(57)【要約】  本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する抗体、およびその抗原結合断片、ならびにその使用、および関連する方法を提供する。【図１】2019516362.tif 000071
2019516362.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＩＬ−３３に特異的に結合し、（ｉ）から（ｖｉ）のいずれか１つ：
（ｉ）Ｋａｂａｔ番号付けによる、配列番号２０、３７、１９０、１９３、２５７、２５８、２５９、および２６０からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｌ１、
（ｉｉ）Ｋａｂａｔ番号付けによる、配列番号２１、１９６、１９９、２６１、２６２、２６３、および２６４からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｌ２、
（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔ番号付けによる、配列番号２２、３８、２０８、２６５、２６、２６７、および２６８からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｌ３、
（ｉｖ）Ｋａｂａｔ番号付けによる、配列番号１６、３３、２６９、２７０、および２７１からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｈ１、
（ｖ）Ｋａｂａｔ番号付けによる、配列番号１７、３４、１６８、１７１、１７４、１８０、２０２、２０５、２１１、２１４、２１７、２２０、２２３、２２６、２２９、２３２、２３５、２７２、２７３、２７４、および２７５からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｈ２、ならびに
（ｖｉ）Ｋａｂａｔ番号付けによる、配列番号１８、３５、１１４、１１９、１２２、１２７、１３０、１３３、１３６、１３９、１４２、１４５、１４８、１５３、１５６、１５９、１７７、１８７、２７６、２７７、２７８、および２７９からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｈ３
を含む抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項２】
配列番号２２５のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３配列と、配列番号２０７のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３配列とを含む、請求項１に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項３】
（ｉ）Ｋａｂａｔ番号付けによる、配列番号２０を含むＣＤＲ−Ｌ１、
（ｉｉ）Ｋａｂａｔ番号付けによる、配列番号２１を含むＣＤＲ−Ｌ２、
（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔ番号付けによる、配列番号２０８を含むＣＤＲ−Ｌ３、
（ｉｖ）Ｋａｂａｔ番号付けによる、配列番号１６を含むＣＤＲ−Ｈ１、
（ｖ）Ｋａｂａｔ番号付けによる、配列番号２２６を含むＣＤＲ−Ｈ２、
（ｖｉ）Ｋａｂａｔ番号付けによる、配列番号１８を含むＣＤＲ−Ｈ３、
を含む、請求項１から２のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項４】
ＶＬフレームワーク配列およびＶＨフレームワーク配列を含み、ＶＬフレームワーク配列またはＶＨフレームワーク配列の一方または両方が、それの派生元となったヒト生殖系列配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であり、ＶＬフレームワーク配列の派生元であるヒト生殖系列ＶＬ配列が、ＤＰＫ９、ＤＰＫ１２、ＤＰＫ１８、ＤＰＫ２４、ＨＫ１０２＿Ｖ１、ＤＰＫ１、ＤＰＫ８、ＤＰＫ３、ＤＰＫ２１、Ｖｇ＿３８Ｋ、ＤＰＫ２２、ＤＰＫ１５、ＤＰＬ１６、ＤＰＬ８、Ｖ１−２２、Ｖλコンセンサス、Ｖλ１コンセンサス、Ｖλ３コンセンサス、Ｖκコンセンサス、Ｖκ１コンセンサス、Ｖκ２コンセンサス、およびＶκ３からなる群から選択され、ＶＨフレームワーク配列の派生元であるヒト生殖系列ＶＨ配列が、ＤＰ５４、ＤＰ４７、ＤＰ５０、ＤＰ３１、ＤＰ４６、ＤＰ７１、ＤＰ７５、ＤＰ１０、ＤＰ７、ＤＰ４９、ＤＰ５１、ＤＰ３８、ＤＰ７９、ＤＰ７８、ＤＰ７３、ＶＨ３、ＶＨ５、ＶＨ１、およびＶＨ４からなる群から選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項５】
配列番号２２５と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号２０７と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項６】
配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項７】
Ｆｃドメインを含み、ＦｃドメインがＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のＦｃドメインである、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項８】
ＦｃがＩｇＧ１である、請求項７に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項９】
配列番号２４４と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＬＣとを含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項１０】
配列番号２４４のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＬＣとを含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項１１】
ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２２７２４を有するプラスミドによってコードされるＶＨ配列と、ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２２７２５を有するプラスミドによってコードされるＶＬ配列とを含む抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項１２】
ヒトＩＬ−３３への結合について、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合断片と競合する抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項１３】
ヒトＩＬ−３３への結合について、７Ｅ８＿キメラ、９Ｂ３＿キメラ、９Ｂ３＿キメラ＿ｈｕＪｓｅｇ、７Ｅ８  ＣＤＲ移植、ＩＬ３３−１０、９Ｂ３  ＣＤＲ移植、９Ｂ３＿１、９Ｂ３＿２Ａ、９Ｂ３＿２Ｂ、９Ｂ３＿３、９Ｂ３＿５、９Ｂ３＿７、９Ｂ３＿１３、９Ｂ３＿１５、９Ｂ３＿１７、９Ｂ３＿２２、９Ｂ３＿３１Ｖ２、９Ｂ３＿３６、９Ｂ３＿７９、９Ｂ３＿１２４、９Ｂ３＿１６２、７Ｅ８Ｈ／９Ｂ３Ｋ、９Ｂ３＿５６３、ＩＬ３３−１１、ＩＬ３３−１２、ＩＬ３３−１３、ＩＬ３３−４５、ＩＬ３３−５５、ＩＬ３３−５６、ＩＬ３３−５７、ＩＬ３３−５８、ＩＬ３３−６１、ＩＬ３３−６２、ＩＬ３３−６８、ＩＬ３３−７４、ＩＬ３３−７５、ＩＬ３３−８０、ＩＬ３３−８１、ＩＬ３３−１０３、ＩＬ３３−１１７、ＩＬ３３−１３６、ＩＬ３３−１５３、ＩＬ３３−１５４、ＩＬ３３−１５５、ＩＬ３３−１５６、ＩＬ３３−１５７、ＩＬ３３−１５８、ＩＬ３３−１６７、ＩＬ３３−１６８、ＩＬ３３−１６９、ＩＬ３３−１７０、ＩＬ３３−１７１、ＩＬ３３−１７２、ＩＬ３３−１７５、ＩＬ３３−１８６、ＩＬ３３−１８７、ＩＬ３３−１８８、ＩＬ３３−１５８−１５２、ＩＬ３３−１６７−１５３、ＩＬ３３−１５８ＬＳ、およびＩＬ３３−１６７ＬＳのうちの１つまたは複数と競合する抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項１４】
約１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、９００ｐＭ、８００ｐＭ、７００ｐＭ、６００ｐＭ、５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１５０ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ、１５ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭ、および１ｐＭからなる群から選択されるおよその値の、または前記群から選択される値未満のＫＤでヒトＩＬ−３３に結合する、請求項１から１３に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項１５】
約１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、９００ｐＭ、８００ｐＭ、７００ｐＭ、６００ｐＭ、５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１５０ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ、１５ｐＭ、１３ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭ、および１ｐＭからなる群から選択されるおよその値の、または前記群から選択される値未満のＫＤでカニクイザルＩＬ−３３に結合する、請求項１から１４に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項１６】
カニクイザルＩＬ−３３への抗体または抗原結合断片の結合ＫＤが、ヒトＩＬ−３３への結合ＫＤの１０倍以内である、請求項１から１５に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項１７】
不活性ＩＬ−３３に結合する場合のＫＤよりも低いＫＤで活性ＩＬ−３３に結合する、請求項１から１６に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項１８】
ヒトにおける終末半減期が少なくとも約３１日である、請求項１から１７に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【請求項１９】
（ｉ）請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体、もしくはその抗原結合断片をコードする１つもしくは複数のヌクレオチド配列；または
（ｉｉ）配列番号３９８、３９９、４００、および４０１のうちの１つもしくは複数として記載される核酸配列；または
（ｉｉｉ）ＡＴＣＣに寄託され、受託番号ＰＴＡ−１２２７２４もしくは受託番号ＰＴＡ−１２２７２５を有する核酸分子のコード配列
を含む、単離された核酸分子。
【請求項２０】
請求項１９に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項２１】
請求項１９に記載の核酸分子、または請求項２０に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項２２】
抗体、またはその抗原結合断片を作製する方法であって、請求項２１に記載の宿主細胞を、前記抗体、またはその抗原結合断片が前記宿主細胞によって発現される条件下で培養することを含む方法。
【請求項２３】
請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合断片と、薬学的に許容できる担体または賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項２４】
医学的状態を処置する方法であって、それを必要とする対象に、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体、もしくはその抗原結合断片、または請求項２３に記載の医薬組成物の治療有効量を投与することを含む方法。
【請求項２５】
状態が、炎症性腸疾患、アレルギー、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、春季カタル、季節性アレルギー、ペットアレルギー、喘息、食物アレルギー、ピーナッツアレルギー、アトピー性皮膚炎、鼻ポリープを伴う慢性鼻副鼻腔炎（ＣＲＳｗＮＰ）、アレルギー性鼻炎、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、呼吸器疾患のウイルス性増悪、小児および成人におけるウイルス感染（呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ライノウイルス、インフルエンザ）、蕁麻疹、好酸球性食道炎、慢性線維症、肝線維症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、慢性腎臓病、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、強皮症、全身性硬化症、急性腎傷害、敗血症、膵炎、１型糖尿病、移植対宿主疾患（ＧＶＨＤ）、組織移植、アルツハイマー病、関節リウマチ、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、乾癬、セリアック病およびレイノー病または現象からなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インターロイキン−３３に特異的に結合する抗体、およびその抗原結合断片、ならびにその組成物、方法および使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＩＬ−３３は、喘息およびアトピー性炎症に関与する多くの細胞型の応答を増幅する重要なＩＬ−１ファミリーメンバーである。ＩＬ−３３は、高い親和性でインターロイキン−１受容体様１（ＩＬ１ＲＬ１；腫瘍原性抑制２［ＳＴ２］としても知られる）に結合し、ＩＬ１ＲＡｃＰと三重複合体を形成して、シグナル伝達複合体を形成する。このシグナル伝達複合体は、ＭｙＤ８８およびＩＲＡＫファミリーメンバーと共に、Ｍｙｄｄｏｓｏｍｅに依存する一連の事象をもたらす。このシグナル伝達は、最終的には、細胞およびサイトカイン環境特異的な状況でＮＦＫｂ活性化および他の経路を誘導する。肥満細胞または好塩基球などの細胞がＩＬ−３３によって刺激される場合、ＩＬ−４、５および１３などの２型サイトカインが産生される。
【０００３】
ＩＬ−３３は、その活性が薬理学的または遺伝学的手法によって遮断された際に、喘息およびアレルギー疾患のいくつかの前臨床モデルにおいて重要な役割を果たすことが示されている。この経路の遮断は、ＩＬ−３３もしくは受容体ＩＬ１ＲＬ１に対する中和抗体、ＩＬ−３３もしくはＩＬ１ＲＬ１の遺伝的欠失、または融合タンパク質としてＦｃとカップリングされた可溶性形態の受容体ＩＬ１ＲＬ１によって達成された（Ｃｏｙｌｅら、１９９９、Ｊ．Ｅｘｐｅｒ．Ｍｅｄ  １９０（７）：８９５〜９０２）。イエダニ、ゴキブリまたはアルテルナリア真菌などにおけるタンパク質分解アレルゲンを含有する病理学的アレルゲンが使用されるほとんどのモデル系では、ＩＬ−３３は、炎症および他の態様の気道再モデリングの誘導において重要な役割を果たす（Ｃｈｕら、２０１３、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３１：１８７〜２００）。水酸化アルミニウム（ミョウバン）、または尿酸一ナトリウム結晶などの感作のためのアジュバントに依拠する薬理学的モデルでは、ＩＬ−３３は、モデルの感作段階ならびにＩＬ−５およびＩＬ１３などの２型サイトカインの誘導において重要な役割を果たす（Ｈａｒａら、２０１４、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９２（９）：４０３２〜４０４２）。ＩＬ−３３はまた、気道におけるウイルス感染と関連する炎症応答において重要な役割を果たすこともわかっている。ウイルス感染による気道上皮の損傷は、ＩＬ−３３の放出を誘発し、免疫応答の型を改変し得る。
【０００４】
鼻ポリープを伴う慢性鼻副鼻腔炎（ＣＲＳｗＮＰ）、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）、および喘息などの疾患は、複数のサイトカインが発症に関与する可能性がある疾患である。ＩＬ−３３受容体、ＳＴ２は、肥満細胞、好塩基球、Ｔｈ２−Ｔ細胞、先天性リンパ細胞２型その他などの、２型炎症と関連する多くの細胞型上で発現される（Ｃａｙｒｏｌ  ＆  Ｇｉｒａｒｄ、２０１４、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３１：３１〜３７；Ｍｏｌｏｆｓｋｙら、２０１５、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４２（６）：１００５〜１０１９）。ＩＬ−３３に対するこれらの細胞型の一次応答は、炎症性サイトカイン、特に、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−４、ＩＬ−３１およびＩＬ−９などの、２型炎症と関連するものの産生である（Ｍｏｌｏｆｓｋｙら、２０１５、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４２（６）：１００５〜１０１９；Ｒｉｖｅｌｌｅｓｅら、２０１４、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４（１０）：３０４５〜３０５５；Ｓｕｚｕｋａｗａら、２００８、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １８１（９）：５９８１〜５９８９；Ｖｏｃｃａら、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２２０（８）：９５４〜９６３；Ｍａｉｅｒら、２０１４、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １９３（２）：６４５〜６５４）。組織部位へのさらなる炎症細胞型の動員の誘導において重要である他のサイトカインならびにケモカインも産生される（Ｃａｙｒｏｌ  ＆  Ｇｉｒａｒｄ、２０１４；Ｍｏｌｏｆｓｋｙら、２０１５）。ＩＬ−３３の初期放出は、体表面または粘膜表面での上皮に対する損傷によって誘発される。疾患関連誘発因子は、タンパク質分解活性を有するアレルゲン、上皮に対する物理的損傷、ウイルスならびに体表面で一般的である真菌および細菌を含む。組織が好酸球および肥満細胞に関して豊富である疾患では、上皮に対する損傷は、ＩＬ−３３が放出されるカスケードを開始させ、局所標的細胞に対して作用し、２型炎症応答にとって中心的である複数のサイトカインの産生を誘導する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する抗体（およびその抗原結合断片）、ならびにその使用、および関連する方法を提供する。当業者であれば、日常的な実験を超えない実験を使用して、本明細書に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識できる、または確認することができる。そのような均等物は、以下の実施形態（Ｅ）によって包含されることが意図される。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
Ｅ１．  ヒトＩＬ−３３に特異的に結合する単離された抗体、またはその抗原結合断片。
【０００７】
Ｅ２．  配列番号１４、３２、９０、９４、９７、１１３、１１８、１２１、１２４、１２６、１２９、１３２、１３５、１３８、１４１、１４４、１４７、１５０、１５２、１５５、１５８、１６１、１６３、１６５、１６７、１７０、１７３、１７６、１７９、１８２、１８４、１８６、２０１、２０４、２１０、２１３、２１６、２１９、２２２、２２５、２２８、２３１、および２３４からなる群の１つのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３配列を含む、Ｅ１に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【０００８】
Ｅ３．  配列番号１９、３６、８１、９１、９８、１１５、１８９、１９２、１９５、１９８、および２０７からなる群の１つのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３配列を含む、Ｅ１〜Ｅ２のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【０００９】
Ｅ４．  （ｉ）〜（ｖｉ）：
（ｉ）配列番号２０、３７、１９０、１９３、２５７、２５８、２５９、および２６０からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｌ１、
（ｉｉ）配列番号２１、１９６、１９９、２６１、２６２、２６３、および２６４からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｌ２、
（ｉｉｉ）配列番号２２、３８、２０８、２６５、２６、２６７、および２６８からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｌ３、
（ｉｖ）配列番号１６、３３、２６９、２７０、および２７１からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｈ１、
（ｖ）配列番号１７、３４、１６８、１７１、１７４、１８０、２０２、２０５、２１１、２１４、２１７、２２０、２２３、２２６、２２９、２３２、２３５、２７２、２７３、２７４、および２７５からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｈ２、
（ｖｉ）配列番号１８、３５、１１４、１１９、１２２、１２７、１３０、１３３、１３６、１３９、１４２、１４５、１４８、１５３、１５６、１５９、１７７、１８７、２７６、２７７、２７８および２７９からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｈ３
の１つまたは複数を含む、Ｅ１〜Ｅ３のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００１０】
Ｅ５．  下記：
（ｉ）配列番号２５７、２５８、２５９、および２６０からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｌ１、
（ｉｉ）配列番号２６１、２６２、２６３、および２６４からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｌ２、
（ｉｉｉ）配列番号２６５、２６６、２６７、および２６８からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｌ３、
（ｉｖ）配列番号２６９、２７０、および２７１からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｈ１、
（ｖ）配列番号２７２、２７３、２７４、および２７５からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｈ２、
（ｖｉ）配列番号２７６、２７７、２７８、および２７９からなる群から選択されるＣＤＲ−Ｈ３
を含むＥ１〜Ｅ４のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００１１】
Ｅ６．  下記：
（ｉ）配列番号２５７を含むＣＤＲ−Ｌ１、
（ｉｉ）配列番号２６１を含むＣＤＲ−Ｌ２、
（ｉｉｉ）配列番号２６５を含むＣＤＲ−Ｌ３、
（ｉｖ）配列番号２６９を含むＣＤＲ−Ｈ１、
（ｖ）配列番号２７２を含むＣＤＲ−Ｈ２、
（ｖｉ）配列番号２７６を含むＣＤＲ−Ｈ３
を含むＥ１〜Ｅ５のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００１２】
Ｅ７．  下記：
（ｉ）配列番号２５８を含むＣＤＲ−Ｌ１、
（ｉｉ）配列番号２６２を含むＣＤＲ−Ｌ２、
（ｉｉｉ）配列番号２６６を含むＣＤＲ−Ｌ３、
（ｉｖ）配列番号２７０を含むＣＤＲ−Ｈ１、
（ｖ）配列番号２７３を含むＣＤＲ−Ｈ２、
（ｖｉ）配列番号２７７を含むＣＤＲ−Ｈ３
を含むＥ１〜Ｅ６のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００１３】
Ｅ８．  下記：
（ｉ）配列番号２５９を含むＣＤＲ−Ｌ１、
（ｉｉ）配列番号２６３を含むＣＤＲ−Ｌ２、
（ｉｉｉ）配列番号２６７を含むＣＤＲ−Ｌ３、
（ｉｖ）配列番号２７１を含むＣＤＲ−Ｈ１、
（ｖ）配列番号２７４を含むＣＤＲ−Ｈ２、
（ｖｉ）配列番号２７８を含むＣＤＲ−Ｈ３
を含むＥ１〜Ｅ７のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００１４】
Ｅ９．  下記：
（ｉ）配列番号２６０を含むＣＤＲ−Ｌ１、
（ｉｉ）配列番号２６４を含むＣＤＲ−Ｌ２、
（ｉｉｉ）配列番号２６８を含むＣＤＲ−Ｌ３、
（ｉｖ）配列番号２７１を含むＣＤＲ−Ｈ１、
（ｖ）配列番号２７５を含むＣＤＲ−Ｈ２、
（ｖｉ）配列番号２７８を含むＣＤＲ−Ｈ３
を含むＥ１〜Ｅ８のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００１５】
Ｅ１０．  下記：
（ｉ）配列番号２０を含むＣＤＲ−Ｌ１、
（ｉｉ）配列番号２１を含むＣＤＲ−Ｌ２、
（ｉｉｉ）配列番号２０８を含むＣＤＲ−Ｌ３、
（ｉｖ）配列番号１６を含むＣＤＲ−Ｈ１、
（ｖ）配列番号２２６を含むＣＤＲ−Ｈ２、
（ｖｉ）配列番号１８を含むＣＤＲ−Ｈ３
を含むＥ１〜Ｅ９のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００１６】
Ｅ１１．  配列番号２２５のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３配列を含む、Ｅ１〜Ｅ１０のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００１７】
Ｅ１２．  配列番号２０７のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３配列を含む、Ｅ１〜Ｅ１１のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００１８】
Ｅ１３．  以下の置換：
（ｉ）ヒト生殖系列ＶＬ配列の対応する残基への、ＣＤＲ  Ｌ１中の１、２、３、４、５、または６個の置換、
（ｉｉ）ヒトＶＬ生殖系列配列の対応する残基への、ＣＤＲ  Ｌ２中の１、２、３、４、または５個の置換、
（ｉｉｉ）ヒト生殖系列ＶＬ配列の対応する残基への、ＣＤＲ  Ｌ３中の１、２、３、４、５、または６個の置換、
（ｉｖ）ヒト生殖系列ＶＨ配列の対応する残基への、ＣＤＲ  Ｈ１中の１個の置換、
（ｖ）ヒト生殖系列ＶＨ配列の対応する残基への、ＣＤＲ  Ｈ２中の１、２、３、４、５、６、７、または８個の置換、
のうちの１つまたは複数を含み、ヒト生殖系列ＶＬ配列が、ＤＰＫ９、ＤＰＫ１２、ＤＰＫ１８、ＤＰＫ２４、ＨＫ１０２＿Ｖ１、ＤＰＫ１、ＤＰＫ８、ＤＰＫ３、ＤＰＫ２１、Ｖｇ＿３８Ｋ、ＤＰＫ２２、ＤＰＫ１５、ＤＰＬ１６、ＤＰＬ８、Ｖ１−２２、Ｖλコンセンサス、Ｖλ１コンセンサス、Ｖλ３コンセンサス、Ｖκコンセンサス、Ｖκ１コンセンサス、Ｖκ２コンセンサス、およびＶκ３からなる群から選択され、ヒト生殖系列ＶＨが、ＤＰ５４、ＤＰ４７、ＤＰ５０、ＤＰ３１、ＤＰ４６、ＤＰ７１、ＤＰ７５、ＤＰ１０、ＤＰ７、ＤＰ４９、ＤＰ５１、ＤＰ３８、ＤＰ７９、ＤＰ７８、ＤＰ７３、ＶＨ３、ＶＨ５、ＶＨ１、およびＶＨ４からなる群から選択される、Ｅ１〜Ｅ１２のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００１９】
Ｅ１４．  ＤＰ５４、ＤＰ４７、ＤＰ５０、ＤＰ３１、ＤＰ４６、ＤＰ７１、ＤＰ７５、ＤＰ１０、ＤＰ７、ＤＰ４９、ＤＰ５１、ＤＰ３８、ＤＰ７９、ＤＰ７８、ＤＰ７３、ＶＨ３、ＶＨ５、ＶＨ１、およびＶＨ４からなる群から選択されるヒト生殖系列ＶＨ配列に由来するＶＨフレームワーク配列を含む、Ｅ１〜Ｅ１３のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００２０】
Ｅ１５．  ヒトＶＨ３生殖系列配列に由来するフレームワークＶＨ配列を含む、Ｅ１〜Ｅ１４のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００２１】
Ｅ１６．  ＤＰ５４、ＤＰ４７、ＤＰ５０、ＤＰ３１、ＤＰ４６、ＤＰ４９、およびＤＰ５１からなる群から選択されるヒト生殖系列ＶＨ配列に由来するフレームワークＶＨ配列を含む、Ｅ１〜Ｅ１５のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００２２】
Ｅ１７．  ＤＰ５４、ＤＰ４７、ＤＰ５０、およびＤＰ３１からなる群から選択されるヒト生殖系列ＶＨ配列に由来するフレームワークＶＨ配列を含む、Ｅ１〜Ｅ１６のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００２３】
Ｅ１８．  ヒト生殖系列ＤＰ５４配列に由来するＶＨフレームワーク配列を含む、Ｅ１〜Ｅ１７のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００２４】
Ｅ１９．  ＤＰＫ９、ＤＰＫ１２、ＤＰＫ１８、ＤＰＫ２４、ＨＫ１０２＿Ｖ１、ＤＰＫ１、ＤＰＫ８、ＤＰＫ３、ＤＰＫ２１、Ｖｇ＿３８Ｋ、ＤＰＫ２２、ＤＰＫ１５、ＤＰＬ１６、ＤＰＬ８、Ｖ１−２２、Ｖλコンセンサス、Ｖλ１コンセンサス、Ｖλ３コンセンサス、Ｖκコンセンサス、Ｖκ１コンセンサス、Ｖκ２コンセンサス、およびＶκ３からなる群から選択されるヒト生殖系列ＶＬ配列に由来するＶＬフレームワーク配列を含む、Ｅ１〜Ｅ１８のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００２５】
Ｅ２０．  ＤＰＫ９、ＤＰＫ１２、ＤＰＫ１８、ＤＰＫ２４、ＨＫ１０２＿Ｖ１、ＤＰＫ１、ＤＰＫ８、ＤＰＫ３、ＤＰＫ２１、Ｖｇ＿３８Ｋ、ＤＰＫ２２、ＤＰＫ１５、Ｖκコンセンサス、Ｖκ１コンセンサス、Ｖκ２コンセンサス、およびＶκ３からなる群から選択されるヒト生殖系列ＶＬ配列に由来するＶＬフレームワーク配列を含む、Ｅ１〜Ｅ１９のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００２６】
Ｅ２１．  ヒト生殖系列Ｖκ１配列に由来するＶＬフレームワーク配列を含む、Ｅ１〜Ｅ２０のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００２７】
Ｅ２２．  ＤＰＫ９、ＨＫ１０２＿Ｖ１、ＤＰＫ１、およびＤＰＫ８からなる群から選択されるヒト生殖系列ＶＬ配列に由来するＶＬフレームワーク配列を含む、Ｅ１〜Ｅ２１のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００２８】
Ｅ２３．  ヒト生殖系列ＤＰＫ９配列に由来するＶＬフレームワーク配列を含む、Ｅ１〜Ｅ２２のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００２９】
Ｅ２４．  ＶＬフレームワーク配列とＶＨフレームワーク配列とを含み、ＶＬフレームワーク配列またはＶＨフレームワーク配列の一方または両方が、それの派生元となったヒト生殖系列配列と少なくとも９０％同一である、Ｅ１〜Ｅ２３のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００３０】
Ｅ２５．  ＶＬフレームワーク配列とＶＨフレームワーク配列とを含み、ＶＬフレームワーク配列またはＶＨフレームワーク配列の一方または両方が、それの派生元となったヒト生殖系列配列と少なくとも６６％、７６％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である、Ｅ１〜Ｅ２４のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００３１】
Ｅ２６．  ＶＬフレームワーク配列とＶＨフレームワーク配列とを含み、ＶＬフレームワーク配列またはＶＨフレームワーク配列の一方または両方が、それの派生元となったヒト生殖系列配列と同一である、Ｅ１〜Ｅ２５のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００３２】
Ｅ２７．  配列番号２２５と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１〜Ｅ２６のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００３３】
Ｅ２８．  配列番号２２５と少なくとも９２％同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１〜Ｅ２７のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００３４】
Ｅ２９．  配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１〜Ｅ２８のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００３５】
