(57)【要約】  本明細書に提供されるのは、抗ＰＤ−Ｌ１および抗ＣＴＬＡ−４抗体またはそれらの抗原結合断片の共製剤を含む組成物、ならびにかかる組成物を作製および使用する方法である。様々な態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）および抗ＣＴＬＡ−４抗体トレメリムマブの安定な共製剤が提供される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む組成物であって、デュルバルマブまたはその抗原結合断片の濃度は、約１８．７ｍｇ／ｍＬ〜約４４．４ｍｇ／ｍＬであり、トレメリムマブまたはその抗原結合断片の濃度は、約２．２ｍｇ／ｍＬ〜約１２．５ｍｇ／ｍＬである、組成物。
【請求項２】
前記デュルバルマブまたはその抗原結合断片の濃度は、約１８．７ｍｇ／ｍＬ、３６．３ｍｇ／ｍＬ、４０．０ｍｇ／ｍＬ、４２．８ｍｇ／ｍＬまたは４４．４ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記トレメリムマブまたはその抗原結合断片の濃度は、約２．２ｍｇ／ｍＬ、２．９ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍｇ／ｍＬ、５．５ｍｇ／ｍＬまたは１２．５ｍｇ／ｍＬである、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片との組み合わせ濃度は、約３１．２ｍｇ／ｍＬ〜約４６．６ｍｇ／ｍＬである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片との組み合わせ濃度は、約３１．２ｍｇ／ｍＬ、４１．８ｍｇ／ｍＬ、４４．０ｍｇ／ｍＬ、４５．７ｍｇ／ｍＬまたは４６．６ｍｇ／ｍＬである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
デュルバルマブ対トレメリムマブの濃度比は、約１５：１０〜約２０：１である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記デュルバルマブ対トレメリムマブの濃度比は、約２０：１である、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
ヒスチジン、ヒスチジン−ＨＣｌまたはそれらの組み合わせをさらに含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記ヒスチジン、ヒスチジン−ＨＣｌまたはそれらの組み合わせの濃度は、約２０ｍＭ〜約２５ｍＭである、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
トレハロース二水和物をさらに含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記トレハロース二水和物の濃度は、約２５４ｍＭ〜約２６９ｍＭである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）をさらに含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
ＥＤＴＡの濃度は、約０．０３ｍＭ〜約０．１７ｍＭである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
ポリソルベート８０（ＰＳ８０）をさらに含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
ポリソルベート８０の濃度は、約０．０２パーセント重量／体積（％ｗ／ｖ）である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
約６．０のｐＨを有する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
約６．０のｐＨにおいて、約４４．４ｍｇ／ｍＬのデュルバルマブまたはその抗体断片、約２．２ｍｇ／ｍＬのトレメリムマブまたはその抗体断片、約２５ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣｌ、約２６９ｍＭのトレハロース二水和物、約０．０３ｍＭのＥＤＴＡおよび約０．０２％ｗ／ｖのＰＳ８０を含むかまたはそれらからなる医薬組成物。
【請求項１８】
静脈内注射のために製剤化される、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
請求項３５〜３７のいずれか一項に記載の方法において使用するための、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組成物と使用説明書とを含むキット。
【請求項２０】
固形腫瘍、癌、肺癌または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療において使用するための、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組成物と使用説明書とを含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出されており、参照によりその全体が本明細書に援用される配列表を含む。２０１７年４月２４日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、ＴＲＢ７−３００−ＷＯ−ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔと称され、サイズが８，４６４バイトである。
【背景技術】
【０００２】
癌は、地球規模での主要な健康負担であり続ける。癌の治療における進歩にもかかわらず、特に既存の治療薬に対して抵抗性を示す進行性疾患または癌を有する患者では、より有効でありかつそれほど有毒でない治療法に対する満たされない医学的需要が引き続き存在している。
【０００３】
腫瘍対照における免疫系、特にＴ細胞媒介性細胞傷害性の役割は十分に理解されている。疾患の初期および後期の両方において、Ｔ細胞が癌患者における腫瘍の増殖および生存を制御するという証拠が増加している。しかし、腫瘍特異的Ｔ細胞応答は、癌患者において増加させかつ維持することが困難である。
【０００４】
現在まで多大な注目を浴びている２つのＴ細胞経路は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４、ＣＤ１５２）およびプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ１またはＣＤ２７４としても公知である）を通じてシグナル伝達する。
【０００５】
ＣＴＬＡ−４は、活性化Ｔ細胞で発現され、ＣＤ２８媒介性Ｔ細胞活性化に続いてＴ細胞応答のチェックを維持するためのコインヒビター（ｃｏ−ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）として機能する。ＣＴＬＡ−４は、ＴＣＲ会合後のナイーブおよびメモリーＴ細胞の早期活性化の規模を調節し、抗腫瘍免疫および自己免疫の両方に影響する中心的阻害経路の一部であると考えられる。ＣＴＬＡ−４は、Ｔ細胞上で排他的に発現され、そのリガンドのＣＤ８０（Ｂ７．１）およびＣＤ８６（Ｂ７．２）の発現は、抗原提示細胞、Ｔ細胞および他の免疫介在細胞に主に制限される。ＣＴＬＡ−４シグナル伝達経路を遮断するアンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体は、Ｔ細胞活性化を増強することが報告されている。１つのかかる抗体であるイピリムマブは、転移性メラノーマの治療について２０１１年にＦＤＡによって認可された。別の抗ＣＴＬＡ−４抗体であるトレメリムマブは、進行性メラノーマの治療を意図した第ＩＩＩ相試験で試験されたが、患者の全生存を当時の標準治療薬（テモゾロミドまたはダカルバジン）と比べて有意に増加させなかった。
【０００６】
ＰＤ−Ｌ１も、Ｔ細胞活性化の制御に関与する受容体およびリガンドの複雑系の一部である。正常組織内で、ＰＤ−Ｌ１は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、間葉系幹細胞、骨髄由来肥満細胞および様々な非造血系細胞で発現される。その正常な機能は、その２つの受容体：プログラム細胞死１（ＰＤ−１またはＣＤ２７９としても公知である）およびＣＤ８０（Ｂ７．１またはＢ７−１としても公知である）との相互作用を通じて、Ｔ細胞活性化と耐容性との間の平衡を調節することである。ＰＤ−Ｌ１は、腫瘍によっても発現され、複数の部位で作用し、腫瘍が宿主免疫系による検出および除去を回避することを促進する。ＰＤ−Ｌ１は、広範囲の癌において高頻度で発現される。一部の癌では、ＰＤ−Ｌ１の発現は、生存率低下および好ましくない予後に関連している。ＰＤ−Ｌ１とその受容体との間の相互作用を遮断する抗体は、ＰＤ−Ｌ１依存性免疫抑制効果を軽減し、インビトロで抗腫瘍Ｔ細胞の細胞傷害活性を増強することができる。デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）は、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１およびＣＤ８０受容体の両方への結合を遮断する能力がある、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的なヒトモノクローナル抗体である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
医学的治療の進歩にもかかわらず、癌患者の生存を改善することが困難であることは変わらない。併用免疫療法は、有効である可能性を有する。しかし、併用療法の現行の方法は、個別薬剤の分割投与を含む。例えば、送達を容易にするため、複数の治療用タンパク質を単一の製剤で投与することができれば有用で望ましいであろう。しかし、薬剤安定性、薬剤純度、薬物互換性、有効な用量濃度（例えば、薬力学的および／または薬物動態的パラメータを得るため；有害作用または薬剤毒性を回避するため）および／または互換性がある薬学的に許容できる賦形剤は、多剤製剤における重要な検討項目を表す。したがって、多剤製剤およびそれを作製する方法において緊急の需要が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、内部で２つのモノクローナル抗体（ｍＡｂ）が異なるタンパク質濃度比で配合される堅固な共製剤（ｃｏｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）設計空間を提供する。抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）および抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、トレメリムマブ）は、個別に安定な製剤中に配合および混合されて、様々な抗ＰＤ−Ｌ１対抗ＣＴＬＡ−４濃度比で新しい液体および凍結乾燥共製剤の設計空間を実現した。
【０００９】
一態様では、本発明は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）またはその抗原結合断片と、抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、トレメリムマブ）またはその抗原結合断片とを含有する組成物を提供し、ここで、抗ＰＤ−Ｌ１またはその抗原結合断片の濃度は、約１８．７ｍｇ／ｍＬ〜約４４．４ｍｇ／ｍＬであり、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片の濃度は、約２．２ｍｇ／ｍＬ〜約１２．５ｍｇ／ｍＬである。
【００１０】
別の態様では、本発明は、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含有する組成物を提供し、ここで、デュルバルマブまたはその抗原結合断片の濃度は、約１８．７ｍｇ／ｍＬ〜約４４．４ｍｇ／ｍＬであり、トレメリムマブまたはその抗原結合断片の濃度は、約２．２ｍｇ／ｍＬ〜約１２．５ｍｇ／ｍＬである。
【００１１】
別の態様では、本発明は、約５．８のｐＨにおいて、約１８．７ｍｇ／ｍＬのデュルバルマブまたはその抗体断片、約１２．５ｍｇ／ｍＬのトレメリムマブまたはその抗体断片、約２２ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣｌ、約２５４ｍＭのトレハロース二水和物、約０．１７ｍＭのＥＤＴＡおよび約０．０２％ｗ／ｖのＰＳ８０を含有するかまたはそれらからなる組成物を提供する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、約５．８のｐＨにおいて、約２８．６ｍｇ／ｍＬのデュルバルマブまたはその抗体断片、約８．６ｍｇ／ｍＬのトレメリムマブまたはその抗体断片、約２３ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣｌ、約２５２ｍＭのトレハロース二水和物、約０．１２ｍＭのＥＤＴＡおよび約０．０２％ｗ／ｖのＰＳ８０を含有するかまたはそれらからなる組成物を提供する。
【００１３】
別の態様では、本発明は、約６．０のｐＨにおいて、約３６．３ｍｇ／ｍＬのデュルバルマブまたはその抗体断片、約５．５ｍｇ／ｍＬのトレメリムマブまたはその抗体断片、約２４ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣｌ、約２６０ｍＭのトレハロース二水和物、約０．０７ｍＭのＥＤＴＡおよび約０．０２％ｗ／ｖのＰＳ８０を含有するかまたはそれらからなる組成物を提供する。
【００１４】
別の態様では、本発明は、約６．０のｐＨにおいて、約４０．０ｍｇ／ｍＬのデュルバルマブまたはその抗体断片、約４．０ｍｇ／ｍＬのトレメリムマブまたはその抗体断片、約２５ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣｌ、約２６４ｍＭのトレハロース二水和物、約０．０５ｍＭのＥＤＴＡおよび約０．０２％ｗ／ｖのＰＳ８０を含有するかまたはそれらからなる組成物を提供する。
【００１５】
