(57)【要約】  本明細書において提供されるのは、ＰＲＣ２によって媒介される疾患または障害を処置するために有用であるトリアゾロピリミジン化合物の結晶形態である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
０．５重量％未満の残留する有機溶媒を含有する、Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン塩酸塩の結晶形態。
【請求項２】
０．２重量％未満の残留する有機溶媒を含有する、請求項１に記載の結晶形態。
【請求項３】
０．１重量％未満の残留する有機溶媒を含有する、請求項１に記載の結晶形態。
【請求項４】
１２．５±０．１、１３．０±０．１、２５．２±０．１および３０．８±０．１の２θ値（ＣｕＫα  λ＝１．５４１８Å）を含むＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン塩酸塩の結晶形態。
【請求項５】
１３．８±０．１、２０．８±０．１、２６．２±０．１、２６．７±０．１および２８．２±０．１からなる群から選択される少なくとも２つのさらなる２θ値（ＣｕＫα  λ＝１．５４１８Å）を含むＸ線粉末回折パターンを有する、請求項４に記載の結晶形態。
【請求項６】
０．５重量％未満の残留する有機溶媒を含有する、請求項４に記載の結晶形態。
【請求項７】
１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、前記得られた懸濁液を塩酸で酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）前記得られた溶液の温度を低下させて結晶化合物Ｘを得るステップと
を含む方法によって得られる、結晶性Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン塩酸塩（化合物Ｘ）。
【請求項８】
１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、前記得られた懸濁液を塩酸で酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）前記得られた溶液の温度を低下させて結晶化合物Ｘを得るステップと
を含む方法によって得られる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の結晶化合物Ｘ。
【請求項９】
ステップ１）において、前記水混和性有機溶媒は、エタノールおよびアセトンからなる群から選択され、
ステップ２）において、前記得られた懸濁液を約５０〜７５℃に加熱し、
ステップ３）において、温度を約５０〜７５℃に維持しつつ、水および前記水混和性有機溶媒の混合物中の０．５ＮのＨＣｌの溶液を加えることにより、前記得られた懸濁液を塩酸で酸性化して透明な溶液を形成し、および
ステップ４）において、前記得られた溶液の温度を低下させて結晶化合物Ｘを得る、方法によって得られる、請求項８に記載の結晶化合物Ｘ。
【請求項１０】
１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、前記得られた懸濁液を塩酸で酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）前記得られた溶液の温度を低下させて化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む方法によって得ることができる、Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン塩酸塩（化合物Ｘ）の結晶形態Ａ。
【請求項１１】
１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、前記得られた懸濁液を塩酸で酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）前記得られた溶液の温度を低下させて化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む方法によって得ることができる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の結晶形態。
【請求項１２】
ステップ１）において、前記水混和性有機溶媒は、エタノールおよびアセトンからなる群から選択され、
ステップ２）において、前記得られた懸濁液を約５０〜７５℃に加熱し、
ステップ３）において、温度を約５０〜７５℃に維持しつつ、水および前記水混和性有機溶媒の混合物中の０．５ＮのＨＣｌの溶液を加えることにより、前記得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成し、および
ステップ４）において、前記得られた溶液の温度を低下させて化合物Ｘの形態Ａを得る、方法によって得られる、請求項１０に記載の結晶形態Ａ。
【請求項１３】
Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン塩酸塩の水和した固体形態。
【請求項１４】
一水和物形態ＨＡである、請求項１３に記載の水和した固体形態。
【請求項１５】
一水和物形態ＨＢである、請求項１３に記載の水和した固体形態。
【請求項１６】
以下の２θ値（ＣｕＫα  λ＝１．５４１８Å）：１３．８±０．１、２０．８±０．１、２６．２±０．１、２６．７±０．１および２８．２±０．１を含むＸ線粉末回折パターンを有する、請求項１４に記載の水和した固体形態。
【請求項１７】
以下の２θ値（ＣｕＫα  λ＝１．５４１８Å）：９．０±０．１、１７．１±０．１、２２．８±０．１、２６．９±０．１および３５．３±０．１を含むＸ線粉末回折パターンを有する、請求項１５に記載の水和した固体形態。
【請求項１８】
１種または複数の薬学的に許容される担体と、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の結晶化合物Ｘとを含む医薬組成物。
【請求項１９】
少なくとも１種のさらなる治療剤をさらに含む、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記少なくとも１種のさらなる治療剤は、他の抗癌剤、免疫調節剤、抗アレルギー剤、制吐剤、鎮痛剤、細胞保護剤およびこれらの組合せから選択される、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
治療において使用するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の結晶化合物Ｘ。
【請求項２２】
ＥＥＤおよび／またはＰＲＣ２によって媒介される疾患または障害を処置するための医薬の製造における、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の結晶化合物Ｘの使用。
【請求項２３】
前記疾患または障害は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、他のリンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、中皮腫、胃癌、悪性ラブドイド腫瘍、肝細胞癌、前立腺癌、乳癌、胆管および胆嚢癌、膀胱癌、神経芽細胞腫、神経鞘腫、神経膠腫、神経膠芽腫および星状細胞腫を含む脳腫瘍、子宮頸癌、結腸癌、黒色腫、子宮内膜癌、食道癌、頭頸部癌、肺癌、上咽頭癌、卵巣癌、膵臓癌、腎細胞癌、直腸癌、甲状腺癌、副甲状腺腫瘍、子宮腫瘍ならびに軟部組織肉腫から選択される、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、前記得られた懸濁液を塩酸で酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）前記得られた溶液の温度を低下させて化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む、化合物Ｘの結晶形態Ａを調製する方法。
【請求項２５】
１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、前記得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）前記得られた溶液の温度を低下させて結晶化合物Ｘを得るステップと
を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の結晶形態を調製する方法。
【請求項２６】
ステップ１）において、前記水混和性有機溶媒は、エタノールおよびアセトンからなる群から選択され、
ステップ２）において、前記得られた懸濁液を約５０〜７５℃に加熱し、
ステップ３）において、温度を約５０〜７５℃に維持しつつ、水および前記水混和性有機溶媒の混合物中の０．５ＮのＨＣｌの溶液を加えることにより、前記得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成し、および
ステップ４）において、前記得られた溶液の温度を低下させて化合物Ｘの形態Ａを得る、請求項２４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン塩酸塩の結晶形態、これらを含む医薬組成物、これらの結晶形態を使用した処置の方法およびこれらの結晶形態を調製する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリコーム群（ＰｃＧ）タンパク質は、多くのヒト癌において調節不全となっているクロマチン修飾酵素である。ＳＵＺ１２（ｚｅｓｔｅ１２のサプレッサー）、ＥＥＤ（胚性外胚葉発達）および触媒サブユニットであるＥＺＨ２（ｚｅｓｔｅ相同体２のエンハンサー）を含むポリコーム抑制複合体２（ＰＲＣ２）は、標的遺伝子のプロモーター領域またはその周囲におけるコアヒストンＨ３リシン２７（Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３）をメチル化することによって遺伝子を抑制する。ＰＲＣ２は、遺伝子転写のエピジェネティック制御に関与している細胞の機構の重大な構成要素であり、発生、および組織分化、および再生において重大な機能を果たしている。ＥＺＨ２は、触媒サブユニットであるが、ＰＲＣ２は、そのメチルトランスフェラーゼ活性のために少なくともＥＥＤおよびＳＵＺ１２を必要とする。ＥＥＤ、ＳＵＺ１２およびＥＺＨ２は、これらに限定されないが、乳癌、前立腺癌、肝細胞癌などを含む多くの癌において過剰発現している。ＥＺＨ２活性化変異は、ＤＬＢＣＬ（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）患者およびＦＬ（濾胞性リンパ腫）患者において同定されている。ＤＬＢＣＬにおいて補因子Ｓ−アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）と競合する化合物によるＰＲＣ２メチルトランスフェラーゼ活性の阻害は、Ｈ３Ｋ２７メチル化を反転させ、標的遺伝子の発現を再活性化し、腫瘍成長／増殖を阻害する。したがって、ＰＲＣ２は、ＤＬＢＣＬおよび他の癌についての薬理学的標的を提供する。
【０００３】
医薬組成物の調製において、所望の特性、例えば溶解速度、溶解度、バイオアベイラビリティーおよび／または保存安定性のバランスを有する治療剤の形態が求められている。多形と称されることが多い複数の固体形態の存在は、固体医薬化合物について周知であり、このような化合物の化学的および物理的安定性ならびに取扱い特性は、どのような固体形態が使用されるかによって決まることが多い。したがって、活性薬物物質の特定の固体形態（例えば、塩の形態、水和もしくは溶媒和形態または多形形態）の選択は、信頼できかつ再現性のある生産プロセスの設計において、ならびに薬物物質の安全および有効な形態の貯蔵、取扱いおよび分配において非常に重要であることが多い。
【０００４】
「Ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ：Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｉｄｕａｌ  Ｓｏｌｖｅｎｔｓ」は、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  ｆｏｒ  Ｈａｒｍｏｎｉｓａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｕｓｅ（ＩＣＨ）によって作製された、医薬品において許容される残留溶媒の量についてのガイドラインである。このガイドラインは、薬物物質および剤形の製造におけるより毒性でない溶媒の使用を推奨しており、薬物製品における残留溶媒（有機揮発性不純物）についての医薬品としての限度を設定している。このガイダンスは、溶媒を、リスクをベースとする３つのクラスに分割する。許容されない毒性をもたらすことが公知であるクラス１溶媒、より重度でない毒性と関連するクラス２溶媒および低い毒性の可能性を有するクラス３溶媒である。
【０００５】
ＩＣＨガイダンスによると、１日当たり５０ｍｇまたはそれ未満（５０００ｐｐｍまたは０．５％に対応する）のクラス３溶媒の残留する量は、正当化を伴わずに許容される。濃度の限度は、毎日投与される１０ｇの生成物質量を想定することによって下記の等式を使用して計算する。
濃度（ｐｐｍ）＝（１０００×ＰＤＥ）／用量
ＰＤＥ（許容される毎日の曝露）は、ｍｇ／日に関して示され、用量は、ｇ／日で示す。より多い量のクラス３溶媒はまた、これらが製造能力および良好な製造の実施に関して現実的である場合に許容され得る。
【０００６】
参照により本明細書中に組み込まれる米国特許出願公開第１４／９７７，２７３号明細書は、ＰＲＣ２によって媒介される疾患または障害を処置するための特定のトリアゾロピリミジン化合物を開示している。この特許出願は、２０１６年６月２３日に米国特許出願公開第２０１６−０１７６８８２号明細書として公表された。その出願において開示されている１つの化合物は、Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（遊離形態）およびその塩酸塩である。遊離形態（本明細書において、化合物Ａと称される）は、下記の構造：
【化１】
2019522051.tif 000002
を有する。
【０００７】
塩酸塩（本明細書において化合物Ｘと称される）は、下記の構造：
【化２】
2019522051.tif 000003
を有する。
【０００８】
遊離形態である化合物Ａは、７．４の生理学的に関連性のあるｐＨレベルにおいておよび人工胃液（ＳＧＦ）中の両方において低い水溶性を示す。化合物Ａの曝露は、げっ歯類薬物動態研究においてより高い用量で比例未満であったことが見出されたが、これは、臨床現場における不十分および可変性の曝露をもたらし得る。実験を行い、水溶解度を改善させる適当な塩を見出した。リン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩およびメシル酸塩も含むいくつかの塩を試験した後、塩酸塩のみが溶解度における必要な改善を実現し、げっ歯類において用量比例的曝露を示すことが発見された。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
化合物Ｘを生成するための米国特許出願公開第１４／９７７，２７３号明細書に記載されている手順は、イソプロパノール（ＩＰＡ、クラス３溶媒）を媒体として使用する。１Ｈ  ＮＭＲによって決定されるように、不定量のＩＰＡが、米国特許出願公開第１４／９７７，２７３号明細書に記載されている手順によって得られる化合物Ｘの異なるバッチにおいて観察された（下記の表２においてエントリー１によって例示される）が、いくつかのバッチにおけるＩＰＡの量は、０．５重量％超である。最終生成物から残留するＩＰＡを除去することは、非常に困難でもあった。さらに、このように得られた化合物Ｘは、ＸＲＰＤスペクトルから判断するように低く可変性の結晶化度を示した。残留するＩＰＡを除去し、結晶化度を改善させる努力がなされたが、あまり成功を伴わなかった。したがって、所望の形態、すなわち残留する有機溶媒を実質的に含有せず、かつ改善されかつ信頼できる結晶化度を示す形態の化合物Ｘを一貫して生成できる方法が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、化合物Ｘの結晶形態（Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン塩酸塩）を提供する。
【００１１】
これらの結晶形態の実施形態は、本明細書において形態Ａ、ＨＡおよびＨＢとして特性決定されるもの、ならびにこれらの結晶形態の組合せまたは混合物を含む。
【００１２】
【表１】
2019522051.tif 000004
【００１３】
本明細書において、特定の形態を特性決定するために使用される名称、例えば「ＨＡ」などは、同様または同一の物理的および化学的特性を有する任意の他の物質に関して限定的であると考えるべきではなく、むしろ、これらの命名は、本明細書においてまた提示する特性決定情報によって解釈すべきである単に識別名であることを理解すべきである。
