(57)【要約】本開示は、変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチド及び変異免疫調節ペプチドを含む融合ポリペプチドを提供する。本開示は、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド及びこれを含む組成物を提供し、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドは、本開示の変異免疫調節ポリペプチドを含む。本開示は、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸及びこの核酸を含む宿主細胞を提供する。本開示は、Ｔ細胞の活性を調節する方法を提供し、この方法は、Ｔ細胞を本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドと接触させることを含む。
2019522466.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
図２Ａもしくは図２Ｂに示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドであって、
前記変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドは、図２Ａに示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列、または配列番号１に示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列と比較して１つまたは複数のアミノ酸置換を有し、
ａ）図３Ａまたは図３Ｂに示されるアミノ酸配列を有するＰＤ１ポリペプチドに対する、図２Ａもしくは図２Ｂに示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列の結合親和性、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列の結合親和性と比較して、前記ＰＤ１ポリペプチドに対する結合親和性の低下を示し、及び／または
ｂ）図３Ｃまたは図３Ｄに示されるアミノ酸配列を有するＢ７−１ポリペプチドに対する、図２Ａもしくは図２Ｂに示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列の結合親和性、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列の結合親和性と比較して、前記Ｂ７−１ポリペプチドに対する結合親和性の低下を示す、変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチド。
【請求項２】
前記ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸の番号付けに基づくアミノ酸Ｄ２６、アミノ酸Ｔ３７、アミノ酸Ｖ５４、アミノ酸Ｑ６６、もしくはアミノ酸Ｅ７２の置換を含むか、または前記ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸の番号付けに基づくアミノ酸Ｄ２６、アミノ酸Ｔ３７、アミノ酸Ｉ５４、アミノ酸Ｑ６６、もしくはアミノ酸Ｅ７２の置換を含む、請求項１に記載の変異免疫調節ポリペプチド。
【請求項３】
前記変異免疫調節ポリペプチドは前記ＰＤ１ポリペプチドに対して示す結合親和性が、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドが示す結合親和性の１０％未満〜７５％未満である、請求項１または請求項２に記載の変異免疫調節ポリペプチド。
【請求項４】
前記変異免疫調節ポリペプチドは前記Ｂ７−１ポリペプチドに対して示す結合親和性が、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドが示す結合親和性の１０％未満〜７５％未満である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の変異免疫調節ポリペプチド。
【請求項５】
前記変異免疫調節ポリペプチドは前記ＰＤ１ポリペプチドに対して示す結合親和性が、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドが示す結合親和性の７５％〜９５％超である、請求項１、請求項２、または請求項４のいずれか１項に記載の変異免疫調節ポリペプチド。
【請求項６】
前記変異免疫調節ポリペプチドは前記Ｂ７−１ポリペプチドに対して示す結合親和性が、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドが示す結合親和性の７５％〜９５％超である、請求項１〜３または請求項５のいずれか１項に記載の変異免疫調節ポリペプチド。
【請求項７】
ａ）
ｉ）エピトープ、
ｉｉ）第１の主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）任意選択の免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇ骨格
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、
を含む多量体ポリペプチドであって、
前記多量体ポリペプチドは、１つまたは複数の免疫調節ドメインを含み、前記１つまたは複数の免疫調節ドメインの少なくとも１つが、
Ａ）前記第１のポリペプチドのＣ末端、
Ｂ）前記第２のポリペプチドのＮ末端、
Ｃ）前記第２のポリペプチドのＣ末端、または
Ｄ）前記第１のポリペプチドのＣ末端及び前記第２のポリペプチドのＮ末端
に位置し、
前記免疫調節ドメインは、図２Ａもしくは図２Ｂに示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
前記変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドは、図２Ａに示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列、または配列番号１に示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列と比較して、１つまたは複数のアミノ酸置換を有し、
前記変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドは、
ａ）図３Ａまたは図３Ｂに示されるアミノ酸配列を有するＰＤ１ポリペプチドに対する、図２Ａもしくは図２Ｂに示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列の結合親和性、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列の結合親和性と比較して、前記ＰＤ１ポリペプチドに対する結合親和性の低下を示し、及び／または
ｂ）図３Ｃまたは図３Ｄに示されるアミノ酸配列を有するＢ７−１ポリペプチドに対する、図２Ａもしくは図２Ｂに示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列の結合親和性、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列の結合親和性と比較して、前記Ｂ７−１ポリペプチドに対する結合親和性の低下を示す、多量体ポリペプチド。
【請求項８】
前記多量体ポリペプチドは、図３Ａまたは図３Ｂに示されるアミノ酸配列を有するＰＤ１ポリペプチドに対する、図２Ａもしくは図２Ｂに示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列を含む免疫調節ドメインを含む対照多量体ポリペプチドの結合親和性、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列を含む免疫調節ドメインを含む対照多量体ポリペプチドの結合親和性と比較して、前記ＰＤ１ポリペプチドに対する結合親和性の低下を示す、請求項７に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項９】
前記多量体ポリペプチドは、
ａ）
ｉ）前記エピトープ、
ｉｉ）前記第１のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉｉ）前記免疫調節ドメイン
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）前記第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）前記ＩｇＦｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、
を含む、請求項７に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１０】
前記多量体ポリペプチドは、
ａ）
ｉ）前記エピトープ、及び
ｉｉ）前記第１のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）前記免疫調節ドメイン、
ｉｉｉ）前記第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）前記ＩｇＦｃポリペプチド、
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、
を含む、請求項７に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１１】
前記多量体ポリペプチドは、
ａ）
ｉ）前記エピトープ、及び
ｉｉ）前記第１のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）前記第２のＭＨＣポリペプチド、
ｉｉ）前記ＩｇＦｃポリペプチド、及び
ｉｉｉ）前記免疫調節ドメイン
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、
を含む、請求項７に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１２】
前記多量体ポリペプチドは、
ａ）
ｉ）前記エピトープ、及び
ｉｉ）前記第１のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）前記第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）前記免疫調節ドメイン
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、
を含む、請求項７に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１３】
前記多量体ポリペプチドは、
ａ）
ｉ）前記エピトープ、及び
ｉｉ）前記第１のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）前記免疫調節ドメイン、及び
ｉｉ）前記第２のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、
を含む、請求項７に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１４】
前記多量体ポリペプチドは、
ａ）
ｉ）前記エピトープ、
ｉｉ）前記第１のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉｉ）前記免疫調節ドメイン
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）前記第２のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、
を含む、請求項７に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１５】
前記非Ｉｇ骨格は、ＸＴＥＮポリペプチド、トランスフェリンポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド、シルク様ポリペプチド、またはシルク−エラスチン様ポリペプチドである、請求項７に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１６】
前記第１のＭＨＣポリペプチドは、β２−ミクログロブリンポリペプチドであり、前記第２のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである、請求項７〜１５のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１７】
前記β２−ミクログロブリンポリペプチドは、図６に示されるアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１８】
前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、またはＨＬＡ−Ｃの重鎖である、請求項１６に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１９】
前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図５Ａ〜５Ｃのうちの１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２０】
前記第１のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩアルファ鎖ポリペプチドであり、前記第２のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩベータ鎖ポリペプチドである、請求項７〜１６のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２１】
前記エピトープは、Ｔ細胞エピトープである、請求項７〜２０のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２１】
Ｆｃポリペプチドを含み、前記ＩｇＦｃポリペプチドは、ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ２Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド、ＩｇＡＦｃポリペプチド、またはＩｇＭＦｃポリペプチドである、請求項７〜１１及び請求項１５〜１８のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２２】
前記ＩｇＦｃポリペプチドは、図４Ａ〜４Ｃに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２３】
前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドとが、非共有結合で結合される、請求項７〜２２のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２４】
前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドとが、共有結合で連結される、請求項７〜２２のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２５】
前記共有結合は、ジスルフィド結合を介するものである、請求項２４に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２６】
前記第１のＭＨＣポリペプチド、または前記エピトープと前記第１のＭＨＣポリペプチドとの間のリンカーは、アミノ酸置換を含むことで第１のＣｙｓ残基を与え、前記第２のＭＨＣポリペプチドは、アミノ酸置換を含むことで第２のＣｙｓ残基を与え、前記ジスルフィド結合が、前記第１のＣｙｓ残基と前記第２のＣｙｓ残基との間に形成される、請求項２５に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２７】
前記エピトープと、前記第１のＭＨＣポリペプチドとの間に挿入された第１のリンカーを含む、請求項７〜１４のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２８】
前記変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドは、図２Ｂに示されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列のアミノ酸の番号付けに基づくＤ２６、Ｔ３７、Ｉ５４、Ｙ５６、Ｑ６６、Ｅ７２、Ｉ１１５、Ｇ１１９、またはＧ１２０から選択されるアミノ酸の置換を含む、請求項７〜１４のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２９】
２つ以上の変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドを含む、請求項７〜２８のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項３０】
前記２つ以上の免疫調節ポリペプチドは、直列に存在する、請求項２９に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項３１】
前記免疫調節ポリペプチドは、請求項１〜６のいずれか１項に記載の免疫調節ポリペプチドである、請求項７〜２８のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項３２】
前記多量体ポリペプチドは、第３のポリペプチドを含み、前記第３のポリペプチドは、前記第１のポリペプチドまたは前記第２のポリペプチドの前記免疫調節ポリペプチドに対して少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫調節ポリペプチドを含む、請求項２９〜３１のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項３３】
前記第３のポリペプチドが、前記第１のポリペプチドに共有結合で連結される、請求項３２に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項３４】
前記第２のポリペプチドは、
ｉ）前記第２のＭＨＣポリペプチド、
ｉｉ）前記ＩｇＦｃポリペプチド、及び
ｉｉｉ）親和性タグ
をＮ末端からＣ末端の順序で含む、請求項７〜１３及び請求項１５〜３３のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項３５】
組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸であって、
ｉ）前記組換えポリペプチドは、
ａ）エピトープ、
ｂ）第１の主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド、
ｃ）請求項１〜６のいずれか１項に記載の変異免疫調節ポリペプチドである免疫調節ポリペプチド、
ｄ）タンパク分解により切断可能なリンカーもしくはリボソームスキッピングシグナル、
ｅ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｆ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含むか、または
ｉｉ）前記組換えポリペプチドは、
ａ）エピトープ、
ｂ）第１のＭＨＣポリペプチド、
ｃ）タンパク分解により切断可能なリンカーもしくはリボソームスキッピングシグナル、
ｄ）請求項１〜６のいずれか１項に記載の変異免疫調節ポリペプチドである免疫調節ポリペプチド、
ｅ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｆ）ＩｇＦｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む、核酸。
【請求項３６】
前記第１のＭＨＣポリペプチドは、β２−ミクログロブリンポリペプチドであり、前記第２のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである、請求項３５に記載の核酸。
【請求項３７】
前記β２−ミクログロブリンポリペプチドは、図６に示されるアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の核酸。
【請求項３８】
前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、またはＨＬＡ−Ｃの重鎖である、請求項３６に記載の核酸。
【請求項３９】
前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図５Ａ〜５Ｃのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３８に記載の核酸。
【請求項４０】
前記第１のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩアルファ鎖ポリペプチドであり、前記第２のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩベータ鎖ポリペプチドである、請求項３５に記載の核酸。
【請求項４１】
前記エピトープは、Ｔ細胞エピトープである、請求項３５に記載の核酸。
【請求項４２】
前記ＩｇＦｃポリペプチドは、ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ２Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ３Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチド、ＩｇＡＦｃポリペプチド、またはＩｇＭＦｃポリペプチドである、請求項３５に記載の核酸。
【請求項４３】
前記ＩｇＦｃポリペプチドは、図４Ａ〜４Ｃに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４２に記載の核酸。
【請求項４４】
前記変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸の番号付けに基づくアミノ酸Ｄ２６、アミノ酸Ｔ３７、アミノ酸Ｖ５４、アミノ酸Ｑ６６、もしくはアミノ酸Ｅ７２の置換を含むか、または前記ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸の番号付けに基づくアミノ酸Ｄ２６、アミノ酸Ｔ３７、アミノ酸Ｉ５４、アミノ酸Ｑ６６、もしくはアミノ酸Ｅ７２の置換を含む、請求項３５に記載の核酸。
【請求項４５】
多量体ポリペプチドは、２つ以上の変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドを含む、請求項３５に記載の核酸。
【請求項４６】
前記タンパク分解により切断可能なリンカーまたはリボソームスキッピングシグナルは、
ａ）ＬＥＶＬＦＱＧＰ（配列番号３４）、
ｂ）ＥＮＬＹＴＱＳ（配列番号３５）、
ｃ）フューリン切断部位、
ｄ）ＬＶＰＲ（配列番号３７）、
ｅ）ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号３８）、
ｆ）ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号３９）、
ｇ）ＧＳＧＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号４０）、及び
ｈ）ＧＳＧＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号４１）
から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３５に記載の核酸。
【請求項４７】
前記組換えポリペプチドは、
ａ）第１のリーダーペプチド、
ｂ）前記エピトープ、
ｃ）前記第１のＭＨＣポリペプチド、
ｄ）前記免疫調節ポリペプチド、
ｅ）前記タンパク分解により切断可能なリンカーまたはリボソームスキッピングシグナル、
ｆ）第２のリーダーペプチド、
ｇ）前記第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｈ）前記免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む、請求項３５に記載の核酸。
【請求項４８】
前記第１のリーダーペプチド及び前記第２のリーダーペプチドは、β２−Ｍリーダーペプチドである、請求項４７に記載の核酸。
【請求項４９】
前記ヌクレオチド配列が、転写制御要素に機能可能なように連結される、請求項３５に記載の核酸。
【請求項５０】
前記転写制御要素は、真核細胞において機能するプロモーターである、請求項４９に記載の核酸。
【請求項５１】
前記第１のＭＨＣポリペプチド、または前記エピトープと前記第１のＭＨＣポリペプチドとの間のリンカーは、アミノ酸置換を含むことで第１のＣｙｓ残基を与え、前記第２のＭＨＣポリペプチドは、アミノ酸置換を含むことで第２のＣｙｓ残基を与え、前記第１のＣｙｓ残基及び前記第２のＣｙｓ残基は、前記第１のＭＨＣポリペプチドと前記第２のＭＨＣポリペプチドとの間にジスルフィド結合を生成する、請求項３５に記載の核酸。
【請求項５２】
請求項３５〜５１のいずれか１項に記載の核酸を含む、組換え発現ベクター。
【請求項５３】
前記ベクターは、ウイルスベクターまたは非ウイルスベクターである、請求項５２に記載の組換え発現ベクター。
【請求項５４】
請求項５２に記載の組換え発現ベクターで遺伝子改変された、宿主細胞。
【請求項５５】
前記宿主細胞は、インビトロのものである、請求項５４に記載の宿主細胞。
【請求項５６】
前記宿主細胞が、前記細胞が内在性のＭＨＣβ２−ミクログロブリンポリペプチドを産生しないように遺伝子改変される、請求項５４に記載の宿主細胞。
【請求項５７】
前記宿主細胞は、Ｔリンパ球である、請求項５４に記載の宿主細胞。
【請求項５８】
ａ）
ｉ）エピトープ、
ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉｉ）請求項１〜６のいずれか１項に記載の変異免疫調節ポリペプチドである免疫調節ドメイン
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の核酸と、
ｂ）
ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）ＩｇＦｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の核酸と、
を含む、組成物。
【請求項５９】
ａ）
ｉ）エピトープ、及び
ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の核酸と、
ｂ）
ｉ）請求項１〜６のいずれか１項に記載の変異免疫調節ポリペプチドである免疫調節ドメイン
ｉｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉｉ）ＩｇＦｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の核酸と、
を含む、組成物。
【請求項６０】
前記第１の核酸及び／または前記第２の核酸は、組換え発現ベクターに存在する、請求項５８または請求項５９に記載の組成物。
【請求項６１】
請求項５８〜６０のいずれか１項に記載の組成物で遺伝子改変された、宿主細胞。
【請求項６２】
請求項７〜３４のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドの産生方法であって、
ａ）請求項５４〜５７及び請求項６１のいずれか１項に記載の宿主細胞が前記多量体ポリペプチドを合成する条件下での培地における前記宿主細胞のインビトロの培養と、
ｂ）前記宿主細胞及び／または前記培地からの前記多量体ポリペプチドの単離と、
を含む、方法。
【請求項６３】
前記第２のポリペプチドは、親和性タグを含み、前記単離は、前記細胞によって産生される前記多量体ポリペプチドと、前記親和性タグに対する結合パートナーと、の接触を含み、前記結合パートナーが固定化されていることによって前記多量体ポリペプチドが固定化される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記固定化された多量体ポリペプチドの溶出を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
エピトープ特異的Ｔ細胞の活性の選択的調節方法であって、
前記エピトープ特異的Ｔ細胞と、請求項７〜３４のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドと、の接触を含み、
前記接触は、前記エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する、方法。
【請求項６６】
前記免疫調節ポリペプチドは、抑制ポリペプチドであり、前記多量体ポリペプチドは、前記エピトープ特異的Ｔ細胞を抑制する、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記接触は、インビトロのものである、請求項６５に記載の方法。
【請求項６８】
前記接触は、インビボのものである、請求項６５に記載の方法。
【請求項６９】
前記接触は、エキソビボのものである、請求項６５に記載の方法。
【請求項７０】
個体におけるエピトープ特異的Ｔ細胞の活性の選択的調節方法であって、
個体におけるエピトープ特異的Ｔ細胞の活性の選択的調節に有効な請求項７〜３４のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドの、有効量での前記個体への投与を含む、方法。
【請求項７１】
前記免疫調節ポリペプチドは、抑制ポリペプチドであり、前記多量体ポリペプチドは、前記エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を抑制する、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記エピトープは、自己エピトープであり、前記投与によって、前記自己エピトープに特異的なＴ細胞の活性が選択的に抑制される、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記エピトープは、同種移植片に存在するエピトープであり、前記投与によって、前記同種移植片に特異的なＴ細胞の活性が選択的に抑制される、請求項７１に記載の方法。
【請求項７４】
個体における自己免疫障害の治療方法であって、
前記個体における自己エピトープに特異的なＴ細胞の活性の選択的抑制に有効な請求項７〜３４のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドの、有効量での前記個体への投与を含み、それによって前記自己免疫障害が治療される、方法。
【請求項７５】
前記自己免疫疾患は、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、または自己免疫性関節炎である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
個体における同種移植片拒絶の抑制方法であって、
前記個体に存在する同種移植片に存在するエピトープに特異的なＴ細胞の活性の選択的抑制に有効な請求項７〜３４のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドの、有効量での前記個体への投与を含み、それによって同種移植片拒絶が抑制される、方法。
【請求項７７】
前記同種移植片は、腎臓、肺、皮膚、肝臓、骨、軟骨、または心臓である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記投与は、皮下投与である、請求項７０〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７９】
前記投与は、静脈内投与である、請求項７０〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８０】
前記投与は、筋肉内投与である、請求項７０〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８１】
前記投与は、全身投与である、請求項７０〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８２】
前記投与は、治療部位から遠い位置への投与である、請求項７０〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８３】
前記投与は、局所投与である、請求項７０〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８４】
前記投与は、治療部位または治療部位付近への投与である、請求項７０〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８５】
ａ）請求項７〜３４のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド、及び
ｂ）医薬的に許容可能な賦形剤
を含む、組成物。
【請求項８６】
ａ）請求項３５〜５１のいずれか１項に記載の核酸、または請求項５２もしくは請求項５３に記載の組換え発現ベクター、及び
ｂ）医薬的に許容可能な賦形剤
を含む、組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
適応免疫応答は、Ｔ細胞の表面に存在するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）と、主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ：ヒトにおいてはヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体とも称される）によって抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面に非共有結合で存在する小さなペプチド抗原との結合を伴う。この結合は、免疫系の標的化機構に相当するものであり、Ｔ細胞の調節（活性化または抑制）及びエフェクター機能に必要な分子相互作用である。
【０００２】
エピトープ特異的な細胞標的化に続き、ＡＰＣに見られる共刺激タンパク質と、Ｔ細胞の対応する共刺激タンパク質と、の結合を介して標的化Ｔ細胞が活性化される。Ｔ細胞の特異性及び活性化または抑制を誘導するためには、エピトープ／ＴＣＲ結合と、ＡＰＣの共刺激タンパク質とＴ細胞の共刺激タンパク質との結合との両方のシグナルが必要である。ＴＣＲは所与のエピトープに特異的であるが、共刺激タンパク質はエピトープ特異的ではなく、代わりに、すべてのＴ細胞または大きなＴ細胞サブセットに一般に発現する。
【発明の概要】
【０００３】
本開示は、変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチド、及び変異免疫調節ペプチドを含む融合ポリペプチドを提供する。本開示は、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド、及びＴ細胞調節多量体ポリペプチドを含む組成物を提供し、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドは、本開示の変異免疫調節ポリペプチドを含む。本開示は、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸、及び核酸を含む宿主細胞を提供する。本開示は、Ｔ細胞の活性の調節方法を提供し、方法は、Ｔ細胞と、本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドとの接触を含む。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
【図１】本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドのさまざまな実施形態を模式的に示す。こうした実施形態では、別々のポリペプチドに存在するＭＨＣ（例えば、ＨＬＡ）ポリペプチドの間にジスルフィド結合が形成される。
【図２−１】野生型マウスＰＤ−Ｌ１ポリペプチドのアミノ酸配列（Ａ）、及び、野生型ヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドのアミノ酸配列（Ｂ）を示す。
【図２−２】マウス及びヒトのＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列の配列アライメント（Ｃ）を示す。
【図２−３】変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの例（Ｄ〜Ｇ）を示す。
【図２−４】変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの例（Ｈ〜Ｋ）を示す。
【図２−５】変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの例（Ｌ〜Ｍ）を示す。
【図３−１】マウスＰＤ−１のアミノ酸配列（Ａ）、及び、ヒトＰＤ−１のアミノ酸配列（Ｂ）を示す。
【図３−２】マウスＢ７−１のアミノ酸配列（Ｃ）、及び、ヒトＢ７−１のアミノ酸配列（Ｄ）を示す。
【図４−１】免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列（Ａ）を示す。
【図４−２】免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列（Ｂ）を示す。
【図４−３】免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列（Ｃ）を示す。
【図５−１】ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列（Ａ及びＢ）を示す。シグナル配列には下線が引かれている。
【図５−２】ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列（Ｃ）を示す。シグナル配列には下線が引かれている。
【図６】Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ＮＰ＿００４０３９．１：配列番号３）、Ｐａｎ  ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ（ＮＰ＿００１００９０６６．１：配列番号４）、Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ（ＮＰ＿００１０４０６０２．１：配列番号５）、Ｂｏｓ  ｔａｕｒｕｓ（ＮＰ＿７７６３１８．１：配列番号６）、及びＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（ＮＰ＿０３３８６５．２：配列番号７）に由来するベータ−２ミクログロブリン（β２Ｍ）前駆体（すなわち、リーダー配列を含む）の複数のアミノ酸配列のアライメントを示す。アミノ酸１〜２０は、シグナルペプチドである。
【図７】ＦＡＣＳによるハイスループットなマイクロビーズ結合アッセイを使用したＰＤ−Ｌ１変異体のスクリーニング（Ａ及びＢ）、ならびに、ＰＤ−Ｌ１変異体についてのＦＡＣＳによるマイクロビーズ結合のデータ（Ｃ）を示す。
【図８】ＰＤ−１またはＢ７−１に対する結合を改変したＰＤ−Ｌ１変異体の特徴付けを示す。
【図９】ＰＤ−Ｌ１に対する結合についてＰＤ−１がＢ７−１と競合することを示す。
【図１０】表１を示す。
【図１１】表２を示す。
【図１２】病原性のエピトープ特異的ＣＤ８+ Ｔ細胞に対するＰＤ−Ｌ１／ｓｙｎＴａｃのインビボの作用を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００５】
定義
「ポリヌクレオチド」及び「核酸」という用語は、本明細書で互換的に使用され、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれかであり、長さが任意の重合形態のヌクレオチドを指す。したがって、この用語は、限定はされないが、一本鎖、二本鎖、または多鎖のＤＮＡまたはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡとＲＮＡとのハイブリッド、あるいはプリン塩基及びピリミジン塩基を含むポリマー、あるいは他の天然のヌクレオチド塩基、化学的もしくは生化学的に改変されたヌクレオチド塩基、非天然のヌクレオチド塩基、または誘導体化されたヌクレオチド塩基を含むポリマーを含む。
【０００６】
「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書で互換的に使用され、化学的または生化学的に改変または誘導体化されたアミノ酸であるコードアミノ酸及び非コードアミノ酸を含み得、長さが任意の重合形態のアミノ酸と、改変されたペプチド骨格を有するポリペプチドとを指す。
【０００７】
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、別のポリヌクレオチドまたはポリペプチドに対してある一定パーセントの「配列同一性」を有し、このことは、アライメントがとられ、２つの配列が比較されると、その割合の塩基またはアミノ酸が同一であり、同一の相対位置に存在することを意味する。配列同一性は、多くの異なる方法において決定することができる。配列同一性を決定するために、さまざまな簡便な方法及びコンピュータープログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ、Ｔ−ＣＯＦＦＥＥ、ＭＵＳＣＬＥ、ＭＡＦＦＴなど）を使用して配列のアライメントをとることができ、こうした方法及びコンピュータープログラムは、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｌｉ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ、ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｔｃｏｆｆｅｅ／、ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｍｕｓｃｌｅ／、ｍａｆｆｔ．ｃｂｒｃ．ｊｐ／ａｌｉｇｎｍｅｎｔ／ｓｏｆｔｗａｒｅ／を含む、いくつかのサイトでワールドワイドウェブを通じて利用可能である。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｉ．２１５：４０３−１０を参照のこと。
【０００８】
「保存的アミノ酸置換」という用語は、同様の側鎖を有するアミノ酸残基の、タンパク質における互換性を指す。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の一群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシンからなり、脂肪族−ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の一群は、セリン及びスレオニンからなり、アミド含有側鎖を有するアミノ酸の一群は、アスパラギン及びグルタミンからなり、芳香族側鎖を有するアミノ酸の一群は、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンからなり、塩基性側鎖を有するアミノ酸の一群は、リジン、アルギニン、及びヒスチジンからなり、酸性側鎖を有するアミノ酸の一群は、グルタミン酸及びアスパラギン酸からなり、含硫側鎖を有するアミノ酸の一群は、システイン及びメチオニンからなる。保存的なアミノ酸置換群の例は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン−グリシン、及びアスパラギン−グルタミンである。
【０００９】
（例えば、Ｔ細胞に存在するポリペプチド（例えば、Ｔ細胞受容体）に対する本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドの結合に関して）本明細書で使用される「結合」は、介在する非共有結合的な相互作用を指す。結合相互作用は、解離定数（ＫD ）が１０-3Ｍ未満であることによって一般に特徴付けられる。好ましいＫD 値は、１０-6Ｍ未満、１０-7Ｍ未満、１０-8Ｍ未満、１０-9Ｍ未満、１０-10 Ｍ未満、１０-11 Ｍ未満、１０-12 Ｍ未満、１０-13 Ｍ未満、１０-14 Ｍ未満、または１０-15 Ｍ未満である。「親和性」は、結合強度を指し、結合親和性の上昇は、ＫD の低下と相関する。
【００１０】
本明細書で使用される「免疫学的シナプス」または「免疫シナプス」という用語は、一般に、適応免疫応答において相互作用する２つの免疫細胞の間の天然の界面を指し、こうした界面には、例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）または標的細胞と、エフェクター細胞（例えば、リンパ球、エフェクターＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、及び同様のものなど）との間の界面が含まれる。ＡＰＣとＴ細胞との間の免疫学的シナプスは、一般に、Ｔ細胞抗原受容体と主要組織適合抗原複合体分子との相互作用によって開始される。このことについては、例えば、Ｂｒｏｍｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１；１９：３７５−９６に記載されており、当該文献の開示内容は、その全体が参照によって本明細書に援用される。
【００１１】
「Ｔ細胞」は、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４+ 細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８+ 細胞）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、及びＮＫ−Ｔ細胞を含む、ＣＤ３を発現するすべての型の免疫細胞を含む。
