(57)【要約】  本開示は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染を治療するためのＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）試薬、これを含む組成物、およびＨＢＶに感染した個体を治療するためのその使用に関する。試薬は、単独で、または追加のｓｈｍｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡと組み合わせて使用される人工的ｍｉＲＮＡ（ｓｈｍｉＲＮＡ）である。【選択図】図５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ショートヘアピン型マイクロＲＮＡ（ｓｈｍｉＲ）をコードするＤＮＡ配列を含む核酸であって、前記ｓｈｍｉＲが、
少なくとも１７ヌクレオチド長のエフェクター配列；
エフェクター相補配列；
ステムループ配列；及び
プライマリーマイクロＲＮＡ（ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ）主鎖；
を含み、前記エフェクター配列は、配列番号１〜１０、３８、４０、及び４２のいずれか１つに示すＲＮＡ転写物に実質的に相補的である、前記核酸。
【請求項２】
前記ｓｈｍｉＲが、
配列番号１１に示すエフェクター配列、及び配列番号１２に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１３に示すエフェクター配列、及び配列番号１４に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１５に示すエフェクター配列、及び配列番号１６に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１７に示すエフェクター配列、及び配列番号１８に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１９に示すエフェクター配列、及び配列番号２０に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号２１に示すエフェクター配列、及び配列番号２２に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号２３に示すエフェクター配列、及び配列番号２４に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号２５に示すエフェクター配列、及び配列番号２６に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号２７に示すエフェクター配列、及び配列番号２８に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号２９に示すエフェクター配列、及び配列番号３０に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号３１に示すエフェクター配列、及び配列番号３２に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号３３に示すエフェクター配列、及び配列番号３４に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号３５に示すエフェクター配列、及び配列番号３６に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号３７に示すエフェクター配列、及び配列番号３８に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号３９に示すエフェクター配列、及び配列番号４０に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；及び
配列番号４１に示すエフェクター配列、及び配列番号４２に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ
からなる群から選択される、請求項１に記載の核酸。
【請求項３】
前記ｓｈｍｉＲが、５’から３’の方向に、
前記ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖の５’隣接配列；
前記エフェクター相補配列；
前記ステムループ配列；
前記エフェクター配列；及び
前記ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖の３’隣接配列
を含んでいる、請求項１または２に記載の核酸。
【請求項４】
前記ステムループ配列が、配列番号７５に示す配列である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項５】
前記ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖が、ｐｒｉ−ｍｉＲ−３０ａ主鎖である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項６】
前記ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖の前記５’隣接配列が、配列番号７６に示すものであり、前記ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖の前記３’隣接配列が、配列番号７７に示すものである、請求項３〜５のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項７】
前記ｓｈｍｉＲが、配列番号４３〜５８のいずれか１つに示す配列を含んでいる、請求項３〜５のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項８】
前記ｓｈｍｉＲをコードする前記ＤＮＡ配列が、配列番号５９〜７４のいずれか１つに示すものである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項９】
複数の核酸であって、
（ａ）請求項１〜８のいずれか１項に記載の少なくとも１つの核酸、及び
（ｂ）少なくとも１つのさらなる核酸であって、
（ｉ）請求項１〜８のいずれか１項に記載の核酸；または
（ｉｉ）少なくとも１７ヌクレオチド長のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むショートヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）をコードするＤＮＡ配列を含む核酸であって、前記エフェクター配列は、配列番号１〜１０、３８、４０、及び４２のいずれか１つに示すＲＮＡ転写物に実質的に相補的である、前記核酸
から選択される前記少なくとも１つのさらなる核酸
を含み、
前記（ａ）の核酸によってコードされる前記ｓｈｍｉＲ及び前記（ｂ）の核酸によってコードされる前記ｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡが異なるエフェクター配列を含んでいる、
前記複数の核酸。
【請求項１０】
請求項９の（ｂ）（ｉｉ）で規定される前記核酸が、
配列番号１１に示すエフェクター配列、及び配列番号１２に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１３に示すエフェクター配列、及び配列番号１４に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１５に示すエフェクター配列、及び配列番号１６に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１７に示すエフェクター配列、及び配列番号１８に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１９に示すエフェクター配列、及び配列番号２０に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号２１に示すエフェクター配列、及び配列番号２２に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号２３に示すエフェクター配列、及び配列番号２４に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号２５に示すエフェクター配列、及び配列番号２６に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号２７に示すエフェクター配列、及び配列番号２８に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号２９に示すエフェクター配列、及び配列番号３０に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号３１に示すエフェクター配列、及び配列番号３２に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号３３に示すエフェクター配列、及び配列番号３４に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号３５に示すエフェクター配列、及び配列番号３６に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号３７に示すエフェクター配列、及び配列番号３８に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号３９に示すエフェクター配列、及び配列番号４０に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；及び
配列番号４１に示すエフェクター配列、及び配列番号４２に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ
からなる群から選択されるｓｈＲＮＡをコードする、請求項９に記載の複数の核酸。
【請求項１１】
請求項９の（ｂ）（ｉｉ）で規定される前記ｓｈＲＮＡが、前記エフェクター配列と前記エフェクター相補配列との間に位置するステムループ配列を含んでいる、請求項９または１０に記載の複数の核酸。
【請求項１２】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の核酸または請求項９〜１１のいずれか１項に記載の複数の核酸を含んでいる、ＤＮＡ指向性ＲＮＡ干渉（ｄｄＲＮＡｉ）コンストラクト。
【請求項１３】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の少なくとも２つの核酸を含み、前記核酸のそれぞれが異なるｓｈｍｉＲをコードする、請求項１２に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項１４】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の少なくとも３つの核酸を含み、前記核酸のそれぞれが異なるｓｈｍｉＲをコードする、請求項１２または１３に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項１５】
前記ｄｄＲＮＡｉコンストラクトが、５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；
（ｂ）配列番号５７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；及び
（ｃ）配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含んでいる、請求項１４に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項１６】
前記ｄｄＲＮＡｉコンストラクトが、５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸；
（ｂ）配列番号７３に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸；及び
（ｃ）配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸
を含んでいる、請求項１４または１５に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項１７】
前記ｄｄＲＮＡｉコンストラクトが、５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；
（ｂ）配列番号４９に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；及び
（ｃ）配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含んでいる、請求項１４に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項１８】
前記ｄｄＲＮＡｉコンストラクトが、５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸；
（ｂ）配列番号６５に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸；及び
（ｃ）配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸
を含んでいる、請求項１４または１７に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項１９】
前記ｄｄＲＮＡｉコンストラクトが、
請求項１〜８のいずれか１項に記載の少なくとも１つの核酸；及び
請求項９〜１１のいずれか１項の（ｂ）（ｉｉ）で規定される少なくとも１つの核酸
を含んでいる、請求項１２に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項２０】
前記ｄｄＲＮＡｉコンストラクトが、
それぞれが異なるｓｈｍｉＲをコードする、請求項１〜８のいずれか１項に記載の少なくとも２つの核酸；及び
請求項９〜１１のいずれか１項の（ｂ）（ｉｉ）で規定される少なくとも１つの核酸
を含んでいる、請求項１２または１９に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項２１】
前記ｄｄＲＮＡｉコンストラクトが、５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；
（ｂ）配列番号３９に示すエフェクター配列、及び配列番号４０に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡをコードする核酸；及び
（ｃ）配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸、
を含んでいる、請求項２０に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項２２】
ｓｈｍｉＲをコードする前記または各核酸の上流のＲＮＡ  ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーター、及びｓｈＲＮＡをコードする前記または各核酸の上流のＲＮＡ  ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターを含んでいる、請求項１２〜２１のいずれか１項に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項２３】
前記または各ＲＮＡ  ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターが、Ｕ６プロモーター及びＨ１プロモーターから選択される、請求項２２に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項２４】
前記または各ＲＮＡ  ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターが、Ｕ６−９プロモーター、Ｕ６−１プロモーター、及びＵ６−８プロモーターから選択されるＵ６プロモーターである、請求項２２または２３に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項２５】
前記ｄｄＲＮＡｉコンストラクトが、５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−９プロモーター；
（ｂ）配列番号７３に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−１プロモーター；及び
（ｃ）配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−８プロモーター
を含んでいる、請求項２４に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項２６】
前記ｄｄＲＮＡｉコンストラクトが、５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−９プロモーター；
（ｂ）配列番号６５に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−１プロモーター；及び
（ｃ）配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−８プロモーター
を含んでいる、請求項２４に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト。
【請求項２７】
請求項１２〜２６のいずれか１項に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクトを含んでいる、発現ベクター。
【請求項２８】
複数の発現ベクターであって、各発現ベクターが、１つ以上のｓｈｍｉＲ及び／またはｓｈＲＮＡを発現できる請求項１２〜２７のいずれか１項に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクトを含んでいる、前記複数の発現ベクター。
【請求項２９】
前記または各発現ベクターが、プラスミドまたはミニサークルである、請求項２７に記載の発現ベクターまたは請求項２８に記載の複数の発現ベクター。
【請求項３０】
前記または各発現ベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルス（ＡｄＶ）ベクター、及びレンチウイルス（ＬＶ）ベクターからなる群から選択されるウイルスベクターである、請求項２７に記載の発現ベクターまたは請求項２８に記載の複数の発現ベクター。
【請求項３１】
請求項１２〜２６のいずれか１項に記載のＤＮＡ指向性ＲＮＡ干渉（ｄｄＲＮＡｉ）コンストラクト、または請求項２７、２９もしくは３０に記載の発現ベクター、または請求項２８〜３０のいずれか１項に記載の複数の発現ベクターを含む、組成物。
【請求項３２】
さらに、１種以上の製薬上許容される担体を含んでいる、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
ＨＢＶ感染を治療するための公知の１つ以上の他の治療剤をさらに含む、請求項３１または３１に記載の組成物。
【請求項３４】
ＨＢＶ感染を治療するための公知の前記１つ以上の他の治療剤が、エンテカビル、テノホビル、ラミブジン、アデホビル、及びＰＥＧ化インターフェロンからなる群から選択される、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
対象のＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染を治療する方法であって、前記対象に、治療有効量の、請求項１〜８のいずれか１項に記載の核酸、または請求項９〜１１のいずれか１項に記載の複数の核酸、または請求項１２〜２６のいずれか１項に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト、または請求項２７、２９もしくは請求項３０に記載の発現ベクター、または請求項２８〜３０のいずれか１項に記載の複数の発現ベクター、または請求項３１〜３４のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含んでいる、前記方法。
【請求項３６】
前記対象が、急性ＨＢＶ感染に苦しんでいる、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記対象が、慢性ＨＢＶ感染に苦しんでいる、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）に感染している対象におけるＢ型肝炎ウイルス負荷を低下させる方法であって、前記対象に、治療有効量の、請求項１〜８のいずれか１項に記載の核酸、または請求項９〜１１のいずれか１項に記載の複数の核酸、または請求項１２〜２６のいずれか１項に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト、または請求項２７、２９もしくは３０に記載の発現ベクター、または請求項２８〜３０のいずれか１項に記載の複数の発現ベクター、または請求項３１〜３４のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含んでいる、前記方法。
【請求項３９】
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染に苦しむ対象のＨＢＶ感染に関連する症状の重症度を軽減する方法であって、前記対象に、治療有効量の、請求項１〜８のいずれか１項に記載の核酸、または請求項９〜１１のいずれか１項に記載の複数の核酸、または請求項１２〜２６のいずれか１項に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト、または請求項２７、２９もしくは３０に記載の発現ベクター、または請求項２８〜３０のいずれか１項に記載の複数の発現ベクター、または請求項３１〜３４のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含んでいる、前記方法。
【請求項４０】
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）に感染した対象のＨＢＶ感染力（ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ）を低下させる方法であって、前記対象に、治療有効量の、請求項１〜８のいずれか１項に記載の核酸、または請求項９〜１１のいずれか１項に記載の複数の核酸、または請求項１２〜２６のいずれか１項に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト、または請求項２７、２９もしくは３０に記載の発現ベクター、または請求項２８〜３０のいずれか１項に記載の複数の発現ベクター、または請求項３１〜３４のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含んでいる、前記方法。
【請求項４１】
１つ以上のＨＢＶ遺伝子の発現を阻害または低下させることを含んでいる、請求項３３〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の核酸、または請求項９〜１１のいずれか１項に記載の複数の核酸、または請求項１２〜２６のいずれか１項に記載のｄｄＲＮＡｉコンストラクト、または請求項２７、２９もしくは３０に記載の発現ベクター、または請求項２８〜３０のいずれか１項に記載の複数の発現ベクター、または請求項３１または３２に記載の組成物が、ＨＢＶ感染の治療用のさらなる治療剤と共に投与される、請求項３３〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＨＢＶ感染の治療用のさらなる治療剤が、エンテカビル、テノホビル、ラミブジン、アデホビル、及びＰＥＧ化インターフェロンからなる群から選択される、請求項４２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２０１６年５月５日に出願の米国仮出願第６２／３３２，２４５号の優先権を主張し、その内容全体を参照として本明細書に援用する。
【０００２】
本開示は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染を治療するためのＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）試薬、これを含む組成物、およびＨＢＶに感染した個体を治療するためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は深刻かつ一般的な感染性の肝疾患であり、世界的に多数の人が罹患している。ＨＢＶは、ヘパドナウイルス科（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）に属する肝臓指向性ＤＮＡウイルスである。このウイルスゲノムの全長は約３．２ｋｂであり、表面抗原（「Ｓ遺伝子」）、コア抗原（「Ｃ遺伝子」）、ＤＮＡポリメラーゼ（「Ｐ遺伝子」）、および機能が未解明の「Ｘ遺伝子」と呼ばれる遺伝子の４つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する。世界中で２０億人を上回る人が一生のうちどこかの時点でＨＢＶに感染しているが、そのうち約３億５千万〜４億人が持続感染し、ウイルスのキャリアとなっている。ＨＢＶ感染が原因で急性Ｂ型肝炎や慢性Ｂ型肝炎が生じることがあり、やがて慢性肝不全、肝硬変、肝細胞癌を発症することもある。さらに、ＨＢＶキャリアはこの疾患を長年にわたり伝染させる可能性もある。慢性のＨＢＶ感染者、すなわちキャリアが肝細胞癌を発症するリスクは非キャリアよりも少なくとも１２倍は高く、ＨＢＶは世界の原発肝臓癌の原因の６０〜８０％を占めている。その結果、ＨＢＶは、既知のヒト発癌物質としてはタバコに次いで第二位に位置している。
【０００４】
ＨＢＶに対するワクチンがあるが、人口におけるＨＢＶ感染率は依然として高い。さらに、現在の慢性ＨＢＶ感染の治療法では、慢性的に感染している患者の大多数において、ウイルス遺伝子の発現と複製の阻害に限られた効果しかない。慢性ＨＢＶ感染の既存の治療法には、ウイルスが薬剤耐性になるという制限もある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
これらの理由から、ＨＢＶ感染の新治療剤が依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本開示は、ＨＢＶ感染の治療および／または予防のための既存のワクチンおよび治療剤は、たとえばウイルスに薬剤耐性ができるせいで長期治療を要する場合および／またはＨＢＶの遺伝子型によって奏功性にばらつきがある場合など、その有効性が限られている、という認識に一部基づくものである。本開示は、ＨＢＶゲノムによって生産されるＲＮＡ転写物の保存領域、すなわち異なるＨＢＶ遺伝子型間で保存されている領域を標的とする１つ以上のショートヘアピンマイクロＲＮＡ（ｓｈｍｉＲ）を発現するためのＤＮＡ指向性ＲＮＡ干渉（ｄｄＲＮＡｉ）コンストラクトを提供する。本開示の例示的ｓｈｍｉＲは、活性ＨＢＶを有するＨｅｐＧ２．２．１５細胞においてＨＢＶ遺伝子転写物の発現を阻害または低下させることができるエフェクター配列を含む。本開示の例示的ｓｈｍｉＲは、ＨＢＶに感染したＰＸＢキメラマウスにおいて。ＨＢＶ遺伝子転写物の発現を阻害または低下させ、細胞内および細胞外ＨＢＶ  ＤＮＡを減少させ、ＨＢＶの共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）を減少させることができるエフェクター配列を含む。したがって、本発明者らは、ＨＢＶによる核酸の発現および／もしくはタンパク質の発現を阻害または低下させる新規の化合物、およびそのような化合物の、たとえば対象のＨＢＶ感染を治療するための使用を提供するものである。
【０００７】
したがって、本開示は、ショートヘアピンマイクロＲＮＡ（ｓｈｍｉＲ）をコードするＤＮＡ配列を含む核酸を提供し、前記ｓｈｍｉＲは、
少なくとも１７ヌクレオチド長のエフェクター配列；
エフェクター相補配列；
ステムループ配列；および
プライマリーマイクロＲＮＡ（ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ）主鎖
を含み、エフェクター配列は、配列番号１〜１０、３８、４０、４２、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、および１３３のいずれかに示すＲＮＡ転写物に実質的に相補的である。好ましくは、エフェクター配列は３０ヌクレオチド長よりも短い。たとえば、好適なエフェクター配列は１７〜２９ヌクレオチド長の範囲であってもよい。好ましくは、エフェクター配列は２０ヌクレオチド長である。より好ましくは、エフェクター配列は２１ヌクレオチド長であり、かつエフェクター相補配列は２０ヌクレオチド長である。
【０００８】
このエフェクター配列は、これが実質的に相補的である配列番号１〜１０、３８、４０、４２、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、および１３３のいずれかに示す配列に対する６塩基対のミスマッチを含むことができる。別の例では、このエフェクター配列は、これが実質的に相補的である配列番号１〜１０、３８、４０、４２、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、および１３３のいずれかに示す配列に対する５塩基対のミスマッチを含んでいる。別の例では、このエフェクター配列は、これが実質的に相補的である配列番号１〜１０、３８、４０、４２、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、および１３３のいずれかに示す配列に対する４塩基対のミスマッチを含んでいる。別の例では、このエフェクター配列は、これが実質的に相補的である配列番号１〜１０、３８、４０、４２、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、および１３３のいずれかに示す配列に対する３塩基対のミスマッチを含んでいる。別の例では、このエフェクター配列は、これが実質的に相補的である配列番号１〜１０、３８、４０、４２、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、および１３３のいずれかに示す配列に対する２塩基対のミスマッチを含んでいる。別の例では、このエフェクター配列は、これが実質的に相補的である配列番号１〜１０、３８、４０、４２、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、および１３３のいずれかに示す配列に対する１塩基対のミスマッチを含んでいる。さらに別の例では、このエフェクター配列は、配列番号１〜１０、３８、４０、４２、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、および１３３のいずれかに示す配列内の同じ長さの領域に１００％相補的である。ミスマッチが存在する場合、それはｓｈｍｉＲのシード領域に対応する領域、すなわちエフェクター配列のヌクレオチド２〜８内に位置しないことが好ましい。
【０００９】
一例では、本明細書に記載する核酸は、以下からなる群から選択されるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる：
（ｉ）配列番号１２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号１４に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１４に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号１６に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１６に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号１８に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１８に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号２０に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２０に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号２２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２２に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号２４に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２４に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有するエフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号２６に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２６に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号２８に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２８に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号３０に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３０に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号３２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３２に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号３４に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３４に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号３６に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３６に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号３８に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３８に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号４０に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号４０に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号４２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号４２に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号１１１に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１１１に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号１１３に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１１３に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号１１５に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１１５に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号１１７に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１１７に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号１１９に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１１９に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号１２１に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２１に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号１２３に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２３に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号１２５に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２５に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号１２７に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２７に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号１２９に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２９に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
（ｉ）配列番号１３１に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１３１に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；および
（ｉ）配列番号１３３に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１３３に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ。
【００１０】
別の例では、本明細書に記載する核酸は、以下からなる群より選択されるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる：
配列番号１１に示すエフェクター配列、および配列番号１１に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１３に示すエフェクター配列、および配列番号１３に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１５に示すエフェクター配列、および配列番号１５に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１７に示すエフェクター配列、および配列番号１７に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１９に示すエフェクター配列、および配列番号１９に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号２１に示すエフェクター配列、および配列番号２１に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号２３に示すエフェクター配列、および配列番号２３に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号２５に示すエフェクター配列、および配列番号２５に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号２７に示すエフェクター配列、および配列番号２７に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号２９に示すエフェクター配列、および配列番号２９に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号３１に示すエフェクター配列、および配列番号３１に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号３３に示すエフェクター配列、および配列番号３３に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号３５に示すエフェクター配列、および配列番号３５に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号３７に示すエフェクター配列、および配列番号３７に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号３９に示すエフェクター配列、および配列番号３９に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号４１に示すエフェクター配列、および配列番号４１に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１１０に示すエフェクター配列、および配列番号１１０に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１１２に示すエフェクター配列、および配列番号１１２に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１１４に示すエフェクター配列、および配列番号１１４に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１１６に示すエフェクター配列、および配列番号１１６に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１１８に示すエフェクター配列、および配列番号１１８に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１２０に示すエフェクター配列、および配列番号１２０に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１２２に示すエフェクター配列、および配列番号１２２に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１２４に示すエフェクター配列、および配列番号１２４に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１２６に示すエフェクター配列、および配列番号１２６に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１２８に示すエフェクター配列、および配列番号１２８に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１３０に示すエフェクター配列、および配列番号１３０に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ；および
配列番号１３２に示すエフェクター配列、および配列番号１３２に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲ。
【００１１】
たとえば、本明細書に記載する核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、同種の（ｃｏｇｎａｔｅ）エフェクター配列とエフェクター相補配列とでデュプレックス領域を形成できるという条件で、対応するエフェクター配列に対して１つ、２つ、３つ、または４つのミスマッチを含むエフェクター相補配列を含むことができる。
【００１２】
別の例では、本明細書に記載する核酸は、以下からなる群より選択されるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる：
配列番号１１に示すエフェクター配列、および配列番号１２に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１３に示すエフェクター配列、および配列番号１４に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１５に示すエフェクター配列、および配列番号１６に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１７に示すエフェクター配列、および配列番号１８に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１９に示すエフェクター配列、および配列番号２０に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号２１に示すエフェクター配列、および配列番号２２に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号２３に示すエフェクター配列、および配列番号２４に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号２５に示すエフェクター配列、および配列番号２６に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号２７に示すエフェクター配列、および配列番号２８に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号２９に示すエフェクター配列、および配列番号３０に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号３１に示すエフェクター配列、および配列番号３２に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号３３に示すエフェクター配列、および配列番号３４に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号３５に示すエフェクター配列、および配列番号３６に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号３７に示すエフェクター配列、および配列番号３８に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号３９に示すエフェクター配列、および配列番号４０に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；および
配列番号４１に示すエフェクター配列、および配列番号４２に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１１０に示すエフェクター配列、および配列番号１１１に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１１２に示すエフェクター配列、および配列番号１１３に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１１４に示すエフェクター配列、および配列番号１１５に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１１６に示すエフェクター配列、および配列番号１１７に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１１８に示すエフェクター配列、および配列番号１１９に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１２０に示すエフェクター配列、および配列番号１２１に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１２２に示すエフェクター配列、および配列番号１２３に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１２４に示すエフェクター配列、および配列番号１２５に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１２６に示すエフェクター配列、および配列番号１２７に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１２８に示すエフェクター配列、および配列番号１２９に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；
配列番号１３０に示すエフェクター配列、および配列番号１３１に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ；および
配列番号１３２に示すエフェクター配列、および配列番号１３３に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈｍｉＲ。
【００１３】
本開示の核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、５’から３’の方向に、
ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖の５’隣接配列；
エフェクター相補配列；
ステムループ配列；
エフェクター配列；および
ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖の３’隣接配列
を含むことができる。
【００１４】
好適なループ配列は、当業界で既知のものから選択することができる。しかし、例示的なステムループ配列は配列番号７５に示すものである。
【００１５】
本開示の核酸において使用するための好適なプライマリーマイクロＲＮＡ（ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡまたはｐｒｉ−Ｒ）主鎖は、当業界で既知のものから選択することができる。たとえば、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖は、ｐｒｉ−ｍｉＲ−３０ａ主鎖、ｐｒｉ−ｍｉＲ−１５５主鎖、ｐｒｉ−ｍｉＲ−２１主鎖、およびｐｒｉ−ｍｉＲ−１３６主鎖から選択することができる。しかし、好ましくは、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖はｐｒｉ−ｍｉＲ−３０ａ主鎖である。ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖がｐｒｉ−ｍｉＲ−３０ａ主鎖である一例によれば、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖の５’隣接配列は配列番号７６に示すものであり、かつｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖の３’隣接配列は配列番号７７に示すものである。
【００１６】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号５９〜７４および１４６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む。この例によれば、本開示の核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号４３〜５８および１３４〜１４５のいずれかに示す配列を含むことができる。
【００１７】
当業者であれば、本開示による核酸を他のＨＢＶ治療剤と併用でまたは組み合わせて使用できることを理解しよう。したがって、本開示は、１種以上の他のＨＢＶ治療剤と併用される、本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含む核酸を提供する。一例では、
（ａ）本明細書に記載する少なくとも１つの核酸；および
（ｂ）
（ｉ）本明細書に記載する核酸による核酸；または
（ｉｉ）少なくとも１７ヌクレオチド長のエフェクター配列およびエフェクター相補配列を含み、該エフェクター配列は配列番号１〜１０、３８、４０、４２、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、および１３３のいずれかに示すＲＮＡ配列に実質的に相補的である、ショートヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）をコードするＤＮＡ配列を含む核酸
から選択される少なくとも１つのさらなる核酸
を含む、複数の核酸が提供され、
（ａ）の核酸によってコードされるｓｈｍｉＲと（ｂ）の核酸によってコードされるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡは異なるエフェクター配列を含んでいる。
【００１８】
好ましくは、配列番号１〜１０、３８、４０、４２、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、および１３３のいずれかに示すＲＮＡ配列に実質的に相補的な（ｂ）（ｉｉ）のｓｈＲＮＡのエフェクター配列は３０ヌクレオチド長よりも短い。たとえば、ｓｈＲＮＡの好適なエフェクター配列は、１７〜２９ヌクレオチド長の範囲であってもよい。
【００１９】
該複数の核酸のうちの少なくとも１つの核酸がｓｈＲＮＡをコードする一例によれば、ｓｈＲＮＡは以下からなる群から選択することができる。
