(57)【要約】  本明細書に記載の発明は、有効量のサイトカイン受容体が改変された免疫細胞を投与することによって、患者において癌を治療するための、方法および組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
エクスビボの改変された免疫細胞であって、
前記の改変された免疫細胞の外側細胞表面上にＣＸＣＲ４受容体を含まないまたは実質的に含まない、
細胞。
【請求項２】
請求項１の細胞であって、
前記の細胞表面上に腫瘍細胞ホーミング受容体をさらに含む、
細胞。
【請求項３】
請求項１または２の細胞であって、
前記の改変された免疫細胞は、腫瘍を有する患者の腫瘍細胞のｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ活性を、前記患者に送達された場合に回避する、
細胞。
【請求項４】
請求項１または２の細胞であって、
前記の改変された免疫細胞の由来は、自家、同種間、または異種である、
細胞。
【請求項５】
請求項１から３のいずれか一項の細胞であって、
前記の改変された免疫細胞は、腫瘍を有する患者から得られる、
細胞。
【請求項６】
請求項１から５のいずれか一項の細胞であって、前記の改変された免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはナチュラルキラー（「ＮＫ」）細胞である、
細胞。
【請求項７】
請求項６の細胞であって、
前記ＮＫ細胞は、ＮＫ−９２細胞である、
細胞。
【請求項８】
請求項２の細胞であって、
前記の腫瘍細胞ホーミング受容体は、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）、Ｆｃ受容体、またはそれらの組み合わせである、
細胞。
【請求項９】
請求項８の細胞であって、
前記ＣＡＲは、腫瘍関連抗原を標的化する、
細胞。
【請求項１０】
請求項９の細胞であって、
前記腫瘍関連抗原は、α−葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＥＡ、ＥＧＰ−２、ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｒｂ−Ｂ２，３，４、ＦＢＰ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、ｋ軽鎖、ＬｅＹ、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソテリン、および、ＰＳＭＡからなる群より選択される、
細胞。
【請求項１１】
請求項１、２、または８から１０のいずれか一項の細胞であって、
前記の改変された免疫細胞は、改変されていない免疫細胞上のＣＸＣＲ４受容体の平均数と比較して、前記外側細胞表面上に、５０％またはそれより少ない量のＣＸＣＲ４受容体を有する、
細胞。
【請求項１２】
請求項１、２、または８から１０のいずれか一項の細胞であって、
前記の改変された免疫細胞は、前記の改変された免疫細胞の外側細胞表面上にＣＸＣＲ４受容体を含まないまたは実質的に含まないように改変される前に、腫瘍細胞ホーミング受容体を発現する、
細胞。
【請求項１３】
請求項１、２、または８から１０のいずれか一項の細胞であって、
前記免疫細胞は、Ｂ細胞またはＮＫ細胞である、
細胞。
【請求項１４】
改変された免疫細胞のエクスビボの集団であって、
前記の改変された免疫細胞の少なくとも一部は、前記免疫細胞の外側細胞表面上にＣＸＣＲ４受容体を有さないまたは実質的に有さない、
集団。
【請求項１５】
請求項１４の細胞集団であって、
前記細胞の少なくとも一部は、前記免疫細胞の前記外側細胞表面上に腫瘍細胞ホーミング受容体を含む、
細胞集団。
【請求項１６】
請求項１４または１５の細胞集団であって、
改変された免疫細胞の前記集団は、患者に送達された場合に、腫瘍細胞のｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ活性を回避する、
細胞集団。
【請求項１７】
請求項１４または１５の細胞集団であって、
前記免疫細胞の由来は、自家、同種間、または異種、またはそれらの組み合わせである、
細胞集団。
【請求項１８】
請求項１４から１７のいずれか一項の細胞集団であって、
改変された免疫細胞の前記集団は、腫瘍を有する患者から得られる、
細胞集団。
【請求項１９】
請求項１４から１８のいずれか一項の細胞集団であって、
改変された免疫細胞の前記集団は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはそれらの組み合わせである、
細胞集団。
【請求項２０】
請求項１５の細胞集団であって、
前記腫瘍細胞ホーミング受容体は、キメラ抗原受容体、Ｆｃ受容体、またはそれらの組み合わせである、
細胞集団。
【請求項２１】
請求項２０の細胞集団であって、
前記ＣＡＲは、腫瘍関連抗原を標的化する、
細胞集団。
【請求項２２】
請求項２１の細胞集団であって、
前記腫瘍関連抗原は、α−葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＥＡ、ＥＧＰ−２、ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｒｂ−Ｂ２，３，４、ＦＢＰ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、ｋ軽鎖、ＬｅＹ、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソテリン、および、ＰＳＭＡからなる群より選択される、
細胞集団。
【請求項２３】
請求項１４から２２のいずれか一項の細胞集団であって、
改変された免疫細胞の前記集団の少なくとも一部は、ＣＸＣＲ４ではない内因性腫瘍細胞ホーミング受容体を発現する、
細胞集団。
【請求項２４】
請求項１４、１５、または２０から２２のいずれか一項の細胞集団であって、
改変された免疫細胞の前記集団は、改変されていない免疫細胞上のＣＸＣＲ４受容体の平均数と比較して、前記外側細胞表面上に、５０％またはそれより少ない量のＣＸＣＲ４受容体を有する、
細胞集団。
【請求項２５】
請求項１から２４のいずれか一項の有効量の改変された免疫細胞または細胞集団および１つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤を含む、
医薬組成物。
【請求項２６】
エクスビボの改変された免疫細胞であって、
免疫細胞の外側細胞表面上に腫瘍細胞ホーミング受容体を含み、
前記細胞の前記外側細胞表面上のＣＸＣＲ４受容体発現が低減または排除されるように、ＣＸＣＲ４遺伝子または遺伝子転写の直接的または間接的な抑制をさらに含む、
細胞。
【請求項２７】
エクスビボの改変された免疫細胞であって、
前記の改変された免疫細胞の外側細胞表面上にＣＸＣＲ７受容体を過剰発現するように改変された、
細胞。
【請求項２８】
請求項２７の細胞であって、
前記ＣＸＣＲ７受容体は、患者に送達された場合に、ＣＸＣＬ１２に結合する、
細胞。
【請求項２９】
請求項２７または２８の細胞であって、
前記免疫細胞の由来は、自家、同種異系、または異種移植（ｘｅｎｏｇｒａｐｈｉｃ）である、
細胞。
【請求項３０】
請求項２７または２８の細胞であって、
前記免疫細胞は、癌を有する患者から得られる、細胞。
【請求項３１】
請求項２７から３０のいずれか一項の細胞であって、
前記免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはナチュラルキラー細胞である、
細胞。
【請求項３２】
請求項２７の細胞であって、
前記免疫細胞は、前記免疫細胞の表面上に腫瘍細胞ホーミング受容体を発現するようにさらに改変される、
細胞。
【請求項３３】
請求項３２の細胞であって、
前記腫瘍細胞ホーミング受容体は、キメラ抗原受容体、Ｆｃ受容体、またはそれらの組み合わせである、
細胞。
【請求項３４】
請求項３３の細胞であって、
前記キメラ抗原受容体は、癌関連抗原を標的化する、
細胞。
【請求項３５】
請求項３４の細胞であって、
前記癌関連抗原は、α−葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＥＡ、ＥＧＰ−２、ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｒｂ−Ｂ２，３，４、ＦＢＰ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、ｋ軽鎖、ＬｅＹ、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソテリン、および、ＰＳＭＡからなる群から選択される、
細胞。
【請求項３６】
請求項２７、２８、または３２から３５のいずれか一項の細胞であって、
前記免疫細胞は、改変されていない免疫細胞上のＣＸＣＲ７受容体の平均数と比較して、前記外側細胞表面上に、１０％またはそれより多くの量のＣＸＣＲ７受容体を有する、
細胞。
【請求項３７】
改変された免疫細胞のエクスビボの集団であって、
前記の改変された免疫細胞の少なくとも一部は、前記免疫細胞の外側細胞表面上にＣＸＣＲ７を過剰発現する、
集団。
【請求項３８】
請求項３７の細胞集団であって、
前記ＣＸＣＲ７受容体は、患者に送達された場合に、ＣＸＣＬ１２に結合する、
細胞集団。
【請求項３９】
請求項３７または３８の細胞集団であって、
前記免疫細胞の由来は、自家、同種異系、または異種移植（ｘｅｎｏｇｒａｐｈｉｃ）、またはそれらの組み合わせである、
細胞集団。
【請求項４０】
請求項３７から３９のいずれか一項の細胞集団であって、
前記免疫細胞は、癌を有する患者から得られる、
細胞集団。
【請求項４１】
請求項３７から４０のいずれか一項の細胞集団であって、
前記免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、またはそれらの組み合わせである、
細胞集団。
【請求項４２】
請求項３７の細胞集団であって、
前記免疫細胞の少なくとも一部は、前記免疫細胞の表面上に腫瘍細胞ホーミング受容体を発現するようにさらに改変される、
細胞集団。
【請求項４３】
請求項４２の細胞集団であって、
前記腫瘍細胞ホーミング受容体は、キメラ抗原受容体、Ｆｃ受容体、またはそれらの組み合わせである、
細胞集団。
【請求項４４】
請求項４３の細胞集団であって、
前記キメラ抗原受容体は、癌関連抗原を標的化する、
細胞集団。
【請求項４５】
請求項４４の細胞集団であって、
前記癌関連抗原は、α−葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＥＡ、ＥＧＰ−２、ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｒｂ−Ｂ２，３，４、ＦＢＰ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、ｋ軽鎖、ＬｅＹ、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソテリン、および、ＰＳＭＡからなる群より選択される、
細胞集団。
【請求項４６】
請求項３７、３８、または４２から４５のいずれか一項の細胞集団であって、
前記免疫細胞は、改変されていない免疫細胞上のＣＸＣＲ７受容体の平均数と比較して、前記外側細胞表面上に、１０％またはそれより多くの量のＣＸＣＲ７受容体を有する、
細胞集団。
【請求項４７】
請求項３７から４６のいずれか一項の有効量の改変された免疫細胞および１つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤を含む、
医薬組成物。
【請求項４８】
エクスビボの改変された免疫細胞であって、
ＣＸＣＲ７遺伝子または遺伝子転写は、ＣＸＣＲ７受容体が前記免疫細胞の外側細胞表面上に過剰発現されるように編集される、
細胞。
エクスビボの改変された免疫細胞であって、
ＣＸＣＲ７受容体を過剰発現するように改変されて、前記の改変された免疫細胞の外側細胞表面上にＣＸＣＲ４受容体を有さないまたは実質的に有さないように改変された、
細胞。
【請求項４９】
請求項４８の細胞であって、
前記ＣＸＣＲ７受容体は、患者に送達された場合に、ＣＸＣＬ１２に結合する、
細胞。
【請求項５０】
請求項４８または４９の細胞であって、
前記免疫細胞は、患者に送達された場合に、腫瘍細胞のｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ活性を回避する、
細胞。
【請求項５１】
請求項４８または４９の細胞であって、
前記免疫細胞の由来は、自家、同種異系、または異種移植（ｘｅｎｏｇｒａｐｈｉｃ）である、
細胞。
【請求項５２】
請求項４８または４９の細胞であって、
前記免疫細胞は、癌を有する患者から得られる、
細胞。
【請求項５３】
請求項４８から５２のいずれか一項の細胞であって、
前記免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはナチュラルキラー細胞である、
細胞。
【請求項５４】
請求項４８の細胞であって、
前記免疫細胞は、前記免疫細胞の表面上に腫瘍細胞ホーミング受容体を発現するようにさらに改変される、
細胞。
【請求項５５】
請求項５４の細胞であって、
前記腫瘍細胞ホーミング受容体は、キメラ抗原受容体、Ｆｃ受容体、またはそれらの海合わせである、
細胞。
【請求項５６】
請求項５５の細胞であって、
前記キメラ抗原受容体は、癌関連抗原を標的化する、
細胞。
【請求項５７】
請求項５６の細胞であって、
前記癌関連抗原は、α−葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＥＡ、ＥＧＰ−２、ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｒｂ−Ｂ２，３，４、ＦＢＰ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、ｋ軽鎖、ＬｅＹ、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソテリン、および、ＰＳＭＡからなる群から選択される、
細胞。
【請求項５８】
請求項４８、４９、または５４から５７のいずれか一項の細胞であって、
前記免疫細胞は、改変されていない免疫細胞上のＣＸＣＲ７受容体の平均数と比較して、前記外側細胞表面上に、１０％またはそれより多くの量のＣＸＣＲ７受容体を有する、
細胞。
【請求項５９】
請求項４８、４９、または５４から５７のいずれか一項の細胞であって、
前記免疫細胞は、改変されていない免疫細胞上のＣＸＣＲ４受容体の平均数と比較して、前記外側細胞表面上に、５０％またはそれより少ない量のＣＸＣＲ４受容体を有する、
細胞。
【請求項６０】
改変された免疫細胞のエクスビボの集団であって、
前記改変された免疫細胞の少なくとも一部は、ＣＸＣＲ７受容体を過剰発現し、前記の改変された免疫細胞の外側細胞表面上にＣＸＣＲ４受容体を有さないまたは実質的に有さない、
集団。
【請求項６１】
請求項６０の細胞集団であって、
前記ＣＸＣＲ７受容体は、患者に送達された場合に、ＣＸＣＬ１２に結合する、
細胞集団。
【請求項６２】
請求項６０または６１の細胞集団であって、
免疫細胞の前記集団は、患者に送達された場合に、腫瘍細胞のｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ活性を回避する、
細胞集団。
【請求項６３】
請求項６０または６１の細胞集団であって、
前記免疫細胞の由来は、自家、同種異系、または異種移植（ｘｅｎｏｇｒａｐｈｉｃ）、またはそれらの組み合わせである、
細胞集団。
【請求項６４】
請求項６０から６３のいずれか一項の細胞集団であって、
前記免疫細胞は、癌を有する患者から得られる、
細胞集団。
【請求項６５】
請求項６０から６４のいずれか一項の細胞集団であって、
前記免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、またはそれらの組み合わせである、
細胞集団。
【請求項６６】
請求項６０の細胞集団であって、
前記免疫細胞の少なくとも一部は、前記免疫細胞の表面上に腫瘍細胞ホーミング受容体を発現するようにさらに改変される、
細胞集団。
【請求項６７】
請求項６６の細胞集団であって、
前記腫瘍細胞ホーミング受容体は、キメラ抗原受容体、Ｆｃ受容体、またはそれらの組み合わせである、
細胞集団。
【請求項６８】
請求項６７の細胞集団であって、
前記キメラ抗原受容体は、癌関連抗原を標的化する、
細胞集団。
【請求項６９】
請求項６８の細胞集団であって、
前記癌関連抗原は、α−葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＥＡ、ＥＧＰ−２、ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｒｂ−Ｂ２，３，４、ＦＢＰ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、ｋ軽鎖、ＬｅＹ、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソテリン、および、ＰＳＭＡからなる群から選択される、
細胞集団
【請求項７０】
請求項６０、６１、または６６から６９のいずれか一項の細胞集団であって、
免疫細胞は、改変されていない免疫細胞上のＣＸＣＲ７受容体の平均数と比較して、前記外側細胞表面上に、１０％またはそれより多くの量のＣＸＣＲ７受容体を有する、
細胞集団。
【請求項７１】
請求項６０、６１、または６６から６９のいずれか一項の細胞集団であって、
免疫細胞は、改変されていない免疫細胞上のＣＸＣＲ４受容体の平均数と比較して、前記外側細胞表面上に、５０％またはそれより少ない量のＣＸＣＲ４受容体を有する、
細胞集団。
【請求項７２】
請求項６０、６１、または６６から６９のいずれか一項の有効量の改変された免疫細胞および１つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤を含む、
医薬組成物。
【請求項７３】
