(57)【要約】  掻痒の処置に使用するための化合物であって、一般式（１ａ）、一般式（１ｂ）または一般式（１ｃ）を含む化合物が提供される。本発明の化合物は、陽性アロステリックα２および／またはα３ＧＡＢＡＡ受容体モジュレーターである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
掻痒の処置に使用するための化合物であって、前記化合物が一般式（１ａ）、一般式（１ｂ）または一般式（１ｃ）を含み、
【化１】
2019507736.tif 000016
特に式（１ａ）および（１ｂ）、より特定的には（１ａ）を含み、式中、
−  Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は互いに独立して−Ｃ、−Ｎ、−Ｓまたは−Ｏであり、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５のうち少なくとも２つは−Ｎであり、
−  Ｙ１およびＹ２は互いに独立して−Ｃまたは−Ｎであり、
−  Ｒ１ｍのｍは１であり、
−  Ｒ１は非置換フェニル、Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＣＮで置換されたフェニル、置換または非置換ビフェニル、または−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３であり、Ｒ３は置換または非置換アリール、または５〜６員環ヘテロアリール、特にＣ６アリールまたは６員環ヘテロアリール、より特定的には６員環ヘテロアリールであり、
−  Ｒ２ｎのｎは１または２であり、
−  各Ｒ２は他のＲ２から独立して置換または非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、置換または非置換６員環ヘテロアリール、ハロゲン、特に−Ｆ、または−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４であり、Ｒ４は置換または非置換５員環または６員環ヘテロアリール、特に５員環ヘテロアリールであり、
−  Ｚ１、Ｚ３、Ｚ４およびＺ５は互いに独立して−Ｃ、−Ｎ、−Ｓまたは−Ｏであり、特にＺ１は−Ｃまたは−Ｎであり、Ｚ３およびＺ４は−Ｃ、−Ｎ、−Ｓまたは−Ｏであり、
−  Ａ１およびＡ２は互いに独立して−Ｃ、−Ｎまたは−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７’であり、Ａ３は−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７’であり、−Ｒ７’はＣ１〜Ｃ６−アルキルであり、特にＡ１およびＡ２は互いに独立して−Ｃまたは−Ｎであり、Ａ３は−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７’であり、Ｒ７’はＣ１〜Ｃ６−アルキル、特にＣ１〜Ｃ２−アルキル、より特定的にはＣ２−アルキルであり、
−  Ｒ５ｌのｌは１または２であり、
−  各Ｒ５は互いに独立してＣ１〜Ｃ４アルキニルまたはハロゲンであり、
−  Ｒ６ｋのｋは１、２、３または４、特に１または２であり、
−  各Ｒ６は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、酸素または水素、特に置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、より特定的には置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリールであり、
−  Ｒ１２のｐは１または２、特に１であり、
−  Ｒ１２は互いに独立して置換または非置換Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、Ｉ、Ｂｒ、ＣｌまたはＦであり、
−  Ｒ１３のｑは１、２、３または４であり、
−  Ｒ１３は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、酸素または水素である、
化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の掻痒の処置に使用するための化合物であって、前記化合物が陽性アロステリックα２および／またはα３ＧＡＢＡＡ受容体モジュレーターである、化合物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の掻痒の処置に使用するための化合物であって、前記化合物が一般式（１ａ）、一般式（１ｂ）または一般式（Ｉｃ）、特に式（１ａ）および（１ｂ）、より特定的には（１ａ）を含み、式中、
−  Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は互いに独立して−Ｃまたは−Ｎであり、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５のうち少なくとも２つは−Ｎであり、
−  Ｙ１およびＹ２は互いに独立して−Ｃまたは−Ｎであり、
−  Ｒ１ｍのｍは１であり、
−  Ｒ１は非置換フェニル、Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＣＮで置換されたフェニル、置換または非置換ビフェニル、または−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３であり、Ｒ３は置換または非置換アリール、または５〜６員環ヘテロアリール、特にＣ６アリールまたは６員環ヘテロアリール、より特定的には６員環ヘテロアリールであり、
−  Ｒ２ｎのｎは１または２であり、
−  各Ｒ２は他のＲ２から独立して置換または非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、置換または非置換６員環ヘテロアリール、ハロゲン、特に−Ｆ、または−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４であり、Ｒ４は置換または非置換５員環または６員環ヘテロアリール、特に５員環ヘテロアリールであり、
−  Ｚ１、Ｚ３、Ｚ４およびＺ５は互いに独立して−Ｃまたは−Ｎであり、
−  Ａ１およびＡ２は互いに独立して−Ｃまたは−Ｎであり、Ａ３は−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７’であり、Ｒ７’はＣ１〜Ｃ４−アルキル、特にＣ１〜Ｃ２−アルキル、より特定的にはＣ２−アルキルであり、
−  Ｒ５ｌのｌは１または２であり、
−  各Ｒ５は互いに独立してＣ１〜Ｃ４アルキニルまたはハロゲンであり、
−  Ｒ６ｋのｋは１、２、３または４、特に１または２であり、
−  各Ｒ６は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、酸素または水素、特に置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、より特定的には置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリールであり、
−  Ｒ１２のｐは１であり、
−  Ｒ１２は置換または非置換Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、Ｉ、Ｂｒ、ＣｌまたはＦであり、
−  Ｒ１３のｑは１、２、３または４であり、
−  Ｒ１３は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、酸素または水素である、
化合物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物であって、前記化合物が、一般式（２）、（３）、（４）、（５）、（Ｉｃ）または（７）、特に（２）、（３）、（４）、（５）または（７）、より特定的には（２）、（３）、（４）または（５）を含み、
【化２】
2019507736.tif 000017
Ｙ１、Ｙ２、Ｚ４、Ｚ５、Ｒ１ｍのｍ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ２ｎのｎ、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ１２のｐ、Ｒ１２、Ｒ１３のｑ、Ｒ１３、Ｒ５ｌのｌ、Ｒ５、Ｒ６ｋのｋ、Ｒ６、Ａ１、Ａ２およびＡ３は上記定義と同じ意味を有する、化合物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物であって、前記化合物が、一般式（２ａ）、（３ａ）、（４ａ）、（５ａ）、（５ｂ）、（Ｉｃ）または（７ａ）、特に（２ａ）、（３ａ）、（４ａ）、（５ａ）、（５ｂ）または（７ａ）、より特定的には（２ａ）、（３ａ）、（４ａ）、（５ａ）または（５ｂ）を含み、
【化３】
2019507736.tif 000018
Ｒ１ｍのｍ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ２ｎのｎ、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ１２のｐ、Ｒ１２、Ｒ１３のｑ、Ｒ１３、Ｒ５ｌのｌ、Ｒ５、Ｒ６ｋのｋおよびＲ６は上記定義と同じ意味を有する、化合物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物であって、
−  Ｒ１のｍは１であり、Ｒ１は、
−  非置換フェニル、
−  置換基としてＣ１〜Ｃ４−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＣＮを含む置換フェニル（特に前記置換フェニルは置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む）、
−  非置換ビフェニル、
−  置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、または
−  置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニル、または
−  −（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３（Ｒ３はピリジン）である、
化合物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物であって、
−  Ｒ２のｎは１または２であり、Ｒ２は、
−  非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキル、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチル、または
−  −Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４（Ｒ４は置換または非置換５員環ヘテロアリール、特にＲ４は置換または非置換トリアゾール）、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコール、より特定的にはイソプロパノール、
−  ハロゲン、特に−Ｆ、
−  非置換６員環ヘテロアリール、特にピリジンである、
化合物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物であって、
−  Ｒ２のｎは２であり、
−  １つのＲ２は、
−  非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキル、または
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチルであり、
−  他のＲ２は、
−  −Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４（Ｒ４は置換または非置換５員環ヘテロアリール、特に置換または非置換トリアゾール）であり、または
−  １つのＲ２は、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコール、より特定的にはイソプロパノールであり、
−  他のＲ２は、
ハロゲン、特に−Ｆである、
化合物。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物であって、Ｒ２のｎは１であり、Ｒ２は非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコール、または非置換６員環ヘテロアリール、特にピリジンであり、特にＲ２はＣ３アルコール、より特定的にはイソプロパノールである、化合物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物であって、
−  Ｒ５のｌは１であり、Ｒ５は、
−  Ｉ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、特にＩ、または
−  Ｃ２アルキニルである、
化合物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物であって、Ｒ６のｋは１であり、Ｒ６は置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、特に置換または非置換Ｃ６アリール、５〜６員環の置換または非置換ヘテロアリール、より特定的にはフェニル、ＦもしくはＣｌで置換されたフェニル、チオフェンまたはピリジンである、
化合物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物であって、前記化合物が、一般式（２ａ’）、（３ａ’）、（４ａ’）、（５ａ’）、（５ｂ’）、（ＶＩ）または（７ａ’）、特に（２ａ’）、（３ａ’）、（４ａ’）、（５ａ’）、（５ｂ’）または（７ａ’）、さらにより特定的には（２ａ’）、（３ａ’）、（４ａ’）、（５ａ’）または（５ｂ’）を含み、
【化４】
2019507736.tif 000019
−  Ｒ１０は置換または非置換アリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、または水素、特に水素であり、
−  Ｒ１１は置換または非置換アリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、または水素、特に置換または非置換アリール、より特定的にはフェニルであり、
−  Ｒ１２のｐは１であり、Ｒ１２はＩ、Ｂｒ、ＣｌまたはＦ、特にＣｌであり、
−  Ｒ１、Ｒ３、Ｒ２ｎのｎ、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２のｐ、Ｒ１２、Ｒ５、Ｒ６ｋのｋ、およびＲ６は上記定義と同じ意味を有する、
化合物。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物であって、前記化合物が、一般式（２ａ’）、（３ａ’）、（４ａ’）、（５ａ’）、（５ｂ’）、（ＶＩ）または（７ａ’）、特に（２ａ’）、（３ａ’）、（４ａ’）、（５ａ’）、（５ｂ’）または（７ａ’）、さらにより特定的には（２ａ’）、（３ａ’）、（４ａ’）、（５ａ’）または（５ｂ’）を含み、
式中、
−  Ｒ１は、
−  式（２ａ’）の場合、
−  置換または非置換Ｃ６アリール、特に
−  非置換フェニル、
−  置換基としてＣ１〜Ｃ４−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＣＮを含む置換フェニル（特に前記置換フェニルは置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む）であり、
−  式（３ａ’）、（５ａ’）または（５ｂ’）の場合、
−  置換または非置換ビフェニル、特に
−  非置換ビフェニル、
−  置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニルであり、または
−  式（４ａ’）の場合、
−  −（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３（Ｒ３は置換または非置換Ｃ６ヘテロアリール）であり、特に
−  Ｒ３はピリジンであり、
−  Ｒ５は、
−  式（７ａ’）の場合、
−  Ｃ２アルキニルまたはＩ、特にＣ２アルキニルであり、
式中、Ｒ２ｎ、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２ｐおよびＲ６ｋは上記定義と同じ意味を有する、化合物。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物であって、前記化合物が、一般式（２ａ’’）、（３ａ’’）、（４ａ’’）、（５ａ’’）、（５ｂ’’）、（ＶＩａ’’）または（７ａ’’）、特に（２ａ’’）、（３ａ’’）、（４ａ’’）、（５ａ’’）、（５ｂ’’）または（７ａ’’）、より特定的には（２ａ’’）、（３ａ’’）、（４ａ’’）、（５ａ’’）または（５ｂ’’）を含み、
【化５】
2019507736.tif 000020
式中、Ｒ１は上記定義と同じ意味を有し、
−  Ｒ７は、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチル、
−  非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキル、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコールであり、特に
−  Ｒ７は、式（２ａ’’）の場合、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチル、または
−  非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキルであり、または
−  Ｒ７は、式（５ａ’’）または（５ｂ’’）の場合、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコールであり、
−  Ｒ８は、
−  −Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４（Ｒ４は置換または非置換５員環ヘテロアリール、特に置換または非置換トリアゾール）、または  
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコールであり、特に
−  Ｒ８は、式（２ａ’’）の場合、
−  −Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４（Ｒ４は置換または非置換５員環ヘテロアリール、特に置換または非置換トリアゾール）であり、または
−  Ｒ８は、式（３ａ’’）の場合、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコールであり、
−  Ｒ９は、
−  非置換Ｃ６ヘテロアリール、特にピリジン、または  
−  ハロゲン、特に−Ｆであり、
−  Ｒ９は、式（４ａ’’）の場合、
−  非置換６員環ヘテロアリール、特にピリジン、または
−  Ｒ９は、式（５ｂ’’）の場合、
−  ハロゲン、特に−Ｆであり、
−  Ｒ１０は、
−  Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたは水素、特に水素であり、
−  Ｒ１１は置換または非置換アリールまたはヘテロアリール、特にピリジン、チオフェン、フェニルまたはＦもしくはＣｌで置換されたフェニルであり、
−  Ｒ１４は置換または非置換アリールまたはヘテロアリール、特に置換または非置換アリール、より特定的にはフェニルであり、
−  Ｒ１２はＩ、Ｃｌ、ＢｒまたはＦ、特にＣｌであり、
−  Ｒ５はＣ２アルキニルまたはＩ、特にＣ２アルキニルである、
化合物。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物であって、前記化合物が、一般式（２ａ’’）、（３ａ’’）、（４ａ’’）、（５ａ’’）または（５ｂ’’）を含み、
【化６】
2019507736.tif 000021
式中、
−  式（２ａ’’）の場合、
−  Ｒ１は、
−  非置換フェニル、
−  置換基としてＣ１〜Ｃ４−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＣＮを含む置換フェニル（特に前記置換フェニルは置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む）であり、
