(57)【要約】  本発明は、ウリジン類ホスホラミドプロドラッグ、その調製方法およびその医薬における使用に関し、本発明に記載のプロドラッグは、一般式Ｉで表される化合物またはその光学異性体またはその薬学的に許容される塩であり、本発明に記載のプロドラッグは、さらに一般式Ｉで表される化合物またはその光学異性体またはその薬学的に許容される塩の溶媒和物を含み、本発明に記載のプロドラッグは、ウイルス感染症、特にＣ型肝炎ウイルス感染症を治療することができる。 2019514843.tif 000024
2019514843.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉで表される化合物またはその光学異性体またはその薬学的に許容される塩である抗ウイルス用ウリジン類ホスホラミドプロドラッグであって、
【化１】
2019514843.tif 000020
（式中、
Ｒは、独立に、置換または無置換のベンジル基、置換または無置換のＣ５〜Ｃ５０の直鎖または環状の天然産物の断片から選ばれ、もしくは、半合成または完全合成の糖類、ビタミン、アルコール類、およびその構造の変換または修飾後に得られる類似体の断片から選ばれ、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立に、Ｈ、置換または無置換のＣ１〜Ｃ１０の直鎖炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の分岐炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の環状炭化水素基、Ｃ６〜Ｃ１０の芳香族炭化水素基またはヘテロアリール基から選ばれ、ただし、前記置換は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｎ、Ｓｅから選ばれる１〜３個のヘテロ原子であり、あるいは、Ｒ１とＲ２、Ｒ１とＲ３、Ｒ２とＲ３がそれらを連結する構造部分とともに置換もしくは無置換の３〜８員環を形成し、
Ｚは、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＨ−または−ＣＨ２−から選ばれる。）
前記プロドラッグは、さらに一般式Ｉで表される化合物またはその光学異性体またはその薬学的に許容される塩のいずれかの溶媒和物を含むプロドラッグ。
【請求項２】
式中、Ｒは、母核がＣ３〜Ｃ８の直鎖または環状の天然産物の断片から選ばれることを特徴とする請求項１に記載のプロドラッグ。
【請求項３】
前記天然産物の断片は、種々の単糖類またはその類似体の断片から選ばれ、もしくは、種々の多糖またはその類似体の断片から選ばれ、あるいは、脂溶性ビタミンから選ばれ、あるいは、天然アルコール類またはその類似体から選ばれることを特徴とする請求項２に記載のプロドラッグ。
【請求項４】
式中、Ｚは、ＯまたはＳであることを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項５】
式中、Ｒは、独立に置換または無置換のベンジル基から選ばれ、ここで、置換基は、独立にオルトまたはパラ置換されたＣ１〜Ｃ１０の直鎖炭化水素基、ＯＣ１〜Ｃ１０のアルコキシ炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の分岐炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の環状炭化水素基、Ｃ６〜Ｃ１０の芳香族炭化水素基またはヘテロアリール基から選ばれ、
Ｚは、ＯまたはＳであることを特徴とする請求項１に記載のプロドラッグ。
【請求項６】
式中、Ｒは、ベンゼン環上で置換されたベンジル基、またはメチレン基上で置換されたベンジル基から選ばれ、ここで、ベンゼン環上の置換基は、独立にメチル基または／およびメトキシ基のベンジル基から選ばれ、メチレン基上の置換基は、独立にＣ１〜Ｃ１０の直鎖炭化水素基、ＯＣ１〜Ｃ１０のアルコキシ炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の分岐炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の環状炭化水素基、Ｃ６〜Ｃ１０の芳香族炭化水素基またはヘテロアリール基のベンジル基から選ばれ、ベンジル基のベンゼン環上に１つの置換基のみがあり且つオルトにある場合、置換基はメチル基ではなく、
Ｒ１はイソプロピル基であり、
Ｒ２はメチル基であり、連結される炭素原子の立体配置はＲまたはＳであり、
Ｒ３はＨであり、
ＺはＯであることを特徴とする請求項５に記載のプロドラッグ。
【請求項７】
前記化合物は、以下の構造の化合物またはその光学異性体、またはその薬学的に許容される塩から選ばれ、あるいは、化合物またはその光学異性体またはその薬学的に許容される塩のいずれかの溶媒和物から選ばれることを特徴とする請求項１〜６のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【化２】
2019514843.tif 000021
【請求項８】
反応式が以下の通りである請求項１に記載のプロドラッグの調製方法であって、
【化３】
2019514843.tif 000022
オキシ塩化リンを塩基の作用下でヒドロキシ基含有アルコール類または糖類またはベンジル基含有化合物と反応させてから、アミノ酸エステルおよびベンゼン環含有活性芳香族試薬と反応させて、活性ホスホネート中間体を得るステップ１、（ここで、Ｙは、Ｏ原子またはＳ原子またはＳｅ原子であり、Ｒ４は、水素原子、または任意のケイ素もしくはフッ素含有活性脱離基であり、Ｗは、任意のハロゲン原子またはニトロ基であり、ｎは、０、または１〜５の間の任意の整数である）
ホスホネート中間体とウリジン類似体３３とを塩基の存在下で反応させて、式Ｉで表されるウリジン類ホスホラミドプロドラッグを生成するステップ２を含むことを特徴とするプロドラッグの調製方法。
【請求項９】
反応式は以下の通りである請求項１に記載のプロドラッグの調製方法であって、
【化４】
2019514843.tif 000023
ウリジンモノリン酸化合物３４とヒドロキシ基含有アルコール類または糖類またはベンジル基を持つ化合物を塩基の作用下で反応させて、ウリジンモノホスホネート中間体を得るステップ１、
ウリジンモノホスホネート中間体を塩基の存在下で、末端にＮＨ−基を含有する化合物分子中の−ＮＨ−基含有環状化合物と縮合剤の作用により反応させて、式Ｉで表されるウリジン類ホスホラミドプロドラッグを生成するステップ２を含むことを特徴とするプロドラッグの調製方法。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか一項に記載のプロドラッグと薬学的に許容される担体とを含むことを特徴とする医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なウリジン類ホスホラミドプロドラッグ、その異性体または薬学的に許容される塩、それらの水和物および溶媒和物、ならびにその調製方法およびその医薬における使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎は、世界的な流行性疾病に属し、現在患者数は２億を超え、そのうち、中国の患者が数千万である。ＮＳ５Ｂ阻害剤は、ポリメラーゼ阻害剤であり、ＮＳ５Ｂ  ＲＮＡ−依存性ＲＮＡポリメラーゼに結合することによってウイルスの複製を妨げる。このような薬物には、ヌクレオシド阻害剤と非ヌクレオシド阻害剤の２種類がある。ヌクレオシド阻害剤は、活性部位阻害剤であり、ポリメラーゼとして偽装された天然の基質をＲＮＡ鎖に挿入して、ＲＮＡの複製を中断させる。したがって、このような薬物は、すべての遺伝子型ＨＣＶ感染に対抗することができ、それに対するウイルスの耐性も非常に低い。そのうち、２−フルオロ−２−メチルデオキシウリジン三リン酸は、細胞内での薬効が強いＮＳ５Ｂ阻害剤であるが、体内では病巣に輸送することができない。その非活性形態の２−フルオロ−２−メチルデオキシウリジンモノリン酸のプロドラッグを用いることが可能であり、それは体内で２−フルオロ−２−メチルデオキシウリジンモノリン酸に代謝されてから２−フルオロ−２−メチルデオキシウリジン三リン酸に活性化され、これによりＮＳ５Ｂを阻害し、抗ＨＣＶ作用を発揮する。
【０００３】
