(57)【要約】  本発明は、生物学的試料中の１又は複数の治療用モノクローナル抗体及び／又は治療用モノクローナル抗体阻害剤薬物抗体の存在及び量を確定するためのパーツのキット並びに方法であって、試料、治療用モノクローナル抗体の標的及び第一のコンジュゲート部分を含む第一のコンジュゲートならびに治療用モノクローナル抗体の標的及び第二のコンジュゲート部分を含む第二のコンジュゲートを用意し、次いで治療用モノクローナル抗体薬、第一のコンジュゲート及び第二のコンジュゲート間で複合体が形成するときの分光測光的シグナルの変化を検出する段階を含む方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的試料中の治療用モノクローナル抗体の存在及び量を確定する方法であって、
ａ．前記治療用モノクローナル抗体の標的及び第一のコンジュゲート部分を含む第一のコンジュゲートを用意する段階；
ｂ．前記治療用モノクローナル抗体の標的及び第二のコンジュゲート部分を含む第二のコンジュゲートを用意する段階であって、前記第一の部分及び前記第二の部分が両方とも固体粒子であるか、又は前記第一の部分が酵素であり、前記第二の部分が前記第一の部分に対する基質であるか、又は前記第一の部分が発蛍光団であり、前記第二の部分が前記第一の部分により与えられる蛍光のモジュレータである段階；
ｃ．第一のコンジュゲート及び第二のコンジュゲートを含む反応液を用意し、試料を該反応液と接触させ、それにより治療用モノクローナル抗体を含む可能性がある試料並びに第一のコンジュゲート及び第二のコンジュゲートを含む検出液が形成される段階；
ｄ．段階ｃにおいて前記試料を前記反応液と接触させた後の前記検出液の分光測光的シグナルの変化を検出する段階；並びに
ｅ．前記治療用モノクローナル抗体の量を確定する段階；
を含む、方法。
【請求項２】
前記治療用モノクローナル抗体の標的がＴＮＦ−αではあり得ない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
１つの治療用モノクローナル抗体を別の治療用モノクローナル抗体と連結することができる作用物質を前記反応液に添加する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記第一の部分および前記第二の部分が、同一の形状及びサイズの固体粒子である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記第一の部分が西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）であり、前記第二の部分がＨＲＰの基質である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記第一の部分が発蛍光団であり、前記第二の部分がＳＰＡＲＣＬ系等の消光剤である、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
段階ｄで実施される前記検出の前に、前記試料又は前記反応液に対し、１又は複数の既知量の前記治療用モノクローナル抗体をスパイクする追加段階を含む、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
生物学的試料中の治療用モノクローナル抗体及び／又は治療用モノクローナル抗体に対する抗体及び／又は治療用モノクローナル抗体に対する中和性抗体の存在及び量を確定する方法であって、
ａ．前記治療用モノクローナル抗体の標的及び第一のコンジュゲート部分を含む第一のコンジュゲートを用意する段階；
ｂ．前記治療用モノクローナル抗体の標的及び第二のコンジュゲート部分を含む第二のコンジュゲートを用意する段階であって、前記第一の部分及び前記第二の部分が両方とも固体粒子であるか、又は前記第一の部分が酵素であり、前記第二の部分が前記第一の部分に対する基質であるか、又は前記第一の部分が発蛍光団であり、前記第二の部分が前記第一の部分により与えられる蛍光のモジュレータである、段階；
ｃ．前記第一のコンジュゲート及び前記第二のコンジュゲートを含む反応液を用意し、既知スパイク量の前記治療用モノクローナル抗体を前記反応液に添加し、そして前記試料を前記反応液と接触させ、それにより前記試料、前記スパイク量の治療用モノクローナル抗体、前記第一のコンジュゲート、及び前記第二のコンジュゲートを含む検出液が形成される段階；
ｄ．段階ｃにおいて前記試料を前記反応液と接触させた後の前記検出液の分光測光的シグナルの変化を検出する段階；並びに
ｅ．得られた結果を内部標準と比較することにより、治療用モノクローナル抗体の量を確定する段階；
ｆ．得られた測定値を、前記治療用モノクローナル抗体の既知添加量から予測される測定値と比較することにより、前記治療用モノクローナル抗体に対する抗体及び／又は前記治療用モノクローナル抗体に対する中和性抗体の存在又は非存在を確定する段階；
を含む、方法。
【請求項９】
既知量の前記治療用モノクローナル抗体の第二のスパイクを伴った段階ｄ〜ｆの少なくとも１回の反復の実施を含むか、又は代わりに既知量の前記治療用モノクローナル抗体の第二のスパイクを用意し、段階ｄの後に前記第二のスパイクを前記検出液に添加し、それに続いて前記第二のスパイクの添加によりもたらされた分光測光的シグナルの変化を検出し、前記試料中の前記治療用モノクローナル抗体の量を確定する追加段階ｇ及びｈを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記治療用モノクローナル抗体が処方薬である、先行する請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
試料中の治療用モノクローナル抗体及び／又は治療用モノクローナル抗体に対する抗体の量を確定するためのパーツのキットであって、
ａ．請求項１〜６に記載された前記治療用モノクローナル抗体の標的及び第一のコンジュゲート部分を含む第一のコンジュゲート；
ｂ．請求項１〜６に記載された前記治療用モノクローナル抗体の標的及び第二のコンジュゲート部分を含む第二のコンジュゲート；
ｃ．それぞれ既知量の前記治療用モノクローナル抗体を含む１又は複数のスパイク標準溶液；
を含む、パーツのキット。
【請求項１２】
更に治療用モノクローナル抗体結合剤を含む、請求項１１に記載のパーツのキット。
【請求項１３】
異なる治療用モノクローナル抗体を含む少なくとも２つの異なるスパイク標準溶液を含む、請求項１１又は１２に記載のパーツのキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療用モノクローナル抗体での処置に対して免疫応答を発生した可能性のある患者において、治療用モノクローナル抗体及びそれらに対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）等の抗体の存在又は非存在について生物学的試料を監視又はアッセイすることに関する。
【０００２】
従って、一実施形態において、本発明は、生物学的試料、好ましくは血液試料、好ましくは２００μｌ未満を含む、好ましくは血液試料中の治療用モノクローナル抗体の量を確定する方法に関するものである。
【０００３】
更なる実施形態において、本発明は、生物学的試料、好ましくは２００μｌ未満を含む、好ましくは血液試料中における治療用モノクローナル抗体に対する１又は複数の抗薬物抗体（ＡＤＡ）の量を確定する方法に関するものである。
【０００４】
更なる実施形態において、本発明は、生物学的試料、好ましくは血液試料、好ましくは２００μｌ未満を含む試料中における、治療用モノクローナル抗体及びそれらに対する抗体の量を確定する方法に関するものである。
【０００５】
更に、本発明は、生物学的試料、好ましくは血液試料、好ましくは２００μｌを含む試料中の治療用モノクローナル抗体及びそれらに対する抗体の量を確定するためのパーツのキットに関するものである。
【背景技術】
【０００６】
治療用モノクローナル抗体は、様々な疾患と闘うために使用されることが増えてきている。
【０００７】
しかしながら、治療用モノクローナル抗体で処置されている患者は、いくつかの理由により、以前には治療に対して十分に反応していたにもかかわらず、処置に対してあまり反応しなくなることがある。典型的には、反応性が低い者は、与えられた用量から予測される量を下回る低量の遊離薬物（治療用モノクローナル抗体）を血液中に有する。従って、患者の血流中の薬物（治療用モノクローナル抗体）のレベルを監視できることが重要である。血液中の薬物のレベルが低い場合、当該治療用モノクローナル抗体の用量の増加が勧められることもある。しかしながら、多くの場合、処置に対する反応が乏しい理由は、患者の免疫系が、その患者の処置に使用されている特定の治療用モノクローナル抗体に対して抗体を産生していることである。従って、当技術分野では患者の血液中における抗薬物抗体（ＡＤＡ）、即ち、治療用モノクローナル抗体に対する抗体の（潜在的）存在を監視することも要望されている。
【０００８】
一例として、抗腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）治療は、いくつかの慢性免疫炎症性疾患の管理における使用にとって重要になってきている。下記の３種の組換え抗ＴＮＦアルファ薬が、関節リウマチ（ＲＡ）、クローン病、及び重症乾癬等の様々な慢性炎症性疾患の患者における臨床使用について現在承認されている：１）レミケード（Ｒｅｍｉｃａｄｅ、登録商標）（インフリキシマブ）、即ちマウス−ヒトＩｇＧ１−カッパ抗ＴＮＦアルファモノクローナル抗体、２）エンブレル（Ｅｎｂｒｅｌ、登録商標）（エタネルセプト）、即ちヒトＴＮＦ受容体２及びヒトＩｇＧ１の融合タンパク質、並びに３）ヒュミラ（Ｈｕｍｉｒａ、登録商標）（アダリムマブ）、即ち完全ヒトＩｇＧ１−カッパ抗ＴＮＦアルファモノクローナル抗体。下記の２種の他の抗ＴＮＦアルファ抗体構築物は、同疾患のいくつかに罹患した患者における極めて重要な第３相臨床試験で有望であることを示した：４）シムジア（Ｃｉｍｚｉａ、登録商標）ＣＤＰ８７０（セルトリズマブペゴル）、即ちヒト化抗ＴＮＦアルファモノクローナル抗体のペグ化Ｆａｂフラグメント、及び５）ＣＮＴＯ１４８（ゴリムマブ）、即ち完全ヒトＩｇＧ１−カッパ抗ＴＮＦアルファモノクローナル抗体。これらのタンパク質は全て、疾患活動性を劇的に低下させ、そして患者によっては、寛解を誘導することもあり得る。
【０００９】
