(57)【要約】  本明細書に提供されるのは、ＣＤ７４に対する結合特異性を有する抗体コンジュゲートおよび抗体コンジュゲートを含む組成物、例えば医薬組成物、コンジュゲートを産生する方法、ならびに治療のためのコンジュゲートおよび組成物を使用する方法であり、ここで抗体は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＥＵ付番スキームに従う、ＨＣ−Ｆ４０４、ＨＣ−Ｋ１２１、ＨＣ−Ｙ１８０、ＨＣ−Ｆ２４１、ＨＣ−２２１、ＬＣ−Ｔ２２、ＬＣ−Ｓ７、ＬＣ−Ｎ１５２、ＬＣ−Ｋ４２、ＬＣ−Ｅ１６１、ＬＣ−Ｄ１７０、ＨＣ−Ｓ１３６、ＨＣ−Ｓ２５、ＨＣ−Ａ４０、ＨＣ−Ｓ１１９、ＨＣ−Ｓ１９０、ＨＣ−Ｋ２２２、ＨＣ−Ｒ１９、ＨＣ−Ｙ５２、またはＨＣ−Ｓ７０からなる群から選択される部位で非天然アミノ酸を含む。
2019506385.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つのペイロード部分に部位特異的に連結されたＣＤ７４に特異的に結合する抗体を含む抗体コンジュゲートであって、前記抗体が、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＥＵ付番スキームに従って、ＨＣ−Ｆ４０４、ＨＣ−Ｋ１２１、ＨＣ−Ｙ１８０、ＨＣ−Ｆ２４１、ＨＣ−２２１、ＬＣ−Ｔ２２、ＬＣ−Ｓ７、ＬＣ−Ｎ１５２、ＬＣ−Ｋ４２、ＬＣ−Ｅ１６１、ＬＣ−Ｄ１７０、ＨＣ−Ｓ１３６、ＨＣ−Ｓ２５、ＨＣ−Ａ４０、ＨＣ−Ｓ１１９、ＨＣ−Ｓ１９０、ＨＣ−Ｋ２２２、ＨＣ−Ｒ１９、ＨＣ−Ｙ５２、またはＨＣ−Ｓ７０からなる群から選択される部位に非天然アミノ酸を含む、抗体コンジュゲート。
【請求項２】
前記非天然アミノ酸が、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃβ−セリン、Ｌドパ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジドメチル−Ｌ−フェニルアラニン、化合物５６、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ヨード−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、およびｐ−プロパルギルオキシ−フェニルアラニンからなる群から選択される、請求項１または２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項３】
前記抗体が、加水分解的に安定なリンカーを介して前記ペイロード部分に連結される、請求項２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項４】
前記抗体が、切断可能なリンカーを介して前記ペイロード部分に連結される、請求項２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項５】
前記非天然アミノ酸残基が、化合物３０または化合物５６に従う、請求項２〜４のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項６】
式１０１ａ〜１０４ｂ：
【化１】
2019506385.tif 000081
【化２】
2019506385.tif 000082
（式中、ＣＯＭＰは前記示される結合を有する前記抗体のアミノ酸残基であり、かつＰＡＹはペイロード部分である）のいずれかに記載される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項７】
前記ペイロード部分が、マイタンシン、ヘミアステリン、アマニチン、およびアウリスタチンからなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項８】
前記ペイロード部分が、ＤＭ１、ヘミアステリン、アマニチン、ＭＭＡＦ、およびＭＭＡＥからなる群から選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項９】
前記抗体が、
ａ．配列番号１および３３の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号６５および９７の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１２９を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｂ．配列番号２および３４の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号６６および９８の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１３０を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｃ．配列番号３および３５の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号６７および９９の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１３１を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｄ．配列番号４および３６の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号６８および１００の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１３２を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｅ．配列番号５および３７の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号６９および１０１の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１３３を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｆ．配列番号６および３８の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号７０および１０２の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１３４を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｇ．配列番号７および３９の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号７１および１０３の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１３５を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｈ．配列番号８および４０の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号７２および１０４の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１３６を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｉ．配列番号９および４１の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号７３および１０５の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１３７を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｊ．配列番号１０および４２の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号７４および１０６の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１３８を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｋ．配列番号１１および４３の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号７５および１０７の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１３９を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
１．配列番号１２および４４の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号７６および１０８の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１４０を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｍ．配列番号１３および４５の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号７７および１０９の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１４１を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｎ．配列番号１４および４６の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号７８および１１０の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１４２を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｏ．配列番号１５および４７の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号７９および１１１の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１４３を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｐ．配列番号１６および４８の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号８０および１１２の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１４４を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｑ．配列番号１７および４９の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号８１および１１３の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１４５を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｒ．配列番号１８および５０の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号８２および１１４の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１４６を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｓ．配列番号１９および５１の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号８３および１１５の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１４７を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｔ．配列番号２０および５２の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号８４および１１６の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１４８を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｕ．配列番号２１および５３の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号８５および１１７の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１４９を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｖ．配列番号２２および５４の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号８６および１１８の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１５０を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｗ．配列番号２３および５５の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号８７および１１９の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１５１を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｘ．配列番号２４および５６の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号８８および１２０の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１５２を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｙ．配列番号２５および５７の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号８９および１２１の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１５３を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ｚ．配列番号２６および５８の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号９０および１２２の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１５４を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；
ａａ．配列番号２７および５９の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号９１および１２３の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１５５を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ；または
ｂｂ．配列番号２８および６０の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号９２および１２４の少なくとも一方を含むＣＤＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１５６を含むＣＤＲ−Ｈ３：を含む、ＶＨ、
を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１０】
前記抗体が、
ａ．配列番号１６１を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１８１を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２０１を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ；
ｂ．配列番号１６２を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１８２を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２０２を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ；
ｃ．配列番号１６３を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１８３を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２０３を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ；
ｄ．配列番号１６４を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１８４を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２０４を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ；
ｅ．配列番号１６５を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１８５を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２０５を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ；
ｆ．配列番号１６６を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１８６を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２０６を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ；
ｇ．配列番号１６７を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１８７を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２０７を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ；
ｈ．配列番号１６８を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１８８を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２０８を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ；
ｉ．配列番号１６９を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１８９を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２０９を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ；
ｊ．配列番号１７０を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１９０を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２１０を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ；
ｋ．配列番号１７１を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１９１を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２１１を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ；
Ｉ．配列番号１７２を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１９２を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２１２を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ；
ｍ．配列番号１７３を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１９３を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２１３を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ；
ｎ．配列番号１７４を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１９４を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２１４を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ；
ｏ．配列番号１７５を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１９５を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２１５を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ；
ｐ．配列番号１７６を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１９６を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２１６を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ；
ｑ．配列番号１７７を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１９７を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２１７を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ；
ｒ．配列番号１７８を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１９８を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２１８を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ；または
ｓ．配列番号１７９を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１９９を含むＣＤＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２１９を含むＣＤＲ−Ｌ３：を含む、ＶＬ、
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１１】
前記抗体が、
ａ．ＶＨ領域が配列番号２３６またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２５６またはその変異体であるか；
ｂ．ＶＨ領域が配列番号２３６またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２５７またはその変異体であるか；
ｃ．ＶＨ領域が配列番号２３６またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６５またはその変異体であるか；
ｄ．ＶＨ領域が配列番号２３６またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６４またはその変異体であるか；
ｅ．ＶＨ領域が配列番号２３６またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６７またはその変異体であるか；
ｆ．ＶＨ領域が配列番号２３６またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６８またはその変異体であるか；
ｇ．ＶＨ領域が配列番号２３６またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６９またはその変異体であるか；
ｈ．ＶＨ領域が配列番号２３６またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２７０またはその変異体であるか；
ｉ．ＶＨ領域が配列番号２３７またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２５６またはその変異体であるか；
ｊ．ＶＨ領域が配列番号２３７またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２５７またはその変異体であるか；
ｋ．ＶＨ領域が配列番号２３７またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６５またはその変異体であるか；
１．ＶＨ領域が配列番号２３７またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６４またはその変異体であるか；
ｍ．ＶＨ領域が配列番号２３７またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６７またはその変異体であるか；
ｎ．ＶＨ領域が配列番号２３７またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６８またはその変異体であるか；
ｏ．ＶＨ領域が配列番号２３７またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６９またはその変異体であるか；
ｐ．ＶＨ領域が配列番号２３７またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２７０またはその変異体であるか；
ｑ．ＶＨ領域が配列番号２３８またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２５６またはその変異体であるか；
ｒ．ＶＨ領域が配列番号２３８またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２５７またはその変異体であるか；
ｓ．ＶＨ領域が配列番号２３８またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６５またはその変異体であるか；
ｔ．ＶＨ領域が配列番号２３８またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６４またはその変異体であるか；
ｕ．ＶＨ領域が配列番号２３８またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６７またはその変異体であるか；
ｖ．ＶＨ領域が配列番号２３８またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６８またはその変異体であるか；
ｗ．ＶＨ領域が配列番号２３８またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６９またはその変異体であるか；
ｘ．ＶＨ領域が配列番号２３８またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２７０またはその変異体であるか；
ｙ．ＶＨ領域が配列番号２３９またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２５６またはその変異体であるか；
ｚ．ＶＨ領域が配列番号２３９またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２５７またはその変異体であるか；
ａａ．ＶＨ領域が配列番号２３９またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６５またはその変異体であるか；
ｂｂ．ＶＨ領域が配列番号２３９またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６４またはその変異体であるか；
ｃｃ．ＶＨ領域が配列番号２３９またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６７またはその変異体であるか；
ｄｄ．ＶＨ領域が配列番号２３９またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６８またはその変異体であるか；
ｅｅ．ＶＨ領域が配列番号２３９またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２６９またはその変異体であるか；あるいは
ｆｆ．ＶＨ領域が配列番号２３９またはその変異体であり、そしてＶＬ領域が配列番号２７０またはその変異体であること、
を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１２】
前記抗体が、ＫａｂａｔのＥＵ付番スキームに準じたＨＣ−Ｆ４０４部位に非天然アミノ酸を含む、請求項１１に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１３】
前記非天然アミノ酸が、パラ−アジドメチルフェニルアラニンまたはｐ−アジドメチル−Ｌ−フェニルアラニンである、請求項１２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１４】
前記抗体コンジュゲートが、（１０２ｂ）の式：
【化３】
2019506385.tif 000083
（式中、ＣＯＭＰは前記示される結合を有する前記抗体の非天然アミノ酸残基であり、かつＰＡＹはＤＭ１である）を有する、請求項１３に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１５】
前記抗体コンジュゲートが、コンジュゲートＡの構造：
【化４】
2019506385.tif 000084
を有し、かつ前記抗体が、配列番号２３６を含むＶＨ領域および配列番号２５６を含むＶＬ領域を含む、請求項１４に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１６】
少なくとも１つの定常領域ドメインをさらに含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１７】
前記定常領域が、配列番号３０４〜３０５から選択される配列を含む、請求項１６に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１８】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項１９】
ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭである、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２０】
前記抗体がヒト化またはヒトである、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２１】
前記抗体が脱グリコシル化される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２２】
前記抗体が抗体断片である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２３】
前記抗体断片が、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’ ）２断片、Ｆａｂ’断片、ｓｃＦｖ（ｓＦｖ）断片、およびｓｃＦｖ−Ｆｃ断片から選択される、請求項２２に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２４】
前記抗体がｓｃＦｖ断片である、請求項２３に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２５】
前記ｓｃＦｖ断片が、配列番号２２１〜２２８から選択される配列を含む、請求項２４に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２６】
前記抗体がｓｃＦｖ−Ｆｃ断片である、請求項２３に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２７】
前記ｓｃＦｖ−Ｆｃ断片が配列番号２２９を含む、請求項２６に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２８】
前記抗体が、２５℃の温度で少なくとも約１０５Ｍ−１×秒−１のｋａを有する、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項２９】
前記抗体が、２５℃の温度で１０−３秒−１以下のｋｄを有する、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項３０】
前記抗体が、２５℃の温度で１０−９Ｍ以下のＫＤを有する、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項３１】
前記抗体が、細胞の表面上のＣＤ７４への結合後に内在化される、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項３２】
前記抗体のＴｍ２が、少なくとも７５℃、７５．５℃、７６℃、７６．５℃、７７℃、７７．５℃、７８℃、７８．５℃、または７９℃である、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項３３】
前記抗体のＴｍ１が、６１℃未満または６０℃未満である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項３４】
請求項１〜３３のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート、および前記抗体コンジュゲートの使用説明書を含むキット。
【請求項３５】
前記抗体コンジュゲートが凍結乾燥される、請求項３４に記載のキット。
【請求項３６】
前記凍結乾燥された抗体コンジュゲートの再構成のための流体をさらに含む、請求項３５に記載のキット。
【請求項３７】
請求項１〜３３のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲートおよび薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物。
【請求項３８】
それを必要とする対象における疾患または状態を治療または予防する方法であって、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート、または請求項３７に記載の医薬組成物を有効量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項３９】
それを必要とする対象における疾患または状態を診断する方法であって、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の抗体コンジュゲート、または請求項３７に記載の医薬組成物を有効量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項４０】
前記疾患または状態が、がん、自己免疫性疾患、炎症性疾患、または感染症から選択される、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記がんが、多発性骨髄腫または膵がんから選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記疾患または状態がＢ細胞リンパ腫である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記疾患または状態が非ホジキンリンパ腫である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記疾患または状態が白血病である、請求項４０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
分野
本明細書に提供されるのは、ＣＤ７４に対する結合特異性を有する抗体コンジュゲートおよび抗体コンジュゲートを含む組成物、例えば医薬組成物、コンジュゲートを産生する方法、ならびに治療のためにコンジュゲートおよび組成物を使用する方法である。コンジュゲートおよび組成物は、細胞増殖およびがんの治療および予防の方法、細胞増殖およびがんの検出方法、および細胞増殖およびがんの診断方法において有用である。コンジュゲートおよび組成物はまた、自己免疫性疾患、感染症、および炎症性状態の治療、予防、検出、および診断の方法において有用である。
【背景技術】
【０００２】
背景
ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩＩ組織適合性抗原γ鎖（ＨＬＡ−ＤＲ抗原関連インバリアント鎖またはＣＤ７４（表面抗原分類７４）としても公知）は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩＩタンパク質の形成および輸送に関与するタンパク質である。Claesson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1983, 80:7395-7399; Kudo et al., Nucleic Acids Res., 1985, 13:8827-8841;およびCresswell, Ann. Rev. Immunol., 1994, 12:259-291を参照のこと。
【０００３】
ＣＤ７４の１つの機能は、細胞内区画内のＭＨＣクラスＩＩヘテロ二量体へのペプチド負荷を調節し、ＭＨＣクラスＩＩが細胞ペプチドに結合することを阻止することである。細胞表面に発現されるＣＤ７４のあらゆる範囲の機能性はまだ知られていない。しかし、試験によると、ＣＤ７４が炎症促進性サイトカインのマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）における受容体であることが示されている。ＭＩＦのＣＤ７４への結合により、ＭＡＰＫおよびＡｋｔ経路を介した下流シグナル伝達が活性化され、細胞増殖および生存が促進される。Gore et al., J. Biol. Chem., 2008, 283:2784-2792;およびStarlets et al., Blood, 2006, 107:4807-4816を参照のこと。
