(57)【要約】  本開示は、１種またはそれ以上の標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む、三重特異性および／または三価結合タンパク質を提供し、ここで、結合タンパク質を形成するポリペプチドの第１の対は、クロスオーバー配向を有する二重の可変ドメインを有し、結合タンパク質を形成するポリペプチドの第２の対は、単一の可変ドメインを有する。本開示はまた、三重特異性および／または三価結合タンパク質を作製する方法およびこのような結合タンパク質の使用を提供する。
2019522459.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１種またはそれ以上の標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ                            ［Ｉ］
によって表される構造を含み、第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１                          ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１                                              ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                                ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成する、前記結合タンパク質。
【請求項２】
１種またはそれ以上の標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ                                  ［Ｉ］
によって表される構造を含み、第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３        ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３                            ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                                      ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成する、前記結合タンパク質。
【請求項３】
第２および／または第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項４】
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはＬ４のうち少なくとも１つは独立に、０個のアミノ酸長である、請求項１または請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項５】
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはＬ４は各々独立に、少なくとも１個のアミノ酸長である、請求項１または請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項６】
（ａ）Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は各々独立に、０個のアミノ酸長であるか、もしくはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）からなる群から選択される配列を含み；または（ｂ）Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は各々独立に、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）からなる群から選択される配列を含む、請求項１または請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項７】
（ａ）Ｌ１は、配列ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）を含み、Ｌ２は、配列ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）を含み、Ｌ３は、配列Ｓを含み、Ｌ４は、配列ＲＴを含む；
（ｂ）Ｌ１は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）を含み、Ｌ２は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）を含み、Ｌ３は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ４は、０個のアミノ酸長である；
（ｃ）Ｌ１は、配列ＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）を含み、Ｌ２は、配列ＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）を含み、Ｌ３は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ４は、０個のアミノ酸長である；または
（ｄ）Ｌ１は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）を含み、Ｌ２は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ３は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）を含み、Ｌ４は、０個のアミノ酸長である、請求項１または請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項８】
三重特異性であり、３つの異なる抗原標的と特異的に結合することが可能である、請求項１または請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項９】
Ｔ細胞上の２つの標的タンパク質および１つの腫瘍標的タンパク質に対応する３つの標的タンパク質と特異的に結合する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項１０】
前記Ｔ細胞上の標的タンパク質のうち１つは、ＣＤ３である、請求項９に記載の結合タンパク質。
【請求項１１】
前記Ｔ細胞上の標的タンパク質のうち１つは、ＣＤ２８である、請求項９または請求項１０に記載の結合タンパク質。
【請求項１２】
前記腫瘍標的タンパク質は、ＣＤ３８である、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項１３】
Ｔ細胞上の２つの標的タンパク質ならびにＡ２ＡＲ、ＡＰＲＩＬ、ＡＴＰＤａｓｅ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＢｌｙＳ、ＢＴＫ、ＢＴＬＡ、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４、Ｂ７Ｈ５、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７Ｈ７、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７−４、Ｃ３、Ｃ５、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７６、ＣＤ２７８、ＣＤ２７９、ＣＤＨ１、キチナーゼ、ＣＬＥＣ９、ＣＬＥＣ９１、ＣＲＴＨ２、ＣＳＦ−１、ＣＳＦ−２、ＣＳＦ−３、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＤＮＧＲ−１、エクトヌクレオチド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＴＰＤ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ１、ＦＬＡＰ、ＦＯＬＨ１、Ｇｉ２４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｈｅｒ２、ＨＨＬＡ２、ＨＭＧＢ１、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳＬＧ、ＩＤＯ、ＩＦＮα、ＩｇＥ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒａ、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒａ、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ｒｈＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒａ１、ＩＬ１３Ｒａ２、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒｂ、ＩＬ１８、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２５、ＩＬ２７、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＴＧＢ４、ＩＴＫ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＬＡＭＰ１、レプチン、ＬＰＦＳ２、ＭＨＣクラスＩＩ、ＮＣＲ３ＬＧ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＴＰＤａｓｅ−１、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１Ｈ、血小板受容体、ＰＲＯＭ１、Ｓ１５２、ＳＩＳＰ１、ＳＬＣ、ＳＰＧ６４、ＳＴ２、ＳＴＥＡＰ２、Ｓｙｋキナーゼ、ＴＡＣＩ、ＴＤＯ、Ｔ１４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＬＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ９、ＴＭＥＦ１、ＴＮＦａ、ＴＮＦＲＳＦ７、Ｔｐ５５、ＴＲＥＭ１、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦ、ＶＩＳＴＡ、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭ、およびＸＣＲ１からなる群から選択される１つの標的タンパク質に対応する３つの標的タンパク質と特異的に結合する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項１４】
１種またはそれ以上の標的タンパク質の機能を阻害することが可能である、請求項１または請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項１５】
１つまたはそれ以上の標的タンパク質は、Ａ２ＡＲ、ＡＰＲＩＬ、ＡＴＰＤａｓｅ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＢｌｙＳ、ＢＴＫ、ＢＴＬＡ、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４、Ｂ７Ｈ５、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７Ｈ７、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７−４、Ｃ３、Ｃ５、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７６、ＣＤ２７８、ＣＤ２７９、ＣＤＨ１、キチナーゼ、ＣＬＥＣ９、ＣＬＥＣ９１、ＣＲＴＨ２、ＣＳＦ−１、ＣＳＦ−２、ＣＳＦ−３、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＤＮＧＲ−１、エクトヌクレオチド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＴＰＤ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ１、ＦＬＡＰ、ＦＯＬＨ１、Ｇｉ２４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｈｅｒ２、ＨＨＬＡ２、ＨＭＧＢ１、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳＬＧ、ＩＤＯ、ＩＦＮα、ＩｇＥ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒａ、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒａ、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ｒｈＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒａ１、ＩＬ１３Ｒａ２、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒｂ、ＩＬ１８、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２５、ＩＬ２７、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＴＧＢ４、ＩＴＫ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＬＡＭＰ１、レプチン、ＬＰＦＳ２、ＭＨＣクラスＩＩ、ＮＣＲ３ＬＧ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＴＰＤａｓｅ−１、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１Ｈ、血小板受容体、ＰＲＯＭ１、Ｓ１５２、ＳＩＳＰ１、ＳＬＣ、ＳＰＧ６４、ＳＴ２、ＳＴＥＡＰ２、Ｓｙｋキナーゼ、ＴＡＣＩ、ＴＤＯ、Ｔ１４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＬＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ９、ＴＭＥＦ１、ＴＮＦａ、ＴＮＦＲＳＦ７、Ｔｐ５５、ＴＲＥＭ１、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦ、ＶＩＳＴＡ、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭ、およびＸＣＲ１からなる群から選択される、請求項１４に記載の結合タンパク質。
【請求項１６】
３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ                              ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１                            ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１                                                ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                                  ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成し；
（ａ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５および１６７のうちいずれか１つに示される可変ドメインを含み；または
（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号４３〜５９、１２３〜１２５、１３８〜１４０および１４９のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含み；
（ａ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４および１６６のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；または
（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号２５〜４２、１２０〜１２２および１２６〜１２８のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含む、前記結合タンパク質。
【請求項１７】
３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ                              ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３      ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３                        ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                                  ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成し；
（ａ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５および１６７のうちいずれか１つに示される可変ドメインを含み；または
（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号４３〜５９、１２３〜１２５、１３８〜１４０および１４９のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含み；
（ａ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４および１６６のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；または
（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号２５〜４２、１２０〜１２２および１２６〜１２８のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含む、前記結合タンパク質。
【請求項１８】
第２および／または第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、請求項１６に記載の結合タンパク質。
【請求項１９】
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはＬ４のうち少なくとも１つは独立に、０個のアミノ酸長である、請求項１６または請求項１７に記載の結合タンパク質。
【請求項２０】
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはＬ４は各々独立に、少なくとも１個のアミノ酸長である、請求項１６または請求項１７に記載の結合タンパク質。
【請求項２１】
（ａ）Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は各々独立に、０個のアミノ酸長であるか、もしくはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）からなる群から選択される配列を含み；または（ｂ）Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は各々独立に、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）からなる群から選択される配列を含む、請求項１６または請求項１７に記載の結合タンパク質。
【請求項２２】
（ａ）Ｌ１は、配列ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）を含み、Ｌ２は、配列ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）を含み、Ｌ３は、配列Ｓを含み、Ｌ４は、配列ＲＴを含む；
（ｂ）Ｌ１は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）を含み、Ｌ２は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）を含み、Ｌ３は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ４は、０個のアミノ酸長である；
（ｃ）Ｌ１は、配列ＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）を含み、Ｌ２は、配列ＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）を含み、Ｌ３は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ４は、０個のアミノ酸長である；または
（ｄ）Ｌ１は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）を含み、Ｌ２は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ３は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）を含み、Ｌ４は、０個のアミノ酸長である、請求項１６または請求項１７に記載の結合タンパク質。
【請求項２３】
（ａ）ＶＨ１は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｂ）ＶＨ１は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｃ）ＶＨ１は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｄ）ＶＨ１は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｅ）ＶＨ１は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｆ）ＶＨ１は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｇ）ＶＨ１は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｈ）ＶＨ１は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｉ）ＶＨ１は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；または
（ｊ）ＶＨ１は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、請求項１６または請求項１７に記載の結合タンパク質。
【請求項２４】
３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ                        ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１                      ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１                                          ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                            ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成し；
（ａ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号１６９、１７１および１７３のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；または
（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号１４１〜１４７、１７８および１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含み；
（ａ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１６８、１７０および１７２のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；または
（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１２９〜１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含む、前記結合タンパク質。
【請求項２５】
３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ                              ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３    ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３                        ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                                  ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成し；
（ａ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号１６９、１７１および１７３のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；または
（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号１４１〜１４７、１７８および１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含み；
（ａ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１６８、１７０および１７２のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；または
（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１２９〜１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含む、前記結合タンパク質。
【請求項２６】
第２および／または第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、該Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、請求項２４に記載の結合タンパク質。
【請求項２７】
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４のうち少なくとも１つは独立に、０個のアミノ酸長である、請求項２４または請求項２５に記載の結合タンパク質。
【請求項２８】
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は各々独立に、少なくとも１個のアミノ酸長である、請求項２４または請求項２５に記載の結合タンパク質。
【請求項２９】
（ａ）Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は各々独立に、０個のアミノ酸長であるか、もしくはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）からなる群から選択される配列を含み；または（ｂ）Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は各々独立に、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）からなる群から選択される配列を含む、請求項２４または請求項２５に記載の結合タンパク質。
【請求項３０】
（ａ）Ｌ１は、配列ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）を含み、Ｌ２は、配列ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）を含み、Ｌ３は、配列Ｓを含み、Ｌ４は、配列ＲＴを含む；
（ｂ）Ｌ１は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）を含み、Ｌ２は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）を含み、Ｌ３は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ４は、０個のアミノ酸長である；
（ｃ）Ｌ１は、配列ＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）を含み、Ｌ２は、配列ＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）を含み、Ｌ３は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ４は、０個のアミノ酸長である；または
（ｄ）Ｌ１は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）を含み、Ｌ２は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ３は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）を含み、Ｌ４は、０個のアミノ酸長である、請求項２４または請求項２５に記載の結合タンパク質。
【請求項３１】
（ａ）ＶＨ１は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｂ）ＶＨ１は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｃ）ＶＨ１は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｄ）ＶＨ１は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｅ）ＶＨ１は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｆ）ＶＨ１は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｇ）ＶＨ１は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｈ）ＶＨ１は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｉ）ＶＨ１は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；または
（ｊ）ＶＨ１は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、請求項２４または請求項２５に記載の結合タンパク質。
【請求項３２】
第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換はＳ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり、第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８および４０７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖである、請求項１、１６および２４のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項３３】
第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、該第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８および４０７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換はＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖであり、第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、該第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、
該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである、請求項１、１６および２４のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項３４】
第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、該第１および第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４２８および４３４に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換はＭ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである、請求項１、１６、２４、３２および３３のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項３５】
第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８および４０７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖである、請求項２、１７および２５のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項３６】
第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８および４０７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである、請求項２、１７および２５のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項３７】
第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは両方とも、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４２８および４３４にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである、請求項２、１７、２５、３５および３６のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項３８】
第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；該第１および第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域であり；該第１および第２のＦｃ領域のうち一方のみは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換はＨ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆである、請求項１、１６、２４および３２〜３４のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項３９】
第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４  ＣＨ３ドメインであり、該ＣＨ３ドメインの一方のみは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換はＨ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆである、請求項２、１７、２５および３５〜３７のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項４０】
第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１の
Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；該第１および第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４
Ｆｃ領域であり；該第１および第２のＦｃ領域は各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２２８および４０９に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換はＳ２２８ＰおよびＲ４０９Ｋである、請求項１、１６、２４、３２〜３４および３８のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項４１】
第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＧ４  ＣＨ３ドメインであり、該ＣＨ３ドメインは各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２２８および４０９に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換はＳ２２８ＰおよびＲ４０９Ｋである、請求項２、１７、２５、３５〜３７および３９のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項４２】
第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；該第１および第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４
Ｆｃ領域であり；該第１および第２のＦｃ領域は各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２３４および２３５に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換はＦ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである、請求項１、１６、２４、３２〜３４、３８および４０のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項４３】
第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＧ４  ＣＨ３ドメインであり、該ＣＨ３ドメインは各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２３４および２３５に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換はＦ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである、請求項２、１７、２５、３５〜３７、３９および４１のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項４４】
第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、該第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、該第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；該第１および第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１
Ｆｃ領域であり；該第１および第２のＦｃ領域は各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２３４および２３５に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換はＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである、請求項１、１６、２４、３２〜３４、３８および４０のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項４５】
第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインであり、該ＣＨ３ドメインは各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２３４および２３５に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換はＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである、請求項２、１７、２５、３５〜３７、３９および４１のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項４６】
ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＣＤ３と特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＣＤ２８と特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒト腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する第３の抗原結合部位
を形成する、請求項２、１７、３５〜３７、３９、４１、４３および４５のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項４７】
ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＣＤ２８と特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＣＤ３と特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒト腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する、請求項２、１７、３５〜３７、３９、４１、４３および４５のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項４８】
第３の抗原結合部位は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３８、Ｈｅｒ２およびＬＡＭＰ１からなる群から選択されるヒト腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する、請求項４６または請求項４７に記載の結合タンパク質。
【請求項４９】
ＣＤ３と特異的に結合する抗原結合部位は、
（ａ）配列番号１５２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；または
（ｂ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項４６〜４８のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項５０】
ＣＤ２８と特異的に結合する抗原結合部位は、
（ａ）配列番号１６０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；または
（ｂ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項４６〜４９のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項５１】
腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する抗原結合部位は：
（ａ）配列番号１５６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｂ）配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｃ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｄ）配列番号１５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；または
（ｅ）配列番号１６６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項４６〜５０のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項５２】
（ａ）ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒトＩＬ４と特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する；
（ｂ）ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＩＬ４と特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する；
（ｃ）ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＩＬ４と特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する第２の抗原結合部位を形
成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する；
（ｄ）ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＩＬ４と特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する；
（ｅ）ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＩＬ４と特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する；または
（ｆ）ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒトＩＬ４と特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する、請求項２、１７、３５〜３７、３９、４１、４３および４５のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項５３】
ヒトＴＮＦａと特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号１６８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項５２に記載の結合タンパク質。
【請求項５４】
ヒトＩＬ４と特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号１７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１７１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項５２または請求項５３に記載の結合タンパク質。
【請求項５５】
ヒトＩＬ１３と特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項５２〜５４のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項５６】
（ａ）第１のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトκＣＬドメインであり、第４のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトλＣＬドメインである；または
（ｂ）第１のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトλＣＬドメインであり、第４のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトκＣＬドメインである、
請求項１〜５５のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項５７】
第１のポリペプチド鎖は、λＣＬドメインを含み；第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換はＳ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置３４９、３６６、３６８、４０７、４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換はＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆであり；第４のポリペプチド鎖は、κＣＬドメインを含む、請求項２、１７、２５、３５〜３７、３９、４１および４３〜５５のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項５８】
第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖、第３のポリペプチド鎖および第４のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
（ａ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列もしくは配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列もしくは配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１のアミノ酸配列もしくは配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２のアミノ酸配列もしくは配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｂ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列もしくは配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列もしくは配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１のアミノ酸配列もしくは配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２のアミノ酸配列もしくは配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｃ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列もしくは配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列もしくは配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列もしくは配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４のアミノ酸配列もしくは配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｄ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列もしくは配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列もしくは配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列もしくは配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４のアミノ酸配列もしくは配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｅ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列もしくは配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列もしくは配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７のアミノ酸配列もしくは配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１８のアミノ酸配列もしくは配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｆ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列もしくは配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列もしくは配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７のアミノ酸配列もしくは配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１８のアミノ酸配列もしくは配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｇ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列もしくは配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列もしくは配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号２１のアミノ酸配列もしくは配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２２のアミノ酸配列もしくは配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｈ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列もしくは配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列もしくは配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号２１のアミノ酸配列もしくは配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２２のアミノ酸配列もしくは配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６３のアミノ酸配列もしくは配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列もしくは配列番号６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列もしくは配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列もしくは配列番号６１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｊ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列もしくは配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列もしくは配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列もしくは配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列もしくは配列番号６１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｋ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列もしくは配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列もしくは配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列もしくは配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７１のアミノ酸配列もしくは配列番号７１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｌ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号７６のアミノ酸配列もしくは配列番号７６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号７５のアミノ酸配列もしくは配列番号７５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列もしくは配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７４のアミノ酸配列もしくは配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｍ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号８２のアミノ酸配列もしくは配列番号８２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号８１のアミノ酸配列もしくは配列番号８１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列もしくは配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７４のアミノ酸配列もしくは配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｎ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号８８のアミノ酸配列もしくは配列番号８８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号８７のアミノ酸配列もしくは配列番号８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列もしくは配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号８６のアミノ酸配列もしくは配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｏ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号９４のアミノ酸配列もしくは配列番号９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９３のアミノ酸配列もしくは配列番号９３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列もしくは配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号８６のアミノ酸配列もしくは配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｐ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列もしくは配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列もしくは配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列もしくは配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７４のアミノ酸配列もしくは配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｑ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列もしくは配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列もしくは配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列もしくは配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号８６のアミノ酸配列もしくは配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｒ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６３のアミノ酸配列もしくは配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列もしくは配列番号６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列もしくは配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７４のアミノ酸配列もしくは配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｓ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６３のアミノ酸配列もしくは配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列もしくは配列番号６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列もしくは配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号８６のアミノ酸配列もしくは配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｔ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列もしくは配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列もしくは配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列もしくは配列番号１１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１５のアミノ酸配列もしくは配列番号１１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；または
（ｕ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列もしくは配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列もしくは配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列もしくは配列番号１１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１５のアミノ酸配列もしくは配列番号１１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、前記結合タンパク質。
【請求項５９】
請求項１〜５８のいずれか１項に記載の結合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
【請求項６０】
請求項５９に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項６１】
請求項５９に記載の核酸分子を含む、単離された宿主細胞。
【請求項６２】
請求項６０に記載の発現ベクターを含む、単離された宿主細胞。
【請求項６３】
哺乳動物細胞または昆虫細胞である、請求項６１または請求項６２に記載の単離された宿主細胞。
【請求項６４】
請求項１〜５８のいずれか１項に記載の結合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項６５】
患者において癌を予防および／または治療する方法であって、該患者に、治療有効量の、請求項１〜２３および３２〜５８のいずれか１項に記載の少なくとも１種の結合タンパク質または請求項６４に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項６６】
結合タンパク質は、Ｔ細胞表面タンパク質と特異的に結合する１つの抗原結合部位および腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する別の抗原結合部位を含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
結合タンパク質は、ＣＤ３と特異的に結合する第１の抗原結合部位、ＣＤ２８と特異的に結合する第２の抗原結合部位ならびにＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３８、Ｈｅｒ２およびＬＡＭＰ１からなる群から選択される腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する第３の抗原結合部位を含む、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
少なくとも１種の結合タンパク質は、化学療法剤と同時投与される、請求項６５〜６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
患者において炎症性疾患または障害を予防および／または治療する方法であって、該患者に、治療有効量の、請求項１〜１５、２４〜４５および５２〜５８のいずれか１項に記載の少なくとも１種の結合タンパク質または請求項６４に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項７０】
結合タンパク質は、ＩＬ−４、ＩＬ−１３およびＴＮＦａからなる群から選択されるサイトカイン標的タンパク質と各々特異的に結合する３つの抗原結合部位を含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
少なくとも１種の結合タンパク質は、抗炎症剤と同時投与される、請求項６９または請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
患者は、ヒトである、請求項６５〜７１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７３】
結合タンパク質は、Ａ２ＡＲ、ＡＰＲＩＬ、ＡＴＰＤａｓｅ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＢｌｙＳ、ＢＴＫ、ＢＴＬＡ、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４、Ｂ７Ｈ５、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７Ｈ７、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７−４、Ｃ３、Ｃ５、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７６、ＣＤ２７８、ＣＤ２７９、ＣＤＨ１、キチナーゼ、ＣＬＥＣ９、ＣＬＥＣ９１、ＣＲＴＨ２、ＣＳＦ−１、ＣＳＦ−２、ＣＳＦ−３、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＤＮＧＲ−１、エクトヌクレオチド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＴＰＤ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ１、ＦＬＡＰ、ＦＯＬＨ１、Ｇｉ２４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｈｅｒ２、ＨＨＬＡ２、ＨＭＧＢ１、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳＬＧ、ＩＤＯ、ＩＦＮα、ＩｇＥ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒａ、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒａ、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ｒｈＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒａ１、ＩＬ１３Ｒａ２、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒｂ、ＩＬ１８、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２５、ＩＬ２７、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＴＧＢ４、ＩＴＫ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＬＡＭＰ１、レプチン、ＬＰＦＳ２、ＭＨＣクラスＩＩ、ＮＣＲ３ＬＧ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＴＰＤａｓｅ−１、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１Ｈ、血小板受容体、ＰＲＯＭ１、Ｓ１５２、ＳＩＳＰ１、ＳＬＣ、ＳＰＧ６４、ＳＴ２、ＳＴＥＡＰ２、Ｓｙｋキナーゼ、ＴＡＣＩ、ＴＤＯ、Ｔ１４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＬＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ９、ＴＭＥＦ１、ＴＮＦａ、ＴＮＦＲＳＦ７、Ｔｐ５５、ＴＲＥＭ１、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦ、ＶＩＳＴＡ、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭ、およびＸＣＲ１からなる群から選択される１種またはそれ以上の標的タンパク質の機能を阻害することが可能である、請求項６５または請求項６９に記載の方法。
【請求項７４】
患者において癌を予防および／または治療する際の使用のための、請求項１〜２３および３２〜５８のいずれか１項に記載の結合タンパク質または請求項６４に記載の組成物。
【請求項７５】
結合タンパク質は、Ｔ細胞表面タンパク質と特異的に結合する１つの抗原結合部位および腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する別の抗原結合部位を含む、請求項７４に記載の使用のための結合タンパク質または使用のための組成物。
【請求項７６】
結合タンパク質は、ＣＤ３と特異的に結合する第１の抗原結合部位、ＣＤ２８と特異的に結合する第２の抗原結合部位ならびにＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３８、Ｈｅｒ２およびＬＡＭＰ１からなる群から選択される腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する第３の抗原結合部位を含む、請求項７５に記載の使用のための結合タンパク質または使用のための組成物。
【請求項７７】
結合タンパク質は、化学療法剤と同時投与される、請求項７４〜７６のいずれか１項に記載の使用のための結合タンパク質または使用のための組成物。
【請求項７８】
患者において炎症性疾患または障害を予防および／または治療する際の使用のための、請求項１〜１５、２４〜４５および５２〜５８のいずれか１項に記載の結合タンパク質または請求項６４に記載の医薬組成物。
【請求項７９】
結合タンパク質は、ＩＬ−４、ＩＬ−１３およびＴＮＦａからなる群から選択されるサイトカイン標的タンパク質と各々特異的に結合する３つの抗原結合部位を含む、請求項７８に記載の使用のための結合タンパク質または使用のための組成物。
【請求項８０】
結合タンパク質は、抗炎症剤と同時投与される、請求項７８または請求項７９に記載の使用のための結合タンパク質または使用のための組成物。
【請求項８１】
患者は、ヒトである、請求項７４〜８０のいずれか１項に記載の使用のための結合タンパク質または使用のための組成物。
【請求項８２】
