(57)【要約】  本発明は、医薬の分野に関し、特に、感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患のヒトを含む哺乳類における処置の治療法及び／又は予防法において用いられるＣＤ６産物とイミペネムとを含む組成物及びキットオブパーツを提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォームとイミペネムとを含む組成物。
【請求項２】
薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とともに、請求項１に記載の組成物を含む医薬組成物。
【請求項３】
ＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォームとイミペネムとを含むキットオブパーツ。
【請求項４】
前記ＣＤ６産物は、組換え可溶性ＣＤ６、好ましくはヒト組換え可溶性ＣＤ６産物である、請求項１若しくは２に記載の組成物、又は請求項３に記載のキットオブパーツ。
【請求項５】
前記ＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォームは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１〜２及び請求項４のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項３若しくは４に記載のキットオブパーツ。
【請求項６】
前記組成物及び／又は前記キットオブパーツは、シラスタチンを更に含む、請求項１〜２及び請求項４〜５のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項３〜５のいずれか一項に記載のキットオブパーツ。
【請求項７】
薬剤として用いられる、請求項１〜２及び請求項４〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患のヒトを含む哺乳類における処置の治療法及び／又は予防法のために用いられる、請求項１〜２及び請求項４〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
薬剤として、同時に、順次的に、又は別々に用いられる、請求項３〜６のいずれか一項に記載のキットオブパーツ。
【請求項１０】
感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患のヒトを含む哺乳類における処置の治療法及び／又は予防法において、同時に、順次的に、又は別々に用いられる、請求項３〜６のいずれか一項に記載のキットオブパーツ。
【請求項１１】
前記感染症は、微生物感染、好ましくは菌血症であり、及び／又は前記炎症状態は、全身性炎症反応症候群又は敗血症であり、及び／又は前記感染病原体は、細菌、真菌、ウイルス、寄生虫、及びそれらの組合せからなる群から選択される、請求項８に記載の組成物、又は請求項１０に記載のキットオブパーツ。
【請求項１２】
感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患のヒトを含む哺乳類における処置の治療法及び／又は予防法において用いられる、ＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォームであって、該方法は、ヒトを含む哺乳類に、該ＣＤ６産物、又はその誘導体及びイミペネムを、同時に、順次的に又は別々に投与することを含む、ＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォーム。
【請求項１３】
前記方法は、シラスタチンの投与を更に含む、請求項１２に記載のＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォーム。
【請求項１４】
感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患のヒトを含む哺乳類における処置の治療法及び／又は予防法において用いられるイミペネムであって、該方法は、ヒトを含む哺乳類に、イミペネム及びＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォームを、同時に、順次的に又は別々に投与することを含む、イミペネム。
【請求項１５】
前記方法は、シラスタチンの投与を更に含む、請求項１４に記載のイミペネム、又はその誘導体、又はそのアイソフォーム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬の分野に、特に、感染症、及びそれに関連した炎症状態の治療的及び／又は予防的処置のための、抗生物質と組み合わせたＣＤ６等のタンパク質の性質を有する化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
敗血症は、感染病原体、最も一般的には細菌であるが、同様に真菌、ウイルス又は寄生虫に対する宿主反応によって引き起こされる生命を脅かす状態である。敗血症は、感染によって引き起こされる調節不全の全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）とみなされ、重篤で持続的な炎症促進性状態を招く。免疫系がかかる反応を制御することができないために、多臓器機能不全（ＭＯＤ）及び心血管虚脱（敗血症性ショック）となり、解決されないと、死に至る可能性がある（非特許文献１）。かかる機能不全性宿主炎症反応は、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）と称される微生物細胞壁上に存在する保存構造によって誘発される。ＰＡＭＰは、微生物生理機能にとって必須化合物であり、それらの中には、グラム陰性（Ｇ−）菌由来のＬＰＳ、グラム陽性（Ｇ＋）菌由来のリポテイコ酸（ＬＴＡ）及びペプチドグリカン（ＰＧＮ）、真菌由来のβ−グルカン及びマンナン、又はウイルス由来の一本／二本鎖核酸がある（非特許文献２）。
【０００３】
敗血症は、多くの原因に起因し得るが、通常は、自然発症した、又は外傷、手術、火傷の結果として、若しくは癌若しくはＡＩＤＳ等の衰弱性状態により誘導される診断未確定及び／又は無処置の局部的感染（例えば、肺炎又は腹膜炎）によって誘発される。敗血症は通常、振戦、発熱、血圧低下（敗血症性ショック）、呼吸促迫、高心拍数、及び皮膚病変から始まる。敗血症は、数時間のうちに、血管での自然凝固、重症低血圧、多臓器不全、ショック、壊疸及び最終的には死を引き起こし得る。敗血症は、ヒト及び他の動物において高い罹患率及び死亡率をもたらす（重症敗血症患者の死亡率は最大６０％）。米国及び欧州では、毎年１５０万人が敗血症を発症する。これらの患者の３０％が、１ヵ月後に死亡し、２０％が、６ヵ月後に死亡する。米国では、敗血症は、１０番目の死因であり、これは、梗塞、乳癌又は肺癌により引き起こされる死亡率よりも死亡率が高いことを表している。
【０００４】
敗血症における最も重要な介入は、迅速な診断と処置である（診断と処置が１時間遅れる毎に、死亡率が５％〜１０％増加する）。敗血症の診断は、困難である場合がある。発熱、頻脈及び呼吸困難等のその症状の幾つかはよく見られるものであり、他の障害に起因するものであると混同されることがある。重症敗血症と診断された患者は通常、専門治療のため病院の集中治療室（ＩＣＵ）に入ることになる。
【０００５】
今日でも、敗血症、重症敗血症及び敗血症性ショックは、人口の高齢化の結果としての予測発生率の増加及び莫大な社会経済的負担、侵襲的医療処置の増加、多剤耐性（ＭＤＲ）細菌の出現、並びに慢性疾患の有病率の増加を伴って、依然として臨床ニーズが満たされないままである（非特許文献３）。
【０００６】
ＰＡＭＰの検出は、免疫細胞上に存在する、生殖系列によりコードされ、クローン選択されず、非多型であるパターン認識受容体（ＰＲＲ）によって達成される。ＰＲＲは、種々の構造タンパク質及び機能タンパク質受容体ファミリー（例えば、Ｔｏｌｌ様受容体、スカベンジャー受容体又はＣ型レクチン）に属し、病原体検出だけでなく、自然免疫反応及び適応免疫反応の会合及び調節にも寄与する（非特許文献４）。
【０００７】
スカベンジャー受容体システインリッチスーパーファミリー（ＳＲＣＲ−ＳＦ）は、９０〜１１０アミノ酸長のシステインリッチ球状ドメインの１回又は数回の反復の存在を特徴とするタンパク質受容体の古来の高度に保存された群である（非特許文献５）。哺乳類では、ＳＲＣＲ−ＳＦの成員は、造血及び非造血由来細胞によって発現され、そこで、多重機能を示す。ＳＲＣＲ−ＳＦの成員全てに関して統一した役割は見られないが、それらの幾つかが、ＰＲＲとして機能する。かかる群として、マクロファージ（ＳＲ−ＡＩ、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ１６３及びＳｐα）、上皮（ＳＣＡＲＡ５、ＤＭＢＴ１、及びＳ５Ｄ−ＳＲＣＲＢ）、又はリンパ球（ＣＤ５及びＣＤ６）受容体が挙げられる（非特許文献６）。
【０００８】
ＣＤ６糖タンパク質は、ＳＲＣＲ−ＳＦの別のリンパ球性の成員であるＣＤ５に非常に相同的なリンパ球表面受容体である。受容体はともに、共通の祖先遺伝子からの複製によって得られると考えられ（非特許文献７）、主にＴ細胞、及び自然抗体の産生に関与するＢ１ａ細胞サブセットによって発現される。ＣＤ６及びＣＤ５は、３つのタンデムＳＲＣＲドメイン及びシグナル伝達に適した細胞質側末端（cytoplasmic tail）によって構成される類似した細胞外領域を共有する。実際に、ＣＤ６及びＣＤ５は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体に物理的に結合され（非特許文献８）、Ｔ細胞発達及び活性化プロセスを調節するのにふさわしい役割を果たす（非特許文献９、非特許文献１０）。ＣＤ６は、ＬＰＳ、ＬＴＡ及びＰＧＮ等の細菌ＰＡＭＰと相互作用するが、ＣＤ５は相互作用しない。ＣＤ６−ＬＰＳ（２．６９±０．３２×１０-8Ｍ）、ＣＤ６−ＬＴＡ（０．１７±０．０２μＭ）及びＣＤ６−ＰＧＮ（１．１±０．１ｎＭ）相互作用のＫｄが決定されており、細菌構成成分に関する主要なマクロファージ受容体であるＣＤ１４に関して報告されるＫｄと類似している（非特許文献１１、非特許文献１２）。
【０００９】
したがって、ヒトＣＤ６の組換え可溶性形態（ｒｓｈＣＤ６）の予防的注入は、Ｇ＋及びＧ−細菌エンドトキシン（それぞれ、ＬＴＡ＋ＰＧＮ、及びＬＰＳ）、並びにＭＤＲ表現型とは無関係に、生きている細菌（黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、アシネトバクター・バウマニ（Acinetobacter baumannii））全体によって誘導される敗血症性ショックのマウスモデルにおいて、死亡率、及び炎症促進性サイトカイン（ＩＬ−１β、ＩＬ−６及びＴＮＦ−α）の血清レベルを大幅に低減させる（非特許文献６、非特許文献１３）。
【００１０】
敗血症及び敗血症性ショックの全死亡率は、対症療法及び強力な広域スペクトル抗生物質の利用能の飛躍的な進歩にも関わらず、依然として高いままである（それぞれ、３５％及び６０％）（非特許文献１４）。抗生物質は、敗血症の処置の欠かせない部分を構成するものであるが、重症敗血症及び敗血症性ショックと関係するＭＯＤと関連付けられる死亡率を実質的に低減するにはおそらく不十分である。これにより、ＭＤＲ細菌の増加とともに、代替非抗生物質（補助的）戦略に関する研究が必須となる。これらの戦略として、対症療法の改善の他に、細菌病原性因子及び／又は宿主炎症性メディエーター及び免疫メディエーターを対象とした処置が挙げられる（非特許文献３、非特許文献１、非特許文献１５）。
【００１１】
特許文献１は、ｒｓｈＣＤ６の腹腔内（ｉ．ｐ．）投与により、マウスにおけるＬＰＳ誘導性敗血症性ショックによって引き起こされる致死効果が相殺されること、またＣＤ６が、敗血症性ショック症候群及び感染症に関連した他の炎症性疾患の介入の治療可能性を有することを開示している。
【００１２】
さらに、発症の初期段階における幾つかの薬物候補は、ＴＲＥＭ−１（Triggering Receptor Expressed on Myeloid cells-1）受容体アゴニスト（Merck & Co Inc及びBioXell SpA）；スーパー抗原と称される黄色ブドウ球菌及び化膿連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）によって産生される致命的な細菌毒素のファミリーの作用を阻止する短ペプチドであるスーパー抗原アンタゴニスト（Atox Bio Ltd.）；免疫系及び代謝機能を制御する自己免疫性及び抗炎症性薬物である免疫調節ホルモン（ＩＲＨ、Hollis-Eden Pharmaceuticals Inc.）；並びにグラム陰性菌血症用の処置としてのアデノシンＡ１受容体アンタゴニスト（Endacea Inc.）である。開発中の他の分子は、Ｔｏｌｌ様受容体−４アンタゴニスト（武田薬品工業株式会社及びエーザイ株式会社）；抗ＴＮＦ−アルファポリクローナル抗体断片（Protherics）；ウシ腸由来アルカリホスファターゼ（AM-Pharma）；一酸化窒素を中和するＮｏｒａｔｈｉｏｌ（Medinox）；及び２００６年に欧州規制当局から販売承認を受け、米国では後期臨床試験中のトランスジェニックアンチトロンビンＩＩＩであるＡＴｒｙｎ（商標）（GTC Biotherapeutics）である。
【００１３】
抗ＩＬ−８抗体（特許文献２）、抗ＩＬ−１８抗体（特許文献３）、抗Ｃ５ａ抗体及びＣ末端切断型Ｃ５ａペプチド（特許文献４）、ケモカイン及びケモカイン断片（特許文献５）、プロテインＣ及びＢＰＩ抗体の組合せ（特許文献６）、ＣＯＸ−２阻害剤（特許文献７）、藻類リポ多糖（特許文献８）並びにＴＮＦ−αに対する抗体及び細菌リポ多糖に対する抗体（特許文献９）等の、敗血症を処置するための他のアプローチが提唱されている。
【００１４】
しかしながら、重症感染の処置におけるこの数十年間の大きな進歩にもかかわらず、敗血症の発生率及び敗血症に起因する死亡率は、増加し続けている。したがって、感染症及びこれらの感染症に関連した炎症状態の予防及び治療用の新規の改善された方法及び組成物を提供することが望ましいと思われる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】欧州特許第２１４３４３６号
【特許文献２】米国特許出願第２００３００２１７８号
【特許文献３】米国特許出願第２００３０００８８２２号
【特許文献４】米国特許出願第２００２０１６５１３８号
【特許文献５】米国特許出願第２００２０１５５０９４号
【特許文献６】米国特許出願第２００２００４４９２９号
【特許文献７】米国特許出願第２００２０００６９１５号
【特許文献８】米国特許第６５３４６４８号
【特許文献９】米国特許第６３１５９９９号
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Delano MJ, Ward PA. 2016. Sepsis-induced immune dysfunction: can immune therapies reduce mortality? J Clin Invest 126:23-31
【非特許文献２】Janeway CA, Medzhitov R. 2002. Innate immune recognition. Annu Rev Immunol 20:197-216.