【００１２】
本明細書で使用される「共刺激ポリペプチド」という用語は、Ｔ細胞に存在する同種の共刺激ポリペプチドに特異的に結合することによって、一次シグナル（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体と、ペプチドが負荷された主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドと、の結合によって生じる）に加えて、Ｔ細胞応答（限定はされないが、増殖、活性化、分化、及び同様のものを含む）を媒介するシグナルを生じさせる、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞、Ｂ細胞、及び同様のもの）に存在するポリペプチドを含む。
【００１３】
本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドの「調節ドメイン」は、共刺激ポリペプチドを含む。
【００１４】
本明細書で使用される「異種」は、それぞれ天然の核酸またはタンパク質に見られないヌクレオチドまたはポリペプチドを意味する。
【００１５】
本明細書で使用される「組換え」は、特定の核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）が、天然系に見られる内在性核酸とは区別可能な構造的なコード配列または非コード配列を有するコンストラクトが生じるクローニング段階、制限段階、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）段階及び／またはライゲーション段階のさまざまな組み合わせの産物であることを意味する。ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、ｃＤＮＡ断片から構築するか、または細胞もしくは細胞を含まない転写及び翻訳系に含められる組換え転写単位からの発現が可能な合成核酸を生成するための一連の合成オリゴヌクレオチドから構築することができる。
【００１６】
「組換え発現ベクター」または「ＤＮＡコンストラクト」という用語は、ベクター及び１つの挿入断片を含むＤＮＡ分子を指すために本明細書で互換的に使用される。組換え発現ベクターは、通常、挿入断片（複数可）の発現及び／または増幅、あるいは他の組換えヌクレオチド配列の構築を目的として生成される。挿入断片（複数可）は、プロモーター配列に機能可能なように連結されてもされなくてもよく、ＤＮＡ制御配列に機能可能なように連結されてもされなくてもよい。
【００１７】
例えば、組換え発現ベクターなどの外来性ＤＮＡが細胞の内部に導入されているとき、そのようなＤＮＡによって細胞は「遺伝子改変」または「形質転換」または「遺伝子導入」されている。外来性ＤＮＡが存在すると、持続性または一過性の遺伝子変化が生じる。形質転換ＤＮＡは、細胞のゲノムへの組み込み（共有結合での連結）が生じることも生じないこともあり得る。原核生物、酵母、及び哺乳類細胞では、例えば、形質転換ＤＮＡは、プラスミドなどのエピソーム要素で維持され得る。真核細胞に関しては、安定的に形質転換された細胞は、形質転換ＤＮＡが染色体に組み込まれており、その結果、染色体の複製を介して形質転換ＤＮＡが娘細胞によって受け継がれる細胞である。
【００１８】
本明細書で使用される「宿主細胞」は、インビボもしくはインビトロの真核細胞、または単細胞実体として培養される多細胞生物由来の細胞（例えば、細胞株）を指し、当該真核細胞は、核酸（例えば、本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクター）のレシピエントとして使用することができるか、または使用されたことがあるものであり、その核酸によって遺伝子改変された元の細胞の子孫を含む。単細胞の子孫は、天然、偶発的、または計画的な変異が生じるため、形態またはゲノムＤＮＡ相補鎖もしくは全ＤＮＡ相補鎖が、元の親と必ずしも完全に同一ではあり得ないと理解される。「組換え宿主細胞」（「遺伝子改変宿主細胞」とも称される）は、例えば、発現ベクターなどの異種核酸が導入された宿主細胞である。例えば、遺伝子改変された真核生物宿主細胞が遺伝子改変されている所以は、例えば、真核生物宿主細胞にとって異質な外来性核酸、または真核生物宿主細胞に通常は見られない組換え核酸などの異種核酸が適切な真核生物宿主細胞に導入されているということにある。
【００１９】
「ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（治療）」、「ｔｒｅａｔｉｎｇ（治療）」という用語、及び同様のものは、一般に、所望の薬理的及び／または生理的作用の発現を意味するために本明細書で使用される。作用は、疾患もしくはその症状を完全もしくは部分的に予防するという点で予防的であり得、及び／または疾患及び／または疾患に起因し得る有害作用を部分的もしくは完全に治すという点で治療的であり得る。本明細書で使用される「Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（治療）」は、動物における疾患または症状の任意の治療を包含すると共に、（ａ）疾患もしくは症状に罹りやすくあり得るが、それを有するとはまだ診断されていない対象における疾患もしくは症状の発症予防、（ｂ）疾患もしくは症状の抑制、すなわち、その発症の抑止、または（ｃ）疾患の軽減、すなわち、疾患の退縮誘起を含む。治療薬剤は、疾患または損傷の発生の前、間、または後に投与してよい。進行中の疾患の治療は、特に対象となるものであり、こうした治療では、治療は、患者の望ましくない臨床症状を安定化または低減するものである。そのような治療は、患部組織における機能が完全に失われる前に実施されることが望ましい。対象の治療は、望ましくは、疾患の兆候段階の間、及び場合によっては、疾患の兆候段階の後に投与されることになる。
【００２０】
「個体」、「対象」、「宿主」、及び「患者」という用語は、本明細書で互換的に使用され、診断、治療、または療法が望まれる任意の哺乳類対象を指す。哺乳類には、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類（例えば、ラット、マウス）、ウサギ類（例えば、ウサギ）、有蹄動物（例えば、雌ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ヤギ、及び同様のもの）などが含まれる。
【００２１】
本発明の追加説明の前に、本発明は、記載される特定の実施形態に限定されず、したがって、実施形態は当然異なり得ると理解されることになる。本明細書で使用される専門用語は、特定の実施形態の説明のみを目的としており、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることになるため、本明細書で使用される専門用語による限定は意図されないとも理解されることになる。
【００２２】
値の範囲が与えられる場合、文脈上明確に示されない限り、その範囲の上限値と下限値との間に存在する、下限値の１０分の１の単位までの各介在値と、その記載範囲の任意の他の記載値または介在値とが本発明に包含されると理解される。こうしたより小さな範囲の上限値及び下限値は、そのより小さな範囲に独立して含まれ得るものであり、こうした上限値及び下限値もまた、本発明に包含され、記載範囲において具体的に除外される任意の限界値の対象になる。記載範囲が限界値の一方または両方を含む場合、そうした含まれる限界値のどちらか一方または両方を除外した範囲もまた、本発明に含まれる。
【００２３】
別段の定義がない限り、本明細書で使用される専門用語及び科学用語はすべて、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同一の意味を有する。本発明の実施または試験においては、本明細書に記載のものと同様または同等の任意の方法及び材料を使用することもできるが、ここでは、好ましい方法及び材料が記載される。本明細書で言及される刊行物はすべて、刊行物が関連付けて引用される方法及び／または材料を開示及び説明するために、参照によって本明細書に援用される。
【００２４】
文脈上明確に示されない限り、本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数形は、複数の参照対象を含むことに留意されなくてはならない。したがって、例えば、「ＰＤ−Ｌ１変異体」に対する参照は、複数のそのような変異体を含み、「ＨＬＡポリペプチド」に対する参照は、１つまたは複数のＨＬＡポリペプチド、及び当業者に知られるその同等形態に対する参照を含むなどである。特許請求の範囲は、任意選択の要素はいずれも除外して起草され得ることにさらに留意されたい。したがって、この記載は、請求要素の記載と関連する「単に」、「のみ」、及び同様のものなどの排他的用語の使用、または「負の」限定の使用のための先行的根拠として働くことが意図される。
【００２５】
本発明のある特定の特徴は、明確化するために別々の実施形態と関連して記載されるが、単一の実施形態において組み合わせて提供してもよいと理解される。逆に、本発明のさまざまな特徴は、簡略化するために単一の実施形態と関連して記載されるが、別々に提供するか、または任意の適切な部分的組み合わせにおいて提供してもよい。本発明に関する実施形態の組み合わせはすべて、本発明によって明確に包含され、それぞれ及びあらゆる組み合わせが個別かつ明示的に開示される場合と同様に本明細書に開示される。さらに、さまざまな実施形態及びそれらの要素の部分的組み合わせもすべて、本発明によって明確に包含され、それぞれ及びあらゆるそのような部分的組み合わせが個別かつ明示的に本明細書に開示される場合と同様に本明細書に開示される。
【００２６】
本明細書で議論される刊行物は、単に、本出願の出願日より前にその開示内容が提供されているにすぎない。先行発明であるという理由によって本発明がそのような刊行物に先行する権利を有さないことを承認するものとして本明細書の記載が解釈されることには全くならない。さらに、提供される刊行物の日付は実際の刊行日とは異なり得るものであり、実際の刊行日は個別に確認する必要があり得る。
【００２７】
詳細な説明
本開示は、変異免疫調節ポリペプチド、及び変異免疫調節ペプチドを含む融合ポリペプチドを提供する。本開示は、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド、及びＴ細胞調節多量体ポリペプチドを含む組成物を提供し、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドは、本開示の変異免疫調節ポリペプチドを含む。本開示は、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸、及び核酸を含む宿主細胞を提供する。本開示は、Ｔ細胞の活性の調節方法を提供し、方法は、Ｔ細胞と、本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドとの接触を含む。
【００２８】
本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドは、「ｓｙｎＴａｃポリペプチド」とも称される。本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、変異調節ドメインを含み、変異調節ドメインは、免疫調節ポリペプチド（例えば、Ｔ細胞に存在する免疫調節ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１調節ドメインの親和性と比較して、免疫調節ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１またはＢ７−１）に対する結合親和性の低下を示す。本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、標的Ｔ細胞の活性を調節（例えば、抑制）することができる。本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、標的細胞の特異性を増進させる。
【００２９】
変異免疫調節ポリペプチド
本開示は、変異ＰＤ−Ｌ１調節ポリペプチドを提供する。ヒトＰＤ−Ｌ１の野生型アミノ酸配列は、図２Ａに示される。
【００３０】
野生型ＰＤ−Ｌ１は、ＰＤ１及びＢ７−１に結合する。マウスＰＤ−１のアミノ酸配列は、図３Ａに示され、ヒトＰＤ−１のアミノ酸配列は、図３Ｂに示される。マウスＢ７−１のアミノ酸配列は、図３Ｃに示され、ヒトＢ７−１のアミノ酸配列は、図３Ｄに示される。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ１に対する野生型ＰＤ−Ｌ１の結合と比較して低い親和性でＰＤ−１に結合する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｂ７−１に対する野生型ＰＤ−Ｌ１の結合と比較して低い親和性でＢ７−１に結合する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１に対する野生型ＰＤ−Ｌ１の結合親和性と実質的に同一の親和性でＰＤ−１に結合し、Ｂ７−１に対する野生型ＰＤ−Ｌ１の結合と比較して低い親和性でＢ７−１に結合する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ１に対する野生型ＰＤ−Ｌ１の結合と比較して低い親和性でＰＤ−１に結合し、Ｂ７−１に対する野生型ＰＤ−Ｌ１の結合と比較して低い親和性でＢ７−１に結合する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１に対する野生型ＰＤ−Ｌ１の結合と比較して低い親和性でＰＤ−１に結合し、Ｂ７−１に対する野生型ＰＤ−Ｌ１の結合親和性と実質的に同一の親和性でＢ７−１に結合する。
【００３１】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して、ＰＤ−１に対する結合親和性の低下を示す。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図３Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチドに対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して低い結合親和性でＰＤ−１に結合する。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＰＤ−１に結合する。
【００３２】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して、ＰＤ−１に対する結合親和性の低下を示す。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチドに対する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して低い結合親和性でＰＤ−１に結合する。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＰＤ−１に結合する。
【００３３】
場合によっては、野生型マウスＰＤ−Ｌ１外部ドメインは、下記のアミノ酸配列を含む。
ＦＴ  ＩＴＡＰＫＤＬＹＶＶ  ＥＹＧＳＮＶＴＭＥＣ  ＲＦＰＶＥＲＥＬＤＬ  ＬＡＬＶＶＹＷＥＫＥ  ＤＥＱＶＩＱＦＶＡＧ  ＥＥＤＬＫＰＱＨＳＮ  ＦＲＧＲＡＳＬＰＫＤ  ＱＬＬＫＧＮＡＡＬＱ  ＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧ  ＶＹＣＣＩＩＳＹＧＧ  ＡＤＹＫＲＩＴＬＫＶ  ＮＡＰＹＲＫＩＮＱＲ  ＩＳＶＤＰＡＴＳＥＨ  ＥＬＩＣＱＡＥＧＹＰ  ＥＡＥＶＩＷＴＮＳＤ  ＨＱＰＶＳＧＫＲＳＶ  ＴＴＳＲＴＥＧＭＬＬ  ＮＶＴＳＳＬＲＶＮＡ  ＴＡＮＤＶＦＹＣＴＦ  ＷＲＳＱＰＧＱＮＨＴ  ＡＥＬＩＩＰＥＬＰＡ  ＴＨＰＰＱＮＲ（配列番号１）。
【００３４】
場合によっては、野生型ヒトＰＤ−Ｌ１外部ドメインは、下記のアミノ酸配列を含む。
ＦＴ  ＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶ  ＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣ  ＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬ  ＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥ  ＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧ  ＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳ  ＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤ  ＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱ  ＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧ  ＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧ  ＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶ  ＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲ  ＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥ  ＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹ  ＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳ  ＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴ  ＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬ  ＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮ  ＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴ  ＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨ  ＴＡＥＬＶＩＰＧＮＩ  ＬＮＶＳＩＫＩ（配列番号２）。
【００３５】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対する配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して、ＰＤ−１に対する結合親和性の低下を示す。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図３Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチドに対する配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して低い結合親和性でＰＤ−１に結合する。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対する配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＰＤ−１に結合する。
【００３６】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して、ＰＤ−１に対する結合親和性の低下を示す。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチドに対する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して低い結合親和性でＰＤ−１に結合する。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＰＤ−１に結合する。
【００３７】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、上記のように、ＰＤ−１に対する結合親和性の低下を示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチドに対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を保持する。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して、ＰＤ−１に対する結合親和性の低下を示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチド（例えば、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）の結合親和性の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を保持する。
【００３８】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して、ＰＤ−１ポリペプチドに対する結合親和性の約４０％〜約６０％の低下を示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチド（例えば、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）の結合親和性の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を保持する。
【００３９】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対する配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して、ＰＤ−１ポリペプチドに対する結合親和性の約４０％〜約６０％の低下を示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチド（例えば、図３Ｃに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）の結合親和性の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を保持する。
【００４０】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、１ｎＭ〜１ｍＭのＰＤ−１に対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、１００ｎＭ〜１００μＭのＰＤ−１に対する結合親和性を有する。別の例として、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＰＤ１（例えば、図３に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチド）に対する結合親和性を有する。
【００４１】
本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）と比較して単一のアミノ酸置換を有し得る。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）と比較して２〜１０のアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）と比較して２つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）と比較して３つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）と比較して４つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）と比較して５つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）と比較して６つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）と比較して７つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）と比較して８つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）と比較して９つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）と比較して１０個のアミノ酸置換を有する。
【００４２】
本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、２００〜２４０のアミノ酸長を有し得る。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、２００〜２２０のアミノ酸長、または２２０〜２４０のアミノ酸長を有する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、２００〜２１９のアミノ酸長を有する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、２１９のアミノ酸長を有する。
【００４３】
Ｄ２６の置換
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＡｒｇである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｌａである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ｇｌｙである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ｖａｌである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ｌｅｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ｉｌｅである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｒｇである。場合によっては、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対する図２Ｂ（または配列番号２）に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して、ＰＤ−１ポリペプチドに対する結合親和性の約４０％〜約６０％の低下を示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチド（例えば、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ｂまたは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）の結合親和性の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を保持する。
【００４４】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｄ２６のアミノ酸置換を有する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｄ８のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、アスパラギン酸以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＡｒｇである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｓｐの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｓｐの代わりにＶａｌである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｓｐの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｓｐの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｓｐの代わりにＩｌｅである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｓｐの代わりにＡｒｇである。
【００４５】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｄ８のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸８は、アスパラギン酸以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸８は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸８は、Ａｓｐの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸８は、Ａｓｐの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＡｒｇである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸８は、Ａｓｐの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸８は、Ａｓｐの代わりにＶａｌである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸８は、Ａｓｐの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸８は、Ａｓｐの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸８は、Ｉｌｅである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸８は、Ａｓｐの代わりにＡｒｇである。
【００４６】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｄに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｅに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｆに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｇに示されるアミノ酸配列を含む。
【００４７】
Ｔ３７の置換
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、スレオニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、またはＨｉｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、またはＨｉｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ａｒｇである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｌｙｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｈｉｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｇｌｙである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ａｌａである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｖａｌである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｌｅｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｉｌｅである。場合によっては、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対して図２Ｂ（または配列番号２）に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドが示す結合親和性の約１５％〜約３５％の結合親和性をＰＤ−１ポリペプチドに対して示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチド（例えば、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図３Ｂまたは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）の結合親和性と比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示す（例えば、Ｂ７−１に対する結合親和性の約７０％〜約９０％の低下を示す）。
【００４８】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｔ３７のアミノ酸置換を有する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｔ１９のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、スレオニン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＡｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＡｒｇである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＬｙｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＨｉｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＶａｌである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＩｌｅである。
【００４９】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｔ１９のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、スレオニン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１９は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＡｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＡｒｇである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＬｙｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＨｉｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＶａｌである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＩｌｅである。
【００５０】
Ｉ５４の置換
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、イソロイシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、イソロイシンまたはバリン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、またはＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、ＧｌｕまたはＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ａｌａである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｙである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｌｅｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ａｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｕである。場合によっては、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対して図２Ｂ（または配列番号２）に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドが示す結合親和性の約７０％〜約１００％の結合親和性をＰＤ−１ポリペプチドに対して示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチド（例えば、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図３Ｂまたは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）の結合親和性と比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示す（例えば、Ｂ７−１に対する結合親和性の約４０％〜約９０％の低下を示す）。
【００５１】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、バリン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、イソロイシンまたはバリン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、またはＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、ＧｌｕまたはＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ａｌａである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｙである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｌｅｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ａｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｕである。場合によっては、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対して図２Ａ（または配列番号１）に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドが示す結合親和性の約７０％〜約１００％の結合親和性をＰＤ−１ポリペプチドに対して示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチド（例えば、図３Ｃに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）の結合親和性と比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示す（例えば、Ｂ７−１に対する結合親和性の約４０％〜約９０％の低下を示す）。
【００５２】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｉ５４のアミノ酸置換を有する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｉ３６のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、イソロイシン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、イソロイシンまたはバリン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｉｌｅの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、またはＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｉｌｅの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｉｌｅの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｉｌｅの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｉｌｅの代わりにＡｓｐである。
【００５３】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｖ５４のアミノ酸置換を有する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｖ３６のアミノ酸置換を有する配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、バリン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、イソロイシンまたはバリン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｖａｌの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、またはＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｖａｌの代わりにＧｌｕまたはＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｖａｌの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｖａｌの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｖａｌの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｖａｌの代わりにＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｖａｌの代わりにＧｌｕである。
【００５４】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｉｌｅ−３６のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、イソロイシン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、イソロイシンまたはバリン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｉｌｅの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、またはＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｉｌｅの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｉｌｅの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｉｌｅの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｉｌｅの代わりにＡｓｐである。
【００５５】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｖ３６のアミノ酸置換を有する配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、バリン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、イソロイシンまたはバリン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｖａｌの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、またはＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｖａｌの代わりにＧｌｕまたはＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｖａｌの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｖａｌの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｖａｌの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｖａｌの代わりにＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｖａｌの代わりにＧｌｕである。
【００５６】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｈに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｉに示されるアミノ酸配列を含む。