有効量のＣＸＣＲ７が改変された免疫細胞および有効量のＣＸＣＲ４が改変された免疫細胞および１つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤を含む、
医薬組成物。
【請求項７４】
ＣＸＣＬ１２を発現する腫瘍を有する患者を治療するための方法であって、
前記患者は、請求項１、２、８から１０、１４、１５、２０から２２、２６、２７、３２から３５、３７、３８、４２から４５、４８、４９、５４から５７、６０、６１、６６から６９、または７３のいずれか一項の有効量の改変された免疫細胞または組成物が投与される、
方法。
【請求項７５】
請求項７４の方法であって、
前記患者における腫瘍細胞のｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ活性は、低減または排除される、
方法。
【請求項７６】
請求項７４の方法であって、
前記免疫細胞は、前記患者に全身性に投与される、
方法。
【請求項７７】
請求項７４の方法であって、
前記免疫細胞は、前記の腫瘍または腫瘍微小環境に直接的に投与される、
方法。
【請求項７８】
請求項７４の方法であって、
前記免疫細胞は、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤と組み合わせて投与される、
方法。
【請求項７９】
請求項７８の方法であって、
前記抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、ＡＭＤ３１００（モゾビル／プレリキサフォル）またはその誘導体、ＫＲＨ−１６３６、Ｔ−２０、Ｔ−２２、Ｔ−１４０、ＴＥ−１４０１１、Ｔ−１４０１２、ＴＮ１４００３、ＴＡＫ−７７９、ＡＫ６０２、ＳＣＨ−３５１１２５、タンニン酸、ＮＳＣ  ６５１０１６、サリドマイド、ＧＦ  １０９２３０Ｘからなる群より選択される、
方法。
【請求項８０】
請求項７８の方法であって、
前記の免疫細胞および抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、連続して投与される、
方法。
【請求項８１】
請求項７８の方法であって、
前記の免疫細胞および抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、同時に投与される、
方法。
【請求項８２】
請求項７４から８１のいずれか一項の方法であって、
前記免疫細胞は、ＮＫ−９２細胞である、
方法。
【請求項８３】
請求項７４から８２のいずれか一項の方法であって、
前記腫瘍は、乳房腫瘍、中皮腫、頸部腫瘍、扁平上皮細胞癌腫、卵巣腫瘍、肝臓腫瘍、または脳腫瘍である、
方法。
【請求項８４】
請求項７４から８３のいずれか一項の方法であって、
少なくとも１つのさらなる抗癌剤が投与される、
方法。
【請求項８５】
請求項８４の方法であって、
前記の少なくとも１つのさらなる抗癌剤は、化学療法剤、放射線療法薬、または免疫療法薬を含む、
方法。
【請求項８６】
請求項１または２の細胞であって、
前記免疫細胞はＴ細胞であって、ＡＭＤ３１００をさらに含む、
細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１５年１１月９日に出願された米国仮出願番号６２／２５３，０９３；２０１６年４月２６日に出願された６２／３２７，８７７；２０１５年１１月９日に出願された６２／２５３，０７２；２０１５年１１月９日に出願された６２／２５３，０９６；および２０１５年１１月９日に出願された６２／２５３，０２１に対して、合衆国法典第３５巻第１１９条（ｅ）の下での優先権を主張するものであり；それぞれ、その全体で参照により本明細書中に援用される。
【背景技術】
【０００２】
特定の刺激に応答した細胞運動は、原核生物および真核生物において見られる。これらの生物で見られる細胞運動は、３つのタイプ：化学走性、または化学物質の濃度の増大に向かう勾配に沿った細胞の運動；化学刺激の勾配を下がる運動として定義されているネガティブ化学走性；および、化学運動性、または化学的薬剤によって誘導される細胞の増大されたランダムな運動に、分類されている。
【０００３】
本明細書に記載の実施態様は、概して、例えば、癌および腫瘍の治療との関連での、細胞の運動を改変することのできる処置および組成物に関する技術および要旨に関する。例えば、実施態様は、腫瘍および／または転移性の癌細胞を効果的および効率的に死滅させるために腫瘍を標的化することのできる技術に関する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
化学走性および化学運動性は、ケモカインと呼ばれるタンパク質のクラスに応答して、哺乳類細胞において生じる。加えて、化学忌避物質、またはｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ活性が、哺乳類細胞において観察されている。例えば、一部の腫瘍細胞は、腫瘍の部位から免疫細胞を忌避するのに十分な濃度のケモカインを分泌し、それにより、腫瘍を標的化および根絶する免疫系の能力を低減させる。転移性癌細胞は、同様のメカニズムを使用して免疫系を回避し得る。例えば、高レベルのＣＸＣＬ１２またはインターロイキン８（ＩＬ−８）を発現している腫瘍からの、腫瘍抗原特異的Ｔ細胞のような免疫細胞の反発作用は、腫瘍細胞が免疫制御を回避するのを可能にする。
【０００５】
ＣＸＣＲ７は、ヒトにおいて、ＣＸＣＲ７遺伝子によってコードされるタンパク質である。ＣＸＣＲ７受容体は、様々な細胞によって発現されて、腫瘍の発生および進行を促進する重要な機能を有する。ＣＸＣＲ７は、リンパ球に関する強力な走化性活性を併せ持つ分子である間質由来因子−１（ＳＤＦ−１、ＣＸＣＬ１２としても知られる）、および、インターフェロン誘導性Ｔ細胞α化学誘引物質（Ｉ−ＴＡＣ、ＣＸＣＬ１１としても知られる）に結合することのできる、ケモカイン受容体である。ＣＸＣＬ１２は、骨髄にホーミングする造血幹細胞において、および、造血幹細胞の静止において、重要であることが知られる。加えて、ＣＸＣＲ７発現は、病理学的炎症および腫瘍発生中に高められると考えられる。報告は、ＣＸＣＲ７は、少なくとも部分的に、デコイ受容体として機能し得て、ＣＸＣＬ１２の内在化および分解を促進する能力によって、ＣＸＣＬ１２（およびＣＸＣＬ１１）スカベンジャーとして作用することを示唆する。
【０００６】
ＣＸＣＲ４は、ヒトにおいて、ＣＸＣＲ４遺伝子によってコードされるタンパク質である。ＣＸＣＲ４受容体は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびナチュラルキラー［ＮＫ］細胞）を含む様々な正常細胞によって発現される。ＣＸＣＲ４は、リンパ球に関する強力な走化性活性を併せ持つ分子であるＣＸＣＬ１２に特異的なα−ケモカイン受容体である。ＣＸＣＬ１２は、ＣＸＣＲ４に関するリガンドであり、骨髄にホーミングする造血幹細胞において、および、造血幹細胞の静止において、重要であることが知られる。ＣＸＣＲ４発現は、多くの健康な組織において低いまたは存在しないが、乳癌、卵巣癌、メラノーマ、および前立腺癌を含む多くのタイプの癌において過剰発現される。癌細胞におけるこの受容体の発現は、高濃度のＣＸＣＬ１２を含む組織、例えば、肺、肝臓および骨髄への転移に関連している。
【０００７】
８５％もの固形腫瘍および白血病が、「ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ壁」とも呼ばれる腫瘍からの免疫細胞の反発のようなｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ効果を有するのに十分なレベルで、ＣＸＣＬ１２を発現する。そのようなレベルでＣＸＣＬ１２を発現する癌は、限定されないが、前立腺癌、肺癌、乳癌、膵癌、卵巣癌、胃癌、食道癌、および白血病を含む。
【０００８】
したがって、腫瘍および／または転移性癌細胞を効果的および効率的に死滅させるために、腫瘍を標的化する治療および組成物に関する必要性が残っている。
【０００９】
この時点の技術は、概して、それらの細胞表面上に、ＣＸＣＲ７受容体を過剰発現する、ＣＸＣＲ４受容体を欠いている、または、ＣＸＣＲ７受容体を過剰発現し、かつ、ＣＸＣＲ４受容体を欠いている免疫細胞、および、癌を治療するためのそれらの使用に関する。
【００１０】
例えば高レベルのＣＸＣＬ１２またはインターロイキン８（ＩＬ−８）を発現している腫瘍由来の、腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の反発は、腫瘍細胞が免疫制御を回避するのを可能にする。理論によって拘束されずに、それらの細胞表面上にＣＸＣＲ７受容体の数が増大した免疫細胞は、患者に投与されると、免疫細胞が腫瘍細胞を検出して破壊するのを可能にするために、少なくとも部分的に、ＣＸＣＬ１２によって誘導されるｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ壁に結合して分解するデコイとして作用することが可能であると考えられる。また、ＣＸＣＲ４受容体がより少ないまたは存在しない免疫細胞は、患者に投与されると、腫瘍細胞を検出して破壊するために、少なくとも部分的に、一部の腫瘍によって作られるｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ壁を回避することが可能であるとも考えられる。
【００１１】
抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、単独で、癌治療に有望な結果を提供するが、本明細書に記載の、ＣＸＣＲ７受容体を過剰発現する、ＣＸＣＲ４受容体を欠いている、または、ＣＸＣＲ７受容体を過剰発現し、かつ、ＣＸＣＲ４受容体を欠いている免疫細胞を用いた治療は、任意選択で抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤と組み合わせて、より効率的な腫瘍標的化および改善された患者成果をもたらすことが検討される。理論によって拘束されずに、そのような方法は、非限定的な例として、腫瘍のサイズが大きい場合、多数の腫瘍が患者内に存在する場合、患者の免疫系が損なわれる場合などに、特に有益であると考えられる。
【００１２】
８５％もの固形腫瘍および白血病が、腫瘍からの免疫細胞の反発のようなｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ効果を有するのに十分なレベルでＣＸＣＬ１２を発現する。ＣＸＣＬ１２をそのようなレベルで発現する癌は、限定されないが、前立腺癌、肺癌、乳癌、膵癌、卵巣癌、胃癌、食道癌、および白血病を含む。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の一態様は、ＣＸＣＲ７受容体を過剰発現するように改変された、エクスビボの改変された免疫細胞に関する。一実施態様では、本発明は、エクスビボの改変された免疫細胞に関し、ここで、ＣＸＣＲ７遺伝子または遺伝子転写は、ＣＸＣＲ７受容体が免疫細胞の外側細胞表面上に過剰発現されるように編集される。
【００１４】
本発明の一態様は、改変された免疫細胞の外側細胞表面上にＣＸＣＲ４受容体を有さないまたは実質的に有さないように改変された、エクスビボの改変された免疫細胞に関する。一実施態様では、本発明は、エクスビボの改変された免疫細胞に関し、ここで、免疫細胞は、細胞の外側細胞表面上のＣＸＣＲ４受容体発現が低減または排除されるように、ＣＸＣＲ４遺伝子または遺伝子転写の直接的または間接的な抑制を含む。
【００１５】
本発明の一態様は、ＣＸＣＲ７受容体を過剰発現するように改変されて、改変された免疫細胞の外側細胞表面上にＣＸＣＲ４受容体を有さないまたは実質的に有さないように改変された、エクスビボの改変された免疫細胞に関する。一実施態様では、本発明は、エクスビボの改変された免疫細胞に関し、ここで、ＣＸＣＲ７遺伝子または遺伝子転写は、ＣＸＣＲ７受容体が免疫細胞の外側細胞表面上に過剰発現されるように編集されて、ここで、免疫細胞は、細胞の外側細胞表面上のＣＸＣＲ４受容体発現が低減または排除されるように、ＣＸＣＲ４遺伝子または遺伝子転写の直接的または間接的な抑制を含む。
【００１６】
本発明の一態様は、改変された免疫細胞のエクスビボの集団に関し、ここで、改変された免疫細胞の少なくとも一部は、ＣＸＣＲ７受容体を過剰発現し、改変された免疫細胞の細胞外側表面上にＣＸＣＲ４受容体を有さないまたは実質的に有さない。
【００１７】
一実施態様では、ＣＸＣＲ７受容体は、患者に送達された場合に、ＣＸＣＬ１２に結合する。
【００１８】
一実施態様では、免疫細胞は、患者に送達された場合に、腫瘍細胞のｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ活性を回避する。
【００１９】
一実施態様では、免疫細胞の由来は、自家、同種異系、または異種移植（ｘｅｎｏｇｒａｐｈｉｃ）、またはそれらの組み合わせである。
【００２０】
一実施態様では、免疫細胞は、癌を有する患者から得られる。
【００２１】
一実施態様では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、またはそれらの任意の組み合わせである。
【００２２】
一実施態様では、免疫細胞は、免疫細胞の外側細胞表面上に、腫瘍細胞ホーミング受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｆｃ受容体、またはそれらの組み合わせを発現するようにさらに改変される。他の実施態様では、免疫細胞は、ＣＸＣＲ４ではない内因性腫瘍細胞ホーミング受容体を発現する。
【００２３】
一実施態様では、ＣＡＲは、癌関連抗原、例えば、α−葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＥＡ、ＥＧＰ−２、ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｒｂ−Ｂ２，３，４、ＦＢＰ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、ｋ軽鎖、ＬｅＹ、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソテリン、および、ＰＳＭＡを標的化する。
【００２４】
一実施態様では、免疫細胞は、改変されていない免疫細胞上のＣＸＣＲ７受容体の平均数と比較して、外側細胞表面上に１０％またはそれより多くの量のＣＸＣＲ７受容体を有する。
【００２５】
一実施態様では、免疫細胞は、改変されていない免疫細胞上のＣＸＣＲ４受容体の平均数と比較して、外側細胞表面上に５０％またはそれより少ない量のＣＸＣＲ４受容体を有する。
【００２６】
本発明の一態様は、有効量の本明細書に記載の改変された免疫細胞を含む改変された免疫細胞集団に関する。一実施態様では、免疫細胞集団は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【００２７】
本発明の一態様は、有効量の本明細書に記載の改変された免疫細胞および１つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤を含む医薬組成物に関する。他の態様では、本発明は、有効量のＣＸＣＲ７が改変された免疫細胞および／または有効量のＣＸＣＲ４が改変された免疫細胞および／または有効量のＣＸＣＲ７およびＣＸＣＲ４が改変された免疫細胞および１つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤を含む医薬組成物に関する。
【００２８】
一実施態様では、組成物は、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤をさらに含む。一実施態様では、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、免疫細胞表面上の１つまたは複数の受容体に結合される。
【００２９】
本発明の一態様は、ＣＸＣＬ１２を発現する腫瘍を有する患者を治療するための方法に関し、前記患者は、有効量の本明細書に記載の改変された免疫細胞または組成物が投与される。
【００３０】
一実施態様では、患者における腫瘍細胞のｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ活性は、少なくとも改変された免疫細胞に関して、低減または排除される。
【００３１】
一実施態様では、免疫細胞は、患者へ全身性に投与される。別の実施態様では、免疫細胞は、腫瘍または腫瘍微小環境へ局所的、例えば直接的に投与される。
【００３２】
一実施態様では、免疫細胞は、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤、例えば、ＡＭＤ３１００（１，１’−［１，４−フェニレンビス（メチレン）］−ビス−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン、モゾビル／プレリキサフォルとしても知られる）またはその誘導体、ＫＲＨ−１６３６、Ｔ−２０、Ｔ−２２、Ｔ−１４０、ＴＥ−１４０１１、Ｔ−１４０１２、ＴＮ１４００３、ＴＡＫ−７７９、ＡＫ６０２、ＳＣＨ−３５１１２５、タンニン酸、ＮＳＣ  ６５１０１６、サリドマイド、ＧＦ  １０９２３０Ｘと組み合わせて投与される。
【００３３】
一実施態様では、免疫細胞および抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、連続して投与される。別の実施態様では、免疫細胞および抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、同時に投与される。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
この説明を読んだ後は、様々な代替の実施態様および代替の適用での本発明の実施のやり方が、当業者に明らかになるであろう。しかしながら、本発明の全ての実施態様が本明細書に記載されるわけではない。ここに示される実施態様は例としてのみ示され、制限ではないことが理解されよう。したがって、様々な代替の実施態様の、この詳細な説明は、以下に記載の本発明の範囲または幅を制限すると解釈されるべきではない。
【００３５】