Ｅ３０．  配列番号２０７と少なくとも６６％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、Ｅ１〜Ｅ２９のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００３６】
Ｅ３１．  配列番号２０７と少なくとも６６％、７６％、８０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、Ｅ１〜Ｅ３０のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００３７】
Ｅ３２．  配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、Ｅ１〜Ｅ３１のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００３８】
Ｅ３３．  Ｆｃドメインを含む、Ｅ１〜Ｅ３２のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００３９】
Ｅ３４．  ＦｃドメインがＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１もしくはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、またはＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４）のＦｃドメインである、Ｅ３３に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００４０】
Ｅ３５．  ＦｃドメインがＩｇＧのＦｃドメインである、Ｅ３４に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００４１】
Ｅ３６．  ＩｇＧが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４からなる群から選択される、Ｅ３５に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００４２】
Ｅ３７．  ＩｇＧがＩｇＧ１である、Ｅ３６に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００４３】
Ｅ３８．  配列番号２４４と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、Ｅ１〜Ｅ３７のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００４４】
Ｅ３９．  配列番号２４４と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、Ｅ１〜Ｅ３８のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００４５】
Ｅ４０．  配列番号２４４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、Ｅ１〜Ｅ３９のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００４６】
Ｅ４１．  配列番号２０９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＬＣを含む、Ｅ１〜Ｅ４０のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００４７】
Ｅ４２．  配列番号２０９と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含むＬＣを含む、Ｅ１〜Ｅ４１のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００４８】
Ｅ４３．  配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＬＣを含む、Ｅ１〜Ｅ４２のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００４９】
Ｅ４４．  ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２２７２４を有するプラスミドによってコードされるＶＬ配列を含む、Ｅ１〜Ｅ４３のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００５０】
Ｅ４５．  ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２２７２５を有するプラスミドによってコードされるＶＬ配列を含む、Ｅ１〜Ｅ４４のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００５１】
Ｅ４６．  ヒトＩＬ−３３への結合について、Ｅ１〜Ｅ４５のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片と競合する抗体、またはその抗原結合断片。
【００５２】
Ｅ４７．  ヒトＩＬ−３３への結合について、７Ｅ８＿キメラ、９Ｂ３＿キメラ、９Ｂ３＿キメラ＿ｈｕＪｓｅｇ、７Ｅ８  ＣＤＲ移植、ＩＬ３３−１０、９Ｂ３  ＣＤＲ移植、９Ｂ３＿１、９Ｂ３＿２Ａ、９Ｂ３＿２Ｂ、９Ｂ３＿３、９Ｂ３＿５、９Ｂ３＿７、９Ｂ３＿１３、９Ｂ３＿１５、９Ｂ３＿１７、９Ｂ３＿２２、９Ｂ３＿３１Ｖ２、９Ｂ３＿３６、９Ｂ３＿７９、９Ｂ３＿１２４、９Ｂ３＿１６２、７Ｅ８Ｈ／９Ｂ３Ｋ、９Ｂ３＿５６３、ＩＬ３３−１１、ＩＬ３３−１２、ＩＬ３３−１３、ＩＬ３３−４５、ＩＬ３３−５５、ＩＬ３３−５６、ＩＬ３３−５７、ＩＬ３３−５８、ＩＬ３３−６１、ＩＬ３３−６２、ＩＬ３３−６８、ＩＬ３３−７４、ＩＬ３３−７５、ＩＬ３３−８０、ＩＬ３３−８１、ＩＬ３３−１０３、ＩＬ３３−１１７、ＩＬ３３−１３６、ＩＬ３３−１５３、ＩＬ３３−１５４、ＩＬ３３−１５５、ＩＬ３３−１５６、ＩＬ３３−１５７、ＩＬ３３−１５８、ＩＬ３３−１６７、ＩＬ３３−１６８、ＩＬ３３−１６９、ＩＬ３３−１７０、ＩＬ３３−１７１、ＩＬ３３−１７２、ＩＬ３３−１７５、ＩＬ３３−１８６、ＩＬ３３−１８７、ＩＬ３３−１８８、ＩＬ３３−１５８−１５２、ＩＬ３３−１６７−１５３、ＩＬ３３−１５８ＬＳ、およびＩＬ３３−１６７ＬＳのうちの１つまたは複数と競合する抗体、またはその抗原結合断片。
【００５３】
Ｅ４８．  ヒトＩＬ−３３への結合について、ＩＬ３３−１５８ＬＳ、またはＩＬ３３−１５８ＬＳの抗原結合断片と競合する抗体、またはその抗原結合断片。
【００５４】
Ｅ４９．  Ｆｃ融合タンパク質、モノボディ、マキシボディ、二官能性抗体、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦｖ、ペプチボディである、Ｅ１〜Ｅ４８のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００５５】
Ｅ５０．  約１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、９００ｐＭ、８００ｐＭ、７００ｐＭ、６００ｐＭ、５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１５０ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ、１５ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭ、および１ｐＭからなる群から選択されるおよその値の、または上記群から選択される値未満のＫＤでヒトＩＬ−３３に結合する、Ｅ１〜Ｅ４９に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００５６】
Ｅ５１．  約１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、９００ｐＭ、８００ｐＭ、７００ｐＭ、６００ｐＭ、５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１５０ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ、１５ｐＭ、１３ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭ、および１ｐＭからなる群から選択されるおよその値の、または上記群から選択される値未満のＫＤでカニクイザルＩＬ−３３に結合する、Ｅ１〜Ｅ５０に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００５７】
Ｅ５２．  カニクイザルＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤが、ヒトＩＬ−３３への抗体、またはその抗原結合断片の結合ＫＤの１桁分以内である、Ｅ１〜Ｅ５１に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００５８】
Ｅ５３．  カニクイザルＩＬ−３３への結合と比較したヒトＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤの比が５：１〜１：５である、Ｅ１〜Ｅ５２に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００５９】
Ｅ５４．  カニクイザルＩＬ−３３への結合と比較したヒトＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤの比が２：１〜１：２である、Ｅ１〜Ｅ５３に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００６０】
Ｅ５５．  不活性ＩＬ−３３と結合する場合のＫＤよりも低いＫＤで活性ＩＬ−３３に結合する、Ｅ１〜Ｅ５４に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００６１】
Ｅ５６．  活性ＩＬ−３３に結合する抗体、またはその抗原結合断片のＫＤが、不活性ＩＬ−３３に結合する抗体、またはその抗原結合断片のＫＤの少なくとも１０分の１の低さである、Ｅ１〜Ｅ５５に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００６２】
Ｅ５７．  活性ＩＬ−３３に結合する抗体、またはその抗原結合断片のＫＤが、不活性形態のＩＬ−３３に結合する抗体、またはその抗原結合断片のＫＤの少なくとも１０分の１、１００分の１、１ｘ１０３分の１、１ｘ１０４分の１、１ｘ１０５分の１、１ｘ１０６分の１、１ｘ１０７分の１の低さである、Ｅ１〜Ｅ５６に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００６３】
Ｅ５８．  活性ＩＬ−３３に結合するが、不活性ＩＬ−３３には結合しない、Ｅ１〜Ｅ５７に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００６４】
Ｅ５９．  活性ＩＬ−３３のＫＤの測定が、ＩＬ−３３バリアントを使用して行われ、配列番号３９６の番号付けによる、２０８位（Ｃ２０８）のシステインアミノ酸残基が、非システインアミノ酸残基で置換される、Ｅ５５〜Ｅ５８に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００６５】
Ｅ６０．  活性ＩＬ−３３のＫＤの測定が、ＩＬ−３３バリアントを使用して行われ、配列番号３９６の番号付けによる、Ｃ２０８およびＣ２３２が、非システインアミノ酸残基で置換される、Ｅ５５〜Ｅ５９に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００６６】
Ｅ６１．  活性ＩＬ−３３のＫＤの測定が、還元型の野生型ＩＬ−３３を使用して行われる、Ｅ５５〜Ｅ６０に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００６７】
Ｅ６２．  不活性ＩＬ−３３のＫＤの測定が、非還元型の野生型ＩＬ−３３を使用して行われる、Ｅ５５〜Ｅ６１に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００６８】
Ｅ６３．  ＩＬ−３３がヒトＩＬ−３３である、Ｅ５５〜Ｅ６２に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００６９】
Ｅ６４．  ＩＬ−３３がカニクイザルＩＬ−３３である、Ｅ５５〜Ｅ６２に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００７０】
Ｅ６５．  ヒトＩＬ−３３への結合と比較した、カニクイザルＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤの比が、低い方の値が０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７，１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、および６．２からなる群から選択され、高い方の値が１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、６．２、９、９．２、および１０からなる群から選択される範囲内にある、Ｅ１〜Ｅ６４に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００７１】
Ｅ６６．  ヒトＩＬ−３３への結合と比較した、カニクイザルＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤの比が、約０．５〜約３．０である、Ｅ１〜Ｅ５５に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００７２】
Ｅ６７．  ヒトＩＬ−３３への結合と比較した、カニクイザルＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤの比が、約１．２〜約２．４である、Ｅ１〜Ｅ５６に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００７３】
Ｅ６８．  ヒトＩＬ−３３への結合と比較した、カニクイザルＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤの比が、約１〜約２である、Ｅ１〜Ｅ５７に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００７４】
Ｅ６９．  ヒトＩＬ−３３への結合と比較した、カニクイザルＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤの比が、約１．３〜約２．３である、Ｅ１〜Ｅ５８に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００７５】
Ｅ７０．  ヒトＩＬ−３３への結合と比較した、カニクイザルＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤの比が、約１．３〜約１．８である、Ｅ１〜Ｅ５９に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００７６】
Ｅ７１．  配列番号３のヒトＩＬ−３３への結合と比較した、配列番号５のカニクイザルＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤの比が、約１．０〜約２．３である、Ｅ１〜Ｅ７０に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００７７】
Ｅ７２．  配列番号３のヒトＩＬ−３３への結合と比較した、配列番号５のカニクイザルＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤの比が、約１．０〜約２．０である、Ｅ１〜Ｅ７１に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００７８】
Ｅ７３．  配列番号３のヒトＩＬ−３３への結合と比較した、配列番号５のカニクイザルＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤの比が、約１．３〜約１．８である、Ｅ１〜Ｅ７２に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００７９】
Ｅ７４．  配列番号３のヒトＩＬ−３３への結合と比較した、配列番号５のカニクイザルＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤの比が、カニクイザルおよびヒトＩＬ−３３の中和に関するＨＥＫ２９３  ＳＴ２  ＮＦκＢリポーターアッセイの結果を比較することによって測定される、Ｅ１〜Ｅ７３に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００８０】
Ｅ７５．  配列番号１のヒトＩＬ−３３への結合と比較した、配列番号３９７のカニクイザルＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤの比が、約４〜約１０である、Ｅ１〜Ｅ７４に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００８１】
Ｅ７６．  配列番号１のヒトＩＬ−３３への結合と比較した、配列番号３９７のカニクイザルＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤの比が、約４．２〜約９．２である、Ｅ１〜Ｅ７５に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００８２】
Ｅ７７．  配列番号１のヒトＩＬ−３３への結合と比較した、配列番号３９７のカニクイザルＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤの比が、約４．２である、Ｅ１〜Ｅ７６に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００８３】
Ｅ７８．  配列番号１のヒトＩＬ−３３への結合と比較した、配列番号３９７のカニクイザルＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤの比が、約６．２である、Ｅ１〜Ｅ７７に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００８４】
Ｅ７９．  配列番号１のヒトＩＬ−３３への結合と比較した、配列番号３９７のカニクイザルＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤの比が、約９．２である、Ｅ１〜Ｅ７８に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００８５】
Ｅ８０．  配列番号１のヒトＩＬ−３３への結合と比較した、配列番号３９７のカニクイザルＩＬ−３３への抗体、または抗原結合断片の結合ＫＤの比が、カニクイザルおよびヒトＩＬ−３３の中和に関するＨＥＫ２９３  ＳＴ２  ＮＦκＢリポーターアッセイの結果を比較することによって測定される、Ｅ１〜Ｅ７９に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００８６】
Ｅ８１．  ＫＤ値が表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される、Ｅ５０〜Ｅ８０のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００８７】
Ｅ８２．  ＫＤ値が表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定され、ＩＬ−３３が固定される、Ｅ５０〜Ｅ８１のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００８８】
Ｅ８３．  カニクイザルにおける終末半減期が少なくとも約１５日である、Ｅ１〜Ｅ８２のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００８９】
Ｅ８４．  カニクイザルにおける終末半減期が少なくとも約１６日である、Ｅ１〜Ｅ８３のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００９０】
Ｅ８５．  カニクイザルにおける終末半減期が少なくとも約１８日である、Ｅ１〜Ｅ８４のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００９１】
Ｅ８６．  ヒトにおける終末半減期が少なくとも約３０日である、Ｅ１〜Ｅ８５のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００９２】
Ｅ８７．  ヒトにおける終末半減期が少なくとも約５０日である、Ｅ１〜Ｅ８６のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００９３】
Ｅ８８．  ヒトにおける終末半減期が少なくとも約５５日である、Ｅ１〜Ｅ８７のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００９４】
Ｅ８９．  ヒトにおける終末半減期が少なくとも約６０日である、Ｅ１〜Ｅ８８のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００９５】
Ｅ９０．  ヒトにおける終末半減期が少なくとも約６５日である、Ｅ１〜Ｅ８９のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００９６】
Ｅ９１．  ヒトにおける終末半減期が少なくとも約７０日である、Ｅ１〜Ｅ９０のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００９７】
Ｅ９２．  ヒトにおける終末半減期が少なくとも約７５日である、Ｅ１〜Ｅ９１のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００９８】
Ｅ９３．  ヒトにおける終末半減期が少なくとも約８０日である、Ｅ１〜Ｅ９２のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【００９９】
Ｅ９４．  ヒトにおける終末半減期が少なくとも約８５日である、Ｅ１〜Ｅ９３のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【０１００】
Ｅ９５．  ヒトにおける終末半減期が少なくとも約９０日である、Ｅ１〜Ｅ９４のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【０１０１】
Ｅ９６．  親和性捕捉自己相互作用ナノ粒子分光アッセイにおいて１５ｎｍ未満のブランクと比較した最大吸収波長を有する、Ｅ１〜Ｅ９５のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【０１０２】
Ｅ９７．  親和性捕捉自己相互作用ナノ粒子分光アッセイにおいて１０ｎｍ未満のブランクと比較した最大吸収波長を有する、Ｅ１〜Ｅ９６のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【０１０３】
Ｅ９８．  親和性捕捉自己相互作用ナノ粒子分光アッセイにおいて５ｎｍ未満のブランクと比較した最大吸収波長を有する、Ｅ１〜Ｅ９７のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【０１０４】
Ｅ９９．  親和性捕捉自己相互作用ナノ粒子分光アッセイにおいて１ｎｍ未満のブランクと比較した最大吸収波長を有する、Ｅ１〜Ｅ９８のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【０１０５】
Ｅ１００．  １９未満のブランクに対して正規化されたＤＮＡ結合スコアを有する、Ｅ１〜Ｅ９９のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【０１０６】
Ｅ１０１．  １５未満のブランクに対して正規化されたＤＮＡ結合スコアを有する、Ｅ１〜Ｅ１００のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【０１０７】
Ｅ１０２．  １０未満のブランクに対して正規化されたＤＮＡ結合スコアを有する、Ｅ１〜Ｅ１０１のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【０１０８】
Ｅ１０３．  ７．５５未満のブランクに対して正規化されたＤＮＡ結合スコアを有する、Ｅ１〜Ｅ１０２のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
【０１０９】
Ｅ１０４．  Ｅ１〜Ｅ１０３のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片と結合について競合する抗体、またはその抗原結合断片。
【０１１０】
Ｅ１０５．  Ｅ１〜Ｅ１０４のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片と同じエピトープに結合する、抗体、またはその抗原結合断片。
【０１１１】
Ｅ１０６．  ７Ｅ８＿キメラ、９Ｂ３＿キメラ、９Ｂ３＿キメラ＿ｈｕＪｓｅｇ、７Ｅ８  ＣＤＲ移植、ＩＬ３３−１０、９Ｂ３  ＣＤＲ移植、９Ｂ３＿１、９Ｂ３＿２Ａ、９Ｂ３＿２Ｂ、９Ｂ３＿３、９Ｂ３＿５、９Ｂ３＿７、９Ｂ３＿１３、９Ｂ３＿１５、９Ｂ３＿１７、９Ｂ３＿２２、９Ｂ３＿３１Ｖ２、９Ｂ３＿３６、９Ｂ３＿７９、９Ｂ３＿１２４、９Ｂ３＿１６２、７Ｅ８Ｈ／９Ｂ３Ｋ、９Ｂ３＿５６３、ＩＬ３３−１１、ＩＬ３３−１２、ＩＬ３３−１３、ＩＬ３３−４５、ＩＬ３３−５５、ＩＬ３３−５６、ＩＬ３３−５７、ＩＬ３３−５８、ＩＬ３３−６１、ＩＬ３３−６２、ＩＬ３３−６８、ＩＬ３３−７４、ＩＬ３３−７５、ＩＬ３３−８０、ＩＬ３３−８１、ＩＬ３３−１０３、ＩＬ３３−１１７、ＩＬ３３−１３６、ＩＬ３３−１５３、ＩＬ３３−１５４、ＩＬ３３−１５５、ＩＬ３３−１５６、ＩＬ３３−１５７、ＩＬ３３−１５８、ＩＬ３３−１６７、ＩＬ３３−１６８、ＩＬ３３−１６９、ＩＬ３３−１７０、ＩＬ３３−１７１、ＩＬ３３−１７２、ＩＬ３３−１７５、ＩＬ３３−１８６、ＩＬ３３−１８７、ＩＬ３３−１８８、ＩＬ３３−１５８−１５２、ＩＬ３３−１６７−１５３、ＩＬ３３−１５８ＬＳ、およびＩＬ３３−１６７ＬＳからなる群から選択される抗体のＣＤＲを含む抗体、またはその抗原結合断片。
【０１１２】
Ｅ１０７．  ７Ｅ８＿キメラ、９Ｂ３＿キメラ、９Ｂ３＿キメラ＿ｈｕＪｓｅｇ、７Ｅ８  ＣＤＲ移植、ＩＬ３３−１０、９Ｂ３  ＣＤＲ移植、９Ｂ３＿１、９Ｂ３＿２Ａ、９Ｂ３＿２Ｂ、９Ｂ３＿３、９Ｂ３＿５、９Ｂ３＿７、９Ｂ３＿１３、９Ｂ３＿１５、９Ｂ３＿１７、９Ｂ３＿２２、９Ｂ３＿３１Ｖ２、９Ｂ３＿３６、９Ｂ３＿７９、９Ｂ３＿１２４、９Ｂ３＿１６２、７Ｅ８Ｈ／９Ｂ３Ｋ、９Ｂ３＿５６３、ＩＬ３３−１１、ＩＬ３３−１２、ＩＬ３３−１３、ＩＬ３３−４５、ＩＬ３３−５５、ＩＬ３３−５６、ＩＬ３３−５７、ＩＬ３３−５８、ＩＬ３３−６１、ＩＬ３３−６２、ＩＬ３３−６８、ＩＬ３３−７４、ＩＬ３３−７５、ＩＬ３３−８０、ＩＬ３３−８１、ＩＬ３３−１０３、ＩＬ３３−１１７、ＩＬ３３−１３６、ＩＬ３３−１５３、ＩＬ３３−１５４、ＩＬ３３−１５５、ＩＬ３３−１５６、ＩＬ３３−１５７、ＩＬ３３−１５８、ＩＬ３３−１６７、ＩＬ３３−１６８、ＩＬ３３−１６９、ＩＬ３３−１７０、ＩＬ３３−１７１、ＩＬ３３−１７２、ＩＬ３３−１７５、ＩＬ３３−１８６、ＩＬ３３−１８７、ＩＬ３３−１８８、ＩＬ３３−１５８−１５２、ＩＬ３３−１６７−１５３、ＩＬ３３−１５８ＬＳ、およびＩＬ３３−１６７ＬＳからなる群から選択される抗体のＶＬおよびＶＨを含む抗体、またはその抗原結合断片。
【０１１３】
Ｅ１０８．  ７Ｅ８＿キメラ、９Ｂ３＿キメラ、９Ｂ３＿キメラ＿ｈｕＪｓｅｇ、７Ｅ８  ＣＤＲ移植、ＩＬ３３−１０、９Ｂ３  ＣＤＲ移植、９Ｂ３＿１、９Ｂ３＿２Ａ、９Ｂ３＿２Ｂ、９Ｂ３＿３、９Ｂ３＿５、９Ｂ３＿７、９Ｂ３＿１３、９Ｂ３＿１５、９Ｂ３＿１７、９Ｂ３＿２２、９Ｂ３＿３１Ｖ２、９Ｂ３＿３６、９Ｂ３＿７９、９Ｂ３＿１２４、９Ｂ３＿１６２、７Ｅ８Ｈ／９Ｂ３Ｋ、９Ｂ３＿５６３、ＩＬ３３−１１、ＩＬ３３−１２、ＩＬ３３−１３、ＩＬ３３−４５、ＩＬ３３−５５、ＩＬ３３−５６、ＩＬ３３−５７、ＩＬ３３−５８、ＩＬ３３−６１、ＩＬ３３−６２、ＩＬ３３−６８、ＩＬ３３−７４、ＩＬ３３−７５、ＩＬ３３−８０、ＩＬ３３−８１、ＩＬ３３−１０３、ＩＬ３３−１１７、ＩＬ３３−１３６、ＩＬ３３−１５３、ＩＬ３３−１５４、ＩＬ３３−１５５、ＩＬ３３−１５６、ＩＬ３３−１５７、ＩＬ３３−１５８、ＩＬ３３−１６７、ＩＬ３３−１６８、ＩＬ３３−１６９、ＩＬ３３−１７０、ＩＬ３３−１７１、ＩＬ３３−１７２、ＩＬ３３−１７５、ＩＬ３３−１８６、ＩＬ３３−１８７、ＩＬ３３−１８８、ＩＬ３３−１５８−１５２、ＩＬ３３−１６７−１５３、ＩＬ３３−１５８ＬＳ、およびＩＬ３３−１６７ＬＳからなる群から選択される抗体、またはその抗原結合断片。
【０１１４】
Ｅ１０９．  Ｅ１〜Ｅ１０８のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
【０１１５】
Ｅ１１０．  配列番号３９８、３９９、４００、および４０１の１つまたは複数に記載の核酸配列を含む単離された核酸分子。
【０１１６】
Ｅ１１１．  配列番号３９８に記載の核酸配列を含む単離された核酸分子。
【０１１７】
Ｅ１１２．  配列番号３９９に記載の核酸配列を含む単離された核酸分子。
【０１１８】
Ｅ１１３．  配列番号４００に記載の核酸配列を含む単離された核酸分子。
【０１１９】
Ｅ１１４．  配列番号４０１に記載の核酸配列を含む単離された核酸分子。
【０１２０】
Ｅ１１５．  ＡＴＣＣに寄託され、受託番号ＰＴＡ−１２２７２４を有する核酸分子のコード配列を含む単離された核酸分子。
【０１２１】
Ｅ１１６．  ＡＴＣＣに寄託され、受託番号ＰＴＡ−１２２７２５を有する核酸分子のコード配列を含む単離された核酸分子。
【０１２２】
Ｅ１１７．  Ｅ１０９〜Ｅ１１６のいずれか１つに記載の核酸分子を含むベクター。
【０１２３】
Ｅ１１８．  Ｅ１０９〜Ｅ１１６のいずれか１つに記載の核酸分子、またはＥ１１７に記載のベクターを含む宿主細胞。
【０１２４】
Ｅ１１９．  哺乳動物細胞である、Ｅ１１８に記載の宿主細胞。
【０１２５】
Ｅ１２０．  ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ−２９３細胞、またはＳｐ２．０細胞である、Ｅ１１９に記載の宿主細胞。
【０１２６】
Ｅ１２１．  抗体、またはその抗原結合断片を作製する方法であって、Ｅ１１９〜Ｅ１２０のいずれか１つに記載の宿主細胞を、前記抗体、またはその抗原結合断片が前記宿主細胞によって発現される条件下で培養することを含む方法。
【０１２７】
Ｅ１２２．  前記抗体、またはその抗原結合断片を単離することをさらに含む、Ｅ１２１に記載の方法。
【０１２８】
Ｅ１２３．  Ｅ１〜Ｅ１０８のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片と、薬学的に許容できる担体または賦形剤とを含む医薬組成物。
【０１２９】
Ｅ１２４．  ＩＬ−３３の活性を低下させる方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量のＥ１〜Ｅ１０８のいずれか１つに記載の抗体、もしくはその抗原結合断片、またはＥ１２３に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【０１３０】
Ｅ１２５．  炎症疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量のＥ１〜Ｅ１０８のいずれか１つに記載の抗体、もしくはその抗原結合断片、またはＥ１２３に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【０１３１】
Ｅ１２６．  アトピー性皮膚炎を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量のＥ１〜Ｅ１０８のいずれか１つに記載の抗体、もしくはその抗原結合断片、またはＥ１２３に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【０１３２】
Ｅ１２７．  炎症性腸疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量のＥ１〜Ｅ１０８のいずれか１つに記載の抗体、もしくはその抗原結合断片、またはＥ１２３に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【０１３３】
Ｅ１２８．  前記対象がヒトである、Ｅ１２１〜Ｅ１２７のいずれか１つに記載の方法。
【０１３４】
Ｅ１２９．  前記抗体、もしくはその抗原結合断片、または医薬組成物を静脈内投与することを含む、Ｅ１２１〜Ｅ１２８のいずれか１つに記載の方法。
【０１３５】
Ｅ１３０．  前記抗体、もしくはその抗原結合断片、または医薬組成物を皮下投与することを含む、Ｅ１２１〜Ｅ１２８のいずれか１つに記載の方法。
【０１３６】
Ｅ１３１．  前記抗体、もしくはその抗原結合断片、または医薬組成物が、週約２回、週１回、２週毎に１回、３週毎に１回、４週毎に１回、５週毎に１回、６週毎に１回、７週毎に１回、８週毎に１回、９週毎に１回、１０週毎に１回、月２回、月１回、２カ月毎に１回、３カ月毎に１回、または４カ月毎に１回投与される、Ｅ１２１〜Ｅ１３０のいずれか１つに記載の方法。
【０１３７】
