(57)【要約】  本発明は、第１のカバースリップおよび第２のカバースリップ、および第１のカバースリップと第２のカバースリップとの間に介装され、その中にキャビティを有する１以上のチャンバを含み、前記チャンバのキャビティに装填された生体組織を観察する、生体組織画像観察装置を提供する。  本発明の生体組織画像観察装置は、簡単な工程と低コストで容易に製造することができ、両面の生体組織画像の観察を容易にするため、数百マイクロメートルのレベルの大きな生体組織の全体像が組織透明化技術を使用することによって得られることができ、それは本発明の装置の顕著な利点である。本発明の装置では、チャンバを形成する外壁部が強く拘束されているので、マウント溶液の漏れや気泡の発生を防止することができ、生体組織の損傷も防止することができる。
2019535033.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のカバースリップおよび第２のカバースリップ、ならびに
第１のカバースリップと第２のカバースリップとの間に介装され、その中にキャビティを有する１以上のチャンバを含み、
前記チャンバのキャビティに装填された生体組織を観察する、
生体組織画像観察装置。
【請求項２】
チャンバが、外壁とキャビティとを含み、
外壁は、第１のカバースリップに取り付けられた第１の外壁と、第２のカバースリップに取り付けられた第２の外壁と、を含み、
第１の外壁と第２の外壁とが、互いに連結されてその中にキャビティを形成する、
請求項１に記載の生体組織画像観察装置。
【請求項３】
第１の外壁が、第２の外壁の内側に接して第２の外壁と連結されている、請求項２に記載の生体組織画像観察装置。
【請求項４】
第１の外壁と前記第２の外壁とが、それぞれ外壁を貫通する１以上の開口部を含む、請求項２に記載の生体組織画像観察装置。
【請求項５】
第１の外壁と第２の外壁とが、ねじ込み方式により一緒に連結されている、請求項２に記載の生体組織画像観察装置。
【請求項６】
以下のステップ、
少なくとも１つの第１の外壁を第１のカバースリップに、少なくとも１つの第２の外壁を第２のカバースリップにそれぞれ取り付け（ステップ１）、および
カバースリップに取り付けられた第１の外壁と第２の外壁とを互いに連結させる（ステップ２）
を含む、生体組織画像観察装置の製造方法。
【請求項７】
請求項１に記載の生体組織画像観察装置を用いた生体組織画像観察方法。
【請求項８】
生体組織画像観察が、光学顕微鏡または電子顕微鏡を用いて行われる、請求項７に記載の生体組織画像観察方法。
【請求項９】
請求項１に記載の生体組織画像観察装置とマウント溶液とを含む、生体組織画像観察キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体組織画像観察装置、その製造方法およびそれを用いた生体組織画像観察方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｘ線による医療診断技術は、ＣＴやＭＲＩなどの二次元走査の過程を備えた非常に正確な診断方法に発展し、それから三次元観察のために走査された画像を三次元画像に再構成する。診断には、光源だけでなく超音波を用いて３次元画像を実現する技術が盛んに用いられている。
【０００３】
しかしながら、最近の技術のほとんどは、ミリメートルレベルでのマイクロ解像度を有しており、細胞レベルでの分析を可能にするマイクロレベルでの三次元観察を満たすことができないことを示唆している。ほとんどの細胞レベルの分析は現在伝統的な二次元技術を使用している。従って、今日の細胞レベル分析の大部分は伝統的な二次元方式に依存している。
【０００４】
すなわち、生検または剖検組織などの生体組織を固定剤で固定した後、パラフィンまたはポリマーで包埋する。光または電磁波が通過できるように、サンプルを数マイクロメートルまたはナノメートルの厚さに切断する。次に、送信された画像を光学顕微鏡または電子顕微鏡で観察することにより微細構造を分析する。
【０００５】