【００１４】
本発明は、化合物Ｘの結晶形態の調製方法を提供する。
【００１５】
本発明は、化合物Ｘの結晶形態と、少なくとも１種の薬学的に許容される担体、賦形剤または添加剤とを含む医薬組成物も提供する。医薬組成物は、少なくとも１種のさらなる治療剤をさらに含み得る。特に目的であるのは、他の抗癌剤、免疫調節剤、抗アレルギー剤、抗悪心剤（または制吐剤）、鎮痛剤、細胞保護剤およびこれらの組合せから選択されるさらなる治療剤である。
【００１６】
本発明の化合物Ｘの結晶形態は、ＥＥＤおよび／またはＰＲＣ２によって媒介される疾患または障害の処置において使用され得る。
【００１７】
本発明の化合物Ｘの結晶形態は、治療において使用され得る。
【００１８】
本発明の化合物Ｘの結晶形態は、ＥＥＤおよび／またはＰＲＣ２によって媒介される疾患または障害の処置のための医薬の製造のために使用され得る。
【００１９】
本開示の他の特徴および利点は、下記の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】形態Ａ（無水形態）の代表的なＸ線粉末回折パターンを示す。
【図２】形態Ａの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）／熱重量分析（ＴＧＡ）サーモグラムを示す。
【図３】２５℃での形態Ａの動的蒸気吸着（ＤＶＳ）プロットを示す。
【図４】形態ＨＡ（一水和物形態）の代表的なＸ線粉末回折パターンを示す。
【図５】形態ＨＡの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）／熱重量分析（ＴＧＡ）サーモグラムを示す。
【図６】２５℃での形態ＨＡの動的蒸気吸着プロットを示す。
【図７】５０℃での形態ＨＡの動的蒸気吸着プロットを示す。
【図８】形態ＨＢ（二水和物形態）の代表的なＸ線粉末回折パターンを示す。
【図９】形態ＨＢの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）／熱重量分析（ＴＧＡ）サーモグラムを示す。
【図１０】２５℃での形態ＨＢの動的蒸気吸着プロットを示す。
【図１１】下記の実施例３に記載されている手順（Ａ）によって得られたものに対する下記の実施例２に記載されている手順（Ｂ）によって得られたものの、形態Ａの比較を示す（米国特許出願公開第１４／９７７，２７３号明細書にも記載されている）。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明の下記の列挙した実施形態は、代表的なものである。
【００２２】
１．０．５重量％未満の残留する有機溶媒を含有する、Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン塩酸塩の結晶形態Ａ。
【００２３】
２．０．２重量％未満の残留する有機溶媒を含有する、Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン塩酸塩の結晶形態Ａ。
【００２４】
３．０．１重量％未満の残留する有機溶媒を含有する、Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン塩酸塩の結晶形態Ａ。
【００２５】
４．１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）得られた溶液の温度を低下させて化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む方法によって得られる化合物Ｘの結晶形態Ａ。
【００２６】
５．１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）得られた溶液の温度を低下させて化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む方法によって得られる、実施形態１〜３のいずれか１つに記載の化合物Ｘの結晶形態Ａ。
【００２７】
６．ステップ１）において、水混和性有機溶媒は、エタノールおよびアセトンからなる群から選択され、
ステップ２）において、得られた懸濁液を約５０〜７５℃に加熱し、
ステップ３）において、温度を約５０〜７５℃に維持しつつ、水および前記水混和性有機溶媒の混合物中の０．５ＮのＨＣｌの溶液を加えることにより、得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成し、および
ステップ４）において、得られた溶液の温度を低下させて化合物Ｘの形態Ａを得る、方法によって得られる、実施形態５に記載の化合物Ｘの結晶形態Ａ。
【００２８】
７．Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン塩酸塩の水和した固体形態。
【００２９】
８．一水和物形態ＨＡである、実施形態７に記載の水和した固体形態。
【００３０】
９．二水和物形態ＨＢである、実施形態７に記載の水和した固体形態。
【００３１】
１０．以下の２θ値（ＣｕＫα  λ＝１．５４１８Å）：１３．８±０．１、２０．８±０．１、２６．２±０．１、２６．７±０．１および２８．２±０．１を含むＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン塩酸塩の結晶形態（形態ＨＡ）。一部の実施形態では、形態ＨＡは、リスト２におけるものから選択される１つまたは複数（例えば、２つ、３つ、４つもしくは５つ）のさらなる２θ値を有する。
【００３２】
１１．以下の２θ値（ＣｕＫα  λ＝１．５４１８Å）：９．０±０．１、１７．１±０．１、２２．８±０．１、２６．９±０．１および３５．３±０．１を含むＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン塩酸塩の結晶形態（形態ＨＢ）。一部の実施形態では、形態ＨＢは、リスト３におけるものから選択される１つまたは複数（例えば、２つ、３つ、４つもしくは５つ）のさらなる２θ値を有する。
【００３３】
１２．１種または複数の薬学的に許容される担体と、実施形態１〜６のいずれか１つに記載の形態Ａとを含む医薬組成物。
【００３４】
１３．少なくとも１種のさらなる治療剤をさらに含む、実施形態１２に記載の医薬組成物。
【００３５】
１４．前記さらなる治療剤は、他の抗癌剤、免疫調節剤、抗アレルギー剤、制吐剤、鎮痛剤、細胞保護剤およびこれらの組合せから選択される、実施形態１３に記載の医薬組成物。
【００３６】
１５．治療において使用するための、実施形態１〜６のいずれか１つに記載の結晶形態Ａ。
【００３７】
１６．ＥＥＤおよび／またはＰＲＣ２によって媒介される疾患または障害を処置するための医薬の製造における、実施形態１〜６のいずれか１つに記載の形態Ａの使用。
【００３８】
１７．前記疾患または障害は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、他のリンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、中皮腫、胃癌、悪性ラブドイド腫瘍、肝細胞癌、前立腺癌、乳癌、胆管および胆嚢癌、膀胱癌、神経芽細胞腫、神経鞘腫、神経膠腫、神経膠芽腫および星状細胞腫を含む脳腫瘍、子宮頸癌、結腸癌、黒色腫、子宮内膜癌、食道癌、頭頸部癌、肺癌、上咽頭癌、卵巣癌、膵臓癌、腎細胞癌、直腸癌、甲状腺癌、副甲状腺腫瘍、子宮腫瘍ならびに軟部組織肉腫から選択される、実施形態１６に記載の使用。
【００３９】
１８．１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）得られた溶液の温度を低下させて化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む、化合物Ｘの結晶形態Ａを調製する方法。
【００４０】
１９．１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）得られた溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む、０．５重量％未満の残留する有機溶媒、好ましくは０．３重量％未満の残留する有機溶媒、より好ましくは０．１重量％未満の残留する有機溶媒を含有する化合物Ｘの結晶形態Ａを調製する方法。
【００４１】
２０．ステップ１）において、水混和性有機溶媒は、エタノールおよびアセトンからなる群から選択され、
ステップ２）において、得られた懸濁液を約５０〜７５℃に加熱し、
ステップ３）において、温度を約５０〜７５℃に維持しつつ、水および前記水混和性有機溶媒の混合物中の０．５ＮのＨＣｌの溶液を加えることにより、得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成し、および
ステップ４）において、得られた溶液の温度を低下させて化合物Ｘの形態Ａを得る、実施形態１９に記載の方法。
【００４２】
塩の形成の全プロセス中、材料は、「スラリー」として残り、決して完全に溶解しなかったため、化合物Ｘがイソプロパノール媒体中で形成されるとき、ＩＰＡを結晶格子中に捕捉し得ることが仮定された。表２は、選択したクラス３溶媒およびこれらの組合せで行った実験から得た結果を要約する。ＥｔＯＨ／水およびアセトン／水（エントリー１１および１２）は、化合物Ｘの完全な溶解を可能とし、また特に高温で過飽和状態を最適な期間にわたって維持したことが予想外に発見された。これらの組合せは、通常の乾燥後、有機溶媒を実質的に含有せず、例えば重量で０．３％以下、典型的には、０．１％以下の有機溶媒を含有する化合物Ｘの結晶形態を提供する。
【００４３】
【表２】
2019522051.tif 000005
【００４４】
選択した溶媒の対により、表３において列挙したように結晶化条件をさらに最適化した。表３におけるエントリー５および６において示したような条件は、非常により低い含量の残留する有機溶媒およびより高い結晶化度を有する材料を生成したことが見出されたが、一方、より良好な収率は、エントリー５における条件で得た。エントリー５の条件はまた、表３におけるエントリー７として示すように、複数グラムスケールで再生成することができた。
【００４５】
【表３】
2019522051.tif 000006
【００４６】
化合物Ｘの形態Ａ（無水形態）
一実施形態では、化合物Ｘを、形態Ａを含む結晶性材料として提供する。化合物Ｘの結晶形態は、本明細書において化合物Ｘの「形態Ａ」と称される結晶形態を含む。
【００４７】
一実施形態では、化合物Ｘの形態Ａは、下記と概ね等しい単位格子パラメーターによって特性決定される。
【００４８】
【表４】
2019522051.tif 000007
【００４９】
空間群：Ｐ−１
化合物Ｘの分子／非対称単位：２
単位格子中の体積／分子数＝９４６．０（９）Å３
密度（計算値）＝１．４４９ｇ／ｃｍ３
ここで、化合物Ｘの形態Ａの単位格子パラメーターは、約１００（±２）Ｋ（−１７３℃）の温度で測定する。
【００５０】
一実施形態では、本発明は、以下の２θ値（ＣｕＫα  λ＝１．５４１８Å）：１２．５±０．１、１３．０±０．１、２５．２±０．１および３０．８±０．１を含むＸ線粉末回折パターンによって特性決定される化合物Ｘの形態Ａを提供する。別の実施形態では、上記で特定した２θ値に加えて、形態Ａは、リスト１におけるものから選択される１つまたは複数（例えば、２つ、３つ、４つもしくは５つ）のさらなる２θ値を示す。さらに別の実施形態では、形態Ａは、図１に示すものと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを示す。
【００５１】
【表５】
2019522051.tif 000008
【００５２】
別の実施形態では、化合物Ｘの形態Ａは、ＤＳＣ中に約２６４±１℃で強い吸熱を示す。
【００５３】
別の実施形態では、化合物Ｘの形態Ａは、ＴＧＡにより、２００℃までに約０．６％の損失に達するゆっくりとした質量損失を有した。
【００５４】
化合物Ｘの形態ＨＡ（一水和物）
一実施形態では、化合物Ｘは、本明細書において化合物Ｘの「形態ＨＡ」と称される結晶形態において一水和物として提供される。化合物Ｘの形態ＨＡは、化合物Ｘの各分子について１個の水分子の化学量論を有する。
【００５５】
一態様において、本発明は、以下の２θ値（ＣｕＫα  λ＝１．５４１８Å）：１３．８±０．１、２０．８±０．１、２６．２±０．１、２６．７±０．１および２８．２±０．１を含むＸ線粉末回折パターンによって特性決定される化合物Ｘの形態ＨＡを提供する。別の実施形態では、上記で特定した２θ値に加えて、形態ＨＡは、リスト２におけるものから選択される１つまたは複数（例えば、２つ、３つ、４つもしくは５つ）のさらなる２θ値を示す。さらに別の実施形態では、形態ＨＡは、図４に示すものと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを示す。
【００５６】
【表６】
2019522051.tif 000009
【００５７】
一水和物は、０．５〜０．６超の水分活性を有する水／溶媒混合物中で容易に形成され、湿度および温度に対して許容される安定性を示すことが発見されてきた。
【００５８】
別の実施形態では、化合物Ｘの形態ＨＡは、約２５６±１℃でＤＳＣ中に強い吸熱を示す。
【００５９】
別の実施形態では、化合物Ｘの形態ＨＡは、ＴＧＡにより、１１１℃までに約４．２％の損失に達するゆっくりとした質量損失を有した。
【００６０】
化合物Ｘの形態ＨＢ（二水和物）
一実施形態では、化合物Ｘは、本明細書において化合物Ｘの「形態ＨＢ」と称される結晶形態において二水和物として提供される。化合物Ｘの形態ＨＢは、化合物Ｘの各分子について２個の水分子の化学量論を有する。
【００６１】
一態様において、本発明は、以下の２θ値（ＣｕＫα  λ＝１．５４１８Å）：９．０±０．１、１７．１±０．１、２２．８±０．１、２６．９±０．１および３５．３±０．１を含むＸ線粉末回折パターンによって特性決定される化合物Ｘの形態ＨＢを提供する。別の実施形態では、上記で特定した２θ値に加えて、形態ＨＢは、リスト３におけるものから選択される１つまたは複数（例えば、２つ、３つ、４つもしくは５つ）のさらなる２θ値を示す。さらに別の実施形態では、形態ＨＢは、図８に示すものと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを示す。
【００６２】
【表７】
2019522051.tif 000010
【００６３】
別の実施形態では、化合物Ｘの形態ＨＢは、約２４４±１℃でＤＳＣ中に強い吸熱を示す。
【００６４】
別の実施形態では、化合物Ｘの形態ＨＢは、ＴＧＡにより、１２２℃までに約８．５％の損失に達するゆっくりとした質量損失を有した。
【００６５】
反応不純物および／または加工不純物の存在は、当技術分野で公知の分析技術、例えばクロマトグラフィー、核磁気共鳴分光法、質量分析法または赤外分光法によって決定され得る。
【００６６】
本発明の一態様において、本発明の多形は、結晶特性を有し、好ましくは少なくとも５０％結晶性、より好ましくは少なくとも６０％結晶性、さらにより好ましくは少なくとも７０％結晶性、最も好ましくは少なくとも８０％結晶性である。結晶化度は、通常のＸ線回折法技術によって推定することができる。
【００６７】
一部の実施形態では、化合物Ｘの固体形態は、本明細書に記載されている形態の１つまたは複数を含む。化合物Ｘの固体形態は、２つ以上のこれらの形態を含むことができ、すなわち、これは、２つ以上の形態の混合物であり得る。一部の実施形態では、固体形態の試料は、主に形態Ａ、ＨＡ、およびＨＢから選択される単一の形態からなり、これは、材料の５０％以上が１つの固体形態のものであることを意味する。混合物中の様々な形態の相対量は、ＸＲＰＤデータから決定することができる。本明細書に記載のように、形態のいくつか、例えば混合物として生じることができる形態ＡおよびＨＡは、適切な条件下で展開するか、または相互変換することができ、材料がその中で維持される相対湿度および温度によって相互変換することができる。
【００６８】
本発明の一態様において、本発明の多形は、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％〜９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の結晶性である。
【００６９】
本明細書において、Ｘ線粉末回折ピーク（２θ度で表す）は、１．５４０６Å（アルファ１）および１．５４４４Å（アルファ２）の波長を伴う銅Ｘ線を使用して測定される。
【００７０】
本発明の結晶形態は、非溶媒和形態または溶媒和形態で存在することができる。用語「溶媒和物」は、本明細書において、本発明の化合物およびある量の１種または複数の薬学的に許容される溶媒を含む分子錯体を説明するために使用される。薬学的に許容される溶媒の例は、エタノールおよび水を含む。溶媒が水であるとき、用語「水和物」が用いられる。本明細書に記載のような化合物Ｘの２つの多形は、水和物である。
【００７１】
別の実施形態では、結晶形態は、化合物Ｘの形態Ａであり、前記形態Ａは、０．５重量％未満の残留する有機溶媒を含有する。
