(57)【要約】本開示は、概して、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９または哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９）内の１つ以上のエピトープと特異的に結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、抗体断片など）を含む組成物、及びそれを必要とする個体の予防、リスク低下または治療でのかかる組成物の使用に関する。【選択図】図７Ｂ
2019500014.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体であって、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させる、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項２】
前記抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害することなく、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させる、請求項１に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項３】
Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を更に阻害する、請求項１に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項４】
Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項５】
Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させ、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞内レベルを低下させ、Ｓｉｇｌｅｃ−９の総レベルを低下させ、またはこれらの任意の組み合わせを低下させる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項６】
Ｓｉｇｌｅｃ−９の分解、Ｓｉｇｌｅｃ−９の切断、Ｓｉｇｌｅｃ−９の内在化、Ｓｉｇｌｅｃ−９の遊離、Ｓｉｇｌｅｃ−９発現の下方制御またはこれらの任意の組み合わせを誘導する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項７】
Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルをｉｎ  ｖｉｖｏで低下させる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項８】
Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面クラスタリングを阻害する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項９】
１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を阻害する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項１０】
前記１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性が、
（ａ）Ｓｉｇｌｅｃ−９の１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドへの結合（ここで、任意に、前記１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドは、シアル酸含有糖タンパク質、シアル酸含有糖脂質及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される）；
（ｂ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の増殖低下；
（ｃ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の遊走阻害；
（ｄ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の１つ以上の機能の阻害；
（ｅ）アポトーシス性ニューロンクリアランス、神経組織破片クリアランス、機能不全シナプスクリアランス、非神経組織破片クリアランス、細菌クリアランス、他の異物クリアランス、病因タンパク質クリアランス、病因ペプチドクリアランス及び腫瘍細胞クリアランスからなる群から選択される１種以上のクリアランスの阻害（ここで、任意に、前記病因タンパク質は、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドからなる群から選択され、前記腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫及び甲状腺癌からなる群から選択されるがんに由来する）；
（ｆ）ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上による腫瘍細胞殺傷の阻害；
（ｇ）ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上の抗腫瘍細胞増殖活性の阻害；
（ｈ）１つ以上の炎症性受容体の発現調節（ここで、任意に、前記１つ以上の炎症性受容体はＣＤ８６を含み、前記１つ以上の炎症性受容体はミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上に発現している）；
（ｉ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の機能の促進または救援；
（ｊ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞、非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の腫瘍への浸潤増加；
（ｋ）腫瘍、末梢血または他のリンパ系器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の数の増加；
（ｌ）骨髄由来抑制細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の腫瘍促進活性の向上；
（ｍ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の生存の増強；
（ｎ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球の活性低下；
（ｏ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性ＮＫ細胞の浸潤減少；
（ｐ）腫瘍体積の増加；
（ｑ）腫瘍成長速度の増加；ならびに
（ｒ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法または１つ以上のがんワクチンの有効性の低下（ここで、任意に、前記１つ以上の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＳＦ−１受容体及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の標的タンパク質を標的にする免疫療法である）
からなる群から選択される、請求項９に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項１１】
（ａ）腫瘍浸潤性ＣＤ３＋Ｔ細胞の数の増加；
（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞におけるＣＤ３３の細胞レベルの低下（ここで、任意に、前記非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は腫瘍浸潤性細胞であり、あるいは、任意に、前記非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は血中に存在する）；
（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の数の減少（ここで、任意に、前記非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は腫瘍浸潤性細胞であり、あるいは、任意に、前記非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は血中に存在する）；
（ｄ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルの低下（ここで、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；
（ｅ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルの低下（ここで、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；
（ｆ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ２レベルの低下（ここで、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；
（ｇ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ３レベルの低下（ここで、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；
（ｈ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２００Ｒレベルの低下（ここで、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；
（ｉ）１つ以上の細胞におけるＣＤ１６３レベルの低下（ここで、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；
（ｊ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２０６レベルの低下（ここで、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；
（ｋ）固形腫瘍の腫瘍成長速度の減少；
（ｌ）腫瘍体積の減少；
（ｍ）１つ以上のＰＤ−１阻害薬の有効性の向上；
（ｎ）１つ以上のチェックポイント阻害療法及び／または免疫調節療法の有効性の向上（ここで、任意に、前記１つ以上のチェックポイント阻害療法及び／または免疫調節療法は、ＣＴＬＡ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３またはこれらの任意の組み合わせのうちの１つ以上を標的にする）；
（ｏ）１つ以上の化学療法剤の有効性の向上（ここで、任意に、前記１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組み合わせである）；
（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞の増殖増加；
（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存及び／または１つ以上の機能の阻害；ならびに
（ｒ）化学的または放射性毒素にコンジュゲートした場合における、固形腫瘍及び関連する血管中におけるＣＤ３３発現免疫抑制性非腫瘍形成性骨髄細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４発現細胞の殺傷；
からなる群から選択される１つ以上の活性を呈する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項１２】
前記１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドが、赤血球上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、細菌細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、アポトーシス性細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、神経細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、グリア細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、ミクログリア上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、アストロサイト上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、腫瘍細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、ウイルス上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、樹状細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、βアミロイド斑に結合したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、タウのもつれに結合したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、病因タンパク質上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、病因ペプチド上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、マクロファージ上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、好中球上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、ナチュラルキラー細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、単球上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、Ｔ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、ヘルパーＴ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、細胞傷害性Ｔ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、Ｂ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、腫瘍埋没型免疫抑制性樹状細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、腫瘍埋没型免疫抑制性マクロファージ上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、骨髄由来抑制細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、制御性Ｔ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、分泌型ムチン、シアル酸、シアル酸含有糖脂質、シアル酸含有糖タンパク質、α−２，８−ジシアリル含有糖脂質、分岐α−２，６−結合シアル酸含有糖タンパク質、末端α−２，６−結合シアル酸含有糖脂質、末端α−２，３−結合シアル酸含有糖タンパク質及びジシアロガングリオシドからなる群から選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項１３】
前記Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルが、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、マクロファージ、好中球及びＮＫ細胞からなる群から選択される初代細胞または細胞株で測定され、前記Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏセルアッセイを利用して測定される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項１４】
ＴＲＥＭ２発現を低下させない、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項１５】
不連続なＳｉｇｌｅｃ−９エピトープと結合する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項１６】
前記不連続なＳｉｇｌｅｃ−９エピトープが、２つ以上のペプチド、３つ以上のペプチド、４つ以上のペプチド、５つ以上のペプチド、６つ以上のペプチド、７つ以上のペプチド、８つ以上のペプチド、９つ以上のペプチドまたは１０以上のペプチドを含む、請求項１５に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項１７】
前記ペプチドのそれぞれが、配列番号１のアミノ酸配列のうちの５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上  １４以上、１５以上、１６以上、１７以上、１８以上、１９以上もしくは２０以上のアミノ酸残基、または配列番号１のアミノ酸配列に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上の５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上  １４以上、１５以上、１６以上、１７以上、１８以上、１９以上もしくは２０以上のアミノ酸残基を含む、請求項１６に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項１８】
Ｓｉｇｌｅｃ−９の高次構造エピトープに結合する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項１９】
配列番号１のアミノ酸残基２０〜３４７、２０〜１４０、１４１〜３４７、１４６〜３４７、１４６〜２２９、２３６〜３３６もしくは１４６〜３４７内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基２０〜３４７、２０〜１４０、１４１〜３４７、１４６〜３４７、１４６〜２２９、２３６〜３３６もしくは１４６〜３４７に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項２０】
ｉ．配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６、または配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６及び８６〜９２、または配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６及び８６〜９２に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基８６〜９２、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９２に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；
ｖ．配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６及び１０５〜１１６、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６及び１０５〜１１６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；
ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基１０５〜１１６、または配列番号１のアミノ酸残基１０５〜１１６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；
ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１０７〜１１５、または配列番号１のアミノ酸残基１０７〜１１５に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；ならびに
ｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１８５〜１９４、または配列番号１のアミノ酸残基１８５〜１９４に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；
からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項２１】
配列番号１のＬ２２、Ｈ４８、Ｗ５０、Ｉ５１、Ｙ５２、Ｋ１２３、Ｉ１２６、Ｄ１８９、Ｐ１９０、Ｒ１９４からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基、または配列番号１のＬ２２、Ｈ４８、Ｗ５０、Ｉ５１、Ｙ５２、Ｋ１２３、Ｉ１２６、Ｄ１８９、Ｐ１９０、Ｒ１９４からなる群から選択されるアミノ酸残基に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−７タンパク質上の１つ以上のアミノ酸残基に結合する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項２２】
Ｓｉｇｌｅｃ−９への結合について、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の抗体と競合する、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項２３】
軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、前記軽鎖可変ドメイン、前記重鎖可変ドメインまたはその両方は、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、及び１７Ｃ２からなる群から選択されるモノクローナル抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのＨＶＲを含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項２４】
（ａ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号６〜９、１７２及び１７３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか；または
（ｂ）前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号１０〜１３、１７４及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか；または
（ｃ）前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号１４〜１８、１７６及び１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか；または
（ｄ）前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号１９〜２１、１７８及び１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか；または
（ｅ）前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号２２〜２５、１８０及び１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか；または
（ｆ）前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号２６〜２９、１８２及び１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
請求項２３に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項２５】
（ａ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２６のアミノ酸配列を含むか；または
（ｂ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号２０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２７のアミノ酸配列を含むか；または
（ｃ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２８のアミノ酸配列を含むか；または
（ｄ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２９のアミノ酸配列を含むか；または
（ｅ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２８のアミノ酸配列を含むか；または
（ｆ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号１７２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１７４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１７６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号１７８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１８０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１８２のアミノ酸配列を含むか；または
（ｇ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号１７３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１７５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１７７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号１７９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１８１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１８３のアミノ酸配列を含む、
請求項２３または２４に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項２６】
軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、前記軽鎖可変ドメインは、
（ａ）配列番号６〜９、１７２及び１７３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号６〜９、１７２及び１７３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｌ１と、
（ｂ）配列番号１０〜１３、１７４及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１０〜１３、１７４及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｌ２と、
（ｃ）配列番号１４〜１８、１７６及び１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１４〜１８、１７６及び１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｌ３とを含み、
前記重鎖可変ドメインは、
（ａ）配列番号１９〜２１、１７８及び１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１９〜２１、１７８及び１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｈ１と、
（ｂ）配列番号２２〜２５、１８０及び１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２〜２５、１８０及び１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｈ２と、
（ｃ）配列番号２６〜２９、１８２及び１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２６〜２９、１８２及び１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｈ３とを含む、
請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項２７】
前記抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が、配列番号６１〜１１５及び１９７〜２０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；及び／または配列番号１１６〜１７０及び２０５〜２１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項２８】
軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、
（ａ）前記軽鎖可変ドメインが、配列番号６１のアミノ酸配列を含み；前記重鎖可変ドメインが、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むか；または
（ｂ）前記軽鎖可変ドメインが、配列番号７２のアミノ酸配列を含み；前記重鎖可変ドメインが、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むか；または
（ｃ）前記軽鎖可変ドメインが、配列番号８３のアミノ酸配列を含み；前記重鎖可変ドメインが、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むか；または
（ｄ）前記軽鎖可変ドメインが、配列番号９４のアミノ酸配列を含み；前記重鎖可変ドメインが、配列番号１４９のアミノ酸配列を含むか；または
（ｅ）前記軽鎖可変ドメインが、配列番号１０５のアミノ酸配列を含み；前記重鎖可変ドメインが、配列番号１６０のアミノ酸配列を含むか；または
（ｆ）前記軽鎖可変ドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を含み；前記重鎖可変ドメインが、配列番号２０５のアミノ酸配列を含むか；または
（ｇ）前記軽鎖可変ドメインが、配列番号２０１のアミノ酸配列を含み；前記重鎖可変ドメインが、配列番号２１０のアミノ酸配列を含む、
請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項２９】
２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、及び１７Ｃ２からなる群から選択されるモノクローナル抗体の軽鎖可変ドメイン；ならびに／または２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、及び１７Ｃ２からなる群から選択されるモノクローナル抗体の重鎖可変ドメインを含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項３０】
配列番号１のアミノ酸残基２０〜３４７、２０〜１４０、１４１〜３４７、１４６〜３４７、１４６〜２２９、２３６〜３３６もしくは１４６〜３４７内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基２０〜３４７、２０〜１４０、１４１〜３４７、１４６〜３４７、１４６〜２２９、２３６〜３３６もしくは１４６〜３４７に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項３１】
ｉ．配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６、または配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６及び８６〜９２、または配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６及び８６〜９２に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基８６〜９２、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９２に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；
ｖ．配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６及び１０５〜１１６、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６及び１０５〜１１６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；
ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基１０５〜１１６、または配列番号１のアミノ酸残基１０５〜１１６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；
ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１０７〜１１５、または配列番号１のアミノ酸残基１０７〜１１５に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；ならびに
Ｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１８５〜１９４、または配列番号１のアミノ酸残基１８５〜１９４に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基
からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、請求項３０に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項３２】
配列番号１のＬ２２、Ｈ４８、Ｗ５０、Ｉ５１、Ｙ５２、Ｋ１２３、Ｉ１２６、Ｄ１８９、Ｐ１９０、Ｒ１９４からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基、または配列番号１のＬ２２、Ｈ４８、Ｗ５０、Ｉ５１、Ｙ５２、Ｋ１２３、Ｉ１２６、Ｄ１８９、Ｐ１９０、Ｒ１９４からなる群から選択されるアミノ酸残基に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−７タンパク質上の１つ以上のアミノ酸残基に結合する、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項３３】
軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、前記軽鎖可変ドメイン、前記重鎖可変ドメインまたはその両方は、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２及び１７Ｃ２からなる群から選択されるモノクローナル抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのＨＶＲを含む、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項３４】
（ａ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号６〜９、１７２及び１７３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか；または
（ｂ）前記ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号１０〜１３、１７４及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか；または
（ｃ）前記ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号１４〜１８、１７６及び１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか；または
（ｄ）前記ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号１９〜２１、１７８及び１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか；または
（ｅ）前記ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号２２〜２５、１８０及び１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか；または
（ｆ）前記ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号２６〜２９、１８２及び１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
請求項３３に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項３５】
（ａ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２６のアミノ酸配列を含むか；または
（ｂ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号２０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２７のアミノ酸配列を含むか；または
（ｃ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２８のアミノ酸配列を含むか；または
（ｄ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２９のアミノ酸配列を含むか；または
（ｅ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２８のアミノ酸配列を含むか；または
（ｆ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号１７２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１７４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１７６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号１７８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１８０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１８２のアミノ酸配列を含むか；または
（ｇ）前記ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号１７３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１７５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１７７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号１７９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１８１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１８３のアミノ酸配列を含む、
請求項３３または請求項３４に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項３６】
前記軽鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号６〜９、１７２及び１７３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号６〜９、１７２及び１７３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｌ１と、
（ｂ）配列番号１０〜１３、１７４及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１０〜１３、１７４及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｌ２と、
（ｃ）配列番号１４〜１８、１７６及び１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１４〜１８、１７６及び１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｌ３とを含み、
前記重鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号１９〜２１、１７８及び１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１９〜２１、１７８及び１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｈ１と、
（ｂ）配列番号２２〜２５、１８０及び１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２〜２５、１８０及び１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｈ２と、
（ｃ）配列番号２６〜２９、１８２及び１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２６〜２９、１８２及び１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｈ３とを含む、
請求項３３に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項３７】
配列番号６１〜１１５及び１９７〜２０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、及び／または配列番号１１６〜１７０及び２０５〜２１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項３８】
軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、
（ａ）前記軽鎖可変ドメインが、配列番号６１のアミノ酸配列を含み；前記重鎖可変ドメインが、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むか；または
（ｂ）前記軽鎖可変ドメインが、配列番号７２のアミノ酸配列を含み；前記重鎖可変ドメインが、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むか；または
（ｃ）前記軽鎖可変ドメインが、配列番号８３のアミノ酸配列を含み；前記重鎖可変ドメインが、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むか；または
（ｄ）前記軽鎖可変ドメインが、配列番号９４のアミノ酸配列を含み；前記重鎖可変ドメインが、配列番号１４９のアミノ酸配列を含むか；または
（ｅ）前記軽鎖可変ドメインが、配列番号１０５のアミノ酸配列を含み；前記重鎖可変ドメインが、配列番号１６０のアミノ酸配列を含むか；または
（ｆ）前記軽鎖可変ドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を含み；前記重鎖可変ドメインが、配列番号２０５のアミノ酸配列を含むか；または
（ｇ）前記軽鎖可変ドメインが、配列番号２０１のアミノ酸配列を含み；前記重鎖可変ドメインが、配列番号２１０のアミノ酸配列を含む、
請求項３７に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項３９】
２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２及び１７Ｃ２から選択されるモノクローナル抗体の軽鎖可変ドメインならびに／または２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２及び１７Ｃ２からなる群から選択されるモノクローナル抗体の重鎖可変ドメインを含む、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項４０】
Ｓｉｇｌｅｃ−９への結合について、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、７７Ｃ２及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の抗体と競合する、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項４１】
２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２及び１７Ｃ２からなる群から選択されるモノクローナル抗体と本質的に同じＳｉｇｌｅｃ−９エピトープと結合する、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項４２】
軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、前記軽鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号６〜９、１７２及び１７３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号６〜９、１７２及び１７３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｌ１と、
（ｂ）配列番号１０〜１３、１７４及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１０〜１３、１７４及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｌ２と、
（ｃ）配列番号１４〜１８、１７６及び１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１４〜１８、１７６及び１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｌ３とを含み、
前記重鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号１９〜２１、１７８及び１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１９〜２１、１７８及び１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｈ１と、
（ｂ）配列番号２２〜２５、１８０及び１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２〜２５、１８０及び１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｈ２と、
（ｃ）配列番号２６〜２９、１８２及び１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２６〜２９、１８２及び１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｈ３とを含む、
単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項４３】
ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラスまたはＩｇＡクラスのものである、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項４４】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項４３に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項４５】
抑制性Ｆｃ受容体と結合する、請求項４４に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項４６】
前記抑制性Ｆｃ受容体が、抑制性Ｆｃ−γ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である、請求項４５に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項４７】
（ａ）ヒトまたはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、前記Ｆｃ領域中にＮ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ｑ、Ｐ２３８Ｓ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｔ３９４Ｄ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置でのアミノ酸置換を１つ以上含むか（ここで、前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングに従う）、前記Ｆｃ領域中にグリシン２３６に対応する位置でのアミノ酸欠失を含み、
（ｂ）ＩｇＧ１アイソタイプを有し、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含み、任意に、前記ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ  ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴ  ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１７１）のアミノ酸配列を含み、また、任意に、前記抗体Ｆｃ領域は、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換もしくはその両方及び／またはＮ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含み（ここで、前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングに従う）、
（ｃ）ＩｇＧ２アイソタイプを有し、前記Ｆｃ領域中にＰ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２１４Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｌ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置でのアミノ酸置換を１つ以上含み（ここで、前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングに従う）、
（ｄ）ヒトまたはマウスＩｇＧ４アイソタイプを有し、前記Ｆｃ領域中にＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｌ２３５Ｅ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置でのアミノ酸置換を１つ以上含み（ここで、前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングに従う）、あるいは
（ｅ）ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有し、任意に、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含む（ここで、前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングに従う）、
請求項４６に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項４８】
（ａ）ヒトまたはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、前記Ｆｃ領域中にＮ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２７０Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置でのアミノ酸置換を１つ以上含み（ここで、前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングに従う）、
（ｂ）ＩｇＧ２アイソタイプを有し、前記Ｆｃ領域中にＰ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置でのアミノ酸置換を１つ以上含み（ここで、前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングに従う）、あるいは
（ｃ）ＩｇＧ４アイソタイプを有し、前記Ｆｃ領域中にＥ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置でのアミノ酸置換を１つ以上含む（ここで、前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングに従う）、請求項４４に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項４９】
（ａ）前記Ｆｃ領域が、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置での追加のアミノ酸置換を更に１つ以上含み（ここで、前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングに従う）、
（ｂ）前記Ｆｃ領域が、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置での追加のアミノ酸置換を更に１つ以上含み（ここで、前記残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングに従う）、あるいは
（ｃ）前記Ｆｃ領域が、ＥＵナンバリングに従ったＳ２２８Ｐのアミノ酸置換を更に含む、
請求項４８に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項５０】
ＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項５１】
残基位置２２８でのＳ２２８Ｐアミノ酸置換、残基位置２３４でのＦ２３４Ａアミノ酸置換及び残基位置２３５でのＬ２３５Ａアミノ酸置換を含む（ここで、前記残基位置のナンバリングは、ＥＵナンバリングに従う）、請求項５０に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項５２】
前記Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質が、哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項５３】
前記Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質が、野生型タンパク質である、請求項１〜５２のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項５４】
前記Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質が、天然バリアントである、請求項１〜５２のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項５５】
前記Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質が、ヒト樹状細胞、ヒトマクロファージ、ヒト好中球、ヒトＮＫ細胞、ヒト単球、ヒト破骨細胞、ヒトＴ細胞、ヒトヘルパーＴ細胞、ヒト細胞傷害性Ｔ細胞、ヒト顆粒球及びヒトミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞上に発現される、請求項１〜５４のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項５６】
哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質またはその両方に特異的に結合する、請求項１〜５５のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項５７】
ｐＨ依存的にＳｉｇｌｅｃ−９と結合する、請求項１〜５６のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項５８】
５．５〜８．０の範囲であるｐＨでＳｉｇｌｅｃ−９と結合する、請求項５７に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項５９】
５．０未満のｐＨでＳｉｇｌｅｃ−９から解離する、請求項５７に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項６０】
ヒトＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質または哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する抗体断片である、請求項１〜５９のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項６１】
ヒトＳｉｇｌｅｃ−９、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９の天然バリアント及びヒトＳｉｇｌｅｃ−９の疾患バリアントからなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体断片である、請求項１〜５９のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項６２】
前記抗体断片が、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９の天然バリアント及びヒトＳｉｇｌｅｃ−９の疾患バリアントからなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する第２の抗体断片に架橋された、請求項６０または請求項６１に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項６３】
前記断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖまたはｓｃＦｖ断片である、請求項６０〜６２のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項６４】
ネズミ抗体である、請求項１〜６３のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項６５】
ヒト化抗体、二重特異性抗体、モノクローナル抗体、多価抗体、コンジュゲート抗体またはキメラ抗体である、請求項１〜６３のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項６６】
第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である、請求項１〜６３のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項６７】
前記第１の抗原が、Ｓｉｇｌｅｃ−９であり、前記第２の抗原が、
（ａ）血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原；
（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマ単一ドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンジオペプペプチド及びＡＮＧ１００５からなる群から選択される血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原；
（ｃ）病因ペプチドもしくはタンパク質または病因核酸からなる群から選択される病因物質（ここで、前記病因核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡであり、前記病因タンパク質は、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドからなる群から選択される）；ならびに
（ｄ）免疫細胞上に発現されるリガンド及び／またはタンパク質（ここで、前記リガンド及び／またはタンパク質は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、及びホスファチジルセリンからなる群から選択される）；ならびに
（ｅ）１つ以上の腫瘍細胞上に発現されるタンパク質、脂質、多糖または糖脂質である、
請求項６６に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項６８】
コンジュゲート抗体である、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項６９】
検出可能なマーカー、毒素または治療用物質にコンジュゲートされた、請求項６８に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項７０】
リシン、リシンＡ鎖、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メイタンシノイド、タキソール、臭化エチジウム、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、アクチノマイシン、ジフテリア毒素、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素（ＰＥ）Ａ、ＰＥ４０、アブリン、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、αサルシン、ゲロニン、ミトゲリン、レトストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、クリシン、クロチン、カリケアミシン、Ｓａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害物質、糖質コルチコイド、アウリスタチン、オーロマイシン、イットリウム、ビスマス、コンブレスタチン、デュオカルマイシン、ドラスタチン、ｃｃ１０６５及びシスプラチンからなる群から選択される毒素にコンジュゲートされた、請求項６９に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項７１】
アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質もしくはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドならびにこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される病因タンパク質と特異的に結合する１つ以上の抗体、またはＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３３、Ｓｉｇｌｅｃ−５、Ｓｉｇｌｅｃ−７、Ｓｉｇｌｅｃ−１１、ホスファチジルセリン、病因核酸、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される免疫調節タンパク質と結合する１つ以上の抗体と組み合わせて使用される、請求項１〜７０のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項７２】
ヒトＳｉｇｌｅｃ−９及び哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９に対して、約１０ｎＭ〜約１０ｐＭの範囲または１０ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ）を有し、前記ＫＤは、約２５℃の温度で決定される、先行請求項のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項７３】
ヒトＳｉｇｌｅｃ−９に対して、約９ｎＭ〜約２３０ｐＭの範囲または２３０ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ）を有し、前記ＫＤは、約２５℃の温度で決定される、先行請求項のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体。
【請求項７４】
先行請求項のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体をコードする核酸配列を含む、単離された核酸。
【請求項７５】
請求項７４に記載の核酸を含む、ベクター。
【請求項７６】
請求項７５に記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。
【請求項７７】
抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が産生されるように、請求項７６に記載の宿主細胞を培養することを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を産生する方法。
【請求項７８】
前記宿主細胞によって産生された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を回収することを更に含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
請求項７７または７８に記載の方法によって産生された、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−７抗体。
【請求項８０】
請求項１〜７３のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項８１】
認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、タウパチー病、感染症及びがんからなる群から選択される疾患、障害または損傷を予防し、そのリスクを低下させ、または治療する方法であって、それを必要とする個体に、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるか、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害するか、その両方を行う作用物質の治療上有効な量を投与することを含む、前記方法。
【請求項８２】
前記疾患、障害または損傷が、がんであり、前記作用物質が、
（ａ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連抑制性好中球、腫瘍関連抑制性ＮＫ細胞、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の増殖、成熟、遊走、分化及び／または機能の促進；
（ｂ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連抑制性好中球、腫瘍関連抑制性ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の腫瘍への浸潤増大；
（ｃ）腫瘍、末梢血または他のリンパ系器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の数の増加；
（ｄ）骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の腫瘍促進活性の向上；
（ｅ）腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現上昇（ここで、任意に、前記腫瘍促進性サイトカインはＴＧＦ−βまたはＩＬ−１０である）；
（ｆ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤の増加；
（ｇ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球の活性低下；
（ｈ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球の浸潤減少；
（ｉ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性ＮＫ細胞の浸潤減少；
（ｊ）ＮＫ細胞の潜在的腫瘍殺傷能力の低下；
（ｋ）免疫応答を増大させる能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｂリンパ球の浸潤減少；
（ｌ）腫瘍体積の増加；
（ｍ）腫瘍成長速度の増加；
（ｎ）転移の増加；
（ｏ）腫瘍再発率の増加；
（ｐ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法または１つ以上のがんワクチンの有効性の低下（ここで、任意に、前記１つ以上の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の標的タンパク質を標的にする免疫療法である）；
（ｑ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害；ならびに
（ｒ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害
からなる群から選択される１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を阻害する、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記疾患、障害または損傷ががんであり、前記作用物質が、
（ａ）腫瘍浸潤性ＣＤ３＋Ｔ細胞の数の増加；
（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞におけるＣＤ３３の細胞レベルの減少（ここで、任意に、前記非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は腫瘍浸潤性細胞であり、あるいは、任意に、前記非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は血中に存在する）；
（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の数の減少（ここで、任意に、前記非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は腫瘍浸潤性細胞であり、あるいは、任意に、前記非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞は血中に存在する）；
（ｄ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルの低下（ここで、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；
（ｅ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルの低下（ここで、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；
（ｆ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ２レベルの低下（ここで、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；
（ｇ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ３レベルの低下（ここで、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；
（ｈ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２００Ｒレベルの低下（ここで、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；
（ｉ）１つ以上の細胞におけるＣＤ１６３レベルの低下（ここで、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；
（ｊ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２０６レベルの低下（ここで、任意に、前記１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；
（ｋ）固形腫瘍の腫瘍成長速度の減少；
（ｌ）腫瘍体積の減少；
（ｍ）１つ以上のＰＤ−１阻害薬の有効性の向上；
（ｎ）１つ以上のチェックポイント阻害療法及び／または免疫調節療法の有効性の向上（ここで、任意に、前記１つ以上のチェックポイント阻害療法及び／または免疫調節療法は、ＣＴＬＡ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３またはこれらの任意の組み合わせのうちの１つ以上を標的にする）；
（ｏ）１つ以上の化学療法剤の有効性の向上（ここで、任意に、前記１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組み合わせである）；
（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞の増殖増加；
（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存及び／または１つ以上の機能の阻害；ならびに
（ｒ）化学的または放射性毒素にコンジュゲートした場合における、固形腫瘍及び関連する血管中におけるＣＤ３３発現免疫抑制性非腫瘍形成性骨髄細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４発現細胞の殺傷；
からなる群から選択される１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を呈する、請求項８１に記載の方法。
【請求項８４】
前記がんが、Ｓｉｇｌｅｃ−９または１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドを発現している、請求項８２または請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記がんが、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）及び多発性骨髄腫からなる群から選択される、請求項８１〜８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
それを必要とする個体において、１つ以上の免疫細胞の生存、成熟、機能、遊走または増殖を誘導または促進する方法であって、前記個体に、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるか、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害するか、その両方を行う作用物質の治療上有効な量を投与することを含む、前記方法。
【請求項８７】
前記１つ以上の免疫細胞が、樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、ミクログリア、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記作用物質が、抗体、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ−９イムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害物質、タンパク質及びペプチドからなる群から選択される、請求項８１〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
前記作用物質が、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体である、請求項８１〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
前記抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が、請求項１〜７３のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
それを必要とする個体において、制御性Ｔ細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性樹状細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性マクロファージ、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能または生存を低下させる方法であって、前記個体に、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、または相互作用する作用物質の治療上有効な量を投与することを含む、前記方法。
【請求項９２】
前記作用物質が、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体または抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体コンジュゲートである、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が、請求項１〜７３のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体である、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
それを必要とする個体において、１つ以上の細胞のＳｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させる方法であって、前記個体に、治療上有効な量の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を投与することを含む、前記方法。
【請求項９５】
前記抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルをｉｎ  ｖｉｖｏで低下させる、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が、請求項１〜７３のいずれか一項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体である、請求項９４または請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体を前記個体に投与すること、及び／または１つ以上の標準的もしくは治験中抗癌療法を実施することを更に含む、請求項８１〜９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
前記抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体が、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体と組み合わせて投与される、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体が、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂリンパ球Ｔリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー抑制性受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ−１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＭ−４抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ７３抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−５抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−７抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１１抗体、抗ＴＲＥＭ１アンタゴニスト抗体、抗ＴＲＥＭ２アンタゴニスト抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＣＤ２抗体、抗ＣＤ５抗体、ならびにこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項９７または９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記１つ以上の標準的または治験中抗がん療法が、放射線治療、細胞毒性化学療法、標的治療、イマチニブ療法、トラスツズマブ療法、エタネルセプ療法、養子細胞移入（ＡＣＴ）療法、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ−Ｔ）療法、ワクチン療法及びサイトカイン療法からなる群から選択される、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０１】
抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を前記個体に投与することを更に含む、請求項８１〜１００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
前記抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体が、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体と組み合わせて投与される、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体が、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１０１または請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を前記個体に投与することを更に含む、請求項８１〜１０３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
前記刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体が、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体と組み合わせて投与される、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０６】
前記刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体が、抗ＣＤ４０アゴニスト抗体、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体、抗ＩＣＯＳアゴニスト抗体、抗ＣＤ２８アゴニスト抗体、抗ＴＲＥＭ１アゴニスト抗体、抗ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体、抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢアゴニスト抗体、抗ＣＤ２７アゴニスト抗体、抗糖質コルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲアゴニスト抗体、抗ＣＤ３０アゴニスト抗体、抗ＢＴＬＡアゴニスト抗体、抗ＨＶＥＭアゴニスト抗体、抗ＣＤ２アゴニスト抗体、抗ＣＤ５アゴニスト抗体、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１０４または１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
少なくとも１つの刺激性サイトカインを前記個体に投与することを更に含む、請求項８１〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
前記少なくとも１つの刺激性サイトカインが、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体と組み合わせて投与される、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
前記少なくとも１つの刺激性サイトカインが、ＩＬ−２、ＩＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１−β及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１０７または請求項１０８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年１０月２９日に出願された米国仮出願第６２／２４８，２３１号の利益を主張するものであり、前記出願は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出の内容は、その全体が参照により本明細書に援用される：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７３５０２２００１０４０ＳＥＱＬＩＳＴＩＮＧ．ＴＸＴ、記録日：２０１６年１０月２８日、サイズ：１９７ＫＢ）。
【０００３】
本開示は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体及びかかる抗体の治療的使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
シアル酸結合Ｉｇ様レクチン−９（Ｓｉｇｌｅｃ−９）は、１型免疫グロブリン様膜貫通タンパク質であり、単球、マクロファージ、樹状細胞、好中球、及びミクログリア細胞などの未成熟及び成熟骨髄細胞に加えて、ナチュラルキラー細胞及びＴ細胞の亜群などのリンパ系細胞を含む、免疫細胞及び造血細胞上に発現している（Ｃｒｏｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：２５５−２６６；Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｐａｕｌｓｏｎ（２００９）Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．３０：５：２４０−２４８；ａｎｄ  Ｍａｃａｕｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍ．１４：６５３−６６６）。Ｓｉｇｌｅｃ−９は、糖タンパク質及び糖脂質のシアル酸残基と結合するレクチンであるＳｉｇｌｅｃファミリーに属するメンバーである。Ｓｉｇｌｅｃタンパク質の結合標的の候補の１つは、ガングリオシドである。すなわち、シアル酸付加グリカンに連結したセラミドからなる糖脂質である。ほとんどのガングリオシドは、共通するラクト−セラミドコア及び１つ以上のシアル酸残基を有している。Ｓｉｇｌｅｃリガンドの多様性は、他の中性糖及びシアル酸の分枝または末端のいずれかの異なる連結での付加、ならびにシアル酸自体の修飾によって生じる。
【０００５】
Ｓｉｇｌｅｃタンパク質は、ヒトで１４個、マウスで９個同定されており、シアル酸結合部位を含有するアミノ末端Ｖセットドメインを含む、２〜１７の細胞外Ｉｇドメインからなる。シアル酸結合領域は、ＶセットＩｇ様ドメインに位置し、このドメインは、全Ｓｉｇｌｅｃで高度に保存された２つの芳香族残基と１つのアルギニンのモチーフを含有する（Ｃｒｏｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：２５５−２６６；ＭｃＭｉｌｌａｎ  ａｎｄ  Ｃｒｏｃｋｅｒ（２００８）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ  Ｒｅｓ．３４３：２０５０−２０５６；Ｖｏｎ  Ｇｕｎｔｅｎ  ａｎｄ  Ｂｏｃｈｎｅｒ（２００８）Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．１１４３：６１−８２；Ｍａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ．１：７１９−７２８；Ｃｒｏｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．３４１：３５５−３６１；及びＣｒｏｃｋｅｒ  ａｎｄ  Ｖａｒｋｉ（２００１）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：３３７−３４２）。シアル酸付加リガンドに対する結合部位は、リガンドが結合した状態であるかないかにかかわらず、結晶構造によってマッピングされている（Ａｔｔｒｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１  ３２７７４−３２７８３；Ａｌｐｈｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：５  ３３７２−３３７７；Ｖａｒｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，１６  ｐｐ．１Ｒ−２７Ｒ；及びＭａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  １：５：７１９−７２８）。細胞膜はシアル酸に富むことから、Ｓｉｇｌｅｃによるリガンド結合は、シス及びトランスで生じ得、いずれも機能特性に影響を及ぼす。各Ｓｉｇｌｅｃは、哺乳動物細胞の表面上に存在する多種多様なシアル酸付加グリカンへの結合に関して、明確な選択を有している（Ｃｒｏｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：２５５−２６６；及びＣｒｏｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：２５５−２６６）。ほとんどのＳｉｇｌｅｃタンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ−９を含め、その細胞質尾部に１つ以上の免疫受容体チロシン抑制性モチーフ（ＩＴＩＭ）配列を含有しており、これにより、抑制性受容体として作用でき、チロシンホスファターゼＳＨＰ１及びＳＨＰ２の動員を介した免疫機能の負の調節因子となる（Ｃｒｏｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：２５５−２６６；ＭｃＭｉｌｌａｎ  ａｎｄ  Ｃｒｏｃｋｅｒ（２００８）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ  Ｒｅｓ．３４３：２０５０−２０５６；及びＶｏｎ  Ｇｕｎｔｅｎ  ａｎｄ  Ｂｏｃｈｎｅｒ（２００８）Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．１１４３：６１−８２）。いくつかのＳｉｇｌｅｃは、その細胞質尾部に免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）配列を含有しており、これにより活性化受容体として作用でき、脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）の予測動員を介した免疫機能の正の調節因子となる（Ｍａｃａｕｌｅｙ  ＳＭ．ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４，６５３−６６６）。Ｓｉｇｌｅｃタンパク質ファミリーは、自己免疫、感染症の易罹患性、多種多様ながん（リンパ腫、白血病及び急性骨髄性白血病を含む）、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、神経変性疾患、喘息、アレルギー、敗血症、慢性閉塞性肺疾患、移植片対宿主病、好酸球増多症及び骨粗鬆症を含む、多数のヒト疾患に関連している（Ｍａｃａｕｌｅｙ  ＳＭ．ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４，６５３−６６６）。
【０００６】
Ｓｉｇｌｅｃ−９は、２０００年に末梢血単核球からクローニングされ（Ａｎｇａｔａ  ａｎｄ  Ｖａｒｋｉ（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：２９：２２１２７−２２１３５）、顆粒球及び単球における選択的発現が認められた。独立したグループが、ＨＬ−６０（ヒト前骨髄球性白血病）細胞からＳｉｇｌｅｃ−９を単離し、単球、好中球、ＮＫ細胞及びＴ細胞の小サブセットでの発現を実証した（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：２９  ２２１２１−２２１２６）。
【０００７】
Ｓｉｇｌｅｃ−９は、１つの細胞外Ｎ末端Ｉｇ様（免疫グロブリン様）Ｖ型ドメイン及び２つのＩｇ様Ｃ２セットドメインと、その細胞質ドメイン中に２つのコンセンサスＩＴＩＭモチーフを含有する。ＣＯＳ細胞におけるＳｉｇｌｅｃ−９の発現は、赤血球のシアル酸依存的な結合を示す。その結合は、末端α２−３またはα２−６シアル酸結合を介する（Ａｎｇａｔａ  ａｎｄ  Ｖａｒｋｉ（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：２２１２７−２２１３５，Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：２９  ２２１２１−２２１２６）。Ｓｉｇｌｅｃ−９は、内在性細胞内シアル酸によってマスクされ、細胞のシアリダーゼ処理時にのみ外来性の末端α２−３またはα２−６シアル酸プローブに結合することが更に確認された（Ｙａｍａｊｉ（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：８  ６３２４−６３３２）。Ｓｉｇｌｅｃ−７領域をＳｉｇｌｅｃ−９領域に交換することによって、及びその逆の交換によって、Ｓｉｇｌｅｃ−９のＮ末端Ｖ−セットＩｇ様ドメイン内のリガンド特異性を、小領域Ａｓｎ７０〜Ｌｙｓ７５にマッピングした。それぞれのＳｉｇｌｅｃリガンド特異性が、これらのアミノ酸残基内で獲得されるという事実は、リガンド特異性が可変Ｃ−Ｃ′ループにおける相互作用によって決定されるという概念を支持する（Ｙａｍａｊｉ（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：８  ６３２４−６３３２）。Ｂ型Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓがヒト好中球上のＳｉｇｌｅｃ−９に結合し、病原性または共生性のいずれかであり得る細菌に対する免疫応答を低下させ得ることが報告されていることから、病原体は明らかに「自己」系としてのシアル酸を破壊した（Ｃａｒｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ（２００９）Ｂｌｏｏｄ  １１３：３３３３−３３３６）。ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＳｉｇｌｅｃ−９シアル酸リガンドの他の供給源は、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ１６などの腫瘍分泌性ムチンであり；Ｓｉｇｌｅｃ−９は、がん患者の血清由来ムチンに結合することが示された（Ｏｈｔａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｂｉｏｃｈｅｍ．ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．４０２：６６３−６６９；Ｂｅｌｉｓｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  ９：１１８）。
【０００８】
Ｓｉｇｌｅｃ−９は、ｃ−ＳｒｃまたはＬｃｋと思われるチロシンキナーゼによって、Ｔｙｒ−４３３及びＴｙｒ−４５６のリン酸化を受け、抑制性受容体として機能する（Ａｖｒｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｊ．Ｉｍｍ．１７３：６８４１−６８４９）。ＩＴＩＭドメインの近位のＴｙｒ−４３３がリン酸化を受けることで、Ｓｉｇｌｅｃ−９は、ＳＨＰ−２／ＰＴＰＮ１１及びＳＨＰ−１／ＰＴＰＮ６と結合する。突然変異がＳｉｇｌｅｃ−９のチロシンリン酸化または阻害機能を排除しないことから、膜遠位ＩＴＩＭモチーフは有意に寄与しないと考えられる。Ｓｉｇｌｅｃ−９は、ＫＩＲ（キラーＩｇ様受容体）と呼ばれるＮＫ細胞上に発現する抑制性受容体クラスを特徴づけるためにこれまで使用されてきたラット好塩基球性白血病細胞においてＦｃεＲＩ介在活性を阻害することが示された（Ａｖｒｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｊ．Ｉｍｍ．１７３：６８４１−６８４９）。更に、ホスファターゼ活性は、細胞内カルシウム動員の低下、及び多数のタンパク質に対するチロシンリン酸化の減少に関連し（Ｕｌｙａｎｏｖａ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｅｕｒ  Ｊ  ｌｍｍｕｎｏｌ  ２９，３４４０−３４４９；Ｐａｕｌ，Ｓ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，（２０００）．Ｂｌｏｏｄ  ９６，４８３−４９０）、また、部分的には、隣接する活性化受容体（ＩＴＡＭモチーフ、パターン認識受容体、Ｔｏｌｌ様受容体及び損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）受容体を含有するものなど）上のシグナル伝達分子を脱リン酸化することによって、シグナル伝達及び免疫応答の遮断にも関連している。ＩＴＩＭ含有Ｓｉｇｌｅｃ受容体と活性化受容体との会合については、これらの受容体と結合し架橋する細胞外リガンドによる可能性が提案されている（Ｍａｃａｕｌｅｙ  ＳＭ．ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４，６５３−６６６）。
【０００９】
全てではないが、Ｓｉｇｌｅｃリガンドのいくつかは、受容体の下方制御を誘導する（Ｍａｃａｕｌｅｙ  ＳＭ．ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４，６５３−６６６）。チロシンキナーゼ受容体（Ｍｏｎｓｏｎｅｇｏ−Ｏｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｆｅｂｓ  ｌｅｔｔｅｒｓ  ５２８，８３−８９；及びＦａｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｃｅｌｌ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ９．２５１−２６６）及びステロイド受容体（Ｃａｌｌｉｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２５．４３４９−４３５８；及びＰｏｌｌｅｎｚ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｃｈｅｍｉｃｏ−Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．１６４．４９−５９）に関するリガンド誘導性受容体分解が報告されている。Ｓｉｇｌｅｃ−９は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞において恒常的にリサイクルされると考えられており、これらの細胞上の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９モノクローナル抗体の急速なエンドサイトーシスを媒介することが示されている（Ｂｉｅｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．３１：２：２１１−２２０）。しかしながら、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルの低下は、ＡＭＬまたは正常な初代免疫細胞のいずれにおいても報告されていない。同様に、どのタイプの初代細胞においても、受容体リサイクリングまたは抗体依存性受容体ダウンレギュレーションは報告されていない。Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面上での発現は、過剰発現系で行われた突然変異分析によれば、膜近位ＩＴＩＭモチーフに部分的に依存するが、遠位モチーフには依存しない（Ｂｉｅｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．３１：２：２１１−２２０）。
【００１０】
Ｓｉｇｌｅｃ−９は、サイトカイン産生に対する免疫調節効果を有すると記載されている。マクロファージ細胞株におけるＳｉｇｌｅｃ−９の過剰発現及び付随するＴＬＲ刺激は、減少した炎症促進性サイトカインＴＮＦ−α及びＩＬ−６の産生ならびにＩＬ−１０の上方制御と関連することが示されている（Ａｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．３６９：８７８−８８３）。また、腫瘍産生ムチンが、未成熟ＤＣだけでなくＳｉｇｌｅｃ−９にも結合することも示されている（Ｏｈｔａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｂｉｏｃｈｅｍ．ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．４０２：６６３−６６９）。ＬＰＳ及びムチンの存在下では、未成熟ＤＣのＩＬ−１２産生は低下したが、ＩＬ−１０産生は維持された。このことは、Ｓｉｇｌｅｃ−９がサイトカイン産生を炎症促進性から抗炎症性に歪ませ、それによって、攻撃的な病原体、がん、または他の症状のクリアランスとは対照的に、免疫寛容の状態を維持することを示唆している。
【００１１】
ナチュラルキラー細胞の機能、ならびにＴ細胞及び好中球などのリンパ系細胞の制御におけるＳｉｇｌｅｃ−９の抑制的役割が更に特徴づけられている（Ｃｒｏｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ａｎｎ．Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１２５３，１０２−１１１；Ｐｉｌｌａｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０，３５７−３９２；ｖｏｎ  Ｇｕｎｔｅｎ  ａｎｄ  Ｂｏｃｈｎｅｒ（２００８）Ａｎｎ．Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１１４３，６１−８２；Ｊａｎｄｕｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２４（４）１８１０−１８２０；Ｉｋｅｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：４１  ４３１１７−４３１２５；及びｖｏｎ  Ｇｕｎｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｂｌｏｏｄ  １０６（４）１４２３−１４３１）。ナチュラルキラー細胞の機能研究では、Ｓｉｇｌｅｃ−９結合シアル酸リガンドを発現する腫瘍細胞がＮＫ細胞の活性化及び腫瘍細胞殺傷を阻害することが示された。多くのヒト腫瘍が、Ｓｉｇｌｅｃ−９に結合するシアル酸リガンドを強く上方制御することで、免疫回避及びがん進行を可能にしている（Ｊａｎｄｕｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２４：４：１８１０−１８２０）。腫瘍におけるシアル酸上方制御により、ナチュラルキラー細胞の免疫監視を強力に阻害する「超自己（ｓｕｐｅｒ  ｓｅｌｆ）」の状態が促進されると考えられる（Ｍａｃａｕｌｅｙ  ａｎｄ  Ｐａｕｌｓｏｎ（２０１４）Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１０：１：７−８）。リンパ系統細胞において、Ｓｉｇｌｅｃ−９は、ＩＴＩＭチロシンリン酸化及びＳＨＰ−１結合を介してＴ細胞受容体シグナル伝達を負に調節することが示されている。下流のＴＣＲシグナル伝達分子ＺＡＰ−７０は、Ｔｙｒ３１９に対するリン酸化の減少及びＮＦＡＴ転写活性の低下を示した。シアル酸リガンド結合ドメイン中の保存されたＡｒｇ残基を変異させると、ＴＣＲシグナル伝達に及ぼすＳｉｇｌｅｃ−９の阻害効果は減少した（Ｉｋｅｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：４１  ４３１１７−４３１２５）。好中球では、Ｓｉｇｌｅｃ−９の会合は、アポトーシス機構及び非アポトーシス機構を介した細胞死を媒介する。非疾患または関節リウマチ及び急性敗血性ショック患者由来の好中球は、Ｓｉｇｌｅｃ−９依存性の細胞死を生じることが抗体架橋によって示された。敗血症またはＲＡ患者由来の好中球は、Ｓｉｇｌｅｃ−９をライゲーションすると、有意により多くの細胞死を示した。この増加は炎症促進性サイトカインとの短期間のプレインキュベーションによって模倣することができ、炎症がＳｉｇｌｅｃ−９細胞死経路のプライミングをもたらすことを示唆している（Ｂｅｌｉｓｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  ９：１１８）。
【００１２】
Ｓｉｇｌｅｃ−９のネズミホモログはＳｉｇｌｅｃ−Ｅであり、これは、５３％の類似性である。Ｓｉｇｌｅｃ−Ｅはシアル酸依存的にヒト赤血球に結合することが示され、機能的にはＳｉｇｌｅｃ−９と同様に、ＩＴＩＭを介してＳＨＰ−１及びＳＨＰ−２を動員して免疫細胞における抑制的シグナル伝達を媒介する（Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．（２００１）３５３，４８３−４９２）。マウスにおいて、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｅの遺伝子不活性化は、明らかな発達異常、組織学的異常または行動異常を起こさず、また、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｅ欠損マウスが正常に繁殖したことから、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｅは必須遺伝子ではなく、その機能は自然免疫に限られると思われることが示された（ＭｃＭｉｌｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｂｌｏｏｄ  １２１：１１：２０８４−２０９４）。Ｓｉｇｌｅｃ−Ｅ欠損マウスをエアロゾルＬＰＳで抗原刺激すると、肺における好中球動員の増加が示され、β２−インテグリンＣＤ１１ｂを遮断すると、これを逆転することができた。Ｓｉｇｌｅｃ−Ｅ欠損好中球は、ＣＤ１１ｂ依存的にＳｙｋ及びｐ３８  ＭＡＰＫのリン酸化が増加していることがわかった。これは、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｅが急性肺炎モデルにおいて好中球動員を抑制するように機能することを示唆している（ＭｃＭｉｌｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｂｌｏｏｄ  １２１：１１：２０８４−２０９４）。同系がんモデルでは、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｅ欠損マウス由来の好中球は、ｅｘ  ｖｉｖｏでの腫瘍細胞の殺傷を促進し、ＲＯＳ産生ならびにＴＲＡＩＬ及びＦａｓＬなどのアポトーシス誘導リガンドの増加を示した（Ｌａｕｂｌｉ  ｅｔ  ａｌ（２０１４）ＰＮＡＳ  １１１（３９）１４２１１−１４２１６）。
【００１３】
腫瘍学において、Ｓｉｇｌｅｃ−９は、初代ＡＭＬ細胞上に発現するが、多数の患者の骨髄試料上の前駆細胞には存在しないため、急性骨髄性白血病の治療標的として提案されている（Ｂｉｅｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．３１：２：２１１−２２０）。固形癌では、上皮腫瘍細胞はＳｉｇｌｅｃ−９に結合する高度にグリコシル化したムチンを産生し、増加したリガンド相互作用をブロックすることが治療上有益であることを示唆している（Ｏｈｔａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｂｉｏｃｈｅｍ．ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．４０２：６６３−６６９；Ｂｅｌｉｓｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  ９：１１８）。更に、結腸直腸、乳房、卵巣、非小細胞肺細胞及び前立腺癌の組織学的切片において、Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンドの強固な発現及び腫瘍浸潤性Ｓｉｇｌｅｃ−９＋免疫細胞が見出された（Ｌａｕｂｌｉ  ｅｔ  ａｌ（２０１４）ＰＮＡＳ  １１１（３９）１４２１１−１４２１６）。シアリルリガンド結合を減少させる天然Ｓｉｇｌｅｃ−９  Ｋ１３１Ｑ（Ａ３９１Ｃ）多型（ｒｓ１６９８８９１０）は、非小細胞肺癌患者の早期生存（２年未満）を有意に改善することが判明したが、その効果は２年より後には消失した（Ｌａｕｂｌｉ  ｅｔ  ａｌ（２０１４）ＰＮＡＳ  １１１（３９）１４２１１−１４２１６）。
【００１４】
近年、がん細胞上で発現するシアリル糖タンパク質がＳｉｇｌｅｃ−９結合を介して腫瘍細胞に「活性化」シグナルを伝達し、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）の分解及び細胞運動性及び浸潤の増加をもたらすことが提唱されている（Ｓａｂｉｔ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８８（４９）：３５４１７−３５４２７）。これらの結果は、Ｓｉｇｌｅｃ−９−シアリルリガンド相互作用が、免疫系の多数の細胞型に対する抑制効果に寄与するだけでなく、がん細胞への直接的影響を介して腫瘍転移を増強し得ることを示唆している。
【００１５】
Ｓｉｇｌｅｃ−９に対する抗体は、例えば、ＷＯ２００７０４９０４４、ＵＳ８３９４３８２、ＥＰ１９５４３１８、及びＵＳ２０１３０３０２３１７に記載されている。しかしながら、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させる、またはＳｉｇｌｅｃ−９とそのリガンドの１つ以上との相互作用を破壊する抗体は報告されていない。
【００１６】
したがって、望ましくないＳｉｇｌｅｃ−９活性に関連する１つ以上の疾患、障害及び病態を治療するために、Ｓｉｇｌｅｃ−９と特異的に結合し、そして、細胞表面上のＳｉｇｌｅｃ−９発現を減少させ、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの相互作用を低下させ、かつ／または１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を低下させる、治療用抗体が必要とされている。
【００１７】
本明細書で引用される全ての参考文献は、特許、特許出願及び公報を含め、その全体が参照により本明細書に援用される。
【発明の概要】
【００１８】
本開示は、概して、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体などのＳｉｇｌｅｃ−９作用物質及びかかるＳｉｇｌｅｃ−９作用物質の使用方法に関する。本明細書で提供される方法は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、固形癌及び血液癌、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９リガンドを発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶ  Ｉ型、ならびにインフルエンザ菌を有する個体の予防、リスク低下または治療において有用である。本明細書で提供される方法はまた、それを必要とする個体において、１つ以上の免疫細胞の生存、成熟、機能、遊走または増殖を誘導または促進するのに有用である。本明細書で提供される方法は、更に、それを必要とする個体において、制御性Ｔ細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性樹状細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性マクロファージ、好中球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能または生存を低下させるのに有用である。本明細書で提供される方法はまた、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるのにも有用である。
【００１９】
本開示の特定の態様は、少なくとも部分的には、ヒト初代免疫細胞及びＳｉｇｌｅｃ−９発現細胞株でＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させることが可能であり、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９リガンドのＳｉｇｌｅｃ−９への結合を阻害することが可能である抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の特定に基づく（例えば、実施例３〜５参照）。
【００２０】
したがって、本開示の特定の態様は、単離された（例えば、モノクローナル）抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、この抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させる。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害することなく、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させる。いくつかの実施形態において、抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を更に阻害する。本開示の他の態様は、単離された（例えば、モノクローナル）抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、この抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する。
【００２１】
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させ、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞内レベルを低下させ、Ｓｉｇｌｅｃ−９の総レベルを低下させ、またはこれらの任意の組み合わせを低下させる。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の分解、Ｓｉｇｌｅｃ−９の切断、Ｓｉｇｌｅｃ−９の内在化、Ｓｉｇｌｅｃ−９の遊離（ｓｈｅｄｄｉｎｇ）、Ｓｉｇｌｅｃ−９発現の下方制御またはこれらの任意の組み合わせを誘導する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルをｉｎ  ｖｉｖｏで低下させる。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面クラスタリングを阻害する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を阻害する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性は、（ａ）Ｓｉｇｌｅｃ−９の１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドへの結合（ここで、任意に、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドは、シアル酸含有糖タンパク質、シアル酸含有糖脂質及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される）；（ｂ）Ｓｉｇｌｅｃ−９のＳＨＰ１またはＳＨＰ２への結合；（ｃ）１つ以上のＳＲＣファミリーチロシンキナーゼによって誘導されるＴｙｒ−４３３、Ｔｙｒ−４５６またはその両方のリン酸化（ここで、任意に、１つ以上のＳＲＣファミリーチロシンキナーゼは、Ｓｙｋ、ＬＣＫ、ＦＹＭ及びＺＡＰ−７０からなる群から選択される）；（ｄ）１つ以上の炎症促進性サイトカインの発現調節（ここで、任意に、１つ以上の炎症促進性サイトカインは、ＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＩＬ−１α、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１−βからなる群から選択される）；（ｅ）マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つ以上の細胞における１つ以上の炎症促進性サイトカインの発現調節；（ｆ）１つ以上の抗炎症性サイトカイン（ここで、任意に、１つ以上の抗炎症性サイトカインは、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１Ｒａ、Ｇ−ＣＳＦからなる群から選択される）及びＴＮＦ、ＩＦＮ−β１ａ、ＩＦＮ−β１ｂまたはＩＬ−６の可溶性受容体の発現調節；（ｇ）マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球及びミクログリア細胞からなる群か��選択される１つ以上の細胞における１つ以上の抗炎症性サイトカインの発現調節；（ｈ）Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ及びＰＹＣＡＲＤからなる群から選択される１つ以上のタンパク質の発現調節；（ｉ）細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化の阻害；（ｊ）１つ以上の細胞タンパク質に対するチロシンリン酸化の減少（ここで、任意に、１つ以上の細胞タンパク質はＺＡＰ−７０を含み、チロシンリン酸化はＺＡＰ−７０のＴｙｒ−３１９に生じる）；（ｋ）Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現調節；（ｌ）ＣＣＬ１９発現細胞及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞走化性の阻害；（ｍ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、Ｍ２ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球及びＭ２  ＮＫ細胞からなる群から選択される１つ以上の細胞によって誘導されるＴ細胞増殖の減少；（ｎ）破骨細胞生成の阻害、破骨細胞形成速度の低下またはその両方；（ｏ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の生存低下；（ｐ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の増殖低下；（ｑ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の遊走阻害；（ｒ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破��細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の１つ以上の機能の阻害；（ｓ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の成熟阻害；（ｔ）アポトーシス性ニューロンクリアランス、神経組織破片クリアランス、機能不全シナプスクリアランス、非神経組織破片クリアランス、細菌クリアランス、他の異物クリアランス、病因タンパク質クリアランス、病因ペプチドクリアランス及び腫瘍細胞クリアランスからなる群から選択される１種以上のクリアランスの阻害（ここで、任意に、病因タンパク質は、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドからなる群から選択され、腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫及び甲状腺癌からなる群から選択されるがんに由来する）；（ｕ）アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、機能不全シナプス、非神経組織破片、細菌、他の異物、病因タンパク質、病因ペプチド、
病因核酸または腫瘍細胞のうちの１つ以上の食作用の阻害（ここで、任意に、病因核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡであり、病因タンパク質は、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドからなる群から選択され、腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫または甲状腺癌からなる群から選択されるがんに由来する）；（ｖ）腫瘍細胞に対するＳｉｇｌｅｃ−９リガンドの結合；（ｗ）好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、マクロファージ及びＮＫ細胞からなる群から選択される細胞に対するＳｉｇｌｅｃ−９リガンドの結合；（ｘ）ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上による腫瘍細胞殺傷の阻害；（ｙ）ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上の抗腫瘍細胞増殖活性の阻害；（ｚ）ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上の抗腫瘍細胞転移活性の阻害；（ａａ）１つ以上のＩＴＡＭモチーフ含有受容体の阻害（ここで、