結合タンパク質は、Ａ２ＡＲ、ＡＰＲＩＬ、ＡＴＰＤａｓｅ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＢｌｙＳ、ＢＴＫ、ＢＴＬＡ、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４、Ｂ７Ｈ５、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７Ｈ７、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７−４、Ｃ３、Ｃ５、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７６、ＣＤ２７８、ＣＤ２７９、ＣＤＨ１、キチナーゼ、ＣＬＥＣ９、ＣＬＥＣ９１、ＣＲＴＨ２、ＣＳＦ−１、ＣＳＦ−２、ＣＳＦ−３、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＤＮＧＲ−１、エクトヌクレオチド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＴＰＤ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ１、ＦＬＡＰ、ＦＯＬＨ１、Ｇｉ２４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｈｅｒ２、ＨＨＬＡ２、ＨＭＧＢ１、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳＬＧ、ＩＤＯ、ＩＦＮα、ＩｇＥ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒａ、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒａ、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ｒｈＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒａ１、ＩＬ１３Ｒａ２、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒｂ、ＩＬ１８、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２５、ＩＬ２７、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＴＧＢ４、ＩＴＫ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＬＡＭＰ１、レプチン、ＬＰＦＳ２、ＭＨＣクラスＩＩ、ＮＣＲ３ＬＧ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＴＰＤａｓｅ−１、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１Ｈ、血小板受容体、ＰＲＯＭ１、Ｓ１５２、ＳＩＳＰ１、ＳＬＣ、ＳＰＧ６４、ＳＴ２、ＳＴＥＡＰ２、Ｓｙｋキナーゼ、ＴＡＣＩ、ＴＤＯ、Ｔ１４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＬＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ９、ＴＭＥＦ１、ＴＮＦａ、ＴＮＦＲＳＦ７、Ｔｐ５５、ＴＲＥＭ１、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦ、ＶＩＳＴＡ、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭ、およびＸＣＲ１からなる群から選択される１種またはそれ以上の標的タンパク質の機能を阻害することが可能である、請求項７４または請求項７８に記載の使用のための結合タンパク質または使用のための組成物。
【請求項８３】
宿主細胞によって産生された結合タンパク質を精製する方法であって、
（ａ）宿主細胞において請求項２、１７、２５、３５〜３７、４１、４３、４５および４６〜５５のいずれか１項に記載の結合タンパク質を産生する工程であって、第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインおよび第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインのうち一方のみは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＨ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆである、前記工程と；
（ｂ）（ａ）で産生された結合タンパク質を、プロテインＡと接触させる工程と；
（ｃ）Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆであるアミノ酸置換を含む０または２つのＣＨ３ドメインを含む結合タンパク質から離して結合タンパク質を単離するのに適した条件下で結合タンパク質をプロテインＡから溶出させる工程と
を含む、前記方法。
【請求項８４】
第１のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトκＣＬドメインであり、第４のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトλＣＬドメインである；または第１のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトλＣＬドメインであり、第４のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトκＣＬドメインであり：
（ｄ）（ｃ）で溶出された結合タンパク質を、κ軽鎖親和性媒体と接触させる工程と；
（ｅ）λＣＬドメインのみを含む結合タンパク質から離して結合タンパク質を単離するのに適した条件下で、結合タンパク質をκ軽鎖親和性媒体から溶出させる工程と
をさらに含む、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
（ｅ）の後：
（ｆ）（ｅ）で溶出された結合タンパク質を、λ軽鎖親和性媒体と接触させる工程と；
（ｇ）κＣＬドメインのみを含む結合タンパク質から離して結合タンパク質を単離するのに適した条件下で、結合タンパク質をλ軽鎖親和性媒体から溶出させる工程と
をさらに含む、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
第１のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトκＣＬドメインであり、第４のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトλＣＬドメインである；または第１のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトλＣＬドメインであり、第４のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトκＣＬドメインであり：
（ｄ）（ｃ）で溶出された結合タンパク質を、λ軽鎖親和性媒体と接触させる工程と；
（ｅ）κＣＬドメインのみを含む結合タンパク質から離して結合タンパク質を単離するのに適した条件下で、結合タンパク質をλ軽鎖親和性媒体から溶出させる工程と
をさらに含む、請求項８３に記載の方法。
【請求項８７】
（ｅ）の後：
（ｆ）（ｅ）で溶出された結合タンパク質を、κ軽鎖親和性媒体と接触させる工程と；
（ｇ）λＣＬドメインのみを含む結合タンパク質から離して結合タンパク質を単離するのに適した条件下で、結合タンパク質をκ軽鎖親和性媒体から溶出させる工程と
をさらに含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
第１のポリペプチド鎖は、λＣＬドメインを含み；第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換はＳ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置３４９、３６６、３６８、４０７、４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸置換はＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆであり；第４のポリペプチド鎖は、κＣＬドメインを含む、請求項８３〜８７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８９】
結合タンパク質は、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を使用して（ｃ）および（ｅ）のうち一方またはそれ以上において検出される、請求項８３〜８８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９０】
第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４  ＣＨ３ドメインである、請求項８３〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、参照によってその全文を本明細書に組み入れる、２０１６年４月１３日に出願された米国特許仮出願第６２／３２２，０３６号、２０１６年５月３日に出願された米国特許仮出願第６２／３３１，１９１号、２０１６年１０月２４日に出願された米国特許仮出願第６２／４１２，１８７号および２０１７年３月１７日に出願された欧州特許出願第ＥＰ１７３０５２９８．６号の優先利益を主張する。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの下記の提出の内容は、参照によってその全文を本明細書に組み入れる：配列表のコンピュータによって読み取り可能な形態（ＣＲＦ）（ファイル名：１８３９５２０２７１４０ＳＥＱＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔ、記録された日付：２０１７年４月１１日、大きさ：２００ＫＢ）。
【０００３】
本開示は、１種またはそれ以上の標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む、三重特異性および／または三価結合タンパク質に関し、ここで、結合タンパク質を形成するポリペプチドの第１の対は、クロスオーバー配向を有する二重の可変ドメインを有し、結合タンパク質を形成するポリペプチドの第２の対は、単一の可変ドメインを有する。本開示はまた、三重特異性および／または三価結合タンパク質を作製する方法およびこのような結合タンパク質の使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
モノクローナル抗体をベースとする生物治療薬は、新規薬物開発のための重要な手段となった。モノクローナル抗体技術は、特異的ターゲティング、特定の細胞集団への正確なシグナル伝達送達および／またはペイロードを提供し、そのＦｃ機能を介して長期間持続する生物学的効果を提供する。抗体エンジニアリングにおける効果は、種々の生物学的適用のために２種のモノクローナル抗体の特異性を組み合わせる二重特異性抗体を開発し、抗体薬物開発の範囲を広げることを可能にしてきた。幅（ｂｒｅａｄｔｈ）および効力が改善された新規な中和抗体が発見されると、癌、関節炎および／または炎症性障害などの複合疾患を治療するための生物治療薬を開発するための選択肢が増える可能性がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
３つの抗原結合部位を形成する多重特異性結合タンパク質（例えば、抗体）が、本明細書において提供される。これらの結合タンパク質は、１種、２種または３種の抗原標的または標的タンパク質と特異的に結合し得る。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一実施形態では、本開示は、１つまたはそれ以上の抗原標的または標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ        ［Ｉ］
によって表される構造を有し、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１      ［ＩＩ］
によって表される構造を有し、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１                        ［ＩＩＩ］
によって表される構造を有し、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                          ［ＩＶ］
によって表される構造を有し、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成する、結合タンパク質を提供する。
【０００７】
いくつかの実施形態では、第２および／または第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。
【０００８】
別の実施形態では、本開示は、１種またはそれ以上の標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ                                ［Ｉ］
によって表される構造を含み、第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３      ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３                          ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                                    ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成する、結合タンパク質を提供する。
【０００９】
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、三重特異性であり、３つの異なる抗原標的と特異的に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、三価であるが、二重特異性であり、３つの抗原標的と特異的に結合することが可能であり、それらのうち２つは同一である。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、三価であるが、単一特異性であり、３つの抗原標的と特異的に結合することが可能であり、それらのすべてが同一である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、１種またはそれ以上の標的タンパク質の機能を阻害することが可能である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、三重特異性であり、３つの異なる抗原標的と特異的に結合することが可能である。
【００１０】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、Ａ２ＡＲ、ＡＰＲＩＬ、ＡＴＰＤａｓｅ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＢｌｙＳ、ＢＴＫ、ＢＴＬＡ、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４（ＶＴＣＮ１としても知られる）、Ｂ７Ｈ５、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７Ｈ７、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７−４、Ｃ３、Ｃ５、ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１としても知られる）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−１ａとしても知られる）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１ｂとしても知られる）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳとしても知られる）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ−３としても知られる）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２としても知られる）、ＣＣＬ１１（エオタキシンとしても知られる）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−１ｄとしても知られる）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣとしても知られる）、ＣＣＬ１９（ＭＩＰ−３ｂとしても知られる）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａとしても知られる）、ＣＣＬ２１（ＭＩＰ−２としても知られる）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２としても知られる）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫとしても知られる）、ＣＣＬ２６（エオタキシン−３としても知られる）、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３（ＦＣＥＲ２としても知られる、ＩｇＥの受容体）、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０（Ｂ７−１としても知られる）、ＣＤ８６（Ｂ７−２としても知られる）、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７（４１ＢＢとしても知られる）、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４としても知られる）、ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌとしても知られる）、ＣＤ１６０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３（ＰＤＬ２としても知られる）、ＣＤ２７４（ＰＤＬ１としても知られる）、ＣＤ２７５（Ｂ７Ｈ２としても知られる）、ＣＤ２７６（Ｂ７Ｈ３としても知られる）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとしても知られる）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１としても知られる）、ＣＤＨ１（Ｅ−カドヘリンとしても知られる）、キチナーゼ、ＣＬＥＣ９、ＣＬＥＣ９１、ＣＲＴＨ２、ＣＳＦ−１（Ｍ−ＣＳＦとしても知られる）、ＣＳＦ−２（ＧＭ−ＣＳＦとしても知られる）、ＣＳＦ−３（ＧＣＳＦとしても知られる）、ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤ１としても知られる）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１としても知られる）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＤＮＧＲ−１、エクトヌクレオチド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＴＰＤ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ１、ＦＬＡＰ、ＦＯＬＨ１、Ｇｉ２４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｈｅｒ２、ＨＨＬＡ２、ＨＭＧＢ１、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳＬＧ、ＩＤＯ、ＩＦＮα、ＩｇＥ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒａ、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒａ、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ｒｈＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒａ１、ＩＬ１３Ｒａ２、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒｂ（ＩＬ２５の受容体としても知られる）、ＩＬ１８、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２５、ＩＬ２７、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリンとしても知られる）、ＩＴＫ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＬＡＭＰ１、レプチン、ＬＰＦＳ２、ＭＨＣクラスＩＩ、ＮＣＲ３ＬＧ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＴＰ��ａｓｅ−１、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１Ｈ、血小板受容体、ＰＲＯＭ１、Ｓ１５２、ＳＩＳＰ１、ＳＬＣ、ＳＰＧ６４、ＳＴ２（ＩＬ３３の受容体としても知られる）、ＳＴＥＡＰ２、Ｓｙｋキナーゼ、ＴＡＣＩ、ＴＤＯ、Ｔ１４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＬＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ９、ＴＭＥＦ１、ＴＮＦａ、ＴＮＦＲＳＦ７、Ｔｐ５５、ＴＲＥＭ１、ＴＳＬＰ（ＩＬ７Ｒａの共受容体としても知られる）、ＴＳＬＰＲ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦ、ＶＩＳＴＡ、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭおよびＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１としても知られる）から選択される標的タンパク質と特異的に結合する１つ、２つまたは３つの抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、上記の抗原標的のうち１つまたはそれ以上は、ヒト抗原標的である。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、三重特異性であり、上記のリストから選択される３つの異なる抗原標的と特異的に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、三価であるが、二重特異性であり、上記のリストから選択される３つの抗原標的と特異的に結合することが可能であり、それらのうち２つは同一である。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、三価であるが、単一特異性であり、上記のリストから選択される３つの抗原標的と特異的に結合することが可能であり、それらのすべてが同一である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、Ｔ細胞上の２つの標的タンパク質および１つの腫瘍標的タンパク質に対応する３つの標的タンパク質と特異的に結合する。いくつかの実施形態では、前記Ｔ細胞上の標的タンパク質のうち１つは、ＣＤ３である。いくつかの実施形態では、前記Ｔ細胞上の標的タンパク質のうち１つは、ＣＤ２８である。いくつかの実施形態では、前記腫瘍標的タンパク質は、ＣＤ３８である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、Ｔ細胞上の２つの標的タンパク質ならびにＡ２ＡＲ、ＡＰＲＩＬ、ＡＴＰＤａｓｅ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＢｌｙＳ、ＢＴＫ、ＢＴＬＡ、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４、Ｂ７Ｈ５、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７Ｈ７、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７−４、Ｃ３、Ｃ５、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７６、ＣＤ２７８、ＣＤ２７９、ＣＤＨ１、キチナーゼ、ＣＬＥＣ９、ＣＬＥＣ９１、ＣＲＴＨ２、ＣＳＦ−１、ＣＳＦ−２、ＣＳＦ−３、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＤＮＧＲ−１、エクトヌクレオチド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＴＰＤ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ１、ＦＬＡＰ、ＦＯＬＨ１、Ｇｉ２４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｈｅｒ２、ＨＨＬＡ２、ＨＭＧＢ１、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳＬ��、ＩＤＯ、ＩＦＮα、ＩｇＥ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒａ、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒａ、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ｒｈＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒａ１、ＩＬ１３Ｒａ２、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒｂ、ＩＬ１８、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２５、ＩＬ２７、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＴＧＢ４、ＩＴＫ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＬＡＭＰ１、レプチン、ＬＰＦＳ２、ＭＨＣクラスＩＩ、ＮＣＲ３ＬＧ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＴＰＤａｓｅ−１、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１Ｈ、血小板受容体、ＰＲＯＭ１、Ｓ１５２、ＳＩＳＰ１、ＳＬＣ、ＳＰＧ６４、ＳＴ２、ＳＴＥＡＰ２、Ｓｙｋキナーゼ、ＴＡＣＩ、ＴＤＯ、Ｔ１４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＬＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ９、ＴＭＥＦ１、ＴＮＦａ、ＴＮＦＲＳＦ７、Ｔｐ５５、ＴＲＥＭ１、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦ、ＶＩＳＴＡ、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭ、およびＸＣＲ１からなる群から選択される１つの標的タンパク質に対応する３つの標的タンパク質と特異的に結合する。
【００１１】
別の実施形態では、本開示は、３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ                      ［Ｉ］
によって表される構造を有し、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１                    ［ＩＩ］
によって表される構造を有し、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１                                      ［ＩＩＩ］
によって表される構造を有し、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                        ［ＩＶ］
によって表される構造を有し、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成し；
（ａ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号２、４、１０、１４、１８、２２、１１５のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列に由来する可変ドメインであり；
（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号４３〜５９、１２３〜１２５のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む可変ドメインの軽鎖相補性決定領域を含み；
（ｃ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５および１６７のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；
（ｄ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号４３〜５９、１２３〜１２５、１３８〜１４０および１４９のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含み；または
（ｅ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、表２〜５に示される軽鎖相補性決定領域および／または可変ドメイン配列を含み；
（ａ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１、３、９、１３、１７、２１、１１４のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列に由来する可変ドメインであり；
（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号２５〜４２、１２０〜１２２のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含み；
（ｃ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４および１６６のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；
（ｄ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号２５〜４２、１２０〜１２２および１２６〜１２８のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含み；
（ｅ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、表２〜５に示される重鎖相補性決定領域および／または可変ドメイン配列を含む、結合タンパク質を提供する。
【００１２】
いくつかの実施形態では、第２および／または第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。
【００１３】
別の実施形態では、本開示は、３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ                              ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３      ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３                        ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                                  ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成し；
（ａ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号２、４、１０、１４、１８、２２、１１５のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列に由来する可変ドメインであり；
（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号４３〜５９、１２３〜１２５のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む可変ドメインの軽鎖相補性決定領域を含み；
（ｃ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５および１６７のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；
（ｄ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号４３〜５９、１２３〜１２５、１３８〜１４０および１４９のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含み；または
（ｅ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、表２〜５に示される軽鎖相補性決定領域および／または可変ドメイン配列を含み；
（ａ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１、３、９、１３、１７、２１、１１４のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列に由来する可変ドメインであり；
（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号２５〜４２、１２０〜１２２のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含み；
（ｃ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４および１６６のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；
（ｄ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号２５〜４２、１２０〜１２２および１２６〜１２８のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含み；
（ｅ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、表２〜５に示される重鎖相補性決定領域および／または可変ドメイン配列を含む、結合タンパク質を提供する。
【００１４】
いくつかの実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５および１６７のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４および１６６のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号４３〜５９、１２３〜１２５、１３８〜１４０および１４９のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含み；（ｄ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号２５〜４２、１２０〜１２２および１２６〜１２８のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含む。
【００１５】
本明細書において記載される結合タンパク質のいずれかのいくつかの実施形態では、
（ａ）ＶＨ１は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；（ｂ）ＶＨ１は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；（ｃ）ＶＨ１は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；（ｄ）ＶＨ１は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｅ）ＶＨ１は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；（ｆ）ＶＨ１は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；（ｇ）ＶＨ１は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；（ｈ）ＶＨ１は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；（ｉ）ＶＨ１は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；または（ｊ）ＶＨ１は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；
ＶＬ３は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、（ａ）ＶＨ１は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、Ｔ細胞表面タンパク質と特異的に結合する１つの抗原結合部位と、抗原標的、例えば、腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する別の抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、ＣＤ３と特異的に結合する抗原結合部位、ＣＤ２８と特異的に結合する抗原結合部位ならびにＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３８、Ｈｅｒ２およびＬＡＭＰ１からなる群から選択される腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＣＤ３と特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＣＤ２８と特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒト腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＣＤ２８と特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＣＤ３と特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒト腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する第３の結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、抗原結合部位は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３８、Ｈｅｒ２およびＬＡＭＰ１からなる群から選択されるヒト腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３と特異的に結合する抗原結合部位は、（ａ）配列番号１５２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；または（ｂ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３と特異的に結合する抗原結合部位は、表２〜５に示される、６つのＣＤＲまたは重鎖および軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８と特異的に結合する抗原結合部位は、（ａ）配列番号１６０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；または（ｂ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８と特異的に結合する抗原結合部位は、表２〜５に示される、６つのＣＤＲまたは重鎖および軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する抗原結合部位は、（ａ）配列番号１５６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；（ｂ）配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；（ｃ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；（ｄ）配列番号１５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；または（ｅ）配列番号１６６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する抗原結合部位は、表２〜５に示される、６つのＣＤＲまたは重鎖および軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する抗原結合部位は、表２〜５に示される、抗Ｈｅｒ２、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ３８または抗ＬＡＭＰ１結合ドメインの６つのＣＤＲまたは重鎖および軽鎖可変ドメインを含む。
【００１７】
別の実施形態では、本開示は、３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ                ［Ｉ］
によって表される構造を有し、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１              ［ＩＩ］
によって表される構造を有し、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１                                ［ＩＩＩ］
によって表される構造を有し、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                  ［ＩＶ］
によって表される構造を有し、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成し；
（ａ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号６１、６３、６９、７１、７４、７６、８２、８６、８８、９４のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列に由来する可変ドメインであり；または
（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号６１、６３、６９、７１、７４、７６、８２、８６、８８、９４のうちいずれか１つに示される少なくとも１つのアミノ酸配列の可変ドメインの軽鎖相補性決定領域を含み；
（ｃ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号１６９、１７１および１７３のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；
（ｄ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号１４１〜１４７、１７８および１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含み；または
（ｅ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、表２〜５に示される軽鎖相補性決定領域および／または可変ドメイン配列を含み；
（ａ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号６０、６２、６８、７３、７５、８１、８５、８７、９３のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列に由来する可変ドメインであり；または
（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号６０、６２、６８、７３、７５、８１、８５、８７、９３のうちいずれか１つに示される少なくとも１つのアミノ酸配列の可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含み；
（ｃ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１６８、１７０および１７２のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；
（ｄ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１２９〜１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含み；または
（ｅ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、表２〜５に示される重鎖相補性決定領域および／または可変ドメイン配列を含む、結合タンパク質を提供する。
【００１８】
いくつかの実施形態では、第２および／または第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。
【００１９】
別の実施形態では、本開示は、３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ                              ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３      ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３                      ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                              ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成し；
（ａ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号６１、６３、６９、７１、７４、７６、８２、８６、８８、９４のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列に由来する可変ドメインであり；
（ｂ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号６１、６３、６９、７１、７４、７６、８２、８６、８８、９４のうちいずれか１つに示される少なくとも１つのアミノ酸配列の可変ドメインの軽鎖相補性決定領域を含み；
（ｃ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号１６９、１７１および１７３のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；
（ｄ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号１４１〜１４７、１７８および１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含み；または
（ｅ）ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、表２〜５に示される軽鎖相補性決定領域および／または可変ドメイン配列を含み；
（ａ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号６０、６２、６８、７３、７５、８１、８５、８７、９３のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列に由来する可変ドメインであり；
（ｂ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号６０、６２、６８、７３、７５、８１、８５、８７、９３のうちいずれか１つに示される少なくとも１つのアミノ酸配列の可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含み；
（ｃ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１６８、１７０および１７２のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；
（ｄ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１２９〜１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含み；
（ｅ）ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、表２〜５に示される重鎖相補性決定領域および／または可変ドメイン配列を含む、結合タンパク質を提供する。
【００２０】
いくつかの実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号１６９、１７１および１７３のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１６８、１７０および１７２のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号１４１〜１４７、１７８および１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含み；ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１２９〜１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含む。
【００２１】
本明細書において記載される結合タンパク質のいずれかのいくつかの実施形態では、（ａ）ＶＨ１は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；（ｂ）ＶＨ１は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；（ｃ）ＶＨ１は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；（ｄ）ＶＨ１は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；（ｅ）ＶＨ１は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；（ｆ）ＶＨ１は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；（ｇ）ＶＨ１は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；（ｈ）ＶＨ１は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｉ）ＶＨ１は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；または（ｊ）ＶＨ１は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ１は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ２は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ２は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶＨ３は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶＬ３は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２、ＶＬ２、ＶＨ３およびＶＬ３のうち１つまたはそれ以上は、表２〜５に示される抗体の１つ、２つまたは３つのＣＤＲ配列を含む。
【００２２】
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、３つの抗原結合部位を含み、ここで、１つ、２つまたは３つの抗原結合部位は、ＩＬ−４、ＩＬ−１３およびＴＮＦａからなる群から選択されるサイトカイン標的タンパク質と特異的に結合する。いくつかの実施形態では、（ａ）ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒトＩＬ４と特異的に結合する抗原結合部位を形成する；（ｂ）ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＩＬ４と特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する；（ｃ）ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＩＬ４と特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する；（ｄ）ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＩＬ４と特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する；（ｅ）ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＩＬ４と特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する；または（ｆ）ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒトＩＬ４と特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号１６８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ４と特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号１７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１７１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【００２３】
本明細書において記載される結合タンパク質のいずれかのいくつかの実施形態では、第２および／または第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含み、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはＬ４のうち少なくとも１つは独立に、０個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはＬ４は各々独立に、少なくとも１個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、三重特異性であり、３つの異なる抗原標的と特異的に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、三重特異性であり、３つの異なる抗原標的と特異的に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、１種またはそれ以上の標的タンパク質の機能を阻害することが可能である。
【００２４】
本明細書において記載される結合タンパク質のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはＬ４のうち少なくとも１つは独立に、０個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはＬ４は各々独立に、少なくとも１個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４のうち１つ、２つ、３つまたは４つすべてが、０個から１５個の間のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４のうち少なくとも２つは、１個から１５個の間のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、（ａ）Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は各々独立に、０個のアミノ酸長であるか、もしくはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）からなる群から選択される配列を含み；または（ｂ）Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は各々独立に、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）からなる群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、（ａ）Ｌ１は、配列ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）を含み、Ｌ２は、配列ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）を含み、Ｌ３は、配列Ｓを含み、Ｌ４は、配列ＲＴを含む；（ｂ）Ｌ１は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）を含み、Ｌ２は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）を含み、Ｌ３は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ４は、０個のアミノ酸長である；（ｃ）Ｌ１は、配列ＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）を含み、Ｌ２は、配列ＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）を含み、Ｌ３は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ４は、０個のアミノ酸長である；または（ｄ）Ｌ１は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）を含み、Ｌ２は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ３は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）を含み、Ｌ４は、０個のアミノ酸長である。
【００２５】
本明細書において記載される結合タンパク質のいずれかのいくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＳ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり、第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８および４０７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖである。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８および４０７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖであり、第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第１および／または第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４２８および４３４に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＭ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８および４０７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖである。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８および４０７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである。いくつかの実施形態では、第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは両方とも、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４２８および４３４にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；ここで、第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第１および第２のＦｃ領域のうち一方のみが、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＨ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆである。いくつかの実施形態では、第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインであり、ここで、ＣＨ３ドメインのうち一方のみが、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＨ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆである。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；ここで、第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第１および／または第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域であり；第１および第２のＦｃ領域は各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２２８および４０９に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＳ２２８ＰおよびＲ４０９Ｋである。いくつかの実施形態では、第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＧ４  ＣＨ３ドメインであり、ここで、ＣＨ３ドメインは各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２２８および４０９に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＳ２２８ＰおよびＲ４０９Ｋである。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；ここで、第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第１および／または第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域であり；第１および第２のＦｃ領域は各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２３４および２３５に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＦ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである。いくつかの実施形態では、第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＧ４  ＣＨ３ドメインであり、ここで、ＣＨ３ドメインは各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２３４および２３５に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換ンはＦ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；ここで、第１および／または第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域であり；第１および第２のＦｃ領域は各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置２３４および２３５に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである。いくつかの実施形態では、第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインであり、ＣＨ３ドメインは各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置２３４および２３５に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである。いくつかの実施形態では、第１および／または第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、第１および／または第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域である。
【００２６】
本明細書において記載される結合タンパク質のいずれかのいくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトκＣＬドメインであり、第４のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトλ  ＣＬドメインである；または第１のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトλＣＬドメインであり、第４のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトκＣＬドメインである。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、λＣＬドメインを含み；ここで、第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＳ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８、４０７、４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆであり；第４のポリペプチド鎖は、κＣＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、λＣＬドメインを含み；ここで、第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＳ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８、４０７、４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆであり；第４のポリペプチド鎖は、κＣＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、λＣＬドメインを含み；ここで、第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４、３６６、４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆであり；第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８および４０７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖであり；第４のポリペプチド鎖は、κＣＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、κＣＬドメインを含み；ここで、第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８、４０７、４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆであり；第４のポリペプチド鎖は、λＣＬドメインを含む。い���つかの実施形態では、第２および／または第３のポリペプチド鎖は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域を含む。
【００２７】
別の実施形態では、本開示は、第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖、第３のポリペプチド鎖および第４のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
（ａ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列もしくは配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列もしくは配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１のアミノ酸配列もしくは配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２のアミノ酸配列もしくは配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｂ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列もしくは配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列もしくは配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１のアミノ酸配列もしくは配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２のアミノ酸配列もしくは配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｃ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列もしくは配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列もしくは配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列もしくは配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４のアミノ酸配列もしくは配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｄ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列もしくは配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列もしくは配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列もしくは配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４のアミノ酸配列もしくは配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｅ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列もしくは配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列もしくは配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７のアミノ酸配列もしくは配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１８のアミノ酸配列もしくは配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｆ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列もしくは配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列もしくは配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７のアミノ酸配列もしくは配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１８のアミノ酸配列もしくは配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｇ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列もしくは配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列もしくは配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号２１のアミノ酸配列もしくは配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２２のアミノ酸配列もしくは配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｈ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列もしくは配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列もしくは配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号２１のアミノ酸配列もしくは配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２２のアミノ酸配列もしくは配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６３のアミノ酸配列もしくは配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列もしくは配列番号６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列もしくは配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列もしくは配列番号６１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｊ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列もしくは配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列もしくは配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列もしくは配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列もしくは配列番号６１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｋ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列もしくは配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列もしくは配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列もしくは配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７１のアミノ酸配列もしくは配列番号７１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｌ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号７６のアミノ酸配列もしくは配列番号７６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号７５のアミノ酸配列もしくは配列番号７５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列もしくは配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７４のアミノ酸配列もしくは配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｍ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号８２のアミノ酸配列もしくは配列番号８２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号８１のアミノ酸配列もしくは配列番号８１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列もしくは配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７４のアミノ酸配列もしくは配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｎ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号８８のアミノ酸配列もしくは配列番号８８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号８７のアミノ酸配列もしくは配列番号８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列もしくは配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号８６のアミノ酸配列もしくは配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｏ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号９４のアミノ酸配列もしくは配列番号９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９３のアミノ酸配列もしくは配列番号９３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列もしくは配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号８６のアミノ酸配列もしくは配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｐ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列もしくは配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列もしくは配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列もしくは配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７４のアミノ酸配列もしくは配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｑ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列もしくは配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列もしくは配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列もしくは配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号８６のアミノ酸配列もしくは配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｒ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６３のアミノ酸配列もしくは配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプ
チド鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列もしくは配列番号６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列もしくは配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７４のアミノ酸配列もしくは配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｓ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６３のアミノ酸配列もしくは配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列もしくは配列番号６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列もしくは配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号８６のアミノ酸配列もしくは配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｔ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列もしくは配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列もしくは配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列もしくは配列番号１１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１５のアミノ酸配列もしくは配列番号１１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；または
（ｕ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列もしくは配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列もしくは配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列もしくは配列番号１１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１５のアミノ酸配列もしくは配列番号１１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、結合タンパク質を提供する。
【００２８】
別の実施形態では、本開示は、上記の実施形態のいずれかに従う結合タンパク質またはそのポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を提供する。別の実施形態では、本開示は、上記の実施形態の１つに従う核酸分子を含む発現ベクターを提供する。別の実施形態では、本開示は、上記の実施形態のいずれかに従う核酸分子を含む単離された宿主細胞を提供する。別の実施形態では、本開示は、上記の実施形態のいずれかに従う発現ベクターを含む単離された宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態では、単離された宿主細胞は、哺乳動物細胞または昆虫細胞である。一実施形態では、本開示は、上記の実施形態のいずれかに従う、結合タンパク質の第１、第２、第３および第４のポリペプチド鎖をコードする１つまたはそれ以上のベクターを含むベクター系を提供する。いくつかの実施形態では、ベクター系は、結合タンパク質の第１のポリペプチド鎖をコードする第１のベクター、結合タンパク質の第２のポリペプチド鎖をコードする第２のベクター、結合タンパク質の第３のポリペプチド鎖をコードする第３のベクターおよび結合タンパク質の第４のポリペプチド鎖をコードする第４のベクターを含む。いくつかの実施形態では、ベクター系は、結合タンパク質の第１および第２のポリペプチド鎖をコードする第１のベクターならびに結合タンパク質の第３および第４のポリペプチド鎖をコードする第２のベクターを含む。いくつかの実施形態では、１つまたはそれ以上のベクターは、発現ベクターである。一実施形態では、本開示は、上記の実施形態のいずれかに従うベクター系を含む単離された宿主細胞を提供する。一実施形態では、本開示は、結合タンパク質を製造する方法であって、ａ）上記の実施形態のいずれかに従う宿主細胞を、宿主細胞が結合タンパク質を発現するような条件下で培養する工程と；ｂ）宿主細胞から結合タンパク質を単離する工程とを含む方法を提供する。一実施形態では、本開示は、上記の実施形態のいずれかに従う結合タンパク質と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
【００２９】
別の実施形態では、本開示は、患者において癌を予防および／または治療する方法であって、該患者に、治療有効量の、上記の実施形態のいずれかに従う少なくとも１種の結合タンパク質または医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。別の実施形態では、本開示は、患者において癌を予防および／または治療するための、上記の実施形態のいずれかに従う結合タンパク質または医薬組成物を提供する。別の実施形態では、本開示は、患者において癌を予防および／または治療するための医薬の製造のための、上記の実施形態のいずれかに従う結合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、Ｔ細胞表面タンパク質と特異的に結合する１つの抗原結合部位および腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する別の抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、ＣＤ３と特異的に結合する抗原結合部位、ＣＤ２８と特異的に結合する抗原結合部位ならびにＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３８、Ｈｅｒ２およびＬＡＭＰ１からなる群から選択される腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの結合タンパク質は、化学療法剤と同時投与される。いくつかの実施形態では、患者は、ヒトである。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、Ａ２ＡＲ、ＡＰＲＩＬ、ＡＴＰＤａｓｅ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＢｌｙＳ、ＢＴＫ、ＢＴＬＡ、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４、Ｂ７Ｈ５、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７Ｈ７、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７−４、Ｃ３、Ｃ５、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７６、ＣＤ２７８、ＣＤ２７９、ＣＤＨ１、キチナーゼ、ＣＬＥＣ９、ＣＬＥＣ９１、ＣＲＴＨ２、ＣＳＦ−１、ＣＳＦ−２、ＣＳＦ−３、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＤＮＧＲ−１、エクトヌクレオチド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＴＰＤ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ１、ＦＬＡＰ、ＦＯＬＨ１、Ｇｉ２４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｈｅｒ２、ＨＨＬＡ２、ＨＭＧＢ１、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳＬＧ、ＩＤＯ、ＩＦＮα、ＩｇＥ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒａ、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒａ、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ｒｈＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒａ１、ＩＬ１３Ｒａ２、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒｂ、ＩＬ１８、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２５、ＩＬ２７、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＴＧＢ４、ＩＴＫ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＬＡＭＰ１、レプチン、ＬＰＦＳ２、ＭＨＣクラスＩＩ、ＮＣＲ３ＬＧ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＴＰＤａｓｅ−１、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１Ｈ、血小板受容体��ＰＲＯＭ１、Ｓ１５２、ＳＩＳＰ１、ＳＬＣ、ＳＰＧ６４、ＳＴ２、ＳＴＥＡＰ２、Ｓｙｋキナーゼ、ＴＡＣＩ、ＴＤＯ、Ｔ１４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＬＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ９、ＴＭＥＦ１、ＴＮＦａ、ＴＮＦＲＳＦ７、Ｔｐ５５、ＴＲＥＭ１、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦ、ＶＩＳＴＡ、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭ、およびＸＣＲ１からなる群から選択される１種またはそれ以上の標的タンパク質の機能を阻害することが可能である。
【００３０】
別の実施形態では、本開示は、患者において炎症性疾患または障害を予防および／または治療する方法であって、該患者に、治療有効量の、上記の実施形態のいずれかに従う少なくとも１種の結合タンパク質または医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。別の実施形態では、本開示は、患者において炎症性疾患または障害を予防および／または治療する際の使用のための、上記の実施形態のいずれかに従う結合タンパク質または医薬組成物を提供する。別の実施形態では、本開示は、患者において炎症性疾患または障害を予防および／または治療するための医薬の製造のための、上記の実施形態のいずれかに従う結合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、ＩＬ−４、ＩＬ−１３およびＴＮＦａからなる群から選択されるサイトカイン標的タンパク質と各々特異的に結合する３つの抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、３つの結合部位のうち２つは、ＩＬ−４、ＩＬ−１３およびＴＮＦａからなる群から選択されるサイトカイン標的タンパク質と特異的に結合する。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の結合タンパク質は、抗炎症剤と同時投与される。いくつかの実施形態では、患者は、ヒトである。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、Ａ２ＡＲ、ＡＰＲＩＬ、ＡＴＰＤａｓｅ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＢｌｙＳ、ＢＴＫ、ＢＴＬＡ、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４、Ｂ７Ｈ５、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７Ｈ７、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７−４、Ｃ３、Ｃ５、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７６、ＣＤ２７８、ＣＤ２７９、ＣＤＨ１、キチナーゼ、ＣＬＥＣ９、ＣＬＥＣ９１、ＣＲＴＨ２、ＣＳＦ−１、ＣＳＦ−２、ＣＳＦ−３、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＤＮＧＲ−１、エクトヌクレオチド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＴＰＤ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ１、ＦＬＡＰ、ＦＯＬＨ１、Ｇｉ２４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｈｅｒ２、ＨＨＬＡ２、ＨＭＧＢ１、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳＬＧ、ＩＤＯ、ＩＦＮα、ＩｇＥ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒａ、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒａ、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ｒｈＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒａ１、ＩＬ１３Ｒａ２、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒｂ、ＩＬ１８、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２５、ＩＬ２７、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＴＧＢ４、ＩＴＫ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＬＡＭＰ１、レプチン、ＬＰＦＳ２、ＭＨＣクラスＩＩ、ＮＣＲ３ＬＧ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＴＰＤａｓｅ−１、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１Ｈ、血小板受容体、ＰＲＯＭ１、Ｓ１５２、ＳＩＳＰ��、ＳＬＣ、ＳＰＧ６４、ＳＴ２、ＳＴＥＡＰ２、Ｓｙｋキナーゼ、ＴＡＣＩ、ＴＤＯ、Ｔ１４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＬＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ９、ＴＭＥＦ１、ＴＮＦａ、ＴＮＦＲＳＦ７、Ｔｐ５５、ＴＲＥＭ１、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦ、ＶＩＳＴＡ、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭ、およびＸＣＲ１からなる群から選択される１種またはそれ以上の標的タンパク質の機能を阻害することが可能である。
【００３１】
別の実施形態では、本開示は、宿主細胞によって産生された結合タンパク質を精製する方法であって、
（ａ）宿主細胞において、１種またはそれ以上の抗原標的または標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質を産生する工程であって、第１のポリペプチド鎖が、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ                              ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖が、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３      ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖が、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１                                              ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖が、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                                ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶＬ１が、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２が、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３が、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１が、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２が、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３が、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬが、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１が、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２が、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３が、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジが、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４が、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドが、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成し；第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインおよび第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインのうち一方のみが、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換がＨ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆである、結合タンパク質を産生する工程と；
（ｂ）（ａ）で産生された結合タンパク質を、プロテインＡと接触させる工程と；
（ｃ）０または２つの、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆであるアミノ酸置換を含むＣＨ３ドメインを含む結合タンパク質から離して結合タンパク質を単離するのに適した条件下でプロテインＡから結合タンパク質を溶出させる工程と
を含む方法を提供する。
【００３２】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトκＣＬドメインであり、第４のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトλ  ＣＬドメインであり；または第１のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトλＣＬドメインであり、第４のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトκＣＬドメインであり、方法は、（ｄ）（ｃ）で溶出された結合タンパク質を、κ軽鎖親和性媒体と接触させる工程と、（ｅ）λＣＬドメインのみを含む結合タンパク質から離して結合タンパク質を単離するのに適した条件下で、κ軽鎖親和性媒体から結合タンパク質を溶出させる工程とをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、（ｅ）後に、（ｆ）（ｅ）で溶出された結合タンパク質を、λ軽鎖親和性媒体と接触させる工程と；（ｇ）κＣＬドメインのみを含む結合タンパク質から離して結合タンパク質を単離するのに適した条件下で、λ軽鎖親和性媒体から結合タンパク質を溶出させる工程とをさらに含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトκＣＬドメインであり、第４のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトλＣＬドメインであり；または第１のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトλＣＬドメインであり、第４のポリペプチド鎖のＣＬドメインは、ヒトκＣＬドメインであり、方法は、（ｄ）（ｃ）で溶出された結合タンパク質を、λ軽鎖親和性媒体と接触させる工程と；（ｅ）κＣＬドメインのみを含む結合タンパク質から離して結合タンパク質を単離するのに適した条件下で、λ軽鎖親和性媒体から結合タンパク質を溶出させる工程とをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、（ｅ）後、（ｆ）（ｅ）で溶出された結合タンパク質を、κ軽鎖親和性媒体と接触させる工程と；（ｇ）λＣＬドメインのみを含む結合タンパク質から離して結合タンパク質を単離するのに適した条件下で、κ軽鎖親和性媒体から結合タンパク質を溶出させる工程とをさらに含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、λＣＬドメインを含み；ここで、第２のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＳ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置３４９、３６６、３６８、４０７、４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆであり；第４のポリペプチド鎖は、κＣＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を使用して（ｃ）および（ｅ）のうち一方またはそれ以上で検出される。いくつかの実施形態では、第２および第３のポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインおよび／またはＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４  ＣＨ３ドメインおよび／またはＦｃ領域である。
【００３３】
本明細書において記載される種々の実施形態の特性のうちの１つ、一部またはすべてを、本発明のその他の実施形態を形成するように組み合わせることができるということは理解されるべきである。本発明のこれらおよびその他の態様は、当業者に明らかとなろう。本発明のこれらおよびその他の実施形態を、以下の詳細な説明によってさらに記載する。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１−１】図１Ａ〜１Ｃは、３つの標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む三重特異性結合タンパク質の模式図を示す図であり、ここで、ポリペプチドの第１の対は、２つの抗原結合部位を形成するクロスオーバー配向（ＶＨ１−ＶＨ２およびＶＬ２−ＶＬ１）を有する二重可変ドメインを有し、ポリペプチドの第２の対は、単一の抗原結合部位を形成する単一の可変ドメイン（ＶＨ３およびＶＬ３）を有する。図１Ａは、ノブが、単一の可変ドメインを有するポリペプチドの第２の対上にある、「ノブ・イントゥー・ホール（ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ）」突然変異を含む三重特異性結合タンパク質を示す。図１Ｂは、ノブが、クロスオーバー配向を有するポリペプチドの第１の対上にある、「ノブ・イントゥー・ホール」突然変異を含む三重特異性結合タンパク質を示す。図１Ｃは、ポリペプチド鎖上の可変ドメインの配向を示し、結合タンパク質のノブ／ホール配向は、表１〜３に示されている。「重鎖Ａ」（例えば、本開示の第３のポリペプチド鎖）は、重鎖Ａの可変ドメインを示す。「軽鎖Ａ」（例えば、本開示の第４のポリペプチド鎖）は、軽鎖Ａの可変ドメインを示す。「重鎖Ｂ」（例えば、本開示の第２のポリペプチド鎖）は、重鎖Ｂの可変ドメイン１および可変ドメイン２を示す。「軽鎖Ｂ」（例えば、本開示の第１のポリペプチド鎖）は、軽鎖Ｂの可変ドメイン１および可変ドメイン２を示す。
【図１−２】図１−１の続き。
【図２】図２は、抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（結合タンパク質１）またはアイソタイプ対照抗体の、ヒトＣＤ３、ＣＤ２８およびＨｅｒ２との結合を調べるＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図である。結合している抗体は、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）がコンジュゲートされた抗Ｆａｂ二次抗体を使用して検出された。
【図３−１】図３Ａ〜３Ｃは、抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（本明細書において、「結合タンパク質１」と呼ばれる）、抗ＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４二重特異性抗体（ｈｕＣＤ２８ｘＣＤ３）、抗Ｈｅｒ２  ＩｇＧ１抗体または対照抗体（ヒトＩｇＧ１）を使用する、Ｅ：Ｔ＝１０でヒトＰＢＭＣを使用する、Ｈｅｒ２＋乳癌細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す図である。図３Ａは、ＺＲ−７５−１細胞の三重特異性抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図３Ｂは、ＡＵ５６５細胞の三重特異性抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図３Ｃは、ＺＲ−７５−１およびＡＵ５６５細胞上での示されたマーカーの細胞表面発現を調べるＦＡＣＳ解析の結果を示す。
【図３−２】図３−１の続き。
【図４】図４および５は、抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（結合タンパク質１）、抗ＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４二重特異性抗体（ｈｕＣＤ２８ｘＣＤ３）、抗Ｈｅｒ２  ＩｇＧ１抗体または対照抗体（ヒトＩｇＧ１）を使用する、Ｈｅｒ２＋乳癌細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す図である。図４は、Ｅ：Ｔ＝１０でドナーＫＰ４５９２６由来のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用する、ＺＲ−７５−１細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図５は、Ｅ：Ｔ＝１０でドナーＫＰ４５９４４由来のヒトＰＢＭＣを使用する、ＡＵ５６５細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図４および５によって、異なるドナー由来のＰＢＭＣを使用する図３Ａ〜３Ｃに示される同様の細胞死滅結果が確認される。
【図５】図４および５は、抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（結合タンパク質１）、抗ＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４二重特異性抗体（ｈｕＣＤ２８ｘＣＤ３）、抗Ｈｅｒ２  ＩｇＧ１抗体または対照抗体（ヒトＩｇＧ１）を使用する、Ｈｅｒ２＋乳癌細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す図である。図４は、Ｅ：Ｔ＝１０でドナーＫＰ４５９２６由来のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用する、ＺＲ−７５−１細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図５は、Ｅ：Ｔ＝１０でドナーＫＰ４５９４４由来のヒトＰＢＭＣを使用する、ＡＵ５６５細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図４および５によって、異なるドナー由来のＰＢＭＣを使用する図３Ａ〜３Ｃに示される同様の細胞死滅結果が確認される。
【図６Ａ】図６Ａおよび６Ｂは、抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性結合タンパク質（ＨＥＲ２／ＣＤ２８ｓｕｐｘＣＤ３ｍｉｄ；本明細書において「結合タンパク質１」と呼ばれる）、抗ＣＤ２８結合ドメインを欠く抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性結合タンパク質（ＨＥＲ２／ΔＣＤ２８ｓｕｐｘＣＤ３ｍｉｄ）、抗ＣＤ３結合ドメインを欠く抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性結合タンパク質（ＨＥＲ２／ＣＤ２８ｓｕｐｘΔＣＤ３ｍｉｄ）、抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３結合ドメインの両方を欠く抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性結合タンパク質（ＨＥＲ２／Δ（ＣＤ２８ｓｕｐｘΔＣＤ３ｍｉｄ））、対照抗ＣＤ３モノクローナル抗体または対照ＩｇＧ４抗体を用いて処理された、ヒトＴ細胞の活性化（ＣＤ６９＋）および増殖を示す図である。図６Ａは、３人のドナーのヒトＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化（ＣＤ６９＋）を示す。図６Ｂは、３人のドナーのヒトＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化（ＣＤ６９＋）を示す。ＣＤ２８ｓｕｐ：抗ＣＤ２８スーパーアゴニスト抗体。ＣＤ３ｍｉｄ：抗ＣＤ３抗体。
【図６Ｂ】図６Ａおよび６Ｂは、抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性結合タンパク質（ＨＥＲ２／ＣＤ２８ｓｕｐｘＣＤ３ｍｉｄ；本明細書において「結合タンパク質１」と呼ばれる）、抗ＣＤ２８結合ドメインを欠く抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性結合タンパク質（ＨＥＲ２／ΔＣＤ２８ｓｕｐｘＣＤ３ｍｉｄ）、抗ＣＤ３結合ドメインを欠く抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性結合タンパク質（ＨＥＲ２／ＣＤ２８ｓｕｐｘΔＣＤ３ｍｉｄ）、抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３結合ドメインの両方を欠く抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性結合タンパク質（ＨＥＲ２／Δ（ＣＤ２８ｓｕｐｘΔＣＤ３ｍｉｄ））、対照抗ＣＤ３モノクローナル抗体または対照ＩｇＧ４抗体を用いて処理された、ヒトＴ細胞の活性化（ＣＤ６９＋）および増殖を示す図である。図６Ａは、３人のドナーのヒトＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化（ＣＤ６９＋）を示す。図６Ｂは、３人のドナーのヒトＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化（ＣＤ６９＋）を示す。ＣＤ２８ｓｕｐ：抗ＣＤ２８スーパーアゴニスト抗体。ＣＤ３ｍｉｄ：抗ＣＤ３抗体。
【図７】図７Ａ〜Ｃは、ＩＬ−２プロモーター−ルシフェラーゼ構築物（図７Ａ）、ＮＦκＢプロモーター−ルシフェラーゼ構築物（図７Ｂ）またはＮＦＡＴプロモーター−ルシフェラーゼ構築物（図７Ｃ）を有するヒトジャーカットＴ細胞を使用する、ルシフェラーゼアッセイによって測定されるような、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８シグナル伝達を介する、ＩＬ−２、ＮＦκＢおよび活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦＡＴ）経路活性化を示す図である。試験した抗体は、図６Ａ〜６Ｄに関連して上記で記載されたものであった。
【図８】図８は、抗ＣＤ１９ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（本明細書において「結合タンパク質３」と呼ばれる）またはアイソタイプ対照抗体の、ＣＤ３、ＣＤ２８およびＣＤ１９との結合を調べるＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す。結合された抗体は、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）がコンジュゲートされた抗Ｆａｂ二次抗体を使用して検出された。
【図９−１】図９Ａ〜９Ｎは、抗ＣＤ１９ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（本明細書において「結合タンパク質３」と呼ばれる）または示された対照を使用する、Ｅ：Ｔ＝１０でエフェクター細胞としてヒトＰＢＭＣを使用する、ＣＤ１９＋ヒトＧＣＢリンパ腫細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す図である。図９Ａは、ＯＣＩ−ＬＹ１９細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図９Ｂは、ＯＣＩ−ＬＹ１９細胞上の示されたマーカーの細胞表面発現を調べるＦＡＣＳ解析の結果を示す。図９Ｃは、Ｅ：Ｔ＝１０でドナーＫＰ４８５７２由来のＰＢＭＣを使用する、ＯＣＩ−ＬＹ１９細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図９Ｄは、Ｅ：Ｔ＝１０でドナーＫＰ４８５７３由来のＰＢＭＣを使用する、ＯＣＩ−ＬＹ１９細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図９Ｅは、Ｅ：Ｔ＝１０でドナーＫＰ４８５７２由来のＰＢＭＣを使用する、ヒトリンパ腫ＫＡＲＰＡＳＳ−４２２細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図９Ｆは、Ｅ：Ｔ＝１０でドナーＫＰ４８５７３由来のＰＢＭＣを使用する、ＫＡＲＰＡＳＳ−４２２細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図９Ｇは、Ｅ：Ｔ＝１０でドナーＫＰ４８５７２由来のＰＢＭＣを使用する、ヒト慢性Ｂ細胞白血病ＭｅＣ１細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図９Ｈは、Ｅ：Ｔ＝１０でドナーＫＰ４８７７５由来のＰＢＭＣを使用する、ヒト多発性骨髄腫ＲＰＭＩ８２２６細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図９Ｉは、Ｅ：Ｔ＝１０でドナーＫＰ４８５７２由来のＰＢＭＣを使用する、ヒトバーキットリンパ腫ラージ細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図９Ｊは、Ｅ：Ｔ＝１０でドナーＫＰ４８７７５由来のＰＢＭＣを使用する、ヒトびまん性大細胞種Ｂ細胞リンパ腫ＨＢＬ１細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図９Ｋは、Ｅ：Ｔ＝１０でドナーＫＰ４８５７２由来のＰＢＭＣを使用する、大細胞種リンパ腫ＳＵＤＨＬ８細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図９Ｌは、Ｅ：Ｔ＝１０でドナーＫＰ４８５７３由来のＰＢＭＣを使用する、ＳＵＤＨＬ８細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図９Ｍは、Ｅ：Ｔ＝１０でドナーＫＰ４８７７５由来のＰＢＭＣを使用する、ヒトＢ細胞リンパ腫ＡＲＨ７７細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図９Ｎは、Ｅ：Ｔ＝１０でドナーＫＰ４８７７５由来のＰＢＭＣを使用する、ＯＣＩ−Ｌｙ３細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。
【図９−２】図９−１の続き。
【図９−３】図９−２の続き。
【図９−４】図９−３の続き。
【図１０】図１０は、抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（結合タンパク質５）またはアイソタイプ対照抗体の、ＣＤ３、ＣＤ２８およびＣＤ３８との結合を調べるＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図である。結合された抗体は、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）がコンジュゲートされた抗Ｆａｂ二次抗体を使用して検出された。
【図１１−１】図１１Ａ〜１１Ｄは、抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（結合タンパク質５）、抗ＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４二重特異性抗体（ｈｕＣＤ２８ｘＣＤ３）、抗ＣＤ３８  ＩｇＧ１抗体または対照抗体（ヒトＩｇＧ１）を使用する、ＣＤ３８＋ヒト多発性骨髄腫癌細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す図である。図１１Ａは、Ｅ：Ｔ＝１０でエフェクター細胞としてヒトＰＢＭＣを使用する、ＭＯＬＰ−８細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図１１Ｂは、Ｅ：Ｔ＝１０でエフェクター細胞としてヒトＰＢＭＣを使用する、ＲＰＭＩ−８２２６細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図１１Ｃは、Ｅ：Ｔ＝１０でエフェクター細胞としてヒトＰＢＭＣを使用する、ＫＭＳ−１２−ＢＭ細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図１１Ｄは、ＭＯＬＰ−８、ＲＰＭＩ−８２２６およびＫＭＳ−１２−ＢＭ細胞上の示されたマーカーの細胞表面発現を調べるＦＡＣＳ解析の結果を示す。
【図１１−２】図１１−１の続き。
【図１２−１】図１２Ａ〜１２Ｄは、抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（結合タンパク質５）、抗ＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４二重特異性抗体（ｈｕＣＤ２８ｘＣＤ３）、抗ＣＤ３８  ＩｇＧ１抗体または対照抗体（ヒトＩｇＧ１）を使用する、Ｅ：Ｔ＝１０でエフェクター細胞としてヒトＰＢＭＣを使用する、ＣＤ３８＋ヒト多発性骨髄腫癌細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す図である。図１２Ａは、ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図１２Ｂは、ＭＭ．１Ｓ細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図１２Ｃは、ＭＭ．１Ｒ細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図１２Ｄは、ＮＣＩ−Ｈ９２９、ＭＭ．１ＳおよびＭＭ．１Ｒ細胞上の示されたマーカーの細胞表面発現を調べるＦＡＣＳ解析の結果を示す。
【図１２−２】図１２−１の続き。
【図１３−１】図１３Ａ〜１３Ｄは、抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（結合タンパク質５）、抗ＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４二重特異性抗体（ｈｕＣＤ２８ｘＣＤ３）、抗ＣＤ３８  ＩｇＧ１抗体または対照抗体（ヒトＩｇＧ１）を使用する、Ｅ：Ｔ＝１０でエフェクター細胞としてヒトＰＢＭＣを使用する、ＣＤ３８＋ヒト多発性骨髄腫癌細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す図である。図１３Ａは、ＯＰＭ−２細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図１３Ｂは、ＫＭＳ−２６細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図１３Ｃは、Ｕ２６６細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図１３Ｄは、ＯＰＭ−２、ＫＭＳ−２６およびＵ２２６細胞上での示されたマーカーの細胞表面発現を調べるＦＡＣＳ解析の結果を示す。
【図１３−２】図１３−１の続き。
【図１４−１】図１４Ａ〜１４Ｃは、抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（結合タンパク質５）、抗ＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４二重特異性抗体（ｈｕＣＤ２８ｘＣＤ３）、抗ＣＤ３８  ＩｇＧ１抗体または対照抗体（ヒトＩｇＧ１）を使用する、Ｅ：Ｔ＝１０でエフェクター細胞としてヒトＰＢＭＣを使用する、ＣＤ３８＋ヒトリンパ腫癌細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す図である。図１４Ａは、ＳＵＤＨＬ−８細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図１４Ｂは、ＯＣＩ−ＬＹ１９細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図１４Ｃは、ＳＵＤＨＬ−８およびＯＣＩ−ＬＹ１９細胞上での示されたマーカーの細胞表面発現を調べるＦＡＣＳ解析の結果を示す。
【図１４−２】図１４−１の続き。
【図１５−１】図１５Ａ〜１５Ｄは、抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（結合タンパク質５）、抗ＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４二重特異性抗体（ｈｕＣＤ２８ｘＣＤ３）、抗ＣＤ３８  ＩｇＧ１抗体または対照抗体（ヒトＩｇＧ１）を使用する、Ｅ：Ｔ＝１０でエフェクター細胞としてヒトＰＢＭＣを使用する、ＣＤ３８＋のすべての癌細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す図である。図１５Ａは、ＫＯＰＮ−８細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図１５Ｂは、ＨＡＬ−１細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図１５Ｃは、ＣＣＲＦ−ＳＢ細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す。図１５Ｄは、ＫＯＰＮ−８、ＨＡＬ−１およびＣＣＲＦ−ＳＢ細胞上での示されたマーカーの細胞表面発現を調べるＦＡＣＳ解析の結果を示す。
【図１５−２】図１５−１の続き。
【図１６】図１６は、抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（使用される特異的抗ＣＤ２８結合ドメインに応じて、本明細書において「結合タンパク質５」および「結合タンパク質６」と呼ばれる）、抗ＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４二重特異性抗体（ｈｕＣＤ２８ｘＣＤ３）、抗ＣＤ３８  ＩｇＧ１抗体、対照抗ＣＤ３８  ＩｇＧ１抗体または対照抗体（ヒトＩｇＧ１）を使用する、Ｅ：Ｔ＝１０でドナーＰＫ４５９２６に由来するＰＢＭＣを使用する、ＣＤ３８＋骨髄腫癌細胞の抗体媒介性特異的死滅の結果を示す図である。
【図１７】図１７Ａおよび１７Ｂは、ＩＬ−２プロモーター−ルシフェラーゼ構築物（図１７Ａ）またはＮＦＡＴプロモーター−ルシフェラーゼ構築物（図１７Ｂ）を有するヒトジャーカットＴ細胞を使用する、ルシフェラーゼアッセイによって測定されるような、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８シグナル伝達を介する、ＩＬ−２、ＮＦκＢおよび活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦＡＴ）経路活性化を示す図である。試験した抗体は、抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性ＩｇＧ４抗体（「Ｔｒｉ−Ａｂ」として表示される結合タンパク質５）、ＣＤ２８結合ドメインを欠く抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性ＩｇＧ４抗体（「Ｔｒｉ−Ａｂ（ΔＣＤ２８）として表示される）、ＣＤ３結合ドメインを欠く抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性ＩｇＧ４抗体（「Ｔｒｉ−Ａｂ（ΔＣＤ３）として表示される）およびＣＤ３およびＣＤ２８結合ドメインを欠く抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性ＩｇＧ４抗体（「Ｔｒｉ−Ａｂ（ΔＣＤ２８ｘΔＣＤ３）として表示される）であった。ルシフェラーゼアッセイは、示されたＴｒｉ−Ａｂの各々について２連で実施した。
【図１８−１】図１８Ａ〜１８Ｅは、非ヒト霊長類において、抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（本明細書において「結合タンパク質１」と呼ばれる）を使用する用量漸増毒性研究の結果を示す図である（０．１、０．５、２．５、５、１０から１００μｇ／ｋｇへの用量漸増；「４０９」および「４１０」と表示される動物）。図１８Ａは、抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性抗体を投与した６時間後の、各動物における循環ＣＤ４＋Ｔ細胞パーセンテージの結果を示す。図１８Ｂは、抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性抗体の投与の６時間後の、各動物における循環ＣＤ８＋Ｔ細胞パーセンテージの結果を示す。図１８Ｃは、投薬の６時間後の、循環ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化（ＣＤ６９＋）の結果を示す。図１８Ｄは、投薬の６時間後の、循環ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化（ＣＤ６９＋）の結果を示す。図１８Ｅは、各投薬での抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性抗体の投与の６時間後に観察された炎症性サイトカイン放出を示す。
【図１８−２】図１８−１の続き。
【図１８−３】図１８−２の続き。
【図１９】図１９Ａ〜Ｂは、ＢＴ４７４細胞を移植された、ＣＤ３４＋臍帯血細胞ヒト化ＮＳＧマウスモデルにおける、抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（本明細書において「結合タンパク質１」と呼ばれる）のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を示す図である。図１９Ａは、示された濃度の抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性結合タンパク質またはＰＢＳ対照を用いて処置されたマウスの体重の変化を示す。図１９Ｂは、示された濃度の抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性結合タンパク質またはＰＢＳ対照を用いて処置されたマウスにおける腫瘍量の変化を示す。
【図２０−１】図２０Ａ〜２０Ｈは、ＢＴ４７４細胞を移植されたヒトＰＢＭＣヒト化ＮＳＧマウスモデルにおける、抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（本明細書において「結合タンパク質１」と呼ばれる）のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を示す図である。図２０Ａは、マウスの体重に対する、示された濃度の抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性結合タンパク質、示された濃度のヘルセプチンまたはビヒクル対照を投与する効果を示す。図２０Ｂは、個々のマウスにおけるような、抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性結合タンパク質、ヘルセプチンまたは示された対照の用量依存性抗腫瘍活性を示す。図２０Ｃは、示された濃度の抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性結合タンパク質またはＰＢＳ対照の投与後のマウスの平均腫瘍量を示す。図２０Ｄは、示された濃度のヘルセプチンまたはＰＢＳ対照の投与後のマウスの平均腫瘍量を示す。図２０Ｅは、示された濃度の抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性結合タンパク質、示された濃度のヘルセプチンまたはＰＢＳ対照の投与後のマウスの３４日での平均腫瘍量の棒グラフを示す。図２０Ｆは、示された濃度の抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性結合タンパク質、示された濃度のヘルセプチンまたはＰＢＳ対照の投与後のマウスの３４日での平均腫瘍重量を示す。図２０Ｇは、研究の最後のマウスの血液中のヒトＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋細胞を示す。図２０Ｈは、研究の最後のマウスの脾臓中のヒトＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋細胞を示す。
【図２０−２】図２０−１の続き。
【図２０−３】図２０−２の続き。
【図２０−４】図２０−３の続き。
【図２０−５】図２０−４の続き。
【図２１−１】図２１Ａ〜Ｆは、非ヒト霊長類における抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（結合タンパク質５）を使用する用量漸増毒性研究の結果を示す図である（０．１、０．５、２．５、５、１０から１００μｇ／ｋｇへの用量漸増）。図２１Ａは、抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性抗体の投与後の循環ＣＤ４＋Ｔ細胞のＴ細胞活性化（ＣＤ６９＋）（折れ線グラフ）および増殖（棒グラフ）を示す。図２１Ｂは、抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性抗体の投与後の循環ＣＤ８＋Ｔ細胞のＴ細胞活性化（ＣＤ６９＋）（折れ線グラフ）および増殖（棒グラフ）を示す。図２１Ｃは、個々の動物による、各投薬の６時間後の抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性抗体を施されている動物におけるＩＬ６放出を示す。図２１Ｄは、個々の動物による、各投薬の６時間後の抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性抗体を施されている動物におけるＩＬ１０放出を示す。図２１Ｅは、抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性抗体を施されている動物におけるＴＮＦα放出を示す。図２１Ｆは、個々の動物による、各投薬の６時間後の抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性抗体を施されている動物におけるＩＦＮγ放出を示す。
【図２１−２】図２１−１の続き。
【図２１−３】図２１−２の続き。
【図２２−１】図２２Ａ〜２２Ｃは、ＣＤ３８およびＰＤ−Ｌ１を用いて形質導入されたＲＰＭＩ−８２２６多発性骨髄腫細胞が移植されたＣＤ３４＋臍帯血細胞ヒト化ＮＳＧマウスモデルにおける、抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（結合タンパク質５）のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を示す図である。パイロット研究として、この実験は、結合タンパク質５の作業用量範囲を決定した。図２２Ａは、示された濃度の抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性結合タンパク質または対照の群におけるｉｎ  ｖｉｖｏ腫瘍成長曲線を示す。図２２Ｂは、抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性結合タンパク質または示された対照を投与されたマウスにおける、腫瘍浸潤ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞を示す。図２２Ｃは、抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性結合タンパク質または示された対照を投与されたマウスにおける、腫瘍浸潤ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞を示す。
【図２２−２】図２２−１の続き。
【図２３−１】図２３Ａ〜２３Ｄは、ＣＤ３８およびＰＤ−Ｌ１を用いて形質導入されたＲＰＭＩ−８２２６細胞が移植された、ＣＤ３４＋臍帯血細胞ヒト化ＮＳＧマウスモデルにおける、抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（結合タンパク質５）のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を示す図である。図２３Ａは、示された濃度の抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性結合タンパク質またはＰＢＳ対照を用いて処置されたマウスの体重の変化を示す。図２３Ｂは、示された濃度の抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性結合タンパク質またはＰＢＳ対照を用いて処置されたマウスにおける腫瘍量の変化を示す。図２３Ｃは、１９日目の各群における腫瘍量を示す。すべての処置群における腫瘍量は、著しい低減を示し、これは、ＰＢＳ対照群から統計上異なっている。図２３Ｄは、示された濃度の抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性結合タンパク質またはＰＢＳ対照の第１の用量の４時間後のマウスにおける、炎症性サイトカインＩＦＮ−ｇ、ＴＮＦおよびＩＬ−２の血清濃度を示す。
【図２３−２】図２３−１の続き。
【図２３−３】図２３−２の続き。
【図２４】図２４および２５は、ＣＤ６９＋Ｔ細胞のパーセンテージの増大を調べることによる、抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（結合タンパク質５；三角）、抗ＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４二重特異性抗体（四角）または抗ＣＤ２８  ＩｇＧ４抗体（丸）を投与することによるＣＤ３４＋臍帯血細胞ヒト化ＮＳＧマウスモデルにおけるＴ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ活性化を示す図である。図２４は、ＣＤ４＋Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ活性化を示す。図２５は、ＣＤ８＋Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ活性化を示す。
【図２５】図２４および２５は、ＣＤ６９＋Ｔ細胞のパーセンテージの増大を調べることによる、抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（結合タンパク質５；三角）、抗ＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４二重特異性抗体（四角）または抗ＣＤ２８  ＩｇＧ４抗体（丸）を投与することによるＣＤ３４＋臍帯血細胞ヒト化ＮＳＧマウスモデルにおけるＴ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ活性化を示す図である。図２４は、ＣＤ４＋Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ活性化を示す。図２５は、ＣＤ８＋Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ活性化を示す。
【図２６】図２６Ａ〜２６Ｃは、炎症性サイトカインの血清レベルを調べることによる、抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４三重特異性抗体（結合タンパク質５；三角）、抗ＣＤ２８ｘＣＤ３  ＩｇＧ４二重特異性抗体（四角）または抗ＣＤ２８  ＩｇＧ４抗体（丸）を投与することによるＣＤ３４＋臍帯血細胞ヒト化ＮＳＧマウスモデルにおけるＴ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ活性化を示す図である。図２６Ａは、ＩＬ−２の血清レベルを示す。図２６Ｂは、ＴＮＦの血清レベルを示す。図２６Ｃは、ＩＦＮ−γの血清レベルを示す。
【図２７Ａ】図２７Ａおよび２７Ｂは、サイズ排除クロマトグラフィーによる示されたタンパク質の精製を示す図である。図２７Ａは、サイズ排除クロマトグラフィーによる結合タンパク質９〜１５の精製を示す。図２７Ｂは、サイズ排除クロマトグラフィーによる結合タンパク質１６〜１９の精製を示す。
【図２７Ｂ】図２７Ａおよび２７Ｂは、サイズ排除クロマトグラフィーによる示されたタンパク質の精製を示す図である。図２７Ａは、サイズ排除クロマトグラフィーによる結合タンパク質９〜１５の精製を示す。図２７Ｂは、サイズ排除クロマトグラフィーによる結合タンパク質１６〜１９の精製を示す。
【図２８Ａ】図２８Ａは、任意選択の結合タンパク質機能（例えば、κ／λ軽鎖、ノブ／ホール突然変異およびＨ４３５Ｒ／Ｙ４３６Ｆ突然変異）の精製スキームおよび配置を最適化するための実験において使用される三重特異性結合タンパク質を表す図である。
【図２８Ｂ】図２８Ｂは、試験した配置の各々を示す図である。
【図２９】図２９は、解析的疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）から得た代表的なクロマトグラムを示す図であり、三重特異性結合タンパク質は、誤対合種から識別することが可能であることを実証した。
【図３０】図３０Ａおよび３０Ｂは、プロテインＡと、それに続くΚＳｅｌｅｃｔ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）精製工程による、ＣＯＤＶアームについてλ軽鎖を、Ｆａｂアームについてκ軽鎖を、ＣＯＤＶアーム上にノブ突然変異を、Ｆａｂアーム上にホール突然変異を、およびＦａｂアーム上にＲＦ突然変異を有する結合タンパク質の精製の成功を示す図である。誤対合種からの結合タンパク質の精製の成功は、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ；図３０Ａ）およびＳＤＳ−ＰＡＧＥ（図３０Ｂ）によって実証された。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
本開示は、１つまたはそれ以上の標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む三重特異性および／または三価結合タンパク質を提供し、ここで、結合タンパク質を形成するポリペプチドの第１の対は、クロスオーバー配向を有する二重可変ドメインを有し、結合タンパク質を形成するポリペプチドの第２の対は、単一の可変ドメインを有する。
【００３６】
一般的定義
本開示に従って利用されるように、以下の用語は、特に断りのない限り、以下の意味を有すると理解されなければならない。文脈によって別に要求されない限り、単数形の用語は、複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。
【００３７】
用語「ポリヌクレオチド」とは、本明細書において、少なくとも１０ヌクレオチド長の一本鎖または二本鎖核酸ポリマーを指す。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドを含むヌクレオチドは、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドまたはいずれかの種類のヌクレオチドの修飾された形態であり得る。このような修飾として、ブロモウリジン（ｂｒｏｍｕｒｉｄｉｎｅ）などの塩基修飾、アラビノシドおよび２’，３’−ジデオキシリボースなどのリボース修飾ならびにホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏａｎｉｌｏｔｈｉｏａｔｅ）、ホスホロアニラデート（ｐｈｏｓｈｏｒａｎｉｌａｄａｔｅ）およびホスホロアミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏａｍｉｄａｔｅ）などのヌクレオチド間結合修飾が挙げられる。用語「ポリヌクレオチド」は、ＤＮＡの一本鎖および二本鎖形態を具体的に含む。
【００３８】
「単離されたポリヌクレオチド」とは、（１）単離されたポリヌクレオチドが天然に見られるポリヌクレオチドのすべてまたは一部と関連していない、（２）天然に連結されていないポリヌクレオチドに連結されている、または（３）より大きな配列の一部として天然に生じない、ゲノム、ｃＤＮＡまたは合成起源のポリヌクレオチドまたはそれらのいくつかの組合せである。
【００３９】
「単離されたポリペプチド」は、（１）通常、ともに見られる少なくともいくつかのその他のポリペプチドを含まない、（２）同一供給源に由来する、例えば、同一種に由来するその他のポリペプチドを本質的に含まない、（３）異なる種に由来する細胞によって発現される、（４）天然に関連しているポリヌクレオチド、脂質、炭水化物またはその他の材料のうち少なくとも約５０パーセントから分離されている、（５）「単離されたポリペプチド」が天然に関連しているポリペプチドの部分と関連していない（共有結合性または非共有結合性相互作用によって）、（６）天然には関連していないポリペプチドと作動可能に関連している（共有結合性または非共有結合性相互作用によって）、または（７）天然には生じないものである。このような単離されたポリペプチドは、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡまたはその他のＲＮＡによってコードされ得る、合成起源のものであり得る、またはそれらの任意の組合せであり得る。好ましくは、単離されたポリペプチドは、その使用（治療的、診断的、予防的、研究的またはその他の）を干渉するであろう、天然環境において見られるポリペプチドまたはその他の混入物を実質的に含まない。
【００４０】
天然に存在する抗体は、通常、四量体を含む。このような四量体は各々、通常、２つの同一のポリペプチド鎖の対から構成され、各対は、１つの全長「軽」鎖（通常、約２５ｋＤａの分子量を有する）および１つの全長「重」鎖（通常、約５０〜７０ｋＤａの分子量を有する）。用語「重鎖」および「軽鎖」とは、本明細書において、標的抗原に対する特異性を付与するのに十分な可変ドメイン配列を有する任意の免疫グロブリンポリペプチドを指す。通常、各軽鎖および重鎖のアミノ末端部分は、通常、抗原認識に関与する約１００〜１１０個またはそれ以上のアミノ酸の可変ドメインを含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、通常、エフェクター機能に関与する定常ドメインを規定する。したがって、天然に存在する抗体では、全長重鎖免疫グロブリンポリペプチドは、可変ドメイン（ＶＨ）および３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）を含み、ここで、ＶＨドメインはポリペプチドのアミノ末端にあり、ＣＨ３ドメインは、カルボキシル末端にあり、全長軽鎖免疫グロブリンポリペプチドは、可変ドメイン（ＶＬ）および定常ドメイン（ＣＬ）を含み、ＶＬドメインは、ポリペプチドのアミノ末端にあり、ＣＬドメインは、カルボキシル末端にある。
【００４１】
ヒト軽鎖は、通常、κおよびλ軽鎖として分類され、ヒト重鎖は、通常、μ、δ、γ、αまたはεとして分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥとして規定する。ＩｇＧは、それだけには限らないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含むいくつかのサブクラスを有する。ＩｇＭは、それだけには限らないが、ＩｇＭ１およびＩｇＭ２を含むサブクラスを有する。ＩｇＡは、それだけには限らないが、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含むサブクラスに同様に細分される。全長軽鎖および重鎖内で、可変および定常ドメインは、通常、約１２個またはそれ以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって、約１０個多いアミノ酸の「Ｄ」領域も含む重鎖と接続される。例えば、すべての目的のために参照によってその全文を本明細書に組み入れるＦＵＮＤＡＭＥＮＴＡＬ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ  （Ｐａｕｌ，Ｗ．編、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、第２版、１９８９）を参照のこと。各軽鎖／重鎖対の可変領域は、通常、抗原結合部位を形成する。天然に存在する抗体の可変ドメインは、通常、相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる３つの超可変領域によって接続された相対的に保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同一の全体的構造を示す。各対の２つの鎖に由来するＣＤＲは、通常、特定のエピトープとの結合を可能にし得るフレームワーク領域によってアラインされる。軽鎖および重鎖可変ドメインの両方は、アミノ末端からカルボキシル末端に、通常、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。
【００４２】
