(57)【要約】  本発明は、特に、ＦＧＦＲ発現、過剰発現または機能亢進と関連する過剰増殖性疾患の予防または治療のための、ソラフェニブと組み合わせたＦＧＦ受容体４（ＦＧＦＲ４）に対する抗体の医療用途に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＦＧＦＲ４発現、過剰発現および／または機能亢進と関連する過剰増殖性疾患の予防および／または治療における使用のための、（ｉ）ヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントおよび（ｉｉ）ソラフェニブまたはその薬学的に許容できる塩の組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、ヒトＦＧＦＲ４のアミノ酸１１９〜２４８の間、好ましくはアミノ酸１５２〜２４０の間、より好ましくはアミノ酸２３０と２４０との間のエピトープに対して向けられる、
組み合わせ。
【請求項２】
請求項１の使用のための組み合わせであって、
前記過剰増殖性疾患は、癌であり、特に、肝細胞癌腫（ＨＣＣ）、腎細胞癌腫（ＲＣＣ）、および甲状腺癌から選択される癌である、
組み合わせ。
【請求項３】
請求項１または２の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、ＦＧＦＲ４のＩｇ様ドメイン２に対して、特に、アミノ酸配列ＲＹＮＹを含む配列エピトープに対して、結合する、
組み合わせ。
【請求項４】
請求項１から３のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、
（ｉ）以下を含む重鎖：
配列番号１〜６のいずれか１つに示される配列またはそれから１または２アミノ酸異なる配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、配列番号７〜１２のいずれか１つに示される配列またはそれから１または２アミノ酸異なる配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）、および／または、配列番号１３〜２０のいずれか１つに示される配列またはそれから１または２アミノ酸異なる配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）、および／または
（ｉｉ）以下を含む軽鎖：
配列番号２１〜２３および６８のいずれか１つに示される配列またはそれから１または２アミノ酸異なる配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）、配列番号２４〜２７のいずれか１つに示される配列またはそれから１または２アミノ酸異なる配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）、および／または、配列番号２８〜３５のいずれか１つに示される配列またはそれから１または２アミノ酸異なる配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）
を含む、
組み合わせ。
【請求項５】
請求項４の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、配列番号１〜６のいずれか１つに示される配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号７〜１２のいずれか１つに示される配列を有するＣＤＲＨ２、配列番号１３〜２０のいずれか１つに示される配列を有するＣＤＲＨ３、配列番号２１〜２３および６８のいずれか１つに示される配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号２４〜２７のいずれか１つに示される配列を有するＣＤＲＬ２、および、配列番号２８〜３５のいずれか１つに示される配列を有するＣＤＲＬ３を含む、
組み合わせ。
【請求項６】
請求項１から５のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、
（ａ）配列番号１に示されるＣＤＲＨ１、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ１配列、
（ｂ）配列番号７に示されるＣＤＲＨ２、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ２配列、および
（ｃ）配列番号１３に示されるＣＤＲＨ３、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ３配列、
を含む重鎖、
および／または
（ｄ）配列番号２１に示されるＣＤＲＬ１、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ１配列、
（ｅ）配列番号２４に示されるＣＤＲＬ２、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ２配列、および
（ｆ）配列番号２８に示されるＣＤＲＬ３、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ３配列、
を含む軽鎖、
を含む、
組み合わせ。
【請求項７】
請求項１から６のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、
（ａ）配列番号２に示されるＣＤＲＨ１、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ１配列、
（ｂ）配列番号７に示されるＣＤＲＨ２、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ２配列、および
（ｃ）配列番号１４に示されるＣＤＲＨ３、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ３配列、
を含む重鎖
および／または
（ｄ）配列番号２２に示されるＣＤＲＬ１、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ１配列、
（ｅ）配列番号２４に示されるＣＤＲＬ２、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ２配列、および
（ｆ）配列番号２９を含むＣＤＲＬ３、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ３配列、
を含む軽鎖
を含む、
組み合わせ。
【請求項８】
請求項１から６のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、
（ａ）配列番号３に示されるＣＤＲＨ１、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ１配列、
（ｂ）配列番号８に示されるＣＤＲＨ２、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ２配列、および
（ｃ）配列番号１５に示されるＣＤＲＨ３、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ３配列、
を含む重鎖
および／または
（ｄ）配列番号２３に示されるＣＤＲＬ１、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ１配列、
（ｅ）配列番号２５に示されるＣＤＲＬ２、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ２配列、および
（ｆ）配列番号３０に示されるＣＤＲＬ３、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ３配列、
を含む軽鎖
を含む、
組み合わせ。
【請求項９】
請求項１から６のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、
（ａ）配列番号４に示されるＣＤＲＨ１、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ１配列、
（ｂ）配列番号９に示されるＣＤＲＨ２、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ２配列、および
（ｃ）配列番号１６に示されるＣＤＲＨ３、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ３配列、
を含む重鎖
および／または
（ｄ）配列番号２２に示されるＣＤＲＬ１、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ１配列、
（ｅ）配列番号２４に示されるＣＤＲＬ２、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ２配列、および
（ｆ）配列番号３１に示されるＣＤＲＬ３、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ３配列、
を含む軽鎖
を含む、
組み合わせ。
【請求項１０】
請求項１から６のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、
（ａ）配列番号５に示されるＣＤＲＨ１、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ１配列、
（ｂ）配列番号１０に示されるＣＤＲＨ２、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ２配列、および
（ｃ）配列番号１７に示されるＣＤＲＨ３、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ３配列、
を含む重鎖
および／または
（ｄ）配列番号２２に示されるＣＤＲＬ１、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ１配列、
（ｅ）配列番号２４に示されるＣＤＲＬ２、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ２配列、および
（ｆ）配列番号３２に示されるＣＤＲＬ３、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ３配列、
を含む軽鎖
を含む、
組み合わせ。
【請求項１１】
請求項１から６のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、
（ａ）配列番号４に示されるＣＤＲＨ１、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ１配列、
（ｂ）配列番号１１に示されるＣＤＲＨ２、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ２配列、および
（ｃ）配列番号１８に示されるＣＤＲＨ３、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ３配列、
を含む重鎖
および／または
（ｄ）配列番号２２に示されるＣＤＲＬ１、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ１配列、
（ｅ）配列番号２４に示されるＣＤＲＬ２、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ２配列、および
（ｆ）配列番号３３に示されるＣＤＲＬ３、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ３配列、
を含む軽鎖
を含む、
組み合わせ。
【請求項１２】
請求項１から６のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、
（ａ）配列番号６に示されるＣＤＲＨ１、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ１配列、
（ｂ）配列番号１２に示されるＣＤＲＨ２、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ２配列、および