【０００４】
ＣＤ７４発現の上方制御が、がんおよび自己免疫性疾患（Borghese et al., Exp. Op. Ther. Targets, 2011, 15:237-251）、ならびに感染症（Hofman et al., Modern Pathology, 2007, 20:974-989）および炎症性状態（Vera et al., Exp. Biol. & Med., 2008, 233:620-626）において認められている。ＣＤ７４は、Ｂ細胞リンパ腫、白血病、および多発性骨髄腫を含む種々の血液学的腫瘍で、中程度から高レベルで発現されることが知られている。Burton et al., Clin. Cancer Res., 2004, 10:6606-6611。ＣＤ７４発現はまた、膵がんの進行に関連した主要な要因であることが知られている。Zhang et al., Hepatobiliary Pancreat. Dis. Int., 2014, 13:81-86。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
複数の疾患過程におけるＣＤ７４の役割を考慮すると、ＣＤ７４とそのリガンドとの相互作用およびＣＤ７４によって活性化される下流シグナル伝達過程を調節する改善された方法に対する必要性がある。さらに、幾つかの疾患におけるＣＤ７４の上方制御を仮定すると、ＣＤ７４を過剰発現する細胞および組織を特異的に標的にする治療薬に対する必要性もある。ＣＤ７４の抗体コンジュゲートであれば、かかる疾患の治療または診断のため、治療用または診断用ペイロード部分をＣＤ７４を発現する標的細胞に送達するのに用いることができる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
概要
一態様では、本明細書に提供されるのは、ＣＤ７４に選択的に結合する抗体コンジュゲートである。抗体コンジュゲートは、１つ以上のペイロード部分に連結されたＣＤ７４に結合する抗体を含む。この抗体は、直接的に共有結合により、または間接的にリンカーを介して、ペイロードに連結され得る。ＣＤ７４抗体は、有用なペイロード部分、および有用なリンカーであるものとして、本明細書で詳述される。
【０００７】
別の態様では、提供されるのは、抗体コンジュゲートを含む組成物である。一部の実施形態では、組成物は医薬組成物である。任意の好適な医薬組成物が用いられてもよい。一部の実施形態では、医薬組成物は、非経口投与用の組成物である。さらなる態様では、本明細書に提供されるのは、抗体コンジュゲートまたは医薬組成物を含むキットである。
【０００８】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、抗ＣＤ７４抗体コンジュゲートを使用する方法である。一部の実施形態では、本方法は、１つ以上のペイロード部分を、ＣＤ７４を発現する標的細胞または組織に送達する方法である。一部の実施形態では、本方法は、治療方法である。一部の実施形態では、本方法は、診断方法である。一部の実施形態では、本方法は、分析方法である。一部の実施形態では、抗体コンジュゲートは、疾患または状態の治療に用いられる。一部の態様では、疾患または状態は、がん、自己免疫性疾患、感染症、または炎症性状態から選択される。一部の態様では、疾患または状態は、Ｂ細胞リンパ腫である。一部の態様では、疾患または状態は、非ホジキンリンパ腫である。一部の態様では、疾患または状態は、白血病である。一部の態様では、疾患または状態は、膵がんである。一部の態様では、疾患または状態は、多発性骨髄腫である。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】ＣＤＲ−Ｈ１に対するＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ付番系の比較を提示する。Martin A.C.R. (2010). Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains. In R. Kontermann & S. Duebel (Eds.), Antibody Engineering vol. 2 (pp. 33-51). Springer-Verlag, Berlin Heidelbergを参照のこと。
【図２Ａ】本明細書中の実施例に従って発現される抗体のタンパク質収量を提示する。
【図２Ｂ】非還元および還元条件下での抗体のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を提示する。
【図３Ａ】本明細書で開示される通りの抗ＣＤ７４抗体−薬剤コンジュゲートの投与後の播種性ＡＲＰ−１多発性骨髄腫モデルにおける時間の関数としての体重変化（ＢＷＣ）を図示するプロットである。
【図３Ｂ】腫瘍細胞接種後４６日目の各実験群における個別の体重データの散布図を提示する。
【図４Ａ】本明細書で開示される通りの抗ＣＤ７４抗体−薬剤コンジュゲートの投与後の播種性ＡＲＰ−１多発性骨髄腫モデルからの卵巣および腎臓とその周辺に形成される得られた腫瘤の画像を含む。
【図４Ｂ】各実験群における最終の腫瘍組織重量の棒グラフを提示する。
【図５Ａ】本明細書で開示される通りの抗ＣＤ７４抗体−薬剤コンジュゲートの投与後の骨髄（大腿骨および脛骨）中に存在するヒトＣＤ１３８陽性ＡＲＰ−１骨髄腫細胞の百分率における代表的なフローサイトメトリードットプロットを提示する。
【図５Ｂ】各実験群におけるヒトＣＤ１３８陽性ＡＲＰ−１骨髄腫細胞の百分率の棒グラフとしてフローサイトメトリーデータを提示する。
【図６Ａ】本明細書で開示される通りの抗ＣＤ７４抗体−薬剤コンジュゲートの投与後の播種性ＭＭ．１Ｓ多発性骨髄腫モデルにおける時間の関数としての体重変化（ＢＷＣ）を示す。
【図６Ｂ】各治療群における多発性骨髄腫モデルにおけるカプラン・マイヤー生存プロット（右）を提示する。
【図６Ｃ】本明細書で開示される通りの抗ＣＤ７４抗体−薬剤コンジュゲートの投与後の各実験群における腫瘍接種後３２日目の骨髄中に存在するヒトＣＤ１３８陽性ＭＭ．１Ｓ骨髄腫細胞の百分率の棒グラフを図示する。
【図６Ｄ】本明細書で開示される通りの抗ＣＤ７４抗体−薬剤コンジュゲートの投与後の実験群における腫瘍接種後１２９日目の骨髄中に存在するヒトＣＤ１３８陽性ＭＭ．１Ｓ骨髄腫細胞の百分率の棒グラフを図示する。
【図７Ａ】本明細書で開示される通りの抗ＣＤ７４抗体−薬剤コンジュゲートの投与後の非ホジキンリンパ腫モデルにおける時間の関数としての腫瘍増殖曲線を提示する。
【図７Ｂ】抗ＣＤ７４抗体−薬剤コンジュゲートの投与後の非ホジキンリンパ腫モデルにおける各実験群における１８日目の個別の腫瘍サイズの散布図を提示する。
【図８】本明細書で開示される通りの抗ＣＤ７４抗体−薬剤コンジュゲートの投与後の非ホジキンリンパ腫動物モデルにおける時間の関数としての体重変化（ＢＷＣ）のプロットを提示する。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
詳細な説明
１．定義
特に定義されない限り、当該技術分野のすべての用語、記号、本明細書で用いられる他の科学用語は、本発明が属する当業者によって共通に理解されている意味を有することが意図される。場合によっては、共通に理解される意味を有する用語は、明確化および／または即時参考を意図して本明細書で定義され、本明細書中でのかかる定義の包含は、必ずしも当該技術分野で一般に理解されているものからの逸脱を表すように解釈されるべきではない。本明細書で説明または参照される技術および方法は、一般に十分に理解され、当業者により、通常の方法、例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2nd ed. (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NYに記載の幅広く利用される分子クローニング法などを用いて共通に利用される。適宜、市販のキットおよび試薬の使用を含む手順は、特に断りのない限り、一般に製造業者規定のプロトコルおよび／またはパラメータに従って実施される。
【００１１】
本明細書で用いられるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、その内容が特に明示されない限り、複数の参照を含む。
【００１２】
用語「約」は、指示値およびその値の上下範囲を示し、包含する。特定の実施形態では、約という用語は、指示値±１０％、±５％または±１％を示す。特定の実施形態では、約という用語は、指示値±その値の１標準偏差を示す。
【００１３】
用語「ＣＤ７４」および「ＣＤ７４抗原」は、本明細書で交換可能に用いられる。特に指定がない限り、同用語は、細胞により天然に発現される、またはＣＤ７４遺伝子が遺伝子導入された細胞により発現されるヒトＣＤ７４の任意の変異体、アイソフォームおよび種相同体を含む。
【００１４】
ＣＤ７４の少なくとも４つのヒトアイソフォーム、例えばｐ４３、ｐ４１、ｐ３５およびｐ３３などが存在することは公知である。Borghese et al., Expert Opin. Ther. Targets, 2011, 15:237-251（その全体が参照により援用される）。これらのアイソフォームは、転写物の選択的スプライシングおよび２つの翻訳開始部位から生じる。
【００１５】
ｐ４３（ＣＤ７４アイソフォーム１、アイソフォームａ、または「ロング」としても公知；ＵｎｉＰｒｏｔエントリＰ０４２３３−１およびＮＣＢＩ参照配列ＮＰ００１０２０３３０を参照、各々はその全体が参照により援用される）は、細胞外部分を形成する残基７３〜２９６を有する２９６アミノ酸を有する。アイソフォーム１の細胞外部分を有するＣＤ７４のタンパク質構築物は、本明細書中で「変異体１」または「ＣＤ７４ｖ１」と称される。
【００１６】
ｐ３５（ＣＤ７４アイソフォーム２、アイソフォームｂまたは「ショート」としても公知；ＵｎｉＰｒｏｔエントリＰ０４２３３−２およびＮＣＢＩ参照配列ＮＰ００４３４６、各々はその全体が参照により援用される）は、選択的スプライシングに起因して細胞外ドメインから残基２０９〜２７２が欠如している。アイソフォーム２の細胞外部分を有するＣＤ７４のタンパク質構築物は、本明細書中で「変異体２」または「ＣＤ７４ｖ２」と称される。
【００１７】
ｐ４１およびｐ３３は、除去された１６アミノ酸内部に存在する小胞体（ＥＲ）保持シグナルが欠如するが、各々、ｐ４３およびｐ３５と同一の細胞外ドメインを有する変異体をもたらす選択的翻訳開始部位（４８ヌクレオチド／１６アミノ酸下流）から生じる。
【００１８】
残基１４８〜１６０が置換され、かつ残基１６１〜２９６が欠如している別のアイソフォーム（アイソフォーム３およびアイソフォームｃとして公知）の配列がＮＰ００１０２０３２９で提供される。
【００１９】
カニクイザルＣＤ７４相同体の配列が、例えば、ＮＣＢＩ参照配列：ＸＰ-００１０９９４９１．２およびＮＣＢＩ参照配列：ＸＰ-００２８０４６２４．１で提供される。
【００２０】
用語「免疫グロブリン」は、一般に２対のポリペプチド鎖（１対の軽（Ｌ）鎖および１対の重（Ｈ）鎖）からなる構造関連タンパク質のクラスを指す。インタクトな免疫グロブリンでは、これらの鎖の４つ全部がジスルフィド結合により相互接続される。免疫グロブリンの構造は、十分に特徴づけられている。例えば、Paul, Fundamental Immunology 7th ed., Ch. 5 (2013) Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PAを参照のこと。簡潔に述べると、各重鎖は、典型的には重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を含む。重鎖定常領域は、典型的にはＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３の３つのドメインを含む。各軽鎖は、典型的には軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、典型的には１つのドメイン（略してＣＬ）を含む。
【００２１】
用語「抗体」は、免疫グロブリン分子のタイプを記述し、本明細書中でその最も広範な意味で用いられる。抗体は、具体的には、モノクローナル抗体コンジュゲート、ポリクローナル抗体コンジュゲート、インタクトな抗体コンジュゲート、および抗体断片を含む。抗体コンジュゲートは、少なくとも１つの抗原結合ドメインを含む。抗原結合ドメインの一例が、ＶＨ−ＶＬ二量体によって形成される抗原結合ドメインである。「ＣＤ７４抗体」、「抗ＣＤ７４抗体」、「ＣＤ７４  Ａｂ」、「ＣＤ７４特異抗体」または「抗ＣＤ７４  Ａｂ」は、本明細書で記載されるとき、抗原ＣＤ７４に特異的に結合する抗体である。
【００２２】
ＶＨおよびＶＬ領域は、より保存された領域が散在する超可変性の領域（「超可変領域」（ＨＶＲ）；「相補性決定領域」（ＣＤＲ）とも称される）にさらに細分されてもよい。より保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される。ＶＨおよびＶＬの各々は、一般に、以下の順序（Ｎ末端からＣ末端へ）：ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４で配列される３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含む。ＣＤＲは、抗原結合に関与し、抗体に抗原特異性および結合親和性を与える。Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest 5th ed. (1991) Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD（その全体が参照により援用される）を参照のこと。
【００２３】
任意の脊椎動物種からの軽鎖は、定常ドメインの配列に基づき、κおよびλと称される２つのタイプの内の１つに割り当てることができる。
【００２４】
任意の脊椎動物種からの重鎖は、５つの異なるクラス（またはアイソタイプ）：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭの内の１つに割り当てることができる。これらのクラスは各々、α、δ、ε、γ、およびμとも称される。ＩｇＧおよびＩｇＡクラスは、配列および機能における差異に基づいてサブクラスにさらに分かれる。ヒトは、以下のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２を発現する。
【００２５】
ＣＤＲのアミノ酸配列境界は、Kabat et al.、上記（「Ｋａｂａｔ」付番スキーム）；Al-Lazikani et al., 1997, J. Mol. Biol., 273:927-948（「Ｃｈｏｔｈｉａ」付番スキーム）；MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol. 262:732-745（「Ｃｏｎｔａｃｔ」付番スキーム）；Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol., 2003, 27:55-77（「ＩＭＧＴ」付番スキーム）；およびHonegge and Plueckthun, J. Mol. Biol., 2001, 309:657-70（「ＡＨｏ」付番スキーム）（それらの各々はその全体が参照により援用される）によって記載されたものを含む幾つかの公知の付番スキームのいずれかを用いて、当業者により判定され得る。
【００２６】
表１は、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａスキームにより同定された、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３の位置を提示する。ＣＤＲ−Ｈ１においては、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ付番スキームの双方を用いて残基付番が提示される。図１は、ＣＤＲ−Ｈ１に対するＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ付番スキームの比較を提示する。Martin (2010)、上記を参照のこと。
【００２７】
特に指定されない限り、本明細書中の特定ＣＤＲの同定に用いられる付番スキームは、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ付番スキームである。これら２つの付番スキームが分岐する場合、付番スキームは、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａのいずれかとして特定される。
【００２８】
【表１】
2019506385.tif 000003
【００２９】
「ＥＵ付番スキーム」または「ＥＵインデックス」は、抗体重鎖定常領域内の残基を参照するとき、一般に用いられる（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．、上記に報告されたＥＵインデックス）。特に断りのない限り、ＥＵ付番スキームは、本明細書に記載の抗体重鎖定常領域内の残基を指すために用いられる。
【００３０】
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部、例えばインタクトな抗体の抗原結合または可変領域を含む。抗体断片は、例えば、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、ｓｃＦｖ（ｓＦｖ）断片、およびｓｃＦｖ−Ｆｃ断片を含む。
【００３１】
「Ｆｖ」断片は、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインとの非共有結合で連結された二量体を含む。
【００３２】
「Ｆａｂ」断片は、重鎖および軽鎖可変ドメインに加えて、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。Ｆａｂ断片は、例えば全長抗体のパパイン消化により作製されてもよい。
【００３３】
「Ｆ（ａｂ’）２」断片は、ヒンジ領域近傍にジスルフィド結合により連結された２つのＦａｂ’断片を含む。Ｆ（ａｂ’）２断片は、例えばインタクトな抗体のペプシン消化により作製されてもよい。Ｆ（ａｂ’）断片は、例えばβメルカプトエタノール処理により解離され得る。
【００３４】
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、単一のポリペプチド鎖内にＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む。ＶＨおよびＶＬは、一般にペプチドリンカーにより連結される。Plueckthun A. (1994). Antibodies from Escherichia coli. In Rosenberg M. & Moore G.P. (Eds.), The Pharmacology of Monoclonal Antibodies vol. 113 (pp. 269-315). Springer-Verlag, New York（その全体が参照により援用される）。「ｓｃＦｖ−Ｆｃ」断片は、Ｆｃドメインに結合されたｓｃＦｖを含む。例えば、Ｆｃドメインは、ｓｃＦｖのＣ末端に結合され得る。Ｆｃドメインは、ｓｃＦｖ内の可変ドメインの配向性（すなわち、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨ）に応じて、ＶＨまたはＶＬに後続し得る。当該技術分野で公知であるかまたは本明細書に記載される任意の好適なＦｃドメインが用いられてもよい。場合によっては、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメイン（例えば配列番号２８９）である。
【００３５】
用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一の抗体の集団に由来する抗体を指す。実質的に均一の抗体の集団は、モノクローナル抗体の産生中に正常に生じ得る変異体を除く、実質的に類似し、かつ同じエピトープに結合する抗体を含む。かかる変異体は、一般にほんの微量で存在する。モノクローナル抗体は、典型的には、複数の抗体からの単一の抗体の選択を含むプロセスにより得られる。例えば、選択プロセスは、複数のクローン、例えば、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、酵母クローン、細菌クローン、または他の組換えＤＮＡクローンのプールからの唯一のクローンの選択であり得る。選択された抗体は、例えば、標的に対する親和性を改善するため（「親和性成熟」）、抗体をヒト化するため、細胞培養下でのその産生を改善するため、かつ／または対象におけるその免疫原性を低減するため、さらに改変され得る。
【００３６】
用語「キメラ抗体」は、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の供給源または種に由来する一方で、重鎖および／または軽鎖の残りが異なる供給源または種に由来する抗体を指す。
【００３７】
非ヒト抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する最小配列を含むキメラ抗体である。ヒト化抗体は、一般に、１つ以上のＣＤＲからの残基が非ヒト抗体（ドナー抗体）の１つ以上のＣＤＲからの残基によって置換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。ドナー抗体は、所望される特異性、親和性、または生物学的効果を有する任意の好適な非ヒト抗体、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ニワトリ、または非ヒト霊長類抗体であり得る。場合によっては、レシピエント抗体の選択されたフレームワーク領域残基は、ドナー抗体からの対応するフレームワーク領域残基によって置換される。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体またはドナー抗体のいずれにも見出されない残基を含んでもよい。かかる修飾は、抗体機能をさらに改良するため、設けられてもよい。さらなる詳細については、Jones et al., Nature, 1986, 321:522-525; Riechmann et al., Nature, 1988, 332:323-329;およびPresta, Curr. Op. Struct. Biol., 1992, 2:593-596（それらの各々はその全体が参照により援用される）を参照のこと。
【００３８】
「ヒト抗体」は、ヒトまたはヒト細胞によって産生される、またはヒト抗体レパートリーもしくはヒト抗体コード配列（例えば、ヒト供給源から得られるかまたは新規に設計される）を利用する非ヒト供給源に由来する抗体の場合に対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体では、詳細にはヒト化抗体が除外される。
【００３９】
「単離された抗体」は、その天然環境の成分から分離および／または回収されているものである。天然環境の成分は、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性材料を含んでもよい。一部の実施形態では、単離された抗体は、例えばスピニングカップ配列決定装置の使用により、少なくとも１５残基のＮ末端または内部アミノ酸配列を得るのに十分な程度まで精製される。一部の実施形態では、単離された抗体は、還元または非還元条件下でゲル電気泳動泳動（例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により均一になるまで精製され、クーマシーブルーまたは銀染色により検出される。単離された抗体は、抗体の天然環境の少なくとも１つの成分が存在しないことから、組換え細胞内のインサイチュでの抗体を含む。一部の態様では、単離された抗体は、少なくとも１つの精製ステップによって調製される。
【００４０】
一部の実施形態では、単離された抗体は、少なくとも８０重量％、８５重量％、９０重量％、９５重量％、または９９重量％に精製される。一部の実施形態では、単離された抗体は、抗体の少なくとも８５重量％、９０重量％、９５重量％、９８重量％、９９重量％〜１００重量％を含む溶液として提供され、重量の残りは溶媒中に溶解される他の溶質の重量を含む。
【００４１】
「親和性」は、分子（例えば抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば抗原）との間の非共有結合相互作用の全合計の力を指す。特に指定されない限り、本明細書で用いられるとき、「結合親和性」は、結合対（例えば抗体および抗原）のメンバー間の１：１相互作用を反映する固有結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に解離定数（ＫＤ）により表すことができる。親和性は、当該技術分野で公知の一般的方法、例えば本明細書に記載のものにより、測定され得る。親和性は、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術、例えばBiacore（登録商標）装置を用いて測定され得る。
【００４２】
抗体の標的分子への結合に関連して、特定の抗原（例えばポリペプチド標的）または特定の抗原上のエピトープに対して、用語「特異的結合」、「特異的に結合する」、「特異的な」、「選択的に結合する」、および「選択的な」は、測定可能に非特異的または非選択的相互作用と異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば分子の結合を対照分子の結合と比べて測定することにより測定され得る。特異的結合はまた、標的と類似する対照分子との競合、例えば余分な非標識標的により測定され得る。その場合、特異的結合は、標識標的のプローブへの結合が余分な非標識標的により競合的に阻害される場合、示される。
【００４３】
用語「ｋｄ」（秒−１）は、本明細書で用いられるとき、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度定数を指す。この値はｋｏｆｆ値とも称される。
【００４４】
用語「ｋａ」（Ｍ−１×秒−１）は、本明細書で用いられるとき、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度定数を指す。この値はｋｏｎ値とも称される。
【００４５】
用語「ＫＤ」（Ｍ）は、本明細書で用いられるとき、特定の抗体−抗原相互作用の解離平衡定数を指す。ＫＤ＝ｋｄ／ｋａ。
【００４６】
用語「ＫＡ」（Ｍ−１）は、本明細書で用いられるとき、特定の抗体−抗原相互作用の会合平衡定数を指す。ＫＡ＝ｋａ／ｋｄ。
【００４７】
「親和性成熟された」抗体は、改変を有しない親抗体と比べて、抗体のその抗原に対する親和性における改善をもたらす、１つ以上のＣＤＲまたはＦＲにおける１つ以上の改変を有するものである。一実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモルまたはピコモルの親和性を有する。親和性成熟抗体は、当該技術分野で公知の種々の方法を用いて産生されてもよい。例えば、Marks et al.（Bio/Technology, 1992, 10:779-783、その全体が参照により援用される）は、ＶＨおよびＶＬドメイン混合による親和性成熟について記載している。ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は、例えば、Barbas et al. (Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 1994, 91:3809-3813); Schier et al., Gene, 1995, 169:147-155; Yelton et al., J. Immunol., 1995, 155:1994-2004; Jackson et al., J. Immunol., 1995, 154:3310-33199;およびHawkins et al, J. Mol. Biol., 1992, 226:889-896（それらの各々は、その全体が参照により援用される）により記載されている。
【００４８】
２つ以上の抗体と関連して本明細書で用いられるとき、用語「〜と競合する」または「〜と交差競合する」は、２つ以上の抗体が抗原（例えばＣＤ７４）への結合に対して競合することを示す。１つの例示的アッセイでは、ＣＤ７４は、プレート上にコーティングされ、第１抗体への結合とその後の第２の標識抗体の付加を可能にする。第１抗体の存在により第２抗体の結合が低下する場合、抗体は競合する。用語「〜と競合する」はまた、１つの抗体が別の抗体の結合を低減するが、抗体が逆順で付加されるときに競合が認められない場合の抗体の組み合わせを含む。しかし、一部の実施形態では、第１および第２抗体は、それらが付加される順序と無関係に互いの結合を阻害する。一部の実施形態では、１つの抗体が、別の抗体のその抗原への結合を少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％低減する。
【００４９】
用語「エピトープ」は、抗体に特異的に結合する能力がある抗原の一部を意味する。エピトープは、表面接近可能アミノ酸残基および／または糖側鎖からなることが多く、特異的な三次元構造特性、ならびに特異的な電荷特性を有することがある。立体構造および非立体構造エピトープは、後者ではなく前者への結合が変性溶媒の存在下で失われる点で区別される。エピトープは、その結合に直接的に関与するアミノ酸残基、およびその結合に直接的に関与しない他のアミノ酸残基を含んでもよい。抗体が結合する相手のエピトープは、例えば異なる点突然変異を有するＣＤ７４変異体への抗体の結合についての試験など、エピトープ測定のための公知の技術を用いて測定され得る。
【００５０】
ポリペプチド配列と参照配列との間のパーセント「同一性」は、最大パーセント配列同一性を得るため、必要な場合、配列を整列し、ギャップを導入した後、参照配列内のアミノ酸残基と同一であるポリペプチド配列内のアミノ酸残基の百分率と定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定することを目的とする整列化は、例えば、BLAST、BLAST-2、ALIGN、MEGALIGN (DNASTAR)、またはCLUSTALWソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを用いて、当該技術分野の範囲内に含まれる様々な方法で達成され得る。当業者は、比較されている配列の全長にわたって最大整列化を達成するのに要求される任意のアルゴリズムを含む、配列を整列するための適切なパラメータを決定することができる。
【００５１】
「保存的置換」または「保存的アミノ酸置換」は、１つ以上のアミノ酸と１つ以上の化学的または機能的に類似したアミノ酸との置換を指す。類似のアミノ酸を提供する保存的置換表は、当該技術分野で周知である。かかる置換を有するポリペプチド配列は、「保存的修飾変異体」として知られる。かかる保存的修飾変異体は、多型変異体、種間相同体、および対立遺伝子に追加的なものであり、それらを除外しない。例として、アミノ酸の以下のグループは、互いに対して保存的置換とみなされる。
【００５２】
【表２】
2019506385.tif 000004
【００５３】
【表３】
2019506385.tif 000005
【００５４】
追加的な保存的置換は、例えば、Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties 2nd ed. (1993) W. H. Freeman & Co., New York, NY中に見出され得る。親抗体中にアミノ酸残基の１つ以上の保存的置換を設けることにより作製される抗体は、「保存的修飾変異体」と称される。
【００５５】
用語「アミノ酸」は、２０の共通の天然に存在するアミノ酸を指す。天然に存在するアミノ酸は、アラニン（Ａｌａ；Ａ）、アルギニン（Ａｒｇ；Ｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ；Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ；Ｄ）、システイン（Ｃｙｓ；Ｃ）；グルタミン酸（Ｇｌｕ；Ｅ）、グルタミン（Ｇｌｎ；Ｑ）、グリシン（Ｇｌｙ；Ｇ）；ヒスチジン（Ｈｉｓ；Ｈ）、イソロイシン（Ｉｌｅ；Ｉ）、ロイシン（Ｌｅｕ；Ｌ）、リジン（Ｌｙｓ；Ｋ）、メチオニン（Ｍｅｔ；Ｍ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ；Ｆ）、プロリン（Ｐｒｏ；Ｐ）、セリン（Ｓｅｒ；Ｓ）、トレオニン（Ｔｈｒ；Ｔ）、トリプトファン（Ｔｒｐ；Ｗ）、チロシン（Ｔｙｒ；Ｙ）、およびバリン（Ｖａｌ；Ｖ）を含む。
【００５６】
天然にコードされたアミノ酸は、当業者に公知のタンパク質原性アミノ酸である。それらは、２０の一般的なアミノ酸（アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリン）、ならびにあまり一般的でないピロールリジンおよびセレノシステインを含む。天然にコードされたアミノ酸は、２２の天然に存在するアミノ酸の翻訳後変異体、例えば、プレニル化アミノ酸、イソプレニル化アミノ酸、ミリストイル化アミノ酸、パルミトイル化アミノ酸、Ｎ−結合型グリコシル化アミノ酸、Ｏ−結合型グリコシル化アミノ酸、リン酸化アミノ酸およびアシル化アミノ酸を含む。
【００５７】
用語「非天然アミノ酸」は、タンパク質原性アミノ酸でないアミノ酸、またはその翻訳後修飾変異体を指す。特に、同用語は、２０の一般的なアミノ酸の１つでないアミノ酸またはピロールリジンまたはセレノシステイン、またはその翻訳後修飾変異体を指す。
【００５８】
用語「コンジュゲート」または「抗体コンジュゲート」は、１つ以上のペイロード部分に連結された抗体を指す。この抗体は、本明細書に記載の任意の抗体であり得る。ペイロードは、本明細書に記載の任意のペイロードであり得る。この抗体は、共有結合を介してペイロードに直接的に連結され得るか、またはこの抗体はリンカーを介してペイロードに間接的に連結され得る。典型的には、リンカーは、この抗体に共有結合され、ペイロードにも共有結合される。用語「抗体薬物コンジュゲート」または「ＡＤＣ」は、少なくとも１つのペイロードが薬物などの治療部分である場合のコンジュゲートを指す。
【００５９】
用語「ペイロード」は、抗体にコンジュゲートされ得る分子部分を指す。特定の実施形態では、ペイロードは、治療部分および標識部分からなる群から選択される。
【００６０】
用語「リンカー」は、少なくとも２つの共有結合を形成する能力がある分子部分を指す。典型的には、リンカーは、抗体に対して少なくとも１つの共有結合、またペイロードに対して少なくとももう１つの共有結合を形成する能力がある。特定の実施形態では、リンカーは、抗体に対して２つ以上の共有結合を形成し得る。特定の実施形態では、リンカーは、１つのペイロードに対して２つ以上の共有結合を形成し得るかまたは２つ以上のペイロードに対して共有結合を形成し得る。リンカーが抗体、またはペイロード、または双方に対する結合を形成した後、残りの構造、すなわち１つ以上の共有結合が形成された後のリンカーの残基もまた、本明細書中で「リンカー」と称されてもよい。用語「リンカー前駆体」は、抗体またはペイロード、または双方と共有結合を形成する能力がある１つ以上の反応基を有するリンカーを指す。
【００６１】
任意の疾患または障害に対しての「治療する」または「治療」は、特定の実施形態では、対象中に存在する疾患または障害を寛解させることを指す。別の実施形態では、「治療する」または「治療」は、対象によって識別不能であり得る、少なくとも１つの物理的パラメータを寛解させることを含む。さらに別の実施形態では、「治療する」または「治療」は、身体的に（例えば識別可能な症状の安定化）または生理学的に（例えば身体的パラメータの安定化）または双方のいずれかで疾患または障害を調節することを含む。さらに別の実施形態では、「治療する」または「治療」は、疾患または障害の発症を遅延させることを含む。
【００６２】
本明細書で用いられるとき、用語「治療有効量」または「有効量」は、対象に投与されるとき、疾患または疾患の進行を予防するかまたは寛解させる、または症状の寛解をもたらすのに有効である抗体または組成物の量を指す。
【００６３】
本明細書で用いられるとき、用語「成長を阻害する」（例えば細胞、例えば腫瘍細胞を参照するとき）は、ＣＤ７４抗体と接触されるときの細胞成長（例えば腫瘍細胞成長）における、ＣＤ７４抗体と接触状態にない同じ細胞の成長と比べての任意の測定可能な減少を含むことが意図される。一部の実施形態では、成長は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％、または１００％阻害され得る。細胞成長における減少は、限定はされないが、抗体内在化、アポトーシス、壊死、および／またはエフェクター機能に媒介される活性を含む種々の機構によって生じ得る。
【００６４】
本明細書で用いられるとき、用語「対象」は、哺乳類対象を意味する。例示的な対象として、限定はされないが、ヒト、サル、イヌ、ネコ、マウス、ラット、雌ウシ、ウマ、ヤギおよびヒツジが挙げられる。特定の実施形態では、対象はヒトである。一部の実施形態では、対象は、本明細書に提供される抗体で治療され得る、がん、炎症疾患または状態、または自己免疫疾患または状態を有する。一部の実施形態では、対象は、がん、炎症疾患または状態、または自己免疫疾患または状態を有するかまたは有することが疑われるヒトである。
【００６５】
本明細書に図示される一部の化学構造では、特定の置換基、化学基、および原子は、置換基、化学基、および原子の結合を介する原子を示すため、１つまたは複数の結合を交差させる曲線／波線（例えば、
【化１】
2019506385.tif 000006
）で表される。例えば、限定はされないが、
【化２】
2019506385.tif 000007
などの一部の構造では、この曲線／波線は、図示される化学実体の結合相手のコンジュゲートまたはリンカー−ペイロード構造の骨格内の原子を示す。限定はされないが、
【化３】
2019506385.tif 000008
などの一部の構造では、この曲線／波線は、抗体または抗体断片中の原子ならびに図示される化学実体の結合相手のコンジュゲートまたはリンカー−ペイロード構造の骨格内の原子を示す。
【００６６】
用語「部位特異的な」は、ポリペプチド中の所定の配列位置でのポリペプチドの修飾を指す。修飾は、ポリペプチドの単一の予測可能な残基に存在し、ここで変異はほとんどまたは全く伴わない。特定の実施形態では、修飾アミノ酸がその配列位置に、例えば組換え的にまたは合成的に導入される。同様に、ある部分がポリペプチド中の特定の配列位置の残基に「部位特異的に」連結され得る。特定の実施形態では、ポリペプチドは、２つ以上の部位特異的修飾を含み得る。