任意に、１つ以上のＩＴＡＭモチーフ含有受容体は、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、Ｓｉｒｐβ、ＦｃｇＲ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２からなる群から選択される）；（ｂｂ）１つ以上のパターン認識受容体（ＰＲＲ）によるシグナル伝達の阻害（ここで、任意に、１つ以上のＰＲＲは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を特定する受容体、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を特定する受容体及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される）；（ｃｃ）モチーフＤ／Ｅｘ０−２ＹｘｘＬ／ＩＸ６−８ＹｘｘＬ／Ｉ（配列番号２５２）を含む１つ以上の受容体の阻害；（ｄｄ）１つ以上のＴｏｌｌ様受容体によるシグナル伝達の阻害；（ｅｅ）ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路の阻害；（ｆｆ）活性化Ｂ細胞の核内因子κ軽鎖エンハンサー（ＮＦκＢ）の阻害；（ｇｇ）ＩＴＡＭモチーフ含有受容体の脱リン酸化；（ｈｈ）１つ以上の炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または免疫細胞上で発現する受容体の発現調節（ここで、任意に、１つ以上の炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または免疫細胞上で発現する受容体には、ＣＤ８６、Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ、及び／またはＰＹＣＡＲＤが含まれ、１つ以上の炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または免疫細胞上で発現する受容体は、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上に発現している）；（ｉｉ）１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９依存的遺伝子の発現上昇；（ｊｊ）破壊されたＳｉｇｌｅｃ−９依存的遺伝子発現の正常化；（ｋｋ）１つ以上のＩＴＡＭ依存的遺伝子の発現低下（ここで、任意に、１つ以上のＩＴＡＭ依存的遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子によって活性化される）；（ｌｌ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の分化促進；（ｍｍ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の機能の促進または救援；（ｎｎ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の腫瘍への浸潤増加；（ｏｏ）腫瘍、末梢血または他のリンパ系器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞の数の増加；（ｐｐ）骨髄由来抑制細胞の腫瘍促進活性の向上；（ｑｑ）腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現上昇（ここで、任意に、腫瘍促進性サイトカインはＴＧＦ−βまたはＩＬ−１０である）；（ｒｒ）腫���促進性ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤の増加；（ｓｓ）骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の腫瘍促進活性の向上；（ｔｔ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球の活性低下；（ｕｕ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性ＮＫ細胞の浸潤減少；（ｖｖ）ＮＫ細胞の潜在的腫瘍殺傷能力の低下；（ｗｗ）免疫応答を増大させる能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｂリンパ球の浸潤減少；（ｘｘ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球の浸潤減少；（ｙｙ）腫瘍体積の増加；（ｚｚ）腫瘍成長速度の増加；（ａａａ）転移の増加；（ｂｂｂ）腫瘍再発率の増加；（ｃｃｃ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法または１つ以上のがんワクチンの有効性の低下（ここで、任意に、１つ以上の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ＤＲ−５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＳＦ−１受容体及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の標的タンパク質を標的にする免疫療法である）；（ｄｄｄ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害；ならびに（ｅｅｅ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害からなる群から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性は、（ａ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制性好中球、非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞、及び調節性Ｔ細胞の１つ以上の腫瘍への浸潤増大；（ｂ）腫瘍、末梢血、または他のリンパ系器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制細胞の数の増加；（ｒ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の腫瘍促進活性の増強；（ｃ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）及び／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の生存の増強；（ｄ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化の減少；（ｅ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有するＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔリンパ球の活性化の減少；（ｆ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤減少；（ｇ）免疫応答を増大させる能力を潜在的に有する腫瘍特異的Ｂリンパ球の浸潤減少；（ｈ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の浸潤減少；（ｉ）ＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔリンパ球の浸潤減少からなる群から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性は、（ａ）Ｓｉｇｌｅｃ−９の１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドへの結合（ここで、任意に、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドは、シアル酸含有糖タンパク質、シアル酸含有糖脂質及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される）；（ｂ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の増殖低下；（ｃ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の遊走阻害；（ｄ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞の１つ以上の機能の阻害；（ｅ）アポトーシス性ニューロンクリアランス、神経組織破片クリアランス、機能不全シナプスクリアランス、非神経組織破片クリアランス、細菌クリアランス、他の異物クリアランス、病因タンパク質クリアランス、病因ペプチドクリアランス及び腫瘍細胞クリアランスからなる群から選択される１種以上のクリアランスの阻害（ここで、任意に、病因タンパク質は、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドからなる群から選択され、腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫及び甲状腺癌からな���群から選択されるがんに由来する）；（ｆ）ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上による腫瘍細胞殺傷の阻害；（ｇ）ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上の抗腫瘍細胞増殖活性の阻害；（ｈ）１つ以上の炎症性受容体の発現調節（ここで、
任意に、１つ以上の炎症性受容体はＣＤ８６を含み、１つ以上の炎症性受容体はミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上に発現している）；（ｉ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の機能の促進または救援；（ｊ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞、非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の腫瘍への浸潤増加；（ｋ）腫瘍、末梢血または他のリンパ系器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の数の増加；（ｌ）骨髄由来抑制細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の腫瘍促進活性の向上；（ｍ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の生存の増強；（ｎ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球の活性低下；（ｏ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性ＮＫ細胞の浸潤減少；（ｐ）腫瘍体積の増加；（ｑ）腫瘍成長速度の増加；ならびに（ｒ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法または１つ以上のがんワクチンの有効性の低下（ここで、任意に、１つ以上の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＳＦ−１受容体及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の標的タンパク質を標的にする免疫療法である）からなる群から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、（ａ）腫瘍浸潤性ＣＤ３＋Ｔ細胞の数の増加；（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞におけるＣＤ３３の細胞レベルの低下（ここで、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が腫瘍浸潤性細胞であり、あるいは、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が血中に存在する）；（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の数の減少（ここで、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が腫瘍浸潤性細胞であり、あるいは、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が血中に存在する）；（ｄ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｅ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｆ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ２レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｇ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ３レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｈ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２００Ｒレベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｉ）１つ以上の細胞におけるＣＤ１６３レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｊ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２０６レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞は、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｋ）固形腫瘍の腫瘍成長速度の減少；（ｌ）腫瘍体積の減少；（ｍ）１つ以上のＰＤ−１阻害薬の有効性の向上；（ｎ）１つ以上のチェックポイント阻害療法及び／または免疫調節療法の有効性の向上（ここで、任意に、１つ以上のチェックポイント阻害療法及び／または免疫調節療法は、ＣＴＬＡ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３またはこれらの任意の組み合わせのうちの１つ以上を標的にする）；（ｏ）１つ以上の化学療法剤の有効性の向上（ここで、任意に、１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組み合わせである）；（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞の増殖の向上；（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存及び／または１つ以上の機能の阻害；ならびに（ｒ）化学的または放射性毒素にコンジュゲートした場合における、固形腫瘍及び関連する血管におけるＣＤ３３発現免疫抑制性非腫瘍形成性骨髄細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４発現細胞の殺傷からなる群から選択される１つ以上の活性を呈する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドは、赤血球上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、細菌細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、アポトーシス性細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、神経細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、グリア細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、ミクログリア上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、アストロサイト上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、腫瘍細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、ウイルス上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、樹状細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、βアミロイド斑に結合したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、タウのもつれ（Ｔａｕ  ｔａｎｇｌｅｓ）に結合したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、病因タンパク質上のＳｉｇｌｅｃ−９リガ��ド、病因ペプチド上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、マクロファージ上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、好中球上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、ナチュラルキラー細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、単球上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、Ｔ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、ヘルパーＴ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、細胞傷害性Ｔ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、Ｂ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、腫瘍埋没型免疫抑制性樹状細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、腫瘍埋没型免疫抑制性マクロファージ上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、骨髄由来抑制細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、制御性Ｔ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、分泌型ムチン、シアル酸、シアル酸含有糖脂質、シアル酸含有糖タンパク質、α−２，８−ジシアリル含有糖脂質、分岐α−２，６−結合シアル酸含有糖タンパク質、末端α−２，６−結合シアル酸含有糖脂質、末端α−２，３−結合シアル酸含有糖タンパク質及びジシアロガングリオシドからなる群から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルは、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、マクロファージ、好中球及びＮＫ細胞からなる群から選択される初代細胞または細胞株で測定され、また、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏセルアッセイを利用して測定される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ＴＲＥＭ２発現を低下させない。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、（ａ）腫瘍浸潤性ＣＤ３＋Ｔ細胞の数の増加、（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞におけるＳｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルの低下（ここで、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が腫瘍浸潤細胞であり、あるいは、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が血中に存在する）；（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の数の減少（ここで、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が腫瘍浸潤細胞であり、あるいは、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が血中に存在する）；（ｄ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｅ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｆ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ２レベルの低下、（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｇ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ３レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｈ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２００Ｒレベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｉ）１つ以上の細胞におけるＣＤ１６３レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞���非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｊ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２０６レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｋ）固形腫瘍の腫瘍増殖率の低下；（ｌ）腫瘍体積の減少；（ｍ）１つ以上のＰＤ−１阻害剤の有効性の向上；（ｎ）１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法の有効性の向上（ここで、任意に、１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法が、ＣＴＬＡ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、及びその任意の組み合わせの１つ以上を標的とする）；（ｏ）１つ以上の化学療法剤の有効性の向上（ここで、任意に、１つ以上の化学療法剤が、ゲムシタビン、カンプシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びその任意の組み合わせである）；（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞の増殖の増大；（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存及び／または１つ以上の機能の阻害；（ｒ）化学的または放射性毒素にコンジュゲートした場合における、固形腫瘍及び関連する血管におけるＳｉｇｌｅｃ−９発現免疫抑制性非腫瘍形成性骨髄細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４発現細胞の殺傷からなる群から選択される１つ以上の活性を示す。
【００２２】
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、不連続なＳｉｇｌｅｃ−９エピトープと結合する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、不連続なＳｉｇｌｅｃ−９エピトープは、２つ以上のペプチド、３つ以上のペプチド、４つ以上のペプチド、５つ以上のペプチド、６つ以上のペプチド、７つ以上のペプチド、８つ以上のペプチド、９つ以上のペプチドまたは１０以上のペプチドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、上記ペプチドのそれぞれは、配列番号１のアミノ酸配列のうちの５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上、１５以上、１６以上、１７以上、１８以上、１９以上もしくは２０以上のアミノ酸残基、または配列番号１のアミノ酸配列に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上の５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上、１５以上、１６以上、１７以上、１８以上、１９以上もしくは２０以上のアミノ酸残基を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の高次構造エピトープに結合する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基２０〜３４７、２０〜１４０、１４１〜３４７、１４６〜３４７、１４６〜２２９、２３６〜３３６、もしくは１４６〜３４７内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基２０〜３４７、２０〜１４０、１４１〜３４７、１４６〜３４７、１４６〜２２９、２３６〜３３６、もしくは１４６〜３４７に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ｉ．配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６、または配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６及び８６〜９２、または配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６及び８６〜９２に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基８６〜９２、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９２に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；ｖ．配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６及び１０５〜１１６、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６及び１０５〜１１６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基１０５〜１１６、または配列番号１のアミノ酸残基１０５〜１１６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１０７〜１１５、または配列番号１のアミノ酸残基１０７〜１１５に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基；ならびにｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１８５〜１９４、または配列番号１のアミノ酸残基１８５〜１９４に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６及び８６〜９２内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６及び８６〜９２に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基８６〜９２内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９２に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６及び１０５〜１１６内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６及び１０５〜１１６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１０５〜１１６内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基１０５〜１１６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１０７〜１１５内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基１０７〜１１５に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１８５〜１９４内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基１８５〜１９４に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のＬ２２、Ｈ４８、Ｗ５０、Ｉ５１、Ｙ５２、Ｋ１２３、Ｉ１２６、Ｄ１８９、Ｐ１９０、Ｒ１９４からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基、または配列番号１のＬ２２、Ｈ４８、Ｗ５０、Ｉ５１、Ｙ５２、Ｋ１２３、Ｉ１２６、Ｄ１８９、Ｐ１９０、Ｒ１９４からなる群から選択されるアミノ酸残基に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−７タンパク質上の１つ以上のアミノ酸残基に結合する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９への結合について、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の抗体と競合する。
【００２３】
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメインまたはその両方は、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、及び１７Ｃ２からなる群から選択されるモノクローナル抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６〜９、１７２、及び１７３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、または（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１０〜１３、１７４、及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、または（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１４〜１８、１７６、及び１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、または（ｄ）ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１９〜２１、１７８、及び１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、または（ｅ）ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２２〜２５、１８０、及び１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、または（ｆ）ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２６〜２９、１８２、及び１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、または（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、または（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、または（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、または（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、または（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１７４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１７６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１７８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号１８０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１８２のアミノ酸配列を含むか、または（ｇ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１７３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１７５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１７７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号１７９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号１８１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１８３のアミノ酸配列を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号６〜９、１７２、及び１７３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号６〜９、１７２、及び１７３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０〜１３、１７４、及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１０〜１３、１７４、及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに（ｃ）配列番号１４〜１８、１７６、及び１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１４〜１８、１７６、及び１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号１９〜２１、１７８、及び１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１９〜２１、１７８、及び１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２〜２５、１８０、及び１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２〜２５、１８０、及び１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ならびに（ｃ）配列番号２６〜２９、１８２、及び１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２６〜２９、１８２、及び１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号６１〜１１５、及び１９７〜２０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、及び／または重鎖可変ドメインは、配列番号１１６〜１７０、及び２０５〜２１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、（ａ）軽鎖可変ドメインは、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むか、または（ｂ）軽鎖可変ドメインは、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むか、または（ｃ）軽鎖可変ドメインは、配列番号８３のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むか、または（ｄ）軽鎖可変ドメインは、
配列番号９４のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号１４９のアミノ酸配列を含むか、または（ｅ）軽鎖可変ドメインは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号１６０のアミノ酸配列を含むか、または（ｆ）軽鎖可変ドメインは、配列番号１９７のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号２０５のアミノ酸配列を含むか、または（ｇ）軽鎖可変ドメインは、配列番号２０１のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号２１０のアミノ酸配列を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、及び１７Ｃ２からなる群から選択されるモノクローナル抗体の軽鎖可変ドメイン及び／または２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、及び１７Ｃ２からなる群から選択されるモノクローナル抗体の重鎖可変ドメインを含む。
【００２４】
本開示の他の態様は、単離された（例えば、モノクローナル）抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基２０〜３４７、２０〜１４０、１４１〜３４７、１４６〜３４７、１４６〜２２９、２３６〜３３６、もしくは１４６〜３４７、または配列番号１のアミノ酸残基２０〜３４７、２０〜１４０、１４１〜３４７、１４６〜３４７、１４６〜２２９、２３６〜３３６内、もしくは１４６〜３４７に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ｉ．配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６、または配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸残基、ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６及び８６〜９２、または配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６及び８６〜９２に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸残基、ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基８６〜９２、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９２に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸残基、ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸残基、ｖ．配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６及び１０５〜１１６、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６及び１０５〜１１６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸残基、ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基１０５〜１１６、または配列番号１のアミノ酸残基１０５〜１１６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸残基、ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１０７〜１１５、または配列番号１のアミノ酸残基１０７〜１１５に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸残基、ならびにｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１８５〜１９４、または配列番号１のアミノ酸残基１８５〜１９４に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６及び８６〜９２内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６及び８６〜９２に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基８６〜９２内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９２に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６及び１０５〜１１６内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６及び１０５〜１１６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１０５〜１１６内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基１０５〜１１６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１０７〜１１５内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基１０７〜１１５に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１８５〜１９４内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基１８５〜１９４に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。本開示の他の態様は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のＬ２２、Ｈ４８、Ｗ５０、Ｉ５１、Ｙ５２、Ｋ１２３、Ｉ１２６、Ｄ１８９、Ｐ１９０、Ｒ１９４からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基、または配列番号１のＬ２２、Ｈ４８、Ｗ５０、Ｉ５１、Ｙ５２、Ｋ１２３、Ｉ１２６、Ｄ１８９、Ｐ１９０、Ｒ１９４からなる群から選択されるアミノ酸残基に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−７タンパク質上の１つ以上のアミノ酸残基に結合する。
【００２５】
本開示の他の態様は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、ここで、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。本開示の他の態様は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、ここで、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６及び８６〜９２内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６及び８６〜９２に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。本開示の他の態様は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、ここで、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基８６〜９２内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９２に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。本開示の他の態様は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、ここで、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。本開示の他の態様は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、ここで、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６及び１０５〜１１６内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６及び１０５〜１１６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。本開示の他の態様は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、ここで、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１０５〜１１６内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基１０５〜１１６に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。本開示の他の態様は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、ここで、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１０７〜１１５内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基１０７〜１１５に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。本開示の他の態様は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、ここで、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１８５〜１９４内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基１８５〜１９４に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。
【００２６】
本開示の他の態様は、単離された（例えば、モノクローナル）抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、ここで、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン、またはその両方が、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、及び１７Ｃ２からなる群から選択されるモノクローナル抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号６〜９、１７２、及び１７３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、または（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号１０〜１３、１７４、及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、または（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号１４〜１８、１７６、及び１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、または（ｄ）ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号１９〜２１、１７８、及び１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、または（ｅ）ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号２２〜２５、１８０、及び１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、または（ｆ）ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号２６〜２９、１８２、及び１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、または（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号２０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、または（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、または（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、または（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、または（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号１７２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１７４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１７６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号１７８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１８０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１８２のアミノ酸配列を含むか、または（ｇ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号１７３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１７５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１７７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号１７９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号１８１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１８３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号６〜９、１７２、及び１７３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号６〜９、１７２、及び１７３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０〜１３、１７４、及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１０〜１３、１７４、及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｃ）配列番号１４〜１８、１７６、及び１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１４〜１８、１７６、及び１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号１９〜２１、１７８、及び１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１９〜２１、１７８、及び１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２〜２５、１８０、及び１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２〜２５、１８０、及び１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２６〜２９、１８２、及び１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２６〜２９、１８２、及び１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【００２７】
本開示の他の態様は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。本開示の他の態様は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。本開示の他の態様は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。本開示の他の態様は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。本開示の他の態様は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。本開示の他の態様は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。本開示の他の態様は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。本開示の他の態様は、単離された（例えば、モノクローナル）抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号６１〜１１５及び１９７〜２０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、及び／または配列番号１１６〜１７０及び２０５〜２１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。本開示の他の態様は、単離された（例えば、モノクローナル）抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、（ａ）軽鎖可変ドメインが配列番号６１のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインが配列番号１１６のアミノ酸配列を含むか、または（ｂ）軽鎖可変ドメインが配列番号７２のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインが配列番号１２７のアミノ酸配列を含むか、または（ｃ）軽鎖可変ドメインが配列番号８３のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインが配列番号１３８のアミノ酸配列を含むか、または（ｄ）軽鎖可変ドメインが配列番号９４のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインが配列番号１４９のアミノ酸配列を含むか、または（ｅ）軽鎖可変ドメインが配列番号１０５のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインが配列番号１６０のアミノ酸配列を含むか、または（ｆ）軽鎖可変ドメインが配列番号１９７のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインが配列番号２０５のアミノ酸配列を含むか、または（ｇ）軽鎖可変ドメインが配列番号２０１のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインが配列番号２１０のアミノ酸配列を含む。本開示の他の態様は、単離された（例えば、モノクローナル）抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、及び１７Ｃ２からなる群から選択されるモノクローナル抗体の軽鎖可変ドメイン、及び／または２Ｄ４、５Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、及び１７Ｃ２からなる群から選択されるモノクローナル抗体の重鎖可変ドメインを含む。本開示の他の態様は、単離された（例えば、モノクローナル）抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９への結合について、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の抗体と競合する。本開示の他の態様は、単離された（例えば、モノクローナル）抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、及び１７Ｃ２からなる群から選択されるモノクローナル抗体と本質的に同じＳｉｇｌｅｃ−９エピトープに結合する。本開示の他の態様は、単離された（例えば、モノクローナル）抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号６〜９、１７２、及び１７３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号６〜９、１７２、及び１７３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０〜１３、１７４、及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１０〜１３、１７４、及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｃ）配列番号１４〜１８、１７６、及び１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１４〜１８、１７６、及び１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号１９〜２１、１７８、及び１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１９〜２１、１７８、及び１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２〜２５、１８０、及び１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２〜２５、１８０、及び１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２６〜２９、１８２、及び１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２６〜２９、１８２、及び１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【００２８】
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗体は、抑制性Ｆｃ受容体と結合する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抑制性Ｆｃ受容体は、抑制性Ｆｃ−γ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、（ａ）抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトまたはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｆｃ領域中にＮ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ｑ、Ｐ２３８Ｓ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｔ３９４Ｄ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置でのアミノ酸置換を１つ以上含むか（ここで、残基のナンバリングは、ＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリングに従う）、Ｆｃ領域中にグリシン２３６に対応する位置でのアミノ酸欠失を含み、（ｂ）抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有し、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含み、ここで、任意に、ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ  ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴ  ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１７１）のアミノ酸配列を含み、また、任意に、抗体Ｆｃ領域は、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換もしくはその両方及び／またはＮ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含み（ここで、残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングに従う）、（ｃ）抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有し、Ｆｃ領域中にＰ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２１４Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｌ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置でのアミノ酸置換を１つ以上含み（ここで、残基のナンバリングは、ＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリングに従う）、（ｄ）抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトまたはマウスＩｇＧ４アイソタイプを有し、Ｆｃ領域中にＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ���Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｌ２３５Ｅ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置でのアミノ酸置換を１つ以上含み（ここで、残基のナンバリングは、ＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリングに従う）、あるいは（ｅ）抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有し、ここで、任意に、抗体は、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含む（ここで、残基のナンバリングは、ＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリングに従う）。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、（ａ）抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトまたはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｆｃ領域中にＮ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２７０Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置でのアミノ酸置換を１つ以上含み（ここで、残基のナンバリングは、ＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリングに従う）、（ｂ）抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有し、Ｆｃ領域中にＰ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置でのアミノ酸置換を１つ以上含み（ここで、残基のナンバリングは、ＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリングに従う）、あるいは（ｃ）抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有し、Ｆｃ領域中にＥ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置でのアミノ酸置換を１つ以上含む（ここで、残基のナンバリングは、ＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリングに従う）。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、（ａ）Ｆｃ領域は、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置での追加のアミノ酸置換を更に１つ以上含み（ここで、残基のナンバリングは、ＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリングに従う）、（ｂ）Ｆｃ領域は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置での追加のアミノ酸置換を更に１つ以上含み（ここで、残基のナンバリングは、ＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリングに従う）、あるいは（ｃ）Ｆｃ領域は、ＥＵまたはＫａｂａｔのナンバリングに従ったＳ２２８Ｐのアミノ酸置換を更に含む。前述の実施形���のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、残基位置２２８でのＳ２２８Ｐアミノ酸置換、残基位置２３４でのＦ２３４Ａアミノ酸置換及び残基位置２３５でのＬ２３５Ａアミノ酸置換を含む（ここで、残基位置のナンバリングは、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリングに従う）。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質は、哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質は、野生型タンパク質である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質は、天然バリアントである。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質は、ヒト樹状細胞、ヒトマクロファージ、ヒト好中球、ヒトＮＫ細胞、ヒト単球、ヒト破骨細胞、ヒトＴ細胞、ヒトヘルパーＴ細胞、ヒト細胞傷害性Ｔ細胞、ヒト顆粒球及びヒトミクログリアからなる群から選択される１つ以上の細胞上に発現される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質またはその両方に特異的に結合する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ｐＨ依存的にＳｉｇｌｅｃ−９と結合する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、５．５〜８．０の範囲であるｐＨでＳｉｇｌｅｃ−９と結合する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、５．０未満のｐＨでＳｉｇｌｅｃ−９から解離する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９または哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する抗体断片である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９の天然バリアント及びヒトＳｉｇｌｅｃ−９の疾患バリアントからなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体断片である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗体断片は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９の天然バリアント及びヒトＳｉｇｌｅｃ−９の疾患バリアントからなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する第２の抗体断片に架橋される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’���２、ＦｖまたはｓｃＦｖ断片である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ネズミ抗体である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒト化抗体、二重特異性抗体、モノクローナル抗体、多価抗体、コンジュゲート抗体またはキメラ抗体である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、第１の抗原は、Ｓｉｇｌｅｃ−９であり、第２の抗原は、（ａ）血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原；（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマ単一ドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンジオペプペプチド及びＡＮＧ１００５からなる群から選択される血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原；（ｃ）病因ペプチドもしくはタンパク質または病因核酸からなる群から選択される病因物質（ここで、病因核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡであり、病因タンパク質は、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドからなる群から選択される）；（ｄ）免疫細胞上に発現されるリガンド及び／またはタンパク質（ここで、リガンド及び／またはタンパク質は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、及びホスファチジルセリンからなる群から選択される）；ならびに（ｅ）１つ以上の腫瘍細胞上に発現されるタンパク質、脂質、多糖または糖脂質である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、コンジュゲート抗体である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、検出可能なマーカー、毒素または治療用物��にコンジュゲートされる。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、リシン、リシンＡ鎖、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メイタンシノイド、タキソール、臭化エチジウム、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、アクチノマイシン、ジフテリア毒素、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素（ＰＥ）Ａ、ＰＥ４０、アブリン、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、αサルシン、ゲロニン、ミトゲリン、レトストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、クリシン、クロチン、カリケアミシン、Ｓａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害物質、糖質コルチコイド、アウリスタチン、オーロマイシン、イットリウム、ビスマス、コンブレスタチン、デュオカルマイシン、ドラスタチン、ｃｃ１０６５及びシスプラチンからなる群から選択される毒素にコンジュゲートされる。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質もしくはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドならびにこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される病因タンパク質と特異的に結合する１つ以上の抗体、またはＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３３、Ｓｉｇｌｅｃ−５、Ｓｉｇｌｅｃ−７、Ｓｉｇｌｅｃ−１１、ホスファチジルセリン、病因核酸、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡ及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される免疫調節タンパク質と結合する１つ以上の抗体と組み合わせて使用される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９及び哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９に対して、約１０ｎＭ〜約１０ｐＭの範囲または１０ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ）を有し、ＫＤは、約２５℃の温度で決定される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９に対して、約９ｎＭ〜約３００ｐＭの範囲または３００ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ）を有し、ＫＤは、約２５℃の温度で決定される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９抗体に対して、約９ｎＭ〜約２３０ｐＭ、または２３０ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ）を有し、ＫＤは、約２５℃の温度で決定される。
【００２９】
本開示の他の態様は、前述の実施形態のうちのいずれかの抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体をコードする核酸を含む、単離された核酸に関する。本開示の他の態様は、前述の実施形態のうちのいずれかの核酸を含むベクターに関する。本開示の他の態様は、前述の実施形態のうちのいずれかのベクターを含む、単離された宿主細胞に関する。本開示の他の態様は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を産生する方法に関し、この方法は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が産生されるように、前述の実施形態のうちのいずれかの宿主細胞を培養することを含む。いくつかの実施形態において、方法は、宿主細胞によって産生された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を回収することを更に含む。本開示の他の態様は、前述の実施形態のうちのいずれかの方法によって産生された、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関する。本開示の他の態様は、前述の実施形態のうちのいずれかの抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物に関する。
【００３０】
本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびにがん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドを発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶ  Ｉ型、ならびにインフルエンザ菌からなる群から選択される疾患、障害または損傷を予防し、そのリスクを低下させ、または治療する方法に関し、この方法は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるか、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害するか、その両方を行う作用物質の治療上有効な量を、それを必要とする個体に投与することを含む。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびにがん、膀胱癌、脳癌、��癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドを発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶ  Ｉ型、ならびにインフルエンザ菌からなる群から選択される疾患、障害または損傷の予防、リスク低下または治療に使用するための、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるか、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害するか、その両方を行う作用物質に関する。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびにがん、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドを発現する腫瘍、甲状腺癌、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶ  Ｉ型、ならびにインフルエンザ菌からなる群から選択される疾患、障害または損傷の予防、リスク低下または治療のための薬剤の製造における、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるか、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害するか、その両方を行う作用物質の使用に関する。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、タウパチー病、感染症及び癌からなる群から選択される疾患、障害または損傷を予防し、そのリスクを低下させ、または治療する方法に関し、この方法は、それを必要とする個体に、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるか、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害するか、その両方を行う作用物質の治療上有効な量を投与することを含む。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、タウパチー病、感染症及びがんからなる群から選択される疾患、障害または損傷の予防、リスク低下または治療に使用するための、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるか、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害するか、その両方を行う作用物質に関する。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、タウパチー病、感染症及びがんからなる群から選択される疾患、障害または損傷の予防、リスク低下または治療のための薬剤の製造における、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるか、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害するか、その両方を行う作用物質の使用に関する。いくつかの実施形態において、疾患、障害または損傷は、がんであり、作用物質は、（ａ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連抑制性好中球、腫瘍関連抑制性ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の増殖、成熟、遊走、分化及び／または機能の促進；（ｂ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連抑制性好中球、腫瘍関連抑制性ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の腫瘍への浸潤増大；（ｃ）腫瘍、末梢血または他のリンパ系器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞の数の増加；（ｄ）骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の腫瘍促進活性の向上；（ｅ）腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現上昇（ここで、任意に、腫瘍促進性サイトカインはＴＧＦ−βまたはＩＬ−１０である）；（ｆ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤の増加；（ｇ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球の活性低下；（ｈ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球の浸潤減少；
（ｉ）１つ以上の免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞、非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞、及び制御性Ｔ細胞の、腫瘍への浸潤増加；（ｊ）腫瘍、末梢血、または他のリンパ系器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の数の増加；（ｋ）骨髄由来抑制細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の腫瘍促進活性の増強；（ｌ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の生存の増強；（ｍ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化の減少；（ｎ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤減少；（ｏ）腫瘍体積の増加；（ｐ）腫瘍成長速度の増加；（ｑ）転移の増加；（ｒ）腫瘍再発率の増加；（ｓ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法または１つ以上のがんワクチンの有効性の低下（ここで、任意に、１つ以上の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の標的タンパク質を標的にする免疫療法である）；（ｔ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害；ならびに（ｕ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害からなる群から選択される１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を阻害する。いくつかの実施形態において、がんは、Ｓｉｇｌｅｃ−９または１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドを発現する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、疾患、障害、または損傷はがんであり、作用物質は、（ａ）１つ以上の免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞、及び制御性Ｔ細胞の増殖、成熟、遊走、分化、及び／または機能の促進；（ｂ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の腫瘍への
浸潤増大；（ｃ）腫瘍、末梢血または他のリンパ器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の数の増加；（ｄ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の腫瘍促進活性の増強；（ｅ）腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現増大（ここで、任意に腫瘍促進性サイトカインはＴＧＦ−βまたはＩＬ−１０である）；（ｆ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔリンパ球の腫瘍への浸潤増大；（ｇ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化の減少；（ｈ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の浸潤減少；（ｉ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤減少；（ｊ）ＮＫ細胞の腫瘍殺傷能力の減少；（ｋ）免疫応答を増大させる能力を潜在的に有する腫瘍特異的Ｂリンパ球の浸潤減少；（ｌ）腫瘍体積の増大；（ｍ）腫瘍成長速度の増加；（ｎ）転移の増大；（ｏ）腫瘍再発率の増加；（ｐ）１つ以上のＰＤ−１リガンドの発現増大；（ｑ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法または１つ以上のがんワクチンの有効性の減少（ここで、１つ以上の免疫療法は、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ＤＲ−５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＳＦ−１受容体、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のタンパク質を標的とする免疫療法である）；（ｒ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害；（ｓ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害；ならびに（ｔ）１つ以上の化学療法剤の有効性の減少（ここで、１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組み合わせである）からなる群から選択される１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を阻害する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、疾患、障害または損傷はがんであり、作用物質は、（ａ）腫瘍浸潤性ＣＤ３＋Ｔ細胞の数の増加；（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞におけるＳｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルの低下（ここで、任意に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が腫瘍浸潤性細胞であるか、または任意に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が血中に存在する）；（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の数の減少（ここで、任意に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が腫瘍浸潤性細胞であるか、または任意に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が血中に存在する）；（ｄ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルの低下（ここで、任意に１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳ��）である）；（ｅ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルの低下（ここで、任意に１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｆ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ２レベルの低下（ここで、任意に１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｇ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ３レベルの低下（ここで、任意に１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｈ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２００Ｒレベルの低下（ここで、任意に１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｉ）１つ以上の細胞におけるＣＤ１６３レベルの低下（ここで、任意に１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｊ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２０６レベルの低下（ここで、任意に１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｋ）固形腫瘍の腫瘍成長率の低下；（ｌ）腫瘍体積の減少；（ｍ）１つ以上のＰＤ−１阻害剤の有効性の向上；（ｎ）１つ以上のチェックポイント阻害療法及び／または免疫調節療法の有効性の向上（ここで、任意に１つ以上のチェックポイント阻害療法及び／または免疫調節療法は、ＣＴＬＡ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上を標的にする）；（ｏ）１つ以上の化学療法剤の有効性の向上（ここで、任意に１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組み合わせである）；（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞の増殖の増大；及び（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存、及び／または１つ以上の機能の阻害；ならびに（ｒ）化学的または放射性毒素にコンジュゲートした場合における、固形腫瘍及び関連する血管におけるＳｉｇｌｅｃ−９発現免疫抑制性骨髄細胞及び／またはＣＤ１４発現細胞の殺傷からなる群から選択される１つ以上の活性を示す。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、作用物質は、（ａ）腫瘍浸潤性ＣＤ３＋Ｔ細胞の数の増大、（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞におけるＣＤ３３の細胞レベルの低下（ここで、任意に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が腫瘍浸潤性細胞であるか、または任意に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が血中に存在する）；（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の数の減少（ここで、任意に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が腫瘍浸潤性細胞であるか、または任意に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が血中に存在する）；（ｄ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルの低下（ここで、任意に１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）で��る）；（ｅ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルの低下（ここで、任意に１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｆ）１つ以上の細胞のＢ７−Ｈ２レベルの低下（ここで、任意に１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｇ）１つ以上の細胞のＢ７−Ｈ３レベルの低下（ここで、任意に１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｈ）１つ以上の細胞のＣＤ２００Ｒレベルの低下（ここで、任意に１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｉ）１つ以上の細胞のＣＤ１６３レベルの低下（ここで、任意に１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｊ）１つ以上の細胞のＣＤ２０６レベルの低下（ここで、任意に１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｋ）固形腫瘍の腫瘍増殖率の低下；（ｌ）腫瘍体積の減少；（ｍ）１つ以上のＰＤ−１阻害剤の有効性の向上；（ｎ）１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法の有効性の向上（ここで、任意に１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法は、ＣＴＬＡ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、またはそれらの任意の組み合わせの１つ以上を標的とする）、（ｏ）１つ以上の化学療法剤の有効性の向上（ここで、１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組み合わせである）、（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞の増殖の増大；及び（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存、及び／または１つ以上の機能の阻害；ならびに（ｒ）化学的または放射性毒素にコンジュゲートした場合における、固形腫瘍及び関連する血管におけるＣＤ３３発現免疫抑制骨髄細胞及び／またはＣＤ１４発現細胞の殺傷からなる群から選択される１つ以上の活性を示す。いくつかの実施形態において、がんは、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）及び多発性骨髄腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、作用物質は、抗体、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ−９イムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害剤、タンパク質及びペプチドからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、作用物質は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体である。いくつかの実施��態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、前述の実施形態のいずれかの抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体である。いくつかの実施形態において、１つ以上の免疫細胞は、樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、ミクログリア、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【００３１】
本開示の他の態様は、それを必要とする個体において、１つ以上の免疫細胞の生存、成熟、機能、遊走または増殖を誘導または促進する方法に関し、この方法は、当該個体に、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるか、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害するか、その両方を行う作用物質の治療上有効な量を投与することを含む。本開示の他の態様は、それを必要とする個体において、１つ以上の免疫細胞の生存、成熟、機能、遊走または増殖を誘導または促進するのに使用するための、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるか、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害するか、その両方を行う作用物質に関する。本開示の他の態様は、それを必要とする個体において、１つ以上の免疫細胞の生存、成熟、機能、遊走または増殖を誘導または促進するための薬剤の製造における、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるか、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害するか、その両方を行う作用物質の使用に関する。いくつかの実施形態において、１つ以上の免疫細胞は、樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、ミクログリア、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、作用物質は、抗体、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ−９イムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害物質、タンパク質及びペプチドからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、作用物質は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、前述の実施形態のうちのいずれかの抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体である。いくつかの実施形態において、１つ以上の免疫細胞は、樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、ミクログリア、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【００３２】
本開示の他の態様は、それを必要とする個体において、制御性Ｔ細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性樹状細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性マクロファージ、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能または生存を低下させる方法に関し、この方法は、当該個体に、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、または相互作用する作用物質の治療上有効な量を投与することを含む。本開示の他の態様は、それを必要とする個体において、制御性Ｔ細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性樹状細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性マクロファージ、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能または生存を低下させるのに使用するための、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、または相互作用する作用物質の使用に関する。本開示の他の態様は、それを必要とする個体において、制御性Ｔ細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性樹状細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性マクロファージ、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能または生存を低下させるための薬剤の製造における、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、または相互作用する作用物質の使用に関する。いくつかの実施形態において、作用物質は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体または抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体コンジュゲートである。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、前述の実施形態のうちのいずれかの抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体である。
【００３３】
本開示の他の態様は、それを必要とする個体において１つ以上の細胞のＳｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させる方法に関し、この方法は、治療上有効な量の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を当該個体に投与することを含む。本開示の他の態様は、それを必要とする個体において１つ以上の細胞のＳｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるのに使用するための、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の使用に関する。本開示の他の態様は、それを必要とする個体において１つ以上の細胞のＳｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるための薬剤の製造における、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の使用に関する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルをｉｎ  ｖｉｖｏで低下させる。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、前述の実施形態のうちのいずれかの抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体である。
【００３４】
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、方法は、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体を個体に投与すること、及び／または１つ以上の標準的もしくは治験中抗がん療法を実施することを更に含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体と組み合わせて投与される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂリンパ球Ｔリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー抑制性受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ−１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＭ−４抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ７３抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−５抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−７抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１１抗体、抗ＴＲＥＭ１アンタゴニスト抗体、抗ＴＲＥＭ２アンタゴニスト抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＣＤ２抗体、抗ＣＤ５抗体、ならびにこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、１つ以上の標準的または治験中抗がん療法は、放射線治療、細胞毒性化学療法、標的治療、イマチニブ療法、トラスツズマブ療法、エタネルセプト療法、養子細胞移入（ＡＣＴ）療法、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ−Ｔ）療法、ワクチン療法及びサイトカイン療法からなる群から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、方法は、抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を個体に投与することを更に含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体と組み合わせて投与される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、方法は、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を個体に投与することを更に含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体と組み合わせて投与される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、抗ＣＤ４０アゴニスト抗体、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体、抗ＩＣＯＳアゴニスト抗体、抗ＣＤ２８アゴニスト抗体、抗ＴＲＥＭ１アゴニスト抗体、抗ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体、抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢアゴニスト抗体、抗ＣＤ２７アゴニスト抗体、抗糖質コルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲアゴニスト抗体、抗ＣＤ３０アゴニスト抗体、抗ＢＴＬＡアゴニスト抗体、抗ＨＶＥＭアゴニスト抗体、抗ＣＤ２アゴニスト抗体、抗ＣＤ５アゴニスト抗体、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、方法は、少なくとも１つの刺激性サイトカインを個体に投与することを更に含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、少なくとも１つの刺激性サイトカインは、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体と組み合わせて投与される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、少なくとも１つの刺激性サイトカインは、ＩＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１−β及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【００３５】
本開示の他の態様は、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、または相互作用する作用物質に対する、それを必要とする被験者の応答性を評価する方法に関し、この方法は、ａ．抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を被験者に投与する前に、被験者から得た血液試料中の非腫瘍形成性骨髄細胞上のＣＤ４５＋及びＣＤ１４＋の発現レベルを測定することと、ｂ．治療上有効な量の作用物質を被験者に投与することと、ｃ．抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の投与後に被験者から得た血液試料中の非腫瘍形成性骨髄細胞上のＣＤ４５＋及びＣＤ１４＋の発現レベルを測定することとを含み、ここで、Ｓｉｇｌｅｃ−９の投与後に、非腫瘍形成性骨髄細胞上のＣＤ４５＋ＣＤ１４＋のレベルが低下することは、その被験者が作用物質に応答性であることを示す。いくつかの実施形態において、応答性の評価方法は、１つ以上の追加の治療上有効な量の作用物質を投与することを更に含む。前述の実施形態と組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、作用物質は、抗体、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ−９イムノアドヘシン、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害物質、タンパク質及びペプチドからなる群から選択される。前述の実施形態と組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、作用物質は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体または抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体コンジュゲートである。前述の実施形態と組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、前述の実施形態のいずれかの抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体である。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１−１】図１Ａは、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号１）、チンパンジーＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号２）、ミドリザルＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号３）、アカゲザルＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号４）、及びマウスＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号５）のアミノ酸配列アライメントを示す。アスタリスク（「＊」）は、単一の完全に保存されている残基を有する位置を指し、コロン（「：」）は、類似する特性が強い群間保存（Ｇｏｎｎｅｔ  ＰＡＭ  ２５０行列で０．５を超えるスコア）を示し、ピリオド（「．」）は、類似する特性が弱い群間保存（Ｇｏｎｎｅｔ  ＰＡＭ  ２５０行列で０．５以下のスコア）を示す。
【図１−２】図１Ｂは、示されるＳｉｇｌｅｃ−９変異体に対する本開示の抗体の結合反応性を、野生型Ｓｉｇｌｅｃ−９（％ＷＴ）に対する割合で示す。
【図１−３】図１Ｃは、Ｓｉｇｌｅｃ−９のＰｈｙｒｅ２由来モデル（Ｓｉｇｌｅｃ−５の結晶構造；ＰＤＢ  ＩＤ  ２ＺＧ２に基づく）を示し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４の結合に関与するアミノ酸残基を示す。結合に重要な残基を赤丸で示す。図１Ｄは、Ｓｉｇｌｅｃ−９のＰｈｙｒｅ２由来モデル（Ｓｉｇｌｅｃ−５の結晶構造；ＰＤＢ  ＩＤ  ２ＺＧ２に基づく）を示し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体５Ｃ６の結合に関与するアミノ酸残基を示す。結合に重要な残基を赤丸で示す。図１Ｅは、Ｓｉｇｌｅｃ−９のＰｈｙｒｅ２由来モデル（Ｓｉｇｌｅｃ−５の結晶構造；ＰＤＢ  ＩＤ  ２ＺＧ２に基づく）を示し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体１２Ｂ１２の結合に関与するアミノ酸残基を示す。結合に重要な残基を赤丸で示す。
【図２】Ｓｉｇｌｅｃ−９などのヒトＳｉｇｌｅｃタンパク質のグリカン結合特異性を示す。本図は、最も一般的に研究されているシアル酸付加グリカンについて最も一般的に報告されている特異性の概要を示す。各Ｓｉｇｌｅｃ試験での相対的結合について、強い結合を＋＋、検出可能な結合を＋、極めて弱い結合または検出不可能な結合を−で示す。最近報告された強い結合選択性の６’−硫酸化−シアリル−Ｌｅｗｉｓ  ｘ（ｓＬｅｘ）に対するｈＳｉｇｌｅｃ−８及びｍＳｉｇｌｅｃ−Ｆならびに６−硫酸化−ｓＬｅｘに対するｈＳｉｇｌｅｃ−９は示されていない。わずかな例外（ＣＤ２２及びＭＡＧ）を除いて、異なるアッセイを使用した種々の研究者によるヒトＳｉｇｌｅｃの結合特異性試験の結果は、大きく異なっている。アッセイフォーマット及びグリカンリンカーの問題に加えて、試験リガンドの密度及び配置がこのばらつきに関与している可能性がある（Ｖａｒｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌ．１６：１Ｒ−２７Ｒ）。
【図３】哺乳動物の脳におけるジシアロガングリオシドの構造及び代謝を示す。図中のジシアロガングリオシドの命名は、Ｓｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍ（１９６４）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．５：１４５−１５５（Ａｒｉｇａ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．４９：１１５７−１１７５）のシステムに従う。
【図４】ヒト初代免疫細胞におけるＳｉｇｌｅｃ−９発現を表すＦＡＣＳ解析の結果を示す。
【図５】アイソタイプコントロールと比較した、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体のヒト初代樹状細胞に対する結合のＦＡＣＳ解析を示す。
【図６Ａ−１】精製されたＳｉｇｌｅｃ−９−ヒスタグ付きタンパク質に対する本開示のＳｉｇｌｅｃ−９抗体の結合親和性を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。
【図６Ａ−２】精製されたＳｉｇｌｅｃ−９−ヒスタグ付きタンパク質に対する本開示のＳｉｇｌｅｃ−９抗体の結合親和性を示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムを示す。
【図６Ｂ】精製されたＳｉｇｌｅｃ−９−ヒスタグ付きタンパク質に対する本開示のＳｉｇｌｅｃ−９抗体の結合親和性を示すＦｏｒｔｅＢｉｏセンサーグラムを示す。
【図６Ｃ】抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体５Ｃ６（ＡｂＭ  Ｓ９−５Ｃ６．３）のヒト化形態の抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を組み合わせるための概略図を示す。更なる変形形態を各配列の下に示す。図は、ヒト化抗体５Ｃ６の形態のための配列を含む。図中、ＩＧＫＶ２３０＊０１（配列番号２１３）；結合領域（配列番号２１４）；５Ｃ６．３（配列番号２１５）；２−３０＊０１（配列番号２１６）；ｈ５Ｃ６．３−Ｌ１（配列番号２１７）；ｈ５Ｃ６．３−Ｌ２（配列番号２１８）；ｈ５Ｃ６．３−Ｌ３（配列番号２１９）である。
【図６Ｄ】抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体５Ｃ６（ＡｂＭ  Ｓ９−５Ｃ６．３）のヒト化形態の抗体重鎖可変領域（ＶＨ）配列を組み合わせるための概略図を示す。更なる変形形態を各配列の下に示す。図は、ヒト化抗体５Ｃ６の形態のための配列を含む。図中、ＩＧＨＶ１−１８＊０１（配列番号２２０）；結合領域（配列番号２２１）；５Ｃ６．３（配列番号２２２）；１−１８＊０１（配列番号２２３）；ｈ５Ｃ６．３−Ｈ１（配列番号２２４）；ｈ５Ｃ６．３−Ｈ２（配列番号２２５）；ｈ５Ｃ６．３−Ｈ３（配列番号２２６）；ｈ５Ｃ６．３−Ｈ４（配列番号２２７）である。
【図６Ｅ】抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体１２Ｂ１２（ＡｂＭ  Ｓ９−１２Ｂ１２．２）のヒト化形態の抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を組み合わせるための概略図を示す。更なる変形形態を各配列の下に示す。図は、ヒト化抗体１２Ｂ１２の形態のための配列を含む。図中、ＩＧＫＶ１−３９＊０１（配列番号２２８）；結合領域（配列番号２２９）；１２Ｂ１２．２（配列番号２３０）；１−３９＊０１（配列番号２３１）；ｈ１２Ｂ１２．２−Ｌ１（配列番号２３２）；ｈ１２Ｂ１２．２−Ｌ２（配列番号２３３）；ｈ１２Ｂ１２．２−Ｌ３（配列番号２３４）である。
【図６Ｆ】抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体１２Ｂ１２（ＡｂＭ  Ｓ９−１２Ｂ１２．２）のヒト化形態の抗体重鎖可変領域（ＶＨ）配列を組み合わせるための概略図を示す。更なる変形形態を各配列の下に示す。図は、ヒト化抗体１２Ｂ１２の形態のための配列を含む。図中、ＩＧＨＶ３−２３＊０４（配列番号２３５）；結合領域（配列番号２３６）；１２Ｂ１２．２（配列番号２３７）；３−２３＊０４（配列番号２３８）；ｈ１２Ｂ１２．２−Ｈ１（配列番号２３９）；ｈ１２Ｂ１２．２−Ｈ２（配列番号２４０）である。図６Ｃ〜６Ｆに関して、ＣＤＲ配列を太字で示し、残基ナンバリングは、順次（ｓｅｑ）か、Ｃｈｏｔｈｉａに従って示し、「ｂ」は、埋もれた側鎖を指し、「ｐ」は、部分的に埋もれた側鎖を指し、「ｉ」は、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間の界面の側鎖を指し、ヒト生殖系列とネズミ生殖系列の間の配列の違いをアスタリスク（＊）で示し、フレームワーク中の更なる潜在的変異を配列の下に示し、ＣＤＲ配列の考えられる変化を各ＣＤＲ配列の下に示す（このような変化は、アスパラギン（Ｎ）脱アミド、トリプトファン（Ｗ）酸化またはイソアスパラギン酸（ＤＧ）形成を防ぎ得る）。
【図７−１】図７Ａは、様々なヒト細胞型における細胞表面Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体のＳｉｇｌｅｃ−９抗体依存性下方制御を示す。ＴＨＰ−１急性単球性リンパ腫細胞を示す。図７Ｂは、様々なヒト細胞型における細胞表面Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体のＳｉｇｌｅｃ−９抗体依存性下方制御を示す。ヒト初代単球を示す。
【図７−２】図７Ｃは、様々なヒト細胞型における細胞表面Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体のＳｉｇｌｅｃ−９抗体依存性下方制御を示す。ヒト初代ミクログリアを示す。図７Ｄは、様々なヒト細胞型における細胞表面Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体のＳｉｇｌｅｃ−９抗体依存性下方制御を示す。ヒト初代マクロファージを示す。
【図７−３】図７Ｅは、様々なヒト細胞型における細胞表面Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体のＳｉｇｌｅｃ−９抗体依存性下方制御を示す。ヒト初代樹状細胞を示す。図７Ｆは、様々なヒト細胞型における細胞表面Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体のＳｉｇｌｅｃ−９抗体依存性下方制御を示す。ヒト初代樹状細胞を用いた抗体のタイトレーションを示す。
【図７−４】図７Ｇは、様々なヒト細胞型における細胞表面Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体のＳｉｇｌｅｃ−９抗体依存性下方制御を示す。ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗体処置後のＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルのｉｎ  ｖｉｖｏ減少を示す。図７Ｈは、様々なヒト細胞型における細胞表面Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体のＳｉｇｌｅｃ−９抗体依存性下方制御を示す。無関係の受容体ＣＤ３３の発現を示す。ＣＤ３３をコントロールとして使用した。ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗体処置後に、ＣＤ３３の細胞表面レベルは有意に低下しなかった。
【図７−５】図７Ｉは、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体５Ｃ６（Ｓ９−５Ｃ６）、１２Ｂ１２（Ｓ９−１２Ｂ１２）、１７Ｃ２（Ｓ９−１７Ｃ２）、及びアイソタイプコントロール（ｍＩｇＧ２ａ）によるヒト初代マクロファージ上のＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面発現を低下させるための抗体濃度力価曲線を示す。図７Ｊは、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体５Ｃ６（Ｓ９−５Ｃ６）、１２Ｂ１２（Ｓ９−１２Ｂ１２）、１７Ｃ２（Ｓ９−１７Ｃ２）、及びアイソタイプコントロール（ｍＩｇＧ２ａ）を用いたヒト初代マクロファージ上のコントロール受容体ＣＤ１１ｂの細胞表面発現を低下させるための抗体濃度タイトレーション曲線を示す。
