(57)【要約】  本発明の一実施形態は、特発性肺線維症の治療のための、ニンテダニブ及びその医薬的に許容される塩、並びにピルフェニドン、及びその医薬的に許容される塩から成る群より選択される化合物であり、治療の開始は、少なくとも2つの連続時点での患者の体試料のCRPM含量の定量によって判定され、かつCRPM濃度の変化率が1カ月当たり1.7ng/mlより大きい、さらに好ましくは1ng/mlより大きい、なおさらに好ましくは0ng/mlより大きい場合に治療が始まる。2019522638.tif 000006【選択図】なし
2019522638.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
特発性肺線維症の治療のための、ニンテダニブ及びその医薬的に許容される塩、並びにピルフェニドン及びその医薬的に許容される塩、から成る群より選択される化合物であって、前記治療の開始が、少なくとも2つの連続時点での患者の体試料、好ましくは血液のCRPM含量の定量によって判定され、かつCRPM濃度の変化率が1カ月当たり1.7ng/mlより大きい場合に前記治療が始まる、前記化合物。
【請求項２】
前記変化率が1カ月当たり1ng/mlより大きい、請求項1に記載の化合物。
【請求項３】
前記変化率が1カ月当たり0ng/mlより大きい、請求項1に記載の化合物。
【請求項４】
ニンテダニブがそのモノエタンスルホン酸塩の形態である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項５】
前記体試料が血清である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項６】
前記体試料が血漿である、請求項1〜5のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項７】
前記変化率が、4〜12週間の時間間隔に基づいて決定される、請求項1〜6のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項８】
前記変化率が、約12週間の時間間隔に基づいて決定される、請求項1〜6のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項９】
前記変化率が、12週間の時間間隔に基づいて決定される、請求項1〜6のいずれか1項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
発明の背景
IPF
特発性肺線維症(IPF)は、肺胞間の組織である肺間質の関与を特徴とする間質性肺疾患(ILD)として知られる200を超える肺疾患の大きな群に属する。
特発性肺線維症(IPF)は、肺容量低下及び進行性肺動脈弁閉鎖不全をもたらす肺間質の進行性線維症を特徴とする未知の病因論の希少疾患である。個々の患者の疾患の経過は異なり：ある患者は急速に進行し、他の患者は、急性増悪で中断された相対的安定性の期間を有し、他の患者は比較的ゆっくり進行する。IPFの急性増悪は、毎年5〜10%の患者に起こる原因不明の呼吸器劣化の事象であり、非常に不良な予後を伴う。IPFは中年及び高齢患者に最もよく見られ、通常は40〜70歳の年齢で症状が見つかる。診断後のIPF患者の平均余命は2〜3年である。2015年に米国胸部学会(American Thoracic Society) (ATS)、欧州呼吸器学会(European Respiratory Society)(ERS)、日本呼吸器学会(Japanese Respiratory Society)(JRS)及びラテンアメリカ胸部学会(Latin American Thoracic Association)(ALAT)によって共同で発行されたIPF治療のための臨床実践ガイドラインへの最新の更新は、個々の患者の有用性及び優先度を考慮して、IPF患者の大多数に適したニンテダニブ又はピルフェニドンによる治療のための条件付き勧告を提供した。n-アセチルシステイン(NAC)、コルチコステロイド、シクロホスファミド、シクロスポリン及びアザチオプリン等の従来のIPF治療薬は、IPFのために認可されない治療薬であり、それらの有効性は疑わしいか又は有害でさえある。一部の患者には肺リハビリテーション及び長期酸素療法等の非薬理学的療法が推奨されるが、それらの有効性はIPF患者では確立されていない。