(57)【要約】本発明はＤＭＳＯを含む単一のペースト型水硬性根管充填材のための組成物に関する。本発明の一態様によると、ケイ酸カルシウム成分、およびＤＭＳＯを含む単一のペースト型水硬性根管充填材組成物が提供される。
2019535739.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ケイ酸カルシウム成分、および
ＤＭＳＯを含む、単一のペースト型水硬性根管充填材組成物。
【請求項２】
ポゾラン物質をさらに含む、請求項１に記載の単一のペースト型水硬性根管充填材組成物。
【請求項３】
前記ポゾラン物質はヒュームドシリカ、沈降シリカおよびコロイダルシリカのうち少なくとも一つである、請求項２に記載の単一のペースト型水硬性根管充填材組成物。
【請求項４】
メタカオリン、硅藻土および膨潤性粘土のうち少なくとも一つをさらに含む、請求項１に記載の単一のペースト型水硬性根管充填材組成物。
【請求項５】
前記膨潤性粘土はベントナイト、ヘクトライトおよび合成膨潤性粘土のうち少なくとも一つを含む、請求項４に記載の単一のペースト型水硬性根管充填材組成物。
【請求項６】
前記ＤＭＳＯは前記単一のペースト型水硬性根管充填材組成物の液体成分の重量の７０％以上を占める、請求項１に記載の単一のペースト型水硬性根管充填材組成物。
【請求項７】
水、エタノール、ポリエチレングリコールおよびＤＥＧＥＥで構成された群から選択された少なくとも一つを前記液体成分の重量の３０％以下で含む、請求項６に記載の単一のペースト型水硬性根管充填材組成物。
【請求項８】
放射線不透過性物質をさらに含み、
前記放射線不透過性物質は、バリウムチタネート、ビスマスチタネート、バリウムジルコネート、ジルコニウムオキサイド、カルシウムタングステート、タンタルオキサイドおよびこれらのうち二以上の混合物から選択される、請求項１に記載の単一のペースト型水硬性根管充填材組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はジメチルスルホキシド（ＤｉＭｅｔｈｙｌ  ＳｕｌｆＯｘｉｄｅ；ＤＭＳＯ）を含む単一のペースト型水硬性根管充填材のための組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に医療用セメント組成物は、神経、血管、細胞組織などが除去された空間に充填される物質として多様な分野で使われている。特に、歯科分野において、歯内部の神経、血管、その他細胞組織などを除去した後、その空間に材料を充填し密封して歯の機能を維持させる根管（神経）治療（ｅｎｄｏｄｏｎｔｉｃ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）をする場合における医療用セメント組成物の使用は必須である。
【０００３】
医療用セメント組成物の一つであるＭＴＡ（Ｍｉｎｅｒａｌ  Ｔｒｉｏｘｉｄｅ  Ａｇｇｒｅｇａｔｅ）は根管の治療時に広範囲に使われる物質であって、主に歯根の穿孔の修復、歯髄切断術、部分歯髄切断術、歯髄覆髄（ｐｕｌｐ  ｃａｐｐｉｎｇ）、根管充填（ｒｏｏｔ  ｃａｎａｌ  ｆｉｌｌｉｎｇ）、歯根端逆充填（ｒｏｏｔ−ｅｎｄ  ｒｅｔｒｏｆｉｌｌｉｎｇ）等に使われる。ＭＴＡは密閉性および生体親和性が優秀であり、生活歯の歯髄治療に主に使用される水酸化カルシウムより第三象牙質の形成や炎症細胞の浸潤の側面では優位にあると言える。
【０００４】
ＭＴＡはカルシウムシリケート（ｃａｌｃｉｕｍ  ｓｉｌｉｃａｔｅ）、カルシウムアルミネート（ｃａｌｃｉｕｍ  ａｌｕｍｉｎａｔｅ）および石膏を主成分として含む。体液、唾液、その他液体などが存在する環境において、前記のようなカルシウムシリケートが水と反応してカルシウムシリケート水和物（Ｃａｌｃｉｕｍ  Ｓｉｌｉｃａｔｅ  Ｈｙｄｒａｔｅ；Ｃ−Ｓ−Ｈ）と水酸化カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ  ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ）を生成することになる。ここで、一般的にＭＴＡの水和反応によって生成される生成物の７５％はカルシウムシリケート水和物（Ｃ−Ｓ−Ｈ）であり、残りの２５％程度が水酸化カルシウムであると推定される。カルシウムシリケートの水和反応は非常に長時間を要するため、カルシウムアルミネートを添加して硬化時間を調節する。カルシウムアルミネートは水和の初期にエトリンガイトを形成して初期強度を発生させるが、この時、過度に早い水和反応によって操作性が悪くなる可能性があるため、カルシウムアルミネートに対する重量比で４０〜１００％程度の石膏をさらに混合する。石膏は二水石膏よりは無水石膏や半水石膏が使われ、半水石膏の中ではベータ型よりアルファ型が体積安定性の面で好まれ、無水石膏は多様な種類があるが特に２型無水石膏が好まれる。