現在、リン酸基上にマスキング基を添加することによってプロドラッグを形成する方法が採用されており、１つのマスキング基がリン酸基とホスホアミド構造を形成し、別の基がリン酸基とホスホネート類の化合物を形成することにおいて、肝臓標的効果を有することが実証された。エステル形成基は、種々の芳香族環と芳香族複素環、特にフェノールエステルのテノホビルプロドラッグにおける使用（ＣＮ２０１３１００４１６４７．４、ＷＯ０２０８２８４１）を含むが、エステル形成基が相対的に非毒性であるベンジル基または天然アルコールまたは糖またはビタミンの２−フルオロ−２−メチルデオキシウリジンモノリン酸のプロドラッグについての合成および生物活性研究は報告されていない。
【０００４】
本発明は、薬物の肝臓標的性と生物学的利用性を同時に向上させて、薬物効果を高め、薬物の使用量を低減させて毒性を低下させるために、新規なウリジンモノホスホラミド類プロドラッグ化合物およびその調製方法、ならびにウイルス感染症を治療する薬物における用途を提供することを目的とする。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
発明者によりウリジン類ホスホラミドプロドラッグ化合物が発明されており、本発明の化合物は、ラットへの胃内投与後に肝臓で有効に代謝され、リン酸化されて、活性生成物の２−フルオロ−２−メチルデオキシウリジン三リン酸に転化でき、また、従来の技術に比べ、本発明の化合物は、血漿中でより安定しており、その活性代謝生成物の２−フルオロ−２−メチルデオキシウリジン三リン酸は血漿中で完全に検出されず、これにより血漿代謝による活性代謝生成物の非標的器官における発現により引き起こされる器官系の毒性副作用を低下させた。
【０００６】
本発明は、一般式Ｉで表される化合物、その光学異性体またはその薬学的に許容される塩である抗ウイルス用ウリジン類ホスホラミドプロドラッグであって、
【化１】
2019514843.tif 000003
（式中、
Ｒは、独立に、置換または無置換のベンジル基、置換または無置換のＣ５〜Ｃ５０の直鎖または環状の天然産物の断片から選ばれ、もしくは、半合成または完全合成の糖類、ビタミン、アルコール類、およびその構造の改変または修飾後に得られる類似体の断片から選ばれ、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立に、Ｈ、置換または無置換のＣ１〜Ｃ１０の直鎖炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の分岐炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の環状炭化水素基、Ｃ６〜Ｃ１０の芳香族炭化水素基またはヘテロアリール基から選ばれ、ただし、前記置換は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｎ、Ｓｅから選ばれる１〜３個のヘテロ原子であり、あるいは、Ｒ１とＲ２、Ｒ１とＲ３、Ｒ２とＲ３がそれらを連結する構造部分とともに置換もしくは無置換の３〜８員環を形成し、
Ｚは、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＨ−または−ＣＨ２−から選ばれる。）
前記プロドラッグは、さらに一般式Ｉで表される化合物またはその薬学的に許容される塩の溶媒和物、その光学異性体を含むプロドラッグを提供することを目的とする。
【０００７】
本発明に記載のプロドラッグは、
Ｒは、独立に、置換または無置換のベンジル基から選ばれ、もしくは、母核がＣ３〜Ｃ８の直鎖または環状の天然産物の断片から選ばれ、もしくは、半合成または完全合成の糖類、ビタミン、アルコール類、およびその構造の改変または修飾後に得られる類似体の断片から選ばれ、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立に、Ｈ、置換または無置換のＣ１〜Ｃ１０の直鎖炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の分岐炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の環状炭化水素基、Ｃ６〜Ｃ１０の芳香族炭化水素基またはヘテロアリール基から選ばれ、ただし、前記置換は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｎ、Ｓｅから選ばれる１〜３個のヘテロ原子であり、あるいは、Ｒ１とＲ２、Ｒ１とＲ３、Ｒ２とＲ３がそれらを連結する構造部分とともに置換もしくは無置換の３〜８員環を形成し、
Ｚは、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＨ−または−ＣＨ２−から選ばれることが好ましい。
【０００８】
本発明に記載のプロドラッグは、
Ｒは、独立に、置換または無置換のベンジル基から選ばれ、もしくは、母核がＣ３〜Ｃ８の天然産物から選ばれ、前記天然産物は、種々の単糖類またはその類似体の断片から選ばれ、もしくは、種々の多糖またはその類似体の断片から選ばれ、もしくは、脂溶性ビタミンから選ばれ、もしくは、天然アルコール類またはその類似体から選ばれ、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立に、Ｈ、置換または無置換のＣ１〜Ｃ１０の直鎖炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の分岐炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の環状炭化水素基、Ｃ６〜Ｃ１０の芳香族炭化水素基またはヘテロアリール基から選ばれ、ただし、前記置換は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｎ、Ｓｅから選ばれる１〜３個のヘテロ原子であり、あるいは、Ｒ１とＲ２、Ｒ１とＲ３、Ｒ２とＲ３がそれらを連結する構造部分とともに置換もしくは無置換の３〜８員環を形成し、
Ｚは、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＨ−または−ＣＨ２−から選ばれることが更に好ましい。
【０００９】
本発明に記載のプロドラッグは、
Ｒは、独立に、置換もしくは無置換のベンジル基から選ばれ、または母核がＣ３〜Ｃ８の天然産物から選ばれ、前記天然産物は、種々の単糖類またはその類似体の断片から選ばれ、あるいは、種々の多糖類またはその類似体の断片から選ばれ、あるいは、脂溶性ビタミンから選ばれ、あるいは、天然アルコール類またはその類似体から選ばれ、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立に、Ｈ、置換もしくは無置換のＣ１〜Ｃ１０の直鎖炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の分岐炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の環炭化水素基、Ｃ６〜Ｃ１０の芳香族炭化水素基またはヘテロアリール基から選ばれ、ただし、前記置換は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｎ、Ｓｅから選ばれる１〜３個のヘテロ原子であり、あるいは、Ｒ１とＲ２、Ｒ１とＲ３、Ｒ２とＲ３がそれらを連結する構造部分とともに置換もしくは無置換の３〜８員環を形成し、
Ｚは、ＯまたはＳであることが更に好ましい。
【００１０】
本発明に記載のプロドラッグは、
Ｒは、ベンゼン環上で無置換されたベンジル基、またはメチレン基上で無置換されたベンジル基から選ばれ、もしくは、ベンゼン環上の置換基は、独立に、オルトまたはパラ置換されたＣ１〜Ｃ１０の直鎖炭化水素基、ＯＣ１〜Ｃ１０のアルコキシ炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の分岐炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の環状炭化水素基、Ｃ６〜Ｃ１０の芳香族炭化水素基またはヘテロアリール基のベンジル基から選ばれ、もしくは、メチレン基上の置換基は、独立に、Ｃ１〜Ｃ１０の直鎖炭化水素基、ＯＣ１〜Ｃ１０のアルコキシ炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の分岐炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の環状炭化水素基、Ｃ６〜Ｃ１０の芳香族炭化水素基またはヘテロアリール基のベンジル基から選ばれ、もしくは、母核がＣ３〜Ｃ８の種々の単糖類またはその類似体の断片から選ばれ、もしくは、種々の多糖類またはその類似体の断片から選ばれ、もしくは、脂溶性ビタミンから選ばれ、もしくは、天然アルコール類またはその類似体から選ばれ、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、それぞれ独立に、Ｈ、置換または無置換のＣ１〜Ｃ１０の直鎖炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の分岐炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の環状炭化水素基、Ｃ６〜Ｃ１０の芳香族炭化水素基またはヘテロアリール基から選ばれ、ただし、前記置換は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｎ、Ｓｅから選ばれる１〜３個のヘテロ原子であり、あるいは、Ｒ１とＲ２、Ｒ１とＲ３、Ｒ２とＲ３がそれらを連結する構造部分とともに置換もしくは無置換の３〜８員環を形成し、