しかしながら、不幸なことに、全ての患者が抗ＴＮＦアルファ薬に対し有利に反応するわけではない。患者によっては、全く反応しないこと（一次応答不全）もあれば、又は当初は反応するが、その後増量した投薬量及び／又はより頻繁な薬物投与にもかかわらず病状がぶり返すこと（二次応答不全）もある。これらの応答不全についての理由は常に明確なわけではないが、個体間及び更には個体内でのバイオアベイラビリティ及び薬物動態の差異がこの問題の一因となっている可能性がある。患者に抗抗体を発生させることになる薬物の免疫原性は、現在多くの研究者、薬物規制機関、健康保険会社、及び製薬業者により認識されている問題である。従って、機能性抗ＴＮＦアルファ薬の循環レベル及び抗抗体発生について患者を監視することは、投与を個々の患者に適合させ得るために、また患者に対するリスクをほとんど又は全く伴わずに延長治療を有効且つ経済的に提供できるためにも当然のことである。
【００１０】
反復注入に続く、中和性抗ＴＮＦアルファ薬の形成は、用量増加又はより頻繁な薬物投与を必要とする問題となっており、二次応答不全及び／又は注入関連副作用のために治療の中断を余儀なくさせることもあり得る。これは、ＲＡ患者及び他の免疫炎症性疾患の患者の両方で観察されている。しかしながら、臨床現場では、インフリキシマブで処置されたＲＡ又は他の何らかの慢性炎症性疾患の患者は、ランダム化臨床試験における平均患者とはかなり異なることがあり得る。例えば、インフリキシマブの初期バイオアベイラビリティはこの薬物の静脈内投与のために１００％に近づくが、薬物動態の差異により、個々の患者が注入と注入の間の長期間にわたって不適切な薬物レベルを有することになり得る。この問題は、抗体の出現により悪化することになり得る。若干の試験により、ＲＡ患者及びクローン病患者におけるＴＮＦアルファに指向した治療用タンパク質の濃度効果関係及び薬物レベルとＡＤＡとの間の反比例が報告されている。
【００１１】
同様の問題は、他の治療用モノクローナル抗体での処置中にも生じる。
【００１２】
事実、生物製剤（特に治療用モノクローナル抗体）に対する抗体（ＡＤＡ）の誘導による応答不全は、ますます現実化している。生物製剤に対する宿主（患者）抗体の発生は、薬物が長期にわたって送達されるとき、即ち、数か月又は数年の期間にわたる周期的投与の場合特に関連性がある。抗ＴＮＦアルファ薬は、典型的には長期にわたって送達される。ＡＤＡを測定するとき、非中和性ＡＤＡに対し中和性ＡＤＡを識別することが重要である。
【００１３】
宿主抗体の発現は投薬量を増すことにより改善することはできるが、一旦患者の症状が著しく悪化すると典型的には処方用量を増やすだけであるため、これは典型的には遅延した、どちらかと言えば一時的な応答であり、投薬量を増やしたことにより患者の免疫系の更なる増大を招くのは当然であり得る。典型的には、より好ましい治療は、処置の計画を切り替え、別の薬物（即ち、別の治療用モノクローナル抗体）を使用することである。
【００１４】
従って、患者から得た生物学的試料中の治療用モノクローナル抗体及びそれらに対する抗体（ＡＤＡ）の量を正確に評価することは、医療従事者に対し偏在する難題を突きつけている。
【００１５】
種々の方法が、治療用モノクローナル抗体及びそれらに対する抗薬物抗体の循環レベルを評価するのに使用されてきた。これらのうちのいくつかは、治療用モノクローナル抗体をプラスチック製のビーズ又はウェルに固定し、抗薬物抗体による標識治療用モノクローナル抗体の結合を橋渡しすることを読出しとして使用するエンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ）に基づく。他のアッセイは、選択的吸収により、例えば免疫グロブリンＴＮＦアルファ阻害剤のＦａｂの、プロテインＡ又は抗軽鎖Ｆａｂに対する抗体への結合による抗薬物抗体と治療用モノクローナル抗体との複合体を検出する。
【００１６】
しかしながら、これらの方法は、面倒であり、所定の治療用モノクローナル抗体に対して特異的である（この方法を、いくつかの異なる治療用モノクローナル抗体に対する機能でもって普遍的に適用することはできない）。更に、これらの方法は、同じアッセイ手順での治療用モノクローナル抗体及びそれらの抗体の両方の検出及び定量には適していない可能性がある。
【００１７】
特許文献１及び特許文献２は、試料を標識ＴＮＦアルファ複合体と接触させた後、サイズ排除クロマトグラフィーを用いて試料中のＴＮＦアルファ阻害剤の存在を検出する移動度シフトアッセイを開示している。
【００１８】
Ｈｏｃｋら（非特許文献１）は、アダリムマブ又はインフリキシマブのいずれかを投薬されている患者において薬物及びＡＤＡの両方を検出するための酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）に基づく方法を記載している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１９】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１３／０２９５６８５号明細書
【特許文献２】国際公開第２０１１／０５６５９０号明細書
【非特許文献】
【００２０】
【非特許文献１】Ｈｏｃｋら、Ｔｈｅ  Ｄｒｕｇ  Ｍｏｎｉｔ、第３８巻、第１号、３２−４１頁、２０１６年２月
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
しかしながら、これらの技術は面倒であり、多大な時間を必要とする。
【００２２】
従って、いくつかの治療用モノクローナル抗体のバイオアベイラビリティ及びいくつかの治療用モノクローナル抗体に対する抗体の出現を監視するのに使用することができるアッセイの開発は、直接的な臨床的重要性を有する。特に、当技術分野では、患者が来院している間に遂行され得る迅速で信頼できる方法が要望されている。
【００２３】
従って、当技術分野では、治療用モノクローナル抗体及びそれらに対する抗体を確定する代替的方法、特に普遍的に適用可能であり、高められた精度を提供し、高められた再現性を与える方法に対する恒常的な要望がある。
【００２４】
本発明の目的は、かかる方法及びかかる方法で使用するためのパーツのキットを提供することである。
【００２５】
特に、当技術分野では、医療従事者が同じアッセイを用いて異なる個々の患者（異なる処方薬を用いている可能性がある患者）を評価することができるという意味で、普遍的に適用することができるパーツのキット及び方法が要望されている。本発明の目的は、かかる方法及びパーツのキットを提供することである。
【００２６】
患者が利用しやすく、使用者も利用しやすい設備による血液試料中の被検体の測定は、慣例的に２００μｌ未満の血液から成る血液試料の分析を目指す。かかる量は、深刻な健康リスクを伴うことなく、個々の患者により容易に入手される。
【００２７】
従って、当技術分野では、血液試料中の治療用モノクローナル抗体及びそれらに対する抗体の量を分析することができる方法及び装置が要望されている。かかる血液試料は、典型的には２００μμｌ未満の血液を含む。従って、より具体的には、当技術分野では、例えば１８０μｌ未満の血液等、例えば１５０μｌ未満等、例えば１００μｌ未満等、例えば５０μｌ未満等、例えば２０μｌ未満等、例えば１０μｌ未満等、例えば９μｌ未満等、例えば８μｌ未満等、例えば７μｌ未満等、例えば６μｌ未満等、例えば５μｌ未満等、例えば４μｌ未満等、例えば３μｌ未満等、例えば２μｌ以下の血液等、２００μｌ未満の血液を含む血液試料中の治療用モノクローナル抗体及びそれらに対する抗体の量を分析することができる方法及び装置が要望されている。本発明の目的は、かかる方法を提供することである。
【００２８】
別の難題は、各分析の容易さを、好ましくは血液中の治療用モノクローナル抗体及びそれらに対する抗体の測定を、医療従事者の支援を伴わずに患者が行うことができるレベルまで高めることである。更に、各測定が消費者にとって手頃なものであるレベルまでコストを下げるというのも１つの難題である。
【００２９】
従って、当技術分野では、血液試料中の治療用モノクローナル抗体及びそれらに対する抗体のレベルの正確且つ容易な測定を可能にする方法及び患者が利用しやすいパーツのキットが要望されている。更に、当技術分野では、試料の単純で容易な操作及び血液分析を可能にする方法及びパーツのキットが要望されている。本発明の目的は、かかる方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００３０】
本発明は、試料中の治療用モノクローナル抗体（薬物）の検出及び定量化、並びに特に試料中における治療用モノクローナル抗体の検出及びその治療用モノクローナル抗体に対する抗体（抗薬物抗体）の検出を同時に行うことに関するものである。
【００３１】
治療用モノクローナル抗体
本発明による治療用モノクローナル抗体は、ヒトにおいて特定の標的と結合することによりその機能を発揮する抗体薬である。
【００３２】
本発明によると、「標的」は、関連のある治療用モノクローナル抗体が、その関連のある生物学的機能を発揮する時に結合する分子エピトープを含む物質又は構造を意味する。
【００３３】
表１（参考：Ｗｉｋｉｐｅｄｉａ“Ｌｉｓｔ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”３０Ｊｕｎｅ２０１６；ｈｔｔｐｓ：／／ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／Ｌｉｓｔ＿ｏｆ＿ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ＿ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ＿ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）は、承認された試験中の治療用モノクローナル抗体（「薬物」）及び市場から撤退した治療用モノクローナル抗体（「薬物」）を包含する。従って、「用途」の欄は、必ずしも臨床的使用法を示すわけではない。表１に出てくる薬物及び標的は、本発明による特に好ましい治療用モノクローナル抗体及び特に好ましい治療用モノクローナル抗体標的である。
【００３４】
本発明者らは、本願の発明の概念に関連する特許出願を以前に申請している。しかしながら、その出願は、ＴＮＦ−α結合性薬物の検出に向けられたものに過ぎなかった。
【００３５】
上記出願の申請以来、本発明者らは、驚くべきことに、その発明の概念が、試料中の実質的に全ての治療用モノクローナル抗体（薬物）の検出及び特に試料中のそれらに対する抗体（抗薬物抗体）の同時検出に適用可能であることを見出した。
【００３６】
従って、一実施態様において、本発明は、治療用モノクローナル抗体がＴＮＦ−α阻害性薬物又は物質ではないという条件のもと、治療用モノクローナル抗体及び／又はそれに対する抗薬物抗体を検出するための方法に関するものである。