【非特許文献３】Okeke EB, Uzonna JE. 2016. In Search of a Cure for Sepsis: Taming the Monster in Critical Care Medicine. J Innate Immun 8:156-70
【非特許文献４】Palm NW, Medzhitov R. 2009. Pattern recognition receptors and control of adaptive immunity. Immunol Rev 227:221-33
【非特許文献５】Sarrias MR, et al., 2004. The Scavenger Receptor Cysteine-Rich (SRCR) Domain: An Ancient and Highly Conserved Protein Module of the Innate Immune System. Crit Rev Immunol 24:1-38.
【非特許文献６】Martinez-Florensa M, et al., 2014. Targeting of key pathogenic factors from gram-positive bacteria by the soluble ectodomain of the scavenger-like lymphocyte receptor CD6. J Infect Dis 209:1077-1086
【非特許文献７】Lecomte O, et al., 1996. Molecular linkage of the mouse CD5 and CD6 genes. Immunogenetics 44:385-90
【非特許文献８】Gimferrer I, et al., 2004. Relevance of CD6-mediated interactions in T cell activation and proliferation. J Immunol 173:2262-70
【非特許文献９】Santos RF, et al., 2016. Tuning T Cell Activation: The Function of CD6 At the Immunological 439 Synapse and in T Cell Responses. Curr Drug Targets 17:630-9
【非特許文献１０】Soldevila G, et al., 2011. The immunomodulatory properties of the CD5 lymphocyte receptor in health and disease. Curr Opin Immunol 23:310-8
【非特許文献１１】Dziarski R, et al., 1998. Binding of bacterial peptidoglycan to CD14. J Biol Chem 273:8680-90
【非特許文献１２】Tobias PS, et al., 1995. Lipopolysaccharide binding protein-mediated complexation of lipopolysaccharide with soluble CD14. J Biol Chem 270:10482-8
【非特許文献１３】Sarrias M-R, et al., 2007. CD6 binds to pathogen-associated molecular patterns and protects from LPS-induced septic shock. Proc Natl Acad Sci U S A 104:11724-9
【非特許文献１４】Cohen J. 2009. Non-antibiotic strategies for sepsis. Clin Microbiol Infect 15:302-7
【非特許文献１５】Fink MP, Warren HS. 2014. Strategies to improve drug development for sepsis. Nat Rev Drug Discov 13:741-58
【発明の概要】
【００１７】
本出願は、盲腸結紮穿孔（Cecal ligation and puncture：腸管穿孔）（ＣＬＰ）によって誘導される腹腔内起源の多微生物感染の致死的モデルにおけるスカベンジャー様リンパ球受容体ＣＤ６（ｓＣＤ６）由来の可溶性エクトドメインのｉｎ  ｖｉｖｏでの予防効果及び治療効果について開示する。結果により、ＣＬＰ誘導後のマウス生存率に対するｓＣＤ６注入の時間及び用量依存的効果が示され、それらは、全身性炎症反応及び細菌負荷の低減を伴う。驚くべきことに、ヒト及びマウスｓＣＤ６注入はともに、広域スペクトル殺菌性抗生物質イミペネムと組み合わせた場合に、マウス生存率に対する効果の改善を示した（が、同じファミリー、又は異なるファミリーの抗生物質、例えばメロペネム又はエリスロマイシン等の他の抗生物質は効果の改善を示さなかった）。
【００１８】
主にリンパ系統の細胞によって発現される細胞表面受容体であるヒトＣＤ６のエクトドメインは、広域スペクトル殺菌性カルバペネム系イミペネムと組み合わせて投与すると、マウスにおけるＣＬＰ誘導性敗血症性ショックによって引き起こされる致死効果を低減する際のＣＤ６の効果を大幅に増加させることが可能である。したがって、ＣＤ６及びイミペネムの併用療法は、敗血症性ショック症候群及び感染症に関連した他の炎症性疾患の介入の治療可能性を有する。
【００１９】
したがって、本発明は、ＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォームと、イミペネムとを含む新規組成物を提供する。さらに、本発明は、ＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォームと、イミペネムとを含む、本明細書中で複合製品及び医薬製品とも称されるキットオブパーツを提供する。さらに、本発明は、薬剤としての、特に、感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患のヒトを含む哺乳類における処置の治療法及び／又は予防法における薬剤としての本発明の新規組成物及び／又は新規キットオブパーツの使用を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】ＣＬＰ誘導性多微生物敗血症性ショックに対する予防的なｒｓｈＣＤ６のｉ．ｐ．注入の効果を示す図である。Ａ，Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、ＣＬＰ誘導性敗血症性ショックの誘導の１時間前に、生理食塩水（ｎ＝１８）、ｒｓｈＣＤ５（１．２５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝９）、又はｒｓｈＣＤＣ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１５）をｉ．ｐ．（腹腔内に）注入した。Ｂ，Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、ＣＬＰ誘導性敗血症性ショックの１時間前に、生理食塩水（ｎ＝２１）、又は漸増量のｒｓｈＣＤＣ６（０．３１ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１２；０．６２ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１０；１．２５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１７；又は２．５０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝５）のいずれかを注入した。Ａ及びＢにおいて、生存率の平均パーセントを、各群に関して経時的に分析して、ログランクｔ検定を使用して、生理食塩水で処置した群と比較した。Ｃ，表示したサイトカインの血漿レベルを、生理食塩水（ｎ＝１０）又はｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１０）のいずれかで予防的に処置した（−１時間）Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおいて、ＣＬＰ後の表示した時点（＋４時間、＋２０時間）でモニタリングした。データは、ｎｇ又はｐｇ／ｍＬ（平均値±ＳＥＭ）で表し、統計学的差異は、両側スチューデントｔ検定を使用して評価した。Ｄ，細菌負荷を、生理食塩水（ｎ＝８）又はｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８）のいずれかで予防的に処置した（−１時間）Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおいて、ＣＬＰ後の表示した時点（＋４時間、＋２０時間）で、血液、脾臓及び腎臓で測定した。データは、ｃｆｕ（コロニー形成単位）×１０2／ｍＬ又はｍｇ（平均値±ＳＤ）で表し、統計学的差異は、両側スチューデントｔ検定を使用して評価した。
【図２】ＣＬＰ誘導性多微生物敗血症性ショックに対する治療的なｒｓｈＣＤ６のｉ．ｐ．注入の効果を示す図である。Ａ，Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、ＣＬＰ誘導性敗血症性ショックの前（−１時間、ｎ＝１９）又は後（＋１時間、ｎ＝３１；＋３時間、ｎ＝１４；＋６時間、ｎ＝１７）のいずれかの種々の時点で、生理食塩水（ｎ＝４６）又はｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ）のいずれかをｉ．ｐ．注入した。Ｂ，Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、ＣＬＰの１時間後（＋１時間、ｎ＝３１）に、生理食塩水（ｎ＝４６）若しくはｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ）の単回用量を、又はＣＬＰ誘導性敗血症性ショックの誘導後の＋１時間、＋３時間及び＋６時間に（１＋３＋６時間、ｎ＝１９）、ｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ）の反復投与量をｉ．ｐ．注入した。Ａ及びＢにおいて、生存率の平均パーセントを、経時的に分析して、ログランクｔ検定を使用することによって統計学的比較を行った。Ｃ，炎症促進性サイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６）及び抗炎症性サイトカイン（ＩＬ−１０）の血漿レベルを、生理食塩水（ｎ＝１０）又はｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１０）のいずれかでｉ．ｐ．で治療的に処置した（＋１時間）Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおいて、ＣＬＰ誘導性敗血症性ショック後の表示した時点（＋４時間、＋２０時間）で、ＥＬＩＳＡによってモニタリングした。データは、ｎｇ又はｐｇ／ｍＬ（平均値±ＳＤ）で表し、両側スチューデントｔ検定を使用することによって統計学的比較を行った。Ｄ，細菌負荷を、生理食塩水（ｎ＝１０）又はｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１０）のいずれかで治療的に処置した（＋１時間）Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおいて、ＣＬＰ誘導性敗血症性ショック後の表示した時点（＋４時間、＋２０時間）で、血液、脾臓及び腎臓で測定した。データは、ｃｆｕ×１０2／ｍＬ又はｍｇ（平均値±ＳＤ）で表し、両側スチューデントｔ検定を使用して、統計学的比較を行った。Ｅ，Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、生理食塩水（ｎ＝２４）、ｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１８）、イミペネム／シラスタチン（Ｉ／Ｃ、３３ｍｇ／ｋｇ／８時間、ｎ＝２５）又は後者の組合せ（ｎ＝２４）をｉ．ｐ．で治療的に（＋１時間）注入し、マウス生存率の平均パーセントを、経時的に表示した。
【図３】ＣＬＰ誘導性多微生物敗血症性ショックに対する治療的なｒｓｈＣＤ６のｉ．ｖ．注入の効果を示す図である。Ａ，Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、ｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ）をｉ．ｐ．（ｎ＝６、左）又はｉ．ｖ．（静脈内）（ｎ＝６、右）で注入し、ｒｓｈＣＤ６の血漿レベルを、ＥＬＩＳＡによってμｇ／ｍＬ（平均値±ＳＤ）として決定した。Ｂ，Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、ＣＬＰ誘導性敗血症性ショック後の種々の時点（＋１時間、ｎ＝２０；＋３時間、ｎ＝１０；及び＋６時間、ｎ＝５）で、生理食塩水（ｎ＝１８）又はｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ）をｉ．ｖ．で注入した。Ｃ，Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、生理食塩水（ｎ＝２４）、ｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１８）、イミペネム／シラスタチン（Ｉ／Ｃ、３３ｍｇ／ｋｇ／８時間、ｎ＝２５）又は後者２つの組合せ（ｎ＝２４）をｉ．ｖ．で治療的に（＋１時間）注入した。Ｂ及びＣにおいて、生存率の平均値を、各群に関して経時的に分析して、ログランクｔ検定を使用して、生理食塩水で処置した群と統計学的に比較した。