別の態様では、本発明は、約６．０のｐＨにおいて、約４２．８ｍｇ／ｍＬのデュルバルマブまたはその抗体断片、約２．９ｍｇ／ｍＬのトレメリムマブまたはその抗体断片、約２５ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣｌ、約２６７ｍＭのトレハロース二水和物、約０．０４ｍＭのＥＤＴＡおよび約０．０２％ｗ／ｖのＰＳ８０を含有するかまたはそれらからなる組成物を提供する。
【００１６】
別の態様では、本発明は、約６．０のｐＨにおいて、約４４．４ｍｇ／ｍＬのデュルバルマブまたはその抗体断片、約２．２ｍｇ／ｍＬのトレメリムマブまたはその抗体断片、約２５ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣｌ、約２６９ｍＭのトレハロース二水和物、約０．０３ｍＭのＥＤＴＡおよび約０．０２％ｗ／ｖのＰＳ８０を含有するかまたはそれらからなる組成物を提供する。
【００１７】
別の態様では、本発明は、約６．０のｐＨにおいて、約４４．４ｍｇ／ｍＬのデュルバルマブまたはその抗体断片、約２．２ｍｇ／ｍＬのトレメリムマブまたはその抗体断片、約２５ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣｌ、約２６９ｍＭのトレハロース二水和物、約０．０３ｍＭのＥＤＴＡおよび約０．０２％ｗ／ｖのＰＳ８０を含有するかまたはそれらからなる組成物を提供する。
【００１８】
別の態様では、本発明は、本明細書に詳述される任意の態様に従って組成物を作製する方法であって、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）またはその抗原結合断片と、抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、トレメリムマブ）またはその抗原結合断片とを混合して、約１８．７ｍｇ／ｍＬ〜約４４．４ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片の濃度と、約２．２ｍｇ／ｍＬ〜約１２．５ｍｇ／ｍＬの抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片の濃度とを得るステップを含む方法を提供する。
【００１９】
別の態様では、本発明は、本明細書に詳述される任意の態様に従う組成物を対象（例えば、患者）に投与することを含む治療方法を提供する。
【００２０】
別の態様では、本発明は、本明細書に詳述される任意の態様の方法において（例えば、固形腫瘍、癌、肺癌または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療において）使用するための、本明細書に詳述される任意の態様に従う組成物と使用説明書とを含むキットを提供する。
【００２１】
本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片の濃度は、約１８．７ｍｇ／ｍＬ、２８．６ｍｇ／ｍＬ、３６．３ｍｇ／ｍＬ、４０．０ｍｇ／ｍＬ、４２．８ｍｇ／ｍＬまたは４４．４ｍｇ／ｍＬである。本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片の濃度は、約２．２ｍｇ／ｍＬ、２．９ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍｇ／ｍＬ、５．５ｍｇ／ｍＬ、８．６ｍｇ／ｍＬまたは１２．５ｍｇ／ｍＬである。
【００２２】
本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１またはその抗原結合断片と、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片との組み合わせ濃度は、約３１．２ｍｇ／ｍＬ〜約４６．６ｍｇ／ｍＬである。特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１またはその抗原結合断片と、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片との組み合わせ濃度は、約３１．２ｍｇ／ｍＬ、３７．１ｍｇ／ｍＬ、４１．８ｍｇ／ｍＬ、４４．０ｍｇ／ｍＬ、４５．７ｍｇ／ｍＬまたは４６．６ｍｇ／ｍＬである。
【００２３】
本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片対抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片の濃度比は、約１５：１０〜約２０：１である。特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合断片対抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片の濃度比は、約１５：１０、１０：３、２０：３、１０：１、１５：１または２０：１である。
【００２４】
本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、デュルバルマブである。本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、トレメリムマブである。本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、デュルバルマブであり、および抗ＣＴＬＡ−４抗体は、トレメリムマブである。
【００２５】
本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、デュルバルマブまたはその抗原結合断片の濃度は、約１８．７ｍｇ／ｍＬ、２８．６ｍｇ／ｍＬ、３６．３ｍｇ／ｍＬ、４０．０ｍｇ／ｍＬ、４２．８ｍｇ／ｍＬまたは４４．４ｍｇ／ｍＬである。本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、トレメリムマブまたはその抗原結合断片の濃度は、約２．２ｍｇ／ｍＬ、２．９ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍｇ／ｍＬ、５．５ｍｇ／ｍＬ、８．６ｍｇ／ｍＬまたは１２．５ｍｇ／ｍＬである。
【００２６】
本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片との組み合わせ濃度は、約３１．２ｍｇ／ｍＬ〜約４６．６ｍｇ／ｍＬである。特定の実施形態では、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片との組み合わせ濃度は、約３１．２ｍｇ／ｍＬ、３７．１ｍｇ／ｍＬ、４１．８ｍｇ／ｍＬ、４４．０ｍｇ／ｍＬ、４５．７ｍｇ／ｍＬまたは４６．６ｍｇ／ｍＬである。
【００２７】
本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、デュルバルマブ対トレメリムマブの濃度比は、約１５：１０〜約２０：１である。特定の実施形態では、濃度比は、約１５：１０、１０：３、２０：３、１０：１、１５：１または２０：１である。
【００２８】
本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、組成物は、ヒスチジン、ヒスチジン−ＨＣｌまたはそれらの組み合わせを含有する。様々な実施形態では、ヒスチジン、ヒスチジン−ＨＣｌまたはそれらの組み合わせの濃度は、約２０ｍＭ〜約２５ｍＭである。
【００２９】
本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、組成物は、トレハロース二水和物を含有する。特定の実施形態では、トレハロース二水和物の濃度は、約２５４ｍＭ〜約２６９ｍＭである。
【００３０】
本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、組成物は、エデト酸二ナトリウム二水和物（エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩二水和物）を含有する。特定の実施形態では、ＥＤＴＡの濃度は、約０．０３ｍＭ〜約０．２７ｍＭである。
【００３１】
本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、組成物は、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含有する。特定の実施形態では、ポリソルベート８０の濃度は、約０．０２パーセント重量／体積（％ｗ／ｖ）である。
【００３２】
本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、組成物は、約６．０のｐＨを有する。
【００３３】
本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、組成物は、静脈内注射のために配合される。本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、対象は、固形腫瘍、癌、肺癌または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の１つ以上を有する。本明細書に詳述される任意の態様の様々な実施形態では、組成物は、静脈内注射によって投与される。
【００３４】
定義
特に定義されない限り、本明細書で用いられるすべての科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。以下の参考文献：Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（２ｎｄ  ｅｄ．１９９４）；Ｔｈｅ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｗａｌｋｅｒ  ｅｄ．，１９８８）；Ｔｈｅ  Ｇｌｏｓｓａｒｙ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ（１９９１）；およびＨａｌｅ＆Ｍａｒｈａｍ，Ｔｈｅ  Ｈａｒｐｅｒ  Ｃｏｌｌｉｎｓ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９１）は、本発明で用いられる用語の多くの一般的定義を当業者に提供する。本明細書で用いられるとき、以下の用語は、特に指定がない限り、下記のそれらに帰する意味を有する。
【００３５】
用語「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」実体は、その実体の１つ以上を指すことが認められるべきであり、例えば、「抗体」は、１つ以上の抗体を表すように理解される。そのように、用語「１つの（ａ）」（または「１つの（ａｎ）」）、「１つ以上」および「少なくとも１つ」は、本明細書中で交換可能に用いられ得る。
【００３６】
用語「抗体」は、本開示中で用いられるとき、免疫グロブリンまたはその断片もしくは誘導体を指し、それがインビトロで産生されるかまたはインビボで産生されるかとは無関係に、抗原−結合部位を含む任意のポリペプチドを包含する。この用語は、限定されないが、ポリクローナル、モノクローナル、単一特異性、多特異性、非特異性、ヒト化、一本鎖、キメラ、合成、組換え、ハイブリッド、突然変異および移植抗体を含む。本開示を意図して、「インタクトな抗体」のように用語「インタクトな」によって特に修飾されない限り、用語「抗体」は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂおよび抗原結合機能を保持する他の抗体断片などの抗体断片も含む。典型的には、かかる断片は、抗原結合ドメインを含むことになる。
【００３７】
用語「抗原結合ドメイン」、「抗原結合断片」および「結合断片」は、抗体と抗原との間の特異的結合に関与するアミノ酸を含む抗体分子の一部を指す。場合により、抗原が大きい場合、抗原結合ドメインは、抗原の一部のみに結合し得る。抗原結合ドメインとの特異的相互作用に関与する抗原分子の一部は、「エピトープ」または「抗原決定基」と称される。抗原結合ドメインは、典型的には抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むが、必ずしも両方を含む必要はない。例えば、いわゆるＦｄ抗体断片は、ＶＨドメインのみからなるが、依然としてインタクトな抗体の一部の抗原結合機能を保持する。
【００３８】
抗体の結合断片は、組換えＤＮＡ技術またはインタクトな抗体の酵素的もしくは化学的切断によって作製される。結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖおよび一本鎖抗体を含む。「二重特異性」または「二機能性」抗体以外の抗体は、その結合部位の各々を同一にすると理解される。パパイン酵素による抗体の消化は、抗原−結合活性を有しないが、結晶化する能力を有する、「Ｆａｂ」断片および「Ｆｃ」断片としても知られる２つの同一の抗原結合断片をもたらす。ペプシン酵素による抗体の消化は、抗体分子の２つのアームが連結状態を維持し、２つの抗原結合部位を含むＦ（ａｂ’）２断片をもたらす。Ｆ（ａｂ’）２断片は、抗原を架橋する能力を有する。「Ｆｖ」は、本明細書で用いられるとき、抗原−認識および抗原−結合部位の両方を保持する抗体の最小断片を指す。「Ｆａｂ」は、本明細書で用いられるとき、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖のＣＨＩドメインを含む抗体の断片を指す。
【００３９】
用語「ｍＡｂ」は、モノクローナル抗体を指す。本発明の抗体は、限定されないが、全天然抗体、二重特異性抗体；キメラ抗体；Ｆａｂ、Ｆａｂ’、一本鎖Ｖ領域断片（ｓｃＦｖ）、融合ポリペプチドおよび非定型抗体を含む。
【００４０】
本開示では、「含む」、「含んでいる」、「含有している」および「有している」などは、米国特許法におけるそれらに帰する意味を有し得、「包含する」、「包含している」などを意味し得る一方、「本質的に〜からなる」または「〜を本質的に構成する」は、同様に米国特許法における帰する意味を有し、この用語は、制限がなく、列挙されるものの基本的または新規な特徴が列挙されるものを超える存在によって変更されない限り、列挙されるものを超える存在を許容するが、先行技術の実施形態を除外する。
【００４１】
「検出する」は、検出される分析物の存在、不在または量を同定することを指す。一実施形態では、分析物はタンパク質であり、検出方法では、タンパク質の物理化学的特性が評価される。
【００４２】