【００３７】
従って、一実施態様において、本発明は、治療用モノクローナル抗体及び／又はそれに対する抗薬物抗体の検出方法に関するものであるが、但し、この方法で使用されるユニバーサルリガンド（標的）はＴＮＦ−αではないということを条件とする。
【００３８】
一実施態様において、本発明は、ヒト患者から得た試料中の治療用モノクローナル抗体、即ち、３Ｆ８、８Ｈ９、アバゴボマブ（Ａｂａｇｏｖｏｍａｂ）、アブシキシマブ、アビツズマブ（Ａｂｉｔｕｚｕｍａｂ）、アブリルマブ（Ａｂｒｉｌｕｍａｂ）、アクトクスマブ、アブシキシマブ、アビツズマブ、アブリルマブ、アクトクスマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ（Ａｄｅｃａｔｕｍｕｍａｂ）、アデュカヌマブ（Ａｄｕｃａｎｕｍａｂ）、アフツズマブ（Ａｆｕｔｕｚｕｍａｂ）、アラシズマブ・ペゴル（Ａｌａｃｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、ＡＬＤ５１８、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブ・ペンテテート（Ａｌｔｕｍｏｍａｂ  ｐｅｎｔｅｔａｔｅ）、アマツキシマブ、アナツモマブ・マフェナトックス（Ａｎａｔｕｍｏｍａｂ  ｍａｆｅｎａｔｏｘ）、アネツマブ・ラブタンシン（Ａｎｅｔｕｍａｂ  ｒａｖｔａｎｓｉｎｅ）、アニフロルマブ、アンルキンズマブ（Ａｎｒｕｋｉｎｚｕｍａｂ）（＝ＩＭＡ−６３８）、アポリズマブ、アルシツモマブ（Ａｒｃｉｔｕｍｏｍａｂ）、アスクリンバクマブ（Ａｓｃｒｉｎｖａｃｕｍａｂ）、アセリズマブ（Ａｓｅｌｉｚｕｍａｂ）、アテゾリズマブ、アチヌマブ（Ａｔｉｎｕｍａｂ）、アトリズマブ（＝トシリズマブ）、アトロリムマブ（Ａｔｏｒｏｌｉｍｕｍａｂ）、バピネウズマブ（Ｂａｐｉｎｅｕｚｕｍａｂ）、バシリキシマブ（Ｂａｓｉｌｉｘｉｍａｂ）、バビツキシマブ（Ｂａｖｉｔｕｘｉｍａｂ）、ベクツモマブ（Ｂｅｃｔｕｍｏｍａｂ）、ベゲロマブ（Ｂｅｇｅｌｏｍａｂ）、ベリムマブ（Ｂｅｌｉｍｕｍａｂ）、ベンラリズマブ（Ｂｅｎｒａｌｉｚｕｍａｂ）、ベルチリムマブ（Ｂｅｒｔｉｌｉｍｕｍａｂ）、ベシレソマブ（Ｂｅｓｉｌｅｓｏｍａｂ）、ベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、ベズロトクスマブ（Ｂｅｚｌｏｔｏｘｕｍａｂ）、ビシロマブ（Ｂｉｃｉｒｏｍａｂ）、ビマグルマブ（Ｂｉｍａｇｒｕｍａｂ）、ビメキズマブ（Ｂｉｍｅｋｉｚｕｍａｂ）、ビバツズマブ・メルタンシン（Ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）、ブリナツモマブ（Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ）、ブロソズマブ（Ｂｌｏｓｏｚｕｍａｂ）、ボコシズマブ（Ｂｏｃｏｃｉｚｕｍａｂ）、ブレンツキシマブ・ベドチン（Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、ブリアキヌマブ（Ｂｒｉａｋｉｎｕｍａｂ）、ブロダルマブ（Ｂｒｏｄａｌｕｍａｂ）、ブロルシズマブ（Ｂｒｏｌｕｃｉｚｕｍａｂ）、ブロンチクツズマブ（Ｂｒｏｎｔｉｃｔｕｚｕｍａｂ）、カナキヌマブ（Ｃａｎａｋｉｎｕｍａｂ）、カンツズマブ・メルタンシン（Ｃａｎｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）、カンツズマブ・ラブタンシン（Ｃａｎｔｕｚｕｍａｂ  ｒａｖｔａｎｓｉｎｅ）、カプラシズマブ（Ｃａｐｌａｃｉｚｕｍａｂ）、カプロマブ・ペンデチド（Ｃａｐｒｏｍａｂ  ｐｅｎｄｅｔｉｄｅ）、カルルマブ（Ｃａｒｌｕｍａｂ）、カツマキソマブ（Ｃａｔｕｍａｘｏｍａｂ）、ｃＢＲ９６−ドキソルビシン免疫複合体、セデリズマブ（Ｃｅｄｅｌｉｚｕｍａｂ）、セツキシマブ（Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、Ｃｈ．１４．１８、シタツズマブ・ボガトックス（Ｃｉｔａｔｕｚｕｍａｂ  ｂｏｇａｔｏｘ）、シクスツムマブ（Ｃｉｘｕｔｕｍｕｍａ���）、クラザキズマブ（Ｃｌａｚａｋｉｚｕｍａｂ）、クレノリキシマブ（Ｃｌｅｎｏｌｉｘｉｍａｂ）、クリバツズマブ・テトラキセタン（Ｃｌｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｔｅｔｒａｘｅｔａｎ）、コドリツズマブ（Ｃｏｄｒｉｔｕｚｕｍａｂ）、コルツキシマブ・ラブタンシン（Ｃｏｌｔｕｘｉｍａｂ  ｒａｖｔａｎｓｉｎｅ）、コナツムマブ（Ｃｏｎａｔｕｍｕｍａｂ）、コンシズマブ（Ｃｏｎｃｉｚｕｍａｂ）、クレネズマブ（Ｃｒｅｎｅｚｕｍａｂ）、ＣＲ６２６１、ダセツズマブ（Ｄａｃｅｔｕｚｕｍａｂ）、ダクリズマブ（Ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）、ダロツズマブ（Ｄａｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、ダピロリズマブ・ペゴル（Ｄａｐｉｒｏｌｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、ダラツムマ（Ｄａｒａｔｕｍｕｍａ）、デクトレクマブ（Ｄｅｃｔｒｅｋｕｍａｂ）、デムシズマブ（Ｄｅｍｃｉｚｕｍａｂ）、デニンツズマブ・マフォドチン（Ｄｅｎｉｎｔｕｚｕｍａｂ  ｍａｆｏｄｏｔｉｎ）、デノスマブ（Ｄｅｎｏｓｕｍａｂ）、デルロツキシマブ・ビオチン（Ｄｅｒｌｏｔｕｘｉｍａｂ  ｂｉｏｔｉｎ）、デツモマブ（Ｄｅｔｕｍｏｍａｂ）、ジヌツキシマブ（Ｄｉｎｕｔｕｘｉｍａｂ）、ジリダブマブ（Ｄｉｒｉｄａｖｕｍａｂ）、ドルリモマブ・アリトクス（Ｄｏｒｌｉｍｏｍａｂ  ａｒｉｔｏｘ）、ドロジツマブ（Ｄｒｏｚｉｔｕｍａｂ）、デュリゴツマブ（Ｄｕｌｉｇｏｔｕｍａｂ）、デュピルマブ（Ｄｕｐｉｌｕｍａｂ）デュルバルマブ（Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）、デュシギツマブ（Ｄｕｓｉｇｉｔｕｍａｂ）、エクロメキシマブ（Ｅｃｒｏｍｅｘｉｍａｂ）、エクリズマブ（Ｅｃｕｌｉｚｕｍａｂ）、エドバコマブ（Ｅｄｏｂａｃｏｍａｂ）、エドレコロマブ（Ｅｄｒｅｃｏｌｏｍａｂ）、エファリズマブ（Ｅｆａｌｉｚｕｍａｂ）、エフングマブ（Ｅｆｕｎｇｕｍａｂ）、エルデルマブ（Ｅｌｄｅｌｕｍａｂ）、エルゲムツマブ（Ｅｌｇｅｍｔｕｍａｂ）、エロツズマブ（Ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、エルシリモマブ（Ｅｌｓｉｌｉｍｏｍａｂ）、エマクツズマブ（Ｅｍａｃｔｕｚｕｍａｂ）、エミベツズマブ（Ｅｍｉｂｅｔｕｚｕｍａｂ）、エナバツズマブ（Ｅｎａｖａｔｕｚｕｍａｂ）、エンフォルツマブ・ベドチン（Ｅｎｆｏｒｔｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、エンリモマブ・ペゴル（Ｅｎｌｉｍｏｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、エノブリツズマブ（Ｅｎｏｂｌｉｔｕｚｕｍａｂ）、エノキズマブ（Ｅｎｏｋｉｚｕｍａｂ）、エノチクマブ（Ｅｎｏｔｉｃｕｍａｂ）、エンシツキシマブ（Ｅｎｓｉｔｕｘｉｍａｂ）、エピツモマブ・シツキセタン（Ｅｐｉｔｕｍｏｍａｂ  ｃｉｔｕｘｅｔａｎ）、エプラツズマブ（Ｅｐｒａｔｕｚｕｍａｂ）、エルリズマブ（Ｅｒｌｉｚｕｍａｂ）、エルツマキソマブ（Ｅｒｔｕｍａｘｏｍａｂ）、エタラシズマブ（Ｅｔａｒａｃｉｚｕｍａｂ）、エトロリズマブ（Ｅｔｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、エビナクマブ（Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ）、エボロクマブ（Ｅｖｏｌｏｃｕｍａｂ）、エキスビビルマブ（Ｅｘｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、ファノレソマブ（Ｆａｎｏｌｅｓｏｍａｂ）、ファラリモマブ（Ｆａｒａｌｉｍｏｍａｂ）、ファルレツズマブ（Ｆａｒｌｅｔｕｚｕｍａｂ）、ファシヌマブ（Ｆａｓｉｎｕｍａｂ）、ＦＢＴＡ０５、フェルビズマブ（Ｆｅｌｖｉｚｕｍａｂ）、フェザキヌマブ���Ｆｅｚａｋｉｎｕｍａｂ）、フィクラツズマブ（Ｆｉｃｌａｔｕｚｕｍａｂ）、フィギツムマブ（Ｆｉｇｉｔｕｍｕｍａｂ）、フィリブマブ（Ｆｉｒｉｖｕｍａｂ）、フランボツマブ（Ｆｌａｎｖｏｔｕｍａｂ）、フレチクマブ（Ｆｌｅｔｉｋｕｍａｂ）、フォントリズマブ（Ｆｏｎｔｏｌｉｚｕｍａｂ）、フォラルマブ（Ｆｏｒａｌｕｍａｂ）、フォラビルマブ（Ｆｏｒａｖｉｒｕｍａｂ）、フレソリムマブ（Ｆｒｅｓｏｌｉｍｕｍａｂ）、フルラヌマブ（Ｆｕｌｒａｎｕｍａｂ）、フツキシマブ（Ｆｕｔｕｘｉｍａｂ）、ガリキシマブ（Ｇａｌｉｘｉｍａｂ）、ガニツマブ（Ｇａｎｉｔｕｍａｂ）、ガンテネルマブ（Ｇａｎｔｅｎｅｒｕｍａｂ）、ガビリモマブ（Ｇａｖｉｌｉｍｏｍａｂ）、ゲムツズマブ・オゾガマイシン（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）、ゲボキズマブ（Ｇｅｖｏｋｉｚｕｍａｂ）、ギレンツキシマブ（Ｇｉｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ）、グレムバツムマブ・ベドチン（Ｇｌｅｍｂａｔｕｍｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、ゴミリキシマブ（Ｇｏｍｉｌｉｘｉｍａｂ）、グセルクマブ（Ｇｕｓｅｌｋｕｍａｂ）、イバリズマブ（Ｉｂａｌｉｚｕｍａｂ）、イブリツモマブ・チウキセタン（Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ  ｔｉｕｘｅｔａｎ）、イクルクマブ（Ｉｃｒｕｃｕｍａｂ）、イダルシズマブ（Ｉｄａｒｕｃｉｚｕｍａｂ）、イゴボマブ（Ｉｇｏｖｏｍａｂ）、ＩＭＡＢ３６２、イマルマブ（Ｉｍａｌｕｍａｂ）、イムシロマブ（Ｉｍｃｉｒｏｍａｂ）、イムガツズマブ（Ｉｍｇａｔｕｚｕｍａｂ）、インクラクマブ（Ｉｎｃｌａｃｕｍａｂ）、インダツキシマブ・ラブタンシン（Ｉｎｄａｔｕｘｉｍａｂ  