(57)【要約】本発明は、概して、グルタチオン活性化ジスルフィドプロドラッグ部分、ＤＴ−ジアフォラーゼ活性化キノンプロドラッグ部分、または活性酸素種活性化アリールボロン酸もしくはアリールボロン酸エステルプロドラッグ部分を有する、ピロロベンゾジアゼピン単量体及び二量体プロドラッグに関する。本発明は、さらに、ピロロベンゾジアゼピンプロドラッグ二量体−抗体コンジュゲートに関する。【選択図】図２５
2019534238.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のピロロベンゾジアゼピンプロドラッグ単量体Ｍ１と、第２のピロロベンゾジアゼピン−抗体単量体Ｍ２と、を含む、式（Ｉ）のピロロベンゾジアゼピンプロドラッグ二量体−抗体コンジュゲート化合物であって、
2019534238.tif 000188
式中、
（Ｉ）Ｍ１については、
（ａ）Ｒ２は、−Ｈ、＝ＣＨ２、−ＣＮ、−Ｒ、＝ＣＨ−Ｒ、アリール、ヘテロアリール、二環式環、及びヘテロ二環式環から選択され、
（ｂ）Ｒ３は、Ｈであり、
（ｃ）Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９は、独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ハロ、アミノ、ニトロ、ＳＨ、及びＳＲから選択され、
（ｄ）Ｘは、Ｓ、Ｏ、及びＮＨから選択され、
（ｅ）Ｒ１０は、（ｉ）グルタチオン活性化ジスルフィド、（ｉｉ）ＤＴ−ジアフォラーゼ活性化キノン、または（ｉｉｉ）活性酸素種活性化アリールボロン酸もしくはアリールボロン酸エステルを含む、プロドラッグ部分であり、
（ｆ）Ｒ１１は、（ｉ）ＸがＯまたはＮＨであるとき、Ｈ及びＲ、ならびに（ｉｉ）ＸがＳであるとき、Ｈ、Ｒ、及びＯｚＵ（式中、ｚは、２または３であり、Ｕは、一価の薬学的に許容可能なカチオンである）から選択され、
（ｇ）Ｒは、１〜１０個の炭素原子を有する低級アルキル基、及び最大１２個の炭素原子のアリールアルキル基から選択され、（ｉ）前記アルキル基は、任意に、１つ以上の炭素−炭素二重もしくは三重結合、または最大１２個の炭素原子のアリール基を含有し、（ｉｉ）Ｒは、任意に、１つ以上のハロ、ヒドロキシ、アミノ、またはニトロ基によって置換され、任意に、１つ以上のヘテロ原子を含有し、
（ｈ）破線は、（ｉ）Ｃ１とＣ２、（ｉｉ）Ｃ２とＣ３、及び（ｉｉｉ）Ｃ２とＲ２のうちの１つの間で、任意の二重結合を表し、
（ＩＩ）Ｍ２については、
（ａ）Ｒ２’、Ｒ３’、Ｒ６’、Ｒ７’、Ｒ９’、Ｒ１１’、及びＸ’は、それぞれ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１１、及びＸに対応し、
（ｂ）Ｌは、ジスルフィド部分、ペプチド部分、及びペプチド模倣部分のうちの少なくとも１つを含む、自壊性リンカーであり、
（ｃ）破線は、（ｉ）Ｃ１’とＣ２’、（ｉｉ）Ｃ２’とＣ３’、及び（ｉｉｉ）Ｃ２’とＲ２’のうちの１つの間で、任意の二重結合を表し、
（ＩＩＩ）Ｍ１及びＭ２は、部分−Ｑ−Ｔ−Ｑ’−（式中、Ｑ及びＱ’は、独立して、Ｏ、ＮＨ、及びＳから選択され、Ｔは、１つ以上のヘテロ原子及び／または芳香環によってさらに任意に中断される、任意に置換されたＣ１−１２アルキレン基である）によってＣ８位で結合され、
（ＩＶ）ｐは、１、２、３、４、５、６、７、または８であり、
（Ｖ）Ａｂは、抗体であり、
（ＶＩ）各アスタリスクは、独立して、キラル中心を表す、前記化合物。
【請求項２】
Ｍ１のＣ１とＣ２との間の前記結合は、単結合であり、Ｍ１のＣ２とＣ３との間の前記結合は、単結合であり、Ｍ２のＣ１’とＣ２’との間の前記結合は、単結合であり、Ｍ２のＣ２’とＣ３’との間の前記結合は、単結合であり、Ｍ１のＣ３は、２つのＲ３基で置換され、これらの各々はＨであり、Ｍ２のＣ３’は、２つのＲ３’基で置換され、これらの各々はＨであり、Ｍ１のＣ２とＲ２との間の前記結合は、二重結合であり、Ｍ２のＣ２’とＲ２’との間の前記結合は、二重結合である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２及びＲ２’は、＝ＣＨ２である、請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ６、Ｒ６’、Ｒ９、及びＲ９’は、Ｈである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ７、及びＲ７’は、ＯＣＨ３である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｑ及びＱ’は、Ｏであり、Ｔは、Ｃ３アルキレンまたはＣ５アルキレンである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
ｐは、１、２、３、または４である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
コンジュゲート化合物の混合物を含み、前記コンジュゲート化合物の混合物中の１抗体当たりの平均薬物負荷は、約２〜約５である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
前記抗体は、コンジュゲーションのために操作された少なくとも１つのシステインスルフヒドリル部分を含み、前記抗体は、
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ、（２）Ｅ１６、（３）ＳＴＥＡＰ１、（４）ＭＵＣ１６、（５）ＭＰＦ、（６）Ｎａｐｉ２ｂ、（７）Ｓｅｍａ５ｂ、（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ、（９）ＥＴＢＲ、（１０）ＭＳＧ７８３、（１１）ＳＴＥＡＰ２、（１２）ＴｒｐＭ４、（１３）ＣＲＩＰＴＯ、（１４）ＣＤ２１、（１５）ＣＤ７９ｂ、（１６）ＦｃＲＨ２、（１７）ＨＥＲ２、（１８）ＮＣＡ、（１９）ＭＤＰ、（２０）ＩＬ２０Ｒα、（２１）Ｂｒｅｖｉｃａｎ、（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ、（２３）ＡＳＬＧ６５９、（２４）ＰＳＣＡ、（２５）ＧＥＤＡ、（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ、（２７）ＣＤ２２、（２８）ＣＤ７９ａ、（２９）ＣＸＣＲ５、（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ、（３１）Ｐ２Ｘ５、（３２）ＣＤ７２、（３３）ＬＹ６４、（３４）ＦｃＲＨ１、（３５）ＦｃＲＨ５、（３６）ＴＥＮＢ２、（３７）ＰＭＥＬ１７、（３８）ＴＭＥＦＦ１、（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１、（４０）Ｌｙ６Ｅ、（４１）ＴＭＥＭ４６、（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ、（４３）ＬＧＲ５、（４４）ＲＥＴ、（４５）ＬＹ６Ｋ、（４６）ＧＰＲ１９、（４７）ＧＰＲ５４、（４８）ＡＳＰＨＤ１、（４９）チロシナーゼ、（５０）ＴＭＥＭ１１８、（５１）ＧＰＲ１７２Ａ、（５２）ＣＤ３３、及び（５３）ＣＬＬ−１、から選択される１つ以上の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体に結合する、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
前記抗体は、システイン操作抗体である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
前記システイン操作抗体は、ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ、ＨＣ  Ａ１１８Ｃ、ＨＣ  Ａ１４０Ｃ、またはＬＣ  Ｖ２０５Ｃをリンカーコンジュゲートの部位として含む、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
