(57)【要約】  ギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤又は阻害剤を含む化合物及び組成物、ならびにその使用の方法が、血管性又は他の疾患、障害、及び状態の治療又は予防のために提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１〜５２からなる群から選択される化合物及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
【請求項２】
式Ｉに記載の化合物及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
【請求項３】
式ＩＩに記載の化合物及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
【請求項４】
式ＩＩＩに記載の化合物及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
【請求項５】
式ＩＶに記載の化合物及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
【請求項６】
配列番号１〜５２からなる群から選択される単離された化合物。
【請求項７】
式Ｉにより選択される単離された化合物。
【請求項８】
式ＩＩにより選択される単離された化合物。
【請求項９】
式ＩＩＩにより選択される単離された化合物。
【請求項１０】
式ＩＶにより選択される単離された化合物。
【請求項１１】
前記化合物が、配列番号１〜１０、２１、２５、２７〜３０、４６、４９、５０、及び５１から選択され、前記薬学的に許容可能な担体が、滅菌済みの賦形剤を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
この出願は、２０１６年５月３日出願の「新規のペプチド及びペプチド模倣体」と題された米国仮特許出願第６２／３３１，４１６号の優先権を請求するものであり、当該出願の内容は、その全体が記載されるがごとく本明細書に参照により組み込まれる。
【０００２】
本発明は、ペプチド及びペプチド模倣体に関する。
【背景技術】
【０００３】
以下は、本願発明を理解する際に有用となり得る情報を含む。本明細書に具体的に又は暗黙的に記述又は参照される情報、刊行物、又は文書のいずれも、ここに記載されるか又は特許請求の範囲に記載される発明に対し、先行技術であること、又は不可欠であることを、自認するものではない。
【０００４】
本明細書に言及された全ての米国特許、米国特許出願公開公報、国外特許、国外及びＰＣＴ公開出願、論文及び他の文書、参照文献及び刊行物、ならびに本明細書から発行されたいずれかの１つ又は複数の特許に引用参照文献として一覧に挙げられたもの全てが、参照によりその全体を本明細書に組み込まれる。
【０００５】
ギャップ結合は、細胞間の連絡を推進する細胞膜の構造である。それらは、細胞間のチャネルのクラスターからなり、このチャネルは、２つの隣接細胞の細胞質を直接的に接続して、それらの間で様々な分子、イオン、及び電気的インパルスを直接的に通すことを可能にする。ギャップ結合チャネルは、分子量≦１ｋＤａの物質を透過可能である。透過性は、コネキシンのタイプ及び透過分子の電荷に依存する。これらのチャネルは、互いに接しているほぼ全ての動物細胞に見出され、成熟骨格筋細胞及び精子や赤血球などの可動性細胞のタイプを例外として、身体の実質上全ての組織で発現されている。それらは、きつく詰め込まれた粒子のクラスター（又はプラーク）として現れ、その中では、各粒子は単一のギャップ結合チャネルである。１細胞当たり数多くのギャップ結合プラークがある場合があり、そこでは、各プラークが少数から何千もの細胞間チャネルユニットを含有している。
【０００６】
細胞間のギャップ結合チャネルは、「コネクソン」又は「ヘミチャネル」とよばれる２つの半片のチャネルが、ヘッドトゥーヘッドでドッキングすることによって形成され、そこでは、一方の細胞膜のヘミチャネルが反対側の膜の別のヘミチャネルにドッキングして単一のギャップ結合チャネルを形成する。各ギャップ結合ヘミチャネルは、６つの「コネキシン」とよばれる４回膜内在性膜タンパク質のアセンブリであり、水性孔の周囲に六角形に整列されている。全てのコネキシンタンパク質は、２つの細胞外ループ及び１つの細胞内ループによって隔てられている、４つの高度に保存されたα−へリックスの膜貫通セグメントからなる。アミノ末端及びカルボキシ末端は、細胞内に位置している。細胞外ループは、隣接するコネキシンの細胞外ループを認識し区別して、チャネル管腔と細胞外空隙との間に不透過性のシールを形成することができる［Ｗｈｉｔｅ  ＴＷ，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １２５：８７９−８９２］。２１種のヒトコネキシンファミリーのメンバーが特定されている。それらは、主にその細胞内ループとカルボキシ末端の配列に違いがあり、そこでは、各コネキシンは、そのキロダルトンでの推定分子量に基づいて名称を有する。コネキシン２６は、例えば、２６ｋＤのタンパク質である。
【０００７】
細胞間の連絡の推進に加えて、コネキシン４３ギャップ結合タンパク質は、急性傷害の応答といくつかの慢性疾患において重要な役割も果たすようであり、その際に、タンパク質の発現は、前者では下がり、後者では上がる。ギャップ結合ヘミチャネルもまた、関与することがある。近隣の細胞にドッキングする前に、コネキシン４３ヘミチャネルは、開いたチャネルが大きくかつ相対的に非特異的な膜孔を構成する際に開口確率が低いことがいくつかの例で報告されており、そして、コネキシン４３ヘミチャネルは、休止状態下では厳密に制御されると言われている一方で［Ｂｕｋａｕｓｋａｓ  ＦＦ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ９７：２５５６−２５６１；Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １００：１１３８８−１１３９３］、それらはまた、炎症誘発性サイトカインを含めた傷害［Ｒｅｔａｍａｌ  ＭＡ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２７：１３７８１−１３７９２］、代謝阻害［Ｊｏｈｎ  ＳＡ，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７４：２３６−２４０；Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ９９：４９５−５００］、Ｃａ２＋濃度（細胞質Ｃａ２＋濃度の増加又は細胞外濃度の減少）［Ｌｉ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  細胞  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １３４：１０１９−１０３０；Ｔｈｉｍｍ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８０：１０６４６−１０６５４；Ｄｅ  Ｖｕｙｓｔ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｅｌｌ  Ｃａｌｃｉｕｍ  ４６：１７６−１８７］に特徴的な複数の要因に応答して、及びグラム陽性細菌の細胞壁タンパク質などの感染性材（ペプチドグリカン又はリポ多糖）［Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ４３２：１３３−１４３］によって、開くことが報告されている。ギャップ結合のチャネル及びタンパク質は、脊髄傷害［Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ  ＳＪ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｃｅｌｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  ＆  Ａｄｈｅｓｉｏｎ  １５：２７−４２；Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ  ＳＪ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７５：２５６−２６７；Ｔｏｎｋｉｎ  ＲＳ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ７：１０２］、早産児の虚血及び窒息［Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ＪＯ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ７１：１２１−１３２；Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ＪＯ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）ＰｌｏＳ  Ｏｎｅ  ９：ｅ９６５５８］、感染［Ｅｕｇｅｎｉｎ  ＥＡ，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅ��ｃｅ  ３１：９４５６−９４６５］、大脳のマラリア［Ｚｈａｎｇ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＣｏｎｎｅｘｉＮ−Ｂａｓｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍ．Ｉｎ：Ｃｏｎｎｅｘｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  Ｃｈａｎｎｅｌｓ（Ｏｖｉｅｄｏ−Ｏｒｔａ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ），ｐｐ  ２７３−３０６：ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ］、及び網膜の虚血再灌流傷害［Ｄａｎｅｓｈ−Ｍｅｙｅｒ  ＨＶ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｂｒａｉｎ  １３５：５０６−５２０］を含めた、様々な病理学に関して議論されている。ヘミチャネルの開口もまた、慢性炎症において、報告によればインフラマソーム経路を通じて［Ｋｉｍ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ａｄｖ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｂｉｏｌ  １０４：１−３７］役割を持つことがある。概観のために、Ｄａｎｅｓｈ−Ｍｅｙｅｒ  ＨＶ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．５１：４１−６８（グリア細胞の活性化、浮腫、及び血管の完全性の喪失を含めた、二次損傷の様々な局面に関与するコネキシン４３の上方制御及びヘミチャネルの開口）を参照されたい。Ｖｉｎｋｅｎ，Ｍ（２０１５）Ａｒｃｈ  Ｔｏｘｉｃｏｌ．８９（１）：１４３−１４５も参照されたい。それゆえ、ギャップ結合によって、細胞の生存に極めて重要な細胞間でのイオン及び代謝物の移動が可能になる一方で（Ｋｒｙｓｋｏ  ＤＶ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  １０：４５９−４６９）、大きくかつ相対的に非選択的なドッキングされていないヘミチャネル孔の開口は、受傷部でのイオン勾配及び代謝物勾配を分解し［Ｔａｋｅｕｃｈｉ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８１：２１３６２−２１３６８］、細胞の浸透圧調節能を損ない［Ｑｕｉｓｔ  ＡＰ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １４８：１０６３−１０７４；Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｓｉｎｏｖａｓ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ９４：２１９−２３２；Ｄａｎｅｓｈ−Ｍｅｙｅｒ  ＨＶ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｂｒａｉｎ  １３５：５０６−５２０］、二次損傷の広がりを促進する  Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ＪＯ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３ａ）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  １４：３６−４６；Ｄｅｃｒｏｃｋ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ７２：２８２３−２８５１．ことによって、細胞死に駆り立てる能力を有する。
【０００８】
小さな化合物、例えばアルコール（ヘプタノール、オクタノール）、麻酔剤（ハロタン及びエタン）、脂肪酸（オレアミド）、抗マラリア薬（キニーネ誘導体）、グリシルレチン酸、及びその誘導体、カルバノクソロンなどは、コネキシンチャネルを遮断することが示されてきたが、これらの化合物は、オフターゲット効果があるために治療適用に限定される。概観のために、Ｂｏｄｅｎｄｉｅｋ  ＳＢ  ａｎｄ  Ｒａｍａｎ  Ｇ（２０１０）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １７：４１９１−４２３０を参照されたい。他のさらに特殊な抗コネキシンアプローチも供試されている。例えば、コネキシン４３のアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドが局所的に適用されて、マウスの皮膚の損傷［Ｑｉｕ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１３：１９６７−１７０３］、新生仔マウスの熱傷［Ｃｏｕｔｉｎｈｏ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｌａｓｔｉｃ  Ｓｕｒｇｅｒｙ  ５８：６５８−６６７］、及び齧歯動物の脊髄の傷害、Ｃｒｏｎｉｎ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ３９：１５２−１６０］で腫脹、炎症を低減し、機能的なアウトカムを向上させている。コネキシン４３のアンチセンスは、非治癒性の眼の熱傷で、例外的使用の場合に有効性を実証している（Ｏｒｍｏｎｄｅ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４５：３８１−３８８）。他のアプローチは、コネキシンの細胞外ループの部分（例えば、Ｇａｐ２６、Ｇａｐ２７、ペプチド５など）［Ｅｖａｎｓ  ＷＨ（２０１５）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ  ４３：４５０−４５９］又はコネキシン４３タンパク質の細胞内領域（例えば、Ｇａｐ１９、ＡＣＴ−１）［Ｄ’Ｈｏｎｄｔ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ４３２：７０７−７１２］に合致するペプチドに焦点を当てている。しかし、後者の２つのペプチドは、それらを有効とする場合には、細胞膜を横切るものである必要がある。Ｇａｐ２６及びＧａｐ２７は、コネキシン４３ヘミチャネルのゲーティングに作用するという仮説が立てられている［Ｗａｎｇ  Ｎ，Ｄｅ  Ｂｏｃｋ  Ｍ，Ｄｅｃｒｏｃｋ  Ｅ，Ｂｏｌ  Ｍ，Ｇａｄｉｃｈｅｒｌａ  Ａ，Ｂｕｌｔｙｎｃｋ  Ｇ，Ｌｅｙｂａｅｒｔ  Ｌ（２０１３）Ｃｏｎｎｅｘｉｎ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｖｏｌｔａｇｅ−ａｎｄ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｃａ２＋−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  Ｃｘ４３  ｈｅｍｉｃｈａｎｎｅｌ  ｏｐｅｎｉｎｇ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ７５：５０６−５１６に概説されている］。ペプチド５（ＶＤＣＬＳＲＰＴＥＫＴ）は、コネキシン４３の細胞外ループ２配列に由来し、上記  のＯ’Ｃａｒｒｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）によって紹介され、濃度依存的な作用を有することが報告されている。上記のＤａｖｉｄｓｏｎ  ＪＯ，ｅｔ  ａｌ（２０１２）；上記のＤａｖｉｄｓｏｎ  ＪＯ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）；上記のＤａｎｅｓｈ−Ｍｅｙｅｒ  ＨＶ，ｅｔ  ａｌ．（２０���２）を参照されたい。
【０００９】
ヘミチャネル及びギャップ結合の調節によって寛解し得る、眼及びＣＮＳの疾患、障害、及び状態を含めた疾患、障害、及び状態を治療する際に有用な、新しい治療法が依然として当技術分野に求められている。特に、炎症、浮腫及び／又は酸化ストレスに関連がある血管性の疾患、障害、及び状態のスペクトル全体に及ぶ、新しい治療法が求められている。そのような治療法は、新しいギャップ結合及びヘミチャネルの調節剤の発見に基づき、本明細書に記載され特許請求されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｗｈｉｔｅ  ＴＷ，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １２５：８７９−８９２
【非特許文献２】Ｂｕｋａｕｓｋａｓ  ＦＦ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ９７：２５５６−２５６１
【非特許文献３】Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １００：１１３８８−１１３９３
【非特許文献４】Ｒｅｔａｍａｌ  ＭＡ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２７：１３７８１−１３７９２
【非特許文献５】Ｊｏｈｎ  ＳＡ，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７４：２３６−２４０
【非特許文献６】Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ９９：４９５−５００
【非特許文献７】Ｌｉ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  細胞  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １３４：１０１９−１０３０
【非特許文献８】Ｔｈｉｍｍ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８０：１０６４６−１０６５４
【非特許文献９】Ｄｅ  Ｖｕｙｓｔ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｅｌｌ  Ｃａｌｃｉｕｍ  ４６：１７６−１８７
【非特許文献１０】Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ４３２：１３３−１４３
【非特許文献１１】Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ  ＳＪ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｃｅｌｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  ＆  Ａｄｈｅｓｉｏｎ  １５：２７−４２
【非特許文献１２】Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ  ＳＪ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７５：２５６−２６７
【非特許文献１３】Ｔｏｎｋｉｎ  ＲＳ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ７：１０２
【非特許文献１４】Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ＪＯ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ７１：１２１−１３２
【非特許文献１５】Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ＪＯ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）ＰｌｏＳ  Ｏｎｅ  ９：ｅ９６５５８
【非特許文献１６】Ｅｕｇｅｎｉｎ  ＥＡ，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ３１：９４５６−９４６５
【非特許文献１７】Ｚｈａｎｇ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＣｏｎｎｅｘｉＮ−Ｂａｓｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍ．Ｉｎ：Ｃｏｎｎｅｘｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  Ｃｈａｎｎｅｌｓ（Ｏｖｉｅｄｏ−Ｏｒｔａ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ），ｐｐ  ２７３−３０６：ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ
【非特許文献１８】Ｄａｎｅｓｈ−Ｍｅｙｅｒ  ＨＶ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｂｒａｉｎ  １３５：５０６−５２０
【非特許文献１９】Ｋｉｍ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ａｄｖ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｂｉｏｌ  １０４：１−３７
【非特許文献２０】Ｄａｎｅｓｈ−Ｍｅｙｅｒ  ＨＶ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．５１：４１−６８
【非特許文献２１】Ｖｉｎｋｅｎ，Ｍ（２０１５）Ａｒｃｈ  Ｔｏｘｉｃｏｌ．８９（１）：１４３−１４５
【非特許文献２２】Ｋｒｙｓｋｏ  ＤＶ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  １０：４５９−４６９
【非特許文献２３】Ｔａｋｅｕｃｈｉ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８１：２１３６２−２１３６８
【非特許文献２４】Ｑｕｉｓｔ  ＡＰ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １４８：１０６３−１０７４
【非特許文献２５】Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｓｉｎｏｖａｓ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ９４：２１９−２３２
【非特許文献２６】Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ＪＯ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３ａ）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  １４：３６−４６
【非特許文献２７】Ｄｅｃｒｏｃｋ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ７２：２８２３−２８５１．
【非特許文献２８】Ｂｏｄｅｎｄｉｅｋ  ＳＢ  ａｎｄ  Ｒａｍａｎ  Ｇ（２０１０）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １７：４１９１−４２３０
【非特許文献２９】Ｑｉｕ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１３：１９６７−１７０３
【非特許文献３０】Ｃｏｕｔｉｎｈｏ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｌａｓｔｉｃ  Ｓｕｒｇｅｒｙ  ５８：６５８−６６７
【非特許文献３１】Ｃｒｏｎｉｎ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ３９：１５２−１６０
【非特許文献３２】Ｏｒｍｏｎｄｅ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４５：３８１−３８８
【非特許文献３３】Ｅｖａｎｓ  ＷＨ（２０１５）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ  ４３：４５０−４５９
【非特許文献３４】Ｄ’Ｈｏｎｄｔ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ４３２：７０７−７１２
【非特許文献３５】Ｗａｎｇ  Ｎ，Ｄｅ  Ｂｏｃｋ  Ｍ，Ｄｅｃｒｏｃｋ  Ｅ，Ｂｏｌ  Ｍ，Ｇａｄｉｃｈｅｒｌａ  Ａ，Ｂｕｌｔｙｎｃｋ  Ｇ，Ｌｅｙｂａｅｒｔ  Ｌ（２０１３）Ｃｏｎｎｅｘｉｎ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｖｏｌｔａｇｅ−ａｎｄ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｃａ２＋−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  Ｃｘ４３  ｈｅｍｉｃｈａｎｎｅｌ  ｏｐｅｎｉｎｇ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ７５：５０６−５１６
【発明の概要】
【００１１】
本明細書に記載され特許請求される本発明は、多くの特質及び実施形態を有し、そのようなものとしては、以下に限定されないが、この簡潔な概要に明記又は記載又は参照されるものが挙げられる。包括的であることは意図されていないため、本明細書に記載され特許請求される本発明は、制限ではなく説明の目的で含まれているに過ぎないこの簡潔な概要に特定される特長又は実施形態に、又はそれによって、限定されるものではない。
【００１２】
本願発明は、ギャップ結合の連絡及びヘミチャネルの開口及び本明細書に記載される他の活性を調節するのに有用な薬物動態学的特性及び薬力学的特性を有する、ペプチド及びペプチド模倣物の生産、ならびに、ギャップ結合活性ならびに／又はヘミチャネルの開口及びヘミチャネル活性を調節することが治療的に有益である疾患、障害、及び状態の治療におけるそれらの使用を提供する。
【００１３】
本明細書に記載され特許請求される本発明は、ギャップ結合タンパク質及びギャップ結合ヘミチャネルタンパク質に結合する、ペプチド及びペプチド模倣体に関する。また、出願人の発明は、血管性の疾患、障害、及び状態の影響の治療、予防、及び寛解に有用な医薬品、組成物、及び方法、ならびにそのような化合物及び組成物を含む製品及びキットに関する。一態様では、本発明は、ギャップ結合タンパク質チャネル活性を制御するための化合物に関する。別の態様では、本発明は、ギャップ結合ヘミチャネル活性を制御するための化合物に関する。
【００１４】
一実施形態では、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド模倣物は、ギャップ結合チャネル阻害剤である。一実施形態では、ギャップ結合は、コネキシン４３タンパク質を含む。一実施形態では、ギャップ結合は、コネキシン４５タンパク質を含む。別の実施形態では、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド模倣物は、ギャップ結合ヘミチャネルの開口の阻害剤である。一実施形態では、ギャップ結合ヘミチャネルは、コネキシン４３タンパク質を含む。一実施形態では、ギャップ結合ヘミチャネルは、コネキシン４５タンパク質を含む。他の実施形態では、ギャップ結合及びヘミチャネルは、コネキシン２５、コネキシン２６、コネキシン２９（コネキシン３０．２）、コネキシン３０、コネキシン３０．３、コネキシン３１、コネキシン３１．１、コネキシン３１．３、コネキシン３１．９、コネキシン３２、コネキシン３６、コネキシン３７、コネキシン４０、コネキシン４０．１、コネキシン４６、コネキシン４６．６（コネキシン４７）、コネキシン５０、コネキシン５８、コネキシン５９、コネキシン６２のタンパク質を含み、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド模倣物は、これらのギャップ結合チャネル及び対応のヘミチャネルのうち１つ又は複数の阻害剤である。
【００１５】
別の態様では、本発明は、表面に露出されたギャップ結合ヘミチャネルの開口を制御するための化合物に関する。別の態様では、本発明は、ヘミチャネルの開口を持続的に制御するための化合物に関する。別の態様では、本発明は、ヘミチャネルを閉じるための化合物に関する。さらに別の態様では、本発明は、ヘミチャネルの開口を調節するための化合物に関する。
【００１６】
一態様では、本明細書に提供される本発明は、化合物を含む。別の態様では、本発明は、それらの化合物のうち１つ又は複数を含むかそれから本質的になる組成物を含み、ここでは、本発明の根本的かつ新規の特徴とは、本明細書に記載されるようなギャップ結合及び／又はヘミチャネルの機能もしくは活性を調節する能力である。本化合物は、ギャップ結合及び／又はヘミチャネルに関連する障害の治療に有用である。
【００１７】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物としては、以下のペプチド：「Ａｌａ１」ＡＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号１）、「Ａｌａ４」ＶＤＣＡＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号２）、「Ａｌａ６」ＶＤＣＦＬＡＲＰＴＥＫＴ（配列番号３）、「Ａｌａ９」ＶＤＣＦＬＳＲＰＡＥＫＴ（配列番号４）、「Ａｌａ１２」ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＡ（配列番号５）、「Ｍｏｄ−１／Ａｌａ１０」ＣＦＬＳＲＰＴＡＫＴ（配列番号６）、「Ｍｏｄ−１／Ａｌａ４」ＣＡＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号７）、「Ｍｏｄ−１／Ａｌａ６」ＣＦＬＡＲＰＴＥＫＴ（配列番号８）、「Ｍｏｄ−１／Ａｌａ９」ＣＦＬＳＲＰＡＥＫＴ（配列番号９）、及び「Ｍｏｄ−１／Ａｌａ１２」ＣＦＬＳＲＰＴＥＫＡ（配列番号１０）が挙げられる。配列番号１〜１０に示されるような上記のペプチドのうちいずれか又は全てにおいて、別々に又は任意の組合せで共に、バリン（Ｖ）は、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、及びフェニルアラニン（Ｆ）に置換することができ；アスパラギン酸（Ａｓｐ）は、グルタミン酸（Ｅ）に置換することができ；システイン（Ｃ）は、セリン（Ｓ）に置換することができ；フェニルアラニン（Ｐ）は、アラニン（Ａ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、及びバリン（Ｖ）に置換することができ；ロイシン（Ｌ）は、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）に置換することができ；セリン（Ｓ）は、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、及びバリン（Ｖ）に、好ましくはアラニンに置換することができ；アルギニン（Ｒ）は、リジン（Ｌ）又はグルタミン（Ｑ）に置換することができ、プロリン（Ｐ）は、置換することができず；スレオニン（Ｔ）は、アラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、及びグリシン（Ｇ）に置換することができ；グルタミン酸（Ｅ）は、アラニン（Ａ）、グルタミン（Ｑ）、及びアスパラギン（Ｎ）に置換することができ；リジン（Ｋ）は、アルギニン（Ｒ）に置換することができ、これらは全て、配列番号１〜８の類似体である。配列番号１〜８として示される上記のペプチドのうちいずれか又は全てにおいて、別々に又は任意の組合せで共に、いずれのアミノ酸もＬ−アミノ酸とすることもＤ−アミノ酸とすることもできるが、但し、そのペプチドは、Ｌ−Ｖａｌ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｌｅｕ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒではない。Ｄ−アミノ酸を含有する配列番号１〜８として示される上記のペプチドのいずれも、配列番号１〜８の類似体でもある。
【００１８】
非限定的で好適な実施形態で単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物は、以下の式Ｉによる化合物も含む。
Ｒ１  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４
式中、Ｒ１  は、存在しないか、又はＨ、１個から２０個までの炭素原子由来の線状又は分岐の飽和もしくは不飽和の炭化水素鎖を含有するアシル基、アミド、カルバメート、尿素、ＰＥＧ、又はヒドロキシアルキル  デンプンからなる群から選択され；Ｘ１は、Ｐｈｅであるか、又はＡｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、ならびに／もしくはＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ならびに／もしくはＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、ならびに／もしくはＮｖａもしくはＮｌｅ、ならびに／もしくはｔｅｒｔ−ブチルグリシン、フェニルグリシン、７−アザトリプトファン、４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−アラニン、サルコシン、Ｎ−メチル−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−フェニルグリシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−７−アザトリプトファン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−チロシン、Ｎ−メチル−バリン、及びＮ−メチル−リジン、ならびに／もしくは前述のもののうちいずれかのＤ−エナンチオマーからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｘ２は、Ｔｈｒであるか、又はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、ＮｖａもしくはＮｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｘ３は、Ｇｌｕ、Ａｌａ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｎｖａ又はＮｌｅであり；Ｘ４は、Ｔｈｒであるか、又はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、ＮｖａもしくはＮｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であるが；但し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、同時にそれぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではなく、ペプチド  Ｒ１  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４  ペプチド  は、Ｌ−Ｖａｌ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｌｅｕ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒではない。
【００１９】
本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ１は、Ｐｈｅであり、Ｘ２、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＴｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ２は、Ｔｈｒであり、Ｘ１、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ３は、Ｇｌｕであり、Ｘ１、Ｘ２、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ４は、Ｔｈｒであり、Ｘ１、Ｘ２、及び／又はＸ３のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、及びＧｌｕではない。
【００２０】
本発明の化合物は、非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋であり、以下の式ＩＩによる化合物も含む。
Ｒ１  Ｙ１  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｌｅｕ  Ｚ１  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４
式中、Ｙ１は、Ｖａｌ、Ａｌａ、又はＩｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｔｙｒ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ｎｖａ、Ｎｌｅ、ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、フェニルグリシン、７−アザトリプトファン、４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−アラニン、サルコシン、Ｎ−メチル−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−フェニルグリシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−７−アザトリプトファン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−チロシン、Ｎ−メチル−バリン、及びＮ−メチル−リジン、ならびに／もしくは前述のもののうちいずれかのＤ−エナンチオマーからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｚ１は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、又はＡｓｎ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、及びＡｒｇからなる群から選択されるアミノ酸であり；ならびに式中、Ｒ１、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、式Ｉについて上に記載された通りであるが；但し、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、同時にそれぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではなく、ペプチドＲ１  Ｙ１  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｌｅｕ  Ｚ１  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４  ペプチドは、Ｌ−Ｖａｌ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｌｅｕ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒではない。
【００２１】
本発明はまた、式ＩＩの化合物を含み、式中、Ｙ１は、Ｖａｌであり、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、Ｘ３及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ１は、Ｐｈｅであり、Ｙ１、Ｚ１、Ｘ２、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＶａｌ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ２は、Ｔｈｒであり、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ３は、Ｇｌｕであり、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ４は、Ｔｈｒであり、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、及び／又はＸ３のうち１つ又は複数は、それぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、及びＧｌｕではない。
【００２２】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物は、以下の式ＩＩＩによる化合物も含む。
Ｒ１  Ｉｌｅ  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４
式中、Ｒ１は、存在しないか、又はＨ、１個から２０個までの炭素原子由来の線状又は分岐の飽和もしくは不飽和の炭化水素鎖を含有するアシル基、アミド、カルバメート、尿素、ＰＥＧ、又はヒドロキシアルキル  デンプンからなる群から選択され；Ｘ１は、Ｐｈｅであるか、又はＡｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、ならびに／もしくはＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ならびに／もしくはＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、ならびに／もしくはＮｖａもしくはＮｌｅ、ならびに／もしくはｔｅｒｔ−ブチルグリシン、フェニルグリシン、７−アザトリプトファン、４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−アラニン、サルコシン、Ｎ−メチル−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−フェニルグリシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−７−アザトリプトファン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−チロシン、Ｎ−メチル−バリン、及びＮ−メチル−リジン、ならびに／もしくは前述のいずれかのＤ−エナンチオマーからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｘ２は、Ｔｈｒであるか、又はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、ＮｖａもしくはＮｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｘ３は、Ｇｌｕ、Ａｌａ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｎｖａ又はＮｌｅであり；Ｘ４は、Ｔｈｒであるか、又はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、ＮｖａもしくはＮｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であるが；但し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、同時にそれぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではなく、ペプチド  Ｒ１  Ｉｌｅ  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４  ペプチドは、Ｌ−Ｉｌｅ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｉｌｅ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒ、又は任意の天然に存在するコネキシンペプチド配列ではない。
【００２３】
本発明はまた、式ＩＩＩの化合物も含み、式中、Ｘ１は、Ｐｈｅであり、Ｘ２、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＴｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。  本発明はまた、式ＩＩＩの化合物も含み、式中、Ｘ２は、Ｔｈｒであり、Ｘ１、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。  本発明はまた、式ＩＩＩの化合物も含み、式中、Ｘ３は、Ｇｌｕであり、Ｘ１、Ｘ２、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、及びＴｈｒではない。  本発明はまた、式ＩＩＩの化合物も含み、式中、Ｘ４は、Ｔｈｒであり、Ｘ１、Ｘ２、及び／又はＸ３のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、及びＧｌｕではない。
【００２４】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物はまた、以下の式ＩＶによる化合物を含む。
Ｒ１  Ｙ１  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  ＩＬｅ  Ｚ１  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４
式中、Ｙ１は、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、及び／又はＰｈｅ、もしくはＩｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｔｙｒ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ｎｖａ、Ｎｌｅ、ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、フェニルグリシン、７−アザトリプトファン、４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−アラニン、サルコシン、Ｎ−メチル−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−フェニルグリシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−７−アザトリプトファン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−チロシン、Ｎ−メチル−バリン、及びＮ−メチル−リジン、ならびに／もしくは前述のもののうちいずれかのＤ−エナンチオマーからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｚ１は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、又はＡｓｎ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、及びＡｒｇからなる群から選択されるアミノ酸であり；ならびに式中、Ｒ１、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、式ＩＩＩについて上に記載された通りであるが；但し、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、同時にそれぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではなく、ペプチドＲ１  Ｙ１  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｉｌｅ  Ｚ１  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４  ペプチドは、Ｌ−Ｉｌｅ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｉｌｅ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒ、又は任意の天然に存在するコネキシンペプチド配列ではない。
【００２５】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物はまた、以下の表１による１２アミノペプチドを含むことも除くこともある。
表１：
【表１】
2019522041.tif 000002
【００２６】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の他の実施形態は、また、アミノ酸配列ＶＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号３１）という、例えば、コネキシン５０、６２、３７、４６．６、２６、３２、又は３１．９のうちいずれかから構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＦＩＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号３２）という、例えば、コネキシン４６又は３０のうちいずれかから構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列を含む。
【００２７】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の他の実施形態は、また、アミノ酸配列ＩＴＣＮＬＳＲＰＳＥＫＴ（配列番号３３）という、例えば、コネキシン２９（３０．２）又は３１．３のいずれかから構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＹＶＳＲＰＴＥＫＳ（配列番号３４）という、例えば、コネキシン４０．１から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＥＣＹＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号３５）という、例えば、コネキシン３６から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＩＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号３６）、例えば、コネキシン５９から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＹＩＳＲＰＴＥＫＫ（配列番号３７）という、例えば、コネキシン３０．３から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＦＩＳＫＰＳＥＫＮ（配列番号３８）という、例えば、コネキシン３１．１から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＹＩＡＲＰＴＥＫＫ（配列番号３９）という、例えば、コネキシン３１から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＦＩＳＫＰＴＥＫＴ（配列番号４０）という、例えば、コネキシン２５から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；ならびに、アミノ酸配列ＩＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４１）という、コネキシン５８及びコネキシン５９のうちいずれかから構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列を含む。
【００２８】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の他の実施形態は、また、アミノ酸配列ＶＮＣＹＶＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号４２）が、例えばギャップ結合チャネルに対する遮断剤として、及び／又はコネキシン４０から構成されるヘミチャネルに対するヘミチャネル遮断剤として、特異的かつ有用なアイソフォームとなることを含む。上に記載されたＲ１などの基を有するもの、及び例えば分子量を増加してタンパク質分解酵素からそれらを遮蔽するのに有用な他のものを含めて、本配列及びそれらの活性類似体は、少なくとも部分的には微小血管の漏れという特徴を持つものを含めた血管性の疾患、障害、及び状態に対処するために、ならびにがん治療として、特に重要となる。
【００２９】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の他の実施形態は、また、アミノ酸配列ＩＤＣＦＩＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４３）が、例えばギャップ結合チャネルに対する遮断剤として、及び／又はコネキシン４５から構成されるヘミチャネルに対するヘミチャネル遮断剤として、特異的かつ有用なアイソフォームとなることを含む。上に記載されたＲ１などの基を有するもの、及び例えば分子量を増加してタンパク質分解酵素からそれらを遮蔽するのに有用な他のものを含めて、本配列及びそれらの活性類似体は、少なくとも部分的には血管の損傷及び／又は漏れという特徴を持つものを含めた心臓の疾患、障害、及び状態に対処するために、ならびに心筋梗塞及び心発作に由来する血管のダイバック（ｄｉｅｂａｃｋ）に対処するための治療として、特に重要となる。
【００３０】
本発明の他の実施形態は、コネキシン細胞外ループ１及び２の両方の領域に合致するペプチドとの組合せ治療が有効性の増加を示し（図３、表２）、その増加は至適基準の対照のチャネル遮断剤として通例使用されるカルバノクソロンの有効性を超えることを含む。
【００３１】
本発明の他の実施形態は、コネキシンヘミチャネル遮断剤ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号４４）と、式Ｉ又は式ＩＩによるものを含めた本明細書に記載されるペプチドのうちいずれか１つ又は複数との組合せを含む、組成物及び治療が、コネキシン４３ヘミチャネルを遮断する組合せとしても有用となることを含む。
【００３２】
本発明の他の実施形態は、コネキシンヘミチャネル遮断剤ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号４４）と、式ＩＩＩ又は式ＩＶによるものを含めた本明細書に記載されるペプチドのうちいずれか１つ又は複数との組合せを含む、組成物及び治療が、コネキシンヘミチャネルを遮断する組合せとしても有用となることを含む。
【００３３】
これらの配列は、別々に又は共に、独立した実体として又は連結されて、送達されてもよい。そのため、本発明はまた、例えば、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号４４）をコネキシン４３ヘミチャネル遮断剤ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４５）に、例えばＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ−Ｘ−ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号４６）の形態で連結させることを含み、上式で、Ｘは、この組合せペプチドがコネキシン４３ヘミチャネル上のそれらの両方の結合部位にそれぞれ接触するのに充分な可撓性を有する、１つ又は複数の連結グリシン又は他の非機能性リンカーである。
【００３４】
本発明はまた、例えば、組織で同時に複数のコネキシンアイソフォームに対し機能できる組合せで配列を含み、共に別々に又は共に、独立した実体として又は連結されて、送達されることがある。例えば、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４７）は、コネキシン４０ヘミチャネル遮断剤ＶＮＣＹＶＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号４８）に、ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ−Ｘ−ＶＮＣＹＶＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号４９）の形態で連結することができ、上式で、Ｘは、この組合せペプチドをコネキシン４３又はコネキシン４０のどちらかからなるヘミチャネルと相互作用できるようにする、１つ又は複数の連結グリシン又は他の非機能性リンカーである。
【００３５】
本発明はまた、例えば、１つ又は４つのペプチドコネキシンアイソフォーム遮断剤配列を組合せで含み、そこでは、それらは三次構造を形成せず、その連結が線形構造の保持をもたらす。一実施形態では、血管内皮コネキシン４０、４３、３７に対するペプチドが調製され、そのようなものとしては、ＶＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号５０）；ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号５１）；及びＶＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号５２）が挙げられる。
【００３６】
本発明の範囲に含まれるのは、これらの化合物の活性類似体及び保存されたバリアントであり、そのようなものとしては、その切頭体、好ましくはＮ末端の１又は２アミノ酸の切頭体が挙げられる。
【００３７】
非限定的な一実施形態では、本発明の範囲内にあるペプチドのアミノ酸のうち１つ又は複数は、配列番号１〜５２及び式Ｉ〜ＩＩ内の配列を含めて、Ｌ−又はＤ−の立体配置としてよい。他の実施形態では、本発明の範囲内にあるペプチドのアミノ酸のうち１つ又は複数は、天然に存在するか又は遺伝子にコードされていないアミノ酸である。さらに他の実施形態では、本発明の範囲内にあるペプチドのアミノ酸のうち１つ又は複数は、アミノ酸類似体又は合成アミノ酸である。
【００３８】
別の非限定的な実施形態では、Ｎ末端アミノ酸は、ホルミル基；ホルミル基、カルボン酸エステル（好ましくはアルデヒドエステル、例えば、カルボキシエチル基、カルボキシメチル基など）を含む基；又はカルボン酸エステルを含む基を含有するように修飾されることがある。ホルミル基、カルボキシエチル基、及びカルボキシメチル基を用いた修飾が、ここでは好適である。
【００３９】
別の実施形態では、配列番号１〜５２及び式Ｉ〜ＩＩ内の配列を含めた本発明の範囲内の化合物のうち１つ又は複数のアミノ酸は、主にアミノ酸側鎖の化学的特性及び物理学的特性に基づき、類似のアミノ酸のクラス又はサブクラス由来の別のアミノ酸に置換される。例えば、１つ又は複数の親水性又は極性のアミノ酸を、別の親水性又は極性のアミノ酸に置換することができる。同様に、１つ又は複数の疎水性又は非極性のアミノ酸を、別の疎水性又は非極性のアミノ酸に置換することができる。そのような置換を作製する際に、極性アミノ酸を、酸性、塩基性、又は親水性の側鎖を有するアミノ酸にさらに細分化することができ、非極性のアミノ酸を、芳香族又は疎水性の側鎖を有するアミノ酸にさらに細分化することができる。非極性アミノ酸は、さらに細分化されて、特に脂肪族アミノ酸を含むことがある。
【００４０】
また、本発明の範囲内には、生物薬剤特性を改善するために修飾されている、本発明の化合物がある。ある実施形態では、本発明の化合物は、例えば、安定性の増加、タンパク質分解による不活性化に対する耐性の増加、存在しない免疫原性への減少、血清中半減期の改変及び治療半減期の改変を含めた循環寿命の増加、ならびに毒性の低下を付与するために、修飾される。本発明の化合物の修飾形態としては、プロドラッグ形態が挙げられ、その代表的な例は、本明細書の他の箇所に記載されている。本発明の化合物を修飾することができる方法としては、また、例えば、ＰＥＧ化によるもの、化学的誘導体化によるもの、及びペプチド又は脂質との融合又はコンジュゲーションによるものが挙げられる。修飾化合物としては、修飾ペプチドヘミチャネル剤が挙げられ、そのようなものとしては、例えば、修飾された配列番号１〜１０のいずれか、及び修飾類似体、及びそれらのバリアント（例えば、保存されたバリアント）が挙げられる。
【００４１】
他の実施形態としては、Ｃ末端スレオニンを含まない、配列番号１から１０より選択されるペプチド、ならびに式Ｉ及び／又は式ＩＩによるペプチドが挙げられる。他の実施形態としては、Ｎ末端バリンを含まない、配列番号１から１０より選択されるペプチド、ならびに式Ｉ及び／又は式ＩＩによるペプチドが挙げられる。他の実施形態としては、Ｎ末端バリン又はＣ末端スレオニンを含まない、配列番号１から１０より選択されるペプチド、ならびに式Ｉ及び／又は式ＩＩによるペプチドが挙げられる。
【００４２】
他の実施形態としては、Ｃ末端アミノ酸を除去されている、すなわち、Ｃ末端１つを切頭された、配列番号１１から５２より選択されるペプチドが挙げられる。他の実施形態としては、１番目及び／又は２番目のＮ末端アミノ酸が除去されている、すなわち、Ｎ末端１つ又は２つを切頭された、配列番号１１から５２より選択されるペプチドが挙げられる。
【００４３】
実施形態によっては、本願発明は、本願発明のペプチド又はペプチド模倣物のうち１つ又は複数と、薬学的に許容可能な担体又は賦形剤とを含む、医薬組成物を提供する。実施形態によっては、本願発明は、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、又は状態のうち１つ又は複数に用いる、哺乳動物の予防又は治療のためのキットを提供し、前記キットが、１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤又は阻害剤を含み、かつ任意選択で試薬及び／又は使用指示書を伴うという特徴を有することによってなり、ここで、前記１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤又は阻害剤は、本明細書に記載されるペプチド又はペプチド模倣物のうちいずれかの少なくとも１０個の連続するアミノ酸の配列を含む。
【００４４】
本願発明はまた、ペプチド断片剤と、薬学的に許容可能な担体と、本明細書に記載又は参照されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物のうち１つ又は複数とを、含むか又はそれらから本質的になる医薬組成物を含む。一実施形態では、本医薬組成物は、配列番号１〜５２のうちいずれかを含むか又はそれから本質的になる。別の実施形態では、本医薬組成物は、式Ｉ又は式ＩＩのどちらかから選択される配列を含むか又はそれから本質的になる。本発明の範囲に含まれるのは、これらの化合物の１つ又は複数の活性類似体及び保存されたバリアントを、それらの切頭体、好ましくは記載されるような１アミノ酸もしくは２アミノ酸のＮ末端切頭体、又は１アミノ酸のＣ末端切頭体を含めて、含む医薬組成物である。
【００４５】
別の実施形態では、本発明は、その生物薬剤特性を改善するために修飾されている、類似体、バリアント、切頭体などを含めた本発明の化合物を、含むか又はそれから本質的になる医薬組成物を含む。ある実施形態では、本発明の化合物は、例えば、安定性の増加、タンパク質分解による不活性化に対する耐性の増加、存在しない免疫原性への減少、半減期又は循環寿命の増加、ならびに毒性の低下を付与するために、修飾される。本発明の化合物を修飾することができる方法としては、例えば、ＰＥＧ化によるもの、化学的誘導体化によるもの、及びペプチド又は脂質との融合又はコンジュゲーションによるものが挙げられる。
【００４６】
本発明は、心血管障害、例えば、急性冠閉塞症候群、心不全、虚血性心疾患など；ならびに虚血及び／又は酸化ストレスという特徴を少なくとも部分的に持つ、関連の心血管の疾患、障害、及び状態；ならびに関連の障害及び状態を治療するための、本明細書に記載又は参照される１つ又は複数の薬学的に許容可能なギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む、医薬組成物を含む。ある種の好適なギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、本明細書に配列番号１から５２として特定されている。配列番号１〜１０は、特に好適なコネキシン４３のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物である。他のコネキシンに対する他の特に好適なギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が、記載されている。
【００４７】
本発明は、心血管の疾患、障害、又は状態に対し、対象の治療に適しているか又は適応させた形態で、医薬組成物を含む。本発明は、網膜の疾患、障害、及び状態を含めた眼の疾患、障害、又は状態；ならびに例えば、脈絡膜新血管形成、損傷、漏出、浮腫及び／もしくは炎症という特徴を持つ疾患、障害、及び状態を含めた、血管の損傷又は漏出という特徴を全体的又は部分的に有する、他の眼の疾患、障害、及び状態に対し、対象の治療に適しているか又は適応させた形態で、医薬組成物を含む。
【００４８】
一実施形態では、本願発明は、コネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤として作用する、コネキシンギャップ結合化合物又はコネキシンヘミチャネル化合物を提供する。一実施形態では、本願発明は、複数回用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤を患者に逐次的に投与することによって、血管新生性の目の障害を治療するための方法を提供する。本願発明の方法は、複数回用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤を、６週間毎、７週間毎、８週間毎、又はそれを超える週毎に１回の頻度で、患者に投与することを含む。
【００４９】
本願発明の方法は、ウェット型加齢黄斑変性症、ドライ型加齢黄斑変性症、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、網膜中心静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症や、角膜新血管形成などの、血管新生性の目の障害の治療に有用である。
【００５０】
本願発明は、複数回用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤を、時間をかけて患者に逐次的に投与することを含む方法を提供する。具体的には、本発明の方法は、単回の一次用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤、続いて１回又は複数回の二次用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤、続いて１回又は複数回の三次用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤を、患者に逐次的に投与することを含む。そのため、本願発明の方法によれば、各二次用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤は、すぐ前の用量の後に２週間から４週間投与され、各三次用量は、すぐ前の用量の後に少なくとも８週間投与される。そのような用量投与レジメンの利点とは、それにより、治療コースの多く（すなわち、三次用量）にわたって、治療コース全体を通じて毎月の投与を要した血管新生性の目の障害のための以前の投与レジメンに比べてより頻度の少ない用量投与（例えば、８週間毎に１回）が可能になることである。例えば、ルセンティス（登録商標）（ラニビズマブ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．に関する処方情報を参照されたい。
【００５１】
表現「血管新生性の目の障害」とは、本明細書に使用される際には、血管の成長もしくは増殖に起因もしくは関連するか、又は血管の漏れに起因する、任意の目の疾患を意味する。本願発明の方法を使用する治療可能な血管新生性の目の障害の非限定的な例としては、加齢黄斑変性症（例えば、ウェット型ＡＭＤ、滲出型ＡＭＤなど）、ドライ型ＡＭＤ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ；例えば、ＣＲＶＯに続く黄斑浮腫）、網膜静脈分枝閉塞症（ＢＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、脈絡膜新血管形成（ＣＮＶ；例えば、近視性ＣＮＶ）、虹彩新血管形成、新血管形成緑内障、緑内障の術後線維症、増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）、視神経乳頭新血管形成、角膜新血管形成、網膜新血管形成、硝子体新血管形成、パンヌス、翼状片、血管性網膜症、及び糖尿病性網膜症が挙げられる。
【００５２】
一実施形態では、疾患、障害、又は状態は、炎症、例えば、血管又は微小血管の炎症に関連する。別の実施形態では、疾患、障害、又は状態は、虚血及び／又は酸化ストレス、例えば、血管又は微小血管の虚血及び／又は酸化ストレスに関連する。別の実施形態では、疾患、障害、又は状態は、浮腫、例えば、血管又は微小血管の損傷又は漏出に関連する浮腫に、関連する。
【００５３】
一実施形態では、疾患、障害、又は状態は、新生物、すなわち、細胞が分裂するべきよりも多く分裂するか又は死ぬべき際に死なない際に結果として生じる、異常な大きさの組織に関連する。本明細書に使用される際に、新生物とはまた、腫瘍と称され、良性（がんではない）であることも悪性（がん）であることもある。
【００５４】
ある実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、急性冠閉塞症候群である。この急性冠閉塞症候群は、例えば、ＳＴセグメント上昇型心筋梗塞、非ＳＴセグメント上昇型心筋梗塞、及び不安定狭心症からなる群から選択されることがある。他の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、虚血性心疾患である。他の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、心不全（任意の形態）である。例えば、この心不全は、収縮期又は弛緩期の心不全であり得る。心不全は、左室の収縮期の機能不全の結果生じることがある。心不全はまた、右室梗塞、肺高血圧症、慢性重症三尖弁逆流、又は不整脈源性右室異形成症の結果であることがある。心不全はまた、弛緩期のＬＶ機能不全の結果であることがある。別の実施形態では、心血管性の疾患、障害、又は状態とは、虚血性心疾患である。コネキシン４０、４３、及び４５のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、心血管の疾患、障害、又は状態の治療のために特に有用である。
【００５５】
一態様では、本発明は、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、又は状態のうち１つ又は複数について対象を予防及び／又は治療するために有用な医薬組成物を含み、対象、そのようなものとしては、非経口の送達の形態及び製剤、ならびに輸液、注射、及び滴下による送達のための形態、ならびに遅延放出型、徐放出型、延長放出型、又は制御放出型の組成物、デバイス、及びマトリックスを含めた他の送達の形態が挙げられ、これらは、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物のみ、又は別の心血管治療剤（複数可）との組合せと、薬学的に許容可能な担体とを含むか、又はそれらから本質的になる。ある好適な実施形態では、本医薬組成物は、輸液によるか又はボーラスとすることを含めて、静脈内投与に用いるために製剤化される。他の投与経路に用いる他の製剤もまた、本発明の範囲内にあり、そのようなものとしては、例えば、経鼻、経肺、バッカル、経直腸、経皮、及び経口の送達に用いる製剤が挙げられる。
【００５６】
別の態様では、本発明の組成物は、約０．０１から約１００ミリグラム、約１００から約５００ミリグラム、又は約５００から約１０００ミリグラム、又はそれを超える本発明の化合物、例えば、ギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物又は類似体を含み、そのようなものとしては、配列番号１〜５２及び式ＩからＩＩのいずれかによるペプチドのうち１つ又は複数が挙げられる。他の用量は、本明細書に記載されており、少なくとも約１００ナノグラムから及ぶ用量を含み、そのようなものとしては、例えば少なくとも約２００マイクログラム又はミリグラム、６００マイクログラム又はミリグラム、２０００マイクログラム又はミリグラム、６０００マイクログラム又はミリグラム、及び少なくとも約１０，０００マイクログラム又はミリグラムが挙げられる。用量の濃度としては、少なくとも１リットル当たり約０．１モルの濃度が挙げられ、そのようなものとしては、例えば、少なくとも約０．３、１．０、３．０、及び１０．０モル／Ｌが挙げられる。用量の濃度としてはまた、０．１マイクロモル又はミリモル／Ｌ、０．３マイクロモル又はミリモル／Ｌ、１．０マイクロモル又はミリモル／Ｌ、３．０マイクロモル又はミリモル／Ｌ、及び１０．０マイクロモル又はミリモル／Ｌの濃度が挙げられる。用量の濃度は、０．１、０．３、１、３、及び１０から１００ｍｇ／ｍＬに等しいことがあり、投与可能な重量の用量で１〜１０、１０〜２０、２０〜５０、５０〜１００、１００〜５００、及び５００〜１０００ミリグラム／ｋｇ（ｍｇ／ｋｇ）であることがある。また、本発明の中には、０．１から５．０μｇ／ｋｇまで、及び０．１から１０．０ｇ／ｋｇまでに及ぶ他の用量もある。これらの組成物及び量は、単回用量としても複数回用量としても提供されることがある。
【００５７】
ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物（又はギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む医薬製剤）は、任意の公知の送達系及び／又は投与方法によって患者に投与されることがある。ある実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、眼、眼球内、硝子体内、又は結膜下の注射によって患者に投与される。他の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、局所投与によって、例えば、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含有する点眼剤又は他の液体、ゲル、軟膏、又は流体を介して、患者に投与することができ、目に直接的に適用することができる。他のあり得る投与経路としては、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口が挙げられる。
【００５８】
本発明はまた、本明細書に参照されるような疾患、障害、又は状態にあるか又はそれが発達するリスクがある対象の、治療の方法を含み、この方法は、治療有効量の本明細書に記載される化合物又は医薬組成物のうち１つ又は複数を、対象に投与することを含む。非限定的な一実施形態では、疾患、障害、又は状態は、血管損傷、血管漏出、浮腫、炎症、虚血及び／又は酸化ストレスに関連する。一実施形態では、疾患、障害、又は状態とは、急性冠閉塞症候群、例えば、ＳＴセグメント上昇型心筋梗塞、非ＳＴセグメント上昇型心筋梗塞、又は不安定狭心症である。別の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、心不全である。他の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、虚血性心疾患である。別の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、安定狭心症である。
【００５９】
本発明は、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、又は状態にあるか、又はそれが発達するリスクがあるか、又はそれが進行するリスクがある、対象を治療する方法を含み、この方法は、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と、薬学的に許容可能な担体とを含む。一実施形態では、本医薬組成物中のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、配列番号１〜５２から選択される配列を含むか又はそれから本質的になる。別の実施形態では、本医薬組成物中のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、式Ｉ又は式ＩＩから選択される配列を含むか又はそれから本質的になる。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネル遮断又は阻害剤化合物としてはまた、本明細書に記載されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の活性類似体、バリアント、切頭体、及び修飾形態が挙げられる。
【００６０】
別の態様では、本発明は、対象でギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの活性を減少させることによって、対象で炎症、虚血、及び／又は酸化ストレスに関連する心血管又は眼の疾患、障害、又は状態を治療及び／又は予防する方法を含む。これは例えば、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む組成物を対象に投与することによって達成されることがあり、ここで例えば、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、配列番号１〜５２から選択される配列か、又は式ＩからＩＩのいずれかによるペプチドを含むかもしくはそれから本質的になるペプチドか、又は例えば記載されるようなそれらの類似体、バリアント、切頭体、もしくは修飾体を、含むか又はそれから本質的になる。ある実施形態では、約０．０１から約１００、５００、又は１０００ナノグラム又はミリグラム又はそれを超える（例えば、少なくとも約１００ナノグラムもしくはミリグラム、少なくとも約５００ナノグラムもしくはミリグラム、又は少なくとも約１０００ナノグラムもしくはミリグラム）のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物、又は類似体は、例えば、単回用量もしくは分割用量で、又は継続的もしくは周期的な放出によって、１日当たり投与される。
【００６１】
一実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、単回用量で投与される。別の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、２回以上の用量で投与される。さらに別の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、ある期間、例えばある所定の期間にわたって、継続的に投与又は放出される。さらに別の実施形態では、心血管治療剤又は眼薬（例えば、ＶＥＧＦアンタゴニスト）は、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と併せて投与又は共投与される。そのような他の心血管治療剤としては、硝酸塩、β遮断剤、カルシウムチャネル遮断剤（具体的には安定狭心症又は不安定狭心症に用いるものであるが、β遮断剤の場合では心不全にも用いる）、利尿剤、血管拡張剤、陽性変力剤、ＡＣＥ阻害剤、及びアルドステロンアンタゴニスト、例えば、スピロノラクトン（具体的には心不全に用いる）、抗凝血治療薬（例えば、アスピリン、ヘパリン、ワルファリン）、及びニトログリセリン（具体的にはＭＩに用いる）が挙げられる。
【００６２】
本発明はまた、血管形成術をそれを必要とする患者に実施するための方法を提供し、この方法は、血管形成術の処置の間、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、患者に投与することを含む。さらに別の一実施形態では、この方法は、血管形成術の処置の前に、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、患者に投与することを含むか又はさらに含む。さらに別の一実施形態では、この方法は、血管形成術の処置に続いて、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、患者に投与することを含むか又はさらに含む。他の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、血管形成術の処置の前に、間に、及び／又は後に、任意の組合せで患者に投与される。
【００６３】
また、提供されるのは、最初の心臓窮迫の症状に続いて血栓溶解療法が有効となる時間を増すための方法であり、その方法は、以下の症状：１５分よりも長く続く胸痛、安静時の胸痛、最低限の労作後の胸痛、悪心、息切れ、動悸、又は眩暈のうち、１つ又は複数の発症の後に、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を投与することを含む。
【００６４】
別の態様では、治療される対象は、哺乳動物であり、好ましくはヒトである。他の哺乳動物としては、家庭内及び家畜用の動物、ならびに動物園用、競技用、又は愛玩用の動物、例えばイヌ、ウマや、ネコなどが挙げられる。
【００６５】
本発明はまた、本明細書に記載される化合物又は医薬組成物のうち１つ又は複数を含有する、パッケージ材を含む製造品を含む。次いで発明はまた、本明細書に言及されるような疾患、障害、又は状態を予防及び／又は治療するために、本明細書に記載される化合物又は医薬組成物のうち１つ又は複数を、対象中又はその上での使用に用いる指示書と共に含有するパッケージ材を含む、製造品を含む。一実施形態では、血管性の疾患、障害、又は状態は、炎症、血管新生、及び／又は血管の漏出、虚血及び／又は酸化ストレスに関連する指示書に参照される。別の実施形態では、指示書に参照される疾患、障害、又は状態は、心血管性の疾患、障害、又は状態である。一実施形態では、指示書に参照される疾患、障害、又は状態は、血管新生性の目の障害である。指示書は、電子化されている、及び／又はウェブサイトに関連付けられていることがある。
【００６６】
本発明はまた、本明細書に参照される疾患、障害、又は状態のうち１つ又は複数を予防又は治療するための医薬を調製する方法を含み、この方法は、本明細書に参照される治療有効量の化合物、例えば、ギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物又は類似体又はバリアントと、薬学的に許容可能な担体とをまとめ合わせることを含む。一実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、配列番号１から５２より選択される配列を含む。別の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、式Ｉ〜ＩＩのうち１つ又は複数より選択される化合物である。一実施形態では、上記医薬は、非経口投与に用いるために製剤化される。一実施形態では、上記医薬は、眼の投与に用いるために製剤化される。別の実施形態では、上記医薬は、局所投与に用いるために製剤化される。別の実施形態では、上記医薬は、経口投与に用いるために製剤化される。
【００６７】
本明細書に記載されるような１つ又は複数の化合物又は医薬組成物を用いる、本明細書に提供されるような対象の治療は、それらの同時の、別々の、逐次的な、又は持続的な投与を含むことがある。
【００６８】
本明細書に参照又は記載される疾患、障害、又は状態を予防及び／又は治療するのに有用な医薬組成物はまた、組合せ調製物の形態で、例えば、２種以上のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物、類似体、又はバリアントの混和物として、提供される。
【００６９】
用語「組合せ調製物」は、上記に定義されたような組合せパートナーが独立して、又は量の区別された組合せパートナー（ａ）及び（ｂ）を用いて異なる既定の組合せを使用することによって、すなわち同時に、別々に、又は逐次的に、用量投与することができるという意味においては、化合物の物理的な組合せだけではなく、「パーツのキット」として提供される化合物をも含む。次いで、キットのパーツは、例えば同時に、又は時系列で時差をつけて、その場合はパーツのキットの任意のパーツについて等しいかもしくは異なる時間間隔でかつ異なる時点で、投与することができる。
【００７０】
別の態様では、本発明は、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物、又は類似体、又はバリアントを、それのみで又は別の治療剤との組合せで、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、又は状態にあるか又はそれが発達するリスクがある対象に投与するための方法を含み、上記剤は、遅延放出調製物、徐放出調製物、延長放出調製物、制御放出調製物に、及び／又は複効調製物に、製剤化される。