かかるマイクロ画像化技術を用いて三次元画像を取得するためには、共焦点顕微鏡が必要となる。その場合、数十マイクロメートルレベルの厚さ情報を得ることができる。おおよそ、厚さは光源が貫通できる深さによって制限される。生体組織における重要な構造の大部分は、少なくとも数百マイクロメートルの大きさであり、そのため、情報の一部のみが上記の従来の方法によって得られることができる。
【０００６】
したがって、より厚い組織の画像を得るためには、数十マイクロメートルの厚さの一連の切片を連続して準備し、続いて各切片について顕微鏡で画像化し、それを再構成する必要がある。特に、脳組織内のニューロン全体を画像化するためには、１つのニューロンがその軸索を数メートルまで伸ばすことができるので、組織切断およびそれらの再構築の過程において問題がある。
【０００７】
組織透明化技術は、組織を損傷することなく組織内の内部構造およびタンパク質分布を調べることができる技術である。したがって、組織透明化技術の進歩は、従来の方法の限界を克服しながら組織構造をより深く観察し、そして種々の系からの構造および分子に関する不可欠な情報に近づくために多くの方法でなされてきた。
【０００８】
しかしながら、上記方法の進歩にもかかわらず、画像化のための透明で大きなサンプルを収容するための適切なチャンバは未だ開発されていない。図６に示されるように、従来の方法は多くの材料および工程を必要とし、そして熟練した研究者だけが損傷を与えることなく組織のマウントを行うことができる。さらに、材料の価格は高価である。
【０００９】
そこで、本発明者らは、透明で大きな生体組織の画像を観察するためのチャンバを開発し、さらに本発明によるチャンバの製造方法が簡便であり、チャンバがマウント溶液の漏れを防止し、気泡の発生を防止するのに十分であることを確認し、本発明を完成させた。
【００１０】
上記に関連して、韓国特許第１０−１６８９８７９号は、ｉｎ  ｖｉｖｏで乳房組織のマイクロ画像を取得するためのウィンドウ装置およびそれを使用して画像を取得するための方法を記載している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、生物組織画像観察装置、生物組織画像観察装置の製造方法、および上記装置を用いた生物組織観察方法を提供することにある。
【００１２】
上記目的を達成するために、本発明は、第１のカバースリップおよび第２のカバースリップ、ならびに第１のカバースリップと第２のカバースリップとの間に介装され、その中にキャビティを有する１以上のチャンバを含み、前記チャンバのキャビティに装填された生体組織を観察する、生体組織画像観察装置を提供する。
【００１３】
本発明はまた、以下のステップ、少なくとも１つの第１の外壁を第１のカバースリップに、少なくとも１つの第２の外壁を第２のカバースリップにそれぞれ取り付け（ステップ１）、およびカバースリップに取り付けられた第１の外壁と第２の外壁とを互いに連結させる（ステップ２）を含む、生体組織画像観察装置の製造方法を提供する。
【００１４】
本発明はまた、上記の生体組織画像観察装置を用いた生体組織画像観察方法を提供する。
さらに、本発明は、上記の生体組織画像観察装置とマウント溶液とを含む生体組織画像観察キットを提供する。
【００１５】
有利な効果
本発明の生体組織画像観察装置は、簡単な工程と低コストで容易に作成することができ、両側の生体組織画像の観察を容易にするので、大きな生体組織の全体画像が、組織透明化技術を使用することによって数百マイクロメートルのレベルを得ることができ、これは本発明の装置の顕著な利点である。本発明の装置では、チャンバを形成する外壁部が強く拘束されているので、マウント溶液の漏れや気泡の発生を防止することができ、生体組織の損傷も防止することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１および図２は、本発明の一実施形態に係る生体組織画像観察装置を説明するための図である。
【図２】図１および図２は、本発明の一実施形態に係る生体組織画像観察装置を説明するための図である。
