(57)【要約】  本発明は、置換の6員窒素含有複素環式化合物およびその製造と使用を、具体的に、下記式（I）で表される化合物を提供する。ここで、各基の定義は明細書に記載された通りである。本発明の化合物は優れたチロシンキナーゼ抑制活性を有するため、チロシンキナーゼ活性に関連する疾患を治療する薬物の製造に有用である。【化１】2019512011.tif 000049
2019512011.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式で表される式I化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【化１】
2019512011.tif 000044
（ただし、
XはCHまたはNからなる群から選ばれる。
環Aは置換または無置換の6〜12員アリール基、置換または無置換の5〜12員ヘテロアリール基から選ばれ、ここで、前記の置換とは基における一つまたは複数の水素原子がC1〜C8アルキル基、C1〜C8アルコキシ基、C1〜C8アルキルアミノ基、ハロゲン、C1〜C8ハロアルキル基からなる群から選ばれる置換基で置換されることをいう。
R1は-CONHR3、-COOR3から選ばれる。
R2は置換または無置換のC1〜C8アルキル基、置換または無置換のC1〜C8アルコキシ基、置換または無置換の4〜10員複素環基、置換または無置換のアミノ基、置換または無置換のC1〜C8アルキルアミノ基、-NHCOR3からなる群から選ばれ、ここで、前記の置換とは基がさらにC1〜C8アルキル基、ヒドロキシ基、ヒドロキシC1〜C8アルキル基、-COOR3、アミノ基置換のC3〜C10シクロアルキル基、無置換の4〜10員ヘテロシクロアルキル基あるいは一つまたは複数のハロゲン原子、ヒドロキシ基またはC1〜C8アルキル基で置換された4〜10員ヘテロシクロアルキル基からなる群から選ばれる一つまたは複素の置換基で置換されることをいう。
R3は水素、C1〜C8アルキル基、C2〜C10アルケニル基から選ばれる。）
【請求項２】
前記の式I化合物では、R2は置換または無置換のC1〜C4アルキル基、置換または無置換のC1〜C4アルコキシ基、置換または無置換の5〜6員複素環基、置換または無置換のアミノ基、置換または無置換のC1〜C4アルキルアミノ基、-NHCOR3からなる群から選ばれ、ここで、前記の置換とは基がさらにC1〜C8アルキル基、ヒドロキシ基、ヒドロキシC1〜C8アルキル基、-COOR3、アミノ基置換のC3〜C10シクロアルキル基、無置換の4〜10員ヘテロシクロアルキル基あるいは一つまたは複数のハロゲン原子、ヒドロキシ基またはC1〜C8アルキル基で置換された4〜10員ヘテロシクロアルキル基からなる群から選ばれる一つまたは複素の置換基で置換されることをいうことを特徴とする請求項1に記載の化合物。
【請求項３】
前記の式I化合物では、環Aは置換または無置換の6〜10員アリール基、置換または無置換の5〜6員ヘテロアリール基から選ばれることを特徴とする請求項1に記載の化合物。
【請求項４】
前記の式I化合物では、環Aは置換または無置換の、ベンゼン環、ナフタレン環、ピリジン環、ピラジン環、チオフェン環、フラン環、イミダゾール環、ピロール環、オキサゾール環、チアゾール環、ピラゾール環、インドール環、ピリミジン環、ベンゾフラン環、ベンゾチアゾール環、ベンゾイミダゾール環、キノリン環、イソキノリン環から選ばれる基であることを特徴とする請求項1に記載の化合物。
【請求項５】
R3は水素、C1〜C4アルキル基、C2〜C4アルケニル基から選ばれることを特徴とする請求項1に記載の化合物。
【請求項６】
前記の式I化合物では、環Aは置換または無置換のベンゼン環、置換または無置換のチアゾール環、置換または無置換のオキサゾール環、置換または無置換のピリミジン環からなる群から選ばれることを特徴とする請求項1に記載の化合物。
【請求項７】
前記の式I化合物では、R3は水素、メチル基、ビニル基から選ばれることを特徴とする請求項1に記載の化合物。
【請求項８】
前記の化合物は以下の群から選ばれることを特徴とする請求項1に記載の化合物。
【表１】
2019512011.tif 000045
2019512011.tif 000046
2019512011.tif 000047
【請求項９】
請求項1に記載の化合物の製造方法であって、
【化２】
2019512011.tif 000048
（ただし、Qは脱離基で、環A、X、R1、R2の定義は請求項1に記載の通りである。）
不活性溶媒において、式A化合物を用いて式B化合物と反応させ、式I化合物を得る工程、を含むことを特徴とする方法。
【請求項１０】
治療有効量の請求項1〜8のいずれかに記載の化合物、またはその薬用塩、そのプロドラッグ、その水和物もしくは溶媒和物と、任意に薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む薬物組成物。
【請求項１１】
FGFRに関連する疾患を予防および/または治療する薬物の製造に使用されることを特徴とする請求項1に記載の化合物、またはその光学異性体、薬学的に許容される塩、エステル、プロドラッグもしくは水和物の使用。
【請求項１２】
前記の腫瘍に関連する疾患は、乳腺癌、肺癌、膀胱癌、胃癌、膵臓腺癌、前立腺癌、結腸癌、骨髄腫、肝臓癌、メラノーマ、頭頚部癌、甲状腺癌、腎細胞癌、膠芽腫および睾丸癌から選ばれることを特徴とする請求項11に記載の使用。
【請求項１３】
抑制有効量の請求項1〜4のいずれかに記載の化合物、またはその薬用塩、そのプロドラッグ、その水和物もしくは溶媒和物を含むことを特徴とするプロテインチロシンキナーゼ活性阻害剤。
【請求項１４】
癌またはプロテインチロシンキナーゼ活性に関連する疾患を治療する薬物組成物であって、治療有効量の請求項1〜8のいずれかに記載の化合物、またはその薬用塩、そのプロドラッグ、その水和物もしくは溶媒和物を活性成分として含むことを特徴とする薬物組成物
。
【請求項１５】
癌またはプロテインチロシンキナーゼ活性に関連する疾患を治療または予防する方法であって、治療または予防対象に治療または予防有効量の請求項1〜8のいずれかに記載の化合物、またはその薬用塩、そのプロドラッグ、その水和物もしくは溶媒和物、あるいは本発明に係る薬物組成物を施用する工程を含むことを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、チロシンキナーゼ選択的阻害活性を有する置換のアミノピリジン系化合物およびその薬学的に許容される塩もしくはその薬学的に許容される溶媒和物、その製造方法ならびに生体内における線維芽細胞増殖因子受容体に関連する細胞の異常増殖、形態変化や運動機能亢進などと関わる疾患、および血管新生または癌転移と関わる疾患を予防または治療する薬物の製造、特に腫瘍の生長と転移を治療または予防する薬物の製造におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
線維芽細胞増殖因子受容体(FGFR)は受容体チロシンキナーゼで、ファミリーメンバーはFGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4があり、その基本的な構造は細胞外領域、膜貫通領域、チロシンキナーゼ領域を含み、中では、細胞外領域は3つのイムノグロブリン様ドメインからなり、1つの酸性フレームワーク、1つの膜ドメインおよび1つの分裂期細胞内チロシンキナーゼドメインを含む。ほかのチロシンキナーゼと同様に、配位子がFGFRに結合すると、受容体が二量体化し、形成した三元(FGF-FGFR-HPSG)複合体が二量体化することでFGFRの構造が変化し、細胞内チロシンキナーゼドメインおよび末端カルボン酸の部位で分子内のリン酸化転移が生じ、その後FGFR受容体基質(FRS2α)およびホスホリパーゼC(PLCγ)と結合して一連の下流シグナル経路、たとえばRas/分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ(MAPK)経路やホスファチジルイノシトール3キナーゼ(PI3K)/Akt経路を活性化し、そして細胞内における一部の生理過程、たとえば細胞の増殖、生存、遷移や血管新生などにつながる。
【０００３】
FGFRの活性化は多くの腫瘍の発生・発展および薬剤耐性と密接に関連する。FGFRは主に染色体転座、遺伝子突然変異、遺伝子の増幅または過剰発現といった3つの機序によって腫瘍の発生に関与する。FGFR1遺伝子またはその融合遺伝子の染色体転座は主に多発性骨髄腫に存在する。FGFR2およびFGFR3の突然変異はいずれも肺扁平上皮癌において発現され、膜貫通領域のFGFR4 Y367C突然変異は乳腺癌細胞が持続的に活性化するようにさせる。文献では、FGFRの増幅は様々な癌において現れ、FGFR1の増幅は直腸癌、肺癌および腎臓癌の患者において現れ、また約10％の乳腺癌、特にエストロゲン受容体陽性の患者において、FGFR1 8p11-12部位で増幅が現れ、胃癌および直腸癌の患者でもFGFR2の増幅が現れ、FGFR3の増幅は膀胱癌の患者で最も見られることが報告された。そのため、FGFRキナーゼを標的とする阻害剤の研究は悪性腫瘍の治療において非常に重要な意味がある。
【０００４】
近年、FGFRを治療標的とする小分子チロシンキナーゼ阻害剤（TKI）の研究・開発は既に抗腫瘍薬の研究の焦点になっている。いくつかのFGFR阻害剤は既に臨床研究の段階に入っており、その使用の範囲によって選択的FGFR阻害剤と非選択的FGFR阻害剤に分かれている。このような阻害剤は主にFGFRの細胞内キナーゼ領域のATP結合部位を標的にとしてFGFRの活性化を抑制し、FGFRs過剰発現、FGFR突然変異またはFGFR-融合タンパク質を発現するタイプの腫瘍に使用することができる。AZD4547、BGJ398、LY2874455およびAL-3810は現在いずれも臨床に入っており、抗腫瘍活性の強い選択的FGFR阻害剤である。文献では、AZD-4547、BGJ-398、AL-3810はFGFR1-3の強力な阻害剤で、LY2874455は汎FGFR阻害剤(FGFR1〜4に作用するもの)である。
【０００５】
【化１】
2019512011.tif 000003
【０００６】
PDGFR、VEGFRおよびFGFRはキナーゼ領域が高度に類似し、多くのFGFR TKIは同時にPDGFR、VEGFRを抑制する活性を有するため、FGFR阻害剤は大きい毒性・副作用を有し、FGFRの阻害剤の研究・開発はまだ大きな挑戦に面している。構造の面では、FGFR阻害剤は構造の種類が非常に限られている。
【０００７】
このように、本分野では、まだ新規な構造を有するFGFR阻害剤の開発が必要である。