Ｚは、ＯまたはＳであることが更に好ましい。
【００１１】
本発明に記載のプロドラッグは、
Ｒは、ベンゼン環上で無置換されたベンジル基、またはメチレン基上で無置換されたベンジル基から選ばれ、もしくは、ベンゼン環上の置換基は、独立に、メチル基または／およびメトキシ基のベンジル基から選ばれ、もしくは、メチレン基上の置換基は、独立に、Ｃ１〜Ｃ１０の直鎖炭化水素基、ＯＣ１〜Ｃ１０のアルコキシ炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の分岐炭化水素基、Ｃ３〜Ｃ１０の環状炭化水素基、Ｃ６〜Ｃ１０の芳香族炭化水素基またはヘテロアリール基のベンジル基から選ばれ、ベンジル基のベンゼン環上に１つの置換基のみがあり且つオルトにある場合、置換基はメチル基ではなく、
Ｒ１は、イソプロピル基であり、
Ｒ２は、メチル基であり、連結される炭素原子の立体配置はＲまたはＳであり、
Ｒ３は、Ｈであり、
Ｚは、Ｏであることが更に好ましい。
【００１２】
本発明に記載のプロドラッグは、
Ｒは、独立に、ベンゼン環上で無置換されたベンジル基から選ばれ、もしくは、ベンゼン環上の置換基がメチル基または／およびメトキシ基のベンジル基から選ばれ、ベンジル基のベンゼン環上に１つの置換基のみがあり且つオルトにある場合、置換基はメチル基ではなく、
Ｒ１は、イソプロピル基であり、
Ｒ２は、メチル基であり、連結される炭素原子の立体配置はＲまたはＳであり、
Ｒ３は、Ｈであり、
Ｚは、Ｏであることが更に好ましい。
【００１３】
本発明に記載のプロドラッグは、
Ｒは、独立に、ベンゼン環上で無置換されたベンジル基から選ばれ、もしくは、ベンゼン環上の置換基がメチル基または／およびメトキシ基のベンジル基から選ばれ、ベンジル基のベンゼン環上に１つの置換基のみがあり且つオルトにある場合、置換基はメチル基ではなく、
Ｒ１は、イソプロピル基であり、
Ｒ２は、メチル基であり、連結される炭素原子の立体配置はＳであり、
Ｒ３は、Ｈであり、
Ｚは、Ｏであることが一層好ましい。
【００１４】
本発明に記載のプロドラッグは、以下の構造の化合物、その光学異性体、またはその薬学的に許容される塩、あるいは化合物またはその光学異性体またはその薬学的に許容される塩の３種類の形態の化合物の溶媒和物であることが特に好ましい。
【００１５】
【化２】
2019514843.tif 000004
【００１６】
本発明のプロドラッグにおいて、前記式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩は、塩酸、硫酸のような無機酸で形成される塩、酢酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、マレイン酸、シュウ酸、コハク酸、安息香酸、酒石酸、フマル酸、マンデル酸、アスコルビン酸またはリンゴ酸のような有機酸で形成される塩、アラニン、アスパラギン酸、リジンのようなアミノ酸で形成される塩、およびメタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸のようなスルホン酸で形成される塩を含む。必要および化合物の性質に応じて、通常の方法でそれらをカリウム塩、ナトリウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、銀塩、バリウム塩などに調製してもよい。
【００１７】
本発明の式Ｉの化合物は、溶媒和物（例えば水和物）の形態で存在してもよく、したがって、このような溶媒和物（例えば水和物）も本発明の化合物に含まれる。
【００１８】
本発明は、さらに前記プロドラッグの調製方法を含み、前記方法における第一の反応式は以下の通りである。
【００１９】
【化３】
2019514843.tif 000005
【００２０】
１．１）オキシ塩化リンを塩基の作用下でヒドロキシ基含有アルコール類または糖類またはベンジル基含有化合物と反応させてから、アミノ酸エステルおよびベンゼン環含有活性芳香族試薬と反応させて、活性ホスホネート中間体を得る。ここで、Ｙは、Ｏ原子またはＳ原子またはＳｅ原子であり、Ｒ４は、水素原子、または任意のケイ素もしくはフッ素含有活性脱離基であり、Ｗは、任意のハロゲン原子またはニトロ基であり、ｎは、０〜５の任意の整数である。
１．２）ホスホネート中間体とウリジン類似体３３とを塩基の存在下で反応させて、式Ｉで表されるウリジン類ホスホラミドプロドラッグを生成する。
【００２１】
前記ステップ１．１）において、
塩基は、無機塩基または有機塩基であり、有機塩基が好ましく、有機塩基が、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ｔｅｒｔ−ブチルアミン、ジエチルアミンなどのアミン類化合物であることが更に好ましいが、これらに限定されない。
ベンジル基含有化合物とは、種々の置換または無置換のベンジルハライドやベンジルアルコール、種々の置換または無置換のベンジルブロミド、種々の置換または無置換のベンジルアルコールがより好ましい。
前記ステップ１．２）において、
塩基は、無機塩基または有機塩基であり、有機塩基が好ましく、有機塩基が、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ｔｅｒｔ−ブチルアミン、ジエチルアミンなどのアミン類化合物であることが更に好ましいが、これらに限定されない。
【００２２】
前記方法における第二の反応式は以下の通りである。
【００２３】
【化４】
2019514843.tif 000006
【００２４】
２．１）ウリジンモノリン酸化合物３４とヒドロキシ基含有アルコール類または糖類またはベンジル基を持つ化合物を塩基の作用下で反応させて、ウリジンモノホスホネート中間体を得る。
２．２）ウリジンモノホスホネート中間体を塩基の存在下で、末端にＮＨ−基を含有する化合物分子中の−ＮＨ−基含有環状化合物と縮合剤の作用により反応させて、式Ｉで表されるウリジン類ホスホラミドプロドラッグを生成する。
【００２５】
前記ステップ２．１）において、
塩基は、無機塩基または有機塩基であり、有機塩基が好ましく、有機塩基が、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ｔｅｒｔ−ブチルアミン、ジエチルアミンなどのアミン類化合物であることが更に好ましいが、これらに限定されない。
ベンジル基を持つ化合物は、種々の置換または無置換のベンジルハライドやベンジルアルコール、種々の置換または無置換ベンジルブロミド、種々の置換または無置換のベンジルアルコールであることが好ましい。
前記ステップ２．２）において、
塩基は、無機塩基または有機塩基であり、有機塩基が好ましく、有機塩基が、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ｔｅｒｔ−ブチルアミン、ジエチルアミンなどのアミン類化合物であることが更に好ましいが、これらに限定されない。
【００２６】
本発明は、さらに化合物のキラル分離方法を含み、ＨＰＬＣ逆相分取カラム分離またはキラルカラム分離されて各保持時間ごとに溶離液を収集し、乾燥させて各キラル異性体が得られる。
【００２７】
本発明は、さらに本発明に記載のプロドラッグと薬学的に許容される担体とを含有する医薬組成物を含む。前記プロドラッグは、Ｃ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルスに起因する疾病のようなウイルス感染症を治療することができる。
【００２８】