【００７２】
別の実施形態では、結晶形態は、化合物Ｘの形態Ａであり、前記形態Ａは、０．４重量％未満の残留する有機溶媒を含有する。
【００７３】
別の実施形態では、結晶形態は、化合物Ｘの形態Ａであり、前記形態Ａは、０．３重量％未満の残留する有機溶媒を含有する。
【００７４】
別の実施形態では、結晶形態は、化合物Ｘの形態Ａであり、前記形態Ａは、０．２重量％未満の残留する有機溶媒を含有する。
【００７５】
別の実施形態では、結晶形態は、化合物Ｘの形態Ａであり、前記形態Ａは、０．１重量％未満の残留する有機溶媒を含有する。
【００７６】
別の実施形態では、結晶形態は、化合物Ｘの形態ＨＡである。
【００７７】
別の実施形態では、結晶形態は、化合物Ｘの形態ＨＢである。
【００７８】
別の実施形態では、結晶形態は、化合物Ｘの形態ＨＡと組み合わせた化合物Ｘの形態Ａである。
【００７９】
別の実施形態では、結晶形態は、化合物Ｘの形態ＨＡと組み合わせた化合物Ｘの形態Ａである。
【００８０】
別の実施形態では、結晶形態は、化合物Ｘの形態ＨＢと組み合わせた化合物Ｘの形態Ａである。
【００８１】
別の実施形態では、結晶形態は、化合物Ｘの形態ＨＡおよび化合物Ｘの形態ＨＢと組み合わせた化合物Ｘの形態Ａである。
【００８２】
別の実施形態では、本発明は、上記の実施形態のいずれかから選択される１つの固体形態を含む組成物を提供する。
【００８３】
別の実施形態では、本発明は、上記の実施形態のいずれかから選択される１つの固体形態と、少なくとも１種の薬学的に許容される担体、賦形剤または添加剤とを含む医薬組成物を提供する。
【００８４】
別の実施形態では、本発明は、治療的有効量の上記の実施形態のいずれかから選択される１つの固体形態と、少なくとも１種の薬学的に許容される担体、賦形剤または添加剤とを含む医薬組成物を提供する。
【００８５】
医薬組成物は、ＥＥＤおよび／またはＰＲＣ２によって媒介される疾患または障害の処置において有用である。
【００８６】
別の実施形態では、本発明は、さらなる治療剤をさらに含む、上記に定義されているような医薬組成物を提供する。
【００８７】
別の実施形態では、本発明は、治療において使用するための、単独でまたは任意選択で本発明の別の化合物および／もしくは少なくとも１種の他のタイプの治療剤と組み合わせた、上記の実施形態のいずれかから選択される１つの固体形態を提供する。
【００８８】
別の実施形態では、本発明は、ＥＥＤおよび／またはＰＲＣ２によって媒介される疾患または障害の処置のための治療において使用するための、単独でおよび／または少なくとも１種の他のタイプの治療剤、上記の実施形態のいずれかから選択される１つの固体形態を提供する。
【００８９】
別の実施形態では、本発明は、このような処置を必要としている患者に、単独でおよび／または少なくとも１種の他のタイプの治療剤、治療的有効量の上記の実施形態のいずれかから選択される１種の固体形態を投与することを含む、ＥＥＤおよび／またはＰＲＣ２によって媒介される疾患または障害の処置のための方法を提供する。
【００９０】
別の実施形態では、本発明は、それを必要とする患者に、治療的有効量の第１および第２の治療剤を投与することを含む、ＥＥＤおよび／またはＰＲＣ２によって媒介される疾患または障害の処置のための方法を提供し、第１の治療剤は、上記の実施形態のいずれかから選択される１つの固体形態であり、および第２の治療剤は、１種の他のタイプの治療剤である。
【００９１】
別の実施形態では、本発明は、ＥＥＤおよび／またはＰＲＣ２によって媒介される疾患または障害の処置のための医薬の製造のための、単独でまたは任意選択で少なくとも１種の他のタイプの治療剤と組み合わせた、上記の実施形態のいずれかから選択される１つの固体形態の使用も提供する。
【００９２】
別の実施形態では、本発明は、治療における使用のための、上記の実施形態のいずれかから選択される１つの固体形態およびさらなる治療剤の合わせた調製物を提供する。
【００９３】
別の実施形態では、本発明は、治療における同時または別々の使用のための、上記の実施形態のいずれかから選択される１つの固体形態の組合せおよびさらなる治療剤を提供する。
【００９４】
別の実施形態では、本発明は、ＥＥＤおよび／またはＰＲＣ２によって媒介される疾患または障害の処置における同時、別々または逐次使用のための、上記の実施形態のいずれかから選択される１つの固体形態およびさらなる治療剤の合わせた調製物を提供する。前記固体形態は、本明細書に記載されている医薬組成物として投与され得る。
【００９５】
ＥＥＤおよび／またはＰＲＣ２によって媒介される疾患または障害の例には、これらに限定されないが、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、他のリンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、中皮腫、胃癌、悪性ラブドイド腫瘍、肝細胞癌、前立腺癌、乳癌、胆管および胆嚢癌、膀胱癌、神経芽細胞腫、神経膠腫、神経膠芽腫および星状細胞腫を含む脳腫瘍、子宮頸癌、結腸癌、黒色腫、子宮内膜癌、食道癌、頭頸部癌、肺癌、上咽頭癌、卵巣癌、膵臓癌、腎細胞癌、直腸癌、甲状腺癌、副甲状腺腫瘍、子宮腫瘍、ならびに横紋筋肉腫（ＲＭＳ）、カポジ肉腫、滑膜肉腫、骨肉腫およびユーイング肉腫から選択される軟部組織肉腫が含まれる。
【００９６】
別の実施形態では、本発明は、それを必要とする患者に、任意選択で第２の治療剤と共に治療的有効量の第１の治療剤を投与することを含む、ＥＥＤおよび／またはＰＲＣ２によって媒介される疾患または障害の処置のための方法を提供し、第１の治療剤は、上記の実施形態のいずれかから選択される１つの固体形態であり、および第２の治療剤は、１種の他のタイプの治療剤であり、疾患または障害は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、他のリンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、胃癌、悪性ラブドイド腫瘍および肝細胞癌から選択される。
【００９７】
別の実施形態では、合わせた医薬組成物、または合わせた方法、または合わせた使用において使用されるさらなる治療剤は、以下の治療剤：他の抗癌剤、免疫調節剤、抗アレルギー剤、抗悪心剤（または制吐剤）、鎮痛剤、細胞保護剤およびこれらの組合せの１つまたは複数、好ましくは１〜３つから選択される。
【００９８】
別の実施形態では、本発明は、化合物Ｘの結晶形態Ａを調製する方法を提供し、前記形態Ａは、０．５重量％未満の残留する有機溶媒、好ましくは０．２重量％未満の残留する有機溶媒、より好ましくは０．１重量％未満の残留する有機溶媒を含有する。
【００９９】
別の実施形態では、本発明は、
１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を少なくとも約５０℃に加熱するステップと、
３）温度を少なくとも約５０℃に維持しつつ、得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）得られた溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む、化合物Ｘの結晶形態Ａを調製する方法を提供する。
【０１００】
別の実施形態では、本発明は、
１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）得られた溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む、０．５重量％未満の残留する有機溶媒、好ましくは０．３重量％未満の残留する有機溶媒、より好ましくは０．１重量％未満の残留する有機溶媒を含有する化合物Ｘの結晶形態Ａを調製する方法である。
【０１０１】
別の実施形態では、本発明は、
１）化合物Ａを、水と、エタノールおよびアセトンからなる群から選択される水混和性有機溶媒との混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０〜７５℃に加熱するステップと、
３）温度を約５０〜７５℃に維持しつつ、水および前記水混和性有機溶媒の混合物中の０．５ＮのＨＣｌの溶液を加えることにより、得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む、０．５重量％未満の残留する有機溶媒を含有する化合物Ｘの結晶形態Ａを調製する方法を提供する。
【０１０２】
別の実施形態では、本発明は、
１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）得られた溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む方法によって得られる、化合物Ｘの結晶形態Ａを提供する。
【０１０３】
別の実施形態では、本発明は、
１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）得られた溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む方法によって得られる、０．５重量％未満の残留する有機溶媒、好ましくは０．３重量％未満の残留する有機溶媒、より好ましくは０．１重量％未満の残留する有機溶媒を含有する化合物Ｘの結晶形態Ａを提供する。
【０１０４】
別の実施形態では、本発明は、
１）化合物Ａを、水と、エタノールおよびアセトンからなる群から選択される水混和性有機溶媒との混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０〜７５℃に加熱するステップと、
３）温度を約５０〜７５℃に維持しつつ、水および前記水混和性有機溶媒の混合物中の０．５ＮのＨＣｌの溶液を加えることにより、得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む方法によって得られる、０．５重量％未満の残留する有機溶媒、好ましくは０．３重量％未満の残留する有機溶媒、より好ましくは０．１重量％未満の残留する有機溶媒を含有する化合物Ｘの結晶形態Ａを提供する。
【０１０５】
別の実施形態では、本発明は、
１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）得られた溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む方法によって得ることができる、化合物Ｘの結晶形態Ａを提供する。
【０１０６】
別の実施形態では、本発明は、
１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）得られた溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む方法によって得られる、０．５重量％未満の残留する有機溶媒、好ましくは０．３重量％未満の残留する有機溶媒、より好ましくは０．１重量％未満の残留する有機溶媒を含有する化合物Ｘの結晶形態Ａを提供する。
【０１０７】
別の実施形態では、本発明は、
１）化合物Ａを、水と、エタノールおよびアセトンからなる群から選択される水混和性有機溶媒との混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０〜７５℃に加熱するステップと、
３）温度を約５０〜７５℃に維持しつつ、水および前記水混和性有機溶媒の混合物中の０．５ＮのＨＣｌの溶液を加えることにより、得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む方法によって得ることができる、０．５重量％未満の残留する有機溶媒、好ましくは０．３重量％未満の残留する有機溶媒、より好ましくは０．１重量％未満の残留する有機溶媒を含有する化合物Ｘの結晶形態Ａを提供する。
【０１０８】
別の実施形態では、本発明は、
１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を少なくとも約５０℃に加熱するステップと、
３）温度を少なくとも約５０℃に維持しつつ、得られた懸濁液を塩酸で酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）得られた溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む、化合物Ｘの結晶形態Ａを調製する方法を提供する。
【０１０９】
別の実施形態では、本発明は、
１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、得られた懸濁液を塩酸で酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）得られた溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む、０．５重量％未満の残留する有機溶媒、好ましくは０．３重量％未満の残留する有機溶媒、より好ましくは０．１重量％未満の残留する有機溶媒を含有する化合物Ｘの結晶形態Ａを調製する方法を提供する。
【０１１０】
別の実施形態では、本発明は、
１）化合物Ａを、水と、エタノールおよびアセトンからなる群から選択される水混和性有機溶媒との混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０〜７５℃に加熱するステップと、
３）温度を約５０〜７５℃に維持しつつ、水および前記水混和性有機溶媒の混合物中の０．５ＮのＨＣｌの溶液を加えることにより、得られた懸濁液を塩酸で酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む、０．５重量％未満の残留する有機溶媒を含有する化合物Ｘの結晶形態Ａを調製する方法を提供する。
【０１１１】
別の実施形態では、本発明は、
１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、得られた懸濁液を塩酸で酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）得られた溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む方法によって得られる、化合物Ｘの結晶形態Ａを提供する。
【０１１２】
別の実施形態では、本発明は、
１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、得られた懸濁液を塩酸で酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）得られた溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む方法によって得られる、０．５重量％未満の残留する有機溶媒、好ましくは０．３重量％未満の残留する有機溶媒、より好ましくは０．１重量％未満の残留する有機溶媒を含有する化合物Ｘの結晶形態Ａを提供する。
【０１１３】
別の実施形態では、本発明は、
１）化合物Ａを、水と、エタノールおよびアセトンからなる群から選択される水混和性有機溶媒との混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０〜７５℃に加熱するステップと、
３）温度を約５０〜７５℃に維持しつつ、水および前記水混和性有機溶媒の混合物中の０．５ＮのＨＣｌの溶液を加えることにより、得られた懸濁液を塩酸で酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む方法によって得られる、０．５重量％未満の残留する有機溶媒、好ましくは０．３重量％未満の残留する有機溶媒、より好ましくは０．１重量％未満の残留する有機溶媒を含有する化合物Ｘの結晶形態Ａを提供する。
【０１１４】
別の実施形態では、本発明は、
１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、得られた懸濁液を塩酸で酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）得られた溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む方法によって得ることができる、化合物Ｘの結晶形態Ａを提供する。
【０１１５】
別の実施形態では、本発明は、
１）Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（化合物Ａ）を水および水混和性有機溶媒の混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０℃または５０℃超に加熱するステップと、
３）温度を約５０℃または５０℃超に維持しつつ、得られた懸濁液を酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）得られた溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む方法によって得られる、０．５重量％未満の残留する有機溶媒、好ましくは０．３重量％未満の残留する有機溶媒、より好ましくは０．１重量％未満の残留する有機溶媒を含有する化合物Ｘの結晶形態Ａを提供する。