【図３】図３および図４は、本発明の一実施形態に係る生体組織画像観察装置の各構成を分離して示す図である。
【図４】図３および図４は、本発明の一実施形態に係る生体組織画像観察装置の各構成を分離して示す図である。
【図５】図５は、本発明の比較例に係る従来の生体組織画像観察装置を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、第１のカバースリップおよび第２のカバースリップ、ならびに第１のカバースリップと第２のカバースリップとの間に介装され、その中にキャビティを有する１以上のチャンバを含み、前記チャンバのキャビティに装填された生体組織を観察する、生体組織画像観察装置を提供する。
【００１８】
以下、図１および図２を参照して、本発明による生体組織画像観察装置を詳細に説明する。
【００１９】
従来技術によれば、適切な生体組織画像観察装置はないので、図３に示すようなシリコンチャンバを製造し、カバースリップを製造したシリコンチャンバの上下両側に取り付けた。そして、生体組織をチャンバ内に装填し、次に画像記録が行われた。
【００２０】
しかしながら、上記従来の方法では、生体組織やチャンバを損傷させずに生体組織をマウントすることが困難であり、また材料が高価であるという問題がある。一方、本発明の生体組織画像観察装置は、その製造方法が単純で、かつ大きな生体組織を容易にマウントすることができるため、経済的かつ効率的である。
【００２１】
図１および図２は、本発明の一実施形態に係る生体組織画像観察装置（１００）を説明するための図である。上記の図は、本発明の一実施形態に対応し、本発明の範囲および精神を限定するものではない。
【００２２】
図１および図２に示すように、本発明の一実施形態に係る生体組織画像観察装置（１００）は、第１のカバースリップおよび第２のカバースリップ（２００）；ならびに第１のカバースリップと第２のカバースリップ（２００）との間に介装され、その中にキャビティを有する１以上のチャンバ（３００）とから構成される。
【００２３】
図１および図２では、カバースリップ（２００）は長方形の形で提示されているが、形状は限定されない。例えば、円形、三角形、および五角形など様々な形状が可能である。
【００２４】
上記カバースリップ（２００）の大きさは、約１０ｍｍから１５０ｍｍであり得るが、必ずしもそれに限定されない。カバースリップ（２００）の大きさは、形状とは異なることを意味する。例えば、カバースリップが円の形をしている場合、サイズは円の直径を意味する。カバースリップが楕円の形の場合、サイズは長径または短径の直径を意味する。カバースリップが多角の形の場合、サイズは一辺の直径を意味する。
【００２５】
上記カバースリップ（２００）は、最近一般的に受け入れられている通常のサイズにすることができる。顕微鏡レンズの観察範囲を広くするために、サンプルが入る底部のみを細くし、任意の部分を観察できるよう上下両側を同様に構築する。
【００２６】
上記チャンバ（３００）は、外壁部とキャビティとを含む。外壁部は、第１のカバースリップに取り付けられた第１の外壁と、第２のカバースリップに取り付けられた第２の外壁とを含み、このとき第１の外壁と第２の外壁は互いに連結されて、内部にキャビティを形成する。
【００２７】
このとき、連結は多くの方法で達成することができ、第１の外壁と第２の外壁とは、いかなる漏れ空間なしに互いに連結されなければならない。これは、生体組織とマウント溶液が両方の外壁に形成されたキャビティに注入されるとき、生体組織が外部に漏れるべきではないことを意味する。
【００２８】
例えば、図３および図４に示されるように、連結は、ねじ込み方式によって達成することができ、Ｏリングを使用することで達成することができ、溝を使用することで達成することができるが、必ずしもそれらに限定されるわけではなく、壁からの漏れなしに連結を堅くすることができるものなら何でも使用することができる。
【００２９】