Ｅ１３２．  薬剤としての使用のための、Ｅ１〜Ｅ１０８のいずれか１つに記載の抗体、もしくはその抗原結合断片、またはＥ１２３に記載の医薬組成物。
【０１３８】
Ｅ１３３．  対象におけるＩＬ−３３の活性を低下させるのに使用するための、Ｅ１〜Ｅ１０８のいずれか１つに記載の抗体、もしくはその抗原結合断片、またはＥ１２３に記載の医薬組成物。
【０１３９】
Ｅ１３４．  対象における炎症疾患を処置するのに使用するための、Ｅ１〜Ｅ１０８のいずれか１つに記載の抗体、もしくはその抗原結合断片、またはＥ１２３に記載の医薬組成物。
【０１４０】
Ｅ１３５．  対象におけるアトピー性皮膚炎を処置するのに使用するための、Ｅ１〜Ｅ１０８のいずれか１つに記載の抗体、もしくはその抗原結合断片、またはＥ１２３に記載の医薬組成物。
【０１４１】
Ｅ１３６．  医学的状態を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量のＥ１〜Ｅ１０８のいずれか１つに記載の抗体、もしくはその抗原結合断片、またはＥ１２３に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【０１４２】
Ｅ１３７．  状態が、炎症性腸疾患、アレルギー、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、春季カタル、季節性アレルギー、ペットアレルギー、喘息、食物アレルギー、ピーナッツアレルギー、アトピー性皮膚炎、鼻ポリープを伴う慢性鼻副鼻腔炎（ＣＲＳｗＮＰ）、アレルギー性鼻炎、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、呼吸器疾患のウイルス性増悪、小児および成人におけるウイルス感染（呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ライノウイルス、インフルエンザ）、蕁麻疹、好酸球性食道炎、慢性線維症、肝線維症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、慢性腎臓病、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、強皮症、全身性硬化症、急性腎傷害、敗血症、膵炎、１型糖尿病、移植対宿主疾患（ＧＶＨＤ）、組織移植、アルツハイマー病、関節リウマチ、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、乾癬、セリアック病およびレイノー病または現象からなる群から選択される、Ｅ１３６に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【０１４３】
【図１Ａ】捕捉されたラット７Ｅ８  ＦａｂへのＩＬ−３３結合の表面プラズモン共鳴トレースを示すパネルである。図１Ａは、固定されたヒトＩＬ−３３（ｍｍ２）へのラット７Ｅ８  Ｆａｂの結合を示す。
【図１Ｂ】捕捉されたラット７Ｅ８  ＦａｂへのＩＬ−３３結合の表面プラズモン共鳴トレースを示すパネルである。図１Ｂは、還元剤の非存在下での固定されたヒトＩＬ−３３（ＷＴ）へのラット７Ｅ８  Ｆａｂの結合を示す。
【図１Ｃ】捕捉されたラット７Ｅ８  ＦａｂへのＩＬ−３３結合の表面プラズモン共鳴トレースを示すパネルである。図１Ｃは、還元剤（ＤＴＴ）の存在下での固定されたヒトＩＬ−３３（ＷＴ）へのラット７Ｅ８  Ｆａｂの結合を示す。
【図２Ａ】ヒトＤＰ−５４／ＤＰＫ９生殖系列に対する抗ＩＬ−３３最適化可変領域の配列アラインメントを示すパネルである。図２Ａは、ＩＬ３３−１５８−１５２／ＩＬ３３−１５８ＬＳのＶＨ（配列番号２２５）およびＶＬ（配列番号２０７）の、ヒト生殖系列配列ＤＰ−５４／ＪＨ４（配列番号７）およびＤＰＫ９／ＪＫ４（配列番号１１）とのアラインメントを示す。
【図２Ｂ】ヒトＤＰ−５４／ＤＰＫ９生殖系列に対する抗ＩＬ−３３最適化可変領域の配列アラインメントを示すパネルである。図２Ｂは、ＩＬ３３−１６７−１５３／ＩＬ３３−１６７ＬＳのＶＨ（配列番号２１０）およびＶＬ（配列番号９１）の、ヒト生殖系列配列ＤＰ−５４／ＪＨ４（配列番号７）およびＤＰＫ９／ＪＫ４（配列番号１１）とのアラインメントを示す。
【図３Ａ】チップ上に固定された本発明の抗体へのサイトカインの結合を示すパネルである。図３Ａは、固定されたＩＬ３３−１５８ＬＳ  Ｆａｂへのサイトカインの結合を示す。
【図３Ｂ】チップ上に固定された本発明の抗体へのサイトカインの結合を示すパネルである。図３Ｂは、固定された７Ｅ８  Ｆａｂへのサイトカインの結合を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１４４】
抗体
抗体の「抗原結合断片」とは、抗原に特異的に結合する能力を保持する（好ましくは、実質的に同じ結合親和性を有する）完全長抗体の断片を指す。抗原結合断片の例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２個のＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４〜５４６）；ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、ジスルフィド結合したＦｖ（ｄｓＦｖ）、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体およびイントラボディが挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２個のドメイン、ＶＬおよびＶＨは別々の遺伝子によってコードされるが、ＶＬおよびＶＨ領域が対形成して一価分子を形成する単一タンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる）として作製することができる合成リンカーによって、組換え方法を使用して、それらを連結することができる；例えば、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３〜４２６（１９８８）およびＨｕｓｔｏｎら、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９〜５８８３を参照されたい。ダイアボディなどの、他の形態の単鎖抗体も包含される。ダイアボディは、ＶＨおよびＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上で発現されるが、同じ鎖上の２個のドメイン間で対形成させるには短すぎるリンカーを使用し、それにより、そのドメインに、別の鎖の相補的ドメインと対形成させ、２個の抗原結合部位を作出する、二価の二特異的抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、１９９３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４〜６４４８；Ｐｏｌｊａｋら、１９９４、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１〜１１２３を参照されたい）。
【０１４５】
抗体「可変」ドメインとは、単独の、または組み合わせた、抗体軽鎖（ＶＬ）の可変領域または抗体重鎖（ＶＨ）の可変領域を指す。当業界で公知のように、重鎖および軽鎖の可変領域はそれぞれ、３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続された４個のフレームワーク領域（ＦＲ）からなり、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。
【０１４６】
「相補性決定領域」（ＣＤＲ）を、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの両方の蓄積、ＡｂＭ、コンタクト、Ｎｏｒｔｈの定義、および／または当業界で周知のコンフォメーション定義もしくはＣＤＲ決定の任意の方法に従って同定することができる。例えば、Ｋａｂａｔら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版（超可変領域）；Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７〜８８３（構造ループ構造）を参照されたい。ＣＤＲを構成する特定の抗体中のアミノ酸残基の同一性を、当業界で周知の方法を使用して決定することができる。ＣＤＲのＡｂＭ定義は、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの妥協であり、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ  ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ａｃｃｅｌｒｙｓ（登録商標））を使用する。ＣＤＲの「コンタクト」定義は、ＭａｃＣａｌｌｕｍら、１９９６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２６２：７３２〜７４５に記載された、観察された抗原接触に基づくものである。ＣＤＲの「コンフォメーション」定義は、抗原結合へのエンタルピー寄与を行う残基に基づくものである（例えば、Ｍａｋａｂｅら、２００８、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８３：１１５６〜１１６６を参照されたい）。Ｎｏｒｔｈは、ＣＤＲ定義の異なる好ましいセットを使用して標準的なＣＤＲコンフォメーションを同定した（Ｎｏｒｔｈら、２０１１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４０６：２２８〜２５６）。本明細書でＣＤＲの「コンフォメーション定義」と呼ばれる、別の手法では、ＣＤＲの位置を、抗原結合へのエンタルピー寄与を行う残基として同定することができる（Ｍａｋａｂｅら、２００８、Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８３：１１５６〜１１６６）。さらに他のＣＤＲ境界定義は、上記の手法の１つに厳密に従わなくてもよいが、それにもかかわらず、ＫａｂａｔのＣＤＲの少なくとも一部と重複するが、それらは、特定の残基または残基群またはさらにはＣＤＲ全体が抗原結合に有意に影響しないという予測または実験的知見を考慮して短縮するか、または伸長することができる。本明細書で使用される場合、ＣＤＲは、手法の組合せなどの、当業界で公知の任意の手法によって定義されるＣＤＲを指してもよい。本明細書で使用される方法は、これらの手法のいずれかに従って定義されたＣＤＲを使用してもよい。１つを超えるＣＤＲを含有する任意の所与の実施形態について、ＣＤＲ（または抗体の他の残基）を、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｎｏｒｔｈ、拡張、ＡｂＭ、コンタクト、および／またはコンフォメーション定義のいずれかに従って定義することができる。
【０１４７】
可変ドメイン中の残基は、抗体の編集物の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインについて使用される番号付け系である、Ｋａｂａｔに従って番号付けられる。Ｋａｂａｔら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ．を参照されたい。この番号付け系を使用して、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＣＤＲの短縮、またはそれへの挿入に対応する、より少ない、または追加のアミノ酸を含有してもよい。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）および重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、および８２ｃ）を含んでもよい。残基のＫａｂａｔ番号付けを、抗体の配列の相同性の領域での、「標準的な」Ｋａｂａｔ番号付き配列とのアラインメントによって所与の抗体について決定することができる。Ｋａｂａｔ番号付けを割り当てるための様々なアルゴリズムが利用可能である。Ａｂｙｓｉｓのバージョン２．３．３リリース（ｗｗｗ．ａｂｙｓｉｓ．ｏｒｇ）に実装されたアルゴリズムが、可変領域ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３にＫａｂａｔ番号付けを割り当てるために本明細書で使用される。ＣＤＲ−Ｈ１については、ＡｂＭ定義が使用される。
【０１４８】
抗体中の特定のアミノ酸残基位置を、Ｋａｂａｔに従って番号付けることもできる。
【０１４９】
「フレームワーク」（ＦＲ）残基は、ＣＤＲ残基以外の抗体可変ドメイン残基である。ＶＨまたはＶＬドメインフレームワークは、以下の構造：ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４において、ＣＤＲが散在する、４個のフレームワークサブ領域、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４を含む。
【０１５０】
「エピトープ」とは、抗体が、例えば、抗体と相互作用する残基を含むエリアまたは領域に特異的に結合する抗原のエリアまたは領域を指す。エピトープは、線状エピトープであってもコンフォメーションエピトープであってもよい。
【０１５１】
エピトープに「選択的に結合する」または「特異的に結合する」（本明細書では互換的に使用される）抗体は、当業界でよく理解される用語であり、そのような特異的または選択的結合を決定するための方法も、当業界で周知である。分子は、それが代替細胞または物質に会合するよりも特定の細胞または物質とより頻繁に、より迅速に、より長い持続期間および／またはより高い親和性で反応または会合する場合、「特異的結合」または「選択的結合」を示すと言われる。抗体は、それが他の物質に結合するよりも高い親和性、アビディティで、より容易に、および／またはより長い持続期間で結合する場合、標的に「特異的に結合する」または「選択的に結合する」。例えば、ＩＬ−３３エピトープに特異的または選択的に結合する抗体は、それが他のＩＬ−３３エピトープまたは非ＩＬ−３３エピトープに結合するよりも高い親和性、アビディティで、より容易に、および／またはより長い持続期間でこのエピトープに結合する抗体である。また、例えば、第１の標的に特異的または選択的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）が、第２の標的に特異的または選択的に結合してもよい、またはしなくてもよいことが、この定義を読むことによって理解される。そのようなものとして、「特異的結合」または「選択的結合」は、排他的結合を必ずしも必要としない（しかし、含んでもよい）。一般に、必須ではないが、結合に対する参照は、選択的結合を意味する。「特異的結合」または「選択的結合」は、特定の分子を認識し、これに結合するが、試料中の他の分子を実質的に認識しないか、またはそれに結合しない化合物、例えば、タンパク質、核酸、抗体などを含む。例えば、試料中の同族リガンドまたは結合パートナー（例えば、腫瘍抗原に結合する抗ヒト腫瘍抗原抗体）を認識し、これに結合するが、試料中の他の分子を実質的に認識しない、またはそれに結合しない抗体またはペプチド受容体は、同族リガンドまたは結合パートナーに特異的に結合する。かくして、指定のアッセイ条件下では、特定の結合部分（例えば、抗体、もしくはその抗原結合部分または受容体もしくはそのリガンド結合部分）は、特定の標的分子に選択的に結合し、試験試料中に存在する他の成分には有意な量で結合しない。
【０１５２】
様々なアッセイ形式を使用して、目的の分子に特異的に結合する抗体またはペプチドを選択することができる。例えば、他にも多くあるが、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイ、免疫沈降、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、Ｏｃｔｅｔ（商標）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．、Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ、ＣＡ）およびウェスタンブロット分析は、同族リガンドまたは結合パートナーに特異的に結合する抗原もしくは受容体、またはそのリガンド結合部分と特異的に反応する抗体を同定するために使用することができるアッセイである。典型的には、特異的または選択的反応は、バックグラウンドシグナルまたはノイズの少なくとも２倍であり、より典型的には、バックグラウンドの１０倍を超え、さらにより具体的には、抗体は、平衡解離定数（ＫＤ）が１μＭ以下、好ましくは、１００ｎＭ以下、より好ましくは、１０ｎＭ以下、さらにより好ましくは、１００ｐＭ以下、さらにより好ましくは、１０ｐＭ以下、さらにより好ましくは、１ｐＭ以下である場合、抗原に「特異的に結合する」と言われる。
【０１５３】
抗体に関して本明細書で使用される用語「競合する」とは、抗原への、第１の抗体、またはその抗原結合部分の結合が、第２の抗体、またはその抗原結合部分による同じ抗原のその後の結合を減少させることを意味する。一般に、第１の抗体への結合は、立体障害、コンフォメーション変化、または共通エピトープ（またはその一部）への結合を作出し、同じ抗原への第２の抗体の結合は減少する。標準的な競合アッセイを使用して、２つの抗体が互いに競合するかどうかを決定することができる。抗体競合に関する１つの好適なアッセイは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術を使用して、典型的には、バイオセンサーシステム（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）システムなど）を使用して相互作用の程度を測定することができる、Ｂｉａｃｏｒｅ技術の使用を含む。例えば、ＳＰＲを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ競合結合阻害アッセイにおいて使用して、第２の抗体の結合を阻害するある抗体の能力を決定することができる。抗体競合を測定するための別のアッセイは、ＥＬＩＳＡに基づく手法を使用する。
【０１５４】
さらに、その競合に基づいて抗体を「ビニング」するための高スループットプロセスが、国際特許出願ＷＯ２００３／４８７３１に記載されている。一方の抗体（または断片）が、ＩＬ−３３への別の抗体（または断片）の結合を減少させる場合、競合が存在する。例えば、異なる抗体が連続的に添加される、連続結合競合アッセイを使用することができる。第１の抗体を、飽和に近い結合に達するまで添加することができる。次いで、第２の抗体を添加する。ＩＬ−３３への第２の抗体の結合が、検出されないか、または第１の抗体の非存在下での平行アッセイ（値を１００％として設定することができる）と比較して有意に減少している（例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％の減少）場合、２つの抗体は互いに競合すると考えられる。ＳＰＲによる例示的抗体競合アッセイ（および重複エピトープ分析）は、実施例４に提供される。
【０１５５】
「Ｆｃ融合」タンパク質は、１つまたは複数のポリペプチドがＦｃポリペプチドに作動可能に連結されたタンパク質である。Ｆｃ融合物は、免疫グロブリンのＦｃ領域と、融合パートナーとを組み合わせるものである。
【０１５６】
用語「処置」は、予防的および／または治療的処置を含む。それが状態の臨床兆候の前に投与された場合、処置は予防的であると考えられる。治療的処置は、例えば、疾患の重症度の改善もしくは低下、または疾患の長さの短縮を含む。
【０１５７】
結合親和性
抗体の結合親和性を、特定の抗原−抗体相互作用の解離速度を指すＫＤ値として表すことができる。ＫＤは、結合速度、または「オンレート（ｋｏｎ）」に対する、「オフレート（ｋｏｆｆ）」とも呼ばれる解離速度の比である。かくして、ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎに等しく、モル濃度（Ｍ）として表され、ＫＤが小さいほど、結合の親和性は強くなる。抗体のＫＤ値は、当業界で確立された方法を使用して決定することができる。Ｋｄを測定するための１つの例示的な方法は、典型的には、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用する、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）である。ＢＩＡｃｏｒｅ速度分析は、チップ表面上での、分子（例えば、エピトープ結合ドメインを含む分子）が固定されたチップからの抗原の結合および解離を分析することを含む。抗体のＫｄを決定するための別の方法は、典型的には、ＯＣＴＥＴ（登録商標）技術（Ｏｃｔｅｔ  ＱＫｅ  ｓｙｓｔｅｍ、ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用する、Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙを使用することによるものである。あるいは、またはさらに、Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ、Ｉｄ．）から入手可能な、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙ）アッセイを使用することもできる。
【０１５８】
一部の態様では、ＫＤ値は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される。ＩＬ−３３を固定することができる。ＩＬ−３３を固相表面に固定することができる。ＩＬ−３３を、例えば、共有カップリング（アミンカップリングなど）により、チップに固定することができる。チップは、ＣＭ５センサーチップであってもよい。
【０１５９】
分析物はリガンドに結合するため、センサー表面上へのタンパク質の蓄積は、屈折率の増大を引き起こす。この屈折率の変化は、リアルタイムで測定され（速度分析実験におけるサンプリングは０．１ｓ毎に行われる）、その結果は、応答単位（ＲＵ）対時間（センサーグラムと呼ばれる）としてプロットされる。重要なことに、泳動バッファーと試料バッファーの屈折率に差異がある場合も、応答（バックグラウンド応答）が生成される。このバックグラウンド応答を、センサーグラムから差し引いて、実際の結合応答を得る必要がある。バックグラウンド応答は、センサー表面上にリガンドが固定されていない、または無関係のリガンドが固定された対照または参照フローセルを介して分析物を注入することによって記録される。結合相互作用の結合および解離のリアルタイム測定は、結合および解離速度定数ならびに対応する親和性定数の算出を可能にする。１ＲＵは、１平方ｍｍあたり、１ｐｇのタンパク質の結合を表す。一般的には、良好な再現可能な応答を生成するためには、１平方ｍｍあたり５０ｐｇを超える分析物結合が実際に必要である。８５〜３７０ＲＵのＩＬ−３３を固定することができる。８５〜２２５ＲＵのＩＬ−３３を固定することができる。
【０１６０】
ＩＬ−３３からの抗体の解離を、約３６００秒にわたってモニタリングすることができる。ＳＰＲ分析を行い、約１５℃〜約３７℃でデータを収集することができる。ＳＰＲ分析を行い、約２５℃〜３７℃でデータを収集することができる。ＳＰＲ分析を行い、約３７℃でデータを収集することができる。ＳＰＲ分析を行い、３７℃でデータを収集することができる。ＫＤ値を、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｔ２００機器を使用してＳＰＲにより測定することができる。得られるセンサーグラムデータを、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｔ２００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン１．０において１：１モデルに適合させることによって、ＳＰＲ速度および親和性を決定することができる。収集速度は約１Ｈｚであってもよい。
【０１６１】
用語「ＩＬ−３３分子」とは、ＩＬ−１ファミリーのサイトカインの別のメンバーよりも野生型ＩＬ−３３に対する高い配列同一性を示す分子を指す（そのような比較は同じ種内で行われる）。ＩＬ−３３分子という用語は、変異体、バリアント、トランケーション、断片、スプライスバリアント、種バリアント、および融合タンパク質のＩＬ−３３様部分を含む。
【０１６２】
ＩＬ−３３は、核への転座およびクロマチンへの結合を担うＮ末端ドメインと、ＳＴ２受容体と相互作用し、ＩＬ−３３の生物活性を担うＣ末端１２鎖ベータ−トレフォイルドメインとを有する前駆体として産生される。ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｏ９５７６０．１によって表される全長型のヒトＩＬ−３３は、本明細書で配列番号３９６として提供される。
【０１６３】
細胞からのＩＬ−３３の放出時に、Ｎ末端ドメインが切断され、完全長タンパク質のものよりも高い活性を有するＣ末端ドメインの放出をもたらす。カルパインなどの、ＩＬ−３３の細胞供給源にとって内因性であるもの、ならびに肥満細胞および好中球などの、炎症細胞に由来する外因性プロテアーゼの両方のいくつかの異なるプロテアーゼが、ＩＬ−３３前駆体分子を切断することができる。ＩＬ−３３の正確な切断部位は、存在するプロテアーゼに応じて変化するであろう。配列番号３９６のアミノ酸１１２〜２７０に由来する組換え型のＩＬ−３３  Ｃ末端ドメインは、ＩＬ−３３の活性Ｃ末端型を代表するものであり、配列番号１として与えられる。
【０１６４】
ＩＬ−３３の構造は、それが４個の遊離システイン残基（配列番号３９６の番号付けによる、Ｃ２０８、Ｃ２３２、Ｃ２２７およびＣ２５９）を有するβ−トレフォイルタンパク質であることを示唆する。証拠は、ＩＬ−３３が、これらの４個のシステインが還元された活性型、およびシステイン残基の対間にジスルフィド結合（Ｃ２０８−Ｃ２５９対およびＣ２２７−Ｃ２３２対の間のジスルフィド結合を含む）を有する不活性型で存在することを示唆し、これは、高親和性ＳＴ２結合部位の破壊を含む実質的なコンフォメーション変化と一致する可能性があり、かくして、ＳＴ２結合の喪失に関する潜在的な構造的説明を提供する（Ｃｏｈｅｎら、２０１５、Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ６：８３２７；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ９３２７）。変異的証拠は、システイン残基Ｃ２０８およびＣ２３２も、ＩＬ−３３の不活化をもたらすジスルフィド結合を形成し得ることをさらに示唆する（Ｃｏｈｅｎら、２０１５）。
【０１６５】
１つまたは複数のシステイン残基を非システイン残基に変異させることにより、構成的に活性型のＩＬ−３３を生成することができる。残基Ｃ２０８は、不活化プロセスにとって特に重要であることがわかっており、残基Ｃ２３２の変異も不活化に対する耐性を付与すると考えられる。証拠はまた、Ｃ２２７およびＣ２５９中の変異は類似するレベルの不活性に対する耐性を付与しないため、Ｃ２０８−Ｃ２５９とＣ２２７−Ｃ２３２との間の可能なジスルフィド結合が不活化の原因の全てではないことも示唆し、したがって、ＩＬ−３３に関するいくつかのパターンのジスルフィド結合形成が存在し得る（Ｃｏｈｅｎ＿２０１５）。
【０１６６】
「活性ＩＬ−３３」を、ＳＴ２に結合することができるＩＬ−３３分子と定義することができる。活性ＩＬ−３３を、２０８、２２７、２３２、および２５９位（配列番号３９６の番号付けによる）の残基の対間の１つまたは２つの分子内共有結合を欠くＩＬ−３３分子と定義することができる。活性ＩＬ−３３を、２０８、２２７、２３２、および２５９位（配列番号３９６の番号付けによる）の残基の対間の２つの分子内共有結合を欠くＩＬ−３３分子と定義することができる。一部の態様では、活性ＩＬ−３３は、残基２０８と２５９の間の共有結合を欠くＩＬ−３３分子である。一部の態様では、活性ＩＬ−３３は、残基２２７と２３２の間の共有結合を欠くＩＬ−３３分子である。一部の態様では、活性ＩＬ−３３は、残基２０８と２２７の間の共有結合を欠くＩＬ−３３分子である。一部の態様では、活性ＩＬ−３３は、残基２０８と２３２の間の共有結合を欠くＩＬ−３３分子である。一部の態様では、活性ＩＬ−３３は、残基対２０８／２５９と２２７／２３２の間、または残基対２０８／２３２と２２７／２５９の間の共有結合を欠くＩＬ−３３分子である。したがって、活性ＩＬ−３３は、還元型の野生型ＩＬ−３３、および変異型のＩＬ−３３を含み、ここで、位置番号２０８、２２７、２３２、および２５９の少なくとも１、２、３または４個の残基がシステインではない。一部の態様では、残基２０８と２３２のうちの少なくとも一方は、システインではない。一部の態様では、少なくとも残基２０８はシステインではない。一部の態様では、少なくとも残基２０８と２３２はシステインではない。一部の態様では、残基２０８、２２７、２３２および２５９はそれぞれ、システインではない。一部の態様では、残基２０８、２２７、２３２および２５９の１つまたは複数はセリンである。共有結合は、ジスルフィド結合であってもよい。前記の残基番号付けは、配列番号１の番号付けによるものである。一部の態様では、活性ＩＬ−３３は、配列番号１を含む完全に還元された分子を含む。一部の態様では、活性ＩＬ−３３は、配列番号４を含む完全に還元された分子を含む。一部の態様では、活性ＩＬ−３３は、配列番号３を含む分子を含む。一部の態様では、活性ＩＬ−３３は、配列番号５を含む分子を含む。
【０１６７】
不活性ＩＬ−３３は、活性ＩＬ−３３の少なくとも１０分の１の低さの親和性でＳＴ２に結合するＩＬ−３３分子と定義することができる。一部の態様では、不活性ＩＬ−３３は、活性ＩＬ−３３の少なくとも１００分の１の低さの親和性でＳＴ２に結合する。一部の態様では、不活性ＩＬ−３３は、活性ＩＬ−３３の少なくとも１０００分の１の低さの親和性でＳＴ２に結合する。一部の態様では、不活性ＩＬ−３３は、活性ＩＬ−３３よりも少なくとも４桁分低い親和性でＳＴ２に結合する。一部の態様では、不活性ＩＬ−３３は、活性ＩＬ−３３よりも少なくとも５桁分低い親和性でＳＴ２に結合する。一部の態様では、不活性ＩＬ−３３は、残基対２０８／２５９と２２７／２３２の一方または両方の間に共有結合を含む。一部の態様では、不活性ＩＬ−３３は、残基対２０８／２３２と２２７／２５９の一方または両方の間に共有結合を含む。一部の態様では、不活性ＩＬ−３３は、残基２０８と２３２の間に共有結合を含む。一部の態様では、不活性ＩＬ−３３は、残基２０８と２５９の間に共有結合を含む。一部の態様では、不活性ＩＬ−３３は、残基２２７と２３２の間に共有結合を含む。一部の態様では、不活性ＩＬ−３３は、残基対２０８／２５９と２２７／２３２の両方の間に共有結合を含む。１つまたは複数の残基がシステインであってもよい。共有結合の一方または両方がジスルフィド結合であってもよい。前記残基番号付けは、配列番号３９６の番号付けによる。
【０１６８】
一部の態様では、ＩＬ−３３は、ヒトＩＬ−３３である。一部の態様では、野生型ＩＬ−３３の配列は、配列番号１である。一部の態様では、ＩＬ−３３は、ラットＩＬ−３３である。一部の態様では、ＩＬ−３３は、マウスＩＬ−３３である。一部の態様では、ＩＬ−３３は、霊長類ＩＬ−３３である。一部の態様では、ＩＬ−３３は、類人猿ＩＬ−３３である。一部の態様では、ＩＬ−３３は、サルＩＬ−３３である。一部の態様では、ＩＬ−３３は、カニクイザルＩＬ−３３である。
【０１６９】
活性ＩＬ−３３のＫＤの測定を、少なくともＣ２０８が別のアミノ酸残基で置換されたＩＬ−３３バリアントを使用して行うことができる。一部の態様では、活性ＩＬ−３３のＫＤの測定は、少なくともＣ２３２が別の残基で置換されたＩＬ−３３バリアントを使用して行われる。一部の態様では、活性ＩＬ−３３のＫＤの測定は、少なくともＣ２０８およびＣ２３２が置換されたＩＬ−３３バリアントを使用して行われる。一部の態様では、活性ＩＬ−３３のＫＤの測定は、Ｃ２０８、Ｃ２２７、Ｃ２３２、およびＣ２５９が置換されたＩＬ−３３バリアントを使用して行われる。一部の態様では、１つまたは複数のシステイン残基が、セリンで置換される。
【０１７０】
ＩＬ−３３に対する抗体
一部の態様では、本発明は、アンタゴニストＩＬ−３３抗体を提供する。ＩＬ−３３経路の高親和性アンタゴニストは、ＩＬ−３３がその標的細胞に対して作用すると考えられる複数の細胞型および複数の組織区画に対して有効であってよい。一部の態様では、本発明の抗体は、ＩＬ−３３が細胞、特に、上皮および内皮細胞から放出される部位に接近することができる。一部の態様では、本発明は、肺および他の組織内の細胞外空間に分配することができ、細胞表面受容体に対してＩＬ−３３の結合と効率的に競合することができ、頻繁でない投与を可能にする比較的長い半減期を有するＩＬ−３３抗体を提供する。本発明の抗体は、喘息と関連する発症および炎症を誘導する重要な経路を改変する能力を有する。
【０１７１】
中和または「遮断」抗体とは、ＩＬ−３３への結合が、（ｉ）ＩＬ−３３もしくはＩＬ−３３断片と、ＩＬ−３３受容体成分（例えば、ＳＴ２、ＩＬ−１  ＲＡｃＰなど）との相互作用と干渉する、それを制限する、もしくは阻害する；および／または（ｉｉ）ＩＬ−３３の少なくとも１つの生物学的機能の阻害をもたらす抗体を指す。本発明の抗体による中和を決定するためのアッセイは、本明細書の他の場所に記載されており、当業界で周知である。
【０１７２】