【図４】ＣＬＰ誘導性多微生物敗血症性ショックに対するｒｓｍＣＤ６のＡＡＶ媒介性遺伝子送達の効果を示す図である。Ａ，Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝６）を、ｒｓｍＣＤ６をコードする肝臓指向性ＡＡＶウイルス（アデノ随伴ウイルス）（ＡＡＶ−ｒｓｍＣＤ６）でｉ．ｖ．処置し、種々の時点で出血させて、ＥＬＩＳＡによってｒｓｍＣＤ６血漿レベルをモニタリングした。データは、μｇ／ｍＬ（平均値±ＳＤ）で表す。Ｂ，ＣＬＰ誘導性敗血症性ショックの２週前に１×１０11個のＡＡＶ−ｒｓｍＣＤ６又はＡＡＶ−Ｌｕｃウイルス粒子でｉ．ｖ．処置したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、イミペネム／シラスタチン（Ｉ／Ｃ、３３ｍｇ／ｋｇ／８時間）をｉ．ｐ．で治療的に（＋１時間）注入した（それぞれ、ｎ＝１５及びｎ＝１６）か、又は注入しなかった（それぞれ、ｎ＝１４及びｎ＝１３）。生存率の平均パーセントを、経時的に分析して、ログランクｔ検定を使用することによって統計学的比較を行った。Ｃ，表示したサイトカインの血漿レベルを、２週前に１×１０11個のＡＡＶ−ｒｓｍＣＤ６（ｎ＝１０）又はＡＡＶ−Ｌｕｃ（ｎ＝１０）ウイルス粒子で処置したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおいて、ＣＬＰ誘導性敗血症性ショック後の表示した時点（＋４時間、＋２０時間）でＥＬＩＳＡによってモニタリングした。データは、ｎｇ又はｐｇ／ｍＬ（平均値±ＳＤ）で表し、両側スチューデントｔ検定を使用して統計学的比較を行った。Ｄ，細菌負荷を、２週前に１×１０11個のＡＡＶ−ｒｓｍＣＤ６（ｎ＝８）又はＡＡＶ−Ｌｕｃ（ｎ＝８）ウイルス粒子で処置したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス由来の血液、腹膜灌流、脾臓及び腎臓で、ＣＬＰ誘導後の表示した時点（＋４時間、＋２０時間）でモニタリングした。データは、ｃｆｕ×１０3／ｍＬ又はｍｇの平均値±ＳＤで表し、両側スチューデントｔ検定を使用することによって統計学的比較を行った。
【図５】ＣＬＰ誘導性多微生物敗血症性ショックに対するｒｓｈＣＤ６及び／又はエリスロマイシンのｉ．ｐ．注入の治療有効性を示す図である。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（８週齢〜１０週齢）に、ＣＬＰ誘導性敗血症性ショック後の時間＋０時間（Ａ、上）又は＋１時間（Ｂ、下）で、生理食塩水（ｎ＝１０）、ｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ）、エリスロマイシン（２．７５μｇ／ｋｇ／８時間）又は後者２つの組合せ（ｎ＝１２）をｉ．ｐ．で注入した。生存率の平均値を、各群に関して経時的に分析して、ログランクｔ検定を使用して、生理食塩水で処置した群と統計学的に比較した。
【図６】ＣＬＰ誘導性多微生物敗血症性ショックに対するｒｓｈＣＤ６及び／又はメロペネムのｉ．ｐ．注入の治療有効性を示す図である。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（８週齢〜１０週齢）に、ＣＬＰ誘導性敗血症性ショック後の時間＋０時間（Ａ、上）又は＋１時間（Ｂ、下）で、生理食塩水、ｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ）、メロペネム（１７ｍｇ／ｋｇ／８時間）又は後者２つの組合せ（ｎ＝１５）をｉ．ｐ．で注入した。生存率の平均値を、各群に関して経時的に分析して、ログランクｔ検定を使用して、生理食塩水で処置した群と統計学的に比較した。
【図７】ＣＬＰ誘導性多微生物敗血症性ショックに対するｒｓｈＣＤ６のｉ．ｖ．注入及び／又はイミペネム／シラスタチンのｉ．ｖ．注入の治療有効性を示す図である。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（８週齢〜１０週齢）に、ＣＬＰ誘導性敗血症性ショック後の＋１時間で、生理食塩水（ｎ＝１４）、ｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ）（ｎ＝１５）をｉ．ｖ．で、イミペネム／シラスタチン（３３ｍｇ／ｋｇ／８時間、ｎ＝１７）又は後者２つの組合せ（ｎ＝１５）をｉ．ｐ．で注入した。生存率の平均値を、各群に関して経時的に分析して、ログランクｔ検定を使用して、生理食塩水で処置した群と統計学的に比較した。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
組成物
第１の態様において、本発明は、ＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォームと、イミペネムとを含む組成物（「本発明の組成物」）を提供する。本発明の組成物はまた、本明細書中で、「組合せ」（「本発明の組合せ」）とも称することができる。
【００２２】
好ましくは、本発明の組成物は、医薬組成物である。当業者が理解しているように、医薬組成物は、１つ以上の有効成分（例えば、本発明の場合、ＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォーム、及びイミペネム）の他に、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤を含んでもよい。したがって、本発明の医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とともに、本発明の組成物を含む。
【００２３】
本明細書中で使用する場合、「ＣＤ６産物の誘導体」という表現は、生物学的機能を果たすことが可能なＣＤ６産物の任意の誘導体、即ち、ＣＤ６エクトドメイン又はその断片を含む産物と同じ生物学的機能を果たすことが可能なＣＤ６産物の任意の誘導体を含む。例えば、ＣＤ６産物の誘導体は、配列番号１と少なくとも７０％同一性を有するタンパク質又はその断片であってもよい。例えば、ＣＤ６産物の誘導体は、本発明のＣＤ６産物と同じ生物学的機能を果たすことが可能な配列番号１と少なくとも７０％、例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％又は９９％同一性を有するタンパク質又はその断片であってもよい。
【００２４】
タンパク質「アイソフォーム」は、同じタンパク質の幾つかの異なる形態のいずれかを意味する。異なる形態のタンパク質は、関連遺伝子から産生され得るか、又は選択的スプライシングによって、若しくはタンパク質分解的切断、リン酸化、グリコシル化等の翻訳後修飾によって同じ遺伝子から生じ得る。また、多数のアイソフォームが、同じ遺伝子の対立遺伝子間の小さな遺伝的差異である一塩基多型即ちＳＮＰによって引き起こされる。これらは、遺伝子内の特異的な個々のヌクレオチド位置で起きる。或いは、アイソフォームは、従来の分子生物学技法によって人工的に生成され得る。アイソフォームはまた、本明細書中で使用する場合、完全長タンパク質の断片を含む。例えば、（例えば、天然に存在する）完全長タンパク質のアミノ酸配列の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％又は少なくとも９０％を有するポリペプチドは、上記完全長タンパク質のアイソフォームと称することができる。また、「アイソフォーム」は本明細書中で使用する場合、グリコフォーム、即ち、グリコシル化パターンが（本質的に）異なるが、同じ生物学的機能を果たすことが可能なタンパク質変異体の概念を含む。
【００２５】
配列番号１は、ヒトＣＤ６の成熟（完全にプロセシングされた）可溶性アイソフォームに相当する。ヒトＣＤ６受容体の配列は、受託番号Ｐ３０２０３で同定されるものである（ＣＤ６＿ＨＵＭＡＮ、最終更新日２００９年１２月１５日。ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔデータベースのバージョン３）。この配列は、膜アイソフォームにおける受容体に相当する。ＣＤ６の可溶性アイソフォームがまた、タンパク質分解的切断によって生成されるかどうかは、完全にはまだ決定されていない。配列番号１は、膜貫通領域に先行するストーク領域における停止コドンの付加によって得られる。
【００２６】
配列番号１
DQLNTSSAESELWEPGERLPVRLTNGSSSCSGTVEVRLEASWEPACGALWDSRAAEAVCRALGCGGAEAASQLAPPTPELPPPPAAGNTSVAANATLAGAPALLCSGAEWRLCEVVEHACRSDGRRARVTCAENRALRLVDGGGACAGRVEMLEHGEWGSVCDDTWDLEDAHVVCRQLGCGWAVQALPGLHFTPGRGPIHRDQVNCSGAEAYLWDCPGLPGQHYCGHKEDAGVVCSEHQSWRLTGGADRCEGQVEVHFRGVWNTVCDSEWYPSEAKVLCQSLGCGTAVERPKGLPHSLSGRMYYSCNGEELTLSNCSWRFNNSNLCSQSLAARVLCSASRSLHNLSTPEVPASVQTVTIESSVTVKIENKESR
【００２７】
配列番号１は、配列番号２を含むヌクレオチド配列の転写及び翻訳によって生じる。
【００２８】
配列番号２
gaccagctca acaccagcag tgcagagagt gagctctggg agccagggga gcggcttccg
gtccgtctga caaacgggag cagcagctgc agcgggacgg tggaggtgcg gctcgaggcg
tcctgggagc ccgcgtgcgg ggcgctctgg gacagccgcg ccgccgaggc cgtgtgccga
gcactgggct gcggcggggc ggaggccgcc tctcagctcg ccccgccgac ccctgagctg
ccgcccccgc ctgcagccgg gaacaccagc gtagcagcta atgccactct ggccggggcg
cccgccctcc tgtgcagcgg cgccgagtgg cggctctgcg aggtggtgga gcacgcgtgc
cgcagcgacg ggaggcgggc ccgtgtcacc tgtgcagaga accgcgcgct gcgcctggtg
gacggtggcg gcgcctgcgc cggccgcgtg gagatgctgg agcatggcga gtggggatca
gtgtgcgatg acacttggga cctggaggac gcccacgtgg tgtgcaggca actgggctgc
ggctgggcag tccaggccct gcccggcttg cacttcacgc ccggccgcgg gcctatccac
cgggaccagg tgaactgctc gggggccgaa gcttacctgt gggactgccc ggggctgcca
ggacagcact actgcggcca caaagaggac gcgggcgtgg tgtgctcaga gcaccagtcc
tggcgcctga cagggggcgc tgaccgctgc gaggggcagg tggaggtaca cttccgaggg
gtctggaaca cagtgtgtga cagtgagtgg tacccatcgg aggccaaggt gctctgccag
tccttgggct gtggaactgc ggttgagagg cccaaggggc tgccccactc cttgtccggc
aggatgtact actcatgcaa tggggaggag ctcaccctct ccaactgctc ctggcggttc
aacaactcca acctctgcag ccagtcgctg gcagccaggg tcctctgctc agcttcccgg
agtttgcaca atctgtccac tcccgaagtc cctgcaagtg ttcagacagt cactatagaa
tcttctgtga cagtgaaaat agagaacaag gaatctcggt ag
【００２９】
本明細書中で使用する場合、「薬学的に許容可能な担体」という表現は、医薬組成物、即ち、患者への投与が可能な投薬形態の形成を可能にするための無毒性溶媒、分散剤、賦形剤、アジュバント、又は有効成分（複数の場合もある）と混合される他の材料を意味する。かかる担体の一例は、非経口投与に通常使用される薬学的に可溶な油である。
【００３０】
「薬学的に許容可能な塩」という用語は、本明細書中で使用する場合、本発明の化合物の塩を医薬品調製物に使用することができることを意味する。しかしながら、他の塩が、本発明による化合物又はその薬学的に許容可能な塩の調製物において有用である場合もある。
【００３１】
「担体」という用語は、有効成分（複数の場合もある）とともに投与される希釈剤又は賦形剤を指す。かかる医薬担体は、滅菌液体、例えば水及び石油、動物、植物又は合成起源のものを含む油、例えば落花生油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油等であり得る。水、又は生理食塩水の水溶液並びにデキストロース及びグリセロールの水溶液が、特に注射液のために、担体として使用されることが好ましい。適切な医薬担体は、１９９５年にE.W. Martinによって「Remington's Pharmaceutical Sciences」に記載されている。
【００３２】
「アジュバント」は、本明細書中で使用する場合、それ自体では薬理学的効果をほとんど又は全く有さないが、他の作用物質と（本質的に）同じ時間に、多くの場合（本質的に）同じ投与経路で（本質的に）同じ部位に付与されると（例えば、同じ筋肉への注射）、他の作用物質の有効性又は効力を高め得る物質である。より詳細には、免疫化において使用する場合、アジュバントは、それ自体ではいかなる特異的な抗原効果も有さずに、免疫系を刺激するか、又は免疫系を刺激する可能性があり、免疫化剤に対する反応を高め得る物質である。より具体的には、免疫原性アジュバントは、特異的な抗原剤（複数の場合もある）と組み合わせて使用すると、抗原特異的な免疫反応を加速するか、延長させるか、又は増強するように作用する物質として定義され得る。
【００３３】
本発明の医薬組成物の所望の医薬投薬形態を製造するのに必要な担体及び補助物質は、他の要因の中でもとりわけ、選択される医薬投薬形態に依存する。本発明の医薬組成物の上記医薬投薬形態は、当業者が既知の従来法に従って製造される。
【００３４】
医薬組成物の例として、経口、局所、腹腔内、静脈内又は非経口投与用の任意の固体（錠剤、丸剤、カプセル、顆粒等）又は液体（溶液、懸濁液又はエマルジョン）組成物が挙げられる。さらに、医薬組成物は、必要に応じて、安定剤、懸濁液、防腐剤、界面活性剤等を含有することができる。
【００３５】
当業者は、特定の投与様式に応じて組成物を適応させることができる。本発明の組成物は、感染症若しくはそれに関連した炎症状態に対する他の治療剤、又はそれらの組み合わせを更に含んでもよい。
【００３６】
キットオブパーツ
