(57)【要約】  ヒトＮ３ｐＧｌｕＡβに対する抗体、このようなＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体を含む組成物、ならびに臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症を含む、Ａβの沈着を特徴とする疾患の治療のためにこのようなＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体を使用する方法。【選択図】【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変部（ＬＣＶＲ）と、配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖可変部（ＨＣＶＲ）と、を含む、ヒトＮ３ｐＧｌｕＡβを結合する抗体。
【請求項２】
配列番号９のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
配列番号１２または配列番号１３のアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）と、配列番号１１のアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）と、を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
配列番号１２のアミノ酸配列を有するＬＣと、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＨＣと、を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項６】
配列番号１３のアミノ酸配列を有するＬＣと、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＨＣと、を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項７】
各ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１２または配列番号１３であり、かつ各ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１１である、２つのＬＣと、２つのＨＣと、を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項８】
各ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１２であり、かつ各ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１１である、２つのＬＣと、２つのＨＣと、を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項９】
各ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１３であり、かつ各ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１１である、２つのＬＣと、２つのＨＣと、を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体と、１つ以上の医薬として許容され得る担体、希釈剤または賦形剤と、を含む、医薬組成物。
【請求項１１】
Ａβの沈着を特徴とする疾患に罹患している患者へ、有効量の請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、前記患者を治療する方法。
【請求項１２】
臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症から選択される容態に罹患している患者へ、有効量の請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、前記患者を治療する方法。
【請求項１３】
有効量の請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、及び重度ＡＤから選択される容態に罹患している患者を治療する方法。
【請求項１４】
臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症から選択される容態に罹患している患者へ、有効量の請求項１０に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記患者を治療する方法。
【請求項１５】
前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、及び重度ＡＤから選択される容態に罹患している患者へ、有効量の請求項１０に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記患者を治療する方法。
【請求項１６】
臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症から選択される容態と診断された患者へ、有効量の請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、前記患者における認知低下を遅延させる方法。
【請求項１７】
前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ及び重度ＡＤから選択される容態と診断された患者へ、有効量の請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、前記患者における認知低下を遅延させる方法。
【請求項１８】
臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症から選択される容態と診断された患者へ、有効量の請求項１０に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記患者における認知低下を遅延させる方法。
【請求項１９】
前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ及び重度ＡＤから選択される容態と診断された患者へ、有効量の請求項１０に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記患者における認知低下を遅延させる方法。
【請求項２０】
療法における使用のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２１】
Ａβの沈着を特徴とする疾患の治療における使用のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２２】
臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症から選択される容態の治療における使用のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２３】
前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、及び重度ＡＤから選択される容態の治療における使用のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２４】
臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症から選択される容態と診断された患者における認知低下を遅延させる上での使用のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２５】
前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ及び重度ＡＤから選択される容態と診断された患者における認知低下を遅延させる上での使用のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２６】
Ａβの沈着を特徴とする疾患の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項２７】
臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症から選択される容態の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項２８】
前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ及び重度ＡＤから選択される容態の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｎ３ｐＧｌｕアミロイドベータペプチドを結合する抗体、及びアミロイドベータ（本明細書ではＡβまたはＡベータと呼ぶ）ペプチドと関連した疾患を治療する上での当該抗体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アミロイド前駆体タンパク質の切断は結果的に、大きさが３８〜４３個のアミノ酸に及ぶＡβペプチドを生じる。Ａβの可溶性から不溶性への変換は、高いβシート含有量を有することを形成し、脳における老人斑及び脳血管プラークとしてのこれらの不溶性形態の沈着は、アルツハイマー病（ＡＤ）、ダウン症候群、及び脳アミロイド血管症（ＣＡＡ）を含むいくつかの容態及び疾患と関係づけられてきた。