本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する抗体を提供する。一部の態様では、本発明は、ＩＬ−３３を少なくとも５０％中和する抗体、またはその抗原結合断片を提供する。一部の態様では、本発明は、ＩＬ−３３を少なくとも６０％中和する抗体、またはその抗原結合断片を提供する。一部の態様では、本発明は、ＩＬ−３３を少なくとも７０％中和する抗体、またはその抗原結合断片を提供する。一部の態様では、本発明は、ＩＬ−３３を少なくとも８０％中和する抗体、またはその抗原結合断片を提供する。一部の態様では、本発明は、ＩＬ−３３を少なくとも９０％中和する抗体、またはその抗原結合断片を提供する。一部の態様では、本発明は、ＩＬ−３３を少なくとも９５％中和する抗体、またはその抗原結合断片を提供する。一部の態様では、本発明は、ＩＬ−３３を少なくとも９６％中和する抗体、またはその抗原結合断片を提供する。一部の態様では、本発明は、ＩＬ−３３を少なくとも９７％中和する抗体、またはその抗原結合断片を提供する。一部の態様では、本発明は、ＩＬ−３３を少なくとも９８％中和する抗体、またはその抗原結合断片を提供する。一部の態様では、本発明は、ＩＬ−３３を少なくとも９９％中和する抗体、またはその抗原結合断片を提供する。
【０１７３】
抗体、またはその抗原結合断片を、７Ｅ８＿キメラ、９Ｂ３＿キメラ、９Ｂ３＿キメラ＿ｈｕＪｓｅｇ、７Ｅ８  ＣＤＲ移植、ＩＬ３３−１０、９Ｂ３  ＣＤＲ移植、９Ｂ３＿１、９Ｂ３＿２Ａ、９Ｂ３＿２Ｂ、９Ｂ３＿３、９Ｂ３＿５、９Ｂ３＿７、９Ｂ３＿１３、９Ｂ３＿１５、９Ｂ３＿１７、９Ｂ３＿２２、９Ｂ３＿３１Ｖ２、９Ｂ３＿３６、９Ｂ３＿７９、９Ｂ３＿１２４、９Ｂ３＿１６２、７Ｅ８Ｈ／９Ｂ３Ｋ、９Ｂ３＿５６３、ＩＬ３３−１１、ＩＬ３３−１２、ＩＬ３３−１３、ＩＬ３３−４５、ＩＬ３３−５５、ＩＬ３３−５６、ＩＬ３３−５７、ＩＬ３３−５８、ＩＬ３３−６１、ＩＬ３３−６２、ＩＬ３３−６８、ＩＬ３３−７４、ＩＬ３３−７５、ＩＬ３３−８０、ＩＬ３３−８１、ＩＬ３３−１０３、ＩＬ３３−１１７、ＩＬ３３−１３６、ＩＬ３３−１５３、ＩＬ３３−１５４、ＩＬ３３−１５５、ＩＬ３３−１５６、ＩＬ３３−１５７、ＩＬ３３−１５８、ＩＬ３３−１６７、ＩＬ３３−１６８、ＩＬ３３−１６９、ＩＬ３３−１７０、ＩＬ３３−１７１、ＩＬ３３−１７２、ＩＬ３３−１７５、ＩＬ３３−１８６、ＩＬ３３−１８７、ＩＬ３３−１８８、ＩＬ３３−１５８−１５２、ＩＬ３３−１６７−１５３、ＩＬ３３−１５８ＬＳ、およびＩＬ３３−１６７ＬＳ、その抗原結合断片、ならびにその変異体、バリアント、誘導体および実質的に類似するバージョンからなる群から選択することができる。
【０１７４】
ＣＤＲコンセンサス配列
一部の態様では、ＣＤＲは、配列番号２５７、２６１、２６５、２６９、２７２、および２７６を含む。これらのＣＤＲ配列は、全ての利用可能なデータ（ＡＢＳ＋変異＋ラットレパートリー）に基づくコンセンサス、試験したＶＨ生殖系列、およびＩＬ−３３への結合を保持／改善する、または結合を破壊することなく多反応性もしくは配列ライアビリティ（ｌｉａｂｉｌｉｔｉｅｓ）を減少させるためのモデリングに基づく変異を組み込む。
【０１７５】
ＣＤＲ  Ｈ１：ＣＤＲ  Ｈ１の広いコンセンサス配列は、利用可能な情報全体に基づくと、配列番号２６９である。ＣＤＲ  Ｈ１のコンセンサス配列のさらなる精緻化されたサブセットは、親ラット抗体７Ｅ８および９Ｂ３の最適化ならびに増強バイナリー置換（ａｕｇｍｅｎｔｅｄ  ｂｉｎａｒｙ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）（ＡＢＳ）の結果を含む、配列番号２７０である。最適化された７Ｅ８のコンセンサスＣＤＲ  Ｈ１配列は、２６ＧＦ（Ｔ／Ｅ）Ｆ（Ｓ／Ｅ）（Ｎ／Ｓ）ＹＷＭＹ３２（配列番号２７０）である。Ｓ３１Ｎ変異を導入した、９Ｂ３に由来するＣＤＲ  Ｈ１の置換、またはＴ２８ＥもしくはＳ３０Ｅ変異の導入は、完全な活性の保持を可能にした。増強バイナリー置換変異誘発は、ＤＰ５４生殖系列残基Ｓの代わりに３５位でのＹへの強力な選択性を示した。３１位の９Ｂ３配列および３５位のＡＢＳ選択性に対処する最適化された７Ｅ８のコンセンサスＣＤＲ  Ｈ１配列は、配列番号２７１である。
【０１７６】
ＣＤＲ  Ｈ２：ＣＤＲ  Ｈ２の広いコンセンサス配列は、利用可能な情報全体に基づくと、配列番号２７２である。ＣＤＲ  Ｈ２のコンセンサス配列のさらなる精緻化されたサブセットは、７Ｅ８および９Ｂ３の最適化ならびに増強バイナリー置換（ＡＢＳ）の結果を含む、配列番号２７３である。最適化された７Ｅ８のコンセンサスＣＤＲ  Ｈ２配列は、５０（Ｓ／Ａ）Ｉ（Ｔ／Ｎ）（Ｐ／Ｎ）（Ｎ／Ｄ）（Ｇ／Ａ）（Ｇ／Ｓ／Ｈ）（Ｎ／Ｄ／Ｅ）（Ｔ／Ｋ／Ｄ／Ｅ）ＹＹ（Ｐ／Ｖ／Ｌ）（Ｄ／Ｅ）ＳＶ（Ｋ／Ｑ）Ｇ６６（配列番号２７３）である。Ｓ５０Ａ、Ｇ５５Ａ、Ｇ５６Ｈ、Ｎ５７Ｄ、Ｎ５７Ｅ、Ｔ５８Ｄ、Ｔ５８Ｅ、Ｄ６２Ｅ、またはＫ６５Ｑ変異の導入は、非特異的結合の実質的な増大なくヒトＩＬ−３３中和効力の保持を可能にした。Ｎ５４Ｉ、Ｎ５４Ｌ、Ｎ５４Ｖ、Ｎ５４Ｙ、およびＮ５４Ｗは、ヒトＩＬ−３３中和効力の保持を可能にしたが、非特異的結合の増大を導入した。４つの変化（Ｔ５２Ｎ、Ｐ５３Ｎ、Ｎ５４Ｄ、およびＰ６１Ｌ）を導入した、９Ｂ３から７Ｅ８へのＣＤＲ  Ｈ２の置換は、ヒトＩＬ−３３の強力な中和の保持を可能にしたが、カニクイザルＩＬ−３３中和の効力の低下をもたらした。増強バイナリー置換変異誘発は、ＤＰ５４生殖系列残基Ｎ、ＫおよびＱの代わりに５０、５２および５３位でのＳ、ＴおよびＰへの強力な選択性を示したが、ＤＰ５４生殖系列変異Ｎ５４Ｄ、Ｇ５６Ｓ、Ｎ５７Ｅ、Ｔ５８Ｋ、およびＰ６１Ｖの組込みは許容された。５２および５３位のＡＢＳ選択性に対処する最適化された７Ｅ８のコンセンサスＣＤＲ  Ｈ２配列ならびにヒトＩＬ−３３の中和のために許容される９Ｂ３配列は、配列番号２７４である。５２および５３位のＡＢＳ選択性に対処する最適化された７Ｅ８のコンセンサスＣＤＲ  Ｈ２配列は、配列番号２７５である。
【０１７７】
ＣＤＲ  Ｈ３：ＣＤＲ  Ｈ３の広いコンセンサス配列は、利用可能な情報全体に基づくと、配列番号２７６である。ＣＤＲ  Ｈ３のコンセンサス配列のさらなる精緻化されたサブセットは、７Ｅ８および９Ｂ３の最適化ならびにヒトＩＬ−３３で免疫されたラットの抗体レパートリーに由来する配列の分析の結果を含む、配列番号２７７である。最適化された７Ｅ８のコンセンサスＣＤＲ  Ｈ３配列は、９９Ｇ（Ｈ／Ｙ）Ｙ（Ｙ／Ｓ）（Ｙ／Ｈ）（Ｔ／Ｓ／Ｎ）（Ｓ／Ａ）ＹＳ（Ｌ／Ｆ）（Ｇ／Ｓ）Ｙ１１０（配列番号２７８）である。Ｈ１００Ｙ、Ｙ１０３Ｈ、Ｔ１０４Ｎ、Ｔ１０４Ｓ、またはＳ１０５Ａ変異の導入は、非特異的結合の実質的な増大なくヒトＩＬ−３３中和効力の保持を可能にした。Ｓ１０５ＤおよびＳ１０５Ｎ変異は、ヒトＩＬ−３３中和効力の喪失をもたらした。Ｙ１０２Ｓ、Ｔ１０４Ｓ、Ｌ１０８Ｆ、およびＧ１０９Ｓ変異を導入した、９Ｂ３から７Ｅ８へのＣＤＲ  Ｈ３の置換は、ヒトＩＬ−３３の強力な中和の保持を可能にしたが、カニクイザルＩＬ−３３中和の効力の低下をもたらした。ヒトＩＬ−３３で免疫されたラットの抗体レパートリーから同定された７Ｅ８関連ＣＤＲ  Ｈ３配列の組込みは、以下のアミノ酸が高いヒトＩＬ−３３中和効力と適合することを示した：Ｒ１００、Ｆ１０１、Ｎ１０４、Ｉ１０８、Ａ１０９、Ｈ１１０、Ｎ１１０、Ｓ１１０、およびＦ１１０。ヒトＩＬ−３３の中和のために許容される９Ｂ３配列に対処する最適化された７Ｅ８のコンセンサスＣＤＲ  Ｈ３配列は、配列番号２７９である。
【０１７８】
ＣＤＲ  Ｌ１：ＣＤＲ  Ｌ１の広いコンセンサス配列は、利用可能な情報全体に基づくと、配列番号２５７である。ＣＤＲ  Ｌ１のコンセンサス配列のさらなる精緻化されたサブセットは、７Ｅ８および９Ｂ３の最適化ならびに増強バイナリー置換（ＡＢＳ）の結果を含む、配列番号２５８である。最適化された７Ｅ８のコンセンサスＣＤＲ  Ｌ１配列は、２４（Ｋ／Ｒ）ＡＳ（Ｑ／Ｈ）（Ｎ／Ｓ）Ｉ（Ｎ／Ｓ）（Ｋ／Ｓ）ＨＬＤ３４（配列番号２５９）である。増強バイナリー置換変異誘発は、ＤＰＫ９生殖系列残基Ｙ３２およびＮ３４の代わりに３２および３４位でのＨおよびＤへの強力な選択性を示したが、ＤＰＫ９生殖系列変異Ｋ２４Ｒ、Ｎ２８Ｓ、Ｎ３０Ｓ、およびＫ３１Ｓの組込みは許容された。７Ｅ８軽鎖への９Ｂ３軽鎖の置換（軽鎖配列変化Ｑ２７Ｈを含む）は、非特異的結合を導入することなく、ＩＬ−３３中和効力の保持を可能にした。Ｎ３０Ｈ、Ｋ３１Ｒ、およびＨ３２Ｙ変異の導入は、ヒトＩＬ−３３中和の保持を可能にしたが、非特異的結合を増大させた一方、Ｎ３０Ｙ、Ｎ３０Ｄ、Ｎ３０Ｗ、Ｋ３１Ｅ、およびＫ３１Ｄ変異は、効力を低下させ、および／またはより高い非特異的結合を導入した。２７位での軽鎖配列変化を可能にすることなく、３２および３４位のＡＢＳ選択性に対処する最適化された７Ｅ８のコンセンサスＣＤＲ  Ｌ１配列は、配列番号２６０である。
【０１７９】
ＣＤＲ  Ｌ２：ＣＤＲ  Ｌ２の広いコンセンサス配列は、利用可能な情報全体に基づくと、配列番号２６１である。ＣＤＲ  Ｌ２のコンセンサス配列のさらなる精緻化されたサブセットは、７Ｅ８および９Ｂ３の最適化ならびに増強バイナリー置換（ＡＢＳ）の結果を含む、配列番号２６２である。最適化された７Ｅ８のコンセンサスＣＤＲ  Ｌ２配列は、５０Ｆ（Ｔ／Ａ）（Ｎ／Ｓ）（Ｎ／Ｓ）ＬＱ（Ｔ／Ｓ）５６（配列番号２６３）である。増強バイナリー置換変異誘発は、ＤＰＫ９生殖系列残基Ａの代わりに５０位でのＦへの強力な選択性を示したが、ＤＰＫ９生殖系列変異Ｔ５１Ａ、Ｎ５２Ｓ、Ｎ５３Ｓ、およびＴ５６Ｓの組込みは許容された。Ｎ５２ＹまたはＮ５３Ｒ変異の導入は、ヒトＩＬ−３３中和の保持を可能にしたが、非特異的結合を増大させた一方、Ｆ５０Ｈ、Ｔ５６Ｄ、Ｔ５６Ｅ、およびＴ５６Ｑ変異は、効力を低下させ、および／またはより高い非特異的結合を導入した。５３位での変化を可能にすることなく最適化された７Ｅ８のコンセンサスＣＤＲ  Ｌ２配列は、配列番号２６４である。
【０１８０】
ＣＤＲ  Ｌ３：ＣＤＲ  Ｌ３の広いコンセンサス配列は、利用可能な情報全体に基づくと、配列番号２６５である。ＣＤＲ  Ｌ３のコンセンサス配列のさらなる精緻化されたサブセットは、７Ｅ８および９Ｂ３の最適化ならびに増強バイナリー置換（ＡＢＳ）の結果を含む、配列番号２６６である。最適化された７Ｅ８のコンセンサスＣＤＲ  Ｌ３配列は、８９（Ｆ／Ｑ）ＱＹ（Ｎ／Ｙ）（Ｎ／Ｓ／Ｑ／Ｒ）ＧＷＴ９６（配列番号２６７）である。Ｎ９３Ｑ変異の導入は、非特異的結合の実質的な増大なくヒトＩＬ−３３中和効力の保持を可能にしたが、Ｎ９３Ｒ変異は、非特異的結合をわずかに増大させながらヒトＩＬ−３３中和効力の保持を可能にした。Ｎ９２ＲおよびＧ９４Ｒ変異は、ヒトＩＬ−３３中和効力の保持を可能にしたが、非特異的結合の増大をもたらした。７Ｅ８軽鎖への９Ｂ３軽鎖の置換（軽鎖配列変化Ｎ９３Ｓを含む）は、非特異的結合を導入することなくＩＬ−３３中和効力の保持を可能にした。増強バイナリー置換変異誘発は、ＤＰＫ９生殖系列残基ＳおよびＴの代わりに９１および９４位でのＹおよびＧへの強力な選択性を示したが、ＤＰＫ９生殖系列変異Ｆ８９Ｑ、Ｎ９２Ｙ、およびＮ９３Ｓの組込みは許容された。ラットＪセグメント残基Ｗ９５の保持は、ヒトＪＫ４残基Ｗ９５Ｌの置換よりも強力に好まれた。９３位のＲの組込みを可能にすることなく９１および９４位のＡＢＳ選択性に対処する最適化された７Ｅ８のコンセンサスＣＤＲ  Ｌ３配列は、配列番号２６８である。
【０１８１】
一部の態様では、抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号２５７を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２６１を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２６５を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号２６９を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２７２を含むＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号２７６を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１８２】
一部の態様では、抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号２５８を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２６２を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２６６を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号２７０を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２７３を含むＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号２７７を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１８３】
一部の態様では、抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号２５９を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２６３を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２６７を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号２７１を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２７４を含むＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号２７８を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１８４】
一部の態様では、抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号２６０を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２６４を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２６８を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号２７１を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２７５を含むＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号２７９を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１８５】
一部の態様では、抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号２０を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２１を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２０８を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号１６を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２６を含むＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号１８を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１８６】
一部の態様では、抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号２２５のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。
【０１８７】
一部の態様では、抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号２０７のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３配列を含む。
【０１８８】
抗体、または抗原結合断片は、配列番号２２５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含んでもよい。ＶＨは、配列番号２２５と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含んでもよい。ＶＨは、配列番号２２５のアミノ酸配列を含んでもよい。
【０１８９】
抗体、または抗原結合断片は、配列番号２０７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含んでもよい。ＶＬは、配列番号２０７と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含んでもよい。ＶＬは、配列番号２０７のアミノ酸配列を含んでもよい。
【０１９０】
抗体、または抗原結合断片は、配列番号２４４と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むＨＣを含んでもよい。ＨＣは、配列番号２４４のアミノ酸配列を含んでもよい。
【０１９１】
抗体、または抗原結合断片は、配列番号２０９と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むＬＣを含んでもよい。ＬＣは、配列番号２０９のアミノ酸配列を含んでもよい。
【０１９２】
一部の態様では、抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号２０を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２１を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２２を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号１６を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２１１を含むＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号１８を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０１９３】
一部の態様では、抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号２１０のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。
【０１９４】
一部の態様では、抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号９１のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３配列を含む。
【０１９５】
抗体、または抗原結合断片は、配列番号２１０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含んでもよい。ＶＨは、配列番号２１０と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含んでもよい。ＶＨは、配列番号２１０のアミノ酸配列を含んでもよい。
【０１９６】
抗体、または抗原結合断片は、配列番号９１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含んでもよい。ＶＬは、配列番号９１と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含んでもよい。ＶＬは、配列番号９１のアミノ酸配列を含んでもよい。
【０１９７】
抗体、または抗原結合断片は、配列番号２４５と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むＨＣを含んでもよい。ＨＣは、配列番号２４５のアミノ酸配列を含んでもよい。
【０１９８】
抗体、または抗原結合断片は、配列番号９３と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むＬＣを含んでもよい。ＬＣは、配列番号９３のアミノ酸配列を含んでもよい。
【０１９９】
生殖系列置換
ある特定の実施形態では、抗体、またはその抗原結合断片は、以下の重鎖ＣＤＲ配列：（ｉ）配列番号１６を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２６を含むＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号１８を含むＣＤＲ−Ｈ３；ならびに／または（ｉｉ）以下の軽鎖ＣＤＲ配列：配列番号２０を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２１を含むＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号２０８を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０２００】
ある特定の実施形態では、配列番号２０と比較して、１１個以下、または１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、または１個以下の置換がＣＤＲ−Ｌ１中で行われる。ある特定の実施形態では、配列番号２１と比較して、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、または１個以下の置換がＣＤＲ−Ｌ２中で行われる。ある特定の実施形態では、配列番号２０８と比較して、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、または１個以下の置換がＣＤＲ−Ｌ３中で行われる。一部の実施形態では、配列番号１６と比較して、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、または１個以下の置換がＣＤＲ−Ｈ１中で行われる。一部の実施形態では、配列番号２１１と比較して、１７個以下、１６個以下、１５個以下、１４個以下、１３個以下、１２個以下、１１個以下、または１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、または１個以下の置換がＣＤＲ−Ｈ２中で行われる。一部の実施形態では、配列番号１８と比較して、１２個以下、１１個以下、または１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、または１個以下の置換がＣＤＲ−Ｈ３中で行われる。ある特定の実施形態では、置換は、結合親和性（ＫＤ）値を１０００倍、１００倍、または１０倍を超えて変化させない。ある特定の実施形態では、置換は、表１に記載の保存的置換である。
【０２０１】
【表１】
2019516362.tif 000003
【０２０２】
ある特定の実施形態では、置換は、ヒトアミノ酸含量を増加させ、抗体の免疫原性を潜在的に低下させるために、ＣＤＲ残基が対応するヒト生殖系列残基で置き換えられたヒト生殖系列置換である。例えば、ヒト生殖系列ＤＰＫ９フレームワークが使用され、例示的抗体がＩＬ−３３−１５８ＬＳである場合、ＩＬ３３−１５８ＬＳ抗体のＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２０）とヒト生殖系列ＤＰＫ９とのアラインメントは以下の通りである。
【０２０３】
【表２】
2019516362.tif 000004
【０２０４】
２５、２６、２７、２９、３３、および３４位について、ヒト生殖系列残基および対応するＩＬ３３−１５８ＬＳ残基は同じであり、生殖系列置換は不可能である。２４、２８、３０、３１、および３２位（太字かつ下線付き）については、ヒト生殖系列残基および対応するＩＬ３３−１５８ＬＳ残基は異なる。これらの位置でのＩＬ３３−１５８ＬＳの残基を、対応するヒト生殖系列ＤＰＫ９残基で置き換えて、ヒト残基含量をさらに増加させることができる。
【０２０５】
抗体ＣＤＲ中にヒト生殖系列残基を導入するための方法およびライブラリーは、米国特許仮出願第６２／１６２，９０５号および（Ｔｏｗｎｓｅｎｄら、２０１５、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．１１２（５０）：１５３５４〜１５３５９）に詳細に記載されており、これらは両方ともその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０６】
抗体、またはその抗原結合断片は、ヒト生殖系列ＶＨフレームワーク配列を含むＶＨフレームワークを含んでもよい。ＶＨフレームワーク配列は、ヒトＶＨ３生殖系列、ＶＨ１生殖系列、ＶＨ５生殖系列、またはＶＨ４生殖系列に由来するものであってもよい。好ましいヒト生殖系列重鎖フレームワークは、ＶＨ１、ＶＨ３、またはＶＨ５生殖系列に由来するフレームワークである。例えば、以下の生殖系列に由来するＶＨフレームワーク：ＩＧＨＶ３−２３、ＩＧＨＶ３−７、またはＩＧＨＶ１−６９（生殖系列名はＩＭＧＴ生殖系列定義に基づく）を使用することができる。好ましいヒト生殖系列軽鎖フレームワークは、ＶκまたはＶλ生殖系列に由来するフレームワークである。例えば、以下の生殖系列に由来するＶＬフレームワーク：ＩＧＫＶ１−３９またはＩＧＫＶ３−２０（生殖系列名はＩＭＧＴ生殖系列定義に基づく）を使用することができる。あるいは、またはさらに、フレームワーク配列は、ヒトＶλ１コンセンサス配列、Ｖκ１コンセンサス配列、Ｖκ２コンセンサス配列、Ｖκ３コンセンサス配列、ＶＨ３生殖系列コンセンサス配列、ＶＨ１生殖系列コンセンサス配列、ＶＨ５生殖系列コンセンサス配列、またはＶＨ４生殖系列コンセンサス配列のフレームワークなどの、ヒト生殖系列コンセンサスフレームワーク配列であってもよい。ヒト生殖系列フレームワークの配列は、Ｖ−ｂａｓｅ、ＩＭＧＴ、ＮＣＢＩ、またはＡｂｙｓｉｓなどの、様々な公共データベースから入手可能である。
【０２０７】
抗体、またはその抗原結合断片は、ヒト生殖系列ＶＬフレームワーク配列を含むＶＬフレームワークを含んでもよい。ＶＬフレームワークは、それの派生元となった生殖系列との機能的および構造的類似性を依然として保持しながら、１個または複数のアミノ酸置換、付加、または欠失を含んでもよい。一部の態様では、ＶＬフレームワークは、ヒト生殖系列ＶＬフレームワーク配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である。一部の態様では、抗体、またはその抗原結合断片は、ヒト生殖系列ＶＬフレームワーク配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個のアミノ酸置換、付加または欠失を含むＶＬフレームワークを含む。一部の態様では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換、付加または欠失は、フレームワーク領域中にのみある。一部の態様では、同一性％は、本明細書でＣＤＲとして定義されるこれらの部分を除くＶＬとの類似性に基づく。
【０２０８】
ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ＤＰＫ９（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ１−３９）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ＤＰＫ１２（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ２Ｄ−２９）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ＤＰＫ１８（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ２−３０）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ＤＰＫ２４（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ４−１）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ＨＫ１０２＿Ｖ１（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ１−５）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ＤＰＫ１（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ１−３３）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ＤＰＫ８（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ１−９）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ＤＰＫ３（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ１−６）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ＤＰＫ２１（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ３−１５）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、Ｖｇ＿３８Ｋ（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ３−１１）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ＤＰＫ２２（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ３−２０）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ＤＰＫ１５（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ２−２８）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ＤＰＬ１６（ＩＭＧＴ名：ＩＧＬＶ３−１９）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ＤＰＬ８（ＩＭＧＴ名：ＩＧＬＶ１−４０）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、Ｖ１−２２（ＩＭＧＴ名：ＩＧＬＶ６−５７）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ヒトＶλコンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ヒトＶλ１コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ヒトＶλ３コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ヒトＶκコンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ヒトＶκ１コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ヒトＶκ２コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、ヒトＶκ３コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。
【０２０９】
一部の態様では、ＶＬフレームワークは、ＤＰＫ９である。他の同様のフレームワーク領域もまた、ＤＰＫ−９のＦＷ領域に対する、それぞれ、９９、９７、９７、９６、８０、７６、６６、９７、９７、９６、７６、および７４％の同一性ならびに共通の構造的特徴における１個またはそれより少ないアミノ酸差異（Ｋａｂａｔ番号付け）（Ａ）ＣＤＲの直下の残基（Ｖｅｒｎｉｅｒ  Ｚｏｎｅ）、Ｌ２、Ｌ４、Ｌ３５、Ｌ３６、Ｌ４６、Ｌ４７、Ｌ４８、Ｌ４９、Ｌ６４、Ｌ６６、Ｌ６８、Ｌ６９、Ｌ７１、（Ｂ）ＶＨ／ＶＬ鎖パッキング残基：Ｌ３６、Ｌ３８、Ｌ４４、Ｌ４６、Ｌ８７および（Ｃ）標準ＣＤＲ構造支持残基Ｌ２、Ｌ４８、Ｌ６４、Ｌ７１を含む、ＤＰＫ５、ＤＰＫ４、ＤＰＫ１、ＩＧＫＶ１−５＊０１、ＤＰＫ２４、ＤＰＫ２１、ＤＰＫ１５、ＩＧＫＶ１−１３＊０２、ＩＧＫＶ１−１７＊０１、ＤＰＫ８、ＩＧＫＶ３−１１＊０１、およびＤＰＫ２２を含む、配列番号２５７、２６１、および２６５；または配列番号２５８、２６２、および２６６；または配列番号２５９、２６３、および２６７；または配列番号２６０、２６４、２６８；または配列番号２０、２１、および２０８のＣＤＲを含む本発明の有利な抗体を送達することが予測される（Ｌｏ、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｂｙ  ＣＤＲ  Ｇｒａｆｔｉｎｇ」、（２００４）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｖｏｌ．２４８、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｐｐ  １３５〜１５９ならびにＯ'ＢｒｉｅｎおよびＪｏｎｅｓ、「Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｂｙ  ＣＤＲ  Ｇｒａｆｔｉｎｇ」、（２００３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｖｏｌ．２０７、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｐｐ  ８１〜１００を参照されたい）。特に好ましいのは、ＤＰＫ９に対して、それぞれ、９９、９７、９７、９６、８０、７６、６６％の同一性を有し、これらの共通の構造的特徴においてアミノ酸差異を有さないＤＰＫ５、ＤＰＫ４、ＤＰＫ１、ＩＧＫＶ１−５＊０１、ＤＰＫ２４、ＤＰＫ２１、ＤＰＫ１５のフレームワーク領域である。一部の態様では、同一性％は、本明細書でＣＤＲとして定義されるこれらの部分を除くＶＬとの類似性に基づくものである。
