(57)【要約】  前立腺癌の治療を要する被験者にニラパリブを投与することによる前立腺癌の治療方法を開示する。
2019522032.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
前立腺癌の治療を要するヒトの前立腺癌を治療する方法であって、前記ヒトに安全かつ有効量のニラパリブを投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記前立腺癌が、去勢抵抗性前立腺癌又は転移性去勢抵抗性前立腺癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記前立腺癌が抗アンドロゲン抵抗性である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ヒトが、ＢＲＣＡ−１、ＢＲＣＡ−２、ＦＡＮＣＡ、ＰＡＬＢ２、ＣＨＥＫ２、ＢＲＩＰ１、ＨＤＡＣ２、及びＡＴＭからなる群から選択される少なくとも１つのＤＮＡ修復異常を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＤＮＡ修復異常が、ＢＲＣＡ−１又はＢＲＣＡ−２である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記前立腺癌が、去勢抵抗性前立腺癌である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記前立腺癌が、転移性去勢抵抗性前立腺癌である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
ニラパリブが、約３０ｍｇ／日〜約４００ｍｇ／日の量で投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記投与されるニラパリブの量が、約３００ｍｇ／日である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ニラパリブが、３つの１００ｍｇの経口剤形での１日１回の経口投与として投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ヒトの去勢抵抗性前立腺癌及び抗アンドロゲン抵抗性前立腺癌を治療する方法であって、前記ヒトに３つの１００ｍｇの経口剤形のニラパリブを１日１回投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
該当なし。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、安全かつ／又は有効量のニラパリブをヒトに投与することによるヒトにおける転移性ホルモン未治療前立腺癌の治療に関する。
【背景技術】
【０００３】
前立腺癌は、男性における最も一般的な非皮膚悪性腫瘍であり、西欧諸国における男性の癌死因の第２位となっている。前立腺癌は、前立腺の異常細胞の制御されない増殖により生じる。前立腺癌の腫瘍が発生すると、テストステロンなどのアンドロゲンが前立腺癌の腫瘍増殖を促進する。その初期段階において、局在性の前立腺癌は、例えば、前立腺の外科的除去及び放射線治療を含む局所的治療によって治療されることが多い。しかしながら、男性の１／３でそうであるように、局所的治療により前立腺癌が治癒できない場合、疾患は治癒不能な転移性疾患（すなわち、身体の１つの部分から他の部分に癌が転移する疾患）に進行してしまう。
【０００４】
転移性前立腺癌の治療法であるアンドロゲン除去療法（「ＡＤＴ」）又はアンドロゲン抑制療法は、睾丸でのテストステロンの産生を低下させるために行われる。ＡＤＴでは、外科的去勢（精巣摘出）を行うか、又は黄体形成ホルモン放出ホルモン（「ＬＨＲＨ」）のアンタゴニスト又はアゴニストを使用する。ＬＨＲＨアンタゴニストの例としては、デガレリクスが挙げられる。ＬＨＲＨアゴニストの例としては、ゴセレリン酢酸塩、ヒストレリン酢酸塩、ロイプロリド酢酸塩、及びトリプトレリンパルモ酸塩が挙げられる。
【０００５】
アビラテロン酢酸塩はアビラテロンのプロドラッグであり、アンドロゲン生合成における主要酵素である１７αヒドロキシラーゼ／Ｃ１７，２０リアーゼ（シトクロムＰ４５０ｃ１７［ＣＹＰ１７］）を阻害する。アビラテロン酢酸塩とプレドニゾンとの併用は、以前にドセタキセルを含む化学療法を受けている転移性去勢抵抗性前立腺癌（「ｍＣＲＰＣ」）に罹患した男性の治療に承認されている。ｍＣＲＰＣに罹患した患者におけるアビラテロン酢酸塩（１，０００ｍｇ／日の錠剤用量）及びプレドニゾン（５ｍｇを１日２回）治療の有効性及び安全性は、いずれも第３相の多国籍、無作為化、二重盲検プラセボ対照試験であるＣＯＵ−ＡＡ−３０１及びＣＯＵ−ＡＡ−３０２の結果によって確立される。試験ＣＯＵ−ＡＡ−３０１は、アビラテロン酢酸塩によるＣＹＰ１７阻害を利用してアンドロゲン除去療法（「ＡＤＴ」）により実現される濃度よりも低い濃度にまで更にテストステロン濃度を低下させることがｍＣＲＰＣを有する患者の生存率を改善させることを示した最初の第３相試験であった。ＣＯＵ−ＡＡ−３０２は、プラセボとプレドニゾンの併用と比較して、アビラテロン酢酸塩とプレドニゾンの併用で治療を行った、ｍＣＲＰＣを有する化学療法治療歴のない患者において、全生存率（「ＯＳ」）及びＸ線像に基づいた無増悪生存率（「ｒＰＦＳ」）が有意に改善することを示した。
【０００６】
予後因子が高リスクであるｍＨＮＰＣを有する被験者におけるｒＰＦＳ及びＯＳの改善において、ＡＤＴ単独と比較してアビラテロン酢酸塩と低用量のプレドニゾン及びＡＤＴとの併用が優れているか否かを判定するためのデータが求められている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
したがって、ＤＮＡ修復異常を有する患者を含むｍＣＲＰＣ患者におけるニラパリブによるＰＡＲＰ阻害による去勢抵抗性前立腺癌及び転移性去勢抵抗性前立腺癌を含む前立腺癌の治療。この治療は、化学療法に続いて行ってもよいし、又は化学療法治療歴のない被験者に行ってもよい。この治療は、例えばエンザルタミド、アパルタミド、及びビカルタミドなどのＡＲ標的剤に続いて行うことができる。したがって、ニラパリブは、別の治療選択肢を与えることができる。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、前立腺癌の治療を要するヒトの前立腺癌を治療する方法であって、ヒトに治療有効量のニラパリブを投与することを含む、これからなる、及び／又はこれから本質的になる方法に関する。
【０００９】
一実施形態において、本発明は、前立腺癌の治療を要するヒトの前立腺癌を治療する方法であって、ヒトに治療有効量のニラパリブを投与することを含む、これからなる、及び／又はこれから本質的になる方法であって、前立腺癌が、去勢抵抗性前立腺癌（「ＣＲＰＣ」）、転移性去勢抵抗性前立腺癌、及び／又は抗アンドロゲン抵抗性前立腺癌である、方法に関する。
【００１０】
別の実施形態では、本発明は、前立腺癌の治療を要するヒトの前立腺癌を治療する方法であって、ヒトにニラパリブを投与することを含む、これからなる、及び／又はこれから本質的になる方法であって、ヒトが、ＢＲＣＡ−１、ＢＲＣＡ−２、ＦＡＮＣＡ、ＰＡＬＢ２、ＣＨＥＫ２、ＢＲＩＰ１、ＨＤＡＣ２、及び／又はＡＴＭからなる群から選択される少なくとも１つのＤＮＡ修復異常を有する、方法に関する。
【００１１】
別の実施形態では、本発明は、前立腺癌の治療を要するヒトの前立腺癌を治療する方法であって、ヒトにニラパリブを投与することを含む、これからなる、及び／又はこれから本質的になる方法であって、ヒトが、ＢＲＣＡ−１又はＢＲＣＡ−２のいずれかである少なくとも１つのＤＮＡ修復異常を有する、方法に関する。
【００１２】
別の実施形態では、本発明は、前立腺癌の治療を要するヒトの前立腺癌を治療する方法であって、ヒトにニラパリブを、好ましくは約３０ｍｇ／日〜約４００ｍｇ／日、より好ましくは３００ｍｇ／日の量で、最も好ましくは３つの１００ｍｇの経口剤形で１日１回経口投与することを含む、これからなる、及び／又はこれから本質的になる方法に関する。
【００１３】
別の実施形態では、本発明は、前立腺癌、抗アンドロゲン抵抗性前立腺癌、去勢抵抗性前立腺癌、及び転移性去勢抵抗性前立腺癌を治療するためのニラパリブを含む組成物に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】ニラパリブがヒト前立腺腫瘍細胞株の増殖をインビトロで阻害することを示す。
