(57)【要約】本発明は、CD45+、CD135+、CD34+、CD90+、および／またはCD110+細胞などの細胞の枯渇、ならびに、とりわけ、さまざまな造血性疾患、代謝障害、がん、および自己免疫疾患の治療に有用な組成物および方法を提供する。例えば、ヒトなどの患者のCD45+、CD135+、CD34+、CD90+、またはCD110+細胞の集団を枯渇させることによってこれらの状態の治療を達成するために適用することができる抗体、その抗原結合フラグメント、リガンド、およびコンジュゲートが本明細書に記載される。本明細書に記載の組成物および方法を使用して、例えば、CD45+、CD135+、CD34+、CD90+、またはCD110+がん細胞または自己免疫細胞の集団を枯渇させることによって、障害を直接治療することができる。本明細書に記載の組成物および方法を使用して、造血幹細胞移植治療に患者を備えさせることと、移植処置の前に内因性造血幹細胞を選択的に枯渇させることによって造血幹細胞移植の生着を改善することもできる。
2019522050.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト患者におけるCD45RO+細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記患者に、CD45ROに結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与する工程を含む、方法。
【請求項２】
造血幹細胞移植を必要とするヒト患者におけるCD45RO+細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記患者に、CD45ROに結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を、前記患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける前に投与する工程を含む、方法。
【請求項３】
ヒト患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含む方法であって、前記患者が、CD45ROに結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記患者におけるCD45RO+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で予め投与されている、方法。
【請求項４】
a.ヒト患者に、CD45ROに結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記患者におけるCD45RO+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で投与する工程と；
b.続いて、前記患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程
とを含む、方法。
【請求項５】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞毒素にコンジュゲートしている、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ヒト患者におけるCD135+細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記患者に、CD135に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与する工程を含み、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項７】
造血幹細胞移植を必要とするヒト患者におけるCD135+細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記患者に、CD135に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を、前記患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける前に投与する工程を含み、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項８】
ヒト患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含む方法であって、前記患者が、CD135に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記患者におけるCD135+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で予め投与されており、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項９】
a.ヒト患者に、CD135に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記患者におけるCD135+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で投与する工程と；
b.続いて、前記患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程
とを含み、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項１０】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、以下の相補性決定領域（CDR）を含む、請求項６〜９のいずれか一項に記載の方法：
a.アミノ酸配列SYYMH（配列番号１）を有するCDR-H1；
b.アミノ酸配列IINPSGGSTSYAQKFQG（配列番号２）を有するCDR-H2；
c.アミノ酸配列GVGAHDAFDI（配列番号３）またはVVAAAVADY（配列番号４）を有するCDR-H3；
d.アミノ酸配列RSSQSLLHSNGNNYLD（配列番号５）またはRSSQSLLHSNGYNYLD（配列番号６）を有するCDR-L1；
e.アミノ酸配列LGSNRAS（配列番号７）を有するCDR-L2；および
f.アミノ酸配列MQGTHPAIS（配列番号８）またはMQSLQTPFT（配列番号９）を有するCDR-L3。
【請求項１１】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、以下のCDRを含む、請求項６〜９のいずれか一項に記載の方法：
a.アミノ酸配列SYAIS（配列番号１０）を有するCDR-H1；
b.アミノ酸配列GIIPIFGTANYAQKFQG（配列番号１１）を有するCDR-H2；
c.アミノ酸配列FALFGFREQAFDI（配列番号１２）を有するCDR-H3；
d.アミノ酸配列RASQSISSYLN（配列番号１３）を有するCDR-L1；
e.アミノ酸配列AASSLQS（配列番号１４）を有するCDR-L2；および
f.アミノ酸配列QQSYSTPFT（配列番号１５）を有するCDR-L3。
【請求項１２】
ヒト患者におけるCD135+細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記患者に、CD135に結合することができるヒトFlt3リガンド、またはそのフラグメントの有効量を投与する工程を含む、方法。
【請求項１３】
造血幹細胞移植を必要とするヒト患者におけるCD135+細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記患者に、CD135に結合することができるヒトFlt3リガンド、またはそのフラグメントの有効量を、前記患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける前に投与する工程を含む、方法。
【請求項１４】
ヒト患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含む方法であって、前記患者が、CD135に結合することができるヒトFlt3リガンド、またはそのフラグメントを、前記患者におけるCD135+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で予め投与されている、方法。
【請求項１５】
a.ヒト患者に、CD135に結合することができるヒトFlt3リガンド、またはそのフラグメントを、前記患者におけるCD135+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で投与する工程と；
b.続いて、前記患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程
とを含む、方法。
【請求項１６】
前記ヒトFlt3リガンドまたはそのフラグメントが、Fcドメインに共有結合している、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ヒトFlt3リガンドまたはそのフラグメントのN末端が、前記Fcドメインに共有結合している、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ヒトFlt3リガンドまたはそのフラグメントのC末端が、前記Fcドメインに共有結合している、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記Fcドメインが、細胞毒素に共有結合している、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ヒトFlt3リガンドまたはそのフラグメントが、細胞毒素に共有結合している、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ヒトFlt3リガンドまたはそのフラグメントのN末端が、前記細胞毒素に共有結合している、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ヒトFlt3リガンドまたはそのフラグメントのC末端が、前記細胞毒素に共有結合している、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記細胞毒素が、Fcドメインに共有結合している、請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ヒトFlt3リガンドまたはそのフラグメントが、1つの部位で前記細胞毒素に共有結合し、異なる部位でFcドメインに共有結合している、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
前記Fcドメインが、ヒトIgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4アイソタイプFcドメインである、請求項１６〜１９、２３、および２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
ヒト患者におけるCD34+細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記患者に、CD34に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与する工程を含み、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項２７】
造血幹細胞移植を必要とするヒト患者におけるCD34+細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記患者に、CD34に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を、前記患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける前に投与する工程を含み、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項２８】
ヒト患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含む方法であって、前記患者が、CD34に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記患者におけるCD34+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で予め投与されており、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項２９】
a.ヒト患者に、CD34に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記患者におけるCD34+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で投与する工程と；
b.続いて、前記患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程
とを含み、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項３０】
ヒト患者におけるCD90+細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記患者に、CD90に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与する工程を含み、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項３１】
造血幹細胞移植を必要とするヒト患者におけるCD90+細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記患者に、CD90に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を、前記患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける前に投与する工程を含み、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項３２】
ヒト患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含む方法であって、前記患者が、CD90に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記患者におけるCD90+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で予め投与されており、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項３３】
a.ヒト患者に、CD90に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記患者におけるCD90+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で投与する工程と；
b.続いて、前記患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程
とを含み、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項３４】
ヒト患者におけるCD110+細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記患者に、CD110に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与する工程を含み、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項３５】
造血幹細胞移植を必要とするヒト患者におけるCD110+細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記患者に、CD110に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を、前記患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける前に投与する工程を含み、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項３６】
ヒト患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含む方法であって、前記患者が、CD110に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記患者におけるCD110+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で予め投与されており、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項３７】
a.ヒト患者に、CD110に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記患者におけるCD110+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で投与する工程と；
b.続いて、前記患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程
とを含み、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項３８】
前記細胞毒素が、アマトキシン、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、およびインドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体からなる群より選択される、請求項５〜１１および１９〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
ヒト患者におけるCD45+細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記患者に、CD45に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与する工程を含み、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、アマトキシン、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、およびインドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体からなる群より選択される細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項４０】
造血幹細胞移植を必要とするヒト患者におけるCD45+細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記患者に、CD45に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を、前記患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける前に投与する工程を含み、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、アマトキシン、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、およびインドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体からなる群より選択される細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項４１】
ヒト患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含む方法であって、前記患者が、CD45に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記患者におけるCD45+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で予め投与されており、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、アマトキシン、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、およびインドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体からなる群より選択される細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項４２】
a.ヒト患者に、CD45に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントを、前記患者におけるCD45+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で投与する工程と；
b.続いて、前記患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程
とを含み、ここで、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、アマトキシン、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、およびインドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体からなる群より選択される細胞毒素にコンジュゲートしている、方法。
【請求項４３】
細胞毒素にコンジュゲートした前記抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドが、式Ab-Amで表され、式中、Abが前記抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドであり、Amが式（I）で表されるアマトキシンである、請求項５〜１１および１９〜４２のいずれか一項に記載の方法：
【化１】
2019522050.tif 000034
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4、R5、R6、およびR7は、それぞれ独立して、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたC1-C6アルキル、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意に置換されたC2-C6アルケニル、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意に置換されたC2-C6アルキニル、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたC1-C6アルキレン、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキレン、任意に置換されたC2-C6アルケニレン、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニレン、任意に置換されたC2-C6アルキニレン、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；ならびに
Zは、L上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位であり、
式中、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む］。
【請求項４４】
Amが、式（IA）で表されるアマトキシンである、請求項４３に記載の方法。
【化２】
2019522050.tif 000035
【請求項４５】
Amが、式（IB）で表されるアマトキシンである、請求項４３に記載の方法。
【化３】
2019522050.tif 000036
【請求項４６】
RAおよびRBが、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成する、請求項４４または４５に記載の方法：
【化４】
2019522050.tif 000037
［式中、Yは、O、S、NRE、およびCREREから選択され、ならびに
REおよびRE'は、それぞれ独立して、任意に置換されたC1-C6アルキレン-RC、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキレン-RC、任意に置換されたC2-C6アルケニレン-RC、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニレン-RC、任意に置換されたC2-C6アルキニレン-RC、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニレン-RC、任意に置換されたシクロアルキレン-RC、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン-RC、任意に置換されたアリーレン-RC、または任意に置換されたヘテロアリーレン-RCである］。
【請求項４７】
RAおよびRBが、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成する、請求項４６に記載の方法：
【化５】
2019522050.tif 000038
。
【請求項４８】
R1が、H、OH、またはORAであり；
R2が、H、OH、またはORBであり；
RAおよびRBが、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し：
【化６】
2019522050.tif 000039
；
R3、R4、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R5がORCであり；
R8が、OHまたはNH2であり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項４４または４５に記載の方法。
【請求項４９】
R1およびR2が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3がRCであり；
R4、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R5が、H、OH、またはOC1-C6アルキルであり；
R8が、OHまたはNH2であり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項４４または４５に記載の方法。
【請求項５０】
R1およびR2が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R4およびR5が、それぞれ独立して、H、OH、ORC、またはRCであり；
R8が、OHまたはNH2であり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項４４または４５に記載の方法。
【請求項５１】
R1およびR2が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R4およびR5が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R8が、ORCまたはNHRCであり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項４４または４５に記載の方法。
【請求項５２】
細胞毒素にコンジュゲートした前記抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドが、式Ab-Amで表され、式中、Abが前記抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドであり、Amが式（II）で表されるアマトキシンである、請求項５〜１１および１９〜４２のいずれか一項に記載の方法：
【化７】
2019522050.tif 000040
［式中、Xが、S、SO、またはSO2であり；
R1が、H、または前記抗体もしくはその抗原結合フラグメントに共有結合しているリンカーであり；ならびに
R2が、H、または前記抗体もしくはその抗原結合フラグメントに共有結合しているリンカーであり；
ここで、R1がHである場合、R2は前記リンカーであり、R2がHである場合、R1は前記リンカーである］。
【請求項５３】
前記細胞毒素が、DM1およびDM4からなる群より選択されるメイタンシノイドである、請求項５〜１１および１９〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記細胞毒素が、モノメチルアウリスタチンEおよびモノメチルアウリスタチンFからなる群より選択されるアウリスタチンである、請求項５〜１１および１９〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記細胞毒素が、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、およびイダルビシンからなる群より選択されるアントラサイクリンである、請求項５〜１１および１９〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ポリクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Fv分子（scFv）、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')2分子、およびタンデムジscFVからなる群より選択される、請求項１〜１１および２６〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記抗体が、IgG、IgA、IgM、IgD、およびIgEからなる群より選択されるアイソタイプを有する、請求項１〜１１および２６〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドが、前記患者への投与後に、がん細胞、自己免疫細胞、または造血幹細胞に取り込まれる、請求項１〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドが、がん細胞、自己免疫細胞、または造血幹細胞の壊死を促進することができる、請求項１〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドが、前記患者への投与の際に、1つ以上の補体タンパク質を前記造血幹細胞に補充することができる、請求項２〜５、７〜１１、１３〜２５、２７〜２９、３１〜３３、３５〜３８、および４０〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
造血幹細胞を含む前記移植片が、前記抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドの濃度が前記患者の血液から実質的に除去された後に患者に投与される、請求項２〜５、７〜１１、１３〜２５、２７〜２９、３１〜３３、３５〜３８、および４０〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記造血幹細胞またはその子孫が、前記造血幹細胞を前記患者に移植してから2日以上後に、造血幹細胞の機能的能力を維持している、請求項２〜５、７〜１１、１３〜２５、２７〜２９、３１〜３３、３５〜３８、および４０〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記造血幹細胞またはその子孫が、前記造血幹細胞を前記患者に移植した後に、造血組織に局在化することおよび／または造血を回復させることができる、請求項２〜５、７〜１１、１３〜２５、２７〜２９、３１〜３３、３５〜３８、および４０〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記患者への移植の際に、前記造血幹細胞が、巨核球、血小板、血小板、赤血球、肥満細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、小膠細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Tリンパ球、およびBリンパ球からなる群より選択される細胞集団の回復を引き起こす、請求項２〜５、７〜１１、１３〜２５、２７〜２９、３１〜３３、３５〜３８、および４０〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記患者が幹細胞障害に罹患している、請求項１〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記患者が異常ヘモグロビン症障害に罹患している、請求項１〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記異常ヘモグロビン症障害が、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコニ貧血、再生不良性貧血、およびウィスコット-アルドリッチ症候群からなる群より選択される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記異常ヘモグロビン症障害がファンコニ貧血である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
前記異常ヘモグロビン症障害が再生不良性貧血である、請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
前記異常ヘモグロビン症障害が鎌状赤血球貧血である、請求項６６に記載の方法。
【請求項７１】
前記異常ヘモグロビン症障害がサラセミアである、請求項６６に記載の方法。
【請求項７２】
前記患者が骨髄異形成障害に罹患している、請求項１〜７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
前記患者が免疫不全障害に罹患している、請求項１〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記免疫不全障害が先天性免疫不全である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記免疫不全障害が後天性免疫不全である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
前記後天性免疫不全が、ヒト免疫不全ウイルスまたは後天性免疫不全症候群である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記患者が代謝障害に罹患している、請求項１〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記代謝障害が、グリコーゲン蓄積症、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴリピドーシス、および異染性白質ジストロフィーからなる群より選択される、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記患者が、がんに罹患している、請求項１〜７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
前記がんが、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、および神経芽細胞腫からなる群より選択される、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記がんが、血液がんである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８２】
前記がんが、急性骨髄性白血病である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８３】
前記がんが、急性リンパ性白血病である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８４】
前記がんが、慢性骨髄性白血病である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８５】
前記がんが、慢性リンパ性白血病である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８６】
前記がんが、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８７】
前記がんが、非ホジキンリンパ腫である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８８】
前記患者が、アデノシンデアミナーゼ欠損症および重症複合免疫不全、高免疫グロブリンM症候群、チェディアック・東症候群、遺伝性リンパ組織球増多症、大理石骨病、骨形成不全症、蓄積症、サラセミアメジャー、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、および若年性関節リウマチからなる群より選択される障害に罹患している、請求項１〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
前記患者が自己免疫疾患に罹患している、請求項１〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
前記自己免疫障害が、以下からなる群より選択される、請求項８９に記載の方法：多発性硬化症、ヒト全身性狼瘡、関節リウマチ、炎症性腸疾患、乾癬の治療、1型真性糖尿病、急性播種性脳脊髄炎、アジソン病、全身性脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳炎、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性卵巣炎、バロー病、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、シャガス病、慢性疲労免疫不全症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、クローン病、瘢痕性類天疱瘡、セリアック病-疱疹状皮膚炎、寒冷凝集素症、CREST症候群、ドゴー病、円板状狼瘡、自律神経失調症、子宮内膜症、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症-線維筋炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、特発性および／または急性血小板減少性紫斑病、特発性肺線維症、IgA神経障害、間質性膀胱炎、若年性関節炎、川崎病、扁平苔癬、ライム病、メニエール病、混合結合組織病、重症筋無力症、神経性筋緊張症、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、視神経炎、オード甲状腺炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多発性軟骨炎、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性胆汁性肝硬変、結節性多発動脈炎、多腺症候群、リウマチ性多発筋痛、原発性無ガンマグロブリン血症、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティフパーソン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎、潰瘍性大腸炎、ぶどう膜炎、血管炎、白斑、外陰痛、ならびにウェゲナー肉芽腫症。
【請求項９１】
前記自己免疫障害が強皮症である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
前記自己免疫障害が多発性硬化症である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９３】
前記自己免疫障害が潰瘍性大腸炎である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９４】
前記自己免疫障害がクローン病である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９５】
前記自己免疫障害が1型糖尿病である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９６】
前記方法が前記障害またはがんを治療する、請求項６５〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
CD45+細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記集団を式Ab-Amで表されるコンジュゲートの有効量と接触させる工程を含み、式中、Abが、CD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Amがアマトキシンである、方法。
【請求項９８】
Amが、式（IA）で表される、請求項９７に記載の方法：
【化８】
2019522050.tif 000041
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4、R5、R6、およびR7は、それぞれ独立して、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたC1-C6アルキル、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意に置換されたC2-C6アルケニル、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意に置換されたC2-C6アルキニル、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたC1-C6アルキレン、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキレン、任意に置換されたC2-C6アルケニレン、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニレン、任意に置換されたC2-C6アルキニレン、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；ならびに
Zは、L上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位であり、
式中、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む］。
【請求項９９】
Amが、式（IB）で表される、請求項９７に記載の方法：
【化９】
2019522050.tif 000042
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4、R5、R6、およびR7は、それぞれ独立して、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたC1-C6アルキル、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意に置換されたC2-C6アルケニル、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意に置換されたC2-C6アルキニル、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたC1-C6アルキレン、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキレン、任意に置換されたC2-C6アルケニレン、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニレン、任意に置換されたC2-C6アルキニレン、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；ならびに
Zは、L上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位であり、
式中、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む］。
【請求項１００】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのFcドメイン内のシステイン残基を介して前記アマトキシンにコンジュゲートしている、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０１】
前記システイン残基が、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのFcドメインにおける突然変異によって導入される、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記システイン残基が、Cys118、Cys239、およびCys265からなる群より選択される、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記システイン残基が、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのFcドメインに天然に存在する、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０４】
前記FcドメインがIgG Fcドメインであり、前記システイン残基がCys261、Cys321、Cys367、およびCys425からなる群より選択される、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
R1が、H、OH、またはORAであり；
R2が、H、OH、またはORBであり；
RAおよびRBが、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し：
【化１０】
2019522050.tif 000043
；
R3、R4、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R5がORCであり；
R8が、OHまたはNH2であり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項９８または９９に記載の方法。
【請求項１０６】
R1およびR2が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3がRCであり；
R4、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R5が、H、OH、またはOC1-C6アルキルであり；
R8が、OHまたはNH2であり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項９８または９９に記載の方法。
【請求項１０７】
R1およびR2が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R4が、ORC、またはRCであり；
R5が、H、OH、またはOC1-C6アルキルであり；
R8が、OHまたはNH2であり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項９８または９９に記載の方法。
【請求項１０８】
R1およびR2が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R4およびR5が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R8が、ORCまたはNHRCであり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項９８または９９に記載の方法。
【請求項１０９】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、CD45+細胞によって取り込まれる、請求項９７に記載の方法。
【請求項１１０】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、約0.1pM〜約1μMのKdでCD45に結合する、請求項９７に記載の方法。
【請求項１１１】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、約9×10-2M-1s-1〜約1×102M-1s-1のkonでCD45に結合する、請求項９７に記載の方法。
【請求項１１２】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、CD45の第2の抗体またはその抗原結合フラグメントへの結合を競合的に阻害し、前記第2の抗体またはその抗原結合フラグメントが、以下の相補性決定領域（CDR）を含む、請求項９７に記載の方法：
a.アミノ酸配列SYAMS（配列番号１６）を有するCDR-H1；
b.アミノ酸配列AISGSGGSTFYADSVRG（配列番号１７）を有するCDR-H2；
c.アミノ酸配列EVMGPIFFDY（配列番号１８）を有するCDR-H3；
d.アミノ酸配列RASQSIISSALA（配列番号１９）を有するCDR-L1；
e.アミノ酸配列GASSRAT（配列番号２０）を有するCDR-L2；および
f.アミノ酸配列QQYGSTPLT（配列番号２１）を有するCDR-L3。