図３および図４に示すように、連結がねじ込み方式によって達成される場合、第１の外壁および第２の外壁は、カバースリップ（２００）、凸部（３２０）および溝部（３４０）に取り付けられた領域（２２０、２４０）を含むことができる。このとき、第１の外壁および第２の外壁は、それぞれ凸部および溝部を含むことができる。
【００３０】
したがって、第１の外壁と第２の外壁とが連結されるとき、第１の外壁は、第２の外壁の内側と接触することができる。
【００３１】
第１の外壁と第２の外壁とは互いに分離することができる。両方の壁を連結して分離することができるので、それらはリサイクルすることができる。正確には、壁は生体組織画像の観察のために連結され、観察後にそれらは互いに分離され、観察を終えた生体組織は廃棄される。分離された壁は、他の生体組織を観察するために再び連結することができる。
【００３２】
この場合、第１の外壁および第２の外壁は、外壁を貫通する１以上の開口部（５００）を含むことができる。
【００３３】
開口部（５００）の形状は限定されない。図３および図４に示すように、第１の外壁と第２の外壁とをねじ込み方式で一緒に連結するとき、外壁同士をを互いに接触させて回転させることにより強固な連結を形成する。このとき、連結が完了する前に、第１の外壁と第２の外壁とのそれぞれに形成された開口部（５００）が互いに突き合わされて貫通スポットを形成する。
【００３４】
生体組織およびマウント溶液は、開口部（５００）を通してチャンバ内に装填される。装填後、外壁は回転されてより強く互いに連結され、次いで第１の外壁および第２の外壁の開口部（５００）は互いに貫通しないので、チャンバに装填された生体組織およびマウント溶液は、チャンバの外側に漏れることがない。
【００３５】
生体組織およびマウント溶液を注入する過程において、第１の外壁および第２の外壁に形成された開口部（５００）を、互いに貫通するように一列にする。次に、一致した開口部（５００）を上方向に配置する。注入後に外壁をさらに回転させることにより、マウント溶液の漏れおよび気泡の発生が防止される。
【００３６】
さらに、装置は、複数の開口部（５００）を含むことができ、すなわち、生体組織およびマウント溶液を注入するための開口部（５００）に加えて、キャビティの内側から空気を放出するために追加の開口部（５００）を含むことができる。
【００３７】
カバースリップに取り付けられている部分を除く、上記チャンバの凸部は、様々な形、例えば、ねじ、円筒、三角柱、四角柱、五角柱または六角柱であり得るが、必ずしもそれに限定されない。
【００３８】
第１の外壁および第２の外壁において、カバースリップが取り付けられる部分以外の部分の大きさは、約５ｍｍ〜約３０ｍｍとすることができるが、必ずしもこれに限定されない。大きさは、カバースリップに取り付けられている部分の表面の大きさを指し、大きさは形状によって変えることができる。
【００３９】
例えば、凸部が円筒の形をしている場合、大きさは円の直径を意味し、凸部が楕円の形の場合、大きさは長径または短径の直径を意味する。凸部が多角筒の形の場合、大きさは一辺の直径を意味する。
【００４０】
第１の外壁および第２の外壁において、凸部の高さは、おおよそ３ｍｍ〜２０ｍｍとすることができるが、必ずしもこれに限定されない。高さが上記範囲より高い場合、顕微鏡レンズの光屈折率が影響を受ける可能性がある。しかし、サンプルが顕微鏡で測定可能な高さを有する大きな組織である場合、凸部は上記範囲よりも高い高さで製造することができるが、必ずしもこれに限定されない。
【００４１】
第１の外壁および第２の外壁の材料は、チャンバの内側の構造を保護することができ、マウント溶液によって損傷を受けない材料であれば任意であり、アクリル樹脂が例示されるが、必ずしもこれらに限定されない。
【００４２】
本発明の生体組織画像観察装置（１００）の構成を図３および図４に模式的に示す。
【００４３】
特に、上記装置は、第１のカバースリップおよび第２のカバースリップ（２００）と、第１のカバースリップに取り付けられた第１の外壁と、第２のカバースリップに取り付けられた第２の外壁とを含む。このとき、第１の外壁と第２の外壁とは、カバースリップに取り付けられた領域（２２０、２４０）、凸部および溝部（３２０、３４０）を含み、凸部は互いに接続されている。
