(57)【要約】高溶解性繊維源及び低溶解性繊維源を含む繊維成分と、ポリフェノール源とを含むものである基材を含む、放出制御ペットフード組成物であって、この基材は、ポリフェノール源を、哺乳動物によって摂取された後に哺乳動物の下部消化器（ＧＩ）管へ送達するように構成される、放出制御ペットフード組成物が、本明細書に記載されている。これらの組成物を製造する方法、及び使用する方法も記載されている。
2019500048.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
高溶解性繊維源および低溶解性繊維源を含む繊維成分と、
ポリフェノール源とを含む基材を含む、放出制御ペットフード組成物であって、
前記基材は、哺乳動物による摂取後に、前記ポリフェノール源を哺乳動物の下部消化器（ＧＩ）管に送達するように構成される、放出制御ペットフード組成物。
【請求項２】
高溶解性繊維源についての低溶解性繊維源に対する重量比は、約１：２０〜約１：１である、請求項１に記載のペットフード組成物。
【請求項３】
高溶解性繊維源についての低溶解性繊維源に対する重量比は、約１：１５〜約１：２である、請求項１又は請求項２に記載のペットフード組成物。
【請求項４】
高溶解性繊維源についての低溶解性繊維源に対する重量比は、約１：１０〜約１：３である、請求項１〜３のいずれかに記載のペットフード組成物。
【請求項５】
高溶解性繊維源についての低溶解性繊維源に対する重量比は、約１：５〜約１：３である、請求項１〜４のいずれかに記載のペットフード組成物。
【請求項６】
高溶解性繊維源についての低溶解性繊維源に対する重量比は、約１：４である、請求項１〜５のいずれかに記載のペットフード組成物。
【請求項７】
前記高溶解性繊維源は、オート麦ふすま、ソバ挽き割り、エンドウ豆ふすま、大麦、トマトかす、柑橘類パルプ、ビートパルプ、及びそれらの２つ以上の組み合わせを含む、請求項１〜６のいずれかに記載のペットフード組成物。
【請求項８】
前記低溶解性繊維源は、セルロース系材料、ピーカン繊維、又はそれらの組み合わせを含む、請求項１〜７のいずれかに記載のペットフード組成物。
【請求項９】
前記ポリフェノール源は、食品又は植物由来である、請求項１〜８のいずれかに記載のペットフード組成物。
【請求項１０】
食品由来の前記ポリフェノール源は、果物又は野菜由来のポリフェノールを含む、請求項９に記載のペットフード組成物。
【請求項１１】
前記ポリフェノール源は、フラボノイド又はフェノール酸を含む、請求項１〜１０のいずれかに記載のペットフード組成物。
【請求項１２】
前記ポリフェノール源は、デヒドロキシロスマリン酸、クマロイルネピトリン、ユーパフォリン、カルノソール、スクテラリン、ケンフェロール、ロスマリン酸、ロスマノール、シルシマリチン、ルテオリン、６−メトキシ−ルテオリン、７−エピロスマンノール、ケルセチン、カテキン、ヘスペリジン、シアニジン、及びこれらの２つ以上の組み合わせから選択されるポリフェノールを提供する、請求項１〜１１のいずれかに記載のペットフード組成物。
【請求項１３】
アミノ酸プロファイルを含む加水分解された動物性又は植物性タンパク質の供給源を更に含む、請求項１〜１２のいずれかに記載のペットフード組成物。
【請求項１４】
加水分解された動物性又は植物性タンパク質の前記供給源は、鶏の肝臓を含む、請求項１３に記載のペットフード組成物。
【請求項１５】
加水分解された動物性又は植物性タンパク質の前記供給源は、約２５〜約４５重量％の活性含有量で存在する、請求項１３又は請求項１４に記載のペットフード組成物。
【請求項１６】
高ドコサヘキサエン酸魚油を更に含む、請求項１〜１５のいずれかに記載のペットフード組成物。
【請求項１７】
前記高ドコサヘキサエン酸魚油の前記活性含有量は、約０．５〜約２．５重量％である、請求項１６に記載のペットフード組成物。
【請求項１８】
炎症性の疾患、状態若しくは障害の症状について、例えば哺乳動物の炎症性腸疾患について治療、予防、又は改善する方法であって、請求項１〜１７のいずれかに記載の組成物の有効量を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む、方法。
【請求項１９】
哺乳動物の腸内ミクロフローラを有益に操作する方法であって、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物の有効量を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む、方法。
【請求項２０】
ペットフード組成物を形成する方法であって、
基材を押し出す工程であって、前記基材が、
高溶解性繊維源及び低溶解性繊維源を含む繊維成分と、
ポリフェノール源と、を含むものである、押し出す工程と、
キブルに表面コーティングを施す工程と、を含み、
前記基材は、前記ポリフェノール源を、哺乳動物によって摂取された後に前記哺乳動物の下部消化器（ＧＩ）管へ送達するように構成される、方法。
【請求項２１】
前記表面コーティングは美味剤を含む、請求項２０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
