(57)【要約】本明細書に開示される主題は、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ分子複合体に結合する、抗原結合性タンパク質（例えば、キメラ抗原受容体）および抗体またはその抗原結合性部分を提供する。斯かる抗体、その融合タンパク質およびコンジュゲートは、調節性Ｔ細胞の阻害およびがんの処置に有用である。本明細書に開示される主題は、Ｆｏｘｐ３転写因子を標的とすることができる抗体およびキメラ抗原受容体等、抗原結合性タンパク質を同定し、特徴付ける。
2019512207.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドに結合する、単離された抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２】
前記ヒトＭＨＣ分子が、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）分子である、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項４】
前記ＨＬＡクラスＩ分子が、ＨＬＡ−Ａである、請求項３に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項５】
前記ＨＬＡ−Ａが、ＨＬＡ−Ａ２である、請求項４に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項６】
前記ＨＬＡ−Ａ２が、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である、請求項５に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項７】
前記Ｆｏｘｐ３ペプチドが、配列番号１に表記されているアミノ酸配列を含むヒトＦｏｘｐ３ポリペプチドの部分である、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項８】
前記Ｆｏｘｐ３ペプチドが、８〜１２アミノ酸の長さを有する、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項９】
前記Ｆｏｘｐ３ペプチドが、９アミノ酸の長さを有する、請求項８に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１０】
前記Ｆｏｘｐ３ペプチドが、１０アミノ酸の長さを有する、請求項８に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１１】
前記Ｆｏｘｐ３ペプチドが、配列番号８に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−７またはその部分、配列番号２に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−１またはその部分、配列番号３に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−２またはその部分、配列番号４に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−３またはその部分、配列番号５に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−４またはその部分、配列番号６に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−５またはその部分、および配列番号７に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−６またはその部分からなる群から選択される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１２】
（ａ）配列番号１１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号１４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；
（ｂ）配列番号１７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号２０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；
（ｃ）配列番号２３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号２６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；
（ｄ）配列番号２９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号３２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；
（ｅ）配列番号３５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号３８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；
（ｆ）配列番号４１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号４４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；
（ｇ）配列番号４７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号５０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；ならびに
（ｈ）配列番号５３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号５６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列
からなる群から選択される重鎖可変領域ＣＤＲ３配列および軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列を含む、請求項１から８および１０から１１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１３】
（ａ）配列番号１０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号１３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；
（ｂ）配列番号１６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号１９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；
（ｃ）配列番号２２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号２５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；
（ｄ）配列番号２８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号３１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；
（ｅ）配列番号３４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号３７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；
（ｆ）配列番号４０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号４３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；
（ｇ）配列番号４６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号４９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；ならびに
（ｈ）配列番号５２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号５５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列
からなる群から選択される重鎖可変領域ＣＤＲ２配列および軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列をさらに含む、請求項１から８および１０から１２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１４】
（ａ）配列番号９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号１２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；
（ｂ）配列番号１５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号１８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；
（ｃ）配列番号２１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号２４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；
（ｄ）配列番号２７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号３０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；
（ｅ）配列番号３３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号３６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；
（ｆ）配列番号３９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号４２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；
（ｇ）配列番号４５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号４８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；ならびに
（ｈ）配列番号５１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号５４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列
からなる群から選択される重鎖可変領域ＣＤＲ１配列および軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列をさらに含む、請求項１から８および１０から１３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１５】
（ａ）配列番号９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号１５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｃ）配列番号２１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号２７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｅ）配列番号３３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３４に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３７に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｆ）配列番号３９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号４４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｇ）配列番号４５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号５０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；または
（ｈ）配列番号５１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号５６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１から８および１０から１４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１６】
配列番号３９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号４４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、請求項１５に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１７】
配列番号９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５および１０７からなる群から選択される配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１から８および１０から１５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１８】
配列番号９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５および１０７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１７に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１９】
配列番号９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６および１０８からなる群から選択される配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から８および１０から１５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２０】
配列番号９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６および１０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１９に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２１】
（ａ）配列番号９３に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９４に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号９５に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９６に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号９７に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９８に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号９９に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号１０１に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０２に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号１０３に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０４に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｇ）配列番号１０５に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０６に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｈ）配列番号１０７に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０８に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１７から２０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２２】
（ａ）配列番号９３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号９５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号９７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号９９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号１０１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号１０３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｇ）配列番号１０５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｈ）配列番号１０７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項２１に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２３】
配列番号１０３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項２２に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２４】
前記Ｆｏｘｐ３ペプチドが、配列番号３に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−２である、請求項１１に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２５】
（ａ）配列番号５９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号６２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；
（ｂ）配列番号６５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号６８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；
（ｃ）配列番号７１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号７４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；
（ｄ）配列番号７７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号８０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；ならびに
（ｅ）配列番号８３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号８６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列
からなる群から選択される重鎖可変領域ＣＤＲ３配列および軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列を含む、請求項２４に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２６】
（ａ）配列番号５８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号６１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；
（ｂ）配列番号６４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号６７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；
（ｃ）配列番号７０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号７３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；
（ｄ）配列番号７６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号７９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；ならびに
（ｅ）配列番号８２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号８５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列
からなる群から選択される重鎖可変領域ＣＤＲ２配列および軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列をさらに含む、請求項２４または２５に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２７】
（ａ）配列番号５７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号６０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；
（ｂ）配列番号６３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号６６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；
（ｃ）配列番号６９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号７１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；
（ｄ）配列番号７５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号７８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；ならびに
（ｅ）配列番号８１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号８４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列
からなる群から選択される重鎖可変領域ＣＤＲ１配列および軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列をさらに含む、請求項２４、２５または２６に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２８】
配列番号１０９、１１１、１１３、１１５および１１７からなる群から選択される配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項２４から２７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２９】
配列番号１１０、１１２、１１４、１１６および１１８からなる群から選択される配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項２４から２８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３０】
前記Ｆｏｘｐ３ペプチドが、配列番号５に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−４である、請求項１１に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３１】
配列番号８９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号９２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列を含む、請求項３０に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３２】
配列番号８８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号９１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列を含む、請求項３０または３１に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３３】
配列番号８７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号９０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列を含む、請求項３０、３１または３２に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３４】
配列番号１１９に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項３０から３３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３５】
配列番号１２０に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項３０から３４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３６】
前記ヒトＭＨＣ分子に結合した前記Ｆｏｘｐ３ペプチドのＮ末端、または前記ヒトＭＨＣ分子に結合した前記Ｆｏｘｐ３ペプチドのＣ末端に結合する、請求項１から３５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３７】
約１×１０−７Ｍまたはそれ未満の結合親和性（ＫＤ）で、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する、請求項１から３６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３８】
（ａ）配列番号９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号１５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｃ）配列番号２１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号２７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｅ）配列番号３３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３４に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３７に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｆ）配列番号３９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号４４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｇ）配列番号４５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号５０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｈ）配列番号５１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号５６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｉ）配列番号５７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号６２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｊ）配列番号６３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６４に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号６５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６７に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号６８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｋ）配列番号６９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号７１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号７２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｌ）配列番号７５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号７７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号７８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｍ）配列番号８１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号８３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号８４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；または
（ｎ）配列番号８７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号８９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号９０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号９１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号９２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む参照抗体または抗原結合性部分と、ヒトＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドへの結合に関して交差競合する、単離された抗体またはその抗原結合性部分であって、
前記交差競合する抗体またはその抗原結合性部分が、約５×１０−７Ｍまたはそれ未満の結合親和性（ＫＤ）で、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合する、
単離された抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３９】
（ａ）配列番号９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号１５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｃ）配列番号２１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号２７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｅ）配列番号３３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３４に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３７に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｆ）配列番号３９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号４４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｇ）配列番号４５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号５０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｈ）配列番号５１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号５６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｉ）配列番号５７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号６２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｊ）配列番号６３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６４に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号６５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６７に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号６８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｋ）配列番号６９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号７１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号７２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｌ）配列番号７５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号７７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号７８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｍ）配列番号８１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号８３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号８４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；または
（ｎ）配列番号８７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号８９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号９０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号９１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号９２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む参照抗体または抗原結合性部分と、ＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチド上の同じエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合。
【請求項４０】
（ａ）配列番号９３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号９５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号９７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号９９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号１０１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号１０３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｇ）配列番号１０５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｈ）配列番号１０７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｉ）配列番号１０９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｊ）配列番号１１１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｋ）配列番号１１３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｌ）配列番号１１５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｍ）配列番号１１７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｎ）配列番号１１９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１２０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む参照抗体または抗原結合性部分と、ＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドへの結合に関して交差競合する、単離された抗体またはその抗原結合性部分であって、
前記交差競合する抗体またはその抗原結合性部分が、約５×１０−７Ｍまたはそれ未満の結合親和性（ＫＤ）で、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合する、
単離された抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項４１】
（ａ）配列番号９３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号９５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号９７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号９９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号１０１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号１０３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｇ）配列番号１０５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｈ）配列番号１０７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｉ）配列番号１０９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｊ）配列番号１１１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｋ）配列番号１１３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｌ）配列番号１１５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｍ）配列番号１１７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｎ）配列番号１１９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１２０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む参照抗体または抗原結合性部分と、ＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドにおける同じエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項４２】
前記抗体が、ヒト可変領域フレームワーク領域を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項４３】
完全ヒト抗体もしくはその抗原結合性部分、キメラ抗体もしくはその抗原結合性部分、またはヒト化抗体もしくはその抗原結合性部分である、先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項４４】
前記抗体の前記抗原結合性部分が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である、先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項４５】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのものである、先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項４６】
１個または複数の翻訳後修飾を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項４７】
前記１個または複数の翻訳後修飾が、非フコシル化を含む、請求項４６に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項４８】
非フコシル化Ｆｃ領域を含む、請求項４７に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項４９】
治療剤に連結された、請求項１から４８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分を含むイムノコンジュゲート。
【請求項５０】
前記治療剤が、薬物、細胞毒または放射性同位元素である、請求項４９に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項５１】
第２の官能部分に連結された、請求項１から４８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分を含む二特異性分子。
【請求項５２】
前記ＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドおよび細胞表面タンパク質を認識する、請求項５１に記載の二特異性分子。
【請求項５３】
前記細胞表面タンパク質が、ＣＤ３またはＣＤ１６である、請求項５２に記載の二特異性分子。
【請求項５４】
請求項１から４８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分、請求項４９もしくは５０に記載のイムノコンジュゲート、または請求項５１から５３のいずれか一項に記載の二特異性分子と、薬学的に許容される担体とを含む組成物。
【請求項５５】
請求項１から４８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分をコードする、単離された核酸。
【請求項５６】
請求項５５に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項５７】
請求項５６に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項５８】
全細胞または組織におけるＦｏｘｐ３を検出するための方法であって、
（ａ）ヒトＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドに結合する抗体またはその抗原結合性部分と細胞または組織とを接触させるステップであって、前記抗体またはその抗原結合性部分が、検出可能な標識を含む、ステップと、
（ｂ）前記細胞または組織に会合した検出可能な標識の量を測定することにより、前記細胞または組織に結合した、標識された抗体またはその抗原結合性部分の量を決定するステップであって、結合した抗体またはその抗原結合性部分の量が、前記細胞または組織におけるＦｏｘｐ３の量を示す、ステップと
を含む方法。
【請求項５９】
前記抗体またはその抗原結合性部分が、請求項１から４８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
ヒトＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドに特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項６１】
前記Ｆｏｘｐ３ペプチドが、配列番号８に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−７またはその部分、配列番号２に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−１またはその部分、配列番号３に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−２またはその部分、配列番号４に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−３またはその部分、配列番号５に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−４またはその部分、配列番号６に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−５またはその部分、および配列番号７に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−６またはその部分からなる群から選択される、請求項６０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項６２】
請求項１から４８のいずれか一項に記載の抗原結合性部分を含む、請求項６０または６１のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項６３】
前記抗原結合性部分が、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、請求項６０から６２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項６４】
前記ｓｃＦｖが、ヒトｓｃＦｖである、請求項６３に記載のＣＡＲ。
【請求項６５】
前記ヒトｓｃＦｖが、配列番号１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３および１３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６４に記載のＣＡＲ。
【請求項６６】
請求項６０から６５のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする、単離された核酸。
【請求項６７】
請求項６６に記載の単離された核酸を含むベクター。
【請求項６８】
請求項６７に記載の核酸を含む宿主細胞。
【請求項６９】
Ｆｏｘｐ３発現細胞を死滅させるか、免疫応答を誘導するか、そして／またはがんを処置する方法であって、
（ａ）請求項１から４８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分；
（ｂ）請求項６０から６５のいずれか一項に記載のＣＡＲ；
（ｃ）請求項５１から５３のいずれか一項に記載の二特異性抗体；
（ｄ）請求項４９もしくは５０に記載のイムノコンジュゲート；および／または
（ｄ）請求項５４に記載の組成物
のうち１種とＦｏｘｐ３発現細胞とを接触させるステップを含む方法。
【請求項７０】
Ｆｏｘｐ３発現細胞を死滅させるための、そして／または免疫応答を誘導するための、請求項１から４８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分、請求項６０から６５のいずれか一項に記載のＣＡＲ、請求項５１から５３のいずれか一項に記載の二特異性抗体、請求項４９もしくは５０に記載のイムノコンジュゲート、または請求項５４に記載の組成物の使用。
【請求項７１】
Ｆｏｘｐ３発現細胞の死滅における使用のための、そして／または免疫応答の誘導における使用のための、請求項１から４８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分、請求項６０から６５のいずれか一項に記載のＣＡＲ、請求項５１から５３のいずれか一項に記載の二特異性抗体、請求項４９もしくは５０に記載のイムノコンジュゲート、または請求項５４に記載の組成物。
【請求項７２】
前記Ｆｏｘｐ３発現細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択されるＴ細胞である、請求項６９に記載の方法、請求項７０に記載の使用、または請求項７１に記載の抗体、ＣＡＲ、二特異性抗体、イムノコンジュゲートもしくは組成物。
【請求項７３】
対象におけるＴ細胞を選択的に阻害する方法であって、
（ａ）請求項１から４８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分；
（ｂ）請求項６０から６５のいずれか一項に記載のＣＡＲ；
（ｃ）請求項５１から５３のいずれか一項に記載の二特異性抗体；
（ｄ）請求項４９もしくは５０に記載のイムノコンジュゲート；および／または
（ｄ）請求項５４に記載の組成物
のうちの１種を前記対象に投与するステップを含み、前記Ｔ細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択される、方法。
【請求項７４】
Ｔ細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択される、対象におけるＴ細胞を選択的に阻害するための、請求項１から４８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分、請求項６０から６５のいずれか一項に記載のＣＡＲ、請求項５１から５３のいずれか一項に記載の二特異性抗体、請求項４９もしくは５０に記載のイムノコンジュゲート、または請求項５４に記載の組成物の使用。
【請求項７５】
Ｔ細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択される、Ｔ細胞の選択的阻害における使用のための、請求項１から４８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分、請求項６０から６５のいずれか一項に記載のＣＡＲ、請求項５１から５３のいずれか一項に記載の二特異性抗体、請求項４９もしくは５０に記載のイムノコンジュゲート、または請求項５４に記載の組成物。
【請求項７６】
対象が、がんを患う、請求項６９、７２および７３のいずれか一項に記載の方法、請求項７０、７２および７４のいずれか一項に記載の使用、または請求項７１、７２および７５のいずれか一項に記載の抗体、ＣＡＲ、二特異性抗体、イムノコンジュゲートもしくは組成物。
【請求項７７】
次の、
（ｉ）Ｔ細胞の数を低下させるステップ、
（ｉｉ）前記Ｔ細胞を枯渇させるステップ、
（ｉｉｉ）前記Ｔ細胞の免疫抑制活性を阻害するステップ、および
（ｉｖ）リンパ節への前記Ｔ細胞輸送を遮断するステップ、
（ｖ）前記Ｔ細胞を阻害するステップ、および
（ｖｉ）がん細胞の死を誘導するステップ
のうち１つまたは複数を含む、請求項６９、７２、７３および７６のいずれか一項に記載の方法、請求項７０、７２、７４および７６のいずれか一項に記載の使用、または請求項７１、７２、７５および７６のいずれか一項に記載の抗体、ＣＡＲ、二特異性抗体、イムノコンジュゲートもしくは組成物。
【請求項７８】
前記Ｔ細胞が、調節性Ｔ細胞である、請求項７２、７３、７６および７７のいずれか一項に記載の方法、請求項７２、７４、７６および７７のいずれか一項に記載の使用、または請求項７２、７５、７６および７７のいずれか一項に記載の抗体、ＣＡＲ、二特異性抗体、イムノコンジュゲートもしくは組成物。
【請求項７９】
がんが、乳がん、卵巣がん、メラノーマ、肺がん、膵がん、胃がん、結腸がん、神経膠芽腫、腎臓がん、肝臓がん、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫およびこれらの組合せからなる群から選択される、請求項６９、７２、７３および７６から７８のいずれか一項に記載の方法、請求項７０、７２、７４および７６から７８のいずれか一項に記載の使用、または請求項７１、７２および７５から７８のいずれか一項に記載の抗体、ＣＡＲ、二特異性抗体、イムノコンジュゲートもしくは組成物。
【請求項８０】
対象が、ヒトである、請求項６９、７２、７３および７６から７９のいずれか一項に記載の方法、請求項７０、７２、７４および７６から７９のいずれか一項に記載の使用、または請求項７１、７２および７５から７９のいずれか一項に記載の抗体、ＣＡＲ、二特異性抗体、イムノコンジュゲートもしくは組成物。
【請求項８１】
対象が、抗がん免疫療法を受ける、請求項６９、７２、７３および７６から８０のいずれか一項に記載の方法、請求項７０、７２、７４および７６から８０のいずれか一項に記載の使用、または請求項７１、７２および７５から８０のいずれか一項に記載の抗体、ＣＡＲ、二特異性抗体、イムノコンジュゲートもしくは組成物。
【請求項８２】
次の、
請求項１から４８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分；
（ｂ）請求項６０から６５のいずれか一項に記載のＣＡＲ；
（ｃ）請求項５１から５３のいずれか一項に記載の二特異性抗体；
（ｄ）請求項４９もしくは５０に記載のイムノコンジュゲート；および／または
（ｄ）請求項５４に記載の組成物
のうち１種または複数を含む、がんを処置するためのキット。
【請求項８３】
前記がんが、乳がん、卵巣がん、メラノーマ、肺がん、膵がん、胃がん、結腸がん、神経膠芽腫、腎臓がん、肝臓がん、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫およびこれらの組合せからなる群から選択される、請求項８２に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、２０１６年１月１４日に出願された米国仮特許出願番号第６２／２７８，８１５号に基づく優先権を主張しており、この仮特許出願への優先権が主張され、そしてその内容は、その全体が本明細書中に援用される。
【０００２】
認可情報
本発明は、国立衛生研究所から認可番号ＮＩＨ  ＮＣＩ  ｐ３０  ｃａ  ００８７４８の下、政府支援でなされた。政府は本明細書に開示される主題において特定の権利を有する。
【０００３】
技術分野
本明細書に開示される主題は、全般的には、フォークヘッドボックスＰ３（「Ｆｏｘｐ３」）に対する抗体、具体的には、主要組織適合遺伝子複合体（「ＭＨＣ」）分子と併せたＦｏｘｐ３ペプチドを認識する抗体に関する。
【背景技術】
【０００４】
本明細書に開示される主題の背景
細胞傷害性Ｔ細胞（「ＣＴＬ」）応答の誘導のため、細胞内タンパク質は通常、プロテアソームまたはエンドソーム／リソソームによって分解され、その結果得られるペプチド断片は、ＭＨＣクラスＩまたはＩＩ分子に結合する。このようなペプチド−ＭＨＣ複合体は、細胞表面に表示され、ペプチド−ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）−Ｔ細胞受容体（「ＴＣＲ」）相互作用を介したＴ細胞認識のための標的をもたらす（Okaら、The  Scientific  World  Journal  ２００７年；７巻：６４９〜６６５頁；Kobayashiら、Cancer  Immunol.  Immunother.２００６年；５５巻（７号）：８５０〜８６０頁）。
【０００５】
有効性を改善するために、細胞マーカー抗原を、モノクローナル抗体（「ｍＡｂ」）療法による標的とすることができる。Ｍａｂ療法は、標的分子を発現し、抗腫瘍免疫応答抑制および腫瘍進行支持の機能を有する細胞における、補体依存性細胞傷害（「ＣＤＣ」）、抗体依存性細胞性細胞傷害（「ＡＤＣＣ」）および直接的細胞阻害またはアポトーシス誘導効果を含む複数の機構によって強力な抗腫瘍効果を発揮することが示されてきた。さらに、ｍＡｂは、放射性核種、細胞傷害性薬物または毒素等、細胞傷害性部分を標的細胞へと特異的に送達するための担体として使用することができる（Miedererら、Adv  Drug  Deliv  Rev  ２００８年；６０巻（１２号）：１３７１〜１３８２頁）。
【０００６】
細胞免疫療法アプローチに加えて、体液性免疫療法アプローチを、非細胞表面抗原の標的化に利用できるのであれば、多大な利益があるであろう。したがって、ＭＨＣ分子と併せた細胞内タンパク質の断片、例えば、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＨＬＡ−Ａ２複合体を含む標的に特異的であるという点においてＴ細胞受容体を模倣するｍＡｂは、単独で、または薬物、毒素および放射性元素等の強力な抗がん試薬を送達することができる媒体として、新規かつ有効な治療剤となるであろう。斯かるｍＡｂは、診断または予後ツールとしても有用となるであろう。
【０００７】
Ｆｏｘｐ３を発現する調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞は、自己寛容および免疫恒常性の維持における中心的な役割を果たす。Ｔｒｅｇ細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ナチュラルキラー（「ＮＫ」）細胞、ＮＫ−Ｔ細胞、Ｂ細胞および抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む多種多様な免疫細胞の活性化、増殖および機能を抑制することができる。Ｔｒｅｇ細胞の機能不全は、自己免疫性疾患、アレルギーおよび同種免疫寛容の維持をもたらす。他方では、Ｔｒｅｇ細胞は、抗腫瘍免疫応答を抑制し、腫瘍進行を支持することもできるため、腫瘍誘導性調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞による免疫抑制は、免疫療法成功に対する主要な障害物を示す。Ｔｒｅｇ細胞は、抗腫瘍免疫の最も強力な阻害剤および免疫療法成功に対する最大の障壁と考えられる。Ｔｒｅｇ増加および腫瘍成長に対するその負の予後における関わりは、多くの種類のがんに見られる一般現象である。したがって、Ｔｒｅｇを枯渇させるための戦略の開発は、がん細胞に対する免疫応答の再活性化または刺激に役立つことができる。Ｔｒｅｇ機能の枯渇または干渉のためのいくつかの戦略が試みられており、例えば、ＣＤ２５、グルココルチコイド（glucorticoid）誘導性ＴＮＦ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）に特異的なモノクローナル抗体（ｍＡｂ）、および細胞表面受容体ＣＤ２５に標的化されたリガンド指向性毒素（デニロイキン（Dennileukin）ジフチトクス等）によるＴｒｅｇの枯渇がある。しかし、ＣＤ２５およびＧＩＴＲは両者共に、Ｔｒｅｇ細胞のみならず、活性化されたＣＤ４およびＣＤ８エフェクターＴ細胞においても発現される。これらの戦略に伴う問題は、現在利用できる薬剤の特異性の欠如であり、これは、有益な抗腫瘍エフェクターＴ細胞の枯渇をもたらす。転写因子フォークヘッドボックスＰ３（Ｆｏｘｐ３）は、Ｔｒｅｇの確立および抑制性機能に必須であり、したがって、Ｔｒｅｇ細胞を排除するための高度に特異的かつ理想的な標的となるであろう。しかし、Ｆｏｘｐ３は、新薬の開発につながらない細胞内タンパク質である。したがって、Ｔｒｅｇ細胞を選択的に阻害する薬物に対する大きな必要性は満たされていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Okaら、The  Scientific  World  Journal  ２００７年；７巻：６４９〜６６５頁
【非特許文献２】Kobayashiら、Cancer  Immunol.  Immunother.２００６年；５５巻（７号）：８５０〜８６０頁
【非特許文献３】Miedererら、Adv  Drug  Deliv  Rev  ２００８年；６０巻（１２号）：１３７１〜１３８２頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本明細書に開示される主題の要旨
本明細書に開示される主題は、Ｆｏｘｐ３転写因子を標的とすることができる抗体およびキメラ抗原受容体等、抗原結合性タンパク質を同定し、特徴付ける。本明細書に開示される抗体は、ペプチド／ＭＨＣ複合体を標的とするが、その理由として、これがＦｏｘｐ３タンパク質の抗原プロセシングおよび細胞による提示後に細胞の表面に典型的に現れるであろうことが挙げられる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、Ｔ細胞受容体模倣物（ＴＣＲｍ）抗体である。ある特定の実施形態では、ＴＣＲｍ抗体は、この抗体が、ＭＨＣ拘束様式で、すなわち、ペプチドがＭＨＣ抗原（例えば、ヒトＭＨＣ分子）に結合した場合に、ペプチドを特異的に認識しこれに結合する能力を有するという点において、Ｔ細胞受容体を模倣する。ペプチド／ＭＨＣ複合体は、抗原を再現するが、その理由として、これが、Ｆｏｘｐ３タンパク質の抗原プロセシングおよびＴ細胞への提示後に細胞の表面に典型的に現れるであろうことが挙げられる。ある特定の実施形態では、ＴＣＲｍ抗体は、ＨＬＡ溝（ペプチドが由来する完全タンパク質の３Ｄトポロジーに対し）に提示されたペプチドを認識し、下流のＴ細胞免疫エフェクターを誘発することができるという点において、Ｔ細胞受容体のように機能する可溶性抗体である。
【００１０】
ある特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分はいずれも、そのパートナーＭＨＣ分子の非存在下でその標的Ｆｏｘｐ３ペプチドに結合しない。ある特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ペプチド／ＭＨＣ複合体への抗体またはその抗原結合性部分の結合親和性（affininty）の少なくとも１０分の１または少なくとも１００分の１または少なくとも１０００分の１のより少ない結合親和性で、そのパートナーＭＨＣ分子の非存在下でその標的Ｆｏｘｐ３ペプチドに結合する。
【００１１】
本明細書に開示されている抗体は、ペプチド／ＭＨＣ複合体（例えば、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ複合体、より具体的には、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡクラスＩ複合体、より具体的には、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ複合体、より具体的には、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ２複合体、さらにより具体的には、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体）のエピトープを特異的に認識し、これに結合する。ヒトＭＨＣ−ペプチド複合体の一部としての本明細書に開示される主題の抗原結合性タンパク質によって認識されるＦｏｘｐ３ペプチドの例として、配列番号２に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−１またはその部分、配列番号３に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−２またはその部分、配列番号４に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−３またはその部分、配列番号５に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−４またはその部分、配列番号６に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−５またはその部分、配列番号７に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−６またはその部分、および配列番号８に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−７またはその部分が挙げられるがこれらに限定されない。
【００１２】
ある特定の実施形態では、したがって、本明細書に開示される主題は、ヒトＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドに結合する、単離された抗体またはその抗原結合性部分を提供する。Ｆｏｘｐ３ペプチドは、ＭＨＣ分子に結合して、Ｆｏｘｐ３／ＭＨＣ複合体を形成する。ある特定の実施形態では、ＭＨＣ分子は、ＨＬＡクラスＩ分子である。ある特定の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ−Ａである。ある特定の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ２である。ある特定の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【００１３】
ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３ペプチドは、配列番号１に表記されているアミノ酸配列を含むヒトＦｏｘｐ３ポリペプチドの部分である。ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３ペプチドは、８〜１２アミノ酸の長さを有する。ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３ペプチドは、９アミノ酸の長さを有する。ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３ペプチドは、１０アミノ酸の長さを有する。
【００１４】
ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性部分は、配列番号８に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−７に結合する。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性部分は、Ｆｏｘｐ３−７の部分に結合する。ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３−７またはその部分に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、（ａ）配列番号１１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号１４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；（ｂ）配列番号１７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号２０に表記されているアミノ酸（amino  an  acid）配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；（ｃ）配列番号２３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号２６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；（ｄ）配列番号２９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号３２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；（ｅ）配列番号３５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号３８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；（ｆ）配列番号４１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号４４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；（ｇ）配列番号４７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号５０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；ならびに（ｈ）配列番号５３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号５６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列からなる群から選択される重鎖可変領域ＣＤＲ３配列および軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３−７またはその部分に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、（ａ）配列番号１０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号１３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；（ｂ）配列番号１６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号１９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；（ｃ）配列番号２２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号２５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；（ｄ）配列番号２８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号３１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；（ｅ）配列番号３４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号３７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；（ｆ）配列番号４０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号４３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；（ｇ）配列番号４６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号４９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；ならびに（ｈ）配列番号５２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号５５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列からなる群から選択される重鎖可変領域ＣＤＲ２配列および軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列をさらに含む。ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３−７またはその部分に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、（ａ）配列番号９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号１２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；（ｂ）配列番号１５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号１８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；（ｃ）配列番号２１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号２４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；（ｄ）配列番号２７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号３０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；（ｅ）配列番号３３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号３６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；（ｆ）配列番号３９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号４２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；（ｇ）配列番号４５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号４８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；ならびに（ｈ）配列番号５１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号５４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列からなる群から選択される重鎖可変領域ＣＤＲ１配列および軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列をさらに含む。
【００１５】
ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３−７またはその部分に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、（ａ）配列番号９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｂ）配列番号１５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｃ）配列番号２１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号２７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｅ）配列番号３３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３４に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３７に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｆ）配列番号３９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号４４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｇ）配列番号４５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号５０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；または（ｈ）配列番号５１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号５６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３−７またはその部分に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号３９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号４４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００１６】
ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３−７またはその部分に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５および１０７からなる群から選択される配列に対し少なくとも約８０％相同もしくは少なくとも約９０％相同もしくは少なくとも約９５％相同もしくは少なくとも約９８％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６および１０８からなる群から選択される配列に対し少なくとも約８０％相同もしくは少なくとも約９０％相同もしくは少なくとも約９５％相同もしくは少なくとも約９８％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。斯かる抗体またはその抗原結合性部分は、（ａ）配列番号９３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；（ｂ）配列番号９５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；（ｃ）配列番号９７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；（ｄ）配列番号９９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；（ｅ）配列番号１０１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；（ｆ）配列番号１０３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；（ｇ）配列番号１０５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または（ｈ）配列番号１０７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３−７またはその部分に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１０３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００１７】
ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性部分は、配列番号３に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−２またはその部分に結合する。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性部分は、Ｆｏｘｐ３−２の部分に結合する。ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３−２またはその部分に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、：（ａ）配列番号５９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号６２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；（ｂ）配列番号６５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号６８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；（ｃ）配列番号７１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号７４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；（ｄ）配列番号７７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号８０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および（ｅ）配列番号８３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、または配列番号８６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３−２またはその部分に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、（ａ）配列番号５８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号６１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；（ｂ）配列番号６４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号６７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；（ｃ）配列番号７０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号７３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；（ｄ）配列番号７６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号７９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および（ｅ）配列番号８２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号８５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列をさらに含む。ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３−２またはその部分に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、（ａ）配列番号５７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号６０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；（ｂ）配列番号６３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号６６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；（ｃ）配列番号６９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号７１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；（ｄ）配列番号７５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号７８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および；（ｅ）配列番号８１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号８４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列からなる群から選択される重鎖可変領域ＣＤＲ１配列および軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列をさらに含む。
【００１８】
ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３−２またはその部分に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、（ａ）配列番号５７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号６２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｂ）配列番号６３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６４に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号６５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６７に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号６８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｃ）配列番号６９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号７１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号７２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号７５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号７７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号７８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、または（ｅ）配列番号８１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号８３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号８４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００１９】
ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３−２またはその部分に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１０９、１１１、１１３、１１５および１１７からなる群から選択される配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１１０、１１２、１１４、１１６および１１８からなる群から選択される配列に対し少なくとも約８０％相同もしくは少なくとも約９０％相同もしくは少なくとも約９５％相同もしくは少なくとも約９８％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。斯かる抗体またはその抗原結合性部分は、（ａ）配列番号１０９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；（ｂ）配列番号１１１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；（ｃ）配列番号１１３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；（ｄ）配列番号１１５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または（ｅ）配列番号１１７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００２０】
ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性部分は、配列番号５に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−４またはその部分に結合する。ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３−２またはその部分に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号８７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号８９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号９０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号９１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号９２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００２１】
ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３−４またはその部分に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１１９の配列に対し少なくとも約８０％相同もしくは少なくとも約９０％相同もしくは少なくとも約９５％相同もしくは少なくとも約９８％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１２０の配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３−４またはその部分に結合する抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１１９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１２０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００２２】
修飾は、１個または複数の欠失、挿入および／または置換であり得る。その修飾は、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の修飾を含むことができる。修飾は、保存的（conversative）修飾または非保存的（non-a  conservative）修飾であり得る。
【００２３】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、Ｆｏｘｐ３ペプチドのＮ末端に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、Ｆｏｘｐ３ペプチドのＣ末端に結合する。抗体またはその抗原結合性部分は、Ｆｏｘｐ３ペプチドに特異的に結合する、例えば、１×１０−７Ｍまたはそれ未満の結合親和性（ＫＤ）で、Ｆｏｘｐ３ペプチドに結合する。
【００２４】
本明細書に開示される主題は、（ｉ）本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性部分のいずれかと、ヒトＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドへの結合に関して交差競合し、（ｉｉ）約５×１０−７Ｍまたはそれ未満の結合親和性（ＫＤ）で、Ｆｏｘｐ３ペプチドに特異的に結合する、単離された抗体またはその抗原結合性部分も提供する。
【００２５】
ある特定の非限定的な実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、そのパートナーＭＨＣ分子の非存在下でその標的Ｆｏｘｐ３ペプチドに結合しないか、または多くても１０分の１または多くても１００分の１または多くても１０００分の１の親和性で結合する、のいずれかである。
【００２６】
本明細書に開示される主題は、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性部分のいずれかと、ヒトＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドにおける同じまたは実質的に重複する均等なエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合性部分をさらに提供する。
【００２７】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、完全ヒト抗体またはその抗原結合性部分である。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、キメラ抗体またはその抗原結合性部分である。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ヒト化抗体またはその抗原結合性部分である。ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合性部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのものである。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。ある特定の実施形態では、抗原結合性部分は、１個または複数の非免疫グロブリン構成成分との融合タンパク質に含まれる。
【００２８】
ある特定の実施形態（embodimetns）では、上述の抗体は、１個または複数の翻訳後修飾を含む。ある特定の非限定的な実施形態では、１個または複数の翻訳後修飾は、非フコシル化を含む。例えば、抗体は、非フコシル化Ｆｃ領域を含む。
【００２９】
別の態様では、本明細書に開示される主題は、本明細書に開示されている抗原結合性タンパク質、抗体またはその抗原結合性部分である、第１の構成成分を含むイムノコンジュゲートを提供する。イムノコンジュゲートは、細胞毒、検出可能な標識、放射性同位体、治療剤、結合タンパク質または第２のアミノ酸配列を有する分子である、第２の構成成分を含む。第２の構成成分が、結合タンパク質または第２の抗体である場合、結合タンパク質または第２の抗体は、第１の構成成分が特異的であるＨＬＡ−ペプチド複合体とは異なる標的に対する結合特異性を有する。
【００３０】
関連する態様では、したがって、本明細書に開示される主題は、本明細書に記載されている抗原結合性タンパク質またはその機能的断片を含む二特異性抗体を提供する。ある特定の実施形態では、二特異性抗体は、ＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチド（Ｆｏｘｐ３／ＭＨＣ複合体）および細胞表面タンパク質を認識する。ある特定の実施形態では、細胞表面タンパク質は、ＣＤ３またはＣＤ１６である。
【００３１】
さらに別の態様では、本明細書に開示される主題は、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＨＬＡ複合体、例えば、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡクラスＩ複合体、より具体的には、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ複合体、より具体的には、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ２複合体、さらにより具体的には、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体に特異的な抗体およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む抗原結合性タンパク質を提供する。本明細書に開示される主題は、本開示のＣＡＲをコードする核酸、本開示の主題に従った抗原結合性タンパク質（例えば、抗体またはＣＡＲ）の発現および／または分泌を容易にするためのベクターを含む、斯かる核酸を含むベクターも提供する。
【００３２】
別の関連する態様では、本開示の主題は、本開示の主題に従った抗原結合性領域を含むＣＡＲを発現するように遺伝的に修飾されたＴ細胞等、組換え免疫エフェクター細胞を含む、本明細書に開示されている核酸または抗原結合性タンパク質を含む宿主細胞を提供する。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、Ｔ細胞である。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、Ｔｒｅｇ細胞である。本開示に従った抗体を産生するように操作された細胞も、本開示の主題によって包含される。
【００３３】
関連する態様では、本開示の主題は、薬学的に許容される担体と共に、本明細書に開示されている抗原結合性タンパク質、抗体、核酸ベクターまたは核酸もしくは抗原結合性タンパク質を含む細胞を含む医薬組成物を提供する。
【００３４】
別の態様では、本開示の主題は、本開示の主題のＦｏｘｐ３抗体を使用して、細胞または組織の表面におけるＦｏｘｐ３／ＭＨＣを検出するための方法を提供する。
【００３５】
別の態様では、本開示の主題は、対象におけるＦｏｘｐ３発現細胞を死滅させる方法を提供する。ある特定の実施形態では、本方法は、本明細書に開示されている抗体もしくはその抗原結合性部分（二特異性抗体を含む）、抗原結合性タンパク質（ＣＡＲを含む）、イムノコンジュゲート、抗原結合性タンパク質もしくは抗体をコードする核酸、または核酸もしくはタンパク質を含む細胞を対象に投与するステップを含む。
【００３６】
別の態様では、本開示の主題は、対象における免疫応答を誘導する方法を提供する。ある特定の実施形態では、本方法は、本明細書に開示されている抗体もしくはその抗原結合性部分（二特異性抗体を含む）、抗原結合性タンパク質（ＣＡＲを含む）、イムノコンジュゲート、抗原結合性タンパク質もしくは抗体をコードする核酸、または核酸もしくはタンパク質を含む細胞を対象に投与するステップを含む。
【００３７】
別の態様では、本開示の主題は、対象における調節性Ｔ細胞を選択的に阻害（例えば、不活性化、増殖阻害または死滅）する方法を提供する。ある特定の実施形態では、本方法は、本明細書に開示されている抗体もしくはその抗原結合性部分（二特異性抗体を含む）、抗原結合性タンパク質（ＣＡＲを含む）、イムノコンジュゲート、抗原結合性タンパク質もしくは抗体をコードする核酸、または核酸もしくはタンパク質を含む細胞を対象に投与するステップを含む。ある特定の実施形態では、本方法は、調節性Ｔ細胞の数を低下させる、調節性Ｔ細胞を枯渇する、調節性Ｔ細胞の免疫抑制活性を阻害する、および／またはリンパ節もしくは腫瘍への調節性Ｔ細胞輸送を遮断する。
【００３８】
さらに別の態様では、本開示の主題は、がんを処置するための方法であって、本明細書に開示されている治療有効量の抗体もしくはその抗原結合性部分（二特異性抗体を含む）、抗原結合性タンパク質（例えば、ＣＡＲ）、イムノコンジュゲート、抗原結合性タンパク質もしくは抗体をコードする核酸、または核酸もしくはタンパク質を含む細胞を、がんを患う対象に投与し、これにより、対象におけるがん細胞の死を誘導するステップを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、がんは、乳がん、卵巣がん、メラノーマ、肺がん、膵がん、胃がん、結腸がん、神経膠芽腫、腎臓がん、肝臓がん、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫およびこれらの組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、対象は、ヒトである。ある特定の実施形態では、対象は、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ等が挙げられるがこれらに限定されない、非ヒト動物である。ある特定の実施形態では、がん細胞は、Ｆｏｘｐ３を発現する。
【００３９】
さらに、本開示の主題は、本明細書に開示されている抗体もしくはその抗原結合性部分（二特異性抗体を含む）、抗原結合性タンパク質（ＣＡＲを含む）、イムノコンジュゲート、抗原結合性タンパク質もしくは抗体をコードする核酸、または核酸もしくはタンパク質を含む細胞を含む、がんを処置するためのキットを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】図１Ａ〜図１Ｄは、Ｆｏｘｐ３ペプチドのペプチド特異的Ｔ細胞応答を表す図である。（Ａ）ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１（「ＨＬＡ−Ａ０２０１」または「ＨＬＡ−Ａ＊０２０１」とも呼ばれる）ドナー由来のＣＤ３  Ｔ細胞をＦｏｘｐ３−４またはＦｏｘｐ３−６ペプチドで３ラウンド刺激し、Ｆｏｘｐ３−１、Ｆｏｘｐ３−２、Ｆｏｘｐ３−３、Ｆｏｘｐ３−４、Ｆｏｘｐ３−５、またはＦｏｘｐ３−６ペプチドに対するＴ細胞応答をＩＦＮ−ｇエリスポットアッセイによって試験した。（Ｂ）同じドナー由来のＴ細胞をＦｏｘｐ３−４またはＦｏｘｐ３−６ペプチドでもう２ラウンドさらに刺激し、Ｆｏｘｐ３−４またはＦｏｘｐ３−６ペプチドに対する試験を行った。（ＣおよびＤ）異なるＨＬＡ−Ａ２＋ドナー由来のＴ細胞を、Ｆｏｘｐ３−１もしくはＦｏｘｐ３−３（３ラウンド）、またはＦｏｘｐ３−２もしくはＦｏｘｐ３−５ペプチド（５ラウンド）で刺激し、刺激性ペプチドに対するペプチド特異的Ｔ細胞応答を試験した。対照：ＣＤ１４＋ＡＰＣおよび無関係のペプチドＥＷをパルスしたＣＤ１４＋細胞。データは、３連のマイクロウェル培養物からの平均値＋／−ＳＤを表す。
【００４１】
【図２】図２Ａ〜図２Ｄは、Ｆｏｘｐ３ペプチドのペプチド特異的Ｔ細胞応答を表す図である。（ＡおよびＢ）第３のＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋ドナー由来のＣＤ３  Ｔ細胞を、示されているＦｏｘｐ３ペプチドで５ラウンド刺激し、刺激性ペプチドに対する試験を行った。異なる実験において、Ｆｏｘｐ３−４、Ｆｏｘｐ３−６、またはＦｏｘｐ３−７ペプチドで刺激したＴ細胞を、自家ＣＤ１４＋ＡＰＣにパルスした刺激性ペプチドに対して試験し（Ｃ）、パルスしていないＦｏｘｐ３＋ＨＬＡ−Ａ２＋細胞株ＭＡＣ−１、ＭＡＣ２Ａ、Ｆｏｘｐ３＋ＨＬＡ−Ａ２−細胞株Ｊｕｒｋａｔ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで生成したＣＤ４＋ＣＤ２５＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔｒｅｇ細胞を標的細胞として使用した（Ｄ）。
【００４２】
【図３】図３は、Ｆｏｘｐ３ペプチドのエピトープ特異的Ｔ細胞応答を表す図である。ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋ドナー由来のＣＤ３  Ｔ細胞をＦｏｘｐ３−ペプチド１、２、４、５、６、または７で４ラウンド刺激し、Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋細胞株ＭＡＣ−１、ＭＡＣ−２Ａ、またはＦｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２−細胞株Ｊｕｒｋａｔに対するＦｏｘｐ３の認識をＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって試験した。
【００４３】
【図４】図４Ａ〜図４Ｆは、Ｆｏｘｐ３ペプチドの、ペプチド特異的な、Ｔ細胞による細胞傷害を表す図である。ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋ドナー由来のＣＤ３  Ｔ細胞を、Ｆｏｘｐ３由来ペプチドのＦｏｘｐ３−１、Ｆｏｘｐ３−２、Ｆｏｘｐ３−４（Ａ、Ｃ、およびＥ）、Ｆｏｘｐ３−５、Ｆｏｘｐ３−６、またはＦｏｘｐ３−７（Ｂ、Ｄ、およびＦ）で５ラウンド刺激し、Ｔ２細胞における刺激性ペプチドに対する細胞傷害を、５１Ｃｒ放出アッセイによって測定した。Ｔ２細胞単独またはＥＷをパルスしたものを陰性対照として使用した。各データ点は、３連の培養物からの平均＋／−ＳＤを表す。
【００４４】
【図５】図５Ａ〜図５Ｄは、ＨＬＡ−Ａ０２０１分子との関連におけるＦｏｘｐ３−ＴＬＩによるペプチド特異的Ｔ細胞応答の誘導を表す図である。（Ａ）ＨＬＡ−Ａ０＊２０１＋Ｆｏｘｐ３ドナー由来のＣＤ３  Ｔ細胞をＦｏｘｐ３−ＴＬＩペプチドで４ラウンド刺激し、ＴＬＩペプチドまたは無関係のペプチドＥＷに対するＴ細胞応答をＩＦＮ−γエリスポットアッセイによって試験した。ＣＤ１４＋ＡＰＣは、陰性対照として機能する。（Ｂ）ＴＬＩで刺激されたＴ細胞はまた、ＨＬＡ−Ａ０２０１＋Ｔｒｅｇ様細胞株のＭＡＣ−１およびＭＡＣ−２Ａ細胞を認識するが、ＨＬＡ−Ａ０＊２０１−Ｊｕｒｋａｔ細胞は認識しない。（ＣおよびＤ）同じドナー由来のＴ細胞を５ラウンド刺激し、５１Ｃｒ放出アッセイにより、Ｔ２細胞にパルスした刺激性ペプチド（Ｃ）またはパルスしていない標的細胞（Ｄ）に対する５１Ｃｒ放出アッセイにより、細胞傷害を測定した。ＨＬＡ−Ａ０＊２０１陰性ＡＭＬ細胞株ＨＬ−６０を陰性対照として使用した。（Ｃ）これらのＴ細胞は、Ｆｏｘｐ３ペプチドをパルスしたＴ２細胞、ならびに（Ｄ）ＭＡＣ−１およびＭＡＣ−２Ａ細胞を死滅させることができたが、ＨＬＡ−Ａ０２０１−ＨＬ−６０細胞は死滅させなかった。各データ点は、３連の培養物からの平均＋／−ＳＤを表す。
【００４５】
【図６Ａ】図６Ａ〜図６Ｊは、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド、Ｆｏｘｐ３−２ペプチド、およびＦｏｘｐ３−４ペプチドをパルスしたＴ２細胞に対する、ファージｓｃＦｖクローンの結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。陰性対照は、第２の抗体なし、抗体なし、および無関係の抗体Ｐｒ４３５であった。Ｔ２細胞単独（Ｂ、Ｄ、Ｆ）、対照ペプチドＲ３をパルスしたもの（Ｃ、Ｇ）、またはＥＷペプチドをパルスしたもの（Ｅ、Ｈ）。（Ｉ）Ｆｏｘｐ３−２ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。（Ｊ）Ｆｏｘｐ３−４ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。ファージクローン＃９、１１、１７、１８、２１、２６、２７、２８、３２は、Ｔ２細胞単独またはＲ３ペプチドをパルスしたものに対する著しい結合を示さなかったが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞には結合し、クローン＃３２の結合が最も強力であった。このデータは、５つの同様の実験からのデータを表す。染色対照は、未染色細胞、二次ｍＡｂ（ＧＡＭ）、または無関係のファージＰｒ４３５−＃２０を含む。
【図６Ｂ】図６Ａ〜図６Ｊは、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド、Ｆｏｘｐ３−２ペプチド、およびＦｏｘｐ３−４ペプチドをパルスしたＴ２細胞に対する、ファージｓｃＦｖクローンの結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。陰性対照は、第２の抗体なし、抗体なし、および無関係の抗体Ｐｒ４３５であった。Ｔ２細胞単独（Ｂ、Ｄ、Ｆ）、対照ペプチドＲ３をパルスしたもの（Ｃ、Ｇ）、またはＥＷペプチドをパルスしたもの（Ｅ、Ｈ）。（Ｉ）Ｆｏｘｐ３−２ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。（Ｊ）Ｆｏｘｐ３−４ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。ファージクローン＃９、１１、１７、１８、２１、２６、２７、２８、３２は、Ｔ２細胞単独またはＲ３ペプチドをパルスしたものに対する著しい結合を示さなかったが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞には結合し、クローン＃３２の結合が最も強力であった。このデータは、５つの同様の実験からのデータを表す。染色対照は、未染色細胞、二次ｍＡｂ（ＧＡＭ）、または無関係のファージＰｒ４３５−＃２０を含む。
【図６Ｃ】図６Ａ〜図６Ｊは、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド、Ｆｏｘｐ３−２ペプチド、およびＦｏｘｐ３−４ペプチドをパルスしたＴ２細胞に対する、ファージｓｃＦｖクローンの結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。陰性対照は、第２の抗体なし、抗体なし、および無関係の抗体Ｐｒ４３５であった。Ｔ２細胞単独（Ｂ、Ｄ、Ｆ）、対照ペプチドＲ３をパルスしたもの（Ｃ、Ｇ）、またはＥＷペプチドをパルスしたもの（Ｅ、Ｈ）。（Ｉ）Ｆｏｘｐ３−２ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。（Ｊ）Ｆｏｘｐ３−４ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。ファージクローン＃９、１１、１７、１８、２１、２６、２７、２８、３２は、Ｔ２細胞単独またはＲ３ペプチドをパルスしたものに対する著しい結合を示さなかったが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞には結合し、クローン＃３２の結合が最も強力であった。このデータは、５つの同様の実験からのデータを表す。染色対照は、未染色細胞、二次ｍＡｂ（ＧＡＭ）、または無関係のファージＰｒ４３５−＃２０を含む。
【図６Ｄ】図６Ａ〜図６Ｊは、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド、Ｆｏｘｐ３−２ペプチド、およびＦｏｘｐ３−４ペプチドをパルスしたＴ２細胞に対する、ファージｓｃＦｖクローンの結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。陰性対照は、第２の抗体なし、抗体なし、および無関係の抗体Ｐｒ４３５であった。Ｔ２細胞単独（Ｂ、Ｄ、Ｆ）、対照ペプチドＲ３をパルスしたもの（Ｃ、Ｇ）、またはＥＷペプチドをパルスしたもの（Ｅ、Ｈ）。（Ｉ）Ｆｏｘｐ３−２ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。（Ｊ）Ｆｏｘｐ３−４ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。ファージクローン＃９、１１、１７、１８、２１、２６、２７、２８、３２は、Ｔ２細胞単独またはＲ３ペプチドをパルスしたものに対する著しい結合を示さなかったが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞には結合し、クローン＃３２の結合が最も強力であった。このデータは、５つの同様の実験からのデータを表す。染色対照は、未染色細胞、二次ｍＡｂ（ＧＡＭ）、または無関係のファージＰｒ４３５−＃２０を含む。
【図６Ｅ−１】図６Ａ〜図６Ｊは、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド、Ｆｏｘｐ３−２ペプチド、およびＦｏｘｐ３−４ペプチドをパルスしたＴ２細胞に対する、ファージｓｃＦｖクローンの結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。陰性対照は、第２の抗体なし、抗体なし、および無関係の抗体Ｐｒ４３５であった。Ｔ２細胞単独（Ｂ、Ｄ、Ｆ）、対照ペプチドＲ３をパルスしたもの（Ｃ、Ｇ）、またはＥＷペプチドをパルスしたもの（Ｅ、Ｈ）。（Ｉ）Ｆｏｘｐ３−２ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。（Ｊ）Ｆｏｘｐ３−４ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。ファージクローン＃９、１１、１７、１８、２１、２６、２７、２８、３２は、Ｔ２細胞単独またはＲ３ペプチドをパルスしたものに対する著しい結合を示さなかったが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞には結合し、クローン＃３２の結合が最も強力であった。このデータは、５つの同様の実験からのデータを表す。染色対照は、未染色細胞、二次ｍＡｂ（ＧＡＭ）、または無関係のファージＰｒ４３５−＃２０を含む。
【図６Ｅ−２】図６Ａ〜図６Ｊは、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド、Ｆｏｘｐ３−２ペプチド、およびＦｏｘｐ３−４ペプチドをパルスしたＴ２細胞に対する、ファージｓｃＦｖクローンの結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。陰性対照は、第２の抗体なし、抗体なし、および無関係の抗体Ｐｒ４３５であった。Ｔ２細胞単独（Ｂ、Ｄ、Ｆ）、対照ペプチドＲ３をパルスしたもの（Ｃ、Ｇ）、またはＥＷペプチドをパルスしたもの（Ｅ、Ｈ）。（Ｉ）Ｆｏｘｐ３−２ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。（Ｊ）Ｆｏｘｐ３−４ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。ファージクローン＃９、１１、１７、１８、２１、２６、２７、２８、３２は、Ｔ２細胞単独またはＲ３ペプチドをパルスしたものに対する著しい結合を示さなかったが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞には結合し、クローン＃３２の結合が最も強力であった。このデータは、５つの同様の実験からのデータを表す。染色対照は、未染色細胞、二次ｍＡｂ（ＧＡＭ）、または無関係のファージＰｒ４３５−＃２０を含む。
【図６Ｆ】図６Ａ〜図６Ｊは、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド、Ｆｏｘｐ３−２ペプチド、およびＦｏｘｐ３−４ペプチドをパルスしたＴ２細胞に対する、ファージｓｃＦｖクローンの結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。陰性対照は、第２の抗体なし、抗体なし、および無関係の抗体Ｐｒ４３５であった。Ｔ２細胞単独（Ｂ、Ｄ、Ｆ）、対照ペプチドＲ３をパルスしたもの（Ｃ、Ｇ）、またはＥＷペプチドをパルスしたもの（Ｅ、Ｈ）。（Ｉ）Ｆｏｘｐ３−２ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。（Ｊ）Ｆｏｘｐ３−４ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。ファージクローン＃９、１１、１７、１８、２１、２６、２７、２８、３２は、Ｔ２細胞単独またはＲ３ペプチドをパルスしたものに対する著しい結合を示さなかったが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞には結合し、クローン＃３２の結合が最も強力であった。このデータは、５つの同様の実験からのデータを表す。染色対照は、未染色細胞、二次ｍＡｂ（ＧＡＭ）、または無関係のファージＰｒ４３５−＃２０を含む。
【図６Ｇ−１】図６Ａ〜図６Ｊは、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド、Ｆｏｘｐ３−２ペプチド、およびＦｏｘｐ３−４ペプチドをパルスしたＴ２細胞に対する、ファージｓｃＦｖクローンの結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。陰性対照は、第２の抗体なし、抗体なし、および無関係の抗体Ｐｒ４３５であった。Ｔ２細胞単独（Ｂ、Ｄ、Ｆ）、対照ペプチドＲ３をパルスしたもの（Ｃ、Ｇ）、またはＥＷペプチドをパルスしたもの（Ｅ、Ｈ）。（Ｉ）Ｆｏｘｐ３−２ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。（Ｊ）Ｆｏｘｐ３−４ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。ファージクローン＃９、１１、１７、１８、２１、２６、２７、２８、３２は、Ｔ２細胞単独またはＲ３ペプチドをパルスしたものに対する著しい結合を示さなかったが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞には結合し、クローン＃３２の結合が最も強力であった。このデータは、５つの同様の実験からのデータを表す。染色対照は、未染色細胞、二次ｍＡｂ（ＧＡＭ）、または無関係のファージＰｒ４３５−＃２０を含む。
【図６Ｇ−２】図６Ａ〜図６Ｊは、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド、Ｆｏｘｐ３−２ペプチド、およびＦｏｘｐ３−４ペプチドをパルスしたＴ２細胞に対する、ファージｓｃＦｖクローンの結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。陰性対照は、第２の抗体なし、抗体なし、および無関係の抗体Ｐｒ４３５であった。Ｔ２細胞単独（Ｂ、Ｄ、Ｆ）、対照ペプチドＲ３をパルスしたもの（Ｃ、Ｇ）、またはＥＷペプチドをパルスしたもの（Ｅ、Ｈ）。（Ｉ）Ｆｏｘｐ３−２ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。（Ｊ）Ｆｏｘｐ３−４ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。ファージクローン＃９、１１、１７、１８、２１、２６、２７、２８、３２は、Ｔ２細胞単独またはＲ３ペプチドをパルスしたものに対する著しい結合を示さなかったが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞には結合し、クローン＃３２の結合が最も強力であった。このデータは、５つの同様の実験からのデータを表す。染色対照は、未染色細胞、二次ｍＡｂ（ＧＡＭ）、または無関係のファージＰｒ４３５−＃２０を含む。
【図６Ｇ−３】図６Ａ〜図６Ｊは、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド、Ｆｏｘｐ３−２ペプチド、およびＦｏｘｐ３−４ペプチドをパルスしたＴ２細胞に対する、ファージｓｃＦｖクローンの結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。陰性対照は、第２の抗体なし、抗体なし、および無関係の抗体Ｐｒ４３５であった。Ｔ２細胞単独（Ｂ、Ｄ、Ｆ）、対照ペプチドＲ３をパルスしたもの（Ｃ、Ｇ）、またはＥＷペプチドをパルスしたもの（Ｅ、Ｈ）。（Ｉ）Ｆｏｘｐ３−２ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。（Ｊ）Ｆｏｘｐ３−４ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。ファージクローン＃９、１１、１７、１８、２１、２６、２７、２８、３２は、Ｔ２細胞単独またはＲ３ペプチドをパルスしたものに対する著しい結合を示さなかったが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞には結合し、クローン＃３２の結合が最も強力であった。このデータは、５つの同様の実験からのデータを表す。染色対照は、未染色細胞、二次ｍＡｂ（ＧＡＭ）、または無関係のファージＰｒ４３５−＃２０を含む。
【図６Ｈ−１】図６Ａ〜図６Ｊは、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド、Ｆｏｘｐ３−２ペプチド、およびＦｏｘｐ３−４ペプチドをパルスしたＴ２細胞に対する、ファージｓｃＦｖクローンの結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。陰性対照は、第２の抗体なし、抗体なし、および無関係の抗体Ｐｒ４３５であった。Ｔ２細胞単独（Ｂ、Ｄ、Ｆ）、対照ペプチドＲ３をパルスしたもの（Ｃ、Ｇ）、またはＥＷペプチドをパルスしたもの（Ｅ、Ｈ）。（Ｉ）Ｆｏｘｐ３−２ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。（Ｊ）Ｆｏｘｐ３−４ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。ファージクローン＃９、１１、１７、１８、２１、２６、２７、２８、３２は、Ｔ２細胞単独またはＲ３ペプチドをパルスしたものに対する著しい結合を示さなかったが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞には結合し、クローン＃３２の結合が最も強力であった。このデータは、５つの同様の実験からのデータを表す。染色対照は、未染色細胞、二次ｍＡｂ（ＧＡＭ）、または無関係のファージＰｒ４３５−＃２０を含む。
【図６Ｈ−２】図６Ａ〜図６Ｊは、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド、Ｆｏｘｐ３−２ペプチド、およびＦｏｘｐ３−４ペプチドをパルスしたＴ２細胞に対する、ファージｓｃＦｖクローンの結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。陰性対照は、第２の抗体なし、抗体なし、および無関係の抗体Ｐｒ４３５であった。Ｔ２細胞単独（Ｂ、Ｄ、Ｆ）、対照ペプチドＲ３をパルスしたもの（Ｃ、Ｇ）、またはＥＷペプチドをパルスしたもの（Ｅ、Ｈ）。（Ｉ）Ｆｏｘｐ３−２ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。（Ｊ）Ｆｏｘｐ３−４ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。ファージクローン＃９、１１、１７、１８、２１、２６、２７、２８、３２は、Ｔ２細胞単独またはＲ３ペプチドをパルスしたものに対する著しい結合を示さなかったが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞には結合し、クローン＃３２の結合が最も強力であった。このデータは、５つの同様の実験からのデータを表す。染色対照は、未染色細胞、二次ｍＡｂ（ＧＡＭ）、または無関係のファージＰｒ４３５−＃２０を含む。
【図６Ｉ−１】図６Ａ〜図６Ｊは、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド、Ｆｏｘｐ３−２ペプチド、およびＦｏｘｐ３−４ペプチドをパルスしたＴ２細胞に対する、ファージｓｃＦｖクローンの結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。陰性対照は、第２の抗体なし、抗体なし、および無関係の抗体Ｐｒ４３５であった。Ｔ２細胞単独（Ｂ、Ｄ、Ｆ）、対照ペプチドＲ３をパルスしたもの（Ｃ、Ｇ）、またはＥＷペプチドをパルスしたもの（Ｅ、Ｈ）。（Ｉ）Ｆｏｘｐ３−２ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。（Ｊ）Ｆｏｘｐ３−４ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。ファージクローン＃９、１１、１７、１８、２１、２６、２７、２８、３２は、Ｔ２細胞単独またはＲ３ペプチドをパルスしたものに対する著しい結合を示さなかったが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞には結合し、クローン＃３２の結合が最も強力であった。このデータは、５つの同様の実験からのデータを表す。染色対照は、未染色細胞、二次ｍＡｂ（ＧＡＭ）、または無関係のファージＰｒ４３５−＃２０を含む。
【図６Ｉ−２】図６Ａ〜図６Ｊは、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド、Ｆｏｘｐ３−２ペプチド、およびＦｏｘｐ３−４ペプチドをパルスしたＴ２細胞に対する、ファージｓｃＦｖクローンの結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。陰性対照は、第２の抗体なし、抗体なし、および無関係の抗体Ｐｒ４３５であった。Ｔ２細胞単独（Ｂ、Ｄ、Ｆ）、対照ペプチドＲ３をパルスしたもの（Ｃ、Ｇ）、またはＥＷペプチドをパルスしたもの（Ｅ、Ｈ）。（Ｉ）Ｆｏｘｐ３−２ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。（Ｊ）Ｆｏｘｐ３−４ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。ファージクローン＃９、１１、１７、１８、２１、２６、２７、２８、３２は、Ｔ２細胞単独またはＲ３ペプチドをパルスしたものに対する著しい結合を示さなかったが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞には結合し、クローン＃３２の結合が最も強力であった。このデータは、５つの同様の実験からのデータを表す。染色対照は、未染色細胞、二次ｍＡｂ（ＧＡＭ）、または無関係のファージＰｒ４３５−＃２０を含む。
【図６Ｉ−３】図６Ａ〜図６Ｊは、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド、Ｆｏｘｐ３−２ペプチド、およびＦｏｘｐ３−４ペプチドをパルスしたＴ２細胞に対する、ファージｓｃＦｖクローンの結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。陰性対照は、第２の抗体なし、抗体なし、および無関係の抗体Ｐｒ４３５であった。Ｔ２細胞単独（Ｂ、Ｄ、Ｆ）、対照ペプチドＲ３をパルスしたもの（Ｃ、Ｇ）、またはＥＷペプチドをパルスしたもの（Ｅ、Ｈ）。（Ｉ）Ｆｏｘｐ３−２ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。（Ｊ）Ｆｏｘｐ３−４ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。ファージクローン＃９、１１、１７、１８、２１、２６、２７、２８、３２は、Ｔ２細胞単独またはＲ３ペプチドをパルスしたものに対する著しい結合を示さなかったが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞には結合し、クローン＃３２の結合が最も強力であった。このデータは、５つの同様の実験からのデータを表す。染色対照は、未染色細胞、二次ｍＡｂ（ＧＡＭ）、または無関係のファージＰｒ４３５−＃２０を含む。
【図６Ｊ−１】図６Ａ〜図６Ｊは、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド、Ｆｏｘｐ３−２ペプチド、およびＦｏｘｐ３−４ペプチドをパルスしたＴ２細胞に対する、ファージｓｃＦｖクローンの結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。陰性対照は、第２の抗体なし、抗体なし、および無関係の抗体Ｐｒ４３５であった。Ｔ２細胞単独（Ｂ、Ｄ、Ｆ）、対照ペプチドＲ３をパルスしたもの（Ｃ、Ｇ）、またはＥＷペプチドをパルスしたもの（Ｅ、Ｈ）。（Ｉ）Ｆｏｘｐ３−２ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。（Ｊ）Ｆｏｘｐ３−４ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。ファージクローン＃９、１１、１７、１８、２１、２６、２７、２８、３２は、Ｔ２細胞単独またはＲ３ペプチドをパルスしたものに対する著しい結合を示さなかったが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞には結合し、クローン＃３２の結合が最も強力であった。このデータは、５つの同様の実験からのデータを表す。染色対照は、未染色細胞、二次ｍＡｂ（ＧＡＭ）、または無関係のファージＰｒ４３５−＃２０を含む。
【図６Ｊ−２】図６Ａ〜図６Ｊは、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド、Ｆｏｘｐ３−２ペプチド、およびＦｏｘｐ３−４ペプチドをパルスしたＴ２細胞に対する、ファージｓｃＦｖクローンの結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。陰性対照は、第２の抗体なし、抗体なし、および無関係の抗体Ｐｒ４３５であった。Ｔ２細胞単独（Ｂ、Ｄ、Ｆ）、対照ペプチドＲ３をパルスしたもの（Ｃ、Ｇ）、またはＥＷペプチドをパルスしたもの（Ｅ、Ｈ）。（Ｉ）Ｆｏｘｐ３−２ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。（Ｊ）Ｆｏｘｐ３−４ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。ファージクローン＃９、１１、１７、１８、２１、２６、２７、２８、３２は、Ｔ２細胞単独またはＲ３ペプチドをパルスしたものに対する著しい結合を示さなかったが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞には結合し、クローン＃３２の結合が最も強力であった。このデータは、５つの同様の実験からのデータを表す。染色対照は、未染色細胞、二次ｍＡｂ（ＧＡＭ）、または無関係のファージＰｒ４３５−＃２０を含む。
【図６Ｊ−３】図６Ａ〜図６Ｊは、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド、Ｆｏｘｐ３−２ペプチド、およびＦｏｘｐ３−４ペプチドをパルスしたＴ２細胞に対する、ファージｓｃＦｖクローンの結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。陰性対照は、第２の抗体なし、抗体なし、および無関係の抗体Ｐｒ４３５であった。Ｔ２細胞単独（Ｂ、Ｄ、Ｆ）、対照ペプチドＲ３をパルスしたもの（Ｃ、Ｇ）、またはＥＷペプチドをパルスしたもの（Ｅ、Ｈ）。（Ｉ）Ｆｏｘｐ３−２ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。（Ｊ）Ｆｏｘｐ３−４ペプチドに特異的なファージクローンに対するＴ２細胞のフローサイトメトリ解析の代表的なデータ。ファージクローン＃９、１１、１７、１８、２１、２６、２７、２８、３２は、Ｔ２細胞単独またはＲ３ペプチドをパルスしたものに対する著しい結合を示さなかったが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞には結合し、クローン＃３２の結合が最も強力であった。このデータは、５つの同様の実験からのデータを表す。染色対照は、未染色細胞、二次ｍＡｂ（ＧＡＭ）、または無関係のファージＰｒ４３５−＃２０を含む。
【００４６】
【図７Ａ−１】図７Ａ〜図７Ｃは、Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔリンパ腫細胞株ＭＡＣ−１、ＭＡＣ−２Ａ、およびＣＤ３＋Ｔ細胞株Ｊｕｒｋａｔに対する、示されている二特異性抗体（ＢｓＡｂ：ｂｉ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）（「ＢｉＴＥ」とも呼ばれる）構築物の結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔリンパ腫細胞株ＭＡＣ−１に対する、示されているＢｓＡｂ構築物の結合。これらのＢｓＡｂ構築物はｍｙｃタグ付きであったため、ＢｓＡｂに続いて二次ｍＡｂであるマウス抗ｍｙｃのＦＩＴＣコンジュゲートで細胞を染色することにより、結合を試験した。対照は、未染色細胞、対照ＢｓＡｂのＮＣ−１６、または二次ｍＡｂのＧＡ６ｘＨｉｓを含んだ。示されているように、抗Ａ２  ｍＡｂのＢＢ７およびそのアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ｂで細胞を染色することによって、ＨＬＡ−Ａ２発現を測定した。結合強度は、蛍光強度中央値によって示されている。（Ｂ）Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔリンパ腫細胞株ＭＡＣ−２Ａに対する、示されているＢｓＡｂ構築物の結合。対照は、未染色細胞、対照ＢｓＡｂのＮＣ−１６、または二次ｍＡｂのＧＡ６ｘＨｉｓを含んだ。示されているように、抗Ａ２  ｍＡｂのＢＢ７およびそのアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ｂで細胞を染色することによって、ＨＬＡ−Ａ２発現を測定した。結合強度は、蛍光強度中央値によって示されている。（Ｃ）同様に、（Ａ）に記載されているように、ＣＤ３アームに対する＃３２  ＢｉＴＥの結合をＣＤ３＋Ｔ細胞株Ｊｕｒｋａｔで測定した。対照は、未染色細胞、対照ＢｓＡｂのＮＣ−１６、または二次ｍＡｂのＧＡ６ｘＨｉｓを含んだ。示されているように、抗Ａ２  ｍＡｂのＢＢ７およびそのアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ｂで細胞を染色することによって、ＨＬＡ−Ａ２発現を測定した。結合強度は、蛍光強度中央値によって示されている。
【図７Ａ−２】図７Ａ〜図７Ｃは、Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔリンパ腫細胞株ＭＡＣ−１、ＭＡＣ−２Ａ、およびＣＤ３＋Ｔ細胞株Ｊｕｒｋａｔに対する、示されている二特異性抗体（ＢｓＡｂ：ｂｉ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）（「ＢｉＴＥ」とも呼ばれる）構築物の結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔリンパ腫細胞株ＭＡＣ−１に対する、示されているＢｓＡｂ構築物の結合。これらのＢｓＡｂ構築物はｍｙｃタグ付きであったため、ＢｓＡｂに続いて二次ｍＡｂであるマウス抗ｍｙｃのＦＩＴＣコンジュゲートで細胞を染色することにより、結合を試験した。対照は、未染色細胞、対照ＢｓＡｂのＮＣ−１６、または二次ｍＡｂのＧＡ６ｘＨｉｓを含んだ。示されているように、抗Ａ２  ｍＡｂのＢＢ７およびそのアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ｂで細胞を染色することによって、ＨＬＡ−Ａ２発現を測定した。結合強度は、蛍光強度中央値によって示されている。（Ｂ）Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔリンパ腫細胞株ＭＡＣ−２Ａに対する、示されているＢｓＡｂ構築物の結合。対照は、未染色細胞、対照ＢｓＡｂのＮＣ−１６、または二次ｍＡｂのＧＡ６ｘＨｉｓを含んだ。示されているように、抗Ａ２  ｍＡｂのＢＢ７およびそのアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ｂで細胞を染色することによって、ＨＬＡ−Ａ２発現を測定した。結合強度は、蛍光強度中央値によって示されている。（Ｃ）同様に、（Ａ）に記載されているように、ＣＤ３アームに対する＃３２  ＢｉＴＥの結合をＣＤ３＋Ｔ細胞株Ｊｕｒｋａｔで測定した。対照は、未染色細胞、対照ＢｓＡｂのＮＣ−１６、または二次ｍＡｂのＧＡ６ｘＨｉｓを含んだ。示されているように、抗Ａ２  ｍＡｂのＢＢ７およびそのアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ｂで細胞を染色することによって、ＨＬＡ−Ａ２発現を測定した。結合強度は、蛍光強度中央値によって示されている。
【図７Ｂ−１】図７Ａ〜図７Ｃは、Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔリンパ腫細胞株ＭＡＣ−１、ＭＡＣ−２Ａ、およびＣＤ３＋Ｔ細胞株Ｊｕｒｋａｔに対する、示されている二特異性抗体（ＢｓＡｂ：ｂｉ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）（「ＢｉＴＥ」とも呼ばれる）構築物の結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔリンパ腫細胞株ＭＡＣ−１に対する、示されているＢｓＡｂ構築物の結合。これらのＢｓＡｂ構築物はｍｙｃタグ付きであったため、ＢｓＡｂに続いて二次ｍＡｂであるマウス抗ｍｙｃのＦＩＴＣコンジュゲートで細胞を染色することにより、結合を試験した。対照は、未染色細胞、対照ＢｓＡｂのＮＣ−１６、または二次ｍＡｂのＧＡ６ｘＨｉｓを含んだ。示されているように、抗Ａ２  ｍＡｂのＢＢ７およびそのアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ｂで細胞を染色することによって、ＨＬＡ−Ａ２発現を測定した。結合強度は、蛍光強度中央値によって示されている。（Ｂ）Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔリンパ腫細胞株ＭＡＣ−２Ａに対する、示されているＢｓＡｂ構築物の結合。対照は、未染色細胞、対照ＢｓＡｂのＮＣ−１６、または二次ｍＡｂのＧＡ６ｘＨｉｓを含んだ。示されているように、抗Ａ２  ｍＡｂのＢＢ７およびそのアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ｂで細胞を染色することによって、ＨＬＡ−Ａ２発現を測定した。結合強度は、蛍光強度中央値によって示されている。（Ｃ）同様に、（Ａ）に記載されているように、ＣＤ３アームに対する＃３２  ＢｉＴＥの結合をＣＤ３＋Ｔ細胞株Ｊｕｒｋａｔで測定した。対照は、未染色細胞、対照ＢｓＡｂのＮＣ−１６、または二次ｍＡｂのＧＡ６ｘＨｉｓを含んだ。示されているように、抗Ａ２  ｍＡｂのＢＢ７およびそのアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ｂで細胞を染色することによって、ＨＬＡ−Ａ２発現を測定した。結合強度は、蛍光強度中央値によって示されている。
【図７Ｂ−２】図７Ａ〜図７Ｃは、Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔリンパ腫細胞株ＭＡＣ−１、ＭＡＣ−２Ａ、およびＣＤ３＋Ｔ細胞株Ｊｕｒｋａｔに対する、示されている二特異性抗体（ＢｓＡｂ：ｂｉ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）（「ＢｉＴＥ」とも呼ばれる）構築物の結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔリンパ腫細胞株ＭＡＣ−１に対する、示されているＢｓＡｂ構築物の結合。これらのＢｓＡｂ構築物はｍｙｃタグ付きであったため、ＢｓＡｂに続いて二次ｍＡｂであるマウス抗ｍｙｃのＦＩＴＣコンジュゲートで細胞を染色することにより、結合を試験した。対照は、未染色細胞、対照ＢｓＡｂのＮＣ−１６、または二次ｍＡｂのＧＡ６ｘＨｉｓを含んだ。示されているように、抗Ａ２  ｍＡｂのＢＢ７およびそのアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ｂで細胞を染色することによって、ＨＬＡ−Ａ２発現を測定した。結合強度は、蛍光強度中央値によって示されている。（Ｂ）Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔリンパ腫細胞株ＭＡＣ−２Ａに対する、示されているＢｓＡｂ構築物の結合。対照は、未染色細胞、対照ＢｓＡｂのＮＣ−１６、または二次ｍＡｂのＧＡ６ｘＨｉｓを含んだ。示されているように、抗Ａ２  ｍＡｂのＢＢ７およびそのアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ｂで細胞を染色することによって、ＨＬＡ−Ａ２発現を測定した。結合強度は、蛍光強度中央値によって示されている。（Ｃ）同様に、（Ａ）に記載されているように、ＣＤ３アームに対する＃３２  ＢｉＴＥの結合をＣＤ３＋Ｔ細胞株Ｊｕｒｋａｔで測定した。対照は、未染色細胞、対照ＢｓＡｂのＮＣ−１６、または二次ｍＡｂのＧＡ６ｘＨｉｓを含んだ。示されているように、抗Ａ２  ｍＡｂのＢＢ７およびそのアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ｂで細胞を染色することによって、ＨＬＡ−Ａ２発現を測定した。結合強度は、蛍光強度中央値によって示されている。
【図７Ｃ−１】図７Ａ〜図７Ｃは、Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔリンパ腫細胞株ＭＡＣ−１、ＭＡＣ−２Ａ、およびＣＤ３＋Ｔ細胞株Ｊｕｒｋａｔに対する、示されている二特異性抗体（ＢｓＡｂ：ｂｉ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）（「ＢｉＴＥ」とも呼ばれる）構築物の結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔリンパ腫細胞株ＭＡＣ−１に対する、示されているＢｓＡｂ構築物の結合。これらのＢｓＡｂ構築物はｍｙｃタグ付きであったため、ＢｓＡｂに続いて二次ｍＡｂであるマウス抗ｍｙｃのＦＩＴＣコンジュゲートで細胞を染色することにより、結合を試験した。対照は、未染色細胞、対照ＢｓＡｂのＮＣ−１６、または二次ｍＡｂのＧＡ６ｘＨｉｓを含んだ。示されているように、抗Ａ２  ｍＡｂのＢＢ７およびそのアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ｂで細胞を染色することによって、ＨＬＡ−Ａ２発現を測定した。結合強度は、蛍光強度中央値によって示されている。（Ｂ）Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔリンパ腫細胞株ＭＡＣ−２Ａに対する、示されているＢｓＡｂ構築物の結合。対照は、未染色細胞、対照ＢｓＡｂのＮＣ−１６、または二次ｍＡｂのＧＡ６ｘＨｉｓを含んだ。示されているように、抗Ａ２  ｍＡｂのＢＢ７およびそのアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ｂで細胞を染色することによって、ＨＬＡ−Ａ２発現を測定した。結合強度は、蛍光強度中央値によって示されている。（Ｃ）同様に、（Ａ）に記載されているように、ＣＤ３アームに対する＃３２  ＢｉＴＥの結合をＣＤ３＋Ｔ細胞株Ｊｕｒｋａｔで測定した。対照は、未染色細胞、対照ＢｓＡｂのＮＣ−１６、または二次ｍＡｂのＧＡ６ｘＨｉｓを含んだ。示されているように、抗Ａ２  ｍＡｂのＢＢ７およびそのアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ｂで細胞を染色することによって、ＨＬＡ−Ａ２発現を測定した。結合強度は、蛍光強度中央値によって示されている。