（ｉ）配列番号１２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号１４に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１４に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号１６に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１６に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号１８に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１８に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号２０に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２０に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号２２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２２に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号２４に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２４に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号２６に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２６に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号２８に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２８に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号３０に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３０に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号３２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３２に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号３４に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３４に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号３６に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３６に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号３８に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３８に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号４０に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号４０に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号４２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号４２に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号１１１に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１１１に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号１１３に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１１３に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号１１５に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１１５に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号１１７に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１１７に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号１１９に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１１９に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号１２１に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２１に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号１２３に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２３に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号１２５に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２５に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号１２７に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２７に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号１２９に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２９に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；
（ｉ）配列番号１３１に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１３１に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ；および
（ｉ）配列番号１３３に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１３３に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列、および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈＲＮＡ。
【００２０】
該複数の核酸のうちの少なくとも１つの核酸がｓｈＲＮＡをコードする別の例によれば、ｓｈＲＮＡは以下からなる群から選択することができる。
配列番号１１に示すエフェクター配列、および配列番号１１に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１３に示すエフェクター配列、および配列番号１３に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１５に示すエフェクター配列、および配列番号１５に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１７に示すエフェクター配列、および配列番号１７に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１９に示すエフェクター配列、および配列番号１９に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号２１に示すエフェクター配列、および配列番号２１に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号２３に示すエフェクター配列、および配列番号２３に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号２５に示すエフェクター配列、および配列番号２５に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号２７に示すエフェクター配列、および配列番号２７に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号２９に示すエフェクター配列、および配列番号２９に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号３１に示すエフェクター配列、および配列番号３１に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号３３に示すエフェクター配列、および配列番号３３に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号３５に示すエフェクター配列、および配列番号３５に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号３７に示すエフェクター配列、および配列番号３７に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号３９に示すエフェクター配列、および配列番号３９に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号４１に示すエフェクター配列、および配列番号４１に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１１０に示すエフェクター配列、および配列番号１１０に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１１２に示すエフェクター配列、および配列番号１１２に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１１４に示すエフェクター配列、および配列番号１１４に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１１６に示すエフェクター配列、および配列番号１１６に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１１８に示すエフェクター配列、および配列番号１１８に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１２０に示すエフェクター配列、および配列番号１２０に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１２２に示すエフェクター配列、および配列番号１２２に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１２４に示すエフェクター配列、および配列番号１２４に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１２６に示すエフェクター配列、および配列番号１２６に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１２８に示すエフェクター配列、および配列番号１２８に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１３０に示すエフェクター配列、および配列番号１３０に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；および
配列番号１３２に示すエフェクター配列、および配列番号１３２に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ。
【００２１】
たとえば、本明細書に記載する複数の核酸のうちの核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、同種のエフェクター配列とエフェクター相補配列とでデュプレックス領域を形成できるという条件で、対応するエフェクター配列に対し１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを含むエフェクター相補配列を含むことができる。
【００２２】
該複数の核酸のうちの少なくとも１つの核酸がｓｈＲＮＡをコードする別の例において、ｓｈＲＮＡは以下からなる群から選択することができる。
配列番号１１に示すエフェクター配列、および配列番号１２に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１３に示すエフェクター配列、および配列番号１４に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１５に示すエフェクター配列、および配列番号１６に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１７に示すエフェクター配列、および配列番号１８に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１９に示すエフェクター配列、および配列番号２０に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号２１に示すエフェクター配列、および配列番号２２に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号２３に示すエフェクター配列、および配列番号２４に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号２５に示すエフェクター配列、および配列番号２６に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号２７に示すエフェクター配列、および配列番号２８に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号２９に示すエフェクター配列、および配列番号３０に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号３１に示すエフェクター配列、および配列番号３２に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号３３に示すエフェクター配列、および配列番号３４に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号３５に示すエフェクター配列、および配列番号３６に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号３７に示すエフェクター配列、および配列番号３８に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号３９に示すエフェクター配列、および配列番号４０に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号４１に示すエフェクター配列、および配列番号４２に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１１０に示すエフェクター配列、および配列番号１１１に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１１２に示すエフェクター配列、および配列番号１１３に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１１４に示すエフェクター配列、および配列番号１１５に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１１６に示すエフェクター配列、および配列番号１１７に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１１８に示すエフェクター配列、および配列番号１１９に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１２０に示すエフェクター配列、および配列番号１２１に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１２２に示すエフェクター配列、および配列番号１２３に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１２４に示すエフェクター配列、および配列番号１２５に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１２６に示すエフェクター配列、および配列番号１２７に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１２８に示すエフェクター配列、および配列番号１２９に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；
配列番号１３０に示すエフェクター配列、および配列番号１３１に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ；および
配列番号１３２に示すエフェクター配列、および配列番号１３３に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡ。
【００２３】
本開示の核酸がｓｈＲＮＡをコードする任意の例によれば、ｓｈＲＮＡは、エフェクター配列とエフェクター相補配列の間に配置されたステムループ配列を含むことができる。好適なループ配列は、当業界で既知のものから選択することができる。あるいは、好適なステムループを新たに開発してもよい。一例では、ｓｈＲＮＡをコードする本明細書に記載する複数の核酸のうちのある核酸は、エフェクター配列をコードするＤＮＡ配列とエフェクター相補配列をコードするＤＮＡ配列の間に配置されたステムループをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、本開示の核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、配列番号７８〜９３のいずれかに示す配列を含むことができる。したがって、本明細書に記載する複数の核酸のうちのある核酸は、配列番号９４〜１０９のいずれかに示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなることができる。
【００２４】
本開示による複数の核酸は、２つの核酸、３つの核酸、４つの核酸、５つの核酸、６つの核酸、７つの核酸、８つの核酸、９つの核酸、または１０の核酸など、各核酸が本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする最大１０の核酸を含む場合がある。一例では、複数の核酸には、本開示の２つの核酸が含まれ、各々が、本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする。別の例では、複数の核酸には、本開示の３つの核酸が含まれ、各々が、本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする。一例では、複数の核酸には、本開示の４つの核酸が含まれ、各々が、本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする。一例では、複数の核酸には、本開示の５つの核酸が含まれ、各々が、本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする。一例では、複数の核酸には、本開示の６つの核酸が含まれ、各々が、本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする。一例では、複数の核酸には、本開示の７つの核酸が含まれ、各々が、本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする。一例では、複数の核酸には、本開示の８つの核酸が含まれ、各々が、本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする。一例では、複数の核酸には、本開示の９つの核酸が含まれ、各々が、本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする。一例では、複数のＲＮＡは、１０の本開示の核酸を含み、各々が本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする。本明細書に記載する任意の例によれば、該複数の核酸のうちの１つ以上の核酸は、本明細書に記載するｓｈＲＮＡをコードすることができる。
【００２５】
複数の核酸が提供される一例によれば、核酸のうちの２つ以上は、同じポリヌクレオチドの別々の部分を形成することができる。別の例では、該複数の核酸のうちの２つ以上の核酸は、異なるポリヌクレオチドの部分をそれぞれ形成する。
【００２６】
本開示による該または各核酸は、１つ以上の転写終結配列を含むかまたはそれと機能的に連結されている場合もある。たとえば、該または各核酸は、ｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする配列の３’末端に転写終結（ターミネーター）配列を含むことができる。そのような配列はプロモーターの選択に依存し、当業者には明らかであろう。たとえば、本開示の核酸がＲＮＡ  ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターと機能的に連結されている場合、転写終結配列は、『ＴＴＴＴＴ』または『ＴＴＴＴＴＴ』を含むことができる。
【００２７】
あるいは、またはさらに、本開示による該または各核酸は、転写開始配列を含むかまたはそれと機能的に連結されている場合もある。たとえば、該または各核酸は、ｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする配列の５’末端に転写開始（イニシエーター）配列を含むことができる。そのような配列は当業者には明らかであろうが、『Ｇ』を含むことができる。
【００２８】
あるいは、またはさらに、本開示による該または各核酸は、たとえば核酸（複数可）をクローニング・ベクターまたは発現ベクター中にクローニングするのを容易にするために、１つ以上の制限部位を含むことができる。たとえば、本明細書に記載する核酸は、本開示のｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする配列の上流および／または下流に制限部位を含むことができる。好適な制限酵素認識配列は当業者には明らかであろう。しかし、一例では、本開示の核酸（複数可）は、ｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする配列の５’末端すなわち上流にＢａｍＨ１制限部位（ＧＧＡＴＣＣ）を、ｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする配列の３’末端すなわち下流にＥｃｏＲ１制限部位（ＧＡＡＴＴＣ）を含むことができる。
【００２９】
本開示による核酸は、本開示の核酸（複数可）によってコードされる１つ以上のｓｈｍｉＲを発現できるＤＮＡ指向性ＲＮＡ干渉（ｄｄＲＮＡｉ）コンストラクトとして、またはそれに含めて提供することもできる。この点で、本開示の核酸を含む１つ以上のｄｄＲＮＡｉコンストラクトも提供される。
【００３０】
別の例では、本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする核酸をそれぞれが含む複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトを提供し、
（ａ）該複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトのうちの少なくとも１つが、本明細書に記載する複数の核酸のうちの第１の核酸を含み；かつ
（ｂ）該複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトのうちの少なくとも１つが、本明細書に記載する複数の核酸のうちの第２の核酸を含み、
該第１の核酸と該第２の核酸は、互いに異なるｓｈｍｉＲをコードする。
【００３１】
本明細書に記載する複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、本開示の２つのｄｄＲＮＡｉコンストラクト、または３つのｄｄＲＮＡｉコンストラクト、または４つのｄｄＲＮＡｉコンストラクト、または５つのｄｄＲＮＡｉコンストラクト、または６つのｄｄＲＮＡｉコンストラクト、または７つのｄｄＲＮＡｉコンストラクト、または８つのｄｄＲＮＡｉコンストラクト、または９つのｄｄＲＮＡｉコンストラクト、または１０のｄｄＲＮＡｉコンストラクトなど、本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする１つ以上の核酸をそれぞれが含む最大１０のｄｄＲＮＡｉコンストラクトを含む場合がある。
【００３２】
さらに別の例では、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、本明細書に記載する複数の核酸を含み、該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、ＨＢＶを標的とする複数のｓｈｍｉＲをコードし、該ｓｈｍｉＲのそれぞれは互いに異なっている。
【００３３】
一例では、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、本開示の少なくとも２つの核酸を含み、該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、ＨＢＶを標的とする少なくとも２つのｓｈｍｉＲをコードし、該ｓｈｍｉＲのそれぞれは互いに異なっている。
【００３４】
本開示の少なくとも２つの核酸を含む例示的なｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；および
（ｂ）配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含むことができる。
【００３５】
別の例では、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、本明細書に記載する少なくとも３つの核酸を含み、該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、ＨＢＶを標的とする少なくとも３つのｓｈｍｉＲをコードし、該ｓｈｍｉＲのそれぞれは互いに異なっている。
【００３６】
本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトの一例は、
（ａ）配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸：
（ｂ）本明細書に記載するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸；および
（ｃ）配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含み、（ｂ）の核酸は、（ａ）および（ｃ）の核酸によってコードされるｓｈｍｉＲのエフェクター配列とは異なるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする。
【００３７】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、好ましくは５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸：
（ｂ）配列番号５７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；および
（ｃ）配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むことができる。
【００３８】
たとえば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、好ましくは５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸：
（ｂ）配列番号７３に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸；および
（ｃ）配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
【００３９】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、好ましくは５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸：、
（ｂ）配列番号４９に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；および
（ｃ）配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含むことができる。
【００４０】
たとえば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、好ましくは５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸：
（ｂ）配列番号６５に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸；および
（ｃ）配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
【００４１】
３つのｓｈｍｉＲをコードする本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトの別の例によれば、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸：
（ｂ）配列番号１３７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；および
（ｃ）配列番号１４１に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含む。一例では、（ａ）から（ｃ）は、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトにおいて５’から３’の方向で提供される。
【００４２】
たとえば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、好ましくは５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸：
（ｂ）配列番号１４９に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸；および
（ｃ）配列番号１５３に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
【００４３】
さらに別の例では、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする少なくとも１つの核酸および本明細書に記載するＨＢＶを標的とするｓｈＲＮＡをコードする少なくとも１つの核酸を含むことができ、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトによってコードされるｓｈｍｉＲおよびｓｈＲＮＡは、異なるエフェクター配列を含んでいる。この例によれば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、好ましくは５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；
（ｂ）配列番号３９に示すエフェクター配列、および配列番号４０に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡをコードする核酸；および
（ｃ）配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含むことができる。
【００４４】
たとえば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、好ましくは５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸：
（ｂ）配列番号９２に示す配列からなるｓｈＲＮＡをコードする核酸；および
（ｃ）配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含むことができる。
【００４５】
たとえば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、好ましくは５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸：
（ｂ）配列番号１０８に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸；および
（ｃ）配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸を含むことができる。
【００４６】
一例では、本明細書に記載するｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、本開示のｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする該または各核酸に機能的に連結された１つのプロモーターを含む。
【００４７】
別の例では、本開示のｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする各核酸は、別のプロモーターに機能的に連結されている。
【００４８】
たとえば、プロモーター（複数可）は、ｓｈｍｉＲ（複数可）またはｓｈＲＮＡ（複数可）をそれぞれコードする核酸（複数可）の上流に配置されている。複数のプロモーターを含むｄｄＲＮＡｉコンストラクトでは、これらのプロモーターは同じでも異なっていてもよい。例示的なプロモーターは、ＲＮＡ  ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーター系のたとえばＵ６およびＨ１プロモーターなどである。例示的なＵ６プロモーターは、Ｕ６−１、Ｕ６−８、およびＵ６−９プロモーターである。
【００４９】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−９プロモーター：
（ｂ）配列番号７３に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−１プロモーター；および
（ｃ）配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−８プロモーター
を含む。
【００５０】
別の例では、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−９プロモーター：
（ｂ）配列番号６５に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−１プロモーター；および
（ｃ）配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−８プロモーター
を含む。
【００５１】
別の例では、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−９プロモーター：
（ｂ）配列番号１４９に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−１プロモーター；および
（ｃ）配列番号１５３に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−８プロモーター
を含む。
【００５２】
本開示は、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトを含んでいる発現ベクターも提供する。
【００５３】
本開示は、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトをそれぞれが含んでいる複数の発現ベクターも提供する。たとえば、該複数の発現ベクターのうちの１つ以上が、本明細書に記載する複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトを含んでいる。別の例では、該複数の発現ベクターのそれぞれが、本明細書に記載する複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトを含んでいる。さらなる例では、該複数の発現ベクターのそれぞれが、本明細書に記載する１つのｄｄＲＮＡｉコンストラクトを含んでいる。この段落で述べたどの例でも、該複数の発現ベクターは本開示による複数のｓｈｍｉＲを集合的に発現することができる。
【００５４】
一例では、該または各発現ベクターは、プラスミドまたは小環である。
【００５５】
一例では、プラスミドまたは小環または発現ベクターまたはｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、カチオン性ＤＮＡ結合ポリマーとの複合体である。
【００５６】
別の例では、該または各発現ベクターは、ウイルスベクターである。たとえば、該ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター（ＡｄＶ）およびレンチウイルス（ＬＶ）ベクターからなる群より選択される。
【００５７】
本開示は、本明細書に記載するｄｄＲＮＡｉコンストラクトおよび／または複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトおよび／または発現ベクターおよび／または複数の発現ベクターを含む組成物も提供する。一例では、該組成物は、１種以上の製薬上許容される担体および／または希釈剤も含むことができる。一例では、該組成物は、ＨＢＶ感染の治療で知られている別の治療剤と共に、すなわち補助治療剤としてさらに含むことができる。たとえば、ＨＢＶ感染の治療で知られている他の治療剤は、エンテカビル、テノホビル、ラミブジン、アデホビル、および／またはＰＥＧ化インターフェロンから選択することができる。
【００５８】
本開示は、対象のＨＢＶ感染を治療する方法も提供し、該方法は、本明細書に記載する治療有効量の核酸、複数の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクト、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクト、発現ベクター、複数の発現ベクターおよび／または組成物を該対象に投与することを含む。
【００５９】
本開示は、ＨＢＶ感染した対象のＨＢＶウイルス負荷を低下させる方法も提供し、該方法は、本明細書に記載する治療有効量の核酸、複数の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクト、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクト、発現ベクター、複数の発現ベクターおよび／または組成物を該対象に投与することを含む。
【００６０】
本開示は、ＨＢＶ感染に苦しむ対象のＨＢＶ感染と関連する１つ以上の症状の重症度を軽減する方法も提供し、該方法は、本明細書に記載する治療有効量の核酸、複数の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクト、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクト、発現ベクター、複数の発現ベクターおよび／または組成物を該対象に投与することを含む。
【００６１】
本開示は、ＨＢＶに感染した対象のＨＢＶ感染力を低下させる方法も提供し、該方法は、本明細書に記載する治療有効量の核酸、複数の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクト、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクト、発現ベクター、複数の発現ベクターおよび／または組成物を該対象に投与することを含む。
【００６２】
本開示は、ＨＢＶ感染に苦しんでいる対象が慢性肝不全、肝硬変、および／または肝細胞癌を発症するリスクを低下させる方法も提供し、該方法は、本明細書に記載する治療有効量の核酸、複数の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクト、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクト、発現ベクター、複数の発現ベクターおよび／または組成物を該対象に投与することを含む。
【００６３】
本明細書に記載するいずれの方法においても、一例では、対象は急性ＨＢＶ感染に苦しんでいる。あるいは、一例では、対象は慢性ＨＢＶ感染に苦しんでいる。
【００６４】
一例では、本明細書に記載する方法は、対象におけるＨＢＶゲノムによってコードされる１つ以上の転写物の発現を阻害する、または低下させることを含む。
【００６５】
一例では、本開示の核酸、複数の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクト、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクト、発現ベクター、複数の発現ベクターおよび／または組成物が投与される対象は、ＨＢＶ感染の治療のために既に別の治療剤の投与を受けている。たとえば、該対象および／またはＨＢＶは、ＨＢＶ感染の治療で知られている他剤での治療に耐性または抵抗性がある。
【００６６】
別の例では、本開示の核酸、複数の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクト、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクト、発現ベクター、複数の発現ベクターおよび／または組成物は、ＨＢＶ感染の治療で知られている別の治療剤と組み合わせて、すなわち補助治療剤として投与される。たとえば、ＨＢＶ感染の治療で知られている他の治療剤は、エンテカビル、テノホビル、ラミブジン、アデホビル、および／またはＰＥＧ化インターフェロンから選択することができる。ＨＢＶ感染の治療で知られている他の治療剤、ならびに本開示の核酸、複数の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクト、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクト、発現ベクター、複数の発現ベクター、および／または組成物は、別々にまたは一緒に投与することができる。投与が別々である一例によれば、ＨＢＶ感染の治療で知られている他の治療剤は、本開示の核酸、複数の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクト、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクト、発現ベクター、複数の発現ベクター、および／または組成物の投与と同時に投与することができる。投与が別々である別の例によれば、ＨＢＶ感染の治療で知られている他の治療剤は、本開示の核酸、複数の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクト、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクト、発現ベクター、複数の発現ベクター、および／または組成物の投与と連続的に投与することができる。
【００６７】
一例では、本開示の組成物はキットとして提供される。たとえば、本開示の組成物は、ＨＢＶ感染の治療で知られている１種以上の他の治療剤と一緒にパッケージングされている。そのような他の治療剤は、当業者には明らかであろう。たとえば、ＨＢＶ感染の治療で知られている他の治療剤は、エンテカビル、テノホビル、ラミブジン、アデホビル、および／またはＰＥＧ化インターフェロンから選択することができる。別の例では、組成物は、本開示の方法の使用説明書と一緒にパッケージングされている。
【００６８】
本開示は、たとえば対象のＨＢＶ感染を治療するためのおよび／または本明細書に開示する方法でＨＢＶ感染を治療するための医薬の調製における、本明細書に記載する核酸、複数の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクト、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクト、発現ベクター、複数の発現ベクターおよび／または組成物の使用も提供する。一例では、対象は急性ＨＢＶ感染に苦しんでいる。ある代替例では、対象は慢性ＨＢＶ感染に苦しんでいる。
【００６９】
本開示は、治療における使用のための本明細書に記載する核酸、複数の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクト、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクト、発現ベクター、複数の発現ベクターおよび／または組成物も提供する。たとえば、該核酸、複数の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクト、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクト、発現ベクター、複数の発現ベクターおよび／または組成物は、対象のＨＢＶ感染の治療における、および／または本明細書に記載する方法における使用のためのものである。対象は急性ＨＢＶ感染に苦しんでいる場合もある。ある代替例では、対象は慢性ＨＢＶ感染に苦しんでいる場合もある。
【００７０】
本明細書に記載するどの例におけるＨＢＶ治療も、対象のＨＢＶウイルス負荷の低下、ＨＢＶ感染に関連する症状の重症度の軽減および／または対象のＨＢＶ感染力の低下のうちの１つ以上を含むことができる。一例では、治療薬はこれが投与される対象においてＨＢＶ遺伝子転写産物を減少させることになる。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１Ａ】ルシフェラーゼ・レポーター・アッセイにおけるｓｈｍｉＲ−６、ｓｈｍｉＲ−１５、およびｓｈｍｉＲ−１２と称するｓｈｍｉＲの阻害活性をそれらのｓｈＲＮＡ対応物（それぞれ、ｓｈＲＮＡ−６、ｓｈＲＮＡ−１５、およびｓｈＲＮＡ−１２）と比べて例示する図である。ルシフェラーゼ・レポーター・アッセイにおけるｓｈｍｉＲ−６、ｓｈｍｉＲ−１５、およびｓｈｍｉＲ−１２と称するｓｈｍｉＲのセンスおよびアンチセンス鎖優先阻害活性をそれらのｓｈＲＮＡ対応物（それぞれ、ｓｈＲＮＡ−６、ｓｈＲＮＡ−１５、およびｓｈＲＮＡ−１２）と比べて示す。
【図１Ｂ】ルシフェラーゼ・レポーター・アッセイにおけるｓｈｍｉＲ−６、ｓｈｍｉＲ−１５、およびｓｈｍｉＲ−１２と称するｓｈｍｉＲの阻害活性をそれらのｓｈＲＮＡ対応物（それぞれ、ｓｈＲＮＡ−６、ｓｈＲＮＡ−１５、およびｓｈＲＮＡ−１２）と比べて例示する図である。それぞれｓｈｍｉＲ−６、ｓｈｍｉＲ−１５、およびｓｈｍｉＲ−１２がルシフェラーゼ・レポーター・アッセイ系において用量依存的にルシフェラーゼタンパク質発現を阻害する能力を同じ用量のそれらのｓｈＲＮＡ対応物（それぞれ、ｓｈＲＮＡ−６、ｓｈＲＮＡ−１５、およびｓｈＲＮＡ−１２）と比べて示し、比較する図である。
【図１Ｃ】ルシフェラーゼ・レポーター・アッセイにおけるｓｈｍｉＲ−６、ｓｈｍｉＲ−１５、およびｓｈｍｉＲ−１２と称するｓｈｍｉＲの阻害活性をそれらのｓｈＲＮＡ対応物（それぞれ、ｓｈＲＮＡ−６、ｓｈＲＮＡ−１５、およびｓｈＲＮＡ−１２）と比べて例示する図である。それぞれｓｈｍｉＲ−６、ｓｈｍｉＲ−１５、およびｓｈｍｉＲ−１２がルシフェラーゼ・レポーター・アッセイ系において用量依存的にルシフェラーゼタンパク質発現を阻害する能力を同じ用量のそれらのｓｈＲＮＡ対応物（それぞれ、ｓｈＲＮＡ−６、ｓｈＲＮＡ−１５、およびｓｈＲＮＡ−１２）と比べて例示し、比較する図である。
【図１Ｄ】ルシフェラーゼ・レポーター・アッセイにおけるｓｈｍｉＲ−６、ｓｈｍｉＲ−１５、およびｓｈｍｉＲ−１２と称するｓｈｍｉＲの阻害活性をそれらのｓｈＲＮＡ対応物（それぞれ、ｓｈＲＮＡ−６、ｓｈＲＮＡ−１５、およびｓｈＲＮＡ−１２）と比べて例示する図である。それぞれｓｈｍｉＲ−６、ｓｈｍｉＲ−１５、およびｓｈｍｉＲ−１２がルシフェラーゼ・レポーター・アッセイ系において用量依存的にルシフェラーゼタンパク質発現を阻害する能力を同じ用量のそれらのｓｈＲＮＡ対応物（それぞれ、ｓｈＲＮＡ−６、ｓｈＲＮＡ−１５、およびｓｈＲＮＡ−１２）と比べて例示し、比較する図である。
【図２Ａ】ルシフェラーゼ・レポーター・アッセイにおけるｓｈｍｉＲ−１２およびｓｈｍｉＲ−１５のバリアントについてのセンスおよびアンチセンス鎖優先阻害活性を各々の親ｓｈｍｉＲ（それぞれｓｈｍｉＲ−１２およびｓｈｍｉＲ−１５）と比べて示す。ｓｈｍｉＲ−１２の６つすべてのバリアントが親ｓｈｍｉＲよりも良好な鎖の優先性を有することを示す。
【図２Ｂ】ルシフェラーゼ・レポーター・アッセイにおけるｓｈｍｉＲ−１２およびｓｈｍｉＲ−１５のバリアントについてのセンスおよびアンチセンス鎖優先阻害活性を各々の親ｓｈｍｉＲ（それぞれｓｈｍｉＲ−１２およびｓｈｍｉＲ−１５）と比べて示す。ｓｈｍｉＲ−１５の６つのバリアントのうちの４つが親ｓｈｍｉＲよりも良好な鎖の優先性を有することを示す。
【図３Ａ】ｄｄＲＮＡｉ剤を形質導入されたＨｅｐＧ２．２．１５細胞における細胞当たりのコピー数として表されるＲＮＡｉエフェクター分子の発現レベルを示す。（ｉ）シングルコンストラクトとして発現されたｓｈｍｉＲ−１２、（ｉｉ）シングルコンストラクトとして発現されたｓｈＲＮＡ−１２、および（ｉｉｉ）ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１の一部として発現されたｓｈＲＮＡ−１２についての、形質導入から３、４、５、および６日後のエフェクター配列の相対発現レベルを示す。
【図３Ｂ】ｄｄＲＮＡｉ剤を形質導入されたＨｅｐＧ２．２．１５細胞における細胞当たりのコピー数として表されるＲＮＡｉエフェクター分子の発現レベルを示す。（ｉ）シングルコンストラクトとして発現されたｓｈｍｉＲ−１５、（ｉｉ）シングルコンストラクトとして発現されたｓｈＲＮＡ−１５、および（ｉｉｉ）ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１の一部として発現されたｓｈＲＮＡ−１５についての、形質導入から３、４、５、および６日後のエフェクター配列の相対発現レベルを示す。
【図４Ａ】ｓｈｍｉＲ−１２または対応するｓｈＲＮＡをシングルまたはトリプルコンストラクトの一部として発現するＨＢＶ  ＡｄＶベクター（ＭＯＩ＝１００）を形質導入されたＨｅｐＧ２．２．１５における形質導入後３〜６日後のＨＢＶ抗原ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ、およびＨｂｘＡｇに対応する領域でのＨＢＶ  ＲＮＡ転写物の阻害レベルをＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡのレベルと比べて示す。
【図４Ｂ】ｓｈｍｉＲ−１５または対応するｓｈＲＮＡをシングルまたはトリプルコンストラクトの一部として発現するＨＢＶ  ＡｄＶベクター（ＭＯＩ＝１００）を形質導入されたＨｅｐＧ２．２．１５における形質導入後３〜６日後のＨＢＶ抗原ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ、およびＨｂｘＡｇに対応する領域でのＨＢＶ  ＲＮＡ転写物の阻害レベルをＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡのレベルと比べて示す。
【図５】ｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１、ｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１、およびｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１のコンストラクトの図解を提供する。
【図６】ｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１、ｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１、およびｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１を使用してＰｈｏｅｎｉｘＢｉｏ（ＰＸＢ）キメラマウスモデルで行ったインビボの有効性試験のフロー図を提供する。
【図７】単剤療法としてのまたはエンテカビルと組み合わせた単回用量のｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１またはｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１で治療したマウスで血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルが低下したが、生理食塩水処置コントロール動物でのウイルス価は９１日の試験期間にわたって比較的一定のままであったことを示す。
【図８】単剤療法としてのまたはエンテカビルと組み合わせた単回用量のｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１またはｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１で治療したマウスで血清ＨＢｓＡｇ抗原レベルが低下したが、生理食塩水処置コントロール動物での血清ＨＢｓＡｇ抗原レベルは９１日の試験期間にわたって比較的一定のままであったことを示す。