前記抗体は、抗ＨＥＲ２、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗Ｎａｐｉ２ｂ、抗Ｌｙ６Ｅ、及び抗ＣＬＬ−１から選択される、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記リンカーは、ジスルフィド部分またはペプチド部分を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
（ｉ）コンジュゲーション前に、前記抗体は、少なくとも１つの反応性スルフヒドリル部分を含み、（ｉｉ）コンジュゲーション前に、前記リンカーは、反応性硫黄原子、マレイミド、ブロムアセトアミド、ヨードアセトアミド、またはアルケンを含み、前記抗体は、前記抗体反応性スルフヒドリルと、前記リンカー反応性硫黄原子、マレイミド、ブロムアセトアミド、ヨードアセトアミド、またはアルケンとの反応によって形成される共有結合によって前記リンカーにコンジュゲートされる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
前記リンカー抗体部分は、以下の構造のリンカー抗体部分であり、
2019534238.tif 000189
式中、
（Ｉ）Ａｂは、抗体であり、
（ＩＩ）ＳＣは、抗体システイン硫黄原子であり、
（ＩＩＩ）Ｒ７０及びＲ７１は、独立して、Ｈ及びＣ１−３アルキルから選択され、Ｒ７０及びＲ７１のうちの１つのみがＨであり得るか、またはＲ７０及びＲ７１は、それらが結合する炭素原子と一緒に、酸素ヘテロ原子を任意に含む４〜６員環を形成し、
（ＩＶ）波線は、Ｍ２のカルバメート部分の酸素原子への結合点を示し、
（Ｖ）ｐは、請求項１に定義されるとおりである、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ７０及びＲ７１は、独立して、Ｈ、−ＣＨ３、及び−ＣＨ２ＣＨ３から選択され、Ｒ７０及びＲ７１のうちの１つのみがＨであり得るか、またはＲ７０及びＲ７１は、それらが結合する炭素原子と一緒に、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、テトラヒドロフラン、及びテトラヒドロピランから選択される環を形成する、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
前記リンカー抗体部分は、以下の構造のリンカー抗体部分であり、
2019534238.tif 000190
式中、Ｌは、ペプチド部分及び／またはペプチド模倣部分を含む自壊性リンカーであり、波線は、Ｍ２のカルバメート部分の酸素原子への結合点を示す、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ１０は、式（ＩＩＩａ）及び（ＩＩＩｂ）から選択されるキノンであり、
2019534238.tif 000191
式中、
（Ｉ）Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、及びＪは、独立して、Ｃ及びＮから選択され、Ｎは、第二級アニメ、第三級アミン、または構造＝Ｎ−のイミンであり、
（ＩＩ）各ｍは、独立して、０及び１から選択され、
（ＩＩＩ）破線は、任意の二重結合を表し、
（ＩＶ）ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＧ、及びＲＪは、独立して、Ｈ、ＯＨ、ならびに任意に置換されたＣ１−４アルキルまたはヘテロアルキル、Ｃ１−４アルコキシまたはヘテロアルコキシ、及びハロゲンから選択され、
（Ｖ）ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＧ、及びＲＪのうちの１つは、式（Ｉ）のＭ１のカルバメート部分の酸素原子に共有結合しているＣ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーである、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１９】
ＲＡ、ＲＤ、及びＲＥのうちの１つは、前記Ｃ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
Ａ−（ＲＡ）ｍ、Ｄ−（ＲＤ）ｍ、及びＥ−（ＲＥ）ｍのうちの１つは、
2019534238.tif 000192
である、請求項１８または請求項１９に記載の化合物。
【請求項２１】
Ａ−（ＲＡ）ｍは、
2019534238.tif 000193
であり、Ｄは、Ｃであり、ＲＤは、Ｃ１リンカーであり、Ｅ−（ＲＥ）ｍは、
2019534238.tif 000194
であり、式中、ＤとＥとの間の前記結合は、二重結合である、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｇ及びＪは、Ｃである、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｇ及びＪは、Ｃであり、ＲＧ及びＲＪのうちの１つは、−Ｏ−ＣＨ３である、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２４】
前記キノンは、式（ＩＩＩｃ）及び（ＩＩＩｄ）から選択され、
2019534238.tif 000195
式中、波線は、式（Ｉ）のＭ１のカルバメート部分の酸素原子への結合点を示す、請求項１８〜２３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｒ１０は、式（ＩＩＩｅ）及び（ＩＩＩｆ）から選択されるキノンであり、
2019534238.tif 000196
式中、
（Ｉ）Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、及びＪは、独立して、Ｃ及びＮから選択され、Ａ、Ｄ、Ｅ、及びＦの少なくとも１つは、Ｃであり、Ｇ及びＪの少なくとも１つは、Ｃであり、Ｎは、第二級アニメ、第三級アミン、または構造＝Ｎ−のイミンであり、
（ＩＩ）各ｎは、独立して、０及び１から選択され、
（ＩＩＩ）破線は、任意の二重結合を表し、
（ＩＶ）ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、ＲＧ、及びＲＪは、独立して、Ｈ、ＯＨ、ならびに任意に置換されたＣ１−４アルキルまたはヘテロアルキル、Ｃ１−４アルコキシまたはヘテロアルコキシ、及びハロゲンから選択され、
（Ｖ）ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、ＲＧ、及びＲＪのうちの１つは、式（Ｉ）のＭ１のカルバメート部分の酸素原子に共有結合しているＣ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーである、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２６】
ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、及びＲＦのうちの１つは、前記Ｃ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｄ−ＲＤまたはＥ−ＲＥは、前記Ｃ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーに結合している炭素原子を有する部分であり、Ａ、Ｆのうちの少なくとも１つ、ならびにＤ及びＥの他方は、Ｎである、請求項２５または請求項２６に記載の化合物。
【請求項２８】
ＲＡ、ＲＥ、及びＲＦのうちの１つは、独立して、Ｈ、任意に置換されたＣ１−４アルキルまたはヘテロアルキル、及び任意に置換されたＣ１−４アルコキシまたはヘテロアルコキシから選択され、式中、Ｄは、Ｃであり、ＲＤは、Ｃ１リンカーである、請求項２５〜２７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｇ−（ＲＧ）ｎ及びＪ−（ＲＪ）ｎのうちの少なくとも１つは、
