(57)【要約】本明細書は、従来の全身送達と比較して、骨髄を選択的に標的とし、腫瘍への送達を最小限にし、骨髄における高い薬物濃度を維持するリポソームベースのナノ担体を記載する。このナノ担体の組成物はまた、リンパ節および他の細網内皮系の器官（例えば、脾臓、例えば、肝臓）を選択的に標的とするように調節されうる。また、本明細書は、記載された上記ナノ担体を使用して骨髄および／または他の細網内皮系の器官をイメージングおよびマッピングする方法を記載する。これらの方法は、ＰＥＴを介して解像度の高い、非侵襲的かつ定量的イメージングをもたらし、従来のイメージング／追跡方法よりも利点をもたらす。さらに、特定の実施形態では、上記担体を使用して、放射線防護体／フリーラジカルスカベンジャー薬物を安定化させ骨髄へ送達することによって、次の放射線曝露から骨髄を防護することにより、個体での放射線曝露の有害な影響を制限する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂質、および
有機ポリマー
を含み、
前記脂質に起因する負電荷を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体。
【請求項２】
前記脂質が、１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）（スクシニルＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、コレステロール、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、および１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）（スクシニル−ＤＰＰＥ）からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項１に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項３】
前記脂質が、同位体およびキレート剤で標識されている、請求項１または２に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項４】
前記同位体が、６４Ｃｕ、６６Ｇａ、８６Ｙ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１２４／１３１Ｉ、および１７７Ｌｕからなる群から選択されるメンバーを含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項５】
前記キレート剤が、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）および１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）からなる群から選択されるメンバーを含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項６】
前記キレート剤が、ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥおよびＮＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥからなる群から選択されるメンバーを含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項７】
前記有機ポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項８】
前記ナノ担体が、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−メトキシ（ポリエチレングリコール）（ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ）を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項９】
ＰＥＧの濃度が、約０．５ｗｔ％〜約１０ｗｔ％である、請求項７または８に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項１０】
少なくとも３モル％の脂質である、先行する請求項のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項１１】
会合した薬物をさらに含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項１２】
前記会合した薬物が、
フリーラジカルスカベンジャー、
放射線防護体、
増殖因子、
ビスホスホネート、
選択的エストロゲン受容体モジュレーター、
副甲状腺ホルモンモジュレーター、
生物学的製剤、および
化学療法薬
からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項１１に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項１３】
３０ｎｍ〜３００ｎｍの範囲の平均直径を有する、先行する請求項のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項１４】
以下の（ｉ）、（ｉｉ）、および（ｉｉｉ）：
（ｉ）３〜２０ｗｔ％のスクシニルＤＰＰＥ、
（ｉｉ）０．５〜２ｗｔ％のＰＥＧ、および
（ｉｉｉ）５〜９ｗｔ％のＰＥＧ
のうちの１つまたは複数を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項１５】
前記リポソームベースのナノ担体の前記表面の前記負電荷が、１５ｍＶ〜２５ｍＶの大きさを有する、先行する請求項のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項１６】
対象をイメージングするための方法であって、先行する請求項のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体を前記対象に投与するステップを含み、前記脂質が同位体およびキレート剤で標識されている方法。
【請求項１７】
前記リポソームベースのナノ担体を含む前記対象の少なくとも１つの組織のポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）および／またはポジトロン放出断層撮影−コンピューター断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）画像を得るステップ、およびそれを表示するステップをさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記対象の少なくとも１つの組織における前記リポソームベースのナノ担体の分布を定量的に測定するステップをさらに含む、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項１９】
細網内皮系の器官における前記リポソームベースのナノ担体の前記分布を定量的に測定するステップを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記器官が、肝臓、脾臓、および骨髄からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記組織のポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）またはポジトロン放出断層撮影−コンピューター断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）画像に基づいて、前記組織における送達された放射線標識薬物の濃度および／または総量を決定するステップを含む、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
１つまたは複数のリンパ節における前記リポソームベースのナノ担体の前記分布を定量的に測定するステップを含む、請求項１８から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記投与されたリポソームベースのナノ担体が、前記リポソームベースのナノ担体の投与の所定時間後の、骨髄における前記リポソームベースのナノ担体の濃度が、いずれかの腫瘍組織における前記リポソームベースのナノ担体の濃度より少なくとも３倍高くなるような、前記対象の骨髄への選択的標的化を示し、ここで、前記所定時間が、投与の少なくとも１時間後である、請求項１６から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
リアルタイムで、ＰＥＴ画像のシーケンスをキャプチャーするステップ、および表示するステップをさらに含む、請求項１６から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
疾患および／または状態に罹患しているか、または罹患しやすい前記対象に、請求項１から１５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体を投与するステップを含む、対象を処置する方法。
【請求項２６】
前記疾患および／または状態が、骨髄抑制（ＢＭＳ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、敗血症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、骨転移、および骨粗鬆症からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記疾患および／または状態が、放射線への曝露を含む、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記リポソームベースのナノ担体の投与後、化学療法および／または放射線療法を投与するステップをさらに含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記投与されたリポソームベースのナノ担体が、前記リポソームベースのナノ担体の投与の所定時間後の、骨髄における前記リポソームベースのナノ担体の濃度が、いずれかの腫瘍組織における前記リポソームベースのナノ担体の濃度より少なくとも３倍高くなるような、前記対象の骨髄への選択的標的化を示し、ここで、前記所定時間が、投与の少なくとも１時間後である、請求項２５から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
患者をモニタリングする方法であって、
疾患および／または状態に罹患しているか、または罹患しやすい患者に、請求項１から１５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体を投与するステップと、
前記患者の少なくとも１つの組織に送達された薬物の量を調査するステップとを含む方法。
【請求項３１】
対象の細網内皮系の器官をイメージングする方法であって、請求項１から１５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体からの放射線を検出するステップを含み、前記対象が前記リポソームベースのナノ担体を投与されていた方法。
【請求項３２】
前記放射線が、外部ＰＥＴイメージングシステムによって検出される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記器官が、活性骨髄、肝臓、および脾臓からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記検出された放射線に対応する画像を表示するステップであって、前記画像が活性骨髄を他の組織から視覚的に識別するステップと、任意選択で、薬物および／またはリポソームベースのナノ担体の濃度を定量するステップとをさらに含む、請求項３１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
対象の疾患および／または状態を処置する方法において使用するための、
脂質、および
有機ポリマー
を含み、
前記脂質に起因する負電荷を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体であって、
前記処置することが前記対象に前記組成物を送達することを含む、リポソームベースのナノ担体。
【請求項３６】
対象の疾患および／または状態をモニタリングする方法において使用するための、
脂質、および
有機ポリマー
を含み、
前記脂質に起因する負電荷を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体であって、
前記モニタリングすることが前記対象に前記組成物を送達することを含む、リポソームベースのナノ担体。
【請求項３７】
（ａ）対象の疾患および／もしくは状態を処置する方法または（ｂ）対象の疾患および／もしくは状態をモニタリングする方法であって、前記モニタリングすることが前記対象に組成物を送達することを含む方法において使用するための、
脂質、および
有機ポリマー
を含み、
前記脂質に起因する負電荷を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体であって、
前記モニタリングすることが前記対象に前記組成物を送達することを含む、リポソームベースのナノ担体。
【請求項３８】
療法において使用するための、
脂質、および
有機ポリマー
を含み、
前記脂質に起因する負電荷を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体。
【請求項３９】
疾患または状態のモニタリングにおいて使用するための、
脂質、および
有機ポリマー
を含み、
前記脂質に起因する負電荷を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体。
【請求項４０】
前記脂質が、１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）（スクシニルＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、コレステロール、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、および１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）（スクシニル−ＤＰＰＥ）からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項３５から３９のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項４１】
前記脂質が、同位体およびキレート剤で標識されている、請求項３５から４０のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項４２】
前記同位体が、６４Ｃｕ、６６Ｇａ、８６Ｙ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１２４／１３１Ｉ、および１７７Ｌｕからなる群から選択されるメンバーを含む、請求項３５から４１のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項４３】
前記キレート剤が、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）および１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項３５から４２のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項４４】
前記キレート剤が、ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥおよびＮＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥからなる群から選択されるメンバーを含む、請求項３５から４３のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項４５】
前記有機ポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む、請求項３５から４４のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項４６】
前記ナノ担体が、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−メトキシ（ポリエチレングリコール）（ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ）を含む、請求項３５から４５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項４７】
ＰＥＧの濃度が、約０．５ｗｔ％〜約１０ｗｔ％である、請求項４５または４６に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項４８】
少なくとも３モル％の脂質である、請求項３５から４７のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項４９】
会合した薬物をさらに含む、請求項３５から４８のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項５０】
前記会合した薬物が、
フリーラジカルスカベンジャー、
放射線防護体、
増殖因子、
ビスホスホネート、
選択的エストロゲン受容体モジュレーター、
副甲状腺ホルモンモジュレーター、
生物学的製剤、および
化学療法薬
からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項４９に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項５１】
３０ｎｍ〜３００ｎｍの範囲の平均直径を有する、請求項３５から５０のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項５２】
以下の（ｉ）、（ｉｉ）、および（ｉｉｉ）：
（ｉ）３〜２０ｗｔ％のスクシニルＤＰＰＥ、
（ｉｉ）０．５〜２ｗｔ％のＰＥＧ、および
（ｉｉｉ）５〜９ｗｔ％のＰＥＧ
のうちの１つまたは複数を含む、請求項３５から５１のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項５３】
前記リポソームベースのナノ担体の前記表面の前記負電荷が、１５ｍＶ〜２５ｍＶの大きさを有する、請求項３５から５２のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項５４】
前記処置および／またはモニタリングすることが、前記対象にリポソームベースのナノ担体を投与することをさらに含み、ここで、前記脂質が、同位体およびキレート剤で標識されている、請求項３５から５３のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項５５】
前記処置および／またはモニタリングすることが、前記リポソームベースのナノ担体を含む前記対象の少なくとも１つの組織のポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）および／またはポジトロン放出断層撮影−コンピューター断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）画像を得ること、および表示することをさらに含む、請求項５４に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項５６】
前記処置および／またはモニタリングすることが、前記対象の少なくとも１つの組織における前記リポソームベースのナノ担体の分布を定量的に測定することをさらに含む、請求項５４または５５に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項５７】
前記処置および／またはモニタリングすることが、細網内皮系の器官における前記リポソームベースのナノ担体の前記分布を定量的に測定することをさらに含む、請求項５６に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項５８】
前記器官が、肝臓、脾臓、および骨髄からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項５７に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項５９】
前記処置および／またはモニタリングすることが、前記組織のポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）またはポジトロン放出断層撮影−コンピューター断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）画像に基づいて、前記組織における送達された放射線標識薬物の濃度および／または総量を決定することをさらに含む、請求項５７または５８に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項６０】
前記処置および／またはモニタリングすることが、１つまたは複数のリンパ節における前記リポソームベースのナノ担体の前記分布を定量的に測定することをさらに含む、請求項５６から５９に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項６１】
前記投与されたリポソームベースのナノ担体が、前記リポソームベースのナノ担体の投与の所定時間後の、骨髄における前記リポソームベースのナノ担体の濃度が、いずれかの腫瘍組織における前記リポソームベースのナノ担体の濃度より少なくとも３倍高くなるような、前記対象の骨髄への選択的標的化を示し、ここで、前記所定時間が、投与の少なくとも１時間後である、請求項５４から６０のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項６２】
前記処置および／またはモニタリングすることが、リアルタイムで、ＰＥＴ画像のシーケンスをキャプチャーするステップ、および表示するステップをさらに含む、請求項５４から６１のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項６３】
前記疾患および／または状態が、骨髄抑制（ＢＭＳ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、敗血症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、骨転移、および骨粗鬆症からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項３５から６２のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項６４】
前記疾患および／または状態が、放射線への曝露を含む、請求項６３に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項６５】
前記処置および／またはモニタリングすることが、前記リポソームベースのナノ担体の投与後、化学療法および／または放射線療法を投与することをさらに含む、請求項６３に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項６６】
前記投与されたリポソームベースのナノ担体が、前記リポソームベースのナノ担体の投与の所定時間後の、骨髄における前記リポソームベースのナノ担体の濃度が、いずれかの腫瘍組織における前記リポソームベースのナノ担体の濃度より少なくとも３倍高くなるような、前記対象の骨髄への選択的標的化を示し、ここで、前記所定時間が、投与の少なくとも１時間後である、請求項６３から６５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項６７】
前記処置および／またはモニタリングすることが、
疾患および／または状態に罹患しているか、または罹患しやすい患者に請求項１から１５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体を投与することと、