（ｃ）配列番号１９に示されるＣＤＲＨ３、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ３配列、
を含む重鎖
および／または
（ｄ）配列番号２２に示されるＣＤＲＬ１、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ１配列、
（ｅ）配列番号２６に示されるＣＤＲＬ２、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ２配列、および
（ｆ）配列番号３４に示されるＣＤＲＬ３、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ３配列、
を含む軽鎖
を含む、
組み合わせ。
【請求項１３】
請求項１から６のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、
（ａ）配列番号３に示されるＣＤＲＨ１、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ１配列、
（ｂ）配列番号７に示されるＣＤＲＨ２、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ２配列、および
（ｃ）配列番号２０に示されるＣＤＲＨ３、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ３配列、
を含む重鎖
および／または
（ｄ）配列番号６８に示されるＣＤＲＬ１、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ１配列、
（ｅ）配列番号２７に示されるＣＤＲＬ２、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ２配列、および
（ｆ）配列番号３５に示されるＣＤＲＬ３、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ３配列、
を含む軽鎖
を含む、
組み合わせ。
【請求項１４】
請求項１から６のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、
（ａ）配列番号３に示されるＣＤＲＨ１、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ１配列、
（ｂ）配列番号８に示されるＣＤＲＨ２、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ２配列、および
（ｃ）配列番号１５に示されるＣＤＲＨ３、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＨ３配列、
および／または
（ｄ）配列番号６８に示されるＣＤＲＬ１、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ１配列、
（ｅ）配列番号２７に示されるＣＤＲＬ２、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ２配列、および
（ｆ）配列番号３５に示されるＣＤＲＬ３、またはそれから１または２アミノ酸異なるＣＤＲＬ３配列、
を含む軽鎖
を含む、
組み合わせ。
【請求項１５】
請求項１から１４のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、配列番号５２〜５９のいずれか１つに示される重鎖可変領域および／または配列番号６０〜６７のいずれか１つに示される軽鎖可変領域を含む、
組み合わせ。
【請求項１６】
請求項１から１５のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）、フラグメント、Ｆｖフラグメント、ダイアボディ、または単鎖抗体分子である、
組み合わせ。
【請求項１７】
請求項１から１６のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、ＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型またはＩｇＧ４型である、
組み合わせ。
【請求項１８】
請求項１から１７のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、ＦＧＦＲ４シグナリングの阻害剤であり、
特に、前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、ＦＧＲＦ４に結合するリガンドの阻害剤である、
組み合わせ。
【請求項１９】
請求項１８の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、ＦＧＦＲ４に対する、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ４、ＦＧＦ６、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１および／またはＦＧＦ２３の結合を阻害する、
組み合わせ。
【請求項２０】
請求項１から１９のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、ＦＧＦＲ１−３ｂ、およびｃに対して交差反応性を有さない、
組み合わせ。
【請求項２１】
請求項１から２０のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記使用は、化学療法および／または放射線と組み合わせられる、
組み合わせ。
【請求項２２】
請求項１から２１のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、標識基および／またはエフェクター基、好ましくは治療的基に連結される、
組み合わせ。
【請求項２３】
請求項１から２２のいずれか一項に記載の組み合わせであって、
前記のヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、ＩＬ−２に融合される、
組み合わせ。
【請求項２４】
（ｉ）請求項１から２３のいずれか一項に定義されるヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメント、および、（ｉｉ）ソラフェニブまたはその薬学的に許容できる塩を含む、
キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、過剰増殖性疾患、特に癌の、予防または治療のための、ソラフェニブと組み合わせたＦＧＦ受容体４（ＦＧＦＲ４）に対する抗体の医療用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌化学療法は、ここ数十年の主な医療進歩の１つとなっている。しかしながら、従来の化学療法は、典型的に、急速に分裂する正常細胞と腫瘍細胞の間を効果的に区別せず、したがって、いくつかの毒性副作用をもたらす。対照的に、近年導入されている標的化治療は、癌特異的な分子およびシグナル伝達経路に対して向けられる。したがって、標的化治療は、腫瘍細胞に向けて高い特異性を有し、より少ない毒性でより広範な治療的ウインドーを提供する。チロシンキナーゼは、増殖因子シグナリングの調節において重要な役割を果たすので、特に重要な標的である。
【０００３】
線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）は、血管新生、創傷治癒、胚発生および様々な内分泌シグナル伝達経路に関与するメンバーを有する、さまざまな生物学的活性を有する増殖因子のファミリーである。ヒトＦＧＦファミリーは、１８のメンバーを含み、それらは構造的にシグナリング分子と関連する。それらは、受容体チロシンキナーゼのファミリーであるそれらの同起源受容体（ＦＧＦＲ）と相互作用することにより、それらの生物学的活性を発揮する。哺乳類のＦＧＦＲファミリーは、４つのメンバー：ＦＧＦＲ１〜４を有し、それぞれ、３つの細胞外免疫グロブリン型ドメイン（Ｄ１〜Ｄ３）、シングルスパン膜貫通ドメインおよび細胞内スプリットチロシンキナーゼドメインからなる。ＦＧＦは、主に、Ｄ２およびＤ３ドメインと相互作用する。各ＦＧＦＲは、ＦＧＦの特定のサブセットに結合する。ほとんどのＦＧＦは、いくつかの異なるＦＧＦＲサブタイプと結合することができ、一方で、他のものは、１つの受容体、または受容体の１つのアイソフォームを特異的に活性化する。
【０００４】
受容体−リガンド間の相互作用は、受容体の二量体化および自己リン酸化、膜関連および細胞質のアクセサリータンパク質との複合体の形成、および、多数のシグナリングカスケードの開始をもたらす。ＦＧＦＲ−ＦＧＦシグナリングシステムは、増殖、分化、遊走、形態形成および血管新生のような細胞の機能およびプロセスを調節することにより、発生および組織修復において重要な役割を果たす。
【０００５】
ＦＧＦＲ４シグナリングは、ＦＧＦＲファミリーの他のメンバーも活性化するいくつかのＦＧＦにより活性化され（Ｏｒｎｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９６，２７１：１５２９２−７）、一方で、ＦＧＦ１９は、ＦＧＦＲ４に特異的である（Ｘｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，１１（１０）：７２０−３５）。ＦＧＦＲ４受容体の活性化は、ＦＧＦによるＦＧＦＲ４の刺激に続き、リン酸化カスケードが仲介するシグナル伝達経路の機構を含むいくつかのタイプの細胞シグナリングをもたらす。ＦＧＦＲ４の細胞外ドメインへのリガンドの結合の際に、受容体の二量体化およびその後のチロシンキナーゼ残基のリン酸化は、受容体へのシグナリング分子の結合を誘導することにより、シグナル伝達経路の活性化をもたらす（Ｖａｉｎｉｋｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＥＭＢＯ，１１（１２）：４２７３−４２８０、および、１９９４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１８３２０−１８３２６）。例えば、ＦＧＦＲ４はＰＬＣγ１と関連し、ＦＧＦ刺激（ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ）の際のＤＮＡ合成およびＭＡＰキナーゼ活性化の増大が観察されている。他のヒトＦＧＦ増殖因子受容体ファミリーメンバーとのさらなる相互作用は、ＦＧＦＲ４のシグナリング能を拡張させ得て、シグナル多様化のためだけではなく、シグナル増幅のための手段である（ＭｃＫｅｅｈａｎ  Ｗ．Ｌ．ａｎｄ  Ｋａｎ  Ｍ．，１９９４，Ｍｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｄｅｖ．３９：６９−８２）。８５ｋＤａのセリンキナーゼは、ＦＧＦＲ４のチロシンリン酸化をネガティブに調節することが見いだされているが、その正確な機能は解明されていない（Ｖａｉｎｉｋｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：１２７０−１２７３）。ＮＣＡＭとＦＧＦＲ４の関連は、インテグリン依存性の付着を仲介することが示されているが（Ｃａｖａｌｌａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．３：６５０−６５７）、それは、腫瘍転移における決定的な役割を果たし得る。
【０００６】
ＦＧＦＲ４は、いくつかの細胞の役割を有することが報告されている。受容体は、骨格筋の分化および再生、間葉分化、または骨形成のような、インビトロおよびインビボでの様々な細胞分化プロセスの制御、あるいは、出生後の肝臓発達中の肺胞形成に関与する。さらに、ＦＧＦＲ４は、胆汁酸およびコレステロールのホメオスタシスの制御において説明され、肥満の制御に関与すると考えられている。さらに、胆汁生産とコレステロール生産との間のバランスは、インビトロおよびインビボで、ＦＧＦＲ４により制御される。また、ＦＧＦＲ４は、特定の腫瘍現象、例えば、肝細胞癌腫または結腸癌の発生、または、乳腺線維腺腫細胞または乳腺癌上皮細胞の増殖、例えば、乳腺または結腸直腸癌腫細胞運動にも関与する。また、ＦＧＦＲ４の過剰発現は、特定の膵癌株において説明されていて、星状細胞腫悪性腫瘍と相関する。
