(57)【要約】  本発明は、全般に、治療化合物の分野、より詳細には、４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸（本明細書では「ＢＨＢＡ−００１」と称される）の結晶形態に関し、当該化合物は、中でも特に、（選択的）レチノイン酸受容体ベータ（ＲＡＲβ）（例えば、ＲＡＲβ２）アゴニストである。本発明はまた、そのような結晶形態を含む医薬組成物と、ＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）を（選択的に）活性化するための、そのような結晶形態及び組成物の、インビトロ及びインビボの両方における使用と、神経突起成長、神経突起伸長、及び／または神経突起再生を誘起または促進するための、そのような結晶形態及び組成物の、インビトロ及びインビボの両方における使用と、例えば、脊髄損傷などの神経学的損傷を含む、ＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）によって媒介され、ＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）の活性化等によって改善する疾患及び病状の治療における、そのような結晶形態及び組成物の、インビトロ及びインビボの両方における使用とにも関する。2019522650.tif 000037【選択図】なし
2019522650.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸の結晶形態であって、該結晶形態が形態４である、結晶形態。
【請求項２】
少なくとも１４．８°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する、請求項１に記載の結晶形態。
【請求項３】
少なくとも１４．８°±０．２°、及び２０．７°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する、請求項１に記載の結晶形態。
【請求項４】
少なくとも１４．８°±０．２°、２０．７°±０．２°、及び９．５°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する、請求項１に記載の結晶形態。
【請求項５】
少なくとも１４．８°±０．２°、２０．７°±０．２°、９．５°±０．２°、及び１６．４°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する、請求項１に記載の結晶形態。
【請求項６】
少なくとも１４．８°±０．２°、２０．７°±０．２°、９．５°±０．２°、１６．４°±０．２°、１３．１°±０．２°、２４．６°±０．２°、２６．７°±０．２°、及び２１．０°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する、請求項１に記載の結晶形態。
【請求項７】
少なくとも１４．８°±０．２°、２０．７°±０．２°、９．５°±０．２°、１６．４°±０．２°、１３．１°±０．２°、２４．６°±０．２°、２６．７°±０．２°、２１．０°±０．２°、１４．４°±０．２°、１２．４°±０．２°、１２．７°±０．２°、及び２８．１°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する、請求項１に記載の結晶形態。
【請求項８】
１７．０°±０．２°と２０．０°±０．２°との間の特徴的な散乱角（２θ）における任意のピークが、最も強いピークの約２％未満のピーク強度を有する、Ｘ線粉末回折を有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の結晶形態。
【請求項９】
実質的に図９に示されるようなＸ線粉末回折を有する、請求項１に記載の結晶形態。
【請求項１０】
約２６８±４℃に吸熱を含む示差走査熱量測定サーモグラムを有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の結晶形態。
【請求項１１】
実質的に図１０に示されるような示差走査熱量測定サーモグラムを有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の結晶形態。
【請求項１２】
４０±４℃と１００±４℃との間で約０．５％未満の重量損失を示す熱重量分析サーモグラムを有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の結晶形態。
【請求項１３】
実質的に図１１に示されるような熱重量分析サーモグラムを有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の結晶形態。
【請求項１４】
実質的に図１２に示されるような動的水蒸気収着の収着−脱着プロファイルを有する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の結晶形態。
【請求項１５】
実質的に図１３に示されるような動的水蒸気収着の質量取り込みプロファイルを有する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の結晶形態。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の結晶形態と、医薬的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、組成物。
【請求項１７】
４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸の他の結晶形態を実質的に含まない、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
組成物全体における（ａ）４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸の他の結晶形態（例えば、形態１、２、及び３）の総重量の、（ｂ）４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸の結晶形態４の重量との比が、約１：１０未満である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１９】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の結晶形態と、医薬的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤とを混合するステップを含む、組成物の調製方法。
【請求項２０】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の結晶形態の調製方法であって、
（ａ）４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸とエタノールとの混合物を加熱するステップ；
（ｂ）前記混合物を冷却するステップ；及び
（ｃ）前記混合物から前記結晶形態を単離するステップ
を順に含む、方法。
【請求項２１】
４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸とエタノールとの前記混合物が、固体４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸とエタノールとの混合物（例えば、スラリー）である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記加熱が、約４０℃から前記混合物の還流温度（例えば、約７８℃）の温度で行われる、請求項２０または２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記加熱が、約３０分〜約２４時間（例えば、約２時間）の期間行われる、請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記冷却が、約５℃〜約３０℃（例えば、約２０℃）の温度まで行われる、請求項２０〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記冷却の後に、（ｂ’）前記冷却された混合物を熟成させるステップを行う、請求項２０〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記熟成が、約３０分〜約２４時間（例えば、約１時間）の期間行われる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
インビトロまたはインビボにおける、レチノイン酸受容体β（ＲＡＲβ）の活性化方法であって、ＲＡＲβと、有効量の、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の結晶形態、または請求項１〜１５のいずれか一項に記載の結晶形態から得られる４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸とを接触させることを含む、方法。
【請求項２８】
インビトロまたはインビボにおける、ＲＡＲα及び／またはＲＡＲγとの関連での、レチノイン酸受容体β（ＲＡＲβ）の選択的活性化方法であって、ＲＡＲβと、有効量の、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の結晶形態、または請求項１〜１５のいずれか一項に記載の結晶形態から得られる４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸とを接触させることを含む、方法。
【請求項２９】
インビトロまたはインビボにおける、神経細胞における、レチノイン酸受容体β（ＲＡＲβ）の活性化方法であって、該細胞と、有効量の、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の結晶形態、または請求項１〜１５のいずれか一項に記載の結晶形態から得られる４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸とを接触させることを含む、方法。
【請求項３０】
インビトロまたはインビボにおける、神経細胞における、レチノイン酸受容体β（ＲＡＲβ）の選択的活性化方法であって、該細胞と、有効量の、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の結晶形態、または請求項１〜１５のいずれか一項に記載の結晶形態から得られる４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸とを接触させることを含む、方法。
【請求項３１】
神経突起成長、神経突起伸長、及び／または神経突起再生の誘起方法または促進方法であって、インビトロまたはインビボにおいて、神経細胞と、有効量の、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の結晶形態、または請求項１〜１５のいずれか一項に記載の結晶形態から得られる４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸とを接触させることを含む、方法。
【請求項３２】
療法による、ヒトまたは動物の体の治療方法に使用するための、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の結晶形態。
【請求項３３】
神経学的損傷；
中枢神経系（ＣＮＳ）の損傷；
末梢神経系（ＰＮＳ）の損傷；
神経損傷；
ＰＮＳの神経損傷；
ＣＮＳの神経損傷；
脊髄損傷；
外傷によって生じた脊髄損傷；
視神経損傷；
緑内障によって生じた視神経損傷；
神経障害；
ＰＮＳの神経障害；
ＣＮＳの神経障害；
脊髄の神経障害；
視神経の神経障害；
糖尿病性神経障害；
ＡＩＤＳ神経障害；
ハンセン病神経障害；
末梢の神経障害；
多発性神経障害、単神経障害、多発単神経炎、または自律神経障害；
神経変性障害；
認知障害、記憶機能障害（ｍｅｍｏｒｙ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ）、記憶欠損、老年認知症、アルツハイマー病、初期段階のアルツハイマー病、中間段階のアルツハイマー病、後期段階のアルツハイマー病、認知機能障害（ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ）、または軽度認知機能障害；
ハンチントン病；
パーキンソン病；
運動神経疾患；
局所麻痺；
ベル麻痺；
神経起因性（ｎｅｕｒａｌｌｙ−ｂａｓｅｄ）インポテンス；
前立腺全摘除後に神経外傷によって生じた神経起因性インポテンス；
麻痺；
単麻痺、四肢麻痺、または対麻痺；
神経学的損傷によって生じた神経学的障害；
神経障害によって生じた神経学的障害；または
神経障害によって生じた神経学的損傷
の治療方法に使用するための、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の結晶形態。
【請求項３４】
神経学的損傷；
中枢神経系（ＣＮＳ）の損傷；
末梢神経系（ＰＮＳ）の損傷；
神経損傷；
ＰＮＳの神経損傷；
ＣＮＳの神経損傷；
脊髄損傷；
外傷によって生じた脊髄損傷；
視神経損傷；
緑内障によって生じた視神経損傷；
神経障害；
ＰＮＳの神経障害；
ＣＮＳの神経障害；
脊髄の神経障害；
視神経の神経障害；
糖尿病性神経障害；
ＡＩＤＳ神経障害；
ハンセン病神経障害；
末梢の神経障害；
多発性神経障害、単神経障害、多発単神経炎、または自律神経障害；
神経変性障害；
認知障害、記憶機能障害、記憶欠損、老年認知症、アルツハイマー病、初期段階のアルツハイマー病、中間段階のアルツハイマー病、後期段階のアルツハイマー病、認知機能障害、または軽度認知機能障害；
ハンチントン病；
パーキンソン病；
運動神経疾患；
局所麻痺；
ベル麻痺；
神経起因性インポテンス；
前立腺全摘除後に神経外傷によって生じた神経起因性インポテンス；
麻痺；
単麻痺、四肢麻痺、または対麻痺；
神経学的損傷によって生じた神経学的障害；
神経障害によって生じた神経学的障害；または
神経障害によって生じた神経学的損傷
の治療のための医薬の製造における、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の結晶形態の使用。
【請求項３５】
神経学的損傷；
中枢神経系（ＣＮＳ）の損傷；
末梢神経系（ＰＮＳ）の損傷；
神経損傷；
ＰＮＳの神経損傷；
ＣＮＳの神経損傷；
脊髄損傷；
外傷によって生じた脊髄損傷；
視神経損傷；
緑内障によって生じた視神経損傷；
神経障害；
ＰＮＳの神経障害；
ＣＮＳの神経障害；
脊髄の神経障害；
視神経の神経障害；
糖尿病性神経障害；
ＡＩＤＳ神経障害；
ハンセン病神経障害；
末梢の神経障害；
多発性神経障害、単神経障害、多発単神経炎、または自律神経障害；
神経変性障害；
認知障害、記憶機能障害、記憶欠損、老年認知症、アルツハイマー病、初期段階のアルツハイマー病、中間段階のアルツハイマー病、後期段階のアルツハイマー病、認知機能障害、または軽度認知機能障害；
ハンチントン病；
パーキンソン病；
運動神経疾患；
局所麻痺；
ベル麻痺；
神経起因性インポテンス；
前立腺全摘除後に神経外傷によって生じた神経起因性インポテンス；
麻痺；
単麻痺、四肢麻痺、または対麻痺；
神経学的損傷によって生じた神経学的障害；
神経障害によって生じた神経学的障害；または
神経障害によって生じた神経学的損傷
の治療方法であって、治療上有効な量の、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の結晶形態、または請求項１〜１５のいずれか一項に記載の結晶形態から得られる４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸を、治療を必要とする対象に投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１６年６月２２日に出願の英国特許出願第１６１０８６７．２号に関連し、これに基づく優先権を主張し、当該文献の内容は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【０００２】
技術分野
本発明は、全般に、治療化合物の分野、より詳細には、４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸（本明細書では「ＢＨＢＡ−００１」と称される）の結晶形態に関し、当該化合物は、中でも特に、（選択的）レチノイン酸受容体ベータ（ＲＡＲβ）（例えば、ＲＡＲβ２）アゴニストである。本発明はまた、そのような結晶形態を含む医薬組成物と、ＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）を（選択的に）活性化するための、そのような結晶形態及び組成物の、インビトロ及びインビボの両方における使用と、神経突起成長、神経突起伸長、及び／または神経突起再生を誘起または促進するための、そのような結晶形態及び組成物の、インビトロ及びインビボの両方における使用と、例えば、脊髄損傷などの神経学的損傷を含む、ＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）によって媒介され、ＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）の活性化等によって改善する疾患及び病状の治療における、そのような結晶形態及び組成物の、インビトロ及びインビボの両方における使用とにも関する。
【背景技術】
【０００３】
本発明、及び本発明と関係する技術分野の状況を、より完全に説明及び開示するために、いくつかの特許及び出版物が本明細書に引用される。本明細書では、これらの参考文献のそれぞれは、それぞれの個々の参考文献が参照によって組み込まれることが具体的かつ個々に示されるのと同程度に、その全体が参照によって本開示に組み込まれる。
【０００４】
後に続く特許請求の範囲を含めて、本明細書全体にわたって、別段の記載がない限り、「ｃｏｍｐｒｉｓｅ（含む）」という言葉、ならびに「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ（含む）」及び「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」などの変形形態は、記載の整数もしくはステップ、または整数もしくはステップの群を含むが、任意の他の整数もしくはステップ、または整数もしくはステップの群を排除しないことを意味すると理解される。
【０００５】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」という単数形は、別段の記載がない限り、複数の参照対象を含むことに留意されなくてはならない。したがって、例えば、「医薬担体（ａ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｃａｒｒｉｅｒ）」に対する参照は、２つ以上のそのような担体の混合物、及び同様のものを含む。
【０００６】
本明細書では、範囲は、「約」で修飾された１つの特定の値から、及び／または「約」で修飾された別の特定の値までと表現されることが多い。そのような範囲が表現されるとき、別の実施形態は、一方の特定の値から、及び／またはもう一方の特定の値までを含む。同様に、前述の「約」を使用することによって、値が近似として表現されるとき、特定の値が、別の実施形態を形成すると理解される。
【０００７】
本開示は、本発明の理解に有用であり得る情報を含む。本明細書に提供される情報はいずれも、それが従来技術であるか、もしくはここに特許請求される発明と関連があると承認されるものではなく、または具体的もしくは暗示的に参照される出版物のいずれも、それが従来技術であると承認されるものではない。
【０００８】
神経損傷
これまでのところ、脊髄損傷（ＳＣＩ）、脳卒中、及び末梢神経損傷を含む神経損傷のための有効な治療は存在しない。発明者らは、新規のシグナル伝達機構であるレチノイドシグナル伝達経路を同定した。レチノイドシグナル伝達経路は、神経損傷モデルにおいて刺激されて、軸索伸長及び機能回復を引き起こし得る。例えば、Ｍａｄｅｎ  ａｎｄ  Ｃｏｒｃｏｒａｎ，２０００を参照のこと。この経路は、核で働いてＲＮＡ合成を推進し、それによって軸索伸長のためのタンパク質を産生するレチノイン酸受容体（ＲＡＲ）に対して、レチノイン酸（ＲＡ）が結合することによって活性化する。発明者らは、ＲＡＲβ２サブタイプが、このプロセスに特異的に関与していることを示した。
【０００９】
レチノイドシグナル伝達及び神経突起伸長
脊髄損傷の後、中枢神経系（ＣＮＳ）神経細胞の軸索伸長が失われる原因は、少なくとも３つ存在する。第１に、Ｎｏｇｏ−Ａ、ミエリン関連糖タンパク質（ＭＡＧ）、及びオリゴデンドロサイトミエリン糖タンパク質（Ｏｍｇｐ）を含む伸長阻害分子が存在すること（例えば、Ｈｅ  ａｎｄ  Ｋｏｐｒｉｖｉｃａ，２００４を参照のこと）。第２に、伸長促進因子が不足していること。伸長促進因子は、インビトロにおいて神経突起伸長を促進し、損傷した脊髄に投与されると、いくらかの軸索伸長を誘導する能力を有していることがよく知られている（例えば、Ｓｃｈｎｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４、Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００４を参照のこと）。第３に、神経細胞の損傷によって、適切な「伸長プログラム」が失われること（例えば、Ｋｗｏｎ  ａｎｄ  Ｔｅｔｚｌａｆｆ，２００１を参照のこと）。そのような伸長プログラムを誘導することができる因子の１つは、ＲＡシグナル伝達である（例えば、Ｑｕｉｎｎ  ａｎｄ  Ｄｅ  Ｂｏｎｉ，１９９１を参照のこと）。これは、ＲＡＲ及びレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）によって媒介され、それらの両方が、３つのサブタイプ（α、β、及びγ、ならびにさまざまなアイソフォーム）を有している（例えば、Ｂａｓｔｉｅｎ  ａｎｄ  Ｒｏｃｈｅｔｔｅ−Ｅｇｌｙ，２００４を参照のこと）。ＲＡが、ＲＡＲ／ＲＸＲヘテロ２量体に結合すると、それに続いて当該ヘテロ２量体が、標的遺伝子の制御領域に位置するレチノイン酸応答配列（ＲＡＲＥ）に結合して転写が生じる（例えば、Ｂａｓｔｉｅｎ  ａｎｄ  Ｒｏｃｈｅｔｔｅ−Ｅｇｌｙ，２００４を参照のこと）。
【００１０】
ＲＡＲβ２シグナル伝達は、神経突起伸長を媒介する
レチノイドシグナル伝達は、胚の発生に重要である。発生の間に、神経系においてＲＡが欠乏すると、例えば、ＲＡ欠乏性の胚では、神経突起伸長がうまくいかない（例えば、Ｍａｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６、Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８を参照のこと）。神経細胞にレチノイド媒介性の神経突起伸長が生じるには、ＲＡＲβシグナル伝達が必要である一方で、ＲＡＲαシグナル伝達またはＲＡＲγシグナル伝達は効果を有さないことを、一連のＲＡＲアゴニストを使用することによって、発明者らは示した（例えば、Ｃｏｒｃｏｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００を参照のこと）。より詳細には、この効果を媒介するのは、ＲＡＲβ２の活性化であり（例えば、Ｃｏｒｃｏｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００を参照のこと）、これは、そのリガンドによって自己制御されている（例えば、Ｌｅｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２を参照のこと）。レチノイドによってＲＡＲβ２が活性化すると、培養された胚後根神経節（ＤＲＧ）、脊髄、及び成体ＤＲＧに神経突起伸長が生じる（例えば、Ｃｏｒｃｏｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００、Ｃｏｒｃｏｒａｎ  ａｎｄ  Ｍａｄｅｎ，１９９９、Ｓｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００６、Ｃｏｒｃｏｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２を参照のこと）。げっ歯類の培養成体脊髄外植片（通常、この受容体を発現しない）にＲＡＲβ２を形質導入すると、神経突起伸長が生じる（例えば、Ｃｏｒｃｏｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２を参照のこと）。
【００１１】
ＲＡＲβ２シグナル伝達は、軸索伸長を媒介する
軸索伸長におけるＲＡＲβシグナル伝達の重要性は、遺伝子が欠失したＲＡＲβ欠損マウスにおいて試験される。末梢神経破壊モデルでは、ＤＲＧ神経細胞においてＲＡＲβ２を発現する正常マウスと比較して、軸索伸長が妨害される（例えば、Ｃｏｒｃｏｒａｎ  ａｎｄ  Ｍａｄｅｎ，１９９９、Ｓｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００６を参照のこと）。
【００１２】
さらに、インビボにおける軸索伸長にはＲＡＲβ２の発現が必須であることを、脊髄損傷モデルにおいてＲＡＲβ２を過剰発現させることによって示すことができる。げっ歯類の裂離モデル（末梢感覚軸索の軸索損傷により、前足に麻痺を有する）では、損傷したＤＲＧの神経細胞に、ＲＡＲβ２を過剰発現して導入すると、後根侵入部（ＤＲＥＺ）を横断し、脊髄に戻って軸索伸長が生じることで、機能性回復を引き起こす（例えば、Ｗｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００６を参照のこと）。