【図７−６】図７Ｋは、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４またはアイソタイプコントロール抗体（ＭＯＰＣ−２１）での処置から２１日後のヒト化ＮＳＧマウス由来の末梢骨髄細胞におけるＳｉｇｌｅｃ−９及びＣＤ３３発現を示す。
【図７−７】図７Ｌは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗体処置後のＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルのｉｎ  ｖｉｖｏ減少を示す。図７Ｍは、無関係の受容体ＣＤ３３の発現を示す。ＣＤ３３をコントロールとして使用した。ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗体処置後に、ＣＤ３３の細胞表面レベルは有意に低下しなかった。
【図７−８】図７Ｎは、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４またはアイソタイプコントロール抗体（ＭＯＰＣ２１）での処置から２１日後の、ヒト化ＮＳＧマウス由来の血液サンプルのＦＡＣＳゲーティング戦略を示す。
【図７−９】図７Ｏは、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４またはアイソタイプコントロール抗体で処置した後のヒト樹状細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９表面発現及びＴＲＥＭ２表面発現のレベルを抗体なしのコントロールと比較して示す。
【図７−１０】図７Ｐは、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４による処置後のヒト樹状細胞でのＣＤ１１ｃ表面発現、Ｓｉｇｌｅｃ−９表面発現、及びＴＲＥＭ２表面発現のレベルを示す。
【図７−１１】図７Ｑは、Ｓｉｇｌｅｃ−９（Ｓｉｇｌｅｃ−９−ＦＣ）とＵ９３７がん細胞に内在的に発現するシアル酸リガンドとの結合をブロックする本開示のＳｉｇｌｅｃ−９抗体の能力を示す。
【図８】樹状細胞上のシアル酸リガンドが、ヒト初代細胞との混合リンパ球反応中に、Ｔ細胞増殖を制限することを表すＦＡＣＳ解析を示す。
【図９】樹状細胞上のシアル酸Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンドが、混合リンパ球反応中に、Ｔ細胞増殖を制限することを表す結果を示す。
【図１０−１】図１０Ａは、種々の刺激物によって誘導されたヒト骨髄細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９受容体及びＳｉｇｌｅｃ−９リガンド発現上昇を表す結果を示す。腫瘍上清による処理後のヒト初代樹状細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９受容体及びＳｉｇｌｅｃ−９リガンド発現上昇を表す結果を示す。図１０Ｂは、種々の刺激物によって誘導されたヒト骨髄細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９受容体及びＳｉｇｌｅｃ−９リガンド発現上昇を表す結果を示す。腫瘍上清による処理後のヒト初代樹状細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９受容体及びＳｉｇｌｅｃ−９リガンド発現上昇を表す結果を示す。図１０Ｃは、種々の刺激物によって誘導されたヒト骨髄細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９受容体及びＳｉｇｌｅｃ−９リガンド発現上昇を表す結果を示す。腫瘍上清による処理後のヒト初代樹状細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンド発現上昇を表す結果を示す。図１０Ｄは、種々の刺激物によって誘導されたヒト骨髄細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９受容体及びＳｉｇｌｅｃ−９リガンド発現上昇を表す結果を示す。腫瘍上清による処理後のヒト初代樹状細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンド発現上昇を表す結果を示す。
【図１０−２】図１０Ｅは、種々の刺激物によって誘導されたヒト骨髄細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９受容体及びＳｉｇｌｅｃ−９リガンド発現上昇を表す結果を示す。ＬＰＳ誘発性炎症中におけるヒト樹状細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９受容体発現を表す結果を示す。図１０Ｆは、種々の刺激物によって誘導されたヒト骨髄細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９受容体及びＳｉｇｌｅｃ−９リガンド発現上昇を表す結果を示す。ＬＰＳ誘発性炎症中におけるヒト樹状細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９受容体発現を表す結果を示す。図１０Ｇは、種々の刺激物によって誘導されたヒト骨髄細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９受容体及びＳｉｇｌｅｃ−９リガンド発現上昇を表す結果を示す。ＬＰＳ誘発性炎症中におけるヒト骨髄細胞上のシアル酸の発現上昇を表す結果を示す。これらの結果は、腫瘍が、腫瘍細胞上及び免疫細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９に対する抑制性リガンドのレベルを上方制御することによって免疫監視を回避することができることを示している。図１０Ｈは、種々の刺激物によって誘導されたヒト骨髄細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９受容体及びＳｉｇｌｅｃ−９リガンド発現上昇を表す結果を示す。ＬＰＳ誘発性炎症中におけるヒト骨髄細胞上のシアル酸の発現上昇を表す結果を示す。これらの結果は、腫瘍が、腫瘍細胞上及び免疫細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９に対する抑制性リガンドのレベルを上方制御することによって免疫監視を回避することができることを示している。
【図１１】Ｅ．ｃｏｌｉからＳｉｇｌｅｃ−９リガンドを除去するシアリダーゼ処理がヒト初代樹状細胞による食作用を増加させることを表す結果を示す。
【図１２】アルツハイマー病脳（ＡＤ）及び健康な脳（非ＡＤ）に由来する脳切片中のＳｉｇｌｅｃ−９リガンド発現を示す。２名のドナー（ドナー１及びドナー２）に由来するＡＤ脳試料及び非ＡＤ脳試料中のＳｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃの免疫組織化学染色を示す。
【図１３】抑制性Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンドの発現が肺腫瘍細胞、黒色腫細胞及び結腸癌細胞で増加することを表す結果を示す。結果は、抑制性Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンドがこれらの腫瘍種のがん病理に関与することを示す。
【図１４】ヒト末梢血細胞を注射したＮＯＧマウスの細胞中におけるＳｉｇｌｅｃ−９の発現を示す。ヒト胎児肝臓ＣＤ３４＋細胞の移植から１２週間後に、ヒト化マウスに患者由来黒色腫を移植した。末梢血、脾臓及び腫瘍組織を分離し、免疫細胞マーカー及びＳｉｇｌｅｃ−９発現について解析した。ＦＡＣＳ解析では、ヒト造血細胞をＣＤ４５発現によって特定し、ＣＤ１４＋，ＣＤ３＋集団でゲーティングした。結果は、抑制性Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンドがこの腫瘍種のがん病理に関与することを示す。
【図１５−１】図１５Ａは、免疫学的にヒト化したマウスにおける患者由来がんのマウスモデルに対するＰＤ−１／Ｓｉｇｌｅｃ−９組み合わせ抗体処置プロトコルを示す。
【図１５−２】図１５Ｂは、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４との組み合わせで処置したマウスの血液サンプルに由来するＣＤ１４＋骨髄細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルのｉｎ  ｖｉｖｏ減少を示す。図１５Ｃは、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４との組み合わせで処置したマウスの血液サンプルに由来するＣＤ１４＋骨髄細胞上のコントロール受容体ＣＤ３３のｉｎ  ｖｉｖｏ細胞表面レベルを示す。
【図１５−３】図１５Ｄは、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４との組み合わせで処置したマウスに由来する末梢血ＣＤ１４＋骨髄細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ減少を示す。図１５Ｅは、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４との組み合わせで処置したマウスに由来する血液サンプル中の末梢血ＣＤ３＋Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ増加を示す。
【図１５−４】図１５Ｆは、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４との組み合わせで処置したマウスに由来する腫瘍浸潤性ＣＤ１４＋骨髄細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ減少を示す。図１５Ｇは、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４との組み合わせで処置したマウスに由来する腫瘍浸潤性ＣＤ３＋Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ増加を示す。
【図１５−５】図１５Ｈは、ヒトドナー９８４４８０１１２由来ヒト免疫幹細胞を移植したマウスに、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４との組み合わせを処置した後の、平均腫瘍体積を示す。図１５Ｉは、ヒトドナー１７５０９１１２に由来するヒト免疫幹細胞を移植したマウスに、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４との組み合わせを処置した後の、平均腫瘍体積を示す。図１５Ｊは、ヒトドナー１６５５４７１１２に由来するヒト免疫幹細胞を移植したマウスに、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）抗ＰＤ−１抗体単独または抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４との組み合わせを処置した後の、平均腫瘍体積を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
一般的技法
本明細書中に記載され、または参照される技法及び手順は、当業者によって一般に十分に理解されており、従来の方法論、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ３ｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，（２００３））；ｔｈｅ  ｓｅｒｉｅｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）：ＰＣＲ  ２：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ  ａｎｄ  Ｇ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ  ｅｄｓ．（１９９５）），Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，ｅｄｓ．（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ａｎｄ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．（１９８７））；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ），ｅｄ．，１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ  ａｎｄ  Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ  Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９９３−８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ  ａｎｄ  Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８−１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒ��ａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ  ａｎｄ  Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０００）；Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９９）；Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ  ａｎｄ  Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ，ｅｄｓ．，Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）；及びＣａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）に記載の広く利用されている方法論などを使用して、一般的に用いられる。
【００３８】
定義
本明細書で使用されるとき、「予防する」という用語は、個体における特定の疾患、障害または病態の発生または再発に対する予防を提供することを含む。個体は、特定の疾患、障害または病態にかかりやすく感受性であり得て、あるいは、かかる疾患、障害または病態を発症するリスクがあり得るが、まだ当該疾患、障害または病態であると診断されていない。
【００３９】
本明細書で使用されるとき、特定の疾患、障害または病態を発症する「リスクのある」個体は、検出可能な疾患または疾患の症状を有していてもいなくてもよく、本明細書に記載される治療方法の前に、検出可能な疾患または疾患の症状を呈していてもいなくてもよい。「リスクのある」とは、個体が、当技術分野において既知である、特定の疾患、障害または病態の発症と相関する測定可能なパラメータである、１つ以上の危険因子を有することを意味する。これらの危険因子のうちの１つ以上を有する個体は、これらの危険因子のうちの１つ以上を有しない個体よりも特定の疾患、障害または病態を発症する可能性が高い。
【００４０】
本明細書で使用されるとき、「治療」という用語は、臨床病理の過程で治療される個体の自然経過を変化させるように設計された臨床的介入を指す。治療の望ましい効果としては、特定の疾患、障害または病態の進行速度の低減、病的状態の回復または緩和、及び寛解または予後の改善が挙げられる。個体は、例えば、特定の疾患、障害または病態に伴う１つ以上の症状が軽減または排除された場合、「治療」に成功する。
【００４１】
「有効量」は、少なくとも、所望の治療結果または予防結果を達成するために必要な用量及び期間での有効な量を指す。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。本明細書における有効量は、個体の病状、年齢、性別及び体重、ならびに個体において所望の応答を引き起こす治療薬の能力などの因子によって変動し得る。有効量はまた、治療のあらゆる毒性または有害な影響よりも治療上有益な効果が勝るものでもある。予防的使用に関して、有益な結果または望ましい結果には、疾患のリスクの排除もしくは低下、重症度の軽減、または疾患（疾患の生化学的、組織学的及び／または行動学的症状、その合併症、ならびに疾患の発症中に呈示される中間的な病理学的表現型を含む）の開始の遅延などの結果が含まれる。治療的使用に関して、有益な結果または望ましい結果には、疾患に起因する１つ以上の症状の低減、疾患に罹患している人の生活の質の向上、疾患の治療に必要な他の薬の用量の減少、標的化などを介した別の薬の効果の増大、疾患進行の遅延、及び／または生存期間延長などの臨床的結果が含まれる。薬物、化合物または医薬組成物の有効量は、直接的または間接的に、予防的処置または治療的処置を実施するのに十分な量である。臨床的状況において理解されるように、薬物、化合物または医薬組成物の有効量は、別の薬物、化合物または医薬組成物と併せて達成されてもよいし、そうでなくてもよい。したがって、「有効量」は、１つ以上の治療用物質を投与する状況で考慮され得、単一の作用物質は、それが１つ以上の他の作用物質と併せて望ましい結果を達成し得、または達成するのであれば、有効量で投与されたとみなされ得る。
【００４２】
「治療上有効な量」は、少なくとも、特定の疾患、障害または病態の測定可能な改善をもたらすために必要な最小限の濃度である。本明細書における治療上有効な量は、患者の病状、年齢、性別及び体重、ならびに個体において所望の応答を引き起こすＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質アンタゴニストの能力などの因子によって変動し得る。治療上有効な量は、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質アンタゴニストのあらゆる毒性または有害な影響よりも治療上有益な効果が勝るものでもある。
【００４３】
本明細書で使用されるとき、別の化合物または組成物との「併用」投与は、同時投与及び／または異なる時点での投与を含む。併用投与はまた、合剤としての投与または別個の組成物としての投与を包含し、異なる投与頻度または間隔で、かつ同じ投与経路または異なる投与経路を使用することを含む。
【００４４】
治療、予防またはリスク低下の目的のための「個体」は、ヒト、飼育動物及び家畜、ならびに動物園、競技用または愛玩動物、例えば、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、アレチネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどを含む、哺乳動物に分類される任意の動物を指す。好ましくは、個体は、ヒトである。
【００４５】
「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書において、「抗体」と同じ意味で使用される。本明細書における「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクト抗体から形成された多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片（ただし、所望の生物活性を呈する場合に限る）を具体的に包含する。
【００４６】
基本的な４本鎖の抗体単位は、２本の同一の軽鎖（Ｌ）と２本の同一の重鎖（Ｈ）とから構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である。ＶＨとＶＬとが一緒に対合することにより、単一の抗原結合部位が形成される。異なる抗体クラスの構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８ｔｈ  Ｅｄ．，Ｄａｎｉｅｌ  Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓ，Ａｂｂａ  Ｉ．Ｔｅｒｒ  ａｎｄ  Ｔｒｉｓｔｒａｍ  Ｇ．Ｐａｒｓｌｏｗ（ｅｄｓ．），Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，１９９４，ｐａｇｅ  ７１  ａｎｄ  Ｃｈａｐｔｅｒ  ６を参照されたい。
【００４７】
任意の脊椎動物種に由来するＬ鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（「κ」）及びラムダ（「λ」）と呼ばれる２つの明確に異なる種類のうちの１つに割り振ることができる。免疫グロブリンは、その重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、異なるクラスまたはアイソタイプに割り振ることができる。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭの５つのクラスがあり、それぞれ、アルファ（「α」）、デルタ（「δ」）、イプシロン（「ε」）、ガンマ（「γ」）及びミュー（「μ」）と表記される重鎖を有する。γ及びαのクラスは、ＣＨ配列及び機能の相対的にわずかな相違に基づいて、サブクラス（アイソタイプ）に更に分類され、例えば、ヒトは、以下のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を発現する。異なる免疫グロブリンクラスのサブユニット構造及び三次元構成は既知であり、例えば、Ａｂｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  ｅｄ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏ．，２０００）に大まかに記載されている。
【００４８】
「天然抗体」は、通常、２つの同一の軽鎖（Ｌ）及び２つの同一の重鎖（Ｈ）から構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は、１つのジスルフィド共有結合により重鎖に結合しているが、ジスルフィド結合の数は、種々の免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。各重鎖及び軽鎖は、規則的な間隔を置いた鎖内ジスルフィド架橋も有する。各重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、これにいくつかの定常ドメインが続く。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、他端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインと整列し、軽鎖の可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列する。特定のアミノ酸残基が軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられている。
【００４９】
「単離された」抗体（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、その産生環境（例えば、天然または組み換え）の構成成分から同定、分離及び／または回収されたものである。好ましくは、単離されたポリペプチドは、その産生環境に由来する他の全ての夾雑成分との会合がない。その産生環境に由来する夾雑成分、例えば、組み換えトランスフェクション細胞に起因するものなどは、典型的に、抗体の研究上、診断上または治療上での使用を妨げる物質であり、これらには、酵素、ホルモン及び他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質が含まれ得る。好ましい実施形態において、ポリペプチドは、（１）抗体が、例えば、ローリー法によって決定したときに、９５重量％超、いくつかの実施形態では９９重量％超になるまで、（２）スピニングカップ配列決定装置の使用により、少なくとも１５個のＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の残基を得るのに十分な程度になるまで、または（３）クマシーブルー染色もしくは好ましくはシルバー染色を使用して、非還元条件もしくは還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均質性が得られるまで、精製される。単離された抗体には、組み換えＴ細胞内でのｉｎ  ｓｉｔｕ抗体が含まれるが、これは、抗体の天然環境の少なくとも１つの構成成分が存在していないためである。しかしながら、通常、単離されたポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製ステップによって調製される。
【００５０】
抗体（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、「ＶＨ」及び「ＶＬ」と呼ぶことができる。これらのドメインは、一般に、可変性の最も高い抗体部分であり（同じクラスの他の抗体と比べて）、抗原結合部位を含有する。
【００５１】
「可変」という用語は、可変ドメインの特定のセグメントが、抗体（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）間で配列が大幅に異なるという事実を指す。Ｖドメインは、抗原結合を媒介し、その特定の抗原に対する、特定の抗体の特異性を定義する。しかしながら、可変性は、可変ドメイン全体に均一に分布しているわけではない。むしろ、それは、軽鎖及び重鎖の両方の可変ドメイン中の超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのうち、より高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、各々、３つのＨＶＲによって接続されたベータシート立体配置を主とする４つのＦＲ領域を含み、これらのＨＶＲは、ベータシート構造を接続し、場合により、ベータシート構造の一部を形成するループを形成する。各鎖中のＨＶＲは、ＦＲ領域によって極めて近接して一緒に保持され、他方の鎖からのＨＶＲとともに、その抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）参照）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、抗体の抗体依存性細胞毒性への関与などの様々なエフェクター機能を呈する。
【００５２】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体集団から得られる抗体、例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を指す。すなわち、その集団に含まれる個々の抗体は、微量で存在し得る可能性のある自然発生の変異及び／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除き、同一である。モノクローナル抗体は、特異性が高く、１つ以上の抗原部位を指向する。いくつかの実施形態において、本開示のモノクローナル抗体は、二重特異性抗体であり得る。各モノクローナル抗体は、異なる決定基（エピトープ）を指向する種々の抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、１つ以上の抗原部位上の単一の決定基を指向する。「モノクローナル」という修飾語句は、実質的に同種の抗体集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の作製を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本開示に従って使用されるモノクローナル抗体は、様々な技法によって作製することができ、これらには、例えば、ファージディスプレイ法（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−４７２（２００４）；及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）参照、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−９７（１９７５）；Ｈｏｎｇｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１４（３）：２５３−２６０（１９９５），Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｄ  ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１））、組み換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号参照）、及びヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子座または遺伝子の一部または全てを有する動物におけるヒト抗体またはヒト様抗体の産生技術（例えば、ＷＯ１９９８／２４８９３；ＷＯ１９９６／３４０９６；ＷＯ１９９６／３３７３５；ＷＯ１９９１／１０７４１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８��５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号及び同第５，６６１，０１６号；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８１２−８１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５−８５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）；ならびにＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）参照）が含まれる。
【００５３】
「全長抗体」、「インタクト抗体」または「全抗体」という用語は、抗体断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態にある抗体（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を指すために、区別なく使用される。具体的には、全抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有するものを含む。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列の定常ドメイン）であってもよいし、そのアミノ酸配列バリアントであってもよい。いくつかの場合において、インタクト抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有し得る。
【００５４】
「抗体断片」は、インタクト抗体の一部分、好ましくはインタクト抗体の抗原結合領域及び／または可変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５）参照）；一本鎖抗体分子、及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。
【００５５】
抗体（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）をパパイン消化すると、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶化する能力を反映した名称を持つ１つの残留「Ｆｃ」断片とが生成される。Ｆａｂ断片は、Ｌ鎖全体に加えて、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）及び一方の重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関しては一価であり、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体をペプシン処理すると、単一の大きなＦ（ａｂ’）２断片が得られる。この断片は、異なる抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合したＦａｂ断片にほぼ対応し、依然として抗原を架橋することができる。Ｆａｂ’断片は、ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に、抗体ヒンジ領域に由来する１つ以上のシステインを含む、いくつかの追加の残基を有する点で、Ｆａｂ断片と異なる。Ｆａｂ’−ＳＨとは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を持つＦａｂ’の本明細書における表記である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元来、その断片間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として作製された。抗体断片の他の化学的カップリングも既知である。
【００５６】
Ｆｃ断片は、ジスルフィドによって一緒に保持された、２つのＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域の配列によって決定され、この領域はまた、特定の細胞型にみられるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される。
【００５７】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位及び抗原結合部位を含有する最小の抗体断片である。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインが非共有結合で緊密に結合した二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みにより、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供し、この抗体に抗原結合特異性を与える、６つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的なＨＶＲを３つしか含まない半分のＦｖ）であっても、全結合部位よりも低い親和性であるが、抗原を認識し結合する能力を有する。
【００５８】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」と短縮されることもある「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖の状態に連結された、ＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む、抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーを更に含み、このリンカーにより、ｓＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することが可能となっている。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたい。
【００５９】
抗体（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）の「機能性断片」は、インタクト抗体の一部分を含み、概して、インタクト抗体の抗原結合領域もしくは可変領域、またはＦｃＲ結合能力を保持するか、改変されたＦｃＲ結合能力を有する抗体のＦ領域を含む。抗体断片の例には、直鎖抗体、一本鎖抗体分子、及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。
【００６０】
「ダイアボディ」という用語は、鎖内ではなく鎖間のＶドメイン対合を達成し、それによって二価断片、すなわち、２つの抗原結合部位を有する断片が得られるように、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に短いリンカー（約５〜１０個の残基）を用いてｓＦｖ断片（前述の段落を参照）を構築することによって作製された小さな抗体断片を指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在している、２つの「交差」ｓＦｖ断片のヘテロ二量体である。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４，０９７号、ＷＯ９３／１１１６１；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−４８（１９９３）に更に詳細に記載されている。
【００６１】
本明細書で使用されるとき、「キメラ抗体」は、抗体（免疫グロブリン）（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）であって、重鎖及び／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来する抗体または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同であり、かつ、その鎖（複数可）の残りが、別の種に由来する抗体または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同である抗体、ならびにかかる抗体の断片（ただし、所望の生物活性を呈する場合に限る）を指す（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−５５（１９８４））。本明細書中で対象とするキメラ抗体には、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体が含まれ、この場合、当該抗体の抗原結合領域は、例えば、マカクザルに目的の抗原を免疫することによって産生される抗体に由来する。本明細書で使用されるとき、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用される。
【００６２】
非ヒト（例えば、ネズミ）抗体（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含有するキメラ抗体である。一実施形態において、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲに由来する残基が、所望される特異性、親和性及び／または能力を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）のＨＶＲに由来する残基で置き換えられている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。場合によって、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基を、対応する非ヒト残基で置き換える。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にもみられない残基を含み得る。これらの修飾は、結合親和性などの抗体性能を更に改良するために行われ得る。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、超可変ループの全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリン配列の超可変ループに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域に対応する。ただし、ＦＲ領域には、結合親和性、異性体化、免疫原性などの抗体性能を向上させる１つ以上の別個のＦＲ残基置換が含まれてもよい。ＦＲ領域におけるこれらのアミノ酸置換の数は、典型的に、Ｈ鎖で６個以下であり、Ｌ鎖で３個以下である。ヒト化抗体はまた、任意選択により、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部分を含む。更なる詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照されたい。また、例えば、Ｖａｓｗａｎｉ  ａｎｄ  Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ＆Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５−１１５（１９９８）；Ｈａｒｒｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ２３：１０３５−１０３８（１９９５）；Ｈｕｒｌｅ  ａｎｄ  Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８−４３３（１９９４）；ならびに米国特許第６，９８２，３２１号及び同第７，０８７，４０９号を参照されたい。
【００６３】
「ヒト抗体」は、ヒトによって産生された抗体（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を含む抗体、及び／または本明細書に開示されるヒト抗体を作製する技法のうちのいずれかを使用して作製された抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリを含む、当該技術分野において既知の様々な技法を使用して作製することができる。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）．ヒトモノクローナル抗体の作製には、Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６−９５（１９９１）に記載されている方法も使用できる。ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）も参照されたい。ヒト抗体は、かかる抗体を抗原刺激に応答して産生するように改変され、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物（例えば、免疫化異種マウス）に抗原を投与することによって作製することができる（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術については、例えば、米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号参照）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって生成されるヒト抗体については、例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）も参照されたい。
【００６４】
本明細書で使用されるとき、「超可変領域」、「ＨＶＲ」または「ＨＶ」という用語は、配列が超可変性であり、かつ／または構造的に定義されたループを形成する、抗体可変ドメインの領域（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の抗体可変ドメインの領域）を指す。一般に、抗体は、６つのＨＶＲを含み、３つがＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、３つがＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある。天然抗体において、Ｈ３及びＬ３が６つのＨＶＲのうちで最も高い多様性を呈し、特にＨ３が抗体に優れた特異性を与える上で特有の役割を果たすと考えられる。例えば、Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：３７−４５（２０００）；Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｗｕ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１−２５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３））を参照されたい。事実、重鎖のみからなる天然ラクダ抗体は、軽鎖がない状態で、機能的であり、安定している。例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８（１９９３）及びＳｈｅｒｉｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：７３３−７３６（１９９６）を参照されたい。
【００６５】
多くのＨＶＲ記述が本明細書で使用され、本明細書に包含される。ＥＵまたはＫａｂａｔによる相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＨＶＲは、配列可変性に基づくものであり、最も一般的に使用されている（Ｋａｂａｔら、上掲）。Ｃｈｏｔｈｉａは、むしろ、構造的ループの位置に言及するものである（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。ＡｂＭ  ＨＶＲは、ＥＵまたはＫａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造的ループとの間の妥協案を示し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されている。「接触」ＨＶＲは、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づくものである。これらのＨＶＲの各々の残基を、以下に示す。
2019500014.tif 000003
【００６６】
ＨＶＲは、次の「伸長ＨＶＲ」を含み得る：ＶＬ中、２４〜３６または２４〜３４（Ｌ１）、４６〜５６または５０〜５６（Ｌ２）及び８９〜９７または８９〜９６（Ｌ３）、ならびにＶＨ中、２６〜３５（Ｈ１）、５０〜６５または４９〜６５（好ましい実施形態）（Ｈ２）及び９３〜１０２、９４〜１０２または９５〜１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基は、これらの伸長ＨＶＲ定義の各々に対して、ＥＵまたはＫａｂａｔら（上掲）に従ってナンバリングされる。
【００６７】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書に定義されるＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【００６８】
「ＥＵまたはＫａｂａｔに従う可変ドメイン残基ナンバリング」または「ＥＵまたはＫａｂａｔに従うアミノ酸位置ナンバリング」という表現及びそれらの変形形態は、ＥＵまたはＫａｂａｔら（上掲）において、抗体編成の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに対して使用されるナンバリングシステムを指す。このナンバリングシステムを使用する場合、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲもしくはＨＶＲの短縮、またはＦＲもしくはＨＶＲへの挿入に対応する、より少ないアミノ酸または追加のアミノ酸を含有することがある。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に１つのアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔに従うと残基５２ａ）を含み得、また重鎖ＦＲ残基８２の後に複数の挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔに従うと残基８２ａ、８２ｂ及び８２ｃなど）を含み得る。所与の抗体に対する残基のＥＵまたはＫａｂａｔナンバリングは、その抗体の配列と「標準の」Ｋａｂａｔによってナンバリングされた配列との相同領域での整列によって決定され得る。
【００６９】
ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリングシステムは、一般に、可変ドメイン中の残基（大体、軽鎖の残基１〜１０７及び重鎖の残基１〜１１３）について言及する際に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。「ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリングシステム」または「ＥＵインデックス」は、一般に、免疫グロブリン重鎖定常領域中の残基について言及する際に使用される（例えば、Ｋａｂａｔら（上掲）で報告されるＥＵインデックス）。「Ｋａｂａｔに従うＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基ナンバリングを指す。本明細書中に別途の記載がない限り、抗体の可変ドメインにおける残基番号の参照は、Ｋａｂａｔナンバリングシステムによる残基ナンバリングを意味する。本明細書中に別途の記載がない限り、抗体の定常ドメインにおける残基番号の参照は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリングシステムによる残基ナンバリングを意味する（例えば、米国特許出願公開第２０１０−２８０２２７号参照）。
【００７０】
本明細書で使用される「アクセプターヒトフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶＬフレームワークまたはＶＨフレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに「由来する」アクセプターヒトフレームワークは、当該フレームワークと同じアミノ酸配列を含んでもよいし、既存のアミノ酸配列変化を含有してもよい。いくつかの実施形態において、既存のアミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下または２以下である。既存のアミノ酸変化がＶＨ中に存在する場合、好ましいアミノ酸変化は、位置７１Ｈ、７３Ｈ及び７８Ｈのうちの３個、２個または１個のみに生じ、例えば、当該位置のアミノ酸残基は、７１Ａ、７３Ｔ及び／または７８Ａであり得る。一実施形態において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、配列において、ＶＬヒト免役グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
【００７１】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免役グロブリンのＶＬフレームワーク配列またはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を代表する、フレームワークである。一般に、ヒト免役グロブリンのＶＬ配列またはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからなされる。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）などのサブグループである。例として、ＶＬに関するものを挙げると、サブグループは、Ｋａｂａｔら（上掲）などのサブグループカッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩまたはカッパＩＶであり得る。更に、ＶＨについては、サブグループは、Ｋａｂａｔら（上掲）などのサブグループＩ、サブグループＩＩまたはサブグループＩＩＩであり得る。
【００７２】
指定位置における「アミノ酸修飾」（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体のアミノ酸修飾）は、指定残基の置換もしくは欠失、または少なくとも１つのアミノ酸残基の指定残基に隣接する挿入を指す。指定残基に「隣接する」挿入とは、その１〜２つの残基内への挿入を意味する。挿入は、指定残基のＮ末端側またはＣ末端側であり得る。本明細書における好ましいアミノ酸修飾は、置換である。
【００７３】
「親和性成熟」抗体（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、当該抗体の１つ以上のＨＶＲに１つ以上の変更を有し、その結果、抗原に対する抗体の親和性が、当該変更（複数可）を有しない親抗体と比較して向上した抗体である。一実施形態において、親和性成熟抗体は、標的抗原に対して、ナノモルまたは更にはピコモルの親和性を有する。親和性成熟抗体は、当該技術分野において既知の手法によって作製される。例えば、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）は、ＶＨドメインとＶＬドメインのシャッフリングによる親和性成熟について記載している。ＨＶＲ及び／またはフレームワーク残基のランダム変異導入については、例えば、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９（１９９５）；及びＨａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６（１９９２）に記載されている。
【００７４】
本明細書で使用されるとき、「特異的に認識する」または「特異的に結合する」という用語は、生体分子を含む不均質な分子集団の存在下で標的の存在を決定できる、標的と抗体（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）との間の引力または結合などの測定可能かつ再現可能な相互作用を指す。例えば、ある標的またはエピトープに特異的または優先的に結合する抗体（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、他の標的または当該標的の他のエピトープに結合するよりも、より高い親和性、アビディティで、より容易に、かつ／またはより長い持続期間で、当該標的またはエピトープと結合する抗体である。この定義の解釈から、例えば、第１の標的に特異的または優先的に結合する抗体（または部分）が第２の標的に特異的または優先的に結合してもしなくてもよいこともまた理解される。したがって、「特異的結合」または「優先的結合」は、排他的な結合を必ずしも必要とするものではない（ただし、包含する場合もある）。標的に特異的に結合する抗体は、少なくとも約１０３Ｍ−１または１０４Ｍ−１、場合により、約１０５Ｍ−１または１０６Ｍ−１、他の場合、約１０６Ｍ−１または１０７Ｍ−１、約１０８Ｍ−１〜１０９Ｍ−１または約１０１０Ｍ−１〜１０１１Ｍ−１以上の会合定数を有し得る。種々のイムノアッセイフォーマットを使用して、特定タンパク質と特異的に免疫反応性である抗体を選択することができる。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイを常法により使用して、タンパク質と特異的に免疫反応性であるモノクローナル抗体を選択する。特異的免疫反応性を決定するために使用できるイムノアッセイフォーマット及び条件の記載については、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。
【００７５】
本明細書で使用されるとき、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質と第２のタンパク質との間の「相互作用」は、限定するものではないが、タンパク質−タンパク質相互作用、物理的相互作用、化学的相互作用、結合、共有結合及びイオン結合を包含する。本明細書で使用されるとき、抗体が２つのタンパク質間の相互作用を中断、低減または完全に排除するとき、その抗体は、２つのタンパク質間の「相互作用を阻害する」。本開示の抗体またはその断片が２つのタンパク質のうちの１つに結合するとき、その抗体またはその断片は、２つのタンパク質間の「相互作用を阻害する」。
【００７６】
「アゴニスト」抗体または「活性化」抗体は、抗体が抗原と結合した後に、抗原の１つ以上の活性または機能を誘導する（例えば、増大する）抗体（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体）である。
【００７７】
「遮断」抗体、「アンタゴニスト」抗体または「阻害」抗体は、抗体が抗原と結合した後に、１つ以上のリガンドへの抗原結合を阻害し、もしくは低下させる（例えば、減少させる）抗体、及び／または抗体が抗原と結合した後に、抗原の１つ以上の活性もしくは機能を阻害し、もしくは低下させる（例えば、減少させる）抗体（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）である。いくつかの実施形態において、遮断抗体、アンタゴニスト抗体または阻害抗体は、１つ以上のリガンドへの抗原結合及び／または抗原の１つ以上の活性もしくは機能を実質的または完全に阻害する。
【００７８】
抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に帰属する生物活性を指し、抗体のアイソタイプに応じて様々である。
【００７９】
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、天然配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、アミノ酸残基の位置Ｃｙｓ２２６またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで及ぶものと定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリングシステムによると残基４４７）は、例えば、抗体の作製もしくは精製の間に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組み換え操作することによって、除去されてもよい。したがって、インタクト抗体の組成は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、及びＫ４４７残基を有する抗体と有しない抗体との混合物を有する抗体集団を含み得る。本開示の抗体における使用に好適な天然配列Ｆｃ領域には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４が含まれる。
【００８０】
「天然配列Ｆｃ領域」は、天然にみられるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域には、天然配列ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）、天然配列ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３  Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域、ならびにそれらの天然バリアントが含まれる。
【００８１】
「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは１つ以上のアミノ酸置換（複数可）により、天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、バリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を有し、例えば、天然配列Ｆｃ領域中または親ポリペプチドのＦｃ領域中に、約１〜約１０のアミノ酸置換、好ましくは約１〜約５のアミノ酸置換を有する。本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、好ましくは、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、最も好ましくは、それらと少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは、それらと少なくとも約９５％の相同性を保有する。
【００８２】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を表す。好ましいＦｃＲは、天然配列のヒトＦｃＲである。更に、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）と結合するものであり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩのサブクラスの受容体（これらの受容体のアレルバリアント及び選択的スプライシング形態を含む）が含まれる。ＦｃγＲＩＩ受容体には、同様のアミノ酸配列を有し、主にその細胞質ドメインが異なる、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「抑制性受容体」）が含まれる。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（「ＩＴＡＭ」）を含有する。抑制性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系抑制性モチーフ（「ＩＴＩＭ」）を含有する（例えば、Ｍ．Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４（１９９７）参照）。ＦｃＲについては、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４（１９９４）；及びｄｅ  Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−４１（１９９５）に概説されている。今後同定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書における「ＦｃＲ」という用語に包含される。ＦｃＲはまた、抗体の血清中半減期を延長し得る。
【００８３】
ヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドのＦｃＲｎへのｉｎ  ｖｉｖｏ結合及び血清中半減期は、例えば、ヒトＦｃＲｎを発現するトランスジェニックマウスもしくはヒトトランスフェクション細胞株において、またはバリアントＦｃ領域を有するポリペプチドが投与される霊長類においてアッセイすることができる。ＷＯ２００４／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）は、ＦｃＲへの結合が改善または低減された抗体バリアントについて記載している。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）も参照されたい。
【００８４】
本明細書で使用されるとき、ペプチド、ポリペプチドまたは抗体配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」及び「アミノ酸配列相同性パーセント（％）」は、配列を整列させ、必要に応じて最大配列同一性パーセントを達成するためにギャップを導入した後の、配列同一性の一部としてあらゆる保存的置換を考慮しない、指定のペプチドまたはポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基の割合を指す。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当該技術分野の技術範囲内である種々の方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの一般に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較する配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要とされる当該技術分野において既知の任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを評価するための適切なパラメータを決定することができる。
【００８５】
「単離された」細胞は、その細胞が生じた環境において通常会合している少なくとも１つの夾雑細胞から同定及び分離された分子または細胞である。いくつかの実施形態において、単離された細胞は、その生成環境に伴う全ての構成成分との会合がない。単離された細胞は、天然にみられる形態または状況とは異なる形態で存在する。単離された細胞は、組織、器官または個体内に天然に存在する細胞とは区別される。いくつかの実施形態において、単離された細胞は、本開示の宿主細胞である。
【００８６】
抗体（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）をコードする「単離された」核酸分子は、その核酸分子が生成された環境において通常会合している少なくとも１つの夾雑核酸分子から同定及び分離された核酸分子である。好ましくは、単離された核酸は、その生成環境に伴う全ての構成成分との会合がない。本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする単離された核酸分子は、天然にみられる形態または状況とは異なる形態で存在する。したがって、単離された核酸分子は、細胞内に天然に存在する本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする核酸とは区別される。
【００８７】
「ベクター」という用語は、本明細書で使用されるとき、当該ベクターに結合された別の核酸を輸送することができる核酸分子を指す。ベクターの一種には「プラスミド」がある。プラスミドは、追加のＤＮＡセグメントをライゲーションすることができる環状二本鎖ＤＮＡを指す。別の種類のベクターは、ファージベクターである。別の種類のベクターは、ウイルスベクターであり、この場合、追加のＤＮＡセグメントは、ウイルスゲノム中にライゲーションすることができる。特定のベクターは、導入された宿主細胞中で自己複製が可能である（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入すると、宿主細胞のゲノム中に組み込まれ、これにより宿主ゲノムとともに複製される。更に、特定のベクターは、作動可能に連結された遺伝子の発現を導くことができる。そのようなベクターは、本明細書において、「組み換え発現ベクター」または簡単に「発現ベクター」と称される。一般に、組み換えＤＮＡ技法において利用される発現ベクターは、プラスミドの形態である場合が多い。本明細書において、「プラスミド」及び「ベクター」は、プラスミドがベクターのうちで最も一般的に使用される形態であるため、区別なく使用され得る。
【００８８】
本明細書で区別なく使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドの重合体を指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基及び／またはそれらの類似体、あるいはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによりまたは合成反応により重合体中に組み込まれ得る任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びその類似体などの修飾ヌクレオチドを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する修飾は、重合体の組み立て前または後に付与され得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分により中断されてもよい。ポリヌクレオチドは、標識へのコンジュゲーションなど、合成後になされた修飾（複数可）を含み得る。他のタイプの修飾には、例えば、「キャップ」、類似体による天然ヌクレオチドのうちの１つ以上の置換、ヌクレオチド間修飾、例えば、非荷電結合（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメートなど）による修飾及び荷電結合（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）による修飾、ペンダント部分、例えば、タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ−Ｌ−リジンなど）を含有する修飾、インターカレータ（例えば、アクリジン、ソラレンなど）による修飾、キレート化剤（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属など）を含有する修飾、アルキル化剤を含有する修飾、修飾結合による修飾（例えば、αアノマー核酸など）、ならびにポリヌクレオチド（複数可）の未修飾形態が含まれる。更に、糖内に通常存在するヒドロキシル基のうちのいずれかを、例えば、ホスホン酸基、リン酸基により置換してもよいし、標準的な保護基により保護してもよいし、活性化して追加のヌクレオチドへの更なる結合を生成してもよいし、固体または半固体支持体にコンジュゲートしてもよい。５’末端及び３’末端のＯＨを、リン酸化してもよいし、アミンもしくは１〜２０個の炭素原子の有機キャッピング基部分で置換してもよい。他のヒドロキシルも、標準的な保護基に誘導体化してもよい。ポリヌクレオチドはまた、当該技術分野において一般的に知られているリボース糖またはデオキシリボース糖の類似形態も含み得、例えば、２’−Ｏ−メチル−、２’−Ｏ−アリル−、２’−フルオロ−または２’−アジド−リボース、炭素環糖類似体、α−アノマー糖、アラビノース、キシロースまたはリキソースなどのエピマー糖、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類似体及びメチルリボシドなどの塩基性ヌクレオシド類似体を含む。１つ以上のホスホジエステル結合は、代替連結基に置き換えられてもよい。これらの代替連結基には、限定されないが、リン酸が、Ｐ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯまたはＣＨ２（「ホルムアセタール」）に置き換えられる実施形態が含まれ、式中、各ＲまたはＲ’は、独立して、Ｈ、置換もしくは無置換アルキル（１〜２０Ｃ）（任意にエーテル（−Ｏ−）結合を含有する）、アリール、アルケニル、シク��アルキル、シクロアルケニルまたはアラルジルである。ポリヌクレオチド内の全ての結合が同一である必要はない。前述の説明は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含む、本明細書において言及される全てのポリヌクレオチドに適用される。
【００８９】
「宿主細胞」は、ポリヌクレオチド挿入物を組み込むためのベクター（複数可）のレシピエントになり得るか、レシピエントになっている個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一の宿主細胞の子孫を含み、その子孫は、自然発生的、偶発的または意図的な変異により、元の親細胞と必ずしも完全に同一でない場合がある（形態学的またはゲノムＤＮＡ相補鎖において）。宿主細胞は、本開示のポリヌクレオチド（複数可）をｉｎ  ｖｉｖｏでトランスフェクションした細胞を含む。
【００９０】
本明細書で使用される「担体」には、使用される用量及び濃度で、その担体に曝露される細胞または哺乳動物に対して無毒である、薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤が含まれる。多くの場合、生理学的に許容される担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。生理学的に許容される担体の例には、リン酸、クエン酸及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンもしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノースもしくはデキストリンを含む、単糖類、二糖類及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート化剤；マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【００９１】
本明細書で使用されるとき、「アポトーシス」という用語は、遺伝子指向性の細胞内の細胞破壊プロセスを指す。アポトーシスは、ネクローシスとは区別され、細胞骨格の破壊、細胞質の収縮及び凝縮、ホスファチジルセリンの細胞膜外表面上の発現及び突出を含み、その結果、細胞膜に結合した小胞またはアポトーシス小体が形成される。このプロセスは、「プログラムされた細胞死」とも呼ばれる。アポトーシスの過程では、湾曲した細胞表面、核クロマチンの凝縮、染色体ＤＮＡの断片化、及びミトコンドリアの機能低下などの特徴的な現象が観察される。アポトーシスは、アネキシンＶ、ヨウ化プロピジウム、ＤＮＡ断片化アッセイ及びＹＯ−ＰＲＯ−１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）による細胞染色などの種々の既知の技術を使用して検出することができる。いくつかの実施形態において、アネキシンＶ及びヨウ化プロピジウムによる染色が使用され得、アネキシンＶ＋／ＰＩ＋、アネキシンＶ＋／ＰＩ−及びアネキシンＶ−／ＰＩ＋集団の合計パーセンテージが死細胞とみなされる。
【００９２】
本明細書で使用されるとき、「Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるか、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害するか、その両方を行う作用物質」という用語は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕ及び／またはｉｎ  ｖｉｖｏで、Ｓｉｇｌｅｃ−９（哺乳動物、例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９）生物活性を減少させ（顕著減少を含む）、低下させ、遮断し、阻害し、または干渉する分子を指す。「作用物質」という用語は、具体的な生物学的作用の機序を何ら意図するものではなく、直接的か間接的かにかかわらず、また、Ｓｉｇｌｅｃ−９と相互作用するか、そのリガンドのうちの１つ以上と相互作用するか、あるいは別の機序を介して相互作用するかにかかわらず、可能性のある全てのＳｉｇｌｅｃ−９との薬理学的、生理学的及び生化学的相互作用を明示的に含み、かつ包含し、また、様々な別個の化学的に異なる組成物によって達成され得る結果を明示的に含み、かつ包含する。例示的な作用物質には、限定するものではないが、Ｓｉｇｌｅｃ−９に特異的に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体タンパク質、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９イムノアドヘシン）、Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンドに結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンドに結合するＳｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン）、Ｓｉｇｌｅｃ−９をコードする核酸を指向するアンチセンス分子、Ｓｉｇｌｅｃ−９をコードする核酸を指向する低分子干渉ＲＮＡ（「ｓｉＲＮＡ」）分子、Ｓｉｇｌｅｃ−９阻害化合物、Ｓｉｇｌｅｃ−９に結合するＲＮＡまたはＤＮＡアプタマー及びＳｉｇｌｅｃ−９構造類似体が挙げられる。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９阻害物質（例えば、抗体）は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるか、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害するか、その両方を行う作用物質と結合し（物理的に相互作用する）、Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンドに結合し、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９合成もしくは産生を阻害する（減少させる）。他の実施形態において、本開示の阻害作用物質は、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、そのリガンドのうちの１つ以上への結合を妨げる。更に他の実施形態において、本開示の作用物質は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の発現（すなわち、転写または翻訳）を減少させるか、排除する。Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるか、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害するか、その両方を行う作用物質の種類の例は、本明細書中に記載される。
【００９３】
本明細書で使用されるとき、「Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、または相互作用する作用物質」という用語は、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質と直接的または間接的に相互作用する分子を指す。「作用物質」という用語は、具体的な生物学的作用の機序を何ら意図するものではなく、直接的か間接的かにかかわらず、また、Ｓｉｇｌｅｃ−９と相互作用するか、あるいは別の機序を介して相互作用するかにかかわらず、可能性のある全てのＳｉｇｌｅｃ−９との薬理学的、生理学的及び生化学的相互作用を明示的に含み、かつ包含し、また、様々な別個の化学的に異なる組成物によって達成され得る結果を明示的に含み、かつ包含する。例示的な作用物質には、限定するものではないが、Ｓｉｇｌｅｃ−９に特異的に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が含まれる。
【００９４】
本明細書で使用されるとき、「ＲＮＡ干渉」または「ＲＮＡｉ」という用語は、一般に、二本鎖ＲＮＡ分子または小ヘアピンＲＮＡ分子が、その二本鎖または小ヘアピンＲＮＡ分子と実質的な相同性または完全な相同性を有する核酸配列の発現を低減させ、または阻害するプロセスを指す。「低分子干渉ＲＮＡ」または「ｓｉＲＮＡ」または「ＲＮＡｉ薬」という用語は、ＲＮＡ干渉を誘導するＲＮＡ配列を指す。ＫｒｅｕｔｚｅｒらのＷＯ００／４４８９５；Ｚｅｒｎｉｃｋａ−ＧｏｅｔｚらのＷＯ０１／３６６４６；ＦｉｒｅのＷＯ９９／３２６１９；Ｍｅｌｌｏ及びＦｉｒｅのＷＯ０１／２９０５８を参照されたい。本明細書で使用されるとき、ｓｉＲＮＡ分子には、化学修飾されたヌクレオチド及び非ヌクレオチドを包含するＲＮＡ分子が含まれる。「ｄｄＲＮＡｉ薬」という用語は、外因性ベクターから転写されるＤＮＡ指向性ＲＮＡｉ薬を指す。「小ヘアピンＲＮＡ」または「ｓｈＲＮＡ」という用語は、二重鎖領域とループ領域とを有するＲＮＡ構造を指す。特定の実施形態において、ｄｄＲＮＡｉ薬は、まず、ｓｈＲＮＡとして発現される。
【００９５】
本明細書で使用されるとき、「アプタマー」という用語は、例えば、一般的な代謝補因子（例えば、補酵素Ａ、Ｓ−アデノシルメチオニンなど）、タンパク質（例えば、補体タンパク質Ｃ５、抗体など）、または核酸分子中の保存された構造成分（例えば、転写因子の結合に重要な構造など）などの所望の分子標的に強固かつ特異的に結合することができる非相同オリゴヌクレオチドを指す。アプタマーは、典型的に、約１０〜約１００ヌクレオチド長、約１０〜約７５ヌクレオチド長、約１０〜約５０ヌクレオチド長、約１０〜約３５ヌクレオチド長及び約１０〜約２５ヌクレオチド長の範囲であるＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオチド配列を含む。合成ＤＮＡまたはＲＮＡオリゴヌクレオチドは、標準的な固相ホスホロアミダイト法及び装置を使用して、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）から入手可能な３９００  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（商標）を使用して、作製することができる。アプタマーは、ＤＮＡ及びＲＮＡにみられる通常生じるヌクレオチド（例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ及びＴ／Ｕ）の誘導体または類似体（主鎖または結合の修飾（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）またはホスホチオエート結合）を含む）を組み込んで、ヌクレアーゼ耐性、結合アビディティを向上させ、またはその薬物動態特性を別様に変更することが多い。例示的な修飾は、米国特許第６，４５５，３０８号、同第４，４６９，８６３号、同第５，５３６，８２１号、同第５，５４１，３０６号、同第５，６３７，６８３号、同第５，６３７，６８４号、同第５，７００，９２２号、同第５，７１７，０８３号、同第５，７１９，２６２号、同第５，７３９，３０８号、同第５，７７３，６０１号、同第５，８８６，１６５号、同第５，９２９，２２６号、同第５，９７７，２９６号、同第６，１４０，４８２号、ならびにＷＩＰＯ国際公開ＷＯ００／５６７４６及びＷＯ０１／１４３９８に記載されている。このような類似体または誘導体を含むオリゴヌクレオチドを合成する方法は、例えば、上で引用した特許公報ならびに米国特許第６，４５５，３０８号、同第５，６１４，６２２号、同第５，７３９，３１４号、同第５，９５５，５９９号、同第５，９６２，６７４号、同第６，１１７，９９２号及びＷＯ００／７５３７２に開示されている。
【００９６】
本明細書で使用される「約」という用語は、本技術分野の当業者に容易に理解される、各値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」を付した値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象にした実施形態を含む（かつ記載する）ものである。
【００９７】
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に明示しない限り、複数形を含む。例えば、「抗体」への言及は、１つの抗体からモル量などの多数の抗体までの言及であり、当業者に既知のその等価物を含むということなどである。
【００９８】
本明細書に記載される本開示の態様及び実施形態は、態様及び実施形態を「含む」、態様及び実施形態「からなる」、ならびに態様及び実施形態「から本質的になる」ことを含むことを理解されたい。
【００９９】
概説
本開示は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害するか、またはＳｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを減少させずに、及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害せずにＳｉｇｌｅｃ−９に結合する作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）、かかる作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）の製造方法及び使用方法；かかる作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を含有する医薬組成物；かかる作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）をコードする核酸；ならびにかかる作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）をコードする核酸を含有する宿主細胞に関する。
【０１００】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、少なくとも部分的には、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上の天然グリカンリガンドとの間の相互作用を阻害するという抗体の能力に起因する１つ以上のアンタゴニスト活性を有する。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、少なくとも部分的には、Ｓｉｇｌｅｃ−９の分解、下方制御、切断、受容体脱感作及び／またはリソソーム標的化を誘導することによってＳｉｇｌｅｃ−９の細胞発現（例えば、細胞表面発現）を低下させる抗体の能力に起因する１つ以上のアンタゴニスト活性を有し得る。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、抗体により誘導されるＳｉｇｌｅｃ−９活性は、本明細書で開示される技法のいずれかによってｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定または試験することができ（例えば、実施例１〜５参照）、限定するものではないが、Ｓｉｇｌｅｃ−９に曝露された抗体の密度を増加させる完全長抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体のプレート結合を試験すること、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を二次抗体と架橋させること、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を１つ以上のＦｃｇ受容体（例えば、ＦｃｇＲＩＩＢ）を発現する細胞と架橋させること、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を溶液で使用すること、及びＳｉｇｌｅｃ−９抗体のＦａｂ断片を使用することを含む。
【０１０２】
本開示の特定の態様は、少なくとも部分的には、Ｓｉｇｌｅｃ−９への結合に関して１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドと競合する能力を呈し、かつ／または細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させることにより、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性の低下、中和、保護もしくは抑制をもたらす能力を呈する作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）の特定に基づく。例示的なＳｉｇｌｅｃ−９活性には、限定するものではないが、Ｓｙｋ、ＬＣＫ、ＦＹＭ及び／またはＺＡＰ７０などのＳｒｃファミリーチロシンキナーゼによるＴｙｒ−４３３及びＴｙｒ−４５６のリン酸化；チロシン特異性タンパク質ホスファターゼＳＨＰ１及びＳＨＰ２の動員及び結合；Ｄｙｎａｍｉｎｉ−１のグアニンヌクレオチド交換因子として作用するＰＬＣ−γ１の動員及び結合；ＳＨ２−ドメイン含有タンパク質（例えば、Ｃｒｋｌ）の動員及び結合；脾臓チロシンキナーゼＳｙｋの動員及び結合；ＳＨ３−ＳＨ２−ＳＨ３成長因子受容体結合タンパク質２（Ｇｒｂ２）の動員及び結合；多数のＳＨ２含有タンパク質の動員及び結合；１つ以上の炎症促進性サイトカイン（ＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＩＬ−１α、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＣＲＰ、ＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１−βなど）の発現調節；マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球及びミクログリア細胞から選択される１つ以上の細胞における１つ以上の炎症促進性サイトカインの発現調節；１つ以上の抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１Ｒａ、Ｇ−ＣＳＦ）及びＴＮＦ、ＩＦＮ−β１ａ、ＩＦＮ−β１ｂまたはＩＬ−６の可溶性受容体の発現上昇；マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球及びミクログリア細胞から選択される１つ以上の細胞における１つ以上の抗炎症性サイトカインの発現調節；Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ及びＰＹＣＡＲＤから選択される１つ以上のタンパク質の発現調節；細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化の阻害；１つ以上の細胞タンパク質に対するチロシンリン酸化の減少（ここで、任意に、１つ以上の細胞タンパク質はＺＡＰ−７０を含み、チロシンリン酸化はＺＡＰ−７０のＴｙｒ−３１９に生じる）；Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現調節；ＣＣＬ１９発現細胞及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞走化性の阻害；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、Ｍ２ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、��１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球及びＭ２  ＮＫ細胞から選択される１つ以上の細胞によって誘導されるＴ細胞増殖の減少；破骨細胞生成の阻害、破骨細胞形成速度の低下またはその両方；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の生存低下；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の増殖低下；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の遊走阻害；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の１つ以上の機能の阻害；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の成熟阻害；アポトーシス性ニューロンクリアランス、神経組織破片クリアランス、機能不全シナプスクリアランス、非神経組織破片クリアランス、細菌クリアランス、他の異物クリアランス、病因タンパク質クリアランス、病因ペプチドクリアランス、及び腫瘍細胞クリアランスから選択される１種以上のクリアランスの阻害（ここで、任意に、病因タンパク質は、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、��ＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択され、腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫及び甲状腺癌から選択されるがんに由来する）；アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、機能不全シナプス、非神経組織破片、細菌、他の異物、病因タンパク質、病因ペプチド、病因核酸または腫瘍細胞のうちの１つ以上の食作用の阻害（ここで、任意に、病因核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡであり、病因タンパク質は、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択され、腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫または甲状腺癌から選択されるがんに由来する）；腫瘍細胞に対するＳｉｇｌｅｃ−９リガンドの結合；好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、マクロファージ及びＮＫ細胞から選択される細胞に対するＳｉｇｌｅｃ−９リガンドの結合；ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上による腫瘍細胞殺傷の阻害；ミクログリア、マクロファージ、
好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上の抗腫瘍細胞増殖活性の阻害；ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上の抗腫瘍細胞転移活性の阻害；１つ以上のＩＴＡＭモチーフ含有受容体の阻害（ここで、任意に、１つ以上のＩＴＡＭモチーフ含有受容体は、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、Ｓｉｒｐβ、ＦｃｇＲ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２から選択される）；１つ以上のパターン認識受容体（ＰＲＲ）によるシグナル伝達の阻害（ここで、任意に、１つ以上のＰＲＲは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を特定する受容体、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を特定する受容体及びこれらの任意の組み合わせから選択される）；モチーフＤ／Ｅｘ０−２ＹｘｘＬ／ＩＸ６−８ＹｘｘＬ／Ｉ（配列番号２５２）を含む１つ以上の受容体の阻害；１つ以上のＴｏｌｌ様受容体によるシグナル伝達の阻害；ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路の阻害；活性化Ｂ細胞の核内因子κ軽鎖エンハンサー（ＮＦκＢ）の阻害；ＩＴＡＭモチーフ含有受容体の脱リン酸化；１つ以上の炎症性受容体の発現調節、補体カスケードタンパク質、及び／または免疫細胞上に発現する受容体（ここで、任意に、１つ以上の炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または免疫細胞上に発現する受容体には、ＣＤ８６、Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ、及び／またはＰＹＣＡＲＤが含まれ、１つ以上の炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または免疫細胞上に発現する受容体は、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上に発現している）；１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９依存的遺伝子の発現上昇；破壊されたＳｉｇｌｅｃ−９依存的遺伝子発現の正常化；１つ以上のＩＴＡＭ依存的遺伝子の発現低下（ここで、任意に、１つ以上のＩＴＡＭ依存的遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子によって活性化される）；免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の機能の促進または救援；免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の腫瘍への浸潤増加；腫瘍、末梢血または他のリンパ系器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞の数の増加；骨髄由来抑制細胞の腫瘍促進活性の向上；腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現上昇（ここで、任意に、腫瘍促進性サイトカインはＴＧＦ−βまたはＩＬ−１０であ���）；腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤の増加；骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の腫瘍促進活性の向上；腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球の活性低下；腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性ＮＫ細胞の浸潤減少；ＮＫ細胞の潜在的腫瘍殺傷能力の低下；免疫応答を増大させる能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｂリンパ球の浸潤減少；腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球の浸潤減少；腫瘍体積の増加；腫瘍成長速度の増加；転移の増加；腫瘍再発率の増加；抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法または１つ以上のがんワクチンの有効性の低下（ここで、任意に、１つ以上の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＳＦ−１受容体及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の標的タンパク質を標的にする免疫療法である）；ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害；ならびにＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害が含まれる。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９遮断抗体などの作用物質によるがん治療は、（ｉ）がん患者の腫瘍、末梢血及びリンパ系器官に蓄積する腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞の生存、増殖、成熟、分化及び／または機能を直接的または間接的に低下させ、（ｉｉ）がん患者の腫瘍、末梢血及び他のリンパ系器官において、腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞の数を減少させ、（ｉｉｉ）骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の腫瘍促進活性を阻害し、（ｉｖ）がん患者の腫瘍及び末梢血において、ＴＧＦ−β及びＩＬ−１０などの腫瘍促進性サイトカインの発現を低下させ、（ｖ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤を減少させ、（ｖｉ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有するＴリンパ球の浸潤及び活性化を増加させ、（ｖｉｉ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性ＮＫ細胞の浸潤を増加させ、（ｖｉｉｉ）ＮＫ細胞の潜在的腫瘍殺傷能力を向上させ、（ｉｘ）免疫応答を増大させる能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｂリンパ球の浸潤を増加させ、（ｘ）腫瘍体積を減少させ、（ｘｉ）腫瘍成長速度を減少させ、（ｘｉｉ）転移を減少及び／または阻害し、（ｘｉｉｉ）腫瘍再発率を低下させ、（ｘｉｖ）抗腫瘍Ｔ細胞応答（ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＴＬＡ４、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４など）を調節する免疫療法及びがんワクチンの有効性を向上させ、（ｘｖ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員を誘導し、活性化し、または別様に増加させ、かつ、（ｘｖｉ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達を誘導し、活性化し、または別様に増加させる。
【０１０４】
免疫抑制性細胞は、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）と呼ばれることもある。ヒトにおいて、ＭＤＳＣは、以下のマーカーの組み合わせ：（１）ＣＤ１４＋  ＨＬＡ−ＤＲｌｏｗ／−、（２）ＣＤ１４＋  ＩＬ４Ｒα＋、（３）ＣＤ１４＋  ＨＬＡ−ＤＲ−  ＩＬ４Ｒα＋、（４）ＣＤ３４＋  ＣＤ１４＋  ＣＤ１１ｂ＋  Ｓｉｇｌｅｃ−９＋、（５）ＣＤ１１ｂ＋  ＣＤ１４＋  Ｓｉｇｌｅｃ−９＋、（６）Ｓｉｇｌｅｃ−９＋  ＨＬＡ−ＤＲ−、（７）Ｌｉｎ−  ＨＬＡ−ＤＲ−、（８）Ｌｉｎ−  ＨＬＡ−ＤＲ−  Ｓｉｇｌｅｃ−９＋、（９）Ｌｉｎ−  ＨＬＡ−ＤＲ−  Ｓｉｇｌｅｃ−９＋  ＣＤ１１ｂ＋、（１０）Ｌｉｎ−  Ｓｉｇｌｅｃ−９＋  ＣＤ１１ｂ＋  ＣＤ１５＋、（１１）Ｌｉｎ−  ＨＬＡ−ＤＲ−  Ｓｉｇｌｅｃ−９＋  ＣＤ１１ｂ＋  ＣＤ１４−  ＣＤ１５＋、（１２）ＣＤ１１ｂ＋  ＣＤ１４−  Ｓｉｇｌｅｃ−９＋、（１３）ＣＤ１１ｂ＋  ＣＤ１４−  ＨＬＡ−ＤＲ−  Ｓｉｇｌｅｃ−９＋  ＣＤ１５＋、（１４）Ｓｉｇｌｅｃ−９＋  ＨＬＡ−ＤＲ−  ＣＤ１５＋、（１５）ＣＤ１５＋  ＩＬ４Ｒα＋、（１６）ＣＤ１１ｂ＋  ＣＤ１５＋  ＣＤ６６ｂ＋、（１７）ＣＤ１５＋  ＦＳＣｌｏｗ  ＳＳＣｈｉｇｈ、（１８）ＣＤ１５ｈｉｇｈ  Ｓｉｇｌｅｃ−９＋、（１９）ＣＤ１１ｂ＋  ＣＤ１４−  ＣＤ１５＋、（２０）ＣＤ６６ｂ＋  ＳＳＣｈｉｇｈ及び（２１）ＣＤ１１ｂ＋  ＣＤ１５＋のうちの１つによって定義することができる（Ｓｏｌｉｔｏ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＮＹ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１４も参照されたい）。マウスにおいて、ＭＤＳＣは、表面マーカーＣＤ４５＋、ＣＤ１１ｂ＋、Ｇｒ１＋及び／またはＩｌ４Ｒａ＋の発現によって定義することができる。更なる例示的な免疫抑制性単球系統は、ＣＤ４５＋、ＣＤ１１ｂ＋、Ｇｒ１ｌｏｗ；及びＣＤ４５＋、ＣＤ１１ｃ＋である。
【０１０５】
本開示は、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、または相互作用する作用物質（抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体など）に更に関する。特定の実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを有意に低下させず、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害しない。
【０１０６】
Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質
一態様において、本開示は、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質内のエピトープなどの領域と相互作用するか、その領域に結合する作用物質、例えば、単離された（例えば、モノクローナル）抗体を提供する。いくつかの実施形態において、本開示の作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合し、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合した後、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性（例えば、細胞内のＳｉｇｌｅｃ−９発現に関連する活性）を調節する。本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質には、限定するものではないが、哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質、マウスＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質及びラットＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質が含まれる。
【０１０７】
Ｓｉｇｌｅｃ−９は、Ｓｉｇｌｅｃ−９分子、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン９、ＣＤ３２９抗原、ＣＤ３２９；ＣＤｗ３２９、ＦＯＡＰ−９、及びＯＢＢＰ−ＬＩＫＥの様々な名称で呼ばれる。
【０１０８】
Ｓｉｇｌｅｃ−９は、主に、限定するものではないが、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、破骨細胞、単球、及びミクログリアを含む、骨髄細胞上に発現する免疫グロブリン様受容体である。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９は、ＣＤ６４との受容体シグナル伝達複合体を形成する。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９シグナリングは、ＰＩ３Ｋまたは他の細胞内シグナルの下流を阻害する。骨髄細胞では、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）シグナルは、例えば感染応答の状況におけるＳｉｇｌｅｃ−９活性の阻害に重要である。ＴＬＲはまた、病理学的炎症反応、例えば、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞及び樹状細胞において発現するＴＬＲにおいて重要な役割を果たす。
【０１０９】
種々のＳｉｇｌｅｃ−９ホモログが知られており、限定するものではないが、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９、チンパンジーＳｉｇｌｅｃ−９、ミドリザルＳｉｇｌｅｃ−９、アカゲザルＳｉｇｌｅｃ−９、及びマウスＳｉｇｌｅｃ−９が含まれる。ヒトＳｉｇｌｅｃ−９のアミノ酸配列を配列番号１として以下に示す。
2019500014.tif 000004
【０１１０】
いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９は、シグナル配列を含むプレタンパク質である。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９は、成熟タンパク質である。いくつかの実施形態において、成熟Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質は、シグナル配列を含まない。いくつかの実施形態において、成熟Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質は、細胞上に発現される。いくつかの実施形態において、成熟Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質は、限定するものではないが、ヒト樹状細胞、ヒトマクロファージ、ヒト単球、ヒト破骨細胞、ヒト好中球、ヒトＴ細胞、ヒトヘルパーＴ細胞、ヒト細胞傷害性Ｔ細胞、ヒト顆粒球及びヒトミクログリアを含む細胞上、例えば、細胞表面上などに発現される。本開示の作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、本明細書で開示される任意の細胞上に発現している、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質のいずれかと結合し得る。
【０１１１】
本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９）は、限定するものではないが、配列番号１のアミノ酸残基１〜１７に位置するシグナル配列、配列番号１のアミノ酸残基２０〜１４０に位置する細胞外免疫グロブリン様可変型（ＩｇＶ）ドメイン、配列番号１のアミノ酸残基１４６〜２２９と２３６〜３３６に位置する２つのＩｇ様Ｃ２型ドメイン、配列番号１のアミノ酸残基３４８〜３７０に位置する膜貫通ドメイン、配列番号１のアミノ酸残基４３１〜４３６に位置するＩＴＩＭモチーフ、及び配列番号１のアミノ酸残基４５４〜４５９に位置するＳＬＡＭ様モチーフを含む、いくつかのドメインを含有する。当業者であれば認識するように、本開示のドメインの開始残基及び終了残基は、ドメインを決定するために使用されるコンピュータモデリング用プログラムまたはその方法に応じて変化し得る。
【０１１２】
本開示の特定の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９またはそのホモログ、例えば、限定するものではないが、哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質及び他種由来Ｓｉｇｌｅｃ−９オルソログに結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を提供する。例示的なＳｉｇｌｅｃ−９ホモログ及びオルソログを表Ａに列挙する。
表Ａ：Ｓｉｇｌｅｃ−９ホモログ及びオルソログ
2019500014.tif 000005
【０１１３】
したがって、本明細書で使用されるとき、本開示の「Ｓｉｇｌｅｃ−９」タンパク質には、限定するものではないが、哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質及び霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質が含まれる。更に、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質及び霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−９のうちの１つ以上のうちのエピトープと結合し得る。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質またはその両方に特異的に結合し得る。特定の実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９、霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−９またはその両方に特異的に結合し得る。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する本開示の作用物質、またはＳｉｇｌｅｃ−９と結合し、もしくは相互作用する本開示の作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、ｐＨ依存的にＳｉｇｌｅｃ−９と結合し得る。いくつかの実施形態において、本開示の作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、中性のｐＨでＳｉｇｌｅｃ−９に結合することができ、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質から解離することなく、内在化することができる。あるいは、酸性のｐＨで、本開示の作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、内在化した後、エンドソーム／リソソーム経路によって分解されると、Ｓｉｇｌｅｃ−９から解離され得る。特定の実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、５．５〜８．０、５．５〜７．５、５．５〜７．０、５．５〜６．５、５．５〜６．０、６．０〜８．０、６．５〜８．０、７．０〜８．０、７．５〜８．０、６．０〜７．５、６．０〜７．０、６．５〜７．５の範囲であるｐＨでＳｉｇｌｅｃ−９と結合する。特定の実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、６．０未満、５．５未満、５．０未満、４．５未満、４．０未満、３．５未満、３．０未満、２．５未満または２．０未満のｐＨでＳｉｇｌｅｃ−９から解離する。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／もしくはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害し、またはＳｉｇｌｅｃ−９と結合し、もしくは相互作用する本開示の作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、本開示の野生型Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質、その天然バリアント及び／またはその疾患バリアントに結合する。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／もしくはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害し、またはＳｉｇｌｅｃ−９と結合し、もしくは相互作用する本開示の作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９のバリアントに結合する。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／もしくはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害し、またはＳｉｇｌｅｃ−９と結合し、もしくは相互作用する本開示の作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、限定するものではないが、ヒト樹状細胞、ヒトマクロファージ、ヒトＮＫ細胞、ヒト単球、ヒト破骨細胞、ヒト好中球、ヒトＴ細胞、ヒトヘルパーＴ細胞、ヒト細胞傷害性Ｔ細胞、ヒト顆粒球及びヒトミクログリアを含む細胞の表面上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合する。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／もしくはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害し、またはＳｉｇｌｅｃ−９と結合し、もしくは相互作用する本開示の作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、細胞表面上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合し、表面に発現したＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合した後、本開示の少なくとも１つのＳｉｇｌｅｃ−９活性を調節する（例えば、誘導または阻害する）。本開示のいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質に特異的に結合する。本開示のいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、少なくとも１つの追加のＳｉｇｌｅｃタンパク質に更に結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、少なくとも１つの追加のＳｉｇｌｅｃタンパク質の１つ以上の活性または少なくとも１つの追加のＳｉｇｌｅｃタンパク質を発現する細胞の１つ以上の活性を調節する。
【０１１８】
Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンド
本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質は、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドと相互作用する（例えば、結合する）ことができる。
【０１１９】
例示的なＳｉｇｌｅｃ−９リガンドには、限定するものではないが、シアル酸、シアル酸含有糖脂質、シアル酸含有糖タンパク質、α−２，８−ジシアリル含有糖脂質、分岐α−２，６−結合シアル酸含有糖タンパク質、末端α−２，６−結合シアル酸含有糖脂質、末端α−２，３−結合シアル酸含有糖タンパク質、ジシアロガングリオシド（例えば、ガングリオシド、すなわちシアル酸付加グリカンに連結したセラミドを含有する糖脂質）、分泌型ムチン、赤血球上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、細菌細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、アポトーシス性細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、神経細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、グリア細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、ミクログリア上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、アストロサイト上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、腫瘍細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、ウイルス上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、樹状細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、βアミロイド斑に結合したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、タウのもつれに結合したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、病因タンパク質上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、病因ペプチド上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、マクロファージ上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、好中球上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、ナチュラルキラー細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、単球上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、Ｔ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、ヘルパーＴ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、細胞傷害性Ｔ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、Ｂ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、腫瘍埋没型免疫抑制性樹状細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、腫瘍埋没型免疫抑制性マクロファージ上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、骨髄由来抑制細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド及び制御性Ｔ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンドが含まれる。いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドは、ガングリオシド（例えば、ジシアロガングリオシド）である。ジシアロガングリオシドは、概して、共通するラクト−セラミドコア及び１つ以上のシアル酸残基を有する。
【０１２０】
好適なＳｉｇｌｅｃ−９リガンドの更なる例を図２に示す。
【０１２１】
好適なガングリオシド（例えば、ジシアロガングリオシド）リガンドの更なる例を図３に示し、表Ｂに列挙する。概して、ガングリオシド（例えば、ジシアロガングリオシド）は、１つ以上のシアル酸（例えば、ｎ−アセチル−ノイラミン酸、ＮＡＮＡ）が糖鎖上に結合したスフィンゴ糖脂質から構成される分子である。
表Ｂ：例示的なガングリオシドＳｉｇｌｅｃ−９リガンドの構造
2019500014.tif 000006
【０１２２】
Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質
本開示の特定の態様は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する作用物質（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質）に関する。本開示の他の態様は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させることなく、及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害することなく、Ｓｉｇｌｅｃ−９に結合する作用物質（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質）に関する。本開示のさらなる態様は、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、または相互作用する作用物質（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質）に関する。いくつかの実施形態において、本開示の作用物質は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕ及び／またはｉｎ  ｖｉｖｏで、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質の１つ以上の活性を遮断し、阻害し、低下させ、またはこれに干渉する。いくつかの実施形態において、本開示の作用物質は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕ及び／またはｉｎ  ｖｉｖｏで、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質の１つ以上の活性を遮断せず、阻害せず、低下させず、またはこれに干渉しない。いくつかの実施形態において、本開示の作用物質は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕ及び／またはｉｎ  ｖｉｖｏで、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質の１つ以上の活性を向上させ、活性化させ、または誘導する。
【０１２３】
特定の実施形態において、本開示の作用物質は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する作用物質（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質）である。Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する本開示の作用物質は、以下の特徴：（１）１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性の阻害または低下；（２）Ｓｉｇｌｅｃ−９のそのリガンドのうちの１つ以上への結合を阻害し、または減少させる能力；（３）Ｓｉｇｌｅｃ−９−発現細胞のＳｉｇｌｅｃ−９発現（ｍＲＮＡレベル及び／またはタンパク質レベルなど）を低下させる能力；（４）Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質と相互作用し、結合し、またはこれを認識する能力；（５）Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質と特異的に相互作用し、またはこれに特異的に結合する能力；及び（６）本明細書に記載され、または本明細書で企図される疾患または障害の任意の側面を治療し、改善し、または予防する能力のうちの１つ以上を有する分子である。