本発明の医薬組成物は、単位用量の医薬製剤の形態であることが好ましく、医薬製剤を製造する際に薬学的に許容される任意の剤形に製造することができ、これらの剤形は、錠剤、糖衣錠剤、フィルムコーティング錠剤、腸溶コーティング錠剤、カプセル剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、経口投与液、口腔剤、顆粒剤、懸濁液、溶剤、注射剤、坐剤、軟膏剤、硬膏剤、クリーム剤、スプレー剤、パッチ剤から選ばれる。経口投与製剤の形態が好ましく、錠剤、カプセル剤が最も好ましい。
【００２９】
また、本発明の前記医薬組成物は、さらに薬学的に許容される担体を含む。
本発明の新規なウリジン類ホスホラミドプロドラッグ化合物、その水和物、またはその溶媒和物、もしくはその薬学的に許容される塩またはその分割された単一異性体と薬学的に許容される担体とを混合するような製剤学の従来技術を用いて該医薬製剤を調製することができる。前記薬学的に許容される担体は、マンニトール、ソルビトール、ソルビン酸またはカリウム塩、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、塩酸システイン、チオグリコール酸、メチオニン、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＤ、アゾン、ＥＤＴＡ二ナトリウム、ＥＤＴＡカルシウムナトリウム、一価のアルカリ金属の炭酸塩、酢酸塩、リン酸塩またはその水溶液、塩酸、酢酸、硫酸、リン酸、アミノ酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、乳酸ナトリウム、キシリトール、マルトース、グルコース、フルクトース、デキストラン、グリシン、デンプン、スクロース、ラクトース、シリコン誘導体、セルロースおよびその誘導体、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、グリセリン、プロピレングリコール、エタノール、ツイン６０〜８０、スパン（Ｓｐａｎ）−８０、ミツロウ、ラノリン、流動パラフィン、セチルアルコール、没食子酸エステル類、寒天、トリエタノールアミン、塩基性アミノ酸、尿素、アラントイン、炭酸カルシウム、重炭酸カルシウム、ポリエチレングリコール、シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、リン脂類材料、カオリン、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウムなどを含むが、これらに限定されない。
【００３０】
本発明の医薬組成物において、薬剤を製造する際に、単位用量の薬剤は、本発明の薬物活性物質を０．１〜１０００ｍｇ含有することができ、残量が薬学的に許容される担体である。薬学的に許容される担体は、重量で製剤の総重量の０．１〜９９．９％であってもよい。
【００３１】
本発明の医薬組成物は、使用の際に、患者の状態に応じて使用方法および使用量を決定する。
【００３２】
以下は、用語の説明である。
前記単糖類またはその類似体は、リボース、デオキシリボース、アラビノース、アロース、フラノース、キシロース、ラムノース、グルコース、マンノースなどを含むが、これらに限定されない。
前記多糖類またはその類似体の断片は、例えばスクロース、ラクトース、マルトース、セロビオースなどであるが、これらに限定されない。
前記脂溶性ビタミンとは、水に不溶で脂肪や有機溶媒に溶けるビタミンであり、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫを含む。
前記天然アルコール類またはその類似体は、例えばレスベラトロール、フラボノール、メントールなどであるが、これらに限定されない。
【００３３】
本発明により提供される化合物は、以下の利点を有する。
１、構造：ソホスブビル（ｓｏｆｏｓｂｕｖｉｒ）構造に比べ、毒性の低いベンジル基、天然アルコール類、天然糖類またはビタミン類でソホスブビル構造中のフェニル基を置換することにより、代謝断片を、神経毒性および心臓毒性の高いフェノールから相対的に非毒性のベンジルアルコール、天然アルコール類、天然糖類またはビタミン類化合物に代替する。
２、効果：本発明により提供される化合物は、ラットへの胃内投与後に肝臓で有効に代謝され、リン酸化されて活性生成物の２−フルオロ−２−メチルデオキシウリジン三リン酸に転化できるが、活性代謝生成物は、血液中で完全に検出されない。さらに、従来の技術に比べ、本発明により提供される化合物は、ヒト血漿中でより安定していることにより、化合物の生物学的活性を維持しながら、血漿代謝による活性代謝生成物の非標的臓器管における発現により引き起こされる器官系の毒性副作用を低下させた。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
以下、当業者が本発明をより全体的に理解できるように、具体的な実施例を参照しながら本発明を詳しく説明する。合成経路または具体的な実施例は、単に本発明の技術スキームを説明するためのものであり、本発明を何ら限定するものではない。
【００３５】
合成経路１
【化５】
2019514843.tif 000007
【００３６】
合成経路２
【化６】
2019514843.tif 000008
【００３７】
実施例１：化合物２１の調製
三つ口フラスコにＰＯＣｌ３（１４．２ｇ、９２．５ｍｍｏｌ、１．００ｅｑ）、無水ジクロロメタン（３００ｍＬ）を加えて、均一に混合してから−４０℃に冷却し、この温度で攪拌しながら化合物１１（合成経路１における原料１１を参照、１０．０ｇ、９２．５ｍｍｏｌ、１．００ｅｑ）と無水トリエチルアミン（９．３６ｇ、９２．５ｍｍｏｌ、１．００ｅｑ）の無水ジクロロメタン（１００ｍＬ）における混合液を滴下し、３０分で滴下を完了した後に−７８℃に保温して２時間攪拌した。
この温度で、反応混合物中に化合物３１（１４．７ｇ、８７．８ｍｍｏｌ、０．９５ｅｑ）と無水ジクロロメタン（５０ｍＬ）を加えてから、トリエチルアミン（１８．７ｇ、１８５ｍｍｏｌ、２．００ｅｑ）の無水ジクロロメタン（５０ｍＬ）溶液を滴下し、３０分で滴下を完了した後に、自然に室温まで昇温して、２時間攪拌してから０℃に冷却した。
反応混合物中に化合物３２（１０．２ｇ、５５．５ｍｍｏｌ、０．６０ｅｑ）とトリエチルアミン（１１．２ｇ、１１１ｍｍｏｌ、１．２０ｅｑ）の無水ジクロロメタン（５０ｍＬ）混合液を滴下し、２０分で滴下を完了した後に、室温条件下で一晩攪拌し（１６時間）、溶媒を減圧下で回転蒸発させた。残渣を水（２００ｍＬ）と酢酸エチル（１００ｍＬ）で分離させ、水相を酢酸エチル（５０ｍＬ×２）でさらに抽出してから有機相を合わせ、有機相をブライン（５０ｍＬ）で洗浄してから無水硫酸ナトリウムで乾燥させて、ろ過し、溶媒を減圧下で回転蒸発させてからカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２００〜３００メッシュ、酢酸エチル／石油エーテルの体積比は１／１０〜１／１）を行って、白色固体２１を得た。収率は８９．８％であった。
【００３８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３７〜７．３８（ｍ，５Ｈ），５．１９〜５．２３（ｍ，２Ｈ），４．９９〜５．０９（ｍ，１Ｈ），３．９７〜４．０８（ｍ，１Ｈ），３．７５−３．８４（ｍ，１Ｈ），１．４１（ｄｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，３Ｈ），１．２２−１．２７（ｍ，６Ｈ）；
１９Ｆ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−１５３．５７〜−１５３．７１（ｍ，２Ｆ），−１５９．７６〜−１６０．０１（ｍ，１Ｆ），−１６２．１５〜−１６２．３４（ｍ，２Ｆ）；
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ３．９１（ｓ，１Ｐ）．
【００３９】
実施例２：化合物２２の調製
調製方法は実施例１と同様であり、ただし、化合物１１を化合物１２（合成経路１における原料１２を参照）に置き換えた。収率は８４．９％であった。
【００４０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３６−７．１８（ｍ，４Ｈ），５．２５−５．２２（ｍ，２Ｈ），５．０８−４．９７（ｍ，１Ｈ），４．０７−３．９５（ｍ，１Ｈ），３．８２−３．７２（ｍ，１Ｈ），２．３８，２．３７（ｓ，ｓ，３Ｈ），１．４３−１．３６（ｄｄ，Ｊ＝２０，８．０Ｈｚ，３Ｈ），１．２７−１．２０（ｍ，６Ｈ）；
