(57)【要約】  本発明は、腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有する抗原性ペプチドを含む免疫原性化合物であって、前記抗原性ペプチドが、本明細書に記載される配列からなる群において選択される免疫原性化合物に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有する抗原性ペプチドを含む免疫原性化合物であって、前記抗原性ペプチドが、配列番号１〜１０６からなる群において選択されることを特徴とする免疫原性化合物。
【請求項２】
配列番号１〜１０６のいずれかで表されるアミノ酸配列を有する抗原性ペプチドを含むことを特徴とする免疫原性化合物。
【請求項３】
前記抗原性ペプチドが、配列番号１７、３１、３２、５１、５２、５５、５６、５９、６８、８９、９４、１００、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む又はからなる請求項１から２のいずれかに記載の免疫原性化合物。
【請求項４】
前記抗原性ペプチドが、配列番号２６、２８、４７、５１、５２、５５、５６、７７、９３、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む又はからなる請求項１から２のいずれかに記載の免疫原性化合物。
【請求項５】
前記抗原性ペプチドが、配列番号５１、５２、５５、５６、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む又はからなる請求項３から４のいずれかに記載の免疫原性化合物。
【請求項６】
前記抗原性ペプチドが、配列番号７１の配列のペプチド又はポリペプチドである請求項１から２のいずれかに記載の免疫原性化合物。
【請求項７】
前記抗原性ペプチドが、担体タンパク質に結合される請求項１から６のいずれかに記載の免疫原性化合物。
【請求項８】
以下の式（Ｉ）の抗原性ペプチドを含む又はからなる請求項１から７のいずれかに記載の免疫原性化合物。
ＰｅｐＮｔ−ＣＯＲＥ−ＰｅｐＣｔ  （Ｉ）    式中、
−「ＰｅｐＮｔ」は、０〜５００のアミノ酸残基のアミノ酸長を有するポリペプチドからなり、式（Ｉ）のポリペプチドのＮ末端に位置し；
−ＣＯＲＥは、配列番号１〜１０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む又はからなるポリペプチドからなり；及び
−「ＰｅｐＣｔ」は、０〜５００のアミノ酸残基のアミノ酸長を有し、式（Ｉ）のポリペプチドのＣ末端に位置するポリペプチドからなる。
【請求項９】
腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有する抗原性ペプチドであって、前記抗原性ペプチドが、ＩＬ１３ＲＡ２とアミノ酸類似性を有するペプチドからなる群において選択され、前記抗原性ペプチドが、配列番号１〜１０６のいずれかで表されるアミノ酸配列を有する抗原性ペプチド。
【請求項１０】
配列番号１〜１０６のいずれかで表されるアミノ酸配列を有する抗原性ペプチド。
【請求項１１】
前記抗原性ペプチドが、配列番号１７、３１、３２、５１、５２、５５、５６、５９、６８、８９、９４、１００、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む又はからなる請求項９から１０のいずれかに記載の抗原性ペプチド。
【請求項１２】
前記抗原性ペプチドが、配列番号２６、２８、４７、５１、５２、５５、５６、７７、９３、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む又はからなる請求項９から１０のいずれかに記載の抗原性ペプチド。
【請求項１３】
前記抗原性ペプチドが、配列番号５１、５２、５５、５６、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む又はからなる請求項９から１０のいずれかに記載の抗原性ペプチド。
【請求項１４】
前記抗原性ペプチドが、配列番号７１の配列のペプチド又はポリペプチドである請求項９から１０のいずれかに記載の抗原性ペプチド。
【請求項１５】
−請求項１から８のいずれかに記載の免疫原性化合物の少なくとも１つ、又は
−請求項９から１４のいずれかに記載の抗原性ペプチドの少なくとも１つ；及び
任意にアジュバントがロードされたことを特徴とするナノ粒子。
【請求項１６】
請求項１から８のいずれかに記載の免疫原性化合物、又は請求項９から１４のいずれかに記載の抗原性ペプチドがロードされたことを特徴とする細胞。
【請求項１７】
前記細胞が、抗原提示細胞、好ましくは樹状細胞である請求項１６に記載の細胞。
【請求項１８】
腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有する抗原性ペプチドをコードする核酸であって、前記抗原性ペプチドが、以下からなる群において選択されることを特徴とする核酸。
−配列番号１〜１０６からなる群において選択される抗原性ペプチド；及び／又は
−請求項８に記載の式（Ｉ）の抗原性ペプチド。
【請求項１９】
前記ペプチドが、腫瘍抗原ＩＬ１３ＲＡ２とアミノ酸類似性を有するペプチドからなる群において選択され、前記ペプチドが、配列番号７１からなる群において選択される請求項１８に記載の核酸。
【請求項２０】
以下をコードするポリヌクレオチドを含むことを特徴とする核酸。
−ペプチド又はタンパク質である、請求項１から８のいずれかに記載の免疫原性化合物；又は
−請求項９から１４のいずれかに記載の抗原性ペプチド。
【請求項２１】
前記核酸が、ＤＮＡ分子又はＲＮＡ分子であり、好ましくは、ゲノムＤＮＡ；ｃＤＮＡ；ｓｉＲＮＡ；ｒＲＮＡ；ｍＲＮＡ；アンチセンスＤＮＡ；アンチセンスＲＮＡ；リボザイム；相補的ＲＮＡ及び／又はＤＮＡ配列；発現エレメント、調節エレメント、及び／又はプロモーターを含む又は含まないＲＮＡ及び／又はＤＮＡ配列；ベクター；それらの組合せから選択される請求項１８から２０のいずれかに記載の核酸。
【請求項２２】
請求項１８から２１のいずれかに記載の核酸を含む宿主細胞であって、前記核酸が、好ましくはベクターであることを特徴とする宿主細胞。
【請求項２３】
前記宿主細胞が、細菌細胞、好ましくは腸内細菌細胞である請求項２２に記載の宿主細胞。
【請求項２４】
−請求項１から８のいずれかに記載の免疫原性化合物、
−請求項９から１４のいずれかに記載の抗原性ペプチド、
−請求項１５に記載のナノ粒子、
−請求項１６から１７のいずれかに記載の細胞、
−請求項１８から２１のいずれかに記載の核酸、又は
−請求項２２から２３のいずれかに記載の宿主細胞、及び
１以上の薬学的に許容される賦形剤を含むことを特徴とする免疫原性組成物。
【請求項２５】
１以上の免疫刺激剤を更に含む請求項２４に記載の免疫原性組成物。
【請求項２６】
前記免疫刺激剤が、免疫アジュバント及び抗原提示細胞からなる群において選択される請求項２４から２５のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項２７】
前記抗原提示細胞が、樹状細胞からなる請求項２６に記載の免疫原性組成物。
【請求項２８】
（ｉ）請求項１から８のいずれかに記載の２つの異なる免疫原性化合物；
（ｉｉ）請求項９から１４のいずれかに記載の２つの異なる抗原性ペプチド；
（ｉｉｉ）請求項１５に記載の２つの異なるナノ粒子；又は
（ｉｖ）請求項１８から２１のいずれかに記載の２つの異なる核酸
を含む請求項１９から２２のいずれに記載の免疫原性組成物。
【請求項２９】
癌の予防又は治療における使用のための、請求項１から８のいずれかに記載の免疫原性化合物、請求項９から１４のいずれかに記載の抗原性ペプチド、請求項１５に記載のナノ粒子、請求項１６から１７のいずれかに記載の細胞、請求項１８から２１のいずれかに記載の核酸、請求項２２から２３のいずれかに記載の宿主細胞、又は請求項２４から２８のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項３０】
黒色腫、結腸直腸癌、又は淡明細胞型腎細胞癌からなる群において選択される請求項２９に記載の癌の予防又は治療における使用のための、請求項１から８のいずれかに記載の免疫原性化合物、請求項９から１４のいずれかに記載の抗原性ペプチド、請求項１５に記載のナノ粒子、請求項１６から１７のいずれかに記載の細胞、請求項１８から２１のいずれかに記載の核酸、請求項２２から２３のいずれかに記載の宿主細胞、又は請求項２４から２８のいずれかに記載の免疫原性組成物。
【請求項３１】
癌の予防及び／又は治療における使用のための、請求項１から８のいずれかに記載の２つの異なる免疫原性化合物の組合せ。
【請求項３２】
癌の予防及び／又は治療における使用のための、請求項９から１４のいずれかに記載の２つの異なる抗原性ペプチドの組合せ。
【請求項３３】
癌の予防及び／又は治療における使用のための、請求項１５に記載の２つの異なるナノ粒子の組合せ。
【請求項３４】
癌の予防及び／又は治療における使用のための、請求項１８から２１のいずれかに記載の２つの異なる核酸の組合せ。
【請求項３５】
前記２つの異なる成分が、異なる組成物中に含有される請求項３１から３４のいずれかに記載の使用のための組合せ。
【請求項３６】
前記２つの異なる成分が、同一の組成物中に含有される請求項３１から３４のいずれかに記載の使用のための組合せ。
【請求項３７】
前記２つの異なる成分が、異なる投与経路で投与される請求項３１から３５のいずれかに記載の使用のための組合せ。
【請求項３８】
前記２つの異なる成分が、同一の投与経路で投与される請求項３１から３６のいずれかに記載の使用のための組合せ。
【請求項３９】
前記２つの異なる成分が、連続的に投与される請求項３１から３５、３７、及び３８のいずれかに記載の使用のための組合せ。
【請求項４０】
前記２つの異なる成分が、ほぼ同時に投与される請求項３１から３８のいずれかに記載の使用のための組合せ。
【請求項４１】
−請求項１から８のいずれかに記載の免疫原性化合物、
−請求項９から１４のいずれかに記載の抗原性ペプチド、
−請求項１５に記載のナノ粒子、
−請求項１６から１７のいずれかに記載の細胞、
−請求項１８から２１のいずれかに記載の核酸、
−請求項２２から２３のいずれかに記載の宿主細胞、又は
−請求項２４から２８のいずれかに記載の免疫原性組成物を含むことを特徴するキット。
【請求項４２】
癌の予防及び／又は治療における使用のための、請求項４１に記載のキット。
【請求項４３】
請求項１から８のいずれかに記載の免疫原性化合物、請求項９から１４のいずれかに記載の抗原性ペプチド、請求項１５に記載のナノ粒子、請求項１６から１７のいずれかに記載の細胞、請求項１８から２１のいずれかに記載の核酸、請求項２２から２３のいずれかに記載の宿主細胞、又は請求項２４から２８のいずれかに記載の免疫原性組成物を使用することによって癌を予防又は治療するための指示を含むパッケージインサート又は指示リーフレットを更に含む請求項４１から４２のいずれかに記載のキット。
【請求項４４】
前記キットが、請求項１から８のいずれかに記載の２つの異なる免疫原性化合物を含む請求項４１から４３のいずれかに記載のキット。
【請求項４５】
前記キットが、請求項９から１４のいずれかに記載の２つの異なる抗原性ペプチドを含む請求項４１から４３のいずれかに記載のキット。
【請求項４６】
前記キットが、請求項１５に記載の２つの異なるナノ粒子を含む請求項４１から４３のいずれかに記載のキット。
【請求項４７】
前記キットが、請求項１８から２１のいずれかに記載の２つの異なる核酸を含む請求項３６から３８のいずれかに記載のキット。
【請求項４８】
それを必要とする被験体において癌を予防及び／又は治療する、又は抗腫瘍応答を開始、増強、又は延長するための方法であって、前記被験体に以下を投与することを含むことを特徴とする方法。
−請求項１から８のいずれかに記載の免疫原性化合物、
−請求項９から１４のいずれかに記載の抗原性ペプチド、
−請求項１５に記載のナノ粒子、
−請求項１６から１７のいずれかに記載の細胞、
−請求項１８から２１のいずれかに記載の核酸、
−請求項２２から２３のいずれかに記載の宿主細胞、
−請求項２４から２８のいずれかに記載の免疫原性組成物、又は
−請求項３１から４０のいずれかに記載の組合せ。
【請求項４９】
前記癌が、黒色腫、結腸直腸癌、又は淡明細胞型腎細胞癌からなる群から選択される請求項４８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌治療、より詳細には免疫療法による癌治療の分野のものである。
【背景技術】
【０００２】
癌は、世界で主要な死因の１つである。世界保健機関によれば、２０１２年だけで、世界中で１，４００万の新たな症例と８２０万の癌関連死が報告され、今後２０年以内に、新たな癌症例数が約７０％増加すると予測されている。これまでのところ、世界の年間総新規症例数の６０％超が、アフリカ、アジア、中南米で発生している。これらの地域はまた、世界の癌による死亡の７０％を占めている。男性の間では、癌の最も一般的な５部位は、肺、前立腺、結腸直腸、胃、及び肝臓であり、一方、女性では、乳房、結腸直腸、肺、子宮頸部、及び胃である。
【０００３】
癌は、外科手術、放射線療法、細胞傷害性化学療法、及び内分泌操作により長年対処されてきた。これらは通常、疾患を最もよく制御するために順番に組み合わされる。しかしながら、これらの標準的治療法の真の有効性に対する主要な制限は、治療に伴う正常組織の付随的損傷、低治癒率、及び固有の薬物耐性をもたらすそれらの不正確な特異性にある。
【０００４】
近年、特に腫瘍及び正常細胞の発現プロファイリングの大きな進歩により、癌治療法の開発が著しく進歩しており、最近の研究及び免疫療法又は分子標的療法における最初の臨床結果が、この疾患に対する認識を変え始めている。
【０００５】
有望な抗癌免疫療法が現実のものとなり、宿主免疫系が腫瘍抗原を認識できるという証拠が、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）及び欧州医薬品局（ＥＭＡ）という規制当局により現在承認されている抗癌剤の開発につながった。様々な治療アプローチには、特に、エクスビボで増殖した腫瘍浸潤リンパ球の養子免疫伝達、癌細胞ワクチン、免疫刺激サイトカイン及びその変異体、パターン認識受容体（ＰＲＲ）アゴニスト、及び腫瘍抗原又は免疫チェックポイントを標的とする免疫調節モノクローナル抗体が含まれる（非特許文献１）。
【０００６】
残念なことに、かなりの割合の患者が依然としてこれらの免疫療法のいくつかに対する固有の耐性を示すか、又は治療過程で耐性を獲得することさえあり得る。例えば、３年生存率は、切除不能又は転移性黒色腫における抗ＣＴＬＡ−４抗体イピルムマブで約２０％であると報告されおり（非特許文献２及び非特許文献３）、一方、ＰＤ１を標的とする別のチェックポイント阻害剤、ニボルマブによる３年生存率は、腎細胞癌（ＲＣＣ）で４４％、ＮＳＣＬＣで１８％であると報告されている（非特許文献４及び非特許文献５）。したがって、根本的な薬剤耐性は、これらの免疫療法の有効性に対する確固たる障壁となっている。したがって、この障壁を打破するには、癌治療への異なるアプローチが必要であることは明らかである。
【０００７】
これらの免疫療法を用いて治療された多数の対象における応答の欠如は、欠陥のある抗腫瘍免疫応答と関連している可能性がある（ＡＰＣによる抗原提示における欠陥又はＴ細胞による抗原認識における欠陥として）。換言すれば、免疫療法に対する陽性反応は、ヒト癌細胞によって発現されるＭＨＣクラスＩ拘束性抗原を認識することができる特定のリンパ球サブセットを発達させる免疫系の能力と相関する（非特許文献６）。この仮説は、腫瘍浸潤リンパ球の養子免疫伝達への応答が患者に輸血されたＣＤ８＋Ｔ細胞の数と直接相関することを示すデータによって強く支持される（非特許文献７）。したがって、強力な抗腫瘍応答は、免疫反応性ペプチドの提示及びこれらの抗原を認識するように「訓練された」十分な数の反応性細胞の存在に依存する。
【０００８】
腫瘍抗原ベースのワクチン接種は、癌治療に対する独自のアプローチであり、これは、特定の耐久性のある方法で腫瘍を認識、攻撃、破壊するために患者自身の免疫システムを動員させることができるため、大きな関心を集めている。腫瘍細胞は実際、免疫系によって認識されやすい多数のペプチド抗原を発現することが知られている。したがって、このような抗原に基づくワクチンは、患者の全生存期間を改善するだけでなく、腫瘍抗原の低毒性及び低分子量に起因して、免疫応答のモニタリング及びＧＭＰグレード製品の調製にも大きな機会を提供する。腫瘍抗原の例には、特に、通常はサイレントな遺伝子又は過剰発現された遺伝子から転写されたタンパク質の副産物、及びオンコウイルスによって発現されたタンパク質（非特許文献８）、細胞性タンパク質の点突然変異から生じるネオ抗原が含まれる。後者は、ＣＴＬＡ４阻害剤で治療された患者における全生存期間の増加と直接関連していることが示されているので、特に興味深い（非特許文献９及び非特許文献１０）。
【０００９】
それにもかかわらず、癌ワクチンを開発することができるヒト腫瘍抗原の数は限られている。特に、突然変異した又は修飾された自己タンパク質に由来する抗原は、免疫寛容及び／又は望ましくない自己免疫副作用を誘発する可能性がある。
【００１０】
したがって、当該技術分野で遭遇する制限、特に現在利用可能な免疫療法に対する耐性を克服することができる代替の癌治療薬を同定することが当技術分野において必要とされている。
【００１１】
本発明は、前述の必要を満たすことを目的としている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｇａｌｕｚｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｉｅｓ．  Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．  ２０１４  Ｄｅｃ  ３０；５（２４）：１２４７２−５０８
【非特許文献２】Ｓｎｙｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ＣＴＬＡ−４  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ．  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．  ２０１４  Ｄｅｃ  ４；３７１（２３）：２１８９−２１９９
【非特許文献３】Ｓｃｈａｄｅｎｄｏｒｆ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｏｏｌｅｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｌｏｎｇ−Ｔｅｒｍ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ  Ｄａｔａ  Ｆｒｏｍ  Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ａｎｄ  Ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  Ｔｒｉａｌｓ  ｏｆ  Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ  ｉｎ  Ｕｎｒｅｓｅｃｔａｂｌｅ  ｏｒ  Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  Ｍｅｌａｎｏｍａ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．  ２０１５  Ｊｕｎ  １０；３３（１７）：１８８９−９４
【非特許文献４】Ｍｃ  Ｄｅｒｍｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｕｒｖｉｖａｌ，  Ｄｕｒａｂｌｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ，  ａｎｄ  Ｌｏｎｇ−Ｔｅｒｍ  Ｓａｆｅｔｙ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ  Ｔｒｅａｔｅｄ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｒｅｎａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  Ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ  Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．  ２０１５  Ｊｕｎ  ２０；３３（１８）：２０１３−２０
【非特許文献５】Ｇｅｔｔｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｏｖｅｒａｌｌ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｎｄ  Ｌｏｎｇ−Ｔｅｒｍ  Ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ  （Ａｎｔｉ−Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ  １  Ａｎｔｉｂｏｄｙ，  ＢＭＳ−９３６５５８，  ＯＮＯ−４５３８）  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ  Ｔｒｅａｔｅｄ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｎｏｎ−Ｓｍａｌｌ−Ｃｅｌｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．  ２０１５  Ｊｕｎ  ２０；３３（１８）：２００４−１２
【非特許文献６】Ｋｖｉｓｔｂｏｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｕｍａｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｔｉｇｅｎｓ．  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１３  Ａｐｒ；２５（２）：２８４−９０
【非特許文献７】Ｂｅｓｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｍｅｌａｎｏｍａ：  ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｆｔｅｒ  ｆａｉｌｕｒｅ  ｔｏ  ｐｒｉｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｉｅｓ．  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２０１３  Ｓｅｐ  １；１９（１７）：４７９２−８００
【非特許文献８】Ｋｖｉｓｔｂｏｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｕｍａｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｔｉｇｅｎｓ．  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１３  Ａｐｒ；２５（２）：２８４−９０
【非特許文献９】Ｓｎｙｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ＣＴＬＡ−４  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ．  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．  ２０１４  Ｄｅｃ  ４；３７１（２３）：２１８９−２１９９
【非特許文献１０】Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｅｏ−ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ  ｂｙ  ｔｕｍｏｒ  ｇｅｎｏｍｅ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅ  ｗｉｔｈ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｓｕｒｖｉｖａｌ．  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．  ２０１４  Ｍａｙ；２４（５）：７４３−５０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は、腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有する抗原性ペプチドに関し、この抗原性ペプチドは、配列番号１〜１０６からなる群において選択される。換言すれば、本発明は、配列番号１〜１０６のいずれかに記載のアミノ酸配列を有する抗原性ペプチドに関する。本発明に係る抗原性ペプチドは、免疫原性化合物の形態であり得る。
【００１４】
したがって、特定の実施形態によれば、本発明は、腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有する抗原性ペプチドを含む免疫原性化合物に関し、この抗原性ペプチドは、配列番号１〜１０６からなる群において選択され、特に配列番号７１である。換言すれば、本発明は、配列番号１〜１０６のいずれかに記載のアミノ酸配列を有する抗原性ペプチドを含む免疫原性化合物に関する。
【００１５】
より詳細には、本発明は、前記抗原性ペプチドが担体タンパク質に連結されている、上で定義された免疫原性化合物に関する。
【００１６】
本発明はまた、少なくとも本発明に係る抗原性ペプチド又は本発明に係る少なくとも１つの免疫原性化合物、及び任意にアジュバントがロードされたナノ粒子に関する。
【００１７】
本発明はまた、上で定義された抗原性ペプチド又は免疫原性化合物を含む組成物に関し、前記組成物は、好ましくは更に１以上の薬学的に許容される賦形剤を含む。
【００１８】
したがって、特定の実施形態によれば、本発明は、上で定義された抗原性ペプチド又は免疫原性化合物と、１以上の薬学的に許容される賦形剤とを含む免疫原性組成物に関する。
【００１９】
好ましくは、前記免疫原性組成物は、１以上の免疫刺激剤を更に含むことができる。
【００２０】
前記１以上の免疫刺激剤は、免疫アジュバント及び抗原提示細胞を含む（又はからなる）群において選択することができる。
【００２１】
前記抗原提示細胞は、樹状細胞からなることができる。
【００２２】
他の実施形態によれば、本発明は、癌の予防又は治療における使用のための、上で定義された抗原性ペプチド又は上で定義された免疫原性化合物に関する。
【００２３】
更なる実施形態によれば、本発明は、癌の予防又は治療における使用のための免疫原性組成物に関する。
【００２４】
本発明はまた、癌を治療又は予防するための医薬を調製するための、上で定義された抗原性ペプチド又は上で定義された免疫原性化合物の使用に関する。
【００２５】
本発明はまた、それを必要とする個体における癌を予防又は治療する方法に関し、前記方法は、前記個体に、上で定義された抗原性ペプチド、又は上で定義された免疫原性化合物、又は上で定義された免疫原性組成物、又は本発明に係るナノ粒子、又は本発明に係る核酸、又は本発明に係る組合せを投与する工程を含む。
【００２６】
更なる実施形態によれば、本発明は、上で定義された抗原性ペプチド又は免疫原性化合物をコードする核酸に関する。
【００２７】
