(57)【要約】本明細書に記載される主題は、抗体−ＰＲＯＴＡＣコンジュゲート（ＰＡＣ）、それらを含有する薬学的組成物、ならびに標的タンパク質分解が有益である疾患及び病態の治療におけるそれらの使用に向けられる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の化学構造を有するコンジュゲートであって、
Ａｂ−（Ｌ１−Ｄ）ｐ
式中、
Ｄは、構造Ｅ３ＬＢ−Ｌ２−ＰＢを有するＰＲＯＴＡＣであり、
Ｅ３ＬＢは、Ｌ２と共有結合したＥ３リガーゼ結合基であり、
Ｌ２は、Ｅ３ＬＢ及びＰＢと共有結合したリンカーであり、
ＰＢは、Ｌ２と共有結合したタンパク質結合基であり、
Ａｂは、Ｌ１と共有結合した抗体であり、
Ｌ１は、Ａｂ及びＤと共有結合したリンカーであり、
ｐは、約１〜約８の値を有する、コンジュゲート。
【請求項２】
Ｅ３ＬＢが、Ｅ３リガーゼに結合する基であり、前記Ｅ３リガーゼが、表１３〜２７に列挙されている、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項３】
Ｅ３ＬＢが、Ｅ３リガーゼに結合する基であり、前記Ｅ３リガーゼが、ｖｏｎ  Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ（ＶＨＬ）；セレブロン；ＸＩＡＰ；Ｅ３Ａ；ＭＤＭ２；後期促進複合体（ＡＰＣ）；ＵＢＲ５（ＥＤＤ１）；ＳＯＣＳ／ＢＣ−ｂｏｘ／ｅｌｏＢＣ／ＣＵＬ５／ＲＩＮＧ；ＬＮＸｐ８０；ＣＢＸ４；ＣＢＬＬ１；ＨＡＣＥ１；ＨＥＣＴＤ１；ＨＥＣＴＤ２；ＨＥＣＴＤ３；ＨＥＣＷ１；ＨＥＣＷ２；ＨＥＲＣ１；ＨＥＲＣ２；ＨＥＲＣ３；ＨＥＲＣ４；ＨＵＷＥ１；ＩＴＣＨ；ＮＥＤＤ４；ＮＥＤＤ４Ｌ；ＰＰＩＬ２；ＰＲＰＦ１９；ＰＩＡＳ１；ＰＩＡＳ２；ＰＩＡＳ３；ＰＩＡＳ４；ＲＡＮＢＰ２；ＲＮＦ４；ＲＢＸ１；ＳＭＵＲＦ１；ＳＭＵＲＦ２；ＳＴＵＢ１；ＴＯＰＯＲＳ；ＴＲＩＰ１２；ＵＢＥ３Ａ；ＵＢＥ３Ｂ；ＵＢＥ３Ｃ；ＵＢＥ４Ａ；ＵＢＥ４Ｂ；ＵＢＯＸ５；ＵＢＲ５；ＷＷＰ１；ＷＷＰ２；Ｐａｒｋｉｎ；Ａ２０／ＴＮＦＡＩＰ３；ＡＭＦＲ／ｇｐ７８；ＡＲＡ５４；ベータ−ＴｒＣＰ１／ＢＴＲＣ；ＢＲＣＡ１；ＣＢＬ；ＣＨＩＰ／ＳＴＵＢ１；Ｅ６；Ｅ６ＡＰ／ＵＢＥ３Ａ；Ｆ−ｂｏｘタンパク質１５／ＦＢＸＯ１５；ＦＢＸＷ７／Ｃｄｃ４；ＧＲＡＩＬ／ＲＮＦ１２８；ＨＯＩＰ／ＲＮＦ３１；ｃＩＡＰ−１／ＨＩＡＰ−２；ｃＩＡＰ−２／ＨＩＡＰ−１；ｃＩＡＰ（ｐａｎ）；ＩＴＣＨ／ＡＩＰ４；ＫＡＰ１；ＭＡＲＣＨ８；；Ｍｉｎｄ  Ｂｏｍｂ  １／ＭＩＢ１；Ｍｉｎｄ  Ｂｏｍｂ  ２／ＭＩＢ２；ＭｕＲＦ１／ＴＲＩＭ６３；ＮＤＦＩＰ１；ＮＥＤＤ４；ＮｌｅＬ；Ｐａｒｋｉｎ；ＲＮＦ２；ＲＮＦ４；ＲＮＦ８；ＲＮＦ１６８；ＲＮＦ４３；ＳＡＲＴ１；Ｓｋｐ２；ＳＭＵＲＦ２；ＴＲＡＦ−１；ＴＲＡＦ−２；ＴＲＡＦ−３；ＴＲＡＦ−４；ＴＲＡＦ−５；ＴＲＡＦ−６；ＴＲＩＭ５；ＴＲＩＭ２１；ＴＲＩＭ３２；ＵＢＲ５；及びＺＮＲＦ３からなる群から選択される、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項４】
Ｅ３ＬＢが、ＸＩＡＰ、ＶＨＬ、セレブロン、及びＭＤＭ２からなる群から選択されるＥ３リガーゼに結合する基である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項５】
Ｅ３ＬＢが、ＶＨＬに結合する化合物、ＶＨＬに結合するヒドロキシプロリン化合物、ＭＤＭ２に結合する化合物、セレブロンに結合する化合物、テトラヒドロ−ベンゾジアゼピノン  ナトリン、サリドマイド、レナリドマイド、及びポマリドマイドからなる群から選択される、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項６】
Ｅ３ＬＢが、以下の式を有するテトラヒドロ−ベンゾジアゼピノンであるＸＩＡＰ阻害剤であり、
【化６０】
2019522633.tif 000112
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５が、ＷＯ／２０１５／０７１３９３に記載される通りである、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項７】
ＰＢが、ＦｏｘＯｌ、ＨＤＡＣ、ＤＰ−１、Ｅ２Ｆ、ＡＢＬ、ＡＭＰＫ、ＢＲＫ、ＢＲＳＫ  Ｉ、ＢＲＳＫ２、ＢＴＫ、ＣＡＭＫＫ１、ＣＡＭＫＫアルファ、ＣＡＭＫＫベータ、Ｒｂ、Ｓｕｖ３９ＨＩ、ＳＣＦ、ｐ１９ＩＮＫ４Ｄ、ＧＳＫ−３、ｐｉ  ８ＩＮＫ４、ｍｙｃ、サイクリンＥ、ＣＤＫ２、ＣＤＫ９、ＣＤＧ４／６、サイクリンＤ、ｐｌ６  ＩＮＫ４Ａ、ｃｄｃ２５Ａ、ＢＭＩ１、ＳＣＦ、Ａｋｔ、ＣＨＫｌ／２、Ｃ１デルタ、ＣＫ１ガンマ、Ｃ２、ＣＬＫ２、ＣＳＫ、ＤＤＲ２、ＤＹＲＫ１Ａ／２／３、ＥＦ２Ｋ、ＥＰＨ−Ａ２／Ａ４／Ｂ１／Ｂ２／Ｂ３／Ｂ４、ＥＩＦ２Ａ  ３、Ｓｍａｄ２、Ｓｍａｄ３、Ｓｍａｄ４、Ｓｍａｄ７、ｐ５３、ｐ２１  Ｃｉｐｌ、ＰＡＸ、Ｆｙｎ、ＣＡＳ、Ｃ３Ｇ、ＳＯＳ、Ｔａｌ、Ｒａｐｔｏｒ、ＲＡＣＫ−１、ＣＲＫ、Ｒａｐｌ、Ｒａｃ、ＫＲａｓ、ＮＲａｓ、ＨＲａｓ、ＧＲＢ２、ＦＡＫ、ＰＩ３Ｋ、ｓｐｒｅｄ、Ｓｐｒｙ、ｍＴＯＲ、ＭＰＫ、ＬＫＢｌ、ＰＡＫ１／２／４／５／６、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＹＫ２、Ｓｒｃ、ＳＲＰＫ１、ＰＬＣ、ＰＫＣ、ＰＫＡ、ＰＫＢアルファ／ベータ、ＰＫＣアルファ／ガンマ／ゼータ、ＰＫＤ、ＰＬＫｌ、ＰＲＡＫ、ＰＲＫ２、ＲＩＰＫ２、ＷＡＶＥ−２、ＴＳＣ２、ＤＡＰＫｌ、ＢＡＤ、ＩＭＰ、Ｃ−ＴＡＫ１、ＴＡＫｌ、ＴＡＯｌ、ＴＢＫ１、ＴＥＳＫ１、ＴＧＦＢＲ１、ＴＩＥ２、ＴＬＫ１、ＴｒｋＡ、ＴＳＳＫ１、ＴＴＢＫ１／２、ＴＴＫ、Ｔｐｌ２／ｃｏｔｌ、ＭＥＫ１、ＭＥＫ２、ＰＬＤＬ  Ｅｒｋｌ、Ｅｒｋ２、Ｅｒｋ５、Ｅｒｋ８、ｐ９０ＲＳＫ、ＰＥＡ−１５、ＳＲＦ、ｐ２７ＫＩＰ１、ＴＩＦ  ｌａ、ＨＭＧＮ１、ＥＲ８１、ＭＫＰ−３、ｃ−Ｆｏｓ、ＦＧＦ−Ｒ１、ＧＣＫ、ＧＳＫ３ベータ、ＨＥＲ４、ＨＩＰＫ１／２／３／、ＩＧＦ−１Ｒ、ｃｄｃ２５、ＵＢＦ、ＬＡＭＴＯＲ２、Ｓｔａｔｌ、ＳｔａＯ、ＣＲＥＢ、ＪＡＫ、Ｓｒｃ、ＰＴＥＮ、ＮＦ−カッパＢ、ＨＥＣＴＨ９、Ｂａｘ、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、Ａｐａｆ−１、Ｃｙｔｏ  ｃ、ＢＣＬ−２、Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｓｍａｃ、ＸＩＡＰ、カスパーゼ−９、カスパーゼ−３、カスパーゼ−６、カスパーゼ−７、ＣＤＣ３７、ＴＡＢ、ＩＫＫ、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、Ｒ１Ｐ１、ＦＬＩＰ、ＴＡＫｌ、ＪＮＫｌ／２／３、Ｌｃｋ、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆ、Ｃ−Ｒａｆ、ＭＯＳ、ＭＬＫｌ／３、ＭＮ  ｌ／２、ＭＳＫｌ、ＭＳＴ２／３／４、ＭＰＳＫ１、ＭＥＫＫｌ、ＭＥ  Ｋ４、ＭＥＬ、ＡＳＫ１、ＭＩＮＫ１、ＭＫＫ１／２／３／４／６／７、ＮＥ２ａ／６／７、ＮＵＡＫ１、ＯＳＲ１、ＳＡＰ、ＳＴＫ３３、Ｓｙｋ、Ｌｙｎ、ＰＤＫ１、ＰＨＫ、ＰＩＭ１／２／３、アタキシン−１、ｍＴＯＲＣｌ、ＭＤＭ２、ｐ２１Ｗａｆｌ、サイクリンＤｌ、Ｌａｍｌｎ  Ａ、Ｔｐｌ２、Ｍｙｃ、カテニン、Ｗｎｔ、ＩＫＫ−ベータ、ＩＫＫ−ガンマ、ＩＫＫ−アルファ、ＩＫＫ−エプシロン、ＥＬＫ、ｐ６５ＲｅｌＡ、ＩＲＡＫＩ、ＩＲＡ２、ＩＲＡＫ４、ＩＲＲ、ＦＡＤＤ、ＴＲＡＦ６、ＴＲＡＦ３、ＭＫＫ３、ＭＫＫ６、ＲＯＣＫ２、ＲＳＫ１／２、ＳＧＫ１、ＳｍＭＬＣＫ、ＳＩＫ２／３、ＵＬＫ１／２、ＶＥＧＦＲ１、ＷＮＫｌ、ＹＥＳ１、ＺＡＰ７０、ＭＡＰ４Ｋ３、ＭＡＰ４Ｋ５、ＭＡＰＫｌｂ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２  Ｋ３、ｐ３８アルファ／ベータ／デルタ／ガンマＭＡＰＫ、オーロラＡ、オーロラＢ、オーロラＣ、ＭＣＡＫ、Ｃｌｉｐ、ＭＡＰＫＡＰＫ、ＦＡＫ、ＭＡＲＫ１／２／３／４、Ｍｕｃｌ、ＳＨＣ、ＣＸＣＲ４、Ｇａｐ−１、Ｍｙｃ、ベータ−カテニン／ＴＣＦ、Ｃｂｌ、ＢＲＭ、Ｍｃｌ１、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＡＲ、ＲＡＳ、ＥｒｂＢ３、ＥＧＦＲ、ＩＲＥ１、ＨＰＫ１、ＲＩＰＫ２、及びＥＲα（これらの全てのバリアント、変異、スプライスバリアント、インデル、及び融合体を含む）に結合する基である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項８】
ＰＢが、熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）阻害剤、キナーゼ及びホスファターゼ阻害剤、ＭＤＭ２阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ヒトリジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、免疫抑制化合物、ならびにヒトＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質、アリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）、ＲＥＦ受容体キナーゼ、ＦＫＢＰ、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、エストロゲン受容体（ＥＲ）、甲状腺ホルモン受容体、ＨＩＶプロテアーゼ、ＨＩＶインテグラーゼ、ＨＣＶプロテアーゼ、及びアシル−タンパク質チオエステラーゼ−１及び−２（ＡＰＴ１及びＡＰＴ２）を標的とする化合物からなる群から選択される、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項９】
ＰＢが、エストロゲン受容体アルファ（ＥＲａ）を標的とする基である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項１０】
前記Ａｂが、システイン操作された抗体またはそのバリアントである、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項１１】
Ａｂが、ＤＬＬ３、ＥＤＡＲ、ＣＬＬ１；ＢＭＰＲ１Ｂ；Ｅ１６；ＳＴＥＡＰ１；０７７２Ｐ；ＭＰＦ；ＮａＰｉ２ｂ；Ｓｅｍａ５ｂ；ＰＳＣＡ  ｈｌｇ；ＥＴＢＲ；ＭＳＧ７８３；ＳＴＥＡＰ２；ＴｒｐＭ４；ＣＲＩＰＴＯ；ＣＤ２１；ＣＤ７９ｂ；ＦｃＲＨ２；Ｂ７−Ｈ４；ＨＥＲ２；ＮＣＡ；ＭＤＰ；ＩＬ２０Ｒα；ブレビカン；ＥｐｈＢ２Ｒ；ＡＳＬＧ６５９；ＰＳＣＡ；ＧＥＤＡ；ＢＡＦＦ−Ｒ；ＣＤ２２；ＣＤ７９ａ；ＣＸＣＲ５；ＨＬＡ−ＤＯＢ；Ｐ２Ｘ５；ＣＤ７２；ＬＹ６４；ＦｃＲＨ１；ＩＲＴＡ２；ＴＥＮＢ２；ＰＭＥＬ１７；ＴＭＥＦＦ１；ＧＤＮＦ−Ｒａ１；Ｌｙ６Ｅ；ＴＭＥＭ４６；Ｌｙ６Ｇ６Ｄ；ＬＧＲ５；ＲＥＴ；ＬＹ６Ｋ；ＧＰＲ１９；ＧＰＲ５４；ＡＳＰＨＤ１；チロシナーゼ；ＴＭＥＭ１１８；ＧＰＲ１７２Ａ；ＭＵＣ１６及びＣＤ３３からなる群から選択されるポリペプチドのうちの１つ以上に結合する、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項１２】
Ａｂが、ＣＬＬ１、ＳＴＥＡＰ１、ＮａＰｉ２ｂ、ＳＴＥＡＰ２、ＴｒｐＭ４、ＣＲＩＰＴＯ、ＣＤ２１、ＣＤ７９ｂ、ＦｃＲＨ２、Ｂ７−Ｈ４、ＨＥＲ２、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７２、ＬＹ６４、Ｌｙ６Ｅ、ＭＵＣ１６、及びＣＤ３３からなる群から選択されるポリペプチドのうちの１つ以上に結合する、請求項１０に記載のコンジュゲート。
【請求項１３】
Ａｂが、Ｂ７−Ｈ４、ＨＥＲ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ２２、及びＮａＰｉ２ｂからなる群から選択されるポリペプチドのうちの１つ以上に結合する抗体である、請求項１２に記載のコンジュゲート。
【請求項１４】
前記抗体が、ＨＥＲ２またはＢ７−Ｈ４に結合する、請求項１２に記載のコンジュゲート。
【請求項１５】
前記抗体が、ＨＥＲ２に結合する、請求項１４に記載のコンジュゲート。
【請求項１６】
Ｌ１が、ペプチド模倣リンカーである、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項１７】
Ｌ１が、以下の式によって表されるペプチド模倣リンカーであり、
−Ｓｔｒ−（ＰＭ）−Ｓｐ−
式中、
Ｓｔｒは、Ａｂに共有結合したストレッチャー単位であり、
Ａｂは、抗体であり、
Ｓｐは、ＰＲＯＴＡＣ部分に共有結合した結合またはスペーサ単位であり、
ＰＭは、以下からなる群から選択される非ペプチド化学部分であり、
【化６１】
2019522633.tif 000113
Ｗは、−ＮＨ−ヘテロシクロアルキル−またはヘテロシクロアルキルであり、
Ｙは、ヘテロアリール、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ６アルキレン、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−ＮＨ２、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−ＮＨ−ＣＨ３、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｎ−（ＣＨ３）２、Ｃ１−Ｃ６アルケニル、またはＣ１−Ｃ６アルキレニルであり、
各Ｒ１は独立して、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、または（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３及びＲ２は各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、アリールアルキル、もしくはヘテロアリールアルキルであるか、またはＲ３及びＲ２は一緒になってＣ３−Ｃ７シクロアルキルを形成してもよく、
Ｒ４及びＲ５は各々独立して、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＯＣＨ２−であるか、またはＲ４及びＲ５は一緒になってＣ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成してもよい、請求項１６に記載のコンジュゲート。
【請求項１８】
Ｙが、ヘテロアリールであり、Ｒ４及びＲ５が一緒になってシクロブチル環を形成する、請求項１７に記載のコンジュゲート。
【請求項１９】
Ｙが、以下からなる群から選択される部分である、請求項１７に記載のコンジュゲート。
【化６２】
2019522633.tif 000114
【請求項２０】
Ｓｔｒは、以下の式によって表される化学部分であり、
【化６３】
2019522633.tif 000115
式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）Ｏ−、及びＣ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）−Ｃ２−Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ７ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリールアリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、及びヘテロアリールからなる群から選択される１〜５個の置換基によって置換されてもよく、各Ｒａは独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｓｐは、−Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−Ａｒ−Ｒｂ−であり、Ａｒは、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−である、請求項１７に記載のコンジュゲート。
【請求項２１】
Ｓｔｒが、以下の式を有し、
【化６４】
2019522633.tif 000116
式中、Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−、Ｎ（Ｒｃ）−（Ｃ２−Ｃ６アルキレン）−Ｎ（Ｒｃ）、及びＮ（Ｒｃ）−（Ｃ２−Ｃ６アルキレン）から選択され、各Ｒｃは独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｓｐは、−Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−Ａｒ−Ｒｂ−であり、Ａｒは、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−である、請求項１７に記載のコンジュゲート。
【請求項２２】
Ｌ１が、以下の式を有し、
【化６５】
2019522633.tif 000117
式中、Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルケニル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３及びＲ２は各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキルである、請求項１７に記載のコンジュゲート。
【請求項２３】
Ｌ１が、以下の式を有し、
【化６６】
2019522633.tif 000118
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ４及びＲ５は一緒になってＣ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成する、請求項１７に記載のコンジュゲート。
【請求項２４】
Ｌ１が、以下の式を有し、
【化６７】
2019522633.tif 000119
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２である、請求項１７に記載のコンジュゲート。
【請求項２５】
以下の式を有し、
【化６８】
2019522633.tif 000120
式中、
Ｓｐは、ＰＲＯＴＡＣ部分Ｄに共有結合した結合またはスペーサ単位であり、
Ｙは、ヘテロアリール、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ６アルキレン、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−ＮＨ２、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−ＮＨ−ＣＨ３、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｎ−（ＣＨ３）２、Ｃ１−Ｃ６アルケニル、またはＣ１−Ｃ６アルキレニルであり、
Ｒ１は独立して、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、または（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３及びＲ２は各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、アリールアルキル、もしくはヘテロアリールアルキルであるか、またはＲ３及びＲ２は一緒になってＣ３−Ｃ７シクロアルキルを形成してもよく、
Ｓｔｒは、以下の式によって表される化学部分であり、
【化６９】
2019522633.tif 000121
Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン及びＣ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）−Ｃ２−Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ７ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、及びヘテロアリールからなる群から選択される１〜５個の置換基によって置換されてもよく、各Ｒａは独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、ｐは、１、２、３、または４である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項２６】
以下を有し、
【化７０】
2019522633.tif 000122
式中、
Ｓｐは、ＰＲＯＴＡＣ部分Ｄに共有結合した結合またはスペーサ単位であり、
Ｒ４及びＲ５は各々独立して、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＯＣＨ２−であるか、またはＲ４及びＲ５は一緒になってＣ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成してもよく、
Ｒ１は独立して、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、または（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｓｔｒは、以下の式によって表される化学部分であり、
【化７１】
2019522633.tif 000123
Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン及びＣ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）−Ｃ２−Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ７ヘテロシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、及びヘテロアリールからなる群から選択される１〜５個の置換基によって置換されてもよく、各Ｒａは独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、ｐは、１、２、３、または４である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項２７】
Ｙが、ヘテロアリール、アリール、またはアルケニルであり、Ｒ６が、Ｃ１−Ｃ１０アルキレンである、請求項２５に記載のコンジュゲート。
【請求項２８】
Ｙが、以下である、請求項２５に記載のコンジュゲート。
【化７２】
2019522633.tif 000124
【請求項２９】
Ｙが、以下である、請求項２５に記載のコンジュゲート。
【化７３】
2019522633.tif 000125
【請求項３０】
Ｙが、以下である、請求項２５に記載のコンジュゲート。
【化７４】
2019522633.tif 000126
【請求項３１】
Ｓｔｒは、以下の式によって表される化学部分であり、
【化７５】
2019522633.tif 000127
Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ６アルキレンであり、
Ｓｐは、−Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−Ａｒ−Ｒｂ−であり、Ａｒは、アリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ３アルキレン）Ｏ−である、請求項２５に記載のコンジュゲート。
【請求項３２】
以下の式を有し、
【化７６】
2019522633.tif 000128
式中、
Ｙは、ヘテロアリール、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ６アルキレン、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−ＮＨ２、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−ＮＨ−ＣＨ３、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｎ−（ＣＨ３）２、Ｃ１−Ｃ６アルケニル、またはＣ１−Ｃ６アルキレニルであり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３及びＲ２は各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、アリールアルキル、もしくはヘテロアリールアルキルであるか、またはＲ３及びＲ２は一緒になってＣ３−Ｃ７シクロアルキルを形成してもよく、
ｐは、１、２、３、または４である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項３３】
以下の式を有し、
【化７７】
2019522633.tif 000129
式中、
ｐは、１、２、３、または４であり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ４及びＲ５は各々独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、前記アルキルは、非置換であるか、またはＲ４及びＲ５は、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成してもよい、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項３４】
Ｌ１が以下の式を有し、
【化７８】
2019522633.tif 000130
式中、Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ及びＣ１−Ｃ６アルキルから選択されるか、またはＲ１及びＲ２は、３、４、５、もしくは６員シクロアルキルもしくはヘテロシクリル基を形成する、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項３５】
ＰＡＣ１、ＰＡＣ２、ＰＡＣ３、ＰＡＣ４、及びＰＡＣ５からなる群から選択される、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項３６】
ｐが、約１．０〜約３である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項３７】
ｐが、約２である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項３８】
請求項１に記載のコンジュゲートと、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物。
【請求項３９】
治療を必要とするヒトにおける疾患を治療する方法であって、有効量の請求項１に記載のコンジュゲートまたは請求項３８に記載の組成物を前記ヒトに投与することを含む、方法。
【請求項４０】
前記疾患が癌である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記癌が、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、白血病、リンパ系腫瘍、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、及び肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸癌を含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｃａｎｃｅｒ）または腎臓癌（ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、ならびに頭頚部癌からなる群から選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記癌が、ＨＥＲ２陽性の癌である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＨＥＲ２陽性の癌が、乳癌または胃癌である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記疾患が、自己免疫疾患である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４５】
前記自己免疫疾患が、リウマチ学的障害、骨関節炎、自己免疫胃腸障害及び肝臓障害、血管炎、自己免疫神経障害、腎障害、自己免疫皮膚障害、血液疾患、アテローム性動脈硬化、ブドウ膜炎、自己免疫聴覚疾患、ベーチェット病、レイノー症候群、臓器移植、自己免疫内分泌障害、アジソン病、ならびに自己免疫甲状腺疾患からなる群から選択される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記自己免疫疾患が、リウマチ性関節炎、潰瘍性大腸炎、ＡＮＣＡ関連血管炎、ループス、多発性硬化症、シェーグレン症候群、グレーブス病、ＩＤＤＭ、悪性貧血、甲状腺炎、及び糸球体腎炎からなる群から選択される、請求項４５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年５月２０日出願の米国仮特許出願第６２／３３９，２５７号の優先権の利益を主張し、当該出願の内容はその内容が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
ＥＦＳ−ＷＥＢを介してテキストファイルとして提出された配列表の参照
配列表の正式なコピーは、２０１６年５月２０日作成の、ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴと名付けた７７キロバイトのサイズを有するファイルでＡＳＣＩＩ形式の配列表としてＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出され、本明細書と同時に提出されている。このＡＳＣＩＩ形式の文書に含まれる配列表は、本明細書の一部であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。配列番号１〜６は意図的に省略されている。
【０００３】
本明細書に記載される主題は、概して、標的タンパク質の細胞内分解を容易にするために有用である抗体−（タンパク質分解−標的キメラ）（ＰＲＯＴＡＣ）コンジュゲート分子に関する。
【背景技術】
【０００４】
細胞維持及び正常機能は、細胞タンパク質の制御された分解を必要とする。例えば、調節タンパク質の分解は、細胞周期における事象例えば、ＤＮＡ複製、染色体分離等を引き起こす。したがって、タンパク質のそのような分解は、細胞の増殖、分化、及び死に影響を及ぼす。
【０００５】
タンパク質の阻害剤は、細胞におけるタンパク質活性を遮断または低減することができる一方、細胞におけるタンパク質分解もまた、活性を低減させるか、または標的タンパク質を完全に除去することができる。したがって、細胞のタンパク質分解経路を利用することによって、タンパク質活性を低減または除去するための手段が提供され得る。細胞の主要な分解経路のうちの１つは、ユビキチン・プロテアソーム系として知られている。この系では、タンパク質をユビキチン化することによって、プロテアソームによる分解のためにタンパク質が標識される。タンパク質のユビキチン化は、タンパク質に結合し、そのタンパク質にユビキチン分子を付加するＥ３ユビキチンリガーゼによって達成される。Ｅ３ユビキチンリガーゼは、タンパク質に付加するためにＥ３ユビキチンリガーゼに対してユビキチンを利用可能にするＥ１及びＥ２ユビキチンリガーゼを含む経路の一部である。
【０００６】
この分解経路を利用するために、ＰＲＯＴＡＣが開発されてきた。ＰＲＯＴＡＣは、Ｅ３ユビキチンリガーゼを、分解のために標識されるタンパク質と一緒に合わせる。プロテアソームによる分解のためのタンパク質を容易にするために、ＰＲＯＴＡＣは、Ｅ３ユビキチンリガーゼに結合する基と、分解することが望まれるタンパク質に結合する基と、を含む。これらの基は、典型的には、リンカーによって接続される。この分子構造は、タンパク質がユビキチン化され、分解のために標識されるように、Ｅ３ユビキチンリガーゼをタンパク質と近接させることができる。
【０００７】
タンパク質標的を含有する細胞へのＰＲＯＴＡＣの増強した標的化送達が、当該技術分野において継続的に必要とされている。抗体−ＰＲＯＴＡＣコンジュゲートを使用する標的化送達は、抗体の特異性を使用した特定の細胞へのＰＲＯＴＡＣの送達を増強することができ、注入などのＰＲＯＴＡＣの他の投与モードに対して、細胞へのＰＲＯＴＡＣの送達の薬物動態も増強することができる。
【発明の概要】
【０００８】
一態様において、本明細書に記載される主題は、以下の式を有するＰＲＯＴＡＣ−抗体コンジュゲート（ＰＡＣ）に向けられ、
Ａｂ−（Ｌ１−Ｄ）ｐ
式中、Ｄは、構造Ｅ３ＬＢ−Ｌ２−ＰＢを有するＰＲＯＴＡＣであり、Ｅ３ＬＢは、Ｌ２に共有結合したＥ３リガーゼ結合基であり、Ｌ２は、Ｅ３ＬＢ及びＰＢに共有結合したリンカーであり、ＰＢは、Ｌ２に共有結合したタンパク質結合基であり、Ａｂは、Ｌ１に共有結合した抗体であり、Ｌ１は、Ａｂ及びＤに共有結合したリンカーであり、ｐは、約１〜約８の値を有する。
【０００９】
本明細書に記載される主題の別の態様は、ＰＡＣと、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と、を含む薬学的組成物である。
【００１０】
本明細書に記載される主題の別の態様は、ＰＡＣを含む薬学的組成物を対象に投与することによって病態及び疾患を治療する方法におけるＰＡＣの使用である。
【００１１】
本明細書に記載される主題の別の態様は、ＰＡＣを作製する方法である。
【００１２】
本明細書に記載される主題の別の態様は、ＰＡＣを含む薬学的組成物と、容器と、疾患または病態を治療するために薬学的組成物が使用され得ることを示す添付文書またはラベルと、を含む物品である。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】ＰＲＯＴＡＣ（Ａｂなし）、化合物Ｐ１、ならびにＰＲＯＴＡＣ−抗体コンジュゲート（ＰＡＣ）ＰＡＣ１及びＰＡＣ２について、ウェスタンブロットによるＥＲ−αの検出を示す。
【図２】操作されたＨＥＲ２−ＭＣＦ７ラインで３日間治療されたＥｎｄｏｘ−ＸＩＡＰ  ＰＡＣについて、蛍光強度によって判定されたＥＲαの定量化を図示する。培地：フェノールレッド不含ＲＰＭＩ中、１０％ＣＳ−ＦＢＳ。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
標的化タンパク質分解、ならびに関連する疾患及び障害の治療に有用な、本明細書においてＰＲＯＴＡＣ−抗体コンジュゲート（ＰＡＣ）と呼ばれる抗体−タンパク質分解標的キメラコンジュゲートが本明細書に開示される。本明細書に記載される主題は、ＰＲＯＴＡＣを標的細胞または組織に向けるために抗体標的化を利用する。本明細書に記載されるように、抗体をＰＲＯＴＡＣと接続させてＰＡＣを形成することにより、ＰＲＯＴＡＣが標的細胞または組織に送達されることが示されてきた。本明細書、例えば実施例１及び２に示されるように、抗原を発現する細胞は、抗原特異ＰＡＣによって標的化され得、それによって、ＰＡＣのＰＲＯＴＡＣ部分は、細胞内で標的細胞へと送達される。また本明細書に示されるように、細胞上に見出されない抗原に対する抗体を含むＰＡＣは、細胞へのＰＲＯＴＡＣの顕著な細胞内送達をもたらさない。
【００１５】
したがって、本明細書に記載される主題は、標的タンパク質のユビキチン化及びその後のタンパク質の分解をもたらすＰＲＯＴＡＣ−抗体コンジュゲート（ＰＡＣ）組成物に向けられる。組成物は、リンカー（Ｌ１）に共有結合した抗体を含み、該リンカーは、任意の利用可能な連結点でＰＲＯＴＡＣに共有結合し、該ＰＲＯＴＡＣは、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合（Ｅ３ＬＢ）部分を含み、該Ｅ３ＬＢ部分は、Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質、及び標的タンパク質を認識するタンパク質結合部分（ＰＢ）を認識する。本明細書に記載される主題は、タンパク質活性の調節、及びタンパク質活性に関連する疾患及び病態の治療に有用である。
【００１６】
本開示の主題は、これ以降でより十分に記載される。しかしながら、以下の記載において提示される教示の利益を有する、本開示の主題が属する分野の当業者には、本明細書に記載される本開示の主題の多くの修正及び他の実施形態が思い当たるであろう。したがって、本開示の主題が、開示される特定の実施形態に限定されるものではなく、修正及び他の実施形態が添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されることを理解されたい。言い換えれば、本明細書に記載される主題は、全ての代替、修正、及び等価物を網羅する。定義された用語、用語の使用法、記載される技術などを含め、組み込まれた文献、特許、及び同様の材料のうちの１つ以上が本出願とは異なるかまたはそれと矛盾する場合には、本出願が優先される。別途定義されない限り、本明細書に使用される全ての技術用語及び科学用語は、この分野における当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、その全体が参照により組み込まれる。
【００１７】
定義
「ＰＲＯＴＡＣ」という用語は、概して３つの構成要素、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合基（Ｅ３ＬＢ）、リンカーＬ２、及びタンパク質結合基（ＰＢ）を有するタンパク質分解標的キメラ分子を指す。
【００１８】
「残基」、「部分」、または「基」という用語は、別の構成要素に共有結合または連結した構成要素を指す。例えば、「ＰＲＯＴＡＣの残基」は、それ自体が任意に抗体とさらに結合し得るリンカーＬ２などの１つ以上の基に共有結合したＰＲＯＴＡＣを指す。
【００１９】
「共有結合した（ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ  ｂｏｕｎｄ）」または「共有結合した（ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ  ｌｉｎｋｅｄ）」という用語は、１つ以上の電子対を共有することによって形成された化学結合を指す。
【００２０】
本明細書で使用される場合、「ペプチド模倣」またはＰＭという用語は、非ペプチド化学部分を意味する。ペプチドは、ペプチド（アミド）結合によって連結したアミノ酸モノマーの短鎖であり、この共有化学結合は、１つのアミノ酸のカルボキシル基が他のアミノ酸のアミノ基と反応したときに形成される。最も短いペプチドは、単一のペプチド結合によって結合した２個のアミノ酸からなるジペプチドであり、トリペプチド、テトラペプチドなどがそれに続く。ペプチド模倣化学部分は、非アミノ酸化学部分を含む。ペプチド模倣化学部分はまた、１つ以上の非アミノ酸化学単位によって分離された１つ以上のアミノ酸を含み得る。ペプチド模倣化学部分は、ペプチド結合によって連結した２つ以上の隣接するアミノ酸をその化学構造中のどの部分にも含有しない。
【００２１】
本明細書における「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、具体的には、それらが所望の生物活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二量体、多量体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を網羅する（Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｊｏｕｒ．ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１７０：４８５４−４８６１）。抗体は、マウス、ヒト、ヒト化、キメラであるか、または他の種に由来してもよい。抗体は、特異的抗原を認識し、かつそれに結合することができる、免疫系によって生成されるタンパク質である。（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。標的抗原は、一般に、複数の抗体上のＣＤＲ（相補性決定領域）によって認識される、エピトープとも呼ばれる多数の結合部位を有する。異なるエピトープに特異的に結合する各抗体は、異なる構造を有する。そのため、１つの抗原は、２つ以上の対応する抗体を有する場合がある。抗体は、全長免疫グロブリン分子または全長免疫グロブリン分子の免疫活性部分、すなわち、目的の標的の抗原またはその一部に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含有する分子を含み、かかる標的には、癌細胞または自己免疫疾患に関連する自己免疫抗体を産生する細胞が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に開示される免疫グロブリンは、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、またはサブクラスの免疫グロブリン分子であってもよい。免疫グロブリンは、任意の種に由来し得る。しかしながら、一態様において、免疫グロブリンは、ヒト、マウス、またはウサギ起源のものである。
【００２２】
本明細書で使用される場合、「抗体断片（複数可）」という用語は、全長抗体の一部、一般に、その抗原結合領域または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖抗体；ミニボディ（Ｏｌａｆｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓｉｇｎ  ＆  Ｓｅｌ．１７（４）：３１５−３２３）、Ｆａｂ発現ライブラリによって産生された断片、抗イディオ（抗−Ｉｄ）抗体、ＣＤＲ（相補性決定領域）、及び癌細胞抗原、ウイルス抗原、または微生物抗原に免疫特異的に結合する、上記のうちのいずれかのエピトープ結合断片；ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。
【００２３】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る天然型の変異の可能性以外には同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対して向けられる。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して向けられる。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の抗体が混入することなく合成することができる点で有利である。「モノクローナル」という修飾語句は、実質的に均質な抗体集団から得られた抗体の特性を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるものではない。例えば、本明細書に記載される主題に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製され得るか、または組み換えＤＮＡ法（例えば、ＵＳ４８１６５６７；ＵＳ５８０７７１５を参照されたい）によって作製され得る。モノクローナル抗体はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７に記載される技術を使用して、ファージ抗体ライブラリから単離されてもよい。
【００２４】
本明細書のモノクローナル抗体は、具体的には、それらが所望の生物活性を呈する限り、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の種に由来するかまたは特定の抗体クラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか、または均質であり、鎖（複数可）の残りの部分は、別の種に由来するかまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか、または均質である、「キメラ」抗体を含む（ＵＳ４８１６５６７；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５）。本明細書における目的のキメラ抗体には、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿など）に由来する可変ドメイン抗原結合配列とヒト定常領域配列とを含む「霊長類化」抗体が含まれる。
【００２５】
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部が特定の源または種に由来し、重鎖及び／または軽鎖の残りの部分が異なる源または種に由来する抗体を指す。
【００２６】
抗体の「クラス」とは、その重鎖によって保有される定常ドメインまたは定常領域の種類を指す。抗体には、５つの主要なクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分けられ得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００２７】
本明細書で使用される場合、「無傷抗体」という用語は、ＶＬ及びＶＨドメイン、ならびに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含むものである。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列変異型であり得る。無傷抗体は、抗体のＦｃ定常領域（天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列変異型Ｆｃ領域）に特有の生物活性を指す１つ以上の「エフェクター機能」を有し得る。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；及びＢ細胞受容体及びＢＣＲなどの細胞表面受容体の下方制御が挙げられる。
【００２８】
本明細書で使用される場合、「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を意味する。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異型Ｆｃ領域を含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端にまで及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在しても存在しなくてもよい。本明細書において別途明記されない限り、Ｆｃ領域または定常領域中のアミノ酸残基の付番は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されるＥＵ付番システムに従う。
【００２９】
本明細書で使用される場合、「フレームワーク」または「ＦＲ」という用語は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメイン、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）において以下の配列で現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
【００３０】
「全長抗体」、「無傷抗体」、及び「全抗体」という用語は、天然抗体構造と実質的に同様な構造を有するか、または本明細書で定義されるようにＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように、本明細書において互換的に使用される。
【００３１】
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生されるか、またはヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト源に由来する抗体の配列に対応するアミノ酸配列、または他のヒト抗体コード配列を保有するものを指す。ヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。
【００３２】
「ヒト化」抗体とは、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、全てまたは実質的に全てのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）が非ヒト抗体のものに対応し、全てまたは実質的に全てのＦＲがヒト抗体のものに対応する、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインのうちの実質的に全てを含むことになる。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含み得る。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化」形態とは、ヒト化を経た抗体を指す。
【００３３】
「単離された抗体」とは、その天然環境の構成要素から分離されたものである。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動法（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフィー法（例えば、イオン交換もしくは逆相ＨＰＬＣ）によって判定される、９５％超または９９％の純度まで精製される。抗体精製の評価のための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。
【００３４】
「単離された核酸」とは、その天然環境から分離された核酸分子を指す。単離された核酸には、核酸分子を通常は含有する細胞内に含有された核酸分子を指すが、この核酸分子は、染色体外、またはその天然染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
【００３５】
「抗体をコードする単離された核酸」とは、抗体の重鎖及び軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクターまたは別個のベクター中の核酸分子（複数可）、及び宿主細胞中の１つ以上の一に存在する核酸分子（複数可）が含まれる。
【００３６】
「裸抗体」とは、異種部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。裸抗体は、医薬製剤中に存在し得る。
【００３７】
「天然型の抗体」とは、異なる構造を有する天然型の免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然型のＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合された２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖で構成された、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端に向けて、各重鎖は、可変重ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｈｅａｖｙドメイン）または重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端に向けて、各軽鎖は、可変軽ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｌｉｇｈｔドメイン）または軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの種類のうちの１つに割り当てられ得る。
【００３８】
参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大配列同一性パーセントを達成するために配列を整列させ、必要であればギャップを導入した後に、かついかなる保存的置換も配列同一性の一部として見なさずに、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを判定する目的のためのアラインメントは、当該技術分野内の様々な手法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたる最大アラインメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列を整列させるための適切なパラメータを判定することができる。しかしながら、本明細書の目的において、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作成され、ソースコードは、米国著作権局（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，２０５５９）に利用者文書と共に提出され、米国著作権登録第ＴＸＵ５１００８７号として登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から公的に利用可能であるか、またはソースコードからコンパイルすることができる。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標）  Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステム上での使用のためにコンパイルされなければならない。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変動しない。
【００３９】
アミノ酸配列比較のためにＡＬＩＧＮ−２が用いられる状況において、所与のアミノ酸配列Ａの、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれに対するアミノ酸配列同一性％（代替的には、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれに対するある特定のアミノ酸配列同一性％を有するかまたは含む所与のアミノ酸配列Ａと表現することができる）は、以下のように計算され、
１００×分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によってＡ及びＢのそのプログラムの配列において同一の一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ａ対Ｂのアミノ酸配列同一性％は、Ｂ対Ａのアミノ酸配列同一性％と等しくならないことが理解されよう。別途明記されない限り、本明細書に使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落にに際されるようにＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られる。
【００４０】
それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、無傷抗体は異なる「クラス」に割り当てられ得る。無傷免疫グロブリン抗体には、５つの主要なクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２にさらに分けられ得る。抗体の異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元構成は、公知である。Ｉｇ形態には、ヒンジ修飾またはヒンジレス形態（Ｒｏｕｘ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：４０８３−４０９０；Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６７：７２４６−７２５６；ＵＳ２００５／００４８５７２；ＵＳ２００４／０２２９３１０）が含まれる。
【００４１】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークを指す。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列は、可変ドメイン配列の下位群からである。一般に、配列の下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３における下位群である。一実施形態では、ＶＬの場合、下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記）における下位群カッパＩである。一実施形態では、ＶＨの場合、下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記）における下位群カッパＩＩＩである。
【００４２】
本明細書の目的において、「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下に定義されるヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、それと同じアミノ酸配列を含んでもよく、またはそれはアミノ酸配列の変化を含有してもよい。いくつかの実施形態では、アミノ酸の変化の数は、１０未満、９未満、８未満、７未満、６未満、５未満、４未満、３未満、または２未満である。いくつかの実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列が同一である。
【００４３】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体を抗原に結合させることに関与する抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然型の抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、一般に、類似の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ｐａｇｅ９１（２００７）を参照されたい。）抗原結合特異性を付与するために単一のＶＨまたはＶＬドメインが十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、それぞれ相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリをスクリーニングするために、抗体由来のＶＨまたはＶＬドメインを使用して単離され得る。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。
【００４４】
「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、本明細書で使用される場合、配列が超可変であり、かつ／または構造的に画定されたループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般に、天然型の四本鎖抗体は、ＶＨにおいて３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、及びＶＬにおいて３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の６つのＨＶＲを含む。ＨＶＲは、一般に、超可変ループ由来の、かつ／または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は、最も高い可変性を有し、かつ／または抗原認識に関与している。例示的な超可変ループは、アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）において生じる。（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）。）例示的なＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基２４〜３４、Ｌ２のアミノ酸残基５０〜５６、Ｌ３のアミノ酸残基８９〜９７、Ｈ１のアミノ酸残基３１〜３５Ｂ、Ｈ２のアミノ酸残基５０〜６５、及びＨ３のアミノ酸残基９５〜１０２において生じる。（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）。）ＶＨにおけるＣＤＲ１を除いて、ＣＤＲは、一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲはまた、抗原に接触する残基である「特異性決定残基」または「ＳＤＲ」を含む。ＳＤＲは、短縮−ＣＤＲ（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ−ＣＤＲ）またはａ−ＣＤＲと呼ばれるＣＤＲの領域内に含有される。例示的なａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基３１〜３４、Ｌ２のアミノ酸残基５０〜５５、Ｌ３のアミノ酸残基８９〜９６、Ｈ１のアミノ酸残基３１〜３５Ｂ、Ｈ２のアミノ酸残基５０〜５８、及びＨ３のアミノ酸残基９５〜１０２において生じる。（Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい。）別途示されない限り、ＨＶＲ残基及び可変ドメイン中の他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記）に従って付番される。
【００４５】
「エフェクター機能」とは、抗体アイソタイプによって異なる、抗体のＦｃ領域に特有の生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
【００４６】
「エピトープ」という用語は、抗体が結合する、抗原分子上の特定の部位を指す。
【００４７】