2019534238.tif 000197
である、請求項２５〜２８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｇ−（ＲＧ）ｎ及びＪ−（ＲＪ）ｎのうちの一方は、Ｃ−Ｏ−ＣＨ３であり、Ｇ−（ＲＧ）ｎ及びＪ−（ＲＪ）ｎの他方は、ＣＨであり、ＧとＪとの間の前記結合は、二重結合である、請求項２５〜２９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３１】
Ａ、Ｄ、Ｅ、及びＦから形成された環は、不飽和であるか、または部分的に飽和される、請求項２５〜３０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｒ１０は、式（ＩＶａ）のアリールボロン酸またはアリールボロン酸エステルであり、
2019534238.tif 000198
式中、
（Ｉ）Ｒ２０及びＲ２１は、独立して、Ｈ、任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキル、任意に置換されたシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル、及び任意に置換されたアリールまたはヘテロアリールから選択されるか、または
（ＩＩ）Ｒ２０及びＲ２１はともに、任意に置換された部分−（ＣＨ２）ｎ−（式中、ｎは、２または３である）であり、前記部分は、それらが結合するＯ原子と一緒に、前記Ｂ原子とヘテロシクロアルキル環を形成し、前記ヘテロシクロアルキル環は、縮合ヘテロアルキル環、縮合アリール環、または縮合ヘテロアリール環を含んでもよく、
（ＩＩＩ）波線は、式（Ｉ）のＭ１のカルバメート部分の酸素原子への結合点を示す、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３３】
Ｒ１０は、式（ＩＶｂ）及び（ＩＶｃ）から選択され、
2019534238.tif 000199
式中、
（Ｉ）Ｒ３０、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３、Ｒ４０、Ｒ４１、Ｒ４２、Ｒ４３、Ｒ４４、及びＲ４５は、独立して、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ２Ｃｌ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ２、任意に置換されたＣ１−８アルキルもしくはヘテロアルキル、２〜７個の炭素原子を含む任意に置換されたシクロアルキルもしくはヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリールもしくはヘテロアリールから選択されるか、または
（ＩＩ）（ｉ）Ｒ３０もしくはＲ３１のうちの１つ及びＲ３２もしくはＲ３３のうちの１つ、（ｉｉ）Ｒ４０もしくはＲ４１のうちの１つ及びＲ４２もしくはＲ４３のうちの１つ、ならびに／または（ｉｉｉ）Ｒ４２もしくはＲ４３のうちの１つ及びＲ４４もしくはＲ４５のうちの１つは、２〜７個の炭素原子を有する、縮合シクロアルキル環、縮合ヘテロシクロアルキル環、縮合アリール環、もしくは縮合ヘテロアリール環を形成する、請求項３２に記載の化合物。
【請求項３４】
Ｒ１０は、式（ＩＶｄ）〜（ＩＶｉ）から選択される、請求項３２または請求項３３に記載の化合物。
2019534238.tif 000200
【請求項３５】
Ｒ１０は、式（ＩＶｄ）である、請求項３４に記載の化合物。
【請求項３６】
Ｒ１０は、式（Ｖ）のジスルフィドであり、
2019534238.tif 000201
式中、
（Ｉ）Ｒ５０は、任意に置換されたＣ１−８アルキルまたはヘテロアルキルであり、Ｒ５１は、任意に置換されたＣ２アルキレンまたは任意に置換されたベンジレンであり、
（ＩＩ）波線は、式（Ｉ）のＭ１のカルバメート部分の酸素原子への結合点を示す、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３７】
Ｒ５０は、Ｃ２−６アルキルであり、ＯＨで任意に置換され、Ｒ５１は、前記式（Ｖａ）のものであり、
2019534238.tif 000202
式中、
（Ｉ）Ｒ６１及びＲ６２は、独立して、Ｈ及びＣＨ３から選択されるか、またはＲ６１及びＲ６２は、それらが結合する炭素原子と一緒に、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または２〜６個の炭素原子を含む任意に置換されたヘテロアリールを形成し、
（ＩＩ）Ｒ６３及びＲ６４は、独立して、Ｈ及びＣＨ３から選択され、
（ＩＩＩ）Ｒ６３及びＲ６４を有する炭素原子で波線は、式（Ｉ）のＭ１のカルバメート部分の酸素原子への結合点を示す、請求項３６に記載の化合物。
【請求項３８】
Ｒ６３及びＲ６４は、Ｈである、請求項３７に記載の化合物。
【請求項３９】
式中、
（Ｉ）Ｒ５０は、ＣＨ３ＣＨ２−、ＨＯＣＨ２ＣＨ２−、（ＣＨ３）２ＣＨ−、及び（ＣＨ３）３Ｃ−から選択され、
（ＩＩ）Ｒ５１は、式（Ｖｂ）〜（Ｖｆ）から選択される、請求項３６〜３８のいずれか１項に記載の化合物。
2019534238.tif 000203
【請求項４０】
2019534238.tif 000204
Ｒ１０は、請求項１または１８〜３９のいずれか１項に定義されるとおりであり、Ｌは、請求項１または１５〜１７のいずれか１項に定義されるとおりであり、Ａｂは、請求項９〜１４のいずれか１項に定義されるとおりであり、ｐは、請求項１、７、または８のいずれか１項に定義されるとおりである、前記式の請求項１〜３９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項４１】
式（ＩＩ）のピロロベンゾジアゼピンプロドラッグ化合物であって、
2019534238.tif 000205
式中、
（ａ）Ｒ２は、−Ｈ、＝ＣＨ２、−ＣＮ、−Ｒ、＝ＣＨ−Ｒ、アリール、ヘテロアリール、二環式環、及びヘテロ二環式環から選択され、
（ｂ）Ｒ３は、Ｈであり、
（ｃ）Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ハロ、アミノ、ニトロ、ＳＨ、及びＳＲから選択されるか、またはＲ７及びＲ８は、それらが結合する炭素原子と一緒に、基−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（式中、ｎが１または２である）を形成し、
（ｄ）Ｘは、Ｓ、Ｏ、及びＮＨから選択され、
（ｅ）Ｒ１０は、（ｉ）グルタチオン活性化ジスルフィド、（ｉｉ）ＤＴ−ジアフォラーゼ活性化キノン、及び（ｉｉｉ）活性酸素種活性化アリールボロン酸またはアリールボロン酸エステルから選択される、プロドラッグ部分であり、
（ｆ）Ｒ１１は、（ｉ）ＸがＯまたはＮＨであるとき、Ｈ及びＲ、ならびに（ｉｉ）ＸがＳであるとき、Ｈ、Ｒ、及びＯｚＵ（式中、ｚは、２または３であり、Ｕは、一価の薬学的に許容可能なカチオンである）から選択され、
（ｇ）Ｒは、１〜１０個の炭素原子を有する低級アルキル基、及び最大１２個の炭素原子のアリールアルキル基から選択され、（ｉ）式中、前記アルキル基は、任意に、１つ以上の炭素−炭素二重もしくは三重結合、または最大１２個の炭素原子のアリール基を含有し、（ｉｉ）式中、Ｒは、任意に、１つ以上のハロ、ヒドロキシ、アミノ、またはニトロ基によって置換され、任意に、１つ以上のヘテロ原子を含有し、
（ｈ）破線は、（ｉ）Ｃ１とＣ２、（ｉｉ）Ｃ２とＣ３、及び（ｉｉｉ）Ｃ２とＲ２のうちの１つの間で、任意の二重結合を表し、
（ｉ）各アスタリスクは、独立して、キラル中心を表す、前記化合物。
【請求項４２】
Ｃ１とＣ２との間の前記結合は、単結合であり、Ｃ２とＣ３との間の前記結合は、単結合であり、Ｃ３は、２つのＲ３基で置換され、これらの各々は、Ｈであり、Ｃ２とＲ２との間の前記結合は、二重結合である、請求項４１に記載の化合物。