−  Ｒ７は、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチル、または
−  非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキルであり、および  
−  Ｒ８は、
−  −Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４（Ｒ４は置換または非置換５員環ヘテロアリール、特に置換または非置換トリアゾール）であり、
−  式（３ａ’’）の場合、
−  Ｒ１は、
−  非置換ビフェニル、
−  置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、または
−  置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニルであり、
−特にＲ１は、
−  置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであり、
−  Ｒ８は、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコール、より特定的にはイソプロパノールであり、
−  式（４ａ’’）の場合、
−  Ｒ１は、
−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３（Ｒ３は非置換６員環ヘテロアリール、特にＲ３はピリジン）であり、および
−  Ｒ９は、
−  非置換Ｃ６ヘテロアリール、特にピリジンであり、
−  式（５ａ’’）の場合、
−  Ｒ１は、
−  非置換ビフェニル、
−  置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニルであり、
−特にＲ１は、
−  置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニルであり、
−  Ｒ７は、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコール、より特定的にはイソプロパノールであり、
−  式（５ｂ’’）の場合、
−  Ｒ１は、
−  非置換ビフェニル、
−  置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニルであり、
−特にＲ１は、
−  置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニルであり、
−  Ｒ７は、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコール、より特定的にはイソプロパノールであり、
−  Ｒ９は、
−  ハロゲン、特に−Ｆである、
化合物。
【請求項１６】
セロトニン誘発掻痒、ヒスタミン誘発掻痒、クロロキン誘発掻痒、化合物４８／８０（ＣＡＳ番号９４７２４−１２−６）誘発掻痒および胆汁酸誘発掻痒、特にセロトニン誘発掻痒、クロロキン誘発掻痒、化合物４８／８０誘発掻痒および胆汁酸誘発掻痒、より特定的にはセロトニン誘発掻痒の予防に使用するための、請求項１または１５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
動物における掻痒の処置に使用するための、請求項１または１５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
掻痒の処置に使用するための陽性アロステリックα２またはα３ＧＡＢＡＡ受容体モジュレーターであって、特に請求項１〜１５のいずれか一項によるモジュレーター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、α２およびα３ＧＡＢＡＡ受容体の陽性アロステリックモジュレーターの掻痒の処置のための使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
掻痒（ラテン語でｐｒｕｒｉｔｕｓ）は、掻爬欲求を誘発する皮膚の不快な感覚である。掻痒の強度は、軽度、中等度または重度であり得、睡眠障害、不快感および過敏症または一般的ストレスの増加をもたらす。一般的な掻痒の症状は、様々な異なる理由と関連している可能性がある。掻痒は、ヒスタミン、プロスタグランジン、プロテアーゼ、サイトカイン、神経ペプチド、特にサブスタンスＰ、および胆汁酸塩などの多くの化学物質によって引き起こされ得る、または増強され得る。いくつかの物質は、自由神経終末に直接作用し、他の物質は、肥満細胞または他の細胞を介して間接的に作用する。掻痒感を増強すると考えられる要因には、表皮および真皮の乾燥、組織の無酸素症、毛細血管の拡張、掻痒性刺激、原発性皮膚疾患および精神障害が含まれる。
【０００３】
掻痒感は末梢神経から脊髄後角を経て脳に伝達される。しかしながら、脳への掻痒信号の伝達に関与する神経線維に存在する阻害性受容体は、原因とは無関係に掻痒感を緩和する有望な薬物標的ではあるが、十分に研究されていない。掻痒のほとんどの症例は、Ｈ１抗ヒスタミン剤で処置され、掻痒の原因がヒスタミンに関するものであれば確実に機能する。ヒスタミン非依存性掻痒の一般的な原因には、アトピー性皮膚炎、腎臓または肝臓疾患およびオピオイドによる処置が含まれるが、これらに限定されない。掻痒に対して使用される他の薬物は、コルチコステロイド、ガバペンチノイド、オピオイド受容体アンタゴニスト、カプサイシンおよび局所麻酔薬であり、これらは局所投与のためのみであるか、または全身的に使用される場合に望ましくない副作用を有し得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の根底にある課題は、掻痒の処置、特に抗ヒスタミン剤で処置できない掻痒の場合のための代替的手段を提供することである。この課題は、独立請求項の内容によって解決される。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の第１の態様によると、掻痒の処置に使用するための化合物であって、
【化１】
2019507736.tif 000002
特に式（１ａ）および（１ｂ）、より特定的には（１ａ）が提供され、
−  Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は互いに独立して−Ｃ、−Ｎ、−Ｓまたは−Ｏであり、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５のうち少なくとも２つは−Ｎであり、
−  Ｙ１およびＹ２は互いに独立して−Ｃまたは−Ｎであり、
−  Ｒ１ｍのｍは１であり、
−  Ｒ１は置換または非置換Ｃ６アリールまたは−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３であり、Ｒ３は置換または非置換Ｃ６ヘテロアリールであり、
−  Ｒ２ｎのｎは１または２であり、
−  各Ｒ２は他のＲ２から独立して置換または非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、置換または非置換Ｃ６ヘテロアリール、ハロゲン、特に−Ｆ、または−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４であり、Ｒ４は置換または非置換Ｃ４ヘテロアリールであり、
−  Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４およびＺ５は互いに独立して−Ｃ、−Ｎ、−Ｓまたは−Ｏであり、
−  Ａ１、Ａ２およびＡ３は互いに独立して−Ｃ、−Ｎまたは−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７であり、Ｒ７はアルキルであり、
−  Ｒ５ｌのｌは１または２であり、
−  各Ｒ５は互いに独立してＣ１〜Ｃ４アルキニルまたはハロゲン、特に−Ｃｌであり、
−  Ｒ６ｋのｋは１、２、３または４、特に１または２であり、
−  各Ｒ６は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、酸素または水素である。
【０００６】
本明細書の文脈におけるＣ１〜Ｃ６アルキルは、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの炭素原子を有する飽和直鎖または分枝炭化水素を意味し、１つの炭素−炭素結合は不飽和であってもよく、１つのＣＨ２部分は酸素と交換されていてもよい（エーテルブリッジ）。Ｃ１〜Ｃ４アルキルの非限定的な例は、メチル、エチル、プロピル、プロプ−２−エニル、ｎ−ブチル、２−メチルプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、ブト−３−エニル、プロプ−２−イニルおよびブト−３−イニルである。
【０００７】
本明細書の文脈におけるアリールという用語は、環状芳香族Ｃ５〜Ｃ１０炭化水素を指す。アリールの例には、フェニル、ナフチルおよびヘテロアリールが含まれるが、これらに限定されない。本発明の文脈におけるヘテロアリールは、１つまたは数個の窒素、酸素および／または硫黄原子を含むアリールである。ヘテロアリールの例には、ピロール、チオフェン、フラン、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、オキサゾール、ピリジン、ピリミジン、チアジン、キノリン、ベンゾフランおよびインドールが含まれるが、これらに制限されない。本発明の文脈におけるアリールまたはヘテロアリールは、さらに、１つ以上のアルキル基によって置換されていてもよい。
【０００８】
本明細書で使用する「アリール」という用語は、環状構造（以下、「芳香族炭化水素」と称する）を形成する炭素原子間に交互に二重結合および一重結合を有する炭化水素を指す。「ヘテロアリール」という用語は、少なくとも１つの炭素原子が酸素、窒素または硫黄原子で置換されているアリール化合物を指す。この芳香族炭化水素は、中性であっても荷電していてもよい。アリールまたはヘテロアリール基の例は、ベンゼン、ピリジン、ピロールまたはシクロペンタ−１，３−ジエン−アニオンである。本明細書で使用するアリールまたはヘテロアリール基は、任意選択的にさらなる置換基を含み得る。
【０００９】
本明細書において、アロステリックモジュレーターという用語は、生化学および薬理学の分野で知られているその意味で使用され、これは受容体におけるアゴニストの効果を間接的に調節する物質を指す。陽性のアロステリックモジュレーターはアゴニストの効果の増幅を誘導し、アゴニストの非存在下ではそれ自体は効果を有しない。アロステリックモジュレーターは、アゴニストの結合部位とは異なる部位に結合する（アロステリック）。
【００１０】
本明細書において、ＧＡＢＡ受容体という用語は、生化学の分野で知られているその意味で使用され、阻害性神経伝達物質γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）の受容体を指す。２つの主要タイプのＧＡＢＡ受容体が知られており、ＧＡＢＡＡ受容体（イオンチャネル型受容体）は、リガンド依存性イオンチャネルであり、ＧＡＢＡＢ受容体は、代謝調節型受容体としても知られており、Ｇタンパク質共役受容体である。ＧＡＢＡＡ受容体は、中枢神経系において最も一般的で最も重要な阻害性受容体である。ＧＡＢＡＡ受容体は、α１−６、β１−３、γ１−３、δ、ε、π、θおよびρ１−３の８つのクラスにグループ分けされた５つのサブユニットを含む。大部分のＧＡＢＡ受容体は、２つのα、２つのβおよび１つのγサブユニットを含む。異なるタイプのサブユニットは、ＧＡＢＡＡ受容体に異なる特性を付与する。α１サブユニットは、他の機能の中でも、ベンゾジアゼピンの鎮静作用の要因であり、α２サブユニットは、受容体の抗不安作用に関連し、α３サブユニットはＧＡＢＡＡ受容体の筋弛緩特性を付与する。
【００１１】
ある実施形態において、一般式（１ａ）を含む化合物が提供され、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は互いに独立して−Ｃ、−Ｎ、−Ｓまたは−Ｏであり、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５のうち少なくとも２つは−Ｎであり、Ｙ１およびＹ２は互いに独立して−Ｃまたは−Ｎであり、Ｒ１ｍのｍは１であり、Ｒ１は置換または非置換Ｃ６アリールまたは−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３であり、Ｒ３は置換または非置換Ｃ６ヘテロアリールであり、Ｒ２ｎのｎは１または２であり、各Ｒ２は他のＲ２から独立して置換または非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、置換または非置換Ｃ６ヘテロアリール、ハロゲン、特に−Ｆ、または−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４であり、Ｒ４は置換または非置換Ｃ４ヘテロアリールである。
【００１２】
ある実施形態において、一般式（１ｂ）を含む化合物が提供され、式中、Ｚ３、Ｚ４およびＺ５は互いに独立して−Ｃ、−Ｎ、−Ｓまたは−Ｏであり、Ａ１、Ａ２およびＡ３は互いに独立して−Ｃ、−Ｎまたは−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７であり、Ｒ７はアルキルであり、Ｒ５ｌのｌは１または２であり、各Ｒ５は互いに独立してＣ１〜Ｃ４アルキニルまたはハロゲン、特に−Ｃｌであり、Ｒ６ｋのｋは１、２、３または４、特に１または２であり、各Ｒ６は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、酸素または水素である。
【００１３】
ある実施形態において、一般式（１ｃ）を含む化合物が提供され、式中、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４およびＺ５は互いに独立して−Ｃ、−Ｎ、−Ｓまたは−Ｏであり、Ｒ５ｌのｌは１または２であり、各Ｒ５は互いに独立してＣ１〜Ｃ４アルキニルまたはハロゲン、特に−Ｃｌであり、Ｒ６ｋのｋは１、２、３または４、特に１または２であり、各Ｒ６は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、酸素または水素である。
【００１４】
ある実施形態において、化合物は、陽性アロステリックα２および／またはα３ＧＡＢＡＡ受容体モジュレーターである。
【００１５】
ある実施形態において、掻痒の処置に使用するための化合物は、一般式（１ａ）、一般式（１ｂ）または一般式（１ｃ）を含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は互いに独立して−Ｃ、−Ｎであり、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５のうち少なくとも２つは−Ｎであり、Ｙ１およびＹ２は互いに独立して−Ｃまたは−Ｎであり、Ｒ１ｍのｍは１であり、Ｒ１は置換または非置換Ｃ６アリールまたは−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３であり、Ｒ３は置換または非置換Ｃ６ヘテロアリールであり、Ｒ２ｎのｎは１または２であり、各Ｒ２は他のＲ２から独立して置換または非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、置換または非置換Ｃ６ヘテロアリール、ハロゲン、特に−Ｆ、または−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４であり、Ｒ４は置換または非置換Ｃ４ヘテロアリールであり、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４およびＺ５は互いに独立して−Ｃ、−Ｎまたは−Ｏであり、Ａ１、Ａ２およびＡ３は互いに独立して−Ｃ、−Ｎまたは−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７であり、Ｒ７はアルキルであり、Ｒ５ｌのｌは１または２であり、各Ｒ５は互いに独立してＣ１〜Ｃ４アルキニルまたはハロゲン、特に−Ｃｌであり、Ｒ６ｋのｋは１、２、３または４、各Ｒ６は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、酸素または水素である。
【００１６】
ある実施形態において、一般式（１ａ）を含む化合物が提供され、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は互いに独立して−Ｃまたは−Ｎであり、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５のうち少なくとも２つは−Ｎであり、Ｙ１およびＹ２は互いに独立して−Ｃまたは−Ｎであり、Ｒ１ｍのｍは１であり、Ｒ１は置換または非置換Ｃ６アリールまたは−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３であり、Ｒ３は置換または非置換Ｃ６ヘテロアリールであり、Ｒ２ｎのｎは１または２であり、各Ｒ２は他のＲ２から独立して置換または非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、置換または非置換Ｃ６ヘテロアリール、ハロゲン、特に−Ｆ、または−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４であり、Ｒ４は置換または非置換Ｃ４ヘテロアリールである。
【００１７】
ある実施形態において、一般式（１ｂ）を含む化合物が提供され、式中、Ｚ３、Ｚ４およびＺ５は互いに独立して−Ｃまたは−Ｎであり、Ａ１、Ａ２およびＡ３は互いに独立して−Ｃ、−Ｎまたは−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７であり、Ｒ７はアルキルであり、Ｒ５ｌのｌは１または２であり、各Ｒ５は互いに独立してＣ１〜Ｃ４アルキニルまたはハロゲン、特に−Ｃｌであり、Ｒ６ｋのｋは１、２、３または４、特に１または２であり、各Ｒ６は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、酸素または水素である。
【００１８】
ある実施形態において、一般式（１ｃ）を含む化合物が提供され、式中、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４およびＺ５は互いに独立して−Ｃ、−Ｎまたは−Ｏであり、Ｒ５ｌのｌは１または２であり、各Ｒ５は互いに独立してＣ１〜Ｃ４アルキニルまたはハロゲン、特に−Ｃｌであり、Ｒ６ｋのｋは１、２、３または４、特に１または２であり、各Ｒ６は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、酸素または水素である。
【００１９】
ある実施形態において、化合物は、一般式（２）、（３）、（４）、（５）、（６）または（７）を含み、
【化２】
2019507736.tif 000003
Ｙ１、Ｙ２、Ｚ１、Ｚ４、Ｚ５、Ｒ１ｍのｍ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ２ｎのｎ、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５ｌのｌ、Ｒ５、Ｒ６ｋのｋ、Ｒ６、Ａ１、Ａ２およびＡ３は上記定義と同じ意味を有する。
【００２０】
ある実施形態において、化合物は、一般式（２）、（３）、（４）または（５）を含み、Ｙ１、Ｙ２、Ｒ１ｍのｍ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ２ｎのｎ、Ｒ２およびＲ４は上記定義と同じ意味を有する。
【００２１】
ある実施形態において、化合物は、一般式（６）を含み、Ｚ１、Ｚ４、Ｚ５、Ｒ５ｌのｌ、Ｒ５、Ｒ６ｋのｋおよびＲ６は上記定義と同じ意味を有する。
【００２２】
ある実施形態において、化合物は、一般式（７）を含み、Ｚ４、Ｚ５、Ｒ５ｌのｌ、Ｒ５、Ｒ６ｋのｋ、Ｒ６、Ａ１、Ａ２およびＡ３は上記定義と同じ意味を有する。
【００２３】
ある実施形態において、化合物は、一般式（２ａ）、（３ａ）、（４ａ）、（５ａ）、（５ｂ）、（６ａ）、（６ｂ）または（７ａ）を含み、
【化３】
2019507736.tif 000004