【０１２４】
Ｓｉｇｌｅｃ−９の生成を阻害する作用物質の例には、限定するものではないが、Ｓｉｇｌｅｃ−９合成及び／もしくは放出を特異的に阻害する化合物、Ｓｉｇｌｅｃ−９を指向するアンチセンス分子、またはＳｉｇｌｅｃ−９をコードする核酸を指向する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）が挙げられる。１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を阻害する作用物質の更なる例には、限定するものではないが、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質に特異的に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を特異的に阻害する化合物（例えば、小分子阻害物質及び／またはペプチド阻害物質）、Ｓｉｇｌｅｃ−９の１つ以上のリガンドへの結合を特異的に阻害する化合物、Ｓｉｇｌｅｃ−９構造類似体、またはＳｉｇｌｅｃ−９と結合するＲＮＡもしくはＤＮＡアプタマーが挙げられる。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する作用物質は、アロステリック阻害物質である。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する作用物質は、オルソステリック阻害物質である。
【０１２５】
特定の実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する作用物質は、限定するものではないが、小ペプチドまたはペプチド様分子、可溶性ペプチド及び合成非ペプチジル有機化合物または無機化合物を含む、小分子阻害物質である。小分子阻害物質は、約１００〜約２０，０００ダルトン（Ｄａ）、約５００〜約１５，０００Ｄａ、約１０００〜約１０，０００Ｄａのいずれかの分子量を有し得る。その製造方法及び１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性に対する小分子の阻害作用を試験する方法は、当該技術分野において既知であり、そのような方法を使用してＳｉｇｌｅｃ−９活性に対する小分子阻害物質の作用を評価することができる。例えば、本明細書で開示される方法及びアッセイのいずれかを使用して、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する小分子阻害物質をスクリーニングすることができる。
【０１２６】
特定の実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する作用物質は、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、または物理的に相互作用する抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体である。抗体は、標的抗原（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９）に対して、ナノモルまたは更にはピコモルの親和性を有し得る。特定の実施形態において、抗体のＫｄは、約０．０５〜約１００ｎＭである。例えば、抗体のＫｄは、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約９００ｐＭ、約８００ｐＭ、約７９０ｐＭ、約７８０ｐＭ、約７７０ｐＭ、約７６０ｐＭ、約７５０ｐＭ、約７４０ｐＭ、約７３０ｐＭ、約７２０ｐＭ、約７１０ｐＭ、約７００ｐＭ、約６５０ｐＭ、約６００ｐＭ、約５９０ｐＭ、約５８０ｐＭ、約５７０ｐＭ、約５６０ｐＭ、約５５０ｐＭ、約５４０ｐＭ、約５３０ｐＭ、約５２０ｐＭ、約５１０ｐＭ、約５００ｐＭ、約４５０ｐＭ、約４００ｐＭ、約３５０ｐＭ約３００ｐＭ、約２９０ｐＭ、約２８０ｐＭ、約２７０ｐＭ、約２６０ｐＭ、約２５０ｐＭ、約２４０ｐＭ、約２３０ｐＭ、約２２０ｐＭ、約２１０ｐＭ、約２００ｐＭ、約１５０ｐＭ、約１００ｐＭ、または約５０ｐＭのいずれか〜約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、または約４０ｐＭのうちのいずれかである。Ｓｉｇｌｅｃ−９と相互作用し、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と特異的に結合する抗体の調製及び選択の方法は、本明細書に記載される。
【０１２７】
特定の実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する作用物質は、Ｓｉｇｌｅｃ−９をコードする核酸を標的にすることによって機能性Ｓｉｇｌｅｃ−９の発現を遮断し、または低下させることができる少なくとも１つのアンチセンス分子を含む。Ｓｉｇｌｅｃ−９の核酸配列は、当該技術分野において既知である。例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＭ＿００１１９８５５８．１に示される核酸配列を有し得、チンパンジーＳｉｇｌｅｃ−９は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＸＭ＿００３３１６５６６．３に示される核酸配列を有し得、マウスＳＩＧＬＥＣ−Ｅは、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＭ＿０３１１８１．２に示される核酸配列を有し得る。アンチセンスオリゴヌクレオチド分子の作製方法は既知であり、そのような方法を使用して、他のポリヌクレオチドとの交差反応なく、Ｓｉｇｌｅｃ−９ｍＲＮＡのうちの１つ以上と特異的に結合するアンチセンスオリゴヌクレオチドを作製することができる。例示的な標的部位には、開始コドン、５’制御領域、コード配列（任意の保存されたコンセンサス領域を含む）及び３’非翻訳領域が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、約１０〜約１００ヌクレオチド長、約１５〜約５０ヌクレオチド長、約１８〜約２５ヌクレオチド長またはそれ以上である。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ耐性などを向上させるために、例えば、ホスホロチオエート結合及び２’−Ｏ−糖修飾などの当業者に既知の化学修飾を更に含む。
【０１２８】
特定の実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する作用物質は、Ｓｉｇｌｅｃ−９をコードする核酸を標的にすることによって機能性Ｓｉｇｌｅｃ−９の発現を遮断し、または低下させることができる少なくとも１つのｓｉＲＮＡ分子を含む。ｓｉＲＮＡ分子の作製方法は当該技術分野において既知であり、そのような方法を使用して、他のポリヌクレオチドとの交差反応なく、Ｓｉｇｌｅｃ−９ｍＲＮＡを特異的に標的にするｓｉＲＮＡ分子を作製することができる。ｓｉＲＮＡ分子は、典型的な固相オリゴヌクレオチド合成などの方法によって生成することができ、ｓｉＲＮＡ作用物質の半減期及び／もしくは有効性を向上させ、かつ／またはより強力な送達製剤とするために、化学修飾を組み込むことが多い。あるいは、ｓｉＲＮＡ分子は、ｓｉＲＮＡの細胞内転写のための発現カセットをコードするベクターを使用して送達される。
【０１２９】
特定の実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する作用物質は、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、または物理的に相互作用し、かつＳｉｇｌｅｃ−９とそのリガンドのうちの１つ以上との間の相互作用を遮断するＲＮＡまたはＤＮＡアプタマーである。特定の実施形態において、アプタマーは、Ｓｉｇｌｅｃ−９の成熟形態に結合する少なくとも１つのＲＮＡまたはＤＮＡアプタマーを含む。
【０１３０】
特定の実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する作用物質は、少なくとも１つのＳｉｇｌｅｃ−９構造類似体を含む。Ｓｉｇｌｅｃ−９構造類似体という用語は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の三次元構造の一部と同様の三次元構造を有し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、生理学的条件下で１つ以上のＣＤ３リガンドに結合し、この結合により、Ｓｉｇｌｅｃ−９生物活性が少なくとも部分的に阻害される化合物を指す。好適なＳｉｇｌｅｃ−９構造類似体は、リガンド（例えば、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９リガンド）に対するＳｉｇｌｅｃ−９結合の分子モデリングにより、設計及び合成することができる。Ｓｉｇｌｅｃ−９構造類似体は、単量体、二量体または更に高次の多量体であり得、改善した親和性及び生物学的作用を得るために、同一構造または異なる構造の任意の所望の組み合わせであってよい。いくつかの実施形態において、作用物質は、Ｓｉｇｌｅｃ−９のアミノ酸配列と結合し、または相互作用する。
【０１３１】
特定の実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する作用物質は、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体タンパク質、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９イムノアドヘシン）、Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンドに結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンドに結合するＳｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン）を含む。特定の実施形態において、このような作用物質は、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドに結合することにより、所与のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドと機能性Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体との間の相互作用を妨げる。
【０１３２】
特定の実施形態において、本開示の作用物質は、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、または相互作用する作用物質（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質）である。Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、または相互作用する作用物質の例には、限定するものではないが、不活性抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体、アゴニスト抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体、Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンド、Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンドアゴニスト断片、Ｓｉｇｌｅｃ−９イムノアドヘシン、Ｓｉｇｌｅｃ−９可溶性受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン）、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンド模倣物質及び小分子化合物が挙げられる。小分子化合物は、約１００〜約２０，０００ダルトン（Ｄａ）、約５００〜約１５，０００Ｄａ、約１０００〜約１０，０００Ｄａのいずれかの分子量を有し得る。その製造方法及び１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性に対する作用物質の作用を試験する方法は、当該技術分野において既知であり、そのような方法を使用してＳｉｇｌｅｃ−９活性に対する小分子阻害物質の作用を評価することができる。例えば、本明細書で開示される方法及びアッセイのいずれかを使用して、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、または相互作用する小分子阻害物質をスクリーニングすることができる。
【０１３３】
アッセイ
Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する作用物質は、当該技術分野において既知の方法、例えば、放射性標識阻害剤アッセイ、光学アッセイ、タンパク質結合アッセイ、生化学的スクリーニングアッセイ、イムノアッセイ、質量シフト測定アッセイ、蛍光アッセイ及び／または蛍光生成ペプチド切断アッセイなどを使用して同定及び／または特性評価することができる。
【０１３４】
結合アッセイ及び他のアッセイ
特定の実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する作用物質は、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質候補のＳｉｇｌｅｃ−９との相互作用及び／または結合親和性の存在を検出する当該技術分野において既知の技法により特定することができる。
【０１３５】
特定の実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９と相互作用する作用物質は、放射性標識阻害剤アッセイを使用して特定することができる。例えば、放射性標識した作用物質候補の既知量を既知量の固定化Ｓｉｇｌｅｃ−９及び緩衝液とともにインキュベートする。続いて、固定化Ｓｉｇｌｅｃ−９を緩衝液で洗浄し、残存する放射性標識Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質候補の存在について、当該技術分野において既知の技法、例えば、ガンマカウンターなどを使用して、固定化Ｓｉｇｌｅｃ−９を測定することができる。放射性標識物質の存在を示す測定値は、放射性標識した作用物質候補がＳｉｇｌｅｃ−９と相互作用し、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９に結合することができることを示し得る。
【０１３６】
特定の実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９と相互作用する作用物質は、光学的技法を使用して特定することができる。Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質を検出するための例示的な光学的技法は、例えば、比色共鳴グラフト表面にＳｉｇｌｅｃ−９を結合させて、これにより、光が取るべき光路に変化を生じさせて反射光の波長をシフトさせ、続いて、作用物質候補をＳｉｇｌｅｃ−９と相互作用させたときの更なる反射光の波長変化を測定することを伴い得る。例えば、作用物質をＳｉｇｌｅｃ−９とともにインキュベートしたときに測定した反射光の波長に変化がないことは、その作用物質候補がＳｉｇｌｅｃ−９と相互作用できないことを示し得、作用物質候補をＳｉｇｌｅｃ−９とともにインキュベートしたときに測定した反射光の波長に変化があることは、その作用物質候補がＳｉｇｌｅｃ−９と結合し、かつ／または相互作用できることを示し得る。
【０１３７】
特定の実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９と相互作用する作用物質は、タンパク質結合アッセイを使用して特定することができる。Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質を検出するための例示的なタンパク質結合アッセイには、例えば、作用物質候補の存在下におけるＳｉｇｌｅｃ−９の共免疫沈降を挙げることができる。例えば、緩衝液中でＳｉｇｌｅｃ−９を作用物質候補とともにインキュベートし、続いて、Ｓｉｇｌｅｃ−９を特異的に捕捉する固定化分子（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体など）を使用して作用物質候補の存在下でＳｉｇｌｅｃ−９を捕捉し、当該技術分野において既知の洗浄手順中に、相互作用する作用物質候補を有する可能性のあるＳｉｇｌｅｃ−９と結合させる。続いて、相互作用する作用物質候補を有する可能性のあるＳｉｇｌｅｃ−９を取り外すことができ、作用物質候補の特徴に基づいて、例えば、質量分析及び／またはウェスタンブロットなどの技法によって、作用物質候補の存在を検出することができる。
【０１３８】
特定の実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９と相互作用する作用物質は、当該技術分野において既知の生化学的アッセイ及び／またはイムノアッセイ分析を使用して特定することができる。例示的な技法には、例えば、ウェスタンブロット、免疫染色及び共免疫沈降などの技法を使用して、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９濃度及び／またはタンパク質半減期の変化を定量的に測定するアッセイを挙げることができる。例えば、作用物質候補を、Ｓｉｇｌｅｃ−９を含有する試料（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現している細胞）とともにインキュベートし、続いて、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質の量及び／または細胞レベルを実験中の複数時点で測定することができる。コントロール処理と比較したタンパク質の量、細胞レベル及び／またはタンパク質半減期の変化は、そのＳｉｇｌｅｃ−９作用物質候補がＳｉｇｌｅｃ−９の半減期及び／または活性を変更できることを示し得る。
【０１３９】
特定の実施形態において、質量シフト測定アッセイを使用して、Ｓｉｇｌｅｃ−９と相互作用する作用物質を特定することができる。例示的な質量シフト測定アッセイは、例えば、限定するものではないが、質量分析計などの機器を使用して、作用物質候補がＳｉｇｌｅｃ−９と相互作用した際のＳｉｇｌｅｃ−９の質量変化を測定することによって、強力に結合した及び／または共有結合したＳｉｇｌｅｃ−９作用物質の存在を検出することを含み得る。例えば、質量シフトアッセイは、作用物質候補の相互作用の性質に応じて、全タンパク質及び／またはペプチドベースの解析で行うことができる。当該作用物質候補のＳｉｇｌｅｃ−９への付加と相関する質量シフトの検出は、その作用物質候補がＳｉｇｌｅｃ−９と相互作用することができ、または別様にＳｉｇｌｅｃ−９を阻害することができる可能性を示し得る。更に、例示的な質量シフト測定アッセイは、例えば、作用物質候補がＳｉｇｌｅｃ−９と相互作用した際の各作用物質候補の質量と相関するＳｉｇｌｅｃ−９の質量増加を、例えば、表面プラズモン共鳴などの技法を使用することによって、検出することを含み得る。例えば、光の屈折率の変化を測定し、センサー表面に結合したＳｉｇｌｅｃ−９の質量変化と相関させることができる。
【０１４０】
特定の実施形態において、化学的架橋アッセイを使用して、Ｓｉｇｌｅｃ−９と相互作用するＳｉｇｌｅｃ−９作用物質を特定することができる。例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで、作用物質候補をＳｉｇｌｅｃ−９とともに、また、Ｓｉｇｌｅｃ−９と相互作用する作用物質候補を当該Ｓｉｇｌｅｃ−９分子に共有結合的に架橋することができる分子架橋剤とともにインキュベートすることができる。続いて、限定するものではないが、質量分析及び／またはウェスタンブロットなどの技法を使用して、Ｓｉｇｌｅｃ−９と相互作用することができ、または別様にＳｉｇｌｅｃ−９を阻害することができる可能性のある作用物質候補を特定することができる。例えば、作用物質候補と共有結合的に架橋したＳｉｇｌｅｃ−９の検出は、その作用物質候補がＳｉｇｌｅｃ−９と相互作用することができ、または別様にＳｉｇｌｅｃ−９を阻害することができる可能性を示し得る。
【０１４１】
特定の実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９と相互作用する作用物質は、蛍光アッセイを使用して特定することができる。例えば、既知量の蛍光性作用物質候補を既知量の固定化Ｓｉｇｌｅｃ−９及び緩衝液とともにインキュベートすることができる。続いて、固定化Ｓｉｇｌｅｃ−９を緩衝液で洗浄し、残存する蛍光性Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質候補の存在について、限定するものではないが、蛍光検出などの当該技術分野において既知の技法を使用して、固定化Ｓｉｇｌｅｃ−９を測定することができる。蛍光性物質の存在を示す測定値は、蛍光性作用物質候補がＳｉｇｌｅｃ−９と相互作用し、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９に結合することができることを示し得る。
【０１４２】
活性アッセイ
当該技術分野において既知のアッセイ及び本明細書に記載されるアッセイ（例えば、実施例１〜１０）を使用して、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質を特定し、生物活性を試験することができる。いくつかの実施形態において、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を調節するＳｉｇｌｅｃ−９作用物質の能力を試験するためのアッセイが提供される。
【０１４３】
抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体
本開示の特定の態様は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を阻害する、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を阻害することなく、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させる。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を阻害する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、かつＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を阻害する。本開示の他の態様は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させずに、及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの相互作用（例えば、結合）を阻害せずに、Ｓｉｇｌｅｃ−９に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関する。
【０１４４】
本明細書中に開示されるように、Ｓｉｇｌｅｃ−９は細胞上で恒常的にリサイクルされ得、したがって、細胞表面上のＳｉｇｌｅｃ−９に結合する任意の作用物質（例えば、抗体）を細胞内にリサイクルし得る（例えばエンドサイトース）。しかしながら、そのようなエンドサイトーシスは、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベル（例えば、細胞表面レベル）の低下をもたらさない可能性がある。急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞は、表面に発現するＳｉｇｌｅｃ−９に結合した抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体のエンドサイトーシスを媒介し得ることが示されている一方で、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルの低下は示されなかった。したがって、本開示の特定の態様は、細胞表面に発現するＳｉｇｌｅｃ−９に結合するだけでなく、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させる抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関する。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、細胞表面に発現するＳｉｇｌｅｃ−９に結合し、さらに細胞にエンドサイトーシスされる。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、細胞にエンドサイトーシスされることなく、細胞表面に発現するＳｉｇｌｅｃ−９に結合する。
【０１４５】
Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルは、限定するものではないが、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベル、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞内レベル及びＳｉｇｌｅｃ−９の総レベルを指し得る。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルの低下は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルの低下を含む。本明細書で使用されるとき、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、本明細書に記載されるまたは当該技術分野において既知である任意のｉｎ  ｖｉｔｒｏセルベースアッセイまたは好適なｉｎ  ｖｉｖｏモデルにより測定したとき、例えば、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）などのフローサイトメトリーを利用してＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを測定したとき、２１％以上のＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベル低下を誘導する場合、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させる。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルの低下は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞内レベルの低下を含む。本明細書で使用されるとき、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、本明細書に記載されるまたは当該技術分野において既知である任意のｉｎ  ｖｉｔｒｏセルベースアッセイまたは好適なｉｎ  ｖｉｖｏモデル（例えば、免疫染色、ウェスタンブロット解析、共免疫沈降及びセルサイトメトリー）により測定したとき、２１％以上のＳｉｇｌｅｃ−９の細胞内レベル低下を誘導する場合、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞内レベルを低下させる。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルの低下は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の総レベルの低下を含む。本明細書で使用されるとき、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、本明細書に記載されるまたは当該技術分野において既知である任意のｉｎ  ｖｉｔｒｏセルベースアッセイまたは好適なｉｎ  ｖｉｖｏモデル（例えば、免疫染色、ウェスタンブロット解析、共免疫沈降及びセルサイトメトリー）により測定したとき、２１％以上のＳｉｇｌｅｃ−９の総レベル低下を誘導する場合、Ｓｉｇｌｅｃ−９の総レベルを低下させる。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９分解、Ｓｉｇｌｅｃ−９切断、Ｓｉｇｌｅｃ−９内在化、Ｓｉｇｌｅｃ−９遊離及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９発現の下方制御を誘導する。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏセルアッセイを利用して、初代細胞（例えば、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア及びマクロファージ）または細胞株で測定される。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が存在しない状態でのＳｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルと比較して、少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％またはそれ以上、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させる。
【０１４７】
本明細書に記載されるまたは当該技術分野において知られている任意のｉｎ  ｖｉｔｒｏセルベースアッセイまたは好適なｉｎ  ｖｉｖｏモデルを使用して、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）の阻害を測定することができる。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、本明細書に記載されるまたは当該技術分野において知られている任意のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイまたはセルベース培養アッセイを利用したとき、飽和抗体濃度（例えば、６７ｎＭ）で、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％またはそれ以上阻害する。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面クラスタリングを阻害する。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、限定するものではないが、Ｓｙｋ、ＬＣＫ、ＦＹＭ及び／またはＺＡＰ７０などのＳｒｃファミリーチロシンキナーゼによるＴｙｒ−４３３及びＴｙｒ−４５６のリン酸化；チロシン特異性タンパク質ホスファターゼＳＨＰ１及びＳＨＰ２の動員及び結合；Ｄｙｎａｍｉｎｉ−１のグアニンヌクレオチド交換因子として作用するＰＬＣ−γ１の動員及び結合；ＳＨ２−ドメイン含有タンパク質（例えば、Ｃｒｋｌ）の動員及び結合；脾臓チロシンキナーゼＳｙｋの動員及び結合；ＳＨ３−ＳＨ２−ＳＨ３成長因子受容体結合タンパク質２（Ｇｒｂ２）の動員及び結合；多数のＳＨ２含有タンパク質の動員及び結合；１つ以上の炎症促進性サイトカインの発現調節（ここで、任意に、１つ以上の抗炎症性サイトカインは、ＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＩＬ−１α、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１−βからなる群から選択される）；マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球及びミクログリア細胞から選択される１つ以上の細胞における１つ以上の炎症促進性サイトカインの発現調節；１つ以上の抗炎症性サイトカイン（ここで、任意に、１つ以上の抗炎症性サイトカインは、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１Ｒａ、Ｇ−ＣＳＦから選択される）及びＴＮＦ、ＩＦＮ−β１ａ、ＩＦＮ−β１ｂまたはＩＬ−６の可溶性受容体の発現調節；マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球及びミクログリア細胞から選択される１つ以上の細胞における１つ以上の抗炎症性サイトカインの発現調節；Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ及びＰＹＣＡＲＤから選択される１つ以上のタンパク質の発現調節；細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化の阻害；１つ以上の細胞タンパク質に対するチロシンリン酸化の減少（ここで、任意に、１つ以上の細胞タンパク質はＺＡＰ−７０を含み、チロシンリン酸化はＺＡＰ−７０のＴｙｒ−３１９に生じる）；Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現調節；ＣＣＬ１９発現細胞及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞走化性の阻害；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、Ｍ２ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細���、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球及びＭ２  ＮＫ細胞から選択される１つ以上の細胞によって誘導されるＴ細胞増殖の減少；破骨細胞生成の阻害、破骨細胞形成速度の低下またはその両方；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の生存低下；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の増殖低下；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の遊走阻害；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の１つ以上の機能の阻害；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の成熟阻害；アポトーシス性ニューロンクリアランス、神経組織破片クリアランス、機能不全シナプスクリアランス、非神経組織破片クリアランス、細菌クリアランス、他の異物クリアランス、病因タンパク質クリアランス、病因ペプチドクリアランス、及び腫瘍細胞クリアランスから選択される１種以上のクリアランスの阻害（ここで、任意に、病因タンパク質は、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択され、腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫及び甲状腺癌から選択されるがんに由来する）；アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、機能不全シナプス、非神経組織破片、細菌、他の異物、病因タンパク質、病因ペプチド、病因核酸または腫瘍細胞のうちの１つ以上の食作用の阻害（ここで、任意に、病因核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡであり、病因タンパク質は、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択され、腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫または甲状腺癌から選択されるがんに由来する）；腫瘍細胞に対するＳｉｇｌｅｃ−９リガンドの結合；好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、マクロファージ及びＮＫ細胞から選択される細胞に対するＳｉｇｌｅｃ−９リガンドの結合；ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上による腫瘍細胞殺傷の阻害；ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上の抗腫瘍細胞増殖活性の阻害；ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上の抗腫瘍細胞転移活性の阻害；
１つ以上の炎症性受容体の発現調節（ここで、任意に、１つ以上の炎症性受容体がＣＤ８６を含み、１つ以上の炎症性受容体がミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上に発現している）；１つ以上のＩＴＡＭモチーフ含有受容体の阻害（ここで、任意に、１つ以上のＩＴＡＭモチーフ含有受容体は、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、Ｓｉｒｐβ、ＦｃｇＲ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２から選択される）；１つ以上のパターン認識受容体（ＰＲＲ）によるシグナル伝達の阻害（ここで、任意に、１つ以上のＰＲＲは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を特定する受容体、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を特定する受容体及びこれらの任意の組み合わせから選択される）；モチーフＤ／Ｅｘ０−２ＹｘｘＬ／ＩＸ６−８ＹｘｘＬ／Ｉ（配列番号２５２）を含む１つ以上の受容体の阻害；１つ以上のＴｏｌｌ様受容体によるシグナル伝達の阻害；ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路の阻害；活性化Ｂ細胞の核内因子κ軽鎖エンハンサー（ＮＦκＢ）の阻害；ＩＴＡＭモチーフ含有受容体の脱リン酸化；１つ以上の炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または免疫細胞上に発現する受容体の発現調節（ここで、任意に、１つ以上の炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または免疫細胞上に発現する受容体は、ＣＤ８６、Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ、及び／またはＰＹＣＡＲＤを含み、１つ以上の炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または免疫細胞上に発現する受容体は、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上に発現している）；１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９依存的遺伝子の発現上昇；破壊されたＳｉｇｌｅｃ−９依存的遺伝子発現の正常化；１つ以上のＩＴＡＭ依存的遺伝子の発現低下（ここで、任意に、１つ以上のＩＴＡＭ依存的遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子によって活性化される）；免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の機能の促進または救援；免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の腫瘍への浸潤増加；腫瘍、末梢血または他のリンパ系器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞の数の増加；骨髄由来抑制細胞の腫瘍促進活性の向上；腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現上昇（ここで、任意に、腫瘍促進性サイトカインはＴＧＦ−βまたはＩＬ−１０である）；腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔリンパ���の腫瘍浸潤の増加；骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の腫瘍促進活性の向上；腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球の活性低下；腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性ＮＫ細胞の浸潤減少；ＮＫ細胞の潜在的腫瘍殺傷能力の低下；免疫応答を増大させる能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｂリンパ球の浸潤減少；腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球の浸潤減少；腫瘍体積の増加；腫瘍成長速度の増加；転移の増加；腫瘍再発率の増加；抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法または１つ以上のがんワクチンの有効性の低下（ここで、任意に、１つ以上の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＳＦ−１受容体及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の標的タンパク質を標的にする免疫療法である）；ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害；ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害；免疫抑制樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、免疫抑制性好中球、非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞、及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の、腫瘍への浸潤の増強；腫瘍、末梢血、または他のリンパ器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球性免疫抑制細胞の数の増加；（ｒ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の腫瘍促進活性の増強；非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）及び／または非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の生存の増強；腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化の低下；（ｅ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有するＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔリンパ球の活性化の低下；腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤の減少；免疫応答の増強能力を潜在的に有する腫瘍特異的Ｂリンパ球の浸潤の減少；腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の浸潤の減少；ならびにＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔリンパ球の浸潤の減少を含む、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質の１つ以上の活性を阻害する。
【０１４９】
いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、例えば、限定するものではないが、赤血球上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、細菌細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、アポトーシス性細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、神経細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、グリア細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、ミクログリア上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、アストロサイト上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、腫瘍細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、ウイルス上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、樹状細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、βアミロイド斑に結合したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、タウのもつれに結合したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、病因タンパク質上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、病因ペプチド上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、マクロファージ上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、好中球上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、ナチュラルキラー細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、単球上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、Ｔ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、ヘルパーＴ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、細胞傷害性Ｔ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、Ｂ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、腫瘍埋没型免疫抑制性樹状細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、腫瘍埋没型免疫抑制性マクロファージ上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、骨髄由来抑制細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド及び制御性Ｔ細胞上に発現したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、分泌型ムチン、シアル酸、シアル酸含有糖脂質、シアル酸含有糖タンパク質、α−２，８−ジシアリル含有糖脂質、分枝α−２，６−結合シアル酸含有糖タンパク質、末端α−２，６−結合シアル酸含有糖脂質、末端α−２，３−結合シアル酸含有糖タンパク質、及びガングリオシド（例えば、ジシアロガングリオシド）との間の相互作用（例えば、結合）を阻害する。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、細胞表面上に発現した本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合し、ネイキッド抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を阻害する。いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合する本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を、細胞表面上または細胞内部のいずれかで、当該タンパク質と相互作用できるＳｉｇｌｅｃ−９の有効レベルを下げることによって、阻害する。いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合する本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の分解を誘導することによって、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を阻害する。
【０１５１】
前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、（ａ）腫瘍浸潤性ＣＤ３＋Ｔ細胞の数の増加；（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞におけるＳｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルの低下（ここで、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が腫瘍浸潤性細胞であるか、または任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が血中に存在する）；（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の数の減少（ここで、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が腫瘍浸潤性細胞であるか、または任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が血中に存在する）；（ｄ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｅ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｆ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ２レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｇ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ３レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｈ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２００Ｒレベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｉ）１つ以上の細胞におけるＣＤ１６３レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｊ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２０６レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｋ）固形腫瘍の腫瘍増殖率の低下；（ｌ）腫瘍体積の減少；（ｍ）１つ以上のＰＤ−１阻害剤の有効性の向上；（ｎ）１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法の有効性の向上（ここで、任意に、チェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法は、１つ以上のＣＴＬＡ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、またはそれらの任意の組み合わせを標的とする）；（ｏ）１つ以上の化学療法剤の有効性の向上（ここで、任意に、１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組み合わせである）、（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞の増殖の増大；（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存及び／または１つ以上の機能の阻害；ならびに（ｒ）化学的または放射性毒素にコンジュゲートした場合における、固形腫瘍及び関連する血管におけるＳｉｇｌｅｃ−９発現免疫抑制性非腫瘍形成性骨髄細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４発現細胞の殺傷からなる群から選択される１つ以上の活性を示す。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は作用物質にコンジュゲートしていない（ここで、任意に、作用物質は、薬物、毒素、化学療法剤、または放射性同位元素である）。
【０１５２】
本開示の他の態様は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを有意に低下させず、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害しない抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体に関する。
【０１５３】
本明細書で使用されるとき、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、本明細書に記載されるまたは当該技術分野において既知である任意のｉｎ  ｖｉｔｒｏセルベースアッセイまたは好適なｉｎ  ｖｉｖｏモデルを利用したとき、Ｓｉｇｌｅｃ−９へのリガンド結合の低下が、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が存在しない状態でのＳｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルと比較して２０％未満である場合、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを有意に低下させない。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が存在しない状態でのＳｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルと比較して、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満または１％未満、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させる。
【０１５４】
本明細書で使用されるとき、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、本明細書に記載されるまたは当該技術分野において既知である任意のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイまたはセルベース培養アッセイを利用したとき、Ｓｉｇｌｅｃ−９へのリガンド結合の減少が飽和抗体濃度（例えば、６７ｎＭ）で２０％未満である場合、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を阻害しない。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、本明細書に記載されるまたは当該技術分野において既知である任意のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイまたはセルベース培養アッセイを利用したとき、飽和抗体濃度（例えば、６７ｎＭ）で、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満または１％未満阻害する。
【０１５５】
本明細書で使用されるとき、Ｓｉｇｌｅｃ−９のレベルは、Ｓｉｇｌｅｃ−９をコードする遺伝子の発現レベル、Ｓｉｇｌｅｃ−９をコードする１つ以上の転写物の発現レベル、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質の発現レベルならびに／または細胞内部及び／もしくは細胞表面上に存在するＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質の量を指し得る。Ｓｉｇｌｅｃ−９のレベルを決定するには、遺伝子の発現、転写、翻訳及び／またはタンパク質の存在量もしくは局在化のレベルを測定するための当該技術分野において既知の任意の方法を使用することができる。
【０１５６】
更に、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を使用して、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびに膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性もしくは特発性骨髄線維症、原発性もしくは特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、甲状腺癌を含むがん、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶＩ型、ならびに／またはインフルエンザ菌を予防し、そのリスクを低下させ、または治療することができる。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、それを必要とする個体において、１つ以上の免疫細胞の生存、成熟、機能、遊走または増殖を誘導または促進するために使用することができ、あるいは、それを必要とする個体において、制御性Ｔ細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性樹状細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性マクロファージ、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞及び／または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能または生存を低下させるために使用することができる。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体である。
【０１５７】
いくつかの実施形態において、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベル（例えば、細胞表面レベル、細胞内レベル及び／または総レベル）を低下させる。いくつかの実施形態において、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の下方制御を誘導する。いくつかの実施形態において、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の切断を誘導する。いくつかの実施形態において、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の内在化を誘導する。いくつかの実施形態において、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の遊離を誘導する。いくつかの実施形態において、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の分解を誘導する。いくつかの実施形態において、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の脱感作を誘導する。いくつかの実施形態において、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９を一時的に活性化するリガンド模倣物質として作用する。いくつかの実施形態において、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、リガンド模倣物質として作用し、Ｓｉｇｌｅｃ−９を一時的に活性化した後、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルの低下及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）の阻害を誘導する。いくつかの実施形態において、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、リガンド模倣物質として作用し、Ｓｉｇｌｅｃ−９を一時的に活性化した後、Ｓｉｇｌｅｃ−９の分解を誘導する。いくつかの実施形態において、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、リガンド模倣物質として作用し、Ｓｉｇｌｅｃ−９を一時的に活性化した後、Ｓｉｇｌｅｃ−９の切断を誘導する。いくつかの実施形態において、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、リガンド模倣物質として作用し、Ｓｉｇｌｅｃ−９を一時的に活性化した後、Ｓｉｇｌｅｃ−９の内在化を誘導する。いくつかの実施形態において、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、リガンド模倣物質として作用し、Ｓｉｇｌｅｃ−９を一時的に活性化した後、Ｓｉｇｌｅｃ−９の遊離を誘導する。いくつかの実施形態において、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、リガンド模倣物質として作用し、Ｓｉｇｌｅｃ−９を一時的に活性化した後、Ｓｉｇｌｅｃ−９発現の下方制御を誘導する。いくつかの実施形態において、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、リガンド模倣物質として作用し、Ｓｉｇｌｅｃ−９を一時的に活性化した後、Ｓｉｇｌｅｃ−９の脱感作を誘導する。
【０１５８】
いくつかの実施形態において、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ネズミ抗体である。いくつかの実施形態において、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、モノクローナル抗体、多価抗体またはキメラ抗体である。かかる抗体の例示的な説明は、本開示全体を通して提供される。
【０１５９】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９またはそのホモログ、例えば、限定するものではないが、哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質、チンパンジーＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質（ＮＣＢＩアクセッション番号ＸＰ＿００３３１６６１４）、ミドリザルＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質（ＮＣＢＩアクセッション番号ＸＰ＿００７９９５９４０．１）、アカゲザルＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質（ＮＣＢＩアクセッション番号ＸＰ＿００１１１４５６０．２）、及びマウスＳＩＧＬＥＣ−Ｅタンパク質（ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿１１２４５８．２）に結合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−９に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９と霊長類Ｓｉｇｌｅｃ−９の両方に特異的に結合する。
【０１６０】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、細胞表面上に発現した本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合し、表面発現したＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合した後、本開示の１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を調節する（例えば、誘導または阻害する）アゴニスト抗体またはアンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、不活性抗体である。
【０１６１】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、限定するものではないが、ＴＲＥＭ２の細胞表面レベル、ＴＲＥＭ２の細胞内レベル及び／またはＴＲＥＭ２の総レベルを含む、ＴＲＥＭ２発現を有意に低下させない。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ＴＲＥＭ２の細胞レベルをｉｎ  ｖｉｖｏで低下させない。いくつかの実施形態において、ＴＲＥＭ２の細胞レベルは、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、マクロファージ、好中球及びＮＫ細胞から選択される初代細胞または細胞株で測定され、また、ＴＲＥＭ２の細胞レベルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏセルアッセイを利用して測定される。本明細書で使用されるとき、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、本明細書に記載されるまたは当該技術分野において既知である任意のｉｎ  ｖｉｔｒｏセルベースアッセイまたは好適なｉｎ  ｖｉｖｏモデルを利用したとき、ＴＲＥＭ２の低下が、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が存在しない状態でのＴＲＥＭ２発現と比較して２０％未満である場合、ｃＴＲＥＭ２発現を有意に低下させない。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が存在しない状態でのＴＲＥＭ２発現と比較して、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満または１％未満、ＴＲＥＭ２発現を低下させる。
【０１６２】
抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体−結合領域
本開示の特定の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号１）のアミノ酸残基２０〜３４７、２０〜１４０、１４１〜３４７、１４６〜３４７、１４６〜２２９、２３６〜３３６、もしくは１４６〜３４７内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基２０〜３４７、２０〜１４０、１４１〜３４７、１４６〜３４７、１４６〜２２９、２３６〜３３６、もしくは１４６〜３４７に対応するＳｉｇｌｅｃ−９ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を提供する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号１）のアミノ酸残基６２〜７６内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６に対応するＳｉｇｌｅｃ−９ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号１）のアミノ酸残基６２〜７６及び８６〜９２内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６及び８６〜９２に対応するＳｉｇｌｅｃ−９ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号１）のアミノ酸残基８６〜９２内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９２に対応するＳｉｇｌｅｃ−９ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号１）のアミノ酸残基８６〜９６内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６に対応するＳｉｇｌｅｃ−９ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号１）のアミノ酸残基８６〜９６及び１０５〜１１６内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６及び１０５〜１１６に対応するＳｉｇｌｅｃ−９ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号１）のアミノ酸残基１０５〜１１６内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基１０５〜１１６に対応するＳｉｇｌｅｃ−９ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号１）のアミノ酸残基１０７〜１１５内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基１０７〜１１５に対応するＳｉｇｌｅｃ−９ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号１）のアミノ酸残基１８５〜１９４内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基１８５〜１９４に対応するＳｉｇｌｅｃ−９ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。
【０１６３】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のＬ２２、Ｈ４８、Ｗ５０、Ｉ５１、Ｙ５２、Ｋ１２３、Ｉ１２６、Ｄ１８９、Ｐ１９０、Ｒ１９４から選択される１つ以上のアミノ酸残基、または配列番号１のＬ２２、Ｈ４８、Ｗ５０、Ｉ５１、Ｙ５２、Ｋ１２３、Ｉ１２６、Ｄ１８９、Ｐ１９０、Ｒ１９４から選択されるアミノ酸残基に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上の１つ以上のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のＤ１８９、Ｐ１９０、及びＲ１９４から選択される１つ以上、２つ以上、もしくは３つ全てのアミノ酸残基、または配列番号１のＤ１８９、Ｐ１９０、及びＲ１９４から選択されるアミノ酸残基に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上の１つ以上、２つ以上、もしくは３つ全てのアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のＨ４８、Ｗ５０、Ｉ５１、Ｙ５２、及びＩ１２６から選択される１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上もしくは５つ全てのアミノ酸残基、または配列番号１のＨ４８、Ｗ５０、Ｉ５１、Ｙ５２、及びＩ１２６から選択されるアミノ酸残基に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上の１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上もしくは５つ全てのアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号１のＬ２２、Ｈ４８、Ｗ５０、Ｉ５１、Ｙ５２、及びＫ１２３から選択される１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、もしくは６つ全てのアミノ酸残基、または配列番号１のＬ２２、Ｈ４８、Ｗ５０、Ｉ５１、Ｙ５２、及びＫ１２３から選択されるアミノ酸残基に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上の１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、もしくは６つ全てのアミノ酸残基に結合する。
【０１６４】
表８Ｂに示すように、抗体２Ｄ４による結合に関与する重要なＳｉｇｌｅｃ−９残基は、配列番号１のアミノ酸残基Ｄ１８９、Ｐ１９０、及びＲ１９４に対応していた。抗体１２Ｂ１２による結合に関与する重要なＳｉｇｌｅｃ−９残基は、配列番号１のアミノ酸残基Ｈ４８、Ｗ５０、Ｉ５１、Ｙ５２、及びＩ１２６に対応していた。抗体５Ｃ６による結合に関与する重要なＳｉｇｌｅｃ−９残基は、配列番号１のアミノ酸残基Ｌ２２、Ｈ４８、Ｗ５０、Ｉ５１、Ｙ５２、及びＫ１２３に対応していた。
【０１６５】
本開示の他の態様は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの相互作用（例えば、結合）を阻害し、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号１）のアミノ酸残基６２〜７６、６２〜７６及び８６〜９２、８６〜９２、８６〜９６、８６〜９６及び１０５〜１１６、１０５〜１１６、もしくは１０７〜１１５内、または配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６、６２〜７６及び８６〜９２、８６〜９２、８６〜９６、８６〜９６及び１０５〜１１６、１０５〜１１６、もしくは１０７〜１１５に対応するＳｉｇｌｅｃ−９ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を提供する。
【０１６６】
本開示の他の態様は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを有意に低下させず、及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を阻害せず、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号１）のアミノ酸残基１８５〜１９４内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基１８５〜１９４に相当するＳｉｇｌｅｃ−９ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を提供する。本開示の他の態様は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを有意に低下させず、及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を阻害せず、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号１）のアミノ酸残基６２〜７６内の１つ以上のアミノ酸、または配列番号１のアミノ酸残基６に相当するＳｉｇｌｅｃ−９ホモログもしくはオルソログ上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を提供する。
【０１６７】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、高次構造エピトープと結合し得る。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、不連続なＳｉｇｌｅｃ−９エピトープと結合し得る。いくつかの実施形態において、不連続なＳｉｇｌｅｃ−９エピトープは、２つ以上のペプチド、３つ以上のペプチド、４つ以上のペプチド、５つ以上のペプチド、６つ以上のペプチド、７つ以上のペプチド、８つ以上のペプチド、９つ以上のペプチド、または１０以上のペプチドを有し得る。本明細書で開示されるように、Ｓｉｇｌｅｃ−９エピトープは、配列番号１のアミノ酸配列のうちの５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上、１５以上、１６以上、１７以上、１８以上、１９以上もしくは２０以上のアミノ酸残基、または配列番号１のアミノ酸配列に相当する哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質上の５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上、１５以上、１６以上、１７以上、１８以上、１９以上もしくは２０以上のアミノ酸残基を含むペプチドを１つ以上含み得る。
【０１６８】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、表２、３、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂ中に列挙される抗体のうちのいずれかから選択される少なくとも１つの抗体の結合を競合的に阻害する。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、及び１７Ｃ２から選択される少なくとも１つの抗体の結合を競合的に阻害する。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、表２、３、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂ中に列挙される抗体のうちのいずれかから選択される少なくとも１つの抗体が結合するＳｉｇｌｅｃ−９エピトープと同じであるか、これと重複するヒトＳｉｇｌｅｃ−９のエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、及び１７Ｃ２から選択される少なくとも１つの抗体が結合するＳｉｇｌｅｃ−９エピトープと同じであるか、これと重複するヒトＳｉｇｌｅｃ−９のエピトープに結合する。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、表２、３、４Ａ、４Ｂ、７Ａ、及び７Ｂ中に列挙される抗体のうちのいずれかから選択される少なくとも１つの抗体が結合するＳｉｇｌｅｃ−９エピトープと本質的に同じＳｉｇｌｅｃ−９エピトープと結合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、及び１７Ｃ２から選択される少なくとも１つの抗体が結合するＳｉｇｌｅｃ−９エピトープと本質的に同じＳｉｇｌｅｃ−９エピトープと結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための具体的な例示的方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）「Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，」  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供されている。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が存在しない状態でのＳｉｇｌｅｃ−９への結合と比較して、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の抗体のＳｉｇｌｅｃ−９への結合を、約５０％〜１００％の範囲の量で減少させるとき、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９への結合について、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の抗体と競合する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が存在しない状態でのＳｉｇｌｅｃ−９への結合と比較して、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の抗体のＳｉｇｌｅｃ−９への結合を、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％減少させるとき、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９への結合について、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の抗体と競合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の抗体のＳｉｇｌｅｃ−９への結合を１００％減少させるとは、当該抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の抗体のＳｉｇｌｅｃ−９への結合を本質的に完全に遮断することを示す。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体と、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の抗体は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体と、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の抗体との比が、１０：１の比、９：１の比、８：１の比、７：１の比、６：１の比、５：１の比、４：１の比、３：１の比、２：１の比、１：１の比、０．７５：１の比、０．５：１の比、０．２５：１の比、０．１：１の比、０．０７５：１の比、０．０５０：１の比、０．０２５：１の比、０．０１：１の比、０．００７５：の比、０．００５０：１の比、０．００２５：１の比、０．００１：の比、０．０００７５：１の比、０．０００５０：１の比、０．０００２５：１の比、０．０００１：の比、１：１０の比、１：９の比、１：８の比、１：７の比、１：６の比、１：５の比、１：４の比、１：３の比、１：２の比、１：０．７５の比、１：０．５の比、１：０．２５の比、１：０．１の比、１：０．０７５の比、１：０．０５０の比、１：０．０２５の比、１：０．０１の比、１：０．００７５の比、１：０．００５０の比、１：０．００２５の比、１：０．００１の比、１：０．０００７５の比、１：０．０００５０の比、１：０．０００２５の比、または１：０．０００１の比に対応する量で存在する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の抗体の量と比較して、約１．５倍〜１００倍の範囲の量または１００倍を超える量で過剰に存在する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の抗体の量と比較して、約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍または１００倍過剰である量で存在する。
【０１７２】
抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が、Ｓｉｇｌｅｃ−９への結合について、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の抗体と競合するかどうかを決定するには、当該技術分野において既知の任意の好適な競合アッセイまたはＳｉｇｌｅｃ−９結合アッセイ、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ解析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーを利用することができる。例示的な競合アッセイでは、固定化されたＳｉｇｌｅｃ−９または細胞表面上にＳｉｇｌｅｃ−９を発現している細胞を、Ｓｉｇｌｅｃ−９（例えば、ヒトまたは非ヒト霊長類）に結合する標識された第１の抗体と、Ｓｉｇｌｅｃ−９への結合について第１の抗体と競合する能力を試験する非標識の第２の抗体とを含む溶液中で、インキュベートする。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在してもよい。コントロールとして、固定化されたＳｉｇｌｅｃ−９またはＳｉｇｌｅｃ−９発現細胞を、標識された第１の抗体を含むが、非標識の第２の抗体を含まない溶液中でインキュベートする。第１の抗体のＳｉｇｌｅｃ−９への結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰の非結合抗体を除去し、固定化されたＳｉｇｌｅｃ−９または細胞が発現しているＳｉｇｌｅｃ−９に結合した標識の量を測定する。固定化されたＳｉｇｌｅｃ−９または細胞が発現しているＳｉｇｌｅｃ−９に結合した標識の量が、コントロール試料と比較して試験試料で実質的に低下している場合、それは、Ｓｉｇｌｅｃ−９への結合について、第２の抗体が第１の抗体と競合することを示す。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
【０１７３】
抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の軽鎖及び重鎖可変領域
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、（ａ）表２、３、４Ａ、４Ｂ、７Ａ及び７Ｂ中に列挙される抗体もしくは２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２及びこれらの任意の組み合わせから選択される抗体のうちのいずれか１つのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つもしくは３つのＨＶＲを含む軽鎖可変領域；ならびに／または（ｂ）表２、３、４Ａ、４Ｂ、７Ａ及び７Ｂ中に列挙される抗体もしくは２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２及びこれらの任意の組み合わせから選択される抗体のうちのいずれか１つのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つもしくは３つのＨＶＲを含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、ＨＶＲ−Ｌ３、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３は、表２、３、４Ａ、４Ｂ、７Ａ及び７Ｂに示され、または２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２及びこれらの任意の組み合わせから選択される抗体に由来する、ＥＵもしくはＫａｂａｔ  ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲまたは接触ＣＤＲ配列を含む。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、（ｉ）表２、３、４Ａ、４Ｂ、７Ａ及び７Ｂ中に列挙されるＨＶＲ−Ｌ１配列、または２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｌ１配列のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｌ１；（ｉｉ）表２、３、４Ａ、４Ｂ、７Ａ及び７Ｂ中に列挙されるＨＶＲ−Ｌ２配列、または２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｌ２配列のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｌ２；（ｉｉｉ）表２、３、４Ａ、４Ｂ、７Ａ及び７Ｂ中に列挙されるＨＶＲ−Ｌ３配列、または２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｌ３配列のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｌ３；（ｉｖ）表２、３、４Ａ、４Ｂ、７Ａ及び７Ｂ中に列挙されるＨＶＲ−Ｈ１配列、または２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｈ１配列のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｈ１；（ｖ）表２、３、４Ａ、４Ｂ、７Ａ及び７Ｂ中に列挙されるＨＶＲ−Ｈ２配列、または２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｈ２配列のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｈ２；ならびに（ｖｉ）表２、３、４Ａ、４Ｂ、７Ａ及び７Ｂ中に列挙されるＨＶＲ−Ｈ３配列、または２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｈ３配列のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのＨＶＲを含む。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号６〜９、１７２、及び１７３から選択されるアミノ酸配列、または配列番号６〜９、１７２、及び１７３から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｌ１と、（ｂ）配列番号１０〜１３、１７４、及び１７５から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１０〜１３、１７４、及び１７５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｌ２と、（ｃ）配列番号１４〜１８、１７６、及び１７７から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１４〜１８、１７６及び１７７から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｌ３の１つ以上を含み、及び／または、重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号１９〜２１、１７８、及び１７９から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１９〜２１、１７８及び１７９から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｈ１と、（ｂ）配列番号２２〜２５、１８０、及び１８１から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２〜２５、１８０、及び１８１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｈ２と、（ｃ）配列番号２６〜２９、１８２、及び１８３から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２６〜２９、１８２、及び１８３から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ−Ｈ３の１つ以上を含む。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインを含み、ここで、（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２６のアミノ酸配列を含むか；（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号２０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２７のアミノ酸配列を含むか；（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２８のアミノ酸配列を含むか；（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２９のアミノ酸配列を含むか；（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号２４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号２８のアミノ酸配列を含むか；（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号１７２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１７４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１７６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号１７８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１８０のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１８２のアミノ酸配列を含むか；または（ｇ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号１７３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１７５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１７７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号１７９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号１８１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号１８３のアミノ酸配列を含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、表２、３、４Ａ、４Ｂ、７Ａ及び７Ｂに列挙される抗体もしくは２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、及び１７Ｃ２から選択される抗体のうちのいずれか１つの軽鎖可変領域、ならびに／または表２、３、４Ａ、４Ｂ、７Ａ及び７Ｂに列挙される抗体もしくは２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、及び１７Ｃ２から選択される抗体のうちのいずれか１つの重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、配列番号６１〜１１５及び１９７〜２０４のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、ならびに／または配列番号１１６〜１７０及び２０５〜２１２のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、軽鎖可変ドメインは配列番号６１のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインは配列番号１１６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖可変ドメインは配列番号７２のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインは配列番号１２７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖可変ドメインは配列番号８３のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインは配列番号１３８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖可変ドメインは配列番号９４のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインは配列番号１４９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖可変ドメインは配列番号１０５のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインは配列番号１６０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖可変ドメインは配列番号１９７のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインは配列番号２０５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖可変ドメインは配列番号２０１のアミノ酸配列を含み、重鎖可変ドメインは配列番号２１０のアミノ酸配列を含む。
【０１７８】
いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗体５Ｃ６−Ｈ１の重鎖可変ドメイン及び抗体５Ｃ６−Ｌ１の軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗体５Ｃ６−Ｈ２の重鎖可変ドメイン及び抗体５Ｃ６−Ｌ２の軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗体５Ｃ６−Ｈ２の重鎖可変ドメイン及び抗体５Ｃ６−Ｌ３の軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗体５Ｃ６−Ｈ３の重鎖可変ドメイン及び抗体５Ｃ６−Ｌ２の軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗体５Ｃ６−Ｈ３の重鎖可変ドメイン及び抗体５Ｃ６−Ｌ３の軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗体５Ｃ６−Ｈ４の重鎖可変ドメイン及び抗体５Ｃ６−Ｌ２の軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗体５Ｃ６−Ｈ４の重鎖可変ドメイン及び抗体５Ｃ６−Ｌ３の軽鎖可変ドメインを含む。
【０１７９】
いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗体１２Ｂ１２−Ｈ１の重鎖可変ドメイン及び抗体１２Ｂ１２−Ｌ１の軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗体１２Ｂ１２−Ｈ２の重鎖可変ドメイン及び抗体１２Ｂ１２−Ｌ１の軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗体１２Ｂ１２−Ｈ２の重鎖可変ドメイン及び抗体１２Ｂ１２−Ｌ２の軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗体１２Ｂ１２−Ｈ２の重鎖可変ドメイン及び抗体１２Ｂ１２−Ｌ３の軽鎖可変ドメインを含む。
【０１８０】
いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９モノクローナル抗体２Ｄ４である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、２Ｄ４と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体２Ｄ４の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を含む、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体２Ｄ４の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体２Ｄ４の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３と、軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３とを含む、単離された抗体である。
【０１８１】
いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９モノクローナル抗体２Ｄ５である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、２Ｄ５と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体２Ｄ５の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を含む、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体２Ｄ５の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体２Ｄ５の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３と、軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３とを含む、単離された抗体である。
【０１８２】
いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９モノクローナル抗体５Ｂ１である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、５Ｂ１と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体５Ｂ１の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を含む、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体５Ｂ１の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体５Ｂ１の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３と、軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離された抗体である。
【０１８３】
いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９モノクローナル抗体６Ｂ２である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、６Ｂ２と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体６Ｂ２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体６Ｂ２の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体６Ｂ２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３と、軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３とを含む、単離された抗体である。
【０１８４】
いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９モノクローナル抗体６Ｄ８である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、６Ｄ８と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体６Ｄ８の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を含む、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体６Ｄ８の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体６Ｄ８の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３と、軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３とを含む、単離された抗体である。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９モノクローナル抗体７Ｈ１２である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、７Ｈ１２と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体７Ｈ１２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を含む、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体７Ｈ１２の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体７Ｈ１２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３と、軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３とを含む、単離された抗体である。
【０１８６】
いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９モノクローナル抗体５Ｃ６である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、５Ｃ６と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープに結合する、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体５Ｃ６の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を含む、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体５Ｃ６の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体５Ｃ６の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３と、軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３とを含む、単離された抗体である。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９モノクローナル抗体１２Ｂ１２である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、１２Ｂ１２と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープと結合する、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体１２Ｂ１２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を含む、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体１２Ｂ１２の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体１２Ｂ１２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３と、軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３とを含む、単離された抗体である。
【０１８８】
いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９モノクローナル抗体１７Ｃ２である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、１７Ｃ２と本質的に同じＴＲＥＭ２エピトープと結合する、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体１７Ｃ２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を含む、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体１７Ｃ２の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、モノクローナル抗体１７Ｃ２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３と、軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３とを含む、単離された抗体である。
【０１８９】
本開示のいずれの抗体も、細胞株によって産生することができる。いくつかの実施形態において、細胞株は、哺乳動物細胞株であってよい。ある特定の実施形態において、細胞株は、ハイブリドーマ細胞株であってよい。他の実施形態において、細胞株は、酵母細胞株であってよい。抗体産生に適した当該技術分野において既知の任意の細胞株を使用して、本開示の抗体を産生することができる。抗体産生のための例示的な細胞株は、本開示全体に記載されている。
【０１９０】
いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２、及び１７Ｃ２から選択される抗Ｓｉｇｌｅｃ−９モノクローナル抗体である。特定の実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、アンタゴニスト抗体である。特定の実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、アゴニスト抗体または不活性抗体である。
【０１９１】
抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の結合親和性
ヒトＳｉｇｌｅｃ−９、哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９またはその両方に対する抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の解離定数（ＫＤ）は、１００ｎＭ未満、９０ｎＭ未満、８０ｎＭ未満、７０ｎＭ未満、６０ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、４０ｎＭ未満、３０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、９．５ｎＭ未満、９ｎＭ未満、８．５ｎＭ未満、８ｎＭ未満、７．５ｎＭ未満、７ｎＭ未満、６．９ｎＭ未満、６．８ｎＭ未満、６．７ｎＭ未満、６．６ｎＭ未満、６．５ｎＭ未満、６．４ｎＭ未満、６．３ｎＭ未満、６．２ｎＭ未満、６．１ｎＭ未満、６ｎＭ未満、５．９ｎＭ未満、５．８ｎＭ未満、５．７ｎＭ未満、５．６ｎＭ未満、５．５ｎＭ未満、５．４ｎＭ未満、５．３ｎＭ未満、５．２ｎＭ未満、５．１ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４．５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３．５ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２．９ｎＭ未満、２．８ｎＭ未満、２．７ｎＭ未満、２．６ｎＭ未満、２．５ｎＭ未満、２．４ｎＭ未満、２．３ｎＭ未満、２．２ｎＭ未満、２．１ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１．５ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．９ｎＭ未満、０．８ｎＭ未満、０．７９ｎＭ未満、０．７８ｎＭ未満、０．７７ｎＭ未満、０．７６ｎＭ未満、０．７５ｎＭ未満、０．７４ｎＭ未満、０．７３ｎＭ未満、０．７２ｎＭ未満、０．７１ｎＭ未満、０．７０ｎＭ未満、０．６ｎＭ未満、０．５９ｎＭ未満、０．５８ｎＭ未満、０．５７ｎＭ未満、０．５６ｎＭ未満、０．５５ｎＭ未満、０．５４ｎＭ未満、０．５３ｎＭ未満、０．５２ｎＭ未満、０．５１ｎＭ未満、０．５０ｎＭ未満、０．４ｎＭ未満、０．３ｎＭ未満、０．２９ｎＭ未満、０．２８ｎＭ未満、０．２７ｎＭ未満、０．２６ｎＭ未満、０．２５ｎＭ未満、０．２４ｎＭ未満、０．２３ｎＭ未満、０．２２ｎＭ未満、０．２１ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満、または０．０５ｎＭ未満（すなわち、５０ｐＭ）であり得る。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９、哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ−９またはその両方に対して、１０ｎＭ未満〜１０ｐＭ未満（すなわち、０．０１ｎＭ）の範囲の解離定数（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９に対して、約９ｎＭ〜約３００ｐＭの範囲または３００ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９に対して、約９ｎＭ〜約２３０ｐＭの範囲または２３００ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ）を有する。解離定数は、任意の解析技法、例えば、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、バイオレイヤー干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏによるＯｃｔｅｔ  Ｓｙｓｔｅｍ参照）、等温滴定カロリメトリー（ＩＴＣ）、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）、円二色性（ＣＤ）、ストップトフロー分析及び比色または蛍光タンパク質融解分析などの任意の生化学的または生物物理学的技法によって決定することができる。いくつかの実施形態において、ＫＤは、一価形態の完全長抗体を使用して決定される。いくつかの実施形態において、ＫＤは、例えば、本明細書に記載されるような表面プラズモン共鳴アッセイまたはＦｏｒｔｅｂｉｏアッセイを利用して決定される（例えば、実施例１参照）。
【０１９２】
更なる抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体、例えば、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に特異的に結合する抗体は、その物理的／化学的性質及び／または生物活性について、当該技術分野において既知の種々のアッセイによって、特定され、スクリーニングされ、かつ／または特性評価され得る。
【０１９３】
Ｆｃγ受容体と結合できる抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｆｃγ受容体に結合する能力を保持する。いくつかの実施形態において、かかる抗体は、受容体活性化と合致する正確なエピトープ特異性を有するとき、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体をクラスター化し、一時的に刺激する特徴を有し得る。いくつかの実施形態において、かかる抗体は、その後、Ｓｉｇｌｅｃ−９の分解、Ｓｉｇｌｅｃ−９の脱感作、Ｓｉｇｌｅｃ−９の切断、Ｓｉｇｌｅｃ−９の内在化、Ｓｉｇｌｅｃ−９の遊離、Ｓｉｇｌｅｃ−９発現の下方制御及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９のリソソーム分解を誘導することによって、Ｓｉｇｌｅｃ−９発現及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質の１つ以上の活性の長期持続的阻害物質として作用し得る。
【０１９４】
ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、考えられる多数の機序のうちのいずれか１つ以上によって、受容体をクラスター化し、Ｓｉｇｌｅｃ−９を一時的に活性化することができる。ＩｇＧ２などのヒト抗体のいくつかのアイソタイプは、その特有の構造により、受容体をクラスター化し、または受容体をクラスター化構造に保持する固有の能力を有することで、Ｆｃ受容体に結合することなく、Ｓｉｇｌｅｃ−９などの受容体を一時的に活性化する（例えば、Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，１３８−１４８）。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、他の抗体は、隣接する細胞上のＦｃｇ受容体に結合することによって、受容体（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９）をクラスター化することができる。いくつかの実施形態において、抗体の定常ＩｇＧ  Ｆｃ領域がＦｃｇ受容体に結合すると、抗体の凝集が生じ得、次に、これらの抗体がその可変領域を介して受容体に結合し、受容体を凝集させ得る（Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ（２００８）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ，４５：３９２６−３９３３；及びＷｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １９，１０１−１１３）。いくつかの実施形態において、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗体をクラスター化するには、サイトカイン分泌、酸化的バースト、食作用の増加及び抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の増大を誘起しない抑制性Ｆｃｇ受容体ＦｃｇＲ（ＦｃｇＲＩＩＢ）への結合が、有害な免疫応答作用を伴わないため、好ましい方法である。
【０１９６】
本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が受容体をクラスター化できる機序には他の機序もある。例えば、一緒に架橋された抗体断片（例えば、Ｆａｂ断片）を使用すると、上記のように、Ｆｃｇ受容体と結合するＦｃ領域を有する抗体と同様の形態で、受容体（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９）をクラスター化することができる。いくつかの実施形態において、架橋された抗体断片（例えば、Ｆａｂ断片）は、細胞表面上で受容体クラスタリングを誘導し、標的（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９）上の適切なエピトープと結合する場合、アゴニスト抗体として一時的に機能することができる。
【０１９７】
したがって、いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質と結合する本開示の抗体は、そのエピトープ特異性により、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を一時的に活性化した後、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を阻害し（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルの低下により）、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を阻害するアゴニスト抗体を含み得る。いくつかの実施形態において、かかる抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９上のリガンド結合部位に結合して天然リガンドの作用を一時的に再現し得る。あるいは、かかる抗体は、リガンド結合部位ではない１つ以上のドメインに結合することによって標的抗原を刺激してシグナルを伝達し得る。いくつかの実施形態において、かかる抗体は、リガンド結合に干渉しない。いくつかの実施形態において、抗体がＳｉｇｌｅｃ−９上のリガンド結合部位に結合するかしないかにかかわらず、その抗体は、その後、Ｓｉｇｌｅｃ−９の分解、Ｓｉｇｌｅｃ−９の脱感作、Ｓｉｇｌｅｃ−９の切断、Ｓｉｇｌｅｃ−９の内在化、Ｓｉｇｌｅｃ−９の遊離、Ｓｉｇｌｅｃ−９発現の下方制御及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９のリソソーム分解を誘導することによって、Ｓｉｇｌｅｃ−９発現及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質の１つ以上の活性の長期持続的阻害物質として作用し得る。