【図７Ｃ−２】図７Ａ〜図７Ｃは、Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔリンパ腫細胞株ＭＡＣ−１、ＭＡＣ−２Ａ、およびＣＤ３＋Ｔ細胞株Ｊｕｒｋａｔに対する、示されている二特異性抗体（ＢｓＡｂ：ｂｉ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）（「ＢｉＴＥ」とも呼ばれる）構築物の結合を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔリンパ腫細胞株ＭＡＣ−１に対する、示されているＢｓＡｂ構築物の結合。これらのＢｓＡｂ構築物はｍｙｃタグ付きであったため、ＢｓＡｂに続いて二次ｍＡｂであるマウス抗ｍｙｃのＦＩＴＣコンジュゲートで細胞を染色することにより、結合を試験した。対照は、未染色細胞、対照ＢｓＡｂのＮＣ−１６、または二次ｍＡｂのＧＡ６ｘＨｉｓを含んだ。示されているように、抗Ａ２  ｍＡｂのＢＢ７およびそのアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ｂで細胞を染色することによって、ＨＬＡ−Ａ２発現を測定した。結合強度は、蛍光強度中央値によって示されている。（Ｂ）Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ２＋Ｔリンパ腫細胞株ＭＡＣ−２Ａに対する、示されているＢｓＡｂ構築物の結合。対照は、未染色細胞、対照ＢｓＡｂのＮＣ−１６、または二次ｍＡｂのＧＡ６ｘＨｉｓを含んだ。示されているように、抗Ａ２  ｍＡｂのＢＢ７およびそのアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ｂで細胞を染色することによって、ＨＬＡ−Ａ２発現を測定した。結合強度は、蛍光強度中央値によって示されている。（Ｃ）同様に、（Ａ）に記載されているように、ＣＤ３アームに対する＃３２  ＢｉＴＥの結合をＣＤ３＋Ｔ細胞株Ｊｕｒｋａｔで測定した。対照は、未染色細胞、対照ＢｓＡｂのＮＣ−１６、または二次ｍＡｂのＧＡ６ｘＨｉｓを含んだ。示されているように、抗Ａ２  ｍＡｂのＢＢ７およびそのアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ｂで細胞を染色することによって、ＨＬＡ−Ａ２発現を測定した。結合強度は、蛍光強度中央値によって示されている。
【００４７】
【図８Ａ】図８Ａ〜図８Ｂは、エピトープ特異性を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−ＴＬＩペプチド配列は、１位、２位、３位、４位、５位、７位、８位、９位をアラニンに、または１０位をグリシンに（Ｇ１０）置換した（図８Ａ〜図８Ｂの配列）。示されているペプチドを５０μｇ／ｍＬでＴ２細胞にパルスし、＃３２−ＢｉＴＥの結合をフローサイトメトリによって測定した。（Ｂ）細胞を抗ＨＬＡ−Ａ２  ｍＡｂのクローンＢＢ７．２で同時に染色して、ＨＬＡ−Ａ２分子に対するこれらのペプチドの相対的な結合を測定した。
【図８Ｂ】図８Ａ〜図８Ｂは、エピトープ特異性を表す図である。（Ａ）Ｆｏｘｐ３−ＴＬＩペプチド配列は、１位、２位、３位、４位、５位、７位、８位、９位をアラニンに、または１０位をグリシンに（Ｇ１０）置換した（図８Ａ〜図８Ｂの配列）。示されているペプチドを５０μｇ／ｍＬでＴ２細胞にパルスし、＃３２−ＢｉＴＥの結合をフローサイトメトリによって測定した。（Ｂ）細胞を抗ＨＬＡ−Ａ２  ｍＡｂのクローンＢＢ７．２で同時に染色して、ＨＬＡ−Ａ２分子に対するこれらのペプチドの相対的な結合を測定した。
【００４８】
【図９Ａ】図９Ａ〜図９Ｅは、健常ドナーのＰＢＭＣにおける天然のＴｒｅｇ細胞に対する＃３２  ｍＡｂの特異的結合を表す図である。ＰＢＭＣは、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ１２７に対して特異的なｍＡｂ、およびｍＡｂ＃３２マウスＩｇＧ１で染色した。データは、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇに対するｍＡｂ＃３２の結合（Ａ）、ＣＤ４＋２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｈｉｇｈ集団に対するｍＡｂ＃３２の結合（Ｂ）、ＨＬＡ−Ａ０＊２０１＋ドナー由来のＣＤ８＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｈｉｇｈに対するｍＡｂ＃３２の結合（Ｃ）、またはＨＬＡ−Ａ−０＊２０１陰性ドナー由来のＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇに対するｍＡｂ＃３２の結合（Ｄ、Ｅ）を示す。データは、３組の様々な個体からの代表的な結果を示す。＃３２  ｍＡｂは、ＨＬＡ−Ａ０２０１＋ドナー由来のＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇは認識するが（Ａ）、ＨＬＡ−Ａ−０＊２０１陰性ドナー由来のものは認識しない（Ｄ、Ｅ）。
【図９Ｂ】図９Ａ〜図９Ｅは、健常ドナーのＰＢＭＣにおける天然のＴｒｅｇ細胞に対する＃３２  ｍＡｂの特異的結合を表す図である。ＰＢＭＣは、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ１２７に対して特異的なｍＡｂ、およびｍＡｂ＃３２マウスＩｇＧ１で染色した。データは、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇに対するｍＡｂ＃３２の結合（Ａ）、ＣＤ４＋２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｈｉｇｈ集団に対するｍＡｂ＃３２の結合（Ｂ）、ＨＬＡ−Ａ０＊２０１＋ドナー由来のＣＤ８＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｈｉｇｈに対するｍＡｂ＃３２の結合（Ｃ）、またはＨＬＡ−Ａ−０＊２０１陰性ドナー由来のＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇに対するｍＡｂ＃３２の結合（Ｄ、Ｅ）を示す。データは、３組の様々な個体からの代表的な結果を示す。＃３２  ｍＡｂは、ＨＬＡ−Ａ０２０１＋ドナー由来のＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇは認識するが（Ａ）、ＨＬＡ−Ａ−０＊２０１陰性ドナー由来のものは認識しない（Ｄ、Ｅ）。
【図９Ｃ】図９Ａ〜図９Ｅは、健常ドナーのＰＢＭＣにおける天然のＴｒｅｇ細胞に対する＃３２  ｍＡｂの特異的結合を表す図である。ＰＢＭＣは、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ１２７に対して特異的なｍＡｂ、およびｍＡｂ＃３２マウスＩｇＧ１で染色した。データは、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇに対するｍＡｂ＃３２の結合（Ａ）、ＣＤ４＋２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｈｉｇｈ集団に対するｍＡｂ＃３２の結合（Ｂ）、ＨＬＡ−Ａ０＊２０１＋ドナー由来のＣＤ８＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｈｉｇｈに対するｍＡｂ＃３２の結合（Ｃ）、またはＨＬＡ−Ａ−０＊２０１陰性ドナー由来のＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇに対するｍＡｂ＃３２の結合（Ｄ、Ｅ）を示す。データは、３組の様々な個体からの代表的な結果を示す。＃３２  ｍＡｂは、ＨＬＡ−Ａ０２０１＋ドナー由来のＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇは認識するが（Ａ）、ＨＬＡ−Ａ−０＊２０１陰性ドナー由来のものは認識しない（Ｄ、Ｅ）。
【図９Ｄ】図９Ａ〜図９Ｅは、健常ドナーのＰＢＭＣにおける天然のＴｒｅｇ細胞に対する＃３２  ｍＡｂの特異的結合を表す図である。ＰＢＭＣは、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ１２７に対して特異的なｍＡｂ、およびｍＡｂ＃３２マウスＩｇＧ１で染色した。データは、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇに対するｍＡｂ＃３２の結合（Ａ）、ＣＤ４＋２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｈｉｇｈ集団に対するｍＡｂ＃３２の結合（Ｂ）、ＨＬＡ−Ａ０＊２０１＋ドナー由来のＣＤ８＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｈｉｇｈに対するｍＡｂ＃３２の結合（Ｃ）、またはＨＬＡ−Ａ−０＊２０１陰性ドナー由来のＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇに対するｍＡｂ＃３２の結合（Ｄ、Ｅ）を示す。データは、３組の様々な個体からの代表的な結果を示す。＃３２  ｍＡｂは、ＨＬＡ−Ａ０２０１＋ドナー由来のＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇは認識するが（Ａ）、ＨＬＡ−Ａ−０＊２０１陰性ドナー由来のものは認識しない（Ｄ、Ｅ）。
【図９Ｅ】図９Ａ〜図９Ｅは、健常ドナーのＰＢＭＣにおける天然のＴｒｅｇ細胞に対する＃３２  ｍＡｂの特異的結合を表す図である。ＰＢＭＣは、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ１２７に対して特異的なｍＡｂ、およびｍＡｂ＃３２マウスＩｇＧ１で染色した。データは、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇに対するｍＡｂ＃３２の結合（Ａ）、ＣＤ４＋２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｈｉｇｈ集団に対するｍＡｂ＃３２の結合（Ｂ）、ＨＬＡ−Ａ０＊２０１＋ドナー由来のＣＤ８＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｈｉｇｈに対するｍＡｂ＃３２の結合（Ｃ）、またはＨＬＡ−Ａ−０＊２０１陰性ドナー由来のＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇに対するｍＡｂ＃３２の結合（Ｄ、Ｅ）を示す。データは、３組の様々な個体からの代表的な結果を示す。＃３２  ｍＡｂは、ＨＬＡ−Ａ０２０１＋ドナー由来のＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇは認識するが（Ａ）、ＨＬＡ−Ａ−０＊２０１陰性ドナー由来のものは認識しない（Ｄ、Ｅ）。
【００４９】
【図１０Ａ】図１０Ａ〜図１０Ｂは、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋ドナーからｉｎ  ｖｉｔｒｏで生成されたＴｒｅｇ細胞に対する＃３２  ｍＡｂの特異的結合を表す図である。この結果は、（Ａ）アロＰＢＭＣまたは（Ｂ）ＭＡＣ−２Ａ細胞のいずれかの刺激によって生成されたＴｒｅｇ間で同様であった。ＣＤ４＋Ｔ細胞にＦＡＣＳ選別を行い、ＩＬ−２（１００ユニット）およびＴＧＦ−β（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下で１週間にわたり、アロＰＢＭＣまたはアロ腫瘍（ＭＡＣ−２Ａ）で刺激した。ＣＤ４、ＣＤ２５、ｆｏｘｐ３に対するｍＡｂ、およびｍＡｂ＃３２／ＡＰＣで細胞を染色した。ＤＡＰＩ−、ＣＤ４およびＣＤ２５二重陽性細胞に対するゲーティングにより、Ｍａｂ＃３２の結合を判定した。このデータは、マウスｍＡｂ＃３２（赤色）およびそのアイソタイプ対照マウスＩｇＧ１（緑色）ならびにｆｏｘｐ３に対するｍＡｂのラットアイソタイプ対照（オレンジ色）のオーバーレイを示す。＃３２  ｍＡｂは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇにのみ結合した。
【図１０Ｂ】図１０Ａ〜図１０Ｂは、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋ドナーからｉｎ  ｖｉｔｒｏで生成されたＴｒｅｇ細胞に対する＃３２  ｍＡｂの特異的結合を表す図である。この結果は、（Ａ）アロＰＢＭＣまたは（Ｂ）ＭＡＣ−２Ａ細胞のいずれかの刺激によって生成されたＴｒｅｇ間で同様であった。ＣＤ４＋Ｔ細胞にＦＡＣＳ選別を行い、ＩＬ−２（１００ユニット）およびＴＧＦ−β（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下で１週間にわたり、アロＰＢＭＣまたはアロ腫瘍（ＭＡＣ−２Ａ）で刺激した。ＣＤ４、ＣＤ２５、ｆｏｘｐ３に対するｍＡｂ、およびｍＡｂ＃３２／ＡＰＣで細胞を染色した。ＤＡＰＩ−、ＣＤ４およびＣＤ２５二重陽性細胞に対するゲーティングにより、Ｍａｂ＃３２の結合を判定した。このデータは、マウスｍＡｂ＃３２（赤色）およびそのアイソタイプ対照マウスＩｇＧ１（緑色）ならびにｆｏｘｐ３に対するｍＡｂのラットアイソタイプ対照（オレンジ色）のオーバーレイを示す。＃３２  ｍＡｂは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇにのみ結合した。
【００５０】
【図１１ＡＢ】図１１Ａ〜図１１Ｅは、Ｆｏｘｐ３＋Ｔリンパ腫細胞に対するＢｉＴＥ＃３２媒介性Ｔ細胞死滅を表す図である。１μｇ／ｍＬ〜０．０００３μｇ／ｍＬの範囲の濃度でＢｉＴＥを含む場合と含まない場合とで、５０：１のＥ：Ｔ比において、ＴＬＩをパルスしたＴ２細胞（Ａ：青線：Ｔ２単独に対する＃３２  ＢｉＴＥ；赤色：Ｔ２単独に対する対照ＢｉＴＥ；緑色：ＴＬＩペプチドをパルスしたＴ２に対する＃３２  ＢｉＴＥ；紫色：ＴＬＩペプチドをパルスしたＴ２に対する対照ＢｉＴＥ；水色：ＥＷペプチドをパルスしたＴ２に対する＃３２  ＢＩＴＥ；オレンジ色：対照ペプチドをパルスしたＴ２に対する対照ＢｉＴＥ）、ＨＬ−６０（Ｂ）、ＭＡＣ−１（Ｃ）、ＭＡＣ−２Ａ（Ｄ）、またはＪｕｒｋａｔ（Ｅ）の標的細胞と共に、ＰＢＭＣをインキュベートした。細胞傷害は、５時間の５１Ｃ放出アッセイによって測定した。このデータは、３連のマイクロウェル培養物の平均値を表す。
【図１１ＣＤ】図１１Ａ〜図１１Ｅは、Ｆｏｘｐ３＋Ｔリンパ腫細胞に対するＢｉＴＥ＃３２媒介性Ｔ細胞死滅を表す図である。１μｇ／ｍＬ〜０．０００３μｇ／ｍＬの範囲の濃度でＢｉＴＥを含む場合と含まない場合とで、５０：１のＥ：Ｔ比において、ＴＬＩをパルスしたＴ２細胞（Ａ：青線：Ｔ２単独に対する＃３２  ＢｉＴＥ；赤色：Ｔ２単独に対する対照ＢｉＴＥ；緑色：ＴＬＩペプチドをパルスしたＴ２に対する＃３２  ＢｉＴＥ；紫色：ＴＬＩペプチドをパルスしたＴ２に対する対照ＢｉＴＥ；水色：ＥＷペプチドをパルスしたＴ２に対する＃３２  ＢＩＴＥ；オレンジ色：対照ペプチドをパルスしたＴ２に対する対照ＢｉＴＥ）、ＨＬ−６０（Ｂ）、ＭＡＣ−１（Ｃ）、ＭＡＣ−２Ａ（Ｄ）、またはＪｕｒｋａｔ（Ｅ）の標的細胞と共に、ＰＢＭＣをインキュベートした。細胞傷害は、５時間の５１Ｃ放出アッセイによって測定した。このデータは、３連のマイクロウェル培養物の平均値を表す。
【図１１Ｅ】図１１Ａ〜図１１Ｅは、Ｆｏｘｐ３＋Ｔリンパ腫細胞に対するＢｉＴＥ＃３２媒介性Ｔ細胞死滅を表す図である。１μｇ／ｍＬ〜０．０００３μｇ／ｍＬの範囲の濃度でＢｉＴＥを含む場合と含まない場合とで、５０：１のＥ：Ｔ比において、ＴＬＩをパルスしたＴ２細胞（Ａ：青線：Ｔ２単独に対する＃３２  ＢｉＴＥ；赤色：Ｔ２単独に対する対照ＢｉＴＥ；緑色：ＴＬＩペプチドをパルスしたＴ２に対する＃３２  ＢｉＴＥ；紫色：ＴＬＩペプチドをパルスしたＴ２に対する対照ＢｉＴＥ；水色：ＥＷペプチドをパルスしたＴ２に対する＃３２  ＢＩＴＥ；オレンジ色：対照ペプチドをパルスしたＴ２に対する対照ＢｉＴＥ）、ＨＬ−６０（Ｂ）、ＭＡＣ−１（Ｃ）、ＭＡＣ−２Ａ（Ｄ）、またはＪｕｒｋａｔ（Ｅ）の標的細胞と共に、ＰＢＭＣをインキュベートした。細胞傷害は、５時間の５１Ｃ放出アッセイによって測定した。このデータは、３連のマイクロウェル培養物の平均値を表す。
【００５１】
【図１２Ａ】図１２Ａ〜図１２Ｄは、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋ドナー由来のＴｒｅｇに対する＃３２  ＢｓＡｂ媒介性Ｔ細胞死滅を表す図である。（ＡおよびＢ）非ＨＬＡ−Ａ２  Ｔ細胞を、ＢｓＡｂ＃３２または対照ＢｓＡｂ（１μｇ／ｍＬ）の存在下または非存在下で、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋ドナーから生成されたＴｒｅｇクローン（Ｔｒｅｇクローン１（Ａ）およびＴｒｅｇクローン３（Ｂ））と共に、５：１のＥ：Ｔ比で一晩にわたってインキュベートした。Ａ２＋Ｔ細胞中のＦｏｘｐ３＋細胞の百分率をフローサイトメトリフローサイトメトリによって決定した。Ｆｏｘｐ３＋細胞に、ＨＬＡ−Ａ２＋（ＢＢ７．２）に対するゲーティングを行った。ＨＬＡ−Ａ２＋Ｆｏｘｐ３＋細胞の低下は、＃３２  ＢｓＡｂ媒介性Ｔ細胞死滅を示した。データは、２連の培養物からの代表的なデータを示す。（Ｃ）図１２Ａおよび図１２Ｂに示されるフローサイトメーターデータを、Ｔｒｅｇ細胞パーセントの低下を示す棒グラフとしてまとめた。各データ点は、２連の培養物の平均を示す。（Ｄ）＃３２  ＢｓＡｂ、対照−ＢｓＡｂ、およびＢｓＡｂなしのＴｒｅｇ細胞溶解データ。
【図１２Ｂ】図１２Ａ〜図１２Ｄは、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋ドナー由来のＴｒｅｇに対する＃３２  ＢｓＡｂ媒介性Ｔ細胞死滅を表す図である。（ＡおよびＢ）非ＨＬＡ−Ａ２  Ｔ細胞を、ＢｓＡｂ＃３２または対照ＢｓＡｂ（１μｇ／ｍＬ）の存在下または非存在下で、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋ドナーから生成されたＴｒｅｇクローン（Ｔｒｅｇクローン１（Ａ）およびＴｒｅｇクローン３（Ｂ））と共に、５：１のＥ：Ｔ比で一晩にわたってインキュベートした。Ａ２＋Ｔ細胞中のＦｏｘｐ３＋細胞の百分率をフローサイトメトリフローサイトメトリによって決定した。Ｆｏｘｐ３＋細胞に、ＨＬＡ−Ａ２＋（ＢＢ７．２）に対するゲーティングを行った。ＨＬＡ−Ａ２＋Ｆｏｘｐ３＋細胞の低下は、＃３２  ＢｓＡｂ媒介性Ｔ細胞死滅を示した。データは、２連の培養物からの代表的なデータを示す。（Ｃ）図１２Ａおよび図１２Ｂに示されるフローサイトメーターデータを、Ｔｒｅｇ細胞パーセントの低下を示す棒グラフとしてまとめた。各データ点は、２連の培養物の平均を示す。（Ｄ）＃３２  ＢｓＡｂ、対照−ＢｓＡｂ、およびＢｓＡｂなしのＴｒｅｇ細胞溶解データ。
【図１２ＣＤ】図１２Ａ〜図１２Ｄは、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋ドナー由来のＴｒｅｇに対する＃３２  ＢｓＡｂ媒介性Ｔ細胞死滅を表す図である。（ＡおよびＢ）非ＨＬＡ−Ａ２  Ｔ細胞を、ＢｓＡｂ＃３２または対照ＢｓＡｂ（１μｇ／ｍＬ）の存在下または非存在下で、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋ドナーから生成されたＴｒｅｇクローン（Ｔｒｅｇクローン１（Ａ）およびＴｒｅｇクローン３（Ｂ））と共に、５：１のＥ：Ｔ比で一晩にわたってインキュベートした。Ａ２＋Ｔ細胞中のＦｏｘｐ３＋細胞の百分率をフローサイトメトリフローサイトメトリによって決定した。Ｆｏｘｐ３＋細胞に、ＨＬＡ−Ａ２＋（ＢＢ７．２）に対するゲーティングを行った。ＨＬＡ−Ａ２＋Ｆｏｘｐ３＋細胞の低下は、＃３２  ＢｓＡｂ媒介性Ｔ細胞死滅を示した。データは、２連の培養物からの代表的なデータを示す。（Ｃ）図１２Ａおよび図１２Ｂに示されるフローサイトメーターデータを、Ｔｒｅｇ細胞パーセントの低下を示す棒グラフとしてまとめた。各データ点は、２連の培養物の平均を示す。（Ｄ）＃３２  ＢｓＡｂ、対照−ＢｓＡｂ、およびＢｓＡｂなしのＴｒｅｇ細胞溶解データ。
【００５２】
【図１３Ａ】図１３Ａ〜図１３Ｈは、アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対する８つのＥＸＴ０１７ファージの結合ヒストグラムを表す図である。（Ａ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−１７ファージの結合ヒストグラム。（Ｂ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−１８ファージの結合ヒストグラム。（Ｃ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２０ファージの結合ヒストグラム。（Ｄ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２７ファージの結合ヒストグラム。（Ｅ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２８ファージの結合ヒストグラム。（Ｆ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−３２ファージの結合ヒストグラム。（Ｇ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−５３ファージの結合ヒストグラム。（Ｈ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−５３ファージの結合ヒストグラム。
【図１３Ｂ】図１３Ａ〜図１３Ｈは、アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対する８つのＥＸＴ０１７ファージの結合ヒストグラムを表す図である。（Ａ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−１７ファージの結合ヒストグラム。（Ｂ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−１８ファージの結合ヒストグラム。（Ｃ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２０ファージの結合ヒストグラム。（Ｄ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２７ファージの結合ヒストグラム。（Ｅ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２８ファージの結合ヒストグラム。（Ｆ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−３２ファージの結合ヒストグラム。（Ｇ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−５３ファージの結合ヒストグラム。（Ｈ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−５３ファージの結合ヒストグラム。
【図１３Ｃ】図１３Ａ〜図１３Ｈは、アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対する８つのＥＸＴ０１７ファージの結合ヒストグラムを表す図である。（Ａ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−１７ファージの結合ヒストグラム。（Ｂ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−１８ファージの結合ヒストグラム。（Ｃ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２０ファージの結合ヒストグラム。（Ｄ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２７ファージの結合ヒストグラム。（Ｅ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２８ファージの結合ヒストグラム。（Ｆ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−３２ファージの結合ヒストグラム。（Ｇ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−５３ファージの結合ヒストグラム。（Ｈ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−５３ファージの結合ヒストグラム。
【図１３Ｄ】図１３Ａ〜図１３Ｈは、アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対する８つのＥＸＴ０１７ファージの結合ヒストグラムを表す図である。（Ａ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−１７ファージの結合ヒストグラム。（Ｂ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−１８ファージの結合ヒストグラム。（Ｃ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２０ファージの結合ヒストグラム。（Ｄ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２７ファージの結合ヒストグラム。（Ｅ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２８ファージの結合ヒストグラム。（Ｆ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−３２ファージの結合ヒストグラム。（Ｇ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−５３ファージの結合ヒストグラム。（Ｈ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−５３ファージの結合ヒストグラム。
【図１３Ｅ】図１３Ａ〜図１３Ｈは、アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対する８つのＥＸＴ０１７ファージの結合ヒストグラムを表す図である。（Ａ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−１７ファージの結合ヒストグラム。（Ｂ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−１８ファージの結合ヒストグラム。（Ｃ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２０ファージの結合ヒストグラム。（Ｄ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２７ファージの結合ヒストグラム。（Ｅ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２８ファージの結合ヒストグラム。（Ｆ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−３２ファージの結合ヒストグラム。（Ｇ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−５３ファージの結合ヒストグラム。（Ｈ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−５３ファージの結合ヒストグラム。
【図１３Ｆ】図１３Ａ〜図１３Ｈは、アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対する８つのＥＸＴ０１７ファージの結合ヒストグラムを表す図である。（Ａ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−１７ファージの結合ヒストグラム。（Ｂ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−１８ファージの結合ヒストグラム。（Ｃ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２０ファージの結合ヒストグラム。（Ｄ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２７ファージの結合ヒストグラム。（Ｅ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２８ファージの結合ヒストグラム。（Ｆ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−３２ファージの結合ヒストグラム。（Ｇ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−５３ファージの結合ヒストグラム。（Ｈ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−５３ファージの結合ヒストグラム。
【図１３Ｇ】図１３Ａ〜図１３Ｈは、アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対する８つのＥＸＴ０１７ファージの結合ヒストグラムを表す図である。（Ａ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−１７ファージの結合ヒストグラム。（Ｂ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−１８ファージの結合ヒストグラム。（Ｃ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２０ファージの結合ヒストグラム。（Ｄ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２７ファージの結合ヒストグラム。（Ｅ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２８ファージの結合ヒストグラム。（Ｆ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−３２ファージの結合ヒストグラム。（Ｇ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−５３ファージの結合ヒストグラム。（Ｈ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−５３ファージの結合ヒストグラム。
【図１３Ｈ】図１３Ａ〜図１３Ｈは、アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対する８つのＥＸＴ０１７ファージの結合ヒストグラムを表す図である。（Ａ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−１７ファージの結合ヒストグラム。（Ｂ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−１８ファージの結合ヒストグラム。（Ｃ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２０ファージの結合ヒストグラム。（Ｄ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２７ファージの結合ヒストグラム。（Ｅ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−２８ファージの結合ヒストグラム。（Ｆ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−３２ファージの結合ヒストグラム。（Ｇ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−５３ファージの結合ヒストグラム。（Ｈ）アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７−５３ファージの結合ヒストグラム。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
詳細な説明
Ｉ．定義
他に規定がなければ、本明細書に使用されているあらゆる技術および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されている意義を有する。次の参考文献は、本開示の主題で使用されている用語の多くの一般的な定義を当業者に与える：Singletonら、Dictionary  of  Microbiology  and  Molecular  Biology（第２版、１９９４年）；The  Cambridge  Dictionary  of  Science  and  Technology（Walker編、１９８８年）；The  Glossary  of  Genetics、第５版、R.  Riegerら（編）Springer  Verlag（１９９１年）；ならびにHaleおよびMarham、The  Harper  Collins  Dictionary  of  Biology（１９９１年）；Molecular  Cloning:  a  Laboratory  Manual  第３版、J.  F.  SambrookおよびD.  W.  Russell編、Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press  ２００１年；Recombinant  Antibodies  for  Immunotherapy、Melvyn  Little編、Cambridge  University  Press  ２００９年；「Oligonucleotide  Synthesis」（M.  J.  Gait編、１９８４年）；「Animal  Cell  Culture」（R.  I.  Freshney編、１９８７年）；「Methods  in  Enzymology」（Academic  Press,  Inc.）；「Current  Protocols  in  Molecular  Biology」（F.  M.  Ausubelら編、１９８７年および定期的更新）；「PCR:  The  Polymerase  Chain  Reaction」（Mullisら編、１９９４年）；「A  Practical  Guide  to  Molecular  Cloning」（Perbal  Bernard  V.、１９８８年）；「Phage  Display:  A  Laboratory  Manual」（Barbasら、２００１年）。製造業者の説明書を含む、当業者に広く公知で頼られる、標準プロトコールを含有する上述の参考文献および他の参考文献の内容は、本開示の主題の一部として、参照により本明細書に組み込む。本明細書において、次の用語は、他に指定がなければ、以下に帰する意義を有する。
【００５４】
次の略語は、本願を通して使用されている：
Ａｂ：抗体
ＡＤＣＣ：抗体依存性細胞性細胞傷害
ＡＬＬ：急性リンパ球性白血病
ＡＭＬ：急性骨髄性白血病
ＡＰＣ：抗原提示細胞
β２Ｍ：ベータ−２−ミクログロブリン
ＢｉＴＥ：二特異性Ｔ細胞誘導抗体（Bi-specific  T  cell  engaging  antibody）
ＣＡＲ：キメラ抗原受容体
ＣＤＣ：補体依存性細胞傷害
ＣＭＣ：補体媒介性細胞傷害
ＣＤＲ：相補性決定領域
ＣＬ：軽鎖の定常ドメイン
ＣＨ１：重鎖の第１の定常ドメイン
ＣＨ１、２、３：重鎖の第１、第２および第３の定常ドメイン
ＣＨ２、３：重鎖の第２および第３の定常ドメイン
ＣＨＯ：チャイニーズハムスター卵巣
ＣＴＬ：細胞傷害性Ｔ細胞
Ｅ：Ｔ比  ：  エフェクター：標的比
Ｆａｂ：抗体結合断片
ＦＡＣＳ：蛍光標識細胞分取（Flow  assisted  cytometric  cell  sorting）
ＦＢＳ：ウシ胎仔血清
ＦＲ：フレームワーク領域
ＨＣ：重鎖
ＨＬＡ：ヒト白血球抗原
Ｉｇ：免疫グロブリン
ＩＲＥＳ：配列内リボソーム進入部位
ＫＤ：解離定数
ｋｏｆｆ：解離速度
ｋｏｎ：会合速度
ＭＨＣ：主要組織適合遺伝子複合体
ＭＭ：多発性骨髄腫
ｓｃＦｖ：単鎖可変断片
ＴＣＲ：Ｔ細胞受容体
ＴＩＬ：腫瘍浸潤リンパ球
ＴＬＩ：Ｆｏｘｐ３−７ペプチド（配列ＴＬＩＲＷＡＩＬＥＡ（配列番号８））
ＶＨ：重鎖高頻度可変領域および重鎖可変フレームワーク領域を含む可変重鎖
ＶＬ：軽鎖高頻度可変領域および軽鎖可変フレームワーク領域を含む可変軽鎖
Ｆｏｘｐ３：フォークヘッド（Foxhead）ボックスＰ３
【００５５】
本明細書において、用語「約」または「およそ」は、当業者によって決定される、特定の値の許容される誤差範囲内を意味し、これは、一部には、値が測定または決定される仕方、すなわち、測定系の限界に依存するであろう。例えば、「約」は、本技術分野の慣例に従った、３または３を超える標準偏差内を意味することができる。あるいは、「約」は、所与の値の最大２０％、例えば、最大１０％、最大５％または最大１％の範囲を意味することができる。あるいは、特に、生命システムまたはプロセスに関して、この用語は、値の１桁以内、例えば、５倍以内または２倍以内を意味することができる。
【００５６】
本明細書において、用語「細胞集団」は、同様のまたは異なる表現型を発現する少なくとも２個の細胞の群を指す。非限定的な例では、細胞集団は、同様のまたは異なる表現型を発現する少なくとも約１０、少なくとも約１００、少なくとも約２００、少なくとも約３００、少なくとも約４００、少なくとも約５００、少なくとも約６００、少なくとも約７００、少なくとも約８００、少なくとも約９００、少なくとも約１０００個の細胞を含むことができる。
【００５７】
本明細書において、用語「抗原結合性タンパク質」は、抗原結合性領域または抗原結合性部分を含む、すなわち、それが結合する別の分子に対し強い親和性を有するタンパク質またはポリペプチドを指す。抗原結合性タンパク質は、抗体、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および融合タンパク質を包含する。
【００５８】
用語「抗体（単数および複数）」は、免疫系の抗原結合性タンパク質を指す。本明細書において、用語「抗体」は、「抗原結合性部分」または「抗原結合性領域」が保持された抗原結合性領域およびそのいずれかの断片を有する全体的な全長抗体、またはその単鎖、例えば、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。用語「抗体」は、インタクトな抗体分子のみならず、免疫原結合能力を保持する抗体分子の断片も意味する。斯かる断片は、また、本技術分野で周知であり、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方において定期的に用いられている。したがって、本明細書において、用語「抗体」は、インタクトな免疫グロブリン分子のみならず、周知の活性断片Ｆ（ａｂ’）２およびＦａｂも意味する。インタクトな抗体のＦｃ断片を欠くＦ（ａｂ’）２およびＦａｂ断片は、インタクト抗体よりも急速に循環から排除され、より低い非特異的組織結合を有することができる（Wahlら、J.  Nucl.  Med.２４巻：３１６〜３２５頁（１９８３年））。ある特定の実施形態では、抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書において、ＶＨと省略）および重鎖定常（ＣＨ）領域で構成される。重鎖定常領域は、３個のドメインのＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書において、ＶＬと省略）および軽鎖定常ＣＬ領域で構成される。軽鎖定常領域は、１個のドメインのＣＬで構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と命名されるより保存された領域を散りばめた、相補性決定領域（ＣＤＲ）と命名される高頻度可変性の領域へとさらに細分され得る。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へと次の順序で配置された３個のＣＤＲおよび４個のＦＲで構成されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１の構成成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。
【００５９】
抗体の「抗原結合性部分」、「抗原結合性断片」または「抗原結合性領域」という用語は、本明細書において、抗原に結合し、抗原特異性を抗体に付与する抗体の該領域または部分を指す；抗原結合性タンパク質の断片、例えば、抗体は、抗原（例えば、ペプチド／ＨＬＡ複合体）に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１個または複数の断片を含む。抗体の抗原結合機能が、全長抗体の断片によって果たされ得ることが示された。抗体の「抗体断片」という用語の内に包含される抗原結合性部分の例として、Ｆａｂ断片、これはＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片である；Ｆ（ａｂ）２断片、これはヒンジ領域におけるジスルフィド架橋によって連結された２個のＦａｂ断片を含む二価断片である；ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；抗体単腕のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Wardら、１９８９年、Nature  ３４１巻：５４４〜５４６頁）；ならびに単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。
【００６０】
さらに、Ｆｖ断片の２個のドメインであるＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子によってコードされるが、組換え方法を使用して、ＶＬおよびＶＨ領域がペア形成して一価分子を形成した単一のタンパク質鎖として作製されることを可能にする合成リンカーによって接合されていてもよい。このようなものは、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知である；例えば、Birdら、１９８８年、Science  ２４２巻：４２３〜４２６頁；およびHustonら、１９８８年、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.８５巻：５８７９〜５８８３頁を参照されたい。このような抗体断片は、当業者に公知の従来技法を使用して得られ、断片は、インタクトな抗体と同じ様式で有用性に関してスクリーニングされる。
【００６１】
「単離された抗体」または「単離された抗原結合性タンパク質」は、その天然の環境の構成成分から同定および分離および／または回収されたものである。「合成抗体」または「組換え抗体」は一般に、当業者に公知の組換え技術を使用して、またはペプチド合成技法を使用して生成される。
【００６２】
本明細書において、用語「単鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」は、ＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体を形成するように共有結合により連結された免疫グロブリン（例えば、マウスまたはヒト）の重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）の可変領域の融合タンパク質である。重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）は、直接的に接合される、またはＶＬのＣ末端とＶＨのＮ末端とをもしくはＶＬのＮ末端とＶＨのＣ末端とを接続するペプチドコードリンカー（例えば、１０、１５、２０、２５アミノ酸）によって接合される、のいずれかである。リンカーは通常、柔軟性のためにグリシンが豊富であると共に、溶解性のためにセリンまたはスレオニンが豊富である。定常領域の除去およびリンカーの導入にもかかわらず、ｓｃＦｖタンパク質は、本来の免疫グロブリンの特異性を保持する。単鎖Ｆｖポリペプチド抗体は、Hustonら（Proc.  Nat.  Acad.  Sci.  USA、８５巻：５８７９〜５８８３頁、１９８８年）によって記載されたＶＨおよびＶＬコード配列を含む核酸から発現され得る。米国特許第５，０９１，５１３号、同第５，１３２，４０５号および同第４，９５６，７７８号；ならびに米国特許出願公開第２００５０１９６７５４号および同第２００５０１９６７５４号も参照されたい。阻害活性を有するアンタゴニストｓｃＦｖについて記載された（例えば、Zhaoら、Hyrbidoma  (Larchmt)  ２００８年、２７巻（６号）：４５５〜５１頁；Peterら、J  Cachexia  Sarcopenia  Muscle  ２０１２年８月１２日；Shiehら、J  Imunol  ２００９年、１８３巻（４号）：２２７７〜８５頁；Giomarelliら、Thromb  Haemost  ２００７年、９７巻（６号）：９５５〜６３頁；Fifeら（eta.）、J  Clin  Invst  ２００６年、１１６巻（８号）：２２５２〜６１頁；Brocksら、Immunotechnology  １９９７年、３巻（３号）：１７３〜８４頁；Moosmayerら、Ther  Immunol  １９９５年、２巻（１０号：３１〜４０頁）を参照）。刺激活性を有するアゴニストｓｃＦｖについて記載された（例えば、Peterら、J  Bioi  Chern  ２００３年、２５２７８巻（３８号）：３６７４０〜７頁；Xieら、Nat  Biotech  １９９７年、１５巻（８号）：７６８〜７１頁；Ledbetterら、Crit  Rev  Immunol  １９９７年、１７巻（５〜６号）：４２７〜５５頁；Hoら、BioChim  Biophys  Acta  ２００３年、１６３８巻（３号）：２５７〜６６頁を参照）。
【００６３】
本明細書において、「Ｆ（ａｂ）」は、抗原に結合する抗体構造の断片を指すが、これは一価であり、Ｆｃ部分を持たず、例えば、酵素パパインによって消化された抗体は、２個のＦ（ａｂ）断片およびＦｃ断片（例えば、重（Ｈ）鎖定常領域；抗原に結合しないＦｃ領域）を生じる。
【００６４】
本明細書において、「Ｆ（ａｂ’）２」は、全体的なＩｇＧ抗体のペプシン消化によって生成された抗体断片を指し、この断片は、２個の抗原結合性（ａｂ’）（二価）領域を有し、各（ａｂ’）領域は、抗原結合のためのＳ−Ｓ結合によって連結された２個の別々のアミノ酸鎖であるＨ鎖の一部および軽（Ｌ）鎖を含み、残っているＨ鎖部分が一体に連結されている。「Ｆ（ａｂ’）２」断片は、２個の個々のＦａｂ’断片へと分割され得る。
【００６５】
本明細書において、用語「ベクター」は、妥当な制御エレメントと関連付けられると複製することができ、遺伝子配列を細胞に移入することができる、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、染色体、ウイルス、ビリオン等、いずれかの遺伝的エレメントを指す。よって、この用語は、クローニングおよび発現媒体、ならびにウイルスベクターおよびプラスミドベクターを含む。
【００６６】
本明細書において、用語「発現ベクター」は、所望のコード配列および特定の宿主生物における作動可能に連結されたコード配列の発現に必要な適切な核酸配列を含有する、組換え核酸配列、例えば、組換えＤＮＡ分子を指す。原核生物における発現に必要な核酸配列は通常、プロモーター、オペレーター（任意選択の）およびリボソーム結合部位を、多くの場合他の配列と共に含む。真核細胞は、プロモーター、エンハンサーならびに終結およびポリアデニル化シグナルを利用することが公知である。
【００６７】
本明細書において、「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の高頻度可変領域である、抗体の相補性決定領域アミノ酸配列として定義されている。例えば、Kabatら、Sequences  of  Proteins  of  Immunological  Interest、4th  U.  S.  Department  of  Health  and  Human  Services、National  Institutes  of  Health（１９８７年）を参照されたい。一般に、抗体は、可変領域において３個の重鎖および３個の軽鎖ＣＤＲまたはＣＤＲ領域を含む。ＣＤＲは、抗原またはエピトープへの抗体の結合のための接触残基の大部分を提供する。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ領域は、Ｋａｂａｔ方式（Kabat,  E.  A.ら（１９９１年）Sequences  of  Proteins  of  Immunological  Interest、第５版、U.S.  Department  of  Health  and  Human  Services、ＮＩＨ出版番号９１−３２４２）を使用して描写される。
【００６８】
本明細書において、用語「親和性」とは、結合強度の尺度を意味する。理論に制約されないが、親和性は、抗体嵌合部位および抗原決定基の間の立体化学的適合の近さ、それらの間の接触面積のサイズ、ならびに荷電および疎水性の基の分布に依存する。親和性は、可逆的複合体の形成後の抗原−抗体結合の強度を指す用語「アビディティー」も含む。抗原に対する抗体の親和性を計算するための方法は、本技術分野で公知であり、親和性を計算するための結合実験の使用を含む。機能アッセイ（例えば、フローサイトメトリアッセイ）における抗体活性も、抗体親和性を反映する。抗体および親和性は、機能アッセイ（例えば、フローサイトメトリアッセイ）を使用して、表現型的に特徴付けるおよび比較することができる。
【００６９】
本開示の主題において有用な核酸分子は、抗体またはその抗原結合性部分をコードするいずれかの核酸分子を含む。斯かる核酸分子は、内在性核酸配列と１００％同一である必要がない。内在性配列に対し「実質的相同性」または「実質的同一性」を有するポリヌクレオチドは典型的に、二本鎖核酸分子の少なくとも一方の鎖とハイブリダイズすることができる。相同性およびパーセント相同性は、ＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡ等、標準ソフトウェアプログラムによって決定することができる。「ハイブリダイズ」とは、様々なストリンジェンシー条件下で、相補的ポリヌクレオチド配列（例えば、本明細書に記載されている遺伝子）またはその部分の間で二本鎖分子を形成するためのペア形成を意味する（例えば、Wahl,  G.  M.およびS.  L.  Berger（１９８７年）Methods  Enzymol.１５２巻：３９９頁；Kimmel,  A.  R.（１９８７年）Methods  Enzymol.１５２巻：５０７頁を参照）。
【００７０】
例えば、ストリンジェントな塩濃度は通常、約７５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび７５ｍＭクエン酸三ナトリウムに満たない、好ましくは、約５００ｍＭ  ＮａＣｌおよび５０ｍＭクエン酸三ナトリウムに満たない、より好ましくは、約２５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび２５ｍＭクエン酸三ナトリウムに満たないであろう。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、有機溶媒、例えば、ホルムアミドの非存在下で得ることができる一方、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、少なくとも約３５％ホルムアミド、より好ましくは、少なくとも約５０％ホルムアミドの存在下で得ることができる。ストリンジェントな温度条件は通常、少なくとも約３０℃、より好ましくは、少なくとも約３７℃、最も好ましくは、少なくとも約４２℃の温度を含むであろう。ハイブリダイゼーション時間、洗剤、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度、および担体ＤＮＡの包接または除外等、変動する追加的なパラメータは、当業者に周知である。必要に応じてこれらの様々な条件を組み合わせることにより、様々なレベルのストリンジェンシーが達成される。好まれる実施形態では、ハイブリダイゼーションは、３０℃、７５０ｍＭ  ＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸三ナトリウムおよび１％ＳＤＳで起こるであろう。より好まれる実施形態では、ハイブリダイゼーションは、３７℃、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、５０ｍＭクエン酸三ナトリウム、１％ＳＤＳ、３５％ホルムアミドおよび１００μｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）で起こるであろう。最も好まれる実施形態では、ハイブリダイゼーションは、４２℃、２５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２５ｍＭクエン酸三ナトリウム、１％ＳＤＳ、５０％ホルムアミドおよび２００μｇ／ｍｌ  ｓｓＤＮＡで起こるであろう。これらの条件に関する有用な変種は、当業者には直ちに明らかとなるであろう。
【００７１】
多くの適用のため、ハイブリダイゼーションに続く洗浄ステップも、ストリンジェンシーが変動するであろう。洗浄ストリンジェンシー条件は、塩濃度および温度によって定義することができる。上述の通り、洗浄ストリンジェンシーは、塩濃度の減少または温度の増加によって増加させることができる。例えば、洗浄ステップのためのストリンジェントな塩濃度は好ましくは、約３０ｍＭ  ＮａＣｌおよび３ｍＭクエン酸三ナトリウムに満たない、最も好ましくは、約１５ｍＭ  ＮａＣｌおよび１．５ｍＭクエン酸三ナトリウムに満たないであろう。洗浄ステップのためのストリンジェントな温度条件は通常、少なくとも約２５℃、より好ましくは、少なくとも約４２℃、さらにより好ましくは、少なくとも約６８℃の温度を含むであろう。好まれる実施形態では、洗浄ステップは、２５℃、３０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭクエン酸三ナトリウムおよび０．１％ＳＤＳで起こるであろう。より好まれる実施形態では、洗浄ステップは、４２℃、１５ｍＭ  ＮａＣｌ、１．５ｍＭクエン酸三ナトリウムおよび０．１％ＳＤＳで起こるであろう。より好まれる実施形態では、洗浄ステップは、６８℃、１５ｍＭ  ＮａＣｌ、１．５ｍＭクエン酸三ナトリウムおよび０．１％ＳＤＳで起こるであろう。これらの条件に関する追加的な変種は、当業者には直ちに明らかになるであろう。ハイブリダイゼーション技法は、当業者に周知であり、例えば、BentonおよびDavis（Science  １９６巻：１８０頁、１９７７年）；GrunsteinおよびRogness（Proc.  Natl.  Acad.  Sci.,  USA  ７２巻：３９６１頁、１９７５年）；Ausubelら（Current  Protocols  in  Molecular  Biology、Wiley  Interscience、New  York、２００１年）；BergerおよびKimmel（Guide  to  Molecular  Cloning  Techniques、１９８７年、Academic  Press、New  York）；ならびにSambrookら、Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual、Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press、New  Yorkに記載されている。
【００７２】
本明細書において、用語「交差競合する」または「競合する」は、所与の抗原、例えば、Ｆｏｘｐ３ペプチドまたはＦｏｘｐ３／ＨＬＡクラスＩ複合体（例えば、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ複合体、例えば、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ２複合体、例えば、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体）への本開示の抗体またはその抗原結合性部分の結合が、例えば、同じ抗原への、本開示の抗体またはその抗原結合性部分のいずれかのＶＨおよびＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列またはＶＨおよびＶＬ配列を含む参照抗体またはその抗原結合性部分の結合を減少または低下させる状況を指す。用語「交差競合する」または「競合する」は、所与の抗原、例えば、Ｆｏｘｐ３ペプチドまたはＦｏｘｐ３／ＨＬＡクラスＩ複合体（例えば、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ複合体、例えば、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ２複合体、例えば、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体）への参照抗体またはその抗原結合性部分の結合が、同じ抗原への本開示の抗体またはその抗原結合性部分の結合を減少または低下させる状況も指す。「交差競合」または「競合」する抗体またはその抗原結合性部分は、参照抗体またはその抗原結合性部分と、抗原（例えば、Ｆｏｘｐ３ペプチドまたはＦｏｘｐ３／ＨＬＡクラスＩ複合体（例えば、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ複合体、例えば、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ２複合体、例えば、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体））における同じもしくは実質的に同じエピトープ、重複するもしくは実質的に重複するエピトープ、または隣接するエピトープに結合する。
【００７３】
本明細書において、「有効量」または「治療有効量」は、処置後に有益なまたは所望の臨床結果をもたらす（affect）のに十分な量である。有効量は、１または複数の用量で対象に投与することができる。処置の観点から、有効量は、疾患の緩和、軽快、安定化、反転もしくは進行を遅くする、または疾患の病理学的結果を他の仕方で低下させるのに十分な量である。有効量は一般に、個別的な基盤で医師によって決定され、当業者の技能範囲内である。有効量の達成に適切な投薬量を決定する際に、いくつかの因子が典型的に考慮に入れられる。このような因子は、対象の年齢、性別および体重、処置されている状態、状態の重症度、ならびに投与される免疫応答性細胞の形態および有効濃度を含む。
【００７４】
本明細書において、用語「異種核酸分子またはポリペプチド」は、細胞または細胞から得られる試料に正常には存在しない核酸分子（例えば、ｃＤＮＡ、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子）またはポリペプチドを指す。この核酸は、別の生物に由来し得る、または例えば、細胞または試料において正常には発現されないｍＲＮＡ分子であり得る。
【００７５】
本明細書において、用語「増加させる」は、約５％、約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７５％または約１００％プラスに変更することが挙げられるがこれらに限定されない、少なくとも約５％プラスに変更することを指す。
【００７６】
本明細書において、用語「低下させる」は、約５％、約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７５％または約１００％マイナスに変更することが挙げられるがこれらに限定されない、少なくとも約５％マイナスに変更することを指す。
【００７７】
本明細書において、用語「単離された」、「精製された」または「生物学的に純粋」は、変動する程度まで、そのネイティブ状況で見られる、正常にはこれに伴う構成成分がない材料を指す。「単離する」は、本来の供給源または周囲環境からの分離の程度を表示する。「精製する」は、単離よりも高い分離の程度を表示する。「精製された」または「生物学的に純粋」なタンパク質は、いかなる不純物もタンパク質の生物学的特性に物質的に影響を与えないように、または他の有害結果を引き起こさないように、他の材料を十分に含まない。すなわち、組換えＤＮＡ技法によって産生される場合は細胞材料、ウイルス材料もしくは培養培地を、または化学合成される場合は化学的前駆物質もしくは他の化学物質を実質的に含まなければ、本開示の主題の核酸またはポリペプチドは、精製されている。純度および均一性は典型的に、分析化学技法、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーを使用して決定される。用語「精製された」は、核酸またはタンパク質が、電気泳動ゲルにおいて基本的に１本のバンドを生じることを表示することができる。修飾、例えば、リン酸化またはグリコシル化に付すことができるタンパク質に関して、異なる修飾が異なる単離されたタンパク質に生じる場合があり、これらは別々に精製することができる。
【００７８】
本明細書において、用語「特異的に結合する」または「に特異的に結合する」または「特異的に標的とする」とは、目的の生体分子（例えば、Ｆｏｘｐ３／ＭＨＣ複合体（例えば、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ複合体、より具体的には、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡクラスＩ複合体、より具体的には、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ複合体、より具体的には、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ２複合体またはより具体的には、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体）を認識および結合するが、試料、例えば、生体試料における他の分子を実質的に認識および結合しない、ポリペプチドまたはその断片（抗体またはその抗原結合性部分を含む）を意味する。ある特定の実施形態では、「Ｆｏｘｐ３／ＭＨＣ複合体に特異的に結合する」抗体またはその抗原結合性部分は、５×１０−７Ｍもしくはそれ未満、１×１０−７Ｍもしくはそれ未満、５×１０−８Ｍもしくはそれ未満、１×１０−８Ｍもしくはそれ未満、５×１０−９Ｍもしくはそれ未満、１×１０−９Ｍもしくはそれ未満、５×１０−１０Ｍもしくはそれ未満、１×１０−１０Ｍもしくはそれ未満、５×１０−１１Ｍもしくはそれ未満または１×１０−１１Ｍもしくはそれ未満のＫＤで、Ｆｏｘｐ３／ＭＨＣ複合体に結合する抗体またはその抗原結合性部分を指す。
【００７９】
本明細書において、用語「処置すること」または「処置」は、処置されている個体または細胞の疾患経過を変更する試みでの臨床介入を指し、予防法のためまたは臨床病理の経過においてのいずれかで行うことができる。処置の治療効果は、疾患の発生または再発の防止、症状の軽減、疾患のいずれか直接的または間接的な病理学的結果の縮小、転移の防止、疾患進行の速度減少、疾患状況の軽快または緩和、および寛解または改善された予後を限定することなく含む。疾患または障害の進行を防止することにより、処置は、罹患もしくは診断された対象または障害を有すると疑われる対象における障害による増悪を防止することができるのみならず、処置は、障害のリスクがあるまたは障害を有すると疑われる対象における障害または障害の症状の発病を防止することができる。
【００８０】
本明細書において、用語「対象」は、ヒトおよび非ヒト動物（非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、齧歯類、ウマ、ウシ、ブタ、マウス、ラット、ハムスター、ウサギその他（例えば、特定の処置のレシピエントとなるべき、またはそこから細胞が収集される）が挙げられるがこれらに限定されない）が挙げられるがこれらに限定されない、いずれかの動物（例えば、哺乳動物）を指す。ある特定の実施形態では、対象は、ヒトである。
【００８１】
ＩＩ．Ｆｏｘｐ３およびＴｒｅｇ細胞
Ｆｏｘｐ３は、Ｔｒｅｇ機能における立役者として同定されており、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞の最も決定的なマーカーである。Ｆｏｘｐ３は、Ｔｒｅｇ細胞系列分化、維持および抑制性機能に要求される。胸腺に生じる天然起源のＴｒｅｇ細胞の他に、感染およびがんで優勢な誘導性Ｔｒｅｇ細胞が同定された。Ｔｒｅｇ細胞の胸腺外生成は、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−βの存在下におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の最適以下の抗原刺激によるＦｏｘｐ３誘導を要求する。腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）におけるＦｏｘｐ３発現の解析は、Ｔｒｅｇ細胞の蓄積が、乳、肺、メラノーマ、卵巣および膵がんを含む多くのがん型における予後不良と相関することを示した（１〜４）。Ｔｒｅｇ集団を治療標的化することは、様々な型のがんのマウスモデルにおける抗腫瘍免疫および腫瘍拒絶を促進する（５、６）。患者において、Ｔｒｅｇ細胞の枯渇が、膵がんにおけるワクチン媒介性抗腫瘍免疫を増強し、メラノーマ転移の退縮を誘導することも示された（７〜９）。これらの試験は、免疫応答の抑制によるがんにおけるＴｒｅｇ細胞の顕著な腫瘍促進性の役割を実証する。
【００８２】
抗腫瘍免疫を阻害することによりがん細胞の成長および転移性利点を付与する、がん患者の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、局所的リンパ節および血液におけるＦｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ細胞の蓄積に加えて、Ｆｏｘｐ３の発現は、いくつかのがん細胞においても示された。Ｆｏｘｐ３発現膵癌細胞および皮膚Ｔ細胞リンパ腫細胞は、Ｔ細胞増殖を抑制することが示された（２、１１）。したがって、がん細胞は、調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞と抑制効果を共有することができ、このＴｒｅｇ機能の模倣は、がんにおける免疫回避の新たな機構を表し得る。
【００８３】
全体的に見て、Ｔｒｅｇ細胞は、抗腫瘍免疫の最も強力な阻害剤、かつ免疫療法成功に対する最大の障壁と考えられる。Ｔｒｅｇ機能の枯渇または干渉のためのいくつかの戦略が試みられてきた。そのようなものを次に挙げる：ＣＤ２５、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）に特異的なモノクローナル抗体（ｍＡｂ）および細胞表面受容体ＣＤ２５に標的化されたリガンド指向性毒素（デニロイキンジフチトクス等）によるＴｒｅｇの枯渇。しかし、ＣＤ２５およびＧＩＴＲは両者共に、Ｔｒｅｇ細胞のみならず、活性化されたＣＤ４およびＣＤ８エフェクターＴ細胞においても発現される。加えて、Ｔｒｅｇによる腫瘍ホーミングの妨害およびＴ細胞可塑性のモジュレーションはすべて試みられてきた。これらの戦略に伴う問題は、有益な抗腫瘍エフェクターＴ細胞の枯渇をもたらす特異性の欠如である。
【００８４】
したがって、Ｔｒｅｇ細胞を選択的に阻害することができる薬物の必要がある。本発明者らの知る限りにおいて、Ｔｒｅｇ細胞を選択的に阻害することができる薬物はなく、Ｔｒｅｇ細胞の抑制またはＴｒｅｇ細胞の死滅に使用することができるまたは現在使用されている細胞表面におけるＴｒｅｇ細胞に有効な標的はなく、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇させることができる選択的薬物はない。
【００８５】
Ｆｏｘｐ３は理想的な標的であるが、小分子による新薬の開発につながらず、細胞内側にあるため抗体療法が実現可能でない点は別である。しかし、細胞表面提示のために分解およびプロセシングされるＦｏｘｐ３タンパク質由来のペプチドは、ＴＣＲ模倣物抗体の標的として機能することができる。Ｆｏｘｐ３由来エピトープに特異的なＴＣＲ模倣物抗体は、Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ細胞および腫瘍細胞を特異的にかつ直接的に枯渇させる。Ｔｒｅｇ細胞の枯渇は、Ｔｒｅｇ細胞および腫瘍細胞の両方に起因する免疫抑制を除去することにより、抗腫瘍免疫を大幅に解放することができる。
【００８６】
Ｔｒｅｇは、ＣＤ４（表面抗原分類４）およびＣＤ２５（ＩＬ−２受容体のアルファ鎖）等、様々な表面細胞マーカーを使用して同定することができる。その上、活性化された従来のＴ細胞は、Ｆｏｘｐ３を一過性発現することができることが公知である。ＣＤ１２７の発現は、活性化された従来のＴ細胞をＴｒｅｇから区別するための細胞マーカーとして使用することができる。ＣＤ１２７は、ＩＬ−７受容体のアルファ鎖としても公知である。Ｔｒｅｇが、ＣＤ１２７を低発現する一方、活性化されたＴ細胞は、ＣＤ１２７を高発現することが判明した。
【００８７】
ある特定の実施形態では、Ｔｒｅｇは、ＣＤ４の存在（ＣＤ４＋）、ＣＤ１２７の低発現レベル（ＣＤ１２７ｌｏｗ）、ＣＤ２５の高発現レベル（ＣＤ２５ｈｉｇｈ）およびＦｏｘｐ３の高発現レベル（Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ）のうち１つまたは複数によって同定される。ある特定の実施形態では、Ｔｒｅｇは、ＣＤ４の存在およびＣＤ２５の高発現レベル、例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞によって同定される。ある特定の実施形態では、Ｔｒｅｇは、ＣＤ４の存在およびＣＤ１２７の低発現レベル、例えば、ＣＤ４＋ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞によって同定される。ある特定の実施形態では、Ｔｒｅｇは、ＣＤ４の存在、ＣＤ２５の高発現レベルおよびＣＤ１２７の低発現レベル、例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞によって同定される。
【００８８】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、１種または複数のＴｒｅｇ細胞に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択される１種または複数のＴ細胞に結合する。組合せは、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびＦｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞を含む、あらゆる可能な組合せを含む：例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびＦｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞のうちいずれか２種（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、Ｄ１２７ｌｏｗＦｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞またはＣＤ２５ｈｉｇｈＦｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞）、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびＦｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞のうちいずれか３種（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ１２７ｌｏｗＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ１２７ｌｏｗＦｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＦｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞またはＣＤ１２７ｌｏｗＣＤ２５ｈｉｇｈＦｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞）、ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびＦｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞の全４種（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ１２７ｌｏｗＣＤ２５ｈｉｇｈＦｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞）。
【００８９】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、１種または複数のＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、１種または複数のＦｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、１種または複数のＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、１種または複数のＣＤ４＋  Ｔ細胞に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、１種または複数のＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、１種または複数のＣＤ４＋ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、１種または複数のＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞に結合する。
【００９０】
ＩＩＩ．Ｆｏｘｐ３／ＭＨＣペプチド複合体を標的とする抗Ｆｏｘｐ３抗体
本開示の主題は、細胞表面に発現されないためアクセスできないタンパク質、例えば、Ｆｏｘｐ３を含む、いずれかのタンパク質に対する治療用抗体を得るためのアプローチを用いる。
【００９１】
治療用抗体の開発のため、細胞内または核内タンパク質に由来する抗原を標的とするために、珍しいアプローチが要求される。このアプローチは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）と同じ特異性で、細胞表面に発現されるペプチド／ＭＨＣ複合体を認識する組換え抗体（Ａｂ、例えば、モノクローナルＡｂ（ｍＡｂ））を生成するためのものである。斯かるＡｂは、標的認識に関して、ＴＣＲと機能的相同性を共有するが、抗体の特色である、より高い親和性および強力な細胞傷害性薬剤を備える能力を付与する。技術的には、ＴＣＲ様ｍＡｂは、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体を産生するための、当業者に公知の従来のハイブリドーマ技法またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗体ライブラリー技法によって生成することができる。
【００９２】
細胞のタンパク質の僅か１０％が、細胞表面における発現に運命づけられる。したがって、圧倒的多数のタンパク質に対し、モノクローナル抗体は存在しない。対照的に、細胞内のほとんどすべてのタンパク質が、Ｔ細胞受容体による認識のためのＭＨＣ分子の文脈内で、プロセシングされ、ペプチドとして細胞表面に提示される。伝統的には、ＭＨＣ−ペプチド複合体は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）によってのみ認識され得、Ｔ細胞に基づく読み取りアッセイを使用して、目的のエピトープを検出する能力を限定する。ファージディスプレイ方法論は今や、このような特有のエピトープに対するモノクローナル抗体の信頼できる生成を可能にし、これにより、以前にアクセスできなかった抗原の新たな領域への門戸を開く。ファージディスプレイライブラリーの使用は、厳密に定義されたエピトープに対する特有のかつ稀な抗体のための多数の抗体レパートリーを選択することを可能にした（ファージディスプレイに関するさらなる詳細については、（McCaffertyら、Nature、３４８巻：５５２〜５５４頁を参照されたい）。よって、腫瘍抗原由来ペプチド−ＭＨＣ複合体分子に高度に特異的なヒトＦａｂまたはｓｃＦｖ断片の迅速な同定が可能になった（Noy、Expert  Rev  Anticancer  Ther  ２００５年：５巻（３号）：５２３〜５３６頁、Chamesら、Proc  Nalt  Acad  Sci  USA  ２０００年；９７巻：７９６９〜７９７４頁；Heldら、Eur  J.  Immunol.２００４年：３４巻：２９１９〜２９２９頁；Levら、Cancer  Res  ２００２年；６２巻：３１８４〜３１９４頁）。メラノーマＡｇ  ＭＡＲＴ−１  ２６−３５／Ａ２またはｇｐ１００  ２８０−２８８／Ａ２に特異的なＴＣＲ様Ｆａｂをトランケート型のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓエンドトキシンに融合することにより生成された免疫毒素は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方でヒトメラノーマ成長を阻害することが示された（Klechevskyら、Cancer  Res  ２００８年；６８巻（１５号）：６３６０〜６３６７頁）。本開示の主題には、例えば、がん療法のための、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＨＬＡ−Ａ２複合体を認識するＴＣＲ様の完全ヒトＡｂ（例えば、ｍＡｂ）の開発が関与する。したがって、本開示の主題は、Ｔｒｅｇ特異的標的を大いに拡大するために、細胞表面における特異的なＭＨＣ／ペプチド複合体を認識するであろうファージ−抗体試薬を構築するための方法および組成物を提供する。本開示の主題は、プロトタイプの細胞内Ｔｒｅｇマーカー、Ｆｏｘｐ３に由来するペプチド／ＭＨＣ複合体のネオエピトープに対する抗体（例えば、モノクローナル抗体）を提供する。
【００９３】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、高い結合親和性で、例えば、約５×１０−７Ｍまたはそれ未満、例えば、約１×１０−７Ｍもしくはそれ未満、約５×１０−８Ｍもしくはそれ未満、約１×１０−８Ｍもしくはそれ未満、約５×１０−９Ｍもしくはそれ未満、約１×１０−９Ｍもしくはそれ未満、約５×１０−１０Ｍもしくはそれ未満、約１×１０−１０Ｍもしくはそれ未満、約５×１０−１１Ｍもしくはそれ未満または約１×１０−１１Ｍもしくはそれ未満のＫＤで、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、約１×１０−１１Ｍ〜約５×１０−７Ｍ、例えば、約１×１０−１１Ｍ〜約１×１０−１０Ｍ、約１×１０−１１Ｍ〜約５×１０−１１Ｍ、約５×１０−１１Ｍ〜約１×１０−１０Ｍ、約１×１０−１０Ｍ〜約１×１０−９Ｍ、約１×１０−１０Ｍ〜約５×１０−１０Ｍ、約５×１０−１０Ｍ〜約１×１０−９Ｍ、１×１０−９Ｍ〜約１×１０−８Ｍ、１×１０−９Ｍ〜約５×１０−９Ｍ、５×１０−９Ｍ〜約１×１０−８Ｍ、約１×１０−８Ｍ〜約１×１０−７Ｍ、約１×１０−８Ｍ〜約５×１０−８Ｍまたは約５×１０−８Ｍ〜約１×１０−７ＭのＫＤで、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、約１×１０−７Ｍ〜約２．５×１０−７Ｍ、例えば、約１×１０−７Ｍ〜約１．５×１０−７Ｍ、約１．５×１０−７Ｍ〜約２×１０−７Ｍまたは約２×１０−７Ｍ〜約２．５×１０−７ＭのＫＤで、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、約１．４×１０−７ＭのＫＤで、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、約１．９×１０−７ＭのＫＤで、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、約２．２×１０−７ＭのＫＤで、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、約３×１０−８Ｍ〜約７×１０−８Ｍ、例えば、約３×１０−８Ｍ〜約４×１０−８Ｍ、約４×１０−８Ｍ〜約５×１０−８Ｍ、約５×１０−８Ｍ〜約６×１０−８Ｍまたは約６×１０−８Ｍ〜約７×１０−８ＭのＫＤで、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、約３．３×１０−８ＭのＫＤで、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、約３．５×１０−８ＭのＫＤで、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、約４．８×１０−８ＭのＫＤで、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、約４．９×１０−８ＭのＫＤで、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、約５×１０−８ＭのＫＤで、Ｆｏｘ��３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、約７×１０−８ＭのＫＤで、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、約７．２×１０−８ＭのＫＤで、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、約１×１０−１０Ｍ〜約５×１０−１０Ｍ、例えば、約１×１０−１０Ｍ〜約２×１０−１０Ｍ、約２×１０−１０Ｍ〜約３×１０−１０Ｍ、約３×１０−１０Ｍ〜約４×１０−１０Ｍ  Ｍまたは４×１０−１０Ｍ〜約５×１０−１０ＭのＫＤで、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、約２×１０−１０ＭのＫＤで、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、約５×１０−１０ＭのＫＤで、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、約４．６×１０−１０ＭのＫＤで、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。
【００９４】
本開示の主題において、組換えＨＬＡ−ペプチド複合体を使用して、ヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーから選択されるｓｃＦｖに基づく抗原結合性領域を有する抗体を含む抗原結合性タンパク質が記載されている。このような分子は、例えば、Ｆｏｘｐ３／ＭＨＣ複合体（例えば、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ複合体、より具体的には、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡクラスＩ複合体、より具体的には、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ複合体、より具体的には、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ２複合体、より具体的には、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体）のみを認識する抗Ｆｏｘｐ３抗体により示される通り、絶妙な特異性を実証した。加えて、それが、他のペプチドを含有するＭＨＣ−複合体に結合できないことと共に、この分子も、ペプチドそれ自体に結合することができず、そのＴＣＲ様特異性をさらに実証する。
【００９５】
ＴＣＲ様特異性を有する組換え抗体は、腫瘍免疫学および免疫療法における研究および治療適用のための新たなかつ役立つツールを表す。Ｆｏｘｐ３は、十分に確立され検証されたＴｒｅｇマーカーである。
【００９６】
本開示の抗原結合性部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）であり得る。ある特定の非限定的な実施形態では、本開示のその抗原結合性部分は、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、ヒトｓｃＦｖである。ファージディスプレイによって選択される本開示の主題のｓｃＦｖは、ＨＬＡ陽性細胞の表面に提示されたペプチドに結合するその能力に関して最初に検査される。Ｔ２細胞が、ペプチドの存在下でインキュベートされた後に、蛍光標識された抗体を使用して、フローサイトメトリを使用して、抗原パルス適用された細胞を選択的に認識することができる。
【００９７】
ある特定の実施形態では、本開示の主題は、抗体の全体的なアビディティーおよび安定性を増加する、二価タンパク質を生じるように、ヒト免疫グロブリンのＦｃ領域を有する抗体を形成するために、抗体の重鎖または軽鎖可変領域の１個または複数の定常ドメインに融合されたｓｃＦｖ配列を有する抗体を提供する。加えて、Ｆｃ部分は、例えば、抗原定量化試験における使用のための、親和性測定のために抗体を固定化するための、治療剤の標的化送達のための、および／または免疫エフェクター細胞を使用してＦｃ媒介性細胞傷害に関して検査するための、ならびに多くの他の適用のための、蛍光色素、細胞毒、放射性同位体等が挙げられるがこれらに限定されない、他の分子の、抗体への直接的コンジュゲーションを可能にする。
【００９８】
本開示の主題の分子は、ファージディスプレイを使用した、ｓｃＦｖの同定および選択に基づき、そのアミノ酸配列は、目的のＭＨＣ拘束ペプチドに対する分子の特異性を付与し、本開示のあらゆる抗原結合性タンパク質の基盤を形成する。したがって、ｓｃＦｖを使用して、例えば、全長抗体、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２等のその断片、ミニボディ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合体を含む融合タンパク質、多価抗体、すなわち、同じ抗原または異なる抗原に対する２以上の特異性を有する抗体、例えば、二特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴｅ）、トリボディ等を含む、多種多様な「抗体」分子を設計することができる（Cuestaら、Multivalent  antibodies:  when  design  surpasses  evolution.  Trends  in  Biotechnology  ２８巻：３５５〜３６２頁、２０１０年を参照）。
【００９９】
組換え免疫グロブリンの構築において、様々な免疫グロブリンアイソタイプの定常領域の適切なアミノ酸配列、および多彩な抗体の産生のための方法が、当業者に公知である。
【０１００】
ファージディスプレイ技術は、それ自体がおよびそれ自体で有用な、または完全抗体、抗原結合性タンパク質もしくはその抗原結合性断片をもたらすようにさらに開発することができる、抗原特異的ｓｃＦｖおよびＦａｂ断片の迅速な選択および産生を可能にする。Ｆｃドメインを有する完全Ａｂは、ｓｃＦｖおよびＦａｂ抗体を上回るいくつかの利点を有する。第一に、全長Ａｂのみが、Ｆｃドメインを介したＣＤＣおよびＡＤＣＣ媒介性等、免疫学的機能を発揮する。第二に、二価ｍＡｂは、単量体Ｆａｂ  Ａｂよりも強い抗原結合親和性を提供する。第三に、血漿半減期および腎クリアランスは、Ｆａｂおよび二価ｍＡｂにより異なるであろう。それぞれの特定の特色および利点は、計画されたエフェクター戦略にマッチさせることができる。第四に、二価ｍＡｂは、ｓｃＦｖおよびＦａｂとは異なる速度で内部移行することができ、免疫機能または担体機能を変更する。例えば、アルファエミッタは、標的を死滅させるために内部移行される必要がないが、多くの薬物および毒素は、免疫複合体の内部移行から恩恵を被るであろう。ある特定の実施形態では、したがって、Ｆｏｘｐ３ペプチド−ＨＬＡ複合体に特異的なｓｃＦｖクローンが、ファージディスプレイライブラリーから得られたら、ｓｃＦｖ断片を使用した全長ＩｇＧ  Ａｂ（例えば、ｍＡｂ）が産生される。
【０１０１】
ＨＥＫ２９３またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株の細胞において組換えヒトモノクローナルＩｇＧを産生するために、当業者に公知の方法に基づき全長ＩｇＧ  ｍＡｂを操作することができる（Tomomatsuら、Production  of  human  monoclonal  antibodies  against  FceRIa  by  a  method  combining  in  vitro  immunization  with  phage  display.  Biosci  Biotechnol  Biochem  ７３巻（７号）：１４６５〜１４６９頁、２００９年）。簡潔に説明すると、抗体可変領域は、マッチするラムダまたはカッパ軽鎖定常配列およびＩｇＧ１サブクラスＦｃ（例えば）と共に、哺乳動物発現ベクターへとサブクローニングすることができる（Lidija  Pら、An  integrated  vector  system  for  the  eukaryotic  expression  of  antibodies  or  their  fragments  after  selection  from  phage  display  libraries.  Gene  １９９７年；１８７巻（１号）：９〜１８頁；Lisa  JHら、Crystallographic  structure  of  an  intact  lgG1  monoclonal  antibody.  Journal  of  Molecular  Biology  １９９８年；２７５巻（５号）：８６１〜８７２頁）。動態結合解析（Yasmina  NAら、Probing  the  binding  mechanism  and  affinity  of  tanezumab,  a  recombinant  humanized  anti-NGF  monoclonal  antibody,  using  a  repertoire  of  biosensors.  Protein  Science  ２００８年；１７巻（８号）：１３２６〜１３３５頁）を使用して、ナノモル濃度範囲内のＫＤでの、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡクラスＩ複合体への全長ＩｇＧの特異的結合を確認することができる。
【０１０２】
ある特定の実施形態では、本開示の主題は、全長抗体（抗Ｆｏｘｐ３抗体）である抗原結合性タンパク質を提供し、本開示の主題の抗体の重鎖および軽鎖は、全長であり得る（例えば、少なくとも１、好ましくは２本の完全重鎖および少なくとも１、好ましくは２本の完全軽鎖を含む抗体）。抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤまたはＩｇＥアイソタイプのものであり得る。ある特定の実施形態では、抗原結合性部分は、１個または複数の非免疫グロブリン構成成分との融合タンパク質に含まれる。ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのものである。非限定的な一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである（例えば、ヒトＩｇＧ１抗体）。抗体型の選択は、抗体が誘発するように設計された免疫エフェクター機能に依存し得る。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ定常領域であり得、好ましくは、カッパ定常領域である。
【０１０３】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体または他の抗原結合性タンパク質は、ＭＨＣ分子、例えば、ＨＬＡ分子、より具体的には、ＨＬＡクラスＩ分子、より具体的には、ＨＬＡ−Ａ分子、より具体的には、ＨＬＡ−Ａ２、さらにより具体的には、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１に結合したＦｏｘｐ３ペプチドに特異的に結合する。Ｆｏｘｐ３ペプチドは、６〜２０アミノ酸、例えば、８〜１２アミノ酸、例えば、８、９、１０、１１または１２アミノ酸を含むことができる。ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３ペプチドは、９−ｍｅｒペプチドである。ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３ペプチドは、１０−ｍｅｒペプチドである。Ｆｏｘｐ３ペプチドは、本技術分野で公知のものであり得る。
【０１０４】
ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３ペプチドは、Ｆｏｘｐ３タンパク質の部分である。ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３ペプチドは、ヒトＦｏｘｐ３タンパク質の部分である。ある特定の実施形態では、ヒトＦｏｘｐ３タンパク質は、下に示す配列番号１（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＢＱ１５２１０．１）に表記されているアミノ酸配列を有する。
【化１】
2019512207.tif 000003
【０１０５】
ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３ペプチドは、配列番号２（配列番号１のアミノ酸配列２５２〜２６０である）またはその部分に表記されているアミノ酸（amnio  acid）配列を有するＦｏｘｐ３−１、配列番号３（配列番号１のアミノ酸配列３９０〜３９８である）に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−２またはその部分、配列番号４（配列番号１のアミノ酸配列３０４〜３１２である）に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−３またはその部分、配列番号５（配列番号１のアミノ酸配列３８８〜３９６である）に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−４またはその部分、配列番号６（配列番号１のアミノ酸配列９５〜１０３である）に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−５またはその部分、配列番号７（配列番号１のアミノ酸配列６９〜７７である）に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−６またはその部分、および配列番号８（配列番号１のアミノ酸配列３４４〜３５３である）に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−７またはその部分からなる群から選択される。配列番号２〜８の配列を下に示す。
【化２】
2019512207.tif 000004
【０１０６】
ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３ペプチドは、Ｆｏｘｐ３−７である。ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３ペプチドは、Ｆｏｘｐ３−２である。ある特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３ペプチドは、Ｆｏｘｐ３−４である。ある特定の実施形態では、抗体または他の抗原結合性タンパク質は、Ｆｏｘｐ３／ＭＨＣ複合体におけるＦｏｘｐ３ペプチドのＣ末端に結合する。ある特定の実施形態では、抗体または他の抗原結合性タンパク質は、Ｆｏｘｐ３／ＭＨＣ複合体におけるＦｏｘｐ３ペプチドのＮ末端に結合する。後述する実施例２に示すエピトープマッピングデータは、ある特定の抗体が、ＭＨＣ分子におけるアミノ酸配列のＣ末端に結合することを実証する。
【０１０７】
ある特定の実施形態では、抗体または他の抗原結合性タンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１と併せたＦｏｘｐ３−７に結合する。Ｆｏｘｐ３−７に結合するｓｃＦｖの非限定的な例として、ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、およびＥＸＴ０１７−５５が挙げられる。
【０１０８】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、Ｆｏｘｐ３−１、Ｆｏｘｐ３−２、Ｆｏｘｐ３−３、Ｆｏｘｐ３−４、Ｆｏｘｐ３−５、Ｆｏｘｐ３−６またはＦｏｘｐ３−７の少なくとも１個の部分に結合する。より具体的には、ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、Ｆｏｘｐ３−７（配列番号８）の少なくとも１個の部分に結合する。
【０１０９】
ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−５３およびＥＸＴ０１７−５４の重鎖および軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を、下表１に示す。ＣＤＲ領域は、Ｋａｂａｔ方式（Kabat,  E.  A.ら（１９９１年）Sequences  of  Proteins  of  Immunological  Interest、第５版、U.S.  Department  of  Health  and  Human  Services、ＮＩＨ出版番号９１−３２４２）を使用して描写されている。ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−５３およびＥＸＴ０１７−５４の全長アミノ酸配列およびこれをコードするヌクレオチド、重鎖可変領域配列およびこれをコードするヌクレオチド、ならびに軽鎖可変領域配列およびこれをコードするヌクレオチドを、付録Ａに示す。
【表１】
2019512207.tif 000005
【０１１０】
ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３４およびＥＸＴ０１７−５５の重鎖および軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を、付録Ｂに示す。ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３４およびＥＸＴ０１７−５５の全長アミノ酸配列およびこれをコードするヌクレオチド、重鎖可変領域配列およびこれをコードするヌクレオチド、ならびに軽鎖可変領域配列およびこれをコードするヌクレオチドを、付録Ｃに示す。
【０１１１】
ある特定の実施形態では、抗体または他の抗原結合性タンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１と併せたＦｏｘｐ３−２に結合する。Ｆｏｘｐ３−２に結合するｓｃＦｖの非限定的な例として、ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３およびＥＸＴ０１９−８が挙げられる。ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−１５およびＥＸＴ０１９−２０の重鎖および軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を、下表２に示す。ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−１５およびＥＸＴ０１９−２０の全長アミノ酸配列およびこれをコードするヌクレオチド、重鎖可変領域配列およびこれをコードするヌクレオチド、ならびに軽鎖可変領域配列およびこれをコードするヌクレオチドを、付録Ｄに示す。
【表２】
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【０１１２】
ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３およびＥＸＴ０１９−８の重鎖および軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を、付録Ｅに示す。ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３およびＥＸＴ０１９−８の全長アミノ酸配列およびこれをコードするヌクレオチド、重鎖可変領域配列およびこれをコードするヌクレオチド、ならびに軽鎖可変領域配列およびこれをコードするヌクレオチドを、付録Ｄに示す。
【０１１３】
ある特定の実施形態では、抗体または他の抗原結合性タンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１と併せたＦｏｘｐ３−４に結合する。Ｆｏｘｐ３−４に結合するｓｃＦｖの非限定的な例として、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２およびＥＸＴ０１８−４が挙げられる。ＥＸＴ０１８−５の重鎖および軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を、下表３に示す。ＥＸＴ０１８−５の全長アミノ酸配列およびこれをコードするヌクレオチド、重鎖可変領域配列およびこれをコードするヌクレオチド、ならびに軽鎖可変領域配列およびこれをコードするヌクレオチドを、付録Ｆに示す。
【表３】
2019512207.tif 000007
【０１１４】
ＥＸＴ０１８−２およびＥＸＴ０１８−４の重鎖および軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を、付録Ｇに示す。ＥＸＴ０１８−２およびＥＸＴ０１８−４の全長アミノ酸配列およびこれをコードするヌクレオチド、重鎖可変領域配列およびこれをコードするヌクレオチド、ならびに軽鎖可変領域配列およびこれをコードするヌクレオチドを、付録Ｆに示す。
【０１１５】
ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、およびＥＸＴ０１７−５５のそれぞれが、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１と併せたＦｏｘｐ３−７に結合することができると仮定すると、ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、およびＥＸＴ０１７−５５のＶＨおよびＶＬ配列が「混合およびマッチされ」て、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１と併せたＦｏｘｐ３−７に結合する他の抗体または他の抗原結合性タンパク質を作製することができる。
【０１１６】
同様に、ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３およびＥＸＴ０１９−８のそれぞれが、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１と併せたＦｏｘｐ３−２に結合することができると仮定すると、ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３およびＥＸＴ０１９−８のＶＨおよびＶＬ配列が「混合およびマッチされ」て、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１と併せたＦｏｘｐ３−２に結合する他の抗体または他の抗原結合性タンパク質を作製することができる。
【０１１７】
同様に、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２およびＥＸＴ０１８−４のそれぞれが、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１と併せたＦｏｘｐ３−４に結合することができると仮定すると、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２およびＥＸＴ０１８−４のＶＨおよびＶＬ配列が「混合およびマッチされ」て、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１と併せたＦｏｘｐ３−４に結合する他の抗体または他の抗原結合性タンパク質を作製することができる。
【０１１８】
斯かる「混合およびマッチされた」抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、ＲＩＡ、Ｂｉａｃｏｒｅ解析を含む、本技術分野で公知の結合アッセイを使用して検査することができる。好ましくは、ＶＨおよびＶＬ鎖が混合およびマッチされる場合、特定のＶＨ／ＶＬペア形成由来のＶＨ配列は、構造的に同様のＶＨ配列に置き換えられる。同様に、特定のＶＨ／ＶＬペア形成由来のＶＬ配列は、構造的に同様のＶＬ配列に置き換えられる。
【０１１９】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体または他の抗原結合性タンパク質は、（ａ）付録ＡおよびＣに示す通り、ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、もしくはＥＸＴ０１７−５５のＶＨ、および／または（ｂ）付録Ａに示す通り、ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、もしくはＥＸＴ０１７−５５のＶＬを含む。
【０１２０】
ある特定の実施形態では、抗体または他の抗原結合性タンパク質は、（ａ）配列番号９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５および１０７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ；および／または（ｂ）配列番号９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６および１０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０１２１】
好まれる重鎖および軽鎖の組合せは、次のものを含む：
（ａ）配列番号９３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号９５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号９７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号９９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号１０１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号１０３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｇ）配列番号１０５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｈ）配列番号１０７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域。
【０１２２】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体または他の抗原結合性タンパク質は、（ａ）付録Ｄに示す通り、ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３およびＥＸＴ０１９−８のＶＨ、および／または（ｂ）付録Ｄに示す通り、ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３およびＥＸＴ０１９−８のＶＬを含む。
【０１２３】
例えば、抗体または他の抗原結合性タンパク質は、（ａ）配列番号１０９、１１１、１１３、１１５および１１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ；および／または（ｂ）配列番号１１０、１１２、１１４、１１６および１１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０１２４】
好まれる重鎖および軽鎖の組合せは、次のものを含む：
（ａ）配列番号１０９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号１１１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号１１３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号１１５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｅ）配列番号１１７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域。
【０１２５】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体または他の抗原結合性タンパク質は、（ａ）付録Ｆに示す通り、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２およびＥＸＴ０１８−４のＶＨ、および／または（ｂ）付録（Appendicx）Ｆに示す通り、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２およびＥＸＴ０１８−４のＶＬを含む。
【０１２６】
例えば、抗体または他の抗原結合性タンパク質は、（ａ）配列番号１１９に表記されているアミノ酸配列を含むＶＨ；および／または（ｂ）配列番号１２０に表記されているアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０１２７】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体または他の抗原結合性タンパク質は、表１および付録Ｂに示す通り、ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、またはＥＸＴ０１７−５５の重鎖および軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。
【０１２８】
ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、またはＥＸＴ０１７−５５のそれぞれが、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１と併せたＦｏｘｐ３−７に結合することができ、抗原結合特異性が、主にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３領域によってもたらされると仮定すると、ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、またはＥＸＴ０１７−５５のそれぞれのＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列ならびにＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列が「混合およびマッチされ」て（すなわち、異なる抗体由来のＣＤＲを混合およびマッチすることができるが、各抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびにＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含有しなければならない）、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１と併せたＦｏｘｐ３−７に結合する他の抗体または他の抗原結合性タンパク質を作製することができる。
【０１２９】
同様に、ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３およびＥＸＴ０１９−８のそれぞれが、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１と併せたＦｏｘｐ３−２に結合することができ、抗原結合特異性が、主にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３領域によってもたらされると仮定すると、ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３およびＥＸＴ０１９−８のそれぞれのＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列ならびにＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列が「混合およびマッチされ」て、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１と併せたＦｏｘｐ３−２に結合する他の抗体または他の抗原結合性タンパク質を作製することができる。斯かる「混合およびマッチされた」抗体は、上述の結合アッセイを使用して検査することができる。
【０１３０】
同様に、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２およびＥＸＴ０１８−４のそれぞれが、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１と併せたＦｏｘｐ３−４に結合することができ、抗原結合特異性が、主にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３領域によってもたらされると仮定すると、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２およびＥＸＴ０１８−４のそれぞれのＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列ならびにＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列が「混合およびマッチされ」て、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１と併せたＦｏｘｐ３−４に結合する他の抗体または他の抗原結合性タンパク質を作製することができる。斯かる「混合およびマッチされた」抗体は、上述の結合アッセイを使用して検査することができる。
【０１３１】
ＶＨ  ＣＤＲ配列が混合およびマッチされる場合、特定のＶＨ配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３配列は、構造的に同様のＣＤＲ配列（複数可）に置き換えられる。同様に、ＶＬ  ＣＤＲ配列が混合およびマッチされる場合、特定のＶＬ配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３配列は、好ましくは、構造的に同様のＣＤＲ配列（複数可）に置き換えられる。当業者には、１個または複数のＶＨおよび／またはＶＬ  ＣＤＲ領域配列を、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性部分のＣＤＲ配列由来の構造的に同様の配列に置換することにより、新規ＶＨおよびＶＬ配列を作製することができることが直ちに明らかとなるであろう。
【０１３２】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、
（ａ）表１および付録Ｂに示す通り、ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、またはＥＸＴ０１７−５５のＶＨ  ＣＤＲ１；
（ｂ）表１および付録Ｂに示す通り、ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、またはＥＸＴ０１７−５５のＶＨ  ＣＤＲ２；
（ｃ）表１および付録Ｂに示す通り、ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、またはＥＸＴ０１７−５５のＶＨ  ＣＤＲ３；
（ｄ）表１および付録Ｂに示す通り、ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、またはＥＸＴ０１７−５５のＶＬ  ＣＤＲ１；
（ｅ）表１および付録Ｂに示す通り、ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、またはＥＸＴ０１７−５５のＶＬ  ＣＤＲ２；ならびに
（ｆ）表１および付録Ｂに示す通り、ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、またはＥＸＴ０１７−５５のＶＬ  ＣＤＲ３
を含む。
【０１３３】
例えば、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、
（ａ）配列番号９、１５、２１、２７、３３、３９、４５および５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１０、１６、２２、２８、３４、４０、４６、５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１１、１７、２３、２９、３５、４１、４７および５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１２、１８、２４、３０、３６、４０、４２、４８および５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１３、１９、２５、３１、３７、４３、４９および５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；ならびに
（ｆ）配列番号１４、２０、２６、３２、３８、４４、５０および５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のこの組合せを含む抗体は、「ＥＸＴ０１７−１７」と称される。
【０１３５】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のこの組合せを含む抗体は、「ＥＸＴ０１７−１８」と称される。
【０１３６】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号２１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のこの組合せを含む抗体は、「ＥＸＴ０１７−２０」と称される。
【０１３７】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号２７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のこの組合せを含む抗体は、「ＥＸＴ０１７−２７」と称される。
【０１３８】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号３３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３４に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３７に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のこの組合せを含む抗体は、「ＥＸＴ０１７−２８」と称される。
【０１３９】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号３９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号４４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のこの組合せを含む抗体は、「ＥＸＴ０１７−３２」と称される。
【０１４０】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号４５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号５０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のこの組合せを含む抗体は、「ＥＸＴ０１７−５３」と称される。
【０１４１】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号５１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号５６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のこの組合せを含む抗体は、「ＥＸＴ０１７−５４」と称される。
【０１４２】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、
（ａ）表２および付録Ｅに示す通り、ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３およびＥＸＴ０１９−８のＶＨ  ＣＤＲ１；
（ｂ）表２および付録Ｅに示す通り、ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３およびＥＸＴ０１９−８のＶＨ  ＣＤＲ２；
（ｃ）表２および付録Ｅに示す通り、ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３およびＥＸＴ０１９−８のＶＨ  ＣＤＲ３；
（ｄ）表２および付録Ｅに示す通り、ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３およびＥＸＴ０１９−８のＶＬ  ＣＤＲ１；
（ｅ）表２および付録Ｅに示す通り、ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３およびＥＸＴ０１９−８のＶＬ  ＣＤＲ２；ならびに
（ｆ）表２および付録Ｅに示す通り、ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３およびＥＸＴ０１９−８のＶＬ  ＣＤＲ３
を含む。
【０１４３】
例えば、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、
（ａ）配列番号５７、６３、６９、７５および８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５８、６４、７０、７６および８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５９、６５、７１、７７および８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６０、６６、７２、７８および８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号６１、６７、７３、７９および８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；ならびに
（ｆ）配列番号６２、６８、７４、８０および８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。
【０１４４】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号５７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号６２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のこの組合せを含む抗体は、「ＥＸＴ０１９−６」と称される。
【０１４５】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号６３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６４に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号６５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６７に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号６８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のこの組合せを含む抗体は、「ＥＸＴ０１９−９」と称される。
【０１４６】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号６９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号７１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号７２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のこの組合せを含む抗体は、「ＥＸＴ０１９−１２」と称される。
【０１４７】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号７５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号７７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号７８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のこの組合せを含む抗体は、「ＥＸＴ０１９−１５」と称される。
【０１４８】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号８１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号８３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号８４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のこの組合せを含む抗体は、「ＥＸＴ０１９−２０」と称される。
【０１４９】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、
（ａ）表３および付録Ｇに示す通り、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２およびＥＸＴ０１８−４のＶＨ  ＣＤＲ１；
（ｂ）表３および付録Ｇに示す通り、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２およびＥＸＴ０１８−４のＶＨ  ＣＤＲ２；
（ｃ）表３および付録Ｇに示す通り、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２およびＥＸＴ０１８−４のＶＨ  ＣＤＲ３；
（ｄ）表３および付録Ｇに示す通り、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２およびＥＸＴ０１８−４のＶＬ  ＣＤＲ１；
（ｅ）表３および付録Ｇに示す通り、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２およびＥＸＴ０１８−４のＶＬ  ＣＤＲ２；ならびに
（ｆ）表３および付録Ｇに示す通り、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２およびＥＸＴ０１８−４のＶＬ  ＣＤＲ３
を含む。
【０１５０】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号８７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号８９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号９０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号９１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号９２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のこの組合せを含む抗体は、「ＥＸＴ０１８−５」と称される。
【０１５１】
本開示の抗体の定常領域／フレームワーク領域を、例えば、アミノ酸置換によって変更させて、抗体の特性を修飾することができる（例えば、次のうち１種または複数を増加または減少させることができる：抗原結合親和性、Ｆｃ受容体結合、抗体炭水化物、例えば、グリコシル化、フコシル化等、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、エフェクター細胞機能、補体機能またはコンジュゲーション部位の導入）。
【０１５２】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体は、完全ヒト抗体である。ある特定の実施形態では、本開示の抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。アナフィラキシーおよび過敏症反応を含む重篤な副作用を引き起こす、ヒトに投与される場合、マウス抗体は、ＨＡＭＡ（ヒト抗マウス抗体）応答として公知の免疫原性反応を引き起こすため、完全ヒトｍＡｂが、ヒトにおける治療使用に好まれる（Azinovic  Iら、Survival  benefit  associated  with  human  anti-mouse  antibody  (HAMA)  in  patients  with  B-cell  malignancies.  Cancer  Immunol  Immunother  ２００６年；５５巻（１２号）：１４５１〜８頁；Tjandra  JJら、Development  of  human  anti-murine  antibody  (HAMA)  response  in  patients.  Immunol  Cell  Biol  １９９０年；６８巻（６号）：３６７〜７６頁）。この免疫原性反応は、天然ヒト抗体とはやや異なるアミノ酸配列のために、マウス抗体を異物として認識するヒト免疫系によって誘発される。本技術分野で公知のヒト化方法（Riechmann  Lら、Reshaping  human  antibodies  for  therapy.  Nature  １９８８年；３３２巻（６１６２号）：３３２：３２３頁；  Queen  Cら、A  humanized  antibody  that  binds  to  the  interleukin  2  receptor.  Proc  Natl  Acad  Sci  USA  １９８９年；８６巻（２４号）：１００２９〜３３頁）を用いて、マウス由来抗体の免疫原性を低下させることができる（Gerd  Rら、Serological  Analysis  of  Human  Anti-Human  Antibody  Responses  in  Colon  Cancer  Patients  Treated  with  Repeated  Doses  of  Humanized  Monoclonal  Antibody  A33.  Cancer  Res  ２００１年；６１巻、６８５１〜６８５９頁）。
【０１５３】
ファージディスプレイライブラリーの使用は、厳密に定義されたエピトープに対する特有のかつ稀な抗体のための多数の抗体レパートリーを選択することを可能にした（ファージディスプレイに関するさらなる詳細については、McCaffertyら、Phage  antibodies:  filamentous  phage  displaying  antibody  variable  domains.  Nature、３４８巻：５５２〜５５４頁を参照されたい）。よって、腫瘍抗原由来ペプチド−ＭＨＣ複合体分子に高度に特異的なヒトＦａｂまたはｓｃＦｖの迅速な同定が可能になった。メラノーマＡｇ  ＭＡＲＴ−１  ２６−３５／Ａ２またはｇｐ１００  ２８０−２８８／Ａ２に特異的なＴＣＲ様Ｆａｂをトランケート型のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓエンドトキシンに融合することにより生成された免疫毒素は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方でヒトメラノーマ成長を阻害することが示された（Klechevsky  Eら、Antitumor  activity  of  immunotoxins  with  T-cell  receptor-like  specificity  against  human  melanoma  xenografts.  Cancer  Res  ２００８年；６８巻（１５号）：６３６０〜６３６７頁）。加えて、Ｆａｂ断片を使用して全長モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を操作することにより、例えば、がんまたは免疫疾患を処置するための治療用ｍＡｂの開発に通常必要とされる、数か月に及ぶ時間のかかる作業を迂回しつつ、治療用ヒトｍＡｂを直接的に生成することが可能である。
【０１５４】
相同抗体
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合性部分（例えば、ｓｃＦｖ）（例えば、ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、ＥＸＴ０１７−５５、ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３、ＥＸＴ０１９−８、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２、またはＥＸＴ０１８−４）のアミノ酸配列に対し相同であるアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖可変領域を含み、抗体またはその抗原結合性部分は、本開示の主題の抗Ｆｏｘｐ３抗体またはその抗原結合性部分の所望の機能特性を保持する。
【０１５５】
例えば、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、ＥＸＴ０１７−５５、ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３、ＥＸＴ０１９−８、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２、またはＥＸＴ０１８−４（付録Ａ、Ｃ、ＤおよびＦに示す通り）のＶＨ配列に対し少なくとも約８０％相同（例えば、少なくとも約８１％相同、少なくとも約８２％相同、少なくとも約８３％相同、少なくとも約８４％相同、少なくとも約８５％相同、少なくとも約８６％相同、少なくとも約８７％相同、少なくとも約８８％相同、少なくとも約８９％相同、少なくとも約９０％相同、少なくとも約９１％相同、少なくとも約９２％相同、少なくとも約９３％相同、少なくとも約９４％相同、少なくとも約９５％相同、少なくとも約９６％相同、少なくとも約９７％相同、少なくとも約９８％相同、少なくとも約９９％相同または約１００％相同）であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、ＥＸＴ０１７−５５、ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３、ＥＸＴ０１９−８、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２、またはＥＸＴ０１８−４（付録Ａ、Ｃ、ＤおよびＦに示す通り）のＶＬ配列に対し少なくとも８０％相同（例えば、少なくとも約８１％相同、少なくとも約８２％相同、少なくとも約８３％相同、少なくとも約８４％相同、少なくとも約８５％相同、少なくとも約８６％相同、少なくとも約８７％相同、少なくとも約８８％相同、少なくとも約８９％相同、少なくとも約９０％相同、少なくとも約９１％相同、少なくとも約９２％相同、少なくとも約９３％相同、少なくとも約９４％相同、少なくとも約９５％相同、少なくとも約９６％相同、少なくとも約９７％相同、少なくとも約９８％相同、少なくとも約９９％相同または約１００％相同）であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体またはその抗原結合性部分は、約５×１０−７Ｍまたはそれ未満のＫＤで、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１と併せたＦｏｘｐ３ペプチドに結合する。
【０１５６】
例えば、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、
（ａ）配列番号９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７および１１９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｂ）配列番号９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８および１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含み、抗体またはその抗原結合性部分は、約５×１０−７Ｍまたはそれ未満のＫＤで、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１と併せたＦｏｘｐ３ペプチドに結合する。
【０１５７】
ある特定の実施形態では、ＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列は、上に表記されている配列に対し約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％相同であり得る。上に表記されている配列のＶＨおよびＶＬ領域に対し高い（すなわち、約８０％またはそれを超える）相同性を有するＶＨおよびＶＬ領域を有する抗体は、突然変異誘発（例えば、部位特異的またはＰＣＲ媒介性突然変異誘発）と、それに続く、本明細書に記載されている結合アッセイを使用した、保持される機能（すなわち、結合親和性）に関するコードされる変更された抗体の検査によって得ることができる。
【０１５８】
２配列間での配列の比較および相同性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができ、これは本技術分野で標準である。
【０１５９】
非限定的な一例として、２種のアミノ酸配列間のパーセント相同性は、ＰＡＭ１２０重量残基表、ギャップ長さペナルティ１２およびギャップペナルティ４を使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に取り込まれた、E.  MeyersおよびW.  Miller（Comput.  Appl.  Biosci.、４巻：１１〜１７頁（１９８８年））のアルゴリズムを使用して決定することができる。加えて、２種のアミノ酸配列間のパーセント相同性は、Ｂｌｏｓｓｕｍ  ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれかを使用して、ギャップ重量１６、１４、１２、１０、８、６または４および長さ重量１、２、３、４、５または６で、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（www.gcg.comにて入手可）内のＧＡＰプログラムに取り込まれた、NeedlemanおよびWunsch（J.  Mol.  Biol.４８巻：４４４〜４５３頁（１９７０年））アルゴリズムを使用して決定することができる。
【０１６０】
その上またはそれに代えて、本開示の主題のタンパク質配列は、公開データベースに対する検索を実行するための「問い合わせ配列」としてさらに使用して、例えば、関連する配列を同定することができる。斯かる検索は、Altschulら（１９９０年）J.  Mol.  Biol.２１５巻：４０３〜１０頁のＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実行することができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長さ＝３により実行して、本発明の抗体分子に対し相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的のギャップ入りアライメントを得るために、Altschulら（１９９７年）Nucleic  Acids  Res.２５巻（１７号）：３３８９〜３４０２頁に記載されている通りにＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる。（www.ncbi.nlm.nih.govを参照）。
【０１６１】
修飾を有する抗体