Ｒ１ｍのｍ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ２ｎのｎ、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５ｌのｌ、Ｒ５、Ｒ６ｋのｋ、およびＲ６は上記定義と同じ意味を有する。
【００２４】
ある実施形態において、化合物は、一般式（２ａ）、（３ａ）、（４ａ）、（５ａ）または（５ｂ）を含み、Ｒ１ｍのｍ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ２ｎのｎ、Ｒ２およびＲ４は上記定義と同じ意味を有する。
【００２５】
ある実施形態において、化合物は、一般式（６ａ）または（６ｂ）を含み、Ｒ５ｌのｌのｍ、Ｒ５、Ｒ６ｋのｋおよびＲ６は上記定義と同じ意味を有する。
【００２６】
ある実施形態において、化合物は、一般式（７ａ）を含み、Ｒ５ｌのｌのｍ、Ｒ５、Ｒ６ｋのｋおよびＲ６は上記定義と同じ意味を有する。
【００２７】
ある実施形態において、化合物は、一般式１ａ、１ｂ、１ｃ、２、３、４、５、６、７、２ａ、３ａ、４ａ、５ａ、５ｂ、６ａ、６ｂまたは７ａを含み、式中、Ｒ１のｍは１であり、Ｒ１は非置換フェニル、置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換フェニル、非置換ビフェニル、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、もしくは置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニル、またはＲ３がピリジンである−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３であり、Ｒ５のｌは１であり、Ｒ５はＣｌ、Ｂｒ、ＦまたはＣ２アルキニルである。
【００２８】
ある実施形態において、化合物は、一般式１ａ、２、３、４、５、２ａ、３ａ、４ａ、５ａまたは５ｂを含み、式中、Ｒ１のｍは１であり、Ｒ１は非置換フェニル、置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換フェニル、非置換ビフェニル、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、もしくは置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニル、または−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３であってＲ３がピリジンである。
【００２９】
ある実施形態において、化合物は、一般式１ｂ、７または７ａを含み、式中、Ｒ５のｌは１であり、Ｒ５はＣｌ、Ｂｒ、ＦまたはＣ２アルキニルである。
【００３０】
ある実施形態において、化合物は、一般式１ｃ、６、６ａまたは６ｂを含み、式中、Ｒ５のｌは１であり、Ｒ５はＣｌ、Ｂｒ、ＦまたはＣ２アルキニルである。
【００３１】
ある実施形態において、化合物は、一般式１ａ、１ｂ、１ｃ、２、３、４、５、６、７、２ａ、３ａ、４ａ、５ｓ、５ｂ、６ａ、６ｂまたは７ａを含み、式中、Ｒ２のｎは１または２であり、ｎが２である場合、各Ｒ２は互いに独立して非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキル、非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチル、または−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４であってＲ４が置換または非置換Ｃ４ヘテロアリール、特にＲ４が置換または非置換トリアゾール、非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコール、ハロゲン、特に−Ｆであり、ｎが１である場合、Ｒ２は非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコール、非置換Ｃ６ヘテロアリール、特にピリジンであり、Ｒ６のｋは１または４であり、ｋが１である場合、Ｒ６は置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、ｋが４である場合、各Ｒ６は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、酸素または水素である。
【００３２】
ある実施形態において、化合物は、一般式１ａ、１ｂ、１ｃ、２、３、４、５、６、７、２ａ、３ａ、４ａ、５ａ、５ｂ、６ａ、６ｂまたは７ａを含み、式中、Ｒ２のｎは１または２であり、ｎが２である場合、各Ｒ２は互いに独立して非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキル、非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチル、または−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４であってＲ４が置換または非置換Ｃ４ヘテロアリール、特にＲ４が置換または非置換トリアゾール、非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコール、ハロゲン、特に−Ｆであり、ｎが１である場合、Ｒ２は非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコール、非置換Ｃ６ヘテロアリール、特にピリジンであり、Ｒ６のｋは１または４であり、ｋが１である場合、Ｒ６は置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、ｋが４である場合、各Ｒ６は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、酸素または水素である。
【００３３】
ある実施形態において、化合物は、一般式１ａ、２、３、４、５、２ａ、３ａ、４ａ、５ａまたは５ｂを含み、式中、Ｒ２のｎは１または２であり、ｎが２である場合、各Ｒ２は互いに独立して非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキル、非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチル、または−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４であってＲ４が置換または非置換Ｃ４ヘテロアリール、特にＲ４が置換または非置換トリアゾール、非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコール、ハロゲン、特に−Ｆであり、ｎが１である場合、Ｒ２は非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコール、非置換Ｃ６ヘテロアリール、特にピリジンである。
【００３４】
ある実施形態において、化合物は、一般式１ｂ、７または７ａを含み、式中、Ｒ６のｋは１または４であり、ｋが１である場合、Ｒ６は置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、ｋが４である場合、各Ｒ６は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、酸素または水素である。
【００３５】
ある実施形態において、化合物は、一般式１ｃ、６、６ａまたは６ｂを含み、式中、Ｒ６のｋは１または４であり、ｋが１である場合、Ｒ６は置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、ｋが４である場合、各Ｒ６は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、酸素または水素である。
【００３６】
ある実施形態において、化合物は、一般式１ａ、１ｂ、１ｃ、２、３、４、５、６、７、２ａ、３ａ、４ａ、５ｓ、５ｂ、６ａ、６ｂまたは７ａを含み、式中、Ｒ２のｎは２であり、１つのＲ２は非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキル、もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチルであり、他のＲ２はＯ−ＣＨ２−Ｒ４であってＲ４が置換または非置換Ｃ４ヘテロアリール、特に置換または非置換トリアゾールであり、または１つのＲ２は非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコールであり、他のＲ２はハロゲン、特に−Ｆであり、Ｒ６のｋは４であり、２つのＲ６は酸素であり、他のＲ６は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたは水素である。
【００３７】
ある実施形態において、化合物は、一般式１ａ、２、３、４、５、２ａ、３ａ、４ａ、５ｓまたは５ｂを含み、式中、Ｒ２のｎは２であり、１つのＲ２は非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキル、もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチルであり、他のＲ２はＯ−ＣＨ２−Ｒ４であってＲ４が置換または非置換Ｃ４ヘテロアリール、特に置換または非置換トリアゾールであり、または１つのＲ２は非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコールであり、他のＲ２はハロゲン、特に−Ｆである。
【００３８】
ある実施形態において、化合物は、一般式１ｂ、７または７ａを含み、式中、Ｒ６のｋは４であり、２つのＲ６は酸素であり、他のＲ６は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたは水素である。
【００３９】
ある実施形態において、化合物は、一般式１ｃ、６、６ａまたは６ｂを含み、式中、Ｒ６のｋは４であり、２つのＲ６は酸素であり、他のＲ６は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたは水素である。
【００４０】
ある実施形態において、化合物は、一般式（２ａ’）、（３ａ’）、（４ａ’）、（５ａ’）、（５ｂ’）、（６ａ’）、（６ｂ’）または（７ａ’）を含み、
【化４】
2019507736.tif 000005
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ２ｎのｎ、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６ｋのｋ、およびＲ６は上記定義と同じ意味を有する。
【００４１】
ある実施形態において、化合物は、一般式（２ａ’）、（３ａ’）、（４ａ’）、（５ａ’）または（５ｂ’）を含み、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ２ｎのｎ、Ｒ２およびＲ４は上記定義と同じ意味を有する。
【００４２】
ある実施形態において、化合物は、一般式（６ａ’）または（６ｂ’）を含み、Ｒ６ｋのｋおよびＲ６は上記定義と同じ意味を有する。
【００４３】
ある実施形態において、化合物は、一般式（７ａ’）を含み、Ｒ６ｋのｋおよびＲ６は上記定義と同じ意味を有する。
【００４４】
ある実施形態において、化合物は、一般式（２ａ’）、（３ａ’）、（４ａ’）、（５ａ’）、（５ｂ’）、（６ａ’）、（６ｂ’）または（７ａ’）を含み、式中、Ｒ１は、式（２ａ’）の場合、置換または非置換Ｃ６アリール、特に非置換フェニル、置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換フェニルであり、式（３ａ’）、（５ａ’）または（５ｂ’）の場合、置換または非置換ビフェニル、特に非置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニル、または式（４ａ’）の場合、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３であり、Ｒ３は置換または非置換Ｃ６ヘテロアリールであり、特にＲ３はピリジンであり、Ｒ５は、式（６ａ’）または（６ｂ’）の場合、Ｃｌ、ＢｒまたはＦであり、式（７ａ’）の場合、Ｃ２アルキニルであり、式中、Ｒ２ｎおよびＲ６ｋは上記定義と同じ意味を有する。
【００４５】
ある実施形態において、化合物は、一般式（２ａ’）、（３ａ’）、（４ａ’）、（５ａ’）または（５ｂ’）を含み、式中、Ｒ１は、式（２ａ’）の場合、置換または非置換Ｃ６アリール、特に非置換フェニル、置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換フェニルであり、式（３ａ’）、（５ａ’）または（５ｂ’）の場合、置換または非置換ビフェニル、特に非置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニル、または式（４ａ’）の場合、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３であり、Ｒ３は置換または非置換Ｃ６ヘテロアリールであり、特にＲ３はピリジンであり、式中、Ｒ２ｎは上記定義と同じ意味を有する。
【００４６】
ある実施形態において、化合物は、一般式（６ａ’）または（６ｂ’）を含み、式中、Ｒ５はＣｌ、ＢｒまたはＦであり、式中、Ｒ６ｋは上記定義と同じ意味を有する。
【００４７】
ある実施形態において、化合物は、一般式（７ａ’）を含み、式中、Ｒ５はＣ２アルキニルであり、式中、Ｒ６ｋは上記定義と同じ意味を有する。
【００４８】
ある実施形態において、化合物は、一般式（２ａ’’）、（３ａ’’）、（４ａ’’）、（５ａ’’）、（５ｂ’’）、（６ａ’’）または（７ａ’’）を含み、
【化５】
2019507736.tif 000006
Ｒ７は非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチル、非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキル、非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコールであり、特にＲ７は、式（２ａ’’）の場合、非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチル、もしくは非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキルであり、またはＲ７は、式（５ａ’’）もしくは（５ｂ’’）の場合、非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコールであり、Ｒ８は−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４であり、Ｒ４は置換または非置換Ｃ４ヘテロアリール、特に置換または非置換トリアゾール、または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコールであり、特にＲ８は、式（２ａ’’）の場合、−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４であり、Ｒ４は置換または非置換Ｃ４ヘテロアリール、特に置換または非置換トリアゾールであり、またはＲ８は、式（３ａ’’）の場合、非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコールであり、Ｒ９は非置換Ｃ６ヘテロアリール、特にピリジン、またはハロゲン、特に−Ｆであり、Ｒ９は、式（４ａ’’）の場合、非置換Ｃ６ヘテロアリール、特にピリジンであり、またはＲ９は、式（５ｂ’’）の場合、ハロゲン、特に−Ｆであり、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ３アルキルまたは水素であり、Ｒ１１は置換または非置換アリール、または置換または非置換ヘテロアリールであり、特にＲ１１は、式（６ａ’’）の場合、置換または非置換アリール、特にフェニルであり、Ｒ１１は、式（７ａ’’）の場合、置換または非置換ヘテロアリール、特にピリジン、置換または非置換アリール、特にフェニルであり、Ｒ５は、式（６ａ’’）の場合、Ｃｌ、ＢｒまたはＦであり、式（７ａ’’）の場合、Ｃ２アルキニルである。
【００４９】
ある実施形態において、化合物は、一般式（２ａ’’）、（３ａ’’）、（４ａ’’）、（５ａ’’）または（５ｂ’’）を含み、Ｒ７は非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチル、非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキル、非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコールであり、特にＲ７は、式（２ａ’’）の場合、非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチル、もしくは非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキルであり、またはＲ７は、式（５ａ’’）もしくは（５ｂ’’）の場合、非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコールであり、Ｒ８は−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４であり、Ｒ４は置換または非置換Ｃ４ヘテロアリール、特に置換または非置換トリアゾール、または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコールであり、特にＲ８は、式（２ａ’’）の場合、−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４であり、Ｒ４は置換または非置換Ｃ４ヘテロアリール、特に置換または非置換トリアゾールであり、またはＲ８は、式（３ａ’’）の場合、非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコールであり、Ｒ９は非置換Ｃ６ヘテロアリール、特にピリジン、またはハロゲン、特に−Ｆであり、Ｒ９は、式（４ａ’’）の場合、非置換Ｃ６ヘテロアリール、特にピリジンであり、またはＲ９は、式（５ｂ’’）の場合、ハロゲン、特に−Ｆである。
【００５０】
ある実施形態において、化合物は、一般式（６ａ’’）を含み、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ３アルキルまたは水素であり、Ｒ１１は置換または非置換アリール、または置換または非置換ヘテロアリールであり、特にＲ１１は、式（６ａ’’）の場合、置換または非置換アリール、特にフェニルであり、Ｒ１１は、式（７ａ’’）の場合、置換または非置換ヘテロアリール、特にピリジンであり、Ｒ５はＣｌ、ＢｒまたはＦである。
【００５１】
ある実施形態において、化合物は、一般式（７ａ’’）を含み、Ｒ１１は置換または非置換アリール、または置換または非置換ヘテロアリールであり、特にＲ１１は、式（６ａ’’）の場合、置換または非置換アリール、特にフェニルであり、Ｒ１１は、式（７ａ’’）の場合、置換または非置換ヘテロアリール、特にピリジンであり、Ｒ５はＣ２アルキニルである。
【００５２】