「有効量」は、患者における症状の寛解をもたらすかまたは所望の生物学的転帰を達成するのに十分な薬剤の用量または量を指す。一実施形態では、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を治療するために有効量が用いられる。
【００４３】
「参照」は、比較の標準を意味する。一実施形態では、参照は、本明細書で用いられるとき、別のタンパク質と共配合されないタンパク質の物理化学的特性を指す。
【００４４】
本明細書に提供される範囲は、その範囲内の値のすべてについての略記であると理解される。例えば、１〜５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０からなる群からの任意の数、数の組み合わせまたは部分範囲を含むように理解される。
【００４５】
特に記述されない限りまたは文脈から明らかでない限り、本明細書で用いられるとき、用語「または」は包括的であると理解される。特に記述されない限りまたは文脈から明らかでない限り、本明細書で用いられるとき、用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、単数または複数であると理解される。
【００４６】
特に記述されない限りまたは文脈から明らかでない限り、本明細書で用いられるとき、用語「約」は、当該技術分野で正常な許容の範囲内、例えば平均の２標準偏差内として理解される。約は、規定値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％または０．０１％以内として理解され得る。文脈から特に明らかでない限り、本明細書に提供されるすべての数値は、約という用語によって修飾される。
【００４７】
本明細書における変数の任意の定義における化学基リストの列挙は、任意の単一の基または列記された基の組み合わせとしての変数の定義を含む。本明細書における変数または態様についての実施形態の列挙は、その実施形態を、任意の単一の実施形態としてまたはその任意の他の実施形態もしくは部分と組み合わせて含む。
【００４８】
本明細書に提供される任意の組成物または方法は、本明細書に提供される他の組成物および方法のいずれかの１つ以上と組み合わせることができる。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】共配合されたデュルバルマブ／トレメリムマブの、様々な濃度比におけるデュルバルマブ単独またはトレメリムマブ単独と比べたときの純度を５℃での高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）による評価として表すグラフである。
【図２】共配合されたデュルバルマブ／トレメリムマブの、様々な濃度比におけるデュルバルマブ単独またはトレメリムマブ単独と比べたときの純度を２５℃でのＨＰＳＥＣによる評価として表すグラフである。
【図３】共配合されたデュルバルマブ／トレメリムマブの、様々な濃度比におけるデュルバルマブ単独またはトレメリムマブ単独と比べたときの純度を４０℃でのＨＰＳＥＣによる評価として表すグラフである。
【図４】共配合された凍結乾燥デュルバルマブ／トレメリムマブの、様々な濃度比における凍結乾燥デュルバルマブ単独と比べたときの純度を５℃での高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）による評価として表すグラフである。
【図５】共配合された凍結乾燥デュルバルマブ／トレメリムマブの、様々な濃度比における凍結乾燥デュルバルマブ単独と比べたときの純度を４０℃での高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）による評価として表すグラフである。
【図６】共配合されたデュルバルマブ／トレメリムマブの、様々な濃度比におけるデュルバルマブ単独と比べたときの≧２μｍの肉眼で見ることができない粒子形成を５℃でのフロー顕微鏡（Ｍｉｃｒｏｆｌｏｗ  Ｉｍａｇｅｒ（商標）；Ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｍｐｌｅ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）によって表す棒グラフである。
【図７】共配合されたデュルバルマブ／トレメリムマブの、様々な濃度比におけるデュルバルマブ単独と比べたときの≧１０μｍの肉眼で見ることができない粒子形成を５℃でのフロー顕微鏡（Ｍｉｃｒｏｆｌｏｗ  Ｉｍａｇｅｒ（商標））によって表す棒グラフである。
【図８】共配合されたデュルバルマブ／トレメリムマブの、様々な濃度比におけるデュルバルマブ単独と比べたときの≧２５μｍの肉眼で見ることができない粒子形成を５℃でのフロー顕微鏡（Ｍｉｃｒｏｆｌｏｗ  Ｉｍａｇｅｒ（商標））によって表す棒グラフである。
【図９】共配合された凍結乾燥デュルバルマブ／トレメリムマブの、１０：３または２０：１の濃度比での再構成後におけるデュルバルマブ単独と比べたときの≧２μｍの肉眼で見ることができない粒子形成を５℃でのフロー顕微鏡（Ｍｉｃｒｏｆｌｏｗ  Ｉｍａｇｅｒ（商標）；Ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｍｐｌｅ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）によって表す棒グラフである。
【図１０】共配合された凍結乾燥デュルバルマブ／トレメリムマブの、１０：３または２０：１の濃度比での再構成後におけるデュルバルマブ単独と比べたときの≧１０μｍの肉眼で見ることができない粒子形成を５℃でのフロー顕微鏡（Ｍｉｃｒｏｆｌｏｗ  Ｉｍａｇｅｒ（商標）；Ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｍｐｌｅ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）によって表す棒グラフである。
【図１１】共配合された凍結乾燥デュルバルマブ／トレメリムマブの、１０：３または２０：１の濃度比での再構成後におけるデュルバルマブ単独と比べたときの≧２５μｍの肉眼で見ることができない粒子形成を５℃でのフロー顕微鏡（Ｍｉｃｒｏｆｌｏｗ  Ｉｍａｇｅｒ（商標）；Ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｍｐｌｅ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）によって表す棒グラフである。
【図１２】デュルバルマブまたはトレメリムマブのいずれかの、２０：１比での共配合におけるデュルバルマブ単独またはトレメリムマブ単独と比べたときの５℃での効力を表すグラフである。
【図１３】デュルバルマブまたはトレメリムマブのいずれかの、２０：１比での共配合におけるデュルバルマブ単独またはトレメリムマブ単独と比べたときの２５℃での効力を表すグラフである。
【図１４】デュルバルマブまたはトレメリムマブのいずれかの、２０：１比での共配合におけるデュルバルマブ単独またはトレメリムマブ単独と比べたときの４０℃での効力を表すグラフである。
【図１５】共配合されたデュルバルマブ／トレメリムマブの、２０：１比におけるデュルバルマブ単独またはトレメリムマブ単独と比べたときの主要ピーク純度を５℃での還元ゲル電気泳動による評価として表すグラフである。
【図１６】共配合されたデュルバルマブ／トレメリムマブの、２０：１比におけるデュルバルマブ単独またはトレメリムマブ単独と比べたときの主要ピーク純度を２５℃での還元ゲル電気泳動による評価として表すグラフである。
【図１７】共配合されたデュルバルマブ／トレメリムマブの、２０：１比におけるデュルバルマブ単独またはトレメリムマブ単独と比べたときの主要ピーク純度を４０℃での還元ゲル電気泳動による評価として表すグラフである。
【図１８】共配合されたデュルバルマブ／トレメリムマブの、２０：１比におけるデュルバルマブ単独またはトレメリムマブ単独と比べたときの主要ピーク純度を５℃での非還元ゲル電気泳動による評価として表すグラフである。
【図１９】共配合されたデュルバルマブ／トレメリムマブの、２０：１比におけるデュルバルマブ単独またはトレメリムマブ単独と比べたときの主要ピーク純度を２５℃での非還元ゲル電気泳動による評価として表すグラフである。
【図２０】共配合されたデュルバルマブ／トレメリムマブの、２０：１比におけるデュルバルマブ単独またはトレメリムマブ単独と比べたときの主要ピーク純度を４０℃での非還元ゲル電気泳動による評価として表すグラフである。
【図２１】（２０：１配合における）トレメリムマブの、ＥＤＴＡの存在下で様々なレベルの鉄イオンが添加されるときの純度を５℃での高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）による評価として表すグラフである。
【図２２】（２０：１配合における）トレメリムマブの、ＥＤＴＡの存在下で様々なレベルの鉄イオンが添加されるときの純度を２５℃での高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）による評価として表すグラフである。
【図２３】（２０：１配合における）トレメリムマブの、ＥＤＴＡの存在下で様々なレベルの鉄イオンが添加されるときの純度を４０℃での高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）による評価として表すグラフである。
【図２４】（２０：１配合における）トレメリムマブの、ＥＤＴＡの不在下で様々なレベルの鉄イオンが添加されるときの純度を５℃での高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）による評価として表すグラフである。
【図２５】（２０：１配合における）トレメリムマブの、ＥＤＴＡの不在下で様々なレベルの鉄イオンが添加されるときの純度を２５℃での高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）による評価として表すグラフである。
【図２６】（２０：１配合における）トレメリムマブの、ＥＤＴＡの不在下で様々なレベルの鉄イオンが添加されるときの純度を４０℃での高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）による評価として表すグラフである。
【図２７】（２０：１配合における）トレメリムマブの、ＥＤＴＡの存在下で様々なレベルの鉄イオンが添加されるときの酸性ピーク百分率を５℃でのキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）による評価として表すグラフである。
【図２８】（２０：１配合における）トレメリムマブの、ＥＤＴＡの存在下で様々なレベルの鉄イオンが添加されるときの酸性ピーク百分率を２５℃でのキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）による評価として表すグラフである。
【図２９】（２０：１配合における）トレメリムマブの、ＥＤＴＡの存在下で様々なレベルの鉄イオンが添加されるときの酸性ピーク百分率を４０℃でのキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）による評価として表すグラフである。
【図３０】（２０：１配合における）トレメリムマブの、ＥＤＴＡの存在下で様々なレベルの鉄イオンが添加されるときの断片百分率を５℃での非還元キャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）による評価として表すグラフである。
【図３１】（２０：１配合における）トレメリムマブの、ＥＤＴＡの存在下で様々なレベルの鉄イオンが添加されるときの断片百分率を２５℃での非還元キャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）による評価として表すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
本発明は、少なくとも２つの抗体（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１および抗ＣＴＬＡ−４抗体）の共製剤を含む組成物、ならびにかかる共製剤を作製および使用する方法を特徴とする。特に、この共製剤は、非経口的（例えば、静脈内）薬剤投与にとって有用である。
【００５１】
本発明は、少なくとも部分的には、内部に２つのモノクローナル抗体（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１および抗ＣＴＬＡ−４抗体）が異なるタンパク質濃度比で配合される堅固な共製剤設計空間の発見に基づく。下記に詳細に報告される通り、異なるタンパク質濃度の抗ＰＤ−Ｌ１抗体デュルバルマブおよび抗ＣＴＬＡ−４抗体トレメリムマブを有する適合的で安定な共製剤を見出すための試験が実施された。
【００５２】
抗ＰＤ−Ｌ１および抗ＣＴＬＡ−４抗体が個別に安定な製剤中に配合された。混合時、最終共製剤は、２つの抗体間の標的最終タンパク質濃度比に基づいて変動した。異なるタンパク質濃度比で共配合された抗体の安定性特性は、対応する個別抗体の場合と比較された。意外にもかつ有利には、共製剤の抗体は、抗体の品質属性を撹乱することなく安定であり、かつ共製剤の賦形剤と適合できることが見出された。したがって、新しい液体共製剤の設計空間は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体デュルバルマブおよび抗ＣＴＬＡ−４抗体トレメリムマブが異なるタンパク質濃度比である場合に得られた。本発明で確立される安定な共製剤は、１０：１、１５：１、１５：１０、２０：１および２０：３の抗ＰＤ−Ｌ１（デュルバルマブ）対抗ＣＴＬＡ−４（トレメリムマブ）濃度比を含む。したがって、これらの２つの抗体の共製剤が堅固であり、かつ２つの抗体の安定性がタンパク質濃度比の試験範囲にわたって維持されることが実証された。
【００５３】
抗体共製剤組成物