第２の態様において、本発明は、本発明のＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォームと、イミペネムとを含むか、或いはそれらからなるキットオブパーツ（「本発明のキットオブパーツ」）を提供する。キットオブパーツはまた、本明細書中では、「複合製品」及び／又は「医薬製品」と称される場合があり、本出願において、例えば組成物中で必ずしも結合体（union）として存在するわけではなく、同時の、別々の又は順次的な適用又は投与に利用可能な２つ以上の構成成分を含む製品又は多成分系と定義される。したがって、キットオブパーツの構成成分は、以下で詳細に記載するように、異なる容器中で物理的に分けられてもよい。
【００３７】
多成分系を使用して、一方の容器中に本発明のＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォームを、他方の容器中にイミペネムを保管することができる。構成成分を、適切な時間で混合して、本発明の組成物を提供することができる。或いは、構成成分を、別々に又は順次的に、即ち、構成成分を必要とする対象への投与前に混合せずに使用してもよい。
【００３８】
特に、かかるキットオブパーツは、（ａ）本発明のＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォームを含む第１の容器と、（ｂ）イミペネムを含む第２の容器とを備え得るか、或いはそれらからなる場合がある。
【００３９】
本発明のキットオブパーツは、対象（哺乳類、好ましくはヒト）に、同時に、順次的に又は別々に投与され得る別々の実体として（例えば、別々の容器中に含まれる）ＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォームと、イミペネムとを含み得るか、或いはそれらからなり得る。好ましい実施形態において、本発明のキットオブパーツは、対象（哺乳類、好ましくはヒト）に、同時に、順次的に又は別々に投与され得る別々の実体として（例えば、別々の容器中に含まれる）本発明のＣＤ６産物、その誘導体、又はそのアイソフォームとイミペネムとを含むか、或いはそれらからなる。別の実施形態において、容器は、容器間に障壁を有する単一の製造品へと組み合わせられる。この障壁を除去又は破壊することで、適切な時間での構成成分の混合が可能となる。
【００４０】
したがって、本発明は、本発明のキットオブパーツに、以下で定義するように、特に感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患のヒトを含む哺乳類における処置の治療法及び／又は予防法における、薬剤としての同時使用、順次的な使用又は別々の使用を提供する。
【００４１】
本発明のキットオブパーツは、
ａ）本発明のＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォームと薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物と、
ｂ）イミペネムと薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物と、
を含み得るか、或いはそれらからなり得る。
【００４２】
医薬組成物（ａ）及び医薬組成物（ｂ）はともに、対象（哺乳類、好ましくはヒト）に、同時に、順次的に又は別々に投与され得る別々の実体として（例えば、上述するように、別々の容器中の別々の液体又は固体組成物として）本発明のキットオブパーツ中に含まれることが好ましい。
【００４３】
以下に記載するように、本発明の組成物、医薬組成物及び／又はキットオブパーツは、シラスタチンを更に含んでもよい。シラスタチンは、好ましくはシラスタチンと、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物の形態で、第３の別々の容器中に、（第３の）別々の実体として本発明のキットオブパーツに含まれてもよい。好ましくは、シラスタチンは、イミペネムと同じ実体（同じ容器）で含まれる（例えば、イミペネムとシラスタチンとを含む組成物又は医薬組成物）。
【００４４】
例えば、本発明のキットオブパーツにおいて、好ましくは別々の実体として含まれる発明のＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォーム（又はＣＤ６産物、若しくはその誘導体、若しくはそのアイソフォームと、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）及びイミペネム（又はイミペネムと薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）は、同時に（同じ時間に）対象（哺乳類、好ましくはヒト）に投与され得る。
【００４５】
或いは、本発明のキットオブパーツおいて、好ましくは別々の実体として含まれる、本発明のＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォーム（又はＣＤ６産物、若しくはその誘導体、若しくはそのアイソフォームと、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）及びイミペネム（又はイミペネムと薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）は、順次的に対象（哺乳類、好ましくはヒト）に投与され得る。例えば、本発明のＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォーム（又はＣＤ６産物、若しくはその誘導体、若しくはそのアイソフォームと、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）は、第１の場所で投与されてもよく、その後、イミペネム（又はイミペネムと薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）が、対象（哺乳類、好ましくはヒト）に投与される。
【００４６】
好ましくは、イミペネム（又はイミペネムと、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）が、まず対象（哺乳類、好ましくはヒト）に投与され、その後、本発明のＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォーム（又はＣＤ６産物、若しくはその誘導体、若しくはそのアイソフォームと、薬学的に許容可能な担体、薬学的器許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）が、対象に投与される。
【００４７】
或いは、本発明のキットオブパーツおいて、好ましくは別々の実体として含まれる、本発明のＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォーム（又はＣＤ６産物、若しくはその誘導体、若しくはそのアイソフォームと、薬学的に許容可能な担体、薬学的器許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）及びイミペネム（又はイミペネムと、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）は、別々に対象（哺乳類、好ましくはヒト）に投与され得る。例えば、対象（哺乳類、好ましくはヒト）は、イミペネム（又はイミペネムと、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）を既に服薬しており、本発明のＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォーム（又はＣＤ６産物、若しくはその誘導体、若しくはそのアイソフォームと、薬学的に許容可能な担体、薬学的器許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）は、好ましくは単回用量で投与される。
【００４８】
したがって、本発明のキットオブパーツの構成成分は、以下に記載するように、好ましくは、感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患の処置の治療法及び／又は予防法において、対象（ヒトを含む哺乳類）に、同時に、順次的に又は別々に投与され得る。
【００４９】
ＣＤ６産物
ＣＤ６受容体は、胸腺細胞、成熟Ｔ細胞、及びＢ１ａ  Ｂ細胞サブセットの膜上に発現される１０５ｋＤａ〜１３０ｋＤａのリンパ系特異的な表面糖タンパク質であるが、ＣＤ６発現はまた、脳の或る特定の領域上でも報告されている。ＣＤ６受容体は、ＳＲＣＲと呼ばれるシステインリッチ細胞外ドメインの１個又は数個の反復の存在を特徴とするＳＲＣＲ−ＳＦに属する（M.R. Sarrias et al., "The Scavenger Receptor Cysteine-Rich (SRCR) domain: an ancient and highly conserved protein module of the innate immune system", Crit. Rev. Immunol. 2004, vol. 24, pp. 1-37を参照）。その細胞外領域は、３つの連続したＳＲＣＲドメインで専ら構成される。機能的に、膜結合性ＣＤ６は、Ｔ（ＴＣＲ／ＣＤ３）細胞上に存在する抗原特異的な受容体複合体に物理的に結合され、そこで、ＣＤ６は、その受容体複合体によって送達される活性化及び分化シグナルの正又は負の調節のいずれかに寄与する。ＣＤ６は、免疫グロブリンスーパーファミリーの広範に発現される接着分子であるその天然リガンドＡＬＣＡＭ（「活性化白血球細胞接着分子」、ＣＤ１６６としても知られる）に結合することが広く受け入れられている（M.A. Bowen et al., "Analysis of domain-domain interactions between CD6 and activated leukocyte cell adhesion molecule (ALCAM)", Tissue Antigens 1996, vol. 48, pp. AS401.32を参照）。
【００５０】
本明細書中で使用する場合、「ＣＤ６産物」という用語は、上述するように、ＣＤ６エクトドメイン又はその断片、又はそのアイソフォームを含む産物を意味する。エクトドメインは、介在配列及びそれを膜と分離するストーク領域を有する３つのＳＲＣＲドメインを指す。適切なＣＤ６産物は、ＣＤ６エクトドメイン又はその断片の天然、合成又は組換えの生物活性なポリペプチド；ハイブリッド融合タンパク質又はホモ若しくはヘテロオリゴマーを含むＣＤ６エクトドメイン又はその断片の生物学的に活性なポリペプチド変異体を含む。ＣＤ６産物は、哺乳類起源に、より好ましくはヒト起源に由来する。好ましくは、本発明のＣＤ６産物は、組換え可溶性ＣＤ６産物（ｒｓＣＤ６）である。好ましくは、本発明のＣＤ６産物は、ヒトＣＤ６産物（ｈＣＤ６）である。より好ましくは、本発明のＣＤ６産物は、組換え可溶性ヒトＣＤ６産物（ｒｓｈＣＤ６）である。別の実施形態において、ＣＤ６産物は、マウスＣＤ６産物（ｍＣＤ６）である。
【００５１】
GenBank受託番号ＮＰ＿００６７１６に記載されるヒト完全長ＣＤ６タンパク質は、６６８個のアミノ酸を有する。エクトドメインは、３つのＳＲＣＲドメイン、介在配列及びストーク領域で構成される。
【００５２】
特定の実施形態において、本発明のＣＤ６産物（ＣＤ６、ｒｓＣＤ６、ｒｓｈＣＤ６、ｈＣＤ６及び／又はｍＣＤ６）は、上述するように、配列番号１のアミノ酸配列を含むか、或いはそれらからなる。この配列は、３つのＳＲＣＲドメイン、介在配列及びストーク領域を含む。上述するように、配列番号１は、配列番号２を含むか、或いはそれからなるヌクレオチド配列の転写及び翻訳によって生じる。
【００５３】
可溶性ＣＤ６の低い血漿レベルに起因して、血漿又は血清の精製からＣＤ６を得ることは、工業的に実行不可能である。したがって、本発明の目的では、遺伝子工学の方法によってＣＤ６産物を産生することが好ましい。当該技術分野で一般的に使用される任意の方法を用いて、これ以降でｒｓＣＤ６と称される組換え可溶性ＣＤ６を産生することができる。ｒｓｈＣＤ６を発現及び精製する好ましい方法は、特許文献１の実施例に記載されている。この方法は、実験目的でｒｓｈＣＤ６を産生するのを可能とし、そのため、大量のｒｓｈＣＤ６を産生するには、工業的なスケールアップが必要である。本発明のＣＤ６産物はまた、融合タンパク質として発現されてもよい。
【００５４】
ＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォームが、本発明の目的に適しているかどうかを試験するために、微生物結合アッセイが使用され得る。適切なアッセイは、特許文献１の実施例１に記載されている。
【００５５】
明細書、実施例及び図面において、ｒｓｈＣＤ６は、組み換えにより得られた、可溶性のヒトＣＤ６エクトドメインを指し、膜結合性ＣＤ６受容体と区別される。
【００５６】
イミペネム
イミペネムは、カルバペネムクラスの抗生物質に属するβ−ラクタム抗生物質である。カルバペネムは、多くの多剤耐性Ｇ−細菌によって産生されるβ−ラクタマーゼ酵素に対して非常に耐性である。イミペネムは、様々なＧ＋細菌及びＧ−細菌の細胞壁合成を阻害すること、したがって溶菌中に放出されるＰＡＭＰの量を低減することにより、抗菌薬として作用する。イミペネムは、幾つかの細菌によって産生されるβ−ラクタマーゼ（ペニシリナーゼ及びセファロスポリナーゼの両方）の存在下で非常に安定なままであり、ほとんどのβ−ラクタム抗生物質に対して耐性である幾つかのＧ−細菌由来のβ−ラクタマーゼの強力な阻害剤である。イミペネムに関するＩＵＰＡＣ系統名は、（５Ｒ，６Ｓ）−６−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシエチル］−３−（｛２−［（イミノメチル）アミノ］エチル｝チオ）−７−オキソ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプタ−２−エン−２−カルボン酸であり、そのＣＡＳ登録番号は、７４４３１−２３−５であり、その化学式は、以下で式１において記載している：
【化１】
2019535834.tif 000002
【００５７】
以下で詳述するように、イミペネムは、一般的にシラスタチンとともに投与される。したがって、好ましい実施形態において、本発明の組成物、医薬組成物及び／又はキットオブパーツは、シラスタチンを更に含む。
【００５８】
シラスタチン
