(57)【要約】肝疾患の予防または治療用薬学的組成物が提供される。肝疾患の予防または治療用薬学的組成物は、化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む。
2019535659.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む肝疾患の予防または治療用薬学的組成物。
【化１】
2019535659.tif 000031
（前記式において、
Ａは、Ｓであり、
Ｒは、非置換されるか、独立して、または選択的に１または２以上のＣ６〜Ｃ１０のアリールで置換された直鎖状または測鎖状のＣ１〜Ｃ５のアルキル、非置換されるか、独立して、または選択的にハロゲン及び直鎖状または測鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルコキシ基が、１または２以上に置換されたベンジルまたはヒドロキシカルボニルで置換されたベンジルであり、
Ｙは、Ｈまたはハロゲン元素である）。
【請求項２】
前記肝疾患は、非アルコール性脂肪肝炎、肝線維症及び肝硬変症のうち１つ以上を含む請求項１に記載の肝疾患の予防または治療用薬学的組成物。
【請求項３】
前記化学式１は、下記化学式Ａで表される化合物である請求項１に記載の肝疾患の予防または治療用薬学的組成物。
【化２】
2019535659.tif 000032
。
【請求項４】
下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む肝疾患の予防または治療用経口投与剤。
【化３】
2019535659.tif 000033
（前記式において、
Ａは、Ｓであり、
Ｒは、非置換されるか、独立して、または選択的に１または２以上のＣ６〜Ｃ１０のアリールで置換された直鎖状または測鎖状のＣ１〜Ｃ５のアルキル、非置換されるか、独立して、または選択的にハロゲン及び直鎖状または測鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルコキシ基が、１または２以上に置換されたベンジルまたはヒドロキシカルボニルで置換されたベンジルであり、
Ｙは、Ｈまたはハロゲン元素である）。
【請求項５】
メチルセルロース（ＭＣ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及び蒸留水からなる群から選択される１つ以上を含む賦形剤をさらに含む請求項４に記載の肝疾患の予防または治療用経口投与剤。
【請求項６】
前記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、粉末状にカプセル剤内に充填される請求項４に記載の肝疾患の予防または治療用経口投与剤。
【請求項７】
前記肝疾患は、非アルコール性脂肪肝炎及び肝線維症のうち１つ以上を含む請求項４に記載の肝疾患の予防または治療用経口投与剤。
【請求項８】
前記化学式１は、下記化学式Ａで表される化合物である請求項４に記載の肝疾患の予防または治療用経口投与剤。
【化４】
2019535659.tif 000034
。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肝疾患の予防または治療、さらには、非アルコール性脂肪肝炎、肝線維化及び肝硬変症の予防または治療に有用に使われるアデノシン誘導体を含む薬学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アデノシン（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ）は、特殊な細胞膜の受容体を通じて多くの生理学的機能を行う物質であって、細胞外に存在するアデノシンは、多くの生理学的体系で神経伝達物質として作用するが、一般的に、与えられた器官の過多活動を補償し、ストレスの有害な効果から保護する作用を行う（Ｊａｃｏｂｓｏｎ，Ｋ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３５，４０７−４２２，１９９２）。このような作用は、細胞内または細胞外のＡＴＰ（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ）が分解されて生成されたアデノシンによる細胞のエネルギー要求を減らし、酸素の供給を増加させようとする部分的に生成された陰性フィードバックループ（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｆｅｅｄｂａｃｋ  ｌｏｏｐ）によるものである。アデノシンは、脳、心臓、腎臓のような必須的な器官の恒常性保持のために重要であり、例えば、脳に外部からアデノシンアゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ）を投与すれば、神経保護作用があることが証明されており、疼痛、認知、運動または睡眠にもかかわっていることが知られている。
【０００３】
アデノシン受容体（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）は、現在まで薬理学的研究及び分子クローニングを通じて、それぞれＰ１とＰ２受容体とに分類される。Ｐ１受容体は、アデノシンが基質として作用し、Ｐ２受容体は、ＡＴＰ、ＡＤＰ、ＵＴＰ及びＵＤＰが基質として作用して、生理活性を発現する。そのうちから、Ｐ１受容体は、４個の互いに異なるサブタイプのアデノシン受容体が確認され、リガンド（ｌｉｇａｎｄ）に対する親和力、体内分布、作用経路などによって、Ａ１、Ａ２またはＡ３に分類され、Ａ２は、再びＡ２ＡとＡ２Ｂとに分類される。これらアデノシン受容体は、Ｇタンパク質共役受容体（Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）群の一部類であって、アデノシンＡ１、Ａ２Ａ及びＡ２Ｂ受容体は、多くの選択的なリガンドを使用して薬理学的に確認されているが、アデノシンＡ３受容体は、１９９２年に最初に明らかになった受容体（Ｚｈｏｕ，Ｑ．Ｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８９，７４３２−７４３６，１９９２）であって、この受容体の病態生理学的な機能を確認するために多くの研究がなされている。
【０００４】
アデノシンＡ１及びＡ２受容体アゴニストは、主にアデノシンの誘導体であって、血圧降下剤、精神病治療剤、不整脈治療剤、脂肪代謝抑制剤（糖尿病治療剤）、脳保護剤として多く研究され、その拮抗剤（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）は、キサンチン（ｘａｎｔｈｉｎｅ）誘導体であるか、多様な二環式が接合されたものであって、喘息治療剤、抗うつ剤、不整脈治療剤、腎臓保護剤、パーキンソン病治療剤、知能開発剤などとして開発されている。それにも拘らず、現在商品化されたものは、上室性頻拍（ｓｕｐｒａｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）の治療目的として使用中であるアデノシン自体と心臓手術後に来る血液凝固を防止するために、ワーファリン（ｗａｒｆａｒｉｎ）の補助剤として使用中であるアデノシン運搬阻害剤であるジピリダモール（ｄｉｐｙｒｉｄａｍｏｌｅ）だけである。このように商品化が円滑ではない理由は、アデノシン受容体が全身に広がっており、受容体の活性化時に伴われる多様な薬理作用のためであり、すなわち、所望の組織のアデノシン受容体のみを活性化させることができる化合物がないためである。
【０００５】
アデノシン受容体のうち、アデノシンＡ３受容体は、広く知られたアデノシンＡ１及びＡ２の受容体とは異なって、最も最近に明らかになった受容体であって、その役割が多く明らかになっておらず、選択的な受容体調節剤の開発のために多くの研究が進行中である。アデノシンＡ３受容体を薬理学的に研究するために、［１２５Ｉ］ＡＢＡ（Ｎ６−（４−アミノ−３−［１２５Ｉ］ヨードベンジル）−アデノシン、Ｎ６−（４−ａｍｉｎｏ−３−［１２５Ｉ］ｉｏｄｏｂｅｎｚｙｌ）−ａｄｅｎｏｓｉｎｅ）、［１２５Ｉ］ＡＰＮＥＡ（Ｎ６−２−（４−アミノ−３−［１２５Ｉ］ヨードフェニル）−エチルアデノシン、Ｎ６−２−（４−ａｍｉｎｏ−３−［１２５Ｉ］ｉｏｄｏｐｈｅｎｙｌ）−ｅｔｈｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ）または［１２５Ｉ］ＡＢ−ＭＥＣＡ（（Ｎ６−（４−アミノ−３−［１２５Ｉ］ヨードベンジル）−アデノシン−５’−Ｎ−メチルカルボキサミド、Ｎ６−（４−ａｍｉｎｏ−３−［１２５Ｉ］ｉｏｄｏｂｅｎｚｙｌ）−ａｄｅｎｏｓｉｎｅ−５’−Ｎ−ｍｅｔｈｙｌｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ）である３個の放射性標職されたリガンドが用いられている。前記放射性標職されたリガンドを利用した薬理学的に研究を通じて、アデノシンＡ３受容体をチャイニーズハムスター卵巣（Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｈａｍｓｔｅｒ  Ｏｖａｒｙ、ＣＨＯ）細胞に発現させた時、Ａ３受容体は、ＡＴＰからｃＡＭＰを生成させる酵素であるアデニリルシクラーゼ（ａｄｅｎｙｌｙｌ  ｃｙｃｌａｓｅ）の抑制作用があり、Ａ３受容体は、アゴニストによって活性化される時、脳でホスファチジルイノシトール（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ  ｉｎｏｓｉｔｏｌ）を分解させて、イノシトールリン酸（ｉｎｏｓｉｔｏｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）とＤＡＧとを生成させる酵素であるＧＴＰ−依存性ホスホリパーゼＣ（Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ  ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ｃ）を活性化させるという事実が証明されている（Ｒａｍｋｕｍａｒ，Ｖ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６８，１６８８７１−１６８８９０，１９９３；Ａｂｂｒａｃｃｈｉｏ，Ｍ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４８，１０３８−１０４５，１９９５）。このような発見は、脳虚血（ｂｒａｉｎ  ｉｓｃｈｅｍｉａ）でのＡ３受容体活性化作用による反応経路の可能性を説明可能にするが、その理由は、このような２次伝達物質体系が脳虚血での神経傷害の反応経路を意味するためである。また、Ａ３受容体のアゴニストは、炎症媒介体である腫瘍壊死因子ＴＮＦ−α（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ）の放出を抑制し、やはり炎症媒介体であるＭＩＰ−１α、インターロイキン−１２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２）及びインターフェロン−γ（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−γ）の生成を抑制し、癲癇のような脳疾患に対する保護効果だけでなく、心臓に対しても保護効果があると知られている。一方、アデノシンＡ３受容体の不活性化は、肥満細胞（ｍａｓｔ  ｃｅｌｌ）からヒスタミンのような炎症誘発因子の放出を引き起こせ、気管支を収縮する作用を行い、免疫細胞で細胞死（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）を引き起こせる。したがって、アデノシンＡ３拮抗剤は、消炎剤及び喘息治療剤としての開発可能性がある。したがって、薬物学的選択性を有した化合物を開発することができるならば、喘息、炎症、脳虚血、心臓疾患、癌など多様な疾病に対する新たな治療薬物の開発が可能であると考えられる。
【０００６】
現在まで研究開発された物質のうち、代表的なヒトアデノシンＡ３アゴニストは、ヌクレオシド系であるＮ６−（３−ヨードベンジル）−５’−（Ｎ−メチルカルバモイル）−アデノシン（Ｎ６−（３−ｉｏｄｏｂｅｎｚｙｌ）−５’−（Ｎ−ｍｅｔｈｙｌｃａｒｂａｍｏｙｌ）−ａｄｅｎｏｓｉｎｅ；ＩＢ−ＭＥＣＡ）及びＮ６−（３−ヨードベンジル）−２−クロロ−５’−（Ｎ−メチルカルバモイル）−アデノシン（Ｎ６−（３−ｉｏｄｏｂｅｎｚｙｌ）−２−ｃｈｌｏｒｏ−５’−（Ｎ−ｍｅｔｈｙｌｃａｒｂａｍｏｙｌ）−ａｄｅｎｏｓｉｎｅ；ＣＩ−ＩＢ−ＭＥＣＡ）であって、アデノシンＡ１及びＡ２受容体に比較して、Ａ３受容体に対して高い親和力及び選択性を有する物質である。一方、高い親和力及び選択性を示すアデノシンＡ３拮抗剤は、ほとんどヌクレオシド骨格ではない非プリン（ｎｏｎｐｕｒｉｎｅ）系の二環式化合物であって、ヒトの受容体では高い活性を示しているが、ラットのＡ３受容体に対しては活性が弱いか、ほとんどないので、臨床適用が可能な薬物の開発のために必須的な動物実験が不可能であるという短所が指摘されている（Ｂａｒａｌｄｉ，Ｐ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１２，１３１９−１３２９，２００５）。しかし、非プリン系の二環式化合物に比べて、ヌクレオシド系の化合物は、種間に関係なく、高い親和力と選択性とを示すために、動物実験が容易な長所があるので、新薬としての開発可能性が非常に大きいと考えられ、したがって、この系列の選択的Ａ３拮抗剤の導出が至急な課題であると言える。
【０００７】
本発明者らは、多様な先行研究の分析を通じて、アデノシンＡ３受容体のアゴニストとして作用するためには、その代表物質であるＩＢ−ＭＥＣＡとＣＩ−ＩＢ−ＭＥＣＡとの構造のうち、糖の５位のＮ−メチルカルバモイル基が必然的に存在しなければならず、塩基部分は、プリンの６番位置がアリールアミノ基またはアルキルアミノ基で置換されていなければならないということが分かった。したがって、糖の５位のＮ−メチルカルバモイル基は、水素結合を通じて受容体のアゴニスト作用に必須的な構造変化（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｎｇｅ）を起こすので（Ｋｉｍ，Ｓ−Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｇｒａｐｈ．Ｍｏｄｅｌ．，２５，５６２−５７７，２００６）、糖の５位のＮ−メチルカルバモイル基を除去した物質を合成すれば、Ａ３受容体拮抗剤として開発されると考えられる。
【０００８】
一方、肝疾患（ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ）のうち、非アルコール性脂肪肝炎（Ｎｏｎａｌｃｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ；ＮＡＳＨまたはＮｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ；ＮＡＦＬＤ）とは、飲酒ではない肥満、糖尿病、高脂血症、薬物などから起因する疾患である。
【０００９】
非アルコール性脂肪肝炎は、肝細胞内に脂肪が蓄積されながら肝細胞の変性／壊死が発生し、これによる炎症及び肝線維化（ｌｉｖｅｒ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）によって肝硬化（ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ）及び肝癌（ｌｉｖｅｒ  ｃａｎｃｅｒ）に発展するために、全世界的に深刻な疾患として認識されている。
【００１０】
これにより、本発明者らは、非アルコール性脂肪肝炎、肝線維症及び肝硬変症の予防及び治療剤としてアデノシンＡ３受容体拮抗剤を最初に研究して、肝組織の脂肪症（ｓｔｅａｔｏｓｉｓ）、炎症（ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）及びバルーニング（ｂａｌｌｏｏｎｉｎｇ）を抑制して、非アルコール性脂肪肝炎の緩和活性があり、肝組織の纎維化に対する抑制効能がある新規なアデノシン誘導体化合物を合成することにより、本発明を完成した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明が解決しようとする課題は、非アルコール性脂肪肝炎、肝線維症、肝硬変症などの肝疾患を予防または治療することができるアデノシンＡ３受容体拮抗剤として作用するアデノシン誘導体を含む薬学的組成物を提供するところにある。
【００１２】
本発明の課題は、前述した技術的課題に制限されず、言及されていないさらに他の技術的課題は、下記の記載から当業者に明確に理解されるであろう。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
前述した課題を解決するための本発明の一実施例による肝疾患の予防または治療用薬学的組成物は、下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む。
【００１４】
【化１】
2019535659.tif 000003
【００１５】
（前記式において、
【００１６】
Ａは、Ｓであり、
【００１７】
Ｒは、非置換されるか、独立して、または選択的に１または２以上のＣ６〜Ｃ１０のアリールで置換された直鎖状または測鎖状のＣ１〜Ｃ５のアルキル、非置換されるか、独立して、または選択的にハロゲン及び直鎖状または測鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルコキシ基が、１または２以上に置換されたベンジルまたはヒドロキシカルボニルで置換されたベンジルであり、
【００１８】
Ｙは、Ｈまたはハロゲン元素である）。
【００１９】
前記肝疾患は、非アルコール性脂肪肝炎、肝線維症及び肝硬変症のうち１つ以上を含みうる。
【００２０】
前記化学式１は、下記化学式Ａで表される化合物であり得る。
【００２１】
【化２】
2019535659.tif 000004
。
【００２２】
前述した課題を解決するための本発明の他の実施例による肝疾患の予防または治療用経口投与剤は、下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む。
【００２３】
【化３】
2019535659.tif 000005
【００２４】
（前記式において、
【００２５】
Ａは、Ｓであり、
【００２６】
Ｒは、非置換されるか、独立して、または選択的に１または２以上のＣ６〜Ｃ１０のアリールで置換された直鎖状または測鎖状のＣ１〜Ｃ５のアルキル、非置換されるか、独立して、または選択的にハロゲン及び直鎖状または測鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルコキシ基が、１または２以上に置換されたベンジルまたはヒドロキシカルボニルで置換されたベンジルであり、
【００２７】
Ｙは、Ｈまたはハロゲン元素である）。
【００２８】
また、メチルセルロース（Ｍｅｔｈｙｌ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ、ＭＣ）、ジメチルスルホキシド（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ、ＤＭＳＯ）、ポリエチレングリコール（Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ、ＰＥＧ）、及び蒸留水からなる群から選択される１つ以上を含む賦形剤をさらに含みうる。
【００２９】
前記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、粉末状にカプセル剤内に充填されるものである。
【００３０】
前記肝疾患は、非アルコール性脂肪肝炎及び肝線維症のうち１つ以上を含みうる。
【００３１】
前記化学式１は、下記化学式Ａで表される化合物であり得る。
【００３２】
【化４】
2019535659.tif 000006
。
【００３３】
その他の実施例の具体的な事項は、詳細な説明及び図面に含まれている。
【発明の効果】
【００３４】
本発明のアデノシン誘導体は、非アルコール性脂肪肝炎、肝線維症及び肝硬変症を緩和する効能を有するアデノシンＡ３受容体拮抗剤として作用し、経口投与時に、薬物の吸収に優れ、体内毒性がほとんどない生体親和的な物質であるために、肝疾患の予防及び治療に非常に適した薬学的組成物として使われる。