【請求項１１３】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ポリクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Fv分子（scFv）、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')2分子、およびタンデムジscFVからなる群より選択される、請求項９７に記載の方法。
【請求項１１４】
式Ab-Amで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Amがアマトキシンである、コンジュゲート。
【請求項１１５】
Amが、式（IA）で表される、請求項１１４に記載のコンジュゲート：
【化１１】
2019522050.tif 000044
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4、R5、R6、およびR7は、それぞれ独立して、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたC1-C6アルキル、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意に置換されたC2-C6アルケニル、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意に置換されたC2-C6アルキニル、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたC1-C6アルキレン、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキレン、任意に置換されたC2-C6アルケニレン、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニレン、任意に置換されたC2-C6アルキニレン、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；ならびに
Zは、L上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位であり、
式中、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む］。
【請求項１１６】
Amが、式（IB）で表される、請求項１１４に記載のコンジュゲート：
【化１２】
2019522050.tif 000045
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4、R5、R6、およびR7は、それぞれ独立して、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたC1-C6アルキル、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意に置換されたC2-C6アルケニル、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意に置換されたC2-C6アルキニル、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたC1-C6アルキレン、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキレン、任意に置換されたC2-C6アルケニレン、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニレン、任意に置換されたC2-C6アルキニレン、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；ならびに
Zは、L上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位であり、
式中、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む］。
【請求項１１７】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのFcドメイン内のシステイン残基を介して前記アマトキシンにコンジュゲートしている、請求項１１４に記載のコンジュゲート。
【請求項１１８】
前記システイン残基が、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのFcドメインにおける突然変異によって導入される、請求項１１７に記載のコンジュゲート。
【請求項１１９】
前記システイン残基が、Cys118、Cys239、およびCys265からなる群より選択される、請求項１１８に記載のコンジュゲート。
【請求項１２０】
前記システイン残基が、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのFcドメインに天然に存在する、請求項１１７に記載のコンジュゲート。
【請求項１２１】
前記FcドメインがIgG Fcドメインであり、前記システイン残基がCys261、Cys321、Cys367、およびCys425からなる群より選択される、請求項１２０に記載のコンジュゲート。
【請求項１２２】
R1が、H、OH、またはORAであり；
R2が、H、OH、またはORBであり；
RAおよびRBが、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し：
【化１３】
2019522050.tif 000046
；
R3、R4、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R5がORCであり；
R8が、OHまたはNH2であり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項１１５または１１６に記載のコンジュゲート。
【請求項１２３】
R1およびR2が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3がRCであり；
R4、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R5が、H、OH、またはOC1-C6アルキルであり；
R8が、OHまたはNH2であり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項１１５または１１６に記載のコンジュゲート。
【請求項１２４】
R1およびR2が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R4が、ORC、またはRCであり；
R5が、H、OH、またはOC1-C6アルキルであり；
R8が、OHまたはNH2であり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項１１５または１１６に記載のコンジュゲート。
【請求項１２５】
R1およびR2が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R4およびR5が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R8が、ORCまたはNHRCであり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項１１５または１１６に記載のコンジュゲート。
【請求項１２６】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、CD45+細胞によって取り込まれる、請求項１１４に記載のコンジュゲート。
【請求項１２７】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、約0.1pM〜約1μMのKdでCD45に結合する、請求項１１４に記載のコンジュゲート。
【請求項１２８】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、約9×10-2M-1s-1〜約1×102M-1s-1のkonでCD45に結合する、請求項１１４に記載のコンジュゲート。
【請求項１２９】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、CD45の第2の抗体またはその抗原結合フラグメントへの結合を競合的に阻害し、前記第2の抗体またはその抗原結合フラグメントが、以下の相補性決定領域（CDR）を含む、請求項１１４に記載のコンジュゲート：
a.アミノ酸配列SYAMS（配列番号１６）を有するCDR-H1；
b.アミノ酸配列AISGSGGSTFYADSVRG（配列番号１７）を有するCDR-H2；
c.アミノ酸配列EVMGPIFFDY（配列番号１８）を有するCDR-H3；
d.アミノ酸配列RASQSIISSALA（配列番号１９）を有するCDR-L1；
e.アミノ酸配列GASSRAT（配列番号２０）を有するCDR-L2；および
f.アミノ酸配列QQYGSTPLT（配列番号２１）を有するCDR-L3。
【請求項１３０】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ポリクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Fv分子（scFv）、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')2分子、およびタンデムジscFVからなる群より選択される、請求項１１４に記載のコンジュゲート。
【請求項１３１】
CD135+細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記集団を式Ab-Amで表されるコンジュゲートの有効量と接触させる工程を含み、式中、Abが、CD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Amがアマトキシンである、方法。
【請求項１３２】
Amが、式（IA）で表される、請求項１３１に記載の方法：
【化１４】
2019522050.tif 000047
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4、R5、R6、およびR7は、それぞれ独立して、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたC1-C6アルキル、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意に置換されたC2-C6アルケニル、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意に置換されたC2-C6アルキニル、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたC1-C6アルキレン、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキレン、任意に置換されたC2-C6アルケニレン、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニレン、任意に置換されたC2-C6アルキニレン、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；ならびに
Zは、L上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位であり、
式中、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む］。
【請求項１３３】
Amが、式（IB）で表される、請求項１３１に記載の方法：
【化１５】
2019522050.tif 000048
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4、R5、R6、およびR7は、それぞれ独立して、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたC1-C6アルキル、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意に置換されたC2-C6アルケニル、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意に置換されたC2-C6アルキニル、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたC1-C6アルキレン、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキレン、任意に置換されたC2-C6アルケニレン、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニレン、任意に置換されたC2-C6アルキニレン、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；ならびに
Zは、L上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位であり、
式中、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む］。
【請求項１３４】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのFcドメイン内のシステイン残基を介して前記アマトキシンにコンジュゲートしている、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３５】
前記システイン残基が、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのFcドメインにおける突然変異によって導入される、請求項１３４に記載の方法。
【請求項１３６】
前記システイン残基が、Cys118、Cys239、およびCys265からなる群より選択される、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３７】
前記システイン残基が、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのFcドメインに天然に存在する、請求項１３４に記載の方法。
【請求項１３８】
前記FcドメインがIgG Fcドメインであり、前記システイン残基がCys261、Cys321、Cys367、およびCys425からなる群より選択される、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
R1が、H、OH、またはORAであり；
R2が、H、OH、またはORBであり；
RAおよびRBが、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し：
【化１６】
2019522050.tif 000049
；
R3、R4、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R5がORCであり；
R8が、OHまたはNH2であり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項１３２または１３３に記載の方法。
【請求項１４０】
R1およびR2が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3がRCであり；
R4、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R5が、H、OH、またはOC1-C6アルキルであり；
R8が、OHまたはNH2であり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項１３２または１３３に記載の方法。
【請求項１４１】
R1およびR2が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R4が、ORC、またはRCであり；
R5が、H、OH、またはOC1-C6アルキルであり；
R8が、OHまたはNH2であり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項１３２または１３３に記載の方法。
【請求項１４２】
R1およびR2が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R4およびR5が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R8が、ORCまたはNHRCであり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項１３２または１３３に記載の方法。
【請求項１４３】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、CD135+細胞によって取り込まれる、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１４４】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、約0.1pM〜約1μMのKdでCD135に結合する、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１４５】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、約9×10-2M-1s-1〜約1×102M-1s-1のkonでCD135に結合する、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１４６】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、CD135の第2の抗体またはその抗原結合フラグメントへの結合を競合的に阻害し、前記第2の抗体またはその抗原結合フラグメントが、以下の相補性決定領域（CDR）を含む、請求項１３１に記載の方法：
a.アミノ酸配列SYYMH（配列番号１）を有するCDR-H1；
b.アミノ酸配列IINPSGGSTSYAQKFQG（配列番号２）を有するCDR-H2；
c.アミノ酸配列GVGAHDAFDI（配列番号３）またはVVAAAVADY（配列番号４）を有するCDR-H3；
d.アミノ酸配列RSSQSLLHSNGNNYLD（配列番号５）またはRSSQSLLHSNGYNYLD（配列番号６）を有するCDR-L1；
e.アミノ酸配列LGSNRAS（配列番号７）を有するCDR-L2；および
f.アミノ酸配列MQGTHPAIS（配列番号８）またはMQSLQTPFT（配列番号９）を有するCDR-L3。
【請求項１４７】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、CD135の第2の抗体またはその抗原結合フラグメントへの結合を競合的に阻害し、前記第2の抗体またはその抗原結合フラグメントが、以下の相補性決定領域（CDR）を含む、請求項１３１に記載の方法：
a.アミノ酸配列SYAIS（配列番号１０）を有するCDR-H1；
b.アミノ酸配列GIIPIFGTANYAQKFQG（配列番号１１）を有するCDR-H2；
c.アミノ酸配列FALFGFREQAFDI（配列番号１２）を有するCDR-H3；
d.アミノ酸配列RASQSISSYLN（配列番号１３）を有するCDR-L1；
e.アミノ酸配列AASSLQS（配列番号１４）を有するCDR-L2；および
f.アミノ酸配列QQSYSTPFT（配列番号１５）を有するCDR-L3。
【請求項１４８】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ポリクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Fv分子（scFv）、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')2分子、およびタンデムジscFVからなる群より選択される、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１４９】
式Ab-Amで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Amがアマトキシンである、コンジュゲート。
【請求項１５０】
Amが、式（IA）で表される、請求項１４９に記載のコンジュゲート：
【化１７】
2019522050.tif 000050
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4、R5、R6、およびR7は、それぞれ独立して、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたC1-C6アルキル、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意に置換されたC2-C6アルケニル、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意に置換されたC2-C6アルキニル、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたC1-C6アルキレン、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキレン、任意に置換されたC2-C6アルケニレン、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニレン、任意に置換されたC2-C6アルキニレン、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；ならびに
Zは、L上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位であり、
式中、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む］。
【請求項１５１】
Amが、式（IB）で表される、請求項１４９に記載のコンジュゲート：
【化１８】
2019522050.tif 000051
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4、R5、R6、およびR7は、それぞれ独立して、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたC1-C6アルキル、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意に置換されたC2-C6アルケニル、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意に置換されたC2-C6アルキニル、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたC1-C6アルキレン、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキレン、任意に置換されたC2-C6アルケニレン、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニレン、任意に置換されたC2-C6アルキニレン、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；ならびに
Zは、L上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位であり、
式中、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む］。
【請求項１５２】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのFcドメイン内のシステイン残基を介して前記アマトキシンにコンジュゲートしている、請求項１４９に記載のコンジュゲート。
【請求項１５３】
前記システイン残基が、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのFcドメインにおける突然変異によって導入される、請求項１５２に記載のコンジュゲート。
【請求項１５４】
前記システイン残基が、Cys118、Cys239、およびCys265からなる群より選択される、請求項１５３に記載のコンジュゲート。
【請求項１５５】
前記システイン残基が、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのFcドメインに天然に存在する、請求項１５２に記載のコンジュゲート。
【請求項１５６】
前記FcドメインがIgG Fcドメインであり、前記システイン残基がCys261、Cys321、Cys367、およびCys425からなる群より選択される、請求項１５５に記載のコンジュゲート。
【請求項１５７】
R1が、H、OH、またはORAであり；
R2が、H、OH、またはORBであり；
RAおよびRBが、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し：
【化１９】
2019522050.tif 000052
；
R3、R4、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R5がORCであり；
R8が、OHまたはNH2であり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項１５０または１５１に記載のコンジュゲート。
【請求項１５８】
R1およびR2が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3がRCであり；
R4、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R5が、H、OH、またはOC1-C6アルキルであり；
R8が、OHまたはNH2であり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項１５０または１５１に記載のコンジュゲート。
【請求項１５９】
R1およびR2が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R4が、ORC、またはRCであり；
R5が、H、OH、またはOC1-C6アルキルであり；
R8が、OHまたはNH2であり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項１５０または１５１に記載のコンジュゲート。
【請求項１６０】
R1およびR2が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3、R6、およびR7が、それぞれHであり；
R4およびR5が、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R8が、ORCまたはNHRCであり；ならびに
R9が、HまたはOHである、請求項１５０または１５１に記載のコンジュゲート。
【請求項１６１】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、CD135+細胞によって取り込まれる、請求項１４９に記載のコンジュゲート。
【請求項１６２】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、約0.1pM〜約1μMのKdでCD135に結合する、請求項１４９に記載のコンジュゲート。
【請求項１６３】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、約9×10-2M-1s-1〜約1×102M-1s-1のkonでCD135に結合する、請求項１４９に記載のコンジュゲート。
【請求項１６４】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、CD135の第2の抗体またはその抗原結合フラグメントへの結合を競合的に阻害し、前記第2の抗体またはその抗原結合フラグメントが、以下の相補性決定領域（CDR）を含む、請求項１４９に記載のコンジュゲート：
a.アミノ酸配列SYYMH（配列番号１）を有するCDR-H1；
b.アミノ酸配列IINPSGGSTSYAQKFQG（配列番号２）を有するCDR-H2；
c.アミノ酸配列GVGAHDAFDI（配列番号３）またはVVAAAVADY（配列番号４）を有するCDR-H3；
d.アミノ酸配列RSSQSLLHSNGNNYLD（配列番号５）またはRSSQSLLHSNGYNYLD（配列番号６）を有するCDR-L1；
e.アミノ酸配列LGSNRAS（配列番号７）を有するCDR-L2；および
f.アミノ酸配列MQGTHPAIS（配列番号８）またはMQSLQTPFT（配列番号９）を有するCDR-L3。
【請求項１６５】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、CD135の第2の抗体またはその抗原結合フラグメントへの結合を競合的に阻害し、前記第2の抗体またはその抗原結合フラグメントが、以下の相補性決定領域（CDR）を含む、請求項１４９に記載のコンジュゲート：
a.アミノ酸配列SYAIS（配列番号１０）を有するCDR-H1；
b.アミノ酸配列GIIPIFGTANYAQKFQG（配列番号１１）を有するCDR-H2；
c.アミノ酸配列FALFGFREQAFDI（配列番号１２）を有するCDR-H3；
d.アミノ酸配列RASQSISSYLN（配列番号１３）を有するCDR-L1；
e.アミノ酸配列AASSLQS（配列番号１４）を有するCDR-L2；および
f.アミノ酸配列QQSYSTPFT（配列番号１５）を有するCDR-L3。
【請求項１６６】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ポリクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Fv分子（scFv）、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')2分子、およびタンデムジscFVからなる群より選択される、請求項１４９に記載のコンジュゲート。
【請求項１６７】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがシュードモナス外毒素Aである、コンジュゲート。
【請求項１６８】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、CyがdeBouganinである、コンジュゲート。
【請求項１６９】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがジフテリア毒素である、コンジュゲート。
【請求項１７０】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがサポリンである、コンジュゲート。
【請求項１７１】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがメイタンシンまたはメイタンシノイドである、コンジュゲート。
【請求項１７２】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがアウリスタチンである、コンジュゲート。
【請求項１７３】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがアントラサイクリンである、コンジュゲート。
【請求項１７４】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがカリケアマイシンである、コンジュゲート。
【請求項１７５】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがイリノテカンである、コンジュゲート。
【請求項１７６】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、CyがSN-38である、コンジュゲート。
【請求項１７７】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがデュオカルマイシンである、コンジュゲート。
【請求項１７８】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがピロロベンゾジアゼピンまたはピロロベンゾジアゼピン二量体である、コンジュゲート。
【請求項１７９】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがインドリノベンゾジアゼピンまたはインドリノベンゾジアゼピン二量体である、コンジュゲート。
【請求項１８０】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがシュードモナス外毒素Aである、コンジュゲート。
【請求項１８１】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、CyがdeBouganinである、コンジュゲート。
【請求項１８２】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがジフテリア毒素である、コンジュゲート。
【請求項１８３】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがサポリンである、コンジュゲート。
【請求項１８４】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがメイタンシンまたはメイタンシノイドである、コンジュゲート。
【請求項１８５】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがアウリスタチンである、コンジュゲート。
【請求項１８６】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがアントラサイクリンである、コンジュゲート。
【請求項１８７】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがカリケアマイシンである、コンジュゲート。
【請求項１８８】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがイリノテカンである、コンジュゲート。
【請求項１８９】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、CyがSN-38である、コンジュゲート。
【請求項１９０】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがデュオカルマイシンである、コンジュゲート。
【請求項１９１】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがピロロベンゾジアゼピンまたはピロロベンゾジアゼピン二量体である、コンジュゲート。
【請求項１９２】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがインドリノベンゾジアゼピンまたはインドリノベンゾジアゼピン二量体である、コンジュゲート。
【請求項１９３】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD34に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがシュードモナス外毒素Aである、コンジュゲート。
【請求項１９４】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD34に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、CyがdeBouganinである、コンジュゲート。
【請求項１９５】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD34に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがジフテリア毒素である、コンジュゲート。
【請求項１９６】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD34に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがサポリンである、コンジュゲート。
【請求項１９７】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD34に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがメイタンシンまたはメイタンシノイドである、コンジュゲート。
【請求項１９８】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD34に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがアウリスタチンである、コンジュゲート。
【請求項１９９】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD34に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがアントラサイクリンである、コンジュゲート。
【請求項２００】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD34に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがカリケアマイシンである、コンジュゲート。
【請求項２０１】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD34に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがイリノテカンである、コンジュゲート。
【請求項２０２】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD34に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、CyがSN-38である、コンジュゲート。
【請求項２０３】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD34に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがデュオカルマイシンである、コンジュゲート。
【請求項２０４】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD34に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがピロロベンゾジアゼピンまたはピロロベンゾジアゼピン二量体である、コンジュゲート。
【請求項２０５】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD34に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがインドリノベンゾジアゼピンまたはインドリノベンゾジアゼピン二量体である、コンジュゲート。
【請求項２０６】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD90に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがシュードモナス外毒素Aである、コンジュゲート。
【請求項２０７】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD90に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、CyがdeBouganinである、コンジュゲート。
【請求項２０８】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD90に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがジフテリア毒素である、コンジュゲート。
【請求項２０９】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD90に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがサポリンである、コンジュゲート。
【請求項２１０】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD90に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがメイタンシンまたはメイタンシノイドである、コンジュゲート。
【請求項２１１】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD90に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがアウリスタチンである、コンジュゲート。
【請求項２１２】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD90に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがアントラサイクリンである、コンジュゲート。
【請求項２１３】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD90に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがカリケアマイシンである、コンジュゲート。
【請求項２１４】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD90に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがイリノテカンである、コンジュゲート。
【請求項２１５】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD90に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、CyがSN-38である、コンジュゲート。
【請求項２１６】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD90に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがデュオカルマイシンである、コンジュゲート。
【請求項２１７】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD90に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがピロロベンゾジアゼピンまたはピロロベンゾジアゼピン二量体である、コンジュゲート。
【請求項２１８】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD90に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがインドリノベンゾジアゼピンまたはインドリノベンゾジアゼピン二量体である、コンジュゲート。
【請求項２１９】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD110に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがシュードモナス外毒素Aである、コンジュゲート。
【請求項２２０】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD110に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、CyがdeBouganinである、コンジュゲート。
【請求項２２１】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD110に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがジフテリア毒素である、コンジュゲート。
【請求項２２２】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD110に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがサポリンである、コンジュゲート。
【請求項２２３】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD110に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがメイタンシンまたはメイタンシノイドである、コンジュゲート。
【請求項２２４】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD110に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがアウリスタチンである、コンジュゲート。
【請求項２２５】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD110に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがアントラサイクリンである、コンジュゲート。
【請求項２２６】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD110に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがカリケアマイシンである、コンジュゲート。
【請求項２２７】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD110に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがイリノテカンである、コンジュゲート。
【請求項２２８】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD110に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、CyがSN-38である、コンジュゲート。
【請求項２２９】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD110に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがデュオカルマイシンである、コンジュゲート。
【請求項２３０】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD110に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがピロロベンゾジアゼピンまたはピロロベンゾジアゼピン二量体である、コンジュゲート。
【請求項２３１】
式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD110に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyがインドリノベンゾジアゼピンまたはインドリノベンゾジアゼピン二量体である、コンジュゲート。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、とりわけ血液疾患、代謝障害、がん、および自己免疫疾患などのさまざまな病状に罹患している患者の、造血幹細胞などの造血細胞によって発現される抗原に結合することができる抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドの投与による治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
医薬技術の進歩にもかかわらず、造血系の病状、とりわけ、特定の血球の疾患、代謝障害、がん、および自己免疫状態などを治療することに対する需要が依然としてある。造血幹細胞は大きな治療可能性を有するが、それらの臨床での使用を妨げてきた制約は、造血幹細胞移植片の宿主への確実な生着に伴う困難であった。現在、外因性造血幹細胞移植片の生着を促進し、これらの細胞の多能性および造血機能が移植後も維持されるようにするための組成物および方法が、必要とされている。
【発明の概要】
【０００３】
本発明は、とりわけ、造血系のさまざまな障害、代謝障害、がん、および自己免疫疾患の直接治療のための組成物および方法を提供する。本発明はさらに、造血幹細胞移植治療を受ける前に、造血幹細胞移植片の生着を促進するように、ヒト患者などの患者をコンディショニングする方法を特徴とする。患者は、異常ヘモグロビン症または他の造血性病状などの1つ以上の血液障害に罹患している患者であり得、したがって造血幹細胞移植を必要としている。本明細書に記載されるように、造血幹細胞は、造血系列の多数の細胞型に分化することができ、患者において欠乏している細胞型を増加または再増加させるために、患者に投与することができる。本発明は、細胞表面造血細胞抗原などの造血細胞によって発現されるタンパク質に結合することができる抗体、抗体フラグメント、リガンド、薬物-抗体コンジュゲート、および薬物-リガンドコンジュゲートで患者を治療する方法を特徴とし、（i）異常血球、がん細胞、もしくは自己免疫細胞などの、CD45、CD135、CD34、CD90、および／もしくはCD110を発現する細胞集団を選択的に枯渇させることによって、本明細書に記載のものの中でも特に、血液障害、代謝性疾患、がん、または自己免疫疾患などの疾患を直接治療すること、ならびに／または（ii）患者内の内因性造血幹細胞集団を枯渇させることを目的とする。CD45、CD135、CD34、CD90、および／またはCD110が、他の細胞型の中でも特に白血病細胞などのがん性細胞、自己抗原と交差反応するT細胞受容体を発現するT細胞などの自己免疫リンパ球によって発現され得るため、前者の活性は、造血系統の細胞に関連する広範囲の障害の直接治療を可能にする。造血幹細胞の選択的枯渇である後者の活性は、次いで欠員を生じさせ、それを外因性（例えば、自己、同種異系、または同系の）造血幹細胞移植片の移植によって後に補充することができる。したがって、本発明は、とりわけ、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコニ貧血、ウィスコット-アルドリッチ症候群、アデノシンデアミナーゼ欠損症-重症複合免疫不全、異染性白質ジストロフィー、ダイヤモンド-ブラックファン貧血およびシュワマン-ダイヤモンド症候群、ヒト免疫不全ウイルス感染症、および後天性免疫不全症候群などのさまざまな造血性症状、ならびにがんおよび自己免疫疾患の治療方法を提供する。