ある特定の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性部分は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、ならびにＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含み、これらのＣＤＲ配列のうち１個または複数は、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合性部分（例えば、ｓｃＦｖ）（例えば、表１〜３ならびに付録Ｂ、ＥおよびＧに示す通り、ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、ＥＸＴ０１７−５５、ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３、ＥＸＴ０１９−８、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２、またはＥＸＴ０１８−４）に基づく指定のアミノ酸配列またはその修飾を含み、抗体またはその抗原結合性部分は、本開示の主題の抗Ｆｏｘｐ３抗体またはその抗原結合性部分の所望の機能特性を保持する。
【０１６２】
本開示の主題は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、ならびにＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合性部分であって、
（ａ）重鎖可変領域ＣＤＲ３配列が、配列番号１１、１７、２３、２９、３５、４１、４７、５３、５９、６５、７１、７７、８３および８９からなる群から選択されるアミノ酸配列またはその保存的修飾を含み、
（ｂ）軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列が、配列番号１４、２０、２６、３２、３８、４４、５０、５６、６２、６８、７４、８０、８６および９２からなる群から選択されるアミノ酸配列またはその修飾を含み、
抗体またはその抗原結合性部分が、ＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドに特異的に結合する、
単離された抗体またはその抗原結合性部分を提供する。
【０１６３】
ある特定の実施形態では、重鎖可変領域ＣＤＲ２配列は、配列番号１０、１６、２２、２８、３４、４０、４６、５２、５８、６４、７０、７６、８２および８８からなる群から選択されるアミノ酸配列またはその修飾を含み、軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列は、配列番号１３、１９、２５、３１、３７、４３、４９、５５、６１、６７、７３、７９、８５および９１からなる群から選択されるアミノ酸配列またはその修飾を含む。
【０１６４】
ある特定の実施形態では、重鎖可変領域ＣＤＲ１配列は、配列番号９、１５、２１、２７、３３、３９、４５、５１、５７、６３、６９、７５、８１および８７ならびにその修飾からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列は、配列番号１２、１８、２４、３０、３６、４２、４８、５４、６０、６６、７２、７８、８４および９０からなる群から選択されるアミノ酸配列またはその修飾を含む。
【０１６５】
ある特定の実施形態では、修飾（複数可）は、アミノ酸配列を含有する抗体の結合特徴に有意に影響または変更しない。斯かる修飾は、アミノ酸置換、付加および欠失を含む。修飾は、部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介性突然変異誘発等、本技術分野で公知の標準技法によって、本開示の抗体または抗原結合性部分に導入することができる。
【０１６６】
修飾は、保存的修飾、非保存的修飾、または保存的および非保存的修飾の混合物であり得る。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が、同様の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられる置換である。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、本技術分野で定義されている。例示的な保存的アミノ酸置換を表４に示す。アミノ酸置換を目的の抗体に導入し、産物を、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少された免疫原性または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣに関してスクリーニングすることができる。
【表４】
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【０１６７】
アミノ酸は、共通側鎖特性に従ってグループ化することができる：
・  疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
・  中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
・  酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
・  塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
・  鎖の配向性に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
・  芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０１６８】
よって、ＣＤＲ領域内の１個または複数のアミノ酸残基は、同じ群の他のアミノ酸残基に置き換えられてよく、変更された抗体は、本明細書に記載されている機能アッセイを使用して、保持された機能に関して検査されてよい。
【０１６９】
非保存的置換は、これらのクラスのうち１クラスの、別のクラスに代えたメンバー交換を必要とする。
【０１７０】
ある特定の実施形態では、指定の配列またはＣＤＲ領域内の１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、５個以下の残基が変更される。
【０１７１】
交差競合する抗体
本開示の主題は、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＨＬＡ複合体（例えば、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＨＬＡクラスＩ複合体、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＨＬＡ−Ａ２複合体またはＦｏｘｐ３ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体）への結合に関して、本開示の主題の抗Ｆｏｘｐ３抗体またはその抗原結合性部分（例えば、ｓｃＦｖ）（例えば、ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、ＥＸＴ０１７−５５、ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３、ＥＸＴ０１９−８、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２、またはＥＸＴ０１８−４）のいずれかと交差競合し、約５×１０−７Ｍまたはそれ未満、例えば、約１×１０−７Ｍもしくはそれ未満、約５×１０−８Ｍもしくはそれ未満、約１×１０−８Ｍもしくはそれ未満、約５×１０−９Ｍもしくはそれ未満、約１×１０−９Ｍもしくはそれ未満、約５×１０−１０Ｍもしくはそれ未満、約１×１０−１０Ｍもしくはそれ未満、約５×１０−１１Ｍもしくはそれ未満または約１×１０−１１Ｍもしくはそれ未満の結合親和性（ＫＤ）で、Ｆｏｘｐ３ペプチドに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合性部分を提供する。交差競合する抗体またはその抗原結合性部分は、本明細書に記載されている抗Ｆｏｘｐ３抗体またはその抗原結合性部分のいずれかと同じエピトープ領域、例えば、同じエピトープ、隣接するエピトープまたは重複するエピトープに結合する。ある特定の実施形態では、交差競合する抗体またはその抗原結合性部分は、本明細書に記載されている抗Ｆｏｘｐ３抗体またはその抗原結合性部分のいずれかと、Ｆｏｘｐ３ペプチドにおける同じエピトープに結合する。
【０１７２】
斯かる交差競合する抗体は、標準Ｆｏｘｐ３結合アッセイにおいて、本開示の抗Ｆｏｘｐ３抗体またはその抗原結合性部分のいずれか１種と交差競合するその能力に基づき同定することができる。例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ解析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリを使用して、本開示の主題の抗体またはその抗原結合性部分との交差競合を実証することができる。例えば、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ（例えば、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ複合体、より具体的には、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡクラスＩ複合体、より具体的には、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ２複合体、より具体的には、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体）への、本開示の抗Ｆｏｘｐ３抗体またはその抗原結合性部分のいずれか１種の結合を阻害する被験抗体の能力は、被験抗体が、本開示の抗Ｆｏｘｐ３抗体またはその抗原結合性部分のいずれか１種と、斯かるＦｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体への結合に関して競合し得ることを実証する。
【０１７３】
抗原への抗体結合の特徴付け
本開示の主題の抗体は、例えば、標準ＥＬＩＳＡによって、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＨＬＡ複合体への結合に関して検査することができる。精製された抗体のアイソタイプを決定するために、アイソタイプＥＬＩＳＡは、特定のアイソタイプの抗体に特異的な試薬を使用して実行することができる。抗Ｆｏｘｐ３ヒトＩｇＧは、ウエスタンブロッティングにより、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体との反応性に関してさらに検査することができる。
【０１７４】
ある特定の実施形態では、ＫＤは、放射標識された抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。ある特定の実施形態では、ＲＩＡは、目的の抗体のＦａｂバージョンおよびその抗原により実行される。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、滴定系列の非標識抗原の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識された抗原によりＦａｂを平衡化し、続いて抗Ｆａｂ抗体コーティングされたプレートにより、結合した抗原を捕捉することによって測定される（例えば、Chenら、J.  Mol.  Biol.２９３巻：８６５〜８８１頁（１９９９年）を参照）。
【０１７５】
ある特定の実施形態では、ＫＤは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用したアッセイ。
【０１７６】
イムノコンジュゲート
本開示の主題は、細胞毒、薬物（例えば、免疫抑制薬）または放射性毒素等、治療用部分にコンジュゲートされた抗Ｆｏｘｐ３抗体またはその抗原結合性部分を提供する。斯かるコンジュゲートは、本明細書において、「イムノコンジュゲート」と称される。１種または複数の細胞毒を含むイムノコンジュゲートは、「免疫毒素」と称される。細胞毒または細胞傷害性薬剤は、細胞にとって有害な（例えば、これを死滅させる）いずれかの薬剤を含む。例として、タキソール（リシン、ジフテリア、ゲロニン等）、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド（tenoposide）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセン（anthracin）ジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロ（dehydro）テストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシン、ならびにこれらのアナログまたはホモログが挙げられる。治療剤は、例えば、カリチアマイシン（calecheamicin）、アレナスタチン（aureastatin）、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシル、ダカルバジン（decarbazine））、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ（thioepa）、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド（cyclothosphamide）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣおよびシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシンおよびアントラマイシン（ＡＭＣ））および有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）も含む。
【０１７７】
本明細書に開示されている抗Ｆｏｘｐ３抗体またはその抗原結合性部分にコンジュゲートすることができる治療用細胞毒の他の例として、デュオカルマイシン、カリチアマイシン、マイタンシンおよびオーリスタチンならびにこれらの誘導体が挙げられる。カリチアマイシン抗体コンジュゲートの例は、市販されている（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（商標）；Ｗｙｅｔｈ−Ａｙｅｒｓｔ）。
【０１７８】
細胞毒素（cytoxin）は、本技術分野で利用できるリンカー技術を使用して、本明細書に開示されている抗Ｆｏｘｐ３抗体またはその抗原結合性部分にコンジュゲートすることができる。抗体への細胞毒のコンジュゲートに使用されてきたリンカー型の例として、ヒドラゾン、チオエーテル、エステル、ジスルフィドおよびペプチド含有リンカーが挙げられるがこれらに限定されない。例えば、リソソーム区画内の低ｐＨによる切断に対し感受性を有する、またはカテプシン（例えば、カテプシンＢ、Ｃ、Ｄ）等、腫瘍組織において優先的に発現されるプロテアーゼ等、プロテアーゼによる切断に対し感受性を有する、リンカーを選択することができる。細胞毒、リンカーおよび治療剤を抗体にコンジュゲートするための方法の型のさらなる考察については、Saito,  G.ら（２００３年）Adv.  Drug  Deliv.  Rev.５５巻：１９９〜２１５頁；Trail,  P.A.ら（２００３年）Cancer  Immunol.  Immunother.５２巻：３２８〜３３７頁；Payne,  G.（２００３年）Cancer  Cell  ３巻：２０７〜２１２頁；Allen,  T.M.（２００２年）Nat.  Rev.  Cancer  ２巻：７５０〜７６３頁；Pastan,  I.およびKreitman,  R.  J.（２００２年）Curr.  Opin.  Investig.  Drugs  ３巻：１０８９〜１０９１頁；Senter,  P.D.およびSpringer,  C.J.（２００１年）Adv.  Drug  Deliv.  Rev.５３巻：２４７〜２６４頁も参照されたい。
【０１７９】
本開示の主題の抗Ｆｏｘｐ３抗体を放射性同位元素にコンジュゲートして、ラジオイムノコンジュゲートとも称される細胞傷害性放射性医薬品を生成することもできる。診断または治療目的の使用のための抗体にコンジュゲートすることができる放射性同位元素の例として、９０Ｙ、１３１Ｉ、２２５Ａｃ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、１７７Ｌｕおよび２２７Ｔｈが挙げられるがこれらに限定されない。ラジオイムノ（radioiimmun）コンジュゲートを調製するための方法は、本技術分野で確立されている。ラジオイムノコンジュゲートの例は市販されており、Ｚｅｖａｌｉｎ（商標）（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）およびＢｅｘｘａｒ（商標）（Ｃｏｒｉｘａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を含み、同様の方法を使用して、本発明の抗体を使用したラジオイムノコンジュゲートを調製することができる。
【０１８０】
本開示の主題の抗体コンジュゲートを使用して、所与の生物学的応答を修飾することができ、薬物部分は、古典的な化学的治療剤に限定されるものとして解釈するべきではない。例えば、薬物部分は、所望の生物学的活性を保有するタンパク質またはポリペプチドであり得る。斯かるタンパク質は、例えば、アブリン、リシンＡ、ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素もしくはジフテリア毒素等、酵素活性を有する毒素またはその活性断片；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）もしくはインターフェロン−γ等、タンパク質；または例えば、リンホカイン、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）もしくは他の増殖因子等、生物学的応答修飾因子を含むことができる。
【０１８１】
斯かる治療用部分を抗体にコンジュゲートするための技法は周知のものであり、例えば、Arnonら「Monoclonal  Antibodies  For  Immunotargeting  Of  Drugs  In  Cancer  Therapy」、Monoclonal  Antibodies  And  Cancer  Therapy内、Reisfeldら（編）２４３〜５６頁（Alan  R.  Liss,  Inc.  １９８５年）；Hellstromら「Antibodies  For  Drug  Delivery」、Controlled  Drug  Delivery（第２版）内、Robinsonら（編）６２３〜５３頁（Marcel  Dekker,  Inc.  １９８７年）；Thorpe「Antibody  Carriers  Of  Cytotoxic  Agents  In  Cancer  Therapy:  A  Review」、Monoclonal  Antibodies  '84:  Biological  And  Clinical  Applications内、Pincheraら（編）４７５〜５０６頁（１９８５年）；「Analysis,  Results,  And  Future  Prospective  Of  The  Therapeutic  Use  Of  Radiolabeled  Antibody  In  Cancer  Therapy」、Monoclonal  Antibodies  For  Cancer  Detection  And  Therapy内、Baldwinら（編）３０３〜１６頁（Academic  Press  １９８５年）およびThorpeら「The  Preparation  And  Cytotoxic  Properties  Of  Antibody-Toxin  Conjugates」、Immunol.  Rev.、６２巻：１１９〜５８頁（１９８２年）を参照されたい。
【０１８２】
二特異性分子
本開示の主題は、本明細書に開示されている抗Ｆｏｘｐ３抗体またはその抗原結合性部分を含む二特異性分子を提供する。本開示の主題の抗体またはその抗原結合性部分は、別の機能的分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質（例えば、別の抗体または受容体に対するリガンド）に誘導体化または連結して、少なくとも２種の異なる結合部位または標的分子に結合する二特異性分子を生成することができる。本開示の主題の抗体は、実際に、２個以上の他の機能的分子に誘導体化または連結して、３個以上の異なる結合部位および／または標的分子に結合する多特異性分子を生成することができる；斯かる多特異性分子も、本明細書における用語「二特異性分子」によって包含されることが企図される。二特異性分子を作製するために、本開示の抗Ｆｏｘｐ３抗体またはその抗原結合性部分は、二特異性分子が生じるように、別の抗体、抗体断片、ペプチドまたは結合ミメティック等、１種または複数の他の結合分子に機能的に連結することができる（例えば、化学的カップリング、遺伝的融合、非共有結合性会合またはそれ以外によって）。
【０１８３】
本開示の主題は、第１の標的エピトープまたは抗原に対する少なくとも１個の第１の結合特異性、および第２の標的エピトープまたは抗原に対する第２の結合特異性を含む二特異性分子を提供する。第２の標的エピトープまたは抗原は、第１のエピトープまたは抗原とは異なることができる。ある特定の実施形態では、二特異性分子は、多特異性であり、分子は、第３の結合特異性をさらに含むことができる。二特異性抗体の第１の部分が、例えば、腫瘍細胞における抗原に結合し、二特異性抗体の第２の部分が、ヒト免疫エフェクター細胞の表面における抗原を認識する場合、抗体は、ヒト免疫エフェクター細胞におけるエフェクター抗原に特異的に結合することにより、該エフェクター細胞の活性を動員することができる。ある特定の実施形態では、二特異性抗体は、したがって、エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞および腫瘍細胞の間に連結を形成し、これにより、エフェクター機能を増強することができる。
【０１８４】
本開示の主題の二特異性分子は、本技術分野で公知の方法を使用して構成物結合特異性をコンジュゲートすることにより調製することができる。例えば、二特異性分子の各結合特異性は、別々に生成し、次いで互いにコンジュゲートすることができる。結合特異性が、タンパク質またはペプチドである場合、種々のカップリングまたは架橋剤を、共有結合性コンジュゲーションに使用することができる。架橋剤の例として、プロテインＡ、カルボジイミド、Ｎ−サクシニミジル−Ｓ−アセチル−チオアセテート（ＳＡＴＡ）、５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）、ｏ−フェニレンジマレイミド（ｏＰＤＭ）、Ｎ−サクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）およびスルホサクシニミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン（cyclohaxane）−１−カルボキシレート（スルホ−ＳＭＣＣ）が挙げられる（例えば、Karpovskyら（１９８４年）J.  Exp.  Med.１６０巻：１６８６頁；Liu,  MAら（１９８５年）Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  ８２巻：８６４８頁を参照）。他の方法は、Paulus（１９８５年）Behring  Ins.Mitt.７８号、１１８〜１３２頁；Brennanら（１９８５年）Science  ２２９巻：８１〜８３頁）およびGlennieら（１９８７年）J.  Immunol.１３９巻：２３６７〜２３７５頁）に記載されているものを含む。好まれるコンジュゲート剤は、ＳＡＴＡおよびスルホ−ＳＭＣＣであり、両者共に、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）から入手できる。
【０１８５】
結合特異性は、抗体である場合、２本の重鎖のＣ末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合を介してコンジュゲートすることができる。非限定的な一実施形態では、ヒンジ領域は、コンジュゲーションに先立ち、奇数のスルフヒドリル残基、好ましくは、１個の残基を含有するように修飾される。
【０１８６】
あるいは、両方の結合特異性は、同じベクターにおいてコードされて、同じ宿主細胞において発現およびアセンブルされ得る。この方法は、二特異性分子が、ｍＡｂ×ｍＡｂ、ｍＡｂ×Ｆａｂ、Ｆａｂ×Ｆ（ａｂ’）２またはリガンド×Ｆａｂ融合タンパク質である場合に特に有用である。
【０１８７】
その特異的標的への二特異性分子の結合は、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＦＡＣＳ解析、バイオアッセイ（例えば、成長阻害）またはウエスタンブロットアッセイによって確認することができる。これらのアッセイのそれぞれは、一般に、目的の複合体に特異的な標識された試薬（例えば、抗体）を用いることにより、特に興味深いタンパク質−抗体複合体の存在を検出する。あるいは、複合体は、種々の他のイムノアッセイのいずれかを使用して検出することができる。例えば、抗体を放射性標識し、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）において使用することができる（例えば、参照により本明細書に組み込むWeintraub,  B.、Principles  of  Radioimmunoassays,  Seventh  Training  Course  on  Radioligand  Assay  Techniques、The  Endocrine  Society、１９８６年３月を参照）。放射性同位元素は、γカウンターもしくはシンチレーションカウンターの使用等の手段によりまたはオートラジオグラフィーにより検出することができる。
【０１８８】
ある特定の実施形態では、二特異性抗体は、Ｆｏｘｐ３／ＭＨＣ複合体、およびＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫ  Ｔ細胞、好中球、単球またはマクロファージにおける細胞表面タンパク質の両方を認識する。細胞表面タンパク質の非限定的な例として、ＣＤ３およびＣＤ１６が挙げられる。ある特定の実施形態では、二特異性抗体は、記載されている通り、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃにより、Ｆｏｘｐ３／ＭＨＣ複合体および免疫Ｔ細胞におけるＣＤ３の両方を認識する（Yanら、J.  Biol.  Chem.２０１０年；２８５巻：１９６３７〜１９６４６頁；Rossiら、Proc  Natl  Aca  Sci  USA  ２００６年；１０３巻：６８４１〜６頁）。二特異性抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＦｃエフェクター機能および長い半減期を維持しつつ、Ｆｏｘｐ３／ＭＨＣ陽性がん細胞へと細胞傷害性Ｔ細胞を動員および標的化する。３種の機構が、二特異性抗体によって媒介される、がん細胞の特異的死滅に関与する：ｉ）活性化されたＴ細胞による死滅；ｉｉ）ＡＤＣＣ活性；ｉｉｉ）ＣＤＣ活性。タンデムｓｃＦｖ分子（ｔａＦｖ）、ダイアボディ（Ｄｂ）または単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、およびヒト血清アルブミンとの融合タンパク質等、二特異性抗体の他のフォーマットを構築することができる（Ryutaroら、J  Biol  Chem  ２０１１年；２８６巻：１８１２〜１８１８頁；Anjaら、Blood  ２０００年；９５巻（６号）：２０９８〜２１０３頁；Weinerら、J.  Immunology  １９９４年；１５２巻（５号）：２３８５〜２３９２頁；Dafneら、J  Biol  Chem  ２００７年；２８２巻：１２６５０〜１２６６０頁）が、別個の薬物動態プロファイルによりＦｃエフェクター機能を欠いている。
【０１８９】
操作および修飾された抗体
本開示の主題の抗体は、修飾された抗体を操作するための出発材料として本明細書に開示されているＶＨおよび／またはＶＬ配列の１個または複数を有する抗体またはその抗原結合性部分を使用してさらに調製することができ、この修飾された抗体は、出発抗体から変更された特性を有することができる。抗体は、一方または両方の可変領域（すなわち、ＶＨおよび／またはＶＬ）内、例えば、１個もしくは複数のＣＤＲ領域内および／または１個もしくは複数のフレームワーク領域内の１個または複数の残基を修飾することにより操作することができる。その上またはそれに代えて、抗体は、定常領域（複数可）内の残基を修飾することにより操作して、例えば、抗体のエフェクター機能（複数可）を変更することができる。
【０１９０】
実行することができる可変領域操作の１型は、ＣＤＲグラフトである。抗体は、主に、６個の重鎖および軽鎖ＣＤＲに位置するアミノ酸残基を介して標的抗原と相互作用する。この理由から、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、個々の抗体間で、ＣＤＲの外側の配列よりも多様である。ＣＤＲ配列は、大部分の抗体−抗原相互作用の原因となるため、異なる特性を有する異なる抗体由来のフレームワーク配列にグラフトされた特異的な天然起源の抗体由来のＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することにより、特異的な天然起源の抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現することが可能である（例えば、Riechmann,  L.ら（１９９８年）Nature  ３３２巻：３２３〜３２７頁；Jones,  P.ら（１９８６年）Nature  ３２１巻：５２２〜５２５頁；Queen,  C.ら（１９８９年）Proc.  Natl.  Acad.を参照。U.S.A.８６巻：１００２９〜１００３３頁；米国特許第５，２２５，５３９号、Winterならびに米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６２号および同第６，１８０，３７０号、Queenらを参照）。
【０１９１】
フレームワーク配列は、生殖系列抗体遺伝子配列を含む、公開ＤＮＡデータベースまたは公表された参考文献から得ることができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子の生殖系列ＤＮＡ配列は、これらそれぞれの内容を明確に参照により本明細書に組み込む、ＩＭＧＴヒト生殖系列配列データベース（http://www.imgt.org/のインターネットで利用可）およびKabat,  E.  A.ら（１９９１年）Sequences  of  Proteins  of  Immunological  Interest、第５版、U.S.  Department  of  Health  and  Human  Services、ＮＩＨ出版番号９１−３２４２；Tomlinson,  I.  M.ら（１９９２年）「The  Repertoire  of  Human  Germline  VH  Sequences  Reveals  about  Fifty  Groups  of  VH  Segments  with  Different  Hypervariable  Loops」J.  Mol.  Biol.２２７巻：７７６〜７９８頁；およびCox,  J.  P.  L.ら（１９９４年）「A  Directory  of  Human  Germ-line  VH  Segments  Reveals  a  Strong  Bias  in  their  Usage」Eur.  J.  Immunol.２４巻：８２７〜８３６頁に見出すことができる。別の例として、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子の生殖系列ＤＮＡ配列は、ＧｅｎＢａｎｋデータベースに見出すことができる。
【０１９２】
ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列ならびにＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列は、フレームワーク配列が由来する生殖系列免疫グロブリン遺伝子に見出されるものと同一配列を有するフレームワーク領域にグラフトすることができる、またはＣＤＲ配列は、生殖系列配列と比較して１個または複数の突然変異を含有するフレームワーク領域にグラフトすることができる。例えば、場合によっては、フレームワーク領域内の残基を突然変異させて、抗体の抗原結合能力を維持または増強することが有益であることが見出された（例えば、米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６２号および同第６，１８０，３７０号、Queenらを参照）。
【０１９３】
可変領域修飾の別の型は、ＶＨおよび／またはＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を突然変異させて、これにより、目的の抗体の１種または複数の結合特性（例えば、親和性）を改善することである。部位特異的突然変異誘発またはＰＣＲ媒介性突然変異誘発を実行して、突然変異（複数可）を導入することができ、抗体結合または他の目的の機能特性における効果は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイにおいて評価することができる。好ましくは、保存的修飾（上に記す通り）が導入される。突然変異は、アミノ酸置換、付加または欠失であり得る。例えば、ＣＤＲ領域内の１、２、３、４または５個以下の残基が変更される。
【０１９４】
したがって、本開示の主題は、（ａ）本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合（bindingn）部分（例えば、ｓｃＦｖ）（例えば、＃９、＃１１、＃１７、＃１８、＃２０、＃２１、＃２６、＃２７、＃２８、＃３２、＃５３、＃５４、＃６、＃９、＃１２、＃１５または＃５）のＶＨ  ＣＤＲ１配列、または本明細書に開示されている抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか１種のＶＨ  ＣＤＲ１配列と比較して少なくとも１個の（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の）アミノ酸修飾（例えば、置換、欠失および／または付加）を有するアミノ酸配列；（ｂ）本明細書に開示されている抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか１種のＶＨ  ＣＤＲ２配列、または本明細書に開示されている抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか１種のＶＨ  ＣＤＲ２と比較して少なくとも１個の（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の）アミノ酸修飾（例えば、置換、欠失および／または付加）を有するアミノ酸配列；（ｃ）本明細書に開示されている抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか１種のＶＨ  ＣＤＲ３配列、または本明細書に開示されている抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか１種のＶＨ  ＣＤＲ３と比較して少なくとも１個の（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の）アミノ酸修飾（例えば、置換、欠失および／または付加）を有するアミノ酸配列；（ｄ）本明細書に開示されている抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか１種のＶＬ  ＣＤＲ１配列、または本明細書に開示されている抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか１種のＶＬ  ＣＤＲ１と比較して少なくとも１個の（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の）アミノ酸修飾（例えば、置換、欠失および／または付加）を有するアミノ酸配列；（ｅ）本明細書に開示されている抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか１種のＶＬ  ＣＤＲ２配列、または本明細書に開示されている抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか１種のＶＬ  ＣＤＲ２と比較して少なくとも１個の（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の）アミノ酸修飾（例えば、置換、欠失および／または付加）を有するアミノ酸配列；ならびに（ｆ）本明細書に開示されている抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか１種のＶＬ  ＣＤＲ３配列、または本明細書に開示されている抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか１種のＶＬ  ＣＤＲ３と比較して少なくとも１個の（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の）アミノ酸修飾（例えば、置換、欠失および／または付加）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗Ｆｏｘｐ３モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分を提供する。
【０１９５】
例えば、本開示の主題は、（ａ）配列番号９、１５、２１、２７、３３、３９、４５、５１、５７、６３、６９、７５、８１もしくは８７に表記されているアミノ酸配列、または配列番号９、１５、２１、２７、３３、３９、４５、５１、５７、６３、６９、７５、８１もしくは８７と比較して少なくとも１個の（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の）アミノ酸修飾（例えば、置換、欠失および／または付加）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号１０、１６、２２、２８、３４、４０、４６、５２、５８、６４、７０、７６、８２もしくは８８に表記されているアミノ酸配列、または配列番号１０、１６、２２、２８、３４、４０、４６、５２、５８、６４、７０、７６、８２もしくは８８と比較して少なくとも１個の（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の）アミノ酸修飾（例えば、置換、欠失および／または付加）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；（ｃ）配列番号１１、１７、２３、２９、３５、４１、４７、５３、５９、６５、７１、７７、８３もしくは８９に表記されているアミノ酸配列、または配列番号１１、１７、２３、２９、３５、４１、４７、５３、５９、６５、７１、７７、８３もしくは８９と比較して少なくとも１個の（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の）アミノ酸修飾（例えば、置換、欠失および／または付加）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；（ｄ）配列番号１２、１８、２４、３０、３６、４０、４２、４８、５４、６０、６６、７２、７８、８４もしくは９０に表記されているアミノ酸配列、または配列番号１２、１８、２４、３０、３６、４０、４２、４８、５４、６０、６６、７２、７８、８４もしくは９０と比較して少なくとも１個の（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の）アミノ酸修飾（例えば、置換、欠失および／または付加）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；（ｅ）配列番号１３、１９、２５、３１、３７、４３、４９、５５、６１、６７、７３、７９、８５もしくは９１に表記されているアミノ酸配列、または配列番号１３、１９、２５、３１、３７、４３、４９、５５、６１、６７、７３、７９、８５もしくは９１と比較して少なくとも１個の（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の）アミノ酸修飾（例えば、置換、欠失および／または付加）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および（ｆ）配列番号１４、２０、２６、３２、３８、４４、５０、５６、６２、６８、７４、８０、８６もしくは９２に表記されているアミノ酸配列、または配列番号１４、２０、２６、３２、３８、４４、５０、５６、６２、６８、７４、８０、８６もしくは９２と比較して少なくとも１個の（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の）アミノ酸修飾（例えば、置換、欠失および／または付加）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗Ｆｏｘｐ３モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分を提供する。
【０１９６】
本開示の主題の操作された抗体は、例えば、抗体の特性を改善するためにＶＨおよび／またはＶＫ内のフレームワーク残基に修飾が為された抗体を含む。典型的に、斯かるフレームワーク修飾は、抗体の免疫原性を減少させるために為される。例えば、アプローチの１種は、対応する生殖系列配列へと１個または複数のフレームワーク残基を「突然変異により戻す」ことである。より具体的には、体細胞突然変異を起こした抗体は、抗体が由来する生殖系列配列とは異なるフレームワーク残基を含有することができる。斯かる残基は、抗体フレームワーク配列を、抗体が由来する生殖系列配列と比較することにより同定することができる。
【０１９７】
フレームワーク修飾の別の型は、Ｔ細胞エピトープを除去して、これにより、抗体の潜在的免疫原性を低下させるために、フレームワーク領域内、さらには１個または複数のＣＤＲ領域内の１個または複数の残基を突然変異させることを伴う。このアプローチは、「脱免疫化」とも称され、Carrらによる米国特許出願公開第２００３０１５３０４３号にさらに詳細に記載されている。
【０１９８】
フレームワークまたはＣＤＲ領域内に為される修飾に加えてまたはそれに代えて、本開示の主題の抗Ｆｏｘｐ３抗体またはその抗原結合性部分は、典型的に、血清半減期、補体固定、Ｆｃ受容体結合および／または抗原依存性細胞性細胞傷害等、抗体の１種または複数の機能特性を変更するために、Ｆｃ領域内に修飾を含むように操作することができる。さらに、本開示の抗Ｆｏｘｐ３抗体は、化学修飾されていてよい（例えば、１個または複数の化学的部分が、抗体に取り付けられていてよい）、またはそのグリコシル化を変更し、重ねて、抗体の１種または複数の機能特性を変更するために修飾されていてよい。ヒンジ領域におけるシステイン残基の数が変更、例えば、増加または減少されるように、ＣＨ１のヒンジ領域は修飾されていてよい。このアプローチは、Bodmerらによる米国特許第５，６７７，４２５号にさらに記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域におけるシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖のアセンブリを容易にする、または抗体の安定性を増加もしくは減少させるように変更される。抗体のＦｃヒンジ領域は、抗体の生物学的半減期を減少させるように突然変異されていてよい。より具体的には、抗体が、ネイティブＦｃ−ヒンジドメインＳｐＡ結合と比べて損なわれたＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌプロテインＡ（ＳｐＡ）結合を有するように、１個または複数のアミノ酸突然変異が、Ｆｃ−ヒンジ断片のＣＨ２−ＣＨ３ドメイン界面領域に導入される。このアプローチは、Wardらによる米国特許第６，１６５，７４５号にさらに詳細に記載されている。抗体は、その生物学的半減期を増加させるように修飾されていてよく、例えば、抗体は、Prestaらによる米国特許第５，８６９，０４６号および同第６，１２１，０２２号に記載されている通り、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２個のループから採られたサルベージ受容体結合エピトープを含有するようにＣＨ１またはＣＬ領域内が変更されていてよい。さらに、Ｆｃ領域は、少なくとも１個のアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基に置き換えて、抗体のエフェクター機能（複数可）を変更することにより変更されていてよい。例えば、PrestaによるＷＯ００／４２０７２に記載されている通り、Ｆｃ領域は、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する抗体の能力を増加させるように、および／またはＦｃγ受容体に対する抗体の親和性を増加させるように修飾されていてよい。ある特定の実施形態では、本開示の抗Ｆｏｘｐ３抗体は、非フコシル化Ｆｃ領域を含む。免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃ部分のＮ−グリカンからのフコース残基の除去は、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）に対する親和性改善により、ＡＤＣＣの劇的な増強をもたらすことができる。
【０１９９】
その上またはそれに代えて、抗体のグリコシル化が修飾されていてよい。例えば、非グリコシル化（aglycoslated）抗体を作製することができる（すなわち、抗体は、グリコシル化を欠く）。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を増加させるように変更されていてよく、例えば、米国特許第５，７１４，３５０号および同第６，３５０，８６１号を参照されたい。斯かる炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内の１個または複数のグリコシル化部位を変更することにより達成することができる。例えば、１個または複数の可変領域フレームワークグリコシル化部位の排除をもたらす１個または複数のアミノ酸置換を為して、これにより、該部位におけるグリコシル化を排除することができる。
【０２００】
その上またはそれに代えて、低下した量のフコシル残基を有する低フコシル化抗体または増加した二分割ＧｌｃＮａｃ構造を有する抗体等、変更された型のグリコシル化を有する抗体を作製することができる。斯かる変更されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増加させることが実証された。斯かる炭水化物修飾は、例えば、変更されたグリコシル化機構を有する宿主細胞において抗体を発現させることにより達成することができる。
【０２０１】
抗体の別の修飾は、ペグ化であり得る。抗体は、例えば、抗体の生物学的（例えば、血清）半減期を増加させるためにペグ化されていてよい。抗体をペグ化するために、抗体またはその断片は典型的に、１個または複数のＰＥＧ基が抗体または抗体断片に取り付けられることになる条件下で、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体等、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応される。ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応により行うことができる。本明細書において、用語「ポリエチレングリコール」は、モノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ−もしくはアリールオキシ−ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミド等、他のタンパク質の誘導体化に使用されたＰＥＧの形態のいずれかを包含することが企図される。ペグ化されるべき抗体は、非グリコシル化抗体であり得る。タンパク質をペグ化するための方法は、本技術分野で公知であり、本明細書に開示されている抗体に適用することができ、例えば、ＥＰ０１５４３１６およびＥＰ０４０１３８４を参照されたい。
【０２０２】
ＩＩＩ．調製方法
１．ＭＨＣ分子への高い予測的結合を有するペプチドの同定
本開示の主題は、ペプチド／ＭＨＣ複合体の一部として提示される場合に特異的な細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘発することができる、ＭＨＣ拘束ペプチドに特異的に結合する抗体の生成のための方法を提供する。ＨＬＡクラスＩ分子は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球に対し、約８〜１２アミノ酸の長さの内在性由来ペプチドを提示する。本開示の方法において使用されるべきペプチドは一般に、約６〜２２アミノ酸の長さであり、一部の実施形態では、約９〜２０の間のアミノ酸（より具体的には、８〜１２の間のアミノ酸、例えば、９アミノ酸または１０アミノ酸）であり、目的のタンパク質、例えば、配列番号１（下に示すＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＢＱ１５２１０．１）またはそのアナログに表記されているアミノ酸配列を有するヒトＦｏｘｐ３タンパク質に由来するアミノ酸配列を含む。
【化３】
2019512207.tif 000009
【０２０３】
本開示の方法に従った抗体の生成における使用に適したペプチドは、当業者に公知のコンピュータ予測モデルを使用して、ＭＨＣ分子（例えば、ＨＬＡ分子、より具体的には、ＨＬＡクラスＩ分子、より具体的には、ＨＬＡ−Ａ、より具体的には、ＨＬＡ−Ａ２、より具体的には、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）結合モチーフならびにプロテアソームおよび免疫−プロテアソームのための切断部位の存在に基づき決定することができる。ＭＨＣクラスＩ結合部位を予測するため、斯かるモデルとして、ＰｒｏＰｒｅｄ１（SinghおよびRaghava、Bioinformatics  １７巻（１２号）：１２３６〜１２３７頁、２００１年により詳細に記載されている）、ＳＹＦＰＥＩＴＨＩ（Schulerら、Immunoinformatics  Methods  in  Molecular  Biology、４０９巻（１号）：７５〜９３頁、２００７年を参照）、Ｎｅｔ  ＭＨＣ（http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHC/）およびＢＩＭＡＳ（http://www-bimas.cit.nih.gov/cgi-bin/molbio/ken_parker_comboform）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２０４】
ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１は、全コーカサス人種の３９〜４６％において発現され、したがって、本方法における使用のためのＭＨＣ抗原の適した選択を表す。Ｆｏｘｐ３ペプチド抗原の一実施形態の同定のため、推定Ｆｏｘｐ３エピトープのアミノ酸配列およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１分子への予測される結合は、ＳＹＦＰＥＩＴＨＩデータベース（http://www.syfpeithi.de/；Schuler（２００７年）を参照）の予測アルゴリズムを使用して同定した。Ｆｏｘｐ３ペプチド抗原の一実施形態の同定のため、推定Ｆｏｘｐ３エピトープのアミノ酸配列およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１分子への予測される結合は、ＢＩＭＡＳ（http://www-bimas.cit.nih.gov/cgi-bin/molbio/ken_parker_comboform）の予測アルゴリズムを使用して同定した。Ｆｏｘｐ３ペプチド抗原の一実施形態の同定のため、推定Ｆｏｘｐ３エピトープのアミノ酸配列およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１分子への予測される結合は、ＲＡＮＫＰＥＰ（http://bio.dfci.harvard.edu/Tools/rankpep.html）の予測アルゴリズムを使用して同定した。
【０２０５】
適切なペプチドが同定されると、当業者に周知のプロトコールに従ってペプチド合成を行うことができる。その相対的に小さいサイズのため、本開示の主題のペプチドは、従来のペプチド合成技法に従って溶液中で、または固体支持体において直接的に合成することができる。様々な自動合成機が市販されており、公知のプロトコールに従って使用することができる。溶液相におけるペプチドの合成は、合成ペプチドの大規模産生のための十分に確立された手順になっており、それ自体、本発明のペプチドを調製するための適した代替方法である（例えば、Stewartら、Tetrahedron  Letters  ３９巻、１５１７〜１５２０頁、１９９８年を参照）。
【０２０６】
本明細書に記載されているプロトコールにおいて使用されるペプチドのそれぞれを購入し、Ｇｅｎｅｍｅｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｉｎｃ．（Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ、ＴＸ）によって合成した。ペプチドの品質は、高速液体クロマトグラフィー解析によって査定し、予想される分子量は、マトリックス支援レーザー脱離質量分析を使用して観察した。ペプチドは無菌であり、８０％〜＞９０％純粋である。ペプチドをＤＭＳＯに溶解し、５ｍｇ／ｍＬにて生理食塩水に希釈し、−８０℃で貯蔵した。
【０２０７】
ペプチド選択の後で、選択されたペプチドの結合活性は、抗原提示溝においてペプチドによって安定化されるとＨＬＡ−Ａの発現を増加させる、抗原プロセシング欠損Ｔ２細胞株を使用して検査される。簡潔に説明すると、Ｔ２細胞は、ＨＬＡ−Ａ発現の誘導に十分な時間、ペプチドをパルス適用される。次にＴ２細胞のＨＬＡ−Ａ発現は、ＨＬＡ−Ａに特異的な蛍光標識されたモノクローナル抗体（例えば、ＢＢ７．２）による免疫染色およびフローサイトメトリによって測定される。蛍光指数（ＦＩ）は、式、ＦＩ＝（ＭＦＩ［ペプチドありのＴ２細胞］／ＭＦＩ［ペプチドなしのＴ２細胞］−１を使用して、蛍光標識細胞分取解析によって決定される、Ｔ２細胞におけるＨＬＡ−Ａ＊０２：０１の平均蛍光強度（ＭＦＩ）として計算される。
【０２０８】
本明細書に開示されている方法を使用して、Ｆｏｘｐ３に対する完全ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）様抗体を産生した。ファージディスプレイ技術によって生成されたＴＣＲ様抗Ｆｏｘｐ３抗体は、ＨＬＡ制限細胞傷害性ＣＤ８  Ｔ細胞を誘導するものと同様に、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＨＬＡ複合体に特異的である。
【０２０９】
適したペプチドが同定されたら、ファージディスプレイライブラリースクリーニングに使用されるべき標的抗原、すなわち、ペプチド／ＭＨＣ複合体（例えば、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ複合体、例えば、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）が、溶液においてペプチドおよび組織適合性抗原を一体にまとめて、複合体を形成することにより調製される。
【０２１０】
２．Ｆｏｘｐ３ペプチドに対する高親和性ｓｃＦｖの選択
次のステップは、結合しないまたはより低い親和性で結合する、のいずれかであるヒトファージディスプレイライブラリーにおけるファージからの、高親和性で目的の標的抗原に結合するファージの選択である。これは、固体支持体、例えば、ビーズまたは哺乳動物細胞に結合した抗原へのファージの結合と、続く結合していないファージの除去および特異的に結合したファージの溶出の反復によって達成される。ある特定の実施形態では、抗原はまず、例えば、ストレプトアビジンコンジュゲートされたＤｙｎａｂｅａｄｓ  Ｍ−２８０への固定化のためにビオチン化される。ファージライブラリーが、細胞、ビーズまたは他の固体支持体と共にインキュベートされ、非結合ファージが、洗浄によって除去される。結合するクローンが選択され、検査される。
【０２１１】
選択されると、陽性ｓｃＦｖクローンは、間接的フローサイトメトリによって、生きているＴ２細胞表面におけるＨＬＡ−Ａ２／ペプチド複合体へのその結合に関して検査される。簡潔に説明すると、ファージクローンは、Ｆｏｘｐ３ペプチドまたは無関係ペプチド（対照）をパルス適用されたＴ２細胞と共にインキュベートされる。細胞が洗浄され、次いでマウス抗Ｍ１３コーティングタンパク質ｍＡｂと共にインキュベートされる。細胞が再度洗浄され、フローサイトメトリに先立ちＦＩＴＣ−ヤギ（Ｆａｂ）２抗マウスＩｇで標識される。
【０２１２】
他の実施形態では、抗Ｆｏｘｐ３抗体は、タンパク質安定性、抗体結合、発現レベルを改善するように、または治療剤のコンジュゲーションのための部位を導入するように設計された、１個または複数のフレームワーク領域アミノ酸置換を含むことができる。次いでこのようなｓｃＦｖは、当業者に公知の方法に従って組換えヒトモノクローナルＩｇの産生に使用される。
【０２１３】
本開示のＦｏｘｐ３抗体と白血病細胞とを接触させるステップを含む、白血病細胞の増殖を低下させるための方法も含まれる。関連する態様では、本開示の抗体は、白血病の防止または処置に使用することができる。治療用抗体の投与は、本技術分野で公知である。
【０２１４】
ＩＶ．キメラ抗原受容体
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、免疫エフェクター細胞に目的の特異性をグラフトまたは付与する、操作された受容体である。ＣＡＲを使用して、Ｔ細胞にモノクローナル抗体の特異性をグラフトすることができ；そのコード配列の移入は、レトロウイルスベクターによって容易になる。
【０２１５】
３世代のＣＡＲが存在する。「第一世代」ＣＡＲは典型的に、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、Ｔ細胞受容体鎖の細胞質／細胞内ドメインに融合された、膜貫通ドメインに融合されたｓｃＦｖ）で構成されている。「第一世代」ＣＡＲは典型的に、内在性ＴＣＲからのシグナルの一次伝達物質であるＣＤ３ξ−鎖由来の細胞内ドメインを有する。「第一世代」ＣＡＲは、ｄｅ  ｎｏｖｏ抗原認識を提供し、ＨＬＡ媒介性抗原提示に依存しない、単一の融合分子におけるそのＣＤ３ζ鎖シグナル伝達ドメインを介して、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞の両方の活性化を引き起こすことができる。「第二世代」ＣＡＲは、様々な同時刺激分子（例えば、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０）由来の細胞内ドメインを、ＣＡＲの細胞質テイルに付加して、Ｔ細胞に追加的なシグナルをもたらす。「第二世代」ＣＡＲは、同時刺激（例えば、ＣＤ２８または４−１ＢＢ）および活性化（ＣＤ３ζ）の両方をもたらすＣＡＲを含む。前臨床試験は、「第二世代」ＣＡＲが、Ｔ細胞の抗腫瘍活性を改善し得ることを示した。例えば、「第二世代」ＣＡＲ修飾されたＴ細胞の頑強な有効性は、慢性リンパ芽球性白血病（ＣＬＬ）および急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の患者におけるＣＤ１９分子を標的とする臨床治験において実証された。「第三世代」ＣＡＲは、複数の同時刺激（例えば、ＣＤ２８および４−１ＢＢ）および活性化（ＣＤ３ζ）をもたらすＣＡＲを含む。
【０２１６】
本開示の主題に従って、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含み、細胞外抗原結合ドメインは、ＭＨＣ分子（例えば、ＨＬＡ分子、より具体的には、ＨＬＡクラスＩ分子）に結合したＦｏｘｐ３ペプチドに結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、ヒトｓｃＦｖである。ｓｃＦｖの非限定的な例として、ＥＸＴ０１７−５、ＥＸＴ０１７−９、ＥＸＴ０１７−１０、ＥＸＴ０１７−１１、ＥＸＴ０１７−１７、ＥＸＴ０１７−１８、ＥＸＴ０１７−２０、ＥＸＴ０１７−２１、ＥＸＴ０１７−２３、ＥＸＴ０１７−２４、ＥＸＴ０１７−２５、ＥＸＴ０１７−２６、ＥＸＴ０１７−２７、ＥＸＴ０１７−２８、ＥＸＴ０１７−２９、ＥＸＴ０１７−３０、ＥＸＴ０１７−３２、ＥＸＴ０１７−３４、ＥＸＴ０１７−５３、ＥＸＴ０１７−５４、ＥＸＴ０１７−５５  ＥＸＴ０１９−６、ＥＸＴ０１９−１２、ＥＸＴ０１９−９、ＥＸＴ０１９−１５、ＥＸＴ０１９−２０、ＥＸＴ０１９−４、ＥＸＴ０１９−１３、ＥＸＴ０１９−８、ＥＸＴ０１８−５、ＥＸＴ０１８−２、およびＥＸＴ０１８−４が挙げられる。
【０２１７】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、任意選択で架橋されたＦａｂである。ある特定の実施形態では、細胞外結合ドメインは、Ｆ（ａｂ）２である。ある特定の実施形態では、前述の分子のいずれかが、異種配列との融合タンパク質に含まれて、細胞外抗原結合ドメインを形成することができる。
【０２１８】
ある特定の非限定的な実施形態では、本開示のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、細胞外抗原結合ドメインの重鎖可変領域および軽鎖可変領域を接続するリンカーを含むことができる。本明細書において、用語「リンカー」は、互いに接続されるように、２個またはそれよりも多いポリペプチドまたは核酸を共有結合により取り付ける官能基（例えば、化学物質またはポリペプチド）を指す。本明細書において、「ペプチドリンカー」は、２個のタンパク質の一体的なカップリング（例えば、ＶＨおよびＶＬドメインのカップリング）に使用される１個または複数のアミノ酸を指す。ある特定の（certian）実施形態では、リンカーは、下に示す配列番号１３５に表記されている配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、配列番号１３５のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列は、下に示す配列番号１３６に表記されている。
【化４】
2019512207.tif 000010
【０２１９】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７もしくは１１９に表記されているアミノ酸配列、または配列番号９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７もしくは１１９に対し少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに配列番号９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６および１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８もしくは１２０に表記されているアミノ酸配列、または配列番号９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６および１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８もしくは１２０に対し少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬ、ならびに任意選択で、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカーを含むｓｃＦｖである。
【０２２０】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、（ａ）配列番号９、１５、２１、２７、３３、３９、４５、５１、５７、６３、６９、７５、８１もしくは８７に表記されているアミノ酸配列、または配列番号９、１５、２１、２７、３３、３９、４５、５１、５７、６３、６９、７５、８１もしくは８７と比較して少なくとも１個の（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の）アミノ酸修飾（例えば、置換、欠失および／または付加）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号１０、１６、２２、２８、３４、４０、４６、５２、５８、６４、７０、７６、８２もしくは８８に表記されているアミノ酸配列、または配列番号１０、１６、２２、２８、３４、４０、４６、５２、５８、６４、７０、７６、８２もしくは８８と比較して少なくとも１個の（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の）アミノ酸修飾（例えば、置換、欠失および／または付加）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；（ｃ）配列番号１１、１７、２３、２９、３５、４１、４７、５３、５９、６５、７１、７７、８３もしくは８９に表記されているアミノ酸配列、または配列番号１１、１７、２３、２９、３５、４１、４７、５３、５９、６５、７１、７７、８３もしくは８９と比較して少なくとも１個の（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の）アミノ酸修飾（例えば、置換、欠失および／または付加）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；（ｄ）配列番号１２、１８、２４、３０、３６、４０、４２、４８、５４、６０、６６、７２、７８、８４もしくは９０に表記されているアミノ酸配列、または配列番号１２、１８、２４、３０、３６、４０、４２、４８、５４、６０、６６、７２、７８、８４もしくは９０と比較して少なくとも１個の（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の）アミノ酸修飾（例えば、置換、欠失および／または付加）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；（ｅ）配列番号１３、１９、２５、３１、３７、４３、４９、５５、６１、６７、７３、７９、８５もしくは９１に表記されているアミノ酸配列、または配列番号１３、１９、２５、３１、３７、４３、４９、５５、６１、６７、７３、７９、８５もしくは９１と比較して少なくとも１個の（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の）アミノ酸修飾（例えば、置換、欠失および／または付加）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および（ｆ）配列番号１４、２０、２６、３２、３８、４４、５０、５６、６２、６８、７４、８０、８６もしくは９２に表記されているアミノ酸配列、または配列番号１４、２０、２６、３２、３８、４４、５０、５６、６２、６８、７４、８０、８６もしくは９２と比較して少なくとも１個の（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の）アミノ酸修飾（例えば、置換、欠失および／または付加）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域、ならびに任意選択で、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカーを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｈｉｓ−タグおよびＨＡ−タグをさらに含む。ある特定の実施形態では、Ｈｉｓ−タグおよびＨＡ−タグのアミノ酸配列は、下に示す配列番号１４１のアミノ酸配列を含む。配列番号１４１をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１４２である。
【化５】
2019512207.tif 000011
【０２２１】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３および１３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖである。
【０２２２】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９３に表記されているアミノ酸配列または配列番号９３に対し少なくとも８０％相同（homolgous）であるアミノ酸配列を含むＶＨ、配列番号９４に表記されているアミノ酸配列または配列番号９４に対し少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬ、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１２１に表記されているアミノ酸配列を含む。
【０２２３】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９５に表記されているアミノ酸配列または配列番号９５に対し少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨ、配列番号９６に表記されているアミノ酸配列または配列番号９６に対し少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬ、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１２２に表記されているアミノ酸配列を含む。
【０２２４】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７に表記されているアミノ酸配列または配列番号９７に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨ、配列番号９８に表記されているアミノ酸配列または配列番号９８に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬ、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１２３に表記されているアミノ酸配列を含む。
【０２２５】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９９に表記されているアミノ酸配列または配列番号９９に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨ、配列番号１００に表記されているアミノ酸配列または配列番号１００に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬ、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１２４に表記されているアミノ酸配列を含む。