【発明の概要】
【０００８】
本発明の目的は、新規な構造で、優れた活性を有するFGFRキナーゼ阻害剤を提供することである。
本発明の第一の側面では、下記式で表される式I化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０００９】
【化２】
2019512011.tif 000004
【００１０】
（ただし、
XはCHまたはNからなる群から選ばれる。
環Aは置換または無置換の6〜12員アリール基、置換または無置換の5〜12員ヘテロアリール基から選ばれ、ここで、前記の置換とは基における一つまたは複数の水素原子がC1〜C8アルキル基、C1〜C8アルコキシ基、C1〜C8アルキルアミノ期、ハロゲン、C1〜C8ハロアルキル基からなる群から選ばれる置換基で置換されることをいう。
【００１１】
R1は-CONHR3、-COOR3から選ばれる。
R2は置換または無置換のC1〜C8アルキル基、置換または無置換のC1〜C8アルコキシ基、置換または無置換の4〜10員複素環基、置換または無置換のアミノ基、置換または無置換のC1〜C8アルキルアミノ基、-NHCOR3からなる群から選ばれ、ここで、前記の置換とは基
がさらにC1〜C8アルキル基、ヒドロキシ基、ヒドロキシC1〜C8アルキル基、-COOR3、アミノ基置換のC3〜C10シクロアルキル基、無置換の4〜10員ヘテロシクロアルキル基あるいは一つまたは複数のハロゲン原子、ヒドロキシ基またはC1〜C8アルキル基で置換された4〜10員ヘテロシクロアルキル基からなる群から選ばれる一つまたは複素の置換基で置換されることをいう。
【００１２】
R3は水素、C1〜C8アルキル基、C2〜C10アルケニル基から選ばれる。）
もう一つの好適な例において、前記の式I化合物では、環Aは置換または無置換の6〜10員アリール基、置換または無置換の5〜10員ヘテロアリール基から選ばれる。
【００１３】
もう一つの好適な例において、前記の式I化合物では、環Aは置換または無置換の6〜10員アリール基、置換または無置換の5〜6員ヘテロアリール基から選ばれる。
もう一つの好適な例において、前記の式I化合物では、環Aは置換または無置換の、ベンゼン環、ナフタレン環、ピリジン環、ピラジン環、チオフェン環、フラン環、イミダゾール環、ピロール環、オキサゾール環、チアゾール環、ピラゾール環、インドール環、ピリミジン環、ベンゾフラン環、ベンゾチアゾール環、ベンゾイミダゾール環、キノリン環、イソキノリン環から選ばれる基である。
【００１４】
もう一つの好適な例において、前記の式I化合物では、環Aは置換または無置換のベンゼン環、置換または無置換のチアゾール環、置換または無置換のオキサゾール環、置換または無置換のピリミジン環からなる群から選ばれる。
【００１５】
もう一つの好適な例において、前記の式I化合物では、R2は置換または無置換のC1〜C4アルキル基、置換または無置換のC1〜C4アルコキシ基、置換または無置換の5〜6員複素環基、置換または無置換のアミノ基、置換または無置換のC1〜C4アルキルアミノ基、-NHCOR3からなる群から選ばれ、ここで、前記の置換とは基がさらにC1〜C8アルキル基、ヒドロキシ基、ヒドロキシC1〜C8アルキル基、-COOR3、アミノ基置換のC3〜C10シクロアルキル基、無置換の4〜10員ヘテロシクロアルキル基あるいは一つまたは複数のハロゲン原子、ヒドロキシ基またはC1〜C8アルキル基で置換された4〜10員ヘテロシクロアルキル基からなる群から選ばれる一つまたは複素の置換基で置換されることをいう。
【００１６】
もう一つの好適な例において、前記の式I化合物では、R3は水素、C1〜C6アルキル基、C2〜C6アルケニル基から選ばれる。
もう一つの好適な例において、前記の式I化合物では、R3は水素、C1〜C4アルキル基、C2〜C4アルケニル基から選ばれる。
【００１７】
もう一つの好適な例において、前記の式I化合物では、R3は水素、メチル基、ビニル基から選ばれる。
もう一つの好適な例において、前記の化合物は、化合物S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、S8、S9、S10、S11、S12、S13、S14、S15、S16、S17、S18、S19、S20、S21、S22、S23またはS24からなる群から選ばれる。
【００１８】
本発明の第二の側面では、本発明の第一の側面に記載の化合物の製造方法であって、
【００１９】
【化３】
2019512011.tif 000005
【００２０】
（ただし、Qは脱離基、好ましくはハロゲンで、環A、X、R1、R2の定義は本発明の第一の側面に記載の通りである。）
不活性溶媒において、式A化合物を用いて式B化合物と反応させ、式I化合物を得る工程、を含む方法を提供する。
【００２１】
もう一つの好適な例において、前記の反応はPd2(dba)3[トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム]、キサントホス[4,5-ビス(ジフェニルホスフィノ)-9,9-ジメチルキサンテン]、炭酸セシウムの存在下において行われる。
【００２２】
もう一つの好適な例において、前記の反応は、化合物A、化合物B（1.0-1.5eq）、Pd2(dba)3[トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム]（0.05-0.2eq）、キサントホス[4,5-ビス(ジフェニルホスフィノ)-9,9-ジメチルキサンテン]（0.1-0.5eq）、炭酸セシウム（1-3eq）を不活性溶媒に溶解させ、窒素ガスの保護下において反応させる工程を含む。
【００２３】
もう一つの好適な例において、前記の不活性溶媒は1,4-ジオキサンである。
もう一つの好適な例において、前記の反応は100℃で行われる。
もう一つの好適な例において、前記の反応時間は1〜10 hである。
【００２４】
もう一つの好適な例において、前記の反応が完了した後、ジクロロメタンおよび水で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、試料に調製してカラムにかけて化合物を得る。
【００２５】
本発明の第三の側面では、治療有効量の本発明の第一の側面に記載の化合物、またはその薬用塩、そのプロドラッグ、その水和物もしくは溶媒和物と、任意に薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む薬物組成物を提供する。
【００２６】
もう一つの好適な例において、前記の薬物組成物は腫瘍を治療する薬物組成物、またはチロシンキナーゼ（好ましくはFGFR、より好ましくはFGFR1）活性に関連する疾患を治療する薬物組成物に使用される。
【００２７】
もう一つの好適な例において、前記の薬物組成物はFGF/FGFRシグナル経路の異常発現に関連する疾患の治療に使用される。
本発明の第四の側面では、FGFRに関連する疾患を予防および/または治療する薬物の製造のための本発明の第一の側面に記載の化合物、またはその光学異性体、薬学的に許容される塩、エステル、プロドラッグもしくは水和物の使用を提供する。
【００２８】
もう一つの好適な例において、前記の腫瘍に関連する疾患は、乳腺癌、肺癌、膀胱癌、胃癌、膵臓腺癌、前立腺癌、結腸癌、骨髄腫、肝臓癌、メラノーマ、頭頚部癌、甲状腺癌、腎細胞癌、膠芽腫および睾丸癌、好ましくは乳腺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、胃癌、膵臓腺癌、前立腺癌、結腸癌、多発性骨髄腫、肝臓癌、メラノーマ、頭頚部癌、甲状腺癌、
腎細胞癌、膠芽腫および睾丸癌、より好ましくは非小細胞肺癌、胃癌、多発性骨髄腫からなる群から選ばれる。
【００２９】
本発明の第五の側面では、抑制有効量の本発明の第一の側面に記載の化合物、またはその薬用塩、そのプロドラッグ、その水和物もしくは溶媒和物を含むプロテインチロシンキナーゼ活性阻害剤を提供する。
【００３０】
本発明の第六の側面では、癌またはプロテインチロシンキナーゼ活性に関連する疾患を治療する薬物組成物であって、治療有効量の本発明の第一の側面に記載の化合物、またはその薬用塩、そのプロドラッグ、その水和物もしくは溶媒和物を活性成分として含む薬物組成物を提供する。
【００３１】
本発明の第七の側面では、癌またはプロテインチロシンキナーゼ活性に関連する疾患を治療または予防する方法であって、治療または予防対象に治療または予防有効量の本発明の第一の側面に記載の化合物、またはその薬用塩、そのプロドラッグ、その水和物もしくは溶媒和物、あるいは本発明に係る薬物組成物を施用する工程を含むことを特徴とする方法を提供する。
【００３２】
もちろん、本発明の範囲内において、本発明の上記の各技術特徴および下記（たとえば実施例）の具体的に記述された各技術特徴は互いに組合せ、新しい、または好適な技術方案を構成できることが理解される。紙数に限りがあるため、ここで逐一説明しない。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】S10がSNU16胃癌細胞株におけるFGFR2および下流シングル分子のリン酸化を抑制した結果の図である。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
本発明者は長期間にわたって幅深く研究したところ、意外に、文献で報告されたFGFR阻害剤であるAL-3810の骨格におけるキノリンをアミノピリジンに変えると、新規な構造のアミノピリジンを母核とする化合物が得られることを見出した。これに基づき、異なる水溶性基で置換された芳香環を導入することによって、より良いFGFR抑制活性および代謝性質を有する、新しいアミノピリジン誘導体を得ることができる。上記の知見に基づき、発明者らは本発明を完成させた。
【００３５】
用語
本明細書で用いられるように、用語「複素環基」はO、NまたはSからなる群から選ばれ
る1、2、3、4または5個のヘテロ原子を有する環状基である。
【００３６】