【００６７】
２．コンジュゲート
本明細書に提供されるのは、ＣＤ７４に対する抗体のコンジュゲートである。コンジュゲートは、ペイロードに直接的にまたはリンカーを介して間接的に共有結合的に連結されたＣＤ７４に対する抗体を含む。特定の実施形態では、この抗体は１つのペイロードに連結される。さらなる実施形態では、この抗体は２つ以上のペイロードに連結される。特定の実施形態では、この抗体は、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、またはより多くのペイロードに連結される。
【００６８】
ペイロードは、熟練した施術者によって有用と思われる任意のペイロードであり得る。特定の実施形態では、ペイロードは、治療部分である。特定の実施形態では、ペイロードは、診断部分、例えば標識である。有用なペイロードは、下記のセクションおよび例にて記載される。
【００６９】
リンカーは、抗体に対する少なくとも１つの結合およびペイロードに対する少なくとも１つの結合を形成する能力がある任意のリンカーであり得る。有用なリンカーは、下記のセクションおよび例にて記載される。
【００７０】
本明細書に提供されるコンジュゲートでは、この抗体は、ＣＤ７４に対して結合特異性を有する任意の抗体であり得る。ＣＤ７４は、任意の種に由来し得る。特定の実施形態では、ＣＤ７４は脊椎動物ＣＤ７４である。特定の実施形態では、ＣＤ７４は哺乳類ＣＤ７４である。特定の実施形態では、ＣＤ７４はヒトＣＤ７４である。特定の実施形態では、ＣＤ７４はマウスＣＤ７４である。特定の実施形態では、ＣＤ７４はカニクイザルＣＤ７４である。
【００７１】
特定の実施形態では、ＣＤ７４に対する抗体は、本明細書に記載の抗体と結合について競合する。特定の実施形態では、ＣＤ７４に対する抗体は、本明細書に記載の抗体と同じエピトープに結合する。
【００７２】
この抗体は、典型的には、複数のポリペプチド鎖を含むタンパク質である。特定の実施形態では、この抗体は、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖を含むヘテロ四量体である。各軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合により、重鎖に連結され得る。各重鎖は、１つ以上の共有ジスルフィド結合により、その他の重鎖に連結され得る。各重鎖および各軽鎖はまた、１つ以上の鎖間ジスルフィド結合を有し得る。当業者に公知の通り、各重鎖は、典型的には、可変ドメイン（ＶＨ）と後続する幾つかの定常ドメインとを含む。各軽鎖は、典型的には、一端に可変ドメイン（ＶＬ）および定常ドメインを含む。当業者に公知の通り、抗体は、典型的には、それらの標的分子、すなわち抗原に対して選択的親和性を有する。
【００７３】
本明細書に提供される抗体は、当業者に公知の任意の抗体型を有し得る。それらは、完全長、または断片であり得る。例示的な完全長抗体として、ＩｇＡ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭなどが挙げられる。例示的な断片として、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆｃ、ｓＦｖなどが挙げられる。
【００７４】
特定の実施形態では、コンジュゲートの抗体は、本明細書に記載のＣＤＲ配列の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む。特定の実施形態では、コンジュゲートの抗体は、本明細書に記載の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。特定の実施形態では、コンジュゲートの抗体は、本明細書に記載の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。特定の実施形態では、コンジュゲートの抗体は、本明細書に記載の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および本明細書に記載の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。特定の実施形態では、コンジュゲートの抗体は、本明細書に記載の対合された重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメイン（ＶＨ−ＶＬペア）を含む。特定の実施形態では、ＣＤ７４に対する抗体はミラツズマブである。
【００７５】
特定の実施形態では、抗体コンジュゲートは、１つ以上の反応基を含む抗体から形成され得る。特定の実施形態では、抗体コンジュゲートは、すべての天然にコードされたアミノ酸を含む抗体から形成され得る。当業者は、幾つかの天然にコードされたアミノ酸が、ペイロードまたはリンカーにコンジュゲート可能な反応基を含むことを理解するであろう。これらの反応基は、システイン側鎖、リジン側鎖、およびアミノ末端基を含む。これらの実施形態では、抗体コンジュゲートは、抗体反応基の残基に連結されたペイロードまたはリンカーを含み得る。これらの実施形態では、ペイロード前駆体またはリンカー前駆体は、抗体反応基との結合を形成する能力がある反応基を含む。典型的な反応基は、マレイミド基、活性化炭酸塩（限定はされないが、ｐ−ニトロフェニルエステルを含む）、活性化エステル（限定はされないが、Ｎ−ヒドロキシサクシニミド、ｐ−ニトロフェニルエステル、およびアルデヒドを含む）を含む。特に有用な反応基は、システインおよびリジン側鎖との結合を形成するため、マレイミドおよびサクシニミド、例えばＮ−ヒドロキシサクシニミドを含む。さらなる反応基が、下記のセクションおよび例にて記載される。
【００７６】
さらなる実施形態では、この抗体は、本明細書に記載の通り、反応基を有する１つ以上の修飾アミノ酸を含む。典型的には、修飾アミノ酸は、天然にコードされたアミノ酸ではない。これらの修飾アミノ酸は、リンカー前駆体またはペイロード前駆体に対して共有結合を形成するのに有用な反応基を含み得る。当業者は、ポリペプチドを修飾アミノ酸に対して共有結合を形成する能力がある任意の分子実体に連結するため、その反応基を用いることができる。したがって、本明細書に提供されるのは、ペイロードに直接的にまたはリンカーを介して間接的に連結された修飾アミノ酸残基を含む抗体を含むコンジュゲートである。例示的な修飾アミノ酸は、下記のセクションにて記載される。一般に、修飾アミノ酸は、相補的反応基を有するリンカーまたはペイロードに対する結合を形成する能力がある反応基を有する。
【００７７】
非天然アミノ酸は、抗体のポリペプチド鎖内の選択された位置に位置づけられる。これらの位置は、非天然アミノ酸との置換のための最適な部位を提供するものとして同定された。各部位は、抗体を産生するための最適な構造、機能および／または方法を伴う非天然アミノ酸を担持する能力がある。
【００７８】
特定の実施形態では、置換のための部位特異的位置は、安定である抗体を提供する。安定性は、当業者にとって明白な任意の技術により測定され得る。
【００７９】
特定の実施形態では、置換のための部位特異的位置は、最適な機能特性を有する抗体を提供する。例えば、この抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を伴わない抗体と比べて、その標的抗原に対する結合親和性の減少をほとんどまたは全く示し得ない。特定の実施形態では、この抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を伴わない抗体と比べて増強された結合を示し得る。
【００８０】
特定の実施形態では、置換のための部位特異的位置は、有利に作製され得る抗体を提供する。例えば、特定の実施形態では、この抗体は、以下で論じられるその合成方法において有利な特性を示す。特定の実施形態では、この抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を伴わない抗体と比べて産生収率の低下をほとんどまたは全く示し得ない。特定の実施形態では、この抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を伴わない抗体と比べて増強された産生収率を示し得る。特定の実施形態では、この抗体は、ｔＲＮＡ抑制の減少を、部位特異的非天然アミノ酸を伴わない抗体と比べてほとんどまたは全く示し得ない。特定の実施形態では、この抗体は、産生において部位特異的非天然アミノ酸を伴わない抗体と比べて増強されたｔＲＮＡ抑制を示し得る。
【００８１】
特定の実施形態では、置換のための部位特異的位置は、有利な溶解度を有する抗体を提供する。特定の実施形態では、この抗体は、溶解度の低下を、部位特異的非天然アミノ酸を伴わない抗体と比べてほとんどまたは全く示し得ない。特定の実施形態では、この抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を伴わない抗体と比べて増強された溶解度を示し得る。
【００８２】
特定の実施形態では、置換のための部位特異的位置は、有利な発現を有する抗体を提供する。特定の実施形態では、この抗体は、発現の減少を、部位特異的非天然アミノ酸を伴わない抗体と比べてほとんどまたは全く示し得ない。特定の実施形態では、この抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を伴わない抗体と比べて増強された発現を示し得る。
【００８３】
特定の実施形態では、置換のための部位特異的位置は、有利なフォールディングを有する抗体を提供する。特定の実施形態では、この抗体は、適切なフォールディングの減少を、部位特異的非天然アミノ酸を伴わない抗体と比べてほとんどまたは全く示し得ない。特定の実施形態では、この抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を伴わない抗体と比べて増強されたフォールディングを示し得る。
【００８４】
特定の実施形態では、置換のための部位特異的位置は、有利なコンジュゲーションが可能な抗体を提供する。下記のように、幾つかの非天然アミノ酸は、この抗体の第２の薬剤への直接的なまたはリンカーを介したコンジュゲーションを促進する側鎖または官能基を有する。特定の実施形態では、この抗体は、他の位置に同じまたは他の非天然アミノ酸を伴わない抗体と比べて増強されたコンジュゲーション効率を示し得る。特定の実施形態では、この抗体は、他の位置に同じまたは他の非天然アミノ酸を伴わない抗体と比べて増強されたコンジュゲーション収率を示し得る。特定の実施形態では、この抗体は、他の位置に同じまたは他の非天然アミノ酸を伴わない抗体と比べて増強されたコンジュゲーション特異性を示し得る。
【００８５】
１つ以上の非天然アミノ酸は、この抗体の少なくとも１つのポリペプチド鎖内の選択された部位特異的位置に位置づけられる。ポリペプチド鎖は、限定はされないが、いずれかの軽鎖またはいずれかの重鎖を含む抗体の任意のポリペプチド鎖であり得る。部位特異的位置は、任意の可変ドメインおよび任意の定常ドメインを含む、この抗体の任意のドメイン内に存在し得る。
【００８６】
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、部位特異的位置に１つの非天然アミノ酸を含む。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、部位特異的位置に２つの非天然アミノ酸を含む。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、部位特異的位置に３つの非天然アミノ酸を含む。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、部位特異的位置に３つを超える非天然アミノ酸を含む。
【００８７】
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａまたはＥＵ付番スキームに準じた重鎖または軽鎖残基ＨＣ−Ｆ４０４、ＨＣ−Ｋ１２１、ＨＣ−Ｙ１８０、ＨＣ−Ｆ２４１、ＨＣ−２２１、ＬＣ−Ｔ２２、ＬＣ−Ｓ７、ＬＣ−Ｎ１５２、ＬＣ−Ｋ４２、ＬＣ−Ｅ１６１、ＬＣ−Ｄ１７０、ＨＣ−Ｓ１３６、ＨＣ−Ｓ２５、ＨＣ−Ａ４０、ＨＣ−Ｓ１１９、ＨＣ−Ｓ１９０、ＨＣ−Ｋ２２２、ＨＣ−Ｒ１９、ＨＣ−Ｙ５２、またはＨＣ−Ｓ７０からなる群から選択される１つ以上の位置に、１つ以上の非天然アミノ酸、またはその翻訳後修飾変異体を含む。これらの指定では、ＨＣは重鎖残基を示し、ＬＣは軽鎖残基を示す。
【００８８】
特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、式（Ｃ１）または（Ｃ２）：
【化４】
2019506385.tif 000009
に従うコンジュゲートまたはその薬学的に許容できる塩、溶媒和化合物、立体異性体、位置異性体、または互変異性体（式中、
ＣＯＭＰは、抗ＣＤ７４抗体の残基であり；
ＰＡＹはペイロード部分であり；
Ｗ１、Ｗ２、Ｗ３、Ｗ４、およびＷ５は、各々独立して、単結合、不在、または二価付着基であり；
ＥＧは、不在、またはエリミネーター基(eliminator  group)であり；
任意選択的な各ＲＴは、式（Ｃ１）または（Ｃ２）の骨格内のまたはＥＧに結合された、放出誘発基(release  trigger  group)であり；
ＨＰは、単結合、不在、または二価親水性基であり；
ＳＧは、単結合、不在、または二価スペーサー基であり；かつ
Ｒは、水素、末端コンジュゲート基、または末端コンジュゲート基の二価残基である）
である。
【００８９】
付着基
付着基は、エリミネーター基、放出誘発基、疎水性基、スペーサー基、および／またはコンジュゲート基の化合物への取り込みを促進する。有用な付着基は、当業者にとって公知であり、かつ明白である。有用な付着基の例が本明細書に提供される。特定の実施形態では、付着基は、Ｗ１、Ｗ２、Ｗ３、Ｗ４、またはＷ５と名付けられる。特定の実施形態では、付着基は、二価ケトン、二価エステル、二価エーテル、二価アミド、二価アミン、アルキレン、アリレン、スルフィド、ジスルフィド、カルボニルエン、またはそれらの組み合わせを含み得る。特定の実施形態では、付着基は、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキル−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＳＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨ−、−ＮＨ−アルキル−、−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、またはその反転（例えば、−ＮＨＣ（Ｏ）−）、またはそれらの組み合わせを含み得る。
【００９０】
エリミネーター基
エリミネーター基は、インビボおよび／またはインビトロで、本明細書に記載の化合物またはコンジュゲートの生物活性部分の、化合物またはコンジュゲートの残りからの分離を促進する。エリミネーター基はまた、放出誘発基と併せて、本明細書に記載の化合物またはコンジュゲートの生物活性部分の分離を促進し得る。例えば、エリミネーター基および放出誘発基は、インビボおよび／またはインビトロで本明細書に記載の化合物またはコンジュゲートの生物活性部分を化合物またはコンジュゲートから放出するための放出反応において反応し得る。放出誘発による放出反応の開始時、エリミネーター基は、生物活性部分、または生物活性部分のプロドラッグ形態を切断し、生物活性部分の活性に対してさらなる作用を有しない安定な非毒性実体を形成する。
【００９１】
特定の実施形態では、エリミネーター基は、本明細書中でＥＧと名付けられる。有用なエリミネーター基は、本明細書に記載のものを含む。特定の実施形態では、エリミネーター基は、
【化５】
2019506385.tif 000010
（式中、ＲＥＧは、水素、アルキル、ビフェニル、−ＣＦ３、−ＮＯ２、−ＣＮ、フルオロ、ブロモ、クロロ、アルコキシル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）−およびジアルキルアミノＣ（Ｏ）−からなる群から選択される）である。各構造では、フェニル環は、１つ、２つ、３つ、または場合によっては４つのＲＥＧ基に結合され得る。第２および第３の構造では、当業者は、上記の式（Ｃ１）に表示される通り、式（Ｃ１）の骨格内に位置しないＲＴにＥＧが結合されることを理解するであろう。一部の実施形態では、ＲＥＧは、水素、アルキル、ビフェニル、−ＣＦ３、アルコキシル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）−およびジアルキルアミノＣ（Ｏ）−からなる群から選択される。さらなる実施形態では、ＲＥＧは、水素、−ＮＯ２、−ＣＮ、フルオロ、ブロモ、およびクロロからなる群から選択される。特定の実施形態では、エリミネーター基は、
【化６】
2019506385.tif 000011
である。特定の実施形態では、エリミネーター基は、
【化７】
2019506385.tif 000012
である。特定の実施形態では、エリミネーター基は、
【化８】
2019506385.tif 000013
である。
【００９２】
放出誘発基
放出誘発基は、インビボおよび／またはインビトロで、本明細書に記載の化合物またはコンジュゲートの生物活性部分の、化合物またはコンジュゲートの残りからの分離を促進する。放出誘発基はまた、エリミネーター基と併せて本明細書に記載の化合物またはコンジュゲートの生物活性部分の分離を促進し得る。例えば、エリミネーター基および放出誘発基は、インビボおよび／またはインビトロで本明細書に記載の化合物またはコンジュゲートの生物活性部分を化合物またはコンジュゲートから放出するための放出反応において反応し得る。特定の実施形態では、放出誘発は、高い腫瘍：非腫瘍の特異性を伴う生物学的に駆動される反応、例えば腫瘍環境下で過剰発現される酵素のタンパク質分解作用を通じて作用し得る。
【００９３】
特定の実施形態では、放出誘発基は、本明細書中でＲＴと名付けられる。特定の実施形態では、ＲＴは、二価であり、式（Ｃ１）の骨格内で結合される。他の実施形態では、ＲＴは、一価であり、上で表される通り、ＥＧに結合される。有用な放出誘発基は、本明細書に記載のものを含む。特定の実施形態では、放出誘発基は、天然もしくは非天然アミノ酸の残基または糖環の残基を含む。特定の実施形態では、放出誘発基は、
【化９】
2019506385.tif 000014
である。当業者は、第１の構造が二価であり、式（Ｃ１）の骨格内でまたは式（Ｃ２）に表される通りに結合され得、また第２の構造が一価であり、上の式（Ｃ１）に表される通りにＥＧに結合され得ることを理解するであろう。特定の実施形態では、放出誘発基は、
【化１０】
2019506385.tif 000015
である。特定の実施形態では、放出誘発基は、
【化１１】
2019506385.tif 000016
である。
【００９４】
親水性基
親水性基は、本明細書に記載の化合物の親水性の増加を促進する。親水性の増加が水溶液、例えば生体系にて見出される水溶液中での溶解度の増加を可能にすると考えられる。親水性基はまた、スペーサー基として機能し、それは本明細書でさらに詳述される。
【００９５】
特定の実施形態では、親水性基は、本明細書中でＨＰと名付けられる。有用な親水性基は、本明細書に記載のものを含む。特定の実施形態では、親水性基は、二価ポリ（エチレングリコール）である。特定の実施形態では、親水性基は、式：
【化１２】
2019506385.tif 000017
（式中、ｍは、１〜１２、任意選択的には１〜４、任意選択的には２〜４の整数である）に従う二価ポリ（エチレングリコール）である。
【００９６】
一部の実施形態では、親水性基は、以下の式：
【化１３】
2019506385.tif 000018
を有する二価ポリ（エチレングリコール）である。
【００９７】
一部の他の実施形態では、親水性基は、以下の式：
【化１４】
2019506385.tif 000019
を有する二価ポリ（エチレングリコール）である。
【００９８】
他の実施形態では、親水性基は、以下の式：
【化１５】
2019506385.tif 000020
を有する二価ポリ（エチレングリコール）である。
【００９９】
他の実施形態では、親水性基は、以下の式：
【化１６】
2019506385.tif 000021
を有する二価ポリ（エチレングリコール）である。
【０１００】
スペーサー基
スペーサー基は、コンジュゲート基の本明細書に記載の化合物の他の基からのスペーシングを促進する。このスペーシングは、本明細書に記載の化合物の第２の化合物へのより効率的なコンジュゲーションをもたらし得る。スペーサー基はまた、コンジュゲート基を安定化させ得る。
【０１０１】
特定の実施形態では、スペーサー基は、本明細書中でＳＰと名付けられる。有用なスペーサー基は、本明細書に記載のものを含む。特定の実施形態では、スペーサー基は、
【化１７】
2019506385.tif 000022
である。特定の実施形態では、スペーサー基、Ｗ４、および親水性基が組み合わさり、式：
【化１８】
2019506385.tif 000023
（式中、ｍは、１〜１２、任意選択的には１〜４、任意選択的には２〜４の整数である）に従う二価ポリ（エチレングリコール）を形成する。
【０１０２】
一部の実施形態では、ＳＰは、
【化１９】
2019506385.tif 000024
である。
【０１０３】
一部の実施形態では、二価ポリ（エチレングリコール）は、以下の式：
【化２０】
2019506385.tif 000025
を有する。
【０１０４】
一部の他の実施形態では、二価ポリ（エチレングリコール）は、以下の式：
【化２１】
2019506385.tif 000026
を有する。
【０１０５】
他の実施形態では、二価ポリ（エチレングリコール）は、以下の式：
【化２２】
2019506385.tif 000027
を有する。
【０１０６】
他の実施形態では、二価ポリ（エチレングリコール）は、以下の式：
【化２３】
2019506385.tif 000028
を有する。
【０１０７】
コンジュゲート基およびその残基
コンジュゲート基は、本明細書に記載の化合物の第２の化合物、例えば標的化部分へのコンジュゲーションを促進する。特定の実施形態では、コンジュゲート基は、本明細書中でＲと名付けられる。コンジュゲート基は、当業者に公知の任意の好適な反応機構を介して反応し得る。特定の実施形態では、コンジュゲート基は、本明細書中で詳述される通り、［３＋２］アルキン−アジド環化付加反応、逆電子要請型ディールス・アルダーライゲーション反応、チオール−求電子試薬反応、またはカルボニル−オキシアミン反応を通じて反応する。特定の実施形態では、コンジュゲート基は、アルキン、歪んだアルキン、テトラジン、チオール、パラ−アセチル−フェニルアラニン残基、オキシアミン、マレイミド、またはアジドを含む。特定の実施形態では、コンジュゲート基は、
【化２４】
2019506385.tif 000029
、−Ｎ３、または−ＳＨである（式中、Ｒ２０１は低級アルキルである）。一実施形態では、Ｒ２０１は、メチル、エチル、またはプロピルである。一実施形態では、Ｒ２０１はメチルである。追加的なコンジュゲート基は、例えば、米国特許出願公開第２０１４／０３５６３８５号、米国特許出願公開第２０１３／０１８９２８７号、米国特許出願公開第２０１３／０２５１７８３号、米国特許第８，７０３，９３６号、米国特許第９，１４５，３６１号、米国特許第９，２２２，９４０号、および米国特許第８，４３１，５５８号に記載されている。
【０１０８】
コンジュゲーション後、コンジュゲート基の二価残基が形成され、第２の化合物の残基に結合される。二価残基の構造は、コンジュゲートの形成に用いられるコンジュゲーション反応のタイプにより判定される。
【０１０９】
特定の実施形態では、コンジュゲートが［３＋２］アルキン−アジド環化付加反応を通じて形成されるとき、コンジュゲート基の二価残基は、トリアゾール環またはトリアゾール環を含む融合環式基を含む。特定の実施形態では、コンジュゲートが［３＋２］アルキン−アジド環化付加反応を通じて形成されるとき、コンジュゲート基の二価残基は、
【化２５】
2019506385.tif 000030
である。
【０１１０】
一実施形態では、本明細書に提供されるのは、以下の式：
【化２６】
2019506385.tif 000031
（式中、ＣＯＭＰは抗ＣＤ７４抗体の残基を示し、ＰＡＹはペイロード部分を示す）のいずれかに従うコンジュゲートである。
【０１１１】
一実施形態では、本明細書に提供されるのは、式１０１ａ〜１０４ｂ
【化２７】
2019506385.tif 000032
【化２８】
2019506385.tif 000033
【化２９】
2019506385.tif 000034
（式中、ＣＯＭＰは抗ＣＤ７４抗体の残基を示し、ＰＡＹはペイロード部分を示す）のいずれかに従うコンジュゲートである。
【０１１２】
特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、式１０１ａ〜１０４ｂ（式中、ＣＯＭＰは下記の式（３０）に記載の非天然アミノ酸残基を示す）のいずれかに記載の抗ＣＤ７４コンジュゲートである。特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＥＵ付番系に準じた重鎖位置４０４での、式１０１ａ〜１０４ｂ（式中、ＣＯＭＰは下記の式（３０）に記載の非天然アミノ酸残基を示す）のいずれかに記載の抗ＣＤ７４コンジュゲートである。特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＥＵ付番系に準じた重鎖位置２４１での、式１０１ａ〜１０４ｂ（式中、ＣＯＭＰは下記の式（３０）に記載の非天然アミノ酸残基を示す）のいずれかに記載の抗ＣＤ７４コンジュゲートである。特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供されるのは、ＥＵ付番系に準じた重鎖位置２２２での、式１０１ａ〜１０４ｂ（式中、ＣＯＭＰは下記の式（３０）に記載の非天然アミノ酸残基を示す）のいずれかに記載の抗ＣＤ７４コンジュゲートである。特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａ付番系に準じた軽鎖位置７での、式１０１ａ〜１０４ｂ（式中、ＣＯＭＰは下記の式（３０）に記載の非天然アミノ酸残基を示す）のいずれかに記載の抗ＣＤ７４コンジュゲートである。特定の実施形態では、ＰＡＹは、メイタンシン、ヘミアステリン、アマニチン、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、およびモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）からなる群から選択される。特定の実施形態では、ＰＡＹはメイタンシンである。特定の実施形態では、ＰＡＹはヘミアステリンである。特定の実施形態では、ＰＡＹはアマニチンである。特定の実施形態では、ＰＡＹはＭＭＡＦである。特定の実施形態では、ＰＡＹはＭＭＡＥである。
【０１１３】
特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、式１０１ａ〜１０４ｂ（式中、ＣＯＭＰは下記の式（５６）に記載の非天然アミノ酸残基を示す）のいずれかに記載の抗ＣＤ７４コンジュゲートである。特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＥＵ付番系に準じた重鎖位置４０４での、式１０１ａ〜１０４ｂ（式中、ＣＯＭＰは下記の式（５６）に記載の非天然アミノ酸残基を示す）のいずれかに記載の抗ＣＤ７４コンジュゲートである。特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＥＵ付番系に準じた重鎖位置２４１での、式１０１ａ〜１０４ｂ（式中、ＣＯＭＰは下記の式（５６）に記載の非天然アミノ酸残基を示す）のいずれかに記載の抗ＣＤ７４コンジュゲートである。特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＥＵ付番系に準じた重鎖位置２２２での、式１０１ａ〜１０４ｂ（式中、ＣＯＭＰは下記の式（５６）に記載の非天然アミノ酸残基を示す）のいずれかに記載の抗ＣＤ７４コンジュゲートである。特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａ付番系に準じた軽鎖位置７での、式１０１ａ〜１０４ｂ（式中、ＣＯＭＰは下記の式（５６）に記載の非天然アミノ酸残基を示す）のいずれかに記載の抗ＣＤ７４コンジュゲートである。特定の実施形態では、ＰＡＹは、メイタンシン、ヘミアステリン、アマニチン、ＭＭＡＦ、およびＭＭＡＥからなる群から選択される。特定の実施形態では、ＰＡＹはメイタンシンである。特定の実施形態では、ＰＡＹはヘミアステリンである。特定の実施形態では、ＰＡＹはアマニチンである。特定の実施形態では、ＰＡＹはＭＭＡＦである。特定の実施形態では、ＰＡＹはＭＭＡＥである。
【０１１４】
特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、式１０１ａ〜１０４ｂ（式中、ＣＯＭＰは非天然アミノ酸残基パラ−アジド−Ｌ−フェニルアラニンを示す）のいずれかに記載の抗ＣＤ７４コンジュゲートである。特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＥＵ付番系に準じた重鎖位置４０４での、式１０１ａ〜１０４ｂ（式中、ＣＯＭＰは非天然アミノ酸残基パラ−アジド−Ｌ−フェニルアラニンを示す）のいずれかに記載の抗ＣＤ７４コンジュゲートである。特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＥＵ付番系に準じた重鎖位置２４１での、式１０１ａ〜１０４ｂ（式中、ＣＯＭＰは非天然アミノ酸残基パラ−アジド−Ｌ−フェニルアラニンを示す）のいずれかに記載の抗ＣＤ７４コンジュゲートである。特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＥＵ付番系に準じた重鎖位置２２２での、式１０１ａ〜１０４ｂ（式中、ＣＯＭＰは非天然アミノ酸残基パラ−アジド−Ｌ−フェニルアラニンを示す）のいずれかに記載の抗ＣＤ７４コンジュゲートである。特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａ付番系に準じた軽鎖位置７での、式１０１ａ〜１０４ｂ（式中、ＣＯＭＰは非天然アミノ酸残基パラ−アジド−Ｌ−フェニルアラニンを示す）のいずれかに記載の抗ＣＤ７４コンジュゲートである。特定の実施形態では、ＰＡＹは、メイタンシン、ヘミアステリン、アマニチン、ＭＭＡＦ、およびＭＭＡＥからなる群から選択される。特定の実施形態では、ＰＡＹはメイタンシンである。特定の実施形態では、ＰＡＹはヘミアステリンである。特定の実施形態では、ＰＡＹはアマニチンである。特定の実施形態では、ＰＡＹはＭＭＡＦである。特定の実施形態では、ＰＡＹはＭＭＡＥである。
【０１１５】
３．ペイロード
分子ペイロードは、当業者がポリペプチドにコンジュゲートすることを望み得る任意の分子実体であり得る。特定の実施形態では、ペイロードは、治療部分である。かかる実施形態では、抗体コンジュゲートを用いて、治療部分をその分子標的に標的化することができる。特定の実施形態では、ペイロードは、標識部分である。かかる実施形態では、抗体コンジュゲートを用いて、ポリペプチドのその標的への結合を検出することができる。特定の実施形態では、ペイロードは、細胞傷害性部分である。かかる実施形態では、抗体コンジュゲートを用いて、細胞傷害性部分を異常細胞、例えばがん細胞に標的化することで、細胞の破壊または除去が開始され得る。当業者にとって明白な他の分子ペイロードを含むコンジュゲートは、本明細書に記載のコンジュゲートの範囲内に含まれる。
【０１１６】
特定の実施形態では、抗体コンジュゲートは、標識、色素、ポリマー、水溶性ポリマー、ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールの誘導体、光架橋剤、細胞傷害性化合物、放射性核種、薬剤、親和性標識、光親和性標識、反応性化合物、樹脂、第２のタンパク質またはポリペプチドまたはポリペプチド類似体、抗体または抗体断片、金属キレート剤、補助因子、脂肪酸、炭水化物、ポリヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、アンチセンスポリヌクレオチド、ペプチド、水溶性デンドリマー、シクロデキストリン、阻害リボ核酸、生体材料、ナノ粒子、スピン標識、フルオロフォア、金属含有部分、放射性部分、新規な官能基、他の分子と共有結合的または非共有結合的に相互作用する基、光ケージド化部分、光異性化可能部分、ビオチン、ビオチンの誘導体、ビオチン類似体、重原子を取り込む部分、化学的に切断可能な基、光切断可能な基、細長い側鎖、炭素結合糖、レドックス活性剤、アミノチオ酸、毒性部分、同位体標識部分、生物物理学的プローブ、燐光基、化学発光基、高電子密度基、磁気基、挿入基、発色団、エネルギー移動剤、生物活性剤、検出可能標識、小分子、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるペイロードを有し得る。一実施形態では、ペイロードは、標識、色素、ポリマー、細胞傷害性化合物、放射性核種、薬剤、親和性標識、樹脂、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチド類似体、抗体、抗体断片、金属キレート剤、補助因子、脂肪酸、炭水化物、ポリヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ペプチド、フルオロフォア、または炭素結合糖である。別の実施形態では、ペイロードは、標識、色素、ポリマー、薬剤、抗体、抗体断片、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはペプチドである。
【０１１７】
有用な薬物ペイロードは、任意の細胞傷害性剤、細胞分裂停止剤または免疫調節剤を含む。細胞傷害性剤または免疫調節剤の有用なクラスは、例えば、抗チューブリン剤、アウリスタチン、ＤＮＡ小溝結合剤、ＤＮＡ複製阻害剤、アルキル化剤（例えば、白金錯体シス−プラチン、モノ（白金）、ビス（白金）および三核白金錯体およびカルボプラチン）、アントラサイクリン、抗生物質、葉酸代謝拮抗薬、代謝拮抗薬、カルモデュリン阻害剤、化学療法増感剤、デュオカルマイシン、エトポシド、フッ素化ピリミジン、イオノフォア、レキシトロプシン、マイタンシノイド、ニトロソウレア、プラチノール、孔形成化合物、プリン代謝拮抗薬、ピューロマイシン、放射線増感剤、ラパマイシン、ステロイド、タキサン、トポイソメラーゼ阻害剤、ビンカアルカロイド、などを含む。
【０１１８】
個別の細胞傷害性剤または免疫調節剤として、例えば、アンドロゲン、アントラマイシン（ＡＭＣ）、アスパラギナーゼ、５−アザシチジン、アザチオプリン、ブレオマイシン、ブスルファン、ブチオニンスルホキシミン、カリケアマイシン、カリケアマイシン誘導体、カンプトテシン、カルボプラチン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ＣＣ−１０６５、クロラムブシル、シスプラチン、コルヒチン、シクロホスファミド、シタラビン、シチジンアラビノシド、サイトカラシンＢ、ダカルバジン、ダクチノマイシン（前アクチノマイシン）、ダウノルビシン、デカルバジン、ＤＭ１、ＤＭ４、ドセタキセル、ドキソルビシン、エトポシド、エストロゲン、５−フルオロデオキシウリジン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、グラミシジンＤ、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メイタンシン、メクロレタミン、メルファラン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、ミスラマイシン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ニトロイミダゾール、パクリタキセル、パリトキシン、プリカマイシン、プロカルバジン、リゾキシン、ストレプトゾトシン、テノポシド、６−チオグアニン、チオテパ、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ＶＰ−１６およびＶＭ−２６が挙げられる。
【０１１９】
一部の実施形態では、好適な細胞毒として、例えば、ＤＮＡ小溝結合剤（例えば、エンジインおよびレキシトロプシン、ＣＢＩ化合物；米国特許第６，１３０，２３７号も参照のこと）、デュオカルマイシン、タキサン（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）、ピューロマイシン、ビンカアルカロイド、ＣＣ−１０６５、ＳＮ−３８、トポテカン、モルホリノ−ドキソルビシン、リゾキシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、エキノマイシン、コンブレタスタチン、ネトロプシン、エポチロンＡおよびＢ、エストラムスチン、クリプトフィシン、セマドチン、マイタンシノイド、ディスコデルモリド、エリュテロビン、およびミトキサントロンが挙げられる。
【０１２０】
一部の実施形態では、ペイロードは、抗チューブリン剤である。抗チューブリン剤の例として、限定はされないが、タキサン（例えば、Taxol（登録商標）（パクリタキセル）、Taxotere（登録商標）（ドセタキセル））、T67（Ｔｕｌａｒｉｋ）およびビンカアルキロイド(vinca alkyloids)（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、およびビノレルビン）が挙げられる。他の抗チューブリン剤として、例えば、バッカチン誘導体、タキサン類似体、エポチロン（例えば、エポチロンＡおよびＢ）、ノコダゾール、コルヒチンおよびコルシミド、エストラムスチン、クリプトフィシン、セマドチン、マイタンシノイド、コンブレタスタチン、ディスコデルモリド、およびエリュテロビンが挙げられる
【０１２１】
特定の実施形態では、細胞毒は、抗チューブリン剤のもう１つの基のマイタンシノイドである。例えば、具体的な実施形態では、マイタンシノイドは、メイタンシンまたはＤＭ−１であり得る（ImmunoGen, Inc.；Chari et al., 1992, Cancer Res. 52:127-131も参照のこと）。
【０１２２】