【０１９８】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質の１つ以上の活性を一時的に誘導する一過性アゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、細胞内で発現しているＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合した後、その１つ以上の活性を一時的に誘導する。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質は、細胞表面上に発現される。いくつかの実施形態において、本開示の一過性抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体によって一時的に誘導されるＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質の１つ以上の活性は、限定するものではないが、Ｓｙｋ、ＬＣＫ、ＦＹＭ及び／またはＺＡＰ７０などのＳｒｃファミリーチロシンキナーゼによるＴｙｒ−４３３及びＴｙｒ−４５６のリン酸化；チロシン特異性タンパク質ホスファターゼＳＨＰ１及びＳＨＰ２の動員及び結合；Ｄｙｎａｍｉｎｉ−１のグアニンヌクレオチド交換因子として作用するＰＬＣ−γ１の動員及び結合；ＳＨ２−ドメイン含有タンパク質（例えば、Ｃｒｋｌ）の動員及び結合；脾臓チロシンキナーゼＳｙｋの動員及び結合；ＳＨ３−ＳＨ２−ＳＨ３成長因子受容体結合タンパク質２（Ｇｒｂ２）の動員及び結合；多数のＳＨ２含有タンパク質の動員及び結合；ＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＩＬ−１α、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＣＲＰ、ＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１−βなどの１つ以上の炎症促進性サイトカインの発現調節；マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球及びミクログリア細胞から選択される１つ以上の細胞における１つ以上の炎症促進性サイトカインの発現調節；１つ以上の抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１Ｒａ、Ｇ−ＣＳＦ）及びＴＮＦ、ＩＦＮ−β１ａ、ＩＦＮ−β１ｂまたはＩＬ−６の可溶性受容体の発現上昇；マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球及びミクログリア細胞から選択される１つ以上の細胞における１つ以上の抗炎症性サイトカインの発現調節；Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ及びＰＹＣＡＲＤから選択される１つ以上のタンパク質の発現調節；細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化の阻害；１つ以上の細胞タンパク質に対するチロシンリン酸化の減少（ここで、任意に、１つ以上の細胞タンパク質はＺＡＰ−７０を含み、チロシンリン酸化はＺＡＰ−７０のＴｙｒ−３１９に生じる）；Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現調節；ＣＣＬ１９発現細胞及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞走化性の阻害；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア��Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、Ｍ２ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球及びＭ２  ＮＫ細胞から選択される１つ以上の細胞によって誘導されるＴ細胞増殖の減少；破骨細胞生成の阻害、破骨細胞形成速度の低下またはその両方；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の生存低下；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の増殖低下；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の遊走阻害；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の１つ以上の機能の阻害；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の成熟阻害；アポトーシス性ニューロンクリアランス、神経組織破片クリアランス、機能不全シナプスクリアランス、非神経組織破片クリアランス、細菌クリアランス、他の異物クリアランス、病因タンパク質クリアランス、病因ペプチドクリアランス及び腫瘍細胞クリアランスから選択される１種以上のクリアランスの阻害（ここで、��意に、病因タンパク質は、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択され、腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫及び甲状腺癌から選択されるがんに由来する）；アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、機能不全シナプス、非神経組織破片、細菌、他の異物、病因タンパク質、病因ペプチド、病因核酸または腫瘍細胞のうちの１つ以上の食作用の阻害（ここで、任意に、病因核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡであり、病因タンパク質は、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択され、腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫または甲状腺癌から選択されるがんに由来する）；腫瘍細胞に対するＳｉｇｌｅｃ−９リガンドの結合；好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、マクロファージ及びＮＫ細胞から選択される細胞に対するＳｉｇｌｅｃ−９リガンドの結合；ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上による腫瘍細胞殺傷の阻害；ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上の抗腫瘍細胞増殖活性の阻害；ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上の抗腫瘍細胞転移活性の阻害；１つ以上のＩＴＡＭモチーフ含有受容体の阻害（ここで、任意に、１つ以上のＩＴＡＭモチーフ含有受容体は、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、Ｓｉｒｐβ、ＦｃｇＲ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２から選択される）；１つ以上のパターン認識受容体（ＰＲＲ）によるシグナル伝達の阻害（ここで、任意に、１つ以上のＰＲＲは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を特定する受容体、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を特定する受容体及びこれらの任意の組み合わせから選択される）；モチーフＤ／Ｅｘ０−２ＹｘｘＬ／ＩＸ６−８ＹｘｘＬ／Ｉ（配列番号２５２）を含む１つ以上の受容体の阻害；１つ以上のＴｏｌｌ様受容体によるシグナル伝達の阻害；ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路の阻害；活性化Ｂ細胞の核内因子κ軽鎖エンハンサー（ＮＦκＢ）
の阻害；ＩＴＡＭモチーフ含有受容体の脱リン酸化；１つ以上の炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または免疫細胞に発現する受容体の発現調節（ここで、任意に、１つ以上の炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または免疫細胞に発現する受容体は、ＣＤ８６、Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ、及び／またはＰＹＣＡＲＤを含み、１つ以上の炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または免疫細胞に発現する受容体は、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上に発現している）；１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９依存的遺伝子の発現上昇；破壊されたＳｉｇｌｅｃ−９依存的遺伝子発現の正常化；１つ以上のＩＴＡＭ依存的遺伝子の発現低下（ここで、任意に、１つ以上のＩＴＡＭ依存的遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子によって活性化される）；免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の機能の促進または救援；免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の腫瘍への浸潤増加；腫瘍、末梢血または他のリンパ系器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞の数の増加；骨髄由来抑制細胞の腫瘍促進活性の向上；腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現上昇（ここで、任意に、腫瘍促進性サイトカインはＴＧＦ−βまたはＩＬ−１０である）；腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤の増加；骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の腫瘍促進活性の向上；腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球の活性低下；腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性ＮＫ細胞の浸潤減少；ＮＫ細胞の潜在的腫瘍殺傷能力の低下；免疫応答を増大させる能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｂリンパ球の浸潤減少；腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球の浸潤減少；腫瘍体積の増加；腫瘍成長速度の増加；転移の増加；腫瘍再発率の増加；抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法または１つ以上のがんワクチンの有効性の低下（ここで、任意に、１つ以上の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＳＦ−１受容体及びこれらの任意の���み合わせから選択される１つ以上の標的タンパク質を標的にする免疫療法である）；ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害；ならびにＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害を含み得る。本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、当該技術分野において既知である及び本明細書で開示される任意の好適な技法またはアッセイを利用して、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質の１つ以上の活性を一時的に誘導する能力について試験することができる。かかる抗体が一時的に誘導する活性に関係なく、当該抗体は、その後、Ｓｉｇｌｅｃ−９の分解、Ｓｉｇｌｅｃ−９の脱感作、Ｓｉｇｌｅｃ−９の切断、Ｓｉｇｌｅｃ−９の内在化、Ｓｉｇｌｅｃ−９の遊離、Ｓｉｇｌｅｃ−９発現の下方制御及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９のリソソーム分解を誘導することによって、Ｓｉｇｌｅｃ−９発現及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質の１つ以上の活性の長期持続的阻害物質として作用し得る。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｆｃ受容体への結合とは関係なく、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質の１つ以上の活性を一時的に誘導する。
【０１９９】
例示的な抗体Ｆｃアイソタイプ及び修飾を以下の表Ｃに記載する。いくつかの実施形態において、Ｆｃγ受容体と結合できる本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、以下の表Ｃ中に列挙されるＦｃアイソタイプを有する。
表Ｃ：Ｆｃγ受容体と結合できる、例示的な抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体Ｆｃアイソタイプ
2019500014.tif 000007
2019500014.tif 000008
【０２００】
表Ｃ中に記載されるアイソタイプに加えて、理論に束縛されることを望むものではないが、ヒトＦｃｇ受容体Ｉ、ＩＩＡ、ＩＩＣ、ＩＩＩＡ、ＩＩＩＢならびに／またはマウスＦｃｇ受容体Ｉ、ＩＩＩ及びＩＶと結合する、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプ及びその変異体を含む抗体（例えば、Ｓｔｒｏｈｌ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２００９，２０：６８５−６９１）も同様に一過性アゴニスト抗体として作用し得ると考えられる。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、Ｆｃγ受容体結合抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラスまたはＩｇＡクラスのものである。いくつかの実施形態において、Ｆｃγ受容体結合抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。
【０２０２】
特定の実施形態において、Ｆｃγ受容体結合抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。いくつかの実施形態において、Ｆｃγ受容体結合抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含有する。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃγ受容体結合抗体は、抑制性Ｆｃ受容体と結合する。特定の実施形態において、抑制性Ｆｃ受容体は、抑制性Ｆｃ−γ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含有する。例えば、いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含有する（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｖ２３４Ａ（Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７−１５４３．３１；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６−２６）、Ｇ２３７Ａ（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，６８：５６３−５７１）、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ（ＵＳ２００７／０１４８１６７；Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２９：２６１３−２６２４；Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｔｈｅ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７；Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｔｈｅ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７）、Ｃ２３２Ｓ及び／またはＣ２３３Ｓ（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，１３８−１４８）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ（Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，４５：３９２６−３９３３）、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及び／またはＴ２５６Ｅから選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則に従うものである。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、Ｆｃγ受容体結合抗体は、Ｃ１２７Ｓアミノ酸置換を含有する重鎖定常ドメインを含むＩｇＧ２アイソタイプを有し、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則に従うものである（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，１３８−１４８；Ｌｉｇｈｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＣＩＥＮＣＥ  １９：７５３−７６２；及びＷＯ２００８０７９２４６）。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、Ｆｃγ受容体結合抗体は、Ｃ２１４Ｓアミノ酸置換を含有するκ軽鎖定常ドメインを含むＩｇＧ２アイソタイプを有し、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則に従うものである（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，１３８−１４８；Ｌｉｇｈｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＣＩＥＮＣＥ  １９：７５３−７６２；及びＷＯ２００８０７９２４６）。
【０２０５】
特定の実施形態において、Ｆｃγ受容体結合抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。いくつかの実施形態において、Ｆｃγ受容体結合抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含有する。いくつかの実施形態において、Ｆｃγ受容体結合抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含有する。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃγ受容体結合抗体は、抑制性Ｆｃ受容体と結合する。特定の実施形態において、抑制性Ｆｃ受容体は、抑制性Ｆｃ−γ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含有する。例えば、いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含有する（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ（Ｂｏｌｔ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３：４０３−４１１）、Ｄ２６５Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６，６５９１−６６０４）、Ｄ２７０Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９２：１１９８０−１１９８４；Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７−１５４３．３１；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６−２６）、Ｇ２３７Ａ（Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７−１５４３．３１；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６−２６）、Ｐ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５−１１９２）、Ｐ３３１Ｓ（Ｓａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２００８，１０５：２０１６７−２０１７２）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ｑ、Ｐ２３８Ｓ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ及び／またはＴ３９４Ｄから選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則に従うものである。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプの重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含む（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，１３８−１４８）。特定の実施形態において、ＩｇＧ２アイソタイプのＣＨ１及びヒンジ領域は、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１７１）のアミノ酸配列を含有する。いくつかの実施形態において、抗体Ｆｃ領域は、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換もしくはその両方、及び／またはＮ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含有し、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則に従うものである。
【０２０７】
特定の実施形態において、Ｆｃγ受容体結合抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。いくつかの実施形態において、Ｆｃγ受容体結合抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含有する。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃγ受容体結合抗体は、抑制性Ｆｃ受容体と結合する。特定の実施形態において、抑制性Ｆｃ受容体は、抑制性Ｆｃ−γ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含有する。例えば、いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含有する（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ（Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６４：１９２５−１９３３）、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及び／またはＴ２５６Ｅから選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則に従うものである。
【０２０８】
特定の実施形態において、Ｆｃγ受容体結合抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する。いくつかの実施形態において、Ｆｃγ受容体結合抗体は、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０（ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリングに従う）と、ヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７（ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリングに従う）とを含有するアミノ酸配列を含む（ＷＯ１９９７／１１９７１；ＷＯ２００７／１０６５８５）。
【０２０９】
特定の実施形態において、抗体は、マウスＩｇＧ４定常領域を含有する（Ｂａｒｔｈｏｌｏｍａｅｕｓ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９２，２０９１−２０９８）。
【０２１０】
いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５ＥまたはＰ３３１Ｓ（ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリングに従う）及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の追加のアミノ酸置換を更に含有する。
【０２１１】
不活性抗体
本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の別のクラスには、不活性抗体が含まれる。本明細書で使用されるとき、「不活性」抗体は、その標的抗原（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９）と特異的に結合するが、抗原機能を調節しない（例えば、機能の低下／阻害をしないまたは活性化／誘導をしない）抗体を指す。例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９の場合、不活性抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを調節せず、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を調節せず、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質の１つ以上の活性を調節しない。いくつかの実施形態において、細胞表面上でＳｉｇｌｅｃ−９をクラスター化する能力を有しない抗体は、受容体活性化と合致するエピトープ特異性を有している場合であっても、不活性抗体であり得る。
【０２１２】
いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質と結合する抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合するが、そのエピトープ特異性または特徴により、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させず、かつ／またはＳｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を阻害しない抗体を含み得る。いくつかの実施形態において、かかる抗体は、例えば、毒素（例えば、化学療法薬）を腫瘍細胞へ輸送するためのカーゴとして使用することができる。かかる抗体は、カリケアマイシンのクラス由来の細胞傷害薬にコンジュゲートして急性骨髄性白血病腫瘍を標的化及び殺傷するために使用するゲムツズマブ・ゾガマイシンなどの、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させる現在市販されている抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体よりも優れ得る（Ｎａｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００），Ｌｅｕｋｅｍｉａ，１４，１４３６−１４４３；Ｒｉｃａｒｔ（２０１１）Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １７；６４１７−６４３６；Ｈａｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｊｏｕｒｎａｌ：Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１３，４７−５８；Ｂｅｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ７；１４９０−６；及びＭａｌｉｋ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１−１４．）。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させない抗体は、別の毒素コンジュゲート抗体によって標的化される腫瘍細胞表面上のＳｉｇｌｅｃ−９をそのままの状態に残しておくので、本開示の不活性抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ゲムツズマブ・ゾガマイシンなどの市販抗体よりも優れ得る。対照的に、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させる抗体は、細胞表面からＳｉｇｌｅｃ−９を取り除くので、毒素コンジュゲート抗体による更なる標的化から腫瘍細胞を保護することになる。したがって、いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合するが、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させたり、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を阻害したり、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質の１つ以上の活性を誘導したりすることができない不活性抗体である。
【０２１３】
細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させる抗体または低下させない抗体は、１つ以上のＦｃｇ受容体への結合の減少を示す不活性Ｆｃ領域と組み合わせることができる。このようなＦｃ領域及び修飾の例を以下の表Ｄに記載する。いくつかの実施形態において、不活性Ｆｃ領域を含む抗体は、以下の表Ｄ中に列挙されるＦｃアイソタイプを有する。
【０２１４】
抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体
本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の３つ目のクラスには、アンタゴニスト抗体が含まれる。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質と結合する抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させ、Ｓｉｇｌｅｃ−９及び／または１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドの間の相互作用（例えば、結合）を阻害し、かつＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質の１つ以上の活性を阻害するアンタゴニスト抗体を含み得る。かかる抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を妨げるか、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドの存在下でＳｉｇｌｅｃ−９の細胞外ドメインから細胞質内へのシグナル伝達を妨げるかのいずれかによって、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質の１つ以上の活性を阻害する。アンタゴニスト抗体はまた、Ｓｉｇｌｅｃ−９の分解、Ｓｉｇｌｅｃ−９の脱感作、Ｓｉｇｌｅｃ−９の切断、Ｓｉｇｌｅｃ−９の内在化、Ｓｉｇｌｅｃ−９の遊離、Ｓｉｇｌｅｃ−９発現の下方制御及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９のリソソーム分解を誘導することにより、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させることによって、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質の１つ以上の活性を阻害することができる。いくつかの実施形態において、かかる抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９を一時的に活性化し得ない。
【０２１５】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体は、本開示の一過性抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体のエピトープ特異性を有し得るが、Ｆｃｇ受容体と結合することができないＦｃドメインを有しているため、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９を一時的にクラスター化し、活性化することはできない。
【０２１６】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体は、限定するものではないが、次の活性：１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンド（例えば、シアル酸含有糖脂質またはシアル酸含有糖タンパク質）に対するＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質の結合を減少させる能力、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質に対するサイトカインシグナル伝達抑制因子（ＳＯＣＳ）タンパク質（例えば、ＳＯＣＳ３タンパク質）の結合を減少させる能力、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質のプロテアソーム分解を増加させる能力、循環性の樹状細胞、マクロファージ、単球、Ｔ細胞及び／またはミクログリアの表面上におけるＳｉｇｌｅｃ−９の機能的発現を低下させる能力、Ｓｙｋ、ＬＣＫ、ＦＹＭ及び／またはＺＡＰ７０などのＳｒｃファミリーチロシンキナーゼによるＴｙｒ−４３３及びＴｙｒ−４５６のリン酸化を減少させ、または阻害する能力；チロシン特異性タンパク質ホスファターゼＳＨＰ１及びＳＨＰ２の動員及び結合を阻害する能力；Ｄｙｎａｍｉｎｉ−１のグアニンヌクレオチド交換因子として作用するＰＬＣ−γ１の動員及び結合を阻害する能力；ＳＨ２−ドメイン含有タンパク質（例えば、Ｃｒｋｌ）の動員及び結合を阻害する能力；脾臓チロシンキナーゼＳｙｋの動員及び結合を阻害する能力；ＳＨ３−ＳＨ２−ＳＨ３成長因子受容体結合タンパク質２（Ｇｒｂ２）の動員及び結合を阻害する能力；多数のＳＨ２含有タンパク質の動員及び結合を阻害する能力；１つ以上の炎症促進性サイトカインの発現を調節する能力（ここで、任意に、１つ以上の抗炎症性サイトカインは、ＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＩＬ−１α、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１−βから選択される）；マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球及びミクログリア細胞から選択される１つ以上の細胞における１つ以上の炎症促進性サイトカインの発現を調節する能力；１つ以上の抗炎症性サイトカイン（ここで、任意に、１つ以上の抗炎症性サイトカインは、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１Ｒａ、Ｇ−ＣＳＦから選択される）及びＴＮＦ、ＩＦＮ−β１ａ、ＩＦＮ−β１ｂまたはＩＬ−６の可溶性受容体の発現を調節する能力；マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球及びミクログリア細胞から選択される１つ以上の細胞における１つ以上の抗炎症性サイトカインの発現を調節する能力；Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ及びＰＹＣＡＲＤから選択される１つ以上のタンパク質の発現を調節する能力；細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化��阻害を中和する能力；１つ以上の細胞タンパク質に対するチロシンリン酸化の減少を妨げる能力（ここで、任意に、１つ以上の細胞タンパク質はＺＡＰ−７０を含み、チロシンリン酸化はＺＡＰ−７０のＴｙｒ−３１９に生じる）；Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現を調節する能力；ＣＣＬ１９発現細胞及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞走化性の阻害を妨げる能力；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、Ｍ２ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球及びＭ２  ＮＫ細胞から選択される１つ以上の細胞によって誘導されるＴ細胞増殖の減少を妨げる能力；破骨細胞生成の阻害を妨げる能力、破骨細胞形成速度の低下を妨げる能力、またはその両方；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の生存低下を妨げる能力；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の増殖低下を妨げる能力；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の遊走を増大させる能力；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の１つ以上の機能の低下を妨げる能力；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  Ｎ��細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の成熟を高める能力；アポトーシス性ニューロンクリアランス、神経組織破片クリアランス、機能不全シナプスクリアランス、非神経組織破片クリアランス、細菌クリアランス、他の異物クリアランス、病因タンパク質クリアランス、病因ペプチドクリアランス及び腫瘍細胞クリアランスから選択される１種以上のクリアランスを高める能力（ここで、任意に、病因タンパク質は、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択され、腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫及び甲状腺癌から選択されるがんに由来する）；アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、機能不全シナプス、非神経組織破片、細菌、他の異物、病因タンパク質、病因ペプチド、病因核酸または腫瘍細胞のうちの１つ以上の食作用の阻害（ここで、任意に、病因核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡであり、病因タンパク質は、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択され、腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫または甲状腺癌から選択されるがんに由来する）；腫瘍細胞に対するＳｉｇｌｅｃ−９リガンドの結合；好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、マクロファージ及びＮＫ細胞から選択される細胞に対するＳｉｇｌｅｃ−９リガンドの結合；ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上による腫瘍細胞殺傷の阻害；ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上の抗腫瘍細胞増殖活性の活性化；ミクログリア、マクロファージ、
好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上の抗腫瘍細胞転移活性を高める能力；１つ以上のＩＴＡＭモチーフ含有受容体の活性を高める能力（ここで、任意に、１つ以上のＩＴＡＭモチーフ含有受容体は、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＳＩＲＰβ、Ｆｃγ受容体（ＦｃｇＲ）
、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２から選択される）；１つ以上のパターン認識受容体（ＰＲＲ）によるシグナル伝達を高める能力（ここで、任意に、１つ以上のＰＲＲは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を特定する受容体、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を特定する受容体及びこれらの任意の組み合わせから選択される）；モチーフＤ／Ｅｘ０−２ＹｘｘＬ／ＩＸ６−８ＹｘｘＬ／Ｉ（配列番号２５２）を含む１つ以上の受容体の活性を高める能力；１つ以上のＴｏｌｌ様受容体によるシグナル伝達を高める能力；ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路を強化する能力；活性化Ｂ細胞の核内因子κ軽鎖エンハンサー（ＮＦκＢ）の活性を高める能力；ＩＴＡＭモチーフ含有受容体のリン酸化を増加させる能力；１つ以上の炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または免疫細胞に発現する受容体の発現を上昇させる能力（ここで、任意に、１つ以上の炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または免疫細胞に発現する受容体は、ＣＤ８６、Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ、及び／またはＰＹＣＡＲＤを含み、１つ以上の炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または免疫細胞に発現する受容体は、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上に発現している）；１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９依存的遺伝子の発現を低下させる能力；１つ以上のＩＴＡＭ依存的遺伝子の発現を強める能力（ここで、任意に、１つ以上のＩＴＡＭ依存的遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子によって活性化される）；免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の分化を減少させるか、別様に阻害する能力；免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の機能性を低下させるか、別様に阻害する能力；免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の腫瘍への浸潤を減少させるか、別様に阻害する能力；腫瘍、末梢血または他のリンパ系器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞の数を減少させるか、別様に阻害する能力；骨髄由来抑制細胞の腫瘍促進活性を低下させるか、別様に阻害する能力；腫瘍または末梢血におけるＴＧＦ−βまたはＩＬ−１０などの腫瘍促進性サイトカインの発現を低下させるか、別様に阻害する能力；腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤を減少させるか、別様に阻害する能力；骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の腫瘍促進活性を低下させるか、別様に阻害する能力；腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球を増加させるか、別様に向上させる能力；腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性ＮＫ細胞の浸潤を増加させるか、別様に向上させる能力；ＮＫ細胞の潜在的腫瘍殺傷能力を増加させるか、別様に向上させる能力；免疫応答を増大させる能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｂリンパ球の浸潤を増加させるか、別様に向上させる能力；腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球を増加させるか、別様に向上させる能力；腫瘍体積を減少させる能力；腫瘍成長速度を減少させる能力；転移を減少させるか、別様に阻害する能力；腫瘍再発率を低下させる能力；抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法または１つ以上のがんワクチンの有効性を増加させるか、別様に向上させる能力（ここで、任意に、１つ以上の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＳＦ−１受容体及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の標的タンパク質を標的にする免疫療法である）；ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員を増加させるか、別様に向上させる能力；ならびにＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達を増加させるか、別様に向上させる能力のうちの１つ以上を有する。
【０２１７】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体は、１つ以上のＦｃｇ受容体への結合の減少を示すＦｃ領域を有する。このようなＦｃ領域及び修飾の例を以下の表Ｄに記載する。いくつかの実施形態において、抗体は、以下の表Ｄ中に列挙されるＦｃアイソタイプを有する。
【０２１８】
Ｆｃγ受容体への結合を減じた抗体Ｆｃアイソタイプ
いくつかの実施形態において、Ｆｃγ受容体への結合を減じた抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、以下の表Ｄ中に列挙されるＦｃアイソタイプを有する。
表Ｄ：例示的なＦｃγ受容体への結合を減じた抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体Ｆｃアイソタイプ
2019500014.tif 000009
【０２１９】
特定の実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。いくつかの実施形態において、抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含有する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含有する。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含有する。例えば、いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含有する（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）。
【０２２０】
いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ（Ｂｏｌｔ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３：４０３−４１１）、Ｄ２７０Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５−１１９２）、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５−１１９２）、Ｐ２３８Ｓ（Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，３４：２２０４−２２１０）、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５−１１９２）、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ＲＬ．ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１−６０４）、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（Ｈｅｚａｒｅｈ，ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７５，１２１６１−１２１６８；Ｏｇａｎｅｓｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）．Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ  ６４，７００−７０４）、Ｐ３３１Ｓ（Ｏｇａｎｅｓｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ  ６４，７００−７０４）、Ｔ３９４Ｄ（Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＭＡｂｓ  ５（３）：４０６−４１７）、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及び／またはＴ２５６Ｅから選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則に従うものである。特定の実施形態において、Ｆｃ領域は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則に従ったグリシン２３６に相当する位置でのアミノ酸欠失を更に含む。
【０２２１】
いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則に従ったＣ２２０Ｓアミノ酸置換を含有する重鎖定常領域を含むＩｇＧ１アイソタイプを有する。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則に従ったＡ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ及び／またはＰ３３１Ｓから選択される１つ以上の更なるアミノ酸置換を更に含有する。特定の実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含有する。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含有する。例えば、いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含有する（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及び／またはＴ２５６Ｅから選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則に従うものである（Ｖａｆａ  Ｏ．ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６５：１１４−１２６）。
【０２２２】
特定の実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含有する。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含有する。例えば、いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含有する（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９２：１１９８０−１１９８４）、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ（Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６４：１９２５−１９３３；Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０（１）：１０５−８；ＵＳ８６１４２９９  Ｂ２；Ｖａｆａ  Ｏ．ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６５：１１４−１２６）、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ及び／またはＮ２９７Ｑから選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則に従うものである。
【０２２３】
いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及び／またはＴ２５６Ｅから選択される１つ以上の更なるアミノ酸置換を更に含有し、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則に従うものである。
【０２２４】
更なるＩｇＧ変異
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＩｇＧ１バリアントのうちの１つ以上は、補体活性化を排除するために、Ａ３３０Ｌ変異（Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１０３：４００５−４０１０）またはＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ及び／もしくはＰ３３１Ｓ変異のうちの１つ以上（Ｓａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１０５：２０１６７−２０１７２）と組み合わせることができ、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則に従うものである。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＩｇＧバリアントは、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体のヒト血清中半減期を向上させるために、１つ以上の変異と組み合わせることができる（例えば、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則に従ったＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ変異）（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２８１：２３５１４−２３５２４；及びＳｔｒｏｈｌ  ｅ  ａｌ．，（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０：６８５−６９１）。
【０２２５】
いくつかの実施形態において本開示のＩｇＧ４バリアントは、抗体の安定化を高めるために、ＥＵまたはＫａｂａｔナンバリング規則に従ったＳ２２８Ｐ変異（Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，３０：１０５−１０８）、及び／またはＰｅｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．１３；２８７（２９）：２４５２５−３３）に記載されている１つ以上の変異と組み合わせることができる。
【０２２６】
二重特異性抗体
本開示の特定の態様は、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質上の１つ以上のドメイン及び第２の抗原に結合する二重特異性抗体に関する。二重特異性抗体を作製する方法は、当該技術分野において既知であり、本明細書に記載される。いくつかの実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質の１つ以上のアミノ酸残基、例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号１）の１つ以上のアミノ酸残基、または配列番号１のアミノ酸残基に相当するＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態において、本開示の二重特異性抗体は、第１の抗原及び第２の抗原を認識する。いくつかの実施形態において、第１の抗原は、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質またはその天然バリアントである。いくつかの実施形態において、第２の抗原もまたＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質またはその天然バリアントである。いくつかの実施形態において、第２の抗原は、血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原である（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ  Ｒ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓ．３７（２０１０）４８−５７参照）。このような第２の抗原には、限定するものではないが、トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマ単一ドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、ＡＮＧ１００５などのアンジオペプペプチド（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ，２０１０参照）、ならびに血液脳関門内皮細胞上に豊富に存在する他の細胞表面タンパク質（例えば、Ｄａｎｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１０  Ｏｃｔ  ２９；５（１０）：ｅ１３７４１参照）が含まれる。いくつかの実施形態において、第２の抗原は、限定するものではないが、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドを含む、��因タンパク質である。いくつかの実施形態において、第２の抗原は、免疫細胞上に発現される１つ以上のリガンド及び／またはタンパク質であり、限定するものではないが、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、及びホスファチジルセリンを含む。いくつかの実施形態において、第２の抗原は、１つ以上の腫瘍細胞上に発現されるタンパク質、脂質、多糖または糖脂質である。
【０２２７】
抗体断片
本開示の特定の態様は、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質の天然バリアント及びＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質の疾患バリアントのうちの１つ以上に結合する抗体断片に関する。いくつかの実施形態において、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖまたはｓｃＦｖ断片である。
【０２２８】
いくつかの実施形態において、抗体断片は、第２のＳｉｇｌｅｃ−９抗体と組み合わせて、かつ／またはアミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドならびにこれらの任意の組み合わせから選択される病因タンパク質と特異的に結合する１つ以上の抗体と組み合わせて、またはＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ホスファチジルセリン及びこれらの任意の組み合わせから選択される免疫調節タンパク質と結合する１つ以上の抗体と組み合わせて、使用される。
【０２２９】
いくつかの実施形態において、本開示の抗体断片は、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体のいずれかと同じエピトープと結合する機能性断片であってもよい。いくつかの実施形態において、抗体断片は、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体または抗体断片を小型化したものであり、対応する完全長抗体と同じエピトープを有するが、分子量がかなり小さいものである。このような小型化した抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体断片は、脳透過能により優れ、半減期がより短くなり得るため、イメージング及び診断用途に有利である（例えば、Ｌｕｔｊｅ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ．２０１４  Ｆｅｂ  １９；２５（２）：３３５−４１；Ｔａｖａｒｅ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２０１４  Ｊａｎ  ２１；１１１（３）：１１０８−１３；及びＷｉｅｈｒ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｓｔａｔｅ．２０１４  Ｍａｙ；７４（７）：７４３−５５参照）。したがって、いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体断片は、対応する完全長抗体と比較してより良好な脳透過能を有し、かつ／または対応する完全長抗体と比較してより短い半減期を有する。
【０２３０】
抗体フレームワーク
本明細書に記載される抗体はいずれもフレームワークを更に含む。いくつかの実施形態において、フレームワークは、ヒト免疫グロブリンフレームワークである。例えば、いくつかの実施形態において、抗体（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、上記の実施形態のいずれかにおけるＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを更に含む。ヒト免疫グロブリンフレームワークは、ヒト抗体の一部分であり得、あるいは、非ヒト抗体は、１つ以上の内在性フレームワークをヒトフレームワーク領域（複数可）で置き換えることによってヒト化されてもよい。ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）参照）；軽鎖可変領域または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）参照）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）参照）；及びＦＲライブラリのスクリーニングから得られるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）参照）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２３１】
いくつかの実施形態において、抗体は、本開示のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、表４Ａ中に示される軽鎖フレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つまたは４つとを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、本開示のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域と、表３Ｂ中に示される重鎖フレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つまたは４つとを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、本開示のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、表４Ａ中に示される軽鎖フレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つまたは４つとを含み、更に、本開示のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域と、表４Ｂ中に示される重鎖フレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つまたは４つとを含む。
【０２３２】
抗体の調製
本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化及びキメラ抗体、ヒト抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ及びＦ（ａｂ’）２）、二重特異性及び多重特異性抗体、多価抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、コンジュゲート抗体、ライブラリ由来抗体、改変したエフェクター機能を有する抗体、抗体部分を含有する融合タンパク質、ならびに本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質のアミノ酸残基を有するエピトープなどの抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の改変形態（抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアント及び共有結合的に修飾された抗体を含む）を包含し得る。抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒト、ネズミ、ラットまたは任意の他の起源であってよい（キメラまたはヒト化抗体を含む）。
【０２３３】
（１）ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体、例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９ポリクローナル抗体は、一般に、関連抗原及びアジュバントの皮下（ｓｃ）注射または腹腔内（ｉｐ）注射を複数回行うことによって、動物内で産生される。関連抗原（例えば、本開示の精製または組み換えＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質）は、免疫する種において免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、血清アルブミン、ウシサイログロブリンまたはダイズトリプシン阻害剤に、二官能性または誘導化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介したコンジュゲート）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介する）、グルタールアルデヒド、コハク酸無水物、ＳＯＣｌ２、またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（式中、Ｒ及びＲ１は独立して低級アルキル基である）を使用して、コンジュゲートすることが有用であり得る。用いられ得るアジュバントの例には、フロイント完全アジュバント及びＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（モノホスホリルリピドＡ、合成トレハロースジコリノミコール酸エステル）が挙げられる。当業者であれば、過度な実験をすることなく、免疫付与プロトコルを選択することができる。
【０２３４】
所望の抗原、免疫原性コンジュゲートまたは誘導体に対する動物の免疫化は、例えば、１００μｇ（ウサギの場合）または５μｇ（マウスの場合）のタンパク質またはコンジュゲートを３倍量のフロイント完全アジュバントと合わせ、この溶液を複数部位に皮内注射することによってなされる。１ヶ月後、フロイント完全アジュバント中のペプチドまたはコンジュゲートの元の量の１／５〜１／１０を複数部位に皮下注射することによって動物に追加免疫を行う。７〜１４日後、動物から採血し、血清の抗体力価をアッセイする。力価が安定状態に達するまで、動物に追加免疫を行う。コンジュゲートはまた、組み換え細胞培養でタンパク質融合体として作製することができる。また、ミョウバンなどの凝集剤も免疫応答を高めるのに好適である。
【０２３５】
（２）モノクローナル抗体
抗Ｓｉｇｌｅｃ−９モノクローナル抗体などのモノクローナル抗体は、実質的に同種の抗体集団から得られるものであり、すなわち、その集団に含まれる個々の抗体は、微量で存在し得る可能性のある天然変異及び／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除き、同一である。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、別個の抗体の混合物ではない抗体の特徴を示す。
【０２３６】
例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）により最初に記載されたハイブリドーマ法を使用して作製され得、または組み換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号）によって作製され得る。
【０２３７】
ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物、例えばハムスターなどを上述のように免疫化すると、免疫化に使用されたタンパク質（例えば、本開示の精製または組み換えＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質）に特異的に結合する抗体を産生するか、産生することができるリンパ球が誘発される。あるいは、リンパ球は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫化され得る。その後、ポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用して、リンパ球をミエローマ細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。
【０２３８】
免疫剤は、典型的に、抗原性タンパク質（例えば、本開示の精製または組み換えＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質）またはその融合バリアントを含む。一般に、ヒト起源の細胞が所望される場合には、末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）が使用されるのに対し、非ヒト哺乳動物起源が所望される場合には、脾臓細胞またはリンパ節細胞が使用される。その後、ポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用して、リンパ球を不死化細胞株と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成する。Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８６），ｐｐ．５９−１０３．
【０２３９】
不死化細胞株は、通常、形質転換された哺乳動物細胞、特に齧歯類、ウシまたはヒト起源の骨髄腫細胞である。通常、ラットまたはマウスの骨髄腫細胞株が用いられる。このように調製されたハイブリドーマ細胞を播種し、融合していない親骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１つ以上の物質を好ましくは含有する好適な培養培地で成長させる。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマ用の培養培地は、典型的に、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を妨げる物質であるヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジン（ＨＡＴ培地）を含む。
【０２４０】
好ましい不死化骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による安定した高レベルの抗体産生を支援し、ＨＡＴ培地などの培地に感受性を示すものである。なかでも、ＭＯＰＣ−２１及びＭＰＣ−１１マウス腫瘍に由来するもの（Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡ）から入手可能）、ならびにＳＰ−２細胞及びその誘導体（例えば、Ｘ６３−Ａｇ８−６５３）（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ  ＵＳＡ）から入手可能）などのネズミ骨髄腫細胞株が好ましい。ヒト骨髄腫細胞株及びマウス−ヒト異種骨髄腫細胞株も、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７））。
【０２４１】
ハイブリドーマ細胞が成長している培養培地を、抗原（例えば、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質）に対して指向化されたモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）などのｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイによって決定される。
【０２４２】
ハイブリドーマ細胞を培養している培養培地を、所望の抗原（例えば、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質）に対して指向化されたモノクローナル抗体の存在についてアッセイすることができる。好ましくは、モノクローナル抗体の結合親和性及び結合特異性は、免疫沈降によって、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにより決定することができる。このような技法及びアッセイは、当該技術分野において既知である。例えば、結合親和性は、Ｍｕｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のスキャッチャード分析によって決定され得る。
【０２４３】
所望の特異性、親和性及び／または活性を有する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を特定した後、クローンを限界希釈法によってサブクローニングし、標準的な方法によって成長させることができる（Ｇｏｄｉｎｇ、上掲）。この目的に好適な培養培地には、例えば、Ｄ−ＭＥＭ培地またはＲＰＭＩ−１６４０培地が含まれる。加えて、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物中で腫瘍としてｉｎ  ｖｉｖｏ成長させてもよい。
【０２４４】
サブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製手順、例えば、タンパク質Ａ−セファロースクロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、親和性クロマトグラフィー及び上記の他の方法などによって、培養培地、腹水または血清から好適に分離される。
【０２４５】
抗Ｓｉｇｌｅｃ−９モノクローナル抗体はまた、組み換えＤＮＡ法、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に開示の方法及び上記の方法によって作製され得る。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、ネズミ抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合するオリゴヌクレオチドプローブを使用して）容易に単離及び配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好適な供給源として機能する。ＤＮＡが単離されたら、そのＤＮＡを発現ベクターに入れることができ、次いで、これを、組み換え宿主細胞中でモノクローナル抗体を合成するために、宿主細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または免疫グロブリンタンパク質を別様に産生しない骨髄腫細胞などにトランスフェクトする。抗体をコードするＤＮＡの細菌中での組み換え発現についての総説には、Ｓｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：２５６−２６２（１９９３）及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１３０：１５１−１８８（１９９２）が含まれる。
【０２４６】
特定の実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４（１９９０）に記載の技法を使用して生成された抗体ファージライブラリから単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）は、それぞれ、ファージライブラリからのマウス抗体及びヒト抗体の単離について記載している。後続の公開物は、鎖シャフリングによる高親和性（ナノモル（「ｎＭ」）範囲）のヒト抗体の産生（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２））、ならびに非常に大きいファージライブラリを構築するための戦略としてのコンビナトリアル感染及びｉｎ  ｖｉｖｏ組み換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２１：２２６５−２２６６（１９９３））について記載している。したがって、これらの技法は、所望の特異性を有するモノクローナル抗体（例えば、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質と結合するもの）を単離するための従来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ技法の実行可能な代替案である。
【０２４７】
抗体またはその断片をコードするＤＮＡはまた、例えば、ヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインのコード配列を相同ネズミ配列の代わりに置き換えることによって（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１（１９８４））、または免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全てもしくは一部を共有結合させることによって、改変することができる。典型的に、かかる非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常ドメインと置き換えるか、抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインと置き換えて、ある抗原に対する特異性を有する抗原結合部位と、異なる抗原に対する特異性を有する別の抗原結合部位とを含むキメラ二価抗体が作製される。
【０２４８】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体またはその断片）は、一価であり得、この調製については、当該技術分野において既知である。例えば、１つの方法は、免疫グロブリン軽鎖及び修飾された重鎖の組み換え発現を必要とする。重鎖は、重鎖架橋を防止するように、一般に、Ｆｃ領域内の任意の点で切断される。あるいは、関連するシステイン残基が、別のアミノ酸残基で置換され得るか、架橋を防止するように欠失される。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法も、一価抗体の調製に適している。抗体を消化して、その断片、特にＦａｂ断片を生成することは、当該技術分野において既知の常法を使用して達成することができる。
【０２４９】
キメラ抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体またはハイブリッド抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体もまた、架橋剤を必要とするものを含む、タンパク質合成化学の既知の方法を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで調製することができる。例えば、ジスルフィド交換反応を使用して、またはチオエーテル結合を形成することによって、免疫毒素を構築してもよい。この目的に好適な試薬の例には、イミノチオレート及びメチル−４−メルカプトブチルイミデートが挙げられる。
【０２５０】
（３）ヒト化抗体
本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体またはその抗体断片は、ヒト化抗体またはヒト抗体を更に含み得る。非ヒト（例えば、ネズミ）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含む、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合サブ配列）である。ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基が、所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲに由来する残基で置き換えられている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含む。場合により、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が、対応する非ヒト残基により置き換えられる。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見出されない残基を含み得る。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦＲ領域である。ヒト化抗体はまた、最適に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部を含む。Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）．
【０２５１】
非ヒト抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体のヒト化方法は、当該技術分野において既知である。概して、ヒト化抗体は、ヒト以外の供給源から導入された１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、「移入」残基と呼ばれ、典型的には「移入」可変ドメインから得られる。ヒト化は、本質的にＷｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  ｃｏ−ｗｏｒｋｅｒｓ，Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ    ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６（１９８８）の方法に従って行うことができ、または齧歯類のＣＤＲまたはＣＤＲ配列を、ヒト抗体の対応する配列の代わりに置き換えることによって行うことができる。したがって、このような「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインの実質的に小さい部分が、非ヒト種由来の対応する配列で置換されている、キメラ抗体である（米国特許第４，８１６，５６７号）。実際には、ヒト化抗体は、典型的に、いくつかのＣＤＲ残基と、場合により、いくつかのＦＲ残基とが齧歯類抗体の類似部位に由来する残基によって置換されているヒト抗体である。
【０２５２】
ヒト化抗体の作製に使用されるヒト可変ドメインの選択は、軽鎖と重鎖ドメインの両方とも、抗原性を低減させることが非常に重要である。いわゆる「ベストフィット」法では、齧歯類抗体の可変ドメインの配列を、既知のヒト可変ドメイン配列の全ライブラリに対してスクリーニングする。次いで、齧歯類の配列に最も近いヒト配列を、ヒト化抗体のヒトフレームワーク（ＦＲ）とする。Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７）．別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全ヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークをいくつかの異なるヒト化抗体に使用することができる。Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）．
【０２５３】
更に、抗体は、抗原に対する高い親和性及び他の好ましい生物学的特性を維持したままヒト化されることが重要である。この目的を達成するために、好ましい方法によれば、ヒト化抗体は、親配列及びヒト化配列の三次元モデルを使用して親配列と種々の概念上のヒト化産物について分析するプロセスによって、調製される。三次元免疫グロブリンモデルは一般に利用可能であり、当業者にはよく知られている。選択された免疫グロブリン候補配列から推定される三次元高次構造を例示及び表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示を検討することにより、当該免疫グロブリン候補配列の機能における残基の予想される役割の分析、すなわち、免疫グロブリン候補がその抗原と結合する能力に影響する残基の分析が可能となる。このようにして、標的抗原（複数可）（例えば、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質）に対する親和性の増大などの所望の抗体特性が達成されるように、レシピエント及び移入配列からＦＲ残基を選択し、組み合わせることができる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合への影響に直接的かつ最も実質的に関与している。
【０２５４】
種々の形態のヒト化抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が企図される。例えば、ヒト化抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｆａｂなどの抗体断片であってよく、任意に、免疫コンジュゲートを生成するために、１つ以上の細胞傷害薬（複数可）とコンジュゲートされる。あるいは、ヒト化抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、インタクトＩｇＧ１抗体などのインタクト抗体であってもよい。
【０２５５】
（４）ヒト抗体
あるいは、ヒト抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を作製してもよい。例えば、現在では、免疫化すると、内因性免疫グロブリンの産生がない状態でヒト抗体の完全レパートリーを産生することのできるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を作製することが可能である。内因性抗体産生は、キメラ及び生殖系列変異マウスで抗体重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子をホモ接合欠失させることにより、完全に阻害できる。このような生殖系列変異マウスにヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイを移すと、抗原刺激に際してヒト抗体が産生される。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７：３３（１９９３）；米国特許第５，５９１，６６９号及びＷＯ９７／１７８５２を参照されたい。
【０２５６】
あるいは、ファージディスプレイ法を使用して、未免疫ドナーの免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、ヒト抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体及び抗体断片をｉｎ  ｖｉｔｒｏで作製することができる。ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３（１９９０）；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１（１９９１）．この技法では、Ｍ１３またはｆｄなどの繊維状バクテリオファージのメジャーまたはマイナーのいずれかのコートタンパク質遺伝子に抗体Ｖドメイン遺伝子をインフレームでクローニングし、ファージ粒子の表面上に機能性抗体断片として提示させる。この繊維状粒子は、ファージゲノムの一本鎖ＤＮＡのコピーを含有しているので、抗体の機能性に基づいて選択すれば、当該特性を示す抗体をコードする遺伝子も選択される。したがって、ファージはＢ細胞の特性の一部を模倣する。ファージディスプレイは、種々の形態で実施することができ、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：５６４−５７１（１９９３）に概説されている。Ｖ遺伝子セグメントのいくつかの供給源をファージディスプレイに使用することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）は、免疫化マウスの脾臓から得られたＶ遺伝子の小さなランダムコンビナトリアルライブラリから、多種多様な抗オキサゾロン抗体を単離した。Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）またはＧｒｉｆｆｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４（１９９３）に記載の技法に本質的に従えば、未免疫のヒトドナーに由来するＶ遺伝子のレパートリーを構築することができ、多種多様な抗原（自己抗原を含む）に対する抗体を単離することができる。米国特許第５，５６５，３３２号及び同第５，５７３，９０５号も参照されたい。更に、酵母ディスプレイ法を使用して、ヒト抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体及び抗体断片をｉｎ  ｖｉｔｒｏで作製することができる（例えば、ＷＯ２００９／０３６３７９；ＷＯ２０１０／１０５２５６；ＷＯ２０１２／００９５６８；米国特許第２００９／０１８１８５５号；同第２０１０／００５６３８６号；及びＦｅｌｄｈａｕｓ  ａｎｄ  Ｓｉｅｇｅｌ（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２９０：６９−８０）。他の実施形態において、リボソームディスプレイ法を使用して、ヒト抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体及び抗体断片をｉｎ  ｖｉｔｒｏで作製することができる（例えば、Ｒｏｂｅｒｔｓ  ａｎｄ  Ｓｚｏｓｔａｋ（１９９７）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ９４：１２２９７−１２３０２；Ｓｃｈａｆｆｉｔｚｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１１９−１３５；Ｌｉｐｏｖｓｅｋ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２９０：５１−６７）。
【０２５７】
また、Ｃｏｌｅら及びＢｏｅｒｎｅｒらの技法もヒト抗Ｓｉｇｌｅｃ−９モノクローナル抗体の調製に使用可能である（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１）：８６−９５（１９９１）。同様に、ヒト抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、トランスジェニック動物、例えば、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活性化されたマウスに、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を導入することによって作製することができる。抗原刺激すると、遺伝子再構成、アセンブリ及び抗体レパートリーを含む、全ての点でヒトにおいて見られるものと非常に類似するヒト抗体産生が観察される。このアプローチについては、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６６１，０１６号、ならびに次の科学刊行物：Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８１２−１３（１９９４），Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−５１（１９９６），Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８２６（１９９６）及びＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）に記載されている。
【０２５８】
最後に、ヒト抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、活性化Ｂ細胞によるｉｎ  ｖｉｔｒｏ作製も可能である（米国特許第５，５６７，６１０号及び同第５，２２９，２７５号参照）。
【０２５９】
（５）抗体断片
特定の実施形態では、全抗体の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体ではなく、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の断片を使用することに利点がある。断片サイズがより小さければ、迅速なクリアランス及び良好な脳透過性が可能になる。
【０２６０】
抗体断片を作製するための技法は、様々なものが開発されている。従来、これらの断片は、インタクト抗体のタンパク質分解消化によって得られていた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄ．２４：１０７−１１７（１９９２）；及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１（１９８５）参照）。しかしながら、これらの断片は、現在、組み換え宿主細胞によって、例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体をコードする核酸を使用して、直接作製することができる。Ｆａｂ、Ｆｖ及びｓｃＦｖ抗体断片は全て、Ｅ．ｃｏｌｉ中で発現及び分泌され得るため、これらの断片の直接的な大量作製が可能になる。抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体断片は、上述の抗体ファージライブラリから単離することもできる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨ断片をＥ．ｃｏｌｉから直接回収し、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ’）２断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２））。別のアプローチでは、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組み換え宿主細胞培養から直接単離することができる。ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期が延長されたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２抗体断片の作製については、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。他の実施形態において、最適な抗体は、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号及び米国特許第５，５８７，４５８号を参照されたい。抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体断片はまた、例えば、米国特許５，６４１，８７０号に記載されている「直鎖抗体」であってもよい。かかる直鎖抗体断片は、単一特異性または二重特異性であり得る。
【０２６１】
（６）二重特異性抗体及び多特異性抗体
二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）は、同一または別のタンパク質（例えば、１つ以上の本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質）上のエピトープを含む、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。あるいは、ＢｓＡｂの一方の部分を標的Ｓｉｇｌｅｃ−９抗原に結合するように武装させ、他方の部分を第２のタンパク質に結合するアームと組み合わせることができる。このような抗体は、完全長抗体または抗体断片から得ることができる（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）。
【０２６２】
二重特異性抗体の作製方法は、当該技術分野において既知である。完全長二重特異性抗体の従来の作製は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の共発現に基づくものであり、これらの２つの鎖は、異なる特異性を有する。Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３）．免疫グロブリンの重鎖と軽鎖は、ランダムな組み合わせであるため、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０種の異なる抗体分子の混合物を産生する可能性があり、正しい二重特異性構造を有するのは、これらのうちの１つのみである。正しい分子の精製は、通常は親和性クロマトグラフィーステップにより行われるが、かなり煩雑であり、生成物の収率は低くなる。同様の手法がＷＯ９３／０８８２９及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。
【０２６３】
異なるアプローチでは、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体−抗原結合部位）を免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合させる。融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合である。軽鎖結合に必要な部位を含有する第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）が、融合体のうちの少なくとも１つに存在するのが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合体と、所望により、免疫グロブリン軽鎖とをコードするＤＮＡを別個の発現ベクターに挿入し、好適な宿主生物にコトランスフェクトする。これにより、構築に使用される３つのポリペプチド鎖の割合が異なるときに最適な収率が得られる実施形態では、３つのポリペプチド断片の相互比率を調節する上で、優れた柔軟性がもたらされる。しかしながら、少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が同じ割合であるときに高収率が得られる場合、または割合に特定の重要性がない場合には、２つまたは３つ全てのポリペプチド鎖をコードする配列を１つの発現ベクターに挿入することが可能である。
【０２６４】
このアプローチの好ましい一実施形態において、二重特異性抗体は、第１の結合特異性を有する一方のアームのハイブリッド免疫グロブリン重鎖と、他方のアームのハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第２の結合特異性を提供する）から構成される。この非対称構造は、免疫グロブリン軽鎖が二重特異性分子の半分のみで存在することにより容易な分離方法が提供されるため、望ましくない免疫グロブリン鎖の組み合わせから所望の二重特異性化合物を分離するのが簡便になることが見出された。このアプローチは、ＷＯ９４／０４６９０に開示されている。二重特異性抗体の生成の更なる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０（１９８６）を参照されたい。
【０２６５】
ＷＯ９６／２７０１１または米国特許第５，７３１，１６８号に記載の別のアプローチによれば、一対の抗体分子間の界面を操作して、組み換え細胞培養物から回収されるヘテロ二量体の割合を最大にすることができる。好ましい界面は、抗体定常ドメインのＣＨ３領域の少なくとも一部を含む。この方法では、第１の抗体分子の界面の１つ以上の小さいアミノ酸側鎖を、より大きい側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）に置き換える。この大きい側鎖（複数可）と同一または同様の大きさの補償「キャビティ」を、第２の抗体分子の界面上に、大きいアミノ酸側鎖をより小さいアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはトレオニン）に置き換えることによって作製する。これにより、ホモ二量体などの他の望ましくない最終産物よりもヘテロ二量体の収率が増加する機構が提供される。
【０２６６】
二重特異性抗体を抗体断片から生成するための技法は、文献で説明されている。例えば、二重特異性抗体は、化学結合を使用して調製することができる。Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１（１９８５）は、インタクト抗体をタンパク質分解的に切断して、Ｆ（ａｂ’）２断片を生成する手順を記載している。これらの断片を、ジチオール錯化剤である亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元して、隣接するジチオールを安定させ、分子間ジスルフィド形成を阻止する。次に、生成されたＦａｂ’断片を、チオニトロ安息香酸（ＴＮＢ）誘導体に変換する。次いで、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体のうちの１つをＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体に再変換して、二重特異性抗体を形成する。作製された二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化のための作用物質として使用することができる。
【０２６７】
Ｆａｂ’断片は、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収し、化学的にカップリングして二重特異性抗体を形成してもよい。Ｓｈａｌａｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：２１７−２２５（１９９２）は、完全ヒト化二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の作製について記載している。各Ｆａｂ’断片をＥ．ｃｏｌｉから別々に分泌させ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで指向性化学的カップリングに供することで、二重特異性抗体が形成された。このように形成された二重特異性抗体は、ＥｒｂＢ２受容体を過剰発現する細胞及び正常なヒトＴ細胞に結合するとともに、ヒト乳房腫瘍標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の溶解活性を誘発することができた。
【０２６８】
組み換え細胞培養物から直接的に二価抗体断片を作製及び単離するための様々な技法も記載されている。例えば、ロイシンジッパーを使用して、二価ヘテロ二量体が作製されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）．Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質に由来するロイシンジッパーペプチドを、遺伝子融合によって、２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に結合し、この抗体ホモ二量体をヒンジ領域で還元して単量体を得、次いで、これを再び酸化することで、抗体ヘテロ二量体が形成された。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）に記載された「ダイアボディ」法は、二重特異性／二価抗体断片の作製の代替機構を提供している。当該断片は、同じ鎖上の２つのドメイン間で対合が形成されないような短いリンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。したがって、１つの断片のＶＨドメイン及びＶＬドメインは、もう１つの断片の相補的なＶＬドメイン及びＶＨドメインと対合させられ、それにより、２つの抗原結合部位が形成される。一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用することによって、二重特異性／二価抗体断片を作製するための別の方策も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい。
【０２６９】
２価を超える抗体も企図される。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）．
【０２７０】
例示的な二重特異性抗体は、所与の分子（例えば、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質）上の２つの異なるエピトープに結合し得る。あるいは、特定のタンパク質を発現する細胞に細胞防御機構を集中させるために、Ｓｉｇｌｅｃ−９シグナル伝達構成成分を標的にするアームを、Ｔ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ２８またはＢ７）などの白血球上の誘発分子に結合するアーム、またはＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）などのＩｇＧ（ＦｃγＲ）のＦｃ受容体に結合するアームと組み合わせてもよい。また、二重特異性抗体を使用して、特定のタンパク質を発現する細胞に細胞傷害薬を局在化させることができる。このような抗体は、タンパク質結合アームと、細胞傷害薬または放射性核種キレート剤、例えば、ＥＯＴＵＢＥ、ＤＰＴＡ、ＤＯＴＡまたはＴＥＴＡと結合するアームとを有する。対象となる別の二重特異性抗体は、目的のタンパク質と結合し、更に組織因子（ＴＦ）と結合する。
【０２７１】
（７）多価抗体
多価抗体は、その抗体が結合する抗原を発現する細胞によって、二価抗体よりも速く内部移行（及び／または異化）され得る。本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体またはその抗体断片は、３つ以上の抗原結合部位を有する（ＩｇＭクラス以外の）多価抗体（例えば、四価抗体）であり得、これは、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組み換え発現によって容易に作製することができる。多価抗体は、二量体化ドメイン及び３つ以上の抗原結合部位を含むことができる。好ましい二量体化ドメインは、Ｆｃ領域またはヒンジ領域を含む。このシナリオでは、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域のアミノ末端側に３つ以上の抗原結合部位とを含むことになる。本明細書における好ましい多価抗体は、３〜約８の抗原結合部位を含有するが、好ましくは４つの抗原結合部位を含有する。多価抗体は、少なくとも１つのポリペプチド鎖（好ましくは２つのポリペプチド鎖）を含有し、ここで、ポリペプチド鎖（複数可）は、２つ以上の可変ドメインを含有する。例えば、ポリペプチド鎖（複数可）は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−（Ｘ２）ｎ−Ｆｃを含み得、ここで、ＶＤ１は第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の可変ドメインであり、ＦｃはＦｃ領域の１つのポリペプチド鎖であり、Ｘ１及びＸ２はアミノ酸またはポリペプチドを表し、ｎは０または１である。同様に、ポリペプチド鎖（複数可）は、ＶＨ−ＣＨ１−フレキシブルリンカー−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖またはＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖を含み得る。本明細書における多価抗体は、好ましくは、少なくとも２つ（好ましくは４つ）の軽鎖可変ドメインポリペプチドを更に含む。本明細書における多価抗体は、例えば、約２〜約８の軽鎖可変ドメインポリペプチドを含み得る。本明細書で企図される軽鎖可変ドメインポリペプチドは、軽鎖可変ドメインを含み、任意に、ＣＬドメインを更に含む。多価抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗原だけでなく、限定するものではないが、更なる抗原である、Ａβペプチド抗原、またはαシヌクレインタンパク質抗原、またはＴａｕタンパク質抗原、またはＴＤＰ−４３タンパク質抗原、またはプリオンタンパク質抗原、またはハンチンチンタンパク質抗原、またはＲＡＮ翻訳産物抗原、例えば、グリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）もしくはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）、インスリン受容体、インスリン様成長因子受容体、トランスフェリン受容体、または抗体の血液脳関門通過を促進する任意の他の抗原を認識し得る。
【０２７２】
（８）ヘテロコンジュゲート抗体
ヘテロコンジュゲート抗体もまた、本開示の範囲内である。ヘテロコンジュゲート抗体は、共有結合した２つの抗体（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体またはその抗体断片）から構成される。例えば、ヘテロコンジュゲート中の抗体の一方がアビジンにカップリングし、他方がビオチンにカップリングし得る。このような抗体は、例えば、免疫系細胞を望ましくない細胞へ標的化するために提案されており（米国特許第４，６７６，９８０号）、ＨＩＶ感染症の治療に使用されている。国際公開ＷＯ９１／００３６０、ＷＯ９２／２００３７３及びＥＰ０３０８９３６。抗体は、架橋剤を必要とするものを含む、タンパク質合成化学の既知の方法を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで調製され得ることが企図される。例えば、ジスルフィド交換反応を使用して、またはチオエーテル結合を形成することによって、免疫毒素を構築してもよい。この目的に好適な試薬の例には、イミノチオレート及びメチル−４−メルカプトブチルイミデート、ならびに、例えば米国特許第４，６７６，９８０号のものが挙げられる。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の簡便な架橋方法を使用して作製することができる。好適な架橋剤は、当該技術分野において既知であり、いくつかの架橋技術とともに、米国特許第４，６７６，９８０号に開示されている。
【０２７３】
（９）エフェクター機能操作
また、抗体のエフェクター機能を変更し、かつ／または血清中半減期を延長するために、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を修飾することが望ましい場合がある。例えば、定常領域上のＦｃ受容体結合部位を修飾または変異させて、特定のＦｃ受容体、例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及び／またはＦｃγＲＩＩＩに対する結合親和性を除去または低減することができる。いくつかの実施形態において、エフェクター機能は、抗体のＦｃ領域（例えば、ＩｇＧのＣＨ２ドメイン中）のＮ−グリコシル化を除去することによって低下する。いくつかの実施形態において、エフェクター機能は、ＰＣＴ  ＷＯ９９／５８５７２及びＡｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４０：５８５−５９３（２００３）；Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６４：１９２５−１９３３（２０００）に記載されるように、ヒトＩｇＧの２３３〜２３６、２９７及び／または３２７〜３３１などの領域を修飾することによって低下する。
【０２７４】
抗体の血清中半減期を延長させるには、例えば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載されるように、サルベージ受容体結合エピトープを抗体（特に抗体断片）中に組み込むことができる。本明細書で使用されるとき、「サルベージ受容体結合エピトープ」という用語は、ＩｇＧ分子のｉｎ  ｖｉｖｏ血清中半減期を延長させる要因となるＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。
【０２７５】
（１０）他のアミノ酸配列修飾
本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体またはその抗体断片のアミノ酸配列修飾もまた企図される。例えば、抗体または抗体断片の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましいことがある。抗体または抗体断片のアミノ酸配列バリアントは、その抗体または抗体断片をコードする核酸中に適切なヌクレオチド変化を導入することによって調製され、またはペプチド合成によって調製される。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基の欠失、及び／または挿入、及び／または置換が含まれる。欠失、挿入及び置換は、最終的な構築物に到達するように、任意の組み合わせがなされるが、最終的な構築物が所望の特徴（すなわち、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質と結合し、または物理的に相互作用する能力）を持つことを条件とする。また、アミノ酸の変化により、抗体の翻訳後プロセスを変えることができ、例えば、グリコシル化部位の数または位置を変更することができる。
【０２７６】
変異導入に好ましい位置である抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の特定の残基または領域を特定するのに有用な方法は、「アラニンスキャニング変異導入法」と呼ばれ、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ  ｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５（１９８９）に記載されている。この場合、標的残基のうちのある残基または群（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ及びｇｌｕなどの荷電残基）を特定し、これを中性または負に荷電したアミノ酸（最も好ましくはアラニンまたはポリアラニン）で置き換え、アミノ酸と標的抗原との相互作用に影響を与えるようにする。次いで、その置換部位に、またはその置換部位の代わりに、更なるバリアントまたは他のバリアントを導入することによって、当該置換に対して機能感受性を示すアミノ酸位置の改良を重ねる。したがって、アミノ酸配列の変形を導入する部位は予め決定されているが、変異自体の性質は、予め決定される必要はない。例えば、所与の部位における変異の働きを分析するためには、標的コドンまたは標的領域でアラニンスキャニングまたはランダム変異導入を行い、発現した抗体バリアントを所望の活性についてスクリーニングする。
【０２７７】
アミノ酸配列の挿入には、１残基から１００以上の残基を含有するポリペプチドまでの長さに及ぶアミノ（「Ｎ」）末端及び／またはカルボキシ（「Ｃ」）末端の融合、ならびに１つまたは複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体または細胞毒性ポリペプチドに融合した抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントには、抗体の血清中半減期を延長させる酵素またはポリペプチドを抗体のＮ末端またはＣ末端に融合することが含まれる。
【０２７８】
別の種類のバリアントは、アミノ酸置換バリアントである。これらのバリアントは、抗体分子内に、異なる残基に置き換えられた少なくとも１つのアミノ酸残基を有する。置換変異導入に関して最も関心ある部位は、超可変領域を含むが、ＦＲ改変も企図される。保存的置換について、以下の表Ｅに「好ましい置換」という見出しで示す。かかる置換が生物活性に変化をもたらす場合、次いで、表Ｅに「例示的な置換」と表示されるか、アミノ酸クラスに関して以下に更に記載される、より実質的な変化が導入され、産物がスクリーニングされ得る。
表Ｅ：アミノ酸置換
2019500014.tif 000010
【０２７９】
抗体の生物特性の実質的な改変は、（ａ）置換領域内のポリペプチド主鎖の構造、例えば、シートもしくはヘリックス構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖の嵩を維持することに対する作用が著しく異なる置換を選択することによって達成される。天然に存在する残基は、共通する側鎖特性に基づいて各群：
（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；
（２）中性親水性：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；
（３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ；
（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；及び
（６）芳香族性：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ
に分けられる。
【０２８０】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスに交換することを伴う。
【０２８１】
抗体の適切な立体構造の維持に関与しない任意のシステイン残基もまた、通常、セリンで置換することができ、分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋を阻止することができる。逆に、システイン結合（複数可）を抗体に付加すると、その安定性を改善することができる（具体的には、抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合）。
【０２８２】
特に好ましい種類の置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、更なる開発のために選択された結果として生じるバリアント（複数可）は、それらが生成される親抗体と比較して改善された生物学的特性を有する。かかる置換バリアントを生成するための簡便な方法は、ファージディスプレイを使用した親和性成熟を伴う。簡潔に述べれば、いくつかの超可変領域部位（例えば、６〜７つの部位）を変異させ、想定される全てのアミノ置換を各部位に生じる。このようにして生成された抗体バリアントは、各粒子内にパッケージングされたＭ１３のＩＩＩ遺伝子産物への融合体として繊維状ファージ粒子から一価形態でディスプレイされる。次いで、ファージディスプレイされたバリアントを、本明細書に開示の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。修飾の候補となる超可変領域部位を特定するために、アラニンスキャニング変異導入を行い、抗原結合に著しく寄与する超可変領域残基を特定することができる。代替的にまたは追加的に、抗原−抗体複合体の結晶構造を分析して、抗体と抗原（例えば、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質）との間の接触点を特定することが有益であり得る。かかる接触残基及び隣接残基は、本明細書に詳述される技法に従った置換の候補である。かかるバリアントが生成されたら、本明細書に記載されるようにバリアントのパネルをスクリーニングに供し、１つ以上の関連アッセイにおいて優れた特性を有する抗体が更なる開発のために選択され得る。
【０２８３】
抗体の別の種類のアミノ酸バリアントは、抗体の元のグリコシル化パターンを改変する。改変とは、抗体中に認められる１つ以上の炭水化物部分の欠失、及び／または抗体中に存在しない１つ以上のグリコシル化部位の付加を意味する。
【０２８４】
抗体のグリコシル化は、典型的に、Ｎ結合型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合とは、炭水化物部分のアスパラギン残基の側鎖への結合を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−トレオニン（式中、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸である）は、炭水化物部分のアスパラギン側鎖への酵素結合のための認識配列である。したがって、ポリペプチド中にこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在することは、潜在的なグリコシル化部位の生成となる。Ｏ結合型グリコシル化とは、糖類であるＮ−アセイルガラクトサミン（Ｎ−ａｃｅｙｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ）、ガラクトースまたはキシロースのうちの１つの、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはトレオニンへの結合を指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンも使用され得る。
【０２８５】
抗体へのグリコシル化部位の付加は、上記のトリペプチド配列の１つ以上を含有するようにアミノ酸配列を変えることによって簡便に達成される（Ｎ−結合型グリコシル化部位の場合）。改変はまた、元の抗体の配列に１つ以上のセリン残基もしくはスレオニン残基を付加するか、これらの残基で置換することによっても行うことができる（Ｏ結合型グリコシル化部位の場合）。
【０２８６】
抗ＩｇＥ抗体のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子は、当該技術分野において既知の種々の方法によって調製される。これらの方法には、天然源からの単離（天然アミノ酸配列のバリアントの場合）、または先に調製された抗体（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）もしくは抗体断片のバリアントもしくは非バリアントのオリゴヌクレオチドによる（または部位特異的）変異導入、ＰＣＲ変異導入及びカセット変異導入による作製が含まれるが、これらに限定されない。
【０２８７】
（１１）抗体コンジュゲート
本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体またはその抗体断片は、検出可能なマーカー、毒素または治療用物質にコンジュゲートすることができる。検出可能なマーカー、毒素または治療用物質などの分子を抗体にコンジュゲートするには、当該技術分野において既知の任意の好適な方法を使用することができる。
【０２８８】
例えば、薬物コンジュゲーションは、生物学的に活性な細胞傷害（抗がん）性ペイロードまたは薬物を、特定の腫瘍マーカー（例えば、理想的には、腫瘍細胞内または腫瘍細胞上にのみ認められるタンパク質）を特異的に標的にする抗体にカップリングすることを伴う。抗体は、これらのタンパク質を体内で追跡し、がん細胞表面に付着する。抗体と標的タンパク質（抗原）との間の生化学的反応は、腫瘍細胞内のシグナルを誘発し、次いで、その抗体を細胞毒素とともに吸収し、または内在化する。ＡＤＣが内在化されると、細胞傷害薬物が放出され、がんを殺傷する。この標的化により、理想的には、薬物の副作用が低減し、他の化学療法剤よりも治療域が広くなる。抗体をコンジュゲートする技法は、当該技術分野において開示されており、既知である（例えば、Ｊａｎｅ  ｄｅ  Ｌａｒｔｉｇｕｅ，ＯｎｃＬｉｖｅ  Ｊｕｌｙ  ５，２０１２；ＡＤＣ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ；及びＤｕｃｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２１（１）：５−１３参照）。