【０２１０】
本発明の抗体（および断片）のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３中の残基を、表２に示される対応する生殖系列残基で置換することができる。
【０２１１】
【表３−１】
2019516362.tif 000005
【０２１２】
【表３−２】
2019516362.tif 000006
【０２１３】
抗体、またはその抗原結合断片は、ヒト生殖系列ＶＨフレームワーク配列を含むＶＨフレームワークを含んでもよい。ＶＨフレームワークは、それの派生元となった生殖系列との機能的および構造的類似性を依然として保持しながら、１個または複数のアミノ酸置換、付加、または欠失を含んでもよい。一部の態様では、ＶＨフレームワークは、ヒト生殖系列ＶＨフレームワーク配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である。一部の態様では、抗体、またはその抗原結合断片は、ヒト生殖系列ＶＨフレームワーク配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個のアミノ酸置換、付加または欠失を含むＶＨフレームワークを含む。一部の態様では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換、付加または欠失は、フレームワーク領域中にのみある。一部の態様では、同一性％は、本明細書でＣＤＲとして定義されるこれらの部分を除くＶＨとの類似性に基づく。
【０２１４】
ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ＤＰ５４またはＩＧＨＶ３−７のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ＤＰ４７またはＩＧＨＶ３−２３のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ＤＰ７１またはＩＧＨＶ４−５９のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ＤＰ７５またはＩＧＨＶ１−２＿０２のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ＤＰ１０またはＩＧＨＶ１−６９のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ＤＰ７またはＩＧＨＶ１−４６のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ＤＰ４９またはＩＧＨＶ３−３０のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ＤＰ５１またはＩＧＨＶ３−４８のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ＤＰ３８またはＩＧＨＶ３−１５のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ＤＰ７９またはＩＧＨＶ４−３９のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ＤＰ７８またはＩＧＨＶ４−３０−４のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ＤＰ７３またはＩＧＨＶ５−５１のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ＤＰ５０またはＩＧＨＶ３−３３のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ＤＰ４６またはＩＧＨＶ３−３０−３のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ＤＰ３１またはＩＧＨＶ３−９のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ヒトＶＨ生殖系列コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ヒトＶＨ３生殖系列コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ヒトＶＨ５生殖系列コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ヒトＶＨ１生殖系列コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ヒトＶＨ４生殖系列コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。
【０２１５】
一部の態様では、ＶＨフレームワークは、ＤＰ−５４である。他の同様のフレームワーク領域もまた、ＤＰ−５４のＦＷ領域に対する、それぞれ、９３、９２、９２、９９、９７、９７、９６、９６、９４、９４、９３、９２％の同一性ならびに共通の構造的特徴における１個またはそれより少ないアミノ酸差異（Ｋａｂａｔ番号付け）（Ａ）ＣＤＲの直下の残基（Ｖｅｒｎｉｅｒ  Ｚｏｎｅ）、Ｈ２、Ｈ４７、Ｈ４８、およびＨ４９、Ｈ６７、Ｈ６９、Ｈ７１、Ｈ７３、Ｈ９３、Ｈ９４、（Ｂ）ＶＨ／ＶＬ鎖パッキング残基：Ｈ３７、Ｈ３９、Ｈ４５、Ｈ４７、Ｈ９１、Ｈ９３ならびに（Ｃ）標準ＣＤＲ構造支持残基Ｈ２４、Ｈ７１、Ｈ９４を含む、ＤＰ−５０、ＩＧＨＶ３−３０＊０９、ＩＧＨＶ３−３０＊１５、ＩＧＨＶ３−４８＊０１、ＤＰ−７７、ＤＰ−５１、ＩＧＨＶ３−６６＊０１、ＤＰ−５３、ＤＰ−４８、ＩＧＨＶ３−５３＊０１、ＩＧＨＶ３−３０＊０２、およびＤＰ−４９を含む、配列番号２６９、２７２、および２７６；または配列番号２７０、２７３、および２７７；または配列番号２７１、２７４、および２７８；または配列番号２７１、２７５、および２７８；または配列番号１６、２２６、および１８のＣＤＲを含む本発明の有利な抗体を送達することが予測される（Ｌｏ、２００４、ならびにＯ'ＢｒｉｅｎおよびＪｏｎｅｓ、２００３を参照されたい）。特に好ましいのは、ＤＰ−５４に対して、それぞれ、９３、９２および９２％の同一性を有し、これらの共通の構造的特徴においてアミノ酸差異を有さないＤＰ−５０、ＩＧＨＶ３−３０＊０９、ＩＧＨＶ３−３０＊１５のフレームワーク領域である。一部の態様では、同一性％は、本明細書でＣＤＲとして定義されるこれらの部分を除くＶＨとの類似性に基づくものである。
【０２１６】
本発明の抗体（および断片）のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３中の残基を、表３に示される対応する生殖系列残基で置換することができる。
【０２１７】
【表４】
2019516362.tif 000007
【０２１８】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体、またはその抗原結合断片は、（ｉ）配列番号２２５と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、および／または（ｉｉ）配列番号２０７と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも６６％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。これらのＶＬおよびＶＨ配列の任意の組合せも、本発明によって包含される。
【０２１９】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体、またはその抗原結合断片は、（ｉ）配列番号２４４と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＨＣ、および／または（ｉｉ）配列番号２０９と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＬＣを含む。これらのＨＣおよびＬＣ配列の任意の組合せも、本発明によって包含される。
【０２２０】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体、またはその抗原結合断片は、Ｆｃドメインを含む。Ｆｃドメインは、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１もしくはＩｇＡ２）、ＩｇＧ、ＩｇＥ、またはＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）に由来するものであってもよい。
【０２２１】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体、またはその抗原結合断片は、（ｉ）配列番号１４、３２、４３、５４、６１、７２、９０、９４、９７、１０１、１０６、１１１、１１３、１１８、１２１、１２４、１２６、１２９、１３２、１３５、１３８、１４１、１４４、１４７、１５０、１５２、１５５、１５８、１６１、１６３、１６５、１６７、１７０、１７３、１７６、１７９、１８２、１８４、１８６、２０１、２０４、２１０、２１３、２１６、２１９、２２２、２２５、２２８、２３１、および２３４からなる群の１つと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに／または（ｉｉ）配列番号１９、３６、４７、５６、６５、７６、８１、８４、８６、８８、９１、９８、１０３、１０８、１１５、１８９、１９２、１９５、１９８、および２０７のいずれかと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。これらのＶＬおよびＶＨ配列の任意の組合せも、本発明によって包含される。一部の態様では、ＶＨは、配列番号４３、５４、および１０１からなる群から選択される１つまたは複数ではない。一部の態様では、ＶＬは、配列番号４７、５６、および１０３からなる群から選択される１つまたは複数ではない。
【０２２２】
また、本明細書に提供される抗体（またはその抗原結合断片）のいずれか１つなどの、本明細書に記載の抗体、またはその抗原結合断片のいずれかとヒトＩＬ−３３への結合について競合する抗体、またはその抗原結合断片も本発明によって提供される。例えば、ヒトＩＬ−３３への、抗体、またはその抗原結合部分の結合が、ＩＬ３３−１５８ＬＳによるヒトＩＬ−３３へのその後の結合を妨害する場合、この抗体、またはその抗原結合部分は、ヒトＩＬ−３３結合についてＩＬ３３−１５８ＬＳと競合する。
【０２２３】
また、本明細書に提供される抗体またはその抗原結合断片のいずれか１つなどの、本明細書に記載の抗体、またはその抗原結合断片のいずれかと同じヒトＩＬ−３３エピトープに結合する抗体、またはその抗原結合断片も、本発明によって提供される。例えば、抗体競合アッセイ（および重複エピトープ分析）を、本明細書に詳述される、ＳＰＲによって評価することができる。
【０２２４】
本発明によって提供される抗体および抗原結合断片としては、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃなど）、キメラ抗体、二特異的抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、単鎖（ＳｃＦｖ）、その変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、ヒト化抗体、ならびに抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアント、および共有改変抗体などの、必要とされる特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の改変された構成が挙げられる。抗体および抗原結合断片は、マウス、ラット、ヒト、または任意の他の起源（キメラもしくはヒト化抗体など）であってもよい。一部の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。一部の実施形態では、抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒト抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。
【０２２５】
生物学的寄託物
本発明の代表的な材料は、２０１５年１２月２３日にＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ．２０１１０−２２０９、ＵＳＡに寄託された。ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２２７２４を有するベクターＶＨ−ＩＬ３３−１５８ＬＳは、抗体ＩＬ３３−１５８ＬＳの重鎖可変領域をコードするＤＮＡ挿入物を含み、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２２７２５を有するベクターＶＬ−ＩＬ３３−１５８ＬＳは、抗体ＩＬ３３−１５８ＬＳの軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ挿入物を含む。寄託物は、特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約（ブダペスト条約）の規定の下で作製された。これは、寄託日から３０年間、寄託物の生存能力のある培養物の維持を保証するものである。寄託物は、ブダペスト条約の条項の下でＡＴＣＣによって利用可能になり、Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．とＡＴＣＣの間の合意を受け、関連する米国特許の発行時または任意の米国特許もしくは外国特許の公衆への公開時のいずれか早い方の時点から、寄託物の培養物の子孫の永続的かつ無制限の利用を公衆に保証し、また、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．Ｓｅｃｔｉｏｎ  １２２およびそれに準拠する長官規則（８８６  ＯＧ  ６３８を特に参照する３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．Ｓｅｃｔｉｏｎ  １．１４を含む）にしたがって権利を与えられる米国特許商標庁長官によって決定されたものにその子孫の利用を保証する。
【０２２６】
本特許出願の譲受人は、寄託された材料の培養物が、適切な条件下で培養された時に死滅する、または失われる、または破壊されるべき場合、この材料が同じ材料の別のものと通知と共に速やかに交換されることに合意している。寄託された材料の利用性は、その特許法による任意の政府の権限の下で許可された権利に違反して本発明を実施するライセンスとして解釈されるべきではない。
【０２２７】
核酸
本発明はまた、本明細書に記載の抗体部分および改変抗体を含む、任意の抗体をコードするポリヌクレオチドも提供する。本発明はまた、本明細書に記載の任意のポリヌクレオチドを作製する方法も提供する。ポリヌクレオチドを、当業界で公知の手順によって作製し、発現させることができる。
【０２２８】
所望の抗体、規定の抗体断片、またはその抗原結合断片、およびそのような抗体、またはその断片をコードする核酸の配列を、標準的な配列決定技術を使用して決定することができる。所望の抗体、規定の抗体断片、またはその抗原結合断片をコードする核酸配列を、組換え産生および特徴付けのために様々なベクター（クローニングおよび発現ベクターなど）に挿入することができる。重鎖、規定の抗体断片、または重鎖の抗原結合断片をコードする核酸、および軽鎖、規定の抗体断片、または軽鎖の抗原結合断片をコードする核酸を、同じベクター、または異なるベクター中にクローニングすることができる。
【０２２９】
一態様では、本発明は、以下のＩＬ−３３抗体およびその抗原結合部分のいずれか：７Ｅ８＿キメラ、９Ｂ３＿キメラ、９Ｂ３＿キメラ＿ｈｕＪｓｅｇ、７Ｅ８  ＣＤＲ移植、ＩＬ３３−１０、９Ｂ３  ＣＤＲ移植、９Ｂ３＿１、９Ｂ３＿２Ａ、９Ｂ３＿２Ｂ、９Ｂ３＿３、９Ｂ３＿５、９Ｂ３＿７、９Ｂ３＿１３、９Ｂ３＿１５、９Ｂ３＿１７、９Ｂ３＿２２、９Ｂ３＿３１Ｖ２、９Ｂ３＿３６、９Ｂ３＿７９、９Ｂ３＿１２４、９Ｂ３＿１６２、７Ｅ８Ｈ／９Ｂ３Ｋ、９Ｂ３＿５６３、ＩＬ３３−１１、ＩＬ３３−１２、ＩＬ３３−１３、ＩＬ３３−４５、ＩＬ３３−５５、ＩＬ３３−５６、ＩＬ３３−５７、ＩＬ３３−５８、ＩＬ３３−６１、ＩＬ３３−６２、ＩＬ３３−６８、ＩＬ３３−７４、ＩＬ３３−７５、ＩＬ３３−８０、ＩＬ３３−８１、ＩＬ３３−１０３、ＩＬ３３−１１７、ＩＬ３３−１３６、ＩＬ３３−１５３、ＩＬ３３−１５４、ＩＬ３３−１５５、ＩＬ３３−１５６、ＩＬ３３−１５７、ＩＬ３３−１５８、ＩＬ３３−１６７、ＩＬ３３−１６８、ＩＬ３３−１６９、ＩＬ３３−１７０、ＩＬ３３−１７１、ＩＬ３３−１７２、ＩＬ３３−１７５、ＩＬ３３−１８６、ＩＬ３３−１８７、ＩＬ３３−１８８、ＩＬ３３−１５８−１５２、ＩＬ３３−１６７−１５３、ＩＬ３３−１５８ＬＳ、およびＩＬ３３−１６７ＬＳのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを提供する。
【０２３０】
本発明は、７Ｅ８＿キメラ、９Ｂ３＿キメラ、９Ｂ３＿キメラ＿ｈｕＪｓｅｇ、７Ｅ８  ＣＤＲ移植、ＩＬ３３−１０、９Ｂ３  ＣＤＲ移植、９Ｂ３＿１、９Ｂ３＿２Ａ、９Ｂ３＿２Ｂ、９Ｂ３＿３、９Ｂ３＿５、９Ｂ３＿７、９Ｂ３＿１３、９Ｂ３＿１５、９Ｂ３＿１７、９Ｂ３＿２２、９Ｂ３＿３１Ｖ２、９Ｂ３＿３６、９Ｂ３＿７９、９Ｂ３＿１２４、９Ｂ３＿１６２、７Ｅ８Ｈ／９Ｂ３Ｋ、９Ｂ３＿５６３、ＩＬ３３−１１、ＩＬ３３−１２、ＩＬ３３−１３、ＩＬ３３−４５、ＩＬ３３−５５、ＩＬ３３−５６、ＩＬ３３−５７、ＩＬ３３−５８、ＩＬ３３−６１、ＩＬ３３−６２、ＩＬ３３−６８、ＩＬ３３−７４、ＩＬ３３−７５、ＩＬ３３−８０、ＩＬ３３−８１、ＩＬ３３−１０３、ＩＬ３３−１１７、ＩＬ３３−１３６、ＩＬ３３−１５３、ＩＬ３３−１５４、ＩＬ３３−１５５、ＩＬ３３−１５６、ＩＬ３３−１５７、ＩＬ３３−１５８、ＩＬ３３−１６７、ＩＬ３３−１６８、ＩＬ３３−１６９、ＩＬ３３−１７０、ＩＬ３３−１７１、ＩＬ３３−１７２、ＩＬ３３−１７５、ＩＬ３３−１８６、ＩＬ３３−１８７、ＩＬ３３−１８８、ＩＬ３３−１５８−１５２、ＩＬ３３−１６７−１５３、ＩＬ３３−１５８ＬＳ、およびＩＬ３３−１６７ＬＳからなる群から選択される抗体と実質的に同じエピトープに結合する、抗体、またはその抗原結合断片のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを提供する。
【０２３１】
本発明は、７Ｅ８＿キメラ、９Ｂ３＿キメラ、９Ｂ３＿キメラ＿ｈｕＪｓｅｇ、７Ｅ８  ＣＤＲ移植、ＩＬ３３−１０、９Ｂ３  ＣＤＲ移植、９Ｂ３＿１、９Ｂ３＿２Ａ、９Ｂ３＿２Ｂ、９Ｂ３＿３、９Ｂ３＿５、９Ｂ３＿７、９Ｂ３＿１３、９Ｂ３＿１５、９Ｂ３＿１７、９Ｂ３＿２２、９Ｂ３＿３１Ｖ２、９Ｂ３＿３６、９Ｂ３＿７９、９Ｂ３＿１２４、９Ｂ３＿１６２、７Ｅ８Ｈ／９Ｂ３Ｋ、９Ｂ３＿５６３、ＩＬ３３−１１、ＩＬ３３−１２、ＩＬ３３−１３、ＩＬ３３−４５、ＩＬ３３−５５、ＩＬ３３−５６、ＩＬ３３−５７、ＩＬ３３−５８、ＩＬ３３−６１、ＩＬ３３−６２、ＩＬ３３−６８、ＩＬ３３−７４、ＩＬ３３−７５、ＩＬ３３−８０、ＩＬ３３−８１、ＩＬ３３−１０３、ＩＬ３３−１１７、ＩＬ３３−１３６、ＩＬ３３−１５３、ＩＬ３３−１５４、ＩＬ３３−１５５、ＩＬ３３−１５６、ＩＬ３３−１５７、ＩＬ３３−１５８、ＩＬ３３−１６７、ＩＬ３３−１６８、ＩＬ３３−１６９、ＩＬ３３−１７０、ＩＬ３３−１７１、ＩＬ３３−１７２、ＩＬ３３−１７５、ＩＬ３３−１８６、ＩＬ３３−１８７、ＩＬ３３−１８８、ＩＬ３３−１５８−１５２、ＩＬ３３−１６７−１５３、ＩＬ３３−１５８ＬＳ、およびＩＬ３３−１６７ＬＳからなる群から選択される抗体と、ＩＬ−３３への結合について競合する抗体、またはその抗原結合断片のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを提供する。
【０２３２】
本発明は、（ｉ）配列番号１〜２７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む１つまたは複数のタンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供する。
【０２３３】
本発明は、配列番号３９８、３９９、４００、および４０１のうちの１つまたは複数として記載された核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、配列番号３９８として記載された核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、配列番号３９９として記載された核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、配列番号４００として記載された核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、配列番号４０１として記載された核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。
【０２３４】
本発明は、ＡＴＣＣに寄託され、受託番号ＰＴＡ−１２２７２４および受託番号ＰＴＡ−１２２７２５を有する核酸分子のＤＮＡ挿入物のコード配列の一方または両方を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、ＡＴＣＣに寄託され、受託番号ＰＴＡ−１２２７２４を有する核酸分子を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、ＡＴＣＣに寄託され、受託番号ＰＴＡ−１２２７２５を有する核酸分子を含むポリヌクレオチドを提供する。
【０２３５】
本発明は、配列番号３９８、３９９、４００、および４０１のうちの１つまたは複数に記載の１つまたは複数の核酸分子を含む細胞を提供する。本発明は、配列番号３９８および３９９に記載の１つまたは複数の核酸分子を含む細胞を提供する。本発明は、配列番号４００および４０１に記載の１つまたは複数の核酸分子を含む細胞を提供する。
【０２３６】
別の態様では、本発明は、抗ＩＬ−３３抗体をコードするポリヌクレオチドおよびそのバリアントであって、そのようなバリアントポリヌクレオチドが、本明細書に開示される特定の核酸配列のいずれかに対する少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８７％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する、ポリヌクレオチドおよびそのバリアントを提供する。これらの量は、限定を意味するものではなく、記載されたパーセンテージ間の増分が本開示の一部として具体的に想定される。
【０２３７】
本発明は、本明細書に記載の核酸分子によってコードされるポリペプチドを提供する。
【０２３８】
一実施形態では、ＶＨおよびＶＬドメイン、またはその抗原結合部分、または完全長ＨＣもしくはＬＣは、別々のポリヌクレオチドによってコードされる。あるいは、ＶＨとＶＬの両方、またはその抗原結合部分、またはＨＣとＬＣは、単一のポリヌクレオチドによってコードされる。
【０２３９】
任意のそのような配列と相補的なポリヌクレオチドも、本開示によって包含される。ポリヌクレオチドは、一本鎖（コードもしくはアンチセンス）または二本鎖であってもよく、ＤＮＡ（ゲノム、ｃＤＮＡもしくは合成）またはＲＮＡ分子であってもよい。ＲＮＡ分子は、イントロンを含有し、１対１の様式でＤＮＡ分子に対応するＨｎＲＮＡ分子、およびイントロンを含有しないｍＲＮＡ分子を含む。さらなるコードまたは非コード配列は、必須ではないが、本開示のポリヌクレオチド内に存在してもよく、ポリヌクレオチドは、必須ではないが、他の分子および／または支持材料に連結されていてもよい。
【０２４０】
ポリヌクレオチドは、天然配列（すなわち、抗体、もしくはその一部をコードする内因性配列）を含んでもよいか、またはそのような配列のバリアントを含んでもよい。ポリヌクレオチドバリアントは、コードされるポリペプチドの免疫反応性が、天然の免疫反応分子と比較して減少しないような、１つまたは複数の置換、付加、欠失および／または挿入を含有する。コードされるポリペプチドの免疫反応性に対する効果を、一般的には、本明細書に記載のように評価することができる。一部の実施形態では、バリアントは、天然抗体またはその一部をコードするポリヌクレオチド配列に対して少なくとも約７０％の同一性、一部の実施形態では、少なくとも約８０％の同一性、一部の実施形態では、少なくとも約９０％の同一性、および一部の実施形態では、少なくとも約９５％の同一性を示す。これらの量は、限定を意味するものではなく、記載されたパーセンテージ間の増分が本開示の一部として具体的に想定される。
【０２４１】
２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、２つの配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸の配列が、以下に記載される最大一致のために整列された場合に同じである場合、「同一」であると言われる。２つの配列間の比較は、典型的には、比較ウィンドウにわたって配列を比較して、配列類似性の部分的領域を同定し、比較することによって実施される。本明細書で使用される「比較ウィンドウ」とは、２つの配列を最適に整列させた後に、配列を同じ数の連続する位置の参照配列と比較することができる、少なくとも約２０個の連続する位置、通常は、３０〜約７５個、または４０〜約５０個の断片を指す。
【０２４２】
比較のための配列の最適なアラインメントを、デフォルトパラメータを使用する、バイオインフォマティクスソフトウェアのＬａｓｅｒｇｅｎｅ（登録商標）スイート中のＭｅｇＡｌｉｇｎ（登録商標）プログラム（ＤＮＡＳＴＡＲ（登録商標），Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を使用して行うことができる。このプログラムは、以下の参考文献：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．、１９７８、Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ−Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｄｉｓｔａｎｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（編）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ  Ｖｏｌ．５、Ｓｕｐｐｌ．３、ｐｐ．３４５〜３５８；Ｈｅｉｎ  Ｊ．、１９９０、Ｕｎｉｆｉｅｄ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓ、ｐｐ．６２６〜６４５  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．１８３、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．およびＳｈａｒｐ，Ｐ．Ｍ．、１９８９、ＣＡＢＩＯＳ  ５：１５１〜１５３；Ｍｙｅｒｓ，Ｅ．Ｗ．およびＭｕｌｌｅｒ  Ｗ．、１９８８、ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１〜１７；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｅ．Ｄ．、１９７１、Ｃｏｍｂ．Ｔｈｅｏｒ．１１：１０５；Ｓａｎｔｏｕ，Ｎ．、Ｎｅｓ，Ｍ．、１９８７、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．４：４０６〜４２５；Ｓｎｅａｔｈ，Ｐ．Ｈ．Ａ．およびＳｏｋａｌ，Ｒ．Ｒ．、１９７３、Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ  ｔｈｅ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ、Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ：Ｗｉｌｂｕｒ，Ｗ．Ｊ．およびＬｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．、１９８３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：７２６〜７３０に記載されたいくつかのアラインメントスキームを具体化するものである。
【０２４３】
一部の実施形態では、「配列同一性のパーセンテージ」は、比較ウィンドウ中のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の部分が、２つの配列の最適なアラインメントについて参照配列（付加または欠失を含まない）と比較して、２０パーセントもしくはそれ未満、通常は、５〜１５パーセント、または１０〜１２パーセントの付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含んでもよい、少なくとも２０個の位置の比較のウィンドウにわたって２つの最適に整列された配列を比較することによって決定される。このパーセンテージは、同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が両配列中に存在する位置の数を決定し、一致した位置の数を得ること、一致した位置の数を、参照配列中の位置の総数（すなわち、ウィンドウサイズ）で除算すること、およびその結果に１００を乗算して、配列同一性のパーセンテージを得ることによって算出される。
【０２４４】
バリアントはまた、または代替として、天然遺伝子、またはその一部もしくは相補体と実質的に相同であってもよい。そのようなポリヌクレオチドバリアントは、中程度にストリンジェントな条件下で、天然抗体をコードする天然ＤＮＡ配列（または相補配列）にハイブリダイズすることができる。
【０２４５】
好適な「中程度にストリンジェントな条件」は、５Ｘ  ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ、１．０ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶液中での予備洗浄；５０℃〜６５℃で、５Ｘ  ＳＳＣ、一晩のハイブリダイゼーション；次いで、それぞれ、０．１％ＳＤＳを含有する２Ｘ、０．５Ｘおよび０．２Ｘ  ＳＳＣを用いた６５℃で２０分間、２回の洗浄を含む。
【０２４６】
本明細書で使用される場合、「高度にストリンジェントな条件」または「高ストリンジェンシー条件」は、（１）洗浄のために低イオン強度および高温、例えば、５０℃の０．０１５Ｍ塩化ナトリウム／０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム／０．１％ドデシル硫酸ナトリウムを使用する；（２）ハイブリダイゼーション中に、ホルムアミドなどの変性剤、例えば、４２℃の０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％Ｆｉｃｏｌｌ／０．１％ポリビニルピロリドン／５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ６．５および７５０ｍＭ塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムを含む５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドを使用する；または（３）４２℃の５０％ホルムアミド、５Ｘ  ＳＳＣ（０．７５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５Ｘ  Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液、超音波処理サケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍＬ）、０．１％ＳＤＳ、および１０％硫酸デキストランと共に、４２℃で０．２Ｘ  ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）および５５℃で５０％ホルムアミド中での洗浄、次いで、５５℃のＥＤＴＡを含有する０．１Ｘ  ＳＳＣからなる高ストリンジェンシーの洗浄を使用するものである。当業者であれば、プローブ長などの因子を適合させるために必要に応じて温度、イオン強度などを調整する方法を認識できる。
【０２４７】
当業者であれば、遺伝子コードの縮重性の結果として、本明細書に記載のポリペプチドをコードする多くのヌクレオチド配列が存在することを理解できる。これらのポリヌクレオチドの一部は、任意の天然遺伝子のヌクレオチド配列に対する最小の相同性を有する。それにもかかわらず、コドン使用の差異に起因して変化するポリヌクレオチドが、本開示によって具体的に企図される。さらに、本明細書に提供されるポリヌクレオチド配列を含む遺伝子の対立遺伝子は、本開示の範囲内にある。対立遺伝子は、ヌクレオチドの欠失、付加および／または置換などの、１つまたは複数の変異の結果として変化する内因性遺伝子である。得られるｍＲＮＡおよびタンパク質は、必須ではないが、変化した構造または機能を有してもよい。対立遺伝子を、標準的な技術（ハイブリダイゼーション、増幅および／またはデータベース配列比較など）を使用して同定することができる。
【０２４８】
本開示のポリヌクレオチドを、化学的合成、組換え方法、またはＰＣＲを使用して取得することができる。化学的ポリヌクレオチド合成の方法は、当業界で周知であり、本明細書で詳細に説明する必要はない。当業者であれば、本明細書に提供される配列および市販のＤＮＡ合成装置を使用して、所望のＤＮＡ配列を生成することができる。