更に、本発明はまた、癌の予防及び／又は治療における使用のための本発明に係る２つの異なる免疫原性化合物の組合せに関する。更に、本発明はまた、癌の予防及び／又は治療における使用のための本発明に係る２つの異なる抗原性ペプチドの組合せに関する。更に、本発明はまた、癌の予防及び／又は治療における使用のための本発明に係る２つの異なるナノ粒子の組合せに関する。更に、本発明はまた、癌の予防及び／又は治療における使用のための本発明に係る２つの異なる核酸の組合せに関する。
【００２８】
特定の実施形態においては、本発明に従って使用するための組合せの２つの異なる成分が、同一又は異なる組成物中に含まれる。
【００２９】
特定の実施形態においては、本発明に従って使用するための組合せの２つの異なる成分が、同一又は異なる投与経路で投与される。
【００３０】
特定の実施形態においては、本発明に従って使用するための組合せの２つの異なる成分が、ほぼ同時に又は連続して投与される。
【００３１】
更に、本発明はまた、以下を含むキットに関する。
−  本発明に係る免疫原性化合物、
−  本発明に係る抗原性ペプチド、
−  本発明に係るナノ粒子、
−  本発明に係る核酸、又は
−  本発明に係る免疫原性組成物。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】図１は、ＩＬ１３ＲＡ２を標的とする腫瘍抗原に基づく免疫療法の概念実証の検証のための一般的プロトコールを表す。
【図２】図２は、免疫感作スキームの概略図を表す（ｄ：日）。
【図３】図３は、群１（ＩＬ１３ＲＡ２−Ｂ）及び群２（ＩＬ１３ＲＡ２−Ａ）についてのＥＬＩＳＰＯＴ−ＩＦＮγの結果を表す。ワクチン接種に使用されたペプチド（各群の下の括弧内）及びＥＬＩＳＰＯＴ培養に使用された刺激（Ｘ軸）がグラフに示される。（Ａ）特定のＥＬＩＳＰＯＴ−ＩＦＮγスポットの数（培地条件を差し引いた）。各点は、対応する４連の条件からの一個体／マウスについての平均値を表す。（Ｂ）各個体について、特異的ＥＬＩＳＰＯＴ−ＩＦＮγ応答のレベルを、ＣｏｎＡ刺激と比較する（値：１００％）。統計分析：グループ内比較のための対応のあるｔ検定及びグループ間比較のための対応のないｔ検定。＊ｐ＜０．０５。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
本発明者らは、腫瘍細胞に対する特異的免疫応答を誘導するために使用することができる一組の抗原性ペプチドを同定した。
【００３４】
これらの抗原性ペプチドはいずれも、表１Ａ及び表１Ｂに開示されている遺伝子の組によってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するという性質を共有する。
【００３５】
例えば、インターロイキン−１３受容体サブユニットアルファ−２（ＩＬ−１３Ｒα２又はＩＬ１３ＲＡ２）は、ヒトにおいてＩＬ１３ＲＡ２遺伝子によってコードされる膜結合タンパク質である。包括的ではない方法で、ＩＬ１３ＲＡ２は潜在的な免疫療法標的として報告されている（Ｂｅａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．；Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；  ７２（１１）；２０１２参照）。ＩＬ１３ＲＡ２の高発現は更に、結腸直腸癌における浸潤、肝転移、及び予後不良と関連している（Ｂａｒｄｅｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．；Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；  ７２（１１）；２０１２）。
【００３６】
したがって、本発明は、腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有する抗原性ペプチドに関し、この抗原性ペプチドは、配列番号１〜１０６からなる群において選択される。
【００３７】
本明細書に使用される「腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有する」という表現は、特に、ＩＬ１３ＲＡ２などの（参照）腫瘍抗原の断片の配列変異体を指す。
【００３８】
配列変異体は、特に配列の全長に亘って、参照配列、即ち、（参照）腫瘍抗原の断片と少なくとも５０％の配列同一性を共有する。好ましくは、配列変異体は、参照配列、即ち、（参照）腫瘍抗原の断片と少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、好ましくは少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、更により好ましくは少なくとも８５％、更により好ましくは少なくとも９０％、特に好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を共有する。配列同一性は、以下のように計算することができる。好ましくは、配列変異体は、参照配列の特定の機能、例えばエピトープとしての機能を保存する。特に、アミノ酸配列変異体は、参照配列中の１以上のアミノ酸が欠失又は置換されているか、又は１以上のアミノ酸が参照アミノ酸配列の配列に挿入されている改変された配列を有する。例えば、少なくとも９０％同一である変異体配列は、参照配列の１００アミノ酸当たり１０以下の変更、即ち、欠失、挿入、又は置換の任意の組合せを有する。
【００３９】
２つ以上の配列の同一性（類似性）を比較するための方法は、当該技術分野においてよく知られている。２つの配列が同一である割合は、例えば、数学的アルゴリズムを用いて決定することができる。使用することができる数学的アルゴリズムの好ましいが限定的ではない例は、Ｋａｒｌｉｎら（１９９３）、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、９０：５８７３−５８７７のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、ＢＬＡＳＴファミリーのプログラム、例えば、ＢＬＡＳＴ又はＮＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれており（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５，  ４０３−４１０又はＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７），  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ，  ２５：３３８９−３４０２も参照）、これらは、ワールドウェブサイト（ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）でのＮＣＢＩのホームページ、及びＦＡＳＴＡ（Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９０）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３、６３〜９８；Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ（１９８８）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５，２４４４−２４４８）を通してアクセス可能である。ある程度他の配列と同一である配列は、これらのプログラムによって同定することができる。更に、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ、バージョン９．１（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，３８７−３９５）で利用可能なプログラム、例えば、ＢＥＳＴＦＩＴ及びＧＡＰプログラムもまた、２つのポリヌクレオチド間の同一性％及び２つの（ポリ）ペプチド配列間の同一性％を決定するために使用することができる。ＢＥＳＴＦＩＴは、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９８１）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７，１９５−１９７の「局所相同性」アルゴリズムを用い、２つの配列間の類似性の最良単一領域を見出す。
【００４０】
典型的には、参照配列となる（参照）腫瘍抗原の「断片」は、少なくとも７個、好ましくは少なくとも８個、最も好ましくは（少なくとも）９個のアミノ酸、又は１０個のアミノ酸を含む。
【００４１】
有利なことには、これらの抗原性ペプチドは、特に癌の予防又は治療における使用のための免疫原性化合物の形態であり得る。
【００４２】
したがって、本発明はまた、腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有する抗原性ペプチドを含む免疫原性化合物に関し、この抗原性ペプチドは、配列番号１〜１０６からなる群において選択される。換言すれば、本発明は、配列番号１〜１０６のいずれかで表されるアミノ酸配列を有する抗原性ペプチドを提供する。好ましくは、本発明は、配列番号１７、３１、３２、５１、５２、５５、５６、５９、６８、８９、９４、１００、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む又はからなる抗原性ペプチド（を含む免疫原性化合物）を提供する。また、本発明は、配列番号２６、２８、４７、５１、５２、５５、５６、７７、９３、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む又はからなる抗原性ペプチド（を含む免疫原性化合物）を提供することが好ましい。より好ましくは、本発明は、配列番号５１、５２、５５、５６、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む又はからなる抗原性ペプチド（を含む免疫原性化合物）を提供する。更により好ましくは、本発明は、配列番号５１、５２、５５、又は５６のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む又はからなる抗原性ペプチド（を含む免疫原性化合物）を提供する。また、本発明は、配列番号１０１又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む又はからなる抗原性ペプチド（を含む免疫原性化合物）を提供することが更により好ましい。
【００４３】
本明細書の実施例に示されるように、本発明に係る前記特異的抗原性ペプチドは、それ自体に対する強い免疫応答の上昇を可能にし、最も重要なことには、ＩＬ１３ＲＡ２腫瘍抗原に含まれる前記ペプチドは、それ自体寛容原性であるものの、ＩＬ１３ＲＡ２腫瘍抗原に含まれる、それとのアミノ酸類似性を有するペプチドに対する強い免疫応答の上昇を可能にする。
【００４４】
特定の理論に拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、本明細書に記載の抗原性ペプチドを含む免疫原性組成物のインビボ投与後に測定されたガンマインターフェロンの高発現が、抗原性ペプチド特異的T細胞の活性化を説明し、特に、抗癌免疫応答の関連免疫エフェクタであることが当該技術分野で知られている抗原性ペプチド特異的ＣＴＬの活性化を説明すると考える。
【００４５】
本明細書において特段の断りがない限り、本発明に関して使用される科学的及び技術的用語は、当業者によって通常理解される意味を有するものとする。更に、文脈から異なる方法が必要とされない限り、本明細書中で使用される命名法、並びに細胞及び組織培養の技術は、当該技術分野においてよく知られている通常使用されるものである。
【００４６】
そのような技術は、文献に十分に説明されている。例えば、Ｏｗｅｎら（Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  ７ｔｈ，  ｅｄｉｔｉｏｎ，  ２０１３  −  Ｗ．  Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ）及びＳａｍｂｒｏｏｋら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ  ４ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  −  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ，  ＵＳＡ，  ２０１２）。
【００４７】
それにもかかわらず、本明細書における各種用語の使用に関して、以下の定義がより具体的に適用される。
【００４８】
本明細書中においては、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」は、ペプチド結合（−ＮＨＣＯ−）を介して互いに結合され、インビトロ及び／又はインビボでの細胞において構造的及び／又は機能的役割を果たし得る任意の長さのアミノ酸の連続鎖を意味する。これは、２から少なくとも約１０００アミノ酸残基の範囲のサイズのアミノ酸鎖を包含する。「ペプチド」という用語は、本明細書では、好ましくは約３０アミノ酸未満のサイズのアミノ酸鎖を包含し、「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、好ましくは少なくとも３０アミノ酸のサイズのアミノ酸鎖を包含する。用語「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、本明細書では相互変換可能に使用される。当技術分野においてよく知られているように、ペプチド、ポリペプチド、及びタンパク質は、核酸によってコードされ得る。
【００４９】
「抗原性ペプチド」という用語は、好ましくは腫瘍タンパク質とアミノ酸類似性を有し、それが投与される対象において前記ペプチドに対する免疫学的応答を誘導又は維持する傾向があるペプチドを意味する。
【００５０】
「免疫原性化合物」という用語は、上で定義した抗原性ペプチドを含む化合物であって、それが投与される対象から前記ペプチドに対する免疫学的応答を誘導又は維持することもできる化合物を意味する。
【００５１】
いくつかの実施形態においては、免疫原性化合物は、担体タンパク質を包含するタンパク質に結合された、少なくとも１つの抗原性ペプチド、或いはそのような抗原性ペプチドを含む少なくとも１つの化合物を含む。
【００５２】
担体タンパク質は、通常、本発明に係る抗原性ペプチドなどの、カーゴを輸送することができるタンパク質である。例えば、担体タンパク質は、そのカーゴを膜を横切って輸送することができる。本発明の文脈においては、担体タンパク質は、特に、それに結合している抗原性ペプチドに対する免疫応答を誘発することができるペプチド又はポリペプチドを（もまた）包含する。担体タンパク質は、当該技術分野において知られている。
【００５３】
いくつかの実施形態においては、本明細書に記載の抗原性ペプチド、又は前記抗原性ペプチドを含むポリペプチドは、例えば共有結合又は非共有結合によって、免疫アジュバント特性を有するタンパク質、例えば、配列ＭＡＫＴＩＡＹＤＥＥＡＲＲＧＬＥＲＧＬＮ（配列番号１４４）のＨＨＤ−ＤＲ３ペプチドに結合されてもよい。
【００５４】
或いは、そのような担体ペプチド又はポリペプチドは、免疫アジュバントの形態で同時投与することができる。
【００５５】
好ましくは、本明細書に記載の抗原性ペプチド、又は抗原性ペプチドを含むポリペプチドは、ＣＤ４＋Ｔｈ１細胞の刺激を与えるなどの免疫アジュバント特性を有するタンパク質／ペプチドと同時投与することができる、又は共有結合又は非共有結合などによってこれと結合することができる。本明細書に記載の抗原性ペプチドは、好ましくはＭＨＣクラスＩに結合するが、ＣＤ４＋ヘルパーエピトープを更に使用して効率的な免疫応答を提供することができる。Ｔｈ１ヘルパー細胞は、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、及びインターロイキン−２（ＩＬ−２）を分泌して、樹状細胞（ＤＣ）及びＴ細胞における共刺激シグナルの発現を向上することによって効率的なＤＣ細胞の活性化及び特異的なＣＴＬの活性化を維持することができる（Ｇａｌａｉｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＣＤ４  Ｔ  Ｈｅｌｐｅｒ  １  Ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｖａｃｃｉｎｅ．  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  （Ｂａｓｅｌ）．  ２０１５  Ｊｕｎ  ３０；３（３）：４９０−５０２）。
【００５６】
例えば、アジュバントペプチド／タンパク質は、好ましくは、免疫記憶を想起するか又は非特異的な助けを提供する非腫瘍抗原であり得るか、又は特異的な腫瘍由来ヘルパーペプチドであり得る。破傷風ヘルパーペプチド、キーホールリンペットヘモシアニンペプチド、又はＰＡＤＲＥペプチドなどの非特異的Ｔ細胞ヘルプを提供するためのいくつかのヘルパーペプチドが文献記載されている（Ａｄｏｔｅｖｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ＣＤ４  ｈｅｌｐｅｒ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ｔｕｍｏｒ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｈｅｌｐｅｒ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｖａｃｃｉｎｅ．  Ｈｕｍ  Ｖａｃｃｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ２０１３  Ｍａｙ；９（５）：１０７３−７，  Ｓｌｉｎｇｌｕｆｆ  ＣＬ，  Ｔｈｅ  ｐｒｅｓｅｎｔ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ：  ｓｉｎｇｌｅ  ｏｒ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ，  ｌｏｎｇ  ｏｒ  ｓｈｏｒｔ，  ａｌｏｎｅ  ｏｒ  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ？  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．  ２０１１  Ｓｅｐ−Ｏｃｔ；１７（５）：３４３−５０）。したがって、破傷風ヘルパーペプチド、キーホールリンペットヘモシアニンペプチド、及びＰＡＤＲＥペプチドは、そのようなアジュバントペプチド／タンパク質の好ましい例である。更に、特定の腫瘍由来ヘルパーペプチドが好ましい。特定の腫瘍由来ヘルパーペプチドは、典型的には、ＭＨＣクラスＩＩ、特にＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰ、又はＨＬＡ−ＤＱによって示される。特定の腫瘍由来ヘルパーペプチドは、ＨＥＲ２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｈＴＥＲＴ、又はＩＬ１３ＲＡ２などの共有過剰発現腫瘍抗原の配列の断片であり得る。そのような断片は、好ましくは少なくとも１０アミノ酸、より好ましくは少なくとも１１アミノ酸、更により好ましくは少なくとも１２アミノ酸、最も好ましくは少なくとも１３アミノ酸の長さを有する。特に、１３〜２４アミノ酸の長さを有する共有過剰発現腫瘍抗原、例えばＨＥＲ２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｈＴＥＲＴ、又はＩＬ１３ＲＡ２の断片が好ましい。好ましい断片は、ＭＨＣクラスＩＩに結合し、したがって、例えば、ＩＥＤＢのＭＨＣクラスＩＩ結合予測ツールを用いて同定され得る（Ｉｍｍｕｎｅ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ｄａｔａｂａｓｅ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｒｅｓｏｕｒｃｅ；  Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ  ｂｙ  ａ  ｃｏｎｔｒａｃｔ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，  ａ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ；  ＵＲＬ：  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｅｄｂ．ｏｒｇ／；  ｈｔｔｐ：／／ｔｏｏｌｓ．ｉｅｄｂ．ｏｒｇ／ｍｈｃｉｉ／）。
【００５７】
上で定義した免疫原性化合物を含み、更に、１以上の免疫アジュバント物質を含む本明細書で定義される組成物はまた、本明細書においては、「免疫原性組成物」とも称され、いくつかの実施形態においては「ワクチン組成物」とも称される。
【００５８】
本明細書で使用されるとき、用語「免疫原性組成物」は、哺乳動物に投与されるときに、特にヒト個体に投与されるときに、免疫応答を誘導又は維持することができる、特に免疫応答を誘導することができる組成物を意味する。
【００５９】
本明細書で相互変換可能に使用される「核酸」、「核酸分子」、「核酸配列」、「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド配列」という用語は、正確な連続した天然ヌクレオチド（例えば、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、及びＵ）、又は一本鎖若しくは二本鎖のＤＮＡ又はＲＮＡ、例えば、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、リボソームＤＮＡ、及び前記ＤＮＡの転写産物、例えばＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｍＲＮＡに対応する合成ヌクレオチド；アンチセンスＤＮＡ、アンチセンスＲＮＡ；相補的ＲＮＡ及び／又はＤＮＡ配列；発現エレメント、調節エレメント、及び／又はプロモーターを含む又は含まないＲＮＡ及び／又はＤＮＡ配列；ベクター；及びこれらの組合せを意味する。特定のアミノ酸配列をコードできるヌクレオチド配列を決定することは、当業者の技術の範囲内である。
【００６０】
本発明に係る（ポリ）ペプチド及び／又は核酸は、任意の合成方法、任意の組換え方法、任意のエクスビボ生成方法など、それらの任意の組合せを含むがこれらに限定されない当該技術分野における任意の知られた方法によって調製することができる。そのような技術は、前記のように文献に十分に説明されている。
【００６１】
本発明の文脈において、本発明に係る抗原性ペプチドは、腫瘍抗原と類似性を有する抗原を含む。本明細書中で使用されるとき、用語「腫瘍抗原」は、腫瘍特異的抗原及び腫瘍関連抗原を含む。一般に、用語「腫瘍抗原」又は「腫瘍タンパク質」は、本明細書において、腫瘍細胞において、そして時には正常細胞においても産生され、被験体における投与の際に免疫応答を引き起こし得る抗原性物質を意味する。ヒトにおいては、それらは、発現パターン、機能、又は遺伝的起源にしたがって分類されており、限定するものではないが、過剰発現された自己抗原（例えば、ＨＥＲ２／ｎｅｕ及びその変異体ｄＨＥＲ２、ｐ５３、ウィルムス腫瘍１、エフリン受容体、プロテイナーゼ３、ムチン−１、メソセリン、ＥＧＦＲ、ＣＤ２０）；癌精巣（ＣＴ）抗原（ＭＡＧＥ−１、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１など）；ネオ抗原としても知られる突然変異抗原（例えば、ＭＵＭ−１、ｂｃｒ−ａｂｌ、ｒａｓ、ｂ−ｒａｆ、ｐ５３、ＣＤＫ−４、ＣＤＣ２７、ベータ−カテニン、アルファ−アクテニン−４由来の突然変異体）；組織特異的分化抗原（黒色腫抗原Ｍｅｌａｎ  Ａ／ＭＡＲＴ−１、チロシナーゼ、ＴＲＰ１／ｐｇ７５、ＴＲＰ２、ｇｐ１００、及びガングリオシドＧＭ３、ＧＭ２、ＧＤ２、及びＧＤ３；前立腺癌抗原ＰＳＭＡ、ＰＳＡ、及びＰＡＰなど）；オンコウイルスによって発現されるウイルス抗原（ＨＰＶ、ＥＢＶなど）；癌胎児性抗原（アルファフェトプロテインＡＦＰ及び癌胎児性抗原ＣＥＡなど）；及びユニバーサル抗原（テロメラーゼ、ｈＴＥＲＴ、サバイビン、ｍｄｍ−２、ＣＹＰ−１Ｂ１）（Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ  ａｎｄ  Ｗｏｌｃｈｏｋ，  Ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ：  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ  ＤＮＡ  ｖａｃｃｉｎｅｓ．  Ｊ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．  ２００４  Ａｐｒ  １６；２（１）：１２）を意味する。
【００６２】
本明細書に記載の本発明の各種態様及び実施形態によれば、「被験体」又は「宿主」は、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。前記被験体は、癌、例えば黒色腫、結腸直腸癌、又は淡明細胞型腎細胞癌を有することが疑われている又はそれを引き起こすこと可能性がある。
【００６３】
「薬学的に許容される賦形剤」とは、本明細書においては、活性剤の送達、安定性、又は生物学的利用性を改善し、それが投与される被験体が代謝することができ、前記被験体に対して非毒性である薬学的グレードの化合物を意味する。本発明に係る好ましい賦形剤には、例えば、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール、及びそれらの組合せなどの医薬品に通常使用される任意の賦形剤が含まれる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、又は塩化ナトリウムなどを含有させることが好ましい。薬学的に許容される賦形剤は、湿潤剤若しくは乳化剤、又は保存料などの少量の補助物質を更に含むことができる。
【００６４】
「ワクチン」とは、本明細書においては、予防又は治療のいずれかによって有害な抗原に対する防御がもたらされるように、生物の免疫系を刺激することができる組成物を意味する。
【００６５】
本明細書で使用されるとき、「癌」という用語は、悪性新生物を意味する。特に、用語「癌」は、本明細書では、侵入による隣接組織への直接増殖によって、又は転移による遠隔部位への移植によって、細胞の制御不能な分裂及び他の組織に侵入するこれらの細胞の能力によって特徴付けられる疾患又は障害のクラスの任意のものを意味する。転移は、癌細胞が血流又はリンパ系を通して輸送される段階として定義される。それは、特に、食道癌、胃癌、十二指腸癌、小腸癌、虫垂癌、大腸癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、肛門癌、膵臓癌、肝臓癌、胆嚢癌、脾臓癌、腎臓癌、膀胱癌、前立腺癌、精巣癌、子宮癌、子宮内膜癌、卵巣癌、膣癌、外陰癌、乳癌、肺癌、甲状腺癌、胸腺癌、脳腫瘍、神経系癌、口腔癌、皮膚癌、血液癌、リンパ腫、眼癌、骨癌、骨髄癌、筋肉癌などを含む。本発明の文脈においては、黒色腫、頭頸部、乳房、結腸直腸癌、又は淡明細胞型腎細胞癌が好ましい。
【００６６】