本明細書において、前記のアルキル基は脂肪族アルキル基が好ましく、直鎖アルキル基、分岐鎖アルキル基、スピロシクロアルキル基、架橋シクロアルキル基、アルケニルアルキル基、アルキニルアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、シクロアルキニル基、アルコキシアルキル基、アルコキシアシルアルキル基、シクロアルキルアルキル基でもよく、メチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、t-ブチル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、アリル基、プロパギル基、シクロブテニル基、シクロヘキセニル基を含むが、これらに限定されない。「C1〜C8」のような表現とは1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個または8個の炭素原子を有する相応する基をいうが、たとえば、「C1〜C8アルキル基」とは1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個または8個の炭素原子を有するアルキル基を、「C2〜C10アルケニル基」とは2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個または10個の炭素原子を有するアルケニル基をいう。
【００３７】
本明細書において、前記アルケニル基はビニル基、プロペニル基、ブテニル基、スチリル基、シンナミル基、または類似の基が好ましい。
本明細書において、前記シクロアルキル基は飽和または部分飽和の単環または多環の環状炭化水素置換基でもよく、それに炭素原子が3〜20個、好ましくは3〜12個、より好ましくは3〜10個含まれる。単環シクロアルキル基の非制限的な実施例は、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンテニル基、シクロヘキシル基、シクロオクチルなどを含み、多環シクロアルキル基はスピロ環、縮合環および架橋環のシクロアルキル基を含む。
【００３８】
前記複素環基とは飽和または部分飽和の単環または多環の環状置換基をいい、4〜10員複素環基を含み、かつ前記の複素環基はそれに一つまたは複数のヘテロ原子（窒素、酸素、硫黄）が含まれる、飽和または不飽和の単環、縮合環、スピロ環、縮環、架橋環などを含む。本明細書に記載の複素環基は、モルホリン環、ピペリジン環、ピペラジン環、N-アルキルまたはアシル置換のピペラジン環、ホモピペラジン環、N-アルキルまたはアシル置換のホモピペラジン環、ピロール、テトラヒドロピロール、7H-プリンなどからなる群から選ばれるが、これらに限定されない。
【００３９】
前記アリール基とは6〜10員の全炭素の単環または縮合多環（すなわち隣接する炭素原子対を共有する環）基で、前記の基は共役のπ電子系を有し、たとえばフェニル基やナフチル基が挙げられる。前記アリール環は複素環基、ヘテロアリール基またはシクロアルキル環と縮合してもよく、非制限的な実施例はベンゾイミダゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾオキサゾール、ベンゾイソオキサゾール、ベンゾピラゾール、キノリン、ベンゾインドール、ベンゾジヒドロフランを含む。
【００４０】
前記ヘテロアリール基とはヘテロ原子を1〜4個、環原子を5〜14個含むヘテロ芳香族系をいうが、ここで、ヘテロ原子は酸素、硫黄および窒素を含む。ヘテロアリール基は5員または6員がこのましく、たとえばフリル基、チエニル基、ピリジル基、ピロリル基、N-アルキルピロリル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、イミダゾリル基、テトラゾリル基などが挙げられる。前記のヘテロアリール基はアリール基、複素環基またはシクロアルキル環に縮合してもよいが、ここで、母体構造と連結した環はヘテロアリール環である。
【００４１】
特別に説明しない限り、本発明に記載される構造式はすべての互変異性、光学異性および立体異性の形態（たとえばエナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体または配座異性体）、たとえば不斉中心を有するR、S配置、二重結合の(Z)、(E)異性体および(Z)、(E)の配座異性体を含むことを意味する。そのため、本発明の化合物の単独の立体異性体、互変異性体あるいはそのエナンチオマー、ジアステレオマーまたは幾何異性体または配座異性体または互変異性体の混合物はいずれも本発明の範囲に含まれる。
【００４２】
用語「互変異性体」は異なるエネルギーを有する構造異性体が低いエネルギー障壁を超え、互いに転換することができることを意味する。たとえば、プロトン互変異性体(すなわちプロトトロピー)はプロトン移動によって互変するもの、たとえば1H-インダゾールと2H-インダゾール、1H-ベンゾ[d]イミダゾールと3H-ベンゾ[d]イミダゾールを含み、原子価互変異性体は一部の結合電子が再構成して互変するものを含む。
【００４３】
本明細書において、前記の薬学的に許容される塩は特に限定されず、好ましくは無機酸塩、有機酸塩、アルキルスルホン酸塩およびアリールスルホン酸塩を含み、前記無機酸塩は塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、リン酸塩などを含み、前記有機酸塩はギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩などを含み、前記アルキルスルホン酸塩はメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩などを含み、前記アリールスルホン酸塩はベンゼンスルホン酸塩、p-トルエ
ンスルホン酸塩などを含む。
【００４４】
本明細書において、前記一般式（I）で表される化合物の薬学的に許容される溶媒和物」は特に限定されず、好ましくは式（I）で表される化合物と水、エタノール、イソプロパノール、エチルエーテル、アセトンなどとの溶媒和物を含む。
【００４５】
式（I）化合物
本発明者はFGFRの結晶構造およびほかのチロシンキナーゼ阻害剤の構造-効果関係に対する研究によって、一連の新規な構造の化合物を設計・合成し、分子、細胞および動物モデルでこれらの化合物に対して選別を行い、これらの化合物が分子レベルで顕著にFGFRの酵素活性を抑制することができ、細胞レベルでFGFRによって誘導される様々な癌細胞の増殖に対しても顕著な抑制作用を有し、かつ動物の体内においても腫瘍の生長を顕著に抑制することができるこを見出した。
【００４６】
具体的に、本発明は下記式で表される式I化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００４７】
【化４】
2019512011.tif 000006
【００４８】
もう一つの好適な例において、前記の化合物では、X、環A、R1、R2、R3のうちの任意の一つがそれぞれ実施例に記載の具体的な化合物における相応する基である。
好ましくは、本発明の一般式（I）で表されるアミノピリジン系化合物は、下記表1における化合物から選ばれる。
【００４９】
【表１−１】
2019512011.tif 000007
【００５０】
【表１−２】
2019512011.tif 000008
【００５１】
式（I）化合物を含有する薬物組成物
また、本発明は、治療有効量の式（I）で表されるアミノピリジン系化合物、その薬用塩、そのプロドラッグおよびその水和物と溶媒和物から選ばれる一種または複数種と、任意に、薬学的に許容される担体とを含む薬物組成物に関し、当該薬物組成物は癌など関連
する疾患の治療に使用することができる。前記薬物組成物は、異なる投与経路によって、色々な様態に製造することができる。
【００５２】
本発明に記載の式（I）で表されるアミノピリジン系化合物、その薬用塩、そのプロドラッグおよびその水和物と溶媒和物のうちの一種または複数種、あるいは上記治療有効量の式（I）で表されるアミノピリジン系化合物、その薬用塩、そのプロドラッグおよびその水和物と溶媒和物から選ばれる一種または複数種を含む薬物組成物はプロテインチロシンキナーゼ阻害剤、特にFGFR阻害剤として、癌の治療に使用することができる。前記のFGFRは好ましくはFGFR1を含む。
【００５３】
本発明の化合物の薬用塩の製造は、化合物の遊離塩基を利用し、無機酸または有機酸と直接塩形成反応を行ってもよい。無機酸または有機酸は、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、フッ化水素酸、臭化水素酸、ギ酸、酢酸、ピクリン酸、クエン酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、トリフルオロスルホン酸、エタンスルホン酸およびp-トルエンスルホン酸から選ばれてもよい。
【００５４】
本発明の化合物が優れたFGFRキナーゼ（Kinase）、たとえばFGFR1やFGFR2に対する抑制活性を有するため、本発明の化合物およびその各結晶形、薬学的に許容される無機・有機塩、水和物もしくは溶媒和物、ならびに本発明化合物を主要活性成分として含有する薬物組成物は、FGFRの活性または発現量に関連する疾患の治療、予防および緩和、たとえばFGF/FGFRシグナル経路の異常発現に関連する疾患の予防および/または治療に有用である。既存技術によれば、本発明の化合物は、乳腺癌、肺癌、膀胱癌、胃癌、膵臓腺癌、前立腺癌、結腸癌、多発性骨髄腫AML、肝臓癌、メラノーマ、頭頚部癌、甲状腺癌、腎細胞癌、膠芽腫および睾丸癌を含む癌のような疾患の治療に使用することができる。より特別に、これらの癌は、乳腺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、胃癌、膵臓腺癌、前立腺癌、結腸癌、多発性骨髄腫、肝臓癌、メラノーマ、頭頚部癌、甲状腺癌、腎細胞癌、膠芽腫および睾丸癌から選ばれる。最も特別に、当該癌は非小細胞肺癌、胃癌または多発性骨髄腫である。
【００５５】
本発明の薬物組成物は、安全な有効量の範囲にある本発明化合物または薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤または担体と含む。ここで、「安全有効量」とは、化合物の量が病状の顕著な改善に充分で、重度な副作用が生じないことを指す。通常、薬物組成物は、本発明化合物を1〜2000mg/製剤で、好ましくは5〜200mg/製剤で含有する。好ましくは、前記の「製剤」は、カプセルまたは錠である。
【００５６】
「薬学的に許容される担体」とは、ヒトに適用でき、且つ十分な純度および充分に低い毒性を持たなければならない、一種または複数種の相溶性固体または液体フィラーまたはゲル物質を指す。「相溶性」とは、組成物における各成分が本発明の化合物と、またその同士の間で配合することができ、化合物の効果を顕著に低下させないことを指す。薬学的に許容される担体の例の一部として、セルロースおよびその誘導体(たとえばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースナトリウム、セルロースアセテートなど)、ゼラチン、タルク、固体潤滑剤(たとえばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム)、硫酸カルシウム、植物油(たとえば大豆油、ゴマ油、落花生油、オリーブオイルなど)、多価アルコール(たとえばプロピレングリコール、グリセリン、マンニトール、ソルビトールなど)、乳化剤(たとえばツイン＜登録商標＞)、湿潤剤(たとえばドデシル硫酸ナトリウム)、着色剤、調味剤、安定剤、酸化防止剤、防腐剤、発熱性物質除去蒸留水などがある。