【０２４９】
本明細書でさらに考察されるように、組換え方法を使用してポリヌクレオチドを調製するために、所望の配列を含むポリヌクレオチドを、好適なベクター中に挿入し、次いで、ベクターを、複製および増幅のために好適な宿主細胞中に導入することができる。ポリヌクレオチドを、当業界で公知の任意の手段によって宿主細胞中に挿入することができる。直接的な取込み、エンドサイトーシス、トランスフェクション、Ｆ交配またはエレクトロポレーションにより外因性ポリヌクレオチドを導入することによって、細胞を形質転換する。一度導入されたら、外因性ポリヌクレオチドを、非組込みベクター（プラスミドなど）として細胞内で維持するか、または宿主細胞ゲノム中に組み込むことができる。そのように増幅されたポリヌクレオチドを、当業界で周知の方法によって宿主細胞から単離することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９を参照されたい。
【０２５０】
あるいは、ＰＣＲは、ＤＮＡ配列の再現を可能にする。ＰＣＲ技術は、当業界で周知であり、米国特許第４，６８３，１９５号、第４，８００，１５９号、第４，７５４，０６５号および第４，６８３，２０２号、ならびにＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ、Ｍｕｌｌｉｓら（編）、Ｂｉｒｋａｕｓｗｅｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｓｔｏｎ、１９９４に記載されている。
【０２５１】
ＲＮＡを、適切なベクター中の単離されたＤＮＡを使用し、それを好適な宿主細胞中に挿入することによって取得することができる。細胞が複製し、ＤＮＡがＲＮＡに転写される時、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９に記載のような、当業者には周知の方法を使用して、ＲＮＡを単離することができる。
【０２５２】
好適なクローニングおよび発現ベクターは、プロモーター、エンハンサー、および他の転写調節配列などの、様々な成分を含んでもよい。また、ベクターを、抗体可変ドメインの異なるベクターへのその後のクローニングを可能にするように構築することもできる。好適なクローニングベクターを、標準的な技術に従って構築するか、または当業界で利用可能な多数のクローニングベクターから選択することができる。選択されるクローニングベクターは使用を意図される宿主細胞に応じて変化してもよいが、有用なクローニングベクターは、一般的には、自己複製する能力を有する、特定の制限エンドヌクレアーゼのための単一の標的を有する、および／またはベクターを含有するクローンの選択において使用することができるマーカーのための遺伝子を有してもよい。好適な例としては、プラスミドおよび細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ  ＳＫ＋）およびその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３およびｐＡＴ２８などのシャトルベクターが挙げられる。これらの、および他の多くのクローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、およびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの商業的供給業者から入手可能である。発現ベクターはさらに提供される。発現ベクターは一般的には、本開示によるポリヌクレオチドを含有する複製可能なポリヌクレオチド構築物である。発現ベクターは、エピソームとして、または染色体ＤＮＡの組込み部分として宿主細胞中で複製可能でなければならないことが暗示される。好適な発現ベクターとしては、限定されるものではないが、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスなどのウイルスベクター、コスミド、およびＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号に開示された発現ベクターが挙げられる。ベクター成分は、一般に、限定されるものではないが、以下のうちの１つまたは複数：シグナル配列；複製起点；１つまたは複数のマーカー遺伝子；好適な転写制御エレメント（プロモーター、エンハンサーおよびターミネーターなど）を含んでもよい。発現（すなわち、翻訳）のために、リボソーム結合部位、翻訳開始部位、および停止コドンなどの、１つまたは複数の翻訳制御エレメントも通常は必要である。
【０２５３】
目的のポリヌクレオチドを含有するベクターおよび／またはポリヌクレオチド自体を、エレクトロポレーション、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストラン、または他の物質を使用するトランスフェクション；微小発射ボンバードメント；リポフェクション；および感染（例えば、ベクターがワクシニアウイルスなどの感染性因子である場合）を含む、いくつかの適切な手段のいずれかにより宿主細胞中に導入することができる。ベクターまたはポリヌクレオチドを導入する選択は、宿主細胞の特徴に依存することが多いであろう。
【０２５４】
抗体、またはその抗原結合断片を、好適な宿主細胞を使用して組換え的に作製することができる。抗体、またはその抗原結合断片をコードする核酸を、発現ベクター中にクローニングした後、これを、細胞がそうでなければ免疫グロブリンタンパク質を生成しない大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、酵母細胞、昆虫細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはミエローマ細胞などの宿主細胞中に導入して、組換え宿主細胞中で抗体の合成を得ることができる。好ましい宿主細胞としては、当業界で周知の多くの細胞の中でも、ＣＨＯ細胞、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）２９３細胞、またはＳｐ２．０細胞が挙げられる。抗体断片を、完全長抗体のタンパク質溶解的もしくは他の分解、組換え方法、または化学的合成により生成することができる。抗体のポリペプチド断片、特に、約５０アミノ酸までのより短いポリペプチドを、化学的合成によって都合良く作製することができる。タンパク質およびペプチドのための化学的合成の方法は、当業界で公知であり、商業的に利用可能である。
【０２５５】
本発明の抗体、またはその抗原結合断片を、親和性成熟させることができる。例えば、親和性成熟抗体を、当業界で公知の手順によって生成することができる（Ｍａｒｋｓら、１９９２、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９〜７８３；Ｂａｒｂａｓら、１９９４、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ  ９１：３８０９〜３８１３；Ｓｃｈｉｅｒら、１９９５、Ｇｅｎｅ、１６９：１４７〜１５５；Ｙｅｌｔｏｎら、１９９５、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５：１９９４〜２００４；Ｊａｃｋｓｏｎら、１９９５、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４（７）：３３１０〜９；Ｈａｗｋｉｎｓら、１９９２、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２６：８８９〜８９６；およびＷＯ２００４／０５８１８４）。
【０２５６】
使用および医学的療法
一部の態様では、本発明は、抗ＩＬ−３３抗体、またはその抗原結合断片を使用してＩＬ−３３活性を阻害するための治療的方法であって、抗体、またはその抗原結合断片を含む治療有効量の医薬組成物を投与することを含む治療的方法を提供する。処置される障害は、ＩＬ−３３活性またはシグナル伝達の除去、阻害または減少によって改善、軽減、阻害または防止される任意の疾患または状態である。
【０２５７】
一部の態様では、障害は、炎症疾患もしくは障害、または炎症疾患もしくは障害と関連する少なくとも１つの症状を有する状態である。炎症疾患または障害または症状の重症度、持続期間または発生頻度を軽減するか、または減少させることができる。
【０２５８】
本発明の抗体およびその抗原結合断片が有効であり得る粘膜または体表面でのアレルギーならびに他の疾患としては、アレルギー、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、春季カタル、季節性アレルギー、ペットアレルギー、喘息、食物アレルギー、ピーナッツアレルギー、アトピー性皮膚炎、鼻ポリープを伴う慢性鼻副鼻腔炎（ＣＲＳｗＮＰ）、アレルギー性鼻炎、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、呼吸器疾患のウイルス性増悪、小児および成人におけるウイルス感染（呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ライノウイルス、インフルエンザ）、蕁麻疹、ならびに好酸球性食道炎が挙げられる。慢性線維症を含む疾患を、本発明の抗体およびその抗原結合断片によって処置することもできる。これらのものとしては、肝線維症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、慢性腎臓病、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、強皮症、全身性硬化症が挙げられる。急性組織傷害を含む疾患を、本発明の抗体およびその抗原結合断片によって処置することもでき、急性腎傷害、敗血症、膵炎、１型糖尿病、移植対宿主疾患（ＧＶＨＤ）、組織移植が挙げられる。本発明の抗体およびその抗原結合断片を用いて処置することができる他の慢性変性疾患または慢性炎症疾患としては、アルツハイマー病、関節リウマチ、炎症性腸疾患：過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、クローン病、潰瘍性大腸炎が挙げられる。本発明の抗体およびその抗原結合断片を用いて処置することができるさらなる疾患としては、多発性硬化症、乾癬、セリアック病およびレイノー病が挙げられる。
【０２５９】
抗体およびその抗体断片を、１つまたは複数のさらなる治療活性化合物と共に投与することができる。さらなる治療活性化合物としては、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−３１、ＩＬ３６、ＩＦＮα、ＩＦＮγのうちの１つもしくは複数に対するアンタゴニスト、またはその対応する受容体のアンタゴニスト、ＮＳＡＩＤ、ステロイド、およびコルチコステロイドが挙げられる。
【０２６０】
本発明の抗ＩＬ−３３抗体を使用して、例えば、診断目的で、試料中のＩＬ−３３、またはＩＬ−３３を発現する細胞を検出および／または測定することもできる。例えば、抗ＩＬ−３３抗体、またはその断片を使用して、ＩＬ−３３の異常な発現（例えば、過剰発現、過少発現、発現の欠如など）を特徴とする状態または疾患を診断することができる。ＩＬ−３３のための例示的な診断アッセイは、例えば、患者から得られた試料を、検出可能な標識またはリポーター分子で標識された本発明の抗ＩＬ−３３抗体と接触させることを含んでもよい。
【０２６１】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容できる担体」または「薬学的に許容できる賦形剤」は、活性成分と混合した場合、その成分の生物学的活性の保持を可能にし、対象の免疫系と反応しない任意の材料を含む。例としては、限定されるものではないが、リン酸緩衝溶液、水、油／水乳濁液などの乳濁液、および様々な型の湿潤剤などの任意の標準的な薬学的担体が挙げられる。エアロゾルまたは非経口投与のための好ましい希釈剤は、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）または正常（０．９％）塩水である。そのような担体を含む組成物は、周知の従来方法によって製剤化される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（編）、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９９０；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００を参照されたい）。
【０２６２】
組成物
本発明の抗体、またはその抗原結合断片を、医薬組成物として製剤化することができる。医薬組成物は、凍結乾燥製剤または水性溶液の形態中に、薬学的に許容できる担体、賦形剤、および／または安定剤をさらに含んでもよい（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、２０００、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ（編）、Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ）。許容できる担体、賦形剤、または安定剤は、その用量および濃度でレシピエントにとって非毒性的であり、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンなどの酸化防止剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノースもしくはデキストランなどの他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含んでもよい。薬学的に許容できる賦形剤は、本明細書にさらに記載される。
【０２６３】
用量
本明細書で使用される場合、薬物、化合物、または医薬組成物の「有効用量」、「有効量」または「治療有効量」は、任意の１つまたは複数の有益な、または望ましい結果を得るのに十分な量である。予防的使用については、有益な、または望ましい結果は、リスクの除去もしくは低減、重症度の低下、または疾患の生化学的、組織学的および／もしくは挙動的症状などの疾患、疾患の発生中に呈するその合併症および中間的な病理学的表現型の開始の遅延を含む。治療的使用については、有益な、または望ましい結果は、活性ＩＬ−３３の高発現の結果得られる炎症または１つもしくは複数の症状の低減、疾患を処置するのに必要とされる他の薬剤の用量の減少、別の薬剤の効果の増強、および／または患者の疾患の進行の遅延などの臨床結果を含む。有効用量を、１回または複数回の投与で投与することができる。本発明の目的のために、薬物、化合物、または医薬組成物の有効用量は、直接的または間接的に予防的または治療的処置を達成するのに十分な量である。臨床的文脈において理解されるように、薬物、化合物、または医薬組成物の有効用量は、別の薬物、化合物、または医薬組成物と共に達成しても、またはしなくてもよい。かくして、「有効用量」は、１つまたは複数の治療剤を投与する文脈で考えることができ、単一の薬剤は、１つまたは複数の他の薬剤と一緒に、望ましい結果が達成され得るか、または達成される場合、有効量で与えられると考えることができる。
【０２６４】
「個体」または「対象」は、哺乳動物、より好ましくは、ヒトである。哺乳動物はまた、限定されるものではないが、家畜、スポーツ動物、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウスおよびラットが挙げられる。
【０２６５】
一部の実施形態では、方法または使用は、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの本発明の抗体、もしくはその抗原結合断片、または医薬組成物の初期用量を投与することを含む。この初期用量の後、１または複数のその後の用量を投与してもよい。一部の実施形態では、１または複数のその後の用量を、毎週、２週毎、３週毎、４週毎、５週毎、６週毎、７週毎、８週毎、９週毎、１０週毎、１１週毎、または１２週毎の少なくともいずれかに投与してもよい。
【０２６６】
一部の実施形態では、方法または使用は、約０．２５ｍｇ〜約２０００ｍｇの本発明の抗体、またはその抗原結合断片の固定用量を投与することを含む。一部の実施形態では、抗体、またはその抗原結合断片は、毎週、２週毎、３週毎、４週毎、５週毎、６週毎、７週毎、８週毎、９週毎、１０週毎、１１週毎、または１２週毎に投与される。
【０２６７】
キット
本発明はまた、本発明の抗体、またはその抗原結合断片を含むキットまたは製品、および使用のための指示書も提供する。したがって、一部の実施形態では、容器、抗ＩＬ−３３アンタゴニスト抗体を含む容器内の組成物、およびそれを必要とする患者の処置のために治療有効量の抗ＩＬ−３３アンタゴニスト抗体を投与するための指示書を含有する添付文書を含むキットまたは製品が提供される。
【０２６８】
ある特定の実施形態では、キットは、乾燥タンパク質を有する第１の容器と、水性製剤を有する第２の容器との両方を含有してもよい。ある特定の実施形態では、単一および複数チャンバーの予め充填された注射筒（例えば、液体注射筒および凍結乾燥注射筒）を含有するキットが含まれる。
【０２６９】
本発明の抗体、またはその抗原結合断片の使用に関する指示書は、一般に、意図される処置のための用量、投薬スケジュール、および投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）またはサブユニット用量であってもよい。本発明のキット中に供給される指示書は、典型的には、標識または添付文書（例えば、キットに含まれる用紙）上の文書化された指示書であるが、機械で読み取り可能な指示書（例えば、磁気または光学記憶ディスク上に担持された指示書）も許容できる。
【０２７０】
本発明のキットは、好適な梱包物中にある。好適な梱包物としては、限定されるものではないが、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性梱包物（例えば、密封されたＭｙｌａｒまたはプラスチックバッグ）などが挙げられる。また、吸入器、鼻投与デバイス（例えば、アトマイザー）またはミニポンプなどの輸液用デバイスなどの特定のデバイスと共に使用するためのパッケージも企図される。キットは、無菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針で貫通できるストッパを有するバイアルであってもよい）。容器はまた、無菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針で貫通できるストッパを有するバイアルであってもよい）。容器は、第２の薬学的活性剤をさらに含んでもよい。
【０２７１】
キットは、緩衝液などのさらなる成分および解釈的情報を提供してもよい。通常、キットは、容器と、容器上の、または容器と結合した標識または添付文書とを含む。
【０２７２】
定義
「約」または「およそ」は、測定可能な数的変数と関連して使用される場合、その変数の示された値および示された値の実験誤差の範囲内（例えば、平均に関する９５％信頼区間の範囲内）または示された値の１０%以内の、いずれか大きい方にある変数の全ての値を指す。数値範囲は、その範囲を規定する数を包含する。
【０２７３】
本明細書で使用される「ベクター」は、宿主細胞中で目的の１つまたは複数の遺伝子または配列を送達する、好ましくは、発現することができる構築物を意味する。ベクターの例としては、限定されるものではないが、ウイルスベクター、ネイキッドＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、陽イオン縮合剤と関連するＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソーム中に封入されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、および産生細胞などのある特定の真核細胞が挙げられる。
【０２７４】
当業界で公知のように、用語「同一性」とは、配列を比較することによって決定される、２つ以上のポリペプチド分子または２つ以上の核酸分子の配列間の関係を指す。当業界では、「同一性」はまた、場合によっては、一連のヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の一致により決定される、ポリペプチドまたは核酸分子配列間の配列関連性の程度も意味する。「同一性」は、コンピュータープログラムの特定の数学モデル（すなわち、「アルゴリズム」）によって対処されるギャップアラインメントと共に２つ以上の配列間の同一の一致のパーセントを測定する。
【０２７５】
用語「類似性」は、関連する概念であるが、「同一性」とは対照的に、同一の一致と、保存的置換の一致の両方を含む、類似性の尺度を指す。保存的置換はポリペプチドに適用され、核酸分子には適用されないため、類似性はポリペプチド配列比較のみを扱う。２つのポリペプチド配列が、例えば、２０個の同一のアミノ酸のうちの１０個を有し、残りが全て非保存的置換である場合、同一性および類似性パーセントは、両方とも５０％である。同じ例において、保存的置換が存在するさらに５個の位置が存在する場合、同一性パーセントは５０％のままであるが、類似性パーセントは７５％（２０個のうちの１５個）である。したがって、保存的置換が存在する場合、２つのポリペプチド配列間の類似性の程度は、これらの２つの配列間の同一性パーセントよりも高い。
【実施例】
【０２７６】
例示的な方法および材料は本明細書に記載されるが、本明細書に記載されるものと類似する、または等価な方法および材料を、本発明の実施または試験において使用することもできる。材料、方法、および実施例は例示に過ぎず、限定を意図するものではない。
【０２７７】
（実施例１）
ヒトＩＬ−３３に結合するラットモノクローナル抗体の単離
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、ミョウバンアジュバント中の組換えヒトＩＬ−３３（配列番号１）、アミノ酸Ｓ１１２〜Ｔ２７０（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅｐｏｌｉｓ、ＭＮ；カタログ番号３６２５−ＩＬ／ＣＦ）の複数回の皮下注射によって免疫した。ストレプトアビジン被覆ＥＬＩＳＡプレート上に固定されたビオチン化ヒトＩＬ−３３に対する結合活性を示した血清も、ＥＬＩＳＡプレート上に固定された抗ヒトＦｃにより捕捉されたヒトＳＴ２−Ｆｃ（配列番号２）への１０ｎｇ／ｍｌのビオチン化ヒトＩＬ−３３の結合の遮断についてスクリーニングした。アッセイのために、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）を用いる野生型ＩＬ−３３の還元により、または４個全てのシステイン残基がセリンに変異したヒトＩＬ−３３バリアント、ｍｍ２（配列番号３）を使用することにより、サイトカイン活性を維持した。最も高い力価を有するラットから、ＩＬ−３３被覆ビーズ上で富化されたハイブリドーマおよび培養Ｂ細胞を、ＳＴ２を安定に発現するＨＥＫ−２９３細胞およびＮＦκＢ応答プロモーター下で分泌型アルカリホスファターゼを発現するプラスミド上でヒトＩＬ−３３結合、ヒトＩＬ−３３／ＳＴ２−Ｆｃ結合の遮断、およびヒトＩＬ−３３活性の中和を示す抗体についてスクリーニングした。２２７のＩＬ−３３結合抗体が同定され、そのうちの６つの抗体（３０Ａ１、３０Ｂ１１、７Ｅ８、９Ｂ３、１２Ｆ９、および１４Ｄ８）がＩＬ３３−ＳＴ２結合およびリポーター細胞活性も中和し、分子クローニングおよびその後の分析のために選択した。
【０２７８】
（実施例２）
ラット抗ＩＬ−３３抗体重鎖および軽鎖可変領域のクローニング
中和抗ＩＬ−３３抗体の重鎖および軽鎖可変領域を、ＳＭＡＲＴ（登録商標）ｃＤＮＡ合成システム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．ｏｆ  Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）、次いで、ＰＣＲ増幅を使用してクローニングした。ＲＮＥａｓｙキット（Ｑｉａｇｅｎ）およびＳＭＡＲＴ（登録商標）ＩＩＡオリゴ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．）と共にＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＩＩ（商標）逆転写酵素（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．）を使用して、およそ５００，０００個のクローン化Ｂ細胞（１４Ｄ８、１２Ｆ９）または７Ｅ８、９Ｂ３、３０Ａ１、３０Ｂ１１ハイブリドーマ細胞から単離された１μｇの全ＲＮＡから、ｃＤＮＡを合成した。次いで、ＳＭＡＲＴ（登録商標）ＩＩＡオリゴ配列にアニーリングするプライマーおよびラット定常領域特異的プライマー（軽鎖についてはラットカッパおよび重鎖についてはラットＩｇＧ１）を、ＧｏＴａｑ  Ｇｒｅｅｎポリメラーゼマスターミックス（Ｐｒｏｍｅｇａ）と共に使用するＰＣＲにより、ｃＤＮＡを増幅した。重鎖および軽鎖ＰＣＲ産物を、ｐＣＲ４−ＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中にサブクローニングし、核酸配列を決定した。この方法は、ＤＮＡ配列に関する予備知識が必要とされない点で有利である。さらに、得られるＤＮＡ配列は、縮重ＰＣＲプライマーの使用によって変化しない。
【０２７９】
次いで、可変重鎖領域を、エフェクター機能を無効化するように変異させたヒトＩｇＧ１定常領域（配列番号９）を含有するｐＳＭＥＤ２哺乳動物発現ベクター中にクローニングし（Ｌｅｕ２３４Ａｌａ、Ｌｅｕ２３５ＡｌａおよびＧｌｙ２３７Ａｌａ、ＥＵ番号付け；米国特許第５，６２４，８２１号）、キメラ重鎖を生成した。可変軽鎖領域を、ヒトカッパの定常領域（配列番号３０）を含有するｐＳＭＥＮ３哺乳動物発現ベクター中にクローニングして、キメラ軽鎖を生成した。また、抗体９Ｂ３、１４Ｄ８、３０Ａ１、および３０Ｂ１１の場合、最も近いヒトカッパ鎖Ｊセグメント（配列番号１２、８２）を使用して、ラットカッパ鎖Ｊセグメントを置き換えて、キメラ抗体の発現を改善した。
【０２８０】
（実施例３）
抗ヒトＩＬ−３３抗体によるＩＬ−３３の中和
表４に示されるように、実施例１に記載されたＨＥＫ２９３  ＳＴ２  ＮＦκＢ細胞に基づくリポーターアッセイにおいて、６つのキメラ抗体が、ヒトＩＬ−３３に結合し、その活性を中和することが示された。
【０２８１】
【表５】
2019516362.tif 000008
【０２８２】
また、３個のシステイン残基をセリンに変異させたカニクイザルＩＬ−３３のバリアント（配列番号５）を用いるＨＥＫ２９３  ＳＴ２  ＮＦκＢアッセイを使用して、キメラ抗体を試験して、カニクイザルＩＬ３３を中和するその能力を決定した。７Ｅ８、３０Ａ１、および３０Ｂ１１は、それぞれ、０．２１、２．９５、および０．２０ｎＭのＩＣ５０でカニクイザルＩＬ−３３を中和することができたが、１２Ｆ８および１４Ｂ８は中和できず、９Ｂ３は弱い中和しか示さなかった（表５）。
【０２８３】
【表６】
2019516362.tif 000009
【０２８４】
（実施例４）
抗ＩＬ−３３抗体のエピトープグルーピング
Ｏｃｔｅｔバイオセンサーを使用する競合アッセイに基づいて、６つの中和抗体をエピトープビンにグループ化した。ストレプトアビジン被覆Ｏｃｔｅｔチップに、１０μｇ／ｍｌのビオチン−ｈＩＬ−３３（ｍｍ２）を１５０ｓｅｃにわたって充填し、５０ｓｅｃにわたって遮断バッファー（ＰＢＳ中の１％ＢＳＡ）に移した後、２９０ｓｅｃにわたって６つの抗体のうちの１つを含有するウェルに移して、第１抗体をＩＬ−３３に結合させた。次いで、チップを、２９０ｓｅｃにわたって第２抗体を含有する第２のウェルに移した。第２抗体が第１抗体によって生成されたものを超えるバイオセンサーシグナルの増大を示した場合、抗体を非競合としてスコア化し、第２抗体がシグナルのさらなる増大をもたらさなかった場合、それらを競合としてスコア化した（表６）。これらの競合データに基づくと、抗体７Ｅ８、９Ｂ３、３０Ａ１、および３０Ｂ１１は１つのエピトープ群を規定し、１２Ｆ９および１４Ｄ８は第２の非重複エピトープを規定した。
【０２８５】
【表７】
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【０２８６】
（実施例５）
ラット抗ＩＬ−３３抗体のヒト化
ヒト化バージョンの中和ラット抗体７Ｅ８、９Ｂ３、１２Ｆ９、および３０Ｂ１１を、相補性決定領域（ＣＤＲ）移植（本明細書では以後、「ＣＤＲ移植」と呼ぶ）によって生成した。重鎖ＣＤＲを、ＪＨ４セグメント（配列番号８）を含むヒトＤＰ−５４フレームワーク領域（ＶＨ３サブグループ；配列番号７）上に移植したが、軽鎖ＣＤＲはＪＫ４セグメント（配列番号１２）を含むヒトＤＰＫ９フレームワーク（ＶＫＩサブグループ；配列番号１１）上に移植した。ヒト化ＶＨ領域を、エフェクター機能が変異したヒトＩｇＧ１定常領域（配列番号９）に連結した後、専売の発現ベクター中にサブクローニングして、ＣＤＲ移植された重鎖、配列番号９２（７Ｅ８  ＣＤＲ移植）、９９（９Ｂ３  ＣＤＲ移植）、１０４（１２Ｆ９  ＣＤＲ移植）、および１０９（３０Ｂ１１  ＣＤＲ移植）を生成した。第２のバージョンのＣＤＲ移植された３０Ｂ１１は、生殖系列アルギニン残基の代わりに、重鎖の７１位にラット残基（バリン）を組込み、得られる重鎖を配列番号１１２と指定した。ヒト化ＶＬ領域を、ヒトカッパ定常領域（配列番号１３）に融合した後、専売の発現ベクター中にサブクローニングして、ＣＤＲ移植された軽鎖、配列番号９３（７Ｅ８  ＣＤＲ移植）、１００（９Ｂ３  ＣＤＲ移植）、１０５（１２Ｆ８  ＣＤＲ移植）、および１１０（３０Ｂ１１  ＣＤＲ移植）を作出した。また、７Ｅ８は、他のＶＨ３生殖系列フレームワーク（ＤＰ４７、受託番号ＣＡＡ７８２１７．１；ＤＰ３１、受託番号ＣＡＡ７８２０３．１；ＤＰ５０、受託番号ＣＡＡ７８２２０．１）上に移植され、ＣＤＲ移植された７Ｅ８（配列番号９２、９３）のものと類似する、細胞に基づく活性および非特異的結合を有していた。
【０２８７】
（実施例６）
ヒト化ＩＬ−３３抗体による組換えおよび天然ヒトＩＬ−３３ならびに組換えカニクイザルＩＬ−３３の中和
ＣＤＲ移植された７Ｅ８、９Ｂ３、１２Ｆ９、および３０Ｂ１１は、実施例１に記載されたＨＥＫ２９３  ＳＴ２  ＮＦκＢリポーターアッセイにおいてヒトＩＬ−３３の活性を中和することが示された。特に、ＣＤＲ移植された７Ｅ８は、０．０１９ｎＭのＩＣ５０を示し、７Ｅ８ハイブリドーマにより示された０．０２４ｎＭのＩＣ５０とほぼ同一であった（表７）。ＣＤＲ移植された１２Ｆ９は、キメラ１２Ｆ９について２．７１ｎＭのＩＣ５０（表４）が観察された完全な阻害よりもむしろ高濃度での部分的に過ぎない阻害（表７）を示した。ＣＤＲ移植された９Ｂ３および３０Ｂ１１は、それぞれ、０．５２０および０．３６８ｎＭのＩＣ５０値（表７）を有し、キメラバージョンのこれらの抗体と比較しておよそ１０分の１の活性であった（表４）。重鎖フレームワーク復帰変異Ｒ７１Ｖを含有する第２のバージョンのＣＤＲ移植された３０Ｂ１１は、キメラと比較して効力の同様の低下、０．２７８ｎＭ対０．０２８ｎＭのＩＣ５０を示した（表７、表４）。
【０２８８】
【表８】
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【０２８９】
ＣＤＲ移植された７Ｅ８および７Ｅ８ハイブリドーマはさらに、ヒトＩＬ−３３（ｍｍ２）を用いるＳＴ２−ＮＦκＢリポーターアッセイにおけるその活性（ＣＤＲ移植された７Ｅ８と７Ｅ８ハイブリドーマの両方について０．０４３ｎＭのＩＣ５０；表８）と同様、カニクイザルＩＬ−３３を用いるＳＴ２−ＮＦκＢリポーターアッセイにおいて同様の中和効力（それぞれ、０．０６９ｎＭおよび０．０３２ｎＭ；表８）を有することが示された。ＣＤＲ移植された７Ｅ８および可溶性ヒトＩＬ−３３受容体ＳＴ２−Ｆｃは、ヒトＩＬ−３３（ｍｍ２）に対する同様の中和効力（それぞれ、０．０４３ｎＭおよび０．０５６ｎＭ）を示し、野生型システイン残基を保持したヒトＩＬ−３３に対する同様の中和効力（それぞれ、３．２１ｎＭおよび１．８９ｎＭ；表８）を示した。
【０２９０】
【表９】
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【０２９１】
（実施例７）
ＩＬ−３３抗体によるヒト細胞抽出物に由来する天然ＩＬ−３３の活性の中和
ＣＤＲ移植された７Ｅ８はさらに、培養ヒト肺線維芽細胞により産生された天然ヒトＩＬ−３３の活性を中和することが示された。ヒト肺線維芽細胞株ＨＦＬ−１（ＡＴＣＣ）の早期継代を、ＤＭＥＭ＋１０％熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋Ｌ−グルタミン／ペニシリン／ストレプトマイシン＋１／１００ＨＥＰＥＳ中で増殖させた。細胞が９５〜１００％集密に達した時、培地を除去し、血清を含まない同じ培地と交換し、２４ｈインキュベートした。次いで、培地を除去し、２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−αと交換し、さらに１４ｈインキュベートした。細胞をトリプシン処理によって収獲し、ペレット化し、無血清培地中で凍結した。溶解物を、−２０℃での５回の凍結−解凍サイクルによって調製し、１０ｍＭ  ＤＴＴに入れ、試料を遠心分離し、ＩＬ−３３活性の評価のために希釈した。ＨＦＬ−１細胞溶解物は、ＨＥＫ２９３  ＳＴ２  ＮＦκＢリポーターアッセイにおいてＮＦκＢリポーター遺伝子を活性化することが示され、この活性を、可溶性ヒトＳＴ２−Ｆｃ（配列番号２）およびポリクローナル抗ＩＬ−３３中和抗体によって部分的に遮断することができた。活性は、ラット抗体７Ｅ８、９Ｂ３、３０Ａ１１、および３０Ｂ１１およびキメラによって、ならびにキメラ１４Ｄ８によって完全に遮断されたが、これは、これらの抗体がヒト一次細胞中で産生された内因性ＩＬ−３３を認識し、中和することができることを示している。