【０００５】
ＭＴＡは水と反応して硬化しながら周辺の硬組織に接着するため、従来に使われていたアマルガム、ＩＲＭ、Ｓｕｐｅｒ  ＥＢＡなどより密閉性は優秀であるが、硬化時間が長い上、操作性が悪く、変色が発生するなどの問題点が存在する。また、ＭＴＡは水和過程で周辺の状況に大きく影響され、炎症が存在するか出血が酷い場合、固まらずに洗い落とされる問題がある。悪い操作性はＭＴＡを使う使用者（歯医者）の立場では最も大きな壁であり、特に狭くて深い根管内に粉末型ＭＴＡを液体と混合して適用することは多くの時間と努力そして試行錯誤が要される。
【０００６】
最近ＮＭＰ（Ｎ−Ｍｅｔｈｙｌ−２−Ｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ）とケイ酸カルシウムセメントの混合物を含めて、単一のペースト型で提供されるＭＴＡシーラー（ｓｅａｌｅｒ）が市中に普及するにつれて、使用の便利性、強力な密閉性、施術の安全性などが多くの実験で検証されたし、その結果、相当な脚光を浴びている。ここで、ＮＭＰはケイ酸カルシウムと混錬された状態で提供され、人体内で硬化するものであり得る。ＮＭＰは長い検証期間を経て人体に使って安全なものと医学的に認められる液体ではあるものの、人体に毒性がないため幹細胞の分化に影響を与えない程度の安全性が要求される再生根管治療（ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ｅｎｄｏｄｏｎｔｉｃ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）の目的で使うには少々物足りない。
【０００７】
ＮＭＰのように、極性溶媒でありながら水と粘性が類似するため容易に置換され、人体に長い間使われてきており、安全性と有効性が検証されたものとして、ＤＭＳＯ（ＤｉＭｅｔｈｙｌ  ＳｕｌｆＯｘｉｄｅ）がある。食餌性硫黄は常温で固体で存在すればＭＳＮ（ＤＭＳＯ２）と呼び、液相で存在すればＤＭＳＯと呼ぶ。ＤＭＳＯは抗炎症薬理作用のため、リウマチ関節炎、強直性脊椎炎、湿疹、にきび、膿疱性皮膚疾患、歯周炎、歯髄炎などに主に使用される。他の物質の侵透性を高める性質のため、薬品運搬体として機能性化粧品などにもよく使われる。また、ＤＭＳＯは癌細胞などに変性した細胞の分化を誘導する能力と細胞の成長を抑制する能力があるものとして知られており、ＤＭＳＯの化学構造式を活用した多様な誘導体である、ＨＭＢＡ、ＳＢＨＡ、ＳＡＨＡ、ＴＳＡなどのようなヒストン脱アセチル化酵素（ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ）抑制剤が開発された。これらの誘導体は多様な癌を治療するための抗癌剤として使われている。この他にも、前記のようなＤＭＳＯは溶解力と細胞組織への侵透性に優れており、細胞を凍解から保存する能力が優れている。このような性質のため、細胞凍結保存だけでなく現在の不治の病を未来に治癒するための手段である「冷凍人間の保存」にも広く使われている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は前述した従来技術の問題点を解決することをその目的とする。
【０００９】
本発明は生体親和性が優秀であり、人体内で毒性反応を起こさないためさらに安全な根管充填材を提供することを他の目的とする。
【００１０】
本発明は、混錬状態で提供され、周辺の水を吸収して硬化しながら根管や歯の穿孔部位を三次元的に密閉させる単一のペースト型水硬性根管充填材を提供することをさらに他の目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