ある実施形態において、化合物は、一般式（２ａ’’）、（３ａ’’）、（４ａ’’）、（５ａ’’）または（５ｂ’’）を含み、式（２ａ’’）の場合、Ｒ１はまたは非置換フェニル、置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換フェニルであり、Ｒ７は非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチル、もしくは非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキルであり、Ｒ８は−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４であり、Ｒ４は置換または非置換Ｃ４ヘテロアリール、特に置換または非置換トリアゾールであり、式（３ａ’’）の場合、Ｒ１は非置換ビフェニル、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニルであり、Ｒ８は非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコールであり、式（４ａ’’）の場合、Ｒ１は−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３であり、Ｒ３は非置換Ｃ６ヘテロアリールであり、特にＲ３はピリジンであり、Ｒ９は非置換Ｃ６ヘテロアリール、特にピリジンであり、式（５ａ’’）の場合、Ｒ１は非置換ビフェニル、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニルであり、Ｒ７は非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコールであり、式（５ａ’’）の場合、Ｒ１は非置換ビフェニル、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニルであり、Ｒ７は非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ４アルコールであり、Ｒ９はハロゲン、特に−Ｆである。
【００５３】
ある実施形態において、化合物は、図１１に示される化合物、すなわち、Ｌ−８３８４１７、ＴＰＡ０２３（ＭＫ−０７７７）、ＴＰＡ１２３、ＭＲＫ−４０９（ＭＫ−０３４３）、ＮＳ１１３９４、オシナプロン（ＤＯＶ−２７３５４７）、ＴＰＡ０２３Ｂ、ＴＰ００３、Ｎ−デスメチルクロバザム、１、２、３、４および５から選択される。
【００５４】
ある実施形態において、本発明の第１の態様による化合物は、セロトニン誘発掻痒、ヒスタミン誘発掻痒、クロロキン誘発掻痒、化合物４８／８０誘発掻痒および胆汁酸誘発掻痒、特にセロトニン誘発掻痒、クロロキン誘発掻痒、化合物４８／８０誘発掻痒および胆汁酸誘発掻痒、より特定的にはセロトニン誘発掻痒の予防に使用するための化合物である。
【００５５】
本発明の第２の態様によると、掻痒の処置に使用するα２またはα３ＧＡＢＡモジュレーター、特に本発明の第１の態様によるモジュレーターが提供される。
【００５６】
以下では、本発明の副次的態様について説明する。副次的態様の式（Ｉｃ）および（ＶＩ）は、それぞれ式（１ｃ）および（６）に対応する。式（１ｃ）および（６ｃ）と比較して、式（Ｉｃ）または（ＶＩ）による化合物の置換基は再付番されている（明確性の理由による）。式（１ｃ）のＲ５ｌおよびＲ６ｋは、式（Ｉｃ）においてＲ１２ｐおよびＲ１３ｑと称される。式（６）のＲ１１は、ここで式（ＶＩ）においてＲ１４と称される。
【００５７】
本発明の第１の副次的態様によると、掻痒の処置に使用するための化合物が提供され、化合物は、一般式（１ａ）、一般式（１ｂ）または一般式（Ｉｃ）を含み、
【化６】
2019507736.tif 000007
特に式（１ａ）および（１ｂ）、より特定的には（１ａ）を含み、式中、
−  Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は互いに独立して−Ｃ、−Ｎ、−Ｓまたは−Ｏであり、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５のうち少なくとも２つは−Ｎであり、
−  Ｙ１およびＹ２は互いに独立して−Ｃまたは−Ｎであり、
−  Ｒ１ｍのｍは１であり、
−  Ｒ１は非置換フェニル、Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＣＮで置換されたフェニル、置換または非置換ビフェニル、または−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３であり、Ｒ３は置換または非置換アリール、または５〜６員環ヘテロアリール、特にＣ６アリールまたは６員環ヘテロアリール、より特定的には６員環ヘテロアリールであり、
−  Ｒ２ｎのｎは１または２であり、
−  各Ｒ２は他のＲ２から独立して置換または非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、置換または非置換６員環ヘテロアリール、ハロゲン、特に−Ｆ、または−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４であり、Ｒ４は置換または非置換５員環または６員環ヘテロアリール、特に５員環ヘテロアリールであり、
−  Ｚ１、Ｚ３、Ｚ４およびＺ５は互いに独立して−Ｃ、−Ｎ、−Ｓまたは−Ｏであり、特にＺ１は−Ｃまたは−Ｎであり、Ｚ３およびＺ４は−Ｃ、−Ｎ、−Ｓまたは−Ｏであり、
−  Ａ１およびＡ２は互いに独立して−Ｃ、−Ｎまたは−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７’であり、Ａ３は−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７’であり、−Ｒ７’はＣ１〜Ｃ６−アルキルであり、特にＡ１およびＡ２は互いに独立して−Ｃまたは−Ｎであり、Ａ３は−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７’であり、Ｒ７’はＣ１〜Ｃ６−アルキル、特にＣ１〜Ｃ２−アルキル、より特定的にはＣ２−アルキルであり、
−  Ｒ５ｌのｌは１または２であり、
−  各Ｒ５は互いに独立してＣ１〜Ｃ４アルキニルまたはハロゲンであり、
−  Ｒ６ｋのｋは１、２、３または４、特に１または２であり、
−  各Ｒ６は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、酸素または水素、特に置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、より特定的には置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリールであり、
−  Ｒ１２のｐは１または２、特に１であり、
−  Ｒ１２は互いに独立して置換または非置換Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、Ｉ、Ｂｒ、ＣｌまたはＦであり、
−  Ｒ１３のｑは１、２、３または４であり、
−  Ｒ１３は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、酸素または水素である。
【００５８】
ある実施形態において、掻痒の処置に使用するための化合物は、陽性アロステリックα２および／またはα３ＧＡＢＡＡ受容体モジュレーターである。
【００５９】
ある実施形態において、掻痒の処置に使用するための化合物は、一般式（１ａ）、一般式（１ｂ）または一般式（Ｉｃ）、特に式（１ａ）および（１ｂ）、より特定的には（１ａ）を含み、式中、
−  Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は互いに独立して−Ｃまたは−Ｎであり、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５のうち少なくとも２つは−Ｎであり、
−  Ｙ１およびＹ２は互いに独立して−Ｃまたは−Ｎであり、
−  Ｒ１ｍのｍは１であり、
−  Ｒ１は非置換フェニル、Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＣＮで置換されたフェニル、置換または非置換ビフェニル、または−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３であり、Ｒ３は置換または非置換アリール、または５〜６員環ヘテロアリール、特にＣ６アリールまたは６員環ヘテロアリール、より特定的には６員環ヘテロアリールであり、
−  Ｒ２ｎのｎは１または２であり、
−  各Ｒ２は他のＲ２から独立して置換または非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、置換または非置換６員環ヘテロアリール、ハロゲン、特に−Ｆ、または−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４であり、Ｒ４は置換または非置換５員環または６員環ヘテロアリール、特に５員環ヘテロアリールであり、
−  Ｚ１、Ｚ３、Ｚ４およびＺ５は互いに独立して−Ｃまたは−Ｎであり、
−  Ａ１およびＡ２は互いに独立して−Ｃまたは−Ｎであり、Ａ３は−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７’であり、Ｒ７’はＣ１〜Ｃ４−アルキル、特にＣ１〜Ｃ２−アルキル、より特定的にはＣ２−アルキルであり、
−  Ｒ５ｌのｌは１または２であり、
−  各Ｒ５は互いに独立してＣ１〜Ｃ４アルキニルまたはハロゲンであり、
−  Ｒ６ｋのｋは１、２、３または４、特に１または２であり、
−  各Ｒ６は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、酸素または水素、特に置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、より特定的には置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリールであり、
−  Ｒ１２のｐは１であり、
−  Ｒ１２は置換または非置換Ｃ１〜Ｃ４−アルキル、Ｉ、Ｂｒ、ＣｌまたはＦであり、
−  Ｒ１３のｑは１、２、３または４であり、
−  Ｒ１３は互いに独立して置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、酸素または水素である。
【００６０】
ある実施形態において、第１の副次的態様による化合物は、一般式（２）、（３）、（４）、（５）、（Ｉｃ）または（７）、特に（２）、（３）、（４）、（５）または（７）、より特定的には（２）、（３）、（４）または（５）を含み、
【化７】
2019507736.tif 000008
Ｙ１、Ｙ２、Ｚ４、Ｚ５、Ｒ１ｍのｍ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ２ｎのｎ、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ１２のｐ、Ｒ１２、Ｒ１３のｑ、Ｒ１３、Ｒ５ｌのｌ、Ｒ５、Ｒ６ｋのｋ、Ｒ６、Ａ１、Ａ２およびＡ３は上記定義と同じ意味を有する。
【００６１】
ある実施形態において、第１の副次的態様による化合物は、一般式（２ａ）、（３ａ）、（４ａ）、（５ａ）、（５ｂ）、（Ｉｃ）または（７ａ）、特に（２ａ）、（３ａ）、（４ａ）、（５ａ）、（５ｂ）または（７ａ）、より特定的には（２ａ）、（３ａ）、（４ａ）、（５ａ）または（５ｂ）を含み、
【化８】
2019507736.tif 000009
Ｒ１ｍのｍ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ２ｎのｎ、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ１２のｐ、Ｒ１２、Ｒ１３のｑ、Ｒ１３、Ｒ５ｌのｌ、Ｒ５、Ｒ６ｋのｋおよびＲ６は上記定義と同じ意味を有する。
【００６２】
ある実施形態において、Ｒ１のｍは１であり、Ｒ１は、非置換フェニル、置換基としてＣ１〜Ｃ４−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＣＮを含む置換フェニル（特に前記置換フェニルは置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む）、非置換ビフェニル、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、もしくは置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニル、またはＲ３がピリジンである−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３である。
【００６３】
ある実施形態において、Ｒ１のｍは１であり、Ｒ１は置換基としてＣ１〜Ｃ４−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＣＮを含む置換フェニルであり、特に前記置換フェニルは置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む。置換フェニルは、式（８）によるフェニル部分であり、
【化９】
2019507736.tif 000010
式中、ｒは１、２、３、４または５であり、Ｒ１５はＦであり、ｓは０、１、２、３または４であり、Ｒ１６はＣ１〜Ｃ４−アルキル、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＣＮであり、ｒとｓの合計は５を超えない。
【００６４】
ある実施形態において、Ｒ１のｍは１であり、Ｒ１は式（８）による置換フェニルであり、式中、ｒは１または２であり、Ｒ１５はＦであり、ｓは０、１、２、３または４であり（ｒが２である場合、ｓは０、１、２または３である）、Ｒ１６はＣ１〜Ｃ４−アルキル、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＣＮである。
【００６５】
ある実施形態において、Ｒ１のｍは１であり、Ｒ１は式（８）による置換フェニルであり、式中、ｒは１または２であり、Ｒ１５はＦであり、ｓは０である。
【００６６】
ある実施形態において、Ｒ１のｍは１であり、Ｒ１は置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルである。置換ビフェニルは、式（９）によるビフェニル部分であり、
【化１０】
2019507736.tif 000011
式中、ｔは０、１、２、３または４であり、ｕは０、１、２、３、４または５であり、Ｒ１７は−ＣＮであり、少なくともｔおよび／またはｕは１以上であり、ｖは０、１、２、３または４であり、Ｒ１８はＣ１〜Ｃ４−アルキル、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉまたは−ＣＮであり、ｗは０、１、２、３、４または５であり、Ｒ１９はＣ１〜Ｃ４−アルキル、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉまたは−ＣＮであり、ｔ、ｕ、ｖおよびｗの合計は９を超えない。
【００６７】
ある実施形態において、Ｒ１のｍは１であり、Ｒ１は式（９）による置換ビフェニルであり、式中、ｖおよびｗは０または１であり、Ｒ１８およびＲ１９はＣ１〜Ｃ４−アルキル、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉまたは−ＣＮであり、ｔおよび／またはｕは１であり、Ｒ１７は−ＣＮである。
【００６８】
ある実施形態において、Ｒ１のｍは１であり、Ｒ１は式（９）による置換ビフェニルであり、式中、ｖおよびｗは０であり、ｔおよび／またはｕは１であり、Ｒ１７は−ＣＮである。
【００６９】
ある実施形態において、Ｒ１のｍは１であり、Ｒ１は式（９）による置換ビフェニルであり、式中、ｖ、ｗおよびｔは０であり、ｕは１であり、Ｒ１７は−ＣＮである。
【００７０】
ある実施形態において、Ｒ１のｍは１であり、Ｒ１は置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニルである。この置換ビフェニルは、式（１０）によるビフェニル部分であり、
【化１１】
2019507736.tif 000012
式中、ｔは０、１、２、３または４であり、ｕは０、１、２、３、４または５であり、Ｒ１７は−ＣＮであり、少なくともｔおよび／またはｕは１以上であり、ｖは０、１、２、３または４であり、Ｒ１８はＣ１〜Ｃ４−アルキル、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉまたは−ＣＮであり、ｗは０、１、２、３、４または５であり、Ｒ１９はＣ１〜Ｃ４−アルキル、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉまたは−ＣＮであり、ｘは０、１、２、３または４であり、ｙは０、１、２、３、４または５であり、Ｒ２０はＦであり、少なくともｘおよび／またはｙは１以上であり、ｔ、ｕ、ｖ、ｗ、ｘおよびｙの合計は９を超えない。
【００７１】
ある実施形態において、Ｒ１のｍは１であり、Ｒ１は式（１０）による置換ビフェニルであり、式中、ｖおよびｗは０であり、ｔおよび／またはｕは１であり、Ｒ１７は−ＣＮであり、ｘおよび／またはｙは１であり、Ｒ２０は−Ｆである。
【００７２】
ある実施形態において、Ｒ１のｍは１であり、Ｒ１は式（１０）による置換ビフェニルであり、式中、ｖ、ｗおよびｔは０であり、ｕは１であり、Ｒ１７は−ＣＮであり、ｘおよび／またはｙは１であり、Ｒ２０は−Ｆである。
【００７３】
ある実施形態において、Ｒ１のｍは１であり、Ｒ１は式（１０）による置換ビフェニルであり、式中、ｖ、ｗおよびｔは０であり、ｕは１であり、Ｒ１７は−ＣＮであり、ｘおよびｙは１であり、Ｒ２０は−Ｆである。
【００７４】
ある実施形態において、Ｒ２のｎは１または２であり、Ｒ２は非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキル、非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチル、または−Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４であってＲ４が置換または非置換５員環ヘテロアリール、特にＲ４が置換または非置換トリアゾール、非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコール、より特定的にはイソプロパノール、ハロゲン、特に−Ｆ、非置換６員環ヘテロアリール、特にピリジンである。
【００７５】
ある実施形態において、Ｒ２のｎは２であり、１つのＲ２は非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキル、もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチルであり、他のＲ２はＯ−ＣＨ２−Ｒ４であってＲ４が置換または非置換５員環ヘテロアリール、特に置換または非置換トリアゾールである。
【００７６】
ある実施形態において、Ｒ２は２であり、１つのＲ２は非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコール、より特定的にはイソプロパノールであり、他のＲ２はハロゲン、特に−Ｆである。
【００７７】
ある実施形態において、Ｒ２のｎは１であり、Ｒ２は非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコールまたは非置換６員環ヘテロアリールである。
【００７８】
ある実施形態において、Ｒ２のｎは１であり、Ｒ２はＣ３アルコールまたはピリジンである。
【００７９】
ある実施形態において、Ｒ２のｎは１であり、Ｒ２はＣ３アルコールである。
【００８０】
ある実施形態において、Ｒ２のｎは１であり、Ｒ２はイソプロパノールである。
【００８１】
ある実施形態において、Ｒ５のｌは１であり、Ｒ５はＩ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＦまたはＣ２アルキニルである。
【００８２】
ある実施形態において、Ｒ５のｌは１であり、Ｒ５は−ＩまたはＣ２アルキニルである。
【００８３】
ある実施形態において、Ｒ６のｋは１であり、Ｒ６は置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキルである。
【００８４】
ある実施形態において、Ｒ６のｋは１であり、Ｒ６は置換または非置換Ｃ６アリール、５〜６員環の置換または非置換ヘテロアリールである。
【００８５】
ある実施形態において、Ｒ６のｋは１であり、Ｒ６はフェニル、ＦまたはＣｌで置換されたフェニル、チオフェンまたはピリジンである。
【００８６】
ある実施形態において、第１の副次的態様による化合物は、一般式（２ａ’）、（３ａ’）、（４ａ’）、（５ａ’）、（５ｂ’）、（ＶＩ）または（７ａ’）、特に（２ａ’）、（３ａ’）、（４ａ’）、（５ａ’）、（５ｂ’）または（７ａ’）、さらにより特定的には（２ａ’）、（３ａ’）、（４ａ’）、（５ａ’）または（５ｂ’）を含み、
【化１２】
2019507736.tif 000013
式中、