１９Ｆ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−１５３．６１〜−１５３．７５（ｍ，２Ｆ），−１５９．７６〜−１６０．０１（ｍ，１Ｆ），−１６２．１４〜−１６２．３３（ｍ，２Ｆ）；
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ４．０２，３．９７（ｓ，ｓ，１Ｐ）．
【００４１】
実施例３：化合物２３の調製
調製方法は実施例１と同様であり、ただし、化合物１１を化合物１３（合成経路１における原料１３を参照）に置き換えた。収率は７９．７％であった。
【００４２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３６−７．２７（ｍ，２Ｈ），６．９８−６．９４（ｍ，１Ｈ），６．９０−６．８８（ｍ，１Ｈ），５．３３−５．２１（ｍ，２Ｈ），５．０９−４．９９（ｍ，１Ｈ），４．１０−４．０１（ｍ，１Ｈ），３．９１−３．８３（ｍ，４Ｈ），１．４３（ｄｄ，Ｊ＝９．２，７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．２８−１．２３（ｍ，６Ｈ）；
１９Ｆ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−１５３．４８〜−１５３．６４（ｍ，２Ｆ），−１６０．１１〜−１６０．３５（ｍ，１Ｆ），−１６２．４０〜−１６２．５９（ｍ，２Ｆ）；
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ３．９６，３．８８（ｓ，ｓ，１Ｐ）．
【００４３】
実施例４：化合物２４の調製
調製方法は実施例１と同様であり、ただし、化合物１１を化合物１４（合成経路１における原料１４を参照）に置き換えた。収率は７０．２％であった。
【００４４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２７−７．１６（ｄｄ，Ｊ＝３６，８．０Ｈｚ，４Ｈ），５．１６−５．１４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），５．０５−４．９８（ｍ，１Ｈ），４．０５−３．９６（ｍ，１Ｈ），３．７６−３．７１（ｍ，１Ｈ），２．３６（３，３Ｈ），１．４３，１．４１（ｓ，ｓ，３Ｈ），１．２３，１．２２（ｓ，ｓ，６Ｈ）；
１９Ｆ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−１５３．６３〜−１５３．６９（ｍ，２Ｆ），−１６０．０７〜−１６０．０９（ｍ，１Ｆ），−１６２．３４〜−１６２．４４（ｍ，２Ｆ）；
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ３．９１（ｓ，１Ｐ）．
【００４５】
実施例５：化合物２５の調製
調製方法は実施例１と同様であり、ただし、化合物１１を化合物１５（合成経路１における原料１５を参照）に置き換えた。収率は１５．４％であった。
【００４６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３８−７．２９（ｍ，２Ｈ），６．８９−６．８５（ｍ，１Ｈ），６．８０−６．７８（ｍ，１Ｈ），５．３６−５．２４（ｍ，２Ｈ），５．１５−５．０４（ｍ，１Ｈ），４．１２−４．０４（ｍ，１Ｈ），３．８９−３．８５（ｍ，４Ｈ），１．４５（ｄｄ，Ｊ＝９．２，７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．２７−１．２１（ｍ，６Ｈ）；
１９Ｆ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−１５３．３０〜−１５３．４６（ｍ，２Ｆ），−１６０．０８〜−１６０．３２（ｍ，１Ｆ），−１６２．５９〜−１６２．７０（ｍ，２Ｆ）；
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ３．９５（ｓ，１Ｐ）．
【００４７】
実施例６：化合物０１の調製
方法１
０℃の条件下で、化合物３３（５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）懸濁液中に、１Ｍ  ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロライド（７．５ｍｍｏｌ）を徐々に滴下し、滴下完了後に０℃に保持して１ｈ反応させた後、化合物２１（５．７５ｍｍｏｌ、実施例１で調製）のＴＨＦ溶液（２０ｍｌ）を徐々に滴下し、滴下完了後に０℃に保持して１ｈ反応させた後、自然に室温まで昇温して、一晩攪拌した。
反応液に２０ｍｌ氷水を加えて０．５ｈ攪拌し急冷反応させてから、酢酸エチル（３×２０ｍｌ）で反応液を抽出し、有機相をブライン（２０ｍＬ）で洗浄してから無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。ろ過し、溶媒を減圧下で回転蒸発させてからカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２００〜３００メッシュ、メタノール／ジクロロメタン＝１／２０）を行って、白色固体０１を得た。収率は５８．４％であった。
【００４８】
方法２
化合物３４（５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２０ｍＬ）懸濁液中に、ＤＩＰＥＡ（１０ｍｍｏｌ）、化合物４１（合成経路２における原料４１を参照、５ｍｍｏｌ）を順に加え、該混合物を加熱還流下で１６時間攪拌してから減圧下で回転蒸発させ、残渣にピリジン（２０ｍＬ）を加えて溶解させてから、さらにトリエチルアミン（５ｍＬ）と化合物３１（合成経路１における原料３１を参照、１０ｍｍｏｌ）とを順に加え、５０℃に加熱して３０分攪拌してからこの温度下でトリストリフェニルホスフィン（１５ｍｍｏｌ）と２，２’−ジチオジピリジン（１５ｍｍｏｌ）とを加え、５０℃に保温して３時間攪拌してから減圧下で回転蒸発させた。
残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／ジクロロメタン溶出）で精製して、白色固体の生成物を得た。収率は３２．６％であった。
【００４９】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．４７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．４８，７．４６（ｓ，ｓ，１Ｈ），７．４５−７．３４（ｍ，５Ｈ），６．１９，６．１５（ｓ，ｓ，１Ｈ），５．７４−５．７１（ｄｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），５．１１−４．９６（ｍ，３Ｈ），４．４０−４．２９（ｍ，３Ｈ），４．０９−４．０７（ｍ，３Ｈ），３．８１−３．７５（ｍ，１Ｈ），１．３０−１．２９（ｓ，ｓ，６Ｈ），１．２５−１．２１（ｍ，６Ｈ）；
１９Ｆ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−１６２．０２，−１６２．３５（ｓ，ｓ，１Ｆ）；
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．７２，８．６７（ｓ，ｓ，１Ｐ）．
【００５０】
実施例７：化合物０２の調製
調製方法１は実施例６の方法１と同様であり、ただし、化合物２１を化合物２２に置き換えた。収率は５４．２％であった。
調製方法２は実施例６の方法２と同様であり、ただし、化合物４１を化合物４２（合成経路２における原料４２を参照）に置き換えた。収率は３０．６％であった。
【００５１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．１６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．４７，７．４５（ｓ，ｓ，１Ｈ），７．３５−７．２０（ｍ，４Ｈ），６．１９，６．１５（ｓ，ｓ，１Ｈ），５．７３，５．７１（ｄｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．１７−４．９７（ｍ，３Ｈ），４．４０−４．２３（ｍ，３Ｈ），４．０９−４．０３（ｍ，１Ｈ），３．９５−３．７３（ｍ，３Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ），１．４２−１．２８（ｍ，６Ｈ），１．２３−１．２１（ｍ，６Ｈ）；