前記目的を達成するための本発明の代表的な構成は下記の通りである。
【００１２】
本発明の一態様によると、ケイ酸カルシウム成分、およびＤＭＳＯを含む単一のペースト型水硬性根管充填材組成物が提供される。
【００１３】
この他にも、本発明を実現するための他の根管充填材がさらに提供される。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によると、生体親和性が優秀であり、人体内で毒性反応を起こさないためさらに安全な根管充填材が提供される。
【００１５】
本発明によると、混錬状態で提供され、周辺の水を吸収して硬化しながら根管や歯の穿孔部位を三次元的に密閉させる単一のペースト型水硬性根管充填材が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】本発明の一実施例に係る細胞毒性試験のグラフ。
【図２】本発明の一実施例に係る細胞毒性試験のグラフ。
【図３】本発明の一実施例に係るｐＨ変化実験グラフ。
【図４】本発明の一製造例の試料と前記製造例でベントナイトを９００℃で熱処理した試料がそれぞれバイオフィルムを有するＥ．ｆａｅｃａｌｉｓに対して適用された状況を示すグラフ。
【図５】前記のような試料がそれぞれバイオフィルムを有するＰ．ｅｎｄｏｄｏｎｔａｌｉｓに対して適用された状況を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
後述する本発明についての詳細な説明は、本発明が実施され得る特定の実施例を例示として図示する添付図面を参照する。このような実施例は当業者が本発明を実施できる程度に充分かつ詳細に説明される。本発明の多様な実施例は互いに異なるものの、相互に排他的である必要はないことが理解されるべきである。例えば、本明細書に記載されている特定の形状、構造、成分および特性は、本発明の精神と範囲を逸脱することなく一実施例から他の実施例に変更されて具現され得る。また、それぞれの実施例内の個別の構成要素の位置や配置、または個別の構成要素間の混合、反応などに関する環境や順序も本発明の精神と範囲を逸脱することなく変更され得ることが理解されるべきである。したがって、後述する詳細な説明は限定的な意味として行われるものではなく、本発明の範囲は特許請求の範囲の請求項が請求する範囲およびそれと均等なすべての範囲を包括するものとして理解されるべきである。図面で類似する参照符号は多様な側面に亘って同一または類似する構成要素を示す。
【００１８】
以下、本発明が属する技術分野で通常の知識を有する者が本発明を容易に実施できるようにするために、本発明の多様な好ましい実施例に関して添付された図面を参照して詳細に説明する。
［本発明の好ましい実施例］
【００１９】
本発明の実施例に係る単一のペースト型水硬性根管充填材の組成は次の通りであり得る。これは粉末成分と液体成分とに大別されて説明され得る。
【００２０】
（１）粉末成分
【００２１】
粉末成分は水和反応をするケイ酸カルシウム成分を含むことができる。このようなケイ酸カルシウム成分の種類として３ケイ酸カルシウムと２ケイ酸カルシウムが存在し得る。特に、３ケイ酸カルシウムは三斜晶系の三種類、すなわちＴ１、Ｔ２およびＴ３であるか、単斜晶系の三種類、すなわちＭ１、Ｍ２およびＭ３であるか、菱面体晶系であり得、この中から自由に選択され得る。好ましくは、非中心対称構造であるＭ３またはＲ−ｐｈａｓｅ構造のものが選択され得る。２ケイ酸カルシウムも非中心対称構造であるβ−Ｃ２Ｓであることが好ましい。非中心対称構造を有するケイ酸カルシウム化合物が選択される最も大きな理由は、水との反応性がよく、水和後に残る未反応ケイ酸カルシウム化合物の生体安全性が優秀であるためである。
【００２２】