ｒａｖｔａｎｓｉｎｅ）、インデュサツマブ・ベドチン（Ｉｎｄｕｓａｔｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、インテツムマブ（Ｉｎｔｅｔｕｍｕｍａｂ）、イノリモマブ（Ｉｎｏｌｉｍｏｍａｂ）、イノツズマブ・オゾガマイシン（Ｉｎｏｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）、イピリムマブ（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）、イラツムマブ（Ｉｒａｔｕｍｕｍａｂ）、イサツキシマブ（Ｉｓａｔｕｘｉｍａｂ）、イトリズマブ（Ｉｔｏｌｉｚｕｍａｂ）、イキセキズマブ（Ｉｘｅｋｉｚｕｍａｂ）、ケリキシマブ（Ｋｅｌｉｘｉｍａｂ）、ラベツズマブ（Ｌａｂｅｔｕｚｕｍａｂ）、ラムブロリズマブ（Ｌａｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ラムパリズマブ（Ｌａｍｐａｌｉｚｕｍａｂ）、レブリキズマブ（Ｌｅｂｒｉｋｉｚｕｍａｂ）、レマレソマブ（Ｌｅｍａｌｅｓｏｍａｂ）、レンジルマブ（Ｌｅｎｚｉｌｕｍａｂ）、レルデリムマブ（Ｌｅｒｄｅｌｉｍｕｍａｂ）、レキサツムマブ（Ｌｅｘａｔｕｍｕｍａｂ）、リビビルマブ（Ｌｉｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、リファスツズマブ・ベドチン（Ｌｉｆａｓｔｕｚｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、リゲリズマブ（Ｌｉｇｅｌｉｚｕｍａｂ）、リロトマブ・サテトラキセタン（Ｌｉｌｏｔｏｍａｂ  ｓａｔｅｔｒａｘｅｔａｎ）、リンツズマブ（Ｌｉｎｔｕｚｕｍａｂ）、リリルマブ（Ｌｉｒｉｌｕｍａｂ）、ロデルシズマブ（Ｌｏｄｅｌｃｉｚｕｍａｂ）、ロキベトマブ、ロルボツズマブ・メルタンシン（Ｌｏｒｖｏｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）、ルカツムマブ（Ｌｕｃａｔｕｍｕｍａｂ）、ルリズマブ・ペゴル（Ｌｕｌｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇ��ｌ）、ルミリキシマブ（Ｌｕｍｉｌｉｘｉｍａｂ）、ルムレツズマブ（Ｌｕｍｒｅｔｕｚｕｍａｂ）、マパツムマブ（Ｍａｐａｔｕｍｕｍａｂ）、マルゲツキシマブ（Ｍａｒｇｅｔｕｘｉｍａｂ）、マスリモマブ（Ｍａｓｌｉｍｏｍａｂ）、マブリリムマブ（Ｍａｖｒｉｌｉｍｕｍａｂ）、マツズマブ（Ｍａｔｕｚｕｍａｂ）、メポリズマブ（Ｍｅｐｏｌｉｚｕｍａｂ）、メテリムマブ（Ｍｅｔｅｌｉｍｕｍａｂ）、ミラツズマブ（Ｍｉｌａｔｕｚｕｍａｂ）、ミンレツモマブ（Ｍｉｎｒｅｔｕｍｏｍａｂ）、ミルベツキシマブ・ソラブタンシン（Ｍｉｒｖｅｔｕｘｉｍａｂ  ｓｏｒａｖｔａｎｓｉｎｅ）、ミツモマブ（Ｍｉｔｕｍｏｍａｂ）、モガムリズマブ（Ｍｏｇａｍｕｌｉｚｕｍａｂ）、モロリムマブ（Ｍｏｒｏｌｉｍｕｍａｂ）、モタビズマブ（Ｍｏｔａｖｉｚｕｍａｂ）、モキセツモマブ・パスドトクス（Ｍｏｘｅｔｕｍｏｍａｂ  ｐａｓｕｄｏｔｏｘ）、ムロモナブ（Ｍｕｒｏｍｏｎａｂ）−ＣＤ３、ナコロマブ・タフェナトクス（Ｎａｃｏｌｏｍａｂ  ｔａｆｅｎａｔｏｘ）ナミルマブ（Ｎａｍｉｌｕｍａｂ）、ナプツモマブ・エスタフェナトクス（Ｎａｐｔｕｍｏｍａｂ  ｅｓｔａｆｅｎａｔｏｘ）、ナルナツマブ（Ｎａｒｎａｔｕｍａｂ）、ナタリズマブ（Ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ）、ネバクマブ（Ｎｅｂａｃｕｍａｂ）、ネシツムマブ（Ｎｅｃｉｔｕｍｕｍａｂ）、ネモリズマブ（Ｎｅｍｏｌｉｚｕｍａｂ）、ネスバクマブ（Ｎｅｓｖａｃｕｍａｂ）、ニモツズマブ（Ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂ）、ニボルマブ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、ノフェツモマブ・メルペンタン（Ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂ  ｍｅｒｐｅｎｔａｎ）、オビルトキサキシマブ（Ｏｂｉｌｔｏｘａｘｉｍａｂ）、オビヌツズマブ（Ｏｂｉｎｕｔｕｚｕｍａｂ）、オカラツズマブ（Ｏｃａｒａｔｕｚｕｍａｂ）、オクレリズマブ（Ｏｃｒｅｌｉｚｕｍａｂ）、オデュリモマブ（Ｏｄｕｌｉｍｏｍａｂ）、オファツムマブ（Ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）、オララツマブ（Ｏｌａｒａｔｕｍａｂ）、オロキズマブ（Ｏｌｏｋｉｚｕｍａｂ）、オマリズマブ（Ｏｍａｌｉｚｕｍａｂ）、オナルツズマブ（Ｏｎａｒｔｕｚｕｍａｂ）、オンツキシズマブ（Ｏｎｔｕｘｉｚｕｍａｂ）、オピシヌマブ（Ｏｐｉｃｉｎｕｍａｂ）、オポルツズマブ・モナトクス（Ｏｐｏｒｔｕｚｕｍａｂ  ｍｏｎａｔｏｘ）、オレゴボマブ（Ｏｒｅｇｏｖｏｍａｂ）、オルチクマブ（Ｏｒｔｉｃｕｍａｂ）
、オテリキシズマブ（Ｏｔｅｌｉｘｉｚｕｍａｂ）、オトレルツズマブ（Ｏｔｌｅｒｔｕｚｕｍａｂ）、オキセルマブ（Ｏｘｅｌｕｍａｂ）、オザネズマブ（Ｏｚａｎｅｚｕｍａｂ）、パギバキシマブ（Ｐａｇｉｂａｘｉｍａｂ）、パリビズマブ（Ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ）、パニツムマブ（Ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、パンコマブ（Ｐａｎｋｏｍａｂ）、パノバクマブ（Ｐａｎｏｂａｃｕｍａｂ）、パルサツズマブ（Ｐａｒｓａｔｕｚｕｍａｂ）、パスコリズマブ（Ｐａｓｃｏｌｉｚｕｍａｂ）、パソツキシズマブ（Ｐａｓｏｔｕｘｉｚｕｍａｂ）、パテクリズマブ（Ｐａｔｅｃｌｉｚｕｍａｂ）、パトリツマブ（Ｐａｔｒｉｔｕｍａｂ）、ペムブロリズマブ（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ペムツモマブ（Ｐｅｍｔｕｍｏｍａｂ）、ペラキズマブ（Ｐｅｒａｋｉｚｕｍａｂ）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）、ペキセリズマブ（Ｐｅｘｅｌｉｚｕｍａｂ）、ピジリズマブ（Ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）、ピナツズマブ・ベドチン（Ｐｉｎａｔｕｚｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、ピンツモマブ（Ｐｉｎｔｕｍｏｍａｂ）、プラクルマブ（Ｐｌａｃｕｌｕｍａｂ）、ポラツズマブ・ベドチン（Ｐｏｌａｔｕｚｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、ポネズマブ（Ｐｏｎｅｚｕｍａｂ）、プリリキシマブ（Ｐｒｉｌｉｘｉｍａｂ）、プリトキサキシマブ（Ｐｒｉｔｏｘａｘｉｍａｂ）、プリツムマブ（Ｐｒｉｔｕｍｕｍａｂ）、ＰＲＯ１４０、クイリズマブ（Ｑｕｉｌｉｚｕｍａｂ）、テツロマブ（Ｔｅｔｕｌｏｍａｂ）、ラコツモマブ（Ｒａｃｏｔｕｍｏｍａｂ）、ラドレツマブ（Ｒａｄｒｅｔｕｍａｂ）、ラフィビルマブ（Ｒａｆｉｖｉｒｕｍａｂ）、ラルパンシズマブ（Ｒａｌｐａｎｃｉｚｕｍａｂ）、ラムシルマブ（Ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ）、ラニビズマブ（Ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ）、ラキシバクマブ（Ｒａｘｉｂａｃｕｍａｂ）、レファネズマブ（Ｒｅｆａｎｅｚｕｍａｂ）、レガビルマブ（Ｒｅｇａｖｉｒｕｍａｂ）、レスリズマブ（Ｒｅｓｌｉｚｕｍａｂ）、リロツムマブ（Ｒｉｌｏｔｕｍｕｍａｂ）、リヌクマブ（Ｒｉｎｕｃｕｍａｂ）、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、ロバツムマブ（Ｒｏｂａｔｕｍｕｍａｂ）、ロレデュマブ（Ｒｏｌｅｄｕｍａｂ）、ロモソズマブ（Ｒｏｍｏｓｏｚｕｍａｂ）、ロンタリズマブ（Ｒｏｎｔａｌｉｚｕｍａｂ）、ロベリズマブ（Ｒｏｖｅｌｉｚｕｍａｂ）、ルプリズマブ（Ｒｕｐｌｉｚｕｍａｂ）、サシツズマブ・ゴビテカン（Ｓａｃｉｔｕｚｕｍａｂ  ｇｏｖｉｔｅｃａｎ）、サマリズマブ（Ｓａｍａｌｉｚｕｍａｂ）、サリルマブ（Ｓａｒｉｌｕｍａｂ）、サツモマブ・ペンデチド（Ｓａｔｕｍｏｍａｂ  ｐｅｎｄｅｔｉｄｅ）、セクキヌマブ（Ｓｅｃｕｋｉｎｕｍａｂ）、セリバンツマブ（Ｓｅｒｉｂａｎｔｕｍａｂ）、セトキサキシマブ（Ｓｅｔｏｘａｘｉｍａｂ）、セビルマブ（Ｓｅｖｉｒｕｍａｂ）、シブロツズマブ（Ｓｉｂｒｏｔｕｚｕｍａｂ）、ＳＧＮ−ＣＤ１９Ａ、ＳＧＮ−ＣＤ３３Ａ、シファリムマブ（Ｓｉｆａｌｉｍｕｍａｂ）、シルツキシマブ（Ｓｉｌｔｕｘｉｍａｂ）、シムツズマブ（Ｓｉｍｔｕｚｕｍａｂ）、シプリズマブ（Ｓｉｐｌｉｚｕｍａｂ）、シルクマブ（Ｓｉｒｕｋｕｍａｂ）、ソフィツズマブ・ベドチン（Ｓｏｆｉｔｕｚｕｍａ���  ｖｅｄｏｔｉｎ）、ソラネズマブ（Ｓｏｌａｎｅｚｕｍａｂ）、ソリトマブ（Ｓｏｌｉｔｏｍａｂ）、ソネプシズマブ（Ｓｏｎｅｐｃｉｚｕｍａｂ）、ソンツズマブ（Ｓｏｎｔｕｚｕｍａｂ）、スタムルマブ（Ｓｔａｍｕｌｕｍａｂ）、スレソマブ（Ｓｕｌｅｓｏｍａｂ）、スビズマブ（Ｓｕｖｉｚｕｍａｂ）、タバルマブ（Ｔａｂａｌｕｍａｂ）、タカツズマブ・テトラキセタン（Ｔａｃａｔｕｚｕｍａｂ  ｔｅｔｒａｘｅｔａｎ）、タドシズマブ（Ｔａｄｏｃｉｚｕｍａｂ）、タリズマブ（Ｔａｌｉｚｕｍａｂ）、タネズマブ、タプリツモマブ・パプトクス（Ｔａｐｌｉｔｕｍｏｍａｂ  ｐａｐｔｏｘ）、タレクスツマブ（Ｔａｒｅｘｔｕｍａｂ）、テフィバズマブ（Ｔｅｆｉｂａｚｕｍａｂ）、テリモマブ・アリトクス（Ｔｅｌｉｍｏｍａｂ  ａｒｉｔｏｘ）、テナツモマブ（Ｔｅｎａｔｕｍｏｍａｂ）、テネリキシマブ（Ｔｅｎｅｌｉｘｉｍａｂ）、テプリズマブ（Ｔｅｐｌｉｚｕｍａｂ）、テプロツムマブ（Ｔｅｐｒｏｔｕｍｕｍａｂ）、テシドルマブ（Ｔｅｓｉｄｏｌｕｍａｂ）、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ（Ｔｉｃｉｌｉｍｕｍａｂ）  （＝トレメリムマブ（ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ））、チルドラキズマブ（Ｔｉｌｄｒａｋｉｚｕｍａｂ）、チガツズマブ（Ｔｉｇａｔｕｚｕｍａｂ）、ＴＮＸ−６５０、トシリズマブ（Ｔｏｃｉｌｉｚｕｍａｂ）（＝アトリズマブ（ａｔｌｉｚｕｍａｂ））、トラリズマブ（Ｔｏｒａｌｉｚｕｍａｂ）、トサトクスマブ（Ｔｏｓａｔｏｘｕｍａｂ）、トシツモマブ（Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）、トベツマブ（Ｔｏｖｅｔｕｍａｂ）、トラロキヌマブ（Ｔｒａｌｏｋｉｎｕｍａｂ）、トラスツズマブ、トラスツズマブ・エムタンシン、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ（Ｔｒｅｇａｌｉｚｕｍａｂ）、トレメリムマブ、トレボグルマブ（Ｔｒｅｖｏｇｒｕｍａｂ）、ツコツズマブ・セルモロイキン（Ｔｕｃｏｔｕｚｕｍａｂ  