(57)【要約】本発明はリン吸収能力に優れたラクトバチルス属(Lactobacillus sp.)KCCM 11826P菌株を用いた高リン酸血症腎臓疾患の予防又は治療用の薬学組成物、及び、高リン酸血症腎臓疾患改善用の健康機能性食品に関する。本発明によれば、本発明で選別したラクトバチルス属(Lactobacillus sp.)KCCM 11826Pは、リン吸収能力に優れ、腸内で人体内へのリン吸収を効率的に阻害することができる。また、従来のカルシウム系リン結合剤を代替することができ、血中カルシウム濃度の増加による副作用を最小化することができ、これによって高リン酸血症及び腎臓疾患の余病を効果的に予防又は治療することができる。また、本発明で選別したラクトバチルス属KCCM 11826Pは、既存のリン結合剤に比べて非常に安い価格で服用可能であり、菌株の特性上、ヨーグルト、粉末又は患者の栄養食などに開発が可能であるので、既存のリン結合剤よりも、服用するのに非常に便利である。
2019514420.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐを有効成分として含むことを特徴とする、高リン酸血症改善用食品組成物。
【請求項２】
前記高リン酸血症は、
腎不全症によるものであることを特徴とする、請求項１に記載の高リン酸血症改善用食品組成物。
【請求項３】
前記食品組成物は、
患者栄養食、肉類、穀類、カフェイン飲料、一般飲料、乳製品、チョコレート、パン類、スナック類、お菓子類、ピザ、ゼリー、麺類、ガム類、アイスクリーム類、アルコール性飲料、お酒、ビタミン複合剤及びその他の健康補助食品類の中から選択されるいずれか１種であることを特徴とする、請求項１に記載の高リン酸血症改善用食品組成物。
【請求項４】
ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐを有効成分として含むことを特徴とする、高リン酸血症の予防又は治療用の薬学組成物。
【請求項５】
前記高リン酸血症は、
腎不全症によるものであることを特徴とする、請求項４に記載の高リン酸血症の予防又は治療用の薬学組成物。
【請求項６】
前記薬学組成物は、
顆粒剤（ｇｒａｎｕｌｅｓ）、レモネード剤（ｌｅｍｏｎａｄｅｓ）、散剤（ｐｏｗｄｅｒｓ）、シロップ剤（ｓｙｒｕｐｓ）、液剤（ｌｉｑｕｉｄｓ  ａｎｄ  ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）、エキス剤（ｅｘｔｒａｃｔｓ）、エリキシル剤（ｅｌｉｘｉｒｓ）、流エキス剤（ｆｌｕｉｄ  ｅｘｔｒａｃｔｓ）、懸濁剤（ｓｕｓｐｅｓｉｏｎｓ）、煎剤（ｄｅｃｏｃｔｉｏｎｓ）、浸剤（ｉｎｆｕｓｉｏｎｓ）、錠剤（ｔａｂｌｅｔｓ）、酒精剤（ｓｐｉｒｉｔｓ）、カプセル剤（ｃａｐｓｕｌｅｓ）、トローチ剤（ｔｒｏｃｈｅｓ）、丸剤（ｐｉｌｌｓ）、及び軟質又は硬質ゼラチンカプセルの中から選択されるいずれか１種であることを特徴とする、請求項４に記載の高リン酸血症の予防又は治療用の薬学組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リン吸収能力に優れたラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐ菌株を用いた、高リン酸血症予防及び晩成腎臓疾患治療用の薬学組成物及び健康機能性食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
世界的な年寄り人口の増加によって、成人病である糖尿病及び高血圧の患者が増加する趨勢にある。このような糖尿病及び高血圧は、晩成腎不全を引き起こす、一番有り勝ちな原因であり、これによる晩成腎不全患者の数も、急激に増加している。我が国も、晩成腎不全の有病率が毎年増加しており、特に満６５歳以上の年寄りの場合には、より高い有病率の増加を示しているのが現状である。
【０００３】
晩成腎不全の患者は、一般人に比べて死亡率が非常に高く、生存率も男性６５％、女性６８％程度であって、非常に低い。晩成腎不全の患者の場合、一般人に比べて血管石灰化が、ずっとひどく進むものとして知られている。これは、心血管系疾患を引き起こす重要な要因の一つである。
【０００４】
一方、血液透析患者は、血中リン濃度が目標数値以上に増加するに従って、血管石灰化及び死亡率が比例的に増加すると報告された。したがって、血中リン濃度を調節することは、心血管系疾患の減少、さらに晩成腎不全患者の死亡率を低めるのに非常に重要である。
【０００５】
したがって、晩成腎不全患者の心血管系疾患の発生を予防するためには、薬物及び食餌調節の外に、追加的に、‘血中カルシウム及びリンの濃度調節（５．５ｍｇ／ｄＬ以下）’が必須である。大部分の晩成腎不全患者はリン含有量の低い飲食物を食べるように教育され、追加的に、飲食物中のリンが体に吸収されることを防ぐために、食事中にリン結合剤を服用する。しかし、全血液透析患者の４０〜５０％の患者のみが、目標とした血中リン濃度を達成したと報告された程度であり、血中リン濃度の調節に困難を経験しているのが現状である。
【０００６】