【００５７】
Ｑ６６の置換
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、グルタミン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸６６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、ＧｌｕまたはＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、Ｇｌｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、Ａｓｐである。場合によっては、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対して図２Ｂ（または配列番号２）に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドが示す結合親和性の約８０％〜約１００％の結合親和性をＰＤ−１ポリペプチドに対して示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチド（例えば、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図３Ｂまたは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）の結合親和性と比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示す（例えば、Ｂ７−１に対する結合親和性の約４０％〜約９０％の低下を示す）。
【００５８】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｑ６６のアミノ酸置換を有する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｑ４８のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、グルタミン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸６６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、Ｇｌｎの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、またはＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、Ｇｌｎの代わりにＧｌｕまたはＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、Ｇｌｎの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、Ｇｌｎの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、Ｇｌｎの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、Ｇｌｎの代わりにＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、Ｇｌｎの代わりにＧｌｕである。
【００５９】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｑ４８のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸４８は、グルタミン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４８は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸４８は、Ｇｌｎの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、またはＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸４８は、Ｇｌｎの代わりにＧｌｕまたはＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸４８は、Ｇｌｎの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸４８は、Ｇｌｎの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸４８は、Ｇｌｎの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸４８は、Ｇｌｎの代わりにＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸４８は、Ｇｌｎの代わりにＧｌｕである。
【００６０】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｊに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｋに示されるアミノ酸配列を含む。
【００６１】
Ｅ７２の置換
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、グルタミン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸７２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、またはＨｉｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、またはＨｉｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ａｒｇである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ｌｙｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ｈｉｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ａｓｐである。場合によっては、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対して図２Ｂ（または配列番号２）に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドが示す結合親和性の約３０％〜約６０％の結合親和性をＰＤ−１ポリペプチドに対して示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチド（例えば、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図３Ｂまたは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）の結合親和性と比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示す（例えば、Ｂ７−１に対する結合親和性の約４０％〜約９０％の低下を示す）。
【００６２】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｅ７２のアミノ酸置換を有する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｅ５４のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、グルタミン酸以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸７２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＡｓｐであり得る。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ｇｌｕの代わりにＡｓｐ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ｇｌｕの代わりにＡｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ｇｌｕの代わりにＡｒｇである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ｇｌｕの代わりにＬｙｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ｇｌｕの代わりにＨｉｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ｇｌｕの代わりにＡｓｐである。
【００６３】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｅ５４のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、グルタミン酸以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＡｓｐであり得る。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｕの代わりにＡｓｐ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｕの代わりにＡｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｕの代わりにＡｒｇである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｕの代わりにＬｙｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｕの代わりにＨｉｓである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｕの代わりにＡｓｐである。
【００６４】
場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｌに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｍに示されるアミノ酸配列を含む。
【００６５】
融合ポリペプチド
本開示は、ＰＤ−Ｌ１融合ポリペプチドを提供する。本開示の融合ポリペプチドは、ａ）本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及びｂ）異種融合パートナーを含む。場合によっては、異種融合パートナーは、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドのＮ末端に融合している。場合によっては、異種融合パートナーは、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドのＣ末端に融合している。場合によっては、本開示のＰＤ−Ｌ１融合ポリペプチドは、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドのＮ末端に融合している第１の異種融合パートナー及び変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドのＣ末端に融合している第２の異種融合パートナーを含む。
【００６６】
本開示のＰＤ−Ｌ１融合ポリペプチドの全長は、２４５アミノ酸〜２０００アミノ酸の範囲にわたり得る。例えば、本開示のＰＤ−Ｌ１融合ポリペプチドは、２４５アミノ酸〜２５０アミノ酸、２５０アミノ酸〜２７５アミノ酸、２７５アミノ酸〜３００アミノ酸、３００アミノ酸〜３５０アミノ酸、３５０アミノ酸〜、３５０アミノ酸〜４００アミノ酸、４００アミノ酸〜、４００アミノ酸〜４５０アミノ酸、４５０アミノ酸〜５００アミノ酸、５００アミノ酸〜６００アミノ酸、６００アミノ酸〜７００アミノ酸、７００アミノ酸〜８００アミノ酸、８００アミノ酸〜９００アミノ酸、９００アミノ酸〜１０００アミノ酸、１０００アミノ酸〜１２５０アミノ酸、１２５０アミノ酸〜１５００アミノ酸、１５００アミノ酸〜１７５０アミノ酸、または１７５０アミノ酸〜２０００アミノ酸の範囲にわたり得る。
【００６７】
適切な融合パートナーとしては、限定されないが、膜貫通型ドメイン、免疫グロブリンＦｃ領域（例えば、ＩｇＧのＦｃ領域）、抗体の抗原結合領域、サイトカイン、免疫調節ドメイン、細胞内シグナリングドメインなどが挙げられる。
【００６８】
Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド
本開示は、多量体（例えば、ヘテロ二量体、ヘテロ三量体）ポリペプチドを提供する。多量体ポリペプチドはＴ細胞調節ポリペプチドであり、本明細書では、「Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド」または「ｓｙｎＴａｃ」（「Ｔ細胞活性化のための免疫学的シナプス」）とも称される。図１Ａ〜１Ｄは、本開示のさまざまなＴ細胞調節多量体ポリペプチドの概略図を示す。本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドは、「ｓｙｎＴａｃポリペプチド」または「多量体ポリペプチド」とも称される。本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドがＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチド（例えば、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチド）を含む場合、そのようなＴ細胞調節多量体ポリペプチドは、本明細書で「ＰＤ−Ｌ１／ｓｙｎＴａｃ」とも称される。
【００６９】
場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドを含む。場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、図１０または図１１に示されるうちの１つのアミノ酸置換を含む変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドを含む。したがって、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＤ２６の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＤ８の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＴ３７の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＴ１９の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＤ４９の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＤ３１の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＬ５３の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＬ３５の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＩ５４（マウスＰＤ−Ｌ１ではＶ５４）の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＩ３６の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＹ５６の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＹ３８の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＹ５６の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＹ３８の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＱ６６の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＱ４８の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＱ６６の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＱ４８の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＥ７２の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＥ５４の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＭ１１５（マウスＰＤ−Ｌ１のＩ１１５）の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＭ９７の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＩ１１６の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＩ９８の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＧ１１９の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＧ１０１の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＧ１２０の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＧ１０２の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＧ１２０の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＧ１０２の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＡ１２１の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＡ１０３の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＤ１２２の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＤ１０４の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＹ１２３の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＹ１０５の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＫ１２４の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＫ１０６の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＲ１２５の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＫ１０７の置換を含む。
【００７０】
上記のように、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ１に対する野生型ＰＤ−Ｌ１の結合親和性と比較して、ＰＤ１に対する結合親和性の低下を示す。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む本開示の多量体ポリペプチドもまた、野生型ＰＤ−Ｌ１（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドと比較して、ＰＤ１に対する結合親和性の低下を示す。
【００７１】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｂ７−１に対する野生型ＰＤ−Ｌ１の結合親和性と比較して低い親和性でＢ７−１に結合する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む本開示の多量体ポリペプチドもまた、野生型ＰＤ−Ｌ１（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドと比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示す。
【００７２】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１に対する野生型ＰＤ−Ｌ１の結合親和性と実質的に同一の親和性でＰＤ−１に結合し、Ｂ７−１に対する野生型ＰＤ−Ｌ１の結合と比較して低い親和性でＢ７−１に結合する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む本開示の多量体ポリペプチドもまた、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドと実質的に同一の親和性をＰＤ−１に対して示し、また同様に、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドと比較して、Ｂ７−１に対して低い結合親和性でＢ７−１に結合する。
【００７３】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ１に対する野生型ＰＤ−Ｌ１の結合と比較して低い親和性でＰＤ−１に結合し、Ｂ７−１に対する野生型ＰＤ−Ｌ１の結合と比較して低い親和性でＢ７−１に結合する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む本開示の多量体ポリペプチドもまた、野生型ＰＤ−Ｌ１（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドと比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示し、また同様に、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドと比較して、Ｂ７−１に対して低い結合親和性でＢ７−１に結合する。
【００７４】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１に対する野生型ＰＤ−Ｌ１の結合と比較して低い親和性でＰＤ−１に結合し、Ｂ７−１に対する野生型ＰＤ−Ｌ１の結合親和性と実質的に同一の親和性でＢ７−１に結合する。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む本開示の多量体ポリペプチドもまた、野生型ＰＤ−Ｌ１（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドと比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示し、また同様に、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドと実質的に同一の親和性をＢ７−１に対して示す。
【００７５】
場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドのＰＤ１に対する結合親和性と比較して、ＰＤ１に対する結合親和性の低下を示す。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、図３Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチドに対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドの結合親和性と比較して低い結合親和性でＰＤ１に結合する。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、ＰＤ１（例えば、図３Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチド）に対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＰＤ１に結合する。別の例として、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチドに対する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドの結合親和性と比較して低い結合親和性でＰＤ１に結合する。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、ＰＤ１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチド）に対する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＰＤ１に結合する。
【００７６】
場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドのＰＤ１に対する結合親和性と比較して、ＰＤ１に対する結合親和性の低下を示す。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、図３Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチドに対する配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドの結合親和性と比較して低い結合親和性でＰＤ１に結合する。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、ＰＤ１（例えば、図３Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチド）に対する配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＰＤ１に結合する。
【００７７】
場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドのＰＤ１に対する結合親和性と比較して、ＰＤ１に対する結合親和性の低下を示す。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチドに対する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドの結合親和性と比較して低い結合親和性でＰＤ１に結合する。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、ＰＤ１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチド）に対する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＰＤ１に結合する。
【００７８】
場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドのＢ７−１に対する結合親和性と比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示す。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、図３Ｃに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチドに対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドの結合親和性と比較して低い結合親和性でＢ７−１に結合する。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、Ｂ７−１（例えば、図３Ｃに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＢ７−１に結合する。別の例として、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチドに対する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドの結合親和性と比較して低い結合親和性でＢ７−１に結合する。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、Ｂ７−１（例えば、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＢ７−１に結合する。
【００７９】
場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドのＢ７−１に対する結合親和性と比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示す。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、図３Ｃに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチドに対する配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドの結合親和性と比較して低い結合親和性でＢ７−１に結合する。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、Ｂ７−１（例えば、図３Ｃに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＢ７−１に結合する。
【００８０】
場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドのＢ７−１に対する結合親和性と比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示す。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチドに対する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドの結合親和性と比較して低い結合親和性でＢ７−１に結合する。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、Ｂ７−１（例えば、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＢ７−１に結合する。
【００８１】
上記のように、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む本開示の多量体ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドと実質的に同一の親和性をＢ７−１（例えば、図３Ｃまたは図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対して示す。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む本開示の多量体ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドの親和性の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の親和性をＢ７−１（例えば、図３Ｃまたは図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対して示す。
【００８２】
上記のように、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む本開示の多量体ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドと実質的に同一の親和性をＰＤ１（例えば、図３Ａまたは図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチド）に対して示す。例えば、場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む本開示の多量体ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、または配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドの親和性の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の親和性をＰＤ１（例えば、図３Ａまたは図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチド）に対して示す。
【００８３】
場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドは、１ｎＭ〜約１ｍＭの、ＰＤ１に対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、１００ｎＭ〜約１００μＭの、ＰＤ１に対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドは、約１００ｎＭ〜５００ｎＭの、ＰＤ１に対する結合親和性を有する。例えば、場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドは、約１００ｎＭ〜約１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約４５０ｎＭ、または約４５０ｎＭ〜約５００ｎＭの、ＰＤ１（例えば、図３Ａまたは図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチド）に対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドは、約５００ｎＭ〜１μＭの、ＰＤ１（例えば、図３Ａまたは図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチド）に対する結合親和性を有する。例えば、場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドは、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、または約９００ｎＭ〜約１μＭの、ＰＤ１（例えば、図３Ａまたは図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチド）に対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドは、約１μＭ〜１０μＭの、ＰＤ１（例えば、図３Ａまたは図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチド）に対する結合親和性を有する。例えば、場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドは、約１μＭ〜２μＭ、約２μＭ〜約３μＭ、約３μＭ〜約４μＭ、約４μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約６μＭ、約６μＭ〜約７μＭ、約７μＭ〜約８μＭ、約８μＭ〜約９μＭ、または約９μＭ〜約１０μＭの、ＰＤ１（例えば、図３Ａまたは図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチド）に対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドは、約１０μＭ〜１００μＭの、ＰＤ１（例えば、図３Ａまたは図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチド）に対する結合親和性を有する。例えば、場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドは、約１０μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約３０μＭ、約３０μＭ〜約４０μＭ、約４０μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約６０μＭ、約６０μＭ〜約７０μＭ、約７０μＭ〜約８０μＭ、約８０μＭ〜約９０μＭ、または約９０μＭ〜約１００μＭの、ＰＤ１（例えば、図３Ａまたは図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチド）に対する結合親和性を有する。
【００８４】
本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）に対して、単一のアミノ酸置換を有することができる。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）に対して、２〜１０個のアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）に対して、２つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）に対して、３つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）に対して、４つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）に対して、５つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）に対して、６つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）に対して、７つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）に対して、８つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）に対して、９つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａもしくは図２Ｂまたは配列番号１もしくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）に対して、１０個のアミノ酸置換を有する。
【００８５】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含み、ここでは、第１のポリペプチドは、アミノ末端（Ｎ末端）からカルボキシル末端（Ｃ末端）の順に、ａ）エピトープ（例えば、Ｔ細胞エピトープ）、ｂ）第１の主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド、及びｃ）免疫調節ポリペプチド（例えば、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含み、第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｂ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドを含む。他の場合では、本開示の多量体ポリペプチドは、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含み、ここでは、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）エピトープ（例えば、Ｔ細胞エピトープ）、及びｂ）第１のＭＨＣポリペプチドを含み、第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）免疫調節ポリペプチド（例えば、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）、ｂ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｃ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドを含む。ある場合には、第１及び第２のＭＨＣポリペプチドはクラスＩ  ＭＨＣポリペプチドであり、例えば、場合によっては、第１のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩβ２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍまたはβ２Ｍ）ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩ重鎖（Ｈ鎖）であり、または第１のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩ  Ｈ鎖であり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩβ２Ｍポリペプチドである。他の場合では、第１及び第２のＭＨＣポリペプチドは、クラスＩＩ  ＭＨＣポリペプチドであり、例えば、場合によっては、第１のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩα−鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩβ−鎖ポリペプチドである。他の場合では、第１のポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩβ−鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩα−鎖ポリペプチドである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドを２つ以上含む。本開示の多量体ポリペプチドが２つ以上の免疫調節ポリペプチドを含む場合は、場合によっては、２つ以上の免疫調節ポリペプチドは同じポリペプチド鎖に存在し、直列状態でもよい。本開示の多量体ポリペプチドが２つ以上の免疫調節ポリペプチドを含む場合は、場合によっては、２つ以上の変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドは、互いに同一のアミノ酸配列を含む。本開示の多量体ポリペプチドが２つ以上の変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドを含む場合は、場合によっては、２つ以上の変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドは別々のポリペプチドに存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドはヘテロ二量体である。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは三量体ポリペプチドである。
【００８６】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）エピトープ及びｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む第１のポリペプチド、ならびにｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、ｉｉ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド、及びｉｉｉ）免疫調節ドメイン（例えば、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む第２のポリペプチドを含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）エピトープ及びｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む第１のポリペプチド、ならびにｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｉｉ）免疫調節ドメイン（例えば、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む第２のポリペプチドを含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）エピトープ及びｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む第１のポリペプチド、ならびにｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）免疫調節ドメイン（例えば、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）、及びｉｉ）第２のＭＨＣポリペプチドを含む第２のポリペプチドを含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）エピトープ、ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチド、及びｉｉｉ）免疫調節ドメイン（例えば、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む第１のポリペプチド、ならびにｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチドを含む第２のポリペプチドを含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドが非Ｉｇ骨格を含む場合は、非Ｉｇ骨格は、ＸＴＥＮペプチド、トランスフェリンポリペプチド、Ｆｃ受容体ポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド、シルク様ポリペプチドまたはシルク−エラスチン様ポリペプチドである。