一部の実施形態では、ペイロードは、アウリスタチン、例えばアウリスタチンＥまたはその誘導体である。例えば、アウリスタチンＥ誘導体は、アウリスタチンＥとケト酸との間で形成されるエステルであり得る。例えば、アウリスタチンＥは、パラアセチル安息香酸またはベンゾイル吉草酸と反応し、ＡＥＢおよびＡＥＶＢを各々生成し得る。他の典型的なアウリスタチン誘導体は、ＡＦＰ（アウリスタチンフェニルアラニンフェニレンジアミン）、ＭＭＡＦ（モノメチルアウリスタチンＦ）、およびＭＭＡＥ（モノメチルアウリスタチンＥ）を含む。アウリスタチン誘導体の合成および構造については、米国特許出願公開第２００３−００８３２６３号、米国特許出願公開第２００５−０２３８６４９号および米国特許出願公開第２００５−０００９７５１号；国際特許公開の国際公開第０４／０１０９５７号、国際特許公開の国際公開第０２／０８８１７２号、および米国特許第６，３２３，３１５号；米国特許第６，２３９，１０４号；米国特許第６，０３４，０６５号；米国特許第５，７８０，５８８号；米国特許第５，６６５，８６０号；米国特許第５，６６３，１４９号；米国特許第５，６３５，４８３号；米国特許第５，５９９，９０２号；米国特許第５，５５４，７２５号；米国特許第５，５３０，０９７号；米国特許第５，５２１，２８４号；米国特許第５，５０４，１９１号；米国特許第５，４１０，０２４号；米国特許第５，１３８，０３６号；米国特許第５，０７６，９７３号；米国特許第４，９８６，９８８号；米国特許第４，９７８，７４４号；米国特許第４，８７９，２７８号；米国特許第４，８１６，４４４号；および米国特許第４，４８６，４１４号に記載されている。
【０１２３】
一部の実施形態では、ペイロードは、放射性同位元素ではない。一部の実施形態では、ペイロードは、放射性ではない。
【０１２４】
一部の実施形態では、ペイロードは、代謝拮抗物質である。代謝拮抗物質は、例えば、プリン拮抗剤（例えば、アゾチオプリン(azothioprine)またはミコフェノール酸モフェチル）、ジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤（例えば、メトトレキサート）、アシクロビル、ガンシクロビル、ジドブジン、ビダラビン、リババリン、アジドチミジン、シチジンアラビノシド、アマンタジン、ジデオキシウリジン、ヨードデオキシウリジン、ポスカルネット、またはトリフルリジンであり得る。
【０１２５】
他の実施形態では、ペイロードは、タクロリムス、シクロスポリン、ＦＵ５０６またはラパマイシンである。さらなる実施形態では、薬剤は、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アルトレタミン、アミホスチン、アナストロゾール、三酸化ヒ素、ベキサロテン、ベキサロテン、カルステロン、カペシタビン、セレコキシブ、クラドリビン、ダルベポエチンα、デニロイキンジフチトクス、デクスラゾキサン、ドロモスタノロンプロピオン酸塩、エピルビシン、エポエチンα、エストラムスチン、エキセメスタン、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルダラビン、フルベストラント、ゲムシタビン、ゲムツズマブオゾガマイシン(MYLOTARG)、ゴセレリン、イダルビシン、イホスファミド、メシル酸イマチニブ、インターフェロンα−２ａ、イリノテカン、レトロゾール、ロイコボリン、レバミソール、メクロレタミンまたはナイトロジェンマスタード、メゲストロール、メスナ、メトトレキサート、メトキサレン、マイトマイシンＣ、ミトタン、フェンプロピオン酸ナンドロロン、オプレルベキン、オキサリプラチン、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペグアスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、プロカルバジン、キナクリン、ラスブリカーゼ、リツキシマブ、サルグラモスチム、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ(HERCEPTIN)、トレチノイン、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビンまたはゾレドロン酸である。
【０１２６】
一部の実施形態では、ペイロードは、免疫調節剤である。免疫調節剤は、例えば、ガンシクロビル、エタネルセプト、タクロリムス、シクロスポリン、ラパマイシン、シクロホスファミド、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチルまたはメトトレキサートであり得る。あるいは、免疫調節剤は、例えば、グルココルチコイド（例えば、コルチゾールまたはアルドステロン）またはグルココルチコイド類似体（例えば、プレドニゾンまたはデキサメタゾン）であり得る。
【０１２７】
一部の実施形態では、免疫調節剤は、抗炎症剤、例えば、アリールカルボキシル誘導体、ピラゾール含有誘導体、オキシカム誘導体およびニコチン酸誘導体である。抗炎症剤のクラスとして、例えば、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、およびロイコトリエン受容体拮抗剤が挙げられる。
【０１２８】
好適なシクロオキシゲナーゼ阻害剤は、メクロフェナム酸、メフェナム酸、カプロフェン、ジクロフェナク、ジフルニサル、フェンブフェン、フェノプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ナブメトン、スリンダク、テノキシカムおよびトルメチンを含む。
【０１２９】
好適なリポキシゲナーゼ阻害剤は、レドックス阻害剤（例えば、カテコールブタン誘導体、ノルジヒドログアヤレチン酸（ＮＤＧＡ）、マソプロコール、フェニドン、イアノパレン、インダゾリノン、ナファザトロム、ベンゾフラノール、アルキルヒドロキシルアミン）、および非レドックス阻害剤（例えば、ヒドロキシチアゾール、メトキシアルキルチアゾール、ベンゾピランおよびその誘導体、メトキシテトラヒドロピラン、ボスウェリン酸およびボスウェリン酸のアセチル化誘導体、およびシクロアルキルラジカルで置換されたキノリンメトキシフェニル酢酸）、およびレドックス阻害剤の前駆体を含む。
【０１３０】
他の好適なリポキシゲナーゼ阻害剤として、抗酸化剤（例えば、フェノール、没食子酸プロピル、フラボノイドおよび／またはフラボノイドを含有する天然基質、フラボンのヒドロキシル化誘導体、フラボノール、ジヒドロクエルセチン、ルテオリン、ガランギン、オロボール、カルコンの誘導体、４，２’，４’−トリヒドロキシカルコン、オルト−アミノフェノール、Ｎ−ヒドロキシ尿素、ベンゾフラノール、エブセレンおよび還元セレン含有酵素の活性を増強する種）、鉄キレート剤（例えば、ヒドロキサム酸およびその誘導体、Ｎ−ヒドロキシ尿素、２−ベンジル−１−ナフトール、カテコール、ヒドロキシルアミン、カルノソールトロロックスＣ、カテコール、ナフトール、スルファサラジン、ジロイトン、５−ヒドロキシアントラニル酸および４−（オメガ−アリールアルキル）フェニルアルカン酸）、イミダゾール含有化合物（例えば、ケトコナゾールおよびイトラコナゾール）、フェノチアジン、およびベンゾピラン誘導体が挙げられる。
【０１３１】
さらに他の好適なリポキシゲナーゼ阻害剤として、エイコサノイドの阻害剤（例えば、オクタデカテトラエン酸、エイコサテトラエン酸、ドコサペンタエン酸、エイコサヘキサエン酸およびドコサヘキサエン酸およびそれらのエステル、ＰＧＥ１（プロスタグランジンＥ１）、ＰＧＡ２（プロスタグランジンＡ２）、ビプロストール、１５−モノヒドロキシエイコサテトラエン酸、１５−モノヒドロキシ−エイコサトリエン酸および１５−モノヒドロキシエイコサペンタエン酸、およびロイコトリエンＢ５、Ｃ５およびＤ５）、カルシウム流に干渉する化合物、フェノチアジン、ジフェニルブチルアミン、ベラパミル、フスコシド、クルクミン、クロロゲン酸、コーヒー酸、５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸（ＥＴＹＡ）、ヒドロキシフェニルレチナミド、イオナパレン、エスクリン、ジエチルカルバマジン、フェナントロリン、バイカレイン、プロキシクロミル、チオエーテル、ジアリルスルフィドおよびジ−（１−プロペニル）スルフィドが挙げられる。
【０１３２】
ロイコトリエン受容体拮抗剤として、カルシトリオール、オンタゾラスト、Bayer Bay-x-1005、Ciba-Geigy CGS-25019C、エブセレン、Leo Denmark ETH-615、Lilly LY-293111、Ono ONO-4057、Terumo TMK-688、Boehringer Ingleheim BI-RM-270、Lilly LY 213024、Lilly LY 264086、Lilly LY 292728、Ono ONO LB457、Pfizer 105696、Perdue Frederick PF 10042、Rhone-Poulenc Rorer RP 66153、SmithKline Beecham SB-201146、SmithKline Beecham SB-201993、SmithKline Beecham SB-209247、Searle SC-53228、Sumitamo SM 15178、American Home Products WAY 121006、Bayer Bay-o-8276、Warner-Lambert CI-987、Warner-Lambert CI-987BPC-15LY 223982、Lilly LY 233569、Lilly LY-255283、MacroNex MNX-160、Merck and Co. MK-591、Merck and Co. MK-886、Ono ONO-LB-448、Purdue Frederick PF-5901、Rhone-Poulenc Rorer RG14893、Rhone-Poulenc Rorer RP 66364、Rhone-Poulenc Rorer RP 69698、Shionoogi S-2474、Searle SC-41930、Searle SC-50505、Searle SC-51146、Searle SC-52798、SmithKline Beecham SK&F-104493、Leo Denmark SR 2566、Tanabe T-757およびTeijin TEI-1338が挙げられる。
【０１３３】
他の有用な薬物ペイロードは、がんの治療において有用な化合物を含む。化学療法剤の例として、エルロチニブ(TARCEVA（登録商標）, Genentech/OSI Pharm.)、ボルテゾミブ(VELCADE（登録商標）, Millennium Pharm.)、フルベストラント(FASLODEX（登録商標）, AstraZeneca)、Sutent (SU11248, Pfizer)、レトロゾール(FEMARA（登録商標）, Novartis)、メシル酸イマチニブ(GLEEVEC（登録商標）, Novartis)、PTK787/ZK 222584 (Novartis)、オキサリプラチン(Eloxatin（登録商標）, Sanofi)、５−ＦＵ（５−フルオロウラシル）、ロイコボリン、ラパマイシン(Sirolimus, RAPAMUNE（登録商標）, Wyeth)、ラパチニブ(TYKERB（登録商標）, GSK572016, Glaxo Smith Kline)、ロナファーニブ(SCH 66336)、ソラフェニブ(BAY43-9006, Bayer Labs)、およびゲフィチニブ(IRESSA（登録商標）, AstraZeneca)、AG1478、AG1571 (SU 5271; Sugen)、アルキル化剤、例えばチオテパおよびCYTOXAN（登録商標）シクロスホスファミド；スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパ；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチロロメラミンを含むエチレンイミンおよびメチラメラミン；アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトセシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；CC-1065（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびバイゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、KW-2189およびCB1-TM1を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロマファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノブエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムヌスチン；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンγ１ＩおよびカリケアマイシンωＩ１(Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33:183-186)；ジネマイシン、例えばジネマイシンＡ；ビスホスホネート、例えばクロドロネート；エスペラマイシン；ならびにネオカルチノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ADRIAMYCIN（登録商標）（ドキソルビシン）、モルフォリノ−ドキソルビシン、シアノモルフォリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えばマイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマ���シン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；抗代謝産物、例えば、メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアムニプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充剤(folic acid replenisher)、例えば、フロリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルチン；ジアジコン；エルホルミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；マイタンシノイド、例えば、メイタンシンおよびアンサマイトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；PSK（登録商標）多糖複合体(JHS Natural Products, Eugene, Oreg.)；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテシン（特に、Ｔ−２トキシン、ベラクリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ara-C」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、TAXOL（パクリタキセル；Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.）、ABRAXANE（登録商標）（Cremophor不含）、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Ill.)、およびTAXOTERE（登録商標）（ドキセタキセル；Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France）；クロラムブシル；GEMZAR（登録商標）（ゲムシタビン）；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；プラチナ類似体、例えばシスプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；エトポシド(VP-16)；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；NAVELBINE（登録商標）（ビノレルビン）；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン（XELODA（登録商標））；イバンドロネート；CPT-11；トポイソメラーゼ阻害剤RFS 2000；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えばレチノイン酸；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容できる塩、酸および誘導体、が挙げられる。
【０１３４】
他の有用なペイロードは、（ｉ）腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン薬、例えば抗エストロゲンおよび選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、例えば、タモキシフェン（NOLVADEX（登録商標）；クエン酸タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、LY117018、オナプリストン、およびFARESTON（登録商標）（クエン酸トレミフェン）など；（ｉｉ）副腎におけるエストロゲン産生を制御する、酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、MEGASE（登録商標）（メゲストロール酢酸塩）、AROMASIN（登録商標）（エキセメスタン；Pfizer）、ホルメスタニエ、ファドロゾール、RIVISOR（登録商標）（ボロゾール）、FEMARA（登録商標）（レトロゾール；Novartis）、およびARIMIDEX（登録商標）（アナストロゾール；AstraZeneca）など；（ｉｉｉ）抗アンドロゲン、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリド、およびゴセレリン；ならびにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；（ｉｖ）タンパク質キナーゼ阻害剤；（ｖ）脂質キナーゼ阻害剤；（ｖｉ）アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣα、ＲａｌｆおよびＨ−Ｒａｓなど；（ｖｉｉ）リボザイム、例えば、ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えばANGIOZYME（登録商標））およびＨＥＲ２発現阻害剤；（ｖｉｉｉ）ワクチン、例えば、遺伝子療法ワクチン、例えば、ALLOVECTIN（登録商標）、LEUVECTIN（登録商標）、およびVAXID（登録商標）；PROLEUKIN（登録商標）ｒＩＬ−２；トポイソメラーゼ１阻害剤、例えば、LURTOTECAN（登録商標）；ABARELIX（登録商標）ｒｍＲＨ；（ｉｘ）抗血管新生薬、例えばベバシズマブ(AVASTIN（登録商標）、Genentech）；ならびに（ｘ）上記のいずれかの薬学的に許容できる塩、酸および誘導体、を含む。他の抗血管新生薬として、ＭＭＰ−２（マトリックス−メタロプロテイナーゼ２）阻害剤、ＭＭＰ−９（マトリックス−メタロプロテイナーゼ９）阻害剤、ＣＯＸ−ＩＩ（シクロオキシゲナーゼＩＩ）阻害剤、およびＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤が挙げられる。本化合物／組成物と併用可能なかかる有用なマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤の例が、国際公開第９６／３３１７２号、国際公開第９６／２７５８３号、欧州特許第８１８４４２号、欧州特許第１００４５７８号、国際公開第９８／０７６９７号、国際公開第９８／０３５１６号、国際公開第９８／３４９１８号、国際公開第９８／３４９１５号、国際公開第９８／３３７６８号、国際公開第９８／３０５６６号、欧州特許第６０６，０４６号、欧州特許第９３１，７８８号、国際公開第９０／０５７１９号、国際公開第９９／５２９１０号、国際公開第９９／５２８８９号、国際公開第９９／２９６６７号、国際公開第９９／０７６７５号、欧州特許第９４５８６４号、米国特許第５，８６３，９４９号、米国特許第５，８６１，５１０号、および欧州特許第７８０，３８６号（それらのすべてはそれら全体が参照により本明細書中に援用され��）に記載されている。ＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤の例として、４−（４−ブロモ−２−フルオロアニリノ）−６−メトキシ−７−（１−メチルピペリジン−４−イルメトキシ）キナゾリン（ZD6474；国際公開第０１／３２６５１号中の実施例２）、４−（４−フルオロ−２−メチルインドール−５−イルオキシ）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キナゾリン（AZD2171；国際公開第００／４７２１２号中の実施例２４０）、バタラニブ（PTK787；国際公開第９８／３５９８５号）およびSU11248（スニチニブ；国際公開第０１／６０８１４号）、ならびにＰＣＴ公開の国際公開第９７／２２５９６号、国際公開第９７／３００３５号、国際公開第９７／３２８５６号、および国際公開第９８／１３３５４号に開示されているような化合物）が挙げられる。
【０１３５】
特定の実施形態では、ペイロードは、抗体または抗体断片である。特定の実施形態では、ペイロード抗体または断片は、当業者によって理解されている免疫グロブリン遺伝子のいずれかによりコードされ得る。免疫グロブリン遺伝子は、限定はされないが、κ、λ、α、γ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）、δ、εおよびμ定常領域遺伝子、ならびに免疫グロブリン可変領域遺伝子を含む。同用語は、当業者によって理解されている完全長抗体および抗体断片、ならびにそれらの変異体を含む。例示的な断片として、限定はされないが、Ｆｖ、Ｆｃ、Ｆａｂ、および（Ｆａｂ’）２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、二官能性ハイブリッドポリペプチド、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、ＣＤＲの組み合わせ、可変領域、フレームワーク領域、定常領域などが挙げられる。
【０１３６】
特定の実施形態では、ペイロードは、１つ以上の水溶性ポリマーである。多種多様な高分子ポリマーおよび他の分子は、本明細書に記載のポリペプチドに連結され、ポリペプチドの生物学的特性を調節し、かつ／またはポリペプチドに新しい生物学的特性をもたらし得る。これらの高分子ポリマーは、天然にコードされたアミノ酸を介して、非天然にコードされたアミノ酸、または天然もしくは修飾アミノ酸の任意の機能的置換基、または天然もしくは修飾アミノ酸に付加される任意の置換基もしくは官能基を介して、ポリペプチドに連結され得る。ポリマーの分子量は、広範囲、例えば限定はされないが、約１００Ｄａ〜約１００，０００Ｄａの間またはそれ以上であり得る。
【０１３７】
選択されるポリマーは、付着される対象のタンパク質が水性環境下、例えば生理学的環境下で沈殿しないように水溶性であってもよい。ポリマーは、分岐または非分岐であってもよい。好ましくは、最終生成物調製の治療的適用として、ポリマーは、薬学的に許容可能となる。
【０１３８】
特定の実施形態では、ポリペプチド分子に対するポリエチレングリコール分子の割合は、反応混合物中のそれらの濃度の変動に応じて変動することになる。一般に、（余分な未反応のタンパク質またはポリマーが最小であるような反応の効率の観点での）最適比は、選択されるポリエチレングリコールの分子量により、また利用可能な反応基の数に応じて決定されてもよい。分子量に関しては、典型的には、ポリマーの分子量が高まると、タンパク質に付着され得るポリマー分子の数が少なくなる。同様に、ポリマーの分岐は、これらのパラメータを最適化するとき、考慮されるべきである。一般に、分子量が高まると（または分岐が多くなると）、ポリマー：タンパク質比が高まる。
【０１３９】
水溶性ポリマーは、限定はされないが、線状、フォーク状または分岐状を含む任意の構造形態であってもよい。典型的には、その水溶性ポリマーは、ポリ（アルキレングリコール）、例えばポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）であるが、他の水溶性ポリマーもまた用いられてもよい。例として、特定の実施形態を説明するため、ＰＥＧが用いられる。
【０１４０】
ＰＥＧは、市販されている周知の水溶性ポリマーであるか、または当該技術分野で周知の方法（Sandler and Karo, Polymer Synthesis, Academic Press, New York, Vol. 3, pages 138-161）に従い、エチレングリコールの開環重合により調製され得る。用語「ＰＥＧ」は、サイズまたはＰＥＧの末端での修飾を考慮せずに任意のポリエチレングリコール分子を包含するように広範に用いられ、式：ＸＯ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｙ（式中、ｎは２〜１０，０００であり、Ｘは、Ｈまたは限定はされないがＣ１−４アルキルを含む末端修飾であり、かつＹはポリペプチドに対する付着点である）によりポリペプチドに連結されるものとして表され得る。
【０１４１】
特定の実施形態では、ペイロードは、約８００Ｄａ〜約１００，０００Ｄａの平均分子量を有する水溶性ポリマー骨格を含むアジドまたはアセチレン含有ポリマーである。水溶性ポリマーのポリマー骨格は、ポリ（エチレングリコール）であり得る。しかし、多種多様な水溶性ポリマー、例えば限定はされないがポリ（エチレン）グリコールおよび他の関連ポリマー、例えばポリ（デキストラン）およびポリ（プロピレングリコール）もまた使用に適し、かつＰＥＧまたはポリ（エチレングリコール）という用語の使用がすべてのかかる分子を包含し、含むことが意図されることは理解されるべきである。ＰＥＧという用語は、限定はされないが、その形態、例えば、二官能性ＰＥＧ、マルチアームＰＥＧ、誘導体化ＰＥＧ、フォーク状ＰＥＧ、分岐状ＰＥＧ、垂れ下がった(pendent)ＰＥＧ（すなわち、ＰＥＧまたはポリマー骨格に対して垂れ下がった１つ以上の官能基を有する関連ポリマー）、または分解性結合を内包するＰＥＧのいずれかでのポリ（エチレングリコール）を含む。
【０１４２】
ポリマー骨格は、線状または分岐状であり得る。分岐状ポリマー骨格は、一般に当該技術分野で公知である。典型的には、分岐状ポリマーは、中心分岐コア部分および中心分岐コアに連結された複数の線状ポリマー鎖を有する。ＰＥＧは、一般に、エチレンオキシドの様々なポリオール、例えば、グリセロール、グリセロールオリゴマー、ペンタエリトリトールおよびソルビトールへの添加により調製可能な分岐状形態で用いられる。中心分岐部分はまた、幾つかのアミノ酸、例えばリジンから誘導され得る。分岐状ポリ（エチレングリコール）は、Ｒ（−ＰＥＧ−ＯＨ）ｍ（式中、Ｒは、コア部分、例えば、グリセロール、グリセロールオリゴマー、またはペンタエリトリトールから誘導され、ｍはアームの数を表す）としての一般的形態で表され得る。マルチアームＰＥＧ分子、例えば米国特許第５，９３２，４６２号  米国特許第５，６４３，５７５号；米国特許第５，２２９，４９０号；米国特許第４，２８９，８７２号；米国特許出願公開第２００３／０１４３５９６号；国際公開第９６／２１４６９号；および国際公開第９３／２１２５９号（それらの各々はその全体が参照により本明細書中に援用される）に記載のものもまた、ポリマー骨格として用いることができる。
【０１４３】
多数の他のポリマーもまた、使用に適する。一部の実施形態では、２〜約３００の末端を有する、水溶性であるポリマー骨格は特別である。好適なポリマーの例として、限定はされないが、他のポリ（アルキレングリコール）、例えばポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）、その共重合体（限定はされないが、エチレングリコールおよびプロピレングリコールの共重合体を含む）、そのターポリマー、それらの混合物などが挙げられる。ポリマー骨格の各鎖の分子量は変動し得るが、典型的には、約８００Ｄａ〜約１００，０００Ｄａ、時として約６，０００Ｄａ〜約８０，０００Ｄａの範囲内に含まれる。
【０１４４】
当業者は、実質的に水溶性の骨格についての前述のリストが決して徹底的でなく、あくまで例示的なものであり、また本明細書に記載の品質を有するすべての高分子材料が使用に適したものとして検討されることを理解するであろう。
【０１４５】
一部の実施形態では、ポリマー誘導体は、ポリマー骨格が官能基で官能化または活性化された、少なくとも２つの末端、おそらくは約３００もの末端を有するという意味で「多機能的」である。多機能性ポリマー誘導体は、限定はされないが、２つの末端を有し、各末端が同じまたは異なる場合がある官能基に結合される、線状ポリマーを含む。
【０１４６】
４．リンカー
特定の実施形態では、この抗体は、抗体アミノ酸およびペイロード基と反応する能力がある１つ以上のリンカーを用いてペイロードに連結され得る。１つ以上のリンカーは、当業者にとって明白な任意のリンカーであり得る。
【０１４７】
用語「リンカー」は、通常、化学反応の結果として形成され、典型的には共有結合である基または結合を指すように本明細書中で用いられる。
【０１４８】
有用なリンカーは、本明細書に記載のものを含む。特定の実施形態では、リンカーは、当業者に公知の任意の二価または多価リンカーである。有用な二価リンカーは、アルキレン、置換アルキレン、ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、アリレン、置換アリレン、ヘテロアリレン、および置換ヘテロアリレンを含む。特定の実施形態では、リンカーは、Ｃ１−１０アルキレンまたはＣ１−１０ヘテロアルキレンである。一部の実施形態では、Ｃ１−１０ヘテロアルキレンはＰＥＧである。
【０１４９】
特定の実施形態では、リンカーは、加水分解的に安定である。加水分解的に安定な結合は、例えば限定はされないが、長期間どころか、おそらくは永久的に生理的状態下で、結合が水中で実質的に安定であり、有用なｐＨ値で水と反応しないことを意味する。特定の実施形態では、リンカーは、加水分解的に不安定である。加水分解的に不安定または分解可能な結合は、結合が水または水溶液、例えば血液などで分解可能であることを意味する。酵素的に不安定または分解可能な結合は、結合が１つ以上の酵素によって分解され得ることを意味する。
【０１５０】
当該技術分野で理解される通り、ＰＥＧおよび関連ポリマーは、ポリマー骨格とポリマー分子の末端官能基の１つ以上との間のポリマー骨格内またはリンカー基内の分解可能な結合を含んでもよい。例えば、ＰＥＧカルボン酸または活性化ＰＥＧカルボン酸と生物活性剤上のアルコール基との反応によって形成されるエステル結合は、一般に生理的状態下で加水分解し、薬剤を放出する。
【０１５１】
他の加水分解的に分解可能な結合は、限定はされないが、炭酸塩結合；アミンおよびアルデヒドの反応から得られるイミン結合；アルコールをリン酸基と反応させることにより形成されるリン酸エステル結合；ヒドラジドおよびアルデヒドの反応生成物であるヒドラゾン結合；アルデヒドおよびアルコールの反応生成物であるアセタル結合；ギ酸塩およびアルコールの反応生成物であるオルトエステル結合；例えば限定はされないがＰＥＧなどのポリマーの末端でアミン基により形成されるペプチド結合、およびペプチドのカルボキシル基；ならびに例えば限定はされないがポリマーの末端、およびオリゴヌクレオチドの５’水酸基でホスホラミダイト基により形成されるオリゴヌクレオチド結合を含む。
【０１５２】
幾つかの異なる切断可能なリンカーは、当業者に公知である。米国特許第４，６１８，４９２号；米国特許第４，５４２，２２５号、および米国特許第４，６２５，０１４号を参照のこと。薬剤のこれらのリンカー基からの放出のための機構は、例えば、光解離性結合の照射(irradiation of a photolabile bond)および酸触媒加水分解を含む。米国特許第４，６７１，９５８号は、例えば、患者の補体系のタンパク質分解酵素によりインビボで標的部位で切断されるリンカーを含む免疫コンジュゲートの説明を含む。リンカーの長さは、ポリペプチドとそれに連結された分子との間の所望される空間的関係に応じて、予め決定されるかまたは選択されてもよい。種々の放射線診断用化合物、放射線治療化合物、薬剤、毒素、および他の薬剤をポリペプチドに付着させることについて報告されている多数の方法を考慮すると、当業者は所与の薬剤をポリペプチドに付着させるための好適な方法を決定することができるであろう。
【０１５３】
リンカーは、広範囲の分子量または分子長を有してもよい。ポリペプチドと連結される実体との間に所望される空間的関係または立体構造を提供するため、より大きいまたはより小さい分子量のリンカーが用いられてもよい。またポリペプチドと連結される実体との間に所望される空間または柔軟性を提供するため、より長いまたはより短い分子長を有するリンカーが用いられてもよい。同様に、特定の形状または立体構造をポリペプチドまたは連結される実体に与えるため、ポリペプチドがその標的に達する前または後のいずれかに、特定の形状または立体構造を有するリンカーが利用されてもよい。リンカーの各末端上に存在する官能基を選択することで、所望される条件下でポリペプチドまたはペイロードの放出が調節され得る。ポリペプチドと連結される実体との間の空間的関係のこの最適化により、新しい調節されたまたは所望される特性が分子にもたらされ得る。
【０１５４】
一部の実施形態では、本明細書に提供されるのは、ａ）ポリマー骨格の少なくとも第１の末端上のアジド、アルキン、ヒドラジン、ヒドラジド、ヒドロキシルアミン、またはカルボニル含有部分；およびｂ）ポリマー骨格の第２の末端上の少なくとも第２の官能基を含むダンベル構造を有する水溶性二官能性リンカーである。第２の官能基は、第１の官能基と同じかまたは異なり得る。第２の官能基は、一部の実施形態では、第１の官能基と反応性を示さない。一部の実施形態では、分岐状分子構造の少なくとも１つのアームを含む水溶性化合物が提供される。例えば、分岐状分子構造は、樹状構造であり得る。
【０１５５】
一部の実施形態では、リンカーは、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、４−（２−ピリジルジチオ）ブタン酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＰＤＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホ−ブタン酸（スルホ−ＳＰＤＢ）、ヨード酢酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＩＡ）、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸（ＳＩＡＢ）、マレイミドＰＥＧ  ＮＨＳ、４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボン酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＭＣＣ）、４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボン酸Ｎ−スルホスクシンイミジル（スルホ−ＳＭＣＣ）または１７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５，８，１１，１４−テトラオキソ−４，７，１０，１３−テトラアザヘプタデカン−１−酸２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（ＣＸ１−１）からなる群から選択されるリンカー前駆体から誘導される。特定の実施形態では、リンカーは、リンカー前駆体４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボン酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＭＣＣ）から誘導される。
【０１５６】
一部の実施形態では、リンカーは、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、およびペンタペプチドからなる群から選択されるリンカー前駆体から誘導される。かかる実施形態では、リンカーは、プロテアーゼにより切断され得る。例示的なジペプチドとして、限定はされないが、バリン−シトルリン（ｖｃまたはｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｆまたはａｌａ−ｐｈｅ）；フェニルアラニン−リジン（ｆｋまたはｐｈｅ−ｌｙｓ）；フェニルアラニン−ホモリジン（ｐｈｅ−ｈｏｍｏｌｙｓ）；およびＮ−メチル−バリン−シトルリン（Ｍｅ−ｖａｌ−ｃｉｔ）が挙げられる。例示的なトリペプチドとして、限定はされないが、グリシン−バリン−シトルリン（ｇｌｙ−ｖａｌ−ｃｉｔ）およびグリシン−グリシン−グリシン（ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ）が挙げられる。
【０１５７】
一部の実施形態では、リンカーは、自己犠牲スペーサーを含む。特定の実施形態では、自己犠牲スペーサーは、ｐ−アミノベンジルを含む。一部の実施形態では、ｐ−アミノベンジルアルコールは、アミド結合を介してアミノ酸単位に付着され、カルバメート、カルバミン酸メチル、または炭酸塩は、ベンジルアルコールとペイロードとの間に設けられる(Hamann et al. (2005) Expert Opin. Ther. Patents (2005) 15:1087-1103)。一部の実施形態では、リンカーは、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）を含む。自己犠牲スペーサーの他の例として、限定はされないが、ＰＡＢ基に対して電子工学的に類似した芳香族化合物、例えば２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体（米国特許第７，３７５，０７８号；Hay et al. (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237）およびオルト−またはパラ−アミノベンジルアセタールが挙げられる。一部の実施形態では、アミド結合加水分解時に環化を受けるスペーサー、例えば、置換および非置換４−アミノ酪酸アミド(Rodrigues et al. (1995) Chemistry Biology 2:223)、適切に置換されているビシクロ［２．２．１］およびビシクロ［２．２．２］環系(Storm et al. (1972) J. Amer. Chem. Soc. 94:5815)および２−アミノフェニルプロピオン酸アミド(Amsberry, et al. (1990) J. Org. Chem. 55:5867)を用いることができる。薬剤のグリシン残基のα炭素への結合は、コンジュゲート中で有用であり得る自己犠牲スペーサー別の例である(Kingsbury et al. (1984) J. Med. Chem. 27:1447)。
【０１５８】