【０００７】
様々な障害におけるＦＧＦＲ４の関与は、受容体を、診断的および治療的適用のための興味深い標的にさせる。この文脈において、効果的なストラテジーは、ＦＧＦＲ４に対する抗体の利用である。特に、ＦＧＦＲ４が仲介するシグナリングを妨げる抗体が望ましい。ＦＧＦＲ４抗体の例は、国際出願ＷＯ０３／０６３８９３、ＷＯ２０１２／１３８９７５、ＷＯ２０１３／０１８３３１９および米国出願ＵＳ２０１１／０１５０９０３などの文献に記載されている。Ｂｕｍｂａｃａら（ｍＡｂｓ  ３：４，１−１１；２０１１）は、ＦＧＦ受容体４に対して高い特異性で結合するヒト化抗ＦＧＦＲ４抗体を記載する。
【０００８】
最近になって、ヒトＦＧＦＲ４のアミノ酸１１９〜２８４の間のエピトープに対して向けられる抗体またはその機能性フラグメントが、治療的および診断的適用に特に有用であることが見いだされた。これらの抗体は、国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６８４４０に記載されて、その開示は参照により本明細書中に援用される。記載されるヒト抗体は、治療的および診断的適用に特に有用であることが見いだされた。それらは、ＦＧＦＲ４に特異的に結合して、好ましくは、他のＦＧＦ受容体ＦＧＦＲ１−３ｂ、ｃに対する交差反応性を示さない。さらに、抗体は、ヒトＦＧＦＲ４に結合するリガンドを阻害することが可能である。抗体は、それらの結合特異性および生物学的活性に関して、特に、細胞増殖および細胞遊走を低減するそれらの可能性、さらなる抗悪性腫瘍剤を活性化する、および／または、治療的処置に対して腫瘍細胞を感受性にさせる、それらの能力に関して、有利な特性を示す。しかしながら、過剰増殖性疾患、特に癌を治療するための新規の効果的な治療に関する必要性がなお残っている。
【０００９】
ソラフェニブは、腫瘍細胞増殖および血管新生を阻害する二重作用のＲａｆキナーゼおよびＶＥＧＦＲ阻害剤である。元々はＲａｆキナーゼ阻害剤として開発されたが、その後に、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ、およびＰＤＧＦＲキナーゼを含む様々なキナーゼ受容体を阻害することが見いだされた（Ｗｉｌｈｅｌｍ  ｅｔ  ａｌ．（２００４），Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６４：７０９９−７１０９，Ｓｔｒｕｍｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００５），Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２３：９６５−９７２）。ソラフェニブは、腎臓、結腸、膵臓、肺、および卵巣の腫瘍を含む４つの異なる腫瘍タイプにおいて重大な活性を有する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明において、驚くべきことに、特定の抗ＦＧＦＲ４抗体およびソラフェニブの組み合わせが、癌治療に対する新規かつ有望なアプローチを示すことが見いだされた。組み合わせの治療は、相加または実に相乗の抗癌活性を提供し、したがって、有益な臨床効果をもたらす。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
したがって、本発明の第１の態様は、
ＦＧＦＲ４発現、過剰発現および／または機能亢進と関連する過剰増殖性疾患の予防および／または治療における使用のための、
（ｉ）ヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメント、および
（ｉｉ）ソラフェニブまたはその薬学的に許容できる塩の組み合わせであり、
ここで、ヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、ヒトＦＧＦＲ４のアミノ酸１１９〜２４８の間、好ましくはアミノ酸１５２〜２４０の間、より好ましくはアミノ酸２３０と２４０との間のエピトープに対して向けられる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】肝細胞癌腫（ＨＣＣ）の治療におけるソラフェニブおよび抗体Ｕ４−３を用いた組み合わせ試験の結果を示す。
【図２】Ｈｕｈ−７モデルの分子分析を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の観点から、用語「抗体」は、特に、少なくとも１つの免疫グロブリン重鎖および少なくとも１つの免疫グロブリン軽鎖を含む分子を指す。重鎖および軽鎖のそれぞれは、可変ドメインおよび定常ドメインを含んでよい。抗原結合部位は、重鎖および軽鎖の可変ドメインから形成されてよい。可変領域（可変ドメインとも呼ばれる）は、相補性決定領域（ＣＤＲ）、例えばＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３領域、および、ＣＤＲに隣接するフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。用語「相補性決定領域」は、当業者によって容易に理解され（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  （ｅｄｓ．），Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨＬ  ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８を参照）、主に抗原と接触し、抗体特異性を決定する、抗体の可変ドメイン内の一続きのアミノ酸を指す。この領域は超可変領域としても知られる。
【００１４】
用語「ヒト抗体」は、完全なヒトまたはヒト化抗体を包含し、ここで、完全なヒト抗体が好ましい。ヒト抗体は、公知技術に従って、遺伝学的に操作された動物、例えば異種間の免疫系を含む動物から、または、抗体ディスプレイライブラリーから調製され得る。ヒト抗体は、概して、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ（Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：  ３６８−７４（２００１））およびＬｏｎｂｅｒｇ  （Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８））に記載される。ヒト抗体は、抗原性チャレンジに応答して無傷のヒト抗体またはヒト可変領域を有する無傷の抗体を生産するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することにより調製され得る。そのような動物は、典型的に、ヒト免疫グロブリン座の全てまたは一部を含み、それは内因性免疫グロブリン座を置き換え、または染色体外に存在し、または動物の染色体内にランダムに組み込まれる。そのようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン座は、通常、不活化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得る方法の概説については、例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照。そのような動物により生産される無傷の抗体由来のヒト可変領域は、例えば異なるヒト定常領域と組み合わせることにより、さらに改変され得る。
【００１５】
また、ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の生産のためのヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている（例えばＫｏｚｂｏｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３を参照）。また、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生産されるヒト抗体は、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ  １０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載される。
【００１６】
また、ヒト抗体は、ファージディスプレイ法によって生産してもよい（例えば、ＵＳ６，２４８，５１６、ＵＳ５，４０３，４８４、ＵＳ５，９６９，１０８、ＵＳ５，８８５，７９３、ＵＳ６，６９６，２４８、ＵＳ５，８４９，５００を参照）。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択する技術は、当技術分野で知られている（例えば、Ｃａｒｍｅｎ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ（２００２），１（２），ｐ．１８９−２０３；および、Ｓｉｒｉｗａｒｄｅｎａ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ（２００２）１０９  （３），ｐ．４２７−４３１を参照）。例えば、ヒト抗体可変領域を単鎖抗体（ｓｃＦｖ）としてファージ表面上に発現させるステップ、および、抗原に結合するファージを選択するステップを含む、ファージディスプレイ法を用いることができる（Ｎａｔｕｒｅ（１９９１），３５２，（６３３６），ｐ．６２４−６２８，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９２），２２７，（２），ｐ３８１−３８８、および、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５），２３，（９），ｐ．１１０５−１１１６）。同様に、ヒト抗体Ｆａｂ（抗原−結合フラグメント）をファージの表面上に発現させるステップ、および、抗原に結合するファージを選択するステップを含む、別のファージディスプレイ法も用いることができる（ＷＯ９７／０８３２０およびＷＯ０１／０５９５０）。抗原結合に基づいて選択されたファージの遺伝子を解析して、それにより、抗原に結合するヒト抗体可変領域をコードするＤＮＡ配列を決定することができる。抗原に結合するｓｃＦｖまたはＦａｂのＤＮＡ配列が明らかである場合は、ＣＤＲ配列がそれから抽出されて、そして、その配列を有する発現ベクターを調製して適切な宿主へ導入することができ、その後に遺伝子発現がされてヒト抗体が得られる（ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／２０７９１、ＷＯ９３／０６２１３、ＷＯ９３／１１２３６、ＷＯ９３／１９１７２、ＷＯ９５／０１４３８、ＷＯ９５／１５３８８、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９４）１２，ｐ．４３３−４５５、および、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５）２３（９），ｐ．１１０５−１１１６）。
【００１７】
また、ヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することにより生産してもよい。そのような可変ドメイン配列は、それから、所望のヒト定常ドメインと組み合わせてよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択する技術は、当技術分野で知られている。
【００１８】
ヒト化抗体は、公知技術に従ってモノクローナル抗体のヒト化により調製され得る。典型的に、非ヒト抗体は、親の非ヒト抗体の特異性および親和性を維持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減するためにヒト化される。ヒト化抗体およびそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌａｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３  （２００８）に概説される。