【請求項４３】
Ｒ２は、＝ＣＨ２である、請求項４１または請求項４２に記載の化合物。
【請求項４４】
Ｒ６及びＲ９は、Ｈである、請求項４１〜４３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項４５】
Ｒ７は、ＯＣＨ３である、請求項４１〜４４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項４６】
Ｒ１０は、式（ＩＩＩａ）及び（ＩＩＩｂ）から選択されるキノンであり、
2019534238.tif 000206
式中、
（Ｉ）Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、及びＪは、独立して、Ｃ及びＮから選択され、Ｎは、第二級アニメ、第三級イミン、または構造＝Ｎ−のアミンであり、
（ＩＩ）各ｍは、独立して、０及び１から選択され、
（ＩＩＩ）破線は、任意の二重結合を表し、
（ＩＶ）ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＧ、及びＲＪは、独立して、Ｈ、ＯＨ、ならびに任意に置換されたＣ１−４アルキルまたはヘテロアルキル、Ｃ１−４アルコキシまたはヘテロアルコキシ、及びハロゲンから選択され、
（Ｖ）ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＧ、及びＲＪのうちの１つは、式（ＩＩ）のカルバメート部分の酸素原子に共有結合しているＣ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーである、請求項４１〜４５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項４７】
ＲＡ、ＲＤ、及びＲＥのうちの１つは、前記Ｃ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーである、請求項４６に記載の化合物。
【請求項４８】
Ａ−（ＲＡ）ｍ、Ｄ−（ＲＤ）ｍ、及びＥ−（ＲＥ）ｍのうちの１つは、
2019534238.tif 000207
である、請求項４６または請求項４７に記載の化合物。
【請求項４９】
Ａ−（ＲＡ）ｍは、
2019534238.tif 000208
であり、Ｄは、Ｃであり、ＲＤは、Ｃ１リンカーであり、Ｅ−（ＲＥ）ｍは、
2019534238.tif 000209
であり、ＤとＥとの間の前記結合は、二重結合である、請求項４６〜４８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５０】
Ｇ及びＪは、Ｃである、請求項４６〜４９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５１】
Ｇ及びＪは、Ｃであり、ＲＧ及びＲＪのうちの１つは、−Ｏ−ＣＨ３である、請求項４６〜４９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５２】
前記キノンは、式（ＩＩＩｃ）及び（ＩＩＩｄ）から選択され、
2019534238.tif 000210
式中、波線は、式（ＩＩ）のカルバメート部分の酸素原子への結合点を示す、請求項４６〜５１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５３】
Ｒ１０は、式（ＩＩＩｅ）及び（ＩＩＩｆ）から選択されるキノンであり、
2019534238.tif 000211
式中、
（Ｉ）Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、及びＪは、独立して、Ｃ及びＮから選択され、Ａ、Ｄ、Ｅ、及びＦの少なくとも１つは、Ｃであり、Ｇ及びＪの少なくとも１つは、Ｃであり、Ｎは、第二級アニメ、第三級アミン、または構造＝Ｎ−のイミンであり、
（ＩＩ）各ｎは、独立して、０及び１から選択され、
（ＩＩＩ）破線は、任意の二重結合を表し、
（ＩＶ）ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、ＲＧ、及びＲＪは、独立して、Ｈ、ＯＨ、ならびに任意に置換されたＣ１−４アルキルまたはヘテロアルキル、Ｃ１−４アルコキシまたはヘテロアルコキシ、及びハロゲンから選択され、
（Ｖ）ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、ＲＧ、及びＲＪのうちの１つは、式（ＩＩ）のカルバメート部分の酸素原子に共有結合されるＣ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーである、請求項４１〜４５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５４】
ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、及びＲＦのうちの１つは、前記Ｃ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーである、請求項５３に記載の化合物。
【請求項５５】
Ｄ−ＲＤまたはＥ−ＲＥは、前記Ｃ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーに結合している炭素原子を有する部分であり、Ａ、Ｆのうちの少なくとも１つ、ならびにＤ及びＥの他方は、Ｎである、請求項５３または請求項５４に記載の化合物。
【請求項５６】
ＲＡ、ＲＥ、及びＲＦのうちの１つは、独立して、Ｈ、任意に置換されたＣ１−４アルキルまたはヘテロアルキル、及び任意に置換されたＣ１−４アルコキシまたはヘテロアルコキシから選択され、式中、Ｄは、Ｃであり、ＲＤは、Ｃ１リンカーである、請求項５３〜５５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５７】
Ｇ−（ＲＧ）ｎ及びＪ−（ＲＪ）ｎのうちの少なくとも１つは、
2019534238.tif 000212
である、請求項５３〜５６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５８】
Ｇ−（ＲＧ）ｎ及びＪ−（ＲＪ）ｎの１つは、Ｃ−Ｏ−ＣＨ３であり、Ｇ−（ＲＧ）ｎ及びＪ−（ＲＪ）ｎの他方は、ＣＨであり、ＧとＪとの間の前記結合は、二重結合である、請求項５３〜５７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５９】
Ａ、Ｄ、Ｅ、及びＦから形成された環は、不飽和であるか、または部分的に飽和される、請求項５３〜５８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６０】
Ｒ１０は、式（ＩＶａ）のアリールボロン酸またはアリールボロン酸エステルであり、
2019534238.tif 000213
式中、
（Ｉ）Ｒ２０及びＲ２１は、独立して、Ｈ、任意に置換されたアルキルもしくはヘテロアルキル、任意に置換されたシクロアルキルもしくはヘテロシクロアルキル、及び任意に置換されたアリールもしくはヘテロアリールから選択されるか、または
（ＩＩ）Ｒ２０及びＲ２１はともに、任意に置換された部分−（ＣＨ２）ｎ−（式中、ｎは、２または３である）であり、前記部分は、それらが結合するＯ原子と一緒に、前記Ｂ原子とヘテロシクロアルキル環を形成し、前記ヘテロシクロアルキル環は、任意に、縮合ヘテロアルキル環、縮合アリール環、または縮合ヘテロアリール環を含んでもよく、
（ＩＩＩ）波線は、式（ＩＩ）のカルバメート部分の酸素原子への結合点を示す、請求項４１〜４５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６１】
Ｒ１０は、式（ＩＶｂ）及び（ＩＶｃ）から選択され、
2019534238.tif 000214
式中、