一方、血中リンの増加を治療するための薬は、カルシウムをベースにするか、カルシウムをベースにするリン結合剤を代替する形態のものとして販売されている。このリン結合剤は、腸内で飲食物中のリンと結合して、大便として排出されることによって血中リン濃度の上昇を抑制する。これらのうち、カルシウム剤は、リンの血中濃度を制御するが、カルシウムの血中濃度を増加させるという欠点がある。これを代替するためにセベラマー炭酸塩（ｓｅｖｅｌａｍｅｒ  ｃａｒｂｏｎａｔｅ）及び炭酸ランタン（ｌａｎｔｈａｎｕｍ  ｃａｒｂｏｎａｔｅ）といったリン結合剤が使われているが、高い薬剤費、低いリン結合力、重金属による潜在的危険性及び服用の不便といった欠点が存在する。
【０００７】
したがって、既存の‘カルシウム系リン結合剤の代替’のための薬学組成物及び健康機能性食品に対する開発の要求が切実であるのが現状である。
【０００８】
故に、本発明者は、既存のカルシウム系リン結合剤を代替することができる素材を開発しようと鋭意努力していたところ、多くの乳酸菌のうち、一番リン吸収能力に優れた乳酸菌を選別し、これに基づいて本発明を完成するに至った。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、人体に有利な乳酸菌のうち、リン吸収能力に優れた菌株を選別し、これを既存のリン結合剤の代替剤として使うことにより、高リン酸血症の余病を示す晩成腎臓疾患の予防又は治療用の薬学組成物及び健康機能性食品を開発して提供しようとする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
前記の目的を達成するために、本発明は、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐを有効成分として含むことを特徴とする高リン酸血症改善用の食品組成物を提供する。
【００１１】
また、本発明の高リン酸血症改善用の食品組成物において、前記高リン酸血症は腎不全症によるものであり得る。
【００１２】
晩成腎不全患者の死亡率の主要原因の一つとして、心悩血管疾患が注目されている。腎臓疾患によって腎臓がリンを排泄する役割を正常に果たすことができなくなれば、血中リン濃度が高くなり、増加したリンがカルシウムと結合して、カルシウム−リン結合体を形成することになる。このように形成されたカルシウム−リン結合体は、心臓弁膜、大動脈、冠状動脈などに沈着して、心血管系疾患及び死亡を引き起こすことになるのである。現在、このような血管石灰化を予防するために、患者はリン結合剤を服用しているが、既存のリン結合剤はカルシウムをベースにしているから、リンの濃度を減少させるとともにカルシウム濃度を増加させることになる。よって、リンとカルシウムが互いに結合してカルシウム−リン結合体を形成することで血管石灰化を引き起こすだけでなく、副作用として、高カルシウム血症及び腹部膨満感などの消化器障害を引き起こすことがある。
【００１３】
本発明は、リン吸収能力に優れた乳酸菌であるラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐを選別することにより、カルシウム系リン結合剤の欠点を克服し、リン濃度を効果的に制御することができる技術を開発するに至った。
【００１４】
また、本発明の高リン酸血症改善用食品組成物において、患者栄養食、肉類、穀類、カフェイン飲料、一般飲料、乳製品、チョコレート、パン類、スナック類、お菓子類、ピザ、ゼリー、麺類、ガム類、アイスクリーム類、アルコール性飲料、お酒、ビタミン複合剤及びその他の健康補助食品類の中から選択されるいずれか１種であり得る。このような形態に製造される場合、血中リン濃度の増加による疾病を患っている患者が、楽に容易に服用することができる。
【００１５】
乳酸菌は、我々が既に手軽に摂取していた、ヨーグルト、乳酸菌発酵乳などの食品形態に、多様に活用されて来た。乳酸菌の一つであるラクトバチルスは、キムチなどの伝統食品の発酵に重要な役割をする乳酸菌であり、人間の免疫機能の増進に役立つものとして知られている。したがって、本発明で選別した乳酸菌であるラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐは、優れたリン吸収能力を保有しているだけでなく、人体に有益な菌株であり、多様な食品群に使われうるので、高リン酸血症改善用の健康食品組成物として好適であると言える。
【００１６】
一方、本発明は、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐを有効成分として含むことを特徴とする高リン酸血症の予防又は治療用の薬学組成物を提供する。
【００１７】
本発明で選別したラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐは、このような既存のリン結合剤とは違い、カルシウムをベースとしていないので、高カルシウム血症による疾病の発生がないだけでなく、量産が可能であって価格面でも、とても安価に用いることができる。
【００１８】
また、本発明の高リン酸血症の予防又は治療用の薬学組成物において、前記高リン酸血症は腎不全症によるものであり得る。
【００１９】