【００３５】
本発明の実施例による効果は、以上で例示された内容によって制限されず、さらに多様な効果が、本明細書内に含まれている。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】アゴニストとしてＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡを処理したチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞に対して、本発明の実施例４の化合物の拮抗効果を示す図面である。
【図２】本発明の化合物（実施例２、実施例３及び実施例４）の動物実験による抗炎症活性を示す図面である。
【図３】本発明の化合物（実施例１及び実施例６）の動物実験による抗炎症活性を示す図面である。
【図４】本発明の化合物（実施例５、実施例７及び実施例８）の動物実験による抗炎症活性を示す図面である。
【図５】本発明の化合物（実施例１５及び実施例１６）の動物実験による抗炎症活性を示す図面である。
【図６】実験例９で実験動物の肝の脂肪症程度を数値化して示すグラフである。
【図７】実験例９で実験動物の肝の炎症程度を数値化して示すグラフである。
【図８】実験例９で実験動物の肝のバルーニング程度を数値化して示すグラフである。
【図９】実験例９で実験動物の肝の脂肪症、炎症及びバルーニングに対する数値を総合して非アルコール性脂肪肝炎に対する活性を算出したグラフである。
【図１０】実験例９で実験動物の肝の纎維症発生程度を観察した顕微鏡写真（ｐｈｏｔｏｍｉｃｒｏｇｒａｐｈ）である。
【図１１】実験例９で実験動物の肝の纎維症発生面積を示すグラフである。
【図１２】実験例１１（１１−１及び１１−２）の血中濃度−時間データから得たグラフである。
【図１３】実験例１２（１２−１及び１２−２）の血中濃度−時間データから得たグラフである。
【図１４】実験例１３の血中濃度−時間データから得たグラフである。
【図１５】実験例１４（１４−１、１４−２及び１４−３）の血中濃度−時間データから得たグラフである。
【図１６】実験例１５（１５−１及び１５−２）の血中濃度−時間データから得たグラフである。
【図１７】実験例１７でＡ３  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ（Ａ３  ＡＲ）の発現をリアルタイム重合酵素連鎖反応（Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ、ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲ）を通じて確認した結果を示すグラフである。
【図１８】実験例１８でＴｉｍｐｌ、Ｃｏｌｌａｌ及びＡｃｔａ２（ｏｔＳＭＡ）の発現をリアルタイムＰＣＲ（ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲ）で分析した結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
本研究は、韓国保健福祉部の財源で韓国保健産業振興院の保健医療技術研究開発事業支援によってなされたものである（課題固有番号：ＨＩ１７Ｃ−２２６２−０３００１７）。
【００３８】
（Ｔｈｉｓ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｗａｓ  ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ  ｂｙ  ａ  ｇｒａｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｋｏｒｅａ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｒ＆Ｄ  Ｐｒｏｊｅｃｔ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  Ｋｏｒｅａ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＫＨＩＤＩ）、ｆｕｎｄｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｍｉｎｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ＆  Ｗｅｌｆａｒｅ、Ｒｅｐｕｂｌｉｃ  ｏｆ  Ｋｏｒｅａ（ｇｒａｎｔ  ｎｕｍｂｅｒ：ＨＩ１７Ｃ−２２６２−０３００１７））。
【００３９】
［本発明を支援した研究開発事業］
【００４０】
課題固有番号：ＨＩ１７Ｃ−２２６２−０３００１７
【００４１】
部署名：保健福祉部
【００４２】
研究管理専門機関：ピチュメディシン株式会社
【００４３】
研究事業名：保健医療技術研究開発事業
【００４４】
研究課題名：臨床１相ＩＮＤ承認のためのＣＭＣ、毒性及び薬動学を含んだ非臨床試験完了
【００４５】
寄与率：１／１
【００４６】
主管機関：韓国漢陽大学校産学協力団
【００４７】
研究期間：２０１７．０８．２５−２０１８．１２．３１．
【００４８】
以下、本発明を詳しく説明する。
【００４９】
本発明は、下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含有するアデノシン誘導体を提供する。
【００５０】
【化５】
2019535659.tif 000007
【００５１】
前記式において、
【００５２】
Ａは、 ＯまたはＳであり、
【００５３】
Ｒは、非置換されるか、独立して、または選択的に１または２以上のＣ６〜Ｃ１０のアリールで置換された直鎖状または測鎖状のＣ１〜Ｃ５のアルキル、非置換されるか、独立して、または選択的にハロゲン及び直鎖状または測鎖状のＣ１〜Ｃ４のアルコキシ基が、１または２以上に置換されたベンジルまたはヒドロキシカルボニルで置換されたベンジルであり、
【００５４】
Ｙは、Ｈまたはハロゲン元素である。
【００５５】
望ましくは、
【００５６】
前記Ａは、ＯまたはＳであり、
【００５７】
前記Ｒは、メチル、エチル、プロピル、ナフチルメチル、ベンジル、独立して、または選択的にＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、及びＣ１〜Ｃ３のアルコキシ基からなる群から選択される１または２以上の置換基で置換されたベンジル、またはトルイル酸（ｔｏｌｕｉｃ  ａｃｉｄ）であり、
【００５８】
前記Ｙは、ＨまたはＣｌである。
【００５９】
さらに望ましくは、
【００６０】
前記Ａは、ＯまたはＳであり、
【００６１】
前記Ｒは、メチル、エチル、１−ナフチルメチル、ベンジル、２−クロロベンジル、３−フルオロベンジル、３−クロロベンジル、３−ブロモベンジル、３−ヨードベンジル、２−メトキシ−５−クロロベンジル、２−メトキシベンジルまたは３−トルイル酸であり、
【００６２】
前記Ｙは、ＨまたはＣｌである。
【００６３】
本発明による前記化学式１で表されるアデノシン誘導体の望ましい例は、次の通りである。
【００６４】
１）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−フルオロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；
【００６５】
２）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−クロロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；
【００６６】
３）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−ブロモベンジルアミノ）−２−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；
【００６７】
４）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−ヨードベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；
【００６８】
５）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（２−クロロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；
【００６９】
６）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（５−クロロ−２−メトキシベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；
【００７０】
７）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（２−メトキシベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；
【００７１】
８）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（ナフタレン−１−イルメチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；
【００７２】
９）３−（（２−クロロ−９−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロチオフェン−２−イル）−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）メチル）安息香酸；
【００７３】
１０）２−（２−クロロ−６−メチルアミノ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；
【００７４】
１１）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−フルオロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；
【００７５】
１２）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−クロロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；
【００７６】
１３）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−ブロモベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；
【００７７】
１４）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−ヨードベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；
【００７８】
１５）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−２−（６−（３−ブロモベンジルアミノ）−２−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオール；及び
【００７９】
１６）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−２−（２−クロロ−６−（３−ヨードベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオール。
【００８０】
本発明による前記化学式１で表されるアデノシン誘導体は、薬学的に許容可能な塩の形態で使用することができる。前記塩としては、薬学的に許容される多様な有機酸または無機酸によって形成された酸付加塩が有用である。適した有機酸としては、例えば、カルボン酸、ホスホン酸、スルホン酸、酢酸、プロピオン酸、オクタン酸、デカン酸、グリコール酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、アジピン酸、リンゴ酸、酒石酸、シトロン酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、マイレン酸、安息香酸、サリチル酸、フタル酸、フェニル酢酸、ベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、メチル硫酸、エチル硫酸、ドデシル硫酸などを使用し、適した無機酸としては、例えば、塩酸、硫酸などのハロゲン酸またはリン酸などを使用することができる。
【００８１】
本発明による前記化学式１で表されるアデノシン誘導体は、薬学的に許容可能な塩だけではなく、通常の方法によって製造可能なあらゆる塩、水化物及び溶媒化物をいずれも含みうる。
【００８２】
また、本発明は、前記化学式１で表されるアデノシン誘導体を製造する方法を提供する。
【００８３】
具体的に、下記の反応式１に示されたように、
【００８４】
化学式２の化合物を出発物質として、ルイス酸触媒の存在下でシリル化されたプリン化合物と反応させて、化学式３のβ−アノマー化合物を得る段階（段階１）；前記段階１で得た化学式３の化合物に塩酸を添加して、化学式４のジオール化合物を得る段階（段階２）；及び前記段階２で得た化学式４のジオール化合物を塩基触媒下でアミン化合物と反応させて、アデノシン誘導体を得る段階（段階３）；を含んでなる化学式１のアデノシン誘導体の製造方法を提供する。
【００８５】
【化６】
2019535659.tif 000008
【００８６】
前記反応式１において、Ａ、Ｒ及びＹは、化学式１で定義したようである。
【００８７】
以下、本発明の製造方法を段階別に詳細に説明する。
【００８８】
本発明による段階１は、化学式２の化合物を出発物質として、ルイス酸触媒の存在下でシリル化されたプリン化合物と反応させて、化学式３のβ−アノマー化合物を得る段階である。
【００８９】
前記化学式３の化合物は、化学式２の化合物とシリル化されたプリン化合物とをルイス酸存在下で反応させて得られるが、前記ルイス酸としては、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホナート（ＴＭＳＯＴｆ）を使用することができる。また、前記段階１の溶媒としては、ジクロロエタン、クロロホルム、アセトニトリル、ジクロロメタンなどを使用することが望ましい。その中でも、ジクロロエタンがさらに望ましい。前記シリル化されたプリン化合物は、化学式５のプリン化合物をヘキサメチルジシラザン（ＨＭＤＳ）及び硫酸アンモニウム触媒下で反応させて得られる。
【００９０】
本発明による段階２は、前記段階１で得た化学式３の化合物に塩酸を添加して、化学式４のジオール化合物を得る段階である。この際、塩酸の代わりに、酢酸、硫酸、ｐ−トルエンスルホン酸を使用することができる。
【００９１】
本発明による段階３は、前記段階２で得た化学式４のジオール化合物を塩基触媒下でアミン化合物と反応させて、アデノシン誘導体を得る段階である。
【００９２】
前記塩基触媒としては、トリエチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン、１，４−ジオキサンなどを使用することが望ましく、その中でも、トリエチルアミンがさらに望ましい。また、段階３の溶媒としては、メタノール及びエタノールのような低級アルコールあるいは１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン及びクロロホルムのような溶媒が望ましい。
【００９３】
本発明のアデノシン誘導体の製造方法において、出発物質である化学式２の化合物は、置換基Ａの種類によって、下記の反応式２または反応式３の方法で製造可能である。
【００９４】
Ａが硫黄（Ｓ）である場合、下記の反応式２に示されたように、
【００９５】
化学式６のＤ−マンノース化合物を酸触媒下で２，２−ジメトキシプロパンと反応させて、化学式７のジアセトニド化合物を得る段階（段階ａ１）；前記段階ａ１で得た化学式７の化合物を還元剤存在下に開環させて、化学式８のジオール化合物を得る段階（段階ａ２）；前記段階ａ２で得た化学式８の化合物をメシル化して、化学式９のジメシル化合物を得る段階（段階ａ３）；前記段階ａ３で得た化学式９の化合物を環化させて、化学式１０のチオ糖化合物を得る段階（段階ａ４）；前記段階ａ４で得た化学式１０の化合物を選択的に加水分解させて、化学式１１のジオール化合物を得る段階（段階ａ５）；及び前記段階ａ５で得た化学式１１の化合物を触媒存在下に化学式２ａのアセテート化合物を得る段階（段階ａ６）；を含んでなる。
【００９６】
【化７】
2019535659.tif 000009
【００９７】
（前記反応式２において、化合物２ａは、化学式２の化合物である）。
【００９８】
以下、本発明の化学式２の化合物の製造方法を段階別に詳細に説明する。
【００９９】
本発明の化学式２の化合物の製造方法による前記段階ａ１は、化学式６のＤ−マンノース化合物を酸触媒下で２，２−ジメトキシプロパンと反応させて、化学式７のジアセトニド化合物を得る段階である。
【０１００】
前記化学式７の化合物は、化学式６のＤ−マンノースを酸触媒及び無水酢酸存在下に２，２−ジメトキシプロパンと反応させて得られるが、この際、前記酸触媒としては、濃い硫酸または塩酸ガスのような無機酸、ｐ−トルエンスルホン酸のような有機酸を使用することができる。
【０１０１】
本発明の化学式２の化合物の製造方法による前記段階ａ２は、前記段階ａ１で得た化学式７の化合物を還元剤存在下に開環させて、化学式８のジオール化合物を得る段階である。
【０１０２】
前記化学式８の化合物は、還元剤である水素化ホウ素ナトリウムと反応させて得られる。前記水素化ホウ素ナトリウムの代わりに、水素化アルミニウムリチウムのようなメタルハイドライド、亜硫酸ナトリウムなどを使用することができる。
【０１０３】
本発明の化学式２の化合物の製造方法による前記段階ａ３は、前記段階ａ２で得た化学式８の化合物をメシル化して、化学式９のジメシル化合物を得る段階である。
【０１０４】
前記化学式９の化合物は、化学式８の化合物をメタンスルホニルクロリド（ＭｓＣｌ）と反応させて得られるが、この際、反応溶媒としては、エチルエーテル、石油エーテル、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような不活性溶媒を使用することが望ましい。
【０１０５】
本発明の化学式２の化合物の製造方法による前記段階ａ４は、前記段階ａ３で得た化学式９の化合物を環化させて、化学式１０のチオ糖化合物を得る段階である。
【０１０６】
前記化学式１０の化合物は、化学式９の化合物を硫化ナトリウムと反応させて得られるが、この際、硫化ナトリウムの代わりに、メチルチオアセテートなどのチオエステルと置換反応後、ナトリウムアルコキシドなどを反応させて得られることもある。前記段階ａ４において、溶媒としては、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドなどを使用することができる。
【０１０７】
本発明の化学式２の化合物の製造方法による前記段階ａ５は、前記段階ａ４で得た化学式１０の化合物を選択的に加水分解させて、化学式１１のジオール化合物を得る段階である。
【０１０８】
前記化学式１１の化合物は、化学式１０の化合物を酢酸を用いて５，６−アセトニドを選択的に加水分解して得られるが、この際、酢酸の代わりに、硫酸、塩酸、ｐ−トルエンスルホン酸などを使用することもできる。
【０１０９】
本発明の化学式２の化合物の製造方法による前記段階ａ６は、前記段階ａ５で得た化学式１１の化合物を触媒存在下に化学式２ａのアセテート化合物を得る段階である。
【０１１０】
前記化学式２ａの化合物は、化学式１１の化合物をレッドテトラアセテート（Ｐｄ（ＯＡｃ）４）と反応させて得られる。
【０１１１】
また、本発明による出発物質２において、Ａが酸素（Ｏ）である場合、下記の反応式３に示されたように、
【０１１２】
前記出発物質である化学式２の化合物は、下記の反応式３に示されたように、
【０１１３】
化学式１２の化合物を還元剤と反応させて、化学式１３のラクトール化合物を得る段階（段階ｂ１）；及び前記段階ｂ１で得た化学式１３の化合物を無水酢酸と反応させて、化学式２ｂのアセテート化合物を得る段階（段階ｂ２）；を含んでなる。
【０１１４】
【化８】
2019535659.tif 000010
【０１１５】
（前記反応式３において、化合物２ｂは、化学式２の化合物である）。