【００１３】
別の脊髄損傷モデルは、皮質脊髄路（ＣＳＴ）が切断されているものである。こうしたＣＳＴ神経細胞の細胞体は、脳に位置する。ＣＳＴは、脊髄の後柱において主要な下行路を形成しており、後柱が損傷すると、なんらかの運動課題に機能障害が生じる。ＣＳＴ損傷は、げっ歯類において、Ｃ４レベルの脊髄破壊によって達成することができる。この結果として、前足の機能が損なわれる。成体のＣＳＴ神経細胞において、レンチウイルスベクターによって、ＲＡＲβ２を過剰発現させると、ＣＳＴ軸索の伸長が生じ、前足の機能が回復することが最近示された（例えば、Ｙｉｐ  ｅｔ  ａｌ．，２００６を参照のこと）。
【００１４】
発明者らは、ＲＡＲβアゴニストが、神経損傷の治療において有用である可能性が高いことを今ここに示した。ＲＡＲβアゴニストは、神経損傷モデルにおいて軸索伸長を引き起こし、機能回復が生じる。こうした知見を示す研究については、後述の実施例において、より詳細に記載される。
【００１５】
Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００５では、ＲＡＲβ２アゴニスト活性を有するとされる、ある特定の４，４’−ビフェニルカルボン酸化合物について説明されている。
【００１６】
Ｋｉｋｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００では、ＲＡＲαアゴニスト活性を有するとされる、ある特定のテトラヒドロ−テトラメチル−２−キノキサリン化合物について説明されている。
【００１７】
Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００では、ＲＡＲαアゴニスト活性を有するとされる、ある特定のベンゾフラニル−ピロール化合物及びベンゾチオフェニル−ピロール化合物について説明されている。
【００１８】
Ｓｅｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００４では、急性及び慢性の同種移植片拒絶の予防における、ＲＡＲαアゴニストであるＥＲ−３８９２５の使用について説明されている。
【００１９】
Ｔａｇａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００ａ、Ｔａｇａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００ｂ、及びＴａｇａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００２ではすべて、レチノイン酸受容体アゴニスト作用を示すとされる、ある特定の化合物について説明されている。
【００２０】
Ｋｉｋｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００１では、レチノイン酸の活性を有するとされる、ある特定の化合物について説明されている。
【００２１】
Ｔｓｕｄａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９では、頻尿及び尿失禁の治療において有用とされる、ある特定の化合物について説明されている。
【００２２】
Ｃａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３及びＣａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００５では、カスパーゼの活性化因子、及びアポトーシスの誘導因子とされる、ある特定の化合物について説明されている。
【００２３】
Ｏｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９では、ＲＡＲβ２受容体に対する活性を有するとされる、ある特定の化合物について説明されている。
【００２４】
ＢＨＢＡ−００１
Ｂｏｒｔｈｗｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６では、ある特定のビシクロヘテロアリール−ヘテロアリール−安息香酸（ＢＨＢＡ）化合物、ＲＡＲβ２（例えば、ＲＡＲβ２）を（選択的に）活性化するそれらの活性、及び例えば、脊髄損傷などの神経学的損傷を含む、ＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）によって媒介される疾患及び病状の治療におけるそれらの使用について説明されている。
【００２５】
Ｂｏｒｔｈｗｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６では、その中の合成１においてＢＨＢＡ−００１の調製について説明されている。最後のステップでは、ＬｉＯＨ水溶液で処理することによって、メチルエステルを脱保護した。得られた混合物を室温まで冷却し、ＨＣｌで酸性化し、得られた固体を濾過によって集めた。固体をＭｅＯＨに溶解し、蒸発乾固して、ＢＨＢＡ−００１を「白色固体」として得た。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２６】
本発明は、４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸（以下に示され、本明細書では「ＢＨＢＡ−００１」と称される）の結晶形態に関する。
【００２７】
【化１】
2019522650.tif 000003
【００２８】
本明細書に記載されるように、ＢＨＢＡ−００１の４つの異なる結晶形態が同定されている（すなわち、形態１、２、３、及び４）。
【００２９】
本発明の１つの態様は、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態である。
【００３０】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態は、本明細書に記載の形態１である。
【００３１】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態は、本明細書に記載の形態２である。
【００３２】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態は、本明細書に記載の形態３である。
【００３３】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態は、本明細書に記載の形態４である。
【００３４】
特に、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、他の形態よりも（実質的に）良好な物理化学的特性（例えば、無水、低溶媒残留、低吸湿性、長期安定性、適切な粒径等）を有する。
【００３５】
本発明の別の態様は、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）と、医薬的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、組成物（例えば、医薬組成物）に関する。
【００３６】
本発明の別の態様は、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）と、医薬的に許容可能な担体または希釈剤とを混合するステップを含む、組成物（例えば、医薬組成物）の調製方法に関する。
【００３７】
本発明の別の態様は、インビトロまたはインビボにおける、レチノイン酸受容体β（ＲＡＲβ）（例えば、ＲＡＲβ２）の活性化方法における、例えば、ＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む方法における、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）の使用に関する。
【００３８】
本発明の別の態様は、インビトロまたはインビボにおける、（例えば、ＲＡＲα及び／またはＲＡＲγとの関連での）レチノイン酸受容体β（ＲＡＲβ）（例えば、ＲＡＲβ２）の選択的活性化方法における、例えば、ＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む方法における、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）の使用に関する。
【００３９】
本発明の別の態様は、インビトロまたはインビボにおける、神経細胞における、レチノイン酸受容体β（ＲＡＲβ）（例えば、ＲＡＲβ２）の活性化方法における、例えば、該細胞と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む方法における、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態の使用に関する。
【００４０】
本発明の別の態様は、インビトロまたはインビボにおける、神経細胞における、レチノイン酸受容体β（ＲＡＲβ）（例えば、ＲＡＲβ２）の選択的活性化方法における、例えば、該細胞と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む方法における、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態の使用に関する。
【００４１】
本発明の別の態様は、神経突起成長、神経突起伸長、及び／または神経突起再生の誘起方法または促進方法における、例えば、インビトロまたはインビボにおける、神経細胞と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む方法における、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）の使用に関する。
【００４２】
本発明の別の態様は、療法による、ヒトまたは動物の体の治療方法に使用するための、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）に関する。
【００４３】
本発明の別の態様は、治療に使用するための医薬の製造における、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）の使用に関する。
【００４４】
本発明の別の態様は、治療上有効な量の、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１を、好ましくは医薬組成物の形態で、治療を必要とする対象に投与することを含む、治療方法に関する。
【００４５】
１つの実施形態では、治療は、例えば：
神経学的損傷；
中枢神経系（ＣＮＳ）の損傷；
末梢神経系（ＰＮＳ）の損傷；
神経損傷；
ＰＮＳの神経損傷；
ＣＮＳの神経損傷；
脊髄損傷；
外傷によって生じた脊髄損傷；
視神経損傷；
緑内障によって生じた視神経損傷；
神経障害；
ＰＮＳの神経障害；
ＣＮＳの神経障害；
脊髄の神経障害；
視神経の神経障害；
糖尿病性神経障害（すなわち、糖尿病と関連する神経障害）；
ＡＩＤＳ神経障害（すなわち、ＡＩＤＳと関連する神経障害）；
ハンセン病神経障害（すなわち、ハンセン病と関連する神経障害）；
末梢の神経障害（例えば、多発性神経障害、単神経障害、多発単神経炎、または自律神経障害）；
神経変性障害；
認知障害、記憶機能障害（ｍｅｍｏｒｙ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ）、記憶欠損、老年認知症、アルツハイマー病、初期段階のアルツハイマー病、中間段階のアルツハイマー病、後期段階のアルツハイマー病、認知機能障害（ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ）、または軽度認知機能障害；
ハンチントン病；
パーキンソン病；
運動神経疾患；
局所麻痺；
ベル麻痺；
神経起因性（ｎｅｕｒａｌｌｙ−ｂａｓｅｄ）インポテンス；
前立腺全摘除後に神経外傷によって生じた神経起因性インポテンス；
麻痺、例えば、単麻痺、四肢麻痺、または対麻痺；
神経学的損傷によって生じた神経学的障害；
神経障害によって生じた神経学的障害；または
神経障害によって生じた神経学的損傷
の治療である。
【００４６】
本発明の別の態様は、（ａ）好ましくは、医薬組成物として、適した容器及び／または適した包装を用いて提供される、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態と、（ｂ）使用説明書、例えば、化合物の投与の仕方に関する書面の説明書とを含む、キットに関する。
【００４７】
本発明の別の態様は、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）の調製方法に関する。
【００４８】
本発明の別の態様は、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）の調製方法によって得ることができる、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）に関する。
【００４９】
本発明の別の態様は、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）の調製方法によって得られる、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）に関する。
【００５０】
当業者によって理解されるように、本発明の１つの態様の特徴及び好ましい実施形態は、本発明の他の態様にも関連する。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】図１は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を含有するサンプルについてのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【図２】図２は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を含有するサンプルについての示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
【図３】図３は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を含有するサンプルについての熱重量分析（ＴＧＡ）サーモグラム及び示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムの両方を示す。
【図４】図４は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を含有するサンプルについての動的水蒸気収着（ＤＶＳ）の収着−脱着プロットを示す。
【図５】図５は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を含有するサンプルについての動的水蒸気収着（ＤＶＳ）の質量取り込みプロットを示す。
【図６】図６は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を含有するサンプルについての偏光顕微鏡法（ＰＬＭ）顕微鏡写真を示す。
【図７】図７は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態２を含有するサンプルについてのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【図８】図８は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態３を含有するサンプルについてのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【図９】図９は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含有するサンプルについてのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【図１０】図１０は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含有するサンプルについての示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
【図１１】図１１は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含有するサンプルについての熱重量分析（ＴＧＡ）サーモグラム及び示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムの両方を示す。
【図１２】図１２は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含有するサンプルについての動的水蒸気収着（ＤＶＳ）の収着−脱着プロットを示す。
【図１３】図１３は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含有するサンプルについての動的水蒸気収着（ＤＶＳ）の質量取り込みプロットを示す。
【図１４】図１４は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含有するサンプルについての偏光顕微鏡法（ＰＬＭ）顕微鏡写真を示す。
【図１５】図１５は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１、２、３、及び４を含有するサンプルについてのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンのオーバーレイを示す。
【発明を実施するための形態】
【００５２】
発明の詳細な説明
ＢＨＢＡ−００１の結晶形態
ＢＨＢＡ−００１の特定の結晶形態（例えば、多形体）（例えば、本明細書に記載の形態１、２、３、及び４）を含む、結晶性ＢＨＢＡ−００１は、例えば安定性及び／または溶解性及び／またはバイオアベイラビリティ及び／または不純物プロファイル及び／または濾過特性及び／または乾燥特性及び／または吸湿性、及び／または取り扱いの容易性及び／またはそれらの微粉化の容易性、ならびに／または錠剤及び／もしくはカプセルへの製剤化の容易性に関して、有利な特性を有し得る。
【００５３】
したがって、本発明の１つの態様は、４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸（以下に示され、本明細書では「ＢＨＢＡ−００１」と称される）の結晶形態に関する。
【００５４】
【化２】
2019522650.tif 000004
【００５５】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態は、本明細書に記載の形態１である。
【００５６】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態は、本明細書に記載の形態２である。
【００５７】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態は、本明細書に記載の形態３である。
【００５８】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態は、本明細書に記載の形態４である。
【００５９】
ＢＨＢＡ−００１の様々な結晶形態は、例えばＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、及び他の固体状態法に関して、それらの固有の固体状態の特徴によって同定することができる。結晶形態の水分含量または溶媒含量に関するさらなる特徴付けは、様々な日常的な方法のいずれか、例えば、熱重量分析（ＴＧＡ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、動的水蒸気収着（ＤＳＶ）、及び他の技術によって測定することができる。
【００６０】
特に、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、他の形態よりも（実質的に）良好な物理化学的特性（例えば、無水、低溶媒残留、低吸湿性、長期安定性、適切な粒径等）を有する。
【００６１】
結晶形態１
本発明の１つの態様は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１に関する。
【００６２】
図１は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を含有するサンプルについてのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【００６３】
図２は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を含有するサンプルについての示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
【００６４】
図３は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を含有するサンプルについての熱重量分析（ＴＧＡ）サーモグラム及び示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムの両方を示す。
【００６５】
図４は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を含有するサンプルについての動的水蒸気収着（ＤＶＳ）の収着−脱着プロットを示す。
【００６６】
図５は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を含有するサンプルについての動的水蒸気収着（ＤＶＳ）の質量取り込みプロットを示す。
【００６７】
図６は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を含有するサンプルについての偏光顕微鏡法（ＰＬＭ）顕微鏡写真を示す。
【００６８】
ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１の物理的特性を以下の表に要約する。
【００６９】
【表１】
2019522650.tif 000005
【００７０】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１は、少なくとも１３．１°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【００７１】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１は、少なくとも１３．１°±０．２°、２７．０°±０．２°、及び１７．５°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【００７２】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１は、少なくとも１３．１°±０．２°、２７．０°±０．２°、１７．５°±０．２°、及び２４．０°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【００７３】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１は、少なくとも１３．１°±０．２°、２７．０°±０．２°、１７．５°±０．２°、２４．０°±０．２°、８．８°±０．２°、１８．０°±０．２°、及び１６．３°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【００７４】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１は、少なくとも１３．１°±０．２°、２７．０°±０．２°、１７．５°±０．２°、２４．０°±０．２°、８．８°±０．２°、１８．０°±０．２°、１６．３°±０．２°、１０．９°±０．２°、８．２°±０．２°、及び２１．６°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【００７５】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１は、少なくとも１３．１°±０．２°、２７．０°±０．２°、１７．５°±０．２°、２４．０°±０．２°、８．８°±０．２°、１８．０°±０．２°、１６．３°±０．２°、１０．９°±０．２°、８．２°±０．２°、２１．６°±０．２°、１２．２°±０．２°、１６．６°±０．２°、及び１７．２°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【００７６】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１は、実質的に図１に示されるようなＸ線粉末回折を有する。
【００７７】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１は、２７７±４℃に吸熱を含む示差走査熱量測定サーモグラムを有する。
【００７８】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１は、実質的に図２に示されるような示差走査熱量測定サーモグラムを有する。
【００７９】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１は、４０±４℃と１００±４℃との間で約２．４±２％の重量損失を示す熱重量分析サーモグラムを有する。
【００８０】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１は、２１９±４℃の開始温度で約２．７±２％の重量損失を示す熱重量分析サーモグラムを有する。