肺移植がIPF患者の生存に良い影響を及ぼすことが分かっている。IPFのために移植した患者の数はここ数年間で着実に増加したが、ドナー臓器の乏しい入手可能性、並びに併存疾患及び高齢のため肺移植への照会から多くの患者が排除される。非臨床モデルにおいて抗線維化活性を示した化合物であるピルフェニドンは、この化合物による治療下で肺活量低下の減少を示した局所治験に基づいて2008年に日本国で最初に認可された。国際第III相CAPACITYプログラムにおいて、ピルフェニドンは、2つの確証的治験の1つのみで主要FVC肺機能エンドポイントについて有効性を示した。FDAが要求した追加の確証的ASCEND第III相治験は、予測されるベースラインFVC%からの変化の主要エンドポイントを満たした。またピルフェニドンは、欧州連合において軽度乃至中等度のIPFの治療のためにも2011年2月以来認可され、米国においてIPFの治療のために2014年10月以来認可されている。ピルフェニドンは、いくつかの他の国々でも認可されている。ニンテダニブは、前臨床モデルで抗線維化及び抗炎症活性を示した小分子細胞内チロシンキナーゼ阻害剤である。2つの同型第III相INPULSIS治験及び第II相TOMORROW治験は、IPF患者においてプラセボに対して1日2回のニンテダニブ150mgの有効性について肯定的な結果を一貫して示した。両INPULSIS治験は、ニンテダニブが、疾患の進行を遅くすることと一致して、FVCの年間減少率(mL/年)を約50%下げることを示した。これらの3つの臨床治験に基づいて、ニンテダニブは、USAでは2014年10月に、欧州連合では2015年1月に、日本国では2015年7月にIPFの治療のために認可された。2017年4月15日現在で、ニンテダニブは、60カ国(カナダ、スイス、ロシア、オーストラリア、中国、エクアドル及び台湾を含めて)においてIPF治療の適用に許可されている。ニンテダニブは、世界中の他の国々での市販許可を求めて��示されている。
【０００２】
ニンテダニブ
ニンテダニブ、すなわち化合物3-Z-[1-(4-(N-((4-メチル-ピペラジン-1-イル)-メチルカルボニル)-N-メチル-アミノ)-アニリノ)-1-フェニル-メチレン]-6-メトキシカルボニル-2-インドリノンは、特に腫瘍学的疾患、免疫疾患又は免疫成分に関わる病的状態、又は線維性疾患の治療に有益な薬理学的特性を有する革新的化合物である。
この化合物の化学構造は、下記式Aで示される。
【０００３】
式A
【化１】
2019522638.tif 000003
【０００４】
この化合物の塩基形態はWO 01/27081に記載され、モノエタンスルホン酸塩形態はWO 2004/013099に記載され、種々のさらなる塩形態はWO 2007/141283に提示されている。免疫疾患又は免疫成分に関わる病的状態の治療のためのこの分子の使用はWO 2004/017948に記載され、腫瘍学的疾患の治療のための使用はWO 2004/096224に記載され、線維性疾患の治療のための使用はWO 2006/067165に記載されている。
この化合物のモノエタンスルホン酸塩形態は、この塩形態を特に薬物としての開発に適したものにする特性を示す。3-Z-[1-(4-(N-((4-メチル-ピペラジン-1-イル)-メチルカルボニル)-N-メチル-アミノ)-アニリノ)-1-フェニル-メチレン]-6-メトキシカルボニル-2-インドリノン-モノエタンスルホン酸塩の化学構造は下記式A1で表される。
【０００５】
式A1
【化２】
2019522638.tif 000004
【０００６】
前臨床研究は、この化合物が血管内皮増殖因子受容体(VEGFR)、血小板由来増殖因子受容体(PDGFR)及び線維芽細胞増殖因子受容体(FGFR)の経口で生物が利用可能な非常に強力な阻害剤であることを示した。また、一連の前臨床研究でニンテダニブによるVEGFR、PDGFR、及びFGFR阻害の抗線維化の可能性が評価された。ニンテダニブは、インビトロでPDGFR-α及びPDGFR-βの活性化並びに正常なヒト肺線維芽細胞の増殖を抑制し、IPF患者及びコントロールドナーからのヒト肺線維芽細胞のPDGF-BB、FGF-2、VEGF誘導増殖を抑制することが示された。ニンテダニブは、IPF患者からの肺線維芽細胞のPDGF又はFGF-2刺激遊走を減弱し、IPF患者からの一次ヒト肺線維芽細胞の筋線維芽細胞への形質転換増殖因子(TGF)-β誘導線維芽細胞の形質転換を抑制した。IPFの2つの異なるマウスモデルにおいて、ニンテダニブは、気管支肺胞洗浄液内のリンパ球数及び好中球数の顕著な減少、炎症性サイトカインの減少並びに肺組織の組織学的解析における炎症及び肉芽腫形成の低減によって示されるように抗炎症効果を発揮した。IPFマウスモデルは、総肺コラーゲンの顕著な減少によって及び組織学的解析で同定された線維症の低減によって示されるようにニンテダニブ関連抗線維化効果をも明らかにした。