【００７１】
ある他の態様では、本発明はまた、前記疾患、障害、及び状態を患っているか又はそのリスクがある対象を治療するために、そのような組成物を使用する方法に関する。
【００７２】
他の態様では、本発明は、血管性の損傷又は漏出という特徴を全体的又は部分的に有する任意の疾患、障害、及び／又は状態であるか、又はそうある疑いがあるか、又はそうある傾向があるか、又はそのリスクがある対象を、予防及び／又は治療するための方法及び組成物を含む。
【００７３】
一態様によれば、本願発明は、心血管又は眼の障害の症状を停止もしくは減少させるか又はそれからの解放をもたらす方法に向けられる。
【００７４】
本発明は、本明細書に記載されるような１つ又は複数の剤形を含有するパッケージ材を含む製造品を含み、そこでは、パッケージ材は、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、及び／又は状態のいずれかにあるか、又はそうある疑いがあるか、又はそうある傾向がある対象に、その剤形を使用できることを標示する、ラベルを有する。
【００７５】
本発明は、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物（複数可）を、心血管又は眼の障害を予防及び／又は治療するのに有用な剤形の製造に使用するための方法を含む。そのような剤形としては、例えば、経口送達の形態及び製剤、ならびに他の送達の形態が挙げられ、そのようなものとしては、例えば、輸液、注射、及び滴下による送達に用いられる形態、ならびに徐放出、延長放出、及び遅延放出の組成物、デポー、及びマトリックスを含む組成物及びデバイスが挙げられる。そのような剤形としては、本明細書に開示されるような対象の治療に用いられるものが挙げられる。
【００７６】
本願発明のこれらの及び他の態様は、この簡潔な概要中の情報にもしくはそれによって限定されるものではなく、下記に示される。
【００７７】
本特許又は本出願のファイルは、彩色の施された少なくとも１つの図面を含有する。彩色図面（複数可）を付したこの特許又は特許出願の公報の複写物は、要望及び手数料の支払いの下、庁により提供されるものとなる。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１−１】図１    （図１Ａ）ＤＡＰＩ標識された核（青）を有する非処理対照におけるコネキシン４３（赤）の免疫標識の画像を示す（上方のパネル）。ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（ペプチド５；５００μＭ）への２時間（中間のパネル）又は６時間（下方のパネル）の曝露後のコネキシン４３の分布である。白の矢印は、膜から細胞の中心に向けて広がる細胞質の流れのパターンを強調している。ペプチド５への６時間の曝露後、断片化されたコネキシン４３のプラークが細胞間の境界面に沿って存在する。スケールバー＝３０μｍ
【図１−２】（図１Ｂ）細胞当たりのコネキシン４３のプラークの総面積の定量値を、ペプチド５又はＬａＣｌ３又はＣＢＸ（５００μＭ）による２時間又は６時間の処理の後の非処理対照のパーセンテージとして表す。ＣＢＸによる２時間又は６時間の処理の後、非処理対照に比べて、細胞当たりのコネキシン４３標識の有意な低減が明瞭であった。値は、平均値±平均値の標準誤差（一元配置ＡＮＯＶＡ、ダネットの事後検定）を表す。（図１Ｃ）非処理対照とペプチド５（５０〜５００μＭ）による６時間処理の間で、コネキシン４３標識に有意な差はなく、＊＊ｐ＝０．００４３、＊＊＊ｐ＜０．０００１であった。バーは、平均値±標準誤差（ｎ＝３）を表す。一元配置ＡＮＯＶＡテューキーの多重比較検定。ペプチド５は、ＡＲＰＥ−１９細胞において、コネキシン４３ギャップ結合プラークの分布を変えた。
【図２】図２    ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのｈＣＭＶＥＣ細胞のスクレープローディングアッセイでは、単アラニン置換を有するＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（ペプチド５）類似体が天然のペプチド５とは有意な差がないことを実証する、データ及び顕微鏡画像を示す。対合したギャップ結合チャネルの間の陽性ＬＹ色素の移送を、非処理対照のパーセンテージとして表す。ＣＢＸへの２時間の曝露の後、ＬＹ色素の移送は、非処理対照と比べて有意に低減した。天然のペプチド５及び単アラニン置換（Ａｌａ−１からＡｌａ−１２）を有するその類似体もまた、非処理対照に比べて、ＬＹ色素の移送を有意に減じた。これらの類似体は、天然のペプチド５とは有意に異なっておらず、ＣＢＸ対照のみが、天然のペプチド５よりも有意に多くのＬＹ色素の移送を減じた。全処理群に使用する濃度を１００μＭとした。＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１である。全ての値が、平均値±平均値の標準誤差を表す。一元配置ＡＮＯＶＡ、対照又は天然のペプチド５に対するダネットの多重比較検定。
【図３】図３    ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（ペプチド５）のアラニンの単置換がペプチドの機能に影響を及ぼして、虚血性傷害により誘発されるｈＣＭＶＥＣ細胞からのＡＴＰ放出から保護することを実証する、バーチャートを示す。細胞外の総ＡＴＰ放出の定量値を、各処理群についての傷害対照のパーセンテージとして表す。ＣＢＸ、ＬａＣｌ３、及び天然のペプチド５（全て１００μＭで）による処理によって、ＡＴＰ放出が有意に低減され、傷害対照に対し＊＊＊＊ｐ＜０．０００１であった。Ａｌａ−２、Ａｌａ−３、Ａｌａ−５、Ａｌａ−７、Ａｌａ−８、及びＡｌａ−１１（全て１００μＭで）は、天然のペプチド５（１００μＭ）とは有意に差があったが、傷害に対しては差はなく、このことは、部位ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴにアラニン置換を含有するこれらのペプチドに機能の喪失があることを示す。＊ｐ＜０．０３、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＝０．０００２である。天然のペプチド５と比べると、Ａｌａ−１、Ａｌａ−４、Ａｌａ−６、Ａｌａ−９、Ａｌａ−１０、Ａｌａ−１２に有意な差は観察されなかった。全ての値が、平均値±平均値の標準誤差を表す。一元配置ＡＮＯＶＡ、傷害又は天然のペプチド５に対するダネットの多重比較検定。
【図４】図４．  ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（ペプチド５）の切頭配列が、虚血性傷害により誘導されるｈＣＭＶＥＣ細胞からのＡＴＰ放出に対して有効性の変化を示すことを実証する、バーチャートを示す。細胞外の総ＡＴＰ放出の定量値を、各処理群についての傷害対照のパーセンテージとして表す。天然のペプチド５（１００μＭ）及びＭｏｄ−１による処理によって、ＡＴＰ放出が有意に低減され、傷害対照に対し＊＊＊＊ｐ＜０．０００１であった。これに対し、Ｍｏｄ−２、Ｍｏｄ−３、Ｍｏｄ−４、Ｍｏｄ−５、及びＭｏｄ−６（全て１００μＭで）による処理の後では、天然のペプチド５（１００μＭ）に比べて、有意にさらに大きなＡＴＰ放出が観察され、このことは、これらの改変による機能の喪失を標示している。天然のペプチドに比べて＊ｐ＝０．０２３１及び＊＊＊＊ｐ＜０．０００１であった。ｎ＝８ウェル、４つの独立した実験であった。一元配置ＡＮＯＶＡ、傷害又は天然のペプチド５に対するダネットの多重比較検定。
【図５】図５    （Ａ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのｈＣＭＶＥＣ細胞のスクレープローディングアッセイにおいてＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（ペプチド５）及びＳＲＰＴＥＫＴモチーフがルシファーイエロー色素の移送に及ぼす効果を示す、顕微鏡画像を示す。（図５Ａ）ペプチド５及びＳＲＰＴＥＫＴが低減している対照における陽性ＬＹの移送である。（図５Ｂ）対合したギャップ結合チャネルの間の陽性ＬＹ色素の移送が非処理対照のパーセンテージとして表されていることを示す、バーチャートである。ＣＢＸへの２時間の曝露の後、ＬＹ色素の移送は、非処理対照と比べて有意に低減した。ＳＲＰＴＥＫＴは、有意にＬＹ色素の移送が低減し、それは天然のペプチド５に匹敵した。全処理群に使用する濃度を１００μＭとした。＊＊ｐ＝０．００５７（Ｐｅｐ５）、＊＊ｐ＝０．００２８、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１であった。スクランブルペプチドでは有意差はなかった。全ての値が、平均値±平均値の標準誤差を表す。一元配置ＡＮＯＶＡ、傷害又は天然のペプチド５に対するダネットの多重比較検定。
【図６】図６    コネキシン４３の細胞外ループ及びＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（ペプチド５）に由来する合成ペプチドを用いた競合アッセイををまとめた図及びデータを示す。（図６Ａ）コネキシン４３由来の合成の細胞外ループである。（図６Ｂ）虚血性傷害の刺激に応答したｈＣＭＶＥＣ細胞からの細胞外総ＡＴＰ放出を、各処理群について傷害対照のパーセンテージとして表す。２時間の虚血性傷害の刺激後、ｈＣＭＶＥＣ細胞からの総ＡＴＰ放出に有意な増加があった。ＡＴＰ放出は、等モル濃度の天然のペプチド５及びＥＬ２ｃで有意に増加し、このことは、ペプチド５の機能の喪失を標示している。ＣＢＸ、ペプチド５、及び細胞外ループを濃度１００μＭで使用した。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１である。傷害とペプチド５との間で、総ＡＴＰ放出に有意な差があった。１００μＭの天然のペプチド５では、総ＡＴＰ放出の有意な低減があった。全ての値が、平均値±平均値の標準誤差を表す。一元配置ＡＮＯＶＡ、傷害又は天然のペプチド５に対するダネットの多重比較検定。
【発明を実施するための形態】
【００７９】
本願発明の実践は、当技術分野の技能の範囲内にある様々な従来の分子生物学（組換え手法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、核酸化学、及び免疫学の手法を含むか又は採用してもよい。そのような手法は、文献にて充分に説明されており、以下に限定されないが、ほんの一例として、本明細書で一緒に及び個別に「Ｓａｍｂｒｏｏｋ」と称されるＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｔｈｉｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌ，２００１）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ＆  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ  ＆  Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ２００１）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）；Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ（Ｄ．Ｗｉｌｄ，ｅｄ．，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ  ＮＹ，１９９４）；Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｇｒｅｇ  Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９６）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（Ｒ．Ｍａｓｓｅｙｅｆｆ，Ｗ．Ｈ．Ａｌｂｅｒｔ，ａｎｄ  Ｎ．Ａ．Ｓｔａｉｎｅｓ，ｅｄｓ．，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ：ＶＣＨ  Ｖｅｒｌａｇｓ  ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ  ｍｂＨ，１９９３），Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ａｎｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（ｊｏｉｎｔｌｙ  ａｎｄ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｌｙ  ｒｅｆｅｒｒｅｄ  ｔｏ  ｈｅｒｅｉｎ  ａｓ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ），Ｂｅａｕｃａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（２０００）；及びＡｇｒａｗａｌ，ｅｄ．，Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，（１９９３）が挙げられる。
【００８０】
本発明が、本明細書に記載される具体的な方法論、プロトコール、構築物、及び試薬に限定されず、それ自体変わり得ることが理解されよう。また、本明細書に使用される用語は、具体的な実施形態を記載する目的があるに過ぎず、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることになる本願発明の範囲を、限定することを意図するものではないことが理解されよう。本明細書に使用される際に、及び添付の特許請求の範囲では、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、特段に明確に標示のない限り、複数の言及を含む。ゆえに、例えば、「ａｐ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物」への言及とは、１つ又は複数のそのようなペプチドへの言及であり、現在公知のそれらの等価物又は今後開発されるものを含む。特段に定められない限り、本明細書に使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明の属する技術分野の当業者に通例理解されているものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様又は同等の任意の方法、デバイス、及び材料は、本発明の実践又は試験の際に使用することができるものの、好適な方法、デバイス、及び材料は、ここに記載される。本明細書に開示される数の範囲への言及（例えば１から１２）もまた、その範囲内の全ての関連の数（例えば、１、１．１、２、３、３．９、４、５、６、６．５、７、８、９．５、１０、１１、及び１２）と、さらにその範囲内の任意の範囲の有理数（例えば２から８、１．５から５．５、及び３．１から４．７）への言及を組み込むことが意図され、それゆえ、本明細書に明示的に開示される全ての範囲の全ての部分範囲は、明示的に開示される。これらは、具体的に意図されるものの例に過ぎず、列挙される最低値と最高値との間の数値の全てのあり得る組合せは、同様の方法でこの出願に明示的に述べられているものと考えられよう。以下の用語は、本明細書に使用される際に、以下の意味を有する。
【００８１】
本明細書に記載され特許請求される本発明は、コネキシンギャップ結合及びコネキシンヘミチャネルに関し、そのようなものとしては、コネキシン２５、コネキシン２６、コネキシン２９（コネキシン３０．２）、コネキシン３０、コネキシン３０．３、コネキシン３１、コネキシン３１．１、コネキシン３１．３、コネキシン３１．９、コネキシン３２、コネキシン３６、コネキシン３７、コネキシン４０、コネキシン４０．１、コネキシン４３、コネキシン４５コネキシン４６、コネキシン４６．６（コネキシン４７）、コネキシン５０、コネキシン５８、コネキシン５９、コネキシン６２などが挙げられる。
【００８２】
一実施形態では、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド模倣物は、ギャップ結合チャネル阻害剤である。一実施形態では、ギャップ結合は、コネキシン４３タンパク質を含む。一実施形態では、ギャップ結合は、コネキシン４５タンパク質を含む。別の実施形態では、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド模倣物は、ギャップ結合ヘミチャネルの開口の阻害剤である。一実施形態では、ギャップ結合ヘミチャネルは、コネキシン４３タンパク質を含む。一実施形態では、ギャップ結合ヘミチャネルは、コネキシン４５タンパク質を含む。他の実施形態では、ギャップ結合及びヘミチャネルは、コネキシン２５、コネキシン２６、コネキシン２９（コネキシン３０．２）、コネキシン３０、コネキシン３０．３、コネキシン３１、コネキシン３１．１、コネキシン３１．３、コネキシン３１．９、コネキシン３２、コネキシン３６、コネキシン３７、コネキシン４０、コネキシン４０．１、コネキシン４６、コネキシン４６．６（コネキシン４７）、コネキシン５０、コネキシン５８、コネキシン５９、コネキシン６２のタンパク質を含み、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド模倣物は、これらのギャップ結合チャネル及び対応のヘミチャネルのうち１つ又は複数の阻害剤である。
【００８３】
様々なコネキシン模倣ペプチドを使用して、実施例に示されるように、ヒトコネキシンタンパク質の細胞外ループのペプチド配列類似体が、ヒト微小血管内皮細胞を含めた前臨床モデルで、内皮細胞の喪失を予防し血管透過性を低減することが示されており、そこでは、本発明のペプチド化合物が、ヘミチャネル媒介性の内皮細胞からのＡＴＰ放出を阻害できることが実証された。また、ヘミチャネル媒介性のＡＴＰ放出の阻害及びギャップ結合の不対合に対する、ペプチド配列の特異性及び感受性も実証された。ＳＲＰＴＥＫＴモチーフは機能の中心であるが、それ自体では、使用濃度でヘミチャネルを阻害するのに充分ではない。しかし、高濃度で作用させると、ＳＲＰＴＥＫＴモチーフのみで、ギャップ結合の連絡がＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴに匹敵する程度に低減した。本ペプチドの用量依存的な作用機序を理解することによって、例えば、網膜の傷害及び疾患、心血管疾患、ならびに新生物がんを含めた疾患、障害、及び状態に対する治療としてのそれらの開発もまた支援される。
【００８４】
本明細書に提供される化合物中に使用されるアミノ酸（例えば、ペプチド及びタンパク質）は、遺伝子にコードされているアミノ酸、遺伝子にコードされていない天然に存在するアミノ酸、又は合成アミノ酸とすることができる。上記のいずれかのＬ−エナンチオマーとＤ−エナンチオマーの両方を、化合物中に利用することができる。以下の略号が、遺伝子にコードされた以下のアミノ酸（及びそれらの残基）について本明細書に使用されることがある：アラニン（Ａｌａ、Ａ）；アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）；アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）；アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）；シテイン（ｃｙｔｅｉｎｅ）（Ｃｙｓ、Ｃ）；グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）；グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）；グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）；ヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）；イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）；ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）；リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）；メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）；フェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ）；プロリン（Ｐｒｏ、Ｐ）；セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）；スレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）；トリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）；チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）；及びバリン（Ｖａｌ、Ｖ）。
【００８５】
遺伝子にコードされておらず本発明の活性化合物中に存在する、ある種の通例遭遇するアミノ酸としては、以下に限定されないが、β−アラニン（ｂ−Ａｌａ）及び他のオメガ−アミノ酸、例えば３−アミノプロピオン酸（Ｄａｐ）、２，３−ジアミノプロピオン酸（Ｄｐｒ、Ｚ）、４−アミノ酪酸など；α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）；ε−アミノヘキサン酸（Ａｈａ）；δ−アミノ吉草酸（Ａｖａ）；メチルグリシン（ＭｅＧｌｙ）；オルニチン（Ｏｒｎ）；シトルリン（Ｃｉｔ）；ｔ−ブチルアラニン（ｔ−ＢｕＡ）；ｔ−ブチルグリシン（ｔ−ＢｕＧ）；Ｎ−メチルイソロイシン（ＭｅＩｌｅ）；フェニルグリシン（Ｐｈｇ）；シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）；ノルロイシン（Ｎｌｅ、Ｊ）；２−ナフチルアラニン（２−Ｎａｌ）；４−クロロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｃｌ））；２−フルオロフェニルアラニン［Ｐｈｅ（２−Ｆ）］；３−フルオロフェニルアラニン［Ｐｈｅ（３−Ｆ）］；４−フルオロフェニルアラニン［Ｐｈｅ（４−Ｆ）］；ぺニシラミン（Ｐｅｎ）；１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸（Ｔｉｃ）；ベータ−２−チエニルアラニン（Ｔｈｉ）；メチオニンスルホキシド（ＭＳＯ）；ホモアルギニン（ｈＡｒｇ）；Ｎ−アセチルリジン（ＡｃＬｙｓ）；２，３−ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）；２，３−ジアミノ酪酸（Ｄｂｕ）；ｐ−アミノフェニルアラニン［Ｐｈｅ（ｐＮＨ２）］；Ｎ−メチルバリン（ＭｅＶａｌ）；ホモシステイン（ｈＣｙｓ）；３−ベンゾチアゾール−２−イル−アラニン（ＢｚｔＡｌａ、Ｂ）；及びホモセリン（ｈＳｅｒ）が挙げられる。想定される追加のアミノ酸類似体としては、ホスホセリン、ホスホスレオニン、ホスホチロシン、ヒドロキシプロリン、ガンマ−カルボキシグルタメート、馬尿酸、オクタヒドロインドール−２−カルボン酸、スタチン、α−メチル−アラニン、パラ−ベンゾイル−フェニルアラニン、プロパルギルグリシン、及びサルコシンが挙げられる。本発明の範囲内に包含されるペプチドは、前述のＬ−立体配置又はＤ−立体配置のアミノ酸のうちいずれか、又は本明細書に記載されるかもしくは当技術分野に公知の任意の他のアミノ酸を、現在であろうと将来であろうと、生物活性を保持しつつ有することができる。
【００８６】
互いに置換可能なアミノ酸は、一般に、類似のクラス又はサブクラス内に存在する。当業者に公知であるように、アミノ酸は、主にアミノ酸側鎖の化学的特性及び物理学的特性に基づいて、異なるクラス内に配することができる。例えば、親水性アミノ酸又は極性アミノ酸であるものと一般に考えられるアミノ酸もあれば、疎水性アミノ酸又は非極性アミノ酸であるものと考えられるアミノ酸もある。極性アミノ酸としては、酸性側鎖、塩基性側鎖、又は親水性の側鎖を有するアミノ酸が挙げられ、非極性アミノ酸としては、芳香族側鎖又は疎水性側鎖を有するアミノ酸が挙げられる。非極性アミノ酸は、さらに細分化されて、特に脂肪族アミノ酸を含むことがある。本明細書に使用される際のアミノ酸のクラスの定義は、以下の通りである。
【００８７】
「非極性アミノ酸」とは、生理的ｐＨで電荷を持たず、極性ではなく、一般に水溶液にはじかれる側鎖を有するアミノ酸を指す。遺伝子にコードされている疎水性のアミノ酸の例としては、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＶａｌが挙げられる。遺伝子にコードされていない非極性アミノ酸の例としては、ｔ−ＢｕＡ、Ｃｈａ、及びＮｌｅが挙げられる。
【００８８】
「芳香族アミノ酸」とは、π−電子系がコンジュゲーションされた少なくとも１つの環（芳香族）を含有する側鎖を有する非極性アミノ酸を指す。芳香族は、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシル基、スルホニル基、ニトロ基、及びアミノ基などの置換基にさらに置換されることがある。遺伝子にコードされている芳香族アミノ酸の例としては、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンが挙げられる。遺伝子にコードされていない通例遭遇する芳香族アミノ酸としては、フェニルグリシン、２−ナフチルアラニン、β−２−チエニルアラニン、３−ベンゾチアゾール−２−イル−アラニン、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、４−クロロフェニルアラニン、２−フルオロフェニルアラニン、３−フルオロフェニルアラニン、及び４−フルオロフェニルアラニンが挙げられる。
【００８９】
「脂肪族アミノ酸」とは、飽和又は不飽和の直鎖、分岐、又は環状の炭化水素の側鎖を有する非極性アミノ酸を指す。遺伝子にコードされている脂肪族アミノ酸の例としては、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、及びＩｌｅが挙げられる。コードされていない脂肪族アミノ酸の例としては、Ｎｌｅが挙げられる。
【００９０】
「極性アミノ酸」とは、生理的ｐＨで電荷を持つかもしくは持たず、２原子により共有される電子対がその原子のうちの一方にさらに密に保持されている結合を有する、側鎖を有する親水性アミノ酸を指す。極性アミノ酸は、一般に親水性であり、このことは、水溶液によって引きつけられる側鎖を有するアミノ酸を、それらが有することを意味する。遺伝子にコードされている極性アミノ酸の例としては、アスパラギン、システイン、グルタミン、リジン、及びセリンが挙げられる。遺伝子にコードされていない極性アミノ酸の例としては、シトルリン、ホモシステイン、Ｎ−アセチルリジン、及びメチオニンスルホキシドが挙げられる。
【００９１】
「酸性アミノ酸」とは、７未満の側鎖ｐＫ値を有する親水性アミノ酸を指す。酸性アミノ酸は、典型的には、水素イオンを喪失しているために、生理的ｐＨでは負電荷の側鎖を有する。遺伝子にコードされている酸性アミノ酸の例としては、アスパラギン酸（アスパラギン酸塩）及びグルタミン酸（グルタミン酸塩）が挙げられる。
【００９２】
「塩基性アミノ酸」とは、７を超える側鎖ｐＫ値を有する親水性アミノ酸を指す。塩基性アミノ酸は、典型的には、ヒドロ二ウムイオンを伴うために、生理的ｐＨでは正電荷の側鎖を有する。遺伝子にコードされている塩基性アミノ酸の例としては、アルギニン、リジン、及びヒスチジンが挙げられる。遺伝子にコードされていない塩基性アミノ酸の例としては、オルニチン、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、及びホモアルギニンが挙げられる。
【００９３】
「イオン性アミノ酸」とは、生理的ｐＨで電荷を持つことのできるアミノ酸を指す。そのようなイオン性アミノ酸としては、酸性アミノ酸及び塩基性アミノ酸、例えば、ｄ−アスパラギン酸、ｄ−グルタミン酸、ｄ−ヒスチジン、ｄ−アルギニン、ｄ−リジン、ｄ−ヒドロキシリジン、ｄ−オルニチン、ｌ−アスパラギン酸、ｌ−グルタミン酸、ｌ−ヒスチジン、ｌ−アルギニン、ｌ−リジン、ｌ−ヒドロキシリジン、又はｌ−オルニチンが挙げられる。
【００９４】
当業者によって認識されることになるように、上記の分類は絶対的なものではない。いくつかのアミノ酸は、２種以上の特徴的な性質を示し、それゆえ２種以上のカテゴリーに含めることができる。例えば、チロシンは、非極性の芳香環と極性のヒドロキシル基の両方を有する。そのため、チロシンは、非極性、芳香族、及び極性として記載され得るいくつかの特徴を有する。しかし，非極性環が優位にあるために、チロシンは、一般に非極性であるものと考えられている。同様に、ジスルフィド連結を形成可能であることに加えて、システインもまた、非極性の特徴を有する。このように、疎水性アミノ酸又は非極性アミノ酸として厳密に分類されない一方で、多くの場合、システインを使用して、疎水性又は非極性をペプチドに付与することができる。
【００９５】
実施形態によっては、本願発明により想定される極性アミノ酸としては、例えば、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、ヒスチジン、ホモシステイン、リジン、ヒドロキシリジン、オルニチン、セリン、スレオニン、及び構造的に関連のあるアミノ酸が挙げられる。一実施形態では、極性アミノは、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、ヒドロキシリジン、リジン、又はオルニチンなどのイオン性アミノ酸である。
【００９６】
利用可能な極性アミノ酸残基又は非極性アミノ酸残基の例としては、例えば、アラニン、バリン、ロイシン、メチオニン、イソロイシン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシンなどが挙げられる。
【００９７】
本明細書に使用される際に、「心血管障害」とは、酸化ストレス及び／又は虚血に関与するか、又はそのような特徴が少なくとも部分的にある、任意の心血管の疾患、障害、又は状態である。
【００９８】
生理的な過程の間、分子は、還元反応及び酸化反応を伴う化学変化を受ける。不対電子を持つ分子は、電子を供与することの可能な分子と連結することができる。この電子の供与は酸化と称され、一方で、電子の求引は還元と呼ばれる。還元及び酸化は、還元された分子を不安定化し、自由に他の分子と反応させて、膜、タンパク質や、ＤＮＡなどの細胞及び細胞内の構成成分に損傷を引き起こし得る。本明細書に使用される際に、「酸化ストレス」とは、一例では、細胞損傷の重要なメディエーターである過程である酸化ストレス／ニトロソ化ストレスをもたらす、反応性酸化体種（ＲＯＳ）の過度の産生を指す。転写因子の活性を含む複数のシグナル伝達経路の活性を誘発する酸化還元の不均衡の重要な面、それは、例えば虚血／再灌流傷害に関連する心血管疾患でユビキタスな過程である。反応性酸化体種は、一酸化窒素（ＮＯ）シンターゼ（ＮＯＳ）、キサンチンオキシダーゼ（ＸＯ）、シクロオキシゲナーゼ、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸［ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ］オキシダーゼのアイソフォームや、金属触媒反応など、種々の供給源から生じ得る。これらとしては、スーパーオキシドアニオン（Ｏ２・−）、ヒドロキシルラジカル（ＨＯ・）、脂質ラジカル（ＲＯＯ−）や、一酸化窒素（ＮＯ）などのフリーラジカルが挙げられる。他の反応性酸素種、例えば、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、過酸化亜硝酸（ＯＮＯＯ−）、及び次亜塩素酸（ＨＯＣｌ）は、フリーラジカルではないとはいえ、しかし酸化ストレスの一因となる酸化効果を有する。
【００９９】
「虚血」とは、血流及び酸素が身体のある特定の部分で漸減した際に起こる状態である。心臓又は網膜の虚血とは、例えば心臓又は網膜が上記の標的とする身体の部分である際に、この状態に用いる名称である。
【０１００】
眼の障害としては、例えば、血管新生性の目の障害、例えば、血管の成長もしくは増殖に起因もしくは関連するか、又は血管の漏れに起因する、任意の目の疾患、障害、又は状態が挙げられる。本願発明の方法を使用する治療可能な非限定的な例としては、加齢黄斑変性症（例えば、ウェット型ＡＭＤ、滲出型ＡＭＤなど．）、ドライ型ＡＭＤ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ；例えば、ＣＲＶＯに続く黄斑浮腫）、網膜静脈分枝閉塞症（ＢＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、脈絡膜新血管形成（ＣＮＶ；例えば、近視性ＣＮＶ）、虹彩新血管形成、新血管形成緑内障、緑内障の術後線維症、増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）、視神経乳頭新血管形成、角膜新血管形成、網膜新血管形成、硝子体新血管形成、パンヌス、翼状片、血管性網膜症、及び糖尿病性網膜症が挙げられる。
【０１０１】
当技術分野は、ペプチドの修飾、例えば、ポリマーのコンジュゲーション又は糖鎖付加によるものに、馴染みがある。用語「ギャップ結合チャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物」及び「ヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物」は、ＰＥＧなどのポリマーにコンジュゲーションされたペプチドを含めた修飾ペプチドを含み、システイン、リジン、又は他の残基の１つ又は複数の追加的な誘導体化から構成されることがある。さらに、ヘミチャネルペプチド剤剤は、リンカー又はポリマーを含むことがあり、ここで、リンカー又はポリマーがコンジュゲーションされているアミノ酸は、本願発明による非天然アミノ酸であってもよいし、又は、リジンもしくはシステインとのカップリングなどの当技術分野に公知の手法を利用して、天然にコードされたアミノ酸にコンジュゲーションされていてもよい。
【０１０２】
本発明の化合物に関連して本明細書に記載されるアミノ酸、例えば、配列番号１〜５２、又は例えば式Ｉ及びＩＩに定義されるような他のペプチドの、置換、欠失、改変、又は付加は、融合体、バリアント、断片、コンジュゲーション体などにおける対応の位置での置換、欠失、改変、又は付加をも指すことを意図するものである。
【０１０３】
用語「ギャップ結合チャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物」及び「ヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物」はまた、連結されているホモ二量体、ヘテロ二量体、ホモ多量体、及びヘテロ多量体をも包含し、そのようなものとしては、以下に限定されないが、天然にコードされていないアミノ酸側鎖を介して直接的に、同じであるかもしくは異なるかのどちらかの天然にコードされていないアミノ酸側鎖に、天然にコードされているアミノ酸側鎖に、又は間接的にリンカーを介して、連結されているものが挙げられる。例示的なリンカーとしては、小有機化合物、種々の長さの水溶性ポリマー、例えば様々な長さのポリ（エチレングリコール）やポリデキストランやポリペプチドなどが挙げられる。
【０１０４】
用語「リンカー」は、通常は化学反応の結果として形成され、典型的には共有結合的な連結である、基又は結合を指すために、本明細書に使用される。加水分解的に安定な連結とは、その連結が実質的に水中で安定であり、有用なＰｈ値では水と反応しないことを意味し、その意味には、以下に限定されないが、生理的条件下かつ長期間にわたること、おそらくはそれどころか無期限であることが含まれる。加水分解的に不安定であるか又は分解可能な連結とは、その連結が、例えば血液を含めて、水中又は水溶液中で分解し得ることを意味する。酵素的に不安定であるか又は分解可能な連結とは、その連結が１つ又は複数の酵素によって分解できることを意味する。当技術分野に認識されているように、ＰＥＧ及び関連ポリマーは、ポリマー骨格中に、又はポリマー骨格とポリマー分子の末端の官能基のうち１つ又は複数との間のリンカー基中に、分解可能な連結を含むことがある。例えば、生物活性剤上でＰＥＧカルボン酸又は活性化ＰＥＧカルボン酸とアルコール基との反応によって形成されるエステル連結は、一般に生理的条件下で加水分解して剤を放出する。他の加水分解的に分解可能な連結としては、以下に限定されないが、カーボネート連結；アミンとアルデヒドとの反応の結果生じるイミン連結；アルコールがリン酸基に反応することによって形成されるリン酸エステル連結；ヒドラジドとアルデヒドとの反応生成物であるヒドラゾン連結；アルデヒドとアルコールとの反応生成物であるアセタール連結；ホルメートとアルコールとの反応生成物であるオルトエステル連結；アミン基、例えば、以下に限定されないがＰＥＧなどのポリマーの端部にある基と、ペプチドのカルボキシル基とによって形成される、ペプチド連結；及びホスホロアミダイト基、例えば、以下に限定されないがポリマーの末端にある基と、オリゴヌクレオチドの５’ヒドロキシル基とによって形成される、オリゴヌクレオチド連結が挙げられる。
【０１０５】
本明細書に使用される際の用語「活性の」又は「生物活性の」とは、生物に関連する生体系、生体経路、生体分子、又は生体相互作用の物理学的特性又は生化学的特性に影響を及ぼし得る任意の物質を意味し、上記生物としては、以下に限定されないが、ウイルス、細菌、バクテリオファージ、トランスポゾン、プリオン、昆虫、真菌、植物、動物、及びヒトが挙げられる。具体的には、本明細書に使用される際に、生物活性分子としては、以下に限定されないが、ヒト又は他の動物における本明細書に記載又は参照される疾患、障害、及び状態の治癒、緩和、治療、又は予防を目的とする任意の物質が挙げられる。
【０１０６】
本明細書に使用される際に、用語「水溶性ポリマー」とは、水性溶媒に可溶性の任意のポリマーを指す。水溶性ポリマーとギャップ結合チャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物又はヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物との連結によって、以下に限定されないが、血清中半減期の増加もしくは調節、又は非修飾形態に比した治療半減期の増加もしくは調節、免疫原性の調節、凝集や多量体形成などの物理的会合特性の調節、受容体の結合性の変更、及び受容体の二量体化もしくは多量体化の変更を含めた、変化をもたらすことができる。水溶性ポリマーは、それ自体の生物活性を持つことも持たないこともあり、ギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を他の物質に付加するためのリンカーとして、利用されることがある。適したポリマーとしては、以下に限定されないが、ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒド、それらのモノＣ１−Ｃ１０アルコキシもしくはアリールオキシ誘導体（米国特許第５，２５２，７１４号に記載）、モノメトキシ−ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアミノ酸、ジビニルエーテル無水マレイン酸、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）−メタクリルアミド、デキストラン、デキストラン硫酸を含めたデキストラン誘導体、ポリプロピレングリコール、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール、ヘパリン、ヘパリン断片、多糖、オリゴ糖、グリカン、限定されないがメチルセルロース及びカルボキシメチルセルロースを含めたセルロース及びセルロース誘導体、デンプン及びデンプン誘導体、ポリペプチド、ポリアルキレングリコール及びそれらの誘導体、ポリアルキレングリコール及びそれらの誘導体のコポリマー、ポリビニルエチルエーテル、ならびにアルファ−ベータ−ポリ［（２−ヒドロキシエチル）−ＤＬ−アスパルトアミドなど、又はそれらの混合物が挙げられる。そのような水溶性ポリマーの例としては、以下に限定されないが、ポリエチレングリコール及び血清アルブミンが挙げられる。
【０１０７】
本明細書に使用される際に、用語「ポリアルキレングリコール」又は「ポリ（アルケングリコール）」とは、ポリエチレングリコール［ポリ（エチレングリコール）］、ポリプロピレングリコール、ポリブチレングリコール、及びそれらの誘導体を指す。用語「ポリアルキレングリコール」及び／又は「ポリエチレングリコール」は、線状ポリマーと分岐ポリマーの両方を包含し、平均すると分子量は０．１ｋＤａと１００ｋＤａ以上との間にある。他の例示的な実施形態は、例えば、Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのカタログ「Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  Ｇｌｙｃｏｌ  ａｎｄ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」（２００１）などの商用供給業者のカタログに一覧にされている。
【０１０８】
本明細書に使用される際に、用語「血清中半減期の改変」とは、修飾されたギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の、非修飾形態に比した循環半減期の増加を意味する。血清中半減期は、ギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を投与した後、様々な時点で血液試料を採取し、各試料中の当該分子の濃度を決定することによって測定される。血清濃度と時間との相関関係によって、血清中半減期の算出が可能になる。血清中半減期の増加は、望ましくは少なくとも約２倍であるが、より少ない増加は、例えば、それが満足の行く用量投与レジメンを可能とするか、又は毒性作用を回避する場合に、有用であることがある。実施形態によっては、この増加は、少なくとも約３倍、少なくとも約５倍、又は少なくとも約１０倍以上である。
【０１０９】
本明細書に使用される際の用語「治療半減期の改変」とは、修飾されたギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の、非修飾形態に比した治療有効量の半減期の増加を意味する。治療半減期は、投与後に分子の薬物動態学的特性及び／又は薬力学的特性を様々な時点で測定することによって測定される。治療半減期の増加によって、望ましくは、特に有益な用量投与レジメン、特に有益な総用量が可能になるか、又は望まない作用が回避される。実施形態によっては、治療半減期の増加は、力価の増加、修飾分子とその標的との結合性の増加もしくは減少、プロテアーゼなどの酵素による当該分子の崩壊の増加もしくは減少、又は非修飾分子の作用の別のパラメーターもしくは機構の増加もしくは減少の結果として生じる。
【０１１０】
ペプチドに適用される際の用語「単離された」とは、そのペプチドが、天然の状態でそれに会合する少なくともいくつかの細胞構成成分もしくは他の生体構成成分を含まないか、又はそのペプチドが、そのｉｎ  ｖｉｖｏもしくはｉｎ  ｖｉｔｒｏでの産生の濃度よりも高いレベルに濃縮されていることを示す。それは、均一な又は実質的に均一な状態とすることができる。単離された物質は、乾燥もしくは半乾燥のどちらかの状態、又は限定されないが水溶液を含めた溶液とすることができる。それは、追加の薬学的に許容可能な担体及び／又は賦形剤を含む医薬組成物の構成成分とすることができる。純度及び均一性は、典型的には、例えばポリアクリルアミドゲル電気泳動や高性能液体クロマトグラフィーなどの、分析化学的手法を使用して決定される。
【０１１１】
「実質的に純粋な」とは、ギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の純度の程度を意味し、その場合、少なくとも７０％のギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物があり、それはさらに好ましくは少なくとも８０％であり、そしていっそうさらに好ましくは少なくとも９０％、９５％、又は９９％にまで増加する。特に好適な純度は、少なくとも９５％である。「本質的に純粋な」とは、所望のギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物について、組成物が少なくとも９０％以上純粋であることを意味する。調製物中に存在する最も優勢な種であるペプチドもまた、実質的に精製されている。
【０１１２】
本明細書に使用される際の用語「有効量」とは、治療される疾患、状態、又は障害の症状のうち１つ又は複数をある程度軽減することになる、投与されるギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の量を指す。本明細書に記載されるギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含有する組成物は、予防的治療、増強的治療及び／又は治療的治療のために投与することができる。
【０１１３】
本明細書に使用される際の「対象」とは、任意の哺乳動物を指し、そのようなものとしては、ヒト、家庭内及び家畜用の動物、ならびに動物園用、競技用、もしくは愛玩用の動物、例えばイヌ、ウマ、ネコ、ヒツジ、ブタ、乳牛などが挙げられる。本明細書の好適な哺乳動物とは、成人、小児、及び高齢者を含めたヒトである。好適な競技用動物とは、ウマ及びイヌである。好適な愛玩用動物とは、イヌ及びネコである。
【０１１４】
本明細書に使用される際に、「予防すること」とは、全体的もしくは部分的に予防すること、寛解もしくは制御すること、低減すること、低下させること、又は減少させること、又は遅延もしくは停止させることを意味する。
【０１１５】
本明細書に使用される際に、当該発明の化合物又は組成物に関連する「治療有効量」とは、所望の生物学的、医薬的、又は治療的な結果を誘導するのに充分な量を指す。この結果は、疾患もしくは障害もしくは状態の徴候、症状、もしくは原因のうち１つもしくは複数の軽減、又は任意の他の所望の生体系の変更とすることができる。本願発明では、例として、その結果は、心血管又は眼の障害の症状のうち１つ又は複数の治療、予防、及び／又は低減を含むものとなり、そのような障害としては、例えば、血管新生性、炎症性、もしくは浮腫性の眼の状態、又は急性冠閉塞症候群、例えば、虚血性心疾患、及び任意の眼の心血管の障害、疾患、もしくは状態、例えば、虚血及び／又は酸化ストレスに関与するものが挙げられる。
【０１１６】
本明細書に使用される際に、用語「治療すること」及び「治療」とは、治療的治療と予防的又は予防の手段との両方を指す。
【０１１７】
「類似体」又は「ペプチド類似体」とは、鋳型ペプチドに類似した特性を持つ化合物を指し、非ペプチド薬剤であることがある。「ペプチド模倣体」（「模倣ペプチド）としても知られる）とは、ペプチドベースの化合物を含むが、ペプチド類似体などの非ペプチドベースの化合物も含む。治療的に有用なペプチドに構造的に類似したペプチド模倣体は、同等の又は増強された治療的又は予防的な効果を生じるために、使用されることがある。一般に、ペプチド模倣体は、模範ポリペプチド（すなわち、生物学的又は薬理学的な機能又は活性を有するポリペプチド）に構造的に同一であるか又は類似しているが、また、例えば−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（ｃｉｓ及びｔｒａｎｓ）、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、及びＣＨ２ＳＯ−からなる群から選択される連結によって任意選択的に置換される、１つ又は複数のペプチド連結も有することができる。この模倣体は、天然のアミノ酸で全体を構成されているか、もしくはアミノ酸の非天然類似体であるかのどちらかとすることができるか、又は、部分的に天然のペプチドアミノ酸と部分的にアミノ酸の非天然類似体とのキメラ分子である。この模倣体はまた、任意の量の天然アミノ酸の保存された置換を、そのような置換が模倣的な活性を実質的に変えない限りにおいて含むことができる。
【０１１８】
一般に、用語「ペプチド」とは、ペプチド結合を介して連結された２つ以上の個別のアミノ酸（天然に存在するかしないかに関わらず）の任意のポリマーを指し、それは、１アミノ酸（又はアミノ酸残基）のアルファ炭素に結合しているカルボン酸基のカルボキシル炭素原子が、隣接アミノ酸のアルファ炭素に結合しているアミノ基のアミノ窒素原子に共有結合してゆく際に発生するようなものである。これらのペプチド結合の連結、及びそれらを含む原子［すなわち、アルファ炭素原子、カルボキシル炭素原子（及びそれらの置換基酸素原子）、及びアミノ窒素原子（及びそれらの置換基水素原子）］は、タンパク質の「ポリペプチド骨格」を形成する。さらに、本明細書に使用される際に、用語「ポリペプチド」及び「ペプチド」は、互換的に使用されることがある。同様に、タンパク質の断片、類似体、誘導体、及びバリアントは、本明細書では「ペプチド」又は「ペプチド剤」と称することがある。用語ペプチドの「断片」とは、ペプチドの全アミノ酸残基よりも少数を含むポリペプチドを指す。
【０１１９】
本明細書に使用される際に、「同時に」は、本発明の１つ又は複数の剤を併行して投与することを意味するために使用され、一方で、用語「組合せで」は、それらを投与することを意味するために使用され、同時に又は物理的な組合せではない場合には、次いで、それらの両方を治療的に作用させるのに利用可能な時間枠内に、「逐次的に」それらを投与することを意味するために使用される。そのため、「逐次的な」投与は、ギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と、別の眼又は心血管の治療剤との両方が、例えば、併行して有効量で存在するという条件において、一方の剤を、他方の剤の後の何分か以内（例えば、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０）分以内、又は何時間か、何日間か、何週間か、もしくは何か月間かの間に、投与することを許容することがある。構成成分の１回又は複数回の投与の間の時間遅延は、構成成分の正確な性質、それらの間の相互作用、及びそれらのそれぞれの半減期に応じて変わるものとなる。
ヘミチャネルペプチド剤
【０１２０】
本明細書に記載される本発明のギャップ結合チャネル及びヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、微小血管障害の症状のうち１つ又は複数を調節することが可能である。好ましくは、この微小血管障害は、血管新生性の眼障害又は眼の傷害又は心血管障害であるが、炎症、浮腫、及び／又は血管の損傷もしくは漏出という特徴を持つものを含めた他のものが、本明細書に記載されるように意図されている。
【０１２１】
本願発明は、ギャップ結合の連絡及びヘミチャネルの開口及び本明細書に記載される他の活性を調節するのに有用な薬物動態学的特性及び薬力学的特性を有する、ペプチド及びペプチド模倣物の生産、ならびに、ギャップ結合活性ならびに／又はヘミチャネルの開口及びヘミチャネル活性を調節することが治療的に有益である疾患、障害、及び状態の治療におけるそれらの使用を提供する。
【０１２２】
本明細書に記載され特許請求される本発明は、ギャップ結合タンパク質及びギャップ結合ヘミチャネルタンパク質に結合する、ペプチド及びペプチド模倣体に関する。また、出願人の発明は、血管性の疾患、障害、及び状態の影響の治療、予防、及び寛解に有用な医薬品、組成物、及び方法、ならびにそのような化合物及び組成物を含む製品及びキットに関する。一態様では、本発明は、ギャップ結合タンパク質チャネル活性を制御するための化合物に関する。別の態様では、本発明は、ギャップ結合ヘミチャネル活性を制御するための化合物に関する。
【０１２３】
一実施形態では、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド模倣物は、ギャップ結合チャネル阻害剤である。一実施形態では、ギャップ結合は、コネキシン４３タンパク質を含む。一実施形態では、ギャップ結合は、コネキシン４５タンパク質を含む。別の実施形態では、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド模倣物は、ギャップ結合ヘミチャネルの開口の阻害剤である。一実施形態では、ギャップ結合ヘミチャネルは、コネキシン４３タンパク質を含む。一実施形態では、ギャップ結合ヘミチャネルは、コネキシン４５タンパク質を含む。他の実施形態では、ギャップ結合及びヘミチャネルは、コネキシン２５、コネキシン２６、コネキシン２９（コネキシン３０．２）、コネキシン３０、コネキシン３０．３、コネキシン３１、コネキシン３１．１、コネキシン３１．３、コネキシン３１．９、コネキシン３２、コネキシン３６、コネキシン３７、コネキシン４０、コネキシン４０．１、コネキシン４６、コネキシン４６．６（コネキシン４７）、コネキシン５０、コネキシン５８、コネキシン５９、コネキシン６２のタンパク質を含み、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド模倣物は、これらのギャップ結合チャネル及び対応のヘミチャネルのうち１つ又は複数の阻害剤である。
【０１２４】
別の態様では、本発明は、表面に露出されたギャップ結合ヘミチャネルの開口を制御するための化合物に関する。別の態様では、本発明は、ヘミチャネルの開口を持続的に制御するための化合物に関する。別の態様では、本発明は、ヘミチャネルを閉じるための化合物に関する。さらに別の態様では、本発明は、ヘミチャネルの開口を調節するための化合物に関する。
【０１２５】
一態様では、本明細書に提供される本発明は、化合物を含む。別の態様では、本発明は、それらの化合物のうち１つ又は複数を含むか又はそれから本質的になる組成物を含み、ここでは、本発明の根本的かつ新規の特徴とは、本明細書に記載されるようなギャップ結合及び／又はヘミチャネルの機能もしくは活性を調節する能力である。本化合物は、ギャップ結合及び／又はヘミチャネルに関連する障害の治療に有用である。
【０１２６】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物としては、ＡＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号１）、ＶＤＣＡＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号２）、ＶＤＣＦＬＡＲＰＴＥＫＴ（配列番号３）、ＶＤＣＦＬＳＲＰＡＥＫＴ（配列番号４）、ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＡ（配列番号５）、ＣＦＬＳＲＰＴＡＫＴ（配列番号６）、ＣＡＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号７）、ＣＦＬＡＲＰＴＥＫＴ（配列番号８）、ＣＦＬＳＲＰＡＥＫＴ（配列番号９）、及びＣＦＬＳＲＰＴＥＫＡ（配列番号１０）が挙げられる。配列番号１〜１０に示されるような上記のペプチドのうちいずれか又は全てにおいて、別々に又は任意の組合せで共に、バリン（Ｖ）はアラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、及びフェニルアラニン（Ｆ）に置換することができ；アスパラギン酸（Ａｓｐ）は、グルタミン酸（Ｅ）に置換することができ；システイン（Ｃ）は、セリン（Ｓ）に置換することができ；フェニルアラニン（Ｐ）は、アラニン（Ａ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、及びバリン（Ｖ）に置換することができ；ロイシン（Ｌ）は、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）に置換することができ；セリン（Ｓ）は、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、及びバリン（Ｖ）、好ましくはアラニンに置換することができ；アルギニン（Ｒ）は、リジン（Ｌ）又はグルタミン（Ｑ）に置換することができ、プロリン（Ｐ）は、置換することができず；スレオニン（Ｔ）は、アラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、及びグリシン（Ｇ）に置換することができ；グルタミン酸（Ｅ）は、アラニン（Ａ）、グルタミン（Ｑ）、及びアスパラギン（Ｎ）に置換することができ；リジン（Ｋ）は、アルギニン（Ｒ）に置換することができ、これらは全て、配列番号１〜８の類似体である。配列番号１〜８として示される上記のペプチドのうちいずれか又は全てにおいて、別々に又は任意の組合せで共に、いずれのアミノ酸もＬ−アミノ酸とすることもＤ−アミノ酸とすることもできるが、但し、そのペプチドは、Ｌ−Ｖａｌ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｌｅｕ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒではない。Ｄ−アミノ酸を含有する配列番号１〜８として示される上記のペプチドのいずれも、配列番号１〜８の類似体でもある。
【０１２７】
非限定的で好適な実施形態で単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物は、以下の式Ｉによる化合物も含む。
Ｒ１  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４
式中、Ｒ１は、存在しないか、又はＨ、１個から２０個までの炭素原子由来の線状又は分岐の飽和もしくは不飽和の炭化水素鎖を含有するアシル基、アミド、カルバメート、尿素、ＰＥＧ、もしくはヒドロキシアルキルデンプンからなる群から選択され；Ｘ１は、Ｐｈｅであるか、又はＡｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、ならびに／もしくはＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、及び／又はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、ならびに／もしくはＮｖａもしくはＮｌｅ、ならびに／もしくはｔｅｒｔ−ブチルグリシン、フェニルグリシン、７−アザトリプトファン、４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−アラニン、サルコシン、Ｎ−メチル−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−フェニルグリシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−７−アザトリプトファン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−チロシン、Ｎ−メチル−バリン、ならびにＮ−メチル−リジン、ならびに／もしくは前述のもののいずれかのＤ−エナンチオマーからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｘ２は、Ｔｈｒであるか、又はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、ＮｖａもしくはＮｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｘ３は、Ｇｌｕ、Ａｌａ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｎｖａ又はＮｌｅであり；Ｘ４は、Ｔｈｒであるか、又はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、ＮｖａもしくはＮｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であるが；但し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４は、同時にそれぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではなく、ペプチドＲ１  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４  ペプチドは、Ｌ−Ｖａｌ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｌｅｕ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒではない。
【０１２８】
本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ１は、Ｐｈｅであり、Ｘ２、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＴｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ２は、Ｔｈｒであり、Ｘ１、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ３は、Ｇｌｕであり、Ｘ１、Ｘ２、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ４は、Ｔｈｒであり、Ｘ１、Ｘ２、及び／又はＸ３のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、及びＧｌｕではない。
【０１２９】
本発明の化合物は、非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋であり、以下の式ＩＩによる化合物も含む。
Ｒ１  Ｙ１  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｌｅｕ  Ｚ１  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４
式中、Ｙ１は、Ｖａｌ、Ａｌａ、又はＩｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｔｙｒ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ｎｖａ、Ｎｌｅ、ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、フェニルグリシン、７−アザトリプトファン、４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−アラニン、サルコシン、Ｎ−メチル−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−フェニルグリシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−７−アザトリプトファン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−チロシン、Ｎ−メチル−バリン、及びＮ−メチル−リジン、ならびに／もしくは前述のもののいずれかのＤ−エナンチオマーからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｚ１は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、又はＡｓｎ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、及びＡｒｇからなる群から選択されるアミノ酸であり；ならびに式中、Ｒ１は、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、式Ｉについて上に記載された通りであるが；但し、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、同時にそれぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではなく、ペプチド  Ｒ１  Ｙ１  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｌｅｕ  Ｚ１  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４  ペプチドは、Ｌ−Ｖａｌ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｌｅｕ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒではない。
【０１３０】
本発明はまた、式ＩＩの化合物も含み、式中、Ｙ１は、Ｖａｌであり、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ１は、Ｐｈｅであり、Ｙ１、Ｚ１、Ｘ２、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＶａｌ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ２は、Ｔｈｒであり、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ３は、Ｇｌｕであり、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ４は、Ｔｈｒであり、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、及び／又はＸ３のうち１つ又は複数は、それぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、及びＧｌｕではない。
【０１３１】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の他の実施形態は、また、アミノ酸配列ＩＤＣＦＩＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４３）が、例えばギャップ結合チャネルに対する遮断剤として、及び／又はコネキシン４５から構成されるヘミチャネルに対するヘミチャネル遮断剤として、特異的かつ有用なアイソフォームとなることを含む。上に記載されたＲ１などの基を有するもの、及び例えば分子量を増加してタンパク質分解酵素からそれらを遮蔽するのに有用な他のものを含めて、本配列及びそれらの活性類似体は、少なくとも部分的には血管の損傷及び／又は漏れという特徴を持つものを含めた心臓の疾患、障害、及び状態に対処するために、ならびに心筋梗塞及び心発作に由来する血管のダイバック（ｄｉｅｂａｃｋ）に対処するための治療として、特に重要となる。
【０１３２】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物はまた、以下の式ＩＩＩによる化合物を含む。
Ｒ１  Ｉｌｅ  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４
式中、Ｒ１は、存在しないか、又はＨ、１個から２０個までの炭素原子由来の線状又は分岐の飽和もしくは不飽和の炭化水素鎖を含有するアシル基、アミド、カルバメート、尿素、ＰＥＧ、もしくはヒドロキシアルキルデンプンからなる群から選択され；Ｘ１は、Ｐｈｅであるか、又はＡｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、ならびに／もしくはＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ならびに／もしくはＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、ならびに／もしくはＮｖａもしくはＮｌｅ、ならびに／もしくはｔｅｒｔ−ブチルグリシン、フェニルグリシン、７−アザトリプトファン、４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−アラニン、サルコシン、Ｎ−メチル−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−フェニルグリシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−７−アザトリプトファン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−チロシン、Ｎ−メチル−バリン、及びＮ−メチル−リジン、ならびに／もしくは前述のもののいずれかのＤ−エナンチオマーからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｘ２は、Ｔｈｒであるか、又はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、ＮｖａもしくはＮｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｘ３は、Ｇｌｕ、Ａｌａ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｎｖａ又はＮｌｅであり；Ｘ４は、Ｔｈｒであるか、又はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、ＮｖａもしくはＮｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であるが；但し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、同時にそれぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではなく、ペプチドＲ１  Ｉｌｅ  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４  ペプチドは、Ｌ−Ｉｌｅ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｉｌｅ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒ、又は任意の天然に存在するコネキシンペプチド配列ではない。
【０１３３】
本発明はまた、式ＩＩＩの化合物も含み、式中、Ｘ１は、Ｐｈｅであり、Ｘ２、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＴｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。  本発明はまた、式ＩＩＩの化合物も含み、式中、Ｘ２は、Ｔｈｒであり、Ｘ１、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。  本発明はまた、式ＩＩＩの化合物も含み、式中、Ｘ３は、Ｇｌｕであり、Ｘ１、Ｘ２、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、及びＴｈｒではない。  本発明はまた、式ＩＩＩの化合物も含み、式中、Ｘ４は、Ｔｈｒであり、Ｘ１、Ｘ２、及び／又はＸ３のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、及びＧｌｕではない。
【０１３４】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物はまた、以下の式ＩＶによる化合物を含む。
Ｒ１  Ｙ１  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  ＩＬｅ  Ｚ１  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４
式中、Ｙ１は、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、ならびに／又はＰｈｅもしくはＩｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｔｙｒ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ｎｖａ、Ｎｌｅ、ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、フェニルグリシン、７−アザトリプトファン、４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−アラニン、サルコシン、Ｎ−メチル−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−フェニルグリシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−７−アザトリプトファン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−チロシン、Ｎ−メチル−バリン、及びＮ−メチル−リジン、ならびに／もしくは前述のもののうちいずれかのＤ−エナンチオマーからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｚ１は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、又はＡｓｎ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、及びＡｒｇからなる群から選択されるアミノ酸であり；ならびに式中、Ｒ１、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、式ＩＩＩについて上に記載された通りであるが；但し、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、同時にそれぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではなく、ペプチドＲ１  Ｙ１  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｉｌｅ  Ｚ１  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４  ペプチドは、Ｌ−Ｉｌｅ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｉｌｅ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒ、又は任意の天然に存在するコネキシンペプチド配列ではない。
【０１３５】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物はまた、表１による１２アミノペプチドを含むことも除くこともある。
【０１３６】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の他の実施形態は、また、アミノ酸配列ＶＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号３１）という、例えば、コネキシン５０、６２、３７、４６．６、２６、３２、もしくは３１．９のいずれかから構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＦＩＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号３２）という、例えば、コネキシン４６もしくは３０のいずれかから構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列を含む。
【０１３７】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の他の実施形態は、また、アミノ酸配列ＩＴＣＮＬＳＲＰＳＥＫＴ（配列番号３３）、例えば、コネキシン２９（３０．２）又は３１．３のいずれかから構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＹＶＳＲＰＴＥＫＳ（配列番号３４）という、例えば、コネキシン４０．１から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＥＣＹＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号３５）という、例えば、コネキシン３６から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＩＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号３６）という、例えば、コネキシン５９から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＹＩＳＲＰＴＥＫＫ（配列番号３７）という、例えば、コネキシン３０．３から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＦＩＳＫＰＳＥＫＮ（配列番号３８）という、例えば、コネキシン３１．１から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＹＩＡＲＰＴＥＫＫ（配列番号３９）という、例えば、コネキシン３１から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＦＩＳＫＰＴＥＫＴ（配列番号４０）という、例えば、コネキシン２５から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；ならびにアミノ酸配列ＩＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４１）という、例えば、コネキシン５８及びコネキシン５９のうちいずれかから構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列を含む。
【０１３８】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の他の実施形態は、また、アミノ酸配列ＶＮＣＹＶＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号４２）が、例えばギャップ結合チャネルに対する遮断剤として、及び／又はコネキシン４０から構成されるヘミチャネルに対するヘミチャネル遮断剤として、特異的かつ有用なアイソフォームとなることを含む。上に記載されたＲ１などの基を有するもの、及び例えば分子量を増加してタンパク質分解酵素からそれらを遮蔽するのに有用な他のものを含めて、本配列及びそれらの活性類似体は、少なくとも部分的には微小血管の漏れという特徴を持つものを含めた血管性の疾患、障害、及び状態に対処するために、ならびにがん治療として、特に重要となる。
【０１３９】
ある実施形態では、Ｒ１を、細胞内在化トランスポーターとすることができる。本願発明の細胞内在化トランスポーターは、当技術分野に公知のもしくは新たに発見された任意の内在化配列、又はその保存されたバリアントとしてもよい。細胞内在化トランスポーター及び配列の非限定的な例としては、アンテナペディア配列、ＴＡＴ、ＨＩＶ−Ｔａｔ、ペネトラチン、Ａｎｔｐ−３Ａ（Ａｎｔｐ変異体）、ブフォリンＩＩ、トランスポータン、ＭＡＰ（モデル両親媒性ペプチド）、Ｋ−ＦＧＦ、Ｋｕ７０、プリオン、ｐＶＥＣ、Ｐｅｐ−１、ＳｙｎＢ１、Ｐｅｐ−７、ＨＮ−１、ＢＧＳＣ（ビス−グアニジウム−スペルミジン−コレステロール、及びＢＧＴＣ（ビスグアニジウム−トレン−コレステロール）が挙げられる。
【０１４０】
例示的な細胞内在化ペプチドの配列を下記の表４に示す。
表４
【表２】
2019522041.tif 000003
【０１４１】
表４は、例示的な細胞内在化トランスポーターの配列を一覧に挙げている。
【０１４２】
実施形態によっては、コネキシン、パネキシン及び／又はカドヘリンのモジュレーターペプチドを、輸送ペプチドに融合して、標的細胞内への透過を増加させる。実施形態によっては、輸送ペプチドを、細胞の透過のためのウイルス被覆の部分とすることができる。実施形態によっては、輸送ペプチドを、コネキシン及び／又はカドヘリンのモジュレーターペプチドに、カルボキシ末端又はアミノ末端で、融合することができる。輸送ペプチドは、以下のペプチド：ＡＮＴＰ、ＨＩＶ−ＴＡＴ、トランスポータン、ブフォリンＩＩ、Ｔａｔ、ペネトラチン、ＭＡＰ、Ｋ−ＦＧＦ、Ｋｕ７０、プリオン、ｐＶＥＣ、Ｐｅｐ−１、ＳｙｎＢ１、Ｐｅｐ−７、ＲＧＤ、又はＨＮ−１から選択することができる。
【０１４３】
本願発明の一実施形態では、コネキシン４３モジュレーターペプチドのアミノ酸配列は、本明細書に一覧にされている任意のペプチドの配列番号、又はそれらの保存されたバリアントからなる群から選択することができる。本願発明のさらに別の一実施形態では、コネキシン４３モジュレーターペプチドは、配列番号５４〜７１のアミノ酸配列を含み得る。本願発明の別の実施形態では、コネキシン４３モジュレーターペプチドは、細胞内在化トランスポーターをさらに含む。さらに別の一実施形態では、コネキシン４３モジュレーターペプチドは、アミノ末端で細胞内在化トランスポーターに連結することができる。
【０１４４】
本発明の他の実施形態は、コネキシン細胞外ループ１及び２の両方の領域に合致するペプチドとの組合せ治療が有効性の増加を示し（図３、表２）、その増加は至適基準の対照のチャネル遮断剤として通例使用されるカルバノクソロンの有効性を超えることを含む。
【０１４５】
本発明の他の実施形態は、コネキシンヘミチャネル遮断剤ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号４４）と、式Ｉ又は式ＩＩによるものを含めた本明細書に記載されるペプチドのうちいずれか１つ又は複数との組合せを含む、組成物及び治療が、コネキシン４３ヘミチャネルを遮断する組合せとしても有用となることを含む。
【０１４６】
これらの配列は、別々に又は共に、独立した実体として又は連結されて、送達されてもよい。そのため、本発明はまた、例えば、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号４４）をコネキシン４３ヘミチャネル遮断剤ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４５）に、例えばＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ−Ｘ−ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号４６）の形態で連結させることを含み、上式で、Ｘは、この組合せペプチドがコネキシン４３ヘミチャネル上のそれらの両方の結合部位にそれぞれ接触するのに充分な可撓性を有する、１つ又は複数の連結グリシン又は他の非機能性リンカーである。
【０１４７】
本発明はまた、例えば、組織で同時に複数のコネキシンアイソフォームに対し機能できる組合せで配列を含み、共に別々に又は共に、独立した実体として又は連結されて、送達されることがある。例えば、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４７）は、コネキシン４０ヘミチャネル遮断剤ＶＮＣＹＶＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号４８）に、ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ−Ｘ−ＶＮＣＹＶＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号４９）の形態で連結することができ、上式で、Ｘは、この組合せペプチドをコネキシン４３、コネキシン４０、又はコネキシン４５からなるヘミチャネルと相互作用できるようにする、１つ又は複数の連結グリシン又は他の非機能性リンカーである。
【０１４８】
本発明はまた、例えば、１つ又は４つのペプチドコネキシンアイソフォーム遮断剤配列を組合せで含み、そこでは、それらは三次構造を形成せず、その連結が線形構造の保持をもたらす。一実施形態では、血管内皮コネキシン４０、４３、４５、３７に対するペプチドが調製され、そのようなものとしては、ＶＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号５０）；ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号５１）；及びＶＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号５２）が挙げられる。
【０１４９】
本発明の範囲に含まれるのは、これらの化合物の活性類似体及び保存されたバリアントであり、そのようなものとしては、その切頭体、好ましくはＮ末端の１又は２アミノ酸の切頭体が挙げられる。
【０１５０】
非限定的な一実施形態では、本発明の範囲内にあるペプチドのアミノ酸のうち１つ又は複数は、配列番号１〜５２及び式Ｉ〜ＩＶ内の配列を含めて、Ｌ−又はＤ−の立体配置としてよい。他の実施形態では、本発明の範囲内にあるペプチドのアミノ酸のうち１つ又は複数は、天然に存在するか又は遺伝子にコードされていないアミノ酸である。さらに他の実施形態では、本発明の範囲内にあるペプチドのアミノ酸のうち１つ又は複数は、アミノ酸類似体又は合成アミノ酸である。
【０１５１】
別の非限定的な実施形態では、Ｎ末端アミノ酸は、ホルミル基；ホルミル基、カルボン酸エステル（好ましくはアルデヒドエステル、例えば、カルボキシエチル基、カルボキシメチル基など）を含む基；又はカルボン酸エステルを含む基を含有するように修飾されることがある。ホルミル基、カルボキシエチル基、及びカルボキシメチル基を用いた修飾が、ここでは好適である。
【０１５２】
別の実施形態では、配列番号１〜５２及び式Ｉ〜ＩＶ内の配列を含めた本発明の範囲内の化合物中の１つ又は複数のアミノ酸は、主にアミノ酸側鎖の化学的特性及び物理学的特性に基づき、類似のアミノ酸のクラス又はサブクラス由来の別のアミノ酸に置換される。例えば、１つ又は複数の親水性又は極性のアミノ酸を、別の親水性又は極性のアミノ酸に置換することができる。同様に、１つ又は複数の疎水性又は非極性のアミノ酸を、別の疎水性又は非極性のアミノ酸に置換することができる。そのような置換を作製する際に、極性アミノ酸を、酸性、塩基性、又は親水性の側鎖を有するアミノ酸にさらに細分化することができ、非極性のアミノ酸を、芳香族又は疎水性の側鎖を有するアミノ酸にさらに細分化することができる。非極性アミノ酸は、さらに細分化されて、特に脂肪族アミノ酸を含むことがある。