【００８１】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１は、２５６±４℃の開始温度で約１．１±２％の重量損失を示す熱重量分析サーモグラムを有する。
【００８２】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１は、実質的に図３に示されるような熱重量分析サーモグラムを有する。
【００８３】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１は、実質的に図４に示されるような動的水蒸気収着の収着−脱着プロファイルを有する。
【００８４】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１は、実質的に図５に示されるような動的水蒸気収着の質量取り込みプロファイルを有する。
【００８５】
結晶形態２
本発明の１つの態様は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態２に関する。
【００８６】
図７は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態２を含有するサンプルについてのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【００８７】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態２は、少なくとも１５．６°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【００８８】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態２は、少なくとも１５．６°±０．２°、１０．４°±０．２°、１２．７°±０．２°、及び１７．４°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【００８９】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態２は、少なくとも１５．６°±０．２°、１０．４°±０．２°、１２．７°±０．２°、１７．４°±０．２°、及び８．７°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【００９０】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態２は、少なくとも１５．６°±０．２°、１０．４°±０．２°、１２．７°±０．２°、１７．４°±０．２°、８．７°±０．２°、１１．９°±０．２°、２１．３°±０．２°、及び２６．７°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【００９１】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態２は、実質的に図７に示されるようなＸ線粉末回折を有する。
【００９２】
結晶形態３
本発明の１つの態様は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態３に関する。
【００９３】
図８は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態３を含有するサンプルについてのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【００９４】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態３は、少なくとも１４．２°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【００９５】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態３は、少なくとも１４．２°±０．２°及び１１．１°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【００９６】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態３は、少なくとも１４．２°±０．２°、１１．１°±０．２°、及び１６．１°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【００９７】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態３は、少なくとも１４．２°±０．２°、１１．１°±０．２°、１６．１°±０．２°、及び１６．８°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【００９８】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態３は、少なくとも１４．２°±０．２°、１１．１°±０．２°、１６．１°±０．２°、１６．８°±０．２°、９．５°±０．２°、１８．９°±０．２°、及び７．１°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【００９９】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態３は、少なくとも１４．２°±０．２°、１１．１°±０．２°、１６．１°±０．２°、１６．８°±０．２°、９．５°±０．２°、１８．９°±０．２°、７．１°±０．２°、１２．４°±０．２°、２１．５°±０．２°、及び１２．１°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【０１００】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態３は、実質的に図８に示されるようなＸ線粉末回折を有する。
【０１０１】
結晶形態４
本発明の１つの態様は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４に関する。
【０１０２】
図９は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含有するサンプルについてのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【０１０３】
図１０は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含有するサンプルについての示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
【０１０４】
図１１は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含有するサンプルについての熱重量分析（ＴＧＡ）サーモグラム及び示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムの両方を示す。
【０１０５】
図１２は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含有するサンプルについての動的水蒸気収着（ＤＶＳ）の収着−脱着プロットを示す。
【０１０６】
図１３は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含有するサンプルについての動的水蒸気収着（ＤＶＳ）の質量取り込みプロットを示す。
【０１０７】
図１４は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含有するサンプルについての偏光顕微鏡法（ＰＬＭ）顕微鏡写真を示す。
【０１０８】
ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４の物理的特性を以下の表に要約する。
【０１０９】
【表２】
2019522650.tif 000006
【０１１０】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、少なくとも１４．８°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【０１１１】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、少なくとも１４．８°±０．２°、及び２０．７°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【０１１２】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、少なくとも１４．８°±０．２°、２０．７°±０．２°、及び９．５°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【０１１３】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、少なくとも１４．８°±０．２°、２０．７°±０．２°、９．５°±０．２°、及び１６．４°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【０１１４】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、少なくとも１４．８°±０．２°、２０．７°±０．２°、９．５°±０．２°、１６．４°±０．２°、１３．１°±０．２°、２４．６°±０．２°、２６．７°±０．２°、及び２１．０°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【０１１５】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、少なくとも１４．８°±０．２°、２０．７°±０．２°、９．５°±０．２°、１６．４°±０．２°、１３．１°±０．２°、２４．６°±０．２°、２６．７°±０．２°、２１．０°±０．２°、１４．４°±０．２°、１２．４°±０．２°、１２．７°±０．２°、及び２８．１°±０．２°に特徴的な散乱角（２θ）を示すＸ線粉末回折を有する。
【０１１６】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、１７．０°±０．２°と２０．０°±０．２°との間の特徴的な散乱角（２θ）を示さない（例えば、ピーク強度が、最も強いピークの約３％未満である）Ｘ線粉末回折を有する。
【０１１７】
以下の表に示すように、形態１、２、及び３のそれぞれは、１６．８°〜２０．２°の範囲に大きなピークを有する。対照的に、形態４は、その範囲に３％以上の強度のピークを有さない。例えば図１５も参照のこと。
【０１１８】
【表３】
2019522650.tif 000007
【０１１９】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、１７．０°±０．２°と２０．０°±０．２°との間の特徴的な散乱角（２θ）における任意のピークが、最も強いピークの約３％未満、好ましくは最も強いピークの約２％未満、より好ましくは最も強いピークの約１．５％未満のピーク強度を有する、Ｘ線粉末回折を有する。
【０１２０】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、１０．０°±０．２°と１２．０°±０．２°との間の特徴的な散乱角（２θ）を示さない（例えば、ピーク強度が、最も強いピークの約３％未満である）Ｘ線粉末回折を有する。
【０１２１】
以下の表に示すように、形態１、２、及び３のそれぞれは、９．８°〜１２．２°の範囲に大きなピークを有する。対照的に、形態４は、その範囲に３．０％以上の強度のピークを有さない。例えば図１５も参照のこと。
【０１２２】
【表４】
2019522650.tif 000008
【０１２３】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、１０．０°±０．２°と１２．０°±０．２°との間の特徴的な散乱角（２θ）における任意のピークが、最も強いピークの約３％未満、好ましくは最も強いピークの約２％未満、より好ましくは最も強いピークの約１％未満のピーク強度を有する、Ｘ線粉末回折を有する。
【０１２４】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、実質的に図９に示されるようなＸ線粉末回折を有する。
【０１２５】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、約２６８±４℃に吸熱を含む示差走査熱量測定サーモグラムを有する。
【０１２６】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、実質的に図１０に示されるような示差走査熱量測定サーモグラムを有する。
【０１２７】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、４０±４℃と１００±４℃との間で約０．５％未満の重量損失を示す熱重量分析サーモグラムを有する。
【０１２８】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、実質的に図１１に示されるような熱重量分析サーモグラムを有する。
【０１２９】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、実質的に図１２に示されるような動的水蒸気収着の収着−脱着プロファイルを有する。
【０１３０】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、実質的に図１３に示されるような動的水蒸気収着の質量取り込みプロファイルを有する。
【０１３１】
結晶形態の比較
結晶形態１、２、３、及び４のそれぞれは、異なる特徴的な散乱角を示すＸＲＰＤパターンを有する。例えば図１５を参照のこと。
【０１３２】
ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１は、２．４％（ｗ／ｗ）の残留溶媒を含有し、吸湿性であり（０％と９５％相対湿度（ＲＨ）との間の８．７％（ｗ／ｗ）の取り込みを有する）、固体であり、その固体は、（より）小さな粒子からなる。
【０１３３】
ＢＨＢＡ−００１の結晶形態２（エタノールから得られる）は、エタノールを含有することが見出され、エタノール溶媒和物と特徴付けられた。
【０１３４】
ＢＨＢＡ−００１の結晶形態３（酢酸から得られる）は、酢酸を含有することが見出され、酢酸溶媒和物と特徴付けられた。
【０１３５】
ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、無水であり、残留溶媒をほとんどまたは全く含有せず、低吸湿性を有し、周囲条件で何ヶ月間も安定であり、その固体は、（より）大きな粒子からなる。
【０１３６】
２５０℃を超えると、形態４は融解し、再結晶して形態１が得られる。
【０１３７】
その（実質的に）より良好な物理化学的特性（例えば、無水、低溶媒残留、低吸湿性、長期安定性、適切な粒径等）に基づき、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、製剤候補として開発に最も適している。
【０１３８】
ＢＨＢＡ−００１の化学合成
ＢＨＢＡ−００１の調製のための１つの合成経路は、Ｂｏｒｔｈｗｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６に記載され、以下のスキーム１に示される。
スキーム１
【０１３９】
【化３】
2019522650.tif 000009
【０１４０】
このアプローチでは、２，５−ジメチルフェノール（１）をパラホルムアルデヒドと反応させて、２−ヒドロキシ−３，６−ジメチルベンズアルデヒド（２）を得て、これを次いで、ｔｅｒｔ−ブチル２−ブロモアセテートと反応させて、ｔｅｒｔ−ブチル４，７−ジメチルベンゾフラン−２−カルボキシレート（３）を得て、脱保護して４，７−ジメチルベンゾフラン−２−カルボン酸（４）を得る。次いで、この酸をメチル４−（Ｎ’−ヒドロキシカルバムイミドイル）ベンゾエート（５）と反応させて、メチル４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）ベンゾエート（６）を得て、これを次いで脱保護して標的化合物４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸（ＢＨＢＡ−００１）を得る。
【０１４１】
この合成経路の例を以下に説明する。
【０１４２】
ステップ１：２−ヒドロキシ−３，６−ジメチルベンズアルデヒド（２）
【０１４３】
【化４】
2019522650.tif 000010
【０１４４】
無水ＭｅＣＮ（５５０ｍＬ）中、２，５−ジメチルフェノール（１）（２０ｇ、１６０ｍｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（３４ｇ、１．１ｍｏｌ）、ＭｇＣｌ２（２３．４ｇ、２４６ｍｍｏｌ）、及びＥｔ３Ｎ（８６ｍＬ、６１０ｍｍｏｌ）の懸濁液を還流下で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して体積を半減させ、次いで、Ｅｔ２Ｏ（２００ｍＬ）と１ＭのＨＣｌ（２００ｍＬ）との間で分配した。水相をＥｔ２Ｏ（４００ｍＬ）でさらに抽出し、次いで、合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過した。溶液を減圧下で濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（３３０ｇ、イソヘキサン中０〜２０％Ｅｔ２Ｏ）によって精製することで、表題化合物（２）（８．６ｇ、３５％）を黄色の固体として得た：１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ： １２．１２ （１Ｈ， ｓ）， １０．２９ （１Ｈ， ｓ）， ７．２５ （１Ｈ， ｄ）， ６．６１ （１Ｈ， ｄ）， ２．５６ （３Ｈ， ｓ）， ２．２０ （３Ｈ， ｓ）。
【０１４５】
ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル４，７−ジメチルベンゾフラン−２−カルボキシレート（３）
【０１４６】
【化５】
2019522650.tif 000011
【０１４７】
無水ＤＭＦ（４０ｍＬ）中、２−ヒドロキシ−３，６−ジメチルベンズアルデヒド（２）（８．６ｇ、５７ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１９．８ｇ、１４３ｍｍｏｌ）の撹拌した懸濁液に、ｔｅｒｔ−ブチル２−ブロモアセテート（１０．６ｍＬ、７１．５ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応混合物を還流下で２０時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）との間で混合物を分配し、水相をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）でさらに抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し（５×１００ｍＬ）、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（３３０ｇ、ジクロロメタン（ＤＣＭ）中２０％ＭｅＯＨ）によって精製することで、表題化合物（３）（１２．３ｇ、収率８７％）を赤色の油として得た：１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ： ７．４２ （１Ｈ， ｓ）， ７．０４ （２Ｈ， ｄｄ）， ８．３３ （１Ｈ， ｄ）， ２．５２ （３Ｈ， ｓ）， ２．５０ （３Ｈ， ｓ）， １．６３ （９Ｈ， ｓ）。
【０１４８】
ステップ３：４，７−ジメチルベンゾフラン−２−カルボン酸（４）
【０１４９】
【化６】
2019522650.tif 000012
【０１５０】
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中、ｔｅｒｔ−ブチル４，７−ジメチルベンゾフラン−２−カルボキシレート（３）（１２．３ｇ、４９．８ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（１９．２ｍＬ、２４９ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。添加の後、混合物を室温まで温め、２０時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残留物を、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）と１ＭのＨＣｌ（１００ｍＬ）との間で分配した。水相をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）でさらに抽出し、合わせた有機相をブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、次いで、減圧下で濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解し、次いで、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２００ｍＬ）で抽出した。濃ＨＣｌを添加することによって、水溶液を酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で抽出した。有機溶液を減圧下で濃縮し、トルエンと同時蒸発させることで、表題化合物（４）（７．７ｇ、収率８１％）を薄茶色の固体として得た：ｍ／ｚ １９０ ［Ｍ＋Ｈ］＋ （ＥＳ＋）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ： １３．４８ （１Ｈ， ｓ）， ７．７２ （１Ｈ， ｓ）， ７．１１ （２Ｈ， ｄｄ）， ２．４７ （３Ｈ， ｓ）， ２．４４ （３Ｈ， ｓ）。
【０１５１】
ステップ４：メチル４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）ベンゾエート（６）
【０１５２】
【化７】
2019522650.tif 000013
【０１５３】
無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（２５ｍＬ）中、４，７−ジメチルベンゾフラン−２−カルボン酸（４）（３．０ｇ、１６ｍｍｏｌ）、メチル４−（Ｎ’−ヒドロキシカルバムイミドイル）ベンゾエート（５）（３．１ｇ、１６ｍｍｏｌ）、及びＥｔ３Ｎ（１１ｍＬ、７９ｍｍｏｌ）の混合物に、０℃で、ＥｔＯＡｃ中の２−プロパンホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）の溶液（５０％）（２３．２ｍＬ、３９．４ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。混合物を０℃で１０分間撹拌し、次いで、９０℃まで温め、１８時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、氷水（１５０ｍＬ）へと注ぎ入れた。固体を収集し、冷却したＥｔＯＡｃで洗浄し、吸引下で乾燥させた。この材料を、ＭｅＯＨを用いたトリチュレートによって精製し、減圧下で乾燥させることで、表題化合物（６）（３．６ｇ、収率６５％）を薄赤色の固体として得た：ｍ／ｚ ３４９ ［Ｍ＋Ｈ］＋ （ＥＳ＋）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ： ８．２９−８．２６ （３Ｈ， ｍ）， ８．１９ （２Ｈ， ｄ）， ７．２９ （１Ｈ， ｄ）， ７．１３ （１Ｈ， ｄ）， ３．９２ （３Ｈ， ｓ）， ２．５６ （３Ｈ， ｓ）， ２．５４ （３Ｈ， ｓ）。
【０１５４】
ステップ５：４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）安息香酸（ＢＨＢＡ−００１）
【０１５５】
【化８】
2019522650.tif 000014
【０１５６】
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１ｍＬ）中、メチル４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）ベンゾエート（６）（１００ｍｇ、０．２８７ｍｍｏｌ）の懸濁液を、ＬｉＯＨ（２Ｍ、水性、７２０μＬ、１．４ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を４０℃で２０時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、次いで、１ＭのＨＣｌを滴下して加えることによって酸性化した。得られた固体を濾過によって収集し、次いで、ＭｅＯＨに溶解し、蒸発乾固させることで、表題化合物（ＢＨＢＡ−００１）（９５ｍｇ、収率９９％）を白色の固体として得た：ｍ／ｚ ３３５ ［Ｍ＋Ｈ］＋ （ＥＳ＋）， ３３３ ［Ｍ−Ｈ］− （ＥＳ）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ： １３．３４ （１Ｈ， ｂｒ． ｓ）， ８．２５−８．２３ （３Ｈ， ｍ）， ８．１６ （２Ｈ， ｄ）， ７．２９ （１Ｈ， ｄ）， ７．１２ （１Ｈ， ｄ）， ２．５６ （３Ｈ， ｓ）， ２．５３ （３Ｈ， ｓ）。