本発明が開示および記載される前に、以下に記載される態様は、特定の組成物、そのような組成物を調製する方法、またはそれらの使用に限定されず、したがってもちろん変化し得ることが理解されるべきである。また、本明細書で用いられる専門用語は、特定の態様を説明する目的のためのみであり、限定されることを意図しないことも理解されるべきである。
【００３６】
本開示の全体を通して、様々な刊行物、特許および発行された特許明細書は、特定する引用によって参照される。これらの刊行物、特許および発行された特許明細書の開示は、それらの全体で本開示中に参照により援用される。
【００３７】
定義
別段の定義がされない限り、本明細書で用いられる全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する当業者の１人によって一般に理解されるのと同一の意味を有する。
【００３８】
本明細書において、および、その後の特許請求の範囲において、以下の意味を有することが定義されるいくつかの用語に対して参照がなされる：
【００３９】
本明細書で用いられる専門用語は、特定の実施態様を説明する目的のためのみであり、本発明の限定を意図しない。本明細書において用いられる単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明確に別段の指示をしない限り、複数形も同様に含むことが意図される。
【００４０】
範囲を含む全ての数字表示、例えば、ｐＨ、温度、時間、濃度、量、および分子量は、適切な場合、１０％、１％、または０．１％（＋）または（−）に変動する近似値である。常に明示的に述べられるわけではないが、全ての数字表示は、用語「約」が前に付いてよいことが理解される。また、常に明示的に述べられるわけではないが、本明細書に記載される試薬は単なる例示であること、および、そのような同等物は当技術分野で知られていることも理解される。
【００４１】
「任意選択の（ｏｐｔｉｏｎａｌ）」または「任意選択で（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）」は、その後に記載される事象または状況が生じ得るまたは生じ得ないこと、および、事象または状況が生じる事実およびそうでない事実をその記載が含むことを意味する。
【００４２】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、組成物および方法が、挙げられたエレメントを含むが、他のものを除かないことを意味することを意図する。「から本質的になる」は、組成物および方法を定義するために用いられる場合、組み合わせに対する任意の本質的な意義の他のエレメントを除くことを意味する。例えば、本明細書に定義されるエレメントから本質的になる組成物は、特許請求の範囲に記載された発明の基礎および新規の特徴（単数または複数）に実質的に影響を与えない他のエレメンツを除外しない。「からなる」は、微量より多い他の成分および挙げられた実質的な方法ステップを除くことを意味する。これらの移行用語のそれぞれによって定義される実施態様は、本発明の範囲内である。
【００４３】
用語「患者」、「対象」、「個体」などは、本明細書において相互交換可能に用いられ、インビトロまたはインサイチュであろうと、本明細書に記載の方法に適している任意の動物またはその細胞を指す。好ましい実施態様では、患者、対象、または個体は、哺乳類である。一部の実施態様では、哺乳類は、マウス、ラット、モルモット、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、または家畜動物（例えば、ウマ、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ）である。特に好ましい実施態様では、患者、対象、または個体は、ヒトである。
【００４４】
用語「治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、ヒトなどの対象における、本明細書に記載の疾患または障害の治療をカバーし、および、（ｉ）疾患または障害を阻害する、すなわち、その発達を停止させる；（ｉｉ）疾患または障害を緩和させる、すなわち、障害の回帰を生じさせる；（ｉｉｉ）疾患または障害の進行を遅延させる；および／または、（ｉｖ）疾患または障害の１つまたは複数の症候の進行を阻害、緩和、または遅延させることを含む。例えば、癌または腫瘍の治療は、制限されないが、腫瘍のサイズの縮小、腫瘍および／またはその転移の除去、癌の寛解、腫瘍の転移の阻害、癌の少なくとも１つの兆候の縮小または除去などを含む。
【００４５】
対象への、薬剤、薬、または、ナチュラルキラー細胞の「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」または「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」という用語は、その意図した機能を発揮するために、化合物を対象に導入または送達する任意の経路を含む。投与は、経口、鼻腔内、非経口的（静脈内、筋肉内、腹腔内、または皮下）、または局所的を含む、任意の適切な経路によって行なうことができる。投与は、自己投与および他人による投与を含む。
【００４６】
また、記載される医学的疾患および症状の治療または予防の様々なモデルは、「実質的」を意味することが意図されることも理解されるべきであり、それは、全てを含むが、全てよりも少ない治療または予防も含み、一部の生物学的または医学的に関連のある結果が達成される。
【００４７】
用語「別個の」投与は、異なる経路による同時または実質的に同時の少なくとも２つの有効成分の投与を指す。
【００４８】
用語「連続的な」投与は、異なる時の、少なくとも２つの有効成分の投与を指し、投与経路は同一または異なる。より具体的には、連続的な使用は、他方（単数または複数）の投与の開始前の、有効成分のうちの一方の全体的な投与を指す。したがって、他方の有効成分（単数または複数）の投与の前に、有効成分のうちの一方を、数分、数時間、または数日にわたって投与することが可能である。この場合は、同時の治療は存在しない。
【００４９】
用語「同時の」治療的使用は、少なくとも２つの有効成分を、同一経路によって、同時または実質的に同時に投与することを指す。
【００５０】
本明細書において用いられる用語「治療的」は、治療および／または予防を意味する。治療的効果は、病状の抑制、寛解、または根絶によって得られる。
【００５１】
用語「治療的に有効量」または「有効量」は、投与された場合に、所望の効果を引き起こすのに十分な、薬剤の量を指す。例えば、ＣＸＣＲ７受容体を過剰発現する有効量の改変された免疫細胞は、ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ壁が低減または排除されるようにＣＸＣＬ１２を結合および隔離するのに十分な量であり得る。別の例では、ＣＸＣＲ４受容体を欠く有効量の改変された免疫細胞は、ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ効果を回避して癌細胞または腫瘍を検出および破壊するのに十分な量であり得る。治療的に有効量の改変された免疫細胞は、治療される腫瘍およびその重症度、ならびに、治療される患者の年齢、体重などに応じて変化する。熟練した当業者は、これらおよび他の因子に応じて適切な用量を決定することができる。また、組成物は、１つまたは複数のさらなる治療的化合物と組み合わせて投与してもよい。本明細書に記載の方法では、治療的化合物は、疾患または障害の１つまたは複数の兆候または症候を有する対象に投与され得る。
【００５２】
細胞／細胞集団に関して、用語「死滅させる」は、その細胞／細胞集団の死を導く任意のタイプの操作を含むことを目的とする。
【００５３】
本明細書において用いられる「抗体」は、従来の方法論に従って調製される、ポリクローナル、モノクローナル、単鎖、キメラ、ヒト化およびヒト抗体を含む。
【００５４】
「サイトカイン」は、１つの細胞亜集団から放出されて、そして、例えば免疫応答の発生または制御において細胞間メディエーターとして作用する、非抗体、可溶性タンパク質の総称である。Ｈｕｍａｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ：Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｆｏｒ  Ｂａｓｉｃ＆Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ａｇｇｒａｗａｌ，ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．１９９１）を参照（全ての目的のために、その全体で参照により本明細書中に援用される）。
【００５５】
「ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２拮抗薬」は、ＣＸＣＲ４へのＣＸＣＬ１２の結合に拮抗する、または、ＣＸＣＬ１２のｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ効果をその他の方法で低減させる、化合物を指す。
【００５６】
「ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ活性」または「ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ効果」は、遊走能力を有する真核生物細胞を忌避する（または化学忌避する）薬剤の能力を意味する（すなわち、細胞は、忌避刺激から遠ざかることができる）。また、その用語は、腫瘍細胞などの細胞によって分泌されるケモカインの化学忌避効果も指す。通常、ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ効果は、細胞の周りの領域に存在し、そこでは、ケモカインの濃度は、ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ効果を与えるのに十分である。インターロイキン８およびＣＸＣＬ１２を含む一部のケモカインは、高濃度（例えば、約１００ｎＭよりも上）でｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ活性を発揮し得て、一方で、より低い濃度は、ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ効果を示さず、化学誘引物質にさえもなり得る。
【００５７】
用語「抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ効果」は、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤がケモカインのｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ効果を減衰または除去する効果を指す。
【００５８】
本明細書において用いられる「免疫細胞」は、抗原の特異的な認識に関与する造血系起源の細胞である。免疫細胞は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、例えば、樹状細胞またはマクロファージ、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞などを含む。
【００５９】
本明細書において用いられる用語「抗癌治療」は、化学療法および放射線療法ならびにワクチン療法を含む、伝統的な癌治療を指す。
【００６０】
本明細書において用いられる「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」は、抗原認識部分およびＴ細胞活性化ドメインからなる融合タンパク質を指す。Ｅｓｈｈａｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９０（２）：７２０−７２４。ＣＡＲは、Ｔ細胞シグナリングまたはＴ細胞活性化ドメインに結合された抗体の抗原結合ドメイン（例えば、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ））を含む、人工的に構築された複合型タンパク質またはポリペプチドである。ＣＡＲは、ＭＨＣに制約されない様式で、Ｔ細胞特異性および反応性を、選択された標的（すなわち、腫瘍細胞）の方へ向け直す能力を有し、モノクローナル抗体の抗原結合特性を利用する。ＭＨＣに制約されない抗原認識は、ＣＡＲを発現しているＴ細胞に、抗原プロセッシングとは独立に抗原を認識する能力を与え、したがって、腫瘍エスケープの主なメカニズムを迂回する。さらに、Ｔ細胞において発現される場合、ＣＡＲは、内因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）αおよびβ鎖と有利に二量体化しない。
【００６１】
本明細書において用いられる用語「ノックダウン」は、細胞におけるタンパク質の発現レベルの低減を指す。したがって、「ノックダウン」は、語句「タンパク質のレベルの低減」、「タンパク質の発現レベルの低減」、「タンパク質の細胞内発現レベルの低減」、またはこれらの語句の任意の変形と交換可能に用いられ得る
【００６２】
本明細書において用いられる用語「ノックアウト」は、優性の選択可能マーカーを必ずではないが好適には提供するＤＮＡの外来断片がネイティブ配列内に挿入されるように、または、ネイティブの染色体ＤＮＡの断片が除去されるように、インビトロで操作された、典型的にタンパク質コード領域内でのネイティブの染色体ＤＮＡの破壊を指す。タンパク質コード領域内でのノックアウト突然変異は、野生型タンパク質の発現を防止して、通常、タンパク質によって提供される機能の喪失をもたらす。変更は、挿入、欠失、フレームシフト突然変異、またはミスセンス突然変異であり得る。好ましくは、変更は、挿入または欠失であり、または、ストップコドンを作るフレームシフト突然変異である。
【００６３】
用語「発現する」および「発現」は、遺伝子またはＤＮＡ配列における情報が明らかになるのを可能にすること、または明らかになるようにさせること、例えば、対応する遺伝子またはＤＮＡ配列の転写および翻訳に関与する細胞の機能を活性化することによりタンパク質を産生することを意味する。ＤＮＡ配列は、細胞においてまたは細胞によって発現されて、タンパク質（ＣＡＲなど）のような「発現産物」を形成する。発現産物自体、例えば生じるタンパク質が、「発現される」と言われてもよい。発現産物は、細胞内、細胞外または分泌型として特徴付けられ得る。用語「細胞内」は、何かしらの細胞の内側であるものを指す。用語「細胞外」は、何かしらの細胞の外側であるもの、例えば、細胞表面上を意味する。物質は、細胞の上または内側のどこかから細胞の外側に有意な測定で現れるならば、細胞によって「分泌」される。
【００６４】
本明細書において用いられる用語「過剰発現」は、免疫細胞などの細胞における、遺伝子および／またはそのコードされるタンパク質の増大された発現を指す。タンパク質を「過剰発現する」改変された免疫細胞は、同一タイプの改変されていない免疫細胞と比較して、より高いレベルのタンパク質、例えば、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約２００％、約３００％、またはより多くのタンパク質の発現を有するものである。
【００６５】
用語「遺伝子改変」は、そのネイティブの状態から（例えば、挿入突然変異、欠失突然変異、核酸配列突然変異、または他の突然変異によって）変更された遺伝子、または、その天然の状態から（例えば、遺伝子のコードｍＲＮＡまたはタンパク質上でトランスに働く導入遺伝子の送達、例えば、阻害ＲＮＡの送達またはドミナントネガティブ導入遺伝子の送達によって）変更された遺伝子産物を含む細胞を指すことが意味される。
【００６６】
本明細書において、用語「挿入突然変異」は、ゲノムに組み込まれて、それによってゲノム内で突然変異を生じさせるように、ある位置から動物のゲノム内である別の位置への核酸の転座を指すために用いられる。また、挿入突然変異は、遺伝子トラップまたはカセット挿入を介した内因性または外因性ＤＮＡのノックアウトまたはノックインを含んでもよい。外因性ＤＮＡは、エレクトロポレーションまたは化学的形質転換を介して細胞にアクセスすることができる。外因性ＤＮＡが染色体ＤＮＡと相同性を有する場合は、それ自体を内因性ＤＮＡと並べる。外因性ＤＮＡは、それから、相同組み換えとして知られる２つの隣接する交差イベントを介して内因性ＤＮＡに挿入または破壊する。標的化ベクターは、挿入突然変異誘発のために相同組み換えを使用することができる。また、内因性または外因性ＤＮＡの挿入突然変異誘発は、ＤＮＡトランスポゾンを介して行なうこともできる。ＤＮＡトランスポゾンは、それ自体をさらなる外因性ＤＮＡとともにゲノムに挿入することのできる移動エレメントである。内因性または外因性ＤＮＡの挿入突然変異誘発は、レトロウイルスによって行われ得る。レトロウイルスは、感染された細胞の細胞質内の逆転写酵素によってＤＮＡに変換されるＲＮＡウイルスゲノムを有する。線状レトロウイルスＤＮＡは、核にトランスポートされて、インテグラーゼと呼ばれる酵素によって組み込まれる。内因性または外因性ＤＮＡの挿入突然変異誘発は、レトロトランスポゾンによってもすることができて、逆転写酵素によってＲＮＡ中間体が二本鎖ＤＮＡに翻訳されて、それ自体をゲノムに挿入する。
【００６７】
用語「トランスフェクション」は、外来核酸の細胞への導入を意味する。用語「形質転換」は、細胞が導入された遺伝子または配列を発現して遺伝子改変動物において所望の物質を生産するように、ＥＳ細胞または前核への「外来」（すなわち外的または細胞外）遺伝子、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列の導入を意味する。用語「感染」は、ウイルスまたはウイルスベクターを用いた外来核酸の導入を指す。
【００６８】