【０１５３】
また、本発明の範囲内には、生物薬剤特性を改善するために修飾されている、本発明の化合物がある。ある実施形態では、本発明の化合物は、例えば、安定性の増加、タンパク質分解による不活性化に対する耐性の増加、存在しない免疫原性への減少、血清中半減期の改変及び治療半減期の改変を含めた循環寿命の増加、ならびに毒性の低下を付与するために、修飾される。本発明の化合物の修飾形態としては、プロドラッグ形態が挙げられ、その代表的な例は、本明細書の他の箇所に記載されている。本発明の化合物を修飾することができる方法としては、また、例えば、ＰＥＧ化によるもの、化学的誘導体化によるもの、及びペプチド又は脂質との融合又はコンジュゲーションによるものが挙げられる。修飾化合物としては、修飾ペプチドヘミチャネル剤が挙げられ、そのようなものとしては、例えば、修飾された配列番号１〜１０のいずれか、及び修飾類似体、及びそれらのバリアント（例えば、保存されたバリアント）が挙げられる。
【０１５４】
他の実施形態としては、Ｃ末端スレオニンを含まない、配列番号１から１０より選択されるペプチド、ならびに式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、及び／又は式ＩＶによるペプチドが挙げられる。他の実施形態としては、Ｎ末端バリンを含まない、配列番号１から１０より選択されるペプチド、ならびに式Ｉ及び／又は式ＩＩによるペプチドが挙げられる。他の実施形態としては、Ｎ末端イソロイシンを含まない、式ＩＩＩ及び／又は式ＩＶによるペプチドが挙げられる。他の実施形態としては、Ｎ末端バリン又はＣ末端スレオニンを含まない、配列番号１から１０より選択されるペプチド、ならびに式Ｉ及び／又は式ＩＩによるペプチドが挙げられる。他の実施形態としては、Ｎ末端イソロイシン又はＣ末端スレオニンを含まない、式ＩＩＩ及び／又は式ＩＶによるペプチドが挙げられる。
【０１５５】
他の実施形態としては、Ｃ末端アミノ酸を除去されている、すなわち、Ｃ末端１つを切頭された、配列番号１１から５２より選択されるペプチドが挙げられる。他の実施形態としては、１番目及び／又は２番目のＮ末端アミノ酸が除去されている、すなわち、Ｎ末端１つ又は２つを切頭された、配列番号１１から５２より選択されるペプチドが挙げられる。
【０１５６】
実施形態によっては、本願発明は、本願発明のペプチド又はペプチド模倣物のうち１つ又は複数と、薬学的に許容可能な担体又は賦形剤とを含む、医薬組成物を提供する。実施形態によっては、本願発明は、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、又は状態のうち１つ又は複数に用いる、哺乳動物の予防又は治療のためのキットを提供し、前記キットが、１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤又は阻害剤を含み、かつ任意選択で試薬及び／又は使用指示書を伴うという特徴を有することによってなり、ここで、前記１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤又は阻害剤は、本明細書に記載されるペプチド又はペプチド模倣物のうちいずれかの少なくとも１０個の連続するアミノ酸の配列を含む。
【０１５７】
本願発明はまた、ペプチド断片剤と、薬学的に許容可能な担体と、本明細書に記載又は参照されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物のうち１つ又は複数とを、含むか又はそれらから本質的になる医薬組成物を含む。一実施形態では、本医薬組成物は、配列番号１〜５２のうちいずれかを含むか又はそれから本質的になる。別の実施形態では、本医薬組成物は、式Ｉ又は式ＩＩのどちらかから選択される配列を含むか又はそれから本質的になる。本発明の範囲に含まれるのは、これらの化合物の１つ又は複数の活性類似体及び保存されたバリアントを、それらの切頭体、好ましくは記載されるような１アミノ酸もしくは２アミノ酸のＮ末端切頭体、又は１アミノ酸のＣ末端切頭体を含めて、含む医薬組成物である。
【０１５８】
別の実施形態では、本発明は、その生物薬剤特性を改善するために修飾されている、類似体、バリアント、切頭体などを含めた本発明の化合物を、含むか又はそれから本質的になる医薬組成物を含む。ある実施形態では、本発明の化合物は、例えば、安定性の増加、タンパク質分解による不活性化に対する耐性の増加、存在しない免疫原性への減少、半減期又は循環寿命の増加、ならびに毒性の低下を付与するために、修飾される。本発明の化合物を修飾することができる方法としては、例えば、ＰＥＧ化によるもの、化学的誘導体化によるもの、及びペプチド又は脂質との融合又はコンジュゲーションによるものが挙げられる。
【０１５９】
本発明は、心血管障害、例えば、急性冠閉塞症候群、心不全、虚血性心疾患など；ならびに虚血及び／又は酸化ストレスという特徴を少なくとも部分的に持つ、関連の心血管の疾患、障害、及び状態；ならびに関連の障害及び状態を治療するための、本明細書に記載又は参照される１つ又は複数の薬学的に許容可能なギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む、医薬組成物を含む。ある種の好適なギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、本明細書に配列番号１から５２として特定されている。配列番号１〜１０は、特に好適なコネキシン４３のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物である。他のコネキシンに対する他の特に好適なギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が、記載されている。
【０１６０】
本発明は、心血管の疾患、障害、又は状態に対し、対象の治療に適しているか又は適応させた形態で、医薬組成物を含む。本発明は、網膜の疾患、障害、及び状態を含めた眼の疾患、障害、又は状態；ならびに例えば、脈絡膜新血管形成、損傷、漏出、浮腫及び／もしくは炎症という特徴を持つ疾患、障害、及び状態を含めた、血管の損傷又は漏出という特徴を全体的又は部分的に有する、他の眼の疾患、障害、及び状態に対し、対象の治療に適しているか又は適応させた形態で、医薬組成物を含む。
【０１６１】
一実施形態では、本願発明は、コネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤として作用する、コネキシンギャップ結合化合物又はコネキシンヘミチャネル化合物を提供する。一実施形態では、本願発明は、複数回用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤を患者に逐次的に投与することによって、血管新生性の目の障害を治療するための方法を提供する。本願発明の方法は、複数回用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤を、６週間毎、７週間毎、８週間毎、又はそれを超える週毎に１回の頻度で、患者に投与することを含む。
【０１６２】
本願発明の方法は、加齢黄斑変性症、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、網膜中心静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症や、角膜新血管形成などの、血管新生性の目の障害の治療に有用である。
【０１６３】
本願発明は、複数回用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤を、時間をかけて患者に逐次的に投与することを含む方法を提供する。具体的には、本発明の方法は、単回の一次用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤、続いて１回又は複数回の二次用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤、続いて１回又は複数回の三次用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤を、患者に逐次的に投与することを含む。そのため、本願発明の方法によれば、各二次用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤は、すぐ前の用量の後に２週間から４週間投与され、各三次用量は、すぐ前の用量の後に少なくとも８週間投与される。そのような用量投与レジメンの利点とは、それにより、治療コースの多く（すなわち、三次用量）にわたって、治療コース全体を通じて毎月の投与を要した血管新生性の目の障害のための以前の投与レジメンに比べてより頻度の少ない用量投与（例えば、８週間毎に１回）が可能になることである。例えば、ルセンティス（登録商標）（ラニビズマブ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．に関する処方情報を参照されたい。
【０１６４】
表現「血管新生性の目の障害」とは、本明細書に使用される際には、血管の成長もしくは増殖に起因もしくは関連するか、又は血管の漏れに起因する、任意の目の疾患を意味する。本願発明の方法を使用する治療可能な血管新生性の目の障害の非限定的な例としては、加齢黄斑変性症（例えば、ウェット型ＡＭＤ、滲出型ＡＭＤなど）、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ；例えば、ＣＲＶＯに続く黄斑浮腫）、網膜静脈分枝閉塞症（ＢＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、脈絡膜新血管形成（ＣＮＶ；例えば、近視性ＣＮＶ）、虹彩新血管形成、新血管形成緑内障、緑内障の術後線維症、増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）、視神経乳頭新血管形成、角膜新血管形成、網膜新血管形成、硝子体新血管形成、パンヌス、翼状片、血管性網膜症、及び糖尿病性網膜症が挙げられる。
【０１６５】
一実施形態では、疾患、障害、又は状態は、炎症、例えば、血管又は微小血管の炎症に関連する。別の実施形態では、疾患、障害、又は状態は、虚血及び／又は酸化ストレス、例えば、血管又は微小血管の虚血及び／又は酸化ストレスに関連する。別の実施形態では、疾患、障害、又は状態は、浮腫、例えば、血管又は微小血管の損傷又は漏出に関連する浮腫に、関連する。
【０１６６】
一実施形態では、疾患、障害、又は状態は、新生物、すなわち、細胞が分裂するべきよりも多く分裂するか又は死ぬべき際に死なない際に結果として生じる、異常な大きさの組織に関連する。本明細書に使用される際に、新生物とはまた、腫瘍と称され、良性（がんではない）であることも悪性（がん）であることもある。
【０１６７】
ある実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、急性冠閉塞症候群である。この急性冠閉塞症候群は、例えば、ＳＴセグメント上昇型心筋梗塞、非ＳＴセグメント上昇型心筋梗塞、及び不安定狭心症からなる群から選択されることがある。他の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、虚血性心疾患である。他の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、心不全（任意の形態）である。例えば、この心不全は、収縮期又は弛緩期の心不全であり得る。心不全は、左室の収縮期の機能不全の結果生じることがある。心不全はまた、右室梗塞、肺高血圧症、慢性重症三尖弁逆流、又は不整脈源性右室異形成症の結果であることがある。心不全はまた、弛緩期のＬＶ機能不全の結果であることがある。別の実施形態では、心血管性の疾患、障害、又は状態とは、虚血性心疾患である。コネキシン４０、４３、及び４５のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、心血管の疾患、障害、又は状態の治療のために特に有用である。
【０１６８】
一態様では、本発明は、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、又は状態のうち１つ又は複数について対象を予防及び／又は治療するために有用な医薬組成物を含み、対象、そのようなものとしては、非経口の送達の形態及び製剤、ならびに輸液、注射、及び滴下による送達のための形態、ならびに遅延放出型、徐放出型、延長放出型、又は制御放出型の組成物、デバイス、及びマトリックスを含めた他の送達の形態が挙げられ、これらは、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物のみ、又は別の心血管治療剤（複数可）との組合せと、薬学的に許容可能な担体とを含むか、又はそれらから本質的になる。ある好適な実施形態では、本医薬組成物は、輸液によるか又はボーラスとすることを含めて、静脈内投与に用いるために製剤化される。他の投与経路に用いる他の製剤もまた、本発明の範囲内にあり、そのようなものとしては、例えば、経鼻、経肺、バッカル、経直腸、経皮、及び経口の送達に用いる製剤が挙げられる。
【０１６９】
別の態様では、本発明の組成物は、約０．０１から約１００ミリグラム、約１００から約５００ミリグラム、又は約５００から約１０００ミリグラム、又はそれを超える本発明の化合物、例えば、ギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物又は類似体を含み、そのようなものとしては、配列番号１〜５２及び式ＩからＩＩのいずれかによるペプチドのうち１つ又は複数が挙げられる。他の用量は、本明細書に記載されており、少なくとも約１００ナノグラムから及ぶ用量を含み、そのようなものとしては、例えば少なくとも約２００マイクログラム又はミリグラム、６００マイクログラム又はミリグラム、２０００マイクログラム又はミリグラム、６０００マイクログラム又はミリグラム、及び少なくとも約１０，０００マイクログラム又はミリグラムが挙げられる。用量の濃度としては、少なくとも１リットル当たり約０．１モルの濃度が挙げられ、そのようなものとしては、例えば、少なくとも約０．３、１．０、３．０、及び１０．０モル／Ｌが挙げられる。用量の濃度としてはまた、０．１マイクロモル又はミリモル／Ｌ、０．３マイクロモル又はミリモル／Ｌ、１．０マイクロモル又はミリモル／Ｌ、３．０マイクロモル又はミリモル／Ｌ、及び１０．０マイクロモル又はミリモル／Ｌの濃度が挙げられる。用量の濃度は、０．１、０．３、１、３、及び１０から１００ｍｇ／ｍＬに等しいことがあり、投与可能な重量の用量で１〜１０、１０〜２０、２０〜５０、５０〜１００、１００〜５００、及び５００〜１０００ミリグラム／ｋｇ（ｍｇ／ｋｇ）であることがある。また、本発明の中には、０．１から５．０μｇ／ｋｇまで、及び０．１から１０．０ｇ／ｋｇまでに及ぶ他の用量もある。これらの組成物及び量は、単回用量としても複数回用量としても提供されることがある。
【０１７０】
ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物（又はギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む医薬製剤）は、任意の公知の送達系及び／又は投与方法によって患者に投与されることがある。ある実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、眼、眼球内、硝子体内、又は結膜下の注射によって患者に投与される。他の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、局所投与によって、例えば、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含有する点眼剤又は他の液体、ゲル、軟膏、又は流体を介して、患者に投与することができ、目に直接的に適用することができる。他のあり得る投与経路としては、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口が挙げられる。
【０１７１】
本発明はまた、本明細書に参照されるような疾患、障害、又は状態にあるか又はそれが発達するリスクがある対象の、治療の方法を含み、この方法は、治療有効量の本明細書に記載される化合物又は医薬組成物のうち１つ又は複数を、対象に投与することを含む。非限定的な一実施形態では、疾患、障害、又は状態は、血管損傷、血管漏出、浮腫、炎症、虚血及び／又は酸化ストレスに関連する。一実施形態では、疾患、障害、又は状態とは、急性冠閉塞症候群、例えば、ＳＴセグメント上昇型心筋梗塞、非ＳＴセグメント上昇型心筋梗塞、又は不安定狭心症である。別の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、心不全である。他の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、虚血性心疾患である。別の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、安定狭心症である。
【０１７２】
本発明は、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、又は状態にあるか、又はそれが発達するリスクがあるか、又はそれが進行するリスクがある、対象を治療する方法を含み、この方法は、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と、薬学的に許容可能な担体とを含む。一実施形態では、本医薬組成物中のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、配列番号１〜５２から選択される配列を含むか又はそれから本質的になる。別の実施形態では、本医薬組成物中のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、式Ｉ又は式ＩＩから選択される配列を含むか又はそれから本質的になる。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネル遮断又は阻害剤化合物としてはまた、本明細書に記載されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の活性類似体、バリアント、切頭体、及び修飾形態が挙げられる。
【０１７３】
別の態様では、本発明は、対象でギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの活性を減少させることによって、対象で炎症、虚血、及び／又は酸化ストレスに関連する心血管又は眼の疾患、障害、又は状態を治療及び／又は予防する方法を含む。これは例えば、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む組成物を対象に投与することによって達成されることがあり、ここで例えば、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、配列番号１〜５２から選択される配列か、又は式ＩからＩＩのいずれかによるペプチドを含むかもしくはそれから本質的になるペプチドか、又は例えば記載されるようなそれらの類似体、バリアント、切頭体、もしくは修飾体を、含むか又はそれから本質的になる。ある実施形態では、約０．０１から約１００、５００、又は１０００ナノグラム又はミリグラム又はそれを超える（例えば、少なくとも約１００ナノグラムもしくはミリグラム、少なくとも約５００ナノグラムもしくはミリグラム、又は少なくとも約１０００ナノグラムもしくはミリグラム）のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物、又は類似体は、例えば、単回用量もしくは分割用量で、又は継続的もしくは周期的な放出によって、１日当たり投与される。
【０１７４】
一実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、単回用量で投与される。別の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、２回以上の用量で投与される。さらに別の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、ある期間、例えばある所定の期間にわたって、継続的に投与又は放出される。さらに別の実施形態では、心血管治療剤又は眼薬（例えば、ＶＥＧＦアンタゴニスト）は、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と併せて投与又は共投与される。そのような他の心血管治療剤としては、硝酸塩、β遮断剤、カルシウムチャネル遮断剤（具体的には安定狭心症又は不安定狭心症に用いられるものであるが、β遮断剤の場合では心不全にも用いられる）、利尿剤、血管拡張剤、陽性変力剤、ＡＣＥ阻害剤、及びアルドステロンアンタゴニスト、例えば、スピロノラクトン（具体的には心不全に用いる）、血液希釈治療薬（例えば、アスピリン、ヘパリン、ワルファリン）、及びニトログリセリン（具体的にはＭＩに用いる）が挙げられる。
【０１７５】
本発明はまた、血管形成術をそれを必要とする患者に実施するための方法を提供し、この方法は、血管形成術の処置の間、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、患者に投与することを含む。さらに別の一実施形態では、この方法は、血管形成術の処置の前に、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、患者に投与することを含むか又はさらに含む。さらに別の一実施形態では、この方法は、血管形成術の処置に続いて、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、患者に投与することを含むか又はさらに含む。他の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、血管形成術の処置の前に、間に、及び／又は後に、任意の組合せで患者に投与される。
【０１７６】
また、提供されるのは、最初の心臓窮迫の症状に続いて血栓溶解療法が有効となる時間を増すための方法であり、その方法は、以下の症状：１５分よりも長く続く胸痛、安静時の胸痛、最低限の労作後の胸痛、悪心、息切れ、動悸、又は眩暈のうち、１つ又は複数の発症の後に、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を投与することを含む。
【０１７７】
別の態様では、治療される対象は、哺乳動物であり、好ましくはヒトである。他の哺乳動物としては、家庭内及び家畜用の動物、ならびに動物園用、競技用、又は愛玩用の動物、例えばイヌ、ウマや、ネコなどが挙げられる。
【０１７８】
本発明はまた、本明細書に記載される化合物又は医薬組成物のうち１つ又は複数を含有する、パッケージ材を含む製造品を含む。次いで発明はまた、本明細書に言及されるような疾患、障害、又は状態を予防及び／又は治療するために、本明細書に記載される化合物又は医薬組成物のうち１つ又は複数を、対象中又はその上での使用に用いる指示書と共に含有するパッケージ材を含む、製造品を含む。一実施形態では、血管性の疾患、障害、又は状態は、炎症、血管新生、及び／又は血管の漏出、虚血及び／又は酸化ストレスに関連する指示書に参照される。別の実施形態では、指示書に参照される疾患、障害、又は状態は、心血管性の疾患、障害、又は状態である。一実施形態では、指示書に参照される疾患、障害、又は状態は、血管新生性の目の障害である。指示書は、電子化されている、及び／又はウェブサイトに関連付けられていることがある。
【０１７９】
本発明はまた、本明細書に参照される疾患、障害、又は状態のうち１つ又は複数を予防又は治療するための医薬を調製する方法を含み、この方法は、本明細書に参照される治療有効量の化合物、例えば、ギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物又は類似体又はバリアントと、薬学的に許容可能な担体とをまとめ合わせることを含む。一実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、配列番号１から５２より選択される配列を含む。別の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、式Ｉ〜ＩＩのうち１つ又は複数より選択される化合物である。一実施形態では、上記医薬は、非経口投与に用いるために製剤化される。一実施形態では、上記医薬は、眼の投与に用いるために製剤化される。別の実施形態では、上記医薬は、局所投与に用いるために製剤化される。別の実施形態では、上記医薬は、経口投与に用いるために製剤化される。
【０１８０】
本明細書に記載されるような１つ又は複数の化合物又は医薬組成物を用いる、本明細書に提供されるような対象の治療は、それらの同時の、別々の、逐次的な、又は持続的な投与を含むことがある。
【０１８１】
本明細書に参照又は記載される疾患、障害、又は状態を予防及び／又は治療するのに有用な医薬組成物はまた、組合せ調製物の形態で、例えば、２種以上のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物、類似体、又はバリアントの混和物として、提供される。
【０１８２】
用語「組合せ調製物」は、上記に定義されたような組合せパートナーが独立して、又は量の区別された組合せパートナー（ａ）及び（ｂ）を用いて異なる既定の組合せを使用することによって、すなわち同時に、別々に、又は逐次的に、用量投与することができるという意味においては、化合物の物理的な組合せだけではなく、「パーツのキット」として提供される化合物をも含む。次いで、キットのパーツは、例えば同時に、又は時系列で時差をつけて、その場合はパーツのキットの任意のパーツについて等しいかもしくは異なる時間間隔でかつ異なる時点で、投与することができる。
【０１８３】
別の態様では、本発明は、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物、又は類似体、又はバリアントを、それのみで又は別の治療剤との組合せで、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、又は状態にあるか又はそれが発達するリスクがある対象に投与するための方法を含み、上記剤は、遅延放出調製物、徐放出調製物、延長放出調製物、制御放出調製物に、及び／又は複効調製物に、製剤化される。
【０１８４】
ある他の態様では、本発明はまた、前記疾患、障害、及び状態を患っているか又はそのリスクがある対象を治療するために、そのような組成物を使用する方法に関する。
【０１８５】
他の態様では、本発明は、血管性の損傷又は漏出という特徴を全体的又は部分的に有する任意の疾患、障害、及び／又は状態であるか、又はそうある疑いがあるか、又はそうある傾向があるか、又はそのリスクがある対象を、予防及び／又は治療するための方法及び組成物を含む。
【０１８６】
一態様によれば、本願発明は、心血管又は眼の障害の症状を停止もしくは減少させるか又はそれからの解放をもたらす方法に向けられる。
【０１８７】
本発明は、本明細書に記載されるような１つ又は複数の剤形を含有するパッケージ材を含む製造品を含み、そこでは、パッケージ材は、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、及び／又は状態のいずれかにあるか、又はそうある疑いがあるか、又はそうある傾向がある対象に、その剤形を使用できることを標示する、ラベルを有する。
【０１８８】
本発明は、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物（複数可）を、心血管又は眼の障害を予防及び／又は治療するのに有用な剤形の製造に使用するための方法を含む。そのような剤形としては、例えば、経口送達の形態及び製剤、ならびに他の送達の形態が挙げられ、そのようなものとしては、例えば、輸液、注射、及び滴下による送達に用いられる形態、ならびに徐放出、延長放出、及び遅延放出の組成物、デポー、及びマトリックスを含む組成物及びデバイスが挙げられる。そのような剤形としては、本明細書に開示されるような対象の治療に用いられるものが挙げられる。
【０１８９】
また、本発明の範囲内には、生物薬剤特性を改善するために修飾されている、本発明の化合物がある。ある実施形態では、本発明の化合物は、例えば、安定性の増加、タンパク質分解による不活性化に対する耐性の増加、存在しない免疫原性への減少、血清中半減期の改変及び治療半減期の改変を含めた循環寿命の増加、ならびに毒性の低下を付与するために、修飾される。本発明の化合物を修飾することができる方法としては、例えば、ＰＥＧ化によるもの、化学的誘導体化によるもの、及びペプチド又は脂質との融合又はコンジュゲーションによるものが挙げられる。修飾化合物としては、修飾されたギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が挙げられる。
【０１９０】
この発明は、本発明の治療ペプチドのプロドラッグ形態を想定している。「プロドラッグ」とは、可逆性の化学修飾を含む治療ペプチドの修飾形態であり、この修飾は、患者に送達された後、生理的条件下で酵素触媒反応又は非酵素触媒反応のどちらかを通じて、確実に除去され、プロドラッグを親ペプチドに変換することができる。そのような改変は、親の治療ペプチドの薬力学特性を保持しつつ、例えば、化学安定性を増強し、水溶性を変え、生物学的半減期を延長し、治療指数を広げ、薬力学を改善し、及び／又は生物学的利用能を改善することができる。そのような改変はまた、所望の効果を発揮できる生物学的な区画に到達した後に、親ペプチドが放出されるようにすることができる。「プロドラッグ」とは、親ペプチドのある限定的な特性を変更又は排除するために一時的な方式で使用される１つ又は複数の特化された非毒性の保護基を、含むことがある化合物であり、この保護基（複数可）は、酵素的又は化学的切断によって除去することができる。任意の適した保護基（複数可）を採用して、本発明のペプチドプロドラッグを生成することができる。そのような特化された修飾としては、親ペプチドのアミノ末端及び／又はカルボキシ末端のどちらか又は両方に、１つ又は複数のアミノ酸残基を含むことが挙げられる。追加のＮ又はＣ末端のアミノ酸又はアミノ酸配列のｉｎ  ｖｉｖｏでの効率的な除去を可能にする切断部位が、好ましくはそのようなプロドラッグ分子に含まれる。１つ又は複数のＮ及び／又はＣ末端アミノ酸残基の付加以外の修飾も想定される。例えば、プロドラッグの変換のためのジケトピペラジン及びジケトモルホリン（ＤＫＰ及びＤＭＰ）ストラテジーを使用することもあり（例えば、Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ−Ｂａｄｓｅｄ  Ｐｒｏｄｒｕｇ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｅｄ．Ｄｅ，Ａｒｎａｂ（２０１２）を参照）、その場合、プロドラッグは、酵素的切断を何も必要とすることなく、化合物固有の化学不安定性により駆動される生理的条件で、徐々に親薬剤に変換する。安定性を向上させるため、本発明の親ペプチドを、Ｎ末端及び／又はＣ末端アミノ酸を生体可逆的にマスキングすることによって、エクソペプチダーゼ媒介性の加水分解に対して保護することができる。
【０１９１】
本発明のプロドラッグの例は、親ペプチドにおいて、１つ又は複数の追加のアミノ酸残基が親ペプチドのＮ末端及び／又はＣ末端に添加されているものである。本発明の化合物としてはまた、本発明の剤のプロドラッグ形態も挙げられる。例えば、プロドラッグ形態では、１から１６アミノ酸残基が、例えば、配列番号１〜１０を含むペプチド又は式Ｉ〜ＩＶのうちの任意のペプチドのＮ末端に添加されている。
【０１９２】
本発明によるプロドラッグのさらに別の例としては、親ペプチドのアミノ基が、アシル化、アルキル化、リン酸化、エイコサノイル化、アラニル化、ペンチルアミノカルボキシル化、（５−メチル−２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル）メトキシカルボキシル化、テトラヒドロフラニル化、ピロリジルメチル化、ピバロイルオキシメチル化、又はｔｅｒｔ−ブチル化などをされているもの；親ペプチドのヒドロキシ基が、アシル化、アルキル化、リン酸化、アセチル化、パルミトイル化、プロパノイル化、ピバノイル化、コハク酸化、フマル酸化、アラニル化、又はジメチルアミノメチルカルボキシル化などをされている化合物；及び親ペプチドのカルボキシ基が、エステル化又はアミド化（例えば、エチルエステル化、フェニルエステル化、カルボキシメチルエステル化、ジメチルアミノメチルエステル化、ピバロイルオキシメチルエステル化、エトキシカルボニルオキシエチルエステル化、フタリジルエステル化、（５−メチル−２−エクソ−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチルエステル化、シクロヘキシルオキシカルボニルエチルエステル化、又はメチルアミド化など）などをされている化合物が挙げられる。
【０１９３】
他のプロドラッグ形態も想定され、そのようなものとしては、親ペプチドのＮ末端又はＣ末端に配置されていない１つ又は複数のアミノ酸残基の化学修飾を含有するものが挙げられる。当業者が認識することになるように、生理条件下で除去して本発明の化合物の医薬的に活性な形態を産生することができる、任意の適した化学修飾を利用することができる。
【０１９４】
他の実施形態としては、本発明の化合物のペプチジオ模倣体（ｐｅｐｔｉｄｉｏｍｉｍｅｔｉｃ）が挙げられる。
【０１９５】
ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の心保護活性の説明は、実施例に示されている。
【０１９６】
ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物、ならびに修飾されたギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の合成は、当技術分野に公知の方法を用いて実施される。配列番号１〜５２などのペプチドである本発明の化合物は、，固相化学ペプチド合成によって作製することができる。融合ペプチドなどの他の化合物も、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ＆  Ｍａｎｉａｉｔｉｓに記載される標準的な手順を用いて、従来の組換え手法によって作製することができる。本発明のペプチド及び他の化合物は、化学修飾されることがある。これによって、ペプチダーゼ及び他の酵素に対する耐性が増強されることや、腎臓によるクリアランスが制限されることなどがある。そのような修飾化合物を調製する方法は、当技術分野に公知である。
【０１９７】
使用されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の厳密な配列は、心血管障害の症状又は作用のうち１つ又は複数を寛解させる能力に依存するものとなる。そのような作用を決定するための手段は、実施例に示されている。
【０１９８】
本発明の医薬組成物の調製のための適したギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物としては、配列番号１〜５２が挙げられる。本発明の医薬組成物の調製のための他の適したギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物としては、式Ｉ〜ＩＶのうちのペプチドが挙げられる。医薬組成物の調製のための他の適したギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、本明細書に記載されており、例えば、上述の化合物の類似体、バリエーション、切頭体、及び修飾体（融合体を含む）が挙げられる。
【０１９９】
ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネル遮断剤化合物又は阻害剤化合物の活性は、任意の便利な従来のアプローチによって、例えば実施例に記載されるように、それらの配列及び所望の活性という観点から選択することができる。
治療剤
【０２００】
本明細書に記載又は参照される疾患、障害、又は状態、例えば、急性冠閉塞症候群又は血管新生の眼の障害、ならびに炎症、虚血、及び／又は酸化ストレスに関与する関連の疾患、障害、及び状態の予防及び／又は治療のための、本発明の組成物及び方法は、また、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を順番に、又は（例えば、物理的な組合せで、組合せ調製物として提供される）１つ又は複数の他の治療剤との組合せで、投与することを含む。心血管治療剤としては、硝酸塩、β遮断剤、カルシウムチャネル遮断剤（具体的には安定狭心症又は不安定狭心症に用いるものであるが、β遮断剤の場合では心不全にも用いる）、利尿剤、血管拡張剤、陽性変力剤、ＡＣＥ阻害剤、及びアルドステロンアンタゴニスト、例えば、スピロノラクトン（具体的には心不全に用いる）、血液希釈治療薬（例えば、アスピリン、ヘパリン、ワルファリン）、及びニトログリセリン（具体的にはＭＩに用いる）が挙げられる。眼の治療剤としては、抗ＶＥＧＦ化合物が挙げられる。
【０２０１】
本明細書に記載されるような１つ又は複数の化合物又は医薬組成物を用いる、本明細書に示されるような対象の治療は、それらの緊急の又は持続的な投与及び、組合せの場合には、本明細書にさらに記載されるようにそれらの同時の、別々の、又は逐次的な投与を含むことがある。
【０２０２】
本発明の剤は、本明細書に述べられている疾患、障害、又は状態のいずれかに罹っている対象など、治療を必要とする対象に投与されることがある。そうして、対象の状態を改善することができる。この剤を医薬の製造に使用して、本明細書に述べられている疾患、障害、又は状態のいずれかを治療することがある。このように、本発明に従えば、心血管障害を治療できる製剤が提供される。
【０２０３】
本発明の剤は、急性冠閉塞症候群又は本明細書に述べられている疾患又は状態のいずれかに罹っている対象など、治療を必要とする対象に投与されることがある。そうして、対象の状態を改善することができる。それゆえ、この化合物を療法による対象の身体の治療に使用することがある。それらを医薬の製造に使用して、本明細書に述べられている疾患、障害、又は状態のいずれかを治療することがある。
剤形及び製剤及び投与
【０２０４】
本発明の化合物は、単離されているか又は実質的にもしくは本質的に純粋な形態で存在することがある。生成物は、その生成物の意図されている目的に干渉することのない担体又は希釈剤と混合されることがあり、それでもなお単離されているか又は実質的に純粋であるものとみなされることを理解されたい。本発明の生成物はまた、実質的又は本質的に精製された形態であることがあり、好ましくは、この形態は、約８０％、８５％、又は９０％、例えば少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の化合物又は乾燥質量の調製物を含むか、又はそれから本質的になる。
【０２０５】
意図する投与経路に応じて、本発明の医薬生成物、医薬組成物、組合せ調製物、及び医薬は、例えば、溶液、懸濁液、滴下液、持続放出製剤、又は粉末の形態をとることがあり、典型的には、約０．ｌ％〜９５％の活性成分（複数可）、好ましくは約０．２％〜７０％を含有する。他の適した製剤としては、注射ベースの製剤及び輸液ベースの製剤が挙げられる。他の有用な製剤としては、例えば、制御放出調製物、徐放出調製物、又は遅延放出調製物を含めた、持続放出調製物が挙げられる。
【０２０６】
本発明の態様としては、１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含有する、制御型の又は他の用量、剤形、製剤、組成物、及び／又はデバイスが挙げられる。本願発明は、例えば、少なくとも経口投与、経皮送達、局所適用、眼の送達、坐剤による送達、経粘膜送達、注射（皮下投与；真皮下投与；筋肉内投与；デポー投与；及びボーラスによる送達、徐静脈内注射、静脈内点滴を含めた静脈内投与を含めて）、輸液デバイス（植込み型の輸液デバイスを含めて、能動的及び受動的の両方で）、吸入又はガス注入による投与、バッカル投与、及び舌下投与のための、用量及び剤形を含む。特に静脈内投与のための本明細書に記載される剤形、組成物、製剤、又はデバイスのいずれも、本明細書に想定されるか又は通例採用される他の経路のいずれかによる投与のための剤形、組成物、製剤、又はデバイスに適用可能であるか又は望ましい場合に、利用されることがあることを認識されたい。例えば、１つ又は複数の用量が、経口投与に適した剤形に関し記載されている特長又は組成物を組み込むことがある非経口投与に適した剤形を用いて、非経口的にもたらされ得るか、又は、持続的な剤形、例えば調節放出、延長放出、遅延放出、徐放出や、複効などの剤形で送達され得る。
【０２０７】
好ましくは本発明のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、薬学的に許容可能な担体又は希釈剤と組み合わされて医薬組成物を生産する。適した担体及び希釈剤としては、等張生理食塩水溶液、例えばリン酸緩衝生理食塩水が挙げられる。また、適した希釈剤及び賦形剤としては、例えば、水、生理食塩水、デキストロ―ス、グリセローなど、及びそれらの組合せが挙げられる。さらに、所望があれば、湿潤剤又は乳化剤、安定化剤又はｐＨ緩衝剤などの物質も存在することがある。
【０２０８】
用語「薬学的に許容可能な担体」とは、採用された投薬量及び濃度でそれに曝露されている細胞又は哺乳動物に非毒性である、任意の有用な担体、賦形剤、又は安定化剤を指し、組成物を受けている個体に有害な抗体の産生を誘導しない医薬担体が挙げられる。適した担体は、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸や、アミノ酸コポリマーなど、大きくかつ徐々に代謝される巨大分子とすることができる。多くの場合、生理的に許容可能な担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。他の生理的に許容可能な担体の例としては、リン酸、クエン酸や、他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基の）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンや、イムノグロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンや、リジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、又はデキストリンを含む単糖、二糖、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールやソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；ならびに／又はＴｗｅｅｎ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）や、Ｐｌｕｒｏｎｉｃなどの非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【０２０９】
薬学的に許容可能な塩もまた、存在することができ、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩などの鉱酸塩；及び酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩などの有機酸の塩などである。
【０２１０】
適した担体材料としては、クリーム、ローション、ゲル、エマルジョン、又は局所投与用の塗料に用いる基剤として通例使用される、任意の担体又は媒体が挙げられる。例としては、乳化剤、炭化水素基剤を含めた不活性担体、乳化基剤、非毒性溶媒、又は水溶性基剤が挙げられる。特に適した例としては、プルロニック、ＨＰＭＣ、ＣＭＣ、及び他のセルロースベースの成分、ラノリン、ハードパラフィン、液体パラフィン、ソフトイエローパラフィン、又はソフトホワイトパラフィン、白蜜蝋、黄蜜蝋、セトステアリルアルコール、セチルアルコール、ジメチコン、乳化ワックス、ミリスチン酸イソプロピル、微結晶性ワックス、オレイルアルコール、及びステアリルアルコールが挙げられる。
【０２１１】
カゼイン、ゼラチン、アルブミン、にかわ、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、又はポリビニルアルコールなどの補助剤もまた、本発明の製剤に含まれることがある。
【０２１２】
本発明の剤形、製剤、デバイス、及び／又は組成物は、生物学的利用能を最適化するように、及び長期間を含めて血漿濃度を治療範囲内に維持するように、製剤化されることがある。持続送達調製物、例えば、制御送達調製物もまた、例えば、作用部位で薬剤濃度を最適化し、薬物治療下にある期間又はその間の期間を最小にする。
【０２１３】
本発明で有用な剤形、デバイス、及び／又は組成物は、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の低用量での制御及び／又は低用量での長期持続性のｉｎ  ｖｉｖｏ放出のために、１日１回投与を含めた定期的な投与に提供されることがある。
【０２１４】
経口投与に適した剤形の例としては、以下に限定されないが、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物をもたらすことのできる錠剤、カプセル、菱形剤、もしくはそのような形態、又は任意の液体形態、例えばシロップ、水溶液、エマルジョンなどが挙げられる。
【０２１５】
経皮投与に適した剤形の例としては、以下に限定されないが、経皮パッチ、経皮絆創膏などが挙げられる。本発明で有用な化合物及び製剤の局所投与に適した剤形の例は、媒介物を介して直接的に皮膚に適用するとしないとに関わらず、任意のローション、スティック、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ゲルなどである。
【０２１６】
本発明で有用な化合物及び製剤の坐剤投与に適した剤形の例としては、身体の開口部内へ挿入される任意の固体剤形、具体的には経直腸で、経膣で、及び経尿道で挿入されるものが挙げられる。
【０２１７】
本発明で有用な化合物及び製剤の経粘膜送達に適した剤形の例としては、浣腸用の坐剤溶液、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、噴霧溶液、粉末、及び活性成分に加えて適切なものとして当技術分野に公知のそのような担体を含有する同様の製剤が挙げられる。
【０２１８】
本発明で有用な化合物及び製剤の注射に適した形態の投薬の例としては、静脈内注射、皮下、真皮下、及び筋肉内の投与、又は経口投与による、単回投与や多回投与などのボーラスによる送達が挙げられる。
【０２１９】
本発明で有用な化合物及び製剤のデポー投与に適した剤形の例としては、活性剤のペレットもしくは小円柱又は固体形態が挙げられ、ここで、この活性剤は、  生分解性ポリマー、マイクロエマルジョン、リポソームのマトリックス中に封入されているか、又はマイクロカプセル化されている。
【０２２０】
本発明で有用な化合物及び製剤に用いる輸液デバイスの例としては、１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物ならびに／又は複合体化前のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、所望の回数の用量又は定常状態の投与に用いるための所望の量で含有する輸液ポンプが挙げられ、植込み型の薬剤ポンプが挙げられる。
【０２２１】
本発明で有用な化合物及び製剤に用いる植込み型の輸液デバイスの例としては、活性剤が生分解性ポリマー又は合成ポリマー、例えばシリコーン、シリコーンラバー、サイラスティックや、同様のポリマーなどの内部に被包化されているか、又はそれを通じて分散される、任意の固体形態が挙げられる。
【０２２２】
本発明で有用な化合物及び製剤の吸入又はガス注入に適した剤形の例としては、薬学的に許容可能な水性溶媒もしくは有機溶媒中の溶液及び／もしくは懸濁液、又はその混合物及び／又は粉末を含む組成物が挙げられる。
【０２２３】
本発明で有用な化合物及び製剤のバッカル投与に適した剤形の例としては、菱形剤、錠剤など、薬学的に許容可能な水性溶媒もしくは有機溶媒中の溶液及び／もしくは懸濁液、又はその混合物及び／又は粉末を含む組成物が挙げられる。
【０２２４】
本発明で有用な化合物及び製剤の舌下投与に適した剤形の例としては、菱形剤、錠剤など、薬学的に許容可能な水性溶媒もしくは有機溶媒中の溶液及び／もしくは懸濁液、又はその混合物及び／又は粉末を含む組成物が挙げられる。
【０２２５】
本発明で有用な化合物及び製剤の送達に用いる制御薬製剤の例は、例えば、Ｓｗｅｅｔｍａｎ，Ｓ．Ｃ．（Ｅｄ．）．Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ．Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，３３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｈｉｃａｇｏ，２００２，２４８３  ｐｐ．；Ａｕｌｔｏｎ，Ｍ．Ｅ．（Ｅｄ．）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ．Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍ  Ｄｅｓｉｇｎ．Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ，２０００，７３４  ｐｐ．；及びＡｎｓｅｌ，Ｈ．Ｃ．，Ａｌｌｅｎ，Ｌ．Ｖ．ａｎｄ  Ｐｏｐｏｖｉｃｈ，Ｎ．Ｇ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｒｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  １９９９，６７６  ｐｐに見出される。  薬剤送達系の製造で採用される賦形剤は、当業者に公知の様々な刊行物に記載され、そのようなものとしては、例えば、Ｋｉｂｂｅ，Ｅ．Ｈ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ  Ｅｄ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，２０００，６６５  ｐｐが挙げられる。ＵＳＰもまた、錠剤又はカプセルとして製剤化されたものを含めて、調節放出経口剤形の例を示している。例えば、延長放出及び遅延放出の錠剤及びカプセルの薬剤放出能を決定するための特殊な試験も記載する、Ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  ２３／Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ  １８，Ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ  ＭＤ，１９９５（以降「ＵＳＰ」）を参照されたい。延長放出剤形の分析に関するさらに別のガイダンスがＦＤＡによって示されている。Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ：Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｒａｌ  ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍｓ：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ／ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ．、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ：Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（１９９７）を参照されたい。
【０２２６】
本発明の方法で有用な剤形のさらに別の例としては、以下に限定されないが、遅延放出（ＤＲ）形態；延長作用（ＰＡ）形態；制御放出（ＣＲ）形態；延長放出（ＥＲ）形態；時限放出（ＴＲ）形態；及び長期作用（ＬＡ）形態を含む調節放出（ＭＲ）剤形が挙げられる。大抵の場合、これらの用語は、経口的に投与される剤形を記載するのに使用されるが、これらの用語は、本明細書に記載される剤形、製剤、組成物、及び／又はデバイスのいずれにも適用可能であることがある。これらの製剤は、薬剤投与後の何回かにわたる総薬剤の遅延放出、及び／又は投与後の断続的な小分割量での薬剤放出、及び／又は送達系によって管理された制御速度での薬剤の徐放出、及び／又は不変の一定速度での薬剤放出、及び／又は通常の薬剤よりも大幅に長い期間にわたる薬剤放出に、影響を与える。
【０２２７】
本発明の調節放出剤形としては、従来の形態又は即時放出形態によってもたらされない治療目的又は利便目的を達成するように設計された時間、コース、及び／又は場所に基づく薬剤放出の特長を有する、剤形が挙げられる。例えば、Ｂｏｇｎｅｒ，Ｒ．Ｈ．Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔ  ２２（Ｓｕｐｐｌ．）：３−１２（１９９７）；Ｓｃａｌｅ−ｕｐ  ｏｆ  ｏｒａｌ  ｅｘｔｅｎｄｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ  ｓｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ：ｐａｒｔ  Ｉ，ａｎ  ｏｖｅｒｖｉｅｗ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  ２：２３−２７（１９８５）を参照されたい。本発明の延長放出剤形としては、例えば、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって規定されるように、用量投与の頻度を従来の剤形、例えば溶液又は即時放出剤形により提供されるものにまで低減することを可能にする剤形が挙げられる。例えば、上記Ｂｏｇｎｅｒ，Ｒ．Ｈ．（１９９７）を参照されたい。本発明の複効剤形としては、例えば、２種の単回用量の薬物、すなわち即時放出用の１種と遅延放出用の第２の種とを含有する形態が挙げられる。２層の錠剤は、例えば、即時放出用の１層の薬剤を、後に２次用量として又は延長放出の方式のどちらかで薬剤を放出するように設計された第２層と併せて用いて、調製されることがある。本発明の標的放出剤形としては、例えば、薬剤放出を促進し、かつ吸収のため又は薬剤作用のために身体の領域、組織、又は部位で薬剤を単離又は濃縮することに向けられている、製剤が挙げられる。
【０２２８】
また、本発明で有用なのは、１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物ならびに／又は複合体化前のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物を含有する被覆されたビーズ、顆粒、又はミクロスフェアであり、それらを使用して、被覆されたビーズ、顆粒、又はミクロスフェア内に薬剤を組み込むことによる、１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物ならびに／又は複合体化前のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物の調節放出を達成することがある。そのような系では、ギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物ならびに／又は複合体化前のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物は、ビーズ、ペレット、顆粒、又は他の粒子系の上に散布されている。Ａｎｓｅｌ，Ｈ．Ｃ．，Ａｌｌｅｎ，Ｌ．Ｖ．ａｎｄ  Ｐｏｐｏｖｉｃｈ，Ｎ．Ｇ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  １９９９，ｐ．２３２を参照されたい。
【０２２９】
薬剤送達に適したミクロスフェアの製造のための方法が記載されている。例えば、Ａｒｓｈａｄｙ，Ｒ．Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｅｎｇ  Ｓｃｉ  ３０：１７４６−１７５８（１９８９）を参照されたい；また、Ａｒｓｈａｄｙ，Ｒ．，Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｅｎｇ  Ｓｃｉ  ３０：９０５−９１４（１９９０）を参照されたい；また、Ａｒｓｈａｄｙ  Ｒ．，ポリマー  Ｅｎｇ  Ｓｃｉ  ３０：９１５−９２４（１９９０）を参照されたい。様々な被覆系が市販されている。例えば、Ａｑｕａｃｏａｔ（商標）（ＦＭＣ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ）及びＳｕｒｅｒｅｌｅａｓｅ（商標）（Ｃｏｌｏｒｃｏｎ）；Ａｑｕａｃｏａｔ  ａｑｕｅｏｕｓ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：ＦＭＣ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，１９９１；Ｓｕｒｅｒｅｌｅａｓｅ  ａｑｕｅｏｕｓ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｃｏａｔｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ．Ｗｅｓｔ  Ｐｏｉｎｔ，ＰＡ：Ｃｏｌｏｒｃｏｎ，１９９０；Ｂｕｔｌｅｒ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｔｅｃｈ  ２２：１２２−１３８（１９９８）；Ｙａｚｉｃｉ，Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ  Ｄｅｖ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  １：１７５−１８３（１９９６）である。
【０２３０】
使用される被覆の厚さ及び被覆材のタイプのバリエーションは、体液がその被覆を透過してギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を溶解することが可能な速度に対し影響を及ぼす。一般に、被覆が厚いほど、透過に対する耐性がいっそう大きく、かつギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の放出及び溶解がいっそう遅いものとなる。Ｍａｄａｎ，Ｐ．Ｌ．Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔ  １５：３９−５０（１９９０）を参照されたい。これによって、様々な所望の持続放出速度又は延長放出速度、及び胃腸管の所望のセグメントへの被覆ビーズのターゲティングがもたらされる。水不溶性の放出緩徐化中間層（複数可）に使用できる（ペレット、スフェロイド、又は錠剤のコアに適用される）フィルム形成ポリマーの例としては、エチルセルロース、ポリ酢酸ビニル、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＳ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＬなどが挙げられる［Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＳ及びＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＬのそれぞれは、アンモニオメタクリレートコポリマーである。放出速度は、ラクトース、マンニトール、ソルビトールなどの適した水溶性の孔形成剤を中に組み込むことによるだけではなく、適用される被覆層の厚さによっても、制御することができる。マルチ錠剤、すなわち小さなスフェロイド状の圧縮されたミニ錠剤を含む錠剤が、製剤化されることがあり、このミニ錠剤は、３から４ｍｍの間の径を有することがあり、ゼラチンカプセルシェル中に配して、所望のパターンのギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の放出をもたらすことができる。各カプセルは、８〜１０個のミニ錠剤を含有することがあり、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の即時放出のために被覆されていないものもあれば、延長放出のために被覆されているものもある。．
【０２３１】
ヒト及び他の哺乳動物への経口投与に適した、１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の調節放出剤形を生成するために、数多くの方法が採用されることがある。調節放出型の薬剤送達を達成するのに利用できる２つの基本的な機構としては、薬剤及び賦形剤の溶解又は拡散の変更が挙げられる。このコンテクストの中では、例えば、４つの過程が、同時に又は連続的にのどちらかで採用されることがある。これらは以下の通りである。（ｉ）デバイスの水和（例えば、マトリックスの膨張）；（ｉｉ）デバイス内への水の拡散；（ｉｉｉ）薬剤の制御溶解又は遅延溶解；及び（ｉｖ）デバイス外に溶解又は可溶化された薬剤の制御拡散又は遅延拡散。
【０２３２】
様々な投薬量の値を策定するために、細胞培養アッセイ及び動物試験を使用することができる。そのような化合物の投薬量は、好ましくは、少なくとも５０％の集団に治療的に有効であり、かつこのレベルでは毒性が殆ど又は全くない、用量内にある。
【０２３３】
本発明の方法及び組成物に採用されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物のそれぞれの有効な投薬量は、複数の要因に応じて変わることがあり、そのような要因としては、採用される特定のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物（複数可）；存在するのであれば心血管の治療の組合せのパートナー；投与様式；投与頻度；治療されている状態；治療されている状態の重症度；投与経路；治療される患者の部分集団の要求又は個々の患者の要求であって、その患者に特有の年齢、性別、体重、関連する医学的状態に起因し得る要求が挙げられる。
【０２３４】
適した用量は、約０．００１から約１までもしくは約１０ｍｇ／ｋｇ体重まで、例えば約０．０１から約０．５ｍｇ／ｋｇ体重までなどであることがある。しかし、適した用量は、約０．００１から約０．１ｍｇ／ｋｇ体重まで、例えば約０．０１から約０．０５ｍｇ／ｋｇ体重までなどであることがある。用量約１から１００、１００〜２００、２００〜３００、３００〜４００、及び４００〜５００ミリグラムは適切であり、約５００〜７５０マイクログラム及び約７５０〜１０００マイクログラムの用量も同様である。他の有用な用量としては、用量当たり約３００から約１０００ピコモルまで、及び用量当たり約０．０５から約０．２ナノモルまでが挙げられる。さらに他の用量は、以下の特許請求の範囲内にある。
【０２３５】
例えば、ある実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤又は阻害剤の化合物組成物は、約０．０１ナノモル（ｍＭ）又は０．０５ｎＭから約２００ｎＭの終濃度で投与されることがある。好ましくは、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤又は阻害剤の化合物組成物は、約０．１ｎＭから約１５０ｎＭの終濃度で投与され、さらに好ましくは、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤又は阻害剤の化合物組成物は、約１ｎＭから約１００ｎＭの終濃度で適用され、さらに好ましくは、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤又は阻害剤の化合物組成物は、約１０〜２０ｎＭから約１００〜１５０ｎＭの終濃度で投与される。さらに、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の用量としては、例えば、約０．１〜１、１〜２、２〜３、３〜４、又は４〜５ミリグラム（ｍｇ）、約５から約１０ｍｇまで、約１０から約１５ｍｇまで、約１５から約２０ｍｇまで、約２０から約３０ｍｇまで、約３０から約４０ｍｇまで、約４０から約５０ｍｇまで、約５０から約７５ｍｇまで、約７５から約１００ｍｇまで、約１００ｍｇから約２５０ｍｇまで、及び２５０ｍｇから約５００ｍｇまでが挙げられる。また、上記に言及されるように、５００から約１０００ミリグラム以上までの用量又は提供される。他の用量としては、少なくとも約１００ナノグラムから及ぶ用量を含み、そのようなものとしては、例えば少なくとも約２００ナノグラム、６００ナノグラム、２０００ナノグラム、６０００ナノグラム、及び少なくとも約１０，０００ナノグラム以上が挙げられる。用量の濃度としては、少なくとも１リットル当たり約０．１モルの濃度が挙げられ、そのようなものとしては、例えば、少なくとも約０．３、１．０、３．０、及び１０．０ナノモル／Ｌが挙げられる。用量の濃度としてはまた、０．１ナノモル／Ｌ、０．３ナノモル／Ｌ、１．０ナノモル／Ｌ、３．０ナノモル／Ｌ、及び１０．０ナノモル／Ｌの濃度が挙げられる。これらの用量の濃度は、０．１、０．３、１、３、及び１１μｇ／Ｌに等しく、投与可能な重量の用量で０．４、１．０、４．０、１０、及び３９マイクログラム／ｋｇ（μｇ／ｋｇ）である。また、本発明内には、０．１から５．０μｇ／ｋｇまで、及び０．１から１０．０μｇ／ｋｇまでに及ぶ他の用量もある。さらに、約０．４、１．０、４．０、１０、及び３９μｇ／ｋｇの用量は、本発明内にある。少なくとも約０．４、１．０、４．０、１０、及び３９μｇ／ｋｇの用量もまた、本発明内にある。
【０２３６】
本明細書に記載される各剤の、１日当たり約１ナノグラム（ｎｇ）／ｋｇと約１ｍｇ／ｋｇ体重との間のさらに他の投薬レベル。ある実施形態では、各対象化合物の投薬量は、一般に、ｋｇ体重当たり約１ｎｇから約１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約１ｎｇから約０．１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約１ｎｇから約１０ｎｇ、ｋｇ体重当たり約１０ｎｇから約０．１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約０．１マイクログラムから約１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約２０ｎｇから約１００ｎｇ、ｋｇ体重当たり約０．００１ｍｇから約０．０１ｍｇ、ｋｇ体重当たり約０．０１ｍｇから約０．１ｍｇ、又はｋｇ体重当たり約０．１ｍｇから約１ｍｇの範囲となる。ある実施形態では、各対象化合物の投薬量は、一般に、約０．００１ｍｇから約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１ｍｇから約０．１ｍｇ／ｋｇ体重、約０．１ｍｇから約１ｍｇ／ｋｇ体重の範囲となる。２種以上のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が使用される場合、各ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の投薬量は、他方と同じ範囲にある必要はない。
【０２３７】
好都合には、輸液される場合には、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、少なくとも約０．５から１時間、少なくとも約１〜２時間、少なくとも約２〜４時間、少なくとも約４〜６時間、少なくとも約６〜８時間、少なくとも約８〜１０時間、少なくとも約１２時間、又は少なくとも約２４時間投与される。
【０２３８】
本明細書に言及されるように、例えば組合せで投与されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の用量、又はどちらかもしくは両方との組合せで投与される他の治療剤の用量は、単独で与える際に投与される用量から下げて調整することができる。
【０２３９】
いくつかの剤の組合せ使用によって、任意の個々の剤について必要とされる投薬量が低減されることがあるが、それは、異なる剤の効果の始まり及び継続時間が相補的となることがあるためである。好適な一実施形態では、２種以上のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の組合せ使用は、相加的、相乗的、又は超相加的な効果を有する。
【０２４０】
場合によっては、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と、別の治療剤との、又はどちらかもしくは両方と組み合わせて投与される他の剤との組合せは、相加的な効果を有する。他の場合では、組合せは、相加よりも大きな効果を有し得る。そのような効果は、本明細書に「上の相加的な」効果と称され、相乗的又は強化された相互作用に起因することがある。．
【０２４１】
別の好適な実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と別の治療剤との組合せ使用によって、前記剤を単独で投与する際の頻度に比べて前記剤を投与する頻度が低減される。このように、これらの組合せは、所望の治療ゴールを達成するために以前必要とされていたよりも低い及び／又は少ない用量で各剤を使用することを可能にする。
【０２４２】
用量は、単回適用で投与されても分割適用で投与されてもよい。用量が１回投与されてもよいし、適用が繰り返されてもよい。典型的には、投与は、複数の単回投与に加えて又は代えて、輸液によるものとすることができる。
【０２４３】
１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と、別の心血管治療剤とを、所望に応じて、同じ経路又は異なる経路によって投与してもよい。本発明の様々な剤は、治療コースの間の異なる時間に別々に、又は分割もしくは単回の組合せ形態で併行して、投与することができる。
【０２４４】
本発明の一態様では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が、１種の組成物で投与され、別の心血管治療剤が、第２の組成物で投与される。一実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む第１の組成物は、別の治療剤を含む第２の組成物の前に投与される。一実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む第１の組成物は、別の心血管治療剤を含む第２の組成物の後に投与される。好適な一実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む第１の組成物は、別の治療剤を含む第２の組成物の前又は後に投与される。一実施形態では、別の治療剤を含む第２の組成物は、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物剤を含む第１の組成物の前又は後に投与される。一実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む第１の組成物は、別の治療剤を含む第２の組成物とほぼ同時に投与される。
【０２４５】
単独で又は別の治療剤と併せた、ある期間にわたる、場合によっては約１〜２時間、約２〜４時間、約４〜６時間、約６〜８、又は約２４時間以上の間の、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む製剤の送達もまた、例えば、徐放出又はデポー製剤、ならびに経皮製剤及びデバイスを使用して達成されることがある。
【０２４６】
タンパク質及びペプチドの経口での生物学的利用能を向上させるためのストラテジーは、それらの親油性及び酵素感受性の改変によりそれらの物理化学的特性を変えることから、胃腸管の内在性の輸送担体系によって認識される輸送担体分子を使用して新規の機能性を追加することにまで、及び／又は特に適応された薬剤担体系内にそれらを含めることにまで、及んでいる。市販のポリマーベースの系は、特定の器官／組織を標的化する際の制御放出の点で、及びそれらがタンパク質及びペプチドを送達する能力の点で、大きな注目を引いている。それらは、タンパク質を標的部位に有効に送達し、それゆえ副作用を最小限にしつつ治療効果を増加させることができる。ポリマー性微粒子、ナノ粒子、ハイドロゲルや、パッチなどのポリマーベース担体とのタンパク質の会合は、経口のタンパク質の生物学的利用能を向上させるための有用なアプローチである。ポリマーベース担体は、胃腸管の環境からタンパク質を保護し、物理化学的特性とタンパク質放出特性と、ひいては生物学的挙動とを調節可能にすることができる。また、経口吸収を向上させるという観点から言えば、担体の主要な効果とは、上皮膜の透過性を増加させ、それによってより高い生物学的利用能へと導くことである。
【０２４７】
本発明の化合物及び製剤の剤形、延長されたギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の作用は、ギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が剤形から放出される速度に影響を及ぼすことによって、ならびに／又は胃腸管を通る剤形の通過時間を遅めることによって、達成されることがある［Ｂｏｇｎｅｒ，Ｒ．Ｈ．，ＵＳ  Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔ  ２２（Ｓｕｐｐｌ．）：３−１２（１９９７）を参照］。固体剤形からの薬剤放出の速度は、下記に記載される技術によって改変されることがあり、その技術とは、一般的に以下に基づく。すなわち、１）バリア被覆の使用により、薬剤への生体液のアクセスを制御することによって、薬剤の溶解を改変すること；２）剤形からの薬剤の拡散速度を制御すること；及び３）薬剤物質又はその医薬的バリアと部位特有の生体液との間で化学的に反応又は相互作用させることである。これらの目的を達成するための系もまた、本明細書に示されている。１つのアプローチでは、消化を放出機構として採用し、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、腸管内に徐々に消化又は分散される物質で被覆するか又は封入するかのどちらかとする。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の利用能の速度は、分散可能な材料の消化の速度の関数である。それゆえ、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の放出速度、及びひいては有効度は、対象が材料を消化する能力に応じて、対象によって変わる。
【０２４８】
本発明の化合物及び製剤の徐放出剤形のさらに別の形態は、半透膜、例えば、酢酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸プロピオン酸セルロースのものが、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の放出を制御するのに使用される場合に、任意の適した浸透系である。これらは、腸溶性のラッカーの水性分散物を用いて、放出速度を変えることなく被覆することができる。そのような浸透系の一例は、Ａｌｚａ  Ｉｎｃ．（米国）によって開発されたＯｒｏｓ（商標）デバイスなどの浸透ポンプデバイスである。
【０２４９】
本発明の方法で有用な他のデバイスは、一体構造のマトリックスを利用し、そのようなものとしては、例えば、１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が中に圧縮又は包埋される、緩侵食性又は親水性のポリマーマトリックスが挙げられる。
【０２５０】
本発明で有用な化合物及び製剤を含む一体構造のマトリックスデバイスとしては、例えば、当該マトリックスが溶解又は膨張するにつれて次第に利用可能になってゆく可溶性マトリックス中に分散されているギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を使用して、形成されたものが挙げられる。例としては、ヒドロキシプロピルセルロース（ＢＰ）やヒドロキシプロピルセルロース（ＵＳＰ）などの親水性コロイドマトリックス；ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ；ＢＰ、ＵＳＰ）；メチルセルロース（ＭＣ；ＢＰ、ＵＳＰ）；カルボキシメチルセルロースカルシウム（カルシウムＣＭＣ；ＢＰ、ＵＳＰ）；アクリル酸ポリマーもしくはカルボキシポリメチレン（カーボポール）もしくはカルボマー（ＢＰ、ＵＳＰ）；又はアルギン酸（ＢＰ、ＵＳＰ）などの線状グリクロナンポリマー、例えば、アルギン酸（アルギン酸塩）−ゼラチン親水コロイドコアセルベート系由来の微粒子中に製剤化されているもの、もしくはポリ−Ｌ−リジン膜でアルギン酸を被覆することによってリポソームが中に被包化されているものが挙げられる。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネル遮断剤化合物又は阻害剤化合物の放出は、ポリマーが膨張するのにつれて起こり、この膨張により、コア内への水性流体の拡散と、それゆえに系からのギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の拡散の速度とを制御する、マトリックス層が形成される。
【０２５１】
そのような系では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の放出の速度は、ゲル内でのチャネルの蛇行性、及び封入されている流体の粘性に依存し、その結果、様々な放出の動力学を、例えばパルス放出と組み合わせたゼロ次又は１次を達成することができる。そのようなゲルが架橋していない場合、ポリマー鎖間にはさらに弱く不変性のない会合があり、それは二次結合に依存している。そのようなデバイスを用いれば、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を高度に装填することが達成可能であり、効果的に混和する頻度が高まる。デバイスは、２０〜８０％のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物（ｗ／ｗ）を、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の拡散を増強することのできるゲル改質剤と共に含有することがある。そのような改質剤の例としては、水和の速度を増強することのできる糖、架橋の含有量に影響を与えることのできるイオン、及びポリマーのイオン化のレベルに影響を及ぼすｐＨ緩衝液が挙げられる。親水性マトリックスデバイスもまた、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物ならびに親水性マトリックスに加えて、１つ又は複数のｐＨ緩衝液、界面活性剤、対イオン、ステアリン酸マグネシウム（ＢＰ、ＵＳＰ）などの潤滑剤、及びコロイド状二酸化ケイ素（ＵＳＰ；コロイド状無水シリカ、ＢＰ）などの滑剤を含有することがある。
【０２５２】
また、本発明で有用な化合物及び製剤を含む一体構造のマトリックスデバイスは、例えば、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の粒子を用いて形成されたものが不溶性マトリックス中に溶解されていることを含んでおり、溶媒が多くの場合チャネルを通ってマトリックス中に入ってギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の粒子を溶解するのにつれて、このマトリックスから、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が利用できるようになってゆく。例としては、脂質マトリックスすなわち不溶性ポリマーマトリックスを用いて形成される系が挙げられ、そのようなものとしては、カルナウバ蝋（ＢＰ；ＵＳＰ）；分画ココナッツオイル（ＢＰ）やトリグリセリド飽和媒体（ＰｈＥｕｒ）などの中鎖トリグリセリド；又はセルロースエチルエーテルもしくはエチルセルロース（ＢＰ、ＵＳＰ）から形成される調製物が挙げられる。脂質マトリックスは、製造が単純かつ簡単であり、以下の粉末化された構成成分を組み込む。すなわち、放出過程の間に無傷のままである脂質（２０〜４０％の疎水性固体ｗ／ｗ）と；ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物、例えば、塩化ナトリウムや糖などのチャネリング剤であり、この剤は、製剤から濾し出されて水性のマイクロチャネル（細孔）を形成し、このチャネルを通じて溶媒が入り、このチャネルを通じてギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が放出される。この系では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、不活性の不溶性ポリマー中に包埋されて、水性流体の濾出によって放出されるが、この水性流体は、粒子間に形成された細孔を通じてデバイスのコア内に拡散し、この水性流体からは、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物がデバイス外に拡散する。放出の速度は、圧縮の程度、粒子サイズ、及び賦形剤の性質と相対含有量（ｗ／ｗ）によって制御される。そのようなデバイスの一例は、Ｆｅｒｒｏｕｓ  Ｇｒａｄｕｍｅｔ（Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ  ３３ｒｄ  Ｅｄ．，１３６０．３）のものである。適した不溶性のマトリックスのさらに別の一例は、不活性のプラスチックマトリックスである。この方法によって、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、ポリエチレン、ポリ酢酸ビニルや、ポリメタクリレートなどの不活性のプラスチック材料を用いて顆粒化され、次いで、顆粒化混合物は、錠剤に圧縮される。ひとたび摂取されれば、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、不活性のプラスチックマトリックスから拡散によって徐々に放出される。例えば、Ｂｏｄｍｅｉｅｒ，Ｒ．＆  Ｐａｅｒａｔａｋｕｌ，Ｏ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ７９：３２−２６（１９９０）；Ｌａｇｈｏｕｅｇ，Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  ５０：１３３−１３９（１９８９）；Ｂｕｃｋｔｏｎ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  ７４：１５３−１５８（１９９１）を参照されたい。錠剤の圧縮によって、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の濾出の間、及び胃腸管を通り抜けるその通過を通じて、その形状を保持するマトリックス又はプラスチックの形態が作り出される。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の即時放出部分は、錠剤の表面上に圧縮されることがある。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の消費された不活性の錠剤マトリックスは、糞便によって排出される。このタイプの好結果の剤形の一例は、Ｇｒａｄｕｍｅｔ（Ａｂｂｏｔｔ；例えば、Ｆｅｒｒｏ−Ｇｒａｄｕｍｅｔ，Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ  ３３ｒｄ  Ｅｄ．，ｐ．１８６０．４を参照）である。
【０２５３】
本発明の方法で有用な一体構造のマトリックスデバイスのさらに別の例としては、ポリマーマトリックスへの垂下取付部に組み込まれた本発明の組成物及び製剤が挙げられる。例えば、Ｓｃｈｏｌｓｋｙ，Ｋ．Ｍ．ａｎｄ  Ｆｉｔｃｈ，Ｒ．Ｍ．，Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ３：８７−１０８（１９８６）を参照されたい。これらのデバイスでは、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、水性エマルジョン重合によって調製されたポリ（アクリレート）エステルラテックス粒子とのエステル連結によって付加されることがある。本発明の一体構造のマトリックスデバイスのさらに別の例は、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が、易変性の化学結合によって生体適合性ポリマーに結合しているという剤形を組み込んでおり、例えば、置換無水物（それ自体は、酸塩化物を薬剤：塩化メタクリロイル及びメトキシ安息香酸のナトリウム塩に反応させることによって調製される）から調製されたポリ酸無水物は、胃液中での加水分解時に薬剤を放出する第２のポリマー（Ｅｕｄｒａｇｉｔ  ＲＬ）を有するマトリックスを形成するために使用されている。Ｃｈａｆｉ，Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  ６７：２６５−２７４（１９９２）を参照されたい。
【０２５４】
１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の調節放出形態はまた、マイクロカプセル化によって調製されることがある。マイクロカプセル化とは、それによって、米国特許第３，４８８，４１８号、第３，３９１，４１６号、及び第３，１５５，５９０号に開示されるものなど、被包化されている物質の周囲に「壁」材の薄い被覆を形成することを通じて、固体、液体、又は気体でさえ顕微鏡サイズの粒子内に被包化され得るプロセスである。ゼラチン（ＢＰ、ＵＳＰ）は、マイクロカプセル化される調製物中の壁形成材として通例採用されるが、ポリビニルアルコール（ＵＳＰ）、エチルセルロース（ＢＰ、ＵＳＰ）、ポリ塩化ビニルや、他の材料などの合成ポリマーもまた、使用される。例えば、Ｚｅｎｔｎｅｒ，Ｇ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２：２１７−２２９（１９８５）；Ｆｉｔｅｓ，Ａ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ５９：６１０−６１３（１９７０）；Ｓａｍｕｅｌｏｖ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ６８：３２５−３２９（１９７９）を参照されたい。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の放出の様々な速さは、コアと壁との比、被覆に使用されるポリマー、又はマイクロカプセル化の方法を変えることによって、得られることがある。例えば、Ｙａｚｉｃｉ，Ｅ．，Ｏｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ  Ｄｅｖ  Ｔｅｃｈｎｏｌ；１：１７５−１８３（１９９６）を参照されたい。