ペットは、継続的な成長と通常の健康状態のために健康的な食餌と適切な消化が必要である。しかし、胃腸の苦痛は、一般的に、一般的なペットフード組成物の通常の消化を妨げる。これらの問題のいくつかは、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）及び他の慢性的な消化状態等、かなり深刻なものである場合がある。ＩＢＤは一般的に下痢を伴うが、これはこの状態を抱えるペットにとっては非常に不快であり得、特に慢性的な場合にはペットの糞の後始末をしなければならないペットの所有者には不快でありうる。
【０００２】
ＩＢＤを治療し、ペットにおける炎症状態を改善するための１つの方法は、伝統的なペットフード組成物を介して、有益な薬剤(beneficial agent)、例えば医薬(medicament)、プレバイオティクス(prebiotics)、プロバイオティクス(probiotics)等を投与することである。しかし、有益な薬剤が標的部位に送達されることを確実にすることは困難であった。このように、有益な薬剤の放出を制御し、有益な薬剤が標的部位に送達されることを確実にすることができるペットフード組成物が必要とされている。本発明の実施形態は、これらのニーズを満たすように設計されている。
【発明の概要】
【０００３】
いくつかの実施形態では、本発明は、放出制御ペットフード組成物であって、高溶解性繊維源及び低溶解性繊維源を含む繊維成分と、ポリフェノール源と、を含む基材を含み、基材は、ポリフェノール源を、哺乳動物によって摂取された後に哺乳動物の下部消化器（ＧＩ）管へ送達するように構成される、放出制御ペットフード組成物を提供する。
【０００４】
他の実施形態は、ペットフード組成物を形成する方法であって、次の工程を含むものを提供する。すなわち、(i)制御放出キブルを形成するように基材(matrix)組成物を押し出す工程であって、基材組成物は、高溶解性繊維源及び低溶解性繊維源を含む繊維成分と、ポリフェノール源とを含み、この基材は、ポリフェノール源が、哺乳動物によって摂取された場合に哺乳動物の上部消化器（ＧＩ）管において確実に消化も吸収もされないように構成されるものである、押し出す工程と、(ii)キブルに表面コーティングを施す工程と、を含む方法を提供する。
【０００５】
更に別の実施形態は、炎症性疾患、状態若しくは障害の症状、例えば哺乳動物の炎症性腸疾患を、治療、予防、又は改善する方法を提供し、この方法は、本明細書に記載の組成物のいずれか１つを哺乳動物、例えばそれを必要とするコンパニオン動物に投与することを含む。
【０００６】
いくつかの実施形態は、哺乳動物の腸内ミクロフローラを有益に操作する方法を提供し、この方法は、本明細書に記載の組成物のいずれか１つを哺乳動物、例えばそれを必要とするコンパニオン動物に投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１Ａ】本発明の例示的な組成物が、結腸に、ここで常在性腸内マイクロバイオータ(微生物叢)によって代謝されるポリフェノールを首尾よく提供することを例示するデータを示す（１）。
【図１Ｂ】本発明の例示的な組成物が、結腸に、ここで常在性腸内マイクロバイオータ(微生物叢)によって代謝されるポリフェノールを首尾よく提供することを例示するデータを示す（２）。
【図１Ｃ】本発明の例示的な組成物が、結腸に、ここで常在性腸内マイクロバイオータ(微生物叢)によって代謝されるポリフェノールを首尾よく提供することを例示するデータを示す（３）。
【図２Ａ】本発明の例示的な組成物が、微生物のポストバイオティクスの高い血清レベルをもたらすことを例示するデータを示す（１）。
【図２Ｂ】本発明の例示的な組成物が、微生物のポストバイオティクス(Postbiotics)の高い血清レベルをもたらすことを例示するデータを示す（２）。
【図２Ｃ】本発明の例示的な組成物が、微生物のポストバイオティクスの高い血清レベルをもたらすことを例示するデータを示す（３）。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のペットフード組成物は、以下のことを行う、栄養的食餌因子に基づく多元的な療法を提供する。すなわち、（１）加水分解されたタンパク質の使用によりアレルギー誘発性を低下させること、（２）容易に消化可能な多量栄養素(主要栄養素；macronutrient)を提供すること、（３）代謝中間体を腸細胞にもたらすグルタミニルアミノ酸を提供すること、（４）炎症反応を減少させる免疫調整成分を提供すること、及び（５）耐性、又は後腸の共生生物相を促進・助長する微生物細胞壁画分を提供することを行う、栄養的食餌因子に基づく多元的な療法を提供する。他の実施形態では、ペットフード組成物は、食物ポリフェノールの代謝最終生成物についての腸内微生物産生を増加させ、及び／又はこれらの食物ポリフェノールについての体循環への吸収作用を高める。
【０００９】