また、本発明の高リン酸血症予防又は治療用薬学組成物において、薬学組成物は、顆粒剤（ｇｒａｎｕｌｅｓ）、レモネード剤（ｌｅｍｏｎａｄｅｓ；リモナーデ剤）、散剤（ｐｏｗｄｅｒｓ）、シロップ剤（ｓｙｒｕｐｓ）、液剤（ｌｉｑｕｉｄｓ  ａｎｄ  ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）、エキス剤（ｅｘｔｒａｃｔｓ）、エリキシル剤（ｅｌｉｘｉｒｓ）、流エキス剤（ｆｌｕｉｄ  ｅｘｔｒａｃｔｓ）、懸濁剤（ｓｕｓｐｅｓｉｏｎｓ）、煎剤（ｄｅｃｏｃｔｉｏｎｓ）、浸剤（ｉｎｆｕｓｉｏｎｓ）、錠剤（ｔａｂｌｅｔｓ）、酒精剤（ｓｐｉｒｉｔｓ）、カプセル剤（ｃａｐｓｕｌｅｓ）、トローチ剤（ｔｒｏｃｈｅｓ）、丸剤（ｐｉｌｌｓ）、及び軟質又は硬質ゼラチンカプセルから選択されるいずれか１種であり得る。このような剤形に製造された薬学組成物は、含有成分を人体内にうまく伝達することができるだけでなく、服用が容易である。
【００２０】
一方、本発明の、高リン酸血症の予防又は治療用の薬学組成物の投与量は、投与方法、服用者の年齢、性別、体重、及び、疾患の重症度などを考慮して決定するのがよい。一例として、本発明の高リン酸血症の予防又は治療用の薬学組成物は、有効成分を基準にしたとき、１日０．００００１〜１００ｍｇ／ｋｇ（体重）で１回以上投与することができる。しかし、前記投与量は例示するための一例に過ぎず、服用者の状態によって、医師の処方により変わりうる。
【発明の効果】
【００２１】
本発明によれば、本発明で選別したラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐは、リン吸収能力に優れ、腸内で人体内へのリン吸収を効率的に阻害することができる。すなわち、本発明のラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐを摂取する場合、小腸内で、食品中に含有されているリンを吸収して、排便によって排出することでリンの濃度を効果的に調節することができる。
【００２２】
また、本発明は、従来のカルシウム系リン結合剤を代替することができるので、血中カルシウム濃度の増加による副作用を最小化することができ、これによって高リン酸血症に関連した腎臓疾患の余病を効果的に予防又は治療することができる。
【００２３】
また、本発明で選別したラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐは既存のリン結合剤に比べて非常に安い価格で服用することができ、菌株の特性上、ヨーグルト、粉末又は患者の栄養食などへの開発が可能であるので、既存のリン結合剤よりも、服用が非常に便利である。
【００２４】
また、本発明の乳酸菌であるラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐは、腸内に比較的長時間泊まることができるので、既存のリン結合剤に比べて、服用間隔が長く、小さな服用回数でも腸内リン濃度を効果的に調節することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】リンを吸収した菌株を選別するために、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルリン酸二ナトリウム（５−ｂｒｏｍｏ−４−ｃｈｌｏｒｏ−３−ｉｎｄｏｌｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｉｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ）試薬を用いた比色法で実験した結果である。図１のＡは、菌がリンを吸収して試薬によって青緑色に変色したコロニーの写真であり、図１のＢは、菌株がリンを吸収せず試薬によって変色しなかったコロニーの写真である。
【図２】選別されたラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐと、ラクトバチルス属乳酸菌６種（Ｌ．ｂｒｅｖｉｓ  ＫＢ  ２９０、Ｌ．ｃａｓｅｉ  ＩＡＭ  １０４５、Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＡＴＣＣ  １１５０６、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ＡＴＣＣ  １００１２、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ  ＡＴＣＣ  ７８３０、Ｌ．ｓｕｂｓｐ．  ｌａｃｔｉｓ  ＡＴＣＣ  ２１０５３）、エンテロコッカス属乳酸菌２種（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ  ＡＴＣＣ  ６０５７、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ  ＩＦＯ  ３９７１）及びビフィドバクテリウム属乳酸菌１種（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ  ＡＴＣＣ  １５７０７）のリン吸収能力を比較測定した結果である。