前記のようなケイ酸カルシウム成分の水和により生成される水酸化カルシウムは根管内で初期には有効で安全であるが、過度に長く存在すると歯質を形成するコラーゲンと反応して歯質を弱化させ得る。そのため、水酸化カルシウムを消耗させるポゾラン物質をさらに含むことが好ましい。このようなポゾラン物質としてはヒュームドシリカ、沈降シリカ、コロイダルシリカなどの非晶質シリカが選択され得、この他にもメタカオリン、硅藻土、膨潤性粘土（例えば、膨潤性フィロシリケート）等が適切に使われ得る。特に、膨潤性フィロシリケートはペーストを注入するのに適切な粘性を提供し、硬化過程で根管充填材に適合した膨張率を提供する長所がある。ベントナイト、ヘクトライト、合成膨潤性粘土などが膨潤性フィロシリケートの適切な例であり、抗菌性の優秀なベントナイトが最も好ましい。ベントナイトは７００℃以上で熱処理すればポゾラン反応性までできる長所があり、この時にも抗菌性が維持されるものとして知られている。しかし、熱処理をすることになると膨潤性がなくなるため、適切な膨張のためにはポゾラン反応性がないベントナイトが適合な場合もある。
【００２３】
また、粉末成分として放射線不透過性物質がさらに含まれ得る。放射線不透過性物質は使用者が注入した充填材が所望の位置まで十分に伝達されたか確認できるように助けてくれるため、放射線不透過性が優秀であるように国際基準（ＩＳＯ  １３４８５）よりもう少し多い量を添加することが好ましい。例えば、ビスマスチタネート、バリウムチタネート、バリウムジルコネート、ジルコニウムオキサイド、タンタルオキサイド、カルシウムタングステートなどのように、人体内で安全かつ毒性がなく、浸出（ｌｅａｃｈｉｎｇ）が少ない粉末が好ましい。ビスマスオキサイドのように、歯質を変色させよく浸出する成分は除くことが好ましい。この中でも特にバリウムチタネートやジルコニウムオキサイドの粉末が最も好ましい。
【００２４】
また、適切な、増粘剤が追加され得る。好ましい増粘剤成分としては、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースなどのセルロース誘導体とキチン、キトサン誘導体、ベントナイト、ヘクトライト、糖アルコールなどから選択された少なくとも一つが含まれ得る。増粘剤はＤＭＳＯに溶けたり分散しながら粘性を付与できる成分のうち、硬化を妨害せず人体への使用に適合なものであればいずれでもよい。
【００２５】
（２）液体成分
【００２６】
液体成分はＤＭＳＯを含むことができる。ＤＭＳＯは常温で固体で存在するが、これは通常的な使用に不快感を与え得る。したがって、さらに極少量の水、エタノール、モノエチレングリコールおよびＤＥＧＥＥ（ＤｉＥｔｈｙｌｅｎｅ  Ｇｌｙｃｏｌ  ｍｏｎｏＥｔｈｙｌ  Ｅｔｈｅｒ）のうち一つまたは二以上の組み合わせを添加して氷点を低くすることが好ましい。しかし、いずれの場合でも前記のような添加液体の重量比は全体の液体成分の重量の３０％以下であることが好ましい。すなわち、ＤＭＳＯは重量比を基準として液体成分の少なくとも７０％以上を占めることが好ましい。これより含量が低いと経皮吸収に影響を与え得、抗炎症効果と鎮痛効果が低下し得る。
【００２７】
以下では、本発明の多様な実施例に対して遂行された実験と評価について説明する。
【００２８】
（１）細胞毒性評価
図１は、本発明の一実施例に係る細胞毒性試験のグラフである。図１を参照して詳察することにする。
【００２９】
Ａ：ＮＭＰ、Ｂ：ＤＭＳＯ、Ｃ：ＤＥＧＥＥ、Ｄ：ＤＭＳＯ  ８０％＋  ＤＥＧＥＥ  ２０％
【００３０】
前記のような４種類の溶媒に対して細胞毒性を次のような方法で測定した。
【００３１】
（ｉ）試片を厚さ２ｍｍおよび直径１０ｍｍの大きさでモールドに入れて３７℃のインキュベーターで３日間硬化させる。（ｉｉ）硬化した試片にｍｌ当たり０．５ｃｍ２の表面積／培地の割合で培地を埋めて３７℃で３日間インキュベーションして材料抽出物を導き出す。（ｉｉｉ）ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞を２４−ウェル培養皿にウェルごとに１．５×１０４個ずつシーディングして２４時間の間インキュベーションをした後、培地を吸入（ｓｕｃｔｉｏｎ）して捨て、材料抽出物を１ｍｌずつ入れて３重にセッティングする。（ｉｖ）それぞれ２４時間、４８時間および７２時間の間インキュベーションをした後に培地を捨て、０．０５％のＭＴＴ溶液を２００μｌずつ処理し、アルミホイルで包んで３７℃のインキュベーターで２時間の間反応させる。（ｖ）反応後ＤＭＳＯ  ２００μｌを添加してから反応液を９６−ウェル皿に２００μｌずつ移して５９０ｎｍで吸光度を測定する。
【００３２】