前記患者の少なくとも１つの組織に送達された薬物の量を調査することとをさらに含む、請求項３５から６６のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項６８】
対象の細網内皮系の器官をイメージングおよび／またはモニタリングする方法における使用のために、前記イメージングおよび／またはモニタリングすることが、請求項１から１５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体からの放射線を検出することであって、前記対象が前記リポソームベースのナノ担体を投与されていたことを含む、請求項３５から６７のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項６９】
前記放射線が、外部ＰＥＴイメージングシステムによって検出される、請求項６８に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項７０】
前記器官が、活性骨髄、肝臓、および脾臓からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項６８または６９に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項７１】
前記イメージングおよび／またはモニタリングすることが、前記検出された放射線に対応する画像を表示することをさらに含み、前記画像が活性骨髄を他の組織から視覚的に識別し、任意選択で、薬物および／またはリポソームベースのナノ担体の濃度を定量する、請求項６８または６９に記載のリポソームベースのナノ担体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、２０１６年３月７日に出願された米国出願第６２／３０４，８１４号の利益を主張しており、その開示は、その全体が参考として本明細書によって援用される。
【０００２】
政府支援
本発明は、国立衛生研究所（ＮＩＨ）によって授与された認可番号ＣＡ０８６４３８の下、政府支援でなされた。政府は本発明において特定の権利を有する。
【０００３】
発明の分野
本発明は、一般的に、標的組織、例えば、骨髄、細網内皮系、および／またはリンパ節への画像誘導薬物送達のための放射標識リポソームに関する。特定の実施形態では、本発明は、組織、例えば、骨髄、リンパ節、および細網内皮系の他の器官をイメージングするためのＰＥＴにより追跡可能なリポソームナノ担体、ならびに健康なまたは腫瘍を有する動物（例えば、ヒト）の標的組織への薬物／薬剤の優先的送達に関する。
【背景技術】
【０００４】
背景
細網内皮系は、身体、例えば、脾臓、肝臓、肺、骨髄およびリンパ節に見られる細胞および組織のネットワークである。脾臓の細網内皮細胞は、崩壊した赤血球を処分する能力を有する。肝臓の血液腔に位置する細網内皮細胞はクッパー細胞と呼ばれる。これらの細胞は、全身の結合組織および骨髄の細胞と一緒に、崩壊した赤血球によって放出されるヘモグロビンを胆汁色素に変換することができる。
【０００５】
骨髄は、骨の内側に見られる柔らかい細胞成分であり、脂肪細胞が豊富で高度に血管化した環境で造血幹細胞および間質幹細胞を含む。骨髄成分は、造血、免疫バランス、骨完全性、エネルギー代謝などの維持を含むいくつかの重要な機能を担う。したがって、骨髄は、身体の生存および維持において決定的な役割を果たしている。
【０００６】
骨髄の動的かつ増殖性の性質により、骨髄は、化学療法剤、放射線、および他の薬物に感受性が高くなる。したがって、がん患者を薬物または放射線で処置することの通常の副作用は、骨髄枯渇または骨髄抑制（ＢＭＳ）である。ＢＭＳは、常在性の循環する造血幹細胞（ＨＳＣ）ならびに放射線感受性のリンパ球を含む分化した娘細胞の破壊から生じる。このことにより、潜在的に致命的な合併症、例えば、貧血、好中球減少症、および血小板減少症が引き起こされうる。ＢＭＳは、処置の遅延、追加入院の原因となり、潜在的に疾患を根絶することができる積極的介入を厳しく制限しうる。
【０００７】
放射線療法の設定において放射線防護剤を使用することの主要な課題は、腫瘍への放射線防護体の意図的でない送達である。このことにより、処置プロトコールの全体的な効率が低下し、腫瘍を抑止する効果が低減しうる。この目的のために、全身投与を介したヒト骨髄への選択的かつ十分な薬物送達が、特異的な骨髄成分を最適に刺激し、放射線療法の間に放射線防護をもたらすことが示されている。しかし、これらの方法は、骨髄に薬理学的に妥当な用量を送達するために、高濃度で薬物が投与されることを要する。さらに、最適な薬理効果の窓が短時間であることが多いため、投薬は度々繰り返されなければならない。この方法はまた、腫瘍組織を含む非標的組織への薬物送達の増加を導くことが多く、好ましくない結果を導きうる。
【０００８】
上述のように、手順の間に骨髄中の薬物の細胞保護濃度を確実に維持するためには、高濃度または繰り返し投与が必要とされるため、骨髄への標的化薬物送達は難しい課題である。特に、このことは、放射線療法および化学療法の間の骨髄抑制（ＢＭＳ）を低減するために使用されるａｍｉｆｏｓｔｉｎｅ（登録商標）などの血中半減期の短い分子に当てはまる（Mabro,  M.、S.  Faivre、およびE.  Raymond、A  risk-benefit  assessment  of  amifostine  in  cytoprotection.  Drug  Saf、１９９９年  ２１巻（５号）：３６７〜８７頁；Kouvaris,  J.R.、V.E.  Kouloulias、およびL.J.  Vlahos、Amifostine:  the  first  selective-target  and  broad-spectrum  radioprotector.  Oncologist、２００７年  １２巻（６号）：７３８〜４７頁）。しかし、生物学的半減期を改善することはそれ自体実現可能な解決策ではなく、その理由は、このことにより、腫瘍部位への送達の増加を潜在的に導く可能性があり、したがって、処置（化学または放射線療法）プロトコールの全体的な有効性を低減するためである（Puhalla,  S.、S.  Bhattacharya、およびN.E.  Davidson、Hematopoietic  growth  factors:  personalization  of  risks  and  benefits.  Mol  Oncol、２０１２年  ６巻（２号）：２３７〜４１頁）。
【０００９】
リポソームナノ担体は、新たなクラスの薬理学的薬剤を再発見する必要なく、腫瘍に対する試験された薬物／承認された薬物の薬物動態挙動および送達挙動を変更することが示されている。リポソームは、細胞膜を模倣して、５０ｎｍ〜１０００ｎｍのサイズの範囲で合成することができる脂質二重層から構成される閉じた人工的球状ベシクルである。薬物送達などの生物学的適用としては、最適なサイズは５０ｎｍ〜５００ｎｍの範囲であり、低分子有機物、ペプチド、ＲＮＡ、ＤＮＡ、診断薬および治療剤を含む様々な種類の分子のパッケージングおよび送達に用いることができる（Luk,  B.T.、R.H.  Fang、およびL.  Zhang、Lipid-  and  polymer-based  nanostructures  for  cancer  theranostics.  Theranostics、２０１２年  ２巻（１２号）：１１１７〜２６頁；Al-Jamal,  W.T.およびK.  Kostarelos、Liposomes:  from  a  clinically  established  drug  delivery  system  to  a  nanoparticle  platform  for  theranostic  nanomedicine.  Acc  Chem  Res、２０１１年  ４４巻（１０号）：１０９４〜１０４頁）。
【００１０】
リポソームナノ担体は、能動的または受動的な標的化のメカニズムに基づき、副作用を和らげ、送達を増強し、かつ非標的毒性を低減するために開発されている。リポソームナノ担体の例は、ＦＤＡに承認された薬物であるＤｏｘｉｌ（登録商標）（リポソームでカプセル化したトポイソメラーゼ阻害剤であるドキソルビシンの商標名）であり、ある特定の乳がんおよび小児がんの処置に使用され（Chang,  H.I.およびM.K.  Yeh、Clinical  development  of  liposome-based  drugs:  formulation,  characterization,  and  therapeutic  efficacy.  Int  J  Nanomedicine、２０１２年  ７巻：４９〜６０頁、Porter,  C.J.ら、The  polyoxyethylene/polyoxypropylene  block  co-polymer  poloxamer-407  selectively  redirects  intravenously  injected  microspheres  to  sinusoidal  endothelial  cells  of  rabbit  bone  marrow.  FEBS  letters、１９９２年  ３０５巻（１号）：６２〜６９頁）、長い循環時間および血管透過性滞留性亢進（ＥＰＲ）効果によって腫瘍を標的とする能力を有する（Dawidczyk,  C.M.ら、State-of-the-art  in  design  rules  for  drug  delivery  platforms:  lessons  learned  from  FDA-approved  nanomedicines.  J  Control  Release、２０１４年  １８７巻：１３３〜４４頁；Khawar,  I.A.、J.H.  Kim、およびH.J.  Kuh、Improving  drug  delivery  to  solid  tumors:  Priming  the  tumor  microenvironment.  J  Control  Release、２０１５年  ２０１Ｃ：７８〜８９頁）。
【００１１】
Ｓｏｕらは、リン脂質およびコレステロールベースのリポソームに関して、負に帯電した表面を有する骨髄標的リポソームを合成した。Ｓｏｕらは、ＤＰＰＣ、コレステロール、ＰＥＧ、およびＮ−（３−カルボキシ−１−エキソプロピル）−１，５−ジヘキサデシルエステル（dihexadecy  ester）（ＳＡ−脂質）を含有するリポソームが骨髄を標的とすることを報告した。ＳＡ−脂質は、活性成分であることを意図され、リポソーム中１０モル％のＳＡ−脂質を使用して骨髄を標的とする。さらに、Ｓｏｕらは、２５０ｎｍのサイズのリポソームを合成し、ＰＥＧ濃度をモジュレートして骨髄での取込みに対する効果を観察した。Ｓｏｕらは、負に帯電したリポソームが、０．６％と低いＰＥＧ含有量で骨髄へ非常によく取り込まれることを見出した。しかし、このシステムは、画像誘導薬物送達を欠き、腫瘍において最小限の蓄積量を示していない。
【００１２】
Ａｌｌｅｎらは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、種々の組成およびサイズを有するリポソームのマクロファージへの取込みを試験し、リポソームのサイズは取込みに逆相関し、すなわち、リポソームのサイズが低下すると、マクロファージによる取込みは増加することを見出した。しかし、これらの実験は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで実施され、リポソームが、腫瘍による取込みを最小限にしながら骨髄を標的とすることができるかは実証していない。
【００１３】
骨髄塊をイメージングする現行の方法として、Ｔｃ−硫黄コロイド（ＳＰＥＣＴ）、ＭＲＩ、ＣＴ、およびＰＥＴが挙げられる。しかし、これらの方法は、定量的でも解像度が高いわけでもなく、送達の追跡および定量を制限する場合がある。ＰＥＴの場合、ＦＬＴが骨髄イメージングツールに関して報告されているが、これは、増殖中の骨髄はイメージングするが静止状態の骨髄はイメージングしない。
【００１４】
さらに、放射線を投与するための現行の技術は、正常組織を避けながら、疾患組織への放射線送達の厳しい制御を必要とするが、正常組織の放射線照射量を腫瘍へ照射された放射線の２５％未満とすることは課題である。これらの低いレベルは、コリメータを使用して達成できる場合もあるが、かなりの放射線量が正常組織に依然として投与されている。
【００１５】
正常組織の放射線曝露によって引き起こされる損傷を制限するために、放射線防護薬を投与してもよい。しかし、現行の放射線防護体は、病気や血圧の問題を引き起こし、溶解するのが困難であり、骨髄の外で毒性であり、投与後、短い有効性窓（例えば、１時間またはそれより短い時間）しか有さない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Mabro,  M.、S.  Faivre、およびE.  Raymond、A  risk-benefit  assessment  of  amifostine  in  cytoprotection.  Drug  Saf、１９９９年  ２１巻（５号）：３６７〜８７頁
【非特許文献２】Kouvaris,  J.R.、V.E.  Kouloulias、およびL.J.  Vlahos、Amifostine:  the  first  selective-target  and  broad-spectrum  radioprotector.  Oncologist、２００７年  １２巻（６号）：７３８〜４７頁
【非特許文献３】Puhalla,  S.、S.  Bhattacharya、およびN.E.  Davidson、Hematopoietic  growth  factors:  personalization  of  risks  and  benefits.  Mol  Oncol、２０１２年  ６巻（２号）：２３７〜４１頁
【非特許文献４】Luk,  B.T.、R.H.  Fang、およびL.  Zhang、Lipid-  and  polymer-based  nanostructures  for  cancer  theranostics.  Theranostics、２０１２年  ２巻（１２号）：１１１７〜２６頁
【非特許文献５】Al-Jamal,  W.T.およびK.  Kostarelos、Liposomes:  from  a  clinically  established  drug  delivery  system  to  a  nanoparticle  platform  for  theranostic  nanomedicine.  Acc  Chem  Res、２０１１年  ４４巻（１０号）：１０９４〜１０４頁
【非特許文献６】Chang,  H.I.およびM.K.  Yeh、Clinical  development  of  liposome-based  drugs:  formulation,  characterization,  and  therapeutic  efficacy.  Int  J  Nanomedicine、２０１２年  ７巻：４９〜６０頁
【非特許文献７】Porter,  C.J.ら、The  polyoxyethylene/polyoxypropylene  block  co-polymer  poloxamer-407  selectively  redirects  intravenously  injected  microspheres  to  sinusoidal  endothelial  cells  of  rabbit  bone  marrow.  FEBS  letters、１９９２年  ３０５巻（１号）：６２〜６９頁
【非特許文献８】Dawidczyk,  C.M.ら、State-of-the-art  in  design  rules  for  drug  delivery  platforms:  lessons  learned  from  FDA-approved  nanomedicines.  J  Control  Release、２０１４年  １８７巻：１３３〜４４頁
【非特許文献９】Khawar,  I.A.、J.H.  Kim、およびH.J.  Kuh、Improving  drug  delivery  to  solid  tumors:  Priming  the  tumor  microenvironment.  J  Control  Release、２０１５年  ２０１Ｃ：７８〜８９頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１７】
したがって、放射線療法後のＢＭＳを予防するか、または回復を助けることのできる、放射線防護体（Ａｍｉｆｏｓｔｉｎｅ（登録商標）、例えば、Ｎ−アセチルシステイン、例えば、ＧＴ３）または増殖因子（例えば、ＥＰＯ、ＧＣＳＦなど）などの薬物を送達するために、腫瘍への送達を最小限にしながら、骨髄および細網内皮系を選択的に標的とすることのできる製剤に対する必要性が存在する。治療剤の腫瘍への取込みを最小限にしながら骨髄への標的化および選択的薬物送達を改善する、新たな製剤、方法、および戦略が必要とされる。さらに、骨髄および細網内皮系へ選択的に送達される製剤をマッピングし定量する必要性が存在する。さらに、骨髄および細網内皮系へ選択的に送達される製剤をマッピングし定量する必要性が存在する。さらに、（例えば、全身送達を介した）リンパ節への生理学的標的化物質、例えば、薬物、ワクチン、アジュバント、および抗体に対する必要性、ならびにウイルス病原体（例えば、ＨＩＶ）に対する抗原を発現するクローン細胞を選択的に排除する能力に対する必要性が存在する。
【００１８】
発明の要旨
本明細書は、従来の全身送達と比較して、骨髄を選択的に標的とし、腫瘍への送達を最小限にし、骨髄における高い薬物濃度を維持するリポソームベースのナノ担体について記載している。リポソームベースのナノ担体はまた、リンパ節および他の細網内皮系の器官（例えば、脾臓、例えば、肝臓）も選択的に標的とする。ある特定の実施形態では、負に帯電したナノ担体が性能上の利点をもたらすことが見出される。
【００１９】
本明細書は、記載されたリポソームベースのナノ担体を使用して骨髄および／または他の細網内皮系の器官をイメージングおよびマッピングする方法についても記載する。これらの方法は、ＰＥＴによる解像度の高い、非侵襲的かつ定量的イメージングをもたらし、従来のイメージング／追跡方法よりも利点をもたらす。さらに、ある特定の実施形態では、リポソーム系担体を使用して、放射線防護体／フリーラジカルスカベンジャー薬物を安定化させて骨髄へ送達し、それにより、次の放射線曝露から骨髄を防護し、それにより、個体での放射線曝露の有害な影響を制限する。このような放射線防護、例えば、がん治療の一部として送達される放射線、兵器に由来する放射線、原子力発電所または核廃棄場所における材料に由来する放射線、宇宙空間における自然放射線（例えば、宇宙飛行士に対して）などからの防護が有用である、広範なシナリオが存在する。
【００２０】
一態様では、本発明は、脂質、および有機ポリマー（例えば、会合した、例えば、脂質の部分に共有結合により結合するかまたは非共有結合により結合した、例えば、他の力、例えば、ファンデルワールス力によって会合した有機ポリマー）（例えば、有機ポリマーはポリエチレングリコールを含む、例えば、有機ポリマーはデキストランを含む）を含み、脂質に起因する負電荷（例えば、負のゼータ電位）を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体を対象とする。
【００２１】
ある特定の実施形態では、脂質は、１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）（スクシニルＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、コレステロール、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、および１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）（スクシニル−ＤＰＰＥ）からなる群から選択されるメンバーを含む。ある特定の実施形態では、脂質は、同位体およびキレート剤で標識されている（例えば、会合している、例えば、表面の部分に共有結合によりまたは非共有結合により結合している）。
【００２２】
ある特定の実施形態では、同位体は、６４Ｃｕ、６６／６８Ｇａ、８６Ｙ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、１２４／１３１Ｉ、および１７７Ｌｕからなる群から選択されるメンバーを含む。ある特定の実施形態では、キレート剤は、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）および１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）からなる群から選択されるメンバーを含む。ある特定の実施形態では、キレート剤は、ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥおよびＮＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥからなる群から選択されるメンバーを含む。
【００２３】
ある特定の実施形態では、有機ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
【００２４】
ある特定の実施形態では、ナノ担体は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−メトキシ（ポリエチレングリコール）（ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ）を含む。
【００２５】
ある特定の実施形態では、ＰＥＧの濃度は、約０．５ｗｔ％〜約１０ｗｔ％である。ある特定の実施形態では、ＰＥＧの濃度は、０．７５ｗｔ％〜約１．２５ｗｔ％（例えば、約１ｗｔ％）である。ある特定の実施形態では、ＰＥＧの濃度は、約６ｗｔ％〜約８ｗｔ％（例えば、約７ｗｔ％）である。ある特定の実施形態では、リポソームベースのナノ担体は、少なくとも３モル％の脂質（例えば、少なくとも５モル％の脂質、例えば、少なくとも１０モル％の脂質、例えば、少なくとも１５モル％の脂質）（例えば、脂質はスクシニルＤＰＰＥである）である。
【００２６】
ある特定の実施形態では、リポソームベースのナノ担体は、会合した薬物（例えば、会合した薬物は、リポソームの内側にカプセル化されているか、脂質層に組み込まれているか、またはリポソームの表面の脂質に共有結合により結合されている）を含む。ある特定の実施形態では、会合した薬物は、フリーラジカルスカベンジャー（例えば、ＧＴ３）、放射線防護体（例えば、Ａｍｉｆｏｓｔｉｎｅ、Ｎ−アセチルシステイン、ガンマ−トコトリエノール、Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）、増殖因子（例えば、エリスロポエチン）、顆粒球コロニー刺激因子、ＲＮＡｉ治療薬（例えば、ＧＴＩ−２０４０（リボヌクレオチドレダクターゼ）、ＳＰＣ２９９６（Ｂｃｌ−２）、ＬＹ２１８１３０８（サバイビン）、例えば、免疫抑制剤（例えば、Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ、ｍＴＯＲ阻害剤、コルチコステロイド、抗生剤、エピネフリン類似体、Ｂｉｍに対するＲＮＡｉおよびＰＵＭＡ））、ビスホスホネート（例えば、アレンドロネート、イバンドロネート、リセドロン酸、ゾレドロン酸（zoledonic  acid））、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（例えば、ラロキシフェン）、副甲状腺ホルモンモジュレーター（例えば、テリパラチド）、生物学的製剤（例えば、デノスマブ）、および化学療法薬（例えば、表４に列挙された化学療法薬のいずれか）からなる群から選択されるメンバーを含む。
【００２７】