【０１１６】
以下、本発明の化学式２の化合物のさらに他の製造方法を段階別に詳細に説明する。
【０１１７】
本発明の化学式２の化合物のさらに他の製造方法による前記段階ｂ１は、化学式１２の化合物を還元剤と反応させて、化学式１３のラクトール化合物を得る段階である。
【０１１８】
前記化学式１３の化合物は、容易に合成して得られる化学式１２の化合物を水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ）触媒を用いて還元させて得られる。
【０１１９】
本発明の化学式２の化合物のさらに他の製造方法による前記段階ｂ２は、化学式１３の化合物を無水酢酸と反応させて、化学式２ｂのアセテート化合物を得る段階である。
【０１２０】
前記化学式２の化合物は、化学式１３のラクトール化合物を無水酢酸と反応させて得られる。
【０１２１】
また、本発明は、化学式１で表されるアデノシン誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含有するアデノシンＡ３拮抗剤を提供する。
【０１２２】
さらに、本発明は、化学式１で表されるアデノシン誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含有する炎症性疾患の予防及び治療用薬学的組成物を提供する。
【０１２３】
アデノシンＡ３受容体をチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞に発現させた時、Ａ３受容体は、ＡＴＰからｃＡＭＰを生成させる酵素であるアデニリルシクラーゼの抑制作用があり、Ａ３受容体は、アゴニストによって活性化される時、脳でホスファチジルイノシトールを分解させて、イノシトールリン酸とＤＡＧとを生成させる酵素であるＧＴＰ−依存性ホスホリパーゼＣを活性化させるという事実が証明されている（Ｒａｍｋｕｍａｒ，Ｖ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６８，１６８８７１−１６８８９０，１９９３；Ａｂｂｒａｃｃｈｉｏ，Ｍ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４８，１０３８−１０４５，１９９５）。前記２次伝達物質体系が脳虚血での神経傷害の反応経路を意味するので、このような発見は、脳虚血でのＡ３受容体活性化作用による反応経路を説明することができる。また、アデノシンＡ３アゴニストは、炎症媒介体である腫瘍壊死因子ＴＮＦ−αの放出を抑制し、やはり炎症媒介体であるＭＩＰ−１α、インターロイキン−１２及びインターフェロン−γの生成を抑制し、癲癇のような脳疾患に対する保護効果だけではなく、心臓に対しても保護効果があると知られている。また、アデノシンＡ３受容体の不活性化は、肥満細胞からヒスタミンのような炎症誘発因子の放出を引き起こせ、気管支を収縮させる作用を行い、兔疫細胞で細胞死を引き起こせる。したがって、アデノシンＡ３拮抗剤は、消炎剤及び喘息治療剤としての開発可能性がある。
【０１２４】
本発明のアデノシン誘導体のヒトアデノシン受容体（ｈＡＲ）に対する結合親和力及び選択性を評価するために行った受容体結合親和力（Ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｆｆｉｎｉｔｙ）の測定実験において（実験例１参照）、本発明のアデノシン誘導体は、ヒトアデノシンＡ３（ｈＡ３  ＡＲ）受容体に対して高い結合親和力を示し、アデノシンＡ１及びＡ２Ａ受容体に対しては低い親和力、すなわち、大きな選択性を示した。特に、本発明の実施例１２の化合物は、ｈＡ３受容体に対して、Ｋｉ値が１．５０±０．４０ｎＭに最も高い親和力を示し、その次に、実施例２の化合物（Ｋｉ＝１．６６±０．９０ｎＭ）、実施例１４の化合物（Ｋｉ＝２．５０±１．００ｎＭ）、実施例１０の化合物（Ｋｉ＝３．６９±０．２５ｎＭ）及び実施例４の化合物（Ｋｉ＝４．１６±０．５０ｎＭ）の順に結合親和力が高く表われた。本発明の実施例４の化合物は、また、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞から発現されたラットのアデノシンＡ３受容体に対しても高い親和力（Ｋｉ＝３．８９±１．１５ｎＭ）を示した。また、４’−Ｏであるオキソヌクレオシド形態を帯びるアデノシン誘導体である実施例１５及び実施例１６の化合物も、高い結合親和力と選択性とを示した（表１参照）。
【０１２５】
また、本発明のアデノシン誘導体の抗炎症活性を調査するために行った実験で（実験例３〜実験例６参照）、対照群として用いられたヒドロコルチゾンに比べれば、少ない変化であるが、本発明のアデノシン誘導体が、抗炎症活性を有するということが分かった。
【０１２６】
実施例２〜実施例４の化合物をアセトンに希釈して処理した後、抗炎症活性を調査した結果からＴＰＡによって誘導されたマウス耳浮腫が、化合物４の処理によって浮腫減少効果があることを確認することができた（図２参照）。また、本発明の実施例１及び実施例６の化合物をアセトンに希釈して処理した後、調査した抗炎症活性は、実施例２〜実施例４の化合物よりも４倍以上格段に増加した阻害率を示すことが分かった（図３参照）。
【０１２７】
蒸留水とアセトンとの混合溶媒（１：４）に０．５％に希釈した本発明の実施例５〜実施例７の化合物を用いて調査した抗炎症活性は、それぞれ１７％、３４％及び５３％の炎症阻害率を示した（図４参照）。そして、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）とアセトンとの混合溶媒（１：９）に０．５％に希釈した本発明の実施例１５及び実施例１６の化合物を用いて調査した炎症阻害率は、それぞれ５９％及び７９％に観察されることにより（図５参照）、本発明のアデノシン誘導体化合物が、抗炎症活性を有するということを確認することができた。
【０１２８】
したがって、本発明の化学式１で表されるアデノシン誘導体は、アデノシンＡ３受容体に対して高い結合親和力及び選択性を示すので、優れたアデノシンＡ３拮抗剤として有用に用いられうる。また、本発明のアデノシン誘導体は、アデノシンＡ３受容体に対して拮抗作用して抗炎症活性を示すので、炎症性疾患の予防及び治療剤として利用できる。
【０１２９】
また、本発明による前記炎症性疾患としては、変質性炎症、滲出性炎症、化膿性炎症、出血性炎症または増殖性炎症などの急性及び慢性炎症疾患を含む。
【０１３０】
以下、本発明のアデノシン誘導体またはその薬学的に許容可能な塩の組成物において、剤型方法及び賦形剤を説明するが、これら例のみで限定されるものではない。本発明の組成物は、全身的または局部的に投与される。
【０１３１】
本発明の誘導体を剤形化する場合には、通常の充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を使用して調剤することができる。経口投与のための固型剤型には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、このような固型製剤は、１つ以上の化学式１の化合物に少なくとも１つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム、スクロース（ｓｕｃｒｏｓｅ）またはラクトース（ｌａｃｔｏｓｅ）、ゼラチンなどを混ぜて調剤することができる。また、単純な賦形剤の以外に、ステアリン酸マグネシウム、タルクのような潤滑剤も使用することができる。経口のための液状剤型としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが該当するが、よく使われる単純希釈剤である水、流動パラフィンの以外に、さまざまな賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれうる。
【０１３２】
非経口投与のための剤型には、注射剤、乳剤、吸入剤、座剤などが含まれる。注射剤は、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、オレイン酸エチルのようなエステルなどの滅菌された水性溶剤、非水性溶剤及び懸濁剤が使われ、座剤の基剤としては、ウイテプゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴ−ル、トウイーン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが使われる。また、局所適用のためには、本発明の化合物を軟膏やクリームで剤形化することができる。
【０１３３】
本発明の組成物の望ましい投与量は、患者の状態及び体重、疾病の程度、薬物形態、投与経路及び期間などの多数の因子によって異なるが、当業者によって適切に選択されうる。望ましくは、本発明の化合物を１日０．００１〜１００ｍｇ／体重ｋｇで、より望ましくは、０．０１〜３０ｍｇ／体重ｋｇで投与する。投与は、一日に一回投与することもでき、数回に分けて投与することができる。組成物で本発明の化合物は、全体組成物総重量に対して０．０００１〜１０重量％、望ましくは、０．００１〜１重量％の量で存在しなければならない。また、投与経路は、患者の状態及びその重症度によって変化することができる。
【０１３４】
本発明は、前記化学式１で表される化合物及び／またはその薬学的に許容可能な塩を含むアデノシン誘導体を有効成分として含有する肝疾患の予防及び／または治療用薬学的組成物を提供する。
【０１３５】
肝疾患は、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨまたはＮＡＦＬＤ）、肝線維症（ｌｉｖｅｒ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）及び肝硬変症（ｌｉｖｅｒ  ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ）を含むあらゆる疾病、疾患、症状などを含みうる。
【０１３６】
前記化学式１で表されるアデノシン誘導体の望ましい例は、下記化学式Ａで表される化合物である（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−クロロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールであり得る。
【０１３７】
【化９】
2019535659.tif 000011
。
【０１３８】
本発明の肝疾患の予防及び／または治療用薬学的組成物は、経口投与剤で剤形化される。
【０１３９】
経口投与剤は、前記化学式１で表される化合物及び／またはその薬学的に許容可能な塩と賦形剤とを含みうる。賦形剤は、メチルセルロース（ＭＣ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、蒸留水（Ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ  ｗａｔｅｒ、ＤＷ）、カプセル剤などからなる群から選択される１つ以上を含みうる。賦形剤の望ましい例は、０．５ｗｔ％のメチルセルロースであり得る。
【０１４０】
経口投与剤は、前記化学式１で表される化合物及び／またはその薬学的に許容可能な塩が粉末状または賦形剤に溶解された溶液状にカプセル剤内に充填されたものである。
【０１４１】
本発明の肝疾患の予防及び／または治療用薬学的組成物は、患者に経口投与される。望ましい投与量は、患者の状態及び体重、疾病の程度、薬物形態、投与経路及び期間など多数の因子を考慮して適切に選択されうる。
【０１４２】
本発明のアデノシン誘導体は、投与量依存的に非アルコール性脂肪肝炎、肝線維症及び肝硬化症を緩和する効能を有するアデノシンＡ３拮抗剤として作用し（実験例９参照）、経口投与時の血中濃度及び安定性に優れ（実験例１０）、体内毒性がほとんどない生体親和的な物質であるために（実験例１１〜実験例１６参照）、肝疾患の予防及び／または治療に非常に適した薬学的組成物として使われる。
【０１４３】
出発物質の製造
【０１４４】
＜製造例１＞
（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イルアセテートの製造
【０１４５】
段階ａ１．（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）−２，２−ジメチル−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オールの製造
【０１４６】
アセトン（５０ml）に、Ｄ−マンノース（１．７４ｇ、６．５２ｍｍｏｌ）と２，２−ジメトキシプロパン（２．４５ml、１９．５５ｍｍｏｌ）とを添加した後、攪拌混合し、０℃に冷却した。これに濃い硫酸（０．４５ｇ、１．９６ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物は、室温で２４時間撹拌した。その混合物にトリエチルアミンを添加して中和させ、減圧濃縮した。濃縮後、得た混合物に対して、ヘキサン：酢酸エチル混合溶媒（１：１、ｖ／ｖ）を展開溶媒として使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行って、白色固体の目的化合物（１．６１ｇ、９５％）を得た。
【０１４７】
ｍｐ  １２０．３−１２０．５℃；
【０１４８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ５．３４（ｓ、１Ｈ）、４．７６−４．７９（ｍ、１Ｈ）、４．５８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、４．３４−４．３９（ｍ、１Ｈ）、４．１５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．６、７．２Ｈｚ）、４．００−４．０８（ｍ、２Ｈ）；
【０１４９】
［α］２５Ｄ  １１．７１（ｃ  ０．１１、ＣＨ２Ｃｌ２）；
【０１５０】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ２６１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５１】
段階ａ２．（１Ｒ）−（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）（（４Ｒ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メタノールの製造
【０１５２】
エタノール（２５ml）に、前記段階ａ１で製造した（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）−２，２−ジメチル−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オール（１．５０ｇ、５．７６ｍｍｏｌ）を気をつけて分配して添加し、０℃に冷却した。これに水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＨＢ４、４４０ｍｇ、１１．５３ｍｍｏｌ）を添加し、室温で２時間撹拌した。その反応混合物を酢酸で中和した後、減圧濃縮した。その混合物を酢酸エチルと水とを用いて抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）で乾燥し、濾過した後、再び減圧濃縮した。濃縮後、得た混合物に対して、ヘキサン：酢酸エチル混合溶媒（１：１、ｖ／ｖ）を展開溶媒として使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行って、シロップ形態の目的化合物（１．３８ｇ、９２％）を得た。
【０１５３】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ４．３３（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．６、７．２Ｈｚ）、４．２４−４．２８（ｍ、１Ｈ）、４．０６−４．１３（ｍ、２Ｈ）、３．９２−３．９７（ｍ、１Ｈ）、３．７６−３．８５（ｍ、２Ｈ）、３．５９−３．６１（ｍ、１Ｈ）、１．４８（ｓ、３Ｈ）、１．３８（ｓ、３Ｈ）、１．３６（ｓ、３Ｈ）、１．３３（ｓ、３Ｈ）；
【０１５４】
［α］２５Ｄ−３．８８（ｃ  ０．４４、ＣＨ２Ｃｌ２）；
【０１５５】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ２６３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５６】
段階ａ３．（１Ｒ）−（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）（（４Ｓ，５Ｓ）−２，２−ジメチル−５−（（メチルスルホニルオキシ）メチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチルメタンスルホン酸の製造
【０１５７】
ジクロロメタン（３００ml）とトリエチルアミン（１６３．７５ml、１．１７ｍｏｌ）との混合物に、前記段階ａ２で製造した（１Ｒ）−（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）（（４Ｒ，５Ｓ）−５−（ヒドロキシメチル）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メタノール（３８．５２ｇ、１４６．８５ｍｍｏｌ）と４−ジメチルアミノピリジン（４−ＤＭＡＰ、５．３８ｍｇ、４４．０６ｍｍｏｌ）とを添加した後、混合し、０℃に冷却した。これにジメタンスルホニルクロリド（４７．５９ml、５８７．４２ｍｍｏｌ）を気をつけて滴加した。１時間室温で撹拌した後に、その反応混合物をジクロロメタンで抽出し、飽和された重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）水溶液で洗浄した。有機層を集める間に無水硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）で乾燥し、濾過した後、再び減圧濃縮した。濃縮後、得た褐色シロップ形態のジメシル化合物に対して、ヘキサン：酢酸エチル混合溶媒（５：１、ｖ／ｖ）を展開溶媒として使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行って、シロップ形態の目的化合物（５７．８３ｇ、９４％）を得た。
【０１５８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ４．７５（ｐｓｅｕｄｏ  ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、４．３３−４．４５（ｍ、４Ｈ）、４．０６−４．２０（ｍ、３Ｈ）、３．１２（ｓ、３Ｈ）、３．０７（ｓ、３Ｈ）、１．５１（ｓ、３Ｈ）、１．４３（ｓ、３Ｈ）、１．３７（ｓ、３Ｈ）、１．３３（ｓ、３Ｈ）；
【０１５９】
［α］２５Ｄ  ３８．３２（ｃ  ０．２９、ＣＨ２Ｃｌ２）；
【０１６０】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ４１９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１６１】
段階ａ４．（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−４−（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソールの製造
【０１６２】
ＤＭＦ（５０ml）に、前記段階ａ３で製造した（１Ｒ）−（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）（（４Ｓ，５Ｓ）−２，２−ジメチル−５−（（メチルスルホニルオキシ）メチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチルメタンスルホン酸（９９３．８０ｇ、２．２３ｍｍｏｌ）を溶解させ、これに硫化ナトリウム（３４８．３０ｇ、４．４６ｍｍｏｌ）を添加した後、その混合物を８０℃で夜から朝まで還流撹拌した。反応完了後、減圧で溶媒を除去し、その残留物を酢酸エチルと水とを用いて抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）で乾燥し、濾過した後、再び減圧濃縮した。濃縮後、得た残留物に対して、ヘキサン：酢酸エチル混合溶媒（８：１、ｖ／ｖ）を展開溶媒として使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行って、シロップ形態の目的化合物（４５３．０ｍｇ、７８％）を得た。