「エピトープ４Ｄ５」、または「４Ｄ５エピトープ」、または「４Ｄ５」は、抗体４Ｄ５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１０４６３）及びトラスツズマブが結合する、ＨＥＲ２の細胞外ドメイン内の領域である。このエピトープは、ＨＥＲ２の膜貫通ドメインに近接し、ＨＥＲ２のドメインＩＶ内にある。４Ｄ５エピトープに結合する抗体についてスクリーニングするために、抗体，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されるものなどの定期的なクロスブロッキングアッセイが実施され得る。代替的には、抗体がＨＥＲ２（例えば、ＨＥＲ２（配列番号３９）を含む、約残基５５０〜約残基６１０の領域中の任意の１つ以上の残基）の４Ｄ５エピトープに結合するかどうかを評価するために、エピトープマッピングが実施され得る。
【００４８】
「エピトープ２Ｃ４」または「２Ｃ４エピトープ」は、抗体２Ｃ４が結合する、ＨＥＲ２の細胞外ドメイン内の領域である。２Ｃ４エピトープに結合する抗体についてスクリーニングするために、抗体，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されるものなどの定期的なクロスブロッキングアッセイが実施され得る。代替的には、抗体がＨＥＲ２の２Ｃ４エピトープに結合するかどうかを評価するためにエピトープマッピングが実施され得る。エピトープ２Ｃ４は、ＨＥＲ２の細胞外ドメイン内のドメインＩＩ由来の残基を含む。２Ｃ４抗体及びペルツズマブは、ドメインＩ、ＩＩ、及びＩＩＩの接合点においてＨＥＲ２の細胞外ドメインに結合する（Ｆｒａｎｋｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ５：３１７−３２８（２００４））。
【００４９】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との単結合部位の間の非共有相互作用の総計の強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対（例えば、抗体及び抗原）のメンバー間の１：１相互作用を反映する本質的な結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表され得る。親和性は、本明細書に記載されるものを含む、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための特定の例証的及び例示的な実施形態が以下に記載される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦５ｎｍ、≦４ｎＭ、≦３ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ未満、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する
【００５０】
「親和性成熟」抗体とは、そのような改変を保有しない親抗体と比較して、１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）中に１つ以上の改変を有する抗体を指し、そのような改変は、抗体の光源に対する親和性の向上をもたらす。
【００５１】
「ベクター」という用語は、本明細書で使用される場合、それが結合している別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、ならびにそれが導入された宿主細胞のゲノム内に組み込まれたベクターを含む。ある特定のベクターは、それらが動作可能に結合している核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターは、本明細書において「発現ベクター」と称される。
【００５２】
「遊離システインアミノ酸」という用語は、本明細書で使用される場合、親抗体内へと操作され、チオール官能基（−ＳＨ）を有し、かつ分子内または分子間ジスルフィド架橋として対形成されていないシステインアミノ酸残基を指す。「アミノ酸」という用語は、本明細書で使用される場合、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、メチオニン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、トリプトファン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、またはシトルリンを意味する。
【００５３】
「リンカー」、「リンカー単位」、または「リンク」という用語は、本明細書で使用される場合、ＰＲＯＴＡＣ部分を抗体と、またはＰＲＯＴＡＣの構成要素をＰＲＯＴＡＣの別の構成要素と共有結合させる原子の鎖を含む化学部分を意味する。様々な実施形態では、リンカーは、Ｌ１またはＬ２として指定される二価基である。
【００５４】
「患者」、または「個体」、または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、ならびにげっ歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、患者、個体、または対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、患者は、「癌患者」、すなわち、癌の１つ以上の症状を患っているかまたは患う危険性を有する患者であり得る。
【００５５】
「患者集団」とは、癌患者の群を指す。そのような集団を使用して、薬物の統計学的に有意な有効性及び／または安全性を実証することができる。
【００５６】
「再発した」患者は、寛解後に癌の兆候または症状を有する患者である。任意に、患者は、アジュバントまたはネオアジュバント療法後に再発している。
【００５７】
「ＨＥＲ発現、増幅、または活性化を提示する」癌または生体試料は、診断検査において、ＨＥＲ受容体を発現（過剰発現を含む）し、増幅したＨＥＲ遺伝子を有し、かつ／または別様にＨＥＲ受容体の活性化もしくはリン酸化を実証するものである。
【００５８】
本明細書における「ネオアジュバント療法」または「術前療法」とは、手術の前に与えられる療法を指す。ネオアジュバント療法の目的は、即時の全身治療を提供し、全身療法によって従う標準的な手術手順に従った場合にさもなければ増殖し得る微小転移を潜在的に根絶させることである。ネオアジュバント療法はまた、腫瘍サイズを低減する助けとなり、それによって、最初は切除不可能であった腫瘍の完全な切除、または臓器の一部及びその機能の保存を可能にし得る。さらに、ネオアジュバント療法は、薬物有効性のインビボ評価を許容し、その後の治療の選択をガイドし得る。
【００５９】
本明細書における「アジュバント療法」とは、疾患再発の危険性を低減するために、残存病変の形跡が一切検出されない場合の最終的な手術後に与えられる療法を指す。アジュバント療法の目的は、癌の再発を防止し、したがって、癌関連死の可能性を低減させることである。本明細書におけるアジュバント療法は、ネオアジュバント療法を明確に除外する。
【００６０】
「最終的な手術」は、医学界で使用される用語として使用される。最終的な手術には、例えば、全ての肉眼で見ることができる腫瘍の除去または切除につながるものを含む、腫瘍の除去または切除につながる、外科的または別様の手技が含まれる。最終的な手術には、例えば、腫瘍の完全なもしくは治癒的な切除、または完全な肉眼的切除が含まれる。最終的な手術には、１つ以上の段階で生じる手技が含まれ、例えば、１つ以上の外科的もしくは他の手技が腫瘍の切除前に実施される多段階の外科的手技が含まれる。最終的な手術には、関連する臓器、臓器及び組織の一部、ならびに周囲の臓器、例えばリンパ節、臓器の一部、または組織を含む腫瘍を除去または切除するための手技が含まれる。除去は不完全であり得、その結果、腫瘍細胞は、検出されないものの残存し得る。
【００６１】
「生存」とは、患者が生きたままであることを指し、無病生存（ＤＦＳ）、無増悪生存（ＰＦＳ）、及び全生存（ＯＳ）が含まれる。生存は、カプラン・マイヤー法によって推定することができ、生存における任意の差異は、階層別対数順位検定によって算出される。
【００６２】
「無増悪生存期間」（ＰＦＳ）は、治療の１日目から、記録された疾患進行（単離ＣＮＳ進行を含む）または研究中の任意の原因による死亡のいずれか先に生じた方までの期間である。
【００６３】
「無病生存（ＤＦＳ）」とは、治療の開始から、または最初の診断から、既定の期間、例えば、約１年、約２年、約３年、約４年、約５年、約１０年などにわたって、癌が戻ることなく患者が生きたままであることを指す。本明細書に記載される主題の一態様において、ＤＦＳは、治療意図の原理に従って分析され、すなわち、患者は、それらのそれらの割り当てられた療法に基づいて評価される。ＤＦＳの分析に使用される事象には、癌の局所、限局性、及び遠隔再発、二次癌の発生、ならびに事前の事象（例えば、乳癌再発または二次原発癌）を伴わない患者における任意の原因による死亡が含まれ得る。
【００６４】
「全生存」とは、治療の開始から、または最初の診断から、既定の期間、例えば、約１年、約２年、約３年、約４年、約５年、約１０年などにわたって患者が生きたままであることを指す。
【００６５】
「生存期間の延長」とは、未治療の患者に対する、または対照治療プロトコルに対する、治療される患者におけるＤＦＳ及び／またはＯＳの増加を意味する。生存期間は、治療の開始後、または初期診断後、少なくとも約６カ月、または少なくとも約１年、または少なくとも約２年、または少なくとも約３年、または少なくとも約４年、または少なくとも約５年、または少なくとも約１０年等にわたって監視される。
【００６６】
「単独療法」とは、治療期間の間に癌または腫瘍の治療のために単一の治療剤のみを含む治療レジメンを意味する。
【００６７】
「維持療法」とは、疾患の再発または進行の可能性を低減させるために与えられる治療レジメンを意味する。維持療法は、対象の一生涯までの長期間を含む、任意の期間にわたって提供され得る。維持療法は、初期療法の後に、または初期療法もしくは追加の療法と併せて提供され得る。維持療法に使用される投薬量は変動し得、他の種類の両方に使用される投薬量と比較して少ない投薬量を含み得る。
【００６８】
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養」という用語は、互換的に使用され、外因性の核酸が導入された細胞を指し、これにはかかる細胞の子孫も含まれる。宿主細胞には、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれ、これには、初代形質転換細胞、及び継代の数にかかわらずそれに由来する子孫も含まれる。子孫は、核酸含有量が親細胞と完全に同一ではない場合があるが、変異を含み得る。最初に形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物活性を有する変異子孫が、本明細書に含まれる。
【００６９】
「癌」及び「癌性」という用語は、制御されていない細胞成長／増殖を典型的に特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指すか、または説明する。「腫瘍」は、１つ以上の癌性細胞を含む。癌の例は、本明細書の他の箇所に提供される。
【００７０】
「ＨＥＲ２陽性」の癌は、正常レベルよりも高いＨＥＲ２を有する癌細胞を含む。ＨＥＲ２陽性の癌には、ＨＥＲ２陽性乳癌及びＨＥＲ２陽性胃癌が含まれる。任意に、ＨＥＲ２陽性の癌は、２＋もしくは３＋の免疫組織化学（ＩＨＣ）スコア、及び／または≧２．０のインサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）増幅度を有する。「ＨＥＲ２陽性細胞」という用語は、その表面上にＨＥＲ２を発現する細胞を指す。
【００７１】
「早期乳癌（ｅａｒｌｙ  ｓｔａｇｅ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ）（ＥＢＣ）」または「早期乳癌（ｅａｒｌｙ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ）」という用語は、乳房または腋窩リンパ節を越えて広がっていない乳癌を指すために本明細書で使用される。これには、非浸潤性乳管癌、ならびにＩ期、ＩＩＡ期、ＩＩＢ期、及びＩＩＩＡ期乳癌が含まれる。
【００７２】
「０期」、「Ｉ期」、「ＩＩ期」、「ＩＩＩ期」、または「ＩＶ期」、及びこの分類内での様々なサブステージとしての腫瘍または癌への言及は、当該技術分野で既知の全病期分類（Ｏｖｅｒａｌｌ  Ｓｔａｇｅ  Ｇｒｏｕｐｉｎｇ）またはローマ数字式分類（Ｒｏｍａｎ  Ｎｕｍｅｒａｌ  Ｓｔａｇｉｎｇ）法を使用した腫瘍または癌の分類を示す。癌の実際の病気は癌の種類に依存するものの、一般に、０期の癌は原位置の病変であり、Ｉ期の癌は小さい局所腫瘍であり、ＩＩ期及びＩＩＩ期の癌は、局所リンパ節の関与を呈する進行性の局所腫瘍であり、ＩＶ期の癌は、転移性の癌を表す。腫瘍の各種類の特定の病期は、熟練の臨床医に既知である。
【００７３】
「転移性乳癌」という用語は、血管またはリンパによって癌細胞が原発部位から体内の他の箇所の１つ以上の部位に移って、乳房以外の１つ以上の器官において１つ以上の二次腫瘍を形成している、乳癌の状態を意味する。
【００７４】
「進行」癌とは、局所浸潤または転移のいずれかによって原発の部位または器官の外に広がっているものである。したがって、「進行」癌という用語は、局所進行性及び転移性の疾患の両方を含む。「再発」癌とは、初期治療、例えば手術への応答後に、原発部位または遠隔部位のいずれかで再成長したものである。「局所再発」癌とは、治療後に、以前に治療した癌と同じ場所に戻る癌である。「手術可能な」または「切除可能な」癌は、原発器官に限局され、手術（切除）に適している癌である。「切除不可能な（ｎｏｎ−ｒｅｓｅｃｔａｂｌｅ）」または「切除不可能な（ｕｎｒｅｓｅｃｔａｂｌｅ）」癌は、手術によって除去（切除）することができな。
【００７５】
本明細書で使用される場合、「細胞傷害性剤」という用語は、細胞機能を阻害もしくは防止し、かつ／または細胞死もしくは破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害性剤には、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；化学療法剤または薬物（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他のインターカレート剤）；成長阻害剤；酵素及びその断片、例えば核酸分解酵素；抗生物質；細菌、真菌、植物、または動物起源の小分子毒素または酵素活性毒素（それらの断片及び／またはバリアントを含む）；ならびに以下に開示される様々な抗腫瘍薬及び抗癌薬が含まれるが、これらに限定されない。
【００７６】
「化学療法剤」とは、癌の治療に有用な化学化合物を指す。化学療法剤の例としては、チオテパ及びシクロスホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファンなどのアルキルスルホネート；ベンゾドパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、及びウレドパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド（ｔｒｉｅｔｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリエチレンチオホスホルアミド（ｔｒｉｅｔｈｉｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、及びトリメチロメラミンを含むエチレンイミン及びメチルアメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；βラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）、及び９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、及びビゼレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、クロロホスファミド（ｃｈｌｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビシン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどの窒素マスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムヌスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）などのニトロソ尿素；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアミシン、特にカリケアミシンγ１Ｉ及びカリケアミシンω１Ｉ（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照されたい）；経口α４インテグリン阻害剤であるＣＤＰ３２３；ダイネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）Ａを含むダイネマイシン；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチンクロモフォア及び関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア）、アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎ）、アクチノマイシ、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチ���マイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム法（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、リポソームドキソルビシンＴＬＣ  Ｄ−９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン、及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの代謝拮抗薬；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）；フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）などの葉酸補液；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；マイタンシン及びアンサマイトシンなどのマイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメト（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ））；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２２’２’トリクロロトリエチルアミン；トリコテシン（特にＴ２毒素ベラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ  ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン操作されたナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥＴＭ）、及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））；クロランブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチン（例えば、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））、及びカルボプラチンなどの白金製剤；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、及びビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））を含む、チューブリン重合が微小管を形成することを防止するビンカ；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ロイコボリン；ノバントロン；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））を含むレチノイン酸などのレチノイド；クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）もしくはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））などのビスホスホネート；トロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、例えば、ＰＫＣα、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、及び上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）などの、細胞増殖異常に示されるシグナル経路における遺伝子の発現を阻害するもの；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子療法ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチンなどのワクチン；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ＢＡＹ４３９００６（ソラフェニブ；Ｂａｙｅｒ）；ＳＵ−１１２４８（スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；ペリホシン、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブまたはエトリコキシブ）、プロテオソーム阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））；ＣＣＩ−７７９；チピファルニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ（ｏｒａｆｅｎｉｂ）、ＡＢＴ５１０；オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標）、アンチセンスオリゴヌクレオチド）などのＢｃｌ−２阻害剤；ピキサントロン；ＥＧＦＲ阻害剤（以下の定義を参照されたい）；チロシンキナーゼ阻害剤；ラパマイシン（���ロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））などのセリン−スレオニンキナーゼ阻害剤；ロナファルニブ（ＳＣＨ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲ（商標））などのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤；ならびに上記のうちのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびにＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾロンの併用療法の略語）；及びＦＯＬＦＯＸ（５−ＦＵ及びロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））での治療レジメンの略語）などの、上記のうちの２つ以上の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７７】
本明細書に定義される化学療法剤には、癌の成長を促進し得るホルモンの作用を調節、低減、遮断、または阻害するように作用する「抗ホルモン剤」または「内分泌治療法」が含まれる。それらは、それら自体がホルモンであってもよく、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標））、４−ヒドロキシタモキシフェン、トレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））、イドキシフェン、ドロロキシフェン、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、トリオキシフェン、ケオキシフェン、及びＳＥＲＭ３などの選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）を含む、混合したアゴニスト／アンタゴニストプロファイルを有する抗エストロゲン剤；フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））及びＥＭ８００（かかる薬剤は、エストロゲン受容体（ＥＲ）二量体化を遮断し、ＤＮＡ結合を阻害し、ＥＲ代謝回転を増加させ、かつ／またはＥＲレベルを抑制し得る）などの、アゴニスト特性を有しない純な抗エストロゲン剤；ホルメスタン及びエキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））などのステロイドアロマターゼ阻害剤、ならびにアナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））、及びアミノグルテチミドなどの非ステロイドアロマターゼ阻害剤を含むアロマターゼ阻害剤、ならびに他のアロマターゼ阻害剤には、ボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、ファドロゾール、及び４（５）−イミダゾールが含まれる；ロイプロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）及びＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、ゴセレリン、ブセレリン、及びトリプテレリン（ｔｒｉｐｔｅｒｅｌｉｎ）を含む、黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト；酢酸メゲストロール及び酢酸メドロキシプロゲステロンなどのプロゲスチン、ジエチルスチルベストロール及びプレマリンなどのエストロゲン、ならびにフルオキシメステロン、全てのトランスレチノイン酸、及びフェンレチニドなどのアンドロゲン／レチノイドを含む、性ステロイド；オナプリストン；抗プロゲステロン剤；エストロゲン受容体下方調節剤（ＥＲＤ）；フルタミド、ニルタミド、及びビカルタミドなどの抗アンドロゲン剤；ならびに上記のうちのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに上記のうちの２つ以上の組み合わせが含まれるがこれらに限定されない。
【００７８】
「免疫抑制剤」という用語は、補助療法について本明細書で使用される場合、本明細書で治療される哺乳動物の免疫系を抑制または遮蔽するように作用する物質を指す。これには、サイトカイン産生を抑制するか、自己抗原発現を下方調節もしくは抑制するか、またはＭＨＣ抗原を遮蔽する物質が含まれる。かかる薬剤の例としては、２−アミノ−６−アリール−５−置換ピリミジン（米国特許第４，６６５，０７７号を参照されたい）；非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）；ガンシクロビル、タクロリムス、コルチゾールまたはアルドステロンなどのグルココルチコイド、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、ロイコトリエン受容体アンタゴニストなどの抗炎症剤；アザチオプリンまたはミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）などのプリンアンタゴニスト；シクロホスファミドなどのアルキル化剤；ブロモクリプチン；ダナゾール；ダプソン；グルタルアルデヒド（米国特許第４，１２０，６４９号に記載されるように、ＭＨＣ抗原を遮蔽する）；ＭＨＣ抗原及びＭＨＣ断片に対する抗イディオタイプ抗体；シクロスポリンＡ；コルチコステロイドもしくはグルココルチコステロイドなどのコルチコステロイド、またはグルココルチコイド類似体、例えば、プレドニゾン、ＳＯＬＵ−ＭＥＤＲＯＬ（登録商標）コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウムを含むメチルプレドニゾロン、及びデキサメタゾン；メトトレキサート（経口または皮下）などのジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤；クロロキン及びヒドロキシクロロキンなどの抗マラリア剤；スルファサラジン；レフルノミド；抗インターフェロンα、ベータ、またはγ抗体、抗腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）α抗体（インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））またはアダリムマブ）、抗ＴＮＦαイムノアドヘシン（エタネルセプト）、抗ＴＮＦβ抗体、抗インターロイキン−２（ＩＬ−２）抗体及び抗ＩＬ−２受容体抗体、ならびに抗インターロイキン−６（ＩＬ−６）受容体抗体及びアンタゴニスト（ＡＣＴＥＭＲＡ（商標）（トシリズマブ）など）を含む、サイトカインまたはサイトカイン受容体抗体；抗ＣＤ１１ａ及び抗ＣＤ１８抗体を含む抗ＬＦＡ−１抗体；抗Ｌ３Ｔ４抗体；異種抗リンパ球グロブリン；ｐａｎ−Ｔ抗体、好ましくは抗ＣＤ３または抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体；ＬＦＡ−３結合ドメインを含有する可溶性ペプチド（１９９０年７月２６日に公開されたＷＯ９０／０８１８７）；ストレプトキナーゼ；形質転換成長因子β（ＴＧＦ−β）；ストレプトドルナーゼ；宿主由来のＲＮＡまたはＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ−６１４４３；クロラムブシル；デオキシスパガリン；ラパマイシン；Ｔ細胞受容体（Ｃｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，１１４，７２１号）；Ｔ細胞受容体断片（Ｏｆｆｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：４３０−４３２（１９９１）；ＷＯ９０／１１２９４；Ｉａｎｅｗａｙ，Ｎａｔｕｒｅ，３４１：４８２（１９８９）；及びＷＯ９１／０１１３３）；ＢＡＦＦ抗体、及びＢＲ３抗体、及びｚＴＮＦ４アンタゴニストなどのＢＡＦＦアンタゴニスト（概説について、Ｍａｃｋａｙ  ａｎｄ  Ｍａｃｋａｙ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２３：１１３−５（２００２）、及び以下の��義も参照されたい）；ＣＤ４０−ＣＤ４０リガンドに対する遮断抗体を含む、抗ＣＤ４０受容体または抗ＣＤ４０リガンド（ＣＤ１５４）（例えば、Ｄｕｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６１：１３２８−３０（１９９３）；Ｍｏｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５４：１４７０−８０（１９９５））及びＣＴＬＡ４−Ｉｇ（Ｆｉｎｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６５：１２２５−７（１９９４））などの、Ｔ細胞ヘルパーシグナルに干渉する生物学的薬剤；ならびにＴ１０Ｂ９などのＴ細胞受容体抗体（ＥＰ３４０，１０９）が挙げられる。本明細書におけるいくつかの好ましい免疫抑制剤には、シクロホスファミド、クロラムブシル、アザチオプリン、レフルノミド、ＭＭＦ、またはメトトレキサートが含まれる。
【００７９】
本明細書で使用される場合、「治療」（及び「治療する」または「治療すること」等のその文法上の変形）とは、治療されている個体の自然経過を変更することを目的とした臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理過程中に実施され得る。治療の望ましい効果には、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的病理学的帰結の縮小、転移の予防、疾患進行速度の減少、病状の回復または寛解、及び緩解または予後の改善が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される主題の抗体は、疾患の発症を遅延させるか、または疾患の進行を遅らせるために使用される。
【００８０】
１つ以上の他の薬物と「同時に」投与される薬物は１つ以上の他の薬物と同じ治療日に、同じ治療サイクル中に、かつ任意に、１つ以上の他の薬物と同時に投与される。例えば、３週間毎に与えられる癌療法の場合、同時に投与される薬物は、３週間サイクルの１日目にそれぞれ投与される。
【００８１】
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」とは、所望の治療的または予防的結果を実現するために必要な投薬量及び期間での有効な量を指す。例えば、癌の治療するための有効量の薬物は、癌細胞の数を低減させ、腫瘍サイズを低減させ、末梢器官への癌細胞浸潤を阻害し（すなわち、ある程度遅らせ、好ましくは止める）、腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度遅らせ、好ましくは止める）、腫瘍成長をある程度阻害し、かつ／または癌に関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減し得る。薬物が既存の癌細胞の成長を予防し、かつ／またはそれらを殺滅することができる限り、この薬物は細胞増殖抑制性かつ／または細胞傷害性であり得る。有効量は、無増悪生存期間（例えば、固形がんの治療効果判定（ＲＥＣＩＳＴ）またはＣＡ−１２５変化によって測定される）を延長させ、客観的応答（部分奏功（ＰＲ）または完全奏功（ＣＲ）を含む）をもたらし、全生存期間を増加させ、かつ／または癌の１つ以上の症状（例えば、ＦＯＳＩによって評価される）を改善し得る。
【００８２】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」という用語は、かかる量を受けていない対応する対象と比較して、疾患、障害、もしくは副作用に治療、または疾患もしくは障害の進行速度の減少をもたらす任意の量を意味する。この用語はまた、正常な生理機能を向上させるために有効な量もその範囲内に含む。治療における使用のために、治療有効量のＰＡＣ、並びにその塩は、未加工の化学物質として投与されてもよい。さらに、活性成分は、薬学的組成物として提示され得る。
【００８３】
本明細書で使用される場合、請求項中で別途定義されない限り、「任意に」という用語は、その後に記載される事象（複数可）が生じても生じなくてもよいことを意味し、生じる事象（複数可）及び生じない事象（複数可）の両方が含まれる。
【００８４】
本明細書で使用される場合、別途定義されない限り、「任意に置換された」、「置換された」という句、またはそれらの変形は、１つ以上、例えば１つ、２つ、または３つの置換基での複数種類の置換を含む、任意の置換を示す。この句は、本明細書に記載及び描写される置換と重複するものとして解釈されるべきではない。
【００８５】
「薬学的製剤」という用語は、その調製物中に含有される活性成分の生物活性が有効になるような形態であり、かつ該製剤が投与される対象にとって許容できないほど有毒である追加の構成成分を何ら含有しない調製物を指す。
【００８６】
「薬学的に許容される賦形剤」とは、対象にとって無毒である、活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される賦形剤には、緩衝液、担体、安定剤、または保存剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００８７】
「薬学的に許容される塩」という句は、本明細書で使用される場合、分子の薬学的に許容される有機塩または無機塩を指す。例示的な塩には、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシネート（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、及びパモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエ酸塩））が含まれるが、これらに限定されない。薬学的に許容される塩は、酢酸イオン、コハク酸イオン、または他の対イオンなどの別の分子を含むことを伴い得る。対イオンは、親化合物の電荷を安定させる任意の有機または無機部分であり得る。さらに、薬学的に許容される塩は、その構造中に１つ超の電荷を帯びた原子を有してもよい。複数の電化を帯びた原子が薬学的に許容される塩の一部である場合には、複数の対イオンを有してもよい。したがって、薬学的に許容される塩は、１つ以上の電荷を帯びた原子及び／または１つ以上の対イオンを有することができる。
【００８８】
薬学的に許容されない他の塩は、本明細書に記載される化合物の調製に有用である場合があり、これらは、主題のさらなる態様を形成するために考慮されるべきである。シュウ酸またはトリフルオロ酢酸塩などのこれらの塩は、それら自体は薬学的に許容されないものの、本明細書に記載される化合物及びそれらの薬学的に許容される塩を得る際に、中間体として塩の調製において有用であり得る。
【００８９】
本明細書で使用される場合、「複数」という用語は、２つ以上のコンジュゲートを指す。各コンジュゲートは、同じであるか、その複数における任意の他のコンジュゲートと異なってもよい。
【００９０】
「小分子」または「小分子化合物」とは、一般に、約５キロダルトン（Ｋｄ）未満のサイズである有機分子を指す。いくつかの実施形態では、小分子は、約４Ｋｄ未満、３Ｋｄ、約２Ｋｄ、または約１Ｋｄである。いくつかの実施形態では、小分子は、約８００ダルトン（Ｄ）未満、約６００Ｄ、約５００Ｄ、約４００Ｄ、約３００Ｄ、約２００Ｄ、または約１００Ｄである。いくつかの実施形態では、小分子は、約２０００ｇ／ｍｏｌ未満、約１５００ｇ／ｍｏｌ未満、約１０００ｇ／ｍｏｌ未満、約８００ｇ／ｍｏｌ未満、または約５００ｇ／ｍｏｌ未満である。いくつかの実施形態では、小分子は、非ポリマー性である。小分子は、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、多糖類、糖タンパク質、プロテオグリカン等ではない。小分子の誘導体とは、元の小分子と同じ構造コアを共有するが、元の小分子から一連の化学反応によって調製され得る分子を指す。
【００９１】
「アルキル」という用語は、本明細書で使用される場合、１〜１２個の炭素原子（Ｃ１−Ｃ１２）の任意の長さの一価の飽和直鎖または分岐鎖炭化水素基を指し、アルキル基は任意に、独立して、以下に記載される１つ以上の置換基で置換されてもよい。別の実施形態では、アルキル基は、１〜８個の炭素原子（Ｃ１−Ｃ８）または１〜６個の炭素原子（Ｃ１−Ｃ６）である。アルキル基の例としては、メチル（Ｍｅ、−ＣＨ３）、エチル（Ｅｔ、−ＣＨ２ＣＨ３）、１−プロピル（ｎ−Ｐｒ、ｎ−プロピル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−プロピル（ｉ−Ｐｒ、ｉ−プロピル、−ＣＨ（ＣＨ３）２）、１−ブチル（ｎ−Ｂｕ、ｎ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−１−プロピル（ｉ−Ｂｕ、ｉ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−ブチル（ｓ−Ｂｕ、ｓ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−Ｂｕ、ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ３）３）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、１−ヘキシル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３））、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、２，３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３，３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３、１−へプチる、１−オクチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９２】
「アルキレン」という用語は、本明細書で使用される場合、１〜１２個の炭素原子（Ｃ１−Ｃ１２）の任意の長さの二価の飽和直鎖または分岐鎖炭化水素基を指し、アルキレン基は任意に、独立して、以下に記載される１つ以上の置換基で置換されてもよい。別の実施形態では、アルキレン基は、１〜８個の炭素原子（Ｃ１−Ｃ８）または１〜６個の炭素原子（Ｃ１−Ｃ６）である。アルキレン基の例としては、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９３】
「アルケニル」という用語は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素のｓｐ２二重結合を有する、２〜８個の炭素原子（Ｃ２−Ｃ８）の任意の長さの一価の直鎖または分岐鎖炭化水素基を指し、該アルケニル基は任意に、独立して、本明細書に記載される１つ以上の置換基で置換されてもよく、「シス」及び「トランス」配向、または代替的に、「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有する基を含む。例としては、エチレニル（ｅｔｈｙｌｅｎｙｌ）またはビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９４】
「アルケニレン」という用語は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素のｓｐ２二重結合を有する、２〜８個の炭素原子（Ｃ２−Ｃ８）の任意の長さの二価の直鎖または分岐鎖炭化水素基を指し、該アルケニレン基は任意に、独立して、本明細書に記載される１つ以上の置換基で置換されてもよく、「シス」及び「トランス」配向、または代替的に、「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有する基を含む。例としては、エチレニレン（ｅｔｈｙｌｅｎｙｌｅｎｅ）またはビニレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ−）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９５】
「アルキニル」という用語は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素のｓｐ三重結合を有する、２〜８個の炭素原子（Ｃ２−Ｃ８）の任意の長さの一価の直鎖または分岐鎖炭化水素基を指し、該アルキニル基は任意に、独立して、本明細書に記載される１つ以上の置換基で置換されてもよい。例としては、エチニル（−Ｃ≡ＣＨ）、プロピニル（プロパルギル、−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９６】
「アルキニレン」という用語は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素のｓｐ三重結合を有する、２〜８個の炭素原子（Ｃ２−Ｃ８）の任意の長さの二価の直鎖または分岐鎖炭化水素基を指し、該アルキニレン基は任意に、独立して、本明細書に記載される１つ以上の置換基で置換されてもよい。例としては、エチニレン（−Ｃ≡Ｃ−）、プロピニレン（ｐｒｏｐｙｎｙｌｅｎｅ）（プロパルギレン（ｐｒｏｐａｒｇｙｌｅｎｅ）、−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９７】
「炭素環」、「カルボシクリル」、「炭素環式環」、及び「シクロアルキル」という用語は、単環式環として３〜１２個の炭素原子（Ｃ３−Ｃ１２）、または二環式環として７〜１２個の炭素原子を有する、一価の非芳香族の飽和または部分不飽和環を指す。７〜１２個の原子を有する二環式炭素環は、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］系として配置されてもよく、９または１０個の環原子を有する二環式炭素環は、ビシクロ［５，６］もしくは［６，６］系として、またはビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタン、及びビシクロ［３．２．２］ノナンなどの架橋系として配置されてもよい。スピロ部分もまた、この定義の範囲内に含まれる。単環式炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペント−１−エニル、１−シクロペント−２−エニル、１−シクロペント−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロへキサ−１−エニル、１−シクロヘキサ−２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、シクロウンデシル、シクロドデシルなどが挙げられるが、これらに限定されない。カルボシクリル基は、任意に、本明細書に記載される１つ以上の置換基で独立して置換される。
【００９８】
「アリール」とは、親芳香族環系の単一の炭素原子から１個の水素原子を除去することによって得られた、６〜２０個の炭素原子（Ｃ６−Ｃ２０）の一価の芳香族炭化水素基を意味する。いくつかのアリール基は、例示的な構造において「Ａｒ」として表される。アリールには、飽和、部分不飽和環、または芳香族炭素環式環に縮合された芳香族環を含む二環式基が含まれる。典型的なアリール基には、ベンゼン（フェニル）、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニル、インデニル、インダニル、１，２−ジヒドロナフタレン、１，２，３，４−テトラヒドロナフチルなどに由来する基が含まれるが、これらに限定されない。アリール基は、任意に、本明細書に記載される１つ以上の置換基で独立して置換される。
【００９９】
「アリーレン」とは、親芳香族環系の２個の炭素原子から２個の水素原子を除去することによって得られた、６〜２０個の炭素原子（Ｃ６−Ｃ２０）の二価の芳香族炭化水素基を意味する。いくつかのアリーレン基は、例示的な構造において「Ａｒ」として表される。アリーレンには、飽和、部分不飽和環、または芳香族炭素環式環に縮合された芳香族環を含む二環式基が含まれる。典型的なアリーレン基には、ベンゼン（フェニレン）、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニレン、インデニレン、インダニレン、１，２−ジヒドロナフタレン、１，２，３，４−テトラヒドロナフチルなどに由来する基が含まれるが、これらに限定されない。アリーレン基は、任意に、本明細書に記載される１つ以上の置換基で置換される。
【０１００】
「複素環」、「ヘテロシクリル」、及び「複素環式環」という用語は、本明細書において互換的に使用され、３〜約２０個の環原子の、飽和または部分不飽和（すなわち、環内に１つ以上の二重及び／または三重結合を有する）炭素環基を指し、少なくとも１個の環原子が、窒素、酸素、リン、及び硫黄から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子がＣであり、１個以上の環原子が任意に、以下に記載される１つ以上の置換基で独立して置換される。複素環は、３〜７環員（２〜６個の炭素原子、ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜４個のヘテロ原子）を有する単環、または７〜１０環員（４〜９個の炭素原子、ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜６個のヘテロ原子）を有する二環、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］系であり得る。複素環は、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ  Ａ．；「Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９６８）、特に第１、３、４、６、７、及び９章；「Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ  ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ」（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９５０ｔｏ  ｐｒｅｓｅｎｔ）、特に第１３、１４、１６、１９、及び２８環；ならびにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載されている。「ヘテロシクリル」はまた、複素環基が、飽和、部分不飽和環、または芳香族炭素環式環もしくは複素環式環に縮合されている基も含む。複素環式環の例としては、モルホリン−４−イル、ピペリジン−１−イル、ピペラジニル、ピペラジン−４−イル−２−オン、ピペラジン−４−イル−３−オン、ピロリジン−１−イル、チオモルホリン−４−イル、Ｓ−ジオキソチオモルホリン−４−イル、アゾカン−１−イル、アゼチジン−１−イル、オクタヒドロピリド［１，２−ａ］ピラジン−２−イル、［１，４］ジアゼパン−１−イル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオキサニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、２−ピロリニル、３−ピロリニル、インドリニル、２Ｈ−ピラニル、４Ｈ−ピラニル、ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリジニルイミダゾリニル、イミダゾリジニル、３−アザビシコ（ａｚａｂｉｃｙｃｏ）［３．１．０］ヘキサニル、３−アザビシクロ［４．１．０］ヘプタニル、アザビシクロ［２．２．２］ヘキサニル、３Ｈ−インドリルキノリジニル、及びＮ−ピリジル尿素が挙げられるが、これらに限定されない。スピロ部分もまた、この定義の範囲内に含まれる。２個の環原子がオキソ（＝Ｏ）部分で置換されている複素環基の例は、ピリミジノニル及び１���１−ジオキソ−チオモルホリニルである。本明細書の複素環基は、任意に、本明細書に記載される１つ以上の置換基で独立して置換される。
【０１０１】
「ヘテロアリール」という用語は、５、６、または７員環の一価の芳香族基を指し、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する、５〜２０個の原子の縮合環系（そのうちの少なくとも１つが芳香族である）を含む。ヘテロアリール基の例は、ピリジニル（例えば、２−ヒドロキシピリジニルを含む）、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール、［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン、ピリミジニル（例えば、４−ヒドロキシピリミジニルを含む）、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、及びフロピリジニルである。ヘテロアリール基は、任意に、本明細書に記載される１つ以上の置換基で独立して置換される。
【０１０２】
複素環またはヘテロアリール基は、それらが可能である場合、炭素（炭素結合）または窒素（窒素結合）結合であってもよい。限定ではなく例として、炭素結合複素環またはヘテロアリールは、ピリジンの２、３、４、５、もしくは６位、ピリダジンの３、４、５、もしくは６位、ピリミジンの２、４、５、もしくは６位、ピラジンの２、３、５、もしくは６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール、もしくはテトラヒドロピロールの２、３、４、もしくは５位、オキサゾール、イミダゾール、もしくはチアゾールの２、４、もしくは５位、イソオキサゾール、ピラゾール、もしくはイソチアゾールの３、４、もしくは５位、アジリジンの２もしくは３位、アゼチジンの２、３、もしくは４位、キノリンの２、３、４、５、６、７、もしくは８位、またはイソキノリンの１、３、４、５、６、７、もしくは８位で結合している。
【０１０３】
限定ではなく例として、窒素結合複素環またはヘテロアリールは、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ−インダゾールの１位、イソインドールまたはイソインドリンの２位、モルホリンの４位、及びカルバゾールまたはβ−カルボリンの９位で結合している。
【０１０４】
「キラル」という用語は、鏡像パートナーを重ねることができない特性を有する分子を指す一方、「アキラル」という用語は、それらの鏡像パートナーと重ねることができる分子を指す。
【０１０５】
「立体異性体」という用語は、同一の化学構造を有するが、空間における原子または基の配置の点で異なる化合物を指す。
【０１０６】
「ジアステレオマー」とは、２つ以上の不斉中心を有し、その分子が互いの鏡像ではない立体異性体を指す。ジアステレオマーは、異なる物理特性、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、及び反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、電気泳動及びクロマトグラフィーなどの高分解能分析手法下において分離し得る。
【０１０７】
「エナンチオマー」とは、互いに重ねることができない鏡像である化合物の２つの立体異性体を指す。
【０１０８】
本明細書に使用される立体科学的定義及び慣習は、一般に、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ及びＥｌｉｅｌ，Ｅ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（１９９４）Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに従う。多くの有機化合物は、光学活性形態で存在し、すなわち、それらは、平面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性化合物を説明する際、接頭辞Ｄ及びＬまたはＲ及びＳは、そのキラル中心（複数可）の周りでの分子の絶対配置を示すために使用される。接頭辞ｄ及びｌまたは（＋）及び（−）は、化合物による平面偏光の回転の印を示すために用いられ、（−）または１は、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄの接頭辞を有する化合物は、右旋性である。所与の化学構造について、これらの立体異性体は、それらが互いの鏡像であるということ以外、同一である。特定の立体異性体はまた、エナンチオマーと称される場合があり、かかる異性体の混合物はしばしば、エナンチオマー混合物と呼ばれる。エナンチオマーの５０：５０混合物は、ラセミ混合物またはラセミ体と称され、これは、化学反応またはプロセスにおいて立体選択または立体特異性がなかった場合に生じ得る。「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」という用語は、光学活性を欠く２つのエナンチオマー種の等モル混合物を指す。
【０１０９】
本明細書の他の用語、定義、及び略語は、以下を含む。野生型（「ＷＴ」）；システイン操作された変異抗体（「チオ」）；軽鎖（「ＬＣ」）；重鎖（「ＨＣ」）；６−マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）；マレイミドプロパノイル（「ＭＰ」）；バリン−シトルリン（「ｖａｌ−ｃｉｔ」または「ｖｃ」）、アラニン−フェニルアラニン（「ａｌａ−ｐｈｅ」）、ｐ−アミノベンジル（「ＰＡＢ」）、及びｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢＣ」）；Ａ１１８Ｃ（ＥＵ付番）＝Ａ１２１Ｃ（連続付番）＝重鎖のＡ１１４Ｃ（Ｋａｂａｔ付番）軽鎖のＫ１４９Ｃ（Ｋａｂａｔ付番）なおさらなる定義及び略語は、本明細書の他の箇所に提供される。
【０１１０】
ＩＩ．ＰＲＯＴＡＣ−抗体コンジュゲート（ＰＡＣ）
本明細書に記載されるＰＲＯＴＡＣ−抗体コンジュゲート（ＰＡＣ）分子は、リンカー（Ｌ１）を介してＰＲＯＴＡＣにコンジュゲートされた抗体を含み、ＰＲＯＴＡＣは、ユビキチンＥ３リガーゼ結合基（「Ｅ３ＬＢ」）、リンカー（「Ｌ２」）、及びタンパク質結合基（「ＰＢ」）を含む。ＰＡＣの一般式は、以下であり、
Ａｂ−（Ｌ１−Ｄ）ｐ
式中、Ｄは、構造Ｅ３ＬＢ−Ｌ２−ＰＢを有するＰＲＯＴＡＣであり、Ｅ３ＬＢは、Ｌ２に共有結合したＥ３リガーゼ結合基であり、Ｌ２は、Ｅ３ＬＢ及びＰＢに共有結合したリンカーであり、ＰＢは、Ｌ２に共有結合したタンパク質結合基であり、Ａｂは、Ｌ１に共有結合した抗体であり、Ｌ１は、Ａｂ及びＤに共有結合したリンカーであり、ｐは、約１〜約５０の値を有する。変数ｐは、抗体が１つ以上のＬ１−Ｄ基と結合し得ることを反映する。一実施形態では、ｐは、約１〜８である。別の実施形態では、ｐは、約２である。
【０１１１】
以下の節は、ＰＡＣを構成する構成成分について記載する。強力な有効性及び望ましい治療指数を有するＰＡＣを得るために、以下の構成成分が提供される。
【０１１２】
１．抗体（Ａｂ）
本明細書に記載されるように、抗体、例えば、モノクローナル抗体（ｍＡＢ）は、標的細胞、例えば、抗体によって標的とされる特異的タンパク質を発現する細胞へとＰＲＯＴＡＣを送達するために使用される。ＰＡＣの抗体部分は、抗原を発現する細胞を標的とすることができ、それにより、抗原特異ＰＡＣは、典型的にはエンドサイトーシスを通して標的細胞へと細胞内送達される。細胞表面上に見られない抗原に対する抗体を含むＰＡＣは、ＰＲＯＴＡＣ部分の細胞内へのより少ない特異的細胞内送達をもたらし得る一方、ＰＡＣはなおも飲作用を受けている場合がある。本明細書に記載されるＰＡＣ及びそれらの使用方法は、細胞表面の抗体認識及び／またはＰＡＣのエンドサイトーシスを有利に利用して、ＰＲＯＴＡＣ部分を細胞の内部に送達する。
【０１１３】
ａ．ヒト抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の様々な技術を使用して産生され得る。ヒト抗体は、一般に、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５  :  ３６８−７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載されている。
【０１１４】
ヒト抗体は、抗原投与に応答して無傷ヒト抗体またヒト可変領域を有する無傷抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫源を投与することによって調製され得る。かかる動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、または染色体外に存在するか、もしくは動物の染色体内にランダムに組み込まれるヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有する。かかるトランスジェニックマウスにおいて、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照されたい。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術について記載する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号；ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術について記載する米国特許第５，７７０，４２９号；Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載する米国特許第７，０４１，８７０号、ならびにＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載する米国出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号も参照されたい）。かかる動物によって生成された無傷抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせると組み合わせることによってさらに修飾されてもよい。
【０１１５】
ヒト抗体はまた、ハイブリドーマに基づく方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、ＫｏｚｂｏｒＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい。）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって生成されたヒト抗体も、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法には、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのヒトＩｇＭ抗体の産生について記載）及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマについて記載）に記載されるものが含まれる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）にも記載されている。
【０１１６】
ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成することもできる。かかる可変ドメイン配列はその後、所望のヒト定常ドメインと組み合わされ得る。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技術は、以下に記載される。
【０１１７】
ｂ．ライブラリ由来抗体
ＰＡＣにおける使用のための抗体は、所望の活性（複数可）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、所望の結合特性を保有する抗体についてかかるライブラリをスクリーニングするための多様な方法が当該技術分野で既知である。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ１７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説され、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３４８：５５２−５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｂｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）；Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）にさらに記載されている。
【０１１８】
ある特定のファージディスプレイ法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別個にクローニングされ、ファージライブラリ中でランダムに組み替えられ、その後、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように抗原結合ファージについてスクリーニングされ得る。ファージは、典型的には、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片として、またはＦａｂ断片としてのいずれかで抗体断片を提示する。免疫した供給源由来のライブラリは、ハイブリドーマを構成する必要を伴わずに免疫源に対する高親和性抗体を提供する。代替的には、ナイーブレパートリーをクローニングして（例えば、ヒトから）、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載されるように免疫付与を全く伴わずに幅広い非自己及び自己抗原に対する抗体の単一の供給源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）によって記載されるように、幹細胞由来の再配列されていないＶ遺伝子部分をクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、インビトロでの再配列を達成することによって、合成で作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリについて記載する特許公開には、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が含まれる。
【０１１９】
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体または抗体断片は、本明細書においてヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
【０１２０】
ｃ．キメラ及びヒト化抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載されている。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例において、キメラ抗体は、親抗体からクラスまたはサブクラスが変わった抗体である、「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体には、その抗原結合断片が含まれる。
【０１２１】
ある特定の実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減させるためにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列に由来する、１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、任意に、ヒト定常領域に少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体中のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を回復または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
【０１２２】
ヒト化抗体及びそれを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に概説され、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３−３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９−１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：２５−３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）移植について記載）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」について記載）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」について記載）；ならびにＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングへの「誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」アプローチについて記載）にさらに記載されている。
【０１２３】
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、「ベストフィット」法を使用して選択されたフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）；軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）；ヒト成熟（体細胞変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）；ならびにＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１２４】
ｄ．多重特異性抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。「多重特異性抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ポリエピトープ特異性を有する（すなわち、１つの分子上の２つ以上の異なるエピトープに結合することができるか、または２つ以上の異なる分子上のエピトープに結合することができる）抗原結合ドメインを含む抗体を指す。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原結合部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体（例えば、二重特異性抗体）である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体の第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、１つの同じ分子内の２つのエピトープに結合し得る（分子内結合）。例えば、多重特異性抗体の第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、同じタンパク質分子上の２つの異なるエピトープに結合し得る。ある特定の実施形態では、多重特異性抗体が結合する２つの異なるエピトープは、通常は１つの単一特異性抗体、例えば、従来の抗体または１つの免疫グロブリン単一可変ドメインなどによって同一に結合されないエピトープである。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体の第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、２つの異なる分子内に位置するエピトープに結合し得る（分子間結合）。例えば、多重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、１つのタンパク質分子上の１つのエピトープに結合し得る一方、多重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインは、異なるタンパク質分子上の別のエピトープに結合し得、それによって２つの分子を架橋することができる。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）の抗原結合ドメインは、２つのＶＨ／ＶＬ単位を含み、第１のＶＨ／ＶＬ単位は第１のエピトープに結合し、第２のＶＨ／ＶＬ単位は第２のエピトープに結合し、各ＶＨ／ＶＬ単位は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。かかる多重特異性抗体には、全長抗体、２つ以上のＶＬ及びＶＨドメインを有する抗体、及び抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、二重特異性ダイアボディ及びトリアボディ、共有結合または非共有結合で結合した抗体断片）が含まれるが、これらに限定されない。重鎖可変領域の少なくとも一部及び／または軽鎖可変領域の少なくとも一部をさらに含むＶＨ／ＶＬ単位は、「アーム」、または「ヘミマー」、または「半抗体」とも称され得る。いくつかの実施形態では、ヘミマーは、第２のヘミマーと分子間ジスルフィド結合を形成することを可能にするのに十分な重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヘミマーは、例えば、相補的なホール変異またはノブ変異を含む第２のヘミマーまたは半抗体とのヘテロ二量体化を可能にするために、ノブ変異またはホール変異を含む。ノブ変異及びホール変異は、以下にさらに考察される。
【０１２７】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。「二重特異性抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、１つの分子上の２つの異なるエピトープに結合することができるか、または２つの異なる分子上のエピトープに結合することができる抗原結合ドメインを含む多重特異性抗体を指す。二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体は、本明細書において、「二重特異性（ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）」を有するか、「二重特異性（ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ）」であるとも称され得る。例示的な二重特異性抗体は、タンパク質及び任意の他の抗原の両方に結合し得る。ある特定の実施形態では、結合特異性のうちの一方はタンパク質に対するものであり、他方はＣＤ３に対するものである。例えば、米国特許第５，８２１，３３７号を参照されたい。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、同じタンパク質分子の２つの異なるエピトープに結合し得る。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、２つの異なるタンパク質分子の２津の異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体はまた、タンパク質を発現する細胞に細胞傷害性剤を局在化させるために使用されてもよい。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体断片として調製することができる。
【０１２８】
多重特異性抗体を作製するための技術には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組み換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３）、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、ならびに「ノブ・イン・ホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、ＷＯ２００９／０８９００４、ＵＳ２００９／０１８２１２７、ＵＳ２０１１／０２８７００９、Ｍａｒｖｉｎ  ａｎｄ  Ｚｈｕ，Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．（２００５）２６（６）：６４９−６５８、及びＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ（２００５）Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．，２６：１−９を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。「ノブ・イン・ホール」または「ＫｎＨ」技術という用語は、本明細書で使用される場合、それらが相互作用する界面において隆起（ノブ）を一方のポリペプチド内に、及び空洞（ホール）を他方のポリペプチド内に導入することによって、２つのポリペプチドのインビトロまたはインビボを共に対形成することを指示する技術を指す。例えば、ＫｎＨは、抗体のＦｃ：Ｆｃ結合面、ＣＬ：ＣＨ１結合面、またはＶＨ／ＶＬ界面において導入されている（例えば、ＵＳ２０１１／０２８７００９、ＵＳ２００７／０１７８５５２、ＷＯ９６／０２７０１１、ＷＯ９８／０５０４３１、Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ６：７８１−７８８、及びＷＯ２０１２／１０６５８７を参照されたい）。いくつかの実施形態では、ＫｎＨは、多重特異性抗体の製造中に、２つの異なる重鎖を共に対形成することを駆動する。例えば、それらのＦｃ領域中にＫｎＨを有する多重特異性抗体は、各Ｆｃ領域に結合した単一の可変ドメインをさらに含み得るか、または類似のまたは異なる軽鎖可変ドメインと対形成する異なる重鎖可変ドメインをさらに含み得る。ＫｎＨ技術はまた、２つの異なる受容体細胞外ドメインを共に、または異なる標的認識配列を含む任意の他のポリペプチド配列（例えば、アフィボディ、ペプチボディ、及び他のＦｃ融合）を対形成するために使用され得る。
【０１２９】
「ノブ変異」という用語は、本明細書で使用される場合、ポリペプチドが別のポリペプチドと相互作用する界面において隆起（ノブ）をポリペプチド内に導入する変異を指す。いくつかの実施形態では、他のポリペプチドは、ホール変異を有する。
【０１３０】
「ホール変異」という用語は、本明細書で使用される場合、ポリペプチドが別のポリペプチドと相互作用する界面において空洞（ホール）をポリペプチド内に導入する変異を指す。いくつかの実施形態では、他のポリペプチドは、ノブ変異を有する。
【０１３１】
「隆起」とは、第１のポリペプチドの界面から突出し、かつしたがって、隣接する界面（すなわち、第２のポリペプチドの界面）における補完的な空洞に位置付けて、ヘテロ多量体を安定化させることができ、それによって、例えば、ホモ多量体形成よりもヘテロ多量体形成を好む、少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。隆起は、元の界面に存在し得るか、または合成的に導入されてもよい（例えば、界面をコードする核酸を改変することによって）。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドの界面をコードする核酸は、隆起をコードするように改変される。これを達成するために、第１のポリペプチドの界面中の少なくとも１つの「元の」アミノ酸残基をコードする核酸は、元のアミノ酸残基よりも大きい側鎖量を有する少なくとも１つの「インポート」アミノ酸残基をコードする核酸で置換される。１つ超の元の残基及び対応するインポート残基があってもよいことが理解されよう。様々なアミノ酸残基の側鎖量は、例えば、ＵＳ２０１１／０２８７００９の表１に示される。「隆起」を導入する変異は、「ノブ変異」と称され得る。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、隆起の形成のためのインポート残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、及びトリプトファン（Ｗ）から選択される天然型アミノ酸残基である。いくつかの実施形態では、インポート残基は、トリプトファンまたはチロシンである。いくつかの実施形態では、隆起の形成のための元の残基は、小さい側鎖量を有し、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、スレオニン、またはバリンなどである。
【０１３３】
「空洞」とは、第２のポリペプチドの界面から凹み、したがって第１のポリペプチドの隣接する界面上の対応する隆起を収容する、少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。空洞は、元の界面に存在し得るか、または合成的に導入されてもよい（例えば、界面をコードする核酸を改変することによって）。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドの界面をコードする核酸は、空洞をコードするように改変される。これを達成するために、第２のポリペプチドの界面中の少なくとも１つの「元の」アミノ酸残基をコードする核酸は、元のアミノ酸残基よりも小さい側鎖量を有する少なくとも１つの「インポート」アミノ酸残基をコードするＤＮＡで置換される。１つ超の元の残基及び対応するインポート残基があってもよいことが理解されよう。いくつかの実施形態では、空洞の形成のためのインポート残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、及びバリン（Ｖ）から選択される天然型アミノ酸残基である。いくつかの実施形態では、インポート残基は、セリン、アラニン、またはスレオニンである。いくつかの実施形態では、空洞の形成のための元の残基は、大きい側鎖量を有し、チロシン、アルギニン、フェニルアラニン、またはトリプトファンなどである。「空洞」を導入する変異は、「ホール変異」と称され得る。
【０１３４】
隆起は空洞内で「位置付け可能」であり、これは、それぞれ第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドの界面上の隆起及び空洞の空間的位置ならびに隆起及び空洞のサイズが、界面での第１及び第２のポリペプチドの正常な会合を著しく乱すことなく、隆起が空洞内に位置することができるようなものであることを意味する。Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、及びＴｒｐなどの隆起は典型的に界面軸から垂直に延出せず、好ましい立体構造を有するため、対応する空洞との隆起の整列は、場合によって、Ｘ線結晶解析または核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって得られたものなどの三次元構造に基づいて隆起／空洞の対をモデル化することに依拠し得る。これは、当該技術分野で広く受け入れられている技術を使用して達成することができる。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１定常領域中のノブ変異は、Ｔ３６６Ｗ（ＥＵ付番）である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１定常領域中のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ付番）から選択される１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１定常領域中のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ付番）を含む。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４定常領域中のノブ変異は、Ｔ３６６Ｗ（ＥＵ付番）である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４定常領域中のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ付番）から選択される１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４定常領域中のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ付番）を含む。
【０１３７】
多重特異性抗体はまた、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための静電的ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ  ｓｔｅｅｒｉｎｇ）効果を操作すること（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）；２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）；ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい）；二重特異性抗体を作製するための「ダイアボディ」技術を使用すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい）；ならびに一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）；ならびに例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されるように三重特異性抗体を調製することによって作製することもできる。
【０１３８】
「オクトパス抗体」または「二重可変ドメイン免疫グロブリン」（ＤＶＤ）を含む、３つ以上の機能抗原結合部位を有する操作された抗体もまた、本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１、及びＷｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００７）を参照されたい）。本明細書の抗体または断片はまた、標的タンパク質、ならびに別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」も含む（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照されたい）。
【０１３９】
ｅ．抗体断片
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに以下に記載される他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｅｎ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ抗体，ｖｏｌ．１１３、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたい。ＷＯ９３／１６１８５、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加したインビボ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
【０１４０】
ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．「Ｍｅｄ．」９：１２９−１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディは、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）にも記載されている。
【０１４１】
単一ドメイン抗体は、抗体の軽鎖可変ドメインの全てまたは一部または重鎖可変ドメインの全てまたは一部を含む抗体断片である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）、例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照されたい）。
【０１４２】
抗体断片は、本明細書に記載されるように、無傷抗体のタンパク質消化、ならびに組み換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはファージ）による産生を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製することができる。
【０１４３】
ｆ．抗体バリアント
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な修飾を導入することによって、またはペプチド合成によって調製され得る。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列からの欠失、及び／またはそこへの挿入、及び／またはその中での残基の置換が含まれる。欠失、挿入、及び置換を任意に組み合わせて最終構築物に到達することができるが、但し、最終構築物が所望の特性、例えば抗原結合を保有することを条件とする。
【０１４４】
ｉ．置換、挿入、及び欠失バリアント
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換型辺誘発のための目的の部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、「好ましい置換」という見出しの下で表１に示される。より多くの置換型変化が「例示的な置換」という見出しの下で表１に提供され、アミノ酸側鎖クラスに関連して以下にさらに記載される。アミノ酸置換が目的の抗体中に導入され得、生成物は、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、低下した免疫原性、または改善された抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）もしくは保体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）についてスクリーニングされ得る。
【０１４５】
【表１−１】
2019522633.tif 000002
【表１−２】
2019522633.tif 000003
アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従って群分けされ得る：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０１４６】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスのものと交換することを伴うことになる。
【０１４７】
置換型バリアントの１つの種類は、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、さらなる研究のために選択される結果的なバリアント（複数可）は、親抗体と比べてある特定の生物学的特性における改変（例えば、改善）（例えば、増加した親和性、低減した免疫原性）を有し、かつ／または親抗体の実質的に保持されたある特定の生物学的特性を有することになる。例示的な置換型バリアントは、親和性成熟抗体であり、これは、例えば、本明細書に記載されるものなどのファージディスプレイに基づく親和性成熟技法を使用して好都合に生成され得る。簡潔には、１つ以上のＨＶＲ残基が変異され、バリアント抗体がファージ上に提示され、特定の生物学的特性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０１４８】
改変（例えば、置換）は、例えば、抗体親和性を改善するために、ＨＶＲにおいて行われ得る。かかる改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟過程中に高頻度で変異を経験するコドンによってコードされた残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照されたい）、及び／またはＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）において行われ得、得られたバリアントＶＨまたはＶＬは、結合親和性について試験される。二次ライブラリから構築及び再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ１７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性変異誘発）のうちのいずれかによって成熟のために選択された可変遺伝子中に多様性が導入される。その後、二次ライブラリが作製される。その後、ライブラリをスクリーニングして、所望の親和性を有する任意の抗体バリアントを同定する。多様性を導入するための別の方法は、ＨＶＲ残基（例えば、１回に４〜６個の残基）がランダム化されるＨＶＲ指向性アプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、アラニンスキャニング変異誘発またはモデル化を使用して特異的に同定され得る。特に、ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３がしばしば標的とされる。
【０１４９】
ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、かかる改変が、抗原に結合する抗体の能力を実質的に低減させない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じてもよい。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的改変（例えば、本明細書に提供される保存的置換）は、ＨＶＲ内で行われてもよい。かかる改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」またはＳＤＲの外側であり得る。上に提供されるバリアントＶＨ及びＶＬ配列のある特定の実施形態では、各ＨＶＲは、改変されていないか、または１個、２個、もしくはまたは３個以下のアミノ酸置換を含有するかのいずれかである。
【０１５０】
変異誘発のために標的とされ得る抗体の残基または領域の同定のための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５によって記載されるように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法において、標的残基の残基または基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕなどの電荷を帯びた残基）が同定され、中性のまたは負電荷を帯びたアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置換されて、抗体の光源との相互作用が影響を受けたかどうかを判定する。最初の置換に対して機能的感受性を示すアミノ酸位置において、さらなる置換が導入されてもよい。代替的には、または追加的には、抗原−抗体複合体を使用して、抗体と抗原との間の接触点を識別する。かかる接触残基及び隣接する残基は、標的とされるか、または置換のための候補として排除される。バリアントは、それらが所望の特性を含有するかどうかを判定するためにスクリーニングされてもよい。
【０１５１】
アミノ酸配列挿入には、１個の残基から、１００個以上の残基を含有するポリペプチドの長さにわたる範囲のアミノ末端及び／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一もしくは複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入型バリアントには、抗体のＮ末端もしくはＣ末端の酵素（例えば、抗体指向性プロドラッグ療法（ＡＤＥＰＴ）用）、または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの融合が含まれる。
【０１５２】
ｉｉ．システイン操作された抗体バリアント
ある特定の実施形態では、システイン操作された抗体、例えば、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている「ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換された残基は、抗体の利用可能な部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基がそれにより抗体の利用可能な部位に位置付けられ、抗体をＬ１−ＰＲＯＴＡＣ基などの他の部分にコンジュゲートするために使用して、本明細書にさらに記載されるようにＰＡＣを作製することができる。ある特定の実施形態では、以下の残基のうちの１つ以上がシステインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ付番）；重鎖のＡ１４０（ＥＵ付番）；重鎖のＬ１７４（ＥＵ付番）；重鎖のＹ３７３（ＥＵ付番）；軽鎖のＫ１４９（Ｋａｂａｔ付番）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ付番）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ付番）。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＨＣ−Ａ１４０Ｃ（ＥＵ付番）システイン置換を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ（Ｋａｂａｔ付番）システイン置換を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＨＣ−Ａ１１８Ｃ（ＥＵ付番）システイン置換を含む。
【０１５３】
システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成され得る。
【０１５４】
ある特定の実施形態では、抗体は、以下の重鎖システイン置換のうちの１つを含む：
【表２】
2019522633.tif 000004
【０１５５】
ある特定の実施形態では、抗体は、以下の軽鎖システイン置換のうちの１つを含む：
【表３】
2019522633.tif 000005
【０１５６】
非限定的な例示的なｈｕ７Ｃ２．ｖ２．２．ＬＡ軽鎖（ＬＣ）Ｋ１４９Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、それぞれ配列番号２６及び３０の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。非限定的な例示的なｈｕ７Ｃ２．ｖ２．２．ＬＡ重鎖（ＨＣ）Ａ１１８Ｃ  ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、それぞれ配列番号３１及び２５の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。
【０１５７】
ＰＡＣは、野生型または親抗体の１つ以上のアミノ酸がシステインアミノ酸で置換されたシステイン操作された抗体を含む。任意の形態の抗体がそのように操作、すなわち変異され得る。例えば、親Ｆａｂ抗体断片が操作されて、本明細書で「ＴｈｉｏＦａｂ」と称されるシステイン操作されたＦａｂを形成し得る。同様に、親モノクローナル抗体は操作されて、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体を形成し得る。単一部位の変異はＴｈｉｏＦａｂにおいて単一の操作システイン残基をもたらす一方、ＩｇＧ抗体の二量体的性質に起因して、単一部位の変異はＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体において２つの操作システイン残基をもたらすことに留意されたい。置換された（「操作された」）システイン（Ｃｙｓ）残基を有する変異体は、新位に導入された、操作されたシステインチオール基の反応性について評価される。チオール反応性値は、０〜１．０の範囲の相対的な数値であり、任意のシステイン操作された抗体について測定することができる。ＰＡＣにおける使用のためのシステイン操作された抗体のチオール反応性値は、０．６〜１．０、０．７〜１．０、または０．８〜１．０の範囲である。
【０１５８】
システイン操作された抗体を変異誘発によって調製するために、開始ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントをコードするＤＮＡが当該技術分野で既知の多様な方法によって調製される。これらの方法には、前に調製されたポリペプチドをコードするＤＮＡの部位特異的（またはオリゴヌクレオチド媒介型）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発、及びカセット変異誘発による調製が含まれるが、これらに限定されない。組み換え抗体のバリアントはまた、制限断片の操作によって、または合成オリゴヌクレオチドを用いた重複伸長ＰＣＲによって構築され得る。変異誘発プライマーは、システインコドン置換（複数可）をコードする。標準変異誘発ぎじゅつを用いて、かかる変異システイン操作された抗体をコードするＤＮＡを生成することができる。一般的な手引きは、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９、及びＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９９３に見出すことができる。
【０１５９】
システインアミノ酸は、抗体中の、鎖内または分子内ジスルフィド結合を形成しない反応性部位で操作されてもよい（Ｊｕｎｕｔｕｌａ，ｅｔ  ａｌ．，２００８ｂ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２６（８）：９２５−９３２、Ｄｏｒｎａｎ  ｅｔ  ａｌ（２００９）Ｂｌｏｏｄ１１４（１３）：２７２１−２７２９、ＵＳ７５２１５４１、ＵＳ７７２３４８５、ＷＯ２００９／０５２２４９、Ｓｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ（２０１２）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，３０（２）：１８４−１９１、Ｊｕｎｕｔｕｌａ  ｅｔ  ａｌ（２００８）Ｊｏｕｒ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ３３２：４１−５２）。操作されたシステインチオールは、マレイミド、活性ジスルフィド（例えば、４−ニトロピリジル）、またはアルファ−ハロアミドなどのチオール反応性の親電子性基を有するリンカー試薬、または本明細書に記載されるリンカーＬ１−ＰＲＯＴＡＣ中間体と反応して、システイン操作された抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体）及びＰＲＯＴＡＣ残基と共にＰＡＣを形成し得る。したがって、ＰＲＯＴＡＣ部分の位置は、設計、制御することができ、既知であり得る。操作されたシステインチオール基は典型的にチオール反応性リンカー試薬またはリンカーＬ１−ＰＲＯＴＡＣ中間体と高い収率で反応するため、ＰＲＯＴＡＣ／抗体比（「ＰＡＲ」）を制御することができる。抗体を操作して、重鎖または軽鎖上の単一部位での置換によりシステインアミノ酸を導入することにより、２つの新たなシステインが対称的な抗体にもたらされる。約２のＰＡＲ、及びコンジュゲーション生成物のほとんどの同質性が達成され得る。
【０１６０】
システイン操作された抗体は、好ましくは、それらの野生型の親抗体の対応するものの抗原結合能力を保持する。したがって、システイン操作された抗体は、抗原に、好ましくは特異的に結合することができる。かかる抗原には、例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、細胞表面受容体タンパク質及び他の細胞表面分子、膜貫通タンパク質、シグナルタンパク質、細胞生存調節因子、細胞増殖調節因子、細胞成長または分化に関連付けられる（例えば、それに機能的に寄与することが知られているかまたは疑われている）分子、リンホカイン、サイトカイン、細胞周期調節に関与する分子、脈管形成に関与する分子、ならびに血管新生に関連する（例えば、それに機能的に寄与することが知られているかまたは疑われている）分子が含まれる。腫瘍関連抗原は、クラスタ分化因子（すなわち、ＣＤタンパク質）であり得る。システイン操作された抗体が結合することができる抗原は、上述の分類のうちの１つのサブセットのメンバーであり得、該分類の他のサブセット（複数可）は、固有の特性（目的の抗原に対して）を有する他の分子／抗原を含み得る。
【０１６１】
システイン操作された抗体は、鎖内ジスルフィド基の還元及び再酸化によって、リンカーＬ１中間体とのコンジュゲーションのために調製される。
【０１６２】
ｉｉｉ．糖鎖付加バリアント
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体が糖鎖付加される程度を増加または減少させるために改変されている。抗体への糖鎖付加部位の付加または欠失は、１つ以上の糖鎖付加部位が作製または除去されるようにアミノ酸を改変することによって好都合に達成され得る。
【０１６３】
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物が改変され得る。哺乳動物細胞によって産生された天然抗体は、典型的には、一般にＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ結合によって結合している分岐鎖の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ１５：２６−３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖には、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「幹」でＧｌｃＮＡｃに結合するフコースが含まれ得る。いくつかの実施形態では、抗体におけるオリゴ糖の修飾は、ある特定の改善された特性を有する抗体バリアントを作製するために行われ得る。
【０１６４】
一実施形態では、Ｆｃ領域に結合する（直接または間接的に）フコースを欠いた炭水化物構造を有する抗体バリアントが提供される。例えば、かかる抗体中のフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であり得る。フコースの量は、例えばＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるように、ＷＯＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定される、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計に対する、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって判定される。Ａｓｎ２９７とは、Ｆｃ領域中の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ付番）に位置するアスパラギン残基を指す。しかしながら、Ａｓｎ２９７はまた、抗体中の小規模な配列変異に起因して、２９７位の約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位〜３００位に位置してもよい。かかるフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、同第ＵＳ２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体バリアントに関する刊行物の例として、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化された抗体を産生することができる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠損したＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８Ａ１号，Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ、及びＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１，Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．、特に実施例１１において）、ならびにノックアウト細胞株、例えばアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）が挙げられる。
【０１６５】
例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている、二分されたオリゴ糖を有する抗体バリアントがさらに提供される。かかる抗体バリアントは、天元されたフコシル化及び／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体バリアントの例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔ  ｅｔ  ａｌ．）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）、及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体バリアントも提供される。かかる抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体バリアントは、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ  Ｓ）、及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ  Ｓ）に記載されている。
【０１６６】
ｉｖ．Ｆｃ領域バリアント
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾は、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域内に導入され、それによってＦｃ領域バリアントを生成し得る。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置におけるアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４Ｆｃ領域）を含んでもよい。
【０１６７】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される主題は、全てではないがいくつかのエフェクター機能を保有することにより、インビボでの抗体の半減期は重要であるが、ある特定のエフェクター機能（例えば、補体及びＡＤＣＣ）は不要または有害である用途に望ましい候補となる抗体バリアントに向けられる。ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認するために、インビボ及び／またはインビボの細胞傷害性アッセイが実施され得る。例えば、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（ゆえに、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持することを確実にするために、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイが実施され得る。ＡＤＣＣを媒介する初代細胞であるＮＫ細胞は、Ｆｃ（ＲＩＩＩのみを発現する一方、単球は、Ｆｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ、及びＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照されたい）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：１４９９−１５０２（１９８５）；５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．「Ｍｅｄ．」１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載されている。代替的には、非放射性アッセイ法を用いてもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ））を参照されたい。かかるアッセイのために有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。代替的には、または追加的には、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるものなどの動物モデルにおいて、インビボで評価され得る。抗体がＣ１ｑに結合することができず、ゆえにＣＤＣ活性を欠くことを確認するために、Ｃ１ｑ結合アッセイも実施され得る。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性を評価するために、ＣＤＣアッセイを行ってもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ１０１：１０４５−１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ１０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期判定はまた、当該技術分野で既知の方法を使用して行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照されたい）。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、新生児型Ｆｃ受容体へのＩｇＧ結合を増加させるために、本明細書に提供される抗体のＦｃ部分内に１つ以上のアミノ酸修飾が導入されてもよい。ある特定の実施形態では、抗体は、ＥＵ付番に従い、以下の３つの変異を含む：Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ（「ＹＴＥ変異」）（米国特許第８，６９７，６５０号、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２８１（３３）：２３５１４−２３５２４（２００６）も参照されたい。ある特定の実施形態では、ＹＴＥ変異は、抗体の、その同族抗原に結合する能力に影響を及ぼさない。ある特定の実施形態では、ＹＴＥ変異は、天然（すなわち、非ＹＴＥ変異体）抗体と比較して、抗体の血清半減期を増加させる。いくつかの実施形態では、ＹＴＥ変異は、天然（すなわち、非ＹＴＥ変異体）抗体と比較して、抗体の血清半減期を３倍増加させる。いくつかの実施形態では、ＹＴＥ変異は、天然（すなわち、非ＹＴＥ変異体）抗体と比較して、抗体の血清半減期を２倍増加させる。いくつかの実施形態では、ＹＴＥ変異は、天然（すなわち、非ＹＴＥ変異体）抗体と比較して、抗体の血清半減期を４倍増加させる。いくつかの実施形態では、ＹＴＥ変異は、天然（すなわち、非ＹＴＥ変異体）抗体と比較して、抗体の血清半減期を５倍増加させる。いくつかの実施形態では、ＹＴＥ変異は、天然（すなわち、非ＹＴＥ変異体）抗体と比較して、抗体の血清半減期を１０倍増加させる。例えば、米国特許第８，６９７，６５０号を参照されたい。Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２８１（３３）：２３５１４−２３５２４（２００６）も参照されたい。
【０１６９】
ある特定の実施形態では、ＹＴＥ変異体は、抗体の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を調節する手段を提供する。ある特定の実施形態では、ＹＴＥＯ変異体は、ヒト抗原に対するヒト化ＩｇＧ抗体のＡＤＣＣ活性を調節する手段を提供する。例えば、米国特許第８，６９７，６５０号を参照されたい。Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２８１（３３）：２３５１４−２３５２４（２００６）も参照されたい。
【０１７０】
ある特定の実施形態では、ＹＴＥ変異体は、血清半減期、組織分布、及び抗体活性（例えば、ＩｇＧ抗体のＡＤＣＣ活性）を同時に調節することを可能にする。例えば、米国特許第８，６９７，６５０号を参照されたい。Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２８１（３３）：２３５１４−２３５２４（２００６）も参照されたい。
【０１７１】
低減したエフェクター細胞を有する抗体には、ＥＵ付番に従うＦｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上の置換を有するものが含まれる（米国特許第６７３７０５６号）。かかるＦｃ変異体には、ＥＵ付番に従う残基２６５及び２９７のアラニンでの置換（すなわち、ＥＵ付番に従うＤ２６５Ａ及びＮ２９７Ａ）を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、ＥＵ付番に従うアミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７のうちの２つ以上での置換を有するＦｃ変異体が含まれる（米国特許第７，３３２，５８１号）。ある特定の実施形態では、Ｆｃ変異体は、以下の２つのアミノ酸置換を含む：Ｄ２６５Ａ及びＮ２９７Ａ。ある特定の実施形態では、Ｆｃ変異体は、以下の２つのアミノ酸置換からなる：Ｄ２６５Ａ及びＮ２９７Ａ。
【０１７２】
ある特定の実施形態では、野生型ヒトＦｃ領域の３２９位のプロリン（ＥＵ付番）（Ｐ３２９）は、グリシンもしくはアルギニン、またはＦｃのＰ３２９とＦｃｇＲＩＩＩのトリプトファン残基Ｗ８７及びＷ１１０との間に形成されたＦｃ／Ｆｃγ受容体界面内のプロリンサンドウィッチを破壊するのに十分な大きさのアミノ酸残基で置換される（Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．：  Ｎａｔｕｒｅ４０６，２６７−２７３（２０Ｊｕｌｙ２０００））。さらなる実施形態では、Ｆｃバリアント中の少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、、またはＰ３３１Ｓであり、なお別の実施形態では、該少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ、またはＩｇＧ４Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅであり、これらは全てＥＵ付番に従う（米国特許第８，９６９，５２６号）。
【０１７３】
ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域のＦｃバリアントを含み、ポリペプチドは、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域のＰ３２９がグリシンで置換され、Ｆｃバリアントは、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５ＡまたはヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅにおいて少なくとも２つのさらなるアミノ酸置換を含み、残基は、ＥＵ付番に従い付番されている（米国特許第８，９６９，５２６号）。ある特定の実施形態では、野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域を含むポリペプチドによって誘発されたＡＤＣＣの少なくとも２０％へのＡＤＣＣの下方調節について、及び／またはＡＤＣＰの下方調節について、Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ（ＥＵ付番）置換を含むポリペプチドは、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＡへの提言した親和性を呈する（米国特許第８，９６９，５２６号）。
【０１７４】
特定の実施形態では、野生型ヒトＦｃポリペプチドのＦｃバリアントを含むポリペプチドは、三重変異を含む：ＥＵ付番に従うＰｒｏ３２９位におけるアミノ酸置換、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ変異（Ｐ３２９／ＬＡＬＡ）（米国特許第８，９６９，５２６号）。特定の実施形態では、ポリペプチドは、以下のアミノ酸置換を含む：ＥＵ付番に従うＰ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ。
【０１７５】
改善または現象したＦｃＲへの結合を有するある特定の抗体バリアントが記載される。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたい。）
【０１７６】
ある特定の実施形態では、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、及び３３４位における置換（ＥＵ付番）を有するＦｃ領域を含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、改変された（すなわち、改善または低減のいずれか）Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらす改変がＦｃ領域内で行われる。
【０１７８】
増加した半減期、及び母胎ＩｇＧの胎児への移送を担う新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合を有する抗体（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））は、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへのｋ都合を改善させる１つ以上の置換をその中に有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃバリアントには、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４、例えば、ＥＵ付番に従うＦｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号）のうちの１つ以上での置換を有するものが含まれる。Ｆｃ領域バリアントの他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。
【０１７９】
ｇ．抗体誘導体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、容易に入手可能なさらなる非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾されてもよい。抗体の誘導体かに好適な部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性により、製造における利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量であってもよく、分岐であっても非分岐であってもよい。抗体に結合したポリマーの数は異なり得、２個以上のポリマーが結合している場合、それらは同じ分子であっても異なる分子であってもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／または種類は、改善される抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が規定の条件下で療法に使用されることになるかどうかなどを含むがこれらに限定されない検討事項に基づいて決定され得る。
【０１８０】
別の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る抗体と非タンパク質性部分とのコンジュゲートが提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０２：１１６００−１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長であり得、これには、正常細胞を害さないが、抗体−非タンパク質性部分に隣接する細胞が殺滅される温度まで非タンパク質性部分を加熱する波長が含まれるが、これに限定されない。
【０１８１】
ｈ．腫瘍関連抗原