【００８７】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは一価である。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは多価である。場合によっては、本開示の多価の多量体ポリペプチドは、第１または第２のポリペプチドのうちの１つに免疫グロブリンＦｃポリペプチドを含む。例えば、本開示の多量体ポリペプチド中に存在するＦｃポリペプチドに応じて、多量体ポリペプチドはホモ二量体でもよく、ここでは、多量体ポリペプチドの２つの分子はホモ二量体中に存在し、例えば、２つの分子中に存在するＦｃポリペプチドを介して、多量体ポリペプチドの２つの分子は互いにジスルフィド結合していてもよい。別の例として、本開示の多量体ポリペプチドは、多量体ポリペプチドの３つ、４つまたは５つの分子を含むことができ、ここでは、多量体ポリペプチドの分子は、例えば、分子中に存在するＦｃポリペプチドを介して、互いにジスルフィド結合していてもよい。
【００８８】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、ｉｉ）β２Ｍポリペプチド、及びｉｉｉ）本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、及びｉｉ）β２ＭポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｉ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｉｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドとを含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、ｉｉ）β２Ｍポリペプチド、ｉｉｉ）本開示の第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｖ）本開示の第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及びｖ）本開示の第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）クラスＩ  ＭＨＣ  重鎖、及びｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及び第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、同一のアミノ酸配列を有する。場合によっては、第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及び第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、アミノ酸配列が互いに異なる。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、及びｉｉ）β２ＭポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）本開示の第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｉ）本開示の第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及びｉｉｉ）本開示の第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｖ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｖ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドとを含む。場合によっては、第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及び第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、同一のアミノ酸配列を有する。場合によっては、第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及び第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、アミノ酸配列が互いに異なる。
【００８９】
リンカー
本開示の多量体ポリペプチドは、例えば、エピトープとＭＨＣポリペプチドとの間、ＭＨＣポリペプチドと免疫調節ポリペプチドとの間、ＭＨＣポリペプチドとＩｇ  Ｆｃポリペプチドとの間、第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドと第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドとの間、または第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドと第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドとの間に挿入されたリンカーペプチドを含むことができる。
【００９０】
適切なリンカー（「スペーサー」とも称される）は、容易に選択することができ、いくつかの適切な長さ、例えば、４アミノ酸〜１０アミノ酸、５アミノ酸〜９アミノ酸、６アミノ酸〜８アミノ酸、または７アミノ酸〜８アミノ酸を含めた、１アミノ酸〜２５アミノ酸、３アミノ酸〜２０アミノ酸、２アミノ酸〜１５アミノ酸、３アミノ酸〜１２アミノ酸のうちのいずれかでもよい。適切なリンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸の長さでもよい。
【００９１】
例示的リンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）n 、グリシン−セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）n 、（ＧＳＧＧＳ）n （配列番号８）及び（ＧＧＧＳ）n （配列番号９）を含め、ｎは少なくとも１の整数である）、グリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマー及び当技術分野で既知の他の可動性リンカーが挙げられる。グリシンポリマー及びグリシン−セリンポリマーを使用することができ、ＧｌｙとＳｅｒとは両方とも比較的構造不定であるので、成分間の中立のテザーとして働くことができる。グリシンポリマーを使用することができ、グリシンは、アラニンと比べてでさえ、それよりも有意に多くのファイ−プサイ空間にアクセスし、より長い側鎖を有する残基よりもはるかに制限されない（Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｅｍ．１１１７３−１４２（１９９２）を参照されたい）。例示的リンカーは、限定されないが、ＧＧＳＧ（配列番号１０）、ＧＧＳＧＧ（配列番号１１）、ＧＳＧＳＧ（配列番号１２）、ＧＳＧＧＧ（配列番号１３）、ＧＧＧＳＧ（配列番号１４）、ＧＳＳＳＧ（配列番号１５）などを含めたアミノ酸配列を含むことできる。例示的リンカーは、例えば、ｎが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である、Ｇｌｙ（Ｓｅｒ４）n を含むことができる。場合によっては、リンカーは、ｎが４である、アミノ酸配列（ＧＳＳＳＳ）n を含む。場合によっては、リンカーは、ｎが５である、アミノ酸配列（ＧＳＳＳＳ）n を含む。例示的リンカーは、例えば、ｎが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である、（（Ｇｌｙ4 ）Ｓｅｒ）n （配列番号４５）を含むことができる。例えば、場合によっては、リンカーは、ｎが４である、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）n を含む。場合によっては、リンカーは、ｎが５である、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）n を含む。
【００９２】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド中に存在するリンカーポリペプチドは、本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチド中に存在するシステイン残基とジスルフィド結合を形成することができるシステイン残基を含む。場合によっては、例えば、適切なリンカーは、下記のようなアミノ酸配列（配列番号１６）を含む。
【００９３】
【化１】
2019522466.tif 000003
【００９４】
エピトープ
本開示の多量体ポリペプチド中に存在するエピトープは、約４アミノ酸〜約２５アミノ酸の長さを有することができ、例えば、エピトープは、４アミノ酸（ａａ）〜１０ａａ、１０ａａ〜１５ａａ、１５ａａ〜２０ａａ、または２０ａａ〜２５ａａの長さを有することができる。例えば、本開示の多量体ポリペプチド中に存在するエピトープは、４アミノ酸（ａａ）、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、１０ａａ、１１ａａ、１２ａａ、１３ａａ、１４ａａ、１５ａａ、１６ａａ、１７ａａ、１８ａａ、１９ａａ、２０ａａ、２１ａａ、２２ａａ、２３ａａ、２４ａａ、または２５ａａの長さを有することができる。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチド中に存在するエピトープは、５アミノ酸〜１０アミノ酸、例えば、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、または１０ａａの長さを有する。
【００９５】
本開示の多量体ポリペプチド中に存在するエピトープは、Ｔ細胞に特異的に結合し、すなわち、エピトープはエピトープ特異的Ｔ細胞に特異的に結合する。エピトープ特異的Ｔ細胞は、参照アミノ酸配列を有するエピトープに結合するが、参照アミノ酸配列と異なるエピトープに実質的に結合しない。例えば、エピトープ特異的Ｔ細胞は、参照アミノ酸配列を有するエピトープに結合し、もし結合したとしても、１０-6Ｍ未満、１０-5Ｍ未満または１０-4Ｍ未満の親和性で、参照アミノ酸配列と異なるエピトープに結合する。エピトープ特異的Ｔ細胞は、少なくとも１０-7Ｍ、少なくとも１０-8Ｍ、少なくとも１０-9Ｍまたは少なくとも１０-10 Ｍの親和性で、特異的なエピトープに結合することができる。
【００９６】
適切なエピトープとしては、限定されないが、自己免疫関連抗原に存在するエピトープが挙げられる。自己免疫抗原としては、限定されないが、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質心筋ミオシン（ｍｙｅｌｉｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｉｃ  ｂａｓｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃａｒｄｉａｃ  ｍｙｏｓｉｎ）、細胞表層タンパク質（ＯＳＰ）、ミエリン関連糖タンパク質（ＭＡＧ）、神経フィラメント、インターフェロンオメガ、トランスグルタミナーゼ、芳香族酸カルボキシラーゼ、１７−ヒドロキシラーゼ、２１−ヒドロキシラーゼ、カルジオリピン、ピルビン酸脱水素酵素、β２糖タンパク質Ｉ、ホスファチジルセリン、ａｐｏＨ、アネキシンＡ５、ＬＫＭ−１、可溶性肝抗原、炭酸脱水酵素、ｇｐＩＩｂ−ＩＩＩａまたは１ｂ−ＩＸ、ＸＶＩＩ型コラーゲン、組織トランスグルタミナーゼ、グリアジン、ＧＤ１ａ、ＧＱ１ｂ、ＢＰ−１、ＢＰ−２、表皮トランスグルタミナーゼ、ヒスチジン−ｔＲＮＡ、シグナル識別ペプチド、Ｍｉ−２、Ｊｏ１、グルタミン酸脱炭酸酵素、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、ＩＧＲＰ、インスリン、カルボキシペプチダーゼＨ、インスリノーマ抗原−２、ＩＡ−２ベータ、ＩＣＡ６９、ＺｎＴ８、クロモグラニンＡ、ＩＡＰＰ、ｓｃ１７０、トポイソメラーゼ、ヒストン、基底膜コラーゲンＩＶ型、エノラーゼ、甲状腺ペルオキシダーゼ、サイログロブリン、補体第３成分、電位開口型カルシウムチャネル、Ｑ型カルシウムチャネル、シナプトガグミン（ｓｙｎａｐｔｏｇａｇｍｉｎ）、ムスカリン性アセチルコリン受容体Ｍ１、ＳＭＡ、ＬＫＭ−１、ＬＫＭ−２、ＬＫＭ−３、可溶性肝抗原、ＳＬＡ、ＬＰ、主要末梢ミエリンタンパク質Ｐ０（ｍａｊｏｒ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｍｙｅｌｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐ０）、ミエロペルオキシダーゼ、ＧＱ１ｂ、Ｕ１−ＲＮＰ、Ｋｉｒ４．１、ニコチン性アセチルコリン受容体、ＭｕＳＫタンパク質、ヒポクレチン、オレキシン、ケラチン、ＡＱＰ４、Ｙｏ、Ｈｕ、グルタミン酸受容体、デスモグレイン３、ｐ６２、ｓｐ１００、Ｒｏ、ＬＡ、糖タンパク質ＩＩｂ−ＩＩＩａまたはＩｂ−ＩＸ、ＡＤＡＭＴＳ１３、カルジオリピン、β２糖タンパク質Ｉ、ＨＰＡ−１ａ、ＨＰＡ−５ｂ、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−１、ＴＮＦ−アルファ、及びＧＭＣＳＦが挙げられる。自己免疫抗原としては、１型糖尿病、多発性硬化症、または全身性エリテマトーデスと関連する自己抗原も挙げられる。膵ベータ細胞抗原である膵島特異的グルコース−６−ホスファターゼ触媒サブユニット関連タンパク質（ＩＧＲＰ）ペプチド（ＩＧＲＰ２０６−２１４として知られる）を、例えば、１型糖尿病との関連において自己免疫エピトープとして使用することができる。ＩＧＲＰ２０６−２１４のアミノ酸配列は、ＶＹＬＫＴＮＶＦＬ（配列番号４３）である（例えば、Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８０：４４５８、及びＨａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１５：１８７９を参照のこと）。他の適切なＩＧＲＰペプチドは、例えば、Ｊａｒｃｈｕｍ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２７：３５９において開示されている。１型糖尿病との関連において適切な自己抗原エピトープとしては、プレプロインスリンのペプチドエピトープ（例えば、ＡＬＷＧＰＤＰＡＡＡ（配列番号４４））が挙げられる（例えば、Ｓｋｏｗｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１８：３３９０を参照のこと）。
【００９７】
自己免疫抗原及び関連する自己免疫障害としては、例えば、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、及びミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）（いずれの場合も多発性硬化症（ＭＳ）と関連する）、ＣＤ４４、プレプロインスリン、プロインスリン、インスリン、グルタミン酸脱炭酸酵素（ＧＡＤ６５）、チロシンホスファターゼ様インスリノーマ抗原２（ＩＡ２）、亜鉛輸送体（（ＺｎＴ８）、及び熱ショックタンパク質６０（ＨＳＰ６Ｏ）（いずれの場合もＩ型糖尿病と関連する）、自己免疫性ブドウ膜炎と関連する光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）、アセチルコリン受容体ＡｃｈＲ、及びインスリン様増殖因子−１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）（いずれの場合も重症筋無力症と関連する）、リウマチ熱と関連するベータ−溶血性連鎖球菌由来のＭタンパク質（偽性自己抗原）、関節炎と関連するマクロファージ遊走阻止因子、Ｒｏ／ＬａＲＮＰ複合体、アルファ−フォドリン及びベータ−フォドリン、膵島細胞自己抗原、ポリ（ＡＤＰ）リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）、ＮｕＭＡ、ＮＯＲ−９０、Ｒｏ６０自己抗原、及びｐ２７抗原（いずれの場合もシェーグレン症候群と関連する）、Ｒｏ６０自己抗原、低密度リポタンパク質、Ｕ−１核内低分子リボ核タンパク質複合体のＳｍ抗原（Ｂ／Ｂ’、Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｅ、Ｆ、Ｇ）、及びＲＮＰリボ核タンパク質（いずれの場合もエリテマトーデスと関連する）、ｏｘＬＤＬ、ベータ（２）ＧＰＩ、ＨＳＰ６Ｏ／６５、及びｏｘＬＤＬ／ベータ（２）ＧＰＩ（いずれの場合も粥状動脈硬化と関連する）、特発性拡張型心筋症（ＤＣＭ）と関連する心臓のベータ（１）−アドレナリン受容体、筋炎と関連するヒスチジル−ｔＲＮＡ合成酵素（ＨｉｓＲＳ）、強皮症と関連するトポイソメラーゼＩ、ＩＬ−１７、または熱ショックタンパク質が挙げられる。
【００９８】
ＭＨＣポリペプチド
上記のように、本開示の多量体ポリペプチドはＭＨＣポリペプチドを含む。本開示において、用語「主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド」は、ヒトＭＨＣ（ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）とも称される）ポリペプチド、げっ歯類（例えば、マウス、ラットなど）のＭＨＣポリペプチド及び他の哺乳類種（例えば、ウサギ類（例えば、ウサギ）、非ヒト霊長類、イヌ（例えば、イヌ）、ネコ（例えば、ネコ）、有蹄動物（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ラクダなど）のＭＨＣポリペプチドなどを含めた、様々な種のＭＨＣポリペプチドを含むことを意図する。用語「ＭＨＣポリペプチド」は、クラスＩ  ＭＨＣポリペプチド（例えば、β−２ミクログロブリン及びＭＨＣクラスＩ重鎖）ならびにＭＨＣクラスＩＩポリペプチド（例えば、ＭＨＣクラスＩＩαポリペプチド及びＭＨＣクラスＩＩβポリペプチド）を含むことを意図する。
【００９９】
上記のように、本開示の多量体ポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１及び第２のＭＨＣポリペプチドはクラスＩ  ＭＨＣポリペプチドであり、例えば、場合によっては、第１のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩβ２−ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩ重鎖（Ｈ鎖）である。他の場合では、第１及び第２のＭＨＣポリペプチドは、クラスＩＩ  ＭＨＣポリペプチドであり、例えば、場合によっては、第１のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩα−鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩβ−鎖ポリペプチドである。他の場合では、第１のポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩβ−鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩα−鎖ポリペプチドである。
【０１００】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドのＭＨＣポリペプチドは、ヒトＭＨＣポリペプチドであり、ヒトＭＨＣポリペプチドは、「ヒト白血球抗原」（「ＨＬＡ」）ポリペプチドとも称される。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドのＭＨＣポリペプチドはクラスＩ  ＨＬＡポリペプチド、例えば、β２−ミクログロブリンポリペプチドまたはクラスＩ  ＨＬＡ重鎖ポリペプチドである。クラスＩ  ＨＬＡ重鎖ポリペプチドとしては、ＨＬＡ−Ａ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ−Ｂ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ−Ｃ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ−Ｅ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ−Ｆ重鎖ポリペプチド及びＨＬＡ−Ｇ重鎖ポリペプチドが挙げられる。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドのＭＨＣポリペプチドは、クラスＩＩ  ＨＬＡポリペプチド、例えば、クラスＩＩ  ＨＬＡα鎖またはクラスＩＩ  ＨＬＡβ鎖である。ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとしては、ＭＨＣクラスＩＩ  ＤＰα及びβポリペプチド、ＤＭα及びβポリペプチド、ＤＯＡα及びβポリペプチド、ＤＯＢα及びβポリペプチド、ＤＱα及びβポリペプチドならびにＤＲα及びβポリペプチドが挙げられる。
【０１０１】
一例を挙げると、本開示の多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図５Ａに示されるヒトＨＬＡ−Ａ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列のアミノ酸２５〜３６５に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。
【０１０２】
一例を挙げると、本開示の多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のヒトＨＬＡ−Ａ重鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列のアミノ酸２５〜３６５に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる（配列番号１７）。
【０１０３】
【化２】
2019522466.tif 000004
【０１０４】
別の例として、本開示の多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図５Ｂに示されるヒトＨＬＡ−Ｂ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列のアミノ酸２５〜３６２に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。
【０１０５】
別の例として、本開示の多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図５Ｃに示されるヒトＨＬＡ−Ｃ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列のアミノ酸２５〜３６２に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。
【０１０６】
別の例として、本開示の多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる（配列番号１８）。
【０１０７】
【化３】
2019522466.tif 000005
【０１０８】
本開示の多量体ポリペプチドのβ２−ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドは、ヒトβ２Ｍポリペプチド、非ヒト霊長類β２Ｍポリペプチド、マウスβ２Ｍポリペプチドなどでもよい。ある場合には、β２Ｍポリペプチドは、図６に示されるβ２Ｍアミノ酸配列に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある場合には、β２Ｍポリペプチドは、図６に示されるβ２Ｍアミノ酸配列のアミノ酸２１〜１１９に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１０９】
場合によっては、ＭＨＣポリペプチドは、参照ＭＨＣポリペプチド（参照ＭＨＣポリペプチドは野生型ＭＨＣポリペプチドでもよい）に対して、単一のアミノ酸置換を含み、ここでは、単一のアミノ酸置換は、あるアミノ酸をシステイン（Ｃｙｓ）残基と置換する。そのようなシステイン残基は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドのＭＨＣポリペプチド中に存在する場合には、本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチド鎖中に存在するシステイン残基とジスルフィド結合を形成することができる。
【０１１０】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド中の第１のＭＨＣポリペプチド及び／または本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチド中の第２のＭＨＣポリペプチドは、あるアミノ酸をシステインと置換するためのアミノ酸置換を含み、ここでは、第１のＭＨＣポリペプチド中の置換システインは、第２のＭＨＣポリペプチド中のシステインとジスルフィド結合を形成し、第１のＭＨＣポリペプチド中のシステインは、第２のＭＨＣポリペプチド中の置換システインとジスルフィド結合を形成し、または第１のＭＨＣポリペプチド中の置換システインは、第２のＭＨＣポリペプチド中の置換システインとジスルフィド結合を形成する。
【０１１１】
例えば、場合によっては、ＨＬＡβ２−ミクログロブリン及びＨＬＡクラスＩ重鎖中の残基の以下の対のうちの１つがシステインで置換される（ここでは、残基番号は成熟ポリペプチドのものである）。１）β２Ｍ残基１２、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３６、２）β２Ｍ残基１２、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３７、３）β２Ｍ残基８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３４、４）β２Ｍ残基１０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３５、５）β２Ｍ残基２４、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３６、６）β２Ｍ残基２８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３２、７）β２Ｍ残基９８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基１９２、８）β２Ｍ残基９９、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３４、９）β２Ｍ残基３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基１２０、１０）β２Ｍ残基３１、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基９６、１１）β２Ｍ残基５３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基３５、１２）β２Ｍ残基６０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基９６、１３）β２Ｍ残基６０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基１２２、１４）β２Ｍ残基６３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２７、１５）β２Ｍ残基Ａｒｇ３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｙ１２０、１６）β２Ｍ残基Ｈｉｓ３１、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｎ９６、１７）β２Ｍ残基Ａｓｐ５３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｒｇ３５、１８）β２Ｍ残基Ｔｒｐ６０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｎ９６、１９）β２Ｍ残基Ｔｒｐ６０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｓｐ１２２、２０）β２Ｍ残基Ｔｙｒ６３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｔｙｒ２７、２１）β２Ｍ残基Ｌｙｓ６、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｕ２３２、２２）β２Ｍ残基Ｇｌｎ８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｒｇ２３４、２３）β２Ｍ残基Ｔｙｒ１０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｐｒｏ２３５、２４）β２Ｍ残基Ｓｅｒ１１、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｎ２４２、２５）β２Ｍ残基Ａｓｎ２４、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｌａ２３６、２６）β２Ｍ残基Ｓｅｒ２８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｕ２３２、２７）β２Ｍ残基Ａｓｐ９８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｈｉｓ１９２、及び２８）β２Ｍ残基Ｍｅｔ９９、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｒｇ２３４。ＭＨＣ／ＨＬＡクラスＩ重鎖のアミノ酸の番号付けは、シグナルペプチドを有さない成熟ＭＨＣ／ＨＬＡクラスＩ重鎖に関してである。例えば、シグナルペプチドを含む、図５Ａに示されるアミノ酸配列では、Ｇｌｙ１２０はＧｌｙ１４４である、Ｇｌｎ９６はＧｌｎ１２０である、などである。場合によっては、β２ＭポリペプチドはＲ１２Ｃ置換を含み、ＨＬＡクラスＩ重鎖はＡ２３６Ｃ置換を含み、そのような場合では、β２ＭポリペプチドのＣｙｓ−１２とＨＬＡクラスＩ重鎖のＣｙｓ−２３６との間にジスルフィド結合が生じる。例えば、場合によっては、成熟ＨＬＡ−Ａアミノ酸配列の残基２３６（すなわち、図５Ａに示されるアミノ酸配列の残基２６０）がＣｙｓで置換される。場合によっては、成熟ＨＬＡ−Ｂアミノ酸配列の残基２３６（すなわち、図５Ｂに示されるアミノ酸配列の残基２６０）がＣｙｓで置換される。場合によっては、成熟ＨＬＡ−Ｃアミノ酸配列の残基２３６（すなわち、図５Ｃに示されるアミノ酸配列の残基２６０）がＣｙｓで置換される。場合によっては、図６に示されるアミノ酸配列の残基３２（成熟β２ＭのＡｒｇ−１２に対応する）がＣｙｓで��換される。
【０１１２】
場合によっては、β２Ｍポリペプチドは、下記のアミノ酸配列を含む。
【０１１３】
【化４】
2019522466.tif 000006
【０１１４】
場合によっては、β２Ｍポリペプチドは、下記のアミノ酸配列を含む。
【０１１５】
【化５】
2019522466.tif 000007
【０１１６】
場合によっては、ＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドは、下記のアミノ酸配列（配列番号１９）を含む。
【０１１７】
【化６】
2019522466.tif 000008
【０１１８】
場合によっては、ＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドは、下記のアミノ酸配列（配列番号２０）を含む。
【０１１９】
【化７】
2019522466.tif 000009
【０１２０】
場合によっては、β２Ｍポリペプチドは、下記のアミノ酸配列（配列番号４２）を含む。
【０１２１】
【化８】
2019522466.tif 000010
【０１２２】
本開示の多量体ポリペプチドＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドは、下記のアミノ酸配列（配列番号２１）を含む。ここでは、下線が引かれ、太字のＣｙｓ残基は、多量体ポリペプチド中で互いにジスルフィド結合を形成する。
【０１２３】
【化９】
2019522466.tif 000011
【０１２４】
免疫調節ポリペプチド
本開示の多量体ポリペプチドは、上記のように、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む。したがって、本開示の多量体ポリペプチドは、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドまたは第２のポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む。
【０１２５】
Ｄ２６の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＡｒｇである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ｇｌｙである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ｖａｌである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ｌｅｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ｉｌｅである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対する図２Ｂ（または配列番号２）に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照多量体ポリペプチドの結合親和性と比較して、ＰＤ−１ポリペプチドに対する結合親和性の約４０％〜約６０％の低下を示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチド（例えば、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ｂまたは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドの結合親和性の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を保持する。
【０１２６】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｄ２６のアミノ酸置換を有する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｄ８のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、アスパラギン酸以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｓｐの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｓｐの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＡｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｓｐの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｓｐの代わりにＶａｌである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｓｐの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｓｐの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｓｐの代わりにＩｌｅである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸２６は、Ａｓｐの代わりにＡｒｇである。
【０１２７】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｄ８のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、すなわち、アミノ酸８は、アスパラギン酸以外のものである。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸８は、アスパラギン酸以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸８は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸８は、Ａｓｐの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸８は、Ａｓｐの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、またはＡｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸８は、Ａｓｐの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸８は、Ａｓｐの代わりにＶａｌである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸８は、Ａｓｐの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸８は、Ａｓｐの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸８は、Ｉｌｅである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸８は、Ａｓｐの代わりにＡｒｇである。
【０１２８】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｄに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｅに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｆに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｇに示されるアミノ酸配列を含む。
【０１２９】
Ｔ３７の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、スレオニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、またはＨｉｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、またはＨｉｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ａｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｌｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｈｉｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｇｌｙである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ａｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｖａｌである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｌｅｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｉｌｅである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対して図２Ｂ（または配列番号２）に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照多量体ポリペプチドが示す結合親和性の約１５％〜約３５％の結合親和性をＰＤ−１ポリペプチドに対して示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチド（例えば、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図３Ｂまたは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドの結合親和性と比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示す（例えば、Ｂ７−１に対する結合親和性の約７０％〜約９０％の低下を示す）。
【０１３０】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｔ３７のアミノ酸置換を有する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｔ１９のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、スレオニン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＡｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＡｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＨｉｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＶａｌである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３７は、Ｔｈｒの代わりにＩｌｅである。
【０１３１】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｔ１９のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、すなわち、アミノ酸１９は、スレオニン以外のものである。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、スレオニン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１９は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＡｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＡｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＨｉｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＶａｌである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１９は、Ｔｈｒの代わりにＩｌｅである。
【０１３２】
Ｉ５４の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、イソロイシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、イソロイシンまたはバリン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、またはＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、ＧｌｕまたはＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ａｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｙである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｌｅｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ａｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ａｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対して図２Ｂ（または配列番号２）に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照多量体ポリペプチドが示す結合親和性の約７０％〜約１００％の結合親和性をＰＤ−１ポリペプチドに対して示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチド（例えば、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図３Ｂまたは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドの結合親和性と比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示す（例えば、Ｂ７−１に対する結合親和性の約４０％〜約９０％の低下を示す）。