【０００７】
薬量学：ニンテダニブの推奨用量は、約12時間おいて投与される1日2回の150mgのニンテダニブである。投与すべきニンテダニブの量は、遊離塩基に基づいて計算されるが、それは実際にはモノエタンスルホン酸塩として処方される。150mgの1日2回用量に耐性がない患者には100mgの1日2回用量のみが推奨される。
用量を逃した場合、次の計画時刻に推奨用量で再開すべきである。
用量を逃した場合、患者は追加用量を取るべきでない。300mgの推奨最大1日用量を超えるべきでない。
用量調整：妥当な場合、対症療法に加えて、ニンテダニブに対する有害反応の管理(EMAのオフェブ(Ofev)(登録商標) EPAR、セクション4.4及び4.8参照)は、治療の継続を許容するレベルに特定の有害反応が消散するまで用量低減及び一時的中断を含むことができる。完全用量(150mgを1日2回)又は低減用量(100mgを1日2回)でニンテダニブ治療を再開してよい。患者が100mgを1日2回に耐えない場合、ニンテダニブによる治療を中止すべきである。＞3×正常上限(ULN)のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)又はアラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)増加に起因する中断の場合、一度トランスアミナーゼをベースライン値に戻し、オフェブによる治療を低減用量(100mgを1日2回)で再導入してよく、その後に完全用量(150mgを1日2回)に増やしてよい(EPARセクション4.4及び4.8参照)。
【０００８】
肝障害：
ニンテダニブは、主に胆汁／糞便排泄を介して(＞90%)除去される。肝障害患者における曝露が増えた(チャイルド・ピュー(Child Pugh)A、チャイルド・ピューB；EPARセクション5.2参照)。軽度肝障害(チャイルド・ピューA)の患者では、オフェブの推奨用量は、100mgを約12時間おいて1日2回である。軽度肝障害(チャイルド・ピューA)の患者では、有害反応の管理のために治療の中断又は中止を考慮すべきである。ニンテダニブの安全性及び有効性は、チャイルド・ピューB及びCとして分類される肝障害の患者では調査されたことがない。中等度(チャイルド・ピューB)及び重度(チャイルド・ピューC)の肝障害の患者のオフェブによる治療は推奨されない(EPARセクション5.2参照)。
【０００９】
ピルフェニドン：
ピルフェニドンは、CAS番号53179-13-8を有する5-メチル-1-フェニル-2(1H)-ピリジノンである。この化合物の化学構造は、下記式Bとして表される。
【００１０】
式B:
【化３】
2019522638.tif 000005
【００１１】
ピルフェニドンは、Esbriet(登録商標)として267mgのピルフェニドンのカプセル剤で市販されている。
Esbrietは、EUにおいて軽度乃至中等度の特発性肺線維症(IPF)を有する成人の治療に使用されている。
成人用の治療計画：
治療を開始したらすぐに、14日の期間にわたって以下のように1日当たり9個のカプセル剤という推奨1日用量に用量設定すべきである：
● 日1〜7：1カプセル剤、1日3回(801mg/日)
● 日8〜14：2カプセル剤、1日3回(1602mg/日)
● 日15以降：3カプセル剤、1日3回(2403mg/日)
IPF患者のEsbrietの推奨1日用量は、食事と共に3個の267mgカプセル剤を1日3回、合計2403mg/日である。2403mg/日を超える用量はいずれの患者にも推奨されない。
連続14日以上Esbriet治療を逃した患者は、推奨1日用量まで最初の2週間の用量設定計画を受けることによって、治療を再開すべきである。連続14日未満の治療中断については、用量設定せずに以前の推奨1日用量で再開することができる。