【０２２６】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０１に表記されているアミノ酸配列または配列番号１０１に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨ、配列番号１０２に表記されているアミノ酸配列または配列番号１０２に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬ、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３４に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３７に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１２５に表記されているアミノ酸配列を含む。
【０２２７】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０３に表記されているアミノ酸配列または配列番号１０３に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨ、配列番号１０４に表記されているアミノ酸配列または配列番号１０４に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬ、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号４４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１２６に表記されているアミノ酸配列を含む。
【０２２８】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０５に表記されているアミノ酸配列または配列番号１０５に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨ、配列番号１０６に表記されているアミノ酸配列または配列番号１０６に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬ、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号５０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１２７に表記されているアミノ酸配列を含む。
【０２２９】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０７に表記されているアミノ酸配列または配列番号１０７に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨ、配列番号１０８に表記されているアミノ酸配列または配列番号１０８に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬ、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号５６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１２８に表記されているアミノ酸配列を含む。
【０２３０】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０９に表記されているアミノ酸配列または配列番号１０９に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨ、配列番号１１０に表記されているアミノ酸配列または配列番号１１０に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬ、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号６２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１２９に表記されているアミノ酸配列を含む。
【０２３１】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１１１に表記されているアミノ酸配列または配列番号１１１に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨ、配列番号１１２に表記されているアミノ酸配列または配列番号１１２に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬ、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６４に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号６５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６７に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号６８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３０に表記されているアミノ酸配列を含む。
【０２３２】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１１３に表記されているアミノ酸配列または配列番号１１３に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨ、配列番号１１４に表記されているアミノ酸配列または配列番号１１４に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬ、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号７１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号７２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３１に表記されているアミノ酸配列を含む。
【０２３３】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１１５に表記されているアミノ酸配列または配列番号１１５に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨ、配列番号１１６に表記されているアミノ酸配列または配列番号１１６に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬ、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号７７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号７８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３２に表記されているアミノ酸配列を含む。
【０２３４】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１１７に表記されているアミノ酸配列または配列番号１１７に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨ、配列番号１１８に表記されているアミノ酸配列または配列番号１１８に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬ、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号８３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号８４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３３に表記されているアミノ酸配列を含む。
【０２３５】
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１１９に表記されているアミノ酸配列または配列番号１１９に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＨ、配列番号１２０に表記されているアミノ酸配列または配列番号１２０に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含むＶＬ、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号８９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号９０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号９１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号９２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含むリンカー、ならびに配列番号１４１に表記されているアミノ酸配列を含むＨｉｓ−タグおよびＨＡ−タグを含む、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３４に表記されているアミノ酸配列を含む。
【０２３６】
加えて、細胞外抗原結合ドメインは、新生タンパク質を小胞体へと方向づけるリーダーまたはシグナルペプチドを含むことができる。ＣＡＲがグリコシル化され細胞膜に繋留されるべきである場合、シグナルペプチドまたはリーダーは必須となることがある。シグナル配列またはリーダーは、分泌経路へのその進入を方向づける、新たに合成されたタンパク質のＮ末端に存在するペプチド配列（約５、約１０、約１５、約２０、約２５または約３０アミノ酸長）であり得る。非限定的な例では、シグナルペプチドは、細胞外抗原結合ドメインの５’末端に共有結合により接合される。
【０２３７】
ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、膜の少なくとも部分にまたがる疎水性アルファヘリックスを含む。異なる膜貫通ドメインは、異なる受容体安定性をもたらす。抗原認識後に、受容体はクラスター形成し、シグナルが細胞へと伝達される。本開示の主題に従って、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４−１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＣＴＬＡ−４ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド、ＬＡＧ−３ポリペプチド、２Ｂ４ポリペプチド、ＢＴＬＡポリペプチド、合成ペプチド（免疫応答に関連するタンパク質に基づかない）またはこれらの組合せを含むことができる。
【０２３８】
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチドを含む。
【０２３９】
ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの細胞内ドメインは、細胞（例えば、リンパ系系列の細胞、例えば、Ｔ細胞）を活性化または刺激することができる、ＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）ポリペプチドを含むことができる。ＣＤ３ζは、３個のＩＴＡＭを含み、抗原が結合した後に、細胞（例えば、リンパ系系列の細胞、例えば、Ｔ細胞）へと活性化シグナルを伝達する。ＣＤ３ζポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿９３２１７０（配列番号１３７）を有する配列またはその断片に対し少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％相同であるアミノ酸配列を有することができ、および／または最大１または最大２または最大３個の保存的アミノ酸置換を任意選択で含むことができる。非限定的な実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、少なくとも２０または少なくとも３０または少なくとも４０または少なくとも５０および最大１６４アミノ酸の長さである、配列番号１３７の連続した部分であるアミノ酸配列を有することができる。それに代えてまたはその上、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号１３７のアミノ酸１〜１６４、１〜５０、５０〜１００、１００〜１５０または１５０〜１６４のアミノ酸配列を有する。ある特定の実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号１３７のアミノ酸５２〜１２１のアミノ酸配列を有する。
【０２４０】
配列番号１３７を下に示す：
【化６】
2019512207.tif 000012
【０２４１】
ある特定の実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、下に示す配列番号１３８に表記されているアミノ酸配列を有する。
【化７】
2019512207.tif 000013
【０２４２】
ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの細胞内ドメインは、最適なリンパ球活性化をもたらすことができる、少なくとも１個の同時刺激分子を含む少なくとも１個の同時刺激シグナル伝達領域をさらに含む。本明細書において、「同時刺激分子」は、抗原に対するリンパ球の効率的応答に要求される、抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子を指す。少なくとも１個の同時刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８ポリペプチド、４−１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、合成ペプチド（免疫応答に関連するタンパク質に基づかない）またはこれらの組合せを含むことができる。同時刺激分子は、その受容体への結合後に、同時刺激応答、すなわち、抗原がそのＣＡＲ分子に結合する際にもたらされる刺激を引き起こす細胞内応答を生じる、細胞表面に発現されるタンパク質である、同時刺激リガンドに結合することができる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドを含む同時刺激シグナル伝達領域を含む。非限定的な一実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８膜貫通ドメインおよびＣＤ２８同時刺激シグナル伝達ドメインを含み、膜貫通ドメインおよび同時刺激シグナル伝達領域に含まれるＣＤ２８ポリペプチドは、下に示す配列番号１３９に表記されているアミノ酸配列を有する。
【化８】
2019512207.tif 000014
【０２４３】
加えて、本開示の主題は、本開示のＣＡＲを発現する免疫応答性細胞を提供する。免疫応答性細胞は、細胞がＣＡＲを発現するように、本開示のＣＡＲにより形質導入することができる。本開示の主題は、腫瘍またはＦｏｘｐ３関連病的状態の処置のための斯かる細胞を使用する方法も提供する。本開示の主題の免疫応答性細胞は、リンパ系系列の細胞であり得る。Ｂ、Ｔおよびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含むリンパ系系列は、抗体の産生、細胞免疫系の調節、血液中の異質物質の検出、宿主にとって異物である細胞の検出、その他をもたらす。リンパ系系列の免疫応答性細胞の非限定的な例として、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、胚性幹細胞および多能性幹細胞（例えば、リンパ系細胞を分化させることができる細胞）が挙げられる。
【０２４４】
ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、Ｔ細胞である。Ｔ細胞は、胸腺において成熟し、主に細胞媒介性免疫の原因となる、リンパ球であり得る。Ｔ細胞は、適応免疫系に関与する。本開示の主題のＴ細胞は、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞（セントラルメモリーＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞（またはステム様メモリーＴ細胞）および２型のエフェクターメモリーＴ細胞：例えば、ＴＥＭ細胞およびＴＥＭＲＡ細胞を含む）、調節性Ｔ細胞（サプレッサーＴ細胞としても公知）、ナチュラルキラーＴ細胞、粘膜関連インバリアントＴ細胞およびγδＴ細胞が挙げられるがこれらに限定されない、いずれかの型のＴ細胞であり得る。細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬまたはキラーＴ細胞）は、感染した体細胞または腫瘍細胞の死を誘導することができるＴリンパ球のサブセットである。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ発現Ｔ細胞は、Ｆｏｘｐ３を発現して、Ｔ調節性表現型を達成および維持する。
【０２４５】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、細胞媒介性免疫の一部であるリンパ球であり得、自然免疫応答において作用する。ＮＫ細胞は、標的細胞におけるその細胞傷害性効果を発揮するために、事前の活性化を要求しない。
【０２４６】
免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の遺伝的修飾は、組換えＤＮＡまたはＲＮＡ構築物により実質的に均一な細胞組成を形質導入することにより達成することができる。ベクターは、宿主細胞ゲノムへのＤＮＡまたはＲＮＡ構築物の導入に用いられるレトロウイルスベクター（例えば、ガンマレトロウイルス）であり得る。例えば、本開示のＣＡＲをコードするポリヌクレオチドは、レトロウイルスベクターにクローニングすることができ、発現は、その内在性プロモーター、レトロウイルス末端反復配列または代替内部プロモーターから駆動することができる。
【０２４７】
非ウイルスベクターまたはＲＮＡを同様に使用することができる。ランダム染色体組込みまたは標的化組込み（例えば、ヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）および／またはクラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）を使用した）または導入遺伝子発現（例えば、天然または化学修飾されたＲＮＡを使用した）を使用することができる。
【０２４８】
本開示のＣＡＲを発現する細胞をもたらすための細胞の初期遺伝的修飾のため、レトロウイルスベクターが一般に形質導入に用いられるが、他のいずれかの適したウイルスベクターまたは非ウイルス送達系を使用することができる。少なくとも２個の同時刺激リガンドを含む抗原提示複合体を含む細胞をもたらすための細胞のその後の遺伝的修飾のため、レトロウイルス遺伝子移入（形質導入）は同様に有効であると判明する。レトロウイルスベクターおよび適切なパッケージングラインの組合せも適しており、カプシドタンパク質は、ヒト細胞の感染に機能的となるであろう。様々な両種指向性ウイルス産生細胞株が公知であり、ＰＡ１２（Millerら（１９８５年）Mol.  Cell.  Biol.５巻：４３１〜４３７頁）；ＰＡ３１７（Millerら（１９８６年）Mol.  Cell.  Biol.６巻：２８９５〜２９０２頁）；およびＣＲＩＰ（Danosら（１９８８年）Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  ８５巻：６４６０〜６４６４頁）が挙げられるがこれらに限定されない。非両種指向性粒子、例えば、ＶＳＶＧ、ＲＤ１１４またはＧＡＬＶエンベロープによりシュードタイピングされた粒子および本技術分野で公知のその他も適している。
【０２４９】
可能な形質導入方法は、例えば、Bregniら（１９９２年）Blood  ８０巻：１４１８〜１４２２頁の方法による、産生株細胞と細胞との直接的共培養、または例えば、Xuら（１９９４年）Exp.  Hemat.２２巻：２２３〜２３０頁；およびHughesら（１９９２年）J.  Clin.  Invest.８９巻：１８１７頁の方法による、ウイルス上清単独または適切な増殖因子およびポリカチオンありもしくはなしでの濃縮されたベクターストックとの培養も含む。
【０２５０】
非ウイルスアプローチを、細胞におけるタンパク質の発現に用いることもできる。例えば、核酸分子は、リポフェクション（Feignerら、Proc.  Nat!.  Acad.  Sci.  U.S.A.８４巻：７４１３頁、１９８７年；Onoら、Neuroscience  Letters  １７巻：２５９頁、１９９０年；Brighamら、Am.  J.  Med.  Sci.２９８巻：２７８頁、１９８９年；Staubingerら、Methods  in  Enzymology  １０１巻：５１２頁、１９８３年）、アシアロオロソムコイド−ポリリジンコンジュゲーション（Wuら、Journal  of  Biological  Chemistry  ２６３巻：１４６２１頁、１９８８年；Wuら、Journal  of  Biological  Chemistry  ２６４巻：１６９８５頁、１９８９年）の存在下で、または外科的条件下でのマイクロインジェクションにより（Wolffら、Science  ２４７巻：１４６５頁、１９９０年）核酸を投与することにより、細胞に導入することができる。遺伝子移入のための他の非ウイルス手段は、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥデキストラン、エレクトロポレーションおよびプロトプラスト融合を使用した、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのトランスフェクションを含む。リポソームは、細胞へのＤＮＡの送達にとって潜在的に有益となることもできる。対象の罹患組織への正常遺伝子の移植は、ｅｘ  ｖｉｖｏで培養可能細胞型（例えば、自家もしくは異種初代細胞またはその後代）に正常核酸を移入し、その後に、細胞（またはその子孫）を標的化組織に注射または全身性注射することにより達成することもできる。組換え受容体は、トランスポサーゼまたは標的化ヌクレアーゼ（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼまたはＴＡＬＥヌクレアーゼ）を使用して派生または得ることもできる。ＲＮＡエレクトロポレーションによって一過性発現を得ることができる。
【０２５１】
ポリヌクレオチド治療方法における使用のためのｃＤＮＡ発現は、いずれか適したプロモーター（例えば、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、サルウイルス４０（ＳＶ４０）またはメタロチオネインプロモーター）から方向づけ、いずれか適切な哺乳動物調節エレメントまたはイントロン（例えば、伸長因子１αエンハンサー／プロモーター／イントロン構造）によって調節することができる。例えば、必要に応じて、特異的な細胞型における遺伝子発現を優先的に方向づけることが公知のエンハンサーは、核酸の発現を方向づけるために使用することができる。使用されるエンハンサーは、組織または細胞特異的エンハンサーとして特徴付けられるエンハンサーを限定することなく含むことができる。あるいは、ゲノムクローンが治療用構築物として使用される場合、調節は、上述のプロモーターまたは調節エレメントのいずれかを含む、同族調節配列または必要に応じて、異種供給源に由来する調節配列によって媒介され得る。
【０２５２】
その結果得られる細胞は、無修飾細胞のための条件と同様の条件下で育成することができ、それによって、修飾された細胞を増やし、種々の目的に使用することができる。
【０２５３】
Ｖ．医薬組成物および使用方法
本開示の主題の抗体（本明細書に開示されている二特異性抗体および操作された抗体を含む）およびそれを含む組成物、抗原結合性タンパク質（ＣＡＲを含む）およびそれを含む組成物、ならびにイムノコンジュゲートおよびそれを含む組成物を使用して、Ｆｏｘｐ３発現細胞を死滅させることができる。本開示の主題の抗体（本明細書に開示されている二特異性抗体および操作された抗体を含む）およびそれを含む組成物、抗原結合性タンパク質（ＣＡＲを含む）およびそれを含む組成物、ならびにイムノコンジュゲートおよびそれを含む組成物を使用して、対象における免疫応答を誘導することができる。さらに、本開示の主題の抗体（本明細書に開示されている二特異性抗体および操作された抗体を含む）およびそれを含む組成物、抗原結合性タンパク質（ＣＡＲを含む）およびそれを含む組成物、ならびにイムノコンジュゲートおよびそれを含む組成物を使用して、ある特定のＴ細胞、例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せ、例えば、調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞を選択的に阻害（例えば、不活性化、増殖（proflieration）阻害または死滅）することができる。Ｆｏｘｐ３は、Ｔｒｅｇ機能における立役者として同定されており、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋  Ｔｒｅｇ細胞の最も決定的なマーカーである。本開示の抗体および抗原結合性タンパク質は、Ｔｒｅｇ細胞を特異的に標的とし、Ｔｒｅｇ細胞を選択的に阻害する。ある特定の実施形態では、方法は、本開示の抗体または抗原結合性タンパク質を対象に投与するステップを含む。本開示の主題の抗体および抗原結合性タンパク質は、Ｔ細胞（例えば、Ｔｒｅｇ）の数を低下させる、Ｔ細胞（例えば、Ｔｒｅｇ）を枯渇させる、Ｔ細胞（例えば、Ｔｒｅｇ）の免疫抑制活性を阻害する、リンパ節もしくは腫瘍へのＴ細胞（例えば、Ｔｒｅｇ）輸送を遮断する、Ｔ細胞（例えば、Ｔｒｅｇ）を阻害する（不活性化および／または死滅させる）；および／またはがん細胞の死を誘導することができる。
【０２５４】
その上、本開示の抗体（本明細書に開示されている二特異性抗体および操作された抗体を含む）もしくはそれを含む組成物、抗原結合性タンパク質（ＣＡＲを含む）もしくはそれを含む組成物、またはイムノコンジュゲートもしくはそれを含む組成物を使用して、がんを処置することができる。大部分の腫瘍関連抗原は、免疫療法後に弱い天然または誘導されたＴ細胞応答を誘発する、自己タンパク質である。Ｔｒｅｇ細胞は、腫瘍関連自己抗原を認識し、様々ながん抗原に対するＴ細胞応答を制御することができることが示されてきた。ある特定の実施形態では、方法は、本開示の抗体（本明細書に開示されている二特異性抗体および操作された抗体を含む）もしくはそれを含む組成物、抗原結合性タンパク質（ＣＡＲを含む）もしくはそれを含む組成物、またはイムノコンジュゲートもしくはそれを含む組成物を、がんを患う対象に投与し、これにより、対象におけるがん細胞の死を誘導するステップを含む。ある特定の実施形態では、がん細胞は、Ｆｏｘｐ３を発現する。ある特定の実施形態では、本開示の抗体（本明細書に開示されている二特異性抗体および操作された抗体を含む）もしくはそれを含む組成物、抗原結合性タンパク質（ＣＡＲを含む）もしくはそれを含む組成物、またはイムノコンジュゲートもしくはそれを含む組成物は、がんまたは腫瘍の防止、阻害または進行低下に十分な量で、対象に投与される。進行は、例えば、がんまたは腫瘍の成長、侵襲性、転移および／または再発を含む。この使用に有効な量は、疾患の重症度および患者自身の免疫系の全般的状況に依存するであろう。投薬スケジュールは、患者の疾患状況および状態によっても変動するであろうし、典型的に、１日当たり単一ボーラス投薬量または持続注入から、複数投与（例えば、４〜６時間毎）に及ぶであろう、または処置担当医師および患者の状態によって指示される通りである。
【０２５５】
本開示の主題の抗体（本明細書に開示されている二特異性抗体および操作された抗体を含む）およびそれを含む組成物、抗原結合性タンパク質（ＣＡＲを含む）およびそれを含む組成物、ならびにイムノコンジュゲートおよびそれを含む組成物によって処置可能な医学的状態の同定は、十分に、当業者の能力および知識の範囲内である。本技術分野の技能を有する臨床医は、例えば、臨床検査、身体検査および病歴／家族歴の使用によって、個体が斯かる処置の候補であるか直ちに決定することができる。
【０２５６】
がんの非限定的な例として、メラノーマ、卵巣がん、乳がん、肺がん、膵がん、胃がん、結腸がん、神経膠芽腫、腎臓がん、肝臓がん、リンパ腫、白血病、骨髄腫および肉腫が挙げられるがこれらに限定されない、様々な固形腫瘍が挙げられる。
【０２５７】
抗がん免疫療法は、随伴的なＴｒｅｇ遮断によって改善され得る。ある特定の実施形態では、がん対象は、１種または複数の抗がん免疫療法を受けるまたは受けたことがある。抗がん免疫療法の非限定的な例として、抗体療法、細胞療法（Ｔ細胞、ＮＫ細胞等）、ＣＡＲ療法、骨髄移植およびドナー白血球注入、免疫Ｔ細胞調節療法（免疫チェックポイント療法、例えば、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体および抗ＣＤ４７抗体）およびワクチン接種に基づく薬物、ならびにこれらのバリアントが挙げられる。ある特定の実施形態では、方法は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体および抗ＣＤ４７抗体が挙げられるがこれらに限定されない、１種または複数の他の薬剤と組み合わせた、本開示のＦｏｘｐ３抗体（二特異性抗体および操作された抗体を含む）もしくはそれを含む組成物、抗原結合性タンパク質（ＣＡＲを含む）もしくはそれを含む組成物、またはイムノコンジュゲートもしくはそれを含む組成物を投与するステップを含む。例えば、本開示の主題の実施形態は、本開示の抗体または抗原結合性タンパク質を、抗悪性腫瘍剤と共に投与することにより、医学的状態を処置する方法を提供する。Ｔｒｅｇ遮断は、化学療法、標的化療法（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤）、ホルモン療法、放射線療法、外科手術、温熱療法、局所的治療法、光活性化療法、および活性化された免疫系が、死滅増強、残存腫瘍もしくは白血病細胞低下、または斯かる治療法との相乗的もしくは相加的作用に必要とされ得る治療法が挙げられるがこれらに限定されない、多種多様な他のがん療法の治療効果の利益をもたらすこともできる。抗体は、抗悪性腫瘍剤の１種または複数に化学的または生合成に連結して、抗体薬物コンジュゲートを作製することもできる。
【０２５８】
いずれか適した方法または経路を使用して、本開示の抗体または抗原結合性タンパク質（例えば、ＣＡＲ）を投与することができ、任意選択で、抗悪性腫瘍剤および／または他の受容体のアンタゴニストを同時投与することができる。投与の経路は、例えば、静脈内、腹腔内、動脈内、皮下、くも膜下腔内、局所的または筋肉内投与を含む。同時投与された薬剤は、これらの経路によって、また同様に、経口により与えることができる。しかし、本開示の主題が、いずれか特定の投与方法または経路に限定されないことが強調されるべきである。
【０２５９】
本開示の抗体（二特異性抗体および操作された抗体を含む）または抗原結合性タンパク質（ＣＡＲを含む）を、受容体に特異的に結合し、リガンド−毒素内部移行後に有毒で致死的なペイロードを送達するコンジュゲートとして投与することができることに留意されたい。
【０２６０】
本開示の主題の抗体（二特異性抗体および操作された抗体を含む）、抗原結合性タンパク質（ＣＡＲを含む）またはイムノコンジュゲートを、組成物、例えば、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物の形態で投与することができることが理解される。適した薬学的に許容される担体は、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールその他およびこれらの組合せのうち１種または複数を含む。薬学的に許容される担体は、結合タンパク質の有効期間または有効性を増強する、湿潤剤または乳化剤、保存料またはバッファー等、少量の補助的物質をさらに含むことができる。注射の組成物は、本技術分野で周知の通り、哺乳動物への投与後に、速い、持続性のまたは遅延された活性成分放出をもたらすように製剤化することができる。
【０２６１】
本開示の主題の他の態様は、細胞および組織におけるＦｏｘｐ３の検出のための研究ツールとしての、抗体およびこれをコードする核酸の使用を限定することなく含む。本開示の主題は、細胞または組織全体におけるＦｏｘｐ３を検出するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、本方法は、（ａ）検出可能な標識を含む本開示の抗体またはその抗原結合性部分と細胞または組織とを接触させるステップと、（ｂ）細胞または組織に会合した検出可能な標識の量を測定することにより、細胞または組織に結合した標識された抗体またはその抗原結合性部分の量を決定するステップであって、結合した抗体またはその抗原結合性部分の量が、細胞または組織におけるＦｏｘｐ３の量を示す、ステップとを含む。
【０２６２】
開示されている抗体および核酸を含む医薬組成物は、本開示の主題によって包含される。ベクターによる免疫療法による抗体に基づく処置のための本開示の主題の核酸を含むベクターも、本開示の主題によって考慮される。ベクターは、抗体の発現および分泌を可能にする発現ベクター、ならびにキメラ抗原受容体等、抗原結合性タンパク質の細胞表面発現へと方向づけられたベクターを含む。
【０２６３】
核酸を含む細胞、例えば、本開示の主題のベクターをトランスフェクトされた細胞も、本開示によって包含される。
【０２６４】
診断および研究適用における使用のため、本開示の抗Ｆｏｘｐ３抗体または本開示の主題の核酸、アッセイ試薬、バッファーその他を含有するキットも提供される。
【０２６５】
ＶＩ．キット
本開示の主題は、がんの処置または防止のためのキットを提供する。ある特定の実施形態では、キットは、有効量の本開示の抗体（二特異性抗体または操作された抗体を含む）、抗原結合性タンパク質（ＣＡＲを含む）またはイムノコンジュゲートを単位剤形で含有する治療用組成物を含む。ある特定の実施形態では、キットは、治療的または予防的ワクチンを含有する無菌容器を含む；斯かる容器は、箱、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、パウチ、ブリスターパックまたは本技術分野で公知の他の適した容器形態であり得る。斯かる容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属ホイルまたは医薬の保持に適した他の材料でできていてよい。
【０２６６】
必要に応じて、本開示の抗体（二特異性抗体または操作された抗体を含む）、抗原結合性タンパク質（ＣＡＲを含む）またはイムノコンジュゲートは、がんを有するまたはその発症リスクがある対象に細胞を投与するための説明書と共に提供される。説明書は一般に、がんの処置または防止のための組成物の使用に関する情報を含むであろう。他の実施形態では、説明書は、次のうち少なくとも１種を含む：治療剤の記載；がんもしくはその症状の処置または防止のための投薬量スケジュールおよび投与；注意；警告；適応症；禁忌（counter-indication）；過量服薬情報；有害反応；動物薬理学；臨床試験；および／または参照。説明書は、容器（存在する場合は）に直接的に、または容器に貼られたラベルとして、または容器の中にまたはそれに添えて供給される別々のシート、パンフレット、カードもしくはフォルダーとして印刷されていてよい。
【０２６７】
ＶＩＩ．方法
１．フローサイトメトリ解析
細胞表面染色のため、細胞を、適切なｍＡｂと共に３０分間氷上でインキュベートし、洗浄し、必要であれば二次抗体試薬と共にインキュベートした。＃３２−ＢｉＴＥ染色のため、ヒトＴ細胞またはがん細胞を、異なる濃度の＃３２−ＢｉＴＥまたは対照ＢｉＴＥと共に３０分間氷上でインキュベートし、洗浄し、Ｈｉｓ−タグに対する二次ｍＡｂと共にインキュベートした。ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）またはＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）においてフローサイトメトリデータを収集し、ＦｌｏｗＪｏ  Ｖ８．７．１および９．４．８ソフトウェアにより解析した。
【０２６８】
２．Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体に特異的なｓｃＦｖの選択および特徴付け
当業者に公知の、十分に確立されたファージディスプレイライブラリーおよびスクリーニング方法を使用して、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＨＬＡ−Ａ２複合体に高度に特異的なｓｃＦｖ断片を選択した。ある特定の実施形態では、ヒトｓｃＦｖ抗体ファージディスプレイライブラリーを、ｍＡｂクローンの選択に使用した。プラスチック表面への固定化によって導入されるＭＨＣ１複合体の立体構造変化を低下させるために、従来のプレートパニングの代わりに溶液パニング方法を使用した。手短に言えば、ビオチン化抗原をまず、ヒトｓｃＦｖファージライブラリーと混合し、次いで磁気ラックにより、ストレプトアビジンコンジュゲートされたＤｙｎａｂｅａｄｓ  Ｍ−２８０によって、抗原−ｓｃＦｖ抗体複合体をプルダウンした。
【０２６９】
次に、結合したクローンを溶出させ、Ｅ．Ｃｏｌｉ  ＸＬ１−Ｂｌｕｅの感染に使用した。細菌中に発現されたｓｃＦｖファージクローンを精製した（Yasminaら、Protein  Science  ２００８年；１７巻（８号）：１３２６〜１３３５頁；Robertsら、Blood  ２００２年：９９巻（１０号）：３７４８〜３７５５頁）。パニングを３〜４サイクル行って、特異的にＨＬＡ−Ａ＊０２：０１／Ｆｏｘｐ３複合体に結合しているｓｃＦｖファージクローンを濃縮した。ビオチン化単鎖ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１／Ｆｏｘｐ３ペプチド複合体に対する標準ＥＬＩＳＡ方法によって、陽性クローンを決定した。陽性クローンを、ＴＡＰ欠損、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋細胞株、Ｔ２を使用したフローサイトメトリによって、生細胞表面におけるＨＬＡ−Ａ２／ペプチド複合体へのその結合に関してさらに検査した。Ｔ２細胞に、２０μｇ／ｍｌ  β２Ｍの存在下で一晩、無血清ＲＰＭＩ１６４０培地においてペプチド（５０μｇ／ｍｌ）をパルス適用した。細胞を洗浄し、次の通りに染色を行った。
【０２７０】
細胞をまず、精製されたｓｃＦｖファージクローンで染色し、続いてマウス抗Ｍ１３  ｍＡｂによる染色、最後にＦＩＴＣへのヤギＦ（ａｂ）２抗マウスＩｇのコンジュゲートによる染色を行った。各染色ステップは、３０〜６０分間の間氷上で行い、各染色ステップの間に細胞を２回洗浄した。
【０２７１】
３．選択されたＳｃＦｖ断片を使用した全長ｍＡｂの操作
ファージディスプレイ技術は、それ自体がおよびそれ自体で有用な、または完全抗体、抗原結合性タンパク質もしくはその抗原結合性部分をもたらすようにさらに開発することができる、抗原特異的ｓｃＦｖおよびＦａｂ断片の迅速な選択および産生を可能にする。Ｆｃドメインを有する完全ｍＡｂは、ｓｃＦｖおよびＦａｂ抗体を上回るいくつかの利点を有する。第一に、全長Ａｂのみが、Ｆｃドメインを介してＣＤＣおよびＡＤＣＣ媒介性等の免疫学的機能を発揮する。第二に、二価ｍＡｂは、単量体Ｆａｂ  Ａｂよりも強い抗原結合親和性を提供する。第三に、血漿半減期および腎クリアランスは、Ｆａｂおよび二価ｍＡｂにより異なるであろう。それぞれの特定の特色および利点は、計画されたエフェクター戦略にマッチさせることができる。第四に、二価ｍＡｂは、ｓｃＦｖおよびＦａｂとは異なる速度で内部移行することができ、免疫機能または担体機能を変更する。例えば、アルファエミッタは、標的を死滅させるために内部移行されることを必要としないが、多くの薬物および毒素は、免疫複合体の内部移行から恩恵を被るであろう。ある特定の実施形態では、したがって、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ２に特異的なｓｃＦｖクローンが、ファージディスプレイライブラリーから得られたら、ｓｃＦｖ断片を使用した全長ＩｇＧ  ｍＡｂを産生した。
【０２７２】
選択されたファージクローンの全長ヒトＩｇＧ１を、記載されている通りにＨＥＫ２９３およびチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株において産生した（Caronら、J  Exp  Med  １７６巻：１１９１〜１１９５頁、１９９２年）。手短に言えば、抗体可変領域を、マッチするヒトラムダまたはカッパ軽鎖定常領域およびヒトＩｇＧ１サブクラスＦｃと共に哺乳動物発現ベクターにサブクローニングした。還元および非還元条件下の両方で、電気泳動によって、精製された全長ＩｇＧ抗体の分子量を測定した。
【０２７３】
４．キメラ抗原受容体および免疫エフェクター細胞の操作
本明細書において同定された抗体および抗原結合性タンパク質をコードする核酸を使用して、組換え免疫エフェクター細胞を操作することができる。例えば、遺伝的に修飾されたＴ細胞を生成するための方法およびベクターは、本技術分野で公知である（Brentjensら、Safety  and  persistence  of  adoptively  transferred  autologous  CD19-targeted  T  cells  in  patients  with  relapsed  or  chemotherapy  refractory  B-cell  leukemias  in  Blood  １１８巻（１８号）：４８１７〜４８２８頁、２０１１年１１月を参照）。
【０２７４】
５．Ｆｏｘｐ３／Ａ０２０１複合体に対する全長ヒトＩｇＧ１の特徴付け
最初に、間接的または直接的染色を使用して、Ｆｏｘｐ３ペプチド（例えば、Ｆｏｘｐ３−７）または無関係ＥＷもしくはＲＨＡＭＭ−Ｒ３対照ペプチドをパルス適用されたまたはされていないＴ２細胞を染色し、続いてＰＥまたはＦＩＴＣへの二次ヤギＦ（ａｂ）２抗ヒトＩｇＧ  ｍＡｂコンジュゲートを用いることにより、Ｆｏｘｐ３ペプチド／Ａ０２０１複合体に対する完全ヒトＩｇＧ１  ｍＡｂの特異性を決定した。フローサイトメトリによって蛍光強度を測定した。同じ方法を使用して、新鮮腫瘍細胞および細胞株へのｍＡｂの結合を決定した。
【０２７５】
例示的な実施形態
（１）
ヒト主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドに結合する、単離された抗体またはその抗原結合性部分。
【０２７６】
（２）
前記ヒトＭＨＣ分子が、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）分子である、実施形態１に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２７７】
（３）
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、実施形態２に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２７８】
（４）
前記ＨＬＡクラスＩ分子が、ＨＬＡ−Ａである、実施形態３に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２７９】
（５）
前記ＨＬＡ−Ａが、ＨＬＡ−Ａ２である、実施形態４に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２８０】
（６）
前記ＨＬＡ−Ａ２が、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である、実施形態５に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２８１】
（７）
前記Ｆｏｘｐ３ペプチドが、配列番号１に表記されているアミノ酸配列を含むヒトＦｏｘｐ３ポリペプチドの部分である、実施形態１から６のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２８２】
（８）
前記Ｆｏｘｐ３ペプチドが、８〜１２アミノ酸の長さを有する、実施形態１から７のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２８３】
（９）
前記Ｆｏｘｐ３ペプチドが、９アミノ酸の長さを有する、実施形態８に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２８４】
（１０）
前記Ｆｏｘｐ３ペプチドが、１０アミノ酸の長さを有する、実施形態８に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２８５】
（１１）
前記Ｆｏｘｐ３ペプチドが、配列番号８に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−７またはその部分、配列番号２に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−１またはその部分、配列番号３に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−２またはその部分、配列番号４に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−３またはその部分、配列番号５に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−４またはその部分、配列番号６に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−５またはその部分、および配列番号７に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−６またはその部分からなる群から選択される、実施形態１から１０のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２８６】
（１２）
Ｆｏｘｐ３ペプチドが、配列番号８に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−７である、実施形態１１に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２８７】
（１３）
（ａ）配列番号１１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号１４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；
（ｂ）配列番号１７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号２０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；
（ｃ）配列番号２３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号２６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；
（ｄ）配列番号２９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号３２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；
（ｅ）配列番号３５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号３８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；
（ｆ）配列番号４１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号４４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；
（ｇ）配列番号４７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号５０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；ならびに
（ｈ）配列番号５３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号５６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列
からなる群から選択される重鎖可変領域ＣＤＲ３配列および軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列を含む、実施形態１から８および１０から１２のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２８８】
（１４）
（ａ）配列番号１０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号１３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；
（ｂ）配列番号１６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号１９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；
（ｃ）配列番号２２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号２５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；
（ｄ）配列番号２８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号３１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；
（ｅ）配列番号３４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号３７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；
（ｆ）配列番号４０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号４３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；
（ｇ）配列番号４６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号４９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；ならびに
（ｈ）配列番号５２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号５５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列
からなる群から選択される重鎖可変領域ＣＤＲ２配列および軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列をさらに含む、実施形態１から８および１０から１３のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２８９】
（１５）
（ａ）配列番号９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号１２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；
（ｂ）配列番号１５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号１８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；
（ｃ）配列番号２１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号２４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；
（ｄ）配列番号２７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号３０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；
（ｅ）配列番号３３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号３６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；
（ｆ）配列番号３９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号４２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；
（ｇ）配列番号４５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号４８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；ならびに
（ｈ）配列番号５１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号５４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列
からなる群から選択される重鎖可変領域ＣＤＲ１配列および軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列をさらに含む、実施形態１から８および１０から１４のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２９０】
（１６）
（ａ）配列番号９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号１５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｃ）配列番号２１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号２７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｅ）配列番号３３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３４に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３７に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｆ）配列番号３９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号４４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｇ）配列番号４５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号５０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；または
（ｈ）配列番号５１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号５６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、実施形態１から８および１０から１５のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２９１】
（１７）
配列番号３９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号４４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、実施形態１６に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２９２】
（１８）
配列番号９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５および１０７からなる群から選択される配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、実施形態１から８および１０から１６のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２９３】
（１９）
配列番号９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５および１０７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、実施形態１８に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２９４】
（２０）
配列番号９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６および１０８からなる群から選択される配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態１から８および１０から１６のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２９５】
（２１）
配列番号９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６および１０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態２０に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２９６】
（２２）
（ａ）配列番号９３に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９４に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号９５に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９６に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号９７に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９８に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号９９に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号１０１に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０２に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号１０３に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０４に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｇ）配列番号１０５に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０６に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｈ）配列番号１０７に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０８に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、実施形態１８から２１のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２９７】
（２３）
（ａ）配列番号９３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号９５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号９７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号９９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号１０１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号１０３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｇ）配列番号１０５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｈ）配列番号１０７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、実施形態２２に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２９８】
（２４）
配列番号１０３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態２３に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０２９９】
（２５）
前記Ｆｏｘｐ３ペプチドが、配列番号３に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−２である、実施形態１１に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３００】
（２６）
（ａ）配列番号５９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号６２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；
（ｂ）配列番号６５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号６８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；
（ｃ）配列番号７１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号７４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；
（ｄ）配列番号７７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号８０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列；ならびに
（ｅ）配列番号８３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号８６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列
からなる群から選択される重鎖可変領域ＣＤＲ３配列および軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列を含む、実施形態２５に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３０１】
（２７）
（ａ）配列番号５８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号６１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；
（ｂ）配列番号６４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号６７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；
（ｃ）配列番号７０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号７３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；
（ｄ）配列番号７６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号７９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列；ならびに
（ｅ）配列番号８２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号８５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列
からなる群から選択される重鎖可変領域ＣＤＲ２配列および軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列をさらに含む、実施形態２５または２６に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３０２】
（２８）
（ａ）配列番号５７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号６０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；
（ｂ）配列番号６３に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号６６に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；
（ｃ）配列番号６９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号７１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；
（ｄ）配列番号７５に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号７８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列；ならびに
（ｅ）配列番号８１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号８４に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列
からなる群から選択される重鎖可変領域ＣＤＲ１配列および軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列をさらに含む、実施形態２５、２６または２７に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３０３】
（２９）
（ａ）配列番号５７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号６２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号６３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６４に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号６５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６７に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号６８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｃ）配列番号６９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号７１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号７２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号７５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号７７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号７８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；または
（ｅ）配列番号８１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号８３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号８４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、実施形態２５〜２８のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３０４】
（３０）
配列番号１０９、１１１、１１３、１１５および１１７からなる群から選択される配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、実施形態２５〜２９のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３０５】
（３１）
配列番号１０９、配列番号１１１、配列番号１１３、配列番号１１５または配列番号１１７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、実施形態３０に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３０６】
（３２）
配列番号１１０、１１２、１１４、１１６および１１８からなる群から選択される配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態２５〜３１のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３０７】
（３３）
配列番号１１０、配列番号１１２、配列番号１１４、配列番号１１６または配列番号１１８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態３２に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３０８】
（３４）
（ａ）配列番号１０９に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１０に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号１１１に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１２に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号１１３に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１４に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号１１５に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１６に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｅ）配列番号１１７に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、実施形態３０〜３３のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３０９】