（Ｉ）Ｒ３０、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３、Ｒ４０、Ｒ４１、Ｒ４２、Ｒ４３、Ｒ４４、及びＲ４５は、独立して、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ２Ｃｌ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ２、任意に置換されたＣ１−８アルキルもしくはヘテロアルキル、２〜７個の炭素原子を含む任意に置換されたシクロアルキルもしくはヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリールもしくはヘテロアリールから選択されるか、または
（ＩＩ）（ｉ）Ｒ３０もしくはＲ３１のうちの１つ及びＲ３２もしくはＲ３３のうちの１つ、（ｉｉ）Ｒ４０もしくはＲ４１のうちの１つ及びＲ４２もしくはＲ４３のうちの１つ、ならびに／または（ｉｉｉ）Ｒ４２もしくはＲ４３のうちの１つ及びＲ４４もしくはＲ４５のうちの１つは、２〜７個の炭素原子を有する、任意に置換された縮合シクロアルキル環、縮合ヘテロシクロアルキル環、縮合アリール環、もしくは縮合ヘテロアリール環を形成する、請求項６０に記載の化合物。
【請求項６２】
Ｒ１０は、式（ＩＶｄ）〜（ＩＶｉ）から選択される、請求項６０または請求項６１に記載の化合物。
2019534238.tif 000215
【請求項６３】
Ｒ１０は、式（ＩＶｄ）である、請求項６２に記載の化合物。
【請求項６４】
Ｒ１０は、式（Ｖ）のジスルフィドであり、
2019534238.tif 000216
式中、
（Ｉ）Ｒ５０は、任意に置換されたＣ１−８アルキルまたはヘテロアルキルであり、Ｒ５１は、任意に置換されたＣ２アルキレンまたは任意に置換されたベンジレンであり、
（ＩＩ）波線は、式（ＩＩ）のカルバメート部分の酸素原子への結合点を示す、請求項４１〜４５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６５】
Ｒ５０は、Ｃ２−６アルキルであり、Ｒ５１は、前記式（Ｖａ）のものであり、
2019534238.tif 000217
式中、
（Ｉ）Ｒ６１及びＲ６２は、独立して、Ｈ及びＣＨ３から選択されるか、またはＲ６１及びＲ６２は、それらが結合する炭素原子と一緒に、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または２〜６個の炭素原子を含む任意に置換されたヘテロアリールを形成し、
（ＩＩ）Ｒ６３及びＲ６４は、独立して、Ｈ及びＣＨ３から選択され、
（ＩＩＩ）Ｒ６３及びＲ６４を有する炭素原子で波線は、式（ＩＩ）のカルバメート部分の酸素原子への結合点を示す、請求項６４に記載の化合物。
【請求項６６】
Ｒ６３及びＲ６４は、Ｈである、請求項６５に記載の化合物。
【請求項６７】
式中、
（Ｉ）Ｒ５０は、ＣＨ３ＣＨ２−、（ＣＨ３）２ＣＨ−、及び（ＣＨ３）３Ｃ−から選択され、
（ＩＩ）Ｒ５１は、式（Ｖｂ）〜（Ｖｆ）から選択される、請求項６４〜６６のいずれか１項に記載の化合物。
2019534238.tif 000218
【請求項６８】
式、
2019534238.tif 000219
の請求項４１〜６７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６９】
第１のピロロベンゾジアゼピンプロドラッグ単量体Ｍ１と、第２のピロロベンゾジアゼピン単量体Ｍ２と、を含む、式（ＶＩＩＩ）のピロロベンゾジアゼピンプロドラッグ二量体化合物であって、
2019534238.tif 000220
式中、
（Ｉ）Ｍ１については、
（ａ）Ｒ２は、−Ｈ、＝ＣＨ２、−ＣＮ、−Ｒ、＝ＣＨ−Ｒ、アリール、ヘテロアリール、二環式環、及びヘテロ二環式環から選択され、
（ｂ）Ｒ３は、Ｈであり、
（ｃ）Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９は、独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ハロ、アミノ、ニトロ、ＳＨ、及びＳＲから選択され、
（ｄ）Ｘは、Ｓ、Ｏ、及びＮＨから選択され、
（ｅ）Ｒ１０は、（ｉ）グルタチオン活性化ジスルフィド、（ｉｉ）ＤＴ−ジアフォラーゼ活性化キノン、または（ｉｉｉ）活性酸素種活性化アリールボロン酸もしくはアリールボロン酸エステルを含む、プロドラッグ部分であり、
（ｆ）Ｒ１１は、（ｉ）ＸがＯまたはＮＨであるとき、Ｈ及びＲ、ならびに（ｉｉ）ＸがＳであるとき、Ｈ、Ｒ、及びＯｚＵ（式中、ｚは、２または３であり、Ｕは、一価の薬学的に許容可能なカチオンである）から選択され、
（ｇ）Ｒは、１〜１０個の炭素原子を有する低級アルキル基、及び最大１２個の炭素原子のアリールアルキル基から選択され、（ｉ）前記アルキル基は、任意に、１つ以上の炭素−炭素二重もしくは三重結合、または最大１２個の炭素原子のアリール基を含有し、（ｉｉ）Ｒは、任意に、１つ以上のハロ、ヒドロキシ、アミノ、またはニトロ基によって置換され、任意に、１つ以上のヘテロ原子を含有し、
（ｈ）破線は、（ｉ）Ｃ１とＣ２、（ｉｉ）Ｃ２とＣ３、及び（ｉｉｉ）Ｃ２とＲ２のうちの１つの間で、任意の二重結合を表し、
（ＩＩ）Ｍ２については、
（ａ）Ｒ２’、Ｒ３’、Ｒ６’、Ｒ７’、Ｒ９’、Ｒ１１’、及びＸ’は、それぞれ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１１、及びＸに対応し、
（ｂ）Ｍ２は、（ｉ）Ｃ１’とＣ２’、（ｉｉ）Ｃ２’とＣ３’、及び（ｉｉｉ）Ｃ２’とＲ２’のうちの１つの間で、任意の二重結合を含み、
（ｃ）Ｒ１２は、不在であるか、または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｌ及び−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｒ１０から選択され、Ｎ１０’とＣ１１’との間の前記結合は、Ｒ１２が不在であるとき、二重結合であり、
（ｄ）破線は、（ｉ）Ｃ１’及びＣ２’、（ｉｉ）Ｃ２’及びＣ３’、ならびに（ｉｉｉ）Ｃ２’のうちの１つと、Ｒ２’との間に任意の二重結合を表し、
（ＩＩＩ）Ｌは、ジスルフィド部分、ペプチド部分、及びペプチド模倣部分のうちの少なくとも１つを含む、自壊性リンカーであり、
（ＩＶ）Ｍ１及びＭ２は、部分−Ｑ−Ｔ−Ｑ’−（式中、Ｑ及びＱ’は、独立して、Ｏ、ＮＨ、及びＳから選択され、Ｔは、１つ以上のヘテロ原子及び／または芳香環によってさらに任意に中断される、任意に置換されたＣ１−１２アルキレン基である）によってＣ８位で結合され、
（Ｖ）各アスタリスクは、独立して、キラル中心を表す、前記化合物。
【請求項７０】
Ｍ１のＣ１とＣ２との間の前記結合は、単結合であり、Ｍ１のＣ２とＣ３との間の前記結合は、単結合であり、Ｍ２のＣ１’とＣ２’との間の前記結合は、単結合であり、Ｍ２のＣ２’とＣ３’との間の前記結合は、単結合であり、Ｍ１のＣ３は、２つのＲ３基で置換され、これらの各々はＨであり、Ｍ２のＣ３’は、２つのＲ３’基で置換され、これらの各々はＨであり、Ｍ１のＣ２とＲ２との間の前記結合は、二重結合であり、Ｍ２のＣ２’とＲ２’との間の前記結合は、二重結合である、請求項６９に記載の化合物。
【請求項７１】
Ｒ２及びＲ２’は、＝ＣＨ２である、請求項６９または請求項７０に記載の化合物。
【請求項７２】
Ｒ６、Ｒ６’、Ｒ９、及びＲ９’は、Ｈである、請求項６９〜７１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７３】
Ｒ７及びＲ７’は、ＯＣＨ３である、請求項６９〜７２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７４】
Ｑ及びＱ’は、Ｏであり、Ｔは、Ｃ３アルキレンまたはＣ５アルキレンである、請求項６９〜７３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７５】
Ｒ１０は、式（ＩＩＩａ）及び（ＩＩＩｂ）から選択されるキノンであり、