−  Ｒ１０は置換または非置換アリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、または水素、特に水素であり、
−  Ｒ１１は置換または非置換アリール、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ３アルキル、または水素、特に置換または非置換アリール、より特定的にはフェニルであり、
−  Ｒ１２のｐは１であり、Ｒ１２はＩ、Ｂｒ、ＣｌまたはＦ、特にＣｌであり、
−  Ｒ１、Ｒ３、Ｒ２ｎのｎ、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２のｐ、Ｒ１２、Ｒ５、Ｒ６ｋのｋ、およびＲ６は上記定義と同じ意味を有する。
【００８７】
ある実施形態において、第１の副次的態様による化合物は、一般式（２ａ’）、（３ａ’）、（４ａ’）、（５ａ’）、（５ｂ’）、（ＶＩ）または（７ａ’）、特に（２ａ’）、（３ａ’）、（４ａ’）、（５ａ’）、（５ｂ’）または（７ａ’）、さらにより特定的には（２ａ’）、（３ａ’）、（４ａ’）、（５ａ’）または（５ｂ’）を含み、式中、
−  Ｒ１は、
−  式（２ａ’）の場合、
−  置換または非置換Ｃ６アリール、特に非置換フェニル、
−  置換基としてＣ１〜Ｃ４−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＣＮを含む置換フェニル（特に前記置換フェニルは置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む）、
−  式（３ａ’）、（５ａ’）または（５ｂ’）の場合、
−  置換または非置換ビフェニル、特に非置換ビフェニル、
−  置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニル、または
−  式（４ａ’）の場合、
−  −（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３（Ｒ３は置換または非置換Ｃ６ヘテロアリール、特にＲ３はピリジン）であり、
−  Ｒ５は、
−  式（７ａ’）の場合、
−  Ｃ２アルキニルまたはＩ、特にＣ２アルキニルであり、
式中、Ｒ２ｎ、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２ｐおよびＲ６ｋは上記定義と同じ意味を有する。
【００８８】
ある実施形態において、化合物は、一般式（２ａ’’）、（３ａ’’）、（４ａ’’）、（５ａ’’）、（５ｂ’’）、（ＶＩａ’’）または（７ａ’’）、特に（２ａ’’）、（３ａ’’）、（４ａ’’）、（５ａ’’）、（５ｂ’’）または（７ａ’’）、より特定的には（２ａ’’）、（３ａ’’）、（４ａ’’）、（５ａ’’）または（５ｂ’’）を含み、
【化１３】
2019507736.tif 000014
式中、Ｒ１は上記定義と同じ意味を有し、
−  Ｒ７は、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチル、
−  非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキル、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコールであり、特に
−  Ｒ７は、式（２ａ’’）の場合、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチル、または
−  非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキルであり、または
−  Ｒ７は、式（５ａ’’）または（５ｂ’’）の場合、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコールであり、
−  Ｒ８は、
−  −Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４（Ｒ４は置換または非置換５員環ヘテロアリール、特に置換または非置換トリアゾール）、または  
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコールであり、特に
−  Ｒ８は、式（２ａ’’）の場合、
−  −Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４（Ｒ４は置換または非置換５員環ヘテロアリール、特に置換または非置換トリアゾール）であり、または
−  Ｒ８は、式（３ａ’’）の場合、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコールであり、
−  Ｒ９は、
−  非置換Ｃ６ヘテロアリール、特にピリジン、または
−  ハロゲン、特に−Ｆであり、
−  Ｒ９は、式（４ａ’’）の場合、
−  非置換６員環ヘテロアリール、特にピリジン、または
−  Ｒ９は、式（５ｂ’’）の場合、
−  ハロゲン、特に−Ｆであり、
−  Ｒ１０は、
−  Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたは水素、特に水素であり、
−  Ｒ１１は置換または非置換アリールまたはヘテロアリール、特にピリジン、チオフェン、フェニルまたはＦもしくはＣｌで置換されたフェニルであり、
−  Ｒ１４は置換または非置換アリールまたはヘテロアリール、特に置換または非置換アリール、より特定的にはフェニルであり、
−  Ｒ１２はＩ、Ｃｌ、ＢｒまたはＦ、特にＣｌであり、
−  Ｒ５はＣ２アルキニルまたはＩ、特にＣ２アルキニルである。
【００８９】
ある実施形態において、化合物は、一般式（２ａ’’）、（３ａ’’）、（４ａ’’）、（５ａ’’）または（５ｂ’’）を含み、
【化１４】
2019507736.tif 000015
式中、
−  式（２ａ’’）の場合、
−  Ｒ１は、
−  非置換フェニル、
−  置換基としてＣ１〜Ｃ４−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＣＮを含む置換フェニル（特に前記置換フェニルは置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む）であり、
−  Ｒ７は、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、特にｔｅｒｔ−ブチル、または
−  非置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、特にＣ４−シクロアルキルであり、および  
−  Ｒ８は、
−  −Ｏ−ＣＨ２−Ｒ４（Ｒ４は置換または非置換５員環ヘテロアリール、特に置換または非置換トリアゾール）であり、
−  式（３ａ’’）の場合、
−  Ｒ１は、
−  非置換ビフェニル、
−  置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、または
−  置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニルであり、
−特にＲ１は、
−  置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであり、
−  Ｒ８は、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコール、より特定的にはイソプロパノールであり、
−  式（４ａ’’）の場合、
−  Ｒ１は、
−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ３（Ｒ３は非置換６員環ヘテロアリール、特にＲ３はピリジン）であり、および
−  Ｒ９は、
−  非置換Ｃ６ヘテロアリール、特にピリジンであり、
−  式（５ａ’’）の場合、
−  Ｒ１は、
−  非置換ビフェニル、
−  置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニルであり、
−特にＲ１は、
−  置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニルであり、
−  Ｒ７は、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコール、より特定的にはイソプロパノールであり、
−  式（５ｂ’’）の場合、
−  Ｒ１は、
−  非置換ビフェニル、
−  置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニルであり、
−特にＲ１は、
−  置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニル、特に親部分に結合していないフェニル部分上に、置換基として少なくとも１つの−ＣＮを含む置換ビフェニルであって、特に１つのフェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含み、より特定的には各フェニル部分がさらに置換基として少なくとも１つの−Ｆを含む置換ビフェニルであり、
−  Ｒ７は、
−  非置換Ｃ１〜Ｃ６アルコール、特にＣ３アルコール、より特定的にはイソプロパノールであり、
−  Ｒ９は、
−  ハロゲン、特に−Ｆである。
【００９０】
ある実施形態において、化合物は、上記のように一般式（２ａ’’）、（３ａ’’）、（５ａ’’）または（５ｂ’’）を含む。
【００９１】
ある実施形態において、化合物は、上記のように一般式（５ａ’’）を含む。
【００９２】
ある実施形態において、化合物は、図１１に示される化合物、すなわち、Ｌ−８３８４１７、ＴＰＡ０２３（ＭＫ−０７７７）、ＴＰＡ１２３、ＭＲＫ−４０９（ＭＫ−０３４３）、ＮＳ１１３９４、オシナプロン（ＤＯＶ−２７３５４７）、ＴＰＡ０２３Ｂ、ＴＰ００３、Ｎ−デスメチルクロバザム、１、２、３、４および５、特にＬ−８３８４１７、ＴＰＡ０２３（ＭＫ−０７７７）、ＴＰＡ１２３、ＭＲＫ−４０９（ＭＫ−０３４３）、ＮＳ１１３９４、オシナプロン（ＤＯＶ−２７３５４７）、ＴＰＡ０２３Ｂ、ＴＰ００３、Ｎ−デスメチルクロバザム、１、２、３および５から選択される。
【００９３】
ある実施形態において、化合物は、図１１に示される化合物、すなわち、Ｌ−８３８４１７、ＴＰＡ０２３（ＭＫ−０７７７）、ＴＰＡ１２３、ＭＲＫ−４０９（ＭＫ−０３４３）、ＮＳ１１３９４、オシナプロン（ＤＯＶ−２７３５４７）、ＴＰＡ０２３Ｂ、ＴＰ００３、１、２、３および５から選択される。
【００９４】
ある実施形態において、化合物は、図１１に示される化合物、すなわち、Ｌ−８３８４１７、ＴＰＡ０２３（ＭＫ−０７７７）、ＴＰＡ１２３、ＭＲＫ−４０９（ＭＫ−０３４３）、ＮＳ１１３９４、オシナプロン（ＤＯＶ−２７３５４７）、ＴＰＡ０２３Ｂ、ＴＰ００３、特にＴＰＡ０２３Ｂから選択される。
【００９５】
本発明の別の態様では、セロトニン誘発掻痒、ヒスタミン誘発掻痒、クロロキン誘発掻痒、化合物４８／８０（ＣＡＳ番号９４７２４−１２−６）誘発掻痒および胆汁酸誘発掻痒の予防に使用するための第１の副次的態様による化合物が提供される。
【００９６】
ある実施形態において、化合物は、セロトニン誘発掻痒、クロロキン誘発掻痒、化合物４８／８０（ＣＡＳ番号９４７２４−１２−６）誘発掻痒および胆汁酸誘発掻痒の予防に使用するためのものである。
【００９７】
ある実施形態において、化合物は、セロトニン誘発掻痒の予防に使用するためのものである。
【００９８】
ある実施形態において、動物における掻痒の処置に使用するための第１の副次的態様による化合物が提供される。
【００９９】
本発明の別の態様では、掻痒の処置に使用するための陽性アロステリックα２またはα３ＧＡＢＡＡ受容体モジュレーターが提供される。
【０１００】
本発明の別の態様では、掻痒の処置に使用するための本発明の第１の態様による陽性アロステリックα２またはα３ＧＡＢＡＡ受容体モジュレーターが提供される。
【０１０１】
例えば官能基などの単一の分離可能な特徴の選択肢が本明細書において「実施形態」として示されている場合は常に、そのような選択肢は自由に組み合わせて本明細書に開示する本発明の別個の実施形態を形成し得るものと解されるべきである。
【０１０２】
本発明は、以下の実施例および図面によりさらに説明され、そこからさらなる実施形態および有利な点を導くことができる。これらの実施例は、本発明を説明することを意図しているが、その範囲を限定するものではない。
【図面の簡単な説明】
【０１０３】
【図１】各経口ジアゼパム（遺伝的背景１２９Ｘ１／ＳｖＪのＧＡＢＡＡＲ点突然変異マウスにおけるＤＺＰによる鎮痒効果を示す。ＤＺＰは、ＧＡＢＡＡＲ三重点突然変異マウスにおける２０ｇのα−Ｍｅ−５ＨＴの頬への注入によって誘発された掻爬発作の回数を減少させ、単離したα２、α３またはα５を標的とする。ＤＺＰはα−Ｍｅ−５ＨＴ注入の１時間前に投与した。時間経過（ａ）：データ点は平均値±標準誤差であり、同側の頬に導かれた誘発掻爬発作の統計解析（ｂ）は、２０分間定量化した。＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊Ｐ＜０．０５対溶媒処置マウス（ＡＮＯＶＡ、次いでボンフェローニのポストホック検定、Ｆ（５，４４）＝８．５）。ＲＨＲＲ、ＲＲＨＲおよびＲＲＲＨマウスはマウスであり、すべてのＤＺＰ感受性αサブユニットは、それぞれα２、α３またはα５を除いてＤＺＰ非感受性とされている。ＤＺＰ非感受性は、α１およびα２の１０１位、α３の１２６位、およびα５の１０５位におけるヒスチジンからアルギニンへのアミノ酸交換によって導入された。マウスの数（溶媒／ＤＺＰ処置）：それぞれ、ＲＨＲＲ  ｎ＝８／１０、ＲＲＨＲ  ｎ＝８／８およびＲＲＲＨ  ｎ＝７／９。ＲＨＲＲ：α２のみ、ＲＲＨＲ：α３のみ、ＲＲＲＨ：α５のみ。
【図２Ａ】遺伝的背景１２９Ｘ１／ＳｖＪのマウスにおける、２０μｇのα−Ｍｅ−５ＨＴの皮内注入によって誘発された掻痒に対する経口ＤＺＰの用量依存的鎮痒効果を示す。ＤＺＰはα−Ｍｅ−５ＨＴ注入の１時間前に投与し、（ａ）時間経過データ点は平均値±標準誤差であり、同側の頬に導かれた誘発掻爬発作の統計解析は、３０分間定量化した。＊Ｐ＜０．０５対溶媒処置マウス（ＡＮＯＶＡ、次いでダネットのポストホック検定、Ｆ（６，３７）＝６。マウスの数：ｎ＝７、７、４、６、６、７および溶媒につき６、それぞれ０．１、０．３、１、３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ、（ｂ）ＲＨＲＲマウス（ジアゼパムに感受性のα２ＧＡＢＡＡＲのみ）におけるジアゼパムの鎮痒効果の用量依存性。ＡＮＯＶＡ、次いでダネットのポストホック検定、Ｆ（６，３６）＝６．０２；＊、Ｐ＜０．０５；＊＊、Ｐ＜０．０１、グループあたりｎ＝４〜７、（ｃ）はＲＲＨＲ（ジアゼパムに感受性のα３ＧＡＢＡＡＲのみ）である以外は（ｂ）と同じ。ＡＮＯＶＡ、次いでダネットのポストホック検定、Ｆ（６，３７）＝４．４２；＊、Ｐ＜０．０５；＊＊、Ｐ＜０．０１、グループあたりｎ＝６〜８匹マウス。
【図２Ｂ】遺伝的背景１２９Ｘ１／ＳｖＪのマウスにおける、２０μｇのα−Ｍｅ−５ＨＴの皮内注入によって誘発された掻痒に対する経口ＤＺＰの用量依存的鎮痒効果を示す。ＤＺＰはα−Ｍｅ−５ＨＴ注入の１時間前に投与し、（ａ）時間経過データ点は平均値±標準誤差であり、同側の頬に導かれた誘発掻爬発作の統計解析は、３０分間定量化した。＊Ｐ＜０．０５対溶媒処置マウス（ＡＮＯＶＡ、次いでダネットのポストホック検定、Ｆ（６，３７）＝６。マウスの数：ｎ＝７、７、４、６、６、７および溶媒につき６、それぞれ０．１、０．３、１、３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ、（ｂ）ＲＨＲＲマウス（ジアゼパムに感受性のα２ＧＡＢＡＡＲのみ）におけるジアゼパムの鎮痒効果の用量依存性。ＡＮＯＶＡ、次いでダネットのポストホック検定、Ｆ（６，３６）＝６．０２；＊、Ｐ＜０．０５；＊＊、Ｐ＜０．０１、グループあたりｎ＝４〜７、（ｃ）はＲＲＨＲ（ジアゼパムに感受性のα３ＧＡＢＡＡＲのみ）である以外は（ｂ）と同じ。ＡＮＯＶＡ、次いでダネットのポストホック検定、Ｆ（６，３７）＝４．４２；＊、Ｐ＜０．０５；＊＊、Ｐ＜０．０１、グループあたりｎ＝６〜８匹マウス。
【図２Ｃ】遺伝的背景１２９Ｘ１／ＳｖＪのマウスにおける、２０μｇのα−Ｍｅ−５ＨＴの皮内注入によって誘発された掻痒に対する経口ＤＺＰの用量依存的鎮痒効果を示す。ＤＺＰはα−Ｍｅ−５ＨＴ注入の１時間前に投与し、（ａ）時間経過データ点は平均値±標準誤差であり、同側の頬に導かれた誘発掻爬発作の統計解析は、３０分間定量化した。＊Ｐ＜０．０５対溶媒処置マウス（ＡＮＯＶＡ、次いでダネットのポストホック検定、Ｆ（６，３７）＝６。マウスの数：ｎ＝７、７、４、６、６、７および溶媒につき６、それぞれ０．１、０．３、１、３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ、（ｂ）ＲＨＲＲマウス（ジアゼパムに感受性のα２ＧＡＢＡＡＲのみ）におけるジアゼパムの鎮痒効果の用量依存性。ＡＮＯＶＡ、次いでダネットのポストホック検定、Ｆ（６，３６）＝６．０２；＊、Ｐ＜０．０５；＊＊、Ｐ＜０．０１、グループあたりｎ＝４〜７、（ｃ）はＲＲＨＲ（ジアゼパムに感受性のα３ＧＡＢＡＡＲのみ）である以外は（ｂ）と同じ。ＡＮＯＶＡ、次いでダネットのポストホック検定、Ｆ（６，３７）＝４．４２；＊、Ｐ＜０．０５；＊＊、Ｐ＜０．０１、グループあたりｎ＝６〜８匹マウス。
【図３Ａ】遺伝的背景１２９Ｘ１／ＳｖＪの三重ＧＡＢＡＡＲ点突然変異マウスにおける各経口ＤＺＰによる、慢性接触性皮膚炎モデルにおいて評価された効果を示す。ＲＨＲＲ、ＲＲＨＲ、およびＲＲＲＨマウスを、接触性皮膚炎および慢性掻痒を誘発するために、１日目にアセトン／オリーブ油（４：１）に溶解した１００μＬの１０％オキサゾロン（４−エトキシメチレン−２−フェニル−２−オキサゾリン−５−オン、Ｓｉｇｍａ）で後頚部に処置し、７−１７日目に隔日で１００μＬの１％オキサゾロンで処置した。１８日目に、マウスに１０ｍｇ／ｋｇのＤＺＰ腹腔内注入を行った。時間経過（ａ）データ点は平均値±標準誤差、および後頚部に導かれた０分〜２４０分後の掻爬発作数の統計解析（ｂ）である。＊Ｐ＜０．０５対溶媒処置マウス（ＡＮＯＶＡ、次いでボンフェローニのポストホック検定、Ｆ（３，３５）＝０．６３。マウスの数（溶媒／ＤＺＰ処置）：ＲＨＲＲ  ｎ＝６／７、ＲＲＨＲ  ｎ＝６／７およびＲＲＲＨ  ｎ＝７／７（ｃ〜ｅ）。薬剤または溶媒投与の１５分後からの６時間、掻爬発作を計数した。掻爬発作数は、ＲＨＲＲマウス（ｃ）、ＲＲＲＨマウス（ｄ）およびＲＲＨＲマウス（ｅ）における薬物または溶媒投与後の時間に対してプロットした。
【図３Ｂ】遺伝的背景１２９Ｘ１／ＳｖＪの三重ＧＡＢＡＡＲ点突然変異マウスにおける各経口ＤＺＰによる、慢性接触性皮膚炎モデルにおいて評価された効果を示す。ＲＨＲＲ、ＲＲＨＲ、およびＲＲＲＨマウスを、接触性皮膚炎および慢性掻痒を誘発するために、１日目にアセトン／オリーブ油（４：１）に溶解した１００μＬの１０％オキサゾロン（４−エトキシメチレン−２−フェニル−２−オキサゾリン−５−オン、Ｓｉｇｍａ）で後頚部に処置し、７−１７日目に隔日で１００μＬの１％オキサゾロンで処置した。１８日目に、マウスに１０ｍｇ／ｋｇのＤＺＰ腹腔内注入を行った。時間経過（ａ）データ点は平均値±標準誤差、および後頚部に導かれた０分〜２４０分後の掻爬発作数の統計解析（ｂ）である。＊Ｐ＜０．０５対溶媒処置マウス（ＡＮＯＶＡ、次いでボンフェローニのポストホック検定、Ｆ（３，３５）＝０．６３。マウスの数（溶媒／ＤＺＰ処置）：ＲＨＲＲ  ｎ＝６／７、ＲＲＨＲ  ｎ＝６／７およびＲＲＲＨ  ｎ＝７／７（ｃ〜ｅ）。薬剤または溶媒投与の１５分後からの６時間、掻爬発作を計数した。掻爬発作数は、ＲＨＲＲマウス（ｃ）、ＲＲＲＨマウス（ｄ）およびＲＲＨＲマウス（ｅ）における薬物または溶媒投与後の時間に対してプロットした。
【図３Ｃ】遺伝的背景１２９Ｘ１／ＳｖＪの三重ＧＡＢＡＡＲ点突然変異マウスにおける各経口ＤＺＰによる、慢性接触性皮膚炎モデルにおいて評価された効果を示す。ＲＨＲＲ、ＲＲＨＲ、およびＲＲＲＨマウスを、接触性皮膚炎および慢性掻痒を誘発するために、１日目にアセトン／オリーブ油（４：１）に溶解した１００μＬの１０％オキサゾロン（４−エトキシメチレン−２−フェニル−２−オキサゾリン−５−オン、Ｓｉｇｍａ）で後頚部に処置し、７−１７日目に隔日で１００μＬの１％オキサゾロンで処置した。１８日目に、マウスに１０ｍｇ／ｋｇのＤＺＰ腹腔内注入を行った。時間経過（ａ）データ点は平均値±標準誤差、および後頚部に導かれた０分〜２４０分後の掻爬発作数の統計解析（ｂ）である。＊Ｐ＜０．０５対溶媒処置マウス（ＡＮＯＶＡ、次いでボンフェローニのポストホック検定、Ｆ（３，３５）＝０．６３。マウスの数（溶媒／ＤＺＰ処置）：ＲＨＲＲ  ｎ＝６／７、ＲＲＨＲ  ｎ＝６／７およびＲＲＲＨ  ｎ＝７／７（ｃ〜ｅ）。薬剤または溶媒投与の１５分後からの６時間、掻爬発作を計数した。掻爬発作数は、ＲＨＲＲマウス（ｃ）、ＲＲＲＨマウス（ｄ）およびＲＲＨＲマウス（ｅ）における薬物または溶媒投与後の時間に対してプロットした。