【０００３】
当該プラーク中に認められる沈着は、Ａβペプチドの異種性混合物から構成される。Ｎ３ｐＥ、ｐＥ３−４２、またはＡβｐ３−４２とも呼ばれるＮ３ｐＧｌｕＡβは、Ａβペプチドの切形形態であり、プラーク中にのみ認められる。Ｎ３ｐＧｌｕＡβは、ヒトＡβのＮ末端における最初の２つのアミノ酸残基を欠失しており、第３のアミノ酸位置におけるグルタミン酸に由来したピログルタミン酸塩を有する。Ｎ３ｐＧｌｕＡβペプチドは、脳の中に沈着したＡβの微量構成要素であるが、複数の研究は、Ｎ３ｐＧｌｕＡβペプチドが積極的な凝集特性を有し、沈着カスケードにおいて早期に蓄積することを実証してきた。
【０００４】
Ｎ３ｐＧｌｕＡβに対する抗体は、当該技術分野で既知である。例えば、米国特許第８，６７９，４９８号は、ヒトＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体（例えば、Ｂ１２Ｌ）、当該抗体を用いてアルツハイマー病などの疾患を治療する方法を開示している。しかしながら、親和性がより高く、熱安定性が改良され、非特異的結合が低下し、かつ免疫原性のレベルがより低いＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体についての必要性がなおも残っている。このようなＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体は、より良好な投薬スケジュールのための薬物動態を有する潜在的なヒト治療薬についての改良された安全性特性を提供するであろう。
【０００５】
本発明の範囲内の抗体は、これらの所望の特徴を有する。本発明は、配列番号９または１０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変部（ＬＣＶＲ）と、配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖可変部（ＨＣＶＲ）と、を含む、ヒトＮ３ｐＧｌｕＡβを結合する抗体を提供する。詳細な実施形態において、本発明は、配列番号９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変部（ＬＣＶＲ）と、配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖可変部（ＨＣＶＲ）と、を含む、ヒトＮ３ｐＧｌｕＡβを結合する抗体を提供する。別の詳細な実施形態において、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変部（ＬＣＶＲ）と、配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖可変部（ＨＣＶＲ）と、を含む、ヒトＮ３ｐＧｌｕＡβを結合する抗体を提供する。
【０００６】
実施形態において、本発明は、軽鎖（ＬＣ）と、重鎖（ＨＣ）と、を含む、ヒトＮ３ｐＧｌｕＡβを結合する抗体であって、当該ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１２または１３のアミノ酸配列であり、かつ当該ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１１のアミノ酸配列である抗体を提供する。より詳細な実施形態において、本発明は、軽鎖（ＬＣ）と、重鎖（ＨＣ）と、を含む、ヒトＮ３ｐＧｌｕＡβを結合する抗体であって、当該ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１２であり、かつ当該ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１１のアミノ酸配列である抗体を提供する。別の詳細な実施形態において、本発明は、軽鎖（ＬＣ）と、重鎖（ＨＣ）と、を含む、ヒトＮ３ｐＧｌｕＡβを結合する抗体であって、当該ＬＣのアミノ酸が配列番号１３のアミノ酸配列であり、かつ当該ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１１のアミノ酸配列である抗体を提供する。さらなる実施形態において、本発明は、２つのＬＣと、２つのＨＣと、を含む抗体であって、各ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１２または１３であり、かつ各ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１１である抗体を提供する。より詳細な実施形態において、本発明は、２つのＬＣと、２つのＨＣと、を含む抗体であって、各ＬＣのアミノ酸亜飛列が配列番号１２であり、かつ各ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１１である抗体を提供する。より詳細な実施形態において、本発明は、２つのＬＣと、２つのＨＣと、を含む抗体であって、各ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１３であり、かつ各ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１１である抗体を提供する。
【０００７】
本発明は、ＬＣＶＲと、ＨＣＶＲと、を含むＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体であって、当該ＬＣＶＲが、ＬＣＤＲ１と、ＬＣＤＲ２と、ＬＣＤＲ３と、を含み、かつ当該ＨＣＶＲが、ＨＣＤＲ１と、ＨＣＤＲ２と、ＨＣＤＲ３と、を含み、かつ当該ＣＤＲのアミノ酸配列が、ＬＣＤＲ１については配列番号４であり、ＬＣＤＲ２については配列番号６であり、ＬＣＤＲ３については配列番号７であり、ＨＣＤＲ１については配列番号１であり、ＨＣＤＲ２については配列番号２であり、かつＨＣＤＲ３については配列番号３である、抗体も提供する
【０００８】
本発明は、本発明の抗体と、１つ以上の医薬として許容され得る担体、希釈剤または賦形剤と、を含む医薬組成物をさらに提供する。さらに、本発明は、Ａβの沈着を特徴とする疾患を治療する必要のある患者へ、本発明の医薬組成物を投与することを含む、当該疾患を治療する方法を提供する。特に、本発明は、臨床もしくは非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床もしくは非臨床ＣＡＡを治療するまたは予防する必要のある患者へ、有効量の本発明の抗体を投与することを含む、臨床もしくは非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床もしくは非臨床ＣＡＡを治療する方法または予防する方法を提供する。より詳細には、本発明は、前駆ＡＤ（Ａβ関連軽度認知障害、またはＭＣＩとも時に呼ばれる）、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ及び重度ＡＤから選択される容態を治療するまたは予防する必要のある患者へ、本発明の医薬組成物を投与することを含む、当該容態を治療する方法または予防する方法を提供する。
【０００９】
別の実施形態において、本発明は、本発明の医薬組成物を投与することを含む、非臨床アルツハイマー病または臨床アルツハイマー病と診断された患者における認知低下を遅延させる方法を提供する。より詳細には、本発明は、本発明の医薬組成物を投与することを含む、前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ及び重度ＡＤから選択される容態と診断された患者における認知低下を遅延させる方法をさらに提供する。
【００１０】
別の実施形態において、本発明は、本発明の医薬組成物を投与することを含む、非臨床アルツハイマー病または臨床アルツハイマー病と診断された患者における機能的低下を遅延させる方法を提供する。より詳細には、本発明は、本発明の医薬組成物を投与することを含む、前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ及び重度ＡＤから選択される容態と診断された患者における機能的低下を遅延させる方法を提供する。
【００１１】
別の実施形態において、本発明は、ほんはつめいのいやく非臨床または臨床アルツハイマー病と診断された患者における脳Ａβアミロイドプラーク量を減少させる方法を提供する。より詳細には、本発明は、本発明の医薬組成物を投与することを含む、前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、及び重度ＡＤから選択される容態と診断された患者における脳Ａβアミロイドプラーク量を減少させる方法を提供する。
【００１２】
別の実施形態において、本発明は、脳脊髄液（ＣＳＦ）における低レベルのＡβ１−４２または脳における低レベルのＡβプラークを有する非症候性患者へ本発明の医薬組成物を投与することを含む、当該患者における記憶喪失または認知低下を予防する方法を提供する。
【００１３】