【図９】単剤療法としてのまたはエンテカビルと組み合わせた単回用量のｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１またはｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１で治療したマウスで血清ＨＢｅＡｇ抗原レベルが低下したが、エンテカビルのみで治療した動物は血清ＨＢｅＡｇ抗原レベルのわずかな減少（すなわち、０．３７ｌｏｇ）を示し、生理食塩水処置コントロール動物でのＨＢｅＡｇ抗原レベルは９１日の試験期間にわたって比較的一定のままであったことを示す。
【図１０】単剤療法としてのまたはＰＥＧ化インターフェロン（ＰＥＧ化インターフェロンは１日２回投与）と組み合わせた単回用量のｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１またはｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１で治療したマウスで血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルが有意に低下したが、生理食塩水処置コントロール動物での血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルは９１日の試験期間にわたって比較的一定のままであったことを示す。
【図１１Ａ】単剤療法としてのＰＥＧ化インターフェロン、あるいは単剤療法としてのまたはエンテカビルもしくはＰＥＧ化インターフェロンと組み合わせた単回用量のｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１で治療したマウスでＨＢＶ  ＲＮＡレベルが低下したが、エンテカビルを単独で投与した時のＨＢＶ  ＲＮＡレベルの低下は少しだけであったことを示す。ＡはｓｈｍｉＲ−６に対応する転写物のＨＢＶ  ＲＮＡレベルを示す。
【図１１Ｂ】単剤療法としてのＰＥＧ化インターフェロン、あるいは単剤療法としてのまたはエンテカビルもしくはＰＥＧ化インターフェロンと組み合わせた単回用量のｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１で治療したマウスでＨＢＶ  ＲＮＡレベルが低下したが、エンテカビルを単独で投与した時のＨＢＶ  ＲＮＡレベルの低下は少しだけであったことを示す。ＢはｓｈｍｉＲ−１５に対応する転写物のＨＢＶ  ＲＮＡレベルを示す。
【図１１Ｃ】単剤療法としてのＰＥＧ化インターフェロン、あるいは単剤療法としてのまたはエンテカビルもしくはＰＥＧ化インターフェロンと組み合わせた単回用量のｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１で治療したマウスでＨＢＶ  ＲＮＡレベルが低下したが、エンテカビルを単独で投与した時のＨＢＶ  ＲＮＡレベルの低下は少しだけであったことを示す。ＣはｓｈｍｉＲ−１２に対応する転写物のＨＢＶ  ＲＮＡレベルを示す。
【図１２】単剤療法としてのまたはエンテカビルもしくはＰＥＧ化インターフェロンと組み合わせた単回用量のｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１で治療したマウスの肝臓において細胞内ＨＢＶ  ＤＮＡおよびｃｃｃＤＮＡの両方のレベルが低下したことを示す。
【図１３】単剤療法としてのまたはエンテカビルもしくはＰＥＧ化インターフェロンと組み合わせたｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１、ｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１、またはｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１で治療したマウスから得られた肝臓組織における、細胞当たりのコピー数として表されたＲＮＡｉエフェクター分子の発現レベルを示す。
【図１４】次世代シーケンシング（ＮＧＳ）によって決定された、ＰＸＢマウスから得られた肝臓組織においてｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１、ｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１、およびｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１から産生された優勢なｓｈＲＮＡ−６／ｓｈｍｉＲ−６エフェクター配列種およびその数を示す。
【図１５−１】次世代シーケンシング（ＮＧＳ）によって決定された、ＰＸＢマウスから得られた肝臓組織においてｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１、ｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１、およびｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１から産生された優勢なｓｈＲＮＡ−１５／ｓｈｍｉＲ−１５エフェクター配列種およびその数を示す。
【図１５−２】図１５−１の続き。
【図１６−１】次世代シーケンシング（ＮＧＳ）によって決定された、ＰＸＢマウスから得られた肝臓組織においてｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１、ｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１、およびｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１から産生された優勢なｓｈＲＮＡ−１２／ｓｈｍｉＲ−１２エフェクター配列種およびその数を示す。
【図１６−２】図１６−２の続き。
【発明を実施するための形態】
【００７２】
配列表の一覧
配列番号１：ＨＢＶゲノム内の標的領域１のＲＮＡ転写物。
配列番号２：ＨＢＶゲノム内の標的領域２のＲＮＡ転写物。
配列番号３：ＨＢＶゲノム内の標的領域３のＲＮＡ転写物。
配列番号４：ＨＢＶゲノム内の標的領域４のＲＮＡ転写物。
配列番号５：ＨＢＶゲノム内の標的領域５のＲＮＡ転写物。
配列番号６：ＨＢＶゲノム内の標的領域６のＲＮＡ転写物。
配列番号７：ＨＢＶゲノム内の標的領域７のＲＮＡ転写物。
配列番号８：ＨＢＶゲノム内の標的領域８のＲＮＡ転写物。
配列番号９：ＨＢＶゲノム内の標的領域９のＲＮＡ転写物。
配列番号１０：ＨＢＶゲノム内の標的領域１０のＲＮＡ転写物。
配列番号１１：ｓｈｍｉＲ−１のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１２：ｓｈｍｉＲ−１のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１３：ｓｈｍｉＲ−２のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１４：ｓｈｍｉＲ−２のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１５：ｓｈｍｉＲ−３のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１６：ｓｈｍｉＲ−３のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１７：ｓｈｍｉＲ−４のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１８：ｓｈｍｉＲ−４のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１９：ｓｈｍｉＲ−５のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号２０：ｓｈｍｉＲ−５のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号２１：ｓｈｍｉＲ−６のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号２２：ｓｈｍｉＲ−６のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号２３：ｓｈｍｉＲ−７のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号２４：ｓｈｍｉＲ−７のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号２５：ｓｈｍｉＲ−８のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号２６：ｓｈｍｉＲ−８のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号２７：ｓｈｍｉＲ−９のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号２８：ｓｈｍｉＲ−９のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号２９：ｓｈｍｉＲ−１０のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号３０：ｓｈｍｉＲ−１０のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号３１：ｓｈｍｉＲ−１１のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号３２：ｓｈｍｉＲ−１１のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号３３：ｓｈｍｉＲ−１２のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号３４：ｓｈｍｉＲ−１２のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号３５：ｓｈｍｉＲ−１３のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号３６：ｓｈｍｉＲ−１３のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号３７：ｓｈｍｉＲ−１４のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号３８：ｓｈｍｉＲ−１４のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号３９：ｓｈｍｉＲ−１５のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号４０：ｓｈｍｉＲ−１５のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号４１：ｓｈｍｉＲ−１６のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号４２：ｓｈｍｉＲ−１６のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号４３：ｓｈｍｉＲ−１のＲＮＡ配列。
配列番号４４：ｓｈｍｉＲ−２のＲＮＡ配列。
配列番号４５：ｓｈｍｉＲ−３のＲＮＡ配列。
配列番号４６：ｓｈｍｉＲ−４のＲＮＡ配列。
配列番号４７：ｓｈｍｉＲ−５のＲＮＡ配列。
配列番号４８：ｓｈｍｉＲ−６のＲＮＡ配列。
配列番号４９：ｓｈｍｉＲ−７のＲＮＡ配列。
配列番号５０：ｓｈｍｉＲ−８のＲＮＡ配列。
配列番号５１：ｓｈｍｉＲ−９のＲＮＡ配列。
配列番号５２：ｓｈｍｉＲ−１０のＲＮＡ配列。
配列番号５３：ｓｈｍｉＲ−１１のＲＮＡ配列。
配列番号５４：ｓｈｍｉＲ−１２のＲＮＡ配列。
配列番号５５：ｓｈｍｉＲ−１３のＲＮＡ配列。
配列番号５６：ｓｈｍｉＲ−１４のＲＮＡ配列。
配列番号５７：ｓｈｍｉＲ−１５のＲＮＡ配列。
配列番号５８：ｓｈｍｉＲ−１６のＲＮＡ配列。
配列番号５９：ｓｈｍｉＲ−１をコードするＤＮＡ配列。
配列番号６０：ｓｈｍｉＲ−２をコードするＤＮＡ配列。
配列番号６１：ｓｈｍｉＲ−３をコードするＤＮＡ配列。
配列番号６２：ｓｈｍｉＲ−４をコードするＤＮＡ配列。
配列番号６３：ｓｈｍｉＲ−５をコードするＤＮＡ配列。
配列番号６４：ｓｈｍｉＲ−６をコードするＤＮＡ配列。
配列番号６５：ｓｈｍｉＲ−７をコードするＤＮＡ配列。
配列番号６６：ｓｈｍｉＲ−８をコードするＤＮＡ配列。
配列番号６７：ｓｈｍｉＲ−９をコードするＤＮＡ配列。
配列番号６８：ｓｈｍｉＲ−１０をコードするＤＮＡ配列。
配列番号６９：ｓｈｍｉＲ−１１をコードするＤＮＡ配列。
配列番号７０：ｓｈｍｉＲ−１２をコードするＤＮＡ配列。
配列番号７１：ｓｈｍｉＲ−１３をコードするＤＮＡ配列。
配列番号７２：ｓｈｍｉＲ−１４をコードするＤＮＡ配列。
配列番号７３：ｓｈｍｉＲ−１５をコードするＤＮＡ配列。
配列番号７４：ｓｈｍｉＲ−１６をコードするＤＮＡ配列。
配列番号７５：ｓｈｍｉＲのステムループＲＮＡ配列。
配列番号７６：ｐｒｉ−ｍｉＲ−３０ａ主鎖の５’隣接配列。
配列番号７７：ｐｒｉ−ｍｉＲ−３０ａ主鎖の３’隣接配列。
配列番号７８：ｓｈＲＮＡ−１とされるｓｈＲＮＡのＲＮＡ配列。
配列番号７９：ｓｈＲＮＡ−２とされるｓｈＲＮＡのＲＮＡ配列。
配列番号８０：ｓｈＲＮＡ−３とされるｓｈＲＮＡのＲＮＡ配列。
配列番号８１：ｓｈＲＮＡ−４とされるｓｈＲＮＡのＲＮＡ配列。
配列番号８２：ｓｈＲＮＡ−５とされるｓｈＲＮＡのＲＮＡ配列。
配列番号８３：ｓｈＲＮＡ−６とされるｓｈＲＮＡのＲＮＡ配列。
配列番号８４：ｓｈＲＮＡ−７とされるｓｈＲＮＡのＲＮＡ配列。
配列番号８５：ｓｈＲＮＡ−８とされるｓｈＲＮＡのＲＮＡ配列。
配列番号８６：ｓｈＲＮＡ−９とされるｓｈＲＮＡのＲＮＡ配列。
配列番号８７：ｓｈＲＮＡ−１０とされるｓｈＲＮＡのＲＮＡ配列。
配列番号８８：ｓｈＲＮＡ−１１とされるｓｈＲＮＡのＲＮＡ配列。
配列番号８９：ｓｈＲＮＡ−１２とされるｓｈＲＮＡのＲＮＡ配列。
配列番号９０：ｓｈＲＮＡ−１３とされるｓｈＲＮＡのＲＮＡ配列。
配列番号９１：ｓｈＲＮＡ−１４とされるｓｈＲＮＡのＲＮＡ配列。
配列番号９２：ｓｈＲＮＡ−１５とされるｓｈＲＮＡのＲＮＡ配列。
配列番号９３：ｓｈＲＮＡ−１６とされるｓｈＲＮＡのＲＮＡ配列。
配列番号９４：ｓｈＲＮＡ−１とされるｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列。
配列番号９５：ｓｈＲＮＡ−２とされるｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列。
配列番号９６：ｓｈＲＮＡ−３とされるｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列。
配列番号９７：ｓｈＲＮＡ−４とされるｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列。
配列番号９８：ｓｈＲＮＡ−５とされるｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列。
配列番号９９：ｓｈＲＮＡ−６とされるｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列。
配列番号１００：ｓｈＲＮＡ−７とされるｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列。
配列番号１０１：ｓｈＲＮＡ−８とされるｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列。
配列番号１０２：ｓｈＲＮＡ−９とされるｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列。
配列番号１０３：ｓｈＲＮＡ−１０とされるｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列。
配列番号１０４：ｓｈＲＮＡ−１１とされるｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列。
配列番号１０５：ｓｈＲＮＡ−１２とされるｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列。
配列番号１０６：ｓｈＲＮＡ−１３とされるｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列。
配列番号１０７：ｓｈＲＮＡ−１４とされるｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列。
配列番号１０８：ｓｈＲＮＡ−１５とされるｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列。
配列番号１０９：ｓｈＲＮＡ−１６とされるｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列。
配列番号１１０：ｓｈｍｉＲ−１７のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１１１：ｓｈｍｉＲ−１７のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１１２：ｓｈｍｉＲ−１８のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１１３：ｓｈｍｉＲ−１８のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１１４：ｓｈｍｉＲ−１９のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１１５：ｓｈｍｉＲ−１９のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１１６：ｓｈｍｉＲ−２０のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１１７：ｓｈｍｉＲ−２０のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１１８：ｓｈｍｉＲ−２１のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１１９：ｓｈｍｉＲ−２１のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１２０：ｓｈｍｉＲ−２２のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１２１：ｓｈｍｉＲ−２２のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１２２：ｓｈｍｉＲ−２３のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１２３：ｓｈｍｉＲ−２３のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１２４：ｓｈｍｉＲ−２４のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１２５：ｓｈｍｉＲ−２４のＲＮＡエフェクター相補配列
配列番号１２６：ｓｈｍｉＲ−２５のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１２７：ｓｈｍｉＲ−２５のＲＮＡエフェクター相補配列
配列番号１２８：ｓｈｍｉＲ−２６のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１２９：ｓｈｍｉＲ−２６のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１３０：ｓｈｍｉＲ−２７のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１３１：ｓｈｍｉＲ−２７のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１３２：ｓｈｍｉＲ−２８のＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１３３：ｓｈｍｉＲ−２８のＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１３４：ｓｈｍｉＲ−１７のＲＮＡ配列。
配列番号１３５：ｓｈｍｉＲ−１８のＲＮＡ配列。
配列番号１３６：ｓｈｍｉＲ−１９のＲＮＡ配列。
配列番号１３７：ｓｈｍｉＲ−２０のＲＮＡ配列。
配列番号１３８：ｓｈｍｉＲ−２１のＲＮＡ配列。
配列番号１３９：ｓｈｍｉＲ−２２のＲＮＡ配列。
配列番号１４０：ｓｈｍｉＲ−２３のＲＮＡ配列。
配列番号１４１：ｓｈｍｉＲ−２４のＲＮＡ配列。
配列番号１４２：ｓｈｍｉＲ−２５のＲＮＡ配列。
配列番号１４３：ｓｈｍｉＲ−２６のＲＮＡ配列。
配列番号１４４：ｓｈｍｉＲ−２７のＲＮＡ配列。
配列番号１４５：ｓｈｍｉＲ−２８のＲＮＡ配列。
配列番号１４６：ｓｈｍｉＲ−１７をコードするＤＮＡ配列。
配列番号１４７：ｓｈｍｉＲ−１８をコードするＤＮＡ配列。
配列番号１４８：ｓｈｍｉＲ−１９をコードするＤＮＡ配列。
配列番号１４９：ｓｈｍｉＲ−２０をコードするＤＮＡ配列。
配列番号１５０：ｓｈｍｉＲ−２１をコードするＤＮＡ配列。
配列番号１５１：ｓｈｍｉＲ−２２をコードするＤＮＡ配列。
配列番号１５２：ｓｈｍｉＲ−２３をコードするＤＮＡ配列。
配列番号１５３：ｓｈｍｉＲ−２４をコードするＤＮＡ配列。
配列番号１５４：ｓｈｍｉＲ−２５をコードするＤＮＡ配列。
配列番号１５５：ｓｈｍｉＲ−２６をコードするＤＮＡ配列。
配列番号１５６：ｓｈｍｉＲ−２７をコードするＤＮＡ配列。
配列番号１５７：ｓｈｍｉＲ−２８をコードするＤＮＡ配列。
配列番号１５８：ＨＢＶフォワード・プライマーのＤＮＡ配列。
配列番号１５９：ＨＢＶリバース・プライマーのＤＮＡ配列。
配列番号１６０：ＨＢＶ  ＴａｑｍａｎプローブのＤＮＡ配列。
配列番号１６１：ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡフォワード・プライマーのＤＮＡ配列。
配列番号１６２：ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡリバース・プライマーのＤＮＡ配列。
配列番号１６３：ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡ  ＴａｑｍａｎプローブのＤＮＡ配列。
配列番号１６４：隣接配列を含む、ｓｈＲＮＡ−６をコードするＤＮＡ配列。
配列番号１６５：ｓｈＲＮＡ−６エフェクター種１に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１６６：ｓｈＲＮＡ−６エフェクター種２に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１６７：ｓｈＲＮＡ−６エフェクター種３に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１６８：ｓｈＲＮＡ−６エフェクター種４に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１６９：ｓｈＲＮＡ−６エフェクター種５に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１７０：ｓｈＲＮＡ−６エフェクター種６に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１７１：ｓｈＲＮＡ−６エフェクター種７に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１７２：ｓｈＲＮＡ−６エフェクター種８に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１７３：ｓｈＲＮＡ−６エフェクター種９に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１７４：ｓｈＲＮＡ−６エフェクター種１０に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１７５：ｓｈＲＮＡ−６エフェクター種１１に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１７６：ｍｉＲＮＡ主鎖の隣接配列を含む、ｓｈｍｉＲ−６をコードするＤＮＡ配列。
配列番号１７７：ｓｈｍｉＲ−６エフェクター種１に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１７８：ｓｈｍｉＲ−６エフェクター種２に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１７９：ｓｈｍｉＲ−６エフェクター種３に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１８０：ｓｈｍｉＲ−６エフェクター種４に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１８１：ｓｈｍｉＲ−６エフェクター種５に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１８２：隣接配列を含む、ｓｈＲＮＡ−１５をコードするＤＮＡ配列。
配列番号１８３：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種１に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１８４：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種２に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１８５：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種３に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１８６：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種４に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１８７：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種５に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１８８：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種６に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１８９：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種７に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１９０：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種８に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１９１：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種９に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１９２：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種１０に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１９３：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種１１に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１９４：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種１２に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１９５：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種１３に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１９６：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種１４に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１９７：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種１５に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１９８：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種１６に対応するＤＮＡ配列。
配列番号１９９：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種１７に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２００：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種１８に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２０１：ｓｈＲＮＡ−１５エフェクター種１９に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２０２：ｍｉＲＮＡ主鎖の隣接配列を含む、ｓｈｍｉＲ−１５をコードするＤＮＡ配列。
配列番号２０３：ｓｈｍｉＲ−１５エフェクター種１に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２０４：ｓｈｍｉＲ−１５エフェクター種２に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２０５：ｓｈｍｉＲ−１５エフェクター種３に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２０６：ｓｈｍｉＲ−１５エフェクター種４に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２０７：ｓｈｍｉＲ−１５エフェクター種５に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２０８：ｓｈｍｉＲ−１５エフェクター種６に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２０９：隣接配列を含む、ｓｈＲＮＡ−１２をコードするＤＮＡ配列。
配列番号２１０：ｓｈＲＮＡ−１２エフェクター種１に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２１１：ｓｈＲＮＡ−１２エフェクター種２に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２１２：ｓｈＲＮＡ−１２エフェクター種３に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２１３：ｓｈＲＮＡ−１２エフェクター種４に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２１４：ｓｈＲＮＡ−１２エフェクター種５に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２１５：ｓｈＲＮＡ−１２エフェクター種６に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２１６：ｓｈＲＮＡ−１２エフェクター種７に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２１７：ｓｈＲＮＡ−１２エフェクター種８に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２１８：ｓｈＲＮＡ−１２エフェクター種９に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２１９：ｓｈＲＮＡ−１２エフェクター種１０に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２２０：ｓｈＲＮＡ−１２エフェクター種１１に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２２１：ｓｈＲＮＡ−１２エフェクター種１２に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２２２：ｓｈＲＮＡ−１２エフェクター種１３に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２２３：ｓｈＲＮＡ−１２エフェクター種１４に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２２４：ｍｉＲＮＡ主鎖の隣接配列を含む、ｓｈｍｉＲ−１２をコードするＤＮＡ配列。
配列番号２２５：ｓｈｍｉＲ−１２エフェクター種１に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２２６：ｓｈｍｉＲ−１２エフェクター種２に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２２７：ｓｈｍｉＲ−１２エフェクター種３に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２２８：ｓｈｍｉＲ−１２エフェクター種４に対応するＤＮＡ配列。
配列番号２２９：ｓｈｍｉＲ−１２エフェクター種５に対応するＤＮＡ配列。
【００７３】
詳細な説明
一般事項
本明細書の全体で、特に別途記載しない限り、また内容的に必要のない限り、１つのステップ、特徴、物質の組成、諸ステップ群、または物質の諸特性や諸組成の群への言及は、そういった諸ステップ、諸特性、物質の諸組成、諸ステップ群、物質の諸特性や諸組成の諸群の１つおよび複数（すなわち１つ以上）を包含するものとする。
【００７４】
当業者であれば理解しようが、本開示は、具体的に説明している以外にも変更や改変の余地がある。本開示はそういった変更や改変をすべて含むものと理解すべきである。本開示はまた、本明細書で単独でまたはまとめて言及するかまたは示す諸ステップ、諸特性、諸組成物および諸化合物のすべて、ならびにこれらの諸ステップや諸特性のあらゆる組合せまたは任意の２つ以上を含む。
【００７５】
本開示は、本明細書で例示目的でのみ記載している具体的な諸例によってその範囲を限定されない。機能的に等価な産物、組成物および方法が本開示の範囲内であることは明白である。
【００７６】
本明細書では、特に断らない限り、本開示のいずれの例も必要に応じて変更を加えて本開示の他の任意の例に応用できるものとする。
【００７７】
特に別途定義しない限り、本明細書で使用するすべての科学技術用語は、当業界（たとえば細胞培養、分子遺伝学、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学、生化学など）で当業者が通常理解するのと同じ意味をもつものとする。
【００７８】
特に断らない限り、本開示で用いる組換えＤＮＡ、組換えタンパク質、細胞培養、および免疫学的技法は当業者によく知られた標準的な手順である。そのような技法は、Ｊ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９８４），Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９），Ｔ．Ａ．Ｂｒｏｗｎ（編纂），Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １  ａｎｄ  ２，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９１），Ｄ．Ｍ．Ｇｌｏｖｅｒ  ａｎｄ  Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ（編纂），ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−４，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９５  ａｎｄ  １９９６），ａｎｄ  Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（編纂），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８，現在までのすべての最新情報を含む），Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ（編纂）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，（１９８８）およびＪ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（編纂）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（現在までのすべての最新情報を含む）などの文献資料で説明されている。
【００７９】
本明細書の全体で、内容的に他の意味を必要としない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」またはその変化形である「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」や「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、記載のステップまたはエレメントまたは整数またはステップ群またはエレメント群または整数群を含む意味があるが、任意の他のステップまたはエレメントまたは整数またはエレメント群または整数群を排除するものではないと理解されたい。
【００８０】
「および／または」という用語、たとえば「Ｘおよび／またはＹ」は、「ＸおよびＹ」または「ＸまたはＹ」のいずれかを意味するものと理解すべきであり、両方または片方の意味を明白にサポートするために用いるものとする。
【００８１】
定義
「ＲＮＡ」とは、少なくとも１つのリボヌクレオチド残基を含む分子を意味する。「リボヌクレオチド」とは、β−Ｄ−リボ−フラノース部分の２’位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドを意味する。これらの用語には、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、部分精製ＲＮＡなどの単離されたＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換えにより生産されたＲＮＡ、および１つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換および／または改変によって天然のＲＮＡとは異なるように改変されたＲＮＡが含まれる。そのような改変としては、たとえばｓｉＲＮＡの末端（複数可）に、または内部に、たとえばＲＮＡの１つ以上のヌクレオチドに、非ヌクレオチド物質を付加することであってもよい。本開示のＲＮＡ分子のヌクレオチドは、非標準ヌクレオチド、たとえば非天然ヌクレオチドまたは化学的に合成されたヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドを含むこともできる。これらの改変されたＲＮＡは、アナログ、または天然ＲＮＡのアナログと呼ぶこともできる。
【００８２】
「ＲＮＡ干渉」または「ＲＮＡｉ」という用語は、広くは、細胞の細胞質において二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子によって開始される遺伝子発現のＲＮＡ依存性サイレンシングを指す。ｄｓＲＮＡ分子は標的核酸配列の転写産物を減じまたは阻害し、そうすることで遺伝子を抑制（サイレンシング）し、またはその遺伝子の発現を減じる。
【００８３】
本明細書では、「二本鎖ＲＮＡ」または「ｄｓＲＮＡ」という用語は、二本鎖構造をもつ、互いに長さが同様のエフェクター配列とエフェクター相補配列とを含むＲＮＡ分子を指す。エフェクター配列とエフェクター相補配列は、一本鎖ＲＮＡ中にあっても、別々のＲＮＡ鎖中にあってもよい。「エフェクター配列」（「ガイド鎖」と呼ばれることも多い）は、標的配列に実質的に相補的であり、標的配列とはこの場合はＨＢＶゲノムのＲＮＡ転写産物のある領域である。「エフェクター配列」は「アンチセンス配列」と呼ばれる場合もある。「エフェクター相補配列」は、エフェクター配列にアニールしてデュプレックスを形成できるように、エフェクター配列に対し十分な相補性がある。この点で、エフェクター相補配列は、標的配列のある領域と実質的に相同となる。当業者には明白であろうが、「エフェクター相補配列」という用語は、「エフェクター配列の相補配列」またはセンス配列と呼ぶこともできる。
【００８４】
本明細書では、「デュプレックス」という用語は、２つの相補的もしくは実質的に相補的な核酸（たとえばＲＮＡ）中の領域、あるいは一本鎖核酸（たとえば、ＲＮＡ）中の２つの相補的もしくは実質的に相補的な領域を指し、ワトソン・クリック塩基対形成により、または相補的もしくは実質的に相補的なヌクレオチド配列間で安定したデュプレックスが形成される任意の他の様式により、互いに塩基対を形成している。当業者であれば理解しようが、デュプレックス領域において１００％の相補性は必要ではなく、実質的な相補性があればよい。実質的な相補性としては、６９％以上の相補性を挙げることができる。たとえば、１９塩基対からなるデュプレックス領域中１つのミスマッチ（すなわち、１８塩基対と１ミスマッチ）は、９４．７％の相補性ということになり、デュプレックス領域は実質的に相補的である。別の例では、１９塩基対からなるデュプレックス領域中２つのミスマッチ（すなわち、１７塩基対と２ミスマッチ）は、８９．５％の相補性ということになり、デュプレックス領域は実質的に相補的である。さらに別の例では、１９塩基対からなるデュプレックス領域中３つのミスマッチ（すなわち、１６塩基対と３ミスマッチ）は、８４．２％の相補性ということになり、デュプレックス領域は実質的に相補的である、などである。
【００８５】
ｄｓＲＮＡは、ステムループと呼ばれる少なくとも２ヌクレオチドの配列によって連結されたエフェクター配列とエフェクター相補配列で構成されるデュプレックス領域を有する、ヘアピンまたはステムループ構造として提供することができる。ｄｓＲＮＡがヘアピンまたはステムループ構造で提供されるとき、これを「ヘアピンＲＮＡ」または「ショートヘアピン型ＲＮＡｉ剤」または「ｓｈＲＮＡ」と呼ぶことができる。
【００８６】
ヘアピンまたはステムループ構造として提供されるまたはヘアピンまたはステムループ構造を生じる他のｄｓＲＮＡ分子としては、プライマリーｍｉＲＮＡ転写物（ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ）および前駆体マイクロＲＮＡ（ｐｒｅ−ｍｉＲＮＡ）が挙げられる。ｐｒｅ−ｍｉＲＮＡ  ｓｈＲＮＡは、ステムループ構造を形成するプライマリーｍｉＲＮＡ転写物の領域を認識して放出する酵素ＤｒｏｓｈａおよびＰａｓｈａの作用によってｐｒｉ−ｍｉＲＮＡから天然に産生され得る。あるいは、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ転写物は、天然のステムループ構造を人工的な／組換えのステムループ構造に置換するように操作されていてもよい。すなわち、人工的な／組換えのステムループ構造をその天然のステムループ構造を欠いたｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖配列中に挿入またはクローン化することができる。ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ分子の一部として発現されるように操作されたステムループ配列の場合、ＤｒｏｓｈａおよびＰａｓｈａは人工的なｓｈＲＮＡを認識してそれを放出する。このアプローチを使用して産生されるｄｓＲＮＡ分子は、「ｓｈｍｉＲＮＡ」、「ｓｈｍｉＲ」、または「マイクロＲＮＡフレームワークｓｈＲＮＡ」として知られている。
【００８７】
本明細書では、ある配列に関する「相補的」という用語は、該配列に対しワトソン・クリック塩基対形成による相補的な配列を指し、したがってグアニン（Ｇ）はシトシン（Ｃ）と対をなし、アデニン（Ａ）はウラシル（Ｕ）かチミン（Ｔ）と対をなす。配列は別の配列の全長に対して相補的な場合もあるし、別の配列の特定の部分もしくは長さに対して相補的な場合もある。当業者であれば、ＵはＲＮＡにおいて、ＴはＤＮＡにおいて存在し得ることを知っている。したがって、ＲＮＡ配列またはＤＮＡ配列中のＡは、ＲＮＡ配列中のＵと、あるいはＤＮＡ配列中のＴと対をなすことができる。
【００８８】
本明細書では、「実質的に相補的」という用語は、核酸配列間、たとえばエフェクター配列とエフェクター相補配列の間に、またはエフェクター配列と標的配列の間に安定した特異的な結合が生じるような、十分な相補性があることまたは対形成が正確になされることを指すのに用いられる。核酸の配列は、その標的または相補配列に１００％相補的である必要はないと理解されている。この用語は、オーバーハングを除き、別の配列に相補的な配列を包含している。いくつかの場合には、配列は１つ〜２つのミスマッチを除いて他方の配列に相補的である。いくつかの場合には、配列は１ミスマッチを除いて相補的である。いくつかの場合には、配列は２ミスマッチを除いて相補的である。ほかの場合には、配列は３ミスマッチを除いて相補的である。さらに他の場合には、配列は４ミスマッチを除いて相補的である。
【００８９】
本開示のｓｈＲＮＡまたはｓｈｍｉＲに関連して使われる「コードされ（てい）る」という用語は、ｓｈＲＮＡまたはｓｈｍｉＲがＤＮＡテンプレートから転写されることができることを意味すると理解すべきである。したがって、本開示のｓｈＲＮＡまたはｓｈｍｉＲをコードする核酸は、それぞれのｓｈＲＮＡまたはｓｈｍｉＲの転写のテンプレートとなるＤＮＡ配列を含む。
【００９０】
「ＤＮＡ指向性ＲＮＡｉコンストラクト」または「ｄｄＲＮＡｉコンストラクト」という用語は、転写されるとＲＮＡｉを誘発するｓｈＲＮＡまたはｓｈｍｉＲ分子を生産するＤＮＡ配列を含む核酸を指す。ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、少なくとも２ヌクレオチドのステムループによって連結されたデュプレックス領域を有するヘアピン構造へと自己アニールできる単一のＲＮＡ、すなわちｓｈＲＮＡまたはｓｈｍｉＲとして転写される核酸、または複数のｓｈＲＮＡもしくはｓｈｍｉＲを有する単一のＲＮＡとして転写される核酸、またはそれぞれが単一のｓｈＲＮＡもしくはｓｈｍｉＲとしてフォールディングできる複数のＲＮＡ転写物として転写される核酸、を含むことができる。ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは発現ベクター中にあってもよく、すなわち、たとえばプロモーターに機能的に連結されている「ｄｄＲＮＡｉ発現コンストラクト」であってもよい。
【００９１】
本明細書では、「機能的に連結される」または「機能的連結」という（あるいはそれらと類似の）用語は、コード核酸配列が、該コード配列の発現を促進するように、制御配列たとえばプロモーターに連結されているかまたはそれと結合していることを意味する。制御配列としては、プロモーター、エンハンサー、および当業界で認められている、コード配列の発現を指令するように選択される他の発現制御エレメントが挙げられる。
【００９２】
「ベクター」は、核酸を細胞に導入するためのビヒクルを意味すると理解される。ベクターとしては、限定ではないが、プラスミド、ファージミド、ウイルス、細菌、およびウイルスや細菌ソース由来のビヒクルが挙げられる。「プラスミド」は円形の二本鎖ＤＮＡ分子である。本開示での使用に便利なタイプのベクターは、ウイルスベクターであり、１つ以上のウイルス遺伝子またはその一部を削除するように修飾可能なウイルスゲノムに異種ＤＮＡ配列が挿入される。一部のベクターは、宿主細胞内で自己複製できる（たとえば、宿主細胞内で機能する複製起点を有するベクター）。他のベクターは、宿主細胞のゲノムに安定的に取り込まれ、そうすることで宿主ゲノムと一緒に複製される。本明細書では、「発現ベクター」という用語は、本開示のＲＮＡ分子を発現できるベクターを意味すると理解される。
【００９３】
本明細書では、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」「治療する（ｔｒｅａｔ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語およびその変化形は、治療対象の個体または細胞が臨床病理学的に自然に辿る経路を変更するように設計された臨床的介入を指す。望ましい治療効果としては、疾患の進行速度の低下、疾患状態の改善もしくは緩和、および寛解もしくは良好な予後が挙げられる。したがって、ＨＢＶ感染の治療としては、ＨＢＶ感染した対象のＨＢＶウイルス負荷の低下、ＨＢＶ感染に関連する症状の重症度の軽減、および対象のＨＢＶ感染力の低下が挙げられる。たとえば、このような治療結果のうちの１つ以上が得られた場合、その個体の「治療」は成功した、といえる。
【００９４】
「治療有効量」は、特定の疾患（たとえばＨＢＶ感染）の測定可能な改善が得られるのに必要な、少なくとも最低限の濃度または量である。本明細書における治療有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびにｓｈＲＮＡもしくはｓｈｍｉＲ、それをコードする核酸、ｄｄＲＮＡｉまたは発現コンストラクトがその個体の所望の応答を誘発する能力といった要因によって異なることもある。治療有効量は、ｓｈＲＮＡもしくはｓｈｍｉＲ、それをコードする核酸、ｄｄＲＮＡｉまたは発現コンストラクトのあらゆる毒性または有害な効果よりも治療上有益な効果のほうが勝る量でもある。
【００９５】
本明細書では、「対象」または「患者」は、ＨＢＶ感染したヒトの場合も非ヒト動物の場合もある。「非ヒト動物」は、霊長類、家畜（たとえばヒツジ、ウマ、ウシ、ブタ、ロバ）、コンパニオン動物（たとえばイヌやネコなどのペット）、実験動物（たとえばマウス、ウサギ、ラット、モルモット）、芸などをする動物（たとえば競走馬、ラクダ、グレイハウンド）または飼育下の野生動物であってもよい。一例では、対象または患者は哺乳類である。一例では、対象または患者は霊長類である。一例では、対象または患者はヒトである。
【００９６】
「発現が減少した」「発現の減少」という用語または同様の用語は、標的遺伝子たとえばＨＢＶ  ｐｏｌ遺伝子または他のＨＢＶ遺伝子からのタンパク質および／またはｍＲＮＡ産物の不存在または観察可能なレベルの減少を指す。この減少は完全である必要はなく、本開示の核酸によってコードされるｓｈｍｉＲによるＲＮＡｉの結果として検出可能または観察可能な変化をもたらすのに十分な部分的減少の場合もある。この減少は、ｓｈｍｉＲもしくはｓｈＲＮＡ、それをコードする核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現コンストラクトをもたない細胞と比較しての標的核酸からのｍＲＮＡおよび／またはタンパク質産物レベルの減少を決定することにより測定でき、１％、５％または１０％と僅かな場合もあれば、完全な減少、すなわち１００％阻害である場合もある。この減少の効果は、外向きの特性、すなわち細胞または生物の表現型の量および／または質の調査によって決定することもできるし、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクト投与後のウイルス負荷の評価を含んでも良い。
【００９７】
ＲＮＡｉのための薬剤
一例では、本開示は、ショートヘアピンマイクロＲＮＡ（ｓｈｍｉＲ）をコードするＤＮＡ配列を含む核酸を提供し、前記ｓｈｍｉＲは、
少なくとも１７ヌクレオチド長のエフェクター配列；
エフェクター相補配列；
ステムループ配列；および
プライマリーマイクロＲＮＡ（ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ）主鎖
を含み、エフェクター配列は、配列番号１〜１０、３８、４０、４２、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、および１３３のいずれかに示すＲＮＡ転写物に実質的に相補的である。好ましくは、エフェクター配列は３０ヌクレオチド長よりも短い。たとえば、好適なエフェクター配列は１７〜２９ヌクレオチド長の範囲であってもよい。特に好ましい例では、エフェクター配列は２１ヌクレオチド長である。より好ましくは、エフェクター配列は２１ヌクレオチド長であり、かつエフェクター相補配列は２０ヌクレオチド長である。