【０００４】
第1の態様では、本発明は、CD135に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することによって、ヒト患者におけるCD135+細胞の集団を枯渇させる方法を提供する。
【０００５】
別の態様では、本発明は、患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける前に、CD135に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することによって、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者におけるCD135+細胞の集団を枯渇させる方法を提供する。
【０００６】
さらなる態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含み、ここで患者が、CD135に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントを、患者におけるCD135+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で予め投与されている方法を特徴とする。
【０００７】
別の態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、CD135に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントを、患者におけるCD135+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で投与する工程と、続いて患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程とを含む方法を特徴とする。
【０００８】
前述の4つの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の相補性決定領域（CDR）を含む：
アミノ酸配列SYYMH（配列番号１）を有するCDR-H1；
アミノ酸配列IINPSGGSTSYAQKFQG（配列番号２）を有するCDR-H2；
アミノ酸配列GVGAHDAFDI（配列番号３）またはVVAAAVADY（配列番号４）を有するCDR-H3；
アミノ酸配列RSSQSLLHSNGNNYLD（配列番号５）またはRSSQSLLHSNGYNYLD（配列番号６）を有するCDR-L1；
アミノ酸配列LGSNRAS（配列番号７）を有するCDR-L2；および
アミノ酸配列MQGTHPAIS（配列番号８）またはMQSLQTPFT（配列番号９）を有するCDR-L3。
【０００９】
前述の4つの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下のCDRを含む：
アミノ酸配列SYAIS（配列番号１０）を有するCDR-H1；
アミノ酸配列GIIPIFGTANYAQKFQG（配列番号１１）を有するCDR-H2；
アミノ酸配列FALFGFREQAFDI（配列番号１２）を有するCDR-H3；
アミノ酸配列RASQSISSYLN（配列番号１３）を有するCDR-L1；
アミノ酸配列AASSLQS（配列番号１４）を有するCDR-L2；および
アミノ酸配列QQSYSTPFT（配列番号１５）を有するCDR-L3。
【００１０】
別の態様では、本発明は、患者に、CD135に結合することができるヒトFlt3リガンド、またはそのフラグメントの有効量を投与することによって、ヒト患者におけるCD135+細胞の集団を枯渇させる方法を特徴とする。
【００１１】
別の態様では、本発明は、患者が造血幹細胞を含む移植を受ける前に、患者に、CD135に結合することができるヒトFlt3リガンド、またはそのフラグメントの有効量を投与することによって、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者におけるCD135+細胞の集団を枯渇させる方法を特徴とする。
【００１２】
別の態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含み、ここで患者が、CD135に結合することができるヒトFlt3リガンド、またはそのフラグメントを、患者におけるCD135+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で予め投与されている方法を特徴とする。
【００１３】
さらなる態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、患者に、CD135に結合することができるヒトFlt3リガンド、またはそのフラグメントを、患者におけるCD135+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で投与し；続いて患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含む方法を特徴とする。
【００１４】
前述の4つの態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ヒトFlt3リガンドまたはそのフラグメントは、ヒト抗体から単離された（例えば、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4アイソタイプヒト抗体から単離された）二量体FcドメインなどのFcドメインに共有結合している。いくつかの実施形態では、Fcドメインは、一本鎖ポリペプチド鎖を含有する単量体Fcドメインである。いくつかの実施形態では、ヒトFlt3リガンドまたはそのフラグメントのN末端は、Fcドメインに結合している。いくつかの実施形態では、ヒトFlt3リガンドまたはそのフラグメントのC末端は、Fcドメインに結合している。Fcドメインは、1つ以上のコピーのFlt3リガンドまたはそのフラグメントにコンジュゲートしていてもよい。例えば、本明細書に記載の方法と併せて使用され得るコンジュゲートは、Fcドメインの各ポリペプチド鎖がヒトFlt3リガンドまたはそのフラグメントにコンジュゲートしている二量体Fcドメインを含む。Fcドメインは、次に、本明細書に記載の細胞毒素（例えば、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、α-アマニチンなどのアマトキシン、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、およびインドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体）などの細胞毒素にコンジュゲートしてもよい。
【００１５】
前述の4つの態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ヒトFlt3リガンドまたはそのフラグメントは、本明細書に記載の細胞毒素（例えば、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、α-アマニチンなどのアマトキシン、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、およびインドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体）などの細胞毒素に共有結合している。いくつかの実施形態では、ヒトFlt3リガンドまたはそのフラグメントのN末端は、細胞毒素に結合している。いくつかの実施形態では、ヒトFlt3リガンドまたはそのフラグメントのC末端は、細胞毒素に結合している。細胞毒素は、次にFcドメインにコンジュゲートしてもよい。
【００１６】
前述の4つの態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ヒトFlt3リガンドまたはそのフラグメントは、ヒトFlt3リガンドまたはそのフラグメントの1つの部位（例えば、ヒトFlt3リガンドもしくはそのフラグメントのNまたはC末端）で細胞毒素に共有結合しており、ヒトFlt3リガンドまたはそのフラグメントの別の部位（例えば、ヒトFlt3リガンドまたはそのフラグメントの反対側の末端）でFcドメインに共有結合している。
【００１７】
前述の4つの態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Fcドメインは、ヒトIgG1アイソタイプFcドメインである。いくつかの実施形態では、Fcドメインは、ヒトIgG2アイソタイプFcドメインである。いくつかの実施形態では、Fcドメインは、ヒトIgG3アイソタイプFcドメインである。いくつかの実施形態では、Fcドメインは、ヒトIgG4アイソタイプFcドメインである。
【００１８】
別の態様では、本発明は、CD34に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することによって、ヒト患者におけるCD34+細胞の集団を枯渇させる方法を特徴とする。
【００１９】
別の態様では、本発明は、患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける前に、CD34に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することによって、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者におけるCD34+細胞の集団を枯渇させる方法を特徴とする。
【００２０】
別の態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含み、ここで患者が、CD34に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントを、患者におけるCD34+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で予め投与されている方法を提供する。
【００２１】
さらなる態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、患者に、CD34に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントを、患者におけるCD34+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で投与する工程と、続いて患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程とを含む方法を特徴とする。
【００２２】
別の態様では、本発明は、CD90に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することによって、ヒト患者におけるCD90+細胞の集団を枯渇させる方法を特徴とする。
【００２３】
別の態様では、本発明は、患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける前に、CD90に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することによって、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者におけるCD90+細胞の集団を枯渇させる方法を特徴とする。
【００２４】
別の態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含み、ここで患者が、CD90に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントを、患者におけるCD90+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で予め投与されている方法を提供する。
【００２５】
さらなる態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、患者に、CD90に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントを、患者におけるCD90+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で投与する工程と、続いて患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程とを含む方法を特徴とする。
【００２６】
別の態様では、本発明は、CD110に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することによって、ヒト患者におけるCD110+細胞の集団を枯渇させる方法を特徴とする。
【００２７】
別の態様では、本発明は、患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける前に、CD110に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することによって、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者におけるCD110+細胞の集団を枯渇させる方法を特徴とする。
【００２８】
別の態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含み、ここで患者が、CD110に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントを、患者におけるCD110+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で予め投与されている方法を提供する。
【００２９】
さらなる態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、患者に、CD110に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントを、患者におけるCD110+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で投与する工程と、続いて患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程とを含む方法を特徴とする。
【００３０】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドにコンジュゲートした細胞毒素は、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、α-アマニチンなどのアマトキシン、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、もしくはインドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体である。
【００３１】
別の態様では、本発明は、CD45に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することによって、ヒト患者におけるCD45+細胞の集団を枯渇させる方法を提供する。細胞毒素は、例えば、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、α-アマニチンなどのアマトキシン、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、もしくはインドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体であり得る。
【００３２】
別の態様では、本発明は、患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける前に、CD45に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することによって、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者におけるCD45+細胞の集団を枯渇させる方法を提供する。細胞毒素は、例えば、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、α-アマニチンなどのアマトキシン、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、もしくはインドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体であり得る。
【００３３】
別の態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含み、ここで患者が、CD45に結合することができて細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントを、患者におけるCD45+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で予め投与されている方法を特徴とする。細胞毒素は、例えば、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、α-アマニチンなどのアマトキシン、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、もしくはインドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体であり得る。
【００３４】
さらなる態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、CD45に結合することができて、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、α-アマニチンなどのアマトキシン、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、もしくはインドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体などの細胞毒素にコンジュゲートした抗体またはその抗原結合フラグメントを、患者におけるCD45+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で投与する工程と、続いて患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程とを含む方法を特徴とする。
【００３５】
前述の4つの態様のいくつかの実施形態では、CD45はCD45ROである。
【００３６】
別の態様では、本発明は、CD45ROに結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することによって、ヒト患者におけるCD45RO+細胞の集団を枯渇させる方法を提供する。
【００３７】
別の態様では、本発明は、患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける前に、CD45ROに結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を投与することによって、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者におけるCD45RO+細胞の集団を枯渇させる方法を提供する。
【００３８】
別の態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含み、ここで患者が、CD45ROに結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントを、患者におけるCD45RO+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で予め投与されている方法を特徴とする。
【００３９】
さらなる態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、患者に、CD45ROに結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントを、患者におけるCD45RO+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で投与する工程と、続いて患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程とを含む方法を特徴とする。
【００４０】
本発明の前述の4つの態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、細胞毒素にコンジュゲートしている。
【００４１】
別の態様では、本発明は、CD45に結合することができるリガンドまたはそのフラグメントの有効量を投与することによって、ヒト患者におけるCD45+細胞の集団を枯渇させる方法を提供する。
【００４２】
別の態様では、本発明は、患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける前に、CD45に結合することができるリガンドまたはそのフラグメントの有効量を投与することによって、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者におけるCD45+細胞の集団を枯渇させる方法を提供する。
【００４３】
別の態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含み、ここで患者が、CD45に結合することができるリガンドまたはそのフラグメントを、患者におけるCD45+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で予め投与されている方法を特徴とする。
【００４４】
さらなる態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、CD45に結合することができるリガンドまたはそのフラグメントを、患者におけるCD45+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で投与する工程と、続いて患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程とを含む方法を特徴とする。
【００４５】
別の態様では、本発明は、CD34に結合することができるリガンドまたはそのフラグメントの有効量を投与することによって、ヒト患者におけるCD34+細胞の集団を枯渇させる方法を提供する。
【００４６】
別の態様では、本発明は、患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける前に、CD34に結合することができるリガンドまたはそのフラグメントの有効量を投与することによって、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者におけるCD34+細胞の集団を枯渇させる方法を提供する。
【００４７】
別の態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含み、ここで患者が、CD34に結合することができるリガンドまたはそのフラグメントを、患者におけるCD34+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で予め投与されている方法を特徴とする。
【００４８】
さらなる態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、CD34に結合することができるリガンドまたはそのフラグメントを、患者におけるCD34+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で投与する工程と、続いて患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程とを含む方法を特徴とする。
【００４９】
別の態様では、本発明は、CD90に結合することができるリガンドまたはそのフラグメントの有効量を投与することによって、ヒト患者におけるCD90+細胞の集団を枯渇させる方法を提供する。
【００５０】
別の態様では、本発明は、患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける前に、CD90に結合することができるリガンドまたはそのフラグメントの有効量を投与することによって、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者におけるCD90+細胞の集団を枯渇させる方法を提供する。
【００５１】
別の態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含み、ここで患者が、CD90に結合することができるリガンドまたはそのフラグメントを、患者におけるCD90+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で予め投与されている方法を特徴とする。
【００５２】
さらなる態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、CD90に結合することができるリガンドまたはそのフラグメントを、患者におけるCD90+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で投与する工程と、続いて患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程とを含む方法を特徴とする。
【００５３】
別の態様では、本発明は、CD110に結合することができるリガンドまたはそのフラグメントの有効量を投与することによって、ヒト患者におけるCD110+細胞の集団を枯渇させる方法を提供する。
【００５４】
別の態様では、本発明は、患者が造血幹細胞を含む移植片を受ける前に、CD110に結合することができるリガンドまたはそのフラグメントの有効量を投与することによって、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者におけるCD110+細胞の集団を枯渇させる方法を提供する。
【００５５】
別の態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程を含み、ここで患者が、CD110に結合することができるリガンドまたはそのフラグメントを、患者におけるCD110+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で予め投与されている方法を特徴とする。
【００５６】
さらなる態様では、本発明は、例えば、造血幹細胞移植を必要とするヒト患者を治療する方法であって、ヒト患者に、CD110に結合することができるリガンドまたはそのフラグメントを、患者におけるCD110+細胞の集団を枯渇させるのに十分な量で投与する工程と、続いて患者に、造血幹細胞を含む移植片を投与する工程とを含む方法を特徴とする。
【００５７】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、CD45（例えば、CD45RO）、CD34、CD90、およびCD110のうちの1つ以上に結合するリガンドまたはそのフラグメントは、ヒト抗体から単離された（例えば、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4アイソタイプヒト抗体から単離された）二量体FcドメインなどのFcドメインに共有結合している。いくつかの実施形態では、Fcドメインは、一本鎖ポリペプチド鎖を含有する単量体Fcドメインである。いくつかの実施形態では、リガンドまたはそのフラグメントのN末端は、Fcドメインに結合している。いくつかの実施形態では、リガンドまたはそのフラグメントのC末端は、Fcドメインに結合している。Fcドメインは、1つ以上のコピーのリガンドまたはそのフラグメントにコンジュゲートしていてもよい。例えば、本明細書に記載の方法と併せて使用され得るコンジュゲートは、Fcドメインの各ポリペプチド鎖がリガンドまたはそのフラグメントにコンジュゲートしている二量体Fcドメインを含む。Fcドメインは、次に、本明細書に記載の細胞毒素（例えば、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、α-アマニチンなどのアマトキシン、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、およびインドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体）などの細胞毒素にコンジュゲートしてもよい。
【００５８】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、リガンドまたはそのフラグメントは、本明細書に記載の細胞毒素（例えば、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、α-アマニチンなどのアマトキシン、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、およびインドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体）などの細胞毒素に共有結合している。いくつかの実施形態では、リガンドまたはそのフラグメントのN末端は、細胞毒素に結合している。いくつかの実施形態では、リガンドまたはそのフラグメントのC末端は、細胞毒素に結合している。細胞毒素は、次にFcドメインにコンジュゲートしてもよい。
【００５９】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、リガンドまたはそのフラグメントは、リガンドまたはそのフラグメントの1つの部位（例えば、リガンドもしくはそのフラグメントのNまたはC末端）で細胞毒素に共有結合しており、リガンドまたはそのフラグメントの別の部位（例えば、リガンドまたはそのフラグメントの反対側の末端）でFcドメインに共有結合している。
【００６０】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Fcドメインは、ヒトIgG1アイソタイプFcドメインである。いくつかの実施形態では、Fcドメインは、ヒトIgG2アイソタイプFcドメインである。いくつかの実施形態では、Fcドメインは、ヒトIgG3アイソタイプFcドメインである。いくつかの実施形態では、Fcドメインは、ヒトIgG4アイソタイプFcドメインである。
【００６１】
上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、細胞毒素は、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、およびプロアマヌリンなどのアマトキシンまたはその誘導体である。上記態様のいずれかのいくつかの実施形態では、細胞毒素はアマトキシンであり、細胞毒素にコンジュゲートした抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドは式Ab-Amで表され、式中、Abが抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドであり、Amがアマトキシンである。いくつかの実施形態では、Amは、式（I）で表される：
【化１】
2019522050.tif 000003
(I)
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R5は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R6は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R7は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたアルキル（例えば、C1-C6アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、C1-C6ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、C2-C6アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、C2-C6ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、C2-C6アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、C2-C6ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたアルキレン（例えば、C1-C6アルキレン）、任意に置換されたヘテロアルキレン（例えば、C1-C6ヘテロアルキレン）、任意に置換されたアルケニレン（例えば、C2-C6アルケニレン）、任意に置換されたヘテロアルケニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルケニレン）、任意に置換されたアルキニレン（例えば、C2-C6アルキニレン）、任意に置換されたヘテロアルキニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルキニレン）、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンなどのリンカーであり；ならびに
Zは、L上に存在する反応性置換基と、CD45（CD45ROなど）、CD135、CD34、CD90、および／またはCD110に結合する抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンド内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位である］。
【００６２】
いくつかの実施形態では、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む。
【００６３】
いくつかの実施形態では、Amは、式（IA）で表される： 
【化２】
2019522050.tif 000004
(IA)
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R5は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R6は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R7は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたアルキル（例えば、C1-C6アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、C1-C6ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、C2-C6アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、C2-C6ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、C2-C6アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、C2-C6ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたアルキレン（例えば、C1-C6アルキレン）、任意に置換されたヘテロアルキレン（例えば、C1-C6ヘテロアルキレン）、任意に置換されたアルケニレン（例えば、C2-C6アルケニレン）、任意に置換されたヘテロアルケニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルケニレン）、任意に置換されたアルキニレン（例えば、C2-C6アルキニレン）、任意に置換されたヘテロアルキニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルキニレン）、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンなどのリンカーであり；
Zは、L上に存在する反応性置換基と、CD45（CD45ROなど）、CD135、CD34、CD90、および／またはCD110に結合する抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンド内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位であり；ならびに
式中、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む］。
【００６４】
いくつかの実施形態では、Amは、式（IB）で表される：
【化３】
2019522050.tif 000005
(IB)
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R5は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R6は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R7は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたアルキル（例えば、C1-C6アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、C1-C6ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、C2-C6アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、C2-C6ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、C2-C6アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、C2-C6ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたアルキレン（例えば、C1-C6アルキレン）、任意に置換されたヘテロアルキレン（例えば、C1-C6ヘテロアルキレン）、任意に置換されたアルケニレン（例えば、C2-C6アルケニレン）、任意に置換されたヘテロアルケニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルケニレン）、任意に置換されたアルキニレン（例えば、C2-C6アルキニレン）、任意に置換されたヘテロアルキニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルキニレン）、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンなどのリンカーであり；
Zは、L上に存在する反応性置換基と、CD45（CD45ROなど）、CD135、CD34、CD90、および／またはCD110に結合する抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンド内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位であり；ならびに
式中、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む］。
【００６５】
いくつかの実施形態では、RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成する：
【化４】
2019522050.tif 000006
［式中、Yは、O、S、NRE、およびCREREから選択され、ならびに
REおよびRE'は、それぞれ独立して、任意に置換されたC1-C6アルキレン-RC、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキレン-RC、任意に置換されたC2-C6アルケニレン-RC、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニレン-RC、任意に置換されたC2-C6アルキニレン-RC、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニレン-RC、任意に置換されたシクロアルキレン-RC、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン-RC、任意に置換されたアリーレン-RC、または任意に置換されたヘテロアリーレン-RCである］。
【００６６】
いくつかの実施形態では、Amは、式（IA）または式（IB）で表され、
式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し：
【化５】
2019522050.tif 000007
R3は、HまたはRCであり；
R4は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R5は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R6は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R7は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、またはNHRCであり；
R9は、HまたはOHであり；ならびに
式中、RCおよびRDは、それぞれ上記で定義した通りである。
【００６７】
いくつかの実施形態では、Amは、式（IA）または式（IB）で表され、
式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し：
【化６】
2019522050.tif 000008
R3は、HまたはRCであり；
R4およびR5は、それぞれ独立して、H、OH、ORC、RC、またはORDであり；
R6およびR7は、それぞれHであり；
R8は、OH、NH2、ORC、またはNHRCであり；
R9は、HまたはOHであり；ならびに
式中、RCは、上記で定義した通りである。
【００６８】
いくつかの実施形態では、Amは、式（IA）または式（IB）で表され、
式中、R1は、H、OH、またはORAであり；
R2は、H、OH、またはORBであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し：
【化７】
2019522050.tif 000009
R3、R4、R6、およびR7は、それぞれHであり；
R5はORCであり；
R8は、OHまたはNH2であり；
R9は、HまたはOHであり；ならびに
式中、RCは、上記で定義した通りである。
【００６９】
いくつかの実施形態では、Amは、式（IA）または式（IB）で表され、
式中、R1およびR2は、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3はRCであり；
R4、R6、およびR7は、それぞれHであり；
R5は、H、OH、またはOC1-C6アルキルであり；
R8は、OHまたはNH2であり；
R9は、HまたはOHであり；ならびに
式中、RCは、上記で定義した通りである。
【００７０】
いくつかの実施形態では、Amは、式（IA）または式（IB）で表され、
式中、R1およびR2は、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3、R6、およびR7は、それぞれHであり；
R4およびR5は、それぞれ独立して、H、OH、ORC、またはRCであり；
R8は、OHまたはNH2であり；
R9は、HまたはOHであり；ならびに
式中、RCは、上記で定義した通りである。
【００７１】
いくつかの実施形態では、Amは、式（IA）または式（IB）で表され、
式中、R1およびR2は、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3、R6、およびR7は、それぞれHであり；
R4およびR5は、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R8は、OH、NH2、ORC、またはNHRCであり；
R9は、HまたはOHであり；ならびに
式中、RCは、上記で定義した通りである。
【００７２】
いくつかの実施形態では、Amは、式（II）で表される：
【化８】
2019522050.tif 000010
［式中、Xが、S、SO、またはSO2であり；R1が、H、または抗体もしくはその抗原結合フラグメントに共有結合しているリンカーであり；ならびにR2が、H、または抗体もしくはその抗原結合フラグメントに共有結合しているリンカーであり；ここで、R1がHである場合、R2はリンカーであり、R2がHである場合、R1はリンカーである］。
【００７３】
上記態様のいずれかのいくつかの実施形態では、細胞毒素は、DM1およびDM4からなる群より選択されるメイタンシノイドである。いくつかの実施形態では、細胞毒素は、モノメチルアウリスタチンEおよびモノメチルアウリスタチンFからなる群より選択されるアウリスタチンある。いくつかの実施形態では、細胞毒素は、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、およびイダルビシンからなる群より選択されるアントラサイクリンである。
【００７４】
上記態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ポリクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Fv分子（scFv）、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')2分子、およびタンデムジscFVからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、IgG、IgA、IgM、IgD、およびIgEからなる群より選択されるアイソタイプを有する。
【００７５】
上記態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドは、患者への投与後に、造血幹細胞などの造血細胞、がん細胞、または自己免疫細胞に取り込まれる。例えば、抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドは、受容体媒介エンドサイトーシスによって（例えば、細胞表面CD45、CD135、CD34、CD90、またはCD110に結合した際に）、造血幹細胞、がん細胞、または自己免疫細胞に取り込まれ得る。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントに共有結合した細胞毒素は、化学的開裂によって（例えば、本明細書に記載のリンカーの酵素的または非特異的開裂によって）細胞内に放出され得る。次いで、細胞毒素は、とりわけ、移植治療前の内因性造血幹細胞などの内因性造血細胞、内因性がん細胞、または内因性自己免疫細胞の死を促進するように、その細胞内標的（とりわけ、有糸分裂紡錘体装置、核DNA、リボソームRNA、またはトポイソメラーゼなど）にアクセスし得る。
【００７６】
上記の態様のうちのいずれかにおける、いくつかの実施形態では、抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドは、造血幹細胞の壊死を促進することができる。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、患者への投与の際に、1つ以上の補体タンパク質、ナチュラルキラー（NK）細胞、マクロファージ、好中球、および／または好酸球を造血幹細胞に補充することによって、移植治療の前に内因性造血幹細胞の死を促進し得る。
【００７７】
いくつかの実施形態では、造血幹細胞を含む移植片は、抗体またはその抗原結合フラグメントの濃度が患者の血液から実質的に除去された後に患者に投与される。
【００７８】
いくつかの実施形態では、造血幹細胞またはその子孫は、造血幹細胞を患者に移植してから2日以上（例えば、約2〜約5日、約2〜約7日、約2〜約20日、約2〜約30日、例えば2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日、10日、11日、12日、13日、14日、15日、16日、17日、18日、19日、20日、21日、22日、23日、24日、25日、26日、27日、28日、29日、30日、またはそれ以上）後に、造血幹細胞の機能的能力を維持している。
【００７９】
いくつかの実施形態では、造血幹細胞またはその子孫は、骨髄などの造血組織に局在化すること、および／または造血幹細胞を患者に移植した後に造血を回復させることができる。
【００８０】