本明細書で使用されるとき、用語「予防する」又は「予防」（“ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ”、“ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ”、“ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ”、“ｐｒｅｖｅｎｔ”）は、一般に、発症前に、疾患又は状態の発症を回避又は最低限とすることを意味し、一方、用語「治療する」又は「治療」（“ｔｒｅａｔｉｎｇ”、“ｔｒｅａｔｍｅｎｔ”、“ｔｒｅａｔ”）は、発症後に、疾患又は状態（又は疾患又は状態の症状）を軽減、改善、又は治癒することを含む。本発明の文脈においては、癌の予防及び／又は治療は、例えば、被験体における腫瘍細胞の非増殖、弱い、低減された、又は遅延された増殖、又は被験体における腫瘍細胞の完全又はほぼ完全な除去をもたらし得る。「予防する」という用語は、「〜の発生の可能性を低減する」又は「再発の可能性を低減する」ことを含む。
【００６７】
本明細書で使用される「有効量」又は「有効用量」は、所望の効果をもたらす量である。治療目的のためには、有効量は、有益な又は望ましい臨床結果をもたらすのに十分な量である。所与の適用のための好ましい有効量は、例えば、被験体の大きさ、年齢、体重、予防又は治療される癌の種類、及び癌発症からの経過時間などを考慮して、当業者によって容易に決定され得る。本発明の文脈においては、予防又は治療の観点で、組成物の有効量は、癌に対する体液性及び／又は細胞性免疫応答を誘導するのに十分な量である。
【００６８】
本明細書で使用されるとき、用語「含む」（“ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ”）は、「からなる」（“ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ”）を包含する。
【００６９】
本明細書を通して更なる定義が提供されている。
【００７０】
本発明は、本発明の好ましい実施形態及び本明細書に含まれる実施例を含む以下の詳細な説明を参照することによってより容易に理解することができる。
【００７１】
したがって、本発明は、腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有する抗原性ペプチドを含む免疫原性化合物に関し、この抗原性ペプチドは、配列番号１〜１０６からなる群において選択される。換言すれば、本発明は、配列番号１〜１０６のいずれかで表されるアミノ酸配列を有する抗原性ペプチド（を含む免疫原性化合物）を提供する。好ましくは、配列番号１７、３１、３２、５１、５２、５５、５６、５９、６８、８９、９４、１００、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む又はからなる抗原性ペプチド（を含む免疫原性化合物）を提供する。また、本発明は、配列番号２６、２８、４７、５１、５２、５５、５６、７７、９３、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む又はからなる抗原性ペプチド（を含む免疫原性化合物）を提供する。より好ましくは、本発明は、配列番号５１、５２、５５、５６、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む又はからなる抗原性ペプチド（を含む免疫原性化合物）を提供する。更により好ましくは、本発明は、配列番号５１、５２、５５、又は５６のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む又はからなる抗原性ペプチド（を含む免疫原性化合物）を提供する。また、本発明は、配列番号１０１又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む又はからなる抗原性ペプチド（を含む免疫原性化合物）を提供することが更により好ましい。
【００７２】
例示的な実施形態によれば、上で定義された抗原性ペプチドは、配列番号７１の配列のペプチドである。
【００７３】
一実施形態によれば、上で定義された抗原性ペプチド、又は前記抗原性ペプチドを含むポリペプチドは、例えば共有結合又は非共有結合によって担体タンパク質に結合される。
【００７４】
いくつかの実施形態によれば、本発明は、式（Ｉ）の抗原性ペプチドを含む、上で定義された免疫原性化合物に関する。
ＰｅｐＮｔ−ＣＯＲＥ−ＰｅｐＣｔ  （Ｉ）    式中、
−「ＰｅｐＮｔ」は、０〜３０のアミノ酸残基のアミノ酸長を有するポリペプチドからなり、式（Ｉ）のポリペプチドのＮ末端に位置し；
−ＣＯＲＥは、配列番号１〜１０６（配列番号７１を含む）からなる群から選択されるアミノ酸配列、特に、配列番号２６、２８、４７、５１、５２、５５、５６、７７、９３、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は１７、３１、３２、５１、５２、５５、５６、５９、６８、８９、９４、１００、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列、例えば、５１、５２、５５、５６、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む又はからなるポリペプチドからなり；及び
−「ＰｅｐＣｔ」は、０〜３０のアミノ酸残基のアミノ酸長を有し、式（Ｉ）のポリペプチドのＣ末端に位置するポリペプチドからなる。
【００７５】
好ましくは、式（Ｉ）の抗原性ペプチドは、融合ペプチド又は融合タンパク質、特に組換え融合ペプチド又はタンパク質である。「組換え」という用語は、それが天然には生じないことを意味する。
【００７６】
本発明は更に、以下がロードされたナノ粒子に関する：
−  本発明に係る免疫原性化合物の少なくとも１つ、又は
−  本発明に係る抗原性ペプチドの少なくとも１つ、及び任意にアジュバント。
【００７７】
本発明は更に、以下を含む免疫原性組成物に関する：
−  本発明に係る免疫原性化合物、
−  本発明に係る抗原性ペプチド、
−  本発明に係るナノ粒子、又は
−  本発明に係る核酸、及び
１以上の薬学的に許容される賦形剤。
【００７８】
免疫原性組成物は、１以上の免疫刺激剤を更に含むことができる。
【００７９】
特に、前記免疫刺激剤は、免疫アジュバント及び抗原提示細胞からなる群において選択される。
【００８０】
より具体的には、抗原提示細胞は、樹状細胞からなることができる。
【００８１】
特に、免疫原性組成物は、以下を含むことができる：
（ｉ）本発明に係る２つの異なる免疫原性化合物；
（ｉｉ）本発明に係る２つの異なる抗原性ペプチド；
（ｉｉｉ）本発明に係る２つの異なるナノ粒子；又は
（ｉｖ）本発明に係る２つの異なる核酸。
【００８２】
この文脈においては、２つの異なる成分は、特に本発明に係る異なる抗原性ペプチド（これらは免疫原性化合物、ナノ粒子、及び／又は核酸に含まれる）を意味する。そのような２つの異なる成分、特に本発明に係る２つの異なる抗原性ペプチド（２つの異なる成分に含まれる）は、好ましくは同一種類の癌、例えばこの癌に関連する同一又は異なる抗原、及び／又はこの癌に関連する抗原内の同一又は異なる（参照）エピトープに関する。より好ましくは、２つの異なる成分、特に本発明に係る２つの異なる抗原性ペプチド（２つの異なる成分に含まれる）は、同一腫瘍（関連又は特異的）抗原に関する。２つの異なる成分、特に本発明に係る２つの異なる抗原性ペプチド（２つの異なる成分に含まれる）は、同一又は異なる（参照）腫瘍（関連又は特異的）抗原にも関し得る。
【００８３】
本発明は、更に、癌の予防又は治療における使用のための、以下のいずれかに関する：
−  本発明に係る免疫原性化合物、
−  本発明に係る抗原性ペプチド、
−  本発明に係る（宿主）細胞、
−  本発明に係るナノ粒子、
−  本発明に係る核酸、又は
−  本発明に係る免疫原性組成物。
【００８４】
様々な種類の癌のうち、治療及び／又は予防に関してより具体的に考慮されているものを、特に標的とされる腫瘍抗原の観点から、以下の表１Ｂに詳述する。
【表１−１】
2019534884.tif 000002
【表１−２】
2019534884.tif 000003
【００８５】
したがって、一実施形態によれば、本発明は、表１Ｂから選択される癌の予防又は治療ににおける使用のための、本明細書に記載の抗原性ペプチド及び免疫原性化合物のいずれか、並びに本明細書に記載の免疫原性組成物のいずれかに関する。
【００８６】
本発明は更に、腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有する抗原性ペプチドをコードする核酸に関し、前記ペプチドは、以下からなる群において選択される：
−  配列番号１〜１０６からなる群において選択される抗原性ペプチド；及び／又は
−  本明細書に記載の式（Ｉ）、又は（Ｉａ）、又は（Ｉｂ）の抗原性ペプチド。
【００８７】
特に、上で定義された核酸は、配列番号７１を含む、ＩＬ１３ＲＡ２とアミノ酸類似性を有するペプチドからなる群において選択される抗原性ペプチドをコードし得る。
【００８８】
本発明はまた、それを必要とする被験体における癌の予防若しくは治療又は抗腫瘍応答の開始、増強、若しくは延長のための方法であって、前記被験体に、本発明に係る抗原性ペプチド、又は本発明に係る免疫原性化合物、又は本発明に係る免疫原性組成物、又は本発明に係るナノ粒子、又は本発明に係る核酸、又は本発明に係る組合せを投与することを含む方法に関する。
【００８９】
更に、本発明は、上で定義された抗原性ペプチド又は免疫原性化合物をコードする核酸に関する。
【００９０】
更に、本発明はまた、癌の予防及び／又は治療における使用のための本発明に係る２つの異なる免疫原性化合物の組合せに関する。
【００９１】
更に、本発明はまた、癌の予防及び／又は治療における使用のための本発明に係る２つの異なる抗原性ペプチドの組合せに関する。
【００９２】
更に、本発明はまた、癌の予防及び／又は治療における使用のための本発明に係る２つの異なるナノ粒子の組合せに関する。
【００９３】
更に、本発明はまた、癌の予防及び／又は治療における使用のための本発明に係る２つの異なる核酸の組合せに関する。
【００９４】
特定の実施形態においては、本発明に従って使用するための組合せの２つの異なる成分は、同一又は異なる組成物中に含有される。
【００９５】
特定の実施形態においては、本発明に従って使用するための組合せの２つの異なる成分は、同一又は異なる投与経路で投与される。
【００９６】
特定の実施形態においては、本発明に従って使用するための組合せの２つの異なる成分は、ほぼ同時に（同時に）又は連続して投与される。
【００９７】
更に、本発明はまた、以下を含むキットに関する：
−  本発明に係る免疫原性化合物、
−  本発明に係る抗原性ペプチド、
−  本発明に係る（宿主）細胞、
−  本発明に係るナノ粒子、
−  本発明に係る核酸、又は
−  本発明に係る免疫原性組成物。
【００９８】
抗原性ペプチド、免疫原性化合物、核酸、ナノ粒子、及び細胞
特段の断りがない限り、＜＜抗原性ペプチド＞＞に言及している全ての箇所は、＜＜免疫原性化合物＞＞にも適用され得る。
【００９９】
本発明に係る抗原性ペプチドを以下の表１Ａに示す。これはまた、それらをコードする遺伝子の名称を有する対応する「参照」ヒト腫瘍抗原（エピトープ）に関する情報、及び腫瘍におけるそれらの報告された局在化を与えるが、これらは非限定的である。Ｎ．Ａ．＝適用なし。配列番号１〜１０６の配列番号は、抗原性ペプチドを意味する。
【表１−３】
2019534884.tif 000004
【表１−４】
2019534884.tif 000005
【表１−５】
2019534884.tif 000006
【０１００】
これらの１０６の抗原性ペプチド配列は、参照腫瘍抗原、例えばＩＬ１３ＲＡ２由来の腫瘍抗原の配列に基づいて更に定義することができる。
【０１０１】
したがって、本発明は、腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有する抗原性ペプチドを含む免疫原性化合物に関し、この抗原性ペプチドは、以下を含む配列番号１〜１０６からなる群において選択される：
−  遺伝子ＰＬＩＮ２によってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号１からなる群において選択される；
−  遺伝子ＡＬＤＨ１Ａ１によってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号２〜３からなる群において選択される；
−  遺伝子ＡＦＰによってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号４〜５からなる群において選択される；
−  遺伝子ＰＴＰＲＣによってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号６〜１１からなる群において選択される；
−  遺伝子ＣＥＡＣＡＭ５によってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号１２〜２５からなる群において選択される；
−  遺伝子ＥＮＡＨによってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号２６からなる群において選択される；
−  遺伝子ＥＺＨ２によってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号２７からなる群において選択される；
−  遺伝子ＰＭＥＬによってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号２８からなる群において選択される；
−  遺伝子ＥＲＢＢ２によってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号２９〜７０からなる群において選択される；
−  遺伝子ＩＬ１３ＲＡ２によってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号７１からなる群において選択される；
−  遺伝子ＭＡＧＥＡ１によってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号７２からなる群において選択される；
−  遺伝子ＭＡＧＥＡ３によってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号７３〜７５からなる群において選択される；
−  遺伝子ＭＡＧＥＡ４によってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号７６からなる群において選択される；
−  遺伝子ＭＡＧＥＣ１によってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号７７〜８０からなる群において選択される；
−  遺伝子ＭＡＧＥＣ２によってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号８１〜８５からなる群から選択される；
−  遺伝子ＳＣＧＢ２Ａ２によってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号８６〜８７からなる群において選択される；
−  遺伝子ＭＬＡＮＡによってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号８８〜８９からなる群において選択される；
−  遺伝子ＭＤＫによってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号９０〜９１からなる群において選択される；
−  遺伝子ＭＭＰ２によってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号９２〜９３からなる群において選択される；
−  遺伝子ＣＴＡＧ１Ｂによってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号９４からなる群において選択される；
−  遺伝子ＡＣＰＰによってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号９５〜９９からなる群において選択される；
−  遺伝子ＳＴＥＡＰ１によってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号１００〜１０２からなる群において選択される；
−  遺伝子ＴＡＧ１によってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号１０３〜１０５からなる群において選択される；
−  遺伝子ＴＹＲによってコードされる腫瘍抗原とアミノ酸類似性を有するペプチドであって、前記抗原性ペプチドは、配列番号１０６からなる群において選択される。
【０１０２】
したがって、それら１０６の抗原性ペプチドは、それらの参照ペプチドに従って複数の異なるファミリーに更に分類することができる：
−  ファミリー＜＜ＳＶＡＳＴＩＴＧＶ＞＞（配列番号１０７）、このファミリーは、配列番号１のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＬＬＹＫＬＡＤＬＩ＞＞（配列番号１０８）、このファミリーは、配列番号２〜３のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＱＬＡＶＳＶＩＬＲＶ＞＞（配列番号１０９）、このファミリーは、配列番号４〜５のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＫＦＬＤＡＬＩＳＬ＞＞（配列番号１１０）、このファミリーは、配列番号６〜１１のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＧＶＬＶＧＶＡＬＩ＞＞（配列番号１１１）、このファミリーは、配列番号１２〜２４のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＨＬＦＧＹＳＷＹＫ＞＞（配列番号１１２）、このファミリーは、配列番号２５のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＴＭＮＧＳＫＳＰＶ＞＞（配列番号１１３）、このファミリーは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＦＭＶＥＤＥＴＶＬ＞＞（配列番号１１４）、このファミリーは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＩＴＤＱＶＰＦＳＶ＞＞（配列番号１１５）、このファミリーは、配列番号２８のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＩＩＳＡＶＶＧＩＬ＞＞（配列番号１１６）、このファミリーは、配列番号２９〜４０のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＩＬＨＮＧＡＹＳＬ＞＞（配列番号１１７）、このファミリーは、配列番号４１のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＫＩＦＧＳＬＡＦＬ＞＞（配列番号１１８）、このファミリーは、配列番号４２〜４３のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＰＬＴＳＩＡＩＳＶ＞＞（配列番号１１９）、このファミリーは、配列番号４４〜４６のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＲＬＬＱＥＴＥＬＶ＞＞（配列番号１２０）、このファミリーは、配列番号４７のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＴＬＥＥＩＴＧＹＬ＞＞（配列番号１２１）、このファミリーは、配列番号４８〜５０のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＶＶＬＧＶＶＦＧＩ＞＞（配列番号１２２）、このファミリーは、配列番号５１〜７０のアミノ酸配列を含む；
−  配列番号７１を含むファミリー＜＜ＷＬＰＦＧＦＩＬＩ＞＞（配列番号１２３）；
−  ファミリー＜＜ＫＶＬＥＹＶＩＫＶ＞＞（配列番号１２４）、このファミリーは、配列番号７２のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＥＶＤＰＩＧＨＬＹ＞＞（配列番号１２５）、このファミリーは、配列番号７３〜７４のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＶＡＥＬＶＨＦＬＬ＞＞（配列番号１２６）、このファミリーは、配列番号７５のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＥＶＤＰＡＳＮＴＹ＞＞（配列番号１２７）、このファミリーは、配列番号７６のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＫＶＶＥＦＬＡＭＬ＜＜（配列番号１２８）、このファミリーは、配列番号７７のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＳＦＳＹＴＬＬＳＬ＜＜（配列番号１２９）、このファミリーは、配列番号７８〜７９のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＶＳＳＦＦＳＹＴＬ＞＞（配列番号１３０）、このファミリーは、配列番号８０のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＡＬＫＤＶＥＥＲＶ＞＞（配列番号１３１）、このファミリーは、配列番号８１〜８３のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＡＳＳＴＬＹＬＶＦ＞＞（配列番号１３２）、このファミリーは、配列番号８４〜８５のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＰＬＬＥＮＶＩＳＫ＞＞（配列番号１３３）、このファミリーは、配列番号８６〜８７のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＩＬＴＶＩＬＧＶＬ＞＞（配列番号１３４）。このファミリーは、配列番号８８〜８９のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＡＬＬＡＬＴＳＡＶ＞＞（配列番号１３５）、このファミリーは、配列番号９０〜９１のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＧＬＰＰＤＶＱＲＶ＞＞（配列番号１３６）、このファミリーは、配列番号９２〜９３のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＬＡＭＰＦＡＴＰＭ＞＞（配列番号１３７）、このファミリーは、配列番号９４のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＡＬＤＶＹＮＧＬＬ＞＞（配列番号１３８）、このファミリーは、配列番号９５〜９７のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＦＬＦＬＬＦＦＷＬ＞＞（配列番号１３９）、このファミリーは、配列番号９８のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＴＬＭＳＡＭＴＮＬ＞＞（配列番号１４０）、このファミリーは、配列番号９９のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＭＩＡＶＦＬＰＩＶ＞＞（配列番号１４１）、このファミリーは、配列番号１００〜１０２のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＳＬＧＷＬＦＬＬＬ＞＞（配列番号１４２）、このファミリーは、配列番号１０３〜１０５のアミノ酸配列を含む；
−  ファミリー＜＜ＭＬＬＡＶＬＹＣＬ＞＞（配列番号１４３）、このファミリーは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。
【０１０３】
好ましい実施形態によれば、本発明の抗原性ペプチドは、配列番号：７１のアミノ酸配列を含む又はからなるペプチド又はポリペプチドからなる群から選択される。
【０１０４】
例示的な実施形態によれば、本発明の抗原性ペプチドは、配列番号７１のアミノ酸配列を含む又はからなるペプチド又はポリペプチドである。
【０１０５】
より好ましくは、本発明の抗原性ペプチドは、配列番号１７、３１、３２、５１、５２、５５、５６、５９、６８、８９、９４、１００、１０１、又は１０２のいずれかに係るアミノ酸配列を含む又はからなるペプチド又はポリペプチドからなる群から選択される。また、本発明の抗原性ペプチドは、配列番号２６、２８、４７、５１、５２、５５、５６、７７、９３、１０１、又は１０２のいずれかに係るアミノ酸配列を含む又はからなるペプチド又はポリペプチドからなる群から選択されることがより好ましい。更により好ましくは、本発明の抗原性ペプチドは、配列番号５１、５２、５５、５６、１０１、又は１０２のいずれかに係るアミノ酸配列を含む又はからなるペプチド又はポリペプチドからなる群から選択される。更により好ましくは、本発明の抗原性ペプチドは、配列番号５１、５２、５５、又は５６のいずれかに係るアミノ酸配列を含む又はからなるペプチド又はポリペプチドからなる群から選択される。また、本発明の抗原性ペプチドは、配列番号１０１又は１０２のいずれかに係るアミノ酸配列を含む又はからなるペプチド又はポリペプチドからなる群から選択されることが更により好ましい。
【０１０６】
いくつかの実施形態によれば、免疫原性化合物は、式（Ｉ）の抗原性ペプチドを含む又はからなる：
ＰｅｐＮｔ−ＣＯＲＥ−ＰｅｐＣｔ  （Ｉ）    式中、
−「ＰｅｐＮｔ」は、０〜５００のアミノ酸残基のアミノ酸長を有するポリペプチドからなり、式（Ｉ）のポリペプチドのＮ末端に位置し；
−ＣＯＲＥは、配列番号１〜１０６（配列番号７１を含む）からなる群から選択されるアミノ酸配列、特に、配列番号２６、２８、４７、５１、５２、５５、５６、７７、９３、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は１７、３１、３２、５１、５２、５５、５６、５９、６８、８９、９４、１００、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列、例えば、配列番号５１、５２、５５、５６、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を含む又はからなるポリペプチドからなり；及び
−「ＰｅｐＣｔ」は、０〜５００のアミノ酸残基のアミノ酸長を有し、式（Ｉ）のポリペプチドのＣ末端に位置するポリペプチドからなる。
【０１０７】
１つの特定の実施形態によれば、免疫原性化合物は、以下の式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）の抗原性ペプチドを含む又はからなる：
ＰｅｐＮｔ−ＣＯＲＥ（Ｉａ）；又は
ＣＯＲＥ−ＰｅｐＣｔ（１ｂ）。
式中、「ＰｅｐＮｔ」及び「ＰｅｐＣｔ」及びＣＯＲＥは、上で定義した通りである。
【０１０８】
いくつかの更により具体的な実施形態によれば、上で定義された抗原性ペプチド又は免疫原性は、９〜１０００個のアミノ酸を含み、例えば、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、及び１０００個のアミノ酸を含む。
【０１０９】