【図２】ニラパリブが２つのヒト前立腺腫瘍細胞株におけるＰＡＲ生成をインビトロで抑制することを示す。
【図３】フローサイトメトリーによって測定された際に、ニラパリブ治療が２２ＲＶ１細胞においてγ−Ｈ２ＡＸの増大を用量依存的に誘導することを示す。
【図４】ニラパリブが、インビトロで２２ＲＶ１、ＬＮＣａＰ  ＡＲ−ＴＢ、及びＣ４−２Ｂ細胞にγ−Ｈ２ＡＸを誘導することを示す。
【図５】ニラパリブ治療が、ＮＳＧ雄性マウスのＣ４−２Ｂ−ｌｕｃ前立腺腫瘍の増殖を阻害することを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
「被験者」なる用語は、治療、観察、又は試験の対象とされたことがあるか、又は対象である哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。
【００１６】
「治療」なる用語は、病態に冒された被験者の処置のことを指し、癌細胞を殺滅することにより病態を緩和する作用ばかりでなく、病態の進行の阻害をもたらす作用のことも指し、進行の速度の低下、進行の速度の停止、病態の改善、及び病態の治癒を含む。予防措置としての治療（すなわち、予防法）も含まれる。
【００１７】
「治療有効量」なる用語は、研究者、獣医師、医師、又は他の臨床専門家が組織系において得ようとする、治療される疾患、症候群、病態、若しくは障害の症状の緩和又は部分的緩和を含む生物学的又は薬剤応答を生じるニラパリブの量のことを指す。
【００１８】
「安全かつ有効な量」とは、ヒトにおいて疾患の進行及び許容されない毒性の予防又は緩和をもたらすニラパリブの量のことを指す。
【００１９】
「組成物」なる用語は、時として治療有効量の指定成分を含む医薬製品、並びに指定された量の指定成分の組み合わせから直接又は間接的に得られる任意の製品のことを指す。
【００２０】
本明細書で使用するところの「薬学的に許容される」なる用語は、適切な医療判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、又は他の問題若しくは合併症をともなうことなく、妥当な有益性／危険性の比に見合う、ヒトの組織と接触した使用に適した化合物、材料、組成物、及び／又は剤形に関する。各担体、賦形剤などは、製剤の他の成分との適合性を有するという意味においていずれも「許容される」ものでなければならない。
【００２１】
本明細書で使用するところの「アンドロゲン受容体」なる用語は、野生型アンドロゲン受容体、並びに去勢抵抗性前立腺癌に関連するアンドロゲン抵抗性ＡＲ及び／又はＡＲ突然変異体を含むものとする。
【００２２】
本明細書で使用するところの「抗アンドロゲン剤」なる用語は、体内で通常は反応性を有する組織に対するアンドロゲンの生物学的作用を、防止又は阻害することができるホルモン受容体アンタゴニスト化合物群のことを指す。いくつかの実施形態において、抗アンドロゲン剤は小分子である。抗アンドロゲン剤としては、エンザルタミド、アパルタミド、及びアビラテロン酢酸塩が挙げられる。
【００２３】
本明細書で使用するところの「第１世代抗アンドロゲン剤」なる用語は、野生型ＡＲポリペプチドに対してアンタゴニスト活性を示す薬剤を指す。しかしながら、第１世代抗アンドロゲン剤は、ＣＲＰＣにおいて潜在的にアゴニストとして作用し得るというという点で第２世代抗アンドロゲン剤と異なっている。
【００２４】
例示的な第１世代抗アンドロゲン剤としては、これらに限定されるものではないが、フルタミド、ニルタミド、及びビカルタミドが挙げられる。
【００２５】
本明細書で使用するところの「第２世代抗アンドロゲン剤」なる用語は、野生型ＡＲポリペプチドに対して完全アンタゴニスト活性を示す薬剤を指す。第２世代抗アンドロゲン剤は、例えばＣＲＰＣのようなＡＲの発現レベルが増加している細胞で完全アンタゴニストとして作用するという点で第１世代抗アンドロゲン剤と異なっている。例示的な第２世代抗アンドロゲン剤としては、４−［７−（６−シアノ−５−トリフルオロメチルピリジン−３−イル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクト−５−ｙｌ］−２−フルオロ−Ｎメチルベンズアミド（ＡＲＮ−５０９としても知られる；ＣＡＳ番号９５６１０４−４０−８）；４−（３−（４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−５，５−ジメチル−４−オキソ−２−チオキソイミダゾリジン−ｌ−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミド（ＭＤＶ３１００又はエンザルタミドとしても知られる；ＣＡＳ番号：９１５０８７−３３−１）及びＲＤ１６２（ＣＡＳ番号９１５０８７−２７−３）が挙げられる。いくつかの実施形態において、第２世代ＡＲ抗アンドロゲン剤は、ＡＲポリペプチドのリガンド結合部位で又はその付近でＡＲポリペプチドに結合する。
【００２６】
本明細書で使用するとき、用語「第３世代抗アンドロゲン剤」は、以下に述べるように、野生型ＡＲポリペプチド、及びＡＲポリペプチドのリガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）内に突然変異が生じるＡＲポリペプチドの突然変異体に対して完全アンタゴニスト活性を示す薬剤を指す。第３世代抗アンドロゲン剤は、例えばＣＲＰＣのようなＡＲの発現レベルが増加している細胞において完全アンタゴニストとして作用するという点で第１世代抗アンドロゲン剤と異なっている。
【００２７】
本明細書で使用するとき、用語「突然変異体」は、（基準と比べて）改変された核酸又はポリペプチド、あるいは、そのような改変された核酸又はポリペプチドを含むか若しくは発現している細胞又は生体を指す。
【００２８】
本明細書で使用される場合、特に断らないかぎり、（ＡＲの拮抗作用により影響を受けた疾病、症候群、病状又は疾患に言及する場合の）「影響する」又は「影響される」という用語は、疾病、症候群、病状又は疾患の１つ以上の症状又は所見の頻度及び／又は重症度の低下を含み、並びに／又は疾病、症候群、病状若しくは疾患の１つ以上の症状若しくは所見の発生の予防、又は疾病、病状、症候群又は疾患の発生の予防を含む。
【００２９】
本発明の実施形態には、ニラパリブのプロドラッグが含まれる。一般的には、このようなプロドラッグは、インビボで必要な化合物に容易に変換可能な化合物の機能的誘導体である。したがって、本発明の治療又は予防の方法の実施形態において、「投与すること」という用語には、具体的に開示された化合物による、又は具体的には開示されていない場合もあるが患者への投与後にインビボで特定の化合物に変換される化合物による、記載された様々な疾病、病状、症候群及び疾患の治療又は予防が包含される。適切なプロドラッグ誘導体の選択及び調製に関する通常の手順は、例えば、「Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５に記載されている。
【００３０】
アンドロゲン受容体（ＡＲ）
アンドロゲンは、標的組織の細胞内でアンドロゲン受容体（ＡＲ）という特定の受容体に結合する。ＡＲは身体の多くの組織で発現し、テストステロン（Ｔ）及びジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）などの内因性のアンドロゲンリガンドの生理学的及び病理生理学的作用が発現する受容体である。構造的には、ＡＲは、リガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）、ＤＮＡ結合ドメイン、及びアミノ末端ドメインの３つの主な機能ドメインで構成されている。ＡＲに結合し内因性のＡＲリガンドの作用を模倣する化合物がＡＲアゴニストと呼ばれるのに対して、内因性のＡＲリガンドの作用を阻害する化合物はＡＲアンタゴニストと呼ばれる。受容体へのアンドロゲンの結合は、受容体を活性化させ、受容体を標的遺伝子に隣接したＤＮＡ結合部位に結合させる。ここから受容体は補助活性化因子タンパク質及び基本転写因子と相互作用して遺伝子の発現を制御する。したがって、その受容体を介して、アンドロゲンは細胞内の遺伝子発現に変化を生じさせる。これらの変化は、細胞の代謝産物、分化、又は増殖に標的組織の生理学的状態において目に見える結果を最終的にもたらす。前立腺において、アンドロゲンは、アンドロゲン感受性組織の細胞質中に存在するＡＲに結合することにより、前立腺組織及び前立腺癌細胞の増殖を刺激する。