癌の治療において本明細書に提供されるＰＡＣに有用であり得る、システイン操作された抗体を含むがこれに限定されない抗体には、細胞表面受容体及び腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に対する抗体が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の腫瘍関連抗原は当該技術分野で既知であり、当該技術分野で既知の方法及び情報を使用した抗体の生成における使用のために調製することができる。癌の診断及び療法のための有効な細胞標的をは発見する試みにおいて、研究者らは、１つ以上の正常な非癌性細胞（複数可）と比較して、１つ以上の特定の種類（複数可）の癌細胞の表面上に特異的に発現される膜貫通ポリペプチドまたは別様の腫瘍関連ポリペプチドを同定するように努めてきた。しばしば、かかる腫瘍関連ポリペプチドは、非癌性細胞の表面上と比較して、癌細胞の表面上により豊富に発現される。かかる腫瘍関連細胞表面抗原ポリペプチドの同定は、抗体に基づく療法を介して破壊のための癌細胞をより特異的に標的とする能力をもたらした。
【０１８２】
腫瘍関連抗原ＴＡＡの例としては、以下に列挙されるものが挙げられるが、これらに限定されない。便宜上、全て当該技術分野で既知であるこれらの抗原に関する情報は、以下に列挙され、国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）の拡散及びタンパク質配列同定慣習に従う、名称、代替的な名称、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号、及び主要な文献（複数可）を含む。以下に列挙されるＴＡＡに対応する核酸及びタンパク質配列は、ＧｅｎＢａｎｋなどの公的データベースにおいて入手可能である。抗体によって標的とされる腫瘍関連抗原は、引用文献において同定された配列に対して少なくとも約７０％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を保有し、かつ／または引用文献中に見出される配列を有するＴＡＡと同じ生物学的特性もしくは特性を実質的に呈する全てのアミノ酸配列バリアント及びアイソフォームを含む。例えば、バリアント配列を有するＴＡＡは一般に、レ一挙される対応する配列を有するＴＡＡに特異的に結合する抗体に特異的に結合する。本明細書に具体的に引用される参考文献中の配列及び開示は、参照により明示的に組み込まれる。
【０１８３】
ｉ．組み換え法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されるように、組み換え法及び組成物を使用して産生され得る。一実施形態では、本明細書に記載される抗体をコードする単離された抗体が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／またＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのかかる実施形態では、宿主細胞は、以下を含む（例えば、これらにより形質転換される）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクター。一実施形態では、宿主細胞は、真核性であり、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ球細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗体を作製する方法が提供され、該方法は、上記のように、抗体の発現に好適な条件下で抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することと、任意に宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から抗体を回収することと、を含む。
【０１８４】
抗体の組み換え産生のために、抗体をコードする核酸は、例えば上記のように、単離され、宿主細胞におけるさらなるクローニング及び／または発現のために１つ以上のベクター内に挿入される。かかる核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離及び配列決定され得る。
【０１８５】
抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、本明細書に記載される原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、特に糖鎖付加及びＦｃエフェクター細胞が必要とされない場合に、抗体は細菌中で産生され得る。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現について、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（Ｅ．Ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現について記載するＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照されたい。）発現後、抗体は、細菌細胞ペーストから可溶性画分中に単離され、さらに精製され得る。
【０１８６】
原核細胞に加えて、糸状菌または酵母菌などの真核微生物が、抗体をコードするベクターに好適なクローニングまたは発現宿主であり、これには、それらの糖鎖付加経路が「ヒト化」され、部分的または完全なヒト糖鎖付加パターンを有する抗体の産生をもたらす細菌及び酵母菌株が含まれる。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
【０１８７】
糖鎖付加された抗体の発現に好適な宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物及び昆虫細胞が挙げられる。特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞の遺伝子導入のために、昆虫細胞と併せて使用され得る数々のバキュロウイルス株が同定されている。
【０１８８】
植物細胞培養物も宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物中で抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載）を参照されたい。
【０１８９】
脊椎動物細胞もまた宿主細胞として使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように適合された哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胚腎臓細胞株（例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されるような２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されるようなＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載されるようなＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４２１６（１９８０））、ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に好適なある特定の哺乳動物宿主細胞株の概説について、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。
【０１９０】
次に抗体親和性について言及すると、実施形態では、抗体は、（１）〜（５３）から選択される１つ以上の腫瘍関連抗原またはさいぼう表面受容体に結合する：
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質受容体ＩＢ型、Ｇｅｎｂａｎｋ受託
番号ＮＭ＿００１２０３）
ｔｅｎ  Ｄｉｊｋｅ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ２６４（５１５５）：１０１−１０４（１９９４），Ｏｎｃｏｇｅｎｅ１４（１１）：１３７７−１３８２（１９９７））；ＷＯ２００４０６３３６２（請求項２）；ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）；ＵＳ２００３１３４７９０−Ａ１（３８〜３９頁）；ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３；２９６頁）；ＷＯ２００３０５５４４３（９１〜９２頁）；ＷＯ２００２９９１２２（実施例２；５２８〜５３０頁）；ＷＯ２００３０２９４２１（請求項６）；ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２；図１１２）；ＷＯ２００２９８３５８（請求項１；１８３頁）；ＷＯ２００２５４９４０（１００〜１０１頁）；ＷＯ２００２５９３７７（３４９〜３５０頁）；ＷＯ２００２３０２６８（請求項２７；３７６頁）；ＷＯ２００１４８２０４（実施例；図４）ＮＰ＿００１１９４骨形成タンパク質受容体、ＩＢ型／ｐｉｄ＝ＮＰ＿００１１９４．１−相互参照：ＭＩＭ：６０３２４８；ＮＰ＿００１１９４．１；ＡＹ０６５９９４
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００３４８６）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５５（２），２８３−２８８（１９９９），Ｎａｔｕｒｅ３９５（６６９９）：２８８−２９１（１９９８），Ｇａｕｇｉｔｓｃｈ，Ｈ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７（１６）：１１２６７−１１２７３）；ＷＯ２００４０４８９３８（実施例２）；ＷＯ２００４０３２８４２（実施例ＩＶ）；ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）；ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）；ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）；ＷＯ２００２９９０７４（請求項１９；１２７〜１２９頁）；ＷＯ２００２８６４４３（請求項２７；２２２、３９３頁）；ＷＯ２００３００３９０６（請求項１０；２９３頁）；ＷＯ２００２６４７９８（請求項３３；９３〜９５頁）；ＷＯ２０００１４２２８（請求項５；１３３〜１３６頁）；ＵＳ２００３２２４４５４（図３）；ＷＯ２００３０２５１３８（請求項１２；１５０頁）；ＮＰ＿００３４７７溶質輸送体ファミリー７（カチオン性アミノ酸輸送体、ｙ＋系）、メンバー５／ｐｉｄ＝ＮＰ＿００３４７７．３−ホモサピエンス相互参照：ＭＩＭ：６００１８２；ＮＰ＿００３４７７．３；ＮＭ＿０１５９２３；ＮＭ＿００３４８６＿１
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６膜貫通上皮抗原、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１２４４９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１（１５），５８５７−５８６０（２００１），Ｈｕｂｅｒｔ，Ｒ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９６（２５）：１４５２３−１４５２８）；ＷＯ２００４０６５５７７（請求項６）；ＷＯ２００４０２７０４９（図１Ｌ）；ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）；ＷＯ２００４０１６２２５（請求項２）；ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）；ＵＳ２００３１５７０８９（実施例５）；ＵＳ２００３１８５８３０（実施例５）；ＵＳ２００３０６４３９７（図２）；ＷＯ２００２８９７４７（実施例５；６１８〜６１９頁）；ＷＯ２００３０２２９９５（実施例９；図１３Ａ、実施例５３；１７３頁、実施例２；図２Ａ）；ＮＰ＿０３６５８１前立腺の６膜貫通上皮抗原相互参照：ＭＩＭ：６０４４１５；ＮＰ＿０３６５８１．１；ＮＭ＿０１２４４９＿１
（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５、ＭＵＣ１６、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ３６１４８６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２９）：２７３７１−２７３７５（２００１））；ＷＯ２００４０４５５５３（請求項１４）；ＷＯ２００２９２８３６（請求項６；図１２）；ＷＯ２００２８３８６６（請求項１５；１１６〜１２１頁）；ＵＳ２００３１２４１４０（実施例１６）；ＵＳ７９８９５９。相互参照：ＧＩ：３４５０１４６７；ＡＡＫ７４１２０．３；ＡＦ３６１４８６＿１
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００５８２３）Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，Ｎ．，ｅｔ  ａｌ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（２），８０５−８０８（１９９４），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９６（２０）：１１５３１−１１５３６（１９９９），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９３（１）：１３６−１４０（１９９６），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０（３７）：２１９８４−２１９９０（１９９５））；ＷＯ２００３１０１２８３（請求項１４）；（ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３；２８７〜２８８頁）；ＷＯ２００２１０１０７５（請求項４；３０８〜３０９頁）；ＷＯ２００２７１９２８（３２０〜３２１頁）；ＷＯ９４１０３１２（５２〜５７頁）；相互参照：ＭＩＭ：６０１０５１；ＮＰ＿００５８１４．２；ＮＭ＿００５８２３＿１
（６）Ｎａｐｉ２ｂ（Ｎａｐｉ３ｂ、ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質輸送体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００６４２４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（２２）：１９６６５−１９６７２（２００２），Ｇｅｎｏｍｉｃｓ６２（２）：２８１−２８４（１９９９），Ｆｅｉｌｄ，Ｊ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５８（３）：５７８−５８２）；ＷＯ２００４０２２７７８（請求項２）；ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）；ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３；３２６頁）；ＥＰ８７５５６９（請求項１；１７〜１９頁）；ＷＯ２００１５７１８８（請求項２０；３２９頁）；ＷＯ２００４０３２８４２（実施例ＩＶ）；ＷＯ２００１７５１７７（請求項２４；１３９  １４０頁）；相互参照：ＭＩＭ：６０４２１７；ＮＰ＿００６４１５．１；ＮＭ＿００６４２４＿１
（７）Ｓｅｍａ  ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ  Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７トロンボスポンジン反復（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）及び短い細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＢ０４０８７８）Ｎａｇａｓｅ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ（２０００）ＤＮＡ  Ｒｅｓ．７（２）：１４３−１５０）；ＷＯ２００４０００９９７（請求項１）；ＷＯ２００３００３９８４（請求項１）；ＷＯ２００２０６３３９（請求項１；５０頁）；ＷＯ２００１８８１３３（請求項１；４１〜４３頁、４８〜５８頁）；ＷＯ２００３０５４１５２（請求項２０）；ＷＯ２００３１０１４００（請求項１１）；受託：Ｑ９Ｐ２８３；ＥＭＢＬ；ＡＢ０４０８７８；ＢＡＡ９５９６９．１．Ｇｅｎｅｗ；ＨＧＮＣ：１０７３７；
（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ２７０００５０Ｃ１２遺伝子、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＹ３５８６２８）；Ｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２：２５４６−２５５３；ＵＳ２００３１２９１９２（請求項２）；ＵＳ２００４０４４１８０（請求項１２）；ＵＳ２００４０４４１７９（請求項１１）；ＵＳ２００３０９６９６１（請求項１１）；ＵＳ２００３２３２０５６（実施例５）；ＷＯ２００３１０５７５８（請求項１２）；ＵＳ２００３２０６９１８（実施例５）；ＥＰ１３４７０４６（請求項１）；ＷＯ２００３０２５１４８（請求項２０）；相互参照：ＧＩ：３７１８２３７８；ＡＡＱ８８９９１．１；ＡＹ３５８６２８＿１
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリン受容体タイプＢ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＹ２７５４６３）；Ｎａｋａｍｕｔａ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７７，３４−３９，１９９１；Ｏｇａｗａ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７８，２４８−２５５，１９９１；Ａｒａｉ  Ｈ．，ｅｔ  ａｌ  Ｊｐｎ．Ｃｉｒｃ．Ｊ．５６，１３０３−１３０７，１９９２；Ａｒａｉ  Ｈ．，ｅｔ  ａｌＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，３４６３−３４７０，１９９３；Ｓａｋａｍｏｔｏ  Ａ．，Ｙａｎａｇｉｓａｗａ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７８，６５６−６６３，１９９１；Ｅｌｓｈｏｕｒｂａｇｙ  Ｎ．Ａ．，ｅｔ  ａｌＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，３８７３−３８７９，１９９３；Ｈａｅｎｄｌｅｒ  Ｂ．，ｅｔ  ａｌＪ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０，ｓ１−Ｓ４，１９９２；Ｔｓｕｔｓｕｍｉ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ  Ｇｅｎｅ２２８，４３−４９，１９９９；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  Ｒ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９，１６８９９−１６９０３，２００２；Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓ  Ｃ．，ｅｔ  ａｌＪ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８２，３１１６−３１２３，１９９７；Ｏｋａｍｏｔｏ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２１５８９−２１５９６，１９９７；Ｖｅｒｈｅｉｊ  Ｊ．Ｂ．，ｅｔ  ａｌ  Ａｍ．Ｊ．「Ｍｅｄ．」Ｇｅｎｅｔ．１０８，２２３−２２５，２００２；Ｈｏｆｓｔｒａ  Ｒ．Ｍ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．５，１８０−１８５，１９９７；Ｐｕｆｆｅｎｂｅｒｇｅｒ  Ｅ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ  Ｃｅｌｌ７９，１２５７−１２６６，１９９４；Ａｔｔｉｅ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．４，２４０７−２４０９，１９９５；Ａｕｒｉｃｃｈｉｏ  Ａ．，ｅｔ  ａｌ  Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５：３５１−３５４，１９９６；Ａｍｉｅｌ  Ｊ．，ｅｔ  ａｌ  Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５，３５５−３５７，１９９６；Ｈｏｆｓｔｒａ  Ｒ．Ｍ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ  Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１２，４４５−４４７，１９９６；Ｓｖｅｎｓｓｏｎ  Ｐ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ  Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１０３，１４５−１４８，１９９８；Ｆｕｃｈｓ  Ｓ．，ｅｔ  ａｌ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７，１１５−１２４，２００１；Ｐｉｎｇａｕｌｔ  Ｖ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ  １１１  １９８  ２０６；ＷＯ２００４０４５５１６（請求項１）；ＷＯ２００４０４８９３８（実施例２）；ＷＯ２００４０４００００（請求項１５１）；ＷＯ２００３０８７７６８（請求項１）；ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）；ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）；ＷＯ２００２６１０８７（図１）；ＷＯ２００３０１６４９４（図６）；ＷＯ２００３０２５１３８（請求項１２；１４４頁）；ＷＯ２００１９８３５１（請求項１；１２４〜１２５頁）；ＥＰ５２２８６８（請求項８；図２）；ＷＯ２００１７７１７２（請求項１；２９７〜２９９頁）；ＵＳ２００３１０９６７６；ＵＳ６５１８４０４（図３）；ＵＳ５７７３２２３（請求項１ａ；欄３１〜３４）；ＷＯ２００４００１００４；
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１７７６３）；ＷＯ２００３１０４２７５（請求項１）；ＷＯ２００４０４６３４２（実施例２）；ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）；ＷＯ２００３０８３０７４（請求項１４；６１頁）；ＷＯ２００３０１８６２１（請求項１）；ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２；図９３）；ＷＯ２００１６６６８９（実施例６）；相互参照：ＬｏｃｕｓＩＤ：５４８９４；ＮＰ＿０６０２３３．２；ＮＭ＿０１７７６３＿１
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺の６膜貫通上皮抗原２、６膜貫通前立腺タンパク質、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ４５５１３８）Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．８２（１１）：１５７３−１５８２（２００２））；ＷＯ２００３０８７３０６；ＵＳ２００３０６４３９７（請求項１；図１）；ＷＯ２００２７２５９６（請求項１３；５４〜５５頁）；ＷＯ２００１７２９６２（請求項１；図４Ｂ）；ＷＯ２００３１０４２７０（請求項１１）；ＷＯ２００３１０４２７０（請求項１６）；ＵＳ２００４００５５９８（請求項２２）；ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）；ＵＳ２００３０６０６１２（請求項１２；図１０）；ＷＯ２００２２６８２２（請求項２３；図２）；ＷＯ２００２１６４２９（請求項１２；図１０）；相互参照：ＧＩ：２２６５５４８８；ＡＡＮ０４０８０．１；ＡＦ４５５１３８＿１
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容器電位チャネル、サブファミリーＭ、メンバー４、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１７６３６）Ｘｕ，Ｘ．Ｚ．，ｅｔ  ａｌ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８（１９）：１０６９２−１０６９７（２００１），Ｃｅｌｌ１０９（３）：３９７−４０７（２００２），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８（３３）：３０８１３−３０８２０（２００３））；ＵＳ２００３１４３５５７（請求項４）；ＷＯ２０００４０６１４（請求項１４；１００〜１０３頁）；ＷＯ２００２１０３８２（請求項１；図９Ａ）；ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）；ＷＯ２００２３０２６８（請求項２７；３９１頁）；ＵＳ２００３２１９８０６（請求項４）；ＷＯ２００１６２７９４（請求項１４；図１Ａ〜Ｄ）；相互参照：ＭＩＭ：６０６９３６；ＮＰ＿０６０１０６．２；ＮＭ＿０１７６３６＿１
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌腫由来成長因子、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００３２０３またはＮＭ＿００３２１２）Ｃｉｃｃｏｄｉｃｏｌａ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ  ＥＭＢＯ  Ｊ．８（７）：１９８７−１９９１（１９８９），Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．４９（３）：５５５−５６５（１９９１））；ＵＳ２００３２２４４１１（請求項１）；ＷＯ２００３０８３０４１（実施例１）；ＷＯ２００３０３４９８４（請求項１２）；ＷＯ２００２８８１７０（請求項２；５２〜５３頁）；ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２；図５８）；ＷＯ２００２１６４１３（請求項１；９４〜９５頁、１０５頁）；ＷＯ２００２２２８０８（請求項２；図１）；ＵＳ５８５４３９９（実施例２；欄１７〜１８）；ＵＳ５７９２６１６（図２）；相互参照：ＭＩＭ：１８７３９５；ＮＰ＿００３２０３．１；ＮＭ＿００３２１２＿１
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタイン・バーウイルス受容体）またはＨｓ．７３７９２Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｍ２６００４）Ｆｕｊｉｓａｋｕ  ｅｔ  ａｌ（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４（４）：２１１８−２１２５）；Ｗｅｉｓ  Ｊ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌＪ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７，１０４７−１０６６，１９８８；Ｍｏｏｒｅ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４，９１９４−９１９８，１９８７；Ｂａｒｅｌ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ  Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５，１０２５−１０３１，１９９８；Ｗｅｉｓ  Ｊ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３，５６３９−５６４３，１９８６；Ｓｉｎｈａ  Ｓ．Ｋ．，ｅｔ  ａｌ（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０，５３１１−５３２０；ＷＯ２００４０４５５２０（実施例４）；ＵＳ２００４００５５３８（実施例１）；ＷＯ２００３０６２４０１（請求項９）；ＷＯ２００４０４５５２０（実施例４）；ＷＯ９１０２５３６（図９．１〜９．９）；ＷＯ２００４０２０５９５（請求項１）；受託：Ｐ２００２３；Ｑ１３８６６；Ｑ１４２１２；ＥＭＢＬ；Ｍ２６００４；ＡＡＡ３５７８６．１．
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００６２６または１１０３８６７４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（２００３）１００（７）：４１２６−４１３１，Ｂｌｏｏｄ（２００２）１００（９）：３０６８−３０７６，Ｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（６）：１６２１−１６２５）；ＷＯ２００４０１６２２５（請求項２、図１４０）；ＷＯ２００３０８７７６８、ＵＳ２００４１０１８７４（請求項１、１０２頁）；ＷＯ２００３０６２４０１（請求項９）；ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）；ＵＳ２００２１５０５７３（請求項５、１５頁）；ＵＳ５６４４０３３；ＷＯ２００３０４８２０２（請求項１、３０６及び３０９頁）；ＷＯ９９／５５８６５８、ＵＳ６５３４４８２（請求項１３、図１７Ａ／Ｂ）；ＷＯ２０００５５３５１（請求項１１、１１４５〜１１４６頁）；相互参照：ＭＩＭ：１４７２４５；ＮＰ＿０００６１７．１；ＮＭ＿０００６２６＿１
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ホスファターゼアンカータンパク質１ａを含有するＳＨ２ドメイン）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０３０７６４、ＡＹ３５８１３０）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０（２００３），Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ５４（２）：８７−９５（２００２），Ｂｌｏｏｄ９９（８）：２６６２−２６６９（２００２），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８（１７）：９７７２−９７７７（２００１），Ｘｕ，Ｍ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ（２００１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２８０（３）：７６８−７７５；ＷＯ２００４０１６２２５（請求項２）；ＷＯ２００３０７７８３６；ＷＯ２００１３８４９０（請求項５；図１８Ｄ−１〜１８Ｄ−２）；ＷＯ２００３０９７８０３（請求項１２）；ＷＯ２００３０８９６２４（請求項２５）；相互参照：ＭＩＭ：６０６５０９；ＮＰ＿１１０３９１．２；ＮＭ＿０３０７６４＿１
（１７）ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｍ１１７３０）Ｃｏｕｓｓｅｎｓ  Ｌ．，ｅｔ  ａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８５）２３０（４７３０）：１１３２−１１３９）；Ｙａｍａｍｏｔｏ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ  Ｎａｔｕｒｅ３１９，２３０−２３４，１９８６；Ｓｅｍｂａ  Ｋ．，ｅｔ  ａｌ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２，６４９７−６５０１，１９８５；Ｓｗｉｅｒｃｚ  Ｊ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌＪ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１６５，８６９−８８０，２００４；Ｋｕｈｎｓ  Ｊ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，３６４２２−３６４２７，１９９９；Ｃｈｏ  Ｈ．−Ｓ．，ｅｔ  ａｌ  Ｎａｔｕｒｅ４２１，７５６−７６０，２００３；Ｅｈｓａｎｉ  Ａ．，ｅｔ  ａｌ（１９９３）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ１５，４２６−４２９；ＷＯ２００４０４８９３８（実施例２）；ＷＯ２００４０２７０４９（図１Ｉ）；ＷＯ２００４００９６２２；ＷＯ２００３０８１２１０；ＷＯ２００３０８９９０４（請求項９）；ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）；ＵＳ２００３１１８５９２；ＷＯ２００３００８５３７（請求項１）；ＷＯ２００３０５５４３９（請求項２９；図１Ａ〜Ｂ）；ＷＯ２００３０２５２２８（請求項３７；図５Ｃ）；ＷＯ２００２２２６３６（実施例１３；９５〜１０７頁）；ＷＯ２００２１２３４１（請求項６８；図７）；ＷＯ２００２１３８４７（７１〜７４頁）；ＷＯ２００２１４５０３（１１４〜１１７頁）；ＷＯ２００１５３４６３（請求項２；４１〜４６頁）；ＷＯ２００１４１７８７（１５頁）；ＷＯ２０００４４８９９（請求項５２；図７）；ＷＯ２０００２０５７９（請求項３；図２）；ＵＳ５８６９４４５（請求項３；欄３１〜３８）；ＷＯ９６３０５１４（請求項２；５６〜６１頁）；ＥＰ１４３９３９３（請求項７）；ＷＯ２００４０４３３６１（請求項７）；ＷＯ２００４０２２７０９；ＷＯ２００１００２４４（実施例３；図４）；受託：Ｐ０４６２６；ＥＭＢＬ；Ｍ１１７６７；ＡＡＡ３５８０８．１．ＥＭＢＬ；Ｍ１１７６１；ＡＡＡ３５８０８．１．
（１８）ＮＣＡ（ＣＥＡＣＡＭ６、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｍ１８７２８）；Ｂａｒｎｅｔｔ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ３，５９−６６，１９８８；Ｔａｗａｒａｇｉ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５０，８９−９６，１９８８；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  Ｒ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９：１６８９９−１６９０３，２００２；ＷＯ２００４０６３７０９；ＥＰ１４３９３９３（請求項７）；ＷＯ２００４０４４１７８（実施例４）；ＷＯ２００４０３１２３８；ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）；ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）；ＷＯ２００２８６４４３（請求項２７；４２７頁）；ＷＯ２００２６０３１７（請求項２）；受託：Ｐ４０１９９；Ｑ１４９２０；ＥＭＢＬ；Ｍ２９５４１；ＡＡＡ５９９１５．１．ＥＭＢＬ；Ｍ１８７２８；
（１９）ＭＤＰ（ＤＰＥＰ１Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＢＣ０１７０２３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９（２６）：１６８９９−１６９０３（２００２））；ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）；ＷＯ２００２６４７９８（請求項３３；８５〜８７頁）；ＪＰ０５００３７９０（図６〜８）；ＷＯ９９４６２８４（図９）；相互参照：ＭＩＭ：１７９７８０；ＡＡＨ１７０２３．１；ＢＣ０１７０２３＿１
（２０）ＩＬ２０Ｒα（ＩＬ２０Ｒａ、ＺＣＹＴＯＲ７、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ１８４９７１）；Ｃｌａｒｋ  Ｈ．Ｆ．，ｅｔ  ａｌ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３，２２６５−２２７０，２００３；Ｍｕｎｇａｌｌ  Ａ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ  Ｎａｔｕｒｅ４２５，８０５−８１１，２００３；Ｂｌｕｍｂｅｒｇ  Ｈ．，ｅｔ  ａｌ  Ｃｅｌｌ  １０４，９−１９，２００１；Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．，ｅｔ  ａｌＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７，３５４５−３５４９，２００１；Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋ  Ｊ．，ｅｔ  ａｌＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７，４７５１７−４７５２３，２００２；Ｐｌｅｔｎｅｖ  Ｓ．，ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ４２：１２６１７−１２６２４；Ｓｈｅｉｋｈ  Ｆ．，ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２，２００６−２０１０；ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）；ＵＳ２００４００５３２０（実施例５）；ＷＯ２００３０２９２６２（７４〜７５頁）；ＷＯ２００３００２７１７（請求項２；６３頁）；ＷＯ２００２２２１５３（４５〜４７頁）；ＵＳ２００２０４２３６６（２０〜２１頁）；ＷＯ２００１４６２６１（５７〜５９頁）；ＷＯ２００１４６２３２（６３〜６５頁）；ＷＯ９８３７１９３（請求項１；５５〜５９頁）；受託：Ｑ９ＵＨＦ４；Ｑ６ＵＷＡ９；Ｑ９６ＳＨ８；ＥＭＢＬ；ＡＦ１８４９７１；ＡＡＦ０１３２０．１．
（２１）ブレビカン（ＢＣＡＮ、ＢＥＨＡＢ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ２２９０５３）Ｇａｒｙ  Ｓ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ  Ｇｅｎｅ２５６，１３９−１４７，２０００；Ｃｌａｒｋ  Ｈ．Ｆ．，ｅｔ  ａｌ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３，２２６５−２２７０，２００３；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  Ｒ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９，１６８９９−１６９０３，２００２；ＵＳ２００３１８６３７２（請求項１１）；ＵＳ２００３１８６３７３（請求項１１）；ＵＳ２００３１１９１３１（請求項１；図５２）；ＵＳ２００３１１９１２２（請求項１；図５２）；ＵＳ２００３１１９１２６（請求項１）；ＵＳ２００３１１９１２１（請求項１；図５２）；ＵＳ２００３１１９１２９（請求項１）；ＵＳ２００３１１９１３０（請求項１）；ＵＳ２００３１１９１２８（請求項１；図５２）；ＵＳ２００３１１９１２５（請求項１）；ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）；ＷＯ２００２０２６３４（請求項１）；
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ（ＤＲＴ、ＥＲＫ、Ｈｅｋ５、ＥＰＨＴ３、Ｔｙｒｏ５、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００４４４２）Ｃｈａｎ，Ｊ．ａｎｄ  Ｗａｔｔ，Ｖ．Ｍ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ６（６），１０５７−１０６１（１９９１）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ１０（５）：８９７−９０５（１９９５），Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２１：３０９−３４５（１９９８），Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．１９６：１７７−２４４（２０００））；ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）；ＷＯ２０００５３２１６（請求項１；４１頁）；ＷＯ２００４０６５５７６（請求項１）；ＷＯ２００４０２０５８３（請求項９）；ＷＯ２００３００４５２９（１２８〜１３２頁）；ＷＯ２０００５３２１６（請求項１；４２頁）；相互参照：ＭＩＭ：６００９９７；ＮＰ＿００４４３３．２；ＮＭ＿００４４４２＿１
（２３）ＡＳＬＧ６５９（Ｂ７ｈ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＸ０９２３２８）ＵＳ２００４０１０１８９９（請求項２）；ＷＯ２００３１０４３９９（請求項１１）；ＷＯ２００４０００２２１（図３）；ＵＳ２００３１６５５０４（請求項１）；ＵＳ２００３１２４１４０（実施例２）；ＵＳ２００３０６５１４３（図６０）；ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３；２９９頁）；ＵＳ２００３０９１５８０（実施例２）；ＷＯ２００２１０１８７（請求項６；図１０）；ＷＯ２００１９４６４１（請求項１２；図７ｂ）；ＷＯ２００２０２６２４（請求項１３；図１Ａ〜１Ｂ）；ＵＳ２００２０３４７４９（請求項５４；４５〜４６頁）；ＷＯ２００２０６３１７（実施例２；３２０〜３２１頁、請求項３４；３２１〜３２２頁）；ＷＯ２００２７１９２８（４６８〜４６９頁）；ＷＯ２００２０２５８７（実施例１；図１）；ＷＯ２００１４０２６９（実施例３；１９０〜１９２頁）；ＷＯ２０００３６１０７（実施例２；２０５〜２０７頁）；ＷＯ２００４０５３０７９（請求項１２）；ＷＯ２００３００４９８９（請求項１）；ＷＯ２００２７１９２８（２３３〜２３４、４５２〜４５３頁）；ＷＯ０１１６３１８；
（２４）ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原前駆体、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＪ２９７４３６）Ｒｅｉｔｅｒ  Ｒ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９５，１７３５−１７４０，１９９８；Ｇｕ  Ｚ．，ｅｔ  ａｌ  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ１９，１２８８−１２９６，２０００；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．（２０００）２７５（３）：７８３−７８８；ＷＯ２００４０２２７０９；ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）；ＵＳ２００４０１８５５３（請求項１７）；ＷＯ２００３００８５３７（請求項１）；ＷＯ２００２８１６４６（請求項１；１６４頁）；ＷＯ２００３００３９０６（請求項１０；２８８頁）；ＷＯ２００１４０３０９（実施例１；図１７）；ＵＳ２００１０５５７５１（実施例１；図１ｂ）；ＷＯ２０００３２７５２（請求項１８；図１）；ＷＯ９８５１８０５（請求項１７；９７頁）；ＷＯ９８５１８２４（請求項１０；９４頁）；ＷＯ９８４０４０３（請求項２；図１Ｂ）；受託：Ｏ４３６５３；ＥＭＢＬ；ＡＦ０４３４９８；ＡＡＣ３９６０７．１．
（２５）ＧＥＤＡ（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＹ２６０７６３）；ＡＡＰ１４９５４脂肪腫ＨＭＧＩＣ融合パートナー様タンパク質／ｐｉｄ＝ＡＡＰ１４９５４．１−ホモサピエンス種：ホモサピエンス（ヒト）ＷＯ２００３０５４１５２（請求項２０）；ＷＯ２００３０００８４２（請求項１）；ＷＯ２００３０２３０１３（実施例３、請求項２０）；ＵＳ２００３１９４７０４（請求項４５）；相互参照：ＧＩ：３０１０２４４９；ＡＡＰ１４９５４．１；ＡＹ２６０７６３＿１
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ１１６４５６）；ＢＡＦＦ受容体／ｐｉｄ＝ＮＰ＿４４３１７７．１−ホモサピエンスＴｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ２９３（５５３７），２１０８−２１１１（２００１）；ＷＯ２００４０５８３０９；ＷＯ２００４０１１６１１；ＷＯ２００３０４５４２２（実施例；３２〜３３頁）；ＷＯ２００３０１４２９４（請求項３５；図６Ｂ）；ＷＯ２００３０３５８４６（請求項７０；６１５〜６１６頁）；ＷＯ２００２９４８５２（欄１３６〜１３７）；ＷＯ２００２３８７６６（請求項３；１３３頁）；ＷＯ２００２２４９０９（実施例３；図３）；相互参照：ＭＩＭ：６０６２６９；ＮＰ＿４４３１７７．１；ＮＭ＿０５２９４５＿１；ＡＦ１３２６００
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム、ＢＬ−ＣＡＭ、Ｌｙｂ−８、Ｌｙｂ８、ＳＩＧＬＥＣ−２、ＦＬＪ２２８１４、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＫ０２６４６７）；Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１３７−１４６；ＷＯ２００３０７２０３６（請求項１；図１）；相互参照：ＭＩＭ：１０７２６６；ＮＰ＿００１７６２．１；ＮＭ＿００１７７１＿１
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ、Ｉｇベータ（ＣＤ７９Ｂ）と共有結合的に相互作用し、Ｉｇ  Ｍ分子と共に表面上に複合体を形成するＢ細胞特異タンパク質、Ｂ細胞分化に関与するシグナルを伝達する）、ｐＩ：４．８４，ＭＷ：２５０２８  ＴＭ：２［Ｐ］遺伝子染色体：１９ｑ１３．２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１７７４．１０）ＷＯ２００３０８８８０８、ＵＳ２００３０２２８３１９；ＷＯ２００３０６２４０１（請求項９）；ＵＳ２００２１５０５７３（請求項４、１３〜１４頁）；ＷＯ９９５８６５８（請求項１３、図１６）；ＷＯ９２０７５７４（図１）；ＵＳ５６４４０３３；Ｈａ  ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５２６−１５３１；Ｍｕｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２：１６２１−１６２５；Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ４０（４）：２８７−２９５；Ｐｒｅｕｄ’ｈｏｍｍｅ  ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９０（１）：１４１−１４６；Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（２）６３３−６３７；Ｓａｋａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ（１９８８）ＥＭＢＯ  Ｊ．７（１１）：３４５７−３４６４；
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１、ＣＸＣＬ１３ケモカインによって活性化されたＧタンパク質結合受容体、リンパ球遊走及び液性防御において機能する、ＨＩＶ−２感染ならびにことによるとＡＩＤＳ、リンパ腫、骨髄腫、及び白血病の発症において役割を担う）；３７２ａａ，ｐＩ：８．５４ＭＷ：４１９５９ＴＭ：７［Ｐ］遺伝子染色体：１１ｑ２３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１７０７．１）ＷＯ２００４０４００００；ＷＯ２００４０１５４２６；ＵＳ２００３１０５２９２（実施例２）；ＵＳ６５５５３３９（実施例２）；ＷＯ２００２６１０８７（図１）；ＷＯ２００１５７１８８（請求項２０、２６９頁）；ＷＯ２００１７２８３０（１２〜１３頁）；ＷＯ２０００２２１２９（実施例１、１５２〜１５３頁、実施例２、２５４〜２５６頁）；ＷＯ９９２８４６８（請求項１、３８頁）；ＵＳ５４４００２１（実施例２、欄４９〜５２）；ＷＯ９４２８９３１（５６〜５８頁）；ＷＯ９２１７４９７（請求項７、図５）；Ｄｏｂｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：２７９５−２７９９；Ｂａｒｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０９：７７３−７７９；
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ペプチドに結合し、それらをＣＤ４＋Ｔリンパ球に提示するＭＨＣクラスＩＩ分子（Ｉａ抗原）のベータサブユニット）；２７３ａａ、ｐＩ：６．５６ＭＷ：３０８２０ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：６ｐ２１．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００２１１１．１）Ｔｏｎｎｅｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ（１９８５）ＥＭＢＯ  Ｊ．４（１１）：２８３９−２８４７；Ｊｏｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ（１９８９）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ２９（６）：４１１−４１３；Ｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２８：４３３−４４１；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ９９：１６８９９−１６９０３；Ｓｅｒｖｅｎｉｕｓ  ｅｔ  ａｌ（１９８７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：８７５９−８７６６；Ｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５５：１−１３；Ｎａｒｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ５９：５１２−５１９；ＷＯ９９５８６５８（請求項１３、図１５）；ＵＳ６１５３４０８（欄３５〜３８）；ＵＳ５９７６５５１（欄１６８〜１７０）；ＵＳ６０１１１４６（欄１４５〜１４６）；Ｋａｓａｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ（１９８９）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ３０（１）：６６−６８；Ｌａｒｈａｍｍａｒ  ｅｔ  ａｌ（１９８５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０（２６）：１４１１１−１４１１９；
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型イオンチャネル５、細胞外ＡＴＰによって開口されたイオンチャネル、シナプス伝達及び神経発生に関与する場合がある、欠乏は特発性排尿筋不安定の病態生理学に寄与する場合がある）；４２２ａａ）、ｐＩ：７．６３，ＭＷ：４７２０６ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１７ｐ１３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００２５５２．２）Ｌｅ  ｅｔ  ａｌ（１９９７）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．４１８（１−２）：１９５−１９９；ＷＯ２００４０４７７４９；ＷＯ２００３０７２０３５（請求項１０）；Ｔｏｕｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１０：１６５−１７３；ＷＯ２００２２２６６０（請求項２０）；ＷＯ２００３０９３４４４（請求項１）；ＷＯ２００３０８７７６８（請求項１）；ＷＯ２００３０２９２７７（８２頁）；
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）タンパク質配列完全ｍａｅａｉｔｙ．．．ｔａｆｒｆｐｄ（１．．３５９；３５９ａａ）、ｐＩ：８．６６，ＭＷ：４０２２５ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：９ｐ１３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１７７３．１）ＷＯ２００４０４２３４６（請求項６５）；ＷＯ２００３０２６４９３（５１〜５２、５７〜５８頁）；ＷＯ２０００７５６５５（１０５〜１０６頁）；Ｖｏｎ  Ｈｏｅｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４（１２）：４８７０−４８７７；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ９９：１６８９９−１６９０３；
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ファミリの−Ｉ型膜タンパク質、Ｂ細胞活性化及びアポトーシスを調節する、機能の喪失は全身性紅斑性狼瘡を有する患者における疾患活性の増加に関連する）；６６１ａａ、ｐＩ：６．２０，ＭＷ：７４１４７ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：５ｑ１２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５５７３．１）ＵＳ２００２１９３５６７；ＷＯ９７０７１９８（請求項１１、３９〜４２頁）；Ｍｉｕｒａ  ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ３８（３）：２９９−３０４；Ｍｉｕｒａ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）Ｂｌｏｏｄ９２：２８１５−２８２２；ＷＯ２００３０８３０４７；ＷＯ９７４４４５２（請求項８  ５７〜６１頁）；ＷＯ２０００１２１３０（２４〜２６頁）；
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１、Ｃ２型Ｉｇ様及びＩＴＡＭドメインを含有する免疫グロブリンＦｃドメインの推定受容体、Ｂリンパ球分化において役割を担う場合がある）；４２９ａａ、ｐＩ：５．２８，ＭＷ：４６９２５ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１ｑ２１−１ｑ２２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿４４３１７０．１）ＷＯ２００３０７７８３６；ＷＯ２００１３８４９０（請求項６、図１８Ｅ−１〜１８−Ｅ−２）；Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ９８（１７）：９７７２−９７７７；ＷＯ２００３０８９６２４（請求項８）；ＥＰ１３４７０４６（請求項１）；
ＷＯ２００３０８９６２４（請求項７）；
（３５）ＦＣＲＨ５（ＩＲＴＡ２、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２、Ｂ細胞発生及びリンパ腫形成の役割を有する可能性がある推定免疫受容体；いくつかのＢ細胞悪性腫瘍において転座による遺伝子の調節解除が生じる）；９７７ａａ、ｐＩ：６．８８ＭＷ：１０６４６８ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１ｑ２１、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ヒト：ＡＦ３４３６６２、ＡＦ３４３６６３、ＡＦ３４３６６４、ＡＦ３４３６６５、ＡＦ３６９７９４、ＡＦ３９７４５３、ＡＫ０９０４２３、ＡＫ０９０４７５、ＡＬ８３４１８７、ＡＹ３５８０８５；マウス：ＡＫ０８９７５６、ＡＹ１５８０９０、ＡＹ５０６５５８；ＮＰ＿１１２５７１．１ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２、図９７）；Ｎａｋａｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２７７（１）：１２４−１２７；ＷＯ２００３０７７８３６；ＷＯ２００１３８４９０（請求項３、図１８Ｂ−１〜１８Ｂ−２）；
（３６）ＴＥＮＢ２（ＴＭＥＦＦ２、トモレグリン、ＴＰＥＦ、ＨＰＰ１、ＴＲ、推定膜貫通プロテオグリカン、成長因子及びフォリスタチンのＥＧＦ／ヘレグリンファミリーに関連する）；３７４ａａ、ＮＣＢＩ受託：ＡＡＤ５５７７６、ＡＡＦ９１３９７、ＡＡＧ４９４５１、ＮＣＢＩ  ＲｅｆＳｅｑ：ＮＰ＿０５７２７６；ＮＣＢＩ遺伝子：２３６７１；ＯＭＩＭ：６０５７３４；ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  Ｑ９ＵＩＫ５；Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ１７９２７４；ＡＹ３５８９０７、ＣＡＦ８５７２３、ＣＱ７８２４３６
ＷＯ２００４０７４３２０（配列番号８１０）；ＪＰ２００４１１３１５１（配列番号２、４、８）；ＷＯ２００３０４２６６１（配列番号５８０）；ＷＯ２００３００９８１４（配列番号４１１）；ＥＰ１２９５９４４（６９〜７０頁）；ＷＯ２００２３０２６８（３２９頁）；ＷＯ２００１９０３０４（配列番号２７０６）；ＵＳ２００４２４９１３０；ＵＳ２００４０２２７２７；ＷＯ２００４０６３３５５；ＵＳ２００４１９７３２５；ＵＳ２００３２３２３５０；ＵＳ２００４００５５６３；ＵＳ２００３１２４５７９；Ｈｏｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ６７：１４６−１５２；Ｕｃｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２６６：５９３−６０２；Ｌｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：４９０７−１２；Ｇｌｙｎｎｅ−Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ（２００１）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．Ｏｃｔ１５；９４（２）：１７８−８４；
（３７）ＰＭＥＬ１７（銀ホモログ；ＳＩＬＶ；Ｄ１２Ｓ５３Ｅ；ＰＭＥＬ１７；ＳＩ；ＳＩＬ）；ＭＥ２０；ｇｐ１００）ＢＣ００１４１４；ＢＴ００７２０２；Ｍ３２２９５；Ｍ７７３４８；ＮＭ００６９２８；ＭｃＧｌｉｎｃｈｅｙ  Ｒ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ（２００９）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０６（３３），１３７３１−１３７３６；Ｋｕｍｍｅｒ，Ｍ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ（２００９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８４（４），２２９６−２３０６；
（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様ドメイン及び２つのフォリスタチン様ドメイン１を有する膜貫通タンパク質；トモレグリン−１）；Ｈ７３６５；Ｃ９ｏｒｆ２；Ｃ９ＯＲＦ２；Ｕ１９８７８；Ｘ８３９６１；ＮＭ＿０８０６５５；ＮＭ＿００３６９２；Ｈａｒｍｓ，Ｐ．Ｗ．（２００３）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１７（２１），２６２４−２６２９；Ｇｅｒｙ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ２２（１８）：２７２３−２７２７；