ｃｅｌｍｏｌｅｕｋｉｎ）、ツビルマブ（Ｔｕｖｉｒｕｍａｂ）、ウブリツキシマブ（Ｕｂｌｉｔｕｘｉｍａｂ）、ウロクプルマブ（Ｕｌｏｃｕｐｌｕｍａｂ）、ウレルマブ、ウルトキサズマブ（Ｕｒｔｏｘａｚｕｍａｂ）、ウステキヌマブ、バンドルツズマブ・ベドチン（Ｖａｎｄｏｒｔｕｚｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、バンチクツマブ（Ｖａｎｔｉｃｔｕｍａｂ）、バヌシズマブ（Ｖａｎｕｃｉｚｕｍａｂ）、バパリキシマブ（Ｖａｐａｌｉｘｉｍａｂ）、バルリルマブ（Ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）、バテリズマブ（Ｖａｔｅｌｉｚｕｍａｂ）、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ（Ｖｅｐａｌｉｍｏｍａｂ）、ベセンクマブ（Ｖｅｓｅｎｃｕｍａｂ）、ビシリズマブ（Ｖｉｓｉｌｉｚｕｍａｂ）、ボロシキシマブ（Ｖｏｌｏｃｉｘｉｍａｂ）、ボルセツズマブ・マフォドチン（Ｖｏｒｓｅｔｕｚｕｍａｂ  ｍａｆｏｄｏｔｉｎ）、ボツムマブ（Ｖｏｔｕｍｕｍａｂ）、ザルツムマブ（Ｚａｌｕｔｕｍｕｍａｂ）、ザノリムマブ（Ｚａｎｏｌｉｍｕｍａｂ）、ザツキシマブ（Ｚａｔｕｘｉｍａｂ）、ジラリムマブ（Ｚｉｒａｌｉｍｕｍａｂ）、ゾリモマブ・アリトクス（Ｚｏｌｉｍｏｍａｂ  ａｒｉｔｏｘ）を含む群から選択される治療用モノクローナル抗体及びそれに対応する抗薬物抗体の検出に関するものである。
【００３９】
言い換えれば、本発明は、表１で挙げた分子標的のうちの１つを標的とする治療用モノクローナル抗体を含む群から選択される治療用モノクローナル抗体（及びその対応する抗薬物抗体）の検出に関するものであるが、但し、上記群はＴＮＦ−αを標的とする治療用モノクローナル抗体を含まないことを条件とする。
【００４０】
【表１】
2019522199.tif 000002
2019522199.tif 000003
2019522199.tif 000004
2019522199.tif 000005
2019522199.tif 000006
2019522199.tif 000007
2019522199.tif 000008
2019522199.tif 000009
2019522199.tif 000010
2019522199.tif 000011
2019522199.tif 000012
2019522199.tif 000013
2019522199.tif 000014
【００４１】
本発明の特に好ましい実施態様は、ブロダルマブ、セクキヌマブ、及びイキセキズマブ等のＩＬ１７Ａを標的とする治療用モノクローナル抗体並びにそれに対応する抗薬物抗体の検出に関するものである。
【００４２】
上記で述べたように、当技術分野では、生物学的試料中の（多数の）治療用モノクローナル抗体及びそれらに対する抗体のレベルの正確で感度が高く再現性のある測定値を提供する方法及び患者に好都合なパーツのキットがいたるところで必要とされている。いくつかの実施形態において、本発明による生物学的試料は、血液、血清、リンパ液、リンパ節組織、脾臓組織、骨髄、又はこれらの組織のうちの１以上に由来する免疫グロブリンに富むフラクションから成る群から選択される。本発明によると、血液試料は、患者から採取した全血又はそこから誘導された材料（血清等）の試料を意味する。
【００４３】
本発明の上記目的は、試料中の治療用モノクローナル抗体及びそれらに対する抗体のレベルを検出するための非常に有効且つ感度の高いアッセイを提供することで、本発明により決着がついている。
【００４４】
上記アッセイの基本原理は、治療用モノクローナル抗体に特異的なユニバーサルリガンドとしての治療用モノクローナル抗体の「標識した」標的の使用である。ユニバーサルリガンドは、これが治療用モノクローナル抗体の存在下で分子複合体を形成するという意味で標識される。これにより形成された複合体は、分光学的シグナルを改善する能力があることが見出された。この能力についての理由は、２つのエピトープ結合性配列をもつ（ほとんどの）モノクローナル抗体の二機能性であると考えられている。その結果、単一の治療用モノクローナル抗体が、（同一の又は異なる）２つの部分に結合し、それらを一緒にすることができる。即ち、複数の治療用モノクローナル抗体及び複数の標的が、分光測光試験において（固体粒子を用いたとき）試料の吸光度を変える大きな分子ネットワークで一緒にされる。代替的実施態様では、上記部分は、酵素及びその基質又は発蛍光団及び消光剤等、機能的部分の二面性があるセットであり得る。
【００４５】
即ち、第一の実施形態において、本発明は、１又は複数の血液試料中の治療用モノクローナル抗体の存在及び量を確定する方法であって、
ａ．前記治療用モノクローナル抗体の標的及び第一のコンジュゲート部分を含む第一のコンジュゲートを用意する段階、
ｂ．前記治療用モノクローナル抗体の標的及び第二のコンジュゲート部分を含む第二のコンジュゲートを用意する段階、
ｃ．第一のコンジュゲート及び第二のコンジュゲートを含む反応液を用意し、試料を該反応液と接触させ、それにより治療用モノクローナル抗体を含む可能性がある試料並びに第一のコンジュゲート及び第二のコンジュゲートを含む検出液が形成される段階、
ｄ．段階ｃにおいて試料を反応液と接触させた後（治療用モノクローナル抗体並びに第一のコンジュゲート及び第二のコンジュゲートを含む複合体が形成されたとき）の分光学的シグナルの変化を検出する段階、並びに
ｅ．治療用モノクローナル抗体の量を確定する段階
を含む方法を提供する。
【００４６】
好ましくは、段階ｅは、得られた結果を内部標準と比較することにより行われる。
【００４７】
内部標準は、既知（スパイク）含有量の特定治療用モノクローナル抗体薬を有する対応する試料に対して行われた上記方法により生じたシグナルをプロットする事前に作製された標準曲線により提供され得る。アッセイは、治療用モノクローナル抗体薬が異なればそれに応じて異なる内部標準を必要とする結合親和力の差異故に、治療用モノクローナル抗体薬が異なれば異なる形で機能を果たす。
【００４８】
本発明の一実施形態では、ヘモグロビンのレベルも測定し、血液試料中の治療用モノクローナル抗体及びそれらに対する抗体の相対レベルを評価するのに使用する。
【００４９】
第一のコンジュゲート及び第二のコンジュゲート
本発明によるコンジュゲート（第一及び第二）は、いくつかの実施形態では同一であることもあり、他の実施形態では対をなして機能することもある。
【００５０】
非常に好ましい実施形態では、コンジュゲートは、当該治療用モノクローナル抗体の標的で被覆した固体粒子である。これらの実施形態において、第一の部分及び第二の部分は固体粒子であり、当該治療用モノクローナル抗体並びに第一のコンジュゲート及び第二のコンジュゲートを含む複合体の形成により提供される検出可能なシグナルは、例えば検出液の濁度の変化であってもよい。驚くべきことに、かかる実施形態では、単一の治療用モノクローナル抗体がコンジュゲート（粒子）のうちの２つ以上と結合し、固定させることができ、それにより薬物濃度に比例する検出可能な網目を生成できることが観察された。
【００５１】
しかしながら、更なるリガンド、即ち、当該治療用モノクローナル抗体の標的のための結合部位以外の部位で個々の治療用モノクローナル抗体を共に結合させる、治療用モノクローナル抗体結合剤を加えると、アッセイの性能が大幅に増強されることが見出された。治療用モノクローナル抗体結合剤は、当該治療用モノクローナル抗体についての標的のための結合部位以外の部位で２つの治療用モノクローナル抗体を共に結合させ得るものでなくてはならない。従って、抗体は、好ましい治療用モノクローナル抗体結合剤である。かかる治療用抗体結合剤の一例として（下記実施例１参照）、当該治療用モノクローナル抗体の標的に対する結合部位以外の部位でほとんどの当該治療用モノクローナル抗体分子を共に結合させる、ポリクローナルウサギ抗ヒトＩｇＧＦｃを加えてもよい。
【００５２】
従って、非常に好ましい実施形態において、本発明の方法は、当該治療用モノクローナル抗体の標的についての結合部位以外の部位で個々の治療用モノクローナル抗体分子を共に結合させる、即ち、治療用モノクローナル抗体とその標的との間の結合を妨げることのない結合をすることができる治療用モノクローナル抗体結合剤の反応液への更なる添加を含む。好ましくは、かかる追加的リガンドは、当該治療用モノクローナル抗体の標的への結合において相互作用することのない治療用モノクローナル抗体分子の領域に向けて指向された治療用モノクローナル抗体に対するポリクローナル抗体である。かかる治療用モノクローナル抗体結合剤としては、当該治療用モノクローナル抗体のうちの２又はそれ以上と大なり小なり特異的に結合するが、当該治療用モノクローナル抗体の標的への結合において相互作用することのないものであれば、いかなる化合物又はタンパク質（好ましくは抗体）でも使用され得る。かかる結合剤は、抗Ｉｇ、例えばＦｃ特異的抗体又はＦａｂ特異的抗体、プロテインＧ、プロテインＡ、プロテインＨ、プロテインＬ、及びプロテインＡ／Ｇ融合タンパク質等から成るリストから選択され得る。従って、治療用モノクローナル抗体結合剤は、プロテインＡを用いたとき、ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ２と高い親和力で結合する等、特定サブタイプのＴＮＦアルファ阻害剤と特異的に結合するように選択され得る。
【００５３】
治療用モノクローナル抗体結合剤は、通常、特定の治療用モノクローナル抗体に特異的であることを意図したものではないことを理解すべきである。通常、治療用モノクローナル抗体結合剤は、抗体の同一の又は異なるクラス又はサブタイプ内における異なる特異性をもつ異なる抗体と結合することになる。
【００５４】
更に、重要なことに、治療用モノクローナル抗体結合剤、即ち、当該治療用モノクローナル抗体の標的に関する結合部位以外の部位で個々の治療用モノクローナル抗体分子を共に結合させることができる作用物質をアッセイに加えることにより、このアッセイで中和性抗薬物抗体を検出し、非中和性抗薬物抗体を無視することが可能となる。これは、治療用モノクローナル抗体を結合させることにより、アッセイの向上を促す人工的に加えられた非中和性抗体として治療用モノクローナル抗体結合剤それ自体が機能することによるものであると考えられる。
【００５５】