【００３１】
選択的にＡＲを調節する化合物は、これらに限定されるものではないが、前立腺癌、良性前立腺肥大症、女性の多毛症、脱毛症、拒食症、乳癌、にきび、骨疾患などの筋骨格に関する病状、造血に関する病状、神経筋肉疾患、リウマチ疾患、癌、ＡＩＤＳ、悪液質をはじめとする様々な疾患、状態、及び癌の治療又は予防に、男性避妊に用いられるホルモン補充療法（ＨＲＴ）に、男性機能向上に、男性生殖に関する病状に、及び一次又は二次男性性腺機能低下症において臨床的に重要である。
【００３２】
去勢抵抗性前立腺癌
内因性ホルモン（例えばテストステロン）の作用を阻害する薬剤（抗アンドロゲン剤）は極めて効果的であり、前立腺癌の治療に日常的に用いられている（アンドロゲン除去療法）。これらのアンドロゲン除去療法は、初期には腫瘍増殖の抑制に効果的であるが、ほとんどすべての症例で最終的には効果を失い、ＣＲＰＣにつながる。すべてではないが大部分の前立腺癌細胞は、初期にはアンドロゲン除去療法に反応する。しかしながら、前立腺癌細胞はアンドロゲン除去療法によって作り出される選択圧に応答してきており、その時点で治療に反応しなくなっているため、時間の経過とともに前立腺癌細胞の生存集団が生じる。原発癌は用いられる療法に反応しなくなっているばかりか、癌細胞が原発腫瘍から分離し血流中を移動して、疾患を離れた部位（特に骨）に転移させ得る。これは、転移性去勢抵抗性前立腺癌（「ｍＣＲＰＣ」）として知られる。他の作用の中でも、これは患者に顕著な痛み、更に骨の脆弱性を生じる。
【００３３】
いくつかの実施形態では、患者の前立腺癌は、これらに限定されないが、エンザルタミド、アパルタミド、及びアビラテロン酢酸塩などの抗アンドロゲン治療に対して抵抗性又は非反応性である（「抗アンドロゲン抵抗性」）。
【００３４】
ニラパリブ（２−［４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イル］フェニル］インダゾール−７−カルボキサミド）の調製については、２０１０年２月１６日出願の米国仮特許出願第６０／９２１，３１０号の利益を主張する、２０１１年１２月６日発行の発明の名称が「Ａｍｉｄｅ  Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  Ｉｎｄａｚｏｌｅｓ  ａｓ  Ｐｏｌｙ（ＡＤＰ−Ｒｉｂｏｓｅ）Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（ＰＡＲＰ）Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」である米国特許第８，０７１，６２３号、並びに２００８年１月８日出願の米国仮特許出願第６１／０１０，３３３号の利益を主張する、２０１３年５月７日発行の発明の名称がＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  Ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  Ｓａｌｔｓ  ｏｆ  ２−［４−［（３Ｓ）−ｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ］ｐｈｅｎｙｌ］−２Ｈ−ｉｎｄａｚｏｌｅ−７−ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ」である米国特許第８，４３６，１８５号に見ることができ、これらの文献をいずれも本明細書に参照によって援用する。
【００３５】
本発明は、ニラパリブ及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物も提供する。有効成分を含む医薬組成物は、例えば、錠剤、トローチ剤、ロゼンジ剤、水性若しくは油性懸濁液、分散性の粉末若しくは顆粒、エマルション、硬質若しくは軟質カプセル、又はシロップ剤若しくはエリキシル剤などの経口使用に適した形態とすることができる。
【００３６】
経口使用を目的とした組成物は、医薬組成物の製造の技術分野では既知のいずれかの方法にしたがって調製することができ、かかる組成物は、医薬的に洗練された、味のよい製剤を提供するために甘味剤、香味剤、着色剤、及び防腐剤からなる群から選択される１つ以上の薬剤を含むことができる。錠剤は、有効成分を、錠剤の製造に適した無毒性の薬学的に許容される賦形剤と混合された状態で含有する。これらの賦形剤は、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、又はリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；例えば、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、コーンスターチ、又はアルギン酸などの顆粒化及び崩壊剤；例えば、デンプン、ゼラチン、ポリビニルピロリドン又はアカシアなどの結合剤；及び、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、又はタルクなどの潤滑剤とすることができる。錠剤はコーティングされていなくてもよく、又は薬剤の不快な味を隠すか若しくは消化管における崩壊及び吸収を遅らせ、これにより長期にわたって持続する作用をもたらすための既知の技術によりコーティングされていてもよい。例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース若しくはヒドロキヒプロピルセルロースのような水溶性マスキング材料、又はエチルセルロース、酢酸酪酸セルロースのような時間遅延材料を用いることができる。
【００３７】
経口使用のための製剤は、有効成分が、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、又はカオリンのような不活性の固体希釈剤と混合されたハードゼラチンカプセルとして、あるいは有効成分が、例えばポリエチレングリコールのような水溶性担体、又は例えばピーナッツ油、流動パラフィン、若しくはオリーブ油などの油性媒質と混合されたソフトゼラチンカプセルとして与えることもできる。
【００３８】
水性懸濁液は、活性物質を水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合された状態で含有する。かかる賦形剤は、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、及びアカシアガムなどの懸濁化剤であり、分散剤又は湿潤剤は、例えばレシチンなどの天然に存在するホスファチド、又はアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えばステアリン酸ポリオキシエチレン）、又はエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えばヘプタデカエチレンオキシセタナール）、又はエチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトールから誘導された部分エステルとの縮合生成物（例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート）、又はエチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトール無水物から誘導された部分エステルとの縮合生成物（例えばポリエチレンソルビタンモノオレエート）とすることができる。水性懸濁液は、例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル又はｐ−ヒドロキシ安息香酸ｎープロピルなどの１種類以上の防腐剤、１種類以上の着色剤、１種類以上の香味剤、及びスクロース、サッカリン又はアスパルテームなどの１種類以上の甘味剤も含むことができる。
【００３９】