用語「ＣＤＲセット」とは、抗原と結合することが可能な、単一可変領域中に生じる３つのＣＤＲの群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なる系によって異なって定義されている。Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔら、ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ  ＯＦ  ＰＲＯＴＥＩＮＳ  ＯＦ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＩＮＴＥＲＥＳＴ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．  （１９８７）  ａｎｄ  （１９９１））によって記載された系は、抗体の任意の可変領域に適用することが可能な明白な残基番号付けシステムを提供するだけでなく、３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界も提供する。これらＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと呼ばれることもある。Ｃｈｏｔｈｉａおよび共同研究者（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、１９８７、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：  ９０１−１７；Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８３）は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ内の特定の一部分は、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格コンホメーションをとることを見出した。これらの一部分は、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３またはＨ１、Ｈ２およびＨ３と表され、ここで、「Ｌ」および「Ｈ」は、それぞれ軽鎖および重鎖領域を表す。これらの領域は、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲと呼ばれることもあり、これは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複する境界を有する。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複するＣＤＲを規定するその他の境界は、Ｐａｄｌａｎ、１９９５、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．  ９：１３３〜３９頁；ＭａｃＣａｌｌｕｍ、１９９６、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２６２（５）：７３２〜４５頁；およびＬｅｆｒａｎｃ、２００３、Ｄｅｖ．  Ｃｏｍｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２７：５５〜７７頁によって記載されている。さらにその他のＣＤＲ境界定義は、本明細書における系のものを厳密にたどらない場合もあるが、それにもかかわらず、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複するが、それらは、特定の残基または残基の群またはさらに全ＣＤＲでさえも、抗原結合に大幅に影響を与えないという予測または実験的知見を鑑みて、短縮される場合も、延長される場合もある。本明細書において使用される方法は、これらの系のいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用し得るが、特定の実施形態は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａによって定義されるＣＤＲを使用する。アミノ酸配列を使用する予測されるＣＤＲの同定は、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、第２巻．  Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  Ｒ．，  Ｄｕｂｅｌ  Ｓ．編Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  Ｂｅｒｌｉｎ、３３〜５１頁（２０１０）中の、Ｍａｒｔｉｎ、Ａ．Ｃ．「Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ」においてなど、当技術分野において周知である。重鎖および／または軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列はまた、配列超可変性の領域を調べるためにその他の従来方法によって、例えば、その他の重鎖および軽鎖可変領域の既知アミノ酸配列との比較によって、ＣＤＲの配列を同定するために視察され得る。番号付けされた配列は、目視によって、またはＴｈｏｍｐｓｏ��、１９９４、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２２：４６７３〜８０頁に記載されるようなＣＬＵＳＴＡＬスーツのプログラムうち１つなどのアラインメントプログラムを使用することによって、アラインされ得る。分子モデルは、フレームワークおよびＣＤＲ領域を正確に描写し、したがって、配列ベースの割り当てを補正するために従来的に使用される。
【００４３】
用語「Ｆｃ」は、本明細書において、単量体形態であるか、多量体形態であるかに関わらず、抗体の消化に起因する、またはその他の手段によって産生され、ヒンジ領域を含有し得る非抗原結合断片の配列を含む分子を指す。天然Ｆｃの元の免疫グロブリン供給源は、好ましくは、ヒト起源のものであり、免疫グロブリンのいずれでもあり得るが、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２が好ましい。Ｆｃ分子は、共有結合（すなわち、ジスルフィド結合）および非共有結合会合によって二量体形態または多量体形態に連結され得る単量体ポリペプチドで構成される。天然Ｆｃ分子の単量体サブユニット間の分子間ジスルフィド結合の数は、クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥ）またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＡ１およびＩｇＧＡ２）に応じて１〜４の範囲である。Ｆｃの一例は、ＩｇＧのパパイン消化に起因するジスルフィド結合された二量体である。用語「天然Ｆｃ」は、本明細書において、単量体、二量体および多量体形態に対して包括的である。
【００４４】
Ｆ（ａｂ）断片は、通常、１つの軽鎖ならびに１つの重鎖のＶＨおよびＣＨ１ドメインを含み、ここで、Ｆ（ａｂ）断片のＶＨ−ＣＨ１重鎖部分は、別の重鎖ポリペプチドとジスルフィド結合を形成できない。本明細書において、Ｆ（ａｂ）断片はまた、アミノ酸リンカーによってわけられた２つの可変ドメインを含有する１つの軽鎖ならびにアミノ酸リンカーによってわけられた２つの可変ドメインおよびＣＨ１ドメインを含有する１つの重鎖を含み得る。
【００４５】
Ｆ（ａｂ’）断片は、通常、２つの重鎖間に鎖間ジスルフィド結合が形成され、Ｆ（ａｂ’）２分子を形成し得るように、１つの軽鎖および定常領域のより多く（ＣＨ１およびＣＨ２ドメインの間）を含有する１つの重鎖の部分を含む。
【００４６】
用語「結合タンパク質」とは、本明細書において、少なくとも３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む、少なくとも１つの標的抗原と特異的に結合する天然に存在しない（または組換えられたまたは遺伝子操作された）分子を指し、ここで、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ              ［Ｉ］
によって表される構造を有し、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１            ［ＩＩ］
によって表される構造を有し、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１                              ［ＩＩＩ］
によって表される構造を有し
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                ［ＩＶ］
によって表される構造を有し
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成する。
【００４７】
「組換え」分子とは、組換え手段によって、製造され、発現され、作製され、または単離されたものである。
【００４８】
本開示の一実施形態は、１つから３つの間の標的抗原に対して生物学的および免疫学的特異性を有する結合タンパク質を提供する。本開示の別の実施形態は、このような結合タンパク質を形成するポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供する。本開示の別の実施形態は、このような結合タンパク質を形成するポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む発現ベクターを提供する。本開示のさらに別の実施形態は、このような結合タンパク質を発現する（すなわち、このような結合タンパク質を形成するポリペプチド鎖をコードする核酸分子またはベクターを含む）宿主細胞を提供する。
【００４９】
用語「交換可能性（ｓｗａｐａｂｉｌｉｔｙ）」とは、本明細書において、結合タンパク質形式内の、フォールディングおよび最終的な結合親和性を保持した可変ドメインの互換性を指す。「完全交換可能性」とは、結合親和性の保持によって証明されるような結合タンパク質の完全機能を維持しながら、式Ｉのポリペプチド鎖または式ＩＩのポリペプチド鎖中のＶＨ１およびＶＨ２ドメイン両方の順序、したがって、ＶＬ１およびＶＬ２ドメインの順序を交換する能力（すなわち、順序を逆転するための）を指す。さらに、注目すべきは、命名ＶＨおよびＶＬとは、最終形態の特定のタンパク質鎖上のドメインの位置のみを指すということである。例えば、ＶＨ１およびＶＨ２は、親抗体中のＶＬ１およびＶＬ２ドメインに由来し、結合タンパク質中のＶＨ１およびＶＨ２位置中に位置し得る。同様に、ＶＬ１およびＶＬ２は、親抗体中のＶＨ１およびＶＨ２ドメインに由来し、結合タンパク質中のＶＨ１およびＶＨ２位置に位置し得る。したがって、ＶＨおよびＶＬ命名は、親抗体中の下の位置ではなく現在の位置を指す。したがって、ＶＨおよびＶＬドメインは、「交換可能」である。
【００５０】
用語「抗原」または「標的抗原」または「抗原標的」とは、本明細書において、結合タンパク質によって結合されることができ、その抗原のエピトープと結合することが可能な抗体を産生するために動物において使用されることができる分子または分子の一部を指す。標的抗原は、１つまたはそれ以上のエピトープを有し得る。結合タンパク質によって認識される各標的抗原に関して、結合タンパク質は、標的抗原を認識する無傷の抗体と競合することが可能である。
【００５１】
用語「Ｈｅｒ２」とは、上皮成長因子受容体ファミリーのメンバーであるヒト上皮成長因子受容体２を指す。
【００５２】
「ＣＤ３」は、分化因子３ポリペプチドのクラスターであり、通常、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の一部であるＴ細胞表面タンパク質である。
【００５３】
「ＣＤ２８」は、分化２８ポリペプチドのクラスターであり、Ｔ細胞活性化および生存の同時刺激シグナルを提供するＴ細胞表面タンパク質である。
【００５４】
「ＣＤ１９」は、分化１９ポリペプチドのクラスターであり、Ｂ細胞上に位置する。
【００５５】
「ＣＤ２０」は、分化２０ポリペプチドのクラスターであり、Ｂ細胞の表面上に発現された活性化グリコシル化リン酸化タンパク質である。
【００５６】
「ＣＤ３８」は、分化３８ポリペプチドのクラスターであり、多数の免疫細胞の表面上に見られる糖タンパク質である。
【００５７】
「ＬＡＭＰ１」は、リソソーム膜タンパク質１である。
【００５８】
「ＩＬ−４」は、インターロイキン４であり、ナイーブヘルパーＴ細胞の分化を誘導するサイトカインである。
【００５９】
「ＩＬ−１３」は、インターロイキン１３であり、Ｔ細胞などの多数の細胞種によって分泌されるサイトカインである。
【００６０】
「ＴＮＦａ」は、腫瘍壊死因子αであり、全身性炎症に関与するサイトカインである。
【００６１】
用語「Ｔ細胞エンゲージャー（ｅｎｇａｇｅｒ）」とは、宿主の免疫系、より詳しくは、Ｔ細胞の細胞傷害性活性を対象とする、ならびに腫瘍標的タンパク質を対象とする結合タンパク質を指す。
【００６２】
用語「単一特異性結合タンパク質」とは、１つの抗原標的と特異的に結合する結合タンパク質を指す。
【００６３】
用語「一価結合タンパク質」とは、１つの抗原結合部位を有する結合タンパク質を指す。
【００６４】
用語「二重特異性結合タンパク質」とは、２つの異なる抗原標的と特異的に結合する結合タンパク質を指す。
【００６５】
用語「二価結合タンパク質」とは、２つの結合部位を有する結合タンパク質を指す。
【００６６】
用語「三重特異性結合タンパク質」とは、３つの異なる抗原標的と特異的に結合する結合タンパク質を指す。
【００６７】
用語「三価結合タンパク質」とは、３つの結合部位を有する結合タンパク質を指す。特定の実施形態では、三価結合タンパク質は、１つの抗原標的と結合し得る。その他の実施形態では、三価結合タンパク質は、２つの抗原標的と結合し得る。その他の実施形態では、三価結合タンパク質は、３つの抗原標的と結合し得る。
【００６８】
「単離された」結合タンパク質とは、その天然環境から同定および分離および／または回収されているものである。その天然環境の混入物成分は、結合タンパク質の診断的または治療的使用を干渉するであろう材料であり、これとして、酵素、ホルモンおよびその他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を挙げることができる。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、（１）ローリー方法によって決定されるような、抗体の９５重量％超に、最も好ましくは、９９重量％超に、（２）スピニングカップ（ｓｐｉｎｎｉｎｇ  ｃｕｐ）配列決定装置の使用によって少なくとも１５残基のＮ末端または内部アミノ酸配列を得るのに十分な程度に、または（３）クーマシーブルーまたは好ましくは、銀染色を使用して、還元または非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均一性に精製される。単離された結合タンパク質は、組換え細胞内のインサイチュの結合タンパク質を含むが、これは、結合タンパク質の天然環境の少なくとも１種の成分が存在しないからである。
【００６９】
用語「実質的に純粋な」または「実質的に精製された」とは、本明細書において、存在する主な種である（すなわち、モルベースで、その組成物中で任意のその他の個々の種よりも豊富である）化合物または種を指す。いくつかの実施形態では、実質的に精製された画分は、種が、存在するすべての高分子種の少なくとも約５０％（モルベースで）を構成する組成物である。その他の実施形態では、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在するすべての高分子種の約８０％、８５％、９０％、９５％または９９％超を構成する。さらにその他の実施形態では、種は、組成物が本質的に単一高分子種からなるような本質的均一性に精製される（混入物種は、従来の検出方法によって組成物中で検出され得ない）。
【００７０】
結合タンパク質を「中和すること」とは、本明細書において、それが結合する標的抗原のエフェクター機能を遮断または実質的に低減することが可能である分子を指す。本明細書において、「実質的に低減する」とは、標的抗原のエフェクター機能の少なくとも約６０％、好ましくは、少なくとも約７０％、より好ましくは、少なくとも約７５％、一層より好ましくは、少なくとも約８０％、さらにより好ましくは、少なくとも約８５％、最も好ましくは、少なくとも約９０％の低減を意味する。
【００７１】
用語「エピトープ」とは、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体と特異的に結合することが可能である、任意の決定基、好ましくは、ポリペプチド決定基を含む。特定の実施形態では、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基またはスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面群化を含み、特定の実施形態では、特定の三次元構造的特徴および／または特定の電荷特徴を有し得る。エピトープは、抗体または結合タンパク質によって結合される抗原の領域である。特定の実施形態では、結合タンパク質は、タンパク質および／または高分子の複合混合物中でその標的抗原を優先的に認識する場合に、抗原と特異的に結合するといわれる。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、平衡解離定数が≦１０−８Ｍである場合に、より好ましくは、平衡解離定数が、≦１０−９Ｍである場合に、最も好ましくは、解離定数が≦１０−１０Ｍである場合に、抗原と特異的に結合するといわれる。
【００７２】
結合タンパク質の解離定数（ＫＤ）は、例えば、表面プラズモン共鳴によって決定することができる。一般に、表面プラズモン共鳴解析は、リガンド（バイオセンサーマトリックス上の標的抗原）と分析物（溶液中の結合タンパク質）の間のリアルタイム結合相互作用を、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ；  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定する。表面プラズモン解析はまた、分析物（バイオセンサーマトリクス上の結合タンパク質）を固定化することおよびリガンド（標的抗原）を提示することによって実施できる。用語「ＫＤ」とは、本明細書において、特定の結合タンパク質と標的抗原の間の相互作用の解離定数を指す。
【００７３】
用語「特異的に結合する」とは、本明細書において、結合タンパク質またはその抗原結合断片の、少なくとも約１ｘ１０−６Ｍ、１ｘ１０−７Ｍ、１ｘ１０−８Ｍ、１ｘ１０−９Ｍ、１ｘ１０−１０Ｍ、１ｘ１０−１１Ｍ、１ｘ１０−１２Ｍまたはそれ以上のＫｄでエピトープを含有する抗原と結合する能力および／または非特異的抗原に対するその親和性よりも少なくとも２倍より大きい親和性でエピトープと結合する能力を指す。
【００７４】
用語「リンカー」とは、本明細書において、軽鎖および重鎖のドメインがクロスオーバー二重可変領域免疫グロブリンにフォールディングするのに十分な可動性を提供するために、免疫グロブリンドメインの間に挿入された１個またはそれ以上のアミノ酸残基を指す。リンカーは、配列レベルで、それぞれ、可変ドメイン間または可変ドメインおよび定常ドメインの間に遷移部に挿入される。免疫グロブリンドメインの適当な大きさは十分に理解されているので、ドメイン間の遷移部は同定できる。ドメイン遷移部の正確な位置は、実験データによって実証されるように、またはモデリングの技術によって、もしくは二次構造予測によって推定されるように、βシートまたはαへリックスなどの二次構造要素を形成しないペプチドストレッチを位置付けることによって決定できる。本明細書において記載されるリンカーは、ＶＬ２のＣ末端とＶＬ１ドメインのＮ末端の間の軽鎖上に位置するＬ１；ＶＬ１のＣ末端とＣＬドメインのＮ末端の間の軽鎖上に位置するＬ２と呼ばれる。重鎖リンカーは、ＶＨ１のＣ末端とＶＨ２ドメインのＮ末端の間に位置するＬ３；およびＶＨ２のＣ末端とＣＨ１ドメインのＮ末端の間に位置するＬ４として知られている。
【００７５】
用語「ベクター」とは、本明細書において、コーディング情報を宿主細胞に移すために使用される任意の分子（例えば、核酸、プラスミドまたはウイルス）を指す。用語「ベクター」は、連結されている別の核酸を輸送することが可能である核酸分子を含む。ベクターの１つの種類として、さらなるＤＮＡセグメントを挿入することができる環状二本鎖ＤＮＡ分子を指す「プラスミド」がある。別の種類のベクターとして、さらなるＤＮＡセグメントをウイルスゲノム中に挿入することができるウイルスベクターがある。特定のベクターは、それらが導入されている宿主細胞中で自己複製することが可能である（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。その他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入の際に宿主細胞のゲノム中に組み込まれることができ、それによって、宿主ゲノムとともに複製される。さらに、特定のベクターは、それらが作動可能に連結されている遺伝子の発現を指示することが可能である。このようなベクターは、本明細書において、「組換え発現ベクター」（または簡単に、「発現ベクター」）と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、プラスミドの形態であることが多い。プラスミドは、ベクターの最も一般的な形態であるので、用語「プラスミド」および「ベクター」は、本明細書において同義的に使用される。しかし、本開示は、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損のレトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）などの発現ベクターのその他の形態を含むものとする。
【００７６】
語句「組換え宿主細胞」（または「宿主細胞」）とは、本明細書において、組換え発現ベクターが導入されている細胞を指す。組換え宿主細胞または宿主細胞は、特定の対象細胞だけでなく、このような細胞の後代も指すものとする。突然変異または環境的影響のいずれかのために、特定の修飾が続く世代において起こり得るので、このような後代は、実際には、その親細胞と同一ではない場合があるが、本明細書においてこのような細胞は、用語「宿主細胞」の範囲内になお含まれる。結合タンパク質を発現させるためにさまざまな宿主細胞発現系を使用できるが、これとして、細菌、酵母、バキュロウイルスおよび哺乳動物発現系（ならびにファージディスプレイ発現系）が挙げられる。適した細菌発現ベクターの一例として、ｐＵＣ１９がある。結合タンパク質を組み換えによって発現させるために、宿主細胞は、１つまたはそれ以上の、結合タンパク質のポリペプチド鎖をコードするＤＮＡ断片を保持する組換え発現ベクターを用いて形質転換またはトランスフェクトされ、その結果、宿主細胞においてポリペプチド鎖が発現され、好ましくは、宿主細胞が培養される培地中に分泌され、その培地から、結合タンパク質を回収することができる。
【００７７】
用語「形質転換」とは、本明細書において、細胞の遺伝的特徴の変化を指し、細胞は、新規ＤＮＡを含有するように修飾されている場合に形質転換されている。例えば、その天然状態から遺伝的に修飾されている細胞は、形質転換されている。形質転換後、形質転換ＤＮＡは、細胞の染色体中に物理的に組み込まれることによって細胞のものと組み換えられるか、または複製されずにエピソーム要素として一過性に維持されるか、またはプラスミドとして独立に複製し得る。細胞は、ＤＮＡが細胞の分裂とともに複製される場合に安定に形質転換されていると考えられる。用語「トランスフェクション」とは、本明細書において、細胞による外来または外因性ＤＮＡの取り込みを指し、細胞は、外因性ＤＮＡが細胞膜内に導入されている場合にトランスフェクトされている」。いくつかのトランスフェクション技術が、当技術分野において周知である。このような技術を使用して、１つまたはそれ以上の外因性ＤＮＡ分子を適した宿主細胞中に導入できる。
【００７８】
本明細書において使用され、対象に対して適用されるような、用語「天然に存在する」とは、対象は、天然において見ることができ、ヒトによって操作されていないという事実を指す。例えば、天然において供給源から単離することができる、ヒトによって意図的に修飾されていない、生物（ウイルスを含む）中に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドが天然に存在する。同様に、「天然に存在しない」とは、本明細書において、天然において見られない、ヒトによって構造的に修飾されているまたは合成されている対象を指す。
【００７９】
本明細書において、２０種の従来のアミノ酸およびその略語は、従来の利用に従う。２０種の従来のアミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸）；非天然アミノ酸およびα−、α−二置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸およびその他の非従来アミノ酸などの類似体も、結合タンパク質のポリペプチド鎖の適した成分であり得る。非従来アミノ酸の例として、４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリシン、ε−Ｎ−アセチルリシン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、σ−Ｎ−メチルアルギニンおよびその他の同様のアミノ酸およびイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）が挙げられる。本明細書において使用されるポリペプチド表示法では、標準的な利用および慣習に従って、左側方向がアミノ末端方向であり、右側方向が、カルボキシル末端方向である。
【００８０】
天然に存在する残基は、一般的な側鎖特性に基づいてクラスに分けることができる：
（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ；
（２）極性親水性：Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；
（３）脂肪族：Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｐｒｏ；
（４）脂肪族疎水性：Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｐｒｏ；
（５）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（６）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（７）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（８）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（９）芳香族：Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ；および
（１０）芳香族疎水性：Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ。
【００８１】
保存的アミノ酸置換は、これらのクラスのうち１つのメンバーの、同一クラスの別のメンバーとの交換を含み得る。非保温的置換は、これらのクラスの１つのメンバーの、別のクラスのメンバーとの交換を含み得る。
【００８２】
当業者ならば、周知の技術を使用して、結合タンパク質のポリペプチド鎖の適した変異体を決定できるであろう。例えば、当業者ならば、活性にとって重要であると考えられない領域を標的化することによって、活性を破壊することなく変更することができるポリペプチド鎖の適した領域を同定できる。あるいは、当業者ならば、同様のポリペプチドの間で保存されている残基および分子の部分を同定できる。さらに、生物活性にとってまたは構造にとって重要であり得る領域でさえ、生物活性を破壊することなく、またはポリペプチド構造に悪影響を及ぼすことなく保存的アミノ酸置換に付される。
【００８３】
用語「患者」とは、本明細書において、ヒトおよび動物対象を含む。
【００８４】
用語「治療」または「治療する」とは、本明細書において、治療的処置および予防的もしくは防止的手段の両方を指す。治療を必要とするものとして、障害を有するものならびに障害を有する傾向のものまたは障害が防止されるべきものが挙げられる。特定の実施形態では、癌を有するヒトもしくは癌に対して感受性のヒトを治療するために、またはヒト対象において癌を回復させるために、結合タンパク質を使用できる。結合タンパク質はまた、ヒト患者において癌を防止するために使用できる。特定の実施形態では、癌は、多発性骨髄腫、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、リンパ腫、Ｈｅｒ２＋乳癌などの乳癌、胚中心Ｂ細胞リンパ腫（ｌｙｍｐｏｈｏｍａ）またはＢ細胞急性リンパ性白血病であり、その他の実施形態では、炎症性障害を有するヒトもしくは炎症性障害に対して感受性のヒトを治療するために、またはヒト対象において炎症性障害を回復させるために、結合タンパク質を使用できる。
【００８５】
用語「医薬組成物」または「治療用組成物」とは、本明細書において、患者に適切に投与された場合に所望の治療効果を誘導することが可能な化合物または組成物を指す。
【００８６】
用語「薬学的に許容される担体」または「生理学的に許容される担体」は、本明細書において、結合タンパク質の送達を達成または増強するのに適した１種またはそれ以上の製剤化材料を指す。
【００８７】
用語「有効量」および「治療有効量」とは、１種またはそれ以上の結合タンパク質を含む医薬組成物に関連して使用される場合、所望の治療結果をもたらすのに十分な量または投与量を指す。より詳しくは、治療有効量とは、治療されている状態と関連する臨床上定義された病理過程のうち１つまたはそれ以上をしばらくの期間阻害するのに十分な結合タンパク質の量である。有効量は、使用されている特定の結合タンパク質に応じて変わることがあり、また、治療されている患者と関連する種々の因子および状態並びに障害の重症度に左右される。例えば、結合タンパク質がｉｎ  ｖｉｖｏで投与される予定である場合には、それらの因子の中でも、患者の年齢、体重および健康ならびに前臨床動物研究において得られた用量応答曲線および毒性データなどの因子が考慮される。所与の医薬組成物の有効量または治療有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。
【００８８】
本開示の一実施形態は、薬学的に許容される担体および結合タンパク質の治療有効量を含む医薬組成物を提供する。
【００８９】
三重特異性および／または三価結合タンパク質
一実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の（例えば、３つの）異なる抗原標的または標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む三重特異性および／または三価結合タンパク質であり、ここで、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ                          ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１                        ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１                                            ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                              ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成する。
【００９０】
一実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の（例えば、３つの）抗原標的または標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む三重特異性および／または三価結合タンパク質であり、ここで、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ                          ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１                        ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１                                            ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                              ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成する。
【００９１】
一実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の（例えば、３つの）異なる抗原標的または標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む三重特異性および／または三価結合タンパク質であり、ここで、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ                              ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３      ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３                        ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                                  ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成する。
【００９２】
一実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の（例えば、３つの）抗原標的または標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む三重特異性および／または三価結合タンパク質であり、ここで、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ                              ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３      ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３                        ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                                  ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成する。
【００９３】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖および第２のポリペプチド鎖は、２つの別個の抗原結合部位を形成するクロスオーバー配向を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ１およびＶＬ１は、結合対を形成し、第１の抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、ＶＨ２およびＶＬ２は、結合対を形成し、第２の抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、第３のポリペプチドおよび第４のポリペプチドは、第３の抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、ＶＨ３およびＶＬ３は、結合対を形成し、第３の抗原結合部位を形成する。
【００９４】
一実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の（例えば、３つの）抗原標的または標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む三重特異性および／または三価結合タンパク質であり、ここで、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＤ１−Ｌ１−ＶＤ２−Ｌ２−ＣＬ                              ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＤ３−Ｌ３−ＶＤ４−Ｌ４−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３      ［ＩＩ］
によって表される構造を含む、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３                        ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                                  ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶＤ１は、第１の免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の可変ドメインであり；
ＶＤ２は、第２の免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の可変ドメインであり；
ＶＤ３は、第３の免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の可変ドメインであり；
ＶＤ４は、第４の免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の可変ドメインであり；
ＶＨ３は、免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は、免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は、免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成する。
【００９５】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つ、２つまたは３つの抗原標的または標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、３つの抗原標的と結合する。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、３つの異なる抗原標的と結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合部位のうち２つは、同一抗原標的と結合する。それらの実施形態では、結合タンパク質は、同一結合ドメインを２回または異なる結合ドメインを含む、および／または同一抗原標的上の異なる抗原またはエピトープと特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合部位のうち３つが、同一抗原標的と結合する。それらの実施形態では、結合タンパク質は、同一結合ドメインを３回または異なる結合ドメインを含む、および／または同一抗原標的上の異なる抗原またはエピトープと特異的に結合する。
【００９６】
いくつかの実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号２、４、１０、１４、１８、２２または１１５のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列に由来する可変ドメインであり；ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１、３、９、１３、１７、２１または１１４のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列に由来する可変ドメインである。その他の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号６１、６３、６９、７１、７４、７６、８２、８６、８８または９４のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列に由来する可変ドメインであり；ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号６０、６２、６８、７３、７５、８１、８５、８７または９３のうちいずれか１に示されるアミノ酸配列に由来する可変ドメインである。その他の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号４３〜５９、１２３〜１２５のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む可変ドメインの軽鎖相補性決定領域を含み；ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号２５〜４２、１２０〜１２２のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含む。その他の実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号６１、６３、６９、７１、７４、７６、８２、８６、８８または９４のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む可変ドメインの軽鎖相補性決定領域を含み；ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号６０、６２、６８、７３、７５、８１、８５、８７または９３のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、表２〜５に示される重鎖相補性決定領域および／または可変ドメイン配列を含む。
【００９７】
いくつかの実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号１６９、１７１および１７３のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；および／またはＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１６８、１７０および１７２のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号１４１〜１４７、１７８および１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含み；および／またはＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１２９〜１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５および１６７のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；および／またはＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４および１６６のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、配列番号４３〜５９、１２３〜１２５、１３８〜１４０および１４９のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含み；および／またはＶＨ１、ＶＨ２およびＶＨ３は各々独立に、配列番号２５〜４２、１２０〜１２２および１２６〜１２８のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む可変ドメインの重鎖相補性決定領域を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１、ＶＬ２およびＶＬ３は各々独立に、表２〜５に示される軽鎖相補性決定領域および／または可変ドメイン配列を含む。
【００９８】
特定の実施形態では、式Ｉのポリペプチド鎖または式ＩＩのポリペプチド鎖中のＶＨ１およびＶＨ２ドメインの順序、したがって、ＶＬ１およびＶＬ２ドメインの順序は（すなわち、順序を逆転するために）交換される。
【００９９】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号４のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１のアミノ酸配列または配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２のアミノ酸配列または配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号２のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１００】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列または配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１０のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列または配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号９のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１のアミノ酸配列または配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２のアミノ酸配列または配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号２のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号４のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列または配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４のアミノ酸配列または配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１４のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列または配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１０のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列または配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号９のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列または配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４のアミノ酸配列または配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１４のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号４のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７のアミノ酸配列または配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１７のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１８のアミノ酸配列または配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１８のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列または配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１０のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列または配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号９のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７のアミノ酸配列または配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１７のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１８のアミノ酸配列または配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１８のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号４のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号２１のアミノ酸配列または配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号２１のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２２のアミノ酸配列または配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号２２のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列または配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１０のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列または配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号９のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号２１のアミノ酸配列または配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号２１のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２２のアミノ酸配列または配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号２２のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号６３のアミノ酸配列または配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列または配列番号６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６２のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列または配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６０のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列または配列番号６１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６１のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列または配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６９のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列または配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６８のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列または配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６０のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列または配列番号６１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６１のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列または配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６９のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列または配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６８のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列または配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６０のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７１のアミノ酸配列または配列番号７１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号７１のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号７６のアミノ酸配列または配列番号７６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号７６のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号７５のアミノ酸配列または配列番号７５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号７５のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列または配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号７３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７４のアミノ酸配列または配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号７４のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号８２のアミノ酸配列または配列番号８２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号８２のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号８１のアミノ酸配列または配列番号８１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号８１のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列または配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号７３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７４のアミノ酸配列または配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号７４のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号８８のアミノ酸配列または配列番号８８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号８８のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号８７のアミノ酸配列または配列番号８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号８７のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列または配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号８５のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号８６のアミノ酸配列または配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号８６のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号９４のアミノ酸配列または配列番号９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号９４のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９３のアミノ酸配列または配列番号９３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号９３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列または配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号８５のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号８６のアミノ酸配列または配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号８６のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列または配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６９のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列または配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６８のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列または配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号７３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７４のアミノ酸配列または配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号７４のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列または配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６９のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列または配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６８のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列または配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号８５のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号８６のアミノ酸配列または配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号８６のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号６３のアミノ酸配列または配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列または配列番号６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６２のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列または配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号７３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７４のアミノ酸配列または配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号７４のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号６３のアミノ酸配列または配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列または配列番号６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号６２のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列または配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号８５のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号８６のアミノ酸配列または配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号８６のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号４のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列または配列番号１１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１１４のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１５のアミノ酸配列または配列番号１１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１１５のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列または配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１０のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列または配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号９のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列または配列番号１１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１１４のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１５のアミノ酸配列または配列番号１１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号１１５のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含む。
【０１２０】
その他の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の（例えば、３つの）異なる標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む三重特異性および／または三価結合タンパク質であり、ここで、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ                                    ［Ｉ］
によって表される構造を有し、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３（ホール）  ［ＩＩ］
によって表される構造を有し、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３（ノブ）                      ［ＩＩＩ］
によって表される構造を有し、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                                        ［ＩＶ］
によって表される構造を有し、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成する。
【０１２１】
その他の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の（例えば、３つの）標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む三重特異性および／または三価結合タンパク質であり、ここで、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ２−Ｌ１−ＶＬ１−Ｌ２−ＣＬ                                    ［Ｉ］
によって表される構造を有し、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ１−Ｌ３−ＶＨ２−Ｌ４−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３（ホール）  ［ＩＩ］
によって表される構造を有し、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＨ３−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３（ノブ）                      ［ＩＩＩ］
によって表される構造を有し、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶＬ３−ＣＬ                                                        ［ＩＶ］
によって表される構造を有し、
ＶＬ１は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は、免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成する。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖および第２のポリペプチド鎖は、２つの別個の抗原結合部位を形成するクロスオーバー配向を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ１およびＶＬ１は、結合対を形成し、第１の抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、ＶＨ２およびＶＬ２は、結合対を形成し、第２の抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、第３のポリペプチドおよび第４のポリペプチドは、第３の抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、ＶＨ３およびＶＬ３は、結合対を形成し、第３の抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖および第３のポリペプチド鎖は、１つまたはそれ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態では、結合タンパク質の第２のポリペプチド鎖および第３のポリペプチド鎖は異なっている、例えば、異なるＣＨ１、ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメイン（本明細書において記載される修飾を含むものなど）を有する。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖および第４のポリペプチド鎖は、１つまたはそれ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態では、結合タンパク質の第１のポリペプチド鎖および第４のポリペプチド鎖は異なっている、例えば、異なるＣＬドメイン（本明細書において記載される修飾を含むものおよび／またはλ対κ（ｋａｐｐ）ＣＬドメインなど）を有する。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号１５０に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１５０のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび／または配列番号１５１に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１５１のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号１５２に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１５２のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび／または配列番号１５３に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１５３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号１５４に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１５４のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび／または配列番号１５５に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１５５のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号１５６に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１５６のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび／または配列番号１５７に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１５７のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号１５８に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１５８のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび／または配列番号１５９に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１５９のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号１６０に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１６０のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび／または配列番号１６１に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１６１のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号１６２に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１６２のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび／または配列番号１６３に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１６３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号１６４に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１６４のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび／または配列番号１６５に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１６５のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号１６６に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１６６のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび／または配列番号１６７に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１６７のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号１６８に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１６８のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび／または配列番号１６９に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１６９のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号１７０に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１７０のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび／または配列番号１７１に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１７１のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号１７２に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１７２のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む重鎖可変ドメインおよび／または配列番号１７３に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、場合により、配列番号１７３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む抗原結合部位を含む。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つ、２つまたは３つの抗原標的と、１μＭ、５００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭまたは１ｎＭ以下である平衡解離定数（ＫＤ）で結合する。ＫＤを決定するための例示的アッセイは、当技術分野で公知である。例えば、いくつかの実施形態では、ＫＤは、実施例１に記載された技術（例えば、ＳＰＲまたはＥＬＩＳＡ）を使用して、０℃から３７℃の間で、例えば、０℃、４℃、２５℃または３７℃で）結合動態を測定することによって決定される。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＣＤ４および／またはＣＤ８Ｔ細胞を活性化する、および／または結合タンパク質の１つまたはそれ以上の結合ドメインの１つまたはそれ以上の抗原標的を発現細胞の、抗体媒介性ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞死滅を誘導する。例示的ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞死滅およびＴ細胞活性化アッセイは、当技術分野で公知である。例えば、いくつかの実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞死滅および／またはＴ細胞活性化は、実施例１に記載される技術を使用してアッセイされる。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１種またはそれ以上のサイトカインと特異的に結合する、および／または１種またはそれ以上のサイトカインによって媒介されるシグナル伝達を遮断する。例示的サイトカイン放出アッセイは、当技術分野で公知である。例えば、いくつかの実施形態では、サイトカイン放出は、実施例１に記載された技術を使用してアッセイされる。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、Ｔ細胞上の標的タンパク質と特異的に結合する第１の抗原結合部位、Ｔ細胞上の標的タンパク質と特異的に結合する第２の抗原結合部位および抗原標的または標的タンパク質と特異的に結合する第３の抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、Ｔ細胞上の標的タンパク質と特異的に結合する第１の抗原結合部位、Ｔ細胞上の標的タンパク質と特異的に結合する第２の抗原結合部位および腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する第３の抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、Ｔ細胞上の標的タンパク質と特異的に結合する第１の抗原結合部位、Ｔ細胞上の標的タンパク質と特異的に結合する第２の抗原結合部位およびヒト腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する第３の抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、第１および第２の抗原結合部位は、それぞれ、例えば、ＣＤ３およびＣＤ２８から選択される腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１および第２の抗原結合部位は、それぞれ、例えば、ＣＤ２８およびＣＤ３から選択される腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第３の抗原結合部位は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３８、Ｈｅｒ２またはＬＡＭＰ１と特異的に結合する。このような標的および標的タンパク質のさらなる例を、以下に提供する。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ＣＤ３と特異的に結合する第１の抗原結合部位、ＣＤ２８と特異的に結合する第２の抗原結合部位および抗原標的または標的タンパク質と特異的に結合する第３の抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ＣＤ２８と特異的に結合する第１の抗原結合部位、ＣＤ３と特異的に結合する第２の抗原結合部位および抗原標的または標的タンパク質と特異的に結合する第３の抗原結合部位を含む。このような抗原標的または標的タンパク質のさらなる例を、以下に提供する。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ＣＤ３と特異的に結合する第１の抗原結合部位、ＣＤ２８と特異的に結合する第２の抗原結合部位および腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する第３の抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ヒトＣＤ３と特異的に結合する第１の抗原結合部位、ヒトＣＤ２８と特異的に結合する第２の抗原結合部位およびヒト腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する第３の抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ＣＤ２８と特異的に結合する第１の抗原結合部位、ＣＤ３と特異的に結合する第２の抗原結合部位および腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する第３の抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ヒトＣＤ２８と特異的に結合する第１の抗原結合部位、ヒトＣＤ３と特異的に結合する第２の抗原結合部位およびヒト腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する第３の抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、第３の抗原結合部位は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３８、Ｈｅｒ２またはＬＡＭＰ１と特異的に結合する。このような腫瘍抗原標的または腫瘍標的タンパク質のさらなる例を、以下に提供する。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３と特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号１５２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；または配列番号１５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。本明細書において記載される結合タンパク質のいずれかにおいて使用するのに適している、ＣＤ３と特異的に結合する抗体のさらなるＶＨ、ＶＬおよび／またはＣＤＲ配列は、参照によってその全文を本明細書に組み入れる国際公開番号ＷＯ２０１６／１１６６２６において見出すことができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３と特異的に結合する抗原結合部位は、表２〜５に示される６つのＣＤＲまたは重鎖および軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３と特異的に結合する抗原結合部位は、（ｉ）それぞれ、配列番号３４、３５および３６の３つの重鎖ＣＤＲおよびそれぞれ、配列番号５２、５３および５４の３つの軽鎖ＣＤＲ；または（ｉｉ）それぞれ、配列番号３４、３５および３６の３つの重鎖ＣＤＲおよびそれぞれ、配列番号１４９、５３および５４の３つの軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３と特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号３のアミノ酸配列または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖の一部である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３と特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号４のアミノ酸配列または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号４のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖の一部である。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２８と特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号１６０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；または配列番号１６２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８と特異的に結合する抗原結合部位は、表２〜５に示される６つのＣＤＲまたは重鎖および軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８と特異的に結合する抗原結合部位は、（ｉ）それぞれ、配列番号２８、２９および３０の３つの重鎖ＣＤＲおよびそれぞれ、配列番号４６、４７および４８の３つの軽鎖ＣＤＲ；または（ｉｉ）それぞれ、配列番号３１、３２および３３の３つの重鎖ＣＤＲおよびそれぞれ、配列番号４９、５０および５１の３つの軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８と特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号３のアミノ酸配列または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号３のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖の一部である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８と特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号４のアミノ酸配列または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であり、場合により、配列番号４のポリペプチド鎖のＣＤＲに対して１００％同一であるＣＤＲを含むアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖の一部である。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ＣＤ３と特異的に結合する第１の抗原結合部位、ＣＤ２８と特異的に結合する第２の抗原結合部位およびＣＤ３８と特異的に結合する第３の抗原結合部位またはＣＤ２８と特異的に結合する第１の抗原結合部位、ＣＤ３と特異的に結合する第２の抗原結合部位およびＣＤ３８と特異的に結合する第３の抗原結合部位を含み、ここで、