本明細書において、用語「ベクター」は、別の核酸分子の移行または輸送が可能な核酸分子を指すために用いられる。移行された核酸は、一般に、例えばベクター核酸分子に連結される。ベクターは、細胞において自律的複製に向かわせる配列を含んでよく、または、心細胞ＤＮＡへの統合を可能にするのに十分な配列を含んでよい。有用なベクターは、例えば、プラスミド（例えば、ＤＮＡプラスミドまたはＲＮＡプラスミド）、トランスポゾン、コスミド、細菌または酵母の人工染色体、およびウイルスベクターを含む。有用なウイルスベクターは、例えば、アデノウイルス、レトロウイルス、特に複製欠損レトロウイルス、およびレンチウイルスを含む。核酸を送達するための例示的な非ウイルスベクターは、ネイキッドＤＮＡ；単独またはカチオン性ポリマーと組み合わせて、カチオン性脂質と複合された、ＤＮＡ；アニオン性およびカチオン性リポソーム；異種ポリリジン、規定された長さのオリゴペプチド、およびポリエチレンイミンのような、カチオン性ポリマーで濃縮されたＤＮＡを含むＤＮＡ−タンパク質複合体および粒子、ある場合にはリポソーム内に含まれる；および、ウイルスおよびポリリジン−ＤＮＡを含む三元複合体の使用を含む。
【００６９】
本明細書において用いられる用語「ウイルスベクター」は、核酸分子の移行または細胞のゲノムへの統合を典型的に促進するウイルス由来の核酸エレメントを含む核酸分子、または、核酸移行を仲介するウイルス粒子のいずれかを指す。ウイルス粒子は、典型的に、核酸（単数または複数）に加えて、様々なウイルス構成要素および時には心細胞構成要素も含む。用語「ウイルスベクター」は、細胞へ核酸を移行することが可能なウイルスまたはウイルス粒子、または、移行された核酸自体のいずれかを指してもよい。ウイルスベクターおよび移行プラスミドは、主にウイルスから得られる構造的および／または機能的遺伝因子を含む。ウイルスベクターは、複合型ベクター、ＬＴＲ、または、レトロウイルス（例えば、レンチウイルス）配列および非レトロウイルスウイルス配列の両方を含む他の核酸であってよい。複合型ベクターは、逆転写、複製、統合および／またはパッケージングに関するレトロウイルス（例えば、レンチウイルス）配列を含む移行プラスミドまたはベクターを指してよい。
【００７０】
本明細書において用いられる用語「アデノウイルスベクター」は、そのゲノム内に挿入されたポリペプチドをコードする外因性ＤＮＡを含む任意のアデノウイルスベクターを指す。ベクターは、任意の欠損必須遺伝子がトランスで提供される場合、複製およびパッケージが可能でなければならない。アデノウイルスベクターは、望ましくは、ウイルスＤＮＡの複製をサポートするのに必要とされるそれぞれの末端リピートの少なくとも一部、好ましくは全ＩＴＲ配列の少なくとも約９０％、および、ゲノムをウイルスキャプシド内にキャプシド形成するのに必要とされるＤＮＡを含む。多くの適切なアデノウイルスベクターが、当該分野において記載されている。米国特許第６，４４０，９４４号；米国特許第６，０４０，１７４号を参照（複製欠損Ｅ１欠失ベクターおよび特殊化されたパッケージ細胞株）。一部の実施態様では、アデノウイルス発現ベクターは、正常細胞において複製欠損のものである。他の実施態様では、アデノウイルスベクターは、アデノ関連ウイルス（ＡＶＶ）ベクターを指す。一部の実施態様では、アデノウイルス発現ベクターは、標的化を高めるシュードタイプである。
【００７１】
用語「レトロウイルスベクター」は、本来レトロウイルスに由来する構造および機能性遺伝因子、またはそれらの部分を含む、ウイルスベクターまたはプラスミドを指す。
【００７２】
用語「レンチウイルスベクター」は、本来レンチウイルスに由来する構造および機能性遺伝因子、またはそれらの部分を含む、ウイルスベクターまたはプラスミドを指す。
【００７３】
用語「レンチウイルスベクター」または「レンチウイルス発現ベクター」は、レンチウイルスの移行プラスミドおよび／または感染性レンチウイルスの粒子を指すために用いられ得る。核酸配列エレメント、例えば、クローニング部位、プロモーター、調節エレメント、異種核酸などは、本発明のレンチウイルスの粒子においてＲＮＡ形態で存在し、本発明のＤＮＡプラスミドにおいてＤＮＡ形態で存在すると考えられる。
【００７４】
本明細書において用いられる用語「その等価物」は、参照のポリペプチドまたは核酸配列（すなわち、本発明の実施態様と一致するサイクリンタンパク質またはそのフラグメント）とは異なるが、本質的な特質（すなわち、生物学的活性）を保持する、ポリペプチドまたは核酸配列を指す。ポリヌクレオチドの典型的な変異体は、別の参照ポリヌクレオチドとはヌクレオチド配列が異なる。変異体のヌクレオチド配列の変化は、参照ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変更してよく、または変更しなくてよい。ヌクレオチドの変更は、参照配列によってコードされるポリペプチド内に、アミノ酸置換、欠失、付加、融合およびトランケーションをもたらし得る。一般に、参照ポリペプチドと変異体の配列が全体的にほぼ同様および多くの領域において同一であるように、違いは制限される。
【００７５】
免疫細胞
免疫細胞は、病原体および癌細胞を含む他の外来物質に対して体を防御する複雑なネットワークの一部である。免疫系の細胞は、とりわけ、Ｂ細胞、樹状細胞、顆粒球、先天性リンパ系細胞（ＩＬＣ）、巨核球、単球／マクロファージ、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、およびＴ細胞を含む。食細胞（例えば、マクロファージおよび細胞傷害性ＮＫ細胞）によって行なわれる先天性の免疫応答は、病原曝露に対する防御の第一線である。続いて、適応性の免疫応答は、抗原提示細胞（例えば、マクロファージおよび樹状細胞）によって編成される抗原特異的な防御メカニズムを含む。制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を含むＴ細胞（またはＴリンパ球）は、適応免疫のコアにあり、外来物質を探し出して破壊する。Ｔ細胞などの免疫細胞は、ケモカイン受容体（例えば、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７）に結合して方向上の手掛かりを提供するケモカイン（例えば、ＣＸＣＬ１２）によって提供される化学誘引勾配に応答して、外来物質に向かって移行する。一部の実施態様では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはそれらの組み合わせである。一部の好ましい実施態様では、免疫細胞は、Ｔ細胞である。
【００７６】
本開示の免疫細胞は、任意の由来から単離され得る。一部の実施態様では、免疫細胞の由来は、自家、同種異系、または異種移植（ｘｅｎｏｇｒａｐｈｉｃ）、またはそれらの組み合わせである。免疫細胞は、当技術分野で知られている方法に従って、癌性腫瘍または他の癌を有する患者の血液、骨髄または他の免疫細胞を含む臓器から、自家免疫細胞を抽出または他の方法で単離することによって、エクスビボで調製され得る。例えば、そのような方法は、制限されることを意図しないが、アフェレーシス技術、具体的には白血球アフェレーシスを含む。加えて、市販されるキットは、例えば、ＳＴＥＭＣＥＬＬ（商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，ブリティッシュコロンビア州、カナダから利用可能であるＥａｓｙＳｅｐ（商標）Ｈｕｍａｎ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔを用いて、Ｔ細胞の抽出のために使用され得る。
【００７７】
［ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞］
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、ヒトにおけるリンパ球のおよそ１０％を典型的に含む、リンパ球のクラスである。ＮＫ細胞は、腫瘍および感染した（標的）細胞に対して、先天性の細胞性免疫応答を与える。ＣＤ３−／ＣＤ５６＋表現型を有するものとして特徴付けられるＮＫ細胞は、様々な活性化および抑制性の細胞表面受容体を提示する。ＮＫ細胞抑制性受容体は、主に、正常細胞の表面上の主要組織適合複合体クラスＩ（「ＭＨＣ−Ｉ」）タンパク質とエンゲージして、ＮＫ細胞の活性化を防ぐ。ＭＨＣ−Ｉ分子は、特定の個体に「属する」ものとして細胞を定義する。腫瘍またはウイルスが感染した細胞の場合に多いような、これらの「自己」ＭＨＣ−Ｉ分子が欠失または欠損している細胞によってのみ、ＮＫ細胞は活性化され得ると考えられる。
【００７８】
ＮＫ細胞がトリガーされて、標的細胞上の対応するリガンドへの活性化ＮＫ細胞受容体の結合またはライゲーションの際に、標的細胞に対して直接的に細胞傷害性効果を与える。細胞傷害性効果は、ＮＫ細胞による様々なサイトカインの分泌によって仲介されて、次々に、他の免疫系薬剤を刺激および動員して、標的に対して作用する。また、活性化されたＮＫ細胞は、酵素パーフォリンおよびグランザイムの分泌、アポトーシスを開始する受容体の刺激、および他のメカニズムを介して、標的細胞を溶解させる。
【００７９】
ＮＫ細胞は、特定の癌の治療での免疫療法薬として評価されている。この目的のために用いられるＮＫ細胞は、自己由来または非自己由来（すなわち、ドナー由来）であってよい。
【００８０】
一実施態様では、本明細書における組成物および方法で用いられるＮＫ細胞は、自己由来ＮＫ細胞である。一実施態様では、本明細書における組成物および方法で用いられるＮＫ細胞は、非自己由来ＮＫ細胞である。
【００８１】
一実施態様では、本明細書における組成物および方法で用いられるＮＫ細胞は、遺伝子改変されたＮＫ細胞である。ＮＫ細胞は、野生型ＮＫ細胞によって発現されない１つまたは複数のタンパク質を細胞が発現するように、細胞内に遺伝子またはＲＮＡを挿入することによって遺伝子改変され得る。一実施態様では、ＮＫ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変される。好ましい実施態様では、ＣＡＲは、当該方法または組成物によって標的化される癌に特異的である。
【００８２】
改変されたＮＫ細胞の非限定的な例は、例えば、Ｇｌｉｅｎｋｅ，ｅｔ  ａｌ．２０１５，Ａｄｖａｎｔａｇｅｓ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ＣＡＲ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６，ａｒｔｉｃｌｅ  ２１；ＰＣＴ特許公開番号ＷＯ２０１３１５４７６０およびＷＯ２０１４０５５６６８に見ることができ；それぞれ、その全体で参照により本明細書中に援用される。
【００８３】
一部の実施態様では、ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞株である。ＮＫ細胞株は、制限されずに、ＮＫ−９２、ＮＫ−ＹＳ、ＫＨＹＧ−１、ＮＫＬ、ＮＫＧ、ＳＮＫ−６、およびＩＭＣ−１を含む。Ｋｌｉｎｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１６；７：９１を参照し、それは、その全体で参照により本明細書中に援用される。
【００８４】
本明細書において用いられる「ＮＫ−２９細胞」は、活性化されたナチュラルキラー細胞の表現型的および機能的な特性を有する、市販されるヒト細胞株である。それは、大量に拡大され得て腫瘍細胞の死滅化に効果的である、継続的に増殖する細胞株である（Ｇｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ８（４）：６５２−６５８（１９９４年４月）を参照）。ＮＫ−９２細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎなどから利用可能である。
【００８５】
本明細書において用いられる「ＮＫ−９２変異体」は、ＮＫ−９２細胞の変異体であり、その表面上にＣＤ１６のようなＦｃ受容体などの別の分子を発現するようにエクスビボで改変された（例えば、米国特許第８，３１３，９４３号を参照）、または、インターロイキン−２（ＩＬ−２）を発現するように改変された（例えば、米国特許第８，０３４，３３２号を参照）、ＮＫ−９２細胞を含む。
【００８６】
ＮＫ−９２細胞は、大量に拡大され得て腫瘍細胞を死滅化するのに効果的な、継続的に増殖する細胞株である（Ｇｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｖｏｌ．８（４）ＰＰ  ６５２−６５８（１９９４年４月）、および、Ｋｌｉｎｇｅｍａｎｎ  Ｈ−Ｇ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  ＮＫ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ．Ｉｎ  Ｌｏｔｚｅ  ＭＴ＆Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ＡＷ（ｅｄｓ）：Ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ−Ｂａｓｉｃ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（２０１０）：１６９−７５を参照）。ＮＫ−９２細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎなどから市販される。理論によって拘束されることを望まずに、腫瘍を有する患者の免疫系は、腫瘍を認識する、および／または、腫瘍を効果的に攻撃および除去する、その能力を喪失していると考えられる。腫瘍の増殖、進行および／または転移を阻害する能力を有する免疫細胞の投与によってそのような患者の免疫系を抑制することは、腫瘍に対する患者の免疫応答を改善して、患者の全生存を高めるはずである。実際に、難治性または再発性急性骨髄性白血病およびメルケル細胞癌腫、および血液学的悪性腫瘍のような、腫瘍の治療に関するＮＫ−９２細胞の有効性が、臨床試験で研究されている。
【００８７】
ＮＫ−９２細胞の例は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２４０７として利用可能である。遺伝子改変ＮＫ−９２細胞の例は、ＡＴＣＣから、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２４０８、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２４０９、ＰＴＡ−６６７０、ＰＴＡ−６９６７、ＰＴＡ−８８３７、およびＰＴＡ−８８３６として利用可能である。
【００８８】
［Ｔ細胞］
Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体を細胞表面に有するリンパ球である。Ｔ細胞は、特異的な病原体に対する体の免疫応答を仕立てることにより、細胞が仲介する免疫において中心的な役割を果たす。Ｔ細胞は、臨床試験において腫瘍を縮小または除去する見込みが示されている。一般に、そのようなＴ細胞は、改変されて、および／または、養子細胞移入（ＡＣＴ）を受ける。ＡＣＴおよびその変形は、当技術分野でよく知られている。例えば、米国特許第８，３８３，０９９号および第８，０３４，３３４号を参照し、それらの全体で参照により本明細書中に援用される。
【００８９】
米国特許出願公開番号２０１４／００６５０９６および２０１２／０３２１６６６（それらの全体で参照により本明細書中に援用される）は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞の癌治療に関する方法および組成物を記載する。Ｔ細胞は、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号；第６，５３４，０５５号；第６，９０５，６８０号；第６，６９２，９６４号；第５，８５８，３５８号；第６，８８７，４６６号；第６，９０５，６８１号；第７，１４４，５７５号；第７，０６７，３１８号；第７，１７２，８６９号；第７，２３２，５６６号；第７，１７５，８４３号；第５，８８３，２２３号；第６，９０５，８７４号；第６，７９７，５１４号；第６，８６７，０４１号；および米国特許出願公開番号２００６／０１２１００５に記載の方法を用いて一般に拡大および活性化することができ、それぞれ、その全体で参照により本明細書中に援用される。
【００９０】
一実施態様では、本明細書における組成物および方法で用いられるＴ細胞は、自己由来Ｔ細胞である（すなわち、患者から得られる）。一実施態様では、本明細書における組成物および方法で用いられるＴ細胞は、非自己由来（異種；例えばドナーまたは細胞株由来）Ｔ細胞である。一実施態様では、Ｔ細胞は、癌性／形質転換されたＴ細胞（単数または複数）またはＴ細胞（単数または複数）に由来する細胞株である。
【００９１】
好ましい実施態様では、本明細書に記載の方法および組成物で用いられるＴ細胞は、改変されたＴ細胞である。一実施態様では、Ｔ細胞は、Ｔ細胞の表面上にＣＡＲを発現するように改変される。好ましい実施態様では、ＣＡＲは、当該方法または組成物によって標的化される癌に特異的である。一実施態様では、Ｔ細胞は、細胞表面タンパク質またはサイトカインを発現するように改変される。例示的な、改変されたＴ細胞の非限定的な例は、米国特許第８，９０６，６８２号；ＰＣＴ特許公開番号ＷＯ２０１３１５４７６０およびＷＯ２０１４０５５６６８に記載されて；それぞれ、その全体で参照により本明細書中に援用される。
【００９２】
一実施態様では、Ｔ細胞は、Ｔ細胞株である。例示的なＴ細胞株は、米国特許第５，２７２，０８２号に記載のＴ−ＡＬＬ細胞株を含み、それは、その全体で参照により本明細書中に援用される。
【００９３】
改変
一態様では、本発明は、改変された免疫細胞の外側細胞表面上にＣＸＣＲ７受容体を過剰発現している、エクスビボの改変された免疫細胞に関する。別の態様では本発明は、改変された免疫細胞の外側細胞表面上にＣＸＣＲ４受容体を含まないまたは実質的に含まない、エクスビボの改変された免疫細胞に関する。さらに別の態様では、本発明は、ＣＸＣＲ７受容体を過剰発現するように改変されて、改変された免疫細胞の細胞外側表面上にＣＸＣＲ４受容体を有さないまたは実質的に有さないように改変された、エクスビボの改変された免疫細胞に関する。
【００９４】
本発明の一態様は、細胞の外側細胞表面上のＣＸＣＲ７受容体発現が増大するように、ＣＸＣＲ７遺伝子または遺伝子転写の直接的または間接的な過剰発現を含む、エクスビボの改変された免疫細胞に関する。