【００５７】
本発明の薬物組成物の施用様態は、特に限定されないが、代表的な施用様態は、経口投与、腫瘍内、直腸、胃腸外(静脈内、筋肉内、または皮下)投与、および局部投与を含むが、これらに限定されない。
【００５８】
経口投与に用いられる固体剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤を含む。これらの固体剤形において、活性化合物は通常、少なくとも一種の不活性賦形剤(または担体)、たとえばクエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムと混合されるが、あるいは、(a)フィラーまたは相溶剤、たとえば、でん粉、乳糖、ショ糖、グルコース、マンニトールやケイ酸、(b)バインダー、たとえば、ヒドロメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖やアラビアゴム、(c)保湿剤、たとえば、グリセリン、(d)崩壊剤、たとえば、寒天、炭酸カルシウム、馬鈴薯澱粉やタピオカ澱粉、
アルギン酸、ある複合ケイ酸塩や炭酸ナトリウム、(e)溶液遅延剤、たとえばパラフィン、(f)吸収促進剤、たとえば、アンモニウム化合物、(g)湿潤剤、たとえばセタノール、グリセリンモノステアレート、(h)吸着剤、たとえば、カオリン、また(i)潤滑剤、たとえば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ドデシル硫酸ナトリウム、またはこれらの混合物、のような成分と混合される。カプセル剤、錠剤および丸剤において、剤形に緩衝剤を含んでもよい。
【００５９】
固体剤形、たとえば錠剤、ピル、カプセル剤、丸剤や顆粒剤は、コーディングやシェル剤、たとえば、腸衣および他の本分野で公知の材料で製造することができる。不透明剤を含んでもよく、且つこのような組成物において、活性物または化合物の放出は遅延の様態で消化管のある部分で放出してもよい。使用できる包埋成分の実例として、重合物質やワックス系物質が挙げられる。必要な場合、活性化合部も上記賦形剤のうちの一種または複数種とマイクロカプセルの様態に形成してもよい。
【００６０】
経口投与に用いられる液体剤形は、薬学的に許容される乳液、溶液、懸濁液、シロップまたはチンキ剤を含む。活性化合物の他、液体剤形は、本分野で通常使用される不活性希釈剤、たとえば、水または他の溶媒、相溶剤および乳化剤、たとえば、エタノール、イソプロパノール、炭酸エチル、酢酸エチル、プロピレングリコール、1,3-ブタンジオール、ジメチルホルムアミドおよび油、特に、綿実油、落花生油、コーン油、オリーブ油、ヒマシ油やゴマ油またはこれらの物質の混合物などを含んでもよい。
【００６１】
これらの不活性希釈剤の他、組成物は助剤、たとえば、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、甘味料、矯味剤や香料を含んでもよい。
活性化合物の他、懸濁液は、懸濁剤、たとえば、エトキシ化イソオクタデカノール、ポリオキシエチレンソルビトールやソルビタンエステル、微晶質セルロース、メトキシアルミニウムや寒天またはこれらの物質の混合物などを含んでもよい。
【００６２】
胃腸外注射用組成物は、生理的に許容される無菌の水含有または無水溶液、分散液、懸濁液や乳液、および再溶解して無菌の注射可能な溶液または分散液にするための無菌粉末を含む。適切な水含有または非水性担体、希釈剤、溶媒または賦形剤は、水、エタノール、多価アルコールおよびその適切な混合物を含む。
【００６３】
局部投与のための本発明化合物の剤形は、軟膏剤、散剤、湿布剤、噴霧剤や吸入剤を含む。活性成分は、無菌条件で生理学的に許容される担体および任意の防腐剤、緩衝剤、または必要よって駆出剤と一緒に混合される。
【００６４】
本発明化合物は、単独で投与してもよいし、あるいは他の薬学的に許容される化合物と併用して投与してもよい。
薬物組成物を使用する場合、安全な有効量の本発明化合物を治療の必要のある哺乳動物(たとえばヒト)に使用し、使用の際の用量は薬学上で効果があるとされる投与量で、体重60kgのヒトの場合、毎日の投与量は、通常1〜2000mg、好ましくは5〜500mgである。勿論、具体的な投与量は、さらに投与の様態、患者の健康状況などの要素を考えるべきで、す
べて熟練の医者の技能範囲以内である。
【００６５】
以下、具体的な実施例によって、さらに本発明を説明する。これらの実施例は本発明を説明するために用いられるものだけで、本発明の範囲の制限にはならないと理解されるものである。以下の実施例において、具体的な条件が記載されていない実験方法は、通常、通常の条件、あるいはメーカーの薦めの条件で行われた。特に断らない限り、％と部は、重量で計算される。
【実施例】
【００６６】
一．製造実施例
1H-NMRは、Varian MercuryAMX300型の装置によって測定した。MSは、VG ZAB-HSまたはVG-7070型の装置によって測定し、説明しない限り、いずれもEI源（70ev）であった。溶媒は、すべて使用前に改めて蒸留され、使用された無水溶媒はいずれも標準方法によって乾燥されたものであった。説明しない限り、反応は、いずれも窒素保護下で行い、且つTLCでモニターし、後処理は、いずれも飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄して無水硫酸ナトリウムで乾燥するプロセスであった。製品の精製は、説明しない限り、いずれもシリカゲル（200〜300メッシュ）カラムクロマトグラフィーを使用した。ここで、シリカゲル（200〜300メッシュ）は青島海洋化工厂製のもので、GF254薄層シリカゲル板は、煙台江友シリカゲル開発有限公司製のものであった。
【００６７】
製造実施例1  化合物S1の製造
【００６８】
【化５】
2019512011.tif 000009
【００６９】
化合物1-1の合成方法は文献WO2011140009の方法を参照する。
化合物1-3の合成：
化合物1-1、化合物1-2(1.5eq)を量って単口瓶に入れ、アセトニトリルを入れて溶解させた後、DIPEAをいれ、70℃で一晩反応させた。反応完了後、ジクロロメタンおよび水で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、試料に調製してカラムにかけ、PE:EA=5:1で化合物1-3を得た。
【００７０】
化合物1-4の合成
化合物1-3をメタノールに溶解させ、2eqの水酸化ナトリウム水溶液を入れ、60℃で加熱して4h反応させた。反応完了後、反応液を室温に冷却し、2N HClでpHを5〜6に調整し、大量に固体が析出し、吸引ろ過し、化合物1-4を得た。
【００７１】
化合物1-5の合成
化合物1-5をジクロロメタンに溶解させ、氷浴においてDMF[N,N-ジメチルホルムアミド]
(10eq)、塩化チオニル(4eq)を入れ、添加終了後室温に昇温させて2h反応させ、反応完了後反応液を回転乾燥した後、さらにDCMで溶解させ、それを0℃に冷却したアンモニア水-ジクロロメタン溶液に入れ、室温で5h反応させた。反応完了後、ジクロロメタンおよび水で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、試料に調製してカラムにかけ、CH2Cl2:MeOH=50:1で化合物1-5を得た。
【００７２】
化合物1-6の合成は文献J. Med. Chem. 2008, 51, 1649-1667を参照する。
化合物1-7の合成
化合物1-6、メチルアミン塩酸塩(2.5eq)、EDCI[1-エチル-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩](1.5eq)、HOBt[1-ヒドロキシベンゾトリアゾール](1eq)を量って単口瓶に入れ、ジクロロメタンで溶解させた後、DIPEA[ジイソプロピルエチルアミン](2.5eq)を入れ、室温で一晩反応させた。反応完了後、ジクロロメタンおよび水で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、試料に調製してカラムにかけ、PE:EA（体積比）=1:1で化合物1-7を得た。
【００７３】
化合物S1の合成：
化合物1-5、化合物1-7（1.2eq）、Pd2(dba)3[トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム]（0.1eq）、キサントホス[4,5-ビス(ジフェニルホスフィノ)-9,9-ジメチルキサンテン]（0.2eq）、炭酸セシウム（2eq）を1,4-ジオキサンに溶解させ、窒素ガスの保護下において100℃で5h反応させた。反応完了後、ジクロロメタンおよび水で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、試料に調製してカラムにかけ、CH2Cl2:MeOH=50:1で化合物S1を得た。S1の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.66 (s, 1H), 8.39 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 8.12 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.82 (t, J= 8.8 Hz, 3H), 7.56 (s, 2H), 7.45 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.66 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 6.22 (d, J = 5.0 Hz,
1H), 5.28 - 5.18 (m, 0.5H), 5.09 - 4.97 (m, 0.5H), 4.03 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 3.85 - 3.72 (m, 2H), 3.36 - 3.21 (m, 2H), 3.07 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.92 (t, J = 5.0 Hz, 2H).