2019534238.tif 000221
式中、
（Ｉ）Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、及びＪは、独立して、Ｃ及びＮから選択され、Ｎは、第二級アニメ、第三級アミン、または構造＝Ｎ−のイミンであり、
（ＩＩ）各ｍは、独立して、０及び１から選択され、
（ＩＩＩ）破線は、任意の二重結合を表し、
（ＩＶ）ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＧ、及びＲＪは、独立して、Ｈ、ＯＨ、ならびに任意に置換されたＣ１−４アルキルまたはヘテロアルキル、Ｃ１−４アルコキシまたはヘテロアルコキシ、及びハロゲンから選択され、
（Ｖ）ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＧ、及びＲＪのうちの１つは、式（ＶＩＩＩ）のＭ１のカルバメート部分の酸素原子に共有結合しているＣ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーである、請求項６９〜７４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７６】
ＲＡ、ＲＤ、及びＲＥのうちの１つは、Ｃ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーである、請求項７５に記載の化合物。
【請求項７７】
Ａ−（ＲＡ）ｍ、Ｄ−（ＲＤ）ｍ、及びＥ−（ＲＥ）ｍのうちの１つは、
2019534238.tif 000222
である、請求項７５または請求項７６に記載の化合物。
【請求項７８】
Ａ−（ＲＡ）ｍは、
2019534238.tif 000223
であり、Ｄは、Ｃであり、ＲＤは、Ｃ１リンカーであり、Ｅ−（ＲＥ）ｍは、
2019534238.tif 000224
であり、ＤとＥとの間の前記結合は、二重結合である、請求項７５〜７７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７９】
Ｇ及びＪは、Ｃである、請求項７５〜７８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８０】
Ｇ及びＪは、Ｃであり、ＲＧ及びＲＪのうちの１つは、−Ｏ−ＣＨ３である、請求項７５〜７８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８１】
前記キノンは、式（ＩＩＩｃ）及び（ＩＩＩｄ）から選択され、
2019534238.tif 000225
式中、波線は、式（ＶＩＩＩ）のＭ１のカルバメート部分の酸素原子への結合点を示す、請求項７５〜８０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８２】
Ｒ１０は、式（ＩＩＩｅ）及び（ＩＩＩｆ）から選択されるキノンであり、
2019534238.tif 000226
式中、
（Ｉ）Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、及びＪは、独立して、Ｃ及びＮから選択され、Ａ、Ｄ、Ｅ、及びＦの少なくとも１つは、Ｃであり、Ｇ及びＪの少なくとも１つは、Ｃであり、Ｎは、第二級アニメ、第三級アミン、または構造＝Ｎ−のイミンであり、
（ＩＩ）各ｎは、独立して、０及び１から選択され、
（ＩＩＩ）破線は、任意の二重結合を表し、
（ＩＶ）ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、ＲＧ、及びＲＪは、独立して、Ｈ、ＯＨ、ならびに任意に置換されたＣ１−４アルキルまたはヘテロアルキル、Ｃ１−４アルコキシまたはヘテロアルコキシ、及びハロゲンから選択され、
（Ｖ）ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、ＲＧ、及びＲＪのうちの１つは、式（ＶＩＩＩ）のＭ１のカルバメート部分の酸素原子に共有結合しているＣ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーである、請求項６９〜７４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８３】
ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、及びＲＦのうちの１つは、前記Ｃ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーである、請求項８２に記載の化合物。
【請求項８４】
Ｄ−ＲＤまたはＥ−ＲＥは、前記Ｃ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーに結合している炭素原子を有する部分であり、Ａ、Ｆのうちの少なくとも一方、ならびにＤ及びＥの他方は、Ｎである、請求項８２または請求項８３に記載の化合物。
【請求項８５】
ＲＡ、ＲＥ、及びＲＦのうちの１つは、独立して、Ｈ、任意に置換されたＣ１−４アルキルまたはヘテロアルキル、及び任意に置換されたＣ１−４アルコキシまたはヘテロアルコキシから選択され、Ｄは、Ｃであり、ＲＤは、Ｃ１リンカーである、請求項８２〜８４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８６】
Ｇ−（ＲＧ）ｎ及びＪ−（ＲＪ）ｎのうちの少なくとも１つは、
2019534238.tif 000227
である、請求項８２〜８５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８７】
Ｇ−ＲＧ及びＪ−ＲＪのうちの一方は、Ｃ−Ｏ−ＣＨ３であり、Ｇ−ＲＧ及びＪ−ＲＪの他方は、ＣＨであり、ＧとＪとの間の前記結合は、二重結合である、請求項８２〜８６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８８】
Ａ、Ｄ、Ｅ、及びＦから形成された環は、不飽和であるか、または部分的に飽和される、請求項８２〜８７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８９】
Ｒ１０は、式（ＩＶａ）のアリールボロン酸またはアリールボロン酸エステルであり、
2019534238.tif 000228
式中、
（Ｉ）Ｒ２０及びＲ２１は、独立して、Ｈ、任意に置換されたアルキルもしくはヘテロアルキル、任意に置換されたシクロアルキルもしくはヘテロシクロアルキル、及び任意に置換されたアリールもしくはヘテロアリールから選択されるか、または
（ＩＩ）Ｒ２０及びＲ２１はともに、任意に置換された部分−（ＣＨ２）ｎ−（式中、ｎは、２または３である）であり、前記部分は、それらが結合するＯ原子と一緒に、前記Ｂ原子とヘテロシクロアルキル環を形成し、前記ヘテロシクロアルキル環は、任意に、縮合ヘテロアルキル環、縮合アリール環、または縮合ヘテロアリール環を含んでもよく、
（ＩＩＩ）波線は、式（ＶＩＩＩ）のＭ１のカルバメート部分の酸素原子への結合点を示す、請求項６９〜７４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９０】
Ｒ１０は、式（ＩＶｂ）及び（ＩＶｃ）から選択され、
2019534238.tif 000229
式中、
（Ｉ）Ｒ３０、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３、Ｒ４０、Ｒ４１、Ｒ４２、Ｒ４３、Ｒ４４、及びＲ４５は、独立して、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ２Ｃｌ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ２、任意に置換されたＣ１−８アルキルもしくはヘテロアルキル、２〜７個の炭素原子を含む任意に置換されたシクロアルキルもしくはヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリールもしくはヘテロアリールから選択されるか、または