【０１１６】
別の実施形態では、本発明は、
１）化合物Ａを、水と、エタノールおよびアセトンからなる群から選択される水混和性有機溶媒との混合物に懸濁させるステップと、
２）得られた懸濁液を約５０〜７５℃に加熱するステップと、
３）温度を約５０〜７５℃に維持しつつ、水および前記水混和性有機溶媒の混合物中の０．５ＮのＨＣｌの溶液を加えることにより、得られた懸濁液を塩酸で酸性化して透明な溶液を形成するステップと、
４）溶液の温度を低下させて結晶の形成を促し、化合物Ｘの形態Ａを得るステップと
を含む方法によって得ることができる、０．５重量％未満の残留する有機溶媒、好ましくは０．３重量％未満の残留する有機溶媒、より好ましくは０．１重量％未満の残留する有機溶媒を含有する化合物Ｘの結晶形態Ａを提供する。
【０１１７】
化合物Ｘの結晶形態Ａを調製する上記の方法へのさらなる実施形態では、本発明は、溶媒混合物の下記の好ましい比を提供する。
【０１１８】
Ｈ２ＯおよびＥｔＯＨの溶媒混合物の比であり、ここで、ＥｔＯＨは、８０〜１００重量％である。
【０１１９】
Ｈ２ＯおよびＥｔＯＨの溶媒混合物の比であり、ここで、ＥｔＯＨは、８５〜１００重量％である。
【０１２０】
Ｈ２ＯおよびＥｔＯＨの溶媒混合物の比であり、ここで、ＥｔＯＨは、９０〜１００重量％である。
【０１２１】
Ｈ２ＯおよびＥｔＯＨの溶媒混合物の比であり、ここで、ＥｔＯＨは、９５〜１００重量％である。
【０１２２】
Ｈ２ＯおよびＥｔＯＨの溶媒混合物の比であり、ここで、ＥｔＯＨは、８５〜９５重量％である。
【０１２３】
Ｈ２ＯおよびＥｔＯＨの溶媒混合物の比であり、ここで、ＥｔＯＨは、９０〜９５重量％である。
【０１２４】
化合物Ｘの結晶形態Ａを調製する上記の方法へのさらなる実施形態では、本発明は、ステップ２のための下記の好ましい温度範囲を提供する。
【０１２５】
温度範囲は、５０〜７５℃である。
【０１２６】
温度範囲は、６０〜７５℃である。
【０１２７】
温度範囲は、７０〜７５℃である。
【０１２８】
本発明の様々な（列挙した）実施形態は、本明細書に記載されている。各実施形態において特定されている特徴は、他の特定した特徴と併せて本発明のさらなる実施形態を提供し得ることが認識される。実施形態のそれぞれの個々の要素は、それ自体の独立した実施形態であることも理解される。
【０１２９】
本発明の他の特徴は、本発明の例示のために示される例示的な実施形態の上記の説明の過程で明白となるべきであり、それを限定するものではない。
【０１３０】
ＩＩＩ．定義
本明細書の上および下で使用する一般用語は、好ましくは、他に示さない限り、本発明に関連して下記の意味を有し、いかなる箇所で用いられようとも、より一般の用語は、互いに独立に、より特定の定義または残存によって置き換えられ得、したがって本発明のより詳細な実施形態を定義する。
【０１３１】
本発明の特徴および利点は、下記の詳細な説明を読むことによって当業者がより容易に理解し得る。明確さのために、別々の実施形態に関連して上記および下記で記載した本発明の特定の特徴は、合わせて単一の実施形態を形成し得ることも理解すべきである。逆に、簡潔さのために、単一の実施形態に関連して記載されている本発明の様々な特徴は、これらの部分組合せを形成するためにも合わされ得る。
【０１３２】
用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、「その（ｔｈｅ）」および本発明に関連して（特に特許請求の範囲に関連して）使用される同様の用語は、本明細書において他に示さない限りまたは文脈によって明らかに矛盾しない限り、単数および複数の両方を包含すると解釈される。
【０１３３】
単語「約」が先行する成分、重量パーセント、温度などの数量を表す全ての数は、近似値としてのみ理解され、したがって、表示された数の上および下の僅かなバリエーションを使用して、表示された数と実質的に同じ結果を達成し得る。したがって、逆に示さない限り、単語「約」が先行する数的パラメーターは、得ることを目指す所望の特性によって変化し得る近似値である。最低限でも、特許請求の範囲への均等の原則の適用を限定する試みとしてではなく、それぞれの数的パラメーターは、報告された有効桁の数に照らしておよび通常の丸めの技術を適用することによって少なくとも解釈すべきである。
【０１３４】
本明細書において、特定の形態を特性決定するために使用される名称、例えば「ＨＡ」などは、本明細書において提示される特性決定情報によって解釈される単に識別名であり、同様または同一の物理的および化学的特性を有する任意の他の物質を除外するように限定されない。
【０１３５】
全ての測定は、実験誤差を免れず、本発明の趣旨内である。
【０１３６】
本明細書に記載されている全ての方法は、本明細書において他に示さない限りまたは他に文脈によって明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で行うことができる。本明細書において提供するあらゆる例または例示的な言語（例えば、「など」）の使用は、本発明をより良好に例示することを単に意図し、他に特許請求される本発明の範囲に対する限定を提起しない。
【０１３７】
語句「薬学的に許容される」は、物質または組成物が、製剤を構成する他の成分および／またはそれによって処置される哺乳動物と化学的および／または毒物学的に適合性でなければならないことを示す。
【０１３８】
プロセス条件により、本発明の最終生成物は、遊離（中性）または塩の形態で得られる。これらの最終生成物の遊離形態および塩の両方は、本発明の範囲内である。必要に応じて、化合物の１つの形態は、別の形態に変換され得る。遊離塩基または酸は、塩に変換され得る。塩は、遊離化合物または別の塩に変換され得る。本発明の異性体化合物の混合物は、個々の異性体に分離され得る。
【０１３９】
本発明の薬学的に許容される塩は、通常の化学的方法により、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般に、このような塩は、水中または有機溶媒中または２つの混合物中において、これらの化合物の遊離酸または遊離塩基形態と化学量論量の適当な塩基または酸とを反応させることによって調製することができる。一般に、非水性媒体、例えばエーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルが好ましい。適切な塩のリストは、その発明が参照により本明細書に組み込まれるＡｌｌｅｎ，Ｌ．Ｖ．，Ｊｒ．，ｅｄ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ（２０１２）に見出される。
【０１４０】
本明細書において使用する場合、「多形」は、同じ化学構造／組成を有するが、結晶を形成する分子および／またはイオンの異なる空間的配置を有する結晶形態を指す。
【０１４１】
本明細書において使用する場合、「アモルファス」は、結晶性ではない分子、原子および／またはイオンの固体形態を指す。アモルファス固体は、明確なＸ線回折パターンを示さない。
【０１４２】
薬局方の目的のために、医薬品中の「残留する有機溶媒」は、薬物物質もしくは添加剤の製造においてまたは薬物製品の調製において使用または生成される有機揮発性化学物質と定義される。残留する有機溶媒は、実際的な製造技術によって完全に除去されない。
【０１４３】
本明細書において使用する場合、「水混和性有機溶媒」は、室温で液体であり、水と完全に混和性であり、好ましくはエタノールおよびアセトンから選択される有機溶媒を指す。
【０１４４】
本明細書において使用する場合、ピークの特定した群から選択されるいくつかのピークを「含む」ＸＲＰＤパターンは、ピークの特定した群に含まれないさらなるピークを有するＸＲＰＤパターンを含むことを意図する。
【０１４５】
「ＥＥＤ」は、遺伝子である胚性外胚葉発達のタンパク質産物を指す。
【０１４６】
「ＰＲＣ２」は、ポリコーム抑制複合体２を指す。
【０１４７】
用語「ＰＲＣ２によって媒介される疾患または障害」は、ＰＲＣ２によって直接的または間接的にレギュレートされている任意の疾患または障害を指す。これには、これらに限定されないが、ＥＥＤによって直接的または間接的にレギュレートされている任意の疾患または障害が含まれる。
【０１４８】
用語「ＥＥＤおよび／またはＰＲＣ２によって媒介される疾患または障害」は、ＥＥＤおよび／またはＰＲＣ２によって直接的または間接的にレギュレートされている疾患または障害を指す。
【０１４９】
本明細書において使用する場合、用語「患者」は、全ての哺乳動物種を包含する。
【０１５０】
本明細書において使用する場合、用語「対象」は、動物を指す。典型的には、動物は、哺乳動物である。「対象」はまた、ＥＥＤ阻害剤による処置から潜在的に恩恵を受けることができる任意のヒトまたはヒトではない生物を指す。対象はまた、例えば、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、魚、鳥などを指す。特定の実施形態では、対象は、霊長類である。また他の実施形態では、対象は、ヒトである。例示的な対象は、癌疾患についての危険因子を有する任意の年齢の人間を含む。
【０１５１】
本明細書において使用する場合、対象は、このような対象が生物学的に、医学的にまたは生活の質においてこのような処置から恩恵を受ける場合、処置を「必要としている」（好ましくは、ヒト）。
【０１５２】
本明細書において使用する場合、用語「阻害する」、「阻害」または「阻害すること」は、所与の状態、症状もしくは障害または疾患の低減または抑制、あるいは生物活性または生物学的過程のベースライン活性における有意な減少を指す。
【０１５３】
本明細書において使用する場合、任意の疾患／障害を「処置する」、「処置すること」または「処置」という用語は、哺乳動物、特にヒトにおける疾患／障害の処置を指し、（ａ）疾患／障害を寛解すること（すなわち疾患／障害またはその臨床症状の少なくとも１つの発生を遅延または抑止または低減させること）、（ｂ）疾患／障害を緩和またはモジュレートすること（すなわち疾患／障害の後退をもたらすこと、身体的に（例えば、識別可能な症状の安定化）、生理学的に（例えば、物理的パラメーターの安定化）または両方）、（ｃ）対象によって識別可能でないことがあり得るものを含む少なくとも１つの物理的パラメーターを軽減または寛解すること、ならびに／あるいは（ｄ）特に哺乳動物が疾患または障害にかかりやすいが、依然としてそれを有していると診断されていないとき、このような哺乳動物において疾患または障害の開始または発生または進行が起こることを予防または遅延させることを含む。
【０１５４】
本明細書において使用する場合、「予防すること」または「予防」は、臨床病態が起こる可能性を低減させることを目指す、哺乳動物、特にヒトにおける無症候性病態の予防処置（すなわち予防および／またはリスク軽減）を包含する。患者は、一般集団と比較して、臨床病態を被る危険性を増加させることが公知である要因に基づいて予防的治療のために選択される。「予防」治療は、（ａ）一次予防および（ｂ）二次予防に分けることができる。一次予防は、臨床病態を依然として提示していない対象における処置として定義される一方、二次予防は、同じまたは同様の臨床病態が２回目に起こることを予防することと定義される。
【０１５５】
本明細書において使用する場合、「リスク軽減」または「リスクを軽減すること」は、臨床病態の発生の頻度を低下させる治療を包含する。したがって、一次および二次予防治療は、リスク軽減の例である。
【０１５６】
「治療的有効量」は、対象の生物学的もしくは医学的応答、例えばＥＥＤおよび／もしくはＰＲＣ２の低減もしくは阻害を誘発するか、または症状を寛解し、状態を軽減し、疾患の進行を遅延もしくは遅くするか、またはＰＲＣ２によって媒介される疾患または障害を予防する、本発明の化合物の量を含むことを意図する。組合せに適用されるとき、この用語は、組み合わせて、連続的にまたは同時に投与されるであろうとなかろうと、予防効果または治療効果をもたらす活性成分の合わせた量を指す。
【０１５７】
略語は、本明細書において使用する場合、下記のように定義される。エタノールについて「ＥｔＯＨ」、１回について「１×」、２回について「２×」、３回について「３×」、摂氏温度について「℃」、水性について「ａｑ」、カラムについて「Ｃｏｌ」、当量について「ｅｑ」、グラムについて「ｇ」、ミリグラムについて「ｍｇ」、リットルについて「Ｌ」、ミリリットルについて「ｍＬ」、マイクロリットルについて「μＬ」、ノルマルについて「Ｎ」、モルについて「Ｍ」、ナノモルについて「ｎＭ」、モルについて「ｍｏｌ」、ミリモルについて「ｍｍｏｌ」、分について「ｍｉｎ」、時間について「ｈ」、室温について「ｒｔ」、保持時間について「ＲＴ」、一晩について「ＯＮ」、気圧について「ａｔｍ」、ポンド／平方インチについて「ｐｓｉ」、濃縮物について「ｃｏｎｃ．」、水性について「ａｑ」、飽和について「ｓａｔ」または「ｓａｔ’ｄ」、分子量について「ＭＷ」、マイクロ波について「ｍｗ」または「μｗａｖｅ」、融点について「ｍｐ」、重量について「Ｗｔ」、質量分析法について「ＭＳ」または「Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃ」、エレクトロスプレーイオン化質量分析について「ＥＳＩ」、高分解能について「ＨＲ」、高分解能質量分析法について「ＨＲＭＳ」、液体クロマトグラフィー質量分析法について「ＬＣ−ＭＳ」、高圧液体クロマトグラフィーについて「ＨＰＬＣ」、逆相ＨＰＬＣについて「ＲＰ  ＨＰＬＣ」、薄層クロマトグラフィーについて「ＴＬＣ」または「ｔｌｃ」、核磁気共鳴分光法について「ＮＭＲ」、核オーバーハウザー効果分光法について「ｎＯｅ」、プロトンについて「１Ｈ」、デルタについて「δ」、一重線について「ｓ」、二重線について「ｄ」、三重線について「ｔ」、四重線について「ｑ」、多重項について「ｍ」、幅広いについて「ｂｒ」、ヘルツについて「Ｈｚ」、「鏡像体過剰率」について「ｅｅ」であり、「α」、「β」、「Ｒ」、「Ｓ」、「Ｅ」および「Ｚ」は、当業者によく知られている立体化学の命名である。
【０１５８】
一般方法
下記の方法を、他に記述する場合を除いて、例示をする例において使用した。
【０１５９】
結晶形態は、例えば、適切な溶媒からの結晶化または再結晶化、昇華、融解物からの成長、別の相からの固体状態の変換、超臨界流体からの結晶化およびジェット噴霧を含む種々の方法によって調製され得る。溶媒混合物からの結晶形態の結晶化または再結晶化のための技術は、例えば、溶媒の蒸発、溶媒混合物の温度を低下させること、分子および／または塩の過飽和溶媒混合物を結晶シーディングすること、溶媒混合物を凍結乾燥すること、ならびに溶媒混合物への逆溶剤（反溶剤）の添加を含む。ハイスループットな結晶化技術を用いて、多形を含む結晶形態を調製し得る。
【０１６０】
溶媒を用いる結晶化技術のために、溶媒の選択は、典型的には、１つまたは複数の要因、例えば化合物の溶解度、結晶化技術および溶媒の蒸気圧によって決まる。溶媒の組合せを用いることができ、例えば、化合物を第１の溶媒に可溶化して溶液を得、それに続いて逆溶剤を加えて溶液中の化合物の溶解度を減少させて、結晶の形成を得ることができる。逆溶剤は、その中で化合物が難溶解性である溶媒である。
【０１６１】
結晶を調製する１つの方法において、化合物を適切な溶媒中で懸濁および／または撹拌し、スラリーを得、これを加熱して溶解を促進し得る。用語「スラリー」は、本明細書において使用する場合、化合物の飽和溶液を意味し、これは、さらなる量の化合物も含有し、所与の温度で化合物および溶媒の不均一混合物を得ることができる。
【０１６２】
種結晶を任意の結晶化混合物に加えて結晶化を促進し得る。シーディングを用いて特定の多形の成長を制御するか、または結晶性生成物の粒径分布を制御し得る。一般に、小さいサイズの種は、バッチにおける結晶の成長を効果的に制御するのに必要である。小さいサイズの種は、大きい結晶をふるいにかけるか、粉砕するか、もしくは微粒子化することにより、または溶液を微結晶化することにより生じさせ得る。結晶の粉砕または微粒子化は、所望の結晶形態からの結晶化度の変化（すなわちアモルファスまたは別の多形への変化）をもたらさないように注意するべきである。
【０１６３】
冷却した結晶化混合物は、真空下で濾過され得、単離した固体は、適切な溶媒、例えば冷たい再結晶化溶媒で洗浄し、窒素でパージしながら乾燥させ、所望の結晶形態を得ることができる。単離した固体は、適切な分光技術または分析技術、例えば固体核磁気共鳴、示差走査熱量測定、Ｘ線粉末回折などによって分析し、生成物の好ましい結晶形態の形成を確実にし得る。得られた結晶形態は、典型的には、結晶化手順において最初に用いられる化合物の重量に基づいて約７０重量％超の単離収率、好ましくは９０重量％超の単離収率の量で生成される。生成物は、必要に応じて、共粉砕するか、またはメッシュスクリーンを通過させて生成物を砕塊し得る。
【０１６４】
結晶形態は、化合物Ｘを調製するための最終プロセスの反応媒体から直接調製し得る。これは、例えば、最終工程ステップにおいて、そこから化合物（Ｉ）を結晶化し得る溶媒または溶媒の混合物を用いることによって達成し得る。代わりに、結晶形態は、蒸留または溶媒添加技術によって得ることができる。この目的のための適切な溶媒は、例えば、上記の無極性溶媒ならびにプロトン性極性溶媒、例えばアルコールおよび非プロトン性極性溶媒、例えばケトンを含む極性溶媒を含む。