【０２９２】
【表１０】
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【０２９３】
（実施例８）
抗ＩＬ−３３抗体は高い効力でＩＬ−３３を中和する
リガンドの濃度によって影響されないアッセイにおいてＩＬ−３３への抗体の結合に関する親和性を測定するために、Ｓｃｈｉｌｄ分析を実施して、ＩＬ−３３に対する７Ｅ８の親和性のアッセイおよびリガンド濃度に依存しない測定値を算出することができるＨＥＫ２９３  ＳＴ２  ＮＦκＢリポーターアッセイシステム（ＡｒｕｎｌａｋｓｈａｎａおよびＳｃｈｉｌｄ、１９５９）を用いる実験を設計した。ＩＬ−３３のＥＣ５０を、ＮＦκＢ  ＳＴ２リポーターアッセイにおいて７Ｅ８  ＣＤＲ移植（配列番号９２、９３）の複数の濃度で決定し、６．０１ｐＭのｋＢがＩＬ−３３（ｍｍ２）について算出され（表１０）、野生型ＩＬ−３３（Ｒ＆Ｄ）については８３．４５ｐＭが算出された。
【０２９４】
ＩＬ−３３はまた、共刺激がＩＬ−１２である場合、血液中のナチュラルキラー細胞からのＩＦＮγ産生の強力な共刺激因子である。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌにより新鮮なヘパリン処理したヒト血液から精製した後、ＩＬ−１２で２ｈ処理した後、５ｐＭのＩＬ−３３の混合物で処理し、抗ＩＬ−３３抗体の用量滴定を行った。培養上清を、ＩＬ−３３の添加の２０ｈ後に収集し、ＩＦＮγのレベルを、ＭＳＤプレートリーダー（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）によって測定した。ヒトＰＢＭＣ中では、ＨＥＫ２９３  ＳＴ２  ＮＦκＢリポーターアッセイにおいて行われた観察と同様、ＩＬ−３３（ｍｍ２）の７Ｅ８阻害は、２人のドナーにおいて１．０４および６．６４ｐＭの算出されたｋＢをもたらした。かくして、ＩＬ−３３（ｍｍ２）に対する７Ｅ８  ＣＤＲ移植の見かけの親和性は、１桁のピコモル範囲で非常に高く、野生型ＩＬ−３３については１００ｐＭ未満である。
【０２９５】
【表１１】
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【０２９６】
（実施例９）
ヒトおよびカニクイザルＩＬ−３３に対するＩＬ−３３抗体の結合親和性
ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｔ２００機器を使用する表面プラズモン共鳴によって、ヒトおよびカニクイザルＩＬ−３３への結合を測定した。抗ヒトＦｃ抗体を、ＣＭ５チップ上に固定し、抗ＩＬ−３３抗体を捕捉した。ヒトＩＬ−３３（ｍｍ２）またはカニクイザルＩＬ−３３を、３．９〜１２５ｎＭの濃度範囲で、４５ｓｅｃにわたって５０μｌ／ｍｉｎでチップ上に流し、２４０〜１５００ｓｅｃにわたって解離させた。親和性の値を、以下の表１１に示されるように決定した。全ての抗体がヒトＩＬ−３３に結合し、その親和性の範囲は１７１〜５４０ｐＭであった。捕捉されたキメラ１２Ｆ９およびキメラ１４Ｄ８は、溶液中の１２５ｎＭのカニクイザルＩＬ−３３に結合しなかったが、ＣＤＲ移植された７Ｅ８、キメラ９Ｂ３、キメラ３０Ａ１、およびキメラ３０Ｂ１１は、溶液相のヒトおよびカニクイザルＩＬ−３３に結合した。
【０２９７】
【表１２】
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【０２９８】
（実施例１０）
表面プラズモン共鳴およびＫｉｎＥｘＡ（商標）法を使用する７Ｅ８の動的評価
捕捉されたＩｇＧとして測定された抗体の見かけの親和性は、溶液相においてＩＬ−３３中和のその効力よりも有意に低かったため（実施例１１）、親和性決定のための２つの代替的な手法を採用した。ＩｇＧ分子の２つの結合アームの二価提示の影響を除去するために、一価抗ＩＬ−３３抗体Ｆａｂ断片を、ＣＤＲ移植された７Ｅ８（配列番号９２、９３）のパパイン切断によって調製した。Ｆａｂ断片親和性を、２つの方法、チップ上に捕捉されたＦａｂまたはＩＬ−３３と共に、ＢＩＡｃｏｒｅ機器を使用する表面プラズモン共鳴、および溶液中のＦａｂとＩＬ−３３の両方と共に、ＫｉｎＥｘＡ機器を使用する溶液平衡親和性測定によって測定した。
【０２９９】
表面プラズモン共鳴実験を、２つの形式で行った。７Ｅ８  Ｆａｂを抗ヒトＦａｂ捕捉キット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号２８９５８３２５）によって捕捉した場合、親和性（表１２）は、ＩＬ−３３（ｍｍ２）については２４９．５ｐＭおよびＩＬ−３３（Ｒ＆Ｄ）については２９０ｐＭと測定され、同様の形式で捕捉されたＩｇＧについて得られた結果（表１１）と同様であった。しかしながら、ビオチン化ｈＩＬ−３３（ｍｍ２）をストレプトアビジン被覆ＢＩＡｃｏｒｅバイオセンサー上で捕捉し、７Ｅ８  Ｆａｂの滴定系列をセンサー表面上に注入した場合、ＩＬ−３３（ｍｍ２）に対する７Ｅ８  Ｆａｂの親和性は、３．０６ｐＭであると測定された（表１２）。いかなる特定の理論によっても束縛されることを望むものではないが、２つの形式間の結果の差異は、マトリックス効果に起因する可能性があり、例えば、ｐＨ７．４では、負に荷電したＣＭ５センサーチップへの、溶液中の正に荷電したＦａｂ（ｐＩ８．５２）の誘引が予想され、同様に、負に荷電したＣＭ５センサーチップへの、溶液中の負に荷電したＩＬ−３３の反発（ＩＬ−３３  ｍｍ２についてはｐＩ５．２、ＩＬ−３３ＷＴについてはｐＩ４．４５、およびビオチン化ＩＬ−３３  ｍｍ２についてはｐＩ５．４８）（Ｄｒａｋｅら、２０１２、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４２９（１）：５８〜６９）も予想される。親和性測定に対する直交的（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ）手法は、以下の実施例１０に記載される。
【０３００】
野生型ＩＬ３３への７Ｅ８の結合を評価するために、野生型システイン残基を含む組換えＩＬ−３３タンパク質（配列番号４）を、アミンカップリングキット（カタログ番号ＢＲ１０００５０、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、製造業者のプロトコールに従って使用して、ＣＭ５センサーチップ（カタログ番号ＢＲ１００５３０、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に共有結合的にカップリングさせた。非還元型ＩＬ−３３と、固定の前に室温で３ｈにわたって３ｍＭのＤＴＴで還元したＩＬ−３３試料とを用いて平行試験を実施した。同様のレベルのＩＬ−３３を固定した（非還元型および還元型ＩＬ−３３について、それぞれ、２９３および３７０共鳴単位）。フローセル１を活性化し、参照フローセルとしての使用のために遮断した。親ラットＦａｂ  ７Ｅ８の滴定系列を、泳動バッファーおよび試料バッファーとして１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％Ｐ−２０（ＨＢＳ−ＥＰ＋）を使用し、５０μｌ／ｍｉｎの流量で実施した。解離を、３６００秒間モニタリングした。Ｂｉａｃｏｒｅ動的アッセイを、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００機器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上、１Ｈｚの収集速度、３７℃で行った。速度定数および親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン１．０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）中、得られたセンサーグラムデータを１：１モデルに適合させることによって決定した。ＤＴＴで予備処理した野生型ヒトＩＬ−３３に対するラット７Ｅ８  Ｆａｂの親和性は、４４．２３ｐＭ（表１２）であると測定されたが、７Ｅ８  Ｆａｂは非還元型ＩＬ−３３に結合しなかった（図１）。この観察は、７Ｅ８が活性型ＩＬ−３３に選択的に結合し、酸化によって不活化されたＩＬ−３３には結合しないことを示し、治療設定において、不活化ＩＬ−３３の存在が活性型ＩＬ−３３に結合する７Ｅ８由来抗体の能力を阻害しないことを示唆する。
【０３０１】
【表１３】
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【０３０２】
異なる試薬の向きでの表面プラズモン共鳴により測定される親和性における形式依存的差異に対処するために、両方の結合パートナーが溶液中にある直交的方法を使用して、ＩＬ−３３に対する７Ｅ８  Ｆａｂの親和性を評価した。結合平衡除外アッセイ（ＫｉｎＥｘＡ）機器（モデル３２００、Ｓｐｉｄｙｎｅ）を使用して、ｈｕＩＬ−３３（ｍｍ２）（配列番号３）およびｈｕＩＬ３３ｗｔ（配列番号４）に対する７Ｅ８  Ｆａｂの結合親和性を決定した。使用前に最小で２ｈにわたって、３ｍＭ  ＤＴＴ中でｈｕＩＬ３３ｗｔを還元した。固定抗原アッセイ形式を使用して、室温で親和性決定を行った。平衡結合を、２５℃で７２ｈのインキュベーションによって達成した。データ分析を、ＫｉｎＥｘＡ  Ｐｒｏソフトウェアバージョン３．６．５（Ｓａｐｉｄｙｎｅ）を用いて実施した。「親和性標準」モデルを使用して、データを分析し、ｈｕＩＬ３３ｍｍ２および還元型ｈｕＩＬ３３ｗｔの見かけのＫＤおよび見かけの活性濃度を決定した。必要に応じて、「ドリフト補正」を使用した。独立実験において、受容体およびＫＤの両方が制御されたかたちで、複数の曲線を取得し、「ｎ曲線分析」ツールを使用して分析して、ＫＤおよび活性濃度に関する大域的最良適合値を得た。このソフトウェアは、９５％信頼区間と共にそれぞれの最良適合値を報告する。ＫｉｎＥｘＡ分析は、７Ｅ８  Ｆａｂが非常に高い親和性でヒトＩＬ−３３に結合することを示し、ＫＤはｍｍ２型のｈＩＬ−３３については０．３５ｐＭおよび還元型ＷＴ型については４．０４ｐＭと測定された（表１３）。これらの結果は、溶液平衡条件下で、７Ｅ８  ＣＤＲ移植が低ピコモル濃度の親和性で溶液中のＩＬ−３３に結合することを示したＳｃｈｉｌｄ分析（実施例８）によって分析された細胞に基づくアッセイの結果と一致している。
【０３０３】
【表１４】
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【０３０４】
（実施例１１）
増強バイナリー置換による抗ＩＬ−３３抗体のパラトープ決定
３つの方法を使用して、抗体７Ｅ８の機能にとって重要なアミノ酸を同定した。第１に、ラットｍＡｂ  ＣＤＲ配列と、ヒト生殖系列ＣＤＲ配列とで異なるＣＤＲ残基の体系的検査を実行して、どの位置が元のラット配列を必要とし、変化を許容するかを決定した。この方法は、重鎖および軽鎖ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３中のＣＤＲ−Ｈ１およびＣＤＲ−Ｈ２中の配列に対処するものであった。第２の方法（実施例１２）は、生殖系列中にコードされない、ＣＤＲ−Ｈ３中の配列変化に関する許容性に対処するものであった。親７Ｅ８の派生元となった免疫化されたラットの脾臓Ｂ細胞中に存在する配列変化を、次世代配列決定（ＮＧＳ）によって決定し、ＣＤＲ−Ｈ３のそれぞれの位置での変化の頻度を決定した。バリアントＣＤＲ配列のサブセットの機能を試験して、観察された配列変化の影響を決定した。機能的ＣＤＲ残基を検査する第３の方法は、抗体操作の過程における特異的に操作されたアミノ酸バリアントの検査であった（実施例１４〜１６を参照されたい）。
【０３０５】
機能的抗体バリアントが、ＣＤＲ−Ｈ３を除くそれぞれのＣＤＲ位置でヒト生殖系列残基または対応するげっ歯類残基を含有するライブラリーから選択される、重要なＣＤＲ残基を決定するための方法が記載されている（Ｔｏｗｎｓｅｎｄら、２０１５）。ヒト生殖系列と異なる７Ｅ８の全てのＣＤＲ位置（ＤＰ５４／ＤＰＫ９）が、およそ５０％のクローンがラット７Ｅ８アミノ酸をコードし、およそ５０％がその位置でヒト生殖系列アミノ酸をコードするように無作為化されたファージｓｃＦｖライブラリーを構築した（表１４）。ライブラリーを調製し、ヒトＩＬ−３３（ｍｍ２）上での３〜４回の選択にかけた。ＩＬ−３３への結合を保持したクローンを回収し、その配列を決定した。この実験から、ヒト配列が結合クローンのおよそ２０％未満において観察された位置を、必須ラット残基と定義した。ラット残基は、１１個の位置（重鎖残基Ｙ３５、Ｓ５０、Ｔ５２、およびＰ５３；軽鎖残基Ｈ３２、Ｄ３４、Ｆ５０、Ｎ５３、Ｙ９１、Ｇ９４、およびＷ９５）で選択的に保持され、これは、ヒト生殖系列残基によるこれらの残基の置き換えが強く嫌われたことを示している。軽鎖中のＦ５０の、Ａによる置き換えは観察されなかったが、これは、Ｆがこの位置で強く好ましいアミノ酸であることを示している。ラットおよびヒト残基は、重鎖残基５４（Ｎ／Ｄ）、５６（Ｇ／Ｓ）、５７（Ｎ／Ｅ）、５８（Ｔ／Ｋ）、および６１（Ｐ／Ｖ）ならびに軽鎖残基２４（Ｋ／Ｒ）、２８（Ｎ／Ｓ）、３０（Ｎ／Ｓ）、３１（Ｋ／Ｓ）、５２（Ｎ／Ｓ）、５６（Ｔ／Ｓ）、８９（Ｆ／Ｑ）、９２（Ｎ／Ｙ）、および９３（Ｎ／Ｓ）で類似する頻度で認められたが、これは、ラット配列がこれらの位置で重要ではないことを示している。軽鎖中の５１位はラット７Ｅ８クローン中のトレオニン残基をコードしたが、ヒトＤＰＫ９生殖系列配列中にコードされたアラニンが好ましく、結合クローンの８６％に含まれていた（表１４）。ライブラリー中の５１位のアラニンコドンの出発頻度は６８％であり、多くのものよりも高かったが、いくつかの他の残基と類似し、類似する偏り出発した他の位置（例えば、出発ライブラリー中のＬ２４位で６５％のアルギニンコドンおよびＬ３０位で６３％のセリンコドン）は、選択されたクローン中のアミノ酸のほぼ等しい分布を有していた。この観察は、アラニンが５１位で強く好まれることを示唆する。
【０３０６】
【表１５】
2019516362.tif 000018
【０３０７】
（実施例１２）
ヒトＩＬ３３で免疫されたラットにおける抗ＩＬ−３３抗体ＣＤＲ−Ｈ３配列中の許容される変化
実施例１に記載のＩＬ−３３中和抗体と関連する抗体によるＣＤＲ  Ｈ３配列変化の許容を、抗体の派生元となった同じ動物の免疫レパートリーの配列決定によって検査した。ＲＮＡを、免疫されたラットに由来する脾臓組織から単離し、実施例２に記載された逆転写−ＲＡＣＥ  ＰＣＲによって調製し、Ｒｏｃｈｅ  ＦＬＸ＋機器上での次世代配列決定にかけた。６２，４８４の配列リードから、実施例１における中和抗体のものと関連するＣＤＲ配列を有するＶＨ遺伝子のセットを同定した。ユニークなＣＤＲ３配列のセット内で、アミノ酸がそれぞれの位置で中和抗体配列から分岐した頻度を、集団中のそれぞれのＣＤＲ３配列の頻度について調整することなく算出した（表１５）。７Ｅ８と９Ｂ３の両方に由来するＣＤＲ３中の強く保存された配列（非加重試料中で１５％未満の変化）は、Ｇ９９、Ｈ１００、Ｙ１０１、Ｙ１０３、Ｓ１０５、Ｙ１０６、およびＳ１０７であった。Ｙ１０６における変化は、ラットレパートリーにおいて同定された７２の配列バリアント間で観察されず、Ｙ１０３、Ｓ１０５、およびＳ１０７に由来する変化は、配列の３パーセント未満において観察された。
【０３０８】
【表１６】
2019516362.tif 000019
【０３０９】
表１６に示される、９Ｂ３および７Ｅ８と関連するＣＤＲＨ３配列のサブセットを、キメラ９Ｂ３重鎖のフレームワーク中でクローニングし、配列番号１１６、１２０、１２３、１２５、１２８、１３１、１３４、１３７、１４０、１４３、１４６、１４９、１５１、１５４、１５７、および１６０によって指定される重鎖を生成した。これらの重鎖を、キメラ９Ｂ３軽鎖（配列番号１１７）と同時トランスフェクトし、得られた抗体を発現させ、精製し、ＢＩＡｃｏｒｅ分析およびＨＥＫ２９３  ＳＴ２  ＮＦκＢリポーターアッセイにおけるＩＬ−３３シグナル伝達の阻害によりＩＬ−３３解離速度について分析した。解離速度を、実施例９に記載された固定された抗ヒトＦｃ抗体により捕捉されたインタクトなＩｇＧを使用して、１２５ｎＭのＩＬ−３３（ｍｍ２）への結合後に測定した。両アッセイは、ラットレパートリー中に存在するほとんどのＣＤＲＨ３配列バリアントが、親９Ｂ３のものと比較して解離速度または中和効力のわずかな変化を付与するか、または変化を付与しないことを示したが、これは、観察された配列変化が良好に許容される変化であることを示している。試験した１８の抗体の全ての解離速度は、９Ｂ３のものの２．５倍以内にあった。４倍までの細胞に基づく効力の低下が、１８の抗体のうちの４つにおいて観察した。これらの抗体の４つ全部は、最小の機能的効果を示す他のバリアントにおいて観察された変異を含有していたため、効力のより大きい変化は、特異的な単一の変化に起因するものではない。２つの高度に保存されたアミノ酸の、化学的に類似する側鎖（抗体９Ｂ３−２２における芳香族側鎖置換Ｙ１０１Ｆおよび抗体９Ｂ３−７における正に荷電した側鎖置換Ｈ１００Ｒ）による置換は、これらの抗体におけるさらなる置換の文脈において抗体機能の有意な変化をもたらさなかった。総合すると、免疫されたレパートリーにおいて観察されたアミノ酸配列変化は、残基Ｇ９９、Ｈ１００、Ｙ１０１、Ｙ１０３、Ｓ１０５、Ｙ１０６、およびＳ１０７または化学的に類似する側鎖を有する残基が、抗体９Ｂ３およびその密接に関連する７Ｅ８のＣＤＲ  Ｈ３において好まれることを示唆する。
【０３１０】
【表１７】
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【０３１１】
（実施例１３）
抗ＩＬ−３３抗体の非特異的結合の評価
その標的以外の分子への抗体の非特異的結合は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの迅速なクリアランスの機構であると提唱されている（Ｈｏｔｚｅｌら、２０１０、ＭＡｂｓ  ４（６）：７５３〜７６０）。そのような多反応性非標的結合に関する証拠を、膜調製物（Ｘｕら、２０１３、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌｅｃｔ．２６（１０）：６６３〜７０）、バキュロウイルス粒子（Ｈｏｔｚｅｌら、２０１２、ｍＡｂｓ  ４：７５３〜６０）、またはＤＮＡ、インスリン、およびヘパリンなどの負に荷電した基質（Ｔｉｌｌｅｒら、２００８、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３２９（１−２）：１１２〜１２４）への結合の測定によって取得することができる。
【０３１２】
ＤＮＡおよびインスリンに関するＥＬＩＳＡは、狼瘡患者に由来する低親和性自己抗体の検出のために元々開発された低ストリンジェンシープロトコールを使用した（Ｔｉｌｌｅｒら、２００８）。ＰＢＳ中の５μｇ／ｍｌのインスリンまたは１０μｇ／ｍｌの一本鎖もしくは二本鎖ＤＮＡを、Ｎｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｐ  ＥＬＩＳＡプレート上に一晩被覆した。ウェルを水で３回洗浄した後、室温で１ｈ、ＥＬＩＳＡバッファー（ＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ／１ｍＭ  ＥＤＴＡ）で遮断した。ＥＬＩＳＡバッファー中の３〜１０μｇ／ｍｌの抗体を、室温で１ｈ、ウェル中でインキュベートし、ウェルを水で３回洗浄し、室温で１ｈ、ＥＬＩＳＡバッファー中のＨＲＰコンジュゲート化ヤギ抗ヒトＩｇＧ  １：５０００と共にインキュベートした。水で３回洗浄した後、ＴＭＢで５ｍｉｎ、発色させ、０．１Ｍ硫酸で反応を停止させた。バキュロウイルス（ＢＶ）粒子への結合に関するＥＬＩＳＡは、Ｈｏｔｚｅｌ、２０１２に記載の方法に基づくものであった。各ウェルに、５０ｍＭ炭酸ナトリウムバッファーｐＨ９．６中の４％ＢＶ懸濁液を添加し、粒子をプレートに４℃で一晩吸着させることによって、抗原をＮｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｐ  ＥＬＩＳＡプレート中に固定した。ウェルを、室温で１ｈ、遮断バッファー（ＰＢＳ／０．５％ＢＳＡ）で遮断した。ＰＢＳで３回洗浄した後、遮断バッファー中の１０μｇ／ｍｌの抗体を、ＥＬＩＳＡウェルに添加し、室温で１ｈインキュベートした。プレートをＰＢＳで６回洗浄し、室温で１ｈ、２０ｎｇ／ｍｌのＨＲＰ−ヤギ抗ヒト抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、カタログ番号１０９−０３５−００８）と共にインキュベートした。プレートをＰＢＳ中で６回洗浄し、２５μｌのＴＭＢ基質を各ウェルに添加し、１５ｍｉｎ発色させた後、１Ｍリン酸を各ウェルに添加することによって停止させた。界面活性剤を、全てのステップにおいてバッファーに添加しなかった。１０μｇ／ｍｌのＡｂでのＡ４５０シグナルを、試料の比較のためにブランクウェルに由来するシグナルに対して正規化した。
【０３１３】
キメラおよびＣＤＲ移植された７Ｅ８は、低ストリンジェンシー多反応性ＥＬＩＳＡにおいてＤＮＡおよびインスリンへの中程度の結合を有することが見出されたが、キメラ９Ｂ３は、７Ｅ８との配列類似性にも拘わらず、陰性対照抗体のものに近いＤＮＡおよびインスリン結合を示した（表１７）。７Ｅ８のＣＤＲ−Ｈ２の、その９Ｂ３対応物による置き換えは、多反応性の部分的減少をもたらすが、ＣＤＲ  Ｈ１またはＣＤＲ  Ｈ３の置き換えは、最小の効果を有していた。
【０３１４】
９Ｂ３のヒトＩＬ−３３（ｍｍ２）遮断活性は、７Ｅ８のものよりも低い（ＨＥＫ２９３  ＳＴ２  ＮＦκＢアッセイにおいて、９Ｂ３については０．２６４ｎＭであるのに対して、７Ｅ８については０．０５９ｎＭ）。この差異は、カニクイザルＩＬ−３３の阻害において、より顕著である：７Ｅ８は、ヒトＩＬ−３３に対するその効力と類似する効力（０．１３１ｎＭ）で阻害するが、９Ｂ３は、カニクイザルＩＬ−３３に対しては実質的により弱く、２０ｎＭで部分的にのみ遮断する。７Ｅ８  ＣＤＲ  Ｈ２の、９Ｂ３  ＣＤＲ  Ｈ２による置き換えは、カニクイザルＩＬ−３３に対する効力の大きな喪失をもたらし（０．１３１ｎＭのＩＣ５０が３．４６ｎＭに低下した）、同様に、７Ｅ８  ＣＤＲ  Ｈ３の、９Ｂ３  ＣＤＲ  Ｈ３による置き換えは、カニクイザルＩＬ−３３の効力の喪失をもたらす（７．６５ｎＭ）。かくして、ＣＤＲ  Ｈ２は、７Ｅ８／９Ｂ３ファミリーのＩＬ−３３中和抗体の特異的活性と非特異的活性の両方の決定因子を有し、ＣＤＲ  Ｈ３は、特異的活性の決定因子を有する。
【０３１５】
【表１８】
2019516362.tif 000021
【０３１６】
（実施例１４）
７Ｅ８のＣＤＲバリアントの非特異的結合および活性の評価
多反応性は、ＣＤＲ中の正電荷の不均衡と関連している（Ｄａｔｔａ−Ｍａｎｎａｎら、２０１５、ＭＡｂｓ  ７（３）：４８３〜４９３）。７Ｅ８と９Ｂ３の軽鎖間には電荷差は存在しない。７Ｅ８および９Ｂ３のＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３配列（配列番号１７、３４、１８、および３５）の検査は、４つのＣＤＲ−Ｈ２と４つのＣＤＲ−Ｈ３の差異を示し、そのうちのただ１つ（５４位の、７Ｅ８中のＮおよび９Ｂ３中のＤ）が電荷差をもたらす。ＩＬ３３−４５（重鎖、配列番号１６９）を生成するためのＮ５４Ｄ変異による７Ｅ８の改変は、多反応性に対する中程度の効果しか有さなかったが、７Ｅ８のＣＤＲ  Ｈ２の、９Ｂ３のものとの置換に関して観察されたものと類似する様式で、カニクイザルＩＬ−３３中和を有意に減少させた（表１８）。この理由から、７Ｅ８の多反応性を減少させながら、ヒトとカニクイザルのＩＬ−３３の両方に対する７Ｅ８活性の保持を可能にする配列変化を同定するためには、さらなる配列バリアントが必要であった。
【０３１７】
【表１９】
2019516362.tif 000022
【０３１８】
（実施例１５）
抗ＩＬ−３３抗体７Ｅ８の最適化
活性を喪失することなく多反応性を減少させる変化を同定するために、一連の変異を７Ｅ８中で作製した。ＣＤＲ  Ｈ２中のＮ５４の、アスパラギン酸による置換は多反応性をわずかに減少させたが、細胞に基づく活性の低下をもたらし、Ｎ５４の他のアミノ酸（Ｉ、Ｌ、Ｖ、Ｗ、Ｙ）による置き換えは、細胞に基づく活性をインタクトなままにしながら、バキュロウイルスへの非特異的結合を増加させた。
【０３１９】
ＣＤＲ  Ｈ２残基Ｎ５７の、２つの負に荷電した残基、アスパラギン酸またはグルタミン酸のいずれかによる置き換えは、バキュロウイルス粒子、ＤＮＡ、またはインスリンへの結合によって測定された場合、多反応性の有意な減少をもたらしたが、これらの変異は、中和活性を低下させなかった（表１９）。驚くべきことに、重鎖のＣＤＲ３への負電荷の付加（Ｓ１０５Ｄ）は、多反応性と、細胞に基づく活性の両方における望ましくない変化をもたらし、軽鎖への負電荷の付加（変異Ｎ３０Ｄ、Ｋ３１Ｄ、Ｔ５６Ｄ、またはＴ５６Ｅ）は多反応性を増加させた。Ｎ５７ＤおよびＮ５７Ｅバリアントは、したがって、それらがヒトまたはカニクイザルＩＬ−３３の中和を損なうことなく多反応性を改善する点で通常ではない。これらの結果は、可変ドメイン上の単に総電荷だけでなく負電荷の位置が重要であることを示唆する。
【０３２０】
【表２０】
2019516362.tif 000023
【０３２１】
負電荷を導入し、疎水性残基を除去するか、または５７位に近い残基を改変すると予測される一連のさらなる重鎖ＣＤＲ変異を、Ｎ５７Ｅと関連して試験した。Ｎ５７Ｅ変異を有する７Ｅ８の多反応性は、ＣＤＲ−Ｈ２中の個々の変異（Ｓ５０Ａ、Ｔ５８Ｄ；表２０）の組込みにより全体的に低いままであり、ＨＥＫ２９３  ＳＴ２  ＮＦκＢ細胞に基づくアッセイ（表２１）では、Ｎ５７Ｅ変異を有する７Ｅ８の効力は、Ｓ５０ＡまたはＴ５８Ｄの組込みによって大きく変化しなかった。同様に、Ｎ５７Ｅ変異を有する７Ｅ８の多反応性は、ＣＤＲ  Ｈ１（Ｔ２８Ｅ）、Ｈ２（Ｇ５６Ｈ、Ｔ５８Ｄ、Ｄ６２Ｅ、Ｓ６３Ａ、もしくはＫ６５Ｑ）またはＨ３（Ｈ１００Ｙ、Ｙ１０２Ｈ、Ｙ１０３Ｈ、Ｙ１０３Ｗ、Ｔ１０４Ｎ、もしくはＴ１０４Ｓ）中のさらなる個々の変異の組込みにより全体として低いままであった。同様に、ＨＥＫ２９３  ＳＴ２  ＮＦκＢ細胞に基づくアッセイにおいて、Ｎ５７Ｅ変異を有する７Ｅ８の効力は、ＣＤＲ  Ｈ１（Ｔ２８Ｅ）、Ｈ２（Ｋ６５Ｑ）またはＨ３（Ｈ１００Ｙ、Ｔ１０４Ｎ、もしくはＴ１０４Ｓ）中のさらなる個々の変異の組込みによって大きく変化しなかった。
【０３２２】
ＰＢＭＣについての５ｐＭのＩＬ−３３と比較して、高濃度のＩＬ−３３（１００ｐＭ）が全血応答のために必要とされることを除いて、ＩＬ−３３は、実施例８に記載のＰＢＭＣアッセイのために使用されたものとほぼ同一の形式で、ＩＬ−１２による共刺激と共にヒト全血中でのＩＦＮγの産生を刺激することができる。ＨＥＫ２９３  ＳＴ２  ＮＦκＢアッセイにおいて観察された結果と同様、Ｎ５７Ｅ変異を有する７Ｅ８の全血効力は、個々の変異Ｓ５０ＡまたはＴ５８Ｄの組込みによって大きく変化しなかった（表２１）。同様に、Ｎ５７Ｅ変異を有する７Ｅ８の効力は、ＣＤＲ  Ｈ１（Ｔ２８Ｅ）、Ｈ２（Ｓ６３ＡもしくはＫ６５Ｑ）またはＨ３（Ｙ１０３Ｈ、Ｔ１０４ＮもしくはＴ１０４Ｓ）中のさらなる個々の変異の組込みによって大きく変化しなかった。
【０３２３】
潜在的なＮＧアスパラギン脱アミド化部位を除去する、翻訳後改変の潜在的部位（軽鎖Ｎ９３Ｑ）を除去するように設計された変異（Ｃｈｅｌｉｕｓら、２００５、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７７（１８）：６００４〜６０１１）を、抗体ＩＬ３３−１３６中の重鎖変異Ｎ５７Ｅと組み合わせたところ、多反応性（表２０）の改善の部分的保持と共に、細胞に基づく活性（表２１）の保持をもたらすことが見出された。
【０３２４】
【表２１】
2019516362.tif 000024
【０３２５】
【表２２】
2019516362.tif 000025
【０３２６】
これらの変異と２つのさらなる重鎖変異の組合せ（潜在的なＮＧアスパラギン脱アミド化部位の除去を可能にするＧ５５Ａ、および潜在的なＤＳアスパラギン酸異性化部位を除去するＤ６２Ｅ；Ｃｈｅｌｉｕｓ，Ｄ．ら（２００５））を、活性および多反応性について試験し、出発クローン７Ｅ８  ＣＤＲ移植のおよそ２倍以内の、細胞に基づく活性（ＨＥＫ２９３  ＳＴ２  ＮＦκＢリポーターアッセイ、ヒト全血、およびヒトＰＢＭＣアッセイにおける）ならびに陰性対照抗体の２倍以内の多反応性を示すクローンのセットを同定した（表２２、表２３）。
【０３２７】
【表２３】
2019516362.tif 000026
【０３２８】
【表２４】
2019516362.tif 000027
【０３２９】
（実施例１７）
最適化された抗体７Ｅ８バリアントへの半減期延長変異の付加
一方のバリアントＦｃ（配列番号２３７）が、エフェクター機能を低下させるためにＦｃ中にＬ２３４Ａ  Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａ変異を（米国特許第５，６２４，８２１号に記載されている）、生成物不均一性を低下させるためにＣ末端にリシン残基の欠失を含有し、他方（配列番号２３８）が、ｉｎ  ｖｉｖｏでの半減期の延長をもたらすと予想される、酸性ｐＨでの新生Ｆｃ受容体ＦｃＲｎへの結合を増強するためにＬ２３４Ａ  Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａ変異、Ｃ末端リシン欠失、ならびに二重変異Ｍ４３２Ｌ  Ｎ４３８Ｓを含有する（Ｚａｌｅｖｓｋｙら、２０１０、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２８（２）：１５７〜１５９）、抗体ＩＬ３３−１５８およびＩＬ３３−１６７の２つの重鎖バリアントバージョンを生成した。それぞれの構築物を、ｐＲＹ１９ベクター中で構築し、ＣＨＯ細胞中に安定にトランスフェクトした。得られた抗体は、ＩＬ３３−１５８−１５２（配列番号２４１、配列番号２０９）、ＩＬ３３−１６７−１５３（配列番号２４２、配列番号９３）、ＩＬ３３−１５８ＬＳ（配列番号２４４、配列番号２０９）、およびＩＬ３３−１６７ＬＳ（配列番号２４５、配列番号９３）であった。最適化された抗体の可変領域と、対応するヒト生殖系列配列との配列アラインメントを、図２に示す。
【０３３０】
（実施例１８）
最適化された分子における多反応性の低下
安定にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞から産生された抗体Ｌ３３−１５８ＬＳ（配列番号２４４、配列番号２０９）およびＩＬ３３−１６７ＬＳ（配列番号２４５、配列番号９３）は、陰性対照のモノクローナル抗体ベバシズマブものと同等の多反応性レベルを示した（表２４）。これらのレベルは、表２２に示された、ＩＬ３３−１５８（配列番号２２７、配列番号２０９）およびＩＬ３３−１６７（配列番号２１２、配列番号９３）のものと同等であり、これは、定常領域変異Ｌ２３４Ａ  Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｍ４３２ＬおよびＮ４３８Ｓ変異の付加ならびにＣ末端リシンの欠失が、得られる分子の多反応性を実質的に変化させなかったことを示している。
【０３３１】
【表２５】
2019516362.tif 000028
【０３３２】
（実施例１９）
細胞に基づくアッセイにおける最適化された抗ＩＬ−３３抗体のヒトおよびカニクイザルＩＬ−３３中和活性
安定にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞から産生された抗体ＩＬ３３−１５８−１５２（配列番号２４１、配列番号２０９）、ＩＬ３３−１６７−１５３（配列番号２４２、配列番号９３）、ＩＬ３３−１５８ＬＳ（配列番号２４４、配列番号２０９）、およびＩＬ３３−１６７ＬＳ（配列番号２４５、配列番号９３）は、ヒトＩＬ−３３（ｍｍ２）、ヒトＩＬ−３３（ＷＴ）およびカニクイザルＩＬ−３３（ｃｙｓ  ｍｕｔ）に関する親抗体７Ｅ８  ＣＤＲ移植（配列番号９２、配列番号９３）のものと同様、ＨＥＫ２９３  ＳＴ２  ＮＦκＢリポーターアッセイにおいてＩＬ−３３の中和を示した。
【０３３３】
【表２６】
2019516362.tif 000029
【０３３４】
（実施例２０）
ＰＢＭＣおよび全血中での最適化された抗ＩＬ−３３抗体のＩＬ−３３中和活性
安定にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞から産生された抗体ＩＬ３３−１５８ＬＳ（配列番号２４４、配列番号２０９）およびＩＬ３３−１６７ＬＳ（配列番号２４５、配列番号９３）は、親抗体７Ｅ８  ＣＤＲ移植（配列番号９２、配列番号９３）のものと同様、ヒトＰＢＭＣ中でＩＬ−３３（ｍｍ２）の中和を示した。
【０３３５】
【表２７】
2019516362.tif 000030
【０３３６】
安定にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞から産生された抗体ＩＬ３３−１５８ＬＳ（配列番号２４４、配列番号２０９）およびＩＬ３３−１６７ＬＳ（配列番号２４５、配列番号９３）は、ヒトＩＬ−３３（ｍｍ２）およびヒトＩＬ−３３（ＷＴ）に関する親抗体７Ｅ８  ＣＤＲ移植（配列番号９２、配列番号９３）のものと同様、ヒト全血中でヒトにおけるＩＬ−３３刺激ＩＦＮγ産生の中和を示した。
【０３３７】
【表２８】
2019516362.tif 000031
【０３３８】
安定にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞から産生された抗体ＩＬ３３−１５８ＬＳ（配列番号２４４、配列番号２０９）は、ヒトＩＬ−３３（ｍｍ２）およびヒトＩＬ３３（Ｒ＆Ｄ）の中和を示したが、商業的に入手可能なＮｅｓｓｙ−１は有意な中和を示さなかった。商業的に入手可能なモノクローナル抗体１９Ｇ８は、ＩＬ３３−１５８ＬＳよりも弱いヒトＩＬ−３３（ｍｍ２）の中和を示し、ヒトＩＬ３３（Ｒ＆Ｄ）と同等の中和を示した（表２８）。かくして、ＩＬ−３３（ｍｍ２）により表される活性型のヒトＩＬ−３３の非常に選択的な中和は、ＩＬ３３−１５８ＬＳの特徴的な特性である。