【００９８】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【００９９】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号２に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号２に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号２に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号２に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号２に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号２に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号２に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号２に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１００】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１０１】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号４に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１０２】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１０３】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号６に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号６に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号６に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号６に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号６に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号６に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号６に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号６に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１０４】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１０５】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号８に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号８に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号８に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号８に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号８に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号８に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号８に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号８に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１０６】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１０７】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号１０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１０８】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号３８に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号３８に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号３８に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号３８に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号３８に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号３８に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号３８に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号３８に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１０９】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号４０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１１０】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号４２に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４２に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４２に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４２に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４２に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４２に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４２に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号４２に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１１１】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号１１１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１１２】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号１１３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１１３】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号１１５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１１４】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号１１７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１１５】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号１１９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１１９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１１６】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号１２１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１１７】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号１２３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１１８】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号１２５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１１９】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号１２７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２７に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１２０】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号１２９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１２９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１２１】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号１３１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１３１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１３１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１３１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１３１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１３１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１３１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１３１に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１２２】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号１３３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含む。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１３３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し６ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１３３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し５ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１３３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し４ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１３３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し３ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１３３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し２ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１３３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、それに対し１ミスマッチ塩基を含むことができる。たとえば、エフェクター配列は、配列番号１３３に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に１００％相補的な場合もある。
【０１２３】
本開示のｓｈｍｉＲのエフェクター配列が本明細書に記載するＨＢＶ  ＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、かつそれに対し１、２、３、４、５、または６ミスマッチ塩基（複数可）を含む一例によれば、ミスマッチ（複数可）はｓｈｍｉＲのシード領域に対応する領域内、すなわちエフェクター配列のヌクレオチド２〜８内に位置しないことが好ましい。
【０１２４】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号１２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１１に示すエフェクター配列、および配列番号１１に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号１１に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１２に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−１」と称する。
【０１２５】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号１４に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１４に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１３に示すエフェクター配列、および配列番号１３に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号１３に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１４に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−２」と称する。
【０１２６】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号１６に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１６に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１５に示すエフェクター配列、および配列番号１５に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号１５に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１６に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−３」と称する。
【０１２７】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号１８に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１８に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１７に示すエフェクター配列、および配列番号１７に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号１７に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１８に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−４」と称する。
【０１２８】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号２０に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２０に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１９に示すエフェクター配列、および配列番号１９に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号１９に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号２０に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−５」と称する。
【０１２９】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号２２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２２に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号２１に示すエフェクター配列、および配列番号２１に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号２１に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号２２に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−６」と称する。
【０１３０】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号２４に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２４に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号２３に示すエフェクター配列、および配列番号２３に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号２３に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号２４に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−７」と称する。
【０１３１】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号２６に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２６に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号２５に示すエフェクター配列、および配列番号２５に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号２５に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号２６に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−８」と称する。
【０１３２】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号２８に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２８に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号２７に示すエフェクター配列、および配列番号２７に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号２７に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号２８に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−９」と称する。
【０１３３】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号３０に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３０に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号２９に示すエフェクター配列、および配列番号２９に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号２９に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号３０に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−１０」と称する。
【０１３４】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号３２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３２に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号３１に示すエフェクター配列、および配列番号３１に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号３１に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号３２に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−１１」と称する。
【０１３５】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号３４に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３４に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号３３に示すエフェクター配列、および配列番号３３に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号３３に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号３４に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−１２」と称する。
【０１３６】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号３６に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３６に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号３５に示すエフェクター配列、および配列番号３５に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号３５に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号３６に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−１３」と称する。
【０１３７】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号３８に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３８に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号３７に示すエフェクター配列、および配列番号３７に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号３７に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号３８に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−１４」と称する。
【０１３８】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号４０に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号４０に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号３９に示すエフェクター配列、および配列番号３９に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号３９に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号４０に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−１５」と称する。
【０１３９】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号４２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号４２に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号４１に示すエフェクター配列、および配列番号４１に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号４１に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号４２に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−１６」と称する。
【０１４０】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号１１１に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１１１に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１１２に示すエフェクター配列、および配列番号１１２に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号１１２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１１１に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−１７」と称する。
【０１４１】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号１１３に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１１３に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１１４に示すエフェクター配列、および配列番号１１４に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号１１４に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１１３に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−１８」と称する。
【０１４２】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号１１５に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１１５に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１１６に示すエフェクター配列、および配列番号１１６に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号１１６に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１１５に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−１９」と称する。
【０１４３】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号１１７に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１１７に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１１８に示すエフェクター配列、および配列番号１１８に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号１１８に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１１７に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−２０」と称する。
【０１４４】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号１１９に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１１９に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１２０に示すエフェクター配列、および配列番号１２０に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号１２０に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１１９に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−２１」と称する。
【０１４５】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号１２１に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２１に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１２２に示すエフェクター配列、および配列番号１２２に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号１２２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１２１に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−２２」と称する。
【０１４６】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号１２３に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２３に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１２４に示すエフェクター配列、および配列番号１２４に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号１２４に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１２３に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−２３」と称する。
【０１４７】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号１２５に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２５に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１２６に示すエフェクター配列、および配列番号１２６に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号１２６に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１２５に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−２４」と称する。
【０１４８】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号１２７に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２７に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１２８に示すエフェクター配列、および配列番号１２８に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号１２８に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１２７に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−２５」と称する。
【０１４９】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号１２９に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２９に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１３０に示すエフェクター配列、および配列番号１３０に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号１３０に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１２９に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−２６」と称する。
【０１５０】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号１３１に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１３１に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１３２に示すエフェクター配列、および配列番号１３２に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号１３２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１３１に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−２７」と称する。
【０１５１】
一例では、本明細書に記載する核酸は、（ｉ）配列番号１３３に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１３３に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１３４に示すエフェクター配列、および配列番号１３４に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含むことができる。配列番号１３４に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１３３に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈｍｉＲを以後、「ｓｈｍｉＲ−２８」と称する。
【０１５２】
本明細書に記載する任意の例において、本開示の核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、５’から３’の方向に、
ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖の５’隣接配列；
エフェクター相補配列；
ステムループ配列；
エフェクター配列；および
ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖の３’隣接配列
を含むことができる。
【０１５３】
好適なループ配列は、当業界で既知のものから選択することができる。しかし、例示的なステムループ配列は、配列番号７５に示すものである。
【０１５４】
本開示の核酸において使用するための好適なプライマリーマイクロＲＮＡ（ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡまたはｐｒｉ−Ｒ）主鎖は、当業界で既知のものから選択することができる。たとえば、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖は、ｐｒｉ−ｍｉＲ−３０ａ主鎖、ｐｒｉ−ｍｉＲ−１５５主鎖、ｐｒｉ−ｍｉＲ−２１主鎖、およびｐｒｉ−ｍｉＲ−１３６主鎖から選択することができる。しかし、好ましくは、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖はｐｒｉ−ｍｉＲ−３０ａ主鎖である。ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖がｐｒｉ−ｍｉＲ−３０ａ主鎖である一例によれば、ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖の５’隣接配列は配列番号７６に示すものであり、かつｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ主鎖の３’隣接配列は配列番号７７に示すものである。したがって、本開示のｓｈｍｉＲ（たとえば、本明細書に記載するｓｈｍｉＲ−１からｓｈｍｉＲ−１６）をコードする核酸は、配列番号７６に示す配列をコードするＤＮＡ配列および配列番号７７に示す配列をコードするＤＮＡ配列を含むことができる。
【０１５５】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号５９〜７４および１４６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含むことができる。
【０１５６】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号５９に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号４３に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１）をコードする。
【０１５７】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号６０に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号４４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２）をコードする。
【０１５８】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号６１に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号４５に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−３）をコードする。
【０１５９】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号６２に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号４６に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−４）をコードする。
【０１６０】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号６３に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号４７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−５）をコードする。
【０１６１】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号６４に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−６）をコードする。
【０１６２】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号６５に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号４９に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−７）をコードする。
【０１６３】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号６６に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号５０に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−８）をコードする。
【０１６４】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号６７に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号５１に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−９）をコードする。
【０１６５】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号６８に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号５２に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１０）をコードする。
【０１６６】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号６９に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号５３に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１１）をコードする。
【０１６７】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号７０に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１２）をコードする。
【０１６８】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号７１に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号５５に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１３）をコードする。
【０１６９】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号７２に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号５６に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１４）をコードする。
【０１７０】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号７３に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号５７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１５）をコードする。
【０１７１】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号７４に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号５８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１６）をコードする。
【０１７２】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号１４６に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１３４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１７）をコードする。
【０１７３】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号１４７に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１３５に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１８）をコードする。
【０１７４】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号１４８に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１３６に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１９）をコードする。
【０１７５】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号１４９に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１３７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２０）をコードする。
【０１７６】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号１５０に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１３８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２１）をコードする。
【０１７７】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号１５１に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１３９に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２２）をコードする。
【０１７８】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号１５２に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１４０に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２３）をコードする。
【０１７９】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号１５３に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１４１に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２４）をコードする。
【０１８０】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号１５４に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１４２に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２５）をコードする。
【０１８１】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号１５５に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１４３に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２６）をコードする。
【０１８２】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号１５６に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１４４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２７）をコードする。
【０１８３】
一例では、本明細書に記載する核酸は、配列番号１５７に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１４５に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２８）をコードする。
【０１８４】
本開示の例示的な核酸は、本明細書に記載するｓｈｍｉＲ−６、ｓｈｍｉＲ−７、ｓｈｍｉＲ−１２、およびｓｈｍｉＲ−１５から選択されるｓｈｍｉＲをコードする。本開示のさらなる例示的な核酸は、ｓｈｍｉＲ−２３、ｓｈｍｉＲ−２４、ｓｈｍｉＲ−２５、ｓｈｍｉＲ−２６、ｓｈｍｉＲ−２７、およびｓｈｍｉＲ−２８から選択されるｓｈｍｉＲ−１２のバリアントをコードするか、またはｓｈｍｉＲ−１７、ｓｈｍｉＲ−１８、ｓｈｍｉＲ−１９、ｓｈｍｉＲ−２０、ｓｈｍｉＲ−２１、およびｓｈｍｉＲ−２２から選択されるｓｈｍｉＲ−１５のバリアントをコードする。
【０１８５】
当業者であれば、本開示による核酸を他のＨＢＶ治療剤と併用でまたは組み合わせて使用できることを理解しよう。したがって、本開示は、１種以上の他のＨＢＶ治療剤と併用される、本明細書に記載するｓｈｍｉＲ（たとえば、本明細書に記載するｓｈｍｉＲ１〜ｓｈｍｉＲ−２８と称する１つ以上のｓｈｍｉＲ）をコードするＤＮＡ配列を含む核酸を提供する。一例では、
（ａ）本明細書に記載する少なくとも１つの核酸；および
（ｂ）
（ｉ）本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含む核酸；または
（ｉｉ）少なくとも１７ヌクレオチド長のエフェクター配列およびエフェクター相補配列を含むショートヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）をコードするＤＮＡ配列を含み、エフェクター配列は配列番号１〜１０、３８、４０、４２、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、および１３３のいずれかに示すＲＮＡ配列に実質的に相補的である、核酸
から選択される少なくとも１つのさらなる核酸
を含む複数の核酸を提供し、（ａ）の核酸によってコードされるｓｈｍｉＲおよび（ｂ）の核酸によってコードされるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡは、異なるエフェクター配列を含んでいる。好ましくは、配列番号１〜１０、３８、４０、４２、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、および１３３のいずれかに示すＲＮＡ配列に実質的に相補的な（ｂ）（ｉｉ）のｓｈＲＮＡのエフェクター配列は、３０ヌクレオチド長よりも短い。たとえば、ｓｈＲＮＡの好適なエフェクター配列は、１７〜２９ヌクレオチド長の範囲であってもよい。
【０１８６】
したがって、一例では、本開示の複数の核酸は、本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする２つ、または３つ、または４つ、または５つ、または６つ、または７つ、または８つ、または９つ、または１０の核酸など、本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする２つ以上の核酸を含むことができる。
【０１８７】
別の例では、本開示の複数の核酸は、本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする少なくとも１つの核酸、および少なくとも１７ヌクレオチド長のエフェクターおよびエフェクター相補配列を含むｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含む少なくとも１つの核酸を含み、エフェクター配列は、配列番号１〜１０、３８、４０、４２、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、および１３３のいずれかに示すＲＮＡ配列に実質的に相補的である。
【０１８８】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、（ｉ）配列番号１２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１２に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含む。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、配列番号１１に示すエフェクター配列、および配列番号１１に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含むことができる。配列番号１１に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１２に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈＲＮＡを以後、「ｓｈＲＮＡ−１」と称する。