ある特定の実施形態では、リポソームベースのナノ担体は、３０ｎｍ〜３００ｎｍの範囲の平均直径を有する。ある特定の実施形態では、リポソームベースのナノ担体は、５０ｎｍ〜２００ｎｍの範囲の平均直径を有する。ある特定の実施形態では、リポソームベースのナノ担体は、約８０ｎｍ〜１５０ｎｍの範囲の平均直径を有する。ある特定の実施形態では、リポソームベースのナノ担体は、約９０ｎｍである平均直径を有する。ある特定の実施形態では、リポソームベースのナノ担体は、約１４０ｎｍである平均直径を有する。
【００２８】
ある特定の実施形態では、リポソームベースのナノ担体は、以下の（ｉ）、（ｉｉ）、および（ｉｉｉ）：（ｉ）３〜２０ｗｔ％（例えば、約１０ｗｔ％）のスクシニルＤＰＰＥ、（ｉｉ）０．５〜２ｗｔ％（例えば、約１ｗｔ％）のＰＥＧ（例えば、骨髄を標的とするための）、および（ｉｉｉ）５〜９ｗｔ％（例えば、約７ｗｔ％、例えば、７±１．５ｗｔ％）のＰＥＧ（例えば、リンパ節を標的とするための）のうちの１つまたは複数をさらに含む。
【００２９】
ある特定の実施形態では、リポソームベースのナノ担体の表面の負電荷は、１５ｍＶ〜２５ｍＶの大きさを有する。
【００３０】
別の態様では、本発明は、対象（例えば、ヒト、例えば、患者）をイメージングするための方法であって、対象にリポソームベースのナノ担体を投与することを含み、ここで、脂質が同位体およびキレート剤（例えば、同位体はキレート剤（例えば、ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥ、ＮＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥ）から室温で２４時間解離していない）で標識されている（例えば、会合している、例えば、表面の部分に共有結合によりまたは非共有結合により結合している）方法を対象とする。
【００３１】
ある特定の実施形態では、本方法は、リポソームベースのナノ担体を含む対象の少なくとも１つの組織のポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）および／またはポジトロン放出断層撮影−コンピューター断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）画像を得、それを表示するステップをさらに含む。
【００３２】
ある特定の実施形態では、本方法は、対象の少なくとも１つの組織におけるリポソームベースのナノ担体の分布を（例えば、コンピューターデバイスのプロセッサーにより）定量的に測定するステップをさらに含む。
【００３３】
ある特定の実施形態では、本方法は、細網内皮系の器官におけるリポソームベースのナノ担体の分布を定量的に測定するステップを含む。
【００３４】
ある特定の実施形態では、器官は、肝臓、脾臓、および骨髄からなる群から選択されるメンバーを含む。
【００３５】
ある特定の実施形態では、本方法は、組織のポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）またはポジトロン放出断層撮影−コンピューター断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）画像に基づいて、組織における送達された放射線標識薬物の濃度および／または総量を決定するステップ（例えば、コンピューターデバイスのプロセッサーによる）を含む。
【００３６】
ある特定の実施形態では、本方法は、１つまたは複数のリンパ節におけるリポソームベースのナノ担体の分布を定量的に測定するステップ（例えば、組織における送達された放射線標識薬物の濃度および総量は、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）および／またはポジトロン放出断層撮影−コンピューター断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）画像から測定される）を含む。
【００３７】
ある特定の実施形態では、投与されたリポソームベースのナノ担体は、リポソームベースのナノ担体の投与の所定時間後の、骨髄におけるリポソームベースのナノ担体の濃度が、腫瘍組織のいずれかにおけるリポソームベースのナノ担体の濃度より少なくとも３倍（例えば、少なくとも５倍、例えば、少なくとも８倍）高くなるような、対象の骨髄への選択的標的化を示し、ここで、所定時間は、投与の少なくとも１時間後、少なくとも４時間後、少なくとも８時間後、少なくとも１６時間後、少なくとも２０時間後、少なくとも２４時間後である。
【００３８】
ある特定の実施形態では、本方法は、リアルタイムで、ＰＥＴ画像のシーケンスをキャプチャーするステップ、および表示するステップを含む。
【００３９】
別の態様では、本発明は、対象を処置する方法であって、疾患および／または状態に罹患しているか、または罹患しやすい対象に、リポソームベースのナノ担体を投与するステップを含む方法を対象とする。ある特定の実施形態では、疾患および／または状態は、骨髄抑制（ＢＭＳ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、敗血症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、骨転移、および骨粗鬆症からなる群から選択されるメンバーを含む。ある特定の実施形態では、疾患および／または状態は、放射線（例えば、がん治療の一部として送達される放射線、兵器に由来する放射線、原子力発電所もしくは核廃棄場所における材料に由来する放射線、または宇宙空間における自然放射線）への曝露を含む。
【００４０】
ある特定の実施形態では、本方法は、リポソームベースのナノ担体の投与後、化学療法および／または放射線療法を投与するステップをさらに含む。
【００４１】
ある特定の実施形態では、投与されたリポソームベースのナノ担体は、リポソームベースのナノ担体の投与の所定時間後の、骨髄におけるリポソームベースのナノ担体の濃度が、いずれかの腫瘍組織におけるリポソームベースのナノ担体の濃度より少なくとも３倍（例えば、少なくとも３倍、例えば、少なくとも５倍、例えば、少なくとも８倍）高くなるような、対象の骨髄への選択的標的化を示し、ここで、所定時間は、投与の少なくとも１時間後（例えば、少なくとも４時間後、少なくとも１６時間後、少なくとも２０時間後、少なくとも２４時間後）である。
【００４２】
別の態様では、本発明は、患者をモニタリングする方法であって、疾患および／または状態に罹患しているか、または罹患しやすい患者にリポソームベースのナノ担体を投与するステップと、患者の少なくとも１つの組織に送達された薬物の量を調査するステップとを含む方法を対象とする。
【００４３】
別の態様では、本発明は、対象（例えば、動物、例えば、ヒト）の細網内皮系の器官をイメージングする方法であって、リポソームベースのナノ担体からの放射線を検出するステップを含み、対象がリポソームベースのナノ担体を投与されていた方法を対象とする。
【００４４】
ある特定の実施形態では、放射線は、外部ＰＥＴイメージングシステムによって検出される。
【００４５】
ある特定の実施形態では、器官は、活性骨髄、肝臓、および脾臓からなる群から選択されるメンバーを含む。
【００４６】
ある特定の実施形態では、本方法は、検出された放射線に対応する画像を表示するステップであって、画像が活性骨髄を他の組織から視覚的に識別するステップと、任意選択で、薬物および／またはリポソームベースのナノ担体の濃度を定量するステップとを含む。
【００４７】
別の態様では、本発明は、対象の疾患および／または状態を処置する方法において使用するための、脂質、および有機ポリマー（例えば、会合した、例えば、脂質の部分に共有結合により結合するかまたは非共有結合により結合した、例えば、他の力、例えば、ファンデルワールス力によって会合した有機ポリマー）（例えば、有機ポリマーはポリエチレングリコールを含む、例えば、有機ポリマーはデキストランを含む）を含み、脂質に起因する負電荷（例えば、負のゼータ電位）を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体であって、処置することが対象に組成物を送達することを含む、リポソームベースのナノ担体を対象とする。
【００４８】
別の態様では、本発明は、対象の疾患および／または状態をモニタリングする方法において使用するための、脂質、および有機ポリマー（例えば、会合した、例えば、脂質の部分に共有結合により結合するかまたは非共有結合により結合した、例えば、他の力、例えば、ファンデルワールス力によって会合した有機ポリマー）（例えば、有機ポリマーはポリエチレングリコールを含む、例えば、有機ポリマーはデキストランを含む）を含み、脂質に起因する負電荷（例えば、負のゼータ電位）を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体であって、モニタリングすることが対象に組成物を送達することを含む、リポソームベースのナノ担体を対象とする。
【００４９】
別の態様では、本発明は、（ａ）対象の疾患および／もしくは状態を処置する方法または（ｂ）対象の疾患および／もしくは状態をモニタリングする方法において使用するための、脂質、および有機ポリマー（例えば、会合した、例えば、脂質の部分に共有結合により結合するかまたは非共有結合により結合した、例えば、他の力、例えば、ファンデルワールス力によって会合した有機ポリマー）（例えば、有機ポリマーはポリエチレングリコールを含む、例えば、有機ポリマーはデキストランを含む）を含み、脂質に起因する負電荷（例えば、負のゼータ電位）を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体であって、モニタリングすることが対象に組成物を送達することを含む、リポソームベースのナノ担体を対象とする。
【００５０】
別の態様では、本発明は、療法において使用するための、脂質、および有機ポリマー（例えば、会合した、例えば、脂質の部分に共有結合により結合するかまたは非共有結合により結合した、例えば、他の力、例えば、ファンデルワールス力によって会合した有機ポリマー）（例えば、有機ポリマーはポリエチレングリコールを含む、例えば、有機ポリマーはデキストランを含む）を含み、脂質に起因する負電荷（例えば、負のゼータ電位）を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体を対象とする。
【００５１】
別の態様では、本発明は、疾患または状態のモニタリングにおいて使用するための、脂質、および有機ポリマー（例えば、会合した、例えば、脂質の部分に共有結合により結合するかまたは非共有結合により結合した、例えば、他の力、例えば、ファンデルワールス力によって会合した有機ポリマー）（例えば、有機ポリマーはポリエチレングリコールを含む、例えば、有機ポリマーはデキストランを含む）を含み、脂質に起因する負電荷（例えば、負のゼータ電位）を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体を対象とする。
【００５２】
ある特定の実施形態では、脂質は、１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）（スクシニルＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、コレステロール、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、および１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）（スクシニル−ＤＰＰＥ）からなる群から選択されるメンバーを含む。ある特定の実施形態では、脂質は、同位体およびキレート剤で標識されている（例えば、会合している、例えば、表面の部分に共有結合によりまたは非共有結合により結合している）。
【００５３】
ある特定の実施形態では、同位体は、６４Ｃｕ、６６／６８Ｇａ、８６Ｙ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、１２４／１３１Ｉ、および１７７Ｌｕからなる群から選択されるメンバーを含む。ある特定の実施形態では、キレート剤は、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）および１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）からなる群から選択されるメンバーを含む。ある特定の実施形態では、キレート剤は、ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥおよびＮＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥからなる群から選択されるメンバーを含む。
【００５４】
ある特定の実施形態では、有機ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
【００５５】
ある特定の実施形態では、ナノ担体は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−メトキシ（ポリエチレングリコール）（ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ）を含む。
【００５６】
ある特定の実施形態では、ＰＥＧの濃度は、約０．５ｗｔ％〜約１０ｗｔ％である。ある特定の実施形態では、ＰＥＧの濃度は、０．７５ｗｔ％〜約１．２５ｗｔ％（例えば、約１ｗｔ％）である。ある特定の実施形態では、ＰＥＧの濃度は、約６ｗｔ％〜約８ｗｔ％（例えば、約７ｗｔ％）である。ある特定の実施形態では、リポソームベースのナノ担体は、少なくとも３モル％の脂質である。
【００５７】
ある特定の実施形態では、リポソームベースのナノ担体は、会合した薬物（例えば、会合した薬物は、リポソームの内側にカプセル化されているか、脂質層に組み込まれているか、またはリポソームの表面の脂質に共有結合により結合されている）を含む。ある特定の実施形態では、会合した薬物は、フリーラジカルスカベンジャー（例えば、ＧＴ３）、放射線防護体（例えば、Ａｍｉｆｏｓｔｉｎｅ、Ｎ−アセチルシステイン、ガンマ−トコトリエノール、Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）、増殖因子（例えば、エリスロポエチン）、顆粒球コロニー刺激因子、ＲＮＡｉ治療薬（例えば、ＧＴＩ−２０４０（リボヌクレオチドレダクターゼ）、ＳＰＣ２９９６（Ｂｃｌ−２）、ＬＹ２１８１３０８（サバイビン）、例えば、免疫抑制剤（例えば、Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ、ｍＴＯＲ阻害剤、コルチコステロイド、抗生剤、エピネフリン類似体、Ｂｉｍに対するＲＮＡｉおよびＰＵＭＡ））、ビスホスホネート（例えば、アレンドロネート、イバンドロネート、リセドロン酸、ゾレドロン酸）、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（例えば、ラロキシフェン）、副甲状腺ホルモンモジュレーター（例えば、テリパラチド）、生物学的製剤（例えば、デノスマブ）、および化学療法薬（例えば、表４に列挙された化学療法薬のいずれか）からなる群から選択されるメンバーを含む。
【００５８】
ある特定の実施形態では、リポソームベースのナノ担体は、３０ｎｍ〜３００ｎｍの範囲の平均直径を有する。ある特定の実施形態では、リポソームベースのナノ担体は、５０ｎｍ〜２００ｎｍの範囲の平均直径を有する。ある特定の実施形態では、リポソームベースのナノ担体は、約８０ｎｍ〜１５０ｎｍの範囲の平均直径を有する。ある特定の実施形態では、リポソームベースのナノ担体は、約９０ｎｍである平均直径を有する。ある特定の実施形態では、リポソームベースのナノ担体は、約１４０ｎｍである平均直径を有する。
【００５９】
ある特定の実施形態では、リポソームベースのナノ担体は、以下の（ｉ）、（ｉｉ）、および（ｉｉｉ）：（ｉ）３〜２０ｗｔ％（例えば、約１０ｗｔ％）のスクシニルＤＰＰＥ、（ｉｉ）０．５〜２ｗｔ％（例えば、約１ｗｔ％）のＰＥＧ（例えば、骨髄を標的とするための）、および（ｉｉｉ）５〜９ｗｔ％（例えば、約７ｗｔ％）のＰＥＧ（例えば、リンパ節を標的とするための）のうちの１つまたは複数を含む。
【００６０】
ある特定の実施形態では、リポソームベースのナノ担体の表面の負電荷は、１５ｍＶ〜２５ｍＶの大きさを有する。
【００６１】
ある特定の実施形態では、処置および／またはモニタリングすることは、対象にリポソームベースのナノ担体を投与することをさらに含み、ここで、脂質は、同位体およびキレート剤（例えば、同位体はキレート剤（例えば、ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥ、ＮＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥ）から室温で２４時間解離していない）で標識されている（例えば、会合している、例えば、表面の部分に共有結合によりまたは非共有結合により結合している）。ある特定の実施形態では、処置および／またはモニタリングすることは、リポソームベースのナノ担体を含む対象の少なくとも１つの組織のポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）および／またはポジトロン放出断層撮影−コンピューター断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）画像を得て、表示することをさらに含む。ある特定の実施形態では、処置および／またはモニタリングすることは、対象の少なくとも１つの組織におけるリポソームベースのナノ担体の分布を（例えば、コンピューターデバイスのプロセッサーにより）定量的に測定することをさらに含む。ある特定の実施形態では、処置および／またはモニタリングすることは、細網内皮系の器官におけるリポソームベースのナノ担体の分布を定量的に測定することをさらに含む。
【００６２】
ある特定の実施形態では、器官は、肝臓、脾臓、および骨髄からなる群から選択されるメンバーを含む。
【００６３】
ある特定の実施形態では、処置および／またはモニタリングすることは、組織のポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）またはポジトロン放出断層撮影−コンピューター断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）画像に基づいて、（例えば、コンピューターデバイスのプロセッサーにより）組織における送達された放射線標識薬物の濃度および／または総量を決定することをさらに含む。ある特定の実施形態では、処置および／またはモニタリングすることは、１つまたは複数のリンパ節におけるリポソームベースのナノ担体の分布を定量的に測定すること（例えば、組織における送達された放射線標識薬物の濃度および総量は、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）および／またはポジトロン放出断層撮影−コンピューター断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）画像から測定される）をさらに含む。
【００６４】
ある特定の実施形態では、投与されたリポソームベースのナノ担体は、リポソームベースのナノ担体の投与の所定時間後の、骨髄におけるリポソームベースのナノ担体の濃度が、腫瘍組織のいずれかにおけるリポソームベースのナノ担体の濃度より少なくとも３倍（例えば、少なくとも５倍、例えば、少なくとも８倍）高くなるような、対象の骨髄への選択的標的化を示し、ここで、所定時間は、投与の少なくとも１時間後、少なくとも４時間後、少なくとも８時間後、少なくとも１６時間後、少なくとも２０時間後、少なくとも２４時間後である。
【００６５】
ある特定の実施形態では、処置および／またはモニタリングすることは、リアルタイムで、ＰＥＴ画像のシーケンスをキャプチャーするステップ、および表示するステップをさらに含む。
【００６６】
ある特定の実施形態では、疾患および／または状態は、骨髄抑制（ＢＭＳ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、敗血症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、骨転移、および骨粗鬆症からなる群から選択されるメンバーを含む。ある特定の実施形態では、疾患および／または状態は、放射線（例えば、がん治療の一部として送達される放射線、兵器に由来する放射線、原子力発電所もしくは核廃棄場所における材料に由来する放射線、または宇宙空間における自然放射線）への曝露を含む。
【００６７】
ある特定の実施形態では、処置および／またはモニタリングすることは、リポソームベースのナノ担体の投与後、化学療法および／または放射線療法を投与することをさらに含む。
【００６８】
ある特定の実施形態では、投与されたリポソームベースのナノ担体は、リポソームベースのナノ担体の投与の所定時間後の、骨髄におけるリポソームベースのナノ担体の濃度が、腫瘍組織いずれかにおけるリポソームベースのナノ担体の濃度より少なくとも３倍（例えば、少なくとも３倍、例えば、少なくとも５倍、例えば、少なくとも８倍）高くなるような、対象の骨髄への選択的標的化を示し、ここで、所定時間は、投与の少なくとも１時間後である。
【００６９】
ある特定の実施形態では、処置および／またはモニタリングすることは、疾患および／または状態に罹患しているか、または罹患しやすい患者にリポソームベースのナノ担体を投与することと、患者の少なくとも１つの組織に送達された薬物の量を調査することとをさらに含む。
【００７０】
ある特定の実施形態では、イメージングおよび／またはモニタリングすることは、対象（例えば、動物、例えば、ヒト）の細網内皮系の器官をモニタリングすることを含み、イメージングおよび／またはモニタリングすることは、リポソームベースのナノ担体からの放射線を検出することであって、対象がリポソームベースのナノ担体を投与されていたことを含む。
【００７１】
ある特定の実施形態では、放射線は、外部ＰＥＴイメージングシステムによって検出される。
【００７２】
ある特定の実施形態では、器官は、活性骨髄、肝臓、および脾臓からなる群から選択されるメンバーを含む。
【００７３】
ある特定の実施形態では、イメージングおよび／またはモニタリングすることは、検出された放射線に対応する画像を表示することであって、画像が活性骨髄を他の組織から視覚的に識別することと、任意選択で、薬物および／またはリポソームベースのナノ担体の濃度を定量することとをさらに含む。
【００７４】
本発明の１つの態様（例えば、方法）に関与する実施形態の要素は、本発明の他の態様（例えば、組成物）に関与する実施形態に適用することができ、逆もまた同様である。
定義
【００７５】
本開示をより理解し易くするために、まず、ある特定の用語を以下に定義する。以下の用語および他の用語に対するさらなる定義は本明細書全体を通して示されている。
【００７６】
この出願では、「または（ｏｒ）」の使用は、他に記載されていなければ、「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」を意味する。この出願で使用される場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」およびこの用語の変形、例えば、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、他の添加物、成分、整数またはステップを除外することを意図しない。この出願で使用される場合、用語「約（ａｂｏｕｔ）」および「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は同等であるとして使用される。この出願で使用される任意の数値は、約／およそを伴う場合も伴わない場合も、関連技術における当業者によって認識される任意の正常変動を網羅することを意味する。ある特定の実施形態では、用語「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」または「約（ａｂｏｕｔ）」は、他に記載されていなければ、またはそうでなければ文脈から明らかでなければ、記載された参照値のいずれかの方向に（それより大きいかまたは小さい）２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％またはそれより小さい値の範囲を指す（このような数値が可能な値の１００％を超える場合を除く）。
【００７７】