シラスタチンは、抗生物質イミペネムのｉｎ  ｖｉｖｏでの分解に関与する酵素であるヒトデヒドロペプチダーゼを阻害する化合物である。したがって、シラスタチンは、イミペネムとともに投与されて、デヒドロペプチダーゼによるその分解を抑え、それにより、身体中の循環時間、したがってその抗菌効果を延ばし得る。シラスタチン自体は、抗生物質活性を持たない。当業者が承知しているように、イミペネム単独は、有効な抗生物質であり、シラスタチンを伴わずに投与することができる。しかしながら、好ましくは、イミペネムは、好ましくはイミペネム：シラスタチンの比１：１でシラスタチンとともに投与される。
【００５９】
本発明の組成物、医薬組成物及びキットオブパーツの効果
本発明の教示に従って、本発明の組成物、医薬組成物及び／又はキットオブパーツの構成成分を、哺乳類、好ましくはヒトに投与することができる。本発明の組成物、医薬組成物及び／又はキットオブパーツの構成成分の投与の目的は、予防的（これらの疾患の発症を回避するため）及び／又は治療的（これらの疾患が発症／導入された後に、これらの疾患を処置するため）であり得る。
【００６０】
本発明の組成物、医薬組成物及び／又はキットオブパーツの構成成分は、薬学的に許容可能な形態で投与されることは理解されよう。当業者は、標準的な手順を使用して、適正な用量を確認し得る。炎症反応の低減が、処置した対象で見られるという意味で、用量は、ＣＤ６産物及びイミペネム（上述するように、好ましくは、シラスタチンとともに）の有効量であるべきであることが理解される。
【００６１】
本発明者らは、ＣＤ６産物及びイミペネム（上述するように、好ましくは、シラスタチンとともに）の特異的な共投与（同時に、順次的に又は別々に）（腹腔内、ｉ．ｐ．及び／又は静脈内、ｉ．ｖ．）が、ヒトを含む哺乳類において、特に感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患の治療及び／又は予防において、明らかに改善された相加的治療効果を提供することを発見した。
【００６２】
ＣＤ６産物が、ヒトを含む哺乳類において、感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患の処置に関して最適な他の広域スペクトル抗生物質とともに投与された場合には、この相加的効果の改善は観察されなかったことに留意されたい。
【００６３】
例えば、以下の実施例２に示すように、ＣＬＰ誘導性敗血症において、抗生物質エリスロマイシンをＣＤ６産物であるｒｓｈＣＤ６と共投与した場合に、非相加的効果が観察された。さらに、以下の実施例２に示すように、ＣＬＰ誘導性敗血症において、抗生物質メロペネムをＣＤ６産物であるｒｓｈＣＤ６と共投与した場合に、非相加的効果が観察された。ＣＬＰ誘導性敗血症は、多微生物敗血症を引き起こす盲腸結紮穿孔（ＣＬＰ）法を使用して、マウスに実験的敗血症を誘導する代表的な方法である。
【００６４】
エリスロマイシン及びメロペネムはともに、感染症、又は感染症に関連した炎症状態、例えば敗血症の治療及び／又は予防のための広域スペクトル抗生物質である。
【００６５】
メロペネムは、多種多様な感染を処置するのに一般的に使用される広域スペクトル殺菌性注射可能抗生物質である。メロペネムは、イミペネムと同様に、β−ラクタムであり、カルバペネムの亜群に属する。しかしながら、メロペネムは、ヒト酵素デヒドロペプチダーゼによって分解されず、シラスタチンとの結合は不要となる。メロペネムのＩＵＰＡＣ系統名は、（４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３−（（（３Ｓ，５Ｓ）−５−（ジメチルルカルバモイル）ピロリジン−３−イル）チオ）−６−（（Ｒ）−１−ヒドロキシエチル）−４−メチル−７−オキソ−１−アザビシクル［３．２．０］ヘプタ−２−エン−２−カルボン酸であり、そのＣＡＳ登録番号は、１１９４７８−５６−７であり、その化学式は、以下で式２に表される通りである：
【化２】
2019535834.tif 000003
【００６６】
エリスロマイシンは、種々の起源（主に、皮膚及び気道）由来のＧ＋細菌種及びＧ−細菌種の両方によって引き起こされる全身感染に対して有効な静菌性抗生物質である。エリスロマイシンのＩＵＰＡＣ系統名は、（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｒ，９Ｒ，１１Ｒ，１２Ｒ，１３Ｓ，１４Ｒ）−６−｛［（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，６Ｒ）−４−（ジメチルアミノ）−３−ヒドロキシ−６−メチルオキサン−２−イル］オキシ｝−１４−エチル−７，１２，１３−トリヒドロキシ−４−｛［（２Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−５−ヒドロキシ−４−メトキシ−４，６−ジメチルオキサン−２−イル］オキシ｝−３，５，７，９，１１，１３−ヘキサメチル−１−オキサシクロテトラデカン−２，１０−ジオンである。エリスロマイシンは、アミノアシル転位を妨げて、ｒＲＮＡ複合体のＰ部位への、ｒＲＮＡ複合体のＡ部位で結合されるｔＲＮＡの移行を防ぐことによって、タンパク質合成及び細菌の増殖を阻止する。
【００６７】
処置方法
更なる態様において、本発明の組成物、医薬組成物及び／又はキットオブパーツは、それらの変形形態のいずれかにおいて、薬剤として、好ましくは感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患のヒトを含む哺乳類における処置の治療法及び／又は予防法における薬剤として使用することができる。したがって、本発明は、本発明の組成物、医薬組成物及び／又はキットオブパーツの構成成分を哺乳類に投与することを含む、感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患の処置の治療法及び／又は予防法を提供する。好ましい実施形態において、哺乳類はヒトである。
【００６８】
例えば、本発明は、薬剤としての同時使用、順次的な使用又は別々の使用のための本発明のキットオブパーツを提供する。特に本発明は、感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患のヒトを含む哺乳類における処置の治療法及び／又は予防法における同時使用、順次的な使用又は別々の使用のための本発明のキットオブパーツを提供する。
【００６９】
本発明の特定の実施形態において、感染症は、微生物感染である。より特定の実施形態において、微生物感染は、細菌感染（Ｇ＋細菌又はＧ−細菌、非病原性又は病原性、好気性又は嫌気性のいずれか）、真菌感染、ウイルス感染、寄生虫感染、及びそれらの組合せ（多微生物感染）からなる群から選択される。
【００７０】
別の特定の実施形態において、感染症は、菌血症である。本明細書中で使用する場合、「菌血症」という用語は、血流中の任意の微生物の存在を指す。特に、菌血症は、細菌血症（bacteremia）、真菌血症、ウイルス血症、寄生虫血症及びそれらの組合せからなる群から選択される。
【００７１】
生存可能な微生物の存在は、感染症に関連した炎症状態のほとんどの事例で見られるのに対して、患者の２０％〜３０％が、いかなる供給源からも同定される微生物を有さないが、微生物に由来する産物を有する。したがって、別の実施形態において、炎症状態は、感染病原体に由来する産物に関連する。特に、感染病原体は、細菌（Ｇ＋細菌又はＧ−細菌、非病原性又は病原性、好気性又は嫌気性のいずれか）、真菌、ウイルス、寄生虫、及び／又はそれらの組合せからなる群から選択される。
【００７２】
敗血症は、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）と呼ばれる全身反応の徴候を付随する感染の存在又は推定される存在として定義される。敗血症の定義に関して、"Severe sepsis and septic shock: review of the literature and emergency department management guidelines", H.B. Nguyen et al., Ann. Emergency Med. 2006, vol. 48, pp. 28-54という論文を参照する。敗血症は通常、細菌感染（Ｇ＋細菌又はＧ−細菌のいずれか）によって引き起こされるが、他の病原体によっても引き起こされ得る。しかしながら、最も多くの場合、敗血症は、Ｇ＋細菌感染及びＧ−細菌感染によって引き起こされる。しかしながら、敗血症に起因する損傷及び症状は、生きている細菌全体によって引き起こされるだけでなく、エンドトキシンとして知られる細菌細胞壁の構成成分によっても引き起こされる。エンドトキシン（例えば、ＬＰＳ、ＬＴＡ、ＰＧＮ）は、Ｇ＋細菌及びＧ−細菌の外膜に遍在する糖脂質である。エンドトキシンは、免疫系が侵入細菌を破壊すると放出される。放出されたエンドトキシンは、免疫細胞（単球、マクロファージ、顆粒球、リンパ球、並びに内皮細胞及び上皮細胞）に結合して、サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β及びＩＬ−６）及びケモカイン（例えば、ＩＬ−８）等の炎症の各種可溶性メディエーターの産生を誘発し、これらは、重症形態の敗血症の主要な原因となる。
【００７３】
本発明の特定の実施形態において、炎症状態は、ＳＩＲＳ（全身性炎症反応症候群）である。別の特定の実施形態において、炎症状態は、敗血症である。ＳＩＲＳは、（１）３８℃を超えるか、又は３６℃未満の体温、（２）９０回の拍動／分を超える脈拍数、（３）２０回の呼吸／分を超える呼吸数（又は３２トール未満のＰＣＯ2）及び（４）１２０００個／ｍｍ3を超えるか、若しくは４０００個／ｍｍ3未満の白血球数、又は１０％を超える未熟桿型のうちの２つ以上の存在として定義される。
【００７４】
特定の実施形態において、敗血症は、多微生物敗血症である。多微生物敗血症は、多重感染病原体（例えば、細菌及び真菌；非病原性及び病原性；好気性及び嫌気性等）の同時発生に関与する複雑な全身感染と定義される。
【００７５】
別の特定の実施形態において、炎症状態は、重症敗血症である。重症敗血症は、１つ以上の臓器不全を付随する敗血症と定義される。臓器不全は、急性肺損傷、凝固異常、血小板減少症、精神状態変化、腎不全、肝不全若しくは心不全、又は乳酸アシドーシスを伴う低灌流として定義することができる。
【００７６】
別の特定の実施形態において、炎症状態は、敗血症性ショックである。敗血症性ショックは、敗血症及び難治性低血圧、即ち、９０ｍｍＨｇ未満の収縮期血圧、６５ｍｍＨｇ未満の平均動脈圧、又は２０ｍｌ／ｋｇ〜４０ｍｌ／ｋｇの晶質液負荷（challenge）に対して応答しない、ベースラインと比較して収縮期血圧における４０ｍｍＨｇの減少の存在として定義される。したがって、敗血症ショックは、事実上、重症敗血症の一形態である。最終的に、敗血症性ショックは、エンドトキシン誘導性敗血症性ショックであってもよい。
【００７７】
感染の供給源は、身体全体にわたる多数の場所のいずれかであり得る。敗血症に至る可能性のある一般的な感染部位は、虫垂の炎症（虫垂炎）、憩室炎、腸管障害、腹腔の感染（腹膜炎）、及び胆嚢又は肝臓感染；脳又は脊髄の炎症又は感染（髄膜炎、脳炎）；肺炎等の肺感染；創傷又は静脈内カテーテルでできた開口による皮膚感染、蜂巣炎（皮膚の結合組織の炎症）；尿路感染、特に患者が尿を排出する導尿カテーテルを有する場合；歯科及び婦人科の検査又は処置；鈍傷又は穿通性外傷、手術及び心内膜炎症を含む。
【００７８】
ヒトを含む哺乳類への本発明の組成物、医薬組成物及び／又はキットオブパーツの構成成分の投与は、それらの変形形態のいずれかにおいて、腹腔内で（ｉ．ｐ．）及び／又は静脈内で（ｉ．ｖ．）行われる。好ましい実施形態において、本発明の組成物、医薬組成物及び／又は産物は、ヒトを含む哺乳類に、静脈内で投与される。本発明者らは、ｉ．ｖ．経路の使用により、ＣＬＰ誘導後の最大＋３時間又は＋６時間、ｒｓｈＣＤ６の治療効果を延ばすことが可能となることを発見した（以下の実施例を参照）。
【００７９】
好ましくは、本発明のキットオブパーツの構成成分は、下記の通りに投与される。ＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォーム、好ましくはｒｓｈＣＤ６（又はＣＤ６産物、好ましくはｒｓｈＣＤ６、若しくはその誘導体、若しくはそのアイソフォームと、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）の単回用量を、できる限り早期に、好ましくはｉ．ｖ．で、イミペネム（上述するように、好ましくはシラスタチンとともに）処置中に投与する。マウスにおける最適なｒｓｈＣＤ６用量は、１．２５ｍｇ／ｋｇ〜２．５０ｍｇ／ｋｇである。当業者に理解されるように、ヒトを含む他の哺乳類の最適なｒｓｈＣＤ６用量は、臨床アッセイで確立させるべきである。
【００８０】
別の好ましい実施形態において、本発明のキットオブパーツの構成成分は、下記の通りに投与される。ＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォーム、好ましくはｒｓｈＣＤ６（又はＣＤ６産物、好ましくはｒｓｈＣＤ６、若しくはその誘導体、若しくはそのアイソフォームと、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）の単回用量を、できる限り早期に、好ましくはｉ．ｖ．で投与し、続いて、イミペネム（又はイミペネムと、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）（上述するように、好ましくはシラスタチンとともに）を、それを必要とする対象に投与する。
【００８１】
別の好ましい実施形態において、本発明のキットオブパーツの構成成分は、下記の通りに投与される。まず、イミペネム（又はイミペネムと、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）（上述するように、好ましくはシラスタチンとともに）を、それを必要とする対象に投与する。続いて、ＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォーム、好ましくはｒｓｈＣＤ６（又はＣＤ６産物、好ましくはｒｓｈＣＤ６、若しくはその誘導体、若しくはそのアイソフォームと、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）の単回用量を、好ましくはｉ．ｖ．で投与する。
【００８２】