【０１８９】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、（ｉ）配列番号１４に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１４に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含む。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、配列番号１３に示すエフェクター配列、および配列番号１３に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含むことができる。配列番号１３に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１４に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈＲＮＡを以後、「ｓｈＲＮＡ−２」と称する。
【０１９０】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、（ｉ）配列番号１６に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１６に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含む。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、配列番号１５に示すエフェクター配列、および配列番号１５に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含むことができる。配列番号１５に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１６に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈＲＮＡを以後、「ｓｈＲＮＡ−３」と称する。
【０１９１】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、（ｉ）配列番号１８に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号１８に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含む。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、配列番号１７に示すエフェクター配列、および配列番号１７に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含むことができる。配列番号１７に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号１８に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈＲＮＡを以後、「ｓｈＲＮＡ−４」と称する。
【０１９２】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、（ｉ）配列番号２０に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２０に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含む。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、配列番号１９に示すエフェクター配列、および配列番号１９に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含むことができる。配列番号１９に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号２０に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈＲＮＡを以後、「ｓｈＲＮＡ−５」と称する。
【０１９３】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、（ｉ）配列番号２２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２２に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含む。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、配列番号２１に示すエフェクター配列、および配列番号２１に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含むことができる。配列番号２１に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号２２に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈＲＮＡを以後、「ｓｈＲＮＡ−６」と称する。
【０１９４】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、（ｉ）配列番号２４に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２４に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含む。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、配列番号２３に示すエフェクター配列、および配列番号２３に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含むことができる。配列番号２３に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号２４に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈＲＮＡを以後、「ｓｈＲＮＡ−７」と称する。
【０１９５】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、（ｉ）配列番号２６に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２６に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含む。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、配列番号２５に示すエフェクター配列、および配列番号２５に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含むことができる。配列番号２５に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号２６に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈＲＮＡを以後、「ｓｈＲＮＡ−８」と称する。
【０１９６】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、（ｉ）配列番号２８に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号２８に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含む。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、配列番号２７に示すエフェクター配列、および配列番号２７に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含むことができる。配列番号２７に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号２８に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈＲＮＡを以後、「ｓｈＲＮＡ−９」と称する。
【０１９７】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、（ｉ）配列番号３０に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３０に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含む。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、配列番号２９に示すエフェクター配列、および配列番号２９に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含むことができる。配列番号２９に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号３０に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈＲＮＡを以後、「ｓｈＲＮＡ−１０」と称する。
【０１９８】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、（ｉ）配列番号３２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３２に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含む。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、配列番号３１に示すエフェクター配列、および配列番号３１に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含むことができる。配列番号３１に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号３２に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈＲＮＡを以後、「ｓｈＲＮＡ−１１」と称する。
【０１９９】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、（ｉ）配列番号３４に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３４に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含む。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、配列番号３３に示すエフェクター配列、および配列番号３３に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含むことができる。配列番号３３に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号３４に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈＲＮＡを以後、「ｓｈＲＮＡ−１２」と称する。
【０２００】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、（ｉ）配列番号３６に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３６に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含む。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、配列番号３５に示すエフェクター配列、および配列番号３５に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含むことができる。配列番号３５に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号３６に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈＲＮＡを以後、「ｓｈＲＮＡ−１３」と称する。
【０２０１】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、（ｉ）配列番号３８に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号３８に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含む。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、配列番号３７に示すエフェクター配列、および配列番号３７に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含むことができる。配列番号３７に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号３８に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈＲＮＡを以後、「ｓｈＲＮＡ−１４」と称する。
【０２０２】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、（ｉ）配列番号４０に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号４０に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含む。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、配列番号３９に示すエフェクター配列、および配列番号３９に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含むことができる。配列番号３９に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号４０に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈＲＮＡを以後、「ｓｈＲＮＡ−１５」と称する。
【０２０３】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、（ｉ）配列番号４２に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号４２に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で１、２、３、４、５、または６塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列；および（ｉｉ）該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含む。たとえば、該核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、配列番号４１に示すエフェクター配列、および配列番号４１に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含むことができる。配列番号４１に示す配列に実質的に相補的なエフェクター相補配列は、配列番号４２に示す配列であってよい。この実施例によるｓｈＲＮＡを以後、「ｓｈＲＮＡ−１６」と称する。
【０２０４】
本明細書に記載する複数の核酸のうちの１つ以上の核酸がｓｈＲＮＡをコードする任意の例によれば、ｓｈＲＮＡは、エフェクター配列とエフェクター相補配列の間に配置されたステムループ配列を含むことができる。好適なループ配列は、当業界で既知のものから選択することができる。あるいは、好適なステムループを新たに開発してもよい。一例では、ｓｈＲＮＡをコードする本明細書に記載する複数の核酸のうちのある核酸は、エフェクター配列をコードするＤＮＡ配列とエフェクター相補配列をコードするＤＮＡ配列の間に配置されたステムループをコードするＤＮＡ配列を含むことができる。たとえば、本開示の核酸によってコードされるｓｈＲＮＡは、配列番号７８〜９３のいずれかに示す配列を含むことができる。したがって、本明細書に記載する複数の核酸のうちのある核酸は、配列番号９４〜１０９のいずれかに示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなることができる。
【０２０５】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号５９に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号４３に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２０６】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号６０に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号４４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２０７】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号６１に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号４５に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−３）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２０８】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号６２に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号４６に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−４）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２０９】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号６３に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号４７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−５）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２１０】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号６４に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−６）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２１１】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号６５に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号４９に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−７）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２１２】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号６６に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号５０に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−８）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２１３】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号６７に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号５１に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−９）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２１４】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号６８に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号５２に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１０）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２１５】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号６９に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号５３に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１１）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２１６】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号７０に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１２）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２１７】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号７１に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号５５に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１３）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２１８】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号７２に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号５６に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１４）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２１９】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号７３に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号５７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１５）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２２０】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号７４に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号５８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１６）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２２１】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号１４６に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１３４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１７）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２２２】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号１４７に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１３５に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１８）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２２３】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号１４８に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１３６に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１９）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２２４】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号１４９に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１３７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２０）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２２５】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号１５０に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１３８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２１）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２２６】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号１５１に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１３９に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２２）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２２７】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号１５２に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１４０に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２３）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２２８】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号１５３に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１４１に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２４）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２２９】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号１５４に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１４２に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２５）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２３０】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号１５５に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１４３に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２６）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２３１】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号１５６に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１４４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２７）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２３２】
一例では、本明細書に記載する複数の核酸は、配列番号１５７に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなり、配列番号１４５に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２８）をコードする核酸、およびＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。
【０２３３】
本明細書に記載する複数の核酸の任意の例によれば、複数の核酸は、核酸の少なくとも１つが本開示のｓｈｍｉＲをコードするならば、本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする２つ、または３つ、または４つ、または５つ、または６つ、または７つ、または８つ、または９つ、または１０の核酸など、本明細書に記載するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする２つ以上の核酸を含むことができる。
【０２３４】
一例では、複数の核酸は、核酸の少なくとも１つが本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードするならば、本明細書に記載するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする２つの核酸を含む。一例では、複数の核酸は、核酸の少なくとも１つが本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードするならば、本明細書に記載するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする３つの核酸を含む。一例では、複数の核酸は、核酸の少なくとも１つが本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードするならば、本明細書に記載するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする４つの核酸を含む。一例では、複数の核酸は、核酸の少なくとも１つが本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードするならば、本明細書に記載するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする５つの核酸を含む。一例では、複数の核酸は、核酸の少なくとも１つが本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードするならば、本明細書に記載するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする６つの核酸を含む。一例では、複数の核酸は、核酸の少なくとも１つが本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードするならば、本明細書に記載するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする７つの核酸を含む。一例では、複数の核酸は、核酸の少なくとも１つが本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードするならば、本明細書に記載するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする８つの核酸を含む。一例では、複数の核酸は、核酸の少なくとも１つが本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードするならば、本明細書に記載するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする９つの核酸を含む。一例では、複数の核酸は、核酸の少なくとも１つが本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードするならば、本明細書に記載するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする１０の核酸を含む。
【０２３５】
一例では、該複数の核酸のうちの１つの核酸によってコードされるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡのエフェクター配列は、配列番号４に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的である。配列番号４に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする好適な核酸は、本明細書に記載されている。
【０２３６】
一例では、該複数の核酸のうちの１つの核酸によってコードされるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡのエフェクター配列は、配列番号５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的である。配列番号５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする好適な核酸は、本明細書に記載されている。
【０２３７】
一例では、該複数の核酸のうちの１つの核酸によってコードされるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡのエフェクター配列は、配列番号９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的である。配列番号９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする好適な核酸は、本明細書に記載されている。
【０２３８】
一例では、該複数の核酸のうちの１つの核酸によってコードされるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡのエフェクター配列は、配列番号４０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的である。配列番号４０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする好適な核酸は、本明細書に記載されている。
【０２３９】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈｍｉＲのエフェクター配列は、配列番号４に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、かつ該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈｍｉＲのエフェクター配列は、配列番号９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的である。
【０２４０】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈｍｉＲのエフェクター配列は、配列番号４に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈｍｉＲのエフェクター配列は、配列番号９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、且つ該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈｍｉＲのエフェクター配列は、配列番号５に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的である。
【０２４１】
一例では、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈｍｉＲのエフェクター配列は、配列番号４に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈｍｉＲのエフェクター配列は、配列番号９に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的であり、且つ該複数の核酸のうちのある核酸によってコードされるｓｈｍｉＲのエフェクター配列は、配列番号４０に示す配列を含むかまたはそれからなるＲＮＡ転写物に実質的に相補的である。
【０２４２】
配列番号４、５、９、または４０に示すＲＮＡ転写物に実質的に相補的なエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲなどの、ＨＢＶを標的とするｓｈｍｉＲをコードする本開示の例示的な核酸は、本明細書に記載されており、本開示の複数の核酸が説明される各例に必要に応じて変更を加えて応用できるものとする。
【０２４３】
一例では、本開示の複数の核酸は、
（ｉ）配列番号２１に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号２２に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸；および
（ｉｉ）配列番号３３に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号３４に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸
を含む。
【０２４４】
一例では、本開示の複数の核酸は、
（ｉ）配列番号２１に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号２２に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸；
（ｉｉ）配列番号３３に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号３４に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸；および
（ｉｉｉ）ＨＢＶゲノムのＲＮＡ転写物に実質的に相補的な少なくとも１７ヌクレオチド長のエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含む少なくとも１つの他の核酸
を含む。
【０２４５】
一例では、本開示の他の核酸は、（ｉ）および（ｉｉ）の核酸によってコードされるｓｈｍｉＲのエフェクター配列とは異なるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする本明細書に記載する核酸である。
【０２４６】
一例では、本開示の複数の核酸は、
（ｉ）配列番号２１に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号２２に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸；
（ｉｉ）配列番号３９に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号４０に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸；および
（ｉｉｉ）配列番号３３に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号３４に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸
を含む。
【０２４７】
一例では、本開示の複数の核酸は、
（ｉ）配列番号２１に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号２２に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸；
（ｉｉ）配列番号２３に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号２４に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸；および
（ｉｉｉ）配列番号３３に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号３４に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸
を含む。
【０２４８】
一例では、本開示の複数の核酸は、
（ｉ）配列番号２１に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号２２に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸；
（ｉｉ）配列番号３９に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号４０に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸；および
（ｉｉｉ）配列番号３３に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号３４に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸
を含む。
【０２４９】
一例では、本開示の複数の核酸は、
（ｉ）配列番号２１に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号２２に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸；および
（ｉｉ）配列番号１１６に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号１１７に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸
を含む。
【０２５０】
一例では、本開示の複数の核酸は、
（ｉ）配列番号２１に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号２２に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸；および
（ｉｉ）配列番号１２４に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号１２５に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸
を含む。
【０２５１】
一例では、本開示の複数の核酸は、
（ｉ）配列番号２１に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号２２に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸；
（ｉｉ）配列番号１１６に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号１１７に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸；および
（ｉｉｉ）配列番号１２４に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号１２５に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸
を含む。
【０２５２】
一例では、本開示の複数の核酸は、
（ｉ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなるＤＮＡ配列（配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする）を含んでいる核酸；および
（ｉｉ）配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなるＤＮＡ配列（配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする）を含んでいる核酸
を含む。
【０２５３】
一例では、本開示の複数の核酸は、
（ｉ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなるＤＮＡ配列（配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする）を含んでいる核酸；
（ｉｉ）配列番号７３に示す配列を含むかまたはそれからなるＤＮＡ配列（配列番号５７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする）を含んでいる核酸；および
（ｉｉｉ）配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなるＤＮＡ配列（配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする）を含んでいる核酸
を含む。
【０２５４】
一例では、本開示の複数の核酸は、
（ｉ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなるＤＮＡ配列（配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする）を含んでいる核酸；
（ｉｉ）配列番号７３に示す配列を含むかまたはそれからなるＤＮＡ配列（配列番号５７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする）を含んでいる核酸；および
（ｉｉｉ）配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなるＤＮＡ配列（配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする）を含んでいる核酸
を含む。
【０２５５】
一例では、本開示の複数の核酸は、
（ｉ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなるＤＮＡ配列（配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする）を含んでいる核酸；
（ｉｉ）配列番号９９に示す配列を含むかまたはそれからなるＤＮＡ配列（配列番号８３に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈＲＮＡをコードする）を含んでいる核酸；および
（ｉｉｉ）配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなるＤＮＡ配列（配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする）を含んでいる核酸
を含む。
【０２５６】
一例では、本開示の複数の核酸は、
（ｉ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなるＤＮＡ配列（配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする）を含んでいる核酸；および
（ｉｉ）配列番号１４９に示す配列を含むかまたはそれからなるＤＮＡ配列（配列番号１３７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする）を含んでいる核酸
を含む。
【０２５７】
一例では、本開示の複数の核酸は、
（ｉ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなるＤＮＡ配列（配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする）を含んでいる核酸；および
（ｉｉ）配列番号１５３に示す配列を含むかまたはそれからなるＤＮＡ配列（配列番号１４１に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする）を含んでいる核酸
を含む。
【０２５８】
一例では、本開示の複数の核酸は、
（ｉ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなるＤＮＡ配列（配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする）を含んでいる核酸；
（ｉｉ）配列番号１４９に示す配列を含むかまたはそれからなるＤＮＡ配列（配列番号１３７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする）を含んでいる核酸；および
（ｉｉｉ）配列番号１５３に示す配列を含むかまたはそれからなるＤＮＡ配列（配列番号１４１に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする）を含んでいる核酸
を含む。
【０２５９】
複数の核酸が提供される一例によれば、核酸のうちの２つ以上は同じポリヌクレオチドの別々の部分を形成してもよい。別の例では、該複数の核酸のうちの２つ以上の核酸は、それぞれ異なるポリヌクレオチドの部分を形成する。別の例では、本明細書に記載する複数の核酸は、複数の成分として、たとえば複数の組成物として提供される。たとえば、該複数の核酸の各核酸は別々に提供することができる。あるいは、本開示の少なくとも３つの核酸が提供される一例では、これらの核酸のうちの少なくとも１つを別に提供し、該複数の核酸のうちの２つ以上の核酸を一緒に提供することができる。
【０２６０】
いくつかの例では、本開示による該または各核酸は、たとえばＲＮＡの転写を促進するための、追加のエレメントを含んでもよく、またはそれと機能的に連結されていてもよい。たとえば、該または各核酸は、本明細書に記載するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする配列に機能的に連結されたプロモーターを含むことができる。他のエレメント、たとえば転写ターミネーターおよびイニシエーターは、当業界で既知であり、かつ／または本明細書に記載される。
【０２６１】
あるいは、またはさらに、本開示による該または各核酸は、たとえば核酸（複数可）のクローニングまたは発現ベクターにクローニングするのを容易にするために、１つ以上の制限部位を含むことができる。たとえば、本明細書に記載する核酸は、本開示のｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする配列の上流および／または下流に制限部位を含むことができる。好適な制限酵素認識配列は当業者には公知であろう。しかし、一例では、本開示の核酸（複数可）は、ｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする配列の５’末端すなわち上流にＢａｍＨ１制限部位（ＧＧＡＴＣＣ）を、ｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする配列の３’末端すなわち下流にＥｃｏＲ１制限部位（ＧＡＡＴＴＣ）を含むことができる。
【０２６２】
ｄｄＲＮＡｉ
一例では、本開示の該または各核酸は、ＤＮＡ指向性ＲＮＡｉ（ｄｄＲＮＡｉ）コンストラクトの形態で提供される、またはｄｄＲＮＡｉコンストラクトに含まれる。したがって、一例では、本開示は、本明細書に記載する核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクトを提供する。別の例では、本開示は、本明細書に記載する複数の核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクトを提供する。ＨＢＶ転写物を標的とするエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする例示的な核酸は、本明細書に記載されており、本開示のこの例に必要に応じて変更を加えて応用できるものする。
【０２６３】
一例では、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、プロモーターに機能的に連結された本開示の核酸を含む。
【０２６４】
ｄｄＲＮＡｉコンストラクトが本明細書に記載する複数の核酸を含む一例によれば、該核酸のそれぞれは、プロモーターに機能的に連結されている場合がある。一例では、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトに含まれる核酸は、同じプロモーターに機能的に連結されている場合がある。一例では、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトに含まれる核酸は、異なるプロモーターに機能的に連結されている場合がある。