【図３Ｄ】遺伝的背景１２９Ｘ１／ＳｖＪの三重ＧＡＢＡＡＲ点突然変異マウスにおける各経口ＤＺＰによる、慢性接触性皮膚炎モデルにおいて評価された効果を示す。ＲＨＲＲ、ＲＲＨＲ、およびＲＲＲＨマウスを、接触性皮膚炎および慢性掻痒を誘発するために、１日目にアセトン／オリーブ油（４：１）に溶解した１００μＬの１０％オキサゾロン（４−エトキシメチレン−２−フェニル−２−オキサゾリン−５−オン、Ｓｉｇｍａ）で後頚部に処置し、７−１７日目に隔日で１００μＬの１％オキサゾロンで処置した。１８日目に、マウスに１０ｍｇ／ｋｇのＤＺＰ腹腔内注入を行った。時間経過（ａ）データ点は平均値±標準誤差、および後頚部に導かれた０分〜２４０分後の掻爬発作数の統計解析（ｂ）である。＊Ｐ＜０．０５対溶媒処置マウス（ＡＮＯＶＡ、次いでボンフェローニのポストホック検定、Ｆ（３，３５）＝０．６３。マウスの数（溶媒／ＤＺＰ処置）：ＲＨＲＲ  ｎ＝６／７、ＲＲＨＲ  ｎ＝６／７およびＲＲＲＨ  ｎ＝７／７（ｃ〜ｅ）。薬剤または溶媒投与の１５分後からの６時間、掻爬発作を計数した。掻爬発作数は、ＲＨＲＲマウス（ｃ）、ＲＲＲＨマウス（ｄ）およびＲＲＨＲマウス（ｅ）における薬物または溶媒投与後の時間に対してプロットした。
【図３Ｅ】遺伝的背景１２９Ｘ１／ＳｖＪの三重ＧＡＢＡＡＲ点突然変異マウスにおける各経口ＤＺＰによる、慢性接触性皮膚炎モデルにおいて評価された効果を示す。ＲＨＲＲ、ＲＲＨＲ、およびＲＲＲＨマウスを、接触性皮膚炎および慢性掻痒を誘発するために、１日目にアセトン／オリーブ油（４：１）に溶解した１００μＬの１０％オキサゾロン（４−エトキシメチレン−２−フェニル−２−オキサゾリン−５−オン、Ｓｉｇｍａ）で後頚部に処置し、７−１７日目に隔日で１００μＬの１％オキサゾロンで処置した。１８日目に、マウスに１０ｍｇ／ｋｇのＤＺＰ腹腔内注入を行った。時間経過（ａ）データ点は平均値±標準誤差、および後頚部に導かれた０分〜２４０分後の掻爬発作数の統計解析（ｂ）である。＊Ｐ＜０．０５対溶媒処置マウス（ＡＮＯＶＡ、次いでボンフェローニのポストホック検定、Ｆ（３，３５）＝０．６３。マウスの数（溶媒／ＤＺＰ処置）：ＲＨＲＲ  ｎ＝６／７、ＲＲＨＲ  ｎ＝６／７およびＲＲＲＨ  ｎ＝７／７（ｃ〜ｅ）。薬剤または溶媒投与の１５分後からの６時間、掻爬発作を計数した。掻爬発作数は、ＲＨＲＲマウス（ｃ）、ＲＲＲＨマウス（ｄ）およびＲＲＨＲマウス（ｅ）における薬物または溶媒投与後の時間に対してプロットした。
【図４Ａ】野生型Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスにおける１００μｇのヒスタミンの皮内注入によって誘発された掻痒に対する経口ＴＰＡ０２３Ｂの鎮痒効果を示す。時間経過（ａ）データ点は平均値±標準誤差であり、同側の頬に導かれた誘発掻爬発作の統計解析（ｂ）は、３０分間定量化した。＊＊Ｐ＜０．０１対溶媒処置マウス（ＡＮＯＶＡ、次いでダネットのポストホック検定、Ｆ（５，４２）＝５．２。マウスの数：ｎ＝１０、８、１０、７、６および溶媒につき６、それぞれ０．０１、０．０３、０．１、１および３ｍｇ／ｋｇ、（ｃ）各経口ＴＰＡ０２３Ｂによる鎮静作用の不存在。ＴＰＡ０２３Ｂは、マウスをオープンフィールドの活動領域に配置する直前に注入した。＊＊＊Ｐ＜０．００１対溶媒処置マウス（ＡＮＯＶＡ、次いでダネットのポストホック検定、Ｆ（５，３４）＝７．６）。マウスの数：ｎ＝７、５、７、７、７および溶媒につき７、それぞれ０．３、１、３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ。すべてのデータ点は、注入後１〜２時間の間に得られた平均値±標準誤差である。
【図４Ｂ】野生型Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスにおける１００μｇのヒスタミンの皮内注入によって誘発された掻痒に対する経口ＴＰＡ０２３Ｂの鎮痒効果を示す。時間経過（ａ）データ点は平均値±標準誤差であり、同側の頬に導かれた誘発掻爬発作の統計解析（ｂ）は、３０分間定量化した。＊＊Ｐ＜０．０１対溶媒処置マウス（ＡＮＯＶＡ、次いでダネットのポストホック検定、Ｆ（５，４２）＝５．２。マウスの数：ｎ＝１０、８、１０、７、６および溶媒につき６、それぞれ０．０１、０．０３、０．１、１および３ｍｇ／ｋｇ、（ｃ）各経口ＴＰＡ０２３Ｂによる鎮静作用の不存在。ＴＰＡ０２３Ｂは、マウスをオープンフィールドの活動領域に配置する直前に注入した。＊＊＊Ｐ＜０．００１対溶媒処置マウス（ＡＮＯＶＡ、次いでダネットのポストホック検定、Ｆ（５，３４）＝７．６）。マウスの数：ｎ＝７、５、７、７、７および溶媒につき７、それぞれ０．３、１、３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ。すべてのデータ点は、注入後１〜２時間の間に得られた平均値±標準誤差である。
【図４Ｃ】野生型Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスにおける１００μｇのヒスタミンの皮内注入によって誘発された掻痒に対する経口ＴＰＡ０２３Ｂの鎮痒効果を示す。時間経過（ａ）データ点は平均値±標準誤差であり、同側の頬に導かれた誘発掻爬発作の統計解析（ｂ）は、３０分間定量化した。＊＊Ｐ＜０．０１対溶媒処置マウス（ＡＮＯＶＡ、次いでダネットのポストホック検定、Ｆ（５，４２）＝５．２。マウスの数：ｎ＝１０、８、１０、７、６および溶媒につき６、それぞれ０．０１、０．０３、０．１、１および３ｍｇ／ｋｇ、（ｃ）各経口ＴＰＡ０２３Ｂによる鎮静作用の不存在。ＴＰＡ０２３Ｂは、マウスをオープンフィールドの活動領域に配置する直前に注入した。＊＊＊Ｐ＜０．００１対溶媒処置マウス（ＡＮＯＶＡ、次いでダネットのポストホック検定、Ｆ（５，３４）＝７．６）。マウスの数：ｎ＝７、５、７、７、７および溶媒につき７、それぞれ０．３、１、３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ。すべてのデータ点は、注入後１〜２時間の間に得られた平均値±標準誤差である。
【図５】野生型Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスにおける１００μｇのクロロキンの皮内注入によって誘発された掻痒に対する経口ＴＰＡ０２３Ｂ用量の鎮痒効果を示す。時間経過（ａ）データ点は平均値±標準誤差であり、同側の頬に導かれた誘発掻爬発作の統計解析（ｂ）は、３０分間定量化した。＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊Ｐ＜０．０１；＊Ｐ＜０．０５対溶媒処置マウス（ＡＮＯＶＡ、次いでダネットのポストホック検定、Ｆ（５，３０）＝６．４。マウスの数：ｎ＝６、６、６、６、６および溶媒につき５、それぞれ０．０１、０．０３、０．１、１および３ｍｇ／ｋｇ。
【図６】慢性掻痒の接触性皮膚炎モデルにおけるＴＰＡ０２３Ｂの鎮痒効果を示す。野生型Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスを、１日目にアセトン／オリーブ油（４：１）に溶解した１００μＬの１０％オキサゾロン（４−エトキシメチレン−２−フェニル−２−オキサゾリン−５−オン、Ｓｉｇｍａ）で後頚部に処置し、７−１７日目に隔日で１００μＬの１％オキサゾロンで処置した。１８日目に、マウスに１ｍｇ／ｋｇのＴＰＡ０２３Ｂ腹腔内注入を行った。時間経過（ａ）データ点は平均値±標準誤差、および注入後１５〜２１０分後に定量化した、後頚部に導かれた掻爬発作数の統計解析（ｂ）である。＊＊＊Ｐ＜０．００１（不対ｔ検定）、溶媒およびＴＰＡ０２３Ｂ処置マウスにつきｎ＝１０。
【図７】野生型Ｃ５７ＢＬ６／ＪマウスにおけるＴＰＡ０２３Ｂの鎮痒効果に対する耐性発達の不存在を示す。マウスを１日目に１０％オキサゾロンで処置し、７〜２７日目に１％オキサゾロンで処置した。１７日目以降、マウスを溶媒または１ｍｇ／ｋｇのＴＰＡ０２３Ｂで１日１回、９日間連続して処置した。２８日目に、マウスに溶媒またはＴＰＡ０２３Ｂ（１ｍｇ／ｋｇ腹腔内）のいずれかを投与した。時間経過（ａ）データ点は平均値±標準誤差、および注入後１５〜９０分後に定量化した、後頚部に導かれた掻爬発作数の統計解析（ｂ）である。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１（不対ｔ検定）。相互作用前処置×急性処置の二元ＡＮＯＶＡ  Ｆ（３，１６）＝１、溶媒／溶媒（ｖ／ｖ）、溶媒／ＴＰＡ０２３Ｂ（ｖ／ｄ）、ＴＰＡ０２３Ｂ／溶媒（ｄ／ｖ）およびＴＰＡ０２３Ｂ／ＴＰＡ０２３Ｂ（ｄ／ｄ）処置マウスについて、それぞれｎ＝５、５、６および６。
【図８】野生型１２９Ｘ１／ＳｖＪマウスにおける２０μｇのα−Ｍｅ−５ＨＴ誘発掻痒に対するα３−ＧＡＢＡＡ受容体選択的化合物ＴＰ００３（各経口１０ｍｇ／ｋｇ）の鎮痒効果を示すが、α３−ＧＡＢＡＡＲをＤＺＰ非感受性とした点突然変異マウス（ＨＨＲＨマウス）は示さない。ＴＰ００３はμｇのα−Ｍｅ−５ＨＴ注入の１時間前に注入した。時間経過（ａ）データ点は平均値±標準誤差であり、同側の頬に導かれた誘発掻爬発作の統計解析（ｂ）は、２０分間定量化した。＊＊Ｐ＜０．０１対溶媒処置マウス（不対ｔ検定）。相互作用前処置×急性処置の二元ＡＮＯＶＡ  Ｆ（３，２０）＝８．７、溶媒およびＴＰ００３処置野生型マウスではそれぞれｎ＝６および７であり、溶媒およびＴＰ００３処置ＨＨＲＨマウスではそれぞれｎ＝６および５であった。
【図９】慢性掻痒の接触性皮膚炎モデルにおけるＮＤＭＣの鎮痒効果を示す。野生型Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスを、１日目にアセトン／オリーブ油（４：１）に溶解した１００μＬの１０％オキサゾロン（４−エトキシメチレン−２−フェニル−２−オキサゾリン−５−オン、Ｓｉｇｍａ）で後頚部に処置し、７−１７日目に隔日で１００μＬの１％オキサゾロンで処置した。１８日目に、マウスに１０ｍｇ／ｋｇのＮＤＭＣ腹腔内注入を行った。時間経過（ａ）データ点は平均値±標準誤差、および注入後１５〜２１０分後に定量化した、後頚部に導かれた掻爬発作数の統計解析（ｂ）である。＊Ｐ＜０．０５（不対ｔ検定）、溶媒およびＮＤＭＣ処置マウスにつきｎ＝９。
【図１０】は、野生型Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスにおける１００μｇのクロロキンの皮内注入によって誘発された掻痒に対する、腹腔内注入（３０ｍｇ／ｋｇ）された神経ステロイドガナキソロンの鎮痒効果を示す。時間経過（ａ）データ点は平均値±標準誤差であり、同側の頬に導かれた誘発掻爬発作の統計解析（ｂ）は、３０分間定量化した。＊Ｐ＜０．０５対溶媒処置マウス（不対ｔ検定）。マウスの数：溶媒およびガナキソロンにつきそれぞれｎ＝８および９。
【図１１】アロステリックＧＡＢＡＡ受容体モジュレーターの構造を示す。
【図１２】１２９ＳｖＪマウスにおけるα−メチル５−ＨＴの用量試験結果を示す。（Ａ）より代謝的に安定なセロトニン類似体α−メチル５−ＨＴによって誘発された野生型１２９Ｘ１／ＳｖＪにおける掻爬応答。異なる用量のα−メチル５−ＨＴを右頬に皮内注入し、掻痒応答を３０分間計数した。（Ａ）α−メチル５−ＨＴ注入後の経時的な掻爬発作の数（平均±標準誤差）。（Ｂ）定量および統計分析（ＡＮＯＶＡ、次いでダネットのポストホック検定）。円は個々のマウスから得られた値である。バーおよびエラーバーは平均値および標準誤差である。Ｆ（４，２１）＝８．８４；＊、Ｐ＜０．０５；＊＊＊、Ｐ＜０．００１；グループあたりｎ＝３〜１０。
【図１３】ＴＰＡ０２３Ｂのインビトロおよびインビボの薬理学的プロファイルを示す。（ａ）ＴＰＡ０２３Ｂ（１μＭ、灰色）およびビククリン（ｂｉｃ１０μＭ、矢印で示す）の存在下、対照条件下（黒色）で記録したＧＡＢＡ作動性ＩＰＳＣの例（１０連続電流トレースの平均）。緑色に重ねると、二重指数関数に適合する。ＩＰＳＣは電場刺激によって誘発され、アクセス抵抗およびリーク電流をモニターするための過分極電圧ステップが先行した。ＩＰＳＣ減衰（ｂ）および振幅（ｃ）の加重時間定数の変化。円は個々のセルである。バーおよびエラーバーは平均±標準誤差である。Ｐ値は対応ｔ検定から得られた。セルの数ｎは、両分析で７であった。
【図１４】急性掻痒のマウスモデルにおけるＴＰＡ０２３Ｂ（経口）の鎮痒作用を示す。掻痒応答は、α−Ｍｅ５ＨＴ（２０μｇ）の皮内注入によって誘発された。ｎ＝８、６、７、７、６および溶媒につき６匹のマウス、０．０１、０．０３、０．１、１．０および３．０ｍｇ／ｋｇ。
【図１５】ＴＰＡ０２３Ｂの鎮痒作用がＧＡＢＡＡＲのベンゾジアゼピン結合部位を介して起こることを示す。右頬にα−メチル５−ＨＴ（２０μｇ）を皮内注入した。ＴＰＡ０２３Ｂ（１ｍｇ／ｋｇ、経口）は、野生型マウスにおいて強い鎮痒作用を示した。すべてのＴＰＡ０２３Ｂ感受性ＧＡＢＡＡＲサブタイプがベンゾジアゼピン非感受性とされたＨＲＲＲマウスでは、ＴＰＡ０２３Ｂはその鎮痒作用を完全に失っていた。二元ＡＮＯＶＡ  Ｆ（２，２２）＝６．４５。遺伝子型×処置につきＰ＝０．０１９。野生型およびＨＲＲＲマウス（ｎ＝６〜７匹／グループ）の処置効果につき、それぞれＰ＝０．００５（＊＊）および０．６０（ｎｓ）であった。ＴＰＡ０２３Ｂ処置野生型マウスに対し、＋＋、Ｐ＜０．０１であった。（Ｃ）野生型マウスにおける髄腔内注入ＴＰＡ０２３Ｂ（０．３ｍｇ／ｋｇ）の鎮痒作用。右腿皮膚にクロロキン（１００μｇ）を皮内注入した。
【図１６】ＧＡＢＡＡＲαサブユニットにおけるＨ→Ｒ点突然変異がＴＰＡ０２３ＢによるＧＡＢＡＡＲのモジュレーションおよび結合を妨げることを示す。（Ａ）ＨＥＫ２９３細胞におけるα２ＧＡＢＡＡＲのＴＰＡ０２３Ｂ（１μＭ）による陽性アロステリックモジュレーションは、α２サブユニットのＨ→Ｒ点突然変異によって消失する。（Ｂ）従って、ＴＰＡ０２３Ｂは、α１、２、３、５Ｈ→Ｒ点突然変異マウスから調製した脳膜への［３Ｈ］Ｒｏ１５−４５１３結合を置換することができなかった。同じことが、α（Ｈ／Ｈ）受容体にのみ結合するジアゼパムについても確認された。対照的に、α（Ｈ／Ｈ）受容体およびα（Ｒ／Ｒ）受容体の両方に結合するブラタゼニルは、［３Ｈ］Ｒｏ１５−４５１３結合を用量依存的に阻害した。平均値±標準偏差、ｎ＝４。記号よりも小さなエラーバーは表示されない。
【図１７】野生型マウスにおいて髄腔内（すなわち、脊柱管内）注入ＴＰＡ０２３Ｂ（０．３ｍｇ／ｋｇ）の鎮痒作用を示す。右腿皮膚にクロロキン（１００μｇ）を皮内注入した。（ａ）注入した皮膚領域を咬んでいた時間（秒／分）。（ｂ）起痒物質注入後０〜１０分の間に計数された掻爬発作の総数。Ｐ＝０．００８、不対ｔ検定（ｎ＝６〜７匹マウス）、（ｃ）特異的に脊髄からα２ＧＡＢＡＡＲを欠くｈｏｘＢ８−α２−／−マウスにおけるＴＰＡ０２３Ｂ（１ｍｇ／ｋｇ）の鎮痒作用。比較のために、ＧＡＢＡＡＲα２ｆｌ／ｆｌマウスおよび全体的α２ＧＡＢＡＡＲ（Ｈ→Ｒ）点突然変異マウスを示す。右腿にクロロキン（１００μｇ）を皮内注入した。３つの遺伝子型すべてにおいて、クロロキン誘発咬合応答（注入した皮膚領域を咬んでいた合計時間）は実質的に同一であった（すべての比較につき、ＡＮＯＶＡ、次いでボンフェローニのポストホック検定、Ｆ（１４，２）＝０．３９、Ｐ＝１．０）。対照的に、ＴＰＡ０２３Ｂ（１ｍｇ／ｋｇ、経口）処置マウスの咬合応答は遺伝子型間で有意に異なった（ＡＮＯＶＡ、次いでボンフェローニのポストホック検定、Ｆ（２，１３）＝１０．６）。＋、Ｐ≦０．０５；＋＋、Ｐ≦０．０１。ｈｏｘＢ８−α２−／−マウスと全体的α２Ｒ／Ｒマウスとの間に有意差（Ｐ＝０．４５）は見られず、少なくともα２ＧＡＢＡＡＲ媒介成分が脊髄部位を介して発生したことを示した。
【実施例】
【０１０４】
脊髄後角の抑制ニューロンは、シナプス後標的ニューロンの興奮性を低下させるために、２つの高速アミノ酸伝達物質、ＧＡＢＡおよびグリシンを放出する。本実施例において、本発明者らは、ＧＡＢＡ作動系にその努力を集中させ、脊髄ＧＡＢＡＡ受容体（ＧＡＢＡＡＲ）の特定のサブタイプの薬理学的モジュレーションによる阻害を強化することにより、掻痒、特に慢性掻痒を抑制できるかどうかを調べた。ＧＡＢＡＡＲは、１９のサブユニットのレパートリーから構築されたアニオンチャネルである。脳および脊髄のＧＡＢＡＡＲの大部分は、化学量論的に２：２：１のα、βおよびγサブユニットで構成されている。哺乳動物ゲノムは、これらのサブユニット（α１−６、β１−３およびγ１−３）をコードする１２の遺伝子を有する。脊髄ＧＡＢＡＡＲは、β２／３サブユニットおよびγサブユニットと共に、主にα１、α２、α３またはα５サブユニットを含み、α４およびα６サブユニットは低密度にしか発現しないかまたは完全に欠損している。これらのＧＡＢＡＡＲの生理学的機能および薬理学的特性の差異は、主にαサブユニットによる。本発明者らは、ＧＡＢＡＡＲを含むα２／α３を脊髄掻痒コントロールの重要な要素として同定するために遺伝子改変マウスを使用した。この結果を踏まえ、本発明者らはα２／α３ＧＡＢＡＡＲ選択的化合物の潜在的な鎮痒作用を評価し、それらがマウスにおける急性ヒスタミン依存性およびヒスタミン非依存性掻痒を軽減するだけでなく、明らかな副作用なく、マウスおよび犬における慢性的掻痒を軽減することを示した。
【０１０５】
実施例１：ジアゼパム（ＤＺＰ）の鎮痒効果
セロトニン誘発掻痒に対するＤＺＰの効果を試験するために、ベンゾジアゼピン感受性α２、α３またはα５ＧＡＢＡＡ受容体のいずれかを有するＧＡＢＡＡ受容体三重点突然変異マウス（Ｒａｌｖｅｎｉｕｓ  ｅｔ．ａｌ．、Ｎａｔ  Ｃｏｍｍ  ６：６８０３、２０１５）を使用した。この特定の遺伝的背景（１２９ＳｖＪ）のマウスは、掻痒実験においてまだ系統的に分析されていないので、本発明者らは最初に、右頬に注入した一連の起痒物質に対するこれらのマウスの感受性を評価した。本発明者らは、重要な掻痒メッセンジャーセロトニンのより代謝的に安定した誘導体であるα−メチルセロトニン（α−メチル５−ＨＴ）の注入が、注入部位に導かれる用量依存的な強い掻爬行動を誘発することを見出した（図１２）。定義されたＧＡＢＡＡ受容体サブタイプの活性化によって誘発される可能性のある鎮痒効果を試験するために、マウスに各経口投与１０ｍｇ／ｋｇのＤＺＰまたは溶媒を投与した。ＤＺＰ注入の１時間後に、マウスに掻痒を誘発するために、セロトニン受容体アゴニストであるα−メチル−５−ヒドロキシ−トリプトアミン（α−Ｍｅ−５ＨＴ）２０μｇを頬注入で投与した。２０分が経過する間、同側の頬に導かれた掻爬発作を記録し、ＤＺＰ注入マウスを溶媒注入対照マウスと比較した（図１ａ、ｂ）。
【０１０６】
ＤＺＰ感受性α２またはα３ＧＡＢＡＡ受容体を有するマウスは、ＤＺＰ処置に応答して掻爬発作の有意な減少を示したが、ＤＺＰ感受性α５ＧＡＢＡＡ受容体のみを有するマウスは、ＤＺＰ処置後の掻爬発作において有意な減少を示さなかった。α１受容体がベンゾジアゼピンの鎮静効果を与えるため、ＤＺＰの鎮痒効果に対するα１受容体の寄与の可能性は調べることができなかった。残りのα−サブユニットα４およびα６はＤＺＯＰ非感受性であり、従ってＤＺＰの鎮痒効果に寄与する可能性は非常に低い。結果として、本発明者らは、α２およびα３ＧＡＢＡＡ受容体によって媒介されるセロトニン誘発掻痒に対するベンゾジアゼピンＤＺＰの鎮痒効果を実証している。
【０１０７】
実施例２：ＤＺＰの用量依存的鎮痒効果
２０μｇのα−Ｍｅ−５ＨＴによって誘発された掻痒に対する用量応答関係を確立するため、ＤＺＰに感受性のα２ＧＡＢＡＡ受容体のみを有するマウス（ＲＨＲＲマウス）に、溶媒、または０．１、０．３、１、３、１０および３０ｍｇ／ｋｇのＤＺＰで各経口投与した。３０分が経過する間、α−Ｍｅ−５ＨＴを注入した頬に導かれた掻爬発作を記録し、ＤＺＰ処置マウスを溶媒処置対照マウスと比較した（図２ａ、ｂ）。α−Ｍｅ−５ＨＴの１時間前にＤＺＰまたは溶媒を注入した。本発明者らは、ＤＺＰ処置による、α２ＧＡＢＡＡ受容体によって媒介される掻痒発作の用量依存的減少を実証している。
【０１０８】
実施例３：接触性皮膚炎の慢性掻痒モデルにおけるジアゼパムの鎮痒効果