「投与」：用語「投与」は、物質を対象へと導入することを指す。一般的に、例えば、非経口（例えば、静脈内）、経口、局所、皮下、腹腔内、動脈内、吸入、経腟、直腸、経鼻、脳脊髄液への導入、または身体コンパートメントへの点滴注入を含む任意の投与経路を利用してもよい。一部の実施形態では、投与は経口による。さらに、またはあるいは、一部の実施形態では、投与は非経口による。一部の実施形態では、投与は静脈内である。
【００７８】
「生体適合性」：用語「生体適合性」は、本明細書で使用する場合、ｉｎ  ｖｉｖｏで物質の有害な応答を誘引しない材料を記載することを意図する。ある特定の実施形態では、材料が細胞に対して毒性でない場合、その材料は「生体適合性」である。ある特定の実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞への材料の添加が２０％より小さいかもしくは２０％に等しい細胞死しか生じない、および／またはｉｎ  ｖｉｖｏでの材料の投与が炎症もしくは他のこのような有害作用を誘導しない場合に、材料は「生体適合性」である。ある特定の実施形態では、材料は生分解性である。
【００７９】
「生分解性」：本明細書で使用する場合、「生分解性」材料は、細胞に導入された場合、細胞で顕著な毒性作用を有さずに、細胞機構によって（例えば、酵素分解）または細胞が再利用もしくは処分できる成分への加水分解によって分解されるものである。ある特定の実施形態では、生分解性材料の分解によって生じる成分は、ｉｎ  ｖｉｖｏで炎症および／または他の有害作用を誘導しない。一部の実施形態では、生分解性材料は酵素により分解される。あるいは、またはさらに、一部の実施形態では、生分解性材料は加水分解によって分解される。一部の実施形態では、生分解性ポリマー材料は、その成分ポリマーへと分解する。一部の実施形態では、生分解性材料（例えば、生分解性ポリマー材料を含む）の分解は、エステル結合の加水分解を含む。一部の実施形態では、材料（例えば、生分解性ポリマー材料を含む）の分解は、ウレタン結合の切断を含む。
【００８０】
「生体分子」：本明細書で使用する場合、「生体分子」は、生体活性のある、診断用の、予防的な分子を指す。本発明で使用することができる生体分子として、これらに限定されないが、合成の、組換えの、または単離されたペプチドおよびタンパク質、例えば、抗体および抗原、受容体リガンド、酵素、ならびに接着ペプチド；ヌクレオチドおよびポリ核酸、例えば、ＤＮＡおよびアンチセンス核酸分子；活性化された糖および多糖；バクテリア；ウイルス；ならびに化学的薬剤、例えば、抗生剤、抗炎症薬、および抗真菌剤が挙げられる。
【００８１】
「担体」：本明細書で使用する場合、「担体」は、化合物がそれと共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。このような医薬担体は、無菌液体、例えば、水および石油、動物、植物または合成起源のものを含む油、例えば、落花生油、ダイズ油、鉱油などでありうる。好ましくは、水または生理食塩水溶液および水性デキストロースおよびグリセロール溶液が、特に注射溶液用の担体として用いられる。適切な医薬担体は、E.  W.  Martinによる「Remington's  Pharmaceutical  Sciences」に記載されている。
【００８２】
「フリーラジカルスカベンジャー」：本明細書で使用する場合、「フリーラジカルスカベンジャー」は、組織（例えば、ヒト組織）において放射線によって誘導されるイオン化を取り除く薬物を指す。
【００８３】
「放射標識」：本明細書で使用する場合、「放射標識」は、少なくとも１つの元素の放射活性同位体を含む部分を指す。例示的な適切な放射標識として、これらに限定されないが、本明細書に記載されているものが挙げられる。一部の実施形態では、放射標識は、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）において使用されるものである。一部の実施形態では、放射標識は、単一光子放射コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）において使用されるものである。一部の実施形態では、放射性同位体は、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６４Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、６７Ｃｕ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、１４９Ｐｍ、９０Ｙ、２１３Ｂｉ、１０３Ｐｄ、１０９Ｐｄ、１５９Ｇｄ、１４０Ｌａ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１６５Ｄｙ、１６６Ｄｙ、１０５Ｒｈ、１１１Ａｇ、８９Ｚｒ、２２５Ａｃ、および１９２Ｉｒを含む。
【００８４】
「対象」：本明細書で使用する場合、用語「対象」は、ヒトおよび哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ブタ、ネコ、イヌ、およびウマ）を含む。多くの実施形態では、対象は、哺乳動物、特に霊長類、とりわけヒトである。一部の実施形態では、対象は、ウシ、ヒツジ、ヤギ、雌ウシ、ブタなどの家畜；ニワトリ、アヒル、ガチョウ、シチメンチョウなどの家禽類；および飼育動物、特にペット、例えば、イヌおよびネコである。一部の実施形態では（例えば、特に研究の文脈で）、対象の哺乳動物は、例えば、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ハムスター）、ウサギ、霊長類、またはブタ、例えば、近交系ブタなどである。
【００８５】
「小分子」：本明細書で使用する場合、用語「小分子」は、非ポリマー分子、例えば、または５０００Ｄａ未満の種を指しうる。
【００８６】
「治療剤」：本明細書で使用する場合、句「治療剤」は、対象に投与した際に、治療効果を有し、ならびに／または所望の生物学的および／もしくは薬理学的効果を誘引する任意の薬剤を指す。
【００８７】
「治療指数」：本明細書で使用する場合、句「治療指数」は、領域における正常組織に対する標的組織における濃度を指す。例えば、「治療指数」は、周囲の軟組織（例えば、筋肉）における濃度と比較した骨髄における濃度を指す。
【００８８】
「処置」：本明細書で使用する場合、用語「処置」（「処置する」または「処置すること」も）は、特定の疾患、障害、および／または状態の１つまたは複数の症状、特徴、および／または原因を、部分的または完全に、緩和させ、軽快させ、和らげ、阻害し、その発症を遅延させ、その重症度を低減し、および／またはその発症率を低減する物質の任意の投与を指す。このような処置は、関連する疾患、障害、および／もしくは状態の徴候を示さない対象のものであってもよく、ならびに／または疾患、障害、および／もしくは状態の初期徴候のみを示す対象のものであってもよい。あるいは、またはさらに、このような処置は、関連する疾患、障害および／または状態の１つまたは複数の確立した徴候を示す対象のものであってもよい。一部の実施形態では、処置は、関連する疾患、障害、および／または状態に罹患していると診断された対象のものであってもよい。一部の実施形態では、処置は、関連する疾患、障害、および／または状態の発症のリスクの増加と統計的に相関する１つまたは複数の感受性因子を有することが知られている対象のものであってもよい。
【００８９】
図面は、例証を目的として本明細書で提示されるものであり、制限を目的とするものではない。
【００９０】
前述の内容ならびに本開示の他の対象、態様、特徴、および利点は、添付の図面についてなされる以下の記載を参照してより明らかとなり、より理解されることになる。
【図面の簡単な説明】
【００９１】
【図１Ａ】図１Ａは、例えば、６４Ｃｕまたは１７７ＬｕをキレートするＤＳＰＥ−Ｂｎ−ＤＯＴＡの合成スキームを示す。クロロホルム、メタノール、および水混合物を溶媒として使用し、トリエチレンアミンを塩基として使用した。
【００９２】
【図１Ｂ】図１Ｂは、反応生成物の質量スペクトルを示す。ＤＳＰＥ−Ｂｎ−ＤＯＴＡのピークは１２９８ｍ／ｚに現れる。
【００９３】
【図１Ｃ】図１Ｃは、動的光散乱により観察されたリポソームの代表的なサイズ分布を示す。例えば、１４０ｎｍおよび９０ｎｍの直径のリポソームを本明細書で記載されている実験に使用する。
【００９４】
【図２Ａ】図２Ａ〜２Ｃは、ＤＳＰＥ−Ｂｎ−ＤＯＴＡでドープしたリポソームにおける６４Ｃｕの組込みおよび経時的な安定性を示す。図２Ａは、６４ＣｕをｐＨ５．５の酢酸緩衝液中５０℃でインキュベートし、インスタント薄層クロマトグラフィー（ＩＴＬＣ）によって分析したことを示す。左のパネルは、リポソームへの６４Ｃｕの１００％の組込みを示す。図２Ｂは、リポソームのサイズ分布が、６４Ｃｕのキレート後に変化しないことを示す。図２Ｃは、６４Ｃｕ標識リポソームを５０％のＦＣＳ中２、４、８、および２４時間インキュベートしたことを示す。ＩＴＬＣを使用して、リポソームにおける６４Ｃｕの安定性を決定した。６４Ｃｕは、２４時間までリポソームから放出されなかった。
【００９５】
【図２Ｂ】図２Ａ〜２Ｃは、ＤＳＰＥ−Ｂｎ−ＤＯＴＡでドープしたリポソームにおける６４Ｃｕの組込みおよび経時的な安定性を示す。図２Ａは、６４ＣｕをｐＨ５．５の酢酸緩衝液中５０℃でインキュベートし、インスタント薄層クロマトグラフィー（ＩＴＬＣ）によって分析したことを示す。左のパネルは、リポソームへの６４Ｃｕの１００％の組込みを示す。図２Ｂは、リポソームのサイズ分布が、６４Ｃｕのキレート後に変化しないことを示す。図２Ｃは、６４Ｃｕ標識リポソームを５０％のＦＣＳ中２、４、８、および２４時間インキュベートしたことを示す。ＩＴＬＣを使用して、リポソームにおける６４Ｃｕの安定性を決定した。６４Ｃｕは、２４時間までリポソームから放出されなかった。
【００９６】
【図２Ｃ】図２Ａ〜２Ｃは、ＤＳＰＥ−Ｂｎ−ＤＯＴＡでドープしたリポソームにおける６４Ｃｕの組込みおよび経時的な安定性を示す。図２Ａは、６４ＣｕをｐＨ５．５の酢酸緩衝液中５０℃でインキュベートし、インスタント薄層クロマトグラフィー（ＩＴＬＣ）によって分析したことを示す。左のパネルは、リポソームへの６４Ｃｕの１００％の組込みを示す。図２Ｂは、リポソームのサイズ分布が、６４Ｃｕのキレート後に変化しないことを示す。図２Ｃは、６４Ｃｕ標識リポソームを５０％のＦＣＳ中２、４、８、および２４時間インキュベートしたことを示す。ＩＴＬＣを使用して、リポソームにおける６４Ｃｕの安定性を決定した。６４Ｃｕは、２４時間までリポソームから放出されなかった。
【００９７】
【図３Ａ】図３Ａ〜３Ｂは、６４Ｃｕで標識された骨髄標的リポソームの生体分布および標識リポソームの血液クリアランスを示す。図３Ａでは、左のパネルが、注射の４時間後および２４時間後の例示的な９０ｎｍの直径のリポソーム分布を示す。図３Ａでは、右のパネルが、注射の４時間後および２４時間後の例示的な１４０ｎｍの直径のリポソーム分布を示す。図３Ｂは、リポソームの血液クリアランスを、６４Ｃｕ標識リポソームを静脈内から注射した後マウスから血液を採取することによって測定したことを示す。９０ｎｍおよび１４０ｎｍのリポソームの両方が、血液から同様のクリアランスを示し、リポソームの血液クリアランスの半減期は、それぞれ、４．６±１．９時間および４．２±０．８時間である。
【００９８】
【図３Ｂ】図３Ａ〜３Ｂは、６４Ｃｕで標識された骨髄標的リポソームの生体分布および標識リポソームの血液クリアランスを示す。図３Ａでは、左のパネルが、注射の４時間後および２４時間後の例示的な９０ｎｍの直径のリポソーム分布を示す。図３Ａでは、右のパネルが、注射の４時間後および２４時間後の例示的な１４０ｎｍの直径のリポソーム分布を示す。図３Ｂは、リポソームの血液クリアランスを、６４Ｃｕ標識リポソームを静脈内から注射した後マウスから血液を採取することによって測定したことを示す。９０ｎｍおよび１４０ｎｍのリポソームの両方が、血液から同様のクリアランスを示し、リポソームの血液クリアランスの半減期は、それぞれ、４．６±１．９時間および４．２±０．８時間である。
【００９９】
【図４】図４Ａ〜４Ｃは、例示的な９０ｎｍの６４Ｃｕ標識リポソームベースのナノ担体を投与したマウスの代表的なＰＥＴ／ＣＴ画像を示す。図４Ａは、マウスのＣＴ、ＰＥＴ／ＣＴ融合およびＰＥＴ画像を示す代表的な全身の画像（スライス）を示す。図４Ｂは、同じマウスの脛骨のＣＴ、ＰＥＴ／ＣＴ融合およびＰＥＴ画像を示す拡大画像を示す。図４Ｃは、脛骨のＣＴ、ＰＥＴ／ＣＴ融合およびＰＥＴ画像を示すボリュームレンダリングした画像がリポソームベースのナノ担体の蓄積が骨髄に特異的であることを実証することを示す。
【０１００】
【図５】図５は、腫瘍を有するマウスの骨髄標的リポソームの生体分布を示す。骨髄標的リポソームを投与の２４時間後のＰＣ９を有する胸腺欠損ヌードマウスに注射する。骨髄では多量の骨髄での取込みがあるが、腫瘍での取込みは少ない。骨髄／腫瘍での取込み間の比は８．５である。
【０１０１】
【図６Ａ】図６Ａ〜６Ｂは、尾静脈注射後の６４Ｃｕ標識リポソームの時間活性曲線およびコンパートメントモデル解析を示す。図６Ａは、２．５、３．７、５、７．５、１０、２０、２４、および２８時間の静的ＰＥＴ画像と組み合わせた１時間の動的ＰＥＴスキャンの画像から、心臓、肝臓、脾臓、および仙骨付近から取った目的の領域（ＲＯＩ）から構築した正規化した時間活性曲線を示す。モーションアーチファクト、部分容積効果、減衰、散乱補正は、これらのパラメータを導出するために適用されなかった。図６Ｂは、血液の時間活性曲線が２−コンパートメントモデルでフィッティングされたことを示す。
【０１０２】
【図６Ｂ】図６Ａ〜６Ｂは、尾静脈注射後の６４Ｃｕ標識リポソームの時間活性曲線およびコンパートメントモデル解析を示す。図６Ａは、２．５、３．７、５、７．５、１０、２０、２４、および２８時間の静的ＰＥＴ画像と組み合わせた１時間の動的ＰＥＴスキャンの画像から、心臓、肝臓、脾臓、および仙骨付近から取った目的の領域（ＲＯＩ）から構築した正規化した時間活性曲線を示す。モーションアーチファクト、部分容積効果、減衰、散乱補正は、これらのパラメータを導出するために適用されなかった。図６Ｂは、血液の時間活性曲線が２−コンパートメントモデルでフィッティングされたことを示す。
【０１０３】
【図７】図７は、リンパ節標的リポソームベースのナノ担体の生体分布を示す。骨髄におけるＰＥＧ含有量が７％まで増加した場合、標的化効率は劇的に変化する。リンパ節での蓄積量は６．９％〜１４．９％ＩＤ／ｇまで増加し、骨髄での蓄積は１４．２％ＩＤ／ｇ〜２．４％ＩＤ／ｇまで減少する。
【０１０４】
【図８】図８Ａおよび８Ｂは、骨髄標的リポソーム（図８Ａ）およびリンパ節標的リポソーム（図８Ｂ）の蓄積についてのＰＥＴ画像を示す。
【０１０５】
【図９】図９は、オボアルブミン標識リンパ節標的リポソームベースのナノ担体の合成の概略図を示す。
【０１０６】
【図１０】図１０Ａ〜１０Ｃは、リンパ節を標的とするＤＩＢＯ−Ｏｖａとアジド標識リポソームベースのナノ担体のカップリングを示す。図１０Ａは、リンパ節標的リポソームの表面へのオボアルブミン標識のＳＤＳページを示す。マーカー、オボアルブミン、およびＤＩＢＯがコンジュゲートしたオボアルブミンをレーン１〜３にローディングした。アジド標識リポソームベースのナノ担体でＤＩＢＯ−ｏｖａｌを１時間、２時間、および３時間コンジュゲートした後、試料をレーン４〜６にローディングした。図１０Ｂおよび１０Ｃは、オボアルブミンで標識したリポソームベースのナノ担体が非標識リポソームベースのナノ担体より大きな直径（例えば、それぞれ、直径１４３ｎｍおよび１３１ｎｍ）を有することを示す。
【０１０７】
【図１１】図１１は、リポソームの骨髄での蓄積が注射の２４時間後に１６．６％ＩＤ／ｇであることを示す。骨髄での蓄積は、リポソームへのＧＴ３組込みのない骨髄標的リポソームと同様である。
【０１０８】
【図１２】図１２は、６４Ｃｕ標識ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥリポソームの安定性プロファイルを示す。標識リポソームの合成スキームおよびサイズ分布は、それぞれ、図１Ａ、１Ｃ、および２Ｂに示される。
【０１０９】
【図１３】図１３Ａおよび図１３Ｂは、リポソームの６４Ｃｕ標識スキーム（図１３Ａ）およびインスタント薄層クロマトグラフィー（ＩＴＬＣ）による特徴付け（図１３Ｂ）を示す。
【０１１０】
【図１４】図１４Ａおよび１４Ｂは、６４Ｃｕ標識した９０ｎｍおよび１４０ｎｍの骨髄標的（ＢＭＴ）リポソームのｅｘ  ｖｉｖｏ生体分布データを示す。注射の４時間後および２４時間後の９０ｎｍのリポソーム（図１４Ａ）および１４０ｎｍのリポソーム（図１４Ｂ）の胸腺欠損ヌードマウス（ｎ＝９）における生体分布データ。＊ｐ＜０．５、＃統計的に有意ではない。
【０１１１】
【図１５】図１５は、１４０μＣｉの６４Ｃｕで標識した９０ｎｍのリポソーム注射後のマウスの同じ平面（冠状断面）の脊椎および仙骨のＣＴ、ＰＥＴ／ＣＴ融合、およびＰＥＴ画像を示す拡大画像を示す。
【０１１２】
【図１６】図１６は、２．５、３．７、５、７．５、１０、２０、２４、および２８時間の静的ＰＥＴ画像と組み合わせた１時間の動的ＰＥＴスキャンの画像から、心臓、肝臓、脾臓、および仙骨付近から取った目的の領域（ＲＯＩ）から構築した正規化した時間活性曲線を示す。モーションアーチファクト、部分容積効果、減衰、散乱補正は、これらのパラメータを導出するために適用されなかった。
【０１１３】
【図１７】図１７は、骨のＢＭＥおよびＤｏｘｉｌ（登録商標）様リポソームのｅｘ  ｖｉｖｏ生体分布データを示す。静脈内投与の２４時間後のＰＣ９腫瘍を有する胸腺欠損ヌードマウス（ｎ＝５）における６４Ｃｕ標識した９０ｎｍのリポソームの生体分布データ。図１７に表されたデータは、ＢＭＴリポソームが、薬物を腫瘍に送達するために使用したリポソーム製剤ＤＯＸＩＬと比較して、骨髄を特異的に標的とすることを示す。ＤＯＸＩＬは、卵巣がんなどの処置に対して、ドキソルビシンを含有するホスファチジルコリンベースのリポソームである。
【０１１４】
【図１８】図１８は、ＢＭＴリポソームおよび９９ｍＴｃ−硫黄コロイドのｅｘ  ｖｉｖｏ生体分布データを示す。９０ｎｍのＢＭＴリポソームは、９９ｍＴｃ−硫黄コロイドより多い骨髄での蓄積を示す。＊ｐ＜０．０５
【０１１５】
【図１９】図１９Ａ〜１９Ｃは、ＢＭＴリポソーム安定性をキット製剤として試験したことを示す。サイズ、ゼータ電位、および６４Ｃｕ標識効率は９カ月間安定なままである。リポソームのサイズ（図１９Ａ）、ｐＨ７．４におけるゼータ電位（図１９Ｂ）、および標識効率（図１９Ｃ）を１、２、３、４、６、および９カ月間測定した。
【０１１６】
【図２０】図２０Ａ〜２０Ｃは、異なるＰＥＧ含有量を有する正に帯電したリポソームを示す。ＢＭＴリポソームはリンパ節も標的とすることが見出された。標的化がリポソーム製剤に特異的であるかどうかを決定するために、正に帯電したリポソーム（図２０Ａ、図２０Ｂ）を異なるＰＥＧ含有量で製剤化した。図２０Ａは、１，２−ジオレイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＴＡＰ）の化学構造を示す。図２０Ｂは、１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）の化学構造を示す。図２０Ｃは、正に帯電したリポソームに対するｐＨ７．４におけるゼータ電位がＤＯＰＥ：ＤＯＴＡＰの異なる比を有することを示す。ＤＯＰＥ：ＤＯＴＡＰ＝３：１は、ｐＨ７．４におけるそのゼータ電位が１４．８ｍＶであり、その絶対値がｐＨ７．４において−１８．８ｍＶのゼータ電位を有するＢＭＴリポソームと類似するように選択された。
【０１１７】
【図２１】図２１は、異なるＰＥＧ含有量を有するＢＭＴリポソームと正に帯電したリポソームの生体分布を示す。それぞれ、ＢＭＴリポソームは、１ｗｔ％および７ｗｔ％のＰＥＧ含有量で５２．９および９１．８％ＩＤ／ｇでリンパ節を標的とし、一方、カチオン性リポソームは、低濃度の７．８％ＩＤ／ｇおよび１１．６％ＩＤ／ｇでリンパ節に蓄積する。７ｗｔ％のＰＥＧを含むＢＭＴリポソーム製剤は最適なリンパ節標的化をもたらす。
【０１１８】
【図２２】図２２Ａおよび２２Ｂは、１％のＰＥＧを含む負電荷（図２２Ａ）および正電荷（図２２Ｂ）のリポソームのリンパ節標的化の６４ＣＵ  ＰＥＴ／ＣＴ画像を示す。
【０１１９】
【図２３】図２３Ａおよび２３Ｂは、放射線防護体ＧＴ３を含有するＢＭＴリポソームの特徴付けを示す。サイズ分布（１０５±３．５ｎｍ）はＢＭＴリポソームと同様であり、合成のために同じ孔径のメンブレンフィルターを使用した（図２３Ａ）。ｐＨ７．４におけるゼータ電位は、ＧＴ３を含まないＢＭＴリポソームより若干低い（図２３Ｂ）。
【０１２０】
【図２４】図２４Ａ〜２４Ｃは、ＧＴ３を含有するＢＭＴリポソームの６４Ｃｕおよび［１２４／１３１］Ｉ標識を示す。ＧＴ３を含有するＢＭＴリポソームを６４Ｃｕおよび１３１Ｉの両方で標識し、その薬物動態をモニタリングした。図２４Ａは、ＧＴ３が６４ＣｕのＢＭＴリポソームへの標識を妨げないことを示す。図２４Ｂは、穏やかな条件下で、１３１Ｉをヨウ化ナトリウムを使用してヨードゲンで標識したことを示す。図２４Ｃは、１３１Ｉ標識リポソームをＰＤ−１０サイズ排除カラムを使用して分離したことを示す。
【０１２１】
【図２５】図２５は、ＢＭＴリポソームからのＧＴ３放出を示す。６、８、および１０モル％のＧＴ３をＢＭＴリポソームへ組み込んだ。ＧＴ３への１３１Ｉ標識化後、ＧＴ３を含有するＢＭＴリポソームを５０ｋ  ＭＷＣＯ透析バッグ中でインキュベートし、放射活性を計数した。ＧＴ３の最大の保持は、２４時間の時点で、６％のＧＴ３を含有するリポソームで得られた（または２４時間にわたる５０％の放出）。この結果に基づき、６％のＧＴ３リポソームを本明細書で記載されているさらなる実験用に選択した。
【０１２２】
【図２６】図２６Ａおよび２６Ｂは、ＧＴ３を含有するリポソームの生体分布データを示す。生体分布データは、ＧＴ３を含有するリポソームがＧＴ３を含まないＢＭＴリポソームと同様に挙動することを示す。
【０１２３】
【図２７】図２７Ａおよび２７Ｂは、２４時間の時点でのＧＴ３を含有するリポソームの６４Ｃｕ  ＰＥＴ／ＣＴ画像を示す。図２７Ａは、ＣＴ、ＰＥＴ、およびＰＥＴ／ＣＴ画像の冠状断面画像を示す。図２７Ｂは、３Ｄ情報を含有する最大強度投影像（ＭＩＰ）を示す。
【０１２４】
【図２８】図２８Ａおよび２８Ｂは、電離放射後のＧＴ３リポソームで処置したマウスの血球数を示す。白血球（ＷＢＣ）（図２８Ａ）およびリンパ（図２８Ｂ）数を２Ｇｙ＋ＧＴ３を含有するリポソーム、２Ｇｙ、４Ｇｙ＋ＧＴ３を含有するリポソーム、および４Ｇｙで処理したマウスについて示す。
【０１２５】
【図２９】図２９は、１０モル％のＧＴ３リポソームと比較した相対的なＧＴ３量とＧＴ３含有量は、注射の２４時間後の６〜１０モル％のＧＴ３リポソームと同様であったことを示す。
【発明を実施するための形態】
【０１２６】
詳細な説明
組成物が特定の成分を有する（ｈａｖｉｎｇ）、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、もしくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）と記載されているか、または方法が特定のステップを有する（ｈａｖｉｎｇ）、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、もしくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）と記載されている本明細書全体を通して、さらに、記載された成分から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）、もしくはからなる（ｃｏｎｓｉｓｔ  ｏｆ）本発明の組成物が存在し、記載された処理ステップから本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）、もしくはからなる（ｃｏｎｓｉｓｔ  ｏｆ）本発明の方法が存在することが企図される。
【０１２７】
ステップの順序またはある特定の行為を実施するための順序は、本発明が実施可能である限り重要ではないことを理解されたい。さらに、２つまたはそれより多いステップまたは行為は同時に行われてもよい。
【０１２８】
ここで、例えば、背景技術の項で言及された任意の刊行物は、その刊行物が、ここで提示する請求項のいずれかに関して先行技術となることの自認ではない。背景技術の項は、明示の目的のために提示されているのであって、任意の請求項についての先行技術についての記載を意味するものではない。
【０１２９】