【０１３３】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、バリン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、イソロイシンまたはバリン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、またはＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、ＧｌｕまたはＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ａｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｙである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｌｅｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ａｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ａｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ａに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対して図２Ａ（または配列番号１）に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照多量体ポリペプチドが示す結合親和性の約７０％〜約１００％の結合親和性をＰＤ−１ポリペプチドに対して示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチド（例えば、図３Ｃに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドの結合親和性と比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示す（例えば、Ｂ７−１に対する結合親和性の約４０％〜約９０％の低下を示す）。
【０１３４】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｉ５４のアミノ酸置換を有する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｉ３６のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、イソロイシン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、イソロイシンまたはバリン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｉｌｅの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、またはＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｉｌｅの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｉｌｅの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｉｌｅの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｉｌｅの代わりにＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｉｌｅの代わりにＡｒｇである。
【０１３５】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｖ５４のアミノ酸置換を有する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｖ３６のアミノ酸置換を有する配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、バリン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、イソロイシンまたはバリン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｖａｌの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、またはＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｖａｌの代わりにＧｌｕまたはＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｖａｌの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｖａｌの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｖａｌの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｖａｌの代わりにＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｖａｌの代わりにＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｖａｌの代わりにＡｒｇである。
【０１３６】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｉｌｅ−３６のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、すなわち、アミノ酸３６は、イソロイシン以外のものである。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、イソロイシン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、イソロイシンまたはバリン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｉｌｅの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、またはＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｉｌｅの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｉｌｅの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｉｌｅの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｉｌｅの代わりにＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｉｌｅの代わりにＡｒｇである。
【０１３７】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｖ３６のアミノ酸置換を有する配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、バリン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、イソロイシンまたはバリン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｖａｌの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、またはＡｓｐである。場合によっては、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｖａｌの代わりにＧｌｕまたはＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｖａｌの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｖａｌの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｖａｌの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｖａｌの代わりにＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｖａｌの代わりにＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３６は、Ｖａｌの代わりにＡｒｇである。
【０１３８】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｈに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｉに示されるアミノ酸配列を含む。
【０１３９】
Ｑ６６の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、グルタミン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸６６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、ＧｌｕまたはＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、Ｇｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、Ａｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対して図２Ｂ（または配列番号２）に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照多量体ポリペプチドが示す結合親和性の約８０％〜約１００％の結合親和性をＰＤ−１ポリペプチドに対して示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチド（例えば、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図３Ｂまたは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドの結合親和性と比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示す（例えば、Ｂ７−１に対する結合親和性の約４０％〜約９０％の低下を示す）。
【０１４０】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｑ６６のアミノ酸置換を有する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｑ４８のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、グルタミン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸６６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、Ｇｌｎの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、またはＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、Ｇｌｎの代わりにＧｌｕまたはＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、Ｇｌｎの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、Ｇｌｎの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、Ｇｌｎの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、Ｇｌｎの代わりにＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸６６は、Ｇｌｎの代わりにＧｌｕである。
【０１４１】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｑ４８のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、すなわち、アミノ酸４８は、グルタミン以外のものである。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸４８は、グルタミン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４８は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸４８は、Ｇｌｎの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、またはＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸４８は、Ｇｌｎの代わりにＧｌｕまたはＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸４８は、Ｇｌｎの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸４８は、Ｇｌｎの代わりにＬｅｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸４８は、Ｇｌｎの代わりにＧｌｙである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸４８は、Ｇｌｎの代わりにＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸４８は、Ｇｌｎの代わりにＧｌｕである。
【０１４２】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｊに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｋに示されるアミノ酸配列を含む。
【０１４３】
Ｅ７２の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、グルタミン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸７２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、またはＨｉｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、またはＨｉｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ａｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ｌｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ｈｉｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ａｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対して図２Ｂ（または配列番号２）に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照多量体ポリペプチドが示す結合親和性の約３０％〜約６０％の結合親和性をＰＤ−１ポリペプチドに対して示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチド（例えば、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図３Ｂまたは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドの結合親和性と比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示す（例えば、Ｂ７−１に対する結合親和性の約４０％〜約９０％の低下を示す）。
【０１４４】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｅ７２のアミノ酸置換を有する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｅ５４のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、グルタミン酸以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸７２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＡｓｐであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ｇｌｕの代わりにＡｓｐ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ｇｌｕの代わりにＡｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ｇｌｕの代わりにＡｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ｇｌｕの代わりにＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ｇｌｕの代わりにＨｉｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸７２は、Ｇｌｕの代わりにＡｓｐである。
【０１４５】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｅ５４のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、すなわち、アミノ酸５４は、グルタミン酸以外のものである。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、グルタミン酸以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＡｓｐであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｕの代わりにＡｓｐ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｕの代わりにＡｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｕの代わりにＡｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｕの代わりにＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｕの代わりにＨｉｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５４は、Ｇｌｕの代わりにＡｓｐである。
【０１４６】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｌに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｍに示されるアミノ酸配列を含む。
【０１４７】
Ｙ５６の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５６は、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５６は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５６は、ＡｓｐまたはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５６は、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５６は、Ａｌａ、Ａｓｐ、またはＡｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５６は、Ａｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５６は、Ａｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸５６は、Ａｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対して図２Ｂ（または配列番号２）に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照多量体ポリペプチドが示す結合親和性の約５０％〜約１００％の結合親和性をＰＤ−１ポリペプチドに対して示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチド（例えば、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図３Ｂまたは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドの結合親和性と比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示す（例えば、Ｂ７−１に対する結合親和性の約６０％〜約９５％の低下を示す）。
【０１４８】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｙ５６のアミノ酸置換を有する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｙ３８のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５６は、チロシン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５６は、Ｔｙｒの代わりにＡｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５６は、Ｔｙｒの代わりにＡｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５６は、Ｔｙｒの代わりにＡｓｐまたはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５６は、Ｔｙｒの代わりにＡｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５６は、Ｔｙｒの代わりにＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸５６は、Ｔｙｒの代わりにＡｌａである。
【０１４９】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｙ３８のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、すなわち、アミノ酸３８は、チロシン以外のものである。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３８は、チロシン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３８は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３８は、Ｔｙｒの代わりにＡｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３８は、Ｔｙｒの代わりにＡｓｐまたはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３８は、Ｔｙｒの代わりにＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３８は、Ｔｙｒの代わりにＡｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３８は、Ｔｙｒの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸３８は、Ｔｙｒの代わりにＡｓｐである。
【０１５０】
Ｇ１１９の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸１１９は、グリシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１１９は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸１１９は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸１１９は、ＡｓｐまたはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸１１９は、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸１１９は、Ａｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸１１９は、Ａｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸１１９は、Ａｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対して図２Ｂ（または配列番号２）に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照多量体ポリペプチドが示す結合親和性の約２０％〜約５０％または約５０％〜１００％の結合親和性をＰＤ−１ポリペプチドに対して示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチド（例えば、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図３Ｂまたは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドの結合親和性と比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示し（例えば、Ｂ７−１に対する結合親和性の約６０％〜約９５％の低下を示す）。
【０１５１】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｇ１１９のアミノ酸置換を有する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｇ１０１のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１１９は、グリシン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１１９は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１１９は、Ｇｌｙの代わりにＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１１９は、Ｇｌｙの代わりにＡｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１１９は、Ｇｌｙの代わりにＡｓｐまたはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１１９は、Ｇｌｙの代わりにＡｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１１９は、Ｇｌｙの代わりにＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１１９は、Ｇｌｙの代わりにＡｌａである。
【０１５２】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｇ１０１のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、すなわち、アミノ酸１０１は、グリシン以外のものである。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１０１は、グリシン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１０１は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１０１は、Ｇｌｙの代わりにＡｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１０１は、Ｇｌｙの代わりにＡｓｐまたはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１０１は、Ｇｌｙの代わりにＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１０１は、Ｇｌｙの代わりにＡｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１０１は、Ｇｌｙの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１０１は、Ｇｌｙの代わりにＡｓｐである。
【０１５３】
Ｇ１２０の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸１２０は、グリシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１２０は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸１２０は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸１２０は、ＡｓｐまたはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸１２０は、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸１２０は、Ａｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸１２０は、Ａｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸１２０は、Ａｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ＰＤ−１（例えば、図３Ｂに示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対して図２Ｂ（または配列番号２）に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む対照多量体ポリペプチドが示す結合親和性の約２０％〜約５０％または約５０％〜１００％の結合親和性をＰＤ−１ポリペプチドに対して示し、野生型Ｂ７−１ポリペプチド（例えば、図３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＢ７−１ポリペプチド）に対する野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（例えば、図３Ｂまたは配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含む対照多量体ポリペプチドの結合親和性と比較して、Ｂ７−１に対する結合親和性の低下を示す（例えば、Ｂ７−１に対する結合親和性の約６０％〜約９５％の低下を示す）。
【０１５４】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｇ１２０のアミノ酸置換を有する図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｇ１０２のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１２０は、グリシン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１２０は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１２０は、Ｇｌｙの代わりにＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１２０は、Ｇｌｙの代わりにＡｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１２０は、Ｇｌｙの代わりにＡｓｐまたはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１２０は、Ｇｌｙの代わりにＡｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１２０は、Ｇｌｙの代わりにＡｓｐである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１２０は、Ｇｌｙの代わりにＡｌａである。
【０１５５】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、Ｇ１０２のアミノ酸置換を有する配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、すなわち、アミノ酸１０２は、グリシン以外のものである。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１０２は、グリシン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１０１は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり得る。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１０２は、Ｇｌｙの代わりにＡｒｇ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１０２は、Ｇｌｙの代わりにＡｓｐまたはＧｌｕである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１０２は、Ｇｌｙの代わりにＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１０２は、Ｇｌｙの代わりにＡｒｇである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１０２は、Ｇｌｙの代わりにＡｌａである。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸１０２は、Ｇｌｙの代わりにＡｓｐである。
【０１５６】
複数の変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ドメイン
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、単一の変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドを含む。
【０１５７】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、２つの変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドを含む。場合によっては、２つの変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドは、ポリペプチド鎖に直列に存在する。場合によっては、２つの変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドは、別々のポリペプチド鎖に存在する。場合によっては、２つの変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドは、多量体ポリペプチドの別々のポリペプチド鎖に存在する。場合によっては、２つの変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、互いに同一のアミノ酸配列を有する。場合によっては、２つの変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、異なるアミノ酸配列を有する（例えば、これら２つは、少なくとも１つのアミノ酸が互いに異なる）。
【０１５８】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、３つの変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドを含む。場合によっては、３つの変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドは、ポリペプチド鎖に直列で存在する。場合によっては、３つの変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドのうちの１つは、多量体ポリペプチドにおいてその他の２つの変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドとは別のポリペプチド鎖に存在する。場合によっては、３つの変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、互いに同一のアミノ酸配列を有する。場合によっては、３つの変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドはそれぞれ、異なるアミノ酸配列を有する（例えば、それぞれ、少なくとも１つのアミノ酸がその他の２つとは異なる）。
【０１５９】
骨格ポリペプチド
本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドは、Ｆｃポリペプチドまたは別の適切な骨格ポリペプチドを含む。
【０１６０】
適切な骨格ポリペプチドとしては、抗体ベースの骨格ポリペプチド及び非抗体ベースの骨格が挙げられる。非抗体ベースの骨格としては、例えば、アルブミン、ＸＴＥＮ（伸長組換え）ポリペプチド、トランスフェリン、Ｆｃ受容体ポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（例えば、Ｈａｓｓｏｕｎｅｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．５０２：２１５を参照されたい。例えば、Ｘがプロリン以外の任意のアミノ酸である（Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ）のペンタペプチド繰り返し単位を含むポリペプチド）、アルブミン結合ポリペプチド、シルク様ポリペプチド（例えば、Ｖａｌｌｕｚｚｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｐｈｉｌｏｓ  Ｔｒａｎｓ  Ｒ  Ｓｏｃ  Ｌｏｎｄ  Ｂ  Ｂｉｏｌ  Ｓｃｉ．３５７：１６５）を参照されたい）、シルク−エラスチン様ポリペプチド（ＳＥＬＰ：例えば、Ｍｅｇｅｅｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．５４：１０７５を参照されたい）などが挙げられる。適切なＸＴＥＮポリペプチドとしては、例えば、ＷＯ２００９／０２３２７０、ＷＯ２０１０／０９１１２２、ＷＯ２００７／１０３５１５、ＵＳ２０１０／０１８９６８２及びＵＳ２００９／００９２５８２に開示されているものが挙げられ、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２７：１１８６）も参照されたい。適切なアルブミンポリペプチドとしては、例えば、ヒト血清アルブミンが挙げられる。
【０１６１】
適切な骨格ポリペプチドは、場合によっては、半減期延長ポリペプチドである。したがって、場合によっては、適切な骨格ポリペプチドは、骨格ポリペプチドを欠く対照多量体ポリペプチドと比較して、多量体ポリペプチドのインビボ半減期（例えば、血清半減期）を延ばす。例えば、場合によっては、骨格ポリペプチドは、骨格ポリペプチドを欠く対照多量体ポリペプチドと比較して、多量体ポリペプチドのインビボ半減期（例えば、血清半減期）を少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍または１００倍超延ばす。一例を挙げると、場合によっては、Ｆｃポリペプチドは、Ｆｃポリペプチドを欠く対照多量体ポリペプチドと比較して、多量体ポリペプチドのインビボ半減期（例えば、血清半減期）を少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍または１００倍超延ばす。
【０１６２】
Ｆｃポリペプチド
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの第１及び／または第２のポリペプチド鎖は、Ｆｃポリペプチドを含む。本開示の多量体ポリペプチドのＦｃポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ、ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ、ヒトＩｇＧ３  Ｆｃ、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃなどでもよい。場合によっては、Ｆｃポリペプチドは、図４Ａ〜４Ｃに示されるＦｃ領域のアミノ酸配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、Ｆｃ領域は、図４Ａに示されるヒトＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、Ｆｃ領域は、図４Ａに示されるヒトＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つＮ７７の置換を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、Ｎ７７Ａ置換を含む。場合によっては、Ｆｃポリペプチドは、図４Ａに示されるヒトＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図４Ａに示されるヒトＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチドのアミノ酸９９〜３２５に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、Ｆｃポリペプチドは、図４Ａに示されるヒトＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図４Ａに示されるヒトＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチドのアミノ酸１９〜２４６に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、Ｆｃポリペプチドは、図４Ｂに示されるヒトＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくと��約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図４Ｂに示されるヒトＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドに対するアミノ酸１〜２７６に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、Ｆｃポリペプチドは、図４Ｃに示されるヒトＩｇＡ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図４Ｃに示されるヒトＩｇＡ  Ｆｃポリペプチドに対するアミノ酸１〜２３４に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１６３】
さらなるポリペプチド
本開示の多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖は、上記のものに加えて、１つまたは複数のポリペプチドを含むことができる。適切なさらなるポリペプチドとしては、エピトープタグ及び親和性ドメインが挙げられる。１つまたは複数のさらなるポリペプチドは、本開示の多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖のＮ末端、本開示の多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖のＣ末端または本開示の多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖の内部に含まれ得る。
【０１６４】
エピトープタグ
適切なエピトープタグとしては、限定されないが、ヘマグルチニン（ＨＡ：例えば、ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（配列番号２２））、ＦＬＡＧ（例えば、ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号２３））、ｃ−ｍｙｃ（例えば、ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ（配列番号２４））などが挙げられる。
【０１６５】
親和性ドメイン