別の実施形態において、本発明は、アルツハイマー病に起因する遺伝的変異を有することが知られている非症候性患者へ、本発明の医薬組成物を投与することを含む、当該患者を治療する方法を提供する。詳細な実施形態において、本発明は、ＰＳＥＮ１  Ｅ２８０Ａアルツハイマー病起因性遺伝的変異（パイサ変異）を有することが知られている非症候性患者へ、本発明の医薬組成物を投与することを含む、当該患者を治療する方法を提供する。別の詳細な実施形態において、自己染色体優勢アルツハイマー病を生じる遺伝的変異を有する非症候性患者へ、本発明の医薬組成物を投与することを含む、当該患者を治療する方法を提供する。
【００１４】
別の実施形態において、本発明は、アルツハイマー病を生じる遺伝的変異を有することが知られている非症候性患者へ、本発明の医薬組成物を投与することを含む、当該患者における記憶喪失または認知低下を予防する方法を提供する。詳細な実施形態において、本発明は、ＰＳＥＮ１  Ｅ２８０Ａアルツハイマー病を生じる遺伝的変異（パイサ変異）を有することが知られている非症候性患者へ、本発明の医薬組成物を投与することを含む、当該患者における記憶喪失または認知低下を予防する方法を提供する。別の詳細な実施形態において、本発明は、自己染色体優勢アルツハイマー病を生じる遺伝的変異を有する非症候性患者へ、本発明の医薬組成物を投与することを含む、当該患者における記憶喪失または認知低下を予防する方法を提供する。
【００１５】
別の実施形態において、本発明は、アルツハイマー病を生じる遺伝的変異を有するうことが知られている非症候性患者へ、本発明の医薬組成物を投与することを含む、当該患者における認知低下を予防する方法を提供する。詳細な実施形態において、本発明は、ＰＳＥＮ１  Ｅ２８０Ａアルツハイマー病を生じる遺伝的変異（パイサ変異）を有することが知られている非症候性患者へ、本発明の医薬組成物を投与することを含む、当該患者における認知低下を遅延させる方法を提供する。別の詳細な実施形態において、本発明は、自己染色体優勢アルツハイマー病を生じる遺伝的変異を有する非症候性患者へ、本発明の医薬組成物を投与することを含む、当該患者における認知低下を遅延させる方法を提供する。
【００１６】
本発明は、療法における使用のための、本発明の抗体も提供する。実施形態において、本発明は、Ａβの沈着を特徴とする疾患の治療における使用のための、本発明の抗体を提供する。別の実施形態において、本発明は、臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症の治療における使用のための、本発明の抗体を提供する。別の実施形態において、本発明は、前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ及び重度ＡＤから選択される容態の治療における使用のための、本発明の抗体を提供する。別の実施形態において、本発明は、臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症から選択される容態と診断された患者における認知低下を遅延させる上での使用のための、本発明の抗体を提供する。別の実施形態において、本発明は、前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ及び重度ＡＤから選択される容態と診断された患者における認知低下を遅延させる上での使用のための、本発明の抗体を提供する。
【００１７】
さらに、本発明は、療法における使用のための、本発明の抗体を含む医薬組成物を提供する。実施形態において、本発明は、Ａβの沈着を特徴とする疾患の治療における使用のための抗体を含む医薬組成物を提供する。
【００１８】
本発明は、Ａβの沈着を特徴とする疾患の治療のための薬剤の製造における、本発明の抗体の使用も提供する。実施形態において、本発明は、臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症の治療のための薬剤の製造における、本発明の抗体の使用を提供する。実施形態において、本発明は、前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤまたは重度ＡＤの治療のための薬剤の製造における、本発明の抗体の使用を提供する。別の実施形態において、本発明は、臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症から選択される容態と診断された患者における認知低下を遅延させるための薬剤の製造における、本発明の抗体の使用を提供する。別の実施形態において、本発明は、前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ及び重度ＡＤから選択される容態と診断された患者における認知低下を遅延させるための薬剤の製造における、本発明の抗体の使用を提供する。
【００１９】
実施形態において、本発明は、配列番号８のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。実施形態において、本発明は、配列番号９のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。実施形態において、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号８のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む、かつ配列番号９のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。別の実施形態において、本発明は、配列番号８のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む、かつ配列番号１０のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。
【００２０】
実施形態において、本発明は、配列番号１１のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。実施形態において、本発明は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。実施形態において、本発明は、配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号１１のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む、かつ配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。別の実施形態において、本発明は、配列番号１１のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む、かつ配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。別の実施形態において、本発明は、配列番号１１のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。別の実施形態において、本発明は、配列番号１１のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子、及び配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を提供する。詳細な実施形態において、配列番号１１のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１４であり、かつ配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１５である。詳細な実施形態において、配列番号１１のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１４であり、かつ配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１６である。
【００２１】
さらに、本発明は、配列番号１１のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子と、配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子と、を含む哺乳類細胞を提供する。好ましくは、当該哺乳類細胞は、配列番号１１のアミノ酸配列を有するポリペプチド及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む。本発明は、配列番号１１のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子と、配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子と、を含む哺乳類細胞も提供する。好ましくは、当該哺乳類細胞は、配列番号１１のアミノ酸配列を有するポリペプチド及び配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む。実施形態において、当該哺乳類細胞株は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株またはハムスター胚性腎（ＨＥＫ）細胞株である。
【００２２】