・ＣＤ３と特異的に結合する抗原結合部位は、（ｉ）それぞれ、配列番号３４、３５および３６の３つの重鎖ＣＤＲおよびそれぞれ、配列番号５２、５３および５４の３つの軽鎖ＣＤＲ；または（ｉｉ）それぞれ、配列番号３４、３５および３６の３つの重鎖ＣＤＲおよびそれぞれ、配列番号１４９、５３および５４の３つの軽鎖ＣＤＲを含み；
・ＣＤ２８と特異的に結合する抗原結合部位は、（ｉ）それぞれ、配列番号２８、２９および３０の３つの重鎖ＣＤＲおよびそれぞれ、配列番号４６、４７および４８の３つの軽鎖ＣＤＲ；または（ｉｉ）それぞれ、配列番号３１、３２および３３の３つの重鎖ＣＤＲおよびそれぞれ、配列番号４９、５０および５１の３つの軽鎖ＣＤＲを含み；
・ＣＤ３８と特異的に結合する抗原結合部位は、（ｉ）それぞれ、配列番号４０、４１および４２の３つの重鎖ＣＤＲおよびそれぞれ、配列番号５８、４４および５９の３つの軽鎖ＣＤＲを含む。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号１５６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；配列番号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；配列番号１５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；または配列番号１６６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する抗原結合部位は、表２〜５に示される６つのＣＤＲまたは重鎖および軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する抗原結合部位は、表２〜５に示される、抗Ｈｅｒ２、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ３８または抗ＬＡＭＰ１結合ドメインの６つのＣＤＲを含む。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、ここで、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL2−Ｌ1−ＶL1-Ｌ2−ＣL                              ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH1−Ｌ3−ＶH2−Ｌ4−ＣH1−ヒンジ−ＣH2−ＣH3        ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH3−ＣH1−ヒンジ−ＣH2−ＣH3                        ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL3−ＣL                                              ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶL1は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL2は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL3は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶH1は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH2は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH3は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣLは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣH1は、免疫グロブリンＣH1重鎖定常ドメインであり；
ＣH2は、免疫グロブリンＣH2重鎖定常ドメインであり；
ＣH3は、免疫グロブリンＣH3重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣH1およびＣH2ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4ハ、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成し；
ＶL1、ＶL2およびＶL3は各々独立に、配列番号１６９、１７１および１７３のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；
ＶH1、ＶH2およびＶH3は各々独立に、配列番号１６８、１７０および１７２のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含む。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、ここで、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL2−Ｌ1−ＶL1-Ｌ2−ＣL                                ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH1−Ｌ3−ＶH2−Ｌ4−ＣH1−ヒンジ−ＣH2−ＣH3          ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH3−ＣH1−ヒンジ−ＣH2−ＣH3                          ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL3−ＣL                                                ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶL1は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL2は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL3は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶH1は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH2は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH3は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣLは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣH1は、免疫グロブリンＣH1重鎖定常ドメインであり；
ＣH2は、免疫グロブリンＣH2重鎖定常ドメインであり；
ＣH3は、免疫グロブリンＣH3重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣH1およびＣH2ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成し；
ＶL1、ＶL2およびＶL3は各々独立に、配列番号１４１〜１４７、１７８および１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含み；
ＶH1、ＶH2およびＶH3は各々独立に、配列番号１２９〜１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含む。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、ここで、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL2−Ｌ1−ＶL1-Ｌ2−ＣL                            ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH1−Ｌ3−ＶH2−Ｌ4−ＣH1−ヒンジ−ＣH2−ＣH3      ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH3−ＣH1−ヒンジ−ＣH2−ＣH3                      ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL3−ＣL                                          ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶL1は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL2は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL3は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶH1は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH2は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH3は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣLは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣH1は、免疫グロブリンＣH1重鎖定常ドメインであり；
ＣH2は、免疫グロブリンＣH2重鎖定常ドメインであり；
ＣH3は、免疫グロブリンＣH3重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣH1およびＣH2ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4ハ、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成し；
ＶL1、ＶL2およびＶL3は各々独立に、配列番号１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５および１６７のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；
ＶH1、ＶH2およびＶH3は各々独立に、配列番号１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４および１６６のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含む。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、ここで、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL2−Ｌ1−ＶL1-Ｌ2−ＣL                              ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH1−Ｌ3−ＶH2−Ｌ4−ＣH1−ヒンジ−ＣH2−ＣH3        ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH3−ＣH1−ヒンジ−ＣH2−ＣH3                        ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL3−ＣL                                              ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶL1は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL2は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL3は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶH1は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH2は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH3は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣLは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣH1は、免疫グロブリンＣH1重鎖定常ドメインであり；
ＣH2は、免疫グロブリンＣH2重鎖定常ドメインであり；
ＣH3は、免疫グロブリンＣH3重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣH1およびＣH2ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成し；
ＶL1、ＶL2およびＶL3は各々独立に、配列番号４３〜５９、１２３〜１２５、１３８〜１４０および１４９のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含み；
ＶH1、ＶH2およびＶH3は各々独立に、配列番号２５〜４２、１２０〜１２２および１２６〜１２８のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含む。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ＣＤ３と特異的に結合する抗原結合部位、ＣＤ２８と特異的に結合する抗原結合部位およびＣＤ３またはＣＤ２８以外の抗原標的と特異的に結合する抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ヒトＣＤ３と特異的に結合する抗原結合部位、ヒトＣＤ２８と特異的に結合する抗原結合部位およびＣＤ３またはＣＤ２８以外のヒト抗原標的と特異的に結合する抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、（ａ）ＣＤ３と特異的に結合する抗原結合部位を含み、ここで、ＣＤ３と特異的に結合する抗原結合部位は、（ｉ）配列番号１５２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（ｉｉ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（ｉｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖可変ドメインならびに配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変ドメインまたは（ｉｖ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖可変ドメインならびに配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変ドメインを含み、（ｂ）ＣＤ２８と特異的に結合する抗原結合部位を含み、ここで、ＣＤ２８と特異的に結合する抗原結合部位は、（ｉ）配列番号１６０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（ｉｉ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（ｉｉｉ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖可変ドメインならびに配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変ドメインまたは（ｉｖ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖可変ドメインならびに配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変ドメインを含み、ならびに（ｃ）ＣＤ３またはＣＤ２８以外の抗原標的と特異的に結合する抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号４または１０のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖、配列番号３または９のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖ならびに第３および第４のポリペプチド鎖を含み、ここで、第３および第４のポリペプチド鎖は、ＣＤ３またはＣＤ２８以外の抗原標的と特異的に結合する抗原結合ドメインを形成する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３またはＣＤ２８以外の抗原標的と特異的に結合する抗原結合部位は、Ａ２ＡＲ、ＡＰＲＩＬ、ＡＴＰＤａｓｅ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＢｌｙＳ、ＢＴＫ、ＢＴＬＡ、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４（ＶＴＣＮ１としても知られる）、Ｂ７Ｈ５、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７Ｈ７、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７−４、Ｃ３、Ｃ５、ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１としても知られる）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−１ａとしても知られる）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１ｂとしても知られる）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳとしても知られる）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ−３としても知られる）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２としても知られる）、ＣＣＬ１１（エオタキシンとしても知られる）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−１ｄとしても知られる）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣとしても知られる）、ＣＣＬ１９（ＭＩＰ−３ｂとしても知られる）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａとしても知られる）、ＣＣＬ２１（ＭＩＰ−２としても知られる）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２としても知られる）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫとしても知られる）、ＣＣＬ２６（エオタキシン−３としても知られる）、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３（ＦＣＥＲ２としても知られる、ＩｇＥの受容体）、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０（Ｂ７−１としても知られる）、ＣＤ８６（Ｂ７−２としても知られる）、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７（４１ＢＢとしても知られる）、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４としても知られる）、ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌとしても知られる）、ＣＤ１６０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３（ＰＤＬ２としても知られる）、ＣＤ２７４（ＰＤＬ１としても知られる）、ＣＤ２７５（Ｂ７Ｈ２としても知られる）、ＣＤ２７６（Ｂ７Ｈ３としても知られる）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとしても知られる）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１としても知られる）、ＣＤＨ１（Ｅ−カドヘリンとしても知られる）、キチナーゼ、ＣＬＥＣ９、ＣＬＥＣ９１、ＣＲＴＨ２、ＣＳＦ−１（Ｍ−ＣＳＦとしても知られる）、ＣＳＦ−２（ＧＭ−ＣＳＦとしても知られる）、ＣＳＦ−３（ＧＣＳＦとしても知られる）、ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤ１としても知られる）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１としても知られる）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＤＮＧＲ−１、エクトヌクレオチド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＴＰＤ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ１、ＦＬＡＰ、ＦＯＬＨ１、Ｇｉ２４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｈｅｒ２、ＨＨＬＡ２、ＨＭＧＢ１、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳＬＧ、ＩＤＯ、ＩＦＮα、ＩｇＥ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒａ、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒａ、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ｒｈＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒａ１、ＩＬ１３Ｒａ２、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒｂ（ＩＬ２５の受容体としても��られる）、ＩＬ１８、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２５、ＩＬ２７、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリンとしても知られる）、ＩＴＫ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＬＡＭＰ１、レプチン、ＬＰＦＳ２、ＭＨＣクラスＩＩ、ＮＣＲ３ＬＧ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＴＰＤａｓｅ−１、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１Ｈ、血小板受容体、ＰＲＯＭ１、Ｓ１５２、ＳＩＳＰ１、ＳＬＣ、ＳＰＧ６４、ＳＴ２（ＩＬ３３の受容体としても知られる）、ＳＴＥＡＰ２、Ｓｙｋキナーゼ、ＴＡＣＩ、ＴＤＯ、Ｔ１４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＬＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ９、ＴＭＥＦ１、ＴＮＦａ、ＴＮＦＲＳＦ７、Ｔｐ５５、ＴＲＥＭ１、ＴＳＬＰ（ＩＬ７Ｒａの共受容体としても知られる）、ＴＳＬＰＲ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦ、ＶＩＳＴＡ、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭおよびＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１としても知られる）から選択される抗原標的と結合する。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、ＶH1は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１６０】
抗原標的
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、以下の抗原標的または標的タンパク質のうち１種またはそれ以上の（例えば、１種、２種または３種）と結合する：Ａ２ＡＲ、ＡＰＲＩＬ、ＡＴＰＤａｓｅ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＢｌｙＳ、ＢＴＫ、ＢＴＬＡ、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４（ＶＴＣＮ１としても知られる）、Ｂ７Ｈ５、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７Ｈ７、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７−４、Ｃ３、Ｃ５、ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１としても知られる）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−１ａとしても知られる）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１ｂとしても知られる）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳとしても知られる）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ−３としても知られる）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２としても知られる）、ＣＣＬ１１（エオタキシンとしても知られる）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−１ｄとしても知られる）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣとしても知られる）、ＣＣＬ１９（ＭＩＰ−３ｂとしても知られる）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａとしても知られる）、ＣＣＬ２１（ＭＩＰ−２としても知られる）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２としても知られる）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫとしても知られる）、ＣＣＬ２６（エオタキシン−３としても知られる）、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３（ＦＣＥＲ２としても知られる、ＩｇＥの受容体）、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０（Ｂ７−１としても知られる）、ＣＤ８６（Ｂ７−２としても知られる）、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７（４１ＢＢとしても知られる）、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４としても知られる）、ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌとしても知られる）、ＣＤ１６０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３（ＰＤＬ２としても知られる）、ＣＤ２７４（ＰＤＬ１としても知られる）、ＣＤ２７５（Ｂ７Ｈ２としても知られる）、ＣＤ２７６（Ｂ７Ｈ３としても知られる）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとしても知られる）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１としても知られる）、ＣＤＨ１（Ｅ−カドヘリンとしても知られる）、キチナーゼ、ＣＬＥＣ９、ＣＬＥＣ９１、ＣＲＴＨ２、ＣＳＦ−１（Ｍ−ＣＳＦとしても知られる）、ＣＳＦ−２（ＧＭ−ＣＳＦとしても知られる）、ＣＳＦ−３（ＧＣＳＦとしても知られる）、ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤ１としても知られる）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１としても知られる）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＤＮＧＲ−１、エクトヌクレオチド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＴＰＤ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ１、ＦＬＡＰ、ＦＯＬＨ１、Ｇｉ２４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｈｅｒ２、ＨＨＬＡ２、ＨＭＧＢ１、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳＬＧ、ＩＤＯ、ＩＦＮα、ＩｇＥ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒａ、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒａ、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ｒｈＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒａ１、ＩＬ１３Ｒａ２、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒｂ（ＩＬ２５の受容体としても知られる）、ＩＬ１８、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２５、ＩＬ２７、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリンとしても知られる）、ＩＴＫ、��ＩＲ、ＬＡＧ３、ＬＡＭＰ１、レプチン、ＬＰＦＳ２、ＭＨＣクラスＩＩ、ＮＣＲ３ＬＧ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＴＰＤａｓｅ−１、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１Ｈ、血小板受容体、ＰＲＯＭ１、Ｓ１５２、ＳＩＳＰ１、ＳＬＣ、ＳＰＧ６４、ＳＴ２（ＩＬ３３の受容体としても知られる）、ＳＴＥＡＰ２、Ｓｙｋキナーゼ、ＴＡＣＩ、ＴＤＯ、Ｔ１４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＬＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ９、ＴＭＥＦ１、ＴＮＦａ、ＴＮＦＲＳＦ７、Ｔｐ５５、ＴＲＥＭ１、ＴＳＬＰ（ＩＬ７Ｒａの共受容体としても知られる）、ＴＳＬＰＲ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦ、ＶＩＳＴＡ、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭおよびＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１としても知られる）。いくつかの実施形態では、上記の抗原標的のうち１種またはそれ以上は、ヒト抗原標的である。
【０１６１】
一実施形態では、結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の腫瘍抗原標的（例えば、標的タンパク質）と特異的に結合する。その他の実施形態では、結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の腫瘍標的タンパク質およびＴ細胞受容体複合体を含む、Ｔ細胞上の１つまたはそれ以上の標的タンパク質と特異的に結合する。これらのＴ細胞エンゲージャー結合タンパク質は、Ｔ細胞を標的細胞に一過性に動員させることが可能であり、同時に、Ｔ細胞の細胞溶解活性を活性化することが可能である。Ｔ細胞上の標的タンパク質の例として、それだけには限らないが、中でも、ＣＤ３およびＣＤ２８が挙げられる。このような抗原標的または標的タンパク質のさらなる例は、前掲で提供されている。いくつかの実施形態では、２つまたはそれ以上の単一特異性抗体（親抗体）の抗原結合ドメインを１つの抗体に組み合わせることによって、三重特異性結合タンパク質を作製することができる。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、以下の抗原標的：ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２８、ＣＤ３８、Ｈｅｒ２、ＬＡＭＰ１、ＩＬ−４、ＩＬ−１３およびＴＮＦａのうち１つまたはそれ以上の（例えば、１つ、２つまたは３つ）と結合する。
【０１６２】
本開示のいくつかの実施形態では、三価結合タンパク質は、３つの抗原標的と結合することが可能である。本開示のいくつかの実施形態では、三価結合タンパク質は、３つの異なる抗原標的と結合することが可能である。一実施形態では、結合タンパク質は、三重特異性であり、１つの軽鎖−重鎖対は、２つの異なる抗原標的またはエピトープと結合することが可能であり、１つの軽鎖−重鎖対は、１つの抗原標的またはエピトープと結合することが可能である。別の実施形態では、結合タンパク質は、３つの腫瘍抗原標的と結合することが可能である。別の実施形態では、結合タンパク質は、３つの異なる腫瘍抗原標的と結合することが可能である。その他の実施形態では、結合タンパク質は、１種またはそれ以上の抗原標的の機能を阻害することが可能である。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の腫瘍標的タンパク質と結合する。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、単一腫瘍標的タンパク質上の３つのエピトープと特異的に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、単一の腫瘍標的タンパク質上の３種の異なるエピトープと特異的に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、第１の腫瘍標的タンパク質上の２つの異なるエピトープおよび第２の腫瘍標的タンパク質上の１つのエピトープと結合することが可能である。いくつかの実施形態では、第１および第２の腫瘍標的タンパク質は異なっている。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、３つの異なる腫瘍標的タンパク質と特異的に結合することが可能である。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたはそれ以上のサイトカイン標的タンパク質と結合する。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、単一サイトカイン標的タンパク質上の３つのエピトープと特異的に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、単一サイトカイン標的タンパク質上の３つの異なるエピトープと特異的に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、第１のサイトカイン標的タンパク質上の２つの異なるエピトープおよび第２のサイトカイン標的タンパク質上の１つのエピトープと結合することが可能である。いくつかの実施形態では、第１および第２のサイトカイン標的タンパク質は、異なっている。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、３つの異なるサイトカイン標的タンパク質と特異的に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、１つまたはそれ以上のサイトカイン標的タンパク質は、ＩＬ−４、ＩＬ−１３および／またはＴＮＦａのうち１つまたはそれ以上である。サイトカイン標的タンパク質のさらなる例は、以下に提供する。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の腫瘍標的タンパク質および１つまたはそれ以上のＴ細胞標的タンパク質と結合する。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、１つの腫瘍標的タンパク質および単一Ｔ細胞標的タンパク質上の２つの異なるエピトープと特異的に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、１つの腫瘍標的タンパク質および２つの異なるＴ細胞標的タンパク質（例えば、ＣＤ２８およびＣＤ３）と特異的に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、１つのＴ細胞標的タンパク質および単一腫瘍標的タンパク質上の２つの異なるエピトープと特異的に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、１つのＴ細胞標的タンパク質および２つの異なる腫瘍標的タンパク質と特異的に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質の第１および第２のポリペプチド鎖は、２つのＴ細胞標的タンパク質を特異的に標的とする２つの抗原結合部位を形成し、結合タンパク質の第３および第４のポリペプチド鎖は、腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、結合タンパク質の第１および第２のポリペプチド鎖は、２つの腫瘍標的タンパク質を特異的に標的とする２つの抗原結合部位を形成し、結合タンパク質の第３および第４のポリペプチド鎖は、Ｔ細胞標的タンパク質と特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、１つまたはそれ以上の腫瘍標的タンパク質は、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２８、ＣＤ３８、Ｈｅｒ２、ＬＡＭＰ１、ＩＬ−４、ＩＬ−１３および／またはＴＮＦａのうち１つまたはそれ以上である。いくつかの実施形態では、１つまたはそれ以上のＴ細胞標的タンパク質は、ＣＤ３およびＣＤ２８のうち１つまたはそれ以上である。腫瘍標的タンパク質およびＴ細胞標的タンパク質のさらなる例は、前掲で提供されている。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、互いに独立に、サイトカイン標的タンパク質、腫瘍標的抗原または腫瘍標的タンパク質、Ｔ細胞標的タンパク質、免疫チェックポイント阻害剤、免疫チェックポイントモジュレーター、免疫チェックポイント共刺激分子および／または免疫細胞の表面上の標的分子から選択される、同一または異なる、１つ、２つまたは３つの抗原標的または標的タンパク質と結合する。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、三価であるが、二重特異性であり、同一抗原標的または標的タンパク質と２回特異的に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、単一サイトカイン標的タンパク質、腫瘍標的抗原または腫瘍標的タンパク質、Ｔ細胞標的タンパク質、免疫チェックポイント阻害剤、免疫チェックポイントモジュレーター、免疫チェックポイント共刺激分子および／または免疫細胞の表面上の標的分子上の２つの異なるエピトープと特異的に結合することが可能である。このような抗原標的または標的タンパク質のさらなる例は、前掲で提供されている。
【０１６７】
本開示の結合タンパク質は、例えば、ヒト、マウスまたはヒト化抗体を含む、任意のヒトまたは非ヒト抗体から得られた、またはそれに由来するドメインまたは配列を使用して製造することができる。
【０１６８】
リンカー
いくつかの実施形態では、リンカーＬ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は、アミノ酸なし（長さ＝０）〜約１００個のアミノ酸長または１００、５０、４０、３０、２０もしくは１５個未満のアミノ酸またはそれ未満の範囲である。リンカーはまた、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１個のアミノ酸長であり得る。１つの結合タンパク質中のＬ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は、すべて同一アミノ酸配列を有する場合も、すべて異なるアミノ酸配列を有する場合もある。
【０１６９】
適したリンカーの例として、単一グリシン（Ｇｌｙ）残基；ジグリシンペプチド（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）；トリペプチド（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）；４個のグリシン残基を有するペプチド（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ；配列番号９８）；５個のグリシン残基を有するペプチド（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ；配列番号９９）；６個のグリシン残基を有するペプチド（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ；配列番号１００）；７個のグリシン残基を有するペプチド（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ；配列番号１０１）；８個のグリシン残基を有するペプチド（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ；配列番号１０２）が挙げられる。ペプチドＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（配列番号１０３）、ペプチドＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（配列番号１０４）、ペプチドＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（配列番号１０５）およびペプチドＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号１４８）などのアミノ酸残基のその他の組合せも使用できる。その他の適したリンカーとして、単一ＳｅｒおよびＶａｌ残基；ジペプチドＡｒｇ−Ｔｈｒ、Ｇｌｎ−Ｐｒｏ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−ＬｙｓおよびＳｅｒ−Ｌｅｕ；Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（配列番号１０６）、Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ（配列番号１０７）、Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ（配列番号１０８）、Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ（配列番号１０９）；Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（配列番号１１０）、Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（配列番号１１１）、Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ（配列番号１１２）およびＨｉｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ（配列番号１１３）が挙げられる。上記で列挙された例は、決して本開示の範囲を制限するものではなく、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパルテート、グルタメート、アスパラギン、グルタミン、グリシンおよびプロリンからなる群から選択される無作為に選択されたアミノ酸を含むリンカーが、結合タンパク質において適しているとわかっている。リンカー配列のさらなる説明については、例えば、ＷＯ２０１２１３５３４５を参照のこと。
【０１７０】
リンカー中のアミノ酸残基の同一性および配列は、リンカーにおいて達成するのに必要な二次構造要素の種類に応じて変わり得る。例えば、グリシン、セリンおよびアラニンは、最大の可動性を有するリンカーにとって最良である。より強固な延長したリンカーが必要である場合には、グリシン、プロリン、トレオニンおよびセリンのいくつかの組合せが有用である。所望の特性に応じて必要に応じてより大きなペプチドリンカーを構築するために、任意のアミノ酸残基がその他のアミノ酸残基と組み合わせてリンカーとして考えられる。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、Ｌ1の長さは、Ｌ3の長さの少なくとも２倍である。いくつかの実施形態では、Ｌ2の長さは、Ｌ4の長さの少なくとも２倍である。いくつかの実施形態では、Ｌ1の長さは、Ｌ3の長さの少なくとも２倍であり、Ｌ2の長さは、Ｌ4の長さの少なくとも２倍である。いくつかの実施形態では、Ｌ1は、３〜１２個のアミノ酸残基の長さであり、Ｌ2は、３〜１４個のアミノ酸残基の長さであり、Ｌ3は、１〜８個のアミノ酸残基の長さであり、Ｌ4は、１〜３個のアミノ酸残基の長さである。いくつかの実施形態では、Ｌ1は、５〜１０個のアミノ酸残基の長さであり、Ｌ2は、５〜８個のアミノ酸残基の長さであり、Ｌ3は、１〜５個のアミノ酸残基の長さであり、Ｌ4は、１〜２個のアミノ酸残基の長さである。いくつかの実施形態では、Ｌ1は、７個のアミノ酸残基の長さであり、Ｌ2は、５個のアミノ酸残基の長さであり、Ｌ3は、１個のアミノ酸残基の長さであり、Ｌ4は、２個のアミノ酸残基の長さである。いくつかの実施形態では、Ｌ1は、１０個のアミノ酸残基の長さであり、Ｌ2は、１０個のアミノ酸残基の長さであり、Ｌ3は、０個のアミノ酸残基の長さであり、Ｌ4は、０個のアミノ酸残基の長さである。いくつかの実施形態では、Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は各々、０〜１５個のアミノ酸（例えば、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸）から独立に選択された長さを有し、ここで、リンカーのうち少なくとも２つは、１〜１５個のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸）の長さを有する。いくつかの実施形態では、Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は各々、０個のアミノ酸の長さである。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3、および／またはＬ4は、配列Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ（配列番号５２５）を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ1は、配列Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ（配列番号５２５）を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ3は、配列Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ（配列番号５２５）を含む。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3および／またはＬ4は、抗体可変ドメインおよび抗体定常ドメインの間の接合部に、天然に存在する配列に由来する配列を含む（例えば、ＷＯ２０１２／１３５３４５に記載されるように）。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーは、内因性ＶHおおよびＣH1ドメインの間または内因性ＶLおよびＣLドメイン（例えば、κまたはλ）の間の遷移部に見られる配列を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、内因性ヒトＶHおよびＣH1ドメインの間または内因性ヒトＶLおよびＣLドメイン（例えば、ヒトκまたはλ）の間の遷移部に見られる配列を含む。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3、および／またはＬ4は、配列Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ（配列番号１７５）を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ1は、配列Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ（配列番号１７５）を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ1は、配列Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ（配列番号１７５）を含み、Ｌ2は、配列Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ（配列番号１７６）を含み、Ｌ3は、配列Ｓｅｒを含み、Ｌ4は、配列Ａｒｇ−Ｔｈｒを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ3は、配列Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ（配列番号１７５）を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ1は、配列Ｓｅｒを含み、Ｌ2は、配列Ａｒｇ−Ｔｈｒを含み、Ｌ3は、配列Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ（配列番号１７５）を含み、Ｌ4は、配列Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ（配列番号１７６）を含む。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は各々独立に、（ＧＧＧＧＳ）n（式中、ｎは、０から５の間の整数である；配列番号１７４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配
列番号１０４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ1は、配列ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）を含み、Ｌ2は、配列ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）を含み、Ｌ3は、配列Ｓを含み、Ｌ4は、配列ＲＴを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ1は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）を含み、Ｌ2は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）を含み、Ｌ3は、０個のアミノ酸の長さであり、Ｌ4は、０個のアミノ酸の長さである。いくつかの実施形態では、Ｌ1は、配列ＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）を含み、Ｌ2は、配列ＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）を含み、Ｌ3は、０個のアミノ酸の長さでありＬ4は、０個のアミノ酸の長さである。いくつかの実施形態では、Ｌ1は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）を含み、Ｌ2は、０個のアミノ酸の長さであり、Ｌ3は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）を含み、Ｌ4は、０個のアミノ酸の長さである。いくつかの実施形態では、Ｌ1およびＬ2は、０個のアミノ酸の長さであり、Ｌ3およびＬ4は各々、（ＧＧＧＧＳ）n（式中、ｎは、０から５の間の整数である；配列番号１７４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）から選択される独立に選択された配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ3およびＬ4は、０個のアミノ酸の長さであり、Ｌ1およびＬ2は各々（ＧＧＧＧＳ）n（式中、ｎは、０から５の間の整数である；配列番号１７４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）から選択される独立に選択された配列を含む。
【０１７６】
Ｆｃ領域および定常ドメイン
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含む第２のポリペプチド鎖を含み、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含む第３のポリペプチド鎖を含み、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含む第２のポリペプチド鎖を含み、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域およびＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ならびにＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含む第３のポリペプチド鎖を含み、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域およびＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１種または２種のＦｃ変異体を含む。用語「Ｆｃ変異体」とは、本明細書において、天然Ｆｃから修飾されているが、依然としてサルベージ受容体、ＦｃＲｎ（新生児型Ｆｃ受容体）の結合部位を含む分子または配列を指す。例示的Ｆｃ変異体およびそのサルベージ受容体との相互作用は、当技術分野で公知である。したがって、用語「Ｆｃ変異体」は、非ヒト天然Ｆｃからヒト化されている分子または配列を含み得る。さらに、天然Ｆｃは、本発明の抗体様結合タンパク質にとって必要ではない構造的機能または生物活性を提供するので除去することができる領域を含む。したがって、用語「Ｆｃ変異体」は、（１）ジスルフィド結合形成、（２）選択された宿主細胞との不適合性、（３）選択された宿主細胞における発現の際のＮ末端不均一性、（４）グリコシル化、（５）相補体との相互作用、（６）サルベージ受容体以外のＦｃ受容体との結合または（７）抗体依存性細胞性細胞毒性（ＡＤＣＣ）に影響を及ぼす、またはそれに関与している、１つまたはそれ以上の天然Ｆｃ部位もしくは残基を欠く、または１つまたはそれ以上のＦｃ部位もしくは残基が修飾されている分子または配列を含む。
【０１７８】