いくつかの実施形態では、本発明のペットフード組成物は、免疫最適化の所望の効果を提供することができる食餌成分を含むものである基材(matrix)を含む。具体的には、組成物は、上部消化器（ＧＩ）管において消化も吸収もされないように化学的に又は物理的に結合されたポリフェノールを有する不活性非発酵性繊維源を含むものである基材を、含み得る。いくつかの実施形態において、これらの繊維結合ポリフェノールは、上部ＧＩ管を通り抜け、動物の結腸に無傷で到達する。腸内微生物は食物繊維を代謝すると考えられ、その過程で、繊維結合ポリフェノールを遊離させる。これらの新たに遊離したポリフェノールはまた、微生物代謝の影響を受け、「ポストバイオティクス」と呼ばれる小さな生体分子を生成する。ポストバイオティクスは結腸全体で吸収され、全身に分布し、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療や炎症反応の改善に役立つ免疫調整を含む、多面発現効果をもたらす。哺乳動物の下部ＧＩ管で難溶性である低溶解性繊維源（例えば、リグニン）を用いる１つの利点は、便の嵩高さをもたらすことである。
【００１０】
いくつかの実施形態では、基材は、繊維性ネットワークを含む。いくつかの実施形態では、繊維性ネットワークは、様々な溶解速度を有する繊維を含む。いくつかの実施形態では、繊維の溶解速度はｐＨに左右される。いくつかの実施形態では、溶解速度は温度に左右される。いくつかの実施形態では、繊維性ネットワークは、繊維間空隙を含む。いくつかの実施形態では、繊維間空隙は、溶解剤を繊維性ネットワークに入れるのに十分な寸法のものである。
【００１１】
本明細書で使用する「溶解剤」(dissolution agent)は、流体、材料、又はその類似のものを含むことを意図し、そしてそれは基材の溶解速度を高め、それによって有益な薬剤（例えば、ポリフェノール源）の放出を促進する。
【００１２】
いくつかの実施形態では、基材は、繊維源に結合された有益な薬剤を含む。いくつかの実施形態では、有益な薬剤は、本開示による標的送達を行うのが望ましい任意の成分でありうる。
【００１３】
いくつかの実施形態では、有益な薬剤はポリフェノール源である。いくつかの実施形態では、ポリフェノール源は、放出制御基材の溶解プロファイル（溶解特性；dissolution profile）の結果として、実質的に上部ＧＩ管で利用できない。
【００１４】
いくつかの実施形態は、高溶解性繊維源及び低溶解性繊維源を含む繊維成分と、ポリフェノール源とを含むものである基材を含む、放出制御ペットフード組成物を提供し、基材は、ポリフェノール源について、哺乳動物によって摂取された後に哺乳動物の下部消化器（ＧＩ）管へ送達するように構成される。いくつかの実施形態では、高溶解性繊維源についての低溶解性繊維源に対する重量比は、約１：２０〜約１：１である。他の実施形態では、高溶解性繊維源についての低溶解性繊維源に対する重量比は、約１：１５〜約１：２である。更に別の実施形態は、高溶解性繊維源についての低溶解性繊維源に対する重量比が約１：１０〜約１：３である組成物を提供する。別の実施形態は、高溶解性繊維源についての低溶解性繊維源に対する重量比が約１：５〜約１：３である組成物を提供する。一方、別の実施形態は、高溶解性繊維源についての低溶解性繊維源に対する重量比が約１：４である組成物を提供する。いくつかの実施形態では、高溶解性繊維源についての低溶解性繊維源に対する重量比は、約１：４．３である。
【００１５】
いくつかの実施形態において、「高溶解性繊維」と「可溶性繊維」という用語を互換的に使用することができる。いくつかの実施形態では、「低溶解性繊維」と「不溶性繊維」という用語を互換的に使用することができる。
【００１６】
いくつかの実施形態では、高溶解性繊維源は、オート麦ふすま、ソバ挽き割り、エンドウ豆ふすま、大麦、トマトかす、柑橘類パルプ、ビートパルプ、及びそれらの２つ以上の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、低溶解性繊維源は、セルロース系材料、ピーカン（ペカン；pecan）繊維、又はそれらの組み合わせを含む。
【００１７】
いくつかの実施形態では、ポリフェノール源は、食品又は植物由来である。いくつかの実施形態では、食品由来のポリフェノール源は、果物又は野菜由来のポリフェノールを含む。いくつかの実施形態において、ポリフェノール源は、フラボノイド又はフェノール酸（フェノールカルボン酸）を含む。
【００１８】
いくつかの実施形態では、ポリフェノール源は、デヒドロオキシロスマリン酸、クマロイルネピトリン、ユーパフォリン、カルノソール、スクテラリン、ケンフェロール、ロスマリン酸、ロスマノール、シルシマリチン、ルテオリン、６−メトキシ−ルテオリン、７−エピロスマンノール、ケルセチン、カテキン、ヘスペリジン、シアニジン、及びこれらの２つ以上の組み合わせから選択されるポリフェノールを提供する。
【００１９】
いくつかの実施形態は、アミノ酸プロファイルを含む加水分解された動物性又は植物性タンパク質の供給源を更に含む。いくつかの実施形態において、加水分解された動物性又は植物性タンパク質の供給源は、鶏の肝臓を含む。いくつかの実施形態において、加水分解された動物性又は植物性タンパク質の供給源は、約２５〜約４５重量％の活性含有量で存在する。
【００２０】