【０１６５】
Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）
Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）データは、ＣｕＫαアノードを有するＢｒｕｋｅｒ  Ｄ８Ｄｉｓｃｏｖｅｒを使用して得た。粉末試料をスライドガラス上に置き、Ｘ線ビームの中央に置いた。試料−検出器の距離は、概ね３０ｃｍであり、３フレームをマージした。放射線は、ＣｕＫα（λ＝１．５４１８Å）であった。データは、少なくとも２７０秒の試料曝露時間を伴って２＜２θ＜４５°について集めた。
【０１６６】
生成された原子パラメーター（座標および温度因子）は、フルマトリックス最小二乗法によって精密化した。精密化において最小化される関数は、Σｗ（｜Ｆｏ｜−｜Ｆｃ｜）２であった。Ｒは、Σ｜｜Ｆ｜−｜Ｆ｜｜／Σ｜Ｆｏ｜として定義される一方、Ｒｗ＝［Σｗ（｜Ｆｏ｜−｜Ｆｃ｜）２／Σｗ｜Ｆｏ｜２］１／２であり、ここで、ｗは、観察された強度における誤差に基づいた適当な重み関数である。差分マップは、精密化の全ての段階において試験した。水素原子は、等方性温度因子によって理想的な位置に導入したが、水素パラメーターは、変化しなかった。
【０１６７】
【表８】
2019522051.tif 000011
【０１６８】
熱重量分析
熱重量分析は、ＴＡ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＴＧＡ機器を使用して各結晶形態について行った。各分析のため、ＴＧＡセル／試料チャンバーを２０ｍｌ／ｍｉｎの超高純度窒素ガスでパージした。窒素でパージしながら標準重量を使用して重量較正を行った。加熱速度は、ｒｔ〜３００℃の温度範囲で毎分１０℃であった。重量パーセント変化（重量％）を、測定した試料温度に対してプロットした。
【０１６９】
示差走査熱量測定
示差走査熱量測定を、ＴＡ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＤＳＣを使用して各結晶形態について行った。各分析のために、ＤＳＣセル／試料チャンバーを５０ｍｌ／ｍｉｎの超高純度窒素ガスでパージした。機器を高純度インジウムで較正した。加熱速度は、３０〜３００℃の温度範囲で毎分１０℃であった。試料重量によって規格化した熱流を、測定した試料温度に対してプロットした。データは、ワット／グラム（「Ｗ／ｇ」）の単位で報告した。プロットは、下向きの吸熱ピークで作製した。吸熱融解ピーク（融点）を補外開始温度について評価した。
【０１７０】
動的蒸気吸着
動的蒸気吸着をＳｕｒｆａｃｅ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＤＶＳ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ機器で行った。概ね１０ｍｇの材料を試料パン中に充填した。試料を１０％相対湿度（ＲＨ）ステップにおいて２５℃および５０℃で５０％−９０％−０％−９０％−５０％ＲＨの範囲にわたって吸着／脱着サイクルに曝露した。５ｍｉｎにわたる０．００２％未満の質量変化の標的平衡条件を、それぞれ１０ｍｉｎおよび３６０ｍｉｎの最小および最大平衡期間と共に設定した。キャリアガスは、１００ｍＬ／ｍｉｎの流量を伴う窒素であった。系を飽和塩溶液で較正する。各段階における試料の重量パーセント変化（重量％）を測定し、標的分圧に対してプロットした。
【０１７１】
【表９】
2019522051.tif 000012
【０１７２】
実施例の特性決定において用いられるＮＭＲ
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、下記のような周波数で作動するＢｒｕｋｅｒフーリエ変換分光器で得た：１Ｈ  ＮＭＲ：４００ＭＨｚ（Ｂｒｕｋｅｒ）。１３Ｃ  ＮＭＲ：１００ＭＨｚ（Ｂｒｕｋｅｒ）。スペクトルデータは、フォーマット：化学シフト（多重度、水素の数）で報告する。化学シフトは、テトラメチルシラン内部標準のｐｐｍ低磁場（δ単位、テトラメチルシラン＝０ｐｐｍ）においておよび／または１Ｈ  ＮＭＲスペクトルにおいて、ＣＤ２ＨＳＯＣＤ３について２．４９ｐｐｍ、ＣＤ２ＨＯＤについて３．３０ｐｐｍ、ＣＤ３ＣＮについて１．９４、およびＣＤＣｌ３について７．２４ｐｐｍにおいて現れ、１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルにおいて、ＣＤ３ＳＯＣＤ３について３９．７ｐｐｍ、ＣＤ３ＯＤについて４９．０ｐｐｍ、およびＣＤＣｌ３について７７．０ｐｐｍにおいて現れる溶媒ピークを参照して特定する。全ての１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルをプロトンデカップリングした。測定は室温でまたは他に特定するように行った。溶媒残渣の量は、対応する１ＨＮＭＲスペクトルにおける最も代表的な水素の積分値に基づいて計算した。
【実施例】
【０１７３】
下記の実施例は、本明細書において開示されている方法を使用して調製、単離および特性決定した。下記の実施例は、本発明の範囲を限定するものであることを意味しない。
【０１７４】
実施例１
化合物Ａ（Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン）の調製
中間体３：８−ブロモ−５−（メチルチオ）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン
【化３】
2019522051.tif 000013
５−ブロモ−４−ヒドラジニル−２−（メチルチオ）ピリミジン（２）：５−ブロモ−４−クロロ−２−（メチルチオ）ピリミジン（１、４９．０ｇ、０．２０５ｍｏｌ）のエタノール（１０００ｍＬ）溶液にヒドラジン（２１．５ｇ、０．４３０ｍｏｌ）を加えた。反応物をｒｔで４ｈ撹拌した。得られた懸濁液を濾過し、ヘキサンで洗浄し、真空中で乾燥させ、表題化合物（４４．１ｇ、９２％）を白色の固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ２．４２（ｓ，３Ｈ），８．０８（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３４．９；２３６．９．
【０１７５】
中間体３：５−ブロモ−４−ヒドラジニル−２−（メチルチオ）ピリミジン（２）（４０．０ｇ、０．１７ｍｏｌ）を２００ｍＬのトリエトキシメタンに溶解した。混合物を加熱還流させ、３ｈ撹拌した。反応混合物減圧下で濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥＡ：ＰＥ＝１：１５〜１：１）によって精製し、表題化合物（３８．３ｇ、９２％）を白色の固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ  ｐｐｍ  ２．８２（ｓ，３Ｈ），８．０３（ｓ，１Ｈ），８．８７（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４５．０；２４７．０．
【０１７６】
中間体Ａ１：８−ブロモ−Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン
【化４】
2019522051.tif 000014
２−ブロモ−４−（２，２−ジエトキシエトキシ）−１−フルオロベンゼン（Ａ１．１）：３−ブロモ−４−フルオロフェノール（５００ｇ、２．６２ｍｏｌ）および２−ブロモ−１，１−ジエトキシエタン（６７０ｇ、３．４ｍｏｌ）のＤＭＦ（２．０Ｌ）溶液にＫ２ＣＯ３（１０８５ｇ、７．８６ｍｏｌ）を一度に加えた。懸濁液を１１０℃で加熱し、Ｎ２下で一晩撹拌した。ｒｔに冷却した後、反応物を１０．０ＬのＨ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃ（２．０Ｌ×３）で抽出した。合わせた有機相をブラインで２回洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲル（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝０：１００〜５：１００）上で精製し、表題化合物（８１０ｇ、８０％）を黄色の油として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ  ｐｐｍ  １．２７（ｔ，６Ｈ），３．６５（ｑ，２Ｈ），３．７８（ｑ，２Ｈ），３．９７（ｄ，２Ｈ），４．８２（ｔ，１Ｈ），３．９７（ｄ，２Ｈ），６．８４（ｄｄ，１Ｈ），７．０４（ｄｄ，１Ｈ），７．１３（ｄ，１Ｈ）．
【０１７７】
４−ブロモ−５−フルオロベンゾフラン（Ａ１．２ａ、位置異性体Ａ１．２ｂと共に）：ＰＰＡ（１３２４ｇ、３．９３ｍｏｌ）のトルエン（２．０Ｌ）溶液にＡ１．１（８１０ｇ、２．６２ｍｏｌ）を３０ｍｉｎにわたり９５℃で加えた。反応混合物を９５℃で２ｈ撹拌した。ｒｔに冷却した後、４．０Ｌの氷水をゆっくりと加えた。混合物をＰＥ（２．０Ｌ×２）で抽出し、合わせた有機相をブライン（２．０Ｌ×２）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲル（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝０：１００〜５：１００）上で精製し、Ａ１．２ａおよびＡ１．２ｂの混合物（Ａ１．２ａ  ：Ａ１．２ｂ＝１：０．７、３１０ｇ、５５％収率）を黄色の油として得た。
【０１７８】
５−フルオロベンゾフラン−４−カルボニトリル（Ａ１．３）：１．０ＬのＤＭＦ中のＡ１．２ａ、およびＡ１．２ｂ（３１０ｇ、１．４４ｍｏｌ）、およびＺｎ（ＣＮ）２（２５３ｇ、２．１６ｍｏｌ）の混合物にＮ２下でＰｄ（ＰＰｈ３）４（１６２ｇ、０．１４ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１００℃で加熱し、１８ｈ撹拌した。ｒｔに冷却した後、混合物を５．０Ｌの水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１．０Ｌ×２）で抽出した。合わせた有機相をブライン（１Ｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４（無水）上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラム（移動相：ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝１：７０、３０ｍｉｎ、保持時間＝１１ｍｉｎ、流量：１２０ｍＬ／ｍｉｎ）によって精製し、表題化合物（９２ｇ、４０％）を白色の固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ  ｐｐｍ  ７．０７（ｄ，１Ｈ），７．３０（ｄｄ，１Ｈ），７．８９（ｄｄ，１Ｈ），８．１０（ｄｄ，１Ｈ）．
【０１７９】
ｔｅｒｔ−ブチル（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）カルバメート（Ａ１．４）：Ａ１．３（４４．５ｇ、２７６．４ｍｍｏｌ）およびＢｏｃ２Ｏ（９０．０ｇ、４１４．６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１．０Ｌ）溶液にＰｄ／Ｃ（５ｇ、１０重量％）を加えた。反応混合物をＨ２で脱気し、Ｈ２下で一晩撹拌した。混合物をｃｅｌｉｔｅを通して濾過し、ＭｅＯＨ（３００ｍＬ×２）で洗浄し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をＰＥから再結晶化し、表題化合物（６１．０ｇ、９３％）を白色の固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．３８（ｓ，９Ｈ），３．２１（ｔ，２Ｈ），４．１２（ｄ，２Ｈ），４．５３（ｔ，２Ｈ），６．６３（ｄｄ，１Ｈ），６．８６（ｄｄ，１Ｈ），７．２５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ−ｔＢｕ＋Ｈ］＋＝２１２．１．
【０１８０】
（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メタンアミン（Ａ１．５）：Ａ１．４（１８．３ｇ、６８．５ｍｍｏｌ）のＨＣＩ／ジオキサン（４ｍｏｌ／Ｌ）（５０ｍＬ）溶液をｒｔで４ｈ撹拌した。混合物を減圧下で濃縮した。残渣を混合物溶媒（ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮ＝１：１０、５００ｍＬ）で希釈し、次いでＫ２ＣＯ３（１８．０ｇ、３４２．５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を６０℃で加熱し、３ｈ撹拌し、ｒｔに冷却し、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲル（ＭｅＯＨ：ＥｔＯＡｃ＝０：１００〜１：４）上で精製し、表題化合物（９．２ｇ、８０％）を黄色の油として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ  ｐｐｍ  ３．２７（ｔ，２Ｈ），３．７７（ｓ，２Ｈ），４．５６（ｔ，２Ｈ），６．５９（ｄｄ，１Ｈ），６．８１（ｄｄ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１６８．１．
【０１８１】
【化５】
2019522051.tif 000015
中間体Ａ１：Ａ１．５（１．４１ｇ、８．２ｍｍｏｌ）および８−ブロモ−５−（メチルチオ）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン（３）（１．０ｇ、４．１ｍｍｏｌ）の混合物を４０℃で加熱し、１６ｈ撹拌した。ｒｔに冷却した後、混合物をＥｔＯＡｃ（３５ｍＬ）で希釈した。沈殿物を濾過し、ＥｔＯＡｃ（３ｍＬ×３）で洗浄し、真空中で乾燥させ、表題化合物（１．０ｇ、６７％）を白色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  ｐｐｍ  ３．２７（ｔ，２Ｈ），４．５３（ｔ，２Ｈ），４．６６（ｄ，２Ｈ），６．７１（ｄｄ，１Ｈ），６．９５（ｔ，１Ｈ），７．８５（ｓ，１Ｈ），８．７５（ｔ，１Ｈ），９．４８（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３６３．７；３６５．７．
【０１８２】
【化６】
2019522051.tif 000016
１，４−ジオキサン（３ｍＬ）、ＭｅＣＮ（０．３０ｍＬ）および水（０．３０ｍＬ）中のＡ１（４０ｍｇ、０．１１０ｍｍｏｌ）の混合物に（２−メチルピリジン−３−イル）ボロン酸（３０．１ｍｇ、０．２２０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（４５．５ｍｇ、０．３３０ｍｍｏｌ）およびＰｄ（Ｐｈ３Ｐ）４（１２．６９ｍｇ、１０．９８μｍｏｌ）を加えた。得られた混合物をＮ２下で１１０℃において３ｈ撹拌し、ｒｔに冷却し、真空下で蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）上で精製し、Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミンを白色の固体（２０ｍｇ、４６．０％）として得た。
【０１８３】
代わりに、Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミンを下記のように調製した。１，４−ジオキサン（３００ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１００ｍＬ）の混合物溶液中のＡ１（２５．５ｇ、７０ｍｍｏｌ）、２−メチル−３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン（３０．６ｇ、１４０ｍｍｏｌ）およびＮａＨＣＯ３（３５．３ｇ、４２０ｍｍｏｌ）の懸濁液にＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（５．９４ｇ、６１２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２で脱気し、１１０℃で１ｈ加熱した。得られた混合物をｒｔに冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ＝２０：１）上で精製し、１４ｇの所望の生成物を得た。２００ｍＬのアセトンを生成物に加え、得られた懸濁液を５０℃で２ｈ加熱した。白色の固体を濾過によって集め、真空下で乾燥させ、Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（１３．６ｇ、５２％）を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ２．４０（ｓ，３Ｈ），３．３３（ｔ，２Ｈ），４．５６（ｔ，２Ｈ），４．７２（ｓ，２Ｈ），６．７２（ｄｄ，１Ｈ），６．９６（ｄｄ，１Ｈ），７．３１（ｄｄ，１Ｈ），７．６６（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｄ，１Ｈ），８．５１（ｄ，１Ｈ），８．７２（ｔ，１Ｈ），９．４９（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７６．９．