或いは、本発明のＣＤ６産物の単回用量を、上述するように、それを必要とする対象に投与するだけでなく、２回以上の用量、例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回又はそれ以上の用量を、それを必要とする対象に投与してもよい。当業者に理解されるように、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回又はそれ以上の用量を、イミペネム（好ましくはシラスタチンとともに）の投与の前、投与の間又は投与の後のいずれかで投与してもよい。さらに、ＣＤ６産物は、複数回の用量で投与しなくてもよく、連続灌流（好ましくは、ｉ．ｖ．で）として、イミペネム（好ましくはシラスタチンとともに）の投与の前、投与の間又は投与の後のいずれかで投与してもよい。
【００８３】
当然のことながら、それを必要とする対象は、本発明の組成物、医薬組成物及び／又はキットオブパーツの構成成分が、その変形形態のいずれかにおいて、投与される場合に、他の抗生物質等の他の薬物の処置下にあってもよい。
【００８４】
本発明はまた、感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患のヒトを含む哺乳類における処置の治療法及び／又は予防法における使用のためのＣＤ６産物、又はその誘導体であって、該方法は、ヒトを含む哺乳類に、該ＣＤ６産物、又はその誘導体及びイミペネムを、同時に、順次的に又は別々に投与することを含む、ＣＤ６産物、又はその誘導体を提供する。上記方法は、シラスタチンの投与を更に含むことが好ましい。
【００８５】
さらに本発明は、感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患のヒトを含む哺乳類における処置の治療法及び／又は予防法における使用のためのイミペネムであって、該方法は、ヒトを含む哺乳類に、イミペネム及びＣＤ６産物、又はその誘導体を、同時に、順次的に又は別々に投与することを含む、使用のためのイミペネムを、好ましくはシラスタチンとともに提供する。上記方法は、シラスタチンの投与を更に含むことが好ましい。
【００８６】
したがって、治療上有効量のＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォーム（又はＣＤ６産物、好ましくはｒｓｈＣＤ６、若しくはその誘導体、若しくはそのアイソフォームと、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）及びイミペネム（又はイミペネムと、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）（上述するように、好ましくはシラスタチンとともに）を、それを必要とする対象（ヒトを含む哺乳類）に、順次的に又は別々に投与してもよい。これは、特に対象がすでにイミペネム（好ましくはシラスタチンとともに）による抗生物質処置下にある場合に当てはまり、その後に、治療上有効量のＣＤ６産物、又はその誘導体を対象に投与する。
【００８７】
好ましくは、治療上有効量のＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォーム（又はＣＤ６産物、好ましくはｒｓｈＣＤ６、若しくはその誘導体、若しくはそのアイソフォームと、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）及びイミペネム（又はイミペネムと、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）（上述するように、好ましくはシラスタチンとともに）を、それらを必要とする対象（ヒトを含む哺乳類）に、同時に投与してもよい。例えば、感染の臨床症状を伴う対象は、抗生物質による処置を受けてもよい。感染が寛解しない場合、臨床医は、上述するように本発明の組成物、医薬組成物及び／又はキットオブパーツの構成成分を投与してもよい。
【００８８】
好ましい実施形態において、本発明のＣＤ６産物、又はその誘導体、又はアイソフォームは、それらを必要とする対象に、遺伝子療法により投与される。例えば、血漿中の持続性ＣＤ６レベルは、アデノウイルス媒介性発現（例えば、肝臓特異的なＡＡＶ媒介性の発現）により達成され得る。これは、小児科又は成人の免疫不全対象（患者）等の免疫不全対象（患者）に特に適している。これらの対象（患者）はすでに、ＣＤ６産物、又はその誘導体、又はそのアイソフォームで処置されている。上述するように、感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患の臨床所見が見られたら、イミペネム（又はイミペネムと、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とを含む医薬組成物）（上述するように、好ましくはシラスタチンとともに）を、対象（患者）に投与する。
【００８９】
「治療上有効量」は、いわゆる障害又は状態を処置する際に有効な化合物の量を意味する。
【００９０】
本明細書中で使用する場合、「約」という用語は、表示した値±その値の１％を意味するか、又は「約」という用語は、表示した値±その値の２％を意味するか、又は「約」という用語は、表示した値±その値の５％を意味するか、又は「約」という用語は、表示した値±その値の１０％を意味するか、又は「約」という用語は、表示した値±その値の２０％を意味するか、又は「約」という用語は、表示した値±その値の３０％を意味し、好ましくは、「約」という用語は、正確に表示した値（±０％）を意味する。
【００９１】
「処置」又は「療法」という用語は、疾患を処置する予防法及び治癒法の両方を包含する。というのは、ともに、健康の維持又は回復に関するためである。疼痛、不快感又は不能の原因に関わらず、適切な作用物質の投与によるその緩和は、本出願において療法又は治療的使用と解釈されるべきである。
【００９２】
したがって、本発明の組成物、医薬組成物及び／又はキットオブパーツは、治療的処置（疾患の臨床所見後）及び／又は予防的処置（疾患の臨床所見前）の方法において使用され得る。
【００９３】
特許請求の範囲の記載中で、「を含む」という語句及びその変形は、他の技術的特徴、添加剤、構成成分又は工程を排除すると意図されない。さらに、「を含む」という用語はまた、「からなる」という用語を包含し得る。
【００９４】
別記しない限り、本明細書中で使用する技術用語及び科学用語は全て、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書中に記載するものに類似するか、又はそれらと同等の方法及び材料を、本発明の実施に使用することができる。本発明の付加的な目的、利点及び特徴が本明細書を検討することで当業者に明らかとなるか、又は本発明の実施によって理解され得る。以下の実施例及び図面は実例として提示され、本発明を限定することを意図したものではない。
【実施例】
【００９５】
材料及び方法
組換えタンパク質の発現、精製及びビオチン化
精製ｒｓｈＣＤ６及びｒｓｈＣＤ５タンパク質の産生（１０％グリセロールを有するＰＢＳ中、ｐＨ７．４）は、Ｓｅｌｅｘｉｓ  ＳＵＲＥｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ（商標）（スイス、ジュネーブ）からのＳＵＲＥ  ＣＨＯ−Ｍ細胞株（商標）クローンを使用すること、及び無血清上清をPX'Therapeutics（フランス、グルノーブル）で開発されたサイズ排除クロマトグラフィープロトコルに付すことによって実行した。
【００９６】
盲腸結紮穿孔（ＣＬＰ）手順
動物手順は全て、バルセロナ大学の動物実験倫理委員会によって承認された。ＣＬＰ誘導性敗血症性ショックを、これまでに報告された方法に従って、８週齢〜１０週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウス（２０ｇ〜２５ｇ；Charles River）において誘導した（Rittirsch D, et al., 2009. Immunodesign of experimental sepsis by cecal ligation and puncture. Nat Protoc 4:31-36）。ＣＬＰモデルの重篤性は、盲腸の７５％を結紮することによって高い死亡率（最初の４８時間〜７２時間で死亡率９０％以上を意味する）を達成するように調節した。マウスを１００ｍｇ／ｋｇのケタミン（Ｉｍａｌｇｅｎｅ  １０００、Merial）及び１０ｍｇ／ｋｇのキシラジン（Ｒｏｍｐｕｎ、Bayer）で麻酔し、続いて、腹腔内に（ｉ．ｐ．）生理食塩水血清１ｍＬを用いて蘇生した。疼痛の作用を軽減するために、０．０５ｍｇ／ｋｇ／１２時間のブプレノルフィンを皮下投与した。必要であれば、イミペネム／シラスタチン（３３ｍｇ／ｋｇ／８時間、Actavis、アイスランド）、エリスロマイシン（２．７５μｇ／ｋｇ／８時間）、メロペネム（１７ｍｇ／ｋｇ／８時間）及び／又はｒｓｈＣＤ６（０．３２ｍｇ／ｋｇ〜２．５ｍｇ／ｋｇ）の単回用量をｉ．ｐ．又はｉ．ｖ．で投与した。最終的な実験結果は、自然死亡率の観察であり、それは、時間に対する生存動物のパーセントとして表された。毎日の体重損失のモニタリング（通常、ＣＬＰ後の最初の４８時間で、１０％〜１５％以下であった）により、臨床的敗血症を受けない動物の排除が可能となった。
【００９７】
細菌負荷の決定
ＣＬＰの４時間後に顔面静脈穿刺により、生きているマウスから血液試料を採取した。腹膜、脾臓及び腎臓試料は、ＣＬＰの２０時間後に、安楽死させたマウスから入手した。腹膜灌流に関しては、安楽死させたマウスに、冷ＰＢＳ  ３ｍＬをｉ．ｐ．注入した。腹部を５分間、穏やかにもんだ後、脂肪組織による詰まりを回避して、かつ内臓に損傷を与えないように注意しながら、腹水を収集した。血液汚染された腹膜試料を廃棄した。収集した腹水を遠心分離して（３５００ｒｐｍ、４℃で１０分）、ペレットをＰＢＳ  ２００μＬ中に再懸濁させた。冷ＰＢＳ  ３ｍＬ中で４０μｍのセルストレーナーに通してシリンジプランジャーで臓器を押すことによって、脾臓（１００ｍｇ）及び腎臓（２５０ｍｇ）の均質化を実施した。得られたホモジネートを遠心分離して（３５００ｒｐｍ、４℃で１０分）、ペレットをＰＢＳ  ７５０μＬ中に再懸濁させた。３７℃で一晩の５％ヒツジ血液（Becton Dikinson、英国）を用いた寒天上でのプレーティング用に、血液、腹膜灌流、並びに脾臓及び腎臓ホモジネートの段階希釈物を、滅菌ＰＢＳ中に調製した。生存細菌数は、１ｍＬ又は１ｍｇ当たりのコロニー形成単位（ｃｆｕ）で表した。
【００９８】
ｒｓｈＣＤ６及びサイトカイン血漿レベルのＥＬＩＳＡ測定
それぞれ、捕捉抗血清及び検出抗血清として、非標識（１６１．８）抗ＣＤ６モノクローナル抗体及びビオチン標識（ＳＰＶ−Ｌ１４．２）抗ＣＤ６モノクローナル抗体（それぞれ、２μｇ／ｍＬ）を使用して、ｒｓｈＣＤ６の血漿レベルを、サンドイッチＥＬＩＳＡによって決定した。精製ｒｓｈＣＤ６の段階希釈物を標準物質として使用した。希釈血漿試料又は希釈していない血漿試料を、市販のＥＬＩＳＡキットによって、製造業者の説明書に従って、ＩＬ−６（１：７０；マウスＩＬ−６  ＥＬＩＳＡセット、BD Bioscience−５５５２４０）、ＴＮＦ−α（１：１０；マウスＴＮＦ−α  ＥＬＩＳＡセット、BD Bioscience−５５８５３４）、ＩＬ−１０（ニート；マウスＩＬ−１０  ＥＬＩＳＡセット、BD Bioscience−５５５２５２）、及びＩＬ−１β（ニート；マウスＩＬ−１β  ＥＬＩＳＡセット、BD Bioscience−５５９６０３）レベルをモニタリングするのに使用した。プレートをホースラディッシュペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン（Roche Diagnostics）及びＴＭＢ基質試薬セット（ＢＤ  ＯｐｔＥＩＡ、BD Biosciences）で発色させて、４５０ｎｍでの光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）の更なる測定を行った。
【００９９】
組換えＡＡＶベクター構築並びにウイルス産生及び精製
アルブミンエンハンサー及びヒトα−１−アンチトリプシンプロモーター（ＥａｌｂＡＡＴ）によって形成されるキメラ肝臓特異的なプロモーターの制御下でマウス可溶性ＣＤ６（ｍｓＣＤ６）又はルシフェラーゼタンパク質を発現する組換えＡＡＶ８ベクターを構築した（Vanrell L, et al., 2011. Development of a liver-specific Tet-on inducible system for AAV vectors and its application in the treatment of liver cancer. Mol Ther 19:1245-1253）。ｍｓＣＤ６由来のアミノ酸Ｇｌｙ２５〜Ｔｈｒ３９８とインフレームで融合された免疫グロブリンκ軽鎖可変領域由来のシグナルペプチドをコードするｃＤＮＡ（Whitney G, et al., 1995. Cloning and characterization of murine CD6. Mol Immunol 32:89-92）を、ＡＡＶ２ゲノムへＳａｌ  Ｉ−Ｎｏｔ  Ｉとしてクローニングして、ｐＡＡＶ−ＥａｌｂＡＡＴ−ｒｍｓＣＤ６を得た。ＡＡＶ−ｒｍｓＣＤ６ウイルス産生に関して、ｐＡＡＶ−ＥａｌｂＡＡＴ−ｒｍｓＣＤ６（２０μｇ）及びｐＤＰ８．ａｐｅ（５５μｇ；PlasmidFactory GmbH & Co. KG、ドイツ、ビーレフェルト）プラスミドの混合物を、線状ポリエチレンイミン（ＰＥＩ、分子量２５ｋＤａ；Polysciences、ペンシルバニア州、ウォリントン）を使用してセミコンフルエントな２９３Ｔ細胞を播種した１５ｃｍのプレートにトランスフェクトした。トランスフェクションの７２時間後に、細胞を収集して、３回の細胞凍結融解によってウイルスを放出させた。これまでに記載された方法（Zolotukhin S, et al., 1999. Recombinant adeno-associated virus purification using novel methods improves infectious titer and yield. Gene Ther 6:973-985）に従って、粗製溶解物をベンゾナーゼ（５０Ｕ／ｍＬ）で、３７℃にて１時間処置して、イオジキサノール勾配を使用することによって精製するまで、−８０℃で保持した。精製したウイルスバッチを、クロスフロー濾過によって濃縮した後、濾過して（０．２２μｍ）、−８０℃で保管した。ヒトα−１−アンチトリプシンプロモーターに特異的なプライマー（ＡＡＴ−フォワード（Ｆｗ）：５’−ＣＣＣＴＧＴＴＴＧＣＴＣＣＴＣＣＧＡＴＡＡ−３’及びＡＡＴ−リバース（Ｒｖ）：５’−ＧＴＣＣＧＴＡＴＴＴＡＡＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＣＡ−３’）を使用して、リアルタイム定量的ＰＣＲによって、ウイルス力価（１ｍＬ当たりのゲノムのコピー数に関して）を決定した。ＡＡＶ生体内分布研究に関して、マウスに、１×１０11個のウイルス粒子／マウスの単回ｉ．ｖ．用量（最終容量２００μＬ）を付与して、ｍｓＣＤ６血漿レベルを、種々の時点でＥＬＩＳＡ（ＤｕｏｓｅｔマウスＣＤ６、R&D Systems）によってモニタリングした。