本発明は、配列番号８のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子と／または、配列番号９のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子と、を含む哺乳類細胞であって、当該細胞が配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、配列番号９のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、を含む抗体を発現することができる哺乳類細胞も提供する。好ましくは、当該哺乳類細胞は、配列番号８のアミノ酸配列を有するポリペプチド、及び配列番号９のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む。本発明は、配列番号８のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子と／または、配列番号１０のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子と、を含む哺乳類細胞であって、当該細胞が配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、を含む抗体を発現することができる哺乳類細胞も提供する。好ましくは、当該哺乳類細胞は、配列番号８のアミノ酸配列を有するポリペプチド及び配列番号１０のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含む。実施形態において、当該哺乳類細胞株は、ＣＨＯ細胞株またはＨＥＫ細胞株である。
【００２３】
別の実施形態において、本発明は、配列番号９のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、を含む抗体を産生するためのプロセスであって、当該抗体が発現するような条件下で配列番号９のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲをコードするＤＮＡと／または配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲをコードするＤＮＡと、を含む哺乳類細胞を培養することと、発現した抗体を回収することと、を含むプロセスを提供する。本発明は、直前に説明した本発明のプロセスによって得られることのできる抗体を含む。本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、を含む抗体を産生するためのプロセスであって、当該抗体が発現するような条件下で配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲ及び／または配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲをコードするＤＮＡを含む哺乳類細胞を培養することと、発現した抗体を回収することと、を含む、プロセスを提供する。本発明は、直前に説明した本発明のプロセスによって得られることのできる抗体を含む。
【００２４】
別の実施形態において、本発明は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＬＣと、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＨＣと、を含む抗体を産生するためのプロセスであって、当該抗体が発現するような条件下で配列番号１２のアミノ酸配列を有するＬＣ及び／または、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＨＣをコードする  ＤＮＡを含む哺乳類細胞を培養することと、発現した抗体を回収することと、を含むプロセスを提供する。本発明は、直前に説明した本発明のプロセスによって得られることのできる抗体を含む。本発明は、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＬＣと、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＨＣと、を含む抗体を産生するためのプロセスであって、当該抗体が発現するような条件下で配列番号１３のアミノ酸配列を有するＬＣ及び／または配列番号１１のアミノ酸配列を有するＨＣをコードするＤＮＡを含む哺乳類細胞を培養することと、発現した抗体を回収することと、を含むプロセスも提供する。本発明は、直前に説明した本発明のプロセスによって得られることのできる抗体を含む。
【００２５】
本発明は、２つのＨＣの各々のアミノ酸配列が配列番号１１であり、かつ２つのＬＣの各々のアミノ酸配列が配列番号１２である、２つのＨＣと、２つのＬＣと、を含む抗体を産生するためのプロセスであって、ａ）当該抗体が発現するような条件下で本発明の哺乳類細胞を先に説明した通り培養することと、ｂ）発現した抗体を回収することと、を含むプロセスを含む。本発明は、直前に説明した本発明のプロセスによって得られることのできる抗体を含む。本発明は、２つのＨＣの各々のアミノ酸配列が配列番号１１でありかつ、２つのＬＣの各々のアミノ酸配列が配列番号１３である、２つのＨＣと、２つのＬＣと、を含む抗体を産生するためのプロセスであって、ａ）当該抗体が発現するような条件下で本発明の哺乳類細胞を先に説明したように培養することと、ｂ）発言した抗体を回収することと、を含むプロセスも含む。本発明は、直前に説明した本発明のプロセスによって得られることのできる抗体を含む。
【００２６】
本発明の抗体は、Ｎ３ｐＧｌｕＡβへ結合する。Ｎ３ｐＧｌｕＡβは、配列番号１７のアミノ酸配列である。
【００２７】
本明細書で使用する場合、「抗体」とは、ジスルフィド結合によって相互結合した、２つの重鎖（ＨＣ）と、２つの軽鎖（ＬＣ）と、を含む免疫グロブリン分子である。各ＬＣ及びＨＣのアミノ末端部分は、含有される相補性決定領域（ＣＤＲ）を介して抗原認識を生じる可変部を含む。ＣＤＲは、より保存的な、フレームワーク領域と呼ばれる領域が点在している。本発明の抗体のＬＣＶＲ領域及びＨＣＶＲ領域内のＣＤＲドメインへのアミノ酸の割り当ては、周知のカバット付番の慣習に基づく（Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２〜３９３（１９７１）、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２（１９９１））、及びＮｏｒｔｈ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ（Ｎｏｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａ  Ｎｅｗ  Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＣＤＲ  Ｌｏｏｐ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，４０６：２２８〜２５６（２０１１））。先の方法に従って、本発明のＣＤＲを決定した（表１）。
【００２８】
本発明の抗体は、カッパＬＣと、ＩｇＧ  ＨＣと、を含む。詳細な実施形態において、本発明の抗体は、ＩｇＧ１である。
【００２９】
本発明の抗体は、モノクローナル抗体（「ｍＡｂ」）である。モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ技術、組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術、例えば、ＣＤＲ移植、または当該技術分野で既知のこのようなまたは他の技術の組み合わせによって作製されることができる。本発明の別の実施形態において、当該抗体、またはこれをコードする核酸は、単離された形態で提供される。本明細書で使用する場合、「単離された」という用語は、天然では認められず、かつ細胞環境の中において認められる他の巨大分子種が存在しないまたは実質的に存在しないタンパク質、ペプチドまたは核酸を指す。「実質的に存在しない」は、本明細書で使用する場合、関心対象のタンパク質、ペプチドまたは核酸が、存在する巨大分子種の８０％超（モルに基づく）、好ましくは９０％超及びより好ましくは９５％超を含むことを意味する。
【００３０】
抗体の発現及び分泌後、培地を清澄化して細胞を取り出し、清澄化した培地を、多くの通常使用される技術のうちのいずれかを用いて精製する。精製した抗体は、非経口投与のために、特に皮下投与、髄腔内投与、または静脈内投与のためにタンパク質及び抗体を製剤化するための周知の方法により、医薬組成物へと製剤化され得る。抗体は、適切な医薬として許容され得る賦形剤とともに凍結乾燥させられた後、使用前に水性希釈剤を用いて再構成され得る。あるいは、抗体は、水溶液中で製剤化され、使用前に最長１〜３年間保存され得る。いずれの場合でも、抗体の医薬組成物の保存される形態及び注射される形態は、抗体以外の成分である医薬として許容され得る賦形剤または複数の賦形剤を含有するであろう。成分が医薬として許容され得るかどうかは、医薬組成物の安全性及び有効性に及ぼす当該成分の作用、または安全性、純度及び効能に及ぼす当該成分の作用による。成分がヒトへの投与のための組成物中に使用されていないことを保証するために、当該成分が安全性または有効性（あるいは安全性、純度、または効能）に及ぼす十分に好ましくない作用を有していると判断された場合、当該抗体の医薬組成物において使用されることは医薬として許容され得ない。