【００９５】
本発明の一態様は、細胞の外側細胞表面上のＣＸＣＲ４受容体の発現が低減または排除されるように、ＣＸＣＲ４遺伝子または遺伝子転写の直接的または間接的な抑制を含む、エクスビボの改変された免疫細胞に関する。直接的な抑制は、ＣＸＣＲ４遺伝子またはＣＸＣＲ４遺伝子転写自体を標的化する薬剤および方法を指す。例えば、ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドは、ＣＸＣＲ４遺伝子は正常なレベルで発現されるが転写およびタンパク質レベルは免疫細胞の外側表面上に発現されるＣＸＣＲ４受容体の数が低減されるように少なくされるように、ＣＸＣＲ４遺伝子転写を標的化する。直接的な抑制の別の例は、遺伝子発現が低減または排除されるように標的ＤＮＡ配列内で二本鎖切断をもたらすＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムである。間接的な抑制は、例えば、ＴＦ１４０１６のような化学的なＣＸＣＲ４阻害剤、または、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、ＩＦＮ−α、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、およびＧ−ＣＳＦのようなサイトカインによって行なわれ得る。Ｎａｇａｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ７１（４）：７１１−７１７。
【００９６】
本発明の一態様は、改変された免疫細胞のエクスビボの集団に関し、ここで、改変された免疫細胞の少なくとも一部は、免疫細胞の外側細胞表面上にＣＸＣＲ７を過剰発現する。本発明の別の態様は、改変された免疫細胞のエクスビボの集団に関し、ここで、改変された免疫細胞の少なくとも一部は、免疫細胞の外側細胞表面上にＣＸＣＲ４受容体を有さないまたは実質的に有さない。さらに別の態様は、改変された免疫細胞のエクスビボの集団に関し、ここで、改変された免疫細胞の少なくとも一部は、ＣＸＣＲ７受容体を過剰発現し、改変された免疫細胞の細胞外側表面上にＣＸＣＲ４受容体を有さないまたは実質的に有さない。
【００９７】
当技術分野で知られている任意の方法は、細胞外側細胞表面上にＣＸＣＲ７受容体を過剰発現している免疫細胞、細胞外側細胞表面上にＣＸＣＲ４受容体を有さないまたは実質的に有さない免疫細胞、または、ＣＸＣＲ７受容体を過剰発現、かつ、細胞外側表面上にＣＸＣＲ４受容体を有さないまたは実質的に有さない免疫細胞を提供するために、本開示の免疫細胞を遺伝学的に改変するために用いられ得ることが理解されるべきである。
【００９８】
一態様では、用語「ベクター」は、分裂しないおよび／またはゆっくり分裂する細胞を感染および形質導入して、標的細胞のゲノム（例えば、免疫細胞）に組み込む能力を保持する組み換えベクターを意図する。様々な態様において、ベクターは、野生型ウイルスまたはプラスミドに由来または基づく。さらなる態様では、ベクターは、野生型レンチウイルスに由来または基づく。そのような例は、制限されずに、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）およびネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）を含む。あるいは、ミューリン白血病ウイルス（ＭＬＶ）のような他のレトロウイルスが、ベクター主鎖のための基礎として用いられ得ると考えられる。本発明に係るウイルスベクターは、特定のウイルスの構成要素に制限される必要がないことが明らかである。ウイルスベクターは、２以上の異なるウイルス由来の構成要素を含んでよく、また、合成の構成要素を含んでもよい。一部の実施態様では、ベクターは、エピソームベクターである。ベクター構成要素は、標的細胞特異性のような所望の特性を得るように操られ得る。
【００９９】
本開示のベクターは、霊長類および非霊長類に由来し得る。霊長類レンチウイルスの例は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒト後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の原因物質、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）を含む。非霊長類レンチウイルスのグループは、原型「スローウイルス」ビスナ／マエディウイルス（ＶＭＶ）、ならびに、関連するヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、および、より最近に説明されるネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）およびウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）を含む。従来技術の組み換えレンチウイルスベクターは、当技術分野で知られていて、例えば、米国特許６，９２４，１２３；７，０５６，６９９；７，０７，９９３；７，４１９，８２９および７，４４２，５５１を参照し、参照により本明細書中に援用される。
【０１００】
一実施態様では、ベクターは、ウイルスベクターである。関連する実施態様では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベクター、エピソームベクター、およびアルファウイルスベクターからなる群より選択される。さらに、さらなる実施態様では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。
【０１０１】
非ウイルスベクターは、インビトロ、インビボまたはエクスビボのいずれかで標的細胞に送達することが可能な異種ポリヌクレオチドを含むプラスミドを含んでよい。異種ポリヌクレオチドは、目的の配列（例えば、ＣＸＣＲ７）を含んでよく、１つまたは複数の調節エレメントに動作可能に連結されてよく、目的の核酸配列（例えば、ＣＸＣＲ７）の転写を制御し得る。
【０１０２】
当技術分野で知られている任意の方法を用いて、細胞外側細胞表面上にＣＸＣＲ４受容体を有さないまたは実質的に有さない免疫細胞を提供するために、本開示の免疫細胞を遺伝学的に改変することができることが理解されるべきである。遺伝子ノックダウンは、細胞における遺伝子発現の一時的な低減を指す。遺伝子ノックダウンのための１つの一般に用いられる方法は、ＲＮＡｉ（例えば、短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）およびショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ））であり、典型的に遺伝子を完全にシャットオフしないが、転写およびタンパク質レベルを低減させる。Ｋｅｔｔｉｎｇ（２０１１）Ｄｅｖ．Ｃｅｌｌ  ２０（２）：１４８−１６１。これらのＲＮＡｉ方法を用いて、遺伝子機能は低減されるが除去されない。一方で、遺伝子編集（例えば、ＤＮＡが挿入、置換、またはゲノムから除去される遺伝子操作）を用いて、遺伝子機能が完全または実質的に除去されるように（「ノックアウト」）、遺伝子に標的化された永久的な変化をもたらすことができる。ノックアウトのために一般に用いられる方法は、限定されないが、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｏｒ−Ｌｉｋｅ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｎｕｃｌｅａｓｅ（ＴＡＬＥＮ）およびＣｌｕｓｔｅｒｅｄ，Ｒｅｇｕｌａｒｌｙ  Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  Ｒｅｐｅａｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ（ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ）タンパク質およびジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を含む。Ｂｏｇｄａｎｏｖｅ＆Ｖｏｙｔａｓ（２０１１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３３（６０５１）：１８４３−１８４６；Ｓｈａｌｅｍ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４３：８４−８７；および米国特許第８，６９７，３５９号．Ｕｒｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １１：６３６−６４６。
【０１０３】
ＲＮＡ干渉「ＲＮＡｉ」は、それらの「標的」核酸配列に対して配列特異的な相同性を有する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子によって仲介される。Ｃａｐｌｅｎ，Ｎ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９８：９７４２−９７４７。本発明の特定の実施態様では、ＲＮＡ依存性ＣＸＣＲ４サイレンシングのメディエーターは、２１〜２５個のヌクレオチド「小干渉」ＲＮＡデュプレックス（ｓｉＲＮＡ）である。ｓｉＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒとして知られるＲＮａｓｅ酵素によるｄｓＲＮＡの処理に由来する。Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．、（２００１）Ｎａｔｕｒｅ  ４０９：３６３−３６６。ｓｉＲＮＡデュプレックス産物は、ＲＩＳＣ（ＲＮＡ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  Ｃｏｍｐｌｅｘ）と呼ばれるマルチ−タンパク質ｓｉＲＮＡ複合体へ動員される。それから、ＲＩＳＣは、標的核酸（好適にはｍＲＮＡ）にガイドされると考えられて、そこで、ｓｉＲＮＡデュプレックスは、配列特異的な方法で相互作用して、触媒様式で切断を仲介する。Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｎａｔｕｒｅ  ４０９：３６３−３６６；Ｂｏｕｔｌａ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．１１：１７７６−１７８０（２００１）。本発明によって用いられ得る小干渉ＲＮＡは、当技術分野でよく知られていて通常の技術者に馴染みのある手順に従って合成されて用いられ得る。本発明の方法での使用のための小干渉ＲＮＡは、好適に、約０〜約５０ヌクレオチド（ｎｔ）を含む。非限定的な実施態様の例では、ｓｉＲＮＡは、約５〜約４０ｎｔ、約５〜約３０ｎｔ、約１０〜約３０ｎｔ、約１５〜約２５ｎｔ、または約２０〜２５ヌクレオチドを含んでよい。
【０１０４】
一部の実施態様では、免疫細胞上のＣＸＣＲ４受容体レベルを調整するための方法は、アプタマー−干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）分子を含み、ここで、前記分子は、ＣＸＣＲ４に標的化される。別の実施態様では、干渉ＲＮＡは、少なくとも１つの短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）；マイクロ干渉ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）；小分子ＲＮＡ（ｓｔＲＮＡ）；またはショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を含む。一部の実施態様では、ＲＮＡｉは、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡである。
【０１０５】
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、ＴＡＬＥＮ、および、標的ＤＮＡ部位に特異的に結合するように設計されたホーミングエンドヌクレアーゼを含む、改変されたヌクレアーゼもまた、ゲノム操作において有用である。例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）は、ヌクレアーゼドメインに融合された改変された部位特異的なジンクフィンガーを含むタンパク質である。そのようなＺＦＮおよびＴＡＬＥＮは、様々な異なる種におけるゲノム改変のために成功的に用いられている。例えば、米国特許公報２００３／０２３２４１０；２００５／０２０８４８９；２００５／００２６１５７；２００５／００６４４７４；２００６／０１８８９８７；２００６／００６３２３１；２０１１／０３０１０７３；２０１３／０１７７９８３；２０１３／０１７７９６０；および国際公報ＷＯ０７／０１４２７５を参照し、その開示は、全ての目的に関してそれらの全体で参照により援用される。これらの改変されたヌクレアーゼは、規定されたヌクレオチド配列において二本鎖切断（ＤＳＢ）を作ることができて、それは、標的化された遺伝子座における相同組み換えの頻度を１０００倍よりも多く増大させる。したがって、改変されたヌクレアーゼを用いて、相同組換え修復（ＨＤＲ）システムを活用することができ、細胞のゲノム中への標的化された導入遺伝子の組み込みを促進することができる。加えて、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）による部位特異的なＤＳＢの不正確な修復は、遺伝子の破壊をもたらす結果にもなり得る。免疫細胞が腫瘍細胞を検出および破壊するのを可能にするために、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ、ＴＡＬＥＮ、またはＺＦＮを用いてＣＸＣＲ７遺伝子を免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）に挿入して、ＣＸＣＬ１２によって誘導されるｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ壁に結合して分解するデコイとして少なくとも部分的に作用することができると考えられる。また、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ、ＴＡＬＥＮ、またはＺＦＮを用いて、内因性ＣＸＣＲ７を活性化することもできると考えられる。免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）において、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ、ＴＡＬＥＮ、または、ＺＦＮヌクレアーゼおよび／またはＣＸＣＲ４の標的化を用いて、ＣＸＣＬ１２を過剰発現している腫瘍によって作られるｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ壁を効果的に回避して、免疫細胞が腫瘍細胞に到達および死滅化させることを可能にして、それにより癌を治療することができることがさらに考えられる。
【０１０６】
一部の実施態様では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、１つまたは複数の遺伝子産物（例えば、ＣＸＣＲ７）をコードする免疫細胞ＤＮＡ分子中に導入するために用いられて、ここで、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、ＣＲＩＰＳＲ／Ｃａｓヌクレアーゼを含み、および、改変されたｃｒＲＮＡ／ｔｒａｃｒＲＮＡ（または単一ガイドＲＮＡ）が用いられる。米国特許第８，６９７，３５９号を参照。他の実施態様では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、ゲノム内のＣＸＣＲ４遺伝子内の関心領域内の標的部位に結合し、ここで、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、ＣＲＩＰＳＲ／Ｃａｓヌクレアーゼを含み、改変されたｃｒＲＮＡ／ｔｒａｃｒＲＮＡ（または単一ガイドＲＮＡ）が用いられる。米国特許文献２０１５／００５６７０５を参照。
【０１０７】
別の態様では、１つまたは複数のジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮｓ）、１つまたは複数のＴＡＬＥＮ、１つまたは複数のメガヌクレアーゼ、および／または、１つまたは複数のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓｅヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドのような、ヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドが提供される。ポリヌクレオチドは、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはそれらの組み合わせを含んでよい。特定の実施態様では、ポリヌクレオチドは、プラスミドを含む。他の実施態様では、ヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡを含む。
【０１０８】
一部の実施態様では、改変された免疫細胞は、外側細胞表面上に増加した量のＣＸＣＲ７を有し、例えば、免疫細胞は、改変されていない免疫細胞上のＣＸＣＲ７受容体の平均数と比較して、外側細胞表面上に、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、１００％以上、２００％以上、３００％以上（および１０％〜５００％の間の任意のサブ値またはサブ範囲）のＣＸＣＲ７を有する。
【０１０９】
一部の実施態様では、改変された免疫細胞は、外側細胞表面上にＣＸＣＲ４を有さない。他の実施態様では、改変された免疫細胞は、外側細胞表面上にＣＸＣＲ４を実質的に有さず、例えば、免疫細胞は、改変されていない免疫細胞上のＣＸＣＲ４受容体の平均数と比較して、外側細胞表面上に、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、または１％以下（および５０％〜１％の間の任意のサブ値またはサブ範囲）の量のＣＸＣＲ４受容体を有する。