【０２５５】
他の有用なアプローチとしては、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が、ポリマー性コロイド粒子又はマイクロカプセル（微粒子、ミクロスフェア、又はナノ粒子）内に、リザーバー又はマトリックスデバイスの形態で組み込まれているものが挙げられる。以下：Ｄｏｕｇｌａｓ，Ｓ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃ．Ｒ．Ｃ．Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｔｈｅｒａｐ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ  ３：２３３−２６１（１９８７）；Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ，Ｒ．Ｃ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  ８：２１７−２３４（１９８１）；Ｈｉｇｕｃｈｉ，Ｔ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ５２：１１４５−１１４９（１９６３）を参照されたい。
【０２５６】
経皮送達に適した薬剤の製剤は、当業者に公知であり、Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（上記）などの参考文献に記載されている。経皮的な経路による薬剤の送達を増強することが知られる方法としては、可逆的に損傷させるか、又はその他薬剤の拡散に対する耐性を低下させるように角質層の物理化学的性質を変えることによって、皮膚透過性を増加させる、化学皮膚透過増強剤が挙げられる。Ｓｈａｈ，Ｖ．，Ｐｅｃｋ，Ｃ．Ｃ．，ａｎｄ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｒ．Ｌ．，Ｓｋｉｎ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ：ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ，Ｉｎ：Ｗａｌｔｅｒｓ，Ｋ．Ａ．ａｎｄ  Ｈａｄｇｒａｆｔ，Ｊ．（Ｅｄｓ．）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｓｋｉｎ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｄｅｋｋｅｒ，（１９９３）を参照されたい。経皮の薬剤送達系におけるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を用いた製剤に適した皮膚透過増強剤は、以下の一覧：アセトン、ラウロカプラム、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、エタノール、オレイン酸、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、及びラウリル硫酸ナトリウムから選ばれてもよい。さらに、皮膚透過増強剤が、当業者に公知の刊行物に見出されることがある。例えば、Ｏｓｂｏｒｎｅ，Ｄ．Ｗ．，＆  Ｈｅｎｋｅ，Ｊ．Ｊ．，Ｐｈａｒｍ  Ｔｅｃｈ  ２１：５０−６６（１９９７）；Ｒｏｌｆ，Ｄ．，“Ｐｈａｒｍ  Ｔｅｃｈ  １２：１３０−１３９（１９８８）を参照されたい。化学的な手段に加えて、本発明の化合物及び製剤の経皮の薬剤の送達及び透過を増強する、物理的な方法がある。これらはイオン泳動及び音波泳動を含む。イオン泳動又は音波泳動による投与に適した製剤は、ゲル、クリーム、又はローションの形態であることがある。
【０２５７】
本発明の経皮の送達、方法、又は製剤は、特に、一体構造の送達系、薬剤を含浸させた粘着送達系（例えば、３Ｍ由来のＬａｔｉｔｕｄｅ（商標）薬剤入り粘着システム）、能動輸送デバイス、及び膜制御系を利用することがある。本発明の経皮送達の剤形としては、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、ジクロフェナク又は他の薬学的に許容可能なその塩の代わりに置き換えたものが挙げられ、それは、例として、米国特許第６，１９３，９９６号及び第６，２６２，１２１号に開示される経皮送達系に参照される。
【０２５８】
他の剤形としては、坐剤又は他の非経口使用に適応された経口剤形のバリアントが挙げられる。坐剤の形態で経直腸で投与される際に、例えば、これらの組成物は、本発明の１つ又は複数の化合物及び製剤を、ココアバター、合成グリセリドエステルや、ポリエチレングリコールなどの刺激のない適した賦形剤と混合することによって調製されることがあり、このような賦形剤は、常温では固体であるが、直腸腔では液化及び／又は溶解して、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を放出する。坐剤は、一般的には、直腸、膣、及び時には尿道を含めた身体の開口部内へ挿入することを意図されている固体剤形であり、長時間作用するか又は徐放出とすることができる。．坐剤は、基剤を含み、そのようなものとしては、以下に限定されないが、アルギン酸などの材料を挙げることができ、そのような材料は、何時間（５〜７）にもわたって薬学的に許容可能な活性成分の放出を延長するものとなる。
【０２５９】
本発明で有用な化合物及び製剤の経粘膜投与は、任意の粘膜を利用することがあるが、通例、鼻、バッカル、膣、及び直腸の組織を利用する。本発明の化合物及び製剤の経鼻投与に適した製剤は、液体形態で、例えば、経鼻スプレー、点鼻剤、又はネブライザーによるエアロゾル投与によって投与されることがあり、そのような形態としては、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の水性又は油性の溶液が挙げられる。担体が固体である場合の経鼻投与の製剤は、例えば、約１００ミクロン未満の、好ましくはより少ない、最も好ましくは約５０ミクロンの１日に１倍又は２倍の粒子サイズを有する粗粉末を含み、この粉末は、嗅ぎ薬を摂る方式で、すなわち、鼻に至るまで密に保持されている粉末の容器から経鼻経路を通じた急速吸入によって、投与される。溶液中の組成物は、不活性ガスの使用によって噴霧されてもよく、そのような噴霧溶液は、噴霧デバイスから直接的に吸い込まれてもよいし、噴霧デバイスがフェースマスク、テントに取り付けられてもよいし、断続的なギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が、適切な方式で製剤を送達するデバイスから、経口的に又は経鼻的に投与されてもよい。製剤は、水溶液、例えば生理食塩水溶液として、当技術分野に公知のベンジルアルコールや他の適した保存剤、生物学的利用能を増強するための吸収促進剤、フッ化炭素、及び／又は他の可溶化剤もしくは分散剤を利用している溶液として、調製されてもよい。
【０２６０】
組成物は、ある量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物（複数可）の（複数可）成分を希釈剤に溶解又は懸濁することによる、従来の方法に従って調製されてもよい。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の量は、希釈剤ｍＬ当たり０．１ｍｇから１０００ｍｇまでの間である。実施形態によっては、１００ｍｇ及び２００ｍｇのギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の剤形が提供される。ほんの一例として、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の量は、約１ｍｇから約７５０ｍｇ以上までに及ぶことがある（例えば、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７５０ｍｇ、約８００ｍｇ、約１０００ｍｇ、及び約１２００ｍｇ）。他の用量としては、少なくとも約１００ナノグラムから及ぶ用量を含み、そのようなものとしては、例えば少なくとも約２００ナノグラム、６００ナノグラム、２０００ナノグラム、６０００ナノグラム、及び少なくとも約１０，０００ナノグラム以上が挙げられる。用量の濃度としては、少なくとも１リットル当たり約０．１モルの濃度が挙げられ、そのようなものとしては、例えば、少なくとも約０．３、１．０、３．０、及び１０．０ナノモル／Ｌが挙げられる。用量の濃度としてはまた、０．１ナノモル／Ｌ、０．３ナノモル／Ｌ、１．０ナノモル／Ｌ、３．０ナノモル／Ｌ、及び１０．０ナノモル／Ｌの濃度が挙げられる。これらの用量の濃度は、０．１、０．３、１、３、及び１１μｇ／Ｌに等しく、投与可能な重量の用量で０．４、１．０、４．０、１０、及び３９マイクログラム／ｋｇ（μｇ／ｋｇ）である。また、本発明内には、０．１から５．０μｇ／ｋｇまで、及び０．１から１０．０μｇ／ｋｇまでに及ぶ他の用量もある。さらに、約０．４、１．０、４．０、１０、及び３９μｇ／ｋｇの用量は、本発明内にある。少なくとも約０．４、１．０、４．０、１０、及び３９μｇ／ｋｇの用量もまた、本発明内にある。これらの範囲内の他の量も、使用されることがあり、その間のそれぞれの数が明示的に述べられなくとも具体的に想定される。
【０２６１】
ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、１日１回用量投与に適した形態で提供及び投与することができる。酢酸、リン酸、クエン酸、又はグルタミン酸の緩衝液を添加して、最終組成物のｐＨを約５．０から約９．５とすることがある。そして、任意選択的に、炭水化物又は多価アルコールの張性剤、及びｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、メチル、エチル、プロピル、及びブチルパラベン、ならびにフェノールからなる群から選択される保存剤も添加することがある。注射用の水、塩化ナトリウムなどの張性増強剤、ならびに他の賦形剤も、所望に応じて存在することがある。非経口投与については、投与部位での刺激及び痛みを避けるために、製剤は等張であるか又は実質的に等張である。
【０２６２】
水素イオン濃度又はｐＨに関連して使用される際の用語である緩衝液、緩衝液溶液、及び緩衝溶液とは、酸又は塩基の添加時又は溶媒による希釈時に、ある系が、具体的には水溶液が、ｐＨの変化に耐える能力を指す。酸又は塩基の添加時のｐＨの小さな変化を受ける、緩衝溶液の特徴は、弱酸と弱酸の塩、又は弱塩基と弱塩基の塩のどちらかが存在することである。前者の系の一例は、酢酸及び酢酸ナトリウムである。添加されるヒドロキシルイオンの量が、それを中和する緩衝液系の能力を超えない限り、ｐＨの変化は僅かである。
【０２６３】
製剤のｐＨをおよそ５．０から約９．５の範囲に維持することによって、本願発明の非経口製剤の安定性を増強することができる。他のｐＨ範囲としては、例えば、約５．５から約９．０、もしくは約６．０から約８．５、もしくは約６．５から約８．０、又は好ましくは、約７．０から約７．５が挙げられる。
【０２６４】
使用される緩衝液は、以下の例えば、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、又はグルタミン酸緩衝液のいずれかから選択されてもよく、最も好適な緩衝液はリン酸緩衝液である。担体又は賦形剤も、本発明の組成物及び製剤の投与を容易にするために使用することができる。担体及び賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、例えばラクトース、グルコースや、スクロースなど、又はデンプンのタイプ、セルロース誘導体、ゼラチン、ポリエチレングリコール、及び生理的に適合可能な溶媒が挙げられる。安定化剤を含むことがあるが、一般的には必要とはならない。しかし、含む場合、本発明の実践に有用な安定化剤の一例は、炭水化物又は多価アルコールである。多価アルコールとしては、ソルビトール、マンニトール、グリセロール、キシリトール、及びポリプロピレン／エチレングリコールコポリマー、ならびに分子量２００、４００、１４５０、３３５０、４０００、６０００、及び８０００）の様々なポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの化合物が挙げられる。炭水化物としては、例えば、マンノース、リボース、トレハロース、マルトース、イノシトール、ラクトース、ガラクトース、アラビノース、又はラクトースが挙げられる。
【０２６５】
等張剤、又は等張性を維持するための剤もまた、使用されるか又は含まれていてもよい。
【０２６６】
米国薬局方（ＵＳＰ）は、複数用量容器に納められた調製物には静細菌濃度又は静真菌濃度の抗微生物剤を添加しなければならないことを表明している。それらは、皮下注射用の針及びシリンジを用いて、又はペン型注射器など他の送達用の侵襲的な手段を使用して、内容物の一部を引き抜く間、調製物内に不注意に持ち込まれる微生物の繁殖を防止するために、正確な濃度で使用時に存在しなければならない。抗微生物剤は、配合の他の全ての構成成分への適合性を確保するように検討されるべきであり、それらの活性は、ある製剤に有効な特定の剤が別のものには有効ではないことを確保するように、配合全体で検討されるべきである。特定の剤がある製剤には有効となるが別の製剤には有効とはならないことを、見出すのは珍しいことではない。本発明の実践に使用するための保存剤が０．００５から１．０％（ｗ／ｖ）までに及び得る一方で、各保存剤の好適な範囲は、単独で又は他のものとの組合せで、ベンジルアルコール（０．１〜１．０％）、又はｍ−クレゾール（０．１〜０．６％）、又はフェノール（０．１〜０．８％）、又はメチルパラベン（０．０５〜０．２５％）とエチルパラベンもしくはプロピルパラベンもしくはブチルパラベン（０．００５％〜０．０３％）との組合せである。パラベンは、パラ−ヒドロキシ安息香酸の低級アルキルエステルである。各保存剤の詳細な記載は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」ならびにＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌ．１，１９９２，Ａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．に明記されている。これらの目的で、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、非経口的に（皮下注射、静脈内、筋肉内、皮内注射、又は輸液手法を含めて）、又は従来の非毒性の薬学的に許容可能な担体、アジュバント、及び媒体を含有する投薬単位製剤での吸入スプレーによって、投与されることがある。
【０２６７】
所望に応じて、非経口製剤は、メチルセルロースなどの増粘剤を用いて濃厚にされることがある。この製剤は、油中水又は水中油のどちらかのエマルジョン形態で調製されることがある。任意の実に様々な薬学的に許容可能な乳化剤が利用されてもよく、そのようなものとしては、例えば、アカシア粉末、非イオン性界面活性剤、又はイオン性界面活性剤が挙げられる。また、適した分散剤又は懸濁剤を医薬製剤に添加することが望ましいこともある。これらのものとしては、例えば、合成及び天然のゴム、例えば、トラガカント、アカシア、アルギン酸塩、デキストラン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリビニル−ピロリドンや、ゼラチンなどの水性懸濁液が挙げられ得る。
【０２６８】
他の成分が、本発明で有用な非経口医薬製剤中に存在し得る可能性がある。そのような追加の成分としては、湿潤剤、油脂（例えば、ゴマ、ピーナッツや、オリーブなどの植物油）、鎮痛剤、乳化剤、抗酸化剤、増量剤、浸透圧改質剤、金属イオン、油性媒体、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン、ゼラチン、又はタンパク質）、及び双性イオン（例えば、ベタイン、タウリン、アルギニン、グリシン、リジンや、ヒスチジンなどのアミノ酸）が挙げられ得る。そのような追加の成分は勿論、本願発明の医薬製剤の全体的な安定性に不利な影響を及ぼすべきではない。医薬製剤に関しては、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌ．１，２ｎｄ  ｅｄ．，Ａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｍｅｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．１９９２も参照されたい。
【０２６９】
適した非経口投与の経路としては、筋肉内、静脈内、皮下、腹腔内、真皮下、皮内、関節内、くも膜下腔内などが挙げられる。粘膜送達も許容される。用量及び投薬レジメンは、対象の体重及び健康に依存するものとなる。
【０２７０】
薬剤作用の延長を達成する上記の手段に加えて、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の送達の速度及び持続時間は、例えば、機械で制御される薬剤輸液ポンプを使用することによって制御されることがある。
【０２７１】
ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物（複数可）は、デポー注射の形態で投与することができ、この形態は、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の持続的な放出を可能にするような方式で製剤化されることがある。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、ペレット又は小円柱に圧縮し、皮下又は筋肉内に植え込むことができる。ペレット又は円柱は、所望の放出プロファイルをもたらすように選ばれた適した生分解性のポリマーを用いて、追加的に被覆されることがある。あるいは、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、マイクロペレット化されることがある。生体的に許容可能なポリマーを用いたギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物のマイクロペレットは、所望の放出プロファイルをもたらすように放出速度を操作することを可能とするように、設計することができる。あるいは、注射可能なデポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中の、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物のマイクロカプセル化マトリックスを形成することによって、作製することができる。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物とポリマーとの比、ならびに利用される特定のポリマーの性質に応じて、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の放出の速度を制御することができる。デポー注射可能な製剤はまた、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物をリポソームに封入することによって調製することができ、そのリポソームの例としては、単層小胞、大型単層小胞、及び多重層小胞が挙げられる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミンや、ホスファチジルコリンなどの種々のリン脂質から形成することができる。デポー注射可能な製剤はまた、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、体組織に適合可能なマイクロエマルジョンに封入することによって、調製することができる。例として、米国特許第６，４１０，０４１号及び第６，３６２，１９０号が参照される。
【０２７２】
植込み型の輸液デバイスは、上に一覧に挙げられた生分解性のポリマー、又は合成シリコーン、例えば、シラスティック、シリコーンゴム、もしくはＤｏｗ−Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって製造される他のポリマーなどの、不活性材を利用することがある。ポリマーは、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と任意の賦形剤とを用いて充填されることがある。植込み型の輸液デバイスはまた、医療デバイスの被覆又は一部を含むことがあり、その被覆は、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と任意の賦形剤とを充填されたポリマーを含む。そのような植込み型の輸液デバイスは、米国特許第６，３０９，３８０号に開示されるように調製されることがあり、その調製は、所望の投薬量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と任意の賦形剤とを含む溶液を有するポリマーを含有する、ｉｎ  ｖｉｖｏの生体適合性かつ生分解性又は生体吸収性又は生体浸食性の液体又はゲル溶液を用いて、デバイスを被覆することによって行われる。上記溶液は、医療デバイスに付着しているフィルムに変換され、それによって、植込み型のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を送達することが可能な医療デバイスが形成される。植込み型の輸液デバイスはまた、米国特許第６，１２０，７８９号に開示されるように固体マトリックスを含有するギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、ｉｎ  ｓｉｔｕで形成することによって、調製されることがある。植込み型の輸液デバイスは、当技術分野に公知のように、受動的でも能動的でもよい。
【０２７３】
また、本発明の方法で有用なのは、マイクロエマルジョン、すなわち、親水相、親油相、少なくとも１種の界面活性剤（ＳＡ）及び少なくとも１種の補助界面活性剤（ＣｏＳＡ）から構成される流体や安定で均一な溶液などである。適した界面活性剤の例としては、モノグリセリド、ジグリセリド、及びトリグリセリド、ならびにポリエチレングリコール（ＰＥＧ）モノエステル及びジエステルが挙げられる。時には「補助表面活性剤ｍ」としても知られる補助界面活性剤は、マイクロエマルジョン中で水相及び油相の相互の可溶化を引き起こすことを意図される、疎水性の性質を有する化学化合物である。適した補助界面活性剤の例としては、エチルジグリコール、プロピレングリコールのラウリン酸エステル、ポリグリセロールのオレイン酸エステル、及び関連化合物が挙げられる。
【０２７４】
ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物はまた、粘膜表面への付着を増加させることによって、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の加水分解及び酵素分解による分解の速度を減少させることによって、及び粒子のサイズに対するギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の表面積を増加させることによって、生物学的利用能を増強するように、様々なポリマーを用いて送達されることがある。適したポリマーは、天然とも合成ともすることができ、生分解性とも非生分解性ともすることができる。低分子量活性剤、例えばギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物などの送達は、ポリマー系の拡散と分解のどちらによっても起こることがある。代表的な天然ポリマーとしては、ゼイン、修飾ゼイン、カゼイン、ゼラチン、グルテン、血清アルブミンや、コラーゲンなどのタンパク質；セルロース、デキストランや、ポリヒアルロン酸などの多糖が挙げられる。合成ポリマーは、より良好な分解及び放出プロファイルの特徴を持つことから、一般的に好適である。代表的な合成ポリマーとしては、ポリホスファゼン、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアクリレート、ポリアルキレン、ポリアクリルアミド、ポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド、ポリアルキレンテレフタラート、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリビニルハライド、ポリビニルピロリドン、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリウレタン、及びそれらのコポリマーが挙げられる。適したポリアクリレートの例としては、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、及びポリ（オクタデシルアクリレート）が挙げられる。合成で修飾される天然のポリマーとしては、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステルや、ニトロセルロースなどのセルロース誘導体が挙げられる。適したセルロース誘導体の例としては、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、酢酸セルロース、プロピオン酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシメチルセルロース、三酢酸セルロース、及び硫酸セルロースナトリウム塩が挙げられる。上に記載された各ポリマーは、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、セントルイス、ミズーリ州、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ、ウォレントン、ペンシルバニア州、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、ミルウォーキー、ウィスコンシン州、Ｆｌｕｋａ、ロンコンコマ、ニューヨーク州、及びＢｉｏＲａｄ、リッチモンド、カリフォルニア州などの商業的供給源から得ることができるか���又はこれらの供給業者から得られるモノマーから、標準的な手法を用いて合成することができる。
【０２７５】
上に記載されたポリマーは、生分解性、非生分解性、及び生体接着性のポリマーとして、別々に特徴付けることができる。代表的な合成の分解性ポリマーとしては、ポリヒドロキシ酸、例えばポリラクチド、ポリグリコリドや、それらのコポリマーなど、ポリ（エチレンテレフタラート）、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−コ−カプロラクトン）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ならびにそれらの混和物及びコポリマーが挙げられる。代表的な天然の生分解性ポリマーとしては、単独で又は合成ポリマーとの組合せで、多糖、例えば、アルギン酸塩、デキストラン、セルロース、コラーゲンや、それらの化学誘導体（置換、化学基、例えば、アルキル、アルキレンの付加、水酸化、酸化、及び当業者によって定型的に行われる他の改変）など：ならびにタンパク質、例えば、アルブミン、ゼイン、ならびにそれらのコポリマー及び混和物が挙げられる。非生分解性のポリマーの例としては、エチレン酢酸ビニル、ポリ（メタ）アクリル酸、ポリアミド、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリビニルフェノール、ならびにそれらのコポリマー及び混合物が挙げられる。親水性ポリマー及びハイドロゲルは、生体接着性を有する傾向がある。カルボキシル基［例えば、ポリ（アクリル酸）］を含有する親水性ポリマーは、最良の生体接着性を示す傾向がある。高濃度のカルボキシル基を有するポリマーは、柔らかい組織上の生体接着性が所望される際に好適である。．様々なセルロース誘導体、例えばアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロースや、メチルセルロースなどもまた、生体接着性を有する。これらの生体接着性材料には、水溶性のものもあれば、ハイドロゲルもある。ヒドロキシプロピルメチルセルロース酢酸エステルコハク酸エステル（ＨＰＭＣＡＳ）、酢酸トリメリト酸セルロース（ＣＡＴ）、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、ヒドロキシプロピルセルロース酢酸エステルフタル酸エステル（ＨＰＣＡＰ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース酢酸エステルフタル酸エステル（ＨＰＭＣＡＰ）、及びメチルセルロース酢酸エステルフタル酸エステル（ＭＣＡＰ）などのポリマーは、併せて複合体化されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の生物学的利用能を増強するために利用されることがある。急速な生体浸食性のポリマー、例えば、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ無水物や、ポリオルトエステルなどは、その滑らかな表面が浸食されるにつれてそのカルボキシル基が外部表面に露出されるが、また、生体接着性のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の送達系に使用することができる。さらに、易変性の結合を含有するポリマー、例えば、ポリ無水物やポリエステルなどは、その加水分解反応性が周知である。それらの加水分解の分解速度は、一般に、ポリマー骨格の単純な変化によって変えることができる。分解すると、これらの材料はまた、その外部表面にカルボキシル基を露出することから、Ｂナトリウム排泄増加性シグナルペプチド断片剤の送達系として使用することができる。
【０２７６】
１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の生物学的利用能又は吸収を増強する他の剤は、腸管粘膜を横切る輸送を促進又は阻害することによって作用することができる。例えば、血管拡張剤などの血流を増加させる剤は、胃腸管への血流を増加させることによって、経口的に投与されたギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の吸収の速度を増加させることがある。血管拡張剤は、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の生物学的利用能を増強し得る別の剤のクラスを構成する。
【０２７７】
本発明で有用な組成物及び製剤の生物学的利用能を増強する他の機構としては、逆能動輸送機構の阻害が挙げられる。例えば、現在では、腸管上皮細胞に存在する能動輸送機構の１つは、ｐ−糖タンパク質輸送機構であるものと考えられており、この機構は、上皮細胞の内部に分散しているか又は輸送されて腸の内腔内に戻る、物質の逆輸送を促進する。このｐ−糖タンパク質媒介性の能動輸送系を阻害することによって、内腔内に戻して輸送される薬剤が少ないものとなり、それゆえに、腸上皮を横切る総薬剤輸送量が増加し、血中で最終的に利用可能な薬剤の量が増加することになる。様々なｐ−糖タンパク質阻害剤が、当技術分野に周知であり、認識されている。これらのものとしては、水溶性のビタミンＥ；ポリエチレングリコール；Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８を含めたポロキサマー；ポリエチレンオキシド；Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ及びＣｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＲＨ  ４０を含めたポリオキシエチレンヒマシ油誘導体；クリシン、（＋）−タキシフォリン；ナリンゲリン；ジオスミン；ケルセチン；などが挙げられる。
【０２７８】
そのため、送達の期間が、状態と剤との両方及び所望の治療効果に依存するものとなる一方で、約０．５〜１時間、約１〜２時間、約２〜４時間、約４〜６時間、約６〜８、又は約２４時間以上の継続的な又は徐放出の送達がもたらされる。本願発明に従えば、これは、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、単独で又は別の心血管治療剤と共に、薬学的に許容可能な担体又は媒体を併せて含む製剤で、具体的には継続的な又は徐放出の製剤の形態で、含むことによって達成される。
【０２７９】
言及されるように、本発明の１つ又は複数の剤は、対象の中又は上での処置、例えば、血管形成の処置、又はステント留置などの他の物理的な介入の後に、間に、直後に、投与されることがある。それらは、好ましくは、例えば、処置の約２４、約１２、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、約２時間前及び／もしくはその間もしくはそれ以内、又は例えば、処置後の約６０、約４５、約３０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、約１分以内に、投与される。
【０２８０】
熟練した医師は、いかなる特定の患者又は状態についても、最適な投与経路及び投薬量を考慮するものとなることから、本明細書に記載される投与及び投薬の経路は、ガイドとすることを意図されているに過ぎない。
【０２８１】
心血管障害を持つか又はそのリスクがある対象を治療する方法のいずれも、本明細書に記載される用量、剤形、製剤、及び／又は組成物のうちいずれの投与を利用してもよい。
医薬組成物
【０２８２】
本願発明は、心血管障害を予防及び／又は治療するための医薬組成物及びそれらの使用方法に向けられており、その組成物は、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、単独で又は別の心血管治療剤と併せて含む。
【０２８３】
したがって、一態様では、本発明は、心血管障害を予防及び／又は治療する際の使用のための組成物を提供し、この組成物は、少なくとも１種のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、単独で又は別の心血管治療剤と併せて含むか、又はそれらから本質的になる。好適な一実施形態では、組成物は、薬学的に許容可能な担体又は媒体をさらに含む。
キット、医薬、及び製造品
【０２８４】
ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物はまた、心血管障害ならびに関連の障害及び状態を予防及び／又は治療するための医薬の製造に使用されることがある。
【０２８５】
一態様では、本発明は、記載される１つ又は複数の組成物又は製剤を含む、心血管障害を予防及び／又は治療するためのキットを提供する。例えば、本発明は、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、単独で又は１つもしくは複数の心血管治療剤との組合せで含む、組成物を含むキットを含む。例えば、このキットは、有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物、ならびに又は、以下：硝酸塩、β遮断剤、カルシウムチャネル遮断剤（具体的には安定狭心症又は不安定狭心症に用いられるものであるが、β遮断剤の場合では心不全にも用いられる）；利尿剤、血管拡張剤、陽性変力剤、ＡＣＥ阻害剤、及びアルドステロンアンタゴニスト、例えば．スピロノラクトン（具体的には心不全に用いる）、血液希釈治療薬（例えば、アスピリン、ヘパリン、ワルファリン）、及びニトログリセリン（具体的にはＭＩに用いる）のうち多くを含む、組成物を含むことがある。キットはまた、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、単独で又は（例えば、組合せ調製物として提供される物理的な組合せで）１つ又は複数の抗血栓溶解療法（例えば、ストレプトキナーゼ阻害剤、抗血小板療法剤、例えばクロピドグレルなど）との組合せで、含むか又はそれから本質的になる組成物を含む。キットはまた、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、単独で又はとの組合せで、（例えば、組合せ調製物として提供される物理的な組合せで）含むことがある。
【０２８６】
製造品はまた、本明細書に記載されるような本発明の組成物又は製剤（任意の用量又は用量形又はデバイスの）を含有する容器、ならびに対象の治療に使用するための指示書を含んで、提供される。例えば、別の態様では、本発明は、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、単独で又は１つもしくは複数の他の心血管治療剤との組合せで含有する容器を含む、製造品を含む。
製造及び安定性
【０２８７】
この発明のポリペプチドは、当技術分野に公知の化学を用いて製造することができる。一態様では、この発明の製剤は、この発明のポリペプチドのナトリウム塩など、この発明のポリペプチドの塩を含むものとなる。一実施形態では、製剤は、例えば、配列番号１〜５２のうちいずれか１つを有するポリペプチドのナトリウム塩を含むことがある。
【０２８８】
実施形態によっては、この発明の製剤は、実質的に純粋である。実質的に純粋なとは、製剤が約１０％未満、５％未満、又は１％未満、及び好ましくは約０．１％未満の、任意のアミノ酸又は非アミノ酸の不純度を含むことを意味する。実施形態によっては、コネキシン４３調節ポリペプチドの代謝物を含む総不純物は、１５％以下となる。実施形態によっては、コネキシン４３調節調節ポリペプチドの代謝物を含む総不純物は、１２％以下となる。実施形態によっては、コネキシン４３調節調節ポリペプチドの代謝物を含む総不純物は、１１％以下となる。他の実施形態では、コネキシン４３調節ポリペプチドの代謝物を含む総不純物は、１０％以下となる。
【０２８９】
実施形態によっては、この発明の製剤の純度は、陰イオン交換ＨＰＬＣ（ＡＥＸ−ＨＰＬＣ）又は質量分析から選択される方法を用いて測定されることがある。質量分析としては、ＬＣ／ＭＳ又はＬＣ／ＭＳ／ＭＳが挙げられ得る。アッセイは、実施形態によっては、ＡＥＸ−ＨＰＬＣとＬＣ／ＭＳとの両方を含むことがある。
【０２９０】
抗コネキシン調節ポリペプチドを製剤媒体に溶解することによる無菌の手順を用いて調製される、この発明のコネキシン調節ポリペプチドを含む、滅菌済みの組成物。一実施形態では、製剤はまた、濾過によって滅菌されることがある。この発明の製剤のの製造で使用される賦形剤は、医薬製品に広く使用され、薬局方収載の基準として公表されている。一実施形態では、この開示の医薬組成物は、本明細書に記載される化合物と、滅菌済みの賦形剤を含む薬学的に許容可能な担体とを含む。一実施形態では、本医薬組成物は、配列番号１〜１０、２１、２５、２７〜３０、４６、４９、５０、及び５１から選択される化合物を含み；そして、薬学的に許容可能な担体は、滅菌済みの賦形剤を含む。一実施形態では、滅菌済みの賦形剤は、本明細書に記載される賦形剤の滅菌形態である。
【０２９１】
一態様では、本発明は、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物、ならびに任意選択的に別の心血管治療剤の、持続的な投与に向けられる。一実施形態では、剤（複数可）は、少なくとも約０．５時間、約１〜２４時間、少なくとも約２時間、少なくとも約３時間、少なくとも約４時間、少なくとも約５時間、少なくとも約６時間、少なくとも約７時間、少なくとも約８時間、少なくとも約９時間、少なくとも約１０時間、少なくとも約１１時間、少なくとも約１２時間、又は少なくとも約２４時間、投与される。
【０２９２】
本明細書に参照又は記載される疾患、障害、及び／又は状態にあるか又はそうある疑いがあるか又はそうある傾向がある対象を治療する方法のいずれも、本明細書に記載される用量、剤形、製剤、組成物、及び／又はデバイスのうちいずれかの投与を利用することがある。
【０２９３】
本発明のより良い理解は、以下の非限定的な実験項への参照により高められるものとなり、この実験項は、形はどうあれ説明的なものであり、本発明又は特許請求の範囲を限定することを意図するものではない。データは、記載されるような心血管の疾患、障害、及び状態の治療のための本明細書に記載される化合物及び組成物の使用を、支援するものである。
【実施例】
【０２９４】
方法
細胞培養
【０２９５】
ヒト大脳微小血管内皮（ｈＣＭＶＥＣ）細胞［ＡＢＭＧｏｏｄ、（Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  １２：１３１］を、１０％ＦＣＳ、１μｇ／ｍＬ  ヒドロコルチゾン（Ｓｉｇｍａ）、３μｇ／ｍＬ  ヒトＦＧＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）、１０μｇ／ｍＬ  ヒトＥＧＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）、１０μｇ／ｍＬ  ヘパリン（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）及び８０μＭ  ブチリルｃＡＭＰ（Ｓｉｇｍａ）を補ったＭ１９９培地（Ｇｉｂｃｏ）中で成長させ、１μｇ／ｃｍ２コラーゲンＩ（Ｇｉｂｃｏ）で被覆されたＴ２５フラスコ又はＴ７５フラスコ中で培養した。ＡＲＰＥ−１９  細胞を、ＤＭＥＭ／Ｆ：１２、１０％ＦＣＳ及び１％  抗生物質−抗真菌剤（Ｔｈｅｒｍｏ  ｆｉｓｈｅｒ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で培養した。全ての細胞を、特段に明示しない限り、８０〜９０％の集密度に成長させ、ＴｒｙｐＬＥ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてトリプシン処理し、１：３〜１：５の比で分けて、３７°Ｃ、９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２で培養した。
ペプチド及び化学試薬
【０２９６】
ギャップ結合に関する細胞のスクレープロードダイ対合アッセイ、ヘミチャネルの遮断に関する誘導されたタンパク質の分布の変化及びＡＴＰ放出の試験に用いるために、コネキシン４３模倣ペプチド（ペプチド５、配列ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ）（Ａｕｓｐｅｐ、オーストラリア）を純度＞９５％で合成し、ストック濃度１０ｍＭでミリＱ  Ｈ２Ｏに溶解した。競合アッセイに用いるため、細胞外ループに適合するペプチドをカスタム合成し、製造業者（Ａｕｓｐｅｐ、オーストラリア）により供給された純度に従ってミリＱ  Ｈ２Ｏにストック濃度１ｍＭで溶解した。ペプチド５配列置換試験に用いるために、ペプチドをオークランド大学化学科で作製した。Ｆｍｏｃ固相合成を用いてペプチドを調製した。Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ又はＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨをＨＭＰＰリンカーに予めロードし、自前で調製したアミノメチルＰＳ樹脂２．１（ＤＭＦ中でＤＩＣを使用）に付加した。これに続いて、自動化Ｔｒｉｂｕｔｅ  Ｆｍｏｃ−ＳＰＰＳを介して、０．１  Ｍの６−Ｃｌ−ＨＯＢｔ及びＨＢＴＵ及びＮＭＭをそれぞれ含有する５％ピペラジンを用いて、脱保護とカップリングとの交互の反応に供した。ＴＦＡを用いて樹脂を切断して粗生成物を得、それを分取用ＲＰ−ＨＰＬＣを介する精製に供した。ペプチドを高純度（＞９５％）かつ好収率（１７％〜４６％）で取得した。全アラニンを置換された類似体は、ミリＱ  Ｈ２Ｏに可溶性であった（表５）。
表５  ペプチド５配列の特異性を検討するためのコネキシン４３の単アラニン置換ペプチド。アラニン置換を下線部で標示する。
【表３】
2019522041.tif 000004
実施例１：切頭型ペプチド５モチーフの合成
【０２９７】
機能に必須のペプチド５のモチーフを決定するために、さらに６種の切頭型ペプチド（表２）を純度９５％で合成し、ミリＱ  Ｈ２Ｏにストック濃度１０ｍＭで溶解した（ＣｈｉｎａＰｅｐｔｉｄｅ  Ｃｏ  Ｌｔｄ、上海、中国；ｗｗｗ．ｃｈｉｎａｐｅｐｔｉｄｅ．ｏｒｇ）。
表２  コネキシン４３ペプチドの切頭型ペプチド
【表４】
2019522041.tif 000005
【０２９８】
ペプチド５（ＲＦＫＰＳＬＣＴＴＤＥＶ）のスクランブル配列をペプチド対照（Ａｕｓｐｅｐ、オーストラリア）として使用した（尤もこの配列は、細胞骨格タンパク質に相同性があり、非特異的作用を有する可能性があった）。非特異的なヘミチャネル阻害剤である塩化ランタン（ＬａＣｌ３、Ｓｉｇｍａ）（Ｍｙｌｖａｇａｎａｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ５：１７２）をミリＱ  Ｈ２Ｏにストック濃度１ｍＭで溶解した。カルバノクソロン（ＣＢＸ、Ｓｉｇｍａ）、コネキシンチャネルの非特異的な阻害剤、及びさらにギャップ結合チャネルの広範囲阻害剤（Ｓａｌａｍｅｈ  ａｎｄ  Ｄｈｅｉｎ，２００５，Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １７１９：３６−５８）をミリＱ  Ｈ２Ｏにストック濃度１０ｍＭで溶解した。
実施例２：機能のためのペプチド５のモチーフの決定
【０２９９】
機能に必須のペプチド５のモチーフを決定するために、６種の切頭型ペプチド（表２）を純度９５％で合成し、ミリＱ  Ｈ２Ｏにストック濃度１０ｍＭで溶解した（ＣｈｉｎａＰｅｏｔｉｄｅ  Ｃｏ  Ｌｔｄ、上海、中国；ｗｗｗ．ｃｈｉｎａｐｅｐｔｉｄｅ．ｏｒｇ）。
【０３００】
ペプチド５（ＲＦＫＰＳＬＣＴＴＤＥＶ）のスクランブル配列をペプチド対照（Ａｕｓｐｅｐ、オーストラリア）として使用した（尤もこの配列は、細胞骨格タンパク質に相同性があり、非特異的作用を有する可能性があった）。非特異的なヘミチャネル阻害剤である塩化ランタン（ＬａＣｌ３、Ｓｉｇｍａ）（Ｍｙｌｖａｇａｎａｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）を、ミリＱ  Ｈ２Ｏにストック濃度１ｍＭで溶解した。コネキシンチャネルの非特異的な阻害剤であり、広範囲のギャップ結合チャネルの阻害剤でもある（Ｓａｌａｍｅｈ  ａｎｄ  Ｄｈｅｉｎ，２００５）カルバノクソロン（ＣＢＸ、Ｓｉｇｍａ）を、ミリＱ  Ｈ２Ｏにストック濃度１０ｍＭで溶解した。
スクレープローディングアッセイ  
【０３０１】
ｈＣＭＶＥＣ細胞を、１μｇ／ｃｍ２コラーゲンＩ（Ｇｉｂｃｏ）１２ウェルプレートにウェル当たり０．４×１０６個の細胞の密度で広げて、一晩培養した。培養培地中に溶解したペプチド５（５〜１００μＭ）中で、集密な単層のｈＣＭＶＥＣを、２時間又は２４時間プレインキュベーションした。濃度１００μＭのＣＢＸを陽性対照として使用した。Ｃａ２＋又はＭｇ２＋不含のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いて、細胞を３回洗浄した。次いで、対合しているギャップ結合チャネルを通じて移送される蛍光色素（ｅｌ−Ｆｏｕｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  １６８：４２２−４３０）である０．０５％ルシファーイエロー（ＬＹ）（Ｓｉｇｍａ）、ＰＢＳに溶解された＋／−ペプチド５中で、細胞をインキュベーションし、サイズ１０の炭素鋼の手術用刃（ＳｗａｎＮ−Ｍｏｒｔｏｎ、イギリス）を用いて掻創を付けた。光のない、３７°Ｃ、９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２での５分間のインキュベーションに続いて、０．０５％ＬＹ溶液を除去した。Ｃａ２＋又はＭｇ２＋を含むＰＢＳで細胞を４回リンスし、次いで、ｐＨ７．４のＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）の中で、室温で１０分間固定した。次いで、蛍光イメージングの前に、細胞をＰＢＳで３回洗浄して、ＰＦＡを除去した。蛍光イメージを、Ｎｉｋｏｎ  ＴＥ２０００Ｅ倒立蛍光顕微鏡（１０×倍率、０．３開口数）を用いて可視化し、Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｓｉｇｈｔ  ＣＣＤカメラ及びＥｃｌｉｐｓｅ  Ｎｅｔソフトウェア（Ｎｉｋｏｎ）を用いて取り込んだ。独立した３つの実験から各ウェル内で３つのイメージを解析用に撮影し、ローディングされたものから染料の取り込みを示す細胞の総数を、マスキングされた観察者が手作業でカウントした。
Ｃｘ４３プラークの免疫細胞化学及び定量
【０３０２】
ＡＲＰＥ−１９細胞を、８ウェルのガラスチャンバースライド（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ）で集密になるまで成長させた。集密な単層のＡＲＰＥ−１９細胞を、培養培地中、終濃度５０から５００μＭのペプチド５、５００μＭ  ＬａＣｌ３、及び５００μＭ  ＣＢＸで、２時間又は６時間インキュベーションした。細胞を、ｐＨ７．４で４％  ＰＦＡ（ＰｒｏＳｃｉＴｅｃｈ）中、室温で１０分間固定し、ＰＢＳ中０．０５％  Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００を用いて透過処理し、非特異的な標識化をブロッキングするために、１０％正常ヤギ血清中でインキュベーションした。固定、透過処理、及びブロッキングの各ステップの間に、細胞を、０．１ｍＭ  ＣａＣｌ２を含有するＰＢＳで３回リンスした。コネキシン４３ポリクローナルウサギ抗体（Ｃ６２１９、Ｓｉｇｍａ、１：２０００）を一晩適用した後、ヤギ抗ウサギＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５６８二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１：２００）を４５分間適用した。核を、１０，０００倍希釈のＤＡＰＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて５分間、対比染色し、Ｃｉｔｉｆｌｕｏｒ（商標）マウント培地を用いてマウントした。油浸レンズ（６０×倍率、１．３５開口数）を取り付けたＯｌｙｍｐｕｓ  ＦＶ１０００正立共焦点レーザー走査顕微鏡及びＯｌｙｍｐｕｓ  ＦＶ１０−ＡＳＷ  ４．０ソフトウェアを用いて、イメージを可視化して取り込んだ。ＭｅｔａＸｐｒｅｓｓ（登録商標）イメージ取得及び解析ソフトウェア（バージョン５．３．０．１、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）のＴｒａｎｓｆｌｕｏｒ機能を使用して、イメージ当たりのコネキシン４３のプラークの総面積を定量した。結果は、平均値±標準誤差を表し、統計検定を、一元ＡＮＯＶＡ及びテューキーの多重比較検定を用いて実施した。
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏの虚血再灌流でのＡＴＰアッセイ
【０３０３】
実験の前日に、ヒト大脳内皮細胞（ｈＣＭＶＥＣ）を、コラーゲン被覆１２ウェルプレート（１μｇ／ｃｍ２）中、ウェル当たり０．０２５×１０６個の細胞の密度で広げた。細胞を培養培地中で一晩インキュベーションした。低酸素虚血脳の間質腔のイオン濃度及び酸−塩基のシフトを模した低酸素、酸性、イオンシフト型リンゲル傷害溶液（Ｂｏｎｄａｒｅｎｋｏ  ａｎｄ  Ｃｈｅｓｌｅｒ，２００１，Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １７：４１９１−４２３０）を使用して、ヘミチャネルの開口を誘発した。この傷害溶液は、（ｍＭで）以下：３８  ＮａＣｌ、１３  ＮａＨＣＯ３、３  Ｎａ−グルコン酸塩、６５  Ｋ−グルコン酸塩、３８  ＮＭＤＧ−Ｃｌ、１  ＮａＨ２ＰＯ４、及び１．５  ＭｇＣｌ２を含有していた。傷害溶液を、９５％Ｎ２、５％ＣＯ２ガス（２０Ｌ／分）で５分間発泡させ、使用前にｐＨを６．６に調整した。標準リンゲル溶液は、（ｍＭで）以下：１２４  ＮａＣｌ、３  ＫＣｌ、２６  ＮａＨＣＯ３、２６  ＮａＨＣＯ３、１  ＮａＨ２ＰＯ４、１．３  ＣａＣｌ２、１．５  ＭｇＣｌ２、及び１０  グルコースを含有し、使用前にｐＨを７．４に調整された（Ｂｏｎｄａｒｅｎｋｏ  ａｎｄ  Ｃｈｅｓｌｅｒ，２００１）。虚血傷害モデルでは、ｈＣＭＶＥＣ  細胞を、５００μＬの傷害溶液＋／−ペプチド５（１００μＭ）（Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｃｅｌｌ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  ＆  ａｄｈｅｓｉｏｎ  １５：２７−４２；Ｄａｎｅｓｈ−Ｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｂｒａｉｎ  ：ａ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  １３５：５０６−５２０；Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ７１：１２１−１３２；Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｅｘｐｅｒｉｍｒｎｔａｌ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ２４８：３０１−３０８；Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，ＰｌｏＳ  ｏｎｅ  ９：ｅ９６５５８；Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｊ  Ｃｅｒｅｂ  Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ）もしくは＋／−細胞外ループ配列（表５）、又は傷害溶液（５００μＬ）中に終濃度１００μＭで溶解された修飾ペプチド（表２、３）の中で、２時間インキュベーションした。陰性対照では、ｈＣＭＶＥＣ細胞を、５００μＬの標準リンゲル溶液のみの中で２時間インキュベーションした。陽性対照では、ｈＣＭＶＥＣ細胞を、５００μＬの標準リンゲル溶液のみの中で２時間インキュベーションした。全てのインキュベーションを、３７°Ｃ、９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２で実施した。各実験の終了時に、試料を取り出して直ちに氷上に置いた。試料中のＡＴＰの濃度を、ルシフェリン／ルシフェラーゼ生物発光反応（ＡＴＰ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を使用して決定し、蛍光プレートリーダー（ＶＩＣＴＯＲ  Ｘ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＃２０３０−００１０）を使用して検出した。各実験で、ＡＴＰ標品（０から５００ｎＭ）から標準曲線を作製して、生物発光単位をＡＴＰ濃度に変換した。治療群は、実験当たり２ウェルの試料サイズを有し、各試料のＡＴＰの濃度は、３連にて１０回の読取りの繰り返���にわたって測定された。データを、傷害又は傷害−再灌流の陽性対照に対する平均値±標準誤差として提示する。分散の一元分析及びテューキーの多重比較検定を用いて、試料間の統計的有意差を試験した。
単アラニン置換ペプチド及び切頭型ペプチドのアッセイ
【０３０４】
上に記載されたようにｈＣＭＶＥＣ細胞で虚血傷害モデルを用いて、表５及び表２に一覧に挙げられたペプチドを評価し、ＡＴＰ放出の測定のために培地を採集した。これらの実験に用いるために、ヘミチャネルの遮断を誘導することが知られている５〜５０μＭ（Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌｅｔａｌ．，２００８）よりも僅かに高い、標準的な１００μＭ濃度を使用した。これは、機能的有効性が低下する可能性があるペプチドを用いたいかなる結果も、確実にやはり測定可能な範囲内にあるものとするためである。
競合的ペプチド結合アッセイ
【０３０５】
コネキシン４３タンパク質上のペプチド５相互作用部位を、競合アッセイを用いて決定した。細胞外ループ配列（Ａｕｓｐｅｐ、オーストラリア）をミリＱ  Ｈ２Ｏにストック濃度１ｍＭで溶解した（表３）。細胞外ループ配列を、天然のペプチド５と１：１の比（１００μＭ）で混合し、それを、実験前に室温で１時間放置して、競合的な結合が起こるようにした。１時間のインキュベーション後、細胞外ループ配列とペプチド５との混合物を、傷害溶液に溶解し、上に記載された虚血再灌流モデルを用いて、ｈＣＭＶＥＣ細胞に２時間曝露した。次いで、細胞外の培地をＡＴＰの測定用に採集した。全ての細胞外ループペプチドは、ＥＬ２ａ配列を除いてミリＱ  Ｈ２Ｏに可溶性であり、このＥＬ２ａ配列は、以降の試験には使用しなかった。
表３  競合アッセイで使用されたコネキシン４３の細胞外ループ配列
【表５】
2019522041.tif 000006
＊ＥＬ２ａ配列をこの試験に使用しなかった。
スクレープローディングアッセイ
【０３０６】
ｈＣＭＶＥＣ細胞を、１μｇ／ｃｍ２コラーゲンＩ（Ｇｉｂｃｏ）１２ウェルプレートにウェル当たり０．４×１０６個の細胞の密度で広げて、一晩培養した。培養培地中に溶解したペプチド５（５〜１００μＭ）中で、集密な単層のｈＣＭＶＥＣを、２時間又は２４時間プレインキュベーションした。濃度１００μＭのＣＢＸを陽性対照として使用した。Ｃａ２＋又はＭｇ２＋不含のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いて、細胞を３回洗浄した。次いで、対合しているギャップ結合チャネルを通じて移送される蛍光色素（ｅｌ−Ｆｏｕｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７）である０．０５％  ルシファーイエロー（ＬＹ）（Ｓｉｇｍａ）、ＰＢＳに溶解された＋／−ペプチド５中で細胞をインキュベーションし、サイズ１０の炭素鋼の手術用刃（ＳｗａｎＮ−Ｍｏｒｔｏｎ、イギリス）を用いて掻創を付けた。光のない、３７°Ｃ、９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２での５分間のインキュベーションに続いて、０．０５％ＬＹ溶液を除去した。Ｃａ２＋又はＭｇ２＋を含むＰＢＳで細胞を４回リンスし、次いで、ｐＨ７．４のＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）の中で、室温で１０分間固定した。次いで、蛍光イメージングの前に、細胞をＰＢＳで３回洗浄して、ＰＦＡを除去した。蛍光イメージを、Ｎｉｋｏｎ  ＴＥ２０００Ｅ倒立蛍光顕微鏡（１０×倍率、０．３開口数）を用いて可視化し、Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｓｉｇｈｔ  ＣＣＤカメラ及びＥｃｌｉｐｓｅ  Ｎｅｔソフトウェア（Ｎｉｋｏｎ）を用いて取り込んだ。独立した３つの実験から各ウェル内で３つのイメージを解析用に撮影し、ローディングされたものから染料の取り込みを示す細胞の総数を、マスキングされた観察者が手作業でカウントした。
Ｃｘ４３プラークの免疫細胞化学及び定量
【０３０７】
ＡＲＰＥ−１９細胞を、８ウェルのガラスチャンバースライド（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ）で集密になるまで成長させた。集密な単層のＡＲＰＥ−１９細胞を、培養培地中、終濃度５０から５００μＭのペプチド５、５００μＭ  ＬａＣｌ３、及び５００μＭ  ＣＢＸで、２時間又は６時間インキュベーションした。細胞を、ｐＨ７．４で４％  ＰＦＡ（ＰｒｏＳｃｉＴｅｃｈ）中、室温で１０分間固定し、ＰＢＳ中０．０５％  Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００を用いて透過処理し、非特異的な標識化をブロッキングするために、１０％正常ヤギ血清中でインキュベーションした。固定、透過処理、及びブロッキングの各ステップの間に、細胞を、０．１ｍＭ  ＣａＣｌ２を含有するＰＢＳで３回リンスした。コネキシン４３ポリクローナルウサギ抗体（Ｃ６２１９、Ｓｉｇｍａ、１：２０００）を一晩適用した後、ヤギ抗ウサギＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５６８二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１：２００）を４５分間適用した。核を、１０，０００倍希釈のＤＡＰＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて５分間、対比染色し、Ｃｉｔｉｆｌｕｏｒ（商標）マウント培地を用いてマウントした。油浸レンズ（６０×倍率、１．３５開口数）を取り付けたＯｌｙｍｐｕｓ  ＦＶ１０００正立共焦点レーザー走査顕微鏡及びＯｌｙｍｐｕｓ  ＦＶ１０−ＡＳＷ  ４．０ソフトウェアを用いて、イメージを可視化して取り込んだ。ＭｅｔａＸｐｒｅｓｓ（登録商標）イメージ取得及び解析ソフトウェア（バージョン５．３．０．１、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）のＴｒａｎｓｆｌｕｏｒ機能を使用して、イメージ当たりのコネキシン４３のプラークの総面積を定量した。結果は、平均値±標準誤差を表し、統計検定を、一元ＡＮＯＶＡ及びテューキーの多重比較検定を用いて実施した。
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏの虚血再灌流でのＡＴＰアッセイ
【０３０８】
実験の前日に、ヒト大脳内皮細胞（ｈＣＭＶＥＣ）を、コラーゲン被覆１２ウェルプレート（１μｇ／ｃｍ２）中、ウェル当たり０．０２５×１０６個の細胞の密度で広げた。細胞を培養培地中で一晩インキュベーションした。低酸素虚血脳の間質腔のイオン濃度及び酸−塩基のシフトを模した低酸素、酸性、イオンシフト型リンゲル傷害溶液（Ｂｏｎｄａｒｅｎｋｏ  ａｎｄ  Ｃｈｅｓｌｅｒ，２００１，Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １７：４１９１−４２３０）を使用して、ヘミチャネルの開口を誘発した。この傷害溶液は、（ｍＭで）以下：３８  ＮａＣｌ、１３  ＮａＨＣＯ３、３  Ｎａ−グルコン酸塩、６５  Ｋ−グルコン酸塩、３８  ＮＭＤＧ−Ｃｌ、１  ＮａＨ２ＰＯ４、及び１．５  ＭｇＣｌ２を含有していた。傷害溶液を、９５％Ｎ２、５％ＣＯ２ガス（２０Ｌ／分）で５分間発泡させ、使用前にｐＨを６．６に調整した。標準リンゲル溶液は、（ｍＭで）以下：１２４  ＮａＣｌ、３  ＫＣｌ、２６  ＮａＨＣＯ３、２６  ＮａＨＣＯ３、１  ＮａＨ２ＰＯ４、１．３  ＣａＣｌ２、１．５  ＭｇＣｌ２、及び１０  グルコースを含有し、使用前にｐＨを７．４に調整された（Ｂｏｎｄａｒｅｎｋｏ  ａｎｄ  Ｃｈｅｓｌｅｒ，２００１）。虚血傷害モデルでは、ｈＣＭＶＥＣ  細胞を、５００μＬの傷害溶液＋／−ペプチド５（１００μＭ）（Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００８、Ｄａｎｅｓｈ−Ｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２、Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２、Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３ｂ、Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４、Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）もしくは＋／−細胞外ループ配列（表５）、又は傷害溶液（５００μＬ）中に終濃度１００μＭで溶解された修飾ペプチド（表２、３）の中で、２時間インキュベーションした。陰性対照では、ｈＣＭＶＥＣ細胞を、５００μＬの標準リンゲル溶液のみの中で２時間インキュベーションした。陽性対照では、ｈＣＭＶＥＣ細胞を、５００μＬの標準リンゲル溶液のみの中で２時間インキュベーションした。全てのインキュベーションを、３７°Ｃ、９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２で実施した。各実験の終了時に、試料を取り出して直ちに氷上に置いた  試料中のＡＴＰの濃度を、ルシフェリン／ルシフェラーゼ生物発光反応（ＡＴＰ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を使用して決定し、蛍光プレートリーダー（ＶＩＣＴＯＲ  Ｘ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＃２０３０−００１０）を使用して検出した。各実験で、ＡＴＰ標品（０から５００ｎＭ）から標準曲線を作製して、生物発光単位をＡＴＰ濃度に変換した。治療群は、実験当たり２ウェルの試料サイズを有し、各試料のＡＴＰの濃度は、３連にて１０回の読取りの繰り返しにわたって測定された。データを、傷害又は傷害−再灌流の陽性対照に対する平均値±標準誤差として提示する。分散の一元分析及びテューキーの多重比較検定を用いて、試料間の統計的有意差を試験した。
単アラニン置換ペプチド及び切頭型ペプチドのアッセイ
【０３０９】
上に記載されたようにｈＣＭＶＥＣ細胞で虚血傷害モデルを用いて、表５及び表２に一覧に挙げられたペプチドを評価し、ＡＴＰ放出の測定のために培地を採集した。これらの実験に用いるために、ヘミチャネルの遮断を誘導することが知られている５〜５０μＭ（Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌｅｔａｌ．，２００８）よりも僅かに高い、標準的な１００μＭ濃度を使用した。これは、機能的有効性が低下する可能性があるペプチドを用いたいかなる結果も、確実にやはり測定可能な範囲内にあるものとするためである。
競合的ペプチド結合アッセイ
【０３１０】
コネキシン４３タンパク質上のペプチド５相互作用部位を、競合アッセイを用いて決定した。細胞外ループ配列（Ａｕｓｐｅｐ、オーストラリア）をミリＱ  Ｈ２Ｏにストック濃度１ｍＭで溶解した（表３）。細胞外ループ配列を、天然のペプチド５と１：１の比（１００μＭ）で混合し、それを、実験前に室温で１時間放置して、競合的な結合が起こるようにした。１時間のインキュベーション後、細胞外ループ配列とペプチド５との混合物を、傷害溶液に溶解し、上に記載された虚血再灌流モデルを用いて、ｈＣＭＶＥＣ細胞に２時間曝露した。次いで、細胞外の培地をＡＴＰの測定用に採集した。全ての細胞外ループペプチドは、ＥＬ２ａ配列を除いてミリＱ  Ｈ２Ｏに可溶性であった。
結果
高濃度のペプチド５は、コネキシン４３のプラークのＡＲＰＥ−１９膜からの内在化を引き起こす
【０３１１】
ペプチド５は、低濃度（５〜５０μＭ）では特異的にヘミチャネルを阻害するが、高濃度（５００μＭ）ではヘミチャネルとギャップ結合チャネルの機能の両方を阻害する（Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。発明者らは、細胞間の境界でコネキシン４３の内在性発現の高い細胞株であるＡＲＰＥ−１９細胞（Ｈｕｔｎｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ＆  ｖｉｓｕａｌ  ｓｃｉｅｎｃｅ  ４９：８００−８０６）を、ペプチド５（５００μＭ）に曝露し、それがコネキシン４３ギャップ結合のプラークの分布及び数に及ぼす効果を決定した（図１）。図１は、免疫蛍光性のコネキシン４３のプラークが、基本条件下で、細胞間の接触の間に、通常のタイル様のパターンで標識されていることを示す（図１Ａ）。さらに、コネキシン４３の標識は、核周囲の領域にも可視化され、その領域は、ゴルジ装置のコネキシン４３の細胞内プールを表す可能性が最も高い（Ｄａｓ  Ｓａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  ｓｃｉｅｎｃｅ  １１４：４０１３−４０２４）。ペプチド５（５００μＭ）への２時間の曝露後、コネキシン４３のプラークが細胞間の接触に沿って可視化されたが、膜から細胞の中心へ延びる細胞質の流れのパターンを示した（図１Ａ）。また、点状のコネキシン４３の標識が、形質膜直下の細胞内領域に可視化された（図１Ａ）。細胞間の境界面に沿ったコネキシン４３のプラークは、ペプチド５（５００μＭ）への６時間の曝露後に断片化されていた（図１Ａ）。
【０３１２】
発明者らはまた、驚くべきことに、細胞当たりのコネキシン４３の総標識量がペプチド５への曝露後に低減することを確定した。ペプチド５（５０〜５００μＭ）を用いた２時間又は６時間の処理に続いて観察された細胞当たりのコネキシン４３の標識に、有意差はなかった（ｐ＞０．１）。同様に、ＬａＣｌ３（５００μＭ）は、処理後２時間又は６時間では、対照と有意に違いはなかった（ｐ＞０．１）（図１Ｂ、Ｃ）。これに対して、ＣＢＸ（５００μＭ）によって、コネキシン４３の総発現量は、対照に対して、２時間の曝露に続き３０．０±８．２％（ｐ＝０．００４３）、６時間の曝露後に５３．４±８．１％（ｐ＜０．０００１）、有意に低減した（図２）。
アラニン置換は、ペプチド５媒介性のギャップ結合の不対合を変えなかった。
【０３１３】
図２は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで天然型及び修飾型のペプチド５がギャップ結合の連絡に及ぼす効果をまとめたものである。対照では、ＬＹ陽性のｈＣＭＶＥＣ細胞は、ギャップ結合チャネルを通じた細胞間のＬＹの移送を標示し、それは、ＣＢＸ及びペプチド５を用いた処理後に低減した（図２Ａ）。ＣＢＸ及び天然のペプチド５によって、ＬＹ陽性細胞は、対照に比べて、１６．３±１．１％（ｐ＜０．０００１）及び５６．２±２．６％（ｐ＜０．０００１）に有意に減少した（図２Ａ）。天然のペプチド５に比べると、アラニン改変を有するＬＹ陽性細胞に有意な差はなかった（ｐ＞０．９）（図２Ｂ）。
ペプチド５媒介性のヘミチャネルの遮断は、精緻な配列特異的な機構を介する。
【０３１４】
ペプチド５媒介性のヘミチャネル遮断機構を確定するために、発明者らは、ペプチド５内のアラニンを体系的に置換して（表５）、どのアミノ酸が有効性に重要であるかを決定した。ＣＢＸ対照及びＬａＣｌ３対照は、ＡＴＰを、傷害対照（１００±３．６％）のそれぞれ９．１±１０．１％（ｐ＜０．０００１）及び４７．８±１３．６％（ｐ＜０．０００１）に有意に減じた（図３）。天然のペプチド５を用いた処理後、ＡＴＰ放出は、傷害対照の４４．６±７．７％に有意に低減した（ｐ＜０．０００１）（図３）。機能の喪失が、アラニン置換体Ａｌａ−２、Ａｌａ−３、Ａｌａ−４、Ａｌａ−５、Ａｌａ−６、Ａｌａ−７、Ａｌａ−８、及びＡｌａ−１１により観察され、これらは傷害対照と有意差がない程度であった（ｐ＞０．９）（図３）。これに対して、Ａｌａ−４、Ａｌａ−９、Ａｌａ−１０、及びＡｌａ−１２の置換体は、ＡＴＰ放出が傷害対照のそれぞれ６０．７±４．３％（ｐ＝０．００９８）、６２．４±１２．４％（ｐ＝０．０１５４）、６２．０±９．０％（ｐ＝０．０１３７）、６１．２±９．８％（ｐ＝０．０２）に有意に低下し（図３）、このことは、これらのペプチドが有効性を保持することを標示する。したがって、Ａｌａ−４、Ａｌａ−９、Ａｌａ−１０、及びＡｌａ−１２の置換ペプチドは、天然のペプチド５と有意な差がなかった（ｐ＞０．０９）。Ａｌａ−１は、傷害対照又は天然のペプチド５と比べると、有意な差がなかった。
ＳＲＰＴＥＫＴモチーフは、ペプチド５媒介性のヘミチャネルの阻害に極めて重要であるが、それ自体は有効ではない    
【０３１５】
ペプチド５の機能領域（複数可）を決定するために、切頭型ペプチド５配列をＡＴＰヘミチャネルアッセイに供試した（表２、図４）天然のペプチド５配列は、ＡＴＰを、傷害対照（１００±３．７％）の４７．３±５．１％に有意に減少させた（ｐ＜０．０００１）。ペプチドｍｏｄ−２、ｍｏｄ−３、ｍｏｄ−４、ｍｏｄ−５、及びｍｏｄ−６は、傷害対照とは有意に差がなく、このことは、機能の喪失を標示する（図４）。言い換えれば、ｍｏｄ−２、ｍｏｄ−３、ｍｏｄ−４、ｍｏｄ−５、及びｍｏｄ−６は、ＡＴＰ放出を阻害する能力の点では、天然のペプチド５にそれぞれ比べて、２８．４±９．８％（ｐ＝０．０２３１）、５９．２±８．８％（ｐ＜０．０００１）、４３．９±８．８％（ｐ＜０．０００１）、５９．６±１１．５％（ｐ＜０．０００１）、及び６８．８±９．８％（ｐ＜０．０００１）に有意に有効性が低かった。興味深いことに、ｍｏｄ−１（４９．１±７．１％）は、傷害対照と有意に差があったが（ｐ＜０．０００１）、天然のペプチド５とは有意に差はなく（ｐ＞０．９）、このことは、それが機能を保持していたことを示す。．
【０３１６】
これらの結果は、ＡＴＰ放出に関するペプチド５媒介性の阻害が配列特異的であり、保存されているＳＲＰＴＥＫＴ領域がペプチド５の機能に重要であるようではあるが、それ自体はヘミチャネルの阻害に有効ではないことを示す。また、発明者らは、驚くべきことに、スクレープローディングアッセイにおいて、ＳＲＰＴＥＫＴ配列がそれ自体で高濃度で、ギャップ結合の連絡を阻害できるか否かを確定した（図５）。ＣＢＸ（カルベノキセロン（ｃａｒｂｅｎｏｘｅｌｏｎｅ）は、ＬＹ染料の移送が、非処理対照（１００±４．５％）の１５．３±１．８％（ｐ＜０．０００１）に有意に低減した（図５）。非処理対照に比べて、ＬＹ染料の移送は、ペプチド５及びＳＲＰＴＥＫＴの処理により、それぞれ７９．４±３．９％（ｐ＝０．００５７）及び７７．６±４．８％（ｐ＝０．００２８）に有意に低減した（図５）。非処理対照に対して、スクランブルペプチドでは有意差はなかった（ｐ＝０．３７）。
作用部位の競合アッセイ
【０３１７】
作用部位を決定するために、コネキシン４３タンパク質の細胞外ループ１及び２由来の合成ペプチド断片（表３）を、天然のペプチド５に対して供試した。ペプチドセグメントの画分は、天然のペプチド５配列に競合的に結合することから、ペプチド５の機能の喪失が観察され、ヘミチャネル媒介性のＡＴＰ放出は、ペプチド５のみに比べるとさらに大きい。図６は、ＣＢＸ及びペプチド５が、ＡＴＰ放出を、それぞれ傷害対照（１００±３．５％）の１３．４±４．８％（ｐ＜０．０００１）及び５４．１±４．４％（ｐ＜０．０００１）に有意に低減したことを実証する。ペプチド５と組み合わせたセグメントＥＬ１完全配列、ＥＬ１ａ配列、ＥＬ１ｂ配列、及びＥＬ１ｃ配列、ならびにＥＬ２ｂ配列は、ＡＴＰを、それぞれ傷害対照の３．２±６．７％（ｐ＜０．０００１）、６０．１±６．２％（ｐ＜０．０００１）、２９．３±５．５％（ｐ＜０．０００１）、４０．１±７．０％（ｐ＜０．０００１）、及び７５．５±７．４％（ｐ＝０．０３０２）に有意に低下した（図６）。驚くべきことに、発明者らは、ペプチド５と組み合わせたＥＬ１完全配列及びＥＬ１ｂ配列が、ペプチド５のみに比べて、有意に有効性が５０．８±７．９％（ｐ＜０．０００１）及び２４．８±８．８％（ｐ＝０．０３３４）大きいことを発見している（図６）。これに対し、ＥＬ２ｃは、ペプチド５の機能が傷害対照と有意差がない程（ｐ＝０．５６１５）に完全に消滅し、ＡＴＰ放出は、ペプチド５のみよりも有意に５８．９±８．８％（ｐ＜０．０００１）大きかった。これらの結果は、ＥＬ２ｃ配列がペプチド５のための作用部位である可能性があることを標示する。
実施例３：ギャップ結合及び／又はコネキシンチャネル調節ペプチドの製剤
【０３１８】
この発明は、１つ又は複数のギャップ結合及び／又はコネキシンチャネル調節ペプチドを含有する製剤を提供する。本発明は、治療使用に適しかつ長期間にわたって通常使用の保管条件下で安定を保つ、ギャップ結合及び／又はコネキシンチャネル調節ペプチドの水性製剤を提供する。この製剤は、ギャップ結合及び／又はコネキシン調節ペプチドを用いた治療が治療効果をもたらすような状態を、治療するのに有用である。局所投与のために、１滴から２滴のこれらの製剤を、１日当たり１回から６回、患部に送達することができる。
【０３１９】
コネキシン調節ペプチドの投与について、コネキシン４３調節ペプチド（モジュレーター）は、製剤中に約８μＭから約２０μＭの終濃度で存在することがあり、あるいは、コネキシン４３モジュレーターは、約１０μＭから約２０μＭの終濃度で、又は約１０から約１５μＭの終濃度で存在する。ある他の実施形態では、コネキシン４３モジュレーターは、約１０μＭの終濃度で存在する。さらに別の実施形態では、コネキシン４３モジュレーターは、約１〜１５μＭの終濃度で存在する。他の実施形態では、コネキシン４３モジュレーターは、約２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ、１０〜２００μＭ、２００〜３００μＭ、３００〜４００μＭ、４００〜５００μＭ、５００〜６００μＭ、６００〜７００μＭ、７００〜８００μＭ、８００〜９００μＭ、９００〜１０００又は１０００〜１５００μＭ、又は１５００μＭ〜２０００μＭ、２０００μＭ〜３０００μＭ、３０００μＭ〜４０００μＭ、４０００μＭ〜５０００μＭ、５０００μＭ〜６０００μＭ、６０００μＭ〜７０００μＭ、７０００μＭ〜８０００μＭ、８０００μＭ〜９０００μＭ、９０００μＭ〜１０，０００μＭ、１０，０００μＭ〜１１，０００μＭ、１１，０００μＭ〜１２，０００μＭ、１２，０００μＭ〜１３，０００μＭ、１３，０００μＭ〜１４，０００μＭ、１４，０００μＭ〜１５，０００μＭ、１５，０００μＭ〜２０，０００μＭ、２０，０００μＭ〜３０，０００μＭ、３０，０００μＭ〜５０，０００μＭで、もしくはそれを超えて、又は記載された用量のうち任意の２つの間の任意の範囲もしくは部分範囲で、又は又は約２０μＭから約５０，０００μＭまでの範囲内に属する任意の用量で、存在する。
【０３２０】
コネキシン４３モジュレーターの投与について、コネキシンモジュレーターは、本明細書に記載されるペプチド配列のいずれかである。実施形態によっては、コネキシンモジュレーターを配列番号１のペプチドとすることができる。
【０３２１】
調節しているペプチドのそれぞれの１日当たり約１ナノグラム（ｎｇ）／ｋｇと約１ｍｇ／ｋｇ体重との間のさらに他の投薬レベル。ある実施形態では、対象化合物の投薬量は、一般に、ｋｇ体重当たり約１ｎｇから約１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約１ｎｇから約０．１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約１ｎｇから約１０ｎｇ、ｋｇ体重当たり約１０ｎｇから約０．１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約０．１マイクログラムから約１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約２０ｎｇから約１００ｎｇ、ｋｇ体重当たり約０．００１ｍｇから約０．０１ｍｇ、ｋｇ体重当たり約０．０１ｍｇから約０．１ｍｇ、又はｋｇ体重当たり約０．１ｍｇから約１ｍｇの範囲内となる。ある実施形態では、各対象化合物の投薬量は、一般に、ｋｇ体重当たり約０．００１ｍｇから約０．０１ｍｇ、ｋｇ体重当たり約０．０１ｍｇから約０．１ｍｇ、ｋｇ体重当たり約０．１ｍｇから約１ｍｇとなる。２種以上のギャップ結合及び／又はコネキシンチャネル調節ペプチドが使用される場合、各抗コネキシン剤の投薬量は、他方と同じ範囲にある必要はない。例えば、一方のギャップ結合及び／又はコネキシンチャネルモジュレーターの投薬量は、ｋｇ体重当たり約０．０１ｍｇから約１０ｍｇの間であることがあり、別のギャップ結合及び／又はコネキシンチャネルモジュレーターの投薬量は、ｋｇ体重当たり約０．１ｍｇから約１ｍｇ、０．１から約１０、０．１から約２０、０．１から約３０、０．１から約４０、又はｋｇ体重当たり約０．１と約５０ｍｇとの間であることがある。投薬量はまた、ｋｇ体重当たり約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０、１１．０、１２．０、１３．０、１４．０、１５．０、１６．０、１７．０、１８．０、１９．０、２０．０、２１．０、２２．０、２３．０、２４．０、２５．０、２６．０、２７．０、２８．０、２９．０、３０．０、３１．０、３２．０、３３．０、３４．０、３５．０、３６．０、３７．０、３８．０、３９．０、４０．０、４１．０、４２．０、４３．０、４４．０、４５．０、４６．０、４７．０、４８．０、４９．０、５０．０、５２．５、５５．０、５７．５、６０．０、６２．５、６５．０、６７．５、７０．０、７２．５、７５．０、７７．５、８０．０、８２．５、８５．０、８７．５、９０．０、９２．５、９５．０、９７．５、もしくは約１００．０ｍｇ、又は記載された用量のうち任意の２つの間の任意の範囲もしくは部分範囲、又はｋｇ体重当たり約０．１から約１００ｍｇまでの範囲に属する任意の用量とすることができる。
【０３２２】
任意選択的に、本製剤は、患部の投与部位での本製剤の滞留時間を増加させるために、粘度増強剤を含むことができる。非限定的な例としては、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを、粘度増強剤として本願発明に使用することができる。
＊＊＊
【０３２３】
本明細書に記載及び特許請求される本発明は、以下に限定されないが、この詳細な開示に規定又は記載又は参照されるものを含めて、数多くの特質及び実施形態を有する。包括的であることは意図されておらず、本明細書に記載及び特許請求される本発明は、制限ではなく説明の目的で含まれているこの詳細な開示に特定される、特長もしくは実施形態に又はそれによって限定されるものではない。構成要素及びパラメーターの多くが、本発明の範囲を逸脱することなく、ある程度まで変わり得るかもしくは改変され得るか、又は公知の等価物に置換され得ることを、当業者は容易に認識することになる。そのような改変及び等価物は、個別に記載されているがごとく本明細書に組み込まれることが理解されるべきである。また、この明細書に参照又は標示されるステップ、特長、組成物、及び化合物の全てを個別に又は集合的に、ならびに任意の２つ以上の前記ステップ又は特長のうちいずれか又は全てを、本発明は含む。
【０３２４】
本明細書に参照及び記述される全ての特許、刊行物、科学論文、ウェブサイト、ならびに他の文書及び資料は、本発明の属する技術分野の当業者の技能のレベルを標示するものであり、そのような参照される文書及び資料のそれぞれは、参照によりその全体を個別に組み入れられているか又は本明細書にその全体を記載されているのと同じ程度に、ここに参照により組み込まれる。出願人は、任意のそのような特許、刊行物、科学論文、ウェブサイト、電子的に利用可能な情報、及び他の参照される資料又は文書から得られるいずれか及び全ての資料及び情報を、この明細書中に物理的に組み込む権利を保持する。この明細書中でのいかなる出願、特許、及び刊行物への参照も、それらが妥当な先行技術を構成するか又は世界中のいずれかの国での一般常識の一部を形成するという自認又は何らかの形態の示唆として、解されるものではなく解されるべきではない。
【０３２５】
本明細書に記載される具体的な方法及び組成物は、好適な実施形態を代表するものであり、例示的なものであり、本発明の範囲上の限定として意図されるものではない。他の目的、態様、及び実施形態は、この明細書の考慮の下で当業者に生じるものとなり、特許請求の範囲の範囲によって規定されるように、本発明の趣旨の内に包含される。様々な置換及び改変が、本発明の範囲及び趣旨を逸脱することなく、本明細書に開示される本発明になされ得ることが、当業者には容易に明らかになろう。適切に本明細書に説明的に記載される本発明は、必須のものとして本明細書に具体的に開示されない、任意の１つもしくは複数の要素の不在下で、又は１つもしくは複数の限定下で、実践されることがある。それゆえ、例えば、本明細書の各例において、本願発明の実施形態又は例では、用語「含む」、「から本質的になる」、及び「からなる」のいずれも、本明細書の他の２つの用語のどちらかに置き換えられることがある。また、用語「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」などは、拡張的にかつ限定なく読み取られるものとなる。適切に本明細書に説明的に記載される方法及びプロセスは、様々なステップの指示で実践されることがあり、それらは必ずしも、本明細書又は特許請求の範囲に標示されるステップの指示に制限されない。また、本明細書に使用される際に、及び添付の特許請求の範囲では、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が特段に明確に示さない限り、複数の言及を含む。いかなる場合も、本特許は、本明細書に具体的に開示される具体的な例又は実施形態又は方法に限定されるものと解釈されないことがある。いかなる状況であっても、具体的に、かつ限定又は留保なく、出願人による応答書面に明示的に援用されない限り、本特許は、特許商標庁のいかなる審査官又はいかなる他の公務員もしくは従業員によって行われるいかなる陳述によっても限定されるものと解釈されないことがある。さらに、題名、見出しなどは、この文書に関する読み手の理解を高めるために提供され、本願発明の範囲を限定するものと読み取られるべきではない。本明細書に参照される本発明の態様、実施形態、又は構成成分のいかなる例も、非限定的であるものとみなされることになる。
【０３２６】
採用されている用語及び表現は、限定ではなく記載の用語として使用されるのであって、そのような用語及び表現の使用に際して、呈示及び記載される特長のいかなる等価物又はその一部も除外する意図はないが、様々な改変は、特許請求の範囲にあるような本発明の範囲内にある可能性があることが認識される。ゆえに、本願発明が、好適な実施形態及び任意選択的な特長によって具体的に開示されているのにも関わらず、本明細書に開示される概念の改変及びバリエーションが、当業者によって復元されることがあること；及びそのような改変及びバリエーションは、添付の特許請求の範囲によって規定されるようなこの発明の範囲内にあるものとみなされることを理解されたい。
【０３２７】
本発明は、本明細書に幅広く総称的に記載されている。この総称的な開示内にあるさらに狭い種及び亜属のグループ分類のそれぞれもまた、本発明の一部を形成する。これは、条件付きの、又はその属から任意の主題を除外する否定的限定を伴う、本発明の総称的な記載を含み、その削除された材料が本明細書に具体的に記載されるか否かに関わるものではない。
【０３２８】
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内にある。さらに、本発明の特長又は態様がＭａｒｋｕｓｈグループの観点で記載されている場合、それによって本発明がまた、Ｍａｒｋｕｓｈグループの任意の個別のメンバー又はメンバーのサブグループの観点で記載されていることを、当業者は認識することになる。