他の実施形態では、組成物は、オメガ−３、オメガ−６、又はオメガ−９脂肪酸の供給源を含む。いくつかの実施形態は、高ドコサヘキサエン酸魚油を含む。いくつかの実施形態では、高ドコサヘキサエン酸魚油の活性含有量は、約０．５〜約２．５重量％である。
【００２１】
更に別の実施形態は、炎症性の疾患、状態若しくは障害の症状を、例えば哺乳動物の炎症性腸疾患を、治療、予防、又は改善する方法を提供し、本明細書に記載の組成物のいずれか１つの有効量を投与することを含む。
【００２２】
いくつかの実施形態は、哺乳動物の腸内ミクロフローラを有益に操作する方法を提供し、この方法は、本明細書に記載の組成物のいずれか１つの有効量を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む。
【００２３】
更に他の実施形態は、高溶解性繊維源及び低溶解性繊維源を含む繊維成分と、ポリフェノール源とを含む基材を押し出す工程と、キブルに表面コーティングを施す工程と、を含み、基材は、ポリフェノール源を、哺乳動物によって摂取された後に哺乳動物の下部消化器（ＧＩ）管へ送達するように構成されるのである、ペットフード組成物を形成する方法を提供する。いくつかの実施形態では、表面コーティングは美味剤（ｐａｌａｔａｎｔ）を含む。
【００２４】
いくつかの実施形態では、本発明は、獣医師、ペット所有者又は他のケアギバー(caregiver)によって経口投与され得る、コンパニオン動物用の放出制御組成物を対象とする。本発明の組成物は、放出制御特性を全く損なうことなく咀嚼可能である。特に、放出制御機能に関連する恩恵は、動物による咀嚼後でさえも実質的に維持される。このように、本発明の文脈では咀嚼可能（チュアブル）であるということは、投薬剤の放出制御性能が咀嚼に対して効果的に抵抗力があることを意味することが理解されるであろう。
【００２５】
本発明の組成物は、一般に咀嚼されるが、本開示は、嚥下後に有益な薬剤の放出制御をもたらす組成物を含むものとする。
【００２６】
本明細書で使用される「放出制御」は、剤形のある特性の関数としての医薬的に活性な薬剤の放出速度を指す。例えば、１）有益な薬剤が体内の特定の位置で放出されるように構成される標的放出、２）組成物が摂取された後と、有益な薬剤の放出が開始される前とで、時間差がある遅延放出、及び、３）有益な薬剤が即時放出又は調節放出様式で放出される、拍動放出である。この拍動放出は、例えば、標的放出又は遅延放出に続いて、放出がほとんどない又は全くない期間が続き、更に即時放出又は調節放出等の別の期間が続く。このようにして、１つ以上の放出パルスを得ることができる。
【００２７】
当業者に理解されるように、他の送達プロファイルが可能であり、全てが本発明の目的の放出制御の範囲内にあると考えられる。
【００２８】
いくつかの実施形態では、本発明の放出制御組成物は、微粒子形態の有益な薬剤（例えば、ポリフェノール）を提供する。いくつかの実施形態では、有益な薬剤は、組成物が動物によって咀嚼される際に、有益な薬剤（粒子）が任意の有意の程度に、更に細かく砕かれないような大きさを有する粒子の形態で提供される。
【００２９】
本明細書に記載の具体的な方法に加えて、本発明の組成物を、当業者に公知の様々な技術によって調製することができる。
【００３０】
いくつかの実施形態では、微粒子は最大約５０００μｍの平均粒子径を有し、より好ましくは約１０μｍ〜約５０００μｍの平均粒子径であり、更により好ましくは約５０μｍ〜約２０００μｍの平均粒子径であり、なお更により好ましくは約１００μｍ〜約１０００μｍの平均粒子径である。当業者に理解されるように、粒子は、本明細書に記載の標的送達を提供する限り、任意のサイズの形状でありうる。
【００３１】
本明細書に記載の高溶解性及び低溶解性繊維源に加えて、有益な薬剤の放出を制御するために、追加の成分、例えばポリマーを使用することができる。例えばｐＨ感受性ポリマーであり、それは低ｐＨ、例えば胃の中で一般的に見られるようなｐＨ１〜約５では典型的には不溶性であるが、より高いｐＨ、例えば典型的には小腸の中で遭遇するような、ｐＨ５．５よりも高いｐＨでは可溶性である。具体的には、好適なポリマーとしては、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  ＲＬ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  ＲＳ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  ＲＬ１００／ＲＳ１００の混合物、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  ＮＥ３０Ｄ、酢酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、シリコーン、エチルセルロース分散液（市販のＡｑｕａｃｏａｔ（登録商標）ＦＭＣ及びＳｕｒｒｅｌｅａｓｅ（登録商標）（ｃｏｌｏｒｏｎ））を含むが、これらに限定されない。
【００３２】
本明細書中で使用される場合、用語「コンパニオン動物」は、飼い慣らされた動物を指す。コンパニオン動物はヒトを除外する。好ましくは、動物は哺乳動物である。コンパニオン動物の例として、イヌ、ネコ及びウマが挙げられるが、これらに限定されない。好ましいコンパニオン動物はイヌ及びネコである。