【０１５７】
ＢＨＢＡ−００１の調製のための別の方法は、以下のスキーム２に示される。
スキーム２
【０１５８】
【化９】
2019522650.tif 000015
【０１５９】
このアプローチでは、メチル４−シアノベンゾエート（ＩＩＩ）を、溶媒としてメタノール中の水性ヒドロキシルアミンで処理する。反応の完了後、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）を加え、混合物を冷却し、一晩熟成後、生成物メチル４−（Ｎ’−ヒドロキシカルバムイミドイル）ベンゾエート（ＩＶ）を固体として単離する。
【０１６０】
４，７−ジメチルベンゾフラン−２−カルボン酸（Ｉ）を、触媒Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドの存在下でジクロロメタン中で塩化オキサリルで処理する。反応の完了後、生成物４，７−ジメチルベンゾフラン−２−カルボニルクロリド（ＩＩ）を含有する溶液を、次の段階へ入れ込む。
【０１６１】
４，７−ジメチルベンゾフラン−２−カルボニルクロリド（ＩＩ）を、塩基としてのトリエチルアミン及び溶媒としての２−ブタノンの存在下でメチル４−（Ｎ’−ヒドロキシカルバムイミドイル）ベンゾエート（ＩＶ）で処理する。溶媒の除去後、最後から２番目の中間体であるメチル４−［５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］ベンゾエート（ＶＩ）を、メタノールから結晶化させ、濾過により単離する。
【０１６２】
メチル４−［５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］ベンゾエート（ＶＩ）を、６０〜６５℃でテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中の水酸化カリウムで処理することによって加水分解し、続いて水及びエタノールで希釈する。濃塩酸を加えると、標的化合物４−［５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］安息香酸（ＢＨＢＡ−００１）が沈殿し、濾過により単離される。
【０１６３】
この合成経路の例を以下に説明する。
【０１６４】
ステップ１：メチル４−（Ｎ’−ヒドロキシカルバムイミドイル）ベンゾエート（ＩＶ）
【０１６５】
【化１０】
2019522650.tif 000016
【０１６６】
メタノール（７．５Ｌ、３ｖｏｌ）中、メチル４−シアノベンゾエート（ＩＩＩ）（２．５０ｋｇ、１ｗｔ）の溶液を、メチルｔｅｒｔ．−ブチルエーテル（９．３ｋｇ、３．７ｗｔ）で希釈した。ヒドロキシルアミン水溶液（５０％溶液；１．２３ｋｇ、０．５ｗｔ、１．２ｅｑ．）を、２０〜２５℃で約０．５時間かけて添加した。添加ラインをメタノール（１ｋｇ、０．４ｗｔ）ですすぎ、反応を２０〜２５℃で約１２時間進行させた。バッチを５±５℃まで冷却し、５±５℃で３時間熟成させた。生成物メチル４−（Ｎ’−ヒドロキシカルバムイミドイル）ベンゾエート（ＩＶ）を濾過によって単離し、メチルｔｅｒｔ．−ブチルエーテル（２×５．５ｋｇ、２×２．２ｗｔ）で洗浄し、窒素流下で周囲で約４時間乾燥させた（２．３８ｋｇ、９３％）。
【０１６７】
ステップ２：４，７−ジメチルベンゾフラン−２−カルボニルクロリド（ＩＩ）
【０１６８】
【化１１】
2019522650.tif 000017
【０１６９】
反応器に、４，７−ジメチルベンゾフラン−２−カルボン酸（Ｉ）（１．９６ｋｇ、１ｗｔ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８ｇ、０．００４ｗｔ）及びジクロロメタン（６．８５ｋｇ、３．５ｗｔ）を入れ、バッチを２５〜３０℃に加熱した。約１５分かけて、塩化オキサリル（１．４７ｋｇ、０．７５ｗｔ、１．１ｅｑ）を混合物に添加し、添加ラインをジクロロメタン（１．３ｋｇ、０．６６ｗｔ）ですすいだ。バッチを３０〜３５℃で約１．５時間撹拌し、得られた生成物４，７−ジメチルベンゾフラン−２−カルボニルクロリド（ＩＩ）を、さらに精製することなく次のステップに直接使用した。
【０１７０】
ステップ３：メチル４−［５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］ベンゾエート（ＶＩ）
【０１７１】
【化１２】
2019522650.tif 000018
【０１７２】
反応器に、メチル４−（Ｎ’−ヒドロキシカルバムイミドイル）ベンゾエート（ＩＶ）（１．９７ｋｇ、１ｗｔ、（Ｉ）に基づき０．９７ｅｑ）、トリエチルアミン（２．３４ｋｇ、１．２ｗｔ、２．２ｅｑ）及びメチルイソブチルケトン（２３．９ｋｇ、１２ｗｔ）を入れた。バッチを３０〜３５℃に加熱し、４，７−ジメチルベンゾフラン−２−カルボニルクロリド（ＩＩ）（ステップ２で調製）の溶液を添加し、温度が６０℃を超えないことを確認した。添加ラインをジクロロメタン（０．６６ｗｔ）ですすぎ、溶媒を最初に蒸留して、いくらかの溶媒を除去し、次いで、大気圧下で１１０〜１１５℃で約３時間加熱した。バッチを６０〜７０℃まで冷却し、メタノール（８ｋｇ、４ｗｔ）を加え、バッチをこの温度でさらに３０分間加熱した。バッチを２０±３℃まで冷却し、この温度で約１時間熟成させた。固体生成物を濾過し、メタノール（２×６．２ｋｇ、２×３．１ｗｔ）で洗浄し、窒素流下で周囲温度で１６時間乾燥させた（３．３ｋｇ、９３％）。
【０１７３】
ステップ４：４−［５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］安息香酸（ＢＨＢＡ−００１）
【０１７４】
【化１３】
2019522650.tif 000019
【０１７５】
反応器に、メチル４−［５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］ベンゾエート（ＶＩ）（３．０ｋｇ、１ｗｔ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（２２ｋｇ、７．１ｗｔ）、及び脱塩水（ＤＥＭＩ水、７．５ｋｇ、２．５ｗｔ）中の水性水酸化カリウム（固体ＫＯＨから調製した）（０．６９ｋｇ、０．２３ｗｔ）の溶液を入れた。バッチを、６５±５℃に加熱し、６５±５℃で約３時間撹拌した。バッチを３０〜３５℃まで冷却し、反応混合物を排出した。この溶液を、インラインフィルターを介して反応器に入れた（すなわち、清澄化ステップ）。反応器に、インラインフィルターを介して、ＤＥＭＩ水（６ｋｇ、２．０ｗｔ）及び無水エタノール（９．６ｋｇ、３．２ｗｔ）を入れた。バッチを５５±５℃に加熱した。反応器に、インラインフィルターを介して、濃（３０ｗｔ％）塩酸（１．３５ｋｇ、０．４５ｗｔ）を添加し、バッチを５５±５℃で約１５分間撹拌した。バッチを２０±３℃まで冷却し、この温度で２時間熟成させた。生成物を濾過し、濾過ケーキを、ＤＥＭＩ水（１．５ｋｇ、０．５ｗｔ）と無水エタノール（８．４ｋｇ、２．８ｗｔ）との混合物で２回洗浄した。バッチを約１時間、周囲温度でフィルター上で乾燥させて、標的化合物ＢＨＢＡ−００１を得た。
【０１７６】
スクリーニング研究
研究１：溶解性研究
最初の多形挙動を研究するために、ＢＨＢＡ−００１（ＸＲＰＤにより形態１と特徴付けられた）の溶解性を、１５種類の溶媒中で測定した。固体を公知の量の溶媒（例えば、３ｍＬ）に段階的に（例えば、１回に１０ｍｇ）加える、振盪フラスコ法を適用した。溶解性は目視で確認した。添加後、ゆっくりした溶解または再結晶を確認するために、懸濁液／溶液を２０℃で２４時間保持した。固体が完全に溶解していない場合、懸濁液を５０℃に加熱して溶解を促した。次いで、場合によっては逆溶媒の助けを借りて、溶媒を蒸発により除去した。得られた固体をＸＲＰＤを用いて分析した。
【０１７７】
結果を以下の表に要約する。化合物は、ほとんどの溶媒中で不十分に溶解するのみであった。しかし、２つの新しい結晶形態が同定された：形態２及び形態３。
【０１７８】
【表５】
2019522650.tif 000020
【０１７９】
研究２：スラリー研究
その低い溶解性のため、３つの異なる温度プロファイルを用いて、ＢＨＢＡ−００１（形態１）を様々な溶媒でスラリーにし、再結晶効果を観察した：（ａ）２０℃で５日間；（ｂ）５０℃で２日間；及び（ｃ）６０℃に加熱した後、６０℃から５℃まで５℃／時間の徐冷プロファイル。スラリーにした後、液体をデカントし、残った固体を窒素流下で乾燥させ、ＸＲＰＤを用いて分析した。
【０１８０】
結果を以下の表に要約する。ほとんどすべての場合において、スラリー研究は形態１をもたらした。しかし、１つの新しい結晶形態が同定された（形態４）。
【０１８１】
徐冷研究では、そのいずれも形態１をもたらし、粒子癖（ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｈａｂｉｔ）は、５〜１０μｍの細長い粒子に変化した。
【０１８２】
【表６】
2019522650.tif 000021
【０１８３】
【表７】
2019522650.tif 000022
【０１８４】
【表８】
2019522650.tif 000023
【０１８５】
研究３：スラリー研究（水和物について）
水和物が形成されるかどうかを決定しようとして、いくつかの水−メタノール混合物を用いて、さらなるスラリー研究を行った。
【０１８６】
結果を以下の表に要約する。新しい結晶形態は同定されなかった（及びしたがって水和物は同定されなかった）。
【０１８７】
【表９】
2019522650.tif 000024
【０１８８】
研究４：競合的スラリー研究
競合的スラリー実験を、いくつかの異なる溶媒中で行った（データは示さず）。形態１、２、３、及び４の混合物を各溶媒でスラリーにし、得られた固体をＸＲＰＤによって分析した。競合的スラリー研究は、どの多形が形成されるのかを決定するのが溶媒である（温度ではない）ことを示した。
【０１８９】
スクリーニング研究で同定された結晶形態の特徴付け
特徴付け方法
ＢＨＢＡ−００１の様々な結晶形態は、例えばＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、及び他の固体状態法に関して、それらの固有の固体状態の特徴によって同定することができる。
【０１９０】
結晶形態の水分含量または溶媒含量に関するさらなる特徴付けは、様々な日常的な方法のいずれか、例えば、熱重量分析（ＴＧＡ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、動的水蒸気収着（ＤＶＳ）、及び他の技術によって測定することができる。
【０１９１】
Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）：
ＸＲＰＤ研究は、Ｃｕ−Ｋα放射線を用いたＢｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏ構成（装置番号１５４９）におけるＢｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｄ２  ＰＨＡＳＥＲを用いて行った。実験パラメータは：３０ｋＶ、１０ｍＡでのＣｕ陽極；サンプルステージ標準回転；Ｋβ−フィルター（０．５％Ｎｉ）による単色化；スリット：固定発散スリット１．０ｍｍ（＝０．６１°）、一次軸ソーラー（Ｓｏｌｌｅｒ）スリット２．５°、二次軸ソーラースリット２．５°；検出器：受光スリット５°検出器開口部を有する一次元検出器ＬＹＮＸＥＹＥであった。標準的なサンプルホルダ（（５１０）シリコンウェハにおける０．１ｍｍキャビティ）は、バックグラウンドシグナルへの最小の寄与を有する。
【０１９２】
測定条件は：走査範囲：５〜４５°２θ；サンプル回転：５ｒｐｍ、０．５ｓ／ステップ、０．０１０°／ステップ、３．０ｍｍ検出器スリットであった。システムの適合性を確認するために、コランダムサンプルＡ２６−Ｂ２６−Ｓ（ＮＩＳＴ標準）を毎日測定した。
【０１９３】
データ収集に使用されたソフトウェアは、Ｄｉｆｆｒａｃ．Ｃｏｍｍａｎｄｅｒ  ｖ３．３．３５であった。データ分析は、Ｄｉｆｆｒａｃ．Ｅｖａ  Ｖ３．０を用いて行った。回折パターンには、バックグラウンド補正または平滑化を適用しなかった。Ｃｕ−Ｋα２の寄与を、Ｄｉｆｆｒａｃ．Ｅｖａソフトウェアを使用してなくした。
【０１９４】
ＸＲＰＤの場合、ピークの相対強度は、サンプル調製技術、サンプルのマウント手順、及び使用される特定の機器に応じて変化し得る。さらに、機器の変動及び他の要因が、２θ値に影響を与える可能性がある。したがって、回折パターンのピーク割り当ては、典型的にはプラスまたはマイナス約０．２°（例えば、±０．２°）変化し得る。
【０１９５】
熱重量分析／示差走査熱量測定（ＴＧＡ／ＤＳＣ）：
ＴＧＡ／ＤＳＣ研究は、３４個の位置のオートサンプラーを備えたＭｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＴＧＡ／ＤＳＣｌ  ＳＴＡＲｅシステム（装置番号１５４７）を用いて行った。
【０１９６】
サンプルを、アルミニウムるつぼ（４０μＬ；穿孔された）を用いて調製した。典型的には、５〜１０ｍｇのサンプルを、予め秤量したアルミニウムるつぼに入れ、３０℃で５分間保持し、その後、３０℃から３００℃まで１０℃／分で加熱した。４０ｍＬ／分の窒素パージを、サンプルの上をおおって維持した。システムの適合性を確認するために、インジウム及び亜鉛を参照として用いる。
【０１９７】
データの収集及び評価に使用されたソフトウェアは、ＳＴＡＲｅ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖ１０．００ビルド２４８０であった。サーモグラムには、補正を適用しなかった。
【０１９８】
ＤＳＣの場合、観察される温度は、温度変化の速度、ならびにサンプル調製技術、及び使用される特定の機器に依存することが知られている。したがって、ＤＳＣサーモグラムに関する本明細書に報告される値は、プラスまたはマイナス約４℃変化し得る。
【０１９９】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）：
ＤＳＣ研究は、Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＤＳＣｌ  ＳＴＡＲｅシステム（装置番号１５６４）を用いて行った。
【０２００】
サンプルを、アルミニウムるつぼ（４０μＬ；穿孔された）を用いて作製した。典型的には、１〜８ｍｇのサンプルを、予め秤量したアルミニウムるつぼに入れ、３０℃で５分間保持し、その後、３０℃から３５０℃まで１０℃／分で加熱し、再び３５０℃で維持した。４０ｍＬ／分の窒素パージを、サンプルの上をおおって維持した。システムの適合性を確認するために、インジウム及び亜鉛を参照として用いる。
【０２０１】
データの収集及び評価に使用されるソフトウェアは、ＳＴＡＲｅ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖ１０．００ビルド２４８０である。サーモグラムには、補正を適用しない。
【０２０２】
ＤＳＣの場合、観察される温度は、温度変化の速度、ならびにサンプル調製技術、及び使用される特定の機器に依存することが知られている。したがって、ＤＳＣサーモグラムに関する本明細書に報告される値は、プラスまたはマイナス約４℃変化し得る。
【０２０３】
動的水蒸気収着（ＤＶＳ）：
ＤＶＳ研究は、Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｌｔｄ．  ＤＶＳ−１  Ｎｏ  Ｖｉｄｅｏ（装置番号２１２６）を用いて行った。
【０２０４】
サンプルを、ガラスパン中で典型的には２０〜３０ｍｇ秤量し、０％ＲＨで平衡化した。材料が乾燥した後、相対湿度（ＲＨ）を、インクリメント当たり１時間、ステップ当たり１０％増加させ、９５％ＲＨで終了した。
【０２０５】
データ収集に使用したソフトウェアは、ＤＶＳＷｉｎ  ｖ３．０１  Ｎｏ  Ｖｉｄｅｏであった。データ分析を、ＤＶＳ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｕｉｔｅ  ｖ６．３．０（標準）を用いて行った。
【０２０６】
偏光顕微鏡法（ＰＬＭ）：
顕微鏡法研究を、ＡｘｉｏＣａｍＥＲｃ  ５ｓを備えたＡｘｉｏＶｅｒｔ  ３５Ｍ（装置番号１６１２）を用いて行った。
【０２０７】
顕微鏡は４つのレンズを備えていた：Ｚｅｉｓｓ  Ａ−Ｐｌａｎ  Ｓｘ／０．１２；Ｚｅｉｓｓ  Ａ−ｐｌａｎ  ｌＯｘ／０．２５；ＬＤ  Ａ−Ｐｌａｎ  ２０ｘ／０．３０；及びＡｃｈｒｏｓ  ＴＩＧＭＡＴ  ３２ｘ／０．４０。
【０２０８】
データ収集及び評価は、Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  Ｚｅｎ  ＡｘｉｏＶｉｓｉｏｎ  Ｂｌｕｅ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｌｉｔｅ  ２０１１  ｖ１．０．０．０ソフトウェアを用いて行った。少量のサンプルを、対物レンズ上に載せ、薄層が得られるまで広げた。
【０２０９】
安定性研究：
安定性研究は以下のように行った。サンプルを、二重低密度ポリエチレンバッグに包装し、プラスチックタイで密封し、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）ドラムに入れた。サンプルを、以下の保存条件で保存した：２５℃／６０％ＲＨ（「リアルタイム」をシミュレートする）及び４０℃／７５％ＲＨ（「加速」）。
【０２１０】
サンプルを、外観、薬物含量（ＨＰＬＣによる）、水分含量（カールフィッシャー滴定による）、及び薬物関連不純物（ＨＰＬＣによる）について定期的に試験した。
【０２１１】
無水及び無溶媒ベースで補正された薬物含量は、以下の式から計算される：含量（％）＝１００−（水＋溶媒＋強熱残分＋関連不純物）。
【０２１２】
薬物関連不純物は、１５０ｍｍ×４．６ｍｍ、３μｍのＷａｔｅｒｓ  Ａｔｌａｎｔｉｓ  Ｔ３カラムを用い、以下のパラメータを用いて、２５４ｎｍでのＵＶ検出を用いた逆相勾配ＨＰＬＣ法を用いて測定した：
【０２１３】
【表１０】
2019522650.tif 000025
【０２１４】
【表１１】
2019522650.tif 000026
【０２１５】
結晶形態１
図１は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を含有するサンプルについてのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【０２１６】
ＸＲＰＤパターンにおける２５個の最も強いピークが、以下の表に記載される。
【０２１７】
【表１２】
2019522650.tif 000027
【０２１８】
図２は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を含有するサンプルについての示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
【０２１９】
ＤＳＣサーモグラムは、４０〜１００℃の間の幅広い脱溶媒和事象（開始：３６．３６℃；ピーク：６５．７２℃；熱流：−５９．７０Ｊ／ｇ）と、その後の、約２７７℃にピークを有する吸熱事象（融点）（開始：２７３．２１℃；ピーク：２７７．２３℃；熱流：−１１４．９０Ｊ／ｇ）によって特徴付けられた。小さな幅広い事象はまた、２００〜２５０℃で見られた（開始：２０７．０１℃；ピーク：２３５．９４℃、熱流：−１４４．４４Ｊ／ｇ）。
【０２２０】
図３は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を含有するサンプルについての熱重量分析（ＴＧＡ）サーモグラム及び示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムの両方を示す。
【０２２１】
ＤＳＣサーモグラムは、ＴＧＡによる２．３５％ｗ／ｗの重量損失に関連する４０〜１００℃の間の幅広い吸熱事象（開始：７７．７８℃；ピーク：９４．８３℃；熱流：−２７．２６Ｊ／ｇ）によって特徴付けられた。２つのガラス転移吸熱が観察された：２１９℃の開始温度（開始：２１９．６３℃；中点２３７．１９℃）を有し、ＴＧＡによる２．７％ｗ／ｗの重量損失に関連する第１の事象；及び２５６℃の開始温度（開始：２５６．３３℃；中点：２５８．０４℃）を有し、ＴＧＡによる１．１３％ｗ／ｗの重量損失に関連する第２の事象。形態１の吸熱融解は、２７３℃の観察された開始温度（開始：２７２．９８℃；ピーク：２７７．３３℃；熱流：−１５５．３５Ｊ／ｇ）を有した。
【０２２２】
図４は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を含有するサンプルについての動的水蒸気収着（ＤＶＳ）の収着−脱着プロットを示す。
【０２２３】
形態１の吸湿性を決定するために、ＤＶＳプロットを、二重収着−脱着サイクルについて２５℃で測定した。総質量取り込みは、０％と９５％ＲＨとの間の８．７％ｗ／ｗであり、これは形態１を吸湿性形態と特徴付けた。取り込みは可逆的であり、再現性があった。
【０２２４】
図５は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を含有するサンプルについての動的水蒸気収着（ＤＶＳ）の質量取り込みプロットを示す。
【０２２５】
ＤＶＳプロットは、２５℃における、及び０％ＲＨで平衡化された、形態１のサンプルについて記録された。材料が乾燥した後、ＲＨを、インクリメント当たり１時間、ステップ当たり１０％増加させ、９５％ＲＨ及び８．７％ｗ／ｗの最終質量取り込みで終了した。ＲＨを、インクリメント当たり１時間、ステップ当たり１０％減少させ、０％ＲＨへ戻した。形態１は、吸湿性形態と特徴付けられた。取り込みは可逆的であり、再現性があった。
【０２２６】
図６は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を含有するサンプルについての偏光顕微鏡法（ＰＬＭ）顕微鏡写真を示す。
【０２２７】
形態１は、非常に小さな粒子の凝集体と特徴付けられた。
【０２２８】
ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１の物理的特性を以下の表に要約する。
【０２２９】
【表１３】
2019522650.tif 000028
【０２３０】
ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１は、２．４％（質量による）の残留溶媒（水を含む）を含有する。
【０２３１】
ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１は、吸湿性であり、０％と９５％ＲＨとの間の水の８．７％ｗ／ｗ取り込みを有する。
【０２３２】
結晶形態２
図７は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態２を含有するサンプルについてのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【０２３３】
ＸＲＰＤパターンにおける１２個の最も強いピークが、以下の表に記載される。
【０２３４】
【表１４】
2019522650.tif 000029
【０２３５】
形態２（エタノールから得られる）は、エタノールを含有することが見出され（溶液１Ｈ  ＮＭＲによる；データは示さず）、ＸＲＰＤ及び１Ｈ  ＮＭＲデータに基づき、エタノール溶媒和物と特徴付けられた。
【０２３６】
結晶形態３
図８は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態３を含有するサンプルについてのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【０２３７】
ＸＲＰＤパターンにおける１２個の最も強いピークが、以下の表に記載される。
【０２３８】
【表１５】
2019522650.tif 000030
【０２３９】
形態３（酢酸から得られる）は、酢酸を含有することが見出され（溶液１Ｈ  ＮＭＲによる；データは示さず）、ＸＲＰＤ及び１Ｈ  ＮＭＲデータに基づき、酢酸溶媒和物と特徴付けられた。
【０２４０】
結晶形態４
図９は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含有するサンプルについてのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【０２４１】
ＸＲＰＤパターンにおける３２個の最も強いピークが、以下の表に記載される。
【０２４２】
【表１６】
2019522650.tif 000031
【０２４３】
図１０は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含有するサンプルについての示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
【０２４４】
ＤＳＣサーモグラムは、２つの吸熱事象によって特徴付けられた：２７０℃のピーク温度（開始：２６９．８０℃；ピーク：２７０．６９℃；熱流＋２．６１Ｊ／ｇ）を有する発熱事象（再結晶）と組み合わせた、形態４の融解に対応する、２６８℃のピーク温度を有する第１の事象（開始：２６３．３６℃；ピーク：２６８．０７℃；熱流：−１６．６５Ｊ／ｇ）と、その後の、２７９℃のピーク温度における形態１の融解（開始：２７７．５４℃；ピーク：２７９．１９℃；熱流：−５１．９５Ｊ／ｇ）。
【０２４５】
図１１は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含有するサンプルについての熱重量分析（ＴＧＡ）サーモグラム及び示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムの両方を示す。
【０２４６】