【０１６３】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ４．９２（ｄｔ、１Ｈ、Ｊ＝１．８、５．６Ｈｚ）、４．７２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．０、６．０Ｈｚ）、４．２６−４．３０（ｍ、１Ｈ）、４．０４（ｓ、１Ｈ）、３．７９（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝３．８Ｈｚ）、３．３１−３．３２（ｍ、１Ｈ）、３．１９（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．４、１２．０Ｈｚ）、２．８４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．６、１２．０Ｈｚ）、１．５１（ｓ、３Ｈ）、１．４３（ｓ、３Ｈ）、１．３２（ｄｄ、６Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）；
【０１６４】
［α］２５Ｄ−９６．０４（ｃ  ０．２０、ＣＨ２Ｃｌ２）；
【０１６５】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ２６１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１６６】
段階ａ５．１−（（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）エタン−１，２−ジオールの製造
【０１６７】
６０％酢酸水溶液（２５０ml）に、前記段階ａ４で製造した（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−４−（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール（２１．７８ｇ、８３．６６ｍｍｏｌ）を溶解させ、室温で２時間撹拌した。その反応混合物を減圧で濃縮し、得た残留物に対して、ヘキサン：酢酸エチル混合溶媒（１：２、ｖ／ｖ）を展開溶媒として使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行って、白色固体の目的化合物（１４．８５ｇ、８１％）を得た。
【０１６８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ４．９２（ｄｔ、１Ｈ、Ｊ＝１．８、５．６Ｈｚ）、４．７２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．０、６．０Ｈｚ）、４．２６−４．３０（ｍ、１Ｈ）、４．０４（ｓ、１Ｈ）、３．７９（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝３．８Ｈｚ）、３．３１−３．３２（ｍ、１Ｈ）、３．１９（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．４、１２．０Ｈｚ）、２．８４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．６、１２．０Ｈｚ）、１．５１（ｓ、３Ｈ）、１．４３（ｓ、３Ｈ）、１．３２（ｄｄ、６Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）；
【０１６９】
［α］２５Ｄ−９６．０４（ｃ  ０．２０、ＣＨ２Ｃｌ２）；
【０１７０】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ２６１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１７１】
段階ａ６．（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イルアセテートの製造
【０１７２】
酢酸エチル（３００ml）に、前記段階ａ５で製造した１−（（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）エタン−１，２−ジオール（１４．８５ｇ、６７．４１ｍｍｏｌ）を溶解させ、０℃に冷却した。これにレッドテトラアアセテート（Ｐｂ（ＯＡｃ）４、１５７．３１ｇ、３３７．０６ｍｍｏｌ）を添加した後、室温で夜から朝まで撹拌した。その反応混合物をセライトで濾過し、その濾液を酢酸エチルで希釈した。その有機層をジクロロメタンで希釈し、飽和された重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）水溶液で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した。濃縮後、得た残留物に対して、ヘキサン：酢酸エチル混合溶媒（８：１、ｖ／ｖ）を展開溶媒として使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行って、シロップ形態の目的化合物（８．８２ｇ、６０％）を得た。
【０１７３】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ５．０３（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．６、９．６Ｈｚ）、４．７９（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．６、８．８Ｈｚ）、３．２１−３．２７（ｍ、２Ｈ）、３．０１（ｄｔ、２Ｈ、Ｊ＝０．８、１２．８Ｈｚ）、２．０５（ｓ、３Ｈ）、１．５０（ｓ、３Ｈ）、１．３１（ｓ、３Ｈ）；
【０１７４】
［α］２５Ｄ−２５８．１５（ｃ  ０．１８、ＣＨ２Ｃｌ２）；
【０１７５】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ２１８［Ｍ］＋。
【０１７６】
＜製造例２＞
（３ａＳ，４Ｓ，６ａＳ）−２，２−ジメチル−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イルアセテートの製造
【０１７７】
段階ｂ１．（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）−２，２−ジメチル−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オールの製造
【０１７８】
トルエン（２０ml）に、２，３−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−エリスロノラクトン（２，３−Ｏ−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｉｄｅｎｅ−Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏｎｏｌａｃｔｏｎｅ、１．０４ｇ、６．４２ｍｍｏｌ）を溶解させた後、１Ｍの水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ）／ＴＨＦ溶液を−７８℃で添加した。その反応混合物を同じ温度で３０分間撹拌した後、メタノールを徐々に添加して反応を終結させた。その懸濁液をセライトで濾過し、酢酸エチルと水とで抽出した後、それに対して、ヘキサン：酢酸エチル混合溶媒（３：１、ｖ／ｖ）を展開溶媒として使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行って、シロップ形態の目的化合物（１．９４ｇ、９６％）を得た。
【０１７９】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ５．３９（ｓ、１Ｈ）、４．８２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．６、６．０Ｈｚ）、４．５５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、４．０５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．６、１０．２Ｈｚ）、４．００（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．０Ｈｚ）、１．４５（ｓ、３Ｈ）、１．３０（ｓ、３Ｈ）。
【０１８０】
段階ｂ２．（３ａＳ，４Ｓ，６ａＳ）−２，２−ジメチル−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イルアセテートの製造
【０１８１】
ピリジン（１０ｍｌ）に、前記製造例２の段階ｂ１で製造したラクトール化合物（８７５．９ｍｇ、５．４７ｍｍｏｌ）を溶解させた後、無水酢酸（０．６７ml、６．５６ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。その反応混合物を室温で３時間撹拌した後、減圧濃縮した。濃縮後、残留物を酢酸エチルと水とで抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、再び減圧濃縮した。その残留物に対して、ヘキサン：酢酸エチル混合溶媒（８：１、ｖ／ｖ）を展開溶媒として使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行って、シロップ形態の目的化合物（７０２．１ｍｇ、６５％）を得た。
【０１８２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ６．１６（ｓ、１Ｈ）、４．８６（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．６、６．０Ｈｚ）、４．６６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、４．１２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、３．９９（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．６、１０．８Ｈｚ）、２．０５（ｓ、３Ｈ）、１．４８（ｓ、３Ｈ）、１．３３（ｓ、３Ｈ）。
【０１８３】
＜実施例１＞
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−フルオロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０１８４】
段階１．２，６−ジクロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリンの製造
【０１８５】
ヘキサメチルジシラザン（ＨＭＤＳ、５０ml）に、２，６−ジクロロプリン（２．２９ｇ、２２．１２ｍｍｏｌ）と硫酸アンモニウム（４３８ｍｇ、３．３２ｍｍｏｌ）とを溶解させた後、不活性の乾燥された条件で夜から朝まで還流させた。その反応混合物を減圧で濃縮した後、得た固体混合物を冷たい１，２−ジクロロエタン（２０ml）に再び溶解させた。前記製造例１で得た（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イルアセテート（１．４１ｇ、１１．０６ｍｍｏｌ）を１，２−ジクロロエタン（２０ml）に溶解させて、前記溶液に再び滴加した。その混合物にトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（ＴＭＳＯＴｆ、４．０ml、２２．１２ｍｍｏｌ）を滴加し、０℃で３０分間撹拌した後、室温で１時間撹拌した後、８０℃に加熱して、２時間撹拌した。反応混合物を冷却した後、ジクロロメタンで希釈し、飽和された重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）水溶液で洗浄した。その有機層を無水硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）で乾燥した後、減圧濃縮して、黄色のシロップ形態の残留物を得た。その残留物に対して、ジクロロメタン：メタノール混合溶媒（５０：１、ｖ／ｖ）を展開溶媒として使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行って、泡（ｆｏａｍ）状の目的化合物（３．０３ｇ、７９％）を得た。
【０１８６】
ＵＶ（ＣＨ２Ｃｌ２）λｍａｘ  ２７５．０ｎｍ；
【０１８７】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）δ８．１７（ｓ、１Ｈ）、５．８７（ｓ、１Ｈ）、５．３２（ｐｓｅｕｄｏ  ｔ、１Ｈ、Ｊ＝４．８Ｈｚ）、５．２１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．６Ｈｚ）、３．７９（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．４、１２．８Ｈｚ）、３．２６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１３．２Ｈｚ）、１．５９（ｓ、３Ｈ）、１．３６（ｓ、３Ｈ）；
【０１８８】
［α］２５Ｄ−４２．０４（ｃ  ０．１６、ＣＨ２Ｃｌ２）；
【０１８９】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３４７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１９０】
段階２．（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０１９１】
テトラヒドロフラン（２０ml）に、前記段階１で製造した２，６−ジクロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリンを溶解させた後、２Ｎの塩酸を添加し、夜から朝まで室温で撹拌した。その混合物を１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液で中和させた後、気をつけて減圧で濃縮した。濃縮後、残留物に対して、ジクロロメタン：メタノール混合溶媒（２０：１、ｖ／ｖ）を展開溶媒として使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行って、白色固体の目的化合物（１．９４ｇ、９６％）を得た。
【０１９２】
ｍｐ  １９８．３−２００．３℃；
【０１９３】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２７５．０ｎｍ；
【０１９４】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ８．８７（ｓ、１Ｈ）、６．０８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．８Ｈｚ）、４．６９（ｑ、１Ｈ、Ｊ＝３．２Ｈｚ）、４．４８（ｑ、１Ｈ、Ｊ＝３．６Ｈｚ）、３．５６（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．４、１１．２Ｈｚ）、２．９７（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．４、１１．２Ｈｚ）；
【０１９５】
［α］２５Ｄ−５０．４３（ｃ  ０．１２、ＤＭＳＯ）；
【０１９６】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１９７】
段階３．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−フルオロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０１９８】
室温でエタノール（５ml）に、前記段階２で製造した（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール（１当量）と３−フルオロベンジルアミン（１．５当量）とを溶解させた後、その反応混合物を２〜３時間室温で撹拌した。反応完了後、減圧濃縮して得た残留物に対して、ジクロロメタン：メタノール混合溶媒（２０：１、ｖ／ｖ）を展開溶媒として使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行って、目的化合物（０．１０ｇ、８０％）を得た。
【０１９９】
ｍｐ  １８３．２−１８３．５℃；
【０２００】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２７５．０ｎｍ；
【０２０１】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９１（ｔ、１Ｈ−ＮＨ、Ｊ＝５．８Ｈｚ）、８．５１（ｓ、１Ｈ）、７．３３−７．３９（ｍ、１Ｈ）、７．１３−７．１８（ｍ、２Ｈ）、７．０６（ｄｔ、１Ｈ、Ｊ＝２．８、１１．６Ｈｚ）、５．８２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、５．５６（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、５．３７（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝４．４Ｈｚ）、４．６５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、４．６０（ｍ、１Ｈ）、４．３３−４．３５（ｍ、１Ｈ）、３．４１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．０、１０．８Ｈｚ）、２．７９（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．８、１０．８Ｈｚ）；
【０２０２】
［α］２５Ｄ−９６．２１（ｃ  ０．１２、ＤＭＳＯ）；
【０２０３】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３９６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０４】
＜実施例２＞
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−クロロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２０５】
段階１．２，６−ジクロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリンの製造
【０２０６】
前記実施例１の段階１と同じ方法によって、泡状の目的化合物を得た。
【０２０７】
段階２．（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２０８】
前記実施例１の段階２と同じ方法によって、白色固体の目的化合物を得た。
【０２０９】
段階３．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−クロロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２１０】
３−フルオロベンジルアミンの代わりに、３−クロロベンジルアミンを使用して、前記実施例１の段階３と同じ条件で合成を行って、目的化合物（０．１１ｇ、８３％）を得た。
【０２１１】
ｍｐ  １６３．３−１６５．３℃；
【０２１２】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２７４．５ｎｍ；
【０２１３】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ８．３４（ｓ、１Ｈ）、７．４１（ｓ、１Ｈ）、７．２４−７．３４（ｍ、３Ｈ）、５．９４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、４．７５（ｂｒｓ、２Ｈ）、４．６１（ｑ、１Ｈ、Ｊ＝３．２Ｈｚ）、４．４５（ｑ、１Ｈ、Ｊ＝４．０Ｈｚ）、３．５１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．８、１１．２Ｈｚ）、２．９５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．６、１０．８Ｈｚ）；