【００３１】
本発明の抗体を含む医薬組成物は、本明細書で説明される疾患もしくは障害についての危険にある患者または当該疾患もしくは障害を呈する患者へ、非経口経路（例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内）によって投与されることができる。皮下経路および静脈内経路が好ましい。本発明の医薬組成物は、「有効」量の本発明の抗体を含有する。有効量とは、所望の治療結果を達成するのに（薬用量でならびに投与の時間及び投与手段にとって）必要な量を指す。抗体の有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、ならびに個体における所望の応答を惹起する抗体の能力などの因子によって変わり得る。有効量は、当業者のような随行する診断医または医療従事者によって、既知の技術を用いることによって、及び結果を観察することによって容易に判断することができる。投薬の頻度は、ヒトにおける実際の薬物動態及び薬力学による。治療の持続期間は、多くの因子に応じて変化するであろうし、患者の診断医または治療する医療従事者によって、当該技術分野における経験及び技術に基づいて判断されるであろう。治療の頻度及び持続期間は、症候によって変わり得る。「治療」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療すること（ｔｏ  ｔｒｅａｔ）」という用語、及びこれらに類するものは、患者における既存の症状、容態、疾患、または障害の進行または重症度を拘束すること、遅延させることまたは停止させることを含む。「患者」という用語は、ヒトを指す。
【００３２】
「予防」という用語は、非臨床アルツハイマー病の進行を予防するために、無症候性患者または非臨床アルツハイマー病に罹患している患者への本発明の抗体の予防上の投与を意味する。
【００３３】
「Ａβの沈着を特徴とする疾患」という用語は、脳または脳血管構造におけるＡβ沈着を病理学的に特徴とする疾患である。これは、アルツハイマー病、ダウン症候群、及び脳アミロイド血管症などの疾患を含む。アルツハイマー病の臨床診断、病期分類または進行は、当業者のような随行する診断医または医療従事者によって、既知の技術を用いることによって及び結果を観察することによって容易に判断することができる。このことは概して、脳プラーク画像化、精神もしくは認知の評価（例えば、臨床認知症評価法−ボックスの要約（ＣＤＲ−ＳＢ）、精神状態短時間検査（ＭＭＳＥ）またはアルツハイマー病評価尺度−認知（ＡＤＡＳ−Ｃｏｇ））または機能的評価（例えば、アルツハイマー病共同研究−日常生活動作（ＡＤＣＳ−ＡＤＬ）のうちの何らかの形態を含む。  本明細書で使用する場合の「臨床アルツハイマー病」は、アルツハイマー病の診断された病期である。これは、前駆アルツハイマー病、軽度アルツハイマー病、中等度アルツハイマー病及び重度アルツハイマー病として診断された容態を含む。「非臨床アルツハイマー病」という用語は、臨床アルツハイマー病に先行する病期であり、バイオマーカー（ＣＳＦ  Ａβ４２レベルまたはアミロイドＰＥＴによって沈着する脳プラークなど）の測定可能な変化は、臨床アルツハイマー病へ進行する、アルツハイマー病に罹患している患者の最初期の徴候を示す。これは通常、記憶喪失及び混乱などの症状が顕著である前である。
【００３４】
以下の実施例及びアッセイは、本発明の抗体が、アルツハイマー病、ダウン症候群、及びＣＡＡなど、Ａβの沈着を特徴とする疾患を治療するために有用であることを実証している。しかしながら、以下の実施例は、説明によって示されており、制限してはおらず、種々の変更が当業者によってなされ得ることは理解されるべきである。
【実施例】
【００３５】
操作されたＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体の発現及び精製
本発明のＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体は、本質的に次の通り発現させて精製することができる。配列番号１２または１３のＬＣアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列を含有するグルタミンシンテターゼ（ＧＳ）発現ベクター、及び配列番号１１のＨＣアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列を使用して、電気穿孔法により、チャイニーズハムスター卵巣細胞株（ＣＨＯ）をトランスフェクトする。発現ベクターは、ＳＶ初期（サルウイルス４０Ｅ）プロモーターとＧＳについての遺伝子とをコードする。トランスフェクション後、細胞は、０〜５０μＭのＬ−メチオニンスルホキシミン（ＭＳＸ）を用いたバルク選択を受ける。次に、選択されたバルクの細胞またはマスターウェルを無血清懸濁培養において規模拡大して、産生に使用する。
【００３６】
抗体が分泌された清澄化した培地を、リン酸緩衝塩類溶液（ｐＨ７．４）などの適合性のある緩衝液を用いて平衡化しておいたプロテインＡアフィニティカラムへ適用する。子のカラムを１Ｍ  ＮａＣｌで洗浄して、非特異的結合構成要素を除去する。結合したＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体を、例えば、ｐＨ（およそ）３．５のクエン酸ナトリウムを用いて溶出し、画分を１Ｍトリス緩衝液で中和する。Ｎ３ｐＧｌｕＡβ抗体画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥまたは分析用サイズ排除などによって検出した後、プールする。本発明のＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体をｐＨ７．４のＰＢＳ緩衝液またはｐＨ約６の１０ｍＭクエン酸Ｎａ緩衝液、１５０ｍＭ  ＮａＣｌのいずれかにおいて濃縮する。最終材料は、通常の技術を用いて濾過滅菌することができる。Ｎ３ｐＧｌｕＡβ抗体の純度は、９５％超である。本発明のＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体は、−７０℃で即時凍結され得、または４℃で数か月間保存され得る。本発明の例示的な抗体についてのアミノ酸の配列番号を以下に示す。
【表１】
2019507107.tif 000002
【００３７】
結合親和性及び動態
ｐＥ３−４２Ａβペプチドに対するまたはＡβ１−４０ペプチドに対するＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体の結合親和性及び動態を、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）３０００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いた表面プラズモン共鳴によって測定する。結合親和性をＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＣＭ５チップ上に固定したプロテインＡを介してＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体を捕捉すること、及び１００ｎＭから出発して３．１２５ｎＭまで２倍連続希釈するｐＥ３−４２ＡβペプチドまたはＡβ１−４０ペプチドを流すことによって測定する。本実験は、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＢＲ１００６６９、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）において２５℃で実施する。
【００３８】
各周期について、抗体を１０μｇ／ｍＬ濃度の抗体溶液の５μＬ注入液を１０μＬ／分の流量で用いて捕捉し、ペプチドを２５０μＬ注入液と５０μｌ／分で結合させた後、１０分間解離させる。５μＬのｐＨ１．５のグリシン緩衝液注入液を１０μＬ／ｍＬの流量で用いてチップ表面を再生させる。データを１：１のラングミュア結合モデルへ適合させて、ｋオン、ｋオフを得、ＫＤを算出する。本質的に先に説明した手順に従って、次のパラメータ（表２に示す）を観察した。
【表２】
2019507107.tif 000003
【００３９】
Ａβ１−４０  への明らかな結合は検出されず、このことは、抗体Ｉ及び抗体ＩＩがＡβ１−４０と比較してｐＥ３−４２Ａβペプチドへ特異的に結合することを示した。
【００４０】
熱安定性
ストレスをかけた条件（すなわち、温度上昇及び低ｐＨ）において抗体安定性を決定するために、本発明の抗体を含有する清澄化した培地をＰＢＳまたは１００ｍＭのクエン酸ナトリウムを用いてそれぞれｐＨ７．４またはｐＨ５．０へ調整する。試料を密封し、６５℃で６０分間インキュベートした後、氷上で冷却する。試料中のタンパク質凝集物を遠心分離によって沈殿させ、透明な上清を新たなプレートへ移し、ＰＢＳ緩衝液中への５０倍希釈によってｐＨ７．４へ中和させる。抗原（ｐＥ３−４２）結合活性を測定し、ストレスをかけていない試料に対して算出して、残っている活性の百分率を決定する。
【００４１】
本質的に先に説明した手順に従って、次のデータを得た。