いくつかの実施形態では、患者への移植の際に、造血幹細胞は、巨核球、血小板、血小板、赤血球、肥満細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、小膠細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Tリンパ球、およびBリンパ球からなる群より選択される細胞集団の回復を引き起こす。
【００８１】
上記態様のいずれかのいくつかの実施形態では、本方法は、移植された造血幹細胞がホーミングし得るニッチを提供するように、造血幹細胞移植治療の前に患者の造血幹細胞の集団を枯渇させるなどによって、1つ以上の障害を治療するために使用される。移植後、造血幹細胞は、患者における欠損細胞型、または積極的に死滅されているか、もしくは例えば化学療法的方法によって死滅された細胞型を補充するように、生産的造血を確立し得る。例えば、患者は、幹細胞障害に罹患している患者であり得る。いくつかの実施形態では、患者は、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコニ貧血、再生不良性貧血、およびウィスコット-アルドリッチ症候群などの異常ヘモグロビン症障害に罹患している。患者は、先天性免疫不全障害または後天性免疫不全障害（例えば、ヒト免疫不全ウイルスもしくは後天性免疫不全症候群）などの免疫不全障害に罹患している場合がある。いくつかの実施形態では、患者は、グリコーゲン蓄積症、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴリピドーシス、および異染性白質ジストロフィーなどの代謝障害に罹患している。いくつかの実施形態では、患者は、アデノシンデアミナーゼ欠損症および重症複合免疫不全、高免疫グロブリンM症候群、チェディアック・東症候群、遺伝性リンパ組織球増多症、大理石骨病、骨形成不全症、蓄積症、サラセミアメジャー、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、および若年性関節リウマチからなる群より選択される障害に罹患している。いくつかの実施形態では、患者は、強皮症、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、および1型糖尿病などの自己免疫疾患に罹患している。いくつかの実施形態では、患者は、血液がんなどのがんまたは骨髄増殖性疾患に罹患している。いくつかの実施形態では、患者は、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫に罹患している。いくつかの実施形態では、患者は骨髄異形成症候群などの骨髄異形成疾患に罹患している。
【００８２】
上記態様のいずれかのいくつかの実施形態では、本方法は、CD45+、CD135+、CD34+、CD90+、またはCD110+細胞で特徴付けられるがん（例えば、CD45+、CD135+、CD34+、CD90+、またはCD110+細胞で特徴付けられる白血病）などのがんを直接治療するために使用されるが、それは、患者におけるCD45+、CD135+、CD34+、CD90+、もしくはCD110+がん細胞の集団を枯渇させる抗体、その抗原結合フラグメント、もしくはリガンドの投与による、および／または造血幹細胞移植の前に内因性造血幹細胞の集団を枯渇させるように、抗体、その抗原結合フラグメント、もしくはリガンドの投与による。後者の場合、移植は、例えば、がん細胞を根絶する過程の間に枯渇した細胞の集団を後で再構築し得る。がんは、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫などの血液がんであり得る。
【００８３】
上記態様のいずれかのいくつかの実施形態では、本方法は、自己免疫疾患を治療するために使用されるが、それは例えば、CD45+、CD135+、CD34+、CD90+、もしくはCD110+自己免疫細胞の集団を枯渇させるように抗体、その抗原結合フラグメント、もしくはリガンドを投与することなどによる、および／または造血幹細胞移植の前に内因性造血幹細胞の集団を枯渇させるように、抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドの投与による。後者の場合、移植は、例えば、自己免疫細胞を根絶する過程の間に枯渇した細胞の集団を後で再構築し得る。自己免疫疾患は、例えば、以下であり得る：強皮症、多発性硬化症（MS）、ヒト全身性狼瘡（SLE）、関節リウマチ（RA）、炎症性腸疾患（IBD）、乾癬の治療、1型真性糖尿病（1型糖尿病）、急性播種性脳脊髄炎（ADEM）、アジソン病、全身性脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群（APS）、再生不良性貧血、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳炎（AIED）、自己免疫性リンパ増殖性症候群（ALPS）、自己免疫性卵巣炎、バロー病、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、シャガス病、慢性疲労免疫不全症候群（CFIDS）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、クローン病、瘢痕性類天疱瘡、セリアック病-疱疹状皮膚炎、寒冷凝集素症、CREST症候群、ドゴー病、円板状狼瘡、自律神経失調症、子宮内膜症、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症-線維筋炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギランバレー症候群（GBS）、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、特発性および／または急性血小板減少性紫斑病、特発性肺線維症、IgA神経障害、間質性膀胱炎、若年性関節炎、川崎病、扁平苔癬、ライム病、メニエール病、混合性結合組織病（MCTD）、重症筋無力症、神経性筋緊張症、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群（OMS）、視神経炎、オード甲状腺炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多発性軟骨炎、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性胆汁性肝硬変、結節性多発動脈炎、多腺症候群、リウマチ性多発筋痛、原発性無ガンマグロブリン血症、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティフパーソン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎（「巨細胞性動脈炎」としても知られている）、潰瘍性大腸炎、ぶどう膜炎、血管炎、白斑、外陰痛（「外陰部前庭炎」）、ならびにウェゲナー肉芽腫症。
【００８４】
したがって、上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、本発明は、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコニ貧血、再生不良性貧血、およびウィスコット-アルドリッチ症候群などの異常ヘモグロビン症障害を治療する方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、本発明は、先天性免疫不全障害または後天性免疫不全障害（例えば、ヒト免疫不全ウイルスもしくは後天性免疫不全症候群）などの免疫不全障害を治療する方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、本発明は、グリコーゲン蓄積症、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴリピドーシス、および異染性白質ジストロフィーなどの代謝障害を治療する方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、本発明は、アデノシンデアミナーゼ欠損症および重症複合免疫不全、高免疫グロブリンM症候群、チェディアック・東症候群、遺伝性リンパ組織球増多症、大理石骨病、骨形成不全症、蓄積症、サラセミアメジャー、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、および若年性関節リウマチからなる群より選択される障害を治療する方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、本発明は、強皮症、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、および1型糖尿病などの自己免疫疾患を治療する方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、本発明は、血液がんなどのがんまたは骨髄増殖性疾患を治療する方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、本発明は、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫を治療する方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、患者は、骨髄異形成症候群などの骨髄異形成疾患に罹患している。これらの実施形態では、本方法は、CD45、CD135、CD34、CD90、もしくはCD110に結合する抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンド、および／または造血幹細胞移植片を、本発明の上記の態様および実施形態のいずれかの方法に従って投与する工程を含み得る。
【００８５】
同様に、上記態様のいずれかのいくつかの実施形態では、本発明は、CD45+、CD135+、CD34+、CD90+、またはCD110+細胞で特徴付けられるがん（例えば、CD45+、CD135+、CD34+、CD90+、またはCD110+細胞で特徴付けられる白血病）などのがんを直接治療する方法を提供する。これらの実施形態では、本方法は、CD45、CD135、CD34、CD90、もしくはCD110に結合する抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドを投与する工程を含む。がんは、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫などの血液がんであり得る。
【００８６】
さらに、上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、本発明は、以下などの自己免疫疾患を治療する方法を提供する：多発性硬化症（MS）、ヒト全身性狼瘡（SLE）、関節リウマチ（RA）、炎症性腸疾患（IBD）、乾癬の治療、1型真性糖尿病（1型糖尿病）、急性播種性脳脊髄炎（ADEM）、アジソン病、全身性脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群（APS）、再生不良性貧血、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳炎（AIED）、自己免疫性リンパ増殖性症候群（ALPS）、自己免疫性卵巣炎、バロー病、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、シャガス病、慢性疲労免疫不全症候群（CFIDS）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、クローン病、瘢痕性類天疱瘡、セリアック病-疱疹状皮膚炎、寒冷凝集素症、CREST症候群、ドゴー病、円板状狼瘡、自律神経失調症、子宮内膜症、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症-線維筋炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギランバレー症候群（GBS）、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、特発性および／または急性血小板減少性紫斑病、特発性肺線維症、IgA神経障害、間質性膀胱炎、若年性関節炎、川崎病、扁平苔癬、ライム病、メニエール病、混合性結合組織病（MCTD）、重症筋無力症、神経性筋緊張症、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群（OMS）、視神経炎、オード甲状腺炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多発性軟骨炎、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性胆汁性肝硬変、結節性多発動脈炎、多腺症候群、リウマチ性多発筋痛、原発性無ガンマグロブリン血症、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティフパーソン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎（「巨細胞性動脈炎」としても知られている）、潰瘍性大腸炎、ぶどう膜炎、血管炎、白斑、外陰痛（「外陰部前庭炎」）、ならびにウェゲナー肉芽腫症。これらの実施形態では、本方法は、CD45、CD135、CD34、CD90、もしくはCD110に結合する抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドを投与する工程を含む。
【００８７】
別の態様では、本発明は、CD45+細胞の集団を枯渇させる方法であって、該集団を式Ab-Amで表されるコンジュゲートの有効量と接触させることによる方法を特徴とし、式中、Abは、CD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Amはアマトキシンである。Amは、式（IA）で表され得る：
【化９】
2019522050.tif 000011
(IA)
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4、R5、R6、およびR7は、それぞれ独立して、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたアルキル（例えば、C1-C6アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、C1-C6ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、C2-C6アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、C2-C6ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、C2-C6アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、C2-C6ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたアルキレン（例えば、C1-C6アルキレン）、任意に置換されたヘテロアルキレン（例えば、C1-C6ヘテロアルキレン）、任意に置換されたアルケニレン（例えば、C2-C6アルケニレン）、任意に置換されたヘテロアルケニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルケニレン）、任意に置換されたアルキニレン（例えば、C2-C6アルキニレン）、任意に置換されたヘテロアルキニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルキニレン）、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンなどのリンカーであり；ならびに
Zは、L上に存在する反応性置換基と、抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位であり、
式中、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む］。
【００８８】
いくつかの実施形態では、Amは、式（IB）で表される：
【化１０】
2019522050.tif 000012
(IB)
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4、R5、R6、およびR7は、それぞれ独立して、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたアルキル（例えば、C1-C6アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、C1-C6ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、C2-C6アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、C2-C6ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、C2-C6アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、C2-C6ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたアルキレン（例えば、C1-C6アルキレン）、任意に置換されたヘテロアルキレン（例えば、C1-C6ヘテロアルキレン）、任意に置換されたアルケニレン（例えば、C2-C6アルケニレン）、任意に置換されたヘテロアルケニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルケニレン）、任意に置換されたアルキニレン（例えば、C2-C6アルキニレン）、任意に置換されたヘテロアルキニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルキニレン）、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンなどのリンカーであり；ならびに
Zは、L上に存在する反応性置換基と、抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位であり、
式中、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む］。
【００８９】
別の態様では、本発明は、式Ab-Amで表されるコンジュゲートを特徴とし、式中、Abは、CD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Amはアマトキシンである。いくつかの実施形態では、Amは、上記の式（IA）または式（IB）で表される。
【００９０】
前述の2つの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントのFcドメイン内のシステイン残基を介してアマトキシンにコンジュゲートしている。いくつかの実施形態では、システイン残基は、抗体またはその抗原結合フラグメントのFcドメインにおける突然変異によって導入される。例えば、システイン残基は、Cys118、Cys239、およびCys265からなる群より選択され得る。
【００９１】
これらの態様のいくつかの実施形態では、システイン残基は、抗体またはその抗原結合フラグメントのFcドメインに天然に存在する。例えば、Fcドメインは、ヒトIgG1 FcドメインなどのIgG Fcドメインであり得、システイン残基は、Cys261、Cys321、Cys367、およびCys425からなる群より選択され得る。
【００９２】
これらの態様のいくつかの実施形態では、R1は、H、OH、またはORAであり；
R2は、H、OH、またはORBであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し：
【化１１】
2019522050.tif 000013
；
R3、R4、R6、およびR7は、それぞれHであり；
R5はORCであり；
R8は、OHまたはNH2であり；ならびに
R9は、HまたはOHである。
【００９３】
いくつかの実施形態では、R1およびR2は、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3はRCであり；
R4、R6、およびR7は、それぞれHであり；
R5は、H、OH、またはOC1-C6アルキルであり；
R8は、OHまたはNH2であり；ならびに
R9は、HまたはOHである。
【００９４】
いくつかの実施形態では、R1およびR2は、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3、R6、およびR7は、それぞれHであり；
R4は、ORC、またはRCであり；
R5は、H、OH、またはOC1-C6アルキルであり；
R8は、OHまたはNH2であり；ならびに
R9は、HまたはOHである。
【００９５】
いくつかの実施形態では、R1およびR2は、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3、R6、およびR7は、それぞれHであり；
R4およびR5は、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R8は、ORCまたはNHRCであり；ならびに
R9は、HまたはOHである。
【００９６】
これらの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、CD45+細胞によって取り込まれる。
【００９７】
これらの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、1μM未満、750nM未満、500nM未満、250nM未満、200nM未満、150nM未満、100nM未満、75nM未満、50nM未満、10nM未満、1nM未満、0.1nM未満、10pM未満、1pM未満、または0.1pM未満のKdでCD45に結合する。いくつかの実施形態では、Kdは、約0.1pM〜約1μMである。いくつかの実施形態では、Kdは約357pMであり、konは約2.56×105M-1s-1であり、および／またはKoffは約9.14×10-5s-1である。
【００９８】
これらの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、約9×10-2M-1s-1〜約1×102M-1s-1のkonでCD45に結合する。
【００９９】
これらの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、CD45の第2の抗体またはその抗原結合フラグメントへの結合を競合的に阻害し、ここで第2の抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の相補性決定領域（CDR）を有する：
a.アミノ酸配列SYAMS（配列番号１６）を有するCDR-H1；
b.アミノ酸配列AISGSGGSTFYADSVRG（配列番号１７）を有するCDR-H2；
c.アミノ酸配列EVMGPIFFDY（配列番号１８）を有するCDR-H3；
d.アミノ酸配列RASQSIISSALA（配列番号１９）を有するCDR-L1；
e.アミノ酸配列GASSRAT（配列番号２０）を有するCDR-L2；および
f.アミノ酸配列QQYGSTPLT（配列番号２１）を有するCDR-L3。
【０１００】
これらの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ラットYTH24.5またはそのヒト化変異体である。
【０１０１】
これらの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、CD45の第2の抗体またはその抗原結合フラグメントへの結合を競合的に阻害し、ここで第2の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ラットYTH24.5またはそのヒト化変異体である。
【０１０２】
これらの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ポリクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Fv分子（scFv）、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')2分子、およびタンデムジscFVからなる群より選択される。
【０１０３】
別の態様では、本発明は、CD135+細胞の集団を枯渇させる方法であって、該集団を式Ab-Amで表されるコンジュゲートの有効量と接触させることによる方法を特徴とし、式中、Abは、CD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Amはアマトキシンである。Amは、式（IA）で表され得る：
【化１２】
2019522050.tif 000014
(IA)
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4、R5、R6、およびR7は、それぞれ独立して、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたアルキル（例えば、C1-C6アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、C1-C6ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、C2-C6アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、C2-C6ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、C2-C6アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、C2-C6ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたアルキレン（例えば、C1-C6アルキレン）、任意に置換されたヘテロアルキレン（例えば、C1-C6ヘテロアルキレン）、任意に置換されたアルケニレン（例えば、C2-C6アルケニレン）、任意に置換されたヘテロアルケニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルケニレン）、任意に置換されたアルキニレン（例えば、C2-C6アルキニレン）、任意に置換されたヘテロアルキニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルキニレン）、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンなどのリンカーであり；ならびに
Zは、L上に存在する反応性置換基と、抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位であり、
式中、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む］。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、Amは、式（IB）で表される：
【化１３】
2019522050.tif 000015
(IB)
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4、R5、R6、およびR7は、それぞれ独立して、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたアルキル（例えば、C1-C6アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、C1-C6ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、C2-C6アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、C2-C6ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、C2-C6アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、C2-C6ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたアルキレン（例えば、C1-C6アルキレン）、任意に置換されたヘテロアルキレン（例えば、C1-C6ヘテロアルキレン）、任意に置換されたアルケニレン（例えば、C2-C6アルケニレン）、任意に置換されたヘテロアルケニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルケニレン）、任意に置換されたアルキニレン（例えば、C2-C6アルキニレン）、任意に置換されたヘテロアルキニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルキニレン）、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンなどのリンカーであり；ならびに
Zは、L上に存在する反応性置換基と、抗体またはその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位であり、
式中、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む］。
【０１０５】
別の態様では、本発明は、式Ab-Amで表されるコンジュゲートを特徴とし、式中、Abは、CD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Amはアマトキシンである。いくつかの実施形態では、Amは、上記の式（IA）または式（IB）で表される。
【０１０６】
前述の2つの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントのFcドメイン内のシステイン残基を介してアマトキシンにコンジュゲートしている。いくつかの実施形態では、システイン残基は、抗体またはその抗原結合フラグメントのFcドメインにおける突然変異によって導入される。例えば、システイン残基は、Cys118、Cys239、およびCys265からなる群より選択され得る。
【０１０７】
これらの態様のいくつかの実施形態では、システイン残基は、抗体またはその抗原結合フラグメントのFcドメインに天然に存在する。例えば、Fcドメインは、ヒトIgG1 FcドメインなどのIgG Fcドメインであり得、システイン残基は、Cys261、Cys321、Cys367、およびCys425からなる群より選択され得る。
【０１０８】
これらの態様のいくつかの実施形態では、R1は、H、OH、またはORAであり；
R2は、H、OH、またはORBであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し：
【化１４】
2019522050.tif 000016
R3、R4、R6、およびR7は、それぞれHであり；
R5はORCであり；
R8は、OHまたはNH2であり；ならびに
R9は、HまたはOHである。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、R1およびR2は、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3はRCであり；
R4、R6、およびR7は、それぞれHであり；
R5は、H、OH、またはOC1-C6アルキルであり；
R8は、OHまたはNH2であり；ならびに
R9は、HまたはOHである。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、R1およびR2は、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3、R6、およびR7は、それぞれHであり；
R4は、ORC、またはRCであり；
R5は、H、OH、またはOC1-C6アルキルであり；
R8は、OHまたはNH2であり；ならびに
R9は、HまたはOHである。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、R1およびR2は、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3、R6、およびR7は、それぞれHであり；
R4およびR5は、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R8は、ORCまたはNHRCであり；ならびに
R9は、HまたはOHである。
【０１１２】
これらの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、CD135+細胞によって取り込まれる。
【０１１３】
これらの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、1μM未満、750nM未満、500nM未満、250nM未満、200nM未満、150nM未満、100nM未満、75nM未満、50nM未満、10nM未満、1nM未満、0.1nM未満、10pM未満、1pM未満、または0.1pM未満のKdでCD135に結合する。いくつかの実施形態では、Kdは、約0.1pM〜約1μMである。
【０１１４】
これらの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、約9×10-2M-1s-1〜約1×102M-1s-1のkonでCD135に結合する。
【０１１５】
これらの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下のCDRを有する：
a.アミノ酸配列SYYMH（配列番号１）を有するCDR-H1；
b.アミノ酸配列IINPSGGSTSYAQKFQG（配列番号２）を有するCDR-H2；
c.アミノ酸配列GVGAHDAFDI（配列番号３）またはVVAAAVADY（配列番号４）を有するCDR-H3；
d.アミノ酸配列RSSQSLLHSNGNNYLD（配列番号５）またはRSSQSLLHSNGYNYLD（配列番号６）を有するCDR-L1；
e.アミノ酸配列LGSNRAS（配列番号７）を有するCDR-L2；および
f.アミノ酸配列MQGTHPAIS（配列番号８）またはMQSLQTPFT（配列番号９）を有するCDR-L3。
【０１１６】
これらの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下のCDRを有する：
a.アミノ酸配列SYAIS（配列番号１０）を有するCDR-H1；
b.アミノ酸配列GIIPIFGTANYAQKFQG（配列番号１１）を有するCDR-H2；
c.アミノ酸配列FALFGFREQAFDI（配列番号１２）を有するCDR-H3；
d.アミノ酸配列RASQSISSYLN（配列番号１３）を有するCDR-L1；
e.アミノ酸配列AASSLQS（配列番号１４）を有するCDR-L2；および
f.アミノ酸配列QQSYSTPFT（配列番号１５）を有するCDR-L3。
【０１１７】
これらの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、CD135の第2の抗体またはその抗原結合フラグメントへの結合を競合的に阻害し、ここで第2の抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下のCDRを有する：
a.アミノ酸配列SYYMH（配列番号１）を有するCDR-H1；
b.アミノ酸配列IINPSGGSTSYAQKFQG（配列番号２）を有するCDR-H2；
c.アミノ酸配列GVGAHDAFDI（配列番号３）またはVVAAAVADY（配列番号４）を有するCDR-H3；
d.アミノ酸配列RSSQSLLHSNGNNYLD（配列番号５）またはRSSQSLLHSNGYNYLD（配列番号６）を有するCDR-L1；
e.アミノ酸配列LGSNRAS（配列番号７）を有するCDR-L2；および
f.アミノ酸配列MQGTHPAIS（配列番号８）またはMQSLQTPFT（配列番号９）を有するCDR-L3。
【０１１８】
これらの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、CD135の第2の抗体またはその抗原結合フラグメントへの結合を競合的に阻害し、ここで第2の抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下のCDRを有する：
a.アミノ酸配列SYAIS（配列番号１０）を有するCDR-H1；
b.アミノ酸配列GIIPIFGTANYAQKFQG（配列番号１１）を有するCDR-H2；
c.アミノ酸配列FALFGFREQAFDI（配列番号１２）を有するCDR-H3；
d.アミノ酸配列RASQSISSYLN（配列番号１３）を有するCDR-L1；
e.アミノ酸配列AASSLQS（配列番号１４）を有するCDR-L2；および
f.アミノ酸配列QQSYSTPFT（配列番号１５）を有するCDR-L3。
【０１１９】
これらの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ポリクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Fv分子（scFv）、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')2分子、およびタンデムジscFVからなる群より選択される。
【０１２０】
別の態様では、本発明は、式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD45（例えば、CD45RO）に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyが細胞毒素であるコンジュゲートを特徴とする。この態様のいくつかの実施形態では、細胞毒素は、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、もしくはインドリノベンゾジアゼピン二量体、または前述の細胞毒素のいずれかの変異体である。
【０１２１】
別の態様では、本発明は、式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyが細胞毒素であるコンジュゲートを特徴とする。この態様のいくつかの実施形態では、細胞毒素は、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、もしくはインドリノベンゾジアゼピン二量体、または前述の細胞毒素のいずれかの変異体である。
【０１２２】
別の態様では、本発明は、式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD34に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyが細胞毒素であるコンジュゲートを特徴とする。この態様のいくつかの実施形態では、細胞毒素は、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、もしくはインドリノベンゾジアゼピン二量体、または前述の細胞毒素のいずれかの変異体である。
【０１２３】
別の態様では、本発明は、式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD90に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyが細胞毒素であるコンジュゲートを特徴とする。この態様のいくつかの実施形態では、細胞毒素は、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、もしくはインドリノベンゾジアゼピン二量体、または前述の細胞毒素のいずれかの変異体である。
【０１２４】
別の態様では、本発明は、式Ab-Cyで表されるコンジュゲートであって、式中、Abが、CD110に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Cyが細胞毒素であるコンジュゲートを特徴とする。この態様のいくつかの実施形態では、細胞毒素は、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、もしくはインドリノベンゾジアゼピン二量体、または前述の細胞毒素のいずれかの変異体である。
【０１２５】
前述の5つの態様の、いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、造血幹細胞（例えば、CD45+（CD45RO+など）、CD135+、CD34+、CD90+、および／またはCD110+細胞）などの造血細胞によって取り込まれる。
【０１２６】
これらの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、1μM未満、750nM未満、500nM未満、250nM未満、200nM未満、150nM未満、100nM未満、75nM未満、50nM未満、10nM未満、1nM未満、0.1nM未満、10pM未満、1pM未満、もしくは0.1pM未満のKdでCD45（例えば、CD45RO）、CD135、CD34、CD90、またはCD110に結合する。いくつかの実施形態では、Kdは、約0.1pM〜約1μMである。
【０１２７】
この態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、約9×10-2M-1s-1〜約1×102M-1s-1のkonでCD45（例えば、CD45RO）、CD135、CD34、CD90、またはCD110に結合する。
【０１２８】
これらの態様のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ポリクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Fv分子（scFv）、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')2分子、およびタンデムジscFVからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、IgG、IgA、IgM、IgD、およびIgEからなる群より選択されるアイソタイプを有する。
【図面の簡単な説明】
【０１２９】
【図１】サポリンコンジュゲートFabフラグメントを介してサポリンにそれぞれ結合した、さまざまな濃度の抗CD45モノクローナル抗体Ab1、Ab2、およびAb3、またはアイソタイプが一致する陰性対照の、Reh細胞のin vitroでの生存率に対する効果を示すグラフである。細胞生存率は、以下の実施例８に記載のように、CellTiter-Glo（商標）アッセイキットを用いて評価した。
【図２】サポリンコンジュゲートFabフラグメントを介してサポリンにそれぞれ結合した、さまざまな濃度の抗CD45モノクローナル抗体またはアイソタイプが一致する陰性対照の、ヒトCD34+細胞のin vitroでの生存率に対する効果を示すグラフである。細胞生存率は、以下の実施例８に記載のように、CellTiter-Glo（商標）アッセイキットを用いて評価した。
【発明を実施するための形態】
【０１３０】
本発明は、さまざまな障害、とりわけ、造血系統における細胞型の疾患、がん、自己免疫疾患、代謝障害、および幹細胞障害などを治療する方法を提供する。本明細書に記載の組成物および方法は、（i）病状を引き起こす細胞の集団、例えばがん細胞（例えば、白血病細胞）および自己免疫細胞（例えば、自己反応性T細胞）の集団などを直接枯渇させ得る、および／または（ii）移植された造血幹細胞の生着を、移植された細胞がホーミングし得るニッチを提供することによって促進するように、内因性造血幹細胞の集団を枯渇させ得る。前述の活性は、内因性の疾患を引き起こす細胞もしくは造血幹細胞によって発現される抗原に結合することができる抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドの投与によって達成することができる。疾患の直接治療の場合には、この投与は、関心のある病状を引き起こす細胞の量の減少を引き起こし得る。造血幹細胞移植治療のために患者を備えさせる場合、この投与は、内因性造血幹細胞の集団の選択的枯渇を引き起こすことができ、それによって骨髄などの造血組織に欠員を生じさせ、これは後に、移植された外因性造血幹細胞によって補充され得る。本発明は、CD45、CD135、CD34、CD90、またはCD110に結合することができる抗体、その抗原結合フラグメント、およびリガンドを患者に投与して、上記の両方の活性を達成することができるという発見に一部基づいている。CD45、CD135、CD34、CD90、またはCD110に結合する抗体、その抗原結合フラグメント、およびリガンドを、がんまたは自己免疫疾患に罹患している患者に投与し、がん性細胞または自己免疫細胞の集団を直接枯渇させることができ、ならびに移植された造血幹細胞の生存および生着の可能性を促進させるために、造血幹細胞移植治療を必要とする患者に投与することもできる。
【０１３１】
抗CD45抗体、抗CD135抗体、抗CD34抗体、抗CD90抗体、または抗CD110抗体、それらの抗原結合フラグメント、またはリガンドの投与による造血幹細胞移植片の生着は、さまざまな経験的測定で明らかにすることができる。例えば、移植された造血幹細胞の生着は、CD45、CD135、CD34、CD90、またはCD110に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントの投与と、それに続く造血幹細胞移植片の投与との後に、患者の骨髄内に存在する競合的再構築単位（CRU）の量を測定することによって評価できる。さらに、蛍光、発色、または発光産物を生じる化学反応を触媒する酵素などのレポーター遺伝子を、ドナー造血幹細胞がトランスフェクトされたベクターに組み込ませ、続いてその対応するシグナルを、骨髄などの造血幹細胞がホーミングしている組織においてモニターすることによって、造血幹細胞移植片の生着を観察することができる。例えば、当該技術分野において知られている蛍光活性化細胞分類（FACS）分析方法によって決定されるように、造血幹細胞および前駆細胞の量および生存の評価によって、造血幹細胞移植片の生着を観察することもできる。生着は、移植後期間中の末梢血中の白血球数を測定することによっても、および／または骨髄穿刺液試料中のドナー細胞による骨髄細胞の回復を測定することによっても決定することができる。
【０１３２】
以下の節は、がんもしくは自己免疫疾患を患っている患者、または造血幹細胞移植治療を必要とする患者などの患者に、造血幹細胞移植片の生着を促進するために投与することができる抗体、その抗原結合フラグメント、およびリガンドの説明、ならびにそのような治療薬を（例えば、造血幹細胞移植の前に）患者に投与する方法を提供する。
【０１３３】
（定義）
本明細書で使用される場合、用語「約」は、記載されている値の上下10%以内の値を指す。例えば、用語「約5nM」は、4.5nM〜5.5nMの範囲を示す。
【０１３４】
本明細書で使用される場合、用語「アマトキシン」は、タマゴテングタケによって産生されるペプチドのアマトキシンファミリーのメンバー、またはその変異体もしくは誘導体、例えばRNAポリメラーゼII活性を阻害することができるその変異体もしくは誘導体を指す。本明細書に記載の組成物および方法との併用で有用なアマトキシンには、以下の式（III）の化合物、例えば、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、およびプロアマヌリンなどが挙げられる。式（III）は、以下の通りである：
【化１５】
2019522050.tif 000017
［式中、R1は、H、OH、またはORAであり；
R2は、H、OH、またはORBであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、HまたはRDであり；
R4は、H、OH、ORD、またはRDであり；
R5は、H、OH、ORD、またはRDであり；
R6は、H、OH、ORD、またはRDであり；
R7は、H、OH、ORD、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、またはORDであり；
R9は、H、OH、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；ならびに
RDは、任意に置換されたアルキル（例えば、C1-C6アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、C1-C6ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、C2-C6アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、C2-C6ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、C2-C6アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、C2-C6ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールである。
【０１３５】
例えば、本明細書に記載の組成物および方法との併用で有用なアマトキシンには、以下の式（IIIA）の化合物が挙げられる：
【化１６】
2019522050.tif 000018
［式中、R1は、H、OH、またはORAであり；
R2は、H、OH、またはORBであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、HまたはRDであり；
R4は、H、OH、ORD、またはRDであり；
R5は、H、OH、ORD、またはRDであり；
R6は、H、OH、ORD、またはRDであり；
R7は、H、OH、ORD、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、またはORDであり；
R9は、H、OH、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；ならびに