本発明は、抗ＰＤ−Ｌ１および抗ＣＴＬＡ−４抗体またはそれらの抗体断片を含む共製剤組成物を特徴とする。特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体デュルバルマブおよび抗ＣＴＬＡ−４抗体トレメリムマブは、共配合される。デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）は、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１およびＣＤ８０への結合を遮断する選択的な高親和性のヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。進行する第１／２相試験では、デュルバルマブ単独療法は、進行性ＮＳＣＬＣを有する患者において、管理しやすい耐容性特性とともに持続的応答をもたらしている。デュルバルマブに関する開示は、米国特許第８，７７９，１０８号明細書および米国特許第９，４９３，５６５号明細書に見出すことができる。トレメリムマブ（ＣＰ−６７５，２０６）は、ＣＴＬＡ−４阻害を通じてＴ細胞活性を促進するが、制御性Ｔ細胞を直接的に枯渇させるように思われないＣＴＬＡ−４の選択的なヒトＩｇＧ２  ｍＡｂ阻害剤である。トレメリムアブに関する開示は、米国特許第６，６８２，７３６号明細書に見出すことができる。デュルバルマブおよびトレメリムマブの組み合わせは、２つの経路が非冗長的であることを示す強力な前臨床データに基づき、これは、両方を標的化することが相加的または相乗的効果を有し得ることを示唆する。本明細書で詳述される製剤において、組成物または製剤中の抗体または抗体断片は、所望の生物学的活性を保持し、かつ／または所望の物理化学的特性を保持することが注目されるべきである。様々な実施形態では、本開示の製剤は、水または１つ以上の好適な溶媒を含む。様々な実施形態では、水は蒸留される。特定の実施形態では、製剤は、１つ以上の追加的成分、例えば賦形剤を含む。好ましい実施形態では、本開示の抗体製剤は、無菌および／またはパイロジェンフリーであり、例えば対象への注射に適する。医薬組成物を調製するための方法は、当該技術分野で公知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．）１６ｔｈ  ｅｄ．（１９８０）（参照により本明細書に援用される）によって記載されている。
【００５４】
製剤のこれらの成分の各々の濃度および／または比率は、本明細書で詳述される。本開示では、特定の濃度の任意の組み合わせの本明細書に示される成分を含む製剤が検討されることが理解されるべきである。加えて、任意選択的に他の賦形剤を含み得る製剤について、これらの特徴の任意の組み合わせを含む製剤が記述において検討されることが理解されるべきである。
【００５５】
様々な実施形態では、組成物または共製剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）またはその抗体断片を約１８．７ｍｇ／ｍＬ〜約４４．４ｍｇ／ｍＬの濃度で、および抗ＣＴＬＡ−４抗体（トレメリムマブ）またはその抗体断片を約２．２ｍｇ／ｍＬ〜約１２．５ｍｇ／ｍＬの濃度で含有する。他の実施形態では、組成物または共製剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）またはその抗体断片を約１８．０ｍｇ／ｍＬ〜約４５ｍｇ／ｍＬの濃度で、および抗ＣＴＬＡ−４抗体（トレメリムマブ）またはその抗体断片を約２．０ｍｇ／ｍＬ〜約１５．０ｍｇ／ｍＬの濃度で含有する。特定の実施形態では、組成物または共製剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）またはその抗体断片を約１８．７ｍｇ／ｍＬ、３６．３ｍｇ／ｍＬ、４０．０ｍｇ／ｍＬ、４２．８ｍｇ／ｍＬまたは４４．４ｍｇ／ｍＬの濃度で含有する。他の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）またはその抗体断片の濃度は、約１８．０、２７．０、３６．０または４５．０ｍｇ／ｍＬである。他の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）またはその抗体断片の濃度は、約２０．０、２５．０、３０．０、３５．０、４０．０または４５．０ｍｇ／ｍＬである。特定の実施形態では、組成物または共製剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、トレメリムマブ）またはその抗体断片を約２．２ｍｇ／ｍＬ、２．９ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍｇ／ｍＬ、５．５ｍｇ／ｍＬまたは１２．５ｍｇ／ｍＬの濃度で含有する。他の実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、トレメリムマブ）またはその抗体断片の濃度は、約２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０、１１．０、１２．０、１３．０、１４．０または１５．０ｍｇ／ｍＬである。
【００５６】
具体的な実施形態では、組成物または共製剤は、約１８．７ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）もしくはその抗体断片、および約１２．５ｍｇ／ｍＬの抗ＣＴＬＡ−４抗体（トレメリムマブ）もしくはその抗体断片；約３６．３ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）もしくはその抗体断片、および約５．５ｍｇ／ｍＬの抗ＣＴＬＡ−４抗体（トレメリムマブ）もしくはその抗体断片；約４０．０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）もしくはその抗体断片、および約４．０ｍｇ／ｍＬの抗ＣＴＬＡ−４抗体（トレメリムマブ）もしくはその抗体断片；約４２．８ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）もしくはその抗体断片、および約２．９ｍｇ／ｍＬの抗ＣＴＬＡ−４抗体（トレメリムマブ）もしくはその抗体断片；または約４４．４ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）もしくはその抗体断片、および約２．２ｍｇ／ｍＬの抗ＣＴＬＡ−４抗体（トレメリムマブ）もしくはその抗体断片を含有する。
【００５７】
様々な実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（デュルバルマブ）またはその抗体断片対抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、トレメリムマブ）またはその抗体断片のタンパク質濃度比は、約１５：１０〜約２０：１である。特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗体断片対抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗体断片のタンパク質濃度比は、約１５：１０、２０：３、１０：１、１５：１または２０：１である。タンパク質濃度比を用いて、抗体のタンパク質濃度に対応する抗体の断片におけるタンパク質濃度を、例えば抗体とその抗体断片との間の分子量の差を考慮して得ることができることが当業者によって理解される。
【００５８】
一部の実施形態では、組成物または製剤は、ヒスチジンを約１ｍＭ〜約５０ｍＭ、または約２０ｍＭ〜約３０ｍＭ、または約２２ｍＭ〜約２５ｍＭの範囲の濃度で含有し得る。具体的な実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０ｍＭである。ヒスチジンは、Ｌ−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジンまたはそれらの混合物の形態であり得る。ヒスチジンは、水和物の形態でもあり得る。ヒスチジンは、薬学的に許容できる塩、例えば塩酸塩（例えば、一塩酸塩および二塩酸塩）、臭化水素酸塩、硫酸塩、酢酸塩などの形態で用いられ得る。ヒスチジンの純度は、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または少なくとも９９．５％である必要がある。ヒスチジンは、約５．５〜約６．０のｐＨを有する溶液中の緩衝液として作用する。
【００５９】
組成物または製剤は、賦形剤、例えば糖類（例えば、スクロース、マンノース、トレハロースなど）、ポリオール（例えば、ツイーン）および／または糖アルコール（例えば、マンニトール、ソルビトールなど）をさらに含み得る。一実施形態では、賦形剤は糖類である。特定の実施形態では、糖類は、約２００ｍＭ〜約３００ｍＭ、または約２２５ｍＭ〜約２７５ｍＭ、約２５０ｍＭ〜約２７０ｍＭ、または約２５４〜約２６９ｍＭの範囲の濃度のトレハロース（例えば、トレハロース二水和物）である。具体的な実施形態では、糖類（例えば、トレハロース二水和物）の濃度は、約２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９または２７０ｍＭである。別の実施形態では、賦形剤はポリオールである。具体的な実施形態では、ポリオールは、約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約１．０％（ｗ／ｖ）または約０．０２％（ｗ／ｖ）〜約０．０５％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度のポリソルベート（例えば、ポリソルベート８０）である。具体的な実施形態では、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート８０）の濃度は、約０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％または１．０％（ｗ／ｖ）の濃度である。
【００６０】
組成物または製剤は、保存剤（例えば、抗菌性保存剤）をさらに含み得る。様々な実施形態では、組成物または製剤は、エデト酸二ナトリウム二水和物（エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩二水和物）を含む。特定の実施形態では、ＥＤＴＡの濃度は、約０．０１ｍＭ〜約０．３ｍＭ、約０．０３〜約０．１７または約０．０３ｍＭ〜約０．３ｍＭである。具体的な実施形態では、ＥＤＴＡの濃度は、約０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．１１、０．１２、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１８、０．１９、０．２０、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、０．２５、０．２６、０．２７、０．２８、０．２９または０．３０ｍＭである。
【００６１】
製剤のｐＨは、一般に特定の抗体（その抗体断片を含む）の等電点に等しいべきでなく、約４．０〜約７．０、約５．０〜約６．０または約５．５〜約６．０の範囲であり得る。特定の実施形態では、本開示の組成物または製剤は、約５．５、５．６、５．７、５．８、５．９または６．０のｐＨを有する。
【００６２】
様々な実施形態では、本開示の組成物または製剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）またはその抗体断片、抗ＣＴＬＡ−４抗体（トレメリムマブ）またはその抗体断片、水性担体（例えば、水）、トレハロース（例えば、トレハロース二水和物）、ヒスチジン（例えば、ヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣｌ）、ポリソルベート８０およびＥＤＴＡを含む。特定の実施形態では、組成物または製剤は、表２に示される成分および量または濃度を含む。
【００６３】
具体的な実施形態では、組成物または製剤は、約５．８のｐＨにおいて、約１８．７ｍｇ／ｍＬのデュルバルマブまたはその抗体断片、約１２．５ｍｇ／ｍＬのトレメリムマブまたはその抗体断片、約２２ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣｌ、約２５４ｍＭのトレハロース二水和物、約０．１７ｍＭのＥＤＴＡおよび約０．０２％ｗ／ｖのＰＳ８０を含むかまたはそれらからなる。
【００６４】
具体的な実施形態では、組成物または製剤は、約６．０のｐＨにおいて、約３６．３ｍｇ／ｍＬのデュルバルマブまたはその抗体断片、約５．５ｍｇ／ｍＬのトレメリムマブまたはその抗体断片、約２４ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣｌ、約２６０ｍＭのトレハロース二水和物、約０．０７ｍＭのＥＤＴＡおよび約０．０２％ｗ／ｖのＰＳ８０を含むかまたはそれらからなる。
【００６５】
具体的な実施形態では、組成物または製剤は、約６．０のｐＨにおいて、約４０．０ｍｇ／ｍＬのデュルバルマブまたはその抗体断片、約４．０ｍｇ／ｍＬのトレメリムマブまたはその抗体断片、約２５ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣｌ、約２６４ｍＭのトレハロース二水和物、約０．０５ｍＭのＥＤＴＡおよび約０．０２％ｗ／ｖのＰＳ８０を含むかまたはそれらからなる。
【００６６】
具体的な実施形態では、組成物または製剤は、約６．０のｐＨにおいて、約４２．８ｍｇ／ｍＬのデュルバルマブまたはその抗体断片、約２．９ｍｇ／ｍＬのトレメリムマブまたはその抗体断片、約２５ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣｌ、約２６７ｍＭのトレハロース二水和物、約０．０４ｍＭのＥＤＴＡおよび約０．０２％ｗ／ｖのＰＳ８０を含むかまたはそれらからなる。
【００６７】
具体的な実施形態では、組成物または製剤は、約６．０のｐＨにおいて、約４４．４ｍｇ／ｍＬのデュルバルマブまたはその抗体断片、約２．２ｍｇ／ｍＬのトレメリムマブまたはその抗体断片、約２５ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣｌ、約２６９ｍＭのトレハロース二水和物、約０．０３ｍＭのＥＤＴＡおよび約０．０２％ｗ／ｖのＰＳ８０を含むかまたはそれらからなる。
【００６８】
特定の実施形態では、本開示の製剤は、少なくとも６か月間にわたり、約２３℃〜約２７℃または約２０℃〜約２４℃の温度範囲で安定性を示す。加えてまたは代わりに、特定の実施形態では、製剤は、少なくとも６か月間、少なくとも１年間またはそれより長い期間にわたり、約２℃〜約８℃の温度範囲で安定である。加えてまたは代わりに、特定の実施形態では、製剤は、少なくとも１か月間および一部の実施形態では少なくとも３か月間にわたり、３８℃〜約４２℃の温度範囲で安定である。