【０１１０】
細胞または細胞集団によって発現される受容体の数または平均数は、当技術分野で知られている任意の方法によって決定され得る。非限定的な例として、これらは、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、ウェスタンブロッティング、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ、視覚的な分析（例えば、細胞染色）などを含む。
【０１１１】
遺伝子は、当業者に一般に知られる様々なメカニズムによって細胞に送達され得る。ウイルス構築物は、適切な宿主細胞におけるウイルスの生産を通して送達され得る。ウイルスはそれから、宿主細胞から採取されて、標的細胞と接触される。目的の遺伝子を発現することが可能なウイルスおよび非ウイルスベクターは、ＤＮＡ／リポソーム複合体、ミセルおよび標的化されたウイルスタンパク質−ＤＮＡ複合体を介して、標的細胞に送達され得る。標的化抗体またはそのフラグメントも含むリポソームが、本発明の方法において用いられ得る。細胞または細胞集団へのポリヌクレオチドの送達に加えて、細胞または細胞集団への本明細書に記載のタンパク質の直接的な導入は、タンパク質トランスフェクションの非限定的な技術によってなされ得て、あるいは、本発明のタンパク質の発現を高めるおよび／または活性を促進することのできる培養条件は、他の非限定的な技術である。
【０１１２】
本発明の遺伝子をコードするベクターを送達する他の方法は、限定されないが、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、プロトプラスト融合、またはリポソーム介在トランスフェクションを含む。本発明のベクターを用いてトランスフェクトされる宿主細胞は、（限定されないが）Ｅ．ｃｏｌｉまたは他の細菌、酵母、菌類、昆虫細胞（例えば、ＳＦ９昆虫細胞における発現のためにバキュロウイルスベクターを用いる）、またはマウス、ヒト、または他の動物（例えば、哺乳類）由来の細胞を含んでよい。クローン化されたＤＮＡによってコードされる、タンパク質、融合、ポリペプチドフラグメント、または突然変異体のインビトロ発現を用いてもよい。分子生物学の当業者は、多種多様の発現システムおよび精製システムを用いて組み換えタンパク質およびそのフラグメントが生産され得ることを理解するであろう。
【０１１３】
ＣＸＣＲ７
述べられたように、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、ＣＸＣＲ７の発現が増大するように改変され得る。ＣＸＣＲ７は、少なくとも部分的に「デコイ」受容体として作用すると考えられるＣＸＣＬ１２およびＣＸＣＬ１１に関するケモカイン受容体である。Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ．２４（１）：４１−４９。また、ＣＸＣＲ７は、異型ケモカイン受容体３（ＡＣＫ３）としても知られる。
【０１１４】
様々な種由来の、ＣＸＣＲ７に関するアミノ酸配列およびＣＸＣＲ７ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、当技術分野で知られている。例えば：（１）ＧｅｎＢａｎｋアクセッションナンバーＮＰ＿０６４７０７．１（ホモサピエンス３６２アミノ酸異型ケモカイン受容体３）；（２）ＧｅｎＢａｎｋアクセッションナンバーＮＰ＿００１２５８５３６．１（ハツカネズミ３６２アミノ酸異型ケモカイン受容体３）；（３）ＧｅｎＢａｎｋアクセッションナンバーＮＭ＿０２０３１１．２（ホモサピエンス異型ケモカイン受容体３（ＡＣＫＲ３）をコードするヌクレオチド配列）；（４）ＧｅｎＢａｎｋアクセッションナンバーＮＭ＿００７７２２．４（ハツカネズミ異型ケモカイン受容体３をコードするヌクレオチド配列、転写変異体２）を参照。
【０１１５】
一部の実施態様では、適切なＣＸＣＲ７核酸は、ＣＸＣＲ７ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、適切なヌクレオチド配列は、本明細書に開示される配列の少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％ヌクレオチド配列同一性（または、その間の任意のサブ値またはサブ範囲）を有するヌクレオチド配列を含む。
【０１１６】
一部の実施態様では、適切なＣＸＣＲ７ポリペプチドは、ＣＸＣＲ７ポリペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、ここで、適切なアミノ酸配列は、本明細書に開示される配列の少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％アミノ酸配列同一性（または、その間の任意のサブ値またはサブ範囲）を有するポリペプチド配列を含む。
【０１１７】
ＣＸＣＲ４
述べられたように、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、ＣＸＣＲ４の発現が低減され、または発現がないように、改変され得る。ＣＸＣＲ４は、ＣＸＣＬ１２に関するケモカイン受容体であり、ＣＸＣＲ４へのＣＸＣＬ１２の結合の際にとりわけ、化学走性、細胞生存および／または増殖に関与する細胞内シグナル伝達を誘導する。Ｔｅｉｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１６：２９２７−２９３１。
【０１１８】
様々な種由来の、ＣＸＣＲ４に関するアミノ酸配列およびＣＸＣＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、当技術分野で知られている。例えば：（１）ＧｅｎＢａｎｋアクセッションナンバーＣＡＡ１２１６６．１（ホモサピエンス３６０アミノ酸ＣＸＣＲ４）；（２）ＧｅｎＢａｎｋアクセッションナンバーＮＰ＿０３４０４１．２（ハツカネズミ３５９アミノ酸Ｃｘｃｒ４）；（３）ＧｅｎＢａｎｋアクセッションナンバーＮＭ＿００３４６７．２（ホモサピエンスケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）をコードするヌクレオチド配列、転写変異体２）；（４）ＧｅｎＢａｎｋアクセッションナンバーＮＭ＿００１００８５４０．１（ホモサピエンスケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）をコードするヌクレオチド配列、転写変異体１）；（５）ＧｅｎＢａｎｋアクセッションナンバーＮＭ＿００９９１１．３（ハツカネズミケモカイン受容体４（Ｃｘｃｒ４）をコードするヌクレオチド配列）を参照。ヒトＣＸＣＲ４の配列および構造は公知である；例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッションナンバーＮＭ  ００３４６７およびＮＭ  ００１００８５４０（ヌクレオチド配列に関して）およびＮＰ  ００３４５８を参照。ヒトＳＤＦ−１αのヌクレオチドおよびポリペプチド配列は、それぞれ、ＧｅｎＢａｎｋアクセッションナンバーＮＭ．ｓｕｂ．−−０００６０９およびＮＰ．ｓｕｂ．−−０００６００に示される。
【０１１９】
一部の実施態様では、適切なＣＸＣＲ４核酸は、ＣＸＣＲ４ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、適切なヌクレオチド配列は、本明細書に開示される配列の少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％ヌクレオチド配列同一性（または、その間の任意のサブ値またはサブ範囲）を有するヌクレオチド配列を含む。
【０１２０】
一部の実施態様では、適切なＣＸＣＲ４ポリペプチドは、ＣＸＣＲ４ポリペプチドをコードするアミノ配列を含み、ここで、適切なアミノ酸配列は、本明細書に開示される配列の少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％アミノ酸配列同一性（または、その間の任意のサブ値またはサブ範囲）を有するポリペプチド配列を含む。
【０１２１】
一部の実施態様では、改変された免疫細胞は、外側細胞表面上にＣＸＣＲ４を有さない。他の実施態様では、改変された免疫細胞は、外側細胞表面上にＣＸＣＲ４を実質的に有さず、例えば、免疫細胞は、改変されていない免疫細胞上のＣＸＣＲ４受容体の平均数と比較して、外側細胞表面上に、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、または１％以下（または、その間の任意のサブ値またはサブ範囲）の量のＣＸＣＲ４受容体を有する。
【０１２２】
ホーミング受容体
一部の実施態様では、免疫細胞は、免疫細胞の外側細胞表面上に腫瘍細胞ホーミング受容体を発現するように改変される。ホーミング受容体は、例えば、キメラ抗原受容体、Ｆｃ受容体、またはそれらの組み合わせであってよい。一部の実施態様では、ＣＡＲは、癌関連抗原を標的化する。他の実施態様では、免疫細胞の少なくとも一部は、ＣＸＣＲ４ではない内因性腫瘍細胞ホーミング受容体を発現する。
【０１２３】
本開示の一態様では、免疫細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように改変される。一部の実施態様では、免疫細胞は、ＣＡＲをコードする核酸を用いて形質転換されて、ここで、ＣＡＲは、免疫細胞の外側細胞表面上に発現される。一部の実施態様では、免疫細胞は、Ｔ細胞、例えば、活性化されたＴ細胞である。
【０１２４】
一部の実施態様では、免疫細胞は、細胞表面上にＣＸＣＲ４を発現しないまたは実質的に発現しないように改変される前に、腫瘍ホーミング受容体を発現するように改変される。
【０１２５】
一部の実施態様では、免疫細胞は、細胞表面上にＣＸＣＲ４を発現しないまたは実質的に発現しないように改変された後に、腫瘍ホーミング受容体を発現するように改変される。一部の実施態様では、免疫細胞は、細胞表面上にＣＸＣＲ４を発現しないまたは実質的に発現しない前に、同時または実質的に同時に、腫瘍ホーミング受容体を発現するように改変される。
【０１２６】
一部の実施態様では、免疫細胞は、ＣＡＲをコードする核酸を用いて形質転換されて、外側細胞表面上にＣＡＲを発現する。一部の実施態様では、免疫細胞は、Ｔ細胞、例えば、活性化されたＴ細胞である。
【０１２７】
現在または将来に当業者に公知である任意のＣＡＲは、本開示によって包含される。一実施態様では、ＣＡＲは、腫瘍特異的抗原に特異的である。腫瘍特異的抗原は、癌特異的抗原とも呼ばれ得る。一実施態様では、ＣＡＲは、腫瘍関連抗原に特異的である。腫瘍関連抗原は、癌関連抗原とも呼ばれ得る。腫瘍特異的抗原は、癌細胞に特有のタンパク質または他の分子であり、一方で、腫瘍関連抗原は、特定の腫瘍細胞と高い相関の抗原であり、典型的に、正常細胞と比較して腫瘍細胞上により高いレベルでみられる。腫瘍特異的抗原は、非限定的な例として、米国特許第８，３９９，６４５号、米国特許第７，０９８，００８号；ＷＯ１９９９／０２４５６６；ＷＯ２０００／０２０４６０；およびＷＯ２０１１／１６３４０１に記載されて、それぞれ、その全体で参照により本明細書中に援用される。加えて、一部の公知のＣＡＲの非限定的な例が、表２に提供される。一実施態様では、ＣＡＲは、α−葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＥＡ、ＥＧＰ−２、ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｒｂ−Ｂ２，３，４、ＦＢＰ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、ｋ軽鎖、ＬｅＹ、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソテリン、および、ＰＳＭＡからなる群から選択される腫瘍関連抗原を標的化する。
【０１２８】
一部の実施態様では、ＣＡＲは、卵巣癌、腎細胞癌、Ｂ細胞悪性腫瘍、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞悪性腫瘍、難治性小胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、無痛性Ｂ細胞リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ホジキンリンパ腫、頸部癌腫、乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌、神経芽細胞腫、メラノーマ、横紋筋肉腫、髄芽腫、腺癌、および、腫瘍血管新生からなる群より選択される特定の癌タイプと関連する抗原を認識する。
【０１２９】
【表１】
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【０１３０】
抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤
多くの腫瘍は、腫瘍細胞によって分泌されるケモカインに起因して、例えば免疫細胞に対してｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ効果を有する。腫瘍細胞によって分泌される高濃度のケモカインは、細胞に対してｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ（化学忌避）効果を有し得て、一方で、より低い濃度はそのような効果を有さず、化学誘引さえもたらす。例えば、Ｔ細胞は、濃度依存性およびＣＸＣＲ４受容体に仲介されるメカニズムによって、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ−１）により忌避される。本発明は、本明細書に記載の抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤が腫瘍のｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ効果を低減させて、それにより、免疫細胞および他の抗癌剤が腫瘍細胞により良好にアクセスして死滅化させるのを可能にするという驚くべき知見に基づいている。
【０１３１】
抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、米国特許出願公報２００８／０３００１６５に記載の抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤のような、当技術分野で知られている任意の薬剤であってよく、その全体で参照により本明細書中に援用される。
【０１３２】
抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、ケモカインおよび／またはケモカイン受容体の二量体化を特異的に阻害し、それにより、ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤に対する化学忌避応答をブロックする、任意の薬剤を含む。ＩＬ−８およびＣＸＣＬ１２を含む特定のケモカインは、多くのケモカインが二量体として存在する高濃度（例えば、１００ｎＭよりも上）で、化学忌避物質としての役割を果たすこともできる。ケモカインの二量体化は、細胞において示差的応答を誘発して、ケモカイン受容体の二量体化を引き起こし、その活性は、化学忌避物質シグナルとして解釈される。腫瘍によって分泌される高濃度のケモカインの化学忌避効果のブロックは、例えば、ケモカイン二量体形成またはケモカイン受容体二量体形成を阻害する抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤によって達成され得る。例えばリガンド結合または二量体化ドメインの妨害によって、例えばケモカイン受容体二量体化を標的化およびブロックする抗体は、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤であり得る。他の作用機構を介して作用する、例えば、細胞によって分泌されるｆｕｇｅｔａｃｔｉｃサイトカインの量を低減させる、二量体化を阻害する、および／または、標的受容体に対するケモカインの結合を阻害する、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤も、本発明に含まれる。所望の場合は、この効果は、単量体ケモカインの走化性作用を阻害せずに達成することができる。
【０１３３】
一部の実施態様では、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、さらに、米国特許出願公報２００８／０３００１６５に記載の抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤のような当技術分野で知られている任意の薬剤であってよく、その全体で参照により本明細書中に援用される。
【０１３４】
他の実施態様では、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、ＣＸＣＲ４拮抗薬、ＣＸＣＲ３拮抗薬、ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２拮抗薬または選択的なＰＫＣ阻害剤である。
【０１３５】
ＣＸＣＲ４拮抗薬は、制限されないが、ＡＭＤ３１００、ＫＲＨ−１６３６、Ｔ−２０、Ｔ−２２、Ｔ−１４０、ＴＥ−１４０１１、Ｔ−１４０１２、またはＴＮ１４００３、または、ＣＸＣＲ４の二量体化を妨げる抗体であってよい。さらなるＣＸＣＲ４拮抗薬は、例えば、米国特許公報番号２０１４／０２１９９５２およびＤｅｂｎａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ，２０１３；３（１）：４７−７５に記載されて、それぞれ、その全体で参照により本明細書中に援用されて、ＴＧ−００５４（ｂｕｒｉｘａｆｏｒ）、ＡＭＤ３４６５、ＮＩＢＲ１８１６、ＡＭＤ０７０、およびそれらの誘導体を含む。
【０１３６】
ＣＸＣＲ３拮抗薬は、制限されないが、ＴＡＫ−７７９、ＡＫ６０２、またはＳＣＨ−３５１１２５、または、ＣＸＣＲ３の二量体化を妨げる抗体であってよい。