RDは、任意に置換されたアルキル（例えば、C1-C6アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、C1-C6ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、C2-C6アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、C2-C6ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、C2-C6アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、C2-C6ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールである。
【０１３６】
本明細書に記載の組成物および方法との併用で有用なアマトキシンには、以下の式（IIIB）の化合物も挙げられる：
【化１７】
2019522050.tif 000019
［式中、R1は、H、OH、またはORAであり；
R2は、H、OH、またはORBであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、HまたはRDであり；
R4は、H、OH、ORD、またはRDであり；
R5は、H、OH、ORD、またはRDであり；
R6は、H、OH、ORD、またはRDであり；
R7は、H、OH、ORD、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、またはORDであり；
R9は、H、OH、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；ならびに
RDは、任意に置換されたアルキル（例えば、C1-C6アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、C1-C6ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、C2-C6アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、C2-C6ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、C2-C6アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、C2-C6ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールである。
【０１３７】
本明細書に記載されるように、アマトキシンは、例えば、リンカー部位を介して、抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドにコンジュゲートされ得る。アマトキシンコンジュゲーションの例示的な方法およびそのようなプロセスに有用なリンカーは、「化学的コンジュゲーション用リンカー」と題された節、ならびに以下の表２に記載されている。本明細書に記載の組成物および方法による、抗体、抗原結合フラグメント、またはリガンドへのコンジュゲーションに有用な例示的なリンカー含有アマトキシンは、本明細書に列挙される構造式（I）、（IA）、（IB）および（II）に示される。
【０１３８】
本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、特定の抗原に特異的に結合するか、またはそれと免疫学的に反応性である免疫グロブリン分子を指し、ポリクローナル、モノクローナル、遺伝子操作された、およびその他の修飾形態の抗体が挙げられ、限定されないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重、三重および四重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、およびテトラボディ）、ならびに、例えば、Fab'、F(ab')2、Fab、Fv、rIgG、およびscFVフラグメントなどが含まれる抗体の抗原結合フラグメントが挙げられる。特に断りのない限り、用語「モノクローナル抗体」（mAb）は、標的タンパク質に特異的に結合することができるインタクトな分子と、抗体フラグメント（例えば、FabおよびF(ab')2フラグメントを含む）との両方を含むことを意味する。本明細書で使用される場合、FabおよびF(ab')2フラグメントは、インタクトな抗体のFcフラグメントを欠く抗体フラグメントを指す。これらの抗体フラグメントの例は、本明細書に記載されている。
【０１３９】
用語「抗原結合フラグメント」語は、本明細書で使用される場合、標的抗原に特異的に結合する能力を保持している、抗体の1つ以上のフラグメントを指す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体のフラグメントによって実行され得る。抗体フラグメントは、例えば、Fab、F(ab')2、scFV、ダイアボディ、トリアボディ、アフィボディ、ナノボディ、アプタマー、またはドメイン抗体であり得る。抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含される結合フラグメントの例には、以下が含まれるが、これらに限定されない：（i）Fabフラグメント、VL、VH、CL、およびCH1ドメインからなる一価フラグメント；（ii）F(ab')2フラグメント、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された2つのFabフラグメントを含む二価フラグメント；（iii）VHおよびCH1ドメインからなるFdフラグメント；（iv）抗体の単一アームのVLおよびVHドメインからなるFvフラグメント、（v）VHおよびVLドメインを含むdAb；（vi）VHドメインからなるdAbフラグメント（例えば、Ward et al., Nature 341:544-546, 1989を参照）；（vii）VHまたはVLドメインからなるdAb；（viii）単離された相補性決定領域（CDR）；（ix）任意に合成リンカーによって連結されていてもよい2つ以上（例えば、2、3、4、5、または6つ）の単離されたCDRの組み合わせ。さらに、Fvフラグメントの2つのドメイン、VLおよびVHは、別々の遺伝子によってコードされているが、それらは、組み換え法を用いて、VLおよびVH領域が対になって一価分子を形成する単一のタンパク質鎖としてそれらが作製されることを可能にするリンカーによって連結され得る（一本鎖Fv（scFv）として知られる；例えば、Bird et al., Science 242:423-426, 1988およびHuston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883, 1988を参照）。これらの抗体フラグメントは、当業者に知られている従来技術を用いて得ることができ、フラグメントは、インタクトな抗体と同じ様式で、有用性についてスクリーニングすることができる。抗原結合フラグメントは、組み換えDNA技術、インタクトな免疫グロブリンの酵素的または化学的開裂によって、または、ある場合には、当該技術分野で知られている化学的ペプチド合成手順によって産生することができる。
【０１４０】
本明細書で使用される場合、用語「抗CD45抗体」は、CD45（例えば、CD45RO）に特異的に結合することができる、免疫グロブリン分子の少なくとも一部、例えば、限定されないが、重鎖もしくは軽鎖またはそれらのリガンド結合部位の少なくとも1つの相補性決定領域（CDR）、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域、またはそれらの任意の部位などを含むタンパク質またはペプチド含有分子を指す。抗CD45抗体には、抗体CDRと構造および溶媒接近性が類似しているBC、DE、およびFG構造ループを含む10番目のフィブロネクチンIII型ドメイン（10Fn3）などの抗体様タンパク質足場も挙げられる。10Fn3ドメインの三次構造は、IgG重鎖の可変領域の三次構造に似ており、当業者は、例えば、10Fn3のBC、DE、およびFGループの残基を、抗CD45モノクローナル抗体のCDRH-1、CDRH-2、またはCDRH-3領域からの残基と置換することによって、抗CD45モノクローナル抗体のCDRをフィブロネクチン足場上に移植することができる。
【０１４１】
本明細書で使用される場合、用語「抗CD135抗体」は、CD135に特異的に結合することができる、免疫グロブリン分子の少なくとも一部、例えば、限定されないが、重鎖もしくは軽鎖またはそれらのリガンド結合部位の少なくとも1つの相補性決定領域（CDR）、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域、またはそれらの任意の部位などを含むタンパク質またはペプチド含有分子を指す。抗CD135抗体には、抗体CDRと構造および溶媒接近性が類似しているBC、DE、およびFG構造ループを含む10番目のフィブロネクチンIII型ドメイン（10Fn3）などの抗体様タンパク質足場も挙げられる。10Fn3ドメインの三次構造は、IgG重鎖の可変領域の三次構造に似ており、当業者は、例えば、10Fn3のBC、DE、およびFGループの残基を、抗CD135モノクローナル抗体のCDRH-1、CDRH-2、またはCDRH-3領域からの残基と置換することによって、抗CD135モノクローナル抗体のCDRをフィブロネクチン足場上に移植することができる。
【０１４２】
本明細書で使用される場合、用語「抗CD34抗体」は、CD34に特異的に結合することができる、免疫グロブリン分子の少なくとも一部、例えば、限定されないが、重鎖もしくは軽鎖またはそれらのリガンド結合部位の少なくとも1つの相補性決定領域（CDR）、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域、またはそれらの任意の部位などを含むタンパク質またはペプチド含有分子を指す。抗CD34抗体には、抗体CDRと構造および溶媒接近性が類似しているBC、DE、およびFG構造ループを含む10番目のフィブロネクチンIII型ドメイン（10Fn3）などの抗体様タンパク質足場も挙げられる。10Fn3ドメインの三次構造は、IgG重鎖の可変領域の三次構造に似ており、当業者は、例えば、10Fn3のBC、DE、およびFGループの残基を、抗CD34モノクローナル抗体のCDRH-1、CDRH-2、またはCDRH-3領域からの残基と置換することによって、抗CD34モノクローナル抗体のCDRをフィブロネクチン足場上に移植することができる。
【０１４３】
本明細書で使用される場合、用語「抗CD90抗体」は、CD90に特異的に結合することができる、免疫グロブリン分子の少なくとも一部、例えば、限定されないが、重鎖もしくは軽鎖またはそれらのリガンド結合部位の少なくとも1つの相補性決定領域（CDR）、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域、またはそれらの任意の部位などを含むタンパク質またはペプチド含有分子を指す。抗CD90抗体には、抗体CDRと構造および溶媒接近性が類似しているBC、DE、およびFG構造ループを含む10番目のフィブロネクチンIII型ドメイン（10Fn3）などの抗体様タンパク質足場も挙げられる。10Fn3ドメインの三次構造は、IgG重鎖の可変領域の三次構造に似ており、当業者は、例えば、10Fn3のBC、DE、およびFGループの残基を、抗CD90モノクローナル抗体のCDRH-1、CDRH-2、またはCDRH-3領域からの残基と置換することによって、抗CD90モノクローナル抗体のCDRをフィブロネクチン足場上に移植することができる。
【０１４４】
本明細書で使用される場合、用語「抗CD110抗体」は、CD110に特異的に結合することができる、免疫グロブリン分子の少なくとも一部、例えば、限定されないが、重鎖もしくは軽鎖またはそれらのリガンド結合部位の少なくとも1つの相補性決定領域（CDR）、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域、またはそれらの任意の部位などを含むタンパク質またはペプチド含有分子を指す。抗CD110抗体には、抗体CDRと構造および溶媒接近性が類似しているBC、DE、およびFG構造ループを含む10番目のフィブロネクチンIII型ドメイン（10Fn3）などの抗体様タンパク質足場も挙げられる。10Fn3ドメインの三次構造は、IgG重鎖の可変領域の三次構造に似ており、当業者は、例えば、10Fn3のBC、DE、およびFGループの残基を、抗CD110モノクローナル抗体のCDRH-1、CDRH-2、またはCDRH-3領域からの残基と置換することによって、抗CD110モノクローナル抗体のCDRをフィブロネクチン足場上に移植することができる。
【０１４５】
本明細書で使用される場合、用語「二重特異性抗体」は、例えば、少なくとも2つの異なる抗原に結合することができるモノクローナル抗体、多くの場合ヒト抗体またはヒト化抗体を指す。例えば、結合特異性の一方を、CD45（例えば、CD45RO）、CD135、CD34、CD90、またはCD110などの造血幹細胞表面抗原に向けることができ、他方を、異なる造血幹細胞表面抗原または別の細胞表面タンパク質、とりわけ、細胞増殖を増強するシグナル伝達経路に関与する受容体または受容体サブユニットなどに向けることができる。
【０１４６】
本明細書で使用される場合、用語「相補性決定領域」（CDR）は、抗体の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインの両方に見られる超可変領域を指す。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（FR）と呼ばれる。抗体の超可変領域を線引きするアミノ酸位置は、文脈および当該技術分野で知られているさまざまな定義に応じて変わり得る。可変ドメイン内のいくつかの位置は、これらの位置がある基準の下では超可変領域内にあると見なすことができるが、異なる基準の下では超可変領域外にあると見なすことができるという点で、ハイブリッド超可変位置と見なされ得る。これらの位置のうちの1つ以上を、拡張超可変領域にも見ることができる。本明細書に記載の抗体は、これらのハイブリッド超可変位置に修飾を含み得る。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、主にβシート構造をとる4つのフレームワーク領域を含み、3つのCDRによって接続され、それらはβシート構造をつなぐループを形成し、場合によってはβシート構造の一部を形成する。各鎖中のCDRは、FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4の順序で、フレームワーク領域によって互いに近接して一緒に保持され、他の抗体鎖からのCDRと共に、抗体の標的結合部位の形成に寄与する（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institute of Health, Bethesda, MD., 1987を参照）。本明細書で使用される場合、免疫グロブリンアミノ酸残基の番号付けは、特に断りのない限り、Kabatらの免疫グロブリンアミノ酸残基番号付けシステムに従って行われる。
【０１４７】
本明細書で使用される場合、用語「コンディショニングする」および「コンディショニング」は、造血幹細胞を含む移植片を受容するように患者を備えさせる過程を指す。そのような手順は、造血幹細胞移植の生着を促進する（例えば、コンディショニング手順およびそれに続く造血幹細胞移植の後に患者から単離された血液試料内の生存可能な造血幹細胞の量の持続的増加から推測されるように）。本明細書に記載の方法では、造血幹細胞によって発現される抗原、例えばCD45（例えばCD45RO）、CD135、CD34、CD90、またはCD110に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメントの患者への投与によって、造血幹細胞移植治療のために患者を調節することができる。本明細書に記載されるように、抗体は、薬物-抗体コンジュゲートを形成するように、細胞毒素に共有結合的にコンジュゲートすることができる。1つ以上の前述の抗原に結合することができる抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートの、造血幹細胞移植治療を必要とする患者への投与は、例えば、内因性造血幹細胞を選択的に枯渇させ、それにより外因性造血幹細胞移植によって補充される欠員を作り出すことによって、造血幹細胞移植片の生着を促進することができる。
【０１４８】
本明細書で使用される場合、用語「コンジュゲート」は、抗体またはその抗原結合フラグメントなどの1つの分子の反応性官能基と、本明細書に記載の細胞毒素などの別の分子の適切な反応性官能基との化学結合によって形成される化合物を指す。コンジュゲートは、互いに結合した2つの分子間にリンカーを含み得る。コンジュゲートの形成に使用できるリンカーの例には、天然に存在するアミノ酸またはD-アミノ酸などの天然に存在しないアミノ酸を含有するものなどのペプチド含有リンカーが挙げられる。リンカーは、本明細書に記載され、当該技術分野で知られている種々の戦略を使用して調製することができる。その中の反応性成分に応じて、リンカーは、例えば、酵素加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、塩基性条件下での加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核開裂、または有機金属開裂によって開裂され得る（例えば、Leriche et al., Bioorg. Med. Chem., 20:571-582, 2012を参照）。
【０１４９】
本明細書で使用される場合、用語「カップリング反応」は、互いに反応するのに適した2つ以上の置換基が反応して、各置換基に結合した分子フラグメントを（例えば、共有結合的に）連結する化学的部位を形成する化学反応を指す。カップリング反応には、細胞毒素、例えば当該技術分野で知られているまたは本明細書に記載の細胞毒素などであるフラグメントに結合した反応性置換基が、抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンド、例えば、当該技術分野で知られているもしくは本明細書に記載のCD45（CD45ROなど）、CD135、CD34、CD90、および／またはCD110に特異的な抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドなどであるフラグメントに結合した、適切に反応性の置換基と反応するものが挙げられる。適切に反応性の置換基の例には、求核剤／求電子剤対（例えば、とりわけチオール／ハロアルキル対、アミン／カルボニル対、またはチオール／α、β-不飽和カルボニル対）、ジエン／ジエノフィル対（例えば、とりわけアジド／アルキン対）などが挙げられる。カップリング反応には、特に限定されないが、チオールアルキル化、ヒドロキシルアルキル化、アミンアルキル化、アミン縮合、アミド化、エステル化、ジスルフィド形成、環化付加（例えば、とりわけ、［4+2］ディールス-アルダー環化付加、［3+2］ヒュスゲン環化付加）、求核芳香族置換、求電子芳香族置換、および当該技術分野で知られているまたは本明細書に記載の他の反応様式が含まれる。
【０１５０】
本明細書で使用される場合、「CRU（競合的再構築単位）」は、in vivo移植後に検出することができる、長期生着幹細胞の測定単位を指す。
【０１５１】
本明細書で使用される場合、用語「ドナー」は、1つ以上の細胞が、その細胞またはその子孫のレシピエントへの投与の前に単離されるヒトまたは動物を指す。1つ以上の細胞は、例えば、造血幹細胞の集団であり得る。
【０１５２】
本明細書で使用される場合、用語「ダイアボディ」は、2本のポリペプチド鎖を含有する二価抗体を指し、各ポリペプチド鎖は、同じペプチド鎖上のVHおよびVLドメインの分子内会合を可能にするには短すぎるリンカー（例えば、5個のアミノ酸からなるリンカー）によって連結されたVHおよびVLドメインを含む。この立体配置は、ホモ二量体構造を形成するように、各ドメインを別のポリペプチド鎖上の相補的ドメインと対合させる。したがって、用語「トリアボディ」は、3つのペプチド鎖を含む三価抗体を指し、その各々は、同じペプチド鎖内のVHドメインとVLドメインの分子内会合を可能にするには非常に短いリンカー（例えば、1〜2個のアミノ酸からなるリンカー）によって連結された1つのVHドメインと1つのVLドメインとを含む。それらの天然構造に折り畳むために、このように構成されたペプチドは、典型的には、隣接するペプチド鎖のVHおよびVLドメインを互いに空間的に近位に配置するように三量体化する（例えば、Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-48, 1993を参照）。
【０１５３】
本明細書で使用される場合、「二重可変ドメイン免疫グロブリン」（「DVD-Ig」）は、2つのモノクローナル抗体の標的結合可変ドメインをリンカーを介して合わせて四価二重標的単一剤を作製する抗体を指す（例えば、Gu et al., Meth. Enzymol., 502:25-41, 2012を参照）。
【０１５４】
本明細書で使用される場合、用語「内因性」は、ヒト患者などの特定の生物に天然に見られる分子、細胞、組織、または臓器などの物質（例えば、造血幹細胞または造血系列の細胞、例えば巨核球、血小板、血小板、赤血球、肥満細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、小膠細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Tリンパ球、またはBリンパ球など）を表す。
【０１５５】
本明細書で使用される場合、用語「生着潜在力」は、造血幹細胞および前駆細胞の組織を再構築する能力を指すために使用され、そのような細胞が天然に循環しているかまたは移植によって供給されたかにかかわらない。この用語は、細胞の組織ホーミングおよび目的の組織内の細胞のコロニー形成などの、生着を取り巻くまたは生着に至るまでの全ての事象を包含する。生着効率または生着速度は、当業者に知られている任意の臨床的に許容されるパラメーターを用いて評価または定量化することができ、例えば、競合的再構築単位（CRU）の評価；幹細胞がホーミング、コロニー形成、もしくは生着した組織（単数または複数）へのマーカーの組み込みもしくは発現を含むことができる；または、疾患の進行、造血幹細胞および前駆細胞の生存、もしくはレシピエントの生存による被験体の進行の評価による。生着は、移植後期間中の末梢血中の白血球数を測定することによって決定することもできる。生着は、骨髄穿刺液試料中のドナー細胞による骨髄細胞の回復を測定することによって評価することもできる。
【０１５６】
本明細書で使用される場合、用語「外因性」は、ヒト患者などの特定の生物に天然には見られない分子、細胞、組織、または臓器などの物質（例えば、造血幹細胞または造血系列の細胞、例えば巨核球、血小板、血小板、赤血球、肥満細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、小膠細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Tリンパ球、またはBリンパ球など）を表す。外因性物質には、外部供給源から生物に、またはそれらから抽出された培養物に提供されるものが挙げられる。
【０１５７】
本明細書で使用される場合、用語「フレームワーク領域」すなわち「FW領域」は、抗体またはその抗原結合フラグメントのCDRに隣接しているアミノ酸残基を含む。FW領域残基は、例えば、とりわけ、ヒト抗体、ヒト化抗体、モノクローナル抗体、抗体フラグメント、Fabフラグメント、一本鎖抗体フラグメント、scFVフラグメント、抗体ドメイン、および二重特異性抗体に存在し得る。
【０１５８】
本明細書で使用される場合、用語「造血幹細胞」（「HSC」）は、自己複製し、以下を含むが、これらに限定されない多様な系統を含む成熟血球に分化する能力を有する未成熟血球を指す：顆粒球（例えば前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、血小板（例えば、巨核球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、小膠細胞、破骨細胞、およびリンパ球（例えば、NK細胞、B細胞およびT細胞）。そのような細胞には、CD34+細胞が挙げられ得る。CD34+細胞は、CD34細胞表面マーカーを発現する未熟細胞である。ヒトでは、CD34+細胞は上記定義の幹細胞特性を有する細胞の亜集団を含むと考えられているが、マウスでは、HSCはCD34-である。さらに、HSCは、長期再構築HSC（LT-HSC）および短期再構築HSC（ST-HSC）も指す。LT-HSCおよびST-HSCは、機能的能力および細胞表面マーカー発現に基づいて区別される。例えば、ヒトHSCは、CD34+、CD38-、CD45RA-、CD90+、CD49F+、およびlin-（CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD10、CD11B、CD19、CD20、CD56、CD235Aを含む成熟系統マーカーについて陰性）である。マウスでは、骨髄LT-HSCは、CD34-、SCA-1+、C-kit+、CD135-、Slamf1/CD150+、CD48-、およびlin-（Ter119、CD11b、Gr1、CD3、CD4、CD8、B220、IL7raを含む成熟系統マーカーについて陰性）であり、一方、ST-HSCは、CD34+、SCA-1+、C-kit+、CD135-、Slamf1/CD150+、およびlin-（Ter119、CD11b、Gr1、CD3、CD4、CD8、B220、IL7raを含む成熟系統マーカーについて陰性）である。さらに、ST-HSCは、恒常性条件下で、LT-HSCよりも不活発ではなく、増殖性が高い。しかしながら、LT-HSCは、より大きな自己複製能力を有し（すなわち、それらは成熟期を通じて生存し、一連のレシピエントを通して連続的に移植され得る）、一方でST-HSCは、限られた自己複製を有する（すなわち、それらは限られた期間のみ生存し、連続移植能力を持たない）。これらのHSCのいずれも、本明細書に記載の方法で使用することができる。ST-HSCは、高度に増殖性であり、したがってより迅速に分化した子孫を生じさせることができるため、特に有用である。
【０１５９】
本明細書で使用される場合、用語「造血幹細胞機能的能力」は、以下を含む造血幹細胞の機能的特性を指す：1）多能性（顆粒球（例えば前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、血小板（例えば、巨核球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、小膠細胞、破骨細胞、およびリンパ球（例えば、NK細胞、B細胞およびT細胞を含むが、これらに限定されない複数の異なる血系列に分化する能力を指す）、2）自己複製（造血幹細胞が、母細胞と同等の能力を有する娘細胞を生じさせる能力を指し、さらにこの能力は、枯渇することなく個体の生涯を通じて繰り返し出現することができる）、ならびに3）造血幹細胞またはその子孫が移植レシピエントに再導入され、そこでそれらが造血幹細胞ニッチにホーミングし、生産的かつ持続的な造血を回復させる能力。
【０１６０】
本明細書で使用される場合、用語「ヒト抗体」は、タンパク質の実質的に全ての部分（例えば、全てのCDR、フレームワーク領域、CL、CHドメイン（例えば、CH1、CH2、CH3）、ヒンジ、ならびにVLおよびVHドメイン）が、ヒトにおいて実質的に非免疫原性であり、ほんのわずかな配列の変化または変異のみの抗体を指す。ヒト抗体は、ヒト細胞において（例えば、組み換え発現によって）、または機能的に再配列されたヒト免疫グロブリン（重鎖および／もしくは軽鎖などの）遺伝子を発現することができる非ヒト動物もしくは原核生物細胞もしくは真核生物細胞によって、産生され得る。ヒト抗体が一本鎖抗体である場合、それは天然のヒト抗体には見られないリンカーペプチドを含み得る。例えば、Fvは、重鎖の可変領域と軽鎖の可変領域とを連結する、2〜約8個のグリシンまたは他のアミノ酸残基などのリンカーペプチドを含み得る。そのようなリンカーペプチドはヒト起源のものとみなされる。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを用いたファージディスプレイ法を含む、当該技術分野で知られているさまざまな方法によって作製することができる。ヒト抗体は、機能的内因性免疫グロブリンを発現することはできないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを使用して産生することもできる（例えば、PCT公開番号WO 1998/24893；WO 1992/01047；WO 1996/34096；WO 1996/33735；米国特許第5,413,923；5,625,126；5,633,425；5,569,825；5,661,016；5,545,806；5,814,318；5,885,793；5,916,771；および5,939,598号明細書を参照）。
【０１６１】
本明細書で使用される場合、用語「ヒト化」抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含む非ヒト抗体を指す。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも1つ、典型的には2つの可変ドメインの実質的に全部を含み、ここでCDR領域の全部または実質的に全部が、非ヒト免疫グロブリンのものに対応する。FW領域の全部または実質的に全部がまた、ヒト免疫グロブリン配列のものであり得る。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Fc）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のそれも含み得る。抗体のヒト化の方法は当該技術分野において知られており、例えば、Riechmann et al., Nature 332:323-7, 1988；米国特許第5,530,101；5,585,089；5,693,761；5,693,762；および6,180,370号明細書などで説明されている。
【０１６２】
本明細書で使用される場合、造血幹細胞移植を「必要とする」患者には、1つ以上の血液細胞型に欠陥または欠乏を示す患者、ならびに幹細胞障害、自己免疫疾患、がん、または他の本明細書に記載の病状を有する患者が含まれる。造血幹細胞は、一般に、1）多能性を示し、したがって、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、血小板（例えば、巨核球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、小膠細胞、破骨細胞、およびリンパ球（例えば、NK細胞、B細胞およびT細胞）を含むが、これらに限定されない複数の異なる血系列に分化することができ、2）自己複製を示し、したがって、母細胞と同等の能力を有する娘細胞を生じさせることができ、ならびに3）移植レシピエントに再導入される能力を示し、そこでそれらが造血幹細胞ニッチにホーミングし、生産的かつ持続的な造血を回復させる。したがって、欠陥または欠乏がある細胞集団をin vivoで再構築するために、造血幹細胞を、造血系統の1つ以上の細胞型に欠陥または欠乏のある患者に投与することができる。例えば、患者はがんに罹患している場合があり、該欠乏は、選択的もしくは非特異的にがん性細胞集団を枯渇させる化学療法剤または他の薬剤の投与によって生じ得る。追加的にまたは代替的に、患者は、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコニ貧血、再生不良性貧血、およびウィスコット-アルドリッチ症候群などの異常ヘモグロビン症（例えば、非悪性異常ヘモグロビン症）に罹患している場合がある。被験体は、アデノシンデアミナーゼ重症複合免疫不全症（ADA SCID）、HIV/AIDS、異染性白質ジストロフィー、ダイヤモンド-ブラックファン貧血、およびシュワマン-ダイヤモンド症候群に罹患している被験体であり得る。被験体は、遺伝性の血液障害（例えば、鎌状赤血球貧血）または自己免疫障害を患っているか、またはそれらの影響を受ける可能性がある。追加的にまたは代替的に、被験体は、神経芽細胞腫または血液がんなどの悪性腫瘍を患っているか、またはそれらの影響を受ける可能性がある。例えば、被験体は、白血病、リンパ腫、または骨髄腫を患っている場合がある。いくつかの実施形態では、被験体は、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫を患っている。いくつかの実施形態では、被験体は、骨髄異形成症候群を患っている。いくつかの実施形態では、被験体は、強皮症、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、1型糖尿病、または本明細書に記載の別の自己免疫病状などの自己免疫疾患を患っている。いくつかの実施形態では、被験体は、キメラ抗原受容体T細胞（CART）療法を必要としている。いくつかの実施形態では、被験体は、代謝性蓄積症を患っているか、そうでなければそれらの影響を受ける。被験体は、以下を患っているか、そうでなければそれらの影響を受ける可能性がある：グリコーゲン蓄積症、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴリピドーシス、異染性白質ジストロフィーからなる群より選択される代謝障害、または、限定されないが以下が挙げられる、本明細書に開示された治療および療法から利益を得る可能性がある別の疾患もしくは障害：重症複合免疫不全、ウィスコット-アルドリッチ症候群、高免疫グロブリンM（IgM）症候群、チェディアック・東症候群、遺伝性リンパ組織球増多症、大理石骨病、骨形成不全症、蓄積症、サラセミアメジャー、鎌状赤血球症、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、若年性関節リウマチ、および"Bone Marrow Transplantation for Non-Malignant Disease," ASH Education Book, 1:319-338 (2000)に記載されている疾患または障害であって、その開示は、造血幹細胞移植療法の実施によって治療され得る病状に関するものとして、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。追加的または代替的に、造血幹細胞移植を「必要とする」患者は、前述の病状のうちの1つに罹患しているかまたは罹患していないが、それでもなお、巨核球、血小板、血小板、赤血球、肥満細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、小膠細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Tリンパ球、およびBリンパ球などの造血系統内の1つ以上の内因性細胞型の減少したレベルを（例えば、他の点では健康な被験体のレベルと比較して）示す患者であり得る。当業者は、他の点では健康な被験体に関して、1つ以上の前述の細胞型または他の血球型のレベルが低下しているかどうかを、例えば、当該技術分野で知られている他の手順の中でも、フローサイトメトリーおよび蛍光活性化細胞ソーティング（FACS）方法を用いて、容易に決定することができる。
【０１６３】
本明細書で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」は、それが産生される方法ではなく、任意の真核生物、原核生物、またはファージクローンを含む単一クローンに由来する抗体を指す。
【０１６４】
本明細書で使用される場合、用語「レシピエント」は、造血幹細胞の集団を含む移植片などの移植片を受ける患者を指す。レシピエントに投与される移植細胞は、例えば、自己細胞、同系細胞、または同種異系細胞であり得る。
【０１６５】
本明細書で使用される場合、用語「試料」は、被験体から採取した検体（例えば、血液、血液成分（例えば、血清または血漿）、尿、唾液、羊水、脳脊髄液、組織（例えば、胎盤または真皮）、膵液、絨毛膜絨毛試料、および細胞）を指す。
【０１６６】
本明細書で使用される場合、用語「scFV」は、抗体由来の重鎖および軽鎖の可変ドメインが連結されて1本の鎖を形成している一本鎖Fv抗体を指す。scFVフラグメントは、リンカーによって分離された、抗体軽鎖の可変領域（VL）（例えば、CDR-L1、CDR-L2、および／またはCDR-L3）と抗体重鎖の可変領域（VH）（例えば、CDR-H1、CDR-H2、および／またはCDR-H3）とを含む単一ポリペプチド鎖を含有する。scFVフラグメントのVLおよびVH領域を連結するリンカーは、タンパク質新生アミノ酸からなるペプチドリンカーであり得る。代替リンカーを、scFVフラグメントのタンパク質分解に対する耐性を増加させるように（例えば、D-アミノ酸を含有するリンカー）、scFVフラグメントの溶解性を高めるために（例えば、ポリエチレングリコール含有リンカーもしくは反復グリシンおよびセリン残基を含有するポリペプチドなどの親水性リンカー）、分子の生物物理学的安定性を改善するために（例えば、分子内もしくは分子間ジスルフィド結合を形成するシステイン残基を含有するリンカー）、またはscFVフラグメントの免疫原性を弱めるために（例えば、グリコシル化部位を含むリンカー）、使用することができる。本明細書に記載のscFV分子の可変領域は、それらが由来する抗体分子とはアミノ酸配列が異なるように修飾することができることも、当業者には理解されよう。例えば、保存的置換もしくはアミノ酸残基の変化をもたらすヌクレオチドまたはアミノ酸置換を（例えば、CDRおよび／またはフレームワーク残基において）、対応する抗体によって認識される抗原に結合するscFVの能力を保持または増強するように、実施することができる。
【０１６７】
本明細書で使用される場合、用語「被験体」および「患者」は、本明細書に記載されるような特定の疾患または状態の治療を受ける、ヒトなどの生物を指す。例えば、ヒト患者などの患者は、外因性造血幹細胞の生着を促進するために、造血幹細胞移植療法の前に治療を受けてもよい。
【０１６８】
本明細書で使用される場合、句「血液から実質的に除去される」は、治療薬（抗CD45、抗CD135、抗CD34、抗CD90、または抗CD110抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドなど）の患者への投与後のある時点であって、患者から単離された血液試料中の治療薬の濃度が、従来の手段によって治療薬を検出することができないようなときであるとき（例えば、治療薬が、治療薬の検出に使用される装置またはアッセイのノイズ閾値を超えて検出されないとき）を指す。当該技術分野で知られているまたは本明細書に記載されるELISAベースの検出アッセイなどの、当該技術分野で知られているさまざまな技術が、抗体、抗体フラグメント、およびタンパク質リガンドを検出するために使用され得る。抗体、抗体フラグメント、およびタンパク質リガンドを検出するために使用され得る。追加的アッセイは、当該技術分野で知られているものの中でも、免疫沈降技術および免疫ブロットアッセイを含む。
【０１６９】
本明細書で使用される場合、語句「幹細胞障害」は、被験体の標的組織をコンディショニングすることによって、および／または標的組織中の内因性幹細胞集団を切除することによって（例えば、内因性造血幹細胞もしくは前駆細胞集団を被験体の骨髄組織から除去することによって）、および／または被験体の標的組織に幹細胞を生着させるもしくは移植することによって治療もしくは治癒され得る任意の疾患、障害、または状態を広く指す。例えば、I型糖尿病は、造血幹細胞移植によって治癒されることが示されており、本明細書に記載の組成物および方法に従ってコンディショニングすることから利益を得る可能性がある。本明細書に記載の組成物および方法を用いて治療することができるさらなる障害は、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコニ貧血、再生不良性貧血、ウィスコット-アルドリッチ症候群、ADA SCID、HIV/AIDS、異染性白質ジストロフィー、ダイヤモンド-ブラックファン貧血、およびシュワマン-ダイヤモンド症候群が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載の患者のコンディショニングおよび／または造血幹細胞移植方法を用いて治療することができるさらなる疾患には、遺伝性の血液障害（例えば、鎌状赤血球貧血）ならびに強皮症、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、およびクローン病などの自己免疫障害が挙げられる。本明細書に記載のコンディショニングおよび／または移植方法を使用して治療され得るさらなる疾患には、神経芽細胞腫などの悪性腫瘍、または、白血病、リンパ腫、および骨髄腫などの血液がんが含まれる。例えば、がんは、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫であり得る。本明細書に記載のコンディショニングおよび／または移植方法を用いて治療可能なさらなる疾患には、骨髄異形成症候群が含まれる。いくつかの実施形態では、被験体は、代謝性蓄積症を患っているか、そうでなければそれらの影響を受ける。例えば、被験体は、以下を患っているか、そうでなければそれらの影響を受ける可能性がある：グリコーゲン蓄積症、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴリピドーシス、異染性白質ジストロフィーからなる群より選択される代謝障害、または、限定されないが以下が挙げられる、開示された治療および療法から利益を得る可能性がある別の疾患もしくは障害：重症複合免疫不全、ウィスコット-アルドリッチ症候群、高免疫グロブリンM（IgM）症候群、チェディアック・東症候群、遺伝性リンパ組織球増多症、大理石骨病、骨形成不全症、蓄積症、サラセミアメジャー、鎌状赤血球症、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、若年性関節リウマチ、および"Bone Marrow Transplantation for Non-Malignant Disease," ASH Education Book, 1:319-338 (2000)に記載されている疾患または障害であって、その開示は、造血幹細胞移植療法の実施によって治療され得る病状に関するものとして、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７０】
本明細書で使用される場合、用語「治療する」または「治療」は、その目的が、望ましくない生理学的変化もしくは障害を予防または減速（軽減）させることであるか、または治療を受ける患者において有益な表現型を促進することである治療的処置を指す。有益なまたは望ましい臨床結果には、本明細書に記載の抗体コンディショニング療法およびそれに続く造血幹細胞移植治療の後の患者における外因性造血細胞の生着の促進が挙げられるが、これらに限定されない。さらなる有益な結果には、造血幹細胞移植を必要とする患者における、コンディショニング療法およびそれに続く患者への外因性造血幹細胞移植片の投与後の造血幹細胞の細胞数または相対濃度の増加が挙げられる。本明細書に記載の治療の有益な結果には、コンディショニング療法およびそれに続く造血幹細胞移植治療の後の、巨核球、血小板、血小板、赤血球、肥満細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、小膠細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Tリンパ球、またはBリンパ球などの造血系列の1つ以上の細胞の細胞数または相対濃度の増加も含まれ得る。さらなる有益な結果には、がん細胞（例えば、CD45+、CD135+、CD34+、CD90+、もしくはCD110+白血病細胞）または自己免疫細胞（例えば、自己抗原と交差反応するT細胞受容体を発現するCD45+、CD135+、CD34+、CD90+、もしくはCD110+T細胞などの、CD45+、CD135+、CD34+、CD90+、もしくはCD110自己免疫リンパ球）の集団などの、疾患を引き起こす細胞集団の量の減少も含まれ得る。
【０１７１】
本明細書で使用される場合、用語「変異体」および「誘導体」は交換可能に使用され、本明細書に記載の化合物、ペプチド、タンパク質、または他の物質の、天然、合成、および半合成類似体を指す。本明細書に記載の化合物、ペプチド、タンパク質、もしくは他の物質の変異体または誘導体は、元の材料の生物学的活性を、保持もしくは改善する場合がある。
【０１７２】
本明細書で使用される場合、用語「ベクター」は、プラスミド、DNAベクター、プラスミド、RNAベクター、ウイルス、または他の適切なレプリコンなどの核酸ベクターを含む。本明細書に記載の発現ベクターは、ポリヌクレオチド配列、ならびに、例えば、タンパク質の発現および／またはこれらのポリヌクレオチド配列の哺乳動物細胞のゲノムへの組み込みに使用される追加的配列要素を含み得る。本発明の抗体および抗体フラグメントの発現に用いることができる特定のベクターは、遺伝子転写を指示するプロモーターおよびエンハンサー領域などの調節配列を含有するプラスミドを含む。抗体および抗体フラグメントの発現のための他の有用なベクターは、これらの遺伝子の翻訳速度を増強するか、または遺伝子転写から生じるmRNAの安定性もしくは核外輸送を改善するポリヌクレオチド配列を含有する。これらの配列要素は、例えば、発現ベクターで運ばれる遺伝子の効率的な転写を指示するための、5'および3'非翻訳領域とポリアデニル化シグナル部位とを含み得る。本明細書に記載の発現ベクターは、そのようなベクターを含む細胞を選択するためのマーカーをコードするポリヌクレオチドを含有し得る。適切なマーカーの例には、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、およびノウルセオトリシンなどの抗生物質に対する耐性をコードする遺伝子が挙げられる。
【０１７３】
本明細書で使用される場合、用語「アルキル」は、例えば、鎖中に1〜20個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルキル基を指す。アルキル基の例には、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、イソペンチル、tert-ペンチル、ヘキシル、イソヘキシルなどが挙げられる。
【０１７４】
本明細書で使用される場合、用語「アルキレン」は、直鎖または分岐鎖の二価アルキル基を指す。二価の位置は、アルキル鎖内の同じまたは異なる原子上にあり得る。アルキレンの例には、メチレン、エチレン、プロピレン、イソプロピレンなどが挙げられる。
【０１７５】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアルキル」は、例えば、鎖中に1〜20個の炭素原子を有し、さらに鎖中に1個以上のヘテロ原子（例えば、とりわけ酸素、窒素、または硫黄）を含有する直鎖または分岐鎖アルキル基を指す。
【０１７６】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアルキレン」は、直鎖または分岐鎖の二価ヘテロアルキル基を指す。二価の位置は、ヘテロアルキル鎖内の同じまたは異なる原子上にあり得る。二価の位置は、1個以上のヘテロ原子であり得る。
【０１７７】
本明細書で使用される場合、用語「アルケニル」は、例えば、鎖中に2〜20個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルケニル基を指す。アルケニル基の例には、ビニル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、tert-ブチレニル、ヘキセニルなどが挙げられる。
【０１７８】
本明細書で使用される場合、用語「アルケニレン」は、直鎖または分岐鎖の二価アルケニル基を指す。二価の位置は、アルケニル鎖内の同じまたは異なる原子上にあり得る。アルケニレンの例には、エテニレン、プロペニレン、イソプロペニレン、ブテニレンなどが挙げられる。
【０１７９】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアルケニル」は、例えば、鎖中に2〜20個の炭素原子を有し、さらに鎖中に1個以上のヘテロ原子（例えば、とりわけ酸素、窒素、または硫黄）を含有する直鎖または分岐鎖アルケニル基を指す。
【０１８０】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアルケニレン」は、直鎖または分岐鎖の二価ヘテロアルケニル基を指す。二価の位置は、ヘテロアルケニル鎖内の同じまたは異なる原子上にあり得る。二価の位置は、1個以上のヘテロ原子であり得る。
【０１８１】
本明細書で使用される場合、用語「アルキニル」は、例えば、鎖中に2〜20個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルキニル基を指す。アルキニル基の例には、プロパルギル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニルなどが挙げられる。
【０１８２】
本明細書で使用される場合、用語「アルキニレン」は、直鎖または分岐鎖の二価アルキニル基を指す。二価の位置は、アルキニル鎖内の同じまたは異なる原子上にあり得る。
【０１８３】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアルキニル」は、例えば、鎖中に2〜20個の炭素原子を有し、さらに鎖中に1個以上のヘテロ原子（例えば、とりわけ酸素、窒素、または硫黄）を含有する直鎖または分岐鎖アルキニル基を指す。
【０１８４】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアルキニレン」は、直鎖または分岐鎖の二価ヘテロアルキニル基を指す。二価の位置は、ヘテロアルキニル鎖内の同じまたは異なる原子上にあり得る。二価の位置は、1個以上のヘテロ原子であり得る。