【００６９】
安定性は、例えば、タンパク質濃度測定（例えば、２８０ｍＭでの吸光度の測定またはイオン交換タイタークロマトグラフィー）または高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）によって評価され得る。特定の実施形態では、安定性は、純度のレベルの維持によって経時的に評価され得る。例えば、特定の実施形態では、本開示の共製剤は、ＨＰＳＥＣによる測定によると、約２℃〜約８℃で貯蔵されるとき、純度／年において１％未満、０．８％未満、０．７５％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満またはさらに０．４％未満の減少を有する。一実施形態では、本開示の製剤は、断片および／または集合種の存在または不在を監視するＨＰＳＥＣによる測定によると、６か月または１年を超える有効期間を有する。
【００７０】
特定の実施形態では、本開示の共製剤組成物は、上記のような規定期間の貯蔵後、２℃〜８℃下で貯蔵されるとき、低レベルから検出不能レベルの集合および／または断片化を促進する。好ましくは、抗体（その抗体断片を含む）の５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、最も好ましくは０．５％以下が、上記のような規定期間の貯蔵後、ＨＰＳＥＣによる測定によると、断片または集合体（可逆的または非可逆的）形態を形成する。集合および／または断片化は、例えば、外観検査、フロー顕微鏡、遠心分離、ゲル電気泳動（例えば、還元および非還元条件下）およびイオン交換クロマトグラフィーの１つ以上を含む様々なアッセイによって評価される。
【００７１】
さらに、本開示の共製剤組成物は、様々なアッセイによる評価によると、上記の条件下で貯蔵を延長する間、抗体（その抗体断片を含む）の生物学的活性をほとんど低下させない。例えば、免疫学的アッセイ、例えば酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）およびラジオイムノアッセイでは、抗体（その抗体断片を含む）が抗原に免疫特異的に結合する能力を測定することができる。抗体成分の効力は、幾つもの生物検定、例えば各抗体に特異的なレポーター遺伝子生物検定を用いて測定され得る。本開示の共製剤組成物は、上記規定期間の貯蔵後、製剤の貯蔵に先立つ初期の生物学的活性（例えば、抗原に結合する能力）の８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、９８％超、９９％超、９９．５％超、９９．８％超または９９．９％超の保持を促進する。一部の実施形態では、本開示の共製剤組成物は、上記規定期間の貯蔵後、貯蔵前の抗体を表す参照抗体と比べて生物学的活性の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．８％または少なくとも９９．９％の保持を促進する。
【００７２】
治療方法
本開示の共製剤組成物は、例えば、医薬組成物の送達および／または貯蔵において有用である。一実施形態では、共製剤組成物は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、デュルバルマブ）またはその抗原結合断片と、抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、トレメリムマブ）またはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物を含む。プログラム細胞死１／プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１）経路および細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）経路遮断薬の組み合わせは２つの区画を標的にし、ここで、抗ＰＤ−Ｌ１／抗ＰＤ−１は、腫瘍微小環境内で作用し、Ｔ細胞機能の阻害を遮断する一方、抗ＣＴＬＡ−４は、リンパ系区画内で作用し、腫瘍反応性Ｔ細胞の数およびレパートリーを拡張する１，２。
【００７３】
デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）は、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１およびＣＤ８０への結合を遮断するが４、プログラム細胞死（ＰＤ−Ｌ２）に結合しないことで５、感受性動物モデルにおいて認められるＰＤ−Ｌ２遮断に起因する潜在的な免疫関連毒性を回避する６，７、選択的な高親和性のヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。進行する第１／２相試験では、デュルバルマブ単独療法は、進行性ＮＳＣＬＣを有する患者において、管理しやすい耐容性特性とともに持続的応答をもたらしており、１０ｍｇ／ｋｇ、２週毎（ｑ２ｗ）のデュルバルマブで確認された／未確認のＯＲＲは、ＰＤ−Ｌ１＋患者において２７％であり、ＰＤ−Ｌ１−患者において５％であった８。その試験では、最大耐容量（ＭＴＤ）は、用量漸増相において到達されず、用量拡大コホートが１０ｍｇ／ｋｇの用量、ｑ２ｗを用いて開始された８。トレメリムマブ（ＣＰ−６７５，２０６）は、ＣＴＬＡ−４の選択的なヒトＩｇＧ２  ｍＡｂ阻害剤であり９、それは、ＣＴＬＡ−４阻害を通じてＴ細胞活性を促進するが、制御性Ｔ細胞を直接的に枯渇させるように思われない１０。デュルバルマブおよびトレメリムマブの組み合わせは、２つの経路が非冗長的であることを示す強力な前臨床データに基づき、これは、両方を標的化することが相加的または相乗的効果を有し得ることを示唆する１１。
【００７４】
「デュルバルマブ」（「ＭＥＤＩ４７３６」としても公知である）は、ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドに選択的に結合する抗体またはその抗原結合断片を意味し、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域の少なくとも一部および／または配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域の少なくとも一部を含む。
【００７５】
本明細書に提供される方法で用いられるデュルバルマブ（またはその抗原結合断片）に関する情報は、米国特許第８，７７９，１０８号明細書（その開示は、その全体が参照により本明細書に援用される）に見出すことができる。デュルバルマブの断片結晶化可能（Ｆｃ）ドメインは、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介することに関与する補体成分Ｃ１ｑおよびＦｃγ受容体への結合を低減するＩｇＧ１重鎖の定常ドメイン内に三重突然変異を有する。デュルバルマブは、ＰＤ−Ｌ１に対して選択的であり、かつＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１およびＣＤ８０受容体への結合を遮断する。デュルバルマブは、インビトロでヒトＴ細胞活性化のＰＤ−Ｌ１媒介性抑制を軽減し得、Ｔ細胞依存性機構を介して異種移植片モデルにおける腫瘍増殖を阻害する。
【００７６】
デュルバルマブは、重鎖および軽鎖または重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。具体的な態様では、本明細書に提供される方法において用いるためのデュルバルマブまたはその抗原結合断片は、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域および配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。具体的な態様では、本明細書に提供される方法において用いるためのデュルバルマブまたはその抗原結合断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は、配列番号３〜５のＫａｂａｔ定義のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含み、および軽鎖可変領域は、配列番号６〜８のＫａｂａｔ定義のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む。当業者であれば、当業者に公知のＣｈｏｔｈｉａ定義、Ａｂｍ定義または他のＣＤＲ定義を容易に同定することができるであろう。具体的な態様では、本明細書に提供される方法において用いるためのデュルバルマブまたはその抗原結合断片は、米国特許第８，７７９，１０８号明細書（その全体が参照により本明細書に援用される）に開示のような２．１４Ｈ９ＯＰＴ抗体の可変重鎖および可変軽鎖ＣＤＲ配列を含む。
【００７７】
「トレメリムマブ」は、ＣＴＬＡ−４ポリペプチドに選択的に結合する抗体またはその抗原結合断片を意味し、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域の少なくとも一部および／または配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域の少なくとも一部を含む。例示的な抗ＣＴＬＡ−４抗体は、例えば、米国特許第６，６８２，７３６号明細書；米国特許第７，１０９，００３号明細書；米国特許第７，１２３，２８１号明細書；米国特許第７，４１１，０５７号明細書；米国特許第７，８２４，６７９号明細書；米国特許第８，１４３，３７９号明細書；米国特許第７，８０７，７９７号明細書；および米国特許第８，４９１，８９５号明細書（トレメリムマブはその中の１１．２．１である）（それらは参照により本明細書に援用される）に記載されている。トレメリムマブは、例示的な抗ＣＴＬＡ−４抗体である。トレメリムマブ配列は、下記の配列表に提供される。
【００７８】
本明細書に提供される方法において用いられるトレメリムマブ（またはその抗原結合断片）に関する情報は、米国特許第６，６８２，７３６号明細書に見出すことができる（１１．２．１と称される場合、その開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。トレメリムマブ（ＣＰ−６７５，２０６、ＣＰ−６７５、ＣＰ−６７５２０６およびチシリムマブとも称される）は、ＣＴＬＡ−４に高度に選択的であり、かつＣＴＬＡ−４のＣＤ８０（Ｂ７．１）およびＣＤ８６（Ｂ７．２）への結合を遮断するヒトＩｇＧ２モノクローナル抗体である。それは、インビトロで免疫活性化をもたらすことが示されており、トレメリムマブで治療された一部の患者は、腫瘍退縮を示している。
【００７９】
本明細書に提供される方法において用いるためのトレメリムマブおよびその抗原結合断片は、重鎖および軽鎖または重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。具体的な態様では、本明細書に提供される方法において用いるためのトレメリムマブまたはその抗原結合断片は、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域および配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。具体的な態様では、本明細書に提供される方法において用いるためのトレメリムマブまたはその抗原結合断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は、配列番号１１〜１３のＫａｂａｔ定義のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含み、および軽鎖可変領域は、配列番号１４〜１６のＫａｂａｔ定義のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む。当業者であれば、当業者に公知のＣｈｏｔｈｉａ定義、Ａｂｍ定義または他のＣＤＲ定義を容易に同定することができるであろう。具体的な態様では、本明細書に提供される方法において用いるためのトレメリムマブまたはその抗原結合断片は、米国特許第６，６８２，７３６号明細書（その全体が参照により本明細書に援用される）に開示のような１１．２．１抗体の可変重鎖および可変軽鎖ＣＤＲ配列を含む。
【００８０】
用語「抗原結合断片」は、インタクトな抗体の一部を指し、かつ／またはインタクトな抗体の抗原決定可変領域を指す。抗体の抗原結合機能が完全長抗体の断片によって行われ得ることは公知である。抗体断片の例として、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片、線状抗体、一本鎖抗体、二重特異性抗体ならびに抗体断片から形成される多特異性抗体が挙げられる。
【００８１】
特定の態様では、固形腫瘍（例えば、ＮＳＣＬＣ）を呈している患者に、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物が投与される。患者に投与される、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物の量は、患者の年齢、体重、臨床的評価、腫瘍量および／または主治医の判断を含む他の要素などの様々なパラメータに依存することになる。
【００８２】
本発明の共製剤組成物は、１回のみまたは低頻度に投与される一方、患者に利益をもたらし得る。さらなる態様では、患者にさらなる継続用量が投与される。継続用量は、患者の年齢、体重、臨床的評価、腫瘍量および／または主治医の判断を含む他の要素に応じて様々な時間間隔で投与され得る。
【００８３】
特定の態様では、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物が１回以上の用量（例えば、２、３またはより多くの用量）で患者に投与される。「複数回用量」は、２回以上の用量を意味する。特に、複数回用量製剤は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または複数回用量で投与される。
【００８４】
デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物の投与間の間隔は、４週毎であり得る。デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物の投与間の間隔は、１２週毎であり得る。デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物の投与間の間隔は、４週毎で６サイクル、次いで１２週毎であり得る。
【００８５】
一部の実施形態では、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む少なくとも２用量の共製剤組成物が患者に投与される。一部の実施形態では、少なくとも３用量、少なくとも４用量、少なくとも５用量、少なくとも６用量、少なくとも７用量、少なくとも８用量、少なくとも９用量、少なくとも１０用量または少なくとも１５用量以上が患者に投与され得る。一部の実施形態では、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物は、４週の治療期間にわたり、８週の治療期間にわたり、１６週の治療期間にわたり、２０週の治療期間にわたり、２４週の治療期間にわたりまたは１年以上の治療期間にわたり投与される。
【００８６】
特定の態様では、本明細書に提供される方法に従う、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物の投与は、非経口投与による。例えば、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物は、静脈内注入または皮下注射によって投与され得る。特定の実施形態では、投与は、静脈内注入による。
【００８７】
併用療法
本明細書に提供される通り、抗ＣＴＬＡ−４抗体および抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそれらの抗原結合断片を含む本発明の共製剤組成物を用いる、固形腫瘍を有する患者の治療は、相加的または相乗的効果をもたらし得る。本明細書で用いられるとき、用語「相乗的」は、治療薬の組み合わせ（例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体および抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそれらの抗原結合断片の組み合わせ）を指す。
【００８８】
治療薬の組み合わせ（例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体および抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそれらの抗原結合断片の組み合わせ）の相乗的効果は、治療薬の１つ以上のより低い用量での使用および／または前記治療薬の固形腫瘍を有する患者へのより低い頻度での投与を可能にする。治療薬をより低い用量で利用する能力および／または前記治療薬をより低い頻度で投与する能力により、固形腫瘍の治療における前記治療薬の有効性が低下することなく、前記治療薬の対象への投与に関連した毒性が低減される。さらに、相乗的効果により、固形腫瘍の管理、治療または寛解における治療薬の有効性の改善がもたらされ得る。治療薬の組み合わせの相乗的効果により、いずれかの単一の治療薬の使用に関連した有害なまたは望まれない副作用が回避または低減され得る。
【００８９】
併用療法では、抗ＣＴＬＡ−４抗体および抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそれらの抗原結合断片の組み合わせは、同じ医薬組成物（例えば、共製剤）中に含まれ得る。特定の態様では、本開示に従う医薬組成物は、薬学的に許容できる非毒性の滅菌担体、例えば生理食塩水、非毒性緩衝液、保存剤などを含む。好適な製剤は、治療方法において用いるため、本明細書中に開示される。
【００９０】
腫瘍応答を測定するためのアッセイ
本明細書に提供される治療方法は、腫瘍増殖を低減するか、遅延させるか、または安定化させ得る。一部の態様では、低減または遅延は、統計学的に有意であり得る。腫瘍増殖における低減は、ベースラインでの患者の腫瘍の増殖に対して、予想される腫瘍増殖に対して、大患者集団を基準とした予想される腫瘍増殖に対して、または対照集団の腫瘍増殖に対して比較することによって評価され得る。特定の態様では、腫瘍応答は、固形癌効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）を用いて評価される。
【００９１】
特定の態様では、腫瘍応答は、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物の２回以上の用量での投与後に検出可能である。特定の態様では、腫瘍応答は、８週目に検出可能である。特定の態様では、腫瘍応答は、３３週目に検出可能である。特定の態様では、腫瘍応答は、５０週目に検出可能である。
【００９２】
特定の態様では、「客観的応答」（抗腫瘍活性に関する）は、確認された完全または部分寛解（ＣＲまたはＰＲ）と定義される。特定の態様では、２４週目の「疾患制御」は、≧２４週のＣＲ、ＰＲまたは安定疾患（ＳＤ）持続時間と定義される。２４週目の奏効率（ＯＲＲ）および疾患制御率（ＤＣＲ）が評価され、９５％信頼区間（ＣＩ）が正確な二項分布を用いて算出される。
【００９３】
特定の態様では、患者は、疾患制御（ＤＣ）を達成する。疾患制御は、完全寛解（ＣＲ）、部分寛解（ＰＲ）または安定疾患（ＳＤ）であり得る。
【００９４】
「完全寛解」（ＣＲ）、「部分寛解」（ＰＲ）および「安定疾患」（ＳＤ）は、下の表１に定義されるように判定され得る。
【００９５】
【表１】
2019514889.tif 000003
【００９６】
特定の態様では、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物の投与により、進行のない生存（ＰＦＳ）が短縮し得る。
【００９７】
特定の態様では、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物の投与により、全生存（ＯＳ）が延長し得る。
【００９８】
一部の実施形態では、患者は、少なくとも１つの化学療法剤による治療を以前に受けている。一部の実施形態では、患者は、少なくとも２つの化学療法剤による治療を以前に受けている。化学療法剤は、例えば、限定されないが、ベムラフェニブ、エルロチニブ、アファチニブ、セツキシマブ、カルボプラチン、ベバシズマブ、エルロチニブ、ゲフィチニブおよび／またはペメトレキセドであり得る。
【００９９】
一部の実施形態では、ＮＳＣＬＣは、少なくとも１つの化学療法剤に対して難治性または抵抗性を示す。一部の実施形態では、腫瘍は、少なくとも２つの化学療法剤に対して難治性または抵抗性を示す。腫瘍は、例えば、限定されないが、ベムラフェニブ、エルロチニブ、アファチニブ、セツキシマブ、カルボプラチン、ベバシズマブ、エルロチニブ、ゲフィチニブおよび／またはペメトレキセドの１つ以上に対して難治性または抵抗性を示す。一部の実施形態では、ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１に対して陰性である。一部の実施形態では、ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１に対して陽性である。
【０１００】
一部の実施形態では、患者は、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物の投与前に０または１の米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）（Ｏｋｅｎ  ＭＭ，ｅｔ  ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．５：６４９−５５（１９８２））活動状態を有する。
【０１０１】
本明細書に提供される方法によると、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物の投与により、望ましい薬物動態パラメータがもたらされ得る。総薬物暴露量は、「曲線下面積」（ＡＵＣ）を用いて評価され得る。「ＡＵＣ（τ）」は、投与間隔である時間０〜時間τのＡＵＣを指す一方、「ＡＵＣ（ｉｎｆ）」は、無限時間までのＡＵＣを指す。投与により、デュルバルマブまたはその抗原結合断片で約６００〜約３，０００μｇ／ｍＬ＊日、トレメリムマブまたはその抗原結合断片で約２５０〜約３５０μｇ／ｍＬ＊日のＡＵＣ（τ）がもたらされ得る。投与により、デュルバルマブまたはその抗原結合断片で約６０〜約３００μｇ／ｍＬ、トレメリムマブまたはその抗原結合断片で約２５〜約３５μｇ／ｍＬの最大観察濃度（Ｃｍａｘ）がもたらされ得る。投与により、デュルバルマブまたはその抗原結合断片で約５〜約４０μｇ／ｍＬ、トレメリムマブまたはその抗原結合断片で約４〜約６μｇ／ｍＬのＣトラフ（最小血漿薬物濃度）がもたらされ得る。
【０１０２】
本明細書に提供される通り、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物中のデュルバルマブまたはその抗原結合断片は、遊離（可溶性）ＰＤ−Ｌ１レベルも低下させ得る。遊離（可溶性）ＰＤ−Ｌ１は、（例えば、デュルバルマブにより）結合されないＰＤ−Ｌ１を指す。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１レベルは、少なくとも６５％低下する。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１レベルは、少なくとも８０％低下する。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１レベルは、少なくとも９０％低下する。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１レベルは、少なくとも９５％低下する。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１レベルは、少なくとも９９％低下する。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１レベルは、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物の投与後に検出不能である。
【０１０３】
一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１レベルは、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物の１回以上の投与後に少なくとも６５％低下する。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１レベルは、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物の単回投与後に少なくとも８０％低下する。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１レベルは、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物の単回投与後に少なくとも９０％低下する。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１レベルは、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物の単回投与後に少なくとも９５％低下する。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１レベルは、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物の単回投与後に少なくとも９９％低下する。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１レベルは、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物の単回投与後に検出不能である。
【０１０４】
本明細書に提供されるのは、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを含む共製剤組成物を用いて固形腫瘍非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を治療するための方法である。デュルバルマブおよびトレメリムマブの組み合わせは、非小細胞肺癌の治療時に有効である。本発明は、少なくとも一部にはこれらの発見に基づく。提供される方法は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を治療するため、共製剤組成物として、デュルバルマブまたはその抗原結合断片と、トレメリムマブまたはその抗原結合断片とを有効量で投与するステップを含む。
【０１０５】
ＮＳＣＬＣには、３つの主なサブタイプ：扁平上皮癌、腺癌および大細胞（未分化）癌がある。他のサブタイプとして、腺扁平上皮癌および肉腫様癌が挙げられる。ＮＳＣＬＣは、ＫＲＡＳ中または上皮成長因子受容体中の突然変異を含み得る。かかる突然変異は、当該技術分野で公知であり、例えば、Ｒｉｅｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ａｍ  Ｔｈｏｒａｃ  Ｓｏｃ．２００９  Ａｐｒ  １５；６（２）：２０１−５（参照により本明細書に援用される）に記載されている。
【０１０６】
肺癌（例えば、非小細胞肺癌）を患う対象は、治療方法を選択する過程でＰＤ−Ｌ１ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの発現について試験され得る。（例えば、ＣｔまたはＩＨＣ−Ｍスコアによる定義として）ＰＤ−Ｌ１が陰性である腫瘍を有するとして、または参照レベルに対して低下したレベルもしくは検出不能レベルのＰＤ−Ｌ１を有するとして同定された患者は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびトレメリムマブの組み合わせを用いた治療に対する応答性として同定される。かかる患者には、デュルバルマブまたはその抗原結合断片がトレメリムマブまたはその抗原結合断片と組み合わせて投与される。
【０１０７】