本明細書では、従来の全身送達と比較して、骨髄および／またはリンパ節を選択的に標的とし、腫瘍への送達を最小限にし、骨髄および／またはリンパ節における高い薬物濃度（例えば、Ａｍｉｆｏｓｔｉｎｅまたは他の放射線防護体）を維持するリポソームベースのナノ担体について記載している。解像度の高い、非侵襲性のイメージングについて、ＤＯＴＡ標識したまたは他のキレート剤で標識した（例えば、ＮＯＴＡ標識した）脂質をＰＥＴ同位体（例えば、６４Ｃｕ）で標識し、ｉｎ  ｖｉｖｏでリポソームの薬物動態をフォローし、様々な器官におけるリポソーム分布を定量的に決定する。リポソーム製剤は、スクシニルＰＥ、ＤＳＰＣ、コレステロール、およびｍＰＥＧ−ＤＳＰＥを含む組成物で調製し、直径が９０ｎｍと１４０ｎｍであり、リポソームへの安定した６４Ｃｕの組込みのためにＤＳＰＥ−Ｂｎ−ＤＯＴＡでドープした。ＰＥＴ画像および６４Ｃｕ標識したリポソームの生体分布により、骨髄における蓄積量が、９０ｎｍのリポソームで１５．１８％ＩＤ／ｇ、１４０ｎｍのリポソームで７．０１％ＩＤ／ｇの多さであったことが示された。リポソーム製剤は、高い効率で骨髄を標的とし、腫瘍の異種移植片における高い蓄積量を回避させた（例えば、腫瘍に比して８．５倍の骨髄への標的化送達）。
【０１３０】
本明細書で記載されているように、リポソームナノ担体を安定したＰＥＴ標識リポソーム送達系として開発および特徴付けし、腫瘍に送達される用量を低減しながら、細網内皮系（ＲＥＳ）、特に骨髄への薬物の送達を増強する。
【０１３１】
ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）画像誘導送達および定量のために６４Ｃｕ（例えば、または他の放射標識）で放射標識することができる骨髄標的リポソームを開発した。サイズ、表面電荷、およびポリ（エチレン）グリコール（ＰＥＧ）含有量は、標的化効率に影響を及ぼす。ある特定の実施形態では、生体分布および画像データは、１０％のスクシニルＤＰＰＥ、１％のＰＥＧ、および９０ｎｍの直径サイズのリポソームは、高効率で骨髄を標的としたことを示した。この蓄積量は、ＰＣ９腫瘍異種移植片で観察されたものより８．５倍多かった。動的ＰＥＴスキャンおよび誘導された薬物動態パラメータは、ｉｎ  ｖｉｖｏでリポソームの動的挙動を理解するためにも実証された。ある特定の実施形態では、本明細書で記載されているプラットホームを、放射線防護体を骨髄に送達するために使用することができる。他の実施形態では、画像誘導リポソーム送達系は、放射線療法に通常付随する有害な副作用を低減する補助となりうる。
【０１３２】
ある特定の実施形態では、骨髄の貪食活性、特に「固定」マクロファージは、造血骨髄の支持要素であり、定量的に、通常の条件下で密接に関連する。ある特定の実施形態では、本開示は、哺乳動物（例えば、ヒト、動物など）の活性骨髄の程度をイメージングすることができるリポソーム薬物を提供する。
【０１３３】
ある特定の実施形態では、骨髄標的リポソームの濃度は、標準の外部ＰＥＴ画像装置でイメージングする公知の物理学を使用して、定量的に測定することができる。各リポソームにおける薬物の既知濃度および注射されたリポソームの測定量に基づいて、放射標識薬物の濃度および総量を、器官への送達について測定することができる。
【０１３４】
定量的外部ＰＥＴイメージングを使用して、本開示は、放射標識リポソーム担体の画分が、例えば、ヒトの腫瘍のドレナージベッドにおいて、リンパ節を標的とすることも提供する。各リポソームにおける薬物の既知濃度と注射されたリポソームの測定量に基づき、放射標識薬物の濃度および総量を１つまたは複数のリンパ節への送達について測定することができる。リポソームに含有され、そして／またはリポソームで機能化される薬物または実体として、これらに限定されないが、以下の：化学療法薬、抗原、アジュバントなどを挙げることができる。ヒトにおいて、ＰＥＴイメージングを、標準装置（ＰＥＴ／ＣＴ）を用いて実施することができ、個々のリンパ節について、送達された薬物の量を計算することができる。確立された技術によって、部分容積効果に対する相関を適用することができる。
【０１３５】
骨髄への医薬品の選択的送達により、常在する骨髄の常在細胞を選択的に保護し、改変し、および／または破壊することができる。上述のように、幹細胞移植前に骨髄を根絶するための現行の手法は、全身に高い放射線量で放射線照射することに関する。放射線全身照射の副作用として、腸粘膜、唾液腺への損傷および他の合併症が挙げられる。本明細書で記載されているリポソームベースのナノ担体は、化学毒性または放射性毒性薬物を骨髄へ選択的に送達し、身体のこれらの選択エリアにおいてのみ免疫細胞の顕著な枯渇を導くことができる。
【０１３６】
薬剤（例えば、骨因子）の骨髄への選択的送達は、骨再生、骨粗鬆症の予防、骨折のより早い治癒、および／またはＨＩＶ／ＡＩＤＳの遺伝子療法も促進する（Viruses.  ２０１５年７月１７日；７巻（７号）：３９１０〜３６頁）。遺伝的素因または以前の化学物質／放射線への曝露に起因して赤血球産生が低減する骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）は、記載されているリポソームベースのナノ担体の選択的送達からも利益を得ることができる。
【０１３７】
ＥＰＯなどの増殖因子は、通常、化学または放射線療法を受けているがん患者に投与され、赤血球数を高める。しかし、ＥＰＯは、ＥｐｈＢ４受容体を活性化することによって腫瘍成長を促進することが示されている（Erythropoietin  Stimulates  Tumor  Growth  via  EphB4.  Cancer  Cell.  ２０１５年１１月９日；２８巻（５号）：６１０〜２２頁）。したがって、腫瘍組織を回避しながらの増殖因子の髄への選択的送達は、がん患者への増殖因子処置の副作用を低減することができる。
【０１３８】
本明細書で記載されているように、骨髄ならびに肝臓および脾臓における固定マクロファージへの生理学的標的化では、感受性細胞について放射線から対象を保護し、骨髄、脾臓および肝臓への転移を妨害する薬物の治療指数（ＴＩ）を増強し、骨髄刺激薬物、例えば顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）（ニューポジェン（neupogan）としても公知）、および赤血球新生細胞の送達を最適化し、ならびに同種骨髄移植（ＡＢＴ）のための準備として骨髄成分の放射線感受性を増強することが必要である。
【０１３９】
放射線防護体／フリーラジカルスカベンジャー（例えば、ＧＴ３）は、電離放射線からの骨髄の保護を助けることができる。しかし、非標的蓄積、低い水溶性、および制限されたバイオアベイラビリティ（または高用量での送達の困難さ）は、通常の投与に対するＧＴ３の移動の重大な妨害となる。ＧＴ３などの放射線防護体を送達する骨髄標的リポソームは、造血系の増殖および分化を捕捉および／または刺激するフリーラジカルの送達を増強することによって骨髄を放射線から防護する。さらに、放射線防護体は、幹細胞ニッチ（脈管構造、脂肪マトリックスを含む）への損傷を最小限にし、それにより放射線からの曝露からのより早い回復を助ける。本明細書で記載されている組成物を使用して骨髄を標的とすることにより、放射線防護体／フリーラジカルスカベンジャーの非標的投与と比較して、骨髄防護の窓を広げることができる。
【０１４０】
放射線療法を受けているほとんどの患者の主要な用量制限毒性は骨髄毒性である。放射線療法は治癒的でありうるが、流出する放射線場に起因する骨髄への意図しない曝露（例えば、泌尿器科または婦人科の悪性腫瘍の場合には骨盤、乳がんおよび肺がんの患者では肋骨）によって、用量および強度は制限される。放射線送達技術の広範な改良にもかかわらず、骨髄を含有する器官に病変が近接することにより、これらの流出する場は存在する。患者は、放射線が骨髄を破壊するという理由で過剰な放射線を受けることができず、したがって、ほとんどの放射線療法は治癒の目的を実施しない。放射線療法（または、一部の場合には、化学療法）の前に、本明細書で記載されている組成物を投与することにより、骨髄を防護することができ、したがって、適切な場合には、高い放射線量を完全な治癒を達成するために投与することができる。リポソームは、肝臓および脾臓（固定マクロファージ系の部分）を含むマクロファージ貪食系に多量の蓄積量も有する。したがって、この組成物は、内側および外側両方の供給源から、肝臓および脾臓を放射線から防護するために使用することができる。さらに、［１５３Ｓｍ］−ＥＤＴＭＰまたは８９Ｓｒ−ＳｒＣｌ２などの薬剤で緩和処置を受けている患者は、本発明者らの放射線防護体をロードしたＢＭＴリポソームから利益を受ける可能性を有する。
【実施例】
【０１４１】
リポソーム製剤および特徴付け
１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）をキレート剤（例えば、６４Ｃｕに対する）として使用し、ジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）を脂質二重層に固定するための脂質として使用した。図１Ａは、ｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＤＯＴＡから出発するＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥの合成を示す。さらに、反応に使用された溶媒は、クロロホルム、メタノール、および水であり、そのすべては、脂質フィルムを作製するために蒸発中に除去される。
【０１４２】
マクロファージはリポソームを取り込むことが公知であり、その取込みはリポソームの表面電荷およびＰＥＧ含有量に依存する。リポソームを有するマクロファージは骨髄に移動し蓄積する。スクシニルＤＰＰＥの含有量を調整して、リポソームの表面電荷をモジュレートした。本明細書で記載されているように、リポソーム表面の負電荷は、１０モル％の市販のスクシニルＤＰＰＥを添加することによって達成された。リポソームのサイズは、押出し膜の孔径によって制御され、動的光散乱を使用してリポソームの特性を測定した。リポソームのサイズを制御するために、１００ｎｍおよび３０ｎｍの孔の膜を使用し、１４０ｎｍおよび９０ｎｍのリポソームを生成した。多分散指数（ＰＤＩ）は、０．０３８と０．０９６の間であり、リポソームが均一かつ狭いサイズ分布で形成されたことを示す。
【０１４３】
ｉｎ  ｖｉｖｏ実験では、血清中の６４Ｃｕ標識リポソームの安定性を図２Ｃに示している。図２Ｃに示したように、６４Ｃｕは、室温で２４時間ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥから解離せず、リポソームの銅標識を器官におけるリポソーム蓄積に対する定量的測定として使用することができる。
リポソームの生体分布と血液クリアランス
【０１４４】
リポソームの骨髄標的化効率を、骨髄、肝臓、および脾臓を含む主要な器官の６４Ｃｕの生体分布特性を測定することによって決定した。いくつかの異なるリポソームを表１に示されるように、製剤化し、特徴付け、試験した。列挙したすべてのリポソームは同様のサイズおよび多分散指数（ＰＤＩ）を示し、１年を超えて、サイズが安定であった（データは示さない）。リポソーム番号４を、その負の表面電荷およびＰＥＧ含有量によって選択し、このリポソームの２つの異なるサイズ（９０ｎｍおよび１４０ｎｍ）を調査した（図１Ｃ）。直径９０ｎｍであったリポソームは、それらの小さいサイズによって選択した。１４０ｎｍであったリポソームは１５０ｎｍのカットオフに合致するよう選択した。
【０１４５】
骨髄への最も高い取込みは、９０ｎｍのサイズのリポソームを注射した２４時間後に生じた（１５．１８±３．６９％ＩＤ／ｇ）。脾臓は最も多い量の取込みを示した（３４．９８±３．１６％ＩＤ／ｇ）。骨髄へのリポソーム蓄積のＡＮＯＶＡは、平均値の間の差に関して統計的に有意であり（ｐ＜０．０１）、連続した複数の比較は、２４時間の時点での９０ｎｍのリポソームの骨髄への蓄積は、他の条件のすべてから統計的に有意であることを示した（ｐ＜０．０５）。
【０１４６】
表１は、骨髄標的化に使用した異なる組成の脂質のリポソームの特徴付けを示す。
【表１】
2019512484.tif 000002
【０１４７】
ｉｎ  ｖｉｖｏでのリポソーム分布は、機械的濾過、膜融合、および血清プロテインおよびそれらの細胞受容体との相互作用によって影響を受ける。具体的には、リポソームクリアランスは、リポソームが単核食細胞系（ＭＰＳ）によって排除される補体経路によってほとんどが媒介される。この補体媒介経路は、表面の負電荷、コレステロール含有量、アシル鎖の飽和および長さ、リポソームのサイズを含む複数の因子によって支配される。補体結合が循環において起こる場合、リポソームがＭＰＳ系に結合し、それなよって、特に肝臓のＫｕｐｆｆｅｒ細胞によって排除される。補体結合系を支配する因子をモジュレートすることによって、リポソームの肝臓での取込みを低下させることができ、取込みは別のＭＰＳ系によって生じうる。本明細書において、この結果は、リポソームの骨髄での取込みは、リポソームの直径が９０ｎｍであり、リポソームが負に帯電している場合に最も多いことを支持する。
【０１４８】
これらの結果に基づき、異なるサイズ分布、表面電荷、およびＰＥＧ濃度のリポソームが合成され、骨髄への薬物送達に理想的な候補を特定した。骨髄におけるリポソームの取込みに関するサイズの影響は、表２および図３において明らかに示すことができ、９０ｎｍのリポソームが１４０ｎｍのリポソームと比較してより良い取込みを示すことを示している。
【０１４９】
表２は、マウスにおいて６４Ｃｕで標識した骨髄標的リポソームの生体分布を示す。１４０μＣｉの６４Ｃｕ標識リポソームを尾静脈注射を介して注射した。１群当たり９匹のマウスを指定の時間に屠殺し、主要な器官を採取し、ガンマカウンターを使用して放射活性を測定した。各群当たり９匹のマウスを使用して、％ＩＤ／ｇを体重の測定と放射活性の時間補正測定によって計算した。
【表２−１】
2019512484.tif 000003
【表２−２】
2019512484.tif 000004
【０１５０】
リポソームは骨髄に蓄積し、腫瘍での蓄積は少ない
血管透過性滞留性亢進（ＥＰＲ）効果は、どのようにして、特定のサイズの分子（ナノ粒子またはマクロ粒子）が、健康な器官より腫瘍組織においてより蓄積しやすいのかを指す。理論に拘泥されることを望むものではないが、腫瘍内に新たに形成された血管構造は漏れやすく、３０ｎｍ〜２５０ｎｍの粒子は腫瘍内の血管から漏出し腫瘍内に蓄積しうる。抗腫瘍薬Ｄｏｘｉｌ（登録商標）（ドキソルビシンをカプセル化したリポソーム）は、高用量の薬物を腫瘍に送達するＥＰＲ効果の利益を得る。
【０１５１】
本明細書で記載されているように、放射線防護体が腫瘍での放射線処置の有効性を低減するのを妨げるために、放射線防護体は骨髄を選択的に標的化して、腫瘍組織への放射線防護体の送達を最小化した。リポソーム分布を骨髄と腫瘍の両方で測定した。腫瘍および骨髄におけるリポソームの相対的取込みを評価するために、６４Ｃｕ標識リポソームをＰＣ９（肺腫瘍）腫瘍異種移植片を有するヌードマウスへと注射した。図５に示すように、ＰＣ９の異種移植片における９０ｎｍのリポソーム取込みは、蓄積が１３．８７％ＩＤ／ｇである骨髄と比較して、投与の２４時間後に約１．６１％ＩＤ／ｇであった。データは、この系を使用することによって、腫瘍と比較して、骨髄における８．５倍高い取込みを達成することができることを実証する。
【０１５２】
したがって、本明細書で記載されているリポソーム製剤を使用して、腫瘍の放射線療法の転帰を損なうことなく、多量の放射線防護体を骨髄へと送達することができる。
【０１５３】
結果
ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥの合成
ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥを、ｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＤＯＴＡとＤＳＰＥをカップリングすることによって合成し、質量分析によって特定した（図１）。合成のために、ＤＳＰＥとｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＤＯＴＡの間のモル比を１：２に設定し、すべてのｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＤＯＴＡがＤＳＰＥとカップリングすることを確実にした。質量スペクトルに示されるように、［Ｍ＋Ｈ］ピークは１２９８ｍ／ｚで特定され、未反応のＤＳＰＥピークを７４７ｍ／ｚで特定した。反応生成物の主要成分がｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＤＯＴＡおよびＤＳＰＥであることを特定した後、さらなる精製ステップは実施されなかった。
【０１５４】
ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥおよびスクシニルＤＰＰＥを含有するリポソームの合成
ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥおよびスクシニルＤＰＰＥを含むリポソームを、異なるサイズの異なる濃度のスクシニルＤＰＰＥを用いて調製した（表１）。押出し法を使用して、２つの異なる孔径の膜を用いて、１４０ｎｍおよび９０ｎｍの直径を有するリポソームを生成した。例えば、１４０〜１５０ｎｍの直径のリポソームは、押出しに１００ｎｍの孔径の膜を使用して生成し、９０ｎｍのリポソームは、押出しに３０ｎｍの孔径の膜を使用して生成した。両方のリポソームは、主として単分散であり、多分散指数は０．０３８〜０．０９６であった。ｐＨ７．４におけるゼータ電位は、リポソームの組成によって−６．２４ｍＶ〜−３２．３７ｍＶまで変化した（表１）。スクシニルＤＰＰＥ含有量が多く、ＰＥＧ  ＤＳＰＥ含有量が少ないとゼータ電位は大きくなり、リポソーム安定性も高くなった。リポソーム安定性はリポソームのサイズを測定することによって試験した。少なくとも１８カ月間、サイズ分布に変化は観察されなかった。
【０１５５】
６４Ｃｕおよび標識化ならびに遊離６４Ｃｕの除去
ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥリポソームへの６４Ｃｕ標識化を、振盪しながら、ｐＨ５．５で、５０℃で１時間実施した。ＩＴＬＣデータは、６４Ｃｕの標識効率がほぼ１００％であることを示す。図２Ｂで示されるように、リポソームのサイズ分布は６４Ｃｕ組込み後に変化しない。ＰＢＳを含むＰＤ−１０カラムまたはＰＤ  ＭｉｎｉＴｒａｐ  Ｇ−２５カラムを使用して、結合していない６４Ｃｕを除去し、反応溶液のｐＨをｐＨ５．５〜ｐＨ７．４に調整した。
【０１５６】
６４Ｃｕ標識リポソームの血清安定性および血液クリアランス
５０％の血清中で、３７℃で２４時間、放射標識リポソームをインキュベートすることによって、６４Ｃｕ−ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥリポソームの血清安定性を測定した。リポソームからの銅の浸出および／または［６４Ｃｕ］−ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥの損失をＩＴＬＣを使用して測定し、結果を図３Ａ〜３Ｂにまとめる。図３Ａ〜３Ｂに示すように、６４Ｃｕ標識リポソームは、２４時間まで、リポソームから放射活性をほとんど失うことなく、血清中で非常に安定である。リポソームの血液クリアランスは、６４Ｃｕ標識リポソームを尾静脈を介して注射した後、所定時点でマウスの尾から血液を抽出することによって測定した。血液クリアランスの半減期を１フェーズ減衰を使用して計算し、９０ｎｍのものは４．６±１．９時間であり１４０ｎｍのものは４．２±０．８時間であった。
【０１５７】
６４Ｃｕ標識リポソームの生体分布
それぞれ、４時間および２４時間の時点での９０ｎｍおよび１４０ｎｍのサイズの６４Ｃｕ標識リポソームのｅｘ  ｖｉｖｏ生体分布データを表２に表した。このデータは、両方のリポソームが骨髄に蓄積することを示す。初期の時点では、両方のリポソームは、骨髄で等しい効率（４時間の時点で約６．５％ＩＤ／ｇ）で蓄積するが、投与の２４時間後では、１４０ｎｍのリポソームと比較して、９０ｎｍのリポソームがより高い濃度で骨髄に優先的に蓄積する。対応する％ＩＤ／ｇ値は、９０および１４０ｎｍのリポソームについて、それぞれ、１５．１８±３．６９および７．０１±０．９２である。骨髄に加えて、他のＲＥＳ器官（例えば、肝臓および脾臓）はリポソームの取込みが多いことを示す。しかし、理論による拘泥を有することなく、肝臓および脾臓における時間に依存する取込みは、リポソームのサイズに依存するようである。９０ｎｍのリポソームでは、４時間および２４時間の時点で、肝臓での取込みは同様のままであり、％ＩＤ／ｇ値は、それぞれ、１３．８７±２．８１および１３．７８±３．１６である。脾臓での取込みは骨髄での取込みと同様のパターンを反映し、より後の時点で蓄積が増加し、４時間および２４時間の時点での値は、それぞれ、１４．０４±１．９０および３４．９８±１１．８５である。１４０ｎｍのリポソームについて脾臓で観察された対応する値は、４時間および２４時間の時点で、それぞれ、１４．６１±３．８８および１５．３±４．９５であり、脾臓における初期の標的化と滞留を示す。対照的に、肝臓における１４０ｎｍのリポソームの取込みは、２４時間の時点で有意な増加を示し、％ＩＤ／ｇ値は、４時間および２４時間の時点で、それぞれ、１０．１２±１．６２および２０．１１±５．１６であることを示した。９０と１４０ｎｍの両方のリポソームについての血液の取込みおよびクリアランス値は本質的に同じであることに留意されたい。本明細書におけるデータに基づいて、９０ｎｍのリポソームは骨髄標的化の適用により適している。
【０１５８】
骨髄標的リポソームを注射した動物の静的および動的ＭｉｃｒｏＰＥＴ画像ならびに６４Ｃｕ標識骨髄標的リポソームの薬物動態分析
投与の２４時間後の６４Ｃｕ−ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥリポソームの代表的な生体分布を図４Ａ〜４Ｃにおいて示す。図４Ａは、骨髄標的リポソームの最大強度投影像を示す。生体分布データにおいて示されるように、最も強力なシグナルは、肝臓および脾臓においてであった。骨髄の質量が非常に小さい（４〜６週齢のマウスの大腿骨から抽出した典型的な骨髄は約３〜５ｍｇである）という事実により、骨髄で比較的取込みが多いにもかかわらず（約１５．８％ＩＤ／ｇ）、シグナルは比較的弱いようである。骨髄におけるシグナルが弱いのは、隣接する領域への活性の流出を引き起こし、それにより、骨髄において観察される強度も低減する小さな骨髄容積からの部分容積効果にも起因する。これらの制限にもかかわらず、仙骨、脊椎、大腿骨および脛骨頭は、画像からはっきりと線引きされうる。
【０１５９】
動的ＭｉｃｒｏＰＥＴイメージングを使用する、９０ｎｍの６４Ｃｕ標識骨髄標的リポソームの薬物動態分析
１時間に設定した動的ｍｉｃｒｏＰＥＴイメージングを使用して、９０ｎｍの骨髄標的リポソームの初期の生体分布プロファイルを評価した。尾静脈注射後、リポソームは、血管コンパートメントに急速に分配された。図６に示すように、血液活性は、リポソームの注入が終わると、２００秒で最大取込みに達する。この事象に続いて、次いで、血中の放射活性は低下する。リポソームの肝臓での取込みは、概ね３〜４時間で最大に達し、肝臓における活性の蓄積は２８時間まで同様のままである。リポソームの脾臓での取込みは、尾静脈注射の１時間後まで急速であり、２８時間までその活性はゆっくりと増加した。脾臓での取込みは、注入の間、肝臓と異なり、早い取込みを有さなかったが、比較的類似している速度でその活性を増加させた。肝臓と脾臓の両方でのリポソームの取込みは、肝臓のＫｕｐｆｆｅｒ細胞および脾臓のマクロファージによる血液循環からのリポソームの急速な初期クリアランスを反映した。
【０１６０】
典型的には、頻度の高い動脈血のサンプリングを使用して、放射活性材料の血液濃度および循環を測定するが、動脈血のサンプリングは、小動物には侵襲的で困難なプロセスである。クリアランスが早く、注射後の早い時点で頻度の高いサンプリングを必要とする場合にも困難である。したがって、ＰＥＴイメージングから心臓などの大きな血管構造についてＲＯＩによって導出した時間活性曲線を使用して、血中の放射活性濃度を推定した。尾静脈注射後の６４Ｃｕ標識骨髄標的リポソームの薬物動態パラメータを２コンパートメントモデルを使用して導出した。分布容積（Ｖｄ）および排出速度定数（ｋ）は、それぞれ、３．５１ｍＬおよび０．０６３ｈ−１であり、他の薬物動態パラメータは表３にまとめる。
【０１６１】