【０１８５】
本明細書で使用される場合、用語「シクロアルキル」は、飽和であり、例えば、3〜12個の炭素環原子を有する、単環式、または縮合、架橋、もしくはスピロ多環式環構造を指す。シクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、ビシクロ[3.1.0]ヘキサンなどが挙げられる。
【０１８６】
本明細書で使用される場合、用語「シクロアルキレン」は、二価のシクロアルキル基を指す。二価の位置は、環構造内の同じまたは異なる原子上にあり得る。シクロアルキレンの例には、シクロプロピレン、シクロブチレン、シクロペンチレン、シクロヘキシレンなどが挙げられる。
【０１８７】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロシクロアルキル」は、飽和であり、例えば、炭素原子と、例えば、とりわけ窒素、酸素、および硫黄から選択されるヘテロ原子とから選択される3〜12個の環原子を環構造当たりに有する、単環式、または縮合、架橋、もしくはスピロ多環式環構造を指す。環構造は、例えば、炭素、窒素、または硫黄の環員上に1つ以上のオキソ基を含有し得る。
【０１８８】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロシクロアルキレン」は、二価のヘテロシクロアルキル基を指す。二価の位置は、環構造内の同じまたは異なる原子上にあり得る。二価の位置は、1個以上のヘテロ原子であり得る。
【０１８９】
本明細書で使用される場合、用語「アリール」は、例えば、6〜19個の炭素原子を含有する単環式または多環式芳香環系を指す。アリール基には、フェニル、フルオレニル、ナフチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９０】
本明細書で使用される場合、用語「アリーレン」は、二価のアリール基を指す。二価の位置は、同じまたは異なる原子上にあり得る。
【０１９１】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアリール」は、単環式ヘテロ芳香族、または二環式もしくは三環式の縮合環ヘテロ芳香族基を指す。ヘテロアリール基には、以下が挙げられる：ピリジル、ピロリル、フリル、チエニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、1,2,3-トリアゾリル、1,2,4-トリアゾリル、1,2,3-オキサジアゾリル、1,2,4-オキサジア-ゾリル、1,2,5-オキサジアゾリル、1,3,4-オキサジアゾリル、1,3,4-トリアジニル、1,2,3-トリアジニル、ベンゾフリル、[2,3-ジヒドロ]ベンゾフリル、イソベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾトリアゾリル、イソベンゾチエニル、インドリル、イソインドリル、3H-インドリル、ベンゾイミダゾリル、イミダゾ[1,2-a]ピリジル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノリジニル、キナゾリニル、フタラジニル、キノキサリニル、シンノリニル、ナフチリジニル、ピリド[3,4-b]ピリジル、ピリド[3,2-b]ピリジル、ピリド[4,3-b]ピリジル、キノリル、イソキノリル、テトラゾリル、5,6,7,8-テトラヒドロキノリル、5,6,7,8-テトラヒドロイソキノリル、プリニル、プテリジニル、カルバゾリル、キサンテニル、ベンゾキノリルなど。
【０１９２】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアリーレン」は、二価ヘテロアリール基を指す。二価の位置は、同じまたは異なる原子上にあり得る。二価の位置は、1個以上のヘテロ原子であり得る。
【０１９３】
個々の置換基の定義によって特に制限されない限り、前述の化学的部位、例えば「アルキル」、「アルキレン」、「ヘテロアルキル」、「ヘテロアルキレン」、「アルケニル」、「アルケニレン」、「ヘテロアルケニル」、「ヘテロアルケニレン」、「アルキニル」、「アルキニレン」、「ヘテロアルキニル」、「ヘテロアルキニレン」、「シクロアルキル」、「シクロアルキレン」、「ヘテロシクロアルキル」、「ヘテロシクロアルキレン」、「アリール」、「アリーレン」、「ヘテロアリール」、および「ヘテロアリーレン」基は、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルキルシクロアルキル、アルキルヘテロシクロアルキル、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、ニトロなどからなる群より選択される1〜5個の置換基で任意に置換されていてもよい。置換は、隣接官能置換基の閉環など、隣接置換基が閉環を受けて、例えば、閉環により形成されるラクタム、ラクトン、環状無水物、アセタール、ヘミアセタール、チオアセタール、アミナール、およびヘミナミナールを形成し、例えば、保護基を供給する状況を含み得る。
【０１９４】
（造血細胞抗原を認識する抗体）
本発明は、以下の発見に一部基づいている：CD45、CD135、CD34、CD90、またはCD110に結合することができる抗体、その抗原結合フラグメント、およびリガンドを治療剤として使用し、（i）これらの抗原のうちの1つ以上を発現する細胞を特徴とするがんおよび自己免疫疾患を直接治療することができ、ならびに（ii）移植治療を必要とする患者における移植された造血幹細胞の生着を促進することができる。これらの治療活性は、例えば、抗体、その抗原結合フラグメント、および／またはリガンドの、がん細胞、自己免疫細胞、または造血幹細胞などの細胞の表面上に発現される前述の抗原のうちの1つ以上への結合と、それに続く細胞死の誘導とによって引き起こされ得る。内因性造血幹細胞の枯渇は、移植された造血幹細胞がホーミングすることができるニッチを提供し、それに続く生産的な造血を確立することができる。このようにして、移植された造血幹細胞は、本明細書に記載の幹細胞障害を患っているヒト患者などの患者にうまく生着することができる。以下の節では、これらの抗原の各々、ならびにこれらの標的に結合することができる抗体およびその抗原結合フラグメントについて説明する。
【０１９５】
（抗CD45抗体）
アイソフォームCD45ROに結合することができるものを含む、ヒトCD45に結合することができる抗体および抗原結合フラグメント（mRNA NCBI参照配列：NM_080921.3、タンパク質NCBI参照配列：NP_563578.2）を、本明細書に開示の組成物および方法と併せて使用し、例えば、造血幹細胞移植治療を必要とする患者における造血幹細胞移植片の生着を促進することができる。CD45の複数のアイソフォームは、一次転写物中の34個のエクソンの選択的スプライシングから生じる。エクソン4、5、6、および潜在的に7のスプライシングは、複数のCD45変異を引き起こす。選択的エキソン発現は、下記の表１に記載のCD45アイソフォームにおいて観察される。
【表１】
2019522050.tif 000020
【０１９６】
選択的スプライシングは、CD45タンパク質のさまざまなアイソフォーム（例えば、CD45RA、CD45RAB、CD45RABC）において発現される個々のエキソンまたはエキソンの組み合わせをもたらすことができる。対照的に、CD45ROはエクソン4〜6の発現を欠いており、エクソン1〜3および7〜34の組み合わせから生成される。エクソン7もタンパク質から排除され得、その結果エクソン1〜3および8〜34が一緒にスプライシングされるという証拠がある。E3〜8と命名されたこのタンパク質は、mRNAレベルでは検出されているが、フローサイトメトリーによっては現在同定されていない。
【０１９７】
CD45ROは、現在、造血幹細胞上に発現される唯一の既知CD45アイソフォームである。CD45RAおよびCD45RABCは、検出されていないか、または造血幹細胞の表現型から除外されている。マウスで行われた研究から、CD45RBは胎児造血幹細胞で発現されるが、成体骨髄造血幹細胞には存在しないという証拠がある。特に、CD45RCは、アジア人口内で見られるエクソン6の多型率が高い（CD45RCのエクソン6の多型は、日本人口の約25%で見られる）。この多型は、CD45ROの高発現と、CD45RA、CD45RB、およびCD45RCのレベルの低下をもたらす。さらに、CD45RA変異体（CD45RABおよびCD45RACなど）は、自己免疫疾患と関連しているエクソン4において多型を示す。
【０１９８】
造血幹細胞上のCD45ROの存在と、他の免疫細胞（TおよびBリンパ球サブセットならびにさまざまな骨髄細胞など）上でのその比較的限られた発現とは、CD45ROを、造血幹細胞移植を必要とする患者のコンディショニング療法に特に適した標的とする。CD45ROは、エクソン4、5、および6の発現を欠くだけであるため、免疫原としてのその使用は、全CD45 AbおよびCD45RO特異的抗体のスクリーニングを可能にする。
【０１９９】
本明細書に記載の患者コンディショニング方法と併せて使用することができる抗CD45抗体には、例えば、BIOLEGEND（登録商標）（サンディエゴ、カリフォルニア州）から市販されている抗CD45抗体クローンHI30、ならびにそのヒト化変異体が挙げられる。抗体のヒト化は、当該技術分野で知られている手順に従って、非ヒト抗体のフレームワーク残基および定常領域残基を、生殖系列ヒト抗体のそれらと置換することによって行うことができる（例えば、下記の実施例７に記載）。本明細書に記載の方法と併せて使用することができる追加の抗CD45抗体には、ABCAM（登録商標）（ケンブリッジ、マサチューセッツ州）から市販されている、抗CD45抗体ab10558、EP322Y、MEM-28、ab10559、0.N.125、F10-89-4、HIe-1、2B11、YTH24.5、PD7/26/16、F10-89-4、1B7、ab154885、B-A11,蛍光体S1007、ab170444、EP350、Y321、GA90、D3/9、X1 6/99、およびLT45、ならびにそれらのヒト化変異体が挙げられる。本明細書に記載の患者のコンディショニング手順と併せて使用することができるさらなる抗CD45抗体には、SIGMA-ALDRICH（登録商標）（セントルイス、ミズーリ州）から市販されている、抗CD45抗体HPA000440、およびそのヒト化変異体が挙げられる。本明細書に記載の患者コンディショニング方法と併せて使用することができる追加の抗CD45抗体には、例えば、Matthews et al., Blood 78:1864-1874, 1991に記載されているマウスモノクローナル抗体BC8が挙げられ、その開示は、抗CD45抗体、ならびにそのヒト化変異体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の方法と併せて使用することができるさらなる抗CD45抗体には、例えば、Glatting et al., J. Nucl. Med. 8:1335-1341, 2006に記載されているモノクローナル抗体YAML568が挙げられ、その開示は、抗CD45抗体、ならびにそのヒト化変異体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の患者のコンディショニング手順と併用して使用することができる追加の抗CD45抗体には、例えば、Brenner et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 996:80-88, 2003に記載されているモノクローナル抗体YTH54.12およびYTH25.4が挙げられ、その開示は、抗CD45抗体、ならびにそのヒト化変異体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の患者コンディショニング方法と併用して使用するための追加の抗CD45抗体には、例えば、Brown et al., Immunology 64:331-336, 1998に記載されているUCHL1、2H4、SN130、MD4.3、MBI、およびMT2が挙げられ、その開示は、抗CD45抗体、ならびにそのヒト化変異体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の方法と併せて使用することができる追加の抗CD45抗体には、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ATCC）受託番号RA3-6132、RA3-2C2、およびTIB122から産生および放出されたもの、ならびに、例えば、Johnson et al., J. Exp. Med. 169:1179-1184, 1989に記載されてるモノクローナル抗体C363.16A、および13/2が挙げられ、その開示は、抗CD45抗体、ならびにそのヒト化変異体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の患者コンディショニング方法と併せて使用することができるさらなる抗CD45抗体には、例えば、Harvath et al., J. Immunol. 146:949-957, 1991に記載されているモノクローナル抗体AHN-12.1、AHN-12、AHN-12.2、AHN-12.3、AHN-12.4、HLe-1、およびKC56（T200）が挙げられ、その開示は、抗CD45抗体���ならびにそのヒト化変異体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。
【０２００】
本明細書に記載の患者コンディショニング方法と併せて使用することができる追加の抗CD45抗体には、例えば、米国特許第7,265,212号（例えば、他のクローンの中でも抗CD45抗体39E11、16C9、および1G10を記載する）；7,160,987（例えば、モノクローナル抗体6G3などの、ATCC受託番号HB-11873によって産生および放出される抗CD45抗体を記載する）；ならびに6,099,838（抗CD45抗体MT3、ならびにATCC受託番号HB220（MB23G2とも指名される）およびHB223によって産生および放出される抗体を記載する）、ならびに米国特許第2004/0096901号および米国特許第2008/0003224号（例えば、ATCC受託託番号PTA-7339によって産生および放出される抗CD45抗体、例えばモノクローナル抗体17.1を記載する）に記載のものが挙げられ、それらの各々の開示は、抗CD45抗体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０１】
本明細書に記載の患者コンディショニング方法と併せて使用することができるさらなる抗CD45抗体には、ATCC受託託番号MB4B4、MB23G2、14.8、 GAP 8.3、74-9-3、I/24.D6、9.4、4B2、M1/9.3.4.HL.2から産生および放出される抗体、ならびにそれらのヒト化および／または親和性成熟変異体が挙げられる。親和性成熟は、例えば、以下の実施例６に記載されるように、ファージディスプレイなどの、本明細書に記載のまたは当該技術分野において知られているin vitroディスプレイ技術を使用して遂行することができる。
【０２０２】
本明細書に記載の患者コンディショニング方法と併せて使用することができる追加の抗CD45抗体には、例えば、Morikawa et al., Int. J. Hematol. 54:495-504, 1991に記載されている抗CD45抗体T29/33が挙げられ、その開示は、抗CD45抗体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０３】
前述の刊行物の各々の開示は、それらが抗CD45抗体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の組成物および方法と併せて使用され得る抗体および抗原結合フラグメントには、上記の抗体およびその抗原結合フラグメント、ならびに上記の非ヒト抗体および抗原結合フラグメントのヒト化変異体、および、例えば、競合的CD45結合アッセイによって評価されるように、上記のものと同じエピトープに結合する抗体または抗原結合フラグメントが挙げられる。
【０２０４】
（抗CD135抗体）
本発明は、CD135に結合することができる抗体およびその抗原結合フラグメント（Flt2およびFlt3とも呼ばれる）を治療剤として使用し、がんおよび自己免疫疾患を直接治療することができ、ならびに移植治療を必要とする患者における移植造血幹細胞の生着を促進することができるという発見に一部基づいている。さらに、ヒトFlt3リガンドなどのCD135に結合するリガンドを使用して、がんおよび自己免疫疾患を直接治療することができ、ならびに移植治療を必要とする患者における移植造血幹細胞の生着を促進することができることが発見された。ヒトFlt3リガンドなどのこれらのリガンドは、例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ADCC）を促進するために、Fcドメインなどのエフェクタードメインに共有結合することができる。
【０２０５】
造血幹細胞はCD135を発現することが示されており、なぜなら、この抗原は、Mcl-1のアップレギュレーションを促進し、これは次に造血中の細胞生存を調節することが報告されている受容体チロシンキナーゼであるためである（例えば、その開示が、造血幹細胞によるCD135の発現に関するものとして参照により本明細書に組み込まれるJ. Immunol. 180:7358-7367, 2008を参照）。この細胞表面抗原に結合することができる抗体、その抗原結合フラグメント、およびリガンドは、当該技術分野で知られていて本明細書に記載される技術を用いて、例えば免疫化、計算モデリング技術、ならびに下記に記載のファージディスプレイおよび細胞ベースのディスプレイプラットフォームなどのin vitro選択法などによって同定することができる。
【０２０６】
本明細書に開示の患者コンディショニング方法と併せて使用することができる抗CD135抗体には、以下のCDRのうちの1つ以上、または全てを有するものが含まれる：
a.アミノ酸配列SYYMH（配列番号１）を有するCDR-H1；
b.アミノ酸配列IINPSGGSTSYAQKFQG（配列番号２）を有するCDR-H2；
c.アミノ酸配列GVGAHDAFDI（配列番号３）またはVVAAAVADY（配列番号４）を有するCDR-H3；
d.アミノ酸配列RSSQSLLHSNGNNYLD（配列番号５）またはRSSQSLLHSNGYNYLD（配列番号６）を有するCDR-L1；
e.アミノ酸配列LGSNRAS（配列番号７）を有するCDR-L2；および
f.アミノ酸配列MQGTHPAIS（配列番号８）またはMQSLQTPFT（配列番号９）を有するCDR-L3。
【０２０７】
本明細書に開示の患者コンディショニング方法と併せて使用することができる追加の抗CD135抗体には、以下のCDRのうちの1つ以上、または全てを有するものが含まれる：
a.アミノ酸配列SYAIS（配列番号１０）を有するCDR-H1；
b.アミノ酸配列GIIPIFGTANYAQKFQG（配列番号１１）を有するCDR-H2；
c.アミノ酸配列FALFGFREQAFDI（配列番号１２）を有するCDR-H3；
d.アミノ酸配列RASQSISSYLN（配列番号１３）を有するCDR-L1；
e.アミノ酸配列AASSLQS（配列番号１４）を有するCDR-L2；および
f.アミノ酸配列QQSYSTPFT（配列番号１５）を有するCDR-L3。
【０２０８】
前述の抗体は、例えば、米国特許第8,071,099号に記載されており、その開示は、抗CD135抗体およびその抗原結合フラグメントに関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。IMC-EB10およびIMC-NC7などの、米国特許第8,071,099号に開示されている抗体およびそのフラグメントを、本明細書に開示されている方法と併せて使用することができる。
【０２０９】
上記に加えて、本明細書に記載の患者コンディショニング方法と併せて使用することができる抗CD135抗体には、以下のCDRのうちの1つ以上、または全てを有するものが含まれる：
a.アミノ酸配列SYWMH（配列番号２２）を有するCDR-H1；
b.アミノ酸配列EIDPSDSYKDYNQKFK（配列番号２３）を有するCDR-H2；
c.アミノ酸配列AITTTPFDF（配列番号２４）を有するCDR-H3；
d.アミノ酸配列RASQSISNNLH（配列番号２５）を有するCDR-L1；
e.アミノ酸配列YASQSIS（配列番号２６）を有するCDR-L2；および
f.アミノ酸配列QQSNTWPYT（配列番号２７）を有するCDR-L3。
【０２１０】
本明細書に開示される患者コンディショニング方法と併せて使用することができる追加の抗CD135抗体には、以下のCDRのうちの1つ以上、または全てを有するものが含まれる：
a.アミノ酸配列NYGLH（配列番号２８）を有するCDR-H1；
b.アミノ酸配列VIWSGGSTDYNAAFIS（配列番号２９）を有するCDR-H2；
c.アミノ酸配列KGGIYYANHYYAMDY（配列番号３０）を有するCDR-H3；
d.アミノ酸配列KSSQSLLNSGNQKNYM（配列番号３１）を有するCDR-L1；
e.アミノ酸配列GASTRES（配列番号３２）を有するCDR-L2；および
f.アミノ酸配列QNDHSYPLT（配列番号３３）を有するCDR-L3。
【０２１１】
前述の抗体は、例えば、米国特許第9,023,996号に記載されており、その開示は、抗CD135抗体およびその抗原結合フラグメントに関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。クローン4G8およびBV10などの米国特許第9,023,996号に開示されている抗体およびそのフラグメントを、本明細書に開示の方法と併せて使用することができる。
【０２１２】
本明細書に記載の患者コンディショニング方法と併せて使用することができる他の抗CD135抗体には、例えば、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ATCC）受託番号ATCC HB 11,557によって産生および放出される抗体が含まれ、それは、例えば、米国特許第5,635,388号に記載されており、その開示は、抗CD135抗体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の患者コンディショニング方法と併せて使用することができる追加の抗CD135抗体には、例えば、1995年12月19日時点で、ブダペスト条約に基づいて番号DSM ACC2249のもとで国際寄託機関DSMZ-Deutsche Sammung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH Mascheroder Weg 1b（D-38124、ブラウンシュワイク、ドイツ）に寄託されて、4G8B4B 12と命名されたハイブリドーマ細胞によって産生および放出される抗体が挙げられ、それは、例えば、米国特許第6,156,882号に記載されており、その開示は、抗CD135抗体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の患者コンディショニング方法と併せて使用することができる追加の抗CD135抗体には、例えば、1995年12月19日に、ブダペスト条約に基づいて番号DSM ACC2248のもとでGerman Collection of Microorganisms and Cell Cultures Ltd.に寄託され、BV10A4H2と命名されたハイブリドーマ細胞によって産生および放出される抗体が挙げられ、それは、例えば、米国特許第5,777,084号に記載されており、その開示は、抗CD135抗体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の患者コンディショニング方法と併せて使用することができる追加の抗CD135抗体には、例えば、米国特許第7,183,385号に記載されているATCC受託番号FTA-4089によって産生および放出される抗体が含まれ、その開示は、抗CD135抗体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。追加の抗CD135抗体は、米国特許第5,548,065号（例えば、ATCC受託託番号CRL 10907, CRL 10935, CRL 10936およびCRL 11005によって産生および放出される抗CD135抗体、その抗原結合フラグメント、およびリガンドを含む）および9,109,227号、ならびに米国特許出願公開第2009/0054358号に記載されており、これらの各々の開示は、抗CD135抗体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の方法と併せて使用するための他の抗CD135抗体には、例えば、米国特許出願公開第2010/0093008号に記載されているように、ウサギハイブリドーマ細胞系C24D9によって産生される抗体、およびそのヒト化変異体が挙げられ、その開示は、抗CD135抗体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１３】
上記に加えて、CD135に結合することができる抗体およびその抗原結合フラグメントには、国際公開第1995/007348号に記載されているものが挙げられ、その開示は、抗CD135抗体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。例えば、ATCC受託入番号HB 11442により産生および放出されるラット抗体19Aのヒト化変異体、ATCC受託託番号HB 11443により産生および放出される抗体23Hのヒト化変異体、ATCC受託託番号11444により産生および放出される抗体2A13のヒト化変異体、ATCC受託託番号HB 11445により産生および放出されるマウス抗体6J11のヒト化変異体および国際公開第1995/007348号に記載のラット抗体7 IEのヒト化変異体を、本明細書に記載の方法と併せて使用し、造血幹細胞移植治療の前に患者をコンディショニングすることができる。
【０２１４】
抗体および抗原結合フラグメントに加えて、ヒトFlt3リガンドなどのCD135リガンドを患者に、本明細書に記載の方法に従い、例えば、がんもしくは自己免疫障害を治療するために、または造血幹細胞移植治療の前に患者をコンディショニングするために投与することができる。例えば、ヒトFlt3リガンドなどのCD135リガンドは、（例えば、以下に記載される方法もしくは当該技術分野で知られている方法に従って）細胞毒素またはFcドメインなどの別のエフェクター分子にコンジュゲートすることができる。本明細書に記載の方法と併せて使用するためのCD135リガンドには、例えば、ヒトFlt3リガンド-IgG1 Fcコンジュゲート、ヒトFlt3リガンド-IgG2 Fcコンジュゲート、ヒトFlt3リガンド-IgG3 Fcコンジュゲート、およびヒトFlt3リガンド-IgG4 Fcコンジュゲート、例えば、ADIPOGEN（登録商標）（サンディエゴ、カリフォルニア州）、製品番号AG-40B-0119により製造されるものなどが挙げられる。
【０２１５】
前述の刊行物の各々の開示は、抗CD135抗体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の組成物および方法と併せて使用され得る抗体および抗原結合フラグメントには、上記の抗体およびその抗原結合フラグメント、ならびに上記の非ヒト抗体および抗原結合フラグメントのヒト化変異体、および、例えば、競合的CD135結合アッセイによって評価されるように、上記のものと同じエピトープに結合する抗体または抗原結合フラグメントが挙げられる。
【０２１６】
（抗CD34抗体）
ヒトCD34（mRNA NCBI参照配列：NM_001025109.1、タンパク質NCBI参照配列：NP_001020280.1）に結合することができる抗体および抗原結合フラグメントは、本明細書に記載の組成物および方法と併せて使用することができる。有意な割合の集団においてCD34のコード領域または細胞外ドメインに影響を及ぼす多型の理解は、まだ確立されていない。それらの細胞質尾部の長さが異なる（長いおよび短い）CD34の2つのアイソフォームがある。近年、長いアイソフォームを使用して、免疫原として使用することができるCD34を発現する安定な細胞株が生成された（例えば、Adv. Pharm. Bull. 5:69-75, 2015を参照）。CD34、例えばCD34の長いアイソフォームなどは、CD34に結合することができ、例えばがんおよび自己免疫疾患の治療に適した抗体およびその抗原結合フラグメントを同定するための免疫原として使用することができ、ならびに造血幹細胞移植治療の前のコンディショニング剤としての使用もできる。
【０２１７】
本明細書に記載の方法と併せて使用することができるCD34抗体には、例えば米国特許第5,843,633号に記載されているような、ATCC受託託番号AC133.1およびHB 12346から産生および放出される抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１８】
前述の刊行物の開示は、抗CD34抗体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の組成物および方法と併せて使用され得る抗体および抗原結合フラグメントには、上記の抗体およびその抗原結合フラグメント、ならびに上記の非ヒト抗体および抗原結合フラグメントのヒト化変異体、および、例えば、競合的CD34結合アッセイによって評価されるように、上記のものと同じエピトープに結合する抗体または抗原結合フラグメントが挙げられる。
【０２１９】
（抗CD90抗体）
ヒトCD90に結合することができる抗体およびその抗原結合フラグメントを、本明細書に記載の組成物および方法と併せて使用することができる。造血幹細胞は、ヒト臍帯血のLin-CD34+CD38-CD90+CD45RA-画分が富化されて造血幹細胞を含むと報告されているため、CD90を発現することが示されている（例えば、Majeti et al., Cell Stem Cell 1:635-645, 2007を参照、その開示は、造血幹細胞によるCD90の発現に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる）。この細胞表面抗原に結合することができる抗体および抗原結合フラグメントは、免疫化ならびに下記のファージディスプレイおよび細胞ベースのディスプレイプラットフォームを含むin vitro選択技術などの、当該技術分野で知られているおよび本明細書に記載の技術を用いて産生され得る。
【０２２０】
本明細書に記載の方法と併せて使用することができる抗CD90抗体には、限定されないが、EPR3132、EPR3133、AF-9、5E10、F15-42-1、7E1B11、ab189367、aTHy-1A1、ab106934、およびab110477が挙げられ、これらはABCAM（登録商標）（ケンブリッジ、マサチューセッツ州）から市販されているもの、ならびにそれらのヒト化変異体である。
【０２２１】
本明細書に記載の組成物および方法と併せて使用され得る抗体および抗原結合フラグメントには、上記の抗体およびその抗原結合フラグメント、ならびに上記の非ヒト抗体および抗原結合フラグメントのヒト化変異体、および、例えば、競合的CD90結合アッセイによって評価されるように、上記のものと同じエピトープに結合する抗体または抗原結合フラグメントが挙げられる。
【０２２２】
（抗CD110抗体）
ヒトCD110に結合することができる抗体およびその抗原結合フラグメント（c-mplおよび血小板受容体（TPO）とも呼ばれる）を、本明細書に記載の組成物および方法と併せて使用することができる。造血幹細胞はCD110を発現することが示されており、CD110の発現は、造血幹細胞の機能的潜在能力と相関し、造血幹細胞が分化して造血系列に成長するにつれて減少する（例えば、Ninos et al., J. Transl. Med. 4:9, 2006を参照し、その開示は、造血幹細胞によるCD110の発現に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる）。この細胞表面抗原に結合することができる抗体および抗原結合フラグメントは、免疫化ならびに下記のファージディスプレイおよび細胞ベースのディスプレイプラットフォームを含むin vitro選択技術などの、当該技術分野で知られているおよび本明細書に記載の技術を用いて育てられ得る。
【０２２３】
本明細書に記載のがん治療方法、自己免疫疾患治療方法、および患者コンディショニング方法などの本明細書に記載の方法と併せて使用することができる抗CD110抗体には、例えば、De Gobbi et al., Epigenetics Chromatin 4:9, 2011；Erickson-Miller et al., BMC Cancer 12:405, 2012；およびPetit Cocault et al., Exp. Hematol. 44:297-302, 2016に記載のクローンBAH-1, 1.78.1、および1.6.1が挙げられ、それらの各々の開示は、抗CD110抗体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。
【０２２４】
前述の刊行物の各々の開示は、抗CD110抗体に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の組成物および方法と併せて使用され得る抗体および抗原結合フラグメントには、上記の抗体およびその抗原結合フラグメント、ならびに上記の非ヒト抗体および抗原結合フラグメントのヒト化変異体、および、例えば、競合的CD110結合アッセイによって評価されるように、上記のものと同じエピトープに結合する抗体または抗原結合フラグメントが挙げられる。
【０２２５】
（追加の抗体およびその抗原結合フラグメント）
本明細書に記載の方法と併せて使用するための抗体およびリガンドには、Fcドメインを含むかまたは欠く抗体フラグメントなどの上記の抗体の変異体、ならびに本明細書に記載の抗体、抗体フラグメント、またはリガンドの1つ以上もしくは全てのCDRまたはその等価領域を含む、本明細書に記載の非ヒト抗体のヒト化変異体および抗体様タンパク質足場（例えば、10Fn3ドメイン）が挙げられる。前述の抗体の例示的な抗原結合フラグメントには、とりわけ、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Fv分子（scFv）、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質足場、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')2分子、およびタンデムジ-scFvが挙げられる。
【０２２６】
（併用療法の方法）
本明細書に記載の方法を使用して、当業の内科医は、がんもしくは自己免疫疾患について患者を治療することができ、または造血幹細胞移植治療の前に、本明細書に記載の1つ以上の抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドを投与することによって患者をコンディショニングすることができる。例えば、内科医は、CD45（例えば、CD45RO）を認識して結合する抗体、その抗原結合フラグメント、もしくはリガンドを、単独で、またはCD135を認識して結合する抗体、その抗原結合フラグメント、もしくはリガンド、CD34を認識して結合する抗体、その抗原結合フラグメント、もしくはリガンド、CD90を認識して結合する抗体、その抗原結合フラグメント、もしくはリガンド、ならびに／またはCD110を認識して結合する抗体、その抗原結合フラグメント、もしくはリガンドと併用して投与することによって、がんもしくは自己免疫疾患を治療するか、または造血幹細胞移植治療のために患者をコンディショニングしてもよい。併用療法のための投薬計画は、2つ以上の上記抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドの逐次投与を含み得、例えば、第1の抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドを指定された時点で患者に投与し、その後第2の抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドを患者に後の時点で、例えば、合わせた治療用量の薬物動態プロファイルが最適化されるように投与する。本明細書に記載の1つ以上の造血幹細胞抗原にそれぞれ結合する2つ以上の抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドは、患者（例えば、ヒト患者）に同時に投与することができ、単一の医薬組成物中で互いに混合してもよく、または異なる時間に投与してもよい（例えば、互いに1〜24時間以内、例えば、互いに1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、11時間、12時間、13時間、14時間、15時間、16時間、17時間、18時間、19時間、20時間、21時間、22時間、23時間、24時間、またはそれ以上の時間以内）。
【０２２７】
抗体、その抗原結合フラグメント、およびリガンドは、単一の抗体を用いて複数の造血幹細胞抗原を認識および結合するように患者に投与することができる。これは、例えば、二重特異性抗体および多重特異性抗体を用いて達成することができる。例えば、CD45（例えば、CD45RO）に選択的に結合する抗原結合フラグメントとCD135に選択的に結合する別の抗原結合フラグメントとを含有する二重特異性抗体を、造血幹細胞移植治療を必要とする患者に投与することができるが、その目的は、CD45+CD135+細胞を枯渇させ、それにより造血組織（例えば骨髄）に、外因性造血幹細胞移植で補充することができる欠員を作り出すためである。同様に、CD45（例えば、CD45RO）およびCD34に選択的に結合する抗原結合フラグメントを含有する二重特異性抗体を患者に、造血幹細胞移植治療の前にCD34+CD45+細胞を枯渇させるために投与することができる。CD45（例えば、CD45RO）およびCD90に選択的に結合する抗原結合フラグメントを含有する二重特異性抗体を、がんまたは自己免疫疾患に罹患している患者などの患者に、造血幹細胞移植治療の前に、CD45+CD90+細胞を枯渇させるために、同様に投与できる。さらに、CD45（例えば、CD45RO）およびCD110に選択的に結合する抗原結合フラグメントを含有する二重特異性抗体を患者に、例えば、造血幹細胞移植の前に、CD45+CD110+細胞を枯渇させるために、投与することができる。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、CD135に選択的に結合する抗原結合フラグメントとCD34に選択的に結合する別の抗原結合フラグメントとを含む二重特異性抗体を、例えば、がん、自己免疫疾患に罹患している患者、または造血幹細胞移植治療を必要としている患者などの患者に投与することができるが、その目的は、CD34+CD135+細胞を枯渇させ、それにより造血組織（例えば、骨髄）に、外因性造血幹細胞移植で補充することができる欠員を作り出すためである。同様に、CD135およびCD90に選択的に結合する抗原結合フラグメントを含有する二重特異性抗体を患者に、造血幹細胞移植治療の前にCD90+CD135+細胞を枯渇させるために投与することができる。CD135およびCD110に選択的に結合する抗原結合フラグメントを含有する二重特異性抗体を患者に、例えば、造血幹細胞移植治療の前にCD110+CD135+細胞を枯渇させるために、同様に投与することができる。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、CD34に選択的に結合する抗原結合フラグメントとCD90に選択的に結合する別の抗原結合フラグメントとを含有する二重特異性抗体を、がん、自己免疫疾患に罹患している患者、または造血幹細胞移植を必要とする患者に投与することができるが、その目的は、CD34+CD90+細胞を枯渇させ、それにより造血組織（例えば、骨髄）に、外因性造血幹細胞移植で補充することができる欠員を作り出すためである。同様に、CD34およびCD110に選択的に結合する抗原結合フラグメントを含む二重特異性抗体を患者に、例えば、造血幹細胞移植治療の前にCD34+CD110+細胞を枯渇させるために投与することができる。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、CD90に選択的に結合する抗原結合フラグメントとCD110に選択的に結合する別の抗原結合フラグメントとを含有する二重特異性抗体を、がん、自己免疫疾患に罹患している患者、または造血幹細胞移植を必要とする患者に投与することができるが、その目的は、CD90+CD110+細胞を枯渇させ、それにより造血組織（例えば、骨髄）に、外因性造血幹細胞移植で補充することができる欠員を作り出すためである。
【０２３１】
（抗体およびリガンドを同定する方法）
CD45（例えば、CD45RO）、CD135、CD34、CD90、およびCD110に結合することができる分子についての抗体、抗体フラグメント、およびリガンドライブラリーのハイスループットスクリーニングのための方法を使用し、がん、自己免疫疾患を治療するのと、本明細書に記載のように造血幹細胞療法を必要とする患者（例えば、ヒト患者）をコンディショニングするのとに有用な親和性成熟抗体を同定することができる。そのような方法には、とりわけファージディスプレイ、細菌ディスプレイ、酵母ディスプレイ、哺乳動物細胞ディスプレイ、リボソームディスプレイ、mRNAディスプレイ、およびcDNAディスプレイなどの当該技術分野で知られているin vitroディスプレイ技術が挙げられる。生物学的に関連のある分子に結合するリガンドを単離するためのファージディスプレイの使用は、例えば、Felici et al., Biotechnol. Annual Rev. 1:149-183, 1995；Katz, Annual Rev. Biophys. Biomol. Struct. 26:27-45, 1997；およびHoogenboom et al., Immunotechnology 4:1-20, 1998にレビューされており、これらの各々の開示は、in vitroディスプレイ技術に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。Kay, Perspect. Drug Discovery Des. 2:251-268, 1995およびKay et al., Mol. Divers. 1:139-140, 1996に記載されているように、細胞表面抗原に結合するポリペプチドを選択するために、ランダム化コンビナトリアルペプチドライブラリーが構築されており、これらの各々の開示は、抗原結合分子の発見に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。多量体タンパク質などのタンパク質は、機能的分子として首尾よくファージディスプレイされている（例えば、EP 0349578；EP 4527839；およびEP 0589877、ならびにChiswell and McCafferty, Trends Biotechnol. 10:80-84 1992を参照し、それらの各々の開示は、抗原結合分子の発見のためのin vitroディスプレイ技術の使用に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる）。さらに、FabフラグメントおよびscFVフラグメントなどの機能的抗体フラグメントは、in vitroディスプレイフォーマットで発現されている（例えば、McCafferty et al., Nature 348:552- 554, 1990；Barbas et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:7978-7982, 1991；およびClackson et al., Nature 352:624-628, 1991を参照し、これらの各々の開示は、抗原結合分子の発見のためのin vitroディスプレイ技術の使用に関するものとして参照により本明細書に組み込まれる）。これらの技術は、とりわけ、造血幹細胞抗原に結合する抗体（例えば、CD45（例えば、CD45RO）、CD135、CD34、CD90、およびCD110）の親和性を同定および改善するために使用することができ、それは次いで、造血幹細胞移植治療を必要とする患者（例えば、ヒト患者）における内因性造血幹細胞を枯渇させるために使用することができる。
【０２３２】
In vitroディスプレイ技術に加えて、コンピューターモデリング技術を使用して、CD45（例えば、CD45RO）、CD135、CD34、CD90、またはCD110に結合する抗体、抗体フラグメント、およびリガンドをin silicoで設計および同定することができる。例えば、コンピューターモデリング技術を使用して、当業者は、抗体、抗体フラグメント、およびリガンドのライブラリーを、in silicoで、CD45（例えば、CD45RO）、CD135、CD34、CD90、およびCD110上の特異的エピトープに結合することができる分子、例えばこれらの抗原の細胞外エピトープなどについてスクリーニングすることができる。これらの計算技術によって同定された抗体、その抗原結合フラグメント、およびリガンドを、本明細書に記載のがんおよび自己免疫疾患の治療方法などの本明細書に記載の治療方法ならびに本明細書に記載の患者のコンディショニング手順と併せて使用できる。
【０２３３】
細胞（例えば、がん細胞、自己免疫細胞、または造血幹細胞）の表面上のCD45（例えば、CD45RO）、CD135、CD34、CD90、および／またはCD110に結合し、例えば、受容体媒介エンドサイトーシスによって細胞に取り込まれる抗体、その抗原結合フラグメント、およびリガンドを同定するために、さらなる技術を使用することができる。例えば、がん細胞、自己免疫細胞、または造血幹細胞の表面上のCD45（例えば、CD45RO）、CD135、CD34、CD90、および／またはCD110に結合し、その後取り込まれる抗体、その抗原結合フラグメント、ならびにリガンドについてスクリーニングするために、上記のin vitroディスプレイ技術を適応することができる。ファージディスプレイは、このスクリーニングパラダイムと併せて使用することができるそのような技術の1つを表す。上記の標的の1つ以上に結合し、続いてがん細胞、自己免疫細胞、または造血幹細胞によって取り込まれる抗体、そのフラグメント、およびリガンドを同定するために、当業者は、Williams et al., Leukemia 19:1432-1438, 2005に記載のファージディスプレイ技術を適応させることができ、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。例えば、当該技術分野で知られている突然変異誘発法を用いて、とりわけ抗体、抗体フラグメント、例えばscFvフラグメント、Fabフラグメント、ダイアボディ、トリアボディ、および10Fn3ドメインなど、またはランダム化アミノ酸カセット（例えば、CDRもしくはその等価領域のうちの1つ以上、もしくは全部、または抗体もしくは抗体フラグメント）を含有するリガンドをコードする組み換えファージライブラリーを作製することができる。フレームワーク領域、ヒンジ、Fcドメイン、および抗体または抗体フラグメントの他の領域は、例えば、ヒト生殖細胞系列抗体配列またはヒト生殖細胞系列抗体に対してわずかな変異のみを示す配列を有することによって、ヒトにおいて非免疫原性であるように設計され得る。
【０２３４】
本明細書に記載のまたは当該技術分野で知られているファージディスプレイ技術を用いて、ファージ粒子に共有結合したランダム化抗体、抗体フラグメント、またはリガンドを含むファージライブラリーを、CD45（例えば、CD45RO）、CD135、CD34、CD90、および／またはCD110と共にインキュベートすることができ、それは、例えば、最初に、ファージライブラリーをブロッキング剤（例えば、乳タンパク質、ウシ血清アルブミン、および／またはIgGなど）と共にインキュベートし、非特異的タンパク質結合を示す抗体、そのフラグメント、またはリガンドをコードするファージと、Fcドメインに結合する抗体またはそのフラグメントをコードするファージとを除去し、次いでファージライブラリーを造血幹細胞の集団と共にインキュベートすることによる。ファージライブラリーを、がん細胞、自己免疫細胞、または造血幹細胞などの標的細胞と共に十分な時間インキュベートし、CD45特異的、CD135特異的、CD34特異的、CD90特異的、および／またはCD110特異的抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドが細胞表面抗原に結合し、その後、がん細胞、自己免疫細胞、または造血幹細胞によって取り込まれるのを可能することができる（例えば、4℃で30分〜6時間、例えば4℃で1時間など）。これらの抗原の1つ以上に対して十分な親和性を示さない抗体、そのフラグメント、またはリガンドを含有するファージは、がん細胞、自己免疫細胞、または造血幹細胞への結合およびそれらによる取り込みを可能にするために、その後、細胞を、例えば、pH 2.8の冷（4℃）0.1 Mグリシン緩衝液で洗浄することによって除去できる。がん細胞、自己免疫細胞、または造血幹細胞によって取り込まれた抗体、そのフラグメント、またはリガンドに結合したファージは、例えば、細胞を溶解し、取り込まれたファージを細胞培養培地から回収することによって同定することができる。次いで、ファージは、例えば、細菌細胞を、2×YT培地中で回収されたファージと当該技術分野で知られている方法を用いてインキュベートすることによって、細菌細胞中で増幅することができる。次いで、この培地から回収されたファージは、例えば、ファージゲノム内に挿入された抗体、そのフラグメント、またはリガンドをコードする遺伝子（単数または複数）の核酸配列を決定することによって特徴付けることができる。コードされた抗体、そのフラグメント、またはリガンドは、その後、（例えば、scFVフラグメントなどの抗体フラグメント、もしくはリガンドの）化学合成または（例えば、全長抗体の）組み換え発現によってde novoで調製することができる。