【０２１４】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ４１１［Ｍ］＋。
【０２１５】
＜実施例３＞
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−ブロモベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２１６】
段階１．２，６−ジクロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリンの製造
【０２１７】
前記実施例１の段階１と同じ方法によって、泡状の目的化合物を得た。
【０２１８】
段階２．（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２１９】
前記実施例１の段階２と同じ方法によって、白色固体の目的化合物を得た。
【０２２０】
段階３．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−ブロモベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２２１】
３−フルオロベンジルアミンの代わりに、３−ブロモベンジルアミンを使用して、前記実施例１の段階３と同じ条件で合成を行って、目的化合物（０．１２ｇ、８３％）を得た。
【０２２２】
ｍｐ  １８４．０−１８５．０℃；
【０２２３】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２７４．０ｎｍ；
【０２２４】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９１（ｂｒｓ、１Ｈ−ＮＨ）、８．５１（ｓ、１Ｈ）、７．５５（ｓ、１Ｈ）、７．４３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．３３−７．３５（ｍ、１Ｈ）、７．２６−７．３０（ｍ、１Ｈ）、５．８２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、５．５７（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、５．３８（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝４．０Ｈｚ）、４．６０−４．６３（ｍ、３Ｈ）、４．３４（ｓ、１Ｈ）、３．４１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．４、１１．２Ｈｚ）、２．８０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．８、１０．８Ｈｚ）；
【０２２５】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ４５６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２２６】
＜実施例４＞
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−ヨードベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２２７】
段階１．２，６−ジクロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリンの製造
【０２２８】
前記実施例１の段階１と同じ方法によって、泡状の目的化合物を得た。
【０２２９】
段階２．（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２３０】
前記実施例１の段階２と同じ方法によって、白色固体の目的化合物を得た。
【０２３１】
段階３．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−ヨードベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２３２】
３−フルオロベンジルアミンの代わりに、３−ヨードベンジルアミンを使用して、前記実施例１の段階３と同じ条件で合成を行って、目的化合物（０．１４ｇ、８４％）を得た。
【０２３３】
ｍｐ  １９８．７−１９９．９℃；
【０２３４】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２７４．０ｎｍ；
【０２３５】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９０（ｔ、１Ｈ−ＮＨ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、８．５１（ｓ、１Ｈ）、７．７４（ｓ、１Ｈ）、７．６０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．３５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．１３（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、５．８２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、５．５６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、５．３７（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．０Ｈｚ）、４．６０（ｄ、３Ｈ、Ｊ＝４．４Ｈｚ）、４．３４（ｂｒｓ、１Ｈ）、３．３８（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．０、１０．８Ｈｚ）、２．８０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．０、１０．８Ｈｚ）；
【０２３６】
［α］２５Ｄ−７８．９１（ｃ  ０．１３、ＤＭＳＯ）；
【０２３７】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ５０４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２３８】
＜実施例５＞
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（２−クロロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２３９】
段階１．２，６−ジクロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリンの製造
【０２４０】
前記実施例１の段階１と同じ方法によって、泡状の目的化合物を得た。
【０２４１】
段階２．（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２４２】
前記実施例１の段階２と同じ方法によって、白色固体の目的化合物を得た。
【０２４３】
段階３．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（２−クロロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２４４】
３−フルオロベンジルアミンの代わりに、２−クロロベンジルアミンを使用して、前記実施例１の段階３と同じ条件で合成を行って、目的化合物（０．１１ｇ、８１％）を得た。
【０２４５】
ｍｐ  １９８．７−１９９．７℃；
【０２４６】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２７３．５ｎｍ；
【０２４７】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ８．３５（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．４５−７．４７（ｍ、１Ｈ）、７．３９−７．４３（ｍ、１Ｈ）、７．２５−７．２９（ｍ、２Ｈ）、５．９５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、４．６０−４．６３（ｍ、１Ｈ）、４．４５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．６、８．０Ｈｚ）、３．５１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．８、１０．８Ｈｚ）、２．９５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．０、１０．８Ｈｚ）；
【０２４８】
［α］２５Ｄ−９６．２１（ｃ  ０．１２、ＤＭＳＯ）；
【０２４９】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ４１２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２５０】
＜実施例６＞
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（５−クロロ−２−メトキシベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２５１】
段階１．２，６−ジクロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリンの製造
【０２５２】
前記実施例１の段階１と同じ方法によって、泡状の目的化合物を得た。
【０２５３】
段階２．（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２５４】
前記実施例１の段階２と同じ方法によって、白色固体の目的化合物を得た。
【０２５５】
段階３．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（５−クロロ−２−メトキシベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２５６】
３−フルオロベンジルアミンの代わりに、５−クロロ−２−メトキシベンジルアミンを使用して、前記実施例１の段階３と同じ条件で合成を行って、目的化合物（０．１１ｇ、７８％）を得た。
【０２５７】
ｍｐ  １８８．８−１８９．８℃；
【０２５８】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２７５．５ｎｍ；
【０２５９】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．６４（ｔ、１Ｈ−ＮＨ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、８．５１（ｓ、１Ｈ）、７．２１−７．２５（ｍ、１Ｈ）、７．１２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、７．００（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、６．８５−６．８９（ｍ、１Ｈ）、５．８２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、５．５７（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、５．３７（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝４．０Ｈｚ）、４．６１−４．６３（ｍ、２Ｈ）、４．３５（ｍ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．７１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．６、１０．４Ｈｚ）、２．８０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．４、１０．８Ｈｚ）；
【０２６０】
［α］２５Ｄ−９６．１０（ｃ  ０．２１、ＤＭＳＯ）；
【０２６１】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ４４２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２６２】
＜実施例７＞
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ＞−２−（２−クロロ−６−（２−メトキシベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２６３】
段階１．２，６−ジクロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリンの製造
【０２６４】
前記実施例１の段階１と同じ方法によって、泡状の目的化合物を得た。
【０２６５】
段階２．（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２６６】
前記実施例１の段階２と同じ方法によって、白色固体の目的化合物を得た。
【０２６７】
段階３．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（２−メトキシベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２６８】
３−フルオロベンジルアミンの代わりに、２−メトキシベンジルアミンを使用して、前記実施例１の段階３と同じ条件で合成を行って、目的化合物（０．１２ｇ、８８％）を得た。
【０２６９】
ｍｐ  １８８．０℃；
【０２７０】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２７６．５ｎｍ；
【０２７１】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．６５（ｔ、１Ｈ−ＮＨ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、８．５１（ｓ、１Ｈ）、７．２１−７．２５（ｍ、１Ｈ）、７．１２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、７．００（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、６．８５−６．８９（ｍ、１Ｈ）、５．８３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．８Ｈｚ）、５．５８（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、５．３９（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝３．６Ｈｚ）、４．６２−４．６４（ｍ、２Ｈ）、４．３５（ｓ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、１Ｈ）、３．４２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．６、１０．４Ｈｚ）、２．７９−２．８２（ｍ、１Ｈ）；
【０２７２】
［α］２５Ｄ−９３．５３（ｃ  ０．１７、ＤＭＳＯ）；
【０２７３】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ４０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２７４】
＜実施例８＞
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（ナフタレン−１−イルメチルベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２７５】
段階１．２，６−ジクロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリンの製造
【０２７６】
前記実施例１の段階１と同じ方法によって、泡状の目的化合物を得た。
【０２７７】
段階２．（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２７８】
前記実施例１の段階２と同じ方法によって、白色固体の目的化合物を得た。
【０２７９】
段階３．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（ナフタレン−１−イルメチルベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２８０】
３−フルオロベンジルアミンの代わりに、ナフタレン−１−イルメチルベンジルアミンを使用して、前記実施例１の段階３と同じ条件で合成を行って、目的化合物（０．１３ｇ、９０％）を得た。
【０２８１】
ｍｐ  ２２６．３℃（ｄｅｃｏｍｐ）；
【０２８２】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２８１．０ｎｍ；
【０２８３】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９６（ｔ、１Ｈ−ＮＨ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、８．５１（ｓ、１Ｈ）、８．２５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．９５−７．９７（ｍ、１Ｈ）、７．８３−７．８５（ｍ、１Ｈ）、７．５３−７．６１（ｍ、２Ｈ）、７．４３−７．４６（ｍ、２Ｈ）、５．８２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、５．５６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、５．３８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．０Ｈｚ）、５．１２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、４．５９−４．６１（ｍ、１Ｈ）、４．３４−４．３５（ｍ、１Ｈ）、３．４０−３．４４（ｍ、１Ｈ）、２．８０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．４、６．８Ｈｚ）；
【０２８４】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ４２８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２８５】
＜実施例９＞
３−（（２−クロロ−９−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロチオフェン−２−イル）−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）メチル）安息香酸の製造
【０２８６】
段階１．２，６−ジクロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリンの製造
【０２８７】
前記実施例１の段階１と同じ方法によって、泡状の目的化合物を得た。
【０２８８】
段階２．（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２８９】
前記実施例１の段階２と同じ方法によって、白色固体の目的化合物を得た。
【０２９０】
段階３．３−（（２−クロロ−９−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロチオフェン−２−イル）−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）メチル）安息香酸の製造
【０２９１】