特定の実施形態では、リンカー前駆体は、より大きいリンカーを形成するように複合され得る。例えば、特定の実施形態では、リンカーは、ジペプチドバリン−シトルリンおよびｐ−アミノベンジルオキシカルボニルを含む。これらはまた、ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢリンカーとも称される。
【０１５９】
特定の実施形態では、ペイロードは、抗体アミノ酸基と反応する能力がある１つ以上のリンカー基で、本明細書でリンカー−ペイロードと称されるリンカーに連結され得る。１つ以上のリンカーは、当業者にとって明白な任意のリンカーまたは本明細書中で示されるものであり得る。
【０１６０】
５．抗体特異性
コンジュゲートは、ヒトＣＤ７４に選択的に結合する抗体を含む。一部の態様では、この抗体は、ヒトＣＤ７４アイソフォーム１に選択的に結合する。一部の態様では、この抗体は、ヒトＣＤ７４アイソフォーム２に選択的に結合する。一部の態様では、この抗体は、２つ以上のＣＤ７４アイソフォーム、例えばヒトＣＤ７４アイソフォーム１および２の双方に選択的に結合し得る。一部の態様では、この抗体は、アイソフォーム１および２と同じ細胞外ドメインを有する１つ以上のＣＤ７４アイソフォーム、例えば各々、ｐ４１およびｐ３３に選択的に結合し得る。
【０１６１】
一部の実施形態では、この抗体は、ヒトＣＤ７４の相同体に結合する。一部の態様では、この抗体は、サル、イヌ、ネコ、マウス、ラット、雌ウシ、ウマ、ヤギまたはヒツジから選択される種からのヒトＣＤ７４の相同体に結合する。一部の態様では、相同体は、カニクイザル相同体である。
【０１６２】
一部の実施形態では、この抗体は、他の抗ＣＤ７４抗体よりも高い融解温度を有する。一部の態様では、この抗体のＴｍ２は、他の抗ＣＤ７４抗体よりも高い。Ｔｍ２は、ＩｇＧのＦａｂドメインの融解温度を表す。したがって、Ｔｍ２が高まると、抗体結合部位の安定性が促進される。かかる安定性の改善により、貯蔵中の抗体のより優れた安定性、ならびに作製中の収率の改善がもたらされ得る。
【０１６３】
一部の実施形態では、この抗体は、本開示にて提供されるコンセンサス配列により規定される少なくとも１つのＣＤＲ配列を含む。一部の実施形態では、この抗体は、本開示にて提供される例示的なＣＤＲ、ＶＨ、またはＶＬ配列、またはその変異体を含む。一部の態様では、この変異体は、保存的アミノ酸置換を有する変異体である。
【０１６４】
一部の実施形態では、この抗体は、アミノ酸残基の数の観点で特定長を有する１つ以上のＣＤＲを有する。一部の態様では、抗体のＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１は７残基長である。一部の実施形態では、抗体のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１は５残基長である。一部の態様では、抗体のＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２は６残基長である。一部の実施形態では、抗体のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２は１７残基長である。一部の態様では、抗体のＣｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３は１１残基長である。一部の態様では、抗体のＣｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３は１２残基長である。一部の態様では、抗体のＣｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３は１３残基長である。一部の態様では、抗体のＣｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３は１４残基長である。一部の態様では、抗体のＣｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３は１５残基長である。一部の態様では、抗体のＣｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３は１５残基長を超える。一部の態様では、抗体のＣｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３は最大２５残基長である。
【０１６５】
一部の態様では、抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｌ１は１１残基長である。一部の態様では、抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｌ１は１２残基長である。一部の態様では、抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｌ２は７残基長である。一部の態様では、抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｌ３は９残基長である。
【０１６６】
一部の実施形態では、この抗体は、軽鎖を含む。一部の態様では、軽鎖は、κ軽鎖およびλ軽鎖から選択される。
【０１６７】
一部の実施形態では、この抗体は、重鎖を含む。一部の態様では、重鎖は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭから選択される。一部の態様では、重鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２から選択される。
【０１６８】
一部の実施形態では、この抗体は、抗体断片である。一部の態様では、抗体断片は、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、ｓｃＦｖ（ｓＦｖ）断片、およびｓｃＦｖ−Ｆｃ断片から選択される。
【０１６９】
一部の実施形態では、この抗体は、モノクローナル抗体である。
【０１７０】
一部の実施形態では、この抗体は、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体である。
【０１７１】
一部の実施形態では、この抗体は、親和性成熟抗体である。一部の態様では、この抗体は、本開示で提供される例示的配列に由来する親和性成熟抗体である。
【０１７２】
一部の実施形態では、この抗体は、結合後、細胞により内在化される。
【０１７３】
一部の実施形態では、この抗体は、ＣＤ７４のそのリガンドへの結合を阻害する。一部の態様では、この抗体は、ＣＤ７４のマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）への結合を阻害する。
【０１７４】
一部の実施形態では、この抗体は、国際公開第２０１６／０１４４３４Ａ２号（その全体が参照により本明細書中に援用される）に記載されるものである。
【０１７５】
５．１．ＣＤＲ−Ｈ３配列
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号１２９〜１６０から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。
【０１７６】
一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号１５７〜１６０から選択される配列を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号１５７を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号１５８を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号１５９を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号１６０を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。
【０１７７】
５．２．例示的ＣＤＲを含むＶＨ配列
一部の実施形態では、この抗体は、本開示で提供される１つ以上の例示的ＣＤＲ−Ｈ配列を含む、それらからなる、または本質的にそれらからなる１つ以上のＣＤＲ−Ｈ配列を含むＶＨ配列、およびその変異体を含む。
【０１７８】
５．２．１．例示的Ｋａｂａｔ  ＣＤＲを含むＶＨ配列
一部の実施形態では、この抗体は、本開示で提供される１つ以上の例示的Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ配列を含む、それらからなる、または本質的にそれらからなる１つ以上のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ配列を含むＶＨ配列、およびその変異体を含む。
【０１７９】
５．２．１．１．Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号１２９〜１５６から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。
【０１８０】
５．２．１．２．Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号９７〜１２４から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。
【０１８１】
５．２．１．３．Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号３３〜６０から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。
【０１８２】
５．２．１．４．Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３＋Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号１２９〜１５６から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列および配列番号９７〜１２４から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列およびＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列の双方は、本開示で提供される単一の例示的ＶＨ配列に由来する。例えば、一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３およびＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２の双方は、配列番号２３０〜２５１および２７３〜２８０から選択される単一の例示的ＶＨ配列に由来する。
【０１８３】
５．２．１．５．Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３＋Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号１２９〜１５６から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列および配列番号３３〜６０から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列およびＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列の双方は、本開示で提供される単一の例示的ＶＨ配列に由来する。例えば、一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３およびＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１の双方は、配列番号２３０〜２５１および２７３〜２８０から選択される単一の例示的ＶＨ配列に由来する。
【０１８４】
５．２．１．６．Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１＋Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号３３〜６０から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列および配列番号９７〜１２４から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列およびＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列の双方は、本開示で提供される単一の例示的ＶＨ配列に由来する。例えば、一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１およびＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２の双方は、配列番号２３０〜２５１および２７３〜２８０から選択される単一の例示的ＶＨ配列に由来する。
【０１８５】
５．２．１．７．Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１＋Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２＋Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号３３〜６０から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列、配列番号９７〜１２４から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列、および配列番号１２９〜１５６から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列、およびＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列のすべては、本開示で提供される単一の例示的ＶＨ配列に由来する。例えば、一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２、およびＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３のすべては、配列番号２３０〜２５１および２７３〜２８０から選択される単一の例示的ＶＨ配列に由来する。
【０１８６】
５．２．１．８．Ｋａｂａｔ  ＣＤＲを含むＶＨ配列からの除外
一部の実施形態では、本明細書に提供されるＶＨ配列は、特定のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｈ２、および／またはＣＤＲ−Ｈ１配列を含まない。
【０１８７】
一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号１５７〜１６０から選択される配列を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号１５７を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号１５８を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号１５９を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号１６０を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。
【０１８８】
一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号１２５〜１２８から選択される配列を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号１２５を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号１２６を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号１２７を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号１２８を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。
【０１８９】
一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号６１〜６４から選択される配列を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号６１を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号６２を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号６３を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号６４を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。
【０１９０】
５．２．２．例示的Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲを含むＶＨ配列
一部の実施形態では、この抗体は、本開示で提供される１つ以上の例示的Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ配列を含む、それらからなる、または本質的にそれらからなる１つ以上のＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ配列を含むＶＨ配列、およびその変異体を含む。
【０１９１】
５．２．２．１．Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号１２９〜１５６から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。
【０１９２】
５．２．２．２．Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号６５〜９２から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。
【０１９３】
５．２．２．３．Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号１〜２８から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。
【０１９４】
５．２．２．４．Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３＋Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号１２９〜１５６から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列および配列番号６５〜９２から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列およびＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列の双方は、本開示で提供される単一の例示的ＶＨ配列に由来する。例えば、一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３およびＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２の双方は、配列番号２３０〜２５１および２７３〜２８０から選択される単一の例示的ＶＨ配列に由来する。
【０１９５】
５．２．２．５．Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３＋Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号１２９〜１５６から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列および配列番号１〜２８から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列およびＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列の双方は、本開示で提供される単一の例示的ＶＨ配列に由来する。例えば、一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３およびＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１の双方は、配列番号２３０〜２５１および２７３〜２８０から選択される単一の例示的ＶＨ配列に由来する。
【０１９６】
５．２．２．６．Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１＋Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号１〜２８から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列および配列番号６５〜９２から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列およびＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列の双方は、本開示で提供される単一の例示的ＶＨ配列に由来する。例えば、一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１およびＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２の双方は、配列番号２３０〜２５１および２７３〜２８０から選択される単一の例示的ＶＨ配列に由来する。
【０１９７】
５．２．２．７．Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１＋Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２＋Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号１〜２８から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列、配列番号６５〜９２から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列、および配列番号１２９〜１５６から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列、およびＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列はすべて、本開示で提供される単一の例示的ＶＨ配列に由来する。例えば、一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３はすべて、配列番号２３０〜２５１および２７３〜２８０から選択される単一の例示的ＶＨ配列に由来する。
【０１９８】
５．２．２．８．Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲを含むＶＨ配列からの除外
一部の実施形態では、本明細書に提供されるＶＨ配列は、特定のＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｈ２、および／またはＣＤＲ−Ｈ１配列を含まない。
【０１９９】
一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号１５７〜１６０から選択される配列を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号１５７を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号１５８を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号１５９を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号１６０を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。
【０２００】
一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号９３〜９６から選択される配列を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号９３を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号９４を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号９５を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号９６を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。
【０２０１】
一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号２９〜３２から選択される配列を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号２９を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号３０を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号３１を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号３２を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。
【０２０２】
５．３．ＶＨ配列
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号２３０〜２５１および２７３〜２８０から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２３０を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２３１を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２３２を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２３３を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２３４を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２３５を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２３６を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２３７を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２３８を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２３９を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２４０を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２４１を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２４２を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２４３を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２４４を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２４５を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２４６を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２４７を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２４８を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２４９を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２５０を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２５１を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２７３を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２７４を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２７５を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２７６を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２７７を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２７８を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２７９を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２８０を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＨ配列を含む。
【０２０３】
５．３．１．ＶＨ配列からの除外
一部の実施形態では、本明細書に提供されるＶＨ配列は、特定のＶＨ配列を含まない。
【０２０４】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２５２〜２５５から選択される配列を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２５２を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２５３を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２５４を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２５５を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。
【０２０５】
５．４．ＣＤＲ−Ｌ３配列
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号２０１〜２１９から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣＤＲ−Ｌ３配列を含む。
【０２０６】
一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、配列番号２２０を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない・
【０２０７】
５．５．例示的ＣＤＲを含むＶＬ配列
一部の実施形態では、この抗体は、本開示で提供される１つ以上の例示的ＣＤＲ−Ｌ配列を含む、それらからなる、または本質的にそれらからなる１つ以上のＣＤＲ−Ｌ配列を含むＶＬ配列、およびその変異体を含む。
【０２０８】
５．５．１．ＣＤＲ−Ｌ３
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号２０１〜２１９から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣＤＲ−Ｌ３配列を含むＶＬ配列を含む。
【０２０９】
５．５．２．ＣＤＲ−Ｌ２
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号１８１〜１９９から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣＤＲ−Ｌ２配列を含むＶＬ配列を含む。
【０２１０】
５．５．３．ＣＤＲ−Ｌ１
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号１６１〜１７９から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣＤＲ−Ｌ１配列を含むＶＬ配列を含む。
【０２１１】
５．５．４．ＣＤＲ−Ｌ３＋ＣＤＲ−Ｌ２
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号２０１〜２１９から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣＤＲ−Ｌ３配列および配列番号１８１〜１９９から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣＤＲ−Ｌ２配列を含むＶＬ配列を含む。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列およびＣＤＲ−Ｌ２配列の双方は、本開示で提供される単一の例示的ＶＬ配列に由来する。例えば、一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３およびＣＤＲ−Ｌ２の双方は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される単一の例示的ＶＬ配列に由来する。
【０２１２】
５．５．５．ＣＤＲ−Ｌ３＋ＣＤＲ−Ｌ１
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号２０１〜２１９から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣＤＲ−Ｌ３配列および配列番号１６１〜１７９から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣＤＲ−Ｌ１配列を含むＶＬ配列を含む。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列およびＣＤＲ−Ｌ１配列の双方は、本開示で提供される単一の例示的ＶＬ配列に由来する。例えば、一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３およびＣＤＲ−Ｌ１の双方は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される単一の例示的ＶＬ配列に由来する。
【０２１３】
５．５．６．ＣＤＲ−Ｌ１＋ＣＤＲ−Ｌ２
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号１６１〜１７９から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣＤＲ−Ｌ１配列および配列番号１８１〜１９９から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣＤＲ−Ｌ２配列を含むＶＬ配列を含む。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１配列およびＣＤＲ−Ｌ２配列の双方は、本開示で提供される単一の例示的ＶＬ配列に由来する。例えば、一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１およびＣＤＲ−Ｌ２の双方は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される単一の例示的ＶＬ配列に由来する。
【０２１４】
５．５．７．ＣＤＲ−Ｌ１＋ＣＤＲ−Ｌ２＋ＣＤＲ−Ｌ３
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号１６１〜１７９から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣＤＲ−Ｌ１配列、配列番号１８１〜１９９から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣＤＲ−Ｌ２配列、および配列番号２０１〜２１９から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＣＤＲ−Ｌ３配列を含むＶＬ配列を含む。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１配列、ＣＤＲ−Ｌ２配列、およびＣＤＲ−Ｌ３配列のすべては、本開示で提供される単一の例示的ＶＬ配列に由来する。例えば、一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３のすべては、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される単一の例示的ＶＬ配列に由来する。
【０２１５】
５．５．８．ＣＤＲ−Ｌを含むＶＬ配列からの除外
一部の実施形態では、本明細書に提供されるＶＬ配列は、特定のＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｌ２、および／またはＣＤＲ−Ｌ１配列を含まない。
【０２１６】
一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、配列番号２２０を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。
【０２１７】
一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、配列番号２００を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。
【０２１８】
一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、配列番号１８０を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。
【０２１９】
５．６．ＶＬ配列