【０２３５】
調製された抗体、そのフラグメント、またはリガンドの取り込み能力は、例えば当該技術分野で知られている放射性核種取り込みアッセイを用いて評価することができる。例えば、本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られているin vitroディスプレイ技術を使用して同定された抗体、そのフラグメント、またはリガンドは、18F、75Br、77Br、122I、123I、124I、125I、129I、131I、211At、67Ga、111In、99Tc、169Yb、186Re、64Cu、67Cu、177Lu、77As、72As、86Y、90Y、89Zr、212Bi、213Bi、または225Acなどの放射性同位元素の組み込みによって官能化することができる。例えば、18F、75Br、77Br、122I、123I、124I、125I、129I、131I、211Atなどの放射性ハロゲンを、求電子性ハロゲン試薬（例えば、ヨウ素化ビーズ、サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ケンブリッジ、マサチューセッツ州）を含有するポリスチレンビーズなどのビーズを用いて、抗体、そのフラグメントまたはリガンドに組み込むことができる。放射標識抗体、そのフラグメント、またはリガンドは、がん細胞、自己免疫細胞、または造血幹細胞と、取り込みを可能にするのに十分な時間（例えば、4℃で30分〜6時間、例えば4℃で1時間）インキュベートすることができる。次いで、細胞を洗浄して、取り込まれなかった抗体、そのフラグメント、またはリガンドを除去することができる（例えば、pH2.8の冷（4℃）0.1Mグリシン緩衝液を使用して）。取り込まれた抗体、そのフラグメント、またはリガンドは、結果として生じるがん細胞、自己免疫細胞、または造血幹細胞から放出される放射線（例えば、γ線）を、回収した洗浄緩衝液から放出される放射線（例えば、γ線）と比較して検出することによって同定できる。
【０２３６】
（薬物-抗体コンジュゲートおよび薬物-リガンドコンジュゲート）
（サイトトキシン）
本明細書に記載の抗体、その抗原結合フラグメント、およびリガンド（例えば、CD45（CD45ROなど）、CD135、CD34、CD90、および／またはCD110を認識して結合する抗体、抗原結合フラグメント、およびリガンド）を、例えば、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、α-アマニチンなどのアマトキシン、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、およびインドリノベンゾジアゼピン二量体、もしくはそれらの変異体などの細胞毒素、または本明細書に記載のもしくは当該技術分野で知られている別の細胞傷害性化合物にコンジュゲートすることができ、例えば、その目的は、本明細書に記載のがんもしくは自己免疫疾患を治療するため、または、造血幹細胞移植療法を必要とする患者（例えば、ヒト患者）に投与した際に内因性造血幹細胞の枯渇を促進するためである。いくつかの実施形態では、細胞傷害性分子は、抗体、抗原結合フラグメント、またはリガンドの細胞取り込み後に細胞毒素がその細胞内標的にアクセスして内因性造血細胞死を媒介し得るように、取り込まれる抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドにコンジュゲートされる。本明細書に記載の組成物および方法と共に使用するのに適した細胞毒素には、当該技術分野で知られているものの中でもとりわけ、DNA挿入剤（例えばアントラサイクリン）、紡錘体装置を破壊することができる薬剤（例えばビンカアルカロイド、メイタンシン、メイタンシノイド、およびそれらの誘導体）、RNAポリメラーゼ阻害剤（例えば、α-アマニチンなどのアマトキシンおよびそれらの誘導体）、タンパク質生合成を破壊することができる薬剤（例えば、サポリンおよびリシンA鎖などのrRNA N-グリコシダーゼ活性を示す薬剤）が挙げられる。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、細胞毒素は、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、およびプロアマヌリンなどの、アマトキシンまたはその誘導体である。例えば、本明細書に記載の抗体、抗原結合フラグメント、およびリガンドは、式Ab-Amで表されるコンジュゲートを形成するようにアマトキシンに結合してもよく、式中、Abは抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドであり、Amはアマトキシンである。いくつかの実施形態では、Amは、式（I）で表される：
【化１８】
2019522050.tif 000021
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R5は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R6は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R7は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたアルキル（例えば、C1-C6アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、C1-C6ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、C2-C6アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、C2-C6ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、C2-C6アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、C2-C6ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたアルキレン（例えば、C1-C6アルキレン）、任意に置換されたヘテロアルキレン（例えば、C1-C6ヘテロアルキレン）、任意に置換されたアルケニレン（例えば、C2-C6アルケニレン）、任意に置換されたヘテロアルケニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルケニレン）、任意に置換されたアルキニレン（例えば、C2-C6アルキニレン）、任意に置換されたヘテロアルキニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルキニレン）、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンなどのリンカーであり；ならびに
Zは、L上に存在する反応性置換基と、CD45（CD45ROなど）、CD135、CD34、CD90、および／またはCD110に結合する抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンド内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位である］。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、Amは、式（IA）で表される：
【化１９】
2019522050.tif 000022
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R5は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R6は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R7は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたアルキル（例えば、C1-C6アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、C1-C6ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、C2-C6アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、C2-C6ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、C2-C6アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、C2-C6ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたアルキレン（例えば、C1-C6アルキレン）、任意に置換されたヘテロアルキレン（例えば、C1-C6ヘテロアルキレン）、任意に置換されたアルケニレン（例えば、C2-C6アルケニレン）、任意に置換されたヘテロアルケニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルケニレン）、任意に置換されたアルキニレン（例えば、C2-C6アルキニレン）、任意に置換されたヘテロアルキニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルキニレン）、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンなどのリンカーであり；
Zは、L上に存在する反応性置換基と、CD45（CD45ROなど）、CD135、CD34、CD90、および／またはCD110に結合する抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンド内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位であり；ならびに
式中、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む］。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、Amは、式（IB）で表される：
【化２０】
2019522050.tif 000023
［式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して任意に置換された5員ヘテロシクロアルキル基を形成し；
R3は、H、RC、またはRDであり；
R4は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R5は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R6は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R7は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、またはNRCRDであり；
R9は、H、OH、ORC、またはORDであり；
Xは、-S-、-S(O)-、または-SO2-であり；
RCは、-L-Zであり；
RDは、任意に置換されたアルキル（例えば、C1-C6アルキル）、任意に置換されたヘテロアルキル（例えば、C1-C6ヘテロアルキル）、任意に置換されたアルケニル（例えば、C2-C6アルケニル）、任意に置換されたヘテロアルケニル（例えば、C2-C6ヘテロアルケニル）、任意に置換されたアルキニル（例えば、C2-C6アルキニル）、任意に置換されたヘテロアルキニル（例えば、C2-C6ヘテロアルキニル）、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Lは、任意に置換されたアルキレン（例えば、C1-C6アルキレン）、任意に置換されたヘテロアルキレン（例えば、C1-C6ヘテロアルキレン）、任意に置換されたアルケニレン（例えば、C2-C6アルケニレン）、任意に置換されたヘテロアルケニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルケニレン）、任意に置換されたアルキニレン（例えば、C2-C6アルキニレン）、任意に置換されたヘテロアルキニレン（例えば、C2-C6ヘテロアルキニレン）、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンなどのリンカーであり；
Zは、L上に存在する反応性置換基と、CD45（CD45ROなど）、CD135、CD34、CD90、および／またはCD110に結合する抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンド内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位であり；ならびに
式中、Amは、ちょうど1つのRC置換基を含む］。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成する：
【化２１】
2019522050.tif 000024
［式中、Yは、O、S、NRE、およびCREREから選択され、ならびに
REおよびRE'は、それぞれ独立して、任意に置換されたC1-C6アルキレン-RC、任意に置換されたC1-C6ヘテロアルキレン-RC、任意に置換されたC2-C6アルケニレン-RC、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルケニレン-RC、任意に置換されたC2-C6アルキニレン-RC、任意に置換されたC2-C6ヘテロアルキニレン-RC、任意に置換されたシクロアルキレン-RC、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン-RC、任意に置換されたアリーレン-RC、または任意に置換されたヘテロアリーレン-RCである］。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、Amは、式（IA）または式（IB）で表され、
式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し：
【化２２】
2019522050.tif 000025
R3は、HまたはRCであり；
R4は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R5は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R6は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R7は、H、OH、ORC、ORD、RC、またはRDであり；
R8は、OH、NH2、ORC、またはNHRCであり；
R9は、HまたはOHであり；ならびに
式中、RCおよびRDは、それぞれ上記で定義した通りである。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、Amは、式（IA）または式（IB）で表され、
式中、R1は、H、OH、ORA、またはORCであり；
R2は、H、OH、ORB、またはORCであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し：
【化２３】
2019522050.tif 000026
R3は、HまたはRCであり；
R4およびR5は、それぞれ独立して、H、OH、ORC、RC、またはORDであり；
R6およびR7は、それぞれHであり；
R8は、OH、NH2、ORC、またはNHRCであり；
R9は、HまたはOHであり；ならびに
式中、RCは、上記で定義した通りである。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、Amは、式（IA）または式（IB）で表され、
式中、R1は、H、OH、またはORAであり；
R2は、H、OH、またはORBであり；
RAおよびRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、結合して以下を形成し：
【化２４】
2019522050.tif 000027
R3、R4、R6、およびR7は、それぞれHであり；
R5はORCであり；
R8は、OHまたはNH2であり；
R9は、HまたはOHであり；ならびに
式中、RCは、上記で定義した通りである。そのようなアマトキシンコンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2016/0002298号に記載されており、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、Amは、式（IA）または式（IB）で表され、
式中、R1およびR2は、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3はRCであり；
R4、R6、およびR7は、それぞれHであり；
R5は、H、OH、またはOC1-C6アルキルであり；
R8は、OHまたはNH2であり；
R9は、HまたはOHであり；ならびに
式中、RCは、上記で定義した通りである。そのようなアマトキシンコンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2014/0294865号に記載されており、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、Amは、式（IA）または式（IB）で表され、
式中、R1およびR2は、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3、R6、およびR7は、それぞれHであり；
R4およびR5は、それぞれ独立して、H、OH、ORC、またはRCであり；
R8は、OHまたはNH2であり；
R9は、HまたはOHであり；ならびに
式中、RCは、上記で定義した通りである。そのようなアマトキシンコンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号に記載されており、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、Amは、式（IA）または式（IB）で表され、
式中、R1およびR2は、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R3、R6、およびR7は、それぞれHであり；
R4およびR5は、それぞれ独立して、HまたはOHであり；
R8は、OH、NH2、ORC、またはNHRCであり；
R9は、HまたはOHであり；ならびに
式中、RCは、上記で定義した通りである。そのようなアマトキシンコンジュゲートは、例えば、米国特許第9,233,173号および第9,399,681号、ならびに米国特許出願公開第2016/0089450号に記載されており、その各々の開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２４８】
本明細書に記載の組成物および方法に従って抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドへのコンジュゲーションに使用され得るさらなるアマトキシンは、例えば、WO 2016/142049；WO 2016/071856；およびWO 2017/046658に記載されており、これらの各々の開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、Amは、式（II）で表される：
【化２５】
2019522050.tif 000028
［式中、Xが、S、SO、またはSO2であり；
R1が、H、または抗体もしくはその抗原結合フラグメントに共有結合しているリンカーであり；
R2が、H、または抗体もしくはその抗原結合フラグメントに共有結合しているリンカーであり；ならびに
ここで、R1がHである場合、R2はリンカーであり、R2がHである場合、R1はリンカーである］。
【０２５０】
本明細書に記載の組成物および方法と併せて使用するための抗体、抗原結合フラグメント、およびリガンドは、当該技術分野で知られているまたは本明細書に記載のコンジュゲート技術を使用して、α-アマニチンなどのアマトキシンまたはその変異体にコンジュゲートすることができる。例えば、CD45（CD45ROなど）、CD135、CD34、CD90、および／またはCD110を認識して結合する抗体、その抗原結合フラグメント、およびリガンドは、α-アマニチンなどのアマトキシンまたはその変異体にコンジュゲートすることができ、米国特許出願公開第2015/0218220に記載されているように、その開示は、例えば、α-アマニチンなどのアマトキシンおよびその変異体、ならびに共有結合コンジュゲーションに使用することができる共有結合リンカーに関するものとして、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２５１】
本明細書に記載の方法と併せて有用な例示的な抗体-薬物およびリガンド-薬物コンジュゲートは、抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドと、抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンド上の反応性残基との反応に適した置換基を含有するリンカーにコンジュゲートしたアマトキシンとの反応によって形成され得る。本明細書に記載の抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンド上の反応性残基との反応に適した置換基を含有するリンカーにコンジュゲートするアマトキシンには以下が挙げられるが、これらに限定されない：7'C-(4-(6-(マレイミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボニル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(3-カルボキシプロパンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(2-ブロモアセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(3-(ピリジン-2-イルジスルファニル)プロパンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(4-(マレイミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(マレイミド)アセチル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(3-(マレイミド)プロパノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(4-(マレイミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((6-((4-(マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(マレイミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メ���ル)-アマトキシン；(R)-7'C-((3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；(S)-7'C-((3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)-S-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)-R-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)-S-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)-R-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(3-カルボキシプロパンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(マレイミド)アセチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(3-(マレイミド)プロパノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(4-(マレイミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-(マレイミド)アセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-(マレイミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)メチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)アゼチジン-1イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-(((2-(6-(マレイミド)-N-メチルヘキサンアミド)エチル)(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-(((4-(6-(マ��イミド)N-メチルヘキサンアミド)ブチル(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-((2-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)アジリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((2-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)アジリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ヘキサンアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(1-(アミノオキシ)-2-オキソ-6,9,12,15-テトラオキサ-3-アザヘプタデカン-17-オイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)アセチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(3-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)プロパノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)アセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(20-(アミノオキシ)-4,19-ジオキソ-6,9,12,15-テトラオキサ-3,18-ジアザイコシル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-(((2-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)-N-メチルヘキサンアミド)エチル)(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-(((4-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)-N-メチルヘキサンアミド)ブチル)(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-S-メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)-R-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-ブロモアセトアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-ブロモアセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(3-(ピリジン-2-イルジスルファニル)プロパンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；6'O-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-(5-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ペンチル)-アマトキシン；6'O-(2-((6-(マレイミド)ヘキシル)オキシ)-2-オキソエチル)-アマトキシン；6'O-((6-(マレイミド)ヘキシル)カルバモイル)-アマトキシン；6'O-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキシル)カルバモイル)-アマトキシン；6'O-(6-(2-ブロモアセトアミド)ヘキシル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(アジド)ヘキサンアミド)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(ヘキサ-5-イノイルアミノ)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；6'O-(6-(6-(11,12-ジデヒドロ-5,6-ジヒドロ-ジベンゾ[b,f]アゾシン-5-イル)-6-オキソヘキサンアミド)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-(6-(ヘキサ-5-イノイルアミノ)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-(6-(2-(アミノオキシ)アセチルアミド)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-((6-アミノオキシ)ヘキシル)-アマトキシン；および6'O-(6-(2-ヨードアセトアミド)ヘキシル)-アマトキシン。前述のリンカーは、とりわけ本明細書に記載の組成物および方法と併せて有用であり、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号に記載されており、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２５２】
がん、自己免疫状態の直接治療に使用するための、または造血幹細胞移植治療に備えて、患者（例えば、ヒト患者）をコンディショニングするための、CD45（CD45ROなど）、CD135、CD34、CD90、および／またはCD110を認識して結合する抗体、その抗原結合フラグメント、およびリガンドにコンジュゲートできるさらなる細胞毒素には、とりわけ以下が挙げられるが、これらに限定されない：5-エチニルウラシル、アビラテロン、アシルフルベン、アデシペノール、アドゼレシン、アルデスロイキン、アルトレタミン、アンバムスチン、アミドックス、アミホスチン、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラホリド、血管新生阻害剤、アンタレリックス、抗背側化形態形成性タンパク質-1、抗アンドロゲン、前立腺癌、抗エストロゲン、抗新生物薬、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アフィジコリングリシネート、アポトーシス遺伝子モジュレーター、アポトーシスレギュレーター、アプリン酸、アスラクリン、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナスタチン1、アキシナスタチン2、アキシナスタチン3、アザセトロン、アザトキシン、アザチロシン、バッカチンIII誘導体、バラノール、バチマスタット、BCR/ABLアンタゴニスト、ベンゾクロリン、ベンゾイルスタウロスポリン、ベータラクタム誘導体、ベータ-アレチン、ベタクラマイシンB、ベツリン酸、bFGF阻害剤、ビカルタミド、ビサントレン、ビスアジリジニルスペルミン、ビスナフィド、ビストラテンA、ビゼレシン、ブレフレート、ブレオマイシンA2、ブレオマイシンB2、ブロピリミン、ブドチタン、ブチオニンスルホキシミン、カルシポトリオール、カルホスチンC、カンプトテシン誘導体（例えば、10-ヒドロキシ-カンプトテシン）、カペシタビン、カルボキサミド-アミノ-トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、カルゼレシン、カゼインキナーゼ阻害剤、カスタノスペルミン、セクロピンB、セトロレリックス、クロリン、クロロキノキサリンスルホンアミド、シカプロスト、シス-ポルフィリン、クラドリビン、クロミフェンおよびその類似体、クロトリマゾール、コリスマイシンA、コリスマイシンB、コンブレタスタチンA4、コンブレタスタチン類似体、コナゲニン、クラムベシジン816、クリスナトール、クリプトフィシン8、クリプトフィシンA誘導体、キュラシンA、シクロペンタアントラキノン、シクロプラタム、シペマイシン、シタラビンオクホスフェート、細胞溶解因子、サイトスタチン、ダクリキシマブ、デシタビン、デヒドロジデムニンB、2'デオキシコホルマイシン（DCF）、デスロレリン、デキシフォスファミド、デクスラゾキサン、デクスベラパミル、ジアジコン、ジデムニンB、ジドックス、ジエチルノルスペルミン、ジヒドロ-5-アザシチジン、ジヒドロタキソール、ジオキサマイシン、ジフェニルスピロムスチン、ディスコデルモリド、ドコサノール、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドロロキシフェン、ドロナビノール、デュオカルマイシンSA、エブセレン、エコムスチン、エデルフォシン、エドレコロマブ、エフロルニチン、エレメン、エミテフル、エポチロン、エピチロン、エプリステリド、エストラムスチンおよびその類似体、エトポシド、エトポシド4'-リン酸（エトポフォスとも呼ばれる）、エキセメスタン、ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチム、フィナステリド、フラボピリドール、フレゼラスチン、フルアステロン、フルダラビン、塩酸フルオロダウノルニシン、ホルフェニメックス、フォルメスタン、フォストリエシン、フォテムスチン、ガドリニウムテキサフィリン、硝酸ガリウム、ガロシタビン、ガニレリックス、ゼラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン、グルタチオン阻害剤、ヘプスルファム、ホモハリングトニン（HHT）、ヒペリシン、イバンドロン酸、イドキシフェン、イドラマントン、イルモホシン、イロマスタット、イミダゾアクリドン、イミキモド、免疫刺激ペプチド、ヨーベングアン、ヨードドキソルビシン、イポメアノール、イリノテカン、イロプラクト、イルソグラジン、イソベンガゾール、ジャスプラキノリド、カハラリドF、ラメラリン-Nトリアセテート、ランレオチド、レイナマイシン、レノグラスチム、レンチナン硫酸、レプトルスタチン、レトロゾール、親油性白金化合物リソクリンアミド7、ロバプラチン、ロメトレキソール、ロニダミン、ロキソキサントロン、ロキソリビン、ルルトテカン、ルテチウムテキサフィリン、リゾフィリン、マソプロコール、マスピン、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、メノガリル、ルネルバロン、メテレリン、メチオニナーゼ、メトクロプラミド、MIF阻害剤、イフェプリストン、ミルテフォシン、ミリモスチム、ミトラシン、ミトグアゾン、ミトラクトール、マイトマイシンおよびその類似体、ミトナフィド、ミトキサントロン、モファロテン、モルグラモスチン、マイカペルオキシドB、ミリアポロン、N-アセチルジナリン、N-置換ベンズアミド、ナファレリン、ナグレスチップ、ナパビン、ナフテルピン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネモルビシン、ネリドロン酸、ニルタミド、ニサマイシン、ニトルリン、オクトレオチド、オキセノン、オナプリストン、オンダンセトロン、オラシン、オルマプラチン、オキサリプラチン、オキサウノマイシン、パクリタキセルおよびその類似体、パラウアミン、パルミトイルリゾキシン、パミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン、パゼリプチン、ペガスパルガーゼ、ペルデシン、ペントサンポリ硫酸ナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール、ペルフルブロン、ペルホスファミド、フェナジノマイシン、ピシバニール、ピラルビシン、ピリトレキシム、ポドフィロトキシン、ポルフィロマイシン、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、ラルチトレキセド、リゾキシン、ログレチミド、ロヒツキン、ルビギノンB1、ルボキシル、サフィンゴール、セイントピン、サルコフィトールA、サルグラモスチム、ソブゾキサン、ソネルミン、スパルホシン酸、スピカマイシンD、スピロムスチン、スチピアミド、スルフィノシン、タリムスチン、テガフール、テモゾロミド、テニポシド、タリブラスチン、チオコラリン、チラパザミン、トポテカン、トプセンチン、トリシリビン、トリメトレキサート、ベラミン、ビノレルビン、ビンキサルチン、ボロゾール、ゼニプラチン、ならびにジラスコルブ。
【０２５３】
（化学的コンジュゲーション用リンカー）
さまざまなリンカーを使用して、本明細書に記載の抗体、抗原結合フラグメント、およびリガンド（例えば、CD45（CD45ROなど）、CD135、CD34、CD90、および／またはCD110を認識して結合する抗体、その抗原結合フラグメント、ならびにリガンド）を細胞傷害性分子とコンジュゲートさせることができる。リンカーには、例えば、酵素加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、塩基性条件下での加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核開裂、または有機金属開裂によって開裂され得るものが挙げられる（例えば、Leriche et al., Bioorg. Med. Chem., 20:571-582, 2012を参照し、その開示は、共有結合コンジュゲーションに適したリンカーに関するものとして参照により本明細書に組み込まれる）。薬物-抗体コンジュゲートおよび薬物-リガンドコンジュゲートの合成に有用なリンカーの例には、とりわけ、マイケル受容体（例えば、マレイミド）、活性化エステル、電子不足カルボニル化合物、およびアルデヒドなどの、抗体または抗原結合フラグメント内に存在する、アミンまたはチオール部位などの求核置換基との反応に適している求電子剤を含むものが含まれる。例えば、薬物-抗体コンジュゲートおよび薬物-リガンドコンジュゲートの合成に適したリンカーとしては、限定されないが、とりわけ、4-(N-マレイミドメチル)-シクロヘキサン-L-カルボン酸スクシンイミジル（SMCC）、N-スクシンイミジルヨードアセタート（SIA）、スルホ-SMCC、m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミジルエステル（MBS）、スルホ-MBS、およびスクシンイミジルヨードアセタートが挙げられ、例えば、Liu et al., 18:690-697, 1979に記載されており、その開示は、化学的コンジュゲーション用リンカーに関するものとして、参照により本明細書に組み込まれる。追加のリンカーには、アウリスタチンなどの微小管破壊剤のコンジュゲーションに特に有用である非開裂性マレイミドカプロイルリンカーが挙げられ、Doronina et al., Bioconjugate Chem. 17:14-24, 2006に記載されており、その開示は、化学的コンジュゲーション用のリンカーに関するものとして参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の薬物-抗体コンジュゲートおよび薬物-リガンドコンジュゲートの合成に適した追加のリンカーには、1,6-脱離プロセスによって細胞毒素を放出することができるもの、例えば、p-アミノベンジルアルコール（PABC）、6-マレイミドヘキサン酸、pH感受性炭酸塩、およびJain et al., Pharm. Res. 32:3526-3540, 2015に記載の他の試薬が挙げられ、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２５４】
抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドを細胞傷害剤にコンジュゲートするために使用することができるリンカーには、リンカーの一端で細胞傷害剤に共有結合しており、リンカーの他端で、リンカー上に存在する反応性置換基と、CD45（CD45ROなど）、CD135、CD34、CD90、および／またはCD110に結合する抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンド内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的部位を含有するものが挙げられる。CD45（CD45ROなど）、CD135、CD34、CD90、および／またはCD110に結合する抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンド内に存在し得る反応性置換基には以下が挙げられるが、これらに限定されない：セリン、スレオニン、およびチロシン残基のヒドロキシル部位；リジン残基のアミノ部位；アスパラギン酸およびグルタミン酸残基のカルボキシル部位；およびシステイン残基のチオール部分、ならびにプロパルギル、アジド、ハロアリール（例えば、フルオロアリール）、ハロヘテロアリール（例えば、フルオロヘテロアリール）、ハロアルキル、および天然に存在しないアミノ酸のハロヘテロアルキル部位。本明細書に記載の抗体-薬物およびリガンド-薬物コンジュゲートと組み合わせて有用なリンカーには、以下の表２に示すようにカップリング反応によって形成された化学的部位を含むリンカーが含まれるが、これらに限定されない。曲線は、抗体、抗原結合フラグメント、またはリガンドおよび細胞傷害性分子への結合点をそれぞれ示す。
【０２５５】
抗体-薬物およびリガンド-薬物コンジュゲートの形成におけるカップリング反応によって形成される例示的な化学的部位
【表２−１】
2019522050.tif 000029
【表２−２】
2019522050.tif 000030
【表２−３】
2019522050.tif 000031
【表２−４】
2019522050.tif 000032
【表２−５】
2019522050.tif 000033
【０２５６】
（治療方法）
本明細書に記載されるように、造血幹細胞移植治療を、治療を必要としている被験体に、1つ以上の血球型を増殖または再増殖するように適用することができる。造血幹細胞は、通常多能性を示し、したがって、顆粒球（例えば前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、血小板（例えば、巨核球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、小膠細胞、破骨細胞、およびリンパ球（例えば、NK細胞、B細胞およびT細胞）を含むが、これらに限定されない複数の異なる血系列に分化することができる。造血幹細胞はさらに自己複製することができ、したがって母細胞と同等の可能性を有する娘細胞を生じさせることができ、移植レシピエントに再導入され、そこでそれらが造血幹細胞ニッチにホーミングし、生産的かつ持続的な造血を回復させる能力も特徴とする。
【０２５７】
したがって、欠陥または欠乏がある細胞集団をin vivoで再構築するために、造血幹細胞を、造血系統の1つ以上の細胞型に欠陥または欠乏のある患者に投与することができ、それによって、内因性血球集団の欠陥または欠乏に関連する病状を治療する。したがって、本明細書に記載の組成物および方法は、非悪性異常ヘモグロビン症（例えば、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコニ貧血、再生不良性貧血、およびウィスコット-アルドリッチ症候群からなる群より選択される異常ヘモグロビン症）を治療するために使用できる。追加的または代替的に、本明細書に記載の組成物および方法は、先天性免疫不全症などの免疫不全症を治療するために使用することができる。追加的または代替的に、本明細書に記載の組成物および方法は、後天性免疫不全症（例えば、HIVおよびAIDSからなる群より選択される後天性免疫不全症）を治療するために使用することができる。本明細書に記載の組成物および方法は、代謝障害（例えば、グリコーゲン蓄積症、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴリピドーシス、および異染性白質ジストロフィーからなる群より選択される代謝障害）を治療するために使用できる。
【０２５８】
追加的または代替的に、本明細書に記載の組成物および方法は、血液がん、骨髄増殖性疾患などの悪性腫瘍または増殖性疾患を治療するために使用することができる。がん治療の場合、造血幹細胞移植治療の前に内因性造血幹細胞の集団を枯渇させるように、本明細書に記載の組成物および方法を患者に適用することができ、その場合、移植細胞は、内因性細胞枯渇工程によって作られたニッチにホーミングすることができ、生産的造血を確立することができる。これは、次に、全身化学療法中などのがん細胞根絶中に枯渇する細胞の集団を再構築することができる。本明細書に記載の組成物および方法を用いて治療することができる例示的な血液がんには、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、および非ホジキンリンパ腫、ならびに神経芽細胞腫を含む他のがん性状態が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５９】
本明細書に記載の組成物および方法で治療することができるさらなる疾患には、アデノシンデアミナーゼ欠損症および重症複合免疫不全、高免疫グロブリンM症候群、チェディアック・東症候群、遺伝性リンパ組織球増多症、大理石骨病、骨形成不全症、蓄積症、サラセミアメジャー、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、および若年性関節リウマチが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２６０】
本明細書に記載の抗体、その抗原結合フラグメント、リガンド、およびコンジュゲートは、固形臓器移植寛容を誘導するために使用され得る。例えば、本明細書に記載の組成物および方法は、標的組織から細胞集団を枯渇または除去するために（例えば、骨髄幹細胞ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために）使用され得る。そのような標的組織からの細胞の枯渇に続いて、臓器ドナーからの幹細胞または前駆細胞の集団（例えば、臓器ドナーからの造血幹細胞）を移植レシピエントに投与し、そのような幹細胞または前駆細胞の生着に続いて一時的または安定的な混合キメラを達成することができ、それによってさらなる免疫抑制剤を必要とせずに長期の移植臓器耐性を可能にする。例えば、本明細書に記載の組成物および方法は、固形臓器移植レシピエント（例えば、とりわけ腎臓移植、肺移植、肝臓移植、および心臓移植）において移植寛容を誘導するために使用され得る。本明細書に記載の組成物および方法は、例えば、低い割合の一時的または安定的なドナー移植片が移植臓器の長期耐性を誘導するのに十分であるため、固形臓器移植耐性の誘導に関連した使用によく適している。
【０２６１】
さらに、本明細書に記載の組成物および方法は、CD45+、CD135+、CD34+、CD90+、またはCD110+である細胞を特徴とするがんなどのがんを直接治療するために使用することができる。例えば、本明細書に記載の組成物および方法は、特にCD45+、CD135+、CD34+、CD90+、またはCD110+白血病細胞を示す患者において、白血病を治療するために使用することができる。白血病細胞などのCD45+、CD135+、CD34+、CD90+、またはCD110+がん性細胞を枯渇させることによって、本明細書に記載の組成物および方法は、さまざまながんを直接治療するために使用され得る。この方法で治療できるがんの例には、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、および非ホジキンリンパ腫などの血液がんが挙げられる。
【０２６２】
さらに、本明細書に記載の組成物および方法は、自己免疫疾患を治療するために使用することができる。例えば、CD45+、CD135+、CD34+、CD90+、またはCD110+免疫細胞を殺すように、抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドを自己免疫疾患に罹患しているヒト患者などの被験体に投与することができる。CD45+、CD135+、CD34+、CD90+、またはCD110+免疫細胞は、自己抗原に特異的に結合し、それに対して免疫応答をもたらすT細胞受容体を発現するT細胞などの自己反応性リンパ球であり得る。自己反応性の、CD45+、CD135+、CD34+、CD90+、またはCD110+細胞を枯渇させることによって、本明細書に記載の組成物および方法は、以下に記載されるものなどの自己免疫病状を治療するために使用され得る。追加的または代替的に、本明細書に記載の組成物および方法は、造血幹細胞移植治療の前に内因性造血幹細胞の集団を枯渇させることによって自己免疫疾患を治療するために使用でき、その場合、移植細胞は、内因性細胞枯渇工程によって作られたニッチにホーミングすることができ、生産的造血を確立することができる。これは、次に、自己免疫細胞根絶の間に枯渇した細胞の集団を再構築することができる。