【０１００】
統計解析
Ｐｒｉｓｍ  ５．００コンピュータープログラム（GraphPad Software Inc、カリフォルニア州、サンディエゴ）を使用して、統計解析を実施した。生存率データは、カプラン・マイヤーグラフで表し、ログランクχ2検定によって解析した。統計学的有意差（Ｐ＜０．０１）を、両側ノンパラメトリックマン・ホイットニー検定によって決定した。
【０１０１】
結果
実施例１．多微生物敗血症の致死モデルにおけるヒト及びマウス可溶性スカベンジャー様ＣＤ６リンパ球受容体の防御効果
ＣＬＰ誘導性敗血症性ショックにおけるｒｓｈＣＤ６のｉ．ｐ．注入の予防効果
ｒｓｈＣＤ６の、Ｇ＋（ＬＴＡ、ＰＧＮ）及びＧ−（ＬＰＳ）細菌由来の病原因子を標的とする報告されている能力を考慮して（Sarrias M-R, et al., 2007. CD6 binds to pathogen-associated molecular patterns and protects from LPS-induced septic shock. Proc Natl Acad Sci U S A 104:11724-1197、Florensa M, et al., 2014. Targeting of key pathogenic factors from gram-positive bacteria by the soluble ectodomain of the scavenger-like lymphocyte receptor CD6. J Infect Dis 209:1077-1086）、腹腔内起源、即ちＣＬＰの多微生物敗血症の予防及び／又は治療に関するその潜在的使用を試験した。単一細菌誘導性腹膜炎のマウスモデルで得られたこれまでの結果に基づいて（Florensa M, et al., 2014. Targeting of key pathogenic factors from gram-positive bacteria by the soluble ectodomain of the scavenger-like lymphocyte receptor CD6. J Infect Dis 209:1077-1086）、まず、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、ｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ）の単回用量を、ＣＬＰ誘導の１時間前に（−１時間）ｉ．ｐ．で注入した。図１Ａに示すように、生理食塩水で処置した群（６．５２％、ｎ＝１８）又はｒｓｈＣＤ５で処置したマウス（１１．１１％、ｎ＝９）と比較して、ｒｓｈＣＤ６で処置したマウス（４７．０６％、ｎ＝１５）に関して、生存率は有意に増加した（Ｐ＝０．００６７）。マウス生存率に対するこれらの予防効果は、用量依存的であり、０．６２５ｍｇ／ｋｇを超える用量は、統計学的に有意な結果を付与し、２．５ｍｇ／ｋｇで最大の有効性に達した（図１Ｂ）。また、ｒｓｈＣＤ６の予防的注入は、生理食塩水で処置した群と比較して、より高レベルの抗炎症性サイトカインＩＬ−１０とともに、炎症促進性サイトカインＩＬ−１β、ＩＬ−６及びＴＮＦ−αの血漿レベルを有意に低下させた（図１Ｃ）。同様に、血液、脾臓及び腎臓試料の細菌負荷もまた、生理食塩水で処置した群と比較して、ｒｓｈＣＤ６の予防的注入によって低下し（図１Ｄ）、それぞれ、４時間及び２０時間で、血液及び腎臓に関して統計学的有意性に達した。まとめると、これらの結果により、ｒｓｈＣＤ６の予防的注入が、ＣＬＰ誘導性敗血症性ショック後のマウス生存率に対して特異的かつ用量依存的な効果を有することが示され、また全身性炎症及び細菌負荷パラメーターに関して有意な低減を示す。
【０１０２】
ＣＬＰ誘導性敗血症性ショックにおけるｒｓｈＣＤ６のｉ．ｐ．注入の治療効果
ｒｓｈＣＤ６注入の推定治療効果を更に研究するために、タイムコース実験を実施した。図２Ａに示すように、ＣＬＰ前及び後の種々の時間でのｉ．ｐ．によるｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ）の単独注入により、生理食塩水で処置した群（６．５２％、ｎ＝４６）と比較して、ＣＬＰ後の＋１時間（２９．０３％、ｎ＝３１）で投与した場合には、マウス生存率に対して統計学的に有意な効果が示された（Ｐ＝０．０１２）が、ＣＬＰ後の＋３時間（１４．２８％、ｎ＝１４）又は＋６時間（１７．６５％、ｎ＝１７）では示されなかった。しかしながら、＋１時間でｒｓｈＣＤ６を注入することによって達成される生存率は、ＣＬＰ前の−１時間で得られたものよりも低く、ＣＬＰ後の＋１時間、＋３時間及び＋６時間での反復投薬によって改善されなかった（２６．３２％、ｎ＝１９）が、後者は依然として、生理食塩水で処置した群と比較して、統計学的有意性に達した（Ｐ＝０．００１６）（図２Ｂ）。ＣＬＰ後の４時間及び２０時間でのサイトカイン血漿レベルのモニタリングにより、ＣＬＰ後の＋１時間にｉ．ｐ．によりｒｓｈＣＤ６で処置したマウスは、生理食塩水で処置した群と比較して、より低い炎症促進性サイトカインレベルを示し、ＩＬ−１β及びＩＬ−６に関しては統計学的有意性に達したが、ＴＮＦ−αに関しては到達せず、抗炎症性サイトカインＩＬ−１０に関して差が観察されなかった（図２Ｃ）。同様に、細菌負荷のモニタリングにより、ＣＬＰ後の＋１時間にｒｓｈＣＤ６で処置したマウスの血液、脾臓及び腎臓由来のより低いｃｆｕが示され、ｃｆｕは、生理食塩水で処置した群に関して、統計学的有意性に到達しなかった（図２Ｄ）。結論として、これらの結果は、ｉ．ｐ．経路でのｒｓｈＣＤ６注入の治療効果は、ＣＬＰ誘導後の早期のみで（＋１時間）達成されるが、後期（＋３時間又は＋６時間）の時点では、反復投薬として投与された場合でさえも、達成されないことを示す。
【０１０３】
ＣＬＰ誘導性敗血症性ショックにおけるｒｓｈＣＤ６のｉ．ｖ．注入の治療効果
ｉ．ｐ．経路は、化合物を動物に全身投与するのに広く使用されている（Lukas G, et al., 1971. The route of absorption of intraperitoneally administered compounds. J Pharmacol Exp Ther 178:562-4）が、ヒト臨床目的で選択される経路は、全身薬物バイオアベイラビリティに影響を与えることができるｉ．ｖ．経路である。したがって、ｒｓｈＣＤ６血漿レベルは、単回用量（１．２５ｍｇ／ｋｇ）をｉ．ｐ．又はｉ．ｖ．のいずれかでＣ５７ＢＬ／６マウスに投与した場合に異なった。図３Ａに示すように、最大ｒｓｈＣＤ６レベルは、ｉ．ｐ．注入後の＋３時間で達成されたが、＋６時間までにはほぼ基礎レベルにまで減少した。対比して、ｉ．ｖ．注入は、＋１時間〜＋３時間で最大かつ持続性血漿レベルに達し、続いてそれは、＋６時間までにはほぼ基礎レベルに低下した。興味深いことに、ｉ．ｖ．で達成される最大レベルは、ｉ．ｐ．で得られる最大レベルよりも高く、したがって、ｉ．ｖ．経路に関して、より高くかつより持続性の全身バイオアベイラビリティが支持された。
【０１０４】
これらの結果を鑑みて、ＣＬＰ誘導性マウス生存率に対するｒｓｈＣＤ６のｉ．ｖ．注入の治療有効性を研究するタイムコース実験を実施した。図３Ｂに示すように、マウス生存率は、生理食塩水で処置した群と比較して、＋１時間（３０％、ｎ＝２０、Ｐ＝０．０２）での単回用量のｉ．ｖ．  ｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ）によって有意に改善されたが、ＣＬＰ後の＋３時間（２０％、ｎ＝１０；Ｐ＝０．０４０５）及び＋６時間（４０％、ｎ＝５；Ｐ＝０．０２）でも有意に改善された。＋１時間、＋３時間及び＋６時間でのｒｓｈＣＤ６処置群間で統計学的有意差は見られなかったが、結果により、ｉ．ｖ．経路が、経時的にｒｓｈＣＤ６の治療効果を延ばすことが示される。
【０１０５】
ＣＬＰ誘導性敗血症性ショックにおけるマウス可溶性ＣＤ６の肝臓特異的なＡＡＶ媒介性の発現の予防効果
可溶性ＣＤ６の高くかつ持続性の循環レベルを達成するために、組換えＡＡＶ８を操作して、肝臓特異的なプロモーターの転写制御下でマウスｓＣＤ６型（ＡＡＶ−ｒｍｓＣＤ６）を発現させた。ヒトｓＣＤ６を使用せずに、ｍｓｃＣＤ６を使用した論理的根拠は、後者が、マウスにとって免疫原性が低いこと、またその長期発現及び機能が、新たに出現する中和抗体によって妨害されないことであった。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＡＡＶ−ｒｓｍＣＤ６ウイルスを形質導入することにより、１０日目から血漿中に検出可能なｒｓｍＣＤ６が生じ、１５日目〜２０日目に最大レベルに達した（図４Ａ）。この発現系は、３ヵ月以上の期間、５μｇ／ｍＬ〜１５μｇ／ｍＬの範囲のｒｍｓＣＤ６の持続性発現レベルを可能にした。これらの結果に従って、ＡＡＶ−ｒｍｓＣＤ６又は対照ＡＡＶ−Ｌｕｃの１×１０11個のウイルス粒子による形質導入の２週後に、マウスをＣＬＰ誘導性敗血症性ショックに付して、それらの生存率を経時的にモニタリングした。図４Ｂに示すように、ＡＡＶ−ｒｍｓＣＤ６で処置したマウスは、ＡＡＶ−Ｌｕｃで処置した対照マウス（７．１４％、ｎ＝１３）と比較して、統計学的に有意に高い生存率（４２．８５％、ｎ＝１４；Ｐ＝０．０１４５）を示した。この効果は、炎症促進性サイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β及びＩＬ−６）の血清レベルの有意な低減及びＩＬ−１０の血清レベルの増加を伴った（図４Ｃ）。同様に、血液、腹膜、脾臓及び腎臓由来の細菌負荷もまた、対照（ＡＡＶ−Ｌｕｃ）と比較して、ＡＡＶ−ｒｍｓＣＤ６群で低減したが、差は、腹膜及び脾臓においてのみ統計学的有意性に達した（図４Ｄ）。
【０１０６】
実施例２．ＣＬＰ誘導性敗血症の治療及び予防におけるＣＤ６産物と広域スペクトル抗生物質との共投与の比較効果
ＣＬＰ誘導性敗血症におけるイミペネム／シラスタチン＋ｒｓｈＣＤ６の効果
ＣＬＰ後のマウス生存率に対する、敗血症を患う重症患者用の処置であるｒｓｈＣＤ６及び広域スペクトル殺菌性カルバペネム系イミペネム／シラスタチンを組み合わせることの治療効果を研究した。この目的で、ＣＬＰに付したマウスに、＋１時間でｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ）、イミペネム／シラスタチン（３３ｍｇ／ｋｇ／８時間）又はその２つの組合せをｉ．ｐ．注入した。図２Ｅに示すように、単独で付与したｒｓｈＣＤ６（２６．４％、ｎ＝３４；Ｐ＝０．００８）及びイミペネム／シラスタチン（１９％、ｎ＝２１；Ｐ＝０．０３）はともに、生理食塩水で処置した群と比較して、マウス生存率に対して類似の有意な効果を示した。重要なことに、ｒｓｈＣＤ６＋イミペネム／シラスタチンの同時投与は、マウス生存率に対して少なくとも相加的効果を示し（３７．５％、ｎ＝２４）、それらは、生理食塩水で処置した群と比較した場合（Ｐ＜０．０００１）だけでなく、イミペネム／シラスタチンのみで処置した群と比較した場合（Ｐ＝０．０３２）にも統計学的に有意であった。
【０１０７】
同様に、ＣＬＰ後の＋１時間でのイミペネム／シラスタチン（３３ｍｇ／ｋｇ／８時間、ｉ．ｐ．）の治療的注入は、ＡＡＶ−ｒｓｍＣＤ６（４２．８５％、ｎ＝１４対７８．５７％、ｎ＝１４）及びＡＡＶ−Ｌｕｃ（７．１４％、ｎ＝１３対５６．２５％、ｎ＝１６）処置群の両方において、マウス生存率の有意な増加を誘導した（図４Ｂ）。
【０１０８】
重要なことに、マウス生存率に対するＣＬＰ後の＋１時間でｉ．ｐ．で注入したｒｓｈＣＤ６＋イミペネム／シラスタチンの相加的効果は、同じ用量及び時点で、ｉ．ｖ．経路でｒｓｈＣＤ６を投与することによって延びた。図７に示すように、イミペネム／シラスタチン（３３ｍｇ／ｋｇ／８時間；ｉ．ｐ．）（２３．５％、ｎ＝１７、Ｐ＝０．０１７）又はｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｖ．）（３３．３％、ｎ＝１５；Ｐ＝０．００６）の個々の投与によって達成されるマウス生存率は、生理食塩水で処置した群と比較して、それらの複合投与（６０％、ｎ＝１５；Ｐ＝０．０００１）によって大いに改善された。重要なことに、イミペネム／シラスタチン単独を付与した群又はｒｓｈＣＤ６と組み合わせた群間で観察されるマウス生存率の差もまた、統計学的に有意であった（Ｐ＝０．００８）。これらの効果は、２つの処置に関して異なる作用機序を示している。
【０１０９】
ＣＬＰ誘導性敗血症におけるエリスロマイシン＋ｒｓｈＣＤ６の非相加的効果
ＣＬＰ誘導性敗血症性ショック後のマウス生存率に対するｒｓｈＣＤ６及び／又はエリスロマイシン注入の治療有効性を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスで分析した。図５Ａに示すように、ＣＬＰ後の＋０時間の時点でのｉ．ｐ．によるｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝９）又はエリスロマイシン（２．７５μｇ／ｋｇ／８時間、ｎ＝１２）のいずれかの単独注入は、生理食塩水で処置した群（０％、ｎ＝１０）と比較した場合に、マウス生存率に対して統計学的に有意な効果（それぞれ、２２．２％、Ｐ＝０．００６５、及び１６．６％、Ｐ＝０．０５４）を示した。ｒｓｈＣＤ６及びエリスロマイシンを組み合わせて付与した場合に、同様の統計学的に有意な結果が得られた（３３．３％、ｎ＝１２、Ｐ＝０．００３４）。しかしながら、併用群を単独療法群と比較した場合には、統計学的有意差は見られなかった。
【０１１０】