【００３３】
本発明のいくつかの実施形態は、「美味剤」又は「嗜好性改善剤」を含む。本明細書で使用される「嗜好性改善剤」又は「美味剤」という用語は、それが添加される組成物の嗜好性を変化させる任意の組成物を含む。本発明の嗜好性改善剤は、肉系のもの、又は肉由来の非肉系のものでありうる。
【００３４】
いくつかの実施形態では、ペットフード組成物は、一般に、栄養的に完全なアミノ酸プロファイルを含む加水分解された動物性タンパク質又は植物性タンパク質（例えば、乾燥鶏肝臓）、ペプチジルグルタミン（例えば、Ｈｙｖｉｔａｌ（登録商標）小麦グルタミンＰＮ）、本明細書に記載の不溶性の不活性繊維（ピーカン繊維、オート麦及びセルロース）、本明細書に記載のプロバイオティクス溶解性繊維（例えば、ビートパルプ）、本明細書に記載の繊維結合ポリフェノール（例えば、クランベリーかす、ザクロエキス、緑茶エキス）、中鎖トリグリセリド、高ドコサヘキサエン酸魚油、ショウガ根粉、ボスウェリアセラータ抽出物、及び酵母ベータグルカンを含む。
【００３５】
別の実施形態では、ペットフード組成物は、ペットフード組成物の総重量に基づいて、以下の表１に記載の成分を指定量含む。
【表１】
2019500048.tif 000003
【００３６】
本明細書に記載のペットフード組成物は、キブルタイプのペットフード組成物を形成する押出成形によって形成され得る。いくつかの実施形態では、組成物の粉砕された原料成分が押し出され、次いで美味剤及び／又は栄養補給油を含む表面コーティングが適用される。いくつかの実施形態では、キブルは、転動式ミキサー内で、美味剤及び／又は栄養補給油を含む組成物でスプレーコーティングされる。他の実施形態では、キブルは真空エンロービング(vacuum enrobing)技術を用いてコーティングされるのであり、キブルは、減圧状態（真空）に置かれ、次いでコーティング材が浴びせられ、この後、真空の解除によりキブル内部へコーティング材を押し込む。
【００３７】
本発明を以下の非限定的な実施例と関連して説明する。
【実施例】
【００３８】
実施例１
例示的なペットフード組成物（実施例１）は、（下記）表２に記載されるように調製される。全ての量を、ペットフード組成物の総重量に基づいて、重量パーセントで示す。この組成物は、アメリカ飼料検査官協会（ＡＡＦＣＯ）及び米国学術研究会議（ＮＲＣ）によって規定される栄養基準に従って配合される。この組成物は、押出成形で製造され、乾燥され、次いで美味剤でコーティングされる。
【表２】
2019500048.tif 000004
【００３９】
組成物の有効性を試験するために、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を有する１３頭のイヌを年齢、体重及び性別が一致する１３頭の健康な対照と共に参加させたＩＡＣＵＣ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）承認のプロトコルを実行する。イヌの評価は、生化学的及び臨床的な健康について、血液及び糞便のマーカーを分析することにより行う。試験は、（実施例１と対照食餌との）どちらかの食餌を摂取する、健康なイヌと炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を有するイヌとの両方を用いた縦断的クロスオーバー試験（longitudinal cross-over design）である。対照食餌用ペットフード組成物は、Ｈｉｌｌ’ｓ  Ｐｅｔ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、Ｉｎｃ．よりＨｉｌｌ’ｓ（登録商標）ｉ／ｄ（登録商標）のブランドで市販されている。全てのイヌには、試験に参加させられる前に摂取していた食餌をどんなものであれ、１週間、事前給餌として与えられた後に、食餌（実施例１及び対照食餌）を４週間与えられる。その後、ベースラインの時点（０週とみなす、１週間の事前給餌の直後）、並びに第４週（第１期）及び第８週（第２期）に試験を行う。
【００４０】
糞便のスコアは５ポイントの尺度で評価され、５は最も健康的な（最も堅い）便である。便について更に水分及び灰分分析を行い、灰分について鉱物解析を行った。全身性慢性炎症の生物活性マーカーもまた、メタボローム解析検査(metabolomics screening)により、血清中について評価される。血液中の好塩基球の循環レベルもまた、臨床計測器によって分析される。最後に、糞便の質も、主観的（視覚的な堅さスコア）及び、また客観的（オスモライト、有機乾燥物質）に調べられる。
【００４１】
以下の表３に示すように、試験食餌は、ベースライン及び対照食餌に比べて、便のスコアが５である便の数を増加させた。
【表３】
2019500048.tif 000005
【００４２】
以下の表４に示すように、水分及び灰分分析に関して、試験食餌は、一貫して、糞便中の水分を減少させ、かつ有機乾燥物を増加させ、糞便中のナトリウム及びカリウムのレベルも概ね低減させた。このことは改善された便の品質及び下痢の発生率の低下と関連することが示されている。