１９Ｆ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−１６３．９４（ｓ，１Ｆ）；
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．７９（ｓ，１Ｐ）．
【００５２】
実施例８：化合物０３の調製
調製方法１は実施例６の方法１と同様であり、ただし、化合物２１を化合物２３に置き換えた。収率は４８．３％であった。
調製方法２は実施例６の方法２と同様であり、ただし、化合物４１を化合物４３（合成経路２における原料４３を参照）に置き換えた。収率は２８．９％であった。
【００５３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．９０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．５２−７．４９（ｍ，１Ｈ），７．３７−７．３２（ｍ，２Ｈ），６．９９−６．８９（ｍ，２Ｈ），６．２１，６．１６（ｓ，ｓ，１Ｈ），５．７５〜５．４７（ｄ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．１６−５．０８（ｍ，２Ｈ），５．０５−４．９６（ｍ，１Ｈ），４．４２−４．３０（ｍ，２Ｈ），４．０９−４．０７（ｍ，１Ｈ），３．９５−３．７２（ｍ，６Ｈ），１．８８（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），１．４２−１．３４（ｍ，６Ｈ），１．２５−１．２２（ｍ，６Ｈ）；
１９Ｆ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−１６２．３０，−１６２．９０（ｓ，ｓ，１Ｆ）；
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．７７，８．７１（ｓ，ｓ，１Ｐ）．
【００５４】
実施例９：化合物０４の調製
調製方法１は実施例６の方法１と同様であり、ただし、化合物２１を化合物２４に置き換えた。収率は５２．９％であった。
調製方法２は実施例６の方法２と同様であり、ただし、化合物４１を化合物４４（合成経路２における原料４４）に置き換えた。収率は２５．３％であった。
【００５５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．０６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．４７−７．４０（ｍ，１Ｈ），７．２８−７．１６（ｍ，４Ｈ），６．９９−６．８９（ｍ，２Ｈ），６．１８（ｄ，Ｊ＝２０Ｈｚ，１Ｈ），５．７１，５．４５（ｄ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０９−４．９４（ｍ，３Ｈ），４．４０−４．２８（ｍ，２Ｈ），４．０８−４．０６（ｍ，１Ｈ），３．９５−３．７２（ｍ，３Ｈ），２．３６，２．３４（ｓ，ｓ，３Ｈ），１．４３−１．２２（ｍ，１２Ｈ）；
１９Ｆ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−１６２．０３，−１６２．４５（ｓ，ｓ，１Ｆ）；
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．７３，８．６６（ｓ，ｓ，１Ｐ）．
【００５６】
実施例１０：化合物０５の調製
調製方法１は実施例６の方法１と同様であり、ただし、化合物２１を化合物２５に置き換えた。収率は５７．３％であった。
調製方法２は、実施例６の方法２と同様であり、ただし、化合物４１を化合物４５（合成経路２における原料４５）に置き換えた。収率は２２．５％であった。
【００５７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．８７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．５５−７．５２（ｍ，１Ｈ），７．３５−７．３０（ｍ，２Ｈ），６．９７−６．８６（ｍ，２Ｈ），６．１９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．７７〜５．４９（ｍ，１Ｈ），５．２５−５．１８（ｍ，２Ｈ），５．１２−４．９９（ｍ，１Ｈ），４．５７−４．４５（ｍ，２Ｈ），４．２１−４．１７（ｍ，１Ｈ），３．９８−３．７６（ｍ，６Ｈ），２．０５（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），１．４４−１．３２（ｍ，６Ｈ），１．２４−１．２０（ｍ，６Ｈ）；
１９Ｆ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−１６２．３０，−１６２．９０（ｓ，ｓ，１Ｆ）；
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．７７，８．７１（ｓ，ｓ，１Ｐ）．
【００５８】
実施例１１：単一のキラル化合物の分離および調製
ＨＰＬＣ逆相クロマトグラフィーカラム分離：実施例６の化合物０１を取り、ＨＰＬＣ分取分離（分取カラム：Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ  Ｃ１８、５μｍ、１５０×２１．１ｍｍ、移動相：２０％アセトニトリル水溶液（Ｖ／Ｖ））によりアイソクラティック溶出してからピーク出現に従って化合物０１ｂと化合物０１ａを連続的に得た。
【００５９】
ＨＰＬＣキラルクロマトグラフィーカラム分離：実施例６の化合物０１を取り、キラルカラム分取分離（分取カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ−Ｈ、０．４６ｃｍ  Ｉ．Ｄ．×２５ｃｍ  Ｌ、移動相：ｎ−ヘキサン／イソプロパノール＝６５／３５（Ｖ／Ｖ））によりアイソクラティック溶出してからピーク出現に従って化合物０１ａと化合物０１ｂを連続的に得た。
【００６０】
化合物０１ａ：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．０７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．４２−７．３３（ｍ，６Ｈ），６．１９，６．１５（ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，１Ｈ），５．４６，５．４４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．１２−４．９８（ｍ，３Ｈ），４．４０，４．３９（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），４．０９，４．０７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９２−３．７３（ｍ，４Ｈ），１．３９−１．３３（ｍ，６Ｈ），１．２４，１．２２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，６Ｈ）；
１９Ｆ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−１６２．４７（ｓ，１Ｆ）；
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．７０（ｓ，１Ｐ）．
【００６１】
化合物０１ｂ：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．９７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．４８，７．４６（ｓ，ｓ，１Ｈ），７．４２−７．３６  （ｍ，５Ｈ），６．１９，６．１５（ｓ，ｓ，１Ｈ），５．７４，５．７２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．１４−４．９７（ｍ，３Ｈ），４．４１−４．２９（ｍ，２Ｈ），４．１４−３．７３（ｍ，５Ｈ），１．４３−１．２２（ｍ，１２Ｈ）；
１９Ｆ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−１６２．０２（ｓ，１Ｆ）；
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．７７（ｓ，１Ｐ）．
【００６２】