前記実施形態によれば、適用される場合、「ＰｅｐＮｔ」及び「ＰｅｐＣｔ」の長さは、次のように定義される。
【０１１０】
したがって、「ＰｅｐＮｔ」及び「ＰｅｐＣｔ」は、上で定義したように、０〜５００個のアミノ酸残基を含むことができ、例えば、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、及び５００個のアミノ酸残基を含む。
【０１１１】
担体分子に結合した式（Ｉ）のペプチドを含む又はからなるものなど、本発明の免疫原性化合物を生成するために使用される担体分子の種類は、十分に当業者の一般的知識の範囲内にある。担体分子の機能は、腫瘍抗原に対する免疫応答を増強するために、サイトカインの助け（又はＴ細胞の助け）を提供することである。
【０１１２】
好ましくは、抗原性ペプチドは、担体分子、特に担体タンパク質に、好ましくは共有結合又は非共有結合によって結合される。ペプチドが任意に結合される担体分子は、多種多様の知られた担体から選択することができる。ワクチン目的のための担体分子の例としては、ヒト又はウシ血清アルブミン及びキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）などのタンパク質、及び脂肪酸が挙げられる。式（Ｉ）の抗原性ペプチドを共有結合させることができる担体分子の他の実施形態としては、ジフテリア、コレラ、大腸菌熱不安定性又は破傷風トキソイドなどの細菌毒素又はトキソイド、髄膜炎菌外膜タンパク質（欧州特許出願第ＥＰ０３７２５０１号）、合成ペプチド（欧州特許出願第ＥＰ０３７８８８１号及び第ＥＰ０４２７３４７号）、熱ショックタンパク質（ＰＣＴ出願第ＷＯ９３／１７７１２号）、百日咳タンパク質（ＰＣＴ出願第ＷＯ９８／５８６６８号）、Ｈ．インフルエンザ由来のタンパク質Ｄ（ＰＣＴ出願第ＷＯ００／５６３６０号）、及びＣ．ディフィシレ由来の毒素Ａ又はＢ（ＰＣＴ出願第ＷＯ００／６１７６１号）が挙げられる。
【０１１３】
一実施形態によれば、担体タンパク質又は担体ペプチドは、ＨＨＤ−ＤＲ３担体ペプチドＭＡＫＴＩＡＹＤＥＥＡＲＲＧＬＥＲＧＬＮ（配列番号１４４）である。
【０１１４】
一実施形態によれば、「ＰｅｐＮｔ」及び／又は「ＰｅｐＣｔ」は、ＨＨＤ−ＤＲ３担体ペプチドＭＡＫＴＩＡＹＤＥＥＡＲＲＧＬＥＲＧＬＮ（配列番号１４４）などの担体タンパク質又は担体ペプチドに対応し得る。
【０１１５】
一実施形態によれば、免疫原性化合物は、配列番号７１の抗原性ペプチドのＮ末端に共有結合している配列番号１４４の担体ペプチドを含む又はからなる。
【０１１６】
より好ましくは、担体タンパク質又は担体ペプチドは、本明細書に記載されるようにＣＤ４＋Ｔｈ１細胞の刺激を提供するなどの免疫アジュバント特性を有するタンパク質／ペプチドである。その好ましい例は、免疫記憶をもたらす又は非特異的な助けを提供する非腫瘍抗原である、又は破傷風ヘルパーペプチド、キーホールリンペットヘモシアニンペプチド、又はＰＡＤＲＥペプチドなどの特異的腫瘍由来ヘルパーペプチドであることができる。別の好ましい例は、ＭＨＣ  ＩＩ、特にＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰ、又はＨＬＡ−ＤＱ、例えば、前記したようにＨＥＲ２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｈＴＥＲＴ、又はＩＬ１３ＲＡ２などの共有過剰発現腫瘍抗原の断片によって示され得る特定の腫瘍由来ヘルパーペプチドである。
【０１１７】
したがって、「ＰｅｐＮｔ」及び／又は「ＰｅｐＣｔ」は、好ましくは、本明細書に記載のＣＤ４＋Ｔｈ１細胞の刺激を提供するなどの免疫アジュバント特性を有するそのようなタンパク質／ペプチドに対応し得る。
【０１１８】
更に、免疫原性化合物は、特に、配列番号２６、２８、４７、５１、５２、５５、５６、７７、９３、１０１、若しくは１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列又は１７、３１、３２、５１、５２、５５、５６、５９、６８、８９、９４、１００、１０１、又は１０２のいずれか、例えば、配列番号５１、５２、５５、５６、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列である配列番号１〜１０６（配列番号７１を含む）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する抗原性ペプチドのＮ末端に共有結合した、本明細書に記載のＣＤ４＋Ｔｈ１細胞の刺激を提供するなどの免疫アジュバント特性を有するタンパク質／ペプチドを含む又はからなる。
【０１１９】
一実施形態によれば、前記抗原性ペプチドは、リンカー部分を介して担体分子に共有結合している。
【０１２０】
前記リンカー剤の制限されたファミリーは、ＧＭＢＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、ＳＭＰＢ、及びスルホ−ＳＭＰＢという名称のリンカー剤を含む、又はそれらからなる。
【０１２１】
上で定義された免疫原性化合物のいくつかの実施形態においては、前記リンカー剤は、ＧＭＢＳ（Ｎ−［γ−マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル）、Ｓｕｌｆｏ−ＧＭＢＳ（Ｎ−［γ−マレイミドブチリルオキシ］スルホスクシンイミドエステル）、ＳＭＰＢ（スクシンイミジル４−［ｐ−マレイミドフェニル］ブチレート）、及びＳｕｌｆｏ−ＳＭＰＢ（スルホスクシンイミジル４−［ｐ−マレイミドフェニル］ブチレート）からなる群から選択される。
【０１２２】
２つのタンパク質を一般にはリンカー剤と、より具体的にはＧＭＢＳ、Ｓｕｌｆｏ−ＧＭＢＳ、ＳＭＰＢ、及びＳｕｌｆｏ−ＳＭＰＢからなる群から選択されるリンカー剤とコンジュゲートするための方法は、当業者によく知られている。実例として、そのようなプロトコルは、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ（イリノイ州、ＵＳＡ）によって公に利用可能であるリーフレットに開示されている。ＧＭＢＳ、Ｓｕｌｆｏ−ＧＭＢＳ、ＳＭＰＢ、及びＳｕｌｆｏ−ＳＭＰＢは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル基及びマレイミド基の両方を含有するヘテロ二官能性リンカー剤からなる。ＧＭＢＳ、Ｓｕｌｆｏ−ＧＭＢＳ、ＳＭＰＢ、又はＳｕｌｆｏ−ＳＭＰＢを用いるコンジュゲーションは、通常、２段階手順で行われる。第１段階において、アミン含有タンパク質をｐＨ７〜９で数倍モル過剰量のリンカー剤と反応させてアミド結合を形成し、続いて、過剰の未反応リンカー剤を通常脱塩又は透析により除去する。第２段階において、スルフヒドリル含有分子（例えば、式（Ｉ）のペプチド）を添加して、ｐＨ６．５〜７．５で第１のタンパク質に既に結合しているマレイミド基と反応させて安定なチオエーテル結合を形成させる。
【０１２３】
式（Ｉ）のペプチドをアミン含有担体タンパク質に共有結合させるためのリンカー剤としてＳＭＰＢ又はＳｕｌｆｏ−ＳＭＰＢを使用すると、以下の式（ＩＩ）のコンジュゲートが得られる。
【化１】
2019534884.tif 000007
（ＩＩ）
式中、
−Ｒ１は、アミン含有担体タンパク質の１つの反応性基からなり、それに結合したＮＨ基は、（ｉ）アミン含有担体タンパク質のＮ末端に位置するアルファアミノ基、又は（ｉｉ）アミン含有担体タンパク質のリジン（Ｋ）アミノ酸残基からの側鎖アミノ基に由来する。
−Ｒ２は、式（Ｉ）のペプチドからなり、それに結合した硫黄（Ｓ）原子は、式（Ｉ）のペプチドのＮ−末端又はＣ−末端に位置するシステイン残基のスルフヒドリル（ＳＨ）基に由来する。いくつかの実施形態において、スルフヒドリル部分は、非天然アミノ酸、又は式（Ｉ）のペプチドの末端に存在する任意の他の分子の一部であり得る。
【０１２４】
式（Ｉ）のペプチドをアミン含有担体タンパク質、特にＣＲＭ１９７担体タンパク質に共有結合させるためのリンカー剤としてＧＭＢＳ又はＳｕｌｆｏ−ＧＭＢＳを使用すると、以下の式（ＩＩＩ）のコンジュゲートが得られる。
【化２】
2019534884.tif 000008
（ＩＩＩ）
式中、
−Ｒ１は、アミン含有担体タンパク質の１つの反応性基からなり、それに結合したＮＨ基は、（ｉ）アミン含有担体タンパク質のＮ末端に位置するアルファアミノ基、又は（ｉｉ）アミン含有担体タンパク質のリジン（Ｋ）アミノ酸残基からの側鎖アミノ基に由来する。
−Ｒ２は、式（Ｉ）のペプチドからなり、それに結合した硫黄（Ｓ）原子は、式（Ｉ）のペプチドのＮ−末端又はＣ−末端に位置するシステイン残基のスルフヒドリル（ＳＨ）基に由来する。いくつかの実施形態において、スルフヒドリル部分は、非天然アミノ酸、又は式（Ｉ）のペプチドの末端に存在する任意の他の分子の一部であり得る。
【０１２５】
更なる態様において、本発明は、本発明に係る少なくとも１つの免疫原性化合物又は本発明に係る少なくとも１つの抗原性ペプチドがロードされた細胞を提供する。好ましい抗原性ペプチドは、配列番号２６、２８、４７、５１、５２、５５、５６、７７、９３、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は１７、３１、３２、５１、５２、５５、５６、５９、６８、８９、９４、１００、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列、例えば、配列番号５１、５２、５５、５６、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を有するペプチド又はポリペプチドである。それらの組合せ、即ち、本発明に係る異なる抗原性ペプチド（又はそれぞれの免疫原性化合物）がロードされた細胞も好ましい。
【０１２６】
好ましい細胞は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、より好ましくは樹状細胞（ＤＣ）である。
【０１２７】
抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、それらの主な機能が抗原を処理し、それを免疫系のＴ細胞に対して細胞表面上に提示してインビボでのＴ細胞応答を開始及び調節することであるので、特に興味深い。本発明の文脈において、ＡＰＣに、本発明に係る抗原性ペプチド及び／又は免疫原性化合物をロードすることが好ましく、これは、ＡＰＣを、インビトロで抗原性ペプチド及び／又は免疫原性化合物に曝露することによって行うことができる（Ｒｉｚｚｏ  ＭＭ，  Ａｌａｎｉｚ  Ｌ，  Ｍａｚｚｏｌｉｎｉ  Ｇ．Ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｌｏａｄｉｎｇ  ｏｆ  ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎｓ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ２０１４；１１３９：４１−４；  Ｒｏｌｉｎｓｋｉ  Ｊ，  Ｈｕｓ  Ｉ．  Ｂｒｅａｋｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｏｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒｓ：  ａ  ｎｅｗ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｆｏｒ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｔｈｅｒａｐｙ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌ．  ２０１４  Ｏｃｔ；１１（４）：３１１−８）。
【０１２８】
本発明に係る好ましい抗原提示細胞は、樹状細胞（ＤＣ）である。それらは最も強力な抗原提示細胞であり、癌患者においてしばしば機能的に欠陥があることが報告されているので、本発明に係る少なくとも１つの抗原性ペプチド又は免疫原性化合物を樹状細胞と組み合わせることは実際に有利であり得る。樹状細胞は、健康的に適合するドナー（即ち、樹状細胞がＨＬＡ関連である）、又はそれらが機能的であるならば患者自身（即ち、樹状細胞が自己由来である）から、例えば、末梢血からの直接的単離、又はＣＤ１４＋単球若しくはＣＤ３４＋造血前駆体などの末梢血細胞からの誘導によって、当業者は容易に得ることができる（Ｆｉｇｄｏｒ  ＣＧ，  ｄｅ  Ｖｒｉｅｓ  ＩＪ，  Ｌｅｓｔｅｒｈｕｉｓ  ＷＪ，  Ｍｅｌｉｅｆ  ＣＪ．  Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ：  ｍａｐｐｉｎｇ  ｔｈｅ  ｗａｙ．  Ｎａｔ  Ｍｅｄ．  ２００４  Ｍａｙ；１０（５）：４７５−８０）。樹状細胞は、実際にそれらの表面マーカー、例えば、Ｓ１００、ｐ５５、ＣＤ８３、及び／又はＯＸ６２によって末梢血の他の細胞と区別することができ、したがって、当該技術分野でよく知られた細胞培養技術を用いて前記マーカーに基づいて単離及び精製され得る。
【０１２９】
更なる態様において、本発明は、本発明に係る抗原性ペプチド又は本発明に係る免疫原性化合物をコードする核酸を提供し、ここで免疫原性化合物は、ペプチド又はタンパク質である。好ましくは、抗原性ペプチドは、配列番号２６、２８、４７、５１、５２、５５、５６、７７、９３、１０１、若しくは１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を有するペプチド又はポリペプチド、又は１７、３１、３２、５１、５２、５５、５６、５９、６８、８９、９４、１００、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列、例えば、配列番号５１、５２、５５、５６、１０１、又は１０２のいずれかで表されるアミノ酸配列を有するペプチド又はタンパク質である；及び／又は前記した式（Ｉ）の抗原性ペプチドである。
【０１３０】
核酸としては、好ましくは一本鎖、二本鎖又は部分的二本鎖核酸を含み、好ましくはゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、発現エレメントを含む又は含まない相補的ＲＮＡ／ＤＮＡ配列、ミニ遺伝子、遺伝子断片、調節要素、プロモーター、及びそれらの組合せから選択される。核酸（分子）及び／又はポリヌクレオチドの更なる好ましい例としては、例えば、組換えポリヌクレオチド、ベクター、オリゴヌクレオチド、ｒＲＮＡ、ｍＲＮＡ、又はｔＲＮＡなどのＲＮＡ分子、又は前記したＤＮＡ分子などが挙げられる。したがって、核酸（分子）はＤＮＡ分子又はＲＮＡ分子であることが好ましく、好ましくは、ゲノムＤＮＡ；ｃＤＮＡ；ｒＲＮＡ；ｍＲＮＡ；アンチセンスＤＮＡ；アンチセンスＲＮＡ；相補的ＲＮＡ及び／又はＤＮＡ配列；発現エレメント、調節エレメント、及び／又はプロモーターを含む又は含まないＲＮＡ及び／又はＤＮＡ配列；ベクター；それらの組合せから選択される。
【０１３１】
したがって、核酸分子はベクターであり得る。本発明の文脈で使用される「ベクター」という用語は、核酸分子、好ましくは人工核酸分子、即ち、天然には存在しない核酸分子を意味する。本発明の文脈におけるベクターは、所望の核酸配列を組み込む又は保持するのに適している。そのようなベクターは、保存ベクター、発現ベクター、クローニングベクター、トランスファーベクターなどであってもよい。保存ベクターは、核酸分子の便利な保存を可能にするベクターである。したがって、ベクターは、例えば本発明に係る所望の抗原性ペプチドに対応する配列を含むことができる。発現ベクターは、ｍＲＮＡなどのＲＮＡ、又はペプチド、ポリペプチド、若しくはタンパク質などの発現産物の産生のために使用することができる。例えば、発現ベクターは、プロモーター配列などの、ベクターの配列範囲の転写に必要な配列を含み得る。クローニングベクターは、典型的には、クローニング部位を含むベクターであり、この部位は、核酸配列をベクターに組み込むために使用され得る。クローニングベクターは、例えば、プラスミドベクター又はバクテリオファージベクターであり得る。トランスファーベクターは、核酸分子を細胞又は生物に導入するのに適したベクター、例えばウイルスベクターであり得る。本発明の文脈におけるベクターは、例えば、ＲＮＡベクター又はＤＮＡベクターであり得る。好ましくは、ベクターは、ＤＮＡ分子である。例えば、本願の意味におけるベクターは、クローニング部位、抗生物質耐性因子などの選択マーカー、及び複製起点などのベクターの増殖に適した配列を含む。好ましくは、本願の文脈におけるベクターは、プラスミドベクターである。好ましくは、本願の文脈におけるベクターは、発現ベクターである。好ましいベクターは、細菌細胞中での発現のためのベクターである。より好ましくは、ベクターは、いわゆる「生細菌ワクチンベクター」における発現に有用であり、生細菌細胞（細菌又は細菌胞子、例えば、内生胞子、外胞子、又は微生物嚢胞など）がワクチンとして役立ち得る。それらの好ましい例は、ｄａ  Ｓｉｌｖａら，  Ｌｉｖｅ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｖｅｃｔｏｒｓ：  ａｎ  ｏｖｅｒｖｉｅｗ；  Ｂｒａｚ  Ｊ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  ２０１５  Ｍａｒ  ４；４５（４）：１１１７−２９に記載されている。
【０１３２】
本発明に係る抗原性ペプチドをコードする核酸は、ネイキッドの核酸、又はプラスミド若しくはウイルスベクターにクローニングされた核酸の形態であり得（Ｔｒｅｇｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｋｉｎｎｅａｒ，  Ｕｓｉｎｇ  Ｐｌａｓｍｉｄｓ  ａｓ  ＤＮＡ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｓｐｅｃｔｒ．  ２０１４  Ｄｅｃ；２（６）．  ｄｏｉ：  １０．１１２８／ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｓｐｅｃ．ＰＬＡＳ−００２８−２０１４）、後者が特に好ましい。本発明に係る適切なウイルスベクターの例としては、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、ヘルペスウイルス、及びポックスウイルスベクターが挙げられるが、これらに限定されない。当該技術分野における標準的な組換え技術を使用して、核酸をプラスミド又はウイルスベクターにクローニングすることは当業者の技術の範囲内である。
【０１３３】
更なる態様において、本発明はまた、本発明に係る核酸を含む宿主細胞を提供し、ここで核酸は好ましくはベクターである。好ましくは、宿主細胞は細菌細胞である。このような宿主細胞は、本発明に係る抗原性ペプチド又は本発明に係る免疫原性化合物の製造に好ましく使用することができる。更に、そのような宿主細胞は、ワクチン中の活性成分であることもできる。
【０１３４】
好ましくは、宿主細胞は細菌細胞であり、好ましくは腸内細菌細胞である。そのような細菌宿主細胞は「生細菌ワクチンベクター」として役立つことができ、ここで生細菌細胞（細菌又は細菌胞子、例えば内生胞子、外胞子、又は微生物嚢胞）はワクチンとして役立つことができる。それらの好ましい例は、ｄａ  Ｓｉｌｖａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｌｉｖｅ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｖｅｃｔｏｒｓ：  ａｎ  ｏｖｅｒｖｉｅｗ；  Ｂｒａｚ  Ｊ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  ２０１５  Ｍａｒ  ４；４５（４）：１１１７−２９に記載されている。
【０１３５】
細菌細胞（細菌又は細菌胞子、例えば内生胞子、外胞子、又は微生物嚢胞）、特に（全）腸細菌種は、それらが含有する（ポリ）ペプチド又は核酸よりも高い免疫応答を引き起こす可能性があるので有利であり得る。
【０１３６】
或いは、本発明に係る細菌細胞、特に腸内細菌は、プロバイオティクス、即ち生きた腸内細菌の形態であってもよく、したがって、それが提供し得る健康上の利益のために食品添加物として使用することができる。それらは、例えば顆粒剤、丸剤、又はカプセル剤で凍結乾燥することができ、或いは消費用乳製品と直接混合することができる。
【０１３７】
更なる態様において、本発明は、以下がロードされたナノ粒子を提供する：
−  本発明に係る免疫原性化合物の少なくとも１つ、又は
−  本発明に係る抗原性ペプチドの少なくとも１つ、及び任意にアジュバント。
【０１３８】
特にワクチンとして使用するためのナノ粒子は、当該技術分野においてしられており、例えば、Ｓｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ−ｂａｓｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ，  ＡＣＳ  Ｎａｎｏ  ２０１５，  ９（１）：１６−３０；  Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ  ｖａｃｃｉｎｅｓ，  Ｖａｃｃｉｎｅ  ２０１４，  ３２（３）：３２７−３７；  ａｎｄ    Ｇｒｅｇｏｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｖａｃｃｉｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｕｓｉｎｇ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ，  Ｆｒｏｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  ２０１３，  ３：１３，  ｄｏｉ：  １０．３３８９／ｆｃｉｍｂ．２０１３．０００１３．  ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ２０１３，  Ｒｅｖｉｅｗに記載されている。特に、ナノ粒子は、抗原性ペプチド（又は抗原性ペプチドを含むポリペプチド／タンパク質／核酸）の送達に使用され、場合によりアジュバントとしても作用し得る。抗原性ペプチド（抗原性ペプチドを含むポリペプチド／タンパク質／核酸）は、典型的には、ナノ粒子内にカプセル化される、又はナノ粒子の表面に連結／結合（表面上に装飾）される（「コーティング」）。従来のアプローチと比較して、ナノ粒子は周囲の生物学的環境からペイロード（抗原／アジュバント）を保護する、半減期を延ばす、全身毒性を最小限に抑える、ＡＰＣへの送達を促進する、又はＴＡＡ特異的Ｔ細胞の活性化を直接引き起こすことさえできる。好ましくは、ナノ粒子は、３００ｎｍ以下、より好ましくは２００ｎｍ以下、最も好ましくは１００ｎｍ以下のサイズ（直径）を有する。そのようなナノ粒子は、食細胞の取り込みから適切に保護され、循環中の構造的完全性が高く且つ循環時間が長く、腫瘍成長部位に蓄積することができ、腫瘍塊中に深く浸透することができる。
【０１３９】
ナノ粒子の例としては、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）及びポリ（Ｄ、Ｌ−乳酸−コグリコール酸）（ＰＬＧＡ）などのポリマーナノ粒子；金ナノ粒子、酸化鉄ビーズ、酸化鉄酸化亜鉛ナノ粒子、カーボンナノチューブ、及びメソポーラスシリカナノ粒子などの無機ナノ粒子；カチオン性リポソームなどのリポソーム；免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）；ウイルス様粒子（ＶＬＰ）；及び自己組織化タンパク質が挙げられる。
【０１４０】
ポリマーナノ粒子は、ポリ（ｄ，ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）、ポリ（ｄ，ｌ−乳酸−コグリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（ｇ−グルタミン酸）（ｇ−ＰＧＡ）、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、及びポリスチレンなどのポリマーをベースとする／含むナノ粒子である。ポリマーナノ粒子は、抗原（例えば、抗原性ペプチド又はそれを含む（ポリ）ペプチド）を捕捉する、又は抗原（たとえば、抗原性ペプチド又はそれを含む（ポリ）ペプチド）に結合／コンジュゲートすることができる。ポリマーナノ粒子を、特定の細胞への送達に使用することができ、また、それらの遅い生分解速度により抗原放出を持続させることができる。例えば、ｇ−ＰＧＡナノ粒子を用いて疎水性抗原をカプセル化することができる。ポリスチレンナノ粒子は、それらが様々な官能基で表面修飾され得るので、様々な抗原にコンジュゲートすることができる。ポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＡ）、ＰＬＧＡ、ＰＥＧなどのポリマー、及び多糖などの天然ポリマーも、ナノサイズの親水性三次元ポリマーネットワークの一種であるヒドロゲルナノ粒子を合成するために使用することができる。ナノゲルは、フレキシブルなメッシュサイズ、多価コンジュゲーションのための大表面積、高含水量、及び抗原の高ロード容量などの好ましい特性を有する。したがって、好ましいナノ粒子は、キトサンナノゲルなどのナノゲルである。好ましいポリマーナノ粒子は、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）及びポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸−コグリコール酸）（ＰＬＧＡ）をベースとする／含むナノ粒子である。
【０１４１】
無機ナノ粒子は、無機物質をベースとする／含む無機粒子であり、そのようなナノ粒子の例としては、金ナノ粒子、酸化鉄ビーズ、酸化鉄酸化亜鉛ナノ粒子、カーボンナノ粒子（例えば、カーボンナノチューブ）、及びメソポーラスシリカナノ粒子が挙げられる。無機ナノ粒子は、剛性構造及び制御可能な合成を提供する。例えば、金ナノ粒子は、球、棒、立方体などの各種形状に容易に製造することができる。無機ナノ粒子は、例えば炭水化物で表面修飾されていてもよい。カーボンナノ粒子は、良好な生体適合性を提供し、例えばナノチューブ又は（メソポーラス）球として製造することができる。例えば、本発明に係る抗原性ペプチド（又はそれを含む（ポリ）ペプチド）の複数のコピーを、カーボンナノチューブなどのカーボンナノ粒子上にコンジュゲートすることができる。メソポーラスカーボンナノ粒子は、経口投与に好ましい。シリカ系ナノ粒子（ＳｉＮＰ）もまた好ましい。ＳｉＮＰは生体適合性であり、選択的腫瘍標的化及びワクチン送達において優れた特性を示す。ＳｉＮＰの表面上の豊富なシラノール基は、細胞認識、特定の生体分子の吸収、細胞との相互作用の改善、及び細胞取り込みの増強などの更なる機能性を導入するための更なる修飾に使用することができる。メソポーラスシリカナノ粒子が特に好ましい。
【０１４２】
リポソームは、典型的には、１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）などのリン脂質によって形成される。一般に、カチオン性リポソームが好ましい。リポソームは、リン脂質二重層シェル及び水性コアが自己組織化している。リポソームは、単層小胞（単一のリン脂質二重層を有する）として、又は多層小胞（水の層によって分離されたいくつかの同心円状のリン脂質シェルを有する）として生成されることができる。したがって、抗原は、コア内又は異なる層／シェル間にカプセル化することができる。好ましいリポソーム系は、Ｉｎｆｌｅｘａｌ（登録商標）Ｖ及びＥｐａｘａｌ（登録商標）などの、ヒトでの使用が承認されているものである。