製造実施例2  化合物S2の製造
【００７４】
【化６】
2019512011.tif 000010
【００７５】
化合物2-1の合成は化合物1-5と同様であった。
S2の合成方法はS1と同様であった。S2の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.53 (s, 1H), 8.36 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.10 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.79
(t, J= 7.7 Hz, 3H), 7.53 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 7.42 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.34 - 7.26 (m, 1H), 6.88 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.62 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 6.01 (s, 1H), 4.03 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.68 (t, J = 12.0 Hz, 4H), 3.05 (d, J = 4.9 Hz, 3H), 2.94 (t, J = 4.9 Hz, 2H)。
【００７６】
製造実施例3  化合物S3の製造
【００７７】
【化７】
2019512011.tif 000011
【００７８】
化合物3-1の合成は化合物1-5と同様であった。
化合物3-2の合成方法はS1と同様であった。
化合物S3の合成：
化合物3-2をメタノールに溶解させ、2Nの塩酸のメタノール(30eq)溶液を入れ、室温で一晩反応させた。反応完了後、反応液を回転乾燥し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液およびDCMで抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、試料に調製してカラムにかけ、CH2Cl2:MeOH=30:1で化合物S3を得た。S3の分析データ：1H NMR (300 MHz,CDCl3) δ 8.58 (s, 1H), 8.41 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 8.15 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.84 (t, J= 7.7 Hz, 3H), 7.57 (s, 2H), 7.51 - 7.42 (m, 1H), 7.35 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 6.95 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 6.67 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 6.12 (s, 1H), 3.88 (s, 2H), 3.09 (d, J= 4.0 Hz, 3H), 0.77 (s, 2H), 0.65 (s, 2H).
製造実施例4  化合物S4の製造
【００７９】
【化８】
2019512011.tif 000012
【００８０】
化合物4-1の合成は化合物1-5と同様であった。
化合物S4の合成方法はS1と同様であった。S4の分析データ：1H NMR (300 MHz,CDCl3) δ 8.87 (s, 1H), 8.34 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.06 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.79 (t, J= 7.0 Hz, 3H), 7.55 - 7.46 (m, 2H), 7.40 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.33 -
7.26 (m, 1H), 6.91 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.62 (d, J= 4.9 Hz, 1H), 6.51 - 6.42 (m, 1H), 4.11 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.00 (d, J= 4.7 Hz, 3H), 2.88 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.59 (s, 4H), 2.35 (s, 1H), 1.78 (s, 4H)。
【００８１】
製造実施例5  化合物S5の製造
【００８２】
【化９】
2019512011.tif 000013
【００８３】
化合物5-3の合成
原料5-1(1eq)および原料5-2(2eq)を量って単口瓶に入れ、DMSO[ジメチルスルホキシド]で溶解させ、炭酸カリウム(3eq)を入れ、110℃で一晩反応させた。反応完了後、反応液を冷却し、水に注ぎ、酢酸エチルで3回抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、試料に調製してカラムにかけ、DCM[ジクロロメタン]:MeOH[メタノール]（体積比）=30:1で化合物5-3を得た。
【００８４】
化合物5-4の合成
化合物5-3をメタノールに溶解させ、2eqの水酸化ナトリウム水溶液を入れ、60℃で加熱して4h反応させた。反応完了後、反応液を室温に冷却し、2N HClでpHを5〜6に調整し、大量に固体が析出し、吸引ろ過し、化合物5-4を得た。
【００８５】
化合物5-5の合成
化合物5-4をジクロロメタンに溶解させ、氷浴においてDMF[N,N-ジメチルホルムアミド](10eq)、塩化チオニル(4eq)を入れ、添加終了後室温に昇温させて2h反応させ、反応完了後反応液を回転乾燥した後、さらにDCMで溶解させ、それを0℃に冷却したアンモニア水-ジクロロメタン溶液に入れ、室温で4h反応させた。反応完了後、ジクロロメタンおよび水で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、試料に調製してカラムにかけ、CH2Cl2:MeOH=15:1で化合物5-5を得た。
【００８６】
化合物S5の合成方法はS1と同様であった。S5の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.64 (s, 1H), 8.36 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.12 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 8.01 (d, J =
1.8 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.48 - 7.38 (m, 1H), 7.32 (dd, J = 9.2, 2.3 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.64 (dd, J = 5.7, 2.2 Hz, 1H), 6.34 (s, 1H), 3.33 (d, J = 4.5 Hz, 4H), 3.04 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.61 - 2.48 (m, 4H), 2.33 (s, 3H).
製造実施例6  化合物S6の製造
【００８７】
【化１０】
2019512011.tif 000014
【００８８】
化合物6-1の合成は文献WO2001060846の方法を参照する。
化合物6-2の合成方法はS1と同様であった。
S6の合成方法はS3と同様であった。S6の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.83 (s, 1H), 8.31 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.10 - 7.93 (m, 2H), 7.73 (dd, J = 13.3, 8.3 Hz, 3H), 7.46 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.40 - 7.33 (m, 1H), 7.24 (d, J = 9.9 Hz, 2H), 6.57 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 6.36 (s, 1H), 3.20 (d, J = 11.8 Hz, 2H), 2.97 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 2.69 (dd, J = 25.0, 13.5 Hz, 2H), 1.73 (dd, J = 31.8, 11.6 Hz, 4H).
製造実施例7  化合物S7の製造
【００８９】
【化１１】
2019512011.tif 000015
【００９０】
化合物7-1の合成は化合物5-5と同様であった。
化合物S7の合成方法はS1と同様であった。S7の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.55 (s, 1H), 8.40 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.15 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 8.03 (d, J =
1.7 Hz, 1H), 7.82 (dd, J = 17.4, 8.4 Hz, 3H), 7.57 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 7.51 - 7.43 (m, 1H), 7.35 (dd, J = 9.1, 2.3 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.66 (dd, J = 5.7, 2.1 Hz, 1H), 6.13 (s, 1H), 3.92 - 3.81 (m, 4H), 3.36 - 3.23 (m, 4H), 3.09 (d, J = 4.9 Hz, 3H).
製造実施例8  化合物S8の製造
【００９１】
【化１２】
2019512011.tif 000016
【００９２】
化合物8-1の合成は化合物5-5と同様であった。
化合物S8の合成方法はS1と同様であった。S8の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.55 (s, 1H), 8.40 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.15 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.81 (dd, J= 21.6, 8.4 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.47 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.88 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.66 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.14 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 3.87 - 3.71 (m, 1H), 3.59 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.09 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 2.51 (t, J = 11.3 Hz, 1H), 1.27 (d, J = 6.2 Hz, 1H).