【００１２】
ニンテダニブ及びピルフェニドンをIPFと診断された患者のケアの 標準物質とみなすことができるが、個々の患者の臨床経過は予測不可能であることを考えると、どちらの薬物で治療をいつ開始し、いつ停止するか、又は言い換えると、利用可能な抗線維化治療の1つからどの患者が最も恩恵を受けるかは不明なままである。IPFの治療アルゴリズムにニンテダニブを導入すれば、早期疾患段階で患者、すなわち、制限された肺容量障害を有する患者におけるニンテダニブのプロファイルをさらに特徴づけ、これらの患者においていつ治療を開始するかという問題に取り組む追加の必要性がある。現在、所与の患者の個々の経過又は治療への応答を予測するためのマーカーがないので、多くの医師がこれらの患者のための戦略を待ち、注視しており、このことは治療開始の遅延をもたらし得る。臨床経過及び疾患の経過の早期に所与の患者の治療利益を予測するためのバイオマーカーを同定することが、患者管理における最も緊急かつ適切な課題の1つのままである。
【発明の概要】
【００１３】
発明の概要
本発明の一実施形態は、特発性肺線維症の治療のための、ニンテダニブ及びその医薬的に許容される塩、並びにピルフェニドン及びその医薬的に許容される塩から成る群より選択される化合物であり、治療の開始は、少なくとも2つの連続時点での患者の体試料のCRPM含量の定量によって判定され、かつCRPM濃度の変化率が1カ月当たり1.7ng/mlより大きい、さらに好ましくは1カ月当たり1ng/mlより大きい、最も好ましくは1カ月当たり0ng/mlより大きい場合に治療が始まる。
本発明の好ましい実施形態では、化合物は、そのモノエタンスルホン酸塩の形態のニンテダニブである。
本発明の好ましい実施形態では、体試料は血漿又は血清である。
特に治療から利益を得る当該IPF患者の疾患はさらに進行することになるので、本発明は彼らの早期同定を可能にする。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
発明の詳細な説明
CRPM定量
CRPMは、マトリックスメタロプロテアーゼ1/8(MMP-1/8)によって分解されるC反応性タンパク質を意味し、これはPROFILE研究で評価された。この研究では、将来を見越してベースライン、1カ月、3カ月、及び6カ月で血清試料を収集し、新規マトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)分解ECMタンパク質のパネルについてELISAに基づくネオエピトープアッセイにより分析した。11種のネオエピトープを55名の患者の発見コホート内で試験して、さらに詳細な分析に十分な厳密さのバイオマーカーを同定した。次に134名の患者の検証コホート内で50名の同年齢かつ同性コントロールと共に8種のネオエピトープをさらに評価した。反復測定モデルを用いてバイオマーカー濃度の変化を特発性肺線維症の進行の続発リスク(研究登録後12か月における死亡又は＞10%の強制肺活量低下として定義される)と関連付けた。PROFILE研究は、ClinicalTrials.gov、番号NCT01134822及びNCT01110694に登録されている。Jenkins et al., Lancet Respir Med (2015)、http://dx.doi.org/10.1016/S2213-2600(15)00048-X、1〜11ページを参照されたい。この研究は、CRPMについて、1か月当たり0ng/mlより大きい変化率(勾配)は2.16(95%CI 1.15〜4.07)のHRを与えたが、1カ月当たり1ng/mlより大きい変化率はHR 4.08(2.14〜7.8)を与え、1カ月当たり1.7ng/mlより大きい変化率はHR 6.61 (95%CI 2.74〜15.94)を伴うことを明らかにした。ハザード比は、ネオエピトープ濃度が安定しているか又は下がっている参加者に対する、ネオエピトープ濃度が上昇している参加者の死亡リスクを表す(JENKINSらの7ページ、2欄、第3パラグラフ参照)。
【００１５】