ＴＧＡサーモグラムは、４０〜８０℃の間の０．２％の非常に小さな重量損失を示した。ＤＳＣサーモグラムは、２つの吸熱事象によって特徴付けられた：２７８℃の開始温度における形態１の再結晶及び融解（開始：２７８．１０℃；ピーク：２７９．７７℃；熱流：−１６６．０１Ｊ／ｇ）と組み合わせた、形態４の融解に対応する、２５６℃の開始温度を有する第１の事象（開始：２５６．０９℃；ピーク：２６４．６０℃；熱流−１６．３４Ｊ／ｇ）。
【０２４７】
図１２は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含有するサンプルについての動的水蒸気収着（ＤＶＳ）の収着−脱着プロットを示す。
【０２４８】
形態４の吸湿性を決定するために、ＤＶＳプロットを、二重収着−脱着サイクルについて２５℃で測定した。総質量取り込みは、０％と９５％ＲＨとの間の０．１％であり、これは形態４を非吸湿性形態と特徴付ける。
【０２４９】
図１３は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含有するサンプルについての動的水蒸気収着（ＤＶＳ）の質量取り込みプロットを示す。
【０２５０】
ＤＶＳプロットは、２５℃における、及び０％ＲＨで平衡化された、形態４のサンプルについて記録された。材料が乾燥した後、ＲＨを、インクリメント当たり１時間、ステップ当たり１０％増加させ、９５％ＲＨ及び０．１％の最終質量取り込みで終了した。ＲＨを、インクリメント当たり１時間、ステップ当たり１０％減少させ、０％ＲＨへ戻した。形態４は、非吸湿性形態と特徴付けられた。
【０２５１】
図１４は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含有するサンプルについての偏光顕微鏡法（ＰＬＭ）顕微鏡写真を示す。
【０２５２】
形態４は、約５０〜１００μｍの針状粒子の好ましい形状を有する粒子癖を有すると特徴付けられた。
【０２５３】
ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４の物理的特性を以下の表に要約する。
【０２５４】
【表１７】
2019522650.tif 000032
【０２５５】
安定性研究（上記のとおり）を、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４について行った。結果を以下の表に要約する。
【０２５６】
【表１８】
2019522650.tif 000033
【０２５７】
サンプルの外観は、２５℃／６０％ＲＨにおける２４ヶ月の保存、及び４０℃／７５％ＲＨにおける６ヶ月の保存後、本質的に変化しないままであった。
【０２５８】
水分含量は、２５℃／６０％ＲＨにおける２４ヶ月の保存、及び４０℃／７５％ＲＨにおける６ヶ月の保存後、本質的に変化しないままであった。
【０２５９】
薬物含量は、２５℃／６０％ＲＨにおける２４ヶ月の保存、及び４０℃／７５％ＲＨにおける６ヶ月の保存後、本質的に変化しないままであった。
【０２６０】
薬物関連不純物レベルは、２５℃／６０％ＲＨにおける２４ヶ月の保存、及び４０℃／７５％ＲＨにおける６ヶ月の保存後、本質的に変化しないままであった。
【０２６１】
要約すると、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４は、２５℃／６０％ＲＨにおける少なくとも２４ヶ月の保存、及び４０℃／７５％ＲＨにおける６ヶ月の保存後に安定であることが示された。
【０２６２】
結晶形態４の調製
結晶形態４の調製のために以下のプロトコルを開発した。少なくとも１つの２．５ｋｇのバッチを含む大規模バッチについて、それはうまくいくことが分かった。
【０２６３】
パート１（脱保護）では、ＢＨＢＡ−００１の溶液を、対応するメチルエステルから調製する。
【０２６４】
パート２（沈殿）では、ＢＨＢＡ−００１を溶液から沈殿させる（形態１として）。
【０２６５】
パート３（形態４の形成）では、ＢＨＢＡ−００１（形態１）を無水エタノール中で高温でスラリーにする（形態４を得るために）。
【０２６６】
パート１：溶液におけるＢＨＢＡ−００１の調製
●メチル４−（５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）ベンゾエート（１ｗｔ）及びテトラヒドロフラン（７．１ｗｔ）を反応器に入れる。
●脱塩水（２．５ｗｔ）中の固体ＫＯＨ（０．２３ｗｔ）から調製した水酸化カリウム水溶液を反応器に入れる。
●バッチを６５±５℃に加熱する。
●６５±５℃で少なくとも３時間、バッチを撹拌する。
●バッチを３０±５℃まで冷却する。
●反応混合物を排出する。
●反応混合物をインラインフィルターを介して第２の反応器に入れる。
●第２の反応器に、インラインフィルターを介して、脱塩水（２．０ｗｔ）及び無水エタノール（３．２ｗｔ）を入れる。
●バッチを５５±５℃に加熱する。
【０２６７】
パート２：ＢＨＢＡ−００１（形態１）の沈殿
●第２の反応器に、インラインフィルターを介して、濃（３０ｗｔ％）塩酸（０．４５ｗｔ）を添加する。
●５５±５℃で少なくとも１５分間、バッチを撹拌する。
●バッチを２０±３℃まで冷却する。
●２０±３℃で少なくとも２時間、バッチを熟成させる。
●バッチを濾過する。
●バッチを洗浄する：反応器に、インラインフィルターを介して、脱塩水（０．５ｗｔ）及び無水エタノール（２．８ｗｔ）の混合物を添加し、この溶媒混合物を使用して濾過ケーキを洗浄する。
●バッチを洗浄する：反応器に、インラインフィルターを介して、無水エタノール（３．２ｗｔ）を添加し、この溶媒を使用して濾過ケーキを洗浄する。
●バッチを乾燥させる：バッチをフィルター上で周囲温度（約２０℃）で少なくとも１時間乾燥させる（ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１を得るために）。
【０２６８】
パート３：ＢＨＢＡ−００１（形態１）をＢＨＢＡ−００１（形態４）に変換するための再スラリー化
●濾過ケーキを反応器に入れる。
●反応器に、インラインフィルターを介して、無水エタノール（１２．６ｗｔ）を入れる。
●混合物を還流（約７８℃）まで加熱し、この温度で少なくとも２時間撹拌する。
●バッチを２０±３℃まで冷却する。
●２０±３℃で少なくとも１時間、バッチを熟成させる。
●バッチを濾過する。
●バッチを洗浄する：反応器に、インラインフィルターを介して、メチルｔｅｒｔ．−ブチルエーテル（２×３．７ｗｔ）を添加し、この溶媒混合物を使用して濾過ケーキを洗浄する。
●バッチを乾燥させる：バッチをフィルター上で周囲温度（約２０℃）で少なくとも１時間乾燥させる（ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を得るために）。
【０２６９】
したがって、本発明の別の態様は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４の調製方法であって、
（ａ）ＢＨＢＡ−００１とエタノールとの混合物を加熱するステップ；
（ｂ）前記混合物を冷却するステップ；及び
（ｃ）前記混合物から前記結晶形態を単離するステップ
を順に含む、方法である。
【０２７０】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１とエタノールとの前記混合物は、固体ＢＨＢＡ−００１とエタノールとの混合物（例えばスラリー）である。
【０２７１】
１つの実施形態では、前記固体ＢＨＢＡ−００１は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態１である。
【０２７２】
１つの実施形態では、前記加熱は、約４０℃から前記混合物の還流温度（例えば、約７８℃）の温度におけるものである。
【０２７３】
１つの実施形態では、前記加熱は、約５０℃から前記混合物の還流温度（例えば、約７８℃）の温度におけるものである。
【０２７４】
１つの実施形態では、前記加熱は、約６０℃から前記混合物の還流温度（例えば、約７８℃）の温度におけるものである。
【０２７５】
１つの実施形態では、前記加熱は、前記混合物の還流温度（例えば、約７８℃）におけるものである（例えば、前記加熱は還流である）。
【０２７６】
１つの実施形態では、前記加熱は、約３０分〜約２４時間の期間のものである。
【０２７７】
１つの実施形態では、前記加熱は、約３０分〜約１２時間の期間のものである。
【０２７８】
１つの実施形態では、前記加熱は、約３０分〜約６時間の期間のものである。
【０２７９】
１つの実施形態では、前記加熱は、約３０分〜約３時間の期間のものである。
【０２８０】
１つの実施形態では、前記加熱は、約２時間の期間のものである。
【０２８１】
１つの実施形態では、前記冷却は、約５℃〜約３０℃の温度までのものである。
【０２８２】
１つの実施形態では、前記冷却は、約５℃〜約２５℃の温度までのものである。
【０２８３】
１つの実施形態では、前記冷却は、約２０℃の温度までのものである。
【０２８４】
１つの実施形態では、前記冷却の後に、（ｂ’）前記冷却された混合物を熟成させるステップが続く。
【０２８５】
１つの実施形態では、前記熟成は、約３０分〜約２４時間の期間のものである。
【０２８６】
１つの実施形態では、前記熟成は、約３０分〜約１２時間の期間のものである。
【０２８７】
１つの実施形態では、前記熟成は、約３０分〜約６時間の期間のものである。
【０２８８】
１つの実施形態では、前記熟成は、約３０分〜約３時間の期間のものである。
【０２８９】
１つの実施形態では、前記熟成は、約１時間の期間のものである。
【０２９０】
１つの実施形態では、前記単離は、濾過によるものである。
【実施例】
【０２９１】
パート１：脱保護
反応器に、メチル４−［５−（４，７−ジメチルベンゾフラン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］ベンゾエート（３．０ｋｇ、１ｗｔ）、テトラヒドロフラン（２２ｋｇ、７．１ｗｔ）、及び脱塩水（ＤＥＭＩ水、７．５ｋｇ、２．５ｗｔ）中の水性水酸化カリウム（固体ＫＯＨから調製した）（０．６９ｋｇ、０．２３ｗｔ）の溶液を入れた。バッチを、６５±５℃に加熱し、６５±５℃で約３時間撹拌した。バッチを３０〜３５℃まで冷却し、反応混合物を排出した。この溶液を、インラインフィルターを介して反応器に入れた（すなわち、清澄化ステップ）。反応器に、インラインフィルターを介して、ＤＥＭＩ水（６ｋｇ、２．０ｗｔ）及び無水エタノール（９．６ｋｇ、３．２ｗｔ）を入れた。バッチを５５±５℃に加熱した。
【０２９２】
パート２：沈殿
反応器に、インラインフィルターを介して、濃（３０ｗｔ％）塩酸（１．３５ｋｇ、０．４５ｗｔ）を添加し、バッチを５５±５℃で約１５分間撹拌した。バッチを２０±３℃まで冷却し、この温度で２時間熟成させた。生成物を濾過し、濾過ケーキを、ＤＥＭＩ水（１．５ｋｇ、０．５ｗｔ）と無水エタノール（８．４ｋｇ、２．８ｗｔ）との混合物で２回洗浄した。バッチを約１時間、周囲温度でフィルター上で乾燥させて、標的化合物ＢＨＢＡ−００１を得た。
【０２９３】
パート３：結晶形態４の形成
濾過ケーキを反応器に入れ、インラインフィルターを介して、無水エタノール（３７．８ｋｇ、１２．６ｗｔ）を添加した。混合物を還流まで加熱し、懸濁液をこの温度で約２時間撹拌した。バッチを２０±３℃まで冷却し、２０±３℃で約１時間この温度で熟成させた。固体を濾過し、メチルｔｅｒｔ．−ブチルエーテル（２×１１ｋｇ、２×３．７ｗｔ）で洗浄し、窒素流下で周囲温度で２０時間乾燥させて、結晶形態４の標的化合物ＢＨＢＡ−００１（２．５２ｋｇ、８０％）を得た。
【０２９４】
組成物、製剤、及び医療用途
組成物
本発明の１つの態様は、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）と、医薬的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、組成物（例えば、医薬組成物）に関する。
【０２９５】
１つの実施形態では、組成物は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４を含み、ＢＨＢＡ−００１の他の結晶形態（例えば、形態１、２、及び３）を実質的に含まない組成物（例えば、医薬組成物）である。
【０２９６】
この文脈で使用される場合、「ＢＨＢＡ−００１の他の結晶形態を実質的に含まない」とは、組成物全体における（ａ）ＢＨＢＡ−００１の他の結晶形態（例えば、形態１、２、及び３）の総重量の、（ｂ）ＢＨＢＡ−００１の結晶形態４の重量との比が、約１：１０未満、好ましくは約１：２０未満、より好ましくは約１：５０未満であることを意味する。
【０２９７】
本発明の別の態様は、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）と、医薬的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤とを混合するステップを含む、組成物（例えば、医薬組成物）の調製方法に関する。
【０２９８】
用途
ＢＨＢＡ−００１（本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）を含む）は、例えば、ＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）の（選択的）活性化によって改善する疾患及び病状、例えば、脊髄損傷などの神経学的損傷の治療において有用である。
【０２９９】
レチノイン酸受容体β（ＲＡＲβ）の活性化方法における使用：
本発明の１つの態様は、インビトロまたはインビボにおける、レチノイン酸受容体β（ＲＡＲβ）（例えば、ＲＡＲβ２）の活性化方法における、例えば、ＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む方法における、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）の使用に関する。
【０３００】
本発明の１つの態様は、インビトロまたはインビボにおける、（例えば、ＲＡＲα及び／またはＲＡＲγとの関連での）レチノイン酸受容体β（ＲＡＲβ）（例えば、ＲＡＲβ２）の選択的活性化方法における、例えば、ＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む方法における、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）の使用に関する。
【０３０１】
本発明の１つの態様は、インビトロまたはインビボにおける、神経細胞における、レチノイン酸受容体β（ＲＡＲβ）（例えば、ＲＡＲβ２）の活性化方法における、例えば、該細胞と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む方法における、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態の使用に関する。
【０３０２】
本発明の１つの態様は、インビトロまたはインビボにおける、神経細胞における、レチノイン酸受容体β（ＲＡＲβ）（例えば、ＲＡＲβ２）の選択的活性化方法における、例えば、該細胞と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む方法における、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態の使用に関する。
【０３０３】
本発明の１つの態様は、インビトロまたはインビボにおける、レチノイン酸受容体β（ＲＡＲβ）（例えば、ＲＡＲβ２）の活性化方法であって、ＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む、方法に関する。
【０３０４】
本発明の１つの態様は、インビトロまたはインビボにおける、（例えば、ＲＡＲα及び／またはＲＡＲγとの関連での）レチノイン酸受容体β（ＲＡＲβ）（例えば、ＲＡＲβ２）の選択的活性化方法であって、ＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む、方法に関する。
【０３０５】
本発明の１つの態様は、インビトロまたはインビボにおける、神経細胞における、レチノイン酸受容体β（ＲＡＲβ）（例えば、ＲＡＲβ２）の活性化方法であって、該細胞と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む、方法に関する。
【０３０６】
本発明の１つの態様は、インビトロまたはインビボにおける、神経細胞における、レチノイン酸受容体β（ＲＡＲβ）（例えば、ＲＡＲβ２）の選択的活性化方法であって、該細胞と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む、方法に関する。
【０３０７】
１つの実施形態では、本方法は、インビトロで行われる。
【０３０８】
１つの実施形態では、本方法は、インビボで行われる。
【０３０９】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１は、例えばＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られる、医薬的に許容可能な組成物の形態で提供される。
【０３１０】
ＲＡＲβ活性化（例えば、ＲＡＲβ２活性化）を決定するための適切なアッセイは、本明細書に記載され、及び／または当技術分野で公知である。
【０３１１】
神経突起成長等の誘起または促進方法における使用：
ＢＨＢＡ−００１（本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）を含む）は、神経突起成長、神経突起伸長、及び／または神経突起再生を誘起または促進するために有用である。
【０３１２】
「神経突起」という用語は、本明細書で使用される場合、神経細胞の細胞体からの突起を指し、例えば、軸索及び樹状突起を含む。
【０３１３】
本発明の１つの態様は、神経突起成長、神経突起伸長、及び／または神経突起再生の誘起方法または促進方法における、例えば、インビトロまたはインビボにおける、神経細胞と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む方法における、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）の使用に関する。
【０３１４】
本発明の１つの態様は、神経突起成長の誘起方法または促進方法における、例えば、インビトロまたはインビボにおける、神経細胞と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む方法における、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）の使用に関する。
【０３１５】
本発明の１つの態様は、神経突起伸長の誘起方法または促進方法における、例えば、インビトロまたはインビボにおける、神経細胞と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む方法における、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）の使用に関する。
【０３１６】
本発明の１つの態様は、神経突起再生の誘起方法または促進方法における、例えば、インビトロまたはインビボにおける、神経細胞と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む方法における、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）の使用に関する。
【０３１７】
本発明の１つの態様は、神経突起成長、神経突起伸長、及び／または神経突起再生の誘起方法または促進方法であって、インビトロまたはインビボにおける、神経細胞と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む、方法に関する。
【０３１８】
本発明の１つの態様は、神経突起成長の誘起方法または促進方法であって、インビトロまたはインビボにおける、神経細胞と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む、方法に関する。
【０３１９】
本発明の１つの態様は、神経突起伸長の誘起方法または促進方法であって、インビトロまたはインビボにおける、神経細胞と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む、方法に関する。
【０３２０】
本発明の１つの態様は、神経突起再生の誘起方法または促進方法であって、インビトロまたはインビボにおける、神経細胞と、有効量の、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１とを接触させることを含む、方法に関する。
【０３２１】
１つの実施形態では、本方法は、インビトロで行われる。
【０３２２】
１つの実施形態では、本方法は、インビボで行われる。
【０３２３】
１つの実施形態では、ＢＨＢＡ−００１は、例えばＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られる、医薬的に許容可能な組成物の形態で提供される。
【０３２４】
神経突起成長、神経突起伸長、及び神経突起再生を決定または測定するための適切なアッセイは、本明細書に記載され、及び／または当技術分野で公知である。
【０３２５】
療法の方法における使用：
本発明の別の態様は、療法による、ヒトまたは動物の体の治療方法に使用するための、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）に関する。
【０３２６】
医薬の製造における使用：
本発明の別の態様は、治療に使用するための医薬の製造における、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）の使用に関する。
【０３２７】
１つの実施形態では、医薬は、ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば形態４）を含む。
【０３２８】
治療方法
本発明の別の態様は、好ましくは医薬組成物の形態における、治療上有効な量の、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）から得られるＢＨＢＡ−００１を、治療を必要とする患者に投与することを含む、治療方法に関する。
【０３２９】
治療される病状
ＲＡＲβによって媒介される病状
（例えば、療法の方法における使用の、医薬の製造における使用の、治療方法の）１つの実施形態では、治療は、ＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）によって媒介される疾患または病状の治療である。
【０３３０】
ＲＡＲβの活性化によって改善する病状
（例えば、療法の方法における使用の、医薬の製造における使用の、治療方法の）１つの実施形態では、治療は、ＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）の活性化によって改善する疾患または病状の治療である。
【０３３１】
（例えば、療法の方法における使用の、医薬の製造における使用の、治療方法の）１つの実施形態では、治療は、（例えば、ＲＡＲα及び／またはＲＡＲγとの関連での）ＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）の選択的活性化によって改善する疾患または病状の治療である。
【０３３２】
神経学的損傷
（例えば、療法の方法に使用するための結晶形態の、医薬の製造における使用の、治療方法の）１つの実施形態では、治療は、神経学的損傷の治療である。
【０３３３】
「神経学的損傷」という用語は、本明細書で使用される場合、神経系の任意の損傷（ｉｎｊｕｒｙ）または損傷（ｄａｍａｇｅ）を指し、例えば、下記の神経系の損傷（ｉｎｊｕｒｙ）または損傷（ｄａｍａｇｅ）を含む。すなわち、機械的に誘導されたもの（例えば、外傷によって生じたもの）、化学的に誘導されたもの（例えば、神経毒によって生じたもの、または設計によるものであるか、もしくは副作用としてのものかを問わず、免疫抑制作用を有する治療レジメンによるもの）、あるいは疾患関連のもの（例えば、微生物、細菌、真菌、もしくはウイルス感染によって生じたもの、神経変性障害によるもの、または任意の他の神経組織関連障害によるもの）である。
【０３３４】
１つの実施形態では、治療は、中枢神経系（ＣＮＳ）の損傷の治療である。
【０３３５】
１つの実施形態では、治療は、末梢神経系（ＰＮＳ）の損傷の治療である。
【０３３６】
「中枢神経系」（ＣＮＳ）という用語は、本明細書で使用される場合、脳及び脊髄を指す。「末梢神経系」（ＰＮＳ）という用語は、本明細書で使用される場合、脳及び脊髄の外側の神経細胞、神経、及び神経節を指す。「神経系」という用語は、本明細書で使用される場合、ＣＮＳ及びＰＮＳの両方を指す。
【０３３７】
１つの実施形態では、治療は、神経損傷の治療である。
【０３３８】
１つの実施形態では、治療は、ＰＮＳの神経損傷の治療である。
【０３３９】
１つの実施形態では、治療は、ＣＮＳの神経損傷の治療である。
【０３４０】
１つの実施形態では、治療は、脊髄損傷の治療である。
【０３４１】
１つの実施形態では、治療は、外傷によって生じた脊髄損傷の治療である。
【０３４２】
１つの実施形態では、治療は、視神経損傷の治療である。
【０３４３】
１つの実施形態では、治療は、緑内障によって生じた視神経損傷の治療である。
【０３４４】
１つの実施形態では、治療は、神経障害の治療である。
【０３４５】
１つの実施形態では、治療は、ＰＮＳの神経障害の治療である。
【０３４６】
１つの実施形態では、治療は、ＣＮＳの神経障害の治療である。
【０３４７】