【図３】ラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐと大膓菌ｔｏｐ１０の菌株のリン吸収能力を比較測定した結果である。図３のＡは、ラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐと大膓菌ｔｏｐ１０の菌株の生長率を測定したグラフであり、図３のＢは、ラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐと大膓菌ｔｏｐ１０の菌株のリン吸収能力を測定して示したグラフである。
【図４】ラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐ菌株と、炭酸カルシウム溶液、及び炭酸カルシウムの粉末形態についてのリン吸収力及び吸着力を比較測定した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
以下、本発明の内容を下記の実施例に基づいてより詳細に説明する。ただ、本発明の権利範囲が下記の実施例に限定されるものではなく、それと等価の、技術的思想内の変形まで含む。
【００２７】
［実施例１：リン吸収能力に優れた菌株の選別］
（１）伝統発酵食品からリン吸収能力に優れた菌株の分離
本実施例は、さまざまなテンジャン（韓国味噌）、コチュジャン（韓国のトウガラシ味噌）、醤油、塩辛、麹（こうじ）、甘酒などの伝統発酵食品から、リン吸収能力に優れた菌株を分離しようとした。
【００２８】
伝統発酵食品をリン酸緩衝生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ、ＰＢＳ）に溶かした後、固体ＴＳＡ、ＭＲＳ、ＬＢ培養培地に塗抹し、３０〜３７℃の好気又は嫌気の条件で、１２〜３６時間、細胞培養器で培養した。培養後、生成されたコロニーのリン吸収能力を評価するために、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルリン酸二ナトリウム（５−ｂｒｏｍｏ−４−ｃｈｌｏｒｏ−３−ｉｎｄｏｌｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｉｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ、ｓｉｇｍａ）を用いて、比色法で評価した。
【００２９】
実験の結果、リンを吸収した菌株の場合は青緑色に現れることを確認することができた（図１）。図１は、リンを吸収した菌株を選別するために、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルリン酸二ナトリウム（５−ｂｒｏｍｏ−４−ｃｈｌｏｒｏ−３−ｉｎｄｏｌｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｉｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ）試薬を用いた比色法で実験した結果である。図１のＡは菌がリンを吸収して試薬によって青緑色に変色したコロニーの写真であり、図１のＢは、菌株がリンを吸収せず試薬によって変色しなかったコロニーの写真である。
【００３０】
前記比色法によって、菌を培養した５００個以上のペトリ皿のうち、色の強度が大きなコロニーを３個以上選別し、このコロニーを、‘総リンの濃度が２０ｍＭになるように製造された９６ウェルの細胞培養用マイクロプレートＭＲＳ液体培地’に、それぞれピッキングし、３７℃及び３０℃で３時間の間、細胞培養器で培養した。その後、リン酸塩分析キット（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ、ｓｉｇｍａ）を用いて、リン濃度を測定した。
【００３１】
測定の結果、リンが添加されたＭＲＳ液体培養培地におけるリン減少が大きな菌株１５０余種を確認して、一次的にスクリーニングした。スクリーニングした１５０余個の菌株について、３７℃及び３０℃で６〜３６時間の間、２３０ｒｐｍの振盪培養器（ｓｈａｋｉｎｇ  ｉｎｃｕｂａｔｏｒ）で前培養を行った。その後、光学密度（Ｏｐｔｉｃａｌ  ｄｅｎｓｉｔｙ、ＯＤ）値を１に合わせて１５０余種の菌の細胞数を標準化（ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ）したのであり、総リン濃度が２０ｍＭになるように製造したＭＲＳ液体培養培地で、３７℃及び３０℃で３時間の間、２３０ｒｐｍの振盪培養器で本培養を行った。培養後、０時間でのリン濃度と３時間でのリン濃度の差を計算し、これを３時間培養後の光学密度（ＯＤ）値で割ることによって、標準化した各菌株当たりのリン吸収率を得た。標準化した菌株当たりのリン吸収率の式は次の通りである。
【００３２】
[数１]
Ｐ濃度（菌株当たりのリン吸収率）＝（Ｐ０ｈ−Ｐ３ｈ）／ＯＤ３ｈ
【００３３】