一部の実施形態では、この抗体は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２５６を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２５７を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２５８を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２５９を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２６０を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２６１を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２６２を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２６３を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２６４を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２６５を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２６６を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２６７を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２６８を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２６９を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２７０を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２８１を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２８２を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２８３を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２８４を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２８５を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２８６を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２８７を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。一部の態様では、この抗体は、配列番号２８８を含む、それからなる、またはそれから本質的になるＶＬ配列を含む。
【０２２０】
５．６．１．ＶＬ配列の除去
一部の実施形態では、本明細書に提供されるＶＬ配列は、特定のＶＬ配列を含まない。
【０２２１】
一部の態様では、ＶＬ配列は、配列番号２７１〜２７２から選択される配列を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、ＶＬ配列は、配列番号２７１を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。一部の態様では、ＶＬ配列は、配列番号２７２を含まない、それからならない、またはそれから本質的にならない。
【０２２２】
５．７．対
５．７．１．ＣＤＲ−Ｈ３−ＣＤＲ−Ｌ３対
一部の実施形態では、この抗体は、ＣＤＲ−Ｈ３配列およびＣＤＲ−Ｌ３配列を含む。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列はＶＨの一部であり、かつＣＤＲ−Ｌ３配列はＶＬの一部である。
【０２２３】
一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号１２９〜１５６を含む、それらからなる、または本質的にそれらからなるＣＤＲ−Ｈ３配列であり、かつＣＤＲ−Ｌ３配列は、配列番号２０１〜２１９を含む、それらからなる、または本質的にそれらからなるＣＤＲ−Ｌ３配列である。
【０２２４】
５．７．１．１．ＣＤＲ−Ｈ３−ＣＤＲ−Ｌ３対の除外
一部の実施形態では、本明細書に提供されるＣＤＲ−Ｈ３−ＣＤＲ−Ｌ３対は、特定のＣＤＲ−Ｈ３−ＣＤＲ−Ｌ３対を含まない。
【０２２５】
一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は配列番号１５７でなく、かつＣＤＲ−Ｌ３配列は配列番号２２０でない。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は配列番号１５８でなく、かつＣＤＲ−Ｌ３配列は配列番号２２０でない。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は配列番号１５９でなく、かつＣＤＲ−Ｌ３配列は配列番号２２０でない。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は配列番号１６０でなく、かつＣＤＲ−Ｌ３配列は配列番号２２０でない。
【０２２６】
５．７．２．ＶＨ−ＶＬ対
一部の実施形態では、この抗体は、ＶＨ配列およびＶＬ配列を含む。
【０２２７】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２３０〜２５１および２７３〜２８０を含む、それらからなる、または本質的にそれらからなるＶＨ配列であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８を含む、それらからなる、または本質的にそれらからなるＶＬ配列である。
【０２２８】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２３０であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２２９】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２３１であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２３０】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２３２であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２３１】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２３３であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２３２】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２３４であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２３３】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２３５であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２３４】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２３６であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２３５】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２３７であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２３６】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２３８であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２３７】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２３９であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２３８】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２４０であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２３９】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２４１であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２４０】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２４２であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２４１】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２４３であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２４２】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２４４であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２４３】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２４５であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２４４】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２４６であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２４５】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２４７であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２４６】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２４８であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２４７】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２４９であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２４８】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２５０であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２４９】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２５１であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２５０】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２７３であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２５１】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２７４であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２５２】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２７５であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２５３】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２７６であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２５４】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２７７であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２５５】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２７８であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２５６】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２７９であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２５７】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２８０であり、かつＶＬ配列は、配列番号２５６〜２７０および２８１〜２８８から選択される。
【０２５８】
５．７．２．１．ＶＨ−ＶＬ対の除外
一部の実施形態では、本明細書に提供されるＶＨ−ＶＬ対は、特定のＶＨ−ＶＬ対を含まない。
【０２５９】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２５２〜２５５から選択されず、かつＶＬ配列は、配列番号２７１〜２７２から選択されない。
【０２６０】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２５２でなく、かつＶＬ配列は、配列番号２７１〜２７２から選択されない。一部の態様では、ＶＬ配列は、配列番号２７１でない。一部の態様では、ＶＬ配列は、配列番号２７２でない。
【０２６１】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２５３でなく、かつＶＬ配列は、配列番号２７１〜２７２から選択されない。一部の態様では、ＶＬ配列は、配列番号２７１でない。一部の態様では、ＶＬ配列は、配列番号２７２でない。
【０２６２】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２５４でなく、かつＶＬ配列は、配列番号２７１〜２７２から選択されない。一部の態様では、ＶＬ配列は、配列番号２７１でない。一部の態様では、ＶＬ配列は、配列番号２７２でない。
【０２６３】
一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号２５５でなく、かつＶＬ配列は、配列番号２７１〜２７２から選択されない。一部の態様では、ＶＬ配列は、配列番号２７１でない。一部の態様では、ＶＬ配列は、配列番号２７２でない。
【０２６４】
６．熱安定性
一部の実施形態では、この抗体は、特定の熱安定性パラメータによって特徴づけられる。抗体の熱安定性は、その融解温度を測定することによって特徴づけられてもよい。融解温度は、Ｔｍ１およびＴｍ２を含む。Ｔｍ１はＩｇＧのＦｃドメインの融解を表す一方で、Ｔｍ２はＩｇＧのＦａｂドメインの融解を表す。
【０２６５】
一部の実施形態では、抗体のＴｍ２は、少なくとも７５℃、７５．５℃、７６℃、７６．５℃、７７℃、７７．５℃、７８℃、７８．５℃、または７９℃である。一部の実施形態では、抗体のＴｍ２は、約７５℃〜約８０℃の間である。一部の実施形態では、抗体のＴｍ２は、約７６℃〜約７９℃の間である。一部の実施形態では、抗体のＴｍ２は、約７７℃〜約７８℃の間である。一部の態様では、上記のＴｍ２は、抗体の脱グリコシル化バージョンに対応する。
【０２６６】
一部の実施形態では、抗体のＴｍ１は、約５９℃〜約６２．２℃の間である。一部の実施形態では、抗体のＴｍ１は６２．２℃未満である。一部の実施形態では、抗体のＴｍ１は６１℃未満である。一部の実施形態では、抗体のＴｍ１は６０℃未満である。一部の態様では、上記のＴｍ１は、抗体の脱グリコシル化バージョンに対応する。
【０２６７】
７．親和性
一部の実施形態では、ＣＤ７４に対する抗体の親和性は、ＫＤで示すと、約１０−５Ｍ未満、約１０−６Ｍ未満、約１０−７Ｍ未満、約１０−８Ｍ未満、約１０−９Ｍ未満、約１０−１０Ｍ未満、約１０−１１Ｍ未満、または約１０−１２Ｍ未満である。一部の実施形態では、抗体の親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−１１Ｍの間である。一部の実施形態では、抗体の親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−１０Ｍの間である。一部の実施形態では、抗体の親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−９Ｍの間である。一部の実施形態では、抗体の親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−８Ｍの間である。一部の実施形態では、抗体の親和性は、約１０−８Ｍ〜１０−１１Ｍの間である。一部の実施形態では、抗体コンジュゲートの親和性は、約１０−９Ｍ〜１０−１１Ｍの間である。一部の実施形態では、抗体コンジュゲートの親和性は、約１０−１０Ｍ〜１０−１１Ｍの間である。一部の実施形態では、抗体の親和性は、約１．０８×１０−７Ｍ〜９．５７×１０−１０Ｍの間である。一部の実施形態では、抗体の親和性は、２．５２×１０−１０Ｍ、またはそれ未満である。一部の実施形態では、抗体の親和性は、約２．５２×１０−１０Ｍである。一部の実施形態では、抗体の親和性は、約３．５４×１０−１０Ｍである。一部の実施形態では、抗体の親和性は、約２．５２×１０−１０Ｍ〜約３．５４×１０−１０Ｍの間である。一部の態様では、ＫＤは２５℃で測定される。
【０２６８】
一部の実施形態では、抗体は、少なくとも約１０５Ｍ−１×秒−１のｋａを有する。一部の実施形態では、抗体は、少なくとも約１０６Ｍ−１×秒−１のｋａを有する。一部の実施形態では、抗体は、約１０５Ｍ−１×秒−１〜約１０６Ｍ−１×秒−１の間のｋａを有する。一部の実施形態では、抗体は、約１．６６×１０５Ｍ−１×秒−１〜約１．０７×１０６Ｍ−１×秒−１の間のｋａを有する。一部の実施形態では、抗体は、約３．０９×１０５Ｍ−１×秒−１、またはそれを超えるｋａを有する。一部の実施形態では、抗体は、約３．０９×１０５Ｍ−１×秒−１のｋａを有する。一部の実施形態では、抗体は、約３．３８×１０５Ｍ−１×秒−１のｋａを有する。一部の実施形態では、抗体は、約３．０９×１０５Ｍ−１×秒−１〜約３．３８×１０５Ｍ−１×秒−１の間のｋａを有する。一部の態様では、ｋａは２５℃で測定される。
【０２６９】
一部の実施形態では、抗体は、約１０−４秒−１以下のｋｄを有する。一部の実施形態では、抗体は、約１０−５秒−１以下のｋｄを有する。一部の実施形態では、抗体は、約１０−４秒−１〜約１０−５秒−１の間のｋｄを有する。一部の実施形態では、抗体は、約２．３５×１０−４秒−１〜約７．１０×１０−５秒−１の間のｋｄを有する。一部の実施形態では、抗体は、約７．７７×１０−５秒−１、またはそれ未満のｋｄを有する。一部の実施形態では、抗体は、約７．７７×１０−５秒−１のｋｄを有する。一部の実施形態では、抗体は、約１．２０×１０−４秒−１のｋｄを有する。一部の実施形態では、抗体は、約１．２０×１０−４秒−１〜約７．７７×１０−５秒−１の間のｋｄを有する。一部の態様では、ｋｄは２５℃で測定される。
【０２７０】
８．グリコシル化変異体
特定の実施形態では、抗体は、それがグリコシル化される程度を増強、低減または除去するため、改変されてもよい。ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には「Ｎ−結合型」または「Ｏ−結合型」のいずれかである。
【０２７１】
「Ｎ−結合型」グリコシル化は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の付着を指す。トリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−トレオニン（式中、Ｘはプロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素付着のための認識配列である。したがって、ポリペプチド中のこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在により、有望なグリコシル化部位が作出される。
【０２７２】
「Ｏ−結合型」グリコシル化は、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンもまた用いられてもよいが、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはトレオニンへの糖Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースの１つの付着を指す。
【０２７３】
抗体に対するＮ−結合型グリコシル化部位の付加または欠失は、上記のトリペプチド配列の１つ以上が作出または除去されるようにアミノ酸配列を改変することにより、行われてもよい。Ｏ−結合型グリコシル化部位の付加または欠失は、（場合に応じて）抗体コンジュゲートの配列におけるまたはそれに対する１つ以上のセリンまたはトレオニン残基の付加、欠失、または置換により、行われてもよい。
【０２７４】
９．Ｆｃ変異体
特定の実施形態では、Ｆｃ領域変異体を作製するため、アミノ酸修飾が本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入されてもよい。特定の実施形態では、Ｆｃ領域変異体は、全部でなく一部のエフェクター機能を有する。かかる抗体は、例えばインビボでの抗体の半減期が重要である場合の用途では有用であり得るが、特定のエフェクター機能は不要または有害である。エフェクター機能の例として、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）および抗体コンジュゲートに特異的な補体媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）が挙げられる。改変されたエフェクター機能を伴う極めて多数の置換または欠失は、当該技術分野で公知である。
【０２７５】
ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性における改変は、インビトロおよび／またはインビボアッセイを用いて確認され得る。例えば、ＦｃγＲ結合を測定するため、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイが実施され得る。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞として、ＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲの発現が、Ravetch and Kinet, Ann. Rev. Immunol., 1991, 9:457-492にまとめられている。
【０２７６】
目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定例が、米国特許第５，５００，３６２号および米国特許第５，８２１，３３７号；Hellstrom et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1986, 83:7059-7063; Hellstrom et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1985, 82:1499-1502;およびBruggemann et al., J. Exp. Med., 1987, 166:1351-1361に提供される。かかるアッセイにとって有用なエフェクター細胞は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。代替的に、または追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、Clynes et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1998, 95:652-656に開示されるような動物モデルを用いてインビボで評価されてもよい。
【０２７７】
抗体がＣ１ｑに結合することができず、それ故にＣＤＣ活性が欠如することを確認するため、Ｃ１ｑ結合アッセイがさらに実施されてもよい。Ｃ１ｑ結合アッセイの例として、国際公開第２００６／０２９８７９号および国際公開第２００５／１００４０２号に記載のものが挙げられる。
【０２７８】
補体活性化アッセイは、例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods, 1996, 202:163-171; Cragg et al., Blood, 2003, 101:1045-1052;およびCragg and Glennie, Blood, 2004, 103:2738-2743に記載のものを含む。
【０２７９】
ＦｃＲｎ結合およびインビボクリアランス（半減期測定）についても、例えば、Petkova et al., Intl. Immunol., 2006, 18:1759-1769に記載の方法を用いて測定され得る。
【０２８０】
１０．修飾アミノ酸
抗体コンジュゲートが修飾アミノ酸を含む場合、修飾アミノ酸は、施術者により好適であるとみなされる任意の修飾アミノ酸であり得る。特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、リンカー前駆体またはペイロード前駆体に対して共有結合を形成するのに有用な反応基を含む。特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、非天然アミノ酸である。特定の実施形態では、反応基は、アミノ、カルボキシ、アセチル、ヒドラジノ、ヒドラジド、セミカルバジド、スルファニル、アジドおよびアルキニルからなる群から選択される。修飾アミノ酸はまた、例えば国際公開第２０１３／１８５１１５号および国際公開第２０１５／００６５５５号（それら各々はその全体が参照により本明細書中に援用される）に記載される。
【０２８１】
特定の実施形態では、アミノ酸残基は、以下の式：
【化３０】
2019506385.tif 000035
のいずれかに従う。当業者は、抗体が一般にＬ−アミノ酸からなることを理解するであろう。しかし、非天然アミノ酸の場合、本方法および組成物は、施術者に、Ｌ−、Ｄ−またはラセミ非天然アミノ酸を部位特異的位置で用いる能力を提供する。特定の実施形態では、本明細書に記載の非天然アミノ酸は、天然アミノ酸のＤ−バージョンおよび天然アミノ酸のラセミバージョンを含む。
【０２８２】
上式では、波線は、抗体のポリペプチド鎖の残りに接続する結合を示す。これらの非天然アミノ酸は、天然アミノ酸が同じポリペプチド鎖中に組み込まれるのと同様に、ポリペプチド鎖中に組み込まれる。特定の実施形態では、非天然アミノ酸は、式中に表されるようなアミド結合を介してポリペプチド鎖中に組み込まれる。
【０２８３】
上式では、Ｒは、限定されることなく、アミノ酸残基が天然アミノ酸残基と同一でない限り、任意の官能基を示す。特定の実施形態では、Ｒは、疎水性基、親水性基、極性基、酸性基、塩基性基、キレート基、反応性基、治療部分または標識部分であり得る。特定の実施形態では、Ｒは、Ｒ１ＮＲ２Ｒ３、Ｒ１Ｃ（＝Ｏ）Ｒ２、Ｒ１Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ２、Ｒ１Ｎ３、Ｒ１Ｃ（≡ＣＨ）からなる群から選択される。これらの実施形態では、Ｒ１は、結合、アルキレン、ヘテロアルキレン、アリレン、ヘテロアリレンからなる群から選択される。Ｒ２およびＲ３は各々、独立して、水素、アルキルおよびヘテロアルキルからなる群から選択される。
【０２８４】
一部の実施形態では、非天然にコードされたアミノ酸は、安定なコンジュゲートを形成するための、２０の共通アミノ酸中に見出されない官能基（例えば限定はされないが、アジド、ケトン、アルデヒドおよびアミノオキシ基）と効率的かつ選択的に反応する側鎖官能基を含む。例えば、アジド官能基を含有する非天然にコードされたアミノ酸を含む抗原結合ポリペプチドは、安定なコンジュゲートを形成するため、ポリマー（例えば限定はされないがポリ（エチレングリコール）または代替的にはアルキン部分を含む第２のポリペプチドと反応され、結果として、アジドおよびアルキン官能基の選択的反応において、ヒュスゲン［３＋２］環化付加産物が形成され得る。
【０２８５】
本発明における使用に適し得、かつ水溶性ポリマーとの反応にとって有用である例示的な非天然にコードされたアミノ酸として、限定はされないが、カルボニル、アミノオキシ、ヒドラジン、ヒドラジド、セミカルバジド、アジドおよびアルキン反応基を有するものが挙げられる。一部の実施形態では、非天然にコードされたアミノ酸は、糖部分を含む。かかるアミノ酸の例として、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−ガラクトサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−トレオニン、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−アスパラギンおよびＯ−マンノサミニル−Ｌ−セリンが挙げられる。かかるアミノ酸の例として、アミノ酸と糖との間の天然に存在するＮ−またはＯ−結合が一般に天然に見出されない共有結合によって置き換えられる場合の例、例えば限定はされないが、アルケン、オキシム、チオエーテル、アミドなども挙げられる。かかるアミノ酸の例として、２−デオキシ−グルコース、２−デオキシガラクトースなどの天然に存在するタンパク質中に一般に見出されない糖も挙げられる。
【０２８６】
本明細書に提供される非天然にコードされたアミノ酸の多くが、例えば、Sigma-Aldrich (St. Louis, Mo., USA), Novabiochem (EMD Biosciencesの支社, Darmstadt, Germany)、またはPeptech (Burlington, Mass., USA)から市販されている。市販されていないものは、任意選択的には、本明細書に提供される通り、または当業者に公知の標準的方法を用いて合成される。有機合成技術については、例えば、Organic Chemistry by Fessendon and Fessendon, (1982, Second Edition, Willard Grant Press, Boston Mass.); Advanced Organic Chemistry by March (Third Edition, 1985, Wiley and Sons, New York);およびAdvanced Organic Chemistry by Carey and Sundberg (Third Edition, Parts A and B, 1990, Plenum Press, New York)を参照のこと。また、米国特許出願公開第２００３／００８２５７５号および米国特許出願公開第２００３／０１０８８８５号（参照により本明細書中に援用される）を参照のこと。
【０２８７】
多数の非天然アミノ酸が、天然アミノ酸、例えば、チロシン、グルタミン、フェニルアラニンなどに基づき、本発明における使用に適する。チロシン類似体として、限定はされないが、パラ置換チロシン、オルト置換チロシン、およびメタ置換チロシンが挙げられ、ここで置換チロシンとして、例えば限定はされないが、ケト基（限定はされないが、アセチル基を含む）、ベンゾイル基、アミノ基、ヒドラジン、ヒドロキシアミン、チオール基、カルボキシ基、イソプロピル基、メチル基、Ｃ６〜Ｃ２０直鎖または分岐炭化水素、飽和または不飽和炭化水素、Ｏ−メチル基、ポリエーテル基、ニトロ基、アルキニル基などが挙げられる。さらに、多重置換アリール環もまた考えられる。本発明での使用に適し得るグルタミン類似体として、限定はされないが、α−ヒドロキシ誘導体、γ−置換誘導体、環状誘導体、およびアミド置換グルタミン誘導体が挙げられる。本発明での使用に適し得るフェニルアラニン類似体の例として、限定はされないが、パラ置換フェニルアラニン、オルト置換フェニルアラニン、およびメタ置換フェニルアラニンが挙げられ、ここで置換基として、例えば限定はされないが、ヒドロキシ基、メトキシ基、メチル基、アリル基、アルデヒド、アジド、ヨード、ブロモ、ケト基（限定はされないがアセチル基を含む）、ベンゾイル、アルキニル基などが挙げられる。本発明での使用に適し得る非天然アミノ酸の具体例として、限定はされないが、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃβ−セリン、Ｌドパ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ヨード−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、およびｐ−プロパルギロキシ−フェニルアラニンなどが挙げられる。本発明での使用に適し得る種々の非天然アミノ酸の構造例が、例えば、「Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｕｎｎａｔｕｒａｌ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ．」という表題の国際公開第２００２／０８５９２３号中に提供される。さらなるメチオニン類似体については、Kiick et al., (2002) Incorporation of azides into recombinant proteins for chemoselective modification by the Staudinger ligation, PNAS 99:19-24も参照のこと。
【０２８８】
本発明での使用に適した非天然アミノ酸の多くが、例えば、Sigma (USA)またはAldrich (Milwaukee, Wis., USA)から市販されている。市販されていないものは、任意選択的には、本明細書に提供される通り、または様々な出版物中に提供される通り、または当業者に公知の標準的方法を用いて合成される。有機合成技術については、例えば、Organic Chemistry by Fessendon and Fessendon, (1982, Second Edition, Willard Grant Press, Boston Mass.); Advanced Organic Chemistry by March (Third Edition, 1985, Wiley and Sons, New York); and Advanced Organic Chemistry by Carey and Sundberg (Third Edition, Parts A and B, 1990, Plenum Press, New York)を参照のこと。非天然アミノ酸の合成について記載しているさらなる出版物として、例えば、「Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｕｎｎａｔｕｒａｌ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ」という表題の国際公開第２００２／０８５９２３号；Matsoukas et al., (1995) J. Med. Chem., 38, 4660-4669; King, F. E. & Kidd, D. A. A. (1949) A New Synthesis of Glutamine and of γ-Dipeptides of Glutamic Acid from Phthylated Intermediates. J. Chem. Soc., 3315-3319; Friedman, O. M. & Chatterrji, R. (1959) Synthesis of Derivatives of Glutamine as Model Substrates for Anti-Tumor Agents. J. Am. Chem. Soc. 81, 3750-3752; Craig, J. C. et al. (1988) Absolute Configuration of the Enantiomers of 7-Chloro-4 [[4 (diethylamino)-1-methylbutyl]amino]quinoline (Chloroquine). J. Org. Chem. 53, 1167-1170; Azoulay, M., Vilmont, M. & Frappier, F. (1991) Glutamine analogues as Potential Antimalarials, Eur. J. Med. Chem. 26, 201-5; Koskinen, A. M. P. & Rapoport, H. (1989) Synthesis of 4-Substituted Prolines as Conformationally Constrained Amino Acid Analogues. J. Org. Chem. 54, 1859-1866; Christie, B. D. & Rapoport, H. (1985) Synthesis of Optically Pure Pipecolates from L-Asparagine. Application to the Total Synthesis of (+)-Apovincamine through Amino Acid Decarbonylation and Iminium Ion Cyclization. J. Org. Chem. 1989:1859-1866; Barton et al., (1987) Synthesis of Novel a-Amino-Acids and Derivatives Using Radical Chemistry: Synthesis of L- and D-a-Amino-Adipic Acids, L-a-aminopimelic Acid and Appropriate Unsaturated Derivatives. Tetrahedron Lett. 43:4297-4308;および、Subasinghe et al., (1992) Quisqualic acid analogues: synthesis of beta-heterocyclic 2 aminopropanoic acid derivatives and their activity at a novel quisqualate-sensitized site. J. Med. Chem. 35:4602-7が挙げられる。「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｒｒａｙｓ」という表題の２００３年１２月２２日に出願された特許出願第１０／７４４，８９９号および２００２年１２月２２日に出願された特許出願第６０／４３５，８２１号も参照のこと。