１つの実施形態では、治療は、脊髄の神経障害の治療である。
【０３４８】
１つの実施形態では、治療は、視神経の神経障害の治療である。
【０３４９】
１つの実施形態では、治療は、糖尿病性神経障害（すなわち、糖尿病と関連する神経障害）の治療である。
【０３５０】
１つの実施形態では、治療は、ＡＩＤＳ神経障害（すなわち、ＡＩＤＳと関連する神経障害）の治療である。
【０３５１】
１つの実施形態では、治療は、ハンセン病神経障害（すなわち、ハンセン病と関連する神経障害）の治療である。
【０３５２】
１つの実施形態では、治療は、末梢の神経障害（例えば、多発性神経障害、単神経障害、多発単神経炎、または自律神経障害）の治療である。
【０３５３】
１つの実施形態では、治療は、神経変性障害の治療である。
【０３５４】
１つの実施形態では、治療は、認知障害、記憶機能障害、記憶欠損、老年認知症、アルツハイマー病、初期段階のアルツハイマー病、中間段階のアルツハイマー病、後期段階のアルツハイマー病、認知機能障害、または軽度認知機能障害の治療である。
【０３５５】
１つの実施形態では、治療は、ハンチントン病の治療である。
【０３５６】
１つの実施形態では、治療は、パーキンソン病の治療である。
【０３５７】
１つの実施形態では、治療は、運動神経疾患の治療である。
【０３５８】
１つの実施形態では、治療は、局所麻痺の治療である。
【０３５９】
１つの実施形態では、治療は、ベル麻痺の治療である。
【０３６０】
１つの実施形態では、治療は、神経起因性インポテンスの治療である。
【０３６１】
１つの実施形態では、治療は、前立腺全摘除後に神経外傷によって生じた神経起因性インポテンスの治療である。
【０３６２】
１つの実施形態では、治療は、例えば、単麻痺、四肢麻痺、または対麻痺といった、麻痺の治療である。
【０３６３】
１つの実施形態では、治療は、神経学的損傷によって生じた神経学的障害の治療である。
【０３６４】
１つの実施形態では、治療は、例えば、上述のような神経障害によって生じた神経学的障害の治療である。
【０３６５】
１つの実施形態では、治療は、例えば、上述のような神経障害によって生じた神経学的損傷の治療である。
【０３６６】
治療
病状の治療との関連において本明細書で使用される「治療」という用語は、一般に、ヒトまたは動物（例えば、獣医学的用途において）を問わず、何らかの所望の治療効果（例えば、病状進行の抑制）が達成される治療及び療法に関し、進行速度の低減、進行速度の停止、病状の症状軽減、病状の改善、及び病状の治癒が含まれる。予防処置としての治療（すなわち、予防）も含まれる。例えば、病状をまだ発症していないが、病状発症の危険を有する患者に関する使用は、「治療」という用語によって包含される（すなわち、病状の治療は、その病状の危険の低減を包含する）。
【０３６７】
例えば、治療には、局所麻痺の予防、局所麻痺の危険の低減、局所麻痺の症状の軽減等が含まれる。
【０３６８】
「治療上有効な量」という用語は、本明細書で使用される場合、化合物の量、または化合物を含む材料、組成物、もしくは剤形の量であって、所望の治療レジメンに従って投与されるとき、何らかの所望の治療効果の提供に有効であり、合理的な利益／危険比に見合う量に関する。
【０３６９】
組み合わせ療法
「治療」という用語は、２つ以上の治療または療法を、例えば、逐次的または同時に組み合わせた、組み合わせ治療及び組み合わせ療法を含む。例えば、本明細書に記載の化合物は、例えば、他の薬剤と併用して、組み合わせ療法において使用してもよい。治療及び療法の例には、限定はされないが、化学療法（例えば、薬物、抗体（例えば、免疫療法において用いられるようなもの）、プロドラッグ（例えば、光線力学的療法、ＧＤＥＰＴ、ＡＤＥＰＴ等において用いられるようなもの）を含む活性薬剤の投与）、手術、放射線療法、光線力学的療法、遺伝子療法、及び制限食が含まれる。
【０３７０】
例えば、本明細書に記載の化合物を用いる治療と、例えば、神経学的損傷を治療する１つまたは複数の他の（例えば、１つ、２つ、３つ、４つの）薬剤または療法とを組み合わせることが有利であり得る。
【０３７１】
本発明の１つの態様は、以下に記載のように、１つまたは複数の追加の治療薬剤と併用される、本明細書に記載の化合物に関する。
【０３７２】
特定の組み合わせは、医師の裁量に委ねられ、医師は、自身の通常の一般的な知識、及び当業者に知られる投薬レジメンを使用して投与量を選択する。
【０３７３】
薬剤（すなわち、本明細書に記載の化合物、及びそれに追加される１つまたは複数の他の薬剤）は、同時または逐次的に投与してよく、異なる用量スケジュールにおいて、異なる経路を介して、個々に投与してよい。例えば、逐次的に投与されるとき、薬剤は、間隔を密にして（例えば、５〜１０分の時間にわたって）、あるいは間隔を長くして（例えば、１時間、２時間、３時間、４時間、もしくはそれより長い時間を空けるか、または必要な場合はさらに長い時間を空けて）投与することができ、正確な投与量レジメンは、治療薬剤（複数可）の性質に応じて決定される。
【０３７４】
薬剤（すなわち、本明細書に記載の化合物、及びそれに追加される１つまたは複数の他の薬剤）は、単一の剤形において一緒に製剤化してよく、あるいは個々の薬剤が別々に製剤化され、キットの形態において一緒に提示されてよく、キットは、任意選択で、薬剤使用のための説明書を含む。
【０３７５】
他の用途
ＢＨＢＡ−００１（本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）を含む）はまた、例えば、神経突起成長、神経突起伸長、及び／または神経突起再生を誘起または促進するために、ＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）を活性化するための細胞培養添加物として使用してもよい。
【０３７６】
ＢＨＢＡ−００１（本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）を含む）はまた、例えば、候補宿主が、問題の化合物を用いた治療により利益を得る可能性があるかどうかを決定するために、例えば、インビトロアッセイの一部として使用してもよい。
【０３７７】
ＢＨＢＡ−００１（本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）を含む）はまた、例えば、他の化合物、他のＲＡＲβ（例えば、ＲＡＲβ２）アゴニスト等を同定するために、アッセイにおいて、基準物質として使用してもよい。
【０３７８】
キット
本発明の１つの態様は、（ａ）例えば、好ましくは、適した容器及び／または適した包装を用いて提供される、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、または本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）を含む組成物と、（ｂ）使用説明書、例えば、化合物または組成物の投与の仕方に関する書面の説明書とを含むキットに関する。
【０３７９】
書面の説明書はまた、活性成分が何の治療に適しているか示すリストを含んでもよい。
【０３８０】
投与経路
ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）、またはＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）を含む医薬組成物は、全身性／末梢性、または局所性（すなわち、所望の作用の部位における）を問わず、任意の簡便な投与経路によって、対象に投与してよい。
【０３８１】
投与経路には、限定はされないが、経口経路（例えば、経口摂取によるもの）、頬側経路、舌下経路、経皮経路（例えば、パッチ、硬膏剤等によるものを含む）、経粘膜経路（例えば、パッチ、硬膏剤等によるものを含む）、鼻腔内経路（例えば、スプレー式点鼻薬によるもの）、経眼経路（例えば、点眼薬によるもの）、経肺経路（例えば、吸入療法または吹送療法によるものであり、例えば、口または鼻を経由し、例えば、エアロゾルを介するものを使用）、経直腸経路（例えば、坐薬または浣腸によるもの）、経膣経路（例えば、ペッサリーによるもの）、例えば、皮下、皮内、筋肉内、静脈内、動脈内、心臓内、くも膜下腔内、脊髄内、関節包内、嚢下、眼窩内、腹腔内、気管内、表皮下、関節内、くも膜下、及び胸骨内へのものを含む、注射によるものなどの非経口経路、例えば、皮下または筋肉内への、デポまたはリザーバーの植込によるものが含まれる。
【０３８２】
対象／患者
対象／患者は、脊索動物（ｃｈｏｒｄａｔｅ）、脊椎動物（ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ）、哺乳動物、胎盤哺乳動物、有袋類（例えば、カンガルー、ウオンバット）、げっ歯類（例えば、モルモット、ハムスター、ラット、マウス）、マウス類（ｍｕｒｉｎｅ）（例えば、マウス）、ウサギ類（ｌａｇｏｍｏｒｐｈ）（例えば、ウサギ）、鳥類（ａｖｉａｎ）（例えば、トリ）、イヌ類（ｃａｎｉｎｅ）（例えば、イヌ）、ネコ類（ｆｅｌｉｎｅ）（例えば、ネコ）、ウマ類（ｅｑｕｉｎｅ）（例えば、ウマ）、ブタ類（ｐｏｒｃｉｎｅ）（例えば、ブタ）、ヒツジ類（ｏｖｉｎｅ）（例えば、ヒツジ）、ウシ類（ｂｏｖｉｎｅ）（例えば、雌ウシ）、霊長類、サル類（ｓｉｍｉａｎ）（例えば、サルまたは類人猿）、サル（ｍｏｎｋｅｙ）（例えば、マーモセット、ヒヒ）、類人猿（例えば、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル）、またはヒトであり得る。
【０３８３】
さらに、対象／患者は、その発生形態のいずれかであり得、例えば、胎児である。
【０３８４】
１つの好ましい実施形態では、対象／患者は、ヒトである。
【０３８５】
製剤
ＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）の単独投与は可能であるが、当業者に周知の１つまたは複数の他の医薬的に許容可能な成分と一緒に、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）を含む医薬製剤（例えば、組成物、調製物、医薬）として提示することが好ましく、他の医薬的に許容可能な成分には、限定はされないが、医薬的に許容可能な担体、希釈剤、賦形剤、補助剤、増量剤、緩衝剤、保存剤、抗酸化剤、潤滑剤、安定剤、可溶化剤、界面活性剤（例えば、湿潤剤）、マスキング剤、着色剤、香料添加剤、及び甘味剤が含まれる。製剤は、例えば、他の治療薬剤または予防薬剤といった、他の活性薬剤をさらに含んでよい。
【０３８６】
したがって、本発明は、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）を、例えば、担体、希釈剤、賦形剤等といった、当業者に周知の１つまたは複数の他の医薬的に許容可能な成分と一緒に含む、上に定義される医薬組成物、及び医薬組成物の調製方法をさらに提供する。別々の単位（例えば、錠剤、カプセル等）として製剤化されるのであれば、それぞれの単位が、所定量（投与量）の化合物を含有する。
【０３８７】
「医薬的に許容可能な」という用語は、本明細書で使用される場合、合理的な利益／危険比に見合い、過剰な毒性、刺激作用、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴うことなく、健全な医学的判断の範囲内で、問題の対象（例えば、ヒト）の組織と接触する使用に適した化合物、成分、材料、組成物、剤形等に関する。担体、希釈剤、賦形剤等はそれぞれ、製剤の他の成分との適合性を有するという意味においても、「許容可能」でなくてはならない。
【０３８８】
適した担体、希釈剤、賦形剤等は、標準的な医薬の教科書において見つけることができ、教科書は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９０、及びＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，２００５である。
【０３８９】
製剤は、薬学分野において周知の任意の方法によって調製してよい。そのような方法は、ＢＨＢＡ−００１（例えば、その結晶形態を含む）と、１つまたは複数の付属成分を構成する担体とを結びつけるステップを含む。一般に、製剤は、ＢＨＢＡ−００１（例えばその結晶形態、例えば形態４を含む）と、担体（液体担体、微粉化された固体担体等）とを均一及び密接に結びつけ、次いで、必要であれば、製品を成形することによって調製される。
【０３９０】
製剤は、迅速放出もしくは徐放、即時放出、遅延放出、時限放出、もしくは持続放出、またはそれらの組み合わせを提供するために調製してよい。
【０３９１】
製剤は、適切に、液体、溶液（例えば、水性、非水性）、懸濁液（例えば、水性、非水性）、乳濁液（例えば、水中油型、油中水型）、エリキシル剤、シロップ、舐剤、口腔洗浄剤、点滴剤、錠剤（例えば、被覆された錠剤を含む）、顆粒、粉末、ロゼンジ、トローチ、カプセル（例えば、ハードゼラチンカプセル及びソフトゼラチンカプセルを含む）、カシェー、丸剤、アンプル、ボーラス、坐薬、ペッサリー、チンキ、ゲル、ペースト、軟膏、クリーム、ローション、オイル、泡沫、スプレー、ミスト、またはエアロゾルの形態であり得る。
【０３９２】
製剤は、ＢＨＢＡ−００１（例えばその結晶形態、例えば形態４を含む）と、任意選択で、例えば、透過増進剤、浸透増進剤、及び吸収増進剤を含む、１つまたは複数の他の医薬的に許容可能な成分とを含浸するパッチ、絆創膏、包帯、ドレッシング材、または同様のものとして適切に提供してよい。製剤は、デポまたはリザーバーの形態において適切に提供してもよい。
【０３９３】
ＢＨＢＡ−００１（例えばその結晶形態、例えば形態４を含む）は、１つまたは複数の他の医薬的に許容可能な成分に溶解、懸濁、またはそれと混合してよい。化合物は、例えば、血液成分または１つもしくは複数の臓器が化合物の標的となるように設計されたリポソームまたは他の微粒子において提示してよい。
【０３９４】
経口投与（例えば、経口摂取によるもの）に適した製剤には、液体、溶液（例えば、水性、非水性）、懸濁液（例えば、水性、非水性）、乳濁液（例えば、水中油型、油中水型）、エリキシル剤、シロップ、舐剤、錠剤、顆粒、粉末、カプセル、カシェー、丸剤、アンプル、ボーラスが含まれる。
【０３９５】
頬側投与に適した製剤には、口腔洗浄剤、ロゼンジ、トローチ、ならびにパッチ、絆創膏、デポ、及びリザーバーが含まれる。ロゼンジは、典型的には、風味付けされた基材において化合物を含み、基材は、通常、スクロース及びアカシアまたはトラガカントである。トローチは、典型的には、ゼラチン及びグリセリン、またはスクロース及びアカシアなどの不活性な基材において化合物を含む。口腔洗浄剤は、典型的には、適した液体担体において化合物を含む。
【０３９６】
舌下投与に適した製剤には、錠剤、ロゼンジ、トローチ、カプセル、及び丸剤が含まれる。
【０３９７】
経口的な経粘膜投与に適した製剤には、液体、溶液（例えば、水性、非水性）、懸濁液（例えば、水性、非水性）、乳濁液（例えば、水中油型、油中水型）、口腔洗浄剤、ロゼンジ、トローチ、ならびにパッチ、絆創膏、デポ、及びリザーバーが含まれる。
【０３９８】
非経口的な経粘膜投与に適した製剤には、液体、溶液（例えば、水性、非水性）、懸濁液（例えば、水性、非水性）、乳濁液（例えば、水中油型、油中水型）、坐薬、ペッサリー、ゲル、ペースト、軟膏、クリーム、ローション、オイル、ならびにパッチ、絆創膏、デポ、及びリザーバーが含まれる。
【０３９９】
経皮投与に適した製剤には、ゲル、ペースト、軟膏、クリーム、ローション、及びオイル、ならびにパッチ、絆創膏、包帯、ドレッシング材、デポ、及びリザーバーが含まれる。
【０４００】
錠剤は、従来の手段、例えば、圧縮または成形によって作製してよい（任意選択で１つまたは複数の付属成分と共に）。圧縮錠剤は、粉末または顆粒などの、流動性形態にあるＢＨＢＡ−００１（例えばその結晶形態、例えば形態４を含む）を、適した機械において圧縮することによって調製してよく、その際、任意選択で、流動性形態にある化合物と、以下に記載のものとを混合して圧縮調製してよい。すなわち、１つまたは複数の、結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、アカシア、ソルビトール、トラガカント、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、増量剤または希釈剤（例えば、ラクトース、微結晶セルロース、リン酸水素カルシウム）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ）、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤または分散剤または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、保存剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル、ソルビン酸）、香料、香料増進剤、及び甘味剤である。成形錠剤は、不活性な液体希釈剤を用いて湿らせた粉末化合物の混合物を、適した機械において成形することによって作製してよい。錠剤は、任意選択で、被覆するか、または割線を入れてよく、例えば、所望の放出プロファイルを得るために、ヒドロキシプロピルメチルセルロースをさまざまな割合で使用することで、錠剤における化合物の放出が遅延または制御されるように製剤化してよい。錠剤は、任意選択で、被覆して提供されてよく、例えば、放出に影響を及ぼすためであり、例えば、腸溶被覆を行うことで、胃以外の腸部分において放出が生じる。
【０４０１】
軟膏は、典型的には、ＢＨＢＡ−００１（例えばその結晶形態、例えば形態４を含む）、及びパラフィンまたは水混和性の軟膏基材から調製される。
【０４０２】
クリームは、典型的には、ＢＨＢＡ−００１（例えばその結晶形態、例えば形態４を含む）及び水中油型のクリーム基材から調製される。望まれるのであれば、クリーム基材の水相は、例えば、多価アルコールを少なくとも約３０％ｗ／ｗ含んでよく、多価アルコールは、すなわち、プロピレングリコール、ブタン−１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、及びポリエチレングリコール、ならびにそれらの混合物などの、２つ以上のヒドロキシル基を有するアルコールである。局所製剤は、皮膚または他の発症範囲を介する、化合物の吸収または透過を増進する化合物を含むことが望ましくあり得る。そのような皮膚透過増進剤の例には、ジメチルスルホキシド及び関連アナログが含まれる。
【０４０３】
乳濁液は、典型的には、ＢＨＢＡ−００１（例えばその結晶形態、例えば形態４を含む）及び油性の相から調製され、任意選択で、単に乳化剤（別名エマルジェント（ｅｍｕｌｇｅｎｔ））を含んでよく、あるいは少なくとも１つの乳化剤と、脂肪もしくはオイル、または脂肪及びオイルの両方との混合物を含んでよい。好ましくは、親水性の乳化剤は、安定剤として働く親油性の乳化剤と一緒に含まれる。オイル及び脂肪の両方を含むことも好ましい。まとめると、安定剤（複数可）を添加するか、または非添加で、乳化剤（複数可）から、いわゆる乳化ワックスが出来上がり、オイル及び／または脂肪が、ワックスと一緒になることで、クリーム製剤の油性分散相を形成する、いわゆる乳化軟膏基材が出来上がる。
【０４０４】
適したエマルジェント及び乳濁液安定剤には、Ｔｗｅｅｎ６０、Ｓｐａｎ８０、セトステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、モノステアリン酸グリセリン、及びラウリル硫酸ナトリウムが含まれる。製剤に適したオイルまたは脂肪の選択は、所望の化粧品性質が達成されるかということに基づき、これは、医薬的な乳濁液製剤に使用される可能性のあるオイルのほとんどにおいて、化合物の溶解性が非常に低くあり得るためである。したがって、クリームは、好ましくは、グリース状でなく、非染色性であり、洗い流すことが可能な製品であって、チューブまたは他の容器からの漏出を避けるために適した粘稠度を有するべきである。ジ−イソアジピン酸エステル（ｄｉ−ｉｓｏａｄｉｐａｔｅ）、ステアリン酸イソセチル、ヤシ脂肪酸のプロピレングリコールジエステル、ミリスチン酸イソプロピル、オレイン酸デシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、パルミチン酸２−エチルヘキシルなどの、直鎖もしくは分岐鎖であり、一塩基性もしくは二塩基性のアルキルエステル、またはＣｒｏｄａｍｏｌ  ＣＡＰとして知られる分岐鎖エステルの混合物を使用してよく、好ましいエステルは、最後に記載した３つのエステルである。こうしたものは、必要とされる性質に応じて単独または組み合わせて使用してよい。あるいは、白色軟パラフィン及び／もしくは流動パラフィン、または他の鉱物油などの高融点脂質を使用することができる。
【０４０５】
鼻腔内投与に適した製剤であり、担体が液体であるものには、例えば、スプレー式点鼻薬、点鼻薬が含まれ、または噴霧器によるエアロゾル投与によるものには、ＢＨＢＡ−００１（例えばその結晶形態、例えば形態４を含む）の水性または油性溶液が含まれる。
【０４０６】
鼻腔内投与に適した製剤であり、担体が固体であるものには、例えば、粒子サイズの範囲が、例えば、約２０〜約５００ミクロンであり、嗅ぎ薬で実施される様式、すなわち、鼻に近づけて保持された粉末容器から、鼻孔を介する急速吸入によって投与される粗粉末として提示されるものが含まれる。
【０４０７】
経肺投与（例えば、吸入療法または吹送療法によるもの）に適した製剤は、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適したガスなどの、適した噴霧剤を使用する加圧型パックに由来するエアロゾルスプレーとして提示されるものが含まれる。
【０４０８】
経眼投与に適した製剤には、ＢＨＢＡ−００１（例えばその結晶形態、例えば形態４を含む）が、その化合物に適した担体、特に、水性溶媒に溶解または懸濁している点眼薬が含まれる。
【０４０９】
経直腸投与に適した製剤は、例えば、天然油もしくは硬化油、ワックス、脂肪、半液体もしくは液体のポリオール、例えば、ココアバターもしくはサリチル酸（ｓａｌｉｃｙｌａｔｅ）を含む適した基材を含む坐薬として提示されてよく、または浣腸による治療向けの溶液もしくは懸濁液として提示されてよい。
【０４１０】
経膣投与に適した製剤は、化合物に加えて、当該技術分野において適していることが知られる担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡沫、またはスプレーの製剤として提示されてよい。
【０４１１】
非経口投与（例えば、注射によるもの）に適した製剤には、水性または非水性で、等張性であり、発熱物質を含まず、無菌の液体（例えば、溶液、懸濁液）であって、その中に、ＢＨＢＡ−００１（例えばその結晶形態、例えば形態４を含む）が溶解、懸濁、または他のやり方で（例えば、リポソームまたは他の微粒子において）提供されるものが含まれる。そのような液体は、他の医薬的に許容可能な成分、例えば、抗酸化剤、緩衝剤、保存剤、安定剤、静菌剤、懸濁剤、増粘剤、及び製剤を、意図するレシピエントの血液（または他の関連体液）と等張性にする溶質を追加で含有してよい。賦形剤の例には、例えば、水、アルコール、ポリオール、グリセロール、植物油、及び同様のものが含まれる。そのような製剤における使用に適した等張性担体の例には、塩化ナトリウム注射液、リンゲル液、または乳酸リンゲル注射液が含まれる。典型的には、液体における化合物の濃度は、約１ｎｇ／ｍＬ〜約１０μｇ／ｍＬであり、例えば、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１μｇ／ｍＬである。製剤は、例えば、アンプル及びバイアルといった、単位用量または複数用量を含む密封容器において提示されてよく、使用直前に、例えば、注射用水といった、無菌液体担体の添加のみが必要な凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｓｅｄ））状態で保存してよい。即時注射用の溶液及び懸濁液は、無菌の粉末、顆粒、及び錠剤から調製してよい。
【０４１２】
投与量
ＢＨＢＡ−００１（例えば、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）を含む）、及びＢＨＢＡ−００１（例えば、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）を含む）を含む組成物の適切な投与量は、患者によって変わり得ることを、当業者であれば理解する。最適な投与量の決定には、一般に、任意の危険または有害な副作用に対する治療利益レベルのバランスを保つことが必要となる。選択される投与量レベルは、限定はされないが、ＢＨＢＡ−００１の活性、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の特定の結晶形態（例えば、形態４）の活性、投与経路、投与時期、ＢＨＢＡ−００１の排出速度、治療期間、組み合わせて使用される他の薬物、化合物、及び／または材料、病状の重症度、ならびに患者の種、雌雄の別、年齢、体重、病状、総体的な健康、及び既往歴を含む、さまざまな因子に依存する。一般に、投与量は、実質的に有害（ｈａｒｍｆｕｌ）または有害（ｄｅｌｅｔｅｒｉｏｕｓ）な副作用を誘起することなく、所望の作用が達成される局所濃度が作用部位で達成されるように選択するものの、ＢＨＢＡ−００１（例えば、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）を含む）の量、及び投与経路は、最終的には、医師、獣医、または臨床医の裁量に委ねられる。
【０４１３】
投与は、治療過程全体を通して、１つの用量において、継続的または断続的に（例えば、適切な間隔をとる分割用量で）行うことができる。投与の最も有効な手段及び投与量を決定する方法は、当業者に周知であり、療法に使用される製剤、療法の目的、治療される標的細胞（複数可）、及び治療される対象に応じて変わる。治療に当たる医師、獣医、または臨床医が選択する用量レベル及びパターンを用いて、単回または複数回の投与を実施することができる。