（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１；ＧＦＲＡ１；ＧＤＮＦＲ；ＧＤＮＦＲＡ；ＲＥＴＬ１；ＴＲＮＲ１；ＲＥＴ１Ｌ；ＧＤＮＦＲ−アルファ１；ＧＦＲ−ＡＬＰＨＡ−１）；Ｕ９５８４７；ＢＣ０１４９６２；ＮＭ＿１４５７９３ＮＭ＿００５２６４；Ｋｉｍ，Ｍ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ（２００９）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２９（８），２２６４−２２７７；Ｔｒｅａｎｏｒ，Ｊ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ３８２（６５８６）：８０−８３；
（４０）Ｌｙ６Ｅ（ｌリンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ；Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）；ＮＰ＿００２３３７．１；ＮＭ＿００２３４６．２；ｄｅ  Ｎｏｏｉｊ−ｖａｎ  Ｄａｌｅｎ，Ａ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ１０３（６），７６８−７７４；Ｚａｍｍｉｔ，Ｄ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２２（３）：９４６−９５２；ＷＯ２０１３／１７７０５；
（４１）ＴＭＥＭ４６（ｓｈｉｓａホモログ２（Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｌａｅｖｉｓ）；ＳＨＩＳＡ２）；ＮＰ＿００１００７５３９．１；ＮＭ＿００１００７５３８．１；Ｆｕｒｕｓｈｉｍａ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ（２００７）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．３０６（２），４８０−４９２；Ｃｌａｒｋ，Ｈ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０；
（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ；Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）；ＮＰ＿０６７０７９．２；ＮＭ＿０２１２４６．２；Ｍａｌｌｙａ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ８０（１）：１１３−１２３；Ｒｉｂａｓ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３（１）：２７８−２８７；
（４３）ＬＧＲ５（ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質結合受容体５；ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）；ＮＰ＿００３６５８．１；ＮＭ＿００３６６７．２；Ｓａｌａｎｔｉ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ（２００９）Ａｍ．Ｊ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１７０（５）：５３７−５４５；Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ３７（３）：５２８−５３３；
（４４）ＲＥＴ（ｒｅｔ癌原遺伝子；ＭＥＮ２Ａ；ＨＳＣＲ１；ＭＥＮ２Ｂ；ＭＴＣ１；ＰＴＣ；ＣＤＨＦ１２；Ｈｓ．１６８１１４；ＲＥＴ５１；ＲＥＴ−ＥＬＥ１）；ＮＰ＿０６６１２４．１；ＮＭ＿０２０９７５．４；Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ（２００９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ．１００（１０）：１８９５−１９０１；Ｎａｒｉｔａ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ（２００９）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ２８（３４）：３０５８−３０６８；
（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ；ＬＹ６Ｋ；ＨＳＪ００１３４８；ＦＬＪ３５２２６）；ＮＰ＿０５９９９７．３；ＮＭ＿０１７５２７．３；Ｉｓｈｉｋａｗａ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ（２００７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６７（２４）：１１６０１−１１６１１；ｄｅ  Ｎｏｏｉｊ−ｖａｎ  Ｄａｌｅｎ，Ａ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ１０３（６）：７６８−７７４；
（４６）ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質結合受容体１９；Ｍｍ．４７８７）；ＮＰ＿００６１３４．１；ＮＭ＿００６１４３．２；Ｍｏｎｔｐｅｔｉｔ，Ａ．ａｎｄ  Ｓｉｎｎｅｔｔ，Ｄ．（１９９９）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１０５（１−２）：１６２−１６４；Ｏ’Ｄｏｗｄ，Ｂ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ（１９９６）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３９４（３）：３２５−３２９；
（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体；ＫＩＳＳ１Ｒ；ＧＰＲ５４；ＨＯＴ７Ｔ１７５；ＡＸＯＲ１２）；ＮＰ＿１１５９４０．２；ＮＭ＿０３２５５１．４；Ｎａｖｅｎｏｔ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ（２００９）Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７５（６）：１３００−１３０６；Ｈａｔａ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ（２００９）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２９（２）：６１７−６２３；
（４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータ−ヒドロキシラーゼドメイン含有１；ＬＯＣ２５３９８２）；ＮＰ＿８５９０６９．２；ＮＭ＿１８１７１８．３；Ｇｅｒｈａｒｄ，Ｄ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１４（１０Ｂ）：２１２１−２１２７；
（４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ；ＯＣＡＩＡ；ＯＣＡ１Ａ；チロシナーゼ；ＳＨＥＰ３）；ＮＰ＿０００３６３．１；ＮＭ＿０００３７２．４；Ｂｉｓｈｏｐ，Ｄ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ（２００９）Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．４１（８）：９２０−９２５；Ｎａｎ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ（２００９）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ１２５（４）：９０９−９１７；
（５０）ＴＭＥＭ１１８（ｒｉｎｇフィンガータンパク質、膜貫通２；ＲＮＦＴ２；ＦＬＪ１４６２７）；ＮＰ＿００１１０３３７３．１；ＮＭ＿００１１０９９０３．１；Ｃｌａｒｋ，Ｈ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０；Ｓｃｈｅｒｅｒ，Ｓ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｎａｔｕｒｅ４４０（７０８２）：３４６−３５１
（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質結合受容体１７２Ａ；ＧＰＣＲ４１；ＦＬＪ１１８５６；Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）；ＮＰ＿０７８８０７．１；ＮＭ＿０２４５３１．３；Ｅｒｉｃｓｓｏｎ，Ｔ．Ａ．ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１００（１１）：６７５９−６７６４；Ｔａｋｅｄａ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ（２００２）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．５２０（１−３）：９７−１０１．
（５２）ＣＤ３３、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチンファミリのメンバー、６７ｋＤａの糖鎖付加された膜貫通タンパク質である。ＣＤ３３は、前駆骨髄単球性及び赤血球全区細胞に加え、ほとんどの骨髄性及び単球性白血病細胞上で発現される。これは、最初期の多能性幹細胞、成熟顆粒球、リンパ球細胞、または非造血性細胞上では見られない（Ｓａｂｂａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７５：７５６−５６；Ａｎｄｒｅｗｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｂｌｏｏｄ６８：１０３０−５）。ＣＤ３３は、その細胞質側末端上に２つのチロシン残基を含有し、その各々に、多くの抑制性受容体において見られる免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）に類似する疎水性残基が続いている。
（５３）ＣＬＬ−１（ＣＬＥＣ１２Ａ、ＭＩＣＬ、及びＤＣＡＬ２）、Ｃ型レクチン／Ｃ型レクチン様ドメイン（ＣＴＬ／ＣＴＬＤ）スーパーファミリー。このファミリーのメンバーは、共通のタンパク質フォールドを共有し、細胞接着、細胞間シグナル伝達、糖タンパク質代謝回転、ならびに炎症及び免疫応答における役割などの多様な機能を有する。この遺伝子によってコードされたタンパク質は、顆粒球及び単球機能の負の調節因子である。この遺伝子の、いくつかの代替的なスプライシングされた転写バリアントが記載されてきたが、これらのバリアントのうちのいくつかの全長の性質は判定されていない。この遺伝子は、染色体１２ｐ１３上のナチュラルキラー遺伝子複合体領域において他のＣＴＬ／ＣＴＬＤスーパーファミリーメンバーと密接に連結している（Ｄｒｉｃｋａｍｅｒ  Ｋ（１９９９）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．９（５）：５８５−９０；ｖａｎ  Ｒｈｅｎｅｎ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ１１０（７）：２６５９−６６；Ｃｈｅｎ  ＣＨ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｂｌｏｏｄ１０７（４）：１４５９−６７；Ｍａｒｓｈａｌｌ  ＡＳ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６（８）：２１５９−６９；Ｂａｋｋｅｒ  ＡＢ，ｅｔ  ａｌ（２００５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４（２２）：８４４３−５０；Ｍａｒｓｈａｌｌ  ＡＳ，ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（１５）：１４７９２−８０２）。ＣＬＬ−１は、単一のＣ型レクチン様ドメイン（カルシウムまたは糖のいずれにも結合することが予測されない）、柄領域、膜貫通ドメイン、及びＩＴＩＭモチーフを含有する短い細胞質側末端を含むＩＩ型膜貫通受容体であることが示されてきた。
【０１９１】
一態様において、ＰＡＣの抗体は、多数の細胞または組織型上で見出されるタンパク質に対する抗体である。かかる抗体の例としては、ｇＤ及びＥｐＣＡＭが挙げられる。言い換えれば、標的化抗体を使用する使用するときのように特異的な細胞型または組織型ではなく、多くの細胞または組織にＰＲＯＴＡＣを送達するために、ＰＡＣを使用することができる。
【０１９２】
本明細書に記載されるように、ＰＡＣは、抗体、例えば、以下から選択される抗体を含み得る。
【０１９３】
抗Ｌｙ６Ｅ抗体
ある特定の実施形態では、ＰＡＣは、抗Ｌｙ６Ｅ抗体を含み得る。レチノイン酸誘発遺伝子Ｅ（ＲＩＧ−Ｅ）及び幹細胞抗原２（ＳＣＡ−２）としても知られる、リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ（Ｌｙ６Ｅ）。これは、ＧＰＩ結合した１３１アミノ酸長の、結合パートナーが知られていない未知の機能の約８．４ｋＤａのタンパク質である。これは最初に、マウスにおける未成熟胸腺細胞、胸腺髄質上皮細胞中で発現された転写として同定された（Ｍａｏ，ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９３：５９１０−５９１４）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される主題は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１３／１７７０５５号に記載される抗Ｌｙ６Ｅ抗体を含むＰＡＣを提供する。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される主題は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗Ｌｙ６Ｅ抗体をを含むＰＡＣを提供する。
【０１９５】
一態様において、本明細書に記載される主題は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を含むＰＡＣを提供する。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１９６】
別の態様において、本明細書に記載される主題は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を含むＰＡＣを提供する。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１９７】
別の態様において、ＰＡＣは、（ａ）（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む抗体を含む。
【０１９８】
別の態様において、本明細書に記載される主題は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を含むＰＡＣを提供する。
【０１９９】
上記の実施形態のいずれにおいても、ＰＡＣの抗Ｌｙ６Ｅ抗体はヒト化されている。一実施形態では、抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、上記の実施形態のいずれかにおけるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
【０２００】
別の態様において、ＰＡＣの抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態では、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、Ｌｙ６Ｅに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号８において合計で１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、配列番号８において合計で１〜５個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、配列番号８のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、以下から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む：（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３。
【０２０１】
別の態様において、ＰＡＣの抗Ｌｙ６Ｅ抗体が提供され、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、Ｌｙ６Ｅに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号７において合計で１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、配列番号７において合計で１〜５個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、配列番号７のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０２０２】
別の態様において、抗Ｌｙ６Ｅ抗体を含むＰＡＣが提供され、抗体は、上に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨと、上に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬと、を含む。
【０２０３】
一実施形態では、ＰＡＣが提供され、抗体は、それぞれ配列番号８及び配列番号７のＶＨ及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
【０２０４】
さらなる態様において、本明細書に提供される抗Ｌｙ６Ｅ抗体と同じエピトープに結合する抗体を含むＰＡＣが本明細書に提供される。例えば、ある特定の実施形態では、それぞれ配列番号８のＶＨ配列及び配列番号７のＶＬ配列を含む抗Ｌｙ６Ｅ抗体と同じエピトープに結合する抗体を含むＰＡＣが提供される。
【０２０５】
さらなる態様において、上記の実施形態のいずれかによるＰＡＣの抗Ｌｙ６Ｅ抗体はモノクローナル抗体であり、これにはヒト抗体が含まれる。一実施形態では、ＰＡＣの抗Ｌｙ６Ｅ抗体は抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、抗体は実質的に全長抗体、例えば、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または本明細書に定義される他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。いくつかの実施形態では、ＰＡＣは、それぞれアミノ酸配列１６及び１５の重鎖及び軽鎖を含む抗Ｌｙ６Ｅ抗体を含む。
【表４−１】
2019522633.tif 000006
【表４−２】
2019522633.tif 000007
【０２０６】
抗ＨＥＲ２抗体
ある特定の実施形態では、ＰＡＣは、抗ＨＥＲ２抗体を含む。一実施形態では、ＰＡＣの抗ＨＥＲ２抗体は、ＵＳ５８２１３３７の表３に記載されるように、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体、例えば、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７、及びｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８を含む。これらの抗体は、ＨＥＲ２に結合するマウス抗体（４Ｄ５）の相補性決定領域を有するヒトフレームワーク領域を含有する。ヒト化抗体ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８はまた、トラスツズマブとも称され、商標名ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ＾の下で市販されている。別の実施形態では、ＰＡＣの抗ＨＥＲ２抗体は、ＵＳ７８６２８１７に記載されるように、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体、例えば、ヒト化２Ｃ４を含む。例示的なヒト化２Ｃ４抗体は、商標名ＰＥＲＪＥＴＡ（登録商標）の下で市販されているペルツズマブである。
【０２０７】
別の実施形態では、ＰＡＣの抗ＨＥＲ２抗体は、ヒト化７Ｃ２抗ＨＥＲ２抗体を含む。ヒト化７Ｃ２抗体は、抗ＨＥＲ２抗体である。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２３、２７、または２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２４または２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＨＥＲ２抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される主題は、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＨＥＲ２抗体をを含むＰＡＣが本明細書に記載される。
【０２０９】
一態様において、（ａ）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列番号２２、（ｂ）配列番号２３、２７、または２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２４または２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。一態様において、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２３、２７、または２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２４または２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０２１０】
別の態様において、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０２１１】
別の態様において、ＰＡＣは、（ａ）（ｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２３、２７、または２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２４または２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む抗体を含む。別の態様において、ＰＡＣは、（ａ）（ｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む抗体を含む。
【０２１２】
別の態様において、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２３、２７、または２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２４または２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される別の態様において、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。
【０２１３】
上記の実施形態のいずれにおいても、ＰＡＣの抗ＨＥＲ２抗体はヒト化されている。一実施形態では、ＰＡＣの抗ＨＥＲ２抗体は、上記の実施形態のいずれかにおけるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
【０２１４】
別の態様において、ＰＡＣの抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態では、配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＨＥＲ２抗体は、ＨＥＲ２に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１８において合計で１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、配列番号１８において合計で１〜５個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号１８のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、以下から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む：（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３。
【０２１５】
別の態様において、ＰＡＣの抗ＨＥＲ２抗体が提供され、抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＨＥＲ２抗体は、ＨＥＲ２に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１７において合計で１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、配列番号１７において合計で１〜５個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号１７のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０２１６】
別の態様において、抗ＨＥＲ２抗体を含むＰＡＣが提供され、抗体は、上に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨと、上に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬと、を含む。
【０２１７】
一実施形態では、抗体を含むＰＡＣが提供され、抗体は、それぞれ配列番号１８及び配列番号１７のＶＨ及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
【０２１８】
一実施形態では、抗体を含むＰＡＣが提供され、抗体は、配列番号３０のヒト化７Ｃ２．ｖ２．２．ＬＡ（ｈｕ７Ｃ２）Ｋ１４９Ｃカッパ軽鎖配列を含む。
【０２１９】
一実施形態では、抗体を含むＰＡＣが提供され、抗体は、配列番号３１のＨｕ７Ｃ２  Ａ１１８Ｃ  ＩｇＧ１重鎖配列を含む。
【０２２０】
さらなる態様において、本明細書に提供される抗ＨＥＲ２抗体と同じエピトープに結合する抗体を含むＰＡＣが本明細書に提供される。例えば、ある特定の実施形態では、それぞれ配列番号１８のＶＨ配列及び配列番号１７のＶＬ配列を含む抗ＨＥＲ２抗体と同じエピトープに結合する抗体を含むＰＡＣが提供される。
【０２２１】
さらなる態様において、上記の実施形態のいずれかによるＰＡＣの抗ＨＥＲ２抗体はモノクローナル抗体であり、これにはヒト抗体が含まれる。一実施形態では、ＰＡＣの抗ＨＥＲ２抗体は抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、ＰＡＣは、実質的に全長抗体、例えば、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または本明細書に定義される他の抗体クラスもしくはアイソタイプである抗体を含む。
【０２２２】
【表５−１】
2019522633.tif 000008
【表５−２】
2019522633.tif 000009
【表５−３】
2019522633.tif 000010
【０２２３】
抗ＭＵＣ１６抗体
ある特定の実施形態では、ＰＡＣは、抗ＭＵＣ１６抗体を含む。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＭＵＣ１６抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。
【０２２５】
一態様において、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０２２６】
別の態様において、（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０２２７】
別の態様において、ＰＡＣは、（ａ）（ｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む抗体を含む。
【０２２８】
別の態様において、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。
【０２２９】
上記の実施形態のいずれにおいても、ＰＡＣの抗ＭＵＣ１６抗体はヒト化されている。一実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体は、上記の実施形態のいずれかにおけるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
【０２３０】
別の態様において、ＰＡＣの抗ＭＵＣ１６抗体は、配列番号３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態では、配列番号３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＭＵＣ１６抗体は、ＭＵＣ１６に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号３９において合計で１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、配列番号３９において合計で１〜５個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＭＵＣ１６抗体は、配列番号３９のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、以下から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む：（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３。
【０２３１】
別の態様において、ＰＡＣの抗ＭＵＣ１６抗体が提供され、抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、配列番号３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＭＵＣ１６抗体は、ＭＵＣ１６に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号３８において合計で１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、配列番号３８において合計で１〜５個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＭＵＣ１６抗体は、配列番号３８のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０２３２】
別の態様において、抗ＭＵＣ１６抗体を含むＰＡＣが提供され、抗体は、上に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨと、上に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬと、を含む。
【０２３３】
一実施形態では、ＰＡＣが提供され、抗体は、それぞれ配列番号３９及び配列番号３８のＶＨ及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
【０２３４】
さらなる態様において、本明細書に提供される抗ＭＵＣ１６抗体と同じエピトープに結合する抗体を含むＰＡＣが本明細書に提供される。例えば、ある特定の実施形態では、それぞれ配列番号３９のＶＨ配列及び配列番号３８のＶＬ配列を含む抗ＭＵＣ１６抗体と同じエピトープに結合する抗体を含むＰＡＣが提供される。
【０２３５】
さらなる態様において、上記の実施形態のいずれかによるＰＡＣの抗ＭＵＣ１６抗体はモノクローナル抗体であり、これにはヒト抗体が含まれる。一実施形態では、ＰＡＣの抗ＭＵＣ１６抗体は抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、抗体は実質的に全長抗体、例えば、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または本明細書に定義される他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【０２３６】
【表６】
2019522633.tif 000011
【０２３７】
抗ＳＴＥＡＰ−１抗体
ある特定の実施形態では、ＰＡＣは、抗ＳＴＥＡＰ  １抗体を含む。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＳＴＥＡＰ−１抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。
【０２３９】
一態様において、（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０２４０】
別の態様において、（ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０２４１】
別の態様において、ＰＡＣは、（ａ）（ｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４２から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む抗体を含む。
【０２４２】
別の態様において、（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。
【０２４３】
上記の実施形態のいずれにおいても、ＰＡＣの抗ＳＴＥＡＰ−１抗体はヒト化されている。一実施形態では、抗ＳＴＥＡＰ−１抗体は、上記の実施形態のいずれかにおけるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
【０２４４】
別の態様において、ＰＡＣの抗ＳＴＥＡＰ−１抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態では、配列番号４６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＳＴＥＡＰ−１抗体は、ＳＴＥＡＰ−１に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号４６において合計で１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、配列番号４６において合計で１〜５個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＳＴＥＡＰ−１抗体は、配列番号４６のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、以下から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む：（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３。
【０２４５】
別の態様において、ＰＡＣの抗ＳＴＥＡＰ−１抗体が提供され、抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＳＴＥＡＰ−１抗体は、ＳＴＥＡＰ−１に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号４７において合計で１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、配列番号４７において１〜５個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＳＴＥＡＰ−１抗体は、配列番号４７のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０２４６】
別の態様において、抗ＳＴＥＡＰ−１抗体を含むＰＡＣが提供され、抗体は、上に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨと、上に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬと、を含む。
【０２４７】
一実施形態では、ＰＡＣが提供され、抗体は、それぞれ配列番号４６及び配列番号４７のＶＨ及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
【０２４８】
さらなる態様において、本明細書に提供される抗ＳＴＥＡＰ−１抗体と同じエピトープに結合する抗体を含むＰＡＣが本明細書に提供される。例えば、ある特定の実施形態では、それぞれ配列番号４６のＶＨ配列及び配列番号４７のＶＬ配列を含む抗ＳＴＥＡＰ−１抗体と同じエピトープに結合する抗体を含むＰＡＣが提供される。
【０２４９】
さらなる態様において、上記の実施形態のいずれかによるＰＡＣの抗ＳＴＥＡＰ−１抗体はモノクローナル抗体であり、これにはヒト抗体が含まれる。一実施形態では、ＰＡＣの抗ＳＴＥＡＰ−１抗体は抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、抗体は実質的に全長抗体、例えば、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または本明細書に定義される他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【０２５０】
【表７−１】
2019522633.tif 000012
【表７−２】
2019522633.tif 000013
【０２５１】
抗ＮａＰｉ２ｂ抗体
ある特定の実施形態では、ＰＡＣは、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体を含む。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、（ａ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＮａＰｉ２ｂ抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。
【０２５３】
一態様において、（ａ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０２５４】
別の態様において、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０２５５】
別の態様において、ＰＡＣは、（ａ）（ｉ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号５０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む抗体を含む。
【０２５６】
別の態様において、（ａ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。
【０２５７】
上記の実施形態のいずれにおいても、ＰＡＣの抗ＮａＰｉ２ｂ抗体はヒト化されている。一実施形態では、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、上記の実施形態のいずれかにおけるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
【０２５８】
別の態様において、ＰＡＣの抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、配列番号５４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態では、配列番号５４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、ＮａＰｉ２ｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号５４において合計で１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、配列番号５４において合計で１〜５個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、配列番号５４のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、以下から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む：（ａ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３。
【０２５９】
別の態様において、ＰＡＣの抗ＮａＰｉ２ｂ抗体が提供され、抗体は、配列番号５５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、配列番号５５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、抗ＮａＰｉ２ｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号５５において合計で１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、配列番号５５において合計で１〜５個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、配列番号５５のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０２６０】
別の態様において、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体を含むＰＡＣが提供され、抗体は、上に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨと、上に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬと、を含む。
【０２６１】
一実施形態では、ＰＡＣが提供され、抗体は、それぞれ配列番号５４及び配列番号５５のＶＨ及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
【０２６２】
さらなる態様において、本明細書に提供される抗ＮａＰｉ２ｂ抗体と同じエピトープに結合する抗体を含むＰＡＣが本明細書に提供される。例えば、ある特定の実施形態では、それぞれ配列番号５４のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列を含む抗ＮａＰｉ２ｂ抗体と同じエピトープに結合する抗体を含むＰＡＣが提供される。
【０２６３】
さらなる態様において、上記の実施形態のいずれかによるＰＡＣの抗ＮａＰｉ２ｂ抗体はモノクローナル抗体であり、これにはヒト抗体が含まれる。一実施形態では、ＰＡＣの抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、抗体は実質的に全長抗体、例えば、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または本明細書に定義される他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【表８】
2019522633.tif 000014
【０２６４】
抗ＣＤ７９ｂ抗体
ある特定の実施形態では、ＰＡＣは、抗ＣＤ７９ｂ抗体を含む。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＣＤ７９ｂ抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。
【０２６６】
一態様において、（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０２６７】
別の態様において、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０２６８】
別の態様において、ＰＡＣは、（ａ）（ｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む抗体を含む。
【０２６９】
別の態様において、（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ  Ｈ３、（ｄ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載される。
【０２７０】
上記の実施形態のいずれにおいても、ＰＡＣの抗ＣＤ７９ｂ抗体はヒト化されている。一実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、上記の実施形態のいずれかにおけるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
【０２７１】
別の態様において、ＰＡＣの抗ＣＤ７９ｂ抗体は、配列番号５６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態では、配列番号５６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＣＤ７９ｂ抗体は、ＣＤ７９ｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号５６において合計で１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、配列番号５６において合計で１〜５個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、配列番号８のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、以下から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む：  （ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３。
【０２７２】
別の態様において、ＰＡＣの抗ＣＤ７９ｂ抗体が提供され、抗体は、配列番号５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、配列番号５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、ＣＤ７９ｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号５７において合計で１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、配列番号５７において合計で１〜５個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、配列番号５７のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０２７３】
別の態様において、抗ＣＤ７９ｂ抗体を含むＰＡＣが本明細書に記載され提供され、抗体は、上に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨと、上に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬと、を含む。
【０２７４】
一実施形態では、ＰＡＣが提供され、抗体は、それぞれ配列番号５６及び配列番号５７のＶＨ及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
【０２７５】
さらなる態様において、本明細書に提供される抗ＣＤ７９ｂ抗体と同じエピトープに結合する抗体を含むＰＡＣが本明細書に提供される。例えば、ある特定の実施形態では、それぞれ配列番号５６のＶＨ配列及び配列番号５７のＶＬ配列を含む抗ＣＤ７９ｂ抗体と同じエピトープに結合する抗体を含むＰＡＣが提供される。
【０２７６】
さらなる態様において、上記の実施形態のいずれかによるＰＡＣの抗ＣＤ７９ｂ抗体はモノクローナル抗体であり、これにはヒト抗体が含まれる。一実施形態では、ＰＡＣの抗ＣＤ７９ｂ抗体は抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、抗体は実質的に全長抗体、例えば、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または本明細書に定義される他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【０２７７】
【表９−１】
2019522633.tif 000015
【表９−２】
2019522633.tif 000016
【０２７８】
抗ＣＤ２２抗体
ある特定の実施形態では、ＰＡＣは、３つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）と３つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）とを含む抗ＣＤ２２抗体を含み得る。一実施形態では、ＰＡＣの抗ＣＤ２２抗体は、３つの軽鎖超可変領域と３つの重鎖超可変領域（配列番号６６〜７１）とを含み、それらの配列は以下に示される。一実施形態では、ＰＡＣの抗ＣＤ２２抗体は、配列番号７２の可変軽鎖配列と配列番号７３の可変重鎖配列とを含む。一実施形態では、本発明のＰＡＣの抗ＣＤ２２抗体は、配列番号７４の軽鎖配列と配列番号７５の重鎖配列とを含む。
【表１０−１】
2019522633.tif 000017
【表１０−２】
2019522633.tif 000018
【０２７９】
抗ＣＤ３３抗体
ある特定の実施形態では、ＰＡＣは、３つの軽鎖超可変領域と３つの重鎖超可変領域とを含む抗ＣＤ３３抗体を含み得、それらの配列（配列番号７６〜８１）は以下に示される。一実施形態では、ＰＡＣの抗ＣＤ３３抗体は、配列番号８２の可変軽鎖配列と配列番号８３の可変重鎖配列とを含む。
【表１１】
2019522633.tif 000019
【０２８０】
一実施形態では、ＰＡＣの抗ＣＤ３３抗体は、配列番号８４の軽鎖配列と配列番号８５の重鎖配列とを含む。一実施形態では、ＰＡＣの抗ＣＤ３３抗体は、３つの軽鎖超可変領域と３つの重鎖超可変領域とを含み、それらの配列（配列番号８４〜８９）は以下に示される。一実施形態では、ＰＡＣの抗ＣＤ３３抗体は、配列番号９０の可変軽鎖配列と配列番号９１の可変重鎖配列とを含む。一実施形態では、ＰＡＣの抗ＣＤ３３抗体は、配列番号９２の可変軽鎖配列と配列番号９３の可変重鎖配列とを含む。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ３３抗体は、配列番号９４の可変軽鎖配列と配列番号９５の可変重鎖配列とを含む。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ３３抗体は、配列番号９６の可変軽鎖配列と配列番号９７の可変重鎖配列とを含む。
【表１２−１】
2019522633.tif 000020
【表１２−２】
2019522633.tif 000021
【０２８１】
抗体親和性
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦５ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有し、かつ任意に、≧１０−１３Ｍ（例えば、１０−８Ｍ未満、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）である。
【０２８２】
一実施形態では、Ｋｄは、以下のアッセイによって記載されるように目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原で実施される放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、非標識抗原の連続滴定の存在下でＦａｂを最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原で平衡させ、その後、結合した抗原を抗Ｆａｂ抗体でコーティングされたプレートで捕捉することによって測定される（例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい）。このアッセイのための条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍｌの捕捉用抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、ＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンで２〜５時間、室温（約２３℃）でブロックする。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭの［１２５Ｉ］抗原を、目的のＦａｂの段階希釈と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）における抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ−１２の評価と一致する）。その後、目的のＦａｂを一晩インキュベートするが、インキュベーションは、平衡が達成されることを確実にするためにより長い時間（例えば、約６５時間）にわたって継続されてもよい。その後、室温でのインキュベーションのために混合物を捕捉プレートに移す（例えば、１時間かけて）。次いで、溶液を除去し、プレートをＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標）で８回洗浄した。プレートが乾燥すると、１５０μｌ／ウェルのシンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）上で１０分間計数する。最大結合の２０％以下の各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイにおける使用のために選択する。
【０２８３】
別の実施形態によれば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ））を使用する表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、約１０応答単位（ＲＵ）で、固定化抗原ＣＭ５チップを用いて２５℃で測定される。簡潔には、カルボメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、供給業者の指示に従い、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化させる。約１０応答単位（ＲＵ）の結合タンパク質を達成するために、５μｌ／分の流速での注入前に抗原を１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）まで希釈する。抗原の注入後、１Ｍのエタノールアミンをブロック未反応基に注入する。動力学的測定のため、Ｆａｂ（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）の２倍段階希釈を、０．０５％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）と共にＰＢＳ中に２５℃で、約２５μｌ／分の流速で注入する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は、会合及び解離センサグラムを同時に適合することによって、単純な１対１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）評価ソフトウエアバージョン３．２）を使用して計算される。平衡解離定数（Ｋｄ）は、  比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算される。例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによるオン速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、オン速度は、ストップフローを装備した分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または撹拌キュベットを有する８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計で測定された抗原の増加する濃度の存在下で、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中、２０ｎＭの抗−抗原抗体（Ｆａｂ形態）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ；発光＝３４０ｎＭ、１６ｎｍバンドパス）における増加または減少を測定する蛍光消光技術を使用して判定することができる。
【０２８４】
２．リンカー（Ｌ１）
本明細書に記載される場合、「リンカー」（Ｌ１）は、１つ以上のＰＲＯＴＡＣ部分（Ｄ）を抗体（Ａｂ）に結合させてＰＡＣを形成するために使用することができる二感応性または多感応性部分である。いくつかの実施形態では、ＰＡＣは、ＰＲＯＴＡＣ及び抗体に共有結合するための反応性の官能性を有するＬ１を使用して調製することができる。例えば、いくつかの実施形態では、抗体（Ａｂ）のシステインチオールは、リンカーの反応性官能基またはリンカーＬ１−ＰＲＯＴＡＣ基と結合を形成してＰＡＣを作製することができる。特に、リンカーの化学構造は、ＰＡＣの有効性及び安全性の両方に大きな影響を及ぼし得る（Ｄｕｃｒｙ＆Ｓｔｕｍｐ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ，２０１０，２１，５−１３）。正しいリンカーを選択することは、標的細胞の意図する細胞区画への適切な薬物送達に影響を及ぼす。
【０２８５】
リンカーは、一般に、２つのカテゴリーに分けられ得る：切断可能（例えば、ペプチド、ヒドロゾン（ｈｙｄｒｚｏｎｅ）、もしくはジスルフィド）または非切断可能（例えば、チオエーテル）。薬物を抗体に接続するために、リソソーム酵素（例えば、カテプシンＢ）によって加水分解され得るバリン−シトルリン（Ｖａｌ−Ｃｉｔ）などのペプチドリンカーが使用されている（ＵＳ６，２１４，３４５）。これらは、それらの体循環における相対的な安定性及び効果的に薬物を腫瘍内に放出する能力に部分的に起因してとりわけ有用である。しかしながら、天然ペプチドによって表される化学空間は限られており、したがって、ペプチドのように作用し、リソソームプロテアーゼによって有効に切断され得る多様な非ペプチドリンカーを有することが望ましい。非ペプチド構造のより多くの多様性は、ペプチドリンカーによってもたらされない新規の有益な特性をもたらし得る。リソソーム酵素によって切断され得るリンカーＬ１のための異なる種類の非ペプチドリンカーが本明細書に提供される。
【０２８６】
ａ．ペプチド模倣リンカー
リソソーム酵素によって切断可能なＰＡＣのための異なる種類の非ペプチドのペプチド模倣リンカーが本明細書に提供される。例えば、ジペプチド（例えば、Ｖａｌ−Ｃｉｔ）の中間にあるアミド結合がアミド模倣物で置換され、かつ／またはアミノ酸（例えば、Ｖａｌ−Ｃｉｔジペプチド中のバリンアミノ酸）全体が非アミノ酸部分（例えば、シクロアルキルジカルボニル構造（例えば、環サイズ＝４もしくは５））で置換された。
【０２８７】
Ｌ１は、ペプチド模倣リンカーである場合、それは以下の式で表され、
−Ｓｔｒ−（ＰＭ）−Ｓｐ−
式中、
Ｓｔｒは、Ａｂに共有結合したストレッチャー単位であり、
Ｓｐは、ＰＲＯＴＡＣ部分に共有結合した結合またはスペーサ単位であり、
ＰＭは、以下からなる群から選択される非ペプチド化学部分であり、
【化１】
2019522633.tif 000022
Ｗは、−ＮＨ−ヘテロシクロアルキル−またはヘテロシクロアルキルであり、
Ｙは、ヘテロアリール、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ６アルキレン、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−ＮＨ２、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−ＮＨ−ＣＨ３、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｎ−（ＣＨ３）２、Ｃ１−Ｃ６アルケニル、またはＣ１−Ｃ６アルキレニルであり、
各Ｒ１は独立して、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、または（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３及びＲ２は各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、アリールアルキル、もしくはヘテロアリールアルキルであるか、またはＲ３及びＲ２は一緒になってＣ３−Ｃ７シクロアルキルを形成してもよく、