【００４４】
本発明はまた、以下のステップ、少なくとも１つの第１の外壁を第１のカバースリップに、少なくとも１つの第２の外壁を第２のカバースリップにそれぞれ取り付け（ステップ１）、およびカバースリップに取り付けられた第１の外壁と第２の外壁とを互いに連結させる（ステップ２）を含む、生体組織画像観察装置の製造方法を提供する。
【００４５】
以下、本発明の生体組織画像観察装置の製造方法をステップ順により詳細に説明する。
【００４６】
まず、ステップ１は、少なくとも１つの第１の外壁を第１のカバースリップに、少なくとも１つの第２の外壁を第２のカバースリップにそれぞれ取り付けることである。
【００４７】
このとき、取り付けは任意の公知の方法で実行できる。例えば、瞬間接着剤やアクリル接着剤などの接着剤を用いる方法を用いることができるが、必ずしもこれに限定されない。
【００４８】
カバースリップの形状は限定されない。例えば、円形、三角形、正方形、五角形など様々な形状が可能である。
【００４９】
上記カバースリップの大きさは、おおよそ１０ｍｍから１５０ｍｍであり得るが、必ずしもそれに限定されない。カバースリップの大きさは、形状とは異なることを意味する。例えば、カバースリップが円の形をしている場合、大きさは円の直径を意味する。カバースリップが楕円の形の場合、サイズは長径または短径の直径を意味する。カバースリップが多角の形の場合、サイズは一辺の直径を意味する。
【００５０】
この場合、第１の外壁および第２の外壁は、カバースリップおよび凸部に取り付けられた領域を含むことができる。凸部は、様々な形、例えば、ねじ、円筒、三角柱、四角柱、五角柱または六角柱であり得るが、必ずしもそれに限定されない。
【００５１】
第１の外壁および第２の外壁において、カバースリップが取り付けられる部分以外の部分の大きさは、約５ｍｍ〜３０ｍｍとすることができるが、必ずしもこれに限定されない。大きさは、カバースリップに取り付けられている部分の表面の大きさを指し、大きさは形状によって変えることができる。
【００５２】
例えば、凸部が円筒の形をしている場合、大きさは円の直径を意味し、凸部が楕円の形の場合、大きさは長径または短径の直径を意味する。凸部が多角筒の形の場合、大きさは一辺の直径を意味する。
【００５３】
第１の外壁および第２の外壁において、凸部の高さは、おおよそ３ｍｍ〜２０ｍｍとすることができるが、必ずしもこれに限定されない。
【００５４】
第１の外壁および第２の外壁の材料は、チャンバの内側の構造を保護することができ、マウント溶液によって損傷を受けない材料であれば任意であり、アクリル樹脂が例示されるが、必ずしもこれらに限定されない。
【００５５】
次に、ステップ２は、カバースリップに取り付けられた第１の外壁と第２の外壁とを互いに連結することである。
【００５６】
このとき、連結は多くの方法で達成することができ、第１の外壁と第２の外壁とは、いかなる漏れ空間なしに一緒に連結されなければならない。これは、生体組織とマウント溶液が両方の外壁に形成されたキャビティに注入されるとき、生体組織が外部に漏れるべきではないことを意味する。
【００５７】
例えば、図２に示されるように、連結は、ねじ込み方式によって達成することができ、Ｏリングを使用することで達成することができ、溝を使用することで達成することができるが、必ずしもそれらに限定されるわけではなく、壁からの漏れなしに連結を堅くすることができるものなら何でも使用することができる。
【００５８】
図３および図４に示すように、連結がねじ込み方式によって達成される場合、第１の外壁および第２の外壁は、カバースリップ（２００）、凸部（３２０）および溝部（３４０）に取り付けられた領域（２２０、２４０）を含むことができる。このとき、第１の外壁および第２の外壁は、それぞれ凸部および溝部を含むことができる。
【００５９】
第１の外壁が第２の外壁に連結されるとき、それは第１の外壁が第２の外壁の内側に配置されて、それに取り付けられる形状であり得る。
【００６０】