【００１９】
また、本発明は、ヒト抗体の機能性フラグメント、例えば、少なくとも１つの抗原結合部位を含む上述の抗体の部分も包含する。本明細書において用いられる用語「機能性フラグメント」は、「抗原結合フラグメント」と同一の意味で用いられる。抗体機能性フラグメントの例は、ヒトＦＧＦＲ４に結合する所望の能力をそれらが示す限り、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ダイアボディまたは単鎖抗体分子および他のフラグメントを含む。特定の抗体フラグメントの総説に関しては、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｔ．９：１２９−１３４（２００３）を参照。
【００２０】
ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体フラグメントである。例えば、Ｈｕｄｓｏｎら（２００３）を参照。単鎖抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てまたは一部、または、軽鎖可変ドメインの全てまたは一部を含む、抗体フラグメントである。抗体フラグメントは、制限されないが、本明細書に記載の組み換え宿主（例えばＥ．ｃｏｌｉまたはファージ）による生産ならびに無傷の抗体のタンパク質消化を含む、様々な技術によって作製することができる。
【００２１】
特定の実施態様では、本明細書において提供される使用のための抗体は、二重特異性抗体のような多重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に関して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。
【００２２】
特定の実施態様では、結合特異性の一方はＦＧＦＲ４に関するものであり、他方は任意の他の抗原に関するものである。
【００２３】
特定の実施態様では、二重特異性抗体は、ＦＧＦＲ４の２つの異なるエピトープに結合し得る。また、二重特異性抗体を用いて、ＦＧＦＲ４を発現する細胞に細胞傷害薬を局在化させてもよい。二重特異性抗体は、抗体全長または抗体フラグメントとして調製することができる。
【００２４】
多重特異性抗体を作製する技術は、限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖ペアの組み換え共発現、および「ｋｎｏｂ  ｉｎ  ｈｏｌｅ」エンジニアリングを含む。また、多重特異性抗体は、説明されるように、抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング効果を操作することにより；２つまたはそれより多くの抗体またはフラグメントを架橋することにより；ロイシンジッパーを用いて二重特異性抗体を生産することにより；二重特異性抗体を作製するための「ダイアボディ」技術を用いることにより、および、単鎖Ｆｖを用いて三重特異性抗体を調製することにより、作製してもよい。「オクトパス抗体」を含む、３つまたはより多くの機能性抗原結合部位を有する操作された抗体もまた、本明細書中に含まれる。
【００２５】
特定の実施態様では、本明細書において提供される抗体のアミノ酸配列変異体は、ヒトＦＧＦＲ４に結合する所望の能力をそれらが示す限り、検討される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましくあり得る。抗体のアミノ酸配列変異体は、適切な改変を、抗体をコードするヌクレオチド配列に導入することにより、またはペプチド合成により、調製され得る。そのような改変は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基の欠失および／または挿入および／または置換を含む。最終構築物が所望の特性、例えば抗原結合を保有するという条件で、最終構築物に到達するために欠失、挿入および置換の任意の組み合わせをすることができる。欠失、挿入、および／または置換されるアミノ酸残基の数は、一般に、１０個以下、好ましくは５個以下、より好ましくは３個以下、最も好ましくは１個または２個である。
【００２６】
用語「結合する」または抗体の「結合」は、標的抗原、すなわち、エピトープを含むそのフラグメントを含むヒトＦＧＦＲ４との、またはそれに対する、少なくとも一時的な相互作用または関連性を意味する。
【００２７】
特定の実施態様では、本明細書において提供される使用のための抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば１０−８Ｍまたはそれ未満、例えば１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍ〜１０１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。一実施態様では、Ｋｄは、目的の抗体のＦａｂバージョンおよびその抗原を用いて行なわれる放射能標識抗原結合アッセイ（ラジオイムノアッセイ、ＲＩＡ）によって測定される。
【００２８】
別の実施態様によれば、Ｋｄは、固定化抗原を用いた表面プラズモン共鳴アッセイを用いて測定される。本発明の好ましい一実施態様によれば、抗体は、本明細書に記載のヒトＦＧＦＲ４のエピトープに対して向けられるヒトモノクローナル抗体である。
【００２９】
本発明の使用のための抗体またはその機能性フラグメントは、ヒトＦＧＦＲ４のアミノ酸１１９〜２８４の間のエピトープに対して向けられる。エピトープは、好ましくは、ヒトＦＧＦＲ４のＩｇ様ドメイン２内に位置する。抗体は、国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６８４４０により詳細に記載されて、その開示は参照により本明細書中に援用される。特に好ましいのは、ヒトＦＧＦＲ４のアミノ酸１５２〜２４０の間、より好ましくはアミノ酸２３０および２４０の間の、エピトープに対して向けられるヒト抗体である。エピトープは、立体構造または配列エピトープであってよい。好ましくは、本発明に係る使用のための抗体は、ヒトＦＧＦＲ４のアミノ酸１５２〜２４０の間、より好ましくはアミノ酸２３０および２４０の間の、配列エピトープに結合する。特に好ましい実施態様によれば、本発明の使用のための抗体は、アミノ酸配列ＲＹＮＹを含む、から本質的になる、またはからなる、エピトープ、好ましくは配列エピトープに対して向けられる。
【００３０】
本発明の使用のための抗体は、様々な免疫グロブリン（Ｉｇ）型、例えばＩｇＡ型、ＩｇＤ型、ＩｇＥ型、ＩｇＧ型またはＩｇＭ型、好ましくはＩｇＧ型またはＩｇＭ型であってよく、制限されないが、ＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型、ＩｇＧ４型、ＩｇＭ１型およびＩｇＭ２型を含む。好ましい一実施態様では、抗体はＩｇＧ１型である。
【００３１】
本発明の特定の実施態様では、抗体は、本明細書において後述する特定の重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２および／またはＣＤＲＨ３を含んでよい。
【００３２】
一実施態様では、ヒト抗体は、配列番号１〜６のいずれか１つに示されるアミノ酸配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有する、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）を含む。
【００３３】
さらなる実施態様では、抗体は、配列番号７〜１２のいずれか１つに示されるアミノ酸配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有する、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）を含む。
【００３４】
また、さらなる実施態様では、抗体は、配列番号１３〜２０のいずれか１つに示されるアミノ酸配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有する、重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）を含む。
【００３５】
また、本発明に係る抗体は、特定の軽鎖相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２および／またはＣＤＲＬ３を含んでもよい。
【００３６】
したがって、一実施態様では、抗体は、配列番号２１〜２３および６８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有する、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）を含む。
【００３７】
さらなる実施態様では、抗体は、配列番号２４〜２７のいずれか１つに示されるアミノ酸配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有する、軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）を含む。
【００３８】
また、さらなる実施態様では、抗体は、配列番号２８〜３５のいずれか１つに示されるアミノ酸配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有する、軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）を含む。
【００３９】
抗体は、好ましくは、１つの重鎖内に、ＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３）の特定の組み合わせを含んでよい。
【００４０】
したがって、好ましい一実施態様では、抗体は、相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を含む重鎖を含み、ここで、ＣＤＲＨ１は、配列番号１〜６に示される配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列から選択され、ＣＤＲＨ２は、配列番号７〜１２に示される配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列から選択され、ＣＤＲＨ３は、配列番号１３〜２０に示される配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列から選択される。
【００４１】
最も好ましくは、本発明の使用のための抗体は、３つのＣＤＲを含む重鎖を含み、ここで、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３の組み合わせは、表１に示されるものから選択される。この表の各列は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３の１つの特定の組み合わせを表わすことが理解されよう。
【００４２】
【表１】
2019507723.tif 000002
【００４３】
本発明によれば、抗体は、１つの軽鎖内に、ＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３）の特定の組み合わせを含むことがさらに好ましい。
【００４４】
したがって、好ましい一実施態様では、抗体は、相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含む軽鎖を含み、ここで、ＣＤＲＬ１は、配列番号２１〜２３および６８のいずれかに示されるアミノ酸配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２は、配列番号２４〜２７のいずれかに示されるアミノ酸配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３は、配列番号２８〜３５のいずれかに示されるアミノ酸配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有する。