即ち、一実施態様において本発明は、治療用モノクローナル抗体に対する中和性抗体の特異的検出に関する。この特定のアッセイでは、治療用モノクローナル抗体結合剤は、好ましくはアッセイに加えられた治療用モノクローナル抗体に対する標的の量に対応する量（モル）で加えられるべきであり、即ち、アッセイにおける標的の量の少なくとも０．１倍（１０分の１）、例えばアッセイにおける標的の量の少なくとも０．５倍（２分の１）、例えばアッセイにおける標的の量の少なくとも１．０倍等の量で加えられるべきである。
【００５６】
本発明の非常に好ましい実施形態では、第一の部分及び第二の部分は両方とも、ポリスチレン粒子、ラテックス粒子、セファロース若しくはアガロースビーズ又は他の多糖ポリマーのビーズ、あるいは磁性若しくは常磁性ビーズ等の同一又は異なるサイズの固体粒子である。更に、非常に好ましい実施形態において、第一の部分及び第二の部分が、対になって機能するのではない部分、即ち、両方とも固体粒子であるとき、１つの治療用モノクローナル抗体を別の治療用モノクローナル抗体と連結することができる治療用モノクローナル抗体結合剤を使用するのが好ましい。
【００５７】
本発明の別の好ましい実施形態において、コンジュゲートは、対になって機能する第一のコンジュゲート及び第二のコンジュゲートを含む。かかる対は、例えば、酵素にコンジュゲートさせた治療用モノクローナル抗体の標的を含む第一のコンジュゲート及び該酵素の基質にコンジュゲートさせた治療用モノクローナル抗体の標的を含む第二のコンジュゲートである。従って、本発明の好ましい実施形態において、第一の部分は酵素であり、第二の部分は第一の部分についての基質である。かかる系の好ましい例としては、西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）系がある。
【００５８】
本発明の別の好ましい実施形態では、かかる対は、例えば、発蛍光団にコンジュゲートさせた治療用モノクローナル抗体の標的を含む第一のコンジュゲート及び該発蛍光団のモジュレータ（消光剤等）にコンジュゲートさせた治療用モノクローナル抗体の標的を含む第二のコンジュゲートである。従って、本発明の好ましい実施形態において、第一の部分は発蛍光団であり、第二の部分は第一の部分により与えられる蛍光のモジュレータである。かかる系の好ましい例としては、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒによる蛍光に基づくアルファスクリーン又はＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒによる化学発光に基づくＳＰＡＲＣＬ（Ｓｐａｔｉａｌ  Ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ  Ａｎａｌｙｔｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ（空間近接被検体試薬捕捉ルミネセンス））技術等の均一な抗体に基づく近接伸長アッセイがある。
【００５９】
本発明によると、発蛍光団は、反応及び検出液におけるその存在が、光輝性又は化学発光性のマーカ化合物等、検出可能な電磁放射線（光）の放出を誘発する作用物質又は手段を意味する。好ましい実施形態において、発蛍光団は、異なる波長の光と接触又は異なる波長の光で照射されている状態に応じて検出可能な光を放出する作用物質である。
【００６０】
スパイクアッセイ
驚くべきことに、本発明による方法により（患者由来の抗薬物抗体の存在／非存在を検出することにより）測定された治療用モノクローナル抗体の量の測定値を実証すること、及び／又は試料を既知量の各治療用モノクローナル抗体でスパイクする、間接的測定の使用により同アッセイにおいて試料中の患者由来の抗薬物抗体のレベルを検出し、定量することが可能であることが見出された。
【００６１】
得られた測定値を上記測定（スパイク量の治療用モノクローナル抗体を含む）の予想される結果と比較することにより、試料中の抗薬物抗体の存在／非存在を確証することができる。かかる中和性抗薬物抗体が存在するならば、治療用モノクローナル抗体の測定量は、スパイク試料で予測される（真の）量より少ない。非中和性抗薬物抗体が試料中に存在するならば、治療用モノクローナル抗体の測定量は、スパイク試料で予測される（真の）量と同一であるか、又はそれより多くなる。非中和性抗薬物抗体が存在し、内部標準測定のアッセイを含むアッセイが十分な（非中和性抗体の存在を大きく上回る）量の治療用モノクローナル抗体結合剤の添加を含む場合、治療用モノクローナル抗体の測定量は、スパイク試料で予測される（真の）量と同一である。
【００６２】
得られた複数の測定値を上記測定の対応する予測結果と比較することにより、試料中の抗薬物抗体の量を確証することができる（下記実施例２参照）。
【００６３】
その結果、驚くべきことに、当該治療用モノクローナル抗体及びその対応する抗薬物抗体の両方の存在を、単一アッセイで実現させることができる。
【００６４】
本発明の最も単純な実施態様において、試料中の当該治療用モノクローナル抗体の量は、（検出前に検出液又は試料に添加され得る）１又は複数の既知量の当該治療用モノクローナル抗体の存在下で確定され得、スパイク添加を含む当該治療用モノクローナル抗体の量が確定される。抗薬物抗体（ＡＤＡ）が存在しない場合、得られる結果は、最初に存在する量及びスパイク操作により添加された量を反映することになる。しかしながら、得られた結果がスパイク操作により添加された量から予測される量より少ない場合、中和性ＡＤＡの存在が確認される。更にその上、当該治療用モノクローナル抗体及びそのＡＤＡの両方の量は、次いで得られた結果を内部標準と比較することから数学的に確定され得る（下記実施例参照）。次いで、当該治療用モノクローナル抗体のスパイク添加量は、好ましくは試料中に存在する予測量より高用量であるか又は同程度とするべきである。更により好ましくは、試料を、異なるスパイク添加量の当該治療用モノクローナル抗体を含む２又はそれ以上のアッセイにかけてもよく、その場合当該治療用モノクローナル抗体及びそのＡＤＡの両方の真の量が、数学的に確定され得る（下記実施例参照）。
【００６５】
即ち、非常に好ましい実施形態において、本発明による方法は、段階ｄ．で行われる検出前に１又は複数の既知量の当該治療用モノクローナル抗体で試料又は反応液をスパイクする追加段階を含み、それにより試料中の当該治療用モノクローナル抗体の存在の測定の妥当性を確定する方法を提供し、そして更に試料中の当該治療用モノクローナル抗体に対する１又は複数の異なる抗体（ＡＤＡ）の存在及び量を確定する方法を提供する。
【００６６】
本発明の別の非常に好ましい実施態様として、試料中の当該治療用モノクローナル抗体の量を、本発明による第一のアッセイで確定してもよく、その後既知スパイク量の当該治療用モノクローナル抗体の存在下でアッセイを繰り返す（該スパイク量を検出液に添加するだけでもよく、次いで反応を再び分光測光的にアッセイしてもよい）。スパイク操作後に得られた結果がスパイク操作により添加された量を反映する場合、抗薬物抗体（ＡＤＡ）の非存在が確認される。しかしながら、得られた結果がスパイク操作により添加された量から予測される量より少ない場合、中和性ＡＤＡの存在が確認される。更にその上、当該治療用モノクローナル抗体及びそのＡＤＡの両方の量はまた、次いで既知添加量（スパイク量）及び対応する観察されたシグナルから数学的に確定され得る（下記実施例参照）。しかしながら、定量的確定は、少なくとも２つの異なるスパイク試料での測定値を必要とする。
【００６７】
即ち、次いで本発明は、血液試料中の治療用モノクローナル抗体の存在及び量を確定する方法、並びに／又は治療用モノクローナル抗体に対する抗体の存在及び量を確定する方法、並びに／又は治療用モノクローナル抗体の存在及び量を確定し、それに続いて対応する治療用モノクローナル抗体−抗体（ＡＤＡ）の存在及び量を確定する方法であって、
ａ．前記治療用モノクローナル抗体の標的及び第一のコンジュゲート部分を含む第一のコンジュゲートを用意する段階；
ｂ．前記治療用モノクローナル抗体の標的及び第二のコンジュゲート部分を含む第二のコンジュゲートを用意する段階；
ｃ．第一のコンジュゲート及び第二のコンジュゲートを含む反応液を用意し、試料を反応液に加えることにより、（治療用モノクローナル抗体を含む可能性がある）試料並びに第一のコンジュゲート及び第二のコンジュゲートを含む第一の検出液を形成する段階；
ｄ．第一の検出液の分光測光的測定により、段階ｃにおける試料の添加後（治療用モノクローナル抗体並びに第一のコンジュゲート及び第二のコンジュゲートを含む複合体が形成されたとき）の検出液のシグナル（例、吸光度又はルミネセンス）の分光測光的変化を検出する段階；並びに
ｅ．第一の検出液中の治療用モノクローナル抗体の見かけ上の量を確定する段階、
ｆ．既知量の治療用モノクローナル抗体を第一の検出液に添加することにより、既知量の治療用モノクローナル抗体、（治療用モノクローナル抗体を含む可能性がある）試料、第一のコンジュゲート及び第二のコンジュゲートを含む第二の検出液を形成する段階、
ｇ．第二の検出液の分光測光的測定により、段階ｆにおける既知量の治療用モノクローナル抗体の添加後（治療用モノクローナル抗体並びに第一のコンジュゲート及び第二のコンジュゲートを含む複合体が形成されたとき）の第二の検出液の分光測光的シグナル（例、吸光度又はルミネセンス）の変化を検出する段階；及び
ｈ．第二の検出液中の治療用モノクローナル抗体の見かけ上の量を確定する段階；並びに
ｉ．治療用モノクローナル抗体及び／又は治療用モノクローナル抗体抗体の存在又は非存在を確定する段階
を含む方法に関するものである。
【００６８】
段階ｅ）及びｈ）における確定は、単に既知量の治療用モノクローナル抗体を含む内部標準試料を参照することにより行われる。
【００６９】
（例、第一の検出液における治療用モノクローナル抗体の見かけ上の量を控除した）第二の検出液における治療用モノクローナル抗体の見かけ上の量が治療用モノクローナル抗体の添加（スパイク）量を反映する場合、第一の検出液における治療用モノクローナル抗体の見かけ上の量は、試料中に存在する治療用モノクローナル抗体の真の量を反映する。
【００７０】
（例、第一の検出液における治療用モノクローナル抗体の見かけ上の量を控除した）第二の検出液における治療用モノクローナル抗体の見かけ上の量が治療用モノクローナル抗体の添加（スパイク）量から予測される量より少ない場合、中和性治療用モノクローナル抗体抗体の存在が確認される。治療用モノクローナル抗体及び対応する中和性治療用モノクローナル抗体抗体（ＡＤＡ）の両方の真の量は、少なくとも２つの異なるスパイク試料についての測定を必要としながらも、（下記実施例で説明されているように）数学的に確定され得る。