第１の外壁と第２の外壁とは互いに分離することができる。両方の壁を連結して分離することができるので、それらはリサイクルすることができる。正確には、壁は生体組織画像の観察のために連結され、観察後にそれらは互いに分離され、観察を終えた生体組織は廃棄される。分離された壁は、他の生体組織を観察するために再び連結することができる。
【００６１】
この場合、第１の外壁および第２の外壁は、外壁を貫通する１以上の開口部（５００）を含むことができる。
【００６２】
開口部（５００）の形状は限定されない。図３および図４に示すように、第１の外壁と第２の外壁とをねじ込み方式で一緒に連結するとき、外壁同士を互いに接触させて回転させることにより強固な連結を形成する。このとき、連結が完了する前に、第１の外壁と第２の外壁とのそれぞれに形成された開口部（５００）が互いに突き合わされて貫通スポットを形成する。
【００６３】
生体組織およびマウント溶液は、開口部（５００）を通してチャンバ内に装填される。  装填後、外壁は回転されてより強く互いに連結され、次いで第１の外壁および第２の外壁の開口部（５００）は互いに貫通しないので、チャンバに装填された生体組織およびマウント溶液は、チャンバの外側に漏れることがない。
【００６４】
生体組織およびマウント溶液を注入する過程において、第１の外壁および第２の外壁に形成された開口部（５００）を、互いに貫通するように一列にする。次に、一致した開口部（５００）を上方向に配置する。注入後に外壁をさらに回転させることにより、マウント溶液の漏れおよび気泡の発生が防止される。
【００６５】
さらに、装置は、複数の開口部（５００）を含むことができ、すなわち、生体組織およびマウント溶液を注入するための開口部（５００）に加えて、キャビティの内側から空気を放出するために追加の開口部（５００）を含むことができる。
【００６６】
本発明はまた、上記生体組織画像観察装置を用いた生体組織画像観察方法もまた提供する。
【００６７】
生体組織画像の観察は、光学顕微鏡や電子顕微鏡を用いてカバースリップ上で行うことができるが、必ずしもこれに限定されない。本発明では、生体組織画像観察装置は両側にカバースリップを備えているので、チャンバ内に注入された生体組織を両側から観察することができ、約１０μｍ〜約１．５ｃｍの最大サイズを有する生体組織を観察することができることを指す。
【００６８】
すなわち、本発明の装置によれば、大きなの生体組織の両側の画像を観察しやすくなるので、生体組織全体の情報を取得し分析することが可能となる。
【００６９】
また、本発明は、上記の生体組織画像観察装置とマウント溶液とを含む生体組織画像観察キットを提供する。
生体組織画像観察装置は上述の通りである。
【００７０】
この場合、マウント溶液は顕微鏡下で生体組織をより鮮明に観察するために用いられるものであり、本明細書では通常用いられるマウント溶液とすることができるが、必ずしもこれに限定されるものではない。
【００７１】
好ましくは、マウント溶液は、生体組織の大きさを調整することができる溶液であり得、そして生体組織の大きさを調整することができるマウント溶液は、以下により詳細に記載される。
【００７２】
生体組織の大きさを調節することができるマウント溶液は、下記式１で表される化合物、それらの光学異性体、それらの水和物、またはそれらの塩およびアルカリ金属ハロゲン化物を含むことができる。
【００７３】
［式１］
【化１】
2019535033.tif 000003
【００７４】
式１において、
Ｒ１およびＲ２は、独立してＣ１−１０の直鎖または分岐のアルキルであり；ならびに
ｐ、ｑおよびｒは独立して０〜１０の整数である。
好ましくは、
Ｒ１およびＲ２は、独立してＣ１〜５の直鎖または分岐のアルキルであり；ならびに
ｐ、ｑおよびｒは独立して０〜５の整数である。
【００７５】
より好ましくは、
Ｒ１およびＲ２はメチルであり；ならびに、
ｐ、ｑおよびｒは１の整数である。
最も好ましくは、
式１で表される化合物は、下記式２で表される化合物またはその水和物である。
【００７６】
［式２］
【化２】