前記式で得られた各菌株当たりのリン吸収率を、比較分析した結果、リン吸収率が最も高い菌株を選別し、この菌株を１６Ｓｒ  ＲＮＡシーケンス分析した。分析の結果、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）菌株と相同性があることを確認したのであり、この選別されたラクトバチルス属菌株を、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐ菌株と名付け、下記の実験例１〜３で使った。
【００３４】
［実験例１：選別されたラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐ菌株のリン吸収能力の確認］
本実験例では、選別されたラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐ菌株のリン吸収能力を確認するために、一般的に多く使われている乳酸菌と、リン吸収能力を比較した。
【００３５】
比較実験に使用された乳酸菌は、ラクトバチルス属乳酸菌６種（Ｌ．ｂｒｅｖｉｓ  ＪＣＭ  １０５９、Ｌ．ｃａｓｅｉ  ＩＡＭ  １０４５、Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＡＴＣＣ  １１５０６、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ＡＴＣＣ  １００１２、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ  ＡＴＣＣ  ７８３０、Ｌ．ｓｕｂｓｐ．  ｌａｃｔｉｓ  ＡＴＣＣ  ２１０５３）、エンテロコッカス属乳酸菌２種（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ  ＡＴＣＣ  ６０５７、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ  ＩＦＯ  ３９７１）及びビフィドバクテリウム属乳酸菌１種（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ  ＡＴＣＣ  １５７０７）であった。
【００３６】
各菌株は、それぞれの最適培養条件の下、リン濃度２０ｍＭのＭＲＳ液体培地にて、実施例１の前培養及び本培養と同じ条件で培養した。その後、実施例１のリン吸収率の計算式によって各菌株のリン吸収率を得た後、比較した。
【００３７】
実験の結果、本発明の実施例１で選別したラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐ菌株のリン吸収能力が一番優れていることを確認することができたのであり、ＯＤ値1で時間当たり０．２９２３ｍＭのリンを吸収することが示された。これは、比較菌株のうちでリン吸収能力が一番高いＥ．ｆａｅｃａｌｉｓ  ＩＦＯ  ３９７１のリン吸収量である、０．１４６７ｍＭと比較してみても、優れたリン吸収能力を有することが分かった（図２）。図２は、選別されたラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐと、ラクトバチルス属乳酸菌６種（Ｌ．ｂｒｅｖｉｓ  ＪＣＭ  １０５９、Ｌ．ｃａｓｅｉ  ＩＡＭ  １０４５、Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＡＴＣＣ  １１５０６、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ＡＴＣＣ  １００１２、Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ  ＡＴＣＣ  ７８３０、Ｌ．ｓｕｂｓｐ．  ｌａｃｔｉｓ  ＡＴＣＣ  ２１０５３）、エンテロコッカス属乳酸菌２種（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ  ＡＴＣＣ  ６０５７、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ  ＩＦＯ  ３９７１）及びビフィドバクテリウム属乳酸菌１種（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ  ＡＴＣＣ  １５７０７）についてのリン吸収能力を比較測定した結果である。
【００３８】
したがって、本発明の実施例１で選別された菌株である、ラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐのリン吸収能力が卓越していることを確認した。
【００３９】
［実験例２：大膓菌ｔｏｐ１０とラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐのリン吸収能力の比較］
本発明の目的は、乳酸菌によってリンの腸内吸収を阻害することである。したがって、本実験例では、代表的な腸内細菌である大膓菌ｔｏｐ１０と、本実施例で選別されたラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐとのリン吸収能力を比較することによって、ラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐが、腸内のリン吸収阻害の役割に適した乳酸菌であるかを確認しようとした。