【００７１】
（例、第一の検出液における治療用モノクローナル抗体の見かけ上の量を控除した）第二の検出液における治療用モノクローナル抗体の見かけ上の量が治療用モノクローナル抗体の添加（スパイク）量から予測される量を上回る場合、非中和性治療用モノクローナル抗体抗体の存在が確認される。治療用モノクローナル抗体及び対応する非中和性治療用モノクローナル抗体抗体（ＡＤＡ）の両方の真の量は、（下記実施例で説明されているように）数学的に確定され得る。
【００７２】
興味深いことに、本発明のアッセイは、「中和性」である治療用モノクローナル抗体抗体（ＡＤＡ）と「非中和性」であるＡＤＡとを区別することができる。中和性ＡＤＡは（標的と治療用モノクローナル薬との間の結合を阻害することにより）治療用モノクローナル薬の機能を阻害するため、これらのＡＤＡは特に興味深いものである。試料中における中和性抗体の存在のみが、シグナルを減少させる（濁度アッセイにおいて複合体の形成を減少させる）ことになり、非中和性抗体の存在は、場合によっては、シグナルを僅かに増加させる（例、濁度アッセイにおいて複合体の形成を増加させる）こともある。
【００７３】
一般的に、アッセイから非中和性抗体の影響を排除するのが好ましく、それにより遊離治療用モノクローナル抗体の真の量及び中和性治療用モノクローナル抗体抗体（ＡＤＡ）の存在／非存在を確定するための迅速で信頼できるアッセイが提供される。これは、試料の添加前に段階ｂ）において治療用モノクローナル抗体結合剤を反応液に加えることにより達成され得る。明らかに、本発明の上記実施態様では、内部標準参照測定もまたそれに応じて実施しなければならない。
【００７４】
本明細書で使用される場合治療用モノクローナル抗体抗体（ＡＤＡ）なる用語は、対象の生物学的試料から誘導され得、特定の治療用モノクローナル抗体を特異的に認識する複数の抗体を指す。ＡＤＡは、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＭ等、抗体の同一クラス又はアイソタイプ内に含まれる複数の抗体であり得る。従って、いくつかの実施形態では、検出又は測定されているＡＤＡは、ＩｇＧ及び／又はＩｇＥなど、抗体の特定アイソタイプ内に含まれる。典型的には、生物学的試料の特異的抗体は、生物学的試料の特異的抗体等、何らかの特異的成分に関して精製されたことはない。本明細書におけるＡＤＡの量の測定は、対象における（試料中、又は試料に対応する組織中等）治療用モノクローナル抗体に対する宿主由来の抗体の濃度の確定をいう。
【００７５】
即ち、本発明はまた、１又は複数の血液試料中の１又は複数の異なる治療用モノクローナル抗体（ＡＤＡ）の存在及び量を確定する方法であって、
ａ．前記治療用モノクローナル抗体の標的及び第一のコンジュゲート部分を含む第一のコンジュゲートを用意する段階；
ｂ．前記治療用モノクローナル抗体の標的及び第二のコンジュゲート部分を含む第二のコンジュゲートを用意する段階；
ｃ．第一のコンジュゲート及び第二のコンジュゲートを含む反応液を用意し、既知量の治療用モノクローナル抗体を該反応液に添加し、試料を反応液と接触させることにより、試料（治療用モノクローナル抗体を含む可能性がある）、スパイク量の治療用モノクローナル抗体、第一のコンジュゲート及び第二のコンジュゲートを含む検出液が形成される段階（スパイク量の治療用モノクローナル抗体は、試料又は反応液に添加され得る）；
ｄ．段階ｃの後（治療用モノクローナル抗体並びに第一のコンジュゲート及び第二のコンジュゲートを含む複合体が形成されたとき）のシグナルの分光学的変化を検出する段階；並びに
ｅ．得られた結果を内部標準と比較することにより、治療用モノクローナル抗体の量を確定する段階；
ｆ．得られた測定値を、治療用モノクローナル抗体の既知添加量から予測される測定値と比較することにより、治療用モノクローナル抗体抗体の存在又は非存在を確定する段階；
を含む方法に関するものである。
【００７６】
反応液への試料及びスパイクの添加後に予測されるものより少ないシグナルの変化は、治療用モノクローナル抗体の存在を示す。
【００７７】
好ましい実施形態では、既知量の治療用モノクローナル抗体の第二のスパイクを伴って段階ａ〜ｆの少なくとも１回の反復を実施するか、又は別法として、既知量の治療用モノクローナル抗体の第二のスパイクを用意し、段階ｄの後に第二のスパイクを検出液に添加し、それに続いて第二のスパイクの添加によりもたらされたシグナルの変化を検出し、試料中の治療用モノクローナル抗体の量を確定する追加段階ｇ及びｈを含めて実施する。
【００７８】
本発明の別の実施態様では、第一のスパイクで添加された治療用モノクローナル抗体とは異なる治療用モノクローナル抗体を含む第二のスパイクを添加することにより、第二の治療用モノクローナル抗体の潜在的中和の評価が可能となる。その結果、患者に、２つの異なる治療用モノクローナル抗体間での処置の切り替えが有望であると予測されるかどうかを通知することもあり得る（例、患者の血液中にＡＤＡが存在する場合）。
【００７９】
本発明による方法は種々のタイプの治療用モノクローナル抗体で普遍的に遂行され得るため、本発明による方法は、個々の患者における処方薬（薬物）のレベルの測定のための臨床で直接適用可能なユニバーサルアッセイの提供に非常に適している。
【００８０】
従って、本発明の好ましい実施形態において、治療用モノクローナル抗体は、処方薬である。現在好ましい処方薬は、エタネルセプト（エンブレル）、インフリキシマブ（レミケード）、アダリムマブ（ヒュミラ）、セルトリズマブ・ペゴル（シムジア）、及びゴリムマブ（シンポニー）の中から選択される。
【００８１】
しかしながら、本発明のある特定の実施態様では、ＴＮＦ−アルファを標的とする治療用モノクローナル抗体は好ましくなく、本発明のある特定の実施態様に含まれることはない。
【００８２】
一実施形態において、本発明は、試料中の治療用モノクローナル抗体の量を確定するため、及び／又は試料中の治療用モノクローナル抗体の量を確定するためのパーツのキットであって、
ａ．前記治療用モノクローナル抗体の標的及び第一のコンジュゲート部分を含む第一のコンジュゲート；
ｂ．前記治療用モノクローナル抗体の標的及び第二のコンジュゲート部分を含む第二のコンジュゲート；並びに
ｃ．それぞれ既知量の治療用モノクローナル抗体薬を含む１又は複数の標準溶液；
を含むパーツのキットである。
【００８３】
本発明による検出測定のために好ましい装置は、２００μｌ以下の試料検出液中で生成又は改善されたシグナルを検出することができる装置である。かかる装置には、例えば、Ａｔｏｌｙｚｅｒ（登録商標）並びに例えばＡｔｏｎｏｍｉｃｓ  Ａ／Ｓの名による欧州特許第２２８１６３１号及び関連出願による装置等の同様の装置がある。
【００８４】
好ましくは、パーツのキットは、好ましくは少なくとも２つの異なる治療用モノクローナル抗体を含む少なくとも２つの異なるスパイク標準溶液等、複数の治療用モノクローナル抗体の標準溶液（スパイク溶液）を含む。好ましい実施形態において、パーツのキットは、少なくとも３つ、例えば少なくとも４つの異なる治療用モノクローナル抗体薬を含む少なくとも３つ、例えば少なくとも４つの異なるスパイク標準溶液を含む。
【００８５】
本発明の非常に好ましい実施形態では、パーツのキットは、治療用モノクローナル抗体の少なくとも１つの標準スパイク溶液を含む。
【００８６】
好ましい実施形態では、パーツのキットはまた、治療用モノクローナル抗体結合剤、即ち個々の治療用モノクローナル抗体を共に結合させることができるリガンドを含む。好ましくは、かかる追加的リガンドは、ポリクローナル抗体、又は治療用モノクローナル抗体の標的への結合において相互作用することのない治療用モノクローナル抗体分子の領域に向けて指向された抗体である。
【００８７】
ＡＤＡを測定するとき、非中和性ＡＤＡに対し中和性ＡＤＡを識別することが重要である。患者らの不応答者プロファイルを、この特許出願に記載されたスパイク回収方法と組み合わせると、特定の薬物に対する臨床応答が不十分な患者に処置計画を提案することが可能となる。
【００８８】
本発明によるアッセイはまた、潜在的中和性ＡＤＡのプールにおけるＩｇＧ４抗体の測定を含み得る。ＩｇＧ４抗体を検出することは、ＩｇＧ４抗体が１価であるため、常に「架橋」に基づくＥＬＩＳＡについての難題であった。
【００８９】
別の実施形態において、本発明は、治療用モノクローナル抗体薬で処置されている患者における疾患の処置方法であって、患者由来の試料に対し本発明による方法を実施することにより、該患者が、該治療用モノクローナル抗体薬の改変された用法又は代替的治療用モノクローナル抗体薬又は代替的医薬治療のいずれを必要とするかを確定する方法に関するものである。
【００９０】
本発明による方法はまた、特定の治療用モノクローナル抗体処置に関する一次不応答者又は低応答者を識別するのにも使用され得る。例えば、これらは、治療用モノクローナル抗体に対する先天的又は先に発現した免疫グロブリン応答を偶然有する患者であり得る。
【００９１】
即ち、別の実施形態において、本発明は、患者における疾患の最適な治療用モノクローナル抗体薬処置を識別する方法であって、患者由来の試料に対し本発明による方法を実施することにより、該患者が、該治療用モノクローナル抗体薬の改変された用法又は代替的治療用モノクローナル抗体薬又は代替的医薬治療のいずれを必要とするかを確定する方法に関するものである。
【００９２】
本発明による方法はまた、例えば二次応答不全の患者を識別するのにも使用され得る。二次応答不全は無症候性であり得、即ち唯一の症状は、処置の有効性が低下するか又は効果が無くなることさえあることである。この場合、本発明による方法の用途として、患者又は医療従事者が該処置の有効性の低下に気づく前に二次応答不全の出現を同定するのに用いることができる。正確で有効なインビボ濃度の達成を確実にするため、より高用量の処置が適用されることもあり、又は代替的処置が選択され得るか、又はそれらの組み合わせもあり得る。
【００９３】
従って、本発明は、患者における処置奏効の欠如が治療用モノクローナル抗体に対する患者由来の抗体の形成に因るものであるか否かを確定する方法を含む。即ち、本発明は、（本明細書で言及されている方法の段階を用いて）治療用モノクローナル抗体で処置可能な疾患に罹患している患者に適切な薬物処置を選択する方法を提供する。
【実施例】
【００９４】
アッセイの原理
ＴＮＦα（ヒト）を、カルボキシル化ポリスチレン粒子上に固定する（Ｒ１）。ＴＮＦ−アルファ阻害剤の薬物は、ＴＮＦα被覆粒子に結合し、粒子凝集を促進させる。（ＴＦアルファ阻害剤の薬物の存在に応答した）粒子凝集反応を高めるため、ポリクローナルウサギ抗ヒトＩｇＧＦｃを添加すると（Ｒ２）、これがＴＮＦ−アルファ阻害剤分子と相互作用する。