【０２６５】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号５９に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号４３に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号６０〜７４および１４６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２６６】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号６０に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号４４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９、６１〜７４および１４６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２６７】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号６１に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号４５に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−３）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜６０、６２〜７４および１４６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２６８】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号６２に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号４６に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−４）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜６１、６３〜７４および１４６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２６９】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号６３に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号４７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−５）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜６２、６４〜７４および１４６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２７０】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号６４に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−６）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜６３、６５〜７４および１４６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２７１】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号６５に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号４９に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−７）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜６４、６６〜７４および１４６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２７２】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号６６に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号５０に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−８）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜６５、６７〜７４および１４６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２７３】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号６７に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号５１に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−９）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜６６、６８〜７４および１４６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２７４】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号６８に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号５２に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１０）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜６７、６９〜７４および１４６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２７５】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号６９に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号５３に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１１）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜６８、７０〜７４および１４６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２７６】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号７０に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１２）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜６９、７１〜７４および１４６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２７７】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号７１に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号５５に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１３）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜７０、７２〜７４および１４６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２７８】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号７２に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号５６に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１４）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜７１、７３〜７４および１４６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２７９】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号７３に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号５７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１５）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜７２、７４および１４６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２８０】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号７４に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号５８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１６）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜７３および１４６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２８１】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号１４６に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号１３４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１７）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜７４および１４７〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２８２】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号１４７に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号１３５に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１８）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜７４、１４６および１４８〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２８３】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号１４８に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号１３６に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１９）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜７４、１４６、１４７および１４９〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２８４】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号１４９に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号１３７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２０）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜７４、１４６〜１４８および１５０〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２８５】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号１５０に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号１３８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２１）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜７４、１４６〜１４９および１５１〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２８６】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号１５１に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号１３９に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２２）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜７４、１４６〜１５０および１５２〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２８７】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号１５２に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号１４０に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２３）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜７４、１４６〜１５１および１５３〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２８８】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号１５３に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号１４１に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２４）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜７４、１４６〜１５２および１５４〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２８９】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号１５４に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号１４２に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２５）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜７４、１４６〜１５３および１５５〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２９０】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号１５５に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号１４３に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２６）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜７４、１４６〜１５４および１５６〜１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２９１】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号１５６に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号１４４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２７）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜７４、１４６〜１５５および１５７のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２９２】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉは、配列番号１５７に示すＤＮＡ配列を含むかまたはそれからなる核酸を含み、配列番号１４５に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２８）をコードする。該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、配列番号５９〜７４および１４６〜１５６のいずれかに示す配列から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸などの、本開示の１つ以上のさらなる核酸を含むことができる。
【０２９３】
本開示の複数の核酸を含む例示的なｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−６）をコードする核酸；および
（ｂ）配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−１２）をコードする核酸
を含む。
【０２９４】
本開示の複数の核酸を含む例示的なｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸；および
（ｂ）配列番号７０に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸
を含む。
【０２９５】
別の例では、本開示の複数の核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−６）をコードする核酸；および
（ｂ）配列番号１３７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２０）をコードする核酸
を含む。
【０２９６】
たとえば、本開示の複数の核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸；および
（ｂ）配列番号１４９に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２０をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
【０２９７】
別の例では、本開示の複数の核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−６）をコードする核酸；および
（ｂ）配列番号１４１に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ−２４）をコードする核酸
を含む。
【０２９８】
たとえば、本開示の複数の核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸；および
（ｂ）配列番号１５３に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２４をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
【０２９９】
本開示はまた、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトであって、本明細書に記載する少なくとも３つの核酸を含み、該ｄｄＲＮＡｉコンストラクトはＨＢＶを標的とする少なくとも３つのｓｈｍｉＲをコードし、各ｓｈｍｉＲが互いに異なる、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトを提供する。
【０３００】
一例では、本開示は、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトであって、
（ａ）配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸：
（ｂ）本明細書に記載するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸；および
（ｃ）配列番号５４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含み、
（ｂ）の核酸は、（ａ）および（ｃ）の核酸によってコードされるｓｈｍｉＲのエフェクター配列とは異なるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする
ｄｄＲＮＡｉコンストラクトを提供する。
【０３０１】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、好ましくは５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；
（ｂ）配列番号５７に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１５）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；および
（ｃ）配列番号５４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含む。
【０３０２】
たとえば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸；
（ｂ）配列番号７３に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１５をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸；および
（ｃ）配列番号７０に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
【０３０３】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、好ましくは５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；
（ｂ）配列番号４９に示す配列（ｓｈｍｉＲ−７）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；および
（ｃ）配列番号５４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含む。
【０３０４】
たとえば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸；
（ｂ）配列番号６５に示す配列（ｓｈｍｉＲ−７をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸；および
（ｃ）配列番号７０に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。一例では、本開示は、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトであって、
（ａ）配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸：
（ｂ）本明細書に記載するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸；および
（ｃ）配列番号１４１（ｓｈｍｉＲ−２４）に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含んでおり、
（ｂ）の核酸は、（ａ）および（ｃ）の核酸によってコードされるｓｈｍｉＲのエフェクター配列とは異なるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする、
ｄｄＲＮＡｉコンストラクトを提供する。
【０３０５】
一例では、本開示は、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトであって、
（ａ）配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸：
（ｂ）本明細書に記載するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含んでいる核酸；および
（ｃ）配列番号１３７に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２０）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含んでおり、
（ｂ）の核酸は、（ａ）および（ｃ）の核酸によってコードされるｓｈｍｉＲのエフェクター配列とは異なるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする、
ｄｄＲＮＡｉコンストラクトを提供する。
【０３０６】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、好ましくは５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；
（ｂ）配列番号１３７に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２０）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；および
（ｃ）配列番号１４１に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２４）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含む。
【０３０７】
たとえば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸；
（ｂ）配列番号１４９に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２０をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸；および
（ｃ）配列番号１５３に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２４をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
【０３０８】
さらに別の例では、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする少なくとも１つの核酸および本明細書に記載するＨＢＶを標的とするｓｈＲＮＡをコードする少なくとも１つの核酸を含むことができ、ここでｄｄＲＮＡｉコンストラクトによってコードされるｓｈｍｉＲおよびｓｈＲＮＡは、異なるエフェクター配列を含んでいる。この例によれば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、好ましくは５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；
（ｂ）配列番号３９に示すエフェクター配列、および配列番号４０に示すエフェクター相補配列を含んでいるｓｈＲＮＡをコードする核酸；および
（ｃ）配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含むことができる。
【０３０９】
たとえば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、好ましくは５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸：
（ｂ）配列番号９２に示す配列からなるｓｈＲＮＡをコードする核酸；および
（ｃ）配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含むことができる。
【０３１０】
たとえば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸：
（ｂ）配列番号１０８に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸；および
（ｃ）配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
【０３１１】
本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトを説明する以上の例のそれぞれにおいて、それに含まれる該または各核酸は、プロモーターに機能的に連結されている場合がある。たとえば、本明細書に記載するｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、たとえばｄｄＲＮＡｉコンストラクトからの１つ以上のｓｈｍｉＲおよび／またはｓｈＲＮＡの発現を駆動するために、それに含まれる該または各核酸に機能的に連結された１つのプロモーターを含むことができる。
【０３１２】
別の例では、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトに含まれる本開示のｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする各核酸は、別のプロモーターに機能的に連結されている。
【０３１３】
複数のプロモーターが存在する一例によれば、プロモーターは同じでも異なっていてもよい。たとえば、コンストラクトは、各コピーが本開示の異なる核酸に機能的に連結されている複数のコピーの同じプロモーターを含むことができる。別の例では、本開示のＲＮＡに機能的に連結された各プロモーターは異なっている。たとえば、３つのｓｈｍｉＲをコードするｄｄＲＮＡｉコンストラクトにおいて、ｓｈｍｉＲをコードする３つの核酸は、それぞれが異なるプロモーターに機能的に連結されている。
【０３１４】
さらなる例では、３つ以上のｓｈｍｉＲをコードするｄｄＲＮＡｉコンストラクトにおいて、ｓｈｍｉＲをコードする核酸のうちの２つ（またはそれ以上）は同じプロモーターに連結されており、かつｓｈｍｉＲをコードする核酸のうちの１つ（またはそれ以上）は異なるプロモーターに連結されている。
【０３１５】
一例では、プロモーターは、構成的プロモーターである。プロモーターに言及する際の「構成的」という用語は、該プロモーターが、特定の刺激（たとえば熱ショック、化学物質、光など）の非存在下で、機能的に連結された核酸配列の転写を指令できることを意味する。一般的には、構成的プロモーターは、実質的にあらゆる細胞およびあらゆる組織においてコード配列の発現を指令できる。本開示の核酸（複数可）からのｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡの転写に用いられるプロモーターとしては、ＲＮＡポリメラーゼＩＩによって制御されるユビキチン、ＣＭＶ、β−アクチン、ヒストンＨ４、ＥＦ−１αまたはｐｇｋ遺伝子のプロモーター、またはＲＮＡポリメラーゼＩによって制御されるプロモーターエレメントが挙げられる。
【０３１６】
一例では、ＣＭＶ、ＳＶ４０、Ｕ１、β−アクチンなどのＰｏｌ  ＩＩプロモーターまたはハイブリッドＰｏｌ  ＩＩプロモーターが用いられる。
【０３１７】
別の例では、Ｕ６プロモーター（Ｕ６−１、Ｕ６−８、Ｕ６−９）、Ｈ１プロモーター、７ＳＬプロモーター、ヒトＹプロモーター（ｈＹ１、ｈＹ３、ｈＹ４（Ｍａｒａｉａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２２（１５）：３０４５−５２（１９９４）を参照のこと）およびｈＹ５（Ｍａｒａｉａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２４（１８）：３５５２−５９（１９９４）を参照のこと）、ヒトＭＲＰ−７−２プロモーター、アデノウイルスＶＡ１プロモーター、ヒトｔＲＮＡプロモーター、または５ｓリボソームＲＮＡプロモーターなどの、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩによって制御されるプロモーターが用いられる。
【０３１８】
本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトで使用される好適なプロモーターが、米国特許第８，００８，４６８号および同第８，１２９，５１０号に記載されている。
【０３１９】
一例では、プロモーターはＲＮＡ  ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターである。たとえば、プロモーターはＵ６プロモーター（たとえば、Ｕ６−１、Ｕ６−８、またはＵ６−９プロモーター）である。別の例では、プロモーターはＨ１プロモーターである。
【０３２０】
本明細書に記載する複数のｓｈｍｉＲをコードする、または１つ以上のｓｈｍｉＲおよびｓｈＲＮＡをコードする本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトの場合、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトに含まれる核酸のそれぞれは、Ｕ６プロモーター、たとえば別のＵ６プロモーターに機能的に連結されている。
【０３２１】
一例では、コンストラクトのプロモーターはＵ６プロモーターである。たとえば、該プロモーターはＵ６−１プロモーターである。たとえば、該プロモーターはＵ６−８プロモーターである。たとえば、該プロモーターはＵ６−９プロモーターである。
【０３２２】
いくつかの例では、様々な長さのプロモーターが用いられる。たとえば、２つ以上の強力なプロモーター（Ｐｏｌ  ＩＩＩタイプのプロモーターなど）の使用は、たとえば利用可能なヌクレオチドまたは他の転写に必要な細胞成分のプールを枯渇させることにより、細胞の負担になる場合もある。さらに、または代わりに、数個の強力なプロモーターの使用により、細胞中に発現するＲＮＡｉ剤、たとえばｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡが有害レベルになる場合もある。したがって、いくつかの例では、複数プロモーターのｄｄＲＮＡｉコンストラクトにおけるプロモーターの１つ以上がそのコンストラクト中の他のプロモーターよりも弱いか、またはそのコンストラクトの全プロモーターが最大発現率を下回るｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡを発現させ得る。プロモーターはまた、様々な分子的技法を用いて、またはそうではなく、たとえば様々な調節エレメントの修飾により、転写レベルをより強化または弱化するように修飾することができる。転写の減少を得る一つの手段は、プロモーター中のプロモーター活性を制御することがわかっている配列エレメントを修飾することである。たとえば近位配列因子（ＰＳＥ）はヒトＵ６プロモーターの活性を生じさせることが知られている（Ｄｏｍｉｔｒｏｖｉｃｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３１：２３４４−２３５２（２００３）を参照のこと）。ヒトＵ６−１、Ｕ６−８またはＵ６−９プロモーターなどの強力なプロモーターのＰＳＥエレメントを、ヒトＵ６−７プロモーターなどの弱いプロモーター由来のエレメントで置き換えると、ハイブリッドＵ６−１、Ｕ６−８またはＵ６−９プロモーターの活性が低下する。この方法は本願に記載する諸例で用いているが、この結果を得るための他の手段も当業界では知られている。
【０３２３】
本開示のいくつかの例で有用なプロモーターは、組織特異的または細胞特異的とすることができる。プロモーターについて用いられる「組織特異的」という用語は、特定の種類の組織（たとえば肝臓組織）に対し目的とする核酸の選択的な転写を指令できるプロモーターを指し、これと同じ目的ヌクレオチド配列の発現は異なる種類の組織（たとえば筋肉）では見られない。プロモーターについて用いられる「細胞特異的」という用語は、特定の種類の細胞において目的の核酸の選択的な転写を指令できるプロモーターを指し、同じ組織内の異なる細胞ではこれと同じ目的ヌクレオチド配列の発現は見られない。
【０３２４】
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、本明細書に記載する核酸によってコードされるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡの発現を増加するために、１つ以上のエンハンサーをさらに含むことができる。本開示の諸例で使用される適切なエンハンサーとしては、Ａｐｏ  Ｅ  ＨＣＲエンハンサー、ＣＭＶエンハンサー（Ｘｉａ  ｅｔ  ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３１−１７（２００３））および当業者に知られている他のエンハンサーが挙げられる。本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトで使用される好適なエンハンサーは、米国特許第８，００８，４６８号に記載されている。
【０３２５】
さらなる例では、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、本開示のｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする核酸に連結されている転写ターミネーターを含むことができる。本明細書に記載する複数の核酸を含む、すなわち複数のｓｈｍｉＲおよび／またはｓｈＲＮＡをコードするｄｄＲＮＡｉコンストラクトの場合は、各核酸に連結されているターミネーターは同一の場合もあるし異なる場合もある。ＲＮＡ  ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターが用いられる一例によれば、ターミネーターは、連続する一続きの４つ以上、または５つ以上、または６つ以上のＴ残基である場合がある。
【０３２６】
異なるプロモーターが使われるいくつかの例では、ターミネーターは互いに異なる場合があり、ターミネーターが由来する遺伝子のプロモーターに合わせられる。そのようなターミネーターとしては、ＳＶ４０  ｐｏｌｙ  Ａ、ＡｄＶ  ＶＡ１遺伝子、５ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、およびヒトｔ−ＲＮＡのターミネーターが挙げられる。さらに、ＲＮＡ  ｐｏｌ  ＩＩプロモーターとターミネーターで一般的に行われるようにプロモーターとターミネーターを混合して合わせることもできる。
【０３２７】
一例では、複数の核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクトにおいて各核酸のために使用されるプロモーターとターミネーターとの組合せは、成分同士でＤＮＡ組換えが生じる可能性を減じるために、異なっている。
【０３２８】
本開示の１つの例示的なｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。たとえば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸を含む。
【０３２９】
本開示の別の例示的なｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号５７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。たとえば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号７３に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸を含む。
【０３３０】
本開示の別の例示的なｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。たとえば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸を含む。
【０３３１】
本開示の別の例示的なｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４９に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。たとえば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６５に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸を含む。
【０３３２】
本開示の別の例示的なｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１３７に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。たとえば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１４９に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸を含む。
【０３３３】
本開示の別の例示的なｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１４１に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。たとえば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１５３に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸を含む。
【０３３４】
本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトが本明細書に記載する複数の核酸を含む、一例によれば、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；および
（ｂ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含むことができる。
【０３３５】
たとえば、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸；および
（ｂ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
【０３３６】
本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトが本明細書に記載する複数の核酸を含む、別の例によれば、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；および
（ｂ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１４１に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２４）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含むことができる。
【０３３７】
たとえば、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸；および
（ｂ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１５３に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２４をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
【０３３８】
本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトが本明細書に記載する複数の核酸を含む、さらに別の例によれば、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；および
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１３７に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２０）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含むことができる。
【０３３９】
たとえば、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸；および
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１４９に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２０をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
【０３４０】
本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトが本明細書に記載する３つの核酸を含む例によれば、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号５７に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１５）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；および
（ｃ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号５４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含む。
【０３４１】
たとえば、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸；
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号７３に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１５をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸；および
（ｃ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号７０に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
【０３４２】
本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトが本明細書に記載する３つの核酸を含む、別の例によれば、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１３７に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２０）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；および
（ｃ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１４１に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２４）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含む。
【０３４３】
たとえば、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸；
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１４９に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２０をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸；および
（ｃ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１５３に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２４をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
【０３４４】
本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトが本明細書に記載する３つの核酸を含む、さらに別の例によれば、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４９に示す配列（ｓｈｍｉＲ−７）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；および
（ｃ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号５４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含む。
【０３４５】
たとえば、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸；
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６５に示す配列（ｓｈｍｉＲ−７をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸；および
（ｃ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号７０に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
【０３４６】
本開示の例示的なｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−９プロモーター：
（ｂ）配列番号７３に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−１プロモーター；および
（ｃ）配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−８プロモーター
を含む。
【０３４７】
本開示の例示的なｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−９プロモーター：
（ｂ）配列番号１４９に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−１プロモーター；および
（ｃ）配列番号１５９に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−８プロモーター
を含む。
【０３４８】
本開示のさらに別の例示的なｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、５’から３’の方向に、
（ａ）配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−９プロモーター：
（ｂ）配列番号６５に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−１プロモーター；および
（ｃ）配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のＵ６−８プロモーター
を含む。
【０３４９】
本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトが本明細書に記載するｓｈｍｉＲをコードする少なくとも１つの核酸および本明細書に記載するＨＢＶを標的とするｓｈＲＮＡをコードする少なくとも１つの核酸を含む別の例によれば、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４８に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸；
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号９２に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈＲＮＡをコードする核酸；および
（ｃ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号５４に示す配列を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸
を含むことができる。
【０３５０】
たとえば、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６４に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸；
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１０８に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸；および