【図１−１】
2019522041.tif 000007
【図１−２】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成31年1月7日(2019.1.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
この出願は、２０１６年５月３日出願の「新規のペプチド及びペプチド模倣体」と題された米国仮特許出願第６２／３３１，４１６号の優先権を請求するものであり、当該出願の内容は、その全体が記載されるがごとく本明細書に参照により組み込まれる。
【０００２】
本発明は、ペプチド及びペプチド模倣体に関する。
【背景技術】
【０００３】
以下は、本願発明を理解する際に有用となり得る情報を含む。本明細書に具体的に又は暗黙的に記述又は参照される情報、刊行物、又は文書のいずれも、ここに記載されるか又は特許請求の範囲に記載される発明に対し、先行技術であること、又は不可欠であることを、自認するものではない。
【０００４】
本明細書に言及された全ての米国特許、米国特許出願公開公報、国外特許、国外及びＰＣＴ公開出願、論文及び他の文書、参照文献及び刊行物、ならびに本明細書から発行されたいずれかの１つ又は複数の特許に引用参照文献として一覧に挙げられたもの全てが、参照によりその全体を本明細書に組み込まれる。
【０００５】
ギャップ結合は、細胞間の連絡を推進する細胞膜の構造である。それらは、細胞間のチャネルのクラスターからなり、このチャネルは、２つの隣接細胞の細胞質を直接的に接続して、それらの間で様々な分子、イオン、及び電気的インパルスを直接的に通すことを可能にする。ギャップ結合チャネルは、分子量≦１ｋＤａの物質を透過可能である。透過性は、コネキシンのタイプ及び透過分子の電荷に依存する。これらのチャネルは、互いに接しているほぼ全ての動物細胞に見出され、成熟骨格筋細胞及び精子や赤血球などの可動性細胞のタイプを例外として、身体の実質上全ての組織で発現されている。それらは、きつく詰め込まれた粒子のクラスター（又はプラーク）として現れ、その中では、各粒子は単一のギャップ結合チャネルである。１細胞当たり数多くのギャップ結合プラークがある場合があり、そこでは、各プラークが少数から何千もの細胞間チャネルユニットを含有している。
【０００６】
細胞間のギャップ結合チャネルは、「コネクソン」又は「ヘミチャネル」とよばれる２つの半片のチャネルが、ヘッドトゥーヘッドでドッキングすることによって形成され、そこでは、一方の細胞膜のヘミチャネルが反対側の膜の別のヘミチャネルにドッキングして単一のギャップ結合チャネルを形成する。各ギャップ結合ヘミチャネルは、６つの「コネキシン」とよばれる４回膜内在性膜タンパク質のアセンブリであり、水性孔の周囲に六角形に整列されている。全てのコネキシンタンパク質は、２つの細胞外ループ及び１つの細胞内ループによって隔てられている、４つの高度に保存されたα−へリックスの膜貫通セグメントからなる。アミノ末端及びカルボキシ末端は、細胞内に位置している。細胞外ループは、隣接するコネキシンの細胞外ループを認識し区別して、チャネル管腔と細胞外空隙との間に不透過性のシールを形成することができる［Ｗｈｉｔｅ  ＴＷ，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １２５：８７９−８９２］。２１種のヒトコネキシンファミリーのメンバーが特定されている。それらは、主にその細胞内ループとカルボキシ末端の配列に違いがあり、そこでは、各コネキシンは、そのキロダルトンでの推定分子量に基づいて名称を有する。コネキシン２６は、例えば、２６ｋＤのタンパク質である。
【０００７】
細胞間の連絡の推進に加えて、コネキシン４３ギャップ結合タンパク質は、急性傷害の応答といくつかの慢性疾患において重要な役割も果たすようであり、その際に、タンパク質の発現は、前者では下がり、後者では上がる。ギャップ結合ヘミチャネルもまた、関与することがある。近隣の細胞にドッキングする前に、コネキシン４３ヘミチャネルは、開いたチャネルが大きくかつ相対的に非特異的な膜孔を構成する際に開口確率が低いことがいくつかの例で報告されており、そして、コネキシン４３ヘミチャネルは、休止状態下では厳密に制御されると言われている一方で［Ｂｕｋａｕｓｋａｓ  ＦＦ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ９７：２５５６−２５６１；Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １００：１１３８８−１１３９３］、それらはまた、炎症誘発性サイトカインを含めた傷害［Ｒｅｔａｍａｌ  ＭＡ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２７：１３７８１−１３７９２］、代謝阻害［Ｊｏｈｎ  ＳＡ，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７４：２３６−２４０；Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ９９：４９５−５００］、Ｃａ２＋濃度（細胞質Ｃａ２＋濃度の増加又は細胞外濃度の減少）［Ｌｉ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  細胞  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １３４：１０１９−１０３０；Ｔｈｉｍｍ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８０：１０６４６−１０６５４；Ｄｅ  Ｖｕｙｓｔ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｅｌｌ  Ｃａｌｃｉｕｍ  ４６：１７６−１８７］に特徴的な複数の要因に応答して、及びグラム陽性細菌の細胞壁タンパク質などの感染性材（ペプチドグリカン又はリポ多糖）［Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ４３２：１３３−１４３］によって、開くことが報告されている。ギャップ結合のチャネル及びタンパク質は、脊髄傷害［Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ  ＳＪ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｃｅｌｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  ＆  Ａｄｈｅｓｉｏｎ  １５：２７−４２；Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ  ＳＪ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７５：２５６−２６７；Ｔｏｎｋｉｎ  ＲＳ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ７：１０２］、早産児の虚血及び窒息［Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ＪＯ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ７１：１２１−１３２；Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ＪＯ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）ＰｌｏＳ  Ｏｎｅ  ９：ｅ９６５５８］、感染［Ｅｕｇｅｎｉｎ  ＥＡ，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅ��ｃｅ  ３１：９４５６−９４６５］、大脳のマラリア［Ｚｈａｎｇ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＣｏｎｎｅｘｉＮ−Ｂａｓｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍ．Ｉｎ：Ｃｏｎｎｅｘｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  Ｃｈａｎｎｅｌｓ（Ｏｖｉｅｄｏ−Ｏｒｔａ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ），ｐｐ  ２７３−３０６：ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ］、及び網膜の虚血再灌流傷害［Ｄａｎｅｓｈ−Ｍｅｙｅｒ  ＨＶ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｂｒａｉｎ  １３５：５０６−５２０］を含めた、様々な病理学に関して議論されている。ヘミチャネルの開口もまた、慢性炎症において、報告によればインフラマソーム経路を通じて［Ｋｉｍ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ａｄｖ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｂｉｏｌ  １０４：１−３７］役割を持つことがある。概観のために、Ｄａｎｅｓｈ−Ｍｅｙｅｒ  ＨＶ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．５１：４１−６８（グリア細胞の活性化、浮腫、及び血管の完全性の喪失を含めた、二次損傷の様々な局面に関与するコネキシン４３の上方制御及びヘミチャネルの開口）を参照されたい。Ｖｉｎｋｅｎ，Ｍ（２０１５）Ａｒｃｈ  Ｔｏｘｉｃｏｌ．８９（１）：１４３−１４５も参照されたい。それゆえ、ギャップ結合によって、細胞の生存に極めて重要な細胞間でのイオン及び代謝物の移動が可能になる一方で（Ｋｒｙｓｋｏ  ＤＶ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  １０：４５９−４６９）、大きくかつ相対的に非選択的なドッキングされていないヘミチャネル孔の開口は、受傷部でのイオン勾配及び代謝物勾配を分解し［Ｔａｋｅｕｃｈｉ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８１：２１３６２−２１３６８］、細胞の浸透圧調節能を損ない［Ｑｕｉｓｔ  ＡＰ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １４８：１０６３−１０７４；Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｓｉｎｏｖａｓ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ９４：２１９−２３２；Ｄａｎｅｓｈ−Ｍｅｙｅｒ  ＨＶ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｂｒａｉｎ  １３５：５０６−５２０］、二次損傷の広がりを促進する  Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ＪＯ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３ａ）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  １４：３６−４６；Ｄｅｃｒｏｃｋ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ７２：２８２３−２８５１．ことによって、細胞死に駆り立てる能力を有する。
【０００８】
小さな化合物、例えばアルコール（ヘプタノール、オクタノール）、麻酔剤（ハロタン及びエタン）、脂肪酸（オレアミド）、抗マラリア薬（キニーネ誘導体）、グリシルレチン酸、及びその誘導体、カルバノクソロンなどは、コネキシンチャネルを遮断することが示されてきたが、これらの化合物は、オフターゲット効果があるために治療適用に限定される。概観のために、Ｂｏｄｅｎｄｉｅｋ  ＳＢ  ａｎｄ  Ｒａｍａｎ  Ｇ（２０１０）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １７：４１９１−４２３０を参照されたい。他のさらに特殊な抗コネキシンアプローチも供試されている。例えば、コネキシン４３のアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドが局所的に適用されて、マウスの皮膚の損傷［Ｑｉｕ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１３：１９６７−１７０３］、新生仔マウスの熱傷［Ｃｏｕｔｉｎｈｏ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｌａｓｔｉｃ  Ｓｕｒｇｅｒｙ  ５８：６５８−６６７］、及び齧歯動物の脊髄の傷害、Ｃｒｏｎｉｎ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ３９：１５２−１６０］で腫脹、炎症を低減し、機能的なアウトカムを向上させている。コネキシン４３のアンチセンスは、非治癒性の眼の熱傷で、例外的使用の場合に有効性を実証している（Ｏｒｍｏｎｄｅ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４５：３８１−３８８）。他のアプローチは、コネキシンの細胞外ループの部分（例えば、Ｇａｐ２６、Ｇａｐ２７、ペプチド５など）［Ｅｖａｎｓ  ＷＨ（２０１５）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ  ４３：４５０−４５９］又はコネキシン４３タンパク質の細胞内領域（例えば、Ｇａｐ１９、ＡＣＴ−１）［Ｄ’Ｈｏｎｄｔ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ４３２：７０７−７１２］に合致するペプチドに焦点を当てている。しかし、後者の２つのペプチドは、それらを有効とする場合には、細胞膜を横切るものである必要がある。Ｇａｐ２６及びＧａｐ２７は、コネキシン４３ヘミチャネルのゲーティングに作用するという仮説が立てられている［Ｗａｎｇ  Ｎ，Ｄｅ  Ｂｏｃｋ  Ｍ，Ｄｅｃｒｏｃｋ  Ｅ，Ｂｏｌ  Ｍ，Ｇａｄｉｃｈｅｒｌａ  Ａ，Ｂｕｌｔｙｎｃｋ  Ｇ，Ｌｅｙｂａｅｒｔ  Ｌ（２０１３）Ｃｏｎｎｅｘｉｎ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｖｏｌｔａｇｅ−ａｎｄ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｃａ２＋−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  Ｃｘ４３  ｈｅｍｉｃｈａｎｎｅｌ  ｏｐｅｎｉｎｇ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ７５：５０６−５１６に概説されている］。ペプチド５（ＶＤＣＬＳＲＰＴＥＫＴ  (配列番号７２））は、コネキシン４３の細胞外ループ２配列に由来し、上記  のＯ’Ｃａｒｒｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）によって紹介され、濃度依存的な作用を有することが報告されている。上記のＤａｖｉｄｓｏｎ  ＪＯ，ｅｔ  ａｌ（２０１２）；上記のＤａｖｉｄｓｏｎ  ＪＯ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）；上記のＤａｎｅｓｈ−Ｍｅｙｅｒ  ＨＶ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）を参照されたい。
【０００９】
ヘミチャネル及びギャップ結合の調節によって寛解し得る、眼及びＣＮＳの疾患、障害、及び状態を含めた疾患、障害、及び状態を治療する際に有用な、新しい治療法が依然として当技術分野に求められている。特に、炎症、浮腫及び／又は酸化ストレスに関連がある血管性の疾患、障害、及び状態のスペクトル全体に及ぶ、新しい治療法が求められている。そのような治療法は、新しいギャップ結合及びヘミチャネルの調節剤の発見に基づき、本明細書に記載され特許請求されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｗｈｉｔｅ  ＴＷ，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １２５：８７９−８９２
【非特許文献２】Ｂｕｋａｕｓｋａｓ  ＦＦ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ９７：２５５６−２５６１
【非特許文献３】Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １００：１１３８８−１１３９３
【非特許文献４】Ｒｅｔａｍａｌ  ＭＡ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２７：１３７８１−１３７９２
【非特許文献５】Ｊｏｈｎ  ＳＡ，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７４：２３６−２４０
【非特許文献６】Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ９９：４９５−５００
【非特許文献７】Ｌｉ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  細胞  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １３４：１０１９−１０３０
【非特許文献８】Ｔｈｉｍｍ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８０：１０６４６−１０６５４
【非特許文献９】Ｄｅ  Ｖｕｙｓｔ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｅｌｌ  Ｃａｌｃｉｕｍ  ４６：１７６−１８７
【非特許文献１０】Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ４３２：１３３−１４３
【非特許文献１１】Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ  ＳＪ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｃｅｌｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  ＆  Ａｄｈｅｓｉｏｎ  １５：２７−４２
【非特許文献１２】Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ  ＳＪ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７５：２５６−２６７
【非特許文献１３】Ｔｏｎｋｉｎ  ＲＳ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ７：１０２
【非特許文献１４】Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ＪＯ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ７１：１２１−１３２
【非特許文献１５】Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ＪＯ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）ＰｌｏＳ  Ｏｎｅ  ９：ｅ９６５５８
【非特許文献１６】Ｅｕｇｅｎｉｎ  ＥＡ，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ３１：９４５６−９４６５
【非特許文献１７】Ｚｈａｎｇ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＣｏｎｎｅｘｉＮ−Ｂａｓｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍ．Ｉｎ：Ｃｏｎｎｅｘｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  Ｃｈａｎｎｅｌｓ（Ｏｖｉｅｄｏ−Ｏｒｔａ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ），ｐｐ  ２７３−３０６：ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ
【非特許文献１８】Ｄａｎｅｓｈ−Ｍｅｙｅｒ  ＨＶ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｂｒａｉｎ  １３５：５０６−５２０
【非特許文献１９】Ｋｉｍ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ａｄｖ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｂｉｏｌ  １０４：１−３７
【非特許文献２０】Ｄａｎｅｓｈ−Ｍｅｙｅｒ  ＨＶ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．５１：４１−６８
【非特許文献２１】Ｖｉｎｋｅｎ，Ｍ（２０１５）Ａｒｃｈ  Ｔｏｘｉｃｏｌ．８９（１）：１４３−１４５
【非特許文献２２】Ｋｒｙｓｋｏ  ＤＶ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  １０：４５９−４６９
【非特許文献２３】Ｔａｋｅｕｃｈｉ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８１：２１３６２−２１３６８
【非特許文献２４】Ｑｕｉｓｔ  ＡＰ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １４８：１０６３−１０７４
【非特許文献２５】Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｓｉｎｏｖａｓ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ９４：２１９−２３２
【非特許文献２６】Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ＪＯ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３ａ）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  １４：３６−４６
【非特許文献２７】Ｄｅｃｒｏｃｋ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ７２：２８２３−２８５１．
【非特許文献２８】Ｂｏｄｅｎｄｉｅｋ  ＳＢ  ａｎｄ  Ｒａｍａｎ  Ｇ（２０１０）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １７：４１９１−４２３０
【非特許文献２９】Ｑｉｕ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１３：１９６７−１７０３
【非特許文献３０】Ｃｏｕｔｉｎｈｏ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｌａｓｔｉｃ  Ｓｕｒｇｅｒｙ  ５８：６５８−６６７
【非特許文献３１】Ｃｒｏｎｉｎ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ３９：１５２−１６０
【非特許文献３２】Ｏｒｍｏｎｄｅ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４５：３８１−３８８
【非特許文献３３】Ｅｖａｎｓ  ＷＨ（２０１５）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ  ４３：４５０−４５９
【非特許文献３４】Ｄ’Ｈｏｎｄｔ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ４３２：７０７−７１２
【非特許文献３５】Ｗａｎｇ  Ｎ，Ｄｅ  Ｂｏｃｋ  Ｍ，Ｄｅｃｒｏｃｋ  Ｅ，Ｂｏｌ  Ｍ，Ｇａｄｉｃｈｅｒｌａ  Ａ，Ｂｕｌｔｙｎｃｋ  Ｇ，Ｌｅｙｂａｅｒｔ  Ｌ（２０１３）Ｃｏｎｎｅｘｉｎ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｖｏｌｔａｇｅ−ａｎｄ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｃａ２＋−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  Ｃｘ４３  ｈｅｍｉｃｈａｎｎｅｌ  ｏｐｅｎｉｎｇ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ７５：５０６−５１６
【発明の概要】
【００１１】
本明細書に記載され特許請求される本発明は、多くの特質及び実施形態を有し、そのようなものとしては、以下に限定されないが、この簡潔な概要に明記又は記載又は参照されるものが挙げられる。包括的であることは意図されていないため、本明細書に記載され特許請求される本発明は、制限ではなく説明の目的で含まれているに過ぎないこの簡潔な概要に特定される特長又は実施形態に、又はそれによって、限定されるものではない。
【００１２】
本願発明は、ギャップ結合の連絡及びヘミチャネルの開口及び本明細書に記載される他の活性を調節するのに有用な薬物動態学的特性及び薬力学的特性を有する、ペプチド及びペプチド模倣物の生産、ならびに、ギャップ結合活性ならびに／又はヘミチャネルの開口及びヘミチャネル活性を調節することが治療的に有益である疾患、障害、及び状態の治療におけるそれらの使用を提供する。
【００１３】
本明細書に記載され特許請求される本発明は、ギャップ結合タンパク質及びギャップ結合ヘミチャネルタンパク質に結合する、ペプチド及びペプチド模倣体に関する。また、出願人の発明は、血管性の疾患、障害、及び状態の影響の治療、予防、及び寛解に有用な医薬品、組成物、及び方法、ならびにそのような化合物及び組成物を含む製品及びキットに関する。一態様では、本発明は、ギャップ結合タンパク質チャネル活性を制御するための化合物に関する。別の態様では、本発明は、ギャップ結合ヘミチャネル活性を制御するための化合物に関する。
【００１４】
一実施形態では、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド模倣物は、ギャップ結合チャネル阻害剤である。一実施形態では、ギャップ結合は、コネキシン４３タンパク質を含む。一実施形態では、ギャップ結合は、コネキシン４５タンパク質を含む。別の実施形態では、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド模倣物は、ギャップ結合ヘミチャネルの開口の阻害剤である。一実施形態では、ギャップ結合ヘミチャネルは、コネキシン４３タンパク質を含む。一実施形態では、ギャップ結合ヘミチャネルは、コネキシン４５タンパク質を含む。他の実施形態では、ギャップ結合及びヘミチャネルは、コネキシン２５、コネキシン２６、コネキシン２９（コネキシン３０．２）、コネキシン３０、コネキシン３０．３、コネキシン３１、コネキシン３１．１、コネキシン３１．３、コネキシン３１．９、コネキシン３２、コネキシン３６、コネキシン３７、コネキシン４０、コネキシン４０．１、コネキシン４６、コネキシン４６．６（コネキシン４７）、コネキシン５０、コネキシン５８、コネキシン５９、コネキシン６２のタンパク質を含み、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド模倣物は、これらのギャップ結合チャネル及び対応のヘミチャネルのうち１つ又は複数の阻害剤である。
【００１５】
別の態様では、本発明は、表面に露出されたギャップ結合ヘミチャネルの開口を制御するための化合物に関する。別の態様では、本発明は、ヘミチャネルの開口を持続的に制御するための化合物に関する。別の態様では、本発明は、ヘミチャネルを閉じるための化合物に関する。さらに別の態様では、本発明は、ヘミチャネルの開口を調節するための化合物に関する。
【００１６】
一態様では、本明細書に提供される本発明は、化合物を含む。別の態様では、本発明は、それらの化合物のうち１つ又は複数を含むかそれから本質的になる組成物を含み、ここでは、本発明の根本的かつ新規の特徴とは、本明細書に記載されるようなギャップ結合及び／又はヘミチャネルの機能もしくは活性を調節する能力である。本化合物は、ギャップ結合及び／又はヘミチャネルに関連する障害の治療に有用である。
【００１７】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物としては、以下のペプチド：「Ａｌａ１」ＡＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号１）、「Ａｌａ４」ＶＤＣＡＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号２）、「Ａｌａ６」ＶＤＣＦＬＡＲＰＴＥＫＴ（配列番号３）、「Ａｌａ９」ＶＤＣＦＬＳＲＰＡＥＫＴ（配列番号４）、「Ａｌａ１２」ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＡ（配列番号５）、「Ｍｏｄ−１／Ａｌａ１０」ＣＦＬＳＲＰＴＡＫＴ（配列番号６）、「Ｍｏｄ−１／Ａｌａ４」ＣＡＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号７）、「Ｍｏｄ−１／Ａｌａ６」ＣＦＬＡＲＰＴＥＫＴ（配列番号８）、「Ｍｏｄ−１／Ａｌａ９」ＣＦＬＳＲＰＡＥＫＴ（配列番号９）、及び「Ｍｏｄ−１／Ａｌａ１２」ＣＦＬＳＲＰＴＥＫＡ（配列番号１０）が挙げられる。配列番号１〜１０に示されるような上記のペプチドのうちいずれか又は全てにおいて、別々に又は任意の組合せで共に、バリン（Ｖ）は、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、及びフェニルアラニン（Ｆ）に置換することができ；アスパラギン酸（Ａｓｐ）は、グルタミン酸（Ｅ）に置換することができ；システイン（Ｃ）は、セリン（Ｓ）に置換することができ；フェニルアラニン（Ｐ）は、アラニン（Ａ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、及びバリン（Ｖ）に置換することができ；ロイシン（Ｌ）は、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）に置換することができ；セリン（Ｓ）は、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、及びバリン（Ｖ）に、好ましくはアラニンに置換することができ；アルギニン（Ｒ）は、リジン（Ｌ）又はグルタミン（Ｑ）に置換することができ、プロリン（Ｐ）は、置換することができず；スレオニン（Ｔ）は、アラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、及びグリシン（Ｇ）に置換することができ；グルタミン酸（Ｅ）は、アラニン（Ａ）、グルタミン（Ｑ）、及びアスパラギン（Ｎ）に置換することができ；リジン（Ｋ）は、アルギニン（Ｒ）に置換することができ、これらは全て、配列番号１〜８の類似体である。配列番号１〜８として示される上記のペプチドのうちいずれか又は全てにおいて、別々に又は任意の組合せで共に、いずれのアミノ酸もＬ−アミノ酸とすることもＤ−アミノ酸とすることもできるが、但し、そのペプチドは、Ｌ−Ｖａｌ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｌｅｕ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒ（配列番号４５）ではない。Ｄ−アミノ酸を含有する配列番号１〜８として示される上記のペプチドのいずれも、配列番号１〜８の類似体でもある。
【００１８】
非限定的で好適な実施形態で単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物は、以下の式Ｉによる化合物も含む。
Ｒ１  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４（配列番号７３）
式中、Ｒ１  は、存在しないか、又はＨ、１個から２０個までの炭素原子由来の線状又は分岐の飽和もしくは不飽和の炭化水素鎖を含有するアシル基、アミド、カルバメート、尿素、ＰＥＧ、又はヒドロキシアルキル  デンプンからなる群から選択され；Ｘ１は、Ｐｈｅであるか、又はＡｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、ならびに／もしくはＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ならびに／もしくはＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、ならびに／もしくはＮｖａもしくはＮｌｅ、ならびに／もしくはｔｅｒｔ−ブチルグリシン、フェニルグリシン、７−アザトリプトファン、４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−アラニン、サルコシン、Ｎ−メチル−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−フェニルグリシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−７−アザトリプトファン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−チロシン、Ｎ−メチル−バリン、及びＮ−メチル−リジン、ならびに／もしくは前述のもののうちいずれかのＤ−エナンチオマーからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｘ２は、Ｔｈｒであるか、又はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、ＮｖａもしくはＮｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｘ３は、Ｇｌｕ、Ａｌａ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｎｖａ又はＮｌｅであり；Ｘ４は、Ｔｈｒであるか、又はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、ＮｖａもしくはＮｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であるが；但し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、同時にそれぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではなく、ペプチド  Ｒ１  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４  ペプチド（配列番号７３）は、Ｌ−Ｖａｌ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｌｅｕ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒ（配列番号４５）ではない。
【００１９】
本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ１は、Ｐｈｅであり、Ｘ２、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＴｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ２は、Ｔｈｒであり、Ｘ１、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ３は、Ｇｌｕであり、Ｘ１、Ｘ２、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ４は、Ｔｈｒであり、Ｘ１、Ｘ２、及び／又はＸ３のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、及びＧｌｕではない。
【００２０】
本発明の化合物は、非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋であり、以下の式ＩＩによる化合物も含む。
Ｒ１  Ｙ１  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｌｅｕ  Ｚ１  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４（配列番号７４）
式中、Ｙ１は、Ｖａｌ、Ａｌａ、又はＩｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｔｙｒ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ｎｖａ、Ｎｌｅ、ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、フェニルグリシン、７−アザトリプトファン、４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−アラニン、サルコシン、Ｎ−メチル−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−フェニルグリシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−７−アザトリプトファン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−チロシン、Ｎ−メチル−バリン、及びＮ−メチル−リジン、ならびに／もしくは前述のもののうちいずれかのＤ−エナンチオマーからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｚ１は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、又はＡｓｎ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、及びＡｒｇからなる群から選択されるアミノ酸であり；ならびに式中、Ｒ１、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、式Ｉについて上に記載された通りであるが；但し、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、同時にそれぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではなく、ペプチドＲ１  Ｙ１  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｌｅｕ  Ｚ１  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４  ペプチド（配列番号７４）は、Ｌ−Ｖａｌ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｌｅｕ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒ（配列番号４５）ではない。
【００２１】
本発明はまた、式ＩＩの化合物を含み、式中、Ｙ１は、Ｖａｌであり、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、Ｘ３及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ１は、Ｐｈｅであり、Ｙ１、Ｚ１、Ｘ２、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＶａｌ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ２は、Ｔｈｒであり、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ３は、Ｇｌｕであり、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ４は、Ｔｈｒであり、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、及び／又はＸ３のうち１つ又は複数は、それぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、及びＧｌｕではない。
【００２２】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物は、以下の式ＩＩＩによる化合物も含む。
Ｒ１  Ｉｌｅ  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４（配列番号７５）
式中、Ｒ１は、存在しないか、又はＨ、１個から２０個までの炭素原子由来の線状又は分岐の飽和もしくは不飽和の炭化水素鎖を含有するアシル基、アミド、カルバメート、尿素、ＰＥＧ、又はヒドロキシアルキル  デンプンからなる群から選択され；Ｘ１は、Ｐｈｅであるか、又はＡｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、ならびに／もしくはＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ならびに／もしくはＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、ならびに／もしくはＮｖａもしくはＮｌｅ、ならびに／もしくはｔｅｒｔ−ブチルグリシン、フェニルグリシン、７−アザトリプトファン、４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−アラニン、サルコシン、Ｎ−メチル−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−フェニルグリシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−７−アザトリプトファン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−チロシン、Ｎ−メチル−バリン、及びＮ−メチル−リジン、ならびに／もしくは前述のいずれかのＤ−エナンチオマーからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｘ２は、Ｔｈｒであるか、又はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、ＮｖａもしくはＮｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｘ３は、Ｇｌｕ、Ａｌａ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｎｖａ又はＮｌｅであり；Ｘ４は、Ｔｈｒであるか、又はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、ＮｖａもしくはＮｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であるが；但し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、同時にそれぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではなく、ペプチド  Ｒ１  Ｉｌｅ  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４  ペプチド（配列番号７５）は、Ｌ−Ｉｌｅ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｉｌｅ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒ（配列番号４３）、又は任意の天然に存在するコネキシンペプチド配列ではない。
【００２３】
本発明はまた、式ＩＩＩの化合物も含み、式中、Ｘ１は、Ｐｈｅであり、Ｘ２、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＴｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。  本発明はまた、式ＩＩＩの化合物も含み、式中、Ｘ２は、Ｔｈｒであり、Ｘ１、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。  本発明はまた、式ＩＩＩの化合物も含み、式中、Ｘ３は、Ｇｌｕであり、Ｘ１、Ｘ２、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、及びＴｈｒではない。  本発明はまた、式ＩＩＩの化合物も含み、式中、Ｘ４は、Ｔｈｒであり、Ｘ１、Ｘ２、及び／又はＸ３のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、及びＧｌｕではない。
【００２４】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物はまた、以下の式ＩＶによる化合物を含む。
Ｒ１  Ｙ１  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  ＩＬｅ  Ｚ１  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４（配列番号７６）
式中、Ｙ１は、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、及び／又はＰｈｅ、もしくはＩｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｔｙｒ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ｎｖａ、Ｎｌｅ、ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、フェニルグリシン、７−アザトリプトファン、４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−アラニン、サルコシン、Ｎ−メチル−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−フェニルグリシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−７−アザトリプトファン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−チロシン、Ｎ−メチル−バリン、及びＮ−メチル−リジン、ならびに／もしくは前述のもののうちいずれかのＤ−エナンチオマーからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｚ１は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、又はＡｓｎ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、及びＡｒｇからなる群から選択されるアミノ酸であり；ならびに式中、Ｒ１、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、式ＩＩＩについて上に記載された通りであるが；但し、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、同時にそれぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではなく、ペプチドＲ１  Ｙ１  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｉｌｅ  Ｚ１  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４  ペプチド（配列番号７６）は、Ｌ−Ｉｌｅ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｉｌｅ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒ（配列番号４３）、又は任意の天然に存在するコネキシンペプチド配列ではない。
【００２５】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物はまた、以下の表１による１２アミノペプチドを含むことも除くこともある。
表１：
【表１】
2019522041.tif 000014
【００２６】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の他の実施形態は、また、アミノ酸配列ＶＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号３１）という、例えば、コネキシン５０、６２、３７、４６．６、２６、３２、又は３１．９のうちいずれかから構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＦＩＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号３２）という、例えば、コネキシン４６又は３０のうちいずれかから構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列を含む。
【００２７】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の他の実施形態は、また、アミノ酸配列ＩＴＣＮＬＳＲＰＳＥＫＴ（配列番号３３）という、例えば、コネキシン２９（３０．２）又は３１．３のいずれかから構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＹＶＳＲＰＴＥＫＳ（配列番号３４）という、例えば、コネキシン４０．１から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＥＣＹＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号３５）という、例えば、コネキシン３６から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＩＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号３６）、例えば、コネキシン５９から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＹＩＳＲＰＴＥＫＫ（配列番号３７）という、例えば、コネキシン３０．３から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＦＩＳＫＰＳＥＫＮ（配列番号３８）という、例えば、コネキシン３１．１から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＹＩＡＲＰＴＥＫＫ（配列番号３９）という、例えば、コネキシン３１から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＦＩＳＫＰＴＥＫＴ（配列番号４０）という、例えば、コネキシン２５から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；ならびに、アミノ酸配列ＩＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４１）という、コネキシン５８及びコネキシン５９のうちいずれかから構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列を含む。
【００２８】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の他の実施形態は、また、アミノ酸配列ＶＮＣＹＶＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号４２）が、例えばギャップ結合チャネルに対する遮断剤として、及び／又はコネキシン４０から構成されるヘミチャネルに対するヘミチャネル遮断剤として、特異的かつ有用なアイソフォームとなることを含む。上に記載されたＲ１などの基を有するもの、及び例えば分子量を増加してタンパク質分解酵素からそれらを遮蔽するのに有用な他のものを含めて、本配列及びそれらの活性類似体は、少なくとも部分的には微小血管の漏れという特徴を持つものを含めた血管性の疾患、障害、及び状態に対処するために、ならびにがん治療として、特に重要となる。
【００２９】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の他の実施形態は、また、アミノ酸配列ＩＤＣＦＩＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４３）が、例えばギャップ結合チャネルに対する遮断剤として、及び／又はコネキシン４５から構成されるヘミチャネルに対するヘミチャネル遮断剤として、特異的かつ有用なアイソフォームとなることを含む。上に記載されたＲ１などの基を有するもの、及び例えば分子量を増加してタンパク質分解酵素からそれらを遮蔽するのに有用な他のものを含めて、本配列及びそれらの活性類似体は、少なくとも部分的には血管の損傷及び／又は漏れという特徴を持つものを含めた心臓の疾患、障害、及び状態に対処するために、ならびに心筋梗塞及び心発作に由来する血管のダイバック（ｄｉｅｂａｃｋ）に対処するための治療として、特に重要となる。
【００３０】
本発明の他の実施形態は、コネキシン細胞外ループ１及び２の両方の領域に合致するペプチドとの組合せ治療が有効性の増加を示し（図３、表２）、その増加は至適基準の対照のチャネル遮断剤として通例使用されるカルバノクソロンの有効性を超えることを含む。
【００３１】
本発明の他の実施形態は、コネキシンヘミチャネル遮断剤ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号４４）と、式Ｉ又は式ＩＩによるものを含めた本明細書に記載されるペプチドのうちいずれか１つ又は複数との組合せを含む、組成物及び治療が、コネキシン４３ヘミチャネルを遮断する組合せとしても有用となることを含む。
【００３２】
本発明の他の実施形態は、コネキシンヘミチャネル遮断剤ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号４４）と、式ＩＩＩ又は式ＩＶによるものを含めた本明細書に記載されるペプチドのうちいずれか１つ又は複数との組合せを含む、組成物及び治療が、コネキシンヘミチャネルを遮断する組合せとしても有用となることを含む。
【００３３】
これらの配列は、別々に又は共に、独立した実体として又は連結されて、送達されてもよい。そのため、本発明はまた、例えば、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号４４）をコネキシン４３ヘミチャネル遮断剤ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４５）に、例えばＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ−Ｘ−ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号４６）の形態で連結させることを含み、上式で、Ｘは、この組合せペプチドがコネキシン４３ヘミチャネル上のそれらの両方の結合部位にそれぞれ接触するのに充分な可撓性を有する、１つ又は複数の連結グリシン又は他の非機能性リンカーである。
【００３４】
本発明はまた、例えば、組織で同時に複数のコネキシンアイソフォームに対し機能できる組合せで配列を含み、共に別々に又は共に、独立した実体として又は連結されて、送達されることがある。例えば、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４７）は、コネキシン４０ヘミチャネル遮断剤ＶＮＣＹＶＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号４８）に、ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ−Ｘ−ＶＮＣＹＶＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号４９）の形態で連結することができ、上式で、Ｘは、この組合せペプチドをコネキシン４３又はコネキシン４０のどちらかからなるヘミチャネルと相互作用できるようにする、１つ又は複数の連結グリシン又は他の非機能性リンカーである。
【００３５】
本発明はまた、例えば、１つ又は４つのペプチドコネキシンアイソフォーム遮断剤配列を組合せで含み、そこでは、それらは三次構造を形成せず、その連結が線形構造の保持をもたらす。一実施形態では、血管内皮コネキシン４０、４３、３７に対するペプチドが調製され、そのようなものとしては、ＶＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号５０）；ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号５１）；及びＶＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号５２）が挙げられる。
【００３６】
本発明の範囲に含まれるのは、これらの化合物の活性類似体及び保存されたバリアントであり、そのようなものとしては、その切頭体、好ましくはＮ末端の１又は２アミノ酸の切頭体が挙げられる。
【００３７】
非限定的な一実施形態では、本発明の範囲内にあるペプチドのアミノ酸のうち１つ又は複数は、配列番号１〜５２及び式Ｉ〜ＩＩ内の配列を含めて、Ｌ−又はＤ−の立体配置としてよい。他の実施形態では、本発明の範囲内にあるペプチドのアミノ酸のうち１つ又は複数は、天然に存在するか又は遺伝子にコードされていないアミノ酸である。さらに他の実施形態では、本発明の範囲内にあるペプチドのアミノ酸のうち１つ又は複数は、アミノ酸類似体又は合成アミノ酸である。
【００３８】
別の非限定的な実施形態では、Ｎ末端アミノ酸は、ホルミル基；ホルミル基、カルボン酸エステル（好ましくはアルデヒドエステル、例えば、カルボキシエチル基、カルボキシメチル基など）を含む基；又はカルボン酸エステルを含む基を含有するように修飾されることがある。ホルミル基、カルボキシエチル基、及びカルボキシメチル基を用いた修飾が、ここでは好適である。
【００３９】
別の実施形態では、配列番号１〜５２及び式Ｉ〜ＩＩ内の配列を含めた本発明の範囲内の化合物のうち１つ又は複数のアミノ酸は、主にアミノ酸側鎖の化学的特性及び物理学的特性に基づき、類似のアミノ酸のクラス又はサブクラス由来の別のアミノ酸に置換される。例えば、１つ又は複数の親水性又は極性のアミノ酸を、別の親水性又は極性のアミノ酸に置換することができる。同様に、１つ又は複数の疎水性又は非極性のアミノ酸を、別の疎水性又は非極性のアミノ酸に置換することができる。そのような置換を作製する際に、極性アミノ酸を、酸性、塩基性、又は親水性の側鎖を有するアミノ酸にさらに細分化することができ、非極性のアミノ酸を、芳香族又は疎水性の側鎖を有するアミノ酸にさらに細分化することができる。非極性アミノ酸は、さらに細分化されて、特に脂肪族アミノ酸を含むことがある。
【００４０】
また、本発明の範囲内には、生物薬剤特性を改善するために修飾されている、本発明の化合物がある。ある実施形態では、本発明の化合物は、例えば、安定性の増加、タンパク質分解による不活性化に対する耐性の増加、存在しない免疫原性への減少、血清中半減期の改変及び治療半減期の改変を含めた循環寿命の増加、ならびに毒性の低下を付与するために、修飾される。本発明の化合物の修飾形態としては、プロドラッグ形態が挙げられ、その代表的な例は、本明細書の他の箇所に記載されている。本発明の化合物を修飾することができる方法としては、また、例えば、ＰＥＧ化によるもの、化学的誘導体化によるもの、及びペプチド又は脂質との融合又はコンジュゲーションによるものが挙げられる。修飾化合物としては、修飾ペプチドヘミチャネル剤が挙げられ、そのようなものとしては、例えば、修飾された配列番号１〜１０のいずれか、及び修飾類似体、及びそれらのバリアント（例えば、保存されたバリアント）が挙げられる。
【００４１】
他の実施形態としては、Ｃ末端スレオニンを含まない、配列番号１から１０より選択されるペプチド、ならびに式Ｉ及び／又は式ＩＩによるペプチドが挙げられる。他の実施形態としては、Ｎ末端バリンを含まない、配列番号１から１０より選択されるペプチド、ならびに式Ｉ及び／又は式ＩＩによるペプチドが挙げられる。他の実施形態としては、Ｎ末端バリン又はＣ末端スレオニンを含まない、配列番号１から１０より選択されるペプチド、ならびに式Ｉ及び／又は式ＩＩによるペプチドが挙げられる。
【００４２】
他の実施形態としては、Ｃ末端アミノ酸を除去されている、すなわち、Ｃ末端１つを切頭された、配列番号１１から５２より選択されるペプチドが挙げられる。他の実施形態としては、１番目及び／又は２番目のＮ末端アミノ酸が除去されている、すなわち、Ｎ末端１つ又は２つを切頭された、配列番号１１から５２より選択されるペプチドが挙げられる。
【００４３】
実施形態によっては、本願発明は、本願発明のペプチド又はペプチド模倣物のうち１つ又は複数と、薬学的に許容可能な担体又は賦形剤とを含む、医薬組成物を提供する。実施形態によっては、本願発明は、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、又は状態のうち１つ又は複数に用いる、哺乳動物の予防又は治療のためのキットを提供し、前記キットが、１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤又は阻害剤を含み、かつ任意選択で試薬及び／又は使用指示書を伴うという特徴を有することによってなり、ここで、前記１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤又は阻害剤は、本明細書に記載されるペプチド又はペプチド模倣物のうちいずれかの少なくとも１０個の連続するアミノ酸の配列を含む。
【００４４】
本願発明はまた、ペプチド断片剤と、薬学的に許容可能な担体と、本明細書に記載又は参照されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物のうち１つ又は複数とを、含むか又はそれらから本質的になる医薬組成物を含む。一実施形態では、本医薬組成物は、配列番号１〜５２のうちいずれかを含むか又はそれから本質的になる。別の実施形態では、本医薬組成物は、式Ｉ又は式ＩＩのどちらかから選択される配列を含むか又はそれから本質的になる。本発明の範囲に含まれるのは、これらの化合物の１つ又は複数の活性類似体及び保存されたバリアントを、それらの切頭体、好ましくは記載されるような１アミノ酸もしくは２アミノ酸のＮ末端切頭体、又は１アミノ酸のＣ末端切頭体を含めて、含む医薬組成物である。
【００４５】
別の実施形態では、本発明は、その生物薬剤特性を改善するために修飾されている、類似体、バリアント、切頭体などを含めた本発明の化合物を、含むか又はそれから本質的になる医薬組成物を含む。ある実施形態では、本発明の化合物は、例えば、安定性の増加、タンパク質分解による不活性化に対する耐性の増加、存在しない免疫原性への減少、半減期又は循環寿命の増加、ならびに毒性の低下を付与するために、修飾される。本発明の化合物を修飾することができる方法としては、例えば、ＰＥＧ化によるもの、化学的誘導体化によるもの、及びペプチド又は脂質との融合又はコンジュゲーションによるものが挙げられる。
【００４６】
本発明は、心血管障害、例えば、急性冠閉塞症候群、心不全、虚血性心疾患など；ならびに虚血及び／又は酸化ストレスという特徴を少なくとも部分的に持つ、関連の心血管の疾患、障害、及び状態；ならびに関連の障害及び状態を治療するための、本明細書に記載又は参照される１つ又は複数の薬学的に許容可能なギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む、医薬組成物を含む。ある種の好適なギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、本明細書に配列番号１から５２として特定されている。配列番号１〜１０は、特に好適なコネキシン４３のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物である。他のコネキシンに対する他の特に好適なギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が、記載されている。
【００４７】
本発明は、心血管の疾患、障害、又は状態に対し、対象の治療に適しているか又は適応させた形態で、医薬組成物を含む。本発明は、網膜の疾患、障害、及び状態を含めた眼の疾患、障害、又は状態；ならびに例えば、脈絡膜新血管形成、損傷、漏出、浮腫及び／もしくは炎症という特徴を持つ疾患、障害、及び状態を含めた、血管の損傷又は漏出という特徴を全体的又は部分的に有する、他の眼の疾患、障害、及び状態に対し、対象の治療に適しているか又は適応させた形態で、医薬組成物を含む。
【００４８】
一実施形態では、本願発明は、コネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤として作用する、コネキシンギャップ結合化合物又はコネキシンヘミチャネル化合物を提供する。一実施形態では、本願発明は、複数回用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤を患者に逐次的に投与することによって、血管新生性の目の障害を治療するための方法を提供する。本願発明の方法は、複数回用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤を、６週間毎、７週間毎、８週間毎、又はそれを超える週毎に１回の頻度で、患者に投与することを含む。
【００４９】
本願発明の方法は、ウェット型加齢黄斑変性症、ドライ型加齢黄斑変性症、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、網膜中心静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症や、角膜新血管形成などの、血管新生性の目の障害の治療に有用である。
【００５０】
本願発明は、複数回用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤を、時間をかけて患者に逐次的に投与することを含む方法を提供する。具体的には、本発明の方法は、単回の一次用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤、続いて１回又は複数回の二次用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤、続いて１回又は複数回の三次用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤を、患者に逐次的に投与することを含む。そのため、本願発明の方法によれば、各二次用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤は、すぐ前の用量の後に２週間から４週間投与され、各三次用量は、すぐ前の用量の後に少なくとも８週間投与される。そのような用量投与レジメンの利点とは、それにより、治療コースの多く（すなわち、三次用量）にわたって、治療コース全体を通じて毎月の投与を要した血管新生性の目の障害のための以前の投与レジメンに比べてより頻度の少ない用量投与（例えば、８週間毎に１回）が可能になることである。例えば、ルセンティス（登録商標）（ラニビズマブ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．に関する処方情報を参照されたい。
【００５１】
表現「血管新生性の目の障害」とは、本明細書に使用される際には、血管の成長もしくは増殖に起因もしくは関連するか、又は血管の漏れに起因する、任意の目の疾患を意味する。本願発明の方法を使用する治療可能な血管新生性の目の障害の非限定的な例としては、加齢黄斑変性症（例えば、ウェット型ＡＭＤ、滲出型ＡＭＤなど）、ドライ型ＡＭＤ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ；例えば、ＣＲＶＯに続く黄斑浮腫）、網膜静脈分枝閉塞症（ＢＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、脈絡膜新血管形成（ＣＮＶ；例えば、近視性ＣＮＶ）、虹彩新血管形成、新血管形成緑内障、緑内障の術後線維症、増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）、視神経乳頭新血管形成、角膜新血管形成、網膜新血管形成、硝子体新血管形成、パンヌス、翼状片、血管性網膜症、及び糖尿病性網膜症が挙げられる。
【００５２】
一実施形態では、疾患、障害、又は状態は、炎症、例えば、血管又は微小血管の炎症に関連する。別の実施形態では、疾患、障害、又は状態は、虚血及び／又は酸化ストレス、例えば、血管又は微小血管の虚血及び／又は酸化ストレスに関連する。別の実施形態では、疾患、障害、又は状態は、浮腫、例えば、血管又は微小血管の損傷又は漏出に関連する浮腫に、関連する。
【００５３】
一実施形態では、疾患、障害、又は状態は、新生物、すなわち、細胞が分裂するべきよりも多く分裂するか又は死ぬべき際に死なない際に結果として生じる、異常な大きさの組織に関連する。本明細書に使用される際に、新生物とはまた、腫瘍と称され、良性（がんではない）であることも悪性（がん）であることもある。
【００５４】
ある実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、急性冠閉塞症候群である。この急性冠閉塞症候群は、例えば、ＳＴセグメント上昇型心筋梗塞、非ＳＴセグメント上昇型心筋梗塞、及び不安定狭心症からなる群から選択されることがある。他の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、虚血性心疾患である。他の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、心不全（任意の形態）である。例えば、この心不全は、収縮期又は弛緩期の心不全であり得る。心不全は、左室の収縮期の機能不全の結果生じることがある。心不全はまた、右室梗塞、肺高血圧症、慢性重症三尖弁逆流、又は不整脈源性右室異形成症の結果であることがある。心不全はまた、弛緩期のＬＶ機能不全の結果であることがある。別の実施形態では、心血管性の疾患、障害、又は状態とは、虚血性心疾患である。コネキシン４０、４３、及び４５のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、心血管の疾患、障害、又は状態の治療のために特に有用である。
【００５５】
一態様では、本発明は、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、又は状態のうち１つ又は複数について対象を予防及び／又は治療するために有用な医薬組成物を含み、対象、そのようなものとしては、非経口の送達の形態及び製剤、ならびに輸液、注射、及び滴下による送達のための形態、ならびに遅延放出型、徐放出型、延長放出型、又は制御放出型の組成物、デバイス、及びマトリックスを含めた他の送達の形態が挙げられ、これらは、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物のみ、又は別の心血管治療剤（複数可）との組合せと、薬学的に許容可能な担体とを含むか、又はそれらから本質的になる。ある好適な実施形態では、本医薬組成物は、輸液によるか又はボーラスとすることを含めて、静脈内投与に用いるために製剤化される。他の投与経路に用いる他の製剤もまた、本発明の範囲内にあり、そのようなものとしては、例えば、経鼻、経肺、バッカル、経直腸、経皮、及び経口の送達に用いる製剤が挙げられる。
【００５６】
別の態様では、本発明の組成物は、約０．０１から約１００ミリグラム、約１００から約５００ミリグラム、又は約５００から約１０００ミリグラム、又はそれを超える本発明の化合物、例えば、ギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物又は類似体を含み、そのようなものとしては、配列番号１〜５２及び式ＩからＩＩのいずれかによるペプチドのうち１つ又は複数が挙げられる。他の用量は、本明細書に記載されており、少なくとも約１００ナノグラムから及ぶ用量を含み、そのようなものとしては、例えば少なくとも約２００マイクログラム又はミリグラム、６００マイクログラム又はミリグラム、２０００マイクログラム又はミリグラム、６０００マイクログラム又はミリグラム、及び少なくとも約１０，０００マイクログラム又はミリグラムが挙げられる。用量の濃度としては、少なくとも１リットル当たり約０．１モルの濃度が挙げられ、そのようなものとしては、例えば、少なくとも約０．３、１．０、３．０、及び１０．０モル／Ｌが挙げられる。用量の濃度としてはまた、０．１マイクロモル又はミリモル／Ｌ、０．３マイクロモル又はミリモル／Ｌ、１．０マイクロモル又はミリモル／Ｌ、３．０マイクロモル又はミリモル／Ｌ、及び１０．０マイクロモル又はミリモル／Ｌの濃度が挙げられる。用量の濃度は、０．１、０．３、１、３、及び１０から１００ｍｇ／ｍＬに等しいことがあり、投与可能な重量の用量で１〜１０、１０〜２０、２０〜５０、５０〜１００、１００〜５００、及び５００〜１０００ミリグラム／ｋｇ（ｍｇ／ｋｇ）であることがある。また、本発明の中には、０．１から５．０μｇ／ｋｇまで、及び０．１から１０．０ｇ／ｋｇまでに及ぶ他の用量もある。これらの組成物及び量は、単回用量としても複数回用量としても提供されることがある。
【００５７】
ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物（又はギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む医薬製剤）は、任意の公知の送達系及び／又は投与方法によって患者に投与されることがある。ある実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、眼、眼球内、硝子体内、又は結膜下の注射によって患者に投与される。他の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、局所投与によって、例えば、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含有する点眼剤又は他の液体、ゲル、軟膏、又は流体を介して、患者に投与することができ、目に直接的に適用することができる。他のあり得る投与経路としては、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口が挙げられる。
【００５８】
本発明はまた、本明細書に参照されるような疾患、障害、又は状態にあるか又はそれが発達するリスクがある対象の、治療の方法を含み、この方法は、治療有効量の本明細書に記載される化合物又は医薬組成物のうち１つ又は複数を、対象に投与することを含む。非限定的な一実施形態では、疾患、障害、又は状態は、血管損傷、血管漏出、浮腫、炎症、虚血及び／又は酸化ストレスに関連する。一実施形態では、疾患、障害、又は状態とは、急性冠閉塞症候群、例えば、ＳＴセグメント上昇型心筋梗塞、非ＳＴセグメント上昇型心筋梗塞、又は不安定狭心症である。別の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、心不全である。他の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、虚血性心疾患である。別の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、安定狭心症である。
【００５９】
本発明は、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、又は状態にあるか、又はそれが発達するリスクがあるか、又はそれが進行するリスクがある、対象を治療する方法を含み、この方法は、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と、薬学的に許容可能な担体とを含む。一実施形態では、本医薬組成物中のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、配列番号１〜５２から選択される配列を含むか又はそれから本質的になる。別の実施形態では、本医薬組成物中のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、式Ｉ又は式ＩＩから選択される配列を含むか又はそれから本質的になる。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネル遮断又は阻害剤化合物としてはまた、本明細書に記載されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の活性類似体、バリアント、切頭体、及び修飾形態が挙げられる。
【００６０】
別の態様では、本発明は、対象でギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの活性を減少させることによって、対象で炎症、虚血、及び／又は酸化ストレスに関連する心血管又は眼の疾患、障害、又は状態を治療及び／又は予防する方法を含む。これは例えば、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む組成物を対象に投与することによって達成されることがあり、ここで例えば、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、配列番号１〜５２から選択される配列か、又は式ＩからＩＩのいずれかによるペプチドを含むかもしくはそれから本質的になるペプチドか、又は例えば記載されるようなそれらの類似体、バリアント、切頭体、もしくは修飾体を、含むか又はそれから本質的になる。ある実施形態では、約０．０１から約１００、５００、又は１０００ナノグラム又はミリグラム又はそれを超える（例えば、少なくとも約１００ナノグラムもしくはミリグラム、少なくとも約５００ナノグラムもしくはミリグラム、又は少なくとも約１０００ナノグラムもしくはミリグラム）のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物、又は類似体は、例えば、単回用量もしくは分割用量で、又は継続的もしくは周期的な放出によって、１日当たり投与される。
【００６１】
一実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、単回用量で投与される。別の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、２回以上の用量で投与される。さらに別の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、ある期間、例えばある所定の期間にわたって、継続的に投与又は放出される。さらに別の実施形態では、心血管治療剤又は眼薬（例えば、ＶＥＧＦアンタゴニスト）は、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と併せて投与又は共投与される。そのような他の心血管治療剤としては、硝酸塩、β遮断剤、カルシウムチャネル遮断剤（具体的には安定狭心症又は不安定狭心症に用いるものであるが、β遮断剤の場合では心不全にも用いる）、利尿剤、血管拡張剤、陽性変力剤、ＡＣＥ阻害剤、及びアルドステロンアンタゴニスト、例えば、スピロノラクトン（具体的には心不全に用いる）、抗凝血治療薬（例えば、アスピリン、ヘパリン、ワルファリン）、及びニトログリセリン（具体的にはＭＩに用いる）が挙げられる。
【００６２】
本発明はまた、血管形成術をそれを必要とする患者に実施するための方法を提供し、この方法は、血管形成術の処置の間、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、患者に投与することを含む。さらに別の一実施形態では、この方法は、血管形成術の処置の前に、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、患者に投与することを含むか又はさらに含む。さらに別の一実施形態では、この方法は、血管形成術の処置に続いて、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、患者に投与することを含むか又はさらに含む。他の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、血管形成術の処置の前に、間に、及び／又は後に、任意の組合せで患者に投与される。
【００６３】
また、提供されるのは、最初の心臓窮迫の症状に続いて血栓溶解療法が有効となる時間を増すための方法であり、その方法は、以下の症状：１５分よりも長く続く胸痛、安静時の胸痛、最低限の労作後の胸痛、悪心、息切れ、動悸、又は眩暈のうち、１つ又は複数の発症の後に、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を投与することを含む。
【００６４】
別の態様では、治療される対象は、哺乳動物であり、好ましくはヒトである。他の哺乳動物としては、家庭内及び家畜用の動物、ならびに動物園用、競技用、又は愛玩用の動物、例えばイヌ、ウマや、ネコなどが挙げられる。
【００６５】
本発明はまた、本明細書に記載される化合物又は医薬組成物のうち１つ又は複数を含有する、パッケージ材を含む製造品を含む。次いで発明はまた、本明細書に言及されるような疾患、障害、又は状態を予防及び／又は治療するために、本明細書に記載される化合物又は医薬組成物のうち１つ又は複数を、対象中又はその上での使用に用いる指示書と共に含有するパッケージ材を含む、製造品を含む。一実施形態では、血管性の疾患、障害、又は状態は、炎症、血管新生、及び／又は血管の漏出、虚血及び／又は酸化ストレスに関連する指示書に参照される。別の実施形態では、指示書に参照される疾患、障害、又は状態は、心血管性の疾患、障害、又は状態である。一実施形態では、指示書に参照される疾患、障害、又は状態は、血管新生性の目の障害である。指示書は、電子化されている、及び／又はウェブサイトに関連付けられていることがある。
【００６６】
本発明はまた、本明細書に参照される疾患、障害、又は状態のうち１つ又は複数を予防又は治療するための医薬を調製する方法を含み、この方法は、本明細書に参照される治療有効量の化合物、例えば、ギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物又は類似体又はバリアントと、薬学的に許容可能な担体とをまとめ合わせることを含む。一実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、配列番号１から５２より選択される配列を含む。別の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、式Ｉ〜ＩＩのうち１つ又は複数より選択される化合物である。一実施形態では、上記医薬は、非経口投与に用いるために製剤化される。一実施形態では、上記医薬は、眼の投与に用いるために製剤化される。別の実施形態では、上記医薬は、局所投与に用いるために製剤化される。別の実施形態では、上記医薬は、経口投与に用いるために製剤化される。
【００６７】
本明細書に記載されるような１つ又は複数の化合物又は医薬組成物を用いる、本明細書に提供されるような対象の治療は、それらの同時の、別々の、逐次的な、又は持続的な投与を含むことがある。
【００６８】
本明細書に参照又は記載される疾患、障害、又は状態を予防及び／又は治療するのに有用な医薬組成物はまた、組合せ調製物の形態で、例えば、２種以上のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物、類似体、又はバリアントの混和物として、提供される。
【００６９】
用語「組合せ調製物」は、上記に定義されたような組合せパートナーが独立して、又は量の区別された組合せパートナー（ａ）及び（ｂ）を用いて異なる既定の組合せを使用することによって、すなわち同時に、別々に、又は逐次的に、用量投与することができるという意味においては、化合物の物理的な組合せだけではなく、「パーツのキット」として提供される化合物をも含む。次いで、キットのパーツは、例えば同時に、又は時系列で時差をつけて、その場合はパーツのキットの任意のパーツについて等しいかもしくは異なる時間間隔でかつ異なる時点で、投与することができる。
【００７０】
別の態様では、本発明は、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物、又は類似体、又はバリアントを、それのみで又は別の治療剤との組合せで、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、又は状態にあるか又はそれが発達するリスクがある対象に投与するための方法を含み、上記剤は、遅延放出調製物、徐放出調製物、延長放出調製物、制御放出調製物に、及び／又は複効調製物に、製剤化される。
【００７１】
ある他の態様では、本発明はまた、前記疾患、障害、及び状態を患っているか又はそのリスクがある対象を治療するために、そのような組成物を使用する方法に関する。
【００７２】
他の態様では、本発明は、血管性の損傷又は漏出という特徴を全体的又は部分的に有する任意の疾患、障害、及び／又は状態であるか、又はそうある疑いがあるか、又はそうある傾向があるか、又はそのリスクがある対象を、予防及び／又は治療するための方法及び組成物を含む。
【００７３】
一態様によれば、本願発明は、心血管又は眼の障害の症状を停止もしくは減少させるか又はそれからの解放をもたらす方法に向けられる。
【００７４】