油性懸濁液は、有効成分を、例えばアラキス油、オリーブ油、ごま油若しくはココナッツ油などの植物油、又は流動パラフィンなどの鉱物油中に懸濁することによって配合することができる。油性懸濁液は、例えば蜜蝋、硬質パラフィン、又はセチルアルコールなどの増粘剤を含んでもよい。上記に記載したもののような甘味剤及び香味剤を添加することで味のよい経口製剤を得ることができる。これらの組成物は、ブチル化ヒドロキシアニソール又はαートコフェロールなどの酸化防止剤の添加によって保存することができる。
【００４０】
水を加えることによる水性懸濁液の調製に適した分散性の粉末及び顆粒によって、分散剤又は湿潤剤、懸濁化剤、及び１種類以上の防腐剤と混合された有効成分が得られる。適当な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤は、既に上記に述べたものに例示される。例えば、甘味剤、香味剤、及び着色剤などの更なる賦形剤が存在してもよい。これらの組成物は、アルコルビン酸などの酸化防止剤の添加によって保存することができる。
【００４１】
本発明の医薬組成物は、水中油型エマルションの形態とすることもできる。油相は、例えばオリーブ油又はアラキス油などの植物油、又は例えば流動パラフィンなどの鉱物油、又はこれらの混合物とすることができる。適当な乳化剤は、天然に存在するホスファチド（例えば大豆レシチン）、及び脂肪酸とヘキシトール無水物とから誘導されたエステル又は部分エステル（例えばソルビタンモノオレエート）、及び当該部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物（例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）であり得る。エマルションは、甘味剤、香味剤、防腐剤、及び酸化防止剤を更に含むこともできる。
【００４２】
シロップ剤及びエリキシル剤は、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、又はスクロースなどの甘味剤と配合することができる。かかる配合物は、粘滑剤、防腐剤、香味剤及び着色剤、並びに酸化防止剤を更に含むことができる。医薬組成物は、滅菌注射水溶液の形態とすることができる。使用することができる許容されるビヒクル及び溶媒としては、水、リンゲル液、及び等張塩化ナトリウム溶液がある。
【００４３】
滅菌注射製剤は、有効成分が油相中に溶解された滅菌注射水中油型マイクロエマルションとすることもできる。例えば、有効成分を最初に大豆油とレシチンとの混合物中に溶解することができる。次いで、この油性溶液を水とグリセロールとの混合物中に導入し、処理してマイクロエマルションを形成する。
【００４４】
注射溶液又はマイクロエマルションは、局所ボーラス注射により患者の血流中に導入することができる。あるいは、溶液又はマイクロエマルションを、本化合物の一定の循環濃度が維持されるような形で投与することが有利となる場合もある。このような一定濃度を維持するには、連続的な静脈内送達装置を利用することができる。かかる装置の一例として、Ｄｅｌｔｅｃ  ＣＡＤＤ−ＰＬＵＳ（商標）モデル５４００静脈内ポンプがある。
【００４５】
医薬組成物は、筋肉内及び皮下投与用の滅菌注射水性又は油脂性懸濁液の形態とすることもできる。この懸濁液は、上記に述べたような適当な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を使用して既知の技術にしたがって配合することができる。滅菌注射製剤は、無毒性の非経口的に許容される希釈剤又は溶媒中の滅菌注射溶液又は懸濁液、例えば１，３−ブタンジオール溶液とすることもできる。更に、滅菌不揮発性油が、溶媒又は懸濁媒質として便宜よく使用される。この目的では、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含むいずれの無菌性不揮発性油も用いることができる。更に、オレイン酸などの脂肪酸も注射製剤の調製に使用することができる。
【００４６】
ニラパリブは、薬剤の直腸投与用の坐剤の形態で投与することもできる。これらの組成物は、薬剤を、通常の温度では固体であるが直腸内の温度で液体であり、したがって直腸内で溶けて薬剤を放出する適当な非刺激性賦形剤と混合することにより調製することができる。そのような材料としては、カカオ脂、グリセリン化ゼラチン、硬化植物油、分子量の異なるポリエチレングリコールとポリエチレングリコールの脂肪酸エステルとの混合物が挙げられる。
【００４７】
局所的使用には、本化合物を含有するクリーム、軟膏、ゼリー、溶液又は懸濁液などが用いられる。（本出願の目的では、局所適用は、マウスウオッシュ及びうがい薬を含む。）
【００４８】
ニラパリブは、適当な鼻腔内ビヒクル及び送達装置の局所的使用により鼻腔内形態で、又は当業者には周知の経皮パッチの形態を用いて経皮的経路により投与することができる。経皮的送達系の形態で投与するには、用量投与は当然のことながら投与レジメン全体を通じて間欠的ではなく連続的に行われる。ニラパリブは、カカオ脂、グリセリン化ゼラチン、硬化植物油、分子量の異なるポリエチレングリコールとポリエチレングリコールの脂肪酸エステルとの混合物などの基剤を用いた坐剤として送達することもできる。
【００４９】
ニラパリブが被験者に投与される際、選択される用量レベルは、これらに限定されるものではないが、特定の化合物の活性、個人の症状の重症度、投与経路、投与時間、化合物の排出速度、治療の継続期間、併用される他の薬剤、化合物、及び／又は材料、並びに患者の年齢、性別、体重、状態、一般的健康状態、及び既往歴を含む様々な因子に応じて決められる。ニラパリブの量及び投与経路は最終的には医師の判断に委ねられるが、用量は一般的に、顕著な有害な又は有毒な副作用を生じることなく作用部位において所望の効果を得る局所濃度を実現するようなものである。
【００５０】
インビボ投与は、治療過程の全体を通じて１回用量で、連続的に又は間欠的（例えば適当な間隔で分割用量で）に行うことができる。最も効果的な投与の手段及び用量を決定する方法は当業者には周知であり、治療に用いられる製剤、治療の目的、治療される標的細胞、及び／又は治療される被験者によって異なる。単回又は複数回の投与を、治療を行う医師によって選択される用量レベル及びパターンで行うことができる。
【００５１】
一般に、ニラパリブの適当な用量は、１日当たり、被験者の体重１ｋｇ当たり約１００μ〜約２５０ｍｇの範囲である。活性化合物が塩、エステル、プロドラッグなどである場合、投与される量は親化合物に基づいて計算されるため、使用される実際の重量はそれに比例して大きくなる。
【００５２】
前立腺癌の治療におけるニラパリブ又はその医薬組成物の治療有効量としては、約３０ｍｇ／日〜約４００ｍｇ／日のニラパリブの用量範囲、又はその範囲内の任意の特定の量若しくは範囲、詳細には約３００ｍｇ／日、及び、３つの１００ｍｇの経口剤形での１日１回の経口投与が挙げられる。
【００５３】
投与されるニラパリブの最適用量は容易に決定することができ、使用される特定の化合物、投与形態、製剤の強度、及び疾患、症候群、病状、又は障害の進行状態によって異なる。更に、被験者の性別、年齢、体重、食事、及び投与時間などの、治療される特定の被験者に関連する因子により、適切な治療レベル及び所望の治療効果を得るために用量を調節する必要性が生じる。したがって、上記の用量は平均的な場合の例である。当然、より高いか又はより低い用量範囲が有効であるような個々の例が存在し得るが、それらは本発明の範囲内に含まれる。
【００５４】
ニラパリブは、ニラパリブの使用がこれを必要とする被験者に求められる場合には、上記の組成物及び投与レジメンのいずれかによって、又は当該技術分野において確立されている組成物及び投与レジメンによって投与することができる。
【実施例】
【００５５】
以下の実施例は、本発明の理解を助けるために記載するものであり、本明細書に付属する「特許請求の範囲」に記載される発明をいかなる意味においても限定することを目的としたものではなく、またそのように解釈されるべきではない。
【００５６】
（実施例１）
ヒト前立腺腫瘍株におけるニラパリブのインビトロ細胞毒性
ニラパリブの細胞毒性を複数のヒト前立腺腫瘍株においてインビトロで試験した。いずれの腫瘍株も、ＢＲＣＡ−１又はＢＲＣＡ−２欠損として知られているものではない。
【００５７】
方法：