（ｃ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号７０に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
【０３５１】
本開示は、２つ以上のｄｄＲＮＡｉコンストラクトを含む複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトであって、各ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、本明細書に記載する好適なプロモーターに機能的に連結された本開示のｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトも提供する。
【０３５２】
一例では、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；および
（ｂ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号５４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト
を含む。
【０３５３】
たとえば、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；および
（ｂ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号７０に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト
を含むことができる。
【０３５４】
一例では、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；および
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号５７に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１５）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト
を含む。
【０３５５】
たとえば、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；および
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号７３に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１５をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト
を含むことができる。
【０３５６】
一例では、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号５４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；および
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号５７に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１５）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト
を含む。
【０３５７】
たとえば、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号５４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；および
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号７３に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１５をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト
を含むことができる。
【０３５８】
一例では、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；および
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１３７に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２０）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト
を含む。
【０３５９】
たとえば、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；および
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１４９に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２０をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト
を含むことができる。
【０３６０】
一例では、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；および
（ｂ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１４１に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２４）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト
を含む。
【０３６１】
たとえば、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；および
（ｂ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１５３に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２４をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト
を含むことができる。複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトが３つのｄｄＲＮＡｉコンストラクトを含む一例によれば、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号５７に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１５）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；および
（ｃ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号５４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト
を含む。
【０３６２】
たとえば、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号７３に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１５をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；および
（ｃ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号７０に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト
を含むことができる。
【０３６３】
複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトが３つのｄｄＲＮＡｉコンストラクトを含む、別の例によれば、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４９に示す配列（ｓｈｍｉＲ−７）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；および
（ｃ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号５４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト
を含む。
【０３６４】
たとえば、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６５に示す配列（ｓｈｍｉＲ−７をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；および
（ｃ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号７０に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト
を含むことができる。
【０３６５】
別の例によれば、本開示の複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号９２に示す配列（ｓｈＲＮＡ−１５）を含むかまたはそれからなるｓｈＲＮＡをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；および
（ｃ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号５４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト
を含むことができる。
【０３６６】
たとえば、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１０８に示す配列（ｓｈＲＮＡ−１５をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；および
（ｃ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号７０に示す配列（ｓｈｍｉＲ−１２をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト
を含むことができる。
【０３６７】
複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトが３つのｄｄＲＮＡｉコンストラクトを含む、別の例によれば、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号４８に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１３７に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２０）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；および
（ｃ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１４１に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２４）を含むかまたはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト
を含む。
【０３６８】
たとえば、複数のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、
（ａ）たとえばＵ６−９プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号６４に示す配列（ｓｈｍｉＲ−６をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；
（ｂ）たとえばＵ６−１プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１４９に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２０をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト；および
（ｃ）たとえばＵ６−８プロモーターなどのＵ６プロモーターに機能的に連結された、配列番号１５３に示す配列（ｓｈｍｉＲ−２４をコードする）を含むかまたはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉコンストラクト
を含むことができる。
【０３６９】
さらに、該または各ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、プロモーター、ｓｈｍｉＲもしくはｓｈＲＮＡをコードする核酸および／または他の調節エレメントが簡単に除去または置換できるように戦略的に配置されている１つまたは複数のクローニング部位および／またはユニークな制限部位を含むことができる。該または各ｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、戦略的に配置されている制限部位および／または相補的粘着末端により、より小さいオリゴヌクレオチド成分の集合から構築することができる。本開示のあるアプローチのためのベースベクターは、（絶対要件ではないが）全部位がユニークであるマルチリンカーを有するプラスミドを含む。順次、各プロモーターが所定のユニーク部位の間に挿入され、その結果として１つ以上のプロモーターを有するベースカセットができ、これはすべて可変方向性を有することができる。さらに、順次、アニールしたプライマー対が各プロモーターの下流のユニーク部位に挿入され、その結果としてシングル、ダブル、または複数発現カセットコンストラクトが生じる。これらのインサートは、シングル、ダブル、または複数発現カセットインサートに隣接する２つの（互いに同じかまたは異なる）ユニークな制限酵素部位により、たとえばＡｄＶ主鎖またはＡＡＶ主鎖へと移動させることができる。
【０３７０】
該または各コンストラクトの生成は、当業界で知られている任意の好適な遺伝子操作技法、たとえば限定ではないが、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成、制限エンドヌクレアーゼ消化、ライゲーション、形質転換、プラスミド精製およびＤＮＡシーケンシングといった標準的な技法により達成することができる。該または各コンストラクトがウイルスコンストラクトである場合は、コンストラクトは、たとえば、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトをウイルス粒子にパッケージングするのに必要な配列、および／またはｄｄＲＮＡｉコンストラクトを標的細胞ゲノムに組み込むことを可能にする配列、を含む。いくつかの例では、該または各ウイルスコンストラクトはさらに、ウイルスの複製と増殖を可能にする遺伝子を含むが、そのような遺伝子はトランスで供給される。さらに、該または各ウイルスコンストラクトは、天然の形態でまたは修飾されて組み込まれる、任意の既知の生物のゲノム由来の遺伝子または遺伝子配列を含むことができる。たとえば、ウイルスコンストラクトは、細菌中でコンストラクトを複製するのに有用な配列を含むことができる。
【０３７１】
該または各コンストラクトは、さらなる遺伝子エレメントを含むことができる。コンストラクトに含むことができるエレメントの種類は何ら限定されず、当業者が選択することができる。たとえば、さらなる遺伝子エレメントとしては、ＧＦＰまたはＲＦＰなど蛍光マーカータンパク質の１つ以上の遺伝子などのレポーター遺伝子；ベータ−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、ベータ−グルクロニダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、または分泌型胚性（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ）アルカリホスファターゼなど簡単にアッセイできる酵素；あるいはホルモンやサイトカインなど免疫アッセイが容易にできるタンパク質、を挙げることができる。
【０３７２】
本開示の実施形態で使用可能な他の遺伝子エレメントとしては、アデノシンデアミナーゼ、アミノグリコシド（ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｄｉｃ）ホスホトランスフェラーゼ、ジヒドロ葉酸レダクターゼ、ハイグロマイシン−Ｂ−ホスホトランスフェラーゼなどの選択的増殖利点を細胞に与えるタンパク質をコードするもの、薬物耐性、あるいは栄養要求株にはない生合成能力を提供するタンパク質をコードする遺伝子が挙げられる。該または各コンストラクトと一緒にレポーター遺伝子が含まれる場合、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を含めることができる。一例では、さらなる遺伝子エレメントは、独立したプロモーター／エンハンサーと機能的に連結され、それによって制御されている。さらに、細菌中でコンストラクトが増殖するための好適な複製起点を用いることもできる。複製起点の配列は、一般に、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトおよび他の遺伝子配列から離れている。そのような複製起点は当業界では知られており、ｐＵＣ、ＣｏｌＥ１、２ミクロンまたはＳＶ４０複製起点が挙げられる。
【０３７３】
発現ベクター
一例では、本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトは、発現ベクター内に含まれている。
【０３７４】
一例では、発現ベクターは、たとえば当業界でも知られているように、プラスミドである。一例では、好適なプラスミド発現ベクターは、たとえばＵ６プロモーターおよび近位配列因子７（ＰＳＥ７）を有する、ｐＳｓｈベクターである。
【０３７５】
一例では、発現ベクターは小環ＤＮＡである。小環ＤＮＡは、米国特許出願公開第２００４／０２１４３２９号に記載されている。小環ＤＮＡは、核酸転写が持続的に高レベルなので有用である。環状ベクターは、発現を抑制する細菌配列をもたないという特徴がある。たとえば、小環ベクターは、たとえばβ−ラクタマーゼ、ｔｅｔなどの細菌プラスミドでは一般的な複製起点や薬剤選択マーカーが欠けているという点で、細菌プラスミドベクターと異なっている。したがって、小環ＤＮＡはサイズも小さくなり、より高効率の送達が可能になる。
【０３７６】
一例では、発現ベクターはウイルスベクターである。
【０３７７】
任意の適切なウイルスに基づくウイルスベクターを、本開示のｄｄＲＮＡｉの送達に用いることができる。さらに、ハイブリッドウイルス系を使用することもできる。ウイルス送達系の選択は、送達の標的である組織、系の形質導入効率、病原性、免疫原性、および毒性の懸念などの様々なパラメーターに依存する。
【０３７８】
遺伝子治療で一般的に使用されるウイルス系のクラスは、そのゲノムが宿主細胞クロマチンに組み込まれる（オンコレトロウイルスおよびレンチウイルス）か、染色体外エピソームとして細胞核内に優勢的に残る（アデノ随伴ウイルス、アデノウイルスおよびヘルペスウイルス）かによって、２つのグループに分類することができる。一例では、本開示のウイルスベクターは宿主細胞クロマチンに組み込まれる。別の例では、本開示のウイルスベクターは染色体外エピソームとして宿主細胞の核に残る。
【０３７９】
一例では、ウイルスベクターはアデノウイルス（ＡｄＶ）ベクターである。アデノウイルスは中型の二本鎖の無エンベロープ型ＤＮＡウイルスであり、ゲノムは線形で２６〜４８Ｋｂｐである。アデノウイルスは、受容体媒介結合と内在化によって標的細胞に入り込み、非分裂細胞でも分裂細胞でも核内に侵入する。アデノウイルスは、生存と複製を宿主細胞に大きく依存し、脊椎動物細胞の核内で宿主の複製機構を使って複製ができる。
【０３８０】
一例では、ウイルスベクターはパルボウイルス科に由来する。パルボウイルス科は、小型の一本鎖の無エンベロープ型ＤＮＡウイルスであり、ゲノムはおよそ５０００ヌクレオチド長である。このファミリーのメンバーにアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）がある。一例では、本開示のウイルスベクターはＡＡＶである。ＡＡＶは、増殖性の感染サイクルを開始し維持するために、通常は別のウイルス（一般にアデノウイルスまたはヘルペスウイルス）との同時感染を要する依存型のパルボウイルスである。そのようなヘルパーウイルスの非存在下でも、ＡＡＶは、受容体媒介結合と内在化によって標的細胞に感染または形質導入する能力があり、非分裂細胞でも分裂細胞でも核内に侵入する。ヘルパーウイルスの非存在下ではＡＡＶ感染から子孫ウイルスが生産されないので、形質導入の範囲は、ウイルス感染した初代細胞に限定される。ＡＡＶのこの特徴は、本開示のベクターとして望ましいものである。さらに、レトロウイルス、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルスなどと違って、ＡＡＶにはヒトに対する病原性や毒性がないとされている（Ｋａｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４２４：２５１（２００３））。そのゲノムは通常２つの遺伝子しかコードしないので、送達ビヒクルとしてのＡＡＶのパッケージング容量が一本鎖４．５キロベース（ｋｂ）に限られるのも驚きに値しない。しかし、このサイズ制限のせいで置換遺伝子療法で送達できる遺伝子が限定されるにしても、ｓｈｍｉＲおよびｓｈＲＮＡなどのより短い配列のパッケージングと発現には悪影響がない。
【０３８１】
本開示のｄｄＲＮＡｉコンストラクトに有用な別のウイルス送達系は、レトロウイルス科に由来するウイルスに基づく系である。レトロウイルスには、独特の２つの特性により特徴づけられる一本鎖ＲＮＡ動物ウイルスが含まれる。１つめの特性は、レトロウイルスのゲノムは２つのコピーのＲＮＡからなる二倍体である、ということである。２つめの特性は、このＲＮＡは、ビリオン関連酵素のリバーストランスクリプターゼによって二本鎖ＤＮＡへと転写されることである。この二本鎖ＤＮＡまたはプロウイルスは、次に、宿主ゲノムに組み込まれ、宿主ゲノムに安定的に組み込まれた要素として親細胞から子孫細胞へと伝えられることが可能になる。
【０３８２】
いくつかの例では、ウイルスベクターはレンチウイルスである。レンチウイルスベクターは、水泡性口内炎ウイルス糖タンパク質（ｖｅｓｉｃｕｌａｒ  ｓｔｅａｔｉｔｅｓ  ｖｉｒｕｓ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）（ＶＳＶ−Ｇ）とシュードタイプ化されることが多く、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）；ヒツジの脳炎（ビスナ）や肺炎の原因となるマエディ・ビスナ（ｖｉｓａｎ−ｍａｅｄｉ）；ウマの自己免疫性溶血性貧血や脳症の原因となるウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）；ネコの免疫不全の原因となるネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）；ウシのリンパ節腫やリンパ球増加症の原因となるウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）；および非ヒト霊長類で免疫不全や脳症の原因となるサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）に由来している。ＨＩＶに基づくベクターは、通常、親ゲノムの５％未満を保持し、このゲノムの２５％未満がパッケージングコンストラクトに組み込まれ、したがって復帰複製能力のあるＨＩＶが生成する可能性は最小限となる。ベクター動員に必要なパッケージングシグナルの転写を排除する、下流の長い末端反復配列中の調節エレメントの欠失を含む自己不活化ベクターの開発によって、バイオセーフティーがさらに向上している。レンチウイルスベクターを使用する主な利点の一つは、形質導入された細胞の分裂後もほとんどの組織または細胞型で遺伝子トランスファーが続くことである。
【０３８３】
本開示の核酸およびｄｄＲＮＡｉコンストラクトからのｓｈｍｉＲおよび／またはｓｈＲＮＡの発現に用いられるレンチウイルスに基づくコンストラクトは、レンチウイルスの５’および３’の長い末端反復配列（ＬＴＲ）の配列を含む。一例では、ウイルスコンストラクトは、レンチウイルス由来の不活化または自己不活化３’ＬＴＲを含む。３’ＬＴＲは、当業界で知られている任意の方法で自己不活化のものとしてもよい。たとえば、３’ＬＴＲのＵ３エレメントは、たとえばＴＡＴＡボックス、Ｓｐ１およびＮＦ−カッパＢ部位でそのエンハンサー配列の欠失を含んでいる。自己不活化３’ＬＴＲの結果として、宿主ゲノムに組み込まれたプロウイルスは、不活化５’ＬＴＲを含むことになる。ＬＴＲ配列は、任意の種の任意のレンチウイルスのＬＴＲ配列であってよい。レンチウイルスに基づくコンストラクトには、ＭＭＬＶもしくはＭＳＣＶ、ＲＳＶまたは哺乳類遺伝子の配列を組み込むこともできる。さらに、レンチウイルス５’ＬＴＲのＵ３配列を、ウイルスコンストラクト中のプロモーター配列で置き換えることができる。こうすることで、パッケージング細胞株から回収されるウイルス力価を増加させることができる。エンハンサー配列も含まれる場合がある。
【０３８４】
当業者に知られている他のウイルス系または非ウイルス系も、目的とする細胞に本発明のｄｄＲＮＡｉまたは核酸を送達するのに使用することができ、限定ではないが遺伝子欠失アデノウイルス−トランスポゾンベクター（Ｙａｎｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０：９９９−１００４（２００２）を参照のこと）；シンドビスウイルスまたはセムリキ森林ウイルス由来の系（Ｐｅｒｒｉ，ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４（２０）：９８０２−０７（２００２）を参照のこと）；ニューカッスル病ウイルスまたはセンダイウイルス由来の系が挙げられる。
【０３８５】
本開示の核酸およびｄｄＲＮＡｉコンストラクトの試験
細胞培養モデル
ＨＢＶは培養液中の細胞には感染しない。しかし、ＨＢＶ  ＤＮＡを（ヘッド・トゥー・テールの二量体として、または１００％を上回る「オーバーレングス」ゲノムとして）ＨｕＨ７またはＨｅｐＧ２肝細胞にトランスフェクションすると、ウイルス遺伝子が発現し、ＨＢＶビリオンが生産され培地中に放出される。そのような細胞株の一例は、安定的に完全ＨＢＶゲノム（血清型ａｙｗ、遺伝子型Ｄ）を有するＨｅｐＧ２ヒト肝細胞癌細胞株のサブ細胞株、ＨｅｐＧ２．２．１５である。ＨｅｐＧ２．２．１５は、全ＨＢＶウイルスＲＮＡおよびタンパク質を発現し、ウイルスゲノムを生産し、ウイルス様粒子を分泌する。本明細書で例示するように、本開示の核酸またはｄｄＲＮＡｉコンストラクトから発現されるｓｈｍｉＲの活性は、核酸またはｄｄＲＮＡｉコンストラクトを細胞に投与した後、ＨＢＶゲノムによってコードされるＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルを測定することによって、決定することができる。細胞内ＨＢＶ遺伝子発現は、Ｔａｑｍａｎ（商標）アッセイか他のリアルタイムＰＣＲアッセイによりＨＢＶ  ＲＮＡを、またはＥＬＩＳＡによりＨＢＶタンパク質を、検定することができる。細胞外ウイルスは、ＰＣＲによりＤＮＡを、またはＥＬＩＳＡによりタンパク質を、検定することができる。ＨＢＶ表面抗原とコアタンパク質の抗体は市販されている。当業界では、トランスフェクション効率およびサンプル回収率の差異を正規化する様々な手段が知られている。初代ヒト肝細胞を用いる細胞培養系の最近の進歩のおかげで、ＨＢＶ治療剤の活性の決定能も向上しよう。
【０３８６】
ＨＢＶゲノムによってコードされるＲＮＡまたはタンパク質の発現を、本開示の核酸またはｄｄＲＮＡｉコンストラクトの非存在下と比べて少なくとも５０％減少させる本開示の核酸またはｄｄＲＮＡｉコンストラクトから発現されるｓｈｍｉＲおよび／またはｓｈＲＮＡは、本開示の方法で有用であると考えられる。
【０３８７】
動物モデル
ＨＢＶ複製の研究に用いることができる小動物モデルがいくつかある。その一つは、放射線照射マウスへのＨＢＶ感染肝臓組織の移植である。ウイルス血症（エビデンスはＰＣＲでＨＢＶ  ＤＮＡを測定）は、移植後８日目に最初に検出され、１８〜２５日目にピークになる（Ｉｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２９，５５３−５６２）。
【０３８８】
ＨＢＶを発現するトランスジェニックマウスも、抗ウイルス剤候補を評価するためのモデルとして用いられている。ＨＢＶ  ＤＮＡはトランスジェニックマウスの肝臓でも血清でも検出可能である（Ｍｏｒｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．，４２，９７−１０８，１９９９）。
【０３８９】
さらなるモデルは、ＨＢＶをトランスフェクションしたＨｅｐＧ２細胞を用いてヌードマウスに皮下腫瘍を作製することである。腫瘍は接種から約２週間で発生し、ＨＢＶ表面抗原とＨＢＶコア抗原を発現する。ＨＢＶ  ＤＮＡおよび表面抗原は腫瘍担持マウスの循環血中でも検出される（Ｙａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒａｌ  Ｈｅｐａｔ．，３，１９−２２，１９９６）。
【０３９０】
さらなるモデルは、本明細書に記載するＰＸＢマウス、つまり肝臓疾患をもつ免疫不全マウス（ｕＰＡ／ＳＣＩＤ）にヒト肝細胞を移植したキメラグループのマウスを用いることである。ｕＰＡ／ＳＣＩＤマウスは相当な肝臓毒性を示すため、健常ヒト細胞を移植すると、ヒト肝細胞で７０〜９０％再配置された健常かつ機能的な肝臓をもつマウスを作ることができる。ＰＸＢマウスの肝臓は組織構造的に正常であり、ヒト肝細胞の特徴の多くを示すため、このようなマウスはキメラ肝臓組織において活性ＨＢＶ感染を維持することができる。
【０３９１】
さらなるモデルは、Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｂモデルの使用である。これは、ヒト肝細胞がこのモデルに供給され、ヒト肝臓の構造と生理を模倣するように組み立てられた三次元の細胞培養プラットフォームである。このモデルは肝細胞（ｌｉｖｅｒ  ｈｅａｐｔｏｃｙｔｅｓ）だけでできているので、Ｂ型肝炎の初の長期的に安定した完全ヒト全ウイルス生活環モデルと考えられ、ＨＢＶ感染性生活環の重要な特性をいくつか再現している。
【０３９２】
上述した動物モデルはいずれも、本開示の核酸またはｄｄＲＮＡｉコンストラクトによるＨＢＶ感染の治療または軽減の有効性の決定に用いることができる。
【０３９３】
担体
いくつかの例では、本開示の核酸またはｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現ベクターのうちの１つ以上は、担体を含む組成物として提供される。
【０３９４】
いくつかの例では、担体は、脂質ベースの担体、カチオン性脂質、またはリポソーム核酸複合体、リポソーム、ミセル、ビロソーム、脂質ナノ粒子またはそれらの混合物である。
【０３９５】
いくつかの例では、担体は、カチオン性ポリマーと核酸の複合体などのポリマーベースの担体である。
【０３９６】
さらなる例では、担体は、シクロデキストリンポリマーと核酸の複合体などのシクロデキストリンベースの担体である。
【０３９７】
さらなる例では、担体は、カチオン性ペプチドと核酸の複合体などのタンパク質ベースの担体である。
【０３９８】
別の例では、担体は、脂質ナノ粒子である。例示的なナノ粒子は、たとえばＵＳ７５１４０９９に記載されている。
【０３９９】
いくつかの例では、本開示の核酸またはｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現ベクターのうちの１つ以上は、カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−Ｃ−ＤＭＡ／ＤＳＰＣ（たとえば４０／４８／２／１０の比率）、カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ／ＤＳＰＣ（たとえば４０／４８／２／１０の比率）、またはカチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ（たとえば６０／３８／２の比率）を含む脂質ナノ粒子組成物と一緒に製剤される。いくつかの例では、カチオン性脂質はＤＭＡ中のオクチルＣＬ、ＤＭＡ中のＤＬ、Ｌ−２７８、ＫＣ２ＤＭＡ中のＤＬ、またはＭＣ３である。
【０４００】
別の例では、本開示の核酸またはｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現ベクターのうちの１つ以上は、ＷＯ２０１０／０２１８６５；ＷＯ２０１０／０８０７２４；ＷＯ２０１０／０４２８７７；ＷＯ２０１０／１０５２０９またはＷＯ２０１１／０２２４６０に記載のいずれかのカチオン性脂質製剤と一緒に製剤される。
【０４０１】
別の例では、本開示の核酸またはｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現ベクターのうちの１つ以上は、たとえば該ＲＮＡまたはｄｄＲＮＡｉまたは発現コンストラクトの送達を容易にするために、別の化合物とコンジュゲートされているかまたは複合体化されている。そのようなコンジュゲートの非限定的な例が、ＵＳ２００８／０１５２６６１およびＵＳ２００４／０１６２２６０に記載されている（たとえば、ＣＤＭ−ＬＢＡ、ＣＤＭ−Ｐｉｐ−ＬＢＡ、ＣＤＭ−ＰＥＧ、ＣＤＭ−ＮＡＧなど）。
【０４０２】
別の例では、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が本開示の核酸またはｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現コンストラクトに共有結合的に付着している。付着ＰＥＧはどのような分子量でもよく、たとえば、約１００〜約５０，０００ダルトン（Ｄａ）である。
【０４０３】
さらに他の例では、本開示の核酸またはｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現ベクターのうちの１つ以上は、たとえば、ＷＯ９６／１０３９１；ＷＯ９６／１０３９０；またはＷＯ９６／１０３９２に記載されているような、ポリ（エチレングリコール）脂質を含有する表面修飾リポソーム（ＰＥＧ修飾、または血中滞留型リポソームまたはステルスリポソーム）を含む担体と一緒に製剤される。
【０４０４】
いくつかの例では、本開示の核酸またはｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現コンストラクトは、ポリエチレンイミン−ポリエチレングリコール−Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＰＥＩ−ＰＥＧ−ＧＡＬ）またはポリエチレンイミン−ポリエチレングリコール−ｔｒｉ−Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＰＥＩ−ＰＥＧ−ｔｒｉＧＡＬ）誘導体など、ポリエチレンイミンまたはその誘導体と一緒に製剤化または複合体化される場合もある。一例では、本開示のＲＮＡまたはｄｄＲＮＡｉまたは発現コンストラクトは、米国特許出願公開第２００３／００７７８２９号に記載されるように製剤化される。
【０４０５】
他の例では、本開示の核酸またはｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現ベクターのうちの１つ以上は、米国特許出願公開第２００１／０００７６６６号に記載されるような膜破壊剤と複合体化される。
【０４０６】
他の担体としては、シクロデキストリン（たとえばＧｏｎｚａｌｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，１０，１０６８−１０７４；またはＷＯ０３／４６１８５を参照のこと）、ポリ乳酸・グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）およびＰＬＣＡマイクロスフィア（たとえばＵＳ２００２１３０４３０を参照のこと）が挙げられる。
【０４０７】
組成物および治療方法
本開示の１つ以上の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクト、または発現ベクターは、ＨＢＶ感染の予防または治療のための組成物に使用することができる。本発明の治療用組成物は、単独で使用することもできるし、他の抗ウイルス剤などの１種以上の物質と併用することもできる。現在ＨＢＶの治療で認可されているのは、エンテカビル、テノホビル、ラミブジン、アデホビルジピボキシル、およびインターフェロンアルファ（たとえば、ＰＥＧ化インターフェロンアルファ）である。本開示の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクト、または発現ベクターは、他の認可薬とは異なる機構でＨＢＶに作用するので、本発明の剤と他の抗ウイルス剤の併用治療で治療の有効性は大きく向上する一方で、たとえば長期ラミブジン治療の大きな問題となっているラミブジン耐性の発生などの薬剤耐性の発生は大きく抑制されることが期待される。
【０４０８】
組成物は、本開示の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクト、または発現ベクターの生物学的安定性を向上させる物質および／または組成物が選択的に肝細胞に侵入する能力を向上させる物質を含むことが望ましい。本開示の治療用組成物は、投与形態や投与経路、および標準的な製剤上の慣例に基づき選択される製薬上許容される担体（たとえば、生理食塩水）中で投与することができる。当業者であれば、本開示の１つ以上の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクト、または発現ベクターを含む医薬組成物を容易に製剤化することができる。いくつかの場合には、等張製剤が用いられる。一般に、等張性のための添加剤としては、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトールおよびラクトースを挙げることができる。いくつかの場合には、リン酸緩衝生理食塩水などの等張液が好ましい。安定化剤としては、ゼラチンやアルブミンが挙げられる。いくつかの例では、血管収縮剤が製剤に添加される。本開示による組成物は、滅菌されパイロジェンを含まない状態で提供される。好適な製薬上の担体、および医薬製剤に用いられる製薬上必要な物質は、この分野の標準的な参照資料であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（旧Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ），Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．およびＵＳＰ／ＮＦに記載されている。
【０４０９】
投与経路としては、限定ではないが、筋肉内、腹腔内、皮内、皮下、静脈内、髄腔内、動脈内、眼内および経口ならびに経皮または吸引もしくは坐薬などが挙げられる。例示的な投与経路としては、静脈内、筋肉内、経口、腹腔内、皮内、動脈内および皮下注射が挙げられる。本開示の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現ベクターを送達するための、標的とするインビボの肝細胞トランスフェクションは、本明細書に記載する１つ以上の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現ベクターと、ラクトシルスペルミン（モノラクトシル化またはトリラクトシル化）とコレステリルスペルミンの混合物（たとえば、３５％／６５％の比率）の複合体（対ＤＮＡチャージ比率０．８でスペルミンを含有）を含む組成物をＩＶ注射することで達成することができる。そのような組成物は、医薬用途に有用であり、非経口投与用の、たとえばＩＶ（ＩＶ点滴を含む）、ＩＭ、ＳＣおよび腹腔内投与用の、好適な滅菌の非発熱性ビヒクル、たとえば注射用緩衝食塩水中で容易に製剤化することができる。特定の組成物では、本開示の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現ベクターは、標的化スペルミンなしのコレステリルスペルミン単剤などのエンドソーム溶解（ｅｎｄｏｓｏｍｏｌｙｔｉｃ）スペルミンと複合体化され、腹腔内注射や点滴などのいくつかの投与経路で、核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現ベクターの肝臓への送達およびトランスフェクションを、有効に達成することができる。
【０４１０】
特別調合された送達ビヒクル中の本開示の１つ以上の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現ベクターを含む無菌の医薬組成物の腹腔内投与（たとえば、超音波誘導腹腔内注射）は、肝細胞を含めた肝臓細胞による取り込みを促進する有益な送達経路となることができる。
【０４１１】
医薬組成物の体積、濃度、および配合、ならびに用量計画は、炎症反応などの毒性を最小限化しながら最大限に細胞送達ができるように、個別調整することができる。たとえば所望により、活性成分が低濃度となる比較的大きな体積（５ｍｌ、１０ｍｌ、２０ｍｌ、５０ｍｌまたはそれ以上）を用いることや、コルチコステロイドなどの抗炎症性化合物を含有させることもできる。
【０４１２】
ＨＢＶに感染した個体では、本開示の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現ベクターは、ウイルスに対する免疫性を高めるように設計された治療ワクチン接種プロトコルと合わせた前治療として有用であると想定される。また、本開示の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現ベクターは、職業上またはそれ以外でＨＢＶに暴露するリスクが高い人に対する定期的な投与計画での予防としても有用であると想定される。
【０４１３】
キット
本開示はまた、本開示の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトおよび／または発現ベクターをキットの形態で提供する。キットは、容器を含む場合がある。典型的なキットには、本開示の１つ以上の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現ベクターと、投与に関する説明書とが含まれる。いくつかの例では、キットには、本開示の２種以上の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現ベクターおよび／または本開示の別の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現ベクターが含まれる。いくつかの例では、キットには、（本明細書に記載する）ＨＢＶ感染の治療のための別の化合物と一緒にパッケージングされた本開示の２種以上の核酸、ｄｄＲＮＡｉコンストラクトまたは発現ベクターが含まれる。たとえば、ＨＢＶ感染の治療で知られている他の治療剤は、エンテカビル、テノホビル、ラミブジン、アデホビルおよび／またはＰＥＧ化インターフェロンから選択することができる。
【実施例】
【０４１４】
［実施例１  ｓｈｍｉＲを発現するｄｄＲＮＡｉ発現コンストラクトの作製］
本開示のシングルのｓｈｍｉＲを発現できるｄｄＲＮＡｉコンストラクトを製造するために、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を合成し、Ｕ６プロモーター（たとえば、Ｕ６−１、Ｕ６−８、またはＵ６−９）の下流にクローン化する。ｄｄＲＮＡｉコンストラクトをそれぞれＨＢＶ−ｓｈｍｉＲ１からＨＢＶ−ｓｈｍｉＲ１６と称する。
【０４１５】
本開示のｓｈｍｉＲに対応するシングルのｓｈＲＮＡを発現できるｄｄＲＮＡｉコンストラクトも製造する。簡単に説明すると、ｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を合成し、近位配列因子７（ＰＳＥ７）と共にＵ６プロモーター（たとえば、Ｕ６−１、Ｕ６−８、またはＵ６−９）の下流にクローン化する。ｄｄＲＮＡｉコンストラクトをそれぞれＨＢＶ−ｓｈＲＮＡ１からＨＢＶ−ｓｈＲＮＡ１６と称する。
【０４１６】
加えて、トリプルのＨＢＶ  ｓｈｍｉＲ発現カセットを含みかつ本開示の３つのｓｈｍｉＲを発現できるｄｄＲＮＡｉコンストラクトを作製する。５’−３’方向に、Ｕ６−９プロモーター、ｓｈｍｉＲ６（配列番号６４）、Ｕ６−１プロモーター、ｓｈｍｉＲ１５（配列番号７３）、Ｕ６−８プロモーター、及びｓｈｍｉＲ１２（配列番号７０）をコードするＤＮＡ配列を含む第１のトリプルＨＢＶ  ｓｈｍｉＲ  ｄｄＲＮＡｉコンストラクト（ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１と称する）を合成する。５’−３’方向に、Ｕ６−９プロモーター、ｓｈｍｉＲ６（配列番号６４）、Ｕ６−１プロモーター、ｓｈｍｉＲ７（配列番号６５）、Ｕ６−８プロモーター、及びｓｈｍｉＲ１２（配列番号７０）をコードするＤＮＡ配列を含む第２のトリプルＨＢＶ  ｓｈｍｉＲ  ｄｄＲＮＡｉコンストラクト（ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ２と称する）も合成する。
【０４１７】
ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１と称するコンストラクトによって発現される３つのｓｈｍｉＲに対応する３つのｓｈＲＮＡを発現できるトリプルのＨＢＶ  ｓｈＲＮＡ発現カセットを含むｄｄＲＮＡｉコンストラクトも作製する。具体的には、５’−３’方向に、Ｕ６−９プロモーター及びＰＳＥ７、ｓｈＲＮＡ６（配列番号９９）、Ｕ６−１プロモーター及びＰＳＥ７、ｓｈＲＮＡ１５（配列番号１０８）、Ｕ６−８プロモーター及びＰＳＥ７、並びにｓｈＲＮＡ１２（配列番号１０５）をコードするＤＮＡ配列を含むトリプルＨＢＶ  ｓｈＲＮＡ  ｄｄＲＮＡｉコンストラクト（ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１と称する）を合成する。
【０４１８】
［実施例２  デュアルルシフェラーゼ・レポーター・アッセイにおけるｄｄＲＮＡｉ発現コンストラクトの活性］
ＨＢＶ転写物をノックダウンするための本開示のｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡを発現するｄｄＲＮＡｉコンストラクトの有効性をＨＥＫ２９３細胞中でデュアルルシフェラーゼ・レポーター・アッセイを使用して決定する。
【０４１９】
本開示のｓｈｍｉＲ及びｓｈＲＮＡのそれぞれからのエフェクター配列及びエフェクター相補配列について、ｐＧＬ３ルシフェラーゼ・レポーター・ベクターに基づくプラスミド・レポーター・コンストラクトを構築する。各末端に２０ｂｐの隣接配列を有するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡ（適宜）の各々のエフェクター配列またはエフェクター相補配列をｐＧＬ３コントロールベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ社、ウィスコンシン州マディソン）に挿入することによって、ルシフェラーゼ・レポーター・コンストラクト、たとえば、ホタルルシフェラーゼ・レポーター・コンストラクトを作製する。ルシフェラーゼ・レポーター遺伝子の後続のＦｓｅＩ及びＸｂａＩ制限酵素部位を使用することにより挿入物をサブクローン化する。
【０４２０】
ＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ）でデュアルルシフェラーゼ・レポーター・アッセイを実施する。ＨＥＫ２９３細胞は、１０％ウシ胎児血清、２ｍＭグルタミン、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）、及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を含むＤＭＥＭ培地中、５％  ＣＯ２、３７℃の加湿インキュベーター内で培養する。ＨＥＫ２９３細胞は、トランスフェクションの１日前に、９６ウェルの培養プレートに２×１０４細胞／ウェルの密度で播種する。
【０４２１】
実施例１に記載のｄｄＲＮＡｉ発現コンストラクト（すなわち、ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲ１からＨＢＶ−ｓｈｍｉＲ１６、ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１及びＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ２と称するｄｄＲＮＡｉコンストラクト）を合成し、任意選択でｓｈＲＮＡを発現するコンストラクト用の近位配列因子７（ＰＳＥ７）と共に、適切なプラスミドベクター、たとえば、ｐＳｓｈベクターに挿入する。
【０４２２】
０．３μＬのリポフェクタミン２０００試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、カリフォルニア州カールスバッド）をメーカーの指示通りに用いて、ｄｄＲＮＡｉ発現コンストラクトを含む発現ベクターを、対応するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡ（適宜）のエフェクター配列またはエフェクター相補配列を発現するルシフェラーゼ・レポーター・コンストラクト、たとえば、ホタルルシフェラーゼ・レポーター・コンストラクトと共に１０：１（ｄｄＲＮＡｉ発現コンストラクト：ルシフェラーゼ・レポーター・コンストラクト）の比でＨＥＫ２９３細胞に同時トランスフェクションする。細胞には、１ｎｇのＲｅｎｉｌｌａレポーター・コンストラクト（トランスフェクションコントロールとして働く）もトランスフェクションする。トランスフェクションから４８時間後、細胞ライセートを回収し、Ｄｕａｌ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ社、ウィスコンシン州マディソン）で解析する。ホタル／Ｒｅｎｉｌｌａの活性比を各トランスフェクションについて決定する。レポーター発現の阻害パーセンテージを、ネガティブコントロール、たとえば、ランダムな非標的化配列を発現するコンストラクトと比較して算出する。実験は重複して行う。
【０４２３】
本開示のｓｈｍｉＲを発現し、かつ各々のルシフェラーゼ・レポーター・コンストラクトからのルシフェラーゼタンパク質の発現を阻害するｄｄＲＮＡｉ発現コンストラクトの能力を決定する。
【０４２４】
加えて、鎖優先活性について、３つのｄｄＲＮＡｉ  ｓｈｍｉＲコンストラクト（すなわち、それぞれｓｈｍｉＲ６、ｓｈｍｉＲ１５、及びｓｈｍｉＲ１２を発現するｄｄＲＮＡｉ  ｓｈｍｉＲコンストラクト）を対応物を発現するそれらのｓｈＲＮＡに対して比較した。図１Ａに示すデータは、ｓｈｍｉＲは対応するｓｈＲＮＡと比べてより高いアンチセンス（エフェクター）鎖活性を呈することを示す。
【０４２５】
［実施例３  ｓｈｍｉＲを発現するｄｄＲＮＡｉコンストラクトの高機能特性］
３つのｄｄＲＮＡｉコンストラクト（すなわち、それぞれｓｈｍｉＲ６、ｓｈｍｉＲ１５、及びｓｈｍｉＲ１２を発現するｄｄＲＮＡｉ  ｓｈｍｉＲコンストラクト）の高機能特性をＨＥＫ２９３細胞中で評価した。
【０４２６】
３つのｄｄＲＮＡｉ発現コンストラクトの各々について、０．３μＬのリポフェクタミン２０００試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、カリフォルニア州カールスバッド）をメーカーの指示通りに用いて、ＨＥＫ２９３細胞を含むウェルに、（ｉ）１００ｎｇ、５０ｎｇ、２０ｎｇ、５ｎｇ、１．６７ｎｇ、０．５６ｎｇ、０．１９ｎｇ、０．０６ｎｇ、または０．０３ｎｇのそれぞれのｄｄＲＮＡｉ発現コンストラクト、（ｉｉ）最終ＤＮＡ含量を１００ｎｇに調節するための様々な量のフィラープラスミド、及び（ｉｉｉ）１０ｎｇの対応するホタルルシフェラーゼ・レポーター・コンストラクト、を同時トランスフェクションした。細胞には、１ｎｇのＲｅｎｉｌｌａレポーター・コンストラクト（ローディングコントロールとして働く）もトランスフェクションした。トランスフェクションから４８時間後、細胞ライセートを回収し、Ｄｕａｌ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ社、ウィスコンシン州マディソン）で解析した。各ウェルのホタル／Ｒｅｎｉｌｌａの活性比を決定し、ｄｄＲＮＡｉ発現コンストラクトの阻害効率を算出した。
【０４２７】
ｓｈｍｉＲ６、ｓｈｍｉＲ１５、またはｓｈｍｉＲ１２（それぞれ配列番号６４、配列番号７３、または配列番号７０）を発現するコンストラクトの活性を決定し、図１に示すように、ｓｈＲＮＡ６、ｓｈＲＮＡ１５、及びｓｈＲＮＡ１２（それぞれ配列番号９９、配列番号１０８、または配列番号１０５）を発現する対応するコンストラクトに対して直接的に比較した。これらのデータは、ｓｈｍｉＲコンストラクトがこれらの実験条件下で対応するｓｈＲＮＡコンストラクトよりも効果的であったことを示す（図１Ａ）。
【０４２８】
高機能アッセイを使用して、コンストラクトの相対活性をさらに特徴づけた。高機能アッセイは、一定量のホタルレポーターと同時トランスフェクションしたｓｈｍｉＲを発現するコンストラクトの量（１００ｎｇから０．０２ｎｇ）を滴定することによって行った。これらのデータ（図１Ｂ〜図１Ｄ）は、ｄｄＲＮＡｉ  ｓｈｍｉＲコンストラクトの３つすべてが、ｓｈＲＮＡを発現する対応するコンストラクトと比べて低濃度で高活性であったことを示し、これは生物学的活性の上昇を指し示す。
【０４２９】
［実施例４  ｓｈｍｉＲバリアントを発現するｄｄＲＮＡｉコンストラクトの設計及び試験］