表３は、マウスにおける６４Ｃｕ標識骨髄標的リポソームの２コンパートメントモデルから導出した薬物動態パラメータを示す。ｋ１２＝コンパートメント１からコンパートメント２への分布速度定数、ｋ２１＝コンパートメント２からコンパートメント１への分布速度定数、Ｖｄ＝分布容積、ｋ＝排出速度定数、ＣＬ＝排出クリアランス、Ｑ＝コンパートメント間クリアランス、ＡＵＣ∞＝曲線下面積。
【表３】
2019512484.tif 000005
【０１６２】
ＲＮＡｉベースの治療薬の送達
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）治療薬の器官を標的とする送達は、血清ヌクレアーゼによる分解、免疫系による認識およびクリアランス、非特異的相互作用、ならびに早い血液クリアランスを含む多くの因子により、主要な課題である。これは、ＲＮＡｉが薬理学的効果を達成するために細胞内に送達されなければならないという事実によってさらに複雑となる。
【０１６３】
本明細書で記載されているリポソームベースのナノ担体を使用して、ＲＮＡｉ治療薬をリンパ節および脾臓などの免疫系の器官へ選択的に送達することができる。ある特定の実施形態では、ＲＮＡｉをリポソーム製剤の内側にパッケージングすることができる。ある特定の実施形態では、ＲＮＡｉを脂質二重層の外側にパッケージングすることができる。ＲＮＡｉ治療薬をリポソームに組み込むことにより、細胞／血清タンパク質によるＲＮＡｉの分解を妨げることができる。分解を妨げることにより、治療薬のバイオアベイラビリティは増大する。
【０１６４】
リポソーム製剤を用いて腫瘍または器官を標的とする。しかし、ＲＮＡｉ治療薬の骨髄またはリンパ節への選択的送達の例は存在していない。ある特定の実施形態では、ＲＮＡｉをリンパ節および／または骨髄に高効率で送達するために、本明細書で記載されているリポソームベースのナノ担体を使用する。使用することができるＲＮＡｉ薬の例として、これらに限定されないが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を処置するための、ＧＴＩ−２０４０（リボヌクレオチドレダクターゼ）、ＳＰＣ２９９６（Ｂｃｌ−２）（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ００２８５１０３）、ＬＹ２１８１３０８（サバイビン）、および類似の薬物が挙げられる。
【０１６５】
薬物の骨髄およびリンパ節への送達は、免疫系が高度に活性化され、抗宿主応答に関与する敗血症などの状態において重要である。別の有効な適用として、移植免疫系（ドナーに由来する）が宿主の自己免疫疾患を引き起こす場合のある移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）が挙げられる。これらの条件下で、薬物を充填したリポソームベースのナノ担体を、Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ、ｍＴＯＲ阻害剤、コルチコステロイド、抗生剤、エピネフリン類似体、Ｂｉｍに対するＲＮＡｉおよびＰＵＭＡ（Shock.  ２００９年８月、３２巻（２号）：１３１〜１３９頁）などの免疫抑制剤の送達のために、脾臓、肝臓、骨髄および／またはリンパ節に使用することができる。
【０１６６】
さらに、リポソームベースのナノ担体は、骨転移または骨粗鬆症の発生を予防するために、薬物を送達することができる。骨粗鬆症を処置するために使用することができる治療薬として、これらに限定されないが、ビスホスホネート（例えば、アレンドロネート、イバンドロネート、リセドロン酸、ゾレドロン酸）、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（例えば、ラロキシフェン）、副甲状腺ホルモン（例えば、テリパラチド）、および生物学的製剤（例えば、デノスマブ）が挙げられる。
【０１６７】
表４は、骨粗鬆症を処置するために使用することができる例示的な小分子薬物の化学構造およびＩＵＰＡＣ名を示す。
【表４】
2019512484.tif 000006
【０１６８】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの送達のための薬物を充填したリポソーム
１０％（モル／モル）のＧＴ３を脂質混合物に添加し、乾燥して脂質膜を形成し、本明細書で記載されているリポソームベースのナノ担体に充填した。リポソームの骨髄での蓄積は注射の２４時間後に１６．６％ＩＤ／ｇであり、リポソームにＧＴ３を組み込んでいない骨髄標的リポソームと同様である。生体分布データにより、２．７％ＩＤ／ｇの濃度が明らかとなった（１３１Ｉによる）（または、骨髄において約５４μＭ）。６４Ｃｕを使用する場合、生体分布データにより、３２０μＭの濃度で骨髄が標的化されたことが明らかとなった。（図１１）。
【０１６９】
ある特定の実施形態では、ＮＡＣを本明細書で記載されているリポソームベースのナノ担体に充填した。データは、ＮＡＣがリポソームベースのナノ担体から急速に放出されたことを明らかにした。早い放出動態を考慮せず、カプセル化効率と６４Ｃｕ生体分布データにのみ基づいたところ、骨髄におけるＮＡＣの濃度は４５０μＭまたはそれより高い濃度に達することができる。
【０１７０】
リンパ節の標的化
免疫応答を最大限にするために、抗原が免疫細胞に提示されなければならない。伝統的な標的化では、アジュバントまたはアジュバントでコーティングした粒子／担体と組み合わせた抗原を皮下（ｓ．ｃ．）注射を使用して送達することができる。このような手法の制限として、注射部位の近くに存在するリンパ節（免疫細胞、抗原提示細胞およびこれらのＢ細胞パートナーを含有する）だけが標的とされることが挙げられる。抗原提示およびその次の免疫応答の可能性を最大限にするために、複数部位の標的化を達成する必要がある。
【０１７１】
ＰＥＴイメージングを使用すると、これらのリンパ節標的リポソームが、腫瘍塊の存在を示すこれらの部位における蓄積の欠如を示すことによって、腫瘍が浸潤／転移したリンパ節を特定するのに有用となりうる。
【０１７２】
本明細書で記載されているリポソームベースのナノ担体は、ｉ．ｖ．投与後に主要なリンパ節を標的とすることができる。リポソームの表面への抗原のローディング／コンジュゲーションは、オボアルブミンをコーティングしたリポソームを得るためのクリック化学の手法を使用して達成された。図９は、オボアルブミン標識リンパ節標的リポソームの合成の概略図を示す。リポソームの表面を修飾して、アジド（ＰＥＧ−アジド）を含有させ、抗原（オボアルブミン）をＤＩＢＯ−ＮＨＳエステル（ジベンゾシクロオクチン−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル）で修飾した。リポソームをＤＩＢＯ−オボアルブミンと共に、室温（ＲＴ）で１時間インキュベートし、続いて、サイズ排除クロマトグラフィーを使用する精製によってコンジュゲーションを達成した（図１０Ａ〜１０Ｃ）。
【０１７３】
図７は、リンパ節標的リポソームベースのナノ担体の生体分布を示す。骨髄におけるＰＥＧ含有量が７％まで増加したとき、標的化効率は劇的に変化する。リンパ節での蓄積は、６．９％ＩＤ／ｇ〜１４．９％ＩＤ／ｇまで増加し、骨髄での蓄積は、１４．２％ＩＤ／ｇ〜２．４％ＩＤ／ｇまで減少した。
【０１７４】
図８Ａおよび８Ｂは、骨髄標的リポソームベースのナノ担体（図８Ａ）およびリンパ節標的リポソームベースのナノ担体（図８Ｂ）の蓄積のＰＥＴ画像を示す。図７は、リンパ節標的リポソームの生体分布を示す。部分容積効果は、リンパ節などのサイズの小さい器官で大きい。したがって、定量は、マウスのリンパ節におけるリポソームベースのナノ担体の蓄積については過小評価され、実際の蓄積はさらに多い。
【０１７５】
材料
すべての化学物質をさらに精製せずに受け取ったまま使用した。化学物質として、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジオクタデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）（スクシニル−ＤＰＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ｍＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ）が挙げられ、これらは、コレステロールと一緒に、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ（Ａｌａｂａｓｔｅｒ、ＡＬ）から購入され、ｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＤＯＴＡは、Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ（Ｄａｌｌａｓ、ＴＸ）から購入され、Ｎ−アセチルシステインは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から入手され、５，５’−ジチオ−ｂｉｓ−（２−ニトロ安息香酸）は、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）から購入され、６４Ｃｕは、Ｓｔ．  ＬｏｕｉｓのＷａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購入され、ここで、６４Ｃｕは、６４Ｎｉ（ｐ，ｎ）６４Ｃｕ反応によってＷａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｃｙｃｌｏｔｒｏｎ（モデルＣＳ−１５；Ｃｙｃｌｏｔｒｏｎ  Ｃｏｒｐ．）で製造され、精製されて［６４Ｃｕ］−ＣｕＣｌ２が得られる。
【０１７６】
活性の測定は、ＣＲＣ−１５Ｒ  Ｄｏｓｅ  Ｃａｌｉｂｒａｔｏｒ（Ｃａｐｉｎｔｅｃ，Ｒａｍｓｅｙ、ＮＪ）を使用してなされた。すべての溶媒および緩衝溶液の成分は分析グレードであった。ＰＤ１０カラムは、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ）から購入した。雄の胸腺欠損ヌードマウスは、Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）から購入した。
【０１７７】
方法
ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥの合成
１２μモルのｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＤＯＴＡを１ｍＬのクロロホルム：メタノール：水（６５：３５：８）混合物に溶解させ、２２μモルのＤＳＰＥを１ｍＬのクロロホルム：メタノール：水混合物に溶解させた。２つの溶液を混合した後、４８μモルのトリエチルアミンを添加した。混合物を４０℃で２時間撹拌し、続いて、室温で１６時間撹拌した。反応の進行を溶離液としてクロロホルム／メタノール／水（６５：３５：１）を使用するシリカゲルでコーティングしたＴＬＣプレートを使用してモニタリングし、生成物の形成を質量分析で確認した。
【０１７８】
リポソームの調製
リポソームは、６：４のモル比のＤＳＰＣとコレステロールから構成された。必要な場合、最初の脂質混合物に１または２．５％モルのｍＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥおよび／または１０％のスクシニル−ＤＰＰＥを補充した。さらなる０．１％モルのＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥを次の６４Ｃｕ標識のためにすべての脂質組成物に添加した。すべての脂質をクロロホルムに溶解させ、丸底フラスコに脂質の均一なコーティングを確保しながら、溶媒を３７℃の窒素気流下で蒸発させた。残留溶媒を真空下で少なくとも２時間除去した。脂質膜をＰＢＳ中６５℃で１時間水和させ、超音波浴にて２０分間隔で３０秒の超音波処理を３回行った。水和した脂質膜は３サイクルの凍結融解を受けた。粗製の脂質分散液を、６５℃で、ミニ押出しシステム（Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ、Ａｌａｂａｓｔｅｒ、ＡＬ）を使用し、０．１μｍまたは０．０３μｍの孔径のＷｈａｔｍａｎ（登録商標）Ｐｏｌｙｃａｒｂｏｎａｔｅ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｆｉｌｔｅｒを通して１１回押し出した。押出し後、ＰＤ１０カラム（ＧＥ  Ｌｉｆｅ  ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）を使用してリポソームを精製し、均一に組み込まれたリポソーム脂質と塩を除去した。
【０１７９】
リポソームの特徴付け
ｐＨ７．４のＰＢＳ中、２５℃でのリポソームのサイズ分布およびゼータ電位を、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｍａｌｖｅｒｎ、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ、ＵＫ）からのＺｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ−ＺＳで決定した。血清中のリポソーム安定性を、リポソームをＰＢＳ中５０％のＦＣＳ中で２４時間インキュベートした後に決定した。４℃におけるリポソームの長期安定性を、サイズ分布を分析することによって１年間試験した。
【０１８０】
６４Ｃｕを用いるリポソームの放射活性標識化
［６４Ｃｕ］−ＣｕＣｌ２（０．１ＮのＨＣｌ中７５０μＣｉ）を７５０μＬの総脂質濃度２０μＭのリポソームに添加し、０．２Ｍの酢酸ナトリウム緩衝液でｐＨ５．５に調整した。反応混合物をＥｐｐｅｎｄｏｒｆのＴｈｅｒｍｏＭｉｘｅｒ（登録商標）を使用して一定に振盪しながら５０℃で１時間撹拌した。ＩＴＬＣ−ＳＧペーパー上で、溶離液として５ｍＭのＤＴＰＡ溶液（ｐＨ５．５）を使用して、インスタント薄層クロマトグラフィー（ＩＴＬＣ）を実施し、反応の進行をモニタリングした。次いで、リポソームをＰＢＳ中のＰＤ−１０カラムで精製し、キレートされていない６４−Ｃｕを分離し、ｐＨを７．４に調整した。
【０１８１】
６４Ｃｕリポソームの血液クリアランス
６４Ｃｕ標識リポソームを、静脈内注射により、胸腺欠損ヌードマウスに注射した。動物の血液試料を、尾静脈を介して様々な時点でサンプリングして採取し、ガンマカウンターで放射活性を決定し、体重に対して正規化した。半減期を、Ｐｒｉｓｍ  ６．０（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）にインストールした１フェーズまたは２フェーズ減衰方程式を使用して計算した。
【０１８２】
６４Ｃｕリポソームの生体分布
生体分布の研究では、約１４０μＣｉ（５．２ＭＢｑ）の６４Ｃｕ標識リポソームを尾静脈注射により静脈内を介して胸腺欠損ヌードマウス（ｎ＝９）に投与した。マウスを注射の４時間後または２４時間後に屠殺し、主要な器官を採取し、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆの微小遠心管に入れた。骨髄を採取するために、大腿骨を液体窒素に浸漬し、骨端の１つを注意深く取り除き、３０  １／２ゲージの針を有する６０ｍＬシリンジを大腿骨の一端に挿入した。空気を吹き込み、放射活性を計数するのと同じチューブに骨髄を採取した。ガンマカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，  Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）においてさらなる処理または組織の可溶化を行わずに試料の放射活性を決定した。データを組織１グラム当たりのパーセント注入用量（％ＩＤ／ｇ）として表した。
【０１８３】
ＭｉｃｒｏＰＥＴおよびＰＥＴ／ＣＴイメージング
６４Ｃｕ標識リポソームを投与したマウスのＰＥＴイメージングを、ｍｉｃｒｏＰＥＴ  Ｆｏｃｕｓ１２０小動物用ＰＥＴスキャナー（Ｓｉｅｍｅｎｓ、Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ、ＴＮ）またはＩｎｖｅｏｎ小動物用ＰＥＴ／ＣＴスキャナー（Ｓｉｅｍｅｎｓ、Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ、ＴＮ）のいずれかを使用して実施した。１４０μＣｉ（５．２ＭＢｑ）の６４Ｃｕ標識リポソームを静脈内注射を介して胸腺欠損ヌードマウスに注射し、注射の４時間後または２４時間後のいずれかで画像を得た。静的スキャンを、注射の４時間後の画像について５分間、または注射の２４時間後の画像について２０分間獲得した。ＡＳＩＰｒｏ（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ、ＴＮ）またはＡｍｉｄｅ（５）ソフトウェアを使用して、ＰＥＴデータを可視化し、画像を作成した。
【０１８４】
６４Ｃｕ標識リポソームを注射したマウスの動的ＭｉｃｒｏＰＥＴイメージングと分析
１００μＣｉ（３．７ＭＢｑ）の６４Ｃｕ標識リポソームをカテーテルを使用して尾静脈を介して胸腺欠損ヌードマウスに注射した。データを集めた後３分間にわたって、リポソームを一定の速度で注射した。トレーサーの投与後最初の６５分間、画像を回収し、マウスを元の位置に戻して２．５、３．７、５、７．５、１０、２０、２４、および２８時間の時点で再度イメージングした。心臓、肝臓、脾臓および仙骨の目的の領域（ＲＯＩ）を画像上に描き、次いで、定量した。Ｐｒｉｓｍ  ６．０においてユーザー定義の方程式による非線形曲線フィッティングを使用する２コンパートメントモデルにデータをフィッティングした後、薬物動態パラメータを導出し、計算した。
【０１８５】
ソフトウェアおよび統計
グラフのプロット、曲線のフィッティング、および統計分析に対してＰｒｉｓｍ  ６．０を使用した。ＰＥＴおよびＰＥＴ／ＣＴ画像分析に対してＡＳＩＰｒｏ  ＶＭ（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ、ＴＮ）およびＡｍｉｄｅを使用した。
【０１８６】
施設の研究動物に関する承認（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ａｎｉｍａｌ  Ａｐｐｒｏｖａｌ）
すべての動物実験は、プロトコール８６−０２−０２０の下、メモリアルスローンケアリングがんセンターの動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ  Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ）によって承認された。
【０１８７】
リポソームの安定性
図１９Ａ〜１９Ｃは、ＢＭＴリポソーム安定性を示す。リポソームのサイズ（図１９Ａ）、ｐＨ７．４におけるゼータ電位（図１９Ｂ）、および標識効率（図１９Ｃ）を１、２、３、４、６、および９カ月間測定した。
【０１８８】
さらに、本実施例は、同位体が室温でキレート剤から解離せず、少なくとも２４時間の十分な貯蔵寿命を有することを実証する。
【０１８９】
様々なＰＥＧ含有量で正に帯電したリポソーム
いかなる理論にも拘泥されることを望むものではないが、負電荷およびＰＥＧ含有量がリンパ節標的化に寄与する可能性があることが仮定された。この仮定を試験するために、１，２−ジオレイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＴＡＰ）および１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含有する正に帯電したリポソームを製剤化し、ＤＮＡまたはＲＮＡを細胞へと送達した（表５を参照のこと）。表２０Ａおよび２０Ｂはそれぞれ、ＤＯＴＡＰおよびＤＯＰＥの化学構造を示す。
【０１９０】
表５は、各成分の比（ＤＯＰＥ：ＤＯＴＡＰ）の組成比（ｗｔ％）を示し、ここで、ＰはＤＯＰＥを指し、ＴはＤＯＴＡＰを指す。例えば、「Ｐ１Ｔ３  ＰＥＧ１」はＤＯＰＥ：ＤＯＴＡＰの比が１：３であることを示す。
【表５】
2019512484.tif 000007
【０１９１】
表６は、サイズ（ｎｍ）、多分散指数（ＰＤＩ）、ｐＨ７．４（ｍＶ）におけるゼータ電位および様々なＰＥＧ含有量で正に帯電したリポソームの６４Ｃｕ標的化を示し、ここで、ＰはＤＯＰＥの略語であり、ＴはＤＯＴＡＰの略語である。例えば、「Ｐ１Ｔ３  ＰＥＧ１」はＤＯＰＥ：ＤＯＴＡＰの比が１：３であることを示す。
【表６】
2019512484.tif 000008
【０１９２】
図２０Ｃは、正に帯電したリポソームに対するｐＨ７．４におけるゼータ電位がＤＯＰＥ：ＤＯＴＡＰの様々な比を有することを示す。ＤＯＰＥ：ＤＯＴＡＰ＝３：１は、ｐＨ７．４におけるそのゼータ電位が１４．８ｍＶであり、その絶対値がｐＨ７．４において−１８．８ｍＶのゼータ電位を有するＢＭＴリポソームと類似するように選択される。
【０１９３】
図２１は、異なるＰＥＧ含有量を有するＢＭＴリポソームと正に帯電したリポソームの生体分布を示す。それぞれ、ＢＭＴリポソームは、１％および７％のＰＥＧ含有量で５２．９％ＩＤ／ｇおよび９１．８％ＩＤ／ｇでリンパ節を標的とし、一方、カチオン性のリポソームは、低濃度の７．８％ＩＤ／ｇおよび１１．６％ＩＤ／ｇでリンパ節に蓄積する。したがって、リポソーム標的化は、リポソームの負電荷によって影響を受けるようである。
【０１９４】
電離放射後のＧＴ３リポソームで処理したマウスの血球数
本実施例は、放射線への曝露の前に、放射線防護体／フリーラジカルスカベンジャー、例えば、ＧＴ３が、リポソームによって骨髄へ送達されうる方法を提供する。
【０１９５】
Ｃ５７／Ｂ６マウスを、２および４Ｇｙの２４時間前に、１０ｍｇ／ｋｇのＧＴ３を含むＧＴ３を含有するＢＭＴリポソームで処理した。照射の０、１、４、６、１３日後に血球を計数した。図２８Ａおよび２８Ｂに示すように、白血球の総数（ＷＢＣ）の計数は、ＧＴ３を含まないＢＭＴリポソームより、ＧＴ３  ＢＭＴリポソーム処理群でより早く回復した。リンパ球の回復が最も顕著である。したがって、ＧＴ３を含有するリポソームの送達およびその次の２または４Ｇｙへの曝露後に、リンパ球と好中球の迅速な回復効果が増強された。この効果は、ＧＴ３が骨髄へ標的化されない場合には見られなかった。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
2019512484.tif 000012
【図２Ｂ】
2019512484.tif 000013
【図２Ｃ】
2019512484.tif 000014
【図３Ａ】
2019512484.tif 000015
【図３Ｂ】
2019512484.tif 000016
【図４】
2019512484.tif 000017
【図５】
2019512484.tif 000018
【図６Ａ】
2019512484.tif 000019
【図６Ｂ】
2019512484.tif 000020
【図７】
2019512484.tif 000021
【図８】
2019512484.tif 000022
【図９】
2019512484.tif 000023
【図１０】
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【図１１】
2019512484.tif 000025
【図１２】
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【図１３】
2019512484.tif 000027
【図１４】
2019512484.tif 000028
【図１５】
2019512484.tif 000029
【図１６】
2019512484.tif 000030
【図１７】
2019512484.tif 000031
【図１８】
2019512484.tif 000032
【図１９】
2019512484.tif 000033
【図２０】
2019512484.tif 000034
【図２１】
2019512484.tif 000035
【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
2019512484.tif 000038
【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
2019512484.tif 000043
【手続補正書】
【提出日】平成30年11月6日(2018.11.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂質、および
有機ポリマー
を含み、
前記脂質に起因する負電荷を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体。