C反応性タンパク質(CRP)は、ヒトの原型急性期反応物質と考えられ、感染症、炎症及び組織損傷を含めた種々の臨床状態に応答して産生される。急性期刺激中、CRPの血清濃度は、24〜48時間以内で1000〜10.000倍上昇に接近し、急速と同程度に数μg/mLの低い正常濃度に下がる。CRPは、炎症性疾患の急性及び慢性の両状況で上方制御されるが、全ての炎症性疾患においてヒトの原型急性期反応物質が上方制御されるため非特異的生化学マーカーであり、感染症、炎症及び組織損傷を含めた種々の臨床状態に応答して産生される(Volanakis, Mol Immunol 2001; 38: 189-97 - DU CLOS, Ann Med 2000; 32: 274-8 - Hirschfield, Pepys,  QJM 2003; 96:793-807)。
【００１６】
血清試料中のCRPMの定量は、Skjot-Arkil et al., Clinical and Experimental Rheumatology 2012; 30: 371-379、特に373-375に開示されている手順に従う。
“CRPのインビトロ切断”
ヒト血清から精製されたCRP (Alpha Diagnostics)をMMP-1、MMP-9、カテプシンK、カテプシンS (Calbiochem, VWR)、MMP-3、MMP-8 (Abcam)、トロンボスポンジンモチーフを有するディスインテグリン・メタロプロテイナーゼ(A Disintegrin And Metalloproteinase with a Thrombospondin motif)(ADAMTS)-1、及びADAMTS-8 (Abnova)で切断した。製造業者の説明書に従ってプロテアーゼを活性化した。各切断は、200μgのCRP及び2μgの活性化酵素をMMP緩衝液(100mMトリス-HCl、100mM NaCl、10mM CaCl2、2mM ZnOAc、pH=8.0)、カテプシン緩衝液(50mM NaOAc、20mM L-システイン、pH=5.5)又はアグリカナーゼ緩衝液(50mMトリス-HCl、10mM NaCl、10mM CaCl2、pH=7.5)中で混合することによって別々に行った。コントロールとして200μgのCRPをMMP緩衝液のみと混合した。各アリコートを37℃で3日間インキュベートした。全てのMMP切断は、GM6001 (Sigma-Aldrich)を用いて終わらせ、全てのカテプシン及びアグリカナーゼ切断はE64 (Sigma-Aldrich)を用いて終わらせた。最後にSilverXpress(登録商標)銀染色キット(Invitrogen)を用い、製造業者の説明書に従って可視化することによって切断を検証した。
【００１７】
MSによるペプチド同定
文献に記載されているようにナノLC-MS-MS分析前に逆相(RP)マイクロカラム(Applied Biosystems)を用いて切断産物を精製及び脱塩した(THINGHOLM & LARSEN: Methods Mol Biol 2009; 527: 57-66, xi.28参照)。精製ペプチドを100%ギ酸に再懸濁させ、H2Oで希釈し、ナノEasy-LCシステム(Proxeon, Thermo Scientific)を用いて18cmのRPキャピラリーカラム上に直接装填した。100%の相A(0.1%のギ酸)から35%の相B(0.1%のギ酸、95%のアセトニトリル)のグラジエントを用いて43分かけてペプチドをLTQ-Orbitrap XL質量質量分析計(Thermo Scientific)中に直接溶出した。
各MSスキャン(Orbitrap、60000の分解能、300〜1800Daの範囲)について5種の最も大量に存在する前駆イオンをフラグメンテーション(CID)のために選択した。生データファイルをmgfファイルに変換し、Mascot 2.2でProteome Discoverer (Thermo Scientific)を用いて検索した。
マスコット確率スコアp＜0.05を有するペプチドをさらに分析した。
【００１８】
免疫化用ペプチドの選択
MSで同定された配列の各自由端の最初の6個のアミノ酸を、問題になっているプロテアーゼによって生成されたネオエピトープとみなした。全てのプロテアーゼ生成配列を相同性及び他の切断部位への距離について分析してから、NPS@：ネットワークタンパク質配列解析(Combet, Blanchet, Geourjon, Deleage, Trends Biochem Sci 2000;25: 147-50)を用いて相同性についてBLAST検索した(blasted)。