【０２８９】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、リシン、リシンＡ鎖、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メイタンシノイド、タキソール、臭化エチジウム、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、アクチノマイシン、ジフテリア毒素、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素（ＰＥ）Ａ、ＰＥ４０、アブリン、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、αサルシン、ゲロニン、ミトゲリン、レトストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、クリシン、クロチン、カリケアミシン、Ｓａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害物質、糖質コルチコイド、アウリスタチン、オーロマイシン、イットリウム、ビスマス、コンブレスタチン、デュオカルマイシン、ドラスタチン、ｃｃ１０６５及びシスプラチンから選択される毒素にコンジュゲートされ得る。
【０２９０】
（１２）他の抗体修飾
本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体またはその抗体断片は、当該技術分野において既知であり、容易に入手可能な更なる非タンパク質性部分を含有するように更に修飾され得る。好ましくは、抗体の誘導化に好適な部分は、水溶性ポリマーである。水溶性ポリマーの非限定的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコールならびにこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性により、製造における利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量のものであってもよく、分岐でも非分岐でもよい。抗体に結合されるポリマーの数は様々であり得、１つを超えるポリマーが結合される場合、それらは同じ分子であっても異なる分子であってもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／または種類は、限定するものではないが、改善対象の抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が規定条件下における療法で使用されるのかどうかなどの考慮に基づいて、決定することができる。かかる技法及び他の好適な処方は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄ．，Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０００）に開示されている。
【０２９１】
結合アッセイ及び他のアッセイ
本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、抗原結合活性に関して、例えば、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、ウェスタンブロットなどの既知の方法によって試験することができる。
【０２９２】
いくつかの実施形態において、競合アッセイを使用して、表２、３、４Ａ、４Ｂ、７Ａ及び７Ｂ中に列挙される抗体または２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２及び１７Ｃ２から選択される抗体のうちのいずれかと競合する抗体を特定することができる。特定の実施形態において、このような競合抗体は、表２、３、４Ａ、４Ｂ、７Ａ及び７Ｂ中に列挙される抗体または２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２及び１７Ｃ２から選択される抗体のうちのいずれかが結合するエピトープ（例えば、直線状または高次構造エピトープ）と同じエピトープに結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための具体的な例示的方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）「Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，」  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供されている。
【０２９３】
例示的な競合アッセイでは、固定化されたＳｉｇｌｅｃ−９または細胞表面上にＳｉｇｌｅｃ−９を発現している細胞を、Ｓｉｇｌｅｃ−９（例えば、ヒトまたは非ヒト霊長類）に結合する標識された第１の抗体と、Ｓｉｇｌｅｃ−９への結合について第１の抗体と競合する能力を試験する非標識の第２の抗体とを含む溶液中で、インキュベートする。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在してもよい。コントロールとして、固定化されたＳｉｇｌｅｃ−９またはＳｉｇｌｅｃ−９発現細胞を、標識された第１の抗体を含むが、非標識の第２の抗体を含まない溶液中でインキュベートする。第１の抗体のＳｉｇｌｅｃ−９への結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰の非結合抗体を除去し、固定化されたＳｉｇｌｅｃ−９または細胞が発現しているＳｉｇｌｅｃ−９に結合した標識の量を測定する。固定化されたＳｉｇｌｅｃ−９または細胞が発現しているＳｉｇｌｅｃ−９に結合した標識の量が、コントロール試料と比較して試験試料で実質的に低下している場合、それは、Ｓｉｇｌｅｃ−９への結合について、第２の抗体が第１の抗体と競合することを示す。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
【０２９４】
核酸、ベクター及び宿主細胞
本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載の組み換え方法及び組成物を使用して産生され得る。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体のうちのいずれかをコードするヌクレオチド配列を有する、単離された核酸が提供される。かかる核酸は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体のＶＬを含有するアミノ酸配列及び／またはＶＨを含有するアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。いくつかの実施形態において、かかる核酸を含有する１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。いくつかの実施形態において、かかる核酸を含有する宿主細胞もまた提供される。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含有するアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含有するアミノ酸配列をコードする核酸を含有するベクター、または（２）抗体のＶＬを含有するアミノ酸配列をコードする核酸を含有する第１のベクター及び抗体のＶＨを含有するアミノ酸配列をコードする核酸を含有する第２のベクターを含有する（例えば、形質導入されている）。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。
【０２９５】
本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の作製方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体をコードする核酸を含有する本開示の宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、その後、宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収される。
【０２９６】
本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を組み換え産生するには、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体をコードする核酸を単離し、宿主細胞における更なるクローニング及び／または発現のために１つ以上のベクター中に挿入する。かかる核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定することができる。
【０２９７】
本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体または本明細書に記載のそのポリペプチド（抗体を含む）断片のうちのいずれかをコードする核酸配列を含有する好適なベクターには、限定するものではないが、クローニングベクター及び発現ベクターが含まれる。好適なクローニングベクターは、標準的技法に従って構築することができ、あるいは当該技術分野において入手可能な多数のクローニングベクターから選択してもよい。選択されるクローニングベクターは、使用予定の宿主細胞に応じて変わり得るが、有用なクローニングベクターは、一般に、自己複製能を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼの標的を１つ有し得、かつ／またはベクターを含有するクローンの選択に用いることができるマーカーの遺伝子を保持し得る。好適な例には、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ  ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３及びｐＡＴ２８などのシャトルベクターが挙げられる。これらのクローニングベクター及び多くの他のクローニングベクターが、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの商業的供給業者から入手可能である。
【０２９８】
発現ベクターは、一般に、本開示の核酸を含有する複製可能なポリヌクレオチド構築物である。発現ベクターは、エピソームまたは染色体ＤＮＡの構成部分のいずれかとして、宿主細胞内で複製可能であり得る。好適な発現ベクターには、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスを含むウイルスベクター、コスミド及びＰＣＴ国際公開番号ＷＯ８７／０４４６２に開示の発現ベクター（複数可）が挙げられるが、これらに限定されない。ベクター構成要素は、一般に、次の要素：シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、好適な転写調節エレメント（プロモーター、エンハンサー及びターミネーターなど）のうちの１つ以上を含み得るが、これらに限定されない。発現（すなわち、翻訳）には、リボソーム結合部位、翻訳開始部位及び終止コドンなどの１つ以上の翻訳調節エレメントも通常必要である。
【０２９９】
目的の核酸を含有するベクターは、エレクトロポレーション、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥデキストランまたは他の物質を用いるトランスフェクション、微粒子銃、リポフェクション及び感染（例えば、この場合のベクターはワクシニアウイルスなどの感染因子である）を含む、多数の適切な手段のいずれかによって、宿主細胞に導入することができる。導入ベクターまたはポリヌクレオチドの選択は、多くの場合、宿主細胞の特徴に依存する。いくつかの実施形態において、ベクターは、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体をコードする１つ以上のアミノ酸配列を含有する核酸を含有する。
【０３００】
抗体コーディングベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合には、細菌において産生され得る。細菌での抗体断片及びポリペプチドの発現については、（例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号及び同第５，８４０，５２３号；ならびにＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４（Ｅ．ｃｏｌｉ．における抗体断片の発現に関する記載））。発現後、抗体は、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離され得、更に精製することができる。
【０３０１】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物もまた、抗体コーディングベクターに好適なクローニング宿主または発現宿主であり、これらには、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌株及び酵母株が含まれる（例えば、Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）；及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６））。
【０３０２】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）から得ることもできる。無脊椎動物細胞の例には、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞とともに、特に、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションに使用することができる、多数のバキュロウイルス株が同定されている。植物細胞培養物もまた、宿主として利用することができる（例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物で抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載されている））。
【０３０３】
脊椎動物細胞もまた、宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように適合された哺乳動物細胞株が、有用であり得る。有用な宿主哺乳動物細胞株の他の例は、ＳＶ４０により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ヒト胚性腎臓株（２９３細胞または例えばＧｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されているような２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載のＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ科腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載のＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な宿主哺乳動物細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０））を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；ならびにＹ０，ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に好適な特定の宿主哺乳動物細胞株の総説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。
【０３０４】
Ｓｉｇｌｅｃ−９活性
ＰＩ３Ｋ活性化
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、細胞内で発現しているＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合した後、ＰＩ３Ｋ活性化を誘導し得る。
【０３０５】
ＰＩ３Ｋは、ホスファチジルイノシトール（ＰｔｄＩｎｓ）のイノシトール環３位のヒドロキシル基をリン酸化することができる同様の細胞内シグナル伝達キナーゼのファミリーである。ＰＩ３Ｋファミリーは、一次構造、制御及びｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける脂質基質特異性に基づいて、３つの異なるクラス（クラスＩ、クラスＩＩ及びクラスＩＩＩ）に分けられる。
【０３０６】
活性化されたＰＩ３Ｋは、限定するものではないが、ＰｔｄＩｎｓ３Ｐ、ＰｔｄＩｎｓ（３，４）Ｐ２、ＰｔｄＩｎｓ（３，５）Ｐ２及びＰｔｄＩｎｓ（３，４，５）Ｐ３を含む、種々の３−リン酸化ホスホイノシチドを産生する。これらの３−リン酸化されたホスホイノシチドは、種々の細胞膜にシグナル伝達タンパク質を動員する機序において機能する。これらのシグナル伝達タンパク質は、限定するものではないが、ＰＸドメイン、プレクストリン相同ドメイン（ＰＨドメイン）及びＦＹＶＥドメインを含む、ホスホイノシチド結合ドメインを含有する。ＰＩ３Ｋ活性化を決定するには、当該技術分野において既知の任意の方法を使用することができる。
【０３０７】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、ＰＩ３Ｋ活性レベルの低下に関連する病態及び／または疾患、例えば、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびに膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、甲状腺癌を含むがん、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶＩ型、ならびにインフルエンザ菌を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３０８】
サイトカインの発現調節
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、細胞表面上に発現しているＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合した後、脳内で炎症促進性メディエーターを調節し得る（例えば、上昇または低下させ得る）。特定の実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、細胞内で発現しているＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合した後、サイトカイン（例えば、炎症促進性メディエーター）の発現を調節し、かつ／または抗炎症性メディエーターの発現を低下させる。
【０３０９】
炎症は、病原体、損傷を受けた細胞及び刺激物などの有害な刺激に対する血管組織の複雑な生体反応の一部である。急性炎症の典型的兆候は、疼痛、発熱、発赤及び腫脹である。炎症は、免疫系細胞を動員及び活性化することによって、損傷部位を制限し、または感染症を取り除くことにより、生体を保護する免疫反応である。炎症反応は、生体に損傷を与えないように、その持続期間及び強度が厳密に制御され、制限されている。炎症は、急性または慢性のいずれかに分類することができる。急性炎症は、まず、有害な刺激物を認識し、そして血液から白血球を損傷組織に動員する、自然免疫応答によって誘導される。サイトカイン及びケモカイン放出を含む、生化学的イベントのカスケードにより、局所の血管系、免疫系及び損傷組織内の各種細胞を伴う炎症反応が伝播される。慢性炎症は、長期的かつ持続的であり、これにより、炎症反応に関与する免疫細胞の種類が徐々に変化する。慢性炎症は、炎症プロセスによってもたらされる組織の進行性破壊及び線維化を特徴とする。
【０３１０】
本明細書で使用されるとき、抗炎症性メディエーターは、炎症反応を減少させ、阻害し、または不活性化させる機序に、直接的または間接的（例えば、抗炎症性シグナル伝達経路を介して）のいずれかで関与するタンパク質である。抗炎症性メディエーターの同定及び特性評価には、当該技術分野において既知の任意の方法を使用することができる。抗炎症性メディエーターの例には、限定するものではないが、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＩＦＮ−α、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１Ｒａ、Ｇ−ＣＳＦなどのサイトカイン、及びＴＮＦ−αまたはＩＬ−６の可溶性受容体が挙げられる。炎症促進性メディエーターの例には、限定するものではないが、ＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＣＲＰ、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１−βなどのサイトカインが挙げられる。
【０３１１】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−８及びＴＮＦ−ａなどのサイトカインの発現を調節し得る（例えば、上昇または低下させ得る）。特定の実施形態において、サイトカインの発現調節は、マクロファージ、好中球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞、単球、破骨細胞，皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、Ｔ細胞及び／またはミクログリア細胞において生じる。発現調節は、限定するものではないが、遺伝子発現の上昇、転写発現の上昇またはタンパク質発現の上昇を含み得る。遺伝子、転写物（例えば、ｍＲＮＡ）及び／またはタンパク質の発現を決定するには、当該技術分野において既知の任意の方法を使用することができる。例えば、ノーザンブロット解析を使用してサイトカイン遺伝子発現レベルを決定することができ、ＲＴ−ＰＣＲを使用してサイトカイン転写レベルを決定することができ、ウェスタンブロット解析を使用してサイトカインタンパク質レベルを決定することができる。
【０３１２】
本明細書で使用されるとき、サイトカインは、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）で治療した対象の１つ以上の細胞におけるその発現が、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質で治療していない当該対象の１つ以上の細胞で発現される同一サイトカインの発現と比較して調節されている場合、調節された発現を有し得る。いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、対象の１つ以上の細胞におけるサイトカイン発現を、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質で治療していない当該対象の１つ以上の細胞におけるサイトカイン発現と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％または少なくとも２００％調節し得る。他の実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、対象の１つ以上の細胞におけるサイトカイン発現を、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質で治療していない当該対象の１つ以上の細胞におけるサイトカイン発現と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍または少なくとも１０倍調節する。
【０３１３】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、１つ以上の炎症促進性メディエーターの異常レベルに関連する病態及び／または疾患、例えば、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびに膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、甲状腺癌を含むがん、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶＩ型、ならびにインフルエンザ菌を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有用である。
【０３１４】
炎症促進性メディエーターの発現調節
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、細胞内で発現しているＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合した後、炎症促進性メディエーターの発現を調節し得る（例えば、上昇または低下させ得る）。
【０３１５】
本明細書で使用されるとき、炎症促進性メディエーターは、炎症反応を誘発し、活性化し、促進し、または別様に増大させる機構に直接的または間接的（例えば、炎症促進性シグナル伝達経路を介して）のいずれかで関与するタンパク質である。炎症促進性メディエーターの同定及び特性評価には、当該技術分野において既知の任意の方法を使用することができる。
【０３１６】
炎症促進性メディエーターの例には、限定するものではないが、Ｉ型及びＩＩ型インターフェロン、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８ならびにＣＲＰなどのサイトカインが挙げられる。
【０３１７】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｉ型及びＩＩ型インターフェロン、ＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＣＲＰ、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１ならびにＭＩＰ−１−βなどの炎症促進性メディエーターの機能的発現及び／または分泌を調節し得る。特定の実施形態において、炎症促進性メディエーターの発現調節は、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、Ｔ細胞及び／またはミクログリア細胞において生じる。発現調節は、限定するものではないが、遺伝子発現の調節、転写発現の調節またはタンパク質発現の調節を含み得る。遺伝子、転写物（例えば、ｍＲＮＡ）及び／またはタンパク質の発現を決定するには、当該技術分野において既知の任意の方法を使用することができる。例えば、ノーザンブロット解析を使用して炎症促進性メディエーターの遺伝子発現レベルを決定することができ、ＲＴ−ＰＣＲを使用して炎症促進性メディエーターの転写レベルを決定することができ、ウェスタンブロット解析を使用して炎症促進性メディエーターのタンパク質レベルを決定することができる。
【０３１８】
特定の実施形態において、炎症促進性メディエーターは、炎症性サイトカインを含む。したがって、特定の実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、１つ以上の炎症性サイトカインの分泌を調節し得る。本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体によって分泌が調節され得る炎症性サイトカインの例には、限定するものではないが、Ｉ型及びＩＩ型インターフェロン、ＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＣＲＰ、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１ならびにＭＩＰ−１−βなどが挙げられる。
【０３１９】
特定の実施形態において、炎症促進性メディエーターは、炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または免疫細胞に発現する受容体を含む。したがって、特定の実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、１つ以上の炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または免疫細胞に発現する受容体の発現を調節し得る。本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）によって発現が調節され得る炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または免疫細胞に発現する受容体の例には、限定するものではないが、ＣＤ８６、ＣＤ８０、ＣＤ８３、Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ、及びＰＹＣＡＲＤが挙げられる。
【０３２０】
本明細書で使用されるとき、炎症促進性メディエーターは、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体）で治療した対象の１つ以上の細胞におけるその発現が、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体で治療していない当該対象の１つ以上の細胞で発現される同一炎症促進性メディエーターの発現と比較して調節されている（例えば、上昇または低下している）場合、調節された発現を有し得る。いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、対象の１つ以上の細胞における炎症促進性メディエーター発現を、例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体で治療していない当該対象の１つ以上の細胞における炎症促進性メディエーターの発現と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％または少なくとも２００％調節し得る。他の実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、対象の１つ以上の細胞における炎症促進性メディエーター発現を、例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体で治療していない当該対象の１つ以上の細胞における炎症促進性メディエーターの発現と比較して、少なくとも少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍または少なくとも１０倍調節し得る。
【０３２１】
いくつかの実施形態において、本開示のいくつかのＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、１つ以上の炎症促進性メディエーターの異常レベルに関連する病態及び／または疾患、例えば、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびに膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、甲状腺癌を含むがん、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶＩ型、ならびにインフルエンザ菌を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有用であり得る。
【０３２２】
ＥＲＫリン酸化
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、細胞内で発現しているＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合した後、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化を誘導し得る。
【０３２３】
細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）は、広範に発現されるプロテインキナーゼの細胞内シグナル伝達キナーゼであり、例えば、分化細胞における減数分裂、有糸分裂及び有糸分裂後機能の制御に関与する。成長因子、サイトカイン、ウイルス感染症、ヘテロ三量体Ｇタンパク質共役受容体リガンド、トランスフォーミング作用物質及び発がん性物質などの種々の刺激物がＥＲＫ経路を活性化する。ＥＲＫのリン酸化は、そのキナーゼ活性の活性化をもたらす。
【０３２４】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、ＥＲＫリン酸化レベルの低下に関連する病態及び／または疾患、例えば、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびに膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、甲状腺癌を含むがん、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶＩ型、ならびにインフルエンザ菌を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３２５】
Ｓｙｋリン酸化
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、細胞内で発現しているＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合した後、脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）リン酸化を誘導し得る。
【０３２６】
脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）は、細胞内シグナル伝達分子であり、Ｓｉｇｌｅｃ−９の下流でいくつかの基質をリン酸化することによって機能することにより、細胞活性化及び炎症性プロセスにつながるシグナル伝達複合体の形成を促進する。
【０３２７】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、Ｓｙｋリン酸化レベルの低下に関連する病態及び／または疾患、例えば、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびに膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、甲状腺癌を含むがん、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶＩ型、ならびにインフルエンザ菌を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３２８】
Ｓｉｇｌｅｃ−９リン酸化
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、細胞内で発現しているＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合した後、Ｓｒｃ、Ｓｙｋ、Ｆｙｎ、Ｆｇｒ、Ｌｃｋ、Ｈｃｋ、Ｂｌｋ、Ｌｙｎ及びＦｒｋなどのＳｒｃファミリーチロシンキナーゼによるＴｙｒ−４３３及びＴｙｒ−４５６のＳｉｇｌｅｃ−９リン酸化を一時的に誘導し得る。
【０３２９】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、Ｓｉｇｌｅｃ−９リン酸化レベルの低下に関連する病態及び／または疾患、例えば、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびに膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、甲状腺癌を含むがん、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶＩ型、ならびにインフルエンザ菌を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３３０】
ＩＴＡＭモチーフ含有受容体のリン酸化
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、細胞内で発現しているＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合した後、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、Ｓｉｒｐβ、ＦｃｇＲ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２などのＩＴＡＭモチーフ含有受容体のリン酸化を誘導し得る。
【０３３１】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、ＩＴＡＭモチーフ含有受容体のリン酸化レベルの低下に関連する病態及び／または疾患、例えば、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびに膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、甲状腺癌を含むがん、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶＩ型、ならびにインフルエンザ菌を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３３２】
Ｃ−Ｃケモカイン受容体７の発現調節
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、細胞内で発現しているＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合した後、Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現を調節し得る。発現調節（例えば、上昇または低下）は、限定するものではないが、遺伝子発現の調節、転写発現の調節またはタンパク質発現の調節を含み得る。遺伝子、転写物（例えば、ｍＲＮＡ）及び／またはタンパク質の発現を決定するには、当該技術分野において既知の任意の方法を使用することができる。例えば、ノーザンブロット解析を使用して抗炎症性メディエーターの遺伝子発現レベルを決定することができ、ＲＴ−ＰＣＲを使用して抗炎症性メディエーターの転写レベルを決定することができ、ウェスタンブロット解析を使用して抗炎症性メディエーターのタンパク質レベルを決定することができる。
【０３３３】
Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）は、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーのメンバーである。ＣＣＲ７は、種々のリンパ系組織で発現し、Ｂ細胞及びＴ細胞を活性化することができる。いくつかの実施形態において、ＣＣＲ７は、リンパ節などの二次性リンパ器官へのメモリーＴ細胞の遊走を調節し得る。他の実施形態において、ＣＣＲ７は、樹状細胞の成熟を刺激し得る。ＣＣＲ７は、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンドＣＣＬ１９／ＥＬＣ及びＣＣＬ２１と結合することができる受容体タンパク質である。
【０３３４】
本明細書で使用されるとき、ＣＣＲ７は、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）で治療した対象の１つ以上の細胞におけるその発現が、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質で治療していない当該対象の１つ以上の細胞で発現されるＣＣＲ７の発現と比較して調節されている（例えば、上昇または低下している）場合、調節された発現を有し得る。いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、対象の１つ以上の細胞におけるＣＣＲ７発現を、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質で治療していない当該対象の１つ以上の細胞におけるＣＣＲ７発現と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％または少なくとも２００％調節し得る。他の実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、対象の１つ以上の細胞におけるＣＣＲ７発現を、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質で治療していない当該対象の１つ以上の細胞におけるＣＣＲ７発現と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍または少なくとも１０倍調節する。
【０３３５】
いくつかの実施形態において、ＣＣＲ７の発現上昇は、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、及び／またはミクログリア細胞において生じる。ＣＣＲ７の発現上昇は、ケモカインＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞走化性を誘導し得る。したがって、特定の実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞走化性を誘導し得る。
【０３３６】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、ＣＣＲ７の異常レベルに関連する病態及び／または疾患、例えば、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびに膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、甲状腺癌を含むがん、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶＩ型、ならびにインフルエンザ菌を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有用である。
【０３３７】
抗原特異的Ｔ細胞の増殖を誘導する骨髄由来樹状細胞の能力の向上または正常化
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、細胞内で発現しているＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合した後、抗原特異的Ｔ細胞の増殖を誘導する骨髄由来樹状細胞の能力を向上及び／または正常化し得る。
【０３３８】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体）は、対象の１つ以上の骨髄由来樹状細胞における抗原特異的Ｔ細胞の増殖を誘導する骨髄由来樹状細胞の能力を、例えば、作用物質で治療していない当該対象の１つ以上の骨髄由来樹状細胞における抗原特異的Ｔ細胞の増殖を誘導する骨髄由来樹状細胞の能力と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％または少なくとも２００％向上及び／または正常化し得る。他の実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体）は、対象の１つ以上の骨髄由来樹状細胞における抗原特異的Ｔ細胞の増殖を誘導する骨髄由来樹状細胞の能力を、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質で治療していない当該対象の１つ以上の骨髄由来樹状細胞における抗原特異的Ｔ細胞の増殖を誘導する骨髄由来樹状細胞の能力と比較して、少なくとも少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍または少なくとも１０倍向上及び／または正常化し得る。
【０３３９】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、抗原特異的Ｔ細胞の増殖を誘導する骨髄由来樹状細胞の能力の低下または調節不全に関連する病態及び／または疾患、例えば、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびに膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、甲状腺癌を含むがん、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶＩ型、ならびにインフルエンザ菌を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３４０】
破骨細胞生成
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、細胞内で発現しているＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合した後、破骨細胞の生成を誘導し、かつ／または破骨細胞の形成速度を増加させ得る。
【０３４１】
本明細書で使用されるとき、破骨細胞は、石灰化基質を除去し、生体骨を破壊すること（例えば、骨吸収）によって、骨組織を取り除くことができる骨細胞の一種である。破骨細胞は、骨髄系細胞の融合によって形成され得る。いくつかの実施形態において、破骨細胞は、酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）及びカテプシンＫの高発現を特徴とし得る。
【０３４２】
本明細書で使用されるとき、破骨細胞の形成速度は、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体）で治療した対象における破骨細胞の形成速度が、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質で治療していない当該対象における破骨細胞の形成速度よりも大きい場合、増加され得る。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体）は、対象における破骨細胞の形成速度を、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質で治療していない当該対象における破骨細胞の形成速度と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％または少なくとも２００％増加させ得る。他の実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体）は、対象における破骨細胞の形成速度を、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質で治療していない当該対象における破骨細胞の形成速度と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍または少なくとも１０倍増加させ得る。
【０３４３】
本明細書で使用されるとき、破骨細胞の形成速度は、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体）で治療した対象における破骨細胞の形成速度が、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質で治療していない当該対象における破骨細胞の形成速度よりも小さい場合、減少され得る。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体）は、対象における破骨細胞の形成速度を、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質で治療していない当該対象における破骨細胞の形成速度と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％または少なくとも２００％減少させ得る。他の実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体）は、対象における破骨細胞の形成速度を、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質で治療していない当該対象における破骨細胞の形成速度と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍または少なくとも１０倍減少させ得る。
【０３４４】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、骨密度の病的低下に関連する骨粗鬆症及び骨密度の病的上昇に関連する骨多孔症を含む、骨形成及び維持の異常に関連する病態及び／または疾患を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３４５】
Ｓｉｇｌｅｃ−９発現細胞の増殖及び生存
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、細胞上に発現しているＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合した後、樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、単球、好中球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、Ｔ細胞及びミクログリア細胞の増殖、生存及び／または機能を向上させ得る。
【０３４６】
本明細書で使用されるとき、本開示のマクロファージは、限定するものではないが、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、及びＭ２マクロファージを含む。本明細書で使用されるとき、本開示の好中球は、限定するものではないが、Ｍ１好中球、活性化Ｍ１好中球、及びＭ２好中球を含む。本明細書で使用されるとき、本開示のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、限定するものではないが、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、及びＭ２  ＮＫ細胞を含む。本明細書で使用されるとき、本開示のミクログリア細胞は、限定するものではないが、Ｍ１ミクログリア細胞、活性化Ｍ１ミクログリア細胞、及びＭ２ミクログリア細胞を含む。
【０３４７】
ミクログリア細胞は、脳及び脊髄の常在性マクロファージであるグリア細胞の一種であり、したがって、中枢神経系（ＣＮＳ）の能動免疫防御の第１形態として、かつ主要形態として作用する。ミクログリア細胞は、脳内の全グリア細胞集団の２０％を構成する。ミクログリア細胞は、プラーク、損傷ニューロン及び感染因子に対して、ＣＮＳを絶えずきれいにしている。脳及び脊髄は、易損性の神経組織に大多数の病原体が到達するのを防ぐ血液脳関門として知られる一連の内皮細胞によって身体の他の部分から分離されていることから、「免疫特権」器官とみなされる。感染因子が脳内に、または血液脳関門を通って直接導入された場合、ミクログリア細胞は、感染因子が感受性の神経組織に損傷を与える前に、迅速に反応して炎症を制限し、感染因子を破壊しなければならない。身体の他の部分からの抗体を利用できない（血液脳関門を通過するほど小さい抗体はほとんどない）ため、ミクログリアは、異物を認識し、それを飲み込み、Ｔ細胞を活性化する抗原提示細胞として作用できなければならない。このプロセスは、致命的になり得る損傷を防ぐために迅速に行われなければならないので、ミクログリア細胞は、ＣＮＳ中の小さな病的変化に対してさえ極めて敏感である。ミクログリア細胞は、この感受性を、部分的には、細胞外カリウムのわずかな変化にも反応する特有のカリウムチャネルを有することによって達成される。
【０３４８】
いくつかの実施形態において、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、樹状細胞、単球、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞及び／またはミクログリア上のＣＤ８０、ＣＤ８３及び／またはＣＤ８６の発現を上昇させ得る。
【０３４９】
本明細書で使用されるとき、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、単球、Ｔ細胞及び／またはミクログリアの増殖速度、生存及び／または機能は、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）で治療した対象における樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞及び／またはミクログリアの増殖速度、生存及び／または機能が、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質で治療していない当該対象における樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、Ｔ細胞及び／またはミクログリアの増殖速度、生存及び／または機能を上回る場合、発現の上昇を伴い得る。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、対象における樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、Ｔ細胞及び／またはミクログリアの増殖速度、生存及び／または機能を、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質で治療していない当該対象における樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、Ｔ細胞及び／またはミクログリアの増殖速度、生存、及び／または機能と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％または少なくとも２００％向上させ得る。他の実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、対象における樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、Ｔ細胞及び／またはミクログリアの増殖速度、生存及び／または機能を、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質で治療していない当該対象における樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、Ｔ細胞及び／またはミクログリアの増殖速度、生存及び／または機能と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍または少なくとも１０倍向上させ得る。
【０３５０】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、樹状細胞、好中球、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、Ｔ細胞及び／またはミクログリアの増殖、生存、アポトーシス増加及び／または機能の低下に関連する病態及び／または疾患、例えば、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびに膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、甲状腺癌を含むがん、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶＩ型、ならびにインフルエンザ菌を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３５１】
クリアランス及び食作用
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、アポトーシス性ニューロン、神経系の神経組織破片、神経系の非神経組織破片、機能不全シナプス、細菌、他の異物、病因タンパク質、病因ペプチド、病因核酸または腫瘍細胞のうちの１つ以上の細胞内で発現しているＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質に結合した後、クリアランス及び／または食作用を誘導し得る。特定の実施形態において、病因タンパク質は、限定するものではないが、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドを含む。特定の実施形態において、病因核酸は、限定するものではないが、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡを含む。
【０３５２】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、限定するものではないが、アポトーシス性ニューロンクリアランス、神経組織破片クリアランス、機能不全シナプスクリアランス、非神経組織破片クリアランス、細菌または他の異物クリアランス、病因タンパク質クリアランス、病因ペプチドクリアランス、病因核酸クリアランス及び腫瘍細胞クリアランスを含む、クリアランスのうちの１種以上を誘導し得る。
【０３５３】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、機能不全シナプス、非神経組織破片、細菌、他の異物、病因タンパク質、病因ペプチド、病因核酸及び／または腫瘍細胞のうちの１つ以上の食作用を含み得る。
【０３５４】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）のレベルが低下した条件下で、好中球、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、単球及び／またはミクログリアによる食作用を増加させ得る。
【０３５５】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、アポトーシス性ニューロン、神経系の神経組織破片、神経系の非神経組織破片、細菌、他の異物、病因タンパク質に関連する病態及び／または疾患、例えば、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびに膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、甲状腺癌を含むがん、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶＩ型、ならびにインフルエンザ菌を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３５６】
Ｓｉｇｌｅｃ−９依存的遺伝子発現
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体）は、Ｓｉｇｌｅｃ−９依存的遺伝子の活性及び／または発現を低下させ得、これにより、免疫系を活性化するシグナル伝達カスケードに関連する遺伝子発現、例えば、ＩＴＡＭ含有受容体、パターン認識受容体、Ｔｏｌｌ様受容体、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）受容体、例えば、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）ファミリー転写因子のうちの１つ以上の転写因子に関連する遺伝子発現を上昇させ得る。
【０３５７】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体）は、Ｓｉｇｌｅｃ−９依存的遺伝子の高レベルに関連する病態及び／または疾患、例えば、限定するものではないが、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびに膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、甲状腺癌を含むがん、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶＩ型、ならびにインフルエンザ菌を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３５８】
Ｔ細胞のＳｉｇｌｅｃ−９依存的活性化
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体）は、細胞傷害性Ｔ細胞  ヘルパーＴ細胞またはその両方の活性を増加させ得る。いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体）は、細胞傷害性Ｔ細胞  ヘルパーＴ細胞またはその両方の活性低下に関連する病態及び／または疾患、例えば、限定するものではないが、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫及び甲状腺癌などの固形腫瘍を含む腫瘍を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３５９】
好中球のＳｉｇｌｅｃ−９依存的阻害
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体）は、好中球の活性を低下させ得る。いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体）は、ナチュラルキラー細胞、好中球またはその両方の活性の活性低下に関連する病態及び／または疾患、例えば、限定するものではないが、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫及び甲状腺癌などの固形腫瘍を含む腫瘍を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３６０】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞による細胞殺傷のＳｉｇｌｅｃ−９依存的向上
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体）は、ＮＫ細胞の殺傷活性を向上させ得る。いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体）は、ナチュラルキラー細胞、好中球またはその両方の活性低下に関連する病態及び／または疾患、例えば、限定するものではないが、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫及び甲状腺癌などの固形腫瘍を含む腫瘍を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３６１】
腫瘍関連免疫細胞のＳｉｇｌｅｃ−９依存的阻害
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体）は、制御性Ｔ細胞または抑制性腫瘍埋没型免疫抑制性樹状細胞または腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞または骨髄由来抑制細胞の活性を低下させ、増殖を低下させ、生存を低下させ、機能を低下させ、腫瘍またはリンパ系器官（例えば、脾臓及びリンパ節）への浸潤を減少させ、かつ／またはアポトーシスを促進し得る。いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体）は、免疫抑制性細胞のうちの１種以上の活性に関連する病態及び／または疾患、例えば、限定するものではないが、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、甲状腺癌などのＳｉｇｌｅｃ−９を発現しない固形腫瘍を含む腫瘍、及び白血病細胞などのＳｉｇｌｅｃ−９を発現する血液腫瘍を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するのに有益である。
【０３６２】
医薬組成物
本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、当該作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を適切な薬学的に許容される担体または希釈剤と組み合わせることによって、種々の治療投与用製剤に組み込むことができ、固体、半固体、液体または気体の各形態の製剤に製剤化され得る。このような製剤の例には、限定するものではないが、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、液剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、マイクロスフェア及びエアロゾル剤が挙げられる。医薬組成物は、所望の製剤に応じて、動物またはヒト投与のための医薬組成物を製剤化するために一般的に使用されるビヒクルである、薬学的に許容される無毒性の希釈剤の担体を含み得る。希釈剤は、その組み合わせの生物活性に影響を与えないように選択される。このような希釈剤の例には、限定するものではないが、蒸留水、緩衝水、生理食塩水、ＰＢＳ、リンゲル液、ブドウ糖溶液及びハンクス液が挙げられる。本開示の医薬組成物または製剤は、他の担体、補助剤または非治療的無毒性非免疫原性安定剤、賦形剤などを更に含み得る。組成物はまた、生理学的条件に近似させるための更なる物質、例えば、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、毒性調整剤、湿潤剤ならびに界面活性剤を含み得る。
【０３６３】
本開示の医薬組成物はまた、種々の安定化剤のうちのいずれか、例えば、抗酸化剤を含み得る。医薬組成物がポリペプチドを含む場合、当該ポリペプチドは、ポリペプチドのｉｎ  ｖｉｖｏ安定性を向上させるか、その薬理学的特性を向上させる（例えば、ポリペプチドの半減期を延長させる、その毒性を低減させる、溶解性または取り込みを向上させる）種々の既知の化合物と複合体化され得る。このような修飾剤または錯化剤の例には、限定するものではないが、硫酸塩、グルコン酸塩、クエン酸塩及びリン酸塩が挙げられる。組成物のポリペプチドはまた、ｉｎ  ｖｉｖｏ属性を向上させる分子と複合体化され得る。このような分子には、限定するものではないが、炭水化物、ポリアミン、アミノ酸、他のペプチド、イオン（例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、マンガン）及び脂質が挙げられる。
【０３６４】
様々な種類の投与に適した製剤の更なる例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，１７ｔｈ  ｅｄ．（１９８５）に見出すことができる。薬物送達法の簡潔な総説については、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３（１９９０）を参照されたい。
【０３６５】
経口投与の場合、有効成分は、カプセル剤、錠剤及び散剤などの固形剤形、またはエリキシル剤、シロップ剤及び懸濁剤などの液体剤形で投与することができる。有効成分（複数可）は、グルコース、ラクトース、スクロース、マンニトール、デンプン、セルロースまたはセルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、サッカリンナトリウム、タルク、炭酸マグネシウムなどの不活性成分及び粉末状担体とともに、ゼラチンカプセルに封入することができる。所望の色、味、安定性、緩衝能、分散性または他の既知の所望の特徴をもたらすために添加され得る更なる不活性成分の例は、赤色酸化鉄、シリカゲル、ラウリル硫酸ナトリウム、二酸化チタン及び食用白色インクである。同様の希釈剤を使用して圧縮錠を作製することができる。錠剤及びカプセル剤はどちらも、数時間にわたって薬剤の連続放出を提供する徐放性製品として製造することができる。圧縮錠は、任意の不快な味をマスキングし、錠剤を大気から保護するために糖衣もしくはフィルムコーティングが施され得、または胃腸管における選択的崩壊のために腸溶コーティングがなされ得る。経口投与用液体剤形は、患者の許容性を高めるために、着色料及び矯味矯臭剤を含有し得る。
【０３６６】
非経口投与に好適な製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤及び製剤を対象のレシピエントの血液と等張にする溶質を含有し得る、水性及び非水性の等張性無菌注射液剤と、懸濁化剤、可溶化剤、粘稠化剤、安定剤及び防腐剤を含み得る、水性及び非水性の無菌懸濁剤が含まれる。
【０３６７】
医薬組成物を製剤化するために使用される成分は、好ましくは高純度のものであり、潜在的に有害な汚染物質を実質的に含まない（例えば、少なくとも国立食品（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｏｄ）（ＮＦ）グレード、一般には少なくとも分析グレード、より典型的には少なくとも医薬品グレード）。更に、ｉｎ  ｖｉｖｏ使用を意図した組成物は、通常無菌である。所与の化合物を使用前に合成する必要がある場合には、得られる生成物は、典型的に、その合成または精製プロセス中に存在し得る、潜在的に有毒ないずれの作用物質、特に、あらゆる内毒素を実質的に含まない。非経口投与用組成物もまた、無菌であり、実質的に等張であり、ＧＭＰ条件下で作製される。
【０３６８】
製剤は、脳または中枢神経系で保持され、安定化するように最適化され得る。作用物質が頭蓋区画に投与される場合、その作用物質がその区画内に保持され、拡散せず、または拡散しても血液脳関門を通過しないことが望ましい。安定化技法には、分子量の増加を達成するために、架橋、多量体化、またはポリエチレングリコール、ポリアクリルアミド、中性タンパク質担体などの基への連結などが含まれる。
【０３６９】
保持を増大させるための他の方策には、本開示の作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を生分解性または生体侵食性インプラント中に封じ込めることが含まれる。治療的活性物質の放出速度は、ポリマーマトリックスを介した輸送速度及びインプラントの生分解速度によって制御される。ポリマーバリアを通過する薬物の輸送はまた、化合物の溶解性、ポリマーの親水性、ポリマーの架橋度、ポリマーバリアの薬物に対する透過性を高めるような吸水時のポリマーの膨張、インプラントの形状などにより影響を受ける。インプラントは、埋込部位として選択された領域の大きさ及び形状に相応する寸法のものである。インプラントは、粒子、シート、パッチ、プラーク、繊維、マイクロカプセルなどであってよく、選択された挿入部位に適合する任意の大きさまたは形状であってよい。
【０３７０】
インプラントは、モノリシック、すなわち、活性物質がポリマーマトリックス全体に均一に分布されていてもよいし、または、カプセル化されてもよく、この場合、活性物質のリザーバがポリマーマトリックスによってカプセル化される。採用されるポリマー組成物の選択は、投与部位、所望の治療期間、患者の耐性、治療対象の疾患の性質などによって変化する。ポリマーの特徴には、埋込部位での生分解性、対象の作用物質との適合性、カプセル化の容易性、生理学的環境での半減期が含まれる。
【０３７１】
採用され得る生分解性ポリマー組成物は、分解したときにモノマーなどの生理学的に許容される分解生成物を生じる、有機エステルまたはエーテルであり得る。無水物、アミド、オルトエステルなどを、単独でまたは他のモノマーと組み合わせて使用することができる。ポリマーは、縮合ポリマーである。ポリマーは、架橋されていても架橋されていなくてもよい。特に対象となるのは、ヒドロキシ脂肪族カルボン酸のポリマー（ホモポリマーまたはコポリマーのいずれか）及び多糖である。対象となるポリエステルには、Ｄ−乳酸、Ｌ−乳酸、ラセミ乳酸、グリコール酸、ポリカプロラクトン及びこれらの組み合わせのポリマーが含まれる。Ｌ−乳酸エステルまたはＤ−乳酸エステルを採用することで、ゆっくり生分解するポリマーが得られ、ラセミ体を含む場合、分解は実質的に増大する。グリコール酸と乳酸のコポリマーは、グリコール酸と乳酸の比率により生分解速度が制御されることから特に対象となる。最も迅速に分解されるコポリマーは、ほぼ同量のグリコール酸と乳酸を有するものであり、この場合、いずれかのホモポリマーが分解に対してより大きい抵抗性がある。グリコール酸と乳酸の比率は、インプラントの脆性に影響し、大きい形状には、可撓性のより大きいインプラントが望ましい。対象となる多糖には、アルギン酸カルシウム及び官能化セルロース、特に、非水溶性であり分子量が約５ｋＤ〜５００ｋＤであることを特徴とするカルボキシメチルセルロースエステルなどがある。生分解性ヒドロゲルを本開示のインプラントに採用してもよい。ヒドロゲルは、典型的に、液体を吸収する能力を特徴とするコポリマー材料である。採用され得る例示的な生分解性ヒドロゲルは、Ｈｅｌｌｅｒ  ｉｎ：Ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｎ．Ａ．Ｐｅｐｐｅｓ  ｅｄ．，Ｖｏｌ．ＩＩＩ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．，１９８７，ｐｐ  １３７−１４９に記載されている。
【０３７２】
薬物の用量
本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を含有する本開示の医薬組成物は、既知の方法に従って、例えば、ボーラスもしくはある期間にわたる連続注入による静脈内投与、筋肉内、腹腔内、脳髄内、頭蓋内、脊髄内、皮下、関節内、髄液内、髄腔内、経口、局所または吸入の各経路によって、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質での治療を必要とする個体、好ましくはヒトに投与することができる。
【０３７３】
本開示の医薬組成物の用量及び所望の薬物濃度は、想定される具体的な用途に応じて変化し得る。適切な用量または投与経路の決定は、十分に当業者の技術範囲内である。動物実験は、ヒト治療に対する有効量を決定するための信頼性の高い指針を提供する。有効量の種間スケーリングは、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ，Ｊ．ａｎｄ  Ｃｈａｐｐｅｌｌ，Ｗ．「Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ  Ｓｃａｌｉｎｇ  ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，」  Ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｙａｃｏｂｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８９，ｐｐ．４２−４６に記載の原則に従って実施することができる。
【０３７４】
本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質のうちのいずれか（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体のうちのいずれか）のｉｎ  ｖｉｖｏ投与の場合、通常用量は、投与経路に応じて、１日当たり個体の体重の約１０ｎｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ以上、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日で変化し得る。数日またはそれより長い期間の反復投与の場合、治療は、治療される疾患、障害または病態の重症度に応じて、症状の所望の抑制が達成されるまで継続される。
【０３７５】
例示的な投薬レジメンは、約２ｍｇ／ｋｇの初回用量の本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与し、続いて、約１ｍｇ／ｋｇの週１回の維持用量を隔週で投与することを含み得る。医師が達成しようとする薬物動態減衰のパターンに応じて、他の投薬レジメンが有用である場合もある。例えば、週１〜２１回の個体への投薬が本明細書において企図される。特定の実施形態において、約３μｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇの範囲（約３μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約３０μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ及び約２／ｍｇ／ｋｇなど）での投薬を用いることができる。特定の実施形態において、投薬頻度は、１日３回、１日２回、１日１回、隔日１回、週１回、２週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回もしくは月１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回またはそれ以上である。治療法の経過は、従来の技法及びアッセイによって容易に観察される。投薬レジメンは、投与されるＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を含め、使用される用量とは関係なく、経時的に変えてもよい。
【０３７６】
特定のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、特定の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）の用量は、当該Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）の投与を１回以上受けている個体で経験的に決定され得る。個体には、漸増用量のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）が投与される。Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）の有効性を評価するために、本開示の疾患、障害または病態（例えば、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、痙攣、網膜ジストロフィー、外傷性脳損傷、脊髄損傷、長期抑圧、アテローム動脈硬化性血管疾患及び正常老化の望ましくない症状）のうちのいずれかの臨床症状が観察され得る。
【０３７７】
Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）の投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与の目的が治療的であるか予防的であるか、また当業者に既知の他の因子に応じて、連続的または断続的であり得る。Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）の投与は、予め選択された期間にわたって本質的に連続的になされてもよいし、一連の間隔を空けた投与であってもよい。
【０３７８】
具体的な用量及び送達の方法に関する指針は、文献に提供されており、例えば、米国特許第４，６５７，７６０号；同第５，２０６，３４４号；または同第５，２２５，２１２号を参照されたい。異なる処方が異なる治療及び異なる障害に有効であり、特定の器官または組織の治療を意図した投与が別の器官または組織への投与とは異なる方法で送達される必要があり得ることは、本開示の範囲内である。更に、用量は、１回以上の別個の投与によって、または連続注入によって投与され得る。数日またはそれより長い期間の反復投与の場合、治療は、病態に応じて、疾患症状の所望の抑制が生じるまで継続される。しかしながら、他の投薬レジメンが有用な場合もある。治療法の経過は、従来の技法及びアッセイによって容易に観察される。
【０３７９】
治療用途
本開示の更なる態様は、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性の調節（例えば、活性化または阻害する）、例えば、限定するものではないが、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質の調節（例えば、活性化または阻害）、Ｓｙｋ、ＬＣＫ、ＦＹＭ及び／またはＺＡＰ７０などのＳｒｃファミリーチロシンキナーゼによるＴｙｒ−４３３及びＴｙｒ−４５６の１つ以上のリン酸化の相殺；チロシン特異性タンパク質ホスファターゼＳＨＰ１及びＳＨＰ２の動員及び結合；Ｄｙｎａｍｉｎｉ−１のグアニンヌクレオチド交換因子として作用するＰＬＣ−γ１の動員及び結合；ＳＨ２−ドメイン含有タンパク質（例えば、Ｃｒｋｌ）の動員及び結合；脾臓チロシンキナーゼＳｙｋの動員及び結合；ＳＨ３−ＳＨ２−ＳＨ３成長因子受容体結合タンパク質２（Ｇｒｂ２）の動員及び結合；多数のＳＨ２含有タンパク質の動員及び結合；１つ以上の炎症促進性サイトカインの発現調節（例えば、活性化または阻害）（ここで、任意に、１つ以上の抗炎症性サイトカインは、ＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＩＬ−１α、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１−βから選択される）；マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球及びミクログリア細胞から選択される１つ以上の細胞における１つ以上の炎症促進性サイトカインの発現調節（例えば、活性化または阻害）；１つ以上の抗炎症性サイトカイン（ここで、任意に、１つ以上の抗炎症性サイトカインは、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−３５、ＩＬ−１６、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１Ｒａ、Ｇ−ＣＳＦから選択される）及びＴＮＦ、ＩＦＮ−β１ａ、ＩＦＮ−β１ｂまたはＩＬ−６の可溶性受容体の発現調節（例えば、活性化または阻害）；マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球及びミクログリア細胞から選択される１つ以上の細胞における１つ以上の抗炎症性サイトカインの発現調節（例えば、活性化または阻害）；Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ及びＰＹＣＡＲＤから選択される１つ以上のタンパク質の発現調節（例えば、活性化または阻害）；細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化の活性化；１つ以上の細胞タンパク質に対するチロシンリン酸化の調節（例えば、活性化または阻害）（ここで、任意に、１つ以上の細胞タンパク質はＺＡＰ−７０を含み、チロシンリン酸化はＺＡＰ−７０のＴｙｒ−３１９に生じる）；Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現調節（例えば、活性化または阻害）；ＣＣＬ１９発現細胞及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞走化性の活性化；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、Ｍ��ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、Ｍ２ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球及びＭ２  ＮＫ細胞から選択される１つ以上の細胞によって誘導されるＴ細胞増殖の調節（例えば、活性化または阻害）；破骨細胞生成の調節（例えば、活性化または阻害）、破骨細胞形成速度の調節（例えば、活性化または阻害）、またはその両方；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の生存調節（例えば、活性化または阻害）；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の増殖調節（例えば、活性化または阻害）；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の遊走調節（例えば、活性化または阻害）；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の１つ以上の機能の調節（例えば、活性化または阻害）；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア及びＭ２ミクログリアから選択される１つ以上の細胞の成熟調節（例えば、活性化または阻害）；アポトーシス性ニューロンクリアランス、神経組織破片クリアランス、機能��全シナプスクリアランス、非神経組織破片クリアランス、細菌クリアランス、他の異物クリアランス、病因タンパク質クリアランス、病因ペプチドクリアランス及び腫瘍細胞クリアランスから選択される１種以上のクリアランスの活性化（ここで、任意に、病因タンパク質は、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）
翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択され、腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫及び甲状腺癌から選択されるがんに由来する）；アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、機能不全シナプス、非神経組織破片、細菌、他の異物、病因タンパク質、病因ペプチド、病因核酸または腫瘍細胞のうちの１つ以上の食作用の活性化（ここで、任意に、病因核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡであり、病因タンパク質は、アミロイドβ、アミロイドβオリゴマー、アミロイドβ斑、アミロイド前駆体タンパク質またはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択され、腫瘍細胞は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫または甲状腺癌から選択されるがんに由来する）；腫瘍細胞に対するＳｉｇｌｅｃ−９リガンドの結合阻害；好中球、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、マクロファージ及びＮＫ細胞から選択される細胞に対するＳｉｇｌｅｃ−９リガンドの結合調節（例えば、活性化または阻害）；ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上による腫瘍細胞殺傷の活性化；ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上の抗腫瘍細胞増殖活性の活性化；ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷��性Ｔ細胞のうちの１つ以上の抗腫瘍細胞転移活性の活性化；１つ以上のＩＴＡＭモチーフ含有受容体の調節（例えば、活性化または阻害）（ここで、任意に、１つ以上のＩＴＡＭモチーフ含有受容体は、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、Ｓｉｒｐβ、ＦｃｇＲ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２から選択される）；１つ以上のパターン認識受容体（ＰＲＲ）によるシグナル伝達の調節（例えば、活性化または阻害）（ここで、任意に、１つ以上のＰＲＲは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を特定する受容体、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を特定する受容体及びこれらの任意の組み合わせから選択される）；モチーフＤ／Ｅｘ０−２ＹｘｘＬ／ＩＸ６−８ＹｘｘＬ／Ｉ（配列番号２５２）を含む１つ以上の受容体の調節（例えば、活性化または阻害）；１つ以上のＴｏｌｌ様受容体によるシグナル伝達の調節（例えば、活性化または阻害）；ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路の調節（例えば、活性化または阻害）；活性化Ｂ細胞の核内因子κ軽鎖エンハンサー（ＮＦκＢ）の調節（例えば、活性化または阻害）；ＩＴＡＭモチーフ含有受容体のリン酸化；１つ以上の炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または受容体の発現調節（例えば、活性化または阻害）（ここで、任意に、１つ以上の炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または受容体はＣＤ８６、Ｃ１ｑａ、Ｃ１ｑＢ、Ｃ１ｑＣ、Ｃ１ｓ、Ｃ１Ｒ、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、ＩＴＧＢ２、ＨＭＯＸ１、ＬＡＴ２、ＣＡＳＰ１、ＣＳＴＡ、ＶＳＩＧ４、ＭＳ４Ａ４Ａ、Ｃ３ＡＲ１、ＧＰＸ１、ＴｙｒｏＢＰ、ＡＬＯＸ５ＡＰ、ＩＴＧＡＭ、ＳＬＣ７Ａ７、ＣＤ４、ＩＴＧＡＸ、及び／またはＰＹＣＡＲＤを含み、１つ以上の炎症性受容体、補体カスケードタンパク質、及び／または受容体は、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞のうちの１つ以上に発現している）；１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９依存的遺伝子の発現調節（例えば、活性化または阻害）；破壊されたＳｉｇｌｅｃ−９依存的遺伝子発現の正常化；１つ以上のＩＴＡＭ依存的遺伝子の発現調節（例えば、活性化または阻害）（ここで、任意に、１つ以上のＩＴＡＭ依存的遺伝子は、活性化Ｔ細胞核内因子（ＮＦＡＴ）転写因子によって活性化される）；免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の機能の救援；免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の腫瘍への浸潤減少；腫瘍、末梢血または他のリンパ系器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞の数の増加；骨髄由来抑制細胞の腫瘍促進活性の向上；腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現上昇（ここで、任意に、腫瘍促進性サイトカインはＴＧＦ−βまたはＩＬ−１０である）；腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤の増加；骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の腫瘍促進活性の向上；腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球の活性低下；腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性ＮＫ細胞の浸潤減少；ＮＫ細胞の潜在的腫瘍殺傷能力の低下；免疫応答を増大させる能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｂリンパ球の浸潤減少；腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球の浸潤減少；腫瘍体積の増加；腫瘍成長速度の増加；転移の増加；腫瘍再発率の増加；抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法または１つ以上のがんワクチンの有効性の低下（ここで、任意に、１つ以上の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＳＦ−１受容体及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の標的タンパク質を標的にする免疫療法である）；ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害；ならびに／あるいはＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害を、それを必要とする個体において、治療上有効な量の本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を個体に投与することによって、当該個体におけるＳｉｇｌｅｃ−９活性のうちの１つ以上を調節（例えば、活性化または阻害）する方法を提供する。
【０３８０】
本明細書に開示されるように、Ｓｉｇｌｅｃ−９に結合するか、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるか、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質、またはそれらの任意の組み合わせ（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびに膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性もしくは特発性骨髄線維症、原発性もしくは特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、甲状腺癌を含むがん、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶＩ型、ならびに／またはインフルエンザ菌を予防し、そのリスクを低下させ、または治療するために使用され得る。いくつかの実施形態において、作用物質は、抗体、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ−９イムノアドヘシン、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドと結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害薬、タンパク質及びペプチドから選択される。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質は、アゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質は、不活性抗体である。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質は、アンタゴニスト抗体である。
【０３８１】
いくつかの実施形態において、本開示は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるか、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害するか、その両方を行う本開示の作用物質の治療上有効な量を、それを必要とする個体に投与することによって、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびに膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性もしくは特発性骨髄線維症、原発性もしくは特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、甲状腺癌を含むがん、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶＩ型、ならびに／またはインフルエンザ菌を予防し、そのリスクを低下させ、または治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、作用物質は、抗体、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ−９イムノアドヘシン、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドと結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害薬、タンパク質及びペプチドから選択される。いくつかの実施形態において、作用物質は、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体である。
【０３８２】
いくつかの実施形態において、本開示は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるか、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害するか、その両方を行う本開示の作用物質の治療上有効な量を、それを必要とする個体に投与することによって、がんを予防し、そのリスクを低下させ、または治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、作用物質は、抗体、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ−９イムノアドヘシン、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドと結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害薬、タンパク質及びペプチドから選択される。特定の実施形態において、作用物質は、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、（ａ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連抑制性好中球、腫瘍関連抑制性ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の増殖、成熟、遊走、分化及び／または機能の促進；（ｂ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連抑制性好中球、腫瘍関連抑制性ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の腫瘍への浸潤増大；（ｃ）腫瘍、末梢血または他のリンパ系器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球免疫抑制性細胞の数の増加；（ｄ）骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の腫瘍促進活性の向上；（ｅ）腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現上昇（ここで、任意に、腫瘍促進性サイトカインはＴＧＦ−βまたはＩＬ−１０である）；（ｆ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤の増加；（ｇ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球の活性低下；（ｈ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｔリンパ球の浸潤減少；（ｉ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異性ＮＫ細胞の浸潤減少；（ｊ）ＮＫ細胞の潜在的腫瘍殺傷能力の低下；（ｋ）免疫応答を増大させる能力を潜在的に有する腫瘍特異性Ｂリンパ球の浸潤減少；（ｌ）腫瘍体積の増加；（ｍ）腫瘍成長速度の増加；（ｎ）転移の増加；（ｏ）腫瘍再発率の増加；（ｐ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法（ここで、任意に、１つ以上の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＳＦ−１受容体及びこれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の標的タンパク質を標的にする免疫療法である）またはがんワクチンの有効性の低下；（ｑ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害；ならびに（ｒ��ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害から選択される１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を阻害する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、（ａ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の増殖、成熟、遊走、分化及び／または機能の促進；（ｂ）免疫抑制性樹状細胞、免疫抑制性マクロファージ、免疫抑制性好中球、非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ及び制御性Ｔ細胞のうちの１つ以上の、腫瘍への浸潤の増強；（ｃ）腫瘍、末梢血または他のリンパ器官における腫瘍促進性骨髄／顆粒球性免疫抑制細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の数の増加；（ｄ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞及び／または非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の腫瘍促進活性の増強；（ｅ）腫瘍または末梢血における腫瘍促進性サイトカインの発現増大（ここで、任意に、腫瘍促進サイトカインはＴＧＦ−βまたはＩＬ−１０である）；（ｆ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤の増大；（ｇ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化の減少；（ｈ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の浸潤の減少；（ｉ）腫瘍殺傷能力を潜在的に有する腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤の減少；（ｊ）ＮＫ細胞の腫瘍殺傷能力の低下；（ｋ）免疫応答の増強能力を潜在的に有する腫瘍特異的Ｂリンパ球の浸潤の減少；（ｌ）腫瘍体積の増大；（ｍ）腫瘍成長速度の増加；（ｎ）転移の増大；（ｏ）腫瘍再発率の増加；（ｐ）１つ以上のＰＤ−１リガンドの発現増大；（ｑ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する１つ以上の免疫療法（ここで、任意に、１つ以上の免疫療法が、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ＤＲ−５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＳＦ−１受容体、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のタンパク質を標的とする免疫療法である）または１つ以上のがんワクチンの有効性の低下、（ｒ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害；（ｓ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害；ならびに（ｔ）１つ以上の化学療法剤の有効性の低下（ここで、任意に、１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））及びそれらの任意の組み合わせである）からなる群から選択される１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を阻���する。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、（ａ）腫瘍浸潤性ＣＤ３＋Ｔ細胞の数の増加、（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞におけるＳｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルの低下（ここで、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が腫瘍浸潤性細胞であり、あるいは、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が血中に存在する）；（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の数の減少（ここで、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が腫瘍浸潤性細胞であり、あるいは、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が血中に存在する）；（ｄ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｅ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｆ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ２レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｇ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ３レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｈ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２００Ｒレベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｉ）１つ以上の細胞におけるＣＤ１６３レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｊ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２０６レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｋ）固形腫瘍の腫瘍増殖率の低下；（ｌ）腫瘍体積の減少；（ｍ）１つ以上のＰＤ−１阻害剤の有効性の向上；（ｎ）１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法の有効性の向上（ここで、任意に、１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法が、１つ以上のＣＴＬＡ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、またはそれらの任意の組み合わせを標的とする）；（ｏ）１つ以上の化学療法剤の有効性の向上（ここで、任意に、１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））及びそれらの任意の組み合わせである）；（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞の増殖の増大；（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存及び／または１つ以上の機能の阻害；ならびに（ｒ）化学的または放射性毒素にコンジュゲートした場合における、固形腫瘍及び関連する血管における、Ｓｉｇｌｅｃ−９発現免疫抑制性骨髄細胞及び／またはＣＤ１４発現細胞の殺傷からなる群から選択される１つ以上の活性を呈���る。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、疾患、障害または損傷はがんであり、作用物質は、（ａ）腫瘍浸潤性ＣＤ３＋Ｔ細胞の数の増加；（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞におけるＳｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルの低下（ここで、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が腫瘍浸潤性細胞であり、あるいは、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が血中に存在する）；（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の数の減少（ここで、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が腫瘍浸潤性細胞であり、あるいは、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が血中に存在する）；（ｄ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｅ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｆ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ２レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｇ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ３レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｈ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２００Ｒレベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｉ）１つ以上の細胞におけるＣＤ１６３レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｊ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２０６レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｋ）固形腫瘍の腫瘍増殖率の低下；（ｌ）腫瘍体積の減少；
（ｍ）１つ以上のＰＤ−１阻害剤の有効性の向上；（ｎ）１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法の有効性の向上（ここで、任意に、１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法が、１つ以上のＣＴＬＡ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、またはそれらの任意の組み合わせを標的とする）；（ｏ）１つ以上の化学療法剤の有効性の向上（ここで、任意に、１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））及びそれらの任意の組み合わせである）；（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞の増殖の増大；（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存及び／または１つ以上の機能の阻害；ならびに（ｒ）化学的または放射性毒素にコンジュゲートした場合における、固形腫瘍及び関連する血管における、Ｓｉｇｌｅｃ−９発現免疫抑制性骨髄細胞及び／またはＣＤ１４発現細胞の殺傷からなる群から選択される１つ以上の活性を呈する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、作用物質は、（ａ）腫瘍浸潤性ＣＤ３＋Ｔ細胞の数の増加；（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞におけるＳｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルの低下（ここで、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が腫瘍浸潤性細胞であり、あるいは、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が血中に存在する）；（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞の数の減少（ここで、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が腫瘍浸潤性細胞であり、あるいは、任意に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄細胞が血中に存在する）；（ｄ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｅ）１つ以上の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｆ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ２レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｇ）１つ以上の細胞におけるＢ７−Ｈ３レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｈ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２００Ｒレベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｉ）１つ以上の細胞におけるＣＤ１６３レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｊ）１つ以上の細胞におけるＣＤ２０６レベルの低下（ここで、任意に、１つ以上の細胞が非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である）；（ｋ）固形腫瘍の腫瘍増殖率の低下；（ｌ）腫瘍体積の減少；（ｍ）１つ以上のＰＤ−１阻害剤の有効性の向上；（ｎ）１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法の有効性の向上（ここで、任意に、１つ以上のチェックポイント阻害剤療法及び／または免疫調節療法が、１つ以上のＣＴＬＡ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、またはそれらの任意の組み合わせを標的とする）；（ｏ）１つ以上の化学療法剤の有効性の向上（ここで、任意に、１つ以上の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））及びそれらの任意の組み合わせである）；（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞の増殖の増大；（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存及び／または１つ以上の機能の阻害；ならびに（ｒ）化学的または放射性毒素にコンジュゲートした場合における、固形腫瘍及び関連する血管における、Ｓｉｇｌｅｃ−９発現免疫抑制性骨髄細胞及び／またはＣＤ１４発現細胞の殺傷からなる群から選択される１つ以上の活性を呈する。
【０３８３】
本明細書で開示されるように、本開示の作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）はまた、１つ以上の免疫細胞（例えば、自然免疫細胞または適応免疫細胞）の生存  成熟、機能、遊走または増殖を誘導及び／または促進するのに使用され得る。いくつかの実施形態において、本開示は、それを必要とする個体において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させるか、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害するか、その両方を行う本開示の作用物質の治療上有効な量を当該対象に投与することによって、１つ以上の免疫細胞の生存、成熟、機能、遊走または増殖を誘導または促進する方法を提供する。いくつかの実施形態において、作用物質は、抗体、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ−９イムノアドヘシン、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドと結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害薬、タンパク質及びペプチドから選択される。いくつかの実施形態において、作用物質は、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体である。いくつかの実施形態において、１つ以上の免疫細胞は、樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、ミクログリア、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
【０３８４】
本開示の他の態様は、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合または相互作用する作用物質に対する、それを必要とする被験者の応答性の評価方法に関し、方法は、ａ．抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を被験者に投与する前に、被験者から得られた血液サンプル中の非腫瘍形成性骨髄細胞上のＣＤ４５＋及びＣＤ１４＋の発現レベルを測定し；ｂ．被験者に治療有効量の作用物質を投与し；ならびにｃ．抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の投与後に被験者から得られた血液サンプル中の非腫瘍形成性骨髄細胞上のＣＤ４５＋及びＣＤ１４＋の発現レベルを測定することを含み、ここで、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の投与後の非腫瘍形成性骨髄細胞上のＣＤ４５＋ＣＤ１４＋レベルの減少は、被験者が作用物質に応答性であることを示す。いくつかの実施形態において、応答性の評価方法は、１つ以上のさらなる治療有効量の作用物質を投与することをさらに含む。前述の実施形態のいずれかと組み合わせてもよいいくつかの実施形態において、作用物質は、抗体、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ−９イムノアドヘシン、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害剤、タンパク質、及びペプチドからなる群から選択される。血液サンプルなどの試料を得るための任意の適切な方法を使用し得る。いくつかの実施形態において、応答性の評価方法は、１つ以上のさらなる治療有効量の作用物質を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、作用物質は、抗体、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ−９イムノアドヘシン、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃイムノアドヘシン、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害剤、タンパク質、及びペプチドからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、作用物質は、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体または抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体複合体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体である。いくつかの実施形態において、被験者はヒトである。
【０３８５】
いくつかの実施形態において、作用物質は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、作用物質は、初めにアゴニストとして作用し、次いで、長期アンタゴニスト抗体として作用する、本開示の一過性抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、作用物質は、不活性抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体である。いくつかの実施形態において、作用物質は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベル（例えば、細胞表面、細胞内または合計のレベル）を低下させる。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の分解を誘導する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の切断を誘導する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の内在化を誘導する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の遊離を誘導する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９発現の下方制御を誘導する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を阻害する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９を一時的に活性化し、次いで、Ｓｉｇｌｅｃ−９の分解を誘導する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９を一時的に活性化し、次いで、Ｓｉｇｌｅｃ−９の切断を誘導する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９を一時的に活性化し、次いで、Ｓｉｇｌｅｃ−９の内在化を誘導する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９を一時的に活性化し、次いで、Ｓｉｇｌｅｃ−９の遊離を誘導する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９発現を一時的に活性化し、次いで、Ｓｉｇｌｅｃ−９発現の下方制御を誘導する。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９を一時的に活性化し、次いで、Ｓｉｇｌｅｃ−９の発現低下を誘導する。特定の実施形態において、個体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９バリアントアレルを有する。
【０３８６】