【００４０】
ラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐと大膓菌ｔｏｐ１０の菌株のリン吸収能力を比較するために、両菌株を、それぞれ２０ｍＭのリンが含まれたＭＲＳ液体培地で発酵させた。
【００４１】
実験の結果、ラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐ菌株の場合は、発酵後、８時間経過でＯＤが１３．３５まで増加したの対し、大膓菌ｔｏｐ１０の場合は、発酵後、８時間でのＯＤが６．６５に止まった（図３のＡ）。
【００４２】
また、ラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐの場合、発酵後、８時間までに３．１７ｍＭのリンを吸収したが、大膓菌ｔｏｐ１０は、発酵後、８時間までに０．５６ｍＭのリンを吸収するに止まった。
【００４３】
したがって、本発明で選別したラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐが、既存の腸内細菌である大膓菌ｔｏｐ１０に比べて、生長率及びリン吸収能力に優れることを確認することができた（図３のＢ）。
【００４４】
図３は、ラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐと大膓菌ｔｏｐ１０菌株のリン吸収能力を比較測定した結果である。図３のＡは、ラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐと大膓菌ｔｏｐ１０の菌株の生長率を測定したグラフ、図３のＢは、ラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐと大膓菌ｔｏｐ１０の菌株のリン吸収能力を測定して示したグラフである。
【００４５】
また、大膓菌ｔｏｐ１０菌株は、６時間経過後からは吸収したリンを細胞外に放出することが観察され、２４時間後には吸収したリンを全部細胞外に放出することが観察された。
【００４６】
したがって、本発明で選別したラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐは、腸内のリン吸収率を阻害する菌として非常に好適であることを確認することができた。
【００４７】
［実験例３：ラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐのリン吸収能力と、リン結合剤である炭酸カルシウム（Ｃａｌｃｉｕｍ  ｃａｒｂｏｎａｔｅ）とのリン吸着能力の比較］
本実験例では、人体内へのリン吸収を防止するために、一般的に使われるリン結合剤の一つである炭酸カルシウムのリン吸着能力と、本発明で選別されたラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐとのリン吸収能力を比較しようとした。
【００４８】
比較実験のために、下記の実施例２、比較例１及び比較例２を準備した。
【００４９】
（１）実施例２の準備
乾燥重量１ｇ／Ｌのラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐ菌株を、リン濃度が２０ｍＭになるように製造したＭＲＳ液体培地５ｍｌに添加することによって実施例２を準備した。
【００５０】
（２）比較例１の準備
炭酸カルシウムを蒸溜水に溶かして、炭酸カルシウムの濃度が１ｇ／Ｌになるように溶液を製造した後、リン濃度が２０ｍＭになるように製造したＭＲＳ液体培地５ｍｌに添加することによって比較例１を準備した。
【００５１】
（３）比較例２の準備
炭酸カルシウム粉末を、リン濃度が２０ｍＭになるように製造した５ｍｌのＭＲＳ液体培地に、１ｇ／Ｌの濃度になるように添加し、１０秒間強く混合して比較例２を準備した。
【００５２】
前記実施例２、比較例１及び比較例２を、３７℃で２３０ｒｐｍの条件の下で３時間の間、細胞培養器で反応させた。
【００５３】
実験の結果、比較例１は１ｇ当たり約４０．０８ｍｇのリンを吸着し、比較例２はリンをほとんど吸着することができないことが示された。これに対し、本発明で選別したラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐは、１ｇ当たり約５８．６９ｍｇのリンを吸着して、炭酸カルシウムに比べて優れたリン吸収能力を示した（図４）。図４は、ラクトバチルス属ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐ菌株と、炭酸カルシウム溶液及び炭酸カルシウムの粉末形態についてのリン吸収力及び吸着力を比較測定した結果である。
【００５４】
［受託番号］
寄託機関人：韓国微生物保存センター（国外）
受託番号：ＫＣＣＭ  １１８２６Ｐ
受託日付：２０１６．０３．２５
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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