【００４５】
最も好ましくは、本発明の使用のための抗体は、３つのＣＤＲを含む軽鎖を含み、ここで、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３の組み合わせは、表２に示されるものから選択される。この表の各列は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３の１つの特定の組み合わせを表わすことが理解されよう。
【００４６】
【表２】
2019507723.tif 000003
【００４７】
上述のように、抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、フレームワーク領域が隣接してよい。３つのＣＤＲを含む抗体の重鎖または軽鎖は、例えば４つのフレームワーク領域を含む。
【００４８】
さらに、本発明は、上記の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲによって特徴付けられる特定の抗体と同一のヒトＦＧＦＲ４上のエピトープを認識する抗体も包含する。これらの抗体の機能性フラグメントもまた、本発明の範囲内である。抗体によって認識されるＦＧＦＲ４上のエピトープを決定するために、ヒトＦＧＦＲ４の細胞外ドメインのアミノ酸配列由来の、化学的に調製されたタンパク質配列アレイ由来の短いペプチドを用いて、抗体エピトープの位置特定および同定をすることができる（Ｒｅｉｎｉｃｋｅ  Ｗ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００４，２４８：４４３−６３）。本発明の抗体により結合されるＦＧＦＲ４細胞外ドメイン内のエピトープをマッピングするためのさらなる方法は、Ｓｎａｐｓ／ＳＥＬＤＩ（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，２００１，Ｊｕｎｅ  １５；９２（６）：８７１−６）を含み、または、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されるような日常的なクロスブロッキングアッセイを行なうことができる。
【００４９】
特に好ましい実施態様によれば、本発明の使用のためのヒト抗体は、
（ａ）配列番号１〜６に示されるＣＤＲＨ１、またはそれから１または２アミノ酸が異なるＣＤＲＨ１配列、
（ｂ）配列番号７〜１２に示されるＣＤＲＨ２、またはそれから１または２アミノ酸が異なるＣＤＲＨ２配列、および
（ｃ）配列番号１３〜２０に示されるＣＤＲＨ３、またはそれから１または２アミノ酸が異なるＣＤＲＨ３配列、
からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖、
および／または、
（ｄ）配列番号２１〜２３または６８に示されるＣＤＲＬ１、またはそれから１または２アミノ酸が異なるＣＤＲＬ１配列、
（ｅ）配列番号２４〜２７に示されるＣＤＲＬ２、またはそれから１または２アミノ酸が異なるＣＤＲＬ２配列、および
（ｆ）配列番号２８〜３５に示されるＣＤＲＬ３、またはそれから１または２アミノ酸が異なるＣＤＲＬ３配列
からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖、
を含む。
【００５０】
本発明の好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５２〜５９のいずれか１つに示される重鎖可変領域（ＶＨ）またはそれから１または２アミノ酸が異なる配列を含む。さらに、本発明のヒト抗体は、好ましくは、配列番号６０〜６７のいずれか１つに示される軽鎖可変領域（ＶＬ）またはそれから１または２アミノ酸が異なる配列を含む。特に好ましいものは、配列番号５２〜５９のいずれか１つに示される重鎖可変領域および配列番号６０〜６７のいずれか１つに示される軽鎖可変領域を含む、ヒト抗体である。
【００５１】
特に好ましいものは、配列番号１に示されるＣＤＲＨ１、配列番号７に示されるＣＤＲＨ２および配列番号１３に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号２１に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２４に示されるＣＤＲＬ２および配列番号２８に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、ヒト抗体（Ｕ４−１）である。また、ＣＤＲの１つまたは複数が１または２アミノ酸異なるヒト抗体、または、ヒトＦＧＦＲ４上の同一エピトープを認識する抗体も包含される。特に好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５２に係る重鎖可変領域および配列番号６０に係る軽鎖可変領域を含む。また、重鎖および／または軽鎖の可変領域の配列が、配列番号５２および６０に示されるものから１または２アミノ酸異なるヒト抗体も包含される。
【００５２】
特に好ましいものは、配列番号２に示されるＣＤＲＨ１、配列番号７に示されるＣＤＲＨ２および配列番号１４に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号２２に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２４に示されるＣＤＲＬ２および配列番号２９に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、ヒト抗体（Ｕ４−２）である。また、ＣＤＲの１つまたは複数が１または２アミノ酸異なるヒト抗体、または、ヒトＦＧＦＲ４上の同一エピトープを認識する抗体も包含される。特に好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５３に係る重鎖可変領域および配列番号６１に係る軽鎖可変領域を含む。また、重鎖および／または軽鎖の可変領域の配列が、配列番号５３および６１に示されるものから１または２アミノ酸異なるヒト抗体も包含される。
【００５３】
特に好ましいものは、配列番号３に示されるＣＤＲＨ１、配列番号８に示されるＣＤＲＨ２および配列番号１５に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号２３に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２５に示されるＣＤＲＬ２および配列番号３０に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、ヒト抗体（Ｕ４−３）である。また、ＣＤＲの１つまたは複数が１または２アミノ酸異なるヒト抗体、または、ヒトＦＧＦＲ４上の同一エピトープを認識する抗体も包含される。特に好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５４に係る重鎖可変領域および配列番号６２に係る軽鎖可変領域を含む。また、重鎖および／または軽鎖の可変領域の配列が、配列番号５４および６２に示されるものから１または２アミノ酸異なるヒト抗体も含まれる。
【００５４】
特に好ましいものは、配列番号４に示されるＣＤＲＨ１、配列番号９に示されるＣＤＲＨ２および配列番号１６に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号２２に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２４に示されるＣＤＲＬ２および配列番号３１に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、ヒト抗体（Ｕ４−４）である。また、ＣＤＲの１つまたは複数が１または２アミノ酸異なるヒト抗体、または、ヒトＦＧＦＲ４上の同一エピトープを認識する抗体も包含される。特に好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５５に係る重鎖可変領域および配列番号６３に係る軽鎖可変領域を含む。また、重鎖および／または軽鎖の可変領域の配列が、配列番号５５および６３に示されるものから１または２アミノ酸異なるヒト抗体も包含される。
【００５５】
特に好ましいものは、配列番号５に示されるＣＤＲＨ１、配列番号１０に示されるＣＤＲＨ２および配列番号１７に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号２２に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２４に示されるＣＤＲＬ２および配列番号３２に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、ヒト抗体（Ｕ４−５）である。また、ＣＤＲの１つまたは複数が１または２アミノ酸異なるヒト抗体、または、ヒトＦＧＦＲ４上の同一エピトープを認識する抗体も包含される。特に好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５６に係る重鎖可変領域および配列番号６４に係る軽鎖可変領域を含む。また重鎖および／または軽鎖の可変領域の配列が、配列番号５６および６４に示されるものから１または２アミノ酸異なるヒト抗体も包含される。
【００５６】
特に好ましいものは、配列番号６に示されるＣＤＲＨ１、配列番号１２に示されるＣＤＲＨ２および配列番号１９に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号２２に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２６に示されるＣＤＲＬ２および配列番号３４に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、ヒト抗体（Ｕ４−６）である。また、ＣＤＲの１つまたは複数が１または２アミノ酸異なるヒト抗体、または、ヒトＦＧＦＲ４上の同一エピトープを認識する抗体も包含される。特に好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５８に係る重鎖可変領域および配列番号６６に係る軽鎖可変領域を含む。また、重鎖および／または軽鎖の可変領域の配列が、配列番号５８および６６に示されるものから１または２アミノ酸異なるヒト抗体も包含される。
【００５７】
特に好ましいものは、配列番号３に示されるＣＤＲＨ１、配列番号７に示されるＣＤＲＨ２および配列番号２０に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号６８に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２７に示されるＣＤＲＬ２および配列番号３５に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、ヒト抗体（Ｕ４−７）である。また、ＣＤＲの１つまたは複数が１または２アミノ酸異なるヒト抗体、または、ヒトＦＧＦＲ４上の同一エピトープを認識する抗体も包含される。特に好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５９に係る重鎖可変領域および配列番号６７に係る軽鎖可変領域を含む。また、重鎖および／または軽鎖の可変領域の配列が、配列番号５９および６７に示されるものから１または２アミノ酸異なるヒト抗体も包含される。
【００５８】