本発明は、本明細書に記載されるような１つ又は複数の剤形を含有するパッケージ材を含む製造品を含み、そこでは、パッケージ材は、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、及び／又は状態のいずれかにあるか、又はそうある疑いがあるか、又はそうある傾向がある対象に、その剤形を使用できることを標示する、ラベルを有する。
【００７５】
本発明は、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物（複数可）を、心血管又は眼の障害を予防及び／又は治療するのに有用な剤形の製造に使用するための方法を含む。そのような剤形としては、例えば、経口送達の形態及び製剤、ならびに他の送達の形態が挙げられ、そのようなものとしては、例えば、輸液、注射、及び滴下による送達に用いられる形態、ならびに徐放出、延長放出、及び遅延放出の組成物、デポー、及びマトリックスを含む組成物及びデバイスが挙げられる。そのような剤形としては、本明細書に開示されるような対象の治療に用いられるものが挙げられる。
【００７６】
本願発明のこれらの及び他の態様は、この簡潔な概要中の情報にもしくはそれによって限定されるものではなく、下記に示される。
【００７７】
本特許又は本出願のファイルは、彩色の施された少なくとも１つの図面を含有する。彩色図面（複数可）を付したこの特許又は特許出願の公報の複写物は、要望及び手数料の支払いの下、庁により提供されるものとなる。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１−１】図１    （図１Ａ）ＤＡＰＩ標識された核（青）を有する非処理対照におけるコネキシン４３（赤）の免疫標識の画像を示す（上方のパネル）。ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（ペプチド５；５００μＭ）（配列番号４５）への２時間（中間のパネル）又は６時間（下方のパネル）の曝露後のコネキシン４３の分布である。白の矢印は、膜から細胞の中心に向けて広がる細胞質の流れのパターンを強調している。ペプチド５への６時間の曝露後、断片化されたコネキシン４３のプラークが細胞間の境界面に沿って存在する。スケールバー＝３０μｍ
【図１−２】（図１Ｂ）細胞当たりのコネキシン４３のプラークの総面積の定量値を、ペプチド５又はＬａＣｌ３又はＣＢＸ（５００μＭ）による２時間又は６時間の処理の後の非処理対照のパーセンテージとして表す。ＣＢＸによる２時間又は６時間の処理の後、非処理対照に比べて、細胞当たりのコネキシン４３標識の有意な低減が明瞭であった。値は、平均値±平均値の標準誤差（一元配置ＡＮＯＶＡ、ダネットの事後検定）を表す。（図１Ｃ）非処理対照とペプチド５（５０〜５００μＭ）による６時間処理の間で、コネキシン４３標識に有意な差はなく、＊＊ｐ＝０．００４３、＊＊＊ｐ＜０．０００１であった。バーは、平均値±標準誤差（ｎ＝３）を表す。一元配置ＡＮＯＶＡテューキーの多重比較検定。ペプチド５は、ＡＲＰＥ−１９細胞において、コネキシン４３ギャップ結合プラークの分布を変えた。
【図２】図２    ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのｈＣＭＶＥＣ細胞のスクレープローディングアッセイでは、単アラニン置換を有するＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（ペプチド５）（配列番号４５）類似体が天然のペプチド５とは有意な差がないことを実証する、データ及び顕微鏡画像を示す。対合したギャップ結合チャネルの間の陽性ＬＹ色素の移送を、非処理対照のパーセンテージとして表す。ＣＢＸへの２時間の曝露の後、ＬＹ色素の移送は、非処理対照と比べて有意に低減した。天然のペプチド５及び単アラニン置換（Ａｌａ−１からＡｌａ−１２）を有するその類似体もまた、非処理対照に比べて、ＬＹ色素の移送を有意に減じた。これらの類似体は、天然のペプチド５とは有意に異なっておらず、ＣＢＸ対照のみが、天然のペプチド５よりも有意に多くのＬＹ色素の移送を減じた。全処理群に使用する濃度を１００μＭとした。＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１である。全ての値が、平均値±平均値の標準誤差を表す。一元配置ＡＮＯＶＡ、対照又は天然のペプチド５に対するダネットの多重比較検定。
【図３】図３    ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（ペプチド５）（配列番号４５）のアラニンの単置換がペプチドの機能に影響を及ぼして、虚血性傷害により誘発されるｈＣＭＶＥＣ細胞からのＡＴＰ放出から保護することを実証する、バーチャートを示す。細胞外の総ＡＴＰ放出の定量値を、各処理群についての傷害対照のパーセンテージとして表す。ＣＢＸ、ＬａＣｌ３、及び天然のペプチド５（全て１００μＭで）による処理によって、ＡＴＰ放出が有意に低減され、傷害対照に対し＊＊＊＊ｐ＜０．０００１であった。Ａｌａ−２、Ａｌａ−３、Ａｌａ−５、Ａｌａ−７、Ａｌａ−８、及びＡｌａ−１１（全て１００μＭで）は、天然のペプチド５（１００μＭ）とは有意に差があったが、傷害に対しては差はなく、このことは、部位ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４５）にアラニン置換を含有するこれらのペプチドに機能の喪失があることを示す。＊ｐ＜０．０３、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＝０．０００２である。天然のペプチド５と比べると、Ａｌａ−１、Ａｌａ−４、Ａｌａ−６、Ａｌａ−９、Ａｌａ−１０、Ａｌａ−１２に有意な差は観察されなかった。全ての値が、平均値±平均値の標準誤差を表す。一元配置ＡＮＯＶＡ、傷害又は天然のペプチド５に対するダネットの多重比較検定。
【図４】図４．  ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（ペプチド５）（配列番号４５）の切頭配列が、虚血性傷害により誘導されるｈＣＭＶＥＣ細胞からのＡＴＰ放出に対して有効性の変化を示すことを実証する、バーチャートを示す。細胞外の総ＡＴＰ放出の定量値を、各処理群についての傷害対照のパーセンテージとして表す。天然のペプチド５（１００μＭ）及びＭｏｄ−１（配列番号８５）による処理によって、ＡＴＰ放出が有意に低減され、傷害対照に対し＊＊＊＊ｐ＜０．０００１であった。これに対し、Ｍｏｄ−２（配列番号８６）、Ｍｏｄ−３（配列番号７７）、Ｍｏｄ−４（配列番号８７）、Ｍｏｄ−５（配列番号８８）、及びＭｏｄ−６（配列番号８９）（全て１００μＭで）による処理の後では、天然のペプチド５（１００μＭ）に比べて、有意にさらに大きなＡＴＰ放出が観察され、このことは、これらの改変による機能の喪失を標示している。天然のペプチドに比べて＊ｐ＝０．０２３１及び＊＊＊＊ｐ＜０．０００１であった。ｎ＝８ウェル、４つの独立した実験であった。一元配置ＡＮＯＶＡ、傷害又は天然のペプチド５に対するダネットの多重比較検定。
【図５】図５    （Ａ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのｈＣＭＶＥＣ細胞のスクレープローディングアッセイにおいてＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（ペプチド５）（配列番号４５）及びＳＲＰＴＥＫＴモチーフ（配列番号７７）がルシファーイエロー色素の移送に及ぼす効果を示す、顕微鏡画像を示す。（図５Ａ）ペプチド５及びＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号７７）が低減している対照における陽性ＬＹの移送である。（図５Ｂ）対合したギャップ結合チャネルの間の陽性ＬＹ色素の移送が非処理対照のパーセンテージとして表されていることを示す、バーチャートである。ＣＢＸへの２時間の曝露の後、ＬＹ色素の移送は、非処理対照と比べて有意に低減した。ＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号７７）は、有意にＬＹ色素の移送が低減し、それは天然のペプチド５に匹敵した。全処理群に使用する濃度を１００μＭとした。＊＊ｐ＝０．００５７（Ｐｅｐ５）、＊＊ｐ＝０．００２８、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１であった。スクランブルペプチドでは有意差はなかった。全ての値が、平均値±平均値の標準誤差を表す。一元配置ＡＮＯＶＡ、傷害又は天然のペプチド５に対するダネットの多重比較検定。
【図６】図６    コネキシン４３の細胞外ループ及びＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（ペプチド５）（配列番号４５）に由来する合成ペプチドを用いた競合アッセイをまとめた図及びデータを示す。（図６Ａ）コネキシン４３由来の合成の細胞外ループである。（図６Ｂ）虚血性傷害の刺激に応答したｈＣＭＶＥＣ細胞からの細胞外総ＡＴＰ放出を、各処理群について傷害対照のパーセンテージとして表す。２時間の虚血性傷害の刺激後、ｈＣＭＶＥＣ細胞からの総ＡＴＰ放出に有意な増加があった。ＡＴＰ放出は、等モル濃度の天然のペプチド５及びＥＬ２ｃで有意に増加し、このことは、ペプチド５の機能の喪失を標示している。ＣＢＸ、ペプチド５、及び細胞外ループを濃度１００μＭで使用した。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１である。傷害とペプチド５との間で、総ＡＴＰ放出に有意な差があった。１００μＭの天然のペプチド５では、総ＡＴＰ放出の有意な低減があった。全ての値が、平均値±平均値の標準誤差を表す。一元配置ＡＮＯＶＡ、傷害又は天然のペプチド５に対するダネットの多重比較検定。
【発明を実施するための形態】
【００７９】
本願発明の実践は、当技術分野の技能の範囲内にある様々な従来の分子生物学（組換え手法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、核酸化学、及び免疫学の手法を含むか又は採用してもよい。そのような手法は、文献にて充分に説明されており、以下に限定されないが、ほんの一例として、本明細書で一緒に及び個別に「Ｓａｍｂｒｏｏｋ」と称されるＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｔｈｉｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌ，２００１）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ＆  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ  ＆  Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ２００１）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）；Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ（Ｄ．Ｗｉｌｄ，ｅｄ．，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ  ＮＹ，１９９４）；Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｇｒｅｇ  Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９６）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（Ｒ．Ｍａｓｓｅｙｅｆｆ，Ｗ．Ｈ．Ａｌｂｅｒｔ，ａｎｄ  Ｎ．Ａ．Ｓｔａｉｎｅｓ，ｅｄｓ．，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ：ＶＣＨ  Ｖｅｒｌａｇｓ  ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ  ｍｂＨ，１９９３），Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ａｎｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（ｊｏｉｎｔｌｙ  ａｎｄ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｌｙ  ｒｅｆｅｒｒｅｄ  ｔｏ  ｈｅｒｅｉｎ  ａｓ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ），Ｂｅａｕｃａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（２０００）；及びＡｇｒａｗａｌ，ｅｄ．，Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，（１９９３）が挙げられる。
【００８０】
本発明が、本明細書に記載される具体的な方法論、プロトコール、構築物、及び試薬に限定されず、それ自体変わり得ることが理解されよう。また、本明細書に使用される用語は、具体的な実施形態を記載する目的があるに過ぎず、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることになる本願発明の範囲を、限定することを意図するものではないことが理解されよう。本明細書に使用される際に、及び添付の特許請求の範囲では、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、特段に明確に標示のない限り、複数の言及を含む。ゆえに、例えば、「ａｐ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物」への言及とは、１つ又は複数のそのようなペプチドへの言及であり、現在公知のそれらの等価物又は今後開発されるものを含む。特段に定められない限り、本明細書に使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明の属する技術分野の当業者に通例理解されているものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様又は同等の任意の方法、デバイス、及び材料は、本発明の実践又は試験の際に使用することができるものの、好適な方法、デバイス、及び材料は、ここに記載される。本明細書に開示される数の範囲への言及（例えば１から１２）もまた、その範囲内の全ての関連の数（例えば、１、１．１、２、３、３．９、４、５、６、６．５、７、８、９．５、１０、１１、及び１２）と、さらにその範囲内の任意の範囲の有理数（例えば２から８、１．５から５．５、及び３．１から４．７）への言及を組み込むことが意図され、それゆえ、本明細書に明示的に開示される全ての範囲の全ての部分範囲は、明示的に開示される。これらは、具体的に意図されるものの例に過ぎず、列挙される最低値と最高値との間の数値の全てのあり得る組合せは、同様の方法でこの出願に明示的に述べられているものと考えられよう。以下の用語は、本明細書に使用される際に、以下の意味を有する。
【００８１】
本明細書に記載され特許請求される本発明は、コネキシンギャップ結合及びコネキシンヘミチャネルに関し、そのようなものとしては、コネキシン２５、コネキシン２６、コネキシン２９（コネキシン３０．２）、コネキシン３０、コネキシン３０．３、コネキシン３１、コネキシン３１．１、コネキシン３１．３、コネキシン３１．９、コネキシン３２、コネキシン３６、コネキシン３７、コネキシン４０、コネキシン４０．１、コネキシン４３、コネキシン４５コネキシン４６、コネキシン４６．６（コネキシン４７）、コネキシン５０、コネキシン５８、コネキシン５９、コネキシン６２などが挙げられる。
【００８２】
一実施形態では、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド模倣物は、ギャップ結合チャネル阻害剤である。一実施形態では、ギャップ結合は、コネキシン４３タンパク質を含む。一実施形態では、ギャップ結合は、コネキシン４５タンパク質を含む。別の実施形態では、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド模倣物は、ギャップ結合ヘミチャネルの開口の阻害剤である。一実施形態では、ギャップ結合ヘミチャネルは、コネキシン４３タンパク質を含む。一実施形態では、ギャップ結合ヘミチャネルは、コネキシン４５タンパク質を含む。他の実施形態では、ギャップ結合及びヘミチャネルは、コネキシン２５、コネキシン２６、コネキシン２９（コネキシン３０．２）、コネキシン３０、コネキシン３０．３、コネキシン３１、コネキシン３１．１、コネキシン３１．３、コネキシン３１．９、コネキシン３２、コネキシン３６、コネキシン３７、コネキシン４０、コネキシン４０．１、コネキシン４６、コネキシン４６．６（コネキシン４７）、コネキシン５０、コネキシン５８、コネキシン５９、コネキシン６２のタンパク質を含み、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド模倣物は、これらのギャップ結合チャネル及び対応のヘミチャネルのうち１つ又は複数の阻害剤である。
【００８３】
様々なコネキシン模倣ペプチドを使用して、実施例に示されるように、ヒトコネキシンタンパク質の細胞外ループのペプチド配列類似体が、ヒト微小血管内皮細胞を含めた前臨床モデルで、内皮細胞の喪失を予防し血管透過性を低減することが示されており、そこでは、本発明のペプチド化合物が、ヘミチャネル媒介性の内皮細胞からのＡＴＰ放出を阻害できることが実証された。また、ヘミチャネル媒介性のＡＴＰ放出の阻害及びギャップ結合の不対合に対する、ペプチド配列の特異性及び感受性も実証された。ＳＲＰＴＥＫＴモチーフ（配列番号７７）は機能の中心であるが、それ自体では、使用濃度でヘミチャネルを阻害するのに充分ではない。しかし、高濃度で作用させると、ＳＲＰＴＥＫＴモチーフ（配列番号７７）のみで、ギャップ結合の連絡がＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４５）に匹敵する程度に低減した。本ペプチドの用量依存的な作用機序を理解することによって、例えば、網膜の傷害及び疾患、心血管疾患、ならびに新生物がんを含めた疾患、障害、及び状態に対する治療としてのそれらの開発もまた支援される。
【００８４】
本明細書に提供される化合物中に使用されるアミノ酸（例えば、ペプチド及びタンパク質）は、遺伝子にコードされているアミノ酸、遺伝子にコードされていない天然に存在するアミノ酸、又は合成アミノ酸とすることができる。上記のいずれかのＬ−エナンチオマーとＤ−エナンチオマーの両方を、化合物中に利用することができる。以下の略号が、遺伝子にコードされた以下のアミノ酸（及びそれらの残基）について本明細書に使用されることがある：アラニン（Ａｌａ、Ａ）；アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）；アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）；アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）；シテイン（ｃｙｔｅｉｎｅ）（Ｃｙｓ、Ｃ）；グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）；グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）；グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）；ヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）；イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）；ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）；リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）；メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）；フェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ）；プロリン（Ｐｒｏ、Ｐ）；セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）；スレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）；トリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）；チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）；及びバリン（Ｖａｌ、Ｖ）。
【００８５】
遺伝子にコードされておらず本発明の活性化合物中に存在する、ある種の通例遭遇するアミノ酸としては、以下に限定されないが、β−アラニン（ｂ−Ａｌａ）及び他のオメガ−アミノ酸、例えば３−アミノプロピオン酸（Ｄａｐ）、２，３−ジアミノプロピオン酸（Ｄｐｒ、Ｚ）、４−アミノ酪酸など；α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）；ε−アミノヘキサン酸（Ａｈａ）；δ−アミノ吉草酸（Ａｖａ）；メチルグリシン（ＭｅＧｌｙ）；オルニチン（Ｏｒｎ）；シトルリン（Ｃｉｔ）；ｔ−ブチルアラニン（ｔ−ＢｕＡ）；ｔ−ブチルグリシン（ｔ−ＢｕＧ）；Ｎ−メチルイソロイシン（ＭｅＩｌｅ）；フェニルグリシン（Ｐｈｇ）；シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）；ノルロイシン（Ｎｌｅ、Ｊ）；２−ナフチルアラニン（２−Ｎａｌ）；４−クロロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｃｌ））；２−フルオロフェニルアラニン［Ｐｈｅ（２−Ｆ）］；３−フルオロフェニルアラニン［Ｐｈｅ（３−Ｆ）］；４−フルオロフェニルアラニン［Ｐｈｅ（４−Ｆ）］；ぺニシラミン（Ｐｅｎ）；１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸（Ｔｉｃ）；ベータ−２−チエニルアラニン（Ｔｈｉ）；メチオニンスルホキシド（ＭＳＯ）；ホモアルギニン（ｈＡｒｇ）；Ｎ−アセチルリジン（ＡｃＬｙｓ）；２，３−ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）；２，３−ジアミノ酪酸（Ｄｂｕ）；ｐ−アミノフェニルアラニン［Ｐｈｅ（ｐＮＨ２）］；Ｎ−メチルバリン（ＭｅＶａｌ）；ホモシステイン（ｈＣｙｓ）；３−ベンゾチアゾール−２−イル−アラニン（ＢｚｔＡｌａ、Ｂ）；及びホモセリン（ｈＳｅｒ）が挙げられる。想定される追加のアミノ酸類似体としては、ホスホセリン、ホスホスレオニン、ホスホチロシン、ヒドロキシプロリン、ガンマ−カルボキシグルタメート、馬尿酸、オクタヒドロインドール−２−カルボン酸、スタチン、α−メチル−アラニン、パラ−ベンゾイル−フェニルアラニン、プロパルギルグリシン、及びサルコシンが挙げられる。本発明の範囲内に包含されるペプチドは、前述のＬ−立体配置又はＤ−立体配置のアミノ酸のうちいずれか、又は本明細書に記載されるかもしくは当技術分野に公知の任意の他のアミノ酸を、現在であろうと将来であろうと、生物活性を保持しつつ有することができる。
【００８６】
互いに置換可能なアミノ酸は、一般に、類似のクラス又はサブクラス内に存在する。当業者に公知であるように、アミノ酸は、主にアミノ酸側鎖の化学的特性及び物理学的特性に基づいて、異なるクラス内に配することができる。例えば、親水性アミノ酸又は極性アミノ酸であるものと一般に考えられるアミノ酸もあれば、疎水性アミノ酸又は非極性アミノ酸であるものと考えられるアミノ酸もある。極性アミノ酸としては、酸性側鎖、塩基性側鎖、又は親水性の側鎖を有するアミノ酸が挙げられ、非極性アミノ酸としては、芳香族側鎖又は疎水性側鎖を有するアミノ酸が挙げられる。非極性アミノ酸は、さらに細分化されて、特に脂肪族アミノ酸を含むことがある。本明細書に使用される際のアミノ酸のクラスの定義は、以下の通りである。
【００８７】
「非極性アミノ酸」とは、生理的ｐＨで電荷を持たず、極性ではなく、一般に水溶液にはじかれる側鎖を有するアミノ酸を指す。遺伝子にコードされている疎水性のアミノ酸の例としては、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＶａｌが挙げられる。遺伝子にコードされていない非極性アミノ酸の例としては、ｔ−ＢｕＡ、Ｃｈａ、及びＮｌｅが挙げられる。
【００８８】
「芳香族アミノ酸」とは、π−電子系がコンジュゲーションされた少なくとも１つの環（芳香族）を含有する側鎖を有する非極性アミノ酸を指す。芳香族は、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシル基、スルホニル基、ニトロ基、及びアミノ基などの置換基にさらに置換されることがある。遺伝子にコードされている芳香族アミノ酸の例としては、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンが挙げられる。遺伝子にコードされていない通例遭遇する芳香族アミノ酸としては、フェニルグリシン、２−ナフチルアラニン、β−２−チエニルアラニン、３−ベンゾチアゾール−２−イル−アラニン、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、４−クロロフェニルアラニン、２−フルオロフェニルアラニン、３−フルオロフェニルアラニン、及び４−フルオロフェニルアラニンが挙げられる。
【００８９】
「脂肪族アミノ酸」とは、飽和又は不飽和の直鎖、分岐、又は環状の炭化水素の側鎖を有する非極性アミノ酸を指す。遺伝子にコードされている脂肪族アミノ酸の例としては、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、及びＩｌｅが挙げられる。コードされていない脂肪族アミノ酸の例としては、Ｎｌｅが挙げられる。
【００９０】
「極性アミノ酸」とは、生理的ｐＨで電荷を持つかもしくは持たず、２原子により共有される電子対がその原子のうちの一方にさらに密に保持されている結合を有する、側鎖を有する親水性アミノ酸を指す。極性アミノ酸は、一般に親水性であり、このことは、水溶液によって引きつけられる側鎖を有するアミノ酸を、それらが有することを意味する。遺伝子にコードされている極性アミノ酸の例としては、アスパラギン、システイン、グルタミン、リジン、及びセリンが挙げられる。遺伝子にコードされていない極性アミノ酸の例としては、シトルリン、ホモシステイン、Ｎ−アセチルリジン、及びメチオニンスルホキシドが挙げられる。
【００９１】
「酸性アミノ酸」とは、７未満の側鎖ｐＫ値を有する親水性アミノ酸を指す。酸性アミノ酸は、典型的には、水素イオンを喪失しているために、生理的ｐＨでは負電荷の側鎖を有する。遺伝子にコードされている酸性アミノ酸の例としては、アスパラギン酸（アスパラギン酸塩）及びグルタミン酸（グルタミン酸塩）が挙げられる。
【００９２】
「塩基性アミノ酸」とは、７を超える側鎖ｐＫ値を有する親水性アミノ酸を指す。塩基性アミノ酸は、典型的には、ヒドロ二ウムイオンを伴うために、生理的ｐＨでは正電荷の側鎖を有する。遺伝子にコードされている塩基性アミノ酸の例としては、アルギニン、リジン、及びヒスチジンが挙げられる。遺伝子にコードされていない塩基性アミノ酸の例としては、オルニチン、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノ酪酸、及びホモアルギニンが挙げられる。
【００９３】
「イオン性アミノ酸」とは、生理的ｐＨで電荷を持つことのできるアミノ酸を指す。そのようなイオン性アミノ酸としては、酸性アミノ酸及び塩基性アミノ酸、例えば、ｄ−アスパラギン酸、ｄ−グルタミン酸、ｄ−ヒスチジン、ｄ−アルギニン、ｄ−リジン、ｄ−ヒドロキシリジン、ｄ−オルニチン、ｌ−アスパラギン酸、ｌ−グルタミン酸、ｌ−ヒスチジン、ｌ−アルギニン、ｌ−リジン、ｌ−ヒドロキシリジン、又はｌ−オルニチンが挙げられる。
【００９４】
当業者によって認識されることになるように、上記の分類は絶対的なものではない。いくつかのアミノ酸は、２種以上の特徴的な性質を示し、それゆえ２種以上のカテゴリーに含めることができる。例えば、チロシンは、非極性の芳香環と極性のヒドロキシル基の両方を有する。そのため、チロシンは、非極性、芳香族、及び極性として記載され得るいくつかの特徴を有する。しかし，非極性環が優位にあるために、チロシンは、一般に非極性であるものと考えられている。同様に、ジスルフィド連結を形成可能であることに加えて、システインもまた、非極性の特徴を有する。このように、疎水性アミノ酸又は非極性アミノ酸として厳密に分類されない一方で、多くの場合、システインを使用して、疎水性又は非極性をペプチドに付与することができる。
【００９５】
実施形態によっては、本願発明により想定される極性アミノ酸としては、例えば、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、ヒスチジン、ホモシステイン、リジン、ヒドロキシリジン、オルニチン、セリン、スレオニン、及び構造的に関連のあるアミノ酸が挙げられる。一実施形態では、極性アミノは、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、ヒドロキシリジン、リジン、又はオルニチンなどのイオン性アミノ酸である。
【００９６】
利用可能な極性アミノ酸残基又は非極性アミノ酸残基の例としては、例えば、アラニン、バリン、ロイシン、メチオニン、イソロイシン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシンなどが挙げられる。
【００９７】
本明細書に使用される際に、「心血管障害」とは、酸化ストレス及び／又は虚血に関与するか、又はそのような特徴が少なくとも部分的にある、任意の心血管の疾患、障害、又は状態である。
【００９８】
生理的な過程の間、分子は、還元反応及び酸化反応を伴う化学変化を受ける。不対電子を持つ分子は、電子を供与することの可能な分子と連結することができる。この電子の供与は酸化と称され、一方で、電子の求引は還元と呼ばれる。還元及び酸化は、還元された分子を不安定化し、自由に他の分子と反応させて、膜、タンパク質や、ＤＮＡなどの細胞及び細胞内の構成成分に損傷を引き起こし得る。本明細書に使用される際に、「酸化ストレス」とは、一例では、細胞損傷の重要なメディエーターである過程である酸化ストレス／ニトロソ化ストレスをもたらす、反応性酸化体種（ＲＯＳ）の過度の産生を指す。転写因子の活性を含む複数のシグナル伝達経路の活性を誘発する酸化還元の不均衡の重要な面、それは、例えば虚血／再灌流傷害に関連する心血管疾患でユビキタスな過程である。反応性酸化体種は、一酸化窒素（ＮＯ）シンターゼ（ＮＯＳ）、キサンチンオキシダーゼ（ＸＯ）、シクロオキシゲナーゼ、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸［ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ］オキシダーゼのアイソフォームや、金属触媒反応など、種々の供給源から生じ得る。これらとしては、スーパーオキシドアニオン（Ｏ２・−）、ヒドロキシルラジカル（ＨＯ・）、脂質ラジカル（ＲＯＯ−）や、一酸化窒素（ＮＯ）などのフリーラジカルが挙げられる。他の反応性酸素種、例えば、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、過酸化亜硝酸（ＯＮＯＯ−）、及び次亜塩素酸（ＨＯＣｌ）は、フリーラジカルではないとはいえ、しかし酸化ストレスの一因となる酸化効果を有する。
【００９９】
「虚血」とは、血流及び酸素が身体のある特定の部分で漸減した際に起こる状態である。心臓又は網膜の虚血とは、例えば心臓又は網膜が上記の標的とする身体の部分である際に、この状態に用いる名称である。
【０１００】
眼の障害としては、例えば、血管新生性の目の障害、例えば、血管の成長もしくは増殖に起因もしくは関連するか、又は血管の漏れに起因する、任意の目の疾患、障害、又は状態が挙げられる。本願発明の方法を使用する治療可能な非限定的な例としては、加齢黄斑変性症（例えば、ウェット型ＡＭＤ、滲出型ＡＭＤなど．）、ドライ型ＡＭＤ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ；例えば、ＣＲＶＯに続く黄斑浮腫）、網膜静脈分枝閉塞症（ＢＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、脈絡膜新血管形成（ＣＮＶ；例えば、近視性ＣＮＶ）、虹彩新血管形成、新血管形成緑内障、緑内障の術後線維症、増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）、視神経乳頭新血管形成、角膜新血管形成、網膜新血管形成、硝子体新血管形成、パンヌス、翼状片、血管性網膜症、及び糖尿病性網膜症が挙げられる。
【０１０１】
当技術分野は、ペプチドの修飾、例えば、ポリマーのコンジュゲーション又は糖鎖付加によるものに、馴染みがある。用語「ギャップ結合チャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物」及び「ヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物」は、ＰＥＧなどのポリマーにコンジュゲーションされたペプチドを含めた修飾ペプチドを含み、システイン、リジン、又は他の残基の１つ又は複数の追加的な誘導体化から構成されることがある。さらに、ヘミチャネルペプチド剤剤は、リンカー又はポリマーを含むことがあり、ここで、リンカー又はポリマーがコンジュゲーションされているアミノ酸は、本願発明による非天然アミノ酸であってもよいし、又は、リジンもしくはシステインとのカップリングなどの当技術分野に公知の手法を利用して、天然にコードされたアミノ酸にコンジュゲーションされていてもよい。
【０１０２】
本発明の化合物に関連して本明細書に記載されるアミノ酸、例えば、配列番号１〜５２、又は例えば式Ｉ及びＩＩに定義されるような他のペプチドの、置換、欠失、改変、又は付加は、融合体、バリアント、断片、コンジュゲーション体などにおける対応の位置での置換、欠失、改変、又は付加をも指すことを意図するものである。
【０１０３】
用語「ギャップ結合チャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物」及び「ヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物」はまた、連結されているホモ二量体、ヘテロ二量体、ホモ多量体、及びヘテロ多量体をも包含し、そのようなものとしては、以下に限定されないが、天然にコードされていないアミノ酸側鎖を介して直接的に、同じであるかもしくは異なるかのどちらかの天然にコードされていないアミノ酸側鎖に、天然にコードされているアミノ酸側鎖に、又は間接的にリンカーを介して、連結されているものが挙げられる。例示的なリンカーとしては、小有機化合物、種々の長さの水溶性ポリマー、例えば様々な長さのポリ（エチレングリコール）やポリデキストランやポリペプチドなどが挙げられる。
【０１０４】
用語「リンカー」は、通常は化学反応の結果として形成され、典型的には共有結合的な連結である、基又は結合を指すために、本明細書に使用される。加水分解的に安定な連結とは、その連結が実質的に水中で安定であり、有用なＰｈ値では水と反応しないことを意味し、その意味には、以下に限定されないが、生理的条件下かつ長期間にわたること、おそらくはそれどころか無期限であることが含まれる。加水分解的に不安定であるか又は分解可能な連結とは、その連結が、例えば血液を含めて、水中又は水溶液中で分解し得ることを意味する。酵素的に不安定であるか又は分解可能な連結とは、その連結が１つ又は複数の酵素によって分解できることを意味する。当技術分野に認識されているように、ＰＥＧ及び関連ポリマーは、ポリマー骨格中に、又はポリマー骨格とポリマー分子の末端の官能基のうち１つ又は複数との間のリンカー基中に、分解可能な連結を含むことがある。例えば、生物活性剤上でＰＥＧカルボン酸又は活性化ＰＥＧカルボン酸とアルコール基との反応によって形成されるエステル連結は、一般に生理的条件下で加水分解して剤を放出する。他の加水分解的に分解可能な連結としては、以下に限定されないが、カーボネート連結；アミンとアルデヒドとの反応の結果生じるイミン連結；アルコールがリン酸基に反応することによって形成されるリン酸エステル連結；ヒドラジドとアルデヒドとの反応生成物であるヒドラゾン連結；アルデヒドとアルコールとの反応生成物であるアセタール連結；ホルメートとアルコールとの反応生成物であるオルトエステル連結；アミン基、例えば、以下に限定されないがＰＥＧなどのポリマーの端部にある基と、ペプチドのカルボキシル基とによって形成される、ペプチド連結；及びホスホロアミダイト基、例えば、以下に限定されないがポリマーの末端にある基と、オリゴヌクレオチドの５’ヒドロキシル基とによって形成される、オリゴヌクレオチド連結が挙げられる。
【０１０５】
本明細書に使用される際の用語「活性の」又は「生物活性の」とは、生物に関連する生体系、生体経路、生体分子、又は生体相互作用の物理学的特性又は生化学的特性に影響を及ぼし得る任意の物質を意味し、上記生物としては、以下に限定されないが、ウイルス、細菌、バクテリオファージ、トランスポゾン、プリオン、昆虫、真菌、植物、動物、及びヒトが挙げられる。具体的には、本明細書に使用される際に、生物活性分子としては、以下に限定されないが、ヒト又は他の動物における本明細書に記載又は参照される疾患、障害、及び状態の治癒、緩和、治療、又は予防を目的とする任意の物質が挙げられる。
【０１０６】
本明細書に使用される際に、用語「水溶性ポリマー」とは、水性溶媒に可溶性の任意のポリマーを指す。水溶性ポリマーとギャップ結合チャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物又はヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物との連結によって、以下に限定されないが、血清中半減期の増加もしくは調節、又は非修飾形態に比した治療半減期の増加もしくは調節、免疫原性の調節、凝集や多量体形成などの物理的会合特性の調節、受容体の結合性の変更、及び受容体の二量体化もしくは多量体化の変更を含めた、変化をもたらすことができる。水溶性ポリマーは、それ自体の生物活性を持つことも持たないこともあり、ギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を他の物質に付加するためのリンカーとして、利用されることがある。適したポリマーとしては、以下に限定されないが、ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒド、それらのモノＣ１−Ｃ１０アルコキシもしくはアリールオキシ誘導体（米国特許第５，２５２，７１４号に記載）、モノメトキシ−ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアミノ酸、ジビニルエーテル無水マレイン酸、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）−メタクリルアミド、デキストラン、デキストラン硫酸を含めたデキストラン誘導体、ポリプロピレングリコール、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール、ヘパリン、ヘパリン断片、多糖、オリゴ糖、グリカン、限定されないがメチルセルロース及びカルボキシメチルセルロースを含めたセルロース及びセルロース誘導体、デンプン及びデンプン誘導体、ポリペプチド、ポリアルキレングリコール及びそれらの誘導体、ポリアルキレングリコール及びそれらの誘導体のコポリマー、ポリビニルエチルエーテル、ならびにアルファ−ベータ−ポリ［（２−ヒドロキシエチル）−ＤＬ−アスパルトアミドなど、又はそれらの混合物が挙げられる。そのような水溶性ポリマーの例としては、以下に限定されないが、ポリエチレングリコール及び血清アルブミンが挙げられる。
【０１０７】
本明細書に使用される際に、用語「ポリアルキレングリコール」又は「ポリ（アルケングリコール）」とは、ポリエチレングリコール［ポリ（エチレングリコール）］、ポリプロピレングリコール、ポリブチレングリコール、及びそれらの誘導体を指す。用語「ポリアルキレングリコール」及び／又は「ポリエチレングリコール」は、線状ポリマーと分岐ポリマーの両方を包含し、平均すると分子量は０．１ｋＤａと１００ｋＤａ以上との間にある。他の例示的な実施形態は、例えば、Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのカタログ「Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  Ｇｌｙｃｏｌ  ａｎｄ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」（２００１）などの商用供給業者のカタログに一覧にされている。
【０１０８】
本明細書に使用される際に、用語「血清中半減期の改変」とは、修飾されたギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の、非修飾形態に比した循環半減期の増加を意味する。血清中半減期は、ギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を投与した後、様々な時点で血液試料を採取し、各試料中の当該分子の濃度を決定することによって測定される。血清濃度と時間との相関関係によって、血清中半減期の算出が可能になる。血清中半減期の増加は、望ましくは少なくとも約２倍であるが、より少ない増加は、例えば、それが満足の行く用量投与レジメンを可能とするか、又は毒性作用を回避する場合に、有用であることがある。実施形態によっては、この増加は、少なくとも約３倍、少なくとも約５倍、又は少なくとも約１０倍以上である。
【０１０９】
本明細書に使用される際の用語「治療半減期の改変」とは、修飾されたギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の、非修飾形態に比した治療有効量の半減期の増加を意味する。治療半減期は、投与後に分子の薬物動態学的特性及び／又は薬力学的特性を様々な時点で測定することによって測定される。治療半減期の増加によって、望ましくは、特に有益な用量投与レジメン、特に有益な総用量が可能になるか、又は望まない作用が回避される。実施形態によっては、治療半減期の増加は、力価の増加、修飾分子とその標的との結合性の増加もしくは減少、プロテアーゼなどの酵素による当該分子の崩壊の増加もしくは減少、又は非修飾分子の作用の別のパラメーターもしくは機構の増加もしくは減少の結果として生じる。
【０１１０】
ペプチドに適用される際の用語「単離された」とは、そのペプチドが、天然の状態でそれに会合する少なくともいくつかの細胞構成成分もしくは他の生体構成成分を含まないか、又はそのペプチドが、そのｉｎ  ｖｉｖｏもしくはｉｎ  ｖｉｔｒｏでの産生の濃度よりも高いレベルに濃縮されていることを示す。それは、均一な又は実質的に均一な状態とすることができる。単離された物質は、乾燥もしくは半乾燥のどちらかの状態、又は限定されないが水溶液を含めた溶液とすることができる。それは、追加の薬学的に許容可能な担体及び／又は賦形剤を含む医薬組成物の構成成分とすることができる。純度及び均一性は、典型的には、例えばポリアクリルアミドゲル電気泳動や高性能液体クロマトグラフィーなどの、分析化学的手法を使用して決定される。
【０１１１】
「実質的に純粋な」とは、ギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の純度の程度を意味し、その場合、少なくとも７０％のギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物があり、それはさらに好ましくは少なくとも８０％であり、そしていっそうさらに好ましくは少なくとも９０％、９５％、又は９９％にまで増加する。特に好適な純度は、少なくとも９５％である。「本質的に純粋な」とは、所望のギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物について、組成物が少なくとも９０％以上純粋であることを意味する。調製物中に存在する最も優勢な種であるペプチドもまた、実質的に精製されている。
【０１１２】
本明細書に使用される際の用語「有効量」とは、治療される疾患、状態、又は障害の症状のうち１つ又は複数をある程度軽減することになる、投与されるギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の量を指す。本明細書に記載されるギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含有する組成物は、予防的治療、増強的治療及び／又は治療的治療のために投与することができる。
【０１１３】
本明細書に使用される際の「対象」とは、任意の哺乳動物を指し、そのようなものとしては、ヒト、家庭内及び家畜用の動物、ならびに動物園用、競技用、もしくは愛玩用の動物、例えばイヌ、ウマ、ネコ、ヒツジ、ブタ、乳牛などが挙げられる。本明細書の好適な哺乳動物とは、成人、小児、及び高齢者を含めたヒトである。好適な競技用動物とは、ウマ及びイヌである。好適な愛玩用動物とは、イヌ及びネコである。
【０１１４】
本明細書に使用される際に、「予防すること」とは、全体的もしくは部分的に予防すること、寛解もしくは制御すること、低減すること、低下させること、又は減少させること、又は遅延もしくは停止させることを意味する。
【０１１５】
本明細書に使用される際に、当該発明の化合物又は組成物に関連する「治療有効量」とは、所望の生物学的、医薬的、又は治療的な結果を誘導するのに充分な量を指す。この結果は、疾患もしくは障害もしくは状態の徴候、症状、もしくは原因のうち１つもしくは複数の軽減、又は任意の他の所望の生体系の変更とすることができる。本願発明では、例として、その結果は、心血管又は眼の障害の症状のうち１つ又は複数の治療、予防、及び／又は低減を含むものとなり、そのような障害としては、例えば、血管新生性、炎症性、もしくは浮腫性の眼の状態、又は急性冠閉塞症候群、例えば、虚血性心疾患、及び任意の眼の心血管の障害、疾患、もしくは状態、例えば、虚血及び／又は酸化ストレスに関与するものが挙げられる。
【０１１６】
本明細書に使用される際に、用語「治療すること」及び「治療」とは、治療的治療と予防的又は予防の手段との両方を指す。
【０１１７】
「類似体」又は「ペプチド類似体」とは、鋳型ペプチドに類似した特性を持つ化合物を指し、非ペプチド薬剤であることがある。「ペプチド模倣体」（「模倣ペプチド）としても知られる）とは、ペプチドベースの化合物を含むが、ペプチド類似体などの非ペプチドベースの化合物も含む。治療的に有用なペプチドに構造的に類似したペプチド模倣体は、同等の又は増強された治療的又は予防的な効果を生じるために、使用されることがある。一般に、ペプチド模倣体は、模範ポリペプチド（すなわち、生物学的又は薬理学的な機能又は活性を有するポリペプチド）に構造的に同一であるか又は類似しているが、また、例えば−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（ｃｉｓ及びｔｒａｎｓ）、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、及びＣＨ２ＳＯ−からなる群から選択される連結によって任意選択的に置換される、１つ又は複数のペプチド連結も有することができる。この模倣体は、天然のアミノ酸で全体を構成されているか、もしくはアミノ酸の非天然類似体であるかのどちらかとすることができるか、又は、部分的に天然のペプチドアミノ酸と部分的にアミノ酸の非天然類似体とのキメラ分子である。この模倣体はまた、任意の量の天然アミノ酸の保存された置換を、そのような置換が模倣的な活性を実質的に変えない限りにおいて含むことができる。
【０１１８】
一般に、用語「ペプチド」とは、ペプチド結合を介して連結された２つ以上の個別のアミノ酸（天然に存在するかしないかに関わらず）の任意のポリマーを指し、それは、１アミノ酸（又はアミノ酸残基）のアルファ炭素に結合しているカルボン酸基のカルボキシル炭素原子が、隣接アミノ酸のアルファ炭素に結合しているアミノ基のアミノ窒素原子に共有結合してゆく際に発生するようなものである。これらのペプチド結合の連結、及びそれらを含む原子［すなわち、アルファ炭素原子、カルボキシル炭素原子（及びそれらの置換基酸素原子）、及びアミノ窒素原子（及びそれらの置換基水素原子）］は、タンパク質の「ポリペプチド骨格」を形成する。さらに、本明細書に使用される際に、用語「ポリペプチド」及び「ペプチド」は、互換的に使用されることがある。同様に、タンパク質の断片、類似体、誘導体、及びバリアントは、本明細書では「ペプチド」又は「ペプチド剤」と称することがある。用語ペプチドの「断片」とは、ペプチドの全アミノ酸残基よりも少数を含むポリペプチドを指す。
【０１１９】
本明細書に使用される際に、「同時に」は、本発明の１つ又は複数の剤を併行して投与することを意味するために使用され、一方で、用語「組合せで」は、それらを投与することを意味するために使用され、同時に又は物理的な組合せではない場合には、次いで、それらの両方を治療的に作用させるのに利用可能な時間枠内に、「逐次的に」それらを投与することを意味するために使用される。そのため、「逐次的な」投与は、ギャップ結合チャネル又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と、別の眼又は心血管の治療剤との両方が、例えば、併行して有効量で存在するという条件において、一方の剤を、他方の剤の後の何分か以内（例えば、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０）分以内、又は何時間か、何日間か、何週間か、もしくは何か月間かの間に、投与することを許容することがある。構成成分の１回又は複数回の投与の間の時間遅延は、構成成分の正確な性質、それらの間の相互作用、及びそれらのそれぞれの半減期に応じて変わるものとなる。
ヘミチャネルペプチド剤
【０１２０】
本明細書に記載される本発明のギャップ結合チャネル及びヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、微小血管障害の症状のうち１つ又は複数を調節することが可能である。好ましくは、この微小血管障害は、血管新生性の眼障害又は眼の傷害又は心血管障害であるが、炎症、浮腫、及び／又は血管の損傷もしくは漏出という特徴を持つものを含めた他のものが、本明細書に記載されるように意図されている。
【０１２１】
本願発明は、ギャップ結合の連絡及びヘミチャネルの開口及び本明細書に記載される他の活性を調節するのに有用な薬物動態学的特性及び薬力学的特性を有する、ペプチド及びペプチド模倣物の生産、ならびに、ギャップ結合活性ならびに／又はヘミチャネルの開口及びヘミチャネル活性を調節することが治療的に有益である疾患、障害、及び状態の治療におけるそれらの使用を提供する。
【０１２２】
本明細書に記載され特許請求される本発明は、ギャップ結合タンパク質及びギャップ結合ヘミチャネルタンパク質に結合する、ペプチド及びペプチド模倣体に関する。また、出願人の発明は、血管性の疾患、障害、及び状態の影響の治療、予防、及び寛解に有用な医薬品、組成物、及び方法、ならびにそのような化合物及び組成物を含む製品及びキットに関する。一態様では、本発明は、ギャップ結合タンパク質チャネル活性を制御するための化合物に関する。別の態様では、本発明は、ギャップ結合ヘミチャネル活性を制御するための化合物に関する。
【０１２３】
一実施形態では、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド模倣物は、ギャップ結合チャネル阻害剤である。一実施形態では、ギャップ結合は、コネキシン４３タンパク質を含む。一実施形態では、ギャップ結合は、コネキシン４５タンパク質を含む。別の実施形態では、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド模倣物は、ギャップ結合ヘミチャネルの開口の阻害剤である。一実施形態では、ギャップ結合ヘミチャネルは、コネキシン４３タンパク質を含む。一実施形態では、ギャップ結合ヘミチャネルは、コネキシン４５タンパク質を含む。他の実施形態では、ギャップ結合及びヘミチャネルは、コネキシン２５、コネキシン２６、コネキシン２９（コネキシン３０．２）、コネキシン３０、コネキシン３０．３、コネキシン３１、コネキシン３１．１、コネキシン３１．３、コネキシン３１．９、コネキシン３２、コネキシン３６、コネキシン３７、コネキシン４０、コネキシン４０．１、コネキシン４６、コネキシン４６．６（コネキシン４７）、コネキシン５０、コネキシン５８、コネキシン５９、コネキシン６２のタンパク質を含み、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド模倣物は、これらのギャップ結合チャネル及び対応のヘミチャネルのうち１つ又は複数の阻害剤である。
【０１２４】
別の態様では、本発明は、表面に露出されたギャップ結合ヘミチャネルの開口を制御するための化合物に関する。別の態様では、本発明は、ヘミチャネルの開口を持続的に制御するための化合物に関する。別の態様では、本発明は、ヘミチャネルを閉じるための化合物に関する。さらに別の態様では、本発明は、ヘミチャネルの開口を調節するための化合物に関する。
【０１２５】
一態様では、本明細書に提供される本発明は、化合物を含む。別の態様では、本発明は、それらの化合物のうち１つ又は複数を含むか又はそれから本質的になる組成物を含み、ここでは、本発明の根本的かつ新規の特徴とは、本明細書に記載されるようなギャップ結合及び／又はヘミチャネルの機能もしくは活性を調節する能力である。本化合物は、ギャップ結合及び／又はヘミチャネルに関連する障害の治療に有用である。
【０１２６】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物としては、ＡＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号１）、ＶＤＣＡＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号２）、ＶＤＣＦＬＡＲＰＴＥＫＴ（配列番号３）、ＶＤＣＦＬＳＲＰＡＥＫＴ（配列番号４）、ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＡ（配列番号５）、ＣＦＬＳＲＰＴＡＫＴ（配列番号６）、ＣＡＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号７）、ＣＦＬＡＲＰＴＥＫＴ（配列番号８）、ＣＦＬＳＲＰＡＥＫＴ（配列番号９）、及びＣＦＬＳＲＰＴＥＫＡ（配列番号１０）が挙げられる。配列番号１〜１０に示されるような上記のペプチドのうちいずれか又は全てにおいて、別々に又は任意の組合せで共に、バリン（Ｖ）はアラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、及びフェニルアラニン（Ｆ）に置換することができ；アスパラギン酸（Ａｓｐ）は、グルタミン酸（Ｅ）に置換することができ；システイン（Ｃ）は、セリン（Ｓ）に置換することができ；フェニルアラニン（Ｐ）は、アラニン（Ａ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、及びバリン（Ｖ）に置換することができ；ロイシン（Ｌ）は、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）に置換することができ；セリン（Ｓ）は、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、及びバリン（Ｖ）、好ましくはアラニンに置換することができ；アルギニン（Ｒ）は、リジン（Ｌ）又はグルタミン（Ｑ）に置換することができ、プロリン（Ｐ）は、置換することができず；スレオニン（Ｔ）は、アラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、及びグリシン（Ｇ）に置換することができ；グルタミン酸（Ｅ）は、アラニン（Ａ）、グルタミン（Ｑ）、及びアスパラギン（Ｎ）に置換することができ；リジン（Ｋ）は、アルギニン（Ｒ）に置換することができ、これらは全て、配列番号１〜８の類似体である。配列番号１〜８として示される上記のペプチドのうちいずれか又は全てにおいて、別々に又は任意の組合せで共に、いずれのアミノ酸もＬ−アミノ酸とすることもＤ−アミノ酸とすることもできるが、但し、そのペプチドは、Ｌ−Ｖａｌ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｌｅｕ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒ（配列番号４５）ではない。Ｄ−アミノ酸を含有する配列番号１〜８として示される上記のペプチドのいずれも、配列番号１〜８の類似体でもある。
【０１２７】
非限定的で好適な実施形態で単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物は、以下の式Ｉによる化合物も含む。
Ｒ１  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４（配列番号７３）
式中、Ｒ１は、存在しないか、又はＨ、１個から２０個までの炭素原子由来の線状又は分岐の飽和もしくは不飽和の炭化水素鎖を含有するアシル基、アミド、カルバメート、尿素、ＰＥＧ、もしくはヒドロキシアルキルデンプンからなる群から選択され；Ｘ１は、Ｐｈｅであるか、又はＡｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、ならびに／もしくはＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、及び／又はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、ならびに／もしくはＮｖａもしくはＮｌｅ、ならびに／もしくはｔｅｒｔ−ブチルグリシン、フェニルグリシン、７−アザトリプトファン、４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−アラニン、サルコシン、Ｎ−メチル−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−フェニルグリシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−７−アザトリプトファン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−チロシン、Ｎ−メチル−バリン、ならびにＮ−メチル−リジン、ならびに／もしくは前述のもののいずれかのＤ−エナンチオマーからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｘ２は、Ｔｈｒであるか、又はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、ＮｖａもしくはＮｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｘ３は、Ｇｌｕ、Ａｌａ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｎｖａ又はＮｌｅであり；Ｘ４は、Ｔｈｒであるか、又はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、ＮｖａもしくはＮｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であるが；但し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４は、同時にそれぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではなく、ペプチドＲ１  Ｖａｌ  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４  ペプチド（配列番号７３）は、Ｌ−Ｖａｌ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｌｅｕ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒ（配列番号４５）ではない。
【０１２８】
本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ１は、Ｐｈｅであり、Ｘ２、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＴｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ２は、Ｔｈｒであり、Ｘ１、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ３は、Ｇｌｕであり、Ｘ１、Ｘ２、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ４は、Ｔｈｒであり、Ｘ１、Ｘ２、及び／又はＸ３のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、及びＧｌｕではない。
【０１２９】
本発明の化合物は、非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋であり、以下の式ＩＩによる化合物も含む。
Ｒ１  Ｙ１  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｌｅｕ  Ｚ１  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４（配列番号７４）式中、Ｙ１は、Ｖａｌ、Ａｌａ、又はＩｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｔｙｒ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ｎｖａ、Ｎｌｅ、ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、フェニルグリシン、７−アザトリプトファン、４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−アラニン、サルコシン、Ｎ−メチル−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−フェニルグリシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−７−アザトリプトファン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−チロシン、Ｎ−メチル−バリン、及びＮ−メチル−リジン、ならびに／もしくは前述のもののいずれかのＤ−エナンチオマーからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｚ１は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、又はＡｓｎ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、及びＡｒｇからなる群から選択されるアミノ酸であり；ならびに式中、Ｒ１は、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、式Ｉについて上に記載された通りであるが；但し、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、同時にそれぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではなく、ペプチド  Ｒ１  Ｙ１  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｌｅｕ  Ｚ１  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４  ペプチド（配列番号７４）は、Ｌ−Ｖａｌ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｌｅｕ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒ（配列番号４５）ではない。
【０１３０】
本発明はまた、式ＩＩの化合物も含み、式中、Ｙ１は、Ｖａｌであり、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ１は、Ｐｈｅであり、Ｙ１、Ｚ１、Ｘ２、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＶａｌ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ２は、Ｔｈｒであり、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ３は、Ｇｌｕであり、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、及びＴｈｒではない。本発明はまた、式Ｉの化合物を含み、式中、Ｘ４は、Ｔｈｒであり、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、及び／又はＸ３のうち１つ又は複数は、それぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、及びＧｌｕではない。
【０１３１】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の他の実施形態は、また、アミノ酸配列ＩＤＣＦＩＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４３）が、例えばギャップ結合チャネルに対する遮断剤として、及び／又はコネキシン４５から構成されるヘミチャネルに対するヘミチャネル遮断剤として、特異的かつ有用なアイソフォームとなることを含む。上に記載されたＲ１などの基を有するもの、及び例えば分子量を増加してタンパク質分解酵素からそれらを遮蔽するのに有用な他のものを含めて、本配列及びそれらの活性類似体は、少なくとも部分的には血管の損傷及び／又は漏れという特徴を持つものを含めた心臓の疾患、障害、及び状態に対処するために、ならびに心筋梗塞及び心発作に由来する血管のダイバック（ｄｉｅｂａｃｋ）に対処するための治療として、特に重要となる。
【０１３２】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物はまた、以下の式ＩＩＩによる化合物を含む。
Ｒ１  Ｉｌｅ  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４（配列番号７５）
式中、Ｒ１は、存在しないか、又はＨ、１個から２０個までの炭素原子由来の線状又は分岐の飽和もしくは不飽和の炭化水素鎖を含有するアシル基、アミド、カルバメート、尿素、ＰＥＧ、もしくはヒドロキシアルキルデンプンからなる群から選択され；Ｘ１は、Ｐｈｅであるか、又はＡｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、ならびに／もしくはＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ならびに／もしくはＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、ならびに／もしくはＮｖａもしくはＮｌｅ、ならびに／もしくはｔｅｒｔ−ブチルグリシン、フェニルグリシン、７−アザトリプトファン、４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−アラニン、サルコシン、Ｎ−メチル−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−フェニルグリシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−７−アザトリプトファン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−チロシン、Ｎ−メチル−バリン、及びＮ−メチル−リジン、ならびに／もしくは前述のもののいずれかのＤ−エナンチオマーからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｘ２は、Ｔｈｒであるか、又はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、ＮｖａもしくはＮｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｘ３は、Ｇｌｕ、Ａｌａ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｎｖａ又はＮｌｅであり；Ｘ４は、Ｔｈｒであるか、又はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、ＮｖａもしくはＮｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であるが；但し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、同時にそれぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではなく、ペプチドＲ１  Ｉｌｅ  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４  ペプチド（配列番号７５）は、Ｌ−Ｉｌｅ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｉｌｅ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒ（配列番号４３）、又は任意の天然に存在するコネキシンペプチド配列ではない。
【０１３３】
本発明はまた、式ＩＩＩの化合物も含み、式中、Ｘ１は、Ｐｈｅであり、Ｘ２、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＴｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。  本発明はまた、式ＩＩＩの化合物も含み、式中、Ｘ２は、Ｔｈｒであり、Ｘ１、Ｘ３、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではない。  本発明はまた、式ＩＩＩの化合物も含み、式中、Ｘ３は、Ｇｌｕであり、Ｘ１、Ｘ２、及び／又はＸ４のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、及びＴｈｒではない。  本発明はまた、式ＩＩＩの化合物も含み、式中、Ｘ４は、Ｔｈｒであり、Ｘ１、Ｘ２、及び／又はＸ３のうち１つ又は複数は、それぞれＰｈｅ、Ｔｈｒ、及びＧｌｕではない。
【０１３４】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物はまた、以下の式ＩＶによる化合物を含む。
Ｒ１  Ｙ１  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  ＩＬｅ  Ｚ１  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４（配列番号７６）
式中、Ｙ１は、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、ならびに／又はＰｈｅもしくはＩｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｔｙｒ、デヒドロアラニン、アミノイソ酪酸、Ｎｖａ、Ｎｌｅ、ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、フェニルグリシン、７−アザトリプトファン、４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−アラニン、サルコシン、Ｎ−メチル−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−フェニルグリシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−７−アザトリプトファン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−４−フルオロフェニルアラニン、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−チロシン、Ｎ−メチル−バリン、及びＮ−メチル−リジン、ならびに／もしくは前述のもののうちいずれかのＤ−エナンチオマーからなる群から選択されるアミノ酸であり；Ｚ１は、Ｓｅｒ、Ａｌａ、又はＡｓｎ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、及びＡｒｇからなる群から選択されるアミノ酸であり；ならびに式中、Ｒ１、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、式ＩＩＩについて上に記載された通りであるが；但し、Ｙ１、Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、同時にそれぞれＶａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、及びＴｈｒではなく、ペプチドＲ１  Ｙ１  Ａｓｐ  Ｃｙｓ  Ｘ１  Ｉｌｅ  Ｚ１  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｘ２  Ｘ３  Ｌｙｓ  Ｘ４  ペプチド（配列番号７６）は、Ｌ−Ｉｌｅ  Ｌ−Ａｓｐ  Ｌ−Ｃｙｓ  Ｌ−Ｐｈｅ  Ｌ−Ｉｌｅ  Ｌ−Ｓｅｒ  Ｌ−Ａｒｇ  Ｌ−Ｐｒｏ  Ｌ−Ｔｈｒ  Ｌ−Ｇｌｕ  Ｌ−Ｌｙｓ  Ｌ−Ｔｈｒ（配列番号４３）、又は任意の天然に存在するコネキシンペプチド配列ではない。
【０１３５】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の化合物はまた、表１による１２アミノペプチドを含むことも除くこともある。
【０１３６】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の他の実施形態は、また、アミノ酸配列ＶＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号３１）という、例えば、コネキシン５０、６２、３７、４６．６、２６、３２、もしくは３１．９のいずれかから構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＦＩＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号３２）という、例えば、コネキシン４６もしくは３０のいずれかから構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列を含む。
【０１３７】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の他の実施形態は、また、アミノ酸配列ＩＴＣＮＬＳＲＰＳＥＫＴ（配列番号３３）、例えば、コネキシン２９（３０．２）又は３１．３のいずれかから構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＹＶＳＲＰＴＥＫＳ（配列番号３４）という、例えば、コネキシン４０．１から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＥＣＹＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号３５）という、例えば、コネキシン３６から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＩＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号３６）という、例えば、コネキシン５９から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＹＩＳＲＰＴＥＫＫ（配列番号３７）という、例えば、コネキシン３０．３から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＦＩＳＫＰＳＥＫＮ（配列番号３８）という、例えば、コネキシン３１．１から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＹＩＡＲＰＴＥＫＫ（配列番号３９）という、例えば、コネキシン３１から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；アミノ酸配列ＶＤＣＦＩＳＫＰＴＥＫＴ（配列番号４０）という、例えば、コネキシン２５から構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列；ならびにアミノ酸配列ＩＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４１）という、例えば、コネキシン５８及びコネキシン５９のうちいずれかから構成されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルに対する遮断剤として有用な配列を含む。
【０１３８】
非限定的で好適な実施形態では単離されているか又は実質的に純粋である、本発明の他の実施形態は、また、アミノ酸配列ＶＮＣＹＶＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号４２）が、例えばギャップ結合チャネルに対する遮断剤として、及び／又はコネキシン４０から構成されるヘミチャネルに対するヘミチャネル遮断剤として、特異的かつ有用なアイソフォームとなることを含む。上に記載されたＲ１などの基を有するもの、及び例えば分子量を増加してタンパク質分解酵素からそれらを遮蔽するのに有用な他のものを含めて、本配列及びそれらの活性類似体は、少なくとも部分的には微小血管の漏れという特徴を持つものを含めた血管性の疾患、障害、及び状態に対処するために、ならびにがん治療として、特に重要となる。
【０１３９】
ある実施形態では、Ｒ１を、細胞内在化トランスポーターとすることができる。本願発明の細胞内在化トランスポーターは、当技術分野に公知のもしくは新たに発見された任意の内在化配列、又はその保存されたバリアントとしてもよい。細胞内在化トランスポーター及び配列の非限定的な例としては、アンテナペディア配列、ＴＡＴ、ＨＩＶ−Ｔａｔ、ペネトラチン、Ａｎｔｐ−３Ａ（Ａｎｔｐ変異体）、ブフォリンＩＩ、トランスポータン、ＭＡＰ（モデル両親媒性ペプチド）、Ｋ−ＦＧＦ、Ｋｕ７０、プリオン、ｐＶＥＣ、Ｐｅｐ−１、ＳｙｎＢ１、Ｐｅｐ−７、ＨＮ−１、ＢＧＳＣ（ビス−グアニジウム−スペルミジン−コレステロール、及びＢＧＴＣ（ビスグアニジウム−トレン−コレステロール）が挙げられる。
【０１４０】
例示的な細胞内在化ペプチドの配列を下記の表４に示す。
表４
【表２】
2019522041.tif 000015
【０１４１】
表４は、例示的な細胞内在化トランスポーターの配列を一覧に挙げている。
【０１４２】
実施形態によっては、コネキシン、パネキシン及び／又はカドヘリンのモジュレーターペプチドを、輸送ペプチドに融合して、標的細胞内への透過を増加させる。実施形態によっては、輸送ペプチドを、細胞の透過のためのウイルス被覆の部分とすることができる。実施形態によっては、輸送ペプチドを、コネキシン及び／又はカドヘリンのモジュレーターペプチドに、カルボキシ末端又はアミノ末端で、融合することができる。輸送ペプチドは、以下のペプチド：ＡＮＴＰ、ＨＩＶ−ＴＡＴ、トランスポータン、ブフォリンＩＩ、Ｔａｔ、ペネトラチン、ＭＡＰ、Ｋ−ＦＧＦ、Ｋｕ７０、プリオン、ｐＶＥＣ、Ｐｅｐ−１、ＳｙｎＢ１、Ｐｅｐ−７、ＲＧＤ、又はＨＮ−１から選択することができる。
【０１４３】
本願発明の一実施形態では、コネキシン４３モジュレーターペプチドのアミノ酸配列は、本明細書に一覧にされている任意のペプチドの配列番号、又はそれらの保存されたバリアントからなる群から選択することができる。本願発明のさらに別の一実施形態では、コネキシン４３モジュレーターペプチドは、配列番号５４〜７１のアミノ酸配列を含み得る。本願発明の別の実施形態では、コネキシン４３モジュレーターペプチドは、細胞内在化トランスポーターをさらに含む。さらに別の一実施形態では、コネキシン４３モジュレーターペプチドは、アミノ末端で細胞内在化トランスポーターに連結することができる。
【０１４４】
本発明の他の実施形態は、コネキシン細胞外ループ１及び２の両方の領域に合致するペプチドとの組合せ治療が有効性の増加を示し（図３、表２）、その増加は至適基準の対照のチャネル遮断剤として通例使用されるカルバノクソロンの有効性を超えることを含む。
【０１４５】
本発明の他の実施形態は、コネキシンヘミチャネル遮断剤ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号４４）と、式Ｉ又は式ＩＩによるものを含めた本明細書に記載されるペプチドのうちいずれか１つ又は複数との組合せを含む、組成物及び治療が、コネキシン４３ヘミチャネルを遮断する組合せとしても有用となることを含む。
【０１４６】
これらの配列は、別々に又は共に、独立した実体として又は連結されて、送達されてもよい。そのため、本発明はまた、例えば、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号４４）をコネキシン４３ヘミチャネル遮断剤ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４５）に、例えばＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ−Ｘ−ＶＣＹＤＫＳＦＰＩＳＨＶＲ（配列番号４６）の形態で連結させることを含み、上式で、Ｘは、この組合せペプチドがコネキシン４３ヘミチャネル上のそれらの両方の結合部位にそれぞれ接触するのに充分な可撓性を有する、１つ又は複数の連結グリシン又は他の非機能性リンカーである。
【０１４７】
本発明はまた、例えば、組織で同時に複数のコネキシンアイソフォームに対し機能できる組合せで配列を含み、共に別々に又は共に、独立した実体として又は連結されて、送達されることがある。例えば、コネキシン４３ヘミチャネル遮断剤ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４７）は、コネキシン４０ヘミチャネル遮断剤ＶＮＣＹＶＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号４８）に、ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ−Ｘ−ＶＮＣＹＶＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号４９）の形態で連結することができ、上式で、Ｘは、この組合せペプチドをコネキシン４３、コネキシン４０、又はコネキシン４５からなるヘミチャネルと相互作用できるようにする、１つ又は複数の連結グリシン又は他の非機能性リンカーである。
【０１４８】
本発明はまた、例えば、１つ又は４つのペプチドコネキシンアイソフォーム遮断剤配列を組合せで含み、そこでは、それらは三次構造を形成せず、その連結が線形構造の保持をもたらす。一実施形態では、血管内皮コネキシン４０、４３、４５、３７に対するペプチドが調製され、そのようなものとしては、ＶＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号５０）；ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＮ（配列番号５１）；及びＶＤＣＦＶＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号５２）が挙げられる。
【０１４９】
本発明の範囲に含まれるのは、これらの化合物の活性類似体及び保存されたバリアントであり、そのようなものとしては、その切頭体、好ましくはＮ末端の１又は２アミノ酸の切頭体が挙げられる。
【０１５０】
非限定的な一実施形態では、本発明の範囲内にあるペプチドのアミノ酸のうち１つ又は複数は、配列番号１〜５２及び式Ｉ〜ＩＶ内の配列を含めて、Ｌ−又はＤ−の立体配置としてよい。他の実施形態では、本発明の範囲内にあるペプチドのアミノ酸のうち１つ又は複数は、天然に存在するか又は遺伝子にコードされていないアミノ酸である。さらに他の実施形態では、本発明の範囲内にあるペプチドのアミノ酸のうち１つ又は複数は、アミノ酸類似体又は合成アミノ酸である。
【０１５１】
別の非限定的な実施形態では、Ｎ末端アミノ酸は、ホルミル基；ホルミル基、カルボン酸エステル（好ましくはアルデヒドエステル、例えば、カルボキシエチル基、カルボキシメチル基など）を含む基；又はカルボン酸エステルを含む基を含有するように修飾されることがある。ホルミル基、カルボキシエチル基、及びカルボキシメチル基を用いた修飾が、ここでは好適である。
【０１５２】
別の実施形態では、配列番号１〜５２及び式Ｉ〜ＩＶ内の配列を含めた本発明の範囲内の化合物中の１つ又は複数のアミノ酸は、主にアミノ酸側鎖の化学的特性及び物理学的特性に基づき、類似のアミノ酸のクラス又はサブクラス由来の別のアミノ酸に置換される。例えば、１つ又は複数の親水性又は極性のアミノ酸を、別の親水性又は極性のアミノ酸に置換することができる。同様に、１つ又は複数の疎水性又は非極性のアミノ酸を、別の疎水性又は非極性のアミノ酸に置換することができる。そのような置換を作製する際に、極性アミノ酸を、酸性、塩基性、又は親水性の側鎖を有するアミノ酸にさらに細分化することができ、非極性のアミノ酸を、芳香族又は疎水性の側鎖を有するアミノ酸にさらに細分化することができる。非極性アミノ酸は、さらに細分化されて、特に脂肪族アミノ酸を含むことがある。
【０１５３】