【表３】
2019507107.tif 000004
【００４２】
表３において実証したように、抗体Ｉ及び抗体ＩＩは、Ｂ１２Ｌと比較して高い熱安定性を有している。
【００４３】
エクスビボ標的結合
固定したＰＤＡＰＰ脳に由来する脳切片上でエクスビボ標的結合を決定するために、免疫組織化学的分析を、本発明の外来的に添加したＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体を用いて実施する。老齢ＰＤＡＰＰマウス（２５か月齢）由来の凍結連続冠状断切片を本発明の２０μｇ／ｍＬの例示的なＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体（抗体Ｉまたは抗体ＩＩ）とともにインキュベートする。ヒトＩｇＧに特異的な二次ＨＲＰ試薬を採用し、沈着したプラークをＤＡＢ−Ｐｌｕｓ（ＤＡＫＯ）を用いて可視化する。ビオチン化ネズミ３Ｄ６抗体後のＳｔｅｐ−ＨＲＰ二次抗体を陽性対照として用いた。陽性対照抗体（ビオチン化３Ｄ６）は、ＰＤＡＰＰ海馬における有意な量の沈着したＡβを標識し、本発明の例示的なＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体は、沈着物の部分集合を標識した。これらの組織学的研究は、本発明の例示的なＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体が、沈着したＡβ標的をエクスビボで結合することを実証した。
【００４４】
エクスビボ食作用
エクスビボ食作用アッセイを実施して、本発明のＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体（抗体Ｉまたは抗体ＩＩ）がプラークに関する小膠細胞の食作用を容易にすることができるかどうかを検討した。ヒトアルツハイマー病患者の脳由来の凍結切片（２０μｍ）を本発明の１０μｇ／ｍＬの例示的なＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体または対照とともに３７℃で２４穴プレート中で１時間プレインキュベートする。１つの処置につき４つのウェルがある。次に、初代ネズミ小膠細胞（８×１０５個、Ｃ５７／ＢＬ６系）を添加し、２４時間インキュベートする。各ウェル中の組織を５．２Ｍグアニジン緩衝液で変性させ、Ａβ１−４２量をＥＬＩＳＡによって評価する。Ａβ量は複数の切片の全範囲にわたって変化し得るので、連続切片による対照を各検査ウェルについて与え、検査ウェルの量を当該連続切片の量に対して標準化する。
【００４５】
陽性対照試料と比較して、本発明の例示的なＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体は、Ａβ１−４２を有意に減少させた。陰性対照試料では、沈着したＡβ１−４２がごくわずかに除去されていた。それゆえ、エクスビボ食作用分析は、本発明の例示的なＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体が食作用によってエクスビボでプラークを除去することができることを示す。
【００４６】
インビボでの標的結合
本発明のＮ３ｐＧ抗体が血液脳関門を通過して、沈着したプラークへインビボで結合するＮ３ｐＧ抗体の能力を測定する。１８か月齢のＰＤＡＰＰトランスジェニックマウスにＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体（抗体Ｉまたは抗体ＩＩ）または陰性対照ＩｇＧを用いた腹腔内注射を与える。１群あたり６匹のマウスは、１日目及び３日目に４０ｍｇ／ｋｇの抗体注射を１回受ける。インビボでの標的結合は、マウスを屠殺して組織化学的分析用に脳を回収する６日目に決定する。
【００４７】
インビボでの標的結合の量を、連続切片上での外来性３Ｄ６免疫染色によって規定されるプラーク総面積に対して標準化されたインビボでのＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体結合について陽性である百分率面積として定量化する（ＴＥ比）。ＴＥ比は、抗体によって結合した面積の百分率を測定すること、及び起こり得る標的の面積の百分率の合計（連続切片上での陽性対照抗体（３Ｄ６）を用いた外来免疫組織化学的分析によって可視化した沈着したＡβ全体）に対する値を標準化することによって生じる。
【００４８】
本質的に先に説明した手順に従って、本発明の例示的なＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体は、海馬内での皮質における限定された量へのインビボでの標的結合を実証したのに対し、対照ＩｇＧを注射した動物は、プラーク特異的な染色を示さない。ＴＥ比は、１．９５％（抗体Ｉ）及び３．６５％（抗体ＩＩ）であった。
【００４９】
類似の研究を平均２４〜２６か月齢のＰＤＡＰＰマウスにおいて抗体ＩＩを用いて実施する。抗体ＩＩは、９．４１％のＴＥ比を有していた。
【００５０】
これらの結果は、抗体Ｉ及び抗体ＩＩが、末梢で投与されると、血液脳関門を通過して、沈着したＡβを結合することができることを実証した。
【００５１】
インビボでのプラーク除去
ネズミ定常カッパ部及びＩｇＧ２ａ  Ｆｃへ融合した抗体のＬＣＶＲ及びＨＣＶＲを有するキメラ代用抗体を用いて研究を行い、老齢ＰＤＡＰＰマウスにおけるインビボでのプラーク除去を評価した。老齢ＰＤＡＰＰマウス（２２〜２４か月齢、１群につきｎ＝２３）に１２．５ｍｇ／ｋｇのキメラ抗体ＩＩまたは対照ＩｇＧを１週間に１回、７週間皮下注射する。対照の老齢ＰＤＡＰＰマウス（本研究の開始時に屠殺）を用いて、治療的処置の前にあらかじめ存在する沈着のレベルを評価する。
【００５２】
本研究の終わりに、最終的な薬剤レベルを血漿中で測定し、脳をＡβ１−４２のレベルについてＥＬＩＳＡによって評価する。老齢ＰＤＡＰＰマウスは、対照ＩｇＧを用いた７週間の処置期間にわたってＡβ１−４２の有意ではないさらなる自然増加によって評価されるようなプラーク天井にある。抗体ＩＩキメラ抗体群は、対照と比較してＡβ１−４２の有意な減少を示す（２３％、ｐ＝０．０１７４）。抗体曝露レベルを７週間の投与期間の終了時に測定し、抗体ＩＩは、３１μｇ／ｍＬのレベルを有していた。本研究は、例示的なキメラＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体が、インビボでプラーク（Ａβ１−４２）を減少させることができることを実証した。
【００５３】
エクスビボＴ細胞増殖ＥｐｉＳｃｒｅｅｎアッセイ
ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）エクスビボヒトＴ細胞アッセイを用いて、本発明の例示的なＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体に応じてヒトＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化（増殖、サイトカイン分泌）を測定する。ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）は、欧州／北米及び世界の人口において発現するＨＬＡ−ＤＲアロタイプ及びＤＱアロタイプの数及び頻度を最良に表す５０名の健常ドナー由来の試料を利用する。２つの陽性対照を本アッセイに含んだ。すなわち、医院において高レベルの免疫原性（７３％）を示す臨床的基準抗体であるヒト化Ａ３３、及びマイトジェン様タンパク質含有ネオ抗原であるＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）である。対応する緩衝液陰性対照も本アッセイに含んだ。
【００５４】
Ｔ細胞増殖の百分率を、時間経過（５日目〜８日目）の間に観察した陽性ドナー応答すべての平均から算出する。Ｔ細胞増殖の百分率は、陽性対照Ａ３３及びＫＬＨについてそれぞれ２０％及び９８％であった。Ｔ細胞増殖の百分率は、Ｂ１２Ｌ、抗体Ｉ、及び抗体ＩＩについてそれぞれ１４％、６％、及び８％であった。これらのデータは、本発明の例示的なＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体が陽性対照及びＢ１２Ｌと比較して低いＴ細胞応答率を有することを実証している。
【００５５】
非特異的結合
本発明のＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体を、生ＣＨＯ細胞に対する非特異的結合については蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）分析によって、ならびにヒト血清アルブミン、フィブロネクチン、及びヒトＬＤＬに対する非特異的な結合については高感度で精確かつ正確な結果を広範な動的範囲にわたって提供するＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）技術を使用するアッセイによって研究する。
【００５６】