特に好ましいものは、配列番号４に示されるＣＤＲＨ１、配列番号１１に示されるＣＤＲＨ２および配列番号１８に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号２２に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２４に示されるＣＤＲＬ２および配列番号３３に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、ヒト抗体（Ｕ４−８）である。また、ＣＤＲの１つまたは複数が１または２アミノ酸異なるヒト抗体、または、ヒトＦＧＦＲ４上の同一エピトープを認識する抗体も包含される。特に好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５７に係る重鎖可変領域および配列番号６５に係る軽鎖可変領域を含む。また、重鎖および／または軽鎖の可変領域の配列が、配列番号５７および６５に示されるものから１または２アミノ酸異なるヒト抗体も包含される。
【００５９】
また、配列番号３に示されるＣＤＲ１、配列番号８に示されるＣＤＲＨ２および配列番号１５に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号６８に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２７に示されるＣＤＲＬ２および配列番号３５に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、ヒト抗体（Ｕ４−９）も好ましい。また、ＣＤＲの１つまたは複数が１または２アミノ酸異なるヒト抗体、または、ヒトＦＧＦＲ４上の同一エピトープを認識する抗体も包含される。特に好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５４に係る重鎖可変領域および配列番号６７に係る軽鎖可変領域を含む。抗体Ｕ４−９は、好ましくは、抗体Ｕ４−３に関して特定される重鎖、および、抗体Ｕ４−７に関して特定される軽鎖、を含む。出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６８４４０において提供される実験では、抗体Ｕ４−９は、ＦＧＦＲ４に関する親和性が、Ｕ４−３よりも高いことが判明した。
【００６０】
特定の実施態様では、本発明の使用のための抗体またはその機能性フラグメントは、Ｕ４−１、Ｕ４−２、Ｕ４−３、Ｕ４−４、Ｕ４−５、Ｕ４−６、Ｕ４−７、Ｕ４−８またはＵ４−９重鎖の可変領域または軽鎖可変領域と実質的な同一性を有する抗体またはその機能性フラグメントを含む。用語「実質的な同一性」は、２つのアミノ酸配列が、少なくとも８０％配列同一性、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％配列同一性を共有することを意味する。２つのアミノ酸配列間の同一性は、デフォルトのパラメーターでＢｌａｓｔアルゴリズムバージョン２．２．２（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｆ．，Ｔｈｏｍａｓ  Ｌ．Ｍａｄｄｅｎ，Ａｌｅｊａｎｄｒｏ  Ａ．Ｓｃｈａｆｆｅｒ，Ｊｉｎｇｈｕｉ  Ｚｈａｎｇ，Ｚｈｅｎｇ  Ｚｈａｎｇ，Ｗｅｂｂ  Ｍｉｌｌｅｒ，ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ（１９９７），「Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ  ａｎｄ  ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ：ａ  ｎｅｗ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄａｔａｂａｓｅ  ｓｅａｒｃｈ  ｐｒｏｇｒａｍｓ」Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２）を用いて決定され得る。Ｂｌａｓｔアルゴリズムは、サイトｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｌａｓｔにアクセスすることによってインターネットを通して用いることもできる。
【００６１】
特定の実施態様では、本発明の使用のための抗体またはその機能性フラグメントは、ＦＧＦＲ４への結合に関してＵ４−１、Ｕ４−２、Ｕ４−３、Ｕ４−４、Ｕ４−５、Ｕ４−６、Ｕ４−７、Ｕ４−８またはＵ４−９と競合する抗体またはその機能性フラグメントを含む。
【００６２】
本発明の使用のための抗体は、例えば、同時係属出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６８４４０において詳細に記載される配列番号３６〜４３および配列番号４４〜５１のいずれか１つに示される核酸配列を含む核酸分子から得ることができる。
【００６３】
上述のように、ヒト抗ＦＧＦＲ４抗体は、それらの結合特異性および生物学的活性に関して、具体的には、ヒトＦＧＦＲ４のエピトープを認識する、細胞増殖および細胞遊走を低減させる、それらの可能性、さらなる抗悪性腫瘍剤を活性化する、および／または、治療的処置に対して腫瘍細胞を感受性にさせる、それらの能力に関して、有利な特性を示す。本発明の抗体Ｕ４−１からＵ４−９は、内因性の抗腫瘍活性を有する。それらは、ＦＧＦＲ４に特異的に結合し、好ましくは、他のＦＧＦ受容体ＦＧＦＲ１−３ｂ、ｃに対して交差反応性を示さない。
【００６４】
本発明の使用のための抗体は、エフェクター基のような異種基に連結され得る。そのような抗体コンジュゲートは、治療的適用に特に適切である。用語「エフェクター基」は、細胞傷害性基、例えば、放射性同位体または放射性核種、毒素、治療基または当技術分野で知られている別のエフェクター基を指し得る。抗体が治療基に連結されたコンジュゲート、いわゆる抗体−薬剤−コンジュゲート（ＡＤＣ）が特に好ましい。あるいは、抗体は、標識基に連結され得る。そのような抗体コンジュゲートは、診断的適用に特に適切である。本明細書において用いられる用語「標識基」は、検出可能なマーカー、例えば放射性標識されたアミノ酸またはビオチン部分、蛍光マーカー、酵素、または当技術分野で知られている任意の他のタイプのマーカーを指す。抗体または抗体フラグメントの、放射性同位体への結合は、例えば、腫瘍治療に利益を提供する。化学療法および他の形式の癌治療とは異なり、放射線免疫療法または放射性同位体−抗体の組み合わせの投与は、周囲の正常の健康な組織に対する損傷を最小限にして癌細胞を標的化する。
【００６５】
本発明のさらなる実施態様は、上記に定義した使用のための組み合わせであり、ここで、抗体は、インターロイキン−２（ＩＬ−２）に融合される。インターロイキン−２は、細胞傷害性Ｔリンパ球を刺激するＴヘルパー細胞およびＮＫ細胞により産生される１５ｋＤａのサイトカインである。ＩＬ−２は、癌患者の免疫系を刺激するために、メラノーマおよび腎細胞癌腫の治療において臨床的に用いられている。腫瘍における長期の高い投与量のＩＬ−２の達成は、そうでなければ致死となる腫瘍の拒絶をもたらす長期にわたる抗−腫瘍応答の誘導をもたらし得る。本発明では、ＩＬ−２を、本明細書において上述した抗体を含む融合タンパク質へ、その活性を維持しながら取り込むことが可能であることが見いだされている。それ故に、抗体がＩＬ−２に融合されている融合タンパク質は、抗原結合特異性を保持しＩＬ−２の全活性を保有するデリバリーシステムとして作用するのに適切である。
【００６６】
本発明によれば、上記に定義される抗体は、ソラフェニブまたはその薬学的に許容できる塩と組み合わせて用いられる。
【００６７】
用語「ソラフェニブ」は、小分子阻害剤４−［４−［［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］カルバモイルアミノ］フェノキシ］−Ｎ−メチル−ピリジン−２−カルボキサミドを指す。ソラフェニブおよびその調製は、とりわけ、ＷＯ００／４２０１２およびＷＯ０３／０６８２２８に記載される。ソラフェニブの薬学的に許容できる塩ならびに一般に用いられるプロドラッグもまた本発明の範囲内であることが理解される。
【００６８】
ソラフェニブの薬学的に許容できる塩は、例えば有機酸または無機酸付加塩である。適切な無機酸は、限定されないが、ハロゲン酸（例えば、塩酸および臭化水素酸）、硫酸、またはリン酸を含む。適切な有機酸は、限定されないが、カルボン酸、ホスホン酸、スルホン酸、またはスルファミン酸を含み、例は、酢酸、プロピオン酸、オクタン酸、デカン酸、トリフルオロ酢酸、ドデカン酸、グリコール酸、乳酸、２−または３−ヒドロキシ酪酸、ｙ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、グルコン酸、グルコースモノカルボン酸、安息香酸、サリチル酸、フェニル酢酸およびマンデル酸、フマル酸、コハク酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸（ａｚｅｉａｉｃ  ａｃｉｄ）、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、グルカル酸、ガラクタル酸、アミノ酸（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸、Ｎメチルグリシン、アセチルアミノ酢酸（ａｃｅｔｙｔａｍｉｎｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）、Ｎ−アセチルアスパラギンまたはＮアセチルシステイン）、ピルビン酸、アセト酢酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、１−ナフタレンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、ホスホセリン、および２−または３−グリセロリン酸を含む。
【００６９】
加えて、薬学的に許容できる塩は、無機塩基の酸塩、例えば、アルカリカチオン（例えば、Ｌｉ＋  Ｎａ＋またはＫ＋）、アルカリ土類カチオン（例えば、Ｍｇ＋２、Ｃａ＋２またはＢａ＋２）、アンモニウムカチオンを含む塩類、ならびに、脂肪族および芳香族置換アンモニウム、および第４級アンモニウムカチオンを含む有機塩基の酸塩、例えば、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルアミン、リジン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、１，４−アザビクロ（ｄｉａｚａｂｉｃｌｏ）［２．２．  ２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、１，５−アザビクロ［４．  ３．０］ノン−５−エン（ＤＢＮ）、および１，８−アザビクロ［５．４．  ０］ウンデセ（ｕｎｄｅｃ）−７−エン（ＤＢＵ）のプロトン化またはペルアルキル化から生じるものを含む。
【００７０】
親の化合物の特性を高めるためのプロドラッグの形成は、当技術分野でよく知られていて；そのような特性は、溶解度、吸収、生体内安定性および放出時間を含む（「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」（第６版）、Ａｎｓｅｌら編集、Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓによって出版、２７〜２９頁、（１９９５）を参照し、参照により本明細書中に援用される）。ソラフェニブの一般に用いられるプロドラッグは、主な薬物生体内変換反応を活用するように設計されて、本発明の範囲内でもあると考えられる。主な生体内変換反応は、Ｎ−脱アルキル化、Ｏ−脱アルキル化、脂肪族ヒドロキシル化、芳香族ヒドロキシル化、Ｎ−酸化、Ｓ−酸化、脱アミノ化、加水分解反応、グルクロン酸抱合、硫酸化およびアセチル化を含む（Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（第９版）、編集者Ｍｏｌｉｎｏｆｆら、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌにより出版、１１〜１３頁、（１９９６）を参照し、参照により本明細書中に援用される）。
【００７１】
好ましい実施態様では、ソラフェニブのトシレート塩が用いられる。ソラフェニブおよびそのトシレート塩の測定可能な合成は、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（２００２），Ｖｏｌ．６，Ｉｓｓｕｅ＃６，７７７−７８１、およびＷＯ０３／０６８２２８に開示されて、参照により本明細書中に援用される。