（３５）
（ａ）配列番号１０９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号１１１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号１１３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号１１５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｅ）配列番号１１７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、実施形態３４に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３１０】
（３６）
Ｆｏｘｐ３ペプチドが、配列番号５に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−４である、実施形態１１に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３１１】
（３７）
配列番号８９に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３配列、および配列番号９２に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３配列を含む、実施形態３６に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３１２】
（３８）
配列番号８８に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２配列、および配列番号９１に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列を含む、実施形態３６または３７に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３１３】
（３９）
配列番号８７に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１配列、および配列番号９０に表記されているアミノ酸配列またはその修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２配列を含む、実施形態３６、３７または３８に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３１４】
（４０）
配列番号８７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号８９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号９０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号９１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号９２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、実施形態３６〜３９のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３１５】
（４１）
配列番号１１９に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、実施形態３６〜４０のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３１６】
（４２）
配列番号１１９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、実施形態４１に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３１７】
（４３）
配列番号１２０に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態３６〜４２のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３１８】
（４４）
配列番号１２０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態４３に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３１９】
（４５）
配列番号１１９に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１２０に表記されているアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％相同であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態４１〜４４のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３２０】
（４６）
配列番号１１９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１２０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態４５に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３２１】
（４７）
修飾が、欠失、挿入、置換およびこれらの組合せから選択される、実施形態１３〜１５、２６〜２８および３７〜３９のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３２２】
（４８）
その修飾が、２個以下、３個以下、４個以下または５個以下の修飾からなる、実施形態１３〜１５、２６〜２８および３７〜３９のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３２３】
（４９）
ヒトＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドのＮ末端に結合する、実施形態１〜４８のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３２４】
（５０）
ヒトＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドのＣ末端に結合する、実施形態１〜４８のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３２５】
（５１）
約１×１０−７Ｍまたはそれ未満の結合親和性（ＫＤ）で、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する、実施形態１から５０のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３２６】
（５２）
（ａ）配列番号９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号１５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｃ）配列番号２１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号２７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｅ）配列番号３３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３４に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３７に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｆ）配列番号３９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号４４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｇ）配列番号４５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号５０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｈ）配列番号５１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号５６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｉ）配列番号５７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号６２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｊ）配列番号６３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６４に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号６５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６７に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号６８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｋ）配列番号６９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号７１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号７２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｌ）配列番号７５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号７７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号７８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｍ）配列番号８１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号８３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号８４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；または
（ｎ）配列番号８７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号８９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号９０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号９１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号９２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む参照抗体または抗原結合性部分と、ヒトＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドへの結合に関して交差競合する、単離された抗体またはその抗原結合性部分であって、
前記交差競合する抗体またはその抗原結合性部分が、約５×１０−７Ｍまたはそれ未満の結合親和性（ＫＤ）で、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合する、
単離された抗体またはその抗原結合性部分。
【０３２７】
（５３）
（ａ）配列番号９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号１５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｃ）配列番号２１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号２７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｅ）配列番号３３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３４に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３７に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｆ）配列番号３９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号４４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｇ）配列番号４５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号５０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｈ）配列番号５１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号５６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｉ）配列番号５７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号５９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号６２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｊ）配列番号６３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６４に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号６５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６７に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号６８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｋ）配列番号６９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７０に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号７１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号７２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７３に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｌ）配列番号７５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７６に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号７７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号７８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７９に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｍ）配列番号８１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８２に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号８３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号８４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８５に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；または
（ｎ）配列番号８７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８８に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号８９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号９０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号９１に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号９２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む参照抗体または抗原結合性部分と、ＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチド上の同じエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合。
【０３２８】
（５４）
（ａ）配列番号９３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号９５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号９７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号９９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号１０１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号１０３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｇ）配列番号１０５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｈ）配列番号１０７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｉ）配列番号１０９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｊ）配列番号１１１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｋ）配列番号１１３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｌ）配列番号１１５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｍ）配列番号１１７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｎ）配列番号１１９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１２０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む参照抗体または抗原結合性部分と、ＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドへの結合に関して交差競合する、単離された抗体またはその抗原結合性部分であって、
前記交差競合する抗体またはその抗原結合性部分が、約５×１０−７Ｍまたはそれ未満の結合親和性（ＫＤ）で、Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合する、
単離された抗体またはその抗原結合性部分。
【０３２９】
（５５）
（ａ）配列番号９３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号９５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号９７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号９９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号１０１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号１０３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｇ）配列番号１０５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｈ）配列番号１０７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｉ）配列番号１０９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｊ）配列番号１１１に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１２に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｋ）配列番号１１３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｌ）配列番号１１５に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１６に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｍ）配列番号１１７に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｎ）配列番号１１９に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１２０に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む参照抗体または抗原結合性部分と、ＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドにおける同じエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合性部分。
【０３３０】
（５６）
ヒトＭＨＣ分子が、ＨＬＡ分子である、実施形態５２〜５５のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３３１】
（５７）
ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、実施形態５６に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３３２】
（５８）
ＨＬＡクラスＩ分子が、ＨＬＡ−Ａである、実施形態５７に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３３３】
（５９）
ＨＬＡ−Ａが、ＨＬＡ−Ａ２である、実施形態５８に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３３４】
（６０）
ＨＬＡ−Ａ２が、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である、実施形態５９に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３３５】
（６１）
Ｆｏｘｐ３ペプチドが、配列番号８に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−７またはその部分、配列番号２に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−１またはその部分、配列番号３に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−２またはその部分、配列番号４に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−３またはその部分、配列番号５に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−４またはその部分、配列番号６に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−５またはその部分、および配列番号７に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−６またはその部分からなる群から選択される、実施形態５２〜６０のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３３６】
（６２）
Ｆｏｘｐ３ペプチドが、Ｆｏｘｐ３−７またはその部分である、実施形態６１に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３３７】
（６３）
参照抗体またはその抗原結合性部分が、配列番号１０３に表記されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０４に表記されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態５２〜６２のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３３８】
（６４）
Ｆｏｘｐ３ペプチドが、Ｆｏｘｐ３−２またはその部分である、実施形態６１に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３３９】
（６５）
Ｆｏｘｐ３ペプチドが、Ｆｏｘｐ３−４またはその部分である、実施形態６１に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３４０】
（６６）
抗体が、ヒト可変領域フレームワーク領域を含む、先行する実施形態のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３４１】
（６７）
完全ヒト抗体またはその抗原結合性部分である、先行する実施形態のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３４２】
（６８）
キメラ抗体またはその抗原結合性部分である、実施形態１〜６６のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３４３】
（６９）
ヒト化抗体またはその抗原結合性部分である、実施形態１〜６６のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３４４】
（７０）
抗体の抗原結合性部分が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である、先行する実施形態のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３４５】
（７１）
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのものである、先行する実施形態のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３４６】
（７２）
ＩｇＧ１アイソタイプのものである、実施形態７１に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３４７】
（７３）
１個または複数の翻訳後修飾を含む、先行する実施形態のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３４８】
（７４）
１個または複数の翻訳後修飾が、非フコシル化（afucosylation）を含む、実施形態７３に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３４９】
（７５）
非フコシル化Ｆｃ領域を含む、実施形態７４に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０３５０】
（７６）
先行する実施形態のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分と、薬学的に許容される担体とを含む組成物。
【０３５１】
（７７）
治療剤に連結された、実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分を含むイムノコンジュゲート。
【０３５２】
（７８）
前記治療剤が、薬物、細胞毒または放射性同位元素である、実施形態７７に記載のイムノコンジュゲート。
【０３５３】
（７９）
実施形態７７または７８に記載のイムノコンジュゲートと、薬学的に許容される担体とを含む組成物。
【０３５４】
（８０）
第２の官能部分に連結された、実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分を含む二特異性分子。
【０３５５】
（８１）
第２の官能部分が、前記抗体またはその抗原結合性部分とは異なる結合特異性を有する、実施形態８０に記載の二特異性分子。
【０３５６】
（８２）
ＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドおよび細胞表面タンパク質を認識する、実施形態８０または８１に記載の二特異性分子。
【０３５７】
（８３）
細胞表面タンパク質が、ＣＤ３またはＣＤ１６である、実施形態８２に記載の二特異性分子。
【０３５８】
（８４）
実施形態８０〜８３のいずれか一形態に記載の二特異性分子と、薬学的に許容される担体とを含む組成物。
【０３５９】
（８５）
実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分をコードする、単離された核酸。
【０３６０】
（８６）
実施形態８５に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【０３６１】
（８７）
実施形態８６に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【０３６２】
（８８）
全細胞または組織におけるＦｏｘｐ３を検出するための方法であって、
（ａ）ヒトＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドに結合する抗体またはその抗原結合性部分と細胞または組織とを接触させるステップであって、前記抗体またはその抗原結合性部分が、検出可能な標識を含む、ステップと、
（ｂ）前記細胞または組織に会合した検出可能な標識の量を測定することにより、前記細胞または組織に結合した、標識された抗体またはその抗原結合性部分の量を決定するステップであって、結合した抗体またはその抗原結合性部分の量が、前記細胞または組織におけるＦｏｘｐ３の量を示す、ステップと
を含む方法。
【０３６３】
（８９）
ヒトＭＨＣ分子が、ＨＬＡ分子である、実施形態８８に記載の方法。
【０３６４】
（９０）
ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、実施形態８９に記載の方法。
【０３６５】
（９１）
ＨＬＡクラスＩ分子が、ＨＬＡ−Ａである、実施形態９０に記載の方法。
【０３６６】
（９２）
ＨＬＡ−Ａが、ＨＬＡ−Ａ２である、実施形態９１に記載の方法。
【０３６７】
（９３）
ＨＬＡ−Ａ２が、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である、実施形態９２に記載の方法。
【０３６８】
（９４）
前記Ｆｏｘｐ３ペプチドが、配列番号８に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−７またはその部分、配列番号２に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−１またはその部分、配列番号３に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−２またはその部分、配列番号４に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−３またはその部分、配列番号５に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−４またはその部分、配列番号６に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−５またはその部分、および配列番号７に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−６またはその部分からなる群から選択される、実施形態８８から９３のいずれか一形態に記載の方法。
【０３６９】
（９５）
Ｆｏｘｐ３ペプチドが、Ｆｏｘｐ３−７またはその部分である、実施形態９４に記載の方法。
【０３７０】
（９６）
Ｆｏｘｐ３ペプチドが、Ｆｏｘｐ３−２またはその部分である、実施形態９４に記載の方法。
【０３７１】
（９７）
Ｆｏｘｐ３ペプチドが、Ｆｏｘｐ３−４またはその部分である、実施形態９４に記載の方法。
【０３７２】
（９８）
抗体またはその抗原結合性部分が、実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分である、実施形態８８〜９７のいずれか一形態に記載の方法。
【０３７３】
（９９）
ヒトＭＨＣ分子に結合したＦｏｘｐ３ペプチドに特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【０３７４】
（１００）
ヒトＭＨＣ分子が、ＨＬＡ分子である、実施形態９９に記載のＣＡＲ。
【０３７５】
（１０１）
ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、実施形態１００に記載のＣＡＲ。
【０３７６】
（１０２）
ＨＬＡクラスＩ分子が、ＨＬＡ−Ａである、実施形態１０１に記載のＣＡＲ。
【０３７７】
（１０３）
ＨＬＡ−Ａが、ＨＬＡ−Ａ２である、実施形態１０２に記載のＣＡＲ。
【０３７８】
（１０４）
ＨＬＡ−Ａ２が、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である、実施形態１０３に記載のＣＡＲ。
【０３７９】
（１０５）
Ｆｏｘｐ３ペプチドが、配列番号８に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−７またはその部分、配列番号２に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−１またはその部分、配列番号３に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−２またはその部分、配列番号４に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−３またはその部分、配列番号５に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−４またはその部分、配列番号６に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−５またはその部分、および配列番号７に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−６またはその部分からなる群から選択される、実施形態９９〜１０４のいずれか一形態に記載のＣＡＲ。
【０３８０】
（１０６）
Ｆｏｘｐ３ペプチドが、Ｆｏｘｐ３−７またはその部分である、実施形態１０５に記載のＣＡＲ。
【０３８１】
（１０７）
Ｆｏｘｐ３ペプチドが、Ｆｏｘｐ３−２またはその部分である、実施形態１０５に記載のＣＡＲ。
【０３８２】
（１０８）
Ｆｏｘｐ３ペプチドが、Ｆｏｘｐ３−４またはその部分である、実施形態１０５に記載のＣＡＲ。
【０３８３】
（１０９）
重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗原結合性部分を含む、実施形態９９〜１０８のいずれか一形態に記載のＣＡＲ。
【０３８４】
（１１０）
重鎖可変領域および軽鎖可変領域の間にリンカーを含む、実施形態１０９に記載のＣＡＲ。
【０３８５】
（１１１）
リンカーが、配列番号１３５に表記されているアミノ酸配列を含む、実施形態１１０に記載のＣＡＲ。
【０３８６】
（１１２）
実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗原結合性部分を含む、実施形態９９〜１１１のいずれか一形態に記載のＣＡＲ。
【０３８７】
（１１３）
抗原結合性部分が、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態１０９〜１１２のいずれか一形態に記載のＣＡＲ。
【０３８８】
（１１４）
ｓｃＦｖが、ヒトｓｃＦｖである、実施形態１１３に記載のＣＡＲ。
【０３８９】
（１１５）
ヒトｓｃＦｖが、配列番号１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３および１３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１１４に記載のＣＡＲ。
【０３９０】
（１１６）
ヒトｓｃＦｖが、配列番号１２６に表記されているアミノ酸配列を含む、実施形態１１５に記載のＣＡＲ。
【０３９１】
（１１７）
抗原結合性部分が、任意選択で架橋されたＦａｂを含む、実施形態１０９〜１１２のいずれか一形態に記載のＣＡＲ。
【０３９２】
（１１８）
抗原結合性部分が、Ｆ（ａｂ）２を含む、実施形態１０９〜１１２のいずれか一形態に記載のＣＡＲ。
【０３９３】
（１１９）
実施形態９９〜１１８のいずれか一形態に記載のＣＡＲをコードする、単離された核酸。
【０３９４】
（１２０）
実施形態１１９に記載の単離された核酸を含むベクター。
【０３９５】
（１２１）
実施形態１１９に記載の核酸を含む宿主細胞。
【０３９６】
（１２２）
Ｔ細胞である、実施形態１２１に記載の宿主細胞。
【０３９７】
（１２３）
Ｆｏｘｐ３発現細胞を死滅させる方法であって、実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分またはそれを含む組成物とＦｏｘｐ３発現細胞とを接触させるステップを含む方法。
【０３９８】
（１２４）
Ｆｏｘｐ３発現細胞を死滅させるための、実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分またはそれを含む組成物の使用。
【０３９９】
（１２５）
Ｆｏｘｐ３発現細胞の死滅における使用のための、実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分またはそれを含む組成物。
【０４００】
（１２６）
Ｆｏｘｐ３発現細胞を死滅させる方法であって、実施形態９９〜１１８のいずれか一形態に記載のＣＡＲまたはそれを含む組成物とＦｏｘｐ３発現細胞とを接触させるステップを含む方法。
【０４０１】
（１２７）
Ｆｏｘｐ３発現細胞を死滅させるための、実施形態９９〜１１８のいずれか一形態に記載のＣＡＲまたはそれを含む組成物の使用。
【０４０２】
（１２８）
Ｆｏｘｐ３発現細胞の死滅における使用のための、実施形態９９〜１１８のいずれか一形態に記載のＣＡＲまたはそれを含む組成物。
【０４０３】
（１２９）
Ｆｏｘｐ３発現細胞を死滅させる方法であって、実施形態８０〜８３のいずれか一形態に記載の二特異性抗体またはそれを含む組成物とＦｏｘｐ３発現細胞とを接触させるステップを含む方法。
【０４０４】
（１３０）
Ｆｏｘｐ３発現細胞を死滅させるための、実施形態８０〜８３のいずれか一形態に記載の二特異性抗体またはそれを含む組成物の使用。
【０４０５】
（１３１）
Ｆｏｘｐ３発現細胞の死滅における使用のための、実施形態８０〜８３のいずれか一形態に記載の二特異性抗体またはそれを含む組成物。
【０４０６】
（１３２）
Ｆｏｘｐ３発現細胞を死滅させる方法であって、実施形態７７もしくは７８に記載のイムノコンジュゲートまたはそれを含む組成物とＦｏｘｐ３発現細胞とを接触させるステップを含む方法。
【０４０７】
（１３３）
Ｆｏｘｐ３発現細胞を死滅させるための、実施形態７７もしくは７８に記載のイムノコンジュゲートまたはそれを含む組成物の使用。
【０４０８】
（１３４）
Ｆｏｘｐ３発現細胞の死滅における使用のための、実施形態７７もしくは７８に記載のイムノコンジュゲートまたはそれを含む組成物。
【０４０９】
（１３５）
Ｆｏｘｐ３発現細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択されるＴ細胞である、実施形態１２３、１２６、１２９および１３２のいずれか一形態に記載の方法。
【０４１０】
（１３６）
Ｆｏｘｐ３発現細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択されるＴ細胞である、実施形態１２４、１２７、１３０および１３３のいずれか一形態に記載の使用。
【０４１１】
（１３７）
Ｆｏｘｐ３発現細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択されるＴ細胞である、実施形態１２５に記載の抗体。
【０４１２】
（１３８）
Ｆｏｘｐ３発現細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択されるＴ細胞である、実施形態１３１に記載の二特異性抗体。
【０４１３】
（１３９）
Ｆｏｘｐ３発現細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択されるＴ細胞である、実施形態１３４に記載のイムノコンジュゲート。
【０４１４】
（１４０）
対象における免疫応答を誘導する方法であって、実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分またはそれを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法。
【０４１５】
（１４１）
対象における免疫応答を誘導するための、実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分またはそれを含む組成物の使用。
【０４１６】
（１４２）
免疫応答の誘導における使用のための、実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分またはそれを含む組成物。
【０４１７】
（１４３）
対象における免疫応答を誘導する方法であって、実施形態９９〜１１８のいずれか一形態に記載のＣＡＲまたはそれを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法。
【０４１８】
（１４４）
対象における免疫応答を誘導するための、実施形態９９〜１１８のいずれか一形態に記載のＣＡＲまたはそれを含む組成物の使用。
【０４１９】
（１４５）
免疫応答の誘導における使用のための、実施形態９９〜１１８のいずれか一形態に記載のＣＡＲまたはそれを含む組成物。
【０４２０】
（１４６）
対象における免疫応答を誘導する方法であって、実施形態８０〜８３のいずれか一形態に記載の二特異性抗体またはそれを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法。
【０４２１】
（１４７）
対象における免疫応答を誘導するための、実施形態８０〜８３のいずれか一形態に記載の二特異性抗体またはそれを含む組成物の使用。
【０４２２】
（１４８）
免疫応答の誘導における使用のための、実施形態８０〜８３のいずれか一形態に記載の二特異性抗体またはそれを含む組成物。
【０４２３】
（１４９）
対象における免疫応答を誘導する方法であって、実施形態７７もしくは７８に記載のイムノコンジュゲートまたはそれを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法。
【０４２４】
（１５０）
対象における免疫応答を誘導するための、実施形態７７もしくは７８に記載のイムノコンジュゲートまたはそれを含む組成物の使用。
【０４２５】
（１５１）
免疫応答の誘導における使用のための、実施形態７７もしくは７８に記載のイムノコンジュゲートまたはそれを含む組成物。
【０４２６】
（１５２）
対象におけるＴ細胞を選択的に阻害する方法であって、実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分またはそれを含む組成物を対象に投与するステップを含み、Ｔ細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択される、方法。
【０４２７】
（１５３）
対象におけるＴ細胞を選択的に阻害するための、実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分またはそれを含む組成物の使用であって、Ｔ細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択される、使用。
【０４２８】
（１５４）
Ｔ細胞の選択的阻害における使用のための、実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分またはそれを含む組成物であって、Ｔ細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択される、抗体もしくはその抗原結合性部分またはそれを含む組成物。
【０４２９】
（１５５）
対象におけるＴ細胞を選択的に阻害する方法であって、実施形態９９〜１１８のいずれか一形態に記載のＣＡＲまたはそれを含む組成物を対象に投与するステップを含み、Ｔ細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択される、方法。
【０４３０】
（１５６）
対象におけるＴ細胞を選択的に阻害するための、実施形態９９〜１１８のいずれか一形態に記載のＣＡＲまたはそれを含む組成物の使用であって、Ｔ細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択される、使用。
【０４３１】
（１５７）
ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択されるＴ細胞の選択的阻害における使用のための、実施形態９９〜１１８のいずれか一形態に記載のＣＡＲまたはそれを含む組成物。
【０４３２】
（１５８）
対象におけるＴ細胞を選択的に阻害する方法であって、実施形態８０〜８３のいずれか一形態に記載の二特異性抗体またはそれを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法。
【０４３３】
（１５９）
対象におけるＴ細胞を選択的に阻害するための、実施形態８０〜８３のいずれか一形態に記載の二特異性抗体またはそれを含む組成物の使用であって、Ｔ細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択される、使用。
【０４３４】
（１６０）
ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択されるＴ細胞の選択的阻害における使用のための、実施形態８０〜８３のいずれか一形態に記載の二特異性抗体またはそれを含む組成物。
【０４３５】
（１６１）
対象におけるＴ細胞を選択的に阻害する方法であって、実施形態７７もしくは７８に記載のイムノコンジュゲートまたはそれを含む組成物を対象に投与するステップを含み、Ｔ細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択される、方法。
【０４３６】
（１６２）
対象におけるＴ細胞を選択的に阻害するための、実施形態７７もしくは７８に記載のイムノコンジュゲートまたはそれを含む組成物の使用であって、Ｔ細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択される、使用。
【０４３７】
（１６３）
ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞およびこれらの組合せからなる群から選択されるＴ細胞の選択的阻害における使用のための、実施形態７７もしくは７８に記載のイムノコンジュゲートまたはそれを含む組成物。
【０４３８】
（１６４）
対象が、がんを患う、実施形態１５２、１５５、１５８および１６１のいずれか一形態に記載の方法。
【０４３９】
（１６５）
対象が、がんを患う、実施形態１５３、１５４、１５９および１６２のいずれか一形態に記載の使用。
【０４４０】
（１６６）
対象が、がんを患う、実施形態１５４に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０４４１】
（１６７）
対象が、がんを患う、実施形態１５７に記載のＣＡＲ。
【０４４２】
（１６８）
対象が、がんを患う、実施形態１６０に記載の二特異性抗体。
【０４４３】
（１６９）
対象が、がんを患う、実施形態１６３に記載のイムノコンジュゲート。
【０４４４】
（１７０）
次の、
（ｉ）Ｔ細胞の数を低下させるステップ、
（ｉｉ）Ｔ細胞を枯渇させるステップ、
（ｉｉｉ）Ｔ細胞の免疫抑制活性を阻害するステップ、および
（ｉｖ）リンパ節へのＴ細胞輸送を遮断するステップ
のうち１つまたは複数を含む、実施形態１５２、１５５、１５８および１６１のいずれか一形態に記載の方法。
【０４４５】
（１７１）
Ｔ細胞が、調節性Ｔ細胞である、実施形態１５２、１５５、１５８、１６１および１７０のいずれか一形態に記載の方法。
【０４４６】
（１７２）
次の、
（ｉ）Ｔ細胞の数を低下させるステップ、
（ｉｉ）Ｔ細胞を枯渇させるステップ、
（ｉｉｉ）Ｔ細胞の免疫抑制活性を阻害するステップ、および
（ｉｖ）リンパ節へのＴ細胞輸送を遮断するステップ
のうち１つまたは複数を含む、実施形態１５３、１５６、１５９および１６２のいずれか一形態に記載の使用。
【０４４７】
（１７３）
Ｔ細胞が、調節性Ｔ細胞である、実施形態１５３、１５６、１５９、１６２および１７２のいずれか一形態に記載の使用。
【０４４８】
（１７４）
（ｉ）Ｔ細胞の数を低下させる、
（ｉｉ）Ｔ細胞を枯渇させる、
（ｉｉｉ）Ｔ細胞の免疫抑制活性を阻害する、および／または
（ｉｖ）リンパ節への調節性Ｔ細胞輸送を遮断する、
実施形態１５４に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０４４９】
（１７５）
Ｔ細胞が、調節性Ｔ細胞である、実施形態１５４または１７３に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０４５０】
（１７６）
（ｉ）Ｔ細胞の数を低下させる、
（ｉｉ）Ｔ細胞を枯渇させる、
（ｉｉｉ）Ｔ細胞の免疫抑制活性を阻害する、および／または
（ｉｖ）リンパ節へのＴ細胞輸送を遮断する、
実施形態１５７に記載のＣＡＲ。
【０４５１】
（１７７）
Ｔ細胞が、調節性Ｔ細胞である、実施形態１５７または１７６に記載のＣＡＲ。
【０４５２】
（１７８）
（ｉ）Ｔ細胞の数を低下させる、
（ｉｉ）Ｔ細胞を枯渇させる、
（ｉｉｉ）Ｔ細胞の免疫抑制活性を阻害する、および／または
（ｉｖ）リンパ節へのＴ細胞輸送を遮断する、
実施形態１６０に記載の二特異性抗体。
【０４５３】
（１７９）
Ｔ細胞が、調節性Ｔ細胞である、実施形態１６０または１７８に記載の二特異性抗体。
【０４５４】
（１８０）
（ｉ）Ｔ細胞の数を低下させる、
（ｉｉ）Ｔ細胞を枯渇させる、
（ｉｉｉ）Ｔ細胞の免疫抑制活性を阻害する、および／または
（ｉｖ）リンパ節へのＴ細胞輸送を遮断する、
実施形態１６３に記載のイムノコンジュゲート。
【０４５５】
（１８１）
Ｔ細胞が、調節性Ｔ細胞である、実施形態１６３または１７９に記載のイムノコンジュゲート。
【０４５６】
（１８２）
がんを処置する方法であって、有効量の実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分またはそれを含む組成物を、がんを患う対象に投与し、これにより、対象におけるがん細胞の死を誘導するステップを含む方法。
【０４５７】
（１８３）
がんを処置する方法であって、有効量の実施形態９９〜１１８のいずれか一形態に記載のＣＡＲまたはそれを含む組成物を、がんを患う対象に投与し、これにより、対象におけるがん細胞の死を誘導するステップを含む方法。
【０４５８】
（１８４）
がんを処置する方法であって、有効量の実施形態８０〜８３のいずれか一形態に記載の二特異性抗体またはそれを含む組成物を、がんを患う対象に投与し、これにより、対象におけるがん細胞の死を誘導するステップを含む方法。
【０４５９】
（１８５）
がんを処置する方法であって、有効量の実施形態７７もしくは７８に記載のイムノコンジュゲートまたはそれを含む組成物を、がんを患う対象に投与し、これにより、対象におけるがん細胞の死を誘導するステップを含む方法。
【０４６０】
（１８６）
がんを処置する方法であって、有効量の実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分、実施形態９９〜１１８のいずれか一形態に記載のＣＡＲ、実施形態８０〜８３のいずれか一形態に記載の二特異性抗体、実施形態７７もしくは７８に記載のイムノコンジュゲート、またはそれを含む組成物を、がんを患う対象に投与し、これにより、対象におけるＴ細胞を阻害するステップを含む方法。
【０４６１】
（１８７）
阻害されるＴ細胞が、Ｔ調節性細胞である、実施形態１８６に記載の方法。
【０４６２】
（１８８）
阻害されるＴ細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ２５ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ  Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３ｈｉｇｈ  Ｔ細胞、または前記マーカーのうち２種もしくはそれよりも多くを示すＴ細胞である、実施形態１８６または１８７に記載の方法。
【０４６３】
（１８９）
がんが、乳がん、卵巣がん、メラノーマ、肺がん、膵がん、胃がん、結腸がん、神経膠芽腫、腎臓がん、肝臓がん、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫およびこれらの組合せからなる群から選択される、実施形態１８２〜１８９のいずれか一形態に記載の方法。
【０４６４】
（１９０）
対象が、ヒトである、実施形態１８２〜１８９のいずれか一形態に記載の方法。
【０４６５】
（１９１）
対象が、抗がん免疫療法を受ける、実施形態１８２〜１９０のいずれか一形態に記載の方法。
【０４６６】
（１９２）
がん細胞および／またはＴ細胞が、Ｆｏｘｐ３を発現する、実施形態１８２〜１９１のいずれか一形態に記載の方法。
【０４６７】
（１９３）
がんを処置するための、実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分またはそれを含む組成物の使用。
【０４６８】
（１９４）
がんを処置するための、実施形態９９〜１１８のいずれか一形態に記載のＣＡＲまたはそれを含む組成物の使用。
【０４６９】
（１９５）
がんを処置するための、実施形態８０〜８３のいずれか一形態に記載の二特異性抗体またはそれを含む組成物の使用。
【０４７０】
（１９６）
がんを処置するための、実施形態７７もしくは７８に記載のイムノコンジュゲートまたはそれを含む組成物の使用。
【０４７１】
（１９７）
がんが、乳がん、卵巣がん、メラノーマ、肺がん、膵がん、胃がん、結腸がん、神経膠芽腫、腎臓がん、肝臓がん、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫およびこれらの組合せからなる群から選択される、実施形態１９３〜１９５のいずれか一形態に記載の使用。
【０４７２】
（１９８）
対象が、ヒトである、実施形態１９３〜１９７のいずれか一形態に記載の使用。
【０４７３】
（１９９）
対象が、抗がん免疫療法を受ける、実施形態１９３〜１９８のいずれか一形態に記載の使用。
【０４７４】
（２００）
がん細胞が、Ｆｏｘｐ３を発現する、実施形態１９３〜１９９のいずれか一形態に記載の使用。
【０４７５】
（２０１）
対象におけるがんの処置における使用のための、実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗体もしくはその抗原結合性部分またはそれを含む組成物。
【０４７６】
（２０２）
がんが、乳がん、卵巣がん、メラノーマ、肺がん、膵がん、胃がん、結腸がん、神経膠芽腫、腎臓がん、肝臓がん、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫およびこれらの組合せからなる群から選択される、実施形態１８８に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０４７７】
（２０３）
対象が、ヒトである、実施形態２０１または２０２に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０４７８】
（２０４）
対象が、抗がん免疫療法を受ける、実施形態２０１〜２０３のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０４７９】
（２０５）
がん細胞が、Ｆｏｘｐ３を発現する、実施形態１９８〜２０１のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分。
【０４８０】
（２０６）
対象におけるがんの処置における使用のための、実施形態９９〜１１８のいずれか一形態に記載のＣＡＲまたはそれを含む組成物。
【０４８１】
（２０７）
がんが、乳がん、卵巣がん、メラノーマ、肺がん、膵がん、胃がん、結腸がん、神経膠芽腫、腎臓がん、肝臓がん、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫およびこれらの組合せからなる群から選択される、実施形態２０６に記載のＣＡＲ。
【０４８２】
（２０８）
対象が、ヒトである、実施形態２０６または２０７に記載のＣＡＲ。
【０４８３】
（２０９）
対象が、抗がん免疫療法を受ける、実施形態２０６〜２０８のいずれか一形態に記載のＣＡＲ。
【０４８４】
（２１０）
がん細胞が、Ｆｏｘｐ３を発現する、実施形態２０６〜２０９のいずれか一形態に記載のＣＡＲ。
【０４８５】
（２１１）
対象におけるがんの処置における使用のための、実施形態８０〜８３のいずれか一形態に記載の二特異性抗体またはそれを含む組成物。
【０４８６】
（２１２）
がんが、乳がん、卵巣がん、メラノーマ、肺がん、膵がん、胃がん、結腸がん、神経膠芽腫、腎臓がん、肝臓がん、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫およびこれらの組合せからなる群から選択される、実施形態２１１に記載の二特異性抗体。
【０４８７】
（２１３）
対象が、ヒトである、実施形態２１１または２１２に記載の二特異性抗体。
【０４８８】
（２１４）
対象が、抗がん免疫療法を受ける、実施形態２１１〜２１３のいずれか一形態に記載の二特異性抗体。
【０４８９】
（２１５）
がん細胞が、Ｆｏｘｐ３を発現する、実施形態２１１〜２１４のいずれか一形態に記載の二特異性抗体。
【０４９０】
（２１６）
対象におけるがんの処置における使用のための、実施形態７７もしくは７８に記載のイムノコンジュゲートまたはそれを含む組成物。
【０４９１】
（２１７）
がんが、乳がん、卵巣がん、メラノーマ、肺がん、膵がん、胃がん、結腸がん、神経膠芽腫、腎臓がん、肝臓がん、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫およびこれらの組合せからなる群から選択される、実施形態２１６に記載のイムノコンジュゲート。
【０４９２】
（２１８）
対象が、ヒトである、実施形態２１６または２１７に記載のイムノコンジュゲート。
【０４９３】
（２１９）
対象が、抗がん免疫療法を受ける、実施形態２１６〜２１８のいずれか一形態に記載のイムノコンジュゲート。
【０４９４】
（２２０）
がん細胞が、Ｆｏｘｐ３を発現する、実施形態２１６〜２１９のいずれか一形態に記載のイムノコンジュゲート。
【０４９５】
（２２１）
実施形態１〜７５のいずれか一形態に記載の抗体またはその抗原結合性部分を含む、がんを処置するためのキット。
【０４９６】
（２２２）
実施形態９９〜１１８のいずれか一形態に記載のＣＡＲを含む、がんを処置するためのキット。
【０４９７】
（２２３）
実施形態８０〜８３のいずれか一形態に記載の二特異性抗体を含む、がんを処置するためのキット。
【０４９８】
（２２４）
実施形態７７または７８に記載のイムノコンジュゲートを含む、がんを処置するためのキット。
【０４９９】
（２２５）
がんが、乳がん、卵巣がん、メラノーマ、肺がん、膵がん、胃がん、結腸がん、神経膠芽腫、腎臓がん、肝臓がん、リンパ腫、白血病、骨髄腫、肉腫およびこれらの組合せからなる群から選択される、実施形態２２１〜２２４のいずれか一形態に記載のキット。
【実施例】
【０５００】
以下の実施例は、本開示の主題の抗体、二特異性抗体、それらを含む組成物の作製および使用方法、スクリーニング、ならびに治療法の完全な開示および説明を当業者に提供するために提示されるものであり、本発明者らがその本開示の主題とみなすものの範囲を限定することを意図するものではない。上記に提供された一般的な説明が与えられれば、種々の他の実施形態が実践され得ることが理解される。
【０５０１】
（実施例１）
Ｆｏｘ３ｐ由来エピトープに対して特異的なＴＣＲ模倣モノクローナル抗体
序論
エフェクターＴ細胞チェックポイント遮断療法は、休眠中または消耗したＴ細胞を活性化させて患者のがん細胞を死滅させることによる、いくつかのがんに対する有効な療法として現れた。ＣＤ４、ＣＤ２５、およびＦｏｘｐ３を発現する調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、腫瘍組織に豊富に見られ、抗腫瘍免疫の強力な阻害剤であり、免疫療法の成功への重大な障壁であると考えられている。腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）におけるＴｒｅｇに対するＣＤ８＋Ｔ細胞の比の減少は、種々のヒトがんにおいて予後不良の指標である。Ｔｒｅｇの枯渇は、動物モデルにおいて、また場合によりがん患者において、自発性およびワクチン誘導性の抗腫瘍免疫応答を増強することが示されている。これらの研究は、がんにおけるＴｒｅｇの顕著な腫瘍促進性の役割を示し、Ｔｒｅｇ機能のモジュレーションがエフェクターＴ細胞を活性化させてがん細胞を死滅させ得る、がん免疫療法の機会を提供する。
【０５０２】
がん患者におけるＴｒｅｇの枯渇には強い関心が寄せられたが、Ｔｒｅｇは、ｍＡｂによって標的化され得る特異的な細胞表面分子も、選択的に新薬の開発につながるような細胞質内経路も発現しないため、有効な適用が阻まれてきた。Ｔｒｅｇ機能の枯渇または干渉のための種々の戦略が試みられており、それらは典型的に、ＣＤ２５に対して特異的なｍＡｂ（ダクリズマブ）、およびＩＬ−２とジフテリア毒素との融合タンパク質であるデニロイキンジフチトクス（Dennileukin  difitox）を使用した、ＣＤ２５（ＩＬ−２受容体）の標的化に焦点を当ててきた。加えて、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）に対するｍＡｂによるＴｒｅｇの排除および抗ＣＴＬＡ４抗体の使用によるＴｒｅｇ機能の抑制、Ｔ−ｒｅｇによる腫瘍ホーミングの妨害、またはＴ細胞可塑性のモジュレーションも試みられてきた。ダクリズマブおよびデニロイキンジフチトクスをワクチンと組み合わせた種々のがんの臨床試験は、相反した結果を示した。これらのデータは、ＣＤ２５およびＧＩＴＲの両方が、Ｔｒｅｇにおいてのみならず、活性化されたＣＤ４およびＣＤ８エフェクターＴ細胞においても発現することにより最も良く説明され得る。これらの分子を標的とすることによるＴｒｅｇの枯渇の潜在的利益は、活性化されたエフェクターリンパ球を同時に排除することによって失われ得る。したがって、これらのアプローチのより広範な適用性を支持する、さらなる臨床的証拠は存在しない。最近のｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究は、Ｃ−Ｃケモカイン受容体４（ＣＣＲ４）に対して特異的なｍＡｂが、より高いレベルのＦｏｘｐ３を発現するエフェクターＴｒｅｇを選択的に枯渇させ、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドに対して特異的なＣＤ８  Ｔ細胞の応答を増大させ得ることを示した。脱フコシル化されたヒト化抗ＣＣＲ４  ｍＡｂであるモガムリズマブは、種々のがんに関する臨床治験下にある。その結果にはより多くの研究が待たれるが、複雑な結果を示したいくつかのデータがある８〜１０。Ｔｒｅｇに加えて、ＣＣＲ４は、活性化されたＴ細胞、Ｔヘルパー２、ＮＫ細胞、マクロファージ、および樹状細胞で発現することが公知であり、ｍＡｂの効果は複雑であり得る。シクロホスファミド（Cyclophosamide）はＴｒｅｇを選択的に抑制することが示されているが、その機構は未知である。シクロホスファミドは、腫瘍細胞に対するその細胞傷害が周知であり、したがって、臨床効果がＴｒｅｇの枯渇のみに起因すると考えるのは困難である。明らかに、Ｔｒｅｇを標的とし、その抑制性機能を排除する、より特異的なアプローチの必要性が高い。
【０５０３】
Ｆｏｘｐ３は、Ｔｒｅｇ機能の立役者として同定されており、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇの最も決定的なマーカーである。これは、Ｔｒｅｇ細胞系列分化、維持、そして重要なことには抑制性機能のために必要とされる。胸腺で生じる天然に存在するＴｒｅｇの他には、感染およびがんで優勢に、誘導性Ｔｒｅｇ細胞が同定された。興味深いことに、ＴｒｅｇにおけるＦｏｘｐ３の重大な役割に加えて、多くのがん細胞もＦｏｘｐ３を発現する。Ｆｏｘｐ３発現膵癌細胞および皮膚Ｔ細胞リンパ腫細胞は、Ｔ細胞増殖を抑制することが示された。これらの研究は、がん細胞がＴｒｅｇと抑制効果を共有し得ること、また、Ｔｒｅｇ機能の模倣が、がんにおける免疫回避の新たな機構を表し得ることを示唆している。
【０５０４】
このように、Ｔｒｅｇを枯渇させることができる選択的薬物は存在しない。Ｆｏｘｐ３は、小分子による新薬の開発につながるようなものでないこと、また、細胞内タンパク質であるため抗体療法が実現可能でないことを除けば、理想的な標的である。理論上、細胞表面提示のために分解およびプロセシングされるＦｏｘｐ３タンパク質由来のペプチドは、ＴＣＲ認識の標的として機能することができる。メラノーママウスモデルにおいて、Ｎａｉｒらは、Ｆｏｘｐ３をコードするｍＲＮＡを電気穿孔で導入した樹状細胞（ＤＣ：ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ）をマウスにワクチン接種した。このワクチン接種は、腫瘍中のＦｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの優先的枯渇をもたらすＦｏｘｐ３特異的ＣＴＬ応答を誘発した。明確に定義されたＴＲＰ２メラノーマ抗原（Ａｇ）およびＦｏｘｐ３をマウスに同時にワクチン接種すると、高度に転移性のＢ６／Ｆ１０．９メラノーマに対するワクチン誘導性保護が増強された。この研究ではＦｏｘｐ３由来エピトープは同定されなかったが、Ｔ細胞アプローチを使用してＦｏｘｐ３タンパク質を標的とすることの可能性が示された。有望なことに、最近のｉｎ  ｖｉｔｒｏヒト研究は、ＨＬＡ−Ａ０２０１分子との関連において、ヒトＣＤ８  Ｔ細胞によりＦｏｘｐ３由来エピトープを同定することの結果を示している。したがって、Ｆｏｘｐ３由来エピトープに対して特異的なＴＣＲ模倣ｍＡｂは、Ｆｏｘｐ３を発現するＴｒｅｇと腫瘍細胞との両方を、両刀効果（ｄｏｕｂｌｅ  ｓｗｏｒｄ  ｅｆｆｅｃｔｓ）で、特異的かつ直接的に枯渇させることができるはずである。ＴＣＲｍ  ｍＡｂを使用して、ヒトＦｏｘｐ３に対して特異的なＴＣＲｍ  ｍＡｂである＃３２が、Ｆｏｘｐ３発現Ｔｒｅｇおよび腫瘍細胞に特異的に結合し、それらを死滅させ得ることが示された。Ｔｒｅｇの枯渇は、Ｔｒｅｇおよび腫瘍細胞の両方によりもたらされる免疫抑制を除去することによって、抗腫瘍免疫を大きく解放するはずである。
【０５０５】
方法および材料
１．ペプチド合成
ペプチドはすべて、Ｇｅｎｅｍｅｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｉｎｃ．（Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ，ＴＸ）によって購入し、合成した。ペプチドは無菌であり、８０％から＞９０％の純度であった。ペプチドをＤＭＳＯに溶解させ、食塩水中５ｍｇ／ｍＬに希釈し、−８０℃で保管した。ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１に使用した対照ペプチド：ユーイング肉腫由来ペプチドＥＷ（ＱＬＱＮＰＳＹＤＫ［配列番号１４０］）。Ｅｕｒｅｋａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．（Ｂｅｒｋｅｌｙ、ＣＡ）において、組換えＨＬＡ−Ａ＊０２およびベータ２ミクログロブリン（β２Ｍ）を用いてペプチドをリフォールディングすることによって、ビオチン化単鎖Ｆｏｘｐ３ｐ／ＨＬＡ−Ａ０２０１複合体を合成した。
【０５０６】
２．サイトカイン、抗体、および細胞株
ヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン（ＩＬ）−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１５、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α、およびプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２：ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｅ２）は、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）から購入した。ベータ２−ミクログロブリン（β２−ｍ）およびヒトＩＦＮ−γは、Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購入した。ＣＤ１４およびＣＤ３のための細胞単離キットは、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ（Ｂｅｒｇｉｓｃｈ  Ｇｌａｄｂａｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入した。ヒトＩＬ−２およびＴＧＦ−βは、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓから購入した。ヒトＴｒｅｇ単離キットは、Ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｃａｎａｄａ）から購入した。Ｆｏｘｐ−３＋およびＨＬＡ−Ａ＊０２０１＋皮膚Ｔリンパ腫細胞株のＭＡＣ−１およびＭＡＣ−２Ａは、親切なことに、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ＤｅｎｍａｒｋのＤｒ．Ｍａｄ  Ｈ．Ａｎｄｅｒｓｏｎにより提供された。ＴＡＰ欠損Ｔ２細胞、Ｔ白血病細胞株ＪＵＲＫＡＴ、および腫瘍細胞は、Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒの細胞免疫学研究室によってＨＬＡタイピングを行った。これらの細胞株を、５％〜１０％のＦＣＳ、ペニシリン、ストレプトマイシン、２ｍｍｏｌ／Ｌのグルタミン、および２−メルカプトエタノールを補充したＲＰＭＩ  １６４０中で、３７℃／５％ＣＯ２において培養した。マイコプラズマに関して定期的に細胞を点検した。表現型または遺伝子型によって細胞同一性を確認した。