結合タンパク質の収率を改善するために、例えば、国際公開番号ＷＯ９６／０２７０１１、Ｒｉｄｇｗａｙら、１９９６、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  ９：６１７〜２１頁；およびＭｅｒｃｈａｎｔら、１９９８、Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １６：６７７〜８１頁においていくつかの実施例を用いて詳細に記載されている「ノブ・イントゥー・ホール」技術によって、ＣH3ドメインを変更することができる。具体的には、２つのＣH3ドメインの相互作用表面は、これら２つのＣH3ドメインを含有する両重鎖のヘテロ二量体化を増大するように変更される。２つのＣH3ドメインの（２つの重鎖の）各々は、「ノブ」であり得、もう一方が「ホール」である。ジスルフィド橋の導入は、ヘテロ二量体をさらに安定化し（Ｍｅｒｃｈａｎｔら、１９９８；Ａｔｗｅｌｌら、１９９７、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２７０：２６〜３５頁）、収率を増大する。特定の実施形態では、ノブは、単一の可変ドメインを有するポリペプチドの第２の対上にある。その他の実施形態では、ノブは、クロスオーバー配向を有するポリペプチドの第１の対上にある。さらにその他の実施形態では、ＣH3ドメインは、ノブインホールを含まない。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、第２のポリペプチド鎖上に「ノブ」突然変異および第３のポリペプチド鎖上に「ホール」突然変異を含む。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、第３のポリペプチド鎖上の「ノブ」突然変異および第２のポリペプチド鎖上の「ホール」突然変異を含む。いくつかの実施形態では、「ノブ」突然変異は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および／または３６６に対応する位置に置換を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｙ、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６ＷまたはＳ３５４ＣおよびＴ３６６Ｙである。いくつかの実施形態では、「ノブ」突然変異は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置に置換を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである。いくつかの実施形態では、「ホール」突然変異は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４０７に、場合により、３４９、３６６および／または３６８に対応する位置に置換を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｙ４０７ＶまたはＹ４０７Ｔ、場合により、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓおよび／またはＬ３６８Ａである。いくつかの実施形態では、「ホール」突然変異は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８および４０７に対応する位置に置換を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖである。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３６６、場合により、３５４に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｔ３６６ＷまたはＴ３６６Ｙ、場合により、Ｓ３５４Ｃであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４０７、場合により、３４９、３６６および／または３６８に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ４０７ＶまたはＹ４０７Ｔ、場合により、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓおよび／またはＬ３６８Ａである。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４０７、場合により、３４９、３６６および／または３６８に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ４０７ＶまたはＹ４０７Ｔ、場合により、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓおよび／またはＬ３６８Ａであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３６６、場合により、３５４に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｔ３６６ＷまたはＴ３６６Ｙ、場合により、Ｓ３５４Ｃである。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｔ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３６６、３６８および／または４０７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａおよび／またはＹ４０７Ｖである。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３６６、３６８および／または４０７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａおよび／またはＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｔ３６６Ｗである。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８および４０７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖである。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８および４０７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである。いくつかの実施形態では、第１および／または第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、第１および／または第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域である。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、血清半減期を改善するために１つまたはそれ以上の突然変異を含む（例えば、Ｈｉｎｔｏｎ，Ｐ．Ｒ．ら（２００６）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７６（１）：３４６〜５６頁を参照のこと）。いくつかの実施形態では、突然変異は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４２８および４３４に対応する位置に置換を含み、ここで、アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含む第２のポリペプチド鎖をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域およびＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ならびにＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含む第３のポリペプチド鎖をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域およびＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第１および／または第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４２８および４３４に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ノブおよびホール突然変異ならびに血清半減期を改善するための１つまたはそれ以上の突然変異を含む。いくつかの実施形態では、第１および／または第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、第１および／または第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域である。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、例えば、ＩｇＧ４のヒンジ領域および／または二量体界面の、安定性を改善するための１つまたはそれ以上の突然変異を含む（例えば、Ｓｐｉｅｓｓ，Ｃ．ら（２０１３）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２８８：２６５８３〜２６５９３頁を参照のこと）。いくつかの実施形態では、突然変異は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２２８および４０９に対応する位置に置換を含み、ここで、アミノ酸置換は、Ｓ２２８ＰおよびＲ４０９Ｋである。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、ＣH1に連結された第１のＦｃ領域をさらに含む第２のポリペプチド鎖を含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域およびＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ならびにＣH1に連結された第２のＦｃ領域をさらに含む第３のポリペプチド鎖を含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域およびＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；ここで、第１および第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域であり；第１および第２のＦｃ領域は各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２２８および４０９に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ２２８ＰおよびＲ４０９Ｋである。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ノブおよびホール突然変異ならびに安定性を改善するための１つまたはそれ以上の突然変異を含む。いくつかの実施形態では、第１および／または第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域である。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、例えば、精製試薬に対する親和性を調節することによる、精製を改善するための１つまたはそれ以上の突然変異を含む。例えば、ヘテロ二量体結合タンパク質は、ヘテロ二量体形態の２つのＦｃ領域のうち１つが、プロテインＡとの結合を低減するまたは排除する突然変異（単数または複数）を含有する場合には、ヘテロ二量体形態は、いずれかのホモ二量体形態よりも、プロテインＡベースの精製に対して中間の親和性を有するので、例えば、異なるｐＨの使用によってプロテインＡから選択的に溶出できるので（例えば、Ｓｍｉｔｈ，Ｅ．Ｊ．ら（２０１５）  Ｓｃｉ．  Ｒｅｐ．  ５：１７９４３を参照のこと）、そのホモ二量体形態から離して選択的に精製することができるということがわかっている。いくつかの実施形態では、突然変異は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４３５および４３６に対応する位置に置換を含み、ここで、アミノ酸置換は、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆである。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、ＣH1に連結された第１のＦｃ領域をさらに含む第２のポリペプチド鎖を含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域およびＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ならびにＣH1に連結された第２のＦｃ領域をさらに含む第３のポリペプチド鎖を含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域およびＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；ここで、第１および第２のＦｃ領域のうち一方のみは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆである。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ノブおよびホール突然変異ならびに精製を改善するための１つまたはそれ以上の突然変異を含む。いくつかの実施形態では、第１および／または第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、第１および／または第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域である。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、エフェクター機能、例えば、Ｆｃ受容体媒介性抗体依存性細胞性食作用（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）および／または抗体依存性細胞性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を低減するための１つまたはそれ以上の突然変異を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；ここで、第３のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第１および第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域であり；第１および第２のＦｃ領域は各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置２３４および２３５に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである。いくつかの実施形態では、第２および第３のポリペプチド鎖のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域であり、ここで、Ｆｃ領域は各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置２３４および２３５に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；ここで、第３のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第１および第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域であり；第１および第２のＦｃ領域は各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置２３４、２３５、３２９に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａである。いくつかの実施形態では、第２および第３のポリペプチド鎖のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域であり、ここで、Ｆｃ領域は各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置２３４、２３５および３２９に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａである。いくつかの実施形態では、突然変異は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２３４および２３５に対応する位置に置換を含み、ここで、アミノ酸置換は、Ｆ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、ＣH1に連結された第１のＦｃ領域をさらに含む第２のポリペプチド鎖を含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域およびＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ならびにＣH1に連結された第２のＦｃ領域をさらに含む第３のポリペプチド鎖を含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域およびＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；ここで、第１および第２のＦｃ領域は各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２３４および２３５に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ���置換は、Ｆ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ノブおよびホール突然変異ならびにエフェクター機能を低減するための１つまたはそれ以上の突然変異を含む。いくつかの実施形態では、第１および／または第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、第１および／または第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域である。位置３２９でのＦｃ突然変異のさらなる説明については、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ら（２００１）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７６：６５９１〜６６０４頁およびＷＯ１９９９０５１６４２を参照のこと。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、前掲で記載される突然変異の種類は、任意の順序または組合せで組み合わせることができる。例えば、本開示の結合タンパク質は、２つまたはそれ以上のノブ」および「ホール」突然変異ならびに血清半減期を改善するための１つまたはそれ以上の突然変異、ＩｇＧ４安定性を改善するための１つまたはそれ以上の突然変異、精製を改善するための１つまたはそれ以上の突然変異および／または前掲で記載されたエフェクター機能を低減するための１つまたはそれ以上の突然変異を含み得る。
【０１９０】
特定の実施形態では、本開示の結合タンパク質は：λＣLドメインを含む第１のポリペプチド鎖；ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換が、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである、第２のポリペプチド鎖のＣH3ドメイン；ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置３４９、３６６、３６８、４０７、４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換が、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆである第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメイン；ならびにκＣLドメインを含む第４のポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、λＣLドメインを含み；ここで、第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第２のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置３４９、３６６、３６８、４０７、４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆであり；第４のポリペプチド鎖は、κＣLドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、λＣLドメインを含み；ここで、第２のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置３５４、３６６、４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆであり；第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置３４９、３６６、３６８および４０７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖであり；第４のポリペプチド鎖は、κＣLドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、κＣLドメインを含み；ここで、第２のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置３４９、３６６、３６８、４０７、４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆであり；第４のポリペプチド鎖は、λＣLドメインを含む。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、κ軽鎖アフィニティークロマトグラフィー（例えば、ΚＳｅｌｅｃｔ樹脂を製造業者の使用説明書に従って使用する；ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、場合により、λ軽鎖アフィニティークロマトグラフィー（例えば、ＬａｍｂｄａＦａｂＳｅｌｅｃｔ樹脂を、製造業者の使用説明書に従って使用する；ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって精製される。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、λ軽鎖アフィニティークロマトグラフィー（例えば、ＬａｍｂｄａＦａｂＳｅｌｅｃｔ樹脂を製造業者の使用説明書に従って使用する；ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、場合により、κ軽鎖アフィニティークロマトグラフィー（例えば、ΚＳｅｌｅｃｔ樹脂を製造業者の使用説明書に従って使用する；ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって精製される。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、２つのＦｃ領域を含み、各々、ＣH3ドメインを含み、ＣH3ドメインの一方のみが、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆである。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、順に、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、次いで、κ軽鎖アフィニティークロマトグラフィー（例えば、ΚＳｅｌｅｃｔ樹脂を製造業者の使用説明書に従って使用する；ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、次いで場合により、λ軽鎖アフィニティークロマトグラフィー（例えば、ＬａｍｂｄａＦａｂＳｅｌｅｃｔ樹脂を、製造業者の使用説明書に従って使用する；ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって精製される。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、順に、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、次いで、λ軽鎖アフィニティークロマトグラフィー（例えば、ＬａｍｂｄａＦａｂＳｅｌｅｃｔ樹脂を、製造業者の使用説明書に従って使用する；ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、次いで場合により、κ軽鎖アフィニティークロマトグラフィー（例えば、ΚＳｅｌｅｃｔ樹脂を製造業者の使用説明書に従って使用する；ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって精製される。例えば、いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、プロテインＡと接触され、０または２つの、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆであるアミノ酸置換を含むＣH3ドメインを含む結合タンパク質から離して結合タンパク質を単離するのに適した条件下でプロテインＡから溶出され、κ軽鎖親和性媒体（例えば、ΚＳｅｌｅｃｔ樹脂において使用されるような；ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）と接触され、λＣLドメインのみを含む結合タンパク質から離して結合タンパク質を単離するのに適した条件下で（例えば、製造業者の使用説明書に従って）、κ軽鎖親和性媒体から溶出される。プロテインＡ溶出に適した条件は、当技術分野で公知であり、制限するものではないが、ｐＨ４．５〜２．８の段階的溶出勾配を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質精製に有用なプロテインＡまたはプロテインＡ変異体が使用される。いくつかの実施形態では、プロテインＡは、例えば、クロマトグラフィー媒体の一部として基板または樹脂に付着される。いくつかの実施形態では、κ軽鎖親和性媒体からの溶出後、結合タンパク質が、λ軽鎖親和性媒体（例えば、ＬａｍｂｄａＦａｂＳｅｌｅｃｔ樹脂において使用されるような；ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）と接触され、κＣLドメインのみを含む結合タンパク質から離して結合タンパク質を単離するのに適した条件下で（例えば、製造業者の使用説明書に従って）、λ軽鎖親和性媒体から溶出される。いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ＨＩＣクロマトグラフィーを使用して検出される。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は：λＣLドメインを含む第１のポリペプチド鎖；ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換がＳ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである第２のポリペプチド鎖のＣH3ドメイン；ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８、４０７、４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換が、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆである第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメイン；ならびにκＣLドメインを含む第４のポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、宿主細胞によって産生される。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、細胞培養培地または宿主細胞抽出物から精製される。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、宿主細胞によって分泌されるか、または宿主細胞から産生され、抽出される（例えば、プロテインＡと接触される前に）。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、プロテインＡと接触される場合に、細胞培養培地または宿主細胞抽出物中にある。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、その他の結合タンパク質、ポリペプチドおよび／またはその他の細胞成分から離して精製される。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、本明細書において記載される三重特異性結合タンパク質のＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＬは、結合タンパク質１〜５３のＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＬ配列のいずれかを含み得る。
【０１９３】
核酸
結合タンパク質を形成するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを構築し、これらのポリヌクレオチドを組換え発現ベクター中に組み込み、このようなベクターを宿主細胞中に導入するために、標準組換えＤＮＡ方法が使用される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、２００１、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、第３版）を参照のこと。酵素反応および精製技術は、製造業者の仕様書に従って、当技術分野で通常達成されるように実施される。特別の定義が提供されない限り、本明細書において記載される解析化学、合成有機化学ならびに医学的および薬学的化学に関連して利用される命名法、その実験手順および技術は、周知のものであり当技術分野において通常使用される。同様に、従来技術は、化学的合成、化学的解析、医薬品製造、製剤化、送達および患者の治療のために使用される。
【０１９４】
本開示のその他の態様は、本明細書において記載される結合タンパク質のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子に関する。いくつかの実施形態では、単離された核酸は、結合タンパク質をコードする核酸配列の転写を指示するために異種プロモーターに作動可能に連結される。プロモーターは、核酸の転写を指示する核酸制御配列を指し得る。第１の核酸配列は、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的に関連して位置する場合に、第２の核酸配列に作動可能に連結される。例えば、プロモーターは、プロモーターが、コード配列の転写または発現に影響を及ぼす場合に、結合タンパク質のコード配列に作動可能に連結される。プロモーターの例として、それだけには限らないが、ウイルス（例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（アデノウイルス２など）、ウシパピローマウイルス、鳥類肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウウイルス、サルウイルス４０（ＳＶ４０）など）のゲノムから得られたプロモーター、異種真核細胞プロモーターから得られたプロモーター（例えば、アクチンプロモーター、免疫グロブリンプロモーター、熱ショックプロモーターからなど）、ＣＡＧ−プロモーター（Ｎｉｗａら、Ｇｅｎｅ  １０８（２）：１９３〜９頁、１９９１）、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、テトラサイクリン誘導プロモーター（Ｍａｓｕｉら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ３３：ｅ４３、２００５）、ｌａｃ系、ｔｒｐ系、ｔａｃ系、ｔｒｃ系、ファージλの主要オペレーターおよびプロモーター領域、３−ホスホグリセリン酸キナーゼのプロモーター、酵母酸性ホスファターゼのプロモーターおよび酵母α接合因子のプロモーターを挙げることができる。本開示の結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、構成プロモーター、誘導プロモーターまたは任意の本明細書において記載されるその他の適したプロモーターまたは当業者によって容易に認識されるその他の適したプロモーターの制御下にあり得る。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、単離された核酸は、ベクター中に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ベクターは、発現ベクターである。発現ベクターは、発現されるべきポリヌクレオチドに作動可能に連結された１つまたはそれ以上の調節配列を含み得る。用語「調節配列」は、プロモーター、エンハンサーおよびその他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含む。適したエンハンサーの例として、それだけには限らないが、哺乳動物遺伝子由来エンハンサー配列（例えば、グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−胎児タンパク質、インスリンなど）および真核細胞ウイルス由来のエンハンサー配列（例えば、複製起点の後期側のＳＶ４０エンハンサー（ｂｐ１００〜２７０）、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、アデノウイルスエンハンサーなど）を挙げることができる。適したベクターの例として、例えば、プラスミド、コスミド、エピソーム、トランスポゾンおよびウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、シンドビスウイルス、麻疹、ヘルペスウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノ随伴ウイルスベクターなど）を挙げることができる。発現ベクターは、例えば、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞および哺乳動物細胞などの宿主細胞をトランスフェクトするために使用できる。宿主において発現および複製可能な生物学的に機能的なウイルスおよびプラスミドＤＮＡベクターは、当技術分野で公知であり、対象の任意の細胞をトランスフェクトするために使用できる。
【０１９６】
本開示のその他の態様は、本明細書において記載される結合タンパク質のいずれかの第１、第２、第３および第４のポリペプチド鎖をコードする１つまたはそれ以上のベクターを含むベクター系に関する。いくつかの実施形態では、ベクター系は、結合タンパク質の第１のポリペプチド鎖をコードする第１のベクター、結合タンパク質の第２のポリペプチド鎖をコードする第２のベクター、結合タンパク質の第３のポリペプチド鎖をコードする第３のベクターおよび結合タンパク質の第４のポリペプチド鎖をコードする第４のベクターを含む。いくつかの実施形態では、ベクター系は、結合タンパク質の第１および第２のポリペプチド鎖をコードする第１のベクターならびに結合タンパク質の第３および第４のポリペプチド鎖をコードする第２のベクターを含む。いくつかの実施形態では、ベクター系は、結合タンパク質の第１および第３のポリペプチド鎖をコードする第１のベクターならびに結合タンパク質の第２および第４のポリペプチド鎖をコードする第２のベクターを含む。いくつかの実施形態では、ベクター系は、結合タンパク質の第１および第４のポリペプチド鎖をコードする第１のベクターならびに結合タンパク質の第２および第３のポリペプチド鎖をコードする第２のベクターを含む。いくつかの実施形態では、ベクター系は、結合タンパク質の第１、第２、第３および第４のポリペプチド鎖をコードする第１のベクターを含む。ベクター系の１つまたはそれ以上のベクターは、本明細書において記載されるベクターのいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、１つまたはそれ以上のベクターは、発現ベクターである。
【０１９７】
単離された宿主細胞
本開示のその他の態様は、本明細書において記載される単離されたポリヌクレオチド、ベクターおよび／またはベクター系のうち１つまたはそれ以上を含む単離された宿主細胞に関する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、細菌細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞）である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、酵母細胞（例えば、Ｓ．セレビシエ（ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）細胞）である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、昆虫細胞である。昆虫宿主細胞の例として、例えば、ショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）細胞（例えば、Ｓ２細胞）、イラクサギンウワバ（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉ）細胞（例えば、Ｈｉｇｈ  Ｆｉｖｅ（商標）細胞）およびヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞（例えば、Ｓｆ２１またはＳｆ９細胞）を挙げることができる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、哺乳動物細胞である。哺乳動物宿主細胞の例として、例えば、ヒト胎児由来腎臓細胞（例えば、懸濁培養での成長のためにサブクローニングされた２９３または２９３細胞）、Ｅｘｐｉ２９３ＴＭ細胞、ＣＨＯ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（例えば、ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １０）、マウスセルトリ細胞（例えば、ＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（例えば、ＣＶ１  ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（例えば、ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）、ヒト子宮頸癌細胞（例えば、ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）、イヌ腎臓細胞（例えば、ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）、バッファローラット肝臓細胞（例えば、ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １４４２）、ヒト肺細胞（例えば、Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）、ヒト肝臓細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）、マウス乳房腫瘍細胞（例えば、ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）、ＴＲＩ細胞、ＭＲＣ  ５細胞、ＦＳ４細胞、ヒト肝細胞腫系統（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２）および骨髄腫細胞（例えば、ＮＳ０およびＳｐ２／０細胞）を挙げることができる。
【０１９８】
本開示のその他の態様は、本明細書において記載された結合タンパク質のいずれかを産生する方法に関する。いくつかの実施形態では、方法は、ａ）宿主細胞が結合タンパク質を発現するような条件下で、単離された核酸、ベクターおよび／またはベクター系（例えば、本明細書において記載された単離された核酸、ベクターおよび／またはベクター系のいずれか）を含む宿主細胞（例えば、本明細書において記載される宿主細胞のいずれか）を培養する工程と；ｂ）宿主細胞から結合タンパク質を単離する工程とを含む。タンパク質を発現するための条件下で宿主細胞を培養する方法は、当業者に周知である。例えば、アフィニティークロマトグラフィー（例えば、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーと、それに続くサイズ排除クロマトグラフィーを含む、２工程アフィニティークロマトグラフィー）を含めて、培養宿主細胞からタンパク質を単離する方法は当業者に周知である。
【０１９９】
結合タンパク質の用途
結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の標的抗原の検出および定量化のための、競合結合アッセイ、直接および間接サンドイッチアッセイおよび免疫沈降アッセイなどの任意の公知のアッセイ方法において使用できる。結合タンパク質は、１つまたはそれ以上の標的抗原と、使用されているアッセイ方法にとって適当である親和性で結合する。
【０２００】
診断適用のために、特定の実施形態では、結合タンパク質を検出可能な部分を用いて標識できる。検出可能な部分は、検出可能なシグナルを直接的または間接的のいずれかで生成可能である任意のものであり得る。例えば、検出可能な部分は、3Ｈ、14Ｃ、32Ｐ、35Ｓ、125Ｉ、99Ｔｃ、111Ｉｎまたは67Ｇａなどの放射性同位元素；フルオレセインイソチオシアネート、ローダミンもしくはルシフェリンなどの蛍光もしくは化学発光化合物；またはアルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼもしくは西洋ワサビペルオキシダーゼなどの酵素であり得る。
【０２０１】
結合タンパク質はまた、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングにとって有用である。検出可能な部分を用いて標識された結合タンパク質を、動物に、好ましくは、血流中に投与することができ、宿主における標識された抗体の存在および位置がアッセイされる。結合タンパク質を、核磁気共鳴、放射線学または当技術分野で公知のその他の検出手段によってにかかわらず、動物において検出可能である任意の部分を用いて標識することができる。
【０２０２】
結合タンパク質はまた、癌、関節炎および／または炎症性障害を治療するための、細胞活性化、腫瘍標的化、サイトカイン活性の中和、ウイルス感染の中和、複数のシグナル伝達事象の組合せのために使用できる。例えば、いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、Ａ２ＡＲ、ＡＰＲＩＬ、ＡＴＰＤａｓｅ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＢｌｙＳ、ＢＴＫ、ＢＴＬＡ、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４（ＶＴＣＮ１としても知られる）、Ｂ７Ｈ５、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７Ｈ７、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７−４、Ｃ３、Ｃ５、ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１としても知られる）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−１ａとしても知られる）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１ｂとしても知られる）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳとしても知られる）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ−３としても知られる）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２としても知られる）、ＣＣＬ１１（エオタキシンとしても知られる）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−１ｄとしても知られる）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣとしても知られる）、ＣＣＬ１９（ＭＩＰ−３ｂとしても知られる）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａとしても知られる）、ＣＣＬ２１（ＭＩＰ−２としても知られる）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２としても知られる）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫとしても知られる）、ＣＣＬ２６（エオタキシン−３としても知られる）、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３（ＦＣＥＲ２としても知られる、ＩｇＥの受容体）、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０（Ｂ７−１としても知られる）、ＣＤ８６（Ｂ７−２としても知られる）、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７（４１ＢＢとしても知られる）、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４としても知られる）、ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌとしても知られる）、ＣＤ１６０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３（ＰＤＬ２としても知られる）、ＣＤ２７４（ＰＤＬ１としても知られる）、ＣＤ２７５（Ｂ７Ｈ２としても知られる）、ＣＤ２７６（Ｂ７Ｈ３としても知られる）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとしても知られる）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１としても知られる）、ＣＤＨ１（Ｅ−カドヘリンとしても知られる）、キチナーゼ、ＣＬＥＣ９、ＣＬＥＣ９１、ＣＲＴＨ２、ＣＳＦ−１（Ｍ−ＣＳＦとしても知られる）、ＣＳＦ−２（ＧＭ−ＣＳＦとしても知られる）、ＣＳＦ−３（ＧＣＳＦとしても知られる）、ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤ１としても知られる）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１としても知られる）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＤＮＧＲ−１、エクトヌクレオチド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＴＰＤ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ１、ＦＬＡＰ、ＦＯＬＨ１、Ｇｉ２４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｈｅｒ２、ＨＨＬＡ２、ＨＭＧＢ１、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳＬＧ、ＩＤＯ、ＩＦＮα、ＩｇＥ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒａ、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒａ、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ｒｈＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒａ１、ＩＬ１３Ｒａ２、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒｂ（ＩＬ２５の受容体としても知られる）、ＩＬ１８、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２５��ＩＬ２７、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリンとしても知られる）、ＩＴＫ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＬＡＭＰ１、レプチン、ＬＰＦＳ２、ＭＨＣクラスＩＩ、ＮＣＲ３ＬＧ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＴＰＤａｓｅ−１、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１Ｈ、血小板受容体、ＰＲＯＭ１、Ｓ１５２、ＳＩＳＰ１、ＳＬＣ、ＳＰＧ６４、ＳＴ２（ＩＬ３３の受容体としても知られる）、ＳＴＥＡＰ２、Ｓｙｋキナーゼ、ＴＡＣＩ、ＴＤＯ、Ｔ１４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＬＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ９、ＴＭＥＦ１、ＴＮＦａ、ＴＮＦＲＳＦ７、Ｔｐ５５、ＴＲＥＭ１、ＴＳＬＰ（ＩＬ７Ｒａの共受容体としても知られる）、ＴＳＬＰＲ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦ、ＶＩＳＴＡ、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭおよびＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１としても知られる）から選択される１つ、２つまたは３つの抗原標的と特異的に結合する。いくつかの実施形態では、上記の抗原標的のうち１つまたはそれ以上は、ヒト抗原標的である。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、癌の治療または予防のために、それを必要とする患者に投与される。例えば、いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、Ｔ細胞表面タンパク質と特異的に結合する１つの抗原結合部位および腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する別の抗原結合部位（例えば、Ｔ細胞表面タンパク質と特異的に結合する２つの抗原結合部位および腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する１つの抗原結合部位または腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する２つの抗原結合部位およびＴ細胞表面タンパク質と特異的に結合する１つの抗原結合部位）を含む。特定の実施形態では、結合タンパク質は、ＣＤ３と特異的に結合する抗原結合部位、ＣＤ２８と特異的に結合する抗原結合部位およびＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３８、Ｈｅｒ２およびＬＡＭＰ１から選択される腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、化学療法剤と同時投与される。いくつかの実施形態では、患者は、ヒトである。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、本開示の結合タンパク質は、炎症性疾患または障害の治療または予防のために、それを必要とする患者に投与される。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、各々、ＩＬ−４、ＩＬ−１３およびＴＮＦａから選択されるサイトカイン標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、抗炎症剤と同時投与される。いくつかの実施形態では、患者は、ヒトである。
【０２０５】
本開示はまた、結合タンパク質および生体サンプルにおける標的抗原レベルを検出するのに有用なその他の試薬を含むキットに関する。このような試薬は、検出可能な標識、ブロッキング血清、陽性および陰性対照サンプルおよび検出試薬を含み得る。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書において記載される、任意の結合タンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、ベクター系および／または宿主細胞を含む組成物を含む。いくつかの実施形態では、キットは、容器および容器上の、または容器に関連付けられたラベルまたは添付文書を含む。適した容器として、例えば、瓶、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグ等が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの種々の材料から形成される。容器は、それ自体でまたは別の組成物と組み合わされて、状態を治療、予防および／または診断するのに有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射ニードルによって穿刺可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであり得る）。いくつかの実施形態では、ラベルまたは添付文書は、選択した状態を予防、診断および／または治療するために組成物が使用されることを示す。あるいは、またはさらに、製造品またはキットは、静菌性注射水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル溶液およびデキストロース溶液などの薬学的に許容されるバッファーを含む第２の（または第３の）容器をさらに含み得る。その他のバッファー、希釈剤、フィルター、ニードルおよびシリンジを含む、商業的およびユーザー的観点から望まれるその他の材料をさらに含み得る。
【０２０６】
結合タンパク質治療用組成物およびその投与
結合タンパク質を含む治療用組成物または医薬組成物は、本開示の範囲内である。このような治療用組成物または医薬組成物は、治療有効量の結合タンパク質または結合タンパク質−薬物コンジュゲートを、投与様式との適合性について選択された薬学的にまたは予防学的に許容される製剤物質と組み合わせて含み得る。
【０２０７】
許容可能な製剤材料は、好ましくは、使用される投与量および濃度でレシピエントに対して非毒性である。
【０２０８】
医薬組成物は、例えば、組成物のｐＨ、浸透圧、粘度、透明性、色、等張性、匂い、無菌性、安定性、溶解または放出速度、吸着または浸透を修飾、維持または保存するための製剤材料を含有し得る。適した製剤材料として、それだけには限らないが、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジンなど）、抗菌剤、抗酸化物質（アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウムまたは亜硫酸水素ナトリウムなど）、バッファー（ホウ酸塩、重炭酸、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、クエン酸、リン酸またはその他の有機酸など）、嵩高剤（マンニトールまたはグリシンなど）、キレート化剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）、錯化剤（カフェイン、ポリビニルピロリドン、β−シクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンなど）、増量剤、単糖類、二糖類およびその他の炭化水素（グルコース、マンノースまたはデキストリンなど）、タンパク質（血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなど）、着色剤、矯味剤および希釈剤、乳化剤、親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）、低分子量ポリペプチド、塩形成性対イオン（ナトリウムなど）、保存料（塩化ベンズアルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸または過酸化水素など）、溶媒（グリセリン、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなど）、糖アルコール（マンニトールまたはソルビトールなど）、沈殿防止剤、界面活性剤または湿潤剤（プルロニック；ＰＥＧ；ソルビタンエステル；ポリソルベート２０またはポリソルベート８０などのポリソルベート；トリトン；トロメタミン；レシチン；コレステロールまたはチロキサパル（ｔｙｌｏｘａｐａｌ）など）、安定性増強剤（スクロースまたはソルビトールなど）、浸透圧増強剤（アルカリ金属ハロゲン化物−好ましくは、塩化ナトリウムまたはカリウム−またはマンニトールソルビトールなど）、送達ビヒクル、希釈剤、賦形剤および／または医薬アジュバント（例えば、いずれかの目的のために、参照によって本明細書に組み入れる、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ‘Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ（第１８版、Ａ．Ｒ．  Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ  １９９０）および同一物のその後の版を参照のこと）。
【０２０９】
最適医薬組成物は、例えば、意図される投与経路、送達形式および所望の投与量に応じて、熟練した技術者によって決定される。このような組成物は、結合タンパク質の物理的状態、安定性、ｉｎ  ｖｉｖｏ放出の速度およびｉｎ  ｖｉｖｏクリアランスの速度に影響を及ぼし得る。
【０２１０】
医薬組成物中の主なビヒクルまたは担体は、事実上、水性または非水性のいずれかであり得る。例えば、注射用の適したビヒクルまたは担体は、おそらくは、非経口投与用の組成物においてよく見られるその他の材料が補充された、水、生理食塩水または人工脳脊髄液であり得る。中性緩衝生理食塩水または血清アルブミンと混合した生理食塩水が、さらなる例示的ビヒクルである。その他の例示的医薬組成物として、ソルビトールまたは適した代用物をさらに含み得る、約ｐＨ７．０〜８．５のＴｒｉｓバッファーまたは約ｐＨ４．０〜５．５の酢酸バッファーを含む。本開示の一実施形態では、所望の程度の純度を有する選択された組成物を、凍結乾燥ケーキまたは水溶液の形態の任意選択の製剤物質と混合することによって、結合タンパク質組成物を貯蔵のために製造することができる。さらに、結合タンパク質は、スクロースなどの適当な賦形剤を使用して凍結乾燥物として製剤化され得る。
【０２１１】
本開示の医薬組成物は、非経口送達または皮下用に選択される。あるいは、組成物は、吸入用または経口的などの消化管を通る送達用に選択される。このような薬学的に許容される組成物の製造は、当業者の範囲内である。
【０２１２】
製剤成分は、投与部位にとって許容される濃度で存在する。例えば、バッファーは、組成物を生理学的ｐＨで、またはわずかに低いｐＨで、通常、約５〜約８のｐＨ範囲内で維持するために使用される。
【０２１３】
非経口投与が考慮される場合には、使用するための治療用組成物は、薬学的に許容されるビヒクル中に所望の結合タンパク質を含む、発熱物質不含の、非経口的に許容される水溶液の形態であり得る。非経口注射用の特に適したビヒクルは、滅菌蒸留水であり、その中で、結合タンパク質が、適宜保存される滅菌等張性溶液として製剤化される。さらに別の製造は、製品の徐放または持続放出を提供し、次いで、持効性注射液、徐放性注射液によって送達される、注射用ミクロスフェア、生体内分解性粒子、ポリマー化合物（ポリ乳酸またはポリグリコール酸など）、ビーズまたはリポソームなどの物質とともの、所望の分子の製剤化を含み得る。ヒアルロン酸も使用でき、これは、循環における持続期間を促進する効果を有する。所望の分子の導入のためのその他の適した手段として、埋め込み可能な薬物送達デバイスが挙げられる。
【０２１４】
一実施形態では、医薬組成物を、吸入用に製剤化できる。例えば、結合タンパク質を吸入用の乾燥散剤として製剤化できる。エアゾール送達用に噴射剤を用いて、結合タンパク質吸入溶液も製剤化できる。さらに別の実施形態では、溶液を噴霧できる。
【０２１５】
特定の製剤が経口投与されるということも考慮される。本開示の一実施形態では、この様式で投与される結合タンパク質を、錠剤およびカプセル剤などの固体投与形の配合において習慣的に使用される担体を用いて、または用いずに製剤化できる。例えば、カプセル剤は、バイオアベイラビリティが最大化され、前全身性（ｐｒｅ−ｓｙｓｔｅｍｉｃ）分解が最小化される場合に、胃腸管において製剤の有効成分を放出するように設計できる。結合タンパク質の吸収を促進するために、さらなる物質を含めることができる。希釈剤、矯味剤、低融点ワックス、植物油、滑沢剤、懸濁剤、錠剤崩壊剤および結合剤も使用できる。
【０２１６】
別の医薬組成物は、錠剤の製造に適している非毒性賦形剤との混合物中に有効量の結合タンパク質を含み得る。滅菌水または別の適当なビヒクル中に錠剤を溶解することによって、溶液を単位用量形態で製造できる。適した賦形剤として、それだけには限らないが、炭酸カルシウム、炭酸もしくは重炭酸ナトリウム、ラクトースまたはリン酸カルシウムなどの不活性希釈剤；またはデンプン、ゼラチンもしくはアラビアガムなどの結合剤；またはステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸もしくはタルクなどの滑沢剤が挙げられる。
【０２１７】
持続送達または制御送達製剤中に結合タンパク質を含む製剤を含む、本開示のさらなる医薬組成物は、当業者には明らかであろう。リポソーム担体、生体内分解性微粒子または多孔性ビーズおよび持効性注射液、徐放性注射液などの種々のその他の持続送達または制御送達手段を製剤化する技術も、当業者に公知である。持続放出製造物のさらなる例として、造形品の形態の半透性ポリマーマトリックス、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルが挙げられる。持続放出マトリックスとして、ポリエステル、ハイドロゲル、ポリラクチド、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、エチレン酢酸ビニルまたはポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸を挙げることができる。持続放出組成物として、当技術分野で公知のいくつかの方法のいずれかによって製造できるリポソームも挙げることができる。
【０２１８】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与のために使用されるべき医薬組成物は、通常、無菌でなくてはならない。これは、滅菌濾過膜を通す濾過によって達成される。組成物が凍結乾燥される場合には、凍結乾燥および再構成の前または後のいずれかで、この方法を使用する滅菌法を実施することができる。非経口投与用の組成物は、凍結乾燥形態で、または溶液で保存できる。さらに、非経口組成物は、一般に、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射ニードルによって穿刺可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアル中に入れられる。
【０２１９】
ひとたび、医薬組成物が製剤化されると、溶液、懸濁液、ゲル、エマルジョン、固体として、または脱水されたもしくは凍結乾燥された粉末として、それを滅菌バイアル中で保存できる。このような製剤は、すぐに使える形態で、または投与に先立って再構成を必要とする形態（例えば、凍結乾燥した）のいずれかで保存できる。
【０２２０】
本開示はまた、単回用量投与単位を生成するためのキットを包含する。キットは、各々、乾燥タンパク質を有する第１の容器および水性製剤を有する第２の容器の両方を含有し得る。また、単一または複数チャンバーの事前充填シリンジ（例えば、液体シリンジおよびリオシリンジ（ｌｙｏｓｙｒｉｎｇｅｓ））を含有するキットも、本開示の範囲内に含まれる。
【０２２１】
治療上使用されるべき結合タンパク質医薬組成物の有効量は、例えば、治療状況および目的に応じて変わる。当業者ならば、したがって、治療のための適当な投与量レベルは、幾分かは、送達される分子、結合タンパク質が使用されている適応症、投与経路ならびに患者の大きさ（体重、身体表面または臓器の大きさ）および状態（年齢および全身の健康）に応じて変わるということを理解するであろう。したがって、臨床医は、最適な治療効果を得るために、投与量を用量設定し、投与経路を修飾できる。
【０２２２】
投薬頻度は、使用されている製剤中の結合タンパク質の薬物動態パラメータに応じて変わる。通常、臨床医は、所望の効果を達成する投与量が達成されるまで組成物を投与する。したがって、組成物を、単一用量として、２またはそれ以上の用量（同量の所望の分子を含有する場合も含有しない場合もある）として経時的に、または埋め込みデバイスもしくはカテーテルによる連続注入として投与できる。適当な投与量のさらなる精緻化は、当業者によって日常的に行われ、彼らによって日常的に実施される課題の範囲内である。適当な投与量は、適当な用量反応データの使用によって確認することができる。
【０２２３】
医薬組成物の投与経路は、公知の方法を踏まえたものである、例えば、経口的に；静脈内、腹腔内、大脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼球内、動脈内、門脈内または病巣内経路による注射によって；持続放出系によって；または埋め込みデバイスによって。望ましい場合には、組成物をボーラス注射によって、または注入によって、もしくは埋め込みデバイスによって連続的に投与できる。
【０２２４】
組成物は、上に所望の分子が吸収されているもしくはカプセル化されている膜、スポンジまたはその他の適当な材料の埋め込みによって局所投与できる。埋め込みデバイスが使用される場合には、デバイスは、任意の適した組織または臓器中に埋め込むことができ、所望の分子の送達は、拡散、持効性ボーラスまたは連続投与によってであり得る。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、本開示は、増殖性疾患または障害（例えば、癌）を予防および／または治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者に、治療有効量の、少なくとも１種の本明細書において記載される結合タンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、患者はヒトである。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の結合タンパク質は、１種またはそれ以上の抗癌療法（例えば、当技術分野で公知の任意の抗癌療法）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の結合タンパク質は、１種またはそれ以上の抗癌療法の前に投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の結合タンパク質は、１種またはそれ以上の抗癌療法と同時に投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の結合タンパク質は、１種またはそれ以上の抗レトロウイルス療法後に投与される。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、本開示は、炎症性疾患または障害（例えば、癌）を予防および／または治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者に、治療有効量の、少なくとも１種の本明細書において記載される結合タンパク質を投与することを含む。いくつかの実施形態では、患者は、ヒトである。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の結合タンパク質は、１種またはそれ以上の抗炎症療法（例えば、当技術分野で公知の任意の抗炎症療法）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の結合タンパク質は、１種またはそれ以上の抗炎症療法の前に投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の結合タンパク質は、１種またはそれ以上の抗炎症療法と同時に投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の結合タンパク質は、１種またはそれ以上の抗炎症療法後に投与される。
【０２２７】
本開示を制限するものではないが、例示目的で本開示のいくつかの実施形態を以下に記載する。
【０２２８】
項目１：１種またはそれ以上の標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL2−Ｌ1−ＶL1−Ｌ2−ＣL                              ［Ｉ］
によって表される構造を含み、第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH1−Ｌ3−ＶH2−Ｌ4−ＣH1                            ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH3−ＣH1                                            ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL3−ＣL                                              ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶL1は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL2は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL3は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶH1は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH2は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH3は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣLは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣH1は、免疫グロブリンＣH1重鎖定常ドメインであり；
Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成する、結合タンパク質。
【０２２９】
項目２：１種またはそれ以上の標的タンパク質と特異的に結合する３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL2−Ｌ1−ＶL1−Ｌ2−ＣL                                ［Ｉ］
によって表される構造を含み、第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH1−Ｌ3−ＶH2−Ｌ4−ＣH1−ヒンジ−ＣH2−ＣH3          ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH3−ＣH1−ヒンジ−ＣH2−ＣH3                          ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL3−ＣL                                                ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶL1は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL2は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL3は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶH1は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH2は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH3は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣLは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣH1は、免疫グロブリンＣH1重鎖定常ドメインであり；
ＣH2は、免疫グロブリンＣH2重鎖定常ドメインであり；
ＣH3は、免疫グロブリンＣH3重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣH1およびＣH2ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成する、結合タンパク質。
【０２３０】
項目３：第２および／または第３のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結されたＦｃ領域をさらに含み、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、項目１の結合タンパク質。
【０２３１】
項目４：Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3またはＬ4のうち少なくとも１つは独立に、０個のアミノ酸長である、項目１〜３のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２３２】
項目５：Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3またはＬ4は各々独立に、少なくとも１個のアミノ酸長である、項目１〜３のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２３３】
項目６：（ａ）Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は各々独立に、０個のアミノ酸長であるか、もしくはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）からなる群から選択される配列を含み；または（ｂ）Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は各々独立に、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）からなる群から選択される配列を含む、項目１〜３および５のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２３４】
項目７：（ａ）Ｌ1は、配列ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）を含み、Ｌ2は、配列ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）を含み、Ｌ3は、配列Ｓを含み、Ｌ4は、配列ＲＴを含む；
（ｂ）Ｌ1は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）を含み、Ｌ2は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）を含み、Ｌ3は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ4は、０個のアミノ酸長である；
（ｃ）Ｌ1は、配列ＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）を含み、Ｌ2は、配列ＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）を含み、Ｌ3は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ4は、０個のアミノ酸長である；または
（ｄ）Ｌ1は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）を含み、Ｌ2は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ3は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）を含み、Ｌ4は、０個のアミノ酸長である、項目１〜５のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２３５】
項目８：三重特異性であり、３つの異なる抗原標的と特異的に結合することが可能である、項目１〜７のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２３６】
項目９：Ｔ細胞上の２つの標的タンパク質および１つの腫瘍標的タンパク質に対応する３つの標的タンパク質と特異的に結合する、項目１〜８のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２３７】
項目１０：前記Ｔ細胞上の標的タンパク質のうち１つは、ＣＤ３である、項目９の結合タンパク質。
【０２３８】
項目１１：前記Ｔ細胞上の標的タンパク質のうち１つは、ＣＤ２８である、項目９または項目１０の結合タンパク質。
【０２３９】
項目１２：前記腫瘍標的タンパク質は、ＣＤ３８である、項目９〜１１のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２４０】
項目１３：Ｔ細胞上の２つの標的タンパク質ならびにＡ２ＡＲ、ＡＰＲＩＬ、ＡＴＰＤａｓｅ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＢｌｙＳ、ＢＴＫ、ＢＴＬＡ、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４、Ｂ７Ｈ５、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７Ｈ７、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７−４、Ｃ３、Ｃ５、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７６、ＣＤ２７８、ＣＤ２７９、ＣＤＨ１、キチナーゼ、ＣＬＥＣ９、ＣＬＥＣ９１、ＣＲＴＨ２、ＣＳＦ−１、ＣＳＦ−２、ＣＳＦ−３、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＤＮＧＲ−１、エクトヌクレオチド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＴＰＤ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ１、ＦＬＡＰ、ＦＯＬＨ１、Ｇｉ２４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｈｅｒ２、ＨＨＬＡ２、ＨＭＧＢ１、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳＬＧ、ＩＤＯ、ＩＦＮα、ＩｇＥ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒａ、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒａ、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ｒｈＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒａ１、ＩＬ１３Ｒａ２、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒｂ、ＩＬ１８、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２５、ＩＬ２７、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＴＧＢ４、ＩＴＫ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＬＡＭＰ１、レプチン、ＬＰＦＳ２、ＭＨＣクラスＩＩ、ＮＣＲ３ＬＧ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＴＰＤａｓｅ−１、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１Ｈ、血小板受容体、ＰＲＯＭ１、Ｓ１５２、ＳＩＳＰ１、ＳＬＣ、ＳＰＧ６４、ＳＴ２、ＳＴＥＡＰ２、Ｓｙｋキナーゼ、ＴＡＣＩ、ＴＤＯ、Ｔ１４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＬＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ９、ＴＭＥＦ１、ＴＮＦａ、ＴＮＦＲＳＦ７、Ｔｐ５５、ＴＲＥＭ１、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦ、ＶＩＳＴＡ、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭ、およびＸＣＲ１からなる群から選択される１つの標的タンパク質に対応する３つの標的タンパク質と特異的に結合する、項目１〜８のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２４１】
項目１４：１種またはそれ以上の標的タンパク質の機能を阻害することが可能である、項目１〜１３のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２４２】