前記実験の結果は下記および図１の通りであった。（ｉ）ＤＭＳＯ、ＤＥＧＥＥ、そしてＤＭＳＯおよびＤＥＧＥＥの混合物を溶媒として使う群が、すべての実験とすべての時期においてＮＭＰを溶媒として使う群と比べて統計的に有意義な高い細胞生存率を示した（ｐ＜０．０５）。（ｉｉ）ＤＭＳＯを溶媒として使う群が、４８時間および７２時間の場合に、ＤＥＧＥＥそしてＤＭＳＯおよびＤＥＧＥＥの混合物を溶媒として使う群と比べて有意義な高い細胞生存率を示した（ｐ＜０．０５）。（ｉｉｉ）ＤＭＳＯおよびＤＥＧＥＥの混合物を溶媒として使う群は４８時間および７２時間の場合に、他の群と比べて有意義な低い細胞生存率を示した（ｐ＜０．０５）。
【００３３】
（２）本発明の実施例に係るペースト
【００３４】
製造例
本発明の一実施例により、ジルコニウムオキサイド、３ケイ酸カルシウム、ベントナイト、ヒュームドシリカおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースをＤＭＳＯと混合してペーストを作った。以上の成分を順に４５：２１：１：０．６：０．６：３１．８の重量比で混合した。
【００３５】
細胞毒性
図２は、本発明の一実施例に係る細胞毒性試験のグラフである。図２を参照して詳察することにする。
【００３６】
ＥＣ：水と混合した既存のｅｎｄｏｃｅｍ  ＭＴＡ製品、ＯＥＳ：ＮＭＰを溶媒として使った既存の単一のペースト型水硬性根管充填材ｅｎｄｏｓｅａｌ  ＭＴＡ製品、ＷＥＳ：ＤＭＳＯを溶媒として使った本実施例により製造されたペースト、ＡＨ＋：市中で市販中のレジン系（ＭＴＡではない）シーラーであるＡＨ  ｐｌｕｓ製品
【００３７】
前記のような４種類の製品／組成物に関して細胞毒性を次のような方法で評価した。
【００３８】
（ｉ）試片を厚さ２ｍｍおよび直径１０ｍｍの大きさでモールドに入れて３７℃のインキュベーターで３日間硬化させる。（ｉｉ）硬化した試片にｍｌ当たり０．５ｃｍ２の表面積／培地の割合で培地を埋めて３７℃で３日間インキュベーションして材料抽出物を導き出す。（ｉｉｉ）ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞を２４−ウェル培養皿にウェルごとに１．５×１０４個ずつシーディングして２４時間の間インキュベーションをした後、培地を吸入して捨て、材料抽出物を１ｍｌずつ入れて３重にセッティングする。（ｉｖ）それぞれ２４時間、４８時間および７２時間の間インキュベーションをした後に培地を捨て、０．０５％のＭＴＴ溶液を２００ｕｌずつ処理し、アルミホイルで包んで３７℃のインキュベーターで２時間の間反応させる。（ｖ）反応後ＤＭＳＯ  ２００μｌを添加してから反応液を９６−ウェル皿に２００μｌずつ移して５９０ｎｍで吸光度を測定する。
【００３９】
図３に図示された通り、ＷＥＳは１日目と２日目に対照群と類似する細胞生存率を示したし、３日目には対照群と比べてより高い細胞生存率を示した（ｐ＜０．０５）。また、ＯＥＳと比べて高い細胞生存率を示したし（ｐ＞０．０５）、ＥＣとは類似する細胞生存率を示した（ｐ＜０．０５）。ＯＥＳはＮＭＰを溶媒として使うがＷＥＳはＤＭＳＯを使うため、低い細胞毒性を示したものと考えられる。図２は、結果としてＷＥＳが既存の製品と比べて優秀な生体適合性を示すことを後押しする。
【００４０】
ｐＨ変化
本実施例により製造されたペーストのｐＨ変化を観察した。ＷＥＳを実験群とし、レジン系物質であるＡＨ  ｐｌｕｓを対照群とした。各材料を１ｍｍの厚さおよび５ｍｍの直径を有するモールドに注入した後に硬化させた。その後、１０ｍｌの蒸溜水に硬化した材料を入れてｐｈメーターを利用して１時間から７日までｐＨを測定した。前記実験の結果については、図３の本発明の一実施例に係るｐＨ変化実験グラフを参照することができる。ＷＥＳは実験期間の間ずっと１０以上のｐＨを維持したがＡＨ  ｐｌｕｓは中性に該当するｐＨを示した。これはヒュームドシリカが強塩基性の水酸化カルシウムを消耗したためと考えられる。
【００４１】
溶解度
根管充填材はできるだけ根管内で組織液などによって溶解しないことが好ましい。溶解度が高いと溶解した空間で細菌が増殖して再感染となり得るためである。すなわち、溶解度が低いほど密閉性が優秀となる。
【００４２】