【０１４３】
免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）は、約４０ｎｍ（直径）のかご様粒子であり、これは、例えば、サポニンアジュバントＱｕｉｌ  Ａ、コレステロール、リン脂質、及び（ポリ）ペプチド抗原（抗原性ペプチド又はそれを含むポリペプチド）からなるコロイド状サポニン含有ミセルである。これらの球状粒子は、無極性相互作用によって抗原を捕捉することができる。２種類のＩＳＣＯＭが記載されており、いずれもコレステロール、リン脂質（典型的にはホスファチジルエタノールアミン又はホスファチジルコリン）及びサポニン（例えばＱｕｉｌ  Ａ）からなる。
【０１４４】
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）は、生体適合性キャプシドタンパク質の自己組織化によって形成された自己組織化ナノ粒子である。天然に最適化されたナノ粒子サイズ及び反復構造秩序のために、ＶＬＰは、強力な免疫応答を誘導することができる。ＶＬＰは、２０ｎｍ〜８００ｎｍの範囲、典型的には２０〜１５０ｎｍの範囲のサイズを有する様々なウイルスに由来し得る。ＶＬＰは、これらのペプチド／タンパク質を粒子に融合させることによって、又は複数の抗原を発現させることによって、更なるペプチド又はタンパク質を発現するように設計することができる。更に、抗原をウイルス表面に化学的にカップリングさせて、バイオコンジュゲートＶＬＰを生成することができる。
【０１４５】
自己組織化タンパク質の例としては、フェリチン及び主要ボールトタンパク質（ＭＶＰ）が挙げられる。フェリチンは、ほぼ球形の１０ｎｍ構造に自己組織化できるタンパク質である。９６ユニットのＭＶＰは、幅約４０ｎｍ及び長さ７０ｎｍのサイズを有する樽型ボールトナノ粒子に自己組織化することができる。最小の相互作用ドメインと遺伝的に融合している抗原は、ＭＶＰと混合したときに自己組織化プロセスによってボールトナノ粒子内にパッケージされることができる。したがって、抗原（それを含むポリペプチドの本発明に係る抗原性ペプチドなど）は、自己組織化タンパク質又はその断片／ドメイン（例えば、ＭＶＰの最小相互作用ドメイン）に融合され得る。したがって、本発明はまた、自己組織化タンパク質（又はその断片／ドメイン）と本発明に係る抗原性ペプチドとを含む融合タンパク質を提供する。
【０１４６】
一般に、ナノ粒子（ＮＰ）の好ましい例としては、酸化鉄ビーズ、ポリスチレンミクロスフェア、ポリ（γ−グルタミン酸）（γ−ＰＧＡ）ＮＰ、酸化鉄−酸化亜鉛ＮＰ、カチオン化ゼラチンＮＰ、プルロニック安定化ポリ（プロピレンスルフィド）（ＰＰＳ）ＮＰ、ＰＬＧＡ  ＮＰ、（カチオン性）リポソーム、（ｐＨ応答性）高分子ミセル、ＰＬＧＡ、癌細胞膜被覆ＰＬＧＡ、脂質−カルシウム−リン酸（ＬＣＰ）ＮＰ、リポソーム−プロタミン−ヒアルロン酸（ＬＰＨ）ＮＰ、ポリスチレンラテックスビーズ、磁性ビーズ、鉄−デキストラン粒子、及び量子ドットナノ結晶が挙げられる。
【０１４７】
好ましくは、ナノ粒子は更にアジュバント、例えばｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストを含む。それによって、抗原性ペプチド（抗原性ペプチドを含むポリペプチド／タンパク質／核酸）をアジュバントと共に、例えば樹状細胞（ＤＣ）などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）に送達することができる。アジュバントは、好ましくは抗原性ペプチドと同様に、ナノ粒子によってカプセル化されるか、又はナノ粒子の表面に結合／コンジュゲートすることができる。
【０１４８】
特に好ましいアジュバントは、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（「ポリＩ：Ｃ」とも称する）及び／又はその誘導体ポリＩＣＬＣである。ポリＩ：Ｃは、一方の鎖がイノシン酸のポリマーであり、他方の鎖がシチジル酸のポリマーであるミスマッチ二本鎖ＲＮＡである。ポリＩ：Ｃは、トール様受容体３（ＴＬＲ３）と相互作用することが知られている免疫刺激剤である。ポリＩ：Ｃは、ＴＬＲ３の「天然の」刺激物である二本鎖ＲＮＡと構造的に類似している。したがって、ポリＩ：Ｃは、二本鎖ＲＮＡの合成類似体と考えることができる。ポリ−ＩＣＬＣは、カルボキシメチルセルロース、ポリイノシン−ポリシチジル酸、及びポリ−Ｌ−リジン二本鎖ＲＮＡの合成複合体である。ポリＩ：Ｃと同様に、ポリＩＣＬＣもまたＴＬＲ３のリガンドである。ポリＩ：Ｃ及びポリＩＣＬＣは、典型的には細胞傷害性サイトカインの放出を刺激する。ポリＩＣＬＣの好ましい例は、ヒルトノール（登録商標）である。
【０１４９】
免疫原性組成物及びキット
本発明に係る免疫原性組成物は、以下の少なくとも１つを含む：
−  本発明に係る抗原性ペプチド、
−  本発明に係る免疫原性化合物、
−  本発明に係るナノ粒子、
−  本発明に係る細胞、
−  本発明に係る核酸、又は
−  本発明に係る宿主細胞。
【０１５０】
好ましくは、免疫原性組成物は更に、１以上の薬学的に許容される賦形剤又は担体を含む。
【０１５１】
本発明の免疫原性組成物は、本発明の目的に適した任意の形態であることができる。例えば、前記組成物は、液体懸濁物、固体剤形（顆粒剤、丸剤、カプセル剤、又は錠剤）、又はペースト若しくはゲルなどの、非経口投与、経腸投与、又は局所投与に適した形態であることができる。意図される目的のために適切な形態の組成物を選択することは当業者の技術の範囲内である。
【０１５２】
実際、本発明の文脈において、低コストでの製造の容易性及び再集合、感染、又は組換えの可能性がない相対的安全性のため、（ポリ）ペプチド又はそれをコードする核酸を使用することが特に有利であり得る。
【０１５３】
本発明の抗原性ペプチドは、本発明に係る免疫原性化合物、本発明に係るそれがロードされた細胞、本発明に係るナノ粒子、本発明に係る核酸、本発明に係る宿主細胞、及び／又は本発明に係る免疫原性組成物の形態で投与することができる。
【０１５４】
一実施形態によれば、それらは腸内細菌種などの微生物の形態で投与されてもよい。
【０１５５】
腸内細菌種全体は、それらが含有する（ポリ）ペプチド又は核酸よりも大きい免疫応答を引き起こす可能性があるので、それらも有利であり得る。
【０１５６】
或いは、本発明に係る腸内細菌は、プロバイオティクス、即ち生きた腸内細菌の形態であってもよく、それが提供し得る健康上の利益のために食品添加物として使用することができる。それらは、例えば顆粒剤、丸剤、又はカプセル剤で凍結乾燥することができ、或いは消費用乳製品と直接混合することができる。
【０１５７】
当業者であれば、予防又は治療される癌の性質、及び／又は前記癌に関与するヒト遺伝子／ヒト腫瘍抗原に基づいて本発明の抗原性ペプチドを選択することができることを容易に理解しよう。例えば、糖タンパク質１００（ｇｐ１００）、ＴＲＰ１、ＴＲＰ２、チロシナーゼ、及び／又はＭｅｌａｎ  Ａ／ＭＡＲＴ１抗原を含む黒色腫の予防又は治療を望むならば、表１Ａに記載される対応する抗原性ペプチドのいずれかを選択することができる。
【０１５８】
免疫応答を増強するために、本発明のいくつかの抗原性ペプチドの同時投与が特に好ましいことを理解されたい。
【０１５９】
したがって、好ましい実施形態によれば、本発明の組成物は、上で定義された少なくとも２個の抗原性ペプチド（免疫原性化合物の形態であり得る）を含み、これは、少なくとも３個の抗原性ペプチド、又は少なくとも４個の抗原性ペプチド、少なくとも５個の抗原性ペプチド、又は少なくとも６個の抗原性ペプチド、又は少なくとも７個の抗原性ペプチド、又は少なくとも８個の抗原性ペプチド、又は少なくとも９個の抗原性ペプチド、又は少なくとも１０個の抗原性ペプチド、又は少なくとも１１個の抗原性ペプチド、又は少なくとも１２個の抗原性ペプチド、又は少なくとも１３個の抗原性ペプチド、又は少なくとも１４個の抗原性ペプチド、又は少なくとも１５個の抗原性ペプチド、又は少なくとも２０個の抗原性ペプチド、又は少なくとも２５個の抗原性ペプチド、又は少なくとも５０個の抗原性ペプチド、又は少なくとも１００個の抗原性ペプチド、又は少なくとも５００個の抗原性ペプチド、又は少なくとも１０００個の抗原性ペプチド、又は少なくとも１５００個の抗原性ペプチドを含む。意図される目的に適した抗原性ペプチド及び／又は免疫原性化合物の組合せを選択することは当業者の技術の範囲内である。例えば、表１Ｂに記載される遺伝子によってコードされる腫瘍抗原を含む黒色腫の予防又は治療を望むならば、表１Ａに記載される対応する抗原性ペプチドの任意の組合せを選択することができる。
【０１６０】
特に好ましい実施形態では、本発明に係る２つの異なる抗原性ペプチド（例えば、同一種類の癌及び／又は同一参照抗原に関する）を組み合わせる。換言すれば、本発明に係る組成物は、好ましくは以下を含む：
（ｉ）本発明に係る２つの異なる免疫原性化合物；
（ｉｉ）本発明に係る２つの異なる抗原性ペプチド；
（ｉｉｉ）本発明に係る２つの異なるナノ粒子；又は
（ｉｖ）本発明に係る２つの異なる核酸。
【０１６１】
本発明に係る組成物は、例えば、抗原性ペプチド又は免疫原性化合物の効果を増強することができる他の活性剤を更に含むことができる。或いは、組成物は、他の活性剤（即ち、本発明に係る抗原性ペプチド、本発明に係る免疫原性化合物、本発明に係るナノ粒子、本発明に係る細胞、本発明に係る核酸、又は本発明に係る宿主細胞以外のもの）を含まなくてもよい。
【０１６２】
好ましい実施形態によれば、前記組成物は、特に抗原性ペプチドによって媒介される免疫応答を増強するために、少なくとも１つの免疫刺激剤を更に含む。本発明に係る好ましい免疫刺激剤は、免疫アジュバント、抗原提示細胞、及びそれらの組合せを含むが、これらに限定されない。好ましくは、免疫刺激剤は、免疫アジュバント又は抗原提示細胞（ＡＰＣ）である。
【０１６３】
いくつかの免疫アジュバントは、実際に、抗原と免疫系との間の相互作用の持続時間に好ましく、これを延長することができ、一方、他のものは適応応答を誘導するために自然免疫の細胞を動員し、活性化させることができる。前者のカテゴリーに属するアジュバントとしては、ミョウバン、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、水酸化カルシウムなどの鉱物化合物；パラフィン油、デンプン油、フロイント完全／不完全アジュバント（ＦＣＡ／ＦＩＡ）、サポニン（例えば、植物のキラヤ、ダイズ、セネガ由来）などの油性エマルジョンなどが挙げられるが、これらに限定されない。後者のカテゴリーに属するアジュバントとしては、サイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ；ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、又はＩＬ−１２などのインターロイキン；ＴＮＦα又はＴＮＦβなどの腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）；ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、又はＩＦＮδなどのインターフェロンＩＦＮなど）などの免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）；イミキモド、レシキモド、又はＭＰＬなどのｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のリガンド；樹状細胞（ＤＣ）又は腫瘍細胞に由来するエキソソームなどのエキソソーム；熱ショックタンパク質（ｇｐ９６、ｈｓｐ９０、ｈｓｐ７０、カルレティキュリン、ｈｓｐ１１０、ｈｓｐ１７０などのＨＳＰ）、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）、多糖類（ＰＬＳ）（多糖類Ｋなど）などの細菌製品が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６４】
一実施形態によれば、免疫アジュバントは、ＨＨＤ−ＤＲ３ペプチドＭＡＫＴＩＡＹＤＥＥＡＲＲＧＬＥＲＧＬＮ（配列番号１４４）であることができる。
【０１６５】
より好ましくは、免疫アジュバントは、本明細書に記載されているように、ＣＤ４＋Ｔｈ１細胞の刺激を提供するなどの免疫アジュバント特性を有するタンパク質／ペプチドである。その好ましい例としては、免疫記憶をもたらす又は非特異的な助けを提供する非腫瘍抗原である、又は本明細書に記載される破傷風ヘルパーペプチド、キーホールリンペットヘモシアニンペプチド、又はＰＡＤＲＥペプチドなどの特異的腫瘍由来ヘルパーペプチドであり得る。別の好ましい例は、ＭＨＣＩＩによって、特にＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰ、又はＨＬＡ−ＤＱによって示され得る、特定の腫瘍由来ヘルパーペプチド、例えば共有過剰発現腫瘍抗原の断片、例えば、前記したＨＥＲ２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｈＴＥＲＴ、又はＩＬ１３ＲＡ２などである。
【０１６６】
特に好ましいアジュバントは、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（「ポリＩ：Ｃ」とも称する）及び／又はその誘導体ポリＩＣＬＣである。ポリＩ：Ｃは、一方の鎖がイノシン酸のポリマーであり、他方の鎖がシチジル酸のポリマーであるミスマッチ二本鎖ＲＮＡである。ポリＩ：Ｃは、ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）と相互作用することが知られている免疫刺激剤である。ポリＩ：Ｃは、ＴＬＲ３の「天然の」刺激物である二本鎖ＲＮＡと構造的に類似している。したがって、ポリＩ：Ｃは、二本鎖ＲＮＡの合成類似体と考えることができる。ポリ−ＩＣＬＣは、カルボキシメチルセルロース、ポリイノシン−ポリシチジル酸、及びポリ−Ｌ−リジン二本鎖ＲＮＡの合成複合体である。ポリＩ：Ｃと同様に、ポリＩＣＬＣもまたＴＬＲ３のリガンドである。ポリＩ：Ｃ及びポリＩＣＬＣは、典型的には細胞傷害性サイトカインの放出を刺激する。ポリＩＣＬＣの好ましい例は、ヒルトノール（登録商標）である。
【０１６７】
抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、また、それらの主な機能が抗原を処理し、それを免疫系のＴ細胞に対して細胞表面上に提示してインビボでのＴ細胞応答を開始及び調節することであるので、特に興味深い。本発明組成物において、ＡＰＣに、本発明に係る抗原性ペプチド及び／又は免疫原性化合物をロードすることが好ましく、これは、ＡＰＣを、インビトロで抗原性ペプチド及び／又は免疫原性化合物に曝露することによって行うことができる（Ｒｉｚｚｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｌｏａｄｉｎｇ  ｏｆ  ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎｓ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ２０１４；１１３９：４１−４；  Ｒｏｌｉｎｓｋｉ  ａｎｄ  Ｈｕｓ，  Ｂｒｅａｋｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｏｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒｓ：  ａ  ｎｅｗ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｆｏｒ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｔｈｅｒａｐｙ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌ．  ２０１４  Ｏｃｔ；１１（４）：３１１−８）。
【０１６８】
本発明に係る好ましい抗原提示細胞は、樹状細胞（ＤＣ）である。それらは最も強力な抗原提示細胞であり、癌患者においてしばしば機能的に欠陥があることが報告されているので、本発明に係る少なくとも１つの抗原性ペプチド又は免疫原性化合物を樹状細胞と組み合わせることは実際に有利であり得る。樹状細胞は、健康的に適合するドナー（即ち、樹状細胞がＨＬＡ関連である）、又はそれらが機能的であるならば患者自身（即ち、樹状細胞が自己由来である）から、例えば、末梢血からの直接的単離、又はＣＤ１４＋単球若しくはＣＤ３４＋造血前駆体などの末梢血細胞からの誘導によって、当業者は容易に得ることができる（Ｅｍｅｎｓら，２００８）。樹状細胞は、実際にそれらの表面マーカー、例えば、Ｓ１００、ｐ５５、ＣＤ８３、及び／又はＯＸ６２によって末梢血の他の細胞と区別することができ、したがって、当該技術分野でよく知られた細胞培養技術を用いて前記マーカーに基づいて単離及び精製され得る。
【０１６９】
好ましい実施形態によれば、医薬組成物は、少なくとも１つの抗癌治療薬を更に含むことができる。したがって、前記治療薬は、好ましくは、本発明に係る抗原性ペプチドが使用されるのと同一種類の癌を予防及び／又は治療することができる。本発明に係る特に好ましい抗癌治療剤としては、抗体、腫瘍細胞溶解物、化学療法剤、放射線療法剤、及びそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。最も好ましくは、抗癌治療剤は、抗体、腫瘍細胞溶解物、化学療法剤、放射線療法剤、免疫チェックポイントモジュレーター、及びそれらの組合せから選択される。
【０１７０】
抗体は、癌細胞表面上の特定の抗原に結合し、それによって治療を腫瘍に向ける（即ち、これらは腫瘍標的化抗体と称される）、又は癌において調節不全である免疫チェックポイントを遮断する（即ち、これらは免疫調節性抗体と称される）ことができるので、癌治療において特に有利である。後者のタイプの抗体の目的は、癌の免疫抵抗を阻害することであり、これは特に腫瘍抗原に特異的なＴ細胞に対して見ることができる。実際、当該技術分野でよく知られているように、通常の生理学的条件下では、免疫チェックポイントが自己寛容（即ち、自己免疫の防止）の維持にとって極めて重要であり、免疫系が病原性感染に反応しているときに、組織を損傷から保護する。しかし、癌では、免疫チェックポイント発現が、免疫抵抗の重要なメカニズムとして調節不全になり得る。前記抵抗は、ＰＤ−Ｌ１チェックポイントに関して、黒色腫、卵巣癌、肺癌、神経膠芽腫、乳癌、及び膵臓癌において特に見られる（Ｋｏｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂ７−Ｈ１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｎ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｗｉｔｈ  ｔｕｍｏｒ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ＰＤ−１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２００４  Ａｕｇ  １；１０（１５）：５０９４−１００；  Ｇｈｅｂｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｈｅ  Ｂ７−Ｈ１  （ＰＤ−Ｌ１）  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｄｕｃｔａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ：  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｉｍｐｏｒｔａｎｔ  ｈｉｇｈ−ｒｉｓｋ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒｓ．  Ｎｅｏｐｌａｓｉａ．  ２００６  Ｍａｒ；８（３）：１９０−８；  Ｈｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ−１  ｌｉｇａｎｄ  １  ｉｓ  ａ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｍｅｌａｎｏｍａ．  Ｃａｎｃｅｒ．  ２０１０  Ａｐｒ  １；１１６（７）：１７５７−６６）。免疫チェックポイントの他の例としては、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ４、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＰＶＲ、ＴＩＧＩＴ、ＧＡＬ９、ＬＡＧ−３、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＴＩＭ３、ＶＩＳＴＡ、ＶＩＳＴＡ−Ｒが挙げられるが、これらに限定されない（Ｐｉｃｏ  ｄｅ  Ｃｏａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ：  ｒｅｖｉｔａｌｉｚｉｎｇ  ａ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ．  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１５  Ａｕｇ；２１（８）：４８２−９１；  Ｐａｒｄｏｌｌ  ＤＭ．  Ｔｈｅ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２０１２  Ｍａｒ  ２２；１２（４）：２５２−６４）。
【０１７１】
抗体は通常、ネイキッドなモノクローナル抗体の形態（即ち、非コンジュゲート）、又は細胞に対して毒性であり得るか又は放射性であり得る別の分子にコンジュゲートされるかのいずれかで、前記目的のために使用される。
【０１７２】
癌免疫療法において使用されるよく知られたモノクローナル腫瘍標的化抗体の例としては、限定されるものではないが、アレムツズマブ（慢性リンパ性白血病）、ベバシズマブ（結腸直腸癌、多形性膠芽腫、子宮頸癌、肺癌、腎癌）、ブレンツキシマブ／ベドチン（リンパ腫）、ブリナツムマブ（急性リンパ芽球性白血病）、カツマキソマブ（ＥＰＣＡＭ＋癌の悪性腹水症）、セツキシマブ（頭頸部癌、結腸直腸癌）、デノスマブ（乳癌、前立腺癌、及び骨癌）、ゲムツズマブ／オゾガマイシン（急性骨髄性白血病）、イブリツモマブ／チウキセタン（非ホジキンリンパ腫）、パニツムマブ（結腸直腸癌）、ペルツズマブ（乳癌）、オビヌツズマブ（慢性リンパ性白血病）、オファツムマブ（慢性リンパ性白血病）、オピリムマブ（黒色腫）、ラムシミルマブ（胃及び胃食道癌）、リツキシマブ（慢性リンパ性白血病及び非ホジキンリンパ腫）、シルツキシマブ（多中心性キャッスルマン病）、トシツモマブ（非ホジキンリンパ腫）、及びトラスツズマブ（乳癌、胃癌及び胃食道癌）が挙げられ；一方、免疫調節抗体の例としては、限定されるものではないが、ＣＴＬＡ４依存性免疫チェックポイントを遮断するイピリムマブ（黒色腫）、いずれもＰＤＣＤ１依存性免疫チェックポイントを遮断するニボルマブ（黒色腫、肺癌）及びプレンブロリズマブ（黒色腫）、及びいずれもＰＤ−Ｌ１依存性免疫チェックポイントを遮断するＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＥＤＩ０６８０、及びＭＳＢ００１０７１８Ｃが挙げられる（Ｓｈａｒｍａ  ａｎｄ  Ａｌｌｉｓｏｎ，  Ｔｈｅ  ｆｕｔｕｒｅ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｔｈｅｒａｐｙ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ．  ２０１５  Ａｐｒ  ３；３４８（６２３０）：５６−６１）。
【０１７３】
以下に、癌免疫療法のための他の抗体が記載されている：Ｂｕｑｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｒｉａｌ  Ｗａｔｃｈ：  Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓ．  Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  ２０１５  Ｍａｒ  ２；４（４）：ｅ１００８８１４．  ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ２０１５  Ａｐｒ；  Ｒｅｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１５  Ｏｃｔ；６７（２  Ｐｔ  Ａ）：２８−４５；  Ｓｉｍｐｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃａｂａｌｌｅｒｏ，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ＭＣ  Ｐｒｏｃ．  ２０１４；  ８（Ｓｕｐｐｌ  ４）：  Ｏ６  ａｓ  ｗｅｌｌ  ａｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｓｏｃｉｅｔｙ  ｗｅｂｓｉｔｅ  （ｌｉｓｔ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｐｐｒｏｖｅｄ  ｏｒ  ｉｎ  ｒｅｖｉｅｗ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｒ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｗｅｂｌｉｎｋ  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｓｏｃｉｅｔｙ．ｏｒｇ／ｎｅｗｓ／ａｐｐｒｏｖｅｄ＿ｍａｂｓ．ｐｈｐ）。
【０１７４】
腫瘍細胞溶解物もまた、本発明に係る抗原性ペプチドと組み合わせることができる。腫瘍細胞は、内因性ペプチド−ＭＨＣ複合体を提示することによって、並びに前記溶解物によって送達された抗原を処理し提示することができる宿主の樹状細胞（ＤＣ）を介して、免疫応答を刺激することができる。それによって、免疫応答の誘導が可能な抗原の範囲が広がる。腫瘍細胞溶解物は、熱ショック及び／又は化学的処理で腫瘍細胞を処理することによって容易に得ることができ、自己由来（即ち、患者自身から単離される）又は同種異系（即ち、別の被験体から単離される）であることができる。
【０１７５】