【０１８４】
実施例２
イソプロパノール（ＩＰＡ）を使用した化合物Ｘ（Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン塩酸塩）の形態Ａの調製（表２におけるエントリー１）
Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン（６．０ｇ、１５．９４ｍｍｏｌ）のＩＰＡ（１００ｍＬ）懸濁液に０．５ＮのＨＣｌのＩＰＡ（３３．０ｍＬ、１６．５０ｍｍｏｌ）溶液をｒｔにおいて滴下で添加した。懸濁液を５０℃で１２ｈ撹拌し、次いでｒｔに冷却し、５ｈ撹拌した。得られた固体を濾過によって集め、４０℃において真空下で２日間乾燥させ、化合物Ｘの形態Ａの塩酸塩を白色の固体として得た（６．５ｇ、９８％）１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ２．６５（ｓ，３Ｈ），３．３５（ｔ，２Ｈ），４．５７（ｔ，２Ｈ），４．７４（ｄ，２Ｈ），６．７３（ｄｄ，１Ｈ），６．９７（ｄｄ，１Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），７．８５−７．９４（ｍ，１Ｈ），８．４６（ｄ，１Ｈ），８．８０（ｄｄ，１Ｈ），９．０７（ｔ，１Ｈ），９．５８（ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７６．９．溶媒残渣の量は、対応する１Ｈ  ＮＭＲスペクトルにおける最も代表的な水素の積分値に基づいて計算した。具体的には、ＩＰＡのメチル基の６個の水素を説明するδ１．０４における積分値は、０．３１である一方、δ２．６４における２−メチル−ピリジンにおけるメチル基の３個の水素のそれは、３である。したがって、ＩＰＡのモル百分率は、下記のように計算する。０．３１／６（１＋０．３１／６）＝４．９％。一方、重量でのＩＰＡ百分率は、下記のように計算する。６０×（０．３１／６）／｛（３７６．３８＋３６．４６＋６０×（０．３１／６）｝＝０．７４％｛ＭＷ（ＩＰＡ）＝６０、ＭＷ（化合物Ａ）＝３７６．４０およびＭＷ（ＨＣｌ）＝３６．４６）｝。
【０１８５】
実施例３
ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏを使用した化合物Ｘ（Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミン塩酸塩）の形態Ａの調製（表２におけるエントリー７）
５００ｍＬのフラスコ中の４．０ｇのＮ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミンに２００ｍＬのＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ（９５／５、ｖ／ｖ）を加え、機械的撹拌によって混合物を撹拌した。得られた懸濁液を７５℃に油浴によって加熱し、その温度で１ｈ維持した。７５℃に維持した懸濁液にＥｔＯＨ（１．１当量）中の２３．３８ｍＬの０．５ＮのＨＣｌを滴下で添加した。塩酸の添加後、混合物は、透明となった。得られた溶液を７５℃で２ｈ撹拌した。次いで、混合物を３ｈでｒｔに冷却し、白色の固体としての得られた化合物Ｘ（３．５ｇ、７９．７％）を濾過によって集め、真空下で６ｈ乾燥させた。ＥｔＯＨ残渣の量を１Ｈ  ＮＭＲスペクトルにおける水素の積分値に基づいて計算した。具体的には、ＥｔＯＨのメチル基の３個のＨを説明するδ１．０６における積分値は、０．０１である一方、ＥｔＯＨのメチル基の３個のＨを説明するδ２．６５におけるメチル基の３個の水素のそれは、３である。したがって、ＥｔＯＨのモル百分率は、下記のように計算した：０．０１／３（１＋０．０１／３）＝０．３３％。一方、重量でのＥｔＯＨ百分率を下記のように計算する。４６．０７×（０．０１／３）／｛（３７６．３８＋３６．４６＋×（０．０１／３）｝＝０．０４％｛ＭＷ（ＥｔＯＨ）＝４６．０７、ＭＷ（化合物Ａ）＝３７６．４０およびＭＷ（ＨＣｌ）＝３６．４６）。
【０１８６】
実施例４
化合物Ｘの形態ＨＡの調製
１．０ｇの化合物Ｘの形態Ａを１０ｍＬのエタノール／水（３：１）混合物に加え、懸濁液を得た。懸濁液をｒｔで３日間撹拌した。得られた固体を真空濾過によって集め、ｒｔで一晩乾燥させた。化合物Ｘの形態ＨＡ（０．８１ｇ）を７７％収率で得た。
【０１８７】
実施例５
化合物Ｘの形態ＨＢの調製
２００ｍｇの化合物Ｘの形態Ａを最小量のアセトン／水（１：１）混合物に６０℃で溶解し、透明な溶液を得た。溶液をｒｔで３〜５日にわたり蒸発させた。得られた固体を真空濾過によって集め、ｒｔで一晩乾燥させた。化合物Ｘの形態ＨＢを得た。
【０１８８】
ＥｔＯＨまたはアセトン中の０．５ＮのＨＣｌの調製：
４．０ｍＬの市販の濃ＨＣｌ水溶液（３６．５％、ｗ／ｗ、水中）を９６．０ｍＬのＥｔＯＨまたはアセトンに加え（任意選択で低減した温度において）、溶液をよく混合し、ＥｔＯＨまたはアセトン中の０．５ＮのＨＣｌを得た。
【０１８９】
表２において要約する実験のための手順：
５０℃で試料バイアル中の１０ｍｇの化合物Ｘに、選択した溶媒を滴下で添加した。透明な溶液となったときまたは溶媒の量が１ｍＬに達したときに溶媒の添加を停止した。得られた混合物を連続的に５０℃で２ｈ撹拌し、次いでｒｔに冷却し、一晩撹拌した。５０℃およびｒｔでの溶解度を、得られた混合物の均一性によって決定した。
【０１９０】
表３において要約した実験についての手順：
表３におけるエントリー１〜６としての実験は、上記の実施例３における塩の形成において記載されている手順によって行ったが、表３において一覧表示した異なるパラメーターを伴った。
【０１９１】
ＶＩ．薬理学および有用性
ＰＲＣ２複合体の重要な構成要素として、ＥＥＤは、内因性酵素活性を有さない。しかし、これは、適正なＰＲＣ２機能のために重大である。ＥＥＤは、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３に直接結合し、この結合事象は、ＰＲＣ２複合体をクロマチン基質に局在化させ、メチルトランスフェラーゼ活性をアロステリックに活性化する。ＰＲＣ２の調節ＥＥＤサブユニット内のアロステリック部位を標的とすることは、ＥＺＨ２またはＰＲＣ２のＳＡＭ競合機序を直接的に標的とすることに対して都合が良いか、またはこれと相互補完的である新規および独特の観点を提供し得る。したがって、ＥＥＤを標的とすることは、多くの形態の癌の処置のための新規な治療の開発のための高度に魅力的な戦略を表す。特に、ＥＥＤを標的とすることによってＰＲＣ２の活性を阻害する小分子が必要とされている。現在開示されているようなトリアゾロピリミジン誘導体は、ＥＥＤまたはＰＲＣ２によって媒介される疾患または障害、特に癌の処置のためにＥＥＤを標的とするのに有用であることが今や見出された。
【０１９２】
本発明の化合物Ｘの有用性は、下記の試験手順のいずれかの１つを使用して示し得る。化合物Ｘは、生化学的アッセイにおいてＥＺＨ２、ＳＵＺ１２、ＥＥＤ、Ｒｂａｐ４８およびＡＥＢＰの五量体複合体におけるＰＲＣ２活性を阻害するその能力についてアセスメントした。ＰＲＣ２の細胞活性を阻害する本発明の化合物の能力は、ヒト細胞系におけるヒストンＨ３リシン２７メチル化を分析することによってアセスメントした。癌を阻害する化合物Ｘの能力は、癌の成長を維持するＰＲＣ２活性に対して特定の依存性を有するヒト癌細胞系における活性をモジュレートするそれらの能力に由来した。
【０１９３】
ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（α−スクリーン）によるＥＥＤ−Ｈ３Ｋ２７Ｍｅ３ペプチド競合結合アッセイ
ＥＥＤ−Ｈ３Ｋ２７Ｍｅ３競合結合アッセイにおける化合物の効力をアセスメントするために、化合物をＤＭＳＯに連続的に３倍希釈し、全部で１２の濃度を得た。次いで、各濃度での化合物（それぞれ７５ｎＬ）をＭｏｓｑｕｉｔｏによって３８４ウェルＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＰｒｏｘｉＰｌａｔｅ３８４  ｐｌｕｓプレート中に移した。緩衝液（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ８、０．０２％Ｔｗｅｅｎ２０、０．５％ＢＳＡ）中に３０ｎＭのＥＥＤ（１−４４１）−Ｈｉｓタンパク質および１５ｎＭのビオチン−Ｈ３Ｋ２７Ｍｅ３（１９−３３）ペプチドを含有する８μＬの溶液をウェルに加え、次いで化合物と共に２０ｍｉｎにわたりインキュベートした。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ検出ビーズミックスは、ニッケルキレートアクセプタービーズおよびストレプトアビジンドナービーズを１：１の比で（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、製品番号６７６０６１９Ｃ／Ｍ／Ｒ）上記の緩衝液中に混合することによって使用の直前に調製した。次いで、４μＬの検出ビーズミックスをプレートに加え、暗中においてｒｔで１ｈインキュベートした。ドナーおよびアクセプタービーズの最終濃度は、それぞれについて１０μｇ／ｍＬであった。プレートは、６８０ｎｍでの試料励起後、６１５ｎｍフィルターによる最適なシグナル検出のために適合されたＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ設定を使用してＥｎＶｉｓｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）上で読み取った。６１５ｎｍでの発光シグナルを使用して化合物阻害を定量化した。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎシグナルは、陽性対照（最大シグナル対照）および陰性対照（最小シグナル対照）からの読取りに基づいて規格化し、残された活性の百分率を得た。次いで、データを、Ｈｅｌｉｏｓプログラム（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を使用して用量応答等式にフィットさせ、ＩＣ５０値を得た。Ｈｅｌｉｏｓは、Ｎｏｒｍｏｌｌｅ，Ｄ．Ｐ．，Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１２：２０２５−２０４２（１９９３）；Ｆｏｒｍｅｎｋｏ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ，Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｇｒａｍｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，８２，３１−３７（２００６）；Ｓｅｂａｕｇｈ，Ｊ．Ｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，１０：１２８−１３４（２０１１）；Ｋｅｌｌｙ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｍｅｔｒｉｃｓ，４６（４）：１０７１−１０８５（１９９０）；およびＫａｈｍ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，３３（７）：（２０１０）（ｇｒｏｆｉｔ：Ｆｉｔｔｉｎｇ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｃｕｒｖｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｒ，ｐａｇｅｓ  １−２１、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｓｔａｔｓｏｆｔ．ｏｒｇ／で利用可能）によって記載されている方法を使用したＮｏｖａｒｔｉｓインハウスアッセイデータ分析ソフトウェアである。
【０１９４】
各化合物をカウンタースクリーニングして、それがＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎビーズに干渉するかを決定した。先行するセクションにおいて記載したように化合物を希釈し、上記の緩衝液中に１２μＬの１０ｎＭのビオチン−ミニＰＥＧ−Ｈｉｓ６ペプチドを加え、それぞれ１０μｇ／ｍＬへのビーズの添加前に２０ｍｉｎにわたりｒｔでインキュベートすることによってアッセイを行った。次いで、プレートをｒｔで暗中において１ｈインキュベートし、その後、ＥｎＶｉｓｏｎで読み取った。
【０１９５】
ＥＥＤ  ＬＣ−ＭＳアッセイ
本発明の代表的な化合物をＤＭＳＯに連続的および別々に３倍希釈し、全部で８つまたは１２つの濃度を得た。次いで、各濃度での試験化合物（それぞれ１２０ｎＬ）をＭｏｓｑｕｉｔｏによって３８４ウェルＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＰｒｏｘｉＰｌａｔｅ３８４ｐｌｕｓプレート中に移した。反応緩衝液（２０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．０、０．１％ＢＳＡ、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ、０．５ｍＭのＤＴＴ）中の２４ｎＭの野生型ＰＲＣ２（ｗｔＰＲＣ２）複合体および２μＭのＳＡＭの溶液（６μＬ）をウェルに加え、次いでこれを試験化合物と共に２０ｍｉｎにわたりインキュベートした。反応緩衝液中の３μＭのペプチド基質Ｈ３Ｋ２７Ｍｅ０（ヒストンＨ３［２１−４４］−ビオチン）の６μＬの溶液を加え、それぞれの反応を開始させた。反応溶液中の最終構成要素は、１２ｎＭのｗｔＰＲＣ２複合体、１μＭのＳＡＭおよび１．５μＭのＨ３Ｋ２７ｍｅ０ペプチドを、変化する濃度の化合物と共に含む。陽性対照は、試験化合物の非存在下での酵素、１μＭのＳＡＭおよび１．５μＭの基質からなり、陰性対照は、１μＭのＳＡＭおよび１．５μＭの基質のみからなった。それぞれの反応物をｒｔで１２０ｍｉｎにわたりインキュベートし、次いで３μＬ毎のクエンチ溶液（３２０ｎＭのｄ４−ＳＡＨを有する２．５％ＴＦＡ）を加えることによって停止させた。反応混合物を遠心し（エッペンドルフ遠心機５８１０、ローターＡ−４−６２）、Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ  ＵＦＬＣ（島津製作所）とカップリングしたＴｕｒｂｕｌｏｎ  Ｓｐｒａｙ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ）を有するＡＰＩ４０００トリプル四重極質量分析計で読み取った。次いで、ＳＡＨ生成のレベルを陽性および陰性対照からの値に基づいて規格化し、酵素活性パーセントを得た。次いで、データを、Ｈｅｌｉｏｓプログラムを使用して用量応答等式にフィットさせ、試験化合物のＩＣ５０値を得た。
【０１９６】
ＥＬＩＳＡ（Ｈ３Ｋ２７メチル化）アッセイ
本発明の代表的な化合物をＤＭＳＯに連続的および別々に３倍希釈し、全部で８つまたは１２つの濃度を得た。次いで、化合物を３８４ウェルプレート中で培養されたＧ４０１細胞に１：５００希釈で加え、２０μＭの最も高い濃度を得た。ＥＬＩＳＡ手順前に細胞を４８ｈにわたりさらに培養した。
【０１９７】
ヒストン抽出：３８４ウェルプレート中の細胞をＰＢＳ（１０×ＰＢＳ緩衝液（８０ｇのＮａＣｌ（Ｓｉｇｍａ、Ｓ３０１４）、２ｇのＫＣｌ（Ｓｉｇｍａ、６０１２８）、１４．４ｇのＮａ２ＨＰＯ４（Ｓｉｇｍａ、Ｓ５１３６）、２．４ｇのＫＨ２ＰＯ４（Ｓｉｇｍａ、Ｐ９７９１）を１Ｌの水に、ｐＨを７．４に）で洗浄し、溶解緩衝液（０．４ＮのＨＣｌ；ウェル毎に４５μＬ）の添加によって溶解した。プレートを４℃で３０ｍｉｎにわたり穏やかにかき混ぜた。細胞ライセートを中和緩衝液（０．５Ｍのリン酸水素二ナトリウム、ｐＨ１２．５、１ｍＭのＤＴＴ；ウェル毎に３６μＬ）で中和した。プレートをかき混ぜ、ＥＬＩＳＡプロトコルの前にライセートが良好に混合していることを確実にした。
【０１９８】