【００７２】
ソラフェニブまたはその薬学的に許容できる塩と上記に定義される抗ＦＧＦＲ４抗体の組み合わせの有用性は、いずれかの薬剤を単独で用いる効果の従来の知識から予測されたものよりも高い。例えば、ソラフェニブと抗体Ｕ４−３の併用療法は、単独で投与される抗体またはソラフェニブのいずれかの投与によって生産されるものと比較して、少なくとも相加的な抗腫瘍の有効性を生産した。一般に、ｒａｆキナーゼ阻害剤ソラフェニブと組み合わせた、上記に定義された抗ＦＧＦＲ４抗体の使用は、単一の薬剤の投与と比較して、腫瘍の増殖の低減においてより高い有効性を生じ、または、実に腫瘍を除去する働きをして、より少ない量の投与される薬剤の投与を与え、より多い投与量の単一の化学療法および特定の他の組み合わせの治療によって生じる有害な薬理学的合併症がより少ない量で、患者において高い耐容性である化学療法治療を与え、哺乳類、特にヒトにおける、より広範の異なる癌タイプの治療を与え、治療された患者間でより高い応答率を与え、標準的な化学療法治療と比較して、治療された患者間でより長い生存時間を与え、腫瘍進行のためのより長い時間を与え、および／または、他の癌薬剤の組み合わせが拮抗薬効果を生じる公知の場合と比較して、単独で用いられる薬剤のものと少なくとも同じくらいに良い有効性および許容性の結果を生じるように役割を果たす。
【００７３】
本発明によれば、（ｉ）ヒト抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントおよび（ｉｉ）ソラフェニブまたはその薬学的に許容できる塩の組み合わせは、ＦＧＦＲ４発現、過剰発現および／または機能亢進と関連する過剰増殖性疾患の予防および／または治療において用いられる。特に、本発明の組み合わせは、制限されないが、結腸癌、結腸直腸癌腫、前立腺癌、白血病、メラノーマ、肝細胞癌腫（ＨＣＣ）、腎細胞癌腫（ＲＣＣ）、頭頚部癌、グリオーマ、肺癌、膵癌、卵巣癌、および乳腺癌腫を含む癌の治療での使用のためのものである。本発明の抗体を用いて予防および／または治療され得る疾患の例は、以下に詳述される。
【００７４】
本発明に係る組み合わせのために、ヒト抗ＦＧＦＲ４抗体および／またはソラフェニブは、一般的な医薬品として、または、より好ましくは、別個の医薬品として、それぞれ任意選択で薬学的に許容できる担体を含んで提供され得る。
【００７５】
用語「担体」は、用いられる用量および濃度でそれに露出される哺乳類または細胞に対して非毒性である薬剤、例えば希釈剤、安定剤、アジュバントまたは他のタイプの賦形剤を含む。薬学的に許容できる担体の例は当技術分野でよく知られていて、リン酸緩衝生理食塩水溶液、水、油／水エマルションなどのエマルション、様々なタイプの湿潤剤、滅菌溶液などを含む。しばしば、薬学的に許容できる担体は、薬物輸送、特に抗体分子の送達に有用な、ｐＨ−緩衝水溶液である。医薬組成物は、よく知られる従来法により、すなわち、活性剤を、担体および任意選択で製剤内に通常取り込まれる他の薬剤と混合することにより、製剤化され得る。例えば、組成物は、凍結乾燥製剤、水溶液、分散または固形製剤の形態で製剤化され得る。
【００７６】
適切な組成物の投与は、異なる方法により、例えば、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、局所、皮内、鼻腔内または気管支内投与により効果をもたらし得る。また、組成物は、標的部位に、例えば微粒子銃送達によって、脳などの標的部位の外側または内側に、直接的に投与してもよい。投与レジメンは、主治医および臨床因子により決定される。
【００７７】
好ましい実施態様では、抗ＦＧＦＲ４抗体および／またはソラフェニブまたはその薬学的に許容できる塩を含む組成物は、経口送達によって、または、静脈内注入またはインフュージョンによって、患者に投与され得る。
【００７８】
別の好ましい実施態様では、抗ＦＧＦＲ４抗体および／またはソラフェニブまたはその薬学的に許容できる塩を含む組成物は、錠剤、液体、局所ゲル、吸入器の形態で、または徐放性組成物の形態で、患者に投与され得る。
【００７９】
抗ＦＧＦＲ４抗体は、同一の製剤中で、または、より典型的には、別個の製剤中で、およびしばしば、異なる投与経路を用いて、ソラフェニブまたはその薬学的に許容できる塩と同時に患者に投与され得る。投与は、任意の順序で連続してもよい。
【００８０】
好ましい実施態様では、抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、ソラフェニブまたはその薬学的に許容できる塩とタンデムで投与され得て、ここで、抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントは、連続する２８日までの間、１日あたり１回以上、同一の合計期間にわたってソラフェニブまたはその薬学的に許容できる塩の同時的または断続的な投与とともに、患者に投与され得る。
【００８１】
本発明の組み合わせは、インビボで、例えば、患者の体内で形成されてもよい。
【００８２】
上記に定義される抗ＦＧＦＲ４抗体および／またはソラフェニブまたはその薬学的に許容できる塩を含む医薬品は、経口、経皮的、非経口的、注入、吸入または噴霧、舌下、直腸または経膣的に、用量単位製剤で投与され得る。用語「注入による投与」は、静脈内、関節内、筋肉内、皮下および非経口注入、ならびに、インフュージョン技術の使用を含む。皮膚投与は、局所適用または経皮投与を含んでよい。１つまたは複数の化合物は、１つまたは複数の非毒性の薬学的に許容できる担体および必要に応じて他の有効成分を伴って存在してよい。
【００８３】
経口使用が意図される組成物は、医薬組成物の製造に関する分野で公知の任意の適切な方法に従って調製され得る。そのような組成物は、味の良い製剤を提供するために、希釈剤、甘味料、香味料、着色料および保存料からなる群より選択される１つまたは複数の薬剤を含んでよい。錠剤は、錠剤の製造に適切な非毒性の薬学的に許容できる賦形剤との混合で有効成分を含む。これらの賦形剤は、例えば、不活性希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム；造粒剤および崩壊剤、例えば、コーンスターチ、またはアルギン酸；および、結合剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであってよい。錠剤は、コーティングされていなくてよく、または、消化管内での崩壊および吸着を遅らせるためにそれらは公知技術によってコーティングされてよく、それによって、より長い期間にわたって持続した作用を提供する。例えば、モノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリンのような時間遅延材料が用いられ得る。これらの化合物は、固体の急速に放出される形態で調製されてもよい。
【００８４】
経口使用のための製剤は、硬ゼラチンカプセルとして提供されてもよく、有効成分は、不活性の固形希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合されて、または、軟ゼラチンカプセルとして提供されてもよく、有効成分は、水または油媒体、例えばピーナッツ油、液体パラフィンまたはオリーブ油と混合される。
【００８５】
水性懸濁液の製造に適切な賦形剤との混合で活性材料を含む水性懸濁液も使用され得る。そのような賦形剤は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガムおよびアカシアガムのような懸濁剤であり；分散剤または湿潤剤は、レシチンのような天然起源のリン脂質、または、ポリオキシエチレンステアリン酸のような脂肪酸とアルキレンオキシドの濃縮産物、または、ヘプタデカエチレンオキシセタノールのような長鎖脂肪族アルコールとエチレンオキシドの濃縮産物、または、脂肪酸およびヘキシトール、例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレートに由来する部分的エステルとエチレンオキシドの濃縮産物、または、脂肪酸およびヘキシトール無水物、例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレートに由来する部分的エステルとエチレンオキシドの濃縮産物であってよい。また、水性懸濁液は、１つまたは複数の防腐剤、例えばエチル、またはｎ−プロピルｐヒドロキシ安息香酸、１つまたは複数の着色剤、１つまたは複数の香味料、および、スクロースまたはサッカリンなどの１つまたは複数の甘味料を含んでもよい。
【００８６】
水の添加による水性懸濁液の調製に適切な分散性の粉末および顆粒は、分散剤または湿潤剤、懸濁剤、および、１つまたは複数の防腐剤との混合で有効成分を与える。適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤は、既に上述したものによって例示される。さらなる賦形剤、例えば、甘味料、香味料および着色剤が存在してもよい。
【００８７】
また、化合物は、非水性液体製剤、例えば、ポリエチレングリコール、落花生油、オリーブ油、ゴマ油またはピーナッツ油のような植物油中または液体パラフィンのような鉱油中に有効成分を懸濁することによって処方され得る、油性懸濁液の形態であってもよい。油性懸濁液は、みつろう、固形パラフィンまたはセチルアルコールのような増粘剤を含んでよい。上記に示されたもののような甘味料、および香味料が、味の良い経口製剤を提供するために添加されてよい。これらの組成物は、アスコルビン酸のような抗酸化剤の添加によって保存され得る。
【００８８】
本発明の使用のための医薬組成物は、水中油エマルションの形態であってもよい。油相は、植物油、例えばオリーブ油または落花生油、または鉱油、例えば液体パラフィンまたはそれらの混合物であってよい。適切な乳化剤は、天然起源ガム、例えばアカシアガムまたはトラガカントガム、天然起源のリン脂質、例えば大豆、レシチン、および、脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来するエステルまたは部分的エステル、例えばソルビタンモノオレート、および、エチレンオキシドと前記部分的エステルの濃縮産物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレートであってよい。エマルションは、甘味料および香味料を含んでもよい。
【００８９】
シロップおよびエリキシル剤は、甘味料、例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールまたはスクロースによって処方され得る。そのような製剤は、粘滑剤、防腐剤および香味料および着色料を含んでもよい。
【００９０】
また、化合物は、薬物の直腸または膣投与のための坐薬の形態で投与されてもよい。これらの組成物は、薬物を、通常の温度では固体であるが直腸温度または膣温度では液体であり、したがって、直腸または膣内で解けて薬物を放出する適切な非刺激性賦形剤と、混合することによって調製され得る。そのような材料は、ココアバターおよびポリエチレングリコールを含む。本発明の化合物は、当業者に公知の方法を用いて経皮的に投与されてもよい（例えば：Ｃｈｉｅｎ；「Ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ」；Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．；１９８７．Ｌｉｐｐ  ｅｔ  ａｌ．Ｗ０９４／０４１５７を参照）。例えば、透過性を高める薬剤を任意選択で含む適切な揮発性溶媒中のソラフェニブまたはその薬学的に許容できる塩の溶液または懸濁液は、マトリックス材料および殺菌剤のような、当業者に公知のさらなる添加剤と組み合わせられ得る。滅菌後、生じる混合物は、公知の手順に従って剤形に処方され得る。加えて、乳化剤および水との処理で、ソラフェニブまたはその薬学的に許容できる塩の溶液または懸濁液は、ローションまたは軟膏に処方され得る。
【００９１】