ニラパリブのインビトロ細胞毒性を５つの前立腺癌細胞株Ｃ４−２Ｂ、ＬＮＣａＰ、ＬＮＣａＰ  ＡＲ．ＴＢ、ＶＣａＰ、及び２２Ｒｖ１で評価した。Ｃ４−２Ｂ、ＬＮＣａＰ、ＬＮＣａＰ  ＡＲ．ＴＢ、及び２２Ｒｖ１細胞株は、１０％熱不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＃１６１４０−０７１）及び非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＃１１１４０−０５０）を添加したＲＰＭＩ１６４０＋ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）−Ｉ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＃６１８７０−０３６）中で増殖させ、ＶＣａＰ細胞は、１０％  ＦＢＳ及びＮＥＡＡを添加したＤＭＥＭ＋ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）−Ｉ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＃＃１０５６９−０１０）中で増殖させた。ＶＣａＰ細胞は７日間ごとに継代培養し、他の株は３〜４日ごとに株分けした。
【００５８】
各細胞株の細胞増殖動態を、複数の密度で細胞を播種し、最大７日間の間隔で増殖を観察することにより測定した。Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｅｌｌ  ＴｉｔｅｒＧｌｏ試薬（＃Ｇ７５７１）を用いて増殖を測定して、化学発光ルシフェリンールシフェラーゼ反応により細胞ＡＴＰを測定した。プレートはＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで読み取り、発光値をプロットして対数期増殖となった播種密度及び所望の時点におけるＣｅｌｌ  ＴｉｔｅｒＧｌｏアッセイの直線範囲内の細胞密度を特定した。
【００５９】
ニラパリブ細胞毒性実験では、細胞を簡単にトリプシン処理して収穫し、各株を１００μＬの培地中で９６ウェルプレートの内側の６０個のウェルに適当な密度で播種して７日間の処理に供した。各プレートの外側のウェルは、試験ウェルからの蒸発を低減させるためにダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ；Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＃１４１９０−１４４）で満たした。細胞を３７℃の加湿した５％  ＣＯ２インキュベーター中のプレート内で一晩静置した。５０μＬの適当な培地に溶かした３Ｘニラパリブ（最終濃度５００、１２５、３１．３、７．８、１．９５、０．４９、０．１２、０．０３μＭ）を加えて三重のウェルとすることにより、処理を開始した。最終ビヒクル濃度は０．５％  ＤＭＳＯとした。
【００６０】
細胞を７日間培養した。処理後の相対細胞生存率を、上記のように、Ｃｅｌｌ  ＴｉｔｅｒＧｌｏ試薬を用いて測定した。発光出力値はすべて、非処理のコントロールウェルの平均発光量に基づいた阻害率（％）に対して正規化し、ビヒクルコントロールウェルの平均阻害率（％）を各処理値から引いた。阻害率（％）をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ７．００でμＭ濃度の対数値に対してプロットした。非線形回帰及びＥＣ５０値の計算を、ｌｏｇ（アゴニスト）／反応--可変傾き（４パラメータ）あてはめを用いて行った。
【００６１】
結果：
細胞毒性アッセイの結果を図１及び表１に示す。各細胞株の増殖は、ニラパリブの濃度を増大させることにより用量依存的に低下した。Ｃ４−２Ｂ細胞はＥＣ５０値が約１．２μＭであり、感受性が最も高いようであった。ＶＣａＰ細胞はＥＣ５０値が４．１μＭであり、感受性が最も低いようであった。
【００６２】
【表１】
2019522032.tif 000003
【００６３】
（実施例２）
ニラパリブによるＰＡＲ形成の阻害
ポリ（ＡＤＰ）リボース（ＰＡＲ）の形成を阻害するニラパリブの能力を２つのヒト前立腺腫瘍株でインビトロで試験した。いずれの腫瘍株も、ＢＲＣＡ−１又はＢＲＣＡ−２欠損として知られているものではない。
【００６４】
方法：
ニラパリブを用いたＰＡＲ阻害を、Ｃ４−２Ｂ及びＶＣａＰの２つのヒト前立腺癌細胞株で評価した。Ｃ４−２Ｂ細胞株は１０％  ＦＢＳ及びＮＥＡＡを添加したＲＰＭＩ１６４０＋ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）−Ｉ培地中で増殖させ、３〜４日ごとに株分けした。ＶＣａＰ細胞は、ＦＢＳ及びＮＥＡＡを添加したＤＭＥＭ＋ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）−Ｉ培地中で増殖させ、７日間ごとに継代培養した。
【００６５】
細胞を簡単にトリプシン処理して収穫し、各株を１ｍＬの培地中で６ウェルプレートに適当な密度で播種した。更に５００μＬの完全培地を各ウェル当たり１．５ｍＬの総体積で加えた。細胞を３７℃の加湿した５％  ＣＯ２インキュベーター中のプレート内で一晩静置した。翌日、培地をプレートから除去し、細胞を１ｍＬ無血清培地（それぞれＲＰＭＩ又はＤＭＥＭ）を用いて洗浄した。１ｍＬの適当な培地に溶かしたニラパリブ（０．１％  ＤＭＳＯ中、最終濃度１００、１０、１、０．１、０．０１、及び０μＭ）を加えて三重のウェルとすることにより、処理を開始した。プレートをインキュベーターに２時間戻した。
【００６６】
処理後、ＨＴ  ＰＡＲＰ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ  Ａｓｓａｙ  ＩＩ（Ｔｒｅｖｉｇｅｎ  ＃４５２０−０９６−Ｋ）で与えられた試薬及び手順を用いて抽出物を調製した。培地を各ウェルから除去し、別々のラベル付けされたマイクロチューブに入れ、プレートを氷上に置いた。各チューブを１５００ｒｐｍで４分間高速回転させて、薬剤とのインキュベーションの間にプレートから分離したすべての細胞をペレット化した。２５０μＬの１００ｍＭ  ＰＭＳＦ（エタノール溶液、Ｓｉｇｍａ  ＃９３４８２）及び２５０μＬの１００Ｘ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＃７８４２９）を加えた２４．５ｍＬの細胞溶解試薬を用いて溶解バッファーを調製した。溶解バッファー（３００μＬ）を氷上でプレートの各ウェルに加えた。接着細胞は溶解バッファー中に掻き落とし、氷上に少なくとも１５分間保持した。上清をマイクロチューブから除去し、６ウェルプレートからの細胞ライセートを対応するチューブの各チューブに加えた。ＳＤＳ（２０ｗ／ｖ％）を加えて最終ＳＤＳ濃度を１％とした。細胞抽出物を９５〜１００℃に５分間加熱した。室温に冷却した後、０．０１体積の１００Ｘマグネシウムカチオンと３μＬのＤＮａｓｅを各チューブに加えた。チューブを短時間ボルテックスし、３７℃のインキュベーターに９０分間戻した。インキュベーション後、チューブを室温で１００００倍のＧで１０分間遠心した。ペレットが存在していた場合にはこれをピペットチップを使用して除去し、抽出物を９６ウェル希釈プレートに移した。細胞抽出物を、タンパク質の定量化及びＰＡＲ  ＥＬＩＳＡアッセイで使用するまで−８０℃で凍結した。ＥＬＩＳＡアッセイプロトコルを製造者の指示にしたがって行った。
【００６７】
タンパク質の定量化は、Ｂｉｏｒａｄ  Ｑｕｉｃｋ  Ｓｔａｒｔウシ血清アルブミンスタンダードセット（＃５０００２０７）が付属した界面活性剤適合性のＢｉｏｒａｄ  ＤＣタンパク質アッセイキットＩＩ（＃５００−０００２）を、製造者の９６ウェルプレートプロトコルにしたがって使用して行った。ＥＬＩＳＡ溶解バッファーをスタンダードに添加し、同じ体積のＰＢＳをすべての試料ウェルに加えてタンパク質の測定値に対する溶解バッファーの影響を補正した。試料は二重でアッセイを行った。バッファーＡ’（２５μＬ）をプレートのすべてのウェルに加え、２００μＬのバッファーＢを各ウェルに直ちに加えた。プレートをシェーカー上で室温にて１５分間インキュベートした。吸光度を、ＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏバージョン６．３ソフトウェアでＤＣタンパク質アッセイプロトコルを使用して、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｍ５プレートリーダーで７５０ｎｍで読み取った。標準曲線の線形回帰、試料タンパク質の値の補間、及び複製試験の平均化をソフトウェアで行った。データをエクセルにエクスポートし、試料の希釈について補正を行った。