標準的な化学療法薬及び放射線療法剤については、特に以下に広く記載されているので、本明細書中に更に記載する必要はない：Ｂａｓｋａｒら（Ｂａｓｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ：  ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓ．  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ．  ２０１２；９（３）：１９３−９）、Ｐａｃｉら（Ｐａｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｄｒｕｇ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｏｆ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇｓ  ｐａｒｔ  １−−ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｓ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２０１４  Ａｕｇ；５０（１２）：２０１０−９）、Ｗｉｄｍｅｒら（Ｗｉｄｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｄｒｕｇ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｏｆ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇｓ  ｐａｒｔ  ｔｗｏ−−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２０１４  Ａｕｇ；５０（１２）：２０２０−３６）。そのような薬物及び薬剤のリストは、ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖウェブサイト（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ａｂｏｕｔ−ｃａｎｃｅｒ／ｔｒｅａｔｍｅｎｔ／ｄｒｕｇｓ）でも利用可能である。
【０１７６】
好ましくは、本明細書で定義された抗原性ペプチドとの組合せのための免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＧＡＲＰ、ＰＳ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＴＤＯ、ＧＩＴＲ、ＴＮＦＲ、及び／又はＦａｓＲ／ＤｃＲ３から選択される１以上の免疫チェックポイント分子の活性化剤又は阻害剤；又は、その１以上のリガンドの活性化剤若しくは阻害剤である。
【０１７７】
より好ましくは、免疫チェックポイントモジュレーターは、（共）刺激チェックポイント分子の活性化剤、又は阻害性チェックポイント分子の阻害剤又はそれらの組合せである。したがって、免疫チェックポイントモジュレーターは、より好ましくは、（ｉ）ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、及び／又はＩＣＯＳの活性化剤、又は（ｉｉ）Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＧＡＲＰ、ＰＳ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＴＤＯ、ＴＮＦＲ、及び／又はＦａｓＲ／ＤｃＲ３の阻害剤である
【０１７８】
更により好ましくは、免疫チェックポイントモジュレーターは、阻害性チェックポイント分子の阻害剤である（が、好ましくは、刺激性チェックポイント分子の阻害剤ではない）。したがって、免疫チェックポイントモジュレーターは、更により好ましくは、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＧＡＲＰ、ＰＳ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＴＤＯ、ＴＮＦＲ、及び／又はＤｃＲ３、或いはそれらのリガンドの阻害剤である。
【０１７９】
免疫チェックポイントモジュレーターは、刺激性又は共刺激性チェックポイント分子の活性化剤であることも好ましい（が、好ましくは、阻害性チェックポイント分子の活性化剤ではない）。したがって、免疫チェックポイントモジュレーターは、より好ましくは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、及び／又はＩＣＯＳ、或いはそれらのリガンドの活性化剤である。
【０１８０】
免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ４０経路、ＩＤＯ経路、ＬＡＧ３経路、ＣＴＬＡ−４経路、及び／又はＰＤ−１経路のモジュレーターであることが更により好ましい。特に、免疫チェックポイントモジュレーターは、好ましくはＣＤ４０、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、及び／又はＩＤＯのモジュレーターであり、より好ましくは免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、ＬＡＧ３、及び／又はＩＤＯの阻害剤又はＣＤ４０の活性化剤であり、更により好ましくは、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−１、ＬＡＧ３、及び／又はＩＤＯの阻害剤であり、更により好ましくは、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ−４、及び／又はＰＤ−１の阻害剤であり、最も好ましくは、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ−４及び／又はＰＤ−１の阻害剤である。
【０１８１】
したがって、抗原性ペプチドとの組合せのためのチェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ−４経路又はＰＤ−１経路の知られたモジュレーターから選択することができる。好ましくは、本明細書中で定義された抗原性ペプチドとの組合せのためのチェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ−４経路又はＰＤ−１経路の知られたモジュレーターから選択することができる。特に好ましくは、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ−１阻害剤である。ＣＴＬＡ−４経路及びＰＤ−１経路の好ましい阻害剤としては、モノクローナル抗体Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ；Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、及びＯｐｄｉｖｏ（登録商標）（ニボルマブ；Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペムブロリズマブ；Ｍｅｒｃｋ）、デュルバルマブ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＭＥＤＩ４７３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；ＷＯ２０１１／０６６３８９  Ａ１参照）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；ＵＳ８，２１７，１４９Ｂ２参照）、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１；ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ−５１４；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ）、ＭＩＨ１（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）、及びランブロリズマブ（例えば、ＷＯ２００８／１５６７１２；Ｈａｍｉｄら，２０１３；Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６９：１３４−１４４において、ｈＰＤ１０９Ａ及びそのヒト化誘導体ｈ４０９Ａｌｌ、ｈ４０９Ａ１６、及びｈ４０９Ａ１７として開示される）が挙げられる。より好ましいチェックポイント阻害剤としては、ＣＴＬＡ−４阻害剤Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ；Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、及びＰＤ−１阻害剤Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）（ニボルマブ；Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペムブロリズマブ；Ｍｅｒｃｋ）、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１；ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ−５１４；Ａｓｔｒａｚｅｎｅｃａ）、ＡＭＰ−２２４、及びランブロリズマブ（例えば、ＷＯ２００８／１５６７１２；Ｈａｍｉｄ  Ｏ．  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６９：１３４−１４４において、ｈＰＤ１０９Ａ及びそのヒト化誘導体ｈ４０９Ａ１１、ｈ４０９Ａ１６、及びｈ４０９Ａ１７として開示される）が挙げられる。
【０１８２】
また、本明細書で定義された抗原性ペプチドとの組合せのための免疫チェックポイントモジュレーターは、ペムブロリズマブ、イピリムマブ、ニボルマブ、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６、トレメリムマブ、アベルマブ、ＰＤＲ００１、ＬＡＧ５２５、ＩＮＣＢ２４３６０、バルリルマブ、ウレルマブ、ＡＭＰ−２２４、及びＣＭ−２４からなる群から選択されることが好ましい。
【０１８３】
本発明の目的のために適切な免疫抗癌治療剤を選択することは、当業者の技術の範囲内である。例えば、黒色腫の予防又は治療を望むならば、黒色腫細胞からの溶解物及び／又は抗体オピリムマブを、表１Ａに記載の対応する抗原性ペプチドと共に好ましく使用することができる。
【０１８４】
抗癌治療剤はまた、本発明の組成物と共に、同時に、別々に、又は連続的に投与することができる。組成物及び治療剤を別々の方法又は連続的な方法で投与する場合、それらは異なる医薬形態で投与することができる。
【０１８５】
したがって、別の態様では、本発明は、同時、別々、又は連続投与のための組合せ製剤としての、本発明の組成物及び前記した少なくとも１つの抗癌治療剤に関する。換言すれが、本発明は、同時、別々、又は連続投与のための、本発明の組成物と前記した少なくとも１つの抗癌治療剤との組合せ使用を提案する。
【０１８６】
更なる態様において、本発明はまた、好ましくは癌の予防及び／又は治療における使用のための、以下のうちの少なくとも１つを含むキットオブパーツに関する：
−  本発明に係る免疫原性化合物、
−  本発明に係る抗原性ペプチド、
−  本発明に係るナノ粒子、
−  本発明に係る細胞、
−  本発明に係る核酸、
−  本発明に係る宿主細胞、又は
−  本発明に係る免疫原性組成物。
【０１８７】
特に、本発明のキットオブパーツは、前記の成分のうちの１超を含むことができきる。例えば、本発明に係るキットオブパーツは、少なくとも２つの異なる免疫原性化合物、少なくとも２つの異なる抗原性ペプチド、少なくとも２つの異なるナノ粒子、少なくとも２つの異なる細胞、少なくとも２つの異なる核酸、少なくとも２つの異なる宿主細胞、及び／又は少なくとも２つの異なる免疫原性組成物を含むことができる。好ましくは、前記キットオブパーツに含まれるそのような異なる成分は、本発明に係る抗原性ペプチドが異なり、例えば、第１の抗原性ペプチドに関する１つの成分と、第２の抗原性ペプチド（前記第１の抗原性ペプチドと異なる）に関する１つの成分である。
【０１８８】
例えば、キットは、本発明に係る２つの異なる免疫原性化合物を含むことができる。
【０１８９】
例えば、キットは、本発明に係る２つの異なる抗原性ペプチドを含むことができる。
【０１９０】
例えば、キットは、本発明に係る２つの異なるナノ粒子を含むことができる。
【０１９１】
例えば、キットは、本発明に係る２つの異なる核酸を含むことができる。
【０１９２】
キットオブパーツの各種成分は、１以上の容器内にパーケージすることができる。前記成分は、凍結乾燥若しくは乾燥形態で提供することができる、又は適切な緩衝液に溶解させることができる。キットはまた、例えば保存剤、成長培地、及び／又は前記成分の保存及び／又は再構成のための緩衝液、洗浄溶液などの更なる試薬を含むことができる。更に、本発明に係るキットオブパーツは、使用説明書を含んでもよい。
【０１９３】
更に、本発明は、本明細書に記載の免疫原性組成物又は本明細書に記載のワクチン、及び癌の予防及び／又は治療における前記免疫原性組成物又は前記ワクチンの使用説明書を含む、癌を治療、予防、及び／又は安定化するためのワクチン接種キットを提供する。
【０１９４】
好ましくは、そのようなキットは、本発明に係る免疫原性化合物、本発明に係る抗原性ペプチド、本発明に係るナノ粒子、本発明に係る細胞、本発明に係る核酸、本発明に係る宿主細胞、又は本発明に係る免疫原性組成物を使用することによって癌を予防又は治療するための指示を含むパッケージインサート又は指示リーフレットを更に含む。
【０１９５】
前記成分のいずれかに加えて、キットが本明細書に記載の抗癌治療剤を含むことも好ましい。
【０１９６】
医学的治療と使用
前記のように、本発明の組成物は、治療目的、特にそれを必要とする患者において癌を予防又は治療するために特定の腫瘍抗原／タンパク質に対して特異的免疫応答を引き起こすために特に有用であり得る。
【０１９７】
更なる態様において、本発明は、癌の予防及び／又は治療における使用のための、本発明に係る免疫原性化合物、本発明に係る抗原性ペプチド、本発明に係るナノ粒子、本発明に係る細胞、本発明に係る核酸、本発明に係る宿主細胞、又は本発明に係る免疫原性組成物を提供する。好ましくは、前記癌は、前記のような抗原性ペプチドの（参照）抗原に関する。
【０１９８】
したがって、本発明は、それを必要とする被験体において癌を予防及び／又は治療する、又は抗腫瘍応答を開始、増強、又は延長するための方法であって、前記被験体に以下を投与することを含む方法を提供する：
−  本発明に係る免疫原性化合物、
−  本発明に係る抗原性ペプチド、
−  本発明に係るナノ粒子、
−  本発明に係る細胞、
−  本発明に係る核酸、
−  本発明に係る宿主細胞、
−  本発明に係る免疫原性組成物、又は
−  本明細書に記載の本発明に係る組合せ。
【０１９９】
更に、本発明は、被験体において、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞に依存する１以上のエピトープに対する免疫応答を誘発又は改善するための方法を提供し、前記方法は、前記被験体に以下のいずれかを投与することを含む：
−  本発明に係る免疫原性化合物、
−  本発明に係る抗原性ペプチド、
−  本発明に係るナノ粒子、
−  本発明に係る細胞、
−  本発明に係る核酸、
−  本発明に係る宿主細胞、
−  本発明に係る免疫原性組成物、又は
−  本明細書に記載の本発明に係る組合せ。
【０２００】
ＣＤ８＋応答に依存する免疫応答は、本発明の化合物の投与前のレベルに対する、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、及びＩＬ−２のｍＲＮＡ又はタンパク質の１以上の発現の上昇などの炎症応答、炎症性サイトカイン応答を評価することによって決定することができる。それはまた、本発明の化合物の投与後の抗原特異的Ｔ細胞の頻度又は絶対数の増加によって測定することができ、これは、ＨＬＡ−ペプチドマルチマー染色、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ、及び遅延型過敏症試験で測定することができる。それはまた、抗原特異的Ｔヘルパー細胞に依存する抗原特異的血清抗体の増加によって間接的に測定することもできる。
【０２０１】
本発明はまた、被験体において、複数のＭＨＣクラスＩ分子によって制限される１以上の抗原又は抗原エピトープに対する免疫応答を誘発又は改善するための方法であって、前記方法は、
−  本発明に係る免疫原性化合物、
−  本発明に係る抗原性ペプチド、
−  本発明に係るナノ粒子、
−  本発明に係る細胞、
−  本発明に係る核酸、
−  本発明に係る宿主細胞、
−  本発明に係る免疫原性組成物、又は
−  本明細書に記載の本発明に係る組合せ
を投与することを含む。
【０２０２】
複数のＭＨＣクラスＩ分子によって制限される、本明細書に記載の複数のエピトープに対する免疫応答を被験体において誘発又は改善するための方法は、サイトカイン応答を評価することによって決定することができる。これは、抗原提示細胞上の別々のＭＨＣクラスＩ分子に結合する個々のペプチドでＴ細胞をインビトロ刺激した後の、本発明の化合物の投与前のレベルに対するＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、及びＩＬ−２のｍＲＮＡ又はタンパク質の１以上の発現の上昇を含む。ＭＨＣクラスＩ分子への制限は、また、ＭＨＣクラスＩ分子を発現する抗原提示細胞を使用することによって、又はＭＨＣクラスＩ遮断抗体を使用することによって評価することができる。ＭＨＣクラスＩ分子と共に組み立てられたマルチマーを用いて、ＨＬＡ−ペプチドマルチマー染色によって測定される、本発明の化合物の投与後の抗原特異的Ｔ細胞の頻度又は絶対数の増加によっても測定することができる。
【０２０３】
したがって、別の態様では、本発明は医薬としての使用のための記で定義された組成物に関する。更に、
−  本発明に係る免疫原性化合物、
−  本発明に係る抗原性ペプチド、
−  本発明に係るナノ粒子、
−  本発明に係る細胞、
−  本発明に係る核酸、
−  本発明に係る宿主細胞、
−  本発明に係る免疫原性組成物、又は
−  本明細書に記載の本発明に係る組合せ
を医薬として使用することができる。
【０２０４】
本発明は、より具体的には、免疫療法のためのワクチンとしての使用のための上で定義された組成物に関する。更に、
−  本発明に係る免疫原性化合物、
−  本発明に係る抗原性ペプチド、
−  本発明に係るナノ粒子、
−  本発明に係る細胞、
−  本発明に係る核酸、
−  本発明に係る宿主細胞、
−  本発明に係る免疫原性組成物、又は
−  本明細書に記載の本発明に係る組合せ
を、特に（癌）免疫療法のためのワクチンとして使用することができる。
【０２０５】
本発明の状況において使用するとき、用語「ワクチン」は、典型的には、特定の疾患、好ましくは癌に対する自然免疫及び／又は適応免疫を提供する生物学的製剤を意味する。したがって、ワクチンは、特に、治療される被験体の免疫系の自然及び／又は適応免疫応答を支援する。例えば、本発明に係る抗原性ペプチドは、典型的には、治療される患者における適応免疫応答を導く又は支援する。
【０２０６】
本発明の状況において、ワクチン（組成物）は、腫瘍抗原に対して特異的な免疫応答を誘導することができ、したがって、好ましくは癌の予防又は治療に使用される。それはまた、本明細書において癌ワクチンとも称することができる。
【０２０７】
したがって、好ましい実施形態では、本発明は、それを必要とする被験体における癌の予防及び／又は治療における使用のための、上で定義した組成物に関する。より正確には、本発明は、それを必要とする被験体における癌を予防又は治療するための医薬の製造のための本発明の組成物の使用に関する。
【０２０８】
換言すれば、本発明は、有効量の本発明の組成物を被験体に投与することを含む、それを必要とする前記被験体における癌を予防又は治療するための方法に関する。
【０２０９】
医薬の投与方法は当業者によく知られている。本発明の組成物に関して、それは、被験体に直接、罹患臓器（即ち、局所投与）又は全身（即ち、経腸又は非経口投与）に投与することができ、或いは被験体又はヒト細胞系統に由来する、後に被験体に投与される細胞にエクスビボで適用することもでき、更には、後に被験体に再度投与される、被験体に由来する免疫細胞の亜集団を選択するためにインビトロで使用することもできる。本明細書で使用される経腸投与には、経口投与及び直腸投与、並びに胃供給チューブ、十二指腸供給チューブ、又は胃瘻による投与が含まれ、一方、非経口投与には、特に、皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、皮内、骨内、脳内投与、及び髄腔内注射が含まれる。投与方法は、組成物中に存在する抗原性ペプチド及び／又は免疫原性化合物、並びに治療される癌の種類及び前記組成物中に含まれ得る他の活性剤に依存することが多い。例えば、免疫原性化合物が上で定義した核酸である場合、投与は、筋肉内又は皮内注射であることが好ましく、前記核酸がウイルスベクターにクローニングされている場合、経口／経鼻投与が特に好ましい。或いは、抗原性ペプチド及び／又は免疫原性化合物が上で定義したような（ポリ）ペプチドである場合、又はそれが本明細書に記載のナノ粒子中／上にロードされる場合、投与は好ましくは筋肉内、皮内、又は経口投与である。更にまた代替的に、抗原性ペプチド及び／又は免疫原性化合物が上で定義された腸内細菌の形態で送達される場合、特に腸内細菌がプロバイオティクスの形態である場合、投与は、好ましくは経口投与である。
【０２１０】
それを必要とする被験体へのそれらの投与を容易にするために、本発明に係る抗原性ペプチド及び／又は免疫原性化合物を更にカプセル化することができる。例えば、それらは、ペプチドナノ担体（免疫原性化合物が核酸又は（ポリ）ペプチドである場合に好ましい）、ビロソーム（免疫原性化合物が核酸又は（ポリ）ペプチドである場合に好ましい）、又はリポソーム−ポリカチオン−ＤＮＡ複合体などの脂質ベースの担体システム（免疫原が核酸又は（ポリ）ペプチドである場合に好ましい）にカプセル化することができる（Ｔｒｏｖａｔｏ  Ｍ，  Ｄｅ  Ｂｅｒａｒｄｉｎｉｓ  Ｐ．  Ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ．  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．  ２０１５  Ａｕｇ  １２；４（３）：１５６−６８；  Ｓａａｄｅ  Ｆ，  Ｐｅｔｒｏｖｓｋｙ  Ｎ．  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ＤＮＡ  ｖａｃｃｉｎｅｓ．  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ．  ２０１２  Ｆｅｂ；１１（２）：１８９−２０９；  Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｖａｃｃｉｎｅ：  Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ａｎｄ  Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ．  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  （Ｂａｓｅｌ）．  ２０１４  Ｊｕｌ  ２；２（３）：５１５−３６）。
【０２１１】
所望の効果を達成するために、組成物を１回超投与することもできる。好ましい実施形態では、前記組成物は繰り返し、少なくとも２回、好ましくは２回超投与される。これは、被験体が適切に免疫感作されることを確実にするために、初回投与後、毎週、隔週、毎月、毎年、又は更に数年間などの長期間に亘って行うことができる。
【０２１２】
一実施形態によれば、本発明に係る抗原性ペプチド又は免疫原性化合物は、それを必要とする被験体における癌を予防又は治療するための組成物及び／又は免疫原性組成物の調製のために使用することができる。
【０２１３】
組合せ治療
特に本発明に係る方法及び使用において、本発明に係る抗原性ペプチド、本発明に係る免疫原性化合物、本発明に係るナノ粒子、本発明に係る細胞、本発明に係る核酸、本発明に係る宿主細胞、及び本発明に係る免疫原性組成物の投与は、単独で又は抗がん治療剤などの癌の治療及び／又は予防に有用な補助剤と組み合わせて実施することができる。
【０２１４】
したがって、前記治療剤は、本発明に係る抗原性ペプチドが使用されるのと同一種類の癌を予防及び／又は治療することができることが好ましい。本発明に係る特に好ましい抗癌治療剤としては、抗体、腫瘍細胞溶解物、化学療法剤、放射線療法剤、免疫チェックポイントモジュレーター、及びそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１５】
抗体は、癌細胞表面上の特定の抗原に結合し、それによって治療を腫瘍に向ける（即ち、これらは腫瘍標的化抗体と称される）、又は癌において調節不全である免疫チェックポイントを遮断する（即ち、これらは免疫調節性抗体と称される）ことができるので、癌治療において特に有利である。後者のタイプの抗体の目的は、癌の免疫抵抗を阻害することであり、これは特に腫瘍抗原に特異的なＴ細胞に対して見ることができる。実際、当該技術分野でよく知られているように、通常の生理学的条件下では、免疫チェックポイントが自己寛容（即ち、自己免疫の防止）の維持にとって極めて重要であり、免疫系が病原性感染に反応しているときに、組織を損傷から保護する。しかし、癌では、免疫チェックポイント発現が、免疫抵抗の重要なメカニズムとして調節不全になり得る。前記抵抗は、ＰＤ−Ｌ１チェックポイントに関して、黒色腫、卵巣癌、肺癌、神経膠芽腫、乳癌、及び膵臓癌において特に見られる（Ｋｏｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂ７−Ｈ１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｎ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｗｉｔｈ  ｔｕｍｏｒ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ＰＤ−１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２００４  Ａｕｇ  １；１０（１５）：５０９４−１００；  Ｇｈｅｂｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｈｅ  Ｂ７−Ｈ１  （ＰＤ−Ｌ１）  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｄｕｃｔａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ：  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｉｍｐｏｒｔａｎｔ  ｈｉｇｈ−ｒｉｓｋ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒｓ．  Ｎｅｏｐｌａｓｉａ．  ２００６  Ｍａｒ；８（３）：１９０−８；  Ｈｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ−１  ｌｉｇａｎｄ  １  ｉｓ  ａ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｍｅｌａｎｏｍａ．  Ｃａｎｃｅｒ．  ２０１０  Ａｐｒ  １；１１６（７）：１７５７−６６）。免疫チェックポイントの他の例としては、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ４、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＰＶＲ、ＴＩＧＩＴ、ＧＡＬ９、ＬＡＧ−３、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＴＩＭ３、ＶＩＳＴＡ、ＶＩＳＴＡ−Ｒが挙げられるが、これらに限定されない（Ｐｉｃｏ  ｄｅ  Ｃｏａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ：  ｒｅｖｉｔａｌｉｚｉｎｇ  ａ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ．  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１５  Ａｕｇ；２１（８）：４８２−９１；  Ｐａｒｄｏｌｌ  ＤＭ１．  Ｔｈｅ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２０１２  Ｍａｒ  ２２；１２（４）：２５２−６４）。