【０４１４】
一般に、ＢＨＢＡ−００１（例えば、本明細書に記載のＢＨＢＡ−００１の結晶形態（例えば、形態４）を含む）の適した用量範囲は、１日当たり、対象の体重キログラム当たり約１０μｇ〜約２５０ｍｇ（より典型的には、約１００μｇ〜約２５ｍｇ）である。
【０４１５】
ＲＡＲβアゴニストについての生物学的モデル化
神経損傷の治療を目的とした、ＲＡＲβアゴニストの生物学的モデル化−１
インビボにおいてＲＡＲβ２の発現を上方制御する単純な手法は、ＲＡＲβアゴニストを使用することであり、この理由は、この受容体の遺伝子がＲＡＲＥを含有しており、その結果として自己制御が生じるためである（例えば、Ｌｅｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２を参照のこと）。また、これは、遺伝子療法と比較して、ＣＮＳの損傷の治療に対する解決策としてはるかに実践的であり、この理由は、レチノイドが小さな親油性分子であり、損傷した神経細胞のすべてに到達できる可能性を有していると共に、用量を容易に制御することができるためである。
【０４１６】
ラットの皮質脊髄路（ＣＳＴ）を、ラットのＣ４レベルで破壊し、ＲＡＲβアゴニスト（ＣＤ２０１９、６−（４−メトキシ−３−（１−メチルシクロヘキシル）フェニル）−２−ナフタレンカルボン酸、ＲＡＲβ選択的アゴニスト）を、インビボにおいて側脳室に２週間適用した。結果は、ＣＳＴの神経細胞体において、ＣＤ２０１９がＲＡＲβ２の上方制御を引き起こすことを示している。５週間後、ＣＳＴの軸索をＢＤＡで標識したところ、損傷した対照動物では、損傷部位を横断した標識化軸索は存在しないことが示されたが、アゴニストで処理したラットでは、顕著な数の軸索が損傷部位を超えて、数ミリメートル横断及び伸長していることが示された。具体的には、ビヒクルで処理した動物では、軸索（白）は、ＳＣＩを横断して伸長しなかったが、ＣＤ２０１９で処理した動物では、損傷部位を横断している軸索が多く観測された。
【０４１７】
５週間後の行動試験では、ＣＤ２０１９で処理したラットの動作は、損傷を有さない動物と同程度に十分なものであった。
【０４１８】
結果はＢｏｒｔｈｗｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６で説明されている。その中の図１は、格子を歩行する課題（Ａ）及び梁を歩行する課題（Ｂ）について、損傷後の経過週数の関数として、ラットが足を滑らせた回数を表す２つのグラフを示す。図１のデータは、損傷した動物において、ＣＤ２０１９が前足の機能的な回復を誘導することを示している。損傷時に、ラットには、１８０ｎｇ／ｋｇ／日で１４日間、脳室内へのＣＤ２０１９処理を実施した。ＣＤ２０１９で処理した損傷ラットは、格子を歩行する課題（Ａ）では、損傷の４週間後、梁を歩行する課題（Ｂ）では、損傷の２週間後に機能的な回復を示した一方で、ビヒクルで処理した損傷動物では、有意な回復は見受けられなかった。誤差バーは、ＳＥＭを示す。アスタリスクは、損傷を有し、処理（ＣＤ２０１９またはビヒクル）を実施した群と、損傷を有さず、ビヒクル処理を実施した群との有意差を示す。＊Ｐ＜０．０５、スチューデント（ｓｔｕｄｅｎｔ）ｔ検定、各処理群のラット数はｎ＝６。
【０４１９】
対照の損傷動物に由来する皮質とは対照的に、ＲＡＲβアゴニストで処理したこれらの動物に由来する皮質断片を培養すると、神経突起伸長が観測された。具体的には、ビヒクルで処理した成体皮質からは軸索伸長が生じなかったが、ＣＤ２０１９で処理した成体皮質からは軸索伸長が生じた。
【０４２０】
神経損傷の治療を目的とした、ＲＡＲβアゴニストの生物学的モデル化−２
神経損傷の別の実施例では、左前足のレベルで、４つのＤＲＧのそれぞれに由来する４つの感覚根を切断し、脊髄へと再移植した。異なった選択性プロファイル（以下の表に示されるとおりであり、データはすべてヒトのものである）を有するいくつかの異なるレチノイド、ならびにＲＡＲβアゴニスト（ＣＤ２０１９及びＢＨＢＡ−００１）を用いてラットを処理した。
【０４２１】
【表１９】
2019522650.tif 000034
【０４２２】
５週間後の行動試験では、損傷を有さない動物と同程度に動作が十分であったのは、ＣＤ２０１９（ＲＡＲβアゴニストとして知られる）及びＢＨＢＡ−００１で処理したラットのみであった。
【０４２３】
結果はＢｏｒｔｈｗｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６で説明されている。その中の図２は、損傷後の経過週数の関数として、損傷した前足に置かれた粘着テープをラットが感知するのに要した時間（パネルＡ）、及び粘着テープをラットが除去するのに要した時間（パネルＢ）を表す２つのグラフを示す。損傷の２日後に、１ｍｇ／ｋｇの試験化合物またはビヒクルでラットを処理し、その後は、実験の期間中、週当たり３回の処理を実施した。誤差バーは、ＳＥＭを示す。＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントｔ検定、各処理群のラット数はｎ＝３〜４。３週目、４週目、及び５週目の時点で、他のレチノイドアゴニスト及びビヒクルで処理したラットと、ＲＡＲβアゴニストで処理したラットとを比較すると、それらの間で有意な差が生じた。
【０４２４】
図２のデータは、さらに、前足の機能的な回復には、ＲＡＲβに対する選択性が必要であることを示している。ＲＡＲβアゴニストで処理した損傷ラットは、機能的な回復を示し、このことは、粘着テープの感知（パネルＡ）及び粘着テープの除去（パネルＢ）によって示されるとおりであり、他のレチノイドアゴニストまたはビヒクルのいずれで処理した損傷ラットにおいても、回復は生じなかった。
【０４２５】
ＲＡＲβ２シグナル伝達と、神経突起伸長に関与する他の経路との相互作用：
軸索／神経突起伸長においてＲＡＲβシグナル伝達経路が重要であるということは、ＲＡＲβシグナル伝達経路と、このプロセスに関与することが知られている他の経路との相互作用を例示することによっても示された。
【０４２６】
ホスホイノシチド３−キナーゼ経路：
神経突起伸長を刺激することが知られている経路には、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）−依存性タンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡ）、及びホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）が含まれ、これらは、ミエリン阻害を克服することができる（例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００５を参照のこと）。Ｂｏｒｔｈｗｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６の著者らはまた、これらの経路のどちらかに、ＲＡＲβシグナル伝達経路が、どのように結び付き得るのかを調べた。
【０４２７】
ミエリン存在下で増殖した小脳神経細胞の培養物において、ＲＡＲβアゴニストであるＣＤ２０１９は、神経突起伸長を誘起し、ｃＡＭＰシグナル伝達を阻止するＰＫＡ阻害剤（ＫＴ５７２０）を存在させても、ＲＡＲβアゴニスト媒介性の神経突起伸長に対する効果は、ほとんどないか、または全くないことが示された。
【０４２８】
しかしながら、ＲＡＲβアゴニスト（ＣＤ２０１９）及びＰＩ３Ｋ阻害剤（ＬＹ２９５００２）の存在下で小脳神経細胞を培養すると、神経突起伸長は著しく妨害された。具体的には、ＰＩ３Ｋ阻害剤（ＬＹ２９５００２）は、ＭＡＧ存在下でＲＡＲβアゴニスト（ＣＤ２０１９）媒介性の神経突起伸長を阻止する一方で、ｃＡＭＰ阻害剤（ＫＴ５７２０）は、ＲＡＲβアゴニスト（ＣＤ２０１９）媒介性の伸長に影響を与えない。さらに、ＲＡＲβアゴニストであるＣＤ２０１９を１μＭで用いて処理した小脳培養物のウエスタンブロットでは、対照培養物と比較して、神経細胞のリン酸化Ａｋｔが４倍にまで顕著に増加するが、ＰＩ３Ｋの標的である全Ａｋｔは増加しないことが示された。このことは、神経突起伸長の刺激において、ＲＡＲβアゴニストが、ＰＩ３Ｋ経路を介して、ＡＫＴのリン酸化を増加させることによって働くが、ＡＫＴのプール全体を増加させるわけではないことを示唆している。損傷したＣＳＴ神経細胞において、リン酸化ＡＫＴがＣＤ２０１９によって誘導されることがインビボにおいても示され、このことは、このアゴニストが、インビトロのものと同一の機構を介して働くことを示唆している（例えば、Ａｇｕｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０を参照のこと）。
【０４２９】
ＣＮＳ再生の標的としてＰＩ３Ｋ経路への関心は存在するが、キナーゼ自体を特異的に標的とするものを調製することは困難である一方で、この経路を調節することができる特異的なＲＡＲβアゴニストを調製することはできる。
【０４３０】
生物学的モデル化−方法の詳細
動物の手術
動物実験はすべて、英国内務省の規制の下で実施した。脊髄後柱への損傷は、以前の説明のように（例えば、Ｂｒａｄｂｕｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００２を参照のこと）、成体の雄性ラットに対して実施した。０．５μＬ／時間の流速を１４日間維持する小型浸透圧ポンプ（Ａｌｚｅｔ（商標））を、１０μＭのＲＡＲβアゴニスト（ＣＤ２０１９、ＣＩＲＤ  Ｇａｌｄｅｒｍａ，Ｓｏｐｈｉａ−Ａｎｔｉｐｏｌｉｓ，Ｆｒａｎｃｅより入手）、またはビヒクル（ＰＢＳ中、１０％ＤＭＳＯ）で満たした。ＣＤ２０１９は、ＲＡＲαと比較して、ＲＡＲβに対して５倍選択的であり、ＲＡＲγと比較して、ＲＡＲβに対して１２倍選択的である（例えば、Ｂｅｒｎａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２、Ｄｅｌｅｓｃｌｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１を参照のこと）。ポンプを皮下に設置し、側脳室（ブレグマ座標：体軸方向：−０．８ｍｍ、内外方向：−１．５ｍｍ、及び背腹方向：−４．５ｍｍ）へと挿入された、脳への注入カテーテル（Ａｌｚｅｔ（商標））に連結した。これにより、１８０ｎｇ／ｋｇ／日のＣＤ２０１９用量が与えられた。用量は、成体ラットの脳における、ＲＡＲα及びＲＡＲβのシグナル伝達の活性化に関して、インビボにおいて以前に実施された研究に基づくものであった（例えば、Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９を参照のこと）。行動研究、及びその後の追跡を実施する動物（処理当たりｎ＝６）は、６週間飼育した後、致死量のペントバルビタールを注射して屠殺し、４％のＰＦＡを経心的に灌流した。解剖した組織（頸髄及び腰髄）を免疫蛍光法に向けて処理した。
【０４３１】
ウエスタンブロッティング
手術１４日後の成体ラット（群当たりｎ＝３）の皮質からタンパク質を抽出した。タンパク質量は、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）タンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して決定した。タンパク質（１０μｇ）は、１０％または６％のＳＤＳ−ＰＡＧＥ用ゲルに負荷した。セミドライブロッティングを実施し、ブロットのプローブとして、ウサギ抗ＲＡＲβ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、１：５００希釈）、ウサギ抗リン酸化Ａｋｔ、ウサギ抗Ａｋｔ（両抗体共、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙより入手し、１：１０００希釈を実施）、及びマウス抗ＧＦＡＰ（Ｓｉｇｍａ、１：１０００希釈）を用いた。その後、ＨＲＰコンジュゲート化二次抗体（Ａｂｃａｍより入手した抗マウスＩｇＭ＋Ａの１：５０００希釈、ならびにＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈより入手した抗マウス及び抗ウサギの１：５０００希釈）と共にメンブレンをインキュベートし、化学発光基質（ＥＣＬ；Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を適用することによって、ＨＲＰ活性を可視化した後、Ｘ線フィルムにメンブレンを曝露した。負荷対照については、ブロットのプローブとして、マウス抗βＩＩＩチューブリン（Ｐｒｏｍｅｇａ、１：１０００希釈）を用いて、上記のように発色させた。曝露したフィルムは、Ｇｅｎｅ  Ｔｏｏｌｓ（商標）プログラム（Ｓｙｎｇｅｎｅ）によって分析した。シグナル密度は、β−ＩＩＩチューブリンに対するシグナル強度比として計算した。
【０４３２】
ＲＴ−ＰＣＲ
以前の説明のように（例えば、Ｃｏｒｃｏｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００を参照のこと）、ＲＮＡを単離し、ｃＤＮＡ合成を実施した。ラットＲＡＲβ２（受入番号ＡＪ００２９４２）のＰＣＲについては、１３４ｂｐの産物をもたらす下記のプライマーを使用した：フォワード（ｔｔｃｇｔｇｇａｃｔｔｔｔｃｔｇｔｇｃ）、及びリバース（ｔｇｔａｇａａａｔｃｃａｇｇａｔｃｔｇｃｃ）。これらのプライマーは、ラットＲＡＲβ２に特異的であり、それ故に、他のＲＡＲ／ＲＸＲアイソフォームが検出される可能性はない。下記条件のサイクルを３０回実施した。９４℃３０秒、５６℃３０秒、及び７２℃３０秒。
【０４３３】
神経突起伸長アッセイ
出生３日後のラットの子から単離した小脳の神経細胞を、対照培地、または組換えＭＡＧ−Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を添加して、ＭＡＧ−Ｆｃの最終濃度を２０μｇ／ｍＬとした培地において、親３Ｔ３細胞の単層上で培養した。単層は、神経細胞添加前の２４時間で確立し、共培養は、約２１時間維持した。４％のパラホルムアルデヒドを用いて注意深く固定化した後、１：５００の比で希釈したＧＡＰ−４３抗体（Ｇｒａｈａｍ  Ｗｉｌｋｉｎ，Ｉｍｐｅｒｉａｌ  Ｃｏｌｌｅｇｅより入手）を用いて神経細胞を免疫染色し、以前の説明のように（例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００５を参照のこと）、約１２０〜１５０個の神経細胞を対象として、細胞当たり最長の神経突起の平均長を測定した。ＤＲＧ及び皮質の外植片を、成体ラットから得て、以前の説明のように（例えば、Ｃｏｒｃｏｒａｎ  ａｎｄ  Ｍａｄｅｎ，１９９９を参照のこと）、それらをセロゲン中で培養した。処理当たり３つの外植片を使用した。３日後に、ＮＦ２００（Ｓｉｇｍａ、１：２００希釈）を用いた免疫組織化学によって神経突起伸長を評価した。神経突起の平均長は、ｉｍａｇｅ  ｐｒｏ  ｐｌｕｓソフトウェアを使用して測定した。培地は、グルコース（３３ｍＭ）及びグルタミン（２ｍＭ）が添加されたＮ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有するＤＭＥＭ−Ｆ１２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からなるものを使用した。
【０４３４】
ＣＳＴの神経細胞／皮質脊髄路の標識化、及び免疫組織化学
脊髄後柱を破壊した後、以前の説明のように（例えば、Ｙｉｐ  ｅｔ  ａｌ．，２００６を参照のこと）、ＢＤＡ（ＰＢＳ中１０％、Ｍｗ１０Ｋ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓより入手）を運動皮質へと注射することによって、下行皮質脊髄路の軸索の順行性追跡を実施した。右皮質への注射を６回実施した（０．５μＬのＢＤＡ／注射点）。動物（処理当たりｎ＝６）に対して灌流を実施し、脊髄をＰＢＳ（０．１％のアジ化ナトリウム含有）へと移し、ゼラチン（１０％、３００ブルーム；Ｓｉｇｍａ，Ｐｏｏｌｅ，ＵＫ）に包埋した。４％のパラホルムアルデヒド中でゼラチン塊を硬化させ、４０μｍのフリーフローティング連続横断切片を、ビブラトーム（ｖｉｂｒａｔｏｍｅ）（Ｌｅｉｃａ，Ｎｕｓｓｌｏｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で切り取り、ＰＢＳ（０．１％のアジ化ナトリウム含有）を含有する２４ウェルプレートに収集した。
【０４３５】
チラミド増幅キット（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）を、エキストラ−アビジン−ＦＩＴＣ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＵＫ、１：５００）と併せて使用することで、ＢＤＡを検出した。損傷部位の上５ｍｍ〜下５ｍｍの測定区間で、１ｍｍの正方格子内で観測される、ＢＤＡで標識された線維をすべて数えた。この作業は、処理について知らされない実験者によって実施した。中点（中心管で見られるもの）から内外方向距離が等しい位置で、各３切片目（各分析点で動物当たり５切片であり、動物当たり全部で４０切片）において、ＢＤＡが陽性の軸索を数えた。
【０４３６】
０．５μＬ／分の速度で、頸髄（Ｃ３−Ｃ４）に対して、５％のＦｌｕｏｒｏｇｏｌｄ（ＦＧ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を、深さ２ｍｍで２μＬ注射し、逆行性追跡を実施することによって、ＣＳＴの神経細胞を標識した（群当たりｎ＝３のラット）。偽動物では、脊髄の中心線の両側０．５ｍｍにＦＧを注射し（片側当たり１μＬ）、損傷動物では、損傷にＦＧ（２μＬ）を注射した。１４日後、４％のパラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）中で皮質を２時間固定化してから、ＯＣＴ化合物に包埋し、凍結保存した。矢状切片（１２μｍ）を切り取り、外側３．４〜３．９ｍｍに由来する２切片を含有する４つの連続スライドを分析用に採取した（例えば、Ｐａｘｉｎｏｓ  ａｎｄ  Ｗａｔｓｏｎ，２００２を参照のこと）。
【０４３７】
免疫組織化学は、抗ウサギリン酸化Ａｋｔ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１：１００希釈）を使用して実施した。二次抗体には、Ｃｙ３コンジュゲート化抗ウサギ（Ｊａｃｋｓｏｎ、１：１０００希釈で使用）を使用した。画像は、Ｒｏｐｅｒｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃのデジタルカメラを使用して、１００倍の拡大率で撮影した。
【０４３８】
行動試験
行動試験は、以前の説明のように（例えば、Ｂｒａｄｂｕｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００２を参照のこと）実施した。格子歩行及び梁歩行を実施するために、最初に２週間、ラット（処理群当たりｎ＝６）を訓練した後に手術を実施した。その後、実験処理について知らされない観測者が、損傷後の５週間、１週間に１回、ラットの試験を実施した。
【０４３９】
グラフ及び統計学
グラフは、Ｓｉｇｍａ  ｐｌｏｔを使用してプロットした。データは、平均値±標準誤差（Ｓ．Ｅ．Ｍ）として示され、統計解析は、Ｓｉｇｍａ  Ｓｔａｔソフトウェア（ＳＰＳＳ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｌｔｄ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ  ＵＫ）を使用し、スチューデントｔ検定を使用して実施した。平均値、ＳＥＭ、ＳＤ、及びＰ値は、要約統計量として提供される。
【０４４０】
ＢＨＢＡ−００１についての生物学的活性
ＲＡＲα受容体、ＲＡＲβ受容体、及びＲＡＲγ受容体を対象としたトランス活性化アッセイ
転写トランス活性化アッセイは、ｇａｌ４融合受容体構築物を用いて実施した。当該構築物は、マウスまたはヒトのいずれかのＲＡＲリガンド結合ドメインをそれぞれ使用して創出したものであり、ｐＦＲ−ｌｕｃ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）レポーター構築物と共に、ＣＯＳ−７細胞に同時導入した。したがって、遺伝子導入された細胞は、ｇａｌ４−ＲＡＲ融合タンパク質を恒常的に発現することになり、次いで、ｇａｌ４−ＲＡＲ融合タンパク質は、全トランス型レチノイン酸（ａｔＲＡ）によってトランス活性化され、ｇａｌ４ＵＡＳが駆動するルシフェラーゼの発現を誘導し得る。
【０４４１】
簡潔に記載すると、１日目に、９６ウェルプレートに対して、ウェル当たり８０００個の細胞を播種した後、一晩回復させた。２日目に、ウェル当たり、１００ｎｇのレポータープラスミドと、１０ｎｇの適切な受容体プラスミドとをリポフェクタミン（ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、細胞に同時導入した。３日目に、リポフェクタミン含有培地を、フェノールレッドを含まないＤＭＥＭと交換した後、総体積１００μＬの各ウェルに対して、１μＬのＤＭＳＯに溶解した試験化合物を添加した。最終的に、４日目に、細胞を溶解し、そのルシフェラーゼ基質をＢｒｉｇｈｔＧｌｏ（商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって供給し、次いで、ＭｉｃｒｏＢｅｔａ  ＴｒｉＬｕｘ（商標）（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）でプレートを読み取った。
【０４４２】
各プレートで、ａｔＲＡの８点用量応答曲線を２連で作成し、試験化合物についても用量応答曲線を２連で作成した。
【０４４３】
ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（商標）を使用して用量応答曲線に適合することによって、試験化合物及びａｔＲＡの両方についてＥＣ５０のデータを得た。試験化合物のデータは、ＥＣ５０値として示される。反復データを得た場合は、データは、別々の実験に由来するＥＣ５０の平均値として示される。
【０４４４】
データは、以下の表に要約される。ＥＣ５０の値は、３回以上の測定の平均値として報告される。
【０４４５】
【表２０】
2019522650.tif 000035
【０４４６】
（＊）「ＲＡＲβ活性」に対する「ＲＡＲα活性」の比は、「ＲＡＲα／ＲＡＲβ比」と称され、ＲＡＲαと比較して、ＲＡＲβに対して何倍選択的であるかを反映する。１を超える値は、ＲＡＲβに対して選択的であることを示す。
（＊＊）「ＲＡＲβ活性」に対する「ＲＡＲγ活性」の比は、「ＲＡＲγ／ＲＡＲβ比」と称され、ＲＡＲγと比較して、ＲＡＲβに対して何倍選択的であるかを反映する。１を超える値は、ＲＡＲβに対して選択的であることを示す。
【０４４７】
ＢＨＢＡ−００１は、２ｎＭ未満のＲＡＲβ活性を有する、ＲＡＲβのアゴニストである。
【０４４８】
ＢＨＢＡ−００１はまた、ＲＡＲαと比較してＲＡＲβに対して選択的である：ＲＡＲαと比較したＲＡＲβに対する選択性は、約１３．４倍である。
【０４４９】
ＢＨＢＡ−００１はまた、ＲＡＲγと比較してＲＡＲβに対して選択的である：ＲＡＲγと比較したＲＡＲβに対する選択性は、約５．６倍である。
【０４５０】
２つの好ましい化合物を対象としたマウス及びヒトの追加データが、以下の表に要約される。
【０４５１】
【表２１】
2019522650.tif 000036
【０４５２】
前述の記載内容において、本発明の原理、好ましい実施形態、及び実施様式について説明した。しかしながら、本発明は、議論した特定の実施形態に限定されるように解釈されるべきではない。その代わりとして、上記の実施形態は、限定的というよりはむしろ例示的であると見なされるべきであり、本発明の範囲から逸脱することなく、そうした実施形態において、当業者は変形形態をつくり得ると理解されるべきである。
【０４５３】
参考文献
本発明、及び本発明と関係する技術分野の状況を、より完全に説明及び開示するために、いくつかの特許及び出版物が本明細書に引用される。これらの参考文献の完全な引用は、以下に提供される。
【０４５４】
本明細書では、これらの参考文献のそれぞれは、それぞれの個々の参考文献が参照によって組み込まれることが具体的かつ個々に示されるのと同程度に、その全体が参照によって本開示に組み込まれる。
【０４５５】
Ａｇｕｄｏ  Ｍ，Ｙｉｐ  Ｐ，Ｄａｖｉｅｓ  Ｍ，Ｂｒａｄｂｕｒｙ  Ｅ，Ｄｏｈｅｒｔｙ  Ｐ，ＭｃＭａｈｏｎ  Ｓ，Ｍａｄｅｎ  Ｍ，Ｃｏｒｃｏｒａｎ  ＪＰ  （２０１０）  Ａ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｅｔａ  ａｇｏｎｉｓｔ  （ＣＤ２０１９）  ｏｖｅｒｃｏｍｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｘｏｎａｌ  ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ  ｖｉａ  ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ  ３−ｋｉｎａｓｅ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｎｊｕｒｅｄ  ａｄｕｌｔ  ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ｄｉｓ  ３７：１４７−１５５．