プロドラッグ化合物にとって最も重要なことは、プロドラッグの非標的器官系における安定性と標的器官部分での代謝活性である。非標的器官系（例えば、胃腸管、血液など）での安定性が高いほど、標的器官（本発明における肝臓など）での活性化合物に代謝される量が多いほど、化合物の毒性が低くなり、薬効が高くなる。試験例において、本発明の化合物、参照化合物などのプロドラッグは、いずれも活性代謝物であるウリジン類三リン酸に代謝されてから、抗Ｃ型肝炎ウイルス作用を発揮する。
【００６３】
現在、構造が類似するプロドラッグ化合物は、ＣＮ１０１９１８４２４Ａ（出願番号２００８８０１０３０２３．８）の実施例２５に開示された化合物（２００８年特許化合物０６と略称する）、ＣＮ１０２４５９２９９Ａ（出願番号２０１０８００３２５４１．２）に開示されたその単一のキラル異性体（２０１０年特許化合物０６ａ、２０１０年特許化合物０６ｂと略称する）、およびＵＳ９１５６８７４に開示された化合物（公開公報中の請求項１５の第３９頁右側カラムの第２化合物、第３化合物の両者を分割させる前の化合物を参照し、２０１３年特許化合物の未分割エナンチオマー０２と略称する）である。
これらの化合物と本発明の化合物とは、同じ親薬物の構造である２−フルオロ−２−メチルデオキシウリジンと活性代謝生成物である２−フルオロ−２−メチルデオキシウリジン三リン酸とを有するが、肝臓標的断片が異なる。
【００６４】
理論的には、本発明の化合物は、活性が同等またはそれ以上であるか、または血液系において構造がより安定しているので器官系の毒性がより低いという利点を有する。
さらに、２００８年特許化合物０６に対しては、本発明の化合物の代謝により生成された安息香酸類化合物が比較的安全であり、２００８年特許化合物０６により放出された毒性フェノールの欠点を克服し、活性が優れながらより低毒性であるという利点を有する。
さらに、２０１３年特許化合物の未分割エナンチオマー０２に対しては、本発明の化合物の肝臓標的断片における非ｏ−メチル基で置換されていないベンジル基はｏ−メチルベンジル基よりも安定しているので、血液エステラーゼ代謝においてベンジル基脱離活性が低く、したがって、血液中の活性親薬物が相対的に減少し、肝臓中の活性代謝物が相対的に増加することにより、より良好な活性を示す。本発明の化合物は、ベンジル基脱離後の毒性が低く、より良好な器官系の安定性とより低い毒性を有し、これらの推測は、実際の研究においてデータにより裏付けされ、検証された。具体的には、以下に記載された試験例の通りである。
【００６５】
試験例１：細胞レベルの抗ＨＢＶ活性および細胞毒性の比較実験
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）遺伝子型（ＧＴ）１ｂによりレプリコン（ｒｅｐｌｉｃｏｎ）を安定にトランスフェクトした細胞系を用いて、ＨＣＶ  ＧＴ１ｂレプリコンに対する化合物の阻害活性を測定し、本実験では、参照化合物として化合物０６ａ（ＧＳ−７９７７）を用いて、実験質量をモニタリングした。
【００６６】
１、化合物の構造
実験される化合物は、本発明の実施例で挙げられた化合物０１、化合物０３、化合物０４、化合物０５、化合物０１を分割させて得られる単一のキラル異性体０１ａ、キラル異性体０１ｂであり、参照化合物は、２００８年特許化合物０６、２０１０年特許化合物０６ａ、２０１３年特許化合物の未分割エナンチオマー０２である。
【００６７】
【化７】
2019514843.tif 000009
【００６８】
２、化合物の希釈：１００％ＤＭＳＯで２０ｍＭ母液を調製し、化合物ＤＭＳＯ母液を希釈して９６ウェルアッセイプレートに加えた。ＤＭＳＯの最終濃度は０．５％である。インビトロ抗ＨＣＶ活性実験および細胞毒性実験全ての化合物の開始濃度は２０μＭ、５倍希釈であり、６つの濃度のＤＭＳＯ最終濃度は０．５％である。
【００６９】
３、細胞処理：前記９６ウェルアッセイプレートにＨＣＶ−１ｂレプリコン細胞（８，０００細胞／ウェル）を播種し、その後３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーター内で３日間培養する。
【００７０】
４、細胞活性の検出：各ウェルに蛍光細胞増殖滴定アッセイ試薬を加え、細胞を３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーター内で１時間培養してから、分光光度計検出システムＥｎｖｉｓｉｏｎでＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅシグナル値を検出し、生データ（ＲＦＵ）は化合物の細胞毒性の計算に用いられる。
【００７１】
５、抗ＨＣＶレプリコン活性の検出：各ウェルにルシフェラーゼ発光基質Ｂｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏを加え、５分以内に化学発光検出システムＥｎｖｉｓｉｏｎでＬｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅシグナル値を検出し、生データ（ＲＬＵ）は化合物の阻害活性計算に用いられる。
【００７２】
６、データ処理：下記式を用いてステップ１．３の生データ（ＲＦＵ）を細胞生存率として処理する。
【数１】
2019514843.tif 000010
下記式を用いてステップ１．４の生データ（ＲＬＵ）を阻害率として処理する。
【数２】
2019514843.tif 000011
細胞生存率、阻害率をそれぞれＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアに導入してデータ処理を行うことにより、化合物の対応する曲線およびその細胞毒性（ＣＣ５０）とＨＣＶレプリコンに対する阻害活性（ＥＣ５０）数値を得た。
【００７３】
７、実験結果および結論：
【００７４】
【表１】
2019514843.tif 000012
【００７５】
この実験では、６つの被験化合物と３つの対照化合物があり、実験結果は以下のように要約される。
被験化合物０１と対照化合物０６（２００８年特許化合物０６）はＨＣＶ  ＧＴ１ｂ複製を阻害する良好な活性を示し、ＥＣ５０値は１０μＭレベル以下であり、化合物０１の活性が対照化合物０６より優れ、被験化合物０４と対照化合物０２（２０１３年特許化合物の未分割エナンチオマー０２）のＨＣＶ  ＧＴ１ｂ複製を阻害する活性が比較的弱く、ＥＣ５０値は１０μＭ〜２０μＭの間であり、他の２つの被験化合物０３、被験化合物０５のＨＣＶ  ＧＴ１ｂ複製を阻害する活性ＥＣ５０値は最大実験濃度２０μＭを上回る。
【００７６】
本発明の化合物０１、化合物０３、化合物０４、化合物０５と対照化合物０２、対照化合物０６は構造が類似するので、類似する薬効作用を有する。
その中で、化合物０１のＨＣＶ  ＧＴ１ｂレプリコンを阻害する活性が２００８年特許化合物０６と２０１３年特許化合物０２よりわずかに優れており、化合物０４の活性が２０１３年特許化合物の未分割エナンチオマー０２よりわずかに優れている。
化合物０１、化合物０６の単一のキラルエナンチオマー化合物０１ａ、キラルエナンチオマー化合物０１ｂ、キラルエナンチオマー化合物０６ａを選択して活性対照を行うことにより、単一のキラル異性体０１ａのＨＣＶ  ＧＴ１ｂ複製を阻害する活性が化合物２０１０年特許化合物０６ａよりわずかに優れていることが分かる。
【００７７】
試験例２：安定性研究結果
下記安定性試験方法は従来技術に従って行われ、表に示されるデータは、実験条件下で被験化合物の異なる時間でのインキュベート後の残存率である。
【００７８】
１、模擬胃液安定性（実験濃度：１０μＭ）、表２を参照する。
【００７９】
【表２】
2019514843.tif 000013
【００８０】
２、模擬腸液安定性（実験濃度：１０μＭ）、表３を参照する。
【００８１】
【表３】
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【００８２】
３、ヒト血漿安定性（実験濃度：２μＭ）、表４を参照する。
【００８３】
【表４】
2019514843.tif 000015
【００８４】
４、ヒト肝臓Ｓ９安定性パラメーター（実験濃度：１μＭ）、表５を参照する。
【００８５】
【表５】
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【００８６】