製造実施例9  化合物S9の製造
【００９３】
【化１３】
2019512011.tif 000017
【００９４】
化合物9-1の合成は化合物5-5と同様であった。
化合物9-2の合成方法はS1と同様であった。
化合物S9の合成方法はS3と同様であった。S9の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.54 (s, 1H), 8.39 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.15 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.84 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.56 (s, 2H), 7.46 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.66 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 6.17 (s, 1H), 3.67 (d, J = 11.9 Hz, 2H), 3.18 - 3.01 (m, 5H), 2.96 (d, J = 13.2 Hz, 2H), 2.82 (t, J = 11.4 Hz, 1H), 2.46 (t, J = 11.3 Hz, 1H), 1.14 (d, J = 6.2 Hz, 3H)。
【００９５】
製造実施例10  化合物S10の製造
【００９６】
【化１４】
2019512011.tif 000018
【００９７】
化合物10-1の合成は化合物5-5と同様であった。
化合物10-2の合成方法はS1と同様であった。
化合物S10の合成方法はS3と同様であった。S10の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3)δ 8.51 (s, 1H), 8.40 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.15 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.85 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.57 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 7.46 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.38 - 7.31 (m, 1H), 6.89 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.70 - 6.62 (m, 1H), 6.13 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 3.67 (d, J = 11.1 Hz, 2H), 3.09 (d, J = 4.7 Hz, 3H), 2.99 (td, J = 9.1, 4.4 Hz, 2H), 2.41 (t, J = 11.2 Hz, 2H), 1.15 (d,
J = 6.2 Hz, 6H)。
【００９８】
製造実施例11  化合物S11の製造
【００９９】
【化１５】
2019512011.tif 000019
【０１００】
化合物11-1の合成は化合物5-5と同様であった。
化合物S11の合成方法はS1と同様であった。S11の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.27 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.79 (d, J
= 8.0 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.52 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 7.42 (t, J =
7.5 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 6.84 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.64 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 3.62 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 3.28 (s, 6H), 2.61 (s, 5H), 2.54 (t, J = 5.4 Hz, 2H)。
【０１０１】
製造実施例12  化合物S12の製造
【０１０２】
【化１６】
2019512011.tif 000020
【０１０３】
化合物12-1の合成は文献WO2013170774の方法を参照する。
化合物12-2の合成は化合物5-5と同様であった。
化合物S12の合成方法はS1と同様であった。S12の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.71 (s, 1H), 8.43 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.15 (d, J= 5.8 Hz, 2H), 8.03 (d, J
= 6.7 Hz, 1H), 8.00 - 7.92 (m, 2H), 7.86 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 7.49 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.69 (d, J = 5.3 Hz,
1H), 3.71 (s, 2H), 3.11 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.54 (s, 8H), 2.32 (s, 4H).
製造実施例13  化合物S13の製造
【０１０４】
【化１７】
2019512011.tif 000021
【０１０５】
化合物13-1の合成は化合物5-5と同様であった。
化合物13-2の合成方法はS1と同様であった。
化合物S13の合成方法はS3と同様であった。S13の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 12.38 (s, 1H), 8.40 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.21 - 8.10 (m, 2H), 8.05 (s, 1H),
7.84 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 7.45 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 6.93 (dd, J = 17.1, 8.9 Hz, 2H), 6.64 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 6.23 (s, 1H), 3.48 (s, 2H), 3.12 - 3.03 (m, 5H), 2.84 (s, 3H), 2.53 (t, J =
10.8 Hz, 2H), 1.14 (d, J= 6.3 Hz, 6H).
製造実施例14  化合物S14の製造
【０１０６】
【化１８】
2019512011.tif 000022
【０１０７】
化合物14-1の合成は化合物5-5と同様であった。
化合物14-2の合成方法はS1と同様であった。
化合物S14の合成方法はS3と同様であった。S14の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 10.28 (s, 1H), 8.37 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.17 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 8.09 (s,
1H), 7.98 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 7.45 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 6.53 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.36 (s, 1H), 6.27 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.05 (s, 3H), 3.64 (d, J = 11.9 Hz, 2H), 3.05 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.98 (d, J = 6.6 Hz, 2H),
2.42 (t, J = 11.2 Hz, 2H), 1.15 (d, J = 6.2 Hz, 6H).
製造実施例15  化合物S15の製造
【０１０８】
【化１９】
2019512011.tif 000023
【０１０９】
化合物15-1の合成は化合物5-5と同様であった。
化合物15-2の合成方法はS1と同様であった。
化合物S15の合成方法はS3と同様であった。S15の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.40 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.491 - 7.43 (m, 2H), 7.24
(d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 6.41 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.27 (s, 1H), 6.13 (s, 1H), 3.67 (d, J=10.9Hz, 2H), 3.12 - 3.03 (m, 5H), 2.45 (t, J =1
1.2 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.17 (d, J = 6.8 Hz, 6H)。
【０１１０】
製造実施例16  化合物S16の製造
【０１１１】
【化２０】
2019512011.tif 000024
【０１１２】
化合物16-1の合成は化合物5-5と同様であった。
化合物16-2の合成方法はS1と同様であった。
化合物S16の合成方法はS3と同様であった。S16の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.77 (s, 2H), 8.49 - 8.36 (m, 2H), 8.15 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.85 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 7.51 - 7.44 (m, 1H), 7.34 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 6.11 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.77 (d, J = 12.7 Hz, 2H), 3.10 (d, J = 4.7 Hz, 3H), 2.94 - 2.81 (m, 2H), 2.54 (t, J = 11.7 Hz, 2H), 1.25 (s, 1H), 1.16 (d, J = 6.2 Hz, 6H).
製造実施例17  化合物S17の製造
【０１１３】
【化２１】
2019512011.tif 000025
【０１１４】
化合物17-1の合成は化合物5-5と同様であった。
化合物S17の合成方法はS1と同様であった。S17の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.61 (s, 1H), 8.40 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.19 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 8.02 (d, J
= 1.8 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 7.47 (t, J =
7.5 Hz, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.36 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.71 - 6.64 (m, 1H), 6.08 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 3.58 - 3.52 (m, 4H), 3.10 (d, J = 4.9 Hz, 3H), 2.56 - 2.49 (m, 4H), 2.36 (s, 3H).
製造実施例18  化合物S18の製造
【０１１５】
【化２２】
2019512011.tif 000026
【０１１６】
化合物18-1の合成は化合物5-5と同様であった。
化合物S18の合成方法はS1と同様であった。S18の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.26 (s, 1H), 8.40 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.18 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.85 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.58 (d, J= 7.1 Hz, 2H), 7.47 (t, J =
7.8 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 3.56 (s, 4H), 3.10 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.49 (s, 4H), 2.34 (s, 3H).
製造実施例19  化合物S19の製造
【０１１７】
【化２３】
2019512011.tif 000027
【０１１８】
化合物19-1の合成方法は文献WO2012040137の方法を参照する。
化合物19-2の合成：
1eqのCDI[カルボニルジイミダゾール]を乾燥のTHF[テトラヒドロフラン]に溶解させ、それに化合物19-1を入れ、40℃で30分間反応させた後、それにアンモニア水(20eq)のテトラヒドロフラン溶液を入れ、30℃で一晩反応させた。反応完了後、ジクロロメタンおよび水で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、そのまま次の反応に使用された。
【０１１９】
化合物S19の合成方法はS1と同様であった。S19の分析データ：1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10.62 (s, 1H), 8.63 - 8.51 (m, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.33 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.02 (dd, J = 6.9, 2.0 Hz, 1H), 7.82 (dd, J = 6.8, 1.9 Hz, 2H), 7.59 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 7.45 (dd, J = 9.2, 2.5 Hz, 1H), 6.80 (dd, J = 5.8, 2.0 Hz, 1H), 4.94 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.14 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.72 (q, J = 5.4 Hz, 2H), 2.86 (d, J = 4.4 Hz, 3H).