2019535033.tif 000004
【００７７】
以下、生体組織の大きさを調整するための組成物についてさらに詳細に説明する。
生体組織の大きさを調整するための組成物は、各成分の含有量および濃度を制御することによって、生体組織の大きさを調整することができる。
【００７８】
また、生体組織の大きさを調整するための組成物は、生体組織を顕微鏡で容易に観察するために用いられるものであり、このとき生体組織は透明な生体組織とすることができる。
【００７９】
透明な生体組織を得るために用いられる生体組織の透明化のための組成物は、従来から用いられている組成物であり得る。好ましくは、生体組織の透明化のための組成物は、式１で表される化合物を含むことができる。
【００８０】
このとき、式１で表される化合物の濃度は、２〜５５ｗ／ｖ％（重量／体積％）、より好ましくは２０〜５０ｗ／ｖ％とすることができる。濃度を示すために使用される溶液は、この分野で一般的に使用される模擬体液であり得、そしてより好ましくは蒸留水、ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）およびＴＢＳ（トリス緩衝溶液）によって例示されるが、必ずしもこれらに限定されない。
【００８１】
上記式１で表される化合物の濃度が２ｗ／ｖ％未満である場合、生体組織の透明化が著しく遅くなる。一方、化合物の濃度が５５ｗ／ｖ％を超える場合、上記式１で表示されるＣＨＡＰＳが完全に溶解しない可能性がある。
【００８２】
また、上記の生体組織を透明化するための組成物は、浸透圧を制御することによって生体組織の透明化を速やかに促進させる役割を果たす物質をさらに含むことができる。このとき、生体組織の透明化を速やかに促進する物質としては、尿素、ＣＨＡＰＳＯ（３−（［３−コラミドプロピル］ジメチルアンモニオ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート）、スクロース、フルクトース、グリセロール、ジアトリゾ酸、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ  １００、Ｔｗｅｅｎ−２０、２，２’−チオジエタノール、イオヘキソール、抱水クロラールまたはそれらの組み合わせが例示されるが、これらに限定されない。
【００８３】
このとき、生体組織の透明化を速やかに促進する物質の濃度は、５〜８０ｗ／ｖ％、５〜７５ｗ／ｖ％、１０〜７０ｗ／ｖ％、５〜５０ｗ／ｖ％、または３５〜６０ｗ／ｖ％とすることができる。濃度が５ｗ／ｖ％未満である場合、生体組織の透明化の割合が遅くなる。一方、濃度が８０ｗ／ｖ％を超えると、結晶が形成されたり、溶解が完了しないことがある。
【００８４】
一例として、生体組織の透明化を速やかに促進する物質として尿素を使用する場合、尿素の濃度は、好ましくは１０〜７０ｗ／ｖ％、より好ましくは２０〜６０ｗ／ｖ％である。かかる生体組織の透明化を速やかに促進する物質の濃度は、式１で表される化合物の好ましい濃度に応じて適宜調整することができる。
【００８５】
生体組織を透明化するための組成物により生体組織が透明にされた後は、生体組織の大きさを調整するための組成物を用いて、生体組織の大きさを調整することができる。
【００８６】
生体組織の大きさを調整するための組成物は、式１で表される化合物、それらの光学異性体、それらの水和物、またはそれらの塩、およびアルカリ金属ハロゲン化物を含むことができる。
【００８７】
このとき、組成物は、さらに尿素、ＣＨＡＰＳＯ（３−（［３−コラミドプロピル］ジメチルアンモニオ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート）、スクロース、フルクトース、グリセロール、ジアトリゾ酸、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ  １００、Ｔｗｅｅｎ−２０、２，２’−チオジエタノール、イオヘキソール、抱水クロラールまたはそれらの組み合わせを含み得る。好ましくは、組成物は尿素を含み得る。
【００８８】