３−フルオロベンジルアミンの代わりに、３−（アミノメチル）安息香酸を使用して、前記実施例１の段階３と同じ条件で合成を行って、目的化合物（０．１２ｇ、８４％）を得た。
【０２９２】
ｍｐ  ２５４．０−２５６．９℃；
【０２９３】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２７５．５ｎｍ；
【０２９４】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９５（ｔ、１Ｈ−ＮＨ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、８．５２（ｓ、１Ｈ）、７．８９（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．４３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、５．８２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、５．５７（ｂｒｓ、１Ｈ）、５．３８（ｂｒｓ、１Ｈ）、４．７１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、４．６０（ｂｒｓ、１Ｈ）、４．３４（ｂｒｓ、１Ｈ）、３．４１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．０、１０．８Ｈｚ）、２．８０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．８、１０．８Ｈｚ）；
【０２９５】
［α］２５Ｄ−９４．５５（ｃ  ０．１１、ＤＭＳＯ）；
【０２９６】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ４２２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２９７】
＜実施例１０＞
２−（２−クロロ−６−メチルアミノ−プリン−９−イル）（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０２９８】
段階１．２，６−ジクロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリンの製造
【０２９９】
前記実施例１の段階１と同じ方法によって、泡状の目的化合物を得た。
【０３００】
段階２．（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０３０１】
前記実施例１の段階２と同じ方法によって、白色固体の目的化合物を得た。
【０３０２】
段階３．２−（２−クロロ−６−メチルアミノ−プリン−９−イル）（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０３０３】
３−フルオロベンジルアミンの代わりに、メチルアミンを使用して、前記実施例１の段階３と同じ条件で合成を行って、目的化合物（０．８９ｇ、９０％）を得た。
【０３０４】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２６９．５ｎｍ（ｐＨ７）；
【０３０５】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ２．９９（１Ｈ、ｄｄ、４’−ＣＨ、Ｊ＝４．４、１０．８Ｈｚ）、３．１２（３Ｈ、ｂｒｓ、ＮＨ−ＣＨ３）、３．４４（１Ｈ、ｄｄ、４’−ＣＨ、Ｊ＝４、１０．８Ｈｚ）、４．４１（１Ｈ、ｍ、２’−ＣＨ、Ｊ＝５．６Ｈｚ）、４．４７（１Ｈ、ｍ、３’−ＣＨ）、５．８９（１Ｈ、ｄ、１’−ＣＨ、Ｊ＝５．６Ｈｚ）、８．４０（ｓ、１Ｈ、８−ＣＨ）；
【０３０６】
［α］２５Ｄ−３４．８（ｃ  ０．１１５、ＤＭＳＯ）；
【０３０７】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３０２．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３０８】
＜実施例１１＞
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−フルオロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０３０９】
段階１．６−クロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリンの製造
【０３１０】
２，６−クロロプリンの代わりに、６−クロロプリン（２．２９ｇ、２２．１２ｍｍｏｌ）を使用して、前記実施例１の段階１と同じ条件で合成を行って、泡状の目的化合物（１．８４ｇ、９１％）を得た。
【０３１１】
ＵＶ（ＣＨ２Ｃｌ２）λｍａｘ  ２６５．０ｎｍ；
【０３１２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．６７（ｐｓｅｕｄｏ  ｔ、１Ｈ、Ｊ＝１．４Ｈｚ）、８．２３（ｓ、１Ｈ）、５．８８（ｓ、１Ｈ）、５．２３（ｍ、２Ｈ）、３．６９（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．０、１３．２Ｈｚ）、３．１８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１２．８Ｈｚ）、１．５２（ｓ、３Ｈ）、１．２９（ｓ、３Ｈ）；
【０３１３】
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１５２．０５、１５１．３９、１５１．０９、１４４．３４、１３２．５６、１１１．９０、８９．６０、８４．３１、７０．３０、４０．７６、２６．４０、２４．６３；
【０３１４】
［α］２５Ｄ−１５７．６４（ｃ  ０．１５、ＭｅＯＨ）；
【０３１５】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３１３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３１６】
段階２．（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０３１７】
前記段階１で製造した６−クロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリン（１．８４ｇ、５．８８ｍｍｏｌ）を使用して、前記実施例１の段階２と同じ条件で合成を行って、白色固体の目的化合物（１．２７ｇ、７９％）を得た。
【０３１８】
ｍｐ  １９２．３−１９２．８℃；
【０３１９】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２６４．５ｎｍ；
【０３２０】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．０２（ｓ、１Ｈ）、８．８２（ｓ、１Ｈ）、６．０２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、５．６２（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、５．４３（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝４．０Ｈｚ）、４．７０−４．７４（ｍ、１Ｈ）、４．３６−４．４０（ｍ、１Ｈ）、３．４７（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．０、１０．８Ｈｚ）、３．１７（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．２Ｈｚ）、２．８４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．８、１１．２Ｈｚ）；
【０３２１】
［α］２５Ｄ−１０９．１５（ｃ  ０．１６、ＤＭＳＯ）；
【０３２２】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ２７３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３２３】
段階３．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−フルオロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０３２４】
室温でエタノール（５ml）に、前記段階２で製造した（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール（１当量）と３−フルオロベンジルアミン（１．５当量）とを溶解させた後、その反応混合物を２〜３時間室温で撹拌した。反応完了後、減圧濃縮して得た残留物に対して、ジクロロメタン：メタノール混合溶媒（２０：１、ｖ／ｖ）を展開溶媒として使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行って、目的化合物（０．１１ｇ、８２％）を得た。
【０３２５】
ｍｐ  １８０．５−１８０．７℃；
【０３２６】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２７３．５ｎｍ；
【０３２７】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４６（ｓ、１Ｈ）、８．２２（ｓ、１Ｈ）、７．３１−７．３９（ｍ、１Ｈ）、７．１２−７．１８（ｍ、２Ｈ）、７．０１−７．０５（ｍ、１Ｈ）、５．９０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、５．５３（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、５．３５（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝４．０Ｈｚ）、４．６７−４．７１（ｍ、２Ｈ）、４．３５−４．３７（ｍ、１Ｈ）、３．３９−３．４３（ｍ、１Ｈ）、３．１７（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．２Ｈｚ）、２．８０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．２、１１．２Ｈｚ）；
【０３２８】
［α］２５Ｄ−１４１．２（ｃ  ０．１１、ＤＭＳＯ）；
【０３２９】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３６２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３３０】
＜実施例１２＞
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−クロロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０３３１】
段階１．６−クロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリンの製造
【０３３２】
前記実施例１１の段階１と同じ方法によって、泡状の目的化合物を得た。
【０３３３】
段階２．（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０３３４】
前記実施例１１の段階２と同じ方法によって、白色固体の目的化合物を得た。
【０３３５】
段階３．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−クロロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０３３６】
３−フルオロベンジルアミンの代わりに、３−クロロベンジルアミンを使用して、前記実施例１１の段階３と同じ条件で合成を行って、目的化合物（０．１２ｇ、８５％）を得た。
【０３３７】
ｍｐ  １６５．０−１６５．３℃；
【０３３８】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２７４．５ｎｍ；
【０３３９】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４７（ｓ、１Ｈ）、８．２２（ｓ、１Ｈ）、７．３９（ｓ、１Ｈ）、７．２６−７．３５（ｍ、３Ｈ）、５．９１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、５．５３（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、５．３５（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝４．０Ｈｚ）、４．６７−４．７１（ｍ、２Ｈ）、４．３３−４．３７（ｍ、１Ｈ）、３．４０−３．４８（ｍ、２Ｈ）、２．８０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．２、１０．４Ｈｚ）；
【０３４０】
［α］２５Ｄ−１６２．５（ｃ  ０．１０、ＤＭＳＯ）；
【０３４１】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３７８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３４２】
＜実施例１３＞
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−ブロモベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０３４３】
段階１．６−クロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリンの製造
【０３４４】
前記実施例１１の段階１と同じ方法によって、泡状の目的化合物を得た。
【０３４５】
段階２．（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０３４６】
前記実施例１１の段階２と同じ方法によって、白色固体の目的化合物を得た。
【０３４７】
段階３．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−ブロモベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０３４８】
３−フルオロベンジルアミンの代わりに、３−ブロモベンジルアミンを使用して、前記実施例１１の段階３と同じ条件で合成を行って、目的化合物（０．１１ｇ、７０％）を得た。
【０３４９】
ｍｐ  １８３．０−１８４．０℃；
【０３５０】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２７０．０ｎｍ；
【０３５１】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４６（ｓ、１Ｈ）、８．２２（ｓ、１Ｈ）、７．５３（ｓ、１Ｈ）、７．３９−７．４２（ｍ、１Ｈ）、７．３４−７．３５（ｍ、１Ｈ）、７．２４−７．２８（ｍ、１Ｈ）、５．９０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、５．５３（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、５．３５（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝４．０Ｈｚ）、４．６７−４．７１（ｍ、２Ｈ）、４．３５−４．３７（ｍ、１Ｈ）、３．４１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．０、１０．８Ｈｚ）、３．０６（ｑ、１Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、２．８０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．８、１０．８Ｈｚ）；
【０３５２】
［α］２５Ｄ−１００．７２（ｃ  ０．１４、ＤＭＳＯ）；
【０３５３】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ４２２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３５４】
＜実施例１４＞
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−ヨードベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０３５５】
段階１．６−クロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチルテトラヒドロチエノ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリンの製造
【０３５６】
前記実施例１１の段階１と同じ方法によって、泡状の目的化合物を得た。
【０３５７】
段階２．（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０３５８】
前記実施例１１の段階２と同じ方法によって、白色固体の目的化合物を得た。
【０３５９】
段階３．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−ヨードベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオールの製造
【０３６０】
３−フルオロベンジルアミンの代わりに、３−ヨードベンジルアミンを使用して、前記実施例１１の段階３と同じ条件で合成を行って、目的化合物（０．１２ｇ、７２％）を得た。
【０３６１】
ｍｐ  １９８．８−１９９．８℃；
【０３６２】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２７１．５ｎｍ；
【０３６３】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４６（ｓ、１Ｈ）、８．２２（ｓ、１Ｈ）、７．７２（ｓ、１Ｈ）、７．５６−７．５９（ｍ、１Ｈ）、７．３５−７．３６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．０１−７．１２（ｍ、１Ｈ）、５．９０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、５．５３（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、５．３５（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝４．４Ｈｚ）、４．６７−４．７１（ｍ、２Ｈ）、４．３４−４．３８（ｍ、１Ｈ）、３．４１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．０、１０．８Ｈｚ）、３．１６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、２．８０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．８、１０．８Ｈｚ）；
【０３６４】
［α］２５Ｄ−９７．０８（ｃ  ０．１４、ＤＭＳＯ）；
【０３６５】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ４７０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３６６】
＜実施例１５＞
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−２−（６−（３−ブロモベンジルアミノ）−２−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオールの製造
【０３６７】
段階１．２，６−ジクロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリンの製造
【０３６８】
前記製造例２で得た（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−オール（７０２．１ｇ、３．４７２ｍｍｏｌ）を使用して、前記実施例１の段階１と同じ条件で合成を行って、泡状の目的化合物（７９３．０ｍｇ、６９％）を得た。