【表４】
2019500048.tif 000006
【００４３】
以下の表５に示すように、炎症の生物活性マーカーの評価に関して、試験食餌は、炎症誘発性プロスタグランジン前駆体である種々のホスファチジルアラキドネートのレベルを低下させることを示し、したがって、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を有する犬の炎症状態を改善した。
【表５】
2019500048.tif 000007
* PA 1 = 1-アラキドノイル-GPI (20:4)
* PA 2 = パルミトイル-アラキドノイル-グリセロホスホコリン (2)
* PA 3 = ステアロイル-アラキドノイル-グリセロホスホコリン (2)
* PA 4 = ステアロイル-アラキドノイル-グリセロホスホエタノールアミン (1)
* PA 5 = ステアロイル-アラキドノイル-グリセロホスホイノシトール (2)
【００４４】
本明細書で使用される「相対倍率濃度」は、各サンプルの値を、全てのサンプルの平均値に関連付ける正規化された濃度水準を指す。
【００４５】
（下記）表６に示すように、好塩基球濃度に関して、試験食餌は、ＩＢＤを有する犬の好塩基球の存在量を増加させ、これらの動物の免疫正常化をもたらすことができる。
【表６】
2019500048.tif 000008
【００４６】
以下の表７に記載するように、腸の健康の糞便マーカーの分析に関して、糞便のポリアミンは、食餌によって投与されるよりもむしろ、特に腸内微生物によって腸内のその場で産生される場合に、腸の健康上の恩恵をもたらすことが知られている。試験食餌は、糞便のポリアミン濃度を、ベースラインを上回る濃度に増加させることが示された。
【表７】
2019500048.tif 000009
【００４７】
表３〜７に記載のデータは、本発明の例示的な組成物（実施例１）が糞便の質、糞便の生化学的プロファイル、生化学的及び細胞性免疫状態の循環マーカー、並びに腸の健康に関連する糞便代謝産物を改善することにより、ＩＢＤ症状を改善し得ることを示す。
【００４８】
実施例２
第２の例示的なペットフード組成物の免疫最適化を決定するために、給餌試験を実施する。例示的なペットフード組成物（実施例２）は、下記の表８に記載されるように調製される。全ての量を、ペットフード組成物の総重量に基づいて、重量パーセントで示す。この組成物は、アメリカ飼料検査官協会（ＡＡＦＣＯ）及び米国学術研究会議（ＮＲＣ）によって規定される栄養基準に従って配合される。この組成物は、押出成形で製造され、乾燥され、次いで美味剤でコーティングされる。（下記）表８に記載される組成物を製造するのに使用される方法は、本発明の基材の生成を確実にする。
【表８】
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【００４９】
ＩＡＣＵＣのプロトコルに従って２４匹のイヌで給餌試験を行う。６週間にわたって本発明の例示的な組成物（実施例２）を摂取する前と後に血液を採取し、体外全血刺激が行われる。具体的には、実施例２を摂取したイヌから全血を採取し、２つのサンプルに分割する。すなわち、第１は細菌性エンドトキシンで刺激されて急性炎症反応を誘発するもの、第２は刺激を全く受けずに比較培養を続けるものに、分割する。２４時間培養を行った後、（刺激を受けた、及び受けない）培養血液を炎症性サイトカインについて分析する。刺激を受けなかったものは基底炎症のプロキシ評価(proxy assessment)を示し、一方、刺激を受けたサンプルは免疫抗原投与に反応する能力を示す。最適化は、実施例２の摂取が、非刺激（基底）サンプル中の炎症性サイトカインの濃度を上昇させる場合に達成される。サイトカインは、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）により測定される。
【００５０】
（下記）表９及び表１０に示すように、実施例２の摂取は、コンパニオン動物（例えばイヌ）におけるサイトカインの産生を刺激刺激し増大させた。分析されるサイトカインは以下の通りである：ＩＬ−１２（インターロイキン１２）、ＩＬ−６（インターロイキン６）、ＶＥＧＦ−Ａ（血管内皮増殖因子）、ＮＧＦ（神経成長因子）、ＳＣＦ（幹細胞因子）、ＴＮＦ−α（腫瘍壊死因子α）ＭＣＰ−１（単球走化性タンパク質−１）、ＩＮＦ−γ（インターフェロンガンマ）、及びＩＬ−１０（インターロイキン１０）である。測定された１０のサイトカインのうちの６つが、実施例２を６週間摂取したイヌの刺激を受けた全血中で、ベースラインと比較して統計的に増加した。これと対照的に、実施例２の食餌の摂取は、刺激を受けていない全血からのものについて、サイトカイン産生をほとんど変化させないままとした。これは、実施例２が急性免疫刺激に対するイヌの反応を増加させるにもかかわらず、基底炎症を増加させないことを示す。
【表９】
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【表１０】
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実施例３