【０１３７】
ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２拮抗薬は、制限されないが、タンニン酸、ＮＳＣ  ６５１０１６、または、ＣＸＣＲ４および／またはＣＸＣＬ１２の二量体化を妨げる抗体であってよい。
【０１３８】
選択的なＰＫＣ阻害剤は、制限されないが、サリドマイドまたはＧＦ  １０９２３０Ｘであってよい。
【０１３９】
好ましい実施態様では、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、ＡＭＤ３１００（プレリキサフォル）である。ＡＭＤ３１００は、米国特許第５，５８３，１３１号に記載され、その全体で参照により本明細書中に援用される。
【０１４０】
一実施態様では、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、ＡＭＤ３１００誘導体である。ＡＭＤ３１００誘導体は、限定されないが、米国特許第７，９３５，６９２号および第５，５８３，１３１号（ＵＳＲＥ４２１５２）に見られるものを含み、それぞれ、その全体で参照により本明細書中に援用される。
【０１４１】
一実施態様では、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、腫瘍の標的化を可能にする分子と連結される。一実施態様では、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、標的化されるべき腫瘍に特異的な抗体と連結（例えば結合）される。一実施態様では、腫瘍の標的化を可能にする分子に連結された抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、全身性に投与される。
【０１４２】
また、腫瘍によるＣＸＣＬ１２発現は、腫瘍増殖、血管新生、および転移も促進し得る。したがって、腫瘍増殖、血管新生、および転移を阻害するための方法が、本発明によって検討される。
【０１４３】
一実施態様では、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、薬剤の抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ活性を高めるさらなる化合物と組み合わせて投与される。一実施態様では、さらなる化合物は、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）である。一実施態様では、Ｇ−ＣＳＦは投与されない。
【０１４４】
抗癌剤
本発明の一態様では、改変された免疫細胞は、少なくとも１つのさらなる抗癌剤と組み合わせて投与される。一実施態様では、少なくとも１つのさらなる抗癌剤は、化学療法薬である。一実施態様では、少なくとも１つのさらなる抗癌剤は、放射線療法薬である。一実施態様では、少なくとも１つのさらなる抗癌剤は、免疫療法薬である。一実施態様では、少なくとも１つのさらなる抗癌剤は、上記の２以上の組み合わせである。
【０１４５】
［化学療法薬］
本発明の一態様では、改変された免疫細胞は、化学療法薬と組み合わせて投与される。化学療法薬は、１つまたは複数のタイプの癌に治療的効果を有する任意の薬剤であってよい。多くの化学療法薬が現在のところ当技術分野で知られている。化学療法薬のタイプは、非限定的な例として、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼ（ｔｏｔｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ）阻害剤、分裂阻害剤、コルチコステロイドなどを含む。
【０１４６】
化学療法薬の非限定的な例は、：ナイトロジェンマスタード、例えば、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、クロラムブシル、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標））、イホスファミド、およびメルファラン）；ニトロソウレア、例えば、ストレプトゾシン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、およびロムスチン；ブスルファンのようなスルホン酸アルキル；ダカルバジン（ＤＴＩＣ）およびテモゾロミド（テモダール（登録商標））のようなトリアジン類；チオテパおよびアルトレタミン（ヘキサメチルメラミン）のようなエチレンイミン類；シスプラチン、カルボプラチン、およびオキサリプラチン（ｏｘａｌａｐｌａｔｉｎ）のようなプラチナ薬；５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）；カペシタビン（ゼローダ（登録商標））；シタラビン（Ａｒａ−Ｃ（登録商標））；フロクスウリジン；フルダラビン；ゲムシタビン（ジェムザール（登録商標））；ヒドロキシ尿素；メトトレキサート；ペメトレキセド（アリムタ（登録商標））；アントラサイクリン、例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標））、エピルビシン、イダルビシン；アクチノマイシン−Ｄ；ブレオマイシン；マイトマイシン−Ｃ；ミトキサントロン；トポテカン；イリノテカン（ＣＰＴ−１１）；エトポシド（ＶＰ−１６）；テニポシド；ミトキサントロン；タキサン：パクリタキセル（タキソール（登録商標））およびドセタキセル（タキソテレ（登録商標））；エポチロン類：イキサベピロン（イグゼンプラ（登録商標））；ビンカアルカロイド：ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））、およびビノレルビン（ナベルビン（登録商標））；エストラムスチン（Ｅｍｃｙｔ（登録商標））；プレドニゾン；メチルプレドニソロン（ソルメドロール（登録商標））；デキサメタゾン（デカドロン（登録商標））；Ｌ−アスパラギナーゼ；ボルテゾミブ（ベルケイド（登録商標））を含む。さらなる化学療法薬は、例えば、米国特許出願公開番号２００８／０３００１６５に挙げられ、その全体で参照により本明細書中に援用される。
【０１４７】
化学療法薬に関する投与量および投与プロトコルは、当技術分野でよく知られている。熟練した臨床医は、投与される化学療法薬（単数または複数）、治療される癌のタイプ、癌のステージ、患者の年齢および状態、患者サイズ、腫瘍の位置などを含む因子に基づいて、使用すべき適切な投薬レジメンを容易に決定することができる。
【０１４８】
［放射線療法薬］
本発明の一態様では、改変された免疫細胞は、放射線療法薬と組み合わせて投与される。放射線療法薬は、１つまたは複数のタイプの癌に対して治療的効果を有する任意のそのような薬剤であってよい。多くの放射線療法薬が、現在のところ、当技術分野で知られている。放射線療法薬のタイプは、非限定的な例として、Ｘ線、γ線、および荷電粒子を含む。一実施態様では、放射線療法薬は、体の外側の機械によって届けられる（体外照射療法）。好ましい実施態様では、放射線療法薬は、腫瘍／癌細胞付近の体内に置かれ（近接照射療法）、または、全身性放射線療法である。
【０１４９】
体外照射療法は任意の手段によって施され得る。例えば、体外照射療法の非限定的タイプは、直線加速器によって施される放射線療法、三次元原体照射法（３Ｄ−ＣＲＴ）、強度変調放射線療法（ＩＭＲＴ）、画像誘導放射線療法（ＩＧＲＴ）、トモセラピー、定位放射線手術、光子療法、定位放射線療法、陽子線療法、および電子ビーム療法を含む。
【０１５０】
内部放射線療法（近接照射療法）は、任意の技術または薬剤によるものであってよい。例えば、内部放射線療法の非限定的タイプは、ラジウム−２２６（Ｒａ−２２６）、コバルト−６０（Ｃｏ−６０）、セシウム−１３７（Ｃｓ−１３７）、セシウム−１３１、イリジウム−１９２（Ｉｒ−１９２）、金−１９８（Ａｕ−１９８）、ヨウ素−１２５（Ｉ−１２５）、パラジウム−１０３、イットリウム−９０などのような、腫瘍内または近位に配置され得る任意の放射性薬剤を含む。そのような薬剤は、シード（ｓｅｅｄ）、ニードル、または任意の他の投与経路によって投与され得て、一時的または永久であってよい。
【０１５１】
全身性放射線療法は、任意の技術または薬剤によるものであってよい。例えば、全身性放射線療法の非限定的なタイプは、放射性ヨウ素、イブリツモマブチウキセタン（ゼヴァリン（登録商標））、トシツモマブおよびヨウ素Ｉ  １３１トシツモマブ（ベキサール（登録商標））、サマリウム−１５３−レキシドロナム（クアドラメット（登録商標））、ストロンチウム−８９クロライド（メタストロン（登録商標））、メタヨードベンジルグアニジン、ルテチウム−１７７、イットリウム−９０、ストロンチウム−８９などを含む。
【０１５２】
一実施態様では、放射線増感剤も患者に投与される。放射線増感剤は、癌細胞に対する放射線の損傷効果を増大させる。
【０１５３】
放射線療法薬に関する投与量および投与プロトコルは、当技術分野でよく知られている。熟練した臨床医は、投与される薬剤（単数または複数）、治療される癌のタイプ、癌のステージ、腫瘍の位置、患者の年齢および状態、患者サイズなどを含む因子に基づいて、使用すべき適切な投薬レジメンを容易に決定することができる。
【０１５４】
［免疫療法薬］
抗癌ワクチン
本発明の一態様では、改変された免疫細胞は、抗癌ワクチン（癌ワクチンとも呼ばれる）と組み合わせて投与される。抗癌ワクチンは、癌細胞を死滅させるための免疫反応を刺激することによって、既存の癌を治療または癌の進行を予防するワクチンである。好ましい実施態様では、抗癌ワクチンは、既存の癌を治療する。
【０１５５】
抗癌ワクチンは、１つまたは複数のタイプの癌に対して治療的効果を有する任意のワクチンであってよい。多くの抗癌ワクチンが、現在のところ当技術分野で知られている。そのようなワクチンは、制限されずに、ｄａｓｉｐｒｏｔｉｍｕｔ−Ｔ、シプリューセル−Ｔ、タリモジーン・ラハーパレプベック、ＨＳＰＰＣ−９６複合体（ビテスペン）、Ｌ−ＢＬＰ２５、ｇｐ１００メラノーマワクチン、および、患者に投与された場合に癌細胞に対して免疫応答を刺激する任意の他のワクチンを含む。
【０１５６】
抗体
また、免疫療法は、抗腫瘍抗体を用いた治療も指す。すなわち、特定のタイプの癌（例えば、標的癌細胞によって発現される細胞表面タンパク質）に特異的な抗体を、癌を有する患者に投与することができる。抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、抗体フラグメント、ヒト抗体、ヒト化抗体、または非ヒト抗体（例えばミューリン、ヤギ、霊長類など）であってよい。治療的抗体は、任意の腫瘍特異的または腫瘍関連抗原に特異的であってよい。例えば、Ｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２０１２，１２：１４を参照し、その全体で参照により本明細書中に援用される。
【０１５７】
一実施態様では、免疫療法薬は、抗癌抗体である。非限定的な例は、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））、セツキシマブ（アービタックス（登録商標））、パニツムマブ（ベクチビックス（登録商標））、イピリムマブ（ヤーボイ（登録商標））、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））、アレムツズマブ（キャンパス（登録商標））、オファツムマブ（アーゼラ（登録商標））、ゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ（登録商標））、ブレンツキシマブベドチン（アドセトリス（登録商標））、９０Ｙ−イブリツモマブチウキセタン（ゼヴァリン（登録商標））、および、１３１Ｉ−トシツモマブ（ベキサール（登録商標））を含む。
【０１５８】
さらなる非限定の抗体が、表１に提供される。
【０１５９】
【表２】
2019500055.tif 000006
【０１６０】
免疫チェックポイント阻害剤
一実施態様では、免疫療法薬は、チェックポイント阻害剤である。免疫チェックポイントタンパク質は、一部のタイプの免疫系細胞、例えば、Ｔ細胞、および、一部の癌細胞によって作られる。Ｔ細胞が癌細胞を死滅させるのを防ぐことができるこれらのタンパク質は、チェックポイント阻害剤によって標的化される。チェックポイント阻害剤は、癌細胞を死滅させるＴ細胞の能力を増大させる。Ｔ細胞または癌細胞上に見られるチェックポイントタンパク質の例は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１およびＣＴＬＡ−４／Ｂ７−１／Ｂ７−２を含む。
【０１６１】
一実施態様では、チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質、例えば、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、またはＣＴＬＡ−４に対する抗体である。チェックポイント阻害剤抗体は、制限されずに、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭｅｄＩ−４７３６、ランブロリズマブ、アレムツズマブ、アテゾリズマブ、イピリムマブ、ニボルマブ、オファツムマブ、ペンブロリズマブ、およびリツキシマブを含む。
【０１６２】
サイトカイン
一実施態様では、免疫療法薬はサイトカインである。サイトカインは、患者の免疫応答を刺激する。サイトカインは、インターフェロンおよびインターロイキンを含む。一実施態様では、サイトカインはインターロイキン−２である。一実施態様では、サイトカインはインターフェロン−αである。
【０１６３】
癌
本明細書に記載の細胞、組成物および方法によって治療され得る癌または腫瘍は、限定されないが：胆管癌；グリア芽腫および髄芽腫を含む脳腫瘍；乳癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸癌；子宮内膜癌；食道癌、胃癌；急性リンパ性および骨髄性白血病を含む血液腫瘍；多発性骨髄腫；ＡＩＤＳ関連の白血病および成人Ｔ細胞白血病リンパ腫；ボーエン病およびパジェット病を含む上皮内腫瘍；肝癌（肝細胞癌）；肺癌；ホジキン病およびリンパ性リンパ腫を含むリンパ腫；神経芽細胞腫；扁平上皮細胞癌腫を含む口腔癌；上皮細胞、間質細胞、生殖細胞および間葉系細胞から生じるものを含む卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；直腸癌；平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫および骨肉腫を含む肉腫；メラノーマ、カポシ肉腫、基底細胞癌および扁平上皮細胞癌を含む皮膚癌；胚腫瘍（セミノーマ、非セミノーマ［テラトーマ、絨毛癌］）、間質腫瘍および胚細胞腫瘍を含む精巣癌；甲状腺癌および髄様癌を含む甲状腺癌；および、腺癌およびウィルムス腫瘍を含む腎癌を含む。重要な実施態様では、免疫認識を回避する癌または腫瘍は、グリオーマ、結腸癌腫、結腸直腸癌、リンパ系細胞由来の白血病、絨毛癌、およびメラノーマを含む。一実施態様では、癌は、乳癌、好ましくは炎症性乳癌である。
【０１６４】
好ましい実施態様では、腫瘍は固形腫瘍である。一実施態様では、腫瘍は白血病である。特に好ましい実施態様では、腫瘍は、ＣＸＣＬ１２を過剰発現する。一実施態様では、腫瘍のＣＸＣＬ１２の発現は、本明細書に記載の組成物の投与の前に評価され得る。例えば、ＣＸＣＬ１２を発現または過剰発現することが判定された腫瘍を有する患者は、本明細書に記載の方法および／または組成物を用いて治療される。
【０１６５】
一実施態様では、腫瘍は脳腫瘍である。手術不可能な脳腫瘍のような脳腫瘍は、本明細書に記載の組成物によって注入され得ることが検討される。一実施態様では、改変された免疫細胞は、脳腫瘍内または近位の血管中へのカテーテルを介して、脳腫瘍に直接投与される。カテーテルまたはマイクロカテーテル投与のさらなる議論を以下に説明する。
【０１６６】
一実施態様では、癌は炎症性乳癌である。炎症性乳癌は、珍しくて非常に侵襲性の疾患であり、癌細胞は、乳房の皮膚内のリンパ管をブロックする。このタイプの乳癌は、乳房がしばしば腫れ上がって赤く、または炎症を起こしているように見えるので、「炎症性」と呼ばれる。炎症性乳癌は稀であり、米国において診断される全ての乳癌の１〜５％を占める。ほとんどの炎症性乳癌は、侵襲性の腺管癌腫であり、それらが乳房の乳管に並ぶ細胞から発展して、それから、管を超えて広がることを意味する。炎症性乳癌は、しばしば数週間または数ヶ月のうちに、急速に進行する。診断においては、炎症性乳癌は、癌細胞がリンパ節付近にのみ広がっているか、または他の組織にも広がっているかどうか応じて、ステージＩＩＩまたはＩＶ疾患のいずれかである。炎症性乳癌は、一般に、腫瘍が縮むのを助けるための全身的な化学療法によって最初に治療されて、それから、腫瘍を除去するための外科的処置により治療されて、放射線療法が続けられる。治療に対するこのアプローチは、マルチモデルアプローチと呼ばれる。研究は、マルチモデルアプローチによって治療されている炎症性乳癌を有する女性は、治療に対するより良好な応答およびより長い生存を有することを見いだした。炎症性乳癌は通常、迅速に進行して、体の他の部分に積極的に広がるので、この疾患と診断された女性は、一般に、他のタイプの乳癌と診断された女性ほど長くは生存しない。ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｔｙｐｅｓ／ｂｒｅａｓｔ／ｉｂｃ−ｆａｃｔ−ｓｈｅｅｔを参照。
【０１６７】
投与量および投与
本明細書に記載の組成物は、有効量で投与される。有効量は、投与モード、治療される特定の状態および所望の成果に依存する。それはまた、本明細書に述べられるように、状態のステージ、対象の年齢および健康状態、もしあるならば同時的な治療の性質、および、医師によく知られた同様の因子にも依存する。治療的適用については、医学的に望ましい結果を達成するのに十分な量である。
【０１６８】
抗癌剤は、任意の適切な方法によって投与され得る。化学療法薬、放射線療法薬、および抗癌ワクチンを含む抗癌剤に関する、用量、治療プロトコル、および、投与経路は、当技術分野で知られていて、および／または、治療のタイプ、癌のタイプなどに基づいて熟練した臨床医が決定する能力内である。