【００６８】
ＰＡＲ  ＥＬＩＳＡスタンダード及び試料の発光値をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍバージョン７で分析し、標準曲線の線形回帰及び試料の値の補間を計算した。補間したＰＡＲの値（ＰＡＲ（ｐｇ）／ｍＬ）を試料の希釈について補正し、対応するタンパク質濃度で割ってタンパク質１ｍｇ当たりのＰＡＲ（ｐｇ）を求めた。これらの値をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖ７でグラフ化した。
【００６９】
結果：
ＰＡＲアッセイの結果を図２に示す。ＰＡＲは、各細胞株でニラパリブの濃度を増大させることにより用量依存的に低下した。
【００７０】
（実施例３）
ニラパリブは、ヒト前立腺腫瘍株にインビトロでγ−Ｈ２ＡＸを誘導する
ＤＮＡに二本鎖切断を誘導するニラパリブの能力を、２２ＲＶ１、ＬＮＣａＰ  ＡＲ．ＴＢ、及びＣ４−２Ｂの３つのヒト前立腺癌株で測定した。ＤＮＡの二本鎖切断に続いて、隣接するヒストンγ−Ｈ２ＡＸのリン酸化が起きるが、このリン酸化は抗体染色及びフローサイトメトリーによって測定することができる。
【００７１】
方法：
２２ＲＶ１、ＬＮＣａＰ  ＡＲ．ＴＢ、及びＣ４−２Ｂ細胞株を上記で概略を述べたようにして増殖させた。細胞株を３〜４日ごとに継代した。
【００７２】
各細胞株について、２×１０５個の細胞を体積１ｍＬの培地中で１２ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎ  ＃３５３０４３）の各ウェルに播種した。細胞を、３７℃の加湿した５％  ＣＯ２インキュベーター中、一晩静置した後、２Ｘ濃縮の連続希釈したニラパリブを含む１ｍＬの培地を加えて、２００、１００、５０、２５、１２．５、６．２５、３．１３、１．５７、０．７８、０．３９、０．２、及び０．１μＭの最終濃度を三重のウェルで得た。最終濃度は０．２％  ＤＭＳＯとし、各細胞株についてビヒクルビヒクル及び培地のコントロールの三重のウェルも得た。プレートを更に１８時間インキュベートした。
【００７３】
薬剤との１８時間のインキュベーション後、細胞の各ウェルを、２ｍＬの培地を１５ｍＬの円錐チューブ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ＃４３０７９８）に最初に移すことにより収穫した。次に、５００μＬの細胞解離バッファー（Ｇｉｂｃｏ  ＃１３１５１−０１４）をウェルに加え、５分間静置した。１ｍＬのピペットを使用して、１ｍＬの培地をウェルに加え、ピペット操作により細胞を剥離させ、細胞を含んだ培地を対応する１５ｍＬの円錐チューブに移した。チューブを１２００ｒｐｍで５分間遠心し、上清を捨て、ペレット化した細胞を再懸濁して９６ウェルＶ字底プレート（Ｃｏｓｔａｒ  ＃３８９６）に移した。プレートを１８００ｒｐｍで３分間遠心し、上清を捨ててから、ウェルを２００μＬのＤＰＢＳで洗浄した。このプロセスを合計で３回の洗浄で繰り返した。次に、細胞を、希釈率１：８００のＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ  ｆｉｘａｂｌｅ  ａｑｕａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃Ｌ３４９５７）を含んだ１００μＬのＤＰＢＳで４℃で２０分間染色した。次に、細胞を１５０μＬのＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  Ｓｔａｉｎ  Ｂｕｆｆｅｒ（染色バッファー；ＢＤ  ＃５５４６５７）で洗浄し、１８００ｒｐｍで３分間遠心した。細胞を２００μＬの染色バッファーで２回、再び洗浄し、次いでＤＰＢＳで１回洗浄した。
【００７４】
細胞を１００μＬの−２０℃の７０％エタノール／Ｈ２Ｏで固定し、プレートを−２０℃で２時間保存した。細胞を、各洗浄間で３分間、２２００ｒｐｍで遠心して染色バッファーで３回洗浄した。次に、細胞を１００μＬの希釈率１：１の染色バッファー及びＡＸＥＬＬビオチンフリーＦｃ受容体ブロッカー（Ａｃｃｕｒａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＆  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏｒｐ  ＃ＮＢ３０９）と４℃で２０分間インキュベートした。細胞を１５０μＬの染色バッファーで洗浄した後、２２００ｒｐｍで３分間、遠心し、上清を捨て、次に細胞を０．２ｖ／ｖ％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含んだ５０μＬの染色バッファー（Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ  ＃２１５６８−２５００）と２時間、室温の暗所で希釈率１：１００のγ−Ｈ２ＡＸ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ  ＃６１３４０８）とともにインキュベートした。
【００７５】
細胞を、０．２ｖ／ｖ％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含んだ２００μＬの染色バッファーで１回洗浄してから、２００μＬの染色バッファーのみで１回洗浄した。細胞を８０μＬの染色バッファーに再懸濁し、５０μＬをＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターで分析した。ＴｒｅｅＳｔａｒ  ＦｌｏｗＪｏ  ｖ９．８．５を使用してデータを分析した。データを生細胞にゲーティングし、ダブレットを区別した後、全体の集団をγ−Ｈ２ＡＸ抗体シグナルについて評価した。結果をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖ７でグラフ化した。
【００７６】
結果：
異なる濃度のニラパリブの影響を示した２２ＲＶ１細胞株の代表的なヒストグラムを図３に示す。薬剤で処理した試料をビヒクル及び培地のコントロールと比較し、図４にグラフで示す。γ−Ｈ２ＡＸシグナルがビヒクルコントロールを有意に上回る最低濃度を表２に示す。これらの結果は、各前立腺腫瘍株でニラパリブがγ−Ｈ２ＡＸを用量依存的に誘導することを示すものである。
【００７７】
【表２】
2019522032.tif 000004
【００７８】
（実施例４）
ニラパリブは、マウスにおいてＣ４−２Ｂヒト前立腺腫瘍の増殖を阻害する。
【００７９】
ニラパリブの活性を、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）重症複合免疫不全（ｓｃｉｄ）γ（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃ  Ｉｌ２ｒｇ／ＳｚＪ）（ＮＳＧ）マウスにおいて予め確立したヒト前立腺皮下Ｃ４−２Ｂモデルで試験した。この腫瘍モデルは、ＢＲＣＡ−１又はＢＲＣＡ−２欠損とは考えられていない。
【００８０】
方法：
ビヒクルは、４℃の暗所で調製し保持した０．５％メチルセルロース（Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（商標）Ｆ４Ｍ）とした。すべての配合物は体重１ｋｇ当たり体積１０ｍＬを投与するように作られた。ＮＳＧ雄性マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）を使用した。実験手順を実施するのに先立って動物を１週間馴化した。マウスを、１２時間の明暗周期下で、温度１９〜２２℃、湿度３５〜４０％の使い捨てのＩＶＣケージ（Ｉｎｎｏｖｉｖｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）にグループ分けして収容した（ケージ当たり５匹ずつ）。マウスにオートクレーブした高脂質（６％）の実験動物用飼料及び水を自由摂取させた。
【００８１】