【００５１】
本発明の例示的なペットフード組成物（実施例２及び３）を摂取した後のポストバイオティック生成について測定するために、２つの追加の実験が行われる。実施例２の成分リストは、上記表８に示されている。実施例３の成分リストは（下記）表１１に記載されている。全ての量を、ペットフード組成物の総重量に基づいて、重量パーセントで示す。この組成物は、アメリカ飼料検査官協会（ＡＡＦＣＯ）及び米国学術研究会議（ＮＲＣ）によって規定される栄養基準に従って配合される。この組成物は、押出成形され、乾燥され、次いで美味剤を含む組成物でコーティングされるのでありうる。実施例２と同様に、表１１に記載される組成物を製造するのに使用される方法は、本発明の発明に関する基材の生成を確実にする。
【表１１】
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【００５２】
以下に記載する実験で、ＩＡＣＵＣ実施計画に従ってイヌに食餌を与える。
【００５３】
実験Ａ−糞便評価
イヌに、対照食餌又は実施例２からなる食餌を、クロスオーバー試験（cross-over design）にて６週間与える。被検体は、本発明の例示的な組成物（実施例２）を摂取する前の３週間、維持食餌（maintenance diet；Ｈｉｌｌ’ｓ  Ｐｅｔ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、Ｉｎｃ．より市販のＨｉｌｌ’ｓ（登録商標）Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｉｅｔ（登録商標）Ｃａｎｉｎｅ  Ａｄｕｌｔ）を摂取する予備給餌期(pre-feed phase)に参加した。ベースライン測定は、予備給餌期の終了時に実施される。対照食餌は、より低濃度の繊維結合ポリフェノール栄養源及び総繊維含量を含有し、繊維は主に不溶性形態である。
【００５４】
実施例２が結腸にポリフェノールの標的送達をもたらす能力を評価するために、対照食餌を与えたイヌ及び実施例２を与えたイヌの糞便サンプルのポリフェノール及びポリフェノール代謝産物の濃度の違いを分析する。ポリフェノール及び代謝産物の多変量プロファイリング解析の結果を図１Ａ及び１Ｂに示す。Ｘ軸は一連のポリフェノール及びそれらの代謝産物を示し、Ｙ軸はベースライン時（図１Ａ）及び実施例２の組成物からなる試験食餌を摂取した後（図１Ｂ）の糞便中に見出される、これらの各々の相対濃度を、目盛を用いて示す。ポリフェノール及び代謝産物の相対濃度について経路濃縮分析(パスウェイエンリッチメント解析; pathway enrichment analysis)を行ったのであり（図１Ｃ）、食品／植物成分クラスターは、試験食餌を摂取させたイヌにおける、ベースラインに対しての統計的増加を示す。データが示すように、糞便のポリフェノール及びポストバイオティクスの相対濃度の比較は、実施例２からなる食餌が、これらの生物活性剤の結腸への標的指向化を、本発明の特徴の組み合わせを含まない市販の高品質のイヌ用維持食餌からなる食餌よりも、より効果的に増加させることを示す。
【００５５】
実験Ｂ−血清評価
イヌに、対照食餌又は実施例３からなる食餌を、クロスオーバーなしで１３週間連続して摂取させる。予備給餌期間はなかった。対照食餌は、試験食餌より低い濃度の繊維結合ポリフェノール栄養源を含有し、総繊維含有量が一致するが、繊維は主に不溶性の形態であった。
【００５６】
採便と同時点での同じ被検体からの血清も、同じメタボローム構造について分析される。具体的には、血清サンプルを、微生物ポリフェノール代謝産物及びそれらの第ＩＩ相解毒共役体の濃度の違いについて分析する。ポリフェノール及び代謝産物の多変量プロファイリング解析の結果を図２Ａ及び２Ｂに示す。Ｘ軸は、ポリフェノールの一連の血清由来（非）共役微生物代謝産物を示し、Ｙ軸はベースライン時（図２Ａ）、及び実施例３の組成物を含む試験食餌を摂取した後（図２Ｂ）、の血清中に見出されるこれらの各々の相対濃度を、目盛を用いて示す。経路濃縮分析はまた、血清由来ポリフェノールの（非）共役微生物代謝産物の相対濃度についても行われ（図２Ｃ参照）、食品／植物成分クラスターは、試験食餌を摂取させたイヌにおける、ベースラインに対しての統計的に有意な増加を示す。データが示すように、血清のポリフェノール及びポストバイオティクスの相対濃度の比較は、実施例３からなる食餌が、これらの生物活性剤の結腸への標的指向化を、本発明の特徴の組み合わせを含まない市販の高品質のイヌ用維持食餌からなる食餌よりも、より効果的に増加させたことを示す。
【００５７】
実験Ｃ−微生物由来のポストバイオティクス
微生物由来のポストバイオティクスの血清濃度について、本発明の放出制御基材を含む本発明の例示的な組成物（実施例３）を与えたイヌ、及び本発明の放出制御基材を含む比較組成物を与えたイヌにて評価する。比較組成物及び実施例３を１３週間与えられたイヌの血清サンプルの微生物ポリフェノール代謝産物及びそれらの第ＩＩ相解毒共役体の濃度の違いについて分析する。ポリフェノールの（非）共役微生物代謝産物の相対血清濃度について、経路濃縮分析を行う。結果は、次のことを示す。すなわち、特定の食餌成分の細菌代謝産物は、比較組成物を与えられたイヌにおけるよりも、実施例３を与えられたイヌの血清において、より顕著に現れることを示している。これらの結果は、有益な薬剤、例えばポリフェノールの標的指向送達を提供する本発明の組成物の能力を更に示す。