項目１５：１つまたはそれ以上の標的タンパク質は、Ａ２ＡＲ、ＡＰＲＩＬ、ＡＴＰＤａｓｅ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＢｌｙＳ、ＢＴＫ、ＢＴＬＡ、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４、Ｂ７Ｈ５、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７Ｈ７、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７−４、Ｃ３、Ｃ５、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７６、ＣＤ２７８、ＣＤ２７９、ＣＤＨ１、キチナーゼ、ＣＬＥＣ９、ＣＬＥＣ９１、ＣＲＴＨ２、ＣＳＦ−１、ＣＳＦ−２、ＣＳＦ−３、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＤＮＧＲ−１、エクトヌクレオチド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＴＰＤ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ１、ＦＬＡＰ、ＦＯＬＨ１、Ｇｉ２４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｈｅｒ２、ＨＨＬＡ２、ＨＭＧＢ１、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳＬＧ、ＩＤＯ、ＩＦＮα、ＩｇＥ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒａ、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒａ、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ｒｈＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒａ１、ＩＬ１３Ｒａ２、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒｂ、ＩＬ１８、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２５、ＩＬ２７、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＴＧＢ４、ＩＴＫ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＬＡＭＰ１、レプチン、ＬＰＦＳ２、ＭＨＣクラスＩＩ、ＮＣＲ３ＬＧ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＴＰＤａｓｅ−１、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１Ｈ、血小板受容体、ＰＲＯＭ１、Ｓ１５２、ＳＩＳＰ１、ＳＬＣ、ＳＰＧ６４、ＳＴ２、ＳＴＥＡＰ２、Ｓｙｋキナーゼ、ＴＡＣＩ、ＴＤＯ、Ｔ１４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＬＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ９、ＴＭＥＦ１、ＴＮＦａ、ＴＮＦＲＳＦ７、Ｔｐ５５、ＴＲＥＭ１、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦ、ＶＩＳＴＡ、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭ、およびＸＣＲ１からなる群から選択される、項目１４の結合タンパク質。
【０２４３】
項目１６：３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL2−Ｌ1−ＶL1−Ｌ2−ＣL                        ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH1−Ｌ3−ＶH2−Ｌ4−ＣH1                        ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH3−ＣH1                                      ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL3−ＣL                                        ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶL1は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL2は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL3は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶH1は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH2は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH3は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣLは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣH1は、免疫グロブリンＣH1重鎖定常ドメインであり；
Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成し；
（ａ）ＶL1、ＶL2およびＶL3は各々独立に、配列番号１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５および１６７のうちいずれか１つに示される可変ドメインを含み；または
（ｂ）ＶL1、ＶL2およびＶL3は各々独立に、配列番号４３〜５９、１２３〜１２５、１３８〜１４０および１４９のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含み；
（ａ）ＶH1、ＶH2およびＶH3は各々独立に、配列番号１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４および１６６のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；または
（ｂ）ＶH1、ＶH2およびＶH3は各々独立に、配列番号２５〜４２、１２０〜１２２および１２６〜１２８のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含む、結合タンパク質。
【０２４４】
項目１７：３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL2−Ｌ1−ＶL1−Ｌ2−ＣL                            ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH1−Ｌ3−ＶH2−Ｌ4−ＣH1−ヒンジ−ＣH2−ＣH3      ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH3−ＣH1−ヒンジ−ＣH2−ＣH3                      ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL3−ＣL                                            ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶL1は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL2は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL3は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶH1は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH2は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH3は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣLは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣH1は、免疫グロブリンＣH1重鎖定常ドメインであり；
ＣH2は、免疫グロブリンＣH2重鎖定常ドメインであり；
ＣH3は、免疫グロブリンＣH3重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣH1およびＣH2ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成し；
（ａ）ＶL1、ＶL2およびＶL3は各々独立に、配列番号１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５および１６７のうちいずれか１つに示される可変ドメインを含み；または
（ｂ）ＶL1、ＶL2およびＶL3は各々独立に、配列番号４３〜５９、１２３〜１２５、１３８〜１４０および１４９のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含み；
（ａ）ＶH1、ＶH2およびＶH3は各々独立に、配列番号１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４および１６６のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；または
（ｂ）ＶH1、ＶH2およびＶH3は各々独立に、配列番号２５〜４２、１２０〜１２２および１２６〜１２８のうちいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含む、結合タンパク質。
【０２４５】
項目１８：第２および／または第３のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結されたＦｃ領域をさらに含み、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、項目１６の結合タンパク質。
【０２４６】
項目１９：Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3またはＬ4のうち少なくとも１つは独立に、０個のアミノ酸長である、項目１６〜１８のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２４７】
項目２０：Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3またはＬ4は各々独立に、少なくとも１個のアミノ酸長である、項目１６〜１８のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２４８】
項目２１：（ａ）Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は各々独立に、０個のアミノ酸長であるか、もしくはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）からなる群から選択される配列を含み；または（ｂ）Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は各々独立に、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）からなる群から選択される配列を含む、項目１６〜１８および２０のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２４９】
項目２２：（ａ）Ｌ1は、配列ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）を含み、Ｌ2は、配列ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）を含み、Ｌ3は、配列Ｓを含み、Ｌ4は、配列ＲＴを含む；
（ｂ）Ｌ1は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）を含み、Ｌ2は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）を含み、Ｌ3は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ4は、０個のアミノ酸長である；
（ｃ）Ｌ1は、配列ＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）を含み、Ｌ2は、配列ＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）を含み、Ｌ3は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ4は、０個のアミノ酸長である；または
（ｄ）Ｌ1は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）を含み、Ｌ2は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ3は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）を含み、Ｌ4は、０個のアミノ酸長である、項目１６〜２０のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２５０】
項目２３：（ａ）ＶH1は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｂ）ＶH1は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｃ）ＶH1は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｄ）ＶH1は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｅ）ＶH1は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｆ）ＶH1は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｇ）ＶH1は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｈ）ＶH1は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｉ）ＶH1は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；または
（ｊ）ＶH1は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、項目１６〜２２のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２５１】
項目２４：３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL2−Ｌ1−ＶL1−Ｌ2−ＣL                            ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH1−Ｌ3−ＶH2−Ｌ4−ＣH1                          ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH3−ＣH1                                          ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL3−ＣL                                            ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶL1は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL2は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL3は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶH1は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH2は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH3は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣLは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣH1は、免疫グロブリンＣH1重鎖定常ドメインであり；
Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成し；
（ａ）ＶL1、ＶL2およびＶL3は各々独立に、配列番号１６９、１７１および１７３のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；または
（ｂ）ＶL1、ＶL2およびＶL3は各々独立に、配列番号１４１〜１４７、１７８および１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含み；
（ａ）ＶH1、ＶH2およびＶH3は各々独立に、配列番号１６８、１７０および１７２のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；または
（ｂ）ＶH1、ＶH2およびＶH3は各々独立に、配列番号１２９〜１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含む、結合タンパク質。
【０２５２】
項目２５：３つの抗原結合部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL2−Ｌ1−ＶL1−Ｌ2−ＣL                            ［Ｉ］
によって表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH1−Ｌ3−ＶH2−Ｌ4−ＣH1−ヒンジ−ＣH2−ＣH3        ［ＩＩ］
によって表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、次式：
ＶH3−ＣH1−ヒンジ−ＣH2−ＣH3                        ［ＩＩＩ］
によって表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、次式：
ＶL3−ＣL                                              ［ＩＶ］
によって表される構造を含み、
ＶL1は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL2は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL3は、第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶH1は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH2は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH3は、第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣLは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣH1は、免疫グロブリンＣH1重鎖定常ドメインであり；
ＣH2は、免疫グロブリンＣH2重鎖定常ドメインであり；
ＣH3は、免疫グロブリンＣH3重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣH1およびＣH2ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は、アミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖−重鎖対を形成し；
（ａ）ＶL1、ＶL2およびＶL3は各々独立に、配列番号１６９、１７１および１７３のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；または
（ｂ）ＶL1、ＶL2およびＶL3は各々独立に、配列番号１４１〜１４７、１７８および１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含み；
（ａ）ＶH1、ＶH2およびＶH3は各々独立に、配列番号１６８、１７０および１７２のうちいずれか１つに示される可変ドメイン配列を含み；または
（ｂ）ＶH1、ＶH2およびＶH3は各々独立に、配列番号１２９〜１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含む、結合タンパク質。
【０２５３】
項目２６：第２および／または第３のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結されたＦｃ領域をさらに含み、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、項目２４の結合タンパク質。
【０２５４】
項目２７：Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4のうち少なくとも１つは独立に、０個のアミノ酸長である、項目２４〜２６のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２５５】
項目２８：Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は各々独立に、少なくとも１個のアミノ酸長である、項目２４〜２６のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２５６】
項目２９：（ａ）Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は各々独立に、０個のアミノ酸長であるか、もしくはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）からなる群から選択される配列を含み；または（ｂ）Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3およびＬ4は各々独立に、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）からなる群から選択される配列を含む、項目２４〜２６および２８のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２５７】
項目３０：（ａ）Ｌ1は、配列ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号１７５）を含み、Ｌ2は、配列ＴＫＧＰＳ（配列番号１０６）を含み、Ｌ3は、配列Ｓを含み、Ｌ4は、配列ＲＴを含む；
（ｂ）Ｌ1は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）を含み、Ｌ2は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）を含み、Ｌ3は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ4は、０個のアミノ酸長である；
（ｃ）Ｌ1は、配列ＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）を含み、Ｌ2は、配列ＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号１４８）を含み、Ｌ3は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ4は、０個のアミノ酸長である；または
（ｄ）Ｌ1は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）を含み、Ｌ2は、０個のアミノ酸長であり、Ｌ3は、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）を含み、Ｌ4は、０個のアミノ酸長である、項目２４〜２８のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２５８】
項目３１：（ａ）ＶH1は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｂ）ＶH1は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６の
アミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｃ）ＶH1は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｄ）ＶH1は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｅ）ＶH1は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｆ）ＶH1は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｇ）ＶH1は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｈ）ＶH1は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；
（ｉ）ＶH1は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む；または
（ｊ）ＶH1は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL1は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH2は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL2は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ＶH3は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；ＶL3は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、項目２４〜３０のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２５９】
項目３２：第２のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＳ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり、第３のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８および４０７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖである、項目１、３〜１６、１８〜２４および２６〜３１のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２６０】
項目３３：第２のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８および４０７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖであり、第３のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、ここで、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである、項目１、３〜１６、１８〜２４および２６〜３１のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２６１】
項目３４：第２のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第３のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第１および第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４２８および４３４に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＭ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである、項目１、３〜１６、１８〜２４および２６〜３３のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２６２】
項目３５：第２のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８および４０７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖである、項目２、４〜１５、１７、１９〜２３、２５および２７〜３１のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２６３】
項目３６：第２のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３４９、３６６、３６８および４０７に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである、項目２、４〜１５、１７、１９〜２３、２５および２７〜３１のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２６４】
項目３７：第２および第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは両方とも、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４２８および４３４にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓである、項目２、４〜１５、１７、１９〜２３、２５、２７〜３１、３５および３６のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２６５】
項目３８：第２のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第３のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第１および第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域であり；第１および第２のＦｃ領域のうち一方のみは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＨ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆである、項目１、３〜１６、１８〜２４および２６〜３４のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２６６】
項目３９：第２および第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４  ＣH3ドメインであり、ＣH3ドメインの一方のみは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＨ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆである、項目２、４〜１５、１７、１９〜２３、２５、２７〜３１および３５〜３７のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２６７】
項目４０：第２のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第３のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第１および第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域であり；第１および第２のＦｃ領域は各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２２８および４０９に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＳ２２８ＰおよびＲ４０９Ｋである、項目１、３〜１６、１８〜２４、２６〜３４および３８のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２６８】
項目４１：第２および第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ヒトＩｇＧ４  ＣH3ドメインであり、ＣH3ドメインは各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２２８および４０９に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＳ２２８ＰおよびＲ４０９Ｋである、項目２、４〜１５、１７、１９〜２３、２５、２７〜３１、３５〜３７および３９のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２６９】
項目４２：第２のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第３のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第１および第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域であり；第１および第２のＦｃ領域は各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２３４および２３５に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＦ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである、項目１、３〜１６、１８〜２４、２６〜３４、３８および４０のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２７０】
項目４３：第２および第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ヒトＩｇＧ４  ＣH3ドメインであり、ＣH3ドメインは各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２３４および２３５に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＦ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである、項目２、４〜１５、１７、１９〜２３、２５、２７〜３１、３５〜３７、３９および４１のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２７１】
項目４４：第２のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第３のポリペプチド鎖は、ＣH1に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域ならびにＣH2およびＣH3免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第１および第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域であり；第１および第２のＦｃ領域は各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２３４および２３５に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである、項目１、３〜１６、１８〜２４、２６〜３４、３８および４０のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２７２】
項目４５：第２および第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ヒトＩｇＧ１  ＣH3ドメインであり、ＣH3ドメインは各々、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ４の位置２３４および２３５に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである、項目２、４〜１５、１７、１９〜２３、２５、２７〜３１、３５〜３７、３９および４１のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２７３】
項目４６：ＶH1およびＶL1は、ヒトＣＤ３と特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶH2およびＶL2は、ヒトＣＤ２８と特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶH3およびＶL3は、ヒト腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する、項目２、４〜１５、１７、１９〜２３、２５、２７〜３１、３５〜３７、３９，４１，４３および４５のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２７４】
項目４７：ＶH1およびＶL1は、ヒトＣＤ２８と特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶH2およびＶL2は、ヒトＣＤ３と特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶH3およびＶL3は、ヒト腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する、項目２、４〜１５、１７、１９〜２３、２５、２７〜３１、３５〜３７、３９，４１，４３および４５のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２７５】
項目４８：第３の抗原結合部位は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３８、Ｈｅｒ２およびＬＡＭＰ１からなる群から選択されるヒト腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する、項目４６または項目４７の結合タンパク質。
【０２７６】
項目４９：ＣＤ３と特異的に結合する抗原結合部位は、
（ａ）配列番号１５２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；または
（ｂ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、項目４６〜４８のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２７７】
項目５０：ＣＤ２８と特異的に結合する抗原結合部位は、
（ａ）配列番号１６０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；または
（ｂ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、項目４６〜４９のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２７８】
項目５１：腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する抗原結合部位は：
（ａ）配列番号１５６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｂ）配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｃ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｄ）配列番号１５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；または
（ｅ）配列番号１６６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、項目４６〜５０のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２７９】
項目５２：（ａ）ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒトＩＬ４と特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する；
（ｂ）ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＩＬ４と特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する；
（ｃ）ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＩＬ４と特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する；
（ｄ）ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＩＬ４と特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する；
（ｅ）ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＩＬ４と特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する；または
（ｆ）ＶＨ１およびＶＬ１は、ヒトＩＬ１３と特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ヒトＴＮＦａと特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、ヒトＩＬ４と特異的に結合する第３の抗原結合部位を形成する、項目２、１７、３５〜３７、３９、４１、４３および４５のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２８０】
項目５３：ヒトＴＮＦａと特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号１６８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、項目５２の結合タンパク質。
【０２８１】
項目５４：ヒトＩＬ４と特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号１７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１７１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、項目５２または項目５３の結合タンパク質。
【０２８２】
項目５５：ヒトＩＬ１３と特異的に結合する抗原結合部位は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、項目５２〜５４のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２８３】
項目５６：（ａ）第１のポリペプチド鎖のＣLドメインは、ヒトκＣLドメインであり、第４のポリペプチド鎖のＣLドメインは、ヒトλＣLドメインである；または
（ｂ）第１のポリペプチド鎖のＣLドメインは、ヒトλＣLドメインであり、第４のポリペプチド鎖のＣLドメインは、ヒトκＣLドメインである、
項目１〜５５のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２８４】
項目５７：第１のポリペプチド鎖は、λＣLドメインを含み；第２のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＳ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置３４９、３６６、３６８、４０７、４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆであり；第４のポリペプチド鎖は、κＣLドメインを含む、項目２、１７、２５、３５〜３７、３９、４１および４３〜５５のうちいずれか１つの結合タンパク質。
【０２８５】
項目５８：第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖、第３のポリペプチド鎖および第４のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であって、
（ａ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列もしくは配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列もしくは配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１のアミノ酸配列もしくは配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２のアミノ酸配列もしくは配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｂ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列もしくは配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列もしくは配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１のアミノ酸配列もしくは配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２のアミノ酸配列もしくは配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｃ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列もしくは配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列もしくは配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列もしくは配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４のアミノ酸配列もしくは配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｄ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列もしくは配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列もしくは配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列もしくは配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４のアミノ酸配列もしくは配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｅ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列もしくは配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列もしくは配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７のアミノ酸配列もしくは配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１８のアミノ酸配列もしくは配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｆ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列もしくは配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列もしくは配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７のアミノ酸配列もしくは配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１８のアミノ酸配列もしくは配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｇ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列もしくは配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列もしくは配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号２１のアミノ酸配列もしくは配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２２のアミノ酸配列もしくは配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｈ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列もしくは配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列もしくは配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号２１のアミノ酸配列もしくは配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２２のアミノ酸配列もしくは配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６３のアミノ酸配列もしくは配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列もしくは配列番号６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列もしくは配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列もしくは配列番号６１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｊ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列もしくは配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列もしくは配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号６０
のアミノ酸配列もしくは配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列もしくは配列番号６１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｋ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列もしくは配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列もしくは配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列もしくは配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７１のアミノ酸配列もしくは配列番号７１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｌ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号７６のアミノ酸配列もしくは配列番号７６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号７５のアミノ酸配列もしくは配列番号７５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列もしくは配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７４のアミノ酸配列もしくは配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｍ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号８２のアミノ酸配列もしくは配列番号８２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号８１のアミノ酸配列もしくは配列番号８１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列もしくは配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７４のアミノ酸配列もしくは配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｎ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号８８のアミノ酸配列もしくは配列番号８８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号８７のアミノ酸配列もしくは配列番号８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列もしくは配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号８６のアミノ酸配列もしくは配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｏ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号９４のアミノ酸配列もしくは配列番号９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９３のアミノ酸配列もしくは配列番号９３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列もしくは配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号８６のアミノ酸配列もしくは配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｐ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列もしくは配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列もしくは配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列もしくは配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７４のアミノ酸配列もしくは配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｑ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列もしくは配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列もしくは配列番号６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列もしくは配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であ
るアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号８６のアミノ酸配列もしくは配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｒ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６３のアミノ酸配列もしくは配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列もしくは配列番号６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列もしくは配列番号７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号７４のアミノ酸配列もしくは配列番号７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｓ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６３のアミノ酸配列もしくは配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号６２のアミノ酸配列もしくは配列番号６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列もしくは配列番号８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号８６のアミノ酸配列もしくは配列番号８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；
（ｔ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４のアミノ酸配列もしくは配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号３のアミノ酸配列もしくは配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列もしくは配列番号１１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１５のアミノ酸配列もしくは配列番号１１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む；または
（ｕ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列もしくは配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列もしくは配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列もしくは配列番号１１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１５のアミノ酸配列もしくは配列番号１１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、結合タンパク質。
【０２８６】
項目５９：項目１〜５８のうちいずれか１つの結合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
【０２８７】
項目６０：項目５９の核酸分子を含む発現ベクター。
【０２８８】
項目６１：項目５９の核酸分子を含む、単離された宿主細胞。
【０２８９】
項目６２：項目６０の発現ベクターを含む、単離された宿主細胞。
【０２９０】
項目６３：哺乳動物細胞または昆虫細胞である、項目６１または項目６２の単離された宿主細胞。
【０２９１】
項目６４：項目１〜５８のうちいずれか１つの結合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【０２９２】
項目６５：患者において癌を予防および／または治療する方法であって、患者に、治療有効量の、項目１〜２３および３２〜５８のうちいずれか１つの少なくとも１種の結合タンパク質または項目６４の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【０２９３】
項目６６：結合タンパク質は、Ｔ細胞表面タンパク質と特異的に結合する１つの抗原結合部位および腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する別の抗原結合部位を含む、項目６５の方法。
【０２９４】
項目６７：結合タンパク質は、ＣＤ３と特異的に結合する第１の抗原結合部位、ＣＤ２８と特異的に結合する第２の抗原結合部位ならびにＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３８、Ｈｅｒ２およびＬＡＭＰ１からなる群から選択される腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する第３の抗原結合部位を含む、項目６６の方法。
【０２９５】
項目６８：少なくとも１種の結合タンパク質は、化学療法剤と同時投与される、項目６５〜６７のうちいずれか１つの方法。
【０２９６】
項目６９：患者において炎症性疾患または障害を予防および／または治療する方法であって、患者に、治療有効量の、項目１〜１５、２４〜４５および５２〜５８のうちいずれか１つの少なくとも１種の結合タンパク質または項目６４の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【０２９７】
項目７０：結合タンパク質は、ＩＬ−４、ＩＬ−１３およびＴＮＦａからなる群から選択されるサイトカイン標的タンパク質と各々特異的に結合する３つの抗原結合部位を含む、項目６９の方法。
【０２９８】
項目７１：少なくとも１種の結合タンパク質は、抗炎症剤と同時投与される、項目６９または項目７０の方法。
【０２９９】
項目７２：患者は、ヒトである、項目６５〜７１のうちいずれか１つの方法。
【０３００】
項目７３：結合タンパク質は、Ａ２ＡＲ、ＡＰＲＩＬ、ＡＴＰＤａｓｅ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＢｌｙＳ、ＢＴＫ、ＢＴＬＡ、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４、Ｂ７Ｈ５、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７Ｈ７、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７−４、Ｃ３、Ｃ５、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７６、ＣＤ２７８、ＣＤ２７９、ＣＤＨ１、キチナーゼ、ＣＬＥＣ９、ＣＬＥＣ９１、ＣＲＴＨ２、ＣＳＦ−１、ＣＳＦ−２、ＣＳＦ−３、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＤＮＧＲ−１、エクトヌクレオチド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＴＰＤ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ１、ＦＬＡＰ、Ｇｉ２４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｈｅｒ２、ＨＨＬＡ２、ＨＭＧＢ１、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳＬＧ、ＩＤＯ、ＩＦＮα、ＩｇＥ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒａ、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒａ、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ｒｈＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒａ１、ＩＬ１３Ｒａ２、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒｂ、ＩＬ１８、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２５、ＩＬ２７、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＴＧＢ４、ＩＴＫ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＬＡＭＰ１、レプチン、ＬＰＦＳ２、ＭＨＣクラスＩＩ、ＮＣＲ３ＬＧ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＴＰＤａｓｅ−１、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１Ｈ、血小板受容体、Ｓ１５２、ＳＩＳＰ１、ＳＬＣ、ＳＰＧ６４、ＳＴ２、Ｓｙｋキナーゼ、ＴＡＣＩ、ＴＤＯ、Ｔ１４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＬＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ９、ＴＮＦａ、ＴＮＦＲＳＦ７、Ｔｐ５５、ＴＲＥＭ１、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦ、ＶＩＳＴＡ、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭ、およびＸＣＲ１からなる群から選択される１種またはそれ以上の標的タンパク質の機能を阻害することが可能である、項目６５または項目６９の方法。
【０３０１】
項目７４：患者において癌を予防および／または治療する際の使用のための、項目１〜２３および３２〜５８のうちいずれか１つの結合タンパク質または項目６４の組成物。
【０３０２】
項目７５：結合タンパク質は、Ｔ細胞表面タンパク質と特異的に結合する１つの抗原結合部位および腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する別の抗原結合部位を含む、項目７４の使用のための結合タンパク質または使用のための組成物。
【０３０３】
項目７６：結合タンパク質は、ＣＤ３と特異的に結合する第１の抗原結合部位、ＣＤ２８と特異的に結合する第２の抗原結合部位ならびにＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３８、Ｈｅｒ２およびＬＡＭＰ１からなる群から選択される腫瘍標的タンパク質と特異的に結合する第３の抗原結合部位を含む、項目７５の使用のための結合タンパク質または使用のための組成物。
【０３０４】
項目７７：結合タンパク質は、化学療法剤と同時投与される、項目７４〜７６のうちいずれか１つの使用のための結合タンパク質または使用のための組成物。
【０３０５】
項目７８：患者において炎症性疾患または障害を予防および／または治療する際の使用のための、項目１〜１５、２４〜４５および５２〜５８のうちいずれか１つの結合タンパク質または項目６４の医薬組成物。
【０３０６】
項目７９：結合タンパク質は、ＩＬ−４、ＩＬ−１３およびＴＮＦａからなる群から選択されるサイトカイン標的タンパク質と各々特異的に結合する３つの抗原結合部位を含む、項目７８の使用のための結合タンパク質または使用のための組成物。
【０３０７】
項目８０：結合タンパク質は、抗炎症剤と同時投与される、項目７８または項目７９の使用のための結合タンパク質または使用のための組成物。
【０３０８】
項目８１：患者は、ヒトである、項目７４〜８０のうちいずれか１つの使用のための結合タンパク質または使用のための組成物。
【０３０９】
項目８２：結合タンパク質は、Ａ２ＡＲ、ＡＰＲＩＬ、ＡＴＰＤａｓｅ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＢｌｙＳ、ＢＴＫ、ＢＴＬＡ、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４、Ｂ７Ｈ５、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７Ｈ７、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７−４、Ｃ３、Ｃ５、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７６、ＣＤ２７８、ＣＤ２７９、ＣＤＨ１、キチナーゼ、ＣＬＥＣ９、ＣＬＥＣ９１、ＣＲＴＨ２、ＣＳＦ−１、ＣＳＦ−２、ＣＳＦ−３、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＤＮＧＲ−１、エクトヌクレオチド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＴＰＤ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ１、ＦＬＡＰ、ＦＯＬＨ１、Ｇｉ２４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｈｅｒ２、ＨＨＬＡ２、ＨＭＧＢ１、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳＬＧ、ＩＤＯ、ＩＦＮα、ＩｇＥ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒａ、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒａ、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ｒｈＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒａ１、ＩＬ１３Ｒａ２、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒｂ、ＩＬ１８、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２５、ＩＬ２７、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＴＧＢ４、ＩＴＫ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＬＡＭＰ１、レプチン、ＬＰＦＳ２、ＭＨＣクラスＩＩ、ＮＣＲ３ＬＧ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＴＰＤａｓｅ−１、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ−１Ｈ、血小板受容体、ＰＲＯＭ１、Ｓ１５２、ＳＩＳＰ１、ＳＬＣ、ＳＰＧ６４、ＳＴ２、ＳＴＥＡＰ２、Ｓｙｋキナーゼ、ＴＡＣＩ、ＴＤＯ、Ｔ１４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＬＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ９、ＴＭＥＦ１、ＴＮＦａ、ＴＮＦＲＳＦ７、Ｔｐ５５、ＴＲＥＭ１、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦ、ＶＩＳＴＡ、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭ、およびＸＣＲ１からなる群から選択される１種またはそれ以上の標的タンパク質の機能を阻害することが可能である、項目７４または項目７８の使用のための結合タンパク質または使用のための組成物。
【０３１０】
項目８３：宿主細胞によって産生された結合タンパク質を精製する方法であって、
（ａ）宿主細胞において項目２、１７、２５、３５〜３７、４１、４３、４５および４６〜５５のうちいずれか１つの結合タンパク質を産生する工程であって、第２のポリペプチド鎖のＣH3ドメインおよび第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメインのうち一方のみが、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の位置４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換がＨ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆである、工程と；
（ｂ）（ａ）で産生された結合タンパク質を、プロテインＡと接触させる工程と；
（ｃ）Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆであるアミノ酸置換を含む０または２つのＣH3ドメインを含む結合タンパク質から離して結合タンパク質を単離するのに適した条件下で結合タンパク質をプロテインＡから溶出させ、それによって、結合タンパク質を精製する工程と
を含む、方法。
【０３１１】
項目８４：第１のポリペプチド鎖のＣLドメインは、ヒトκＣLドメインであり、第４のポリペプチド鎖のＣLドメインは、ヒトλＣLドメインである；または第１のポリペプチド鎖のＣLドメインは、ヒトλＣLドメインであり、第４のポリペプチド鎖のＣLドメインは、ヒトκＣLドメインであり：
（ｄ）（ｃ）で溶出された結合タンパク質を、κ軽鎖親和性媒体と接触させる工程と；
（ｅ）λＣLドメインのみを含む結合タンパク質から離して結合タンパク質を単離するのに適した条件下で、結合タンパク質をκ軽鎖親和性媒体から溶出させる工程と
をさらに含む、項目８３の方法。
【０３１２】
項目８５：（ｅ）の後：
（ｆ）（ｅ）で溶出された結合タンパク質を、λ軽鎖親和性媒体と接触させる工程と；
（ｇ）κＣLドメインのみを含む結合タンパク質から離して結合タンパク質を単離するのに適した条件下で、結合タンパク質をλ軽鎖親和性媒体から溶出させる工程と
をさらに含む、項目８４の方法。
【０３１３】
項目８６：第１のポリペプチド鎖のＣLドメインは、ヒトκＣLドメインであり、第４のポリペプチド鎖のＣLドメインは、ヒトλＣLドメインである；または第１のポリペプチド鎖のＣLドメインは、ヒトλＣLドメインであり、第４のポリペプチド鎖のＣLドメインは、ヒトκＣLドメインであり：
（ｄ）（ｃ）で溶出された結合タンパク質を、λ軽鎖親和性媒体と接触させる工程と；
（ｅ）κＣLドメインのみを含む結合タンパク質から離して結合タンパク質を単離するのに適した条件下で、結合タンパク質をλ軽鎖親和性媒体から溶出させる工程と
をさらに含む、項目８３の方法。
【０３１４】
項目８７：（ｅ）の後：
（ｆ）（ｅ）で溶出された結合タンパク質を、κ軽鎖親和性媒体と接触させる工程と；
（ｇ）λＣLドメインのみを含む結合タンパク質から離して結合タンパク質を単離するのに適した条件下で、結合タンパク質をκ軽鎖親和性媒体から溶出させる工程と
をさらに含む、項目８６の方法。
【０３１５】
項目８８：第１のポリペプチド鎖は、λＣLドメインを含み；第２のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置３５４および３６６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＳ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ＥＵインデックスに従うヒトＩｇＧ１の位置３４９、３６６、３６８、４０７、４３５および４３６に対応する位置にアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆであり；第４のポリペプチド鎖は、κＣLドメインを含む、項目８３〜８７のうちいずれか１つの方法。
【０３１６】
項目８９：結合タンパク質は、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を使用して（ｃ）および（ｅ）のうち一方またはそれ以上において検出される、項目８３〜８８のうちいずれか１つの方法。
【０３１７】