ＤＺＰ感受性α２、α３またはα５ＧＡＢＡＡ受容体のみを有するＧＡＢＡＡ受容体三重点突然変異マウスを、アセトン（オリーブ油（４：１）中に溶解した１００μｌの１０％オキサゾロン（４−エトキシメチレン−２−フェニル−２−オキサゾリン−５−オン；Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）で後頚部に処置した。７日目から１７日目まで、これらのマウスを１００μｌの１％オキサゾロンで毎日処置して、接触性皮膚炎および慢性掻痒を誘発した。１８日目に、マウスに１０ｍｇ／ｋｇＤＺＰまたは溶媒を腹腔内注入した。後頚部に導かれた掻爬発作の数は、注入後４時間にわたって記録された（図３ａ、ｂ）。
【０１０９】
ＤＺＰを投与したマウスは、溶媒のみを投与したマウスと比較して、掻爬発作の数の有意な減少を示した（図２ｂ）。これは、ＤＺＰの鎮痒効果がα２およびα３ＧＡＢＡＡ受容体を介して付与され、慢性掻痒のマウスモデルにおいても有効であることを実証する。
【０１１０】
実施例４：ＴＰＡ０２３Ｂの鎮痒効果
本発明者らは、原理的にすべてのα２およびα３ＧＡＢＡＡ受容体アゴニストが好適な鎮痒物質であるというその知見をさらに支持することを目的として、ＴＰＡ０２３Ｂ（Ｒｕｓｓｅｌｌ  ｅｔ．ａｌ．、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ、４９（４）：１２３５−８、２００６）などの他のサブタイプ特異的ＧＡＢＡＡ受容体モジュレーターを、その鎮痒物質としての適性につき調べた。
【０１１１】
ＴＰＡ０２３Ｂはα２、α３およびα５アゴニストであり、α１アンタゴニストは、鎮痒効果につき、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（図４ａ、ｂ）での１００μｇヒスタミンの頬注入に対して最初に評価された。ヒスタミン注入の９０分前に、各経口ＴＰＡ０２３Ｂをマウスに注入した。ＴＰＡ０２３Ｂの用量は、溶媒、０．０１、０．０３、０．１、１および３ｍｇ／ｋｇであった。本発明者らは、ヒスタミン作動性掻痒に対するＴＰＡ０２３Ｂ処置による掻痒発作の用量依存的な減少を実証し、ＴＰＡ０２３Ｂが野生型マウスにおいて鎮痒性であることを示している。
【０１１２】
ＴＰＡ０２３Ｂがマウスに与え得る鎮静効果を排除するために、用量応答実験を含めた（図４ｃ）。マウスに、溶媒、０．３、１、３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ）の種々の用量でのＴＰＡ０２３Ｂの各経口注入を行った。注入後、マウスをオープンフィールドの活動領域に配置し、注入の１時間後からの１時間、その活動を記録した。１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇの用量で注入されたマウスは、溶媒の注入のみを受けたマウスと比較して、活性の有意な増加を示し、野生型マウスにおけるＴＰＡ０２３Ｂの鎮静作用を排除した。
【０１１３】
野生型動物におけるＴＰＡ０２３Ｂの鎮痒効果を確認し、非ヒスタミン作動性掻痒に対する有効性を証明するために、第２の起痒物質を含めた。１００μｇのクロロキンを頬注入する９０分前に、図４と同じ用量のＴＰＡ０２３Ｂを注入した（図５ａ、ｂ）。本発明者らは、クロロキン誘発掻痒に対するＴＰＡ０２３Ｂ処置による掻痒発作の用量依存的減少を実証し、ＴＰＡ０２３Ｂが野生型マウスの非ヒスタミン作動性掻痒に対して鎮痒性であることを確認している。臨床的に関連する疾患におけるＴＰＡ０２３Ｂの鎮痒効果を評価するために、慢性掻痒の接触性皮膚炎モデルを使用した。この目的のために、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、アセトン（オリーブ油（４：１）に溶解した１００μＬの１０％オキサゾロン（４−エトキシメチレン−２−フェニル−２−オキサゾリン−５−オン、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）で後頚部に処置した。７日目から１７日目まで、これらのマウスを１００μｌの１％オキサゾロンで毎日処置して、接触性皮膚炎および慢性掻痒を誘発した。１８日目に、マウスに１ｍｇ／ｋｇのＴＰＡ０２３Ｂを腹腔内注入した。後頚部に導かれた掻爬発作の数は、注入後１５〜２１０分の間記録された（図６ａ）。ＴＰＡ０２３Ｂ注入マウスは、溶媒注入マウスと比較して、掻爬発作の有意な減少を示した（図６ｂ）。従って、ＴＰＡ０２３Ｂは、発明者の他の知見によれば、鎮痒物質として好適である。
【０１１４】
長期処置の後、ＴＰＡ０２３Ｂの鎮痒効果に対する耐性の発現を、慢性掻痒の接触性皮膚炎モデルにおいて再び調べた。この目的のために、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、アセトン（オリーブ油（４：１）に溶解した１００μＬの１０％オキサゾロン（４−エトキシメチレン−２−フェニル−２−オキサゾリン−５−オン、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）で後頚部に処置した。７日目から２７日目まで、これらのマウスを１００μｌの１％オキサゾロンで隔日で処置して、接触性皮膚炎および慢性掻痒を誘発および維持した。１７日目以降、マウスを溶媒または１ｍｇ／ｋｇのＴＰＡ０２３Ｂの腹腔内注入で９日間連続して処置した。２８日目に、マウスに溶媒またはＴＰＡ０２３Ｂ（１ｍｇ／ｋｇ）のいずれかを腹腔内注入した。注入後１５〜２１０分の間に後頚部に導かれた掻爬発作の数が記録された（図７ａ）。２８日目にＴＰＡ０２３Ｂ注入を受けたマウスは、溶媒注入を受けたマウスと比較して、掻爬発作において有意な減少を示した。これは７日目から２７日目までに受けた処置とは無関係であった。溶媒のみを投与されたマウス（ｖ／ｖ）または７日目から２７日目までＴＰＡ０２３Ｂを投与され、２８日目に溶媒を投与されたマウス（ｄ／ｖ）と比較して、ＴＰＡ０２３Ｂ処置を受けたマウス（ｄ／ｄ）は、７日目から２７日目まで溶媒を投与され、２８日目にＴＰＡ０２３Ｂを投与されたマウス（ｖ／ｄ）と同様の減少を示した（図７ｂ）。従って、本発明者らは、ＴＰＡ０２３Ｂの鎮痒効果に対する耐性発達を排除する。
【０１１５】
実施例５：セロトニン誘発掻痒に対するＴＰ００３の鎮痒効果
ベンゾジアゼピンの鎮痒効果におけるα３ＧＡＢＡＡ受容体の機能は、α３ＧＡＢＡＡ受容体サブタイプ特異的アゴニストＴＰ００３（４，２’−ジフルオロ−５’−［８−フルオロ−７−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−３−イル］ビフェニル−２−カルボニトリル；Ｄｉａｓ  ｅｔ．ａｌ．、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、２５（４６）：１０６８２−１０６８８；２００５）を用いてさらに扱われた。
【０１１６】
野生型およびα３のみがＤＺＰ非感受性とされたＧＡＢＡＡＲ単一点突然変異マウス（ＨＨＲＨマウス）に、１０ｍｇ／ｋｇのＴＰ００３または溶媒を各経口注入で投与した。注入の１時間後に、マウスに２０μｇのα−Ｍｅ−５ＨＴ頬注入を行い、掻痒を誘発した。２０分が経過する間、同側の頬に導かれた掻爬発作を記録し、ＴＰ００３注入マウスを溶媒注入対照マウスと比較した（図８ａ、ｂ）。
【０１１７】
ＴＰ００３注入を受けた野生型マウスは、溶媒注入対照マウスと比較して掻爬発作の有意な減少を示し、ＨＨＲＨマウスにおいては、ＴＰ００３の鎮痒効果は不存在であった。従って、α３ＧＡＢＡＡ受容体の活性化は、セロトニン誘発掻痒後に鎮痒効果を生じるのに十分である。
【０１１８】
実施例６：ＮＤＭＣ接触性皮膚炎誘発掻痒の鎮痒効果
本発明者らは、接触性皮膚炎誘発慢性掻痒に対するα２およびα３ＧＡＢＡＡ受容体アゴニストの鎮痒効果を確認しようと探求した。この目的のために、α２対α１で、改善された活性を有するベンゾジアゼピンであるＮ−デスメチルクロバザムを、その鎮痒効果について評価した（Ｊｅｎｓｅｎ  ｅｔ．ａｌ．、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１４年２月１２日；９（２）：ｅ８８４５６）。野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、アセトン（オリーブ油（４：１）に溶解した１００μＬの１０％オキサゾロン（４−エトキシメチレン−２−フェニル−２−オキサゾリン−５−オン、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）で後頚部に処置した。７日目から１７日目まで、これらのマウスを１００μｌの１％オキサゾロンで毎日処置して、接触性皮膚炎および慢性掻痒を誘発した。１８日目に、マウスに１０ｍｇ／ｋｇのＮＤＭＣを腹腔内注入した。後頚部に導かれた掻爬発作の数は、注入後１５〜２１０分の間記録された（図９ａ）。ＮＤＭＣ注入マウスは、溶媒注入マウスと比較して、掻爬発作の有意な減少を示した（図９ｂ）。従って、ＮＤＭＣは、実施例４のＴＰＡ０２３Ｂで得られた結果によれば、鎮痒物質としても好適である。
【０１１９】
実施例７：クロロキン誘発掻痒に対する神経ステロイドガナキソロンの鎮痒効果
ＧＡＢＡＡ受容体を強化するベンゾジアゼピンとは別の分子クラスは、ガノキソロンなどの神経ステロイドである（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ．ａｌ．、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．１９９７年３月；２８０（３）：１２８４−９５）。掻痒の処置の標的としてのＧＡＢＡＡ受容体を確認するために、本発明者らは３０ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与ガナキソロンで野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを前処置した（図１０ａ、ｂ）。ガナキソロンを注入した動物は、溶媒処置したマウスと比較して、掻爬発作回数の有意な減少を示した。これらのデータは、ベンゾジアゼピン処置によるか神経ステロイド処置によるかにかかわらず、ＧＡＢＡＡ受容体の阻害効果増強が、掻痒を軽減するための可能な戦略であることを示す。
【０１２０】
実施例８：二次掻痒ニューロンの脊髄掻痒受容体（ｐｒｕｒｉｔｏｃｅｐｔｏｒ）への阻害性インプット
本発明者らは、ＧＲＰ（ガストリン放出ペプチド）ニューロンを伝播する掻痒シグナルが局所阻害性介在ニューロンからのインプットを受けることを確認した。この目的のために、本発明者らは、ＧＲＰ：：ｃｒｅトランスジェニックマウスにおいて、ＧＲＰニューロンから開始した逆行性の単／経シナプス狂犬病ウイルスに基づく追跡実験を行った。この逆行追跡により、ＧＲＰニューロンへのシナプス前の多数の阻害性および興奮性ニューロンが同定された。注入された後角部の横断面を免疫蛍光イメージングによって分析した。ＡＡＶ．ｆｌｅｘ．ＲａｂＧに感染したＣｒｅ陽性ＧＲＰニューロンおよび二次狂犬病ウイルス感染ニューロンを可視化した。Ｌｍｘ１ｂおよびＰａｘ２を共染色すると、それぞれ３９％興奮性および４５％阻害性の経シナプス的に標識されたニューロンが明らかになった。経シナプス的に感染したニューロンの１６％は、Ｌｍｘ１ｂまたはＰａｘ２に対する抗体で染色されず、未分類のままであった。阻害性ニューロンの約半分（４８％）は、後角の薄層Ｉ／ＩＩに位置し、阻害性ニューロンの大部分は純粋にＧＡＢＡ作動性であった。残りの半分（５２％）は、ほとんどの阻害性ニューロンがグリシンおよびＧＡＢＡを共発現する、より深い層（薄層ＩＩＩ／ＩＶ）に存在した。
【０１２１】
実施例９：一次掻痒受容体末端および二次掻痒ニューロンで発現するＧＡＢＡＡＲサブタイプ
本発明者らは、ＧＲＰニューロン（二次掻痒受容体）上のα１、α２、α３、およびα５ＧＡＢＡＡＲサブユニットおよび一次ＭｒｇｐｒＡ３陽性掻痒受容体の脊髄軸索および末端の存在を調べた。ＧＲＰニューロンおよびＭｒｇｐｒＡ３繊維の両方は、α２および／またはα３ＧＡＢＡＡＲサブユニットを有する薄層ＩＩに高密度で集中する。ＧＲＰ陽性ニューロンおよびＭｒｇｐｒＡ３陽性軸索および末端を同定するために、本発明者らは、ＧＲＰ：：ｅＧＦＰおよびＭｒｇｐｒＡ３：：ｃｒｅ−ｅＧＦＰトランスジェニックマウスを使用した。これらのマウスから調製した脊髄切片の分析により、α２およびα３ＧＡＢＡＡＲサブユニットの発現が、ＧＲＰニューロンおよびＭｒｇｒｐＡ３陽性末端の発現と重複することが確認された。対照的に、α１およびα５ＧＡＢＡＡＲサブユニットは、薄層ＩＩからは大部分が欠けていたが、深部の後角に集中していた。より高い倍率での共焦点分析により、α２およびα３ＧＡＢＡＡＲサブユニットがＭｒｇｐｒＡ３繊維およびＧＲＰニューロンによって実際に発現されたことがさらに実証された。
【０１２２】
実施例１０：α２／α３選択的ＧＡＢＡＡＲモジュレーターの鎮痒効果。
本発明者らは、遺伝子改変マウスで得られたデータが、ＧＡＢＡＡＲサブタイプ選択的化合物の治療有効性で説明されるかどうかを試験した。この目的のために、本発明者らは、野生型マウスにおけるα１欠乏ＧＡＢＡＡＲモジュレーターＴＰＡ０２３Ｂの鎮痒効果を試験した。ＴＰＡ０２３Ｂを掻痒モデルで試験する前に、そのインビトロの薬理学的プロファイルを、ＧＡＢＡＡＲの異なるサブタイプで一過的にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞において確認した。ＴＰＡ０２３Ｂはα２β３γ２およびα３β３γ２ＧＡＢＡＡＲのベンゾジアゼピン結合部位で部分的アゴニスト活性を有したが、α１β２γ２ＧＡＢＡＡＲにおいてＧＡＢＡ誘導電流を増強せず、α５β２γ２ＧＡＢＡＡＲにおいて非常に弱い増強効果しか有しなかった。これは、ＧＡＢＡの不存在下でＧＡＢＡＡＲを活性化しなかった。α２およびα３ＧＡＢＡＡＲのベンゾジアゼピン結合部位でのこの部分的アゴニスト活性は、ＧＲＰニューロンにおけるＧＡＢＡ作動性阻害の促進を説明した（図１３）。ＧＲＰ：：ｅＧＦＰマウスの急性的に調製した脊髄切片において実施された全細胞記録は、ＴＰＡ０２３Ｂ（１μＭ）がＧＲＰニューロンにおけるＧＡＢＡ作動性阻害シナプス後電流（ＧＡＢＡ−ＩＰＳＣ）の減衰を４３±１０％（Ｐ＜０．０１、対応ｔ検定、ｎ＝７）で有意に延長するが、ＧＡＢＡ−ＩＰＳＣの振幅には影響しないことを明らかにした。
【０１２３】
ＴＰＡ０２３Ｂのこの好ましいインビトロプロファイルは、副作用の傾向の低下を説明するだろうか。α１ＧＡＢＡＡＲにおけるアゴニスト活性の欠如と一致して、ＴＰＡ０２３Ｂは最大３ｍｇ／ｋｇ（経口）の用量で鎮静作用を示さなかったが、代わりに１および３ｍｇ／ｋｇでのオープンフィールド試験では自発運動活性を増加させ、α２ＧＡＢＡＡＲの抗不安活性を反映しているようである。ＴＰＡ０２３Ｂは、水平ワイヤ試験において筋弛緩を引き起こさず、ロータロッドアッセイにおける運動協応を低下させなかった。
【０１２４】
次に、本発明者らは、非ヒスタミン作動性掻痒の２つの介在物質であるクロロキン（１００μｇ）およびα−メチル５−ＨＴ（２０μｇ）、ならびにヒスタミン（１００μｇ）の右頬への皮内注入によって誘発される急性掻痒に対する、全身（経口）ＴＰＡ０２３Ｂの有効性を継続して調べた（図５ｂおよび図１４）。クロロキン誘発掻爬行動は、野生型マウスにおいて、０．０３ｍｇ／ｋｇ以上の用量でのＴＰＡ０２３Ｂによって減少した。α−メチル５−ＨＴ誘発掻痒およびヒスタミン誘発掻痒についても同様の効果が得られた。本発明者らは、ＴＰＡ０２３Ｂの鎮痒効果がＧＡＢＡＡＲのベンゾジアゼピン結合部位におけるその効果によるものであることを確認するために、ＴＰＡ０２３Ｂ（α２、α３およびα５ＧＡＢＡＡＲ）によるモジュレーションに感受性のすべてのＧＡＢＡＡＲがベンゾジアゼピン非感受性とされた、ＧＡＢＡＡＲ三重点突然変異マウスにおいて（すなわち、ＨＲＲＲマウスにおいて）その効果を評価した。ＴＰＡ０２３Ｂの鎮痒作用は、これらのマウスにおいて完全に失われた（図１５）。これらの実験の前提条件として、本発明者らはまた、αサブユニットにおけるＨ→Ｒ点突然変異がＴＰＡ０２３ＢによるＧＡＢＡＡＲの結合および強化を妨げることを確認した（図１６）。野生型マウス（図１７）における腰椎レベルでのＴＰＡ０２３Ｂ（０．３ｍｇ／ｋｇ）の髄腔内注入、および特異的に脊髄からα２ＧＡＢＡＡＲを欠損したｈｏｘＢ８−ＧＡＢＡＡＲα２−／−マウス（図１７）におけるＴＰＡ０２３Ｂ（３ｍｇ／ｋｇ、経口）の全身投与による後続実験により、ＴＰＡ０２３Ｂの鎮痒作用が脊髄に由来すること、または顔の皮膚からのインプットの場合には髄質後角から由来することが確認される。
【０１２５】
材料および方法
マウス。ホモ接合型三重および四重（Ｈ→Ｒ）ＧＡＢＡＡＲ点突然変異マウスは、以前に記載された単一点突然変異マウスの交雑育種によって生成した（Ｓｕｎ，Ｙ．Ｇ．，ｅｔ．ａｌ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２００９、３２５、１５３１−１５３４；Ｒｏｓｓ，Ｓ．Ｅ．，ｅｔ．ａｌ．、Ｎｅｕｒｏｎ、２０１０、６５、８８６−８９８；Ｒｕｄｏｌｐｈ，Ｕ＆Ｍｏｅｈｌｅｒ，Ｈ．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ、２０１４、５４、４８３−５０７）。ＧＡＢＡＡＲ点突然変異マウスおよび対応する対照マウスは、（１２９Ｘ１／ＳｖＪ）背景であった。他のトランスジェニックマウス（単一ＧＡＢＡＡＲ点突然変異マウスを含む）および対応する対照マウスは、Ｃ５７ＢＬ／６遺伝的背景のものであった。ＢＡＣトランスジェニックＧＲＰ：：ｅＧＦＰ（Ｔｇ（Ｇｒｐ−ＥＧＦＰ）ＤＶ１９７Ｇｓａｔ／Ｍｍｕｃｄ）およびＧＲＰ：：ｃｒｅ（Ｔｇ（Ｇｒｐ−ｃｒｅ）ＫＨ２８８Ｇｓａｔ／Ｍｍｕｃｄ）は、ＧＥＮＳＡＴプロジェクト（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｓａｔ．ｏｒｇ）から得た。さらに、ＢＡＣトランスジェニックＭｒｇｐｒＡ３：：ｃｒｅ−ｅＧＦＰ（Ｔｇ（Ｍｒｇｐｒａ３−ＧＦＰ／ｃｒｅ）＃Ｘｚｄ）（Ｈａｎ，Ｌ．，ｅｔ．ａｌ．、Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、２０１３、１６、１７４−１８２）を使用した。これらの３つのＢＡＣトランスジェニックマウス系統はヘテロ接合状態に維持された。ＴＶＡレポーターマウス（Ｇｔ（ＲＯＳＡ）２６Ｓｏｒ＜ｔｍ１（Ｔｖａ）Ｄｓａ）（Ｓｅｉｄｌｅｒ，Ｂ．，ｅｔ．ａｌ．、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、２００８、１０５、１０１３７−１０１４２）は、ｃｒｅ依存的方法で遍在性プロモーターからＴＶＡトランスジーンを発現する。
【０１２６】
薬物。ジアゼパムはＳｉｇｍａから入手した。ＴＰＡ０２３Ｂ（６，２’−ジフルオロ−５’−［３−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］ビフェニル−２−カルボニトリル）は、ＡＮＡＷＡによって合成され、純度は＞９５％であった。マウスへの経口（ｐ．ｏ．）および腹腔内（ｉ．ｐ．）投与のために、ジアゼパムおよびＴＰＡ０２３Ｂを０．９％生理食塩水／１％Ｔｗｅｅｎ８０中に懸濁させた。電気生理学的実験および放射性リガンド結合のために、ＴＰＡ０２３ＢをＤＭＳＯに溶解し、０．００１〜１μＭ（最終ＤＭＳＯ濃度≦０．１２％）まで細胞外溶液で希釈した。
【０１２７】
ＡＡＶ調製。ＡＡＶ．ｆｌｅｘ．ｍＣｈｅｒｒｙ−２Ａ−ＲａｂＧベクターを社内でクローニングし、Ｐｅｎｎ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｃｏｒｅ（Ｐｅｒｅｌｍａｎ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）でカスタムサービスを用いてパッケージングした。ｐＡＡＶ−Ｅｆ１ａ−ＤＩＯ−ｈＣｈＲ２（Ｈ１３４Ｒ）−ｍＣｈｅｒｒｙＷＰＲＥ−ｐＡからＡｓｃＩおよびＮｈｅＩを用いてＣｈＲ２−ｍＣｈｅｒｒｙ融合タンパク質を切り出し、これをＰＣＲ増幅ｍＣｈｅｒｒｙ−２Ａ−ＲａｂＧ  ｃＤＮＡで置換することにより、ＡＡＶ．ｆｌｅｘ．ｍＣｈｅｒｒｙ−２Ａ−ＲａｂＧベクターをクローニングした。血清型１ベクターのＡＡＶをこの研究で使用した。
【０１２８】