ＥＬＩＳＡプロトコル：細胞ライセートを３８４ウェルプレートのウェルに移し、最終容量をＰＢＳでウェル毎に５０μＬに調節した。プレートを密封し、２，０００ｒｐｍで２ｍｉｎにわたり遠心し、４℃で約１６ｈインキュベートした。プレートをＴＢＳＴ緩衝液（１×ＴＢＳ（１０×ＴＢＳ：２４．２ｇのＴｒｉｓ（Ｓｉｇｍａ、Ｔ６０６６）、８０ｇのＮａＣｌ（Ｓｉｇｍａ、Ｓ３０１４）を１Ｌの水へ、ＨＣｌでｐＨを７．６に調節）、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を有する）で洗浄した。ブロッキング緩衝液（ＴＢＳＴ、５％ＢＳＡ；ウェル毎に５０μＬ）を加え、プレートをｒｔで１ｈインキュベートした。ブロッキング緩衝液を除去し、一次抗体を加えた（ウェル毎に３０μＬ）。下記の希釈をブロッキング緩衝液で行った：抗Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃９７３３）について、希釈は、１：１０００であった；抗Ｈ３Ｋ２７ｍｅ２抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃９２８８）について、希釈は、１：１００であった；抗Ｈ３抗体（Ａｂｃａｍ、カタログ＃２４８３４）について、希釈は、１：１０００であった。一次抗体をプレート中でｒｔにおいて１ｈインキュベートした。ウェルをＴＢＳＴで洗浄し、二次抗体と共にｒｔで１ｈインキュベートした。二次抗体について、ブロッキング緩衝液で下記の希釈を行った：抗ウサギ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、＃１１１−０３５−００３）（希釈は、１：２０００であった）；および抗マウス抗体（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃７０７６）（希釈は、１：１０００であった）。ｒｔで１ｈのインキュベーション後、ウェルをＴＢＳＴで洗浄した。ＥＣＬ基質（Ｐｉｅｒｃｅ、＃３４０８０）をウェル毎に３０μＬで加え、プレートを２，０００ｒｐｍで２ｍｉｎにわたり遠心した。ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅａｄｅｒを使用してシグナルを読み取った。Ｈ３シグナルを使用してＨ３Ｋ２７メチル化読み出し情報を規格化し、次いで阻害百分率をＤＭＳＯで処理した試料に対して計算した。次いで、Ｈｅｌｉｏｓプログラムを使用してデータを用量応答曲線にフィットさせ、試験化合物のＩＣ５０値を得た。
【０１９９】
ウエスタンブロット分析
本発明の代表的な化合物を、ＰＲＣ２を選択的に阻害するそれらの能力について分析した。標準的な分子生物学技術を使用してウエスタンブロットを行った。細胞をＳＤＳ溶解緩衝液（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ＃２０−１６３）に溶解し、タンパク質濃度をＢＣＡタンパク質アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ、カタログ＃ＰＩ−２３２２１）によって測定した。ウエスタンブロットのための抗体：抗ＥＺＨ２（＃３１４７）、抗Ｈ３（＃９７１５）、抗Ｈ３Ｋ４ｍｅ１（＃９７２３）、抗Ｈ３Ｋ４ｍｅ２（＃９７２５）、抗Ｈ３Ｋ４ｍｅ３（＃９７２７）、抗Ｈ３Ｋ９ｍｅ２（＃９７５３）、抗Ｈ３Ｋ３６ｍｅ２（＃９７５８）、抗Ｈ３Ｋ２７ｍｅ２（＃９７５５）および抗Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３（＃９７５６）は、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｄａｎｖｅｒｓ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入した。抗Ｈ３Ｋ９ｍｅ１（＃０７−３９５）、抗Ｈ３Ｋ２７ｍｅ１（＃０７−４４８）および抗Ｈ３Ｋ３６ｍｅ１（＃０７−５４８）は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入した。抗Ｈ３Ｋ３６ｍｅ３（ａｂ９０５０−１００）は、Ａｂｃａｍ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）から購入した。抗Ｈ３Ｋ９ｍｅ３（＃３９１６１）は、Ａｃｔｉｖｅ  Ｍｏｔｉｆ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）から購入した。
【０２００】
本発明の化合物は、ＰＲＣ２基質Ｈ３Ｋ２７のメチル化を特異的に阻害する。これは、いくつかのヒト癌細胞系（例は、ラブドイド細胞（Ｇ４０１）およびリンパ腫細胞（ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２、ＫＡＲＰＡＳ４２２、ＳＵ−ＤＨＬ４）を含む）においてＨ３Ｋ２７ｍｅ２およびＨ３Ｋ２７ｍｅ３を阻害するそれらの能力によって示すことができる。選択性をいくつかの他のメチル化マーク、例えばＨ３Ｋ４ｍｅ２；Ｈ３Ｋ９ｍｅ２；Ｈ３Ｋ３６ｍｅ３；およびＨ３Ｋ７９ｍｅ３に対してプロファイルする。
【０２０１】
細胞増殖の分析
Ｂ細胞リンパ腫細胞ＫＡＲＰＡＳ４２２を、１５％ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃１００９９−１４１）を補充したＲＰＭＩ−１６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃１１８７５）中で標準的な細胞培養条件を使用して加湿したインキュベーター中において３７℃、５％ＣＯ２で培養した。細胞増殖に対するＰＲＣ２阻害の効果をアセスメントするために、指数関数的に成長する細胞を１２ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ＃ＣＬＳ３５１３）において１×１０５個の細胞／ｍＬの密度で播種した。細胞播種後、本発明の化合物を細胞培地に加えた（０〜１００μＭの範囲の濃度において、３×希釈系列）。生存細胞数は、Ｖｉ−ＣＥＬＬ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して１４日間まで３〜４日毎に決定した。細胞計数の日に新鮮な成長培地および化合物を補充し、細胞を１×１０５個の細胞／ｍＬの密度へと再び分割した。総細胞数は、１ｍＬ毎の分割調節した生存細胞として表す。用量応答曲線およびＩＣ５０値は、Ｐｒｉｓｍを使用して生じさせた。
【０２０２】
薬物動態特性の分析
現在開示しているような化合物の薬物動態特性は、下記に記載したプロトコルを使用することによって決定することができる。
【０２０３】
本発明の代表的な化合物を１０％のＰＥＧ３００、１０％のＳｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５および８０％のｐＨ４．６５の酢酸緩衝液に溶解し、静脈内（ＩＶ）および経口投与（ＰＯ）のために０．２ｍｇ／ｍＬの最終濃度を生じさせた。
【０２０４】
ラットＰＫ研究のために、全部で３匹の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットのそれぞれを、それぞれラットＩＶおよびＰＯ  ＰＫ研究のために使用した。製剤溶液は、それぞれ１ｍｇ／ｋｇでの単一のボーラスＩＶ、および２ｍｇ／ｋｇでの単一の経口胃管栄養法（ＰＯ）によって投与した。血液試料（概ね１５０μＬ）を適当な時点において頸静脈カニューレによって集めた。
【０２０５】
マウスＰＫ研究のために、全部で１２匹の雄性ＩＣＲマウスを、それぞれＩＶおよびＰＯ研究のために使用した。製剤溶液をそれぞれ１ｍｇ／ｋｇでの単一のボーラスＩＶ、および２ｍｇ／ｋｇでの単一の経口胃管栄養法（ＰＯ）によって投与した。血液試料（概ね１５０μＬ）を、適当な時点において、イソフルランによって麻酔した後の後眼窩穿刺（約１５０μＬ／マウス）または心臓穿刺（終末期の採取）によって集めた（ｎ＝３）。
【０２０６】
試料をＫ３−ＥＤＴＡを含有するチューブ中に集め、遠心するまで氷上で貯蔵した。血液試料を概ね８０００ｒｐｍで２〜８℃において６ｍｉｎにわたり遠心し、得られた血漿を分離し、概ね−８０℃で冷凍貯蔵した。内部標準を加えた後、血漿試料は、較正曲線を使用してＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって定量化した。濃度曲線下面積（ＡＵＣ）、平均滞留時間（ＭＲＴ）、血漿クリアランス（Ｃｌ）、定常状態分布容積（Ｖｄｓｓ）、消失半減期（ｔ１／２）、最高濃度（Ｃｍａｘ）、最高濃度の時間（Ｔｍａｘ）および経口バイオアベイラビリティー（Ｆ％）を含むＰＫパラメーターを、下記の等式を使用して計算した。
【数１】
2019522051.tif 000017
ｔは、時間であり、Ｃは、時間（ｔ）における血漿濃度であり、
用量ｉｖは、静脈内投与のための用量であり、用量経口は、経口投与のための用量である。
Ｃｌ＝用量ｉｖ／ＡＵＣ
ｔ１／２＝０．６９３×ＭＲＴ
Ｖｄｓｓ＝Ｃｌ＊ＭＲＴ
Ｆ％＝（用量ｉｖ×ＡＵＣ経口）／用量経口×ＡＵＣｉｖ）×１００％
【０２０７】
ハイスループット平衡溶解度アッセイのためのプロトコル
本発明の化合物を最初に純粋なＤＭＳＯに１０ｍＭで可溶化した。次いで、それぞれ２０μＬのＤＭＳＯストック溶液を９６ウェルプレート上の６ウェル中に移した。ＤＭＳＯ溶媒をＧｅｎｅＶａｃ溶媒蒸発器によって３０℃、１ミリバールの真空で１ｈ乾燥させた。２００μＬの緩衝溶液（ｐＨ６．８またはＦａＳＳＩＦ）を加えた後、プレートを密封し、１６０ｒｐｍでｒｔにおいて２４ｈ振盪した。プレートを３７５０ｒｐｍで２０ｍｉｎにわたり遠心し、５μＬの上清を４９５μＬのＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（１：１）と混合する。０．０１μＭ、０．１μＭ、１μＭ、１０μＭのストック溶液を較正曲線のために一連の希釈によって調製した。上清を、較正曲線を使用してＨＰＬＣまたはＬＣ／ＭＳによって定量化した。ハイスループット平衡溶解度は、上清の濃度に基づいて決定した。
【０２０８】
マウス異種移植モデルにおける有効性研究
行った全ての実験は、ＡＡＡＬＡＣの証明を取得した施設において雌性胸腺欠損ヌード−ｎｕマウスにおいて行った。動物を個々の換気ケージにおいて一定の温度および湿度（すなわち２０〜２６℃；４０〜７０％）においてＳＰＦ条件下で保持したが、各ケージで５匹以下の動物であった。動物は、照射滅菌した乾燥顆粒状食物および無菌の飲料水に自由にアクセスした。全ての手順およびプロトコルは、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅによって承認された。
【０２０９】
細胞Ｋａｒｐａｓ４２２ヒトＢ細胞リンパ腫は、１５％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ；１００９９−１４１）および１％Ｐｅｎ  Ｓｔｒｅｐ（Ｇｉｂｃｏ；１５１４０−１２２）を補充したＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ；１１８７５−０９３）中で３７℃において空気中の５％ＣＯ２の雰囲気中で培養した。細胞は、０．５〜２×１０６個の細胞／ｍｌの濃度において懸濁培養液中で維持した。細胞を２〜４日毎に１：３で分割した。異種移植腫瘍モデルを確立するために、細胞を集め、ＰＢＳに懸濁させ、１：１の容量比で１×１０８個の細胞／ｍＬの濃度でＭａｔｒｉｇｅｌ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）と混合し、次いでｂａｌｂ／ｃヌードマウス（Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ）の右側腹部の皮下に動物毎に５×１０６個の細胞の濃度で注射した。
【０２１０】
化合物を５０ｍＭのｐＨ６．８緩衝液（ＵＳＰによってインハウスで調製）中の０．５％メチルセルロース（ＭＣ）および０．５％Ｔｗｅｅｎ８０中の懸濁液として製剤化し、特定の用量で経管栄養によって経口的に投与した。
【０２１１】
平均腫瘍体積が１００〜３００ｍｍ３に達したとき、処置を開始した。腫瘍成長および体重を規則的間隔でモニタ−した。異種移植腫瘍の２つの最も大きい直径として幅（Ｗ）および長さ（Ｌ）をカリパスで手作業によって測定し、式：０．５×Ｌ×Ｗ２を使用して腫瘍体積を推定した。
【０２１２】
適用可能であるとき、結果は、平均±ＳＥＭとして提示される。グラフ化および統計解析は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ５．００（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア）を使用して行った。腫瘍および体重の変化データは、統計的に分析した。データにおける分散が通常に分布していた場合（等分散についてバートレット検定）、処置群対対照群の比較のために、事後ダネット検定を伴う一元配置ＡＮＯＶＡを使用してデータを分析した。事後テューキー検定を群内比較のために使用した。別の方法では、クラスカルワリス順位検定事後ダンを使用した。
【０２１３】
有効性の尺度として、Ｔ／Ｃ値％を実験の終わりに、
（△腫瘍体積処置／△腫瘍体積対照）＊１００
によって計算する。腫瘍退縮は、
−（△腫瘍体積処置／腫瘍体積処置、開始時）＊１００
によって計算した。ここで、△腫瘍体積は、評価日における平均腫瘍体積マイナス実験の開始における平均腫瘍体積を表す。
【０２１４】
Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミンを、上記の（ａ）Ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎ結合認定、（ｂ）ＬＣ−ＭＳ認定および（ｃ）ＥＬＩＳＡ認定アッセイにおいてＥＥＤにおいて試験し、ＥＥＤ阻害活性を有することが見出された。
【０２１５】
【表１０】
2019522051.tif 000018
【０２１６】
Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミンについての１４日の処置後のＢ細胞リンパ腫細胞ＫＡＲＰＡＳ４２２における抗増殖活性（ＩＣ５０値）は、０．００３０μＭである。
【０２１７】
したがって、Ｎ−（（５−フルオロ−２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル）メチル）−８−（２−メチルピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ｃ］ピリミジン−５−アミンは、ＥＥＤを阻害することが見出されてきており、したがって、これらに限定されないが、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、他のリンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、中皮腫、胃癌、悪性ラブドイド腫瘍、肝細胞癌、前立腺癌、乳癌、胆管および胆嚢癌、膀胱癌、神経芽細胞腫、神経膠腫、神経膠芽腫および星状細胞腫を含む脳腫瘍、子宮頸癌、結腸癌、黒色腫、子宮内膜癌、食道癌、頭頸部癌、肺癌、上咽頭癌、卵巣癌、膵臓癌、腎細胞癌、直腸癌、甲状腺癌、副甲状腺腫瘍、子宮腫瘍、ならびに横紋筋肉腫（ＲＭＳ）、カポジ肉腫、滑膜肉腫、骨肉腫およびユーイング肉腫から選択される軟部組織肉腫が含まれる、ＥＥＤおよびＰＲＣ２と関連する疾患または障害の処置において有用である。
【０２１８】
Ｖ．医薬組成物および組合せ
「薬学的に許容される担体（賦形剤または添加剤）」は、当業者に公知のような（例えば、Ａｌｌｅｎ，Ｌ．Ｖ．，Ｊｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（２  Ｖｏｌｕｍｅｓ），２２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ（２０１２）を参照されたい、一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）溶媒、分散媒、コーティング、界面活性剤、抗酸化剤、保存剤（例えば、抗菌剤、抗真菌剤）、等張剤、吸収遅延剤、塩、保存剤、薬物安定剤、結合剤、緩衝剤（例えば、マレイン酸、酒石酸、乳酸、クエン酸、酢酸、炭酸水素ナトリウム、リン酸ナトリウムなど）、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤、色素など、およびこれらの組合せを含む、動物、特に哺乳動物への生物活性のある薬剤の送達のために当技術分野で一般に認められている媒体を指す。製剤は、通常の溶解および混合手順を使用して調製し得る。例えば、バルク薬物物質（すなわち本発明の化合物または化合物の安定化された形態（例えば、シクロデキストリン誘導体との複合体または他の公知の複合体形成剤））は、上記の添加剤の１つまたは複数の存在下で適切な溶媒に溶解する。
【０２１９】
化合物Ｘは、任意の適切な手段、例えば経口的、例えば錠剤、カプセル剤（これらのそれぞれは、持続放出もしくは徐放性製剤を含む）、丸剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、懸濁剤（ナノ懸濁剤、ミクロ懸濁剤、噴霧乾燥した分散物を含む）、シロップ剤および乳剤、舌下、口腔内、頬側、例えば皮下、静脈内、筋内もしくは胸骨内の注射、または注入技術によって非経口的（例えば、無菌の注射用水溶液もしくは非水溶液もしくは懸濁液として）、例えば吸入スプレーによる鼻膜への投与を含む経鼻、例えばクリーム剤もしくは軟膏剤の形態で局所的に、または例えば坐剤の形態で直腸により、本明細書に記載されている使用のいずれかのために投与することができる。これらは、単独で投与することができるが、一般に、選択された投与経路および標準的な薬務に基づいて選択された医薬担体と共に投与される。