本明細書に開示されるように、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、または相互作用する本開示の作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、更に、制御性Ｔ細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性樹状細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性マクロファージ、腫瘍埋没型免疫抑制性好中球、腫瘍埋没型免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞及び／または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能または生存を低下させるために使用され得る。いくつかの実施形態において、本開示は、それを必要とする個体において、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、または相互作用する作用物質の治療上有効な量を当該個体に投与することによって、制御性Ｔ細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性樹状細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性マクロファージ、腫瘍埋没型免疫抑制性好中球、腫瘍埋没型免疫抑制性ＮＫ細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能または生存を低下させる方法を提供する。いくつかの実施形態において、作用物質は、抗体、アンタゴニスト抗体、不活性抗体、アゴニスト抗体、Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンド、Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンドアゴニスト断片、Ｓｉｇｌｅｃ−９イムノアドヘシン、Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンド模倣物質、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃ融合タンパク質、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドと結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドと結合するＳｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質及び小分子化合物から選択される。いくつかの実施形態において、作用物質は、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体または抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体コンジュゲートである。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体コンジュゲートは、検出可能なマーカー、毒素または治療用物質にコンジュゲートされた抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を含む。
【０３８７】
本明細書に開示されるように、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、または相互作用する本開示の作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、限定するものではないが、赤血球、細菌細胞、アポトーシス性細胞、神経細胞、グリア細胞、ミクログリア、アストロサイト、腫瘍細胞、ウイルス、樹状細胞、βアミロイド斑に結合したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、タウのもつれに結合したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、病因タンパク質上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、病因ペプチド上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、マクロファージ、好中球、ナチュラルキラー細胞、単球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、Ｂ細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性樹状細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性マクロファージ、骨髄由来抑制細胞及び／または制御性Ｔ細胞を含む、１つ以上の細胞におけるＳｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルをｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで低下させるために使用され得る。いくつかの実施形態において、本開示は、それを必要とする個体において、Ｓｉｇｌｅｃ−９と結合し、または相互作用する作用物質の治療上有効な量を当該個体に投与することによって、１つ以上の細胞におけるＳｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルを低下させる方法を提供する。いくつかの実施形態において、作用物質は、抗体、アンタゴニスト抗体、不活性抗体、アゴニスト抗体、Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンド、Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンドアゴニスト断片、Ｓｉｇｌｅｃ−９イムノアドヘシン、Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンド模倣物質、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体、Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃ融合タンパク質、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドと結合する可溶性Ｓｉｇｌｅｃ受容体、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドと結合するＳｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質及び小分子化合物から選択される。いくつかの実施形態において、作用物質は、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体または抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体コンジュゲートである。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体コンジュゲートは、検出可能なマーカー、毒素または治療用物質にコンジュゲートされた抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の細胞は、赤血球、細菌細胞、アポトーシス性細胞、神経細胞、グリア細胞、ミクログリア、アストロサイト、腫瘍細胞、ウイルス、樹状細胞、βアミロイド斑に結合したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、タウのもつれに結合したＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、病因タンパク質上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、病因ペプチド上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンド、マクロファージ、好中球、ナチュラルキラー細胞、単球、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、Ｂ細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性樹状細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性マクロファージ、骨髄由来抑制細胞、制御性Ｔ細胞及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
【０３８８】
Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルは、限定するものではないが、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベル、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞内レベル及びＳｉｇｌｅｃ−９の総レベルを指し得る。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルの低下は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルの低下を含む。本明細書で使用されるとき、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、本明細書に記載されるまたは当該技術分野にて知られている任意のｉｎ  ｖｉｔｒｏセルベースアッセイまたは好適なｉｎ  ｖｉｖｏモデルによって測定したとき、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルにおいて２１％以上の低下を誘導する場合、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させる。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルの低下は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞内レベルの低下を含む。本明細書で使用されるとき、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、本明細書に記載されるまたは当該技術分野にて知られている任意のｉｎ  ｖｉｔｒｏセルベースアッセイまたは好適なｉｎ  ｖｉｖｏモデルによって測定したとき、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞内レベルにおいて２１％以上の低下を誘導する場合、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞内レベルを低下させる。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルの低下は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の総レベルの低下を含む。本明細書で使用されるとき、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、本明細書に記載されるまたは当該技術分野にて知られている任意のｉｎ  ｖｉｔｒｏセルベースアッセイまたは好適なｉｎ  ｖｉｖｏモデルによって測定したとき、Ｓｉｇｌｅｃ−９の総レベルにおいて２１％以上の低下を誘導する場合、Ｓｉｇｌｅｃ−９の総レベルを低下させる。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の分解、Ｓｉｇｌｅｃ−９の切断、Ｓｉｇｌｅｃ−９の内在化、Ｓｉｇｌｅｃ−９の遊離及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９発現の下方制御を誘導する。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞レベルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏセルアッセイを利用して、初代細胞（例えば、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア及びマクロファージ）または細胞株で測定される。
【０３８９】
いくつかの実施形態において、個体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９のヘテロ接合性バリアントを有する。
【０３９０】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、更に、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体または二重特異性抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）と、パターン認識受容体に結合する抗体、Ｔｏｌｌ様受容体に結合する抗体、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）受容体に結合する抗体及び／またはサイトカインに結合する抗体もしくはインターロイキンに結合する抗体）との共投与を伴い得る。
【０３９１】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体を個体に投与すること、及び／または１つ以上の標準的もしくは治験中抗がん療法を実施することを更に含み得る。いくつかの実施形態において、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体が抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂリンパ球Ｔリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー抑制性受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ−１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＭ−４抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ７３抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−５抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−７抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１１抗体、抗ＴＲＥＭ１アンタゴニスト抗体、抗ＴＲＥＭ２アンタゴニスト抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＣＤ２抗体、抗ＣＤ５抗体、ならびにこれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、１つ以上の標準的または治験中抗がん療法は、放射線治療、細胞毒性化学療法、標的治療、イマチニブ療法、トラスツズマブ療法、エタネルセプ療法、養子細胞移入（ＡＣＴ）療法、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ−Ｔ）療法、ワクチン療法及びサイトカイン療法から選択される。
【０３９２】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を個体に投与することを更に含み得る。いくつかの実施形態において、抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
【０３９３】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を個体に投与することを更に含み得る。いくつかの実施形態において、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、抗ＣＤ４０アゴニスト抗体、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体、抗ＩＣＯＳアゴニスト抗体、抗ＣＤ２８アゴニスト抗体、抗ＴＲＥＭ１アゴニスト抗体、抗ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体、抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢアゴニスト抗体、抗ＣＤ２７アゴニスト抗体、抗糖質コルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲアゴニスト抗体、抗ＣＤ３０アゴニスト抗体、抗ＢＴＬＡアゴニスト抗体、抗ＨＶＥＭアゴニスト抗体、抗ＣＤ２アゴニスト抗体、抗ＣＤ５アゴニスト抗体、及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
【０３９４】
いくつかの実施形態において、本開示の方法は、少なくとも１つの刺激性サイトカインを個体に投与することを更に含み得る。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの刺激性サイトカインは、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの刺激性サイトカインは、ＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１−β及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
【０３９５】
認知症
認知症は、これまでに障害のなかった人において、正常な老化から予想され得るものを超える全体的認知能力の重大な損失として現れる非特異的症候群（すなわち、一連の徴候及び症状）である。認知症は、特有の全体的な脳損傷の結果として、変化しないこともある。あるいは、認知症は、進行性である場合もあり、身体の損傷または疾患によって長期的な減退がもたらされる。認知症は、高齢者集団においてより多く一般的にみられるが、６５歳以前に発症することもある。認知症によって影響を受ける認知領域には、限定するものではないが、記憶、注意持続時間、言語及び問題解決が含まれる。一般に、個体が認知症と診断されるまでには、少なくとも６ヶ月間、症状が存在する必要がある。
【０３９６】
認知症の例示的な形態には、限定するものではないが、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、意味性認知症及びレビー小体型認知症が含まれる。
【０３９７】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与することで、認知症を予防し、そのリスクを低下させ、及び／または治療することができる。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与することで、認知症を有する個体において、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を調節することができる。
【０３９８】
前頭側頭型認知症
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、脳の前頭葉の進行性変性から生じる病態である。この変性は、時間の経過とともに側頭葉に進むことがある。罹患率では、ＦＴＤは、アルツハイマー病（ＡＤ）に次いで、初老年性認知症症例の２０％を占める。ＦＴＤの臨床的特徴には、記憶障害、行動異常、人格変化及び言語障害が含まれる（Ｃｒｕｔｓ，Ｍ．＆  Ｖａｎ  Ｂｒｏｅｃｋｈｏｖｅｎ，Ｃ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．２４：１８６−１９４（２００８）；Ｎｅａｒｙ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５１：１５４６−１５５４（１９９８）；Ｒａｔｎａｖａｌｌｉ，Ｅ．，Ｂｒａｙｎｅ，Ｃ．，Ｄａｗｓｏｎ，Ｋ．＆Ｈｏｄｇｅｓ，Ｊ．Ｒ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５８：１６１５−１６２１（２００２））。
【０３９９】
ＦＴＤ症例のかなりの部分が常染色体優性の様式で遺伝するが、症状は、たとえ１つの家族であっても、行動障害を伴うＦＴＤから、原発性進行性失語まで、大脳皮質基底核神経節変性症までの範囲にわたることがある。ＦＴＤは、ほとんどの神経変性疾患と同様に、罹患脳における特定のタンパク質凝集の病理学的存在によって特徴付けることができる。歴史的に、ＦＴＤに関する最初の記載は、神経原線維変化またはピック球における異常にリン酸化されたタウタンパク質の神経細胞内蓄積の存在を認めたものである。微小管関連タンパク質タウの因果的役割は、いくつかの家族において、タウタンパク質をコードする遺伝子の変異を特定することによって裏付けられた（Ｈｕｔｔｏｎ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３９３：７０２−７０５（１９９８）。しかしながら、ＦＴＤ脳の大部分は、異常にリン酸化されたタウの蓄積を示さず、ユビキチン（Ｕｂ）及びＴＡＲ  ＤＮＡ結合タンパク質（ＴＤＰ４３）に対して免疫反応性を示す（Ｎｅｕｍａｎｎ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．６４：１３８８−１３９４（２００７））。Ｕｂ封入体（ＦＴＤ−Ｕ）を有するこれらのＦＴＤ症例の大部分は、プログラニュリン遺伝子に変異を持つことが示された。
【０４００】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与することで、ＦＴＤを予防し、そのリスクを低下させ、及び／または治療することができる。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与することで、ＦＴＤを有する個体において、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を調節することができる。
【０４０１】
アルツハイマー病
アルツハイマー病（ＡＤ）は、認知症の最も一般的な形態である。この疾患に治療法はなく、進行するにつれて悪化し、最終的には死に至る。ほとんどの場合、ＡＤは、６５歳を越えた人において診断される。しかしながら、あまり一般的ではない早期発症型のアルツハイマー病は、より早期に発症することがある。
【０４０２】
アルツハイマー病の一般的症状には、近時事象の想起困難などの行動症状；認知症状、混乱、易刺激性及び攻撃性、気分変動、言語障害ならびに長期の記憶喪失が含まれる。疾患が進行するにつれて、身体機能が失われ、最終的に死に至る。アルツハイマー病は、完全に明らかになるまでに未知の可変時間量で発症し、何年も診断未確定で進行する場合がある。
【０４０３】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与することで、アルツハイマー病を予防し、そのリスクを低下させ、及び／または治療することができる。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与することで、アルツハイマー病を有する個体において、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を調節することができる。
【０４０４】
パーキンソン病
特発性または原発性パーキンソニズム低運動性硬直症候群（ＨＲＳ）または振戦麻痺とも呼ばれることがあるパーキンソン病は、運動系制御に影響を与える神経変性脳障害である。脳内におけるドーパミン産生細胞の進行性死がパーキンソン病の主要な症状を引き起こす。ほとんどの場合、パーキンソン病は、５０歳を越えた人において診断される。パーキンソン病は、ほとんどの人で特発性（原因不明）である。しかしながら、遺伝的要因がこの疾患にも関与している。
【０４０５】
パーキンソン病の症状には、限定するものではないが、手、腕、足、顎及び顔の振戦、四肢及び胴の筋強剛、運動の遅さ（運動緩慢）、姿勢反射障害、歩行困難、神経精神障害、発語または行動の変化、うつ病、不安、疼痛、精神病、認知症、幻覚ならびに睡眠問題が含まれる。
【０４０６】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与することで、パーキンソン病を予防し、そのリスクを低下させ、または治療することができる。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与することで、パーキンソン病を有する個体において、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を調節することができる。
【０４０７】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）
本明細書で使用されるとき、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）または運動ニューロン疾患またはルーゲーリッグ病は、同じ意味で使用され、急速に進行する筋力低下、筋萎縮及び線維束性収縮、筋痙縮、発話困難（構音障害）、嚥下困難（嚥下障害）ならびに呼吸困難（呼吸障害）を特徴とする様々な病因を有する消耗性疾患を指す。
【０４０８】
プログラニュリンがＡＬＳに関与し（Ｓｃｈｙｍｉｃｋ，ＪＣ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．；７８：７５４−６）、ＴＤＰ−４３などのタンパク質に起因するＡＬＳによって生じる損傷を再保護する（Ｌａｉｒｄ，ＡＳ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）．ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ５：ｅ１３３６８）ことが示されている。ｐｒｏ−ＮＧＦがｐ７５を介して脊髄損傷後の希突起膠細胞及び皮質脊髄ニューロンの死を誘導することも実証された（Ｂｅａｔｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ（２００２），３６，ｐｐ．３７５−３８６；Ｇｉｅｈｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ（２００４），１０１，ｐｐ  ６２２６−３０）。
【０４０９】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与することで、ＡＬＳを予防し、そのリスクを低下させ、及び／または治療することができる。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与することで、筋萎縮性側索硬化症を有する個体において、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を調節することができる。
【０４１０】
ハンチントン病
ハンチントン病（ＨＤ）は、ハンチンチン遺伝子（ＨＴＴ）の常染色体優性変異によって引き起こされる遺伝性神経変性疾患である。ハンチンチン遺伝子内のサイトカイン−アデニン−グアニン（ＣＡＧ）のトリプレットリピートが増加すると、当該遺伝子によってコードされたハンチンチンタンパク質（Ｈｔｔ）の変異体が産生される。この変異ハンチンチンタンパク質（ｍＨｔｔ）は、毒性であり、ニューロン死に関与する。ハンチントン病の症状は、３５〜４４歳の間に現れるのが最も一般的であるが、あらゆる年齢で発生し得る。
【０４１１】
ハンチントン病の症状には、限定するものではないが、運動機能障害、痙攣様不規則運動（舞踏運動）、異常な眼球運動、バランス障害、痙攣、咀嚼困難、嚥下困難、認知障害、発語変化、記憶障害、思考困難、不眠、疲労、認知症、人格変化、うつ病、不安及び強迫的行動が含まれる。
【０４１２】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与することで、ハンチントン病（ＨＤ）を予防し、そのリスクを低下させ、及び／または治療することができる。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与することで、ハンチントン病を有する個体において、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を調節することができる。
【０４１３】
タウパチー病
タウパチー病またはタウオパチーは、脳内における微小管関連タンパク質タウの凝集によって引き起こされる神経変性疾患の一種である。アルツハイマー病（ＡＤ）が最もよく知られたタウパチー病であり、タウタンパク質がニューロン内で不溶性神経原線維変化（ＮＦＴ）の形態で蓄積することを伴う。他のタウパチー病及び障害には、進行性核上性麻痺、ボクサー認知症（慢性外傷性脳症）、１７番染色体に連鎖する前頭側頭型認知症パーキンソニズム、Ｌｙｔｉｃｏ−Ｂｏｄｉｇ病（グアムのパーキンソン−認知症複合症候群）、神経原線維変化優性認知症、神経節膠腫及び神経節細胞腫、髄膜血管腫症、亜急性硬化性全脳炎、鉛脳症、結節性硬化症、ハレルフォルデン・スパッツ病、リポフスチン症、ピック病、皮質基底核変性症、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、ハンチントン病、ならびに前頭側頭葉変性症が含まれる。
【０４１４】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与することで、タウパチー病を予防し、そのリスクを低下させ、及び／または治療することができる。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与することで、タウパチー病を有する個体において、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を調節することができる。
【０４１５】
多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）は、散在性硬化症または散在性脳脊髄炎と呼ばれることもある。ＭＳは、脳及び脊髄の軸索を覆う脂質性ミエリン鞘が損傷を受けて、脱髄及び瘢痕化ならびに広範な徴候及び症状が生じる炎症性疾患である。ＭＳは、脳及び脊髄の神経細胞が互いに有効的に情報伝達を行う能力に影響を及ぼす。神経細胞は、ミエリンと呼ばれる絶縁性物質内にある軸索と呼ばれる長い線維に沿って活動電位と呼ばれる電気信号を送ることによって情報を伝達している。ＭＳでは、身体自体の免疫系がミエリンを攻撃し、損傷を与える。ミエリンが失われると、軸索は、シグナル伝達を有効的に行うことができなくなる。ＭＳ発症は、通常、若年成人で起こり、女性でより一般的である。
【０４１６】
ＭＳの症状には、限定するものではないが、感覚欠如または打診痛などの感覚変化；感覚減退及び感覚異常などの刺痛またはしびれ感；筋力低下；クローヌス；筋痙攣；移動困難；運動失調などの協調及びバランス困難；構音障害などの発語障害または嚥下障害などの嚥下困難；眼振、視神経炎（眼閃を含む）及び複視などの視覚問題；疲労；急性もしくは慢性の疼痛；ならびに膀胱及び腸管障害；様々な程度の認知障害；うつ病または気分不安定の感情症状；通常の周辺温度よりも高い温度に曝されることにより現存する症状が憎悪するウートホフ現象；ならびに頸部を曲げると背中から下方に電気が走ったような感覚があるレルミット徴候が含まれる。
【０４１７】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与することで、多発性硬化症を予防し、そのリスクを低下させ、及び／または治療することができる。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与することで、多発性硬化症を有する個体において、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を調節することができる。
【０４１８】
がん
本開示の更なる態様は、それを必要とする個体に、治療上有効な量の本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与することによって、がんを予防し、そのリスクを低下させ、または治療するための方法を提供する。本開示の単離された抗体のいずれも、これらの方法で使用することができる。いくつかの実施形態において、単離された抗体は、本開示のアゴニスト抗体である。他の実施形態において、単離された抗体は、本開示のアンタゴニスト抗体である。他の実施形態において、単離された抗体は、本開示の不活性抗体である。他の実施形態において、単離された抗体は、本開示の抗体コンジュゲートである。
【０４１９】
本明細書に開示されるように、腫瘍微小環境は、Ｔリンパ球、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、及び骨髄／顆粒球系細胞を含む、雑多な免疫浸潤物を含有することが知られている。腫瘍中の制御性Ｔ細胞、腫瘍埋没型免疫抑制性骨髄細胞及び／またはＭ２−マクロファージ、Ｍ２−好中球及び／またはＭ２−ＮＫ細胞の存在及び活性は、予後不良と関連している。対照的に、細胞傷害性Ｔ細胞の存在及び活性は、がん治療に有益である。細胞傷害性Ｔ細胞の活性を直接的または間接的に向上させ、種々の免疫抑制性細胞の数及び活性を低下させる療法は、大きな治療上の利益をもたらすことが期待される。将来的に重要な前臨床試験では、免疫抑制性細胞を標的にする薬物（例えば、ＣＳＦ１／ＣＳＦ１Ｒ遮断抗体）と細胞傷害性Ｔ細胞を活性化する免疫チェックポイント遮断抗体との間に相乗効果が示されたことから、両方の細胞種を操作することにより、個々の療法があまり効果的でない腫瘍モデルにおいて有効性が示されることが示唆される（Ｚｈｕ  Ｙ；Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１４  Ｓｅｐ  １５；７４（１８）：５０５７−６９）。したがって、いくつかの実施形態において、骨髄細胞、Ｔ細胞の亜群及び腫瘍関連免疫細胞上に発現されるＳｉｇｌｅｃ−９を遮断することにより、有益な抗腫瘍免疫応答が刺激され、その結果、治療的な抗腫瘍免疫応答が生じ得る。
【０４２０】
いくつかの実施形態において、がんを有する個体を予防し、リスクを低下させ、または治療する方法は、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体を当該個体に投与することを更に含む。抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する抗体の例には、限定するものではないが、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂリンパ球Ｔリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー抑制性受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ−１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＭ−４抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ７３抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−５抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−７抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１１抗体、抗ＴＲＥＭ１アンタゴニスト抗体、抗ＴＲＥＭ２アンタゴニスト抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＣＤ２抗体、抗ＣＤ５抗体、ならびにこれらの任意の組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態において、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体）と組み合わせて投与される。
【０４２１】
いくつかの実施形態において、本開示の方法によって予防または治療されるがんには、限定するものではないが、扁平細胞癌（例えば、扁平上皮細胞癌）、小細胞肺癌、非小細胞肺肺癌、肺腺癌及び肺扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌及び消化管間質癌を含む胃癌、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿路癌、ヘパトーマ、乳癌、結腸癌、直腸癌、大腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、表在拡大型黒色腫、悪性黒子型黒色腫、末端黒子型黒色腫、結節性黒色腫、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；毛様細胞性白血病；慢性骨髄芽球性白血病；及び移植後リンパ球増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、及び母斑症に伴う血管増殖異常、浮腫（脳腫瘍に伴うものなど）、メーグス症候群、脳及び頭頸部癌、ならびに関連する転移が含まれる。いくつかの実施形態において、がんは、大腸癌である。いくつかの実施形態において、がんは、非小細胞肺癌、膠芽腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、膀胱癌、卵巣癌、黒色腫、乳癌、胃癌及び肝細胞癌から選択される。いくつかの実施形態において、がんは、トリプルネガティブ乳癌である。いくつかの実施形態において、がんは、早期がんであっても末期がんであってもよい。いくつかの実施形態において、がんは、原発性腫瘍であり得る。いくつかの実施形態において、がんは、上記がん種のいずれかに由来する、第２部位の転移性腫瘍であり得る。
【０４２２】
いくつかの実施形態において、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、限定するものではないが、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫及び甲状腺癌を含む、がんを予防し、そのリスクを低下させ、または治療するために使用され得る。
【０４２３】
いくつかの実施形態において、本開示は、治療上有効な量の本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を個体に投与することによって、がんを有する個体を予防し、リスクを低下させ、または治療する方法を提供する。
【０４２４】
いくつかの実施形態において、方法は、抑制性免疫チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体を個体に投与すること、及び／または別の標準的もしくは治験中抗がん療法を実施することを更に含む。いくつかの実施形態において、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂリンパ球Ｔリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー抑制性受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ−１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＭ−４抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ７３抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−５抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−７抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１１抗体、抗ＴＲＥＭ１アンタゴニスト抗体、抗ＴＲＥＭ２アンタゴニスト抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＣＤ２抗体、抗ＣＤ５抗体、ならびにこれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、標準的または治験中抗がん療法は、放射線治療、細胞毒性化学療法、標的治療、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、養子細胞移入（ＡＣＴ）療法、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ−Ｔ）療法、ワクチン療法及びサイトカイン療法から選択される１つ以上の療法である。
【０４２５】
いくつかの実施形態において、方法は、抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を個体に投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
【０４２６】
いくつかの実施形態において、方法は、刺激性免疫チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を個体に投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、抗ＣＤ４０アゴニスト抗体、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体、抗ＩＣＯＳアゴニスト抗体、抗ＣＤ２８アゴニスト抗体、抗ＴＲＥＭ１アゴニスト抗体、抗ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体、抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢアゴニスト抗体、抗ＣＤ２７アゴニスト抗体、抗糖質コルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲアゴニスト抗体、抗ＣＤ３０アゴニスト抗体、抗ＢＴＬＡアゴニスト抗体、抗ＨＶＥＭアゴニスト抗体、抗ＣＤ２アゴニスト抗体、抗ＣＤ５アゴニスト抗体、及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
【０４２７】
いくつかの実施形態において、方法は、少なくとも１つの刺激性サイトカインを個体に投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの刺激性サイトカインは、Ｓｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの刺激性サイトカインは、ＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１−β及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
【０４２８】
キット／製造品
本開示はまた、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）またはその機能性断片を含有するキット及び／または製造品も提供する。本開示のキット及び／または製造品は、本開示の精製された抗体を含む１つ以上の容器を含み得る。いくつかの実施形態において、キット及び／または製造品は、本開示の方法に従った使用のための説明書を更に含む。いくつかの実施形態において、これらの説明書は、本開示のいずれかの方法に従って、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、那須・ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫症、サルコイドーシス、老人病、痙攣、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨パジェット病、ならびに膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性多血症、本態性血小板増加症、原発性または特発性骨髄線維症、原発性または特発性骨髄硬化症、骨髄由来腫瘍、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する腫瘍、甲状腺癌を含むがん、感染症、ＣＮＳヘルペス、寄生虫感染症、トリパノソーマ感染症、クルーズ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ感染症、Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｄｉｔｉｓ感染症、ＨＩＶＩ型、ならびにインフルエンザ菌から選択される疾患、障害または損傷を有する個体を予防し、リスクを低下させ、または治療するために、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を投与することに関する記述を含む。
【０４２９】
いくつかの実施形態において、説明書は、例えば、個体において、組織試料において、または細胞において、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質を検出する方法の記述を含む。キット及び／または製造品は、個体が疾患を有し、どの段階の疾患を有するかの判断に基づいて、治療に適した個体を選択することに関する記述を更に含み得る。
【０４３０】
いくつかの実施形態において、キット及び／または製造品は、本開示の別の抗体（例えば、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体、抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体及び／または刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体）及び／または少なくとも１つの刺激性サイトカインを更に含み得る。いくつかの実施形態において、キット及び／または製造品は、本開示のいずれかの方法に従って、抗体及び／もしくは刺激性サイトカインを本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）と組み合わせて使用するための説明書、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を抗体及び／もしくは刺激性サイトカインと組み合わせて使用するための説明書、または本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）と抗体及び／もしくは刺激性サイトカインとを使用するための説明書を更に含み得る。
【０４３１】
説明書は、一般に、目的の治療のための用量、投与計画及び投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルク包装（例えば、複数回用量包装）または分割単位用量でもよい。本開示のキット及び／または製造品に付属される説明書は、典型的に、ラベルまたは添付文書（例えば、キットに含まれる書面）上に書かれた説明書であるが、機械で読み取り可能な説明書（例えば、磁気または光学式記憶ディスク上に保持された説明書）も許容される。
【０４３２】
ラベルまたは添付文書は、その組成物が、例えば、本開示の疾患を治療するために使用されることを示す。本明細書に記載される方法のうちのいずれかを実施するための説明書が提供されてもよい。
【０４３３】
本開示のキット及び／または製造品は、好適な包装がなされる。好適な包装には、バイアル、ボトル、ジャー、軟包装（例えば、密閉されたマイラーまたはプラスチックバッグ）などが挙げられるが、これらに限定されない。特定の器具、例えば、吸入器、経鼻投与器具（例えば、アトマイザー）またはミニポンプなどの注入器具と組み合わせて使用するためのパッケージも企図される。キット及び／または製造品は、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静脈内注射用溶液バッグまたはバイアルであってよい）。容器も同様に、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静脈内注射用溶液バッグまたはバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも１つの活性物質は、本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）である。容器は、第２の薬学的活性物質を更に含んでもよい。
【０４３４】
キット及び／または製造品は、任意に、緩衝液及び説明情報などの追加の構成要素を備えてもよい。通常、キットは、容器と、その容器上または容器に付属するラベルまたは添付文書（複数可）とを含む。
【０４３５】
診断用途
本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本開示の単離された抗体）（例えば、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、診断有用性も有する。したがって、本開示は、個体におけるまたは個体由来の組織試料におけるＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質の検出などの診断目的のために、本開示の抗体またはその機能性断片を使用する方法を提供する。
【０４３６】
いくつかの実施形態では、個体は、ヒトである。いくつかの実施形態において、個体は、本開示の疾患、障害または損傷を患っているか、それを発症するリスクのあるヒト患者である。いくつかの実施形態において、診断方法は、生検試料、組織または細胞などの生体標本中のＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質を検出することを伴う。本開示のＳｉｇｌｅｃ−９作用物質（例えば、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）を生体試料に接触させ、抗原に結合した抗体を検出する。例えば、生検標本は、疾患関連細胞を検出及び／または定量するために、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体で染色され得る。検出法は、抗原に結合した抗体の定量を含み得る。生体試料中の抗体検出は、免疫蛍光顕微鏡法、免疫細胞化学、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ分析、免疫沈降またはマイクロポジトロン放出断層撮影を含む、当該技術分野において既知の任意の方法で行うことができる。特定の実施形態において、抗体は、例えば、１８Ｆで放射性標識され、その後、マイクロポジトロン断層撮影分析を利用して検出される。抗体結合はまた、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）、Ｘ線コンピュータ断層撮影、単一光子放射コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）及びコンピュータ体軸断層撮影（ＣＡＴ）などの非侵襲性技法によって、患者において定量され得る。
【０４３７】
他の実施形態において、本開示の単離された抗体（例えば、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、例えば、前臨床疾患モデル（例えば、非ヒト疾患モデル）から採取した脳標本のミクログリアを検出及び／または定量するために使用することができる。したがって、本開示の単離された抗体（例えば、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、痙攣、網膜ジストロフィー、アテローム動脈硬化性血管疾患、那須・ハコラ病または多発性硬化症などの神経系疾患または損傷のモデルにおける治療後の治療応答をコントロールと比較して評価するのに有用であり得る。
【０４３８】
本開示は、以下の実施例を参照することによって、より十分に理解されるであろう。しかしながら、これらは、本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本開示全体にわたる全ての引用は、参照により明示的に本明細書に援用される。
【実施例】
【０４３９】
［実施例１：抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の産生、特定及び特性評価］
序文
ヒトＳｉｇｌｅｃ−９のアミノ酸配列を配列番号１として以下に示す。ヒトＳｉｇｌｅｃ−９は、配列番号１のアミノ酸残基１〜１７に位置するシグナル配列、配列番号１のアミノ酸残基２０〜１４０に位置する細胞外免疫グロブリン様可変型（ＩｇＶ）ドメイン、配列番号１のアミノ酸残基１４６〜２２９と２３６〜３３６に位置する２つのＩｇ様Ｃ２型ドメイン、配列番号１のアミノ酸残基３４８〜３７０に位置する膜貫通ドメイン、配列番号１のアミノ酸残基４３１〜４３６に位置するＩＴＩＭモチーフ１、及び配列番号１のアミノ酸残基４５４〜４５９に位置するＳＬＡＭ様モチーフを含有する。ヒトＳｉｇｌｅｃ−９とＳｉｇｌｅｃ−９ホモログのアライメントを図１Ａに示す。
【０４４０】
Ｓｉｇｌｅｃ−９アミノ酸配列（配列番号１）：
2019500014.tif 000011
【０４４１】
以下の実施例の目的は、樹状細胞、単球、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｔ細胞及び／またはミクログリアの有益な作用を向上させるＳｉｇｌｅｃ−９結合抗体（例えば、アンタゴニスト抗体、Ｓｉｇｌｅｃ−９特異的抗体）を生成することであった。Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞外ドメイン、特にＩｇＶドメイン（配列番号１のアミノ酸残基２０〜１４０）と結合する抗体は、マウスハイブリドーマ技術、ファージディスプレイ技術及び酵母ディスプレイ技術を使用して作製される。以下の実施例に記載されるように、抗体を特定し、次いで、抗体がＳｉｇｌｅｃ−９への結合に関してＳｉｇｌｅｃ−９リガンドと競合する能力、Ｓｉｇｌｅｃ−９の下方制御を誘導する能力、Ｓｉｇｌｅｃ−９の脱感作を誘導する能力、Ｓｉｇｌｅｃ−９の分解を誘導する能力、Ｓｉｇｌｅｃ−９のリソソームへの標的化を誘導する能力、Ｓｉｇｌｅｃ−９の切断を誘導する能力、Ｓｉｇｌｅｃ−９シグナル伝達及び／または細胞及び動物のｉｎ  ｖｉｖｏにおける１つ以上の機能を調節する能力についてスクリーニングする。Ｓｉｇｌｅｃ−９が結合する例示的なリガンドを図２及び図３に示す。
【０４４２】
例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９のＩｇＶドメイン（アミノ酸残基２０〜１４０）を標的にする抗体が選択される。ＩｇＶドメインは、シアル酸標的に結合し、この結合は、抗体で遮断することができる。したがって、アミノ酸残基２０〜１４０は、１つ以上の内因性標的（例えば、リガンド）に対するＳｉｇｌｅｃ−９の結合を遮断する抗体のＳｉｇｌｅｃ−９ペプチド標的に相当する。
【０４４３】
ヒトＳｉｇｌｅｃ−９タンパク質内の有用な部位を同定するための別のアプローチは、ＩｇＶドメイン内に一般的に見出されるＳｉｇｌｅｃ−９Ｍと比較して、Ｓｉｇｌｅｃ−９ｍ上に存在しない部位を標的とする抗体を選択することによる。Ｓｉｇｌｅｃ−９ｍは、アミロイドβペプチドのクリアランスを阻害することができない。有用な抗体を同定するための別のアプローチは、単球、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、ミクログリア及び／またはＴ細胞の細胞表面上のＳｉｇｌｅｃ−９のレベルを低下させる抗体を選択することである。
【０４４４】
本明細書に記載されるように、９つの抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を特定し、特性評価した。
【０４４５】
［結果］
抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体産生
［免疫付与手順］
［急速抗原接種法］：５０日齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウス４匹を以下の手順を使用して免疫した。ヒトＳｉｇｌｅｃ−９抗原を含有するが、アジュバントを含有しない一連の水性注射を１９日にわたって皮下投与した。Ｌａｂ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社製の換気ラックシステムでマウスを飼育した。１９日目にマウス全４匹を安楽死させ、ハイブリドーマ細胞株生成のためにリンパ球を回収した。
【０４４６】
［標準法］：５０日齢の雌のＢＡＬＢ／ｃまたはＮＺＢ／Ｗマウス４匹を以下の手順を使用して免疫した。Ｌａｂ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社製の換気ラックシステムでマウスを飼育した。マウスにＣｐＧ−ＯＤＮアジュバント中に混合したヒトＳｉｇｌｅｃ−９抗原をマウス１匹当たり２５μｇのタンパク質抗原で３週間ごとに腹腔内注射した。（総量１２５μＬ／マウス）。２回目の追加免疫から７日後に、伏在静脈穿刺によって試験採血を行った。試験採血（免疫血清）を間接ＥＬＩＳＡアッセイによって試験し、融合のために、最も応答の良いマウスを２匹決定した。融合前の力価を評価するために、マウスには、３回目及び４回目の追加免疫、ならびに追加免疫から７日後の更なる試験採血が必要な場合もある。抗体力価が十分高くなったら、最も応答の良いマウス２匹に側方尾静脈を介した静脈内投与で最終追加免疫を行う。ＩＶ追加免疫から４日後、融合のために、マウスを安楽死させた。脾臓を採取し、脾臓から単離したリンパ球を融合プロセスに使用してハイブリドーマを生成した。
【０４４７】
［ハイブリドーマの成長］
リンパ球を単離し、これを、Ｒｏｃｈｅの標準プロトコルに従って、ネズミＳＰ２／０骨髄腫細胞とポリエチレングリコール（ＰＥＧ１５００）の存在下で融合させた。シングルステップクローニング法（ＨＡＴ選択）を使用して融合細胞を培養した。この方法は、ハイブリドーマ選択とクローニングを組み合わせて１つのステップにした、半固形メチルセルロースベースのＨＡＴ選択培地を使用するものである。単一細胞由来のハイブリドーマを増殖させて、半固形培地上にモノクローナルコロニーを形成させた。融合イベントから１０日後、得られたハイブリドーマクローンのうち９４８を９６ウェル組織培養プレートに移し、対数増殖期中期に達するまで（５日）、ＨＴ含有培地中で増殖させた。
【０４４８】
［ハイブリドーマスクリーニング］
９４８のハイブリドーマから得た組織培養上清をスクリーニング抗原で間接ＥＬＩＳＡによって試験し（一次スクリーニング）、ヤギ抗ＩｇＧ／ＩｇＭ（Ｈ＆Ｌ）−ＨＲＰ二次抗体を使用してＩｇＧ抗体とＩｇＭ抗体の両方の抗体をプローブし、ＴＭＢ基質で発色させた。このアッセイでＯＤ  ０．２を上回るクローンを次の試験ラウンドに用いた。陽性培養液をスクリーニング抗原で再試験して分泌を確認し、無関係の抗原（ヒトトランスフェリン）で非特異的または「粘着性」ｍＡｂを排除し、偽陽性を除外した。目的の全クローンのアイソタイプを抗体捕捉ＥＬＩＳＡによって特定し、ＩｇＧまたはＩｇＭアイソタイプであるかどうかを決定した。
【０４４９】
［ハイブリドーマ細胞培養］
目的のハイブリドーマ細胞株を、９６ウェルプレートに移した後３２日間にわたって２４ウェル培養プレート中で培養維持した。これを安定期間と呼び、クローンが安定状態及び分泌状態を維持するかどうか試験する。この安定期間中に、−８０℃保存用の一時凍結細胞株のバックアップを目的クローンの全てで作製する（６ヶ月生存可能）。この期間中に、ハイブリドーマの分泌及び特異性を定期的に試験した。
【０４５０】
［サブクローニング］
モノクローナル性を確保するために、上位のハイブリドーマ細胞株（クローン）をサブクローニングした。サブクローニングは、シングルステップクローニングシステムを使用して、親クローンを再度培養して実施した。２４〜９０のサブクローンを９６ウェル培養プレートに移した。サブクローンを間接ＥＬＩＳＡ及び抗体捕捉ＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。各親の上位サブクローンを培養拡大用に使用した。クローン性が５０％未満であった親クローンについては、いずれも、２回目のサブクローニングを実施した。
【０４５１】
次いで、抗体をＳｉｇｌｅｃ−９結合についてスクリーニングした。ヒトＳｉｇｌｅｃ−９への結合が陽性であった抗体を、リガンド結合を遮断する能力及びＳｉｇｌｅｃ−９の表面レベルを低下させる能力について、複数の細胞種で試験した。６つのＳｉｇｌｅｃ−９抗体を特定した。ビン及びアイソタイプ分類を表１に列挙する。
表１：抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体
2019500014.tif 000012
【０４５２】
抗体の重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列
標準的技法を使用して、生成された抗体の軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインをコードするアミノ酸配列を決定した。抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ軽鎖ＨＶＲ配列を表２に示す。抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ重鎖ＨＶＲ配列を表３に示す。抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ軽鎖フレームワーク（ＦＲ）配列を表４Ａに示す。抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ重鎖フレームワーク（ＦＲ）配列を表４Ｂに示す。
表２：抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ軽鎖ＨＶＲ配列
2019500014.tif 000013
表３：抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ重鎖ＨＶＲ配列
2019500014.tif 000014
表４Ａ：抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ軽鎖フレームワーク配列
2019500014.tif 000015
表４Ｂ：抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体のＥＵまたはＫａｂａｔ重鎖フレームワーク配列
2019500014.tif 000016
【０４５３】
Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体結合の特性評価
Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の最初の特性評価には、ヒト初代単球、ヒト初代マクロファージ、ヒト初代樹状細胞、ヒト初代好中球及びヒト初代ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ−９と結合する能力を決定することが含まれた。細胞を回収し、９６ウェルプレート中に１０６／ｍｌで播種し、２％ＦＢＳ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ及び１０μｇ／ｍｌのＭａｂ及びＦｃブロッキング試薬を含有する１００ｕｌ  ＰＢＳ中、氷上で１時間、インキュベートした。細胞を２回洗浄し、２％  ＦＢＳ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ及び５ｕｇ／ｍｌのＰＥ結合二次抗体を含有する１００ｕｌ  ＰＢＳ中、氷上で３０分間、インキュベートした。細胞を冷ＰＢＳ中で２回洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏでのフローサイトメトリーにより解析した。データ解析及びＭＦＩ値の計算は、ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．７を用いて行った。
【０４５４】
ＦＡＣＳ染色解析は、ヒト初代単球、マクロファージ、樹状細胞、好中球及びＮＫ細胞を含む初代骨髄リンパ細胞上に、Ｓｉｇｌｅｃ−９が発現されることを示している（図４）。
【０４５５】
表５は、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現しているヒト初代細胞への抗体結合を示す。Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が結合した細胞種の陽性結合パーセント及び平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を表５中に列挙する。結合は、アイソタイプコントロールとの比較である。抗体は、ヒト初代単球、ヒト初代樹状細胞及びヒト初代マクロファージに結合する。表５中、「緩衝液」は、上に記載するＰＢＳ緩衝液でのみ処理された細胞を指し、「二次Ａｂ」は、ＰＥ結合二次抗体でのみ処理された細胞を指し、「ｍＩｇＧ１」、「ｍＩｇＧ２ａ」及び「ｍＩｇＧ２ｂ」は、アイソタイプコントロール抗体を指す。図５は、ヒト初代樹状細胞に対する抗体結合を示す。
表５：ヒト初代細胞に対するＳｉｇｌｅｃ−９抗体結合
2019500014.tif 000017
【０４５６】
各抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の結合親和性を表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイで各ＫＤを測定することによって決定した。ＳＰＲデータをＢｉａＣｏｒｅ  Ｔ２００機器で、２５℃、１０Ｈｚの速度で収集した。データ解析は、ＢｉａＣｏｒｅ  Ｔ２００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア、バージョン２．０を使用して実施した。ＨＢＳ−ＥＰ＋（１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１．５Ｍ  ＮａＣｌ、３０ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）をランニングバッファーとして、また試薬の調製のために使用した。
【０４５７】
抗マウスＩｇＧを固定化したＣＭ５センサーチップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上にＳｉｇｌｅｃ−９に対するマウス由来抗体（２５ｎＭ）を捕捉した（接触時間６０秒、流量３０ｕＬ／分、安定化時間０秒）。次いで、ヒスチジンタグ付きヒトＳｉｇｌｅｃ−９（ＮｏｖｏＰｒｏｔｅｉｎ）を、捕捉した抗Ｓｉｇｌｅｃ−９表面全体に流した（接触時間１２０秒、流量３０ｕＬ／分、解離時間３００秒）。抗原濃度は、最初のスクリーニングから得られた情報に応じて、５ｎＭ〜１００ｎＭの範囲とした。単一濃度試験は２回実施し、ブランク（抗原０ｎＭ）試料を差し引いた。サイクルとサイクルとの間に１０ｍＭ  グリシン−ＨＣｌ（ｐＨ１．７）を使用してチップ表面を再生させた（接触時間６０秒、流量３０ｕＬ／分、安定化時間６０秒）。結果として生じるＳＰＲシグナルを、空のフローセル上で実施した測定からのレスポンスの差として得た。
【０４５８】
１：１相互作用モデルを使用して単一濃度カイネティクス解析（Ｃａｎｚｉａｎｉ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３２５：３０１−３０７）を実施して、各抗体の結合速度定数及び解離速度定数（それぞれｋａ及びｋｄ）を求めた。親和性定数（ＫＤ）は、ｋｄ／ｋａの比から算出した。複数濃度アプローチ（使用抗原の５つの濃度及びブランク１つ）により、単一濃度解析を確認した。
【０４５９】
結果を表６Ａに示す。図６Ａは、抗体親和性を表すＳＰＲセンサーグラムを示す。
表６Ａ：Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体親和性
2019500014.tif 000018
【０４６０】
抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４、５Ｃ６、及び１２Ｂ１２の結合親和性もまた、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ９６システムを用いてそれらのＫＤを測定することによって決定し、すべての工程をＰＢＳ中の０．２５％カゼイン中で行った。抗体を抗マウスＩｇＧ  Ｆｃキャプチャー（ＡＭＣ）バイオセンサーチップ上に捕捉し、その後、ベースラインを６０秒間実行した。１５分の会合工程を、３．１３ｎＭ〜５０ｎＭの範囲のヒスタグ付きＳｉｇｌｅｃ９抗原の希釈系列において実施し、その後、解離を６０分にわたって測定した。親和性定数（ＫＤ）は、ｋｄ／ｋａの比から算出した。
【０４６１】
Ｆｏｒｔｅｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ９６の結果を表６Ｂに列挙する。図６Ｂは、抗体親和性を示すセンサーグラムを示す。
表６Ｂ：Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体親和性
2019500014.tif 000019
【０４６２】
抗体ヒト化
ヒト投与時の免疫原性を回避するために、抗体ヒト化を使用して、異なる種で作製された抗体を配列及び構造関係までヒト抗体に最も似るように変換する。異なる種に由来する抗体は、その非ヒト抗体の特異性決定領域（ＳＤＲ）をヒト抗体フレームワークにグラフトすることを可能にする特徴的な配列及び構造上の特徴を共有している。これにより、非ヒト抗体の特異性が維持されることになる。ヒト化プロセスは、フレームワーク領域及びＳＤＲを含む、非ヒト抗体の配列及び特徴の特定を伴う。以下の基準を使用して抗体をヒト化する。１）非ヒト抗体と既知のヒト抗体との間のフレームワーク領域における類似性パーセント、２）非ヒト抗体と既知のヒト抗体との間のＳＤＲにおける長さの類似性、３）ヒト抗体のフレームワーク領域を生成するために使用される遺伝子、ならびに４）ヒト化及び治療薬としてのヒト抗体フレームワークのこれまでの使用。フレームワーク領域及びＳＤＲ長さの類似性は、その差が抗体の構造的相違を生じさせ、抗体の特異性を変えることがあるので、重要である。ヒト抗体のフレームワークを生成するために使用される特定の遺伝子は、抗体の安定性または特異性に有益または不利益になることが知られており、したがって、選択的に使用され、または回避される。最後に、ヒト治療薬で使用されているものを含む、これまでに成功している半減期の優れた良好な忍容性のあるヒト化フレームワークは、将来的にヒト化が成功する可能性が高い候補である。
【０４６３】
表７Ａ及び７Ｂに示すように、抗体２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｄ８及び７Ｈ１２のそれぞれについて、１０のヒト化軽鎖及び１０のヒト化重鎖可変領域の配列を特定し、抗体５Ｃ６について、３つの軽鎖可変領域配列及び４つの重鎖可変領域配列を特定し、抗体１２Ｂ１２について、３つの軽鎖可変領域配列及び２つの重鎖可変領域配列を特定した。表７Ａ及び７Ｂ中、太字はＨＶＲ配列を示す。
表７Ａ：ヒト化軽鎖可変領域
2019500014.tif 000020
2019500014.tif 000021
2019500014.tif 000022
2019500014.tif 000023
表７Ｂ：ヒト化重鎖可変領域
2019500014.tif 000024
2019500014.tif 000025
2019500014.tif 000026
2019500014.tif 000027
2019500014.tif 000028
【０４６４】
抗体５Ｃ６のヒト化
ネズミ抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体５Ｃ６（Ｓ９−５Ｃ６．３）のＶＨまたはＶＬ配列を、既知のヒト生殖系配列のライブラリと比較した。使用したデータベースは、ＩＭＧＴヒトＶＨ遺伝子（Ｆ＋ＯＲＦ、２７３の生殖系配列）及びＩＭＧＴヒトＶＬκ遺伝子（Ｆ＋ＯＲＦ、７４の生殖系配列）であった。
【０４６５】
５Ｃ６抗体ＶＬについては、ヒト生殖系ＩＧＫＶ２−３０（アレル１）がアクセプター配列として選択され、ＩＭＧＴ（登録商標）（ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（登録商標））で編纂されたヒト結合領域配列からヒト軽鎖ＩＧＫＪ２（アレル１）結合領域（ＩＧＫＪ遺伝子）が選択された（図６Ｃ）。５Ｃ６抗体ＶＨについては、ヒト生殖系ＩＧＨＶ１−１８（アレル１）がアクセプター配列として選択され、ＩＭＧＴ（登録商標）（ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（登録商標））で編纂されたヒト結合領域配列からヒト重鎖ＩＧＨＪ４（アレル１）結合領域（ＩＧＨＪ遺伝子）が選択された（図６Ｄ）。抗体ＶＬ及びＶＨの相補性決定領域（ＣＤＲ）は、ＡｂＭ定義（ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア）に従って定義した。
【０４６６】
ヒト化抗体の結合を最適化するために、対応する親ネズミ配列に対して、ヒト生殖系フレームワーク（すなわち、ＶＨ及びＶＬ中の非ＣＤＲ残基）の位置を変更する必要があり得る。各ヒト化配列の考えられる変更を図６Ｃ及び６Ｄに示す。図６Ｃ及び６Ｄは、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体５Ｃ６（５Ｃ６．３）のヒト化形態の配列を示す。
【０４６７】
抗体５Ｃ６のＶＬドメインにおいて、ＣＤＲ−Ｌ１内で、Ａｓｐ３０ｃ−Ｇｌｙ３０ｄ−Ａｓｎ３０ｄ−Ｔｈｒ３０ｅは、位置３０ｃ−３０ｄでのＡｓｎとそれに続くイソアスパラギン酸の形成における脱アミドの可能性が高い。この部位での翻訳後修飾は、標的への抗体の結合に影響を及ぼし得る。親マウス抗体を分析して、翻訳後修飾のレベルを決定してもよい（図６Ｃ）。あるいは、抗体５Ｃ６をヒト化し、次いで最終工程で、ＮＧを例えばＳＧ、ＱＧまたはＡＧに改変し、結合が維持されるかどうかを決定してもよく、別個に、ＮＴを、例えばＱＴまたはＳＴに変更してもよい。ＣＤＲ−Ｌ２において、Ａｓｎ５３は、配列及び立体配座に基づいて脱アミノ化の可能性が低く、この翻訳後修飾が低レベルであることを示し得る（図６Ｃ）。ＣＤＲ−Ｌ３において、Ａｓｎ９１は、配列及び立体配座に基づいて脱アミド化の可能性が中程度であり、この翻訳後修飾が低レベルであることを示し得る（図６Ｃ）。上記に基づくバリアントＶＬ配列を表７Ａに列挙する。
【０４６８】
抗体５Ｃ６（５Ｃ６．３）のＶＨドメインにおいて、ＣＤＲ−Ｈ１内の、Ａｓｎ３３及びＡｓｎ９６は、配列及び高次構造に基づいて脱アミド化の可能性が低く、低レベルの翻訳後修飾を示し得る（図６Ｄ）。ＣＤＲ−Ｈ２において、Ａｓｎ５４−Ｇｌｙ５５は、脱アミド化の後のイソアスパラギン酸形成の可能性が低い／中程度である（図６Ｄ）。この部位における翻訳後修飾は、抗体の標的への結合に影響を及ぼし得る。親マウス抗体を分析して、翻訳後修飾のレベルを決定してもよい。あるいは、５Ｃ６をヒト化し、最終ＮＧにおいて、例えばＱＧに変更して、結合が維持されるかどうかを決定してもよい。上記に基づくバリアントＶＨ配列を表７Ｂに列挙する。
【０４６９】
抗体１２Ｂ１２のヒト化
ネズミ抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体１２Ｂ１２（Ｓ９−１２Ｂ１２．２）の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を、既知のヒト生殖系配列のライブラリと比較した。使用されたデータベースは、ＩＭＧＴヒトＶＨ遺伝子（Ｆ＋ＯＲＦ、２７３の生殖系配列）及びＩＭＧＴヒトＶＬκ遺伝子（Ｆ＋ＯＲＦ、７４の生殖系配列）であった。
【０４７０】
１２Ｂ１２抗体ＶＬについては、ヒト生殖系ＩＧＫＶ１−３９（アレル１）がアクセプター配列として選択され、ＩＭＧＴ（登録商標）（ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（登録商標））で編纂されたヒト結合領域配列からヒト軽鎖ＩＧＫＪ２（アレル１）結合領域（ＩＧＫＪ遺伝子）が選択された（図６Ｅ）。１２Ｂ１２抗体ＶＨについては、ヒト生殖系ＩＧＨＶ３−２３（アレル４）がアクセプター配列として選択され、ＩＭＧＴ（登録商標）（ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（登録商標））で編纂されたヒト結合領域配列からヒト重鎖ＩＧＨＪ４（アレル１）結合領域（ＩＧＨＪ遺伝子）が選択された（図６Ｆ）。抗体ＶＬ及びＶＨの相補性決定領域（ＣＤＲ）は、ＡｂＭ定義（ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア）に従って定義した。
【０４７１】
ヒト化抗体の結合を最適化するために、対応する親ネズミ配列に対して、ヒト生殖系フレームワーク（すなわち、ＶＨ及びＶＬ中の非ＣＤＲ残基）の位置を変更する必要があり得る。各ヒト化配列の考えられる変更を図６Ｅ及び６Ｆに示す。図６Ｅ及び６Ｆは、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体１２Ｂ１２（１２Ｂ１２．２）のヒト化形態の配列を示す。
【０４７２】
抗体１２Ｂ１２のＶＬドメインにおいて、ＣＤＲ−Ｌ１内のＡｓｎ２９、Ａｓｎ５３及びＡｓｎ９２は、配列及び高次構造に基づいて、脱アミドの可能性が低く、低レベルの翻訳後修飾を示し得る（図６Ｅ）。ＣＤＲ−Ｌ３内では、Ｔｒｐ９６は、少なくとも部分的に溶媒に露出されやすく、したがってストレス条件下で酸化し得る（図６Ｅ）。上記に基づくバリアントＶＬ配列を表７Ａに列挙する。
【０４７３】
抗体１２Ｂ１２（１２Ｂ１２．２）のＶＨドメインにおいて、ＣＤＲ−Ｈ１内のＡｓｎ３１が、配列及び立体配座に基づいて脱アミノ化の可能性が低く、低レベルの翻訳後修飾を示し得る一方で、ＣＤＲ−Ｈ１内のＡｓｎ５２は、配列及び立体配座に基づいて脱アミド化の可能性が中程度であり、低レベルの翻訳後修飾を示し得る（図６Ｆ）。ＣＤＲ−Ｈ２において、Ａｓｎ５３−Ｇｌｙ５４−Ｇｌｙ５５は、脱アミド化の後のイソアスパラギン酸形成の可能性が中程度である／高い（図６Ｅ）。この部位の翻訳後修飾は、抗体の標的に対する結合に影響を与え得る。親マウス抗体を解析して、翻訳後修飾のレベルを決定することができる。あるいは、抗体１２Ｂ１２をヒト化することができ、次いで、最終段階でＮＧＧを例えばＱＧＧまたはＡＧＧに変更し、その結合が維持されるかどうかを決定してもよい。上記に基づくバリアントＶＨ配列を表７Ｂに列挙する。
【０４７４】
［実施例２：Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体のエピトープマッピング］
Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９全体にわたる１５ｍｅｒまたは２５ｍｅｒのペプチドに結合する能力について試験した。Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体はまた、そのＳｉｇｌｅｃ−９結合領域を決定することによって、参照Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体と比較した。
【０４７５】
方法
ヒトＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号１）の配列に基づいて、１４残基が重複する１５ｍｅｒの線状ペプチドを合成した。加えて、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９（配列番号１）の配列に基づいて、残基シフトが１である２５ｍｅｒの線状ペプチドを合成した。Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の合成ペプチドのそれぞれへの結合をＥＬＩＳＡに基づく方法で試験した。このアッセイにおいて、ペプチドアレイを一次抗体溶液とともにインキュベートした（４℃で一晩）。洗浄後、ペプチドアレイを抗体ペルオキシダーゼ複合体（ＳＢＡ、カタログ番号２０１０−０５）の１／１０００希釈物とともに２５℃で１時間インキュベートした。洗浄後、ペルオキシダーゼ基質の２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンゾチアゾリンスルホン酸塩（ＡＢＴＳ）及び２μｌ／ｍｌの３％Ｈ２Ｏ２を添加した。１時間後、発色を測定した。発色は、電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラ及び画像処理システムで定量した。
【０４７６】
抗体のエピトープビニングは、標準的なサンドイッチ形式のビニングアッセイを使用して、Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ３８４システム（Ｐａｌｌ  Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡ））で実施した（Ｅｓｔｅｐ  ｅｔ  ａｌ，（２０１３）ＭＡｂｓ  ５（２）：２７０−８参照）。コントロールの抗標的ＩｇＧをＡＨＱセンサー上に充填し、センサー上の非占有Ｆｃ結合部位を非関連ヒトＩｇＧ１抗体でブロッキングした。次いで、センサーを１００ｎＭ  標的抗原に曝露し、続いて、抗標的二次抗体に曝露した。ＦｏｒｔｅＢｉｏのデータ解析ソフトウェア７．０を使用してデータを処理した。抗原結合後の二次抗体による更なる結合は非占有エピトープ（非競合物）を指し、一方、結合なしはエピトープブロッキング（競合物）を指す。
【０４７７】
別法として、標的分子のエピトープを再構築するために、ループ及びコンビナトリアルペプチドのライブラリを合成した。独自の親水性ポリマー配合物をグラフト化し、続けて、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）をＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）とともに使用してｔ−ブチルオキシカルボニル−ヘキサメチレンジアミン（ＢｏｃＨＭＤＡ）と反応させ、その後、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を使用してＢｏｃ基を切断することにより、アミノ官能化ポリプロピレン支持体を得た。特注の改変ＪＡＮＵＳ液体処理ステーション（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）により、標準的なＦｍｏｃ−ペプチド合成を使用してアミノ官能化固体支持体上にペプチドを合成した。
【０４７８】
Ｐｅｐｓｃａｎ独自のＣＬＩＰＳ（Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  Ｌｉｎｋｅｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｏｎ  Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ）技法を使用して構造模倣体の合成を行った。ＣＬＩＰＳ技法により、ペプチドを単一ループ及び二重ループの構造にすることができる。ＣＬＩＰＳテンプレートは、システイン残基に連結し、ペプチド中の側鎖の複数のシステインが１つまたは２つのＣＬＩＰＳテンプレートに連結する。例えば、ｍＰ２  ＣＬＩＰＳ（２，６−ビス（ブロモメチル）ピリジン）の０．５ｍＭ溶液を炭酸水素アンモニウム（２０ｍＭ、ｐＨ７．８）／アセトニトリル（１：３（ｖ／ｖ））中に溶解する。この溶液をペプチドアレイ上に加える。ＣＬＩＰＳテンプレートは、ペプチドアレイ（３μｌのウェルを有する４５５ウェルプレート）の固相結合ペプチド中に存在する側鎖の２つのシステインに結合する。ペプチドアレイを溶液中で３０〜６０分間、ペプチドが溶液で完全に覆われるようにしながら、穏やかに振盪する。最後に、ペプチドアレイを過剰のＨ２Ｏで十分に洗浄し、１％ＳＤＳ／０．１％β−メルカプトエタノールを含有するＰＢＳ（ｐＨ７．２）中断緩衝液（Ｄｉｓｒｕｐｔ  ｂｕｆｆｅｒ）中、７０℃で３０分間超音波処理し、続いて、Ｈ２Ｏ中で更に４５分間超音波処理する。類似する方法ではあるが、ここでは３つのシステインを用いて、ペプチドを保持するＴ３  ＣＬＩＰＳ（２，４，６−トリス（ブロモメチル）ピリジン）を作製した。
【０４７９】
［ループペプチド］：長さ１７の拘束ペプチド。位置２〜１６は、標的配列に由来する１５ｍｅｒである。天然Ｃｙｓ残基は、アセトアミドメチル基（ＡＣＭ）で保護する。位置１及び１７は、ｍＰ２  ＣＬＩＰＳ部分が結合するＣｙｓである。［コンビナトリアルペプチド（不連続模倣体）］：長さ３３の拘束ペプチド。位置２〜１６及び１８〜３２は、ＡＣＭで保護した天然Ｃｙｓ残基を含む標的配列に由来する１５ｍｅｒペプチドである。位置１、１７及び３３は、Ｔ３ＣＬＩＰＳ部分が結合するＣｙｓである。
【０４８０】
合成ペプチドのそれぞれへの抗体結合をＰＥＰＳＣＡＮに基づくＥＬＩＳＡで試験する。ペプチドアレイを、実験的至適濃度の試験抗体及びブロッキング溶液（例えば、４％ウマ血清、５％オボアルブミン（ｗ／ｖ）のＰＢＳ／１％Ｔｗｅｅｎ８０）から構成される試験抗体溶液とともにインキュベートする。ペプチドアレイを試験抗体溶液とともに４℃で一晩インキュベートする。洗浄緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ８０）で十分洗浄した後、ペプチドアレイを適切な抗体ペルオキシダーゼ複合体の１／１０００希釈物とともに２５℃で１時間インキュベートする。洗浄緩衝液で洗浄した後、ペルオキシダーゼ基質の２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンゾチアゾリンスルホネート（ＡＢＴＳ）及び２μｌ／ｍｌの３％Ｈ２Ｏ２を加える。１時間後、発色を測定する。発色は、電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラ及び画像処理システムで定量する。
【０４８１】
結果
３つの抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体について、そのＳｉｇｌｅｃ−９結合領域を決定した。結合領域を表８Ａに列挙する。
表８Ａ：Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の結合領域
2019500014.tif 000029
【０４８２】
表８Ａに示されるように、抗体６Ｂ２、７Ｈ１２、２Ｄ５及び５Ｂ１は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞外ＩｇＶドメイン内のペプチドに対してのみ強固な結合を示した。表８Ａに示されるように、抗体６Ｂ２及び７Ｈ１２によって認識されるペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基１０７〜１１５に対応し、アミノ酸配列：ＲＤＡＲＲＳＤＡＧＲを有する。抗体２Ｄ５によって認識されるペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基６２〜７６及び８６〜９２に対応し、ＦＲＥＧＡＮＴＤＱＤＡＰＶＡＴ及びＥＴＲＤＲＦＨのアミノ酸配列を含む。抗体５Ｂ１及び６Ｂ２によって認識されるペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基８６〜９６及び１０５〜１１６に対応し、ＥＴＲＤＲＦＨＬＬＧＤ及びＩＲＤＡＲＲＳＤＡＧＲのアミノ酸配列を含む。
【０４８３】
表８Ａに更に示されるように、抗体２Ｄ４は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞外Ｉｇ様Ｃ２型ドメイン内のペプチドに対してのみ強固な結合を示した。表８Ａに示されるように、抗体２Ｄ４によって認識されるペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基１８５〜１９４に対応し、アミノ酸配列：ＶＳＰＬＤＰＳＴＴＲを有する。
【０４８４】
機能性マッピング
抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体のショットガン変異導入エピトープマッピングを、Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質のアラニンスキャニングライブラリを使用して実施した。Ｃ−末端Ｖ５エピトープタグをコードするＳｉｇｌｅｃ−９発現構築物をハイスループットアラニンスキャニング変異導入法（Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ａｎｄ  Ｄｏｒａｎｚ，２０１４  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４３，１３−２０に概説）にかけて、包括的な変異ライブラリを作製した。Ｓｉｇｌｅｃ−９細胞外ドメインを表す残基のそれぞれを、大部分はアラニンに変異させ、一方のアラニンコドンは、セリンに変異させた。
【０４８５】
３８４ウェルマイクロプレートにアレイしたＳｉｇｌｅｃ−９変異ライブラリクローンをＨＥＫ−２９３Ｔ細胞に個別にトランスフェクトし、２２時間発現させた。抗体を消化してＦａｂを生成し、その後、細胞を１０％正常ヤギ血清（ＮＧＳ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））中に希釈したＦａｂとともにインキュベートした。ライブラリスクリーニングの前に、シグナルが線形検出範囲内にあることを確実にするために、野生型Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する細胞に対する独立した免疫蛍光タイトレーション曲線を使用して、一次Ｆａｂ濃度を決定した。１０％ＮＧＳ中のＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８結合二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｅｓｔｇｒｏｖｅ，ＰＡ））７．５μｇ／ｍｌを使用してＦａｂを検出した。細胞をＰＢＳ−／−で２回洗浄し、０．１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））を含むＣｅｌｌｓｔｒｉｐｐｅｒ（Ｃｅｌｌｇｒｏ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ））中に再懸濁した。場合により、高いｐＨ、高温、及び長い解離時間を含む、よりストリンジェンシーの高い条件を使用した。Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ高速フローサイトメーター（ＨＴＦＣ、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ（Ａｌｂｕｑｕｅｒｑｕｅ，ＮＭ））を使用して、平均細胞蛍光を検出した。各変異体クローンに対するＦａｂ反応性を、モックトランスフェクトコントロールからのシグナルを除算し、野生型Ｓｉｇｌｅｃ−９トランスフェクトコントロールからのシグナルに対して正規化することによって、野生型Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質反応性と比較して算出した。
【０４８６】
重要なクローン内の変異残基は、それらが、試験Ｆａｂの反応性を支持せず、市販の参照ＭａｂであるＭＡＢ１１３９（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号１９１２４０）、または追加の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９Ｆａｂの反応性を支持した場合、Ｆａｂエピトープにとって重要であるとした。このカウンタースクリーニング法は、局所的にミスフォールドを起こしているＳｉｇｌｅｃ−９変異体または発現欠損を有するＳｉｇｌｅｃ−９変異体の排除を容易にした。
【０４８７】
図１Ｂは、スクリーニングで特定された全ての重要残基の平均結合反応性及び範囲を示す。一次重要残基は、変異が試験抗体結合に対しては陰性（ＷＴへの結合の３０％未満）であるが、コントロール抗体に対しては陽性（ＷＴの８０％超）である残基とした。図１Ｃ〜１Ｅは、Ｓｉｇｌｅｃ−９の結晶構造モデル（ＰＤＢ  ＩＤ  ２ＺＧ２；Ｚｈｕｒａｖｌｅｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）を示し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４、５Ｃ６及び１２Ｂ１２に対する重要残基を赤色の球で示す。抗体結合に重要なアミノ酸残基を表８Ｂ中に列挙する。
表８Ｂ：抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体結合に関与する残基
2019500014.tif 000030
【０４８８】
表８Ｂに示されるように、抗体２Ｄ４による結合に関与する重要なＳｉｇｌｅｃ−９残基は、配列番号１のアミノ酸残基Ｄ１８９、Ｐ１９０、及びＲ１９４に対応していた。抗体１２Ｂ１２による結合に関与する重要なＳｉｇｌｅｃ−９残基は、配列番号１のアミノ酸残基Ｈ４８、Ｗ５０、Ｉ５１、Ｙ５２及びＩ１２６に対応していた。抗体５Ｃ６による結合に関与する重要なＳｉｇｌｅｃ−９残基は、配列番号１のアミノ酸残基Ｌ２２、Ｈ４８、Ｗ５０、Ｉ５１、Ｙ５２及びＫ１２３に対応していた。
【０４８９】
［実施例３：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＳｉｇｌｅｃ−９抗体誘導によるＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルの低下］
Ｓｉｇｌｅｃ−９のｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現
以下の実施例の目的は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体が単球、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、Ｔ細胞及び／またはミクログリア上のＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させるかどうかを試験することであった。
【０４９０】
急性単球白血病細胞株ＴＨＰ−１、ならびに、ヒト初代単球、末梢血単球由来ヒト初代樹状細胞（ＤＣ）、ヒト初代マクロファージ及びヒト初代ミクログリア上にあるＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させる抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の能力を評価した。細胞試料を、１０％Ｈｙｃｌｏｎｅ  ＦＢＳ、２ｍＭグルタミン、ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ及び非必須アミノ酸を添加した２ｍｌのＲＰＭＩ中に、２４ウェルプレートで２００，０００細胞／ｍｌで播種するか、６ウェルディッシュで５００，０００細胞で播種した。Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体またはコントロールアイソタイプを１．０μｇ／ｍｌで添加し、３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした。
【０４９１】
受容体のダイナミクスを評価するために、抗体を細胞と１時間結合させ、洗浄し、Ｓｉｇｌｅｃ−９の表面レベルを２４時間及び４８時間後に決定した。
【０４９２】
細胞表面の受容体発現をＦＡＣＳ解析によって検出した。細胞を抗Ｓｉｇｌｅｃ−９−ＦＩＴＣクローンＨＩＭ３−４及びコントロール表面マーカー（Ｕ９３７：Ｓｉｇｌｅｃ−５、ヒト単球：ＣＤ１４、ヒト樹状細胞：ＣＤ１１ｃ、ヒトマクロファージ：ＣＤ１１ｂ）とともに、暗所中、氷上で３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ）中で２回洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏでフローサイトメトリーを実施した。データをＴｒｅｅＳｔａｒのＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して解析した。それぞれのフルオロフォアのＭＦＩ値を使用して、抗体が存在しない場合の受容体発現に対するパーセントとしてデータを算出した。
【０４９３】
表９Ａ及び９Ｂは、ヒト細胞からのＳｉｇｌｅｃ−９細胞表面レベルの結果を示す。表９Ａ及び９Ｂ中、「Ａｂなし」は、抗体で処理しなかった細胞を指し、「ｍＩｇＧ１」、「ｍＩｇＧ２ａ」及び「ｍＩｇＧ２ｂ」は、アイソタイプコントロール抗体を指す。
表９Ａ：Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒト細胞株及びヒト初代細胞において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させる
2019500014.tif 000031
表９Ｂ：Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ヒト初代細胞において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させる
2019500014.tif 000032
【０４９４】
表９Ａ及び９Ｂに示されるように、抗体の大部分は、複数種のヒト細胞上にあるＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させることができた。しかしながら、閾値に８０％以上のＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面発現レベルを用いると、抗体２Ｄ５は、試験したヒト細胞のいずれにおいても、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させないことがわかった。
【０４９５】
図７Ａ〜７Ｅは、抗体の大部分が、ＴＨＰ−１細胞（図７Ａ）、ヒト初代単球（図７Ｂ）、ヒト初代ミクログリア（図７Ｃ）、ヒト初代マクロファージ（図７Ｄ）、及びヒト初代樹状細胞（図７Ｅ）上のＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させることができることを更に示している。図７Ｆは、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４及び６Ｂ２で処理した場合に、ヒト初代樹状細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９の表面レベルが濃度依存的に減少することを示す。
【０４９６】
更に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける表面Ｓｉｇｌｅｃ−９下方制御試験を実施し、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体５Ｃ６、１２Ｂ１２及び１７Ｃ２、ならびにアイソタイプコントロール抗体（ｍＩｇＧ２ａ）を２倍でタイトレーションした。上記のように、初代ヒトマクロファージを回収し、播種した。１ｎＭ〜０．００１μｇ／ｍＬの濃度範囲でＳｉｇｌｅｃ−９抗体を１０倍でタイトレーションして、結合を評価した。抗体を段階希釈し、上記のように細胞とともにインキュベートした。図７Ｉに示すように、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体５Ｃ６、１２Ｂ１２及び１７Ｃ２は、初代ヒトマクロファージ上のＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面発現をダウンレギュレーションすることができた。コントロール受容体ＣＤ１１ｂの細胞表面発現は、Ｓｉｇｌｉｅｃ−９抗体による処理によって影響されなかった（図７Ｊ）。
【０４９７】
Ｓｉｇｌｅｃ−９のｉｎ  ｖｉｖｏ発現
ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させるＳｉｇｌｅｃ−９抗体の能力を試験するために、ヒト化ＮＳＧマウス（ｈｕ−ＮＳＧ）を利用した。Ｈｕ−ＮＳＧマウスは、ヒトＣＤ３４＋造血幹細胞を移植したＮＯＤ−ｓｃｉｄ  ＩＬ２Ｒγｎｕｌｌマウスである。雌のＨｕ−ＮＳＧマウスをＪａｘから購入し、ヒト細胞の移植から１５週後に使用した。０日目に、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４、またはアイソタイプコントロールのマウスＩｇＧ１抗体（クローンＭＯＰＣ−２１）の４０ｍｇ／ｋｇの腹腔内注射をマウスに投与した。１日目に、マウスからの血液試料をヘパリン中に採取し、ＦＡＣＳ解析用に処理した。簡潔に述べれば、まず、血液試料を氷冷ＡＣＫ溶解緩衝液中で５分間インキュベートして赤血球を溶解し、次いで、冷ＰＢＳで十分洗浄した。この手順を２回繰り返した。次いで、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ）中、Ｆｃブロック溶液の存在下、抗ヒト−ＣＤ４５−Ｐｅ−Ｃｙ７、抗マウス−ＣＤ４５−ＡＰＣ−Ｃｙ７、抗ヒト−ＣＤ３−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、抗ヒト−ＣＤ１４−ＦＩＴＣ、抗ヒト−ＣＤ１１ｃ−ＰＢ、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９−ＡＰＣ、抗ＣＤ３３−ＰＥ及び生存色素（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号Ｌ３４９５７）の存在下、氷上で３０分間インキュベートし、冷ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。次いで、４％ＰＦＡで固定した試料を得た。データをＢＤ  ＦＡＣＳ  ＣＡＮＴＯ（商標）ＩＩサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて解析した。−７日目、抗体処置後１日、７日、１４日及び２１日後のｈＣＤ４５＋，ｈＣＤ１４＋細胞集団におけるＳｉｇｌｅｃ９及びコントロール受容体ＣＤ３３の発現レベルを決定した。
【０４９８】
図７Ｇ及び７Ｈに示されるように、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４による処置は、コントロールｍＩｇＧ１抗体処置と比較した場合、処置を行ったｈｕ−ＮＳＧマウスの末梢血の細胞において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させることができた。Ｓｉｇｌｅｃ−９発現は、抗体処置後、早くも１日目に約８０％低下した（図７Ｇ）。比較として、関係のない表面受容体ＣＤ３３の細胞表面発現は、ｍＩｇＧ１コントロール抗体処置後のＣＤ３３の細胞表面レベルと比較して、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体処置後、大きく低下しなかった（図７Ｈ）。
【０４９９】
図７Ｋ〜７Ｎに示されるように、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４による処置は、アイソタイプコントロールＭＯＰＣ２１抗体処置と比較すると、処置を行ったｈｕ−ＮＳＧマウスの末梢血の細胞において、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させることができた。Ｓｉｇｌｅｃ−９発現は、抗体２Ｄ４による抗体処置後、早くも１日目に約８０％低下した（図７Ｌ）。Ｓｉｇｌｅｃ−９発現におけるこの低下は、処置後２１日間持続した（図７Ｋ及び７Ｌ）。比較として、関係のない表面受容体ＣＤ３３の細胞表面発現は、ｍＩｇＧ１コントロール抗体処置後のＣＤ３３の細胞表面レベルと比較して、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体処置後、大きく低下しなかった（図７Ｋ及び７Ｍ）。
【０５００】
これらの結果は、ヒト化マウスを利用したとき、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＳｉｇｌｅｃ−９に結合し、ヒト免疫細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９を機能的に下方制御することを示している。更に、これらの結果は、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４が、ヒト化マウスに注射されたとき、マウスの血中を循環する末梢ｈＣＤ４５＋ｈＣＤ１４＋骨髄細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９に結合することを示している。Ｓｉｇｌｅｃ−９に対する抗体結合は、受容体の下方制御、特にコントロール受容体ＣＤ３３ではなく、Ｓｉｇｌｅｃ−９の下方制御をもたらす。２Ｄ４抗体の単回注射後、ヒト単球上に発現されるＳｉｇｌｅｃ−９の８０％が処置後１日目で下方制御される。受容体の低下は、２Ｄ４抗体の単一処置後２１日間持続する。
【０５０１】
Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体のＴＲＥＭ２発現に及ぼす影響
Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させてＴＲＥＭ２発現を調節するＳｉｇｌｅｃ−９抗体の能力を試験するために、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４で分化させたヒト単球由来樹状細胞を６日目に回収し、１．０μｇ／ｍｌの抗Ｓｉｌｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４、アイソタイプコントロール抗体の存在下、または未処理のまま、２４ウェルのディッシュに５０，０００細胞／ウェルで一晩、プレーティングした。ＣＤ１１ｃ、ＴＲＥＭ２、及びＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面受容体発現を、ＦＡＣＳ分析によって翌日に検出した。細胞をビオチン化抗ＴＲＥＭ２抗体１０Ａ９と共に氷上で２０分間インキュベートした。１回の洗浄後、細胞を、ＡＰＣ結合ストレプトアビジン（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、１：１５０希釈）、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９−ＰＥ、クローンＫ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、及び抗ＣＤ１１ｃ−ＰＥＣｙ７（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）と共にＦＡＣＳ緩衝液中で、暗所、氷上で３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ）で３回洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ上でフローサイトメトリーを行った。ＴｒｅｅＳｔａｒ  ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してデータを分析した。データは、それぞれのフルオロフォアについてＭＦＩ値を用いて、抗体の非存在下での受容体発現の割合として計算した。
【０５０２】
図７Ｏ及び７Ｐに示すように、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させることができた抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４は、ＴＲＥＭ２発現に影響を及ぼさなかった。
【０５０３】
ＴＲＥＭ２の機能喪失型変異は、那須・ハコラ病、前頭側頭型認知症、及びアルツハイマー病を含む重度の神経変性と関連している。ＩＴＩＭを有するＳｉｇｌｅｃ受容体の調節がＴＲＥＭ２発現に影響を及ぼし得ると考えられている。したがって、ヒト免疫細胞上のＴＲＥＭ２発現を低下させない抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ポジティブな治療成績の鍵となる可能性がある。図７Ｏ及び７Ｐの結果は、Ｓｉｇｌｅｃ−９細胞表面レベルをロバストに低下させる抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体クローン２Ｄ４が、ヒト樹状細胞上のＴＲＥＭ２発現を低下させないことを示している。
【０５０４】
［実施例４：ヒトＳｉｇｌｅｃ−９への結合に関して、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体がＳｉｇｌｅｃ−９リガンドと競合するかどうかの判定］
以下の実施例の目的は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体がＳｉｇｌｅｃ−９上のリガンド結合部位を認識し、細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９受容体上に結合するリガンドと競合するかどうかを試験することであった。
【０５０５】
Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体がシアル酸リガンドへの結合をブロックするかどうかを判定するために、Ｓｉｇｌｅｃ−９に優占的に結合するシアル酸リガンドをロバストに発現するＵ９３７細胞をＦＡＣＳベースのプロトコルで利用した。簡潔に述べると、２５μｇ／ｍｌのＳｉｇｌｅｃ−９抗体と、２５μｇ／ｍｌのＳｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号１１３９−ＳＬ−０５０）を、９６ウェルの丸底プレート中の結合緩衝液（０．２５％ＢＳＡ及び１ｍＭ  ＣａＣｌ２を含むＰＢＳ）中で氷上、２０分間、プレカップリングした。抗ヒトＣＤ６４抗体（１０μｇ／ｍｌ、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  カタログ番号１６−０６４９−８５クローン１０．１）で予めブロッキングしたＵ９３７細胞を各ウェルに添加し、混合し、氷上で４５分間インキュベートした。細胞をペレット化し、ヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＰＥ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ  カタログ番号２０４０−０９）二次抗体に、結合緩衝液中１：２０００希釈で３０分間再懸濁した。次いで、細胞を３回洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ上のフローサイトメトリーによって分析した。ＦｌｏｗＪｏバージョン１０．０．６（ＴｒｅｅＳｔａｒ）でデータを分析した。
【０５０６】
リガンド競合アッセイの結果を表１０に示す。表１０中、「Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃ」は、Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃのみで処置した細胞を指し、「アイソタイプ」は、アイソタイプコントロール抗体を指し、「二次Ａｂ」は、ＰＥを結合させた二次抗体のみで処置した細胞を指す。
表１０：Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体はＳｉｇｌｅｃ−９−ＦｃのＵ９３７細胞への結合を遮断しない
2019500014.tif 000033
【０５０７】
表１０に示されるように、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９−ＦｃのＵ９３７細胞への結合を遮断することができず、このことは、Ｓｉｇｌｅｃ−９上のリガンド結合部位への結合に競合することがなく、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害しない（すなわち、Ｓｉｇｌｅｃ−９へのリガンド結合を遮断しない）ことを示すものである。
【０５０８】
別の実験において、Ｕ９３７細胞を培養し、実験分析の前に数回継代した。トリプシンまたはＥＤＴＡを用いてＵ９３７細胞を回収し、Ｕ底型９６ウェルプレートに約１００，０００個／ウェルでプレーティングした。細胞を結合緩衝液（ＰＢＳ＋０．２５％ＢＳＡ及び１ｍＭＣａＣｌ２）中で１回洗浄し、細胞を１００μｌの結合緩衝液に再懸濁した。別の９６ウェルプレートにおいて、Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃを、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４、５Ｃ６、１２Ｂ１２、１７Ｃ２、またはアイソタイプコントロールとともにプレインキュベートした。Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃ融合タンパク質を５０μｇ／ｍｌのストック濃度で保存し、ｒｈＩｇＧ１−Ｆｃを陰性コントロールとして使用し、０．５μｇ／ウェルに対して１０μｌストック／ウェルを使用した。Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体をＰＢＳ中の１．０ｍｇ／ｍｌのストックにて４℃で保存し、１．０μｇ／ウェルの全抗体に対して１μｌ／ウェルを使用した。Ｆｃ融合体＋抗体を同じウェルに加え、氷上で１０分間結合させた。Ｆｃ±ｍａｂをＵ９３７細胞に移し、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を１００μｌの結合緩衝液で１回洗浄し、１２００ｒｐｍで５分間ペレット化した。マウス抗ヒト二次抗体１：２０００  ＰＥを含む結合緩衝液１００μｌ／ウェル中に細胞を再懸濁し、二次抗体の存在下で氷上、３０分間インキュベートし、結合緩衝液で２回洗浄した。ＰＥシグナル検出のためのＦＡＣＳ分析をＦＡＣＳＣａｎｔｏ（ＢＤ）上で行い、データをＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で分析してＭＦＩを比較した。
【０５０９】
図７Ｑに示すように、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体５Ｃ６、１２Ｂ１２及び１７Ｃ２は、Ｕ９３７細胞が発現する内在性シアル酸リガンドへの受容体結合を遮断することができた。表１０の結果と一貫して、抗体２Ｄ４はリガンド結合を遮断することができず、代わりにリガンド−受容体相互作用を増強するようであった（図７Ｑ）。この結果は、リガンドの遮断がＩＴＩＭシグナル伝達を防止し、Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体機能を阻害するための１つのアプローチであり得ることを示している。
【０５１０】
［実施例５：Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の機能性試験に関する要約。］
表１１は、上記実施例３及び４に記載される細胞表面発現試験及びリガンド結合試験の結果をまとめたものである。表１１に示されるように、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体には３つの大まかなクラスがあった。１つのクラスの抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害することなく、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させる。この抗体クラスの抗体には、２Ｄ４、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２が含まれる。
【０５１１】
２つ目のクラスの抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させることがなく、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害することがない。この抗体クラスの抗体には、２Ｄ５が含まれる。
【０５１２】
３つ目のクラスの抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させ、Ｓｉｇｌｅｃ−９と１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドとの間の相互作用を阻害する。この抗体クラスの抗体には、５Ｃ６、１２Ｂ１２及び１７Ｃ２が含まれる。
表１１：Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の機能性試験
2019500014.tif 000034
【０５１３】
［実施例６：樹状細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９に対するリガンド結合は、Ｔ細胞増殖及び食作用を阻害する］
ヒト樹状細胞（ＤＣ）を末梢血単球からＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４を用いて分化させ、５日間培養した。未成熟（懸濁液）ＤＣを回収し、２００，０００細胞／ｍｌの密度で１２ウェルディッシュに播種した。ＤＣをＴＮＦａ（５０μｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１ｂ（５０μｇ／ｍｌ）、ＩＬ−６（１５０ｎｇ／ｍｌ）及びプロスタグランジンＥ２（１μｇ／ｍｌ）のサイトカインカクテルにより２４時間活性化した。ＬＩＮ、ＣＤ１１ｃ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ８６及びＣＤ８３に対する市販抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、樹状細胞の成熟をフローサイトメトリーによって決定した。同種の単離されたＴ細胞との共培養の直前に、活性化されたＤＣを、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａ由来ノイラミニダーゼ１００ｍＵ／ｍｌとともに、血清不含培地中、３７℃で２時間、シアリダーゼ処理するか、未処理のままとした。酵素活性を血清含有培地の添加によりクエンチし、細胞をペレット化し、完全培地に再懸濁した。シアリダーゼ活性化ＤＣ、無処理活性化ＤＣ、または不活性化ＤＣを同種ＣＦＳＥ標識Ｔ細胞と１：１０の比で共培養した。陽性コントロールとして、ＣＤ３／ＣＤ２８  ＤｙｎａｌビーズをＴ細胞単独に加えた。５日後、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏで、Ｔ細胞増殖をＣＦＳＥ希釈物によって測定した。
【０５１４】
図８及び９は、樹状細胞上のシアル酸が混合リンパ球反応（ＭＬＲ）中にＴ細胞の増殖を制限することを示している。図９は、通常、抑制性リガンドを発現するＤＣが低レベルのＴ細胞増殖を誘導するのに対し（左パネル）、ＤＣ上の抑制性リガンドを除去するとＴ細胞増殖が増大すること（右パネル）を示している。
【０５１５】
図８及び９に示されるように、活性化ＤＣからシアル酸を酵素的に除去すると、無処理活性化ＤＣと比較して、Ｔ細胞増殖が増大した。これらの結果は、ＤＣ上に存在するシアル酸が、同種ＤＣと共培養したとき、Ｔ細胞に抑制的に作用してＴ細胞の増殖を制限することを示している。これらの結果は、Ｔ細胞または樹状細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９を遮断する抗体がＴ細胞及び／または樹状細胞の機能を向上させることを示している。陽性コントロールとしてＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｌビーズを使用した。更に、これらの結果は、ＤＣまたは任意の他の細胞源もしくは生物源とのシアル酸相互作用を遮断することにより、Ｔ細胞の機能が向上し得ることを示している。
【０５１６】
［実施例７：炎症状態は、骨髄細胞において、Ｓｉｇｌｅｃ−９シアル酸リガンド発現を誘導する］
ヒト樹状細胞（ＤＣ）を末梢血単球からＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４を用いて分化させ、５日間培養した。未成熟ヒトＤＣを５日目に回収し、Ｂ１６から滅菌濾過した上清、ルイス肺、ＭＣ３８腫瘍上清または１０ｎｇ／ｍｌのＬＰＳとともに共培養した。２４時間後、直接結合Ｓｉｇｌｅｃ−９−ＰＥ抗体を用いて、Ｓｉｇｌｅｃ−９発現をフローサイトメトリーによって決定した。ヒトＩｇＧ１−Ｆｃに融合させた可溶性Ｓｉｇｌｅｃ−９  ５０μｇ／ｍｌとともに氷上で３０分間インキュベーションすることによって、シアル酸リガンド発現を評価した。ＩｇＧ１−Ｆｃ単独をヒトＦｃブロックの存在下で陰性コントロールとして使用した。洗浄工程及びＰＥ結合抗ヒト二次抗体との氷上での３０分間のインキュベーション後、細胞上のシアル酸に対する可溶性受容体の結合を検出した。フローサイトメトリー解析をＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏで実施した。
【０５１７】
初代マクロファージを惹起するために、ヒト末梢血液試料に由来するヒト単球を単離し、これを直接使用するか、５０μｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦを用いて５日間でマクロファージに分化させた。炎症性サイトカイン産生におけるＳｉｇｌｅｃ−９の役割を決定するために、ヒトマクロファージを種々の炎症性メディエーターとともに培養し、サイトカインレベルを培養上清中で測定する。ヒトマクロファージを生成するために、ヒト末梢血液試料に由来するヒト単球を単離し、これを直接使用するか、５日間で、５０μｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦを用いてマクロファージに分化させるか、１００μｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦ及び１００μｇ／ｍｌのＩＬ−４を用いて樹状細胞に分化させた。細胞を５日間培養し、付着細胞を１ｍＭ  ＥＤＴＡ含有ＰＢＳで剥離した。細胞を９６ウェルプレート上に１０５細胞／ウェルで播種し、３７℃で４時間付着させた。次いで、ＴＬＲアゴニストＬＰＳ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ  ｅｑｕｉ）またはザイモサン（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）を０．０１〜１００ｎｇ／ｍｌ（ＬＰＳ）または０．０１〜１００μｇ／ｍｌ（ザイモサン）の範囲の濃度で用いて、細胞を刺激する。あるいは、マクロファージを１０ｎｇ／ｍｌのサイトカインＩＬ−４または５０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−γの存在下で培養する。刺激後２４時間または４８時間に細胞培養上清を回収し、ＴＮＦａ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０及びＭＣＰ−１サイトカインのレベルを、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｂｅａｄ  Ａｒｒａｙ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＢＤ）を製造元のプロトコルに従って使用することによって測定する。炎症性メディエーターＬＰＳまたはザイモサンで刺激したマクロファージは、Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体、または抑制性グリコールリガンドを除去する酵素で処理したとき、より多くの炎症性サイトカインＴＮＦａ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０及びＭＣＰ−１を分泌することが予想される。
【０５１８】
図１０Ａ及び１０Ｂは、ヒト樹状細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９発現が、腫瘍上清への曝露後、維持されたことを示している。図１０Ｃ及び１０Ｄは、腫瘍上清により、シアル酸（Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンド）の発現が上昇したことを示している。図１０Ｅ及び１０Ｆは、ヒト樹状細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９発現が、ＬＰＳ誘発炎症中に維持されたことを示している。図１０Ｇ及び１０Ｈは、ＬＰＳ誘発炎症により、シアル酸（Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンド）の発現が上昇したことを示している。
【０５１９】
これらの結果は、炎症状態及び腫瘍環境がＳｉｇｌｅｃ−９とシアル酸リガンドの両方の上方制御をもたらすことを示している。この結果はまた、Ｓｉｇｌｅｃ−９の機能増大が、ヒト初代樹状細胞の免疫を抑制できることを示している。これらの結果は、下方制御抗体または遮断抗体によりＳｉｇｌｅｃ−９を阻害すれば、免疫抑制された骨髄由来細胞または腫瘍関連骨髄細胞を解放し、免疫機能を回復することができることを示している。これらの結果は、更に、骨髄細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９を遮断する抗体が骨髄細胞の機能を向上させることを示している。