本発明の実施では、別段の指示がない限り、当業者の範囲内で周知である分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の通常技術が利用される。かかる技術は、文献、例えば、“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９）；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｇａｉｔ，１９８４）；“Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ”（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，１９８７）；“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｗｅｉｒ，１９９６）；“Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ”（Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｃａｌｏｓ，１９８７）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”（Ａｕｓｕｂｅｌ，１９８７）；“ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ”，（Ｍｕｌｌｉｓ，１９９４）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｃｏｌｉｇａｎ，１９９１）において十分に説明される。これらの技術は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの作製に適用可能であり、したがって本発明を作製および実施する場合に考慮され得る。特定の実施形態にとって特に有用な技術は、後続するセクションにおいて考察されることになる。
【０１０８】
以下の実施例は、共製剤組成物をどのように作製および使用するか、ならびに本発明の治療方法についての完全な開示および説明を当業者に提供するために提示され、本発明者らがその発明と見なす範囲を限定することは意図されない。
【実施例】
【０１０９】
実施例１：デュルバルマブおよびトレメリムマブ共製剤の安定性評価
材料
試験に用いるすべての材料は、米国薬局方（ＵＳＰ）または三極薬局方適合（Ｍｕｌｔｉｃｏｍｐｅｎｄｉａｌ）グレードのものであった。すべての溶液および緩衝液は、米国薬局方（ＵＳＰ）水または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）水を用いて調製し、さらに使用前に０．２μｍのＰＶＤＦフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｍｉｌｌｅｘ  ＧＶ，ＳＬＧ０３３ＲＢ）を通して濾過した。この試験では、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）によって作製された高純度の抗ＰＤ−Ｌ１抗体（デュルバルマブ）および抗ＣＴＬＡ−４抗体（トレメリムマブ）を用いた。すべての試料は、Ｂｉｏｓａｆｅｔｙ  Ｃａｂｉｎｅｔ  Ｈｏｏｄ（ＢＳＣ）において無菌条件下で調製した。
【０１１０】
方法および結果
選択した時点で、フロー顕微鏡（Ｍｉｃｒｏｆｌｏｗ  Ｉｍａｇｅｒ（商標））、バイオアナライザー、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）および効力について必要に応じて評価した。
【０１１１】
外観
３ｃｃ、１３ｍｍのガラスバイアル中の試料の外観を、Ｐｈ．Ｅｕｒ．（各々、セクション２．９．２０、２．２．１および２．２．２）からの適応した手順に従い、外観検査ステーションで可視粒子、透明性／乳白光および色について評価した。肉眼で見ることができない粒子（ＳＶＰ）数は、Ｍｉｃｒｏｆｌｏｗ  Ｉｍａｇｅｒ（商標）、ＭＦＩ（商標）（Ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｍｐｌｅ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）を用いてフロー顕微鏡によって測定した。不規則な肉眼で見ることができないタンパク質性粒子を球状気泡から識別するため、０．８５以下のソフトウェアアスペクト比を用いて生カウントを処理した。
【０１１２】
異なるデュルバルマブ対トレメリムマブ濃度比での混合時、最終賦形剤濃度およびｐＨは変動した。異なる濃度比での様々な立体構造の最終的な製剤組成物を表２に示す。
【０１１３】
異なるデュルバルマブ対トレメリムマブ濃度比で共配合した試料の安定性を評価し、デュルバルマブ単独またはトレメリムマブ単独の場合と比較した。試験期間にわたり、いずれの安定性試験でも明らかな可視粒子形成は認められなかった。
【０１１４】
図１〜５は、共製剤の、５、２５または４０℃における、異なるデュルバルマブ対トレメリムマブ濃度比でのデュルバルマブ単独またはトレメリムマブ単独と比べたときの純度低下率を図示する。図示のように、共配合した試料の純度低下率は、デュルバルマブ単独またはトレメリムマブ単独の場合に類似した（図１〜３は水性製剤を示し、図４および５は凍結乾燥製剤を示す）。
【０１１５】
図６〜１１は、２〜８℃のインキュベーション下における、共配合した試料の、異なるデュルバルマブ対トレメリムマブ濃度比でのデュルバルマブ単独と比べたときの肉眼で見ることができない粒子数を示す。肉眼で見ることができない粒子（ＳＶＰ）は、Ｍｉｃｒｏｆｌｏｗ  Ｉｍａｇｅｒ（商標）（ＭＦＩ（商標））によって測定した。全体として、すべての試料においてＳＶＰ数の有意な増加は検出されなかった。
【０１１６】
【表２】
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【０１１７】
サイズ排除クロマトグラフィーによる純度測定
タンパク質純度を、２８０ｎｍでのＵＶ検出を伴う、ＴＳＫ−ＧＥＬ  Ｇ３０００ＳＷＸＬカラム（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＬＬＣ，Ｍｏｎｇｏｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＰＡ）を用いる高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）によって測定した。０．１Ｍリン酸ナトリウム、０．１Ｍ硫酸ナトリウムおよび０．０５％（ｗ／ｖ）アジ化ナトリウムを含有するｐＨ６．８の移動相を用いた２０分間にわたる１．０ｍＬ／分の流速を用いて、試料をアッセイした。
【０１１８】
製剤安定性試験
上記の通り、一連の共配合したデュルバルマブおよびトレメリムマブ混合物を清澄なガラスバイアル（３ｃｃ、１３ｍｍ）に充填した。スクリーニングを促進するため、試料を４０℃／７５％ＲＨで安定状態に置いた。より長期の安定性試験では、促進された４０℃条件に加えて、試験を２５℃／６０％ＲＨおよび２〜８℃でも実施した。バイアルの外観について目視検査し、試料をＨＰＳＥＣによって分析した。
【０１１９】
イオン交換クロマトグラフィーによるタンパク質濃度測定（ＩＥＣ＿濃度）
イオン交換タイタークロマトグラフィーを用いて、デュルバルマブおよびトレメリムマブのタンパク質濃度および比を定量した。共配合した試料をイオン交換カラムに周囲カラム温度で注射し、塩勾配で溶出した。タンパク質濃度は、分光光度計（Ａｇｉｌｅｎｔ  ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計）を用いて２８０ｍＭで吸光度を測定することによって測定した。１．５２（ｍｇ／ｍＬ）−１ｃｍ−１および１．４３（ｍｇ／ｍＬ）−１ｃｍ−１で測定された消衰係数を用いて、デュルバルマブおよびトレメリムマブにおけるタンパク質濃度を各々計算した。共製剤濃度について、計算された消衰係数は、表３に示すようなタンパク質濃度比に基づいて得られた。
【０１２０】
【表３】
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【０１２１】
イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）による電荷アイソフォームの測定
イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）を用いて、電荷アイソフォーム、具体的にはトレメリムマブの電荷異質性を測定した。共配合した試料をイオン交換カラムに周囲カラム温度で注射し、塩勾配で溶出した。溶出されたタンパク質を、２２０ｎｍでのＵＶ吸光度を用いて検出した。共製剤中の各成分の％面積ならびにピーク前（酸性変異体）、主要ピークおよびピーク後（塩基性変異体）に関する結果を報告した。
【０１２２】
還元および非還元ゲル電気泳動
断片化は、変性、非還元条件下および変性、還元条件下でゲル電気泳動によって測定した。分析前に試験試料を同じ濃度に調整し、ジチオトレイトール（還元）またはＮ−エチルマレイミド（非還元；試料は変性およびアルキル化された）の存在下でＳＤＳ変性試料緩衝液と混合した。還元条件下での分析では、試料をその重鎖種および軽鎖種に変性および還元させた。アルキル化または還元試料を、ふるい分けポリマーおよび蛍光色素を充填したチップ上に負荷した。帯電したタンパク質種は、電気泳動的に電圧勾配によって駆動される。一定の質量対電荷比およびふるい分けポリマーマトリックスの存在に基づき、帯電したタンパク質種をサイズによって分離する。タンパク質−色素複合体は、レーザー誘導蛍光によって検出した。データを電気泳動図に変換し、ピーク面積を定量化し、純度および断片化レベルを判定した。還元ゲル電気泳動における結果は、重鎖＋軽鎖のピーク面積百分率およびパーセント不純物として報告する。非還元ゲル電気泳動における結果は、パーセント主要ピークおよびパーセント断片として報告する。
【０１２３】
２０：１比で共配合したデュルバルマブ／トレメリムマブの主要ピークの純度および相対的断片化を判定するため、共配合した材料を５℃、２５℃および４０℃で１２か月間貯蔵した。図１５〜２０は、２０：１比で共配合したデュルバルマブおよびトレメリムマブの、デュルバルマブまたはトレメリムマブ単独と比べたときの断片化特性を示す。様々な時点で、共配合した材料、デュルバルマブ単独およびトレメリムムブ単独の主要ピークの純度を還元（図１５〜１７）および非還元（図１８〜２０）ゲル電気泳動によって評価し、断片化のレベルを評価した。図示のように、共配合した材料は、各抗体単独と類似したパーセント純度を示した。純度のさらなる評価として、２０：１比で共配合したデュルバルマブ／トレメリムマブ、デュルバルマブ単独およびトレメリムマブ単独の主要ピークのタンパク質濃度を、２℃〜８℃で最大６か月にわたるインキュベーション後、Ａ２８０およびイオン交換タイタークロマトグラフィーによって測定した（表４）。結果によると、共製剤における断片形成がデュルバルマブ単独またはトレメリムマブ単独の場合と類似することが示された。
【０１２４】
【表４】
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【０１２５】
鉄イオンスパイク試験
エデト酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ）の存在下または不在下でのトレメリムマブの安定性に対する鉄イオンの影響についても試験した。鉄イオン添加ストックを、鉄（ＩＩ）塩化物（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ，Ｗａｒｄ  Ｈｉｌｌ，ＭＡ）をＨＰＬＣ水に溶解させることによって作製し、１０００ｐｐｍの鉄イオン原液を得て、それを試料にさらに添加し、最終的な望ましい鉄イオン濃度を得た。２０：１製剤組成物（２５ｍＭのＨｉｓ／Ｈｉｓ−ＨＣｌ、２７０ｍＭのトレハロース二水和物、０．０２％［ｗ／ｖ］のポリソルベート８０、ｐＨ６．０）中、０．０３ｍＭのＥＤＴＡの存在下または不在下での２ｍｇ／ｍＬのトレメリムマブ単独の試料に鉄イオン（０、１００、２００、５００または１０００ｐｐｂ）を添加し、それらを５、２５または４０℃でインキュベートした。試料は、必要に応じてＨＰＳＥＣ、ｃＩＥＦ、ＣＧＥによって分析した。
【０１２６】
図２１〜２６は、５、２５または４０℃における、異なるレベルの鉄イオンを伴う、０．０３ｍＭのＥＤＴＡの存在下または不在下でのトレメリムマブの単量体純度低下を示す。４０℃での単量体純度百分率は、鉄イオンのレベル上昇とともに経時的に減少した。ＥＤＴＡの存在下において、５および２５℃の両方で、最大１ｐｐｍの鉄イオンに伴い、最大９か月にわたり有意な純度低下は認められなかった。しかし、ＥＤＴＡが不在のとき、５℃または２５℃のいずれかで３か月間のインキュベート後、すべての試験レベルにおいて、鉄イオンを有する試料で純度低下が検出された。
【０１２７】
図２７〜２９は、異なるレベルの鉄イオンを伴う、ＥＤＴＡの存在下でのトレメリムマブにおけるｃＩＥＦによる酸性ピーク特性を示す。予想通り、酸性ピークは、上昇した温度でインキュベートすると増加した。しかし、異なるレベルの鉄イオンを有する試料における有意差は認められなかった。ＥＤＴＡが存在するとき、最大１ｐｐｍの鉄イオンを有する試料では、５℃で最大３か月にわたり、鉄イオンを有しない試料と比べて有意な酸性ピークの増加は認められなかった。
【０１２８】
図３０〜３１は、ＥＤＴＡが存在するときの、異なるレベルの鉄イオンを有するトレメリムマブの断片化特性を示す。５℃および２５℃の両方において、異なるレベルの鉄イオンを有する試料では、最大６か月にわたり、断片化における有意な増加は検出されなかった。
【０１２９】
上記の試験に示すように、様々な方法は、２０：１比で共配合したデュルバルマブ／トレメリムマブが長期間にわたり安定性を維持することを示す。これは、癌治療における臨床医によって用いられる共製剤の生存率を確立することを促進する。
【０１３０】
実施例２：デュルバルマブおよびトレメリムマブ共製剤の効力
共配合した製剤中のデュルバリムマブおよびトレメリムマブの効力は、各成分に特異的なレポーター遺伝子バイオアッセイ法を用いて測定した。
【０１３１】