【０２８９】
有用な非天然アミノ酸の特定例として、限定はされないが、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃｂ−セリン、Ｌドパ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ヨード−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、およびｐ−プロパルギロキシ−フェニルアラニンが挙げられる。さらに有用な例として、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−ガラクトサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−トレオニン、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−アスパラギンおよびＯ−マンノサミニル−Ｌ−セリンが挙げられる。
【０２９０】
特定の実施形態では、非天然アミノ酸は、ｐ−アセチル−フェニルアラニン、ｐ−エチニル−フェニルアラニン、ｐ−プロパルギロキシフェニルアラニン、およびｐ−アジド−フェニルアラニンから選択される。１つの特に有用な非天然アミノ酸は、ｐ−アジドフェニルアラニンである。このアミノ酸残基は、例えばアルキニル基を有する化合物とのヒュスゲン［３＋２］環化付加反応（いわゆる「クリック」化学反応）を促進することが当業者に公知である。この反応は、当業者が非天然アミノ酸の部位特異的位置で抗体に容易かつ迅速にコンジュゲートすることを可能にする。
【０２９１】
特定の実施形態では、第１の反応基はアルキニル部分であり（例えば限定はされないが、非天然アミノ酸ｐ−プロパルギロキシフェニルアラニン中、ここでプロパギル基は時としてアセチレン部分とも称される）、第２の反応基はアジド部分であり、かつ［３＋２］環化付加化学を用いることができる。特定の実施形態では、第１の反応基はアジド部分（例えば限定はされないが、非天然アミノ酸ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン中）であり、かつ第２の反応基はアルキニル部分である。
【０２９２】
上式では、各Ｌは、二価リンカーを表す。二価リンカーは、当業者に公知の任意の二価リンカーであり得る。一般に、二価リンカーは、非天然アミノ酸の官能基Ｒおよびα炭素に対して共有結合を形成する能力がある。有用な二価リンカーは、結合、アルキレン、置換アルキレン、ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、アリレン、置換アリレン、ヘテロアリレンおよび置換ヘテロアリレン。特定の実施形態では、Ｌは、Ｃ１−１０アルキレンまたはＣ１−１０ヘテロアルキレンである。
【０２９３】
本方法で用いられる非天然アミノ酸および本明細書に記載の組成物は、以下の４つの特性：（１）非天然アミノ酸の側鎖上の少なくとも１つの官能基が、２０の共通の遺伝的にコードされたアミノ酸（すなわち、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリン）の化学反応性に対して直交性のまたは非天然アミノ酸を含むポリペプチド中に存在する天然アミノ酸の化学反応性に対して少なくとも直交性の少なくとも１つの特性および／もしくは活性および／もしくは反応性を有する；（２）導入される非天然アミノ酸が、２０の共通の遺伝的にコードされたアミノ酸に対して実質的に化学的に不活性である；（３）非天然アミノ酸が、好ましくは天然に存在するアミノ酸と同等の安定性でまたは典型的な生理学的条件下で、安定的にポリペプチド中に組み込まれ得、さらに好ましくはかかる組み込みは、インビボ系を介して生じ得る；ならびに（４）非天然アミノ酸は、オキシム官能基または試薬との反応によりオキシム基に形質転換可能な官能基を含み、それは、好ましくは非天然アミノ酸を含むポリペプチドの生物学的特性を破壊しない条件下である（当然ながら生物学的特性のかかる破壊は、修飾／形質転換が目的でない場合である）か、または形質転換が約４〜約８の間のｐＨでの水性条件下で生じ得る場合であるか、または非天然アミノ酸上の反応性部位が求電子性部位である場合である、の少なくとも１つを有する。任意の数の非天然アミノ酸が、ポリペプチドに導入され得る。非天然アミノ酸はまた、保護もしくはマスクされたオキシム、または保護基の脱保護もしくはマスクされた基のアンマスキング後にオキシム基に形質転換可能な保護もしくはマスクされた基を含んでもよい。非天然アミノ酸はまた、保護またはマスクされたカルボニルまたはジカルボニル基を含んでもよく、それは、保護基の脱保護もしくはマスクされた基のアンマスキング後にカルボニルもしくはジカルボニル基に形質転換可能であり、それによりヒドロキシルアミンまたはオキシムと反応し、オキシム基を形成するのに利用可能である。
【０２９４】
さらなる実施形態では、本明細書に記載の方法および組成物にて用いられてもよい非天然アミノ酸として、限定はされないが、光活性化可能なクロスリンカーを含むアミノ酸、スピン標識アミノ酸、蛍光アミノ酸、金属結合アミノ酸、金属含有アミノ酸、放射活性アミノ酸、新規な官能基を有するアミノ酸、他の分子と共有結合的または非共有結合的に相互作用するアミノ酸、光ケージド化および／または光異性化アミノ酸、ビオチンまたはビオチン類似体を含むアミノ酸、糖置換セリンなどのグリコシル化アミノ酸、他の炭水化物修飾アミノ酸、ケト含有アミノ酸、アルデヒド含有アミノ酸、ポリエチレングリコールまたは他のポリエーテルを含むアミノ酸、重原子置換アミノ酸、化学切断可能および／または光切断可能アミノ酸、限定はされないがポリエーテルまたは長鎖炭化水素（限定はされないが、約５個より多いかまたは約１０個より多い炭素を含む）を含む、天然アミノ酸と比べて細長い側鎖を有するアミノ酸、炭素結合糖含有アミノ酸、レドックス活性アミノ酸、アミノチオ酸含有アミノ酸、および１つ以上の毒性部分を含むアミノ酸、が挙げられる。
【０２９５】
一部の実施形態では、非天然アミノ酸は、糖部分を含む。かかるアミノ酸の例として、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−ガラクトサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−トレオニン、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−アスパラギンおよびＯ−マンノサミニル−Ｌ−セリンが挙げられる。かかるアミノ酸の例として、アミノ酸と糖との間の天然に存在するＮ−またはＯ−結合が一般に天然に見出されない共有結合によって置き換えられる場合の例、例えば限定はされないが、アルケン、オキシム、チオエーテル、アミドなども挙げられる。かかるアミノ酸の例として、２−デオキシ−グルコース、２−デオキシガラクトースなどの天然に存在するタンパク質中に一般に見出されない糖も挙げられる。
【０２９６】
特定の実施形態では、非天然アミノ酸は、
【化３１】
2019506385.tif 000036
【化３２】
2019506385.tif 000037
【化３３】
2019506385.tif 000038
またはそれらの塩からなる群から選択される。かかる非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖、もしくはポリヌクレオチドおよび任意選択的には翻訳後修飾体に組み込まれてもよい。
【０２９７】
特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、式５１〜６０：
【化３４】
2019506385.tif 000039
またはそれらの塩のいずれかに準じる。
【０２９８】
特定の実施形態では、非天然アミノ酸は、上記化合物３０、５３、５６、５９、および６０からなる群から選択される。特定の実施形態では、非天然アミノ酸は、化合物３０である。特定の実施形態では、非天然アミノ酸は、化合物５６である。
【０２９９】
１１．抗体コンジュゲートの調製
１１．１．抗原の調製
抗体の産生に用いられるべきＣＤ７４抗原は、インタクトなＣＤ７４またはＣＤ７４の断片であってもよい。抗体を産生するために有用なＣＤ７４の他の形態は、当業者にとって明らかになるであろう。
【０３００】
１１．２．モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、例えば、Kohler et al., Nature, 1975, 256:495-497により最初に記載されたハイブリドーマ法を用いて、かつ／または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）により、得られてもよい。モノクローナル抗体はまた、例えばファージまたは酵母に基づくライブラリーを用いて得られてもよい。例えば、米国特許第８，２５８，０８２号および米国特許第８，６９１，７３０号を参照のこと。
【０３０１】
ハイブリドーマ法では、免疫のために用いられるタンパク質に特異的に結合することになる抗体を産生するかまたは産生する能力があるリンパ球を誘発するため、マウスまたは他の適切な宿主動物が免疫される。あるいは、リンパ球は、インビトロで免疫されてもよい。次に、リンパ球は、好適な融剤、例えばポリエチレングリコールを用いて骨髄腫細胞と融合され、ハイブリドーマ細胞を形成する。Goding J.W., Monoclonal Antibodies: Principles and Practice 3rd ed. (1986) Academic Press, San Diego, CAを参照のこと。
【０３０２】
ハイブリドーマ細胞は、融合されていない親骨髄腫細胞の増殖または生存を阻害する１つ以上の物質を含有する好適な培地中で播種され、増殖される。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠如している場合、ハイブリドーマのための培地は、典型的には、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を阻止する物質である、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンを含むことになる（ＨＡＴ培地）。
【０３０３】
有用な骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞により抗体の安定な高レベルの産生を支持し、ＨＡＴ培地の存在または不在などの高感度培地条件であるものである。これらの中で好ましい骨髄腫細胞株は、マウス骨髄腫株、例えばＭＯＰ−２１およびＭＣ−１１マウス腫瘍（Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, CAから入手可能）由来のもの、およびＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞（アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関(American Type Culture Collection), Rockville, MDから入手可能）である。ヒトモノクローナル抗体の産生のため、ヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株についても記載がなされている。例えば、Kozbor, J. Immunol., 1984, 133:3001を参照のこと。
【０３０４】
所望される特異性、親和性、および／または生物学的活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞の同定後、選択されたクローンは、限界希釈法によりサブクローニングされ、標準的方法により増殖されてもよい。Goding、上記を参照のこと。この目的に適した培地として、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。さらに、ハイブリドーマ細胞は、動物における腹水腫瘍としてインビボで増殖されてもよい。
【０３０５】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、通常の手順を用いて（例えば、モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合する能力があるオリゴヌクレオチドプローブを用いることにより）、容易に単離され、配列決定され得る。したがって、ハイブリドーマ細胞は、所望される特性を有する抗体をコードするＤＮＡの有用な供給源として役立ち得る。一旦単離されると、ＤＮＡは発現ベクターに挿入されてもよく、次いで細菌（例えば、大腸菌(E. coli)）、酵母（例えば、サッカロミセス(Saccharomyces)またはピキア菌種(Pichia sp.)）、ＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または本来なら抗体を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞に遺伝子導入され、モノクローナル抗体を産生する。
【０３０６】
１１．３．ヒト化抗体
ヒト化抗体は、モノクローナル抗体の構成部分の大部分または全部を対応するヒト抗体配列と置換することにより作製されてもよい。結果として、抗原特異的な可変部、またはＣＤＲのみが非ヒト配列からなるようなハイブリッド分子が作製される。ヒト化抗体を得るための方法は、例えば、Winter and Milstein, Nature, 1991, 349:293-299; Rader et al., Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 1998, 95:8910-8915; Steinberger et al., J. Biol. Chem., 2000, 275:36073-36078; Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1989, 86:10029-10033；ならびに米国特許第５，５８５，０８９号、米国特許第５，６９３，７６１号、米国特許第５，６９３，７６２号、および米国特許第６，１８０，３７０号に記載されるものを含む。
【０３０７】
１１．４．ヒト抗体
ヒト抗体は、当該技術分野で公知の種々の技術により、例えばトランスジェニック動物（例えばヒト化マウス）．を用いることにより作製され得る。例えば、Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1993, 90:2551; Jakobovits et al., Nature, 1993, 362:255-258; Bruggermann et al., Year in Immuno., 1993, 7:33；ならびに米国特許第５，５９１，６６９号、米国特許第５，５８９，３６９号および米国特許第５，５４５，８０７号を参照のこと。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリー（例えば、Hoogenboom et al., J. Mol. Biol., 1991, 227:381-388; Marks et al., J. Mol. Biol., 1991, 222:581-597；ならびに米国特許第５，５６５，３３２号および米国特許第５，５７３，９０５号）から誘導され得る。ヒト抗体はまた、インビトロ活性化Ｂ細胞（例えば、米国特許第５，５６７，６１０号および米国特許第５，２２９，２７５号）によって作製されてもよい。ヒト抗体はまた、酵母に基づくライブラリー（例えば米国特許第８，６９１，７３０号を参照）から誘導されてもよい。
【０３０８】
１１．５．コンジュゲーション
抗体コンジュゲートは、標準的技術により調製され得る。特定の実施形態では、抗体は、抗体からペイロードへの結合を形成するのに適した条件下でペイロード前駆体と接触され、抗体−ペイロードコンジュゲートを形成する。特定の実施形態では、抗体は、抗体からリンカーへの結合を形成するのに適した条件下でリンカー前駆体と接触される。得られる抗体−リンカーは、抗体−リンカーからペイロードへの結合を形成するのに適した条件下でペイロード前駆体と接触され、抗体−リンカー−ペイロードコンジュゲートを形成する。特定の実施形態では、ペイロード前駆体は、ペイロードからリンカーへの結合を形成するのに適した条件下でリンカー前駆体と接触される。得られるペイロード−リンカーは、ペイロード−リンカーから抗体への結合を形成するのに適した条件下で抗体と接触され、抗体−リンカー−ペイロードコンジュゲートを形成する。例示的な条件は、下記の実施例に記載される。
【０３０９】
１２．ベクター、宿主細胞、および組換え方法
本発明はまた、抗ＣＤ７４抗体コンジュゲートをコードする単離された核酸、核酸を含むベクターおよび宿主細胞、ならびに抗体を産生するための組換え技術を提供する。
【０３１０】
抗体の組換え産生においては、それをコードする核酸は、さらなるクローニング（すなわちＤＮＡの増幅）または発現のため、単離され、複製可能なベクターに挿入されてもよい。一部の態様では、核酸は、例えば米国特許第５，２０４，２４４号に記載のように、相同組換えにより作製されてもよい。
【０３１１】
多種のベクターが当該技術分野で公知である。ベクター成分は、一般に、限定はされないが、例えば米国特許第５，５３４，６１５号に記載のように、シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列の１つ以上を含む。
【０３１２】
好適な宿主細胞の例示的な例が下記に提示される。これらの宿主細胞は、限定することが意図されない。
【０３１３】
好適な宿主細胞は、任意の原核生物（例えば細菌）、下等真核生物（例えば酵母）、または高等真核生物（例えば哺乳類）細胞を含む。好適な原核生物は、真正細菌、例えば、グラム陰性またはグラム陽性生物、例えば、腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、例えば、エシェリキア(Escherichia)（大腸菌(E. coli)）、エンテロバクター(Enterobacter)、エルウィニア(Erwinia)、クレブシエラ(Klebsiella)、プロテウス(Proteus)、サルモネラ(Salmonella)（ネズミチフス菌(S. typhimurium)）、セラチア(Serratia)（セラチア・マルセッセンス(S. marcescans)）、シゲラ(Shigella)、桿菌(Bacilli)（枯草菌(B. subtilis)およびバシラス・リケニフォルミス(B. licheniformis)）、シュードモナス(Pseudomonas)（緑膿菌(P. aeruginosa)）、およびストレプトマイセス(Streptomyces)を含む。１つの有用な大腸菌(E. coli)クローニング宿主は大腸菌(E. coli)２９４であるが、大腸菌(E. coli)B、大腸菌(E. coli) X1776、および大腸菌(E. coli) W3110などの他の株は好適である。
【０３１４】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物もまた、抗ＣＤ７４抗体をコードするベクターに適したクローニングまたは発現宿主である。出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、または通常のパン酵母は、一般に用いられる下等真核生物宿主微生物である。しかし、多数の他の属、種、および株、例えば、分裂酵母(Schizosaccharomyces pombe)、クルイベロマイセス(Kluyveromyces)（クルイベロマイセス・ラクティス(K. lactis)、クルイベロマイセス・フラジリス(K. fragilis)、クルイベロマイセス・ブルガリカス(K. bulgaricus)、クルイベロマイセス・ウィッカラミイ(K. wickeramii)、クルイベロマイセス・ワルティ(K. waltii)、クルイベロマイセス・ドロソフィラルム(K. drosophilarum)、クルイベロマイセス・サーモトレランス(K. thermotolerans)、およびクルイベロマイセス・マルシアヌス(K. marxianus)）、ヤロウイア(Yarrowia)、ピキア・パストリス(Pichia pastoris)、カンジダ(Candida)（カンジダ・アルビカンス(C. albicans)）、トリコデルマ・レーシア(Trichoderma reesia)、アカバンカビ(Neurospora crassa)、シュワンニオマイセス(Schwanniomyces)（シュワンニオミセス・オシデンタリス(S. occidentalis)）、および糸状菌、例えば、アオカビ(Penicillium)、トリポクラジウム(Tolypocladium)、およびアスペルギルス(Aspergillus)（アスペルギルス・ニデュランス(A. nidulans）およびアスペルギルス・ニガー(A. niger)）などが利用可能であり、有用である。
【０３１５】
有用な哺乳類宿主細胞は、ＣＯＳ−７細胞、ＨＥＫ２９３細胞；ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞；チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）；マウスセルトリ細胞；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）などを含む。
【０３１６】
本発明の抗ＣＤ７４抗体を産生するのに用いられる宿主細胞は、種々の培地中で培養されてもよい。例えば、ハムＦ１０、最小必須培地（ＭＥＭ）、ＲＰＭＩ−１６４０、およびダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）などの市販の培地は、宿主細胞の培養に適する。さらに、Ham et al., Meth. Enz., 1979, 58:44; Barnes et al., Anal. Biochem., 1980, 102:255；および米国特許第４，７６７，７０４号、米国特許第４，６５７，８６６号、米国特許第４，９２７，７６２号、米国特許第４，５６０，６５５号、および米国特許第５，１２２，４６９号、または国際公開第９０／０３４３０号および国際公開第８７／００１９５号に記載される培地のいずれかが用いられてもよい。
【０３１７】
これらの培地のいずれかは、必要に応じて、ホルモンおよび／または他の成長因子（インスリン、トランスフェリン、または上皮成長因子など）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸など）、緩衝液（ヘペスなど）、ヌクレオチド（アデノシンおよびチミジンなど）、抗生物質、微量元素（通常、マイクロモル範囲内の最終濃度で存在する無機化合物と定義される）、およびグルコースまたは等価なエネルギー源が添加されてもよい。任意の他の必要な添加物の場合でも、当業者に公知となる適切な濃度で含まれてもよい。
【０３１８】
培養条件、例えば温度、ｐＨなどは、発現用に選択された宿主細胞で以前に用いられたものであり、当業者にとって明らかになるであろう。
【０３１９】
組換え技術を用いるとき、抗体は、細胞内のペリプラズム空間内で産生され得るか、または直接的に培地に分泌され得る。最初のステップとして抗体が細胞内で産生される場合、宿主細胞または溶解断片のいずれかの微粒子片が、例えば遠心分離または限外濾過により除去される。例えば、Carter et al.(Bio/Technology, 1992, 10:163-167)は、大腸菌(E. coli)のペリプラズム空間に分泌される抗体を単離するための手順を記述している。簡潔に述べると、細胞ペーストが、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、およびフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）の存在下で、約３０分かけて解凍される。細胞片は、遠心分離により除去され得る。
【０３２０】
一部の実施形態では、抗体は、無細胞系内で産生される。一部の態様では、無細胞系は、Yin et al., mAbs, 2012, 4:217-225（その全体が参照により援用される）に記載のようなインビトロ転写および翻訳系である。一部の態様では、無細胞系では、真核細胞または原核細胞からの無細胞抽出液が用いられる。一部の態様では、原核細胞は、大腸菌(E. coli)である。抗体の無細胞発現は、例えば、抗体が不可溶性凝集体として細胞内で蓄積する場合、またはペリプラズム発現からの収量が低い場合、有用であり得る。
【０３２１】
抗体が培地中に分泌される場合、かかる発現系からの上清は、一般に、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、Amicon（登録商標）またはMillipore（登録商標）Pellcon（登録商標）限外濾過ユニットを用いて最初に濃縮される。タンパク質加水分解を阻害するため、前記ステップのいずれかにＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤が含まれてもよく、また外来性汚染物質の成長を阻止するため、抗生物質が含まれてもよい。
【０３２２】
細胞から調製される抗体組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、およびアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製され得、ここでアフィニティークロマトグラフィーは特に有用な精製技術である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依存する。ヒトγ１、γ２、またはγ４重鎖に基づく抗体を精製するため、プロテインＡを用いることができる(Lindmark et al., J. Immunol. Meth., 1983, 62:1-13)。プロテインＧは、すべてのマウスアイソタイプおよびヒトγ３にとって有用である(Guss et al., EMBO J., 1986, 5:1567-1575)。
【０３２３】
親和性リガンドが付着する対象のマトリックスはアガロースであることが最も多いが、他のマトリックスが利用可能である。制御された細孔ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなどの機械的に安定なマトリックスは、アガロースで達成され得る場合よりも速い流速および短い処理時間を可能にする。この抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、BakerBond ABX（登録商標）樹脂は精製にとって有用である。
【０３２４】
タンパク質精製のための他の技術、例えば、イオン交換カラムでの分画、エタノール沈降、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンSepharose（登録商標）でのクロマトグラフィー、等電点電気泳動、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈降もまた、利用可能であり、当業者により適用され得る。
【０３２５】
任意の予備精製ステップ後、目的の抗体および汚染物質を含む混合物は、一般に低い塩濃度（例えば約０〜０．２５Ｍ塩）で実施される、約２．５〜４．５の間のｐＨでの溶出緩衝液を用いる低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーにかけてもよい。
【０３２６】
１３．医薬組成物および投与方法
本明細書に提供される抗体コンジュゲートは、当該技術分野で利用可能な方法および本明細書で開示される方法を用いて医薬組成物に配合され得る。本明細書に提供される抗体コンジュゲートのいずれかは、適切な医薬組成物中に提供され、好適な投与経路により投与され得る。
【０３２７】
本明細書に提供される方法は、本明細書に提供される少なくとも１つの抗体および１つ以上の適合でき、薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物を投与することを包含する。これに関連して、用語「薬学的に許容できる」は、連邦または州政府の規制当局により認可されているまたは米国薬局方(U.S. Pharmacopeia)もしくは他の一般に認められている薬局方に、動物、より詳細にはヒトでの使用に関して列記されていることを意味する。用語「担体」は、希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント（完全および不完全））、賦形剤、または治療薬とともに投与される溶媒を含む。かかる薬学的担体は、滅菌液体、例えば水および油、例えば、石油、動物、植物または合成起源のもの、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などであり得る。医薬組成物が静脈内に投与されるとき、担体として水を用いることができる。液体担体として、特に注射可能溶液用に、生理食塩水および水性ブドウ糖およびグリセロール溶液もまた用いることができる。好適な薬学的担体の例が、Martin, E.W., Remington’s Pharmaceutical Sciencesに記載されている。
【０３２８】
診療では、本明細書に提供される医薬組成物または抗体コンジュゲートは、当該技術分野で公知の任意の経路により投与されてもよい。特定の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物または抗体は、非経口的に投与される。
【０３２９】
非経口投与用の組成物は、乳濁液または滅菌溶液であり得る。非経口組成物は、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、および注射可能有機エステル（例えばオレイン酸エチル）を含んでもよい。これらの組成物はまた、湿潤剤、等張化剤、乳化剤、分散剤および安定化剤を含有し得る。滅菌は、幾つかの方法で、例えば細菌学的フィルターを用いて、放射線により、または加熱により実施され得る。非経口組成物はまた、滅菌水または任意の他の注射可能な滅菌培地における使用時に溶解され得る滅菌固体組成物の形態で調製され得る。
【０３３０】
特定の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、医薬組成物または単回単位剤形である。本明細書に提供される医薬組成物および単回単位剤形は、１つ以上の予防または治療抗体コンジュゲートを予防または治療有効量で含む。
【０３３１】
典型的な医薬組成物および剤形は、１つ以上の賦形剤を含む。好適な賦形剤は、薬学の当業者に周知であり、好適な賦形剤の非限定例として、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。特定の賦形剤が医薬組成物または剤形への組み込みに適するか否かは、当該技術分野で周知の種々の要素、例えば限定はされないが、剤形が対象に投与される方法および剤形中の特異抗体に依存する。組成物または単回単位剤形はまた、必要に応じて、少量の湿潤剤または乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含有し得る。
【０３３２】
本明細書に提供されるラクトースを含まない組成物は、当該技術分野で周知であり、例えば米国薬局方(U.S. Pharmacopeia) (USP) SP (XXI)/NF (XVI)に列記される賦形剤を含み得る。一般に、ラクトースを含まない組成物は、活性成分、結合剤／充填剤、および滑沢剤を、薬学的に適合でき、薬学的に許容できる量で含む。例示的なラクトースを含まない剤形は、活性成分、微結晶性セルロース、予備ゼラチン化デンプン、およびステアリン酸マグネシウムを含む。
【０３３３】
本明細書にさらに包含されるのは、水が一部の抗体コンジュゲートの分解を促進し得ることから、抗体を含む無水医薬組成物および剤形である。
【０３３４】
本明細書に提供される無水医薬組成物および剤形は、無水または低水分含有成分および低水分または低湿度条件を用いて調製され得る。ラクトースおよび一次または二次アミンを含む少なくとも１つの活性成分を含む医薬組成物および剤形は、製造、パッケージング、および／または貯蔵の間での水分および／または湿気との実質的接触が想定される場合、無水であり得る。
【０３３５】
無水医薬組成物は、その無水性が維持されるように調製および貯蔵される必要がある。したがって、無水組成物は、好適なフォーミュラリーキット中に含めることができるように、水への曝露を防止することが知られる材料を用いてパッケージングされ得る。好適なパッケージングの例として、限定はされないが、密封ホイル、プラスチック、単位用量容器（例えばバイアル）、ブリスターパック、およびストリップパックが挙げられる。
【０３３６】
さらに提供されるのは、抗体が分解することになる速度を低減する１つ以上の賦形剤を含む医薬組成物および剤形である。本明細書中で「安定剤」と称されるかかる抗体コンジュゲートは、限定はされないが、アスコルビン酸などの抗酸化剤、ｐＨ緩衝液、または塩緩衝液を含む。
【０３３７】
１３．１．非経口剤形
特定の実施形態では、提供されるのは、非経口剤形である。非経口剤形は、限定はされないが、皮下、静脈内（ボーラス注射を含む）、筋肉内、および動脈内を含む様々な経路により対象に投与され得る。それらの投与が典型的には汚染物質に対する対象の自然防御を迂回することから、非経口剤形は、典型的には、無菌であるかまたは対象への投与前に滅菌され得る。非経口剤形の例として、限定はされないが、注射用即時溶液、注射用の薬学的に許容できる溶媒に溶解または懸濁されるべき即時乾燥生成物、注射用即時懸濁液、および乳濁液が挙げられる。
【０３３８】
非経口剤形を提供するのに使用可能な好適な溶媒は当業者に周知である。例として、限定はされないが、注射用水（ＵＳＰ）；水性媒体、例えば限定はされないが、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、ブドウ糖注射液、ブドウ糖および塩化ナトリウム注射液、および乳酸リンゲル注射液；水混和性溶媒、例えば限定はされないが、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、およびポリプロピレングリコール；ならびに非水性溶媒、例えば限定はされないが、トウモロコシ油、綿実油、ピーナッツ油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、および安息香酸ベンジルが挙げられる。
【０３３９】
本明細書に開示される抗体コンジュゲートの１つ以上の溶解度を増加させる賦形剤もまた、非経口剤形中に組み込まれ得る。
【０３４０】
１３．２．用量および単位剤形
ヒト治療薬では、医師は、予防的または根治的治療に従い、また年齢、体重、感染のステージおよび治療されるべき対象に特異的な他の要素に従い、最適であると考える薬量を決定することになる。
【０３４１】
障害またはその１つ以上の症状の予防または治療において有効となる抗体または組成物の量は、疾患または状態の性質および重症度、ならびに抗体が投与される経路とともに変動することになる。頻度および用量もまた、施される特定の治療（例えば治療薬または予防薬）や、障害、疾患、または状態の重症度、投与経路に依存する各対象に特異的な要素、ならびに対象の年齢、体重、応答、および過去の病歴に従って変動することになる。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得られる用量反応曲線から外挿されてもよい。
【０３４２】
特定の実施形態では、組成物の例示的用量は、対象または試料重量のキログラムあたりの抗体のミリグラムまたはマイクログラム量（例えば、約１０μｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、または約１００μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ）を含む。特定の実施形態では、対象における障害、またはその１つ以上の症状を予防する、治療する、処置する、または寛解させるために投与される、本明細書に提供される抗体の、抗体の重量に基づく用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または１５ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上（対象の体重）である。別の実施形態では、対象における障害、またはその１つ以上の症状を予防する、治療する、処置する、または寛解させるために投与される組成物または本明細書に提供される組成物の用量は、０．１ｍｇ〜２００ｍｇ、０．１ｍｇ〜１００ｍｇ、０．１ｍｇ〜５０ｍｇ、０．１ｍｇ〜２５ｍｇ、０．１ｍｇ〜２０ｍｇ、０．１ｍｇ〜１５ｍｇ、０．１ｍｇ〜１０ｍｇ、０．１ｍｇ〜７．５ｍｇ、０．１ｍｇ〜５ｍｇ、０．１〜２．５ｍｇ、０．２５ｍｇ〜２０ｍｇ、０．２５〜１５ｍｇ、０．２５〜１２ｍｇ、０．２５〜１０ｍｇ、０．２５ｍｇ〜７．５ｍｇ、０．２５ｍｇ〜５ｍｇ、０．２５ｍｇ〜２．５ｍｇ、０．５ｍｇ〜２０ｍｇ、０．５〜１５ｍｇ、０．５〜１２ｍｇ、０．５〜１０ｍｇ、０．５ｍｇ〜７．５ｍｇ、０．５ｍｇ〜５ｍｇ、０．５ｍｇ〜２．５ｍｇ、１ｍｇ〜２０ｍｇ、１ｍｇ〜１５ｍｇ、１ｍｇ〜１２ｍｇ、１ｍｇ〜１０ｍｇ、１ｍｇ〜７．５ｍｇ、１ｍｇ〜５ｍｇ、または１ｍｇ〜２．５ｍｇである。
【０３４３】
用量は、好適なスケジュール、例えば、週に１回、２回、３回、または４回に従って投与され得る。当業者にとって明らかになるように、場合によっては、本明細書に開示される範囲外の用量の抗体を用いることが必要であり得る。さらに、臨床医または治療医師が対象応答とともに治療をいつどのように介入し、調節し、または終結させるか知ることになることが記録される。
【０３４４】
異なる治療有効量は、当業者により容易に理解されるように、異なる疾患および状態に適用可能であり得る。同様に、かかる障害を予防する、処置する、治療する、または寛解させるのに十分であるが、本明細書に提供される抗体コンジュゲートに関連した有害作用を引き起こすのに不十分であるか、または低減するのに十分である量もまた、本明細書に記載される用量および投与頻度スケジュールにより包含される。さらに、本明細書に提供される組成物が複数回用量で対象に投与されるとき、用量の全部が同じである必要はない。例えば、対象に投与される用量は、組成物の予防または治療効果を改善するように増加されてもよく、または特定の対象が経験している１つ以上の副作用を低減するように低減されてもよい。
【０３４５】