親和性ドメインは、特定または精製に有用な結合パートナー、例えば固体支持体に固定化されたものなどと相互作用することができるペプチド配列を含む。複数の連続した単一アミノ酸、例えばヒスチジンをコードするＤＮＡ配列は、発現タンパク質に融合している場合に、ニッケルセファロースなどの樹脂カラムへの高親和性結合による組換えタンパク質のワンステップ精製に使用することができる。例示的親和性ドメインとしては、Ｈｉｓ５（ＨＨＨＨＨ）（配列番号２５）、ＨｉｓＸ６（ＨＨＨＨＨＨ）（配列番号２６）、Ｃ−ｍｙｃ（ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ）（配列番号２７）、Ｆｌａｇ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）（配列番号２８）、ＳｔｒｅｐＴａｇ（ＷＳＨＰＱＦＥＫ）（配列番号２９）、ヘマグルチニン、例えば、ＨＡタグ（ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ）（配列番号３０）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、チオレドキシン、セルロース結合ドメイン、ＲＹＩＲＳ（配列番号３１）、Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ（配列番号３２）、キチン結合ドメイン、Ｓ−ペプチド、Ｔ７ペプチド、ＳＨ２ドメイン、Ｃ末端ＲＮＡタグ、ＷＥＡＡＡＲＥＡＣＣＲＥＣＣＡＲＡ（配列番号３３）、金属結合ドメイン、例えば、亜鉛結合ドメインまたはカルシウム結合ドメイン、例えば、カルシウム結合タンパク質、例えば、カルモジュリン、トロポニンＣ、カルシニューリンＢ、ミオシン軽鎖、リカバリン、Ｓ−モジュリン、ビジニン、ＶＩＬＩＰ、ニューロカルシン、ヒポカルシン、フリクエニン、カルトラクチン、カルパイン大サブユニット、Ｓ１００タンパク質、パルブアルブミン、カルビンディンＤ９Ｋ、カルビンディンＤ２８Ｋ及びカルレチニン由来のもの、インテイン、ビオチン、ストレプトアビジン、ＭｙｏＤ、Ｉｄ、ロイシンジッパー配列ならびにマルトース結合タンパク質が挙げられる。
【０１６６】
例示的多量体ポリペプチド
本開示の例示的多量体ポリペプチドを以下に記載する。
【０１６７】
Ｄ２６の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、ｉｉ）β２Ｍポリペプチド、及びｉｉｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドであって、アミノ酸２６が、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２６が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＧｌｕであり、例えば、アミノ酸２６が、ＡｌａもしくはＡｒｇである変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、または配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドであって、アミノ酸８が、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸８が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＧｌｕであり、例えば、アミノ酸８が、ＡｌａもしくはＡｒｇである変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、及びｉｉ）β２ＭポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドであって、アミノ酸２６が、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２６が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＧｌｕであり、例えば、アミノ酸２６が、ＡｌａもしくはＡｒｇである変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、または配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドであって、アミノ酸８が、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸８が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＧｌｕであり、例えば、アミノ酸８が、ＡｌａもしくはＡｒｇである変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及びｉｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、ｉｉ）β２Ｍポリペプチド、ｉｉｉ）本開示の第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｖ）本開示の第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及びｖ）本開示の第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及び第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドはそれぞれ、ｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸２６が、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２６が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＧｌｕであり、例えば、アミノ酸２６が、ＡｌａもしくはＡｒｇであるアミノ酸配列を含むか、またはｉｉ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸８が、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸８が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＧｌｕであり、例えば、アミノ酸８が、ＡｌａもしくはＡｒｇであるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、及びｉｉ）β２ＭポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）本開示の第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｉ）本開示の第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｉｉ）本開示の第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｖ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｖ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及び第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドはそれぞれ、ｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸２６が、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２６が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、���ｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＧｌｕであり、例えば、アミノ酸２６が、ＡｌａもしくはＡｒｇであるアミノ酸配列を含むか、またはｉｉ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸８が、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸８が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＧｌｕであり、例えば、アミノ酸８が、ＡｌａもしくはＡｒｇであるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、及びｉｉ）β２ＭポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）本開示の第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｉ）リンカー、ｉｉｉ）本開示の第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｖ）リンカー、ｖ）本開示の第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｖｉ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｖｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及び第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドはそれぞれ、ｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸２６が、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２６が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＧｌｕであり、例えば、アミノ酸２６が、ＡｌａもしくはＡｒｇであるアミノ酸配列を含むか、またはｉｉ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸８が、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸８が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＧｌｕであり、例えば、アミノ酸８が、ＡｌａもしくはＡｒｇであるアミノ酸配列を含む。場合によっては、リンカーは、（ＧＳＳＳＳ）ｎという配列（ｎは、１、２、３、４、または５である）を含む。場合によっては、ｎは、４である。場合によっては、ｎは、５である。
【０１６８】
Ｔ３７の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、ｉｉ）β２Ｍポリペプチド、及びｉｉｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドであって、アミノ酸３７が、スレオニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３７が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであり、例えば、アミノ酸３７が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、もしくはＨｉｓである変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、または配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドであって、アミノ酸１９が、スレオニン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１９が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであり得、例えば、アミノ酸１９が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、もしくはＨｉｓである変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、及びｉｉ）β２ＭポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドであって、アミノ酸３７が、スレオニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３７が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであり、例えば、アミノ酸３７が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、もしくはＨｉｓである変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、または配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドであって、アミノ酸１９が、スレオニン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１９が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであり得、例えば、アミノ酸１９が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、もしくはＨｉｓである変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及びｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、ｉｉ）β２Ｍポリペプチド、ｉｉｉ）本開示の第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｖ）本開示の第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及びｖ）本開示の第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及び第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドはそれぞれ、ｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸３７が、スレオニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３７が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであり、例えば、アミノ酸３７が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、もしくはＨｉｓであるアミノ酸配列を含むか、またはｉｉ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸１９が、スレオニン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１９が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであり得、例えば、アミノ酸１９が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、もしくはＨｉｓであるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、及びｉｉ）β２ＭポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）本開示の第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｉ）本開示の第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｉｉ）本開示の第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｖ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｖ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及び第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドはそれぞれ、ｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８���％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸３７が、スレオニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３７が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであり、例えば、アミノ酸３７が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、もしくはＨｉｓであるアミノ酸配列を含むか、またはｉｉ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸１９が、スレオニン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１９が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであり得、例えば、アミノ酸１９が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、もしくはＨｉｓであるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、及びｉｉ）β２ＭポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）本開示の第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｉ）リンカー、ｉｉｉ）本開示の第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｖ）リンカー、ｖ）本開示の第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｖｉ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｖｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及び第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドはそれぞれ、ｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸３７が、スレオニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３７が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであり、例えば、アミノ酸３７が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、もしくはＨｉｓであるアミノ酸配列を含むか、またはｉｉ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸１９が、スレオニン以外の任意のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１９が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであり得、例えば、アミノ酸１９が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、もしくはＨｉｓであるアミノ酸配列を含む。場合によっては、リンカーは、（ＧＳＳＳＳ）n という配列（ｎは、１、２、３、４、または５である）を含む。場合によっては、ｎは、４である。場合によっては、ｎは、５である。
【０１６９】
Ｙ５６の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、ｉｉ）β２Ｍポリペプチド、及びｉｉｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドであって、アミノ酸５６が、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５６が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸５６が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸５６が、ＡｓｐもしくはＧｌｕであるか、またはアミノ酸５６が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓである変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、あるいは配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドであって、アミノ酸３８が、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５６が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸３８が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸３８が、ＡｓｐもしくはＧｌｕであるか、またはアミノ酸３８がＡｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓである変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、及びｉｉ）β２ＭポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドであって、アミノ酸５６が、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５６が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸５６が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸５６が、ＡｓｐもしくはＧｌｕであるか、またはアミノ酸５６が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓである変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、あるいは配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドであって、アミノ酸３８が、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３８が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸３８が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸３８が、ＡｓｐもしくはＧｌｕであるか、またはアミノ酸３８が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓである変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及びｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、ｉｉ）β２Ｍポリペプチド、ｉｉｉ）本開示の第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｖ）本開示の第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及びｖ）本開示の第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及び第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドはそれぞれ、ｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸５６が、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５６が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸５６が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸５６が、ＡｓｐもしくはＧｌｕであるか、またはアミノ酸５６が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓであるアミノ酸配列を含むか、あるいはｉｉ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸３８が、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３８が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸３８が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸３８が、ＡｓｐもしくはＧｌｕであるか、またはアミノ酸３８が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓであるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、及びｉｉ）β２ＭポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）本開示の第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｉ）本開示の第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｉｉ）本開示の第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｖ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｖ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及び第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドはそれぞれ、ｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸５６が、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５６が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸５６が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸５６が、ＡｓｐもしくはＧｌｕであるか、またはアミノ酸５６が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓであるアミノ酸配列を含むか、あるいはｉｉ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸３８が、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３８が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸３８が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸３８が、ＡｓｐもしくはＧｌｕであるか、またはアミノ酸３８が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓであるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、及びｉｉ）β２ＭポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）本開示の第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｉ）リンカー、ｉｉｉ）本開示の第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｖ）リンカー、ｖ）本開示の第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｖｉ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｖｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及び第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドはそれぞれ、ｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸５６が、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸５６が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸５６が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸５６が、ＡｓｐもしくはＧｌｕであるか、またはアミノ酸５６が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓであるアミノ酸配列を含むか、あるいはｉｉ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸３８が、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸３８が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸３８が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸３８が、ＡｓｐもしくはＧｌｕであるか、またはアミノ酸３８が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓであるアミノ酸配列を含む。場合によっては、リンカーは、（ＧＳＳＳＳ）n という配列（ｎは、１、２、３、４、または５である）を含む。場合によっては、ｎは、４である。場合によっては、ｎは、５である。
【０１７０】
Ｇ１１９の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、ｉｉ）β２Ｍポリペプチド、及びｉｉｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドであって、アミノ酸１１９が、グリシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１１９が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸１１９が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸１１９が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓであるか、またはアミノ酸１１９が、ＧｌｕもしくはＡｓｐである変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、あるいは配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドであって、アミノ酸１０１が、グリシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１０１が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸１０１が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸１０１が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓであるか、またはアミノ酸１０１が、ＧｌｕもしくはＡｓｐである変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、及びｉｉ）β２ＭポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドど、ｂ）ｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドであって、アミノ酸１１９が、グリシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１１９が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸１１９が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸１１９が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓであるか、またはアミノ酸１１９が、ＧｌｕもしくはＡｓｐである変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、あるいは配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドであって、アミノ酸１０１が、グリシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１０１が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸１０１が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸１０１が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓであるか、またはアミノ酸１０１が、ＧｌｕもしくはＡｓｐである変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及びｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、ｉｉ）β２Ｍポリペプチド、ｉｉｉ）本開示の第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｖ）本開示の第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及びｖ）本開示の第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及び第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドはそれぞれ、ｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸１１９が、グリシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１１９が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸１１９が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸１１９が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓであるか、またはアミノ酸１１９が、ＧｌｕもしくはＡｓｐであるアミノ酸配列を含むか、あるいはｉｉ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸１０１が、グリシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１０１が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸１０１が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸１０１が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓであるか、またはアミノ酸１０１が、ＧｌｕもしくはＡｓｐであるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、及びｉｉ）β２ＭポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）本開示の第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｉ）本開示の第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｉｉ）本開示の第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｖ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｖ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及び第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドはそれぞれ、ｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸１１９が、グリシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１１９が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸１１９が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸１１９が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓであるか、またはアミノ酸１１９が、ＧｌｕもしくはＡｓｐであるアミノ酸配列を含むか、あるいはｉｉ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸１０１が、グリシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１０１が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸１０１が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸１０１が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓであるか、またはアミノ酸１０１が、ＧｌｕもしくはＡｓｐであるアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、及びｉｉ）β２ＭポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）本開示の第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｉ）リンカー、ｉｉｉ）本開示の第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｉｖ）リンカー、ｖ）本開示の第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｖｉ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｖｉｉ）ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、第１の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、第２の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及び第３の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドはそれぞれ、ｉ）図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸１１９が、グリシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１１９が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸１１９が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸１１９が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓであるか、またはアミノ酸１１９が、ＧｌｕもしくはＡｓｐであるアミノ酸配列を含むか、あるいはｉｉ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、アミノ酸１０１が、グリシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１０１が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、もしくはＧｌｕであるか、アミノ酸１０１が、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、もしくはＩｌｅであるか、アミノ酸１０１が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓであるか、またはアミノ酸１０１が、ＧｌｕもしくはＡｓｐであるアミノ酸配列を含む。場合によっては、リンカーは、（ＧＳＳＳＳ）n という配列（ｎは、１、２、３、４、または５である）を含む。場合によっては、ｎは、４である。場合によっては、ｎは、５である。
【０１７１】
上記の実施形態のいずれかでは、多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図１０または図１１に示されるうちの１つのアミノ酸の置換を含み得る。例としては、下記のものが挙げられる。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＤ２６の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＤ８の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＴ３７の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＴ１９の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＤ４９の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＤ３１の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＬ５３の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＬ３５の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＩ５４（マウスＰＤ−Ｌ１ではＶ５４）の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＩ３６の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＹ５６の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＹ３８の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＹ５６の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＹ３８の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＱ６６の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＱ４８の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＱ６６の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＱ４８の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＥ７２の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＥ５４の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＭ１１５（マウスＰＤ−Ｌ１のＩ１１５）の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＭ９７の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＩ１１６の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＩ９８の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＧ１１９の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＧ１０１の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＧ１２０の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＧ１０２の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＧ１２０の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＧ１０２の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＡ１２１の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＡ１０３の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＤ１２２の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＤ１０４の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＹ１２３の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＹ１０５の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＫ１２４の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＫ１０６の置換を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列のＲ１２５の置換、または配列番号２に示されるアミノ酸配列のＫ１０７の置換を含む。