Ｂａｓｔｉｅｎ  Ｊ，Ｒｏｃｈｅｔｔｅ−Ｅｇｌｙ  Ｃ  （２００４）  Ｎｕｃｌｅａｒ  ｒｅｔｉｎｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｔｉｎｏｉｄ−ｔａｒｇｅｔ  ｇｅｎｅｓ．Ｇｅｎｅ  ３２８：１−１６．
Ｂｅｒｎａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇａｍｍａ”，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，Ｖｏｌ．１８６，ｐｐ．９７７−９８３．
Ｂｏｒｔｈｗｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６，“Ｂｉｃｙｃｌｏｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ−ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ−ｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｅｔａ  （ＲＡＲβ）  ａｇｏｎｉｓｔｓ”，ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｐａｔｅｎｔ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０８００２９  ｆｉｌｅｄ  １６  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２０１５，  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ａｓ  ＷＯ  ２０１６／０９７００４  Ａ１  ｏｎ  ２３  Ｊｕｎｅ  ２０１６．
Ｂｒａｄｂｕｒｙ  ＥＪ，Ｍｏｏｎ  ＬＤ，Ｐｏｐａｔ  ＲＪ，Ｋｉｎｇ  ＶＲ，Ｂｅｎｎｅｔｔ  ＧＳ，Ｐａｔｅｌ  ＰＮ，Ｆａｗｃｅｔｔ  ＪＷ，ＭｃＭａｈｏｎ  ＳＢ  （２００２）  Ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎａｓｅ  ＡＢＣ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ａｆｔｅｒ  ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ  ｉｎｊｕｒｙ．Ｎａｔｕｒｅ  ４１６：６３６−６４０．
Ｃａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，“Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  ３−ａｒｙｌ−５−ａｒｙｌ−［１，２，４］−ｏｘａｄｉａｚｏｌｅｓ  ａｎｄ  ａｎａｌｏｇｓ  ａｓ  ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ  ｏｆ  ｃａｓｐａｓｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｒｓ  ｏｆ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｔｈｅｒｅｏｆ”，ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．２００３／００４５５４６  Ａ１  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ０６  Ｍａｒｃｈ  ２００３．
Ｃａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，“Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  ３−ａｒｙｌ−５−ａｒｙｌ−［１，２，４］−ｏｘａｄｉａｚｏｌｅｓ  ａｎｄ  ａｎａｌｏｇｓ  ａｓ  ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ  ｏｆ  ｃａｓｐａｓｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｒｓ  ｏｆ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｔｈｅｒｅｏｆ”，ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．２００５／０１５４０１２  Ａ１  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  １４  Ｊｕｌｙ  ２００５．
Ｃｏｒｃｏｒａｎ  Ｊ，Ｍａｄｅｎ  Ｍ  （１９９９）  Ｎｅｒｖｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｃｔｓ  ｖｉａ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｔｏ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅ  ｎｅｕｒｉｔｅ  ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ  ［ｌｅｔｔｅｒ］．Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２：３０７−３０８．
Ｃｏｒｃｏｒａｎ  Ｊ，Ｓｈｒｏｏｔ  Ｂ，Ｐｉｚｚｅｙ  Ｊ，Ｍａｄｅｎ  Ｍ  （２０００）  Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｎｅｕｒｉｔｅ  ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ  ｆｒｏｍ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｍｏｕｓｅ  ｄｏｒｓａｌ  ｒｏｏｔ  ｇａｎｇｌｉａ  ［Ｉｎ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｃｉｔａｔｉｏｎ］．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ  １１３  （Ｐｔ  １４）：２５６７−２５７４．
Ｃｏｒｃｏｒａｎ  Ｊ，Ｓｏ  ＰＬ，Ｂａｒｂｅｒ  ＲＤ，Ｖｉｎｃｅｎｔ  ＫＪ，Ｍａｚａｒａｋｉｓ  ＮＤ，Ｍｉｔｒｏｐｈａｎｏｕｓ  ＫＡ，Ｋｉｎｇｓｍａｎ  ＳＭ，Ｍａｄｅｎ  Ｍ  （２００２）  Ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｅｔａ２  ａｎｄ  ｎｅｕｒｉｔｅ  ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｍｏｕｓｅ  ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ  １１５：３７７９−３７８６．
Ｄｅｌｅｓｃｌｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，“Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｈｉｇｈ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｏｒ  ｂｅｔａ−ｇａｍｍａ  ｌｉｇａｎｄｓ，”  Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，Ｖｏｌ．４０，ｐｐ．５５６−５６２．
Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，“Ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ  ＲＡＲｂｅｔａ  ａｎｄ  ａｌｐｈａ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｃａｎ  ｉｎｄｕｃｅ  ａｄｕｌｔ  ｆｏｒｅｂｒａｉｎ  ｎｅｕｒａｌ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ  ｉｎｔｏ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｓｈｈ  ａｎｄ  ＦＧＦ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ”，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ．３２６，ｐｐ．３０５−３１３．
Ｈｅ  Ｚ，Ｋｏｐｒｉｖｉｃａ  Ｖ  （２００４）  Ｔｈｅ  ｎｏｇｏ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙ  ｆｏｒ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｂｌｏｃｋ．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２７：３４１−３６８．
Ｋｉｋｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ  ｏｆ  ５，６，７，８−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ−５，５，８，８−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ−２−ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  α  ａｃｔｉｖｉｔｙ”，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．４３，ｐｐ．４０９−４１９．
Ｋｉｋｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，“Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｄｒｕｇ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓａｍｅ”，ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ  ６，３２９，４０２  ｇｒａｎｔｅｄ  １１  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２００１．
Ｋｗｏｎ  ＢＫ，Ｔｅｔｚｌａｆｆ  Ｗ  （２００１）  Ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：ｆｒｏｍ  ｇｅｎｅ  ｔｏ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓ．Ｓｐｉｎｅ  ２６：Ｓ１３−Ｓ２２．
Ｌｅｉｄ  Ｍ，Ｋａｓｔｎｅｒ  Ｐ，Ｃｈａｍｂｏｎ  Ｐ  （１９９２）  Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ  ｇｅｎｅｒａｔｅｓ  ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｃｉ  １７：４２７−４３３．
Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，“Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  ｐｏｔｅｎｔ，ｏｒａｌｌｙ  ａｖａｉｌａｂｌｅ，ａｎｄ  ｉｓｏｆｏｒｍ−ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｒｅｔｉｎｏｉｃａ  ａｃｉｄ  β２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔ”，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．４８，ｐｐ．７５１７−７５１９．
Ｍａｄｅｎ  ａｎｄ  Ｃｏｒｃｏｒａｎ，２０００，“Ｆａｃｔｏｒ”，ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｐａｔｅｎｔ  （ＰＣＴ）  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＷＯ００／５７９００Ａ２，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ０５  Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２０００．
Ｍａｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，“Ｖｉｔａｍｉｎ  Ａ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｑｕａｉｌ  ｅｍｂｒｙｏｓ  ｈａｖｅ  ｈａｌｆ  ａ  ｈｉｎｄｂｒａｉｎ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｎｅｕｒａｌ  ｄｅｆｅｃｔｓ”，Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ．６，ｐｐ．４１７−４２６．
Ｏｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，“Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｗｉｔｈ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｔ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ”，ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．２００９／０１７６８３７Ａ１  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ０９  Ｊｕｌｙ  ２００９．
Ｐａｘｉｎｏｓ  ａｎｄ  Ｗａｔｓｏｎ，２００２，“Ｔｈｅ  Ｒａｔ  Ｂｒａｉｎ  ｉｎ  Ｓｔｅｒｅｏｔａｘｉｃ  Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓ”，２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ．
Ｑｕｉｎｎ  ＳＤ，Ｄｅ  Ｂｏｎｉ  Ｕ  （１９９１）  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｏｆ  ｍｕｒｉｎｅ  ｄｏｒｓａｌ  ｒｏｏｔ  ｇａｎｇｌｉａ  ａｎｄ  ｏｆ  ｆｅｔａｌ  ｍｕｒｉｎｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  ２７：５５−６２．
Ｓｃｈｎｅｌｌ  Ｌ，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  Ｒ，Ｋｏｌｂｅｃｋ  Ｒ，Ｂａｒｄｅ  ＹＡ，Ｓｃｈｗａｂ  ＭＥ  （１９９４）  Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ−３  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｓｐｒｏｕｔｉｎｇ  ｏｆ  ｃｏｒｔｉｃｏｓｐｉｎａｌ  ｔｒａｃｔ  ｄｕｒｉｎｇ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ａｆｔｅｒ  ａｄｕｌｔ  ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ  ｌｅｓｉｏｎ  ［ｓｅｅ  ｃｏｍｍｅｎｔｓ］．Ｎａｔｕｒｅ  ３６７：１７０−１７３．
Ｓｅｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，“Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｃｕｔｅ  ａｎｄ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ａｌｌｏｇｒａｆｔ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｉｐｔｏｒ−α−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ａｇｏｎｉｓｔ”，Ｉｎｔｅｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１６，Ｎｏ．５，ｐｐ．６６５−６７３．
Ｓｏ  ＰＬ，Ｙｉｐ  ＰＫ，Ｂｕｎｔｉｎｇ  Ｓ，Ｗｏｎｇ  ＬＦ，Ｍａｚａｒａｋｉｓ  ＮＤ，Ｈａｌｌ  Ｓ，ＭｃＭａｈｏｎ  Ｓ，Ｍａｄｅｎ  Ｍ，Ｃｏｒｃｏｒａｎ  ＪＰ  （２００６）  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ，ｎｅｒｖｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｓｏｎｉｃ  ｈｅｄｇｅｈｏｇ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｉｎ  ｎｅｕｒｉｔｅ  ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ．Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  ２９８：１６７−１７５．
Ｔａｇａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，“Ｆｕｓｅｄ−ｒｉｎｇ  ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ”，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｐａｔｅｎｔ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＥＰ０８８９０３２Ａ１，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ０７  Ｊａｎｕａｒｙ  １９９９．
Ｔａｇａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００ａ，“Ｆｕｓｅｄ−ｒｉｎｇ  ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ”，ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ  ６，１２１，３０９  ｇｒａｎｔｅｄ  １９  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２０００．
Ｔａｇａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００ｂ，“Ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｈａｖｉｎｇ  ｆｕｓｅｄ  ｒｉｎｇｓ”，ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ  ６，１１０，９５９  ｇｒａｎｔｅｄ  ２９  Ａｕｇｕｓｔ  ２０００．
Ｔａｇａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，“Ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｈａｖｉｎｇ  ｆｕｓｅｄ  ｒｉｎｇｓ，”  ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ  ６，３５８，９９５  ｇｒａｎｔｅｄ  １９  Ｍａｒｃｈ  ２００２．
Ｔｓｕｄａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，“Ｐｙｒｒｏｌｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｎｄ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ”，ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ  ５，９９８，４５９  ｇｒａｎｔｅｄ  ０７  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  １９９９．
Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，“Ｄｅｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｈｉｎｄｂｒａｉｎ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｆｅｔａｌ  ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ  ｆｒｏｍ  ｖｉｔａｍｉｎ  Ａ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ａｒｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｅｄ  ｂｙ  ｆｅｅｄｉｎｇ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ａｌｌ−ｔｒａｎｓ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，Ｖｏｌ．９５，ｐｐ．１３４５９−１２３６４．
Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｇ，Ｅｉｃｋｈｏｌｔ  ＢＪ，Ｍａｉｓｏｎ  Ｐ，Ｐｒｉｎｊｈａ  Ｒ，Ｗａｌｓｈ  ＦＳ，Ｄｏｈｅｒｔｙ  Ｐ  （２００５）  Ａ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ａｐｐｌｉｅｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｓｅｍａｐｈｏｒｉｎ／ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  ９２：１１８０−１１９０．
Ｗｏｎｇ  ＬＦ，Ｙｉｐ  ＰＫ，Ｂａｔｔａｇｌｉａ  Ａ，Ｇｒｉｓｔ  Ｊ，Ｃｏｒｃｏｒａｎ  Ｊ，Ｍａｄｅｎ  Ｍ，Ａｚｚｏｕｚ  Ｍ，Ｋｉｎｇｓｍａｎ  ＳＭ，Ｋｉｎｇｓｍａｎ  ＡＪ，Ｍａｚａｒａｋｉｓ  ＮＤ，ＭｃＭａｈｏｎ  ＳＢ  （２００６）  Ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｅｔａ２  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｎｓｏｒｙ  ａｘｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ．Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ９：２４３−２５０．
Ｙｉｐ  ＰＫ，Ｗｏｎｇ  ＬＦ，Ｐａｔｔｉｎｓｏｎ  Ｄ，Ｂａｔｔａｇｌｉａ  Ａ，Ｇｒｉｓｔ  Ｊ，Ｂｒａｄｂｕｒｙ  ＥＪ，Ｍａｄｅｎ  Ｍ，ＭｃＭａｈｏｎ  ＳＢ，Ｍａｚａｒａｋｉｓ  ＮＤ  （２００６）  Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ  ｖｅｃｔｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｅｔａ２  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ｃｏｒｔｉｃｏｓｐｉｎａｌ  ｔｒａｃｔ  ｉｎｊｕｒｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｒａｔ  ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ．Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  １５：３１０７−３１１８．
Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，“Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｄ  ｐｏｔｅｎｔ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  α  ａｇｏｎｉｓｔｓ：ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｅｎｚｏｆｕｒａｎｙｌ−ｐｙｒｒｏｌｅ  ａｎｄ  ｂｅｎｚｏｔｈｉｏｐｈｅｎｙｌ−ｐｙｒｒｏｌｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ”，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．４３，ｐｐ．２９２９−２９３７．
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【国際調査報告】
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