上記の生体組織の大きさを調整するための組成物は、模擬体液をさらに含み得る。生体組織の大きさを調節するための組成物と擬似体液とを含む混合物において、式１で表される化合物の濃度、それらの光学異性体、それらの水和物またはそれらの塩は、３０〜６０ｗ／ｖ％であり得、そしてアルカリ金属ハロゲン化物の濃度は、１〜５ｗ／ｖ％であり得る。
【００８９】
アルカリ金属ハロゲン化物は、アルカリ金属とハロゲン元素とが結合した構造をとることができ、好ましくは塩化ナトリウムである。
【００９０】
上記のように、生体組織の大きさを調整するための組成物は、組織を損傷することなく透明な生体組織の大きさを調節することができ、脳、肝臓、肺、腎臓、腸、心臓、筋肉および血管の様々な生体組織に適用できる。それに加えて、この組成物の利点は、組織の膨潤、泡形成、変色および黒色沈殿物の発生を防止すること、および低コストであることから、上記組成物は生体組織の大きさを調整するための組成物として有効に使用できる。
【００９１】
産業上の利用可能性
本発明の生体組織画像観察装置は、簡単な工程と低コストで容易に作成することができ、両側の生体組織画像の観察を容易にするので、組織透明化技術を使用することによって、数百マイクロメートルのレベルでの大きな生体組織の全体画像を得ることができ、これは本発明の装置の顕著な利点である。
【００９２】
本発明の装置では、チャンバを形成する外壁部が強く拘束されているので、マウント溶液の漏れや気泡の発生を防止することができ、生体組織の損傷も防止することができる。
【図１】
2019535033.tif 000005
【図２】
2019535033.tif 000006
【図３】
2019535033.tif 000007
【図４】
2019535033.tif 000008
【図５】
2019535033.tif 000009
【手続補正書】
【提出日】平成31年3月27日(2019.3.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のカバースリップおよび第２のカバースリップ、ならびに
第１のカバースリップと第２のカバースリップとの間に介装され、その中にキャビティを有する１以上のチャンバを含み、
前記チャンバのキャビティに装填された生体組織を観察し、
ここでチャンバが、外壁とキャビティとを含み、
外壁は、第１のカバースリップに取り付けられた第１の外壁と、第２のカバースリップに取り付けられた第２の外壁と、を含み、
第１の外壁と第２の外壁とが、互いに連結されてその中にキャビティを形成し、ならびに
第１の外壁と前記第２の外壁とが、それぞれ外壁を貫通する１以上の開口部を含む、
生体組織画像観察装置。
【請求項２】
第１の外壁が、第２の外壁の内側に接して第２の外壁と連結されている、請求項１に記載の生体組織画像観察装置。
【請求項３】
第１の外壁と第２の外壁とが、ねじ込み方式により一緒に連結されている、請求項１に記載の生体組織画像観察装置。
【請求項４】
以下のステップ、
少なくとも１つの第１の外壁を第１のカバースリップに、少なくとも１つの第２の外壁を第２のカバースリップにそれぞれ取り付け（ステップ１）、および
カバースリップに取り付けられた第１の外壁と第２の外壁とを互いに連結させる（ステップ２）
を含み、
ここで、第１の外壁と第２の外壁とが、互いに連結されてその中にキャビティを形成し、ならびに
第１の外壁と前記第２の外壁とが、それぞれ外壁を貫通する１以上の開口部を含む、
生体組織画像観察装置の製造方法。
【請求項５】
請求項１に記載の生体組織画像観察装置を用いた生体組織画像観察方法。
【請求項６】
生体組織画像観察が、光学顕微鏡または電子顕微鏡を用いて行われる、請求項５に記載の生体組織画像観察方法。
【請求項７】
請求項１に記載の生体組織画像観察装置とマウント溶液とを含む、生体組織画像観察キット。
【国際調査報告】
2019535033.tif 000010
2019535033.tif 000011
2019535033.tif 000012
2019535033.tif 000013