また、本発明の範囲内には、生物薬剤特性を改善するために修飾されている、本発明の化合物がある。ある実施形態では、本発明の化合物は、例えば、安定性の増加、タンパク質分解による不活性化に対する耐性の増加、存在しない免疫原性への減少、血清中半減期の改変及び治療半減期の改変を含めた循環寿命の増加、ならびに毒性の低下を付与するために、修飾される。本発明の化合物の修飾形態としては、プロドラッグ形態が挙げられ、その代表的な例は、本明細書の他の箇所に記載されている。本発明の化合物を修飾することができる方法としては、また、例えば、ＰＥＧ化によるもの、化学的誘導体化によるもの、及びペプチド又は脂質との融合又はコンジュゲーションによるものが挙げられる。修飾化合物としては、修飾ペプチドヘミチャネル剤が挙げられ、そのようなものとしては、例えば、修飾された配列番号１〜１０のいずれか、及び修飾類似体、及びそれらのバリアント（例えば、保存されたバリアント）が挙げられる。
【０１５４】
他の実施形態としては、Ｃ末端スレオニンを含まない、配列番号１から１０より選択されるペプチド、ならびに式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、及び／又は式ＩＶによるペプチドが挙げられる。他の実施形態としては、Ｎ末端バリンを含まない、配列番号１から１０より選択されるペプチド、ならびに式Ｉ及び／又は式ＩＩによるペプチドが挙げられる。他の実施形態としては、Ｎ末端イソロイシンを含まない、式ＩＩＩ及び／又は式ＩＶによるペプチドが挙げられる。他の実施形態としては、Ｎ末端バリン又はＣ末端スレオニンを含まない、配列番号１から１０より選択されるペプチド、ならびに式Ｉ及び／又は式ＩＩによるペプチドが挙げられる。他の実施形態としては、Ｎ末端イソロイシン又はＣ末端スレオニンを含まない、式ＩＩＩ及び／又は式ＩＶによるペプチドが挙げられる。
【０１５５】
他の実施形態としては、Ｃ末端アミノ酸を除去されている、すなわち、Ｃ末端１つを切頭された、配列番号１１から５２より選択されるペプチドが挙げられる。他の実施形態としては、１番目及び／又は２番目のＮ末端アミノ酸が除去されている、すなわち、Ｎ末端１つ又は２つを切頭された、配列番号１１から５２より選択されるペプチドが挙げられる。
【０１５６】
実施形態によっては、本願発明は、本願発明のペプチド又はペプチド模倣物のうち１つ又は複数と、薬学的に許容可能な担体又は賦形剤とを含む、医薬組成物を提供する。実施形態によっては、本願発明は、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、又は状態のうち１つ又は複数に用いる、哺乳動物の予防又は治療のためのキットを提供し、前記キットが、１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤又は阻害剤を含み、かつ任意選択で試薬及び／又は使用指示書を伴うという特徴を有することによってなり、ここで、前記１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤又は阻害剤は、本明細書に記載されるペプチド又はペプチド模倣物のうちいずれかの少なくとも１０個の連続するアミノ酸の配列を含む。
【０１５７】
本願発明はまた、ペプチド断片剤と、薬学的に許容可能な担体と、本明細書に記載又は参照されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物のうち１つ又は複数とを、含むか又はそれらから本質的になる医薬組成物を含む。一実施形態では、本医薬組成物は、配列番号１〜５２のうちいずれかを含むか又はそれから本質的になる。別の実施形態では、本医薬組成物は、式Ｉ又は式ＩＩのどちらかから選択される配列を含むか又はそれから本質的になる。本発明の範囲に含まれるのは、これらの化合物の１つ又は複数の活性類似体及び保存されたバリアントを、それらの切頭体、好ましくは記載されるような１アミノ酸もしくは２アミノ酸のＮ末端切頭体、又は１アミノ酸のＣ末端切頭体を含めて、含む医薬組成物である。
【０１５８】
別の実施形態では、本発明は、その生物薬剤特性を改善するために修飾されている、類似体、バリアント、切頭体などを含めた本発明の化合物を、含むか又はそれから本質的になる医薬組成物を含む。ある実施形態では、本発明の化合物は、例えば、安定性の増加、タンパク質分解による不活性化に対する耐性の増加、存在しない免疫原性への減少、半減期又は循環寿命の増加、ならびに毒性の低下を付与するために、修飾される。本発明の化合物を修飾することができる方法としては、例えば、ＰＥＧ化によるもの、化学的誘導体化によるもの、及びペプチド又は脂質との融合又はコンジュゲーションによるものが挙げられる。
【０１５９】
本発明は、心血管障害、例えば、急性冠閉塞症候群、心不全、虚血性心疾患など；ならびに虚血及び／又は酸化ストレスという特徴を少なくとも部分的に持つ、関連の心血管の疾患、障害、及び状態；ならびに関連の障害及び状態を治療するための、本明細書に記載又は参照される１つ又は複数の薬学的に許容可能なギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む、医薬組成物を含む。ある種の好適なギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、本明細書に配列番号１から５２として特定されている。配列番号１〜１０は、特に好適なコネキシン４３のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物である。他のコネキシンに対する他の特に好適なギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が、記載されている。
【０１６０】
本発明は、心血管の疾患、障害、又は状態に対し、対象の治療に適しているか又は適応させた形態で、医薬組成物を含む。本発明は、網膜の疾患、障害、及び状態を含めた眼の疾患、障害、又は状態；ならびに例えば、脈絡膜新血管形成、損傷、漏出、浮腫及び／もしくは炎症という特徴を持つ疾患、障害、及び状態を含めた、血管の損傷又は漏出という特徴を全体的又は部分的に有する、他の眼の疾患、障害、及び状態に対し、対象の治療に適しているか又は適応させた形態で、医薬組成物を含む。
【０１６１】
一実施形態では、本願発明は、コネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤として作用する、コネキシンギャップ結合化合物又はコネキシンヘミチャネル化合物を提供する。一実施形態では、本願発明は、複数回用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤を患者に逐次的に投与することによって、血管新生性の目の障害を治療するための方法を提供する。本願発明の方法は、複数回用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤を、６週間毎、７週間毎、８週間毎、又はそれを超える週毎に１回の頻度で、患者に投与することを含む。
【０１６２】
本願発明の方法は、加齢黄斑変性症、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、網膜中心静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症や、角膜新血管形成などの、血管新生性の目の障害の治療に有用である。
【０１６３】
本願発明は、複数回用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤を、時間をかけて患者に逐次的に投与することを含む方法を提供する。具体的には、本発明の方法は、単回の一次用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤、続いて１回又は複数回の二次用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤、続いて１回又は複数回の三次用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤を、患者に逐次的に投与することを含む。そのため、本願発明の方法によれば、各二次用量のコネキシンギャップ結合又はコネキシンヘミチャネルのアンタゴニスト又は遮断剤は、すぐ前の用量の後に２週間から４週間投与され、各三次用量は、すぐ前の用量の後に少なくとも８週間投与される。そのような用量投与レジメンの利点とは、それにより、治療コースの多く（すなわち、三次用量）にわたって、治療コース全体を通じて毎月の投与を要した血管新生性の目の障害のための以前の投与レジメンに比べてより頻度の少ない用量投与（例えば、８週間毎に１回）が可能になることである。例えば、ルセンティス（登録商標）（ラニビズマブ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．に関する処方情報を参照されたい。
【０１６４】
表現「血管新生性の目の障害」とは、本明細書に使用される際には、血管の成長もしくは増殖に起因もしくは関連するか、又は血管の漏れに起因する、任意の目の疾患を意味する。本願発明の方法を使用する治療可能な血管新生性の目の障害の非限定的な例としては、加齢黄斑変性症（例えば、ウェット型ＡＭＤ、滲出型ＡＭＤなど）、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ；例えば、ＣＲＶＯに続く黄斑浮腫）、網膜静脈分枝閉塞症（ＢＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、脈絡膜新血管形成（ＣＮＶ；例えば、近視性ＣＮＶ）、虹彩新血管形成、新血管形成緑内障、緑内障の術後線維症、増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）、視神経乳頭新血管形成、角膜新血管形成、網膜新血管形成、硝子体新血管形成、パンヌス、翼状片、血管性網膜症、及び糖尿病性網膜症が挙げられる。
【０１６５】
一実施形態では、疾患、障害、又は状態は、炎症、例えば、血管又は微小血管の炎症に関連する。別の実施形態では、疾患、障害、又は状態は、虚血及び／又は酸化ストレス、例えば、血管又は微小血管の虚血及び／又は酸化ストレスに関連する。別の実施形態では、疾患、障害、又は状態は、浮腫、例えば、血管又は微小血管の損傷又は漏出に関連する浮腫に、関連する。
【０１６６】
一実施形態では、疾患、障害、又は状態は、新生物、すなわち、細胞が分裂するべきよりも多く分裂するか又は死ぬべき際に死なない際に結果として生じる、異常な大きさの組織に関連する。本明細書に使用される際に、新生物とはまた、腫瘍と称され、良性（がんではない）であることも悪性（がん）であることもある。
【０１６７】
ある実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、急性冠閉塞症候群である。この急性冠閉塞症候群は、例えば、ＳＴセグメント上昇型心筋梗塞、非ＳＴセグメント上昇型心筋梗塞、及び不安定狭心症からなる群から選択されることがある。他の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、虚血性心疾患である。他の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、心不全（任意の形態）である。例えば、この心不全は、収縮期又は弛緩期の心不全であり得る。心不全は、左室の収縮期の機能不全の結果生じることがある。心不全はまた、右室梗塞、肺高血圧症、慢性重症三尖弁逆流、又は不整脈源性右室異形成症の結果であることがある。心不全はまた、弛緩期のＬＶ機能不全の結果であることがある。別の実施形態では、心血管性の疾患、障害、又は状態とは、虚血性心疾患である。コネキシン４０、４３、及び４５のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、心血管の疾患、障害、又は状態の治療のために特に有用である。
【０１６８】
一態様では、本発明は、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、又は状態のうち１つ又は複数について対象を予防及び／又は治療するために有用な医薬組成物を含み、対象、そのようなものとしては、非経口の送達の形態及び製剤、ならびに輸液、注射、及び滴下による送達のための形態、ならびに遅延放出型、徐放出型、延長放出型、又は制御放出型の組成物、デバイス、及びマトリックスを含めた他の送達の形態が挙げられ、これらは、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物のみ、又は別の心血管治療剤（複数可）との組合せと、薬学的に許容可能な担体とを含むか、又はそれらから本質的になる。ある好適な実施形態では、本医薬組成物は、輸液によるか又はボーラスとすることを含めて、静脈内投与に用いるために製剤化される。他の投与経路に用いる他の製剤もまた、本発明の範囲内にあり、そのようなものとしては、例えば、経鼻、経肺、バッカル、経直腸、経皮、及び経口の送達に用いる製剤が挙げられる。
【０１６９】
別の態様では、本発明の組成物は、約０．０１から約１００ミリグラム、約１００から約５００ミリグラム、又は約５００から約１０００ミリグラム、又はそれを超える本発明の化合物、例えば、ギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物又は類似体を含み、そのようなものとしては、配列番号１〜５２及び式ＩからＩＩのいずれかによるペプチドのうち１つ又は複数が挙げられる。他の用量は、本明細書に記載されており、少なくとも約１００ナノグラムから及ぶ用量を含み、そのようなものとしては、例えば少なくとも約２００マイクログラム又はミリグラム、６００マイクログラム又はミリグラム、２０００マイクログラム又はミリグラム、６０００マイクログラム又はミリグラム、及び少なくとも約１０，０００マイクログラム又はミリグラムが挙げられる。用量の濃度としては、少なくとも１リットル当たり約０．１モルの濃度が挙げられ、そのようなものとしては、例えば、少なくとも約０．３、１．０、３．０、及び１０．０モル／Ｌが挙げられる。用量の濃度としてはまた、０．１マイクロモル又はミリモル／Ｌ、０．３マイクロモル又はミリモル／Ｌ、１．０マイクロモル又はミリモル／Ｌ、３．０マイクロモル又はミリモル／Ｌ、及び１０．０マイクロモル又はミリモル／Ｌの濃度が挙げられる。用量の濃度は、０．１、０．３、１、３、及び１０から１００ｍｇ／ｍＬに等しいことがあり、投与可能な重量の用量で１〜１０、１０〜２０、２０〜５０、５０〜１００、１００〜５００、及び５００〜１０００ミリグラム／ｋｇ（ｍｇ／ｋｇ）であることがある。また、本発明の中には、０．１から５．０μｇ／ｋｇまで、及び０．１から１０．０ｇ／ｋｇまでに及ぶ他の用量もある。これらの組成物及び量は、単回用量としても複数回用量としても提供されることがある。
【０１７０】
ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物（又はギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む医薬製剤）は、任意の公知の送達系及び／又は投与方法によって患者に投与されることがある。ある実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、眼、眼球内、硝子体内、又は結膜下の注射によって患者に投与される。他の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、局所投与によって、例えば、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含有する点眼剤又は他の液体、ゲル、軟膏、又は流体を介して、患者に投与することができ、目に直接的に適用することができる。他のあり得る投与経路としては、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口が挙げられる。
【０１７１】
本発明はまた、本明細書に参照されるような疾患、障害、又は状態にあるか又はそれが発達するリスクがある対象の、治療の方法を含み、この方法は、治療有効量の本明細書に記載される化合物又は医薬組成物のうち１つ又は複数を、対象に投与することを含む。非限定的な一実施形態では、疾患、障害、又は状態は、血管損傷、血管漏出、浮腫、炎症、虚血及び／又は酸化ストレスに関連する。一実施形態では、疾患、障害、又は状態とは、急性冠閉塞症候群、例えば、ＳＴセグメント上昇型心筋梗塞、非ＳＴセグメント上昇型心筋梗塞、又は不安定狭心症である。別の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、心不全である。他の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、虚血性心疾患である。別の実施形態では、心血管の疾患、障害、又は状態とは、安定狭心症である。
【０１７２】
本発明は、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、又は状態にあるか、又はそれが発達するリスクがあるか、又はそれが進行するリスクがある、対象を治療する方法を含み、この方法は、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と、薬学的に許容可能な担体とを含む。一実施形態では、本医薬組成物中のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、配列番号１〜５２から選択される配列を含むか又はそれから本質的になる。別の実施形態では、本医薬組成物中のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、式Ｉ又は式ＩＩから選択される配列を含むか又はそれから本質的になる。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネル遮断又は阻害剤化合物としてはまた、本明細書に記載されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の活性類似体、バリアント、切頭体、及び修飾形態が挙げられる。
【０１７３】
別の態様では、本発明は、対象でギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの活性を減少させることによって、対象で炎症、虚血、及び／又は酸化ストレスに関連する心血管又は眼の疾患、障害、又は状態を治療及び／又は予防する方法を含む。これは例えば、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む組成物を対象に投与することによって達成されることがあり、ここで例えば、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、配列番号１〜５２から選択される配列か、又は式ＩからＩＩのいずれかによるペプチドを含むかもしくはそれから本質的になるペプチドか、又は例えば記載されるようなそれらの類似体、バリアント、切頭体、もしくは修飾体を、含むか又はそれから本質的になる。ある実施形態では、約０．０１から約１００、５００、又は１０００ナノグラム又はミリグラム又はそれを超える（例えば、少なくとも約１００ナノグラムもしくはミリグラム、少なくとも約５００ナノグラムもしくはミリグラム、又は少なくとも約１０００ナノグラムもしくはミリグラム）のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物、又は類似体は、例えば、単回用量もしくは分割用量で、又は継続的もしくは周期的な放出によって、１日当たり投与される。
【０１７４】
一実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、単回用量で投与される。別の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、２回以上の用量で投与される。さらに別の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、ある期間、例えばある所定の期間にわたって、継続的に投与又は放出される。さらに別の実施形態では、心血管治療剤又は眼薬（例えば、ＶＥＧＦアンタゴニスト）は、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と併せて投与又は共投与される。そのような他の心血管治療剤としては、硝酸塩、β遮断剤、カルシウムチャネル遮断剤（具体的には安定狭心症又は不安定狭心症に用いられるものであるが、β遮断剤の場合では心不全にも用いられる）、利尿剤、血管拡張剤、陽性変力剤、ＡＣＥ阻害剤、及びアルドステロンアンタゴニスト、例えば、スピロノラクトン（具体的には心不全に用いる）、血液希釈治療薬（例えば、アスピリン、ヘパリン、ワルファリン）、及びニトログリセリン（具体的にはＭＩに用いる）が挙げられる。
【０１７５】
本発明はまた、血管形成術をそれを必要とする患者に実施するための方法を提供し、この方法は、血管形成術の処置の間、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、患者に投与することを含む。さらに別の一実施形態では、この方法は、血管形成術の処置の前に、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、患者に投与することを含むか又はさらに含む。さらに別の一実施形態では、この方法は、血管形成術の処置に続いて、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、患者に投与することを含むか又はさらに含む。他の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、血管形成術の処置の前に、間に、及び／又は後に、任意の組合せで患者に投与される。
【０１７６】
また、提供されるのは、最初の心臓窮迫の症状に続いて血栓溶解療法が有効となる時間を増すための方法であり、その方法は、以下の症状：１５分よりも長く続く胸痛、安静時の胸痛、最低限の労作後の胸痛、悪心、息切れ、動悸、又は眩暈のうち、１つ又は複数の発症の後に、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を投与することを含む。
【０１７７】
別の態様では、治療される対象は、哺乳動物であり、好ましくはヒトである。他の哺乳動物としては、家庭内及び家畜用の動物、ならびに動物園用、競技用、又は愛玩用の動物、例えばイヌ、ウマや、ネコなどが挙げられる。
【０１７８】
本発明はまた、本明細書に記載される化合物又は医薬組成物のうち１つ又は複数を含有する、パッケージ材を含む製造品を含む。次いで発明はまた、本明細書に言及されるような疾患、障害、又は状態を予防及び／又は治療するために、本明細書に記載される化合物又は医薬組成物のうち１つ又は複数を、対象中又はその上での使用に用いる指示書と共に含有するパッケージ材を含む、製造品を含む。一実施形態では、血管性の疾患、障害、又は状態は、炎症、血管新生、及び／又は血管の漏出、虚血及び／又は酸化ストレスに関連する指示書に参照される。別の実施形態では、指示書に参照される疾患、障害、又は状態は、心血管性の疾患、障害、又は状態である。一実施形態では、指示書に参照される疾患、障害、又は状態は、血管新生性の目の障害である。指示書は、電子化されている、及び／又はウェブサイトに関連付けられていることがある。
【０１７９】
本発明はまた、本明細書に参照される疾患、障害、又は状態のうち１つ又は複数を予防又は治療するための医薬を調製する方法を含み、この方法は、本明細書に参照される治療有効量の化合物、例えば、ギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物又は類似体又はバリアントと、薬学的に許容可能な担体とをまとめ合わせることを含む。一実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、配列番号１から５２より選択される配列を含む。別の実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、式Ｉ〜ＩＩのうち１つ又は複数より選択される化合物である。一実施形態では、上記医薬は、非経口投与に用いるために製剤化される。一実施形態では、上記医薬は、眼の投与に用いるために製剤化される。別の実施形態では、上記医薬は、局所投与に用いるために製剤化される。別の実施形態では、上記医薬は、経口投与に用いるために製剤化される。
【０１８０】
本明細書に記載されるような１つ又は複数の化合物又は医薬組成物を用いる、本明細書に提供されるような対象の治療は、それらの同時の、別々の、逐次的な、又は持続的な投与を含むことがある。
【０１８１】
本明細書に参照又は記載される疾患、障害、又は状態を予防及び／又は治療するのに有用な医薬組成物はまた、組合せ調製物の形態で、例えば、２種以上のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物、類似体、又はバリアントの混和物として、提供される。
【０１８２】
用語「組合せ調製物」は、上記に定義されたような組合せパートナーが独立して、又は量の区別された組合せパートナー（ａ）及び（ｂ）を用いて異なる既定の組合せを使用することによって、すなわち同時に、別々に、又は逐次的に、用量投与することができるという意味においては、化合物の物理的な組合せだけではなく、「パーツのキット」として提供される化合物をも含む。次いで、キットのパーツは、例えば同時に、又は時系列で時差をつけて、その場合はパーツのキットの任意のパーツについて等しいかもしくは異なる時間間隔でかつ異なる時点で、投与することができる。
【０１８３】
別の態様では、本発明は、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物、又は類似体、又はバリアントを、それのみで又は別の治療剤との組合せで、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、又は状態にあるか又はそれが発達するリスクがある対象に投与するための方法を含み、上記剤は、遅延放出調製物、徐放出調製物、延長放出調製物、制御放出調製物に、及び／又は複効調製物に、製剤化される。
【０１８４】
ある他の態様では、本発明はまた、前記疾患、障害、及び状態を患っているか又はそのリスクがある対象を治療するために、そのような組成物を使用する方法に関する。
【０１８５】
他の態様では、本発明は、血管性の損傷又は漏出という特徴を全体的又は部分的に有する任意の疾患、障害、及び／又は状態であるか、又はそうある疑いがあるか、又はそうある傾向があるか、又はそのリスクがある対象を、予防及び／又は治療するための方法及び組成物を含む。
【０１８６】
一態様によれば、本願発明は、心血管又は眼の障害の症状を停止もしくは減少させるか又はそれからの解放をもたらす方法に向けられる。
【０１８７】
本発明は、本明細書に記載されるような１つ又は複数の剤形を含有するパッケージ材を含む製造品を含み、そこでは、パッケージ材は、本明細書に記載又は参照される疾患、障害、及び／又は状態のいずれかにあるか、又はそうある疑いがあるか、又はそうある傾向がある対象に、その剤形を使用できることを標示する、ラベルを有する。
【０１８８】
本発明は、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物（複数可）を、心血管又は眼の障害を予防及び／又は治療するのに有用な剤形の製造に使用するための方法を含む。そのような剤形としては、例えば、経口送達の形態及び製剤、ならびに他の送達の形態が挙げられ、そのようなものとしては、例えば、輸液、注射、及び滴下による送達に用いられる形態、ならびに徐放出、延長放出、及び遅延放出の組成物、デポー、及びマトリックスを含む組成物及びデバイスが挙げられる。そのような剤形としては、本明細書に開示されるような対象の治療に用いられるものが挙げられる。
【０１８９】
また、本発明の範囲内には、生物薬剤特性を改善するために修飾されている、本発明の化合物がある。ある実施形態では、本発明の化合物は、例えば、安定性の増加、タンパク質分解による不活性化に対する耐性の増加、存在しない免疫原性への減少、血清中半減期の改変及び治療半減期の改変を含めた循環寿命の増加、ならびに毒性の低下を付与するために、修飾される。本発明の化合物を修飾することができる方法としては、例えば、ＰＥＧ化によるもの、化学的誘導体化によるもの、及びペプチド又は脂質との融合又はコンジュゲーションによるものが挙げられる。修飾化合物としては、修飾されたギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が挙げられる。
【０１９０】
この発明は、本発明の治療ペプチドのプロドラッグ形態を想定している。「プロドラッグ」とは、可逆性の化学修飾を含む治療ペプチドの修飾形態であり、この修飾は、患者に送達された後、生理的条件下で酵素触媒反応又は非酵素触媒反応のどちらかを通じて、確実に除去され、プロドラッグを親ペプチドに変換することができる。そのような改変は、親の治療ペプチドの薬力学特性を保持しつつ、例えば、化学安定性を増強し、水溶性を変え、生物学的半減期を延長し、治療指数を広げ、薬力学を改善し、及び／又は生物学的利用能を改善することができる。そのような改変はまた、所望の効果を発揮できる生物学的な区画に到達した後に、親ペプチドが放出されるようにすることができる。「プロドラッグ」とは、親ペプチドのある限定的な特性を変更又は排除するために一時的な方式で使用される１つ又は複数の特化された非毒性の保護基を、含むことがある化合物であり、この保護基（複数可）は、酵素的又は化学的切断によって除去することができる。任意の適した保護基（複数可）を採用して、本発明のペプチドプロドラッグを生成することができる。そのような特化された修飾としては、親ペプチドのアミノ末端及び／又はカルボキシ末端のどちらか又は両方に、１つ又は複数のアミノ酸残基を含むことが挙げられる。追加のＮ又はＣ末端のアミノ酸又はアミノ酸配列のｉｎ  ｖｉｖｏでの効率的な除去を可能にする切断部位が、好ましくはそのようなプロドラッグ分子に含まれる。１つ又は複数のＮ及び／又はＣ末端アミノ酸残基の付加以外の修飾も想定される。例えば、プロドラッグの変換のためのジケトピペラジン及びジケトモルホリン（ＤＫＰ及びＤＭＰ）ストラテジーを使用することもあり（例えば、Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ−Ｂａｄｓｅｄ  Ｐｒｏｄｒｕｇ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｅｄ．Ｄｅ，Ａｒｎａｂ（２０１２）を参照）、その場合、プロドラッグは、酵素的切断を何も必要とすることなく、化合物固有の化学不安定性により駆動される生理的条件で、徐々に親薬剤に変換する。安定性を向上させるため、本発明の親ペプチドを、Ｎ末端及び／又はＣ末端アミノ酸を生体可逆的にマスキングすることによって、エクソペプチダーゼ媒介性の加水分解に対して保護することができる。
【０１９１】
本発明のプロドラッグの例は、親ペプチドにおいて、１つ又は複数の追加のアミノ酸残基が親ペプチドのＮ末端及び／又はＣ末端に添加されているものである。本発明の化合物としてはまた、本発明の剤のプロドラッグ形態も挙げられる。例えば、プロドラッグ形態では、１から１６アミノ酸残基が、例えば、配列番号１〜１０を含むペプチド又は式Ｉ〜ＩＶのうちの任意のペプチドのＮ末端に添加されている。
【０１９２】
本発明によるプロドラッグのさらに別の例としては、親ペプチドのアミノ基が、アシル化、アルキル化、リン酸化、エイコサノイル化、アラニル化、ペンチルアミノカルボキシル化、（５−メチル−２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル）メトキシカルボキシル化、テトラヒドロフラニル化、ピロリジルメチル化、ピバロイルオキシメチル化、又はｔｅｒｔ−ブチル化などをされているもの；親ペプチドのヒドロキシ基が、アシル化、アルキル化、リン酸化、アセチル化、パルミトイル化、プロパノイル化、ピバノイル化、コハク酸化、フマル酸化、アラニル化、又はジメチルアミノメチルカルボキシル化などをされている化合物；及び親ペプチドのカルボキシ基が、エステル化又はアミド化（例えば、エチルエステル化、フェニルエステル化、カルボキシメチルエステル化、ジメチルアミノメチルエステル化、ピバロイルオキシメチルエステル化、エトキシカルボニルオキシエチルエステル化、フタリジルエステル化、（５−メチル−２−エクソ−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチルエステル化、シクロヘキシルオキシカルボニルエチルエステル化、又はメチルアミド化など）などをされている化合物が挙げられる。
【０１９３】
他のプロドラッグ形態も想定され、そのようなものとしては、親ペプチドのＮ末端又はＣ末端に配置されていない１つ又は複数のアミノ酸残基の化学修飾を含有するものが挙げられる。当業者が認識することになるように、生理条件下で除去して本発明の化合物の医薬的に活性な形態を産生することができる、任意の適した化学修飾を利用することができる。
【０１９４】
他の実施形態としては、本発明の化合物のペプチジオ模倣体（ｐｅｐｔｉｄｉｏｍｉｍｅｔｉｃ）が挙げられる。
【０１９５】
ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の心保護活性の説明は、実施例に示されている。
【０１９６】
ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物、ならびに修飾されたギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の合成は、当技術分野に公知の方法を用いて実施される。配列番号１〜５２などのペプチドである本発明の化合物は、，固相化学ペプチド合成によって作製することができる。融合ペプチドなどの他の化合物も、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ＆  Ｍａｎｉａｉｔｉｓに記載される標準的な手順を用いて、従来の組換え手法によって作製することができる。本発明のペプチド及び他の化合物は、化学修飾されることがある。これによって、ペプチダーゼ及び他の酵素に対する耐性が増強されることや、腎臓によるクリアランスが制限されることなどがある。そのような修飾化合物を調製する方法は、当技術分野に公知である。
【０１９７】
使用されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の厳密な配列は、心血管障害の症状又は作用のうち１つ又は複数を寛解させる能力に依存するものとなる。そのような作用を決定するための手段は、実施例に示されている。
【０１９８】
本発明の医薬組成物の調製のための適したギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物としては、配列番号１〜５２が挙げられる。本発明の医薬組成物の調製のための他の適したギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物としては、式Ｉ〜ＩＶのうちのペプチドが挙げられる。医薬組成物の調製のための他の適したギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、本明細書に記載されており、例えば、上述の化合物の類似体、バリエーション、切頭体、及び修飾体（融合体を含む）が挙げられる。
【０１９９】
ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネル遮断剤化合物又は阻害剤化合物の活性は、任意の便利な従来のアプローチによって、例えば実施例に記載されるように、それらの配列及び所望の活性という観点から選択することができる。
治療剤
【０２００】
本明細書に記載又は参照される疾患、障害、又は状態、例えば、急性冠閉塞症候群又は血管新生の眼の障害、ならびに炎症、虚血、及び／又は酸化ストレスに関与する関連の疾患、障害、及び状態の予防及び／又は治療のための、本発明の組成物及び方法は、また、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を順番に、又は（例えば、物理的な組合せで、組合せ調製物として提供される）１つ又は複数の他の治療剤との組合せで、投与することを含む。心血管治療剤としては、硝酸塩、β遮断剤、カルシウムチャネル遮断剤（具体的には安定狭心症又は不安定狭心症に用いるものであるが、β遮断剤の場合では心不全にも用いる）、利尿剤、血管拡張剤、陽性変力剤、ＡＣＥ阻害剤、及びアルドステロンアンタゴニスト、例えば、スピロノラクトン（具体的には心不全に用いる）、血液希釈治療薬（例えば、アスピリン、ヘパリン、ワルファリン）、及びニトログリセリン（具体的にはＭＩに用いる）が挙げられる。眼の治療剤としては、抗ＶＥＧＦ化合物が挙げられる。
【０２０１】
本明細書に記載されるような１つ又は複数の化合物又は医薬組成物を用いる、本明細書に示されるような対象の治療は、それらの緊急の又は持続的な投与及び、組合せの場合には、本明細書にさらに記載されるようにそれらの同時の、別々の、又は逐次的な投与を含むことがある。
【０２０２】
本発明の剤は、本明細書に述べられている疾患、障害、又は状態のいずれかに罹っている対象など、治療を必要とする対象に投与されることがある。そうして、対象の状態を改善することができる。この剤を医薬の製造に使用して、本明細書に述べられている疾患、障害、又は状態のいずれかを治療することがある。このように、本発明に従えば、心血管障害を治療できる製剤が提供される。
【０２０３】
本発明の剤は、急性冠閉塞症候群又は本明細書に述べられている疾患又は状態のいずれかに罹っている対象など、治療を必要とする対象に投与されることがある。そうして、対象の状態を改善することができる。それゆえ、この化合物を療法による対象の身体の治療に使用することがある。それらを医薬の製造に使用して、本明細書に述べられている疾患、障害、又は状態のいずれかを治療することがある。
剤形及び製剤及び投与
【０２０４】
本発明の化合物は、単離されているか又は実質的にもしくは本質的に純粋な形態で存在することがある。生成物は、その生成物の意図されている目的に干渉することのない担体又は希釈剤と混合されることがあり、それでもなお単離されているか又は実質的に純粋であるものとみなされることを理解されたい。本発明の生成物はまた、実質的又は本質的に精製された形態であることがあり、好ましくは、この形態は、約８０％、８５％、又は９０％、例えば少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の化合物又は乾燥質量の調製物を含むか、又はそれから本質的になる。
【０２０５】
意図する投与経路に応じて、本発明の医薬生成物、医薬組成物、組合せ調製物、及び医薬は、例えば、溶液、懸濁液、滴下液、持続放出製剤、又は粉末の形態をとることがあり、典型的には、約０．ｌ％〜９５％の活性成分（複数可）、好ましくは約０．２％〜７０％を含有する。他の適した製剤としては、注射ベースの製剤及び輸液ベースの製剤が挙げられる。他の有用な製剤としては、例えば、制御放出調製物、徐放出調製物、又は遅延放出調製物を含めた、持続放出調製物が挙げられる。
【０２０６】
本発明の態様としては、１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含有する、制御型の又は他の用量、剤形、製剤、組成物、及び／又はデバイスが挙げられる。本願発明は、例えば、少なくとも経口投与、経皮送達、局所適用、眼の送達、坐剤による送達、経粘膜送達、注射（皮下投与；真皮下投与；筋肉内投与；デポー投与；及びボーラスによる送達、徐静脈内注射、静脈内点滴を含めた静脈内投与を含めて）、輸液デバイス（植込み型の輸液デバイスを含めて、能動的及び受動的の両方で）、吸入又はガス注入による投与、バッカル投与、及び舌下投与のための、用量及び剤形を含む。特に静脈内投与のための本明細書に記載される剤形、組成物、製剤、又はデバイスのいずれも、本明細書に想定されるか又は通例採用される他の経路のいずれかによる投与のための剤形、組成物、製剤、又はデバイスに適用可能であるか又は望ましい場合に、利用されることがあることを認識されたい。例えば、１つ又は複数の用量が、経口投与に適した剤形に関し記載されている特長又は組成物を組み込むことがある非経口投与に適した剤形を用いて、非経口的にもたらされ得るか、又は、持続的な剤形、例えば調節放出、延長放出、遅延放出、徐放出や、複効などの剤形で送達され得る。
【０２０７】
好ましくは本発明のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、薬学的に許容可能な担体又は希釈剤と組み合わされて医薬組成物を生産する。適した担体及び希釈剤としては、等張生理食塩水溶液、例えばリン酸緩衝生理食塩水が挙げられる。また、適した希釈剤及び賦形剤としては、例えば、水、生理食塩水、デキストロ―ス、グリセローなど、及びそれらの組合せが挙げられる。さらに、所望があれば、湿潤剤又は乳化剤、安定化剤又はｐＨ緩衝剤などの物質も存在することがある。
【０２０８】
用語「薬学的に許容可能な担体」とは、採用された投薬量及び濃度でそれに曝露されている細胞又は哺乳動物に非毒性である、任意の有用な担体、賦形剤、又は安定化剤を指し、組成物を受けている個体に有害な抗体の産生を誘導しない医薬担体が挙げられる。適した担体は、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸や、アミノ酸コポリマーなど、大きくかつ徐々に代謝される巨大分子とすることができる。多くの場合、生理的に許容可能な担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。他の生理的に許容可能な担体の例としては、リン酸、クエン酸や、他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基の）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンや、イムノグロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンや、リジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、又はデキストリンを含む単糖、二糖、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールやソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；ならびに／又はＴｗｅｅｎ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）や、Ｐｌｕｒｏｎｉｃなどの非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【０２０９】
薬学的に許容可能な塩もまた、存在することができ、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩などの鉱酸塩；及び酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩などの有機酸の塩などである。
【０２１０】
適した担体材料としては、クリーム、ローション、ゲル、エマルジョン、又は局所投与用の塗料に用いる基剤として通例使用される、任意の担体又は媒体が挙げられる。例としては、乳化剤、炭化水素基剤を含めた不活性担体、乳化基剤、非毒性溶媒、又は水溶性基剤が挙げられる。特に適した例としては、プルロニック、ＨＰＭＣ、ＣＭＣ、及び他のセルロースベースの成分、ラノリン、ハードパラフィン、液体パラフィン、ソフトイエローパラフィン、又はソフトホワイトパラフィン、白蜜蝋、黄蜜蝋、セトステアリルアルコール、セチルアルコール、ジメチコン、乳化ワックス、ミリスチン酸イソプロピル、微結晶性ワックス、オレイルアルコール、及びステアリルアルコールが挙げられる。
【０２１１】
カゼイン、ゼラチン、アルブミン、にかわ、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、又はポリビニルアルコールなどの補助剤もまた、本発明の製剤に含まれることがある。
【０２１２】
本発明の剤形、製剤、デバイス、及び／又は組成物は、生物学的利用能を最適化するように、及び長期間を含めて血漿濃度を治療範囲内に維持するように、製剤化されることがある。持続送達調製物、例えば、制御送達調製物もまた、例えば、作用部位で薬剤濃度を最適化し、薬物治療下にある期間又はその間の期間を最小にする。
【０２１３】
本発明で有用な剤形、デバイス、及び／又は組成物は、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の低用量での制御及び／又は低用量での長期持続性のｉｎ  ｖｉｖｏ放出のために、１日１回投与を含めた定期的な投与に提供されることがある。
【０２１４】
経口投与に適した剤形の例としては、以下に限定されないが、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物をもたらすことのできる錠剤、カプセル、菱形剤、もしくはそのような形態、又は任意の液体形態、例えばシロップ、水溶液、エマルジョンなどが挙げられる。
【０２１５】
経皮投与に適した剤形の例としては、以下に限定されないが、経皮パッチ、経皮絆創膏などが挙げられる。本発明で有用な化合物及び製剤の局所投与に適した剤形の例は、媒介物を介して直接的に皮膚に適用するとしないとに関わらず、任意のローション、スティック、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ゲルなどである。
【０２１６】
本発明で有用な化合物及び製剤の坐剤投与に適した剤形の例としては、身体の開口部内へ挿入される任意の固体剤形、具体的には経直腸で、経膣で、及び経尿道で挿入されるものが挙げられる。
【０２１７】
本発明で有用な化合物及び製剤の経粘膜送達に適した剤形の例としては、浣腸用の坐剤溶液、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、噴霧溶液、粉末、及び活性成分に加えて適切なものとして当技術分野に公知のそのような担体を含有する同様の製剤が挙げられる。
【０２１８】
本発明で有用な化合物及び製剤の注射に適した形態の投薬の例としては、静脈内注射、皮下、真皮下、及び筋肉内の投与、又は経口投与による、単回投与や多回投与などのボーラスによる送達が挙げられる。
【０２１９】
本発明で有用な化合物及び製剤のデポー投与に適した剤形の例としては、活性剤のペレットもしくは小円柱又は固体形態が挙げられ、ここで、この活性剤は、  生分解性ポリマー、マイクロエマルジョン、リポソームのマトリックス中に封入されているか、又はマイクロカプセル化されている。
【０２２０】
本発明で有用な化合物及び製剤に用いる輸液デバイスの例としては、１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物ならびに／又は複合体化前のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、所望の回数の用量又は定常状態の投与に用いるための所望の量で含有する輸液ポンプが挙げられ、植込み型の薬剤ポンプが挙げられる。
【０２２１】
本発明で有用な化合物及び製剤に用いる植込み型の輸液デバイスの例としては、活性剤が生分解性ポリマー又は合成ポリマー、例えばシリコーン、シリコーンラバー、サイラスティックや、同様のポリマーなどの内部に被包化されているか、又はそれを通じて分散される、任意の固体形態が挙げられる。
【０２２２】
本発明で有用な化合物及び製剤の吸入又はガス注入に適した剤形の例としては、薬学的に許容可能な水性溶媒もしくは有機溶媒中の溶液及び／もしくは懸濁液、又はその混合物及び／又は粉末を含む組成物が挙げられる。
【０２２３】
本発明で有用な化合物及び製剤のバッカル投与に適した剤形の例としては、菱形剤、錠剤など、薬学的に許容可能な水性溶媒もしくは有機溶媒中の溶液及び／もしくは懸濁液、又はその混合物及び／又は粉末を含む組成物が挙げられる。
【０２２４】
本発明で有用な化合物及び製剤の舌下投与に適した剤形の例としては、菱形剤、錠剤など、薬学的に許容可能な水性溶媒もしくは有機溶媒中の溶液及び／もしくは懸濁液、又はその混合物及び／又は粉末を含む組成物が挙げられる。
【０２２５】
本発明で有用な化合物及び製剤の送達に用いる制御薬製剤の例は、例えば、Ｓｗｅｅｔｍａｎ，Ｓ．Ｃ．（Ｅｄ．）．Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ．Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，３３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｈｉｃａｇｏ，２００２，２４８３  ｐｐ．；Ａｕｌｔｏｎ，Ｍ．Ｅ．（Ｅｄ．）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ．Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍ  Ｄｅｓｉｇｎ．Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ，２０００，７３４  ｐｐ．；及びＡｎｓｅｌ，Ｈ．Ｃ．，Ａｌｌｅｎ，Ｌ．Ｖ．ａｎｄ  Ｐｏｐｏｖｉｃｈ，Ｎ．Ｇ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｒｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  １９９９，６７６  ｐｐに見出される。  薬剤送達系の製造で採用される賦形剤は、当業者に公知の様々な刊行物に記載され、そのようなものとしては、例えば、Ｋｉｂｂｅ，Ｅ．Ｈ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ  Ｅｄ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，２０００，６６５  ｐｐが挙げられる。ＵＳＰもまた、錠剤又はカプセルとして製剤化されたものを含めて、調節放出経口剤形の例を示している。例えば、延長放出及び遅延放出の錠剤及びカプセルの薬剤放出能を決定するための特殊な試験も記載する、Ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  ２３／Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ  １８，Ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ  ＭＤ，１９９５（以降「ＵＳＰ」）を参照されたい。延長放出剤形の分析に関するさらに別のガイダンスがＦＤＡによって示されている。Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ：Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｒａｌ  ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍｓ：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ／ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ．、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ：Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（１９９７）を参照されたい。
【０２２６】
本発明の方法で有用な剤形のさらに別の例としては、以下に限定されないが、遅延放出（ＤＲ）形態；延長作用（ＰＡ）形態；制御放出（ＣＲ）形態；延長放出（ＥＲ）形態；時限放出（ＴＲ）形態；及び長期作用（ＬＡ）形態を含む調節放出（ＭＲ）剤形が挙げられる。大抵の場合、これらの用語は、経口的に投与される剤形を記載するのに使用されるが、これらの用語は、本明細書に記載される剤形、製剤、組成物、及び／又はデバイスのいずれにも適用可能であることがある。これらの製剤は、薬剤投与後の何回かにわたる総薬剤の遅延放出、及び／又は投与後の断続的な小分割量での薬剤放出、及び／又は送達系によって管理された制御速度での薬剤の徐放出、及び／又は不変の一定速度での薬剤放出、及び／又は通常の薬剤よりも大幅に長い期間にわたる薬剤放出に、影響を与える。
【０２２７】
本発明の調節放出剤形としては、従来の形態又は即時放出形態によってもたらされない治療目的又は利便目的を達成するように設計された時間、コース、及び／又は場所に基づく薬剤放出の特長を有する、剤形が挙げられる。例えば、Ｂｏｇｎｅｒ，Ｒ．Ｈ．Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔ  ２２（Ｓｕｐｐｌ．）：３−１２（１９９７）；Ｓｃａｌｅ−ｕｐ  ｏｆ  ｏｒａｌ  ｅｘｔｅｎｄｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ  ｓｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ：ｐａｒｔ  Ｉ，ａｎ  ｏｖｅｒｖｉｅｗ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  ２：２３−２７（１９８５）を参照されたい。本発明の延長放出剤形としては、例えば、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって規定されるように、用量投与の頻度を従来の剤形、例えば溶液又は即時放出剤形により提供されるものにまで低減することを可能にする剤形が挙げられる。例えば、上記Ｂｏｇｎｅｒ，Ｒ．Ｈ．（１９９７）を参照されたい。本発明の複効剤形としては、例えば、２種の単回用量の薬物、すなわち即時放出用の１種と遅延放出用の第２の種とを含有する形態が挙げられる。２層の錠剤は、例えば、即時放出用の１層の薬剤を、後に２次用量として又は延長放出の方式のどちらかで薬剤を放出するように設計された第２層と併せて用いて、調製されることがある。本発明の標的放出剤形としては、例えば、薬剤放出を促進し、かつ吸収のため又は薬剤作用のために身体の領域、組織、又は部位で薬剤を単離又は濃縮することに向けられている、製剤が挙げられる。
【０２２８】
また、本発明で有用なのは、１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物ならびに／又は複合体化前のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物を含有する被覆されたビーズ、顆粒、又はミクロスフェアであり、それらを使用して、被覆されたビーズ、顆粒、又はミクロスフェア内に薬剤を組み込むことによる、１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物ならびに／又は複合体化前のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物の調節放出を達成することがある。そのような系では、ギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物ならびに／又は複合体化前のギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物もしくは阻害剤化合物は、ビーズ、ペレット、顆粒、又は他の粒子系の上に散布されている。Ａｎｓｅｌ，Ｈ．Ｃ．，Ａｌｌｅｎ，Ｌ．Ｖ．ａｎｄ  Ｐｏｐｏｖｉｃｈ，Ｎ．Ｇ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  １９９９，ｐ．２３２を参照されたい。
【０２２９】
薬剤送達に適したミクロスフェアの製造のための方法が記載されている。例えば、Ａｒｓｈａｄｙ，Ｒ．Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｅｎｇ  Ｓｃｉ  ３０：１７４６−１７５８（１９８９）を参照されたい；また、Ａｒｓｈａｄｙ，Ｒ．，Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｅｎｇ  Ｓｃｉ  ３０：９０５−９１４（１９９０）を参照されたい；また、Ａｒｓｈａｄｙ  Ｒ．，ポリマー  Ｅｎｇ  Ｓｃｉ  ３０：９１５−９２４（１９９０）を参照されたい。様々な被覆系が市販されている。例えば、Ａｑｕａｃｏａｔ（商標）（ＦＭＣ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ）及びＳｕｒｅｒｅｌｅａｓｅ（商標）（Ｃｏｌｏｒｃｏｎ）；Ａｑｕａｃｏａｔ  ａｑｕｅｏｕｓ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：ＦＭＣ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，１９９１；Ｓｕｒｅｒｅｌｅａｓｅ  ａｑｕｅｏｕｓ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｃｏａｔｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ．Ｗｅｓｔ  Ｐｏｉｎｔ，ＰＡ：Ｃｏｌｏｒｃｏｎ，１９９０；Ｂｕｔｌｅｒ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｔｅｃｈ  ２２：１２２−１３８（１９９８）；Ｙａｚｉｃｉ，Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ  Ｄｅｖ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  １：１７５−１８３（１９９６）である。
【０２３０】
使用される被覆の厚さ及び被覆材のタイプのバリエーションは、体液がその被覆を透過してギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を溶解することが可能な速度に対し影響を及ぼす。一般に、被覆が厚いほど、透過に対する耐性がいっそう大きく、かつギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の放出及び溶解がいっそう遅いものとなる。Ｍａｄａｎ，Ｐ．Ｌ．Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔ  １５：３９−５０（１９９０）を参照されたい。これによって、様々な所望の持続放出速度又は延長放出速度、及び胃腸管の所望のセグメントへの被覆ビーズのターゲティングがもたらされる。水不溶性の放出緩徐化中間層（複数可）に使用できる（ペレット、スフェロイド、又は錠剤のコアに適用される）フィルム形成ポリマーの例としては、エチルセルロース、ポリ酢酸ビニル、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＳ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＬなどが挙げられる［Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＳ及びＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＬのそれぞれは、アンモニオメタクリレートコポリマーである。放出速度は、ラクトース、マンニトール、ソルビトールなどの適した水溶性の孔形成剤を中に組み込むことによるだけではなく、適用される被覆層の厚さによっても、制御することができる。マルチ錠剤、すなわち小さなスフェロイド状の圧縮されたミニ錠剤を含む錠剤が、製剤化されることがあり、このミニ錠剤は、３から４ｍｍの間の径を有することがあり、ゼラチンカプセルシェル中に配して、所望のパターンのギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の放出をもたらすことができる。各カプセルは、８〜１０個のミニ錠剤を含有することがあり、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の即時放出のために被覆されていないものもあれば、延長放出のために被覆されているものもある。．
【０２３１】
ヒト及び他の哺乳動物への経口投与に適した、１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の調節放出剤形を生成するために、数多くの方法が採用されることがある。調節放出型の薬剤送達を達成するのに利用できる２つの基本的な機構としては、薬剤及び賦形剤の溶解又は拡散の変更が挙げられる。このコンテクストの中では、例えば、４つの過程が、同時に又は連続的にのどちらかで採用されることがある。これらは以下の通りである。（ｉ）デバイスの水和（例えば、マトリックスの膨張）；（ｉｉ）デバイス内への水の拡散；（ｉｉｉ）薬剤の制御溶解又は遅延溶解；及び（ｉｖ）デバイス外に溶解又は可溶化された薬剤の制御拡散又は遅延拡散。
【０２３２】
様々な投薬量の値を策定するために、細胞培養アッセイ及び動物試験を使用することができる。そのような化合物の投薬量は、好ましくは、少なくとも５０％の集団に治療的に有効であり、かつこのレベルでは毒性が殆ど又は全くない、用量内にある。
【０２３３】
本発明の方法及び組成物に採用されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物のそれぞれの有効な投薬量は、複数の要因に応じて変わることがあり、そのような要因としては、採用される特定のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物（複数可）；存在するのであれば心血管の治療の組合せのパートナー；投与様式；投与頻度；治療されている状態；治療されている状態の重症度；投与経路；治療される患者の部分集団の要求又は個々の患者の要求であって、その患者に特有の年齢、性別、体重、関連する医学的状態に起因し得る要求が挙げられる。
【０２３４】
適した用量は、約０．００１から約１までもしくは約１０ｍｇ／ｋｇ体重まで、例えば約０．０１から約０．５ｍｇ／ｋｇ体重までなどであることがある。しかし、適した用量は、約０．００１から約０．１ｍｇ／ｋｇ体重まで、例えば約０．０１から約０．０５ｍｇ／ｋｇ体重までなどであることがある。用量約１から１００、１００〜２００、２００〜３００、３００〜４００、及び４００〜５００ミリグラムは適切であり、約５００〜７５０マイクログラム及び約７５０〜１０００マイクログラムの用量も同様である。他の有用な用量としては、用量当たり約３００から約１０００ピコモルまで、及び用量当たり約０．０５から約０．２ナノモルまでが挙げられる。さらに他の用量は、以下の特許請求の範囲内にある。
【０２３５】
例えば、ある実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤又は阻害剤の化合物組成物は、約０．０１ナノモル（ｍＭ）又は０．０５ｎＭから約２００ｎＭの終濃度で投与されることがある。好ましくは、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤又は阻害剤の化合物組成物は、約０．１ｎＭから約１５０ｎＭの終濃度で投与され、さらに好ましくは、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤又は阻害剤の化合物組成物は、約１ｎＭから約１００ｎＭの終濃度で適用され、さらに好ましくは、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤又は阻害剤の化合物組成物は、約１０〜２０ｎＭから約１００〜１５０ｎＭの終濃度で投与される。さらに、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の用量としては、例えば、約０．１〜１、１〜２、２〜３、３〜４、又は４〜５ミリグラム（ｍｇ）、約５から約１０ｍｇまで、約１０から約１５ｍｇまで、約１５から約２０ｍｇまで、約２０から約３０ｍｇまで、約３０から約４０ｍｇまで、約４０から約５０ｍｇまで、約５０から約７５ｍｇまで、約７５から約１００ｍｇまで、約１００ｍｇから約２５０ｍｇまで、及び２５０ｍｇから約５００ｍｇまでが挙げられる。また、上記に言及されるように、５００から約１０００ミリグラム以上までの用量又は提供される。他の用量としては、少なくとも約１００ナノグラムから及ぶ用量を含み、そのようなものとしては、例えば少なくとも約２００ナノグラム、６００ナノグラム、２０００ナノグラム、６０００ナノグラム、及び少なくとも約１０，０００ナノグラム以上が挙げられる。用量の濃度としては、少なくとも１リットル当たり約０．１モルの濃度が挙げられ、そのようなものとしては、例えば、少なくとも約０．３、１．０、３．０、及び１０．０ナノモル／Ｌが挙げられる。用量の濃度としてはまた、０．１ナノモル／Ｌ、０．３ナノモル／Ｌ、１．０ナノモル／Ｌ、３．０ナノモル／Ｌ、及び１０．０ナノモル／Ｌの濃度が挙げられる。これらの用量の濃度は、０．１、０．３、１、３、及び１１μｇ／Ｌに等しく、投与可能な重量の用量で０．４、１．０、４．０、１０、及び３９マイクログラム／ｋｇ（μｇ／ｋｇ）である。また、本発明内には、０．１から５．０μｇ／ｋｇまで、及び０．１から１０．０μｇ／ｋｇまでに及ぶ他の用量もある。さらに、約０．４、１．０、４．０、１０、及び３９μｇ／ｋｇの用量は、本発明内にある。少なくとも約０．４、１．０、４．０、１０、及び３９μｇ／ｋｇの用量もまた、本発明内にある。
【０２３６】
本明細書に記載される各剤の、１日当たり約１ナノグラム（ｎｇ）／ｋｇと約１ｍｇ／ｋｇ体重との間のさらに他の投薬レベル。ある実施形態では、各対象化合物の投薬量は、一般に、ｋｇ体重当たり約１ｎｇから約１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約１ｎｇから約０．１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約１ｎｇから約１０ｎｇ、ｋｇ体重当たり約１０ｎｇから約０．１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約０．１マイクログラムから約１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約２０ｎｇから約１００ｎｇ、ｋｇ体重当たり約０．００１ｍｇから約０．０１ｍｇ、ｋｇ体重当たり約０．０１ｍｇから約０．１ｍｇ、又はｋｇ体重当たり約０．１ｍｇから約１ｍｇの範囲となる。ある実施形態では、各対象化合物の投薬量は、一般に、約０．００１ｍｇから約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１ｍｇから約０．１ｍｇ／ｋｇ体重、約０．１ｍｇから約１ｍｇ／ｋｇ体重の範囲となる。２種以上のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が使用される場合、各ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の投薬量は、他方と同じ範囲にある必要はない。
【０２３７】
好都合には、輸液される場合には、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、少なくとも約０．５から１時間、少なくとも約１〜２時間、少なくとも約２〜４時間、少なくとも約４〜６時間、少なくとも約６〜８時間、少なくとも約８〜１０時間、少なくとも約１２時間、又は少なくとも約２４時間投与される。
【０２３８】
本明細書に言及されるように、例えば組合せで投与されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の用量、又はどちらかもしくは両方との組合せで投与される他の治療剤の用量は、単独で与える際に投与される用量から下げて調整することができる。
【０２３９】
いくつかの剤の組合せ使用によって、任意の個々の剤について必要とされる投薬量が低減されることがあるが、それは、異なる剤の効果の始まり及び継続時間が相補的となることがあるためである。好適な一実施形態では、２種以上のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の組合せ使用は、相加的、相乗的、又は超相加的な効果を有する。
【０２４０】
場合によっては、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と、別の治療剤との、又はどちらかもしくは両方と組み合わせて投与される他の剤との組合せは、相加的な効果を有する。他の場合では、組合せは、相加よりも大きな効果を有し得る。そのような効果は、本明細書に「上の相加的な」効果と称され、相乗的又は強化された相互作用に起因することがある。．
【０２４１】
別の好適な実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と別の治療剤との組合せ使用によって、前記剤を単独で投与する際の頻度に比べて前記剤を投与する頻度が低減される。このように、これらの組合せは、所望の治療ゴールを達成するために以前必要とされていたよりも低い及び／又は少ない用量で各剤を使用することを可能にする。
【０２４２】
用量は、単回適用で投与されても分割適用で投与されてもよい。用量が１回投与されてもよいし、適用が繰り返されてもよい。典型的には、投与は、複数の単回投与に加えて又は代えて、輸液によるものとすることができる。
【０２４３】
１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と、別の心血管治療剤とを、所望に応じて、同じ経路又は異なる経路によって投与してもよい。本発明の様々な剤は、治療コースの間の異なる時間に別々に、又は分割もしくは単回の組合せ形態で併行して、投与することができる。
【０２４４】
本発明の一態様では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が、１種の組成物で投与され、別の心血管治療剤が、第２の組成物で投与される。一実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む第１の組成物は、別の治療剤を含む第２の組成物の前に投与される。一実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む第１の組成物は、別の心血管治療剤を含む第２の組成物の後に投与される。好適な一実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む第１の組成物は、別の治療剤を含む第２の組成物の前又は後に投与される。一実施形態では、別の治療剤を含む第２の組成物は、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物剤を含む第１の組成物の前又は後に投与される。一実施形態では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む第１の組成物は、別の治療剤を含む第２の組成物とほぼ同時に投与される。
【０２４５】
単独で又は別の治療剤と併せた、ある期間にわたる、場合によっては約１〜２時間、約２〜４時間、約４〜６時間、約６〜８、又は約２４時間以上の間の、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を含む製剤の送達もまた、例えば、徐放出又はデポー製剤、ならびに経皮製剤及びデバイスを使用して達成されることがある。
【０２４６】
タンパク質及びペプチドの経口での生物学的利用能を向上させるためのストラテジーは、それらの親油性及び酵素感受性の改変によりそれらの物理化学的特性を変えることから、胃腸管の内在性の輸送担体系によって認識される輸送担体分子を使用して新規の機能性を追加することにまで、及び／又は特に適応された薬剤担体系内にそれらを含めることにまで、及んでいる。市販のポリマーベースの系は、特定の器官／組織を標的化する際の制御放出の点で、及びそれらがタンパク質及びペプチドを送達する能力の点で、大きな注目を引いている。それらは、タンパク質を標的部位に有効に送達し、それゆえ副作用を最小限にしつつ治療効果を増加させることができる。ポリマー性微粒子、ナノ粒子、ハイドロゲルや、パッチなどのポリマーベース担体とのタンパク質の会合は、経口のタンパク質の生物学的利用能を向上させるための有用なアプローチである。ポリマーベース担体は、胃腸管の環境からタンパク質を保護し、物理化学的特性とタンパク質放出特性と、ひいては生物学的挙動とを調節可能にすることができる。また、経口吸収を向上させるという観点から言えば、担体の主要な効果とは、上皮膜の透過性を増加させ、それによってより高い生物学的利用能へと導くことである。
【０２４７】
本発明の化合物及び製剤の剤形、延長されたギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の作用は、ギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が剤形から放出される速度に影響を及ぼすことによって、ならびに／又は胃腸管を通る剤形の通過時間を遅めることによって、達成されることがある［Ｂｏｇｎｅｒ，Ｒ．Ｈ．，ＵＳ  Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔ  ２２（Ｓｕｐｐｌ．）：３−１２（１９９７）を参照］。固体剤形からの薬剤放出の速度は、下記に記載される技術によって改変されることがあり、その技術とは、一般的に以下に基づく。すなわち、１）バリア被覆の使用により、薬剤への生体液のアクセスを制御することによって、薬剤の溶解を改変すること；２）剤形からの薬剤の拡散速度を制御すること；及び３）薬剤物質又はその医薬的バリアと部位特有の生体液との間で化学的に反応又は相互作用させることである。これらの目的を達成するための系もまた、本明細書に示されている。１つのアプローチでは、消化を放出機構として採用し、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、腸管内に徐々に消化又は分散される物質で被覆するか又は封入するかのどちらかとする。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の利用能の速度は、分散可能な材料の消化の速度の関数である。それゆえ、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の放出速度、及びひいては有効度は、対象が材料を消化する能力に応じて、対象によって変わる。
【０２４８】
本発明の化合物及び製剤の徐放出剤形のさらに別の形態は、半透膜、例えば、酢酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸プロピオン酸セルロースのものが、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の放出を制御するのに使用される場合に、任意の適した浸透系である。これらは、腸溶性のラッカーの水性分散物を用いて、放出速度を変えることなく被覆することができる。そのような浸透系の一例は、Ａｌｚａ  Ｉｎｃ．（米国）によって開発されたＯｒｏｓ（商標）デバイスなどの浸透ポンプデバイスである。
【０２４９】
本発明の方法で有用な他のデバイスは、一体構造のマトリックスを利用し、そのようなものとしては、例えば、１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が中に圧縮又は包埋される、緩侵食性又は親水性のポリマーマトリックスが挙げられる。
【０２５０】
本発明で有用な化合物及び製剤を含む一体構造のマトリックスデバイスとしては、例えば、当該マトリックスが溶解又は膨張するにつれて次第に利用可能になってゆく可溶性マトリックス中に分散されているギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を使用して、形成されたものが挙げられる。例としては、ヒドロキシプロピルセルロース（ＢＰ）やヒドロキシプロピルセルロース（ＵＳＰ）などの親水性コロイドマトリックス；ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ；ＢＰ、ＵＳＰ）；メチルセルロース（ＭＣ；ＢＰ、ＵＳＰ）；カルボキシメチルセルロースカルシウム（カルシウムＣＭＣ；ＢＰ、ＵＳＰ）；アクリル酸ポリマーもしくはカルボキシポリメチレン（カーボポール）もしくはカルボマー（ＢＰ、ＵＳＰ）；又はアルギン酸（ＢＰ、ＵＳＰ）などの線状グリクロナンポリマー、例えば、アルギン酸（アルギン酸塩）−ゼラチン親水コロイドコアセルベート系由来の微粒子中に製剤化されているもの、もしくはポリ−Ｌ−リジン膜でアルギン酸を被覆することによってリポソームが中に被包化されているものが挙げられる。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネル遮断剤化合物又は阻害剤化合物の放出は、ポリマーが膨張するのにつれて起こり、この膨張により、コア内への水性流体の拡散と、それゆえに系からのギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の拡散の速度とを制御する、マトリックス層が形成される。
【０２５１】
そのような系では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の放出の速度は、ゲル内でのチャネルの蛇行性、及び封入されている流体の粘性に依存し、その結果、様々な放出の動力学を、例えばパルス放出と組み合わせたゼロ次又は１次を達成することができる。そのようなゲルが架橋していない場合、ポリマー鎖間にはさらに弱く不変性のない会合があり、それは二次結合に依存している。そのようなデバイスを用いれば、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を高度に装填することが達成可能であり、効果的に混和する頻度が高まる。デバイスは、２０〜８０％のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物（ｗ／ｗ）を、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の拡散を増強することのできるゲル改質剤と共に含有することがある。そのような改質剤の例としては、水和の速度を増強することのできる糖、架橋の含有量に影響を与えることのできるイオン、及びポリマーのイオン化のレベルに影響を及ぼすｐＨ緩衝液が挙げられる。親水性マトリックスデバイスもまた、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物ならびに親水性マトリックスに加えて、１つ又は複数のｐＨ緩衝液、界面活性剤、対イオン、ステアリン酸マグネシウム（ＢＰ、ＵＳＰ）などの潤滑剤、及びコロイド状二酸化ケイ素（ＵＳＰ；コロイド状無水シリカ、ＢＰ）などの滑剤を含有することがある。
【０２５２】
また、本発明で有用な化合物及び製剤を含む一体構造のマトリックスデバイスは、例えば、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の粒子を用いて形成されたものが不溶性マトリックス中に溶解されていることを含んでおり、溶媒が多くの場合チャネルを通ってマトリックス中に入ってギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の粒子を溶解するのにつれて、このマトリックスから、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が利用できるようになってゆく。例としては、脂質マトリックスすなわち不溶性ポリマーマトリックスを用いて形成される系が挙げられ、そのようなものとしては、カルナウバ蝋（ＢＰ；ＵＳＰ）；分画ココナッツオイル（ＢＰ）やトリグリセリド飽和媒体（ＰｈＥｕｒ）などの中鎖トリグリセリド；又はセルロースエチルエーテルもしくはエチルセルロース（ＢＰ、ＵＳＰ）から形成される調製物が挙げられる。脂質マトリックスは、製造が単純かつ簡単であり、以下の粉末化された構成成分を組み込む。すなわち、放出過程の間に無傷のままである脂質（２０〜４０％の疎水性固体ｗ／ｗ）と；ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物、例えば、塩化ナトリウムや糖などのチャネリング剤であり、この剤は、製剤から濾し出されて水性のマイクロチャネル（細孔）を形成し、このチャネルを通じて溶媒が入り、このチャネルを通じてギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が放出される。この系では、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、不活性の不溶性ポリマー中に包埋されて、水性流体の濾出によって放出されるが、この水性流体は、粒子間に形成された細孔を通じてデバイスのコア内に拡散し、この水性流体からは、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物がデバイス外に拡散する。放出の速度は、圧縮の程度、粒子サイズ、及び賦形剤の性質と相対含有量（ｗ／ｗ）によって制御される。そのようなデバイスの一例は、Ｆｅｒｒｏｕｓ  Ｇｒａｄｕｍｅｔ（Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ  ３３ｒｄ  Ｅｄ．，１３６０．３）のものである。適した不溶性のマトリックスのさらに別の一例は、不活性のプラスチックマトリックスである。この方法によって、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、ポリエチレン、ポリ酢酸ビニルや、ポリメタクリレートなどの不活性のプラスチック材料を用いて顆粒化され、次いで、顆粒化混合物は、錠剤に圧縮される。ひとたび摂取されれば、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、不活性のプラスチックマトリックスから拡散によって徐々に放出される。例えば、Ｂｏｄｍｅｉｅｒ，Ｒ．＆  Ｐａｅｒａｔａｋｕｌ，Ｏ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ７９：３２−２６（１９９０）；Ｌａｇｈｏｕｅｇ，Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  ５０：１３３−１３９（１９８９）；Ｂｕｃｋｔｏｎ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  ７４：１５３−１５８（１９９１）を参照されたい。錠剤の圧縮によって、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の濾出の間、及び胃腸管を通り抜けるその通過を通じて、その形状を保持するマトリックス又はプラスチックの形態が作り出される。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の即時放出部分は、錠剤の表面上に圧縮されることがある。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の消費された不活性の錠剤マトリックスは、糞便によって排出される。このタイプの好結果の剤形の一例は、Ｇｒａｄｕｍｅｔ（Ａｂｂｏｔｔ；例えば、Ｆｅｒｒｏ−Ｇｒａｄｕｍｅｔ，Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ  ３３ｒｄ  Ｅｄ．，ｐ．１８６０．４を参照）である。
【０２５３】
本発明の方法で有用な一体構造のマトリックスデバイスのさらに別の例としては、ポリマーマトリックスへの垂下取付部に組み込まれた本発明の組成物及び製剤が挙げられる。例えば、Ｓｃｈｏｌｓｋｙ，Ｋ．Ｍ．ａｎｄ  Ｆｉｔｃｈ，Ｒ．Ｍ．，Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ３：８７−１０８（１９８６）を参照されたい。これらのデバイスでは、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、水性エマルジョン重合によって調製されたポリ（アクリレート）エステルラテックス粒子とのエステル連結によって付加されることがある。本発明の一体構造のマトリックスデバイスのさらに別の例は、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が、易変性の化学結合によって生体適合性ポリマーに結合しているという剤形を組み込んでおり、例えば、置換無水物（それ自体は、酸塩化物を薬剤：塩化メタクリロイル及びメトキシ安息香酸のナトリウム塩に反応させることによって調製される）から調製されたポリ酸無水物は、胃液中での加水分解時に薬剤を放出する第２のポリマー（Ｅｕｄｒａｇｉｔ  ＲＬ）を有するマトリックスを形成するために使用されている。Ｃｈａｆｉ，Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  ６７：２６５−２７４（１９９２）を参照されたい。
【０２５４】
１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の調節放出形態はまた、マイクロカプセル化によって調製されることがある。マイクロカプセル化とは、それによって、米国特許第３，４８８，４１８号、第３，３９１，４１６号、及び第３，１５５，５９０号に開示されるものなど、被包化されている物質の周囲に「壁」材の薄い被覆を形成することを通じて、固体、液体、又は気体でさえ顕微鏡サイズの粒子内に被包化され得るプロセスである。ゼラチン（ＢＰ、ＵＳＰ）は、マイクロカプセル化される調製物中の壁形成材として通例採用されるが、ポリビニルアルコール（ＵＳＰ）、エチルセルロース（ＢＰ、ＵＳＰ）、ポリ塩化ビニルや、他の材料などの合成ポリマーもまた、使用される。例えば、Ｚｅｎｔｎｅｒ，Ｇ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２：２１７−２２９（１９８５）；Ｆｉｔｅｓ，Ａ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ５９：６１０−６１３（１９７０）；Ｓａｍｕｅｌｏｖ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ６８：３２５−３２９（１９７９）を参照されたい。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の放出の様々な速さは、コアと壁との比、被覆に使用されるポリマー、又はマイクロカプセル化の方法を変えることによって、得られることがある。例えば、Ｙａｚｉｃｉ，Ｅ．，Ｏｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ  Ｄｅｖ  Ｔｅｃｈｎｏｌ；１：１７５−１８３（１９９６）を参照されたい。
【０２５５】