ｓｈｍｉＲ−１２（配列番号５４）及びｓｈｍｉＲ−１５（配列番号５７）の鎖選好活性を向上させるために、エフェクター相補（センス）配列を１または２ヌクレオチド上流または下流のいずれかにシフトさせることによって、ｓｈｍｉＲ−１２及びｓｈｍｉＲ−１５のバリアントを製造した。ｓｈｍｉＲ−１５のバリアントをｓｈｍｉＲ−１７からｓｈｍｉＲ−２２（それぞれ配列番号１３４〜１３９）と称し、ｓｈｍｉＲ−１２のバリアントをｓｈｍｉＲ−２３からｓｈｍｉＲ−２８（それぞれ配列番号１４０〜１４５）と称する。
【０４３０】
センス配列の３’末端における「Ａ」ヌクレオチドまたは５’末端における「Ｇ」ヌクレオチドの付加の、ｓｈｍｉＲバリアントの熱力学に対する影響も評価した。機能的なＲＮＡｉ活性のためにアンチセンス（またはエフェクター）鎖がＲＩＳＣ複合体に優先的に積込まれるようにすることがその目的である。
【０４３１】
ｓｈｍｉＲ−１２のバリアント（すなわち、ｓｈｍｉＲ−２３からｓｈｍｉＲ２８）について、６つのｓｈｍｉＲバリアントはすべて、親のｓｈｍｉＲ−１２よりも良好な鎖の優先性を実証した（図２Ａ）。ｓｈｍｉＲ−１５のバリアント（すなわち、ｓｈｍｉＲ−１７からｓｈｍｉＲ−２２）について、６つのバリアントのうちの４つが親のｓｈｍｉＲ−１５よりも良好な鎖の優先性を実証した（図２Ｂ）。これらの結果に基づいて、ｓｈｍｉＲ−１２及びｓｈｍｉＲ−１５をコードするＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１中の配列をそれぞれｓｈｍｉＲ−２４（配列番号１５３）及びｓｈｍｉＲ−２０（配列番号１４９）をコードする配列に置換することによってさらなるトリプルＨＢＶ  ｓｈｍｉＲ  ｄｄＲＮＡｉコンストラクトを設計して、第３のトリプルＨＢＶ  ｓｈｍｉＲ  ｄｄＲＮＡｉコンストラクト（ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ３と称する）を形成させた。
【０４３２】
［実施例５  ＨＢＶ  ｓｈｍｉＲ  ＡｄＶベクターを使用するＨｅｐＧ２．２．１５細胞中でのＨＢＶ転写物のノックダウン］
実施例１に記載のｄｄＲＮＡｉ発現コンストラクト（すなわち、ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲ１からＨＢＶ−ｓｈｍｉＲ１６、ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１、及びＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ２と称するｄｄＲＮＡｉコンストラクト）をウイルス生産用アデノウイルス（ＡｄＶ）コンストラクト（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｂｉｏｌａｂｓ社、ペンシルバニア州モルバーン）中にサブクローン化することによって、シングル及びトリプルのｓｈｍｉＲ  ＡｄＶベクターを作製する。
【０４３３】
ＨＢＶ遺伝子の発現をノックダウンする本明細書に記載するｓｈｍｉＲ  ＡｄＶベクターの有効性を試験するために、ＨｅｐＧ２．２．１５を本開示のｓｈｍｉＲ  ＡｄＶベクターに感染させ、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害を検定する。
【０４３４】
ＨｅｐＧ２．２．１５は、完全ＨＢＶゲノム（血清型ａｙｗ、遺伝子型Ｄ）を安定的に有するＨｅｐＧ２ヒト肝細胞癌細胞株の亜細胞株である。ＨｅｐＧ２．２．１５細胞は、全ＨＢＶウイルスＲＮＡ及びタンパク質を発現し、ウイルスゲノムを生産し、ウイルス様粒子を分泌する。ＨｅｐＧ２．２．１５細胞を、４％ウシ胎児血清、４ｍＭグルタミン、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）、及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を補充したＲＰＭＩ１６４０培地で維持し、３７℃の加湿インキュベーター内で、５％  ＣＯ２の雰囲気下で増殖させる。
【０４３５】
ＨｅｐＧ２．２．１５細胞を細胞懸濁液中でＨＢＶ  ｓｈｍｉＲ  ＡｄＶベクターに感染させ、マルチウェル・プレートで培養する。各ウェルは、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞約１．０×１０５個と、本開示のシングルまたはトリプルのＨＢＶ  ｓｈｍｉＲ  ＡｄＶベクターのうちの１つをＭＯＩ：６、１５、３０、６０、９０、または１２０のうちの１つで含む懸濁液を収容する。形質導入後、細胞を３７℃、５％  ＣＯ２で７２時間培養した後回収し、ＲＮＡとＤＮＡを、それぞれＱｉａｇｅｎ  ｍｉＲＮｅａｓｙミニキットとＱｉＡｍｐ  ＤＮＡミニキット（カリフォルニア州バレンシア）を用いて抽出する。
【０４３６】
全ＲＮＡを、ｍｉＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社、カリフォルニア州バレンシア）を用いて単離する。全ＲＮＡをＮａｎｏＤｒｏｐ  １０００  Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を用いて定量化し、作業濃度１０ｎｇ／μｌになるまで希釈する。
【０４３７】
ＨｅｐＧ２．２．１５細胞中で様々なＭＯＩでのシングルまたはトリプルのＨＢＶ  ｓｈｍｉＲ  ＡｄＶベクターから発現されたときの、細胞当たりのｓｈｍｉＲコピー数を本開示の各ｓｈｍｉＲについて、Ｑｉａｇｅｎ社のｍｉＳｃｒｉｐｔ  ＰＣＲ  ｓｙｓｔｅｍを用いて決定する。各ＲＴ−ｑＰＣＲ解析では、Ｑｉａｇｅｎ社のｍｉＳｃｒｉｐｔ  ＩＩ  ＲＴキットを用いて５０ｎｇの全ＲＮＡをｃＤＮＡに変換する。Ｑｉａｇｅｎ社のｍｉＳｃｒｉｐｔ  ＳＹＢＲグリーンＰＣＲキットを各々のｓｈｍｉＲ用に設計されたカスタム・プライマーと一緒に用いて以下のリアルタイムＰＣＲ条件でｓｈｍｉＲの定量ＰＣＲを行う：初回変性は９５℃で１５分、その後４０サイクルの９４℃で１５秒、５５℃で３０秒、及び７０℃で３０秒。
【０４３８】
ＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡのレベルに対し相対的な、ＨＢＶ抗原ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ、及びＨｂｘＡｇに対応する領域のＨＢＶ転写物の阻害のレベルを、各試料につき、各々のＨＢＶ  ｍＲＮＡ転写物のレベルをＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡに対し正規化することによって、決定する。簡単に説明すると、１００ｎｇの全ＲＮＡを用いて、Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、カリフォルニア州カールスバッド）をメーカーの指示通りに用いてｃＤＮＡを合成する。次いで、ＨＢＶ抗原ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ、ＨｂｘＡｇ、及びＧＡＰＤＨ内の領域の定量ＰＣＲ増幅を、Ｐｏｗｅｒ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）及び表１に挙げたプライマーセットを用いて実施する。使用する標準的リアルタイムＰＣＲ条件は、初回変性は９５℃で１０分、その後、４０サイクルの９５℃で１５秒、及び６０℃で１分である。
【０４３９】
【表１】
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【０４４０】
本開示の各ｓｈｍｉＲ（個別に、またはトリプルコンストラクトの部分として発現）について、ＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡのレベルに対する、ＨＢＶ抗原ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ、及びＨｂｘＡｇに対応する領域のＨＢＶ転写物の阻害のレベルを様々なＭＯＩで決定する。
【０４４１】
［実施例６  ＨＢＶ  ｓｈｍｉＲ  ＡｄＶベクターを使用するＨｅｐＧ２．２．１５細胞中でのＨＢＶ転写物のノックダウン］
実施例１に記載のｄｄＲＮＡｉ発現コンストラクト（すなわち、ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲ１からＨＢＶ−ｓｈｍｉＲ１６、ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡ１−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡ１６、ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１、ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ２、及びＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１と称するｄｄＲＮＡｉコンストラクト）をウイルス生産用アデノウイルス（ＡｄＶ）コンストラクト（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｂｉｏｌａｂｓ社、ペンシルバニア州モルバーン）中にサブクローン化することによって、シングル及びトリプルのｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡのＡｄＶベクターを作製した。
【０４４２】
ＨＢＶ遺伝子の発現をノックダウンする本明細書に記載するｓｈｍｉＲ  ＡｄＶベクターの有効性を試験するために、ＨｅｐＧ２．２．１５を本開示のｓｈｍｉＲ  ＡｄＶベクターに感染させ、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害を検定する。
【０４４３】
ＨｅｐＧ２．２．１５は、完全ＨＢＶゲノム（血清型ａｙｗ、遺伝子型Ｄ）を安定的に有するＨｅｐＧ２ヒト肝細胞癌細胞株の亜細胞株である。ＨｅｐＧ２．２．１５細胞は、全ＨＢＶウイルスＲＮＡ及びタンパク質を発現し、ウイルスゲノムを生産し、ウイルス様粒子を分泌する。ＨｅｐＧ２．２．１５細胞を、４％ウシ胎児血清、４ｍＭグルタミン、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）、及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を補充したＲＰＭＩ１６４０培地で維持し、３７℃の加湿インキュベーター内で、５％  ＣＯ２の雰囲気下で増殖させる。
【０４４４】
ＨｅｐＧ２．２．１５細胞を細胞懸濁液中でＨＢＶ  ｓｈｍｉＲ  ＡｄＶベクターまたはＨＢＶ  ｓｈＲＮＡ  ＡｄＶベクターに感染させ、マルチウェル・プレートで培養した。各ウェルは、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞約１．２５×１０５個と、シングルもしくはトリプルのＨＢＶ  ｓｈｍｉＲ  ＡｄＶベクターのうちの１つ、またはシングルもしくはトリプルのＨＢＶ  ｓｈＲＮＡ  ＡｄＶベクターのうちの１つをＭＯＩ−１００で含む懸濁液を収容した。形質導入後、細胞を３７℃、５％  ＣＯ２で３〜７日間培養し、Ｑｉａｇｅｎ  ｍｉＲＮｅａｓｙミニキット（カリフォルニア州バレンシア）を用いてトランスフェクションの３、４、５、及び６日後に全ＲＮＡの単離用に回収した。
【０４４５】
全ＲＮＡを、ＮａｎｏＤｒｏｐ  １０００  Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を用いて定量化し、作業濃度１０ｎｇ／μｌになるまで希釈した。
【０４４６】
Ｑｉａｇｅｎ社のｍｉＳｃｒｉｐｔ  ＰＣＲシステム（ｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡからプロセシングされたＲＮＡエフェクター分子を定量するために設計されている）を用いて、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞中でシングルまたはトリプルのＨＢＶ  ｓｈｍｉＲ  ＡｄＶベクターから発現されたときの、細胞当たりのコピー数として発現されたＲＮＡｉエフェクター分子を、ｓｈｍｉＲ−１２及びｓｈｍｉＲ−１５（それぞれ図３Ａ及び図３Ｂ）について決定した。ｓｈｍｉＲの発現を、シングル及びトリプルのコンストラクトの文脈で対応するｓｈＲＮＡによって誘導されたエフェクターＲＮＡｉ分子のレベルと比較した。各ＲＴ−ｑＰＣＲ解析では、Ｑｉａｇｅｎ社のｍｉＳｃｒｉｐｔ  ＩＩ  ＲＴキットを用いて５０ｎｇの全ＲＮＡをｃＤＮＡに変換した。Ｑｉａｇｅｎ社のｍｉＳｃｒｉｐｔ  ＳＹＢＲグリーンＰＣＲキットを各々のＲＮＡｉ分子用に設計されたカスタム・プライマーと一緒に用いて以下のリアルタイムＰＣＲ条件でエフェクターＲＮＡｉ分子の定量ＰＣＲを行った：初期変性は９５℃で１５分、その後、４０サイクルの９４℃で１５秒、５５℃で３０秒、及び７０℃で３０秒。結果は、ｓｈｍｉＲ−１２及びｓｈｍｉＲ−１５によって発現されたＨＢＶゲノムの領域に対するエフェクターＲＮＡｉ分子のレベルは、対応するｓｈＲＮＡ、すなわちそれぞれｓｈＲＮＡ−１２及びｓｈＲＮＡ−１５よりも高いことを実証した（図３）。
【０４４７】
実施例５に記載の方法にしたがって、ＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡのレベルに対する、ＨＢＶ抗原ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ、及びＨｂｘＡｇに対応する領域のＨＢＶ転写物の阻害のレベルを決定した。
【０４４８】
本開示の各ｓｈｍｉＲ（個別に、またはトリプルコンストラクトの部分として発現）について、ＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡのレベルに対する、ＨＢＶ抗原ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ、及びＨｂｘＡｇに対応する領域のＨＢＶ転写物の阻害のレベルを、ＭＯＩ１００でのＨＢＶ  ｓｈｍｉｒまたはｓｈＲＮＡ  ＡｄＶベクターによる感染の３、４、５、及び６日後に決定した。図４Ａ及び図４Ｂに示すように、ｓｈｍｉＲ−１２及びｓｈｍｉＲ−１５は、対応するｓｈＲＮＡ発現コンストラクトと比べてＨＢＶ  ＲＮＡのより大きいサイレンシングを示した。
【０４４９】
［実施例７  ＨＢＶ  ｓｈｍｉＲを発現する自己相補的なＡＡＶベースのプラスミド・コンストラクト及びウイルスの作製］
実施例１のトリプルＨＢＶ  ｓｈｍｉＲ  ｄｄＲＮＡｉコンストラクトをｓｃＡＡＶ２骨格中にサブクローン化することによって、本開示の３つのｓｈｍｉＲを発現する自己相補的なアデノ随伴ウイルス２型（ｓｃＡＡＶ２）プラスミドを作製する。
【０４５０】
簡単に説明すると、実施例１のトリプルＨＢＶ  ｓｈｍｉＲ  ｄｄＲＮＡｉコンストラクト（すなわち、ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１及びＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ２と称するｄｄＲＮＡｉコンストラクト）をｐＡＡＶ２ベクターの骨格中にクローン化して、それぞれｐＡＡＶ−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１及びｐＡＡＶ−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ２と称するベクターを製造する。非標的化ｓｈｍｉＲを発現するＡＡＶウイルスプラスミドコントロール（ｐＡＡＶ−コントロール−ｓｈｍｉＲ）も製造し得る。
【０４５１】
次いで、ＡＡＶ８カプシドを使用して、組換えシュードタイプ化ＡＡＶベクターストックを生成する。簡単に説明すると、ローラーボトル中、１０％  ＦＢＳを補充したダルベッコ改変イーグル培地中でＨＥＫ２９３Ｔ細胞を培養し、３７℃及び５％  ＣＯ２でインキュベートする。メーカーの指示通りに、各ｐＡＡＶ−トリプルＨＢＶ  ｓｈｍｉＲウイルスプラスミド（ｐＡＡＶ−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１及びｐＡＡＶ−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ２）及びｐＡＡＶｈｅｌｐｅｒｃａｐ８プラスミド（ｐＤＰ８ｒ）をポリエチレンイミン（ＰＥＩ）と複合体化させる。次いで、ｐＡＡＶ−トリプルＨＢＶ  ｓｈｍｉＲウイルスプラスミド（ｐＡＡＶ−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１及びｐＡＡＶ−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ２）のうちの１つ及びｐＤＰ８ｒをＨＥＫ２９３Ｔ細胞にダブルトランスフェクションする。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を７２時間、３７℃及び５％  ＣＯ２で培養した後、細胞を溶解し、各ウイルスプラスミドについてｓｃＡＡＶ  ｓｈｍｉＲ発現粒子をイオジキサノール（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）段階勾配超遠心分離によって精製する。発現カセット間の領域に対して設計されたプライマー及びプローブを用いるＴａｑｍａｎ定量的ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ−ＰＣＲ）を用いてベクターゲノムの数を決定する。
【０４５２】
ｐＡＡＶ−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１、ｐＡＡＶ−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ２、及びｐＡＡＶ−コントロール−ｓｈｍｉＲと称するウイルスプラスミドについて、対応するｓｃＡＡＶ８ウイルス調製物をそれぞれｓｃＡＡＶ−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１、ｓｃＡＡＶ−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ２、及びｓｃＡＡＶ−コントロール−ｓｈｍｉＲと称する。
【０４５３】
実施例１のトリプルＨＢＶ  ｓｈｍｉＲ  ｄｄＲＮＡｉコンストラクトをｓｓＡＡＶベクターの骨格中にサブクローン化することによって、本開示の３つのｓｈｍｉＲを発現する一本鎖アデノ随伴ウイルス（ｓｓＡＡＶ）プラスミドも作製する。
【０４５４】
［実施例８  ＨＢＶ  ｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡを発現する自己相補的かつ一本鎖のＡＡＶ８ベースのプラスミド・コンストラクト及びウイルスの作製］
ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１と称する実施例１のトリプルＨＢＶ  ｓｈｍｉＲ  ｄｄＲＮＡｉコンストラクトをｓｓＡＡＶ８の骨格中にサブクローン化することによって、本開示の３つのｓｈｍｉＲを発現する一本鎖アデノ随伴ウイルス２型（ｓｓＡＡＶ２）プラスミドを作製した。同様に、ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１と称する実施例１のトリプルＨＢＶ  ｓｈＲＮＡ  ｄｄＲＮＡｉコンストラクトをｓｓＡＡＶ２またはｓｃＡＡＶ２の骨格中にサブクローン化することによって、ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１のｓｈｍｉＲに対応する３つのｓｈＲＮＡを発現するｓｓＡＡＶ８及び自己相補的アデノ随伴ウイルス２型（ｓｃＡＡＶ２）プラスミドを作製した。図５に示すように、組換えＡＡＶ一本鎖ＤＮＡゲノムとして発現するようにＤＮＡを設計した。
【０４５５】
次いで、実施例７に記載の方法にしたがって、市販品を入手したＡＡＶ８カプシド（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｂｉｏｌａｂｓ社、ペンシルバニア州モルバーン；Ｎａｔｉｏｎｗｉｄｅ  Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ、オハイオ州コロンバス；Ｐｏｗｅｌｌ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｃｅｎｔｅｒ、フロリダ大学）を用いて、組換えシュードタイプ化ＡＡＶベクターストックを各ＡＡＶ２プラスミドについて作製した。シュードタイプ化ＡＡＶベクターストックをそれぞれｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１、ｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１、及びｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１と称した。
【０４５６】
［実施例９  ＨＢＶのパラメーターのインビボでの阻害］
ｓｃＡＡＶ−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１及びｓｃＡＡＶ−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ２と称するｓｃＡＡＶ  ｓｈｍｉＲ発現粒子の、（ｉ）ＨＢＶウイルス転写物の発現、（ｉｉ）細胞外ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇ、（ｉｉｉ）細胞外及び細胞内ＨＢＶ  ＤＮＡ、及び（ｉｖ）ｃｃｃＤＮＡの形成に及ぼすインビボの効果を、新規にＨＢＶ接種により感染させたＰＸＢマウスモデルにおいて決定する。
【０４５７】
方法
ｓｃＡＡＶ−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１及びｓｃＡＡＶ−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ２と称するｓｃＡＡＶ  ｓｈｍｉＲ発現粒子を実施例７にしたがって作製する。
【０４５８】
キメラＰＸＢマウス（ＰＸＢマウス（登録商標））をＰｈｏｅｎｉｘＢｉｏ社から入手する。すべてのマウスは、実験の間中、温度２３±５℃、湿度５５±２５％下で個別に収容し、１２時間ごとの明暗サイクルに置き、自由に餌と水を取らせる。
【０４５９】
ＰＸＢマウスにＨＢＶ遺伝子型Ｃを接種し、４週間インキュベートして、ベースラインのＨＢＶ感染を作る。ベースラインのＨＢＶ感染を決定するために、マウスから−２８日目、−２１日目、−１４日目、及び−７日目（すなわち、それぞれ接種後０日目、７日目、１４日目、及び２１日目）に採血し、ヒトアルブミン（ｈ−Ａｌｂ）濃度、ならびにＨＢＶ  ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ、及びＨＢｅＡｇの血清濃度を決定することができる。
【０４６０】
各時点での動物からの採血は、後眼窩神経叢／洞を介するたとえばイソフルラン麻酔（Ｅｓｃａｉｎ（登録商標）、Ｍｙｌａｎ社、日本国大阪）による麻酔下で、Ｉｎｔｒａｍｅｄｉｃ（商標）ポリエチレンチューブ（Ｂｅｃｔｏｎ，  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ社、米国ニュージャージー州）を用いて実施する。
【０４６１】
回収した血液から２μＬの全血を食塩水で希釈し、臨床化学アナライザー（ＢｉｏＭａｊｅｓｔｙ（商標）シリーズＪＣＡ−ＢＭ６０５０、ＪＥＯＬ社、日本国東京）を用いてラテックス凝集免疫比濁法（ＬＺ試験「Ｅｉｋｅｎ」Ｕ−ＡＬＢ、Ｅｉｋｅｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社、日本国東京）により、血中ｈ−Ａｌｂ濃度を測定する。
【０４６２】
ＨＢＶ  ＤＮＡの定量化、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの解析のために残りの全血を遠心分離して血清を分離する。
【０４６３】
血清ＨＢＶ  ＤＮＡを測定するために、ＳＭＩＴＥＳＴＥＸ−Ｒ＆Ｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＭＥＤＩＣＡＬ＆ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ社、日本国名古屋）を用いて５μＬの血清からＨＢＶ  ＤＮＡを抽出する。次いで、精製したＤＮＡをヌクレアーゼを含有しない水２０μＬ（Ａｍｂｉｏｎ）に溶解させる。ＨＢＶ感染ＰＸＢマウスから採取した血清をＨＢＶ  ＤＮＡ標準として用いる。合成ＨＢＶ  ＤＮＡを用いてＨＢＶ  ＤＮＡの標準の濃度を決定し、次いでそれを血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルの定量化に用いる。ＨＢＶ  ＤＮＡ標準からＨＢＶ  ＤＮＡを抽出し、適宜希釈した後リアルタイムＰＣＲに用いる。使用される標準の範囲は、たとえば、４．０Ｅ＋０４〜２．０Ｅ＋０９コピー数／ｍＬであってよい。
【０４６４】
次いで、血清ＨＢＶ  ＤＮＡ濃度を測定するため、たとえばＴａｑＭａｎ  Ｆａｓｔ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）及びＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７５００配列検出システム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてリアルタイムＰＣＲを実施する。抽出した５μＬのＤＮＡにＰＣＲ反応混合物を加える。最初に５０℃で２分かけてウラシル−Ｎ−グリコシラーゼを活性化し、次いで９５℃で２０秒かけてポリメラーゼを活性化する。次のＰＣＲ増幅は、ＡＢＩ  ７５００配列検出装置中で、１サイクルにつき９５℃で３秒の変性及び６０℃で３２秒のアニーリング及び伸長の５３サイクルからなる。血清ＨＢＶ  ＤＮＡの平均レベルを２つの別のウェルの値から算出する。
【０４６５】
リアルタイムＰＣＲで用いたプライマーとプローブは以下の通りである。
【０４６６】
【表２】
2019514401.tif 000004
【０４６７】
血清のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇ濃度は、たとえばＡｂｂｏｔｔ社が開発したＣｈｅｍｉＬｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  ＩｍｍｕｎｏＡｓｓａｙ（ＣＬＩＡ）  （ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）  ＳＹＳＴＥＭ）を使用して決定する。
【０４６８】
動物は、以下の基準を満たしていれば次の治療実験に含める。
（ｉ）−１日（すなわちＨＢＶ接種後２７日）時点で体重が１５ｇ以上である；
（ｉｉ）−７日（すなわちＨＢＶ接種後２１日）時点で血清ＨＢＶ  ＤＮＡ濃度が少なくとも１．０Ｅ＋６コピー数／ｍＬである；及び
（ｉｉｉ）−７日（すなわちＨＢＶ接種後２１日）時点でｈ−Ａｌｂの測定値が１０ｍｇ／ｍＬ以上である。
【０４６９】
ベースラインＨＢＶ感染し、上記の基準を満たすマウスを処置群に入れる。群間のばらつきを最小限化するために、群の構成は、体重の相加平均値に基づき、かつ血中ｈ−Ａｌｂ濃度及び血清ＨＢＶ  ＤＮＡ濃度の幾何平均値に基づき、ランダム化してもよい。
【０４７０】
処置群は以下の通りである。
第１群：  ２００μｌのシングルボーラスの生理食塩水のみ；
第２群：ＩＶ注射によって尾静脈に送達される２．０Ｅ＋１３（ｖｇ／ｋｇ）のｓｓＡＡＶ−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１ウイルス粒子を含有する２００μｌのシングルボーラスの生理食塩水；及び
第３群：ＩＶ注射によって尾静脈に送達される２．０Ｅ＋１３（ｖｇ／ｋｇ）のｓｃＡＡＶ−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ２ウイルス粒子を含有する２００μｌのシングルボーラスの生理食塩水。
【０４７１】
処置の直前にすべてのマウスを２〜４％のイソフルランで麻酔する。
【０４７２】
処置の投与（０日目）後、動物をさらに５６日間インキュベートする。この間、８週にわたり毎週採血し（処置後７日目、１４日目、２１日目、２８日目、３５日目、４２日目、４９日目、及び５６日目）、細胞外ＨＢｓＡｇ、細胞外ＨＢｅＡｇ、及び細胞外ＨＢＶ  ＤＮＡの血清濃度を上述した方法によりリアルタイムＰＣＲで決定する。
【０４７３】
５６日目の採血の終了後、生存動物をすべてイソフルラン麻酔下に保ち、心臓穿刺及び瀉血により安楽死させる。
【０４７４】
安楽死後、マウスから全肝臓を摘出し、計量する。左外側葉から厚さ３〜５ｍｍの肝臓の切片を得、これを一辺がおよそ１〜２ｍｍの立方体（キューブ）に切断する。これらの肝臓キューブを、できるだけ迅速に、ラベルを貼ったチューブに移し、ＲＮＡｌａｔｅｒ（登録商標）液（Ａｍｂｉｏｎ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、米国マサチューセッツ州ウォルサム）に浸す。肝臓の検体を５ボリューム以上のＲＮＡｌａｔｅｒ（登録商標）中、４℃で一晩インキュベートして、組織に液を浸透させる。インキュベーション後、ＲＮＡｌａｔｅｒ（登録商標）液を除去し、後の肝臓ＨＢＶ  ＤＮＡレベルの定量化のために肝臓片を−８０℃で保管する。
【０４７５】
処置後の肝臓ＨＢＶ  ＤＮＡのレベルを決定するために、ＲＮＡｌａｔｅｒ（登録商標）で保存した冷凍肝臓組織から、ＤＮｅａｓｙ（登録商標）  Ｂｌｏｏｄ  ＆  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社、日本国東京）を用いてＨＢＶ  ＤＮＡを抽出する。ヌクレアーゼを含有しない水２００μＬにＤＮＡを溶解させ、その後ＢｉｏＰｈｏｔｏｍｅｔｅｒ  ６１３１（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社、日本国東京）を用いてＤＮＡ溶液の濃度を決定する。ＤＮＡ溶液の濃度は、ヌクレアーゼを含有しない水を用いて２０ｎｇ／μＬになるように調節する。
【０４７６】
次いで、肝臓ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡ濃度を測定するため、ＴａｑＭａｎ  Ｆａｓｔ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ及びＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７５００配列検出システムを用いてリアルタイムＰＣＲを実施する。簡単に説明すると、抽出した５μＬのＤＮＡにＰＣＲ反応混合物を加える。ＰＣＲ反応をＴａｋｋｅｎｂｅｒｇの条件に基づいて実行する。最初に５０℃で２分かけてウラシル−Ｎ−グリコシラーゼを活性化し、次いで９５℃で２０秒かけてポリメラーゼを活性化する。次いで、たとえばＡＢＩ  ７５００配列検出装置中で、１サイクルにつき９５℃で３秒間及び６０℃で３２秒間の５５サイクルのＰＣＲ増幅を実行する。ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡの平均レベルを２つの別のウェルの値から算出する。ＨＢＶの全ゲノム配列を含有するプラスミドをＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡの定量化のための標準試料として使用する。使用される標準の範囲は、１．０Ｅ＋０２〜１．０Ｅ＋０５コピー数／１００ｎｇ  ＤＮＡであってよい。
【０４７７】
リアルタイムＰＣＲに使用されるプライマーとプローブは以下の通りである。
【０４７８】
【表３】
2019514401.tif 000005
【０４７９】
［実施例１０  キメラマウスモデルにおけるＨＢＶのパラメーターの阻害］
（図５に示すような）抗ＨＢＶ  ｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡ発現ＡＡＶ粒子のインビボの効果を、新規にＨＢＶ接種により感染させたＰＸＢキメラマウスモデルにおいて決定した。様々なＨＢＶのパラメーターの阻害を評価した：（ｉ）ＨＢＶウイルス転写物の発現、（ｉｉ）細胞外ＨｂｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ、及びＨＢｅＡｇ、（ｉｉｉ）細胞外及び細胞内ＨＢＶ  ＤＮＡ、及び（ｉｖ）ｃｃｃＤＮＡの形成。
【０４８０】
実施例８に記載の抗ＨＢＶ  ｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡ発現ＡＡＶ８粒子をＰＸＢキメラマウスモデルにおいて試験した（図６）。試験した３つの抗ＨＢＶ  ＡＡＶ８粒子は以下の通りであった。
（１）ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１を含有するｓｓＡＡＶ８（ｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１）；
（２）ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１を含有するｓｃＡＡＶ８（ｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１）：及び
（３）ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１を含有するｓｓＡＡＶ８（ｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１）。
【０４８１】
このインビボ試験では、単剤療法として投与されたときまたはエンテカビル（ＥＴＶ）またはＰＥＧ化インターフェロン（ＰＥＧ−ＩＦＮ）のようなＨＢＶ標準治療剤と組み合わせて使用されたときの単回用量のｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１、ｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１、及びｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１のＰＸＢマウスモデル中での活性を評価した。
【０４８２】
方法
キメラＰＸＢマウス（ＰＸＢマウス（登録商標））をＰｈｏｅｎｉｘＢｉｏ社から入手した。すべてのマウスは、実験の間中、温度２３±５℃、湿度５５±２５％下で個別に収容し、１２時間の明暗サイクルに置き、自由に餌と水を取らせた。肝細胞移植の約１０週間後にヒト血清アルブミンの測定を使用して、開始時の肝臓が少なくとも８０％のヒト肝細胞から構成されることを確実にした。ヒト肝細胞の組成のこの閾値を通過したすべてのキメラ動物をＨＢＶ遺伝子型Ｃに感染させ、４週間インキュベートして、ベースラインのＨＢＶ感染を作った。ベースラインのＨＢＶ感染を決定するために、マウスから−２８日目、−２１日目、−１４日目、及び−７日目（すなわち、それぞれ接種後０日目、７日目、１４日目、及び２１日目）に採血し、ヒトアルブミン（ｈ−Ａｌｂ）濃度、ならびにＨＢＶ  ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ、及びＨＢｅＡｇの血清濃度を決定した。これらは、試験動物中の肝臓損傷の検出を可能とする。有害な反応は検出されなかった。
【０４８３】
各時点での動物からの採血は、後眼窩神経叢／洞を介するたとえばイソフルラン麻酔（Ｅｓｃａｉｎ（登録商標）、Ｍｙｌａｎ社、日本国大阪）による麻酔下で、Ｉｎｔｒａｍｅｄｉｃ（商標）ポリエチレンチューブ（Ｂｅｃｔｏｎ，  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ社、米国ニュージャージー州）を用いて実施した。回収した血液から２μＬの全血を食塩水で希釈し、臨床化学アナライザー（ＢｉｏＭａｊｅｓｔｙ（商標）シリーズＪＣＡ−ＢＭ６０５０、ＪＥＯＬ社、日本国東京）を用いてラテックス凝集免疫比濁法（ＬＺ試験「Ｅｉｋｅｎ」Ｕ−ＡＬＢ、Ｅｉｋｅｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社、日本国東京）により、血中ｈ−Ａｌｂ濃度を測定した。
【０４８４】
ＨＢＶ  ＤＮＡの定量化、ＨｂｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ、及びＨＢｅＡｇの解析のために残りの全血を遠心分離して血清を分離した。血清ＨＢＶ  ＤＮＡを測定するために、ＳＭＩＴＥＳＴＥＸ−Ｒ＆Ｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＭＥＤＩＣＡＬ＆ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ社、日本国名古屋）を用いて５μＬの血清からＨＢＶ  ＤＮＡを抽出した。次いで、精製したＤＮＡをヌクレアーゼを含有しない水２０μＬ（Ａｍｂｉｏｎ）に溶解させた。ＨＢＶ感染ＰＸＢマウスから採取した血清をＨＢＶ  ＤＮＡ標準として用いた。合成ＨＢＶ  ＤＮＡを用いてＨＢＶ  ＤＮＡの標準の濃度を決定し、次いでそれを血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルの定量化に用いた。ＨＢＶ  ＤＮＡ標準からＨＢＶ  ＤＮＡを抽出し、適宜希釈した後リアルタイムＰＣＲに用いた。使用される標準の範囲は、たとえば、４．０Ｅ４〜２．０Ｅ９コピー数／ｍＬであってよい。
【０４８５】
次いで、血清ＨＢＶ  ＤＮＡ濃度を測定するため、たとえばＴａｑＭａｎ  Ｆａｓｔ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）及びＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７５００配列検出システム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてリアルタイムＰＣＲを実施した。抽出した５μＬのＤＮＡにＰＣＲ反応混合物を加えた。最初に５０℃で２分かけてウラシル−Ｎ−グリコシラーゼを活性化し、次いで９５℃で２０秒かけてポリメラーゼを活性化した。次のＰＣＲ増幅は、ＡＢＩ  ７５００配列検出装置中で、１サイクルにつき９５℃で３秒の変性及び６０℃で３２秒のアニーリング及び伸長からなる５３サイクルであった。血清ＨＢＶ  ＤＮＡの平均レベルを２つの別のウェルの値から算出した。
【０４８６】
リアルタイムＰＣＲで用いたプライマーとプローブは以下の通りであった。
【０４８７】
【表４】
2019514401.tif 000006
【０４８８】
血清のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇ濃度は、たとえばＡｂｂｏｔｔ社が開発したＣｈｅｍｉＬｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  ＩｍｍｕｎｏＡｓｓａｙ（ＣＬＩＡ）  （ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）  ＳＹＳＴＥＭ）を使用して決定した。
【０４８９】
動物は、以下の基準を満たしていれば次の治療に含めた。
（ｉ）−１日（すなわちＨＢＶ接種後２７日）時点で体重が１５ｇ以上であった；
（ｉｉ）−７日（すなわちＨＢＶ接種後２１日）時点で血清ＨＢＶ  ＤＮＡ濃度が少なくとも１．０Ｅ＋６コピー数／ｍＬであった；及び
（ｉｉｉ）−７日（すなわちＨＢＶ接種後２１日）時点でｈ−Ａｌｂ測定値が１０ｍｇ／ｍＬ以上であった。
【０４９０】
ベースラインＨＢＶ感染し、上記の基準を満たしたマウスを処置用の１２群に入れ、各群は４匹または５匹のマウスから構成された。群間のばらつきを最小限化するために、群の構成は、体重の相加平均値に基づき、かつ血中ｈ−Ａｌｂ濃度及び血清ＨＢＶ  ＤＮＡ濃度の幾何平均値に基づき、ランダム化した。
【０４９１】
試験群は以下の通りであった。
【０４９２】
【表５】
2019514401.tif 000007
【０４９３】
食塩水で処置したＨＢＶ感染マウスをネガティブコントロールとした。ＨＢＶに対する標準治療剤で処置した群をポジティブコントロールとした。すなわち、エンテカビルを６μｇ／ｋｇで毎日投与するか、またはＰＥＧ化インターフェロンを３０μｇ／ｋｇで週に２回与えた。抗ＨＢＶ  ｄｄＲＮＡｉ処置群について、０日目に低圧力尾静脈注射によって２×１０Ｅ＋１３ｖｇ／ｋｇの用量で１回、ｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１、ｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１、またはｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１を投与した。併用処置動物には１日目に毎日のＥＴＶを開始し、または４日目に初めてＰＥＧ−ＩＦＮを投薬した。
【０４９４】
治療の直前にすべてのマウスを２〜４％のイソフルランで麻酔した。
【０４９５】
処置の投与（０日目）後、動物をさらに９１日間インキュベートした。この間、１３週間にわたり毎週採血し（処置後７日目、１４日目、２１日目、２８日目、３５日目、４２日目、４９日目、５６日目、６３日目、７０日目、７７日目、８４日目、及び９１日目）、細胞外ＨＢＶ  ＤＮＡ（ウイルス価）及び細胞外ＨＢｓＡｇの血清濃度を測定した。７０日を通じて２週毎、その後に９１日の実験完了まで毎週、ＨＢｅＡｇレベルを測定した。
【０４９６】
９１日目の採血の終了後、生存動物をすべてイソフルラン麻酔下に保ち、心臓穿刺及び瀉血により安楽死させた。安楽死後、マウスから全肝臓を摘出、計量した。左外側葉から厚さ３〜５ｍｍの肝臓の切片を得、これを一辺がおよそ１〜２ｍｍの立方体（キューブ）に切断した。これらの肝臓キューブを、できるだけ迅速に、ラベルを貼ったチューブに移し、ＲＮＡｌａｔｅｒ（登録商標）液（Ａｍｂｉｏｎ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、米国マサチューセッツ州ウォルサム）に浸した。肝臓の検体を５ボリューム以上のＲＮＡｌａｔｅｒ（登録商標）中、４℃で一晩インキュベートして、組織に液を浸透させた。インキュベーション後、ＲＮＡｌａｔｅｒ（登録商標）液を除去し、様々な肝臓のＨＢＶ  ＤＮＡ及びＲＮＡ、ならびに組換えＡＡＶ由来ｓｈＲＮＡまたはｓｈｍｉＲ  ＲＮＡの発現レベルのその後の定量化のために肝臓片を−８０℃で保管した。
【０４９７】
処置後の肝臓ＨＢＶ  ＤＮＡのレベルを決定するために、ＲＮＡｌａｔｅｒ（登録商標）で保存した凍結肝臓組織から、ＤＮｅａｓｙ（登録商標）  Ｂｌｏｏｄ  ＆  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社、日本国東京）を用いてＨＢＶ  ＤＮＡを抽出した。ヌクレアーゼを含有しない水２００μＬにＤＮＡを溶解させ、その後、ＢｉｏＰｈｏｔｏｍｅｔｅｒ  ６１３１（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社、日本国東京）を用いてＤＮＡ溶液の濃度を決定した。ＤＮＡ溶液の濃度は、ヌクレアーゼを含有しない水を用いて２０ｎｇ／μＬになるように調節した。
【０４９８】
次いで、肝臓のＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡ濃度を測定するため、ＴａｑＭａｎ  Ｆａｓｔ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ及びＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７５００配列検出システムを用いてリアルタイムＰＣＲを実施した。簡単に説明すると、抽出した５μＬのＤＮＡにＰＣＲ反応混合物を加えた。ＰＣＲ反応をＴａｋｋｅｎｂｅｒｇの条件に基づいて実行した。最初に５０℃で２分かけてウラシル−Ｎ−グリコシラーゼを活性化し、次いで９５℃で２０秒かけてポリメラーゼを活性化した。次いで、たとえばＡＢＩ  ７５００配列検出器中で、１サイクルにつき９５℃で３秒間及び６０℃で３２秒間にて次５５サイクルのＰＣＲ増幅を実行した。ＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡの平均レベルを算出した。ＨＢＶの全ゲノム配列を含有するプラスミドをＨＢＶ  ｃｃｃＤＮＡの定量化のための標準試料として使用した。使用される標準の範囲は、１．０Ｅ＋０２〜１．０Ｅ＋０５コピー数／１００ｎｇ  ＤＮＡであってよい。
【０４９９】
リアルタイムＰＣＲに使用されるプライマーとプローブは以下の通りであった。
【０５００】
【表６】
2019514401.tif 000008
【０５０１】
リアルタイムＰＣＲを使用して、実施例５及び実施例６に記載するように抗ＨＢＶエフェクターＲＮＡｉ分子の肝臓での生産及びＨＢＶ  ｍＲＮＡ転写物の阻害を定量した。
【０５０２】
結果：
簡潔性のために、ｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１及びｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１について得られた鍵となるデータポイントのみを提示する。
【０５０３】
食塩水で処置した動物のウイルス価は、１３週間の実験期間にわたって比較的一定のままであり（図７）、１Ｅ＋０８のＨＢＶ  ＤＮＡコピー数／ｍｌより大きかった。毎日のＥＴＶのみからなる処置アームは、血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルの２．６３ｌｏｇの減少を生じた。他の抗ウイルス薬なしでの投薬で、ｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１及びｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１は、対応する血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルの最大の減少を生じさせ、それぞれ２．１７ｌｏｇ及び１．８７ｌｏｇの低下であった。しかしながら、処置の６３日後に、ＨＢＶ  ＤＮＡレベルの小さな揺り戻しが見られた。また、毎日のエンテカビルとの組合せで、単回用量のｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１及びｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１は、アッセイの定量下限（ＬＬＯＱ）である３．７２ｌｏｇ未満に血清ＨＢＶ  ＤＮＡレベルを減少させた。ＨＢＶ  ＤＮＡレベルを正確に定量化することは難しいが、ウイルス負荷の低下は９１日の実験の終了まで減少が続いたようである。
【０５０４】
ｓ抗原（ＨＢｓＡｇ）は免疫抑制及びＨＢＶ慢性化の公知の寄与因子である。活動性の感染症で起こる高レベルのＨＢｓＡｇ発現は治癒の達成に向けての問題となると考えられている。「治癒」は、抗ＨＢｓＡｇ抗体の発現によって定義されるＨＢＶ感染患者のセロコンバージョンによって定義されることが多い。ｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１＋ＥＴＶまたはｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１＋ＥＴＶのいずれかによる感染キメラマウスの処置は、ＨＢｓＡｇレベルをそれぞれ２．１４ｌｏｇ及び１．８６ｌｏｇ減少させた（図８）。単剤療法としてのＥＴＶでの処置はＨＢｓＡｇレベルを０．４６ｌｏｇだけ減少させた。
【０５０５】
ｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１＋ＥＴＶでの処置はＨＢｅＡｇレベルを１．９０ｌｏｇ減少させ、ｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１＋ＥＴＶでの処置はＨＢｅＡｇレベルを１．４２ｌｏｇ減少させた。エンテカビルのみでの処置はＨＢｓＡｇレベルを０．３７ｌｏｇ減少させた（図９）。
【０５０６】
ＥＴＶとの併用処置に加えて、本研究では、ＰＥＧ−ＩＦＮと併用投与したときのｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１またはｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１のいずれかの組合せを試験した。週に２回与えられるＰＥＧ化インターフェロンからなるレジメンの最初のｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１またはｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１のいずれかの単回投与は、それぞれ２．６７及び３．２７ｌｏｇのＨＢＶ血清ＤＮＡレベルの有意な減少を生じさせた（図１０）。
【０５０７】
９１日の薬物処置の完結時にマウスを安楽死させ、肝臓を回収し、これらの組織からＤＮＡ及びＲＮＡを精製して、多数の肝細胞のパラメーターを調査した。たとえば、ＲＮＡ干渉剤として、ｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１は細胞中に存在するＨＢＶウイルス転写物のレベルを低下させることが期待される。
【０５０８】
ＲＮＡｉ誘発切断部位のそれぞれの近くに位置するプライマー／プローブセットを用いて、ＨＢＶ  ＲＮＡのレベルをＲＴ−ＱＰＣＲによって評価した（図１１）。ＰＥＧ化インターフェロンは単剤療法として強いレベルの活性を有していたが、ＨＢＶ  ＲＮＡレベルに対するエンテカビルの影響力は小さなものであり、１３週間の処置を通じておよそ５０％の低下を達成した。単剤療法としてｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１はウイルスＲＮＡの強い抑制を有し、ＨＢＶ転写物の９４％より大きい低下を生じさせた。２つの抗ウイルス剤のいずれかとのｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１の組合せはこの能力をさらに増強させ、９８．６％にも達する抑制レベルでウイルスＲＮＡを阻害した。
【０５０９】
定量ＰＣＲ（ｑｕａｎｔｉａｔｉｖｅ  ＰＣＲ）を用いて肝臓の検体からの細胞内ＨＢＶ  ＤＮＡ及びｃｃｃＤＮＡも評価した。エンテカビルまたはＰＥＧ化インターフェロンのいずれか単独での治療は、細胞内ＤＮＡレベルを２ｌｏｇ減少させることができた（図１２、左）。また、治療レジメン中へのｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１の単回の追加は、細胞内ＤＮＡレベルをさらに３ｌｏｇ低下させた。ＲＮＡ干渉は細胞内ＨＢＶ  ＤＮＡを直接攻撃しないが、ＲＮＡ及び対応する転写物の減少は逆転写プロセスがｐｇＲＮＡ鋳型をＤＮＡ中間体に変換する（ｃｏｖｅｒｔ）能力を低下させ、その減少に繋がっている可能性がある。実際、ＥＴＶを用いた１ｌｏｇの低下よりわずかに大きいｃｃｃＤＮＡの小さな低下が起こったが、ｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１の追加はｃｃｃＤＮＡレベルのさらなる低下を有意に引き起こさなかった（図１２、右）。
【０５１０】
ＰＸＢマウスの肝臓組織からのＲＮＡｉエフェクター分子の発現もＲＴ−ＱＰＣＲ（図１３）及び次世代シーケンシング（ＮＧＳ、図１４〜図１６）によって決定した。ＮＧＳのデータは、ｓｈｍｉＲから生産されたときに優勢なＲＮＡｉエフェクター種の数は２〜３に限定されることを示す（ｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈｍｉＲｘ３−ｖ１）。ｓｈＲＮＡから生産されたときにエフェクター種の数は劇的に増加する（ｓｓＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１及びｓｃＡＡＶ８−ＨＢＶ−ｓｈＲＮＡｘ３−ｖ１）。ｓｈｍｉＲ前駆体として、短鎖ＲＮＡ転写物は、Ｄｒｏｓｈａが最初の切断を行い、ＲＮＡｉデュプレックスの一方の末端を規定する上流のＲＮＡｉ経路に入る。この末端は特徴的な２ｎｔの３’オーバーハングを含有し、これが、ループを切断して最終のｓｉＲＮＡデュプレックスを生産するダイサーのための最適な基質となる。ｄｒｏｓｈａ及びダイサーによるプロセシングは非常に精密であり、そのため最小数の配列のみがディープシーケンシングを通じて見出される。他方、第一世代のｓｈＲＮＡは、配列内に組み込まれてＲＮＡｉデュプレックスの一端を規定する転写ターミネーター（すなわち、ポリＴ）に依拠する。この機構は精密でなく、２〜５ｎｔの３’オーバーハングを有するオーバーハングを生産し、これはダイサー媒介性の切断にとって最適ではない。ｄｉｃｅｒによる低い忠実度の切断の結果として、より大きい数の種がディープシーケンシングを通じて観察される。より重要なことに、（ｓｈｍｉＲと比べて）ｓｈＲＮＡから生産されるエフェクター種のこの広範な分布は、所望の種の活性を減少させることがあり、また効果的でない抗ＨＢＶ  ＲＮＡｉ分子の望まれない生産がオフターゲット作用の可能性を増加させ得る。
【０５１１】
当業者であれば、本開示の広い範囲から逸脱することなく、上述の実施形態に多数の変更及び／または改変を加えることができることを理解しよう。したがって、本発明の実施形態は、あらゆる点において例示であり、制限とはみなすべきではない。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５−１】
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【図１５−２】
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【図１６−１】
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【図１６−２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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