【０２２０】
化合物Ｘは、典型的には、医薬品剤形に製剤化し、薬物の容易に制御可能な投与量を実現し、患者に洗練され容易に扱える製品を得られる。本発明の化合物のための投与量レジメンは、当然ながら、公知の要因、例えば特定の薬剤の薬力学的特性、ならびにその投与のモードおよび経路、レシピエントの種、年齢、性別、健康、医学的状態、および体重、症状の性質および程度、併行処置の種類、処置の頻度、投与経路、患者の腎機能および肝機能、ならびに所望の効果によって変化する。化合物Ｘは、単一の１日用量で投与し得るか、または１日総投与量は、毎日２回、３回もしくは４回の分割用量で投与し得る。
【０２２１】
特定の場合、化合物Ｘを少なくとも１種のさらなる医薬品（または治療剤）、例えば他の抗癌剤、免疫調節剤、抗アレルギー剤、抗悪心剤（または制吐剤）、鎮痛剤、細胞保護剤およびこれらの組合せと組み合わせて投与することが有利であり得る。
【０２２２】
用語「併用療法」は、本発明に記載されている治療上の疾患、障害または状態を処置する２種以上の治療剤の投与を指す。このような投与は、実質的に同時の様式での、例えば固定比率の活性成分を有する単一のカプセル剤中のこれらの治療剤の同時の投与を包含する。代わりに、このような投与は、各活性成分について、複数の容器または別々の容器における同時の投与を包含する（例えば、カプセル剤、粉末および液体）。化合物Ｘおよびさらなる治療剤は、同じ投与経路を介してまたは異なる投与経路を介して投与することができる。粉末および／または液体は、投与前に所望の用量に再構成または希釈され得る。さらに、このような投与はまた、逐次の様式における概ね同じときまたは異なるときの各タイプの治療剤の使用を包含する。いずれの場合でも、処置レジメンは、本明細書に記載される状態または障害の処置において薬物の組合せの有益な効果を実現する。
【０２２３】
併用療法における使用のために考慮される一般の化学療法剤は、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、ブレオマイシン硫酸塩（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、ブスルファン注射用（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロランブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）またはＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注射用（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ、Ｃｏｓｍｅｇａｎ）、ダウノルビシン塩酸塩（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、ダウノルビシンクエン酸塩リポソーム注射用（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、ドキソルビシン塩酸塩（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、リン酸フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、５−フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ−アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、６−メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、メトトレキサート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、ｍｙｌｏｔａｒｇ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ｎａｂ−パクリタキセル（Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標））、フェニックス（イットリウム９０／ＭＸ−ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、カルムスチンインプラントを伴うポリフェプロサン２０（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））、クエン酸タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注射用トポテカン塩酸塩（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））およびビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））を含む。
【０２２４】
化合物Ｘとの組合せのための特に目的の抗癌剤は、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）阻害剤、チェックポイントキナーゼ（ＣＨＫ）阻害剤、Ｃ−ＲＡＦ阻害剤、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤、ＢＣＬ−２阻害剤、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＥＫ）阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、ＳＲＣ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、抗腫瘍抗生物質、脱メチル化剤および抗エストロゲン剤を含み得る。
【０２２５】
一部の患者は、投与中またはその後、本発明の化合物および／または他の抗癌剤に対してアレルギー反応を経験し得る。したがって、抗アレルギー剤は、多くの場合、アレルギー反応の危険性を最小化するために投与され得る。適切な抗アレルギー剤は、コルチコステロイド（Ｋｎｕｔｓｏｎ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，ＤＯＩ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１１１８４０（２０１４））、例えばデキサメタゾン（例えば、Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））、ベクロメタゾン（例えば、Ｂｅｃｌｏｖｅｎｔ（登録商標））、ヒドロコルチゾン（コルチゾン、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウムしても公知であり、商品名Ａｌａ−Ｃｏｒｔ（登録商標）、リン酸ヒドロコルチゾン、Ｓｏｌｕ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）、Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔ  Ａｃｅｔａｔｅ（登録商標）およびＬａｎａｃｏｒｔ（登録商標）で販売されている）、プレドニゾロン（商品名Ｄｅｌｔａ−Ｃｏｒｔｅｌ（登録商標）、Ｏｒａｐｒｅｄ（登録商標）、Ｐｅｄｉａｐｒｅｄ（登録商標）およびＰｒｅｌｏｎｅ（登録商標）として販売されている）、プレドニゾン（商品名Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ（登録商標）、Ｌｉｑｕｉｄ  Ｒｅｄ（登録商標）、Ｍｅｔｉｃｏｒｔｅｎ（登録商標）およびＯｒａｓｏｎｅ（登録商標）として販売されている）、メチルプレドニゾロン（６−メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウムしても公知であり、商品名Ｄｕｒａｌｏｎｅ（登録商標）、Ｍｅｄｒａｌｏｎｅ（登録商標）、Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）、Ｍ−Ｐｒｅｄｎｉｓｏｌ（登録商標）およびＳｏｌｕ−Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）で販売されている）；抗ヒスタミン剤、例えばジフェンヒドラミン（例えば、Ｂｅｎａｄｒｙｌ（登録商標））、ヒドロキシジン、およびシプロヘプタジン；ならびに気管支拡張剤、例えばベータ−アドレナリン作動性受容体アゴニスト、アルブテロール（例えば、Ｐｒｏｖｅｎｔｉｌ（登録商標））およびテルブタリン（Ｂｒｅｔｈｉｎｅ（登録商標））を含む。
【０２２６】
本発明の化合物との組合せのための特に目的の免疫調節剤は、共刺激分子のアクチベーター、あるいは免疫チェックポイント分子の阻害剤（例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３もしくはＣＴＬＡ４の１種もしくは複数の阻害剤）または任意のこれらの組合せの１つまたは複数を含む。
【０２２７】
特定の実施形態では、免疫調節剤は、共刺激分子のアクチベーターである。一実施形態では、共刺激分子のアゴニストは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３またはＣＤ８３リガンドのアゴニスト（例えば、アゴニスト抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたは可溶性融合物）から選択される。
【０２２８】
特定の実施形態では、免疫調節剤は、免疫チェックポイント分子の阻害剤である。一実施形態では、免疫調節剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４および／またはＴＧＦＲベータの阻害剤である。一実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３もしくはＣＴＬＡ４または任意のこれらの組合せを阻害する。用語「阻害」または「阻害剤」は、特定のパラメーター、例えば所与の分子、例えば免疫チェックポイント阻害剤の活性における低減を含む。例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％またはそれより多い活性、例えばＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１活性の阻害は、この用語に含まれる。このように、阻害は、１００％である必要はない。
【０２２９】
一部の患者は、本発明の化合物および／または他の抗癌剤の投与中およびその後、悪心を経験し得る。したがって、制吐剤は、悪心（胃上部）および嘔吐の予防において使用される。適切な制吐剤は、アプレピタント（Ｅｍｅｎｄ（登録商標））、オンダンセトロン（Ｚｏｆｒａｎ（登録商標））、グラニセトロンＨＣｌ（Ｋｙｔｒｉｌ（登録商標））、ロラゼパム（Ａｔｉｖａｎ（登録商標））、デキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））、プロクロルペラジン（Ｃｏｍｐａｚｉｎｅ（登録商標））、カソピタント（Ｒｅｚｏｎｉｃ（登録商標）およびＺｕｎｒｉｓａ（登録商標））ならびにこれらの組合せを含む。
【０２３０】
処置期間中に経験する疼痛を軽減するための医薬品は、患者をより快適とするために処方されることが多い。一般の店頭渡しの鎮痛剤、例えばＴｙｌｅｎｏｌ（登録商標）が多くの場合に使用される。しかし、オピオイド鎮痛薬、例えばヒドロコドン／パラセタモールまたはヒドロコドン／アセトアミノフェン（例えば、Ｖｉｃｏｄｉｎ（登録商標））、モルヒネ（例えば、Ａｓｔｒａｍｏｒｐｈ（登録商標）またはＡｖｉｎｚａ（登録商標））、オキシコドン（例えば、ＯｘｙＣｏｎｔｉｎ（登録商標）またはＰｅｒｃｏｃｅｔ（登録商標））、オキシモルホン塩酸塩（Ｏｐａｎａ（登録商標））およびフェンタニル（例えば、Ｄｕｒａｇｅｓｉｃ（登録商標））はまた、中程度または重度の疼痛のために有用である。
【０２３１】
正常細胞を処置毒性から保護し、臓器毒性を限定する試みにおいて、細胞保護剤（例えば、神経保護剤、フリーラジカル捕捉剤、心臓保護剤、アントラサイクリン血管外漏出中和剤、栄養素など）は、補助治療として使用され得る。適切な細胞保護剤は、アミホスチン（Ｅｔｈｙｏｌ（登録商標））、グルタミン、ジメスナ（Ｔａｖｏｃｅｐｔ（登録商標））、メスナ（Ｍｅｓｎｅｘ（登録商標））、デキスラゾキサン（Ｚｉｎｅｃａｒｄ（登録商標）またはＴｏｔｅｃｔ（登録商標））、キサリプロデン（Ｘａｐｒｉｌａ（登録商標））ならびにロイコボリン（ロイコボリンカルシウム、シトロボラム因子およびフォリン酸しても公知である）を含む。
【０２３２】
コード番号、一般名または商品名によって同定される活性化合物の構造は、標準的な大要「Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ」の実際の版からまたはデータベース、例えばＰａｔｅｎｔｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（例えば、ＩＭＳ  Ｗｏｒｌｄ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）から取得され得る。
【０２３３】
一実施形態では、本発明は、単独でまたは他の抗癌剤と一緒に、ヒトまたは動物対象への投与に適した薬学的に許容される担体と一緒に化合物Ｘを含む医薬組成物を提供する。
【０２３４】
一実施形態では、本発明は、細胞増殖性疾患、例えば癌を患っているヒトまたは動物対象を処置する方法を提供する。本発明は、対象に治療的有効量の本発明の化合物（例えば、本発明の化合物）または薬学的に許容されるその塩を単独でまたは他の抗癌剤と組み合わせて投与することを含む、このような処置を必要としているヒトまたは動物対象を処置する方法を提供する。
【０２３５】
特に、組成物は、併用療法として一緒に製剤化されるかまたは別々に投与される。
【０２３６】
悪性腫瘍の処置のための併用療法において、化合物Ｘおよび他の抗癌剤は、特定の期限を伴わずに同時、併行的または逐次的に投与され得、このような投与は、対象の体における治療的に有効なレベルの２種の化合物を提供する。
【０２３７】
好ましい実施形態では、化合物Ｘおよび他の抗癌剤は、一般に、注入によってまたは経口的に任意の順序で逐次的に投与される。投薬レジメンは、疾患の段階、患者の身体の健康、個々の薬物の安全性プロファイルおよび個々の薬物の耐性、ならびに組合せを投与する主治医および開業医に周知の他の判定基準によって変化し得る。本発明の化合物および他の抗癌剤は、処置のために使用される特定のサイクルにより、互いに数分以内に、数時間、数日、またはむしろ数週間間を開けて投与され得る。さらに、サイクルは、処置サイクル中に他の薬物より頻繁であり、薬物の投与毎に異なる用量での１種の薬物の投与を含み得る。
【０２３８】
本発明の別の態様において、本明細書に開示されているような化合物Ｘおよび組合せパートナーを含むキットが提供される。代表的なキットは、（ａ）化合物Ｘ、（ｂ）少なくとも１種の組合せパートナー、例えば上記で示したようなものを含み、それにより、このようなキットは、添付文書または投与のための指示を含む他のラベリングを含み得る。
【０２３９】
化合物Ｘはまた、公知の治療プロセス、例えばホルモンまたは特に放射線の投与と組み合わせて有利に使用され得る。化合物Ｘは、特に放射線療法に対して乏しい感受性を示す腫瘍の処置のために特に放射線増感剤として使用され得る。
【０２４０】
本発明の別の態様において、本明細書に開示されているような化合物Ｘおよび組合せパートナーを含むキットが提供される。代表的なキットは、（ａ）化合物Ｘ、（ｂ）少なくとも１種の組合せパートナー、例えば上記で示したようなものを含み、それにより、このようなキットは、添付文書または投与のための指示を含む他のラベリングを含み得る。
【０２４１】
本発明の併用療法において、化合物Ｘおよび他の治療剤は、同じまたは異なる製造者によって製造および／または製剤化され得る。さらに、化合物Ｘおよび他の治療剤（または医薬品）は、（ｉ）医師への組合せ製品のリリース前に（例えば、化合物Ｘおよび他の治療剤を含むキットの場合）、（ｉｉ）投与の直前に医師自身によって（または医師のガイダンスの元で）、（ｉｉｉ）例えば、化合物Ｘおよび他の治療剤の逐次投与中に患者自身において、併用療法へと一緒にされ得る。
【０２４２】
適用のための医薬組成物（または製剤）は、薬物を投与するために使用される方法により、様々な方法でパッケージ化され得る。一般に、分配のための物品は、その中に入れられた適当な形態の医薬製剤を有する容器を含む。適切な容器は、当業者に周知であり、例えばボトル（プラスチックおよびガラス）、サシェ、アンプル、プラスチック袋、金属円筒などの材料を含む。容器は、パッケージの内容物への軽率なアクセスを防止するいたずら防止の構築物も含み得る。さらに、容器は、その上に付着されている、容器の内容物を説明するラベルを有する。ラベルは、適当な警告も含み得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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