項目９０：第２および第３のポリペプチド鎖のＣH3ドメインは、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４  ＣH3ドメインである、項目８３〜８９のうちいずれか１つの方法。
【実施例】
【０３１８】
以下の実施例は、本開示の特定の実施形態の例示およびその種々の使用である。それらは、単に説明目的で示されるのであって、決して、本発明の範囲を制限すると解釈されてはならない。
【実施例１】
【０３１９】
材料および方法
以下の材料および方法を、実施例２〜５に記載される実験に使用した。
三重特異性抗体設計
一般的な三重特異性抗体設計の略図が、図１Ａ〜１Ｃに例示されている。個々の三重特異性抗体は、５つのパラメータに基づいて設計した：１）抗体結合部位の選択；２）各結合部位の位置の考慮；３）二重特異性結合アームのためのリンカーの選択（すなわち、図１Ｃ中の重鎖／軽鎖Ｂ）；４）抗体のそれぞれの半分への「ノブ」および「ホール」突然変異組み込み；５）Ｆｃアイソタイプの選択（ＩｇＧ１またはＩｇＧ４）。各三重特異性分子のアミノ酸配列のアセンブリー後に、ヒトが好むコドンを使用して各三重特異性Ａｂの４つの遺伝子を合成し（ＣａｍｂｒＹ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、米国、マサチューセッツ州、ケンブリッジ）、真核細胞発現ベクター中にクローニングした。
【０３２０】
三重特異性抗体の製造および精製
三重特異性抗体は、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクションキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、製造業者のプロトコールに従って使用する、Ｅｘｐｉ２９３細胞への４つの発現プラスミドの一時的トランスフェクションによって製造した。手短には、各プラスミドの２５％（ｗ／ｗ）をＯｐｔｉ−ＭＥＭに希釈し、予め希釈したＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ試薬と室温（ＲＴ）で２０〜３０分間混合し、Ｅｘｐｉ２９３細胞（２．５ｘ１０6個細胞／ｍｌ）中に添加した。プラスミドの最良割合を調べるためのトランスフェクションの最適化を使用して、良好な収率および純度を有する三重特異性抗体を製造することが多かった。
【０３２１】
トランスフェクションの４〜５日後、トランスフェクトされた細胞から得た上清を集め、０．４５μｍフィルターユニット（Ｎａｌｇｅｎｅ）を通して濾過した。上清中の三重特異性抗体を、３工程手順を使用して精製した。第１に、プロテインＡアフィニティー精製を使用し、結合されたＡｂを、「ＩｇＧ溶出バッファー」（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して溶出した。第２に、生成物を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に対して終夜透析し、ＰＢＳバッファーを２回取り替えた。次の工程の前に、任意の沈殿物を、０．４５μｍフィルターユニット（Ｎａｌｇｅｎｅ）を通す濾過によって除去した。第３に、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）精製（Ｈｉｌｏａｄ  １６／６００  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００ｐｇまたはＨｉｌｏａｄ  ２６／６００  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００ｐｇ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、沈殿物中の凝集物および異なる種を除去した。還元および非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥで画分を解析して、単量体三重特異性抗体を含有する画分を同定し、その後、それらを組み合わせた。精製抗体をアリコートにすることもでき、−８０℃で長期間保存した。
【０３２２】
ＥＬＩＳＡアッセイ
精製抗体の結合特性を、ＥＬＩＳＡまたはＳＰＲ方法のいずれかを使用して解析した。ＥＬＩＳＡのために、三重特異性抗体中の各結合部位の対応する抗原を使用して、９６ウェルＩｍｍｕｎｏ  Ｐｌａｔｅ（Ｎｕｎｃ  ４３９４５４、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中、２μｇ／ｍｌの各抗原を使用して４℃で終夜コーティングした。コーティングされたプレートを、ＰＢＳ中、５％脱脂乳＋２％  ＢＳＡを使用して室温で１時間ブロッキングし、続いて、ＰＢＳ＋０．２５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０を用いて３回洗浄した（Ａｑｕａ  Ｍａｘ  ４００、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）。抗体（三重特異性および対照Ａｂ）の段階希釈を製造し、ＥＬＩＳＡプレート上に添加し（２連で１００μｌ／ウェル）、室温で１時間インキュベートし、続いて、ＰＢＳ＋０．２５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０を用いて５回洗浄した。
【０３２３】
洗浄後、ＨＲＰがコンジュゲートした二次抗ヒトＦａｂ（１：５０００、カタログ番号１０９−０３５−０９７、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ）を各ウェルに添加し、ＲＴで３０分間インキュベートした。ＰＢＳ＋０．２５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０を用いて５回洗浄した後、各ウェルに１００μｌのＴＭＢ  Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（ＫＰＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、ＵＳＡ）を添加した。５０μｌの１Ｍ  Ｈ2ＳＯ4を添加することによって反応を終結させ、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ５（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用してＯＤ450を測定し、ＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏ６．３ソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して解析した。最終データをＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）に移し、示されるようにプロットした。同ソフトウェアを使用してＥＣ５０を算出した。
【０３２４】
ＳＰＲアッセイ
完全動態解析のために重鎖および軽鎖の２つの対を選択した。ＢＩＡＣＯＲＥ  ３０００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術を使用して、精製抗体の動態特性を実施した。タグ特異的抗体捕捉および調べられる抗体の配向を使用する捕捉アッセイを使用した。Ｆｃ含有タンパク質構築物の捕捉のために、ヒト抗体捕捉キット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用し、Ｈｉｓタグ含有タンパク質構築物の捕捉のために、Ｈｉｓ捕捉キット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用した。標準手順を使用して研究等級ＣＭ５チップ（ＧＥ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上の第一級アミン基（１１０００ＲＵ）を介して捕捉抗体を固定化した。解析される抗体を、１０μＬ／分の流速で、通常３０ＲＵの最大解析物結合シグナルをもたらす調整されたＲＵ値で捕捉した。
【０３２５】
例示的アッセイのために、組換えヒトＩＬ１３（カタログ番号ＩＬ０１２）およびヒトＩＬ４（カタログ番号ＩＬ００４）は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから購入し、組換えヒトＴＮＦα（カタログ番号Ｈ８９１６）はＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。ＩＬ４について０．１〜３ｎＭの間の、ＩＬ１３について０．８〜２５ｎＭの間の濃度範囲にわたって、組換えヒトＩＬ４およびＩＬ１３に対して結合動態を測定した。ヒトＴＮＦαについて、３〜１００ｎＭの濃度範囲を使用した。アッセイバッファーとして、ＨＢＳ  ＥＰ（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡおよび０．００５％界面活性剤Ｐ２０）を３０μｌ／分の流速で使用した。チップ表面を、それぞれの捕捉キットの再生溶液を用いて再生した。参照として捕捉された抗体を含まないフローセルおよび物質輸送を用いる１：１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデルを使用して、動態パラメータを解析し、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎプログラムパッケージｖ４．１で算出した。抗原の同時結合を研究するために、抗ヒト抗体捕捉表面によって三重特異性抗体を捕捉した。抗原を単一濃度で、ＩＬ４を３ｎＭで、ＩＬ１３を２５ｎＭで、およびＴＮＦαを１００ｎＭで使用した。３種の抗原すべての同時結合を示すために、ＩＬ４、ＩＬ１３およびＴＮＦαの混合物を注射した。別個の解析サイクルでは、ＩＬ１３を単独で注射し、ＩＬ４またはＴＮＦαのいずれかを続け、ＩＬ４／ＴＮＦαの同時注射またはＴＮＦα／ＩＬ４の同時注射を続けた。各サイクルにおいて測定された最終反応を比較して、２種または３種の抗原の連続結合および３種の抗原すべての混合物の同時結合の類似性を示した。
【０３２６】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏＴ細胞活性化および増殖アッセイ
ヒトＰＢＭＣを、Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ（米国、マサチューセッツ州、ブルックリン）から購入したバフィーコートからＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ方法を使用して精製した。手短には、新鮮なバフィーコートを、まず、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で１：３希釈し、瓶を数回反転させることによって使用前にＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ溶液（Ｆｉｃｏｌｌ）と十分に混合した。各Ｌｅｕｃｏｓｅｐ（登録商標）チューブに１５ｍＬの密度勾配培地を添加し、１０００ｘｇ、ＲＴで３０秒間回転させた。ここで、培地を多孔性バリアの下に入れた。次いで、３０〜４０ｍＬの希釈したバフィーコートを、各Ｌｅｕｃｏｓｅｐチューブ中に注意深く注ぎ入れ、８００ｘｇで１５分間室温で遠心分離し、ブレーキを外し、５の最大アクセルを用いた。血漿層を除去し、濃縮されたＰＢＭＣを含有する上清の残部を新規チューブに移した（Ｌｅｕｃｏｓｅｐチューブは、２秒より長く反転位置で保持しなかった）。濃縮されたＰＢＭＣを４５ｍｌ  ＰＢＳを用いて洗浄し、２５０ｘｇで１０分間、室温で遠沈させた。洗浄を反復し、複数のチューブを１つのチューブに合わせた。細胞を２０ｍＬ  ＰＢＳに再懸濁し、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＴＣ２０を使用してカウントした。
【０３２７】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏＴ細胞活性化アッセイを設定するために、精製されたヒトＰＢＭＣを、培養培地（グルタミン／ストレプトマイシンを補充した１０％  ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０）（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に再懸濁した（１０6個細胞／ｍｌ）。示された濃度の種々の三重特異性および対照抗体を各ウェルに添加し、またはＳｔｅｂｂｉｎｇｓ，Ｒ．ら（２００７）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７９：３３２５〜３３３１頁に記載されるように、使用前にプレートをコーティングするために使用し、組織培養インキュベーター中で１６〜２４時間インキュベートした。細胞を遠沈させ、上清をサイトカイン放出を測定するために集めるか、または破棄した。細胞をＴ細胞マーカー（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８など）および活性化マーカー（ＣＤ６９、ＣＤ６２Ｌなど）について蛍光標識抗体を用いて染色し、サンプルを、Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カリフォルニア州、サンノゼ）に流すことによって解析し、続いて、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ  ｖ１０）を使用して解析し、示されるようにプロットした。
【０３２８】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏＴ細胞増殖アッセイを設定するために、精製されたヒトＰＢＭＣを、培養培地（グルタミン／ストレプトマイシンを補充した１０％  ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０）（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に再懸濁した（１０6個細胞／ｍｌ）。示された濃度の種々の三重特異性および対照抗体を各ウェルに添加し、組織培養インキュベーター中で１〜７日間インキュベートした。細胞を遠沈させ、上清をサイトカイン放出を測定するために集めるか、または破棄した。細胞をＴ細胞マーカー（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８など）および活性化マーカー（ＣＤ６９、ＣＤ６２Ｌなど）について蛍光標識抗体を用いて染色し、サンプルを、Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カリフォルニア州、サンノゼ）に流すことによって解析し、続いて、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ  ｖ１０）を使用して解析し、示されるようにプロットした。
【０３２９】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞死滅アッセイ
種々の三重特異性抗体を使用する種々の癌細胞に対する  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ死滅アッセイのために、精製されたヒトＰＢＭＣを使用した。手短には、９６ウェルＶ底プレートにおいて死滅アッセイを設定した。各プレートについて、各ドナーから得た４０ｍｌのＰＢＭＣを２ｘ１０＾６個細胞／ｍｌでプレーティングし、３０ｍｌの、２．５ｘ１０＾５個細胞／ｍｌのＰＫＨ２６（Ｓｉｇｍａ番号ＭＩＮＩ２６）標識された標的細胞（最大１ｘ１０＾７個細胞を染色するための４μＬの色素）を製造した。最初に、種々の濃度の２０μＬ／ウェルの試験タンパク質またはＰＭＡを、各ウェルに添加し、続いて、８０μＬ／ウェルの標識された標的細胞を、各ウェルに添加した（２Ｘ１０＾４個細胞／ウェル）。次いで、１００μＬのＰＢＭＣを、各ウェルに添加し、Ｅ：Ｔ＝１０：１ウェル（２ｘ１０＾５個細胞／ウェル）に達し、３７℃  ５％  ＣＯ２インキュベーターで２４時間インキュベートした。細胞を遠沈させ、上清をサイトカイン放出を測定するために集めるか、または破棄した。細胞を、Ｖｉｖｉｄ  ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（商標）Ｆｉｘａｂｌｅ  Ｖｉｏｌｅｔ  Ｄｅａｄ  Ｃｅｌｌ  Ｓｔａｉｎｉｎｇバッファー（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ番号Ｌ３４９５５）を用いて染色した（染色バッファーは、６０μＬのＶｉｖｉｄ試薬を６０ｍｌのＰＢＳに添加することによって製造した）。暗所ＲＴでの１５分間のインキュベーションによって細胞を１００μＬの染色バッファーに再懸濁した。細胞を１ｘＰＢＳを用いて洗浄した後、細胞を２００μＬの、０．５％パラホルムアルデヒドを有するＰＢＳに再懸濁し、Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カリフォルニア州、サンノゼ）によってＰＫＨ２６＋Ｖｉｖｉｄ＋癌細胞を集め、続いて、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを使用して解析した。死滅のパーセンテージを、特定の死滅−特発性死滅／総細胞として算出し、示されるようにプロットした。
【０３３０】
サイトカイン放出アッセイ
ＣＤ３４＋臍帯細胞ヒト化ＮＳＧマウスにおけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性化アッセイ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ死滅アッセイ、ｉｎ  ｖｉｖｏ活性化アッセイにおいて炎症性サイトカイン濃度を測定するために、および毒性研究のために、細胞培養上清を集め、Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘ  Ｈｕｍａｎ  Ｈｉｇｈ  ＳｅｎｓｉｔｉｉｔｙＴ細胞  １３−ｐｌｅｘキット（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して製造業者のプロトコールに従って血清サンプルを希釈した。続いて、これらをＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＭＡＧＰＩＸ（登録商標）システムおよびＭＩＬＬＩＰＬＥＸ（登録商標）Ａｎａｌｙｓｔ  ５．１ソフトウェアによって解析した。
【０３３１】
ｉｎ  ｖｉｖｏマウスモデルおよび有効性研究
ヒトＣＤ３４＋造血幹細胞を移植されたＮＳＧマウス（ｈｕ−ＣＤ３４）を、ｉｎ  ｖｉｖｏマウスモデルとして使用した。これらのマウスは、複数系統のヒト免疫細胞を発達させ、癌免疫療法有効性研究の確認されたプラットフォームである（例えば、Ｓｈｕｌｔｚ，Ｌ．Ｄ．ら（２０１４）  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ．  Ｐｒｏｔｏｃ．  ２０１４：６９４〜７０８頁を参照のこと）。ｈｕ−ＣＤ３４+  ＮＳＧマウスは、ＣＤ３４+造血幹細胞を注射することによって製造され、Ｔ細胞、Ｂ細胞およびいくつかのその他の集団を含むヒト免疫細胞集団の有効な複数系統移植を示す（ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ，Ｓ．Ｐ．ら（２０１０）  Ｂｌｏｏｄ  １１６：１９３〜２００頁）。複数系統造血発生は１２週内に起こる。移植は、移植片対宿主病をともなわず、１年にわたって安定である。
【０３３２】
ｈｕ−ＣＤ３４  ＮＳＧマウスを使用する有効性研究のために、マウスをＴｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（米国、メイン州）から購入し、使用前にヒト細胞集団を確認した。一般に、各マウスにおいて腫瘍を接種するために、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（５０％  ｖ／ｖ）中で混合した５ｘ１０6個腫瘍細胞を使用した。ひとたび、腫瘍の大きさが、１００〜１５０ｍｍ3の範囲に到達すると、研究のためにマウスを選択し、各群に無作為化した。抗体を、週に３回所与の用量で静脈内に与えた。体重を週に１〜３回モニタリングした。腫瘍の大きさを、ノギス腫瘍測定によって１〜３回／週、測定した。腫瘍の大きさが１，５００ｍｍ3に達した時点または最後の用量の２４時間後に、すべてのマウスを終結させた。最終血液サンプル（０．３ｍＬ）を、血清セパレーターチューブ中に採取し、穏やかに５回反転することによって混合し、チューブラックに入れた。最終腫瘍を採取し、秤量し、その後、免疫組織化学解析のために固定液中に入れた。
【０３３３】
ヒトＰＢＭＣヒト化（ｈｕ−ＰＢＭＣ）ＮＳＧマウスを、別のｉｎ  ｖｉｖｏマウスモデルとして使用した。これらのマウスは、健常なドナーから得た精製ヒトＰＢＭＣを注射することによって製造され、これらは、成人末梢血単核細胞を使用すると最も速い移植速度を有し、強力なエフェクターおよびメモリーＴ細胞およびＮＫ細胞機能を必要とする短期間の研究を可能にし、移植片対宿主病による短期間有効性研究（３〜４週間）に適している。
【０３３４】
ｈｕ−ＰＢＭＣ  ＮＳＧマウスを使用する有効性研究のために、８〜１０週齢のＮＳＧマウス（カタログ番号：００５５５７、ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ）をＴｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（米国、メイン州）から購入した。各マウスに、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（５０％  ｖ／ｖ）中で混合した５ｘ１０6個腫瘍細胞を接種した。ひとたび、腫瘍の大きさが５０〜１００ｍｍ3の範囲に到達すると、健常なドナーから得た１０ｘ１０6個のヒトＰＢＭＣを各マウスに再構成させた。翌日、ヒト細胞再構成を確認した。ひとたび、腫瘍の大きさが１００〜１５０ｍｍ3の範囲に到達すると、研究のためにマウスを選択し、各群に無作為化した。抗体を、週に３回所与の用量で静脈内に与えた。体重を週に１〜３回モニタリングした。腫瘍の大きさを、ノギス腫瘍測定によって１〜３回／週、測定した。腫瘍の大きさが１，５００ｍｍ3に達した時点または最後の用量の２４時間後に、すべてのマウスを終結させた。最終血液サンプル（０．３ｍＬ）を、血清セパレーターチューブ中に採取し、穏やかに５回反転することによって混合し、チューブラックに入れた。最終腫瘍も採取し、秤量し、その後、免疫組織化学解析のために固定液中に入れた。
【０３３５】
ＮＨＰ耐容性および薬物動態研究
すべてのＮＨＰ研究は、Ｃｏｖａｎｃｅ（米国、ニュージャージー州、プリンストン）によってＣｏｖａｎｃｅ  ＩＣＵＣＡプロトコールに従って実施した。すべての研究において、薬物およびタンパク質によって未処置のまたはタンパク質によって未処置の雄のカニクイザルを使用した。研究デザインに基づいて、サルを選択し、各三重特異性抗体にグループ化した。抗体を、伏在静脈を介して静脈内注入によって１時間与えた。低用量（＜１０μｇ／ｋｇ）については連続日で漸増用量を与えたが、観察目的のために、高用量（＞１０μｇ／ｋｇ）については１〜２日の間隔を用いた。指定されたような各用量後にすべての動物について、注入の開始から０時間（１日目のみ）、０．５時間（注入中）、１および６時間で血液サンプルを採取した。試験責任者、病理学者および／または臨床獣医の自由裁量で、さらなる不定期の血液サンプルを採取した。すべての動物を６０日目にコロニーに戻した。血液サンプルに由来するＰＢＭＣおよび血清は、標準法を使用して製造し、さらなる解析のために保存した。
【０３３６】
ルシフェラーゼレポーターアッセイ
ＧｌｏＲｅｓｐｏｎｓｅ（商標）ＩＬ２−ｌｕｃ２Ｐジャーカット細胞、Ｔｈａｗ  ａｎｄ  Ｕｓｅ（Ｐｒｏｍｅｇａパーツ番号ＣＳ１８７００２）およびＧｌｏＲｅｓｐｏｎｓｅ（商標）ＮＦＡＴ−Ｌｕｃ２ジャーカット細胞（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号ＣＳ１７６４０１）を、Ｐｒｏｍｅｇａ  （米国、ウィスコンシン州）から購入し、製造業者のプロトコールに従う使用のために準備した。
【０３３７】
手短には、細胞を３７℃水浴中で２分間解凍し、１０ｍＬの予温したＲ１０培地を含有する１５ｍＬのコニカル遠心機チューブに穏やかに移した。チューブを、３００ｇでＲＴで５分間遠心分離した。上清を除去し、細胞を、２０ｍＬの予温Ｒ１０培地に再懸濁し、７５ｃｍ２培養フラスコに移し、続いて、細胞が増殖し、安定であるまで（約３〜４日）、３７℃組織培養インキュベーター中でインキュベートした。細胞を、０．１ｅ６個細胞／ｍＬに週に２回分割した。細胞を選択のためにＲ１０＋ハイグロマイシンＢ培地で維持した。解凍の約７日後に、細胞をアッセイに使用した。
【０３３８】
抗体刺激のために、種々の濃度の三重特異性または対照抗体を製造し、ＰＢＳで段階希釈した。ウェルあたり２５μＬの抗体を分注した。プレートに結合されたＡｂのために、Ｍａｘｉｓｏｒｐプレートを使用し、４℃で終夜インキュベートした。可溶性Ａｂのために、Ｕ底プレートを使用した。レポーター細胞を０．３〜０．５  ｅ６個／ｍＬに再懸濁し、各ウェルに１７５μＬの細胞を添加し、３７℃のＣＯ2インキュベーター中で６時間インキュベートした。次いで、インキュベーターからプレートを取り出し、周囲温度に平衡化させた（１０〜１５分）。次いで、アッセイプレートの各ウェルに５０μｌのＢｉｏ−Ｇｌｏ（商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｇ７９４１）（周囲温度）を添加した。５分間インキュベートした後、ＭｉｃｒｏＢｅｔａ２  ＬｕｍｉＪＥＴマイクロプレートカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ；読み取り時間１秒）を使用して発光活性を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してデータをプロットした。
【０３３９】
コンホメーション安定性
熱安定性測定値（例えば、融点、Ｔm）を、示差走査型蛍光定量法（ＤＳＦ）を使用して決定した。白色セミスカート９６ウェルプレート（ＢＩＯＲＡＤ）中で、サンプルをＤ−ＰＢＳバッファー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で、Ｄ−ＰＢＳ中のＳＹＰＲＯ−Ｏｒａｎｇｅ色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＤＭＳＯ中の５０００ｘストック）の４ｘ濃縮溶液を含む、０．２μｇ／μｌの最終濃度に希釈した。すべての測定は、ＭｙｉＱ２リアルタイムＰＣＲ機器（ＢＩＯＲＡＤ）を使用して２連で実施した。ｉＱ５ソフトウェアｖ２．１（ＢＩＯＲＡＤ）で、融解曲線の負の第１の誘導体曲線（−ｄ（ＲＦＵ）／ｄＴ）を作成した。次いで、Ｔｍの決定およびデータの図示のために、データをＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌにエクスポートした。
【０３４０】
ＩＣ５０測定
レポーター細胞株を用いるＩＬ−４およびＩＬ−１３に対する抗体活性の検出
サイトカインＩＬ４およびＩＬ１３に対する二重特異性抗体または誘導体の活性を、市販のＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＩＬ−４／ＩＬ−１３レポーター細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）で調べた。ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＩＬ−４／ＩＬ−１３細胞は、ＩＬ−４またはＩＬ１３によるＳＴＡＴ６経路の活性化をモニタリングするように設計されている。いずれかのサイトカインを用いる細胞の刺激は、培養上清においてＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅアッセイを用いて測定できる、レポーター遺伝子分泌型胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）の生成をもたらす。ＩＬ４またはＩＬ１３に対する抗体活性を調べるために、サイトカインを種々の濃度の抗体とともに１時間プレインキュベートし、５０．０００個のＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＩＬ−４／ＩＬ−１３細胞に添加した。２４時間インキュベートした後、細胞培養上清においてＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅアッセイ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を用いてＳＥＡＰのサイトカイン媒介性誘導を測定した。各実験は、各抗体濃度についてｎ＝３のデータ点を用いて実施した。各抗体の最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）を、内部アプリケーションＢｉｏｓｔａｔ−Ｓｐｅｅｄ  Ｖ２．０（Ｓａｎｏｆｉ）によって算出した。
【０３４１】
レポーター細胞株を用いるＴＮＦαに対する抗体活性の検出
ＴＮＦａに対する二重特異性抗体または誘導体の活性を、市販のＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＴＮＦ−ａレポーター細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を使用することによって調べた。ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＴＮＦ−ａ細胞は、培養上清においてＱＵＡＮＴＩ  Ｂｌｕｅアッセイ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を用いて測定できる、レポーター遺伝子分泌型胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）の発現を介してＮＦｋＢ経路の活性化をモニタリングすることによって生理活性ＴＮＦａを検出するように設計されている。ＴＮＦａに対する抗体活性を調べるために、サイトカインを種々の濃度の抗体とともに１時間プレインキュベートし、５０，０００個のＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＴＮＦ−ａ細胞に添加した。２４時間後、培養上清においてＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅアッセイ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を用いてＳＥＡＰのサイトカイン媒介性誘導を測定した。各実験は、各抗体濃度についてｎ＝３のデータ点を用いて実施した。各抗体の最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）を算出した。
【実施例２】
【０３４２】
三重特異性結合タンパク質の概要
三重特異性結合タンパク質の作製のための新規戦略を開発した。三重特異性タンパク質は、３つの標的結合部位を形成する４つのポリペプチドを含んでいた（図１Ａ〜Ｃ）。各標的結合部位は、それぞれのヒト抗原標的を標的化する抗体に由来するＶHおよびＶLドメインを含んでいた（例えば、表１を参照のこと）。三重特異性結合タンパク質は、２つのそれぞれの抗原結合部位を形成するクロスオーバー配向を有する二重可変ドメインを有するポリペプチドの第１の対（ＣＯＤＶ  Ｉｇ形式と呼ばれる）、および各々、第３の抗原結合部位を形成する単一の可変ドメインを有するポリペプチドの第２の対を含んでいた（図１Ａおよび１Ｂ）。
【０３４３】
【表１】
2019522459.tif 000003
【０３４４】
ポリペプチドの第１の対（二重可変ドメインを有していた）は、２つのそれぞれの抗原結合部位を形成するクロスオーバー配向を有するポリペプチドの対：ＶH1−ＶL1およびＶH2−ＶL2をもたらす、構造ＶL2−リンカー−ＶL1−リンカー−免疫グロブリン軽鎖定常ドメインを有する第１のポリペプチド、および構造ＶH1−リンカー−ＶH2−リンカー−免疫グロブリンＣH1重鎖定常ドメインを有する第２のポリペプチドを含んでいた（図１Ｃ、軽鎖および重鎖Ｂを参照のこと）。表Ａは、代表的な三重特異性結合タンパク質のＩｇＧ１およびＩｇＧ４変異体の二重特異性アーム（すなわち、重鎖および軽鎖Ｂを含むアーム）の設計の概要を提供し、三重特異性結合タンパク質の二重特異性アームにおいて使用されるリンカーの種々の組合せを示すことを含む。ポリペプチドの第２の対（各々、単一の可変ドメインを有していた）は、第３の抗原結合部位を形成するポリペプチドの対：ＶH3−ＶL3をもたらす、構造ＶH3−免疫グロブリンＣH1重鎖定常ドメインを有する第１のポリペプチド、および構造ＶL3−免疫グロブリン軽鎖定常ドメインを有する第２のポリペプチドを含んでいた（図１Ｃ、軽鎖および重鎖Ａを参照のこと）。さらに、ＣH3ドメインのいずれかが、抗体ヘテロ二量体化を促進するノブまたはホール修飾を含み得るように三重特異性結合タンパク質を構築した（図１）。
【０３４５】
【表２】
2019522459.tif 000004
【実施例３】
【０３４６】
Ｔ細胞エンゲージャーのｉｎ  Ｖｉｔｒｏ結合活性および抗体媒介性特異的死滅
この実施例は、Ｔ細胞エンゲージャーの活性を特性決定するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを説明する。
【０３４７】
三重特異性結合タンパク質設計のための上記の実施例２に記載されるアプローチを使用して、４種の三重特異性結合タンパク質（結合タンパク質１、３、５および６）を作製した。これらの三重特異性結合タンパク質は、三重特異性結合タンパク質フレームワーク上に、別個のヒトタンパク質：ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２８、ＣＤ３８またはＨｅｒ２を標的とする抗体から単離されたＶHおよびＶLドメインをグラフトすることによって作製した。結合タンパク質１は、ポリペプチドの第１の対（２つの抗原結合部位を形成した）が、ＣＤ２８およびＣＤ３を標的とし、ポリペプチドの第２の対（単一抗原結合部位を形成した）が、Ｈｅｒ２を標的とするように構築した（結合タンパク質１＝Ｈｅｒ２ｘ（ＣＤ２８ｘＣＤ３））。結合タンパク質３は、ポリペプチドの第１の対（２つの抗原結合部位を形成した）が、ＣＤ２８およびＣＤ３を標的とし、ポリペプチドの第２の対（単一抗原結合部位を形成した）が、ＣＤ１９を標的とするように構築した（結合タンパク質３＝ＣＤ１９ｘ（ＣＤ２８ｘＣＤ３））。結合タンパク質５は、ポリペプチドの第１の対（２つの抗原結合部位を形成した）が、ＣＤ２８およびＣＤ３を標的とし、ポリペプチドの第２の対（単一抗原結合部位を形成した）が、ＣＤ３８を標的とするように構築した（結合タンパク質５＝ＣＤ３８ｘ（ＣＤ２８ｘＣＤ３））。結合タンパク質６は、ポリペプチドの第１の対（２つの抗原結合部位を形成した）が、ＣＤ２８およびＣＤ３を標的とし、ポリペプチドの第２の対（単一抗原結合部位を形成した）が、ＣＤ３８を標的とするように構築した（結合タンパク質６＝ＣＤ３８ｘ（ＣＤ２８ｘＣＤ３））。
【０３４８】
抗Ｈｅｒ２を含む三重特異性結合タンパク質を使用するｉｎ  Ｖｉｔｒｏアッセイ
三重特異性結合タンパク質の、３種の異なるヒト抗原を標的とし、結合する能力を調べるために、結合タンパク質１のその標的に対する特異性を、ＥＬＩＳＡアッセイによってまず試験した。結合タンパク質１は、その標的タンパク質−ＣＤ３、ＣＤ２８およびＨｅｒ２のうち３種すべてと結合することが可能であり（図２）−これは、三重特異性形式の各結合ドメインがその機能を保持していたことを示した。
【０３４９】
ＺＲ−７５−１、ＡＵ５６５（Ｈｅｒ２+）、ＡＲＨ−７７（ＣＤ１９+）、ＭＯＬＰ−８、ＲＰＭＩ−８２２６、ＫＭＳ−１２＿ＢＭ、ＮＣＩ−Ｈ９２９、ＭＭ．１．Ｓ、ＭＭ．１．、Ｒ  ＯＰＭ−２、ＫＭＳ−２６およびＵ２６６細胞（ＣＤ３８+）を、膜色素ＰＫＨ−２６（Ｓｉｇｍａ）を用いて標識し、細胞毒性アッセイにおいて標的細胞として使用した。これらの標識された細胞株を、漸増濃度の三重特異性抗体、二重特異性抗体または対照タンパク質の存在下で、濃縮ヒト汎Ｔ細胞とともに１０：１のＥ：Ｔ比で２４時間同時培養した。生存／死滅細胞マーカー（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いる染色およびサンプルをＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カリフォルニア州、サンノゼ）に流すことと、それに続く、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ  ｖ１０）を使用する解析による、標識された標的細胞集団中の死滅細胞数の測定によって、標的細胞における細胞溶解の程度を調べた。
【０３５０】
Ｈｅｒ２＋、ＣＤ１９＋、ＣＤ３８＋腫瘍細胞株を、蛍光コンジュゲートされた、ヒトＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ１９、ＣＤ３８、ＬＡＭＰ１および／またはＨｅｒ２に対する抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を用いて染色した。それぞれのアイソタイプ対応対照抗体を用いる染色も含めた。次いで、Ｆｏｒｔｅｓｓａ（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カリフォルニア州、サンノゼ）機器で細胞を獲得した。ＦｌｏｗＪｏ  ｖ１０でフロー解析を実施した。種々の結合タンパク質の媒介された死滅結果は、図３Ａ〜５、９Ａ、９Ｂおよび１１Ａ〜１６に示されている。
【０３５１】
結合タンパク質１の、その表面にＨＥＲ２タンパク質を発現する腫瘍細胞の抗体媒介性細胞死滅を誘導する能力を調べた。結合タンパク質１はその標的タンパク質のうち３種すべてと結合することが可能であるだけでなく、Ｈｅｒ２+細胞株の抗体媒介性細胞死滅を誘導できた（図３Ａ〜４）。結合タンパク質１は、強力な抗体媒介性細胞死滅活性を示したが、抗ＣＤ３／ＣＤ２８二重特異性Ａｂおよび抗Ｈｅｒ２抗体は、最小の死滅活性しか示さず（図３Ａ、３Ｂ、４および５）、これは、腫瘍抗原（ＨＥＲ２）およびＴ細胞マーカー（ＣＤ３およびＣＤ２８）によって腫瘍細胞をＴ細胞と関わらせるために三重特異性Ａｂを使用することの有効性を実証した。抗ＣＤ３／ＣＤ２８は、Ｔ細胞動員にとって重要であるだけでなく、より有効なＴ細胞活性化および生存シグナル伝達も提供し、有効性を強力に改善した。
【０３５２】
さらに、抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性抗体（結合タンパク質１）を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏＴ細胞活性化および増殖ならびにサイトカイン産生に関する研究を実施した。結合タンパク質１および部位特異的突然変異誘発（ΔＣＤ２８：抗ＣＤ２８が不活性化された；ΔＣＤ３：抗ＣＤ３が不活性化された；Δ（ＣＤ３ｘＣＤ２８）：抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８の両方が不活性化された）によって不活性化された１つまたは２つの結合ドメインを有する対照変異体を、実施例１に記載されるようなヒトＰＢＭＣ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性化アッセイにおいて使用した。結果は、結合タンパク質１は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでヒト一次ＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８Ｔ細胞の両方を効果的に活性化することを示した。抗ＣＤ２８の不活性化は、活性化抗力を低減し、抗ＣＤ２８同時シグナル伝達経路の重要性を示した。抗ＣＤ３結合部位の不活性化は、結合タンパク質１を最小活性にし、これは、抗ＣＤ３が一次Ｔ細胞活性化シグナル伝達を提供したことを示唆する（図６Ａおよび６Ｂ）。ＩＬ２およびＮＦＡＴレポーターヒトＴ細胞株（ジャーカット−ＩＬ２およびジャーカット−ＮＦＡＴ）を使用して同様の結果が得られた（図７Ａ〜７Ｃ）。
【０３５３】
抗ＣＤ１９を含む三重特異性結合タンパク質を使用するｉｎ  Ｖｉｔｒｏアッセイ
抗ＣＤ１９ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性結合タンパク質は、その標的抗原と結合することが可能であり（図８）、これは、三重特異性形式の各結合ドメインがその機能を保持していたことを示した。
【０３５４】
抗ＣＤ１９ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性結合タンパク質はまた、ＣＤ１９＋細胞の抗体媒介性細胞死滅を誘導可能であった（図９Ａ〜９Ｎ）。同様に、抗ＣＤ１９ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性結合タンパク質は、ヒトリンパ腫細胞に対して強力な死滅活性を示したが、抗ＣＤ３／ＣＤ２８、抗ＣＤ１９およびアイソタイプ対照抗体は両方とも、最小の死滅活性しか示さず、これは、腫瘍抗原（ＣＤ１９）およびＴ細胞マーカー（ＣＤ３およびＣＤ２８）によって腫瘍細胞をＴ細胞と関わらせるために三重特異性Ａｂを使用することの有効性を実証した。
【０３５５】
抗ＣＤ３８を含む三重特異性結合タンパク質を使用するｉｎ  Ｖｉｔｒｏアッセイ
結合タンパク質１および３を用いて観察されたように、結合タンパク質５は、ＥＬＩＳＡアッセイによって評価されたように、その標的タンパク質（ＣＤ３、ＣＤ２８およびＣＤ３８）のうち３種すべてと結合することが可能であり（図１０）、これは、三重特異性形式の各結合ドメインがその機能を保持していたことを示した。
【０３５６】
結合タンパク質５はまた、種々のレベルのＣＤ３８およびＣＤ２８発現を有する（図１１Ｄ、１２Ｄおよび１３Ｄを参照のこと）９種のヒト多発性骨髄腫細胞に対して細胞の抗体媒介性細胞死滅を誘導するとわかった（図１１Ａ〜１５Ｄ）。同様に、三重特異性結合タンパク質５は、ヒト多発性骨髄腫細胞に対して強力な死滅活性を示したが、抗ＣＤ３８およびアイソタイプ対照抗体の両方とも、最小の死滅活性しか示さず、これは、腫瘍抗原（ＣＤ３８およびＣＤ２８）およびＴ細胞マーカー（ＣＤ３およびＣＤ２８）によって腫瘍細胞をＴ細胞と関わらせるために三重特異性Ａｂを使用することの有効性を実証した。二重特異性抗ＣＤ３／ＣＤ２８対照抗体も、ＣＤ２８＋ＭＭ細胞に対してわずかな死滅活性を示した、図１１Ｂ、１２Ａ〜Ｃおよび１３Ａ〜Ｃを参照のこと）。
【０３５７】
これらの結果は、本明細書において記載される三重特異性抗体プラットフォームが、２種の腫瘍マーカーの結合部位またはＴ細胞マーカーの２つの結合部位を組み込み、科学的設計および種々の適用のための柔軟性を可能にする可能性を提供することを実証する。結合タンパク質５はまた、５種のＣＤ３８＋ヒトリンパ腫細胞株に対して有効であり（図１４Ｃおよび１５Ｄ）、これは、強力な死滅活性を示す（図１４Ａ〜Ｂおよび１５Ａ〜Ｃ）。
【０３５８】
多発性骨髄腫細胞株ＲＰＭＩ８２２６に対する抗体媒介性細胞死滅を、結合タンパク質５および６を使用して調べ、そのＥＣ50を算出し、ＣＤ２８およびＣＤ３を標的とするＣＯＤＶ形式二重特異性抗体のものと比較した（図１６および表Ｂ）。結合タンパク質５および６は、抗ＣＤ２８結合ドメインにおいてのみ異なり；結合タンパク質５は、抗ＣＤ２８スーパーアゴニストを含有し、一方、結合タンパク質６は、従来の抗ＣＤ２８を含有している。結合タンパク質５は、より強力な死滅活性を示した。
【０３５９】
【表３】
2019522459.tif 000005
【０３６０】
抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性結合タンパク質５および部位特異的突然変異誘発ΔＣＤ２８：抗ＣＤ２８が不活性化された；ΔＣＤ３：抗ＣＤ３が不活性化された；Δ（ＣＤ３ｘＣＤ２８）：抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８の両方が不活性化された）によって不活性化された１つまたは２つの結合ドメインを有する対照変異体の活性を、実施例１に記載されるようなｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性化アッセイにおいてＩＬ２およびＮＦＡＴレポーターヒトＴ細胞株（ジャーカット−ＩＬ２およびジャーカット−ＮＦＡＴ）を使用して調べた。結果は、結合タンパク質５は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、ヒトＩＬ２およびＮＦＡＴプロモーターの両方を効果的に活性化することを示した（図１７Ａおよび１７Ｂ）。抗ＣＤ２８の不活性化は、活性化抗力を低減し、これはＩＬ２レポーターについてより顕著であり、抗ＣＤ２８同時シグナル伝達経路の重要性を示す。抗ＣＤ３結合部位の不活性化は、結合タンパク質５を最小活性にし、これは、抗ＣＤ３が一次Ｔ細胞活性化シグナル伝達を提供したことを示唆する。
【実施例４】
【０３６１】
Ｔ細胞エンゲージャーのｉｎ  Ｖｉｖｏ活性
この実施例は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＴ細胞エンゲージャーを含有する、抗Ｈｅｒ２または抗ＣＤ３８の特性および活性を特性決定する実験を説明する。
【０３６２】
抗Ｈｅｒ２を含む三重特異性結合タンパク質を使用するｉｎ  Ｖｉｖｏアッセイ
Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性抗体を使用する用量漸増研究を、実施例１に記載されたように非ヒト霊長類において実施した（図１８Ａ〜１８Ｅ）。結合タンパク質１中の３つの結合ドメインすべてが、サルＣＤ３／ＣＤ２８／ＨＥＲ２と交差反応する。用量漸増毒性研究は分子の潜在的毒性プロフィールを評価するように考案した。血清およびＰＢＭＣ単離のために血液サンプルを採取した。Ｔ細胞小集団活性化（ＣＤ６９＋）（図１８Ｃおよび１８Ｄ）とともに、各投薬後に循環Ｔ細胞集団を調査した（図１８Ａおよび１８Ｂ）。低用量漸増で、循環中のＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞のパーセンテージが増大したが、高用量漸増で最終的に低下した。有意なＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞活性化は、１００μｇ／ｋｇ用量でのみ顕著であり、これは、むしろ比較的高い耐容量を示唆する。いくつかのサイトカインの血清レベルも測定した。有意なサイトカイン放出は、最高用量（１００μｇ／ｋｇ；図１８Ｅ）でのみ観察された。
【０３６３】
次いで、ヒト化マウスモデルにおける腫瘍成長に対する三重特異性抗Ｈｅｒ２ｘＣＤ２８ｘＣＤ３結合タンパク質１抗体の効果を、実施例１に記載されたように調べた（図１９Ａ〜２０Ｈ）。図１９Ａおよび１９Ｂには、ヒトＨＥＲ２＋乳癌株ＢＴ４７４が接種された、ヒトＣＤ３４＋造血幹細胞外食されたＮＳＧマウス（ｈｕ−ＣＤ３４）モデルを使用して得られた結果がまとめられている。すべての用量群内で有意な抗腫瘍活性が明らかであった。抗腫瘍活性は、用量依存性であり、これは、２５μｇ／ｋｇでの対照群と比較して統計的に異なっている。任意の処置群において有意な体重減少は観察されなかった。
【０３６４】
ヒトＨＥＲ２＋乳癌株ＢＴ４７４が接種された、ヒトＰＢＭＣが再構成されたＮＳＧマウスモデルを使用する第２のｉｎ  ｖｉｖｏ研究も行った（図２０Ａ〜２０Ｈ）。高用量群（１００および５００μｇ／ｋｇ）内で有意な抗腫瘍活性が観察された５００μｇ／ｋｇ群においてマウスの４０％において腫瘍収縮が見られた。抗腫瘍活性は、用量依存性であった。１００および５００μｇ／ｋｇ用量を用いて処置された群における抗腫瘍活性は、抗Ｈｅｒ２処置群（０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ）よりも有意に良好であり、結合タンパク質１に由来する優れた抗腫瘍活性を示す。任意の処置群において有意な体重減少は観察されなかった。
【０３６５】
抗ＣＤ３８を含む三重特異性結合タンパク質を使用するｉｎ  Ｖｉｖｏアッセイ
用量漸増研究を、実施例１に記載されたように三重特異性抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３抗体（結合タンパク質５）を使用して非ヒト霊長類において実施した（図２１Ａ〜２１Ｆ）。結合タンパク質５中の３つの結合ドメインのうち２つは、サルＣＤ３およびＣＤ２８と交差反応する。用量漸増毒性研究は、分子の潜在的毒性プロフィールを評価するように考案した。血清およびＰＢＭＣ単離のために血液サンプルを採取した。Ｔ細胞小集団活性化（ＣＤ６９＋）（図２１Ａおよび２１Ｂ、折れ線グラフ）とともに、各投薬後に循環Ｔ細胞集団を調査した（図２１Ａおよび２１Ｂ、棒グラフ）。低用量漸増で、循環中のＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞のパーセンテージが増大したが、高用量漸増で最終的に低下した。有意なＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞活性化は、１００μｇ／ｋｇ用量でのみ顕著であり、これは、むしろ比較的高い耐容量を示唆する。いくつかのサイトカインの血清レベルも測定した。有意なサイトカイン放出は、最高用量（１００μｇ／ｋｇ；図２１Ｃ〜２１Ｆ）でのみ観察された。
【０３６６】
抗ＣＤ３８ｘＣＤ２８ｘＣＤ３三重特異性抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を、実施例１に記載されたようにヒト化マウスにおいて次いで調べた（図２２Ａ〜２３Ｄ）。図２２Ａ〜２２Ｃには、ＣＤ３８およびＰＤ−Ｌ１を用いて形質導入されたヒトＭＭ細胞株ＲＰＭＩ−８２２６が移植され、５、５０および１００μｇ／ｋｇの結合タンパク質５を用いて処置された、ヒトＣＤ３４＋造血幹細胞が移植されたＮＳＧマウス（ｈｕ−ＣＤ３４）モデルを使用する用量決定パイロット研究から得た結果をまとめた。有意な抗腫瘍活性は、５μｇ／ｋｇを用いて処置された群においてのみ明らかであった（図２２Ａ）。ＣＤ８Ｔ細胞浸潤は、結合タンパク質５（５μｇ／ｋｇ）で処置されたマウスにおいて観察された（図２２Ｂおよび２２Ｃ）。
【０３６７】
０．０４〜５μｇ／ｋｇの投薬で結合タンパク質５を使用して、同一モデルにおけるフォローアップ研究を実施した（図２３Ａ〜２３Ｄ）。結合タンパク質５を用いて処置されたすべての群において有意な抗腫瘍活性が示され（図２３Ｂ）、これは、研究の最後で対照とは統計的に異なっていた（図２３Ｃ）。任意の処置群において有意な体重減少は観察されなかった（図２３Ａ）。示された濃度の結合タンパク質５またはＰＢＳ対照を用いて処置されたマウスにおいて、第１の用量の４時間後の血清炎症性サイトカインＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−２の用量依存性誘導が観察され（図２３Ｄ）、これは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの三重特異性結合タンパク質５による有効なＴ細胞活性化を示す。
【０３６８】
ヒト化ＣＤ３４＋ＮＳＧマウス（ｎ＝３）に、１００ｍｃｇ／ｋｇの三重特異性Ａｂ（三角）、二重特異性Ａｂ（四角）または単一特異性Ａｂ（丸）を用いてｉ．ｖ．注射した。Ａｂ注射後０（注射前）、１、２４および７２時間で、ＬｕｍｉｎｅｘのｘＭＡＰマルチプレックス化技術によって各時点での血漿におけるＣＤ６９の％での平均増大、ＣＤ６２Ｌの低下％および／または炎症性サイトカインの濃度を調べることによってＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を測定した。種々の三重特異性抗体のＴ細胞活性化結果は、図２４〜２６Ｃに示されている。
【０３６９】
結合タンパク質５、抗ＣＤ３／ＣＤ２８＿ＩｇＧ４二重特異性抗体および抗ＣＤ２８  ＩｇＧ４抗体対照の投与後の、ヒトＣＤ３４＋造血幹細胞が移植されたＮＳＧマウス（ｈｕ−ＣＤ３４）モデルにおいて全身性ｉｎ  ｖｉｖｏＴ細胞活性化を研究した（図２４）。１００μｇ／ｋｇの結合タンパク質５および対照抗体を、３匹のマウス／群に投与した。投与前、投与後１時間、２４時間および７２時間で血液サンプルを採取した。血液からマウス血清およびヒトＴ細胞を単離し、Ｔ細胞活性化解析のために、および血清サイトカインレベルの測定のために保存した。図２４および２５は、ヒトＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞の両方が、抗体注入１時間後に活性化されたことを示し、これは、７２時間でベースラインに戻った。図２６Ａ〜２６Ｃは、同一マウスにおける血清ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−２放出の上昇を示し、これは、注入の１時間後に観察され、２４時間後にベースラインに戻った。これらの結果は、結合タンパク質５および抗ＣＤ３／ＣＤ２８  ＩｇＧ４二重特異性抗体の両方が、所与の動物モデルにおけるＴ細胞の活性化において有効であることを実証し、これによって、ｉｎ  ｖｉｖｏ有効性研究にとって適したものになる。
【実施例５】
【０３７０】
サイトカインによって指示される三重特異性および二重特異性三価結合タンパク質の特性決定
以下の実施例は、ヒトサイトカインを標的とする新規三重特異性および二重特異性三価結合タンパク質の安定性、結合特性および活性を特性決定する実験を説明する。
【０３７１】
三重特異性結合タンパク質（例えば、３種の異なる標的タンパク質と結合する；結合タンパク質９〜１５）ならびに二重特異性三価結合タンパク質（例えば、１つの抗原と一価で、１つの抗原と二価で結合する；結合タンパク質１６〜１９）を設計した（表Ｃ）。κ定常ドメインがＣＯＤＶ−ＬＣおよびＦａｂ−アーム−ＬＣの両方で使用される結合タンパク質１１を除いて、すべてのその他の結合タンパク質（９〜１０および１２〜１９）は、ＣＯＤＶ−ＬＣでκ定常ドメインを、Ｆａｂ−アーム−ＬＣでλ定常ドメインを用いて製造した。Ｆｃ骨格として、ＩｇＧ１配列を使用した。ＣＯＤＶ−ＨＣは、ノブ−ＲＦ突然変異（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ；Ｈ４３５ＲおよびＹ４３６Ｆ）を有するのに対し、Ｆａｂ−アーム−ＨＣは、ホール突然変異（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ）を含有する。
【０３７２】
【表４】
2019522459.tif 000006
【０３７３】
三重特異性および二重特異性三価結合タンパク質を、上記のように製造し、精製した（図２７）。
【０３７４】
【表５】
2019522459.tif 000007
【０３７５】
三重特異性結合タンパク質の安定性を評価するために、ＤＳＦによってその融点を評価し、親抗体の熱安定性と比較した（表Ｅ）。
【０３７６】
【表６】
2019522459.tif 000008
【０３７７】
三重特異性形式内のあらゆる単一抗体結合ドメインの結合親和性を評価するために、各単一抗原のＳＰＲ解析を、これまでに記載されたように実施した。結果は、親抗体の親和性に対して評価した（表Ｆ、ＧおよびＨ）。
【０３７８】
【表７】
2019522459.tif 000009
【０３７９】
【表８】
2019522459.tif 000010
【０３８０】
【表９】
2019522459.tif 000011
【０３８１】
三重特異性結合タンパク質の中和活性を評価するために、種々のＨＥＫ  Ｂｌｕｅキット（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を使用して細胞アッセイを実施した。サイトカインを、種々の濃度の抗サイトカイン抗体とともに、９６ウェルプレート中で室温で３０分間プレインキュベートした。対照は、サイトカインのみまたは抗体のみの使用を含んでいた。サイトカイン／抗体混合物に、５０，０００個のＨＥＫ  Ｂｌｕｅ細胞（ＨＥＫ  Ｂｌｕｅ  ＴＮＦａ／ＩＬ１β細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、カタログ番号ｈｋｂ−ｔｎｆｉｌ１；ＨＥＫ  Ｂｌｕｅ  ＳＴＡＴ−６細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、カタログ番号Ｈｋｂ．ｓｔａｔ６）を添加し、インキュベーター中で３７℃、５％  ＣＯ２で２３時間インキュベートした。各培養ウェルにＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ試薬を添加し、３７℃で２時間インキュベートした。ＯＤを６２０ｎｍで測定し、ＢｉｏＳｔａｔ  Ｓｐｅｅｄ  ２．０を使用してＩＣ５０を算出した。表ＩおよびＭにおいて、種々の三重特異性抗体のＨＥＫ  Ｂｌｕｅレポーター細胞アッセイ結果が示されている。
【０３８２】
次いで、結合タンパク質９〜１５についてＩＣ50値を算出し、単一親抗体に対して評価した（表Ｉ）。
【０３８３】
【表１０】
2019522459.tif 000012
【０３８４】
二重特異性三価結合タンパク質の熱安定性を、示差走査型蛍光定量法（ＤＳＦ；表Ｊ）によって測定した。
【０３８５】
【表１１】
2019522459.tif 000013
【０３８６】
ヒトＩＬ−４（表Ｋ）およびＩＬ−１３（表ＫおよびＬ）の、二重特異性三価結合タンパク質の各々によって結合される標的タンパク質の結合親和性および数を測定した。
【０３８７】
【表１２】
2019522459.tif 000014
【０３８８】
【表１３】
2019522459.tif 000015
【０３８９】
最後に、結合タンパク質１６〜１９（表Ｍ）のＩＣ5値を算出した。
【０３９０】
【表１４】
2019522459.tif 000016
【実施例６】
【０３９１】
三重特異性結合タンパク質形式最適化
多数の既存のヘテロ二量体の結合タンパク質形式（例えば、二重特異性抗体およびその変異体）を用いる問題は、いずれかのホモ二量体種も含まずに所望のヘテロ二量体種のみを精製することが困難であり得るということである。したがって、所望のヘテロ二量体の結合タンパク質の効率的な精製のための方法は、例えば、工業的規模の製造のために大変興味深いものである。
【０３９２】
本明細書において記載されるように、本開示の結合タンパク質は、制限するものではないが、ノブおよびホール突然変異（例えば、適切なヘテロ二量体形成を促進するための）および精製を改善するための突然変異を含むいくつかの任意の機能を含み得る。さらに、これらの結合タンパク質は、２つの軽鎖を含み、４種の可能性ある立体配置：２つのκ軽鎖、２つのλ軽鎖、二重可変ドメインを有するアーム上のκ軽鎖（「ＣＯＤＶアーム」）および伝統的な抗体アーム（「Ｆａｂアーム」）上のλ軽鎖ならびにＣＯＤＶアーム上のλ軽鎖およびＦａｂアーム上のκ軽鎖につながる。
【０３９３】
したがって、対象の所望の結合タンパク質の効率的な精製を可能にするプロセスを同定するために実験を行った。結合タンパク質変異体をまた、その精製の効率について調べた。
【０３９４】
図２８Ａは、本開示の例示的結合タンパク質の図を示し、独特な立体配置につながる変動を示す。これらの実験によって、κおよびλ軽鎖（例えば、２つのκ、２つのλ、ＣＯＤＶアーム上のκおよびＦａｂアーム上のλならびにＣＯＤＶアーム上のλおよびＦａｂアーム上のκ）、ノブおよびホール突然変異（例えば、ＣＯＤＶアーム上のノブ突然変異およびＦａｂアーム上のホール突然変異またはＣＯＤＶアーム上のホール突然変異およびＦａｂアーム上のノブ突然変異）ならびにＨ４３５Ｒ／Ｙ４３６Ｆ突然変異（「ＲＦ突然変異」、例えば、ＣＯＤＶまたはＦａｂアーム上のＲＦ突然変異またはＲＦ突然変異なし）の配置の効果を調べた。図２８Ｂに示されたように合計１８種の異なる変異体を調べた。これらの実験のために、ＣＯＤＶアームは、ＴＮＦａに特異的な抗原結合部位（すなわち、それぞれ、配列番号１６８および１６９のＶＨおよびＶＬ配列）およびＩＬ４に特異的な抗原結合部位（すなわち、それぞれ、配列番号１７０および１７１のＶＨおよびＶＬ配列）を有していたが、Ｆａｂアームは、ＩＬ１３に特異的な抗原結合部位（すなわち、それぞれ、配列番号１７２および１７３のＶＨおよびＶＬ配列）を有していた。ノブ突然変異のためにＳ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗを使用し、ホール突然変異のためにＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを使用した。
【０３９５】
ＣＯＤＶおよびＦａｂアームの正しい対合（例えば、ＣＯＤＶまたはＦａｂホモ二量体とは対照的に）ならびに正しい重鎖−軽鎖対合（例えば、Ｆａｂアーム軽鎖およびＣＯＤＶアーム重鎖の間またはＦａｂアーム重鎖およびＣＯＤＶアーム軽鎖の間の対合とは対照的に）をモニタリングする能力のために種々の処理工程を試験した。分析用サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、特徴的な正しい重鎖および軽鎖対合で無効であるとわかった；ＣＯＤＶ重鎖と誤対合したＦａｂアーム軽鎖を有する結合タンパク質および２つのＦａｂアームを有するホモ二量体結合タンパク質は、所望の三重特異性結合タンパク質と同時溶出するとわかった。しかし、分析用疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）は、所望の三重特異性結合タンパク質を、ＣＯＤＶ重鎖と誤対合したＦａｂアーム軽鎖を有する結合タンパク質および２つのＦａｂアームを有するホモ二量体結合タンパク質から分離するとわかった（図２９）。
【０３９６】
図２８Ｂに示された１８種の結合タンパク質立体配置を、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、次いでΚＳｅｌｅｃｔ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）精製によって精製した。種をＨＩＣクロマトグラフィーによってモニタリングした。１種の結合タンパク質立体配置を、誤対合した種：ＣＯＤＶアームにλ軽鎖、Ｆａｂアームにκ軽鎖、ＣＯＤＶアーム上のノブ突然変異、Ｆａｂアーム上のホール突然変異およびＦａｂアーム上のＲＦ突然変異を含まずに効率的に精製した。ＨＩＣクロマトグラフィー（図３０Ａ）、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（図３０Ｂ）および未処置の質量解析によって、所望の三重特異性結合タンパク質に対応する単一種が精製されたことが実証された。
【０３９７】
これらの結果によって、誤対合種から離した、対象の結合タンパク質のより効率的な精製を可能にする結合タンパク質立体配置が同定される。さらに、プロテインＡの精製プロセスとそれに続くΚＳｅｌｅｃｔ精製工程は、誤対合種から離した、対象の結合タンパク質の有効な分離を提供するとわかった。
【０３９８】
本開示は種々の実施形態を含むが、変動および修飾は、当業者には想起されるということは理解される。したがって、添付の特許請求の範囲は、本開示の範囲内に入るすべてのこのような同等の変動を対象とすると意図される。さらに、本明細書において使用される節の見出しは、単に組織化された目的のためであって、記載される主題の制限と解釈されてはならない。
【０３９９】
本明細書において記載される各実施形態は、反対に明確に示されない限り、任意のその他の実施形態（単数または複数）と組み合わせることができる。特に、好ましいまたは有利であると示される任意の機能または実施形態は、反対に明確に示されない限り、好ましいまたは有利であると示される任意のその他の機能（単数または複数）または実施形態（単数または複数）と組み合わせることができる。
【０４００】
本出願に引用されたすべての参考文献は、参照によって本明細書に明確に組み入れられる。
【０４０１】
配列
【０４０２】
【表１５】
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【０４０３】
【表１６】
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【０４０４】
【表１７】
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【０４０５】
【表１８】
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【０４０６】
【表１９】
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【０４０７】
【表２０】
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【０４０８】
【表２１】
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【０４０９】
【表２２】
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【０４１０】
【表２３】
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【０４１１】
【表２４】
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【０４１２】
【表２５】
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【０４１３】
【表２６】
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【０４１４】
【表２７】
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【０４１５】
【表２８】
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【０４１６】
【表２９】
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【０４１７】
【表３０】
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【０４１８】
【表３１】
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【０４１９】
【表３２】
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【０４２０】
【表３３】
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【０４２１】
【表３４】
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【０４２２】
【表３５】
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【０４２３】
【表３６】
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【０４２４】
【表３７】
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【０４２５】
【表３８】
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【０４２６】
【表３９】
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【０４２７】
【表４０】
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【０４２８】
【表４１】
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【０４２９】
【表４２】
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【０４３０】
【表４３】
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【０４３１】
【表４４】
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【０４３２】
【表４５】
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【０４３３】
【表４６】
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【０４３４】
【表４７】
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【０４３５】
【表４８】
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【０４３６】
【表４９】
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【０４３７】
【表５０】
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【０４３８】
【表５１】
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【０４３９】
【表５２】
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【０４４０】
【表５３】
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【０４４１】
【表５４】
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【０４４２】
【表５５】
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【０４４３】
【表５６】
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【０４４４】
【表５７】
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【０４４５】
【表５８】
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【０４４６】
【表５９】
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【０４４７】
【表６０】
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【０４４８】
【表６１】
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【０４４９】
【表６２】
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【０４５０】
【表６３】
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【０４５１】
【表６４】
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【図１−１】
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【図１−２】
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【図２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９−１】
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【図９−２】
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【図９−３】
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【図９−４】
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【図１０】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１４−１】
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【図１４−２】
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【図１５−１】
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【図１５−２】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８−１】
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【図１８−２】
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【図１８−３】
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【図１９】
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【図２０−１】
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【図２０−２】
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【図２０−３】
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【図２０−４】
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【図２０−５】
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【図２１−１】
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【図２１−２】
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【図２１−３】
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【図２２−１】
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【図２２−２】
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【図２３−１】
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【図２３−２】
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【図２３−３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
2019522459.tif 000116
【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２９】
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【図３０】
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【配列表】
2019522459000001.app
【国際調査報告】
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2019522459.tif 000122
2019522459.tif 000123
2019522459.tif 000124
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