他の有用なアプローチとしては、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が、ポリマー性コロイド粒子又はマイクロカプセル（微粒子、ミクロスフェア、又はナノ粒子）内に、リザーバー又はマトリックスデバイスの形態で組み込まれているものが挙げられる。以下：Ｄｏｕｇｌａｓ，Ｓ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃ．Ｒ．Ｃ．Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｔｈｅｒａｐ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ  ３：２３３−２６１（１９８７）；Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ，Ｒ．Ｃ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  ８：２１７−２３４（１９８１）；Ｈｉｇｕｃｈｉ，Ｔ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ５２：１１４５−１１４９（１９６３）を参照されたい。
【０２５６】
経皮送達に適した薬剤の製剤は、当業者に公知であり、Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（上記）などの参考文献に記載されている。経皮的な経路による薬剤の送達を増強することが知られる方法としては、可逆的に損傷させるか、又はその他薬剤の拡散に対する耐性を低下させるように角質層の物理化学的性質を変えることによって、皮膚透過性を増加させる、化学皮膚透過増強剤が挙げられる。Ｓｈａｈ，Ｖ．，Ｐｅｃｋ，Ｃ．Ｃ．，ａｎｄ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｒ．Ｌ．，Ｓｋｉｎ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ：ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ，Ｉｎ：Ｗａｌｔｅｒｓ，Ｋ．Ａ．ａｎｄ  Ｈａｄｇｒａｆｔ，Ｊ．（Ｅｄｓ．）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｓｋｉｎ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｄｅｋｋｅｒ，（１９９３）を参照されたい。経皮の薬剤送達系におけるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を用いた製剤に適した皮膚透過増強剤は、以下の一覧：アセトン、ラウロカプラム、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、エタノール、オレイン酸、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、及びラウリル硫酸ナトリウムから選ばれてもよい。さらに、皮膚透過増強剤が、当業者に公知の刊行物に見出されることがある。例えば、Ｏｓｂｏｒｎｅ，Ｄ．Ｗ．，＆  Ｈｅｎｋｅ，Ｊ．Ｊ．，Ｐｈａｒｍ  Ｔｅｃｈ  ２１：５０−６６（１９９７）；Ｒｏｌｆ，Ｄ．，“Ｐｈａｒｍ  Ｔｅｃｈ  １２：１３０−１３９（１９８８）を参照されたい。化学的な手段に加えて、本発明の化合物及び製剤の経皮の薬剤の送達及び透過を増強する、物理的な方法がある。これらはイオン泳動及び音波泳動を含む。イオン泳動又は音波泳動による投与に適した製剤は、ゲル、クリーム、又はローションの形態であることがある。
【０２５７】
本発明の経皮の送達、方法、又は製剤は、特に、一体構造の送達系、薬剤を含浸させた粘着送達系（例えば、３Ｍ由来のＬａｔｉｔｕｄｅ（商標）薬剤入り粘着システム）、能動輸送デバイス、及び膜制御系を利用することがある。本発明の経皮送達の剤形としては、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、ジクロフェナク又は他の薬学的に許容可能なその塩の代わりに置き換えたものが挙げられ、それは、例として、米国特許第６，１９３，９９６号及び第６，２６２，１２１号に開示される経皮送達系に参照される。
【０２５８】
他の剤形としては、坐剤又は他の非経口使用に適応された経口剤形のバリアントが挙げられる。坐剤の形態で経直腸で投与される際に、例えば、これらの組成物は、本発明の１つ又は複数の化合物及び製剤を、ココアバター、合成グリセリドエステルや、ポリエチレングリコールなどの刺激のない適した賦形剤と混合することによって調製されることがあり、このような賦形剤は、常温では固体であるが、直腸腔では液化及び／又は溶解して、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を放出する。坐剤は、一般的には、直腸、膣、及び時には尿道を含めた身体の開口部内へ挿入することを意図されている固体剤形であり、長時間作用するか又は徐放出とすることができる。．坐剤は、基剤を含み、そのようなものとしては、以下に限定されないが、アルギン酸などの材料を挙げることができ、そのような材料は、何時間（５〜７）にもわたって薬学的に許容可能な活性成分の放出を延長するものとなる。
【０２５９】
本発明で有用な化合物及び製剤の経粘膜投与は、任意の粘膜を利用することがあるが、通例、鼻、バッカル、膣、及び直腸の組織を利用する。本発明の化合物及び製剤の経鼻投与に適した製剤は、液体形態で、例えば、経鼻スプレー、点鼻剤、又はネブライザーによるエアロゾル投与によって投与されることがあり、そのような形態としては、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の水性又は油性の溶液が挙げられる。担体が固体である場合の経鼻投与の製剤は、例えば、約１００ミクロン未満の、好ましくはより少ない、最も好ましくは約５０ミクロンの１日に１倍又は２倍の粒子サイズを有する粗粉末を含み、この粉末は、嗅ぎ薬を摂る方式で、すなわち、鼻に至るまで密に保持されている粉末の容器から経鼻経路を通じた急速吸入によって、投与される。溶液中の組成物は、不活性ガスの使用によって噴霧されてもよく、そのような噴霧溶液は、噴霧デバイスから直接的に吸い込まれてもよいし、噴霧デバイスがフェースマスク、テントに取り付けられてもよいし、断続的なギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物が、適切な方式で製剤を送達するデバイスから、経口的に又は経鼻的に投与されてもよい。製剤は、水溶液、例えば生理食塩水溶液として、当技術分野に公知のベンジルアルコールや他の適した保存剤、生物学的利用能を増強するための吸収促進剤、フッ化炭素、及び／又は他の可溶化剤もしくは分散剤を利用している溶液として、調製されてもよい。
【０２６０】
組成物は、ある量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物（複数可）の（複数可）成分を希釈剤に溶解又は懸濁することによる、従来の方法に従って調製されてもよい。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の量は、希釈剤ｍＬ当たり０．１ｍｇから１０００ｍｇまでの間である。実施形態によっては、１００ｍｇ及び２００ｍｇのギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の剤形が提供される。ほんの一例として、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の量は、約１ｍｇから約７５０ｍｇ以上までに及ぶことがある（例えば、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７５０ｍｇ、約８００ｍｇ、約１０００ｍｇ、及び約１２００ｍｇ）。他の用量としては、少なくとも約１００ナノグラムから及ぶ用量を含み、そのようなものとしては、例えば少なくとも約２００ナノグラム、６００ナノグラム、２０００ナノグラム、６０００ナノグラム、及び少なくとも約１０，０００ナノグラム以上が挙げられる。用量の濃度としては、少なくとも１リットル当たり約０．１モルの濃度が挙げられ、そのようなものとしては、例えば、少なくとも約０．３、１．０、３．０、及び１０．０ナノモル／Ｌが挙げられる。用量の濃度としてはまた、０．１ナノモル／Ｌ、０．３ナノモル／Ｌ、１．０ナノモル／Ｌ、３．０ナノモル／Ｌ、及び１０．０ナノモル／Ｌの濃度が挙げられる。これらの用量の濃度は、０．１、０．３、１、３、及び１１μｇ／Ｌに等しく、投与可能な重量の用量で０．４、１．０、４．０、１０、及び３９マイクログラム／ｋｇ（μｇ／ｋｇ）である。また、本発明内には、０．１から５．０μｇ／ｋｇまで、及び０．１から１０．０μｇ／ｋｇまでに及ぶ他の用量もある。さらに、約０．４、１．０、４．０、１０、及び３９μｇ／ｋｇの用量は、本発明内にある。少なくとも約０．４、１．０、４．０、１０、及び３９μｇ／ｋｇの用量もまた、本発明内にある。これらの範囲内の他の量も、使用されることがあり、その間のそれぞれの数が明示的に述べられなくとも具体的に想定される。
【０２６１】
ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、１日１回用量投与に適した形態で提供及び投与することができる。酢酸、リン酸、クエン酸、又はグルタミン酸の緩衝液を添加して、最終組成物のｐＨを約５．０から約９．５とすることがある。そして、任意選択的に、炭水化物又は多価アルコールの張性剤、及びｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、メチル、エチル、プロピル、及びブチルパラベン、ならびにフェノールからなる群から選択される保存剤も添加することがある。注射用の水、塩化ナトリウムなどの張性増強剤、ならびに他の賦形剤も、所望に応じて存在することがある。非経口投与については、投与部位での刺激及び痛みを避けるために、製剤は等張であるか又は実質的に等張である。
【０２６２】
水素イオン濃度又はｐＨに関連して使用される際の用語である緩衝液、緩衝液溶液、及び緩衝溶液とは、酸又は塩基の添加時又は溶媒による希釈時に、ある系が、具体的には水溶液が、ｐＨの変化に耐える能力を指す。酸又は塩基の添加時のｐＨの小さな変化を受ける、緩衝溶液の特徴は、弱酸と弱酸の塩、又は弱塩基と弱塩基の塩のどちらかが存在することである。前者の系の一例は、酢酸及び酢酸ナトリウムである。添加されるヒドロキシルイオンの量が、それを中和する緩衝液系の能力を超えない限り、ｐＨの変化は僅かである。
【０２６３】
製剤のｐＨをおよそ５．０から約９．５の範囲に維持することによって、本願発明の非経口製剤の安定性を増強することができる。他のｐＨ範囲としては、例えば、約５．５から約９．０、もしくは約６．０から約８．５、もしくは約６．５から約８．０、又は好ましくは、約７．０から約７．５が挙げられる。
【０２６４】
使用される緩衝液は、以下の例えば、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、又はグルタミン酸緩衝液のいずれかから選択されてもよく、最も好適な緩衝液はリン酸緩衝液である。担体又は賦形剤も、本発明の組成物及び製剤の投与を容易にするために使用することができる。担体及び賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、例えばラクトース、グルコースや、スクロースなど、又はデンプンのタイプ、セルロース誘導体、ゼラチン、ポリエチレングリコール、及び生理的に適合可能な溶媒が挙げられる。安定化剤を含むことがあるが、一般的には必要とはならない。しかし、含む場合、本発明の実践に有用な安定化剤の一例は、炭水化物又は多価アルコールである。多価アルコールとしては、ソルビトール、マンニトール、グリセロール、キシリトール、及びポリプロピレン／エチレングリコールコポリマー、ならびに分子量２００、４００、１４５０、３３５０、４０００、６０００、及び８０００）の様々なポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの化合物が挙げられる。炭水化物としては、例えば、マンノース、リボース、トレハロース、マルトース、イノシトール、ラクトース、ガラクトース、アラビノース、又はラクトースが挙げられる。
【０２６５】
等張剤、又は等張性を維持するための剤もまた、使用されるか又は含まれていてもよい。
【０２６６】
米国薬局方（ＵＳＰ）は、複数用量容器に納められた調製物には静細菌濃度又は静真菌濃度の抗微生物剤を添加しなければならないことを表明している。それらは、皮下注射用の針及びシリンジを用いて、又はペン型注射器など他の送達用の侵襲的な手段を使用して、内容物の一部を引き抜く間、調製物内に不注意に持ち込まれる微生物の繁殖を防止するために、正確な濃度で使用時に存在しなければならない。抗微生物剤は、配合の他の全ての構成成分への適合性を確保するように検討されるべきであり、それらの活性は、ある製剤に有効な特定の剤が別のものには有効ではないことを確保するように、配合全体で検討されるべきである。特定の剤がある製剤には有効となるが別の製剤には有効とはならないことを、見出すのは珍しいことではない。本発明の実践に使用するための保存剤が０．００５から１．０％（ｗ／ｖ）までに及び得る一方で、各保存剤の好適な範囲は、単独で又は他のものとの組合せで、ベンジルアルコール（０．１〜１．０％）、又はｍ−クレゾール（０．１〜０．６％）、又はフェノール（０．１〜０．８％）、又はメチルパラベン（０．０５〜０．２５％）とエチルパラベンもしくはプロピルパラベンもしくはブチルパラベン（０．００５％〜０．０３％）との組合せである。パラベンは、パラ−ヒドロキシ安息香酸の低級アルキルエステルである。各保存剤の詳細な記載は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」ならびにＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌ．１，１９９２，Ａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．に明記されている。これらの目的で、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、非経口的に（皮下注射、静脈内、筋肉内、皮内注射、又は輸液手法を含めて）、又は従来の非毒性の薬学的に許容可能な担体、アジュバント、及び媒体を含有する投薬単位製剤での吸入スプレーによって、投与されることがある。
【０２６７】
所望に応じて、非経口製剤は、メチルセルロースなどの増粘剤を用いて濃厚にされることがある。この製剤は、油中水又は水中油のどちらかのエマルジョン形態で調製されることがある。任意の実に様々な薬学的に許容可能な乳化剤が利用されてもよく、そのようなものとしては、例えば、アカシア粉末、非イオン性界面活性剤、又はイオン性界面活性剤が挙げられる。また、適した分散剤又は懸濁剤を医薬製剤に添加することが望ましいこともある。これらのものとしては、例えば、合成及び天然のゴム、例えば、トラガカント、アカシア、アルギン酸塩、デキストラン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリビニル−ピロリドンや、ゼラチンなどの水性懸濁液が挙げられ得る。
【０２６８】
他の成分が、本発明で有用な非経口医薬製剤中に存在し得る可能性がある。そのような追加の成分としては、湿潤剤、油脂（例えば、ゴマ、ピーナッツや、オリーブなどの植物油）、鎮痛剤、乳化剤、抗酸化剤、増量剤、浸透圧改質剤、金属イオン、油性媒体、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン、ゼラチン、又はタンパク質）、及び双性イオン（例えば、ベタイン、タウリン、アルギニン、グリシン、リジンや、ヒスチジンなどのアミノ酸）が挙げられ得る。そのような追加の成分は勿論、本願発明の医薬製剤の全体的な安定性に不利な影響を及ぼすべきではない。医薬製剤に関しては、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌ．１，２ｎｄ  ｅｄ．，Ａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｍｅｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．１９９２も参照されたい。
【０２６９】
適した非経口投与の経路としては、筋肉内、静脈内、皮下、腹腔内、真皮下、皮内、関節内、くも膜下腔内などが挙げられる。粘膜送達も許容される。用量及び投薬レジメンは、対象の体重及び健康に依存するものとなる。
【０２７０】
薬剤作用の延長を達成する上記の手段に加えて、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の送達の速度及び持続時間は、例えば、機械で制御される薬剤輸液ポンプを使用することによって制御されることがある。
【０２７１】
ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物（複数可）は、デポー注射の形態で投与することができ、この形態は、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の持続的な放出を可能にするような方式で製剤化されることがある。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、ペレット又は小円柱に圧縮し、皮下又は筋肉内に植え込むことができる。ペレット又は円柱は、所望の放出プロファイルをもたらすように選ばれた適した生分解性のポリマーを用いて、追加的に被覆されることがある。あるいは、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物は、マイクロペレット化されることがある。生体的に許容可能なポリマーを用いたギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物のマイクロペレットは、所望の放出プロファイルをもたらすように放出速度を操作することを可能とするように、設計することができる。あるいは、注射可能なデポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中の、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物のマイクロカプセル化マトリックスを形成することによって、作製することができる。ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物とポリマーとの比、ならびに利用される特定のポリマーの性質に応じて、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の放出の速度を制御することができる。デポー注射可能な製剤はまた、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物をリポソームに封入することによって調製することができ、そのリポソームの例としては、単層小胞、大型単層小胞、及び多重層小胞が挙げられる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミンや、ホスファチジルコリンなどの種々のリン脂質から形成することができる。デポー注射可能な製剤はまた、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、体組織に適合可能なマイクロエマルジョンに封入することによって、調製することができる。例として、米国特許第６，４１０，０４１号及び第６，３６２，１９０号が参照される。
【０２７２】
植込み型の輸液デバイスは、上に一覧に挙げられた生分解性のポリマー、又は合成シリコーン、例えば、シラスティック、シリコーンゴム、もしくはＤｏｗ−Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって製造される他のポリマーなどの、不活性材を利用することがある。ポリマーは、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と任意の賦形剤とを用いて充填されることがある。植込み型の輸液デバイスはまた、医療デバイスの被覆又は一部を含むことがあり、その被覆は、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と任意の賦形剤とを充填されたポリマーを含む。そのような植込み型の輸液デバイスは、米国特許第６，３０９，３８０号に開示されるように調製されることがあり、その調製は、所望の投薬量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物と任意の賦形剤とを含む溶液を有するポリマーを含有する、ｉｎ  ｖｉｖｏの生体適合性かつ生分解性又は生体吸収性又は生体浸食性の液体又はゲル溶液を用いて、デバイスを被覆することによって行われる。上記溶液は、医療デバイスに付着しているフィルムに変換され、それによって、植込み型のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を送達することが可能な医療デバイスが形成される。植込み型の輸液デバイスはまた、米国特許第６，１２０，７８９号に開示されるように固体マトリックスを含有するギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、ｉｎ  ｓｉｔｕで形成することによって、調製されることがある。植込み型の輸液デバイスは、当技術分野に公知のように、受動的でも能動的でもよい。
【０２７３】
また、本発明の方法で有用なのは、マイクロエマルジョン、すなわち、親水相、親油相、少なくとも１種の界面活性剤（ＳＡ）及び少なくとも１種の補助界面活性剤（ＣｏＳＡ）から構成される流体や安定で均一な溶液などである。適した界面活性剤の例としては、モノグリセリド、ジグリセリド、及びトリグリセリド、ならびにポリエチレングリコール（ＰＥＧ）モノエステル及びジエステルが挙げられる。時には「補助表面活性剤ｍ」としても知られる補助界面活性剤は、マイクロエマルジョン中で水相及び油相の相互の可溶化を引き起こすことを意図される、疎水性の性質を有する化学化合物である。適した補助界面活性剤の例としては、エチルジグリコール、プロピレングリコールのラウリン酸エステル、ポリグリセロールのオレイン酸エステル、及び関連化合物が挙げられる。
【０２７４】
ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物はまた、粘膜表面への付着を増加させることによって、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の加水分解及び酵素分解による分解の速度を減少させることによって、及び粒子のサイズに対するギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の表面積を増加させることによって、生物学的利用能を増強するように、様々なポリマーを用いて送達されることがある。適したポリマーは、天然とも合成ともすることができ、生分解性とも非生分解性ともすることができる。低分子量活性剤、例えばギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物などの送達は、ポリマー系の拡散と分解のどちらによっても起こることがある。代表的な天然ポリマーとしては、ゼイン、修飾ゼイン、カゼイン、ゼラチン、グルテン、血清アルブミンや、コラーゲンなどのタンパク質；セルロース、デキストランや、ポリヒアルロン酸などの多糖が挙げられる。合成ポリマーは、より良好な分解及び放出プロファイルの特徴を持つことから、一般的に好適である。代表的な合成ポリマーとしては、ポリホスファゼン、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアクリレート、ポリアルキレン、ポリアクリルアミド、ポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド、ポリアルキレンテレフタラート、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリビニルハライド、ポリビニルピロリドン、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリウレタン、及びそれらのコポリマーが挙げられる。適したポリアクリレートの例としては、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、及びポリ（オクタデシルアクリレート）が挙げられる。合成で修飾される天然のポリマーとしては、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステルや、ニトロセルロースなどのセルロース誘導体が挙げられる。適したセルロース誘導体の例としては、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、酢酸セルロース、プロピオン酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシメチルセルロース、三酢酸セルロース、及び硫酸セルロースナトリウム塩が挙げられる。上に記載された各ポリマーは、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、セントルイス、ミズーリ州、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ、ウォレントン、ペンシルバニア州、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、ミルウォーキー、ウィスコンシン州、Ｆｌｕｋａ、ロンコンコマ、ニューヨーク州、及びＢｉｏＲａｄ、リッチモンド、カリフォルニア州などの商業的供給源から得ることができるか���又はこれらの供給業者から得られるモノマーから、標準的な手法を用いて合成することができる。
【０２７５】
上に記載されたポリマーは、生分解性、非生分解性、及び生体接着性のポリマーとして、別々に特徴付けることができる。代表的な合成の分解性ポリマーとしては、ポリヒドロキシ酸、例えばポリラクチド、ポリグリコリドや、それらのコポリマーなど、ポリ（エチレンテレフタラート）、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−コ−カプロラクトン）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ならびにそれらの混和物及びコポリマーが挙げられる。代表的な天然の生分解性ポリマーとしては、単独で又は合成ポリマーとの組合せで、多糖、例えば、アルギン酸塩、デキストラン、セルロース、コラーゲンや、それらの化学誘導体（置換、化学基、例えば、アルキル、アルキレンの付加、水酸化、酸化、及び当業者によって定型的に行われる他の改変）など：ならびにタンパク質、例えば、アルブミン、ゼイン、ならびにそれらのコポリマー及び混和物が挙げられる。非生分解性のポリマーの例としては、エチレン酢酸ビニル、ポリ（メタ）アクリル酸、ポリアミド、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリビニルフェノール、ならびにそれらのコポリマー及び混合物が挙げられる。親水性ポリマー及びハイドロゲルは、生体接着性を有する傾向がある。カルボキシル基［例えば、ポリ（アクリル酸）］を含有する親水性ポリマーは、最良の生体接着性を示す傾向がある。高濃度のカルボキシル基を有するポリマーは、柔らかい組織上の生体接着性が所望される際に好適である。．様々なセルロース誘導体、例えばアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロースや、メチルセルロースなどもまた、生体接着性を有する。これらの生体接着性材料には、水溶性のものもあれば、ハイドロゲルもある。ヒドロキシプロピルメチルセルロース酢酸エステルコハク酸エステル（ＨＰＭＣＡＳ）、酢酸トリメリト酸セルロース（ＣＡＴ）、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、ヒドロキシプロピルセルロース酢酸エステルフタル酸エステル（ＨＰＣＡＰ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース酢酸エステルフタル酸エステル（ＨＰＭＣＡＰ）、及びメチルセルロース酢酸エステルフタル酸エステル（ＭＣＡＰ）などのポリマーは、併せて複合体化されるギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の生物学的利用能を増強するために利用されることがある。急速な生体浸食性のポリマー、例えば、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ無水物や、ポリオルトエステルなどは、その滑らかな表面が浸食されるにつれてそのカルボキシル基が外部表面に露出されるが、また、生体接着性のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の送達系に使用することができる。さらに、易変性の結合を含有するポリマー、例えば、ポリ無水物やポリエステルなどは、その加水分解反応性が周知である。それらの加水分解の分解速度は、一般に、ポリマー骨格の単純な変化によって変えることができる。分解すると、これらの材料はまた、その外部表面にカルボキシル基を露出することから、Ｂナトリウム排泄増加性シグナルペプチド断片剤の送達系として使用することができる。
【０２７６】
１つ又は複数のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の生物学的利用能又は吸収を増強する他の剤は、腸管粘膜を横切る輸送を促進又は阻害することによって作用することができる。例えば、血管拡張剤などの血流を増加させる剤は、胃腸管への血流を増加させることによって、経口的に投与されたギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の吸収の速度を増加させることがある。血管拡張剤は、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物の生物学的利用能を増強し得る別の剤のクラスを構成する。
【０２７７】
本発明で有用な組成物及び製剤の生物学的利用能を増強する他の機構としては、逆能動輸送機構の阻害が挙げられる。例えば、現在では、腸管上皮細胞に存在する能動輸送機構の１つは、ｐ−糖タンパク質輸送機構であるものと考えられており、この機構は、上皮細胞の内部に分散しているか又は輸送されて腸の内腔内に戻る、物質の逆輸送を促進する。このｐ−糖タンパク質媒介性の能動輸送系を阻害することによって、内腔内に戻して輸送される薬剤が少ないものとなり、それゆえに、腸上皮を横切る総薬剤輸送量が増加し、血中で最終的に利用可能な薬剤の量が増加することになる。様々なｐ−糖タンパク質阻害剤が、当技術分野に周知であり、認識されている。これらのものとしては、水溶性のビタミンＥ；ポリエチレングリコール；Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８を含めたポロキサマー；ポリエチレンオキシド；Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ及びＣｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＲＨ  ４０を含めたポリオキシエチレンヒマシ油誘導体；クリシン、（＋）−タキシフォリン；ナリンゲリン；ジオスミン；ケルセチン；などが挙げられる。
【０２７８】
そのため、送達の期間が、状態と剤との両方及び所望の治療効果に依存するものとなる一方で、約０．５〜１時間、約１〜２時間、約２〜４時間、約４〜６時間、約６〜８、又は約２４時間以上の継続的な又は徐放出の送達がもたらされる。本願発明に従えば、これは、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、単独で又は別の心血管治療剤と共に、薬学的に許容可能な担体又は媒体を併せて含む製剤で、具体的には継続的な又は徐放出の製剤の形態で、含むことによって達成される。
【０２７９】
言及されるように、本発明の１つ又は複数の剤は、対象の中又は上での処置、例えば、血管形成の処置、又はステント留置などの他の物理的な介入の後に、間に、直後に、投与されることがある。それらは、好ましくは、例えば、処置の約２４、約１２、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、約２時間前及び／もしくはその間もしくはそれ以内、又は例えば、処置後の約６０、約４５、約３０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、約１分以内に、投与される。
【０２８０】
熟練した医師は、いかなる特定の患者又は状態についても、最適な投与経路及び投薬量を考慮するものとなることから、本明細書に記載される投与及び投薬の経路は、ガイドとすることを意図されているに過ぎない。
【０２８１】
心血管障害を持つか又はそのリスクがある対象を治療する方法のいずれも、本明細書に記載される用量、剤形、製剤、及び／又は組成物のうちいずれの投与を利用してもよい。
医薬組成物
【０２８２】
本願発明は、心血管障害を予防及び／又は治療するための医薬組成物及びそれらの使用方法に向けられており、その組成物は、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、単独で又は別の心血管治療剤と併せて含む。
【０２８３】
したがって、一態様では、本発明は、心血管障害を予防及び／又は治療する際の使用のための組成物を提供し、この組成物は、少なくとも１種のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、単独で又は別の心血管治療剤と併せて含むか、又はそれらから本質的になる。好適な一実施形態では、組成物は、薬学的に許容可能な担体又は媒体をさらに含む。
キット、医薬、及び製造品
【０２８４】
ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物はまた、心血管障害ならびに関連の障害及び状態を予防及び／又は治療するための医薬の製造に使用されることがある。
【０２８５】
一態様では、本発明は、記載される１つ又は複数の組成物又は製剤を含む、心血管障害を予防及び／又は治療するためのキットを提供する。例えば、本発明は、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、単独で又は１つもしくは複数の心血管治療剤との組合せで含む、組成物を含むキットを含む。例えば、このキットは、有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物、ならびに又は、以下：硝酸塩、β遮断剤、カルシウムチャネル遮断剤（具体的には安定狭心症又は不安定狭心症に用いられるものであるが、β遮断剤の場合では心不全にも用いられる）；利尿剤、血管拡張剤、陽性変力剤、ＡＣＥ阻害剤、及びアルドステロンアンタゴニスト、例えば．スピロノラクトン（具体的には心不全に用いる）、血液希釈治療薬（例えば、アスピリン、ヘパリン、ワルファリン）、及びニトログリセリン（具体的にはＭＩに用いる）のうち多くを含む、組成物を含むことがある。キットはまた、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、単独で又は（例えば、組合せ調製物として提供される物理的な組合せで）１つ又は複数の抗血栓溶解療法（例えば、ストレプトキナーゼ阻害剤、抗血小板療法剤、例えばクロピドグレルなど）との組合せで、含むか又はそれから本質的になる組成物を含む。キットはまた、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、単独で又はとの組合せで、（例えば、組合せ調製物として提供される物理的な組合せで）含むことがある。
【０２８６】
製造品はまた、本明細書に記載されるような本発明の組成物又は製剤（任意の用量又は用量形又はデバイスの）を含有する容器、ならびに対象の治療に使用するための指示書を含んで、提供される。例えば、別の態様では、本発明は、治療有効量のギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物を、単独で又は１つもしくは複数の他の心血管治療剤との組合せで含有する容器を含む、製造品を含む。
製造及び安定性
【０２８７】
この発明のポリペプチドは、当技術分野に公知の化学を用いて製造することができる。一態様では、この発明の製剤は、この発明のポリペプチドのナトリウム塩など、この発明のポリペプチドの塩を含むものとなる。一実施形態では、製剤は、例えば、配列番号１〜５２のうちいずれか１つを有するポリペプチドのナトリウム塩を含むことがある。
【０２８８】
実施形態によっては、この発明の製剤は、実質的に純粋である。実質的に純粋なとは、製剤が約１０％未満、５％未満、又は１％未満、及び好ましくは約０．１％未満の、任意のアミノ酸又は非アミノ酸の不純度を含むことを意味する。実施形態によっては、コネキシン４３調節ポリペプチドの代謝物を含む総不純物は、１５％以下となる。実施形態によっては、コネキシン４３調節調節ポリペプチドの代謝物を含む総不純物は、１２％以下となる。実施形態によっては、コネキシン４３調節調節ポリペプチドの代謝物を含む総不純物は、１１％以下となる。他の実施形態では、コネキシン４３調節ポリペプチドの代謝物を含む総不純物は、１０％以下となる。
【０２８９】
実施形態によっては、この発明の製剤の純度は、陰イオン交換ＨＰＬＣ（ＡＥＸ−ＨＰＬＣ）又は質量分析から選択される方法を用いて測定されることがある。質量分析としては、ＬＣ／ＭＳ又はＬＣ／ＭＳ／ＭＳが挙げられ得る。アッセイは、実施形態によっては、ＡＥＸ−ＨＰＬＣとＬＣ／ＭＳとの両方を含むことがある。
【０２９０】
抗コネキシン調節ポリペプチドを製剤媒体に溶解することによる無菌の手順を用いて調製される、この発明のコネキシン調節ポリペプチドを含む、滅菌済みの組成物。一実施形態では、製剤はまた、濾過によって滅菌されることがある。この発明の製剤のの製造で使用される賦形剤は、医薬製品に広く使用され、薬局方収載の基準として公表されている。一実施形態では、この開示の医薬組成物は、本明細書に記載される化合物と、滅菌済みの賦形剤を含む薬学的に許容可能な担体とを含む。一実施形態では、本医薬組成物は、配列番号１〜１０、２１、２５、２７〜３０、４６、４９、５０、及び５１から選択される化合物を含み；そして、薬学的に許容可能な担体は、滅菌済みの賦形剤を含む。一実施形態では、滅菌済みの賦形剤は、本明細書に記載される賦形剤の滅菌形態である。
【０２９１】
一態様では、本発明は、ギャップ結合チャネル及び／又はヘミチャネルの遮断剤化合物又は阻害剤化合物、ならびに任意選択的に別の心血管治療剤の、持続的な投与に向けられる。一実施形態では、剤（複数可）は、少なくとも約０．５時間、約１〜２４時間、少なくとも約２時間、少なくとも約３時間、少なくとも約４時間、少なくとも約５時間、少なくとも約６時間、少なくとも約７時間、少なくとも約８時間、少なくとも約９時間、少なくとも約１０時間、少なくとも約１１時間、少なくとも約１２時間、又は少なくとも約２４時間、投与される。
【０２９２】
本明細書に参照又は記載される疾患、障害、及び／又は状態にあるか又はそうある疑いがあるか又はそうある傾向がある対象を治療する方法のいずれも、本明細書に記載される用量、剤形、製剤、組成物、及び／又はデバイスのうちいずれかの投与を利用することがある。
【０２９３】
本発明のより良い理解は、以下の非限定的な実験項への参照により高められるものとなり、この実験項は、形はどうあれ説明的なものであり、本発明又は特許請求の範囲を限定することを意図するものではない。データは、記載されるような心血管の疾患、障害、及び状態の治療のための本明細書に記載される化合物及び組成物の使用を、支援するものである。
【実施例】
【０２９４】
方法
細胞培養
【０２９５】
ヒト大脳微小血管内皮（ｈＣＭＶＥＣ）細胞［ＡＢＭＧｏｏｄ、（Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  １２：１３１］を、１０％ＦＣＳ、１μｇ／ｍＬ  ヒドロコルチゾン（Ｓｉｇｍａ）、３μｇ／ｍＬ  ヒトＦＧＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）、１０μｇ／ｍＬ  ヒトＥＧＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）、１０μｇ／ｍＬ  ヘパリン（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）及び８０μＭ  ブチリルｃＡＭＰ（Ｓｉｇｍａ）を補ったＭ１９９培地（Ｇｉｂｃｏ）中で成長させ、１μｇ／ｃｍ２コラーゲンＩ（Ｇｉｂｃｏ）で被覆されたＴ２５フラスコ又はＴ７５フラスコ中で培養した。ＡＲＰＥ−１９  細胞を、ＤＭＥＭ／Ｆ：１２、１０％ＦＣＳ及び１％  抗生物質−抗真菌剤（Ｔｈｅｒｍｏ  ｆｉｓｈｅｒ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で培養した。全ての細胞を、特段に明示しない限り、８０〜９０％の集密度に成長させ、ＴｒｙｐＬＥ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてトリプシン処理し、１：３〜１：５の比で分けて、３７°Ｃ、９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２で培養した。
ペプチド及び化学試薬
【０２９６】
ギャップ結合に関する細胞のスクレープロードダイ対合アッセイ、ヘミチャネルの遮断に関する誘導されたタンパク質の分布の変化及びＡＴＰ放出の試験に用いるために、コネキシン４３模倣ペプチド（ペプチド５、配列ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号４５））（Ａｕｓｐｅｐ、オーストラリア）を純度＞９５％で合成し、ストック濃度１０ｍＭでミリＱ  Ｈ２Ｏに溶解した。競合アッセイに用いるため、細胞外ループに適合するペプチドをカスタム合成し、製造業者（Ａｕｓｐｅｐ、オーストラリア）により供給された純度に従ってミリＱ  Ｈ２Ｏにストック濃度１ｍＭで溶解した。ペプチド５配列置換試験に用いるために、ペプチドをオークランド大学化学科で作製した。Ｆｍｏｃ固相合成を用いてペプチドを調製した。Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ又はＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨをＨＭＰＰリンカーに予めロードし、自前で調製したアミノメチルＰＳ樹脂２．１（ＤＭＦ中でＤＩＣを使用）に付加した。これに続いて、自動化Ｔｒｉｂｕｔｅ  Ｆｍｏｃ−ＳＰＰＳを介して、０．１  Ｍの６−Ｃｌ−ＨＯＢｔ及びＨＢＴＵ及びＮＭＭをそれぞれ含有する５％ピペラジンを用いて、脱保護とカップリングとの交互の反応に供した。ＴＦＡを用いて樹脂を切断して粗生成物を得、それを分取用ＲＰ−ＨＰＬＣを介する精製に供した。ペプチドを高純度（＞９５％）かつ好収率（１７％〜４６％）で取得した。全アラニンを置換された類似体は、ミリＱ  Ｈ２Ｏに可溶性であった（表５）。
表５  ペプチド５配列の特異性を検討するためのコネキシン４３の単アラニン置換ペプチド。アラニン置換を下線部で標示する。
【表３】
2019522041.tif 000016
実施例１：切頭型ペプチド５モチーフの合成
【０２９７】
機能に必須のペプチド５のモチーフを決定するために、さらに６種の切頭型ペプチド（表２）を純度９５％で合成し、ミリＱ  Ｈ２Ｏにストック濃度１０ｍＭで溶解した（ＣｈｉｎａＰｅｐｔｉｄｅ  Ｃｏ  Ｌｔｄ、上海、中国；ｗｗｗ．ｃｈｉｎａｐｅｐｔｉｄｅ．ｏｒｇ）。
表２  コネキシン４３ペプチドの切頭型ペプチド
【表４】
2019522041.tif 000017
【０２９８】
ペプチド５（ＲＦＫＰＳＬＣＴＴＤＥＶ（配列番号９０））のスクランブル配列をペプチド対照（Ａｕｓｐｅｐ、オーストラリア）として使用した（尤もこの配列は、細胞骨格タンパク質に相同性があり、非特異的作用を有する可能性があった）。非特異的なヘミチャネル阻害剤である塩化ランタン（ＬａＣｌ３、Ｓｉｇｍａ）（Ｍｙｌｖａｇａｎａｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ５：１７２）をミリＱ  Ｈ２Ｏにストック濃度１ｍＭで溶解した。カルバノクソロン（ＣＢＸ、Ｓｉｇｍａ）、コネキシンチャネルの非特異的な阻害剤、及びさらにギャップ結合チャネルの広範囲阻害剤（Ｓａｌａｍｅｈ  ａｎｄ  Ｄｈｅｉｎ，２００５，Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １７１９：３６−５８）をミリＱ  Ｈ２Ｏにストック濃度１０ｍＭで溶解した。
実施例２：機能のためのペプチド５のモチーフの決定
【０２９９】
機能に必須のペプチド５のモチーフを決定するために、６種の切頭型ペプチド（表２）を純度９５％で合成し、ミリＱ  Ｈ２Ｏにストック濃度１０ｍＭで溶解した（ＣｈｉｎａＰｅｏｔｉｄｅ  Ｃｏ  Ｌｔｄ、上海、中国；ｗｗｗ．ｃｈｉｎａｐｅｐｔｉｄｅ．ｏｒｇ）。
【０３００】
ペプチド５（ＲＦＫＰＳＬＣＴＴＤＥＶ（配列番号９０））のスクランブル配列をペプチド対照（Ａｕｓｐｅｐ、オーストラリア）として使用した（尤もこの配列は、細胞骨格タンパク質に相同性があり、非特異的作用を有する可能性があった）。非特異的なヘミチャネル阻害剤である塩化ランタン（ＬａＣｌ３、Ｓｉｇｍａ）（Ｍｙｌｖａｇａｎａｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）を、ミリＱ  Ｈ２Ｏにストック濃度１ｍＭで溶解した。コネキシンチャネルの非特異的な阻害剤であり、広範囲のギャップ結合チャネルの阻害剤でもある（Ｓａｌａｍｅｈ  ａｎｄ  Ｄｈｅｉｎ，２００５）カルバノクソロン（ＣＢＸ、Ｓｉｇｍａ）を、ミリＱ  Ｈ２Ｏにストック濃度１０ｍＭで溶解した。
スクレープローディングアッセイ  
【０３０１】
ｈＣＭＶＥＣ細胞を、１μｇ／ｃｍ２コラーゲンＩ（Ｇｉｂｃｏ）１２ウェルプレートにウェル当たり０．４×１０６個の細胞の密度で広げて、一晩培養した。培養培地中に溶解したペプチド５（５〜１００μＭ）中で、集密な単層のｈＣＭＶＥＣを、２時間又は２４時間プレインキュベーションした。濃度１００μＭのＣＢＸを陽性対照として使用した。Ｃａ２＋又はＭｇ２＋不含のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いて、細胞を３回洗浄した。次いで、対合しているギャップ結合チャネルを通じて移送される蛍光色素（ｅｌ−Ｆｏｕｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  １６８：４２２−４３０）である０．０５％ルシファーイエロー（ＬＹ）（Ｓｉｇｍａ）、ＰＢＳに溶解された＋／−ペプチド５中で、細胞をインキュベーションし、サイズ１０の炭素鋼の手術用刃（ＳｗａｎＮ−Ｍｏｒｔｏｎ、イギリス）を用いて掻創を付けた。光のない、３７°Ｃ、９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２での５分間のインキュベーションに続いて、０．０５％ＬＹ溶液を除去した。Ｃａ２＋又はＭｇ２＋を含むＰＢＳで細胞を４回リンスし、次いで、ｐＨ７．４のＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）の中で、室温で１０分間固定した。次いで、蛍光イメージングの前に、細胞をＰＢＳで３回洗浄して、ＰＦＡを除去した。蛍光イメージを、Ｎｉｋｏｎ  ＴＥ２０００Ｅ倒立蛍光顕微鏡（１０×倍率、０．３開口数）を用いて可視化し、Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｓｉｇｈｔ  ＣＣＤカメラ及びＥｃｌｉｐｓｅ  Ｎｅｔソフトウェア（Ｎｉｋｏｎ）を用いて取り込んだ。独立した３つの実験から各ウェル内で３つのイメージを解析用に撮影し、ローディングされたものから染料の取り込みを示す細胞の総数を、マスキングされた観察者が手作業でカウントした。
Ｃｘ４３プラークの免疫細胞化学及び定量
【０３０２】
ＡＲＰＥ−１９細胞を、８ウェルのガラスチャンバースライド（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ）で集密になるまで成長させた。集密な単層のＡＲＰＥ−１９細胞を、培養培地中、終濃度５０から５００μＭのペプチド５、５００μＭ  ＬａＣｌ３、及び５００μＭ  ＣＢＸで、２時間又は６時間インキュベーションした。細胞を、ｐＨ７．４で４％  ＰＦＡ（ＰｒｏＳｃｉＴｅｃｈ）中、室温で１０分間固定し、ＰＢＳ中０．０５％  Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００を用いて透過処理し、非特異的な標識化をブロッキングするために、１０％正常ヤギ血清中でインキュベーションした。固定、透過処理、及びブロッキングの各ステップの間に、細胞を、０．１ｍＭ  ＣａＣｌ２を含有するＰＢＳで３回リンスした。コネキシン４３ポリクローナルウサギ抗体（Ｃ６２１９、Ｓｉｇｍａ、１：２０００）を一晩適用した後、ヤギ抗ウサギＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５６８二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１：２００）を４５分間適用した。核を、１０，０００倍希釈のＤＡＰＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて５分間、対比染色し、Ｃｉｔｉｆｌｕｏｒ（商標）マウント培地を用いてマウントした。油浸レンズ（６０×倍率、１．３５開口数）を取り付けたＯｌｙｍｐｕｓ  ＦＶ１０００正立共焦点レーザー走査顕微鏡及びＯｌｙｍｐｕｓ  ＦＶ１０−ＡＳＷ  ４．０ソフトウェアを用いて、イメージを可視化して取り込んだ。ＭｅｔａＸｐｒｅｓｓ（登録商標）イメージ取得及び解析ソフトウェア（バージョン５．３．０．１、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）のＴｒａｎｓｆｌｕｏｒ機能を使用して、イメージ当たりのコネキシン４３のプラークの総面積を定量した。結果は、平均値±標準誤差を表し、統計検定を、一元ＡＮＯＶＡ及びテューキーの多重比較検定を用いて実施した。
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏの虚血再灌流でのＡＴＰアッセイ
【０３０３】
実験の前日に、ヒト大脳内皮細胞（ｈＣＭＶＥＣ）を、コラーゲン被覆１２ウェルプレート（１μｇ／ｃｍ２）中、ウェル当たり０．０２５×１０６個の細胞の密度で広げた。細胞を培養培地中で一晩インキュベーションした。低酸素虚血脳の間質腔のイオン濃度及び酸−塩基のシフトを模した低酸素、酸性、イオンシフト型リンゲル傷害溶液（Ｂｏｎｄａｒｅｎｋｏ  ａｎｄ  Ｃｈｅｓｌｅｒ，２００１，Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １７：４１９１−４２３０）を使用して、ヘミチャネルの開口を誘発した。この傷害溶液は、（ｍＭで）以下：３８  ＮａＣｌ、１３  ＮａＨＣＯ３、３  Ｎａ−グルコン酸塩、６５  Ｋ−グルコン酸塩、３８  ＮＭＤＧ−Ｃｌ、１  ＮａＨ２ＰＯ４、及び１．５  ＭｇＣｌ２を含有していた。傷害溶液を、９５％Ｎ２、５％ＣＯ２ガス（２０Ｌ／分）で５分間発泡させ、使用前にｐＨを６．６に調整した。標準リンゲル溶液は、（ｍＭで）以下：１２４  ＮａＣｌ、３  ＫＣｌ、２６  ＮａＨＣＯ３、２６  ＮａＨＣＯ３、１  ＮａＨ２ＰＯ４、１．３  ＣａＣｌ２、１．５  ＭｇＣｌ２、及び１０  グルコースを含有し、使用前にｐＨを７．４に調整された（Ｂｏｎｄａｒｅｎｋｏ  ａｎｄ  Ｃｈｅｓｌｅｒ，２００１）。虚血傷害モデルでは、ｈＣＭＶＥＣ  細胞を、５００μＬの傷害溶液＋／−ペプチド５（１００μＭ）（Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｃｅｌｌ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  ＆  ａｄｈｅｓｉｏｎ  １５：２７−４２；Ｄａｎｅｓｈ−Ｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｂｒａｉｎ  ：ａ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  １３５：５０６−５２０；Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ７１：１２１−１３２；Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｅｘｐｅｒｉｍｒｎｔａｌ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ２４８：３０１−３０８；Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，ＰｌｏＳ  ｏｎｅ  ９：ｅ９６５５８；Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｊ  Ｃｅｒｅｂ  Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ）もしくは＋／−細胞外ループ配列（表５）、又は傷害溶液（５００μＬ）中に終濃度１００μＭで溶解された修飾ペプチド（表２、３）の中で、２時間インキュベーションした。陰性対照では、ｈＣＭＶＥＣ細胞を、５００μＬの標準リンゲル溶液のみの中で２時間インキュベーションした。陽性対照では、ｈＣＭＶＥＣ細胞を、５００μＬの標準リンゲル溶液のみの中で２時間インキュベーションした。全てのインキュベーションを、３７°Ｃ、９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２で実施した。各実験の終了時に、試料を取り出して直ちに氷上に置いた。試料中のＡＴＰの濃度を、ルシフェリン／ルシフェラーゼ生物発光反応（ＡＴＰ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を使用して決定し、蛍光プレートリーダー（ＶＩＣＴＯＲ  Ｘ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＃２０３０−００１０）を使用して検出した。各実験で、ＡＴＰ標品（０から５００ｎＭ）から標準曲線を作製して、生物発光単位をＡＴＰ濃度に変換した。治療群は、実験当たり２ウェルの試料サイズを有し、各試料のＡＴＰの濃度は、３連にて１０回の読取りの繰り返���にわたって測定された。データを、傷害又は傷害−再灌流の陽性対照に対する平均値±標準誤差として提示する。分散の一元分析及びテューキーの多重比較検定を用いて、試料間の統計的有意差を試験した。
単アラニン置換ペプチド及び切頭型ペプチドのアッセイ
【０３０４】
上に記載されたようにｈＣＭＶＥＣ細胞で虚血傷害モデルを用いて、表５及び表２に一覧に挙げられたペプチドを評価し、ＡＴＰ放出の測定のために培地を採集した。これらの実験に用いるために、ヘミチャネルの遮断を誘導することが知られている５〜５０μＭ（Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌｅｔａｌ．，２００８）よりも僅かに高い、標準的な１００μＭ濃度を使用した。これは、機能的有効性が低下する可能性があるペプチドを用いたいかなる結果も、確実にやはり測定可能な範囲内にあるものとするためである。
競合的ペプチド結合アッセイ
【０３０５】
コネキシン４３タンパク質上のペプチド５相互作用部位を、競合アッセイを用いて決定した。細胞外ループ配列（Ａｕｓｐｅｐ、オーストラリア）をミリＱ  Ｈ２Ｏにストック濃度１ｍＭで溶解した（表３）。細胞外ループ配列を、天然のペプチド５と１：１の比（１００μＭ）で混合し、それを、実験前に室温で１時間放置して、競合的な結合が起こるようにした。１時間のインキュベーション後、細胞外ループ配列とペプチド５との混合物を、傷害溶液に溶解し、上に記載された虚血再灌流モデルを用いて、ｈＣＭＶＥＣ細胞に２時間曝露した。次いで、細胞外の培地をＡＴＰの測定用に採集した。全ての細胞外ループペプチドは、ＥＬ２ａ配列を除いてミリＱ  Ｈ２Ｏに可溶性であり、このＥＬ２ａ配列は、以降の試験には使用しなかった。
表３  競合アッセイで使用されたコネキシン４３の細胞外ループ配列
【表５】
2019522041.tif 000018
＊ＥＬ２ａ配列をこの試験に使用しなかった。
スクレープローディングアッセイ
【０３０６】
ｈＣＭＶＥＣ細胞を、１μｇ／ｃｍ２コラーゲンＩ（Ｇｉｂｃｏ）１２ウェルプレートにウェル当たり０．４×１０６個の細胞の密度で広げて、一晩培養した。培養培地中に溶解したペプチド５（５〜１００μＭ）中で、集密な単層のｈＣＭＶＥＣを、２時間又は２４時間プレインキュベーションした。濃度１００μＭのＣＢＸを陽性対照として使用した。Ｃａ２＋又はＭｇ２＋不含のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いて、細胞を３回洗浄した。次いで、対合しているギャップ結合チャネルを通じて移送される蛍光色素（ｅｌ−Ｆｏｕｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７）である０．０５％  ルシファーイエロー（ＬＹ）（Ｓｉｇｍａ）、ＰＢＳに溶解された＋／−ペプチド５中で細胞をインキュベーションし、サイズ１０の炭素鋼の手術用刃（ＳｗａｎＮ−Ｍｏｒｔｏｎ、イギリス）を用いて掻創を付けた。光のない、３７°Ｃ、９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２での５分間のインキュベーションに続いて、０．０５％ＬＹ溶液を除去した。Ｃａ２＋又はＭｇ２＋を含むＰＢＳで細胞を４回リンスし、次いで、ｐＨ７．４のＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）の中で、室温で１０分間固定した。次いで、蛍光イメージングの前に、細胞をＰＢＳで３回洗浄して、ＰＦＡを除去した。蛍光イメージを、Ｎｉｋｏｎ  ＴＥ２０００Ｅ倒立蛍光顕微鏡（１０×倍率、０．３開口数）を用いて可視化し、Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｓｉｇｈｔ  ＣＣＤカメラ及びＥｃｌｉｐｓｅ  Ｎｅｔソフトウェア（Ｎｉｋｏｎ）を用いて取り込んだ。独立した３つの実験から各ウェル内で３つのイメージを解析用に撮影し、ローディングされたものから染料の取り込みを示す細胞の総数を、マスキングされた観察者が手作業でカウントした。
Ｃｘ４３プラークの免疫細胞化学及び定量
【０３０７】
ＡＲＰＥ−１９細胞を、８ウェルのガラスチャンバースライド（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ）で集密になるまで成長させた。集密な単層のＡＲＰＥ−１９細胞を、培養培地中、終濃度５０から５００μＭのペプチド５、５００μＭ  ＬａＣｌ３、及び５００μＭ  ＣＢＸで、２時間又は６時間インキュベーションした。細胞を、ｐＨ７．４で４％  ＰＦＡ（ＰｒｏＳｃｉＴｅｃｈ）中、室温で１０分間固定し、ＰＢＳ中０．０５％  Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００を用いて透過処理し、非特異的な標識化をブロッキングするために、１０％正常ヤギ血清中でインキュベーションした。固定、透過処理、及びブロッキングの各ステップの間に、細胞を、０．１ｍＭ  ＣａＣｌ２を含有するＰＢＳで３回リンスした。コネキシン４３ポリクローナルウサギ抗体（Ｃ６２１９、Ｓｉｇｍａ、１：２０００）を一晩適用した後、ヤギ抗ウサギＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５６８二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１：２００）を４５分間適用した。核を、１０，０００倍希釈のＤＡＰＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて５分間、対比染色し、Ｃｉｔｉｆｌｕｏｒ（商標）マウント培地を用いてマウントした。油浸レンズ（６０×倍率、１．３５開口数）を取り付けたＯｌｙｍｐｕｓ  ＦＶ１０００正立共焦点レーザー走査顕微鏡及びＯｌｙｍｐｕｓ  ＦＶ１０−ＡＳＷ  ４．０ソフトウェアを用いて、イメージを可視化して取り込んだ。ＭｅｔａＸｐｒｅｓｓ（登録商標）イメージ取得及び解析ソフトウェア（バージョン５．３．０．１、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）のＴｒａｎｓｆｌｕｏｒ機能を使用して、イメージ当たりのコネキシン４３のプラークの総面積を定量した。結果は、平均値±標準誤差を表し、統計検定を、一元ＡＮＯＶＡ及びテューキーの多重比較検定を用いて実施した。
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏの虚血再灌流でのＡＴＰアッセイ
【０３０８】
実験の前日に、ヒト大脳内皮細胞（ｈＣＭＶＥＣ）を、コラーゲン被覆１２ウェルプレート（１μｇ／ｃｍ２）中、ウェル当たり０．０２５×１０６個の細胞の密度で広げた。細胞を培養培地中で一晩インキュベーションした。低酸素虚血脳の間質腔のイオン濃度及び酸−塩基のシフトを模した低酸素、酸性、イオンシフト型リンゲル傷害溶液（Ｂｏｎｄａｒｅｎｋｏ  ａｎｄ  Ｃｈｅｓｌｅｒ，２００１，Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １７：４１９１−４２３０）を使用して、ヘミチャネルの開口を誘発した。この傷害溶液は、（ｍＭで）以下：３８  ＮａＣｌ、１３  ＮａＨＣＯ３、３  Ｎａ−グルコン酸塩、６５  Ｋ−グルコン酸塩、３８  ＮＭＤＧ−Ｃｌ、１  ＮａＨ２ＰＯ４、及び１．５  ＭｇＣｌ２を含有していた。傷害溶液を、９５％Ｎ２、５％ＣＯ２ガス（２０Ｌ／分）で５分間発泡させ、使用前にｐＨを６．６に調整した。標準リンゲル溶液は、（ｍＭで）以下：１２４  ＮａＣｌ、３  ＫＣｌ、２６  ＮａＨＣＯ３、２６  ＮａＨＣＯ３、１  ＮａＨ２ＰＯ４、１．３  ＣａＣｌ２、１．５  ＭｇＣｌ２、及び１０  グルコースを含有し、使用前にｐＨを７．４に調整された（Ｂｏｎｄａｒｅｎｋｏ  ａｎｄ  Ｃｈｅｓｌｅｒ，２００１）。虚血傷害モデルでは、ｈＣＭＶＥＣ  細胞を、５００μＬの傷害溶液＋／−ペプチド５（１００μＭ）（Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００８、Ｄａｎｅｓｈ−Ｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２、Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２、Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３ｂ、Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４、Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）もしくは＋／−細胞外ループ配列（表５）、又は傷害溶液（５００μＬ）中に終濃度１００μＭで溶解された修飾ペプチド（表２、３）の中で、２時間インキュベーションした。陰性対照では、ｈＣＭＶＥＣ細胞を、５００μＬの標準リンゲル溶液のみの中で２時間インキュベーションした。陽性対照では、ｈＣＭＶＥＣ細胞を、５００μＬの標準リンゲル溶液のみの中で２時間インキュベーションした。全てのインキュベーションを、３７°Ｃ、９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２で実施した。各実験の終了時に、試料を取り出して直ちに氷上に置いた  試料中のＡＴＰの濃度を、ルシフェリン／ルシフェラーゼ生物発光反応（ＡＴＰ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を使用して決定し、蛍光プレートリーダー（ＶＩＣＴＯＲ  Ｘ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＃２０３０−００１０）を使用して検出した。各実験で、ＡＴＰ標品（０から５００ｎＭ）から標準曲線を作製して、生物発光単位をＡＴＰ濃度に変換した。治療群は、実験当たり２ウェルの試料サイズを有し、各試料のＡＴＰの濃度は、３連にて１０回の読取りの繰り返しにわたって測定された。データを、傷害又は傷害−再灌流の陽性対照に対する平均値±標準誤差として提示する。分散の一元分析及びテューキーの多重比較検定を用いて、試料間の統計的有意差を試験した。
単アラニン置換ペプチド及び切頭型ペプチドのアッセイ
【０３０９】
上に記載されたようにｈＣＭＶＥＣ細胞で虚血傷害モデルを用いて、表５及び表２に一覧に挙げられたペプチドを評価し、ＡＴＰ放出の測定のために培地を採集した。これらの実験に用いるために、ヘミチャネルの遮断を誘導することが知られている５〜５０μＭ（Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌｅｔａｌ．，２００８）よりも僅かに高い、標準的な１００μＭ濃度を使用した。これは、機能的有効性が低下する可能性があるペプチドを用いたいかなる結果も、確実にやはり測定可能な範囲内にあるものとするためである。
競合的ペプチド結合アッセイ
【０３１０】
コネキシン４３タンパク質上のペプチド５相互作用部位を、競合アッセイを用いて決定した。細胞外ループ配列（Ａｕｓｐｅｐ、オーストラリア）をミリＱ  Ｈ２Ｏにストック濃度１ｍＭで溶解した（表３）。細胞外ループ配列を、天然のペプチド５と１：１の比（１００μＭ）で混合し、それを、実験前に室温で１時間放置して、競合的な結合が起こるようにした。１時間のインキュベーション後、細胞外ループ配列とペプチド５との混合物を、傷害溶液に溶解し、上に記載された虚血再灌流モデルを用いて、ｈＣＭＶＥＣ細胞に２時間曝露した。次いで、細胞外の培地をＡＴＰの測定用に採集した。全ての細胞外ループペプチドは、ＥＬ２ａ配列を除いてミリＱ  Ｈ２Ｏに可溶性であった。
結果
高濃度のペプチド５は、コネキシン４３のプラークのＡＲＰＥ−１９膜からの内在化を引き起こす
【０３１１】
ペプチド５は、低濃度（５〜５０μＭ）では特異的にヘミチャネルを阻害するが、高濃度（５００μＭ）ではヘミチャネルとギャップ結合チャネルの機能の両方を阻害する（Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。発明者らは、細胞間の境界でコネキシン４３の内在性発現の高い細胞株であるＡＲＰＥ−１９細胞（Ｈｕｔｎｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ＆  ｖｉｓｕａｌ  ｓｃｉｅｎｃｅ  ４９：８００−８０６）を、ペプチド５（５００μＭ）に曝露し、それがコネキシン４３ギャップ結合のプラークの分布及び数に及ぼす効果を決定した（図１）。図１は、免疫蛍光性のコネキシン４３のプラークが、基本条件下で、細胞間の接触の間に、通常のタイル様のパターンで標識されていることを示す（図１Ａ）。さらに、コネキシン４３の標識は、核周囲の領域にも可視化され、その領域は、ゴルジ装置のコネキシン４３の細胞内プールを表す可能性が最も高い（Ｄａｓ  Ｓａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  ｓｃｉｅｎｃｅ  １１４：４０１３−４０２４）。ペプチド５（５００μＭ）への２時間の曝露後、コネキシン４３のプラークが細胞間の接触に沿って可視化されたが、膜から細胞の中心へ延びる細胞質の流れのパターンを示した（図１Ａ）。また、点状のコネキシン４３の標識が、形質膜直下の細胞内領域に可視化された（図１Ａ）。細胞間の境界面に沿ったコネキシン４３のプラークは、ペプチド５（５００μＭ）への６時間の曝露後に断片化されていた（図１Ａ）。
【０３１２】
発明者らはまた、驚くべきことに、細胞当たりのコネキシン４３の総標識量がペプチド５への曝露後に低減することを確定した。ペプチド５（５０〜５００μＭ）を用いた２時間又は６時間の処理に続いて観察された細胞当たりのコネキシン４３の標識に、有意差はなかった（ｐ＞０．１）。同様に、ＬａＣｌ３（５００μＭ）は、処理後２時間又は６時間では、対照と有意に違いはなかった（ｐ＞０．１）（図１Ｂ、Ｃ）。これに対して、ＣＢＸ（５００μＭ）によって、コネキシン４３の総発現量は、対照に対して、２時間の曝露に続き３０．０±８．２％（ｐ＝０．００４３）、６時間の曝露後に５３．４±８．１％（ｐ＜０．０００１）、有意に低減した（図２）。
アラニン置換は、ペプチド５媒介性のギャップ結合の不対合を変えなかった。
【０３１３】
図２は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで天然型及び修飾型のペプチド５がギャップ結合の連絡に及ぼす効果をまとめたものである。対照では、ＬＹ陽性のｈＣＭＶＥＣ細胞は、ギャップ結合チャネルを通じた細胞間のＬＹの移送を標示し、それは、ＣＢＸ及びペプチド５を用いた処理後に低減した（図２Ａ）。ＣＢＸ及び天然のペプチド５によって、ＬＹ陽性細胞は、対照に比べて、１６．３±１．１％（ｐ＜０．０００１）及び５６．２±２．６％（ｐ＜０．０００１）に有意に減少した（図２Ａ）。天然のペプチド５に比べると、アラニン改変を有するＬＹ陽性細胞に有意な差はなかった（ｐ＞０．９）（図２Ｂ）。
ペプチド５媒介性のヘミチャネルの遮断は、精緻な配列特異的な機構を介する。
【０３１４】
ペプチド５媒介性のヘミチャネル遮断機構を確定するために、発明者らは、ペプチド５内のアラニンを体系的に置換して（表５）、どのアミノ酸が有効性に重要であるかを決定した。ＣＢＸ対照及びＬａＣｌ３対照は、ＡＴＰを、傷害対照（１００±３．６％）のそれぞれ９．１±１０．１％（ｐ＜０．０００１）及び４７．８±１３．６％（ｐ＜０．０００１）に有意に減じた（図３）。天然のペプチド５を用いた処理後、ＡＴＰ放出は、傷害対照の４４．６±７．７％に有意に低減した（ｐ＜０．０００１）（図３）。機能の喪失が、アラニン置換体Ａｌａ−２、Ａｌａ−３、Ａｌａ−４、Ａｌａ−５、Ａｌａ−６、Ａｌａ−７、Ａｌａ−８、及びＡｌａ−１１により観察され、これらは傷害対照と有意差がない程度であった（ｐ＞０．９）（図３）。これに対して、Ａｌａ−４、Ａｌａ−９、Ａｌａ−１０、及びＡｌａ−１２の置換体は、ＡＴＰ放出が傷害対照のそれぞれ６０．７±４．３％（ｐ＝０．００９８）、６２．４±１２．４％（ｐ＝０．０１５４）、６２．０±９．０％（ｐ＝０．０１３７）、６１．２±９．８％（ｐ＝０．０２）に有意に低下し（図３）、このことは、これらのペプチドが有効性を保持することを標示する。したがって、Ａｌａ−４、Ａｌａ−９、Ａｌａ−１０、及びＡｌａ−１２の置換ペプチドは、天然のペプチド５と有意な差がなかった（ｐ＞０．０９）。Ａｌａ−１は、傷害対照又は天然のペプチド５と比べると、有意な差がなかった。
ＳＲＰＴＥＫＴモチーフ（配列番号７７）は、ペプチド５媒介性のヘミチャネルの阻害に極めて重要であるが、それ自体は有効ではない    
【０３１５】
ペプチド５の機能領域（複数可）を決定するために、切頭型ペプチド５配列をＡＴＰヘミチャネルアッセイに供試した（表２、図４）天然のペプチド５配列は、ＡＴＰを、傷害対照（１００±３．７％）の４７．３±５．１％に有意に減少させた（ｐ＜０．０００１）。ペプチドｍｏｄ−２、ｍｏｄ−３、ｍｏｄ−４、ｍｏｄ−５、及びｍｏｄ−６は、傷害対照とは有意に差がなく、このことは、機能の喪失を標示する（図４）。言い換えれば、ｍｏｄ−２、ｍｏｄ−３、ｍｏｄ−４、ｍｏｄ−５、及びｍｏｄ−６は、ＡＴＰ放出を阻害する能力の点では、天然のペプチド５にそれぞれ比べて、２８．４±９．８％（ｐ＝０．０２３１）、５９．２±８．８％（ｐ＜０．０００１）、４３．９±８．８％（ｐ＜０．０００１）、５９．６±１１．５％（ｐ＜０．０００１）、及び６８．８±９．８％（ｐ＜０．０００１）に有意に有効性が低かった。興味深いことに、ｍｏｄ−１（４９．１±７．１％）は、傷害対照と有意に差があったが（ｐ＜０．０００１）、天然のペプチド５とは有意に差はなく（ｐ＞０．９）、このことは、それが機能を保持していたことを示す。．
【０３１６】
これらの結果は、ＡＴＰ放出に関するペプチド５媒介性の阻害が配列特異的であり、保存されているＳＲＰＴＥＫＴ領域（配列番号７７）がペプチド５の機能に重要であるようではあるが、それ自体はヘミチャネルの阻害に有効ではないことを示す。また、発明者らは、驚くべきことに、スクレープローディングアッセイにおいて、ＳＲＰＴＥＫＴ配列（配列番号７７）がそれ自体で高濃度で、ギャップ結合の連絡を阻害できるか否かを確定した（図５）。ＣＢＸ（カルベノキセロン（ｃａｒｂｅｎｏｘｅｌｏｎｅ）は、ＬＹ染料の移送が、非処理対照（１００±４．５％）の１５．３±１．８％（ｐ＜０．０００１）に有意に低減した（図５）。非処理対照に比べて、ＬＹ染料の移送は、ペプチド５及びＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号７７）の処理により、それぞれ７９．４±３．９％（ｐ＝０．００５７）及び７７．６±４．８％（ｐ＝０．００２８）に有意に低減した（図５）。非処理対照に対して、スクランブルペプチドでは有意差はなかった（ｐ＝０．３７）。
作用部位の競合アッセイ
【０３１７】
作用部位を決定するために、コネキシン４３タンパク質の細胞外ループ１及び２由来の合成ペプチド断片（表３）を、天然のペプチド５に対して供試した。ペプチドセグメントの画分は、天然のペプチド５配列に競合的に結合することから、ペプチド５の機能の喪失が観察され、ヘミチャネル媒介性のＡＴＰ放出は、ペプチド５のみに比べるとさらに大きい。図６は、ＣＢＸ及びペプチド５が、ＡＴＰ放出を、それぞれ傷害対照（１００±３．５％）の１３．４±４．８％（ｐ＜０．０００１）及び５４．１±４．４％（ｐ＜０．０００１）に有意に低減したことを実証する。ペプチド５と組み合わせたセグメントＥＬ１完全配列、ＥＬ１ａ配列、ＥＬ１ｂ配列、及びＥＬ１ｃ配列、ならびにＥＬ２ｂ配列は、ＡＴＰを、それぞれ傷害対照の３．２±６．７％（ｐ＜０．０００１）、６０．１±６．２％（ｐ＜０．０００１）、２９．３±５．５％（ｐ＜０．０００１）、４０．１±７．０％（ｐ＜０．０００１）、及び７５．５±７．４％（ｐ＝０．０３０２）に有意に低下した（図６）。驚くべきことに、発明者らは、ペプチド５と組み合わせたＥＬ１完全配列及びＥＬ１ｂ配列が、ペプチド５のみに比べて、有意に有効性が５０．８±７．９％（ｐ＜０．０００１）及び２４．８±８．８％（ｐ＝０．０３３４）大きいことを発見している（図６）。これに対し、ＥＬ２ｃは、ペプチド５の機能が傷害対照と有意差がない程（ｐ＝０．５６１５）に完全に消滅し、ＡＴＰ放出は、ペプチド５のみよりも有意に５８．９±８．８％（ｐ＜０．０００１）大きかった。これらの結果は、ＥＬ２ｃ配列がペプチド５のための作用部位である可能性があることを標示する。
実施例３：ギャップ結合及び／又はコネキシンチャネル調節ペプチドの製剤
【０３１８】
この発明は、１つ又は複数のギャップ結合及び／又はコネキシンチャネル調節ペプチドを含有する製剤を提供する。本発明は、治療使用に適しかつ長期間にわたって通常使用の保管条件下で安定を保つ、ギャップ結合及び／又はコネキシンチャネル調節ペプチドの水性製剤を提供する。この製剤は、ギャップ結合及び／又はコネキシン調節ペプチドを用いた治療が治療効果をもたらすような状態を、治療するのに有用である。局所投与のために、１滴から２滴のこれらの製剤を、１日当たり１回から６回、患部に送達することができる。
【０３１９】
コネキシン調節ペプチドの投与について、コネキシン４３調節ペプチド（モジュレーター）は、製剤中に約８μＭから約２０μＭの終濃度で存在することがあり、あるいは、コネキシン４３モジュレーターは、約１０μＭから約２０μＭの終濃度で、又は約１０から約１５μＭの終濃度で存在する。ある他の実施形態では、コネキシン４３モジュレーターは、約１０μＭの終濃度で存在する。さらに別の実施形態では、コネキシン４３モジュレーターは、約１〜１５μＭの終濃度で存在する。他の実施形態では、コネキシン４３モジュレーターは、約２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ、１０〜２００μＭ、２００〜３００μＭ、３００〜４００μＭ、４００〜５００μＭ、５００〜６００μＭ、６００〜７００μＭ、７００〜８００μＭ、８００〜９００μＭ、９００〜１０００又は１０００〜１５００μＭ、又は１５００μＭ〜２０００μＭ、２０００μＭ〜３０００μＭ、３０００μＭ〜４０００μＭ、４０００μＭ〜５０００μＭ、５０００μＭ〜６０００μＭ、６０００μＭ〜７０００μＭ、７０００μＭ〜８０００μＭ、８０００μＭ〜９０００μＭ、９０００μＭ〜１０，０００μＭ、１０，０００μＭ〜１１，０００μＭ、１１，０００μＭ〜１２，０００μＭ、１２，０００μＭ〜１３，０００μＭ、１３，０００μＭ〜１４，０００μＭ、１４，０００μＭ〜１５，０００μＭ、１５，０００μＭ〜２０，０００μＭ、２０，０００μＭ〜３０，０００μＭ、３０，０００μＭ〜５０，０００μＭで、もしくはそれを超えて、又は記載された用量のうち任意の２つの間の任意の範囲もしくは部分範囲で、又は又は約２０μＭから約５０，０００μＭまでの範囲内に属する任意の用量で、存在する。
【０３２０】
コネキシン４３モジュレーターの投与について、コネキシンモジュレーターは、本明細書に記載されるペプチド配列のいずれかである。実施形態によっては、コネキシンモジュレーターを配列番号１のペプチドとすることができる。
【０３２１】
調節しているペプチドのそれぞれの１日当たり約１ナノグラム（ｎｇ）／ｋｇと約１ｍｇ／ｋｇ体重との間のさらに他の投薬レベル。ある実施形態では、対象化合物の投薬量は、一般に、ｋｇ体重当たり約１ｎｇから約１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約１ｎｇから約０．１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約１ｎｇから約１０ｎｇ、ｋｇ体重当たり約１０ｎｇから約０．１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約０．１マイクログラムから約１マイクログラム、ｋｇ体重当たり約２０ｎｇから約１００ｎｇ、ｋｇ体重当たり約０．００１ｍｇから約０．０１ｍｇ、ｋｇ体重当たり約０．０１ｍｇから約０．１ｍｇ、又はｋｇ体重当たり約０．１ｍｇから約１ｍｇの範囲内となる。ある実施形態では、各対象化合物の投薬量は、一般に、ｋｇ体重当たり約０．００１ｍｇから約０．０１ｍｇ、ｋｇ体重当たり約０．０１ｍｇから約０．１ｍｇ、ｋｇ体重当たり約０．１ｍｇから約１ｍｇとなる。２種以上のギャップ結合及び／又はコネキシンチャネル調節ペプチドが使用される場合、各抗コネキシン剤の投薬量は、他方と同じ範囲にある必要はない。例えば、一方のギャップ結合及び／又はコネキシンチャネルモジュレーターの投薬量は、ｋｇ体重当たり約０．０１ｍｇから約１０ｍｇの間であることがあり、別のギャップ結合及び／又はコネキシンチャネルモジュレーターの投薬量は、ｋｇ体重当たり約０．１ｍｇから約１ｍｇ、０．１から約１０、０．１から約２０、０．１から約３０、０．１から約４０、又はｋｇ体重当たり約０．１と約５０ｍｇとの間であることがある。投薬量はまた、ｋｇ体重当たり約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０、１１．０、１２．０、１３．０、１４．０、１５．０、１６．０、１７．０、１８．０、１９．０、２０．０、２１．０、２２．０、２３．０、２４．０、２５．０、２６．０、２７．０、２８．０、２９．０、３０．０、３１．０、３２．０、３３．０、３４．０、３５．０、３６．０、３７．０、３８．０、３９．０、４０．０、４１．０、４２．０、４３．０、４４．０、４５．０、４６．０、４７．０、４８．０、４９．０、５０．０、５２．５、５５．０、５７．５、６０．０、６２．５、６５．０、６７．５、７０．０、７２．５、７５．０、７７．５、８０．０、８２．５、８５．０、８７．５、９０．０、９２．５、９５．０、９７．５、もしくは約１００．０ｍｇ、又は記載された用量のうち任意の２つの間の任意の範囲もしくは部分範囲、又はｋｇ体重当たり約０．１から約１００ｍｇまでの範囲に属する任意の用量とすることができる。
【０３２２】
任意選択的に、本製剤は、患部の投与部位での本製剤の滞留時間を増加させるために、粘度増強剤を含むことができる。非限定的な例としては、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを、粘度増強剤として本願発明に使用することができる。
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【０３２３】
本明細書に記載及び特許請求される本発明は、以下に限定されないが、この詳細な開示に規定又は記載又は参照されるものを含めて、数多くの特質及び実施形態を有する。包括的であることは意図されておらず、本明細書に記載及び特許請求される本発明は、制限ではなく説明の目的で含まれているこの詳細な開示に特定される、特長もしくは実施形態に又はそれによって限定されるものではない。構成要素及びパラメーターの多くが、本発明の範囲を逸脱することなく、ある程度まで変わり得るかもしくは改変され得るか、又は公知の等価物に置換され得ることを、当業者は容易に認識することになる。そのような改変及び等価物は、個別に記載されているがごとく本明細書に組み込まれることが理解されるべきである。また、この明細書に参照又は標示されるステップ、特長、組成物、及び化合物の全てを個別に又は集合的に、ならびに任意の２つ以上の前記ステップ又は特長のうちいずれか又は全てを、本発明は含む。
【０３２４】
本明細書に参照及び記述される全ての特許、刊行物、科学論文、ウェブサイト、ならびに他の文書及び資料は、本発明の属する技術分野の当業者の技能のレベルを標示するものであり、そのような参照される文書及び資料のそれぞれは、参照によりその全体を個別に組み入れられているか又は本明細書にその全体を記載されているのと同じ程度に、ここに参照により組み込まれる。出願人は、任意のそのような特許、刊行物、科学論文、ウェブサイト、電子的に利用可能な情報、及び他の参照される資料又は文書から得られるいずれか及び全ての資料及び情報を、この明細書中に物理的に組み込む権利を保持する。この明細書中でのいかなる出願、特許、及び刊行物への参照も、それらが妥当な先行技術を構成するか又は世界中のいずれかの国での一般常識の一部を形成するという自認又は何らかの形態の示唆として、解されるものではなく解されるべきではない。
【０３２５】
本明細書に記載される具体的な方法及び組成物は、好適な実施形態を代表するものであり、例示的なものであり、本発明の範囲上の限定として意図されるものではない。他の目的、態様、及び実施形態は、この明細書の考慮の下で当業者に生じるものとなり、特許請求の範囲の範囲によって規定されるように、本発明の趣旨の内に包含される。様々な置換及び改変が、本発明の範囲及び趣旨を逸脱することなく、本明細書に開示される本発明になされ得ることが、当業者には容易に明らかになろう。適切に本明細書に説明的に記載される本発明は、必須のものとして本明細書に具体的に開示されない、任意の１つもしくは複数の要素の不在下で、又は１つもしくは複数の限定下で、実践されることがある。それゆえ、例えば、本明細書の各例において、本願発明の実施形態又は例では、用語「含む」、「から本質的になる」、及び「からなる」のいずれも、本明細書の他の２つの用語のどちらかに置き換えられることがある。また、用語「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」などは、拡張的にかつ限定なく読み取られるものとなる。適切に本明細書に説明的に記載される方法及びプロセスは、様々なステップの指示で実践されることがあり、それらは必ずしも、本明細書又は特許請求の範囲に標示されるステップの指示に制限されない。また、本明細書に使用される際に、及び添付の特許請求の範囲では、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が特段に明確に示さない限り、複数の言及を含む。いかなる場合も、本特許は、本明細書に具体的に開示される具体的な例又は実施形態又は方法に限定されるものと解釈されないことがある。いかなる状況であっても、具体的に、かつ限定又は留保なく、出願人による応答書面に明示的に援用されない限り、本特許は、特許商標庁のいかなる審査官又はいかなる他の公務員もしくは従業員によって行われるいかなる陳述によっても限定されるものと解釈されないことがある。さらに、題名、見出しなどは、この文書に関する読み手の理解を高めるために提供され、本願発明の範囲を限定するものと読み取られるべきではない。本明細書に参照される本発明の態様、実施形態、又は構成成分のいかなる例も、非限定的であるものとみなされることになる。
【０３２６】
採用されている用語及び表現は、限定ではなく記載の用語として使用されるのであって、そのような用語及び表現の使用に際して、呈示及び記載される特長のいかなる等価物又はその一部も除外する意図はないが、様々な改変は、特許請求の範囲にあるような本発明の範囲内にある可能性があることが認識される。ゆえに、本願発明が、好適な実施形態及び任意選択的な特長によって具体的に開示されているのにも関わらず、本明細書に開示される概念の改変及びバリエーションが、当業者によって復元されることがあること；及びそのような改変及びバリエーションは、添付の特許請求の範囲によって規定されるようなこの発明の範囲内にあるものとみなされることを理解されたい。
【０３２７】
本発明は、本明細書に幅広く総称的に記載されている。この総称的な開示内にあるさらに狭い種及び亜属のグループ分類のそれぞれもまた、本発明の一部を形成する。これは、条件付きの、又はその属から任意の主題を除外する否定的限定を伴う、本発明の総称的な記載を含み、その削除された材料が本明細書に具体的に記載されるか否かに関わるものではない。
【０３２８】
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内にある。さらに、本発明の特長又は態様がＭａｒｋｕｓｈグループの観点で記載されている場合、それによって本発明がまた、Ｍａｒｋｕｓｈグループの任意の個別のメンバー又はメンバーのサブグループの観点で記載されていることを、当業者は認識することになる。
【国際調査報告】
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