生ＣＨＯ細胞に対する非特異的結合を検出するために、ＦＡＣＳ分析を実施する。Ｎ３ｐＧｌｕＡβ抗体（抗体Ｉ、抗体ＩＩ、またはＢ１２Ｌ）をＦＡＣＳ緩衝液＋０．１％ＢＳＡ中で２００μｇ／ｍＬへと希釈する。ＲＰＥ標識したＦ（ａｂ’）２ロバ抗ヒトＩｇＧ（重鎖＋軽鎖）二次抗体をＦＡＣＳ緩衝液＋０．１％ＢＳＡ中で２０μｇ／ｍＬへと希釈する。ＣＨＯ細胞を１，０００ｒｐｍで５分間遠心分離した後、ＦＡＣＳ緩衝液＋０．１％ＢＳＡを用いて洗浄する。細胞をＦＡＣＳ緩衝液＋０．１％ＢＳＡ中で４×１０６個／ｍＬへと再懸濁し、５５μＬの細胞懸濁液を９６穴プレートのウェルへと入れる。二次抗体を等量のＮ３ｐＧｌｕＡβ抗体と混合して、室温で１時間インキュベートする。抗体混合物（５５μＬ）を細胞懸濁液へ添加し、室温で１時間インキュベートする。各試料を２つ組で実行する。プレートを遠心分離し、上清を廃棄し、細胞を７５μＬのＦＡＣＳ緩衝液＋０．１％ＢＳＡ中に再懸濁する。プレートを再度遠心分離し、細胞を１１０μＬのＦＡＣＳ緩衝液＋０．１％ＢＳＡ中に再懸濁する。生存度色素（Ｓｙｔｏｘ  Ｂｌｕｅ；１．１μＬを各ウェルに添加し、混合した後、ＦＡＣＳ分析を行った。細胞結合活性を、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）ＦＡＣＳ機（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いるＦＡＣＳ分析によって測定する。
【００５７】
ヒト血清アルブミン、フィブロネクチン、及びヒトＬＤＬに対する非特異的結合を検出するために、ＭＳＤアッセイを利用する。プレート（ＭＳＤ  Ｍｕｌｔｉａｒｒａｙ  ９６穴プレート、ＭＳＤカタログ番号Ｌ１５ＸＡ−３）を３０μＬ／ウェルのコーティングタンパク質（ＰＢＳ中の２０μｇ／ｍＬ）で４℃で一晩コーティングする。コーティングタンパク質は、ＬＤＬ溶液（リポタンパク質、ヒト血清由来の低密度、Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｌ７９１４）、ウシ血清由来のフィブロネクチン（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｆ１１４１）、またはＨＳＡ（５ｍｇ／ｍＬ、Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ８７６３）であり得る。プレートをＰＢＳ＋０．１％トゥイーン２０を用いて３回洗浄し、ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ中で１時間ブロッキングした後、洗浄する。抗体Ｉまたは抗体ＩＩ（５０μｇ／ｍＬ、ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ中に希釈）をウェルへ入れる。各ウェルを２つ組で実行する。プレートを室温で１時間インキュベートした後、洗浄する。ＭＳＤ  ＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ抗ヒト抗体（ＭＳＤ、カタログ番号Ｒ３２ＡＪ−５）を１μｇ／ｍｌへ、ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡを用いて希釈し、５０μＬを各ウェルへ添加する。プレートを室温で１時間インキュベートした後、洗浄する。ＭＳＤ読み取り緩衝液（ＭＳＤ、カタログ番号Ｒ９２ＴＣ−３）を水中で１：４に希釈して、１倍の使用液を得、１５０μＬを各ウェルへ添加する。プレートを読み取り、平均シグナルを算出する。
【００５８】
本質的に先に説明した手順に従って、次のデータを得た。
【表４】
2019507107.tif 000005
【００５９】
表４におけるデータは、抗体Ｉ及び抗体ＩＩが、Ｂ１２Ｌと比較して、生ＣＨＯ細胞、ヒト血清アルブミン、フィブロネクチン、及びヒトＬＤＬに対する低い非特異的結合を有することを実証している。
配列表
抗体Ｉ及び抗体ＩＩ  ＨＣＤＲ１（配列番号１）
ＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＹＩＮ
抗体Ｉ及び抗体ＩＩ  ＨＣＤＲ２（配列番号２）
ＷＩＮＰＧＳＧＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧ
抗体Ｉ及び抗体ＩＩ  ＨＣＤＲ３（配列番号３）
ＴＲＥＧＥＴＶＹ
抗体Ｉ及び抗体ＩＩ  ＬＣＤＲ１（配列番号４）
ＫＳＳＱＳＬＬＹＳＲＧＫＴＹＬＮ
抗体ＩＩ  ＬＣＤＲ２（配列番号５）
ＹＡＶＳＫＬＤＳ
抗体Ｉ  ＬＣＤＲ２（配列番号６）
ＹＤＶＳＫＬＤＳ
抗体Ｉ及び抗体ＩＩ  ＬＣＤＲ３（配列番号７）
ＶＱＧＴＨＹＰＦＴ
抗体Ｉ及び抗体ＩＩ  ＨＣＶＲ（配列番号８）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＹＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＧＳＧＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＥＧＥＴＶＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
抗体Ｉ  ＬＣＶＲ（配列番号９）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＲＧＫＴＹＬＮＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＤＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＶＱＧＴＨＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
抗体ＩＩ  ＬＣＶＲ（配列番号１０）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＲＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＶＳＫＬＤＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＶＱＧＴＨＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
抗体Ｉ及び抗体ＩＩ重鎖（配列番号１１）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＹＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＧＳＧＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＥＧＥＴＶＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
抗体Ｉ軽鎖（配列番号１２）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＲＧＫＴＹＬＮＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＤＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＶＱＧＴＨＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
抗体ＩＩ軽鎖（配列番号１３）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＲＧＫＴＹＬＮＷＬＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＶＳＫＬＤＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＶＱＧＴＨＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１１の抗体重鎖を発現するための例示的なＤＮＡ（配列番号１４）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＴＣＣＴＣＧＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＧＡＣＴＡＴＴＡＴＡＴＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＣＣＴＧＧＣＡＧＴＧＧＴＡＡＴＡＣＡＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＣＡＣＧＡＴＴＡＣＣＧＣＧＧＡＣＧＡＡＴＣＣＡＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＡＣＡＡＧＡＧＡＡＧＧＣＧＡＧＡＣＧＧＴＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＧＣＴＡＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＣＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴ
配列番号１２の抗体軽鎖を発現するための例示的なＤＮＡ（配列番号１５）
ＧＡＴＧＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧＣＣＣＧＴＣＡＣＣＣＴＴＧＧＡＣＡＧＣＣＧＧＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＴＣＴＡＧＴＣＡＡＡＧＣＣＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＴＣＧＣＧＧＡＡＡＡＡＣＣＴＡＣＴＴＧＡＡＴＴＧＧＴＴＴＣＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＡＧＧＣＣＡＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＧＣＣＴＡＡＴＴＴＡＴＧＡＴＧＴＴＴＣＴＡＡＡＣＴＧＧＡＣＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＡＧＧＣＡＣＴＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＧＣＡＧＧＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＴＧＧＧＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＴＧＣＡＡＧＧＴＡＣＡＣＡＣＴＡＣＣＣＴＴＴＣＡＣＴＴＴＴＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
配列番号１３の抗体軽鎖を発現するための例示的なＤＮＡ（配列番号１６）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＣＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＴＣＧＣＧＧＡＡＡＡＡＣＣＴＡＴＴＴＧＡＡＣＴＧＧＣＴＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＴＣＴＣＣＡＡＡＣＴＧＧＡＣＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＴＧＣＡＧＧＧＴＡＣＡＣＡＴＴＡＴＣＣＴＴＴＣＡＣＴＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
Ｎ３ｐＧｌｕＡβ（配列番号１７）
［ｐＥ］ＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦＡＥＤＶＧＳＮＫＧＡＩＩＧＬＭＶＧＧＶＶＩＡ
【配列表】
2019507107000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年6月5日(2018.6.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変部（ＬＣＶＲ）と、配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖可変部（ＨＣＶＲ）と、を含む、ヒトＮ３ｐＧｌｕＡβを結合する抗体。
【請求項２】
配列番号１２のアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）と、配列番号１１のアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）と、を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
各ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１２であり、かつ各ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１１である、２つのＬＣと、２つのＨＣと、を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体と、１つ以上の医薬として許容され得る担体、希釈剤または賦形剤と、を含む、医薬組成物。
【請求項５】
Ａβの沈着を特徴とする疾患に罹患している患者へ、有効量の請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、前記患者を治療する方法。
【請求項６】
臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症から選択される容態に罹患している患者へ、有効量の請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、前記患者を治療する方法。
【請求項７】
有効量の請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、及び重度ＡＤから選択される容態に罹患している患者を治療する方法。
【請求項８】
臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症から選択される容態に罹患している患者へ、有効量の請求項４に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記患者を治療する方法。
【請求項９】
前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、及び重度ＡＤから選択される容態に罹患している患者へ、有効量の請求項４に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記患者を治療する方法。
【請求項１０】
臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症から選択される容態と診断された患者へ、有効量の請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、前記患者における認知低下を遅延させる方法。
【請求項１１】
前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ及び重度ＡＤから選択される容態と診断された患者へ、有効量の請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、前記患者における認知低下を遅延させる方法。
【請求項１２】
臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症から選択される容態と診断された患者へ、有効量の請求項４に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記患者における認知低下を遅延させる方法。
【請求項１３】
前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ及び重度ＡＤから選択される容態と診断された患者へ、有効量の請求項４に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記患者における認知低下を遅延させる方法。
【請求項１４】
療法における使用のための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１５】
Ａβの沈着を特徴とする疾患の治療における使用のための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１６】
臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症から選択される容態の治療における使用のための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１７】
前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ、及び重度ＡＤから選択される容態の治療における使用のための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１８】
臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症から選択される容態と診断された患者における認知低下を遅延させる上での使用のための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１９】
前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ及び重度ＡＤから選択される容態と診断された患者における認知低下を遅延させる上での使用のための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２０】
Ａβの沈着を特徴とする疾患の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項２１】
臨床または非臨床アルツハイマー病、ダウン症候群、及び臨床または非臨床脳アミロイド血管症から選択される容態の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項２２】
前駆ＡＤ、軽度ＡＤ、中等度ＡＤ及び重度ＡＤから選択される容態の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【国際調査報告】
2019507107.tif 000006
2019507107.tif 000007
2019507107.tif 000008
2019507107.tif 000009
2019507107.tif 000010
2019507107.tif 000011