Ｒ４及びＲ５は各々独立して、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＯＣＨ２−であるか、またはＲ４及びＲ５は一緒になってＣ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成してもよい。
【０２８８】
Ｌ１は、Ｅ３ＬＢ、Ｌ２、またはＰＢ基のいずれを通してＰＲＯＴＡＣに接続し得ることに留意されたい。
【０２８９】
実施形態において、Ｙは、ヘテロアリールであり、Ｒ４及びＲ５は一緒になってシクロブチル環を形成する。
【０２９０】
実施形態において、Ｙは、以下からなる群から選択される部分である：
【化２】
2019522633.tif 000023
【０２９１】
実施形態において、Ｓｔｒは、以下の式によって表される化学部分であり、
【化３】
2019522633.tif 000024
式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）Ｏ−、及びＣ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）−Ｃ２−Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ７ヘテロシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、及びヘテロアリールからなる群から選択される１〜５個の置換基によって置換されてもよく、各Ｒａは独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、Ｓｐは、−Ａｒ−Ｒｂ−であり、式中、Ａｒは、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−である。
【０２９２】
実施形態において、Ｓｔｒは、以下の式を有し、
【化４】
2019522633.tif 000025
式中、Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−、Ｎ（Ｒｃ）−（Ｃ２−Ｃ６アルキレン）−Ｎ（Ｒｃ）、及びＮ（Ｒｃ）−（Ｃ２−Ｃ６アルキレン）から選択され、各Ｒｃは独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、Ｓｐは、−Ａｒ−Ｒｂ−であり、式中、Ａｒは、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−またはＳｐ−Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−である。
【０２９３】
実施形態において、Ｌ１は、以下の式によって表される非ペプチド化学部分であり、
【化５】
2019522633.tif 000026
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルケニル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３及びＲ２は各々独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ１０アルキルである。．
【０２９４】
実施形態において、Ｌ１は、以下の式によって表される非ペプチド化学部分であり、
【化６】
2019522633.tif 000027
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ４及びＲ５は一緒になってＣ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成する。
【０２９５】
実施形態において、Ｌ１は、以下の式によって表される非ペプチド化学部分であり、
【化７】
2019522633.tif 000028
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、Ｗは、上で定義した通りである。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、リンカーは、ＷＯ２０１５／０９５２２７、ＷＯ２０１５／０９５１２４、またはＷＯ２０１５／０９５２２３に記載されるものなどのペプチド模倣リンカーであり得る。
【０２９７】
ｂ．非ペプチド模倣リンカー
態様において、リンカーＬ１は、抗体とジスルフィド結合を形成する。態様において、リンカーは、以下の構造を有し、
【化８】
2019522633.tif 000029
式中、Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ及びＣ１−Ｃ６アルキルから選択されるか、またはＲ１及びＲ２は、３、４、５、もしくは６員のシクロアルキルもしくはヘテロシクリル基を形成する。リンカーは、以下のように抗体及びＰＲＯＴＡＣに共有結合される。
【化９】
2019522633.tif 000030
【０２９８】
一態様において、リンカーのカルボニル基は、ＰＲＯＴＡＣ中のアミン基に接続されている。Ａｂに接続された硫黄原子は、抗体中のシステイン由来の硫黄基であることにも留意されたい。別の態様において、リンカーＬ１は、抗体上に存在する遊離システインと反応して共有結合を形成することたできる官能基を有する。かかる反応性官能基の非限定的な例としては、マレイミド、ハロアセトアミド、α−ハロアセチル、活性化エステル例えば、スクシンイミドエステル、４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、無水物、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアネート、及びイソチオシアネートが挙げられる。例えば、Ｋｌｕｓｓｍａｎ，ｅｔ  ａｌ（２００４），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１５（４）：７６５−７７３の７６６頁におけるコンジュゲーション法、及び本明細書の実施例を参照されたい。
【０２９９】
いくつかの実施形態では、リンカーは、抗体上に存在する親電子性基と反応することができる官能基を有する。かかる親電子性基の例としては、アルデヒド及びケトンカルボニル基が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、リンカーの反応性官能基のヘテロ原子は、抗体上の親電子性基と反応し、抗体単位への共有結合を形成することができる。かかる反応性官能基の例としては、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、及びアリールヒドラジドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３００】
リンカーは、１つ以上のリンカー成分を含み得る。例示的なリンカー成分には、６−マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）、マレイミドプロパノイル（「ＭＰ」）、バリン−シトルリン（「ｖａｌ−ｃｉｔ」または「ｖｃ」）、アラニン−フェニルアラニン（「ａｌａ−ｐｈｅ」）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢ」）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（「ＳＰＰ」）、及び４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート（「ＭＣＣ」）が含まれる。様々なリンカー成分が当該技術分野で既知であり、そのうちのいくつかは以下に記載される。
【０３０１】
リンカーは、ＰＲＯＴＡＣの放出を容易にする「切断可能なリンカー」であり得る。非限定的な例示的な切断可能なリンカーには、酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾンを含む）、プロテアーゼ感受性（例えば、ペプチダーゼ感受性）リンカー、感光性リンカー、またはジスルフィド含有リンカーが含まれる（Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５２：１２７−１３１（１９９２）；ＵＳ５２０８０２０）。
【０３０２】
ある特定の実施形態では、リンカーは、以下の式を有し、
【化１０】
2019522633.tif 000031
式中、Ａは、「ストレッチャー単位」であり、０〜１の整数であり、Ｗは、「アミノ酸単位」であり、ｗは、０〜１２であり、Ｙは、「スペーサ単位」であり、ｙは、０、１、または２である。かかるリンカーの例示的な実施形態は、米国特許第７，４９８，２９８号に記載されている。
【０３０３】
いくつかの実施形態では、リンカー成分は、抗体を別のリンカー成分に、またはＰＲＯＴＡＣ部分に結合させる「ストレッチャー単位」を含む。非限定的な例示的なストレッチャー単位は、以下に示される（式中、波線は、抗体、ＰＲＯＴＡＣ、または更なるリンカー成分への共有結合の部位を示す）。
【化１１】
2019522633.tif 000032
【０３０４】
３．ＰＲＯＴＡＣ（「Ｄ」）
有用なＰＲＯＴＡＣは、上記の一般式を有する。特定のＰＲＯＴＡＣは、ＵＳ７，２０８，１５７、ＷＯ２０１３／１０６６４３、ＷＯ２０１３／１０６６４６、及びＷＯ２０１５／１６０８４５に記載されている。ＰＲＯＴＡＣには、以下の成分を有するものが含まれる。
【０３０５】
ａ．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合基（Ｅ３ＬＢ）
Ｅ３ユビキチンリガーゼ（そのうち６００個超がヒトにおいて知られている）は、ユビキチン化のための基質特異性を与える。これらのリガーゼに結合する既知のリガンドが存在する。本明細書に記載されるように、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合基は、Ｅ３ユビキチンリガーゼに結合することができるペプチドまたは小分子である。
【０３０６】
具体的なＥ３ユビキチンリガーゼには、ｖｏｎ  Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ（ＶＨＬ）、セレブロン、ＸＩＡＰ、Ｅ３Ａ；ＭＤＭ２；後期促進複合体（ＡＰＣ）；ＵＢＲ５（ＥＤＤ１）；ＳＯＣＳ／ＢＣ−ｂｏｘ／ｅｌｏＢＣ／ＣＵＬ５／ＲＩＮＧ；ＬＮＸｐ８０；ＣＢＸ４；ＣＢＬＬ１；ＨＡＣＥ１；ＨＥＣＴＤ１；ＨＥＣＴＤ２；ＨＥＣＴＤ３；ＨＥＣＷ１；ＨＥＣＷ２；ＨＥＲＣ１；ＨＥＲＣ２；ＨＥＲＣ３；ＨＥＲＣ４；ＨＵＷＥ１；ＩＴＣＨ；ＮＥＤＤ４；ＮＥＤＤ４Ｌ；ＰＰＩＬ２；ＰＲＰＦ１９；ＰＩＡＳ１；ＰＩＡＳ２；ＰＩＡＳ３；ＰＩＡＳ４；ＲＡＮＢＰ２；ＲＮＦ４；ＲＢＸ１；ＳＭＵＲＦ１；ＳＭＵＲＦ２；ＳＴＵＢ１；ＴＯＰＯＲＳ；ＴＲＩＰ１２；ＵＢＥ３Ａ；ＵＢＥ３Ｂ；ＵＢＥ３Ｃ；ＵＢＥ４Ａ；ＵＢＥ４Ｂ；ＵＢＯＸ５；ＵＢＲ５；ＷＷＰ１；ＷＷＰ２；Ｐａｒｋｉｎ；Ａ２０／ＴＮＦＡＩＰ３；ＡＭＦＲ／ｇｐ７８；ＡＲＡ５４；ベータ−ＴｒＣＰ１／ＢＴＲＣ；ＢＲＣＡ１；ＣＢＬ；ＣＨＩＰ／ＳＴＵＢ１；Ｅ６；Ｅ６ＡＰ／ＵＢＥ３Ａ；Ｆ−ｂｏｘタンパク質１５／ＦＢＸＯ１５；ＦＢＸＷ７／Ｃｄｃ４；ＧＲＡＩＬ／ＲＮＦ１２８；ＨＯＩＰ／ＲＮＦ３１；ｃＩＡＰ−１／ＨＩＡＰ−２；ｃＩＡＰ−２／ＨＩＡＰ−１；ｃＩＡＰ（ｐａｎ）；ＩＴＣＨ／ＡＩＰ４；ＫＡＰ１；ＭＡＲＣＨ８；；Ｍｉｎｄ  Ｂｏｍｂ  １／ＭＩＢ１；Ｍｉｎｄ  Ｂｏｍｂ  ２／ＭＩＢ２；ＭｕＲＦ１／ＴＲＩＭ６３；ＮＤＦＩＰ１；ＮＥＤＤ４；ＮｌｅＬ；Ｐａｒｋｉｎ；ＲＮＦ２；ＲＮＦ４；ＲＮＦ８；ＲＮＦ１６８；ＲＮＦ４３；ＳＡＲＴ１；Ｓｋｐ２；ＳＭＵＲＦ２；ＴＲＡＦ−１；ＴＲＡＦ−２；ＴＲＡＦ−３；ＴＲＡＦ−４；ＴＲＡＦ−５；ＴＲＡＦ−６；ＴＲＩＭ５；ＴＲＩＭ２１；ＴＲＩＭ３２；ＵＢＲ５；及びＺＮＲＦ３が含まれる。
【０３０７】
以下の表１３〜２７は、ある特定のＥ３リガーゼを列挙する。
【表１３−１】
2019522633.tif 000033
【表１３−２】
2019522633.tif 000034
【表１４−１】
2019522633.tif 000035
【表１４−２】
2019522633.tif 000036
【表１４−３】
2019522633.tif 000037
【表１４−４】
2019522633.tif 000038
【表１４−５】
2019522633.tif 000039
【表１４−６】
2019522633.tif 000040
【表１４−７】
2019522633.tif 000041
【表１４−８】
2019522633.tif 000042
【表１５】
2019522633.tif 000043
【表１６−１】
2019522633.tif 000044
【表１７】
2019522633.tif 000045
【表１８】
2019522633.tif 000046
【表１９】
2019522633.tif 000047
【表２０】
2019522633.tif 000048
【表２１】
2019522633.tif 000049
【表２２】
2019522633.tif 000050
【表２３−１】
2019522633.tif 000051
【表２３−２】
2019522633.tif 000052
【表２３−３】
2019522633.tif 000053
【表２４】
2019522633.tif 000054
【表２５−１】
2019522633.tif 000055
【表２５−２】
2019522633.tif 000056
【表２５−３】
2019522633.tif 000057
【表２６】
2019522633.tif 000058
【表２７】
2019522633.tif 000059
【０３０８】
特定のＥ３ユビキチンリガーゼは、Ｅ３リガーゼ複合体ＶＣＢの基質認識サブユニットであるｖｏｎ  Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ（ＶＨＬ）腫瘍抑制因子であり、これもエロンギンＢ及びＣ、Ｃｕｌ２、ならびにＲｂｘｌからなる。ＶＨＬの主基質は、低酸素レベルに応じて血管新生促進成長因子ＶＥＧＦ及び赤血球誘発サイトカインエリスロポエチンなどの遺伝子を上方制御する転写因子である低酸素誘導因子ｌα（ＨＩＦ−ｌα）である。ＶＨＬに結合する化合物は、ＷＯ２０１３／１０６６４３に開示されるものなどのヒドロキシプロリン化合物、ならびにＵＳ２０１６／００４５６０７、ＷＯ２０１４１８７７７７、ＵＳ２０１４０３５６３２２、及びＵＳ９，２４９，１５３に記載される他の化合物であり得る。
【０３０９】
別の特定のＥ３ユビキチンリガーゼは、ＭＤＭ２である。ＭＤＭ２に対する小分子結合化合物の例としては、以下の構造：
を有する「ナトリン」化合物、例えば、ナトリン３ａ及びナトリン３が挙げられる。
【化１２】
2019522633.tif 000060
【０３１０】
また、ＭＤＭ２結合化合物には、ＷＯ２０１２／１２１３６１；
ＷＯ２０１４／０３８６０６；ＷＯ２０１０／０８２６１２；ＷＯ２０１４／０４４４０１；ＷＯ２００９／１５１０６９；ＷＯ２００８／０７２６５５；Ｗ０２０１４／１０００６５；Ｗ０２０１４／１０００７１；Ｗ０２０１４／１２３８８２；Ｗ０２０１４／１２０７４８；Ｗ０２０１３／０９６１５０；Ｗ０２０１５／１６１０３２；Ｗ０２０１２／１５５０６６；Ｗ０２０１２／０６５０２２；Ｗ０２０１１／０６００４９；Ｗ０２００８／０３６１６８；Ｗ０２００６／０９１６４６；Ｗ０２０１２／１５５０６６；Ｗ０２０１２／０６５０２２；Ｗ０２０１１／１５３５０９；Ｗ０２０１３／０４９２５０；Ｗ０２０１４／１５１８６３；Ｗ０２０１４／１３０４７０；Ｗ０２０１４／１３４２０７；Ｗ０２０１４／２００９３７；Ｗ０２０１５／０７０２２４；Ｗ０２０１５／１５８６４８；Ｗ０２０１４／０８２８８９；Ｗ０２０１３／１７８５７０；Ｗ０２０１３／１３５６４８；Ｗ０２０１２／１１６９８９；Ｗ０２０１２／０７６５１３；Ｗ０２０１２／０３８３０７；Ｗ０２０１２／０３４９５４；Ｗ０２０１２／０２２７０７；Ｗ０２０１２／００７４０９；Ｗ０２０１１／１３４９２５；Ｗ０２０１１／０９８３９８；Ｗ０２０１１／１０１２９７；Ｗ０２０１１／０６７１８５；Ｗ０２０１１／０６１１３９；Ｗ０２０１１／０４５２５７；Ｗ０２０１０／１２１９９５；Ｗ０２０１０／０９１９７９；Ｗ０２０１０／０９４６２２；Ｗ０２０１０／０８４０９７；Ｗ０２００９／１１５４２５；Ｗ０２００９／０８０４８８；Ｗ０２００９／０７７３５７；Ｗ０２００９／０４７１６１Ａ１、Ｗ０２００８／１４１９７５Ａ１、Ｗ０２００８／１４１９１７Ａ１、Ｗ０２００８／１２５４８７Ａ１、Ｗ０２００８／０３４７３６Ａ２、Ｗ０２００８／０５５８１２Ａ１；Ｗ０２００７／１０４７１４Ａ１；Ｗ０２００７／１０４６６４Ａ１；Ｗ０２００７／０８２８０５Ａ１；Ｗ０２００７／０６３０１３Ａ１、Ｗ０２００６／１３６６０６Ａ２、Ｗ０２００６／０９７２６１Ａ１、Ｗ０２００５／１２３６９１Ａ１、Ｗ０２００５／１１０９９６Ａ１、Ｗ０２００５／００３０９７Ａ１、Ｗ０２００５／００２５７５Ａ１；Ｗ０２００４／０８０４６０Ａ１、Ｗ０２００３／０５１３６０Ａ１、Ｗ０２００３／０５１３５９Ａ１、Ｗ０１９９８／００１４６７；Ｗ０２０１１／０２３６７７；Ｗ０２０１１／０７６７８６；Ｗ０２０１２／０６６０９５；Ｗ０２０１２／１７５４８７；Ｗ０２０１２／１７５５２０；Ｗ０２０１２／１７６１２３；Ｗ０２０１３／０８０１４１；Ｗ０２０１３／１１１１０５；Ｗ０２０１３／１７５４１７；Ｗ０２０１４／１１５０８０；Ｗ０２０１４／１１５０７７；Ｗ０２０１４／１９１８９６；Ｗ０２０１４／１９８２６６；Ｗ０２０１６／０２８３９１Ａ９；Ｗ０２０１６／０２８３９１Ａ２；Ｗ０２０１６／０２６９３７；Ｗ０２０１６／００１３７６；Ｗ０２０１５／１８９７９９；Ｗ０２０１５／１５５３３２Ａ１；Ｗ０２０１５／００４６１０Ａ８；Ｗ０２０１３／１０５０３７Ａ１；Ｗ０２０１２／１５５０６６Ａ３；Ｗ０２０１２／１５５０６６Ａ２；Ｗ０２０１２／０３３５２５Ａ３；Ｗ０２０１２／０４７５８７Ａ２；Ｗ０２０１２／０３３５２５Ａ２；Ｗ０２０１１／１０６６５０Ａ３、Ｗ０２０１１／１０６６５０Ａ２、Ｗ０２０１１／００５２１９Ａ１、Ｗ０２０１０／０５８８１９Ａ１；Ｗ０２０１０／０２８８６２Ａ１；Ｗ０２００９／０３７３４３Ａ１、Ｗ０２００９／０３７３０８Ａ１、Ｗ０２００８／１３０６１４Ａ３、Ｗ０２００９／０１９２７４Ａ１、Ｗ０２００８／１３０６１４Ａ２；Ｗ０２００８／１０６５０７Ａ３；Ｗ０２００８／１０６５０７Ａ２；Ｗ０２００７／１０７５４５Ａ１；Ｗ０２００７／１０７５４３Ａ１；Ｗ０２００６０３２６３１Ａ１、Ｗ０２０００／０１５６５７Ａ１；Ｗ０１９９８／００１４６７Ａ２；Ｗ０１９９７／００９３４３Ａ３；Ｗ０１９９７／００９３４３Ａ２；Ｗ０１９９６／００２６４２Ａ１；ＵＳ２００７／０１２９４１６；Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ，２０１３，４，４６６−４６９；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１５，５８，１０３８−１０５２；Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２５（２０１５）３６２１−３６２５；Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１６（２００６）３３１０−３３１４に記載されるものも含まれる。ＰＡＣでの使用のために企図されるＭＤＭ２に対する小分子結合化合物のさらなる具体的な例としては、ＲＧ７１１２、ＲＧ７３８８、ＭＩ７７３／ＳＡＲ４０５８３８、ＡＭＧ２３２、ＤＳ−３０３２ｂ、ＲＯ６８３９９２１、ＲＯ５０４５３３７、ＲＯ５５０３７８１、Ｉｄａｓａｎｕｔｌｉｎ、ＣＧＭ−０９７、ＭＫ−８２４２が挙げられる。
【０３１１】
別の特定のＥ３ユビキチンリガーゼは、Ｘ連鎖アポトーシス抑制物質（ＸＩＡＰ）である。ＸＩＡＰは、アポトーシス細胞死を止めるタンパク質である。ＸＩＡＰの調節解除は、癌、神経変性障害、及び自己免疫と関連付けられている。肺癌の発症において、ＸＩＡＰの過剰発現はカスパーゼを阻害する。前立腺癌の発症において、ＸＩＡＰは、前立腺の上皮において過剰発現される４つのＩＡＰのうちの１つである。ＸＩＡＰ遺伝子における変異は、重度かつ稀な種類の炎症性腸疾患をもたらす可能性がある。ＸＩＡＰ遺伝子における血管も、Ｘ連鎖リンパ増殖性疾患と呼ばれる非常に稀な状態をもたらす可能性がある。ＸＩＡＰの分解は、ＸＩＡＰがカスパーゼに結合することを防止することによってアポトーシスを増強させることができる。これは、正常なカスパーゼ活性が進行することを可能にする。
【０３１２】
ＸＩＡＰに対する小分子結合化合物の例としては、ＵＳ９，０９６，５４４；ＷＯ２０１５１８７９９８；ＷＯ２０１５０７１３９３；ＵＳ９，２７８，９７８；ＵＳ９，２４９，１５１；ＵＳ２０１６００２４０５５；ＵＳ２０１５０３０７４９９；ＵＳ２０１４０１３５２７０；ＵＳ２０１５０２８４４２７；ＵＳ２０１５０２５９３５９；ＵＳ２０１５０２６６８７９；ＵＳ２０１５０２４６８８２；ＵＳ２０１５０２５２０７２；ＵＳ２０１５０２２５４４９；ＵＳ８，８８３，７７１、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１５，５８（１６）６５７４−６５８８、及びＳｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｐａｎ−ＩＡＰ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ：  Ａ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｒｅｖｉｅｗ（２０１０）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｐａｔ；２０：２５１−６７（Ｆｌｙｇａｒｅ  ＆  Ｆａｉｒｂｒｏｔｈｅｒ）に開示される化合物が挙げられる。具体的な化合物には、ＷＯ２０１５／０７１３９３に開示されるように、以下の式の全てのテトラヒドロ−ベンゾジアジノン化合物が含まれる。
【化１３】
2019522633.tif 000061
ＸＩＡＰに対する他の小分子結合化合物には、ＡＥＧ３５１５６、エンベリン、ＴＷＸ００６、及びＴＷＸ０２４が含まれる。ＸＩＡＰ結合部分がＰＲＯＴＡＣの一部として使用される場合、ＸＩＡＰ結合部分は、ＸＩＡＰのＢＩＲ２もしくはＢＩＲ３ドメイン、またはその両方に結合することができる。
【０３１３】
別の特定のＥ３ユビキチンリガーゼは、セレブロンである。セレブロンは、損傷ＤＮＡ結合タンパク質１（ＤＤＢ１）、カリン−４Ａ（ＣＵＬ４Ａ）、及びカリン１の調節因子（ＲＯＣ１）と共にＥ３ユビキチンリガーゼ複合体を形成するタンパク質である。この複合体は、多数の他のタンパク質をユビキチン化させる。標的タンパク質のセレブロンユビキチン化は、線維芽細胞成長因子８（ＦＧＦ８）及び線維芽細胞成長因子１０（ＦＧＦ１０）のレベルの増加をもたらす。ＦＧＦ８は同様に、肢及び耳胞の形成などの多数の発生過程を調節する。セレブロンの不在下では、ＤＤＢ１は、ＤＮＡ損傷結合タンパク質として機能するＤＤＢ２と共に複合体を形成する。
【０３１４】
サリドマイド、レナリドマイド、ポマリドマイド、及びこれらの類似体は、セレブロンに結合することが知られている。セレブロンのサリドマイド及び誘導体化合物との結晶構造は、ＵＳ２０１５／０３７４６７８に記載されている。セレブロンに結合する他の小分子化合物、例えば、ＵＳ２０１６／００５８８７２及びＵＳ２０１５／０２９１５６２に開示される化合物も知られている。さらに、ＢＥＴブロモドメインのバインダー、例えばアンタゴニストとのフタルイミドコンジュゲーションは、高度に選択的なセレブロン依存性ＢＥＴタンパク質分解をＰＲＯＴＡＣに提供することができる。Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｕｎｅ１９，２０１５，ｐ．１３７６。かかるＰＲＯＴＡＣは、本明細書に記載される抗体にコンジュゲートされてＰＡＣを形成することができる。
【０３１５】
ｂ．タンパク質結合基（ＰＢ）
ＰＢ成分は、分解を意図する標的タンパク質に結合する基である。「タンパク質」という用語には、それらがＰＢ基に結合することができるのに十分な長さのオリゴペプチド及び参照ポリペプチド配列が含まれる。本明細書に別様に記載されるウイルス、細菌、または真菌を含む、真核生物系または微生物系における任意のタンパク質は、本明細書に記載される化合物によって媒介されるユビキチン化の標的である。
【０３１６】
ＰＢ基には、例えば、タンパク質に特異的に結合する（標的タンパク質に結合する）任意の部分が含まれ、以下の小分子標的タンパク質部分の非限定的な例が含まれる：多数ある中でも、Ｈｓｐ９０阻害剤、キナーゼ阻害剤、ＭＤＭ２阻害剤、ヒトＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質を標的とする化合物、ＨＤＡＣ阻害剤、ヒトリジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、免疫抑制化合物、及びアリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）。以下に記載される組成物は、これらの９種類の小分子標的タンパク質結合部分のうちのいくつかの基を例証する。かかる小分子標的タンパク質結合部分はまた、これらの組成物の薬学的に許容される塩、エナンチオマー、溶媒、及び多形、ならびに目的のタンパク質を標的とし得る他の小分子を含む。
【０３１７】
一般に、標的タンパク質には、例えば、構造タンパク質、受容体、酵素、細胞表面タンパク質、細胞の統合機能に関連するタンパク質（触媒活性、アロマターゼ活性、運動活性、ヘリカーゼ活性、代謝過程（同化作用及びカトラボリズム（ｃａｔｒａｂｏｌｉｓｍ））、抗酸化活性、タンパク質分解、生合成に関与するタンパク質を含む）、キナーゼ活性、オキシドレダクターゼ活性、トランスフェラーゼ活性、ヒドロラーゼ活性、リアーゼ活性、イソメラーゼ活性、リガーセ活性、酵素調節因子活性、シグナル伝達因子活性、構造分子活性、結合活性（タンパク質、脂質炭水化物）、受容体活性、細胞運動性、膜融合、細胞間情報伝達、生物学的過程の調節、発達、細胞分化、刺激に対する反応を有するタンパク質、が含まれ得る。行動タンパク質、細胞接着タンパク質、細胞死に関与するタンパク質、輸送に関与するタンパク質（タンパク質輸送体活性、核輸送、イオン輸送体活性、チャネル輸送体活性、担体活性、パーミアーゼ活性、分泌活性、電子輸送体活性、発病、シャペロン調節因子活性、核酸結合活性、転写調節因子活性、細胞外基質化及びバイオジェネシス活性、翻訳調節因子活性を含むが含まれ得る。目的のタンパク質には、多数ある中でも、薬物療法のための標的としてのヒト、家畜動物を含む他の動物、抗生物質及び他の抗菌薬のための標的の判定のための微生物、ならびに植物、さらにはウイルスを含む、真核生物及び原核生物由来のタンパク質が含まれ得る。
【０３１８】
したがって、ＰＡＣのＰＢ成分は、ＦｏｘＯｌ、ＨＤＡＣ、ＤＰ−１、Ｅ２Ｆ、ＡＢＬ、ＡＭＰＫ、ＢＲＫ、ＢＲＳＫ  Ｉ、ＢＲＳＫ２、ＢＴＫ、ＣＡＭＫＫ１、ＣＡＭＫＫアルファ、ＣＡＭＫＫベータ、Ｒｂ、Ｓｕｖ３９ＨＩ、ＳＣＦ、ｐ１９ＩＮＫ４Ｄ、ＧＳＫ−３、ｐｉ  ８  ＩＮＫ４、ｍｙｃ、サイクリンＥ、ＣＤＫ２、ＣＤＫ９、ＣＤＧ４／６、サイクリンＤ、ｐｌ６  ＩＮＫ４Ａ、ｃｄｃ２５Ａ、ＢＭＩ１、ＳＣＦ、Ａｋｔ、ＣＨＫｌ／２、Ｃ  １デルタ、ＣＫ１ガンマ、Ｃ  ２、ＣＬＫ２、ＣＳＫ、ＤＤＲ２、ＤＹＲＫ１Ａ／２／３、ＥＦ２Ｋ、ＥＰＨ−Ａ２／Ａ４／Ｂ１／Ｂ２／Ｂ３／Ｂ４、ＥＩＦ２Ａ  ３、Ｓｍａｄ２、Ｓｍａｄ３、Ｓｍａｄ４、Ｓｍａｄ７、ｐ５３、ｐ２１  Ｃｉｐｌ、ＰＡＸ、Ｆｙｎ、ＣＡＳ、Ｃ３Ｇ、ＳＯＳ、Ｔａｌ、Ｒａｐｔｏｒ、ＲＡＣＫ−１、ＣＲＫ、Ｒａｐｌ、Ｒａｃ、ＫＲａｓ、ＮＲａｓ、ＨＲａｓ、ＧＲＢ２、ＦＡＫ、ＰＩ３Ｋ、ｓｐｒｅｄ、Ｓｐｒｙ、ｍＴＯＲ、ＭＰＫ、ＬＫＢｌ、ＰＡＫ１／２／４／５／６、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＹＫ２、Ｓｒｃ、ＳＲＰＫ１、ＰＬＣ、ＰＫＣ、ＰＫＡ、ＰＫＢアルファ／ベータ、ＰＫＣアルファ／ガンマ／ゼータ、ＰＫＤ、ＰＬＫｌ、ＰＲＡＫ、ＰＲＫ２、ＷＡＶＥ−２、ＴＳＣ２、ＤＡＰＫｌ、ＢＡＤ、ＩＭＰ、Ｃ−ＴＡＫ１、ＴＡＫｌ、ＴＡＯｌ、ＴＢＫ１、ＴＥＳＫ１、ＴＧＦＢＲ１、ＴＩＥ２、ＴＬＫ１、ＴｒｋＡ、ＴＳＳＫ１、ＴＴＢＫ１／２、ＴＴＫ、Ｔｐｌ２／ｃｏｔｌ、ＭＥＫ１、ＭＥＫ２、ＰＬＤＬ  Ｅｒｋｌ、Ｅｒｋ２、Ｅｒｋ５、Ｅｒｋ８、ｐ９０ＲＳＫ、ＰＥＡ−１５、ＳＲＦ、ｐ２７  ＫＩＰ１、ＴＩＦ  ｌａ、ＨＭＧＮ１、ＥＲ８１、ＭＫＰ−３、ｃ−Ｆｏｓ、ＦＧＦ−Ｒ１、ＧＣＫ、ＧＳＫ３ベータ、ＨＥＲ４、ＨＩＰＫ１／２／３／、ＩＧＦ−１Ｒ、ｃｄｃ２５、ＵＢＦ、ＬＡＭＴＯＲ２、Ｓｔａｔｌ、ＳｔａＯ、ＣＲＥＢ、ＪＡＫ、Ｓｒｃ、ＰＴＥＮ、ＮＦ−カッパＢ、ＨＥＣＴＨ９、Ｂａｘ、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、Ａｐａｆ−１、Ｃｙｔｏ  ｃ、ＢＣＬ−２、Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｓｍａｃ、ＸＩＡＰ、カスパーゼ−９、カスパーゼ−３、カスパーゼ−６、カスパーゼ−７、ＣＤＣ３７、ＴＡＢ、ＩＫＫ、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、Ｒ１Ｐ１、ＦＬＩＰ、ＴＡＫｌ、ＪＮＫｌ／２／３、Ｌｃｋ、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆ、Ｃ−Ｒａｆ、ＭＯＳ、ＭＬＫｌ／３、ＭＮ  ｌ／２、ＭＳＫｌ、ＭＳＴ２／３／４、ＭＰＳＫ１、ＭＥＫＫｌ、ＭＥ  Ｋ４、ＭＥＬ、ＡＳＫ１、ＭＩＮＫ１、ＭＫＫ  １／２／３／４／６／７、ＮＥ  ２ａ／６／７、ＮＵＡＫ１、ＯＳＲ１、ＳＡＰ、ＳＴＫ３３、Ｓｙｋ、Ｌｙｎ、ＰＤＫ１、ＰＨＫ、ＰＩＭ  １／２／３、アタキシン−１、ｍＴＯＲＣｌ、ＭＤＭ２、ｐ２１  Ｗａｆｌ、サイクリンＤｌ、Ｌａｍｌｎ  Ａ、Ｔｐｌ２、Ｍｙｃ、カテニン、Ｗｎｔ、ＩＫＫ−ベータ、ＩＫＫ−ガンマ、ＩＫＫ−アルファ、ＩＫＫ−エプシロン、ＥＬＫ、ｐ６５ＲｅｌＡ、ＩＲＡＫＩ、ＩＲＡ  ２、ＩＲＡＫ４、ＩＲＲ、ＦＡＤＤ、ＴＲＡＦ６、ＴＲＡＦ３、ＭＫＫ３、ＭＫＫ６、ＲＯＣＫ２、ＲＳＫ１／２、ＳＧＫ  １、ＳｍＭＬＣＫ、ＳＩＫ２／３、ＵＬＫ１／２、ＶＥＧＦＲ１、ＷＮＫ  ｌ、ＹＥＳ１、ＺＡＰ７０、ＭＡＰ４Ｋ３、ＭＡＰ４Ｋ５、ＭＡＰＫｌｂ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２  Ｋ３、ｐ��８アルファ／ベータ／デルタ／ガンマＭＡＰＫ、オーロラＡ、オーロラＢ、オーロラＣ、ＭＣＡＫ、Ｃｌｉｐ、ＭＡＰＫＡＰＫ、ＦＡＫ、ＭＡＲＫ  １  ／２／３／４、Ｍｕｃｌ、ＳＨＣ、ＣＸＣＲ４、Ｇａｐ−１、Ｍｙｃ、ベータ−カテニン／ＴＣＦ、Ｃｂｌ、ＢＲＭ、Ｍｃｌ−１、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＡＲ、ＲＡＳ、ＥｒｂＢ３、ＥＧＦＲ、ＩＲＥ１、ＨＰＫ１、ＲＩＰＫ２、及びＥＲα（列挙されるこれらのタンパク質の全てのバリアント、変異、スプライスバリアント、インデル、及び融合体を含む）などの標的タンパク質に結合する任意のペプチドまたは小分子である。
【０３１９】
具体的なＰＢ基は、ＵＳ２０１４／０３５６３２２及びＵＳ２０１６／００４５６０７に開示されるものなどの小分子化合物である。それらに開示される化合物は、熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）阻害剤、キナーゼ及びホスファターゼ阻害剤、ＭＤＭ２阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ヒトリジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、免疫抑制化合物、ならびにヒトＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質、アリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）、ＲＥＦ受容体キナーゼ、ＦＫＢＰ、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、エストロゲン受容体（ＥＲ）、甲状腺ホルモン受容体、ＨＩＶプロテアーゼ、ＨＩＶインテグラーゼ、ＨＣＶプロテアーゼ、アシル−タンパク質チオエステラーゼ−１及び−２（ＡＰＴ１及びＡＰＴ２）を標的とする化合物として分類され得る。
【０３２０】
ｃ．リンカーＬ２
本明細書に記載されるＰＲＯＴＡＣのＥ３ＬＢ及びＰＢ基は、リンカー（Ｌ２）と接続されることができる。ある特定の実施形態では、リンカー基Ｌ２は、Ａの１つ以上の共有結合した構造単位（例えば、−Ａ１．．．Ａｑ−）を含む基であり、式中、Ａ１は、Ｅ３ＬＢ、ＰＢ、またはこれらの組み合わせのうちの少なくとも１つに結合した基である。ある特定の実施形態では、Ａ１は、Ｅ３ＬＢ、ＰＢ、またはこれらの組み合わせを、別のＥ３ＬＢ、ＰＢ、またはこれらの組み合わせに直接結合させる。他の実施形態では、Ａ１は、Ａｑを通して、ＥＬ３Ｂ、ＰＢ、またはこれらの組み合わせを、別のＥ３ＬＢ、ＰＢ、またはこれらの組み合わせと間接的に結合させる。
【０３２１】
ある特定の実施形態では、Ａ１〜Ａｑは各々独立して、結合、ＣＲＬａＲＬｂ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＲＬｃ、ＳＯ２ＮＲＬｃ、ＳＯＮＲＬｃ、ＣＯＮＲＬｃ、ＮＲＬｃＣＯＮＲＬｄ、ＮＲＬｃＳＯ２ＮＲＬｄ、ＣＯ、ＣＲＬａ＝ＣＲＬｂ、Ｃ≡Ｃ、ＳｉＲＬａＲＬｂ、Ｐ（Ｏ）ＲＬａ、Ｐ（Ｏ）ＯＲＬａ、ＮＲＬｃＣ（＝ＮＣＮ）ＮＲＬｄ、ＮＲＬｃＣ（＝ＮＣＮ）、ＮＲＬｃＣ（＝ＣＮＯ２）ＮＲＬｄ、０〜６個のＲＬａ及び／またはＲＬｂ基で任意に置換されたＣ３−１１シクロアルキル、０〜６個のＲＬａ及び／またはＲＬｂ基で任意に置換されたＣ３−１１ヘテロシクリル、０〜６個のＲＬａ及び／またはＲＬｂ基で任意に置換されたアリール、０〜６個のＲＬａ及び／またはＲＬｂ基で任意に置換されたヘテロアリールであり、式中、ＲＬａまＲＬｂは各々独立して、他のＡ基と結合して、０〜４個のＲＬｅ基でさらに置換され得るシクロアルキル及び／またはヘテロシクリル部分を形成することができ、ＲＬａ、ＲＬｂ、ＲＬｃ、ＲＬｄ、及びＲＬｅは各々独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ１−８アルキル、ＯＣ１−８アルキル、ＳＣ１−８アルキル、ＮＨＣ１−８アルキル、Ｎ（Ｃ１−８アルキル）２、Ｃ３−１１シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３−１１ヘテロシクリル、ＯＣ１−８シクロアルキル、ＳＣ１−８シクロアルキル、ＮＨＣ１−８シクロアルキル、Ｎ（Ｃ１−８シクロアルキル）２、Ｎ（Ｃ１−８シクロアルキル）（Ｃ１−８アルキル）、ＯＨ、ＮＨ２、ＳＨ、ＳＯ２Ｃ１−８アルキル、Ｐ（Ｏ）（ＯＣ１−８アルキル）（Ｃ１−８アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＣ１−８アルキル）２、ＣＣ−Ｃ１−８アルキル、ＣＣＨ、ＣＨ＝ＣＨ（Ｃ１−８アルキル）、Ｃ（Ｃ１−８アルキル）＝ＣＨ（Ｃ１−８アルキル）、Ｃ（Ｃ１−８アルキル）＝Ｃ（Ｃ１−８アルキル）２、Ｓｉ（ＯＨ）３、Ｓｉ（Ｃ１−８アルキル）３、Ｓｉ（ＯＨ）（Ｃ１−８アルキル）２、ＣＯＣ１−８アルキル、ＣＯ２Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、ＮＯ２、ＳＦ５、ＳＯ２ＮＨＣ１−８アルキル、ＳＯ２Ｎ（Ｃ１−８アルキル）２、ＳＯＮＨＣ１−８アルキル、ＳＯＮ（Ｃ１−８アルキル）２、ＣＯＮＨＣ１−８アルキル、ＣＯＮ（Ｃ１−８アルキル）２、Ｎ（Ｃ１−８アルキル）ＣＯＮＨ（Ｃ１−８アルキル）、Ｎ（Ｃ１−８アルキル）ＣＯＮ（Ｃ１−８アルキル）２、ＮＨＣＯＮＨ（Ｃ１−８アルキル）、ＮＨＣＯＮ（Ｃ１−８アルキル）２、ＮＨＣＯＮＨ２、Ｎ（Ｃ１−８アルキル）ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−８アルキル）、Ｎ（Ｃ１−８アルキル）ＳＯ２Ｎ（Ｃ１−８アルキル）２、ＮＨ  ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−８アルキル）、ＮＨ  ＳＯ２Ｎ（Ｃ１−８アルキル）２、ＮＨ  ＳＯ２ＮＨ２である。
【０３２２】
ある特定の実施形態では、ｑは、０以上の整数である。ある特定の実施形態では、ｑは、１以上の整数である。
【０３２３】
ある特定の実施形態では、例えば、ｑが２超である場合、Ａｑは、Ｅ３ＬＢ部分に接続した基であり、Ａ１及びＡｑは、Ａの構造単位を介して接続されている（Ａのかかる構造単位の数：ｑ−２）。
【０３２４】
ある特定の実施形態では、例えば、ｑが２である場合、Ａｑは、Ａ１及びＥ３ＬＢ部分に接続した基である。
【０３２５】
ある特定の実施形態では、例えば、ｑが１である場合、リンカー基Ｌ２の構造は−Ａ１−であり、Ａ１は、Ｅ３ＬＢ部分及びＰＢ部分に接続した基である。
【０３２６】
さらなる実施形態では、ｑは、１〜１００、１〜９０、１〜８０、１〜７０、１〜６０、１〜５０、１〜４０、１〜３０、１〜２０、または１〜１０の整数である。
【０３２７】
ある特定の実施形態では、リンカー（Ｌ２）は、以下からなる群から選択される。
【化１４−１】
2019522633.tif 000062
【化１４−２】
2019522633.tif 000063
【０３２８】
さらなる実施形態では、リンカー基は、１〜約１００個のエチレングリコール単位、約１〜約５０個のエチレングリコール単位、１〜約２５個のエチレングリコール単位、約１〜１０個のエチレングリコール単位、１〜約８個のエチレングリコール単位、ならびに１及び６個のエチレングリコール単位、２〜４個のエチレングリコール単位を有する任意に置換された（ポリ）エチレングリコール、または任意に置換されたＯ、Ｎ、Ｓ、Ｐ、もしくはＳｉ原子と相互分散した任意に置換されたアルキル基である。ある特定の実施形態では、リンカーは、アリール、フェニル、ベンジル、アルキル、アルキレン、または複素環基で置換されている。ある特定の実施形態では、リンカーは、非対称であっても対称であってもよい。
【０３２９】
本明細書に記載される化合物の実施形態のいずれにおいても、リンカー基は、本明細書に記載される任意の好適な部分であり得る。一実施形態では、リンカーは、約１〜約１２個のエチレングリコール単位、１〜約１０個のエチレングリコール単位、約２約６個のエチレングリコール単位、約２〜５個のエチレングリコール単位、約２〜４個のエチレングリコール単位の範囲の大きさの、置換または非置換ポリエチレングリコール基である。
【０３３０】
しかしながら、Ｅ３ＬＢ基及びＰＢ基は、適切であり、かつリンカーの化学構造に対して安定な任意の基を通してリンカー基と共有結合してもよい。リンカーは独立して、好ましくはアミド、エステル、チオエステル、ケト基、カルバメート（ウレタン）、炭素、またはエーテルを通してＥ３ＬＢ基及びＰＢ基と共有結合し、これらの基の各々は、ユビキチンリガーゼ上のＥ３ＬＢ基と分解される標的タンパク質上のＰＢ基との最大結合を提供するために、Ｅ３ＬＢ基及びＰＢ基のどこに挿入されてもよい。ＰＢ基がＥ３ＬＢ基である特定の態様において、分解のための標的タンパク質は、ユビキチンリガーゼ自体であり得る。ある特定の態様において、リンカーは、Ｅ３ＬＢ及び／またはＰＢ基上の、任意に置換されたアルキル、アルキレン、アルケン、もしくはアルキン基、アリール基、または複素環基に結合してもよい。Ｅ３ＬＢ基またはＰＢ基は、リンカー上の化学官能基と反応性である化学官能基を作製するために誘導体化される必要がある場合がある。代替的には、リンカーは、Ｅ３ＬＢ及び／またはＰＢ上で見出される官能基と反応することができる化学官能基を含むために誘導体化される必要がある場合がある。
【０３３１】
Ｌ２はまた、以下の式によって表すことができ、
【化１５】
2019522633.tif 000064
式中、Ｚは、Ｅ３ＬＢをＸに結合させる基であり、Ｘは、Ｚを基ＰＢに結合させる基である。
【０３３２】
実施形態において、Ｚは、不在（結合）、−（ＣＨ２）ｉ−Ｏ、−（ＣＨ２）ｉ−Ｓ、−（ＣＨ２）ｉ−Ｎ−Ｒ、（ＣＨ２）ｉ−Ｘ１Ｙ１基（式中、Ｘ１Ｙ１はアミド基、またはウレタン基、エステルもしくはチオエステル基を形成する）、または
【化１６】
2019522633.tif 000065
式中、各Ｒは、Ｈ、またはＣ１−Ｃ３アルキル、アルカノール基、または複素環（リンカー基の水溶性を促進するための水溶性複素環、好ましくはモルホリノ、ピペリジン、もしくはピペラジン基を含む）であり、各Ｙは独立して、結合、Ｏ、Ｓ、またはＮ−Ｒであり、各ｉは独立して、０〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４、または５である。
【０３３３】
実施形態において、Ｘは以下のものであり、
【化１７】
2019522633.tif 000066
（式中、各Ｖは独立して、結合（不在）である）、
【化１８】
2019522633.tif 000067
jは、１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４、または５であり、
ｋは、１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４、または５であり、好ましくはｋは、１、２、３、４、または５であり、
ｍ’は、１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４、または５であり、
ｎは、１〜１００、１〜７５、１〜６０、１〜５５、１〜５０、１〜４５、１〜４０、２〜３５、３〜３０、１〜１５、１〜１０、１〜８、１〜６、１、２、３、４、または５であり、
Ｘ１は、Ｏ、Ｓ、またはＮ−Ｒ、好ましくはＯであり、
Ｙは、上記と同じであり、
ＣＯＮは、リンカー基中に存在する場合、ＺをＸに結合させるコネクター基（結合であり得る）である。
【０３３４】
実施形態において、ＣＯＮは、結合（不在）、ピペラジニルもしくは他の基などの水溶性複素環を含む複素環、または以下の基、
【化１９】
2019522633.tif 000068
（式中、Ｘ２は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ４、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ、−ＯＳ（Ｏ）２、またはＯＳ（Ｏ）２Ｏであり、
Ｘ３は、Ｏ、Ｓ、ＣＨＲ４、ＮＲ４であり、
Ｒは、Ｈ、または１つまたは２つのヒドロキシル基で任意に置換されたＣ１−Ｃ３アルキル基、またはその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、もしくは立体異性体である）である。
【０３３５】
代替的な好ましい態様において、リンカー基は、１〜約１００個のエチレングリコール単位、約１〜約５０個のエチレングリコール単位、１〜約２５個のエチレングリコール単位、約１〜１０個のエチレングリコール単位、１〜約８個のエチレングリコール単位、ならびに１及び６個のエチレングリコール単位、２〜４個のエチレングリコール単位を有する（ポリ）エチレングリコールである。
【０３３６】
実施形態において、ＣＯＮは、
【化２０】
2019522633.tif 000069
またはアミド基である。
【０３３７】
Ｅ３ＬＢ基及びＰＢ基は、適切であり、かつリンカーの化学構造に対して安定な任意の基を通してリンカー基と共有結合してもよいが、好ましい態様において、リンカーは独立して、アミド、エステル、チオエステル、ケト基、カルバメート（ウレタン）、またはエーテルを通してＥ３ＬＢ基及びＰＢ基と共有結合し、これらの基の各々は、ユビキチンリガーゼへのＥ３ＬＢ基の結合、及び分解される標的タンパク質へのＰＢ基の結合を可能にするために、Ｅ３ＬＢ基及びＰＢ基のどこに挿入されてもよい。言い換えれば、本明細書に示されるように、リンカーは、その存在がＥ３ＬＢ及びＰＢのそれぞれの結合パートナーへの結合に及ぼし得る任意の影響を最小化、排除、または中和させるようにＥ３ＬＢ及びＰＢに設計及び接続され得る。ある特定の態様において、分解のための標的タンパク質は、ユビキチンリガーゼであり得る。
【０３３８】
さらなるリンカーＬ２は、米国出願公開第２０１６／００５８８７２号、同第２０１６／００４５６０７号、同第２０１４／０３５６３２２号、及び同第２０１５／０２９１５６２号、ならびにＷＯ２０１４／０６３０６１に開示されている。
【０３３９】
次にＰＡＣを参照すると、ＰＡＣは、単一の抗体を含むことができ、単一の抗体は、１つ超のＰＲＯＴＡＣを有することができ、各ＰＲＯＴＡＣは、リンカーＬ１を通して抗体と共有結合している。「ＰＲＯＴＡＣ負荷」は、抗体当たりのＰＲＯＴＡＣ部分の平均数である。ＰＲＯＴＡＣ負荷は、抗体（Ａｂ）当たり１〜８個のＰＲＯＴＡＣ（Ｄ）の範囲であり得る。すなわち、ＰＡＣ配合物中、Ａｂ−（Ｌ１−Ｄ）ｐであり、ｐは、約１〜約５０、約１〜約８、約１〜約５、約１〜約４、または約１〜約３の値を有する。リンカーＬ１を通して抗体と共有結合した各ＰＲＯＴＡＣは、同じかまたは異なるＰＲＯＴＡＣであり得、抗体と共有結合した任意の他のＬ１と同じ種類または異なる種類のリンカーを有し得る。一実施形態では、Ａｂは、システイン操作された抗体であり、ｐは、約２である。
【０３４０】
コンジュゲーション反応からのＰＡＣの製剤中の抗体当たりのＰＲＯＴＡＣの平均数は、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、電気泳動、及びＨＰＬＣなどの従来の手段によって特性評価することができる。ｐに関するＰＡＣの定量分布も判定され得る。ＥＬＩＳＡによって、ＰＡＣの特定の製剤中のｐの平均値が判定され得る（Ｈａｍｂｌｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０：７０６３−７０７０；Ｓａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ（２００５）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１１：８４３−８５２）。しかしながら、ｐの値の分布は、抗体−抗原結合及びＥＬＩＳＡの検出限界によって認識可能ではない。また、ＰＡＣの検出のためのＥＬＩＳＡアッセイは、ＰＲＯＴＡＣ部分が、重鎖もしくは軽鎖断片、または特定のアミノ酸残基など、どこで抗体に結合しているかを判定しない。いくつかの例において、ｐが他のＰＲＯＴＡＣ負荷を有するＰＡＣからのある特定の値である場合のＰＡＣの分離、精製、及び特性評価は、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動などの手段によって達成され得る。
【０３４１】
いくつかのＰＡＣの場合、ｐは、抗体上の結合部位の数によって制限され得る。例えば、抗体は、１つもしくはいくつかのシステインチオール基を有し得るか、またはそれを通してリンカーが結合され得る１つもしくはいくつかの十分に反応性のチオール基を有し得る。Ｌ１−Ｄを接続するためのＡｂ上の別の反応性部位は、リジン残基のアミン官能基である。ｐの値は、約１〜約５０、約１〜約８、約１〜約５、約１約４、約１〜約３の値を含み、ｐは、２に等しい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される主題は、ｐが約１、２、３、４、５、６、７、または８である任意のＰＡＣに向けられる。
【０３４２】
一般に、コンジュゲーション反応中、理論最大値よりも少ないＰＲＯＴＡＣ部分が抗体にコンジュゲートされる。抗体は、例えば、リンカーＬ１−ＰＲＯＴＡＣ基（Ｌ１−Ｄ）またはリンカー試薬と反応しない多くのリジン残基を含有し得る。最も反応性のリジン基のみがアミン反応性リンカー試薬と反応し得る。また、最も反応性のシステインチオール基は、チオール反応性リンカー試薬またはリンカーＬ１−ＰＲＯＴＡＣ基と反応し得る。一般に、抗体は、ＰＲＯＴＡＣ部分に結合され得る遊離かつ反応性のシステインチオール基を、含有するとしても多くは含有しない。化合物の抗体中のほとんどのシステインチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在し、部分的または全還元条件下で、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）またはＴＣＥＰなどの還元剤で還元されなければならない。しかしながら、ＰＡＲのＰＲＯＴＡＣ負荷（ＰＲＯＴＡＣ／抗体比、「ＰＡＲ」）は、（ｉ）リンカーＬ１−ＰＲＯＴＡＣ基またはリンカー試薬の抗体に対するモル過剰量を制限すること、（ｉｉ）コンジュゲーション反応時間または温度を制限すること、及び（ｉｉｉ）システインチオール修飾のための還元条件を部分的または制限することを含むいくつかの異なる様式で制御され得る。
【０３４３】
ＩＩＩ．Ｌ１−ＰＲＯＴＡＣ化合物
本明細書に記載されるＰＲＯＴＡＣは、リンカーＬ１と共有結合して、Ｌ１−ＰＲＯＴＡＣ基を調製することができる。これらの化合物は、以下の一般式を有し、
Ｌ１−Ｄ
式中、Ｄは、構造Ｅ３ＬＢ−Ｌ２−ＰＢを有するＰＲＯＴＡＣであり、Ｅ３ＬＢは、Ｌ２と共有結合したＥ３リガーゼ結合基であり、Ｌ２は、Ｅ３ＬＢ及びＰＢと共有結合したリンカーであり、ＰＢは、Ｌ２と共有結合したタンパク質結合基であり、Ｌ１は、Ｄと共有結合したリンカーである。これらの成分に有用な基は、上記の通りである。
【０３４４】
特定の実施形態では、Ｌ１は、本明細書の他の箇所に記載される通りであり、ペプチド模倣リンカーを含む。これらの実施形態では、Ｌ１−ＰＲＯＴＡＣは、以下の式を有し、
【化２１】
2019522633.tif 000070
式中、
Ｓｔｒは、ストレッチャー単位であり、
Ｓｐは、Ｄ、すなわち、ＰＲＯＴＡＣ部分と共有結合した結合またはスペーサ単位であり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、または（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ４及びＲ５は各々独立して、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＯＣＨ２−であるか、またはＲ４及びＲ５はＣ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成してもよく、
Ｄは、ＰＲＯＴＡＣ部分である。
【０３４５】
Ｌ１−ＰＲＯＴＡＣ化合物は、以下の式によって表すことができ、
【化２２】
2019522633.tif 000071
式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレンであり、Ｒ４及びＲ５は一緒にＣ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成し、Ｄは、ＰＲＯＴＡＣ部分である。
【０３４６】
Ｌ１−ＰＲＯＴＡＣ化合物は、以下の式によって表すことができ、
【化２３】
2019522633.tif 000072
式中、Ｒ１、Ｒ４、及びＲ５は、本明細書の他の箇所に記載される通りであり、Ｄは、ＰＲＯＴＡＣ部分である。
【０３４７】
Ｌ１−ＰＲＯＴＡＣ化合物は、以下の式によって表すことができ、
【化２４】
2019522633.tif 000073
式中、
Ｓｔｒは、ストレッチャー単位であり、
Ｓｐは、Ｄ、すなわち、ＰＲＯＴＡＣ部分と共有結合した任意のスペーサ単位であり、
Ｙは、ヘテロアリール、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ６アルキレン、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−ＮＨ２、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−ＮＨ−ＣＨ３、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｎ−（ＣＨ３）２、Ｃ１−Ｃ６アルケニル、またはＣ１−Ｃ６アルキレニルであり、Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、または（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３及びＲ２は各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、もしくはヘテロアリールアルキルであるか、またはＲ３及びＲ２は一緒にＣ３−Ｃ７シクロアルキルを形成してもよく、
Ｄは、ＰＲＯＴＡＣ部分である。
【０３４８】
Ｌ１−ＰＲＯＴＡＣ化合物は、以下の式によって表すことができ、
【化２５】
2019522633.tif 000074
式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレンであり、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は本明細書の他の箇所に記載される通りであり、Ｄは、ＰＲＯＴＡＣ部分である。
【０３４９】
Ｌ１−ＰＲＯＴＡＣ化合物は、以下の式によって表すことができ、
【化２６】
2019522633.tif 000075
式中、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、本明細書の他の箇所に記載される通りであり、Ｄは、ＰＲＯＴＡＣ部分である。
【０３５０】
上記のＬ１−ＰＲＯＴＡＣ化合物のいずれにおいても、Ｓｔｒは、以下の式を有することができ、
【化２７】
2019522633.tif 000076
式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）、及びＣ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）−Ｃ２−Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ７ヘテロシクロアルキルアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、及びヘテロアリールからなる群から選択される１〜５個の置換基によって置換されてもよく、各Ｒａは各々独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、Ｓｐは、−Ａｒ−Ｒｂ−であり、Ａｒは、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−である。
【０３５１】
ある特定のＬ１−ＰＲＯＴＡＣ化合物において、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレンであり、Ｓｐは、−Ａｒ−Ｒｂ−であり、式中、Ａｒは、アリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）Ｏ−であるか、またはＲ６は、−（ＣＨ２）ｑは、１〜１０である。
【０３５２】
上記のＬ１−ＰＲＯＴＡＣ化合物のいずれにおいても、Ｓｔｒは、以下の式を有することができ、
【化２８】
2019522633.tif 000077
式中、
【化２８−１】
2019522633.tif 000078
は、抗体にコンジュゲートすることができる部分を示し、Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｏ、Ｎ（Ｒｃ）−（Ｃ２−Ｃ６アルキレン）−Ｎ（Ｒｃ）、及びＮ（Ｒｃ）−（Ｃ２−Ｃ６アルキレン）から選択され、各Ｒｃは独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｓｐは、−Ａｒ−Ｒｂ−であり、式中、Ａｒは、アリールもしくはヘテロアリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−であるか、またはＲ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレンであり、Ｓｐは、−Ａｒ−Ｒｂ−であり、Ａｒは、アリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）Ｏ−である。
【０３５３】
Ｌ１−ＰＲＯＴＡＣは、以下の式を有することができ、式中、各例において、Ｄは、ＰＲＯＴＡＣ部分である。
【化２９】
2019522633.tif 000079
【０３５４】
次にＰＲＯＴＡＣのＰＢ基に言及すると、特定の実施形態では、ＰＢは本明細書の他の箇所に記載される通りであるか、または熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）阻害剤、キナーゼ及びホスファターゼ阻害剤、ＭＤＭ２阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ヒトリジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、免疫抑制化合物、ならびにヒトＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質、アリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）、ＲＥＦ受容体キナーゼ、ＦＫＢＰ、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、エストロゲン受容体（ＥＲ）、甲状腺ホルモン受容体、ＨＩＶプロテアーゼ、ＨＩＶインテグラーゼ、ＨＣＶプロテアーゼ、アシル−タンパク質チオエステラーゼ−１及び−２（ＡＰＴ１及びＡＰＴ２）を標的とする化合物からなる群から選択される。
【０３５５】
特定の実施形態では、Ｅ３ＬＢは本明細書の他の箇所に記載される通りであり、ＸＩＡＰ、ＶＨＬ、セレブロン、及びＭＤＭ２に結合する基を含む。
【０３５６】
本明細書に記載される主題はまた、Ｌ１−ＰＲＯＴＡＣ化合物からＰＡＣを調製する方法に向けられ、該方法は、ＰＡＣが調製される、抗体がＬ１−ＰＲＯＴＡＣ上の任意の利用可能な結合点に共有結合する条件下で、抗体、またはそのバリアント、変異体、スプライスバリアント、インデル、及び融合体を、Ｌ１−ＰＲＯＴＡＣと接触させることを含む。本明細書に記載される主題はまた、Ａｂ−Ｌ１部分、すなわち、Ｌ１と共有結合した抗体、またはそのバリアント、変異体、スプライスバリアント、インデル、及び融合体からＰＡＣを調製する方法に向けられ、該方法は、ＰＡＣが調製される、ＰＲＯＴＡＣがＡｂ−Ｌ１上の任意の利用可能な結合点に共有結合する条件下で、ＰＲＯＴＡＣをＡｂ−Ｌ１と接触させることを含む。方法は、ＰＡＣの定期的な単離及び精製をさらに含み得る。
【０３５７】
次に、ＰＡＣ及びＬ１−ＰＲＯＴＡＣ化合物に言及すると、本明細書に記載されるように、これらは、固体または液体形態で存在することができる。固体状態において、それは、結晶もしくは非結晶形態で、またはその混合物として存在し得る。当業者であれば、薬学的に許容される溶媒が結晶または非結晶化合物のために形成され得ることを理解するであろう。結晶溶媒において、溶媒分子は、結晶化中に結晶格子内に組み込まれる。溶媒は、限定するものではないが、エタノール、イソプロパノール、ＤＭＳＯ、酢酸、エタノールアミン、または酢酸エチルなどの非水溶媒を伴い得るか、またはそれらは、結晶格子内に組み込まれる溶媒として水を伴い得る。水が結晶格子内に組み込まれる水である場合の溶媒は、典型的には、「水和物」と称される。水和物には、化学量論水和物、ならびに可変量の水を含有する組成物が含まれる。本明細書に記載される主題は、全てのかかる溶媒を含む。
【０３５８】
当業者であれば、結晶形態で存在する本明細書に記載されるある特定の化合物及びＰＡＣ（それらの様々な溶媒を含む）が、多形性（すなわち、異なる結晶構造中で生じる能力）を呈する場合があることをさらに理解するであろう。これらの異なる結晶形態は、典型的には、「多形」として知られている。本明細書に開示される主題は、全てのかかる多形を含む。多形は、同じ化学組成を有するが、結晶固体状態の充填、器楽的配置、及び他の記述的特性が異なる。多形は、したがって、会場、密度、硬度、変形能、安定性、及び溶解特性などの異なる物理特性を有し得る。多形は、典型的には、異なる融解点、ＩＲスペクトル、及びＸ線粉末回析を呈し、これらは同定に使用され得る。当業者であれば、異なる多形が、例えば、化合物の作製に使用される反応条件または試薬を変更または調節することによって産生され得ることを理解するであろう。例えば、温度、圧力、または溶媒の変更は、多形をもたらし得る。さらに、１つの多形は、ある特定の条件下で別の多形に自発的に変わることがある。
【０３５９】
本明細書に記載される化合物及びＰＡＣまたはそれらの塩は、立体異性形態で存在し得る（例えば、それは、１つ以上の非対称炭素原子を含有する）。個々の立体異性体（エナンチオマー及びジアステレオマー）及びこれらの混合物は、本明細書に開示される主題の範囲内に含まれる。同様に、式（Ｉ）の化合物または塩が、式に示されるもの以外の互変異性型で存在し得、これらもまた本明細書に開示される主題の範囲内に含まれることを理解されたい。本明細書に開示される主題は、本明細書に記載される特定の基の全ての組み合わせ及びサブセットを含むことを理解されたい。本明細書に開示される主題の範囲には、立体異性体の混合物、ならびに精製されたエナンチオマーまたはエナンチオマー／ジアステレオマーを豊富化した混合物が含まれる。本明細書に開示される主題は、本明細書で上に定義された特定の基の全ての組み合わせ及びサブセットを含むことを理解されたい。
【０３６０】
本明細書に開示される主題にはまた、本明細書に記載される化合物の同位体標識形態も含まれるが、１つ以上の原子が、通常天然に見出される原子量または質量数とは異なる原子量または質量数を有する原子によって置換されている事実について。本明細書に記載される化合物及びその薬学的に許容される塩に組み込まれ得る同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、ヨウ素、及び塩素の同位体、例えば２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ、１２３Ｉ、及び１２５Ｉが挙げられる。
【０３６１】