ＣＬＰ誘導後の＋１時間で同じ療法を施した場合に、非常に類似した状況が観察された。図５Ｂに示すように、ＣＬＰ後の＋１時間でのｉ．ｐ．によるｒｓｈＣＤ（１．２５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１０）又はエリスロマイシン（２．７５μｇ／ｋｇ／８時間、ｎ＝１５）のいずれかの単独注入は、生理食塩水で処置した群（０％、ｎ＝８）と比較した場合に、マウス生存率に対して統計学的に有意な効果を示した（それぞれ、２０％、Ｐ＝０．００７１、及び１３．３％、Ｐ＝０．００２９）。ｒｓｈＣＤ６及びエリスロマイシンを複合化合物として注入した場合に、同様の統計学的に有意な結果が得られた（２０％、ｎ＝１５、Ｐ＝０．００９４）。しかしながら、単独療法群と併用療法群との間に、有意差は見られなかった。
【０１１１】
ＣＬＰ誘導性敗血症におけるメロペネム＋ｒｓｈＣＤ６の非相加的効果
ＣＬＰ誘導性敗血症性ショック後のマウス生存率に対するｒｓｈＣＤ６及び／又はメロペネム注入の治療有効性を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスで分析した。図６Ａに示すように、ＣＬＰ後の＋０時間の時点でのｉ．ｐ．によるｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１６）又はメロペネム（１７ｍｇ／ｋｇ／８時間、ｎ＝２０）のいずれかの単独注入は、生理食塩水で処置した群（０％、ｎ＝１９）と比較した場合に、マウス生存率に対して統計学的に有意な効果（それぞれ、３７．５％、Ｐ＜０．０００１、及び１５％、Ｐ＝０．０００６）を示した。ｒｓｈＣＤ６及びメロペネムを複合化合物として注入した場合に、同様の結果が得られた（２６．６％、ｎ＝１５、Ｐ＝０．００１）。しかしながら、単独併用群と併用療法群との間に、有意差は見られなかった。
【０１１２】
メロペネム＋ｒｓｈＣＤ６対メロペネム  ｐ＝０．１５
【０１１３】
ＣＬＰ誘導後の＋１時間で同じ療法を施した場合に、非常に類似した状況が観察された。図６Ｂに示されるように、ＣＬＰ後の＋１時間でのｒｓｈＣＤ（１．２５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．、ｎ＝１５）又はメロペネム（１７ｍｇ／ｋｇ／８時間、ｉ．ｐ．、ｎ＝２１）のいずれかの単独注入は、生理食塩水で処置した群（ｎ＝２１）と比較した場合に、マウス生存率に対して統計学的に有意な効果を示した（それぞれ、２６．７％、Ｐ＝０．００１１、及び１４．２８％、Ｐ＝０．０１）。ｒｓｈＣＤ６及びメロペネムを複合化合物として注入した場合に、有意な結果が得られた（Ｐ＝０．０００３、２２．２％、ｎ＝１８）。単独療法群と併用群との間に、有意差は観察されなかった。
【０１１４】
ＣＬＰ誘導性敗血症におけるエリスロマイシン＋ｒｓｈＣＤ６の非相加的効果
ＣＬＰ誘導性敗血症性ショック後のマウス生存率に対するｒｓｈＣＤ６及び／又はエリスロマイシン注入の治療有効性を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスで分析した。図５Ａに示すように、ＣＬＰ後の＋０時間の時点でのｉ．ｐ．によるｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝９）又はエリスロマイシン（２．７５μｇ／ｋｇ／８時間、ｎ＝１２）のいずれかの単独注入は、生理食塩水で処置した群（０％、ｎ＝１０）と比較した場合に、マウス生存率に対して統計学的に有意な効果（それぞれ、２２．２％、Ｐ＝０．００６５、及び１６．６％、Ｐ＝０．０５４）を示した。ｒｓｈＣＤ６及びエリスロマイシンを組み合わせて付与した場合に、同様の統計学的に有意な結果が得られた（３３．３％、ｎ＝１２、Ｐ＝０．００３４）。しかしながら、併用群を単独療法群と比較した場合には、統計学的有意差は見られなかった。
【０１１５】
ＣＬＰ誘導後の＋１時間で同じ療法を施した場合に、非常に類似した状況が観察された。図５Ｂに示すように、ＣＬＰ後の＋１時間でのｉ．ｐ．によるｒｓｈＣＤ６（１．２５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１０）又はエリスロマイシン（２．７５μｇ／ｋｇ／８時間、ｎ＝１５）のいずれかの単独注入は、生理食塩水で処置した群（０％、ｎ＝８）と比較した場合に、マウス生存率に対して統計学的に有意な効果を示した（それぞれ、２０％、Ｐ＝０．００７１、及び１３．３％、Ｐ＝０．００２９）。ｒｓｈＣＤ６及びエリスロマイシンを複合化合物として注入した場合に、同様の統計学的に有意な結果が得られた（２０％、ｎ＝１５、Ｐ＝０．００９４）。しかしながら、単独療法群と併用療法群との間に、有意差は見られなかった。
【０１１６】
考察
したがって、本発明の実施例は、腹腔内起源の多微生物感染の致死モデルにおいて、スカベンジャー様リンパ球受容体ＣＤ６（ｓＣＤ６）由来の可溶性エクトドメインのｉｎ  ｖｉｖｏでの予防効果及び治療効果を示す。結果により、ＣＬＰ誘導後のマウス生存率に対して、ｓＣＤ６注入の時間依存的及び用量依存的効果が示され、それらは、全身性炎症反応及び細菌負荷の低減を伴う。興味深いことに、ヒト及びマウスのｓＣＤ６注入はともに、広域スペクトル殺菌性抗生物質イミペネム／シラスタチンと組み合わせた場合に、マウス生存率に対する効果の改善を示した。
【０１１７】
これまでの研究により、ｓＣＤ６は主に、Ｇ−（ＬＰＳ）及びＧ＋（ＬＴＡ及びＰＧＮ）細菌細胞壁由来の重要な病原因子への直接結合により作用し、その結果として、細菌増殖及び生存度を低減させることに加えて、それらによって誘導されるＴＬＲ２及びＴＬＲ４媒介性サイトカイン放出を妨害することが示されている（Florensa M, et al., 2014. Targeting of key pathogenic factors from gram-positive bacteria by the soluble ectodomain of the scavenger-like lymphocyte receptor CD6. J Infect Dis 209:1077-1086）。かかる広範囲の細菌結合特性により、ｓＣＤ６は、ＣＬＰによって誘導されるもの場合と同様に、複雑な多微生物感染を処置するのに適した候補物となる。このモデルにおいて、常在性腸内フローラ（主に、細菌、嫌気性から通性好気性又は好気性まで）の、腹膜及び全身循環への大量の播種は、腹膜炎及び敗血症を特徴とする症状を発症し、ｓＣＤ６の広域スペクトル抗菌特性を試験することが可能になる。
【０１１８】
それにもかかわらず、ｓＣＤ６によって標的とされるＰＡＭＰは、細菌細胞壁の保存された成分であり、これらは、細菌生存に必須であり、生存度及び／又は病原性を損失することなく、容易に突然変異を行いにくい。これらの特性全てにより、ｓＣＤ６は代替的／補助的な抗菌戦略に対する良好な標的となり、ｓＣＤ６は、抗生物質に耐性である細菌株の場合でさえ有効である。
【０１１９】
結果により、ｓＣＤ６注入の予防効果及び治療効果の両方の誘導が示され、またそれらが、どのようにして投与経路に影響されるかが示される。ｉ．ｐ．経路を使用することによって、予防モードで（ＣＬＰ前の−１時間で）最良の結果が達成されるが、治療効果は、ＣＬＰ後の早期（＋１時間）の時点では依然として観察されたが、ＣＬＰ後の後期（＋３時間）の時点では観察されなかった。興味深いことに、ｉ．ｖ．経路の使用により、ＣＬＰ後の最大＋３時間又は＋６時間まで、ｓＣＤ６の治療効果が延びた。
【０１２０】
イミペネム／シラスタチンをｓＣＤ６と共投与する（ｉ．ｐ．又はｉ．ｖ．で）と、少なくとも明確な相加的治療効果が明らかであった。
【０１２１】
予想外にも、ｓＣＤ６の少なくとも相加的治療効果は、同じ（メロペネム）系又は異なる（エリスロマイシン）系由来の他の広域スペクトル抗生物質と組み合わせた場合には観察されなかった。このことは、観察された少なくとも相加的効果が、イミペネムに特異的であり、系統的に他の抗生物質に拡張させることができないことを示す。
【０１２２】
生涯にわたる広域スペクトル抗生物質もまた、先天性又は後天性免疫不全等の幾つかの臨床的背景における感染の予防又は治療に適した選択である。しかしながら、臨床医は、予防的な抗生物質の使用法の利益と、コンプライアンス、有害反応及び抗生物質耐性の発現等の問題とのバランスを取らなくてはならない。これらの状況を鑑みて、肝臓特異的なＡＡＶ媒介性の発現により持続性ｓＣＤ６血漿レベルを誘導することによって達成される予防効果は、臨床的介入として検討され得る。
【０１２３】
ヒトタンパク質に関連した免疫原性関連問題を最低限に抑えるために、マウスｓＣＤ６をコードするＡＡＶウイルスを使用した。これにより、ヒト及びマウスのｓＣＤ６の両方が進化により保存された類似の抗菌特性を共有することを実証することが可能になった。
【０１２４】
結論として、本発明の結果は、ｓＣＤ６ターゲティングが、イミペネム抗生物質療法に対する実現可能な補助的戦略であることを示す。
【０１２５】
本発明の項目−本発明は、下記項目を提供する：
【０１２６】
１．ＣＤ６産物、又はその誘導体と、イミペネムとを含む組成物。
【０１２７】
２．薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な塩、アジュバント及び／又は適切な賦形剤とともに、項目１に記載の組成物を含む医薬組成物。
【０１２８】
３．ＣＤ６産物、又はその誘導体と、イミペネムとを含むキットオブパーツ。
【０１２９】
４．上記ＣＤ６産物は、組換え可溶性ＣＤ６である、項目１若しくは２に記載の組成物、又は項目３に記載のキットオブパーツ。
【０１３０】
５．上記ＣＤ６産物は、ヒトＣＤ６産物である、項目１〜項目２及び項目４のいずれか１つに記載の組成物、又は項目３若しくは項目４に記載のキットオブパーツ。
【０１３１】
６．上記ＣＤ６産物は、配列番号１のアミノ酸配列１を含む、項目１〜２及び項目４〜５のいずれか一項に記載の組成物、又は項目３〜５のいずれか１つに記載のキットオブパーツ。
【０１３２】
７．上記組成物及び／又は上記キットオブパーツは、シラスタチンを更に含む、項目１〜２及び項目４〜６のいずれか一項に記載の組成物、又は項目３〜６のいずれか一項に記載のキットオブパーツ。
【０１３３】
８．薬剤としての使用のための項目１〜２及び項目４〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【０１３４】
９．感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患のヒトを含む哺乳類における処置の治療法及び／又は予防法における使用のための項目１〜２及び項目４〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【０１３５】
１０．薬剤としての同時使用、順次的な使用又は別々の使用のための項目３〜７のいずれか一項に記載のキットオブパーツ。
【０１３６】
１１．感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患のヒトを含む哺乳類における処置の治療法及び／又は予防法における同時使用、順次的な使用又は別々の使用のための項目３〜７のいずれか一項に記載のキットオブパーツ。
【０１３７】
１２．上記感染症は、微生物感染である、項目８若しくは９に記載の使用のための組成物、又は項目１０若しくは１１に記載の使用のためのキットオブパーツ。
【０１３８】
１３．上記微生物感染は、細菌感染、真菌感染、ウイルス感染、寄生虫感染、及びそれらの組合せからなる群から選択される、項目１２に記載の使用のための組成物又はキットオブパーツ。
【０１３９】
１４．上記感染症は、菌血症である、項目９に記載の使用のための組成物、又は項目１１に記載の使用のためのキットオブパーツ。
【０１４０】
１５．上記菌血症は、細菌血症、真菌血症、ウイルス血症、寄生虫血症及びそれらの組合せからなる群から選択される、項目１４に記載の使用のための組成物又はキットオブパーツ。
【０１４１】
１６．上記感染病原体は、細菌、真菌、ウイルス、寄生虫、及びそれらの組合せからなる群から選択される、項目９に記載の使用のための組成物、又は項目１１に記載の使用のためのキットオブパーツ。
【０１４２】
１７．上記炎症状態は、全身性炎症反応症候群である、項目９に記載の使用のための組成物、又は項目１１に記載の使用のためのキットオブパーツ。
【０１４３】
１８．上記炎症状態は、敗血症である、項目９に記載の使用のための組成物、又は項目１１に記載の使用のためのキットオブパーツ。
【０１４４】
１９．上記敗血症は、多微生物敗血症である、項目１８に記載の使用のための組成物又はキットオブパーツ。
【０１４５】
２０．上記敗血症は、重症敗血症である、項目１８に記載の使用のための組成物又はキットオブパーツ。
【０１４６】
２１．上記重症敗血症は、敗血症性ショックである、項目２０に記載の使用のための組成物又はキットオブパーツ。
【０１４７】
２２．上記敗血症性ショックは、エンドトキシン誘導性敗血症性ショックである、項目２１に記載の使用のための組成物又はキットオブパーツ。
【０１４８】
２３．上記組成物は、ヒトを含む哺乳類に、静脈内に及び／又は腹腔内に投与される、項目９〜項目２２のいずれか１つに記載の使用のための組成物又はキットオブパーツ。
【０１４９】
２４．感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患のヒトを含む哺乳類における処置の治療法及び／又は予防法における使用のためのＣＤ６産物、又はその誘導体であって、該方法は、ヒトを含む哺乳類に、該ＣＤ６産物、又はその誘導体及びイミペネムを、同時に、順次的に又は別々に投与することを含む、ＣＤ６産物、又はその誘導体。
【０１５０】
２５．上記ＣＤ６産物は、組換え可溶性ＣＤ６である、項目２４に記載の使用のためのＣＤ６産物、又はその誘導体。
【０１５１】
２６．上記ＣＤ６産物は、ヒトＣＤ６産物である、項目２４に記載の使用のためのＣＤ６産物、又はその誘導体。
【０１５２】
２７．上記ＣＤ６産物は、配列番号１のアミノ酸配列を含む、項目２４に記載の使用のためのＣＤ６産物、又はその誘導体。
【０１５３】
２８．上記方法は、シラスタチンの投与を更に含む、項目２４に記載の使用のためのＣＤ６産物、又はその誘導体。
【０１５４】
２９．感染症、又は感染症に関連した炎症状態、又は感染病原体に由来する産物の存在に関連した炎症性疾患のヒトを含む哺乳類における処置の治療法及び／又は予防法における使用のためのイミペネムであって、該方法は、ヒトを含む哺乳類に、イミペネム及びＣＤ６産物、又はその誘導体を、同時に、順次的に又は別々に投与することを含む、使用のためのイミペネム。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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