デュルバルマブ効力の測定では、２細胞バイオアッセイに利用する抗ＣＤ３  ｓｃＦＶ（ＯＫＴ３）およびＰＤ−Ｌ１をチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株で発現させ、ＰＤ−１およびレポーター遺伝子エレメント（ＡＰ−１ルシフェラーゼ）をＪｕｒｋａｔヒトＴリンパ球細胞株（Ｊｕｒｋａｔ  ＰＤ−１  ＡＰ−１）で発現させた。ＡＰ−１シグナルカスケードが、（ＣＨＯ細胞上で発現される抗ＣＤ３  ｓｃＦＶ［ＯＫＴ３］を介する）抗ＣＤ３および（Ｊｕｒｋａｔ／ＰＤ−１アッセイ培地に添加される）抗ＣＤ２８による共刺激活性化によってＪｕｒｋａｔ／ＰＤ−１細胞内で媒介され、ＡＰ−１転写因子のＡＰ−１  ＤＮＡ応答エレメントへの結合およびルシフェラーゼタンパク質の発現がもたらされた。ルシフェラーゼ基質との反応後、発光リーダーを用いて発光を定量化した。発光量は、Ｔ細胞活性化のレベルに比例する。試験試料のパーセント相対効力を、参照標準のＩＣ５０値を試験試料のＩＣ５０値で除して１００を掛けることによって決定した。
【０１３２】
ＣＨＯ細胞株で発現されるＰＤ−Ｌ１の存在下において、ＣＤ３／ＣＤ２８刺激性シグナルは、阻害され（Ｔ細胞抑制）、発光シグナルが認められなかった。デュルバルマブの存在下において、ＰＤ−Ｌ１は、ＰＤ−１への結合から阻害され、ＣＤ３／ＣＤ２８刺激性シグナルの回復（Ｔ細胞活性化の回復）により、ルシフェラーゼシグナルの増加がもたらされた。デュルバルマブ参照標準に対する共配合した試料の効力を定量化した。
【０１３３】
トレメリムマブ効力の測定では、共配合した製剤（トレメリムマブを含有する）がＴ細胞活性化中にＣＴＬＡ−４媒介性阻害シグナルを減弱させる能力（効力）を測定した。アッセイは、２つの細胞株：ＩＬ−２−ルシフェラーゼおよびＣＴＬＡ−４を発現するように設計されたＪｕｒｋａｔ細胞株およびバーキットリンパ腫由来のリンパ芽球様細胞株（Ｒａｊｉ）からなった。トレメリムマブの存在下において、Ｔ細胞活性化のＣＴＬＡ−４媒介性阻害は、減弱され、ルシフェラーゼレポーター遺伝子の発現を可能にする。発光量は、Ｔ細胞活性化に比例する。Ｓｔｅａｄｙ−Ｇｌｏルシフェラーゼ基質との反応後、ルミノメーターで発光を定量化した。試験試料の効力を、トレメリムマブ参照標準のＥＣ５０値を試験試料のＥＣ５０値で除することによって決定する。
【０１３４】
トレメリムマブ効力の測定では、一方の細胞は、ヒトＣＴＬＡ４およびルシフェラーゼレポーター遺伝子をＩＬ−２プロモーターの制御下で発現するように設計されたＪｕｒｋａｔヒトＴ細胞リンパ球細胞株であり、他方は、Ｂ７を発現するヒトＢリンパ球Ｒａｊｉ細胞株であるような２細胞アッセイを用いた。原理的に、トレメリムマブが細胞膜上のＣＴＬＡ４に結合する結果、ＣＴＬＡ４経路から生成される阻害シグナルが遮断される。刺激因子（抗ＣＤ３抗体、ＯＫＴ３）およびＲａｊｉ細胞の存在下において、トレメリムマブのＣＴＬＡ４との会合により、Ｂ７リガンドのＣＴＬＡ４への結合が用量依存的に遮断され、Ｊｕｒｋａｔ細胞におけるＩＬ２−ルシフェラーゼレポーター遺伝子の転写活性化がもたらされる。Ｔ細胞活性に比例する発光量は、ルシフェラーゼ基質との反応後、ルミノメーターで定量化する。試験試料のパーセント相対効力を、参照標準のＩＣ５０値を試験試料のＩＣ５０値で除して１００を掛けることによって決定する。
【０１３５】
２０：１比で共配合したデュルバルマブおよびトレメリムマブの効力を様々な温度（５℃、２５℃および４０℃）でデュルバルマブおよびトレメリムマブ単独の場合と比較した。効力は、上でより詳細に述べたレポーター遺伝子アッセイを用いて測定した。図１２〜１４に示すように、デュルバルマブ／トレメリムマブの２０：１共製剤は、５℃での貯蔵時に１２か月にわたり（図１２）、２５℃での貯蔵時に６か月にわたり（図１３）、および４０℃で貯蔵時に３か月にわたり（図１４）、対応する抗体単独と類似する効力を示した。
【０１３６】
上記の試験は、デュルバルマブ／トレメリムマブの２０：１共製剤が組み合わせ投与と同じく強力であり、したがって癌患者に多大な利益をもたらすことを示す。
【０１３７】
当業者は、単に通常の実験を用いることで、本明細書に記載される開示の具体的な態様に対する多数の均等物を理解または確認することができるであろう。かかる均等物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
【０１３８】
理解を明確にすることを目的に前述の本発明が図面および実施例を通じてかなり詳細に記載されているが、特定の変更形態および修飾形態が添付の特許請求の範囲の範囲内で実施され得ることは明らかであろう。
【０１３９】
様々な刊行物が本明細書に引用され、それらの開示内容は、その全体が参照により援用される。
【０１４０】
以下の参考文献が本明細書に引用される。
参考文献
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１６．Ｐａｎ  ＺＫ，Ｙｅ  Ｆ，Ｗｕ  Ｘ，Ａｎ  ＨＸ，Ｗｕ  ＪＸ．Ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｌｉｇａｎｄ１（ＰＤ−Ｌ１）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ：ａ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｊ  Ｔｈｏｒａｃ  Ｄｉｓ  ２０１５；７：４６２−７０．
１７．Ｚａｔｌｏｕｋａｌ  Ｐ，Ｈｅｏ  ＤＳ，Ｐａｒｋ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌ  ｃｏｍｐａｒｉｎｇ  ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（ＣＰ−６７５，２０６）ｗｉｔｈ  ｂｅｓｔ  ｓｕｐｐｏｒｔｉｖｅ  ｃａｒｅ（ＢＳＣ）ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ  ｐｌａｔｉｎｕｍ−ｂａｓｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ（ｐｔｓ）ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ（ＮＳＣＬＣ）．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００９；２７：Ｓｕｐｐｌ：８０７１．ａｂｓｔｒａｃｔ．
１８．Ｌｕｔｚｋｙ  Ｊ，Ａｎｔｏｎｉａ  ＳＪ，Ｂｌａｋｅ−Ｈａｓｋｉｎｓ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｐｈａｓｅ  １  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ＭＥＤＩ４７３６，ａｎ  ａｎｔｉ−ＰＤ−Ｌ１  ａｎｔｉｂｏｄｙ，ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１４；３２：Ｓｕｐｐｌ：３００１．ａｂｓｔｒａｃｔ．
１９．Ａｎｔｏｎｉａ  ＳＪ，Ｇｅｔｔｉｎｇｅｒ  ＳＮ，Ｃｈｏｗ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ（ａｎｔｉ−ＰＤ−１；ＢＭＳ−９３６５５８，ＯＮＯ−４５３８）ａｎｄ  ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ  ｉｎ  ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ  ＮＳＣＬＣ：Ｉｎｔｅｒｉｍ  ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｒｅｓｕｌｔｓ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１４；３２：Ｓｕｐｐｌ：８０２３．ａｂｓｔｒａｃｔ．
２０．Ａｎｔｏｎｉａ  ＳＪ，Ｌａｒｋｉｎ  Ｊ，Ａｓｃｉｅｒｔｏ  ＰＡ．Ｉｍｍｕｎｏ−ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ：ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１４；２０：６２５８−６８．
２１．Ｓｗａｎｓｏｎ  ＭＳ，Ｓｉｎｈａ  ＵＫ．Ｒａｔｉｏｎａｌｅ  ｆｏｒ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｏｆ  ＰＤ−１  ａｎｄ  ＣＴＬＡ−４  ｉｎ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｈｅａｄ  ａｎｄ  ｎｅｃｋ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｎｃｅｒ−ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｄａｔａ．Ｏｒａｌ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１５；５１：１２−５．
２２．Ｗｏｌｃｈｏｋ  ＪＤ，Ｋｌｕｇｅｒ  Ｈ，Ｃａｌｌａｈａｎ  ＭＫ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ  ｐｌｕｓ  ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ  ｉｎ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１３；３６９：１２２−３３．
【０１４１】
配列表
配列番号１  デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）ＶＬ
【化１】
2019514889.tif 000007
配列番号２  デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）ＶＨ
【化２】
2019514889.tif 000008
配列番号３  −  デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）ＶＨ  ＣＤＲ１
ＧＦＴＦＳＲＹＷＭＳ
配列番号４  −  デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）ＶＨ  ＣＤＲ２
ＮＩＫＱＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ
配列番号５  −  デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）ＶＨ  ＣＤＲ３
ＥＧＧＷＦＧＥＬＡＦＤＹ
配列番号６  −  デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）ＶＬ  ＣＤＲ１
ＲＡＳＱＲＶＳＳＳＹＬＡ
配列番号７  −  デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）ＶＬ  ＣＤＲ２
ＤＡＳＳＲＡＴ
配列番号８  −  デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）ＶＬ  ＣＤＲ３
ＱＱＹＧＳＬＰＷＴ
配列番号９  トレメリムマブＶＬ
【化３】
2019514889.tif 000009
配列番号１０  トレメリムマブＶＨ
【化４】
2019514889.tif 000010
配列番号１１  −  トレメリムマブＶＨ  ＣＤＲ１
ＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨ
配列番号１２  −  トレメリムマブＶＨ  ＣＤＲ２
ＶＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶ
配列番号１３  −  トレメリムマブＶＨ  ＣＤＲ３
ＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＲＧＡＴＬＹＹＹＹＹＧＭＤＶ
配列番号１４  −  トレメリムマブＶＬ  ＣＤＲ１
ＲＡＳＱＳＩＮＳＹＬＤ
配列番号１５  −  トレメリムマブＶＬ  ＣＤＲ２
ＡＡＳＳＬＱＳ
配列番号１６  −  トレメリムマブＶＬ  ＣＤＲ３
ＱＱＹＹＳＴＰＦＴ
【図１】
2019514889.tif 000011
【図２】
2019514889.tif 000012
【図３】
2019514889.tif 000013
【図４】
2019514889.tif 000014
【図５】
2019514889.tif 000015
【図６】
2019514889.tif 000016
【図７】
2019514889.tif 000017
【図８】
2019514889.tif 000018
【図９】
2019514889.tif 000019
【図１０】
2019514889.tif 000020
【図１１】
2019514889.tif 000021
【図１２】
2019514889.tif 000022
【図１３】
2019514889.tif 000023
【図１４】
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【図１５】
2019514889.tif 000025
【図１６】
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【図１７】
2019514889.tif 000027
【図１８】
2019514889.tif 000028
【図１９】
2019514889.tif 000029
【図２０】
2019514889.tif 000030
【図２１】
2019514889.tif 000031
【図２２】
2019514889.tif 000032
【図２３】
2019514889.tif 000033
【図２４】
2019514889.tif 000034
【図２５】
2019514889.tif 000035
【図２６】
2019514889.tif 000036
【図２７】
2019514889.tif 000037
【図２８】
2019514889.tif 000038
【図２９】
2019514889.tif 000039
【図３０】
2019514889.tif 000040
【図３１】
2019514889.tif 000041
【配列表】
2019514889000001.app
【国際調査報告】
2019514889.tif 000042
2019514889.tif 000043
2019514889.tif 000044