【０２１６】
抗体は通常、ネイキッドなモノクローナル抗体の形態（即ち、非コンジュゲート）、又は細胞に対して毒性であり得るか又は放射性であり得る別の分子にコンジュゲートされるかのいずれかで、前記目的のために使用される。
【０２１７】
癌免疫療法において使用されるよく知られたモノクローナル腫瘍標的化抗体の例としては、限定されるものではないが、アレムツズマブ（慢性リンパ性白血病）、ベバシズマブ（結腸直腸癌、多形性膠芽腫、子宮頸癌、肺癌、腎癌）、ブレンツキシマブ／ベドチン（リンパ腫）、ブリナツムマブ（急性リンパ芽球性白血病）、カツマキソマブ（ＥＰＣＡＭ＋癌の悪性腹水症）、セツキシマブ（頭頸部癌、結腸直腸癌）、デノスマブ（乳癌、前立腺癌、及び骨癌）、ゲムツズマブ／オゾガマイシン（急性骨髄性白血病）、イブリツモマブ／チウキセタン（非ホジキンリンパ腫）、パニツムマブ（結腸直腸癌）、ペルツズマブ（乳癌）、オビヌツズマブ（慢性リンパ性白血病）、オファツムマブ（慢性リンパ性白血病）、オピリムマブ（黒色腫）、ラムシミルマブ（胃及び胃食道癌）、リツキシマブ（慢性リンパ性白血病及び非ホジキンリンパ腫）、シルツキシマブ（多中心性キャッスルマン病）、トシツモマブ（非ホジキンリンパ腫）、及びトラスツズマブ（乳癌、胃癌及び胃食道癌）が挙げられ；一方、免疫調節抗体の例としては、限定されるものではないが、ＣＴＬＡ４依存性免疫チェックポイントを遮断するイピリムマブ（黒色腫）、いずれもＰＤＣＤ１依存性免疫チェックポイントを遮断するニボルマブ（黒色腫、肺癌）及びプレンブロリズマブ（黒色腫）、及びいずれもＰＤ−Ｌ１依存性免疫チェックポイントを遮断するＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＥＤＩ０６８０、及びＭＳＢ００１０７１８Ｃが挙げられる（Ｓｈａｒｍａ  ａｎｄ  Ａｌｌｉｓｏｎ，  Ｔｈｅ  ｆｕｔｕｒｅ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｔｈｅｒａｐｙ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ．  ２０１５  Ａｐｒ  ３；３４８（６２３０）：５６−６１）。
【０２１８】
以下に、癌免疫療法用の他の抗体が記載されている：Ｂｕｑｕｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｕｑｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｒｉａｌ  Ｗａｔｃｈ：  Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓ．  Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  ２０１５  Ｍａｒ  ２；４（４）：ｅ１００８８１４．  ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ２０１５  Ａｐｒ）Ｒｅｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｒｅｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１５  Ｏｃｔ；６７（２  Ｐｔ  Ａ）：２８−４５）、及びＳｉｍｐｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃａｂａｌｌｅｒｏ，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ＭＣ  Ｐｒｏｃ．  ２０１４；  ８（Ｓｕｐｐｌ  ４）：  Ｏ６  ａｓ  ｗｅｌｌ  ａｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｓｏｃｉｅｔｙ  ｗｅｂｓｉｔｅ  （ｌｉｓｔ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｐｐｒｏｖｅｄ  ｏｒ  ｉｎ  ｒｅｖｉｅｗ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｒ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｗｅｂｌｉｎｋ  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｓｏｃｉｅｔｙ．ｏｒｇ／ｎｅｗｓ／ａｐｐｒｏｖｅｄ＿ｍａｂｓ．ｐｈｐ）。
【０２１９】
腫瘍細胞溶解物もまた、本発明に係る抗原性ペプチドと組み合わせることができる。腫瘍細胞は、内因性ペプチド−ＭＨＣ複合体を提示することによって、並びに前記溶解物によって送達された抗原を処理し提示することができる宿主の樹状細胞（ＤＣ）を介して、免疫応答を刺激することができる。それによって、免疫応答の誘導が可能な抗原の範囲が広がる。腫瘍細胞溶解物は、熱ショック及び／又は化学的処理で腫瘍細胞を処理することによって容易に得ることができ、自己由来（即ち、患者自身から単離される）又は同種異系（即ち、別の被験体から単離される）であることができる。
【０２２０】
標準的な化学療法薬及び放射線療法剤については、特に以下に広く記載されているので、本明細書中に更に記載する必要はない：Ｂａｓｋａｒら（Ｂａｓｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ：  ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓ．  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ．  ２０１２；９（３）：１９３−９）、Ｐａｃｉら（Ｐａｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｄｒｕｇ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｏｆ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇｓ  ｐａｒｔ  １−−ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｓ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２０１４  Ａｕｇ；５０（１２）：２０１０−９）、Ｗｉｄｍｅｒら（Ｗｉｄｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｄｒｕｇ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｏｆ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇｓ  ｐａｒｔ  ｔｗｏ−−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２０１４  Ａｕｇ；５０（１２）：２０２０−３６）。そのような薬物及び薬剤のリストは、ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖウェブサイト（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ａｂｏｕｔ−ｃａｎｃｅｒ／ｔｒｅａｔｍｅｎｔ／ｄｒｕｇｓ）でも利用可能である。
【０２２１】
好ましくは、本明細書で定義された抗原性ペプチドとの組合せのための免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＧＡＲＰ、ＰＳ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＴＤＯ、ＧＩＴＲ、ＴＮＦＲ、及び／又はＦａｓＲ／ＤｃＲ３から選択される１以上の免疫チェックポイント分子の活性化剤又は阻害剤；又は、その１以上のリガンドの活性化剤若しくは阻害剤である。
【０２２２】
より好ましくは、免疫チェックポイントモジュレーターは、（共）刺激チェックポイント分子の活性化剤、又は阻害性チェックポイント分子の阻害剤又はそれらの組合せである。したがって、免疫チェックポイントモジュレーターは、より好ましくは、（ｉ）ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、及び／又はＩＣＯＳの活性化剤、又は（ｉｉ）Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＧＡＲＰ、ＰＳ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＴＤＯ、ＴＮＦＲ、及び／又はＦａｓＲ／ＤｃＲ３の阻害剤である
【０２２３】
更により好ましくは、免疫チェックポイントモジュレーターは、阻害性チェックポイント分子の阻害剤である（が、好ましくは、刺激性チェックポイント分子の阻害剤ではない）。したがって、免疫チェックポイントモジュレーターは、更により好ましくは、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＧＡＲＰ、ＰＳ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＴＤＯ、ＴＮＦＲ、及び／又はＤｃＲ３、或いはそれらのリガンドの阻害剤である。
【０２２４】
免疫チェックポイントモジュレーターは、刺激性又は共刺激性チェックポイント分子の活性化剤であることも好ましい（が、好ましくは、阻害性チェックポイント分子の活性化剤ではない）。したがって、免疫チェックポイントモジュレーターは、より好ましくは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、及び／又はＩＣＯＳ、或いはそれらのリガンドの活性化剤である。
【０２２５】
免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ４０経路、ＩＤＯ経路、ＬＡＧ３経路、ＣＴＬＡ−４経路、及び／又はＰＤ−１経路のモジュレーターであることが更により好ましい。特に、免疫チェックポイントモジュレーターは、好ましくはＣＤ４０、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、及び／又はＩＤＯのモジュレーターであり、より好ましくは免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、ＬＡＧ３、及び／又はＩＤＯの阻害剤又はＣＤ４０の活性化剤であり、更により好ましくは、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−１、ＬＡＧ３、及び／又はＩＤＯの阻害剤であり、更により好ましくは、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ−４、及び／又はＰＤ−１の阻害剤であり、最も好ましくは、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ−４及び／又はＰＤ−１の阻害剤である。
【０２２６】
したがって、抗原性ペプチドとの組合せのためのチェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ−４経路又はＰＤ−１経路の知られたモジュレーターから選択することができる。好ましくは、本明細書中で定義された抗原性ペプチドとの組合せのためのチェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ−４経路又はＰＤ−１経路の知られたモジュレーターから選択することができる。特に好ましくは、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ−１阻害剤である。ＣＴＬＡ−４経路及びＰＤ−１経路の好ましい阻害剤としては、モノクローナル抗体Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ；Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、及びＯｐｄｉｖｏ（登録商標）（ニボルマブ；Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペムブロリズマブ；Ｍｅｒｃｋ）、デュルバルマブ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＭＥＤＩ４７３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；ＷＯ２０１１／０６６３８９  Ａ１参照）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；ＵＳ８，２１７，１４９Ｂ２参照）、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１；ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ−５１４；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ）、ＭＩＨ１（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）、及びランブロリズマブ（例えば、ＷＯ２００８／１５６７１２；Ｈａｍｉｄら，２０１３；Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６９：１３４−１４４において、ｈＰＤ１０９Ａ及びそのヒト化誘導体ｈ４０９Ａｌｌ、ｈ４０９Ａ１６、及びｈ４０９Ａ１７として開示される）が挙げられる。より好ましいチェックポイント阻害剤としては、ＣＴＬＡ−４阻害剤Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ；Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、及びＰＤ−１阻害剤Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）（ニボルマブ；Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペムブロリズマブ；Ｍｅｒｃｋ）、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１；ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ−５１４；Ａｓｔｒａｚｅｎｅｃａ）、ＡＭＰ−２２４、及びランブロリズマブ（例えば、ＷＯ２００８／１５６７１２；Ｈａｍｉｄ  Ｏ．  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６９：１３４−１４４において、ｈＰＤ１０９Ａ及びそのヒト化誘導体ｈ４０９Ａ１１、ｈ４０９Ａ１６、及びｈ４０９Ａ１７として開示される）が挙げられる。
【０２２７】
また、本明細書で定義された抗原性ペプチドとの組合せのための免疫チェックポイントモジュレーターは、ペムブロリズマブ、イピリムマブ、ニボルマブ、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６、トレメリムマブ、アベルマブ、ＰＤＲ００１、ＬＡＧ５２５、ＩＮＣＢ２４３６０、バルリルマブ、ウレルマブ、ＡＭＰ−２２４、及びＣＭ−２４からなる群から選択されることが好ましい。
【０２２８】
本発明の目的のために適切な免疫抗癌治療剤を選択することは、当業者の技術の範囲内である。例えば、黒色腫の予防又は治療を望むならば、黒色腫細胞からの溶解物及び／又は抗体オピリムマブを、本明細書に記載の本発明に係る対応する抗原性ペプチドと共に好ましく使用することができる。
【０２２９】
抗癌治療剤はまた、本発明に係る抗原性ペプチド、本発明に係る免疫原性化合物、本発明に係るナノ粒子、本発明に係る細胞、本発明に係る核酸、本発明に係る宿主細胞、又は本発明に係る免疫原性組成物と共に、本明細書に記載されるほぼ同時に又は連続的に、同一又は異なる医薬形態で投与することもできる。
【０２３０】
したがって、別の態様では、本発明は、同時、別々、又は連続投与のための組合せ製剤としての、本発明の組成物及び前記した少なくとも１つの抗癌治療剤に関する。換言すれが、本発明は、同時、別々、又は連続投与のための、本発明の組成物と前記した少なくとも１つの抗癌治療剤との組合せ使用を提案する。
【０２３１】
更に、本発明はまた、本明細書に記載の本発明に係る（少なくとも）２つの異なる抗原性ペプチドの組合せを提供する。これに関連して、（少なくとも）２つの異なる抗原性ペプチドは、任意の形態であることができ、例えば、「ネイキッド」であるか、免疫原性化合物、ナノ粒子、（免疫原性）組成物、又はそれらがロードされた細胞に含まれるか、又は核酸（例えば、ベクター）によってコードされることができる。したがって、（少なくとも）２つの異なる抗原性ペプチドは、（組み合わされる）（少なくとも）２つの異なる成分に含まれ得る。したがって、本発明に係る組合せの２つの異なる成分は、特に本発明に係る異なる抗原性ペプチド（免疫原性化合物、ナノ粒子に含まれる、核酸によってコードされるなど）を意味する。そのような２つの異なる成分、特に本発明に係る２つの異なる抗原性ペプチド（２つの異なる成分に含まれる）は、好ましくは同一種類の癌、例えば、この癌に関連する同一又は異なる抗原、及び／又はこの癌に関連する抗原内の異なる（参照）エピトープと同一又は異なる抗原を意味する。より好ましくは、２つの異なる成分、特に本発明に係る２つの異なる抗原性ペプチド（２つの異なる成分に含まれる）は、同一の腫瘍（関連又は特異的）抗原に関する。２つの異なる成分、特に本発明に係る２つの異なる抗原性ペプチド（２つの異なる成分に含まれる）は、同一又は異なる（参照）腫瘍（関連又は特異的）抗原にも関連し得る。
【０２３２】
更に、本発明に係る抗原性ペプチドはまた、（ペプチド「ファミリー」に関して前記したように）対応する（ヒト）腫瘍抗原エピトープと組み合わせることもできる。それによって、腫瘍に対して非常に効率的なＴ細胞クローンの選択が得られる／支持される。特に、本発明に係る抗原性ペプチドと対応する（ヒト）腫瘍抗原エピトープとを共投与することができる。そのような共投与は、ほぼ同時に（同時に）又は連続的であることができ、連続投与においては、本発明に係る抗原性ペプチドが最初に投与され、その後対応する（ヒト）腫瘍抗原エピトープが投与されることが好ましい。特に、本発明に係る抗原性ペプチドを最初に投与することができ、対応する（ヒト）腫瘍抗原エピトープを（再）追加免疫として使用することができる。例えば、配列番号４７の抗原性ペプチドを配列番号１２０の参照ペプチドと組み合わせることができる。別の例では、配列番号５１、５２、５５、又は５６の抗原性ペプチドを配列番号１２２の参照ペプチドと組み合わせることができる。別の例では、配列番号７７の抗原性ペプチドを配列番号１２８の参照ペプチドと組み合わせることができる。別の例では、配列番号９３の抗原性ペプチドを配列番号１３６の参照ペプチドと組み合わせることができる。別の例では、配列番号２８の抗原性ペプチドを配列番号１１５の参照ペプチドと組み合わせることができる。別の例では、配列番号１０１又は１０２の抗原性ペプチドを配列番号１４１の参照ペプチドと組み合わせることができる。別の例では、配列番号２６の抗原性ペプチドを配列番号１１３の参照ペプチドと組み合わせることができる。
【０２３３】
（ａ）本発明に係る抗原性ペプチド及び対応する（ヒト）腫瘍抗原エピトープ、又は（ｂ）本発明に係る２つの異なる抗原性ペプチドなどの、組み合わせられる両方のペプチドを
−  本発明に係る同一の免疫原性化合物又は本発明に係る異なる免疫原性化合物において、
−  本発明に係る同一のナノ粒子内、又は本発明に係る異なるナノ粒子内に（ロードされて）、
−  本発明に係る同一の細胞内、又は本発明に係る異なる細胞内に（ロードされて）、
−  本発明に係る同一の核酸によって、又は本発明に係る異なる核酸（によってコードされて）、
−  本発明に係る同一の宿主細胞によって、又は本発明に係る異なる宿主細胞（によって発現されて）、
−  本発明に係る同一の免疫原性組成物又は本発明に係る異なる免疫原性組成物（に含有されて）、
投与することができる。
【０２３４】
例えば、本発明は、癌の予防及び／又は治療における使用のための以下の組合せを提供する：
（ｉ）本発明に係る第１の抗原性ペプチドを含む本発明に係る免疫原性化合物、及び
（ｉｉ）本発明に係る第２の抗原性ペプチドを含む本発明に係る免疫原性化合物。
【０２３５】
例えば、本発明は、癌の予防及び／又は治療における使用のための以下の組合せを提供する：
（ｉ）本発明に係る第１の抗原性ペプチド、及び
（ｉｉ）本発明に係る第２の抗原性ペプチド。
【０２３６】
例えば、本発明は、癌の予防及び／又は治療における使用のための以下の組合せを提供する：
（ｉ）本発明に係る第１の抗原性ペプチドを含む本発明に係るナノ粒子、及び
（ｉｉ）本発明に係る第２の抗原性ペプチドを含む本発明に係るナノ粒子。
【０２３７】
例えば、本発明は、癌の予防及び／又は治療における使用のための以下の組合せを提供する：
（ｉ）本発明に係る第１の抗原性ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む本発明に係る核酸、及び
（ｉｉ）本発明に係る第１の抗原性ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む本発明に係る核酸。
【０２３８】
好ましくは、（ａ）本発明に係る抗原性ペプチド及び対応する（ヒト）腫瘍抗原エピトープ、又は（ｂ）本発明に係る２つの異なる抗原性ペプチドなどの、組み合わせられる両方のペプチド、特に成分（ｉ）及び（ｉｉ）は、ほぼ同時に投与される。より一般的には、任意の製剤の第１の（抗原性）ペプチド（例えば、本発明に係る免疫原性化合物、本発明に係るナノ粒子、本発明に係る細胞、本発明に係る核酸、本発明に係る宿主細胞、又は本発明に係る免疫原性組成物の形態；本明細書では「第１の（抗原性）ペプチド成分」と称する）は、任意の製剤の第２の（抗原性）ペプチド（例えば、本発明に係る免疫原性化合物、本発明に係るナノ粒子、本発明に係る細胞、本発明に係る核酸、本発明に係る宿主細胞、又は本発明に係る免疫原性組成物の形態；本明細書では「第２の（抗原性）ペプチド成分」と称する）と、ほぼ同時に投与されことが好ましく、両方の（抗原性）ペプチドは、好ましくは同一形態（即ち、同一種類の製剤、例えば、両方ともナノ粒子として、両方とも免疫原性組成物として、など）で投与される。
【０２３９】
本明細書で使用される「ほぼ同時に」とは、特に同時投与、又は（ｉ）第１の（抗原性）ペプチド成分の投与直後に、（ｉｉ）第２の（抗原性）ペプチド成分が投与される、又は（ｉｉ）第２の（抗原性）ペプチド成分の投与直後に、（ｉ）第１の（抗原性）ペプチド成分が投与されることを意味する。当業者は、「直後」は、第２の投与を準備するのに必要な時間、特に第２の投与のためにその場所を露出及び消毒するのに必要な時間、及び「投与装置」（例えば、シリンジ、ポンプなど）の適切な準備に必要な時間を含むことを理解する。同時投与は、（ｉ）第１（抗原性）ペプチド成分と（ｉｉ）第２（抗原性）ペプチド成分の投与期間が重複する場合、又は例えば１つの成分がより長い期間（例えば、３０分間、１時間、２時間、又はそれ以上）に亘り注入などによって投与され、他の成分がそのような長い期間の間のある時点で投与される場合も含む。異なる投与経路及び／又は異なる投与部位が使用される場合、（ｉ）第１の（抗原性）ペプチド成分及び（ｉｉ）第２の（抗原性）ペプチド成分のほぼ同時投与が特に好ましい。
【０２４０】
また、（ａ）本発明に係る抗原性ペプチド及び対応する（ヒト）腫瘍抗原エピトープ、又は（ｂ）本発明に係る２つの異なる抗原性ペプチドなどの、組み合わせられる両方のペプチド、特に成分（ｉ）及び（ｉｉ）は、連続的に投与されることも好ましい。より一般的には、任意の製剤の第１の（抗原性）ペプチド（例えば、本発明に係る免疫原性化合物、本発明に係るナノ粒子、本発明に係る細胞、本発明に係る核酸、本発明に係る宿主細胞、又は本発明に係る免疫原性組成物の形態；本明細書では「第１の（抗原性）ペプチド成分」と称する）と、任意の製剤の第２の（抗原性）ペプチド（例えば、本発明に係る免疫原性化合物、本発明に係るナノ粒子、本発明に係る細胞、本発明に係る核酸、本発明に係る宿主細胞、又は本発明に係る免疫原性組成物の形態；本明細書では「第２の（抗原性）ペプチド成分」と称する）は連続的に投与されることが好ましく、両方の（抗原性）ペプチドは、好ましくは同一形態（即ち、同一種類の製剤、例えば、両方ともナノ粒子として、両方とも免疫原性組成物として、など）で投与される。
【０２４１】
これは、（ｉ）第１の（抗原性）ペプチド成分が、（ｉｉ）第２の（抗原性）ペプチド成分の前又は後に投与されることを意味する。連続投与において、第１の成分の投与と第２の成分の投与との間の時間は、好ましくは１週間以内、より好ましくは３日間以内、更により好ましくは２日間以内、最も好ましくは２４時間以内である。（ｉ）第１の（抗原性）ペプチド成分及び（ｉｉ）第２の（抗原性）ペプチド成分は、同じ日に投与されることが特に好ましく、第１の成分（第１又は第２の（抗原性））の投与と第２成分（第１又は第２の（抗原性）ペプチドの他方）の投与との間の時間は、好ましくは６時間以内、より好ましくは３時間以内、更により好ましくは２時間以内、最も好ましくは１時間以内である。
【０２４２】
好ましくは、（ｉ）第１の（抗原性）ペプチド成分と（ｉｉ）第２の（抗原性）ペプチド成分は、同一の投与経路で投与される。より一般的には、任意の製剤の第１の（抗原性）ペプチド（例えば、本発明に係る免疫原性化合物、本発明に係るナノ粒子、本発明に係る細胞、本発明に係る核酸、本発明に係る宿主細胞、又は本発明に係る免疫原性組成物の形態；本明細書では「第１の（抗原性）ペプチド成分」と称する）と、任意の製剤の第２の（抗原性）ペプチド（例えば、本発明に係る免疫原性化合物、本発明に係るナノ粒子、本発明に係る細胞、本発明に係る核酸、本発明に係る宿主細胞、又は本発明に係る免疫原性組成物の形態；本明細書では「第２の（抗原性）ペプチド成分」と称する）は、同一の投与経路で投与されることが好ましく、両方の（抗原性）ペプチドは、好ましくは同一形態（即ち、同一種類の製剤、例えば、両方ともナノ粒子として、両方とも免疫原性組成物として、など）で投与される。
【０２４３】
また、成分（ｉ）と（ｉｉ）は、異なる投与経路で投与されることも好ましい。より一般的には、任意の製剤の第１の（抗原性）ペプチド（例えば、本発明に係る免疫原性化合物、本発明に係るナノ粒子、本発明に係る細胞、本発明に係る核酸、本発明に係る宿主細胞、又は本発明に係る免疫原性組成物の形態；本明細書では「第１の（抗原性）ペプチド成分」と称する）と、任意の製剤の第２の（抗原性）ペプチド（例えば、本発明に係る免疫原性化合物、本発明に係るナノ粒子、本発明に係る細胞、本発明に係る核酸、本発明に係る宿主細胞、又は本発明に係る免疫原性組成物の形態；本明細書では「第２の（抗原性）ペプチド成分」と称する）は、異なる投与経路で投与されことが好ましく、両方の（抗原性）ペプチドは、好ましくは同一形態（即ち、同一種類の製剤、例えば、両方ともナノ粒子として、両方とも免疫原性組成物として、など）で投与される。