マウスの右脇腹に、ＬＮＣａＰ  Ｃ４−２Ｂ−ｌｕｃタグ付き細胞（体積２００μｌのＣｕｌｔｒｅｘ（登録商標）：ＲＰＭＩ１６４０培地中、１×１０６個の腫瘍細胞（１：１の比）を注射した。処理群当たり１０匹のマウスで腫瘍体積（腫瘍体積＝２４１±１４ｍｍ３）についてマウスを無作為化した。マウスに、ビヒクル又は以下に示すようなニラパリブを含んだビヒクルのいずれかを、１０ｍＬ／ｋｇの投与体積で強制摂食（経口）により毎日投与した。処理の開始＝１日目。マウスは実験２４日目まで処理した。
【００８２】
グループ１：０ｍｇ／ｋｇのビヒクル（０．５％メトセルＦ４Ｍ）を１日１回経口投与。
グループ２：０．５％メトセルＦ４Ｍに加えた２５ｍｇ／ｋｇのニラパリブを１日１回経口投与。
グループ３：０．５％メトセルＦ４Ｍに加えた５０ｍｇ／ｋｇのニラパリブを１日１回経口投与。
【００８３】
個々の各動物について、体重及び腫瘍体積［ａはノギスで測定して求めた腫瘍の長さを表し、ｂは幅を表すものとして、式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（ａ×ｂ２／２）を用いた］を実験全体を通じて週２回測定した。予め確立された腫瘍について、腫瘍増殖の時間的経過を平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として表す。
【００８４】
結果：
ビヒクルで処理したマウスは、実験およそ２２日目から腫瘍体積の倫理的な限界値に達し始めた（個々の腫瘍体積については図５を参照）。腫瘍体積データを、実験２４日目まで示した（１０匹のビヒクル処理マウスのうち９匹が実験に残った）。処理の１８、２２、及び２４日後、５０ｍｇ／ｋｇのニラパリブを毎日経口投与したグループ３は、腫瘍増殖の有意な阻害／遅延を示し、これらの期間の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）値は約４０％であった。腫瘍増殖の有意差は、１８、２２及び２４日目で認められた（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）。２５ｍｇ／ｋｇのニラパリブを投与したマウスは、有意な腫瘍増殖阻害を示さなかったが、約１２％のある程度のＴＧＩが２２及び２４日目に認められた。
【００８５】
（実施例５）
多施設共同のオープン試験を行って、少なくとも１ラインのタキサンによる化学療法及び少なくとも１ラインの抗アンドロゲン療法（例えば、アビラテロン酢酸塩、エンザルタミド、アパルタミド）を受けたことのあるｍＣＲＰＣ及びＤＮＡ修復異常を有する１８才以上の男性被験者において、３００ｍｇのニラパリブの１日１回投与の有効性及び安全性を評価する。試験は、およそ１００人の被験者で行う。被験者は、試験期間中、及び試験薬の最後の投与の３０日後まで安全性について監視を行う。治療は、疾患の進行、許容されない毒性、死亡、又はスポンサーが試験を中止するまで継続する。
【００８６】
試験は、バイオマーカー評価のみを行う事前スクリーニングフェーズ、スクリーニングフェーズ、治療フェーズ、及びフォローアップフェーズの４つのフェーズからなる。有効性評価には以下のもの、すなわち、腫瘍測定値：胸部、腹部、及び骨盤のＣＴ又はＭＲＩスキャン、並びに全身の骨スキャン（９９ｍＴｃ）、血清ＰＳＡ、生存率状態、ＣＴＣ、及び症候性骨関連事象（ＳＳＥ）が含まれる。
【００８７】
ニラパリブ（３００ｍｇ）は、１日１回経口投与されるカプセル（３×１００ｍｇ）として与えられる。カプセルはまるごと飲み込まなければならない。被験者は朝（食物とともに、又は食物なしで）に用量を服用しなければならない。試験薬剤とはみなされないが、去勢手術を行っていない被験者は定期的に処方されるＧｎＲＨａを継続して服用しなければならない。すべてのＧｎＲＨａ療法は、ｅＣＲＦの併用薬セクションに記録されなければならない。
【００８８】
治療サイクルは２８日間と規定される。被験者はサイクル１の１日目にニラパリブの服用を開始する。各治療サイクルにおける充分な量のニラパリブを各サイクルの初日に配布する。被験者が１つの用量を服用し損なった場合、被験者がおよそ１２時間の範囲内で覚えていた場合にはその用量を補充しなければならない。そうでない場合、被験者は、服用し損ねた用量を補うことなく、翌日に次の用量を服用しなければならない。服用し損ねた用量はｅＣＲＦに記録しなければならない。
【００８９】
バイオマーカー評価を行うための事前スクリーニングフェーズ
事前スクリーニングフェーズでは、可能性のある被験者がＤＮＡ修復異常についてバイオマーカー陽性であるかを評価する。すべての被験者は、事前スクリーニングフェーズのための特定のＩＣＦに署名し、ベースラインとなる人口統計学的特性及び疾患特異的な病歴を提供することが求められる。事前スクリーニングフェーズは、スクリーニングフェーズの前の任意の時点で行うことができる。
【００９０】
バイオマーカー陽性を判定するためのプロセスは、血液に基づいたアッセイが利用可能となる前に事前スクリーニングフェーズに入る被験者では、血液に基づいたアッセイが利用可能となった後で事前スクリーニングフェーズに入る被験者と比較して異なる。これら２つのプロセスについて以下に述べる。
【００９１】
血液に基づいたアッセイが利用可能となる前にバイオマーカー陽性を判定するためのプロセス
被験者は事前スクリーニングのＩＣＦに署名する。被験者が以前にＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）遺伝子パネルによる腫瘍組織の分析を行っている場合、被験者の承諾の後、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）のデータを検討して表１に定義される基準に基づいて適性を判定することができる。被験者がバイオマーカー陽性である場合、スクリーニングフェーズに入る適性を有するものとする。被験者が以前にＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）遺伝子パネルによる腫瘍組織の分析を行っていない場合、被験者は、スポンサーにより承認された試験によってバイオマーカー陽性について分析された、保管された腫瘍組織又は最近採取された（推奨される）腫瘍組織のいずれかを有していなければならない。被験者がバイオマーカー陽性である場合、スクリーニングフェーズに入る適性を有するものとする。
【００９２】
事前スクリーニングフェーズにおいてすべての被験者から血液試料も採取し、血液に基づいたアッセイが利用可能となるときに備えて保存しておく。血液に基づいたアッセイが利用可能となった時点で、保存された血液試料を腫瘍組織試料の結果との一致について分析する。この分析は、血液に基づいたアッセイが利用可能となった後の任意の時点で行うことができる。
【００９３】
血液に基づいたアッセイが利用可能となった後でバイオマーカー陽性を判定するためのプロセス
被験者は事前スクリーニングのＩＣＦに署名する。被験者の血液を採取し、バイオマーカー陽性についての分析用に送付する。被験者が以前にＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）遺伝子パネルによる腫瘍組織の分析を行っている場合、被験者の承諾の後、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）のデータを検討して表１に定義される基準に基づいて適性を判定することができる。被験者がバイオマーカー陽性である場合、被験者はスクリーニングフェーズに入る適性を有するものとし、血液に基づいた分析の結果を待つ必要はない。ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）遺伝子パネルが陰性である場合、被験者は、血液に基づいたアッセイによりバイオマーカー陽性であると判定されれば、依然として適性を有するものとみなすことができる。被験者が以前にＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）遺伝子パネルによる腫瘍組織の分析を行っておらず、保管された組織が利用可能である場合、保管された腫瘍組織を取得及び分析する要請が開始される。血液に基づいたアッセイの結果がバイオマーカー陽性である場合、被験者はスクリーニングフェーズに入る適性を有するものとし、保管された腫瘍組織に基づいた分析の結果を待つ必要はない。保管された腫瘍組織に基づいた分析の結果が利用可能である場合、これを血液に基づいた結果と併せて一致及びブリッジング試験に用いることができる。