特定の実施形態では、治療または予防は、１つ以上の負荷用量、その後の１つ以上の維持用量の本明細書に提供される抗体または組成物を用いて開始され得る。
【０３４６】
特定の実施形態では、対象の血液または血清中で抗体の定常状態濃度を得るように、本明細書に提供される抗体または組成物の用量が投与され得る。定常状態濃度は、当業者に利用可能な技術による測定により決定され得るか、または対象の身長、体重および年齢などの身体的特徴を基準とし得る。
【０３４７】
特定の実施形態では、同じ組成物の投与は、反復されてもよく、その投与は、少なくとも１日、２日、３日、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、２か月、７５日、３か月、または６か月で分割されてもよい。他の実施形態では、同じ予防薬または治療薬の投与は、反復されてもよく、その投与は、少なくとも１日、２日、３日、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、２か月、７５日、３か月、または６か月で分割されてもよい。
【０３４８】
１４．治療的適用
治療的適用においては、本発明の抗体コンジュゲートは、薬学的に許容できる剤形、例えば当該技術分野で公知のものや上で考察されたもので、哺乳動物、一般にヒトに投与される。例えば、本発明の抗体コンジュゲートは、ヒトに、静脈内にボーラスとして、または筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液嚢内、くも膜下腔内、または腫瘍内経路による長期にわたる持続注入により、投与されてもよい。抗体コンジュゲートはまた、腫瘍周囲、病変内、または病変周囲経路により好適に投与され、局所および全身治療効果が発揮される。腹腔内経路は、例えば卵巣腫瘍の治療において特に有用であり得る。
【０３４９】
本明細書に提供される抗体コンジュゲートは、ＣＤ７４の上方制御を含む任意の疾患または状態の治療において有用であり得る。ＣＤ７４発現の上方制御は、がんおよび自己免疫性疾患（Borghese et al., Exp. Op. Ther. Targets, 2011, 15:237-251、その全体が参照により援用される）、ならびに感染症（Hofman et al., Modern Pathology, 2007, 20:974-989、その全体が参照により援用される）および炎症性状態（Vera et al., Exp. Biol. & Med., 2008, 233:620-626、その全体が参照により援用される）において認められている。ＣＤ７４は、多発性骨髄腫にて中等度から高レベルで発現されることが知られている。Burton et al., Clin. Cancer Res., 2004, 10:6606-6611（その全体が参照により援用される）。ＣＤ７４発現はまた、膵がんの進行に関連した主要な因子であることが知られている。Zhang et al., Hepatobiliary Pancreat. Dis. Int., 2014, 13:81-86（その全体が参照により援用される）。
【０３５０】
特定の態様では、本明細書に提供される抗体コンジュゲートは、１つ以上のＢ細胞悪性腫瘍の治療において有用である。Ｂ細胞悪性腫瘍は、熟練した施術者に公知の任意のＢ細胞悪性腫瘍であり得る。これらは、Revised European-American Lymphoma classification system (REAL)に記載されるＢ細胞悪性腫瘍ならびにHarris et al., 1994, Blood 84:1361-1392およびArmitage & Weisenburger, 1998, J. Clin. Oncol. 16:2780-2795（各々、その全体が参照により援用される）に記載されるものを含む。特定の実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）、小リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）からなる群から選択される。特定の実施形態では、ＤＬＢＣＬは、原発性縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富型大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性皮膚びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、下肢型（原発性皮膚ＤＬＢＣＬ、下肢型）、高齢者のＥＢＶ陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、炎症に関連したびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫からなる群から選択される。特定の実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍は、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、原発性中枢神経系リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病に発生する大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫との中間型特徴を有する分類不能型）、およびＢ細胞リンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫との中間型特徴を有する分類不能型）からなる群から選択される。特定の実施形態では、悪性腫瘍は、ホジキンリンパ腫、古典的ホジキンリンパ腫、および結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫から選択される。特定の実施形態では、悪性腫瘍は、非ホジキンリンパ腫である。
【０３５１】
特定の態様では、本明細書に提供される抗体コンジュゲートは、１つ以上の白血病の治療において有用である。特定の実施形態では、白血病は、急性白血病である。特定の実施形態では、白血病は、慢性白血病である。特定の実施形態では、白血病は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、およびヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）からなる群から選択される。
【０３５２】
１５．診断的適用
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体コンジュゲートは、診断的適用において用いられる。例えば、抗ＣＤ７４抗体は、ＣＤ７４タンパク質についてのアッセイにおいて有用であり得る。一部の態様では、様々な細胞および組織内でのＣＤ７４の発現を検出するため、抗体を用いることができる。これらのアッセイは、例えば、がん、感染症および自己免疫性疾患の診断において有用であり得る。
【０３５３】
一部の診断的適用では、この抗体は、検出可能部分で標識されてもよい。好適な検出可能部分は、限定はされないが、放射性同位元素、蛍光標識、および酵素基質標識を含む。本発明の別の実施形態では、抗ＣＤ７４抗体は、標識される必要がなく、その存在は、抗ＣＤ７４抗体に特異的に結合する標識抗体を用いて検出され得る。
【０３５４】
１６．親和性精製試薬
本発明の抗体コンジュゲートは、親和性精製剤として用いられてもよい。このプロセスでは、抗体コンジュゲートは、当該技術分野で周知の方法を用いて、樹脂または濾紙のような固相上に固定化されてもよい。固定化抗体は、精製されるべきＣＤ７４タンパク質（またはその断片）を含有する試料と接触され、その後、支持体が、固定化抗体に結合された、ＣＤ７４タンパク質以外の試料中の材料を実質的に全部除去することになる好適な溶媒で洗浄される。最後に、支持体は、ＣＤ７４タンパク質を抗体から放出することになる別の好適な溶媒、例えばｐＨ５．０のグリシン緩衝液で洗浄される。
【０３５５】
１７．キット
一部の実施形態では、本発明の抗体は、キット、すなわち所定量の試薬と手順を実施するための使用説明書のパッケージされた組み合わせにて提供され得る。一部の実施形態では、この手順は診断アッセイである。他の実施形態では、この手順は、治療手技である。
【実施例１】
【０３５６】
実施例１：抗ＣＤ７４抗体の産生および精製
抗体は、以前に述べたようなXpress CF（商標）反応で発現させ、以下の修飾を行った。この作業のための細胞を含まない抽出物は、大腸菌(E. coli)ＤｓｂＣおよびＦｋｐＡならびにアンバー停止コドンを解読するためのＣＵＡアンチコドンを含有する直交ｔＲＮＡを過剰発現するように設計したＯｍｐＴ感受性ＲＦ１弱毒化大腸菌(E. coli)株から作出した。抽出物は、７５μＭのヨードアセトアミドで、ＲＴ（２０℃）で４５分間処理し、ＩｇＧ重鎖および軽鎖ＤＮＡを除くすべての他の成分を含有するプリミックスに添加した。タンパク質合成反応における最終濃度は、３０％（ｖ／ｖ）の細胞抽出物、２ｍＭのパラ−アジドメチルフェニルアラニン（ｐＡＭＦ）（ＲＳＰアミノ酸）、５ｕＭの改変されたｐＡＭＦに特異的なアミノアシルｔＲＮＡ合成酵素（ＦＲＳ変異体）、２ｍＭのＧＳＳＧ、８ｍＭのグルタミン酸マグネシウム、１０ｍＭのグルタミン酸アンモニウム、１３０ｍＭのグルタミン酸カリウム、３５ｍＭのピルビン酸ナトリウム、１．２ｍＭのＡＭＰ、各々が０．８６ｍＭのＧＭＰ、ＵＭＰ、およびＣＭＰ、２ｍＭのアミノ酸（チロシンおよびフェニルアラニンにおける０．５ｍＭ以外）、４ｍＭのシュウ酸ナトリウム、１ｍＭのプトレシン、１．５ｍＭのスペルミジン、１５ｍＭのリン酸カリウム、１００ｎＭのＴ７  ＲＮＡＰ、１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ７４軽鎖ＤＮＡ、および４μｇ／ｍＬの抗ＣＤ７４重鎖ＤＮＡであった。Ｓ７およびＦ４０４位（各々、軽鎖および重鎖、ｋａｂａｔ付番）でｐＡＭＦ非天然アミノ酸をコードするため、部位特異的突然変異誘発を用いて、アンバー停止コドン（ＴＡＧ）をヌクレオチド配列に導入した。細胞を含まない反応物は、プラスミドＤＮＡの付加により開始させ、１０ｍＬを含有する１００×１０ｍｍのペトリ皿内、３０℃で１６時間インキュベートした。
【０３５７】
抗ＣＤ７４細胞を含まない反応物は、１０，０００ｒｐｍで３０分間の遠心分離により清澄化した。清澄化した上清を、Protein A MabSelect SuRe (GE Healthcare)に適用するとともに、標準洗浄および低ｐＨ溶出を行った。凝集体などの不純物は、５０ｍＭのリン酸ナトリウム、２００ｍＭのアルギニン、ｐＨ６．５で平衡化した分取ＳＥＣ(Sepax SRT-10C)を介して除去した。試料の最終配合は、ダルベッコのリン酸緩衝食塩水（１×ＤＰＢＳ）中で行った。
【０３５８】
実施例２：非天然アミノ酸を有する抗ＣＤ７４抗体の産生
抗体は、ＥＵ付番スキームに従う重鎖残基４０４位、２４１位、および２２２位、ならびにＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａ付番スキームに従う軽鎖残基７位に非天然アミノ酸を有するように調製した。１つの抗体は、４０４位に上の残基（５６）を含み、４つの抗体は、各々が４０４位、２４１位、２２２位（重鎖）および７位（軽鎖）に上の残基（３０）を含んだ。開始重鎖は配列番号２３６に従い、開始軽鎖は配列番号２５６に従った。
【０３５９】
各抗体は、図２Ａに示すように、少なくとも４００ｍｇ／Ｌの総収量で発現され、インタクトなＩｇＧは、図２Ｂに示すように、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより検出された。
【０３６０】
実施例３：抗体−ＰＥＧ４−メイタンシンコンジュゲートの産生
重鎖内のＥＵ４０４位に修飾アミノ酸残基３０（すなわち、パラ−アジド−メチル−Ｌ−フェニルアラニン、またはｐＡＭＦ）を含有する精製した抗ＣＤ７４  ＩｇＧを実施例２に従って得た。抗ＣＤ７４  ＩｇＧは、歪んだシクロオクチン試薬を用いて細胞毒メイタンシンにコンジュゲートし、コンジュゲートＡを得た。
【０３６１】
つまり、以下：
【化３５】
2019506385.tif 000040
に従うＤＢＣＯ−ＰＥＧ４−メイタンシン(ACME Bioscience; Palo Alto, CA)を、最終濃度が５ｍＭになるまでＤＭＳＯに溶解した。化合物は、１２対１の薬剤対抗体のモル比でＰＢＳ中の１ｍｇ／ｍＬの精製タンパク質に添加した。反応混合物をＲＴ（２０℃）で１７時間インキュベートした。余分な遊離薬剤は、ＰＢＳで平衡化したZebaプレート(Thermo Scientific)により除去した。
【０３６２】
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ(Bruker AutoFlex Speed)により、ＤＡＲ分析を行った。コンジュゲートタンパク質は、３７℃で１０分間、水中１０ｍＭのＴＣＥＰで還元し、３０％アセトニトリル、０．１％トリフルオロ酢酸中で最終濃度が５０μｇ／ｍＬになるまで希釈した。試料をＳ−ＤＨＢ  ＭＡＬＤＩマトリックス（５０％アセトニトリル、０．１％トリフルオロ酢酸中、５０ｍｇ／ｍＬ）と１：１で結合させ、１ｕＬをＭＡＬＤＩ標的に適用し、真空下で乾燥させた。リニアモードの全レーザーパワーで５０００ショットにおける各ＭＡＬＤＩスペクトルを蓄積し、重鎖および軽鎖の双方におけるコンジュゲートおよび未コンジュゲート質量における相対ピーク高さを比較することにより、最終ＤＡＲ分析を計算した。
【０３６３】
ピーク強度により、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦは、３．９２の薬剤対抗体比（ＤＡＲ）を示した。２つの位置異性体としてのコンジュゲートＡ：
【化３６】
2019506385.tif 000041
【０３６４】
実施例４：抗体コンジュゲートの産生
実施例２に記載の修飾アミノ酸残基３０を含有する精製した抗ＣＤ７４ＩｇＧを、メイタンシン、ヘミアステリン、アマニチン、ＭＭＡＦ、およびＭＭＡＥリンカー−ペイロード前駆体にコンジュゲートし、コンジュゲートＢ−Ｆと名付けた幾つかの抗ＣＤ７４−リンカー−ペイロードコンジュゲートを得た。
【０３６５】
コンジュゲートＢは、以下のＰＥＧ４−メイタンシン前駆体：
【化３７】
2019506385.tif 000042
を用いて、実施例３に合致するプロトコルに従って調製した。コンジュゲートＢは、以下の構造、またはその位置異性体：
【化３８】
2019506385.tif 000043
を有する。
【０３６６】
コンジュゲートＣは、「Hemiasterlin  Derivatives  for  Conjugation  and  Therapy」という表題の２０１５年１月３０日に出願された米国特許出願第６２／１１０，３９０号（参照により本明細書中に援用される）に記載のような以下のｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ヘミアステリン前駆体：
【化３９】
2019506385.tif 000044
を用いて調製した。コンジュゲートＣは、２つの位置異性体として示される以下の構造：
【化４０】
2019506385.tif 000045
を有する。
【０３６７】
コンジュゲートＤは、以下のリンカー−アマニチン前駆体：
【化４１】
2019506385.tif 000046
を用いて調製した。コンジュゲートＤは、（６−ブロモヘキシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを用いて、α−アマニチン(BioTrend LLC, Destin, Florida)のＯ−アルキル化を介して調製し、その後、Ｂｏｃ保護基の切断およびＤＢＣＯコハク酸塩を用いるアシル化を行った。コンジュゲートＤは、２つの位置異性体として示される以下の構造：
【化４２】
2019506385.tif 000047
を有する。
【０３６８】
コンジュゲートＥは、以下のＰＥＧ４−ＭＭＡＦ前駆体：
【化４３】
2019506385.tif 000048
を用いて調製した。コンジュゲートＥは、コンジュゲートＡについて概説された基本的方法が適用されるＭＭＡＦのアシル化(Doronina, S. et al 2003 Nat Biotechnol 21, 778-84)を介して調製した。コンジュゲートＥは、２つの位置異性体として示される以下の構造：
【化４４】
2019506385.tif 000049
を有する。
【０３６９】
コンジュゲートＦは、以下のＰＥＧ４−ＭＭＡＥ前駆体：
【化４５】
2019506385.tif 000050
を用いて調製した。コンジュゲートＦは、Doronina, S. et al 2003 Nat Biotechnol 21, 778-84に記載される方法の改良により調製した。コンジュゲートＦは、２つの位置異性体として示される以下の構造：
【化４６】
2019506385.tif 000051
を有する。
【０３７０】
各コンジュゲートの発現を２８０ｎｍでの吸光度により測定し、コンジュゲーションの程度をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦにより測定した。対照は、実施例３の未コンジュゲート抗体であった。データは下表にまとめる。
【０３７１】
【表４】
2019506385.tif 000052
【０３７２】
実施例５：細胞結合および細胞死
コンジュゲートＡは、下記の方法により、ＣＤ７４を発現する細胞に対して結合し、死滅させる能力について評価した。試験した細胞株は、Ｂリンパ腫、多発性骨髄腫、および白血病細胞を含んだ。対照は、未コンジュゲート抗ＣＤ７４抗体および遊離リンカー−薬剤（ＤＩＢＣＯ−ＰＥＧ４−メイタンシン）を含んだ。
【０３７３】
細胞結合アッセイ
細胞株は、２０％熱不活性化ウシ胎仔血清(Hyclone; Thermo Scientific; Waltham, MA)、２ｍＭのglutamax (Invitrogen; Carlsbad, CA)および１×ペニシリン／ストレプトマイシン(Cellgro-Mediatech; Manassas, VA)を添加した高グルコースＲＰＭＩ(Cellgro-Mediatech; Manassas, VA)中で維持した。細胞は、収集し、ＦＡＣＳ緩衝液（１％ウシ血清アルブミンを添加したＤＰＢＳ緩衝液）に再懸濁した。全部で２００，０００個の細胞／ウェルを、コンジュゲーションを伴わない抗ＣＤ７４抗体の連続希釈物とともに氷上で６０分間インキュベートした。細胞を氷冷ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、５ｕｇ／ｍｌのAlexa 647標識ロバ抗ヒトＩｇＧ抗体(Jackson Immune-Research)とともに氷上でさらに６０分間インキュベートした。未染色細胞および二次抗体単独で染色した細胞を対照として用いた。次に試料をＦＡＣＳ緩衝液を用いて２回洗浄し、BD FACS Cantoシステムを用いて分析した。平均蛍光強度は、GraphPad Prism上で一部位特異的結合方程式による非線形回帰分析を用いてフィッティングさせた。データは、幾何平均蛍光強度対抗体濃度（ｎＭ）として表した。
【０３７４】
細胞死アッセイ
遊離薬剤リンカーおよびコンジュゲートの細胞傷害性効果は、細胞増殖アッセイを用いて測定した。アッセイ当日、２５μｌの体積中の全部で１２５００個の細胞を３８４ウェル平底白色ポリスチレンプレートに播種した。遊離薬剤−リンカーおよびコンジュゲートは、ＲＰＭＩ培地で２倍の開始濃度（遊離薬剤リンカーにおいて１０００ｎＭ、ＡＤＣにおいて１００ｎＭ）で配合し、MultiScreen HTS 96-Well Filter Plates (Millipore)を通して濾過した。フィルター滅菌試料を無菌条件下で連続希釈（１：３）し、処理ウェルに添加した。プレートは、ＣＯ２インキュベーター内、３７℃で７２時間培養した。細胞生存度測定においては、Cell Titer-Glo（登録商標）試薬(Promega Corp.)３０μｌを各ウェルに添加し、プレートを製品の使用説明書に従って処理した。相対発光を、ENVISION（登録商標）プレートリーダー(Perkin-Elmer; Waltham, MA)で測定した。相対発光の読み取り値は、対照としての未処理細胞を用いて％生存度に変換した。データは、GraphPad Prismを用いて、ｌｏｇ（阻害剤）対応答、可変勾配、４パラメータフィット方程式を用いる非線形回帰分析によりフィッティングさせた。データは、遊離薬剤−リンカーまたはコンジュゲートの用量（ｎＭ）に対する％相対細胞生存度として表した。
【０３７５】
コンジュゲートＡにおける結果を以下の表２にまとめる。
【０３７６】
【表５】
2019506385.tif 000053
【０３７７】
実施例６：細胞結合および細胞死
コンジュゲートＡ〜Ｆの各々を、ＣＤ７４を発現する細胞に対して結合し、死滅させる能力について評価した。試験した細胞株は、Ｂリンパ腫、多発性骨髄腫、および白血病細胞を含んだ。対照は、未コンジュゲート抗ＣＤ７４抗体を含んだ。結果を以下の表３にまとめる。
【０３７８】
【表６】
2019506385.tif 000054
【０３７９】
実施例７：マウス多発性骨髄腫モデルにおけるインビボ抗腫瘍活性の評価
ヒト多発性骨髄腫モデル（播種性）における抗ＣＤ７４抗体−薬剤コンジュゲートのインビボ抗腫瘍有効性を検討するための試験を実施した。コンジュゲートＡ（実施例３）は、ＡＲＰ−１多発性骨髄腫細胞を接種した動物において評価した。ＡＲＰ−１（および同質遺伝子細胞株ＡＲＤ−１およびＣＡＧ）は、多発性骨髄腫を有する患者の骨髄吸引液から確立した（Kwong, K. Characterization of an Isogenic Model System for KDM6A/UTX Loss in Multiple Myeloma. (2013)、その全体が参照により本明細書中に援用される）。
【０３８０】
プロトコル．雌ＣＢ１７  ＳＣＩＤ（重症複合型免疫不全）にＡＲＰ−１細胞を尾静脈注射を介して接種した。腫瘍細胞接種に先立ち、動物を０．４ｍｇ／マウスのフルダラビンおよび２ｍｇ／マウスのシクロホスファミド（腹腔内注射）で前処置した。無作為化および治療は、腫瘍接種の１４日後に開始した。治療群は表４にまとめる。すべての被験物質は、１０ｍＭのクエン酸塩、ｐＨ６．０、１０％スクロース中で配合し、ＰＢＳで希釈した。動物に指定被験物質を静脈内注射により７日毎に４回投与した（ｑ７ｄ×４）。未治療動物は、化学的前処置を受けず、ＡＲＰ−１細胞が接種されなかった。体重を週２回監視した。溶媒対照動物が試験エンドポイント（大きい触知可能な内部腫瘍に基づく安楽死）に達した時、群２および群３からの動物３匹を剖検のために安楽死させ、フローサイトメトリー用に骨髄を（脛骨および大腿骨から）収集した。治療群における残存動物を、治療開始から最大３か月間監視した。
【０３８１】
【表７】
2019506385.tif 000055
【０３８２】
マウス大腿骨および脛骨からの骨髄細胞をプールし、Alexa Fluor 647マウス抗ヒトＣＤ１３８クローンMI15 (BD Biosciences #562097)を用いて、製造業者のプロトコルに従い、ＣＤ１３８発現について評価した。直接免疫蛍光フローサイトメトリー分析を、LSRIIフローサイトメーターおよびFACS Divaソフトウェアを用いて実施した。データは、Flowjo (Tree Star, Inc., Ashland, OR)を用いて分析した。
【０３８３】
試験エンドポイント時の体重、組織体積、または組織重量を、ダネット多重比較検定を用いる一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて分析した。５％未満の確率（ｐ＜０．０５）は有意とみなした。
【０３８４】
結果．多発性骨髄腫細胞ＡＲＰ−１をＣＢ１７重症複合免疫不全マウスの静脈内に接種し、３ｍｇ／ｋｇのコンジュゲートＡで治療した（ｑ７ｄ×４）。試験エンドポイントは、顕著な体重変化、大きい触知可能な内部腫瘍の形成、および瀕死によって特徴づけられた。図３Ａは、腫瘍接種後約２５日目に始まる溶媒対照動物における定常的な体重増加（ＢＷＣの増加）、およびそれに続く３５日目までの膨隆腹の発生を示す。４９日目、溶媒対照動物は、臨床エンドポイントおよび腹部における触知可能な腫瘍に基づいて安楽死させた。コンジュゲートＡで治療した群において、体重における有意な変化（図３Ａ）、拡大した腹部、または苦悩の徴候は認められなかった。溶媒対照群における最終記録日（４６日目）でのＢＷＣは、溶媒対照と比べて有意な方向に推移していた（コンジュゲートＡ、ｐ＝０．０５５１）（図３Ｂ）。
【０３８５】
溶媒対照動物の肉眼的病理分析によると、卵巣および／または腎臓とその周辺に大きい腫瘤が示された（図４Ａ、４Ｂ）。内部腫瘍の形成は、溶媒対照群で認められる膨隆腹および体重増加を示す可能性が高い。コンジュゲートＡで治療した群からの動物のサブセット（ｎ＝３／群）を解剖学的検査およびフローサイトメトリーにおいて収集した。図４Ａおよび４Ｂは、ＣＤ７４  ＡＤＣ治療を受けた両群からの腎臓および卵巣が表現型的に正常に見え、（細胞または治療を受けなかった）未治療の年齢を適合させた対照動物に匹敵する組織重量を有したことを示す。腫瘍量はまた、骨髄（大腿骨および脛骨）中に存在するヒトＣＤ１３８陽性ＡＲＰ−１骨髄腫細胞の百分率を測定することにより評価した。ＣＤ１３８は、多発性骨髄腫および骨髄中の形質細胞に特異的な表面抗原である（Chilosi, M. et al. “CD138/syndecan 1: A useful immunohistochemical marker of normal and neoplastic plasma cells on routine trephine bone marrow biopsies.” Mod. Pathol. Off. J. U. S. Can. Acad. Pathol. Inc 12, 1101-1106 (1999)、その全体が参照により本明細書中に援用される）。溶媒対照群が高い腫瘍量を示した一方、コンジュゲートＡを用いる治療は、骨髄中でのＡＲＰ−１の増殖を実質的に阻害した（図５Ａ、５Ｂ）。未治療の年齢を適合させた対照から単離した骨髄は、コンジュゲートＡ治療群と類似するように見えた。累積的に、これらの結果は、コンジュゲートＡが腫瘍量を抑制したことを示す。
【０３８６】
コンジュゲートＡ治療群中の残存動物（ｎ＝６〜７／群）は、初回治療後、疾患進行について監視され続けた。コンジュゲートＡを用いる治療により、体重増加が同様に約２０日間遅延し、その後、最終投与後の約７０日目または３５日目に体重の安定的増加が始まる。８２日目（最終治療から４５日後）までに、一部の動物が卵巣および／または腎臓の周辺に膨隆腹および大きい腫瘤を発生させた。治療群からの動物のサブセット（ｎ＝３）が、８２日目に開始するコンジュゲートＡ治療の２回目を受けた。明白な体重増加の安定化が認められ、疾患進行の阻止が示唆された。
【０３８７】
この試験からの結果によると、コンジュゲートＡが体重増加を減弱させ、（骨髄中および内部腫瘍における）腫瘍量を低減するとともに、ＡＲＰ−１多発性骨髄腫細胞を接種した動物における応答の効力および持続時間が類似したことが示される。
【０３８８】
実施例８：マウス多発性骨髄腫モデルにおけるインビボ抗腫瘍活性のさらなる試験
ヒト多発性骨髄腫モデル（播種性）における抗ＣＤ７４抗体−薬剤コンジュゲートのインビボ抗腫瘍有効性を検討するための試験を実施した。コンジュゲートＡ（実施例３）は、ＭＭ．１Ｓ多発性骨髄腫細胞を接種した動物において評価した。
【０３８９】
プロトコル．８週齢雌ＮＯＤ  ＳＣＩＤγ（ＮＳＧ）マウスの尾静脈に多発性骨髄腫ＭＭ．１Ｓ細胞を接種した。体重による無作為化および治療の開始は、腫瘍接種から１１日後に開始した。治療群は表５にまとめる。被験物質は、１０ｍＭのクエン酸塩、ｐＨ６．０、１０％スクロース中で配合し、投与のためにＰＢＳで希釈した。動物にコンジュゲートＡを静脈内（ＩＶ）注射により７日毎に３週間投与した（ｑ７ｄ×３）。各群においては、動物のサブセットを骨髄収集および分析のために用いて（ｎ＝３）、残存動物（ｎ＝５）を生存について監視した。生存エンドポイントは、＞２０％の体重減少および嗜眠、後肢麻痺または瀕死を含む臨床徴候によって特徴づけられた。３２日目（治療開始から３週後）、各群からの動物３匹を、フローサイトメトリーのための（脛骨および大腿骨からプールした）骨髄収集のために安楽死させるべく無作為に選択した。１２９日目（治療開始から約４か月後）、すべての生存している動物を安楽死させ、フローサイトメトリーのために骨髄を収集した（脛骨および大腿骨からプールした）。
【０３９０】
【表８】
2019506385.tif 000056
【０３９１】
体重を、週に少なくとも２回、最大１２９日間、監視した。すべてのグラフは、平均±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）対治療開始後日数として表す。
【０３９２】
パーセント体重変化（ＢＷＣ）は、治療当日の体重に対して計算する。実質的毒性は、冒された動物が安楽死される時点での動物体重における＞２０％の減少と定義した。
【０３９３】
マウスの大腿骨および脛骨からの骨髄細胞をプールし、Alexa Fluor 647マウス抗ヒトＣＤ１３８クローンMI15 (BD Biosciences #562097)を用いて、製造業者のプロトコルに従い、ＣＤ１３８発現について評価した。ＣＤ１３８は、ＭＭおよび骨髄中の形質細胞に特異的な表面抗原である（Chilosi, M. et al. (1999)、上記）。直接免疫蛍光フローサイトメトリー分析を、LSRIIフローサイトメーターおよびFACS Divaソフトウェアを用いて実施した。データは、Flowjo (Tree Star, Inc., Ashland, OR)を用いて分析した。
【０３９４】
３２日目、骨髄中のヒトＣＤ１３８＋細胞を、０．０５有意水準でのダネット調整を用いる一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて分析した。ＭＭ．１ｓ陽性対照からのデータを分析から除外した。５％未満の確率（ｐ＜０．０５）を有意とみなした。
【０３９５】
結果．多発性骨髄腫ＭＭ．１Ｓ細胞をＮＳＧマウスの静脈内に接種し、腫瘍接種後１１日目から、溶媒、３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇのコンジュゲートＡで処理した（ｑ７ｄ×３）。生存試験のエンドポイント基準は、２０％を超える体重変化および瀕死の臨床徴候を含んだ。図６Ａは、腫瘍接種から約２８日目からの溶媒対照動物における体重減少を示す。体重減少には、円背、後肢麻痺および重篤な嗜眠を伴った。溶媒群における平均生存が３５日であった一方で、３または１０ｍｇ／ｋｇのコンジュゲートＡを用いる治療の結果、すべての動物で１００％の生存が得られ、接種後１２９日目に疾患の徴候は示されなかった（図６Ｂ）。
【０３９６】
３２日目、腫瘍量を骨髄中のｈＣＤ１３８＋骨髄腫細胞の百分率を測定することにより評価した。図６Ｃは、両方の用量のコンジュゲートＡにより、腫瘍量が溶媒対照群における高い腫瘍量（約５０％）と比べて有意に減少したことを示す。約４か月後（１２９日目）、ｈＣＤ１３８＋細胞が、３および１０ｍｇ／ｋｇのコンジュゲートＡで治療した動物の骨髄中で検出されなかった（図６Ｄ）。３２日目および１２９日目双方のデータセットは、非接種陰性対照動物からの骨髄（細胞または治療なし）および陽性対照としてのＭＭ．１Ｓ細胞を含んだ。予想通り、非接種群およびＭＭ．１Ｓ細胞は各々、低いおよび高いｈＣＤ１３８＋を有した。
【０３９７】
この試験からの結果によると、３または１０ｍｇ／ｋｇのコンジュゲートＡ（ｑ７ｄ×３）により、播種性ＭＭ．１Ｓモデルにおける治療の開始から約４か月後、１００％生存および骨髄中でのｈＣＤ１３８＋の不在に基づき、疾患が根絶したことが示される。
【０３９８】
実施例９：マウス非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）モデルにおけるインビボ抗腫瘍活性の評価
ヒト非ホジキンリンパ腫（「ＮＨＬ」）モデルにおける抗ＣＤ７４抗体−薬剤コンジュゲートのインビボ抗腫瘍有効性を検討するための試験を実施した。コンジュゲートＡ（実施例３）は、確立された皮下ＳＵ−ＤＨＬ−６  ＮＨＬ腫瘍（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）を有する動物において評価した。コンジュゲートＡを用いる治療により、ＮＨＬ腫瘍ＳＵ−ＤＨＬ−６の増殖が有意に遅延した。
【０３９９】
プロトコル．９週齢雌ＣＢ１７  ＳＣＩＤマウスに、イソフルランを麻酔し、ＳＵ−ＤＨＬ−６細胞およびマトリゲルの１：１の混合物を右側腹部に皮下移植した。無作為化、治療群への登録および治療の開始は、移植から約１４日後に開始した。治療群は表６にまとめる。すべての被験物質は、１０ｍＭのクエン酸塩、ｐＨ６．０、９％スクロース中で配合し、ＰＢＳで希釈した。体重および腫瘍サイズは、対照の治療された腫瘍の平均が＞１０００ｍｍ３であるかまたは試験終了まで週２回監視した。動物体重は、腫瘍重量を含んだ。パーセント体重変化（ＢＷＣ）は、治療当日の体重に対して計算する。試料は、試験終了時には収集しなかった。
【０４００】
【表９】
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【０４０１】
腫瘍移植後１８日目（最終日、対照動物は試験中であった）の腫瘍サイズは、ダネット多重比較検定を用いる一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて分析した。５％未満の確率（ｐ＜０．０５）は有意とみなした。
【０４０２】
結果．この試験では、ＮＨＬ細胞ＳＵ−ＤＨＬ−６を、ＣＢ１７  ＳＣＩＤマウスに皮下移植し、１０ｍｇ／ｋｇのコンジュゲートＡで治療した。反復投与計画（ｑ７ｄ×３）からの有効性結果を図７Ａおよび図７Ｂに示す。コンジュゲートＡを用いる治療（ｑ７ｄ×３）により、ＳＵ−ＤＨＬ−６腫瘍の増殖が有意に阻害され、１８日目、対照と比べて約８０％の腫瘍増殖阻害が得られた（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、表６）。コンジュゲートＡを用いる治療の存在下でＳＵ−ＤＨＬ−６腫瘍の継続的増殖が一部認められることが記録された。さらに、コンジュゲートＡを用いる治療は、十分な耐容性があり、動物体重に対する有意な効果の不在に基づき、毒性を全く示さなかった（図８）。
【０４０３】
【表１０】
2019506385.tif 000058
【０４０４】
この試験からの結果によると、コンジュゲートＡがＳＵ−ＤＨＬ−６腫瘍の増殖を緩徐化することに有意に有効であることが示される。
【０４０５】
実施例１０：配列
表７は、本明細書中で参照される配列を提供する。
【０４０６】
【表１１】
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【０４０７】
【表１２】
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【０４０８】
【表１３】
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【０４０９】
【表１４】
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【０４１０】
【表１５】
2019506385.tif 000063
【０４１１】
【表１６】
2019506385.tif 000064
【０４１２】
【表１７】
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【０４１３】
【表１８】
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【０４１４】
【表１９】
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【０４１５】
【表２０】
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【０４１６】
【表２１】
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【０４１７】
【表２２】
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【０４１８】
【表２３】
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【０４１９】
【表２４】
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【０４２０】
【表２５】
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【０４２１】
【表２６】
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【０４２２】
【表２７】
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【０４２３】
【表２８】
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【０４２４】
【表２９】
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【０４２５】
【表３０】
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【０４２６】
【表３１】
2019506385.tif 000079
【０４２７】
【表３２】
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【０４２８】
均等物
上に示される開示内容は、独立した有用性を有する複数の異なる発明を包含してもよい。これらの発明の各々がその好ましい形態で開示されているが、開示された通りの本明細書中に例示されるその具体的な実施形態は、極めて多数のバリエーションが考えられることから、限定的意味で考慮されるべきではない。本発明の主題は、本明細書で開示される様々な要素、特徴、機能、および／または特性のすべての新規かつ非自明的なコンビネーションおよびサブコンビネーションを含む。以下の特許請求の範囲は特に、新規かつ非自明的とみなされる特定のコンビネーションおよびサブコンビネーションを示す。特徴、機能、要素、および／または特性の他のコンビネーションおよびサブコンビネーションにて具体化される発明は、本願、本願から優先権を主張する出願、または関連出願において主張されてもよい。かかる特許請求の範囲が、異なる発明を対象とするかまたは同じ発明を対象とするか、またオリジナルな特許請求の範囲と比べて範囲がより広いか、より狭いか、等しいか、または異なるかについても、本開示の発明の主題の範囲内に含まれるとみなされる。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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