【０１７２】
核酸
本開示は、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。本開示は、本開示のＰＤ−Ｌ１融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。
【０１７３】
本開示は、本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの個々のポリペプチド鎖は、別々の核酸にコードされる。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドのすべてのポリペプチド鎖は、単一の核酸にコードされる。場合によっては、第１の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第２の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。場合によっては、単一の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド及び本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０１７４】
多量体ポリペプチドの個々のポリペプチド鎖をコードする別々の核酸
本開示は、本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。上記のように、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの個々のポリペプチド鎖は、別々の核酸にコードされる。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの別々のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列は、転写制御要素、例えば、真核細胞で機能的なプロモーターなどのプロモーターに作動可能に連結され、ここでは、プロモーターは構成的プロモーターでもよいし、誘導性プロモーターでもよい。したがって、本開示は、第１の核酸及び第２の核酸を含む組成物を提供し、第１の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、第２の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含む。
【０１７５】
本開示は、第１の核酸及び第２の核酸を提供し、ここでは、第１の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）エピトープ（例えば、Ｔ細胞エピトープ）、ｂ）第１のＭＨＣポリペプチド、及びｃ）免疫調節ポリペプチド（例えば、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）を含み、第２の核酸は本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｂ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドを含む。適切なＴ細胞エピトープ、ＭＨＣポリペプチド、免疫調節ポリペプチド及びＩｇ  Ｆｃポリペプチドは既に記載されている。場合によっては、第１及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、転写制御要素に作動可能に連結される。場合によっては、転写制御要素は真核細胞で機能的なプロモーターである。場合によっては、核酸は別々の発現ベクター中に存在する。
【０１７６】
本開示は、第１の核酸及び第２の核酸を提供し、ここでは、第１の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）エピトープ（例えば、Ｔ細胞エピトープ）、及びｂ）第１のＭＨＣポリペプチドを含み、第２の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）免疫調節ポリペプチド（例えば、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）、ｂ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｃ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドを含む。適切なＴ細胞エピトープ、ＭＨＣポリペプチド、変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチド及びＩｇ  Ｆｃポリペプチドは既に記載されている。場合によっては、第１及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、転写制御要素に作動可能に連結される。場合によっては、転写制御要素は真核細胞で機能的なプロモーターである。場合によっては、核酸は別々の発現ベクター中に存在する。
【０１７７】
多量体ポリペプチド中に存在する２つ以上のポリペプチドをコードする核酸
本開示は、少なくとも本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドが、第１、第２及び第３のポリペプチドを含む場合は、核酸は、第１、第２及び第３のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間に挿入された、タンパク分解により切断可能なリンカーを含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間に挿入された配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間に挿入されたリボソームスキッピングシグナル（またはシス作用性ヒドロラーゼ要素、ＣＨＹＳＥＬ）を含む。核酸の例は以下に記載され、ここでは、タンパク分解により切断可能なリンカーは、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとをコードするヌクレオチド配列の間に提供され、これらの実施形態のうちのいずれかでは、タンパク分解により切断可能なリンカーをコードするヌクレオチド配列の代わりに、ＩＲＥＳまたはリボソームスキッピングシグナルを使用することができる。
【０１７８】
場合によっては、第１の核酸（例えば、組換え発現ベクター、ｍＲＮＡ、ウイルスＲＮＡなど）は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、第２の核酸（例えば、組換え発現ベクター、ｍＲＮＡ、ウイルスＲＮＡなど）は、本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含む。場合によっては、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び第２のポリペプチドをコードする第２のヌクレオチド配列は、それぞれ、転写制御要素、例えば、真核細胞で機能的なプロモーターなどのプロモーターに作動可能に連結され、ここでは、プロモーターは構成的プロモーターでもよいし、誘導性プロモーターでもよい。
【０１７９】
本開示は、組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供し、ここでは、組換えポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）エピトープ（例えば、Ｔ細胞エピトープ）、ｂ）第１のＭＨＣポリペプチド、ｃ）免疫調節ポリペプチド（例えば、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）、ｄ）タンパク分解により切断可能なリンカー、ｅ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｆ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドを含む。本開示は、組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供し、ここでは、組換えポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）第１のリーダーペプチド、ｂ）エピトープ、ｃ）第１のＭＨＣポリペプチド、ｄ）免疫調節ポリペプチド（例えば、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）、ｅ）タンパク分解により切断可能なリンカー、ｆ）第２のリーダーペプチド、ｇ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｈ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドを含む。本開示は、組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供し、ここでは、組換えポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）エピトープ、ｂ）第１のＭＨＣポリペプチド、ｃ）タンパク分解により切断可能なリンカー、ｄ）免疫調節ポリペプチド（例えば、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）、ｅ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｆ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドを含む。場合によっては、第１のリーダーペプチド及び第２のリーダーペプチドはβ２−Ｍリーダーペプチドである。場合によっては、ヌクレオチド配列は転写制御要素に作動可能に連結される。場合によっては、転写制御要素は真核細胞で機能的なプロモーターである。
【０１８０】
適切なＭＨＣポリペプチドは既に記載されている。場合によっては、第１のＭＨＣポリペプチドはβ２−ミクログロブリンポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである。場合によっては、β２−ミクログロブリンポリペプチドは、図６に示されるアミノ酸配列のいずれか１つに対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−ＫまたはＨＬＡ−Ｌ重鎖である。場合によっては、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図５Ａ〜Ｃのうちの１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、第１のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩアルファ鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩベータ鎖ポリペプチドである。
【０１８１】
適切なＦｃポリペプチドは既に記載されている。場合によっては、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドは、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ４  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＡ  ＦｃポリペプチドまたはＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドである。場合によっては、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドは、図４Ａ〜４Ｃに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１８２】
適切な変異ＰＤ−Ｌ１免疫調節ポリペプチドは既に記載されている。
【０１８３】
タンパク分解により切断可能な適切なリンカーは既に記載されている。場合によっては、タンパク分解により切断可能なリンカーは、ａ）ＬＥＶＬＦＱＧＰ（配列番号３４）、ｂ）ＥＮＬＹＴＱＳ（配列番号３５）、ｃ）ＤＤＤＤＫ（配列番号３６）、ｄ）ＬＶＰＲ（配列番号３７）、及びｅ）ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号３８）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１８４】
場合によっては、エピトープと第１のＭＨＣポリペプチドとの間のリンカーは第１のＣｙｓ残基を含み、第２のＭＨＣポリペプチドは、第２のＣｙｓ残基をもたらすようにアミノ酸置換を含み、その結果、第１及び第２のＣｙｓ残基がリンカーと第２のＭＨＣポリペプチドとの間にジスルフィド結合をもたらす。場合によっては、第１のＭＨＣポリペプチドは第１のＣｙｓ残基をもたらすようにアミノ酸置換を含み、第２のＭＨＣポリペプチドは第２のＣｙｓ残基をもたらすようにアミノ酸置換を含み、その結果、第１のＣｙｓ残基及び第２のＣｙｓ残基が、第１のＭＨＣポリペプチドと第２のＭＨＣポリペプチドとの間にジスルフィド結合をもたらす。
【０１８５】
組換え発現ベクター
本開示は、本開示の核酸を含む組換え発現ベクターを提供する。場合によっては、組換え発現ベクターは非ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、組換え発現ベクターはウイルスコンストラクト、例えば、組換えアデノ随伴ウイルスコンストラクト（例えば、米国特許第７，０７８，３８７号を参照されたい）、組換えアデノウイルスコンストラクト、組換えレンチウイルスコンストラクト、組換えレトロウイルスコンストラクト、非組込みウイルスベクターなどである。
【０１８６】
適切な発現ベクターとしては、限定されないが、ウイルスベクター（例えば、ワクシニアウイルス、ポリオウイルス、アデノウイルス（例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ３５：２５４３  ２５４９，１９９４、Ｂｏｒｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ６：５１５  ５２４，１９９９、Ｌｉ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄｓｏｎ，ＰＮＡＳ  ９２：７７００  ７７０４，１９９５、Ｓａｋａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ５：１０８８  １０９７，１９９９、ＷＯ９４／１２６４９、ＷＯ９３／０３７６９、ＷＯ９３／１９１９１、ＷＯ９４／２８９３８、ＷＯ９５／１１９８４及びＷＯ９５／００６５５を参照されたい）、アデノ随伴ウイルス（例えば、Ａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ９：８１  ８６，１９９８、Ｆｌａｎｎｅｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９４：６９１６  ６９２１，１９９７、Ｂｅｎｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ３８：２８５７  ２８６３，１９９７、Ｊｏｍａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ４：６８３  ６９０，１９９７、Ｒｏｌｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １０：６４１  ６４８，１９９９、Ａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  ５：５９１  ５９４，１９９６、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ｉｎ  ＷＯ９３／０９２３９、Ｓａｍｕｌｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒ．（１９８９）６３：３８２２ ３８２８、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒｏｌ．（１９８８）１６６：１５４−１６５、及びＦｌｏｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ（１９９３）９０：１０６１３ １０６１７を参照されたい）、ＳＶ４０、単純ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、Ｍｉｙｏｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９４：１０３１９  ２３，１９９７、Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７３：７８１２  ７８１６，１９９９を参照されたい）に基づくウイルスベクター）、レトロウイルスベクター（例えば、マウス白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、ならびにラウス肉腫ウイルス、ハーベイ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、レンチウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス及び乳房腫瘍ウイルスなどのレトロウイルスに由来するベクター）などが挙げられる。
【０１８７】
多数の適切な発現ベクターが当業者に既知であり、多くが市販されている。例として、以下のベクターが提供される。真核宿主細胞用：ｐＸＴ１、ｐＳＧ５（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ及びｐＳＶＬＳＶ４０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）。しかし、宿主細胞に適合さえすれば、任意の他のベクターを使用することができる。
【０１８８】
利用する宿主／ベクター系に応じて、構成的及び誘導性プロモーター、転写エンハンサー要素、転写ターミネータなどを含めたいくつかの適切な転写及び翻訳制御要素を発現ベクターで使用することができる（例えば、Ｂｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１５３：５１６−５４４を参照されたい）。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、ＤＮＡ標的化ＲＮＡ及び／または部位特異的修飾ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、制御要素、例えば、プロモーターなどの転写制御要素に作動可能に連結される。転写制御要素は、真核細胞、例えば哺乳類細胞、または原核細胞（例えば、細菌細胞または古細菌細胞）のいずれかで機能的であり得る。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ標的化ＲＮＡ及び／または部位特異的修飾ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、ＤＮＡ標的化ＲＮＡ及び／または部位特異的修飾ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の発現を原核細胞及び真核細胞の両方で可能にする複数の制御要素に作動可能に連結される。
【０１９０】
適切な真核性プロモーター（真核細胞で機能的なプロモーター）の非限定例としては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ、初期及び後期ＳＶ４０、レトロウイルスのロングターミナルリピート（ＬＴＲ）ならびにマウスメタロチオネイン−Ｉ由来のものが挙げられる。適切なベクター及びプロモーターの選択は、十分に当技術分野の通常の技能のレベル内である。発現ベクターは、翻訳開始のためのリボソーム結合部位及び転写ターミネータも含むことができる。発現ベクターは、発現を増幅するための適切な配列を含むこともできる。
【０１９１】
遺伝子改変宿主細胞
本開示は、宿主細胞が本開示の核酸で遺伝子改変されている、遺伝子改変宿主細胞を提供する。
【０１９２】
適切な宿主細胞としては、酵母細胞、昆虫細胞及び哺乳類細胞などの真核細胞が挙げられる。場合によっては、宿主細胞は哺乳類細胞株の細胞である。適切な哺乳類細胞株としては、ヒト細胞株、非ヒト霊長類細胞株、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）細胞株などが挙げられる。適切な哺乳類細胞株としては、限定されないが、ＨｅＬａ細胞（例えば、アメリカ培養細胞株保存機関（ＡＴＣＣ）番号ＣＣＬ−２）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ９６１８、ＣＣＬ６１、ＣＲＬ９０９６）、２９３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５７３）、ベロ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１６５８）、Ｈｕｈ−７細胞、ＢＨＫ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ１０）、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１７２１）、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ−７細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５１）、ＲＡＴ１細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬＩ．３）、ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）、ＨＬＨｅｐＧ２細胞などが挙げられる。
【０１９３】
場合によっては、宿主細胞は、内生のＭＨＣβ２−Ｍを合成しないように遺伝子改変された哺乳類細胞である。
【０１９４】
多量体ポリペプチドの生成方法
本開示は、本開示の多量体ポリペプチドの生成方法を提供する。この方法は、一般に、多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクターで遺伝子改変されている宿主細胞を培養培地で培養すること、ならびに遺伝子改変宿主細胞及び／または培養培地から多量体ポリペプチドを単離することを含む。多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクターで遺伝子改変されている宿主細胞は、「発現宿主」とも称される。上記のように、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの個々のポリペプチド鎖は、別々の組換え発現ベクターにコードされる。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドのすべてのポリペプチド鎖は、単一の組換え発現ベクターにコードされる。
【０１９５】
発現宿主細胞（例えば、発現宿主細胞のライセート）及び／または宿主細胞が培養される培養培地からの多量体ポリペプチドの単離は、タンパク質精製の標準的な方法を使用して行うことができる。
【０１９６】
例えば、ライセートを発現宿主から調製することができ、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、アフィニティークロマトグラフィーまたは他の精製技法を使用してライセートを精製することができる。あるいは、多量体ポリペプチドが発現宿主細胞から培養培地中に分泌される場合は、ＨＰＬＣ、排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、アフィニティークロマトグラフィーまたは他の精製技法を使用して、多量体ポリペプチドを培養培地から精製することができる。場合によっては、使用される組成物は、生成物の調製及びその精製の方法と関係がある混入物と比べて、少なくとも８０重量％、少なくとも約８５重量％、少なくとも約９５重量％または少なくとも約９９．５重量％の所望の生成物を含む。パーセンテージは総タンパク質に基づき得る。
【０１９７】
場合によっては、例えば、多量体ポリペプチドが親和性タグを含む場合は、親和性タグの固定化された結合パートナーを使用して、多量体ポリペプチドを精製することができる。
【０１９８】
組成物
本開示は、医薬組成物を含めて、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む組成物を提供する。本開示は、医薬組成物を含めて、本開示の多量体ポリペプチドを含む組成物を提供する。本開示は、医薬組成物を含めて、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含む組成物を提供する。
【０１９９】
多量体ポリペプチドを含む組成物
本開示の組成物は、本開示の多量体ポリペプチドに加えて、以下の１つまたは複数を含むことができる：塩、例えば、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ2 、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ4 など、緩衝剤、例えば、トリス緩衝液、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸ナトリウム塩（ＭＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル］メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）など、可溶化剤、デタージェント、例えば、非イオン性デタージェント、例えばＴｗｅｅｎ−２０など、プロテアーゼ阻害剤、グリセロールなど。
【０２００】
組成物は、医薬的に許容可能な賦形剤を含むことができ、様々な医薬的に許容可能な賦形剤が当技術分野で既知であり、本明細書で詳細に論じる必要はない。医薬的に許容可能な賦形剤は、例えば、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，１９ｔｈ  Ｅｄ．（１９９５）または最新版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ  ７ｔｈ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、及びＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，３ｒｄ  ｅｄ．Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃを含めた、様々な刊行物で十分に記載されている。
【０２０１】
医薬組成物は、本開示の多量体ポリペプチド及び医薬的に許容可能な賦形剤を含むことができる。場合によっては、対象の医薬組成物は対象への投与に適しており、例えば、無菌である。例えば、いくつかの実施形態では、対象の医薬組成物はヒト対象への投与に適しており、例えば、ここでは、組成物は無菌であり、検出可能な発熱物質及び／または他の毒素を含んでいない。
【０２０２】
タンパク質組成物は、他の成分、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカン、セルロース、グルコース、ショ糖、マグネシウム、カーボネートなどを含むことができる。組成物は、生理的条件に近づけるために必要とされる医薬的に許容可能な補助物質、例えば、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、毒性調整剤など、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウム、塩酸塩、硫酸塩、溶媒和化合物（例えば、混合イオン性塩、水、有機物）、水和物（例えば、水）などを含むことができる。
【０２０３】
例えば、組成物は、水溶液、粉体、顆粒、錠剤、丸剤、坐剤、カプセル、懸濁液、スプレーなどを含むことができる。組成物は、以下に記載の様々な投与経路に応じて製剤化することができる。
【０２０４】
本開示の多量体ポリペプチドが（例えば、皮下に、腹腔内に、筋肉内に、及び／または静脈内に）直接的に組織に注射剤として投与される場合、製剤は、すぐに使える剤形として、または非水性形態（例えば、再構成可能な貯蔵安定性粉末剤）または水性形態、例えば、医薬的に許容可能な担体及び賦形剤から構成される液剤として、提供することができる。タンパク質含有製剤は、投与後に対象タンパク質の血清半減期を延ばすように提供することもできる。例えば、タンパク質は、コロイドとして調製されたリポソーム製剤、または血清半減期を延ばすための他の従来の技法で提供することができる。例えば、Ｓｚｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．１９８０  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９：４６７、米国特許第４，２３５，８７１号、第４，５０１，７２８号及び第４，８３７，０２８号に記載されているように、リポソームを調製するために様々な方法が利用可能である。制御放出形態または徐放性形態で調製物を提供することもできる。
【０２０５】
非経口投与に適した製剤の他の例としては、等張無菌注射液、抗酸化剤、静菌薬及び製剤を目的のレシピエントの血液と等張にする溶質、懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤及び防腐剤が挙げられる。例えば、対象の医薬組成物は、容器、例えば無菌容器、例えば注射器中に存在していてもよい。製剤は、単位用量または多用量の密閉容器、例えば、アンプル及びバイアル中に提供することができ、注射のために無菌液体賦形剤、例えば水を使用直前に添加することしか必要としないフリーズドライ（凍結乾燥）状態で貯蔵することができる。即時の注射液及び懸濁液は、無菌の粉末剤、顆粒剤及び錠剤から調製することができる。
【０２０６】
製剤中の本開示の多量体ポリペプチドの濃度は、広範に変動する（例えば、重量基準で、約０．１％未満（通常、約２％または少なくとも２％）〜２０％から５０％程度またはそれ以上）可能性があり、選択される特定の投与様式及び患者の要求に従って、主として流体量、粘性及び患者に基づく因子を基に通常選択される。
【０２０７】
本開示は、本開示の組成物、例えば液体組成物を含む容器を提供する。容器は、例えば、注射器、アンプルなどでもよい。場合によっては、容器は無菌である。場合によっては、容器と組成物との両方が無菌である。
【０２０８】
本開示は、医薬組成物を含めて、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む組成物を提供する。組成物は、ａ）本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、及びｂ）多量体ポリペプチドについて上述した賦形剤を含むことができる。場合によっては、賦形剤は医薬的に許容可能な賦形剤である。
【０２０９】
核酸または組換え発現ベクターを含む組成物
本開示は、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含む組成物、例えば医薬組成物を提供する。多種多様の医薬的に許容可能な賦形剤が当技術分野で既知であり、本明細書で詳細に論じる必要はない。医薬的に許容可能な賦形剤は、例えば、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ  ７ｔｈ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、及びＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，３ｒｄ  ｅｄ．Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃを含めた、様々な刊行物に十分に記載されている。
【０２１０】
本開示の組成物は、ａ）対象の核酸または組換え発現ベクター、及びｂ）緩衝液、界面活性剤、抗酸化剤、親水性ポリマー、デキストリン、キレート剤、懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、静菌剤、湿潤剤及び防腐剤の１つまたは複数を含むことができる。適切な緩衝液としては、限定されないが、（例えば、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ−トリス（ヒドロキシメチル）メタン（ビス−トリス）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’３−プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳまたはＨＥＰＰＳ）、グリシルグリシン、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタン−スルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、炭酸水素ナトリウム、３−（Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）−メチル−アミノ）−２−ヒドロキシ−プロパンスルホン酸）ＴＡＰＳＯ、（Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−グリシン（トリシン）、トリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン（トリス）など）が挙げられる。適切な塩としては、例えば、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ2 、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ4 などが挙げられる。
【０２１１】
本開示の医薬製剤は、本開示の核酸または組換え発現ベクターを約０．００１％〜約９０％（ｗ／ｗ）の量で含むことができる。以下の製剤の説明では、「対象の核酸または組換え発現ベクター」は、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含むと理解される。例えば、いくつかの実施形態では、対象の製剤は、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含む。
【０２１２】
対象の核酸または組換え発現ベクターを、他の化合物または化合物の混合物と混合する、カプセル化する、コンジュゲートするまたは結合させることができ、そのような化合物としては、例えば、リポソームまたは受容体標的分子を挙げることができる。対象の核酸または組換え発現ベクターを、取込み、分配及び／また吸収を助ける１種または複数の成分と製剤中で組み合わせることができる。
【０２１３】
対象の核酸または組換え発現ベクターの組成物は、限定されないが、錠剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、液体シロップ剤、軟質ゲル剤、坐剤及び浣腸剤などの多くの考えられる剤形のうちのいずれかに製剤化することができる。対象の核酸または組換え発現ベクターの組成物は、水性、非水性または混合媒体の懸濁剤として製剤化することもできる。水性懸濁剤は、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール及び／またはデキストランを含めた、懸濁剤の粘性を高める物質をさらに含むことができる。懸濁剤は、安定化剤を含むこともできる。
【０２１４】
対象の核酸または組換え発現ベクターを含む製剤は、リポソーム製剤でもよい。本明細書で使用する場合、用語「リポソーム」は、球状の二重層（複数可）に配置された両親媒性脂質から構成される小胞を意味する。リポソームは、親油性材料から形成される膜及び送達される組成物を含む水性の内部を有する、単層または多層状の小胞である。陽イオン性リポソームは、負に荷電したＤＮＡ分子と相互作用して安定な複合体を形成することができる、正に荷電したリポソームである。ｐＨ感受性であるまたは負に荷電したリポソームは、ＤＮＡとの複合体化ではなく、ＤＮＡを封入すると考えられている。陽イオン性及び非陽イオン性リポソームの両方を、対象の核酸または組換え発現ベクターを送達するために使用することができる。
【０２１５】
リポソームは「立体的に安定化した」リポソームも含み、本明細書で使用する場合、この用語は、リポソームに組み込まれた場合に、特殊化した脂質を欠くリポソームと比較して循環寿命を高める１種または複数種の特殊化した脂質を含むリポソームを指す。立体的に安定化したリポソームの例は、リポソームの小胞形成脂質部分の一部が１種または複数種の糖脂質を含むか、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分などの１種または複数種の親水性ポリマーで誘導体化されているものである。リポソーム及びその使用は、米国特許第６，２８７，８６０号にさらに記載されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２１６】
本開示の製剤及び組成物は界面活性剤を含むこともできる。薬物製品、製剤及び乳剤における界面活性剤の使用は当技術分野で周知である。界面活性剤及びその使用は、米国特許第６，２８７，８６０号にさらに記載されている。
【０２１７】
一実施形態では、核酸の効率的な送達をもたらすために、様々な浸透促進剤が含まれる。細胞膜を超えて非親油性薬物が拡散するのを助けることに加えて、浸透促進剤は、親油性薬物の透過性も高める。浸透促進剤は、５つの広いカテゴリー、すなわち、界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート剤及び非キレート化非界面活性剤のうちの１つに属するように分類され得る。浸透促進剤及びその使用は米国特許第６，２８７，８６０号にさらに記載されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２１８】
経口投与用の組成物及び製剤としては、粉末剤もしくは顆粒剤、マイクロ粒子剤、ナノ粒子剤、水もしくは非水性媒体中の懸濁剤もしくは溶液剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、サッシェ剤、錠剤またはミニ錠剤が挙げられる。増粘剤、着香剤、希釈剤、乳化剤、分散助剤または結合剤が望ましい場合もある。適切な経口製剤としては、対象のアンチセンス核酸が、１種または複数の浸透促進剤、界面活性剤及びキレート剤とともに投与されるものが挙げられる。適切な界面活性剤としては、限定されないが、脂肪酸及び／またはそのエステルもしくは塩、胆汁酸及び／またはその塩が挙げられる。適切な胆汁酸／塩及び脂肪酸ならびにその使用は、米国特許第６，２８７，８６０号にさらに記載されている。浸透促進剤の組み合わせ、例えば、胆汁酸／塩と組み合わせた脂肪酸／塩も適切である。例示的な適切な組み合わせは、ラウリン酸、カプリン酸及びＵＤＣＡのナトリウム塩である。さらなる浸透促進剤としては、限定されないが、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル及びポリオキシエチレン−２０−セチルエーテルが挙げられる。適切な浸透促進剤としては、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド、トリエタノールアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、２−ピロリドン及びそれらの誘導体、テトラヒドロフルフリルアルコールならびにＡＺＯＮＥ（商標）も挙げられる。
【０２１９】
治療方法
本発明は、個体においてエピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する方法を提供し、この方法は、個体においてエピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節するために有効な量の本開示の多量体ポリペプチドまたは多量体ポリペプチドをコードする１種または複数の核酸を個体に投与することを含む。場合によっては、本開示の治療方法は、本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１種または複数の組換え発現ベクターをそれらを必要とする個体に投与することを含む。場合によっては、本開示の治療方法は、本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１種または複数のｍＲＮＡ分子をそれらを必要とする個体に投与することを含む。場合によっては、本開示の治療方法は、本開示の多量体ポリペプチドをそれらを必要とする個体に投与することを含む。
【０２２０】
本開示は、個体においてエピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する方法を提供し、この方法は、有効量の、本開示の多量体ポリペプチドまたは多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１種もしくは複数の核酸（例えば、発現ベクター、ｍＲＮＡなど）を個体に投与することを含み、ここでは、多量体ポリペプチドは、個体においてエピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する。エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節することは、個体において疾患または障害を治療することができる。したがって、本開示は、有効量の本開示の多量体ポリペプチドをそれらを必要とする個体に投与することを含む治療方法を提供する。
【０２２１】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する免疫調節ポリペプチド（例えば、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）は抑制ポリペプチドであり、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む多量体ポリペプチドは、エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を抑制する。場合によっては、エピトープは、自己エピトープであり、多量体ポリペプチドは、自己エピトープに特異的なＴ細胞の活性を選択的に抑制する。
【０２２２】
本開示は、個体において自己免疫障害を治療する方法を提供し、この方法は、有効量の、本開示の多量体ポリペプチドまたは多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１種もしくは複数の核酸を個体に投与することを含み、ここでは、多量体ポリペプチドは自己エピトープであるＴ細胞エピトープを含み、多量体ポリペプチドは、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む。場合によっては、多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、多量体ポリペプチドの投与前の、または多量体ポリペプチドを用いる投与がない状態の個体における自己反応性Ｔ細胞の数及び／または活性と比較して、自己反応性Ｔ細胞の数及び／または活性を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％減らす量である。場合によっては、多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、個体においてＴｈ２サイトカインの生成を低減させる量である。場合によっては、多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、個体において自己免疫疾患に付随する１つまたは複数の症状を回復させる量である。
【０２２３】