【０３６９】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２７６．５ｎｍ；
【０３７０】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．１５（ｓ、１Ｈ）、６．０７（ｓ、１Ｈ）、５．４１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、５．２６−５．２９（ｍ、１Ｈ）、４．２５−４．３１（ｍ、２Ｈ）、１．５７（ｓ、３Ｈ）、１．４１（ｓ、３Ｈ）；
【０３７１】
［α］２５Ｄ−２１．００（ｃ  ０．１０、ＤＭＳＯ）；
【０３７２】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３３１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３７３】
段階２．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−２−（２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフロ−３，４−ジオールの製造
【０３７４】
前記段階１で製造した２，６−ジクロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−  リン（９００ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）を使用して、前記段階２と同じ条件で合成を行って、白色固体の目的化合物（０．４６ｇ、８０％）を得た。
【０３７５】
ｍｐ  １２２．７−１２３．４℃；
【０３７６】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２７６．５ｎｍ；
【０３７７】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９８（ｓ、１Ｈ）、５．９６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、５．５７（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、５．３２（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝４．０Ｈｚ）、４．６９−４．７４（ｍ、１Ｈ）、４．４１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．６、９．２Ｈｚ）、４．２９−４．３２（ｍ、１Ｈ）、３．８７（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．０、９．６Ｈｚ）；
【０３７８】
［α］２５Ｄ−６８．０９（ｃ  ０．１４、ＤＭＳＯ）；
【０３７９】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ２９１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３８０】
段階３．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−２−（６−（３−ブロモベンジルアミノ）−２−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフロ−３，４−ジオールの製造
【０３８１】
室温でエタノール（５ml）に、前記段階２で製造した（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフロ−３，４−ジオール（１当量）と３−ブロモベンジルアミン（１．５当量）とを溶解させた後、その反応混合物を２〜３時間室温で撹拌した。反応完了後、減圧濃縮して得た残留物に対して、ジクロロメタン：メタノール混合溶媒（２０：１、ｖ／ｖ）を展開溶媒として使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行って、目的化合物（０．１２ｇ、８２％）を得た。
【０３８２】
ｍｐ  １８１．５−１８１．７℃；
【０３８３】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２７４．５ｎｍ；
【０３８４】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９２（ｔ、１Ｈ−ＮＨ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、８．４３（Ｓ、１Ｈ）、７．５５（ｓ、１Ｈ）、７．４４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．３３−７．３５（ｍ、１Ｈ）、７．２６−７．３０（ｍ、１Ｈ）、５．８１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、５．４７（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、５．２２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝４，０Ｈｚ）、４．６６−４．６９（ｍ、１Ｈ）、４．６２（ｓ，２Ｈ）、４．３２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．６、９．２Ｈｚ）、４．２５（ｂｒｓ、１Ｈ）、３．８０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．６、９．２Ｈｚ）；
【０３８５】
［α］２５Ｄ−６２．７５（ｃ  ０．１０、ＤＭＳＯ）；
【０３８６】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ４４０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３８７】
＜実施例１６＞
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−２−（６−（３−ヨードベンジルアミノ）−２−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフロ−３，４−ジオールの製造
【０３８８】
段階１．２，６−ジクロロ−９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリンの製造
【０３８９】
前記実施例１５の段階１と同じ方法によって、シロップ形態の泡状の目的化合物を得た。
【０３９０】
段階２．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−２−（２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフロ−３，４−ジオールの製造
【０３９１】
前記実施例１５の段階２と同じ方法によって、シロップ形態の白色固体の目的化合物を得た。
【０３９２】
段階３．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−２−（６−（３−ヨードベンジルアミノ）−２−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフロ−３，４−ジオールの製造
【０３９３】
３−ブロモベンジルアミンの代わりに、３−ヨードベンジルアミンを使用して、前記実施例１５の段階３と同じ条件で合成を行って、目的化合物（０．１３ｇ、７８％）を得た。
【０３９４】
ｍｐ  １９５．５−１９５．８℃；
【０３９５】
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ  ２７４．０ｎｍ；
【０３９６】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９１（ｔ、１Ｈ−ＮＨ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、８．４４（ｓ、１Ｈ）、７．７５（ｓ、１Ｈ）、７．６１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．３６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．１３（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝４．０Ｈｚ）、５．８１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．８Ｈｚ）、５．４７（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝６．８Ｈｚ）、５．２３（ｄ、１Ｈ−ＯＨ、Ｊ＝４．０Ｈｚ）、４．７２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．４、１０．８Ｈｚ）、４．６１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、４．３４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．６、９．２Ｈｚ）、３．８１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．２、９．２Ｈｚ）；
【０３９７】
［α］２５Ｄ−６８．０７（ｃ  ０．１２、ＤＭＳＯ）；
【０３９８】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ４８８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９９】
＜実験例１＞アデノシン受容体に対する結合親和力の評価
【０４００】
本発明の誘導体のヒトアデノシン受容体（ｈＡＲ）中のＡ１、Ａ２Ａ及びＡ３受容体に対する親和力及び選択性を評価するために、下記のような実験を行った。
【０４０１】
アデノシンＡ１及びＡ３受容体を発現するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ、ＡＴＣＣ；米国細胞株銀行Ｎｏ．ＣＣＬ−６１）細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）とペニシリン／ストレプトマイシン（１００ユニット／mlと１００μg／ml）とを含むＦ−１２（Ｇｉｂｃｏ社、米国）培地で３７℃、５％二酸化炭素の条件下で培養されて使われた。５０／１０／１緩衝溶液を試験管に入れ、適したｈＡＲが発現されたＣＨＯ細胞一定量と各アデノシンＡ１及びＡ３受容体に選択的に結合する標識リガンド（１ｎＭ［３Ｈ］ＣＣＰＡ及び０．５ｎＭ［１２５Ｉ］ＡＢ−ＭＥＣＡ）とを混合させた。多様な濃度の本発明の誘導体をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に先に溶解させた後、緩衝溶液と希釈されるが、ＤＭＳＯの最終濃度は、１％を超過しないように注意し、３７℃の恒温槽で１時間培養させた後、細胞収集器（ＴＯＭＴＥＣ社、米国）を使用して、迅速に減圧濾過した。次いで、試験管は、３ml緩衝液で３回洗浄した後、放射性をγ−カウンターを使用して決定した。非特異的結合（Ｎｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ）は、全体結合を測定するための条件と同じ条件で、非標識リガンドである５’−Ｎ−エチルカルボキサミドアデノシン（ＮＥＣＡ）の１０μＭ存在下で決定され、平衡定数であるＫｉ値は、［１２５Ｉ］ＡＢ−ＭＥＣＡのＫｄ値が１．４８ｎＭであるという仮定下でチェンプルソフ（Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ）方程式に基づいて決定した。特異的結合は、全体結合で非特異的結合を減算して算出した。このように測定された特異的結合からさまざまな受容体に対するそれぞれの試料の結合親和力を求めた。
【０４０２】
また、ＨＥＫ２９３細胞（ヒト腎臓内皮細胞株）から発現されたＡ２Ａ受容体と標識リガンド、［３Ｈ］ＣＧＳ−２１６８０（２−（（（４−（２−カルボキシエチル）フェニル）エチルアミノ）−５’−Ｎ−エチルカルバモイル）アデノシン）の結合測定は、次のように行われるが、アデノシンデアミナーゼ（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｄｅａｍｉｎａｓｅ）は、脳膜を３０℃で３０分間培養する時と放射性リガンドを入れ、培養する間に共に入れ、少なくとも６回の異なる濃度でそれぞれの実施例の化合物に対するＩＣ５０値を定め、この数値をプロットプログラムを用いてＫｉ値を決定した。本発明による実施例の化合物の構造、置換基及び結合親和力の測定結果、得たＫｉ値を表１に共に示した。
【０４０３】
【表１−１】
2019535659.tif 000012
【０４０４】
【表１−２】
2019535659.tif 000013
【０４０５】
【表１−３】
2019535659.tif 000014
【０４０６】
【表１−４】
2019535659.tif 000015
【０４０７】
表１に示されたように、本発明の実施例の化合物は、ヒトアデノシンＡ３受容体に対して高い結合親和力を示し、アデノシンＡ１及びＡ２Ａ受容体に対しては低い親和力、すなわち、大きな選択性を示した。特に、本発明の実施例１２の化合物は、ｈＡ３受容体に対して、親和力定数、Ｋｉ値が１．５０±０．４０ｎＭに最も高い親和力を示し、その次に、実施例２の化合物（Ｋｉ＝１．６６±０．９０ｎＭ）、実施例１４の化合物（Ｋｉ＝２．５０±１．００ｎＭ）、実施例１０の化合物（Ｋｉ＝３．６９±０．２５ｎＭ）及び実施例４の化合物（Ｋｉ＝４．１６±０．５０ｎＭ）の順に結合親和力が高く表われた。本発明の実施例４の化合物は、また、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞から発現されたラットのアデノシンＡ３受容体に対しても、高い親和力（Ｋｉ＝３．８９±１．１５ｎＭ）を示し、ヒトアデノシンＡ２Ｂ受容体に対しては、アゴニストまたは拮抗剤として活性を示さななかった。
【０４０８】
また、ハロベンジル置換基を有する実施例の化合物で結合親和力は、Ｃｌ＞Ｉ＞Ｆ＞Ｂｒの順序に従うが、３−クロロベンジルを有する実施例２の化合物は、２−クロロベンジルを有する実施例５の化合物（Ｋｉ＝２５．８±６．３ｎｍ）よりもｈＡ３アデノシン受容体に対してさらに高い親和力を示した。また、ヒトアデノシンＡ３受容体は、結合親和力において、ベンゼン環の３−位置が置換された実施例の化合物を２−または４−置換された化合物または２，５−二置換された化合物よりもさらに好むものと表われた。そして、４’−Ｏであるオキソヌクレオシド形態を帯びるアデノシン誘導体である実施例１５及び実施例１６の化合物も、高い結合親和力と選択性とを示したが、それに相応する４’−Ｓであるチオヌクレオシド形態を帯びるアデノシン誘導体、実施例３及び実施例４の化合物よりもさらに良いものではなく、プリン塩基の２位のクロロ基を水素で置換した実施例１０〜実施例１４の化合物は、２−クロロである化合物よりも親和力及び選択性に優れると確認された。
【０４０９】
＜実験例２＞本発明の誘導体によるアデノシンＡ３受容体に対する拮抗効果及びｃＡＭＰ抑制実験
【０４１０】
本発明の誘導体が、ヒトアデノシンＡ３受容体に対して拮抗剤として効果があるかを調べるために、ＣＨＯ細胞に実施例４の化合物及びＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡを共に処理して、本発明の誘導体の拮抗効果及びｃＡＭＰ抑制実験を行った。
【０４１１】
図１に示されたように、ヒトアデノシンＡ３受容体に対して、本発明の実施例４の化合物を濃度を異ならせて処理したＣＨＯ細胞で１００％純粋アゴニストであるＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡのアゴニスト効果は、実施例４の化合物の濃度に依存して阻害されると確認された。これは、本発明の化合物とＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡとが受容体の同じ結合部位に互いに競争的に作用するものであることを示す結果である。また、ＣＨＯ細胞でヒトアデノシンＡ３受容体を媒介とするｃＡＭＰ抑制実験結果、本発明の実施例の化合物は、１００％純粋アデノシンＡ３拮抗剤であるということが分かる。したがって、本発明から合成された化合物は、Ｓｃｈｉｌｄ分析によって測定した解離定数ＫＢ値は１．９２ｎＭであった。
【０４１２】
＜実験例３〜実験例６＞本発明の誘導体による抗炎症活性の測定
【０４１３】
本発明の誘導体の抗炎症活性を調べるために、下記のような動物実験を行った。生後７週齢の雄ＩＣＲマウスは、右側耳にＴＰＡ（１２−Ｏ−ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｒｂｏｌ  １３−ａｃｅｔａｔｅ、２０μｌ）が処理された。１５分以内に本発明の実施例１〜実施例１６の化合物をアセトン（２０μｌ）または蒸留水あるいはＤＭＳＯとアセトンとを混合した混合溶媒（その組成は、表２〜表５に示す）に０．５％の濃度で希釈してマウスに投与した。対照群で炎症治療剤として用いられるヒドロコルチゾン（ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ）を同じ濃度で処理して、同じ実験を行った。
【０４１４】
引き続き、ＴＰＡ処理から６時間後に、本発明のアデノシン誘導体化合物を二番目に処理した。再びＴＰＡ処理から２４時間後に、実験動物を首脱臼方法（ｃｅｒｖｉｃａｌ  ｄｉｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄ）を用いて安楽死させた。次いで、６ｍｍ直径のパンチを用いて右側耳のサンプルを得た。その活性は、微量天秤を用いて重量を測定することで確認することができた。阻害率（％）は、下記数式１を用いて計算された。実験例３〜実験例６の処理組成及び処理量は、表２〜表５に示し、その抗炎症活性の測定結果を図２〜図５に示した。
【０４１５】
【数１】
2019535659.tif 000016
【０４１６】
【表２】
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【０４１７】
【表３】
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【０４１８】
【表４】
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【０４１９】
【表５】
2019535659.tif 000020
【０４２０】
図２に示されたように、対照群として用いられたヒドロコルチゾンに比べれば、極めて少ない変化であるが、実施例２、実施例３及び実施例４の化合物をアセトンに希釈して処理した後、抗炎症活性を調査した結果、ＴＰＡによって誘導されたマウスの耳浮腫が少量減少することを確認することができた。
【０４２１】
図３に示されたように、本発明の実施例１及び実施例６の化合物をアセトンに希釈して処理した後、調査した抗炎症活性は、図２示された実施例２〜実施例４の化合物よりも４倍以上格段に増加した阻害率を示すことが分かった。
【０４２２】
図４に示されたように、蒸留水とアセトンとの混合溶媒（１：４）に０．５％に希釈した本発明の実施例５、実施例６及び実施例７の化合物を用いて調査した抗炎症活性は、それぞれ１７％、３４％及び５３％の炎症阻害率を示した。
【０４２３】
図５に示されたように、ＤＭＳＯとアセトンとの混合溶媒（１：９）に０．５％に希釈した本発明の実施例１５及び実施例１６の化合物を用いて調査した炎症阻害率は、それぞれ５９％及び７９％であって、前記化合物が抗炎症活性を有するということが分かった。
【０４２４】
＜実験例８＞毒性試験
【０４２５】