【００９４】
試験スポンサーの判断により、血液に基づいたアッセイの結果が陰性である場合には、保管された腫瘍組織に基づいた結果を用いて適性を判定してもよい。
【００９５】
保管された腫瘍組織がない場合、被験者は腫瘍組織の採取に同意しなければならない。
【００９６】
血液に基づいたアッセイの結果がバイオマーカー陽性である場合、一致及びブリッジング試験で後で使用するために、サイクル１の１日目よりも前に最近の腫瘍組織を採取しなければならない。最近採取された腫瘍組織の分析は、試験期間の任意の時点で行うことができ、被験者がスクリーニングフェーズに入る前に結果が必要とされない場合がある。
【００９７】
試験スポンサーの判断により、血液に基づいたアッセイの結果が陰性である場合には、最近採取された腫瘍組織を用いて適性を判定してもよい。
【００９８】
事前スクリーニングフェーズにおいて被験者がバイオマーカー陽性であると判定された後、３０日以内にスクリーニングフェーズを開始しなければならない。
【００９９】
スクリーニングフェーズ
すべてのバイオマーカー陽性の被験者は、スクリーニングフェーズでのあらゆる試験関連の手順の実施に先立って主要試験のＩＣＦに署名しなければならない。このフェーズでは、適性の基準を再検討し、「時間及び事象のスケジュール」に示されるようにして完全な臨床評価を行う。特に指定されないかぎり、スクリーニング手順はサイクル１の１日目の３５日前までに行われる。イメージングはサイクル１の１日目の８週間前まで許容される。スクリーニングによる臨床的安全性の臨床検査評価は、サイクル１の１４日目以内に行われるならサイクル１の１日目の評価で使用することができる。
【０１００】
すべての選択基準を満たさないか、又は除外基準を満たす被験者はもう一度、再スクリーニングすることができる。再スクリーニングは調査者の判断に委ねられ、スポンサーの承認及び同意を必要とする。再スクリーニングを行う被験者は、再スクリーニングに先だって新しいＩＣＦに署名しなければならない。予定された登録の３５日以内に再スクリーニングされる被験者は、最初のスクリーニングの臨床検査結果、コンピューター断層撮影（ＣＴ）／磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、及び骨スキャン（サイクル１の１日目の８週間以内である場合）を用いて、再スクリーニングの理由ではないにしても適性を判定することができる。
【０１０１】
治療フェーズ
治療フェーズは、サイクル１の１日目に始まり、試験薬剤が中断されるまで継続する。試験薬剤の投与前又はスクリーニングの際のサイクル１の１日目に測定された最後の測定値（どちらか最後の値）が、ベースライン値として定義される。各サイクルの来院は、特に指定されないかぎり、±３日の範囲を有する。試験の来院は、サイクル１の１日目の日付から計算する。被験者には、画像を要する来院の±７日以内にイメージングを行うことができる。治療フェーズの間の治療来院及び評価については、「時間及び事象のスケジュール」を参照されたい。
【０１０２】
ＰＫ及び薬カ学に関する試料採取日には、被験者は試験来院の朝に自宅で試験薬剤を服用してはならない。試験薬剤は現場で服用しなければならない。ＰＫ及び薬カ学に関する試料採取日及び時間の詳細は、「時間及び事象のスケジュール」に示されている。ＰＫ試料採取に関する更なる詳細についてはセクション９．３に示す。ＰＫ及び薬カ学に関する血液試料の取り扱い及び保管手順の詳細は、実験マニュアルに示されている。
【０１０３】
臨床評価及び臨床検査は、臨床的に必要であれば、より頻繁に繰り返して行うことができる。試験薬剤による治療は、疾患の進行、許容されない毒性、死亡、又はスポンサーが試験を中止するまで継続する。被験者が試験薬剤を一旦中止した場合、被験者は試験薬剤の最後の投与後３０日以内に治療終了（End-of-Treatment）（ＥｏＴ）時の来院を完了し、フォローアップフェーズに入らなければならない。
【０１０４】
治療終了時の来院
治療終了時の来院は、試験薬剤の最後の投与後３０日以内又は新たな抗前立腺癌治療薬の投与前（どちらか早い方）に予定されなければならない。被験者がＥｏＴ来院のために検査所に来院することができない場合、被験者には試験薬剤の最後の投与後３０日以内に生じるＡＥを収集するために連絡が取られなければならない。
【０１０５】
フォローアップフェーズ
被験者が治療フェーズを完了した時点で、生存フォローアップ及びＳＳＥを、来診、電話での問診、カルテ審査、又はその他の都合のよい方法によって３ヶ月ごとに実施する。因果関係にかかわらず死亡例及び試験薬剤に関連すると考えられるＳＡＥは、事象の発見又は通知の２４時間以内に収集し報告する。フォローアップ情報が電話での連絡により得られる場合、ソースドキュメントでの検討を行うために通話内容を書き取った記録がなければならない。
【０１０６】
ＤＮＡ修復異常についてのバイオマーカー陽性試料
被験者がバイオマーカー陽性であるかを評価するため、被験者にとってより便利でありながら、バイオマーカー陽性状態を決定するための組織に基づいた分析よりも速やかな方法を提供する、血液に基づいたアッセイが試験期間中に利用できるようになり得る。血液に基づいたアッセイが利用可能となる前に、腫瘍組織（保管されているか、又は最近採取されたもの）の分析を行う必要がある。どの時点で試験に入ったかにかかわらず、すべての被験者が分析（すなわち、一致試験及びブリッジング試験）に使用できる同じバイオマーカーデータを有するように、腫瘍組織及び血液試料の両方を事前スクリーニングのインフォームドコンセントフォーム（ＩＣＦ）に署名したすべての被験者から得る。バイオマーカー陽性を判定するためのプロセスは、血液に基づいたアッセイが利用可能となる前に事前スクリーニングフェーズに入る被験者では、血液に基づいたアッセイが利用可能となった後で事前スクリーニングフェーズに入る被験者と比較して異なる。しかしながら、腫瘍組織及び血液の両方におけるバイオマーカー陽性の状態はすべての被験者について評価を行う。
【０１０７】
試験に適性を有すると判断されるためには、被験者は腫瘍組織（保管されているか、又は最近採取されたもの）又は利用可能な場合には血液検査によってバイオマーカー陽性であることが確認されなければならない。この試験で対象とされるバイオマーカー及びバイオマーカー陽性の基準を表３に示す。二対立遺伝子損失の代理となるもの（例えばコピー数の喪失をともなう突然変異の同時発現頻度）を定義するために分析を行い、これらの代理を、かかる情報が入手可能になった際にバイオマーカー陽性の判定に用いることができる。
【０１０８】
【表３】
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すべての遺伝子における一対立遺伝子喪失は、二対立遺伝子喪失に関する既存のアルゴリズムの有効性が確認されるまで試験へのエントリーは許容される。
【０１０９】
循環腫瘍細胞
血液試料を「時間及び事象のスケジュール」に示された時点でＣｅｌｌｓａｖｅチューブに採取する。ＣＴＣの計数は、中央臨床検査室で評価して試験薬剤への反応を評価する。
【０１１０】
ＲＮＡ用の全血
全血試料をＰａｘｇｅｎｅチューブに採取する。前立腺腫瘍に見られる複数のリボ核酸（ＲＮＡ）転写産物がＲＮＡ中で検出可能であり、これらの試料の分析は、ニラパリブによって生じ得る抵抗性の潜在的な機序の評価を可能とする。
【０１１１】
循環腫瘍ＤＮＡ
治療過程で採取した血漿試料を用いて、循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）により経時的に観察されるＤＮＡ修復異常のレベル又は種類の変化についてスクリーニングし、ニラパリブに対する抵抗性の潜在的なマーカーについて監視する。
【０１１２】
上記の明細書は、説明を目的として与えられる実施例とともに本発明の原理を教示するものであるが、本発明の実施には、以下の特許請求の範囲及びその均等物の範囲内に含まれるすべての通常の変形例、適合例及び／又は改変例が包含される点が理解されるであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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