前述の同位体及び／または他の原子の他の同位体を含有する本明細書に開示される化合物及びＰＡＣならびにそれらの薬学的に許容される塩は、本明細書に開示される主題の範囲内である。同位体標識された化合物、例えば、３Ｈ、１４Ｃなどの放射性同位体がその中に組み込まれるものは本明細書に開示され、これらは、薬物及び／または基質組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム標識、すなわち３Ｈ、及び炭素−１４、すなわち１４Ｃ同位体は、一般に、それらの調製の容易性及び検出性のために使用される。１１Ｃ及び１８Ｆ同位体は、ＰＥＴ（陽電子放射断層撮影）において有用であり、１２５Ｉ同位体は、ＳＰＥＣＴ（単一光子放射断層撮影）において有用であり、これらは全て脳画像診断において有用である。さらに、重水素、すなわち２Ｈなどのより重い同位体での置換は、より良好な代謝安定性、例えばインビボ半減期の増加または投薬量要件の低減によってもたらされるある特定の治療的な利点をもたらすことができ、ゆえにいくつかの状況では好まれる場合がある。式Ｉの同位体標識された化合物は、一般に、容易に入手可能な同位体標識試薬を非同位体標識試薬の代わりに用いることによって、スキームにおいて、及び／または以下の実施例において開示される手順を実施することによって調製され得る。
【０３６２】
本明細書に記載される主題は、以下の実施形態を含む。
１．以下の化学構造を有するコンジュゲートであって、
Ａｂ−（Ｌ１−Ｄ）ｐ
式中、
Ｄは、構造Ｅ３ＬＢ−Ｌ２−ＰＢを有するＰＲＯＴＡＣであり、
Ｅ３ＬＢは、Ｌ２と共有結合したＥ３リガーゼ結合基であり、
Ｌ２は、Ｅ３ＬＢ及びＰＢと共有結合したリンカーであり、
ＰＢは、Ｌ２と共有結合したタンパク質結合基であり、
Ａｂは、Ｌ１と共有結合した抗体であり、
Ｌ１は、Ａｂ及びＤと共有結合したリンカーであり、
ｐは、約１〜約８の値を有する、コンジュゲート。
【０３６３】
２．Ｅ３ＬＢが、Ｅ３リガーゼに結合する基であり、Ｅ３リガーゼが、表１３〜２７、例えば、表１３、表１４、表１５、表１６、表１７、表１８、表１９、表２０、表２１、表２２、表２３、表２４、表２５、表２６、または表２７に列挙されている、実施形態１に記載のコンジュゲート。
【０３６４】
３．Ｅ３ＬＢが、Ｅ３リガーゼに結合する基であり、Ｅ３リガーゼが、ｖｏｎ  Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ（ＶＨＬ）；セレブロン；ＸＩＡＰ；Ｅ３Ａ；ＭＤＭ２；後期促進複合体（ＡＰＣ）；ＵＢＲ５（ＥＤＤ１）；ＳＯＣＳ／ＢＣ−ｂｏｘ／ｅｌｏＢＣ／ＣＵＬ５／ＲＩＮＧ；ＬＮＸｐ８０；ＣＢＸ４；ＣＢＬＬ１；ＨＡＣＥ１；ＨＥＣＴＤ１；ＨＥＣＴＤ２；ＨＥＣＴＤ３；ＨＥＣＷ１；ＨＥＣＷ２；ＨＥＲＣ１；ＨＥＲＣ２；ＨＥＲＣ３；ＨＥＲＣ４；ＨＵＷＥ１；ＩＴＣＨ；ＮＥＤＤ４；ＮＥＤＤ４Ｌ；ＰＰＩＬ２；ＰＲＰＦ１９；ＰＩＡＳ１；ＰＩＡＳ２；ＰＩＡＳ３；ＰＩＡＳ４；ＲＡＮＢＰ２；ＲＮＦ４；ＲＢＸ１；ＳＭＵＲＦ１；ＳＭＵＲＦ２；ＳＴＵＢ１；ＴＯＰＯＲＳ；ＴＲＩＰ１２；ＵＢＥ３Ａ；ＵＢＥ３Ｂ；ＵＢＥ３Ｃ；ＵＢＥ４Ａ；ＵＢＥ４Ｂ；ＵＢＯＸ５；ＵＢＲ５；ＷＷＰ１；ＷＷＰ２；Ｐａｒｋｉｎ；Ａ２０／ＴＮＦＡＩＰ３；ＡＭＦＲ／ｇｐ７８；ＡＲＡ５４；ベータ−ＴｒＣＰ１／ＢＴＲＣ；ＢＲＣＡ１；ＣＢＬ；ＣＨＩＰ／ＳＴＵＢ１；Ｅ６；Ｅ６ＡＰ／ＵＢＥ３Ａ；Ｆ−ｂｏｘタンパク質１５／ＦＢＸＯ１５；ＦＢＸＷ７／Ｃｄｃ４；ＧＲＡＩＬ／ＲＮＦ１２８；ＨＯＩＰ／ＲＮＦ３１；ｃＩＡＰ−１／ＨＩＡＰ−２；ｃＩＡＰ−２／ＨＩＡＰ−１；ｃＩＡＰ（ｐａｎ）；ＩＴＣＨ／ＡＩＰ４；ＫＡＰ１；ＭＡＲＣＨ８；ＭＤＭ２／ＨＤＭ２；Ｍｉｎｄ  Ｂｏｍｂ  １／ＭＩＢ１；Ｍｉｎｄ  Ｂｏｍｂ  ２／ＭＩＢ２；ＭｕＲＦ１／ＴＲＩＭ６３；ＮＤＦＩＰ１；ＮＥＤＤ４；ＮｌｅＬ；Ｐａｒｋｉｎ；ＲＮＦ２；ＲＮＦ４；ＲＮＦ８；ＲＮＦ１６８；ＲＮＦ４３；ＳＡＲＴ１；Ｓｋｐ２；ＳＭＵＲＦ２；ＴＲＡＦ−１；ＴＲＡＦ−２；ＴＲＡＦ−３；ＴＲＡＦ−４；ＴＲＡＦ−５；ＴＲＡＦ−６；ＴＲＩＭ５；ＴＲＩＭ２１；ＴＲＩＭ３２；ＵＢＲ５；及びＺＮＲＦ３からなる群から選択される、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３６５】
４．Ｅ３ＬＢが、ＸＩＡＰ、ＶＨＬ、セレブロン、及びＭＤＭ２からなる群から選択されるＥ３リガーゼに結合する基である、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３６６】
５．Ｅ３ＬＢが、ＶＨＬに結合する化合物、ＶＨＬに結合するヒドロキシプロリン化合物、ＭＤＭ２に結合する化合物、セレブロンに結合する化合物、テトラヒドロ−ベンゾジアゼピノンナトリン、及び本明細書に記載される小分子結合化合物からなる群から選択される、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３６７】
６．Ｅ３ＬＢが、以下の式を有するテトラヒドロ−ベンゾジアゼピノンであるＸＩＡＰ阻害剤であり、
【化３０】
2019522633.tif 000080
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５が、ＷＯ／２０１５／０７１３９３に記載される通りであり、その中に全ての化合物を含む、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３６８】
７．ＰＢが、ＦｏｘＯｌ、ＨＤＡＣ、ＤＰ−１、Ｅ２Ｆ、ＡＢＬ、ＡＭＰＫ、ＢＲＫ、ＢＲＳＫ  Ｉ、ＢＲＳＫ２、ＢＴＫ、ＣＡＭＫＫ１、ＣＡＭＫＫアルファ、ＣＡＭＫＫベータ、Ｒｂ、Ｓｕｖ３９ＨＩ、ＳＣＦ、ｐ１９ＩＮＫ４Ｄ、ＧＳＫ−３、ｐｉ  ８  ＩＮＫ４、ｍｙｃ、サイクリンＥ、ＣＤＫ２、ＣＤＫ９、ＣＤＧ４／６、サイクリンＤ、ｐｌ６  ＩＮＫ４Ａ、ｃｄｃ２５Ａ、ＢＭＩ１、ＳＣＦ、Ａｋｔ、ＣＨＫｌ／２、Ｃ  １デルタ、ＣＫ１ガンマ、Ｃ  ２、ＣＬＫ２、ＣＳＫ、ＤＤＲ２、ＤＹＲＫ１Ａ／２／３、ＥＦ２Ｋ、ＥＰＨ−Ａ２／Ａ４／Ｂ１／Ｂ２／Ｂ３／Ｂ４、ＥＩＦ２Ａ  ３、Ｓｍａｄ２、Ｓｍａｄ３、Ｓｍａｄ４、Ｓｍａｄ７、ｐ５３、ｐ２１  Ｃｉｐｌ、ＰＡＸ、Ｆｙｎ、ＣＡＳ、Ｃ３Ｇ、ＳＯＳ、Ｔａｌ、Ｒａｐｔｏｒ、ＲＡＣＫ−１、ＣＲＫ、Ｒａｐｌ、Ｒａｃ、ＫＲａｓ、ＮＲａｓ、ＨＲａｓ、ＧＲＢ２、ＦＡＫ、ＰＩ３Ｋ、ｓｐｒｅｄ、Ｓｐｒｙ、ｍＴＯＲ、ＭＰＫ、ＬＫＢｌ、ＰＡＫ１／２／４／５／６、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＹＫ２、Ｓｒｃ、ＳＲＰＫ１、ＰＬＣ、ＰＫＣ、ＰＫＡ、ＰＫＢアルファ／ベータ、ＰＫＣアルファ／ガンマ／ゼータ、ＰＫＤ、ＰＬＫｌ、ＰＲＡＫ、ＰＲＫ２、ＲＩＰＫ２、ＷＡＶＥ−２、ＴＳＣ２、ＤＡＰＫｌ、ＢＡＤ、ＩＭＰ、Ｃ−ＴＡＫ１、ＴＡＫｌ、ＴＡＯｌ、ＴＢＫ１、ＴＥＳＫ１、ＴＧＦＢＲ１、ＴＩＥ２、ＴＬＫ１、ＴｒｋＡ、ＴＳＳＫ１、ＴＴＢＫ１／２、ＴＴＫ、Ｔｐｌ２／ｃｏｔｌ、ＭＥＫ１、ＭＥＫ２、ＰＬＤＬ  Ｅｒｋｌ、Ｅｒｋ２、Ｅｒｋ５、Ｅｒｋ８、ｐ９０ＲＳＫ、ＰＥＡ−  １５、ＳＲＦ、ｐ２７  ＫＩＰ１、ＴＩＦ  ｌａ、ＨＭＧＮ１、ＥＲ８１、ＭＫＰ−３、ｃ−Ｆｏｓ、ＦＧＦ−Ｒ１、ＧＣＫ、ＧＳＫ３ベータ、ＨＥＲ４、ＨＩＰＫ１／２／３／、ＩＧＦ−１Ｒ、ｃｄｃ２５、ＵＢＦ、ＬＡＭＴＯＲ２、Ｓｔａｔｌ、ＳｔａＯ、ＣＲＥＢ、ＪＡＫ、Ｓｒｃ、ＰＴＥＮ、ＮＦ−カッパＢ、ＨＥＣＴＨ９、Ｂａｘ、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、Ａｐａｆ−１、Ｃｙｔｏ  ｃ、ＢＣＬ−２、Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｓｍａｃ、ＸＩＡＰ、カスパーゼ−９、カスパーゼ−３、カスパーゼ−６、カスパーゼ−７、ＣＤＣ３７、ＴＡＢ、ＩＫＫ、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、Ｒ１Ｐ１、ＦＬＩＰ、ＴＡＫｌ、ＪＮＫｌ／２／３、Ｌｃｋ、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆ、Ｃ−Ｒａｆ、ＭＯＳ、ＭＬＫｌ／３、ＭＮ  ｌ／２、ＭＳＫｌ、ＭＳＴ２／３／４、ＭＰＳＫ１、ＭＥＫＫｌ、ＭＥ  Ｋ４、ＭＥＬ、ＡＳＫ１、ＭＩＮＫ１、ＭＫＫ  １／２／３／４／６／７、ＮＥ  ２ａ／６／７、ＮＵＡＫ１、ＯＳＲ１、ＳＡＰ、ＳＴＫ３３、Ｓｙｋ、Ｌｙｎ、ＰＤＫ１、ＰＨＫ、ＰＩＭ  １／２／３、アタキシン−１、ｍＴＯＲＣｌ、ＭＤＭ２、ｐ２１  Ｗａｆｌ、サイクリンＤｌ、Ｌａｍｌｎ  Ａ、Ｔｐｌ２、Ｍｙｃ、カテニン、Ｗｎｔ、ＩＫＫ−ベータ、ＩＫＫ−ガンマ、ＩＫＫ−アルファ、ＩＫＫ−エプシロン、ＥＬＫ、ｐ６５ＲｅｌＡ、ＩＲＡＫＩ、ＩＲＡ  ２、ＩＲＡＫ４、ＩＲＲ、ＦＡＤＤ、ＴＲＡＦ６、ＴＲＡＦ３、ＭＫＫ３、ＭＫＫ６、ＲＯＣＫ２、ＲＳＫ１／２、ＳＧＫ  １、ＳｍＭＬＣＫ、ＳＩＫ２／３、ＵＬＫ１／２、ＶＥＧＦＲ１、ＷＮＫ  ｌ、ＹＥＳ１、ＺＡＰ７０、ＭＡＰ４Ｋ３、ＭＡＰ４Ｋ５、ＭＡＰＫｌｂ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２  Ｋ３、ｐ３８アルファ／ベータ／デルタ／ガンマＭＡＰＫ、オーロラＡ、オーロラＢ、オーロラＣ、ＭＣＡＫ、Ｃｌｉｐ、ＭＡＰＫＡＰＫ、ＦＡＫ、ＭＡＲＫ  １／２／３／４、Ｍｕｃｌ、ＳＨＣ、ＣＸＣＲ４、Ｇａｐ−１、Ｍｙｃ、ベータ−カテニン／ＴＣＦ、Ｃｂｌ、ＢＲＭ、Ｍｃｌ１、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＡＲ、ＲＡＳ、ＥｒｂＢ３、ＥＧＦＲ、ＩＲＥ１、ＨＰＫ１、ＲＩＰＫ２、及びＥｒａ（これらの全てのバリアント、変異、スプライスバリアント、インデル、及び融合体を含む）に結合する基である、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３６９】
８．ＰＢが、熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）阻害剤、キナーゼ及びホスファターゼ阻害剤、ＭＤＭ２阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ヒトリジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、免疫抑制化合物、ならびにヒトＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質、アリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）、ＲＥＦ受容体キナーゼ、ＦＫＢＰ、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、エストロゲン受容体（ＥＲ）、甲状腺ホルモン受容体、ＨＩＶプロテアーゼ、ＨＩＶインテグラーゼ、ＨＣＶプロテアーゼ、及びアシル−タンパク質チオエステラーゼ−１及び−２（ＡＰＴ１及びＡＰＴ２）を標的とする化合物からなる群から選択される、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３７０】
９．ＰＢが、エストロゲン受容体アルファ（ＥＲα）を標的とする化合物である、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３７１】
１０．Ａｂが、表４〜１２、例えば、表４、表５、表６、表７、表８、表９、表１０、表１１、または表１２から選択される、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３７２】
１１．Ａｂが、システイン操作された抗体またはそのバリアントである、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３７３】
１２．Ａｂが、ＤＬＬ３、ＥＤＡＲ、ＣＬＬ１；ＢＭＰＲ１Ｂ；Ｅ１６；ＳＴＥＡＰ１；０７７２Ｐ；ＭＰＦ；ＮａＰｉ２ｂ；Ｓｅｍａ  ５ｂ；ＰＳＣＡ  ｈｌｇ；ＥＴＢＲ；ＭＳＧ７８３；ＳＴＥＡＰ２；ＴｒｐＭ４；ＣＲＩＰＴＯ；ＣＤ２１；ＣＤ７９ｂ；ＦｃＲＨ２；Ｂ７−Ｈ４；ＨＥＲ２；ＮＣＡ；ＭＤＰ；ＩＬ２０Ｒα；ブレビカン；ＥｐｈＢ２Ｒ；ＡＳＬＧ６５９；ＰＳＣＡ；ＧＥＤＡ；ＢＡＦＦ−Ｒ；ＣＤ２２；ＣＤ７９ａ；ＣＸＣＲ５；ＨＬＡ−ＤＯＢ；Ｐ２Ｘ５；ＣＤ７２；ＬＹ６４；ＦｃＲＨ１；ＩＲＴＡ２；ＴＥＮＢ２；ＰＭＥＬ１７；ＴＭＥＦＦ１；ＧＤＮＦ−Ｒａ１；Ｌｙ６Ｅ；ＴＭＥＭ４６；Ｌｙ６Ｇ６Ｄ；ＬＧＲ５；ＲＥＴ；ＬＹ６Ｋ；ＧＰＲ１９；ＧＰＲ５４；ＡＳＰＨＤ１；チロシナーゼ；ＴＭＥＭ１１８；ＧＰＲ１７２Ａ；ＭＵＣ１６及びＣＤ３３からなる群から選択されるポリペプチドのうちの１つ以上に結合する、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３７４】
１３．Ａｂが、ＣＬＬ１、ＳＴＥＡＰ１、ＮａＰｉ２ｂ、ＳＴＥＡＰ２、ＴｒｐＭ４、ＣＲＩＰＴＯ、ＣＤ２１、ＣＤ７９ｂ、ＦｃＲＨ２、Ｂ７−Ｈ４、ＨＥＲ２、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７２、ＬＹ６４、Ｌｙ６Ｅ、ＭＵＣ１６、及びＣＤ３３からなる群から選択されるポリペプチドのうちの１つ以上に結合する、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３７５】
１４．Ａｂが、Ｂ７−Ｈ４、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ２２、及びＮａＰｉ２ｂからなる群から選択されるポリペプチドのうちの１つ以上に結合する抗体である、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３７６】
１５．抗体が、ＨＥＲ２またはＢ７−Ｈ４に結合する、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３７７】
１６．抗体が、Ｈｅｒ２に結合する、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３７８】
１７．Ｌ１が、ペプチド模倣リンカーである、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３７９】
１８．Ｌ１が、以下の式によって表されるペプチド模倣リンカーであり、
−Ｓｔｒ−（ＰＭ）−Ｓｐ−
式中、
Ｓｔｒは、Ａｂに共有結合したストレッチャー単位であり、
Ｓｐは、ＰＲＯＴＡＣ部分に共有結合した結合またはスペーサ単位であり、
ＰＭは、以下からなる群から選択される非ペプチド化学部分であり、
【化３１】
2019522633.tif 000081
Ｗは、−ＮＨ−ヘテロシクロアルキル−またはヘテロシクロアルキルであり、
Ｙは、ヘテロアリール、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ６アルキレン、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−ＮＨ２、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−ＮＨ−ＣＨ３、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｎ−（ＣＨ３）２、Ｃ１−Ｃ６アルケニル、またはＣ１−Ｃ６アルキレニルであり、
各Ｒ１は独立して、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、または（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３及びＲ２は各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、アリールアルキル、もしくはヘテロアリールアルキルであるか、またはＲ３及びＲ２は一緒になってＣ３−Ｃ７シクロアルキルを形成してもよく、
Ｒ４及びＲ５は各々独立して、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＯＣＨ２−であるか、またはＲ４及びＲ５は一緒になってＣ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成してもよい、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３８０】
１９．Ｙが、ヘテロアリールであり、Ｒ４及びＲ５が一緒になってシクロブチル環を形成する、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３８１】
２０．Ｙが、以下からなる群から選択される部分である、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【化３２】
2019522633.tif 000082
【０３８２】
２１．Ｓｔｒは、以下の式によって表される化学構造であり、
【化３３】
2019522633.tif 000083
式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）Ｏ−、及びＣ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）−Ｃ２−Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ７ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリールアリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、及びヘテロアリールからなる群から選択される１〜５個の置換基で置換されてもよく、各Ｒａは独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、Ｓｐは、−Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−Ａｒ−Ｒｂ−であり、Ａｒは、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−である、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３８３】
２２．Ｓｔｒが、以下の式を有し、
【化３４】
2019522633.tif 000084
式中、Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−、Ｎ（Ｒｃ）−（Ｃ２−Ｃ６アルキレン）−Ｎ（Ｒｃ）、及びＮ（Ｒｃ）−（Ｃ２−Ｃ６アルキレン）から選択され、各Ｒｃは独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｓｐは、−Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−Ａｒ−Ｒｂ−であり、Ａｒは、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−である、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３８４】
２３．Ｌ１が、以下の式を有し、
【化３５】
2019522633.tif 000085
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルケニル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３及びＲ２は各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキルであり、Ｓｔｒ及びＳｐは、本明細書に定義される通りである、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３８５】
２４．Ｌ１が、以下の式を有し、
【化３６】
2019522633.tif 000086
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、Ｓｔｒ及びＳｐは、本明細書に定義される通りであり、
Ｒ４及びＲ５は一緒になってＣ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成する、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３８６】
２５．Ｌ１が、以下の式を有し、
【化３７】
2019522633.tif 000087
Ｓｔｒ及びＳｐは、本明細書に定義される通りであり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２である、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３８７】
２６．以下の式を有し、
【化３８】
2019522633.tif 000088
式中、
Ｓｔｒは、以下の式によって表される化学構造であり、
【化３９】
2019522633.tif 000089
Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン及びＣ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）−Ｃ２−Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ７ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、及びヘテロアリールからなる群から選択される１〜５個の置換基によって置換されてもよく、各Ｒａは独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ａｂ及びＳｐは、本明細書に定義される通りであり、
ｐは、１、２、３、または４である、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３８８】
２７．以下の式を有し、
【化４０】
2019522633.tif 000090
式中、
Ｓｔｒは、以下の式によって表される化学構造であり、
【化４１】
2019522633.tif 000091
Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン及びＣ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）−Ｃ２−Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ７ヘテロシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、及びヘテロアリールからなる群から選択される１〜５個の置換基によって置換されてもよく、各Ｒａは独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ａｂ、Ｄ、及びＳｐは、本明細書に定義される通りであり、
ｐは、１、２、３、または４である、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３８９】
２８．Ｙが、ヘテロアリール、アリール、またはアルケニルであり、Ｒ６が、Ｃ１−Ｃ１０アルキレンである、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３９０】
２９．Ｙが、以下である、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【化４２】
2019522633.tif 000092
【０３９１】
３０．Ｙが、以下である、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【化４３】
2019522633.tif 000093
【０３９２】
３１．Ｙが、以下である、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【化４４】
2019522633.tif 000094
【０３９３】
３２．Ｓｔｒは、以下の式によって表される化学構造であり、
【化４５】
2019522633.tif 000095
Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ６アルキレンであり、
Ｓｐは、−Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−Ａｒ−Ｒｂ−であり、Ａｒは、アリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ３アルキレン）Ｏ−である、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３９４】
３３．以下の式を有し、
【化４６】
2019522633.tif 000096
式中、
Ａｂ、Ｄ、Ｒ２、及びＲ３は、本明細書に定義される通りであり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
ｐは、１、２、３、または４である、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３９５】
３４．以下の式を有し、
【化４７】
2019522633.tif 000097
式中、
Ａｂ及びＤは、本明細書に定義される通りであり、
ｐは、１、２、３、または４であり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ４及びＲ５は各々独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、アルキルは、非置換であるか、またはＲ４及びＲ５は、それが結合する炭素と一緒になってシクロブチルなどのＣ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成することができる、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３９６】
３５．Ｌ１が、以下の式を有し、
【化４８】
2019522633.tif 000098
式中、Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ及びＣ１−Ｃ６アルキルから選択されるか、またはＲ１及びＲ２は、３、４、５、もしくは６員のシクロアルキルもしくはヘテロシクリル基を形成する、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３９７】
３６．ＰＡＣ１、ＰＡＣ２、ＰＡＣ３、ＰＡＣ４、及びＰＡＣ５からなる群から選択される、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３９８】
３７．抗体当たりのＰＲＯＴＡＣの比（「ＰＡＲ」）が、約１．５〜約３である、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０３９９】
３８．抗体当たりのＰＲＯＴＡＣの非（「ＰＡＲ」）が、約２である、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲート。
【０４００】
３９．治療を必要とするヒトにおける疾患を治療する方法であって、有効量の任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲートをヒトに投与することを含む、方法。
【０４０１】
４０．任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲートと、薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物。
【０４０２】
４１．治療を必要とするヒトにおける疾患を治療する方法であって、有効量の実施形態４０に記載の薬学的組成物を該ヒトに投与することを含む、方法。
【０４０３】
４２．任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲートを用いて疾患を治療する方法であって、該疾患が、良性または悪性の固形腫瘍及び血液疾患、ならびに神経、膠細胞、星細胞、視床下部、腺、マクロファージ、上皮、間質、胞胚腔、炎症、血管新生、免疫、及び自己免疫状態を伴う障害を含む、過剰増殖性障害である、方法。
【０４０４】
４３．任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲートを用いて疾患を治療する方法であって、該疾患が、癌である、方法。
【０４０５】
４４．任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲートを用いて疾患を治療する方法であって、該癌が、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、白血病、リンパ系腫瘍、扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｎｃｅｒ）（例えば、扁平上皮癌（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｎｃｅｒ））、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、及び肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸癌を含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｃａｎｃｅｒ）または腎臓癌（ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、ならびに頭頚部癌からなる群から選択される、方法。
【０４０６】
４５．癌が、ＨＥＲ２陽性の癌である、実施形態４３に記載の方法。
【０４０７】
４６．ＨＥＲ２陽性の癌が、乳癌または胃癌である、実施形態４５に記載の方法。
【０４０８】
４７．任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲートを用いて疾患を治療する方法であって、該疾患が、自己免疫疾患である、方法。
【０４０９】
４８．該自己免疫疾患が、リウマチ学的障害（例えば、リウマチ性関節炎、シェーグレン症候群、強皮症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及びループス腎炎などのループス、多発性筋炎／皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、抗リン脂質抗体症候群、及び乾癬性関節炎など）、骨関節炎、自己免疫性胃腸及び肝臓障害（例えば、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎及びクローン病）、自己免疫性胃炎及び悪性貧血、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、及びセリアック病）など、血管炎（例えば、チャーグ・ストラウス症候群、ウェゲナー肉芽腫症、及び多発動脈炎を含むＡＮＣＡ関連血管炎など）、自己免疫性神経障害（例えば、多発性硬化症、眼球クローヌス・ミオクローヌス運動失調、重症筋無力症、視神経脊髄炎、パーキンソン病、アルツハイマー病、及び自己免疫性多発神経炎など）、腎障害（例えば、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、及びベルジェ病など）、自己免疫性皮膚科学的障害（例えば、乾癬、じんま疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）、じんましん（ｈｉｖｅｓ）、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、及び皮膚エリテマトーデスなど）、血液障害（例えば、血小板減少性紫斑病、血栓性血小板減少性紫斑病、輸血後紫斑病、及び自己免疫性溶血性貧血など）、アテローム性動脈硬化、ブドウ膜炎、自己免疫性聴覚疾患（例えば、内耳疾患及び聴覚喪失など）、ベーチェット病、レイノー症候群、臓器移植、ならびに自己免疫性内分泌障害（例えば、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）などの糖尿病関連自己免疫性疾患、アジソン病、及び自己免疫性甲状腺疾患（例えば、グレーブス病及び甲状腺炎）など）からなる群から選択される、実施形態４７に記載の方法。
【０４１０】
４９．該自己免疫疾患が、リウマチ性関節炎、潰瘍性大腸炎、ＡＮＣＡ関連血管炎、ループス、多発性硬化症、シェーグレン症候群、グレーブス病、ＩＤＤＭ、悪性貧血、甲状腺炎、及び糸球体腎炎からなる群から選択される、実施形態４７に記載の方法。
【０４１１】
５０．哺乳動物の癌の治療のための医薬品の製造における、任意の上記の実施形態に記載のコンジュゲートの使用。
【０４１２】
５１．ＰＡＣを調製する方法であって、リンカーＬ１−ＰＲＯＴＡＣを抗体と接触させることを含む、方法。
【０４１３】
ＩＶ．合成経路
本明細書に記載されるＰＡＣ及び化合物は、特に、本明細書に含まれる説明を考慮して、化学分野で周知であるもの、及びＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＩＩ，Ｅｄｉｔｏｒｓ  Ｋａｔｒｉｔｚｋｙ  ａｎｄ  Ｒｅｅｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９９７、例えば第３巻；Ｌｉｅｂｉｇｓ  Ａｎｎａｌｅｎ  ｄｅｒ  Ｃｈｅｍｉｅ，（９）：１９１０−１６，（１９８５）；Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ，４１：１０５２−６０，（１９５８）；Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌ−Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇ，４０（１２）：１３２８−３１，（１９９０）に記載される他の複素環のためのものと類似のプロセスを含む合成経路によって合成することができる。開始材料は、一般に、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）などの商業的な供給源から入手可能であるか、または当業者に周知である方法を使用して容易に調製される（例えば、Ｌｏｕｉｓ  Ｆ．Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｍａｒｙ  Ｆｉｅｓｅｒ，Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｖ．１−２３，Ｗｉｌｅｙ，Ｎ．Ｙ．（１９６７−２００６ｅｄ．）、またはその付録も（これもまたＢｅｉｌｓｔｅｉｎオンラインデータベースを介して入手可能である）を含む、Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎｓ  Ｈａｎｄｂｕｃｈ  ｄｅｒ  ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｅ，４，Ａｕｆｌ．ｅｄ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎに一般に記載される方法によって調製される）。
【０４１４】
本明細書に記載されるＰＡＣ及び基の合成に有用な合成化学変換及び保護基の方法論（保護及び脱保護）、ならびに必要な試薬を呼び中間体は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８９）；Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄＥｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９９）；及びＬ．Ｐａｑｕｅｔｔｅ，ｅｄ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９５）、ならびにこれらの後続の版に記載されるものが含まれる。ＰＡＣ及び化合物の調製において、中間体の遠隔官能基（例えば、一級または二級アミン）の保護が必要となる場合がある。かかる保護の必要性は、遠隔官能基の性質及び調製方法の条件によって異なることになる。好適なアミノ保護基には、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚまたはＣＢＺ）、及び９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が含まれる。かかる保護の必要性は、当業者によって容易に判定される保護基及びそれらの使用の概要については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１を参照されたい。
【０４１５】
一般手法及び実施例は、本明細書に記載されるＰＡＣ及び化合物の調製のための例示的な方法を提供する。当業者であれば、ＰＡＣ及び化合物を合成するために他の合成経路が使用され得ることを理解するであろう。スキーム、一般手法、及び実施例において具体的な開始材料及び試薬が描写され、考察されるものの、多様な誘導体及び／または反応条件を提供するために他の開始材料及び試薬で容易に置き換えることができる。さらに、記載される方法によって調製される例示的な化合物の多くは、当業者に周知である従来の化学を使用して、本開示を考慮してさらに修飾されることができる。
【０４１６】
一般に、ＰＡＣは、ＷＯ２０１３／０５５９８７；ＷＯ２０１５／０２３３５５；ＷＯ２０１０／００９１２４；ＷＯ２０１５／０９５２２７の手法に従ってＰＲＯＴＡＣをＬ１リンカー試薬と接続し、それを、本明細書に記載される抗体またはバリアント、変異体、スプライスバリアント、インデル、及び融合体（システイン操作された抗体を含む）のいずれかとコンジュゲートすることによって調製され得る。代替的には、ＰＡＣは、最初に抗体またはリアント、変異体、スプライスバリアント、インデル、及び融合体（システイン操作された抗体を含む）をＬ１リンカー試薬と接続し、それを任意のＰＲＯＴＡＣとコンジュゲートすることによって調製され得る。
【０４１７】
以下の合成経路は、ＰＡＣ及びその構成要素を調製する例示的な方法を記載する。ＰＡＣ及びその構成要素を調製するための他の合成経路は、本明細書の他の箇所に開示される。
【０４１８】
１．リンカーＬ１
リンカーＬ１に関して、スキーム１〜４は、抗体Ａｂへのジスルフィド結合のための例示的なリンカーＬ１への合成経路を描写する。Ａｂは、ジスルフィド結合を通してＬ１と接続し、ＰＲＯＴＡＣは、ＰＲＯＴＡＣ上の任意の利用可能な結合を通してＬ１と接続している。
【化４９】
2019522633.tif 000099
【０４１９】
スキーム１を参照すると、１，２−ジ（ピリジン−２−イル）ジスルファン及び２−メルカプトエタノールを室温でピリジン及びメタノール中で反応させて、２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エタノールを得た。トリエチルアミン及びアセトニトリル中の４−ニトロフェニルカルボノクロリデートのアシル化により、４−ニトロフェニル２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エチルカルボネート９を得た。
【化５０】
2019522633.tif 000100
【０４２０】
スキーム２を参照すると、無水ＤＭＦ／ＭｅＯＨ（２５ｍＬ／２５ｍＬ）中の１，２−ビス（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファン１０（１．０ｇ、３．２２ｍｍｏｌ）の混合物に、ＨＯＡｃ（０．１ｍＬ）、続いて２−アミノエタンチオールヒドロクロリド１１（１８３ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した後、真空下で濃縮して、溶媒を除去し、残渣をＤＣＭ（３０ｍＬ×４）で洗浄して、２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）エタンアミンヒドロクロリド１２を淡い黄色の固体（３００ｍｇ、６９．６％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．２８（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．５６（ｄｄ，Ｊ＝８．８、２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．２４（ｓ、４Ｈ）、８．０３（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．１５−３．１３（ｍ、２Ｈ）、３．０８−３．０６（ｍ、２Ｈ）。
【化５１】
2019522633.tif 000101
【０４２１】
スキーム３を参照すると、無水ＤＣＭ／ＣＨ３ＯＨ（２５０ｍＬ／２５０ｍＬ）中の１，２−ビス（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファン１０（９．６ｇ、３０．９７ｍｍｏｌ）及び２−メルカプトエタノール（１．２１ｇ、１５．４９ｍｍｏｌ）の溶液を、室温で２４時間、Ｎ２下で撹拌した。混合物を真空下で濃縮した後、残渣をＤＣＭ（３００ｍＬ）で希釈した。ＭｎＯ２（１０ｇ）を添加し、混合物を室温でさらに０．５時間撹拌した。シリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１００／１から１００／１）によって混合物を精製して、２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）エタノール１３（２．２ｇ、６１．１％）を茶色の油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｍｈｚ、ＣＤＣｌ３）δ９．３３（ｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ、１Ｈ）、８．３８−８．３５（ｄｄ、Ｊ＝９．２、２．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．６７（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．１０（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．８１−３．７６（ｑ、２Ｈ）、３．０１（ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）。
【０４２２】
無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の１３（５００ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（８３４ｍｇ、６．４５ｍｍｏｌ）、続いてＰＮＰカルボネート（ビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（１．３１ｇ、４．３１ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を室温で４時間撹拌し、ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（ＦＡ）によって混合物を精製して、４−ニトロフェニル２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）エチルカルボネート１４（２７０ｍｇ、３３．１％）を淡い茶色の油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｍｈｚ、ＣＤＣｌ３）δ９．３０（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．４３−８．４０（ｄｄ、Ｊ＝８．８、２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．３０−８．２８（ｍ、２Ｈ）、７．８７（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．３９−７．３７（ｍ、２Ｈ）、４．５６（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．２１（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）。
【化５２】
2019522633.tif 000102
【０４２３】
スキーム４を参照すると、塩化スルフリル（ＤＣＭ中、２．３５ｍＬの１．０Ｍ溶液、２．３５ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下で、乾燥ＤＣＭ（７．５ｍＬ）中の５−ニトロピリジン−２−チオール（３３４ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に０℃（氷／アセトン）で滴下した。反応混合物は、黄色の懸濁液から黄色の溶液へと変化し、室温まで加温し、次いで２時間撹拌し、その後、真空中での蒸発により溶媒を除去して、黄色の固体を得た。固体をＤＣＭ（１５ｍＬ）中に再溶解し、アルゴン雰囲気下で、乾燥ＤＣＭ（７．５ｍＬ）中の（Ｒ）−２−メルカプトプロパン−１−オール（２１３ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ）で０℃で液滴処理した。反応混合物を室温まで加温し、２０時間撹拌し、その時点で、ＬＣ／ＭＳによる分析は、保持時間１．４１分（ＥＳ＋）ｍ／ｚ２４７（［Ｍ＋Ｈ］＋．，約１００％の相対強度）で相当量の生成物の形成を明らかにした。析出物を濾過により除去し、露駅を真空中で蒸発させて、オレンジ色の固体を得て、それをＨ２Ｏ（２０ｍＬ）で処理し、水酸化アンモニウム溶液で塩基性にした。混合物をＤＣＭ（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過し、真空中で蒸発させて、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（１％増分でのグラジエント溶離：１００％ＤＣＭから９８：２ｖ／ｖ  ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）による精製によって、（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロパン−１−オール１５を油状物（１１１ｍｇ、２１％収率）として得た。
【０４２４】
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のトリホスゲン、Ｃｌ３ＣＯＣＯＯＣＣｌ３、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、ＣＡＳ登録番号３２３１５−１０−９（２４１ｍｇ、０．８１２ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロパン−１−オール１５（５００ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ）及びピリジン（１５３ｍｇ、１．９３ｍｍｏｌ）の溶液に２０℃で滴下した。反応混合物を２０℃で３０分間撹拌した後、それを濃縮し、さらなる精製を伴わずに（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピルカルボノクロリデート１６を直接使用して、カルボノクロリデート基を通してＰＲＯＴＡＣ上の任意の利用可能な基を共有結合させることができる。
【０４２５】
２．システイン操作された抗体
還元及び再酸化によるコンジュゲーションのためのシステイン操作された抗体に関して、それらは一般に以下のように調製することができる。軽鎖アミノ酸は、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，（１９９１）５ｔｈ  Ｅｄ．，ＵＳ  Ｄｅｐｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）に従って付番される。重鎖アミノ酸は、Ｋａｂａｔシステムとして示されている場合を除いて、ＥＵ付番システム（Ｅｄｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ（１９６９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ｏｆ  Ｓｃｉ．６３（１）：７８−８５）に従って付番される。一文字のアミノ酸の略語が使用される。
【０４２６】
ＣＨＯ細胞中で発現された全長のシステイン操作されたモノクローナル抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体）は、システイン付加物（シスチン）を有するか、または細胞培養条件に起因して操作されたシステイン上でグルタチオン付加されている。そのままでは、ＣＨＯ細胞から精製されたＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、Ｃｙｓ反応性リンカーＬ１−ＰＲＯＴＡＣ中間体とコンジュゲートすることができない。システイン操作された抗体は、本明細書に記載されるリンカー−ＰＲＯＴＡＣ中間体とのコンジュゲーションのために、ＤＴＴなどの還元剤（Ｃｌｅｌａｎｄの試薬、ジチオトレイトール）、またはＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンヒドロクロリド；Ｇｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｖｏｌ２７３：７３−８０；Ｓｏｌｔｅｃ  Ｖｅｎｔｕｒｅｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）での処理、続いて、デヒドロアスコルビン酸などの穏和な酸化剤での鎖間ジスルフィド結合の再形成（再酸化）によって反応性にされてもよい。ＣＨＯ細胞中で発現された全長のシステイン操作されたモノクローナル抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体）（Ｇｏｍｅｚ  ｅｔ  ａｌ（２０１０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇ．１０５（４）：７４８−７６０；Ｇｏｍｅｚ  ｅｔ  ａｌ（２０１０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２６：１４３８−１４４５）を、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）中、２ｍＭ  ＥＤＴＡと共に室温で、例えば、約５０倍過剰量のＤＴＴを用いて一晩還元し、  それによりＣｙｓ及びグルタチオン付加物を除去し、ならびに抗体中の鎖間ジスルフィド結合を還元した。ＰＬＲＰ−Ｓカラムを使用した逆相ＬＣＭＳによって付加物の除去を監視した。還元されたＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体を希釈し、少なくとも４回容量の１０ｍＭコハク酸ナトリウム（ｐＨ５）緩衝液への添加によって酸性にした。
【０４２７】
代替的には、抗体を希釈し、少なくとも４回容量の１０ｍＭコハク酸塩（ｐＨ５）の添加、及び１０％酢酸での滴定によって、ｐＨがおよそ５になるまで酸性にした。ｐＨが低下し、希釈されたＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体をその後、ＨｉＴｒａｐ  Ｓカチオン交換カラムに装てんし、数回のカラム容量の１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５）で洗浄し、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭ塩化ナトリウムで溶出した。再酸化を行うことによって、親Ｍａｂ中に存在するシステイン残基間でジスルフィド結合が再確立された。上記の溶出した還元ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体を１５Ｘデヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡＡ）で約３時間、代替的には、２００ｎＭ〜２ｍＭ  の硫酸銅水溶液（ＣｕＳＯ４）で室温で一晩処理した。当該技術分野で既知の他の酸化剤（ｏｘｉｄａｎｔ）、すなわち酸化剤（ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、及び酸化条件を使用してもよい。周囲空気の酸化もまた有効であり得る。この穏和な部分的再酸化ステップは、高い忠実度で鎖間ジスルフィドを効果的に形成する。ＰＬＲＰ−Ｓ（登録商標）カラムを使用した逆相ＬＣＭＳによって再酸化を監視した。再酸化されたＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体を、ｐＨおよそ５に達するように上記のようにコハク酸緩衝液で希釈し、溶出を１０ｍＭコハク酸塩（ｐＨ５）、１０ｍＭコハク酸塩中の３００ｍＭ塩化ナトリウム（緩衝液Ｂ）で行ったことを除き、上記のようにＳカラム上での精製を行った。溶出されたＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体に、２ｍＭの最終濃度までＥＤＴＡを添加し、必要に応じて濃縮して、５ｍｇ／ｍＬ超の最終濃度を達成した。コンジュゲーションの準備が整った得られたＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体を、一定分量で−２０℃または−８０℃で保管した。６２００シリーズＴＯＦまたはＱＴＯＦ  Ａｇｉｌｅｎｔ  ＬＣ／ＭＳ上で液体クロマトグラフィー／質量分析を行った。ＰＲＬＰ−Ｓ（登録商標）、１０００Ａ、小口径カラム（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓｈｒｏｐｓｈｉｒｅ，ＵＫ）上で試料をクロマトグラフし、８０℃まで加熱した。３０〜４０％のＢ（溶媒Ａ：水中、０．０５％のＴＦＡ、溶媒Ｂ：アセトニトリル中、０．０４％のＴＦＡ）の直線勾配を使用し、エレクトロスプレー源を使用して溶離液直接イオン化した。データを収集し、ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ）によりデコンボリューションした。ＬＣ／ＭＳ分析の前に、抗体またはコンジュゲート（５０マイクログラム）を、３７℃でＰＮＧａｓｅ  Ｆ（２単位／ｍｌ；ＰＲＯｚｙｍｅ、Ｓａｎ  Ｌｅａｎｄｒｏ，ＣＡ）で２時間処理して、Ｎ結合型炭水化物を除去した。
【０４２８】
代替的には、抗体またはコンジュゲートをＬｙｓＣ（５０μｇ（マイクログラム）の抗体またはコンジュゲート当たり、０．２５μｇ）で１５分間、３７℃で部分的に消化して、ＬＣＭＳによる分析のためのＦａｂ及びＦｃ断片を得た。デコンボリューションされたＬＣＭＳスペクトル中のピークを割り当て、定量化した。認められた全てのピークに対する、ＰＲＯＴＡＣコンジュゲート抗体に対応するピーク（複数可）の強度の比を計算することによって、ＰＲＯＴＡＣ対抗体比（ＰＡＲ）を計算した。
【０４２９】
３．抗体へのリンカーＬ１−ＰＲＯＴＡＣ基のコンジュゲーション
リンカーＬ１−ＰＲＯＴＡＣ化合物を抗体にコンジュゲートする１つの方法では、上記の還元及び再酸化手順の後に、１０ｍＭコハク酸塩（ｐＨ５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ中のシステイン操作された抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体）を、１Ｍ  ＴｒｉｓでｐＨ７．５〜８．５になるようにｐＨ調節する。チオール反応性（例えば、マレイミドまたは４−ニトロピリジジスルフィド）を有する、過剰量の約３モル〜２０当量のリンカー−ＰＲＯＴＡＣ中間体をＤＭＦ、ＤＭＡ、またはプロピレングリコール中に溶解し、還元、再酸化、及びｐＨ調節された抗体に添加する。反応を室温または３７℃でインキュベートし、反応混合物のＬＣ−ＭＳ分析によって判定される完了まで監視する（１〜約２４時間）。反応が完了すると、コンジュゲートを、残りの未反応リンカー−ＰＲＯＴＡＣ中間体及び凝集タンパク質（有意なレベルで存在する場合）を除去することを目的として、いくつかの方法のうちの１つまたは任意の組み合わせによって精製する。例えば、最終ｐＨがおよそ５．５になるまでコンジュゲートを１０ｍＭ酢酸ヒスチジン（ｐＨ５．５）で希釈し、Ａｋｔａ精製システムに接続したＨｉＴｒａｐ  Ｓカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）またはＳマキシスピンカラム（Ｐｉｅｒｃｅ）のいずれかを使用してＳカチオン交換クロマトグラフィーによって精製してもよい。代替的には、コンジュゲートを、Ａｋｔａ精製システムに接続したＳ２００カラムまたはＺｅｂａスピンカラムを使用してゲル濾過クロマトグラフィーによって精製してもよい。代替的には、透析を使用してもよい。ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体ＰＲＯＴＡＣコンジュゲートを、ゲル濾過または透析のいずれかを使用して、２４０ｍＭのスクロースで２０ｍＭ  Ｈｉｓ／酢酸（ｐＨ５）内に製剤化した。精製されたコンジュゲートを遠心分離限外濾過によって濃縮し、滅菌状態下で０．２μｍのフィルターを通して濾過し、保管のために冷凍する。タンパク質濃度を判定するためのＢＣＡアッセイ、凝集分析のための分析的ＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィー）、及びＰＡＲを計算するためのリジンＣエンドペプチダーゼ（ＬｙｓＣ）での処理後のＬＣ−ＭＳによってＰＡＣを特性評価した。
【０４３０】
コンジュゲートのサイズ排除クロマトグラフィーは、０．２５ｍＭ塩化カリウム及び１５％ＩＰＡと共に、０．７５ｍＬ／分の流速で０．２Ｍリン酸カリウム（ｐＨ６．２）中のＳｈｏｄｅｘ  ＫＷ８０２．５カラムを使用して行われる。２８０ｎｍでの溶出したピークエリア吸光度の積算によって、コンジュゲートの凝集状態を判定した。
【０４３１】
ＬＣ−ＭＳ分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＱＴＯＦ６５２０ＥＳＩ器具を使用してＰＡＣ上で行われてもよい。例として、ＰＡＲを、Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）中１：５００ｗ／ｗのエンドプロテアーゼＬｙｓ  Ｃ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で３０分間、３７℃で処理した。得られた切断断片を、８０℃に加熱した１０００Å（オングストローム）、８μｍ（ミクロン）のＰＬＲＰ−Ｓ（高架橋ポリスチレン）カラム上に装てんし、５分間で３０％Ｂから４０％Ｂへのグラジエントで溶出した。移動相Ａは、０．０５％ＴＦＡを伴うＨ２Ｏであり、移動相Ｂは、０．０４％ＴＦＡを伴うアセトニトリルであった。流速は、０．５ｍｌ／分であった。エレクトロスプレーイオン化及びＭＳ分析の前に、タンパク質溶出を２８０ｎｍでのＵＶ吸光度検出によって監視した。非コンジュゲートＦｃ断片、残余非コンジュゲートＦａｂ、及びドラッグ化Ｆａｂのクロマトグラフ分離を通常通りに得た。得られたｍ／ｚスペクトルを、Ｍａｓｓ  Ｈｕｎｔｅｒ（商標）ソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してデコンボリューションして、抗体断片の質量を計算した。
【０４３２】
Ｖ．製剤
本明細書に記載される治療用ＰＲＯＴＡＣ−抗体コンジュゲート（ＰＡＣ）の製剤は、薬学的に許容される非経口ビヒクルと共に、非経口投与、例えば、ボーラス、静脈内、腫瘍内注射のために、かつ単位用量注射可能な形態で調製することができる。所望の純度を有するＰＡＣは、再構成のための凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と任意に混合される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９８０）１６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．）。
【０４３３】
ＰＡＣは、標準的な薬学的実践に従って薬学的組成物として製剤化することができる。この態様によると、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と会合したＰＡＣを含む薬学的組成物が提供される。
【０４３４】
典型的な製剤は、ＰＡＣを、担体及び／または希釈剤などの賦形剤と混合することによって調製される。好適な担体、希釈剤、及び他の賦形剤は、当業者には周知であり、これには、炭水化物、ワックス、水溶性及び／または水膨潤性ポリマー、親水性または疎水性材料、ゼラチン、油、溶媒、水などの材料が含まれる。使用される特定の担体、希釈剤、または他の賦形剤は、ＰＡＣが適用される手段及び目的によることになる。溶媒は、一般に、哺乳動物への投与が安全（ＧＲＡＳ）であることが当業者によって認識されている溶媒に基づいて選択される。
【０４３５】
一般に、安全な溶媒は、水あなどの非毒性の水性溶媒、及び水中で可溶性または混和性である他の非毒性の溶媒である。好適な水性溶媒には、水、エタノール、グリコール、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ  ４００、ＰＥＧ  ３００）など、及びこれらの混合物が含まれる。許容される希釈剤、担体、賦形剤、及び安定剤は、用いられる用量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、これには、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム塩化物；ベンザルコニウム塩化物、ベンゼトニウム塩化物；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／またはＴＷＥＥＮ＾、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ＾、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が含まれる。