上記（７−Ｅｔｈｏｘｙｃｕｍａｒｉｎ）７−エトキシクマリン、（７−Ｈｙｄｒｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ）７−ヒドロキシクマリン、（Ｐｒｏｐａｎｔｈｅｌｉｎｅ）プロパンテリン、（Ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）クロラムブシル、（Ｏｍｅｐｒａｚｏｌｅ）オメプラゾールなどの関連の対照物の実験データにより、この一連の実験の有効性を検証することができる。
【００８７】
安定性予備研究実験データは、模擬胃液、模擬腸液およびヒト血液での安定性において、化合物０１が２０１３年特許化合物の未分割エナンチオマー０２と２００８年特許化合物０６よりいずれも高いことを示している。ヒト肝臓Ｓ９において、化合物０１と２００８年特許化合物０６の安定性が同等であり、活性親薬物に代謝される速度が同等であり、肝細胞中に同濃度の化合物が同等の活性を有することを示唆している。
【００８８】
総合的に比較すると、化合物０２、化合物０６に比べて、化合物０１がより高い胃腸管および血液系の代謝安定性を有し、これにより、非病巣部分の薬物濃度がより低くなり、病巣部分の薬物濃度がより高くなり、２０１３年特許化合物の未分割エナンチオマー０２、２００８年特許化合物０６に比べて、化合物０１が体内でより良好な肝臓標的性およびより低い器官系の毒性を有することを示唆している。
【００８９】
試験例３：体外心臓毒性の研究
１、実験細胞と化合物の調製
実験は、ＡＶｉｖａＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社から得られたｈＥＲＧカリウムイオンチャネルを安定に発現できるＣＨＯ細胞を用いて、３７℃、５％ＣＯ２、一定湿度の環境で細胞をインキュベートする。
化合物と陽性対照化合物アミトリプチリン（Ａｍｉｔｒｉｐｔｙｌｉｎｅ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ＢＣＢＪ８５９４Ｖ）を１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解してからアイソクラティック希釈し、細胞外液中のＤＭＳＯ最終濃度は０．３０％以下であり、−２０℃に保存して用意する。
【００９０】
２、手動パッチクランプ記録
化合物を、室温でＭｕｌｔｉｃｌａｍｐ  ｐａｔｃｈ−ｃｌａｍｐ  ａｍｐｌｉｆｉｅｒで全細胞パッチクランプ技術を用いて実験し、ＤＩｇｉＤＡｔａ  １４４０Ａ／Ｄ−Ｄ／Ａプレートを用いて出力信号をデジタル化し、Ｐｃｌａｍｐ１０ソフトウェアで記録制御を行う。最小シーリング抵抗を５００ＭＯｈｍｓとし、最小特異ｈＥＲＧ電流を０．４ｎＡとして質量制御を行う。
【００９１】
３、データ分析
Ｃｌａｍｐｆｉｔ（Ｖ１０．２、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）、Ｅｘｃｅｌ  ２００３およびＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５．０とを用いてデータ分析を行う。電流計算式は以下の通りである。
【数３】
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【００９２】
４、実験結果と結論：表６を参照する。
【００９３】
【表６】
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【００９４】
結論：ｈＥＲＧ実験中、化合物０１ａ、化合物０１ｂのＩＣ５０はいずれも１０μＭ以上であり、化合物０６ａのＩＣ５０は１０μＭ以上であり、同じ用量で、化合物０１ａ、化合物０１ｂが、２０１０年特許化合物０６ａより心臓毒性を引き起こす点での安全性がわずかに優れていることを示唆している。
【００９５】
試験例４：ラット体内代謝および組織分布実験
１、実験動物、薬物調製方法および投与スキーム
１８匹のＳＤラット（雄、６〜９週齢、Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｎｔｅｒから購入）をランダムに６組に分け、各組３匹であり、投与前に１２ｈ断食させ、断食期間には自由に給水させ、投与の４時間後に断食を終了する。分析用天秤で５０ｍｇの化合物を精密秤量し、９５％（０．５％ＣＭＣ−Ｎａ）／５％ｓｏｌｕｔｏｌ水溶液を加えて混合し、ボルテックスにより均一に混合して、超音波による処理を行っておく。使用量は５０ｍｇ／ｋｇ、投与濃度は１０ｍｇ／ｍＬ、投与体積は５ｍＬ／ｋｇである。
【００９６】
２、サンプル収集スキームおよび処理方法
サンプル収集スキーム：ラットへの胃内投与の１時間後、２時間後、３時間後、６時間後、１２時間後および２４時間後に、血液および肝臓組織を収集する。
【００９７】
血漿サンプル処理方法：抗凝固剤として３μＬ  ０．５ＭのＫ２ＥＤＴＡを予め加えた遠心分離ＥＰチューブ内にラットの全血を移動させた直後に、８００μＬの予め冷却させた７５％ＭｅＯＨ／２５％ＣＡＮおよび内部標準（Ｖ７５％ＭｅＯＨ／２５％ＡＣＮ：ＶＢｌｏｏｄ＝４：１）を含有するＥＰチューブ中に２００μＬの全血を加えて、タンパク質を沈殿させ、被験物の全血での安定性を確保する。サンプルを２分間ボルテックスにより振動させてから約４℃、１２，０００ｒｐｍの条件下で１５分間遠心分離して、７５％ＭｅＯＨ／２５％Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ抽出物と細胞／タンパク質断片を分離した。サンプルは、−７０℃で保存し、上清液３０μＬを取り、３０μＬの水を加えた後ボルテックスにより混合し且つ４℃で遠心分離してから、上清液５μＬを取りサンプリングしてＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析を行う。
【００９８】
肝臓組織サンプル処理方法：マウス組織サンプルを取りプラスチックＥＰチューブ内に入れ、５倍（ｗ：ｖ）の１．７５ｍＬ  ＭｅＯＨと５μＬ  ５０％ＫＯＨ水溶液と０．７５ｍＬ  ２６８ｍＭ  ＥＤＴＡ溶液からなる溶液を加え、均一に混合してから６０μＬのサンプルを取り、２４０μＬの内部標準液を加えて混合し、ボルテックスにより２ｍｉｎ振動させ、１０ｍｉｎ（１３０００ｒｐｍ、４℃）遠心分離して、３０μＬの上清液を取り、３０μＬの水を加えてボルテックスにより混合し且つ４℃で遠心分離してから、上清液５μＬを取りサンプリングしてＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析を行う。
【００９９】
３、サンプル分析方法
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ−Ｏ（ＡＰＩ  ４０００）液体質量分析計およびクロマトカラム：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １３０Å  １．７μｍ  ２．１×５０ｍｍを用い、内部標準化合物としてＴｏｌｂｕｔａｍｉｄｅを用いて、ＵＰＬＣ−ＭＳサンプリングしてから勾配溶出分析を行い、内部標準、測定すべき化合物および代謝生成物ＴＳＬ１１００の保留時間とピーク面積をそれぞれ記録し、ソフトウェアＰｈｏｅｎｉｘ  ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ６．２．１を用いてＳＲＭ定量的検出法により分析を行う。
【０１００】
４、サンプル分析結果および結論：表７を参照する。
【０１０１】
【表７】
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【０１０２】
表７の結果は、全血においては三リン酸類活性代謝生成物が完全に検出されず、肝臓においては活性代謝生成物が検出されたことを示し、そのＰＫパラメーターは下記表の通りである。その結果、このような化合物が肝臓において有効に濃縮され、活性代謝物に転化され得ることを示しており、その肝臓標的性が確認され、その抗ＨＣＶ活性を示唆した。
【０１０３】
試験例で選択した代表的な化合物により、本発明における新規なウリジン類ホスホラミドプロドラッグ化合物がＣ型肝炎ウイルス感染症を治療する薬物の調製に使用できることが実証された。
【０１０４】
上記において、一般的な説明、具体的な実施形態および試験により本発明を詳しく説明したが、当業者には、本発明を基礎として、種々の修正または改良を行うことができることは明らかである。したがって、本発明の趣旨の基礎から逸脱することなくなされたこれらの修正または改良は、いずれも本発明が保護を求める範囲に属する。
【国際調査報告】
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