【０５２０】
［実施例８：シアリダーゼ処理した樹状細胞によるＥ．ｃｏｌｉ食作用の増加］
以下の実施例の目的は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体が、単球、樹状細胞マクロファージ及びミクログリアなどの骨髄系統由来細胞において、アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物及び病因タンパク質、例えば、Ａβペプチド、αシヌクレインタンパク質、タウタンパク質、ＴＤＰ−４３タンパク質、プリオンタンパク質、ハンチンチンタンパク質、ＲＡＮ翻訳産物抗原、例えば、グリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）もしくはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）の食作用を誘導するかどうかを試験することであった。二重特異性抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗原と、限定するものではないが、ＣＤ３、Ａβペプチド抗原、またはαシヌクレインタンパク質抗原、またはタウタンパク質抗原、またはＴＤＰ−４３タンパク質抗原、またはプリオンタンパク質抗原、またはハンチンチンタンパク質抗原、またはＲＡＮ翻訳産物抗原、例えば、グリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）またはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）を含む第２の抗原とを認識する抗体であってよい。
【０５２１】
ヒト末梢血液試料に由来する単球を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（商標）単球単離抗体カクテル（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して単離し、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）を用いて樹状細胞に分化させ、５日間培養した。細胞を培養ディッシュ上の１０％ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）含有ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に播種し、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。非付着細胞を回収し、食作用実験に使用した。
【０５２２】
細菌食作用アッセイを実施するために、樹状細胞を回収し、平底９６ウェルプレート中、サイトカインなしで２時間培養した。ｐＨｒｏｄｏで標識されたＥ．ｃｏｌｉ  ＢｉｏＰａｒｔｉｃｌｅｓを製造元のプロトコルに従って再懸濁し、０．２Ｕ／ｍｌもしくは０．４Ｕ／ｍｌのＶｉｂｒｏ  ｃｈｏｌｅｒａ由来シアリダーゼ、またはＰＢＳ単独により、３７℃、２．５時間処理した。ＢｉｏＰａｒｔｉｃｌｅｓを洗浄し、ＲＰＭＩ中に再懸濁し、２０ｕｇ／ウェルで添加した。樹状細胞及びＥ．ｃｏｌｉ細胞を混合し、ペレット化し、３７℃で３０分間インキュベートした。Ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ  Ｄをコントロールウェルに１０ｕＭで加えた。ＦＡＣＳ解析の直前に細胞を氷に移し、ＦＡＣＳ緩衝液中、４℃で２回洗浄した。ｐＨｒｏｄｏ標識Ｅ．ｃｏｌｉ食作用を、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏでのフローサイトメトリーにより、ＰＥチャンネルで検出した。
【０５２３】
図１１は、シアリダーゼ処理により、Ｅ．ｃｏｌｉの樹状細胞媒介食作用が増加したことを示している。これらの結果は、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞表面発現を低下させ、かつ／または１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９リガンドのＳｉｇｌｅｃ−９への結合を阻害する抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体を、食作用の誘発または増大にも使用できることを示している。
【０５２４】
［実施例９：アルツハイマー病患者の脳切片におけるＳｉｇｌｅｃ−９リガンドの発現上昇］
正常患者及びアルツハイマー病（ＡＤ）患者の脳内におけるシアル酸リガンド発現を、ビオチン化Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ）を用いた免疫組織化学により検出した。Ｓｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃタンパク質を、ＥＺ−Ｌｉｎｋ  Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−Ｂｉｏｔｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）により製造元の説明書に従って、ビオチン化した。ＩＨＣの手順は、終夜のインキュベーションを除き、シェーカーで実施した。試料を１０％ＭｅＯＨ、３％Ｈ２Ｏ２のＰＢＳ中で１５分間インキュベートし、続いて、４％血清含有ＰＢＳ中で３回洗浄した。次いで、試料を０．２％Ｔｒｉｔｏｎ（商標）−Ｘ１００、４％血清、０．０１９％Ｌ−リシンのＰＢＳ中で３０分間インキュベートし、続いて、一次抗体中で１時間、次いで、４％血清含有ＰＢＳ中、４℃で一晩インキュベートした。翌日、試料をシェーカー上に１時間置いた後、３回洗浄し、次いで、試料をＡＢＣ緩衝液中で１時間インキュベートし、３回洗浄した。試料をＶｅｃｔｏｒ  ＤＡＢペルオキシダーゼキットにより発色させ、３回洗浄し、脱水し、カラーカメラを備えたＮｉｋｏｎ  ９０ｉ顕微鏡を用いて倍率２００×で画像を取得した。Ｎｉｋｏｎ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ  ＢＲ画像解析ソフトウエアを使用して定量を行った。
【０５２５】
図１２は、２名のＡＤ患者（ドナー１及びドナー２）に由来する脳切片において、シアル酸Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンドが上方制御されたことを示している。５つのＡＤ及び５つの非ＡＤヒト脳から得たデータは、一元配置ＡＮＯＶＡにより、Ｓｉｇｌｅｃ−９シアル酸リガンドの発現における統計的に有意な上昇を示している（ｐ＝０．０１５９）（図１２）。
【０５２６】
これらの結果は、細胞表面からＳｉｇｌｅｃ−９を除去し、またはリガンド相互作用の上昇を遮断する抗体が、ミクログリアまたは脳内の他の骨髄細胞における抑制性Ｓｉｇｌｅｃ−９依存性シグナル伝達を軽減し、これらの細胞に正常機能を回復させることができ、アルツハイマー病に有益な効果があることを示している。
【０５２７】
［実施例１０：がん細胞におけるＳｉｇｌｅｃ−９リガンドの発現上昇］
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験
マウス黒色腫（Ｂ１６）、ルイス肺腫瘍細胞または結腸癌（ＭＣ３８）におけるＳｉｇｌｅｃ−９結合シアル酸リガンドの発現レベルを特定するために、これらの細胞種を培養し、５０μｇ／ｍｌのＳｉｇｌｅｃ−９−ＦｃまたはＩｇＧ１−Ｆｃコントロールと氷上で３０分間インキュベートした。結合相互作用は、０．２５％ＢＳＡ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２を含むＰＢＳ中で実施した。結合しなかったＳｉｇｌｅｃ−９−Ｆｃを洗浄して除去した後、Ｓｉｇｌｅｃ−９受容体結合を検出するために、ヤギ抗ヒトＦｃ−ＰＥ二次抗体を氷上で３０分間インキュベートした。細胞を結合緩衝液中で３回洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏでのフローサイトメトリーにより解析した。
【０５２８】
図１３は、黒色腫細胞、肺腫瘍細胞及び結腸癌細胞において、抑制性Ｓｉｇｌｅｃ−９リガンドの発現がバックグラウンドよりも少なくとも２０倍上昇していることを示している。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの腫瘍細胞上の抑制性シアル酸リガンド発現の特定は、がん細胞の免疫認識及び免疫クリアランスの回避に関与する機序を示すものである。腫瘍細胞上のシアル酸リガンドは、骨髄細胞及びリンパ免疫細胞上に発現されるＳｉｇｌｅｃ−９を介した免疫抑制性相互作用を媒介することができる。これらの結果は、細胞表面からＳｉｇｌｅｃ−９を除去し、またはリガンド相互作用の上昇を遮断する抗体が、免疫系に対する腫瘍の抑制性作用を軽減させ、がん治療を向上することができることを示している。
【０５２９】
ｉｎ  ｖｉｖｏ試験
４週齢の雌のＴａｃｏｎｉｃ  ＮＯＧマウスに約２４時間骨髄破壊を行った後、ヒト胎児肝臓ＣＤ３４＋細胞（１００，０００細胞／マウス）を静脈内注射により移植した。免疫細胞の再構成を末梢血のフローサイトメトリーによってモニターした。移植から１２週間後、Ｃｈａｍｐｉｏｎｓ腫瘍移植黒色腫モデルを皮下移植した。約８〜１０週後、腫瘍が１５０〜２００ｍｍ３の大きさに達したら、血液、脾臓及び腫瘍を採取し、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏでのフローサイトメトリーによる分析用に処理した。フローサイトメトリー解析を実施して、Ｓｉｇｌｅｃ−９の発現をヒト（ｈＣＤ４５＋）免疫系の異なる区画で決定した。具体的には、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ１４＋単球／マクロファージ及び他のＣＤ３−ＣＤ１４−ヒト免疫細胞における発現を解析した。データをＴｒｅｅＳｔａｒのＦｌｏｗＪｏソフトウェアバージョン１０．０．６を用いて解析した。
【０５３０】
図１４に示されるように、結果は、末梢血、脾臓及びヒト化マウスに移植した黒色腫腫瘍中の腫瘍浸潤性免疫細胞において、Ｓｉｇｌｅｃ−９が発現していることを示している。重要なことは、Ｓｉｇｌｅｃ−９が黒色腫腫瘍浸潤ヒト免疫細胞において大きく上方制御されることである。これは、本マウスモデルとＳｉｇｌｅｃ−９抗体の治療能力の評価との関連性を示すものである。
【０５３１】
［実施例１１：Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／または二重特異性抗体による骨髄細胞の抗炎症性サイトカインＩＬ−１０の減少］
本実施例の目的は、骨髄由来骨髄細胞が、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体での処置、ならびに１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ）での刺激後、アポトーシス性細胞との共培養または同様の刺激物によって、抗炎症性サイトカインＩＬ−１０及び他の抗炎症性メディエーターの減少を示すかどうかを試験することである。
【０５３２】
ヒト骨髄前駆細胞の単離を先の記載されているとおりに実施する。５日後に培地を交換し、細胞を更に１０〜１１日間培養する。２４時間後に上清を回収し、細胞から放出されたＩＬ−１０及び他の抗炎症性サイトカインのレベルを、ＩＬ−１０  ＥＬＩＳＡを製造元の説明書（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）に従って用いて決定する（ＪＥＭ（２００５），２０１；６４７−６５７；及びＰＬｏＳ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００４），４｜Ｉｓｓｕｅ  ４｜ｅ１２４）。
【０５３３】
［実施例１２：Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／または二重特異性抗体による骨髄系統由来細胞の食作用の誘導］
本実施例の目的は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体が、単球、樹状細胞マクロファージ及びミクログリアなどの骨髄系統由来細胞において、アポトーシス性ニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物及び病因タンパク質、例えば、Ａβペプチド、αシヌクレインタンパク質、タウタンパク質、ＴＤＰ−４３タンパク質、プリオンタンパク質、ハンチンチンタンパク質、ＲＡＮ翻訳産物抗原、例えば、グリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）またはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）の食作用を誘導するかどうかを試験することである。二重特異性抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗原と、限定するものではないが、Ａβペプチド抗原、またはαシヌクレインタンパク質抗原、またはタウタンパク質抗原、またはＴＤＰ−４３タンパク質抗原、またはプリオンタンパク質抗原、またはハンチンチンタンパク質抗原、またはＲＡＮ翻訳産物抗原、例えば、グリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）もしくはプロリン−アルギニン（ＰＲ）から構成されるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）を含む第２の抗原とを認識する抗体であってよい。
【０５３４】
ヒト末梢血液試料に由来する単球を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ単球単離抗体カクテル（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して単離し、５０μｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦ（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）を用いてマクロファージ、好中球及びＮＫ細胞に５日間分化させる。細胞を培養ディッシュ上の１０％ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）含有ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に播種し、３７℃、５％ＣＯ２で培養する。付着細胞を回収し、優しくかき取って回収し、食作用実験に使用する。
【０５３５】
Ｅｔｅｍａｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＩ（２０１２）及びＯｈｇｉｄａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｐｏｒｔｓ（２０１４）に記載のプロトコルに従って、１％  Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、１０ｎｇ／ｍｌ  ＧＭ−ＣＳＦ、１０ｎｇ／ｍｌ  Ｍ−ＣＳＦ、１０ｎｇ／ｍｌ  β−ＮＧＦ、１００ｎｇ／ｍｌ  ＣＣＬ−２、１００ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−３４を含む血清不含ＲＰＭＩ中での培養により、ヒトミクログリア細胞を末梢血単球から調製する。分化形態が現れる７〜１０日目に細胞を回収した。
【０５３６】
食作用アッセイを実施するために、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞または樹状細胞をアポトーシス性ニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物及び病因タンパク質とともに培養する。ニューロンは、５〜１０日間培養し、次いで、オカダ酸を最終濃度３０ｎＭで３時間添加し、アポトーシスを誘導する。神経細胞膜をＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒ  ＣＭ−ＤｉＩ膜色素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）で標識する。インキュベーション後、アポトーシス性ニューロンまたは食作用の他の標的を２回洗浄し、エフェクター／標的比１：２０で、形質導入されたミクログリア培養物に添加する。アポトーシス性ニューロンの添加後１時間及び２４時間に、貪食した神経細胞膜を有するミクログリアの数を共焦点蛍光顕微鏡（Ｌｅｉｃａ）下で計数する。アポトーシス性細胞は、倍率６０で３つの異なる領域で計数する。食作用の量をフローサイトメトリーによって確認する。更に、アポトーシス性ニューロンの添加後２４時間、４８時間または７２時間に、細胞を回収し、サイトカインのＲＴ−ＰＣＲに使用する。
【０５３７】
マイクロスフェアビーズまたは細菌食作用アッセイを実施するために、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞または樹状細胞を抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体で処理する。細胞を回収し、平底９６ウェルプレート中、サイトカインなしで２時間培養する。ｐＨｒｏｄｏで標識されたＥ．ｃｏｌｉ  ＢｉｏＰａｒｔｉｃｌｅｓを製造元のプロトコルに従って再懸濁し、０．２Ｕ／ｍｌもしくは０．４Ｕ／ｍｌのＶｉｂｒｏ  ｃｈｏｌｅｒａ由来シアリダーゼ、またはＰＢＳ単独により、３７℃、２．５時間処理する。ＢｉｏＰａｒｔｉｃｌｅｓを洗浄し、ＲＰＭＩ中に再懸濁し、２０μｇ／ウェルで添加する。細胞及びＥ．ｃｏｌｉ細胞を混合し、ペレット化し、３７℃で３０分間インキュベートした。Ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ  Ｄをコントロールウェルに１０μＭで加える。ＦＡＣＳ解析の直前に細胞を氷に移し、ＦＡＣＳ緩衝液中、４℃で２回洗浄する。ｐＨｒｏｄｏ標識Ｅ．ｃｏｌｉ食作用を、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏでのフローサイトメトリーにより、ＰＥチャンネルで検出する。
【０５３８】
２４時間後、１．００μｍの赤色蛍光マイクロスフェアビーズ（Ｆｌｕｏｒｅｓｂｒｉｔｅ  Ｐｏｌｙｃｈｒｏｍａｔｉｃ  Ｒｅｄ  Ｍｉ−ｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ；Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．）を１時間加える。ミクログリアによるマイクロスフェアビーズの食作用を蛍光顕微鏡法によって分析する。更に、培養プレートからミクログリアを回収し、フローサイトメトリーにより解析する。貪食したビーズを有するミクログリアのパーセンテージを決定する。食作用は、実験後ごとに変わるので、食作用の相対変化も決定する。データを、アゴニスト抗体とともに培養したミクログリアと、コントロール抗体とともに培養したミクログリアとの間の食作用の相対変化として示す。
【０５３９】
炎症性遺伝子転写物を解析するＲＴ−ＰＣＲを実施するために、Ｓｉｇｌｅｃ−９ベクターまたはＧＦＰ１コントロールベクターをミクログリアに形質導入する。次いで、細胞をディッシュ上で培養し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体で処理する。２４、４８及び７２時間後に、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を使用して、ミクログリアからＲＮＡを単離する。ｓｈ−Ｓｉｇｌｅｃ−９ＲＮＡ、ｓｈ−コントロールＲＮＡ、ｗＳｉｇｌｅｃ−９、ＧＦＰ２、ｍｔＤＡＰ１２−ＧＦＰ及びＧＦＰ１ベクターを形質導入し、アポトーシス性ニューロンと４８時間共培養したミクログリアからもＲＮＡを回収する。
【０５４０】
次いで、ＲＮＡの逆転写を行う。ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎによる定量ＲＴ−ＰＣＲをＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ５７００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で実施する。ＧＡＰＤＨの増幅を試料の正規化に使用する。増幅プロトコルは、ＧｅｎｅＡｍｐ  ５７００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（バージョン１．３）に従った。ＧＡＰＤＨ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＮＯＳ２及びＴＧＦ−β転写物の検出には、次のフォワード及びリバースプライマーを最終濃度２００ｎＭで使用した。
ＧＡＰＤＨフォワードプライマー：５’−ＣＴＣＣＡＣＴＣＡＣＧＧＣＡＡＡＴＴＣＡＡ−３’（配列番号２４１）及びＧＡＰＤＨリバースプライマー：５’−ＧＡＴＧＡＣＡＡＧＣＴＴＣＣＣＡＴＴＣＴＣＧ−３’（配列番号２４２）；
ＴＮＦ−αフォワードプライマー：５’−ＣＣＧＴＣＡＧＣＣＧＡＴＴＴＧＣＴＡＴＣＴ−３’（配列番号２４３）及びＴＮＦ−αリバースプライマー：５’−ＡＣＧＧＣＡＧＡＧＡＧＧＡＧＧＴＴＧＡＣＴＴ−３’（配列番号２４４）；
ＩＬ−１αフォワードプライマー：５’−ＡＣＡＡ−ＣＡＡＡＡＡＡＧＣＣＴＣＧＴＧＣＴＧ−３’（配列番号２４５）及びＩＬ−１αリバースプライマー：５’−ＣＣＡＴＴＧＡＧＧＴＧＧＡＧＡＧＣＴＴＴＣＡ−３’（配列番号２４６）；
ＮＯＳ２フォワードプライマー：５’−ＧＧＣＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＴＣＴＡＣＧＴＴＣ−３’（配列番号２４７）、ＮＯＳ２リバースプライマー：５’−ＴＡＣＣＴＣＡＴＴＧＧＣＣＡＧＣＴＧＣＴＴ−３’（配列番号２４８）；ならびに
ＴＧＦ−β１フォワードプライマー：５’−ＡＧＧＡＣＣＴＧＧＧＴＴＧＧＡＡＧＴＧＧ−３’（配列番号２４９）及びＴＧＦ−β１リバースプライマー：５’−ＡＧＴＴＧＧＣＡＴＧＧＴＡＧＣＣＣＴＴＧ−３’（配列番号２５０）。
【０５４１】
アミロイド食作用アッセイを実施するために、ＨｉＬｙｔｅＦｌｕｏｒ（商標）６４７（Ａｎａｓｐｅｃ）−Ａβ−（１−４０）をＴｒｉｓ／ＥＤＴＡ（ｐＨ８．２）中に２０ｍＭで再懸濁し、次いで、暗所中、３７℃で３日間インキュベートして凝集を促進させる。ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞または樹状細胞を低血清（０．５％ＦＢＳ、インスリン添加）、ＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＦＮｃ（１００単位／ｍｌ）及び抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体で２４時間前処理した後、凝集した蛍光標識ａβペプチドを加えた。１００ｎＭの凝集ＨｉＬｙｔｅＦｌｕｏｒ（商標）６４７−Ａｂ−（１−４０）の添加から５時間後、アミロイド食作用及びＳｉｇｌｅｃ−９の表面発現をフローサイトメトリー解析によって決定する（ＡＳＮ  ＮＥＵＲＯ（２０１０）２（３）：１５７−１７０）。他の病因タンパク質の食作用を類似の方法で実施する。
【０５４２】
［実施例１３：Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／または二重特異性抗体によるＳＹＫ及び／またはＥＲＫ活性化の誘導］
本実施例の目的は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体がＳｙｋ及びＥＲＫの活性化を誘導するかどうかを試験することである。
【０５４３】
ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞または樹状細胞を抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体に１時間曝露する。刺激後、ウェスタンブロット解析用の還元試料緩衝液中で細胞を溶解する。ＥＲＫのリン酸化ならびにＳｙｋ及び／またはＥＲＫの総量を、ウェスタンブロット解析による抗ホスホＳｙｋまたはＥＲＫ抗体及び抗ＳｙｋまたはＥＲＫ抗体（いずれもＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製）のそれぞれを用いた免疫検出で決定する（ＪＥＭ（２００５），２０１，６４７−６５７）。
【０５４４】
［実施例１４：Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体及び／または二重特異性抗体はＳｙｋリン酸化を誘導する］
脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）は、細胞内シグナル伝達分子であり、Ｓｉｇｌｅｃ−９の下流でいくつかの基質をリン酸化することによって機能することにより、細胞活性化及び炎症性プロセスにつながるシグナル伝達複合体の形成を促進する。ヒトマクロファージ、ヒト好中球、ヒトＮＫ細胞及びヒト初代樹状細胞を培養し、細胞抽出物中のＳｙｋタンパク質のリン酸化状態を測定することによって、Ｓｙｋ活性化を誘導するＳｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体の能力を決定する。
【０５４５】
ヒト初代樹状細胞を１％血清ＲＰＭＩ中で４時間飢餓状態にし、次いで、ＰＢＳ−ＥＤＴＡで細胞を組織培養ディッシュから取り出し、ＰＢＳで洗浄し、計数する。細胞に完全長Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体またはコントロール抗体を氷上で１５分間コーティングする。冷ＰＢＳで洗浄した後、ヤギ抗ヒトＩｇＧの存在下、細胞を３７℃で指定時間インキュベートする。刺激後、溶解緩衝液（１％ｖ／ｖＮＰ−４０％、５０Ｍｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０％グリセロール＋プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤）で細胞を溶解し、続いて、４℃、１６，０００ｇで１０分間遠心分離して不溶性物質を除去する。次いで、ライセートを抗Ｓｙｋ  Ａｂ（ヒトＤＣには４Ｄ１０、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）により免疫沈降させる。沈降したタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分画し、ＰＶＤＦメンブレンへ転写し、抗ホスホチロシンＡｂ（４Ｇ１０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）でプローブする。全基質が十分に免疫沈降したことを確認するために、イムノブロットを抗Ｓｙｋ（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、ヒトＤＣの場合）で再プローブする。可視化は、増強化学発光（ＥＣＬ）システム（ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて記載のとおりに行う（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，３（１２２）：ｒａ３８）。
【０５４６】
［実施例１５：Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／または二重特異性抗体によるミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞及び樹状細胞のＣＣＲ７ならびにＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１への遊走の誘導］
本実施例の目的は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体が、ミクログリア細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞及び樹状細胞において、ＣＣＲ７ならびにＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１への遊走を誘導するかどうかを試験することである。
【０５４７】
ミクログリア、マクロファージまたは樹状細胞を抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９／ＤＡＰ１２二重特異性抗体と培養するか、コントロール抗体のいずれかと培養する。細胞を７２時間後に回収し、ＣＣＲ７特異性抗体で免疫標識し、フローサイトメトリーにより解析する。
【０５４８】
ＣＣＲ７発現の増加によるあらゆる機能上の影響を決定するために、走化性アッセイを実施する。ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞または樹状細胞を抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９／ＤＡＰ１２二重特異性抗体によりＳｉｇｌｅｃ−９を介して刺激し、２チャンバシステム中に入れる。ケモカインリガンドＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１に向かって遊走するミクログリア細胞の数を定量する（ＪＥＭ（２００５），２０１，６４７−６５７）。
【０５４９】
走化性アッセイには、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞または樹状細胞を抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体に曝露し、１μｇ／ｍｌのＬＰＳで処理する。下部チャンバに１００ｎｇ／ｍｌのＣＣＬ１９またはＣＣＬ２１（いずれもＰｅｐｒｏＴｅｃｈ社製）を含む培地４５０μｌを入れたトランスウェルシステム（孔径３μｍフィルター；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の上部チャンバにミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞または樹状細胞を移す。１時間のインキュベーション期間後、下部チャンバに遊走したミクログリア  マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞または樹状細胞の数を、顕微鏡法により３つの異なる領域で計数する（ＪＥＭ（２００５）、２０１、６４７−６５７）。
【０５５０】
［実施例１６：Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／または二重特異性抗体によるミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞及び樹状細胞のＦ−アクチンの誘導］
本実施例の目的は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体が、ミクログリア細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞及び樹状細胞において、Ｆ−アクチンを誘導するかどうかを試験することである。
【０５５１】
ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞または樹状細胞及びＳｉｇｌｅｃ−９が形質導入されているか、Ｓｉｇｌｅｃ−９を発現する他の目的細胞を培養プレートに加え、次いで、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト及び／もしくはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体、またはコントロール抗体に曝露する。細胞を固定し、ブロックし、次いで、１時間後、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５４６結合ファロイジン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）で染色し、Ｆ−アクチンを蛍光色素で標識する。４０×対物レンズ（Ｌｅｉｃａ）を用いる共焦点レーザー走査型顕微鏡法により画像を取得する（ＪＥＭ（２００５），２０１，６４７−６５７）。
【０５５２】
［実施例１７：Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／または二重特異性抗体による破骨細胞の生成誘導及び破骨細胞の形成速度の増加］
本実施例の目的は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体が破骨細胞生成を誘導し、破骨細胞の形成速度を増加させるかどうかを試験することである。
【０５５３】
１０％ＦＢＳ（Ａｔｌａｎｔｉｃ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（Ａｔｌａｎｔａ，ＧＡ，ＵＳＡ））及びペニシリン−ストレプトマイシン−グルタミン（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）または別の適切な培地中に、ヒト単球由来単球／マクロファージを維持する。９６ウェルプレートに細胞を３０００細胞／ウェルで１０％ＦＢＳ、ペニシリン−ストレプトマイシン−グルタミン、５０ｎｇ／ｍｌ  ＲＡＮＫＬ及び２０  ｎｇ／ｍｌＭ−ＣＳＦを添加したα−ＭＥＭ培地中に播種する。３日ごとに培地を交換し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体に曝露し、多核（少なくとも３つの核）ＴＲＡＣＰ＋破骨細胞の数を計数し、光学顕微鏡法でスコア付けする。複雑性及びサイズを決定するために、核の数（１０超または３〜１０の核）に基づいて破骨細胞を計数する。Ｉｍａｇｅ  Ｊソフトウェア（ＮＩＨ）を使用することによって破骨細胞の表面積も測定する。更に、破骨細胞遺伝子の発現レベルを決定する。ＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、異なる時点で、破骨細胞形成培養物から全ＲＮＡを抽出する。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩＩキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用した第一鎖のｃＤＮＡ合成後、Ｎｆａｔｃ１、Ａｃｐ５、Ｃｔｓｋ、Ｃａｌｃｒ及びＣｃｎｄ１のリアルタイム定量ＰＣＲ反応を実施する。標的ｍＲＮＡ発現の相対的定量を算出し、シクロフィリンの発現に対して正規化し、（標的遺伝子ｍＲＮＡ／シクロフィリンｍＲＮＡ）３×１０６として表す（Ｊ．ＯＦ  ＢＯＮＥ  ＡＮＤ  ＭＩＮＥＲＡＬ  ＲＥＳＥＡＲＣＨ（２００６），２１，２３７−２４５；Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１２；１８８：２６１２−２６２１）。
【０５５４】
あるいは、マクロファージ、好中球またはＮＫ細胞を３連ウェルのプレート上に播種し、ＲＡＮＫＬ、Ｍ−ＣＳＦで処理し、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９及び／もしくはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体、またはアイソタイプ適合コントロールモノクローナル抗体で処理する。大きな多核細胞が目にみえるようになるまで、３日ごとに培地を交換する。培養３〜５日後、細胞を３．７％ホルムアルデヒドのＰＢＳ中で１０分間固定する。次いで、プレートをＰＢＳ中で２回洗浄し、５０％アセトン及び５０％エタノールの溶液中で３０秒間インキュベートし、ＰＢＳで洗浄する。Ｓｉｇｍａ社製キット（製品４３５）を用いて、細胞の酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）を染色する。次いで、多核（３つ以上の核）のＴＲＡＰ−陽性細胞を記載のとおりに光学顕微鏡法によって計数する（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，３（１２２）：ｒａ３８）。
【０５５５】
［実施例１８：全身動物におけるＥＡＥ及びクプリゾンからのｉｎ  ｖｉｖｏ保護］
７〜９週齢の雌の成体Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手）に、不完全フロイントアジュバント（Ｄｉｆｃｏ）中に１００μｇのミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質ペプチド３５−５５（アミノ酸ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫ（配列番号２５１）；Ｓｅｑｌａｂ）及び１ｍｇのマイコ結核菌Ｈ３７  Ｒａ（Ｄｉｆｃｏ）を含有する接種源２００μｌを尾根部の両側に注射する。免疫付与後０日目及び２日目に百日咳毒素（２００ｎｇ；Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏ−ｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を注射する。臨床的徴候を次のようにスコア付けを行う。０：臨床的徴候なし、１：完全な尾の弛緩）、２、完全な尾の弛緩及び歩行異常、３：一方の後肢不全対麻痺、４：完全な後肢不全対麻痺；ならびに５：前肢及び後肢の麻痺または瀕死状態。１４日目に疾患を発症しているマウス（臨床スコア１以上）のみを実験に使用する。最初の臨床症状があった日または任意の他の所望の時間に、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体をＥＡＥ疾患マウスに腹腔内または静脈内注射する（ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ（２００７）４（４）：ｅ１２４）。
【０５５６】
若齢または高齢の野生型（ＷＴ）マウスにシュウ酸ビス（シクロヘキシリデンヒドラジド）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を粉末化した０．２％クプリゾン（ＣＰＺ）を含有する標準食餌（Ｈａｒｌａｎ）を４、６または１２週間与える。組織学及び免疫組織化学分析のために、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）によるマウス灌流後に脳を取り出し、４％ＰＦＡ中で２４時間固定し、続いて、３０％スクロース中に２４〜４８時間浸漬する。ミエリンの完全性及び損傷ならびに細胞増殖を評価するために、炎症切片またはマウス脳を、抗ＭＢＰ（１：１００；Ａｂｃａｍ、ａｂ７３４９）、抗ｄＭＢＰ（１：２０００；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ａｂ５８６４）、抗βＡＰＰ（１：１００；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、５１−２７００）、抗ＳＭＩ−３１（１：１０００；Ｃｏｖａｎｃｅ、ｓｍｉ−３１Ｒ）、抗Ｉｂａ１（１：６００；Ｗａｋｏ、０１９−１９７４１）、抗ＢｒｄＵ（１：２５０；Ａｂｃａｍ、ａｂ１８９３）、抗ＧＦＡＰ（１：２００；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１３−０３００）、抗ｉＮＯＳ（１：１００；ＢＤＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ、６１０３２９）、抗ＬＰＬ（１：４００、Ｄｒ．Ｇ．Ｏｌｉｖｅｃｒｏｎａより）及び抗ＭＨＣＩＩ（１：１００；ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、５５３５４９）で染色する。抗体の行動影響に関しては、透明ポリスチレン製囲い及びコンピュータ化された光線機器を使用してマウスの自発運動を解析する。全般的な活動変数（全移動、垂直立ち上がり）を、消費時間、移動距離及びエントリーを含め、情動性の指標とともに解析する。バランス（レッジ及びプラットフォーム）、強さ（逆スクリーン）、協調（ポール及び傾斜スクリーン）及び移動の開始（歩行開始）を評価するために、感覚運動試験バッテリーを実施する。運動協調性及びバランスは、ロータロッドプロトコルを使用して調べる（Ｃａｎｔｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ（２０１５）１２９（３）：４２９−４７）。
【０５５７】
［実施例１９：確立された外傷性脳損傷動物モデルにおけるＳｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体の治療用途の特徴付け］
抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体の治療有効性を、確立された外傷性脳損傷動物モデルで試験する（Ｔａｎａｋａ，Ｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２３１  ４９−６０）。標準マウス、または細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーター下でヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウスのいずれかを使用することができる。例えば、ミクログリア及びアストロサイトの活性化を誘導する外傷性脳損傷のモデルを使用する。８または９週齢の雄のＣ５７ＢＬ／６ＪＷＴマウスを使用する（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓまたはＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入）。滅菌生理食塩水中に溶解させたキシラジン塩酸塩（８ｍｇ／ｋｇ）及び抱水クロラール（３００ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内投与によりマウスに麻酔をかけ、その後、脳定位固定装置（Ｎａｒｉｓｈｉｇｅ（Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ））上に置く。頭皮を切開し、頭蓋を露出させる。頭蓋から骨膜を除去し、右大脳半球上に歯科用ドリルで穴を空け、ニードル先端で硬膜を取り除く。０．５ｍｍの外径を有するステンレス鋼製カニューレを使用して、右半球に長手方向の刺創を施す。正中線に対して横方向１．３ｍｍ及びブレグマの１ｍｍ後方にカニューレを配置し、先端が２ｍｍの深さに達するまで脳内に導入する。次いで、カニューレを２ｍｍ尾側（ブレグマ３ｍｍ）に移動させた後、２ｍｍ吻側に移動させて元の位置に戻す。最後に、カニューレを脳から取り外し、頭皮の傷を縫合する。次いで、標準的手順に従って抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体でマウスを処置した後、組織及び免疫蛍光染色ならびに行動試験によって分析する。かかる実験は、細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡからヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウス、またはｈＳｉｇｌｅｃ−９  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも実施することができる。
【０５５８】
［実施例２０：毒素誘発損傷に伴う神経炎症モデル及びニューロン損失モデルにおけるＳｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体の治療用途の特徴付け］
抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体の治療有用性を、毒素誘発損傷に伴う神経炎症モデル及びニューロン損失モデルで試験する（Ｍａｒｔｅｎｓ，ＬＨ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１２２，３９５５）。３月齢の標準マウスを、１日４回のＭＰＴＰ（１−メチル−４−フェニル−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン）腹腔内注射（４μｇ／ｇ体重）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）またはＰＢＳで２日間処置する。標準的プロトコルに従って抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体でマウスを処置し、次いで、黒質緻密部（ＳＮｐｃ）中のドーパミンニューロン及びミクログリアを定量するために立体解析学的計数を記載のとおりに使用して解析する。かかる実験は、細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡからヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウス、またはｈＳｉｇｌｅｃ−９  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも実施することができる。
【０５５９】
［実施例２１：老人病、痙攣、脊髄損傷、網膜ジストロフィー、前頭側頭型認知症及びアルツハイマー病の動物モデルにおけるＳｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体の治療用途の特徴付け］
抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体の治療有用性を、老人病、痙攣、脊髄損傷、網膜ジストロフィー、前頭側頭型認知症、ハンチントン病、パーキンソン病筋萎縮性側索硬化症及びアルツハイマー病の動物モデルで先に記載されているとおりに試験する（例えば、Ｂｅａｔｔｉｅ，ＭＳ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｎｅｕｒｏｎ  ３６，３７５−３８６；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２６，７７５６−７７６６；Ｎｙｋｊａｅｒ，Ａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．１５，４９−５７；Ｊａｎｓｅｎ，Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１０，１４４９−１４５７；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８，９８７０−９８７９；Ｆａｈｎｅｓｔｏｃｋ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１８，２１０−２２０；Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ．Ｄｉｆｆｅｒ．１４，１５５２−１５５４；Ｙｕｎｅ，Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１１８３，３２−４２；Ｗｅｉ，Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．４２９，１６９−１７４；Ｐｒｏｖｅｎｚａｎｏ，ＭＪ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ  １１８，８７−９３；Ｎｙｋｊａｅｒ，Ａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｎａｔｕｒｅ  ４２７，８４３−８４８；Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＡＷ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０１，６２２６−６２３０；Ｔｅｎｇ，ＨＫ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２５，５４５５−５４６３；Ｊａｎｓｅｎ，Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１０，１４４９−１４５７；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８，９８７０−９８７９；Ｆａｎ，ＹＪ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２７，２３８０−２３９０；Ａｌ−Ｓｈａｗｉ，Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２７，２１０３−２１１４及びＹａｎｏ，Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２９，１４７９０−１４８０２）。かかる実験は、細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡからヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウス、またはｈＳｉｇｌｅｃ−９  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも実施することができる。
【０５６０】
［実施例２２：感染症モデルにおけるＳｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体の治療用途の特徴付け］
抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体の治療有用性を感染症モデルで試験する。例えば、先に記載されているように、正常マウスにおけるＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓまたは他の感染症を使用することができる（例えば、Ｙｉｎ，Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ，２０７，１１７−１２８）。標準マウス、または細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーター下でヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウスのいずれかを使用することができる。
【０５６１】
［実施例２３：炎症性疾患モデルにおけるＳｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体の治療用途の特徴付け］
抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体の治療有用性を炎症性疾患モデルで試験する。例えば、関節リウマチまたは別の炎症性疾患の確立されたモデル（Ｍｉｚｏｇｕｃｈｉ（２０１２）Ｐｒｏｇ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｓｃｉ．，１０５：２６３−３２０；及びＡｓｑｕｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３９：２０４０−４）。かかる実験は、細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡからヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウス、またはｈＳｉｇｌｅｃ−９  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも実施することができる。
【０５６２】
［実施例２４：Ｓｉｇｌｅｃ−９及び下流シグナル伝達分子のリン酸化を誘導または阻害する抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体のスクリーニング］
細胞（Ｊ７７４、ＲＡＷ２６４．７、ＢＭＭ細胞、ヒト初代単球、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ミクログリアまたは破骨細胞）を組織培養ディッシュからＰＢＳ−ＥＤＴＡで取り出し、ＰＢＳで洗浄し、計数する。細胞を抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体及び／もしくはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体とともに、またはアイソタイプ適合コントロール抗体とともに、１μｇ／１０６細胞で、氷上で２０分間、または他の条件下でインキュベートする。氷冷した放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）緩衝液中で細胞を２０分間溶解し、続いて、４℃、１６，０００ｇで１０分間遠心分離して不溶性物質を除去する。得られた上清を指定抗体（ＤＡＰ１２、ＥＲＫまたはＡＫＴ）及びタンパク質Ａアガロースまたはタンパク質Ｇアガロース（Ｓｉｇｍａ）との免疫沈降反応に供する。ＲＩＰＡ緩衝液でビーズを十分に洗浄し、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）でタンパク質を分離する。次いで、ウェスタンブロットによってタンパク質をニトロセルロースメンブレンに転写し、適切な抗体（ＤＡＰ１２、ＥＲＫ、Ｓｙｋ、ＬＣＫ、ＦＹＮ、Ｃ−Ｃｂｌ、ＶＡＶまたはＡＫＴのリン酸化チロシンまたはリン酸化形態を特異的に認識する抗体）とともにインキュベートし、増強化学蛍光（ＥＣＬ）システム（Ｐｉｅｒｃｅ）を記載のとおりに用いて可視化する（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，３（１２２）：ｒａ３８）。
【０５６３】
［実施例２５：カルシウム流出を誘導または阻害する抗Ｓｉｇｌｅｃ−９及び／またはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体のスクリーニング］
ＢＭＭ細胞をＨＥＰＥＳ含有緩衝液［２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、グルコース（１ｍｇ／ｍｌ）、ウシ血清アルブミン（１ｍｇ／ｍｌ）］で２回洗浄し、続いて、０．０５％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−１２７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及び１μＭ  Ｉｎｄｏ−１ＡＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中、３７℃で２０分間インキュベーションする。細胞をＨＥＰＥＳ緩衝液で２回洗浄し、次いで、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体及び／もしくはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体（１６μｇ／ｍｌ）により、またはコントロール抗体（１６μｇ／ｍｌ）により刺激し、分光光度計（ＰＴＬ  Ｐｈｏｔｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）によってモニターする。製造元の説明書に従って、Ｉｎｄｏ−１蛍光発光をカルシウム（Ｃａ２＋）に変換する（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，３（１２２）：ｒａ３８）。
【０５６４】
［実施例２６：Ｓｉｇｌｅｃ−９は、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞及び樹状細胞の生存を増加させる］
細胞生存におけるＳｉｇｌｅｃ−９の役割を評価するために、ヒトまたはマウスのマクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、ミクログリア、Ｔ細胞及び樹状細胞を炎症性メディエーターの存在下で培養し、細胞生存を測定する。
【０５６５】
Ｓｉｇｌｅｃ−９発現マウスまたはＷＴマウスから、脛骨及び大腿骨の骨髄細胞を冷ＰＢＳでフラッシングすることによって、ネズミ骨髄前駆細胞を得る。ＰＢＳで１回洗浄した後、ＡＣＫ溶解緩衝液（Ｌｏｎｚａ）を使用して赤血球を溶解し、ＰＢＳで２回洗浄し、マクロファージ、好中球もしくはＮＫ細胞を得るための５０ｎｇ／ｍｌの指定量のＭ−ＣＳＦ、または樹状細胞を得るための１０ｎｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦを含む完全ＲＰＭＩ培地（１０％ＦＣＳ、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、Ｇｌｎ、ｎｅＡＡ）中に、０．５×１０６細胞／ｍｌで懸濁する。Ｍ２型マクロファージには、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４を培養細胞に添加する。Ｍ１型マクロファージには、５０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮを添加する。いくつかの実験において、５日目に、ＬＰＳまたはザイモサンを１μｇ／ｍｌ〜０．０１ｎｇ／ｍｌの濃度範囲で細胞培養物に添加する。組み換えサイトカインは、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈから購入する。
【０５６６】
骨髄由来マクロファージ、好中球またはＮＫ細胞の生存率を分析するために、上記のように細胞を調製し、ＭＣＳＦ中で培養する。細胞を、９６ウェルプレートに１０５／２００ｕＬ（ルシフェラーゼによるアッセイを使用する生存分析用）または組織培養処理していないプレートの６ウェルプレートに０．５×１０６／１ｍｌ（トリパンブルー排除細胞計数用）のいずれかで播種する。３日目に新鮮なＭ−ＣＳＦを含有する培地を添加する。指定時点で、３ｍＭ  ＥＤＴＡにより細胞をプレートから穏やかに剥離し、Ｂｕｒｋｅｒチャンバを使用して計測する。生細胞のＦＡＣＳ解析については、マクロファージを、５０ｎｇ／ｍｌのＭＣＳＦ中で６日間培養するか（＋ＭＣＳＦ）、５０ｎｇ／ｍｌのＭＣＳＦ中で４日間培養した後、ＭＣＳＦを更に３６時間除去するか（−ＭＣＳＦ）のいずれかとする。ＣＤ１１ｂ抗体及びＤＡＰＩを使用して細胞を染色する。ルシフェラーゼ生存率アッセイについては、段階濃度の成長因子ＧＭＣＳＦ（樹状細胞）、ＭＣＳＦ（Ｍ１マクロファージ）またはＭＣＳＦ＋ＩＬ−４（Ｍ２マクロファージ）中での培養５日目に細胞生存を測定する。細胞をＴｏｘＧｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）と直接インキュベートし、ルシフェラーゼ活性（ルミネセンス）を決定する。炎症性メディエーターＩＦＮ、ＬＰＳまたはザイモサンの存在下で培養した生存マクロファージのＦＡＣＳ解析については、細胞を５日目に回収し、ＣＤ１１ｂ抗体及びＤＡＰＩを使用して染色する。
【０５６７】
［実施例２７：Ｓｉｇｌｅｃ−９は、マクロファージ、好中球またはＮＫ細胞上の炎症性細胞表面マーカーの発現を上昇させる］
炎症性マーカー発現におけるＳｉｇｌｅｃ−９の役割を決定するために、マクロファージ、好中球及びＮＫ細胞を種々の炎症性メディエーターとともに培養し、表面マーカー（例えば、ＣＤ８６及びＣＤ２０６）の発現をＳｉｇｌｅｃ−９抗体の存在下または不存在下で測定する。
【０５６８】
マクロファージ、好中球及びＮＫ細胞を播種し、３７℃で４時間付着させ、ＴＬＲアゴニストＬＰＳ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ  ｅｑｕｉ）及びザイモサン（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）を０．０１〜１００ｎｇ／ｍｌ（ＬＰＳ）または０．０１〜１０μｇ／ｍｌ（ザイモサン）の範囲の濃度で添加する。あるいは、マクロファージ、好中球及びＮＫ細胞をサイトカインＩＬ−４（１０ｎｇ／ｍｌ）またはＩＦＮ（０．５〜５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で培養する。４８時間後に、ＣＤ８６及びＣＤ２０６のＦＡＣＳ解析をＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏで実施する。データ解析は、ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．７．を用いて実施する。
【０５６９】
［実施例２８：Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体及び／または二重特異性抗体の抗がん作用の分析］
標準マウス、または細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターからヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウスのいずれかである、８週齢（±２週齢）のＣ５７Ｂｌ６／ＮＴａｃマウス１０匹の群に、１００ｕｌ  ＰＢＳ中に懸濁した腫瘍細胞（例えば、１×１０５〜１×１０６個のＭＣ３８、ルイス肺またはＢ１６細胞）を皮下接種する。移植前にイソフルランで動物に麻酔をかける。２日目から抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体の各々２００ｕｇを３日ごとに４回投与でマウス群に腹腔内注射する。腫瘍成長は、４日目から測径器を用いて隔週でモニターし、腫瘍成長を測定する。実験のエンドポイントは、腫瘍体積２０００ｍｍ３または６０日とする。腫瘍成長及び生存率（％）を評価基準とする。腫瘍取り込み及び成長速度の減少、腫瘍浸潤性免疫抑制性マクロファージ、好中球及び／またはＮＫ細胞の数の減少、ならびにエフェクターＴ細胞の腫瘍への流入増加は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９遮断抗体の抗がん作用を示す。
【０５７０】
かかる試験には、ヒトＩＬ−３、ヒトＧＭ−ＣＳＦ、ヒトＩＬ−６、ヒトＩＬ−２を発現し、かつ、ヒトの胎盤、胎児肝臓、末梢血または別の供給源に由来するト免疫細胞を接種した免疫不全マウスまたは免疫不全トランスジェニックマウスを使用することもできる（Ｉｔｏ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．；３２４：５３−７６；Ｉｔｏ  Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｃｅｌｌｕｌａｒ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９，２０８−２１４；Ｂｒｅｈｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｏｂｅｓ．１７（２）：１２０−１２５；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ．３４４，１３−１９）。このようなマウスは、細胞株腫瘍または患者由来ヒト腫瘍の異種移植片のいずれかとともに使用することができる（Ｓｉｏｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．；７３（１７）：５３１５−５３１９）。
【０５７１】
かかる実験は、細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡからヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウス、またはｈＳｉｇｌｅｃ−９  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも実施することができる。
【０５７２】
［実施例２９：Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体及び／または二重特異性抗体と、抑制性チェックポイントタンパク質または抑制性サイトカイン／ケモカイン及びこれらの受容体に対する抗体とを組み合わせる併用療法の相加的抗腫瘍作用の分析］
８週齢（±２週齢）のＣ５７Ｂｌ６／ＮＴａｃマウス１５匹の群に、実施例２８の記載のように腫瘍細胞を皮下接種する。移植前にイソフルランで動物に麻酔をかける。２日目から２００ｕｇの抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を単独で、またはチェックポイントタンパク質に対する抗体（例えば、抗ＰＤＬ１  ｍＡｂクローン１０Ｆ．９Ｇ２及び／または抗ＣＴＬＡ４  ｍＡｂクローンＵＣ１０−４Ｆ１０−１１）と組み合わせて、３日ごとに４回投与で３、６及び９日目にマウスに腹腔内注射する。処置群は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤＬ１、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９＋抗ＣＴＬＡ４、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９＋抗ＰＤＬ１及びアイソタイプコントロールを含む。腫瘍成長は、４日目から測径器を用いて隔週でモニターし、腫瘍成長を測定する。実験のエンドポイントは、腫瘍体積２０００ｍｍ３または６０日とする。腫瘍成長及び生存率（％）を評価基準とする。併用療法による腫瘍成長の減少及び生存率（％）の増加は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が抗チェックポイント抗体との相加的または相乗的な治療効果を有することを示す。チェックポイント分子に対するアンタゴニスト抗体には、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３及びホスファチジルセリンに対する抗体が含まれる。抑制性サイトカインに対するアンタゴニスト抗体には、ＣＣＬ２、ＣＳＦ−１及びＩＬ−２に対する抗体が含まれる。かかる試験には、ヒトＩＬ−３、ヒトＧＭ  ＣＳＦ、ヒトＩＬ−６、ヒトＩＬ−２を発現し、かつ、ヒトの胎盤、胎児肝臓、末梢血または別の供給源に由来するト免疫細胞を接種した免疫不全マウスまたは免疫不全トランスジェニックマウスを使用することもできる（Ｉｔｏ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．；３２４：５３−７６；Ｉｔｏ  Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｃｅｌｌｕｌａｒ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９，２０８−２１４；Ｂｒｅｈｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｏｂｅｓ．１７（２）：１２０−１２５；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ．３４４，１３−１９）。このようなマウスは、細胞株腫瘍または患者由来ヒト腫瘍の異種移植片のいずれかとともに使用することができる（Ｓｉｏｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．；７３（１７）：５３１５−５３１９）。
【０５７３】
かかる実験は、細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡからヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウス、またはｈＳｉｇｌｅｃ−９  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも実施することができる。
【０５７４】
［実施例３０：Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体及び／または二重特異性抗体と、刺激性チェックポイントタンパク質を活性化する抗体とを組み合わせる併用療法の相加的抗腫瘍作用の分析］
８週齢（±２週齢）のＣ５７Ｂｌ６／ＮＴａｃマウス１５匹の群に、実施例２８の記載のように腫瘍細胞を皮下接種する。移植前にイソフルランで動物に麻酔をかける。２日目から２００ｕｇの抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を単独で、または刺激性チェックポイントタンパク質を活性化するアゴニスト抗体（例えば、ＯＸ４０またはＩＣＯＳ  ｍＡｂ）と組み合わせて、３日ごとに４回投与で３、６及び９日目にマウスに腹腔内注射する。腫瘍成長は、４日目から測径器を用いて隔週でモニターし、腫瘍成長を測定する。実験のエンドポイントは、腫瘍体積２０００ｍｍ３または６０日とする。腫瘍成長及び生存率（％）を評価基準とする。併用療法による腫瘍成長の減少及び生存率（％）の増加は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が刺激性チェックポイント抗体との相加的または相乗的な治療効果を有することを示す。刺激性チェックポイント抗体には、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０及びＧＩＴＲに対するアゴニスト／刺激性抗体が含まれる。
【０５７５】
かかる試験には、ヒトＩＬ−３、ヒトＧＭ  ＣＳＦ、ヒトＩＬ−６、ヒトＩｌ２を発現し、かつ、ヒトの胎盤、胎児肝臓、末梢血または別の供給源に由来するト免疫細胞を接種した免疫不全マウスまたは免疫不全トランスジェニックマウスを使用することもできる（Ｉｔｏ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．；３２４：５３−７６；Ｉｔｏ  Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｃｅｌｌｕｌａｒ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９，２０８−２１４；Ｂｒｅｈｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｏｂｅｓ．１７（２）：１２０−１２５；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ．３４４，１３−１９）。このようなマウスは、細胞株腫瘍または患者由来ヒト腫瘍の異種移植片のいずれかとともに使用することができる（Ｓｉｏｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．；７３（１７）：５３１５−５３１９）。
【０５７６】
かかる実験は、細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡからヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウス、またはヒトＳｉｇｌｅｃ−９  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも実施することができる。
【０５７７】
［実施例３１：Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体及び／または二重特異性抗体と、刺激性サイトカインとを組み合わせる併用療法の相加的抗腫瘍作用の分析］
８週齢（±２週齢）のＣ５７Ｂｌ６／ＮＴａｃマウス１５匹の群に、実施例２８の記載のように腫瘍細胞を皮下接種する。移植前にイソフルランで動物に麻酔をかける。２日目から２００ｕｇの抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を単独で、または刺激性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−ａ）と組み合わせて、３日ごとに４回投与でマウスに腹腔内注射する。腫瘍成長は、４日目から測径器を用いて隔週でモニターし、腫瘍成長を測定する。実験のエンドポイントは、腫瘍体積２０００ｍｍ３または６０日とする。腫瘍成長及び生存率（％）を評価基準とする。併用療法による腫瘍成長の減少及び生存率（％）の増加は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体が免疫刺激性サイトカインとの相加的または相乗的な治療効果を有することを示す。刺激性サイトカインには、ＩＦＮ−ａ／ｂ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＧＭ−ＣＳＦ及びＧ−ＣＳＦが含まれる。
【０５７８】
かかる試験には、ヒトＩＬ−３、ヒトＧＭ  ＣＳＦ、ヒトＩＬ−６、ヒトＩｌ２を発現し、かつ、ヒトの胎盤、胎児肝臓、末梢血または別の供給源に由来するヒト免疫細胞を接種した免疫不全マウスまたは免疫不全トランスジェニックマウスを使用することもできる（Ｉｔｏ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．；３２４：５３−７６；Ｉｔｏ  Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｃｅｌｌｕｌａｒ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９，２０８−２１４；Ｂｒｅｈｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｏｂｅｓ．１７（２）：１２０−１２５；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ．３４４，１３−１９）。このようなマウスは、細胞株腫瘍または患者由来ヒト腫瘍の異種移植片のいずれかとともに使用することができる（Ｓｉｏｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．；７３（１７）：５３１５−５３１９）。
【０５７９】
かかる実験は、細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡからヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウス、またはｈＳｉｇｌｅｃ−９  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも実施することができる。
【０５８０】
［実施例３２：自然免疫細胞の生存を刺激するＳｉｇｌｅｃ−９抗体及び／または二重特異性抗体Ｆａｂの能力の分析］
プレートに結合した架橋抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体Ｆａｂ断片のアゴニスト機能を自然免疫細胞（例えば、マクロファージ、好中球及びＮＫ細胞）で評価する。
【０５８１】
マクロファージ、好中球及びＮＫ細胞をＭ−ＣＳＦ及びプレート結合Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体Ｆａｂの存在下で培養し、細胞生存を測定する。
【０５８２】
架橋したＳｉｇｌｅｃ−９  Ｆａｂを１２．５ｎＭまたは１００ｎＭのいずれかで予めコーティングした組織培養処理していない９６ウェルプレート上に、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞及びヒト単球由来ＤＣに加えて、Ｔ細胞及びヒト単球由来ヒトミクログリアを播種する。細胞を１０ｎｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦ存在下で４８時間培養する。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）キット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して生存分析を実施する。ＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  ＲｅａｄｅｒによりＧＥＮ５２．０４ソフトウェアを使用して、プレートを読み取る。
【０５８３】
［実施例３３：ＮＦＡＴ依存的遺伝子を調節するＳｉｇｌｅｃ−９抗体及び／または二重特異性抗体の能力の分析］
ＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞の核内因子）プロモーターの制御下でルシフェラーゼレポーター遺伝子を使用して、ＮＦＡＴ依存的遺伝子を活性化する抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体の能力を評価する。
【０５８４】
ＩＴＡＭモチーフ含有共受容体ＤＡＰ１２及びそのリガンド結合パートナーＴＲＥＭ２を発現するマウスＴリンパ球ＢＷ５１４７．Ｇ．１．４（ＡＴＣＣ（登録商標）ＴＩＢ４８（商標））に由来する細胞株を、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９と、Ｃｉｇｎａｌ  Ｌｅｎｔｉ  ＮＦＡＴルシフェラーゼウイルス（Ｑｉａｇｅｎ）とに感染させる。ルシフェラーゼシグナル伝達は、プレート結合抗ＴＲＥＭ２抗体によって活性化される。完全長及びＦａｂ断片の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、ＴＲＥＭ２抗体と一緒に播種するか、溶液で適用する。プレート結合については、組織培養処理済み透明底白色９６ウェルプレート（１００ｕｌ／ウェル）上に抗体をＤＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌで４℃で一晩適用する。ＤＰＢＳでウェルを３回すすいだ後、１％血清を含む培地中に１００，０００細胞／ウェルで播種する。シグナル伝達の陽性コントロールとして、ＰＭＡ（０．０５ｕｇ／ｍｌ）及びイオノマイシン（０．２５ｕＭ）を一緒に添加する。細胞を６時間インキュベートし、各ウェルにＯＮＥ−Ｇｌｏ（商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加え、プレートシェーカー上、室温で３分間インキュベートすることによって、ルシフェラーゼ活性を測定する。ルシフェラーゼのシグナルをＢｉｏＴｅｋプレートリーダーを使用して測定する。
【０５８５】
［実施例３４：Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体及び／または二重特異性抗体の抗脳卒中作用の分析］
ヒト脳卒中によく似ているモデルである中大脳動脈（ＭＣＡＯ）の一過性閉塞を使用して、マウスで脳梗塞を誘発する。右総頸動脈の切開を介して内頸動脈にモノフィラメント（７０ＳＰＲｅ、Ｄｏｃｃｏｌ  Ｃｏｒｐ（ＵＳＡ））を導入する。ある範囲の再灌流時間（６時間、１２時間、２４時間、２日、７日及び２８日）で中大脳動脈を３０分間閉塞する。１２時間及び７日の時点で偽手術動物を使用して手術の影響をコントロールする。偽手術動物は、中大脳動脈の閉塞を含まない同じ手術手順を受ける。ＭＣＡＯ動物を抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体またはコントロール抗体で処置し、梗塞体積、急性炎症反応（１２時間の再灌流）、炎症促進性サイトカインＴＮＦａ、ＩＬ−１ａ及びＩＬ−１ｂの転写、ミクログリア活性（ＣＤ６８、Ｉｂａ１）、ケモカインＣＣＬ２（ＭＣＰ１）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ１ａ及びケモカイン受容体ＣＸ３ＣＲ１の転写、ならびにＣＤ３陽性Ｔ−細胞の浸潤について試験する（Ｓｉｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ８（１）：ｅ５２９８２．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００５２９８２．）。かかる実験は、標準マウス、あるいは代替的に、細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡからヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウス、またはｈＳｉｇｌｅｃ−９  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも実施することができる。
【０５８６】
［実施例３５：抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体及び／または二重特異性抗体の抗アルツハイマー病効果の分析］
アルツハイマー病（ＡＤ）の発症を遅延させ、防止し、または逆転させる抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体の能力を評価するには、５Ｘ  ＦＡＤマウスが使用される。５Ｘ  ＦＡＤマウスは、２つのＦＡＤ変異Ｍ１４６Ｌ及びＬ２８６Ｖを有するヒトＰＳ１に加えて、スウェーデン（Ｋ６７０Ｎ、Ｍ６７１Ｌ）、フロリダ（Ｉ７１６Ｖ）及びロンドン（Ｖ７１７Ｉ）の家族性アルツハイマー病（ＦＡＤ）変異を有する変異型ヒトＡＰＰ（６９５）を過剰発現する。どちらの導入遺伝子もマウスＴｈｙ１プロモーターによって制御され、脳における過剰発現を促進し、ＡＤの主要な特徴を再現する。抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体またはコントロール抗体で処置したマウスのＡβ斑量を組織抽出物の免疫組織化学及びＥＬＩＳＡによって試験する。更に、脳中のミクログリア数、ならびにモリス水迷路（空間学習及び記憶課題）、放射状水迷路（空間学習及び記憶課題）、Ｙ字型迷路（空間認知の尺度として自発的交替を定量する）、オープンフィールドにおける新規嗜好性、学習及び記憶を評価するための自発的学習、及び恐怖条件付けを使用した認知障害の低減についても試験する（ウェブサイトｍｏｕｓｅｂｉｏｌｏｇｙ．ｏｒｇ；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｃｅｌｌ．ｐｉｉ：Ｓ００９２−８６７４（１５）００１２７−０）。かかる実験は、細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡからヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウス、またはｈＳｉｇｌｅｃ−９  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも実施することができる。
【０５８７】
［実施例３６：気道感染症におけるＳｉｇｌｅｃ−９抗体及び／または二重特異性抗体の保護作用の分析］
細菌気道感染症を遅延させ、予防し、または治療するＳｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体の能力を評価するために、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅによるＣ５７Ｂｌ６マウスの抗原刺激を伴う前臨床マウスモデルを使用する。本モデルは、記載に従った１０５ＣＦＵのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３（ＡＴＣＣ  ６３０３）の経鼻（ｉ．ｎ．）投与を伴う（例えば、Ｓｈａｒｉｆ  Ｏ  ｅｔ  ａｌ，２０１４  ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ．２０１４  Ｊｕｎ；１０（６）：ｅ１００４１６７；及びＳｃｈａｂｂａｕｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ，２０１０  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８５：４６８−４７６参照）。本モデルにおいて、感染後６日以内に約９０％のＷＴ  Ｃ５７Ｂｌ６マウスが死亡する。
【０５８８】
１０〜１５匹のマウス／群をＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅで抗原刺激し、同時に、０日目から一日おきに抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体での処置を行う。抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の初回用量は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａでの抗原刺激の３時間前に投与する。１５日間、マウスを毎日モニタリングして、死亡事象を確認する。細菌抗原刺激を生き延びたマウスのパーセンテージ（％）を決定する。
【０５８９】
別個の実験において、血液中及び肺内における細菌負荷数及びサイトカイン発現も決定する。感染後２４時間または４８時間に、ＥＤＴＡ含有チューブ中に血液を採取し、寒天プレート上に播種して血漿中の細菌ＣＦＵを数える。ＥＬＩＳＡによるサイトカイン分析のために、血漿を−２０℃で保存する。肺を採取し、ホモジナイズし、寒天プレート上に播種して、細菌ＣＦＵを数えるか、溶解緩衝液中で３０分間インキュベートし、サイトカイン測定のために上清を分析する。
【０５９０】
別個の実験において、細菌感染から４０時間後に肺を採取し、Ｈ＆Ｅ病理学分析のために、１０％ホルマリンに固定し、パラフィン包理する。
【０５９１】
かかる実験は、細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡからヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウス、またはｈＳｉｇｌｅｃ−９  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも実施することができる。
【０５９２】
［実施例３７：敗血症におけるＳｉｇｌｅｃ−９抗体及び／または二重特異性抗体の保護作用の分析］
敗血症を遅延させ、予防し、または治療するＳｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体の能力を評価するために、ＬＰＳによるＣ５７Ｂｌ６マウスの全身抗原刺激を伴う前臨床マウスモデルを使用する。このモデルは、記載に従った３７ｍｇ／ｍｌのＬＰＳの腹腔内（ｉ．ｐ．）投与を伴う（例えば、Ｇａｗｉｓｈ  Ｒ  ｅｔａｌ，２０１４ＦＡＳＥＢＪ参照）。本モデルにおいて、ＬＰＳ注射後４０時間以内に９５％を超えるＷＴ  Ｃ５７Ｂｌ６マウスが死亡している。
【０５９３】
マウスコホートをＬＰＳで抗原刺激し、同時に、０日目から毎日、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体の処置を行う。抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の初回用量は、ＬＰＳでの抗原刺激の３時間前に投与する。日中、約４時間ごとにマウスをモニタリングして、死亡事象を確認する。ＬＰＳ抗原刺激を生き延びたマウスのパーセンテージを決定する。
【０５９４】
別個の実験において、腹腔洗浄液（ＰＬＦ）を回収する。ＥＬＩＳＡによるサイトカイン分析のために、上清を−２０℃で保存する。ペレット化した細胞を計数して、腹腔内に動員された炎症性細胞を定量する。類似の試験を実施して、感染症の他のモデルにおけるＳｉｇｌｅｃ−９抗体の有効性を試験することができる（例えば、Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．１７；５４（５）：３４５１−６２参照）。
【０５９５】
かかる実験は、細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡからヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウス、またはｈＳｉｇｌｅｃ−９  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも実施することができる。
【０５９６】
［実施例３８：急性及び慢性大腸炎におけるＳｉｇｌｅｃ−９抗体及び／または二重特異性抗体の保護作用の分析］
大腸炎を遅延させ、予防し、または治療する抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体の能力を評価するために、急性または慢性大腸炎の前臨床マウスモデルを使用する。ＤＳＳ誘発大腸炎の場合、飲料水中３％ＤＳＳをマウスに８日間自由摂取させる。ＴＮＢＳ誘発大腸炎の場合、マウスに麻酔をかけ、２０％エタノール（ｖｏｌ／ｖｏｌ）中３ｍｇのＴＮＢＳまたはコントロールのビヒクル単独の直腸内注射で処置する。慢性大腸炎モデルの場合、全てのマウスを、２％ＤＳＳを５日間と、それに続く１０日間の回復期間の３サイクルで処置する。全てのモデルに関して、体重減少、便の硬さ及び便潜血の存在を毎日モニターし、これを記載のとおりに疾患活動性指標を算出するために使用する（例えば、Ｃｏｒｒｅａｌｅ  Ｃ，２０１３，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２０１３，ｐｐ．３４６−３５６．ｅ３参照）。
【０５９７】
０日目からマウスコホートを抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体で毎日処置し、ＤＳＳまたはＴＮＢＳ投与を行う。マウスを毎日モニタリングして、体重減少、便の硬さ及び便潜血の存在を確認し、毎日モニタリングし、これを記載のとおりに疾患活動性指標を算出するために使用する（例えば、Ｓ．Ｖｅｔｒａｎｏ，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１３５（２００８），ｐｐ．１７３−１８４参照）。
【０５９８】
別個の実験において、粘膜損傷の内視鏡的及び組織学的画像を取得して、炎症性細胞の浸潤及び粘膜損傷を評価する。類似の試験を実施して、クローン病、炎症性腸疾患及び潰瘍性大腸炎を含む自己免疫疾患の他のモデルにおけるＳｉｇｌｅｃ−９抗体の効能を試験することができる（例えば、Ｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ  Ｄｅｖｅｌ  Ｔｈｅｒ．；７：１３４１−１３５７；及びＳｏｌｌｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ  ５（９）：ｅ１９８参照）。
【０５９９】
かかる実験は、細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡからヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウス、またはｈＳｉｇｌｅｃ−９  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも実施することができる。
【０６００】
［実施例３９：創傷治癒におけるＳｉｇｌｅｃ−９抗体及び／または二重特異性抗体の保護作用の分析］
外傷後の結腸創傷治癒を向上させる抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体の能力を評価するには、結腸の生検損傷のマウスモデルが使用される。このモデルでは、外側手術シースを備える内視鏡を下行結腸中央部まで挿入し、粘膜を肛門直腸移行部まで調べる。次いで、粘膜及び粘膜下層全体の単一の完全な厚さ領域を、直径３フレンチの軟性生検鉗子で筋層に貫通しないように取り除く。各マウスに結腸の背側に沿った３〜５部位で生検損傷を施す（例えば、Ｓｅｎｏ  Ｈ，２００８，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２００９  Ｊａｎ  ６；１０６（１）：２５６−２６１参照）。
【０６０１】
生検損傷から２日または３日後に、マウスコホートを抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体で処置する。１５日間マウスを毎日モニタリングして、体重減少を調べ、病変の表面積を測定することによって創傷治癒を確認する。
【０６０２】
かかる実験は、細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡからヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウス、またはｈＳｉｇｌｅｃ−９  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも実施することができる。
【０６０３】
［実施例４０：網膜変性におけるＳｉｇｌｅｃ−９抗体及び／または二重特異性抗体の保護効果の分析］
ＡＭＤは、外網膜の変性疾患である。炎症、特に、炎症性サイトカインならびにマクロファージ、好中球及び／またはＮＫ細胞がＡＭＤの疾患進行に関与すると考えられている。
【０６０４】
ドルーゼン、ブルック膜、脈絡膜及び網膜において、ＡＭＤ病変の近傍にはマクロファージ、好中球及びＮＫ細胞が存在することが記載されている。マクロファージ、好中球及びＮＫ細胞は、組織因子（ＴＦ）及び血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）を放出し、ＶＥＦＧは、脈絡膜新生血管を示す患者において新血管形成の拡大を引き起こす。
【０６０５】
黄斑の脈絡膜に存在するマクロファージの種類は加齢とともに変化し、老年の眼では若年の眼と比較してＭ２マクロファージ、好中球及びＮＫ細胞のレベル上昇が示される。しかしながら、進行性ＡＭＤの黄斑では、剖検された同様の年齢の正常な眼と比較して、Ｍ１：Ｍ２比がより高かった（例えば、Ｃａｏ  Ｘ  ｅｔ  ａｌ，（２０１１），Ｐａｔｈｏｌ  Ｉｎｔ  ６１（９）：ｐｐ５２８−３５参照）。これは、後期発症のＡＭＤ進行の眼では、古典的Ｍ１マクロファージの活性化との関連が示唆される。
【０６０６】
網膜のミクログリア細胞は、組織常在性マクロファージであり、通常、内網膜にも存在する。損傷が生じた場合には、ミクログリアは、活性化し、炎症メディエーターとして作用することができる。活性化したミクログリアは、ＡＭＤ組織試料で検出されており、ＡＭＤの病因につながる炎症性プロセスの有力な寄与因子の１つであることが提案されている（Ｇｕｐｔａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．，７６（４）：４６３−７１．）。ＡＭＤを予防し、遅延し、または逆転させるＳｉｇｌｅｃ−９抗体の能力は、ＡＭＤモデルのうちの１つ以上で試験される（例えば、Ｐｅｎｎｅｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｍｏｌ  Ａｓｐｅｃｔｓ  Ｍｅｄ．；３３（４）：４８７−５０９参照）。
【０６０７】
総じて、炎症性マクロファージ、好中球及びＮＫ細胞（Ｍ１及び／または活性化ミクログリアのいずれか）は、ＡＭＤの疾患進行と相関することが記載されていることから、Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体の治療標的となる。緑内障及び遺伝型または網膜色素変性症などの網膜変性において、同様の治療上の利益が達成され得る。
【０６０８】
緑内障の網膜神経節細胞変性を予防し、遅延させ、または逆転させるＳｉｇｌｅｃ−９抗体の能力は、緑内障モデルで試験される（例えば、Ｅｌ−Ｄａｎａｆ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１１；３５（６）：２３２９−４３参照）。同様に、遺伝子的に誘発された網膜変性及び網膜色素変性症におけるＲＥＭ２の治療上の利益は、Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓ．；４２（４）：５１７−２５及び「Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｒａｔ  Ｍｏｄｅｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｐ２３Ｈ  ａｎｄ  Ｓ３３４ｔｅｒ  Ｍｕｔａｎｔ  Ｒｈｏｄｏｐｓｉｎ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｒａｔｓ  ａｎｄ  ＲＣＳ  Ｉｎｂｒｅｄ  ａｎｄ  ＲＣＳ  Ｃｏｎｇｅｎｉｃ  Ｓｔｒａｉｎｓ  ｏｆ  Ｒａｔｓ」，  ＭＭ  ＬａＶａｉｌ，Ｊｕｎｅ  ３０，２０１１に記載されているように試験される。
【０６０９】
かかる実験は、細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡからヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウス、またはｈＳｉｇｌｅｃ−９  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも実施することができる。
【０６１０】
［実施例４１：脂肪生成及び食餌誘発肥満症におけるＳｉｇｌｅｃ−９抗体及び／または二重特異性抗体の保護作用の分析］
脂肪生成及び肥満症におけるＳｉｇｌｅｃ−９抗体の作用を試験するために、高脂肪食（ＨＦＤ）マウスモデルを使用する（例えば、Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｄｉａｂｅｔｅｓ．６４（１）：１１７−２７参照）。
【０６１１】
かかる実験は、細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡからヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウス、またはｈＳｉｇｌｅｃ−９  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも実施することができる。
【０６１２】
［実施例４２：骨粗鬆症におけるＳｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体及び／または二重特異性抗体の保護作用の分析］
骨は、カルシウム恒常性及び構造的必要性を支持するために、絶えず再構成される動的器官である。破骨細胞は、骨の有機成分及び無機成分の両方を取り除くことに関与している細胞である。破骨細胞は、マクロファージ系統の造血前駆細胞に由来し、腫瘍壊死因子ファミリーサイトカインであるＮＦκＢ活性化受容体リガンドに応答して分化する。唯一の骨再吸収細胞である破骨細胞は、骨粗鬆症及び骨粗鬆症の病因の中核である（Ｎｏｖａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ  Ｐａｔｈｏｌ．，３：４５７−８４）。
【０６１３】
骨粗鬆症は、骨折リスクの上昇をもたらし得る骨量及び骨密度の低下を特徴とする進行性骨疾患である。骨粗鬆症は、骨代謝が速まる閉経後の最初の年に主に顕在化し、破骨細胞と骨芽細胞の両方の活性が増加する。しかしながら、再吸収と合成のプロセスにおける不均衡により、正味の影響は、骨喪失であり、これは主に骨梁で生じる。したがって、骨粗鬆症で骨折が最も多い部位は、骨梁構造が骨の全体強度にとって重要である、手首、大腿骨頸部及び椎体である。
【０６１４】
ＤＡＰ１２  ＩＴＡＭシグナル伝達アダプターを欠損していることで、破骨細胞様細胞の分化に重大な欠陥を有する動物モデルで観察されるように、破骨細胞機能の低下は、結果として、骨量の増加及び骨髄空間の排除を伴う骨粗鬆症になる（Ｋｏｇａ，ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｎａｔｕｒｅ  ４２８：７５８−７６３）。
【０６１５】
したがって、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アンタゴニスト抗体を投与することにより、骨粗鬆症を予防し、そのリスクを低下させ、及び／または治療することができる。いくつかの実施形態において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９アゴニスト抗体を投与することは、骨粗鬆症を有する個体において、１つ以上のＳｉｇｌｅｃ−９活性を誘導し得る（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化、Ｓｙｋ活性化及び破骨細胞への分化加速）（Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ（２０１０）．Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．２０１０  １８；３  １２２及びＨｕｍｐｈｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ  Ｒｅｓ．，２１（２）：２３７−４５）。
【０６１６】
かかる実験は、細菌人工染色体もしくは骨髄プロモーターにより駆動されるｃＤＮＡからヒトＳｉｇｌｅｃ−９遺伝子を発現するマウス、またはｈＳｉｇｌｅｃ−９  ｃＤＮＡを含有するレンチウイルスもしくはＡＡＶウイルスを形質導入したマウスでも実施することができる。
【０６１７】
［実施例４３：Ｓｉｇｌｅｃ−９のＳＨＰ１、ＳＨＰ２及び他のシグナル伝達分子への結合を調節するＳｉｇｌｅｃ−９抗体及び／または二重特異性抗体の能力の分析］
ヒト初代単球、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ミクログリアまたは破骨細胞を組織培養ディッシュからＰＢＳ−ＥＤＴＡで取り出し、ＰＢＳで洗浄し、計数する。細胞を抗Ｓｉｇｌｅｃ−９及び／もしくはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体とともに、またはアイソタイプ適合コントロール抗体とともに、１μｇ／１０６細胞で、氷上で２０分間、または他の条件下でインキュベートする。氷冷した放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）緩衝液中で細胞を２０分間溶解し、続いて、４℃、１６，０００ｇで１０分間遠心分離して不溶性物質を除去する。得られた上清を指定抗体（ＳＨＰ１、ＳＨＰ２、ｃ−Ｃｂｌ．、Ｖａｖ、Ｓｙｋ、ＬｃＫ、Ｆｙｎ、ＧＲｂ２、ＰＬＣ−γ、Ｔｏｌｌ様受容体、ＤＡＭＰ受容体、及びパターン認識受容体）及びタンパク質Ａアガロースまたはタンパク質Ｇアガロース（Ｓｉｇｍａ）との免疫沈降反応にかける。ＲＩＰＡ緩衝液でビーズを十分に洗浄し、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）でタンパク質を分離する。次いで、ウェスタンブロットによってタンパク質をニトロセルロースメンブレンに転写し、適切なＳｉｇｌｅｃ−９抗体とインキュベートし、増強化学蛍光（ＥＣＬ）システム（Ｐｉｅｒｃｅ）を記載のとおりに用いて可視化する（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，３（１２２）：ｒａ３８）。あるいは、細胞を抗Ｓｉｇｌｅｃ−９及び／もしくはＳｉｇｌｅｃ−９二重特異性抗体とともに、またはアイソタイプ適合コントロール抗体とともに、１μｇ／１０６細胞で、氷上で２０分間、または他の条件下でインキュベートする。氷冷した放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）緩衝液中で細胞を２０分間溶解し、続いて、４℃、１６，０００ｇで１０分間遠心分離して不溶性物質を除去する。得られた上清を第２のＳｉｇｌｅｃ−９抗体との免疫沈降反応にかける。次いで、ウェスタンブロットによってタンパク質をニトロセルロースメンブレンに転写し、指定抗体（ＳＨＰ１、ＳＨＰ２、ｃ−Ｃｂｌ、Ｖａｖ、Ｓｙｋ、ＬｃＫ、Ｆｙｎ、ＧＲｂ２、ＰＬＣ−γ、Ｔｏｌｌ様受容体、ＤＡＭＰ受容体、及びパターン認識受容体）とともにインキュベートする。
【０６１８】
［実施例４４：ＮＫ細胞による腫瘍細胞殺傷を増強するＳｉｇｌｅｃ−９抗体及び／または二重特異性抗体の能力の分析］
ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐヒトＮＫ細胞濃縮カクテル（ＳＴＥＭＣＥＬＬ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、ヒト血液からナチュラルキラー細胞を単離する。単離した細胞を、１０％Ｈｙｃｌｏｎｅウシ胎仔血清（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、２％Ｈｅｐｅｓ、２％ＧｌｕｔａＭＡＸ、２％ペニシリン−ストレプトマイシン、２％ピルビン酸ナトリウム、及び２％ＭＥＭ非必須アミノ酸（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＲＰＭＩ１６４０（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）中で培養する。ＮＫ細胞を２４ウェルプレートに２５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ）及び２５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２１（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）と共に１×１０６細胞／ウェルで播種し、３７℃、５％ＣＯ２の存在下で７日間インキュベートする。ＮＫ細胞は、単離時及び７日目において、ＡＰＣ抗ヒトＣＤ５６（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＰＥ−Ｃｙ７抗ヒトＣＤ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）及びＶ５００マウス抗ヒトＣＤ１６（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、表現型を決定する。
【０６１９】
培養の７日後、ＮＫ細胞を回収し、１×１０６細胞／ｍｌで再懸濁する。ＮＫエフェクター細胞を、９６ウェルＵ底プレート中に、エフェクター：標的比１２：１、４：１、２：１、０．５：１で、及びエフェクターのみのコントロールウェルについては１２０，０００細胞で播種する。細胞を遠心分離し、１００ｕｌの培地に再懸濁する（陽性コントロールウェルには５０ｕｌの１００％ＥｔＯＨ及び５０ｕｌの培地を添加して、これを１００％の殺傷とする）。１０μｇ／ｍｌのＳｉｇｌｅｃ−７抗体／ｍＩｇＧ１アイソタイプコントロールを加え、混合し、氷上で２０分間インキュベートする。１０，０００個のＣＦＳＥ標識Ｋ５６２標的細胞を、エフェクターのみのコントロールウェルを除く各ウェルに添加する。プレートを１５００ｒｐｍで１分間遠心分離し、３７℃、５％ＣＯ２の存在下で２時間インキュベートする。インキュベーション後、細胞を５０ｕｌのＮｕｃＢｌｕｅ  Ｆｉｘｅｄ  Ｃｅｌｌ  ＲｅａｄｙＰｒｏｂｅｓ試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色し、５分間光から保護しながら室温でインキュベートし、速やかにＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上でフローサイトメトリーにより分析する。
【０６２０】
［実施例４５：Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体ビニングの分析］
ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（商標）ヒト単球濃縮カクテル（ＳＴＥＭＣＥＬＬ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）を用いて、ヒト血液試料から単球を単離した。単離した細胞を、１０％ＨｙＣｌｏｎｅ（商標）ＦＢＳ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、４ｍＭ  ＧｌｕｔａＭＡＸ、２００Ｕ／ｍｌペニシリン−ストレプトマイシン、２ｍＭピルビン酸ナトリウム及び２％ＭＥＭ  ＮＥＡＡ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＲＰＭＩ  １６４０（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）中で培養した。Ｔ１５０組織培養フラスコ中に、細胞を、８％ヒト血清（Ｓｉｇｍａ−Ａｄｒｉｃｈ）及び５０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＭ−ＣＳＦ（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）とともに１×１０６細胞／ｍｌで播種し、３７℃、５％ＣＯ２の存在下で５日間インキュベートした。
【０６２１】
５日目に、接着性単球由来マクロファージを回収し、９６ウェルＵ底型非ＴＣ処理プレートに１００，０００細胞／ウェルで播種した。５μｇ／ｍｌの精製Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体を、１％ＢＳＡ及び２ｍＭ  ＥＤＴＡを含むＰＢＳ中、ヒトＦｃ受容体結合阻害剤（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の存在下で細胞とともにインキュベートした。試料を氷上で３０分間インキュベートし、緩衝液中で２回洗浄した。フルオロフォアを直接コンジュゲートしたＳｉｇｌｅｃ−９抗体を５μｇ／ｍｌで加え、氷上で３０分間インキュベートした後、緩衝液で２回洗浄した。結合させるＳｉｇｌｅｃ−９抗体、アイソタイプ、または未処理のものの存在下で、細胞表面受容体に結合するコンジュゲートのＳｉｇｌｅｃ−９抗体クローンの能力を、ｉＱｕｅ  Ｓｃｒｅｅｎｅｒ（ＩｎｔｅｌｌｉＣｙｔ）上でフローサイトメトリーによって決定し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で解析してこれらのクローンの競合を判定した。使用したコンジュゲートの抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、Ｅ１０２８６（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｋ８（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）及び１９１２４０（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）であった。使用した結合させる抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体は、２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、６Ｂ２、６Ｄ８、７Ｈ１２、５Ｃ６、１２Ｂ１２及び１７Ｃ２であった。
【０６２２】
結果を表１２に示す。
表１２：Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体ビニング
2019500014.tif 000035
【０６２３】
結果は、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体５Ｃ６、１２Ｂ１２及び１７Ｃ２が、抗体２Ｄ４、２Ｄ５、５Ｂ１、及び７Ｈ１２とは異なるビン内にあることを示す。結果は実施例１の結果と一致する。
【０６２４】
［実施例４６：抗Ｓｉｇｌｅｃ−９と抗ＰＤ１抗体の併用処置のｉｎ  ｖｉｖｏ作用］
ＣＴＧ−０２０２患者由来黒色腫腫瘍を、ヒト化マウスへの移植前に、予備試験動物でまず継代した。ストック動物で腫瘍が１〜１．５ｃｍ３に達したら、予備試験動物に再移植するために腫瘍を採取した。腫瘍断片を予備試験動物の左脇腹に片側移植した。継代数６のＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を使用した。
【０６２５】
雌の免疫不全マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  ＮＯＧ）を胎児肝臓由来ＣＤ３４＋造血細胞でヒト化した。マウスは、個別にＨＥＰＡ換気したケージ（Ｉｎｎｏｃａｇｅ（登録商標）ＩＶＣ、Ｉｎｎｏｖｉｖｅ  （ＵＳＡ））中で、照射滅菌済みペーパーツイスト補充１／８インチコーンコブ床敷（Ｓｈｅｐｅｒｄ）上、１２時間の明暗サイクル、６８〜７４°Ｆ（２０〜２３℃）及び湿度３０〜７０％で飼育した。マウスには、水（逆浸透、２ｐｐｍ  Ｃｌ２）を自由摂取で与え、タンパク質１９％、脂肪９％及び繊維４％からなる照射滅菌済み試験齧歯類飼料（Ｔｅｋｌａｄ  ２９１９）を与えた。４８匹のヒト化マウスに移植を行い、移植後７〜１０日から予備試験の腫瘍体積を各実験について記録した。腫瘍が約８０〜２００ｍｍ３の体積に達したら、マウスを腫瘍体積に合わせて処置群またはコントロール群に分け、投与に使用し、投与を０日目に開始した。試験群には、抗ＰＤ−１抗体Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）を、コントロールモノクローナル抗体と組み合わせ（群１）または抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４との組み合わせ（群２）で投与した。表１３及び図１５Ａは、投与スケジュール、投与量及び投与経路を示す。
表１３：Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４のｉｎ  ｖｉｖｏがん有効性試験に関する抗体投与スケジュール及び投与経路
2019500014.tif 000036
【０６２６】
表１３中、「ｎ」は、各処置群のマウス数を指し、「ＣＴＲ  ｍＡｂ」は、アイソタイプコントロール抗体を指し、「２Ｄ４」は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４を指し、「ＲＯＡ」は、投与経路を指し、「ＩＰ」は、腹腔内を指し、「ｑ５ｄ×６」は、５日ごとの投与で合計投与６回の投与スケジュールを指す。
【０６２７】
０日目から開始して、マウスを毎日観察し、デジタルスケールを使用して体重を週２回計測した。デジタルノギスにより腫瘍寸法を週２回測定し、個々の推定腫瘍体積と平均推定腫瘍体積（平均ＴＶ±ＳＥＭ）を含むデータを各群について記録した。腫瘍体積は、式（１）：ＴＶ＝短径２×長径×０．５２を使用して算出した。コントロール群の平均腫瘍体積が２８日目に１５００ｍｍ３に達した時点で試験を終了した。
【０６２８】
試験終了時に、採取した腫瘍をアイスパック上の培地中に一晩移し、翌日に処理を行った。腫瘍試料をコラゲナーゼで３７℃にて３０分間処理した。試料をセルストレーナーに通して分離し、２％ＦＢＳのＰＢＳ中に再懸濁した。ＡＣＫ溶解緩衝液を使用して全血液試料中の赤血球を溶解し、次いで、２％ＦＢＳのＰＢＳで細胞を２回洗浄した。血球計算盤を使用して細胞を計数し、１００万個の細胞を蛍光色素結合抗体により氷上で３０分間染色した後、２％ＦＢＳのＰＢＳで洗浄した。４％パラホルムアルデヒドのＰＢＳで細胞を固定した。全ての染色細胞をＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で解析し、データをＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ）を用いて解析した。腫瘍浸潤免疫細胞を特定するために、標準的な手順に従って、ｈＣＤ４５、ｈＣＤ３、ｈＣＤ４、ｈＣＤ８及びｈＣＤ１４抗体を使用して、集団をゲーティングした。
【０６２９】
図１５Ｂ及び１５Ｃに示されるように、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４と抗ＰＤ−１抗体Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）による併用処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植片ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデルの末梢血ｈＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞におけるＳｉｇｌｅｃ−９の細胞表面レベルを低下させた。２Ｄ４処置は、細胞表面ＣＤ３３のレベルに影響を及ぼさなかった。腫瘍内のｈＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞においても、細胞表面Ｓｉｇｌｅｃ−９レベルの同様の低下が観察された。
【０６３０】
図１５Ｄに示すように、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４と抗ＰＤ−１抗体Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）による併用処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植片ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデルにおける末梢血ｈＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の割合を低下させた。
【０６３１】
図１５Ｅに示されるように、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４と抗ＰＤ−１抗体Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）との併用処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植片ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデルにおいて、末梢血ｈＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔ細胞の割合を増加させた。
【０６３２】
図１５Ｆに示されるように、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４と抗ＰＤ−１抗体Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）による併用処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植片ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデルにおいて、腫瘍浸潤性ｈＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の数を減少させた。
【０６３３】
図１５Ｇに示されるように、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４と抗ＰＤ−１抗体Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）による併用処置は、ヒト免疫幹細胞及び患者由来異種移植片ＣＴＧ−０２０２黒色腫腫瘍を移植したマウス腫瘍モデルにおいて、腫瘍浸潤性ｈＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔ細胞の数を増加させた。
【０６３４】
図１５Ｈ〜１５Ｊに示されるように、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４と抗ＰＤ−１抗体Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）による併用処置は、２人の異なるヒトドナー（ドナー番号１６５５４７１１２、及び１７５０９１１２）に由来するヒト免疫幹細胞を生着させたマウスに移植した患者由来黒色腫腫瘍モデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍成長を阻害し、一方、２Ｄ４による処置は、第三のドナー（ドナー番号９８４４８０１１２）由来の免疫細胞を生着させたマウスにおける腫瘍成長に影響を及ぼさなかった。
【０６３５】
本明細書に記載される結果で重要なのは、腫瘍及び腫瘍に応答する免疫系の両方がヒトであったことである。マウス免疫系は、マウス免疫系を遺伝子的に除去し、放射線照射により骨髄破壊し、これをヒトドナーＣＤ３４＋造血幹細胞及び前駆細胞に置き換え、それが再増殖して骨髄系及びリンパ系免疫細胞に成長するという方法を使用してヒト化された。腫瘍は、患者由来の黒色腫であった。ヒト特異的Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９に対する標的特異的関与及び下方制御を示した。受容体の下方制御は、末梢及び腫瘍ＣＤ１４＋骨髄細胞に対して有意であった。したがって、腫瘍成長、ＣＤ３＋Ｔ細胞の腫瘍浸潤増加、及びＣＤ１４＋細胞の減少に対するあらゆる効果は、２Ｄ４抗体を媒介したヒト骨髄免疫細胞上のＳｉｇｌｅｃ−９の下方制御の結果であった。
【０６３６】
上記のデータは、Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体２Ｄ４が、末梢及び腫瘍浸潤性の骨髄細胞に対して強力かつ有意な受容体下方制御抗体であることを示した。循環及び腫瘍浸潤性免疫細胞集団の両解析において、ＣＤ３＋Ｔ細胞の増加が示された。更に、骨髄細胞集団もＳｉｇｌｅｃ−９抗体処置による影響を受けた。ＣＤ１４＋骨髄細胞の減少が、腫瘍においても、末梢血細胞集団においても観察された。このデータは、Ｓｉｇｌｅｃ−９の下方制御により、腫瘍浸潤性免疫細胞集団が機能的に変更したことを示唆した。まとめると、これらの試験は、ヒトがんを治療する治療薬としての抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体の前臨床有効性を支持するものであった。
【図１−１】
2019500014.tif 000037
【図１−２】
2019500014.tif 000038
【図１−３】
2019500014.tif 000039
【図２】
2019500014.tif 000040
【図３】
2019500014.tif 000041
【図４】
2019500014.tif 000042
【図５】
2019500014.tif 000043
【図６Ａ−１】
2019500014.tif 000044
【図６Ａ−２】
2019500014.tif 000045
【図６Ｂ】
2019500014.tif 000046
【図６Ｃ】
2019500014.tif 000047
【図６Ｄ】
2019500014.tif 000048
【図６Ｅ】
2019500014.tif 000049
【図６Ｆ】
2019500014.tif 000050
【図７−１】
2019500014.tif 000051
【図７−２】
2019500014.tif 000052
【図７−３】
2019500014.tif 000053
【図７−４】
2019500014.tif 000054
【図７−５】
2019500014.tif 000055
【図７−６】
2019500014.tif 000056
【図７−７】
2019500014.tif 000057
【図７−８】
2019500014.tif 000058
【図７−９】
2019500014.tif 000059
【図７−１０】
2019500014.tif 000060
【図７−１１】
2019500014.tif 000061
【図８】
2019500014.tif 000062
【図９】
2019500014.tif 000063
【図１０−１】
2019500014.tif 000064
【図１０−２】
2019500014.tif 000065
【図１１】
2019500014.tif 000066
【図１２】
2019500014.tif 000067
【図１３】
2019500014.tif 000068
【図１４】
2019500014.tif 000069
【図１５−１】
2019500014.tif 000070
【図１５−２】
2019500014.tif 000071
【図１５−３】
2019500014.tif 000072
【図１５−４】
2019500014.tif 000073
【図１５−５】
2019500014.tif 000074
【配列表】
2019500014000001.app
【国際調査報告】
2019500014.tif 000075
2019500014.tif 000076
2019500014.tif 000077
2019500014.tif 000078
2019500014.tif 000079
2019500014.tif 000080
2019500014.tif 000081
2019500014.tif 000082
2019500014.tif 000083
2019500014.tif 000084