本開示の方法での治療に適した自己免疫障害としては、限定されないが、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性アジソン病、副腎の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性の卵巣炎及び精巣炎、自己免疫性血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー−皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群（限定された皮膚型の全身性硬化症としても知られる）、寒冷凝集素症、クローン病、円板状ループス、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症−線維筋炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギラン・バレー、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、過敏性腸疾患（ｉｒｒｉｔａｂｌｅ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ）（ＩＢＤ）、ＩｇＡニューロパチー、若年性関節炎、扁平苔癬、エリテマトーデス、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、１型糖尿病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎及び皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティフ・マン症候群、全身性エリテマトーデス、エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎（疱疹状皮膚炎血管炎（ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ  ｈｅｒｐｅｔｉｆｏｒｍｉｓ  ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ）など）、白斑、及びウェゲナー肉芽腫症が挙げられる。
【０２２４】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する免疫調節ポリペプチド（例えば、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド）は抑制ポリペプチドであり、変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む多量体ポリペプチドは、エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を抑制する。場合によっては、エピトープは、同種移植片（例えば、皮膚同種移植片、肝臓同種移植片、腎臓同種移植片、心臓同種移植片、骨同種移植片、軟骨同種移植片、肺同種移植片、細胞同種移植片（例えば、骨髄同種移植片）など）に存在するエピトープであり、多量体ポリペプチドは、同種移植片に存在する抗原に特異的なＴ細胞の活性を選択的に抑制する。
【０２２５】
本開示は、個体における同種移植片拒絶の抑制方法を提供し、方法は、個体（例えば、同種移植片のレシピエントである個体、または間もなく同種移植片のレシピエントになる個体）に対して、本開示の多量体ポリペプチド、または多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１つもしくは複数の核酸を有効量で投与することを含み、多量体ポリペプチドは、同種移植片に存在するエピトープであるＴ細胞エピトープを含むと共に、多量体ポリペプチドは、本開示の変異ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含む。場合によっては、多量体ポリペプチドの「有効量」は、それを必要とする個体に１つまたは複数の用量で投与されると、多量体ポリペプチドの投与前の個体、または多量体ポリペプチドが投与されない個体におけるアロ反応性（同種移植片反応性）のＴ細胞の数及び／または活性と比較して、アロ反応性（同種移植片反応性）のＴ細胞の数及び／または活性を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％低減する量である。場合によっては、多量体ポリペプチドの「有効量」は、それを必要とする個体に１つまたは複数の用量で投与されると、個体における同種移植片の生存期間を延ばす量であり、例えば、個体における同種移植片の生存期間は、多量体ポリペプチドが投与されない個体における同種移植片の生存期間と比較して、少なくとも２５％，少なくとも５０％、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、または少なくとも１００倍延びる。場合によっては、多量体ポリペプチドの「有効量」は、それを必要とする個体に１つまたは複数の用量で投与されると、個体における同種移植片拒絶と関連する１つまたは複数の症状を寛解させる量である。
【０２２６】
上記のように、場合によっては、対象の治療方法の実施において、本開示の多量体ポリペプチドは、それ自体がポリペプチドとしてそれらを必要とする個体に投与される。他の場合では、対象の治療方法の実施において、本開示の多量体ポリペプチドをコードする１種または複数のヌクレオチド配列を含む核酸がそれらを必要とする個体に投与される。したがって、他の場合では、本開示の１種または複数の核酸、例えば、本開示の１種または複数の組換え発現ベクターがそれらを必要とする個体に投与される。
【０２２７】
製剤
適切な製剤は既に記載されており、適切な製剤は医薬的に許容可能な賦形剤を含む。場合によっては、適切な製剤は、ａ）本開示の多量体ポリペプチド、及びｂ）医薬的に許容可能な賦形剤を含む。場合によっては、適切な製剤は、ａ）本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸、及びｂ）医薬的に許容可能な賦形剤を含み、ある場合には、核酸はｍＲＮＡである。場合によっては、適切な製剤は、ａ）本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の核酸、ｂ）本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の核酸、及びｃ）医薬的に許容可能な賦形剤を含む。場合によっては、適切な製剤は、ａ）本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクター、及びｂ）医薬的に許容可能な賦形剤を含む。場合によっては、適切な製剤は、ａ）本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の組換え発現ベクター、ｂ）本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の組換え発現ベクター、及びｃ）医薬的に許容可能な賦形剤を含む。
【０２２８】
医薬的に許容可能な適切な賦形剤は既に記載されている。
【０２２９】
投薬量
適切な投薬量は、様々な臨床因子に基づいて、主治医または資格を有する他の医療関係者が決定することができる。医学分野で周知であるように、任意のある患者に対する投薬量は、患者のサイズ、体表面積、年齢、投与される特定のポリペプチドまたは核酸、患者の性別、投与の時間及び経路、全体的な健康状態ならびに同時に投与される他の薬物を含めた、多くの因子に依存する。本開示の多量体ポリペプチドは、投与あたり１ｎｇ／ｋｇ体重〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ体重〜５ｍｇ／ｋｇ体重の間の量で投与することができるが、特に前述した因子を考慮すれば、この例示的範囲より低いまたは高い用量が想定される。レジメンが持続注入である場合は、これはまた、１μｇ〜１０ｍｇ／キログラム体重／分の範囲でもよい。
【０２３０】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの適切な用量は、０．０１μｇ〜１００ｇ／ｋｇ体重、０．１μｇ〜１０ｇ／ｋｇ体重、１μｇ〜１ｇ／ｋｇ体重、１０μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、１００μｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重または１００μｇ〜１ｍｇ／ｋｇ体重である。体液または組織における投与される薬剤の測定した滞留時間及び濃度に基づいて、当業者は投薬の反復速度を容易に推定することができる。成功した治療に続いて、病態の再発を予防するために、維持療法を患者に受けさせることが望ましい場合もあり、ここでは、本開示の多量体ポリペプチドは、０．０１μｇ〜１００ｇ／ｋｇ体重、０．１μｇ〜１０ｇ／ｋｇ体重、１μｇ〜１ｇ／ｋｇ体重、１０μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、１００μｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重または１００μｇ〜１ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の維持量で投与される。
【０２３１】
当業者は、特定の多量体ポリペプチド、症状の重症度及び副作用に対する対象の感受性に応じて、用量レベルが変動し得ることを容易に認識するであろう。所与の化合物に対する好ましい投薬量は、様々な手段で当業者によって容易に決定される。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、複数回用量の本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターが投与される。本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターの投与頻度は、様々な因子のうちのいずれか、例えば、症状の重症度などに応じて変動し得る。例えば、いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは、月１回、月２回、月３回、隔週（ｑｏｗ）、週１回（ｑｗ）、週２回（ｂｉｗ）、週３回（ｔｉｗ）、週４回、週５回、週６回、隔日（ｑｏｄ）、１日１回（ｑｄ）、１日２回（ｑｉｄ）または１日３回（ｔｉｄ）投与される。
【０２３３】
本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターの投与の持続期間、例えば、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターが投与される期間は、様々な因子のうちのいずれか、例えば、患者の応答などに応じて変動し得る。例えば、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは、約１日〜約１週、約２週〜約４週、約１か月〜約２か月、約２か月〜約４か月、約４か月〜約６か月、約６か月〜約８か月、約８か月〜約１年、約１年〜約２年、または約２年〜約４年、またはそれ以上に及ぶ期間にわたって投与することができる。
【０２３４】
投与経路
活性薬剤（本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクター）は、インビボ及びエキソビボの方法を含めた、薬物送達に適した任意の利用可能な方法及び経路、ならびに全身的及び局部的投与経路を使用して、個体に投与される。
【０２３５】
従来の医薬的に許容可能な投与経路としては、腫瘍内、腫瘍周囲、筋肉内、気管内、頭蓋内、皮下、皮内、局所適用、静脈内、動脈内、直腸、経鼻、経口ならびに他の経腸及び非経口投与経路が挙げられる。投与経路は、必要であれば、多量体ポリペプチド及び／または所望の効果に応じて、組み合わせることができ、または調整することができる。本開示の多量体ポリペプチドまたは本開示の核酸もしくは組換え発現ベクターは、単回用量または複数回用量で投与することができる。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは静脈内に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは筋肉内に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは局部的に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは腫瘍内に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは腫瘍周囲に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは頭蓋内に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは皮下に投与される。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチドは静脈内に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチドは筋肉内に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチドは局部的に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチドは腫瘍内に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチドは腫瘍周囲に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチドは頭蓋内に投与される。いくつかの実施形態では、多量体ポリペプチドは皮下に投与される。
【０２３８】
本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは、全身的または局部的経路を含めた、従来の薬物の送達に適した任意の利用可能な従来の方法及び経路を使用して、宿主に投与することができる。一般に、本発明が意図する投与経路としては、必ずしも限定されるわけではないが、経腸、非経口または吸入経路が挙げられる。
【０２３９】
吸入投与以外の非経口投与経路としては、必ずしも限定されるわけではないが、局所、経皮、皮下、筋肉内、眼窩内、嚢内、髄腔内、胸骨内、腫瘍内、腫瘍周囲及び静脈内経路、すなわち、消化管経由以外の任意の投与経路が挙げられる。非経口投与は、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターの全身的または局部的送達をもたらすために行うことができる。全身的送達が所望される場合は、投与は、典型的には、侵襲的または全身的に吸収される、医薬調製物の局所または粘膜投与を含む。
【０２４０】
治療に適する対象
本開示の方法による治療に適する対象としては、がんを有すると診断された個体、がんを治療したが、治療に応答することができなかった個体、及びがんを治療し、初期に応答したが、その後に治療に対して抵抗性になった個体を含めた、がんを有する個体が挙げられる。本開示の方法による治療に適する対象としては、感染を有すると診断された個体、及び感染を治療したが、治療に応答することができなかった個体を含めた、感染（例えば、病原体、例えば、細菌、ウイルス、原生動物などによる感染）を有する個体が挙げられる。本開示の方法による治療に適する対象としては、細菌感染を有すると診断された個体、及び細菌感染を治療したが、治療に応答することができなかった個体を含めた、細菌感染を有する個体が挙げられる。本開示の方法による治療に適する対象としては、ウイルス感染を有すると診断された個体、及びウイルス感染を治療したが、治療に応答することができなかった個体を含めた、ウイルス感染を有する個体が挙げられる。本開示の方法による治療に適する対象としては、自己免疫疾患を有すると診断された個体、及び自己免疫疾患を治療したが、治療に応答することができなかった個体を含めた、自己免疫疾患を有する個体が挙げられる。
【実施例】
【０２４１】
以下の実施例は、本発明の製造方法及び使用方法を当業者に完全に開示及び説明するために提供され、本発明者らが自身の発明であると見なすものの範囲を限定することを意図せず、また、以下の実験がすべての、または唯一の実施した実験であることを示すことも意図しない。使用される数字（例えば、量、温度など）に関して正確性を確実にするために努力したが、いくらかの実験上の誤差及び偏差は考慮されるべきである。別段指示がない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧または大気圧付近である。標準的な省略形を使用することができ、例えば、ｂｐ、塩基対（複数可）：ｋｂ、キロベース（複数可）：ｐｌ、ピコリットル（複数可）：ｓまたはｓｅｃ、秒（複数可）：ｍｉｎ、分（複数可）：ｈまたはｈｒ、時間（複数可）：ａａ、アミノ酸（複数可）：ｋｂ、キロベース（複数可）：ｂｐ、塩基対（複数可）：ｎｔ、ヌクレオチド（複数可）：ｉ．ｍ．、筋肉内の（筋肉内に）：ｉ．ｐ．、腹腔内の（腹腔内に）：ｓ．ｃ．、皮下の（皮下に）などである。
【０２４２】
実施例１：ＰＤ−Ｌ１変異体の生成及び特徴付け
材料及び方法
ＰＤ−Ｌ１への変異導入
Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｎ１  ｍＣｈｅｒｒｙ  ベクターのＳａｃＩ及びＢａｍＨＩによる制限酵素部位にマウスの全長ＰＤ−Ｌ１をクローニングした。局在性及び発現レベルを改善するために、天然のリーダーペプチド配列をＥＰＯリーダーペプチド配列によって置き換えた。部位特異的変異導入は、フィデリティが高いＫＯＤポリメラーゼ、２ｍＭのｄＮＴＰ、及び４ｍＭのＭｇＣｌ2 を使用して実施した。変異導入位置は、ヒトのＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１とによって形成された複合体の結晶構造（ＰＤＢ：３ＢＩＫ）に基づいて選択した。マウスＰＤ−Ｌ１における、対応する表面接触可能位置は、ヒトＰＤ−Ｌ１に対して配列アライメントをとることによって同定した（合計で３６位置）。変異導入は、それぞれの選択位置がＡｌａ残基、Ｇｌｕ残基、またはＡｒｇ残基に変異するように試みた。全体の変異導入成功率は約７０％であり、位置によっては、すべての置換（Ａ、Ｅ、及びＲ）は得られなかった。ＨＥＫ２９３細胞の浮遊液１ｍＬを使用した一過性の遺伝子導入によって、配列検証済変異体の発現を試験した。その後、発現が野生型ＰＤ−Ｌ１と同等であり、膜局在化が正しく生じる変異体のみをマイクロアレイ及びＦＡＣＳによる結合試験において利用し、その結果、アッセイに供するための６０のＰＤ−Ｌ１変異体を含む最終セットを得た。
【０２４３】
ＦＡＣＳによるマイクロビーズ結合アッセイ
ＰＤ−Ｌ１  ｍＣｈｅｒｒｙ変異コンストラクトをＨＥＫ２９３Ｓ細胞に一過性に遺伝子導入した後、プロテインＡマイクロビーズ（Ｍｉｌｌｔｅｎｙｉ）を負荷した。このプロテインＡマイクロビーズは、ＰＤ−１  Ｆｃ融合体とＦＩＴＣ−Ｆｃタンパク質とを４：１で含む混合物で事前に飽和させたものを使用した。Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによる以前の報告（１６）に基づき、ビーズに対する総Ｆｃタンパク質の比率は、マイクロビーズ１０ｕＬ当たり５ｕｇとした。ＦＩＴＣ−Ｆｃは、通常であれば非蛍光のマイクロビーズに緑色蛍光を与えるために使用した。各滴定実験について、１０μｇのフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）−Ｆｃと、４０μｇのＰＤ−１−Ｆｃタンパク質またはＢ７−１−Ｆｃタンパク質のいずれかと、を総体積５ｍＬの１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に含めた混合物を５００μＬのプロテインＡマイクロビーズに負荷した。このビーズを４℃で一晩（約１６時間）インキュベートした。負荷型ビーズを使用するまでの保管期間は、最大で２週間とした。最初の実験では、野生型ＰＤ−Ｌ１を遺伝子導入（遺伝子校導入効率は、一貫して６０〜７０％であった）した１５０，０００個の細胞を飽和させるために十分な負荷型ビーズの量は７５μＬであることを決定した。滴定実験については、ＨＥＫ−２９３細胞の浮遊液１ｍＬを含む２４ウェル組織培養プレートにおいて野生型及び変異したＰＤ−Ｌ１コンストラクトのセットの遺伝子導入を行った。遺伝子導入から３日後に細胞の数を数え、２％のＢＳＡを含む１×ＰＢＳで細胞を希釈して１×１０6 個細胞／ｍＬとした。１５０Ｋ個の細胞（１５０μＬ）をエッペンドルフチューブに移し、２％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む追加の１×ＰＢＳ（１００μＬ）と共に、負荷型マイクロビーズを７５μＬ添加した。反応液を回転させて４℃で１時間混合した後、４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）を添加し、ＢＤ  Ａｒｉａ  ＩＩＩサイトメーターでフローサイトメトリーを行うことによって試料を直ちに分析した。データ解析は、生細胞（ＤＡＰＩ陰性）を最初にゲートした後、ｍＣｈｅｒｒｙ陽性細胞（ＰＤ−Ｌ１発現）のゲートを行うことによって実施した。ＦＩＴＣ陽性（マイクロビーズの結合）のｍＣｈｅｒｒｙ陽性細胞の割合を「結合パーセント」として使用した。各実験について、結合パーセントは、野生型の結合に基準化した。
【０２４４】
組換えＦｃ融合タンパク質の精製
ｍＰＤ−Ｌ１  Ｆｃ融合タンパク質のクローニングを行うために、全長の野生型または変異したＰＤ−Ｌ１の外部ドメイン（残基Ｆ１９〜Ｒ２３７）を、Ｃ末端にｈｉｓタグを有するＦｃドメイン（ｍＩｇＧ２ａ−１０×Ｈｉｓ）を含むＬＩＣベクターにサブクローニングした。こうしたコンストラクト及びアイソトープ（ｉｓｏｔｏｐｅ）のみの対照をＨＥＫ２９３細胞の浮遊液１Ｌ中で一過性に発現させた。遺伝子導入から４日後、培地を収集し、５０ｍＭのＭＥＳを添加してｐＨを調整し、１００ｍＭのＡｒｇ−Ｃｌ（ｐＨ７．６）を添加することで溶解性を改善した。その後、Ｆｃ融合体をＮｉ2+−ＮＴＡ樹脂（ＧＥ）で精製した。この精製は、バッチでの結合方法を使用した後、総体積１０ｍＬの樹脂を詰めたガラスカラム（容積６００ｍＬ）で重量流を用いることによって行った。このＮｉ2+−ニトロロ酢酸（ｎｉｔｒｏｌｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）（ＮＴＡ）樹脂を１００カラム体積の洗浄緩衝液（５０ｍＭのＭＥＳ（ｐＨ６．５）、１００ｍＭのＡｒｇ−Ｃｌ、５ｍＭのイミダゾール、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール）で洗浄し、５００ｍＭのイミジゾール（ｉｍｍｉｄｉｚｏｌｅ）を含む同一の緩衝液で結合タンパク質を溶出させた。ニッケル樹脂からの溶出液を濃縮し、５０ｍＭのＭＥＳ（ｐＨ６．５）、１００ｍＭのＡｒｇ−Ｃｌ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロールにおいてＳ２００ｓｅｐｈａｄｅｘカラム（ＧＥ）でゲル濾過を行うことによってさらに精製した。野生型のｍＰＤ−１  Ｆｃ（残基Ｌ２５〜Ｑ１６７）コンストラクト及びｍＢ７−１  Ｆｃ（残基Ｄ３７〜Ｋ２４５）コンストラクトは、レンチウイルス発現用のＬＩＣベクターにクローニングした。このベクターもまた、ｍＩｇＧ２ａ−１０×Ｈｉｓタグを含むものである。これらのコンストラクトをレンチウイルスパッケージングプラスミドと同時に遺伝子導入し、２日後にウイルス上清を収集した。大スケールの形質導入は、２０×１０6 個の細胞及び５〜１０ｍＬのウイルス上清を用いて１２５ｍＬのバッフル付きフラスコにおいて開始した。形質導入から３日目に完全培地の交換を実施し、５日目に培養のスケールアップを開始し、最終体積が１．５Ｌとなるまで行って終了した。１２日目に、精製に向けて上清を収集した。得られたレンチウイルス上清を精製することでＰＤ−１及びＢ７−１を得た。この精製は、ｍＰＤ−Ｌ１を対象に記載したように行った。
【０２４５】
ＦＡＣＳ滴定アッセイ
上記のように社内で精製したＰＤ−１  Ｆｃ融合タンパク質及びＢ７−１  Ｆｃ融合タンパク質を用いて蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）滴定アッセイを実施した。野生型または変異したＰＤ−Ｌ１コンストラクトでＨＥＫ２９３浮遊細胞の遺伝子導入を行った。遺伝子導入から３日後に細胞の数を数え、１×ＰＢＳで細胞を希釈して１×１０6 個細胞／ｍＬとした。最終濃度１μＭのＦｃ融合タンパク質及び１．５μＭのＡｌｅｘａ４８８ヤギ抗マウス二次抗体を含む事前混合反応液を氷上で３０分間インキュベートした。その後、この事前混合反応液を９６ウェルプレートのウェルに対して量を増やしながら添加し、体積を５０μＬに調整した。その後、１５０μＬの希釈細胞（総細胞数１５０，０００個）をウェルに添加した。結合は、４℃で１時間実施し、遠心分離によってＰＢＳで細胞を３回洗浄した後、ＦＡＣＳによって分析した。ゲートした生細胞をｍＣｈｅｒｒｙで部分ゲートし、ｍＣｈｅｒｒｙ陽性細胞をＡｌｅｘａ−４８８で部分ゲートした。結合パーセントは、Ａｌｅｘａ−４８８が陽性であるｍＣｈｅｒｒｙ細胞の割合を示す。結合部位が単一の場合の方程式であるＹ＝Ｂ最大＊Ｘ／（ＥＣ50＋Ｘ）に対して３つの独立した実験を当てはめたものの平均値がデータとして示される。
【０２４６】
Ｔ細胞活性化アッセイ
Ｃ５７ＢＬ／６マウスから脾臓を収集し、マウス抗ＣＤ４マイクロビーズ（Ｍｉｌｌｔｅｎｙｉ）を使用してＣＤ４+ Ｔ細胞を単離した。１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、ペニシリン／ストレプトマイシン抗生物質、２ｍＭのＬ−グルタミン、及び０．１％のＢＭＥが添加されたＲＰＭＩ完全培地にＣＤ４+ Ｔ細胞を収集した。細胞の数を数え、製造者のプロトコールを使用してカルボキシフルオレセインＮ−スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で細胞を染色した後、細胞の数を再度数えた。同日に、９６ウェルＴＣプレートにウェル当たり７５，０００個の細胞を播種してＲＰＭＩ完全培地に含め、そのままにして非活性化状態とするか、３３．３ｎＭ（約５ｕｇ／ｍＬ）の抗ＣＤ３で活性化するか、または約５倍モル過剰（１７４．３ｎＭ）の対照Ｆｃタンパク質、野生型ＰＤ−Ｌ１−Ｆｃタンパク質、もしくは変異ＰＤ−Ｌ１  Ｆｃタンパク質のいずれかの存在下で３３．３ｎＭの抗ＣＤ３で活性化した。活性化から４日後、非活性化Ｔ細胞に対してゲートを実施し、それによってＣＳＦＥの希釈を解析することで、ＦＡＣＳによって増殖を決定した。各実験から得られたデータは、対照のＦｃ集団に基準化し、合計３つの独立した実験を平均化した。
【０２４７】
ＰＤ−１／Ｂ７−１競合結合実験
ｍＢ７−１  ｈＩｇＧ１Ｆｃ融合コンストラクトのクローニングを行った。このコンストラクトでは、元の上記ｍＩｇＧ２ａコンストラクトと同一のエリスロポエチン（ＥＰＯ）リーダー、ｍＢ７−１外部ドメイン境界、及びリンカー配列を使用した。このコンストラクトは、ＨＥＫ２９３細胞において一過性に発現させ、使用した他のＦｃ融合タンパク質を対象に上に記載したように精製した。競合実験に向けて、野生型ｍＰＤ−Ｌ１  ｍＣｈｅｒｒｙを用いてＨＥＫ２９３浮遊細胞に一過性の遺伝子導入を行った。遺伝子導入から３日後、遺伝子導入細胞の数を数え、細胞を希釈して１×１０6 個細胞／ｍＬとした。Ｂ７−１  ｈＩｇＧ１融合タンパク質を最終二量体濃度５ｎＭで１００，０００個の遺伝子導入細胞に添加し、その際、ＰＤ−１  ｍＩｇＧ２ａタンパク質の非存在下とするか、またはＰＤ−１  ｍＩｇＧ２ａタンパク質を濃度上昇系列（二量体濃度０．０１〜２５０ｎＭ）として存在させた。並行実験として、精製したｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照の滴定を同等モル濃度で実施した。タンパク質の結合は、９６ウェルプレートの振とう機上で、９００ｒｐｍ、２２℃で１時間振とうして実施した。結合の後、０．２％のＢＳＡを含む１×ＰＢＳでプレートを２回洗浄し、抗ヒト（Ｈ＋Ｌ）Ａｌｅｘａ４８８標識二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を０．０１μｇ／μＬ（合計１μｇ）で添加し、３０分間インキュベートした。その後、０．２％のＢＳＡを含む１×ＰＢＳでさらに２回、細胞を洗浄した。試料を直ちにＦＡＣＳによって分析し、ｍＣｈｅｒｒｙが陽性（ＦＬ４−  ＰＤ−Ｌ１発現）であり、Ａｌｅｘａ４８８もまた陽性（ＦＬ１−  Ｂ７−１結合）である細胞のパーセントについてデータのゲートを行った。競合データは、ｍＰＤ−１非存在下での５ｎＭのＢ７−１の結合に基準化し、ｌｏｇ［ｍＰＤ−１］の関数としてプロットした。競合部位が１つの競合モデル方程式であるＹ＝最小値＋（最大値−最小値）／（１＋１０x-logEC50 ）を使用し、３つの独立した実験に由来する平均データを当てはめた。
【０２４８】
結果
マイクロアレイ分析による機構的解析
選択的なＰＤ−Ｌ１試薬を生成するために、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との複合体のＸ線構造をフレームワークとして使用することで、変異導入のための残基を同定し、その結果、ＰＤ−Ｌ１のＩｇ可変ドメインに含まれる３６の溶媒露出残基を同定した（２４）。それぞれの残基をアラニン、アルギニン、及びグルタミン酸に変更することで、側鎖の一連の特徴的な物理化学的特性のサンプリングを行った。一連の野生型及び変異したＰＤ−Ｌ１コンストラクトに対してＰＤ−１またはＢ７−１のＦｃ融合タンパク質を負荷するために、細胞マイクロアレイプラットフォームを最初に使用した。こうした実験によって、ＰＤ−１結合のみに影響した変異体（Ｄ１２２Ａ、Ｙ１２３Ａ、Ｙ１２３Ｒ、Ｋ１２４Ａ、Ｋ１２４Ｄ、Ｒ１２５Ａ、Ｒ１２５Ｄ）、Ｂ７−１結合のみに影響した変異体（Ｙ５６Ａ、Ｙ５６Ｄ、Ｅ７２Ｒ、Ｇ１１９Ｄ、Ｇ１２０Ｄ）、または両方に影響した変異体（Ｌ５３Ｒ、Ｇ１１９Ｒ、Ａ１２１Ｒ）を同定した（図１０に示される表１）。しかしながら、下記の理由から、細胞マイクロアレイを使用し、ＰＤ−１／Ｂ７−１結合を一貫して定量化することは困難であることが判明した。（１）ＰＤ−Ｌ１に対するＢ７−１の親和性が低いことから、ＰＤ−１を負荷したものと比較して、こうしたアレイではシグナル対ノイズ比が低下したこと、（２）結合の完全消失の同定は容易であったが、結合の中程度の減少は、より可変性であることが多かったこと、（３）スライドが独立してプリント、遺伝子導入、及び処理されることと関連して生じるスライドごとの固有の可変性がシグナル対ノイズ比の可変性に加わり、直接的な比較をより困難なものにしたこと。
【０２４９】
ＦＡＣＳ分析による検証
ＰＤ−Ｌ１変異体の結合特性を検証し、より定量的に評価するために、我々は、ハイスループットな蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）アッセイを実施した。このアッセイでは、約１５分ごとに９６の試料を調べることが可能である。このＦＡＣｓプラットフォームでは、細胞マイクロアレイと比較してダイナミックレンジの向上がもたらされる。検索タンパク質の提示様式が修正されることは、注目すべきことである。マイクロアレイプラットフォームにおいて使用した二価のＩｇ融合体は、中程度の親和性を有する相互作用の同定には有効であるが、より弱い相互作用は見逃される可能性がある。ＰＤ−Ｌ１変異体のライブラリーの分析において予測される広範囲の見かけの親和性の検出を支援するために、磁性マイクロビーズによる捕捉及び提示によって高まった結合価を利用した（図７Ａ）。例えば、ＰＤ−Ｌ１を提示するマイクロアレイの探索では、ＰＤ−１  Ｆｃと比較してＢ７−１  Ｆｃの濃度を高めることが必要であり、このことによってバックグラウンドシグナルが強くなるという結果を招いた。ＦＡＣＳマイクロビーズアッセイを使用することで観測されるダイナミックレンジの向上は、非特異的な結合によるバックグラウンドが減少することに少なくとも部分的には起因するものである。このことの理由は、以下の２つである可能性がある。（１）マイクロビーズアッセイでは二次抗体を使用しないこと、（２）親和性の向上が、細胞の負荷に使用し得るタンパク質の量の減少を意味すること。マイクロビーズアッセイは、洗浄段階を全く必要としないという利点を追加で有しており、このことによって結合試料の消失が最小化し、アッセイにおけるタンパク質結合の測定が、よりいっそう直接的なものとなる。さらに、Ｂ７−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用などの、いくつかのより低い親和性相互作用については、ＦＡＣＳアッセイにおいて可溶性のＢ７−１  Ｆｃで飽和を達成することは困難であるが、Ｂ７−１  Ｆｃ結合型のマイクロビーズでは顕著な改善がもたらされた。
【０２５０】
簡潔に記載すると、表面ディスプレイされる５５個の異なる変異ＰＤ−Ｌ１−ｍＣｈｅｒｒｙ融合体をＨＥＫ２９３細胞株に対して個別に一過性に遺伝子導入した。野生型ＰＤ−１  Ｉｇ融合タンパク質または野生型Ｂ７−１  Ｉｇ融合タンパク質を結合させたＦＩＴＣ負荷型マイクロビーズのいずれかにこうした細胞が結合する能力をフローサイトメトリーによって探索した（図７Ｂ）。重要なことに、分析に使用した変異体のすべてについて一過性のタンパク質発現レベルは野生型と同様であったことから、こうした変異がＰＤ−Ｌ１の構造または安定性に全体的な変化を生じさせたということはなさそうである。また、野生型及び変異ＰＤ−Ｌ１変異体を蛍光顕微鏡で調べると、Ｃ末端ｍＣｈｅｒｒｙ融合タンパク質が膜に正しく局在化していることが示され、このことは、変異タンパク質が正しく折り畳まれ、プロセシングを受け、膜に挿入された状態であったことを示唆している。こうした試験の結果、ＰＤ−１に特異的に結合したＰＤ−Ｌ１変異体（Ｄ４９Ｒ、Ｖ５４Ｄ、Ｖ５４Ｒ、Ｙ５６Ａ、Ｙ５６Ｄ、Ｙ５６Ｒ、Ｑ６６Ｄ、Ｅ７２Ｒ、Ｇ１１９Ｄ、Ｇ１２０Ｄ）もしくはＢ７−１に特異的に結合したＰＤ−Ｌ１変異体（Ｄ１２２Ａ、Ｙ１２３Ｒ、Ｙ１２３Ａ、Ｋ１２４Ａ、Ｋ１２４Ｄ、Ｋ１２４Ｒ、Ｒ１２５Ａ、Ｒ１２５Ｄ）、またはＰＤ−１もしくはＢ７−１のいずれにも結合しなかったＰＤ−Ｌ１変異体（Ｌ５３Ｄ、Ｌ５３Ｒ、Ｉ１１５Ｄ、Ｉ１１６Ｒ、Ｇ１１９Ｒ、Ｇ１２０Ａ、Ｇ１２０Ｒ、Ａ１２１Ｄ、Ａ１２１Ｒ、Ｄ１２２Ｒ）の同定に至った。影響を受けた残基をＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との複合体の結晶構造にマッピングしたところ、ＰＤ−１結合及びＢ７−１結合を担うＰＤ−Ｌ１表面は重複しているが明確に異なることが示されている。こうした結果によって、最初の細胞マイクロアレイ実験によって得られたものの検証が行われ、特に、ＰＤ−１またはＢ７−１に対する結合が顕著に減少するが消失はしないことが示された変異体について、ＰＤ−１結合及びＢ７−１結合に対する、より定量的な評価が得られた（表１（図１０）、表２（図１１））。例えば、細胞マイクロアレイ実験では、Ｖ５４Ｄ  ＰＤ−Ｌ１変異体及びＱ６６Ｄ  ＰＤ−Ｌ１変異体に対するＰＤ−１結合及びＢ７−１結合のレベルは同様であったが、マイクロビーズＦＡＣＳアッセイの場合、これらの同一の２つの変異体では、ＰＤ−１結合は野生型レベルであり、Ｂ７−１結合は顕著に減少していることが示された。
【０２５１】
ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−Ｌ２との配列アライメント解析からもまた、ＰＤ−１結合及びＢ７−１結合に対するこうした残基の相対的な重要性に対する手がかりが得られる。一般に、ＰＤ−１結合に特異的な残基は、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−Ｌ２との両方において高度に保存されており、このことから、両方のリガンドがＰＤ−１に結合することが予測される。一方で、Ｂ７−１に特異的に結合すると同定された残基の多くは、ＰＤ−Ｌ１のみにおいて高度に保存されており、ＰＤ−Ｌ２ではそうではなく、このことは、ＰＤ−Ｌ２がＢ７−１に結合しないことからも理にかなったことである。このことは、Ｂ７−１結合にはＶ５４及びＹ５６が特に重要であることを強調するデータを支持するものである。
【０２５２】
Ｔ細胞増殖アッセイにおけるＰＤ−Ｌ１変異体の生物学的活性
２４ウェル浮遊組織培養プレートにおけるＨＥＫ２９３細胞のハイスループットな一過性の遺伝子導入では、スクリーニングに見合う量で組換えの分泌型Ｆｃ融合タンパク質が産生するように最適化を行った。この方法を利用し、結合特性が改変されたＰＤ−Ｌ１変異体のサブセットについてＦｃ融合タンパク質の精製を行った。ＰＤ−Ｌ１タンパク質を小スケールでニッケル精製した後、分析ゲル濾過によって、選択変異体の挙動が野生型タンパク質と同様であることが示された。Ｔ細胞増殖試験において活性を試験する前に、表面固定型のＰＤ−１またはＢ７−１（ＧＦＰ融合体）を発現するＨＥＫ細胞に対する結合について、それぞれの変異タンパク質の品質をＦＡＣＳ分析によって評価し、その結果、可溶性試薬の挙動が予測どおりであることが確認された（すなわち、ＰＤ−Ｌ１＿Ｙ５６Ａ＿Ｆｃは、ＰＤ−１を発現する細胞には結合するが、Ｂ７−１を発現する細胞には結合しない）。
【０２５３】
機能的に精査されたＰＤ−Ｌ１変異体の生物学的活性を特徴付けるために、インビトロのＴ細胞活性化アッセイを使用した。これは、広く用いられるアッセイであり、このアッセイでは、Ｔ細胞受容体を介してＴ細胞の活性を刺激するためにプレート結合型の抗ＣＤ３抗体が使用される。ＩｇＧ対照、野生型ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ１変異体のいずれかの存在下で抗ＣＤ３を同時にプレートに固定化し、ＣＳＦＥで標識した初代ＣＤ４+ マウスＴ細胞の活性化を測定した。抗ＣＤ３介在性にＣＤ４+ Ｔ細胞が活性化する状況において、野生型ＰＤ−Ｌ１は、アイソタイプ対照と比較して活性化を抑制し（図８Ｄ）、ＰＤ−１結合のレベルが低下したＰＤ−Ｌ１変異体は、Ｔ細胞の活性化を抑制する能力が顕著に低下することが示された。対照的に、Ｂ７−１活性が低下したＰＤ−Ｌ１変異体は、野生型ＰＤ−Ｌ１と同等の作用を誘発した。こうしたデータは、用いたインビトロの実験系下では、ＣＤ４+ Ｔ細胞の活性化のＰＤ−Ｌ１誘導性の抑制が、ＰＤ−Ｌ１がＰＤ−１と相互作用することを主に介して生じることを示唆している。こうしたデータは、哺乳類免疫に対して、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１との相互作用、及びＰＤ−Ｌ１とＢ７−１との相互作用が明確に異なって寄与することの定義に役立ち得る特定の生物学的活性を有する変異体の生成の実現可能性を示すものである。
【０２５４】
ＰＤ−Ｌ１に対する結合に関するＰＤ−１のＢ７−１との競合
変異導入データによって、ＰＤ−１及びＢ７−１に結合するＰＤ−Ｌ１の結合表面が、重複しているが、明確に異なることが示され、このことは、ＰＤ−１とＢ７−１とが、ＰＤ−Ｌ１に対する結合について競合するであろうことを示唆している。この仮説は、２つの異なるＦｃ融合アイソタイプを使用して我々が精製したＢ７−１及びＰＤ−１のＦｃ融合タンパク質を利用する細胞ベースのＦＡＣＳ競合アッセイを使用して試験した。こうした試薬を用いて、ＰＤ−１（ｍＩｇＧ２ａ）の濃度上昇系列で滴定し、それと同時に、野生型ＰＤ−Ｌ１を発現するＨＥＫ細胞に結合しているＢ７−１（ｈＩｇＧ１）の消失を、抗ヒトＡｌｅｘａ４８８二次抗体を使用して選択的に監視した（図９Ａ）。ＰＤ−１結合が、ＰＤ−Ｌ１を発現する細胞からＢ７−１を効率的に置き換えることが結果によって示され、このことは、結合部位が重複しているという、ＰＤ−Ｌ１変異導入に基づく知見を支持するものである。
【０２５５】
図７Ａ〜７Ｃ：ＦＡＣＳによるハイスループットなマイクロビーズ結合アッセイを使用したＰＤ−Ｌ１変異体のスクリーニング
Ａ）ＦＡＣＳによるマイクロビーズ結合アッセイの模式図を示す。Ｂ）代表的な対照マイクロビーズ実験を示す。対照Ｆｃ、ＰＤ−１  Ｆｃ融合タンパク質、またはＢ７−１  Ｆｃ融合タンパク質が結合したマイクロビーズを、ｍＣｈｅｒｒｙ単独（−対照）またはＰＤ−Ｌ１  ｍＣｈｅｒｒｙのいずれかを発現する細胞に負荷した。ＦＡＣＳデータは、すべての生細胞に対してゲートを行ったものであり、野生型ＰＤ−Ｌ１を発現する細胞に対して、ＰＤ−１がコートされたマイクロビーズと、Ｂ７−１がコートされたマイクロビーズとの両方が結合することを示している（右上の四分区画）。Ｃ）５４個ＰＤ−Ｌ１変異体の一団に対するＦＡＣＳによるマイクロビーズ結合のデータを示す。データは、ＰＤ−１（青色）またはＢ７−１（赤色）のいずれかでコートされたマイクロビーズに結合したｍＣｈｅｒｒｙ陽性細胞（ＰＤ−Ｌ１発現）のフラクションを示しており、結合は、野生型に基準化されている。ＰＤ−１結合及びＢ７−１結合は、３連の実験において並行して実施したものであり、エラーバーは、標準偏差を示す。
【０２５６】
図８Ａ〜８Ｄ：ＰＤ−１またはＢ７−１に対する結合を改変したＰＤ−Ｌ１変異体の特徴付け
Ａ）ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との複合体の結晶構造（ＰＤＢ：３ＳＢＷ）であり、ＰＤ−Ｌ１のＩｇＣドメイン及びＩｇＶドメインのみが示される。ＩｇＶドメインが拡大されており、変異すると結合が変化した残基は下記に従って標識及び色付けされている。緑色＝ＰＤ−１結合が影響を受ける、赤色＝Ｂ７−１結合が影響を受ける、灰色＝ＰＤ−１結合とＢ７−１結合との両方が影響を受ける。Ｂ）野生型ＰＤ−Ｌ１または変異体のいずれかを発現する細胞を組換えのＰＤ−１  Ｆｃ融合タンパク質またはＢ７−１  Ｆｃ融合タンパク質の濃度上昇系列で滴定したＦＡＣＳ滴定実験から得られたデータを示す。結合は、抗マウスＡｌｅｘａ４８８二次抗体を使用して検出した。データ点は、３つの独立した実験の平均値を示し、エラーバーは、標準偏差を示す。曲線は、結合部位が単一の場合の結合モデルにデータを当てはめたものを示す。Ｃ）ＢにおけるＦＡＣＳ滴定実験から得られたＥＣ50値及びＢ最大値の表を示す。星印は、滴定するには非常に結合が弱く（ベースライン）、データを当てはめることが不可能であったものを示す。Ｄ）データは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスから単離してＣＳＦＥで標識し、アイソタイプ対照、野生型、または変異したＰＤ−Ｌ１  Ｆｃ融合タンパク質の存在下で、抗ＣＤ３で４日間刺激した後に活性化したＣＤ４+ Ｔ細胞のフラクションを示す。活性化は、アイソタイプ対照に基準化したものであり、３つの独立した実験を示す。
【０２５７】
図９Ａ〜９Ｂ：ＰＤ−Ｌ１に対する結合に関するＰＤ−１のＢ７−１との競合
Ａ）競合アッセイの模式図を示す。簡潔に記載すると、ＰＤ−Ｌ１  ｍＣｈｅｒｒｙを一過性に遺伝子導入したＨＥＫ２９３細胞を、ｍＰＤ−１  ｍＩｇＧ２ａの濃度上昇系列の非存在下または存在下でｍＢ７−１  ｈＩｇＧ１タンパク質と共にインキュベートした。その後、細胞に結合したｍＢ７−１  ｈＩｇＧ１の量を、抗ヒトＡｌｅｘａ４８８抗体を使用し、ＦＡＣＳ分析によって監視した。Ｂ）１つの代表的な実験に由来する結果を示すヒートマップを示す。対照ｍＩｇＧ２ａの存在下では、ｍＢ７−１  ｈＩｇＧ１の結合の消失は観測されなかった。グラフは、３つの独立した実験から得られたデータに対する平均値及び標準偏差を示す。このデータは、Ｐｒｉｓｍソフトウェアにおいて競合部位が１つの場合のモデル方程式を使用して当てはめたものであり、ＥＣ50は、８．３±１．５ｎＭと計算された。
【０２５８】
実施例２：ＰＤ−Ｌ１／ｓｙｎＴａｃのインビボの活性
１型糖尿病のＮＹ８．３  ＴＣＲ遺伝子導入ＮＯＤモデル（ＮＯＤ８．３）では、ＭＨＣクラスＩ対立遺伝子であるＨ−２Ｋd と関連して膵ベータ細胞抗原であるＩｇｒｐ２０６−２１４を標的とする侵襲性のＴ細胞自己免疫が生じる。ＮＯＤ８．３マウスは、循環性の遺伝子導入（Ｉｇｒｐ特異的）Ｔ細胞を高頻度で有する。脾臓における病原性の遺伝子導入Ｔ細胞の頻度に対する作用を決定するために、Ｉｇｒｐ206-214 ／Ｈ−２Ｋd 及びＰＤ−Ｌ１（Ｇ１１９Ｒ変異体）を有するＰＤ−Ｌ１／ｓｙｎＴａｃをＮＯＤ８．３マウスに投与した。図１２に示されるように、ＰＤ−Ｌ１（Ｇ１１９Ｒ）／ｓｙｎＴａｃは、Ｉｇｒｐ206-214 ／Ｈ−２Ｋd に特異的なＴ細胞の用量依存的な枯渇を引き起こすが、非特異的なＴ細胞にはこの作用を及ぼさない。
【０２５９】
本発明をその特定の実施形態に関して説明してきたが、本発明の真の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更を行うことができ、均等物で置換することができることを当業者は理解されたい。さらに、特定の状況、材料、物質の組成物、方法、方法のステップ（複数可）を本発明の目的、趣旨及び範囲に適合させるために、多くの修正を行うことができる。すべてのそのような修正は、本明細書に添付の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。
【０２６０】
相互参照
本出願は、２０１６年５月１８日出願の米国仮特許出願第６２／３３８，１２８号の利益を主張し、当該出願は、その全体が参照によって本明細書に援用される。
【図１】
2019522466.tif 000012
【図２−１】
2019522466.tif 000013
【図２−２】
2019522466.tif 000014
【図２−３】
2019522466.tif 000015
【図２−４】
2019522466.tif 000016
【図２−５】
2019522466.tif 000017
【図３−１】
2019522466.tif 000018
【図３−２】
2019522466.tif 000019
【図４−１】
2019522466.tif 000020
【図４−２】
2019522466.tif 000021
【図４−３】
2019522466.tif 000022
【図５−１】
2019522466.tif 000023
【図５−２】
2019522466.tif 000024
【図６】
2019522466.tif 000025
【図７】
2019522466.tif 000026
【図８】
2019522466.tif 000027
【図９】
2019522466.tif 000028
【図１０】
2019522466.tif 000029
【図１１】
2019522466.tif 000030
【図１２】
2019522466.tif 000031
【配列表】
2019522466000001.app
【国際調査報告】
2019522466.tif 000032
2019522466.tif 000033
2019522466.tif 000034
2019522466.tif 000035