【請求項２】
前記脂質が、１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）（スクシニルＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、コレステロール、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、および１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）（スクシニル−ＤＰＰＥ）からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項１に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項３】
前記脂質が、同位体およびキレート剤で標識されている、請求項１または２に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項４】
前記同位体が、６４Ｃｕ、６６Ｇａ、８６Ｙ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１２４／１３１Ｉ、および１７７Ｌｕからなる群から選択されるメンバーを含む、請求項３に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項５】
前記キレート剤が、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）および１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項３または４に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項６】
前記キレート剤が、ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥおよびＮＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥからなる群から選択されるメンバーを含む、請求項３〜５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項７】
前記有機ポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項８】
前記ナノ担体が、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−メトキシ（ポリエチレングリコール）（ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ）を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項９】
ＰＥＧの濃度が、約０．５ｗｔ％〜約１０ｗｔ％である、請求項７または８に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項１０】
少なくとも３モル％の脂質である、請求項１〜９のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項１１】
会合した薬物をさらに含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項１２】
前記会合した薬物が、
フリーラジカルスカベンジャー、
放射線防護体、
増殖因子、
ビスホスホネート、
選択的エストロゲン受容体モジュレーター、
副甲状腺ホルモンモジュレーター、
生物学的製剤、および
化学療法薬
からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項１１に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項１３】
３０ｎｍ〜３００ｎｍの範囲の平均直径を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項１４】
以下の（ｉ）、（ｉｉ）、および（ｉｉｉ）：
（ｉ）３〜２０ｗｔ％のスクシニルＤＰＰＥ、
（ｉｉ）０．５〜２ｗｔ％のＰＥＧ、および
（ｉｉｉ）５〜９ｗｔ％のＰＥＧ
のうちの１つまたは複数を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項１５】
前記リポソームベースのナノ担体の前記表面の前記負電荷が、１５ｍＶ〜２５ｍＶの大きさを有する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体を含む、対象をイメージングするための組成物であって、前記脂質が同位体およびキレート剤で標識されている、組成物。
【請求項１７】
前記リポソームベースのナノ担体を含む請求項１６に記載の組成物であって、前記対象の少なくとも１つの組織のポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）および／またはポジトロン放出断層撮影−コンピューター断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）画像が得られ、それが表示される、組成物。
【請求項１８】
前記対象の少なくとも１つの組織における前記リポソームベースのナノ担体の分布が定量的に測定される、請求項１６または１７に記載の組成物。
【請求項１９】
細網内皮系の器官における前記リポソームベースのナノ担体の前記分布が定量的に測定される、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記器官が、肝臓、脾臓、および骨髄からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記組織のポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）またはポジトロン放出断層撮影−コンピューター断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）画像に基づいて、前記組織における送達された放射線標識薬物の濃度および／または総量が決定される、請求項１９または２０に記載の組成物。
【請求項２２】
１つまたは複数のリンパ節における前記リポソームベースのナノ担体の前記分布が定量的に測定される、請求項１８から２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記投与されたリポソームベースのナノ担体が、前記リポソームベースのナノ担体の投与の所定時間後の、骨髄における前記リポソームベースのナノ担体の濃度が、いずれかの腫瘍組織における前記リポソームベースのナノ担体の濃度より少なくとも３倍高くなるような、前記対象の骨髄への選択的標的化を示し、ここで、前記所定時間が、投与の少なくとも１時間後である、請求項１６から２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
リアルタイムで、ＰＥＴ画像のシーケンスがキャプチャーされ、表示される、請求項１６から２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
請求項１から１５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体を含む、対象を処置するための組成物であって、前記組成物は、疾患および／または状態に罹患しているか、または罹患しやすい前記対象に投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項２６】
前記疾患および／または状態が、骨髄抑制（ＢＭＳ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、敗血症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、骨転移、および骨粗鬆症からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記疾患および／または状態が、放射線への曝露を含む、請求項２５または２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記リポソームベースのナノ担体の投与後、化学療法および／または放射線療法が投与されることを特徴とする、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２９】
前記投与されたリポソームベースのナノ担体が、前記リポソームベースのナノ担体の投与の所定時間後の、骨髄における前記リポソームベースのナノ担体の濃度が、いずれかの腫瘍組織における前記リポソームベースのナノ担体の濃度より少なくとも３倍高くなるような、前記対象の骨髄への選択的標的化を示し、ここで、前記所定時間が、投与の少なくとも１時間後である、請求項２５から２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
患者をモニタリングするための方法において使用するための、
請求項１から１５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体を含む組成物であって、前記方法は、
前記組成物を疾患および／または状態に罹患しているか、または罹患しやすい患者に投与するステップと、
前記患者の少なくとも１つの組織に送達された薬物の量を調査するステップとを含む組成物。
【請求項３１】
請求項１から１５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体を含む、対象の細網内皮系の器官をイメージングするための組成物であって、前記対象が前記リポソームベースのナノ担体を投与されており、前記組成物からの放射線が検出される、組成物。
【請求項３２】
前記放射線が、外部ＰＥＴイメージングシステムによって検出される、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記器官が、活性骨髄、肝臓、および脾臓からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項３１または３２に記載の組成物。
【請求項３４】
前記検出された放射線に対応する画像が表示され、前記画像が活性骨髄を他の組織から視覚的に識別するステップと、任意選択で、薬物および／またはリポソームベースのナノ担体の濃度を定量するステップを含む、請求項３１から３３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３５】
対象の疾患および／または状態を処置する方法において使用するための、
脂質、および
有機ポリマー
を含み、
前記脂質に起因する負電荷を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体を含む組成物であって、
前記処置することが前記対象に前記組成物を送達することを含む、組成物。
【請求項３６】
対象の疾患および／または状態をモニタリングする方法において使用するための、
脂質、および
有機ポリマー
を含み、
前記脂質に起因する負電荷を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体を含む組成物であって、
前記モニタリングすることが前記対象に前記組成物を送達することを含む、組成物。
【請求項３７】
（ａ）対象の疾患および／もしくは状態を処置する方法または（ｂ）対象の疾患および／もしくは状態をモニタリングする方法であって、前記モニタリングすることが前記対象に組成物を送達することを含む方法において使用するための、
脂質、および
有機ポリマー
を含み、
前記脂質に起因する負電荷を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体を含む組成物。
【請求項３８】
療法において使用するための、
脂質、および
有機ポリマー
を含み、
前記脂質に起因する負電荷を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体を含む組成物。
【請求項３９】
疾患または状態のモニタリングにおいて使用するための、
脂質、および
有機ポリマー
を含み、
前記脂質に起因する負電荷を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体を含む組成物。
【請求項４０】
前記脂質が、１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）（スクシニルＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、コレステロール、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、および１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）（スクシニル−ＤＰＰＥ）からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項３５から３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４１】
前記脂質が、同位体およびキレート剤で標識されている、請求項３５から４０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４２】
前記同位体が、６４Ｃｕ、６６Ｇａ、８６Ｙ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１２４／１３１Ｉ、および１７７Ｌｕからなる群から選択されるメンバーを含む、請求項３５から４１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４３】
前記キレート剤が、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）および１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項３５から４２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４４】
前記キレート剤が、ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥおよびＮＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥからなる群から選択されるメンバーを含む、請求項３５から４３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４５】
前記有機ポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む、請求項３５から４４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４６】
前記ナノ担体が、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−メトキシ（ポリエチレングリコール）（ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ）を含む、請求項３５から４５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４７】
ＰＥＧの濃度が、約０．５ｗｔ％〜約１０ｗｔ％である、請求項４５または４６に記載の組成物。
【請求項４８】
前記リポソームベースのナノ担体が、少なくとも３モル％の脂質である、請求項３５から４７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４９】
会合した薬物をさらに含む、請求項３５から４８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５０】
前記会合した薬物が、
フリーラジカルスカベンジャー、
放射線防護体、
増殖因子、
ビスホスホネート、
選択的エストロゲン受容体モジュレーター、
副甲状腺ホルモンモジュレーター、
生物学的製剤、および
化学療法薬
からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】
前記リポソームベースのナノ担体が、３０ｎｍ〜３００ｎｍの範囲の平均直径を有する、請求項３５から５０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５２】
以下の（ｉ）、（ｉｉ）、および（ｉｉｉ）：
（ｉ）３〜２０ｗｔ％のスクシニルＤＰＰＥ、
（ｉｉ）０．５〜２ｗｔ％のＰＥＧ、および
（ｉｉｉ）５〜９ｗｔ％のＰＥＧ
のうちの１つまたは複数を含む、請求項３５から５１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５３】
前記リポソームベースのナノ担体の前記表面の前記負電荷が、１５ｍＶ〜２５ｍＶの大きさを有する、請求項３５から５２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５４】
前記処置および／またはモニタリングすることが、前記対象にリポソームベースのナノ担体を投与することをさらに含み、ここで、前記脂質が、同位体およびキレート剤で標識されている、請求項３５から５３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５５】
前記処置および／またはモニタリングすることが、前記リポソームベースのナノ担体を含む前記対象の少なくとも１つの組織のポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）および／またはポジトロン放出断層撮影−コンピューター断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）画像を得ること、および表示することをさらに含む、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５６】
前記処置および／またはモニタリングすることが、前記対象の少なくとも１つの組織における前記リポソームベースのナノ担体の分布を定量的に測定することをさらに含む、請求項５４または５５に記載の組成物。
【請求項５７】
前記処置および／またはモニタリングすることが、細網内皮系の器官における前記リポソームベースのナノ担体の前記分布を定量的に測定することをさらに含む、請求項５６に記載の組成物。
【請求項５８】
前記器官が、肝臓、脾臓、および骨髄からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項５７に記載の組成物。
【請求項５９】
前記処置および／またはモニタリングすることが、前記組織のポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）またはポジトロン放出断層撮影−コンピューター断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）画像に基づいて、前記組織における送達された放射線標識薬物の濃度および／または総量を決定することをさらに含む、請求項５７または５８に記載の組成物。
【請求項６０】
前記処置および／またはモニタリングすることが、１つまたは複数のリンパ節における前記リポソームベースのナノ担体の前記分布を定量的に測定することをさらに含む、請求項５６から５９に記載の組成物。
【請求項６１】
前記投与されたリポソームベースのナノ担体が、前記リポソームベースのナノ担体の投与の所定時間後の、骨髄における前記リポソームベースのナノ担体の濃度が、いずれかの腫瘍組織における前記リポソームベースのナノ担体の濃度より少なくとも３倍高くなるような、前記対象の骨髄への選択的標的化を示し、ここで、前記所定時間が、投与の少なくとも１時間後である、請求項５４から６０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６２】
前記処置および／またはモニタリングすることが、リアルタイムで、ＰＥＴ画像のシーケンスをキャプチャーするステップ、および表示するステップをさらに含む、請求項５４から６１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６３】
前記疾患および／または状態が、骨髄抑制（ＢＭＳ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、敗血症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、骨転移、および骨粗鬆症からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項３５から６２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６４】
前記疾患および／または状態が、放射線への曝露を含む、請求項６３に記載の組成物。
【請求項６５】
前記処置および／またはモニタリングすることが、前記リポソームベースのナノ担体の投与後、化学療法および／または放射線療法を投与することをさらに含む、請求項６３に記載の組成物。
【請求項６６】
前記投与されたリポソームベースのナノ担体が、前記リポソームベースのナノ担体の投与の所定時間後の、骨髄における前記リポソームベースのナノ担体の濃度が、いずれかの腫瘍組織における前記リポソームベースのナノ担体の濃度より少なくとも３倍高くなるような、前記対象の骨髄への選択的標的化を示し、ここで、前記所定時間が、投与の少なくとも１時間後である、請求項６３から６５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６７】
前記処置および／またはモニタリングすることが、
疾患および／または状態に罹患しているか、または罹患しやすい患者に請求項１から１５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体を投与することと、
前記患者の少なくとも１つの組織に送達された薬物の量を調査することとをさらに含む、請求項３５から６６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６８】
対象の細網内皮系の器官をイメージングおよび／またはモニタリングする方法における使用のために、前記イメージングおよび／またはモニタリングすることが、請求項１から１５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体からの放射線を検出することであって、前記対象が前記リポソームベースのナノ担体を投与されていたことを含む、請求項３５から６７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６９】
前記放射線が、外部ＰＥＴイメージングシステムによって検出される、請求項６８に記載の組成物。
【請求項７０】
前記器官が、活性骨髄、肝臓、および脾臓からなる群から選択されるメンバーを含む、請求項６８または６９に記載の組成物。
【請求項７１】
前記イメージングおよび／またはモニタリングすることが、前記検出された放射線に対応する画像を表示することをさらに含み、前記画像が活性骨髄を他の組織から視覚的に識別し、任意選択で、薬物および／またはリポソームベースのナノ担体の濃度を定量する、請求項６８または６９に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
発明の要旨
本明細書は、従来の全身送達と比較して、骨髄を選択的に標的とし、腫瘍への送達を最小限にし、骨髄における高い薬物濃度を維持するリポソームベースのナノ担体について記載している。リポソームベースのナノ担体はまた、リンパ節および他の細網内皮系の器官（例えば、脾臓、例えば、肝臓）も選択的に標的とする。ある特定の実施形態では、負に帯電したナノ担体が性能上の利点をもたらすことが見出される。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
脂質、および
有機ポリマー
を含み、
前記脂質に起因する負電荷を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体。
（項目２）