【０５０７】
Ｆｏｘｐ３−＃３２のＦｃ増強ヒトＩｇＧ１型、マウスＩｇＧ１型、またはＢｉＴＥ型、および各々の対照は、Ｅｕｒｅｋａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｉｎｃによって産生された。Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ−Ｌｉｎｋ  ＡＰＣ抗体標識キットを製造元（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）の指示に従って使用することにより、＃３２のマウスＩｇＧ１形態およびその対照に対するＡＰＣコンジュゲーションを行った。ヒトＨＬＡ  Ａ＊０２に対するＭａｂ（クローンＢＢ７．２）、そのアイソタイプ対照であるマウスＩｇＧ２ｂに対するＭａｂ（クローンＭＰＣ−１１）、ヒトＣＤ３に対するＭａｂ（クローンＨＩＴ３ＡおよびＯＫＴ３）、ＣＤ４に対するＭａｂ（クローンＲＰＡ−Ｔ４）、ＣＤ８に対するＭａｂ（クローンＲＰＡ−Ｔ８）、ＣＤ１９に対するＭａｂ（クローンＨＩＢ１９）、ＣＤ２５に対するＭａｂ（クローン２Ａ３）、ＣＤ３３に対するＭａｂ（クローンＷＭ５３）、ＣＤ４５ＲＡに対するＭａｂ（クローンＨＩ１００）、ＦＩＴＣまたはＰＥにコンジュゲートしたマウス抗ＨｉｓタグｍＡｂ（クローンＦ２４−７９６）は、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から購入した。ヒトＦｏｘｐ３に対して特異的なＭａｂのクローンＰＣＨ１０１、そのアイソタイプ対照であるラットＩｇＧ２ａカッパ、クローン２３６Ａ／Ｅ７およびそのアイソタイプ対照であるマウスＩｇＧ１カッパ、ＣＤ４に対して特異的なＭａｂ（クローンＯＫＴ４）、ＣＤ１４に対して特異的なＭａｂ（クローン６１Ｄ３）、ＣＤ１２７に対して特異的なＭａｂ（クローンＨＩＬ−７Ｒ−Ｍ２１）は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入した。細胞内染色のための固定および透過処理キットもｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入した。ルシフェラーゼ基質のルシフェリンは、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＭＩ）から購入した。
【０５０８】
３．Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ刺激およびヒトＴ細胞培養物
多くの配列はアルゴリズムによって予測することができるが、これらのモデルは、生細胞で試験したとき、ＭＨＣに対する結合を３０％の事例において予測しないため、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験が必要である。加えて、結合が示されたとしても細胞傷害性Ｔ細胞応答が生じない場合があり、さらなるｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究が必要である。
【０５０９】
Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒの施設内審査委員会が承認したプロトコールに基づくインフォームドコンセントの後、フィコール密度遠心分離によってＨＬＡ−Ａ＊２４：０２健常ドナーから末梢血単核球（ＰＢＭＣ：ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｃｅｌｌ）を得た。磁気ビーズとカップリングしたヒトＣＤ１４に対するｍＡｂを使用した陽性選択によってＣＤ１４＋単球を単離し、Ｔ細胞の第１の刺激のために使用した。ＰＢＭＣのＣＤ１４−分画は、汎Ｔ細胞単離キットを使用した陰性免疫磁気細胞分離によるＣＤ３の単離のために使用した。細胞の純度は常に９８％超であった。５％の自家血漿（ＡＰ：ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｐｌａｓｍａ）、２０μｇ／ｍＬの合成ペプチド、２μｇ／ｍＬのβ２−ｍ、および５〜１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１５を補充したＲＰＭＩ  １６４０の存在下で、７日間にわたってＴ細胞を刺激した。１％のＡＰ、５００ユニット／ｍＬの組換えＩＬ−４、および１，０００ユニット／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦを補充したＲＰＭＩ  １６４０培地において細胞を培養することにより、ＣＤ１４＋細胞から単球由来の樹状細胞（ＤＣ）を生成した。インキュベーションの２日目および４日目に、ＩＬ−４およびＧＭ−ＣＳＦを含む新鮮な培地を加えたか、あるいは培養培地の半分を交換した。５日目に、未熟なＤＣに２０μｇ／ｍＬのクラスＩＩペプチドを加えた。６日目に、成熟サイトカインカクテルを加えた（ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ、５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１、１，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−６、１０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦ−α、および１μｇ／ｍＬのＰＧＥ−２）。７日目または８日目に、ＩＬ−１５を含む成熟ＤＣで、３０：１のＴ：ＡＰＣ比において、Ｔ細胞を再刺激した。自家ＤＣまたはＣＤ１４＋細胞のいずれかを抗原提示細胞（ＡＰＣ）として使用し、Ｔ細胞を同じ様式で３〜５回刺激した。最後の刺激の１週間後、ペプチド特異的Ｔ細胞応答を、ＩＦＮ−γ酵素結合免疫スポット（ＥＬＩＳＰＯＴ：ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ）アッセイによって検査した。
【０５１０】
４．ペプチド特異的Ｔ細胞応答を測定するＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
ＰＢＳ中１００μＬのマウス抗ヒトＩＦＮ−γ抗体（１０μｇ／ｍＬ；クローン１−Ｄ１Ｋ；Ｍａｂｔｅｃｈ）でＨＡ−Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）をコーティングし、４℃で一晩インキュベートし、ＰＢＳで洗浄して未結合の抗体を除去し、３７℃で２時間にわたってＲＰＭＩ  １６４０／１０％自家血漿（ＡＰ）でブロッキングした。ＣＤ３＋Ｔ細胞を、自家ＣＤ１４＋（１０：１のＥ：ＡＰＣ比）または自家ＤＣ（３０：１のＥ：ＡＰＣ比）のいずれかと共に播種した。種々の試験ペプチドを２０μｇ／ｍＬでウェルに加えた。陰性対照ウェルは、ペプチドなしで、または無関係のペプチドと共に、ＡＰＣおよびＴ細胞を含んだ。陽性対照ウェルは、Ｔ細胞と、ＡＰＣと、２０μｇ／ｍＬのフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ：ｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ、Ｓｉｇｍａ）を含んだ。すべての条件を３連で行った。マイクロタイタープレートを３７℃で２０時間インキュベートし、次いでＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎでしっかりと洗浄し、ヒトＩＦＮ−γに対するビオチン化検出抗体１００μｌ／ウェル（２μｇ／ｍＬ；クローン７−Ｂ６−１；Ｍａｂｔｅｃｈ）を加えた。これらのプレートを３７℃でさらに２時間インキュベートし、記載されているように（１２、１３）スポット展開を行った。ＫＳ  ＥＬＩＳＰＯＴ  ４．０ソフトウェア（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  Ｖｉｓｉｏｎ）を備えたコンピュータ支援ビデオ画像解析器の使用により、スポット数を自動的に決定した。
【０５１１】
５．５１クロム放出アッセイ。
記載されているように（１２、１３）、標準的なクロム放出アッセイにおいて特異的なＣＴＬの存在を測定した。簡潔に述べると、標的細胞単独、または３７℃で２時間（場合により一晩）にわたって５０μｇ／ｍＬの合成ペプチドをパルスしたものを、５０μＣｉ／細胞１００万個のＮａ２５１ＣｒＯ４（ＮＥＮ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．）で標識する。しっかりと洗浄した後、種々のＥ：Ｔ比においてＴ細胞と共に標的細胞をインキュベートする。すべての条件を３連で行った。プレートは、５％のＣＯ２中で３７℃において４〜５時間インキュベートした。上清液を採取し、ガンマカウンターで放射活性を測定した。特異的溶解率を次式から決定した：［（実験的放出−自発的放出）／（最大放出−自発的放出）］×１００％。最大放出は、１％のＳＤＳにおける放射標識した標的の溶解によって決定した１２、１３。
【０５１２】
６．Ｔｒｅｇの生成。
ＦＡＣＳ選別によってＰＢＭＣからＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を精製し、組換えヒトＩＬ−１（１００ユニット）およびＴＧＦ−β（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下で１週間にわたり、１０〜２０：１のエフェクター：刺激剤（Ｅ：Ｓ）比において、刺激剤／フィーダー細胞としてのアロＰＢＭＣで刺激し、同じ刺激を毎週基準で繰り返して、Ｔｒｅｇ細胞を維持した。ＣＤ４、ＣＤ２５＋に対するｍＡｂを用いた細胞の表面染色、およびｆｏｘｐ３を用いた細胞内染色によって、Ｔｒｅｇの表現型を判定した。ある特定の実施形態では、ｍＡｂ＃３２（ＥＸＴ０１７−３２）をＡＰＣにコンジュゲートし、このｍＡｂのＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋細胞集団に対する結合によって、Ｔｒｅｇ細胞の特異的認識を判定した。
【０５１３】
７．Ｆｏｘｐ３由来エピトープに対して特異的なｓｃＦｖのファージスクリーニング、選択、および特徴付け
以前に記載されているように１８、ｍＡｂクローンの選択のために、ヒトＳｃＦｖ抗体ファージディスプレイライブラリー（７×１０１０個のクローン）を使用した。手短に述べると、ビオチン化した無関係のペプチド／ＨＬＡ−Ａ０２０１複合体を使用して、ＨＬＡ−Ａ０２０１に結合する可能性のある、あらゆるクローンを除去した。残りのクローンをＦｏｘｐ３ｐ／ＨＬＡ−Ａ０２０１複合体に関してスクリーニングした。選択されたクローンを３〜４ラウンドのパニングプロセスによって濃縮した。ビオチン化単鎖Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に対する標準的なＥＬＩＳＡ法によって、陽性クローンを判定した。
【０５１４】
生細胞表面上のＨＬＡ−Ａ２／ペプチド複合体に対する陽性ｓｃＦｖクローンの結合を、次の細胞株についての間接的フローサイトメトリによってさらに試験した。（ｉ）内因性ＨＬＡ関連ペプチドの提示に欠陥があるＴＡＰ欠損ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋細胞株である、Ｔ２。Ｔ２細胞には、Ｆｏｘｐ３ペプチドまたは無関係のペプチドをパルスした。（ｉｉ）Ｆｏｘｐ３＋ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋細胞株、例えばＭＡＣ−１、ＭＡＣ−２Ａ、およびペプチドをパルスしなかった対照細胞株のＪｕｒｋａｔ（ＨＬＡ−Ａ０２−）。後者は、腫瘍細胞における天然にプロセシングされるＦｏｘｐ３−７ｐ／Ａ２複合体に対するｓｃＦｖの認識および結合親和性を決定する。
【０５１５】
合計でＦｏｘｐ３−７のファージクローン２１個、Ｆｏｘｐ３−２のファージクローン８個、およびＦｏｘｐ３−４のファージクローン３個を、各々のＦｏｘｐ３ペプチド／Ａ２複合体に対して特異的なｍＡｂを産生する能力に関してスクリーニングした。２０μｇ／ｍＬのβ２Ｍの存在下で一晩にわたり、無血清ＲＰＭＩ１６４０培地中のＦｏｘｐ３ペプチドおよび他のＨＬＡ−Ａ２結合ペプチド（５０μｇ／ｍＬ）をパルスしたＴ２細胞に対するファージｓｃＦｖの結合によって、生細胞におけるＦｏｘｐ３／Ａ２複合体の認識を測定した。これらは、Ｔ２細胞単独；Ｆｏｘｐ３−７、Ｆｏｘｐ３−２、またはＦｏｘｐ３−３ペプチドをパルスしたＴ２細胞；ＨＬＡ−Ａ２に結合する無関係のＥＷまたはＲＨＡＭＭ  ３（Ｒ３）ペプチドをパルスしたＴ２細胞を含む。上記の群における細胞は、洗浄してから次の３つのステップで染色した。
ステップ１：ファージ染色：Ｔ２細胞懸濁液（１０μＬ）を精製したｓｃＦｖファージクローン９０μＬと共に氷上で６０分間インキュベートし、続いて洗浄した。
ステップ２：１：１００希釈におけるＭ１３コートタンパク質に対するマウスｍＡｂ（１ｍｇ／ｍＬ）、氷上、３０分間、次いで洗浄。
ステップ３：ＦＩＴＣまたはＰＥにコンジュゲートしたヤギ（Ｆａｂ）２抗マウスＩｇ（１：１００希釈）、氷上、３０分間、次いで洗浄。
【０５１６】
これらの細胞を染色の各ステップ間に２回洗浄した。フローサイトメトリのための対照は、未染色細胞、およびヤギ抗マウスＩｇ（Ｆａｂ）／ＦＩＴＣまたはＰＥのみで染色した細胞を含んだ。
【０５１７】
８．Ｆｏｘｐ３−ＢｉＴＥの構築、発現、および精製
以前に記載されているように１９、Ｆｏｘｐ３−＃３２  ＢｉＴＥを操作した。マウスモノクローナル抗体の抗ヒトＣＤ３εのｓｃＦｖのＣ末端に、ｍＡｂ＃３２のｓｃＦｖのＮ末端を可動性リンカーによって連結した。２つのｍＡｂのｓｃＦｖをコードするＤＮＡ断片をＧｅｎｅＡｒｔ（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ）によって合成し、標準的なＤＮＡ技術を使用して、Ｅｕｒｅｋａの哺乳類発現ベクターｐＧＳＮ−Ｈｙｇにサブクローニングした。ＢｉＴＥの検出および精製のために、＃３２  ＢｉＴＥのＣ末端側の下流に６ヒスタミン（Ｈｉｓ）タグを挿入した。
【０５１８】
チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ：Ｃｈｉｎｅｓｅ  ｈａｍｓｔｅｒ  ｏｖａｒｙ）細胞にＦｏｘｐ３−ＢｉＴＥ発現ベクターをトランスフェクトし、メチオニンスルホキシイミン（ＭＳＸ：ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ）を用いた標準的な薬物選択、グルタミンシンセターゼ（ＧＳ：ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ）に基づく方法によって、安定な発現を達成した。分泌されたＦｏｘｐ３−ＢｉＴＥ分子を含有するＣＨＯ細胞上清を収集した。ＦＰＬＣ  ＡＫＴＡシステムによるＨｉｓＴｒａｐ  ＨＰカラム（ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してＦｏｘｐ３−＃３２  ＢｉＴＥを精製した。簡潔に述べると、ＣＨＯ細胞培養物を清澄化し、低いイミダゾール濃度（２０ｍＭ）でカラムに負荷し、次いで、均一濃度の高イミダゾール濃度溶出緩衝液（５００ｍＭ）を使用して、結合したＦｏｘｐ３−ＢｉＴＥタンパク質を溶出させた。無関係のヒトＩｇＧ１抗体（カタログ番号ＥＴ９０１、Ｅｕｒｅｋａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）から陰性対照ＢｉＴＥ抗体を構築し、Ｆｏｘ３−＃３２  ｓｃＦｖを置き換えた。
【０５１９】
９．Ｔｒｅｇの生成、表現型解析、およびＦｏｘｐ３−＃３２  ｍＡｂ結合
ＦＡＣＳ選別によって健常なＨＬＡ−Ａ＊０２０１陽性ドナーのＰＢＭＣからＣＤ４＋Ｔ細胞を精製し、組換えヒトＩＬ−２（１００ユニット）およびＴＧＦ−β（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下で１〜２週間にわたり、１：５〜１０のエフェクター：刺激剤（Ｅ：Ｓ）比において、刺激剤／フィーダー細胞としてのアロＰＢＭＣ（ＨＬＡ−Ａ＊０２０１陰性）または腫瘍細胞で刺激し、同じ刺激を繰り返して、Ｔｒｅｇ細胞を維持した１５〜１７。Ｔｒｅｇの表現型は、次のように判定した。氷上で３０分間にわたり、ＣＤ４、ＣＤ２５＋、ＣＤ１２７に対するｍＡｂ、ＡＰＣにコンジュゲートしたＦｏｘｐ３  ｍＡｂ＃３２で細胞の表面染色を行い、洗浄した。ヒトＦｏｘｐ３に対するｍＡｂおよびＣｙｔｏｆｉｘ／ＣｙｔｏＰｅｒｍキット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を製造元の指示に従って使用し、細胞内タンパク質染色によってＦｏｘｐ３の発現を測定した。Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｆｏｒｔｅｓａでのフローサイトメトリによって解析を行った。
【０５２０】
１０．ＨＬＡ−Ａ＊０２０１との関連においてＳｖＦｖ二特異性抗体（ＢｓＡｂ）構築物により媒介された、Ｔｒｅｇ細胞に対する、Ｔ細胞による細胞傷害
２つの方法を使用して、Ｆｏｘｐ３＃３２  ＢｉＴＥによるＴｒｅｇの死滅を測定した。天然のＴｒｅｇはＣＤ４＋Ｔ細胞の数パーセントにしか相当しないため、Ｔｒｅｇ死滅について十分な読み取りを得るために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ生成されたＴｒｅｇを標的として使用し、フローサイトメトリによるＴｒｅｇ集団の低下によってＴｒｅｇの死滅を判定した。手短に述べると、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１陰性ドナーから陰性選択によって精製されたＣＤ３  Ｔ細胞（エフェクター）を、一晩にわたり、特異的ＢｓＡｂ（「ＢｉＴＥ」とも呼ばれる）構築物（１μｇ／ｍＬ）（例えば、ＢｓＡｂ−＃３２）またはその対照ＢｓＡｂの存在下または非存在下で、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋ドナー由来のＴｒｅｇ細胞と共に、５：１のＥ：Ｔ比でインキュベートした。これらの細胞を洗浄し、ＣＤ４、ＣＤ２５、ｆｏｘｐ３、およびＨＬＡ−Ａ０２に対するｍＡｂで染色した。ＨＬＡ−Ａ２＋細胞をゲーティングし（Ｔｒｅｇを標的として）、エフェクターのみを含む対照培養物またはエフェクターと対照ＢｉＴＥを含む対照培養物と比較した、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１＋細胞中のＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋細胞の百分率の低下により、Ｔｒｅｇの死滅を判定した。加えて、標準的な５１Ｃｒ放出アッセイによるＡＤＣＣアッセイにおいて、Ｔｒｅｇ様Ｔリンパ腫細胞株であるＭＡＣ−１およびＭＡＣ−２Ａ（Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡＡ＊０２０１＋）を標的として使用した。
【０５２１】
１１．抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）
ＡＤＣＣのために使用した標的細胞は、Ｆｏｘｐ３−ＴＬＩペプチドもしくはＥＷ対照ペプチドのパルスありまたはなしのＴ２細胞、ならびにペプチドパルシングを行わなかったＦｏｘｐ３＋ＭＡＣ−１およびＭＡＣ２Ａ細胞株であった（上記の「サイトカイン、抗体、および細胞株」の節における一覧を参照されたい）。種々の濃度におけるＦｏｘｐ３＃３２  Ｆｃ増強ＩｇＧ１またはそのアイソタイプ対照を、標的細胞および新鮮なＰＢＭＣと共に、様々なエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で４〜５時間インキュベートした。細胞傷害は、標準的な５１Ｃｒ放出アッセイによって測定した。
【０５２２】
結果
本研究は、細胞表面のＨＬＡ−Ａ＊０２０１分子によって提示されるヒトＦｏｘｐ３由来のＣＤ８  Ｔ細胞エピトープを認識する、ｍＡｂ＃３２と名付けたＴ細胞受容体模倣（ＴＣＲｍ）ｍＡｂの使用により、選択的にＦｏｘｐ３陽性細胞を標的化する。その結果は、ｍＡｂ＃３２が、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１陽性ドナー由来のＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗＦｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ細胞ならびにＦｏｘｐ３およびＨＬＡ−Ａ＊０２０１を同時発現する腫瘍細胞株に特異的に結合したことを示す。Ｆｏｘｐ３  ｍＡｂの非フコシル化Ｆｃ増強ヒトＩｇＧ１型と二特異性Ｔ細胞エンゲージャー型との両方が、ＨＬＡ−Ａ０２０１＋ドナー由来のｉｎ  ｖｉｔｒｏ生成されたＴｒｅｇクローン、ならびにＣＤ４、ＣＤ２５、およびＦｏｘ３＋の高い発現レベルを有する「Ｔｒｅｇ様」皮膚リンパ腫細胞（ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋）を死滅させることができる。このＴＣＲｍ  ｍＡｂにより、ヒトがんの免疫療法に対する、または選択的な免疫刺激が是認される他の状況のための、別のアプローチが可能となり得る。加えて、Ｆｏｘ３を標的とする抗体は、Ｆｏｘｐ３を発現するＴ−ｒｅｇおよび腫瘍細胞によりもたらされる免疫抑制を克服することによる、がん免疫療法における新規のアプローチとなり得る。
【０５２３】
１．ＨＬＡ−Ａ＊０２０１との関連におけるＦｏｘｐ３由来エピトープの選択
ＷＴ１などの腫瘍抗原に由来する他の明確に定義されたエピトープとは異なり、Ｔ細胞応答を誘導するＦｏｘｐ−３由来のエピトープに関する情報はほとんどなかった。したがって、Ｆｏｘｐ３に対する細胞傷害性ＣＤ８  Ｔ細胞を生成することができる免疫原性エピトープをまず同定した。コンピュータベースの３つの予測アルゴリズム、ＢＩＭＡＳ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ−ｂｉｍａｓ．ｃｉｔ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｍｏｌｂｉｏ／ｋｅｎ＿ｐａｒｋｅｒ＿ｃｏｍｂｏｆｏｒｍ）、ＳＹＦＰＥＩＴＨＩ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｙｆｐｅｉｔｈｉ．ｄｅ／）、およびＲＡＮＫＰＥＰ（ｈｔｔｐ：／／ｂｉｏ．ｄｆｃｉ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／Ｔｏｏｌｓ／ｒａｎｋｐｅｐ．ｈｔｍｌ）を使用して、ヒトＦｏｘｐ３タンパク質配列全体をスクリーニングした。ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１分子との関連におけるＣＤ８  Ｔ細胞のヒトＦｏｘｐ３に由来する潜在的なエピトープ（配列番号２に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−１、配列番号３に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−２、配列番号４に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−３、配列番号５に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−４、配列番号６に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−５、配列番号７に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−６、および配列番号８に表記されているアミノ酸配列を有するＦｏｘｐ３−７）を選択して、これらのペプチドにＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋ドナー由来の特異的なＣＤ８  Ｔ細胞の応答を誘導する能力があるかを試験した。重要なことに、選択されたＨＬＡ−Ａ＊０２０１結合ペプチドのすべてがＣ末端で切断されると予測され、これはプロテオソーム（proteosomes）によってプロセシングされる確率が高いことを示唆している。
【０５２４】
２．ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１分子との関連におけるペプチド特異的Ｔ細胞応答
多くの配列はアルゴリズムによって予測することができるが、これらのモデルは、生細胞で試験したとき、ＭＨＣに対する結合を場合によっては予測しないため、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験が必要である。加えて、結合が示されたとしても、細胞傷害性Ｔ細胞応答が生じない場合があり、さらなるｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究が必要である。いくつかのＦｏｘｐ−３由来ペプチドを選択して、それらにＨＬＡ−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１＋ドナー由来のＣＤ８  Ｔ細胞の応答を刺激する能力があるかを試験した。ヒトＦｏｘｐ３に由来する複数のペプチドを用いて、複数のドナー由来のＴ細胞の応答を試験した後、さらなる研究のためにＦｏｘｐ３−７（配列番号８に表記されているアミノ酸配列）を選択した。興味深いことに、このペプチドは、Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ＊０２０１＋皮膚Ｔリンパ腫細胞を認識する強力なペプチド特異的ＣＤ８  Ｔ細胞応答を誘導することも示されている１４。
【０５２５】
複数のドナーのＣＤ３  Ｔ細胞をＦｏｘｐ３由来ペプチドで３〜５ラウンド刺激し、ＩＦＮ−γエリスポットアッセイおよび５１Ｃｒ放出アッセイによってペプチド特異的Ｔ細胞応答を測定した。Ｆｏｘｐ３−３ペプチドを除くすべてのペプチドが、複数のＨＡＬ−Ａ＊０２：０１＋ドナーにおいてペプチド特異的Ｔ細胞応答を誘導した。
【０５２６】
Ｆｏｘｐ３−１からＦｏｘｐ３−６のペプチドで刺激されたＴ細胞は、刺激性ペプチドのみに対してはペプチド特異的応答を誘発したが、他のペプチドに対しても、ＣＤ１４＋抗原提示細胞（ＡＰＣ）またはペプチドを含まない無関係のペプチドＥＷをパルスしたＡＰＣを含む対照に対しても、ペプチド特異的応答を誘発しなかった（図１Ａ〜図１Ｄおよび図２Ａ）。ペプチド特異的Ｔ細胞応答は複数のＨＬＡ−Ａ２＋ドナーにおいて再現可能であり（図２Ａ〜図２Ｃ）、また図２Ｂに示されている別の例として、これらのペプチド間で交差反応性は全く検出されなかった。
【０５２７】
天然にプロセシングされるＦｏｘｐ３エピトープをペプチド誘導性Ｔ細胞が認識し得るかを試験するために、Ｆｏｘｐ３およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋であるＴ細胞リンパ腫細胞株のＭＡＣ−１およびＭＡＣ２Ａ（図３）（１４）ならびにＦｏｘｐ３＋ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１−細胞株Ｊｕｒｋａｔ（図７Ｃ）を標的として使用した。Ｆｏｘｐ３−４、Ｆｏｘｐ３−６、またはＦｏｘｐ３−７ペプチドで刺激されたＴ細胞は、ＭＡＣ−１およびＭＡＣ−２Ａ細胞株を認識することができたが、Ｊｕｒｋａｔは認識しなかった。Ｆｏｘｐ３−６およびＦｏｘｐ３−７ペプチドで刺激されたＴ細胞はまた、精製されたＣＤ４＋細胞を抗ＣＤ３  ｍＡｂ、ＩＬ−２、およびＴＧＦ−βで刺激することにより、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋ドナーから生成されたＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５  Ｔｒｅｇ細胞を認識した。
【０５２８】
Ｆｏｘｐ３由来ペプチドのＦｏｘｐ３−１、Ｆｏｘｐ３−２、Ｆｏｘｐ３−４、Ｆｏｘｐ３−５、Ｆｏｘｐ３−６、およびＦｏｘｐ３−７の、ペプチド特異的な、Ｔ細胞による細胞傷害も研究した。ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋ドナー由来のＣＤ３  Ｔ細胞を、Ｆｏｘｐ３由来ペプチドのＦｏｘｐ３−１、Ｆｏｘｐ３−２、Ｆｏｘｐ３−４、Ｆｏｘｐ３−５、Ｆｏｘｐ３−６、またはＦｏｘｐ３−７で刺激し、Ｔ２細胞における刺激性ペプチドに対する細胞傷害を、５１Ｃｒ放出アッセイによって測定した。図４Ａ〜図４Ｆならびに図５Ｃおよび図５Ｄに示されているように、試験したＦｏｘｐ３由来ペプチドはすべて、ペプチド特異的な、Ｔ細胞による細胞傷害を示した。
【０５２９】
Ｆｏｘｐ３−７（ＴＬＩペプチドまたはＦｏｘｐ３−ＴＬＩペプチドとも表される）に対するさらなる実験は、４ラウンドの刺激後のＴ細胞が、ＩＦＮ−γエリスポットアッセイによると、ＴＬＩペプチドをパルスした自家ＣＤ１４＋単球のみを認識し、ＣＤ１４＋ＡＰＣ単独または無関係のＨＬＡ−Ａ＊０２０１結合ペプチドＥＷをパルスしたものは認識しなかったことを示す（図５Ａ）。重要なことに、Ｔ細胞応答は、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１＋Ｆｏｘｐ３＋の皮膚Ｔリンパ腫細胞株であるＭＡＣ−１およびＭＡＣ−２Ａに対しても観察されたが、Ｆｏｘｐ３＋ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｔ白血病細胞株のＪｕｒｋａｔに対しては観察されず、このことは、ＴＬＩで刺激されたＴ細胞が、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１分子により提示される天然にプロセシングされるＦｏｘｐ３  ＴＬＩエピトープを認識し得ることを示唆している（図５Ｂ）。ＩＦＮ−γ分泌の結果と整合することには、ＴＬＩペプチドで刺激されたＴ細胞は、ＴＬＩペプチドをパルスしたＴ２ならびにパルスしていないＭＡＣ−１およびＭＡＣ−２Ａ細胞を死滅させたが、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１陰性のＦｏｘｐ３＋細胞株であるＨＬ−６０は死滅させなかった（図５Ｃおよび図５Ｄ）。上記のデータは、ペプチドをパルスしたＴ２細胞と、Ｆｏｘｐ３／ＨＬＡ−Ａ２を発現するＴリンパ腫細胞株との両方において、ＨＬＡ−Ａ２分子との関連におけるＦｏｘｐ３由来エピトープの同定、およびＦｏｘｐ３に対するＣＴＬ応答の発生を示した。これは、天然のペプチドがプロセシングされ、細胞表面上のＨＬＡにおいて、Ｔ細胞ＴＣＲによる認識のために提示されることを示した。これらのデータに基づき、Ｆｏｘｐ３−７、Ｆｏｘ３−４、およびＦｏｘ３−２エピトープを選択して、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１分子との関連におけるＴＣＲ模倣モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を生成した。
【０５３０】
３．ファージディスプレイ技術を使用した、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１分子との関連におけるＦｏｘｐ３ペプチドに対するＴＣＲ模倣ｍＡｂの生成
合計でＦｏｘｐ３−７のファージクローン２１個、Ｆｏｘｐ３−２のファージクローン８個（図６Ｉ）、およびＦｏｘｐ３−４のファージクローン３個（図６Ｊ）を、各々のＦｏｘｐ３ペプチド／Ａ２複合体に対して特異的なｍＡｂを産生する能力に関してスクリーニングした。図６Ａ〜図６Ｈは、Ｆｏｘ３−７に対するファージｓｃＦｖクローンの結合データを示す。図６Ｉは、Ｆｏｘ３−２に対するファージｓｃＦｖクローンの結合データを示す。図６Ｊは、Ｆｏｘ３−４に対するファージｓｃＦｖクローンの結合データを示す。
【０５３１】
特に、Ｆｏｘｐ３−７については、Ｆｏｘｐ３タンパク質を発現する腫瘍細胞を認識するエピトープ特異的Ｔ細胞応答を誘導する能力がＦｏｘｐ３−ＴＬＩペプチドにあることを確認することにより、ＴＬＩ／ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に対して特異的なＴＣＲｍ  ｍＡｂを、以前に記載されているファージディスプレイ技術１８を使用することによって生成した。手短に述べると、ファージライブラリーのスクリーニングによって選択されたＴＬＩｐ／Ａ２複合体に対して特異的な単一ファージクローンを、ＥＬＩＳＡによってさらに検証した。Ｔ２細胞を使用して、選択されたクローンを生細胞に対する結合について試験した。ＴＬＩペプチドを含まないＴ２細胞、またはＨＬＡ−Ａ＊０２０１に結合する無関係のペプチドを含むＴ２細胞に対して結合を示した、あらゆるクローンを除去した。５ラウンドのスクリーニング後、ＴＬＩペプチドをパルスしたＴ２細胞ならびにｆｏｘｐ３およびＨＬＡ−Ａ＊０２０１を発現する生細胞に対する結合特異性に基づいて、８つのｓｃＦｖクローンを、さらなる特徴付けのために、完全長ヒトＩｇＧ１または二特異性Ｔ細胞エンゲージャーｍＡｂ（Ｔ−ＢｉＴＥ）のいずれかの中に操作する（ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｉｎｔｏ）ために選択した。
Ｆｏｘｐ３−７について：クローン＃３２、１７、２８、５４、１８、５３、２７、２０
【０５３２】
４．Ｆｏｘｐ３−７／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体に対して特異的なＢｓＡｂの特徴付け
Ｍａｂの死滅機能は、複数の方法で増強することができる。Ｔ細胞による細胞傷害を標的に向けるための戦略として、Ｆｏｘｐ３−７ペプチド／ＨＬＡ−Ａ２複合体に対して特異的なｍＡｂの８つの二特異性Ｔ細胞エンゲージャー構築物を生成した。Ｆｏｘｐ３−７／ＨＬＡ−Ａ２複合体に対して特異的な８つのＢｓＡｂ（「ＢｉＴＥ」とも呼ばれる）構築物の結合を、Ｆｏｘｐ３−７または無関係のペプチドのパルスありまたはなしのＴ２細胞で試験し、また、パルスしていないＴリンパ腫細胞のＭＡＣ−１、ＭＡＣ−２Ａ、およびＪｕｒｋａｔ細胞でも試験した。
【０５３３】
図７Ａ〜図７Ｃに示されているように、ＢｓＡｂ構築物＃１７、１８、２０、２７、２８、３２、５３、および５４のすべてが、Ｆｏｘｐ３−７ペプチドをパルスしたＴ２細胞に極めて良好に結合したが、Ｔ２細胞単独または対照ペプチドを含むものには良好に結合しなかった。しかしながら、ＢｓＡｂ＃３２はＭＡＣ−１およびＭＡＣ−２Ａの両方の細胞に結合し、天然にプロセシングされるエピトープを認識するのに十分な結合活性を有していたことが示された（図７Ａおよび図７Ｂ）。＃３２  ＢｉＴＥはＣＤ３＋Ｔ細胞株Ｊｕｒｋａｔにも結合し、ＢｉＴＥの抗ＣＤ３アームによるＣＤ３への結合が示された（図７Ｃ）。ＢｓＡｂ構築物のすべてがＣＤ３＋Ｔ細胞株Ｊｕｒｋａｔに結合し、ＢｓＡｂの抗ＣＤ３アームの結合が示された。
【０５３４】
類似体ＴＬＩペプチドを含有するＴ２細胞に対するＦｏｘｐ３−＃３２  ＢｉＴＥの結合を使用することにより、Ｆｏｘｐ３−＃３２  ｍＡｂの特異性をさらに解析した。ＴＬＩペプチドは、１位、２位、３位、４位、５位、７位、および８位をアラニンに、または１０位をグリシンに置換した。６位はすでにアラニンであり、これはそのままにしておいた。変異体ペプチドをＴ２細胞に負荷し、Ｆｏｘｐ３−Ｂｉｔｅ結合について試験した。２位、８位、９位、または１０位におけるアラニンまたはグリシン置換は、天然のＴＬＩペプチドと比較して、ｆｏｘｐ３−ｂｉｔｅの結合を低下させた（図８Ａ）。両方のペプチドがＴ２安定化アッセイにおいて結合の低下を示したため、２位および９位における結合の損失は、ＨＬＡ−Ａ＊０２分子に対するペプチド結合親和性の低下に起因する可能性がある（図８Ｂ）。ＨＬＡ−Ａ２安定化における変異体ペプチドＴＬＩ−Ａ８およびＧ１０の著しい低下はなく、これらの位置におけるアミノ酸がｍＡｂによって特異的に認識され得ることを示唆している。これらの結果は、ＴＬＩペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に対するｆｏｘｐ３−ＢｉＴＥの特異性、そしてＨＬＡ−Ａ＊０２０１分子のみに対する結合が不十分であったことをさらに示した。
【０５３５】
５．Ｆｏｘｐ３およびＨＬＡ−Ａ＊０２０１を発現するヒトＴｒｅｇおよび腫瘍細胞のＦｏｘｐ３−＃３２  ｍＡｂの認識。
Ｆｏｘｐ３  ｍＡｂは、ＴＬＩペプチドをパルスしたＴ２細胞に対して優れた結合特異性を示したものの、ＴＬＩエピトープが天然起源のＴｒｅｇおよび誘導性Ｔｒｅｇ中のＨＬＡ−Ａ＊０２０１分子によってプロセシングおよび提示されるかを試験することが肝要である。健常ドナーのＨＬＡ−Ａ＊０２０１陽性または陰性のＰＢＭＣ由来のＴｒｅｇに対するＦｏｘｐ３＃３２  ｍＡｂの結合に関して、比較を行った。ＣＤ４＋Ｔ細胞に、天然のＴｒｅｇの特徴であるＣＤ２５  ｈｉｇｈおよびＣＤ１２７ｌｏｗ集団に対するゲーティングを行った。ＨＬＡ−Ａ＊０２０１＋ドナーにおいて、Ｍａｂ−＃３２  ｍＡｂは、そのアイソタイプ対照と比較してこの集団の著しいシフトを示した（図９Ａ）。対照的に、ｍＡｂ−＃３２は、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｌｏｗＣＤ１２７ｈｉｇｈ集団にもＣＤ８＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｈｉｇｈ集団にも結合しなかった（それぞれ、図９Ｂおよび図９Ｃ）。ＨＬＡ−Ａ＊０２０１陰性ドナーでは、Ｍａｂ−＃３２は、同じＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇ集団に結合しなかった（図９Ｄ）。
【０５３６】
次に、＃３２  ｍＡｂが誘導性Ｔｒｅｇも認識するかを試験するために、ＨＬＡ−Ａ０２０１＋ドナーから精製されたＣＤ４＋Ｔ細胞をＩＬ−２およびＴＧＦ−βの存在下においてアロＰＢＭＣ（ＨＬＡ−Ａ＊０２０１陰性）または腫瘍細胞ＭＡＣ−２Ａのいずれかで刺激することによって、Ｔｒｅｇ細胞株を生成した１５〜１７。典型的な染色パターンを図１０Ａ〜１０Ｂに示す。図１０Ａ〜図１０Ｂに示されているように、ＥＸＴ０１７−３２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋Ｔｒｅｇ細胞に特異的に結合した。Ｔｒｅｇは、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１陽性ドナー由来のＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１陰性アロＰＢＭＣ（図１０Ａ）またはＭＡＣ−２Ａ腫瘍細胞（図１０Ｂ）のいずれかで刺激することによって生成した。Ｆｏｘｐ３＃３２  ｍＡｂは、単一のＣＤ４＋Ｔ細胞集団と比較してＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞に強力に結合し（右上）、ｍＡｂ−＃３２は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋集団のみに結合し、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３陰性集団には結合しなかった（左下パネル）。この結果は、アロＰＢＭＣ（図１０Ａ）またはＭＡＣ−２Ａ細胞（図１０Ｂ）のいずれかの刺激によって生成されたＴｒｅｇ間で同様であった。これらの結果は、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１分子との関連においてＦｏｘｐ３エピトープを発現するＴｒｅｇを特異的に認識する能力がＦｏｘｐ３−＃３２  ｍＡｂにあることを示した。
【０５３７】
多くの型のヒトがん細胞が、予後不良および遠隔転移に関連するＦｏｘｐ３を発現することが示されている。したがって、Ｆｏｘｐ３  ｍＡｂはまた、Ｆｏｘｐ３を発現する腫瘍細胞を直接的に攻撃し得る。
【０５３８】
６．ＨＬＡ−Ａ＊０２０１との関連におけるＦｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇおよび腫瘍細胞に対する、Ｍａｂ−＃３２  ＢｉＴＥ媒介性の、Ｔ細胞による細胞傷害
ＨＬＡ−Ａ＊０２０１分子との関連において、Ｆｏｘｐ３  ＴＬＩエピトープに対するＴ細胞死滅を媒介する能力がｍＡｂ−＃３２  ＢｉＴＥにあるかを試験するために、実験を行った。ＰＢＭＣをエフェクターとして使用し、＃３２  ＢｓＡｂおよびアイソタイプ由来対照ＢｓＡｂの存在下または非存在下で、標準的な５１Ｃｒ放出アッセイによって細胞傷害を測定した。Ｔ２細胞にＴＬＩまたは対照のＨＬＡ−Ａ０＊２０１結合ペプチドＣＴをパルスし、ｍＡｂ＃３２−ＢｉＴＥまたはアイソタイプ由来対照ＢｉＴＥの存在下または非存在下で、ＰＢＭＣをエフェクターとして使用した。Ｍａｂ−＃３２  ＢｉＴＥは、ＴＬＩペプチドをパルスしたＴ２細胞に対しては特異的かつ強力な死滅活性を媒介したが、Ｔ２細胞単独または対照ペプチドをパルスしたものに対しては特異的かつ強力な死滅活性を媒介しなかった（図１１Ａ）。同様に、ｍＡｂ−＃３２−ＢｉＴＥの存在下のＰＢＭＣは、Ｔｒｅｇ様Ｔリンパ腫細胞株のＭＡＣ−１およびＭＡＣ２Ａ細胞に対して、示された濃度で用量依存的な死滅を示したが（図１１Ｃおよび図１１Ｄ）、Ｆｏｘｐ３＋／ＨＬＡ−Ａ＊０２０１陰性細胞株ＨＬ−６０（図１１Ｂ）またはＪｕｒｋａｔ細胞（図１１Ｅ）に対しては用量依存的な死滅を示さなかった。ＭＡＣ−１およびＭＡＣ−２Ａ両方の細胞株がＣＤ３を発現せず、これらの細胞株に対する、Ｔ細胞による細胞傷害は、抗ＣＤ３  ｍＡｂのｓｃＦｖアームによって媒介されない。これらのデータは、Ｆｏｘｐ３およびＨＬＡ−Ａ０＊２０１を発現する腫瘍細胞を死滅させる能力がｍＡｂ−＃３２  ＢｉＴＥにあることを示し、またＦｏｘｐ３を発現する細胞の死滅の特異性を示した。
【０５３９】
健常なＰＢＭＣ中のＴｒｅｇ集団はｂｉｔｅによって媒介される細胞傷害を測定するには少なすぎる可能性があるため、アロ刺激に続いて限界希釈を行うことにより、ＨＬＡ−Ａ０２０１＋ドナーからＴｒｅｇクローンを生成した。２つの異なるＴｒｅｇクローンを、Ｆｏｘｐ３−ＢｉＴＥまたは対照ｂｉｔｅの存在下または非存在下で一晩にわたり、ＨＬＡ−Ａ＊０２陰性ドナーのＰＢＭＣと共にインキュベートした。次いで、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１＋Ｔ細胞集団（Ｔｒｅｇクローン由来のもののみ）のうちのＦｏｘｐ３＋細胞の百分率を、フローサイトメトリによって測定した。ＨＬＡ−Ａ＊０２＋Ｆｏｘｐ３＋細胞の低下は、Ｆｏｘｐ３−ＢｉＴＥ媒介性Ｔ細胞死滅を示す。図１２Ａ〜図１２Ｂは、それぞれ、２つのＴｒｅｇクローンからの結果を示す。図１２Ａ〜図１２Ｂに示されるフローサイトメーターデータを、Ｔｒｅｇ細胞パーセントの低下を示す棒グラフとして図１２Ｃにまとめた。クローン３では、ＨＬＡ−Ａ＊０２＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔ細胞の百分率は、エフェクターのみを含む対照（ＰＢＭＣ：９．８８％）または対照ＢｉＴＥを含むエフェクター（９．１１％）と比較して、＃３２−ＢｉＴＥの存在下において約６０％超減少した（３．４５％）。他のＴｒｅｇクローンからも同様の結果が得られた。
【０５４０】
これらの結果は、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１分子との関連において、Ｔｒｅｇを認識し、Ｔｒｅｇに対しＴ細胞による細胞傷害を媒介する能力が＃３２−ＢｉＴＥにあることを示した。
【０５４１】
７．Ｆｏｘｐ３ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体に対するＥＸＴ０１７抗体の結合親和性
バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ：ｂｉｏｌａｙｅｒ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ）を使用して、ＥＸＴ０１７ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体に対する結合親和性について８つのＥＸＴ０１７−ＢｓＡｂを評価した。その結果を表５に示す。
【表５】
2019512207.tif 000015
【０５４２】
表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ：ｓｕｒｆａｃｅ  ｐｌａｓｍｏｎ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）を使用して、ＥＸＴ０１７ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体に対するＥＸＴ０１７−３２−ｈＩｇＧ１およびｍＩｇＧ１の結合親和性を測定した。その結果を表６に示す。
【表６】
2019512207.tif 000016
【０５４３】
考察
抗腫瘍免疫を損なうことなくＴｒｅｇ機能の枯渇または干渉を行うための治療戦略の開発は、Ｔｒｅｇ特異的表面マーカーが存在しないために困難であった。Ｔｒｅｇの特異的な枯渇を妨げるもののうちの１つは、ＴｒｅｇおよびエフェクターＴ細胞の両方が、特に細胞表面分子の発現パターンにおいて、活性化された表現型を呈することであり、これらは両方とも、ＣＤ２５、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原（ＣＴＬＡ：ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎｓ）−４、ＯＸ４０、およびグルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体関連タンパク質（ＧＩＴＲ）の発現が高い。Ｔｒｅｇの枯渇は、単独でも、または抗ＣＤ２５  ｍＡｂによるワクチン接種との組合せにおいても、種々の動物モデルで抗腫瘍免疫応答の改善に寄与することが示されている。しかしながら、臨床的には、ダクリズマブ（dacizumab）（抗ＣＤ２５  ｍＡｂ）またはＩＬ−２とジフテリア毒素の活性ドメインとから構成された組換えタンパク質であるデニロイキンジフチトクスを使用することによるＣＤ２５の標的化は、見込みの少ない成果を示している。ＴｒｅｇはＣＴＬＡ−４を発現するものの、臨床試験の結果は、抗ＣＴＬＡ−４処置の効果がエフェクターＴ細胞の活性化の増大に起因すること、または、エフェクター細胞応答の最適な誘導を可能にする初期投与後早期のＴｒｅｇ枯渇効果が存在することを示唆している。ごく最近では、Ｓａｋａｇｕｃｈｉのグループにより、Ｃ−Ｃケモカイン受容体４（ＣＣＲ４）が、メラノーマ患者のＴＩＬ中のエフェクターＴｒｅｇ（ｅＴｒｅｇ；ＣＤ４５ＲＡ−Ｆｏｘｐ３ｈｉＣＤ４＋）において主に発現することが示された。抗ＣＣＲ４  ｍＡｂを使用してこの集団をｉｎ  ｖｉｔｒｏで枯渇させると、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドで刺激した際のＴ細胞応答が増強した。Ｔ細胞白血病リンパ腫患者にこのｍＡｂを投与したとき、ｅＴｒｅｇ分画は低下し、ＮＹ−ＥＳＯ−１特異的ＣＤ８  Ｔ細胞応答は増大される。ＣＣＲ−４は、ＣＣケモカインであるＣＣＬ１７およびＣＣｌ２２の同族受容体であり、免疫細胞の機能的に明確に異なる部分集合において発現する。Ｔｒｅｇに加えて、活性化されたＴ細胞、Ｔｈ２細胞、血小板、ＮＫ細胞、マクロファージ、および樹状細胞（ＤＣ）においても発現する。同様に、同族リガンドまたはアゴニストｍＡｂを使用したＧＩＴＲの標的化は、マウスモデルにおける抗腫瘍応答に有効であることが示されている。しかしながら、このような戦略の臨床的有効性は、ヒト治験では未だ調査されていない。
【０５４４】
Ｆｏｘｐ３は、フォークヘッド／ウィングドヘリックスファミリーの転写因子であり、ＣＤ４＋Ｔ細胞集団全体の２％〜５％を構成するＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞に主に見られるが、がん患者の腫瘍塊、末梢血、または腹水において著しく濃縮されている。腫瘍細胞は、腫瘍部位にＴｒｅｇを動員するのみならず、直接的または間接的に腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を通じて抗原刺激およびサイトカインをもたらすことにより、ナイーブＴ細胞およびまたはエフェクターＴ細胞のＴｒｅｇへの変換においても肝要な役割を果たす。ＴＩＬでは、Ｔｒｅｇに対するエフェクターＴ細胞の比が疾患の転帰を決定する。腫瘍進行とＴｒｅｇとの間には強い相関性が存在し、Ｔｒｅｇの数または出現頻度の増加は、卵巣癌、乳癌、非小細胞肺癌、肝細胞癌、腎細胞癌、膵癌、および胃癌をはじめとする多種のがんにおける予後不良に関連付けられている１〜７。Ｔｒｅｇ媒介性免疫抑制の正確な機構は十分に理解されていないが、Ｔｒｅｇは、部分的には、免疫抑制サイトカインを分泌し、細胞接触依存性機構においてＴ細胞の活性化および増殖を抑制することによって作用し得る。Ｔｒｅｇにおいて、Ｆｏｘｐ３の最も重要な機能は、通常のＴ細胞におけるＦｏｘｐ３の異所発現が、通常のＴ細胞を機能的かつ表現型的にＴｒｅｇ様細胞に変換し得ることである。したがって、Ｆｏｘｐ３は、Ｔｒｅｇの系列決定および発生分化のためのマスター調節遺伝子であると考えられてきた。
【０５４５】
興味深いことに、Ｆｏｘｐ３の免疫抑制性機能は、Ｔｒｅｇのみで限定されるわけではない。Ｈｉｎｚらは、Ｆｏｘｐ３発現が膵がん患者の過半数において検出されたことを報告した。膵臓腺癌細胞におけるＦｏｘｐ３の異所発現は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのＴ細胞増殖の完全な阻害を誘導し、この効果は、ｓｉＲＮＡを使用してＦｏｘｐ３遺伝子発現のサイレンシングを行うことによって部分的に抑止された。著者らは、Ｆｏｘｐ３を発現する膵がん細胞がＴｒｅｇ機能を模倣し、このことが、がん患者における免疫回避の新たな機構を表し得ることを示唆した。Ｆｏｘｐ３の免疫抑制性機能は、白血病細胞中のＣＤ４およびＣＤ２５の構成的発現ならびに顕著な免疫不全状態を特徴とする成人Ｔ白血病（ＡＴＬ：ａｄｕｌｔ  Ｔ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）患者においても示唆されている。その後、多くの型のがん細胞がＦｏｘｐ３を発現するという多数の報告があり、腫瘍抑制微小環境におけるＦｏｘｐ３の重要な役割をさらに支持している。
【０５４６】
Ｆｏｘｐ３は長きにわたりＴｒｅｇの最も決定的なマーカーと考えられており、魅力的な標的である。しかしながら、このタンパク質は細胞内にあり、従来の抗体療法には利用しにくいため、Ｆｏｘｐ３を阻害する薬物またはｍＡｂは存在しない。細胞内にあるものの、ある特定のプロテアソームによりプロセシングされるＦＯＸｐ３ペプチドは、ＭＨＣクラスＩ分子により提示されると細胞表面上に発現し、ＣＤ８  Ｔ細胞によって認識され得る。実際、Ａｎｄｅｒｓｏｎのグループは、Ｆｏｘｐ３特異的な細胞傷害性ＣＤ８  Ｔ細胞が、ヒトＰＢＭＣ、特にがん患者に存在することを示した。そのようなＣＴＬは、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１制限様式でＴｒｅｇを認識し、悪性のＴｒｅｇ様皮膚Ｔリンパ腫細胞を死滅させることができる。この研究は、したがって、ペプチド特異的ＣＴＬを使用するアプローチによって細胞内Ｆｏｘｐ３を標的とすることの可能性を示した。ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１との関連においてＦｏｘｐ３ペプチドに対して特異的なＴ細胞受容体模倣ｍＡｂ（ＴＣＲｍ）を開発するために、本出願における新規のアプローチを採った。Ｆｏｐｘ３タンパク質から、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１分子との関連において特異的ＣＤ８  Ｔ細胞応答を誘導し得るいくつかのペプチドを同定した。Ｆｏｘｐ３は大きなフォークヘッドタンパク質ファミリーのメンバーであることから、オフターゲットの可能性を回避するために、Ｆｏｘｐ１、２、および４などの他のＦｏｘｐファミリーメンバーと最小限の相同性を有するペプチドＴＬＩをｍＡｂ操作のために選択した。このｍＡｂの生成は成功し、このｍＡｂは、Ｆｏｘｐ３陽性がん細胞株およびＴｒｅｇ細胞に特異的に結合し、それらを死滅させることができる。
【０５４７】
活性化された従来のＴ細胞が、Ｆｏｘｐ３を一過性発現することができることは公知である。しかしながら、活性化されたＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞およびＴｒｅｇは、ＩＬ−７受容体のアルファ鎖であるＣＤ１２７の発現によって区別することができる。ＴｒｅｇはＣＤ１２７を低発現するが、活性化されたＴ細胞はＣＤ１２７を高発現する。ＴＣＲｍ  Ｆｏｘｐ３−＃３２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１＋健常ドナーにおけるＣＤ４＋Ｔ細胞の、ＣＤ１２７  ｌｏｗ  ＣＤ２５  ｈｉｇｈ、Ｆｏｘｐ３  ｈｉｇｈ集団のみに結合した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ誘導性Ｔｒｅｇを試験したとき、Ｆｏｘｐ３  ｍＡｂは、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉ集団のみに結合し、ＣＤ２５ｌｏ／陰性集団には結合しなかった。概して、ＴＣＲｍ  ｍＡｂは低密度ペプチド／ＨＬＡ複合体を認識するが、標的化されたタンパク質またはＨＬＡのいずれかの発現が低いと、かかるｍＡｂが効果的に認識を行うのは困難である。したがって、Ｆｏｘｐ３  ＴＣＲｍ  ｍＡｂは、Ｆｏｘｐ３を高発現する細胞にのみ結合する。加えて、腫瘍微小環境において、Ｔ細胞は大いに不活性化状態にあり、ＣＤ２５ｈｉＦｏｘｐ３ｈｉＣＤ４  Ｔ細胞はＴｒｅｇである可能性が最も高い。これによって、Ｆｏｘｐ３−＃３２  ｍＡｂをまず使用してＴｒｅｇを枯渇させた後に、ワクチン接種またはチェックポイント遮断などのアプローチを使用してエフェクターＴ細胞を増やすかまたはそれらのエフェクター活性を増大させる戦略をとることにより、有効な併用療法を設計する治療の幅が得られる。そのような戦略は、Ｔｒｅｇおよび活性化されたＴ細胞の随伴的な枯渇を回避することにより、選択的かつより有効な治療予後を達成し得る。
【０５４８】
（実施例２）
Ｆｏｘｐ３−７のトップファージクローンに関するペプチドエピトープマッピング
Ｆｏｘｐ３−７ペプチドに対する８つのＥＸＴ０１７抗体のエピトープマッピングを行って、抗体結合に必要なエピトープを決定した。簡潔に述べると、１〜９位にアラニン置換を有する変異体ＥＸＴ０１７ペプチドを生成し、これらをＴ２細胞の表面上に個別にパルスした。ペプチドを負荷したＴ２細胞をＥＸＴ０１７ファージで染色し、フローサイトメトリによって結合を測定した。表７に、実験に使用した変異体ＥＸＴ０１７のアミノ酸配列を列記する。表８は、表７に示されているアラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対するＥＸＴ０１７ファージＦＡＣＳ染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）値の要約である。表８に示されているように、ＥＸＴ０１７−ｍｕｔ２はアンカー位置のためのものであった。アラニン変異体のパネルが負荷されたＴ２細胞に対する８つのＥＸＴ０１７ファージの結合ヒストグラムが、図１３Ａ〜図１３Ｈに示されている。
【表７】
2019512207.tif 000017
【表８】
2019512207.tif 000018
【０５４９】
抗体結合に影響する位置（野生型ペプチドに対して結合ＭＦＩ＜２０％）には＊印が付いている。
【０５５０】
（実施例３）
Ｆｏｘｐ３を標的とするＣＡＲ  Ｔ細胞
ＣＡＲ  Ｔ細胞の養子移入は、Ｂ細胞ＡＬＬおよび他の造血系がんのための有効な療法として現れた。しかしながら、免疫抑制性腫瘍微小環境に打ち勝つためのより高い力価および機構が、依然として多くのがん型に必要とされている。１つのアプローチは、抗原に対するＣＡＲ  Ｔ細胞の近傍において優先的に、Ｔｒｅｇ細胞を死滅させることができる治療用ＴＣＲｍ  ＣＡＲを構成的に発現するようにＣＡＲ  Ｔ細胞を修飾することによって、腫瘍耐性を克服することである。ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１との関連において、Ｔｒｅｇ細胞および腫瘍細胞の表面に発現したＦｏｘｐ３を死滅させることができる、Ｆｏｘｐ３のペプチド断片に反応性のあるＴ細胞受容体模倣（ＴＣＲｍ）ＣＡＲを生成する。このＦｏｘｐ３を標的とするＣＡＲを発現するようにＴ細胞を修飾する。
【０５５１】
レトロウイルス構築物の生成および形質導入
本開示のＦｏｘｐ３  ｓｃＦｖ配列を使用して、Ｆｏｘｐ３を標的とする第２世代のＣＡＲを生成する。可変重鎖および軽鎖（（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３リンカーで接続されている）ならびにｃ−ｍｙｃタグを加えて、フローサイトメトリによるＣＡＲ発現の検出を可能にする。必要であれば、ＣＤ２８膜貫通ドメインの上流にスペーサードメインを含むようにＣＡＲを最適化する。これを、ＣＤ２８およびＣＤ３ゼータもしくは４−１ＢＢ、または、当技術分野、例えばＰａｒｋ（２０１６年）において周知である、他の同様のシグナル伝達ＣＡＲ形態を含有するＳＦＧレトロウイルスベクターにクローニングする。安定な２９３ウイルス産生細胞株を生成し、これを使用して、以前に記載されているように（Ｒａｆｉｑ（２０１７年））初代ヒトＴ細胞に形質導入する。形質導入後、Ｆｏｘｐ３−ＣＡＲに組み込まれたｃ−ｍｙｃタグを染色し、フローサイトメトリによってＣＡＲ発現を検証する。初代ヒトＴ細胞のレトロウイルス形質導入は、以前に記載されている（Ｋｏｎｅｒｕ（２０１５年））。
【０５５２】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＦｏｘｐ３  ＣＡＲの特異性および活性の特徴付け
以前に記載されているように（Ｒａｆｉｑ（２０１７年））、ＰＲ２０を形質導入したＴ細胞のＦｏｘｐ３特異的細胞傷害、サイトカイン分泌、および増殖機能を検出することにより、Ｔ細胞機能を再指示するＦｏｘｐ３−ＣＡＲの能力をｉｎ  ｖｉｔｒｏで解析する。ＨＬＡ−Ａ０２０１＋ドナーまたはＦｏｘｐ３＋ＨＬＡ−Ａ＊０２０１陽性もしくは陰性の腫瘍細胞株由来のＴｒｅｇに対して標準的な５１クロム放出アッセイを使用し、特異的細胞傷害を測定する。Ｆｏｘｐ３Ｔ細胞とＦｏｘｐ３＋またはＦｏｘｐ３−細胞との２４時間共培養物から上清を収集することにより、特異的サイトカイン分泌を測定する。Ｌｕｍｉｎｅｘ技術を使用してサイトカインの存在を解析する。形質導入されたＴ細胞をＦｏｘｐ３＋腫瘍細胞と共培養し、計数ビーズを使用したフローサイトメトリでＴ細胞増殖を監視することにより、Ｔ細胞増加を刺激するｆｏｘｐ３  ＣＡＲの能力を解析する。以前に公開されているように（Ｒａｆｉｑ（２０１７年））、無関係の抗原を標的とするＣＡＲを発現するように形質導入されたＴ細胞を、対照として使用する。
【０５５３】
ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるｆｏｘｐ３  ＣＡＲの抗腫瘍有効性の特徴付け
前臨床異種マウスモデルを使用して、Ｆｏｘｐ３＋腫瘍をｉｎ  ｖｉｖｏで根絶するＦｏｘｐ３−ＣＡＲ  Ｔ細胞の能力を査定する。ＳＣＩＤ−ＢｅｉｇｅまたはＮＳＧマウスに、ホタルルシフェラーゼ（ＦＦＬｕｃ：ＦｉｒｅＦｌｙ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｃｅ）を発現するように修飾された腫瘍細胞を接種して（血液悪性腫瘍のため全身的に、または固形腫瘍のため腹腔内にのいずれかで）、生物発光イメージングを可能にする（Ｒａｆｉｑ（２０１７年））。その後、ｆｏｘｐ３−または対照ＣＡＲ  Ｔ細胞（無関係の抗原を標的とするＣＡＲを発現するもの）の全身注入でマウスを処置する。疾患の進行を、臨床的にも、以前に記載されているような（Ｒａｆｉｑ（２０１７年））生物発光イメージングによっても監視する。処置マウスの末梢血を収集し、ＣＡＲ＋Ｔ細胞を検出するためのフローサイトメトリを行うことによって、ＣＡＲ  Ｔ細胞の残留性を判定する。Ｌｕｍｉｎｅｘ技術を使用し、処置マウスの血清中のサイトカインを検出することによって、経時的なＣＡＲ機能を判定する。
【０５５４】
種々の特許および公開文献が本明細書に引用されており、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。
【０５５５】
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19.  Tao  Dao,  Dmitry  Pankov,  Andrew  Scott,  Tatyana  Korontsvit,  Victoriya  Zakhaleva,  Yiyang  Xu,  Jingyi  Xiang,  Su  Yan,  Manuel  Direito  de  Morais  Guerreiro,  Nicholas  Veomett,  Leonid  Dubrovsky,  Michael  Curcio,  Ekaterina  Doubrovina,  Vladimir  Ponomarev,  Cheng  Liu,  Richard  J  O’Reilly  &  David  A  Scheinberg.  Therapeutic  bispecific  T-cell  engager  antibody  targeting  the  intracellular  oncoprotein  WT1.  Nat.  Bio.  Tech.  doi:10.1038/nbt.3349,  2015.
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【０５５６】
付属書類Ａ
【化９】
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【化１０】
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【化１１】
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【化１２】
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【化１３】
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【化１４】
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【化１５】
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【化１６】
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【化１７】
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【化１８】
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付属書類Ｂ
【表９】
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付属書類Ｃ
【化１９】
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【化２０】
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【化２１】
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【化２２】
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【化２３】
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【化２４】
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【化２５】
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【化２６】
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【化２７】
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【化２８】
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【化２９】
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【化３０】
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【化３１】
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付属書類Ｄ
【化３２】
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【化３３】
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【化３４】
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【化３５】
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【化３６】
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付属書類Ｅ
【表１０】
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付属書類Ｆ
【化３７】
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【化３８】
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付属書類Ｇ
【表１１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ−１】
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【図６Ｅ−２】
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【図６Ｆ】
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【図６Ｇ−１】
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【図６Ｇ−２】
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【図６Ｇ−３】
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【図６Ｈ−１】
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【図６Ｈ−２】
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【図６Ｉ−１】
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【図６Ｉ−２】
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【図６Ｉ−３】
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【図６Ｊ−１】
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【図６Ｊ−２】
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【図６Ｊ−３】
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【図７Ａ−１】
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【図７Ａ−２】
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【図７Ｂ−１】
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【図７Ｂ−２】
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【図７Ｃ−１】
2019512207.tif 000079
【図７Ｃ−２】
2019512207.tif 000080
【図８Ａ】
2019512207.tif 000081
【図８Ｂ】
2019512207.tif 000082
【図９Ａ】
2019512207.tif 000083
【図９Ｂ】
2019512207.tif 000084
【図９Ｃ】
2019512207.tif 000085
【図９Ｄ】
2019512207.tif 000086
【図９Ｅ】
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【図１０Ａ】
2019512207.tif 000088
【図１０Ｂ】
2019512207.tif 000089
【図１１ＡＢ】
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【図１１ＣＤ】
2019512207.tif 000091
【図１１Ｅ】
2019512207.tif 000092
【図１２Ａ】
2019512207.tif 000093
【図１２Ｂ】
2019512207.tif 000094
【図１２ＣＤ】
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【図１３Ａ】
2019512207.tif 000096
【図１３Ｂ】
2019512207.tif 000097
【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
2019512207.tif 000100
【図１３Ｆ】
2019512207.tif 000101
【図１３Ｇ】
2019512207.tif 000102
【図１３Ｈ】
2019512207.tif 000103
【配列表】
2019512207000001.app
【国際調査報告】
2019512207.tif 000104
2019512207.tif 000105
2019512207.tif 000106
2019512207.tif 000107
2019512207.tif 000108
2019512207.tif 000109