（ＩＩ）（ｉ）Ｒ３０もしくはＲ３１のうちの１つ及びＲ３２もしくはＲ３３のうちの１つ、（ｉｉ）Ｒ４０もしくはＲ４１のうちの１つ及びＲ４２もしくはＲ４３のうちの１つ、ならびに／または（ｉｉｉ）Ｒ４２もしくはＲ４３のうちの１つ及びＲ４４もしくはＲ４５のうちの１つは、２〜７個の炭素原子を有する、任意に置換された縮合シクロアルキル環、縮合ヘテロシクロアルキル環、縮合アリール環、もしくは縮合ヘテロアリール環を形成する、請求項８９に記載の化合物。
【請求項９１】
Ｒ１０は、式（ＩＶｄ）〜（ＩＶｉ）から選択される、請求項８９または請求項９０に記載の化合物。
2019534238.tif 000230
【請求項９２】
Ｒ１０は、式（ＩＶｄ）である、請求項９１に記載の化合物。
【請求項９３】
Ｒ１０は、式（Ｖ）のジスルフィドであり、
2019534238.tif 000231
式中、
（Ｉ）Ｒ５０は、任意に置換されたＣ１−８アルキルまたはヘテロアルキルであり、Ｒ５１は、任意に置換されたＣ２アルキレンまたは任意に置換されたベンジレンであり、
（ＩＩ）波線は、式（ＶＩＩＩ）のＭ１のカルバメート部分の酸素原子への結合点を示す、請求項６９〜７４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９４】
Ｒ５０は、Ｃ２−６アルキルであり、Ｒ５１は、前記式（Ｖａ）のものであり、
2019534238.tif 000232
式中、
（Ｉ）Ｒ６１及びＲ６２は、独立して、Ｈ及びＣＨ３から選択されるか、またはＲ６１及びＲ６２は、それらが結合する炭素原子と一緒に、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または２〜６個の炭素原子を含む任意に置換されたヘテロアリールを形成し、
（ＩＩ）Ｒ６３及びＲ６４は、独立して、Ｈ及びＣＨ３から選択され、ならびに
（ＩＩＩ）Ｒ６３及びＲ６４を有する炭素原子で波線は、式（ＶＩＩＩ）のＭ１のカルバメート部分の酸素原子への結合点を表す、請求項９３に記載の化合物。
【請求項９５】
Ｒ６３及びＲ６４は、Ｈである、請求項９４に記載の化合物。
【請求項９６】
式中、
（Ｉ）Ｒ５０は、ＣＨ３ＣＨ２−、（ＣＨ３）２ＣＨ−、及び（ＣＨ３）３Ｃ−から選択され、
（ＩＩ）Ｒ５１は、式（Ｖｂ）〜（Ｖｆ）から選択される、請求項９３〜９５のいずれか１項に記載の化合物。
2019534238.tif 000233
【請求項９７】
Ｒ１２は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｌであり、Ｌは、抗体反応性スルフヒドリル部分のコンジュゲーションに好適な、反応性硫黄原子、マレイミド、ブロムアセトアミド、ヨードアセトアミド、またはアルケンを含む、請求項６９〜９６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９８】
式、
2019534238.tif 000234
及び
2019534238.tif 000235
から選択される、請求項６９〜９７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９９】
請求項１〜４０のいずれか１項に記載のピロロベンゾジアゼピンプロドラッグ二量体−抗体コンジュゲート化合物と、薬学的に許容可能な希釈剤、抗体、または賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
【請求項１００】
がんを治療する方法であって、治療を必要とする患者に、請求項９９に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項１０１】
哺乳動物におけるがんの治療のための医薬品の製造における、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の抗体−薬物コンジュゲート化合物の使用。
【請求項１０２】
がんを治療するための方法において使用するための、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の抗体−薬物コンジュゲート化合物。
【請求項１０３】
請求項９９に記載の薬学的組成物と、容器と、前記薬学的組成物ががんを治療するために使用され得ることを示す添付文書またはラベルと、を含む、製造品。
【請求項１０４】
2019534238.tif 000236
、
2019534238.tif 000237
、
2019534238.tif 000238
、
2019534238.tif 000239
、
2019534238.tif 000240
、
2019534238.tif 000241
、
及び
2019534238.tif 000242
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０５】
Ａｂは、
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ、（２）Ｅ１６、（３）ＳＴＥＡＰ１、（４）ＭＵＣ１６、（５）ＭＰＦ、（６）Ｎａｐｉ２ｂ、（７）Ｓｅｍａ５ｂ、（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ、（９）ＥＴＢＲ、（１０）ＭＳＧ７８３、（１１）ＳＴＥＡＰ２、（１２）ＴｒｐＭ４、（１３）ＣＲＩＰＴＯ、（１４）ＣＤ２１、（１５）ＣＤ７９ｂ、（１６）ＦｃＲＨ２、（１７）ＨＥＲ２、（１８）ＮＣＡ、（１９）ＭＤＰ、（２０）ＩＬ２０Ｒα、（２１）Ｂｒｅｖｉｃａｎ、（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ、（２３）ＡＳＬＧ６５９、（２４）ＰＳＣＡ、（２５）ＧＥＤＡ、（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ、（２７）ＣＤ２２、（２８）ＣＤ７９ａ、（２９）ＣＸＣＲ５、（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ、（３１）Ｐ２Ｘ５、（３２）ＣＤ７２、（３３）ＬＹ６４、（３４）ＦｃＲＨ１、（３５）ＦｃＲＨ５、（３６）ＴＥＮＢ２、（３７）ＰＭＥＬ１７、（３８）ＴＭＥＦＦ１、（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１、（４０）Ｌｙ６Ｅ、（４１）ＴＭＥＭ４６、（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ、（４３）ＬＧＲ５、（４４）ＲＥＴ、（４５）ＬＹ６Ｋ、（４６）ＧＰＲ１９、（４７）ＧＰＲ５４、（４８）ＡＳＰＨＤ１、（４９）チロシナーゼ、（５０）ＴＭＥＭ１１８、（５１）ＧＰＲ１７２Ａ、（５２）ＣＤ３３、及び（５３）ＣＬＬ−１、から選択される１つ以上の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体に結合する抗原である、請求項１０４に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年８月１１日に出願された米国仮特許出願第６２／３７３，７４０号の利益を主張し、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本開示の分野は、概して、ジスルフィドトリガー、環式ジオントリガー、またはアリールボロン酸もしくはアリールボロン酸エステルトリガー、及びその抗体コンジュゲートを有する、ピロロベンゾジアゼピンプロドラッグに関する。
【背景技術】
【０００３】
ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）及びその二量体は、ＤＮＡと相互作用することが知られており、有効ながん化学療法剤である。問題としては、心臓毒性及び急性組織壊死などのいくつかのＰＢＤと関連する副作用は、限定された使用、投薬量、及び有効性を有する。