製造実施例20  化合物S20の製造
【０１２０】
【化２４】
2019512011.tif 000028
【０１２１】
化合物20-1の合成は化合物1-7と同様であった。
化合物20-2の合成方法はS1と同様であった。
化合物S20の合成方法はS3と同様であった。S20の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.19 (s, 1H), 8.34 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.17 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.68 (d, J
= 8.1 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.41 (dd, J = 11.5, 5.6 Hz, 2H), 7.30 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.41 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 3.45 (d, J = 12.3 Hz, 2H), 2.91 - 2.79 (m, 5H),
2.48 - 2.32 (m, 2H), 1.09 (d, J = 6.2 Hz, 6H)。
【０１２２】
製造実施例21  化合物S21の製造
【０１２３】
【化２５】
2019512011.tif 000029
【０１２４】
化合物21-2の合成方法はS1と同様であった。
化合物21-3の合成： 
化合物21-2をエタノールに溶解させ、塩化アンモニウム(10eq)の水溶液を入れた後、鉄粉(5eq)を入れ、80℃で5h反応させた。反応完了後、吸引ろ過し、ろ液を回転乾燥した後、ジクロロメタンおよび水で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、試料に調製してカラムにかけ、DCM:MeOH=30:1で化合物21-3を得た。
【０１２５】
化合物S21の合成：
化合物21-3を乾燥のジクロロメタンに溶解させ、窒素ガスの保護下において、氷浴でアクロイルクロリド(1.3eq)を入れた後、DIPEA(2eq)を入れ、添加終了後室温で一晩反応させた。反応完了後、ジクロロメタンおよび水で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、試料に調製してカラムにかけ、DCM:MeOH=30:1で化合物S21を得た。化合物S21の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.26 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 7.85 (s, 1H), 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.49 (d, J = 7.4 Hz, 3H), 7.36 (dt, J = 16.1, 8.1 Hz, 2H), 7.25 (d, J = 2.3
Hz, 1H), 6.64 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 6.37 - 6.15 (m, 2H), 5.65 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 2.95 (s, 3H)。
【０１２６】
製造実施例22  化合物S22の製造
【０１２７】
【化２６】
2019512011.tif 000030
【０１２８】
化合物22-1の合成は化合物21-3と同様であった。
化合物S22の合成方法はS21と同様であった。化合物S22の分析データ：1H NMR (300 MHz, DMSO)δ 10.76 (s, 1H), 10.41 (s, 1H), 8.53 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 8.39 - 8.28 (m, 2H), 8.09 - 8.00 (m, 1H), 7.97 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.88 - 7.80 (m, 2H), 7.75 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.59 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 6.84 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 6.46 (dd, J = 17.4, 10.3 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 17.3 Hz, 1H), 5.80 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 2.86 (d, J = 4.5 Hz, 3H)。
【０１２９】
製造実施例23  化合物S23の製造
【０１３０】
【化２７】
2019512011.tif 000031
【０１３１】
化合物23-1の合成方法は文献WO2013024130の方法を参照する。
化合物S23の合成：
化合物21-3をエタノールに溶解させ、化合物23-1(2eq)を入れた後、さらにDIPEA(2eq)を入れ、75℃で2日反応させた。反応完了後、反応液を回転乾燥した後、ジクロロメタン
および水で抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、試料に調製してカラムにかけ、DCM:MeOH=20:1で化合物S23を得た。化合物S23の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.67 (s, 1H), 8.34 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.11 (d, J=
5.8 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.56 - 7.49 (m, 2H), 7.43 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.31 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.65 (dd, J = 5.8, 2.3 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.43 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.54 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 3.76 - 3.64 (m, 4H), 3.06 (dd, J = 10.8, 5.2 Hz, 5H), 1.82 (s, 1H), 1.73 - 1.54 (m, 4H)。
【０１３２】
製造実施例24  化合物S24の製造
【０１３３】
【化２８】
2019512011.tif 000032
【０１３４】
化合物24-1の合成
化合物1-6をメタノールに溶解させ、氷浴において塩化チオニル(1.5eq)を入れ、添加完了後60℃に昇温させて5h反応させた。反応完了後、反応液を回転乾燥し、DCMおよび飽和炭酸水素ナトリウム溶液で抽出し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、そのまま次の反応に使用された。
【０１３５】
化合物24-2の合成方法はS1と同様であった。
化合物S24の合成方法はS3と同様であった。S24の分析データ：1H NMR (300 MHz, CDCl3)δ 8.71 (s, 1H), 8.45 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.21 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.92 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.63(d, J = 5.9 Hz, 2H), 7.51 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.47 - 7.40 (m, 1H), 6.95 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.85 - 6.78 (m, 1H), 6.13 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H),3.65 (d, J = 11.1 Hz, 2H), 2.94 (td, J = 9.1, 4.4 Hz, 2H), 2.39 (t, J = 11.2 Hz, 2H), 1.14 (d, J = 6.2 Hz, 6H)。
【０１３６】
二．試験実施例
1．化合物の受容体チロシンキナーゼFGFR1の酵素活性に対する抑制の初歩評価実験
試験方法：
1．酵素反応の基質であるPoly(Glu, Tyr)4:1を無カリウムイオンのPBS（10 mM リン酸ナトリウム緩衝液、150 mM NaCl、pH 7.2〜7.4）で20 μg/mLに希釈し、125 μL/ウェルでマイクロプレートを被覆し、37℃に置いて12〜16時間反応させた。ウェルにおける液体を捨てた。プレートを洗浄し、T-PBS（0.1％ Tween-20を含有する無カリウムイオンのPBS、200mL/ウェル）でプレートを5分/回で3回洗浄した。37℃オーブンでマイクロプレートを1〜2時間乾燥した。
【０１３７】
2．各ウェルに反応緩衝液(50 mM HEPES pH 7.4、50 mM MgCl2,、0.5 mM MnCl2、0.2 mM
Na3VO4、1 mM DTT)で希釈したATP溶液49mLを入れ、各ウェルに1 μLの被験化合物を入れ、さらに50μLの反応緩衝液で希釈したFGFR1キナーゼまたは組み換えタンパク質を入れて反応を再開させ、各実験に無ATP対照ウェルを2ウェル設けた。37℃のシェーカー（100 rpm）に置いて1時間反応させた。ウェルにおける液体を捨て、T-PBSでプレートを3回洗浄した。
【０１３８】
3．抗体PY99希釈液(抗体を5mg/mL BSA含有T-PBSで1:500で希釈したもの)を100mL/ウェルで入れ、37℃でシェーカーで0.5時間反応させた。ウェルにおける液体を捨て、T-PBSでプレートを3回洗浄した。
【０１３９】
4．西洋ワサビペルオキシダーゼ標識ヒツジ抗マウス二次抗体希釈液（抗体を5 mg/ml BSA含有T-PBSで1:2000で希釈したもの）を100mL/ウェルで入れ、37℃でシェーカーで0.5時間反応させた。ウェルにおける液体を捨て、T-PBSでプレートを3回洗浄した。
【０１４０】
5．2 mg/mLのOPD呈色液（0.03％ H2O2含有0.1Mクエン酸-クエン酸ナトリウム緩衝液(pH＝5.4)で希釈したもの）を100 mL/ウェルで入れ、25℃で1〜10分間遮光反応させた。
6．2M  H2SO4を50 μL/ウェルで入れて反応を停止し、波長調節可能なマイクロプレートリーダーVERSAmaxによって波長490 nmで数値を読み取った。
【０１４１】
7．結果分析
【０１４２】
【数１】
2019512011.tif 000033
【０１４３】
IC50値はマイクロプレートリーダー付属ソフトによって4パラメータ法でフィッティングして求めた。
化合物の受容体チロシンキナーゼFGFRの酵素活性に対する抑制レベルを下記表に示す。
【０１４４】
【表２】
2019512011.tif 000034
【０１４５】