【０４３６】
製剤にはまた、ＰＡＣの優良な体裁を提供するか、または薬学的製品の製造を補助するために、１つ以上の緩衝材、安定化剤、界面活性剤、湿潤剤、潤滑剤、乳化剤、懸濁化剤、保存剤、抗酸化剤、不透明化剤、滑剤、加工助剤、着色剤、甘味剤、芳香剤、香料、及び他の既知の添加剤が含まれ得る。製剤は、従来の溶解及び混合手順を使用して調製され得る。
【０４３７】
製剤化は、生理学的に許容される担体、すなわち、用いられる用量及び濃度でレシピエントに対して非毒性である担体と、周囲温度で、適切なｐＨ、かつ所望の純度で混合することによって行ってもよい。製剤のｐＨは、主に、化合物の特定の使用及び濃度によるが、約３〜約８の範囲であり得る。ｐＨ５の酢酸緩衝液中の製剤が好適な実施形態である。
【０４３８】
ＰＡＣ製剤は、滅菌であり得る。特に、インビボ投与のために使用される製剤は、滅菌でなければならない。かかる滅菌は、滅菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成される。
【０４３９】
ＰＡＣは通常、固体組成物、凍結乾燥製剤、または水溶液として保管することができる。
【０４４０】
ＰＡＣを含む薬学的組成物は、良好な医療行為と一致する様式、すなわち、量、濃度、スケジュール、経過、ビヒクル、及び投与経路で製剤化、投薬、及び投与することができる。この文脈において考慮する要因には、治療されている特定の障害、治療されている特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジューリング、及び医師に既知である他の要因が含まれる。投与される化合物の「治療有効量」は、かかる考慮によって左右されることになり、凝固因子媒介障害を防止、回復、または治療するのに必要な最小量である。かかる量は、好ましくは、宿主に対して毒性であるか、または宿主を著しくより出血しやすくする量未満である。
【０４４１】
ＰＡＣは、薬物の容易に制御可能な投薬を提供するため、かつ患者が処方されたレジメンに従うことを可能にするために、薬学的剤形に製剤化することができる。用途のための薬学的組成物（または製剤）は、薬物の投与に使用される方法によって多様な方法で包装され得る。一般に、分配のための物品には、適切な形態で薬学的製剤がその中に配置されている容器が含まれる。好適な容器は当業者には周知であり、ボトル（プラスチック及びガラス）、小袋、アンプル、プラスチック製の袋、金属シリンダなどの材料が含まれる。容器はまた、パッケージの内容物への不用意なアクセスを防止するために開封防止のための組み立てを含んでもよい。さらに、容器には、容器の内容物を記載するラベルが貼られている。ラベルはまた、適切な警告も含んでもよい。
【０４４２】
薬学的製剤は、滅菌注射可能な水性または油性懸濁液などの滅菌注射可能な調製物の形態であってもよい。この懸濁液は、上述されてきた好適な分散剤または湿潤剤、及び懸濁化剤を使用して、既知の技術に従って製剤化され得る。滅菌注射可能な調製物はまた、１，３−ブタンジオールなどの、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射可能な溶液または懸濁液であってもよい。滅菌注射可能な調製物はまた、凍結乾燥粉末として調製されてもよい。用いられ得る許容されるビヒクル及び溶媒には、リンガー溶液及び等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、溶媒または懸濁媒体として滅菌不揮発性油が好都合に用いられ得る。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意の無刺激の不揮発性油が用いられ得る。さらに、オレイン酸などの脂肪酸も同様に、注射剤の調製に使用され得る。
【０４４３】
単一の剤形を生成するために担体材料と合わせられ得るＰＡＣの量は、治療される宿主、及び特定の投与モードによって異なることになる。例えば、ヒトへの経口投与が意図される時限放出製剤は、全組成物の約５〜約９５％（重量：重量）で変動し得る適切かつ好都合な量の担体材料と配合された、およそ１〜１０００ｍｇの活性材料を含有し得る。薬学的組成物は、投与のための容易に測定可能な量を提供するように調製され得る。例えば、静脈内注入が意図される水溶液は、約３０ｍＬ／時の速度での好適な量の注入が生じることができるように、溶液１ミリリットル当たり約３〜５００μｇの活性成分を含有し得る。
【０４４４】
非経口投与のために好適な製剤には、製剤と意図されるレシピエントの血液と等張にする抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、及び溶質を含有し得る水性及び非水性滅菌注射溶液、ならびに懸濁化剤及び増粘剤を含み得る水性及び非水性滅菌懸濁液が含まれる。
【０４４５】
製剤は、単位用量または複数用量容器、例えば、密封されたアンプル及びバイアルに包装されてもよく、使用の直前に、注射のために滅菌液体担体、例えば水の添加のみを必要とする冷凍乾燥（凍結乾燥）状態で保管されてもよい。即時注射溶液及び懸濁液は、前述の種類の滅菌粉末、顆粒、及びタブレットから調製される。好ましい単位用量製剤は、本明細書で上に引用されるように、活性成分の１日用量もしくは単位１日サブ用量、またはその適切な分画を含有するものである。
【０４４６】
主題はさらに、獣医学的担体と共に上記の少なくとも１つの活性成分を含む獣医学用組成物を提供する。獣医学的担体は、組成物を投与する目的に有用な材料であり、さもなければ不活性であるかまたは獣医学分野において許容され、かつ活性材料と適合する固体、液体、または気体材料である。これらの獣医学的組成物は、非経口的に、または任意の他の所望の経路によって投与され得る。
【０４４７】
ＶＩ．適応症及び治療方法
本明細書に開示されるＰＲＯＴＡＣ−抗体コンジュゲート（ＰＡＣ）は、様々な疾患または障害を治療するための使用され得ることが企図される。例示的な過剰増殖性障害には、良性または悪性の固形腫瘍、ならびに白血病及びリンパ系腫瘍など血液疾患が含まれる。他には、神経、膠細胞、星細胞、視床下部、腺、マクロファージ、上皮、間質、胞胚腔、炎症、血管新生、自己免疫を含む免疫の疾患が含まれる。
【０４４８】
一般に、治療される疾患または障害は、癌などの過剰増殖性疾患である。本明細書において治療される癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病またはリンパ系腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。癌のより具体的な例としては、扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｎｃｅｒ）（例えば、扁平上皮癌（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｎｃｅｒ））、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、及び肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸癌を含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｃａｎｃｅｒ）または腎臓癌（ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、ならびに頭頚部癌が挙げられる。
【０４４９】
治療においてＰＡＣが使用され得る自己免疫疾患には、リウマチ学的障害（例えば、リウマチ性関節炎、シェーグレン症候群、強皮症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及びループス腎炎などのループス、多発性筋炎／皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、抗リン脂質抗体症候群、及び乾癬性関節炎など）、骨関節炎、自己免疫性胃腸及び肝臓障害（例えば、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎及びクローン病）、自己免疫性胃炎及び悪性貧血、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、及びセリアック病）など、血管炎（例えば、チャーグ・ストラウス症候群、ウェゲナー肉芽腫症、及び多発動脈炎を含むＡＮＣＡ関連血管炎など）、自己免疫性神経障害（例えば、多発性硬化症、眼球クローヌス・ミオクローヌス運動失調、重症筋無力症、視神経脊髄炎、パーキンソン病、アルツハイマー病、及び自己免疫性多発神経炎など）、腎障害（例えば、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、及びベルジェ病など）、自己免疫性皮膚科学的障害（例えば、乾癬、じんま疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）、じんましん（ｈｉｖｅｓ）、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、及び皮膚エリテマトーデスなど）、血液障害（例えば、血小板減少性紫斑病、血栓性血小板減少性紫斑病、輸血後紫斑病、及び自己免疫性溶血性貧血など）、アテローム性動脈硬化、ブドウ膜炎、自己免疫性聴覚疾患（例えば、内耳疾患及び聴覚喪失など）、ベーチェット病、レイノー症候群、臓器移植、ならびに自己免疫性内分泌障害（例えば、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）などの糖尿病関連自己免疫性疾患、アジソン病、及び自己免疫性甲状腺疾患（例えば、グレーブス病及び甲状腺炎）など）が含まれる。より好ましいかかる疾患には、例えば、リウマチ性関節炎、潰瘍性大腸炎、ＡＮＣＡ関連血管炎、ループス、多発性硬化症、シェーグレン症候群、グレーブス病、ＩＤＤＭ、悪性貧血、甲状腺炎、及び糸球体腎炎が含まれる。
【０４５０】
ある特定の実施形態では、上記のものなどの抗ＮａＰｉ２ｂ抗体を含むＰＡＣは、固形腫瘍、例えば卵巣腫瘍を治療する方法に使用される。
【０４５１】
別の実施形態では、本明細書に記載されるものなどのＰＡＣ  抗ＣＤ３３抗体は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大造血リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、及び骨髄細胞白血病（ＭＣＬ）などの、かつＢ細胞関連癌及び増殖性障害を含む、血液疾患を治療する方法に使用される。ＵＳ８２２６９４５；Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ（２０１３）Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅｒ．１２（７）：１２５５−１２６５；Ｐｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ（２０１０）Ｌｅｕｋｅｍｉａ２４：１５６６−１５７３；Ｐｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ（２０１１）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ２０（１）：７５−８５を参照されたい。
【０４５２】
別の実施形態では、本明細書に記載されるものなどの抗ＭＵＣ１６抗体を含むＰＡＣは、卵巣癌、乳癌、及び膵臓癌を治療する方法に使用される。癌は、ＭＵＣ１６／ＣＡ１２５／Ｏ７７２Ｐポリペプチドの発現または活性と関連付けられ得る。ＷＯ２００７／００１８５１；ＵＳ７９８９５９５；ＵＳ８４４９８８３；ＵＳ７７２３４８５；Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ（２００７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６７（１０）：４９２４−４９３２；Ｊｕｎｕｔｕｌａ，ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２６（８）：９２５−９３２を参照されたい。
【０４５３】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるものなどの抗ＨＥＲ２抗体を含むＰＡＣは、癌、例えば、乳癌または胃癌、より具体的にはＨＥＲ２＋乳癌または胃癌を治療する方法に使用され、本方法は、かかる治療を必要とする患者にかかるＰＡＣを投与することを含む。１つのかかる実施形態では、ＰＡＣは、抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブまたはペルツズマブを含む。
【０４５４】
ＰＡＣは、治療される状態に適切な任意の経路によって投与され得る。ＰＡＣは、典型的には、非経口的に、すなわち、注入、皮下、筋肉内、静脈内、皮内、髄腔内、及び硬膜外に投与されることになる。
【０４５５】
ＰＡＣは、治療において単独で、または他の薬剤との組み合わせのいずれかで使用することができる。例えば、ＰＡＣは、少なくとも１つの追加の治療剤と共に同時投与されてもよい。上記のかかる併用療法は、併用投与（２つ以上の治療剤が同じかまたは別個の製剤中に含まれる）、ならびにＰＡＣの投与が追加の治療剤及び／またはアジュバントの投与の前、それと同時に、かつ／もしくはその後に生じ得る別個の投与を包含する。ＰＡＣはまた、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
【０４５６】
ＰＡＣ（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、ならびに局所的治療が所望される場合は、病変内投与を含む任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投薬は、投与が短期的または長期的であるかに部分的に応じて、任意の好適な経路、例えば、静脈内または皮下注射などの注射によるものであり得る。単回投与または様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むが、これらに限定されない様々な投薬スケジュールが本明細書において企図される。
【０４５７】
疾患の予防または治療について、ＰＡＣの適切な投与量（単独で、または１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）は、治療される疾患の種類、ＰＡＣの種類、疾患の重症度及び経過、ＰＡＣが予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の臨床歴、及びＰＡＣに対する応答、ならびに主治医の裁量に依存することになる。ＰＡＣは、一度に、または一連の治療にわたって患者に好適に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば、１回以上の別個の投与によるか、または連続注入によるかを問わず、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）のＰＡＣが、患者に投与するための初回候補投薬量であり得る。１つの典型的な１日の投薬量は、上記の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上であり得る。状態に応じて数日間以上にわたる反復投与の場合、治療は、一般に、疾患症状の所望の抑制が生じるまで持続されるであろう。１つの例示的なＰＡＣの投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ（またはこれらの任意の組み合わせ）の１回以上の容量が患者に投与され得る。かかる用量は、間欠的に、例えば、毎週または３週間に１回（例えば、患者が約２〜約２０回、または例えば約６回の用量を受けるように）投与され得る。より高い初回負荷量に続いて、１回以上のより低い用量が投与されてもよい。しかしながら、他の投薬量レジメンも有用であり得る。この療法の進行は、従来の技法及びアッセイによって容易に監視される。
【０４５８】
ＶＩＩ．製品
別の態様において、製品が本明細書に記載され、例えば、上記の疾患及び障害の治療のために有用な材料を含有する「キット」が提供される。キットは、ＰＡＣを含む容器を含む。キットは、容器上に、または容器と関連付けられたラベルまたは添付文書をさらに含んでもよい。「添付文書」という用語は、治療剤製品の適応症、使用法、投薬量、投与、禁忌症、及び／またはその使用に関する警告についての情報を含む、かかる治療剤製品のパッケージに通例含まれる指示書を指すように使用される。
【０４５９】
好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ブリスターパックなどが含まれる。「バイアル」は、液体または凍結乾燥調製物を保持するために好適な容器である。一実施形態では、バイアルは、単回使用バイアル、例えば、ストッパを有する２０ｃｃの単回使用バイアルである。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの多様な材料から形成され得る。容器は、病態の治療のために有効であるＰＡＣまたはその製剤を保持し得、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、皮下注射針によって穿通可能なストッパを有する静脈薬液バッグまたはバイアルであり得る）。
【０４６０】
組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、ＰＡＣである。ラベルまたは添付文書は、組成物が癌などの任意選択の病態を治療するために使用されることを示す。さらに、ラベルまたは添付文書は、治療される患者が、過剰増殖性障害、神経変性、心肥大、疼痛、偏頭痛、または神経外傷性疾患もしくは事象などの障害を有するものであることを示す場合がある。一実施形態では、ラベルまたは添付文書は、ＰＡＣを含む組成物を使用して、異常細胞増殖に起因する障害を治療することができることを示す。ラベルまたは添付文書はまた、組成物を使用して他の障害を治療することができることも示し得る。代替的には、または追加的に、製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝液を含む第２の容器をさらに含んでもよい。製品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的及び使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
【０４６１】
キットは、ＰＡＣ、及び存在する場合、第２の薬学的製剤の投与のための説明書をさらに含んでもよい。例えば、キットが、ＰＡＣを含む第１の組成物と第２の薬学的製剤とを含む場合、キットは、第１及び第２の薬学的組成物の、それを必要とする患者への同時、逐次、または別個の投与のための説明書をさらに含み得る。
【０４６２】
別の実施形態では、キットは、錠剤またはカプセルなどの、ＰＡＣの固形経口形態の送達に好適である。かかるキットは、好ましくは、いくつかの単位投薬量を含む。かかるキットは、それらの意図される使用の順序に配向された投薬量を有するカードを含み得る。かかるキットの例は、「ブリスターパック」である。ブリスターパックは、包装業界において周知であり、薬学的単位剤形を包装するために広く使用されている。所望される場合、例えば、数字、文字、もしくは他のマークの形態で、または治療スケージュールにおいて投薬量が投与され得る日にちを指定するカレンダー挿入物と共に、記憶補助が提供され得る。
【０４６３】
一実施形態によると、キットは、（ａ）その中にＰＡＣを収容した第１の容器と、任意に（ｂ）その中に第２の薬学的製剤を収容した第２の容器と、を含み得、第２の薬学的製剤は、抗過剰増殖活性を有する第２の化合物を含む。代替的には、または追加的に、キットは、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝液を含む第３の容器をさらに含んでもよい。製品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的及び使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
【０４６４】
キットがＰＡＣ及び第２の治療剤を含むある特定の他の実施形態では、キットは、分割されたボトルまたは分割されたホイルパケットなどの、別個の組成物を収容するための容器を含んでもよい。しかしながら、別個の組成物はまた、単一の分割されていない容器内に収容されてもよい。典型的には、キットは、別個の成分の投与のための説明書を含む。キット形態は、別個の成分が好ましくは異なる投薬形態（例えば、経口及び非経口）で投与される場合、異なる投薬間隔で投与される場合、または組み合わせの個々の成分の滴定が処方医によって望まれる場合に特に有利である。
【０４６５】
以下の実施例は、限定のためではなく、例示のために提供される。
【実施例】
【０４６６】
実施例１：
ＰＡＣの合成
Ａ．ＰＲＯＴＡＣの化学合成：
ｉ．Ｅ３リガーゼ結合基（Ｅ３ＬＢ）へのリンカー（Ｌ２）の結合
【化５３】
2019522633.tif 000103
４−［［（２Ｓ，３Ｓ）−３−［（２Ｓ）−２−［［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］プロパンアミド］−８−シアノ−５−［（２−メトキシナフタレン−１−イル）メチル］−２−メチル−４−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，５−ベンゾジアゼピン−１−イル］カルボニル］安息香酸メチル１，２−ジクロロエタン（５０ｍＬ）中のＮ−［（１Ｓ）−１−［［（３Ｓ，４Ｓ）−７−シアノ−１−［（２−メトキシナフタレン−１−イル）メチル］−４−メチル−２−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，５−ベンゾジアゼピン−３−イル］カルバモイル］エチル］−Ｎ−メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．００ｇ、５．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（２．６ｇ、２５．７ｍｍｏｌ）及び４−（カルボノクロリドイル）安息香酸メチル（３．１０ｇ、１５．６１ｍｍｏｌ）を窒素下で添加した。得られた溶液を、８０℃で５時間撹拌し、室温まで冷却した。水（１００ｍＬ）を添加した。得られた溶液を３×１００ｍＬのジクロロメタンで抽出し、有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で濃縮した。酢酸エチル／石油エーテル（１：１）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって残渣を精製した。これは、３．１０ｇ（８１％）の４−［［（２Ｓ，３Ｓ）−３−［（２Ｓ）−２−［［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］プロパンアミド］−８−シアノ−５−［（２−メトキシナフタレン−１−イル）メチル］−２−メチル−４−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，５−ベンゾジアゼピン−１−イル］カルボニル］安息香酸メチルを茶色の固体としてもたらした。ＭＳ（ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝７３４．４。
【化５４】
2019522633.tif 000104
【０４６７】
４−［［（２Ｓ，３Ｓ）−３−［（２Ｓ）−２−［［（Ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］プロパンアミド］−８−シアノ−５−［（２−メトキシナフタレン−１−イル）メチル］−２−メチル−４−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，５−ベンゾジアゼピン−１−イル］カルボニル］安息香酸ＬｉＯＨ水溶液（３０ｍＬ、１Ｍ）を、テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中の４−［［（２Ｓ，３Ｓ）−３−［（２Ｓ）−２−［［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］プロパンアミド］−８−シアノ−５−［（２−メトキシナフタレン−１−イル）メチル］−２−メチル−４−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，５−ベンゾジアゼピン−１−イル］カルボニル］安息香酸メチル（３．１０ｇ、４．２２ｍｍｏｌ）に室温で添加した。得られた溶液を室温で５時間撹拌した。エチルエーテル（２０ｍＬ）を添加した。相を分離した。水相を、１Ｎ  ＨＣｌ溶液でｐＨ約７まで酸性にした。得られた混合物を２×８０ｍＬの酢酸エチルで抽出し、有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で濃縮した。これは、２．５ｇの４−［［（２Ｓ，３Ｓ）−３−［（２Ｓ）−２−［［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］プロパンアミド］−８−シアノ−５−［（２−メトキシナフタレン−１−イル）メチル］−２−メチル−４−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，５−ベンゾジアゼピン−１−イル］カルボニル］安息香酸を茶色の固体としてもたらした。ＭＳ（ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝７２０．５。
【化５５】
2019522633.tif 000105
【０４６８】
２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）酢酸メチル塩酸塩
２，２−ジメトキシプロパン（５ｍＬ、４０．３２７ｍｍｏｌ）中の２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］酢酸塩酸塩（５００ｍｇ、２．５０５ｍｍｏｌ）の溶液に、濃縮ＨＣｌ（０．２ｍＬ）を室温で滴下した。反応混合物を２５℃で１５時間撹拌し、真空下で濃縮した。さらなる精製を伴わずに残渣を直接使用した。
【化５６】
2019522633.tif 000106
【０４６９】
２−（２−［２−［（４−［［（２Ｓ，３Ｓ）−３−［（２Ｓ）−２−［［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］プロパンアミド］−８−シアノ−５−［（２−メトキシナフタレン−１−イル）メチル］−２−メチル−４−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，５−ベンゾジアゼピン−１−イル］カルボニル］フェニル）ホルムアミド］エトキシ］エトキシ）酢酸メチルＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６ｍＬ）中の［（２Ｓ，３Ｓ）−３−［（２Ｓ）−２−［［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］プロパンアミド］−８−シアノ−５−［（２−メトキシナフタレン−１−イル）メチル］−２−メチル−４−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，５−ベンゾジアゼピン−１−イル］カルボニル］安息香酸（５００ｍｇ、０．６９５ｍｍｏｌ）の溶液に、前のステップからの粗製２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］酢酸メチルＨＣｌ塩（５００ｍｇ）、ＨＡＴＵ（５２８ｍｇ、１．３８９ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（８９７ｍｇ、６．９４ｍｍｏｌ）を窒素下で、室温で添加した。得られた溶液を２５℃で１時間撹拌し、水でクエンチした。得られた溶液をジクロロメタンで抽出し、有機層を合わせた。有機相をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で濃縮した。ジクロロメタン／メタノール（２０：１）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって残渣を精製した。これは、５５０ｍｇ（９０％）の２−（２−［２−［（４−［［（２Ｓ，３Ｓ）−３−［（２Ｓ）−２−［［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］プロパンアミド］−８−シアノ−５−［（２−メトキシナフタレン−１−イル）メチル］−２−メチル−４−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，５−ベンゾジアゼピン−１−イル］カルボニル］フェニル）ホルムアミド］エトキシ］エトキシ）酢酸メチルを黄色の固体としてもたらした。ＭＳ（ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝８７９．５。
【化５７】
2019522633.tif 000107
【０４７０】
２−（２−［２−［（４−［［（２Ｓ，３Ｓ）−３−［（２Ｓ）−２−［［（Ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］プロパンアミド］−８−シアノ−５−［（２−メトキシナフタレン−１−イル）メチル］−２−メチル−４−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，５−ベンゾジアゼピン−１−イル］カルボニル］フェニル）ホルムアミド］エトキシ］エトキシ）酢酸テトラヒドロフラン（８ｍＬ）中の２−（２−［２−［（４−［［（２Ｓ，３Ｓ）−３−［（２Ｓ）−２−［［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］プロパンアミド］−８−シアノ−５−［（２−メトキシナフタレン−１−イル）メチル］−２−メチル−４−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，５−ベンゾジアゼピン−１−イル］カルボニル］フェニル）ホルムアミド］エトキシ］エトキシ）酢酸メチル（５００ｍｇ、０．５６９ｍｍｏｌ）の溶液に、水（１ｍＬ）中の水酸化リチウム一水和物（９５ｍｇ、２．２６ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を２５℃で１時間撹拌した。混合物を水で希釈し、１Ｎクエン酸でｐＨ約４まで酸性にし、酢酸エチルで抽出した（２回）。有機相を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。Ｃ１８シリカゲル（移動相：５ｍＭ水性ＮＨ４ＨＣＯ３及びＣＨ３ＣＮ（０〜９５％））上の逆相フラッシュクロマトグラフィーによって残渣を精製して、３７０ｍｇ（７５％）の２−（２−［２−［（４−［［（２Ｓ，３Ｓ）−３−［（２Ｓ）−２−［［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］プロパンアミド］−８−シアノ−５−［（２−メトキシナフタレン−１−イル）メチル］−２−メチル−４−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，５−ベンゾジアゼピン−１−イル］カルボニル］フェニル）ホルムアミド］エトキシ］エトキシ）酢酸を白色の固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝８６５．５。１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｍｈｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）
【０４７１】
８．７０（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、８．４６（ｔ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．２１（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、１Ｈ）、８．１０（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．９５（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．８９（ｄｄ、Ｊ＝８．６、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．６９（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．５０（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．３０（ｍ、１Ｈ）、７．１８（ｄ、Ｊ＝１．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．１３（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．００（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、２Ｈ）、６．１３（ｄ、Ｊ＝１５．１Ｈｚ、１Ｈ）、５．７８（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、５．５１（ｄ、Ｊ＝１５．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．０４（ｂｒｓ、１Ｈ）、４．６１−４．５２（ｍ、１Ｈ）、４．２２（ｄｄ、Ｊ＝１１．９、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．９９（ｓ、２Ｈ）、３．９６（ｓ、３Ｈ）、３．６８−３．４４（ｍ、７Ｈ）、３．３７（ｓ、１Ｈ）、２．７６（ｓ、３Ｈ）、１．４０−１．３１（ｍ、１２Ｈ）、１．１２（ｄ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、３Ｈ）。
【０４７２】
ｉｉ．リンカー（Ｌ２）を介したＥ３ＬＢへのＰＢの結合
【化５８】
2019522633.tif 000108
４−（（２Ｓ，３Ｓ）−８−シアノ−５−（（２−メトキシナフタレン−１−イル）メチル）−２−メチル−３−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）−４−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ジアゼピン−１−カルボニル）−Ｎ−（２−（２−（２−（（２−（４−（１−（４−ヒドロキシフェニル）−２−フェニルブト−１−エン−１−イル）フェノキシ）エチル）（メチル）アミノ）−２−オキソエトキシ）エトキシ）エチル）ベンズアミド（「化合物Ｐ１」）２−メチルテトラヒドロフラン（０．８５５ｍＬ）中の２−［２−［２−［［４−［（３Ｓ，４Ｓ）−３−［［（２Ｓ）−２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパノイル］アミノ］−７−シアノ−１−［（２−メトキシ−１−ナフチル）メチル］−４−メチル−２−オキソ−３，４−ジヒドロ−１，５−ベンゾジアゼピン−５−カルボニル］ベンゾイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸（７４ｍｇ、０．０８５５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（１．１当量、３６．５ｍｇ、０．０９４１ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３．０当量、０．０４５ｍＬ、０．２５７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３０分間撹拌し、その後、２−メチルテトラヒドロフラン（６０、０．５ｍＬ、４００ｍｇ、５ｍｍｏｌ）中の４−［１−［４−［２−（メチルアミノ）エトキシ］フェニル］−２−フェニル−ブト−１−エニル］フェノール（１．０５当量、３３．５ｍｇ、０．０８９８ｍｍｏｌ）の溶液、続いて０．２ｍＬ  ＤＭＦを添加した。混合物を室温で２２時間撹拌した。水を添加し、溶液をｉＰｒＯＡｃで３回抽出した。有機層を合わせ、その後、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。
【０４７３】
粗製材料をジクロロメタン（０．８５ｍＬ）中に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２６ｍＬ）を滴下した。ガス発生が認められなくなるまで反応物を室温で撹拌した。１時間後、溶液を真空中で濃縮し、逆相ＨＰＬＣによって精製して、４５ｍｇ（２ステップで４５％収率）の所望の生成物を得た。
【０４７４】
Ｍ＋Ｈ＝５６０．９、１１２０．７；δ１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｍｈｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．３９、９．１４（重複ｓ、１Ｈ）、８．８５−８．７０（ｍ、１Ｈ）、８．４４−８．３６（ｍ、１Ｈ）、８．２０（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、８．１０（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．９７−７．８２（ｍ、２Ｈ）、７．７０−７．６４（ｍ、１Ｈ）、７．５０−７．４４（ｍ、１Ｈ）、７．３４−７．２７（ｍ、１Ｈ）、７．２１−７．０４（ｍ、９Ｈ）、７．０３−６．８７（ｍ、４Ｈ）、６．７８−６．６７（ｍ、２Ｈ）、６．６２−６．５４（ｍ、２Ｈ）、６．４４−６．３３（ｍ、１Ｈ）、６．１２（ｄ、Ｊ＝１５．１Ｈｚ、１Ｈ）、５．７８（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、２Ｈ）、５．５２（ｄ、Ｊ＝１５．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．９９−４．８９（ｍ、１Ｈ）、４．３３−４．０４（ｍ、４Ｈ）、４．００−３．８８（ｍ、１Ｈ）、３．９４（ｓ、３Ｈ）、３．６８−３．６１（ｍ、１Ｈ）、３．６０−３．４２（ｍ、５Ｈ）、３．３８−３．３２（ｍ、１Ｈ）、３．０３−２．７８（ｍ、３Ｈ）、２．４５−２．３５（ｍ、２Ｈ）、２．３２（ｓ、３Ｈ）、１．２３（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３Ｈ）、１．１１（ｄ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、３Ｈ）、０．８９−０．７６（ｍ、４Ｈ）。
【０４７５】
Ｂ．Ｌ１−ＰＲＯＴＡＣの調製
ｉｉｉ．ＰＲＯＴＡＣへのリンカーＬ１の結合
【化５９】
2019522633.tif 000109
Ｎ−［（１Ｓ）−１−［［（１Ｓ）−４−（カルバモイルアミノ）−１−［（４−［４−［（１Ｚ）−１−（４−［２−［２−（２−［２−［（４−［［（２Ｓ，３Ｓ）−８−シアノ−５−［（２−メトキシナフタレン−１−イル）メチル］−２−メチル−３−［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド］−４−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，５−ベンゾジアゼピン−１−イル］カルボニル］フェニル）ホルムアミド］エトキシ］エトキシ）−Ｎ−メチルアセトアミド］エトキシ］フェニル）−２−フェニルブト−１−エン−１−イル］フェノキシメチル］フェニル）カルバモイル］ブチル］カルバモイル］−２−メチルプロピル］−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（「化合物ＬＰ２」）ＤＭＦ（０．９ｍＬ）中の（２Ｓ）−Ｎ−［（３Ｓ，４Ｓ）−７−シアノ−５−［（４−［［２−（２−［［（２−［４−［（１Ｚ）−１−（４−ヒドロキシフェニル）−２−フェニルブト−１−エン−１−イル］フェノキシ］エチル）（メチル）カルバモイル］メトキシ］エトキシ）エチル］カルバモイル］フェニル）カルボニル］−１−［（２−メトキシナフタレン−１−イル）メチル］−４−メチル−２−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，５−ベンゾジアゼピン−３−イル］−２−（メチルアミノ）プロパンアミド（化合物Ｐ１、４８ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ）及びＮ−［（１Ｓ）−１−｛［（１Ｓ）−４−（カルバモイルアミノ）−１−｛［４−（クロロメチル）フェニル］カルバモイル｝ブチル］カルバモイル｝−２−メチルプロピル］−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（９０ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（６０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を０℃で４時間撹拌し、予冷されたＤＭＦ（０．９ｍＬ）で希釈した。固体を濾過して除去した。濾液を以下の条件（カラム、ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８ＯＢＤカラム、１９＊１５０ｍｍ５ｕｍ、１０ｎｍ；移動相、水（０．１％ＴＦＡ）及びＣＨ３ＣＮ（５％ＣＨ３ＣＮから１０分間で最大４８％）；検出器、ＵＶ２５４／２２０ｎｍ）で分取ＨＰＬＣによって精製して、２２ｍｇ（３１％）のＮ−［（１Ｓ）−１−［［（１Ｓ）−４−（カルバモイルアミノ）−１−［（４−［４−［（１Ｚ）−１−（４−［２−［２−（２−［２−［（４−［［（２Ｓ，３Ｓ）−８−シアノ−５−［（２−メトキシナフタレン−１−イル）メチル］−２−メチル−３−［（２Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド］−４−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１，５−ベンゾジアゼピン−１−イル］カルボニル］フェニル）ホルムアミド］エトキシ］エトキシ）−Ｎ−メチルアセトアミド］エトキシ］フェニル）−２−フェニルブト−１−エン−１−イル］フェノキシメチル］フェニル）カルバモイル］ブチル］カルバモイル］−２−メチルプロピル］−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミドを白色の固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１６７５．１；１Ｈ−ＮＭＲ（４００Ｍｈｚ、ＤＭ��Ｏ−ｄ６）：δ（ｐｐｍ）１０．１５（ｓ、１Ｈ）、９．９５−９．７２（ｍ、１Ｈ）、９．５２−９．４１（ｍ、１Ｈ）、９．３１−９．１４（ｍ、１Ｈ）、８．４３（ｂｒｓ、１Ｈ）、８．２０−８．１８（ｍ、１Ｈ）、８．１７−８．０７（ｍ、２Ｈ）、７．９３（ｍ、２Ｈ）、７．７０（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．７０−７．６５（ｍ、３Ｈ）、７．４８−７．４２（ｍ、２Ｈ）、７．４１−７．３６（ｍ、１Ｈ）、７．３３−７．２８（ｍ、１Ｈ）、７．２３（ｍ、１Ｈ）、７．１８−７．０７（ｍ、７Ｈ）、７．０２−７．０１（ｍ、１Ｈ）、６．９９（ｓ、３Ｈ）、６．９６−６．９２（ｍ、２Ｈ）、６．７６−６．６７（ｍ、２Ｈ）、６．６０−６．５８（ｍ、２Ｈ）、６．４０（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．１３−６．０８（ｍ、１Ｈ）、５．９９（ｓ、１Ｈ）、５．８０（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、５．５５（ｄ、Ｊ＝１５．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．４４（ｂｒｓ、１Ｈ）、５．０２−４．９３（ｍ、１Ｈ）、７．４３−４．３６（ｍ、３Ｈ）、４．２６−４．０２（ｍ、６Ｈ）、３．９５−３．８８（ｍ、４Ｈ）、３．６６−３．６３（ｍ、３Ｈ）、３．５７−３．５３（ｍ、４Ｈ）、３．３９−３．３６（ｍ、４Ｈ）、３．０５−２．８１（ｍ、５Ｈ）、２．６８（ｓ、２Ｈ）、２．４２−２．３９（ｍ、３Ｈ）、２．２２−２．０７（ｍ、２Ｈ）、２．０３−１．９１（ｍ、１Ｈ）、１．７１（ｂｒｓ、２Ｈ）、１．６２（ｂｒｓ、３Ｈ）、１．５０−１．３６（ｍ、６Ｈ）、１．２１−１．１７（ｍ、５Ｈ）、０．８７−０．８２（ｍ、１０Ｈ）。
【０４７６】
Ｃ．ＰＡＣの調製
ｉｖ．リンカーＬ１を介したＰＲＯＴＡＣへの抗体（Ａｂ）の結合
ＰＲＯＴＡＣ−抗体コンジュゲート（ＰＡＣ）を得るためのＨＥＲ２及びＢ７Ｈ４抗体へのＰＲＯＴＡＣのコンジュゲーションを以下のように達成した。
【０４７７】
１０ｍＭコハク酸塩（ｐＨ５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ中のシステイン操作された抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体）を、１Ｍ  ＴｒｉｓでｐＨ７．５〜８．５になるようにｐＨ調節した。３〜１０当量の、チオール反応性基を有するリンカーＬ１−ＰＲＯＴＡＣをＤＭＦまたはＤＭＡに溶解し、還元、再酸化、及びｐＨ調節された抗体に添加した。反応を室温または３７℃でインキュベートし、反応混合物のＬＣ−ＭＳ分析によって判定される完了まで監視する（１〜約２４時間）。反応が完了すると、コンジュゲートを、残りの未反応リンカーＬ１−ＰＲＯＴＡＣ中間体及び凝集タンパク質（有意なレベルで存在する場合）を除去することを目的として、いくつかの方法のうちの１つまたは任意の組み合わせによって精製する。例えば、最終ｐＨがおよそ５．５になるまでコンジュゲートを１０ｍＭ酢酸ヒスチジン（ｐＨ５．５）で希釈し、Ａｋｔａ精製システムに接続したＨｉＴｒａｐ  Ｓカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）またはＳマキシスピンカラム（Ｐｉｅｒｃｅ）のいずれかを使用してＳカチオン交換クロマトグラフィーによって精製してもよい。代替的には、コンジュゲートを、Ａｋｔａ精製システムに接続したＳ２００カラムまたはＺｅｂａスピンカラムを使用してゲル濾過クロマトグラフィーによって精製してもよい。代替的には、透析を使用してもよい。
【０４７８】
ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体ＰＲＯＴＡＣコンジュゲートを、ゲル濾過または透析のいずれかを使用して、２４０ｍＭのスクロースで２０ｍＭ  Ｈｉｓ／酢酸（ｐＨ５）内に製剤化した。精製されたコンジュゲートを遠心分離限外濾過によって濃縮し、滅菌状態下で０．２μｍのフィルターを通して濾過し、保管のために冷凍する。
【０４７９】
実施例２：
ＰＡＣの特性評価
ＰＡＣを特性評価して、タンパク質濃度（例えば、ＢＣＡアッセイによって）、凝集レベル（分析的ＳＥＣによって）、ＰＡＲ（例えば、ＬＣ−ＭＳによって）を判定した。
【０４８０】
コンジュゲートのサイズ排除クロマトグラフィーは、０．２５ｍＭ塩化カリウム及び１５％  ＩＰＡと共に、０．７５ｍＬ／分の流速で０．２Ｍリン酸カリウム（ｐＨ６．２）中のＳｈｏｄｅｘ  ＫＷ８０２．５カラムを使用して行われる。２８０ｎｍでの溶出したピークエリア吸光度の積算によって、コンジュゲートの凝集状態を判定した。
【０４８１】
ＬＣ−ＭＳ分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＴＯＦ  ６５３０ＥＳＩ器具を使用してコンジュゲート上で行われる。例として、ＰＡＣを、Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）中１：５００ｗ／ｗのエンドプロテアーゼＬｙｓ  Ｃ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で３０分間、３７℃で処理した。得られた切断断片を、８０℃に加熱した１０００Å（オングストローム）、８μｍ（ミクロン）のＰＬＲＰ−Ｓ（高架橋ポリスチレン）カラム上に装てんし、１０分間で３０％Ｂから４０％Ｂへのグラジエントで溶出した。移動相Ａは、０．０５％ＴＦＡを伴うＨ２Ｏであり、移動相Ｂは、０．０４％ＴＦＡを伴うアセトニトリルであった。流速は、０．５ｍｌ／分であった。エレクトロスプレーイオン化及びＭＳ分析の前に、タンパク質溶出を２８０ｎｍでのＵＶ吸光度検出によって監視した。非コンジュゲートＦｃ断片、残余非コンジュゲートＦａｂ、及びＰＲＯＴＡＣコンジュゲートされたＦａｂのクロマトグラフ分離を通常通りに得た。得られたｍ／ｚスペクトルを、Ｍａｓｓ  Ｈｕｎｔｅｒ（商標）ソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してデコンボリューションして、抗体断片の質量を計算した。
【表２８】
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ＭＣ−ＶＣ−ＰＡＢは、（６−マレイミドカプロイル）−（バリン−シトルリン）−（ｐ−アミノベンジル）を指す。
Ｔｈｉｏは、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体を意味する。
ＬＣ  Ｋ１４９Ｃは、軽鎖において１４９位のＫがＣに変わったことを示すＨｕは、ヒトを意味する
抗ＨＥＲ２及び抗Ｂ７−Ｈ４は、それぞれＨＥＲ２及びＢ７−Ｈ４に結合する抗体を意味する。
【０４８２】
実施例３：
ＨＥＲ−２含有ＰＡＣのエストロゲン受容体α密度への効果の検出
以下の実験は、ＰＲＯＴＡＣ及びＰＲＯＴＡＣ−抗体コンジュゲートによる治療後の、ウェスタンブロット法によるＭＣＦ７−ｎｅｏ／ＨＥＲ２細胞株中のエストロゲン受容体α（ＥＲ−α）の検出について記載する。
【０４８３】
ＨＥＲ２／ＮＥＵ受容体を発現するように操作されたＭＣＦ７細胞を、ウェル当たり４０×１０４細胞の細胞密度で１２ウェルプレート中に接種した。エストラジオールを枯渇させるために、１０％（ｖ／ｖ）チャコール処理血清（ｃｈａｒｃｏａｌ  ｓｔｒｉｐｐｅｄ  ｓｅｒｕｍ）（Ｇｅｍｉｎｉ  Ｂｉｏ−  ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、４ｍＭ  Ｌ−グルタミン、各々１００Ｕのペニシリン及びストレプトマイシン、ならびに非必須アミノ酸を含有するフェノールレッド不含ＲＰＭＩ培地（Ｇｉｂｃｏ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で細胞を培養した。３日後、細胞をトリプシン処理し、半分の密度で再接種した。
【０４８４】
翌日、非コンジュゲートＰＲＯＴＡＣまたは抗体にコンジュゲートされたＰＲＯＴＡＣ（ＰＡＣ）を、１０μｇ／ｍｌ（＝１３４ｎＭ  ＰＲＯＴＡＣ）及び１μｇ／ｍｌ（＝１３．４ｎＭ  ＰＲＯＴＡＣ）で培地に添加した。３日後、細胞をＰＢＳで１回洗浄し、１００μＬ尿素溶解緩衝液（６Ｍ尿素、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１２．５ｍＭ  ＮａＣｌ、２．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ））中に溶解した。全タンパク質濃度をＢＣＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）によって判定した。各試料について、１０ｕｇの全細胞タンパク質を４〜１２％  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲル上で分離し、Ｉｎｖｉｔｒｏｌｏｎ  ＰＶＤＦ膜（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）に移した。１０％脱脂粉乳を含有するＰＢＳ−０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０中で膜をブロックし、１：１０００希釈にてエストロゲン受容体α（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＳＣ−８００２）及びＧＡＰＤＨ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＳＣ２５７７８  ＨＲＰ）に対する一次抗体で、続いて１：５０００希釈にてマウスＩｇＧ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に対する二次抗体で探索した。
【０４８５】
化学発光（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用してタンパク質バンドを可視化した。結果は、図１に示される。
【０４８６】
実施例４：
ＨＥＲ−２含有ＰＡＣのエストロゲン受容体α密度への効果の検出
以下の実験は、ＰＲＯＴＡＣ及びＰＲＯＴＡＣ−抗体コンジュゲートでの治療後のＭＣＦ７−ｎｅｏ／ＨＥＲ２細胞中のＥＲαの定量化について記載する。
【０４８７】
細胞プレーティングｎｅｏＭＣＦ７／ＨＥＲ２細胞（ＣＬ１３０２２０）を３７℃で解凍し、次いで、細胞を１２００ＲＣＦで３分間遠心沈殿させ、上清を除去し、増殖培地で置き換えることによって増殖培地（ＲＰＭＩ、１０％ウシ胎児血清Ｆ２４４２（ＦＢＳ））に移した。次いで、細胞を１５０ｃｍ２フラスコ（参照：４３１４６５）に移し、コンフルエントになるまで増殖させた。いったんコンフルエントになったら、細胞をＰＢＳ中で１回洗浄し、ＰＢＳを吸引し、細胞を被覆するために１０ｍＬの１０Ｘ０．５％トリプシン（Ｃａｔ＃１５４００−０５４）をフラスコに添加した。過剰なトリプシンをすぐに吸引し、フラスコを３７℃のインキュベートに５分間移した。インキュベーション後、２０ｍＬの増殖培地（フェノールレッド不含ＲＰＭＩ（Ｃａｔ＃１１８３５−０３０）１０％チャコール処理ＦＢＳ（ＳＫＵ：Ｆ６７６５））をフラスコに添加し、Ｖｉｃｅｌｌ器具を使用して細胞密度を判定した。１０，０００細胞／０．０５ｍＬの細胞密度になるように増殖培地を添加した。次いで、翌日の化合物処理の前に３７℃のインキュベータに一晩保管された２つのＧｒｅｉｎｅｒ３８４ウェルプレート（参照：７８１９４６）の各ウェルに５０ｕｌの細胞を移した。
【０４８８】
化合物処理ＰＡＣを室温で解凍し、３７Ｃの増殖培地中で各々６０ｕｇ／ｍｌに、続いて、３８４ウェルプレート（参照：７８１０９１）にわたる２０点２Ｘ段階希釈によって希釈した。段階希釈からの１０ｕｌの各試料を細胞プレートのウェルに移した。ＰＡＣの最高加工濃度は、１０ｕｇ／ｍｌであった。データ正規化のために細胞プレートカラム１、２、２３、及び２４を未処理のままにした一方、カラム３〜２２はＰＡＣ希釈を含有した。化合物処理の後、細胞プレートを３７Ｃのインキュベータ内に７２時間保管した。
【０４８９】
染色７２時間の化合物処理の後、各ウェル中、１５ｕｌの１６％パラホルムアルデヒド（Ｃａｔ＃１５７１０−Ｓ）で細胞を固定した。内容物を吸引し、５０ｕｌの透過処理／ブロック緩衝液（ＰＢＳ、ＢＳＡ０．５％（ｗ／ｖ）、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ１０００．１％（ｖ／ｖ））を各ウェルに添加した。１０分後、透過処理／ブロック緩衝液を吸引し、ＰＢＳで２回洗浄した。次いで、ウェルを吸引し、透過処理／ブロック緩衝液中の２５ｕｌ１／１０００のｍＡｂ抗ＥＳＲ１（クローンＦ１０）（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  ｓｃ−８００２）で処理し、ＰＢＳ中で４回洗浄する前に、室温で２時間インキュベートした。ウェルの内容物を再び吸引し、２５ｕｌ  １／１０００  Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ  ４８８でコンジュゲートされた抗マウス（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＃Ａ２１２０２）及び１／１０００Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８（Ｃａｔ＃Ｈ３５６９）で処理し、３時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ中で３回洗浄し、密封した。
【０４９０】
データ収集  Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ  Ａｒｒａｙｓｃａｎを使用して、細胞カウント、及び細胞核中に存在するＥＲαの量に比例するＥＲα蛍光強度（ＭｅａｎＣｉｒｃＡｖｇＩｎｔｅｎＣｈ２）を収集した。次いで、データを未処理の細胞対照に対して正規化し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ内にプロットした。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍは、「ｌａｇ（阻害剤）対応答−変数スロープ」関数を使用してＥＣ５０を計算した。
【０４９１】
表２９は、定量化実験からのＩＣ５０データを報告する。
【表２９】
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【０４９２】
結果は、図２に示される。ＨＥＲ２抗体含有ＰＡＣ抗ＨＥＲ２（Ｅｎｄｏｘ−ＸＩＡＰ）でのＨＥＲ２発現細胞の治療は、エストロゲン受容体アルα（ＥＲα）レベルの著しい減少をもたらした。Ｂ７−Ｈ４抗体含有ＰＡＣ抗Ｂ７−Ｈ４（Ｅｎｄｏｘ−ＸＩＡＰ）でのＨＥＲ２発現細胞の治療は、ＥＲαレベルの実質的な減少をもたらさなかった。
【０４９３】
使用される数（例えば、量、温度など）に関する精度を確実にするために努力されているが、いくつかの実験的エラー及び偏差が説明されるべきである。
【０４９４】
当業者であれば、本明細書に記載される主題の実践に使用され得る、本明細書に記載されるものと類似または同等の多くの方法及び材料を認識するであろう。本開示は、記載される方法及び材料のみに限定するものでは一切ない。
【０４９５】
別途定義されない限り、本明細書に使用される技術的及び科学的用語は、本主題が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有し、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ（１９９４）Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；及びＪａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋと一致する。
【０４９６】
本明細書及び特許請求の範囲を通じて、「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」、及び「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」という語は、文脈が別途要求する場合を除いて、非排他的な意味で使用される。本明細書に記載される実施形態は、「からなる」、かつ／または「から本質的になる」実施形態を含むことが理解される。
【０４９７】
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、値を指す場合、いくつかの実施形態では±５０％、いくつかの実施形態では±２０％、いくつかの実施形態では±１０％、いくつかの実施形態では±５％、いくつかの実施形態では±１％、いくつかの実施形態では±０．５％、及びいくつかの実施形態では±０．１％の、指定された量からの変動を包含することを意味し、これは、かかる変動が、開示される方法を実施するか、または開示される組成物を用いるのに適切であるためである。
【０４９８】
値の範囲が提供される場合、範囲の上限と下限との間の各介在する値（文脈が別途明らかに示さない限り、下限の単位の１０分の１まで）、及び所定の範囲における任意の他の示されるかまたは介在する値が包含されることが理解される。これらの小さい範囲の上限及び下限は独立してより小さい範囲に含まれることもまた包含され、所定の範囲における任意の具体的に排除された限界に左右される。所定の範囲が限界値のうちの一方または両方を含む場合、それらの含まれた限界値のうちのいずれかまたは両方を排除する範囲もまた含まれる。
【０４９９】
以下の記載及び関連する図面において提示される教示の利益を有する、本主題が属する分野の当業者には、本明細書に記載される多くの修正及び他の実施形態が思い当たるであろう。したがって、本主題が、開示される特定の実施形態に限定されるものではなく、修正及び他の実施形態が添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されることを理解されたい。具体的な用語が本明細書に用いられているものの、それらは一般的かつ記述的な意味のみで使用され、限定の目的では使用されない。
【図１】
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【図２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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