【０１６９】
本発明の一態様では、改変された免疫細胞は、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤の投与の期間後に投与される。一実施態様では、改変された免疫細胞は、癌細胞／腫瘍のｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ効果が抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤によって弱められる期間、投与される。改変された免疫細胞の投与モードおよび時間の長さは、免疫細胞、治療される腫瘍のタイプ、患者の状態などに応じて変化する。そのようなパラメーターの決定は、熟練した臨床医の能力内である。
【０１７０】
様々な投与経路が利用可能である。本発明の方法は、一般的に言えば、医学的に許容できる任意の投与モードを用いて実施され得て、臨床上受け入れ難い副作用を引き起こさずに効果的なレベルの活性化合物を生産する任意のモードを意味する。
【０１７１】
投与モードは、経口、直腸、局所、経鼻、皮内、または非経口の経路を含む。用語「非経口」は、皮下、静脈内、筋肉内、またはインフュージョンを含む。静脈内または筋肉内経路は、長期の治療および予防には、特に適切でない。しかしながらそれらは、緊急の状況では好ましくあり得る。
【０１７２】
投与される場合、本発明の医薬品は、薬学的に許容できる量および薬学的に許容できる組成物で適用される。そのような製剤は、日常的に、塩、緩衝剤、防腐剤、適合する担体、および任意選択で他の治療的薬剤を含んでよい。医薬品で用いられる場合、塩は薬学的に許容されるべきであるが、薬学的に許容できない塩が、その薬学的に許容できる塩を調製するために好適に用いられ得て、本発明の範囲から除外されない。そのような薬理学的および薬学的に許容できる塩は、限定されないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸などから調製されるものを含む。また、薬学的に許容できる塩は、ナトリウム、カリウムまたはカルシウム塩のような、アルカリ金属またはアルカリ土類塩として調製され得る。
【０１７３】
治療方法
一態様では、高レベルのＣＸＣＬ１２を発現する腫瘍を有する患者を治療するための方法が提供されて、ここで、前記患者は、外側細胞表面上にＣＸＣＲ７受容体を過剰発現している有効量の改変された免疫が投与される。本発明の別の態様では、高レベルのＣＸＣＬ１２を発現する腫瘍を有する患者を治療するための方法が提供されて、ここで、前記患者は、外側細胞表面上にＣＸＣＲ４受容体を有さないまたは実質的に有さない有効量の改変された免疫が投与される。本発明のさらに別の態様では、方法が提供されて、本発明は、ＣＸＣＲ７受容体を過剰発現するように改変されて、改変された免疫細胞の細胞外側表面上にＣＸＣＲ４受容体を有さないまたは実質的に有さないように改変された、エクスビボの改変された免疫細胞に関する。一実施態様では、改変された免疫細胞は、少なくとも１つのさらなる抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤と組み合わせて投与される。
【０１７４】
一態様では、本発明は、患者に送達された場合に、腫瘍細胞のｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ活性を回避することに関する。理論によって拘束されずに、本明細書に記載の改変された免疫細胞は、免疫細胞が腫瘍細胞を検出および破壊するのを可能にするために、ＣＸＣＬ１２によって誘導されるｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ壁に結合して分解するデコイとして作用し得ると考えられる。加えて、理論によって拘束されずに、本明細書に記載の改変された免疫細胞は、周辺の腫瘍微小環境内に高レベルのＣＸＣＬ１２によって作られたｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ壁をバイパスして、腫瘍細胞に到達および死滅化させて、腫瘍細胞を死滅化させることができると考えられる。
【０１７５】
一実施態様では、改変された免疫細胞および抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、連続して投与される。別の実施態様では、改変された免疫細胞および抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、同時に投与される。一実施態様では、改変された免疫細胞は、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤の投与の期間後に投与される。一実施態様では、改変された免疫細胞は、ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ効果が弱められる期間中に投与される。
【０１７６】
一実施態様では、ケモカインは、ＣＸＣＬ１２である。一実施態様では、癌細胞は、固形腫瘍細胞である。一実施態様では、癌細胞は、白血病細胞である。一実施態様では、改変された免疫細胞は、患者への抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤の投与の約３日以内に患者に投与される。一実施態様では、改変された免疫細胞は、患者への抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤の投与の約１日以内に投与される。
【０１７７】
一態様では、本発明は、腫瘍が、ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ効果を生じるのに十分な濃度でＣＸＣＬ１２を発現する哺乳類における、固形腫瘍を治療するための方法に関し、当該方法は、前記哺乳類に、有効量の改変された免疫細胞を、前記ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ効果を回避するように、十分な期間、投与するステップを含む。一実施態様では、癌細胞は、固形腫瘍細胞である。一実施態様では、癌細胞は、白血病細胞である。一実施態様では、改変された免疫細胞は、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤の投与の完了の約３日以内に投与される。一実施態様では、改変された免疫細胞は、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤の投与の完了の約１日以内に投与される。
【０１７８】
一実施態様では、免疫細胞は、患者に全身性に投与される。別の実施態様では、免疫細胞は、腫瘍に直接的にまたは腫瘍に局所的に投与されて、それは、制限されずに、腫瘍微小環境中を含む。
【０１７９】
一実施態様では、免疫細胞は、カテーテル、マイクロカテーテルを用いて投与されて、または、腫瘍内またはその近位に注入または移植される。
【０１８０】
本発明の改変された免疫細胞は、絶対数の細胞によって患者に投与され得て、例えば、患者は、注入あたり、約１０３細胞〜約１０９細胞、例えば、約１０３細胞〜約１０４細胞、約１０４細胞〜約１０５細胞、約１０５細胞〜約１０６細胞、約１０６細胞〜約１０７細胞、約１０７細胞〜約１０８細胞、または、約１０８細胞〜約１０９細胞、または、エンドポイントを含んでその間の任意の範囲が投与され得る。
【０１８１】
他の実施態様では、患者に投与される改変された免疫細胞の量は、体重のｋｇによって計算され得る。一般に、そのような量は、注入あたり、少なくとも１×１０３の改変された免疫細胞／体重のｋｇであり、最も一般的には、１×１０９の改変された免疫細胞／ｋｇを超える必要はなく、例えば、１×１０３細胞／ｋｇ、１×１０４細胞／ｋｇ、１×１０５細胞／ｋｇ、１×１０６細胞／ｋｇ、１×１０７細胞／ｋｇ、１×１０８細胞／ｋｇ、１×１０９細胞／ｋｇ、または、エンドポイントを含んでその間の任意の範囲である。
【０１８２】
改変された免疫細胞は、癌を有するまたは有する疑いがある患者に、治療中に、１回投与され得て、または、複数回、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２または２３時間ごとに１回、または、１、２、３、４、５、６または７日ごとに１回、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれよりも多い週ごとに１回、または、エンドポイントを含んで任意の２つの数の間の任意の範囲で投与され得る。一部の実施態様では、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤は、改変された免疫細胞の投与の少なくとも１日前に送達される。
【０１８３】
パーツのキット
本発明は、さらに、改変された免疫細胞および任意選択で抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤および／または抗癌剤を含む、パーツのキットに関する。一実施態様では、パーツのキットは、改変された免疫細胞を含む第一のコンテナー、および、抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤および抗癌剤を含むさらなるコンテナー（単数または複数）を備える。一実施態様では、パーツのキットは、改変された免疫細胞を含むプレフィルドシリンジの第一のセットおよび任意選択で注入可能な形態の抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤および／または抗癌剤を含むプレフィルドシリンジのさらなるセットを備える。一実施態様では、パーツのキットは、改変された免疫細胞および任意選択で抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ剤および／または抗癌剤の投薬および／または投与のための可読媒体での説明書をさらに含む。
【０１８４】
本明細書において用いられる用語「可読媒体」は、例えばヒトまたは機械によって読み取ることのできるデータの表示を指す。ヒト可読形式の非限定的な例は、パンフレット、インサート、または他の書面形式を含む。機械可読形式の非限定的な例は、機械（例えば、コンピューター、タブレット、および／またはスマートフォン）によって可読な形式で情報を提供する（すなわち、保管および／または伝送する）任意のメカニズムを含む。例えば、機械可読媒体は、読み出し専用メモリ（ＲＯＭ）；ランダムアクセスメモリ（ＲＡＭ）；磁気ディスク記憶媒体；光記憶媒体；およびフラッシュメモリ装置を含む。一実施態様では、機械可読媒体はＣＤ−ＲＯＭである。一実施態様では、機械可読媒体はＵＳＢドライブである。一実施態様では、機械可読媒体はクイックレスポンスコード（ＱＲコード）または他のマトリックスバーコードである。
【実施例】
【０１８５】
以下の実施例は、説明目的のためのみであり、特許請求の範囲に記載された発明の限定として解釈されるべきでない。当業者が利用できる様々な代替の技術および手順が存在し、意図された発明をうまく実施するのを同様に可能にする。
【０１８６】
実施例１：
キメラ受容体遺伝子を、検討される腫瘍およびその関係がある抗原に基づいて設計して作る。標的腫瘍関連抗原を、ｆＵＳＥ５ベクターファージＤＮＡ内に単鎖Ｆｃ（「ｓｃＦｖ」）分子としてクローニングする。抗体特異的結合ファージ（例えばＧＤ２−結合ファージ）を用いた免疫スクリーニングの後に、選択されたｓｃＦｖクローンを、ｐＲＳＶ−γ内にライゲーションして、キメラγ鎖受容体をアセンブルする。ヒトζ鎖の膜貫通および細胞質部分を、ｐＧＥＭ３ｚζから増幅する。ＳＦＧレトロウイルスベクターを用いて、そのＢａｍＨＩおよびＮｃｏＩ部位へのサブクローニングによって、全てのキメラ遺伝子を一緒に構築する。
【０１８７】
Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｅｃｏ細胞株（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ＳＤ３４４４）を、ＣＡＲ遺伝子を有する組み換えレトロウイルスの生産のために、構築されたレトロウイルスベクターを用いて一時的にトランスフェクトする。集めた新鮮なレトロウイルス上清をアプライして、自己不活性化レトロウイルスベクターの臨床適用の生成のために、ＰＧ１３細胞（テナガザル白血病ウイルスシュードタイピングパッケージング細胞株；Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ＣＲＬ−１０６８６）に感染させる。
【０１８８】
製造業者のプロトコルに従ってＥＡＳＹＳＥＰ（商標）Ｍｏｕｓｅ  Ｔ  ＣｅｌｌｓＩｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ（商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、Ｔ細胞を単離する。単離されたＴ細胞をインビトロで培養して、活性化および拡大する。活性化されたＴ細胞を、自己不活性化レトロウイルスベクターの臨床適用によってトランスフェクトする。
【０１８９】
ｓｉＲＮＡ配列を、ＣＸＣＲ４配列に基づいてｓｈＲＮＡとして設計する。それから、ｓｈＲＮＡの配列を、ｓｈＲＮＡの挿入のための多数のクローニング部位を含むＨＩＶ由来レンチウイルスベクターをコードするプラスミドｐＧＣＬ−ＧＦＰにクローニングする。公知の技術を用いてウイルスを増幅する。調製された組み換えレンチウイルスベクターによってＴ細胞を感染させる。
【０１９０】
皮下注射を介して腫瘍細胞をマウスに注入して、高レベルのＣＸＣＬ１２を発現する腫瘍を形成する。腫瘍が形成された時点で、マウスに（腫瘍と同じ脇腹に皮下で）、ＡＭＤ３１００またはビヒクルを、５日間、１日１回注入する。
【０１９１】
ＡＭＤ３１００の最終投薬の１〜３日後に、ＣＡＲを発現してそれらの細胞表面上に低減したＣＸＣＲ４受容体を有するように改変された５×１０６Ｔ細胞（ＣＸＣＲ４ｌｏｗＴ細胞）または改変されていないＴ細胞を用いて、腫瘍増殖のアッセイの１８時間前に、静脈内注入を介してマウスに注入する。マウスでの腫瘍増殖は、ＣＸＣＲ４ｌｏｗＴ細胞で処置されたマウスでは遅れるが、改変されていないＴ細胞で処置されたマウスでは継続する。ＣＸＣＲ４ｌｏｗＴ細胞による処置の前にＡＭＤ３１００によって処置することは、共処置が、ＣＸＣＲ４ｌｏｗＴ細胞単独よりも長い腫瘍増殖の遅延をもたらすように、相乗効果を有すると考えられる。
【０１９２】
実施例２：
製造業者のプロトコルに従ってＥＡＳＹＳＥＰ（商標）Ｍｏｕｓｅ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ（商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、Ｔ細胞を単離する。アデノウイルスを、ＣＸＣＲ７のコード領域を含むように構築する。単離されたＴ細胞を感染するために、２５の多様性のアデノウイルスの感染（ＭＯＩ）を２４時間インキュベートして、それから、培地を新鮮な培地で置き換えた。
【０１９３】
高レベルのＣＸＣＬ１２を発現する腫瘍から、腫瘍細胞（皮下注入）をマウスに注入する。腫瘍が形成された時点で、マウスに（腫瘍と同じ脇腹に皮下で）、ＡＭＤ３１００またはビヒクルを、５日間、１日１回注入する。
【０１９４】
ＡＭＤ３１００の最終投薬の１〜３日後に、５×１０６  ＣＸＣＲ７改変Ｔ細胞（それらの細胞表面上にＣＸＣＲ７を過剰発現している）または改変されていないＴ細胞を用いて、腫瘍増殖のアッセイの１８時間前に、静脈内注入を介してマウスに注入する。マウスでの腫瘍増殖は、ＣＸＣＲ７改変Ｔ細胞で処置されたマウスでは遅れるが、改変されていないＴ細胞で処置されたマウスでは継続する。ＣＸＣＲ７改変Ｔ細胞による処置の前にＡＭＤ３１００によって処置することは、共処置が、ＣＸＣＲ７改変Ｔ細胞単独よりも長い腫瘍増殖の遅延をもたらすように、相乗効果を有すると考えられる。
【０１９５】
実施例３：
製造業者のプロトコルに従ってＥＡＳＹＳＥＰ（商標）Ｍｏｕｓｅ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ（商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてＴ細胞を単離して、２つのサンプルに分けた。単離されたＴ細胞の１つ目のサンプルを感染するために、ＣＸＣＲ７のコード領域を含むように構築された２５の多様性のアデノウイルスの感染（ＭＯＩ）を２４時間インキュベートして、それから、培地を新鮮な培地で置き換えた。単離されたＴ細胞の２つ目のサンプルは、ｓｈＣＸＣＲ４ノックダウンレンチウイルスベクターでトランスフェクトする。それから、１つ目および２つ目のサンプルを組み合わせて、２．５×１０６  ＣＸＣＲ７改変Ｔ細胞（細胞表面上にＣＸＣＲ７を過剰発現している）および２．５×１０６  ＣＸＣＲ４ｌｏｗ改変Ｔ細胞（細胞表面上のＣＸＣＲ４が低減される）を含む組成にする。
【０１９６】
高レベルのＣＸＣＬ１２を発現する腫瘍から、腫瘍細胞（皮下注入）をマウスに注入する。腫瘍が形成された時点で、マウスに（腫瘍と同じ脇腹に皮下で）、ＡＭＤ３１００またはビヒクルを、５日間、１日１回注入する。
【０１９７】
ＡＭＤ３１００の最終投薬の１〜３日後に、半分のＣＸＣＲ７改変Ｔ細胞および半分のＣＸＣＲ４ｌｏｗ改変Ｔ細胞または改変されていないＴ細胞を含む上述の５×１０６Ｔ細胞組成物を用いて、腫瘍増殖のアッセイの１８時間前に、静脈内注入を介してマウスに注入する。マウスでの腫瘍増殖は、改変Ｔ細胞組成物で処置されたマウスでは遅れるが、改変されていないＴ細胞で処置されたマウスでは継続する。ＣＸＣＲ７改変Ｔ細胞およびＣＸＣＲ４ｌｏｗ改変Ｔ細胞による処置の前にＡＭＤ３１００によって処置することは、共処置が、ＣＸＣＲ７改変Ｔ細胞単独またはＣＸＣＲ４ｌｏｗ改変Ｔ細胞よりも長い腫瘍増殖の遅延をもたらすように、相乗効果を有すると考えられる。
【０１９８】
本明細書において引用される全ての参考文献は、それらの全体で参照により本明細書中に援用される。
【国際調査報告】
2019500055.tif 000007
2019500055.tif 000008