本実施例により製造されたペーストを１．５ｍｍの厚さおよび２０ｍｍの直径を有するモールドに注入した後に硬化させ、各試片の重さを測定してこれをＷ１と設定した。各試片を１０ｍｌの蒸溜水に漬け、その後７日目に取り出して再び重さを測定してこの重さをＷ２と設定した。溶解度を溶解度（ｓ）＝（Ｗ１−Ｗ２）／Ｗ１×１００の公式を利用して算出した。その結果、１．１９±０．１１％の相当に良好な溶解度を示した。
【００４３】
体積変化
根管充填材は、一度根管内に適用されると必ず本来の体積をそのまま維持しなければならず、できるだけ収縮してはならない。材料が収縮すると必然的に空いた空間を残すことになり、細菌が増殖し得る条件が造成されるためである。単一のペースト型ＭＴＡシーラーは体積変化が少ないことが最も重要な性質であって、２％内外の膨潤性がなければならない。
【００４４】
本実施例により製造されたペーストを６ｍｍの直径および１２ｍｍの長さを有するシリコンモールドに注入した後に硬化させた。その後、材料をモールドから除去して長さを測定したし、その長さをＭ１と設定した。その次に、３７℃の蒸溜水に保管し、７日後に材料を取り出して再び長さを測定してその長さをＭ２と設定した。体積変化（Ｄ）はＤ＝（Ｍ２−Ｍ１）／Ｍ２×１００によって算出された。その結果、２．２５±０．２８％であり、５％以下の優秀な体積変化を示した。
【００４５】
抗菌性
図４は、製造例の試料（ＦＤ１７０８２８）と製造例でベントナイトを９００℃で熱処理した試料（ＦＤ１７０８２８ＰＨ）（熱処理の理由は膨張を調節して抗菌性を維持するためである）が、それぞれバイオフィルムを有するＥ．ｆａｅｃａｌｉｓに対して適用された状況を示すグラフである。そして、図５は、前記のような試料がそれぞれバイオフィルムを有するＰ．ｅｎｄｏｄｏｎｔａｌｉｓに対して適用された状況を示すグラフである。他の二種類の試料については便宜上説明を省略する。
【００４６】
図４および図５の実験のために、細菌として、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ  ＡＴＣＣ  ２９２２１  ｂｒａｉｎ  ｈｅａｒｔ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓｐａｒｋｓ、ＭＤ、ＵＳＡ）培地を利用して３７℃好気状態で培養したし、Ｐ．ｅｎｄｏｄｏｎｔａｌｉｓ  ＡＴＣＣ  ３５４０６はｈｅｍｉｎ（１ｕｇ／ｍｌ）とｖｉｔａｍｉｎ  Ｋ（０．２ｕｇ／ｍｌ）が含まれたｂｒａｉｎ  ｈｅａｒｔ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ液体培地を利用して３７℃嫌気状態で培養した（５％Ｈ２、１０％ＣＯ２および８５％Ｎ２）。
【００４７】
まず、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓを１２−ウェルプレートに接種し、毎日既存の液体培地を除去し、新しい液体培地で１ｍｌずつ取り換えしながら嫌気状態で一週間の間培養した。一週間後に培地を除去してから、ＦＤ１７０８２８とＦＤ１７０８２８ＰＨを０．５ｍｇを塗布し、３７℃嫌気状態で２時間の間放置した。以降、１ｍｌのＢＨＩ液体培地を入れてスクレーパーでバイオフィルムを除去し、浮遊液を２ｍｌだけチューブに移し、サンプル粒子を除去するために１，０００×ｇで１０分間遠心分離して細菌が含まれた上層液をきれいなチューブに移した。以降、細菌が含まれた浮遊液を１０倍ずつ希釈し、ＢＨＩ固体培地に接種してから細菌数を測定した。細菌数測定には、マイクロリーダーを利用して６６０ｎｍ波長で吸光度を測定する方法を使った。
【００４８】
また、Ｐ．ｅｎｄｏｄｏｎｔａｌｉｓに関しても前記と類似する方法論で遂行した。
【００４９】
結果として、図示された通り、図４および図５の場合、いずれも抗菌性が非常に優秀であることが分かる。
【図１】
2019535739.tif 000003
【図２】
2019535739.tif 000004
【図３】
2019535739.tif 000005
【図４】
2019535739.tif 000006
【図５】
2019535739.tif 000007
【国際調査報告】
2019535739.tif 000008
2019535739.tif 000009
2019535739.tif 000010
2019535739.tif 000011