分子レベルの測定結果から、このような化合物がFGFRに対して強い抑制活性を有し、化合物の半数抑制活性IC50が10 nM未満であったことが示された。
2．化合物の受容体チロシンキナーゼFGFRの細胞レベルの活性評価
試験方法：
化合物のSNU16細胞の増殖に対する抑制作用はCCK-8細胞計数キット(Dojindo)によって検出した。具体的な手順は以下の通りである。対数増殖期にあるSNU16細胞を適切な密度で96ウェルプレートに90 μL/ウェル接種し、一晩培養した後、異なる濃度の化合物を入れて72 h作用させ、かつ溶媒コントロール群（陰性コントロール）を設けた。化合物で細胞に72 h作用させた後、細胞増殖に対する化合物の影響はCCK-8細胞計数キット（Dojindo）によって検出し、CCK-8試薬を10 μL/ウェル入れ、37℃インキュベーターに2〜4時間置いた後、全波長式マイクロプレートリーダーSpectraMax 190で数値を読み取り、測定波長は450 nmであった。
【０１４６】
以下の式で化合物の腫瘍細胞の生長に対する抑制率（％）を算出した。
抑制率（％）＝（OD対照ウェル-OD投与ウェル）/OD対照ウェル×100％
IC50値はマイクロプレートリーダー付属ソフトによって4パラメータ法でフィッティングして求めた。
【０１４７】
化合物のSNU16細胞に対する増殖抑制率を下記表に示す。
【０１４８】
【表３】
2019512011.tif 000035
【０１４９】
NTa = 未測定
SNU16細胞増殖抑制実験の結果から、このような化合物が強い抑制活性を有し、一部の化合物のIC50が10 nM未満であったことが示された。
【０１５０】
3．化合物のFGFR2および下流シグナル分子のリン酸化の抑制実験
結果を図1に示す。結果から、当該化合物が細胞レベルでFGFRを標的として相応する下流シグナル経路のシグナル伝達を抑制したことが示された。
【０１５１】
4．チロシンキナーゼ活性抑制の体外選別試験
選別方法：         酵素結合免疫吸着法(ELISA)
チロシンキナーゼ： ザイモグラム
作用時間：         1h
【０１５２】
【表４−１】
2019512011.tif 000036
【０１５３】
【表４−２】
2019512011.tif 000037
【０１５４】
5．一部の化合物のラット薬物動態学の研究試験
1）  投与プラン
体重200〜220 gの雄のSDラット7匹を無作為に4または3匹ずつ2群に分け、胃内または静脈内によって化合物S10を投与したが、具体的なプランを下記表に示す。
【０１５５】
【表５】
2019512011.tif 000038
【０１５６】
試験前、12h断食し、水を自由に飲ませた。薬物を投与してから2h後、一緒に食事をさせた。
採血の時点およびサンプルの処理：
胃内投与：投与後0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0および24h。
【０１５７】
静脉投与：投与後5min、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0および24h。
以上の所定の時点でラットの眼球後静脈叢から静脈血0.3mLを取り、ヘパリンで処理した試験管に置き、11000rpmで5 min遠心し、血漿を分離し、-20℃の冷蔵庫で冷凍した。
【０１５８】
2）  サンプルのテストおよびデータの分析
LC/MS/MS法によってラットの血漿中S10を測定した。
ソフトWinNonlin 6.3(米国Pharsight社)の非コンパートメントモデルを使用して投与後の薬物動態学のパラメーターを算出した。
【０１５９】
ピーク到達濃度Cmaxおよびピーク到達時間Tmaxは実測値である。
薬物-時間曲線下面積AUC0-t値：台形法で計算した。AUC0-∞= AUC0-t + Ct/ke、Ctは測
定できた最後の時点の血中薬物濃度である。
【０１６０】
keは消失速度定数である。
消失半減期t1/2 =0.693 / ke、
クリアランスCL = D/AUC0-∞、
定常状態分布容積Vss = CL × MRT、
絶対生物的利用能F = (AUC胃内 × D静脈)/ (AUC静脈 × D胃内) ×100％。
【０１６１】
3）  試験結果
【０１６２】
【表６】
2019512011.tif 000039
【０１６３】
6．化合物のヒト肺癌NCI-H1581ヌードマウス皮下移植腫瘍の生長に対する抑制作用
1）  細胞株
ヒト肺癌NCI-H1581細胞株は当実験室で保存された。当該細胞株でヌードマウスの右側の脇下の皮下に接種し、細胞接種量は5×106/匹で、移植腫瘍が形成した後、そのまま接種して使用した。
【０１６４】
2）  実験方法
生長期の腫瘍組織を1.5 mm3程度に切り、無菌条件で、ヌードマウスの右側の脇下の皮下に接種した。ヌードマウスの皮下移植腫瘍は、ノギスで直径を測定し、腫瘍が平均体積約150〜160 mm3に生長した時点で動物を無作為に群分けした。S10 10 mg/kg、5 mg/kg、2.5 mg/kg群では、毎日1回経口投与し、連続して2週間投与した。溶媒対照群では、等量の注射用水を投与した。実験の全過程において、毎週2回移植腫瘍の直径を測定し、同時にマウスの体重を測った。腫瘍体積（tumor volume、TV）の計算式は、TV=1/2×a×b2で、ここで、a、bはそれぞれ長さと幅を表す。測定の結果から相対腫瘍体積（relative tumor
volume、RTV)を計算し、計算式は、RTV=Vt/V0である。ここで、V0は分けて投与する時点（即ちd0）で測定された腫瘍体積で、Vtは毎回の測定の時の腫瘍体積である。抗腫瘍活性の評価指標は相対腫瘍増殖率T/C（％）で、計算公式は、T/C(％)=(TRTV/CRTV)x100％で、TRTVは治療群RTVで、CRTVは陰性対照群RTVである。
【０１６５】
3) 結果
実験結果を下記表に示す。S10 10 mg/kg、5 mg/kgおよび2.5 mg/kg群では、毎日1回経口投与し、連続して2週間投与し、ヒト肺癌NCI-H1581ヌードマウス皮下移植腫瘍の生長に顕著な抑制作用があり、14日目に得られた腫瘍抑制率T/Cは百分率でそれぞれ10.03％、17.18％および40.19％であった。実験期間中において、各群の動物の状態が良く、マウスの死亡がなかった。
【０１６６】
【表７】
2019512011.tif 000040
【０１６７】
7．化合物S10のヒト胃癌SNU-16ヌードマウス皮下移植腫瘍の生長に対する抑制作用
1）  細胞株
ヒト胃癌SNU-16細胞株は当実験室で保存された。当該細胞株でヌードマウスの右側の脇下の皮下に接種し、細胞接種量は5×106/匹で、移植腫瘍が形成した後、さらにヌードマウスの体内で2回継代した後使用した。
【０１６８】
2）  実験方法
生長期の腫瘍組織を1.5 mm3程度に切り、無菌条件で、ヌードマウスの右側の脇下の皮下に接種した。ヌードマウスの皮下移植腫瘍は、ノギスで直径を測定し、腫瘍の平均体積が100 mm3程度になった時点で動物を無作為に群分けした。S10 30 mg/kgおよび10 mg/kg群では、毎日1回経口投与し、連続して21日投与した。AZD4547 10 mg/kg群では、毎日1回経口投与し、連続して21日投与した。溶媒対照群では、等量の注射用水を投与した。実験の全過程において、毎週2回移植腫瘍の直径を測定し、同時にマウスの体重を測った。腫瘍体積（tumor volume、TV）の計算式は、TV=1/2×a×b2で、ここで、a、bはそれぞれ長さと幅を表す。測定の結果から相対腫瘍体積（relative tumor volume、RTV)を計算し、計算式は、RTV=Vt/V0である。ここで、V0は分けて投与する時点（即ちd0）で測定された腫瘍体積で、Vtは毎回の測定の時の腫瘍体積である。抗腫瘍活性の評価指標は相対腫瘍増殖率T/C（％）で、計算公式は、T/C(％)=(TRTV/CRTV)x100％で、TRTVは治療群RTVで、CRTVは陰性対照群RTVである。
【０１６９】
3) 結果
実験結果は下記表に示す。S10 30 mg/kgおよび10 mg/kg群では、毎日1回経口投与し、連続して21日投与した後、ヒト胃癌SNU16ヌードマウス皮下移植腫瘍の生長に顕著な抑制作用があり、21日目に得られたT/Cは百分率でそれぞれ8.67％および25.35％であった。陽性対照薬物AZD4547 10 mg/kg群では、毎日1回経口投与し、連続して21日投与した後、ヒト胃癌SNU16ヌードマウス皮下移植腫瘍の生長に部分的な抑制作用があり、21日目に得られたT/Cは百分率で59.80％であった。実験期間中において、S10 30mg/kg群だけでマウスの平均体重が低下したが、マウスの状態がまだ良く、マウスの死亡がなかった。S10のヒト胃癌SNU-16ヌードマウス移植腫瘍の生長に対する抑制作用は顕著に化合物AZD4547より
も高かった。
【０１７０】
【表８】
2019512011.tif 000041
【０１７１】
8．化合物S10は同様にアミノピリジン母核を有するが、側鎖がインドールである類似物E7090（FGFR阻害剤、臨床第I相）と比べ、S10はヒト肺癌NCI-H1581ヌードマウス移植腫瘍の生長に対する抑制作用がより顕著で、比較の結果を下記表に示す。
【０１７２】
【表９】
2019512011.tif 000042
【０１７３】
T/Cは相対腫瘍増殖率で、数値が小さいほど、抗腫瘍活性が高いことを示す。化合物S10の投与量が2.5mg/kgの場合、T/C値が40％であったが、化合物E7090の投与量が6.25mg/kgの場合、T/C値が46％であったことから、同様の抗腫瘍抑制作用に達するために、化合物E7090の投与量がS10の2〜3倍になることを示された。ほかの結果を比較しても、同様に化合物S10のヒト肺癌NCI-H1581ヌードマウス皮下移植腫瘍の生長に対する抑制作用が顕著に化合物E7090よりも高かったことを示された。
【０１７４】
9．化合物S10はE7090と比べ、S10はヒト胃癌SNU-16ヌードマウス移植腫瘍の生長に対する抑制作用がより顕著で、比較の結果を下記表に示す。
【０１７５】
【表１０】
2019512011.tif 000043
【０１７６】
化合物S10の投与量が30mg/kgの場合、相対腫瘍増殖率T/C値が9％であったが、化合物E7090の投与量が50mg/kgの場合、相対腫瘍増殖率T/C値が18％であったという比較結果から、ヒト胃癌SNU-16ヌードマウス移植腫瘍モデルにおいて、体内で同様の抗腫瘍抑制作用に達するために、化合物S10の投与量がE7090よりも顕著に低かったことを示された。
【０１７７】
このように、新しく設計された化合物はFGFRに対して優れた酵素抑制活性を有し、依存する細胞増殖にも顕著な抑制活性があり、細胞レベルでFGFRを標的として相応する下流シグナル経路のシグナル伝達を抑制し、かつそのうちの代表的な化合物S10はさらに良い薬物動態学的性質を有し、FGFR依存の胃癌および肺癌に高度に敏感で、ヒト肺癌NCI-H1581ヌードマウス移植腫瘍の生長に対する抑制作用とヒト胃癌SNU-16ヌードマウス移植腫瘍の生長に対する抑制作用がE7090化合物よりも顕著に高いことがわかる。そのため、このような化合物は新規なFGFR阻害剤として良い研究・開発の将来性がある。
【０１７８】
各文献がそれぞれ単独に引用されるように、本発明に係るすべての文献は本出願で参考として引用する。また、本発明の上記の内容を読み終わった後、当業者が本発明を各種の変動や修正をすることができるが、それらの等価の形態のものは本発明の請求の範囲に含まれることが理解されるはずである。
【図１】
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【国際調査報告】
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2019512011.tif 000052
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