免疫化手順
フロイント不完全アジュバント(KAFVFPKESD-GGC-KLH及びGNFEGSQSLV-GGC-OVA (Chinese Peptide Company, Beijing, China))を用いて200μLの乳化抗原(免疫化毎に50μg)で6匹の4〜6週齢のBalb/Cマウスを腹部内皮下免疫化した。安定なタイターレベルが得れるまで免疫化を続けた。最高タイターを有するマウスを融合のために選択し、100μLの0.9%塩化ナトリウム溶液中50μgの免疫原で静脈内追加免疫し、3日後に細胞融合のために分離した。融合手順は以前に記載されている(Gefter, Margulies, Scharff, Somatic Cell Genet 1977; 3: 231-6)。
【００１９】
クローンの特徴づけ
それぞれCRP-MMP及びCRPCATと呼ばれる有望な配列KAFVFP及びGNFEGSを抗体産生のために選択した。ストレプトアビジン被覆マイクロタイタープレート上でビオチン化ペプチド(KAFVFPKESD-K-Biotin又はGNFEGSQSLV-K-Biotin)を用いる予備的間接的ELISAにおけるヒト血清の置換及び成長するモノクロナールハイブルドーマによって、モノクロナール抗体の自然な反応性及びペプチド結合を評価した。遊離ペプチド(KAFVFPKESD又はGNFEGSQSLV)、ナンセンスペプチド、及び伸長ペプチド(RKAFVFPKESD又はGGNFEGSQSLV)に対するクローンの特異性を試験した。Clonotyping System-HRPキット(Southern Biotech)を用いてモノクロナール抗体のアイソタイピングを行なった。選ばれたクローンを、プロテインGカラムを用いて製造業者の説明書に従って精製した(GE Healthcare Life Science)。
【００２０】
アッセイプロトコル
選ばれたモノクロナール抗体を、Lightning link HRP標識キットを用い、製造業者(Innovabioscience)の説明書に従って西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)で標識した。96ウェルストレプトアビジンプレートを、アッセイ緩衝液(25mMトリス、1% BSA、0.1%ツイーン20、pH 7.4)に溶かした1.25ng/mLのKAFVFPKESD-K-Biotin (CRP-MMPアッセイ)又は0.40ng/mLのGNFEGSQSLVK-Biotin (CRP-CATアッセイ)で被覆し、20℃で30分間インキュベートした。20μLの遊離ペプチドキャリブレーター又は試料を二度繰り返して適切なウェルに添加した後に100μLの複合モノクロナール抗体(1A7-HRP又は3H8-HRP)を加えて20℃で1時間インキュベートした。最後に、100μLのテトラメチルベンジニジン(tetramethylbenzinidine)(TMB) (Kem-En-Tec)を添加し、暗所でプレートを20℃で15分間インキュベートした。全ての上記インキュベーション工程は300rpmでの振盪を伴った。各インキュベーション工程後にプレートを洗浄緩衝液(20mMトリス、50mM NaCl、pH 7.2)で5回洗浄した。100μLの停止溶液(1%HCl)を加えてTMB反応を終わらせ、基準として650nmを用いて450nmで測定した。アミノ酸解析によって正確に定量された合成遊離ペプチドから調製されたマスターキャリブレーターを較正曲線として使用し、4パラメトリック数学的フィットモデルを用いてプロットした。
【００２１】
技術的評価及び特異性
2倍希釈の品質管理(QC)血清試料から、100%試料の回収の百分率として直線性を計算した。検出の下限を21のゼロ試料(すなわち緩衝液)から決定し、平均＋3×標準偏差として計算した。8つのQC試料の12の独立ランによってアッセイ間及びアッセイ内の変動を決定した。各ランは、二重定量の2回の繰り返しから成った。
1〜10回凍結及び解凍した3つの試料について血清試料の安定性を測定した。構築されたCRP-MMP及びCRPCAT ELISAを“インビトロ切断”の下に記載した材料を用いて評価した。CRPを様々なMMP、カテプシン及びアグリカナーゼで切断した。ELISAにおいてはこれらの材料を1:10に希釈した。