本発明の実施例の化合物の毒性を試験するために、動物実験を行った。２５±５ｇのＩＣＲ系マウス（中央実験動物）と２３５±１０ｇの特定の病院部材（ＳＰＦ）スプラグ−ダウリー（Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ、中央実験動物）ラットとをそれぞれ３匹ずつ３群に分けて、本発明の実施例２の化合物をそれぞれ２０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇの容量で腹腔投与した後、２４時間毒性の有無を観察した。
【０４２６】
実験の結果、３郡いずれもで死亡した例を全く観察することができず、体重増加、飼料摂取量などで外見上対照群と何らの症状が見られず、したがって、本発明の誘導体化合物が、安全な薬物であることを確認することができた。
【０４２７】
本発明のアデノシン誘導体化合物は、下記のような剤型で投与し、下記の製剤例は、本発明を例示するものであり、これにより、本発明の内容が限定されるものではない。
【０４２８】
＜製剤例１＞散剤の製造
【０４２９】
本発明のアデノシン誘導体化合物５００ｍｇ
【０４３０】
トウモロコシ澱粉１００ｍｇ
【０４３１】
乳糖１００ｍｇ
【０４３２】
タルク１０ｍｇ
【０４３３】
前記の成分を混合し、気密布に充填して散剤を製造した。
【０４３４】
＜製剤例２＞錠剤の製造
【０４３５】
本発明のアデノシン誘導体化合物１００ｍｇ
【０４３６】
トウモロコシ澱粉１００ｍｇ
【０４３７】
乳糖１００ｍｇ
【０４３８】
ステアリン酸マグネシウム２ｍｇ
【０４３９】
前記の成分を混合した後、通常の錠剤の製造方法によって、打錠して錠剤を製造した。
【０４４０】
＜製剤例３＞カプセル剤の製造
【０４４１】
本発明のアデノシン誘導体化合物５０ｍｇ
【０４４２】
乳糖５０ｍｇ
【０４４３】
ステアリン酸マグネシウム１ｍｇ
【０４４４】
前記の成分を混合した後、通常のカプセル剤の製造方法によって、打錠してゼラチンカプセルに充填して製造した。
【０４４５】
＜製剤例４＞注射剤の製造
【０４４６】
本発明のアデノシン誘導体化合物１０ｍｇ
【０４４７】
注射用滅菌蒸留水適量
【０４４８】
ｐＨ調節剤適量
【０４４９】
通常の注射剤の製造方法によって、活性成分を注射用蒸留水に溶解し、ｐＨを約７．５に調節した後、全体を注射用蒸留水で２ml容量のアンプルに充填して滅菌させて、注射剤を製造した。
【０４５０】
＜製剤例５＞液剤の製造
【０４５１】
本発明のアデノシン誘導体化合物１ｇ
【０４５２】
異性化糖１０ｇ
【０４５３】
ショ糖１０ｇ
【０４５４】
レモン香適量
【０４５５】
精製水適量
【０４５６】
通常の液剤の製造方法によって、精製水にそれぞれの成分を加え、溶解させ、レモン香を適量加えた後、精製水を加えて、全体を１００mlに調節した後、褐色瓶に充填して滅菌させて、液剤を製造した。
【０４５７】
＜製剤例６＞経口投与剤の製造
【０４５８】
本発明のアデノシン誘導体化合物適量
【０４５９】
０．５ｗｔ％メチルセルロース（ＭＣ）適量
【０４６０】
本発明のアデノシン誘導体化合物を０．５ｗｔ％メチルセルロース（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ、Ｊａｐａｎ）に懸濁させて調剤した。
【０４６１】
＜実験例９＞本発明のアデノシン誘導体の非アルコール性脂肪肝炎、肝線維症及び肝硬化症に対する効能確認の実験
【０４６２】
本発明のアデノシン誘導体の非アルコール性脂肪肝炎及び肝線維症に対する効能を確認するために、下記のような動物実験を行った。
【０４６３】
非アルコール性脂肪肝炎が誘発されたｍｉｃｅ２４匹（下記の各実験例の別に８匹）に６週齢から１０週齢間、表６のように実施例２の化合物を賦形剤（０．５％メチルセルロース）と共に毎日１回経口投与した。
【０４６４】
【表６】
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【０４６５】
比較群として正常ｍｉｃｅ８匹に１０週齢まで何らの処理はせず、陽性対照群（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ）として非アルコール性脂肪肝炎が誘発されたｍｉｃｅ８匹に６週齢から１０週齢間、高血圧治療剤であるテルミサルタン（ｔｅｌｍｉｓａｒｔａｎ）１０ｍｇ／ｋｇを毎日１回経口投与し、陰性対照群（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ）として非アルコール性脂肪肝炎が誘発されたｍｉｃｅ８匹に６週齢から１０週齢間、賦形剤である０．５％メチルセルロース１０ｍＬ／ｋｇのみを毎日１回経口投与した。
【０４６６】
引き続き、１０週齢になった実験動物の肝（ｌｉｖｅｒ）に対して、ＨＥ染色を用いて脂肪症、炎症及びバルーニング程度を測定し、シリウスレッド（Ｓｉｒｉｕｓ  ｒｅｄ）染色を用いて纎維症（ｆｉｂｒｏｓｉｓ）発生面積を観察及び測定し、その結果をＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  Ｔｅｓｔで数値化（ｓｃｏｒｉｎｇ）して、図６〜図１１に示した。
【０４６７】
図６〜図１１において、Ｌｏｗ、Ｍｅｄｉｕｍ、及びＨｉｇｈ  ｄｏｓｅ  ｇｒｏｕｐは、それぞれ実験例９−１、実験例９−２及び実験例９−３を示し、Ｎｏｒｍａｌ、Ｖｅｈｉｃｌｅ及びＴｅｌｍｉｓａｒｔａｎは、それぞれ比較群、陰性対照群及び陽性対照群を示す。
【０４６８】
図６は、実験動物の肝の脂肪症程度を数値化して示すグラフである。図６に示されたように、本発明のアデノシン誘導体を投与した実験例９のｍｉｃｅ及び陽性対照群ｍｉｃｅで陰性対照群と比較して、脂肪症の有意な減少が確認されていない。
【０４６９】
図７は、実験動物の肝の炎症程度を数値化して示すグラフである。図７に示されたように、本発明のアデノシン誘導体を投与したｍｉｃｅで、前記誘導体の投与量に依存的な抗炎症活性があったことを確認することができる。
【０４７０】
図８は、実験動物の肝のバルーニング程度を数値化して示すグラフである。図８に示されたように、本発明のアデノシン誘導体を投与したｍｉｃｅで、前記誘導体の投与量に依存的なバルーニング減少効果があり、本発明のアデノシン誘導体を低容量で投与した実験例９−１のｍｉｃｅでも、バルーニングの確実な減少があったことを確認することができる。
【０４７１】
図９は、実験動物の肝の脂肪症、炎症及びバルーニングに対する数値を総合して、非アルコール性脂肪肝炎に対する活性を算出したグラフである。図９に示されたように、本発明のアデノシン誘導体は、投与量依存的に非アルコール性脂肪肝炎の緩和に対する有意な活性があったことを確認することができる。
【０４７２】
図１０は、実験動物の肝の纎維症発生程度を観察した顕微鏡写真であり、図１１は、纎維症発生面積を示すグラフである。図１０において、赤色で染色された部分が纎維症発生部位である。図１０及び図１１に示されたように、本発明のアデノシン誘導体を投与したｍｉｃｅで、前記誘導体の投与量に依存的な纎維症抑制活性があり、本発明のアデノシン誘導体を低容量で投与した実験例９−１のｍｉｃｅでも、纎維症発生面積の確実な減少があったことを確認することができる。
【０４７３】
＜実験例１０＞本発明のアデノシン誘導体の物理化学的特性の試験
【０４７４】
本発明のアデノシン誘導体の物理化学的特性を試験するために、生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で実施例２の化合物に対する実験を実施し、その結果を表７に示した。血しょう（ｐｌａｓｍａ）安定性（ｓｔａｂｉｌｉｔｙ）及びタンパク質結合度（ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ）は、Ｒａｔとヒトとの血しょうを用いて測定した。
【０４７５】
【表７】
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【０４７６】
表７に示されたように、本発明のアデノシン誘導体は、経口製剤による経口投与に適した吸収、分布、代謝及び排泄（ＡＤＭＥ）の特性値を有するという点を確認することができる。
【０４７７】
＜実験例１１＞本発明のアデノシン誘導体の経口投与に対する薬動力学試験
【０４７８】
本発明のアデノシン誘導体の経口投与後の吸収、分布、代謝及び排泄（ＡＤＭＥ）の特性を試験するために、生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）で実施例２の化合物のＰＫ（Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ）特性を測定した。
【０４７９】
表８のように、実験動物に実施例２の化合物を投与方法を異ならせて投与した。静脈投与は、大腿静脈に挿入したチューブ（ｔｕｂｅ）を通じて投与し、経口投与は、強制経口投与（ｏｒａｌ  ｇａｖａｇｅ）を用いて口腔に投入する方式で行った。
【０４８０】
【表８】
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【０４８１】
投与後、２４時間所定時間間隔で採血して血液を遠心分離した後、血しょうを分離し、適正有機溶媒を使用して血しょう試料を前処理した後、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳで濃度を分析した。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、ＵＳＡ）を用いて実施例２の化合物の血中濃度−時間データを分析し、これについてのグラフを図１２〜図１６に示し、これより算出したｎｏｎｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｐａｒａｍｅｔｅｒに対する結果を表９〜表１３に示した。図１２〜図１６において、Ｉ．Ｖ．は、静脈投与群、Ｐ．Ｏ．は、口腔投与群を示し、表９〜表１３の各パラメータに対する定義は、表１４に示した。
【０４８２】
【表９】
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【０４８３】
【表１０】
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【０４８４】
【表１１】
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【０４８５】
【表１２】
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【０４８６】
【表１３】
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【０４８７】
【表１４】
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【０４８８】
図１２と表９は、実験例１１（１１−１及び１１−２）の血中濃度−時間データから得たグラフ及びパラメータ値であり、図１３と表１０は、実験例１２（１２−１及び１２−２）の血中濃度−時間データから得たグラフ及びパラメータ値である。図１２及び図１３と表９及び表１０とに示されたように、本発明のアデノシン誘導体は、半減期（Ｔ１／２）が最大３．３４時間以上に長期間露出され、静脈投与と比較する時、生体利用率（Ｆｔ）が最大９９．９％以上に経口投与に適した特性を有するということを確認することができる。
【０４８９】
図１４と表１１は、実験例１３の血中濃度−時間データから得たグラフ及びパラメータ値である。図１４と表１１とに示されたように、本発明のアデノシン誘導体は、ｍｉｃｅでも半減期（Ｔ１／２）が３．６１時間程度に長期間露出されて、経口投与に適した特性を有するという点を確認することができる。
【０４９０】
図１５と表１２は、実験例１４（１４−１、１４−２及び１４−３）の血中濃度−時間データから得たグラフ及びパラメータ値である。図１５において、Ｇ２及びＧ３は、それぞれ溶媒に溶解させて経口投与した場合と、カプセル内粉末状に経口投与した場合と、を示す。図１５と表１２とに示されたように、本発明のアデノシン誘導体は、ｄｏｇで半減期（Ｔ１／２）が最大５．５３時間以上にｒａｔやｍｉｃｅよりも長期間露出されて、経口投与に適した特性を有し、特に、カプセル内に粉末状に充填して投与した場合、半減期（Ｔ１／２）及び生体利用率（Ｆｔ）などの特性がより向上するという点を確認することができる。
【０４９１】
図１６と表１３は、実験例１５（１５−１及び１５−２）の血中濃度−時間データから得たグラフ及びパラメータ値である。図１６と表１３とに示されたように、本発明のアデノシン誘導体は、経口投与において、メチルセルロース（ＭＣ）と共に投与されることが従来の賦形剤であるジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、蒸留水（Ｄ．Ｗ．）などと共に投与されることよりも優れた特性を有するという点を確認することができる。
【０４９２】
＜実験例１６＞本発明のアデノシン誘導体の毒性試験
【０４９３】
本発明のアデノシン誘導体の毒性を試験するために、実施例２の化合物に対して、細胞毒性（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）、心臓毒性（ｈＥＲＧ  ｌｉｇａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｓｓａｙ）、遺伝毒性及び単回毒性を評価した。
【０４９４】
まず、実施例２の化合物の細胞毒性を試験するために、Ｃｙｔｏ  ＸＴＭ  ｃｅｌｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔを利用した。試験の結果、実施例２の化合物によるＩＣ５０が、それぞれの細胞株で１０μＭ以上であって、一般細胞毒性に対して安全であると評価された。
【０４９５】
実施例２の化合物の心臓毒性を試験するために、ｒｅｄ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｈＥＲＧ  ｃｈａｎｎｅｌ  ｌｉｇａｎｄ  ｔｒａｃｅｒのｈＥＲＧ  ｃｈａｎｎｅｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ結合程度による蛍光偏光（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）評価を通じて心臓安定性を評価するｎｏｎ−ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ試験法を使用した。試験の結果、実施例２の化合物１０μＭに対する阻害率は、基準値である５０％以下であって、心臓毒性に対して安全であると評価された。
【０４９６】
実施例２の化合物の遺伝毒性を試験するために、ヒスチジン要求性サルモネラ菌（ＴＡ９８、ＴＡ１００、ＴＡ１５３５及びＴＡ１５３７菌株）及びトリプトファン要求性大腸菌（ＷＰ２ｕｖｒＡ（ｐＫＭ１０１）菌株）を用いて代謝活性化非存在下及び存在下のそれぞれの場合に対して、実施例２の化合物の遺伝子突然変異誘発性を評価した。評価の結果、実施例２の化合物は、代謝活性化の有無に関係なく、各菌株のあらゆる容量で復帰変異コロニー数が陰性対照群の２倍を超過せず、容量依存的な増加も観察されず、陽性対照群では、各菌株に対する復帰変異コロニー数が陰性対照群と比較して、２倍以上確実に増加した。以上の結果から、実施例２の化合物は、遺伝毒性に対して安全であると評価された。
【０４９７】
実施例２の化合物の単回毒性を試験するために、ｍａｌｅ  ｒａｔとｆｅｍａｌｅ  ｒａｔの５匹のそれぞれに実施例２の化合物２，０００ｍｇ／ｋｇを単回投与した。試験の結果、死亡した実験動物はなく、前記結果によって、実施例２の化合物は、単回毒性に対して安全であると評価された。
【０４９８】
表１５は、以上の本発明のアデノシン誘導体に対する毒性試験の結果を整理したものである。表１５に示されたように、本発明のアデノシン誘導体は、細胞毒性、心臓毒性、遺伝毒性及び単回毒性に対して安全であるという点を確認することができる。
【０４９９】
【表１５】
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【０５００】
＜実験例１７＞肝の主要構成細胞群でＡ３  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒの発現分析
【０５０１】
マウスの肝に、ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ、ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）を直接灌流（ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）を通じて肝に存在する結合組織を分解した後、単細胞（ｓｉｎｇｌｅ  ｃｅｌｌ）状態で作った後、肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ）、クッパー細胞（Ｋｕｐｆｆｅｒ  ｃｅｌｌｓ）及び肝星状細胞（ｈｅｐａｔｉｃ  ｓｔｅｌｌａｔｅ  ｃｅｌｌｓ）を分離した。肝星状細胞の分離は、Ｎｙｃｏｄｅｎｚを利用した密度勾配遠心法（ｄｅｎｓｉｔｙ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ）を用いて特定の比重を有したｈｅｐａｔｉｃ  ｓｔｅｌｌａｔｅ  ｃｅｌｌ−ｅｎｒｉｃｈｅｄ  ｆｒａｃｔｉｏｎを分離した。最終的にｍａｇｎｅｔｉｃ  ｂｅａｄ−ｂａｓｅｄ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎを行うことにより、肝星状細胞を分離して培養した。分離した細胞群別にＡ３  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ（Ａ３  ＡＲ）の発現をリアルタイム重合酵素連鎖反応（ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲ）を通じて確認し、図１７は、その結果を示すグラフである。図１７において、ＨＳＣｓは、肝星状細胞を意味し、ＫＣｓは、クッパー細胞を意味する。
【０５０２】
Ａ３  ＡＲ  ｍＲＮＡ発現は、肝細胞、クッパー細胞及び肝星状細胞でいずれも発現されるが、図１７に示されたように、クッパー細胞で特に多くの発現が確認され、肝星状細胞も、有意な発現が確認されることが分かる。
【０５０３】
＜実験例１８＞本発明のアデノシン誘導体の肝星状細胞に対する抗繊維化作用分析
【０５０４】
肝星状細胞を培養して、非活性化状態（Ｄａｙ  １）及び活性化状態（Ｄａｙ  ３）で実施例２の化合物の抗繊維化効能を分析した。実施例２の化合物を濃度別（２、４及び８ｐＭ）に処理した後、肝星状細胞の代表的な肝繊維化活性因子であるＴｉｍｐｌ、Ｃｏｌｌａｌ及びＡｃｔａ２（ｏｔＳＭＡ）の発現をリアルタイムＰＣＲで分析し、図１８は、その結果を示すグラフである。
【０５０５】
図１８を参照すれば、マトリックスメタロプロテアーゼ（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ；ＭＭＰｓ）の抑制を通じて纎維化を誘導すると知られたＴｉｍｐｌの肝星状細胞での発現が、実施例２の化合物によって濃度依存的に減少したことが分かり（図１８のＡ）、活性化された肝星状細胞から生産される代表的な細胞外マトリックス（Ｅｘｔｒａ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｍａｔｒｉｘ；ＥＣＭ）であるコラーゲン（Ｃｏｌｌａｇｅｎ）の発現も、実施例２の化合物によって減少したことが分かり（図１８のＢ）、また、活性化された肝星状細胞の代表的なマーカーであるＡｃｔａ２（ａｌｐｈａ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ａｃｔｉｎ）の発現も、実施例２の化合物によって濃度依存的に減少したことが分かる（図１８のＣ）。
【０５０６】
図１８に示されたように、実施例２の化合物の抗繊維化効果は、肝星状細胞の肝繊維化活性に直接に作用することが分かる。
【０５０７】
以上、本発明の実施例を説明したが、当業者ならば、本発明のその技術的思想や必須的な特徴を変更せずとも、他の具体的な形態で実施可能であることを理解できるであろう。したがって、前述した実施例は、あらゆる面で例示的なものであり、限定的ではないということを理解せねばならない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【国際調査報告】
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