脊髄内ウイルス注入。動物を２〜５％イソフルランで麻酔し、腰椎Ｌ４およびＬ５を露出した。次いで動物を電動定位固定枠に入れ、一対の脊髄アダプターを用いて脊柱を固定した。脊椎薄層および背部棘突起を除去して、Ｌ４腰椎切片を露出した。硬膜は、傾斜した３０Ｇの針を用いて背部血管の約５００μｍ左に穿孔された。ウィルスベクターは、１０μｌのＨａｍｉｌｔｏｎシリンジに取り付けられたガラスマイクロピペット（チップ直径３０〜４０μｍ）を用いて２００〜３００μｍの深さで注入された。注入速度（３０ｎｌ／分）は、ｎａｎｏｍｉｔｅアタッチメント（Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ、Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ、ＭＡ）を有するＰＨＤウルトラシリンジポンプを用いて制御した。注入後５分間、マイクロピペットをその場に残した。創傷を縫合し、動物に０．０３ｍｇ／ｋｇのブプレノルフィンを腹腔内注入し、ヒートマットで回復させた。狂犬病ウイルスを注入したマウスを、注入の３〜５日後に灌流に供した。
【０１２９】
逆行性追跡実験。逆行性単シナプス追跡実験は、腰部脊髄のニューロンを発現するＧＲＰ：：ｃｒｅから開始した。二段階戦略が用いられた。これは、最初に、バイシストロン性Ｃｒｅ依存性ｍＣｈｅｒｒｙおよび狂犬病糖タンパク質（ＲｂＧ）発現カセットを含むＡＡＶヘルパーウイルス（ＡＡＶ．ｆｌｅｘ．ｍＣｈｅｒｒｙ−２Ａ−ＲａｂＧ；３００ｎｌの注入あたり２．９×１０９ＧＣ）の注入、および１４日後のＥｎｖＡ（鳥肉腫白血病ウイルス「Ａ」エンベロープ糖タンパク質）シュードタイプ糖タンパク質欠損狂犬病ウイルス（ＥｎｖＡ．Ｒａｂｉｅｓ△Ｇ．ｅＧＦＰ；５００ｎｌの注入あたり１×１０６ＧＣ）の後続注入を含む。Ｒｏｓａ２６レポーターマウス系統（Ｓｅｉｄｌｅｒ，Ｂ．，ｅｔ．ａｌ．、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、２００８、１０５、１０１３７−１０１４２）から発現されたＴＶＡタンパク質は、Ｇｒｐ：：Ｃｒｅ＋ニューロンの細胞型特異的感染を可能にし、ＲｂＧは初代感染ニューロンにおいて糖タンパク質欠損狂犬病ウイルスをトランス補完するために発現された。その後の神経化学分析のために、マウスを狂犬病ウイルス注入の５日後にＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で灌流し、続いてＰＢＳ中の４％ＰＦＡで１〜２時間、後固定した。組織を２５μｍ厚の冠状凍結切片へと切断し、これをＳｕｐｅｒｆｒｏｓｔ  Ｐｌｕｓ顕微鏡スライド（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｚｕｒｉｃｈ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）上に置いた。以下の抗体を使用した：ラット抗ｍＣｈｅｒｒｙ（１：１０００）、ウサギ抗ＧＦＰ（１：１０００）、ニワトリ抗ＧＦＰ（１：１０００）、モルモット抗Ｌｍｘ１ｂ（１：１０，０００、Ｃａｒｍｅｎ  Ｂｉｒｃｈｍｅｉｅｒから贈呈）、ウサギ抗Ｐａｘ２（１：４００）ならびにシアニン３（Ｃｙ３）−、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８−、ＤｙＬｉｇｈｔ４８８−、６４７−および６４９−結合ロバ二次抗体（１：５００；Ｄｉａｎｏｖａ、Ｈａｍｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）。
【０１３０】
画像分析。蛍光画像を、０．８ＮＡ  ２０ｘ  Ｐｌａｎ−ａｐｏｃｈｒｏｍａｔ対物レンズまたは１．３  ＮＡ  ６３ｘ  ＥＣ  Ｐｌａｎ−Ｎｅｏｆｌｕａｒ油浸対物レンズおよびＺＥＮ２０１２ソフトウェア（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ）を使用して、Ｚｅｉｓｓ  ＬＳＭ７１０  Ｐａｓｃａｌ共焦点顕微鏡で取得した。適用可能な場合は常に、ＩｍａｇｅＪまたはＡｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ（Ａｄｏｂｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｄｕｂｌｉｎ、Ｉｒｅｌａｎｄ）でコントラスト、イルミネーションおよび偽色を調整した。４〜８匹の動物から調製した切片で細胞数を定量し、１匹につき少なくとも４つの切片を分析した。隣接する切片における細胞の二重計数を避けるために、定量に使用したすべての切片は少なくとも５０μｍの距離で採取した。免疫応答細胞の数は、ＩｍａｇｅＪ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｅｒプラグインを用いて決定した。
【０１３１】
ＧＡＢＡＡＲサブユニットの免疫組織化学および画像分析。ＧＡＢＡＡＲαサブユニットとＭｒｇｐｒＡ３末端およびＧＲＰニューロンとの共局在化を、４０μｍ厚の水平マウス腰部脊髄凍結切片上で視覚化した。マウスをペントバルビタール（ネンブタール、５０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）で深く麻酔し、酸素化ａＣＳＦで灌流した。脊髄を圧出により迅速に集め、氷冷４％ＰＦＡ中に９０分間置いた。次いで、脊髄を３０％ショ糖／ＰＢＳ溶液中で一晩凍結保存し、ドライアイスで急速凍結し、厚さ４０μｍの冠状フリーフローティング切片へと切断し、染色の日まで−２０℃の不凍液中に保持した（Ｓｅｉｄｌｅｒ，Ｂ．，ｅｔ．ａｌ．、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、２００８、１０５、１０１３７−１０１４２（２００８）。抗体は自家製のサブユニット特異的抗血清であった（Ｓｅｉｄｌｅｒ，Ｂ．，ｅｔ．ａｌ．、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、２００８、１０５、１０１３７−１０１４２（２００８）。最終希釈率は１：２０，０００（α１）、１：１，０００（α２）、１：１０，０００（α３）、および１：３，０００（α５）であった。後角ＧＲＰニューロンにおけるＧＡＢＡＡＲαサブユニットの分布を、上記のように２〜３匹の雄ＧＲＰ：：ｅＧＦＰトランスジェニックマウスから調製した冠状切片上の免疫蛍光染色によって分析した。染色のために、切片を２％正常ヤギ血清を含有するトリス緩衝液で希釈した一次抗体の混合物と共に４℃で一晩インキュベートした。切片を広範囲に洗浄し、Ｃｙ３（１：５００）、Ｃｙ５（１：２００）（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）またはＡｌｅｘａ４８８（１：１０００、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）にコンジュゲートさせた対応する二次抗体と共に室温で１時間インキュベートした。切片を再度洗浄し、蛍光搭載培地（ＤＡＫＯ、Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ、ＣＡ）でカバーした。
【０１３２】
画像取得および分析は、以前に記載されたようにして行った（Ｐａｕｌ，Ｊ．、Ｚｅｉｌｈｏｆｅｒ、Ｈ．Ｕ．＆Ｆｒｉｔｓｃｈｙ、Ｊ．Ｍ．Ｊ  Ｃｏｍｐ  Ｎｅｕｒｏｌ、２０１２、５２０、３８９５−３９１１）。６３ｘ  Ｐｌａｎ−Ａｐｏｃｈｒｏｍａｔ対物レンズ（Ｎ．Ａ．１．４）を用いて、二重免疫蛍光シグナルを共焦点顕微鏡（ＬＳＭ  ７１０；Ｚｅｉｓｓ  ＡＧ、Ｊｅｎａ、Ｇｅｒｍａｎｙ）によって視覚化した。ピンホールは各チャネルごとに１Ａｉｒｙ単位に設定し、別々のカラーチャネルを順番に取得した。取得設定は、光電子増倍管のダイナミックレンジ全体をカバーするように調整された。典型的には、０．３μｍ離れた共焦点画像（１０２４×１０２４ピクセル）のスタックを、５６〜１３０ｎｍ／ピクセルの倍率で取得した。表示のために、画像分析ソフトウェアＩｍａｒｉｓ（Ｂｉｔｐｌａｎｅ；Ｚｕｒｉｃｈ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で画像を処理した。必要に応じて、すべてのチャネルからの画像を重ね合わせ（最大強度投影）、バックグラウンドを差し引いた。αサブユニット染色を表示する画像にはローパスフィルタを用いた。ＧＲＰ：：ｅＧＦＰニューロンおよび樹状突起におけるαサブユニット−ＩＲ分布の解析は、閾値セグメント化アルゴリズムを用いて、８ビットグレースケール画像で７８ｎｍ／ピクセルの倍率で取得した、２〜３匹のマウスからの単一共焦点切片において行った（最小強度、９０〜１３０；面積＞０．０８μｍ２）。
【０１３３】
皮膚組織学および免疫蛍光。背中の皮膚の炎症部および健常部を採取した。組織をＯＣＴ化合物（Ｓａｋｕｒａ  Ｆｉｎｅｔｅｋ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＵＳＡ）中に包埋し、ドライアイス上で凍結させた。クリオスタット切片（７μｍ）をガラススライド上に置き、空気乾燥させ、アセトンで−２０℃で２分間固定し、続いて８０％メタノールで４℃で５分間再湿潤させた。検体を５％ロバ血清、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘおよび１％ＢＳＡ含有ＰＢＳと共に室温で１時間インキュベートした後、ラット抗マウスＣＤ６８（１：２００；Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）で４℃で一晩インキュベートした。試料を室温で３０分間、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８−または５９４−結合二次抗体およびＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２（すべてＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＵＳＡ）と共にインキュベートした。ＡｘｉｏＣａｍ  ＭＲｃカメラ（Ｚｅｉｓｓ）およびＰｌａｎ−Ａｐｏｃｈｒｏｍａｔ  ０．４５ＮＡ  １０ｘ対物レンズ（Ｚｅｉｓｓ）を備えたＡｘｉｏｓｋｏｐ  ２  ｍｏｔ  ｐｌｕｓ顕微鏡（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ、Ｆｅｌｄｂａｃｈ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）でＣＤ６８染色切片を検査した。Ａｘｉｏ−Ｖｉｓｉｏｎソフトウェア４．８を使用して、切片ごとに少なくとも４つの個別視野の画像を取得した。ＩｍａｇｅＪ  ｖ１．４９を用いて、角質層と組織内に３００μｍシフトしたその輪郭との間の蛍光領域を測定した。結果は、基底膜１μｍあたりのＣＤ６８陽性面積（μｍ２）として表される。
【０１３４】
ＨＥＫ２９３細胞記録における電気生理学的記録。組換えＧＡＢＡＡＲによる電流に対するＴＰＡ０２３Ｂの効果を、ＧＡＢＡＡＲを一時的に発現するＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ）において研究した。リポフェクタミンＬＴＸを用いてＨＥＫ２９３細胞をトランスフェクトした（Ｄｕｇｕｅ，Ｇ．Ｐ．，ｅｔ．ａｌ．、Ｎｅｕｒｏｎ、２００９、６１、１２６−１３９）。本発明者らは、すべての記録細胞においてγ２サブユニット（ＢＤＺによるＧＡＢＡＡＲのモジュレーションに必要）の発現を確実にするために、ＩＲＥＳからのγ２サブユニット＋ｅＧＦＰを発現するプラスミド、および記録のために選択されたｅＧＦＰ陽性細胞のみで細胞をトランスフェクトした。トランスフェクション混合物は、１α１、１β２、３γ２／ｅＧＦＰ（成功したトランスフェクションのマーカーとして用いた）を含有し、またはα２、α３もしくはα５ＧＡＢＡＡＲの場合には１αｘ、１β３、３γ２／ｅＧＦＰを含有した（μｇ単位）。記録はトランスフェクションの１８〜３６時間後に行った。ＧＡＢＡ誘発電流の全細胞パッチクランプ記録は、室温（２０〜２４℃）および保持電位−６０ｍＶで行った。記録電極は、１２０ＣｓＣｌ、１０ＥＧＴＡ、１０ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４０）、４ＭｇＣｌ２、０．５ＧＴＰおよび２ＡＴＰ（ｍＭ単位）を含有する溶液で満たした。外部溶液は、１５０ＮａＣｌ、１０ＫＣｌ、２．０ＣａＣｌ２、１．０ＭｇＣｌ２、１０ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）および１０グルコース（ｍＭ単位）を含有した。低飽和ＧＡＢＡ濃度（ＥＣ５）の手動制御パルス（４〜６秒）を用いて、ＧＡＢＡを記録細胞に適用した。分析されたすべてのサブユニットの組み合わせについて、ＧＡＢＡのＥＣ５値を決定した。ＥＣ５０値およびヒル係数（ｎＨ）は、式ＩＧＡＢＡ＝Ｉｍａｘ［ＧＡＢＡ］ｎＨ／（［ＧＡＢＡ］ｎＨ＋［ＥＣ５０］ｎＨ）に対する正規化濃度−応答曲線の適合から得られた。Ｉｍａｘは、１ｍＭ  ＧＡＢＡの濃度によって誘発された平均最大電流として決定された。ＴＰＡ０２３ＢをＤＭＳＯに溶解し、続いて記録溶液で希釈し、プレインキュベーションせずにＧＡＢＡと共に同時適用した。
【０１３５】
脊髄切片における電気生理学的記録。以前に記載されたようにいずれかの性別の２０〜２９日齢のＧＲＰ：：ｅＧＦＰマウスから横脊髄切片（厚さ４００μＭ）を調製した（Ｄｕｇｕｅ，Ｇ．Ｐ．，ｅｔ．ａｌ．、Ｎｅｕｒｏｎ、２００９、６１、１２６−１３９）。全細胞パッチクランプ記録を、ｅＧＦＰ陽性ニューロンを標的として室温で行った。記録中、切片は、９５％Ｏ２、５％ＣＯ２で平衡化した、１２０ＮａＣｌ、２．５ＫＣｌ、１．２５ＮａＨ２ＰＯ４、２６ＮａＨ２ＣＯ３、５ＨＥＰＥＳ、１ＭｇＣｌ２、２ＣａＣｌ２および１４．６グルコース（ｐＨ７．４）（ｍＭ単位）を含有するＳＣＦで１〜２ｍｌ／分の速度で連続的に灌流した。記録されたニューロンを、Ｐａｔｃｈｍａｓｔｅｒ取得ソフトウェアで制御されたＥＰＣ９増幅器（ＨＥＫＡ  Ｅｌｅｋｔｒｏｎｉｃ、Ｌａｍｂｒｅｃｈｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて−７０ｍＶで電圧クランプした。１２０ＣｓＣｌ、２ＭｇＣｌ２、６Ｈ２Ｏ、１０ＨＥＰＥＳ、０．０５ＥＧＴＡ、２ＭｇＡＴＰ、０．１ＮａＧＴＰ、５ＱＸ−３１４（ｐＨ７．３５）（ｍＭ単位）を含む細胞内溶液でパッチピペット（ホウケイ酸ガラス；３．５〜４．５ＭΩ）を充填した。ＩＰＳＣは、ａＣＳＦで充填されたガラス電極を用いて０．０５Ｈｚで電気刺激（３００μｓ、０．２〜５０Ｖ）によって誘発され、記録細胞の細胞体から５０〜１００μｍの位置に置かれた。実験は、ＩＰＳＣのＧＡＢＡ作動性成分を単離するために、ＮＢＱＸ（２０μＭ）、ＡＰＳ（５０μＭ）およびストリキニン（０．５μＭ）の存在下で行った。記録の最後にビククリン（１０μＭ）を添加して、記録されたＩＰＣＳのＧＡＢＡ作動性を確認した。加重減衰時間定数（τｗ）は、以下の式を使用して二重指数適合から計算した：τｗ＝（τ１Ａ１＋τ２Ａ２）／（Ａ１＋Ａ２）式中、τ１およびτ２は高速減衰時間定数および低速減衰時間定数であり、Ａ１およびＡ２は同等の振幅重み係数である（Ｌａｂｒａｋａｋｉｓ，Ｃ、Ｌｏｒｅｎｚｏ，Ｌ．Ｅ．、Ｂｏｒｉｅｓ，Ｃ、Ｒｉｂｅｉｒｏ−ｄａ−Ｓｉｌｖａ，Ａ．＆Ｄｅ  Ｋｏｎｉｎｃｋ，Ｙ  Ｍｏｌ  Ｐａｉｎ、２００９、５、２４）。電気刺激の前に短い過分極電圧ステップを適用して各ニューロンのアクセス抵抗を連続的にモニターした。アクセス抵抗が２０％を超えて変化したセルは分析から除外した。
【０１３６】
［３Ｈ］Ｒｏ１５−４５１３結合。すべての高親和性ジアゼパム感受性結合が不活性化された、８〜１０週齢の四重ＲＲＲＲ（Ｈ→Ｒ）点突然変異マウスの脳組織を、２０倍量のプロテアーゼ阻害剤（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｍｉｎｉ、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を含む１０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１００ｍＭ  ＫＣｌ中でホモジナイズし、１０００ｇで１０分間遠心分離した。上清を３０，０００ｇで２０分間遠心分離し、得られた粗膜ペレットを緩衝液で１回洗浄した。放射性リガンド結合のために、粗膜のアリコート（１００μｇ）を、増加した濃度のジアゼパム（ジアゼパム感受性部位に結合する）、ブレタゼニル（ジアゼパム感受性および非感受性部位に結合する；ｒｅｆ．４８）またはＴＰＡ０２３Ｂおよび４ｎＭの［３Ｈ］Ｒｏ１５−４５１３（２２．７Ｃｉ／ｍｍｏｌ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ジアゼパム感受性および非感受性部位に結合する）で、全量０．２ｍｌで氷上で９０分間インキュベートした。非特異的［３Ｈ］Ｒｏ１５−４５１３結合を、１０μＭのフルマゼニルを反応物に添加することによって評価した。半自動細胞採取装置（Ｓｋａｔｒｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いた急速真空ろ過によりインキュベーションを停止し、洗浄したフィルターを液体シンチレーション計数に付した。
【０１３７】
マウスにおける行動実験。すべての行動実験は、７〜１２週齢の雌および雄のマウスで行った。同数の雌および雄のマウスを確保するように注意した。すべての行動実験は、マウスの遺伝子型または薬物もしくは溶媒によるそれらの処置のいずれかを知らない、男性の実験者によって行われた。ジアゼパムまたはＴＰＡ０２３Ｂと溶媒との比較を含む実験において、マウスを異なるグループにランダムに割り当てた。
【０１３８】
実験の少なくとも１日前に剃毛された右頬に、起痒物質または０．９％生理食塩水の皮内マイクロ注入を受けたマウスにおいて、急性掻痒を評価した。ＧＡＢＡＡＲの一次および二次掻痒受容体における寄与を扱う２組の実験では、右大腿に起痒物質が注入された（図１７）。注入前に、マウスを地上に置かれたケージで３０分超、直径１５ｃｍの円筒状の囲いに順化させた。周囲の音量で部屋のラジオによって生成されたバックグラウンドのホワイトノイズを、聴覚の注意散漫を防ぐために適用した。３０ゲージの針を斜めに挿入し、起痒物質（全量１０μｌ中）を注入する前に挿入点を越えて皮膚中に水平に５ｍｍ押し込んだ。麻酔は使用されなかった。正確な注入は、注入時にわずかなドーム状の水疱の出現によって確認された。注入後、マウスを円筒状の囲いに戻し、３０分間ビデオ撮影した。ビデオはオフラインで解析した。同側の頬に導かれた後肢の掻爬は、発作に計数され、１掻爬は、マウスが掻爬のために足を持ち上げて足をケージの床に戻すまでとして定義した。大腿部の皮膚に起痒物質を注入した実験の場合、注入した皮膚領域を咬んでいた時間は、掻痒の尺度として秒／分で計数した。
【０１３９】
慢性掻痒は、接触性皮膚炎モデルにおいて調べられた（Ｋｉｄｏ−Ｎａｋａｈａｒａ，Ｍ．，ｅｔ．ａｌ．、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ、２０１４、１２４、２６８３−２６９５）。０日目に剃毛した後頚部上のアセトン／オリーブ油（４：１ｖ／ｖ）中の１０％オキサゾロン（１００μｌ）でマウスを１回処置した。７日間の休止期間の後、１０日間隔日で、後頚部上のアセトン／オリーブ油（４：１ｖ／ｖ）中の１％オキサゾロン（１００μｌ）でマウスを処置した。実験の日に、マウスに短時間かつ軽度のイソフルラン麻酔下で、薬物または溶媒を腹腔内注入した。同側の頬に導かれた後肢の掻爬は、掻爬数として定量化した。
【０１４０】
以前に記載されているように、運動活性、筋弛緩作用および運動協応を評価した（Ｒａｌｖｅｎｉｕｓ，Ｗ．Ｔ．、Ｂｅｎｋｅ，Ｄ．、Ａｃｕｎａ，Ｍ．Ａ．、Ｒｕｄｏｌｐｈ，Ｕ．＆Ｚｅｉｌｈｏｆｅｒ，Ｈ．Ｕ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、２０１５、６）。簡潔には、試験の６０分前にＴＰＡ０２３Ｂ（１ｍｇ／ｋｇ、経口）または溶媒を投与した。ＴＰＡ０２３Ｂ投与後６０〜１２０分の時間間隔の間、運動活性を分析した。運動協応は、５分以内に４ｒｐｍから４０ｒｐｍまで加速するロータロッドで評価した。ＴＰＡ０２３Ｂ投与の６０分後、マウスをロータロッド上に置いた。マウス１匹あたり１５回の測定が行われた。筋弛緩を評価するために、マウスを、地上２０ｃｍに置かれた金属水平ワイヤ上にその前足をのせて置いた。ＴＰＡ０２３Ｂ投与後６０分〜１２０分の間に、少なくとも１つの後肢でワイヤを掴むことにつき成功および失敗を記録した。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【国際調査報告】
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