【００２２】
患者内の総CRPに対するCRP-MMP、CRP-CAT
ASと診断された患者由来の血清内でCRP-MMP、CRP-CAT及び全長ヒトCRP (Quantikine, R&D System)を評価し、エアランゲン・ニュルンベルク大学の医学部第3科からの健康な6名の同性かつ同年齢のコントロールと比較した。
改訂ニューヨーク基準に従って強直性脊椎炎(AS)と診断された患者及び同性かつ同年齢の非疾患コントロールから血清試料を回収した。各AS患者についてBASDAI及びmSASSSを登録した。
CRP-MMPアッセイ及びCRP-CATアッセイでは試料を1:4希釈した。本研究は、エアランゲン・ニュルンベルク大学の倫理委員会により認可され、ヘルシンキ宣言の中で概説されている原則に従った。各人から書面によるインフォームドコンセントを得た。
【００２３】
統計学
AS患者と非疾患コントロールとの間の個々のバイオマーカーの血清レベルを両側ノンパラメトリックウィルコクソン順位和検定を用いて比較した。バイオマーカー間の関係はノンパラメトリックスピアマン検定により調査した。受信者動作特性(ROC)を用いて曲線下面積を測定した。バイオマーカーをオッズ比で調べ(秤量レベルから外挿した：集団内の最低値を0に設定し、最高値を1に設定した)、全ての対象をバイオマーカーの正常レベルを有する(正常集団の平均のSD内)か又は高い(＞SD)レベルを有すると分類した。p＜0.05であれば結果を統計的に有意であるとみなした。
CRPM(MMP分解CRP-1/8)の定量化の上限及び下限は、それぞれ3.2及び110.0ng/mlであり、アッセイ内／アッセイ間の可変性は≦11.1%及び≦20.8%である(Jenkins et al., Supplementary Table and Figure Legends)。
【実施例】
【００２４】
実施例：
A)IPF及び制限されたFVC障害を有する患者におけるECM代謝回転のバイオマーカーに及ぼすニンテダニブの効果
12週間の二重盲検ランダム化プラセボ対照並行群間試験後に、特発性肺線維症(IPF)及び制限された強制肺活量(FVC)障害を有する患者における細胞外マトリックス(ECM)代謝回転のバイオマーカーの変化に及ぼす1日2回の経口ニンテダニブ150mgの効果を評価し、疾患進行中の当該ECMバイオマーカーの変化の予測値を調査する40週間の単活性治療群相(single active arm phase)試験を行なった。
主選択基準：来診1での≧40歳の女性及び男性患者(スクリーニング)；来診0の3年以内のATS/ERS/JRS/ALAT 2011ガイドラインに基づくIPF診断；来診0の18カ月以内に行なったHRCT；ランダム化前の胸部HRCT及び外科的肺生検(可能な場合は後で)の中央判定による診断の確認；来診1での正常の≧80%予測FVC(スクリーニング)。
【００２５】
薬量学：有害事象(AE)を管理するために総1日用量を200mg(100mgを1日2回)に減らす可能性がある1日300mg(150mgを1日2回)。
主要エンドポイント：ベースラインから12週までの血中CRPMの変化率(勾配)。
重要な副次エンドポイント：52週までの絶対FVC(予測%)低下≧10%又は死亡によって定義される疾患の進行を伴う患者の比率。
副次エンドポイント：ベースラインから12週までの血中C1Mの変化率(勾配)；
ベースラインから12週への血中C3Mの変化率(勾配)。
さらなるエンドポイント(選ばれた)：12週から52週までの血中CRPM、C1M及びC3Mの変化率(勾配)。
【００２６】
安全性基準：有害事象(特にSAE及び他の顕著なAE)、身体検査、体重測定、12誘導心電図、生命徴候及び実験室評価。
統計法：連続エンドポイントのためのランダム系数回帰モデル、ログランク検定、事象までの時間(time to event)型エンドポイントについてのカプラン・マイヤープロット及びコックス(Cox)回帰、ロジスティック回帰モデル又は二値エンドポイントのための他の適切な方法。
【配列表】
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【国際調査報告】
2019522638.tif 000007
2019522638.tif 000008
2019522638.tif 000009