前記脂質が、１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）（スクシニルＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、コレステロール、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、および１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）（スクシニル−ＤＰＰＥ）からなる群から選択されるメンバーを含む、項目１に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目３）
前記脂質が、同位体およびキレート剤で標識されている、項目１または２に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目４）
前記同位体が、６４Ｃｕ、６６Ｇａ、８６Ｙ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１２４／１３１Ｉ、および１７７Ｌｕからなる群から選択されるメンバーを含む、先行する項目のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目５）
前記キレート剤が、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）および１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）からなる群から選択されるメンバーを含む、先行する項目のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目６）
前記キレート剤が、ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥおよびＮＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥからなる群から選択されるメンバーを含む、先行する項目のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目７）
前記有機ポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む、先行する項目のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目８）
前記ナノ担体が、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−メトキシ（ポリエチレングリコール）（ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ）を含む、先行する項目のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目９）
ＰＥＧの濃度が、約０．５ｗｔ％〜約１０ｗｔ％である、項目７または８に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目１０）
少なくとも３モル％の脂質である、先行する項目のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目１１）
会合した薬物をさらに含む、先行する項目のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目１２）
前記会合した薬物が、
フリーラジカルスカベンジャー、
放射線防護体、
増殖因子、
ビスホスホネート、
選択的エストロゲン受容体モジュレーター、
副甲状腺ホルモンモジュレーター、
生物学的製剤、および
化学療法薬
からなる群から選択されるメンバーを含む、項目１１に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目１３）
３０ｎｍ〜３００ｎｍの範囲の平均直径を有する、先行する項目のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目１４）
以下の（ｉ）、（ｉｉ）、および（ｉｉｉ）：
（ｉ）３〜２０ｗｔ％のスクシニルＤＰＰＥ、
（ｉｉ）０．５〜２ｗｔ％のＰＥＧ、および
（ｉｉｉ）５〜９ｗｔ％のＰＥＧ
のうちの１つまたは複数を含む、先行する項目のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目１５）
前記リポソームベースのナノ担体の前記表面の前記負電荷が、１５ｍＶ〜２５ｍＶの大きさを有する、先行する項目のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目１６）
対象をイメージングするための方法であって、先行する項目のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体を前記対象に投与するステップを含み、前記脂質が同位体およびキレート剤で標識されている方法。
（項目１７）
前記リポソームベースのナノ担体を含む前記対象の少なくとも１つの組織のポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）および／またはポジトロン放出断層撮影−コンピューター断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）画像を得るステップ、およびそれを表示するステップをさらに含む、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記対象の少なくとも１つの組織における前記リポソームベースのナノ担体の分布を定量的に測定するステップをさらに含む、項目１６または１７に記載の方法。
（項目１９）
細網内皮系の器官における前記リポソームベースのナノ担体の前記分布を定量的に測定するステップを含む、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記器官が、肝臓、脾臓、および骨髄からなる群から選択されるメンバーを含む、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記組織のポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）またはポジトロン放出断層撮影−コンピューター断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）画像に基づいて、前記組織における送達された放射線標識薬物の濃度および／または総量を決定するステップを含む、項目１９または２０に記載の方法。
（項目２２）
１つまたは複数のリンパ節における前記リポソームベースのナノ担体の前記分布を定量的に測定するステップを含む、項目１８から２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記投与されたリポソームベースのナノ担体が、前記リポソームベースのナノ担体の投与の所定時間後の、骨髄における前記リポソームベースのナノ担体の濃度が、いずれかの腫瘍組織における前記リポソームベースのナノ担体の濃度より少なくとも３倍高くなるような、前記対象の骨髄への選択的標的化を示し、ここで、前記所定時間が、投与の少なくとも１時間後である、項目１６から２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
リアルタイムで、ＰＥＴ画像のシーケンスをキャプチャーするステップ、および表示するステップをさらに含む、項目１６から２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
疾患および／または状態に罹患しているか、または罹患しやすい前記対象に、項目１から１５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体を投与するステップを含む、対象を処置する方法。
（項目２６）
前記疾患および／または状態が、骨髄抑制（ＢＭＳ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、敗血症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、骨転移、および骨粗鬆症からなる群から選択されるメンバーを含む、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記疾患および／または状態が、放射線への曝露を含む、項目２５または２６に記載の方法。
（項目２８）
前記リポソームベースのナノ担体の投与後、化学療法および／または放射線療法を投与するステップをさらに含む、項目２６に記載の方法。
（項目２９）
前記投与されたリポソームベースのナノ担体が、前記リポソームベースのナノ担体の投与の所定時間後の、骨髄における前記リポソームベースのナノ担体の濃度が、いずれかの腫瘍組織における前記リポソームベースのナノ担体の濃度より少なくとも３倍高くなるような、前記対象の骨髄への選択的標的化を示し、ここで、前記所定時間が、投与の少なくとも１時間後である、項目２５から２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
患者をモニタリングする方法であって、
疾患および／または状態に罹患しているか、または罹患しやすい患者に、項目１から１５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体を投与するステップと、
前記患者の少なくとも１つの組織に送達された薬物の量を調査するステップとを含む方法。
（項目３１）
対象の細網内皮系の器官をイメージングする方法であって、項目１から１５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体からの放射線を検出するステップを含み、前記対象が前記リポソームベースのナノ担体を投与されていた方法。
（項目３２）
前記放射線が、外部ＰＥＴイメージングシステムによって検出される、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記器官が、活性骨髄、肝臓、および脾臓からなる群から選択されるメンバーを含む、項目３１または３２に記載の方法。
（項目３４）
前記検出された放射線に対応する画像を表示するステップであって、前記画像が活性骨髄を他の組織から視覚的に識別するステップと、任意選択で、薬物および／またはリポソームベースのナノ担体の濃度を定量するステップとをさらに含む、項目３１から３３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
対象の疾患および／または状態を処置する方法において使用するための、
脂質、および
有機ポリマー
を含み、
前記脂質に起因する負電荷を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体であって、
前記処置することが前記対象に前記組成物を送達することを含む、リポソームベースのナノ担体。
（項目３６）
対象の疾患および／または状態をモニタリングする方法において使用するための、
脂質、および
有機ポリマー
を含み、
前記脂質に起因する負電荷を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体であって、
前記モニタリングすることが前記対象に前記組成物を送達することを含む、リポソームベースのナノ担体。
（項目３７）
（ａ）対象の疾患および／もしくは状態を処置する方法または（ｂ）対象の疾患および／もしくは状態をモニタリングする方法であって、前記モニタリングすることが前記対象に組成物を送達することを含む方法において使用するための、
脂質、および
有機ポリマー
を含み、
前記脂質に起因する負電荷を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体であって、
前記モニタリングすることが前記対象に前記組成物を送達することを含む、リポソームベースのナノ担体。
（項目３８）
療法において使用するための、
脂質、および
有機ポリマー
を含み、
前記脂質に起因する負電荷を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体。
（項目３９）
疾患または状態のモニタリングにおいて使用するための、
脂質、および
有機ポリマー
を含み、
前記脂質に起因する負電荷を有する表面を有するリポソームベースのナノ担体。
（項目４０）
前記脂質が、１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）（スクシニルＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、コレステロール、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、および１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）（スクシニル−ＤＰＰＥ）からなる群から選択されるメンバーを含む、項目３５から３９のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目４１）
前記脂質が、同位体およびキレート剤で標識されている、項目３５から４０のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目４２）
前記同位体が、６４Ｃｕ、６６Ｇａ、８６Ｙ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１２４／１３１Ｉ、および１７７Ｌｕからなる群から選択されるメンバーを含む、項目３５から４１のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目４３）
前記キレート剤が、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）および１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）からなる群から選択されるメンバーを含む、項目３５から４２のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目４４）
前記キレート剤が、ＤＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥおよびＮＯＴＡ−Ｂｎ−ＤＳＰＥからなる群から選択されるメンバーを含む、項目３５から４３のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目４５）
前記有機ポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む、項目３５から４４のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目４６）
前記ナノ担体が、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−メトキシ（ポリエチレングリコール）（ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ）を含む、項目３５から４５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目４７）
ＰＥＧの濃度が、約０．５ｗｔ％〜約１０ｗｔ％である、項目４５または４６に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目４８）
少なくとも３モル％の脂質である、項目３５から４７のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目４９）
会合した薬物をさらに含む、項目３５から４８のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目５０）
前記会合した薬物が、
フリーラジカルスカベンジャー、
放射線防護体、
増殖因子、
ビスホスホネート、
選択的エストロゲン受容体モジュレーター、
副甲状腺ホルモンモジュレーター、
生物学的製剤、および
化学療法薬
からなる群から選択されるメンバーを含む、項目４９に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目５１）
３０ｎｍ〜３００ｎｍの範囲の平均直径を有する、項目３５から５０のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目５２）
以下の（ｉ）、（ｉｉ）、および（ｉｉｉ）：
（ｉ）３〜２０ｗｔ％のスクシニルＤＰＰＥ、
（ｉｉ）０．５〜２ｗｔ％のＰＥＧ、および
（ｉｉｉ）５〜９ｗｔ％のＰＥＧ
のうちの１つまたは複数を含む、項目３５から５１のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目５３）
前記リポソームベースのナノ担体の前記表面の前記負電荷が、１５ｍＶ〜２５ｍＶの大きさを有する、項目３５から５２のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目５４）
前記処置および／またはモニタリングすることが、前記対象にリポソームベースのナノ担体を投与することをさらに含み、ここで、前記脂質が、同位体およびキレート剤で標識されている、項目３５から５３のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目５５）
前記処置および／またはモニタリングすることが、前記リポソームベースのナノ担体を含む前記対象の少なくとも１つの組織のポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）および／またはポジトロン放出断層撮影−コンピューター断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）画像を得ること、および表示することをさらに含む、項目５４に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目５６）
前記処置および／またはモニタリングすることが、前記対象の少なくとも１つの組織における前記リポソームベースのナノ担体の分布を定量的に測定することをさらに含む、項目５４または５５に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目５７）
前記処置および／またはモニタリングすることが、細網内皮系の器官における前記リポソームベースのナノ担体の前記分布を定量的に測定することをさらに含む、項目５６に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目５８）
前記器官が、肝臓、脾臓、および骨髄からなる群から選択されるメンバーを含む、項目５７に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目５９）
前記処置および／またはモニタリングすることが、前記組織のポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）またはポジトロン放出断層撮影−コンピューター断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）画像に基づいて、前記組織における送達された放射線標識薬物の濃度および／または総量を決定することをさらに含む、項目５７または５８に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目６０）
前記処置および／またはモニタリングすることが、１つまたは複数のリンパ節における前記リポソームベースのナノ担体の前記分布を定量的に測定することをさらに含む、項目５６から５９に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目６１）
前記投与されたリポソームベースのナノ担体が、前記リポソームベースのナノ担体の投与の所定時間後の、骨髄における前記リポソームベースのナノ担体の濃度が、いずれかの腫瘍組織における前記リポソームベースのナノ担体の濃度より少なくとも３倍高くなるような、前記対象の骨髄への選択的標的化を示し、ここで、前記所定時間が、投与の少なくとも１時間後である、項目５４から６０のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目６２）
前記処置および／またはモニタリングすることが、リアルタイムで、ＰＥＴ画像のシーケンスをキャプチャーするステップ、および表示するステップをさらに含む、項目５４から６１のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目６３）
前記疾患および／または状態が、骨髄抑制（ＢＭＳ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、敗血症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、骨転移、および骨粗鬆症からなる群から選択されるメンバーを含む、項目３５から６２のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目６４）
前記疾患および／または状態が、放射線への曝露を含む、項目６３に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目６５）
前記処置および／またはモニタリングすることが、前記リポソームベースのナノ担体の投与後、化学療法および／または放射線療法を投与することをさらに含む、項目６３に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目６６）
前記投与されたリポソームベースのナノ担体が、前記リポソームベースのナノ担体の投与の所定時間後の、骨髄における前記リポソームベースのナノ担体の濃度が、いずれかの腫瘍組織における前記リポソームベースのナノ担体の濃度より少なくとも３倍高くなるような、前記対象の骨髄への選択的標的化を示し、ここで、前記所定時間が、投与の少なくとも１時間後である、項目６３から６５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目６７）
前記処置および／またはモニタリングすることが、
疾患および／または状態に罹患しているか、または罹患しやすい患者に項目１から１５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体を投与することと、
前記患者の少なくとも１つの組織に送達された薬物の量を調査することとをさらに含む、項目３５から６６のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目６８）
対象の細網内皮系の器官をイメージングおよび／またはモニタリングする方法における使用のために、前記イメージングおよび／またはモニタリングすることが、項目１から１５のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体からの放射線を検出することであって、前記対象が前記リポソームベースのナノ担体を投与されていたことを含む、項目３５から６７のいずれか一項に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目６９）
前記放射線が、外部ＰＥＴイメージングシステムによって検出される、項目６８に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目７０）
前記器官が、活性骨髄、肝臓、および脾臓からなる群から選択されるメンバーを含む、項目６８または６９に記載のリポソームベースのナノ担体。
（項目７１）
前記イメージングおよび／またはモニタリングすることが、前記検出された放射線に対応する画像を表示することをさらに含み、前記画像が活性骨髄を他の組織から視覚的に識別し、任意選択で、薬物および／またはリポソームベースのナノ担体の濃度を定量する、項目６８または６９に記載のリポソームベースのナノ担体。
【国際調査報告】
2019512484.tif 000044
2019512484.tif 000045
2019512484.tif 000046
2019512484.tif 000047