【０２６３】
本明細書に記載の組成物および方法を用いて治療することができる自己免疫疾患としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：乾癬、乾癬性関節炎、1型真性糖尿病（1型糖尿病）、関節リウマチ（RA）、ヒト全身性狼瘡（SLE）、多発性硬化症（MS）、炎症性腸疾患（IBD）、リンパ球性大腸炎、急性播種性脳脊髄炎（ADEM）、アジソン病、全身性脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群（APS）、再生不良性貧血、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳炎（AIED）、自己免疫性リンパ増殖性症候群（ALPS）、自己免疫性卵巣炎、バロー病、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、シャガス病、慢性疲労免疫不全症候群（CFIDS）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、クローン病、瘢痕性類天疱瘡、セリアック病-疱疹状皮膚炎、寒冷凝集素症、CREST症候群、ドゴー病、円板状狼瘡、自律神経失調症、子宮内膜症、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症-線維筋炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギランバレー症候群（GBS）、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、特発性および／または急性血小板減少性紫斑病、特発性肺線維症、IgA神経障害、間質性膀胱炎、若年性関節炎、川崎病、扁平苔癬、ライム病、メニエール病、混合性結合組織病（MCTD）、重症筋無力症、神経性筋緊張症、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群（OMS）、視神経炎、オード甲状腺炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多発性軟骨炎、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性胆汁性肝硬変、結節性多発動脈炎、多腺症候群、リウマチ性多発筋痛、原発性無ガンマグロブリン血症、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティフパーソン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎（「巨細胞性動脈炎」としても知られている）、潰瘍性大腸炎、コラーゲン性大腸炎、ぶどう膜炎、血管炎、白斑、外陰痛（「外陰部前庭炎」）、ならびにウェゲナー肉芽腫症。
【０２６４】
（投与経路および服用量）
本明細書に記載の抗体、その抗原結合フラグメント、およびリガンドを、患者（例えば、がん、自己免疫疾患に罹患している、または造血幹細胞移植治療を必要としているヒト患者）にさまざまな剤形で投与することができる。例えば、本明細書に記載の抗体、その抗原結合フラグメント、およびリガンドを、がん、自己免疫疾患に罹患している患者、または造血幹細胞移植治療を必要とする患者に、1つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含有する水溶液などの水溶液の形態で投与することができる。本明細書に記載の組成物および方法と併せて使用される薬学的に許容される賦形剤には、粘度調整剤が挙げられる。水溶液は、当該技術分野で知られている技術を用いて滅菌することができる。
【０２６５】
本明細書に記載の抗体、抗原結合フラグメント、およびリガンドは、経口、経皮、皮下、鼻腔内、静脈内、筋肉内、眼内、または非経口などのさまざまな経路で投与することができる。任意の所与の場合における投与に最も適した経路は、投与される特定の抗体、抗原結合フラグメント、またはリガンド、患者、医薬製剤方法、投与方法（例えば、投与時間および投与経路）、患者の年齢、体重、性別、治療されている疾患の重症度、患者の食事、および患者の排泄率によって決まる。
【０２６６】
本明細書に記載の抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドの有効量は、例えば、単回（例えば、ボーラス）投与、複数回投与、または連続投与あたり、約0.001〜約100mg/kg体重の範囲であり得るか、または、抗体、その抗原結合フラグメント、もしくはリガンドの最適血清濃度（例えば、0.0001〜5000μg/mLの血清濃度）を達成する範囲であり得る。用量は、がん、自己免疫疾患に罹患している被験体（例えば、ヒト）、または造血幹細胞移植治療を受ける準備としてコンディショニング療法を受けている被験体に、1日あたり、週ごと、または月ごとに1回以上（例えば、2〜10回）投与され得る。造血幹細胞移植前のコンディショニング手順の場合、抗体、その抗原結合フラグメント、またはリガンドを、患者に、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進する時点で、例えば、外因性造血幹細胞移植片の投与の1時間〜1週間（例えば、1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、11時間、12時間、13時間、14時間、15時間、16時間、17時間、18時間、19時間、20時間、21時間、22時間、23時間、24時間、2日、3日、4日、5日、6日、もしくは7日）またはそれ以上前に投与することができる。
【実施例】
【０２６７】
以下の実施例は、本明細書に記載の組成物および方法がどのように使用され、製造され、および評価され得るかの説明を当業者に提供するために示され、本発明の純粋な例示となることを意図しており、発明者らが彼らの発明と見なすものの範囲を限定することを意図していない。
【０２６８】
（実施例１：造血幹細胞移植治療の準備におけるヒト患者への抗CD45抗体の投与）
本明細書に開示の方法によれば、造血幹細胞移植治療の前に外来性造血幹細胞移植片の生着を促進するように、当業の内科医はヒト患者などの患者をコンディショニングすることができる。この目的のために、当業の内科医は、造血幹細胞によって発現される抗原に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメント、例えばCD45に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、CD45ROに結合する抗体またはその抗原結合フラグメント）などをヒト患者に投与することができる。抗体を、本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られている細胞傷害性分子などの毒素に共有結合でコンジュゲートさせることができる。例えば、抗CD45抗体またはその抗原結合フラグメント（抗CD45RO抗体またはその抗原結合フラグメントなど）を、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、α-アマニチンなどのアマトキシン、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体などの細胞毒素に共有結合でコンジュゲートさせることができる。このコンジュゲーションは、本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られている共有結合形成技術を使用して実施することができる。抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートをその後患者に、例えば静脈内投与によって、外因性造血幹細胞（自家、同系、または同種異系造血幹細胞など）の患者への移植の前に投与することができる。
【０２６９】
内因性造血幹細胞の量を、造血幹細胞移植治療の前に、例えば10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、またはそれ以上減少させるのに十分な量の抗CD45（例えば、抗CD45RO）抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを投与することができる。造血幹細胞数の減少は、当該技術分野で知られている従来の技術を用いて、例えばコンディショニング療法中にさまざまな間隔で患者から採取された血液試料中の特徴的な造血幹細胞表面抗原を発現する細胞のFACS分析などによってモニターすることができる。例えば、当業の内科医は、コンディショニング療法中のさまざまな時点で患者から血液試料を採取することができ、FACS分析を実施して試料中の造血幹細胞の相対濃度を造血幹細胞マーカー抗原に結合する抗体を用いて解明することによって、内因性造血幹細胞減少の程度を決定することができる。いくつかの実施形態によれば、造血幹細胞の濃度が、抗CD45（例えば、抗CD45RO）抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートでのコンディショニング療法に応答して最小値に達したとき、内科医は、コンディショニング療法を終了し、造血幹細胞移植治療のために患者の準備を始めてもよい。
【０２７０】
抗CD45（例えば、抗CD45RO）抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを、粘度調整剤などの1つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含有する水溶液で患者に投与することができる。水溶液は、本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られている技術を使用して滅菌することができる。造血幹細胞移植片を患者に投与する前に、抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを、例えば、0.001mg/kg〜100mg/kgの投与量で患者に投与することができる。抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを、患者に、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進する時点で、例えば、外因性造血幹細胞移植片の投与の1時間〜1週間（例えば、1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、11時間、12時間、13時間、14時間、15時間、16時間、17時間、18時間、19時間、20時間、21時間、22時間、23時間、24時間、2日、3日、4日、5日、6日、もしくは7日）またはそれ以上前に投与することができる。
【０２７１】
コンディショニング療法の終了後、続いて患者は、コンディショニング療法を実施した同じ内科医から、または異なる内科医などから、外因性造血幹細胞の注入（例えば、静脈内注入）を受けることができる。内科医は、自己、同系、または同種異系の造血幹細胞の注入を、例えば、1x103〜1x109造血幹細胞／kgの投与量で患者に投与することができる。内科医は、例えば、患者から血液試料を採取し、造血幹細胞または造血系統の細胞（巨核球、血小板、血小板、赤血球、肥満細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、小膠細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Tリンパ球、およびBリンパ球など）の移植片の投与後の濃度の増加を測定することによって、造血幹細胞移植片の生着をモニターすることができる。この分析は、例えば、造血幹細胞移植治療後に、1時間〜6ヶ月以上にわたって実施することができる（例えば、1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、11時間、12時間、13時間、14時間、15時間、16時間、17時間、18時間、19時間、20時間、21時間、22時間、23時間、24時間、2日間、3日間、4日間、5日間、6日間、7日間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、9週間、10週間、11週間、12週間、13週間、14週間、15週間、16週間、17週間、18週間、19週間、20週間、21週間、22週間、23週間、24週間、またはそれ以上）。造血幹細胞または造血系統の細胞の濃度が、移植治療前の対応する細胞型の濃度と比較して、移植治療後に（例えば、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、200%、500%、またはそれ以上）増加したという発見は、抗CD45（例えば、抗CD45RO）抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートでの治療が、移植された造血幹細胞移植片の生着をうまく促進したことを示す1つの指標となる。
【０２７２】
（実施例２：造血幹細胞移植治療の準備におけるヒト患者への抗CD135抗体の投与）
本明細書に開示の方法を使用して、当業の内科医は、造血幹細胞移植治療を必要とするヒト患者に、造血幹細胞によって発現される抗原に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメント、例えばCD135に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントなどを投与することができる。このようにして、造血幹細胞移植片の生着を促進するように、内因性造血幹細胞の集団を、外因性造血幹細胞移植片の投与前に枯渇させることができる。抗体を、本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られている細胞傷害性分子などの毒素に共有結合でコンジュゲートさせることができる。例えば、抗CD135抗体またはその抗原結合フラグメントを、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、α-アマニチンなどのアマトキシン、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体などの細胞毒素に共有結合でコンジュゲートさせることができる。このコンジュゲーションは、本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られている共有結合形成技術を使用して実施することができる。抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートをその後患者に、例えば静脈内投与によって、外因性造血幹細胞（自家、同系、または同種異系造血幹細胞など）の患者への移植の前に投与することができる。
【０２７３】
内因性造血幹細胞の量を、造血幹細胞移植治療の前に、例えば、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、またはそれ以上減少させるのに十分な量の抗CD135抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを投与することができる。造血幹細胞数の減少は、当該技術分野で知られている従来の技術を用いて、例えばコンディショニング療法中にさまざまな間隔で患者から採取された血液試料中の特徴的な造血幹細胞表面抗原を発現する細胞のFACS分析などによってモニターすることができる。例えば、当業の内科医は、コンディショニング療法中のさまざまな時点で患者から血液試料を採取することができ、FACS分析を実施して試料中の造血幹細胞の相対濃度を造血幹細胞マーカー抗原に結合する抗体を用いて解明することによって、内因性造血幹細胞減少の程度を決定することができる。いくつかの実施形態によれば、造血幹細胞の濃度が、抗CD135抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートでのコンディショニング療法に応答して最小値に達したとき、内科医は、コンディショニング療法を終了し、造血幹細胞移植治療のために患者の準備を始めてもよい。
【０２７４】
抗CD135抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを、粘度調整剤などの1つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含有する水溶液で患者に投与することができる。水溶液は、本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られている技術を使用して滅菌することができる。造血幹細胞移植片を患者に投与する前に、抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを、例えば、0.001mg/kg〜100mg/kgの投与量で患者に投与することができる。抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを、患者に、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進する時点で、例えば、外因性造血幹細胞移植片の投与の1時間〜1週間（例えば、1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、11時間、12時間、13時間、14時間、15時間、16時間、17時間、18時間、19時間、20時間、21時間、22時間、23時間、24時間、2日、3日、4日、5日、6日、もしくは7日）またはそれ以上前に投与することができる。
【０２７５】
コンディショニング療法の終了後、続いて患者は、コンディショニング療法を実施した同じ内科医から、または異なる内科医などから、外因性造血幹細胞の注入（例えば、静脈内注入）を受けることができる。内科医は、自己、同系、または同種異系の造血幹細胞の注入を、例えば、1x103〜1x109造血幹細胞／kgの投与量で患者に投与することができる。内科医は、例えば、患者から血液試料を採取し、造血幹細胞または造血系統の細胞（巨核球、血小板、血小板、赤血球、肥満細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、小膠細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Tリンパ球、およびBリンパ球など）の移植片の投与後の濃度の増加を測定することによって、造血幹細胞移植片の生着をモニターすることができる。この分析は、例えば、造血幹細胞移植治療後に、1時間〜6ヶ月以上にわたって実施することができる（例えば、1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、11時間、12時間、13時間、14時間、15時間、16時間、17時間、18時間、19時間、20時間、21時間、22時間、23時間、24時間、2日間、3日間、4日間、5日間、6日間、7日間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、9週間、10週間、11週間、12週間、13週間、14週間、15週間、16週間、17週間、18週間、19週間、20週間、21週間、22週間、23週間、24週間、またはそれ以上）。造血幹細胞または造血系統の細胞の濃度が、移植治療前の対応する細胞型の濃度と比較して、移植治療後に（例えば、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、200%、500%、またはそれ以上）増加したという発見は、抗CD135抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートでの治療が、移植された造血幹細胞移植片の生着をうまく促進したことを示す1つの指標となる。
【０２７６】
（実施例３：造血幹細胞移植治療の準備におけるヒト患者への抗CD34抗体の投与）
本明細書に開示の方法を使用して、当業の内科医は、造血幹細胞移植治療を必要とするヒト患者に、造血幹細胞によって発現される抗原に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメント、例えばCD34に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントなどを投与することができる。このようにして、造血幹細胞移植片の生着を促進するように、内因性造血幹細胞の集団を、外因性造血幹細胞移植片の投与前に枯渇させることができる。抗体を、本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られている細胞傷害性分子などの毒素に共有結合でコンジュゲートさせることができる。例えば、抗CD34抗体またはその抗原結合フラグメントを、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、α-アマニチンなどのアマトキシン、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体などの細胞毒素に共有結合でコンジュゲートさせることができる。このコンジュゲーションは、本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られている共有結合形成技術を使用して実施することができる。抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートをその後患者に、例えば静脈内投与によって、外因性造血幹細胞（自家、同系、または同種異系造血幹細胞など）の患者への移植の前に投与することができる。
【０２７７】
内因性造血幹細胞の量を、造血幹細胞移植治療の前に、例えば、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、またはそれ以上減少させるのに十分な量の抗CD34抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを投与することができる。造血幹細胞数の減少は、当該技術分野で知られている従来の技術を用いて、例えばコンディショニング療法中にさまざまな間隔で患者から採取された血液試料中の特徴的な造血幹細胞表面抗原を発現する細胞のFACS分析などによってモニターすることができる。例えば、当業の内科医は、コンディショニング療法中のさまざまな時点で患者から血液試料を採取することができ、FACS分析を実施して試料中の造血幹細胞の相対濃度を造血幹細胞マーカー抗原に結合する抗体を用いて解明することによって、内因性造血幹細胞減少の程度を決定することができる。いくつかの実施形態によれば、造血幹細胞の濃度が、抗CD34抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートでのコンディショニング療法に応答して最小値に達したとき、内科医は、コンディショニング療法を終了し、造血幹細胞移植治療のために患者の準備を始めてもよい。
【０２７８】
抗CD34抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを、粘度調整剤などの1つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含有する水溶液で患者に投与することができる。水溶液は、本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られている技術を使用して滅菌することができる。造血幹細胞移植片を患者に投与する前に、抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを、例えば、0.001mg/kg〜100mg/kgの投与量で患者に投与することができる。抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを、患者に、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進する時点で、例えば、外因性造血幹細胞移植片の投与の1時間〜1週間（例えば、1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、11時間、12時間、13時間、14時間、15時間、16時間、17時間、18時間、19時間、20時間、21時間、22時間、23時間、24時間、2日、3日、4日、5日、6日、もしくは7日）またはそれ以上前に投与することができる。
【０２７９】
コンディショニング療法の終了後、続いて患者は、コンディショニング療法を実施した同じ内科医から、または異なる内科医などから、外因性造血幹細胞の注入（例えば、静脈内注入）を受けることができる。内科医は、自己、同系、または同種異系の造血幹細胞の注入を、例えば、1x103〜1x109造血幹細胞／kgの投与量で患者に投与することができる。内科医は、例えば、患者から血液試料を採取し、造血幹細胞または造血系統の細胞（巨核球、血小板、血小板、赤血球、肥満細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、小膠細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Tリンパ球、およびBリンパ球など）の移植片の投与後の濃度の増加を測定することによって、造血幹細胞移植片の生着をモニターすることができる。この分析は、例えば、造血幹細胞移植治療後に、1時間〜6ヶ月以上にわたって実施することができる（例えば、1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、11時間、12時間、13時間、14時間、15時間、16時間、17時間、18時間、19時間、20時間、21時間、22時間、23時間、24時間、2日間、3日間、4日間、5日間、6日間、7日間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、9週間、10週間、11週間、12週間、13週間、14週間、15週間、16週間、17週間、18週間、19週間、20週間、21週間、22週間、23週間、24週間、またはそれ以上）。造血幹細胞または造血系統の細胞の濃度が、移植治療前の対応する細胞型の濃度と比較して、移植治療後に（例えば、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、200%、500%、またはそれ以上）増加したという発見は、抗CD34抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートでの治療が、移植された造血幹細胞移植片の生着をうまく促進したことを示す1つの指標となる。
【０２８０】
（実施例４：造血幹細胞移植治療の準備におけるヒト患者への抗CD90抗体の投与）
本明細書に開示の方法を使用して、当業の内科医は、造血幹細胞移植治療を必要とするヒト患者に、造血幹細胞によって発現される抗原に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメント、例えばCD90に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントなどを投与することができる。このようにして、造血幹細胞移植片の生着を促進するように、内因性造血幹細胞の集団を、外因性造血幹細胞移植片の投与前に枯渇させることができる。抗体を、本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られている細胞傷害性分子などの毒素に共有結合でコンジュゲートさせることができる。例えば、抗CD90抗体またはその抗原結合フラグメント（抗GNNK+CD90抗体またはその抗原結合フラグメントなど）を、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、α-アマニチンなどのアマトキシン、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体などの細胞毒素に共有結合でコンジュゲートさせることができる。このコンジュゲーションは、本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られている共有結合形成技術を使用して実施することができる。抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートをその後患者に、例えば静脈内投与によって、外因性造血幹細胞（自家、同系、または同種異系造血幹細胞など）の患者への移植の前に投与することができる。
【０２８１】
内因性造血幹細胞の量を、造血幹細胞移植治療の前に、例えば、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、またはそれ以上減少させるのに十分な量の抗CD90抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを投与することができる。造血幹細胞数の減少は、当該技術分野で知られている従来の技術を用いて、例えばコンディショニング療法中にさまざまな間隔で患者から採取された血液試料中の特徴的な造血幹細胞表面抗原を発現する細胞のFACS分析などによってモニターすることができる。例えば、当業の内科医は、コンディショニング療法中のさまざまな時点で患者から血液試料を採取することができ、FACS分析を実施して試料中の造血幹細胞の相対濃度を造血幹細胞マーカー抗原に結合する抗体を用いて解明することによって、内因性造血幹細胞減少の程度を決定することができる。いくつかの実施形態によれば、造血幹細胞の濃度が、抗CD90抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートでのコンディショニング療法に応答して最小値に達したとき、内科医は、コンディショニング療法を終了し、造血幹細胞移植治療のために患者の準備を始めてもよい。
【０２８２】
抗CD90抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを、粘度調整剤などの1つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含有する水溶液で患者に投与することができる。水溶液は、本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られている技術を使用して滅菌することができる。造血幹細胞移植片を患者に投与する前に、抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを、例えば、0.001mg/kg〜100mg/kgの投与量で患者に投与することができる。抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを、患者に、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進する時点で、例えば、外因性造血幹細胞移植片の投与の1時間〜1週間（例えば、1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、11時間、12時間、13時間、14時間、15時間、16時間、17時間、18時間、19時間、20時間、21時間、22時間、23時間、24時間、2日、3日、4日、5日、6日、もしくは7日）またはそれ以上前に投与することができる。
【０２８３】
コンディショニング療法の終了後、続いて患者は、コンディショニング療法を実施した同じ内科医から、または異なる内科医などから、外因性造血幹細胞の注入（例えば、静脈内注入）を受けることができる。内科医は、自己、同系、または同種異系の造血幹細胞の注入を、例えば、1x103〜1x109造血幹細胞／kgの投与量で患者に投与することができる。内科医は、例えば、患者から血液試料を採取し、造血幹細胞または造血系統の細胞（巨核球、血小板、血小板、赤血球、肥満細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、小膠細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Tリンパ球、およびBリンパ球など）の移植片の投与後の濃度の増加を測定することによって、造血幹細胞移植片の生着をモニターすることができる。この分析は、例えば、造血幹細胞移植治療後に、1時間〜6ヶ月以上にわたって実施することができる（例えば、1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、11時間、12時間、13時間、14時間、15時間、16時間、17時間、18時間、19時間、20時間、21時間、22時間、23時間、24時間、2日間、3日間、4日間、5日間、6日間、7日間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、9週間、10週間、11週間、12週間、13週間、14週間、15週間、16週間、17週間、18週間、19週間、20週間、21週間、22週間、23週間、24週間、またはそれ以上）。造血幹細胞または造血系統の細胞の濃度が、移植治療前の対応する細胞型の濃度と比較して、移植治療後に（例えば、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、200%、500%、またはそれ以上）増加したという発見は、抗CD90抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートでの治療が、移植された造血幹細胞移植片の生着をうまく促進したことを示す1つの指標となる。
【０２８４】
（実施例５：造血幹細胞移植治療の準備におけるヒト患者への抗CD110抗体の投与）
本明細書に開示の方法を使用して、当業の内科医は、造血幹細胞移植治療を必要とするヒト患者に、造血幹細胞によって発現される抗原に結合することができる抗体またはその抗原結合フラグメント、例えばCD110に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントなどを投与することができる。このようにして、造血幹細胞移植片の生着を促進するように、内因性造血幹細胞の集団を、外因性造血幹細胞移植片の投与前に枯渇させることができる。抗体を、本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られている細胞傷害性分子などの毒素に共有結合でコンジュゲートさせることができる。例えば、抗CD110抗体またはその抗原結合フラグメントを、シュードモナス外毒素A、deBouganin、ジフテリア毒素、α-アマニチンなどのアマトキシン、サポリン、メイタンシン、メイタンシノイド、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらの変異体などの細胞毒素に共有結合でコンジュゲートさせることができる。このコンジュゲーションは、本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られている共有結合形成技術を使用して実施することができる。抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートをその後患者に、例えば静脈内投与によって、外因性造血幹細胞（自家、同系、または同種異系造血幹細胞など）の患者への移植の前に投与することができる。
【０２８５】
内因性造血幹細胞の量を、造血幹細胞移植治療の前に、例えば、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、またはそれ以上減少させるのに十分な量の抗CD110抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを投与することができる。造血幹細胞数の減少は、当該技術分野で知られている従来の技術を用いて、例えばコンディショニング療法中にさまざまな間隔で患者から採取された血液試料中の特徴的な造血幹細胞表面抗原を発現する細胞のFACS分析などによってモニターすることができる。例えば、当業の内科医は、コンディショニング療法中のさまざまな時点で患者から血液試料を採取することができ、FACS分析を実施して試料中の造血幹細胞の相対濃度を造血幹細胞マーカー抗原に結合する抗体を用いて解明することによって、内因性造血幹細胞減少の程度を決定することができる。いくつかの実施形態によれば、造血幹細胞の濃度が、抗CD110抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートでのコンディショニング療法に応答して最小値に達したとき、内科医は、コンディショニング療法を終了し、造血幹細胞移植治療のために患者の準備を始めてもよい。
【０２８６】
抗CD110抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを、粘度調整剤などの1つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含有する水溶液で患者に投与することができる。水溶液は、本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られている技術を使用して滅菌することができる。造血幹細胞移植片を患者に投与する前に、抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを、例えば、0.001mg/kg〜100mg/kgの投与量で患者に投与することができる。抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートを、患者に、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進する時点で、例えば、外因性造血幹細胞移植片の投与の1時間〜1週間（例えば、1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、11時間、12時間、13時間、14時間、15時間、16時間、17時間、18時間、19時間、20時間、21時間、22時間、23時間、24時間、2日、3日、4日、5日、6日、もしくは7日）またはそれ以上前に投与することができる。
【０２８７】
コンディショニング療法の終了後、続いて患者は、コンディショニング療法を実施した同じ内科医から、または異なる内科医などから、外因性造血幹細胞の注入（例えば、静脈内注入）を受けることができる。内科医は、自己、同系、または同種異系の造血幹細胞の注入を、例えば、1x103〜1x109造血幹細胞／kgの投与量で患者に投与することができる。内科医は、例えば、患者から血液試料を採取し、造血幹細胞または造血系統の細胞（巨核球、血小板、血小板、赤血球、肥満細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、小膠細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Tリンパ球、およびBリンパ球など）の移植片の投与後の濃度の増加を測定することによって、造血幹細胞移植片の生着をモニターすることができる。この分析は、例えば、造血幹細胞移植治療後に、1時間〜6ヶ月以上にわたって実施することができる（例えば、1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、11時間、12時間、13時間、14時間、15時間、16時間、17時間、18時間、19時間、20時間、21時間、22時間、23時間、24時間、2日間、3日間、4日間、5日間、6日間、7日間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、9週間、10週間、11週間、12週間、13週間、14週間、15週間、16週間、17週間、18週間、19週間、20週間、21週間、22週間、23週間、24週間、またはそれ以上）。造血幹細胞または造血系統の細胞の濃度が、移植治療前の対応する細胞型の濃度と比較して、移植治療後に（例えば、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、200%、500%、またはそれ以上）増加したという発見は、抗CD110抗体、その抗原結合フラグメント、または薬物-抗体コンジュゲートでの治療が、移植された造血幹細胞移植片の生着をうまく促進したことを示す1つの指標となる。
【０２８８】
（実施例６：造血幹細胞に結合することができる抗体のファージディスプレイによる生成）
本明細書に記載の組成物および方法と併せて使用する抗CD45（例えば、抗CD45RO）、抗CD135、抗CD34、抗CD90、または抗CD110抗体のin vitro進化のための例示的な方法は、ファージディスプレイである。ファージディスプレイライブラリーは、抗体のCDRまたは抗体様足場の類似領域（例えば、10Fn3ドメインのBC、CD、およびDEループ）のコード配列内に設計された一連の突然変異または変異を作ることによって、作製することができる。これらの変異が導入される鋳型抗体をコードする配列は、例えば、ナイーブヒト生殖細胞系配列であり得る。これらの突然変異は、当該技術分野で知られている標準的な変異誘発技術を用いて行われ得る。したがって、各突然変異配列は、1つ以上のアミノ酸変異を除いて鋳型に対応する抗体をコードする。レトロウイルスおよびファージディスプレイベクターは、当該技術分野で知られている標準的なベクター構築技術を用いて操作され得る。適合性タンパク質発現ベクターと共にP3ファージディスプレイベクターを用いて、抗体多様化のためのファージディスプレイベクターを作製することができる。
【０２８９】
変異DNAは配列多様性を提供し、各形質転換体ファージは、そのDNAによってコードされた最初の鋳型アミノ酸配列の1つの変異を表示し、異なるが構造的に関連した膨大な数のアミノ酸配列を示すファージ集団（ライブラリー）をもたらす。抗体超可変領域の明確な構造のために、ファージディスプレイスクリーンに導入されたアミノ酸変異は、その全体的な分子構造を著しく変えることなく結合ペプチドまたはドメインの結合特性を変えると予想される。
【０２９０】
典型的なスクリーニングでは、ファージライブラリーを前述の抗原の1つまたはそのエピトープと接触させて結合させることができる。結合剤および非結合剤の分離を容易にするために、標的を固体支持体上に固定化するのが都合がいい。CD45、CD135、CD34、CD90、またはCD110結合部位を有するファージは、標的との複合体を固体支持体上に形成することができるが、非結合ファージは溶液中に残り、過剰の緩衝液で洗い流すことができる。次いで、緩衝液を極端なpH（pH2またはpH10）に変化させること、緩衝液のイオン強度を変化させること、変性剤を添加すること、または他の既知の手段によって、結合ファージを標的から遊離させることができる。
【０２９１】
次いで回収されたファージを細菌細胞の感染を通して増幅することができ、目下で非結合抗体が枯渇し、CD45（例えば、CD45RO）、CD135、CD34、CD90、またはCD110に結合する抗体が富化されている新しいプールを用いてスクリーニングプロセスを繰り返すことができる。数個の結合ファージの回収であっても、その後のスクリーニング反復用にファージを増幅するのに十分である。数回の選択の後、結合プール中の選択されたファージクローンに由来する抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする遺伝子配列が従来の方法により決定され、そうして標的に対するファージの結合親和性を付与するペプチド配列が明らかになる。パニングプロセスの間、集団の配列多様性は、望ましいペプチド結合抗体が残るまで、選択の各回と共に減少する。配列は、少数の関連抗体またはその抗原結合フラグメントに収束し得る。選択の各回で回収されたファージの数の増加は、ライブラリーの収束がスクリーニング内で起こったことの指標である。
【０２９２】
（実施例７：造血幹細胞抗原に結合するヒト化抗体の製造）
CD45（例えばCD45RO）、CD135、CD34、CD90、またはCD110に結合する非ヒト抗体は、例えば、以下の手順に従ってヒト化することができる。コンセンサスヒト抗体重鎖および軽鎖配列は、当該技術分野で知られている（例えば、「VBASE」ヒト生殖細胞系配列データベース；Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91 -3242, 1991；Tomlinson et al., J. Mol. Biol. 227:776-798, 1992；およびCox et al.. Eur. J. Immunol. 24:827- 836, 1994を参照し、それらの各々の開示は、コンセンサスヒト抗体重鎖および軽鎖配列に関するものとして、参照により本明細書に組み込まれる）。確立された手順を使用して、当業者は、コンセンサス抗体配列の可変ドメインフレームワーク残基およびCDRを同定することができる（例えば、配列アラインメントにより）。ヒト化抗体を産生するために、コンセンサスヒト抗体の重鎖および／または軽鎖可変ドメインの1つ以上のCDRを、本明細書に記載のようにCD45（例えばCD45RO）、CD135、CD135、CD34、CD90、またはCD110に結合する非ヒト抗体の1つ以上の対応するCDRで置換することができる。このCDR交換は、本明細書に記載されているかまたは当該技術分野で知られている遺伝子編集技術を使用して実施することができる。
【０２９３】
コンセンサスヒト抗体の可変ドメインの一例は、重鎖可変ドメイン
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMSWVRQAPGKGLEWVAVISENGSDTYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGGAVSYFDVWGQGTLVTVSS（配列番号３４）および軽鎖可変ドメインDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSLPYTFGQGTKVEIKRT（配列番号３５）を含み、米国特許第6,054,297号で同定されており、その開示は、ヒト抗体コンセンサス配列に関するものとして、参照により本明細書に組み込まれる。上記配列中のCDRは、太字で示されている。
【０２９４】
ヒト化抗体を産生するために、1つ以上の可変領域CDRがCD45（例えば、CD45RO）、CD135、CD34、CD90、またはCD110に結合する非ヒト抗体の1つ以上の可変領域CDR配列で置換されている上記コンセンサス配列をコードするポリヌクレオチドを、組み換え発現させることができる。造血幹細胞抗原に対する抗体の親和性は主にCDR配列によって決定されるため、得られたヒト化抗体は、ヒト化抗体が由来する非ヒト抗体の親和性とほぼ同じ造血幹細胞抗原に対する親和性を示すと予想される。標的抗原に対する抗体の親和性を決定する方法としては、例えば、本明細書に記載され、当該技術分野で知られているELISAベースの技法、ならびに表面プラズモン共鳴、蛍光異方性、および等温滴定熱量測定がとりわけ挙げられる。
【０２９５】
（実施例８：抗CD45抗体-薬物コンジュゲートの、CD45+細胞集団を枯渇させる能力）
抗CD45抗体-薬物コンジュゲートがCD45+Reh細胞を殺す能力を調べるために、さまざまなアイソタイプの一連の抗CD45モノクローナル抗体Ab1、Ab2、およびAb3をサポリンコンジュゲートFabフラグメントに結合させ、続いてCD45+Reh細胞と共に3日間インキュベートした。陰性対照として、アイソタイプが一致した抗体-サポリンコンジュゲートをAb1、Ab2、およびAb3のそれぞれについて作製し、これらをCD45+Reh細胞と共に同じく3日間インキュベートした。次いで細胞生存率をCellTiter-Glo（商標）アッセイを用いて評価した。図１に示されるように、さまざまな抗体-サポリンコンジュゲートが、異なる効力でCD45+Reh細胞を殺すことができ、それぞれが用量依存的にCD45+Reh細胞株を枯渇させることができた。
【０２９６】
抗CD45モノクローナル抗体-サポリンコンジュゲートがin vitroでヒトCD34+造血幹細胞を枯渇させる能力を調べるために、ヒトIgG1抗CD45モノクローナル抗体-サポリンコンジュゲートまたはアイソタイプが一致した対照をCD34+細胞と共にさまざまな濃度でインキュベートした。6日間のインキュベーション期間の後に、フローサイトメトリーを使用して細胞生存を続けて評価した。この実験の結果を図２に報告する。そこに示されるように、抗CD45抗体-サポリンコンジュゲートは、用量依存的にヒトCD34+造血幹細胞を枯渇させることができることが発見された。
【０２９７】
まとめると、これらの結果は、サポリンにコンジュゲートした抗CD45抗体を使用して、被験体における造血幹細胞の集団を枯渇させ、例えば、造血幹細胞移植治療の準備において、造血幹細胞がホーミングし得るニッチを提供するようにできることを実証する。
【０２９８】
（他の実施形態）
本明細書で言及される全ての刊行物、特許、および特許出願は、あたかもそれぞれの独立した刊行物または特許出願が具体的かつ個別に参照により組み込まれることが示されるのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２９９】
本発明をその特定の実施形態に関連して説明してきたが、それはさらなる修正が可能であることが理解され、本出願は、概して本発明の原理に従い、当該技術分野における既知のまたは慣習的な慣行の範囲内にある本発明からのそのような逸脱を含む本発明のあらゆる変形、使用、または適合を、本発明が前述した本質的な特徴に関連してそれらに適用することができ、特許請求の範囲に従う程度に網羅することを意図している。
【０３００】
他の実施形態は、特許請求の範囲内にある。
【図１】
2019522050.tif 000053
【図２】
2019522050.tif 000054
【配列表】
2019522050000001.app
【国際調査報告】
2019522050.tif 000055
2019522050.tif 000056
2019522050.tif 000057
2019522050.tif 000058
2019522050.tif 000059