【００５８】
本発明のいくつかの実施形態が前述の明細書に開示されているが、前述の説明及び関連する図面に示された教示の利点を有する、本発明が関係する本発明の多くの修正及び他の実施形態が思い浮かぶであろうことは、当業者によって理解されるであろう。したがって、本発明は、上で開示された特定の実施形態に限定されず、多くの変更及び他の実施形態は、以下に続く特許請求の範囲内に含まれることが意図されていることが理解される。更に、本明細書及び添付の特許請求の範囲において特定の用語が使用されているが、それらは、包括的で説明的な意味でのみ使用されており、記載される発明についても、以下に続く特許請求の範囲指向も制限する目的ではない。
【図１Ａ−Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ−Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年7月26日(2018.7.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
高溶解性繊維源および低溶解性繊維源を含む繊維成分と、
ポリフェノール源とを含む基材を含む、放出制御ペットフード組成物であって、
前記基材は、哺乳動物による摂取後に、前記ポリフェノール源を哺乳動物の下部消化器（ＧＩ）管に送達するように構成される、放出制御ペットフード組成物。
【請求項２】
高溶解性繊維源についての低溶解性繊維源に対する重量比は、約１：２０〜約１：１であるか、または、約１：１５〜約１：２であるか、約１：１０〜約１：３であるか、約１：５〜約１：３であるか、もしくは、約１：４である、請求項１に記載のペットフード組成物。
【請求項３】
前記高溶解性繊維源は、オート麦ふすま、ソバ挽き割り、エンドウ豆ふすま、大麦、トマトかす、柑橘類パルプ、ビートパルプ、及びそれらの２つ以上の組み合わせを含む、請求項１または２に記載のペットフード組成物。
【請求項４】
前記低溶解性繊維源は、セルロース系材料、ピーカン繊維、又はそれらの組み合わせを含む、請求項１〜３のいずれかに記載のペットフード組成物。
【請求項５】
前記ポリフェノール源は、食品又は植物由来である、請求項１〜４のいずれかに記載のペットフード組成物。
【請求項６】
食品由来の前記ポリフェノール源は、果物又は野菜由来のポリフェノールを含む、請求項５に記載のペットフード組成物。
【請求項７】
前記ポリフェノール源は、フラボノイド又はフェノール酸を含む、請求項１〜６のいずれかに記載のペットフード組成物。
【請求項８】
前記ポリフェノール源は、デヒドロキシロスマリン酸、クマロイルネピトリン、ユーパフォリン、カルノソール、スクテラリン、ケンフェロール、ロスマリン酸、ロスマノール、シルシマリチン、ルテオリン、６−メトキシ−ルテオリン、７−エピロスマンノール、ケルセチン、カテキン、ヘスペリジン、シアニジン、及びこれらの２つ以上の組み合わせから選択されるポリフェノールを提供する、請求項１〜７のいずれかに記載のペットフード組成物。
【請求項９】
アミノ酸プロファイルを含む加水分解された動物性又は植物性タンパク質の供給源を更に含む、請求項１〜８のいずれかに記載のペットフード組成物。
【請求項１０】
加水分解された動物性又は植物性タンパク質の前記供給源は、鶏の肝臓を含む、請求項９に記載のペットフード組成物。
【請求項１１】
加水分解された動物性又は植物性タンパク質の前記供給源は、約２５〜約４５重量％の活性含有量で存在する、請求項９又は請求項１０に記載のペットフード組成物。
【請求項１２】
高ドコサヘキサエン酸魚油を更に含む、請求項１〜１１のいずれかに記載のペットフード組成物。
【請求項１３】
前記高ドコサヘキサエン酸魚油の前記活性含有量は、約０．５〜約２．５重量％である、請求項１２に記載のペットフード組成物。
【請求項１４】
ヒト以外の哺乳動物における炎症性の疾患、状態若しくは障害の症状について治療、予防、又は改善するか、または、ヒト以外の哺乳動物の腸内ミクロフローラを有益に操作する方法であって、請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物の有効量を、それを必要とするヒト以外の哺乳動物に投与することを含む、方法。
【請求項１５】
ペットフード組成物を形成する方法であって、
基材を押し出す工程であって、前記基材が、
高溶解性繊維源及び低溶解性繊維源を含む繊維成分と、
ポリフェノール源と、を含むものである、押し出す工程と、
キブルに、美味剤を含む表面コーティング、またはその他の表面コーティングを施す工程と、を含み、
前記基材は、前記ポリフェノール源を、哺乳動物によって摂取された後に前記哺乳動物の下部消化器（ＧＩ）管へ送達するように構成される、方法。
【国際調査報告】
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