経皮送達システムを処理するための適切な溶媒は、当業者に知られていて、ジメチルスルホキシド、エタノールまたはイソプロピルアルコールのような低級アルコール類、アセトンのような低級ケトン類、酢酸エチルのような低級カルボン酸エステル類、テトラヒドロフランのような極性エーテル類、ヘキサン、シクロヘキサンまたはベンゼンのような低級炭化水素類、または、ジクロロメタン、クロロホルム、トリクロロトリフルオロエタン、またはトリクロロフルオロエタンのようなハロゲン化炭化水素類を含む。適切な溶媒は、低級アルコール類、低級ケトン類、低級カルボン酸エステル類、極性エーテル類、低級炭化水素類、ハロゲン化炭化水素類から選択される１つまたは複数の材料の混合物を含んでもよい。
【００９２】
経皮送達システムに適切な透過性を高める材料は、当業者に知られていて、例えば、エタノール、プロピレングリコールまたはベンジルアルコールのようなモノヒドロキシまたはポリヒドロキシアルコール類、ラウリルアルコールまたはセチルアルコールのような飽和または不飽和脂肪族アルコール類、ステアリン酸のような飽和または不飽和脂肪酸類、２４個までの炭素を有する飽和または不飽和脂肪エステル類、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔブチル、または、酢酸、カプロン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、ステアリン酸、またはパルミチン酸のモノグリセリンエステル類、または、合計２４個までの炭素と飽和または不飽和ジカルボン酸のジエステル、例えば、アジピン酸ジイソプロピル、アジピン酸ジイソブチル、セバシン酸ジイソプロピル、マレイン酸ジイソプロピル、またはフマル酸ジイソプロピルを含む。さらなる透過性を高める材料は、ホスファチジル誘導体、例えばレシチンまたはセファリン、テルペン、アミド類、ケトン類、尿素およびそれらの誘導体、およびエーテル類、例えば、ジメチルイソソルビドおよびジエチレングリコールモノエチルエーテルを含む。適切な透過性を高める製剤は、モノヒドロキシまたはポリヒドロキシアルコール類、飽和または不飽和Ｃ８−Ｃｌ８脂肪族アルコール類、飽和または不飽和Ｃｇ−Ｃｉｇ脂肪酸類、２４個までの炭素を有する飽和または不飽和脂肪エステル類、合計２４個までの炭素を有する飽和または不飽和ジカルボン酸（ｄｉｓｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）のジエステル、ホスファチジル誘導体、テルペン類、アミド類、ケトン類、尿素およびそれらの誘導体、およびエーテル類から選択される１つまたは複数の材料の混合物を含んでもよい。経皮送達システムに適切な結合材料は、当業者に知られていて、ポリアクリレート、シリコーン、ポリウレタン、ブロックポリマー、スチレンブタジエン共重合体、および、天然および合成ゴムを含む。セルロースエーテル、誘導体化ポリエチレン、およびシリケートも、マトリックス構成要素として用いられ得る。マトリックスの粘性を増大させるために、粘性樹脂または油類のようなさらなる添加剤が添加されてよい。
【００９３】
また、本発明は、ＦＧＦＲ４発現、過剰発現および／または機能亢進、特に哺乳類の癌と関連する過剰増殖性疾患を治療するためのキットも包含する。キットは、効果的な投与量の抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントおよび効果的な投与量のソラフェニブまたはその薬学的に許容できる塩を含む、単一の医薬製剤を含んでよい。あるいは、キットは、効果的な投与量の抗ＦＧＦＲ４抗体または前記抗体の機能性フラグメントおよび効果的な投与量のソラフェニブまたはその薬学的に許容できる塩を、別個の製剤中に含んでよい。また、キットは、治療を必要とする患者への化合物の投与の仕方に関する指示書を含んでもよい。キットは、以下により詳細に説明されるように、ＦＧＦＲ４発現、過剰発現および／または機能亢進と関連する異なる過剰増殖性疾患を治療するために用いられ得る。キットは、制限されないが、結腸癌、結腸直腸癌腫、前立腺癌、白血病、メラノーマ、肝細胞癌腫（ＨＣＣ）、腎細胞癌腫（ＲＣＣ）、頭頚部癌、グリオーマ、肺癌、膵癌、卵巣癌、および乳腺癌腫を含む、癌を治療するのに特に適切である。
【００９４】
本発明の組み合わせの投与の特定の方法は、様々な因子に依存し、その全てが、治療を施す場合に日常的に考慮されることが、当業者によって理解される。しかしながら、任意の所定の患者のための特定の投与量レベルは、用いられる特定の化合物の活性、患者の年齢、患者の体重、患者の健康全般、患者の性別、患者の食事、投与時間、投与経路、排泄率、薬物の組み合わせ、および、治療を受ける症状の重症度を含む、様々な因子に依存することも理解される。最適な治療コース、すなわち、治療モード、および、規定された日数に与えられる抗ＦＧＦＲ４抗体およびソラフェニブまたはその薬学的に許容できる塩の投与量の毎日の数は、従来の治療テストを用いて当業者によって確認され得ることが、当業者によってさらに理解される。
【００９５】
治療される状態のタイプおよび重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇの有効成分が、例えば１または複数の別個の投与により、または連続的なインフュージョンにより、それを必要とする患者に投与され得る。典型的な１日の投与量は、上述した因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲であってよい。数日またはそれより長くにわたる繰り返しの投与については、治療される状態に応じて、治療は、疾患または症状の発生の所望の抑制まで持続される。組成物は、任意の適切な経路により、例えば、非経口（ｐａｒｅｎｔａｌ）、皮下、鼻腔内、血管内、静脈内、動脈内または髄腔内注入またはインフュージョンにより、投与され得る。経過は、定期的な評価によってモニターされ得る。組成物は、局所的または全身性に投与され得る。例えば、ソラフェニブの効果的な投与量は、制限されないが、４００ｍｇ（２×２００ｍｇ錠剤）を１日に２回であってよい。
【００９６】
本発明に係る組み合わせは、他の活性剤と一緒に投与され得る。さらなる活性剤（単数または複数）は、別個に、または、一般的な医薬組成物の一部として投与され得る。
【００９７】
好ましい実施態様によれば、本発明の組み合わせの治療は、さらなる薬剤の投与を含んでよい。さらなる活性剤の例は、さらなる抗悪性腫瘍剤、小分子阻害剤、抗腫瘍剤または化学療法剤を含む。そのような組み合わせは、例えば、異常な細胞増殖を阻害するのに効果的である。
【００９８】
多くの抗悪性腫瘍剤が、現在、当技術分野で知られている。一実施態様では、抗悪性腫瘍剤は、制限されないが、抗体または免疫調節性タンパク質を含む、治療的タンパク質の群より選択される。
【００９９】
別の実施態様では、抗悪性腫瘍剤は、小分子阻害剤、または、分裂阻害剤、キナーゼ阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、インターカレート抗体、増殖因子阻害剤、細胞周期阻害剤、酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、抗生存剤、生物学的応答修飾剤、抗−ホルモン、例えば抗−アンドロゲン、および血管新生阻害剤からなる化学療法剤の群より選択される。
【０１００】
上述のさらなる活性剤は、もちろん、共通の医薬組成物内で抗ＦＧＦＲ４抗体および／またはソラフェニブと一緒に投与され得るだけでなく、別個にも投与されてもよい。
【０１０１】
さらなる実施態様では、本発明は、ＦＧＦＲ４発現、過剰発現および／または機能亢進と関連する過剰増殖性疾患を治療する方法に関する。
【０１０２】
本発明によれば、ＦＧＦＲ４発現、過剰発現および／または機能亢進と関連する過剰増殖性疾患は、例えば癌を含む。本発明によって予防および／または治療され得る癌は、肝細胞癌腫（ＨＣＣ）、乳腺癌腫、結腸癌、結腸直腸癌腫、白血病、横紋筋肉腫、前立腺癌、卵巣癌、軟組織肉腫、メラノーマ、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、膵癌、腎細胞癌腫（ＲＣＣ）、肺癌、（例えば肺腺癌）、グリオーマおよび他のＦＧＦＲ４を発現または過剰発現している癌および腫瘍転移形成からなる群より選択され得る。本発明の組み合わせは、肝細胞癌腫（ＨＣＣ）、腎細胞癌腫（ＲＣＣ）、および甲状腺癌の治療に特に効果的であることが分かった。
【０１０３】
本発明は、以下の図面および実施例によってより詳細に説明される。
【実施例】
【０１０４】
実施例１：
Ｈｕｈ−７肝臓癌細胞のインビボでの増殖阻害
ヒト肝細胞癌腫モデルＨｕＨ−７（Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｌｏｔ  Ｎｒ．：０３２８２０１１）を、１００μｌマトリゲル中に懸濁して動物あたり５×１０６細胞で、６週齢のｎｕ／ｎｕ無胸腺雌マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，日本）の右腹に、皮下（ｓ．ｃ）で移植した。
【０１０５】
治療のための割り当てグループを、移植された腫瘍が２００ｍｍ３の平均腫瘍体積に到達したときに、ＨｕＨ−７細胞懸濁液移植の１２〜１５日後に行なった。腫瘍体積は、デジタルカリパス（Ｍｉｔｕｔｏｙｏ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ＣＤ−１５ＣＸ）を用いて測定して、式：見積もり腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×長さ×幅２に従って計算した。グループあたり１０匹のマウスをランダム化した。
【０１０６】
単一の治療剤としてまたは同時投与でソラフェニブおよびＦＧＦＲ４阻害剤Ｕ４−３を用いた治療を、研究の実験グループへの動物のグループ割り当ての直後に、同日に開始した。
【０１０７】
単一の治療剤としておよび同時投与でソラフェニブおよびＵ４−３を用いた治療のために、ソラフェニブおよびＵ４−３の投与溶液を、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ／エタノール９５％／水（１２．５：１２．５：７５）およびＰＢＳをそれぞれ溶媒として用いて、投与時点ごとに新たに調製した。それぞれの化合物の製剤溶液を、それぞれの治療グループに適切な濃度の活性化合物および１０ｍｌ／ｋｇの最終投与容量に調節した。
【０１０８】
ソラフェニブを、単剤療法としてまたはＵ４−３との同時投与で、毎日の頻度で、１０および３０ｍｇ／ｋｇの投与量で、連続する１０日間、経口（ｐ．ｏ）投与した。
【０１０９】
Ｕ４−３を、単剤療法としてまたはソラフェニブとの同時投与で、週に２回（２ｑＷ）、３、１０および２５ｍｇ／ｋｇの投与量で、１０日の期間、腹腔内（ｉ．ｐ）投与した。インビボの観察期間は、単一の治療剤としてまたは同時投与でのソラフェニブおよびＵ４−３の最後の投与の４８〜７２時間後に終了した。
【０１１０】
【表３】
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【０１１１】
【表４】
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【０１１２】
【表５】
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【０１１３】
統計分析は、最終の測定日の腫瘍体積を用いて、すなわち、それぞれのグループにおいて１０の値で（ｗｉｔｈ  １０  ｖａｌｕｅｓ）行なった。独立両側ｔ検定は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ５．０１を用いて示された２つのグループで行なった。組み合わせの治療による結果が、単一の治療剤と有意に異なったことを示すためには、それぞれのインビボ試験に関して行なわれたｔ検定が両方ともＰ＜０．０５を生じなければならないと考えられた。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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