【０２４４】
好ましくは、成分（ｉ）と（ｉｉ）は、同一の組成物に含有される。より一般的には、任意の製剤の第１の（抗原性）ペプチド（例えば、本発明に係る免疫原性化合物、本発明に係るナノ粒子、本発明に係る細胞、本発明に係る核酸、又は本発明に係る宿主細胞；本明細書では「第１の（抗原性）ペプチド成分」と称する）と、任意の製剤の第２の（抗原性）ペプチド（例えば、本発明に係る免疫原性化合物、本発明に係るナノ粒子、本発明に係る細胞、本発明に係る核酸、又は本発明に係る宿主細胞；本明細書では「第２の（抗原性）ペプチド成分」と称する）は、同一の組成物に含有されることが好ましく、両方の（抗原性）ペプチドは、好ましくは同一形態（即ち、同一種類の製剤、例えば、両方ともナノ粒子として、など）で投与される。
【０２４５】
また、成分（ｉ）と（ｉｉ）は、異なる組成物に含有されることも好ましい。より一般的には、任意の製剤の第１の（抗原性）ペプチド（例えば、本発明に係る免疫原性化合物、本発明に係るナノ粒子、本発明に係る細胞、本発明に係る核酸、又は本発明に係る宿主細胞；本明細書では「第１の（抗原性）ペプチド成分」と称する）と、任意の製剤の第２の（抗原性）ペプチド（例えば、本発明に係る免疫原性化合物、本発明に係るナノ粒子、本発明に係る細胞、本発明に係る核酸、又は本発明に係る宿主細胞；本明細書では「第２の（抗原性）ペプチド成分」と称する）は、異なる組成物に含有されることが好ましく、両方の（抗原性）ペプチドは、好ましくは同一形態（即ち、同一種類の製剤、例えば、両方ともナノ粒子として、など）で投与される。
【０２４６】
実施例
実施例１及び２はいずれも、図１に記載される一般的なプロトコルに関連する。
実施例１：ＨＬＡ−Ａ＊０２０１アレルに対して優れた親和性を有する候補抗原性ペプチドの同定
【０２４７】
この実施例は、配列番号７１の抗原性ペプチド（＜＜ＦＬＰＦＧＦＩＬＶ＞＞、本明細書ではＩＬ１３ＲＡ２−Ｂとも称される）がＨＬＡ−Ａ＊０２０１アレルに対する高い親和性を有するのに対して、ＩＬ１３ＲＡ２由来の対応する参照ヒトペプチド（＜＜ＷＬＰＦＧＦＩＬＩ＞＞、配列番号１２３、本明細書ではＩＬ１３ＲＡ２−Ｈとも称される）は、低い親和性を有することを示す。
【０２４８】
Ａ．材料及び方法
Ａ１．Ｔ２細胞系統に対するペプチドの親和性の測定
実験プロトコルは、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１によって提示されたペプチドについて検証されたものと同様である（Ｔｏｕｒｄｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｔｏ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｌｏｗ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ＨＬＡ−Ａ２．１−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ：  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｒｙｐｔｉｃ  ｔｕｍｏｒ  ｅｐｉｔｏｐｅｓ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０００  Ｄｅｃ；  ３０（１２）：３４１１−２１）。ペプチドの親和性測定は、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１分子を発現するがＴＡＰ１／２陰性であり、内因性ペプチドを提示することができないヒト腫瘍細胞Ｔ２を用いて達成される。
【０２４９】
Ｔ２細胞（２．１０５細胞／ウェル）を、１００ｎｇ／μｌのヒトβ２ｍを添加したＡＩＭＶ培地中で１００μＭから０．１μＭまで減少する濃度のペプチドと共に３７℃で１６時間インキュベートする。次に、細胞を２回洗浄し、ＰＥに結合した抗ＨＬＡ−Ａ２抗体（クローンＢＢ７．２、ＢＤ  Ｐｈａｒｍａｇｅｎ）で標識する。
【０２５０】
分析は、ＦＡＣＳ（Ｇｕａｖａ  Ｅａｓｙ  Ｃｙｔｅ）によって達成される。
【０２５１】
各ペプチド濃度について、目的のペプチドに関連する標識の幾何平均をバックグラウンドノイズから差し引き、１００μＭの濃度で参照ペプチドＨＩＶ  ｐｏｌ  ５８９−５９７で得られたＨＬＡ−Ａ＊０２０２標識の幾何平均のパーセンテージとして報告する。次に、相対的親和性を次のように決定する。
【０２５２】
相対的親和性＝ＨＬＡ−Ａ＊０２０１の発現の２０％を誘導する各ペプチドの濃度／ＨＬＡ−Ａ＊０２０１の発現の２０％を誘導する参照ペプチドの濃度
【０２５３】
Ａ２．ペプチドの可溶化
各ペプチドは、アミノ酸組成を考慮することによって可溶化される。システイン、メチオニン、又はトリプトファンを含まないペプチドの場合、ＤＭＳＯの添加は、全体積の最大１０％まで可能である。他のペプチドを水又はＰＢＳ  ｐＨ７．４に再懸濁する。
【０２５４】
Ｂ．結果
Ｔ２  ＡＴＣＣ細胞の場合：可変ペプチド濃度についての平均蛍光強度：対のＩＬ１３ＲＡ２ペプチド（ＩＬ１３ＲＡ２−Ｈ及びＩＬ１３ＲＡ２−Ｂ）に関して、ヒトペプチドは、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１に強く結合する候補ペプチドＩＬ１３ＲＡ２−Ｂとは反対にＨＬＡ−Ａ＊０２０１に結合しないようである：１００μＭで１１２．０３対１８．６４；１０μＭで４０．７７対１１．６１；１μＭで１２．１８対９．４１；０．１μＭで９．９対７．４６。
【０２５５】
また、４．４μＭでのＩＬ１３ＲＡ２−Ｂは、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１の発現の２０％を誘導する（ＩＬ１３ＲＡ２−Ｈの場合の１００μＭに対して）。
【０２５６】
同様の結果が、第２の異なるＴ２細胞クローンから得られた。
【０２５７】
実施例２：候補抗原性ペプチドを用いたマウスへのワクチン接種は、ＥＬＩＳＰＯＴ−ＩＦＮγアッセイにおいて改善されたＴ細胞応答を誘導する。
【０２５８】
Ａ．材料及び方法
Ａ．１  マウスモデル
使用したモデルの特徴を表２に概説する。
【表２】
2019534884.tif 000009
【０２５９】
Ａ．２  免疫感作スキーム
免疫感作スキームを図２に示す。簡潔に述べると、１４頭のβ／Ａ２／ＤＲ３マウスを無作為に（マウスの性別及び年齢に基づいて）２つの実験群に割り当て、それぞれを共通のヘルパーペプチド（ｈ−ｐＡｇ）と組み合わせられる特定のワクチン接種ペプチド（ｖａｃｃ−ｐＡｇ）で免疫した（以下の表３に概説される）。ｖａｃｃ−ｐＡｇを対で比較した（群１対群２）。これにより、単一のペプチドの天然型と最適化型の両方を各群で比較した。
【表３】
2019534884.tif 000010
【０２６０】
ペプチドは以下のように提供した。
・ｖａｃｃ−ｐＡｇの対：ＩＬ１３ＲＡ２−Ｈ及びＩＬ１３ＲＡ２−Ｂ；いずれも、４ｍｇ／ｍｌ（４ｍＭ）の濃度で製造、提供。
・ｈ−ｐＡｇ：ＨＨＤ−ＤＲ３；凍結乾燥し（５０．６ｍｇ；Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｃ  ｂａｔｃｈ  １６１１１６６）、１０ｍｇ／ｍＬの濃度で純蒸留水に再懸濁した。
【０２６１】
動物を０日目（ｄ０）に初回免疫注射で、ｄ１４に追加免疫注射で免疫した。各マウスの尾部に、以下を含む油性エマルジョンを１００μＬ皮下注射した。
・１００μｇのｖａｃｃ−ｐＡｇ（マウス１頭当たり４ｍｇ／ｍＬストック２５μＬ）。
・１５０μｇのｈ−ｐＡｇ（マウス１頭当たり１０ｍｇ／ｍＬストック１５μＬ）。
・総容量が５０μＬになるようにＰＢＳを１０μＬ（マウス１頭当たり）。
・１：１（ｖ：ｖ）の比率（マウス１頭当たり５０μＬ）で添加される不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）
【０２６２】
以下のように、各ｖａｃｃ−ｐＡｇについて別々のエマルジョンを調製した：ＩＦＡ試薬を、１５ｍＬチューブ中のｖａｃｃ−ｐＡｇ／ｈ−ｐＡｇ／ＰＢＳ混合物に添加し、濃厚なエマルジョンを形成するまで１分間の反復サイクルでボルテックスで混合した。
【０２６３】
Ａ．３  マウス解析
追加免疫注射の７日後（即ち、ｄ２１）、動物を安楽死させ、脾臓を摘出した。脾細胞は、臓器を機械的に破砕した後、７０μｍフィルタリングＦｉｃｏｌｌ密度勾配精製することによって調製した。
【０２６４】
脾細胞を直ちにＥＬＩＳＰＯＴ−ＩＦＮγアッセイに使用した（表４）。１ウェル当たり２×１０５総脾細胞を使用して、実験条件を４連で繰り返し、それらのＩＦＮγ分泌能を評価するために、ｖａｃｃ−ｐＡｇ（１０μＭ）、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ、２．５μｇ／ｍＬ）、又は培地のみの存在下で培養した。市販のＥＬＩＳＰＯＴ−ＩＦＮγキット（Ｄｉａｃｌｏｎｅ  Ｋｉｔ  Ｍｕｊｒｉｎｅ  ＩＦＮγ  ＥＬＩＳｐｏｔ）を製造会社の指示にしたがって使用し、アッセイは、約１６時間のインキュベーション後に実施した。
【表４】
2019534884.tif 000011
【０２６５】
ＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔ  ５．４ソフトウェア（ＣＴＬ−Ｅｕｒｏｐｅ）とインターフェースをとったＧｒａｎｄ  ＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔ（登録商標）Ｓ６  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ＵＶ  Ｉｍａｇｅ  Ａｎａｌｙｚｅｒでスポットを数えた。データプロッティング及び統計分析は、Ｐｒｉｓｍ−５ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．）を用いて行った。
【０２６６】
細胞懸濁液をまた、Ｔ細胞数の規格化のために、フローサイトメトリーによっても分析した。モノクローナル抗体カクテル（データは示さず）を、マウス（１：１０希釈「抗ｍＣＤ１６／ＣＤ３２  ＣＦ１１クローン」−内部供給）Ｆｃ受容体を標的とするＦｃ遮断試薬の存在下で精製白血球に適用した。インキュベーションは、９６ウェルプレート中、暗所で４℃にて１５〜２０分間行った。染色後に遠心分離によって細胞を洗浄して過剰のモノクローナル抗体カクテルを除去し、データ取得のためにＰＢＳに再懸濁した。
【０２６７】
全てのデータ取得は、ＦＡＣＳ−Ｄｉｖａソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）とインターフェースをとったＬＳＲ−ＩＩ  Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターを用いて行われた。データの分析は、ＦｌｏｗＪｏ−９ソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ  Ｉｎｃ．）をゲーティングストラテジ（図示せず）を用いて行った。
【表５】
2019534884.tif 000012
【０２６８】
Ｂ．結果
合計１４頭のβ／Ａ２／ＤＲ３マウスをこの実験に使用した（表６参照）。屠殺時に、脾臓Ｔ細胞群をフローサイトメトリーによって分析したところ、大多数がＣＤ４＋Ｔ細胞サブセットに属することが示された。
【０２６９】
2019534884.tif 000013
【０２７０】
プレーティングし、適切な刺激でインキュベートした後、ＩＦＮγ産生細胞が現れ、これを計数した。次いで、データを、１０６個の全Ｔ細胞当たりの特定のスポットの数（「培地のみ」の条件で得られた平均数を差し引いたもの）として規格化した。
【０２７１】
次に、個々の平均値（４連から得た）を用いて群平均値をプロットした（図３Ａ参照）。Ｔ細胞の機能的能力は個体ごとに異なる可能性があるので、データは個体当たりのＣｏｎＡ応答の割合（％）としても表した（図３Ｂ参照）。
【０２７２】
全体として、ＩＬ１３ＲＡ２−Ｂ  ｐＡｇ（候補）ペプチドによるワクチン接種は、ＩＬ１３ＲＡ２−Ｈ  ｐＡ（参照ヒト）−ワクチン接種動物（群２）と比較して、ＥＬＩＳＰＯＴ−ＩＦＮγアッセイにおいて改善されたＴ細胞応答を誘導した。群１（ＩＬ１３ＲＡ２−Ｂ）では、ＩＬ１３ＲＡ２−Ｂ  ｐＡｇによるエクスビボ再刺激は、ＩＬ１３ＲＡ２−Ｈ  ｐＡｇの場合よりも高い応答を促した。群２（ＩＬ１３ＲＡ２−Ｈ）の場合はそうではなかった。各条件についてのＣｏｎＡ誘導応答の割合（％）（平均＋／−ＳＥＭ）は以下の通りであった。
・群１（ＩＬ１３ＲＡ２−Ｂ）／ＩＬ１３ＲＡ２−Ｂ  ｐＡｇ：５６．３％＋／−１８．１
・群１（ＩＬ１３ＲＡ２−Ｂ）／ＩＬ１３ＲＡ２−Ｈ  ｐＡｇ：３２．３％＋／−１１．８
・群２（ＩＬ１３ＲＡ２−Ｈ）／ＩＬ１３ＲＡ２−Ｂ  ｐＡｇ：２．０％＋／−０．８
・群２（ＩＬ１３ＲＡ２−Ｈ）／ＩＬ１３ＲＡ２−Ｈ  ｐＡｇ：１．１％＋／−０．８
【０２７３】
したがって、これらの結果は、ＩＬ１３ＲＡ２を標的とする腫瘍抗原免疫療法が、インビボでのＴ細胞応答を改善することができ、ＩＬ１３ＲＡ２−Ｂ候補ペプチド（配列番号７１）がその目的に特に有効であるという実験的証拠を与える。
【０２７４】
実施例３：ＨＬＡ−Ａ＊０２０１アレルに対して優れた親和性を有する更なる候補抗原性ペプチドの同定
【０２７５】
この実施例は、配列番号４７の抗原性ペプチド（＜＜ＲＬＬＥＥＴＤＬＶ＞＞、本明細書ではＥＲＢＢ２−１Ｂとも称される）；配列番号５１の抗原性ペプチド（＜＜ＶＭＬＧＶＶＦＧＶ＞＞、本明細書ではＥＲＢＢ２−３Ｂ１とも称される）；配列番号５２の抗原性ペプチド（＜＜ＶＬＬＧＶＶＦＧＶ＞＞、本明細書ではＥＲＢＢ２−３Ｂ２とも称される）；配列番号５５の抗原性ペプチド（＜＜ＶＭＬＧＶＶＦＧＩ＞＞、本明細書ではＥＲＢＢ２−３Ｂ３とも称される）；及び配列番号５６の抗原性ペプチド（＜＜ＩＬＬＧＶＶＦＧＩ＞＞、本明細書ではＥＲＢＢ２−３Ｂ４とも称される）が、ＥＲＢＢ２（＜＜ＲＬＬＱＥＴＥＬＶ＞＞、配列番号１２０、本明細書ではＥＲＢＢ２−１Ｈとも称される）；（＜＜ＶＶＬＧＶＶＦＧＩ＞＞、配列番号１２２、本明細書ではＥＲＢＢ２−３Ｈとも称される）に由来する対応する参照ヒトペプチドよりもＨＬＡ−Ａ＊０２０１アレルに対する高い親和性を有することを示す。
【０２７６】
Ａ．材料及び方法
Ａ１．Ｔ２細胞系統に対するペプチドの親和性の測定
実験プロトコルは、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１によって提示されたペプチドについて検証されたものと同様である（Ｔｏｕｒｄｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｔｏ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｌｏｗ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ＨＬＡ−Ａ２．１−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ：  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｒｙｐｔｉｃ  ｔｕｍｏｒ  ｅｐｉｔｏｐｅｓ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０００  Ｄｅｃ；  ３０（１２）：３４１１−２１）。ペプチドの親和性測定は、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１分子を発現するがＴＡＰ１／２陰性であり、内因性ペプチドを提示することができないヒト腫瘍細胞Ｔ２を用いて達成される。
【０２７７】
Ｔ２細胞（２．１０５細胞／ウェル）を、１００ｎｇ／μｌのヒトβ２ｍを添加したＡＩＭＶ培地中で１００μＭから０．１μＭまで減少する濃度のペプチドと共に３７℃で１６時間インキュベートする。次に、細胞を２回洗浄し、ＰＥに結合した抗ＨＬＡ−Ａ２抗体（クローンＢＢ７．２、ＢＤ  Ｐｈａｒｍａｇｅｎ）で標識する。
【０２７８】
分析は、ＦＡＣＳ（Ｇｕａｖａ  Ｅａｓｙ  Ｃｙｔｅ）によって達成される。
【０２７９】
各ペプチド濃度について、目的のペプチドに関連する標識の幾何平均をバックグラウンドノイズから差し引き、１００μＭの濃度で参照ペプチドＨＩＶ  ｐｏｌ  ５８９−５９７で得られたＨＬＡ−Ａ＊０２０２標識の幾何平均のパーセンテージとして報告する。次に、相対的親和性を次のように決定する。
【０２８０】
相対的親和性＝ＨＬＡ−Ａ＊０２０１の発現の２０％を誘導する各ペプチドの濃度／ＨＬＡ−Ａ＊０２０１の発現の２０％を誘導する参照ペプチドの濃度
【０２８１】
Ａ２．ペプチドの可溶化
各ペプチドは、アミノ酸組成を考慮することによって可溶化される。システイン、メチオニン、又はトリプトファンを含まないペプチドの場合、ＤＭＳＯの添加は、全体積の最大１０％まで可能である。他のペプチドを水又はＰＢＳ  ｐＨ７．４に再懸濁する。
【０２８２】
Ｂ．結果
結果を表７に示す。
【表７】
2019534884.tif 000014
【０２８３】
表７に示されるように（特に、前記したように計算した「相対的親和性」を参照）、抗原性ペプチドＥＲＢＢ２−１Ｂは、対応するヒトペプチドＥＲＢＢ２−１Ｈよりも高い親和性（低い値）を示す。更に、抗原性ペプチドＥＲＢＢ２−３Ｂ１、ＥＲＢＢ２−３Ｂ２、ＥＲＢＢ２−３Ｂ３、及びＥＲＢＢ２−３Ｂ４は、対応するヒトペプチドＥＲＢＢ２−１Ｂよりも高い親和性（低い値）を示す。更に、抗原性ペプチドＥＲＢＢ２−１Ｂ、ＥＲＢＢ２−３Ｂ１、ＥＲＢＢ２−３Ｂ２、ＥＲＢＢ２−３Ｂ３、及びＥＲＢＢ２−３Ｂ４は、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１の発現の２０％を誘導するのに必要な濃度が（それらのヒト参照ペプチドと比較して）より低い。
【０２８４】
同様の結果が第２の異なるＴ２細胞クローンからも得られた。
【０２８５】
実施例４：ＨＬＡ−Ａ＊０２０１アレルに対して優れた親和性を有する更なる候補抗原性ペプチドの同定
【０２８６】
この実施例は、配列番号７７の抗原性ペプチド（＜＜ＫＬＶＥＷＬＡＭＬ＞＞、本明細書ではＭＡＧＥ  Ｃ１Ｂとも称される）；配列番号９３の抗原性ペプチド（＜＜ＳＬＰＰＤＶＱＱＶ＞＞、本明細書ではＭＭＰ２−Ｂとも称される）；配列番号２８の抗原性ペプチド（＜＜ＩＴＳＤＶＰＦＳＶ＞＞、本明細書ではＰＭＥＬ−Ｂとも称される）；配列番号１０１の抗原性ペプチド（＜＜ＭＬＡＶＦＬＰＬＶ＞＞、本明細書ではＳＴＥＡＰ−Ｂ１とも称される）；及び配列番号１０２の抗原性ペプチド（＜＜ＹＬＡＶＦＬＰＩＶ＞＞、本明細書ではＳＴＥＡＰ−Ｂ２とも称される）が、ＭＡＧＥ  Ｃ１（＜＜ＫＶＶＥＦＬＡＭＬ＞＞、配列番号１２８、本明細書ではＭＡＧＥ  Ｃ１Ｈとも称される）、ＭＭＰ２（＜＜ＧＬＰＰＤＶＱＲＶ＞＞、配列番号１３６、本明細書ではＭＭＰ２−Ｈとも称される）、ＰＭＥＬ（＜＜ＩＴＤＱＶＰＦＳＶ＞＞、配列番号１１５、本明細書ではＰＭＥＬ−Ｈとも称される）、及びＳＴＥＡＰ（＜＜ＭＩＡＶＦＬＰＩＶ＞＞、配列番号１４１、本明細書ではＳＴＥＡＰ−Ｈとも称される）に由来する対応する参照ヒトペプチドよりもＨＬＡ−Ａ＊０２０１アレルに対する高い親和性を有することを示す。
【０２８７】
Ａ．材料及び方法
Ａ１．Ｔ２細胞系統に対するペプチドの親和性の測定
実験プロトコルは、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１によって提示されたペプチドについて検証されたものと同様である（Ｔｏｕｒｄｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｔｏ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｌｏｗ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ＨＬＡ−Ａ２．１−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ：  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｒｙｐｔｉｃ  ｔｕｍｏｒ  ｅｐｉｔｏｐｅｓ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０００  Ｄｅｃ；  ３０（１２）：３４１１−２１）。ペプチドの親和性測定は、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１分子を発現するがＴＡＰ１／２陰性であり、内因性ペプチドを提示することができないヒト腫瘍細胞Ｔ２を用いて達成される。
【０２８８】
Ｔ２細胞（２．１０５細胞／ウェル）を、１００ｎｇ／μｌのヒトβ２ｍを添加したＡＩＭＶ培地中で１００μＭから０．１μＭまで減少する濃度のペプチドと共に３７℃で１６時間インキュベートする。次に、細胞を２回洗浄し、ＰＥに結合した抗ＨＬＡ−Ａ２抗体（クローンＢＢ７．２、ＢＤ  Ｐｈａｒｍａｇｅｎ）で標識する。
【０２８９】
分析は、ＦＡＣＳ（Ｇｕａｖａ  Ｅａｓｙ  Ｃｙｔｅ）によって達成される。
【０２９０】
各ペプチド濃度について、目的のペプチドに関連する標識の幾何平均をバックグラウンドノイズから差し引き、１００μＭの濃度で参照ペプチドＨＩＶ  ｐｏｌ  ５８９−５９７で得られたＨＬＡ−Ａ＊０２０２標識の幾何平均のパーセンテージとして報告する。次に、相対的親和性を次のように決定する。
【０２９１】
相対的親和性＝ＨＬＡ−Ａ＊０２０１の発現の２０％を誘導する各ペプチドの濃度／ＨＬＡ−Ａ＊０２０１の発現の２０％を誘導する参照ペプチドの濃度
【０２９２】
Ａ２．ペプチドの可溶化
各ペプチドは、アミノ酸組成を考慮することによって可溶化される。システイン、メチオニン、又はトリプトファンを含まないペプチドの場合、ＤＭＳＯの添加は、全体積の最大１０％まで可能である。他のペプチドを水又はＰＢＳ  ｐＨ７．４に再懸濁する。
【０２９３】
Ｂ．結果
結果を表８に示す。
【表８】
2019534884.tif 000015
【０２９４】
表８に示されるように（特に、前記したように計算した「相対的親和性」を参照）、抗原性ペプチドＭＡＧＥ  Ｃ１Ｂは、対応するヒトペプチドＭＡＧＥ  Ｃ１Ｈよりも高い親和性（低い値）を示す。更に、抗原性ペプチドＭＭＰ２−Ｂは、対応するヒトペプチドＭＭＰ２−Ｈよりも高い親和性（低い値）を示す。更に、抗原性ペプチドＰＭＥＬ−Ｂは、対応するヒトペプチドＰＭＥＬ−Ｈよりも高い親和性（低い値）を示す。更に、抗原性ペプチドＳＴＥＡＰ−Ｂ１及びＳＴＥＡＰ−Ｂ２は、対応するヒトペプチドＳＴＥＡＰ−Ｈよりも高い親和性（低い値）を示す。更に、抗原性ペプチドＭＡＧＥ  Ｃ１Ｂ，  ＭＭＰ２−Ｂ，  ＰＭＥＬ−Ｂ、ＳＴＥＡＰ−Ｂ１、及びＳＴＥＡＰ−Ｂ２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１の発現の２０％を誘導するのに必要な濃度が（それらのヒト参照ペプチドと比較して）より低い。
【０２９５】
同様の結果が第２の異なるＴ２細胞クローンからも得られた。
【０２９６】
実施例５：ＨＬＡ−Ａ＊０２０１アレルに対して優れた親和性を有する更なる候補抗原性ペプチドの同定
【０２９７】
この実施例は、配列番号２６の抗原性ペプチド（＜＜ＴＭＮＧＫＳＳＰＶ＞＞、本明細書ではＥＮＡＨ−Ｂとも称される）がＨＬＡ−Ａ＊０２０１アレルに対する高い親和性を有するのに対して、ＥＮＡＨ由来の対応する参照ヒトペプチド（＜＜ＴＭＮＧＳＫＳＰＶ＞＞、配列番号１１３、本明細書ではＥＮＡＨ−Ｈとも称される）は、低い親和性を有することを示す。
【０２９８】
Ａ．材料及び方法
Ａ１．Ｔ２細胞系統に対するペプチドの親和性の測定
実験プロトコルは、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１によって提示されたペプチドについて検証されたものと同様である（Ｔｏｕｒｄｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｔｏ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｌｏｗ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ＨＬＡ−Ａ２．１−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ：  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｒｙｐｔｉｃ  ｔｕｍｏｒ  ｅｐｉｔｏｐｅｓ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０００  Ｄｅｃ；  ３０（１２）：３４１１−２１）。ペプチドの親和性測定は、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１分子を発現するがＴＡＰ１／２陰性であり、内因性ペプチドを提示することができないヒト腫瘍細胞Ｔ２を用いて達成される。
【０２９９】
Ｔ２細胞（２．１０５細胞／ウェル）を、１００ｎｇ／μｌのヒトβ２ｍを添加したＡＩＭＶ培地中で１００μＭから０．１μＭまで減少する濃度のペプチドと共に３７℃で１６時間インキュベートする。次に、細胞を２回洗浄し、ＰＥに結合した抗ＨＬＡ−Ａ２抗体（クローンＢＢ７．２、ＢＤ  Ｐｈａｒｍａｇｅｎ）で標識する。
【０３００】
分析は、ＦＡＣＳ（Ｇｕａｖａ  Ｅａｓｙ  Ｃｙｔｅ）によって達成される。
【０３０１】
各ペプチド濃度について、目的のペプチドに関連する標識の幾何平均をバックグラウンドノイズから差し引き、１００μＭの濃度で参照ペプチドＨＩＶ  ｐｏｌ  ５８９−５９７で得られたＨＬＡ−Ａ＊０２０２標識の幾何平均のパーセンテージとして報告する。次に、相対的親和性を次のように決定する。
【０３０２】
相対的親和性＝ＨＬＡ−Ａ＊０２０１の発現の２０％を誘導する各ペプチドの濃度／ＨＬＡ−Ａ＊０２０１の発現の２０％を誘導する参照ペプチドの濃度
【０３０３】
Ａ２．ペプチドの可溶化
各ペプチドは、アミノ酸組成を考慮することによって可溶化される。システイン、メチオニン、又はトリプトファンを含まないペプチドの場合、ＤＭＳＯの添加は、全体積の最大１０％まで可能である。他のペプチドを水又はＰＢＳ  ｐＨ７．４に再懸濁する。
【０３０４】
Ｂ．結果
結果を表９に示す。
【表９】
2019534884.tif 000016
【０３０５】
表９に示されるように（特に、前記したように計算した「相対的親和性」を参照）、抗原性ペプチドＥＮＡＨ−Ｂは、対応するヒトペプチドＥＮＡＨ−Ｈよりも高い親和性（低い値）を示す。特に、ヒトペプチドＥＮＡＨ−Ｈは、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１に結合しないと思われる（ＮＤ：測定されず）。
【０３０６】
更に、抗原性ペプチドＥＮＡＨ−Ｂは、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１の発現の２０％を誘導するのに必要な濃度が（ヒト参照ペプチドＥＮＡＨ−Ｈと比較して）より低い。
【０３０７】
同様の結果が第２の異なるＴ２細胞クローンからも得られた。
【図１】
2019534884.tif 000017
【図２】
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【図３】
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【配列表】
2019534884000001.app
【国際調査報告】
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