【００９５】
試薬１（反応液）：ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２、１０ｍｍｏＬ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＮａＣｌ、カルボキシル化ポリスチレン粒子に結合させたヒトＴＮＦα分子、デタージェント、及び安定剤。
試薬２：ホウ酸緩衝液４．６ｍｍｏｌ／Ｌ。ポリクローナルウサギ抗ヒトＩｇＧＦｃ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＮａＣｌ、デタージェント、及び安定剤。
【００９６】
実施例１；治療用モノクローナル抗体アッセイ
【００９７】
実施例１の目的は、別々のアッセイ（エンブレルアッセイ及びヒュミラアッセイ）で粒子に結合された同一のアフィニティーリガンド（ＴＮＦα）を有する（粒子強化免疫比濁測定の実施形態で）開発されたアッセイ原理を用いて、異なるＴＮＦα薬（エンブレル及びヒュミラ）を測定することができるかどうかを調べることであった。
【００９８】
試料
いかなる種類の薬物又は抗薬物抗体も含有しないヒト血漿中でエタネルセプトをスパイクし、粒子強化免疫比濁方法を用いて測定を行った。データを表２に示す。
【００９９】
いかなる種類の薬物又は抗薬物抗体も含有しないヒト血漿中でアダリムマブ（ヒュミラ）をスパイクし、粒子強化免疫比濁方法を用いて測定を行った。データを表２に示す。
【０１００】
アッセイの原理
アッセイ
ＴＮＦ−アルファ阻害剤を含有する試料を、試薬１を含有する反応液に添加した。試薬２を該反応物に添加し、５７０ｎｍでの吸光度における展開を測定した。
【０１０１】
表２
粒子強化免疫比濁方法を用いて、アダリムマブ及びエタネルセプトを測定した。
【表２】
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【０１０２】
表２が示すように、２つのＴＮＦα阻害性抗炎症薬のそれぞれが、免疫比濁アッセイ設定において異なる濃度では異なるシグナルを発するが、これはポリスチレン粒子に固定されたＴＮＦα分子に対する異なる親和力に起因する可能性が最も高い。
【０１０３】
アダリムマブ吸光度データは、ｙ＝０．０２０２ｘ＋０．００１１（Ｒ２＝０．９９７６）の線形応答を示した。エタネルセプトの吸光度データは、ｙ＝０．０３７８ｘ＋０．００２９（Ｒ２＝０．９９８９）の線形応答を示した。
【０１０４】
この実施例は、ヒト試料（抗薬物抗体不含有）中の異なるＴＮＦ−アルファ阻害剤の濃度の正確な測定が記載された方法の使用により可能であることを示す。
【０１０５】
表２のデータは、アダリムマブ及びエタネルセプトについての内部標準として見られ得る。
【０１０６】
試料中にＡＤＡが存在しないとき、未知濃度のアダリムマブ／エタネルセプトを含む試料に対するアッセイの初回実施で、当然、表２の標準を参照することにより試料中での真の濃度と相互関係を示す分光測光的表示数値が容易に与えられるはずである。
【０１０７】
しかしながら、試料中における中和性ＡＤＡの存在／非存在を検出し（そしてそれにより初回測定の信頼性を確認／反証し）、試料に既知量のアダリムマブ／エタネルセプトをスパイクし、そしてスパイクされた試料に対しても測定を実施することは必要である。中和性ＡＤＡが存在する場合、スパイク量のアダリムマブ／エタネルセプトを含む試料に対しアッセイを実施すると、当然、表２の標準を参照することにより試料中の真の濃度から予測される数値より低い（より低い曲線の傾き）分光測光的表示数値が与えられるはずである。
【０１０８】
アダリムマブ／エタネルセプト及び中和性ＡＤＡの量は、下記に示すように数学的に確定され得るが、異なるスパイク試料の少なくとも２つの測定値が要求され得る。
【０１０９】
実施例２；抗薬物抗体（ＡＤＡ）の存在の測定
【０１１０】
実施例２の目的は、本方法を用いてＡＤＡの存在を検出できるかどうかを調べることであった。
【０１１１】
スパイク及び回収操作は、イムノアッセイの分析的妥当性を実証するために使用され得る。被検体について競合する他種の結合剤が存在せず、既知量の被検体をヒト血液、血清又は血漿試料に添加する場合、スパイク試料の後続分析は、典型的には＋／−５％であるアッセイのエラー限界内で被検体のスパイク量の１００％をもたらすはずである。
【０１１２】
例えば、２μｇ／ｍＬの薬物を正常ヒト試料にスパイクした場合、１．９０μｇ／ｍＬ〜２．１０μｇ／ｍＬが後続分析で見出されると予測される。
【０１１３】
しかしながら、既知量の薬物を、数か月間この薬物が皮下注射されている患者（又は患者からの試料）にスパイクすると、ＡＤＡの存在故にかなり低下した回収率を与える可能性がある。
【０１１４】
２又はそれ以上のスパイク及び回収ポイントにより、ＡＤＡの濃度及びそれらの平均親和定数の定量的確定が可能となり得る。
【０１１５】
抗体とそれらの標的被検体など結合性タンパク質間の相互作用は、質量作用の法則（等式１）により規定される
１．Ｋ＝Ｃ／（Ａｇ）（Ａｂ）
【０１１６】
式中、Ｃは抗体−被検体複合体のモル濃度であり、Ａｇは遊離又は未結合被検体の濃度であり、Ａｂは、被検体と複合体中で結合していない抗体の濃度である。
【０１１７】
この等式を、全被検体（Ａｇ０）のうち複合体中で結合されたものの割合であるｘに関して書き直すことができる。
２．Ｃ＝ｘ  Ａｇｏ、ここで、
３．Ａｇ＝（１−ｘ）Ａｇｏ
４．Ａｂ＝Ａｂｏ−ｘＡｇｏ
【０１１８】
代入すると、等式５が得られる。
５．Ｋ＝ｘＡｇｏ／（（１−ｘ）Ａｇｏ＊（Ａｂｏ−ｘＡｇｏ））
【０１１９】
これは等式６に単純化される。
６．Ｋ＝ｘ／（１−ｘ）（Ａｂｏ−ｘＡｇｏ）
【０１２０】
掛けて通分し、移項すると、等式７が得られる。
７．（１−ｘ）＊（Ａｂｏ−ｘＡｇｏ）＝ｘ／Ｋ、これをさらに等式８に簡約することができる。
８．Ａｂｏ−ｘ（Ａｇｏ＋Ａｂｏ）＋ｘ＾２Ａｇｏ＝ｘ／Ｋ、次いで等式９が導かれる。
９．Ｘ＾２Ａｇｏ−ｘ（Ａｇｏ＋Ａｂｏ＋１／Ｋ）＋Ａｂｏ＝０
６．Ｋ＝ｘ／（１−ｘ）（Ａｂｏ−ｘＡｇｏ）
【０１２１】
調べてみると、等式９は、二次方程式の形態であり、等式１０で与えられる解を有する。
１０．Ｘ＝（（ｂ＾２−４ａｃ）１／２）／＠＝２ａ
式中、ａ＝Ａｇｏ、ｂ＝Ａｇｏ＋Ａｂｏ＋１／Ｋ、及びｃ＝Ａｂｏ
【０１２２】
表３；Ｋ及びＡｂｏの想定値について、この表は、様々なレベルの全薬物（Ａｇｏ）についての結合薬物及び遊離薬物の量を示す。
【表３】
2019522199.tif 000016
【０１２３】
抗薬物抗体の存在下では、遊離薬物のみ本アッセイで測定することができる。抗薬物抗体複合体で結合されている薬物は、立体障害故に別の結合性相互作用に関与することはできない。
【０１２４】
薬物の総量が８μｇ／ｍＬである状況では、遊離薬物の見かけ上の量は１．１８μｇ／ｍＬとして測定されることになる。
【０１２５】
追加の４μｇ／ｍＬの薬物にてスパイクするとなれば、全薬物濃度は現状で１２μｇ／ｍＬとなる。しかしながら遊離薬物レベルしか見ることができない観察者であれば、１．１８μｇ／ｍＬ＋４μｇ／ｍＬスパイク量、即ち５．１８μｇ／ｍＬではなく、１．９０μｇ／ｍＬのみ検出することになろう。内因性及びスパイクの両方の薬物の大多数が抗薬物複合体中で拘束されているため、目にするのは予測される薬物レベルの３６．６％に過ぎない。
【０１２６】
その結果、本方法を用いることにより、試料中のＡＤＡの真のレベルを評価することができる。
【０１２７】
実施例３；薬物アッセイ手順（ＩＬ１７Ａ）
【０１２８】
実施例３の目的は、異なる治療用モノクローナル抗体（ＩＬ１７Ａ標的化薬物）を開発されたアッセイ原理を用いて（粒子強化免疫比濁測定法の実施形態で）測定することができるかどうかを調べることであった。
【０１２９】
アッセイの原理
ＩＬ１７Ａ（ヒト）を、カルボキシル化ポリスチレン粒子上に固定する（Ｒ１）。
【０１３０】
ＩＬ１７Ａ阻害剤の薬物は、ＩＬ１７ａ被覆粒子に結合し、粒子凝集を促進させる。（ＩＬ１７Ａ阻害剤の薬物の存在に応答した）粒子凝集反応を高めるため、ポリクローナルウサギ抗ヒトＩｇＧＦｃを添加すると（Ｒ２）、これがＩＬ１７Ａ阻害剤分子と相互作用する。
【０１３１】
試薬１：ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２、１０ｍｍｏＬ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＮａＣｌ、カルボキシル化ポリスチレン粒子に結合させたヒトＩＬ１７Ａ分子、デタージェント、及び安定剤。
試薬２：ホウ酸緩衝液４．６ｍｍｏｌ／Ｌ。ポリクローナルウサギ抗ヒトＩｇＧＦｃ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＮａＣｌ、デタージェント、及び安定剤。
【０１３２】
ＩＬ１７Ａ薬物アッセイ手順
実施例３の目的は、別々のアッセイ（ブロダルマブ、セクキヌマブ、又はイキセキズマブなど）で粒子に結合された同一のアフィニティーリガンド（ＩＬ１７Ａ）を有する（粒子強化免疫比濁測定の実施形態で）開発されたアッセイ原理を用いて、ＩＬ１７Ａ薬（ブロダルマブ又はセクキヌマブなど）を測定することができるかどうかを調べることであった。
【０１３３】
試料
いかなる種類のＩＬ１７Ａ抗体又は抗薬物抗体をも含有しないヒト血漿中でＩＬ１７Ａに対する抗体（ＩＬ１７Ａ−Ａｂ１）をスパイクし、粒子強化免疫比濁方法を用いて測定を行った。データを表２に示す。
【０１３４】
いかなる種類のＩｌ１７Ａ抗体又は抗薬物抗体をも含有しないヒト血漿中でＩＬ１７Ａに対する抗体（ＩＬ１７Ａ−Ａｂ２）をスパイクし、粒子強化免疫比濁方法を用いて測定を行った。データを表２に示す。
【０１３５】
アッセイの原理
アッセイ
ＩＬ１７Ａ阻害剤の抗体ＩＬ１７Ａ−Ａｂ１又はＩＬ１７Ａ−Ａｂ２を含む血漿試料を、試薬１を含む反応液に添加した。試薬２を該反応物に添加し、５７０ｎｍでの吸光度における展開を測定した。
【０１３６】
表４
粒子強化免疫比濁方法を用いて、ＩＬ１７Ａ−Ａｂ１及びＩＬ１７Ａ−Ａｂ２を測定した。
【表４】
2019522199.tif 000017
【０１３７】
ＩＬ１７Ａ−Ａｂ１の吸光度データは、ｙ＝０．０３９ｘ＋０．００３６（Ｒ２＝０．９９９４）の線形応答を示した。ＩＬ１７Ａ−Ａｂ２の吸光度データは、ｙ＝０．０２０５ｘ＋０．０００９（Ｒ２＝０．９９７８）の線形応答を示した。
【国際調査報告】
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