【０３３９】
【表２９】
2019516362.tif 000032
【０３４０】
結論：
ヒト化された、最適化された抗ヒトＩＬ−３３抗体ＩＬ３３−１５８−１５２、ＩＬ３３−１６７−１５３、ＩＬ３３−１５８ＬＳ、およびＩＬ３３−１６７ＬＳは、細胞株、一次ヒト単球、およびヒト全血を使用するバイオアッセイの範囲で、ＩＬ−３３生物活性の強力な中和剤である。
【０３４１】
（実施例２１）
表面プラズモン共鳴を使用する最適化された抗ＩＬ−３３抗体の動的評価
Ｂｉａｃｏｒｅ動的アッセイを、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００機器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上、１Ｈｚの収集速度、３７℃で行った。ヒトＩＬ３３（ｍｍ２）、カニクイザルＩＬ−３３、および還元型ｈｕＩＬ３３ｗｔを、製造業者のプロトコールに従ってアミンカップリングキット（カタログ番号ＢＲ１０００５０、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してＣＭ５センサーチップ（カタログ番号ＢＲ１００５３０、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に共有結合的にカップリングさせた。固定レベルは、２６０ＲＵのヒトＩＬ−３３（ｍｍ２）、８５ＲＵのカニクイザルＩＬ−３３、および１０８〜２２５ＲＵの還元型ヒトＩＬ−３３（ＷＴ）であり、参照フローセルとしての使用のために、フローセル１を活性化し、遮断した。リード抗ＩＬ−３３  Ｆａｂ  １５８ＬＳ、１６７ＬＳおよび親Ｆａｂ  ７Ｅ８の滴定系列を、５０μｌ／ｍｉｎの流量で注入し、３６００秒間にわたって解離をモニタリングした。希釈および泳動バッファーは、ＨＢＳ−ＥＰ＋（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％Ｐ−２０）であった。得られるセンサーグラムデータを、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン１．０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）において１：１モデルに適合させることにより、速度定数および親和性を決定した。
【０３４２】
最適化された抗体ＩＬ３３−１５８ＬＳおよびＩＬ３３−１６７ＬＳのＦａｂ断片の親和性を、ＩＬ−３３がセンサーチップ上および溶液相中のＦａｂ断片に固定された、実施例１０に記載の表面プラズモン共鳴によって測定した。両方の最適化された抗体は、親ＣＤＲ移植された７Ｅ８  Ｆａｂにより示された親和性と同等の、ヒトＩＬ−３３（ｍｍ２）、ヒトＩＬ３３（ＷＴ）、およびカニクイザルＩＬ−３３に対する結合親和性を示した（表２９）。
【０３４３】
【表３０】
2019516362.tif 000033
【０３４４】
（実施例２２）
抗ＩＬ−３３のサイトカイン特異性
抗ＩＬ−３３抗体７Ｅ８およびＩＬ３３−１５８ＬＳのサイトカイン特異性を評価するために、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｔ−２００を用いる表面プラズモン共鳴により、これらの抗体への結合について非標的サイトカインのパネルを評価した。サイトカインのパネルは、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１８、ＩＬ−３６α、およびＩＬ−３６γを含んでいた。結果（表３０、図３）は、１００ｎＭでは非関連サイトカインの結合は存在しないが、抗ＩＬ−３３抗体７Ｅ８およびＩＬ３３−１５８ＬＳは、非常に類似する％Ｒｍａｘ値でＩＬ−３３  ｍｍ２および還元型ＩＬ−３３  ＷＴに結合することを示していた。還元の非存在下では、ＩＬ−３３への結合は観察されなかった。
【０３４５】
【表３１】
2019516362.tif 000034
【０３４６】
（実施例２３）
ＩＬ３３への結合に関するヒトＳＴ２との競合
ＩＬ−３３へのＳＴ２受容体の結合を遮断するＩＬ３３−１５８ＬＳの能力を、Ｏｃｔｅｔ結合アッセイにおいて試験した。抗体またはヒトＳＴ２−Ｆｃ（配列番号６）を、抗ヒトＦｃで被覆したＯｃｔｅｔチップ上に捕捉し、遊離結合部位を過剰のヒトＩｇＧ１対照抗体で遮断し、ＩＬ−３３（Ｒ＆Ｄ）と第２抗体またはＳＴ２−Ｆｃとの混合物をチップに印加した。ＩＬ３３−１５８ＬＳとヒトＩＬ−３３との複合体は、対照非中和抗ＩＬ−３３抗体、Ｏｃｔｅｔチップ上に捕捉されたＩＬ３３−２７１（配列番号２５４、配列番号２５６）に結合することができたが、逆に、ＩＬ３３−２７１とヒトＩＬ−３３との複合体は、固定されたＩＬ３３−１５８ＬＳに結合することができた。同様に、ヒトＳＴ２−ＦｃおよびＩＬ３３−２７１は、いずれかの方向で同時にヒトＩＬ−３３に結合することができた。しかしながら、固定されたＩＬ３３−１５８ＬＳは、ＩＬ−３３とＳＴ２−Ｆｃとの複合体に結合することができず、逆に、固定されたＳＴ２−ＦｃはＩＬ−３３とＩＬ３３−１５８ＬＳとの複合体に結合することができなかった。これらの結果は、ＩＬ３３−１５８ＬＳとＳＴ２−Ｆｃが、ＩＬ−３３上の重複結合部位について競合することを示している。
【０３４７】
【表３２】
2019516362.tif 000035
【０３４８】
（実施例２４）
最適化された抗ＩＬ−３３抗体の熱安定性
示差走査熱量測定法を使用して、ＩＬ３３−１５８−１５２、ＩＬ３３−１５８ＬＳ、ＩＬ３３−１６７−１５３、およびＩＬ３３−１６７ＬＳの安定性を決定した。この分析のために、０．３ｍｇ／ｍｌの試料を、Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒを含むＭｉｃｒｏＣａｌ  ＶＰ−Ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ＤＳＣ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．）の試料トレイ中に分注し、１０℃で５ｍｉｎ平衡化させた後、１００℃／ｈの速度で１１０℃まで走査した。１６ｓｅｃのフィルタリング期間を選択した。生データをベースライン補正し、タンパク質濃度を正規化した。Ｏｒｉｇｉｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ７．０（ＯｒｉｇｉｎＬａｂ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ、ＭＡ）を使用して、適切な数の遷移を用いてＭＮ２−Ｓｔａｔｅ  Ｍｏｄｅｌに対してデータを適合させた。以下の表３２は、２０ｍＭのヒスチジンｐＨ５．８、８．５％のスクロース、０．０５ｍｇ／ｍｌのＥＤＴＡ中での分子の融点（Ｔｍ１〜Ｔｍ３）を示す。４つ全部の分子が、良好な安定性と共に、６５℃より高いＣＨ２ドメイン中の第１の遷移（Ｔｍ１）を示す。さらに、ＬＳ変異の導入は、分子の安定性に対する非常に小さい影響（≦１℃）を有する。
【０３４９】
【表３３】
2019516362.tif 000036
【０３５０】
（実施例２５）
ｉｎ  ｖｉｖｏで投与された抗ＩＬ−３３抗体によるカニクイザルＩＬ−３３の捕捉
ＩＬ３３−１５８ＬＳを、天然カニクイザルＩＬ−３３を捕捉するその能力について試験した。０．１４または１４ｍｇ／ｋｇのＩＬ３３−１５８ＬＳでのカニクイザルの静脈内投与後、水酸化アルミニウム（ミョウバン）を、腹腔内注射（０．１ｍｌ中の１ｍｇ）によって投与した。血液試料を、ミョウバン後７２ｈまで引き出した。ＩＬ３３−１５８ＬＳに結合した全カニクイザルＩＬ−３３を、免疫親和性ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法を使用して測定した。ビオチンコンジュゲート化抗ヒトＦｃ抗体を、それぞれの血漿試料と共にインキュベートし、４℃で一晩インキュベートして、全てのサイトカインを抗ＩＬ−３３抗体に結合させた。ストレプトアビジンビーズを各試料に添加し、３０ｍｉｎインキュベートし、洗浄した後、低ｐＨの溶出バッファーを使用してサイトカインを抗体から遊離させた後、Ｔｒｉｓバッファーで中和した。次いで、ＩＬ−３３のシグナチャー配列を有する伸長した安定なアイソトープ標識されたペプチドを各試料に添加した後、全試料をＤＴＴで還元し、ヨードアセタミドでアルキル化し、トリプシンで消化した。次いで、トリプシンペプチドを、２ＤナノＵＰＬＣタンデム質量分析装置システムを用いて同定した。２０μＬの血漿を使用する、このアッセイの定量限界は、カニクイザルＩＬ−３３について５０ｐｇ／ｍＬである。ＩＬ３３−１５８ＬＳに結合したＩＬ−３３の測定値は、低用量の０．１４ｍｇ／ｋｇのＩＬ３３−１５８ＬＳと比較して、１４．３ｍｇ／ｋｇの投与およびミョウバンチャレンジ後に時間と共に増加した（表３３）。これらの結果は、ＩＬ３３−１５８ＬＳが、用量依存的様式で天然カニクイザルＩＬ−３３に結合し、ヒトにおける薬力学をモデル化するために使用することができる測定可能な効果をもたらすことを示している。
【０３５１】
カニクイザルにおけるＩＬ３３−１５８ＬＳの終末血清半減期は１８日であり、２コンパートメントＰＫモデルのパラメータ化を可能にした。クリアランスに関する０．７５の相対成長指数を用いる速度定数の相対成長率により、４１日の予測ヒト血清終末半減期が得られた。これは、ヒトにおける抗体に関する２０日（ＢｒｅｋｋｅおよびＳａｎｄｌｉｅ（２００３）、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、Ｖｏｌ  ２、ｐｐ５２〜６２）およびヒトまたはヒト化二治療ＩｇＧ抗体に関する１７日（Ｓｉｎｇｈら（Ｃｈａｐｔｅｒ  ５．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ−ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｔｏｗａｒｄｓ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ．Ｉｎ：Ｋｕｍａｒ  Ｓ、Ｋｕｍａｒ  Ｓｉｎｇｈ  Ｓ（編）、Ｄｅｖｅｌｏｐａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：ＣｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌＡｐｐｒｏａｃｈｅｓ．ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ；２０１５：ｐ．１０９〜３４）に報告されたＰＫパラメータに由来する）の典型的に観察される半減期と比較して有意に長い。
【０３５２】
驚くべきことに、健康なヒトボランティアにおける予備評価は、ＩＬ３３−１５８ＬＳの血清排出（β期）半減期が少なくとも５０日であることを示す。本発明の一部の態様では、抗体またはその抗原結合部分の終末半減期は、少なくとも約５０日である。本発明の一部の態様では、抗体またはその抗原結合部分の終末半減期は、少なくとも約５５日である。本発明の一部の態様では、抗体またはその抗原結合部分の終末半減期は、少なくとも約６０日である。本発明の一部の態様では、抗体またはその抗原結合部分の終末半減期は、少なくとも約６５日である。本発明の一部の態様では、抗体またはその抗原結合部分の終末半減期は、少なくとも約７０日である。本発明の一部の態様では、抗体またはその抗原結合部分の終末半減期は、少なくとも約７５日である。本発明の一部の態様では、抗体またはその抗原結合部分の終末半減期は、少なくとも約８０日である。本発明の一部の態様では、抗体またはその抗原結合部分の終末半減期は、少なくとも約８５日である。本発明の一部の態様では、抗体またはその抗原結合部分の終末半減期は、少なくとも約９０日である。予想外に長い半減期は、可変およびＣＤＲ領域、ならびにＦｃドメイン中の改変に起因するものであり得る。
【０３５３】
【表３４】
2019516362.tif 000037
【０３５４】
（実施例２６）
比較ＩＬ−３３抗体の生成および試験
ＷＯ２０１４１６４９５９に記載されたＩｇＧ１バージョンのいくつかのｈＩｇＧ４抗体を生成した（表３５）（単離されたＦａｂ断片の結合特性はＦｃ領域と無関係であり、インタクトなＩｇＧ４の結合特性はＩｇＧ１中で本質的に同一であると予想される）。Ｈ４Ｈ９６７５Ｐ（ＩＬ３３−２６５に対応する）、Ｈ４Ｈ９６５９Ｐ（ＩＬ３３−２６６に対応する）、およびＨ４Ｈ９６６５Ｐ（ＩＬ３３−２６７に対応する）が、３７℃のヒトＩＬ−３３またはサルＩＬ−３３に対して最も高い親和性を有するものとして開示されている（ＷＯ２０１４１６４９５９の表３および表６）。初期の機能的評価により、ＩＬ３３−２６７がＩＬ３３−２６５およびＩＬ−３３−２６６よりも効力が低いことが示された。より詳細な評価により、ＩＬ３３−２６５が、ＩＬ３３−２６６よりも８〜１０倍効力が高いことが示された（表３６）。固定された野生型ヒトＩＬ−３３へのＩｇＧ結合のＢＩＡｃｏｒｅ分析により、ＩＬ３３−２６５が還元型のＩＬ−３３にのみ結合し、非還元型ＩＬ−３３には結合しないことが示された。
【０３５５】
【表３５】
2019516362.tif 000038
【０３５６】
【表３６】
2019516362.tif 000039
【０３５７】
ヒトおよびカニクイザルＩＬ−３３に対する高い親和性を有すると開示された、ＷＯ２０１６０７７３８１の１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８１  ＩｇＧ４に由来する、ＩｇＧ１抗体ＩＬ３３−３１０（配列番号２８７（ＨＣ）および配列番号２８８（ＬＣ））を生成した。
【０３５８】
１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８１は、ＷＯ２０１６０７７３８１の配列番号３０６（ＨＣ）および配列番号３０７（ＬＣ）からなる。発現における使用のためのヌクレオチド配列を取得するために、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩソフトウェアを使用して、可変領域配列を逆翻訳した。ＷＯ２０１６０７７３８１の配列番号３０７のものと同一のアミノ酸配列をコードする、標準的な定常カッパ領域のヌクレオチド配列を、発現構築物のために使用した。標準的な定常ＩｇＧ４領域のヌクレオチド配列は、ＷＯ２０１６０７７３８１の配列番号３０６のものと３個の差異を有するアミノ酸配列をコードし、ＷＯ２０１６０７７３８１の配列番号３０６の定常領域をコードするようにこれらの３個のコドン中で改変された。リーダー配列である配列番号４０２をコードするヌクレオチド配列を、ＶＨおよびＶＬコード配列の上流に読み枠を合わせて置いた。表３７は、ＩＬ−１６７／ＬＳ、ＩＬ−１５８／ＬＳ、ＩＬ３３−２６５、およびＩＬ３３−３１０を比較する細胞に基づくアッセイデータを示す。
【０３５９】
【表３７】
2019516362.tif 000040
【０３６０】
ＩｇＧ１抗体ＩＬ３３−２４４は、ＷＯ２０１５／１０６０８０の配列番号１３６および配列番号１７１として開示されたＡＰＥ０４９０９に基づくものである。ＡＰＥ０４９０９は、例えば、実施例２（ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞に基づくアッセイ）および実施例５（マウスにおける好酸球のヒトＩＬ−３３依存的増殖のｉｎ  ｖｉｖｏ試験、実施例５）に詳細に記載された中和抗体である。しかしながら、抗体をＷＯ２０１５／１０６０８０の配列番号１３６／１７１に従って生成した場合、それはあまり発現されず、不均一なＳＥＣプロファイルを有していた。弱いコドン使用が弱い発現に寄与した可能性を排除するために、同様の、良好に発現される抗体に由来するＤＮＡ配列を出発点として使用し、変化が必要である高頻度のヒトコドンを使用して上記の配列をコードするように調整した。しかしながら、発現はこのステップの後でも依然として弱く、ＳＥＣパターンは依然として不均一性を示した（表３８）。
【０３６１】
【表３８】
2019516362.tif 000041
【０３６２】
ＩＬ３３−２４８は、３Ｈ０４およびＡ２５（図８を参照されたい）としてＷＯ２０１５／０９９１７５に記載されており、ＩＬ３３−２４７は、１Ｃ０４およびＡ１０（図９を参照されたい）としてＷＯ２０１５／０９９１７５に記載されている。ＷＯ２０１５／０９９１７５に由来する可変領域ヌクレオチド配列を合成し、ヒトＩｇＧ１およびヒトラムダ発現ベクター中にクローニングした（ＷＯ２０１５／０９９１７５に由来する配列については表３９を参照されたい）。ＩＬ３３−２４７およびＩＬ３３−２４８は、異なるエピトープＩＬ−１５８／ＬＳおよびＩＬ３３−１６７／ＬＳを有し、ＩＬ３３−２４７については９０．７５ｍｇ／ＬのＣＭおよび１００％の曲線下面積およびＩＬ３３−２４８については３６ｍｇ／ＬのＣＭおよび８５．３％の曲線下面積をもたらし、広い保持時間と共に非対称ピークも示した。
【０３６３】
【表３９】
2019516362.tif 000042
【０３６４】
ＩｇＧ１抗体ＩＬ３３−３１２は、ＷＯ１６１５６４４０の３３＿６４００８７−７Ｂ（配列番号６１５および配列番号６１７）に基づく（例えば、図５２および実施例１１〜１２を参照されたい）。ＩｇＧ１抗体ＩＬ３３−３１３は、ＷＯ１６１５６４４０の３３  ６４０２３７−２Ｂ（配列番号６２３および配列番号６２５）に基づく。
【０３６５】
（実施例２７）
細胞に基づくアッセイにおける最適化された抗ＩＬ−３３抗体および比較抗体のヒトおよびカニクイザルＩＬ−３３中和活性
抗体ＩＬ３３−１５８ＬＳ（配列番号２４４、配列番号２０９）、ＩＬ３３−１６７ＬＳ（配列番号２４５、配列番号９３）、ＩＬ３３−２６５（配列番号４０３、配列番号４０４）、およびＩＬ３３−３１０（配列番号４０５、配列番号４０６）を、ヒトおよびカニクイザルＩＬ−３３の中和に関するＨＥＫ２９３  ＳＴ２  ＮＦκＢリポーターアッセイにおいて試験した（表４０）。ＩＬ３３−１５８ＬＳ（配列番号２４４、配列番号２０９）は、システイン変異体型のヒトおよびカニクイザルＩＬ−３３に対する類似する中和効力を示した（サルＩＣ５０：ヒトＩＣ５０の比は１．８である）。同様に、野生型ヒトおよびカニクイザルＩＬ−３３（配列番号３９７）に対するＩＬ３３−１５８ＬＳ（配列番号２４４、配列番号２０９）の中和効力は、類似していた（サルＩＣ５０：ヒトＩＣ５０の比は４．２である）。ＩＬ３３−１６７ＬＳ（配列番号２４５、配列番号９３）は、サルおよびヒトＩＬ−３３の同様に近い中和を示した。他の２つの抗体、ＩＬ３３−２６５（配列番号４０３、配列番号４０４）、およびＩＬ３３−３１０（配列番号４０５、配列番号４０６）は、ヒトおよびカニクイザルＩＬ−３３の中和間でより広い差異を示した（サルＩＣ５０：ヒトＩＣ５０の比は２８．７〜２５０を超える範囲である）。
【０３６６】
第２の実験では、ＩＬ３３−１５８ＬＳ（配列番号２４４、配列番号２０９）、ＩＬ３３−３１０（配列番号４０５、配列番号４０６）、ＩＬ３３−３１２（配列番号４０７、配列番号４０８）、およびＩＬ３３−３１３（配列番号４０９、配列番号４１０）を、ヒトおよびカニクイザルＩＬ−３３の中和に関するＨＥＫ２９３  ＳＴ２  ＮＦκＢリポーターアッセイにおいて試験した（表４１）。ＩＬ３３−１５８ＬＳおよびＩＬ３３−３１２は、サルおよびヒトシステイン変異体ＩＬ−３３の同様に近い相対的中和を有していた（カニクイザルＩＣ５０：ヒトＩＣ５０の比は、それぞれ、１．４および１．１である）。野生型ヒトおよびカニクイザルＩＬ−３３の相対的中和も、ＩＬ３３−１５８ＬＳおよびＩＬ３３−３１２について類似していた（カニクイザルＩＣ５０：ヒトＩＣ５０の比は、それぞれ、９．２および５．４である）。ＩＬ３３−３１０およびＩＬ３３−３１３は、ヒトおよびカニクイザルＩＣ５０間でより広い差異を示した（サルＩＣ５０：ヒトＩＣ５０の比は、２９．２〜５２８．１の範囲である；表４１）。まとめると、このデータは、ＩＬ３３−１５８ＬＳ（配列番号２４４、配列番号２０９）は、ＩＬ３３−３１２と同等の、高効力の抗ヒトＩＬ−３３抗体のこのパネル内で野生型ヒトおよびカニクイザルＩＬ−３３の最も高度に類似する中和を有していたことを示している。
【０３６７】
【表４０】
2019516362.tif 000043
【０３６８】
【表４１】
2019516362.tif 000044
【０３６９】
（実施例２８）
表面プラズモン共鳴を使用する抗ＩＬ−３３抗体の動的評価
Ｂｉａｃｏｒｅ動的アッセイを、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００機器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上、１Ｈｚの収集速度、３７℃で行った。還元型および非還元型野生型ヒトＩＬ−３３および還元型野生型カニクイザルＩＬ−３３を、アミンカップリングキット（カタログ番号ＢＲ１０００５０、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、製造業者のプロトコールに従って使用して、ＣＭ５センサーチップ（カタログ番号ＢＲ１００５３０、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に共有結合的にカップリングさせた。フローセル１を活性化し、参照フローセルとしての使用のために遮断した。１つの実験では、固定レベルは、２１８ＲＵの還元型野生型ヒトＩＬ−３３および２４８ＲＵの還元型野生型カニクイザルＩＬ−３３であった。この実験では、抗ＩＬ−３３  Ｆａｂ  １５８ＬＳおよび１６７ＬＳの滴定系列を、５０μｌ／ｍｉｎの流量で注入し、３６００秒間にわたって解離をモニタリングした。第２の実験では、固定レベルは、１３０ＲＵの還元型野生型ヒトＩＬ−３３、９７ＲＵの非還元型野生型ヒトＩＬ−３３、および８８ＲＵの還元型野生型カニクイザルＩＬ−３３であった。この実験では、抗ＩＬ−３３  Ｆａｂ  １５８ＬＳ、１６７ＬＳ、およびＩＬ３３−２６５の滴定系列を、５０μｌ／ｍｉｎの流量で注入し、解離を９００秒間にわたってモニタリングした。希釈および泳動バッファーは、ＨＢＳ−ＥＰ＋（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％Ｐ−２０）であった。得られるセンサーグラムデータを、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン１．０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）において１：１モデルに適合させることにより、速度定数および親和性を決定した。インタクトなＩＬ３３−０３１０  ＩｇＧもこの形式で試験したところ、還元型ヒトＩＬ−３３および還元型カニクイザルＩＬ−３３への迅速な結合および非常に遅い解離で結合することが観察されたが、それは非還元型ヒトＩＬ−３３には結合しなかった（表Ｙ）。二価ＩｇＧの動的特性は、一価Ｆａｂ断片のものと直接比較することができず、ここでは提示されない。
【０３７０】
抗ＩＬ−３３  Ｆａｂ  １５８ＬＳ、１６７ＬＳ、ＩＬ３３−２６５、および抗ＩＬ３３  ＩｇＧ  ＩＬ３３−３１０は全て、ＤＴＴ処理された野生型ヒトおよびカニクイザルＩＬ−３３に強く結合した。対照的に、これらの抗体はいずれも、非還元型野生型ヒトＩＬ−３３には結合しなかった（表４２）。
【０３７１】
野生型ヒトおよびカニクイザルＩＬ−３３（配列番号３９７）に対するＩＬ３３−１５８ＬＳのＦａｂ（配列番号２４４、配列番号２０９）の親和性は、類似していた（サルＫＤ：ヒトＫＤ比は、２つの独立実験において１．３および２．３であった）。ＩＬ３３−１６７ＬＳ（配列番号２４５、配列番号９３）は、サルおよびヒトＩＬ−３３に対する同様に近い親和性を示した。ＩＬ３３−２６５（配列番号４０３、配列番号１００３）は、野生型ヒトおよびカニクイザルＩＬ−３３に対する親和性間でより広い差異を示し、サルＫＤ：ヒトＫＤの比は５７．８であった（表４２）。
【０３７２】
【表４２】
2019516362.tif 000045
【０３７３】
（実施例２９）
最適化された抗ＩＬ−３３抗体および比較抗体の自己相互作用および多反応性
抗体ＩＬ３３−１５８（配列番号２２７、配列番号２０９）、ＩＬ３３−１５８ＬＳ（配列番号２４４、配列番号２０９）、およびＩＬ３３−３１２（配列番号４０７、配列番号４０８）を、ＤＮＡおよびインスリンへの結合について試験し、さらに、ＡＣ−ＳＩＮＳアッセイ（親和性捕捉自己相互作用ナノ粒子分光法；Ｌｉｕら、２０１４、ｍＡｂｓ  ６：４８３〜９２）において自己相互作用について試験した。ＡＣ−ＳＩＮＳアッセイでは、金ナノスフェア上に捕捉されたｍＡｂは、それらが互いに結合し、それによって、ビーズのクラスター化を引き起こす場合、最大吸光度のシフトを誘導し、このアッセイにおける高スコアは、溶解度および非特異性膜相互作用と相関することが示唆された（Ｌｉｕら、２０１４、ｍＡｂｓ  ６：４８３〜９２）。ＩＬ３３−１５８およびＩＬ３３−１５８ＬＳは、陰性対照のものと同等の、非常に低いＡＣ−ＳＩＮＳスコアを有していたが、ＩＬ３３−３１２は陽性対照と同等のスコアを有していた（表４３）。ＩＬ３３−３１２はまた、陽性対照と同等の高いＤＮＡ結合スコアを有していたが、ＩＬ３３−１５８およびＩＬ３３−１５８ＬＳは、より中程度のスコアを示した。まとめると、これらの結果は、ＩＬ３３−１５８およびＩＬ３３−１５８ＬＳが、ＩＬ３３−３１２よりも非特異的結合の実質的に低い指標を有することを示している。
【０３７４】
【表４３】
2019516362.tif 000046
【０３７５】
かくして、本発明は、上記の代表的な実施形態を参照して広く開示され、例示された。当業者であれば、その精神および範囲から逸脱することなく、本発明に対して様々な改変を加えることができることを認識するであろう。全ての刊行物、特許出願、および発行された特許は、あたかもそれぞれ個々の刊行物、特許出願または発行された特許が、その全体が参照により組み込まれると具体的かつ個別に示されたのと同程度に参照により本明細書に組み込まれる。参照により組み込まれる文中に含まれる定義は、それらが本開示における定義と矛盾する程度で排除される。
【０３７６】
明確性のために、別々の実施形態の文脈で記載される本発明のある特定の特徴はまた、単一の実施形態において組み合わせて提供され得ることが理解される。逆に、簡潔性のために、単一の実施形態の文脈で記載される本発明の様々な特徴はまた、別々に、または任意の好適な下位の組合せで提供され得る。
【０３７７】
本発明の一実施形態に関して考察される任意の限定は、本発明の他の任意の実施形態にも適用されることが具体的に企図される。さらに、本発明の任意の組成物を、本発明の任意の方法において使用することができ、本発明の任意の方法を使用して、本発明の任意の組成物を生成するか、または使用することができる。特に、特許請求の範囲に記載される本発明の任意の態様は、単独で、または１つもしくは複数のさらなる特許請求の範囲および／もしくは明細書の態様と共に、特許請求の範囲および／または明細書および／または配列表および／または図面の他の場所に記載される本発明の他の態様と組み合わせることができると理解されるべきである。
【０３７８】
本明細書に見出される特定例が本発明の範囲内にない限り、前記特定例は明示的に放棄され得る。
【０３７９】
特許請求の範囲における用語「または」の使用は、代替物のみを指すか、または代替物が相互排他的であると明示的に示されない限り、「および／または」を意味するように使用されるが、本開示は、代替物のみおよび「および／または」を指す定義を支持する。本明細書で使用される場合、「ａ」または「ａｎ」は、別途明確に指摘しない限り、１または複数を意味し得る。特許請求の範囲で使用される単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と関連して使用される場合、単語「ａ」または「ａｎ」は、１または１より多いことを意味し得る。本明細書で使用される場合、「別の」は、少なくとも第２またはそれ以上を意味し得る。本明細書で別途定義されない限り、本発明と関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有する。さらに、文脈によって別途要求されない限り、単数形の用語は、複数形を含み、複数形の用語は、単数形を含む。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ／ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」および単語「有する（ｈａｖｉｎｇ／ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、本発明を参照して本明細書で使用される場合、記述される特徴、整数、ステップまたは成分の存在を特定するために使用されるが、１つまたは複数の他の特徴、整数、ステップ、成分もしくはそれらのグループの存在または付加を除外するものではない。
【０３８０】
開示される教示を、様々な適用、方法、および組成物を参照して記載してきたが、本明細書の教示および以下の特許請求される発明から逸脱することなく、様々な変更および改変を加えることができることが理解されるであろう。実施例は、開示される教示をより良好に例示するために提供されるものであり、本明細書に提示される教示の範囲を制限することを意図するものではない。本教示はこれらの例示的な実施形態に関して記載されてきたが、これらの例示的な実施形態の多くの変更および改変は、過度の実験なく可能である。全てのそのような変更および改変は、本教示の範囲内にある。
【０３８１】
本発明の態様または実施形態が、Ｍａｒｋｕｓｈ群または代替物の他のグループ化に関して記載される場合、本発明は、全体として列挙される全ての群だけでなく、群の各メンバーを個別に、また、主要な群の全ての可能なサブ群も包含し、また、１つまたは複数の群のメンバーが存在しない主要な群も包含する。本発明はまた、特許請求される発明における１つまたは複数の任意の群のメンバーの明示的な排除も想定する。
【０３８２】
特許、特許出願、論文、教科書などを含む、本明細書で引用される全ての参考文献およびそれらに引用される参考文献は、それらが既に組み込まれてはいない範囲で、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。限定されないが、定義された用語、用語の用法、記載された技術などを含む、１つまたは複数の組み込まれた文献および同様の材料が本出願と異なるか、または矛盾する事象では、本出願が優先されるものとする。
【０３８３】
説明および実施例は本発明のある特定の実施形態を詳述し、発明者らによって企図される最良の様式を説明するものである。しかしながら、前述のものがどれほど詳細に本文中に出現し得るとしても、本発明を多くの方法で実施することができ、本発明を添付の特許請求の範囲およびその任意の均等物に従って解釈するべきであることが理解されるであろう。
【０３８４】
【表４４−１】
2019516362.tif 000047
【０３８５】
【表４４−２】
2019516362.tif 000048
【０３８６】
【表４４−３】
2019516362.tif 000049
【０３８７】
【表４５−１】
2019516362.tif 000050
【０３８８】
【表４５−２】
2019516362.tif 000051
【０３８９】
【表４５−３】
2019516362.tif 000052
【０３９０】
【表４５−４】
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【０３９１】
【表４５−５】
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【０３９２】
【表４５−６】
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【０３９３】
【表４５−７】
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【０３９４】
【表４５−８】
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【０３９５】
【表４５−９】
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【０３９６】
【表４５−１０】
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【０３９７】
【表４５−１１】
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【０３９８】
【表４５−１２】
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【０３９９】
【表４５−１３】
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【０４００】
【表４５−１４】
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【０４０１】
【表４５−１５】
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【０４０２】
【表４５−１６】
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【０４０３】
【表４５−１７】
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【０４０４】
【表４５−１８】
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【０４０５】
【表４５−１９】
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【０４０６】
【表４５−２０】
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【０４０７】
【表４５−２１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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