【０００４】
選択的担体−リンカー−ＰＢＤ薬物構造を含むコンジュゲート（例えば、抗体−ＰＢＤコンジュゲート（ＡＤＣ））は、標的細胞に対する選択性の理想的な特性と、細胞傷害性薬物と、を組み合わせるため、それらは、魅力的な選択的化学療法分子である。強力な細胞傷害性薬物を標的細胞に指向することによって、非標的化細胞に対する影響を最小化しながら、標的細胞中で所望される治療効果を改善することができる。そのような改善の例には、治療効果を達成するために必要とされる用量の減少、標的とされる送達、及び改善された血流の安定性が含まれる。それにもかかわらず、ＰＢＤ  ＡＤＣは、依然として、使用及び／または投薬量を制限する有害な副作用を示し得る。
【０００５】
したがって、毒性の減少及び改善されたバイオ有効性を提供するＰＢＤ化合物及び製剤が必要となる。
【発明の概要】
【０００６】
いくつかの実施形態において、第１のＰＢＤプロドラッグ単量体Ｍ１と、第２のＰＢＤ抗体単量体Ｍ２と、を含む、式（Ｉ）のＰＢＤプロドラッグ二量体−抗体コンジュゲート組成物が提供される。
2019534238.tif 000003
【０００７】
Ｍ１は、ＰＢＤ単量体である。Ｒ２は、−Ｈ、＝ＣＨ２、−ＣＮ、−Ｒ、＝ＣＨ−Ｒ、アリール、ヘテロアリール、二環式環、及びヘテロ二環式環から選択される。Ｒ３はＨである。Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９は、独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ハロ、アミノ、ニトロ、ＳＨ、及びＳＲから選択される。Ｘは、Ｓ、Ｏ、及びＮＨから選択される。Ｒ１０は、（ｉ）グルタチオン活性化ジスルフィド、（ｉｉ）ＤＴ−ジアフォラーゼ活性化キノン、または（ｉｉｉ）活性酸素種活性化アリールボロン酸もしくはアリールボロン酸エステルを含む、プロドラッグ部分である。Ｒ１１は、（ｉ）ＸがＯまたはＮＨであるとき、Ｈ及びＲ、ならびに（ｉｉ）ＸがＳであるとき、Ｈ、Ｒ、及びＯｚＵ（式中、ｚは、２または３であり、Ｕは、一価の薬学的に許容可能なカチオンである）から選択される。Ｒは、１〜１０個の炭素原子を有する低級アルキル基、及び最大１２個の炭素原子のアリールアルキル基から選択され、（ｉ）式中、アルキル基は、任意に、１つ以上の炭素−炭素二重もしくは三重結合、または最大１２個の炭素原子のアリールアルキルを含有し、（ｉｉ）式中、Ｒは、任意に、１つ以上のハロ、ヒドロキシ、アミノ、またはニトロ基によって置換され、任意に、１つ以上のヘテロ原子を含有する。Ｍ１は、（ｉ）Ｃ１とＣ２、（ｉｉ）Ｃ２とＣ３、及び（ｉｉｉ）Ｃ２とＲ２のうちの１つの間で破線によって示されるような、任意の二重結合を含む。
【０００８】
Ｍ２は、ＰＢＤ単量体である。Ｒ２’、Ｒ３’、Ｒ６’、Ｒ７’、Ｒ９’、Ｒ１１’、及びＸ’は、それぞれ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１１、及びＸに対応し、それらと同じように定義される。Ｌは、ジスルフィド部分、ペプチド部分、またはペプチド模倣部分を含む、自壊性リンカーである。Ｍ２は、（ｉ）Ｃ１’とＣ２’、（ｉｉ）Ｃ２’とＣ３’、及び（ｉｉｉ）Ｃ２’とＲ２’のうちの１つの間で破線によって示されるような、任意の二重結合を含む。
【０００９】
Ｍ１及びＭ２は、部分−Ｑ−Ｔ−Ｑ’−（式中、Ｑ及びＱ’は、独立して、Ｏ、ＮＨ、及びＳから選択され、Ｔは、１つ以上のヘテロ原子及び／または芳香環によってさらに任意に中断される、任意に置換されたＣ１−１２アルキレン基である）によってＣ８位で結合される。Ａｂは、抗体であり、ｐは、１、２、３、４、５、６、７、または８の値を有する整数であり、抗体にコンジュゲートまたは結合され得るＰＢＤプロドラッグ二量体の数を表す。各アスタリスクは、独立して、ラセミまたは未定義の立体化学のキラル中心を表す。
【００１０】
いくつかの他の実施形態において、式（ＩＩ）のＰＢＤ単量体プロドラッグ組成物が提供される。
2019534238.tif 000004
【００１１】
Ｒ２は、−Ｈ、＝ＣＨ２、−ＣＮ、−Ｒ、＝ＣＨ−Ｒ、アリール、ヘテロアリール、二環式環、及びヘテロ二環式環から選択される。Ｒ３は、Ｈである。Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ハロ、アミノ、ニトロ、ＳＨ、及びＳＲから選択されるか、またはＲ７及びＲ８は、それらが結合する炭素原子と一緒に、基−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（式中、ｎは、１または２である）を形成する。Ｘは、Ｓ、Ｏ、及びＮＨから選択される。Ｒ１０は、（ｉ）グルタチオン活性化ジスルフィド、（ｉｉ）ＤＴ−ジアフォラーゼ活性化キノン、または（ｉｉｉ）活性酸素種活性化アリールボロン酸もしくはアリールボロン酸エステルを含む、プロドラッグ部分である。Ｒ１１は、（ｉ）ＸがＯまたはＮＨであるとき、Ｈ及びＲ、ならびに（ｉｉ）ＸがＳであるとき、Ｈ、Ｒ、及びＯｚＵ（式中、ｚは、２または３であり、Ｕは、一価の薬学的に許容可能なカチオンである）から選択される。Ｒは、１〜１０個の炭素原子を有する低級アルキル基、及び最大１２個の炭素原子のアリールアルキル基から選択され、（ｉ）式中、アルキル基は、任意に、１つ以上の炭素−炭素二重もしくは三重結合、または最大１２個の炭素原子のアリール基を含有し、（ｉｉ）式中、Ｒは、任意に、１つ以上のハロ、ヒドロキシ、アミノ、またはニトロ基によって置換され、任意に、１つ以上のヘテロ原子を含有する。ＰＢＤ単量体プロドラッグは、（ｉ）Ｃ１とＣ２、（ｉｉ）Ｃ２とＣ３、及び（ｉｉｉ）Ｃ２とＲ２のうちの１つの間で破線によって示されるような、任意の二重結合を含む。各アスタリスクは、独立して、ラセミまたは未定義の立体化学のキラル中心を表す。
【００１２】
いくつかの他の実施形態において、第１のＰＢＤプロドラッグ単量体Ｍ１と、第２のＰＢＤ単量体Ｍ２と、を含む、式（ＶＩＩＩ）のＰＢＤプロドラッグ二量体化合物が提供される。
2019534238.tif 000005
【００１３】
Ｍ１は、ＰＢＤ単量体である。Ｒ２は、−Ｈ、＝ＣＨ２、−ＣＮ、−Ｒ、＝ＣＨ−Ｒ、アリール、ヘテロアリール、二環式環、及びヘテロ二環式環から選択される。Ｒ３はＨである。Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９は、独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ハロ、アミノ、ニトロ、ＳＨ、及びＳＲから選択される。Ｘは、Ｓ、Ｏ、及びＮＨから選択される。Ｒ１０は、（ｉ）グルタチオン活性化ジスルフィド、（ｉｉ）ＤＴ−ジアフォラーゼ活性化キノン、または（ｉｉｉ）活性酸素種活性化アリールボロン酸もしくはアリールボロン酸エステルを含む、プロドラッグ部分である。Ｒ１１は、（ｉ）ＸがＯまたはＮＨであるとき、Ｈ及びＲ、ならびに（ｉｉ）ＸがＳであるとき、Ｈ、Ｒ、及びＯｚＵ（式中、ｚは、２または３であり、Ｕは、一価の薬学的に許容可能なカチオンである）から選択される。Ｒは、１〜１０個の炭素原子を有する低級アルキル基、及び最大１２個の炭素原子のアリールアルキル基から選択され、（ｉ）式中、アルキル基は、任意に、１つ以上の炭素−炭素二重もしくは三重結合、または最大１２個の炭素原子のアリール基を含有し、（ｉｉ）式中、Ｒは、任意に、１つ以上のハロ、ヒドロキシ、アミノ、またはニトロ基によって置換され、任意に、１つ以上のヘテロ原子を含有する。Ｍ１は、（ｉ）Ｃ１とＣ２、（ｉｉ）Ｃ２とＣ３、及び（ｉｉｉ）Ｃ２とＲ２のうちの１つの間で破線によって示されるような、任意の二重結合を含む。
【００１４】
Ｍ２は、ＰＢＤ単量体である。Ｒ２’、Ｒ３’、Ｒ６’、Ｒ７’、Ｒ９’、Ｒ１１’、及びＸ’は、それぞれ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１１、及びＸに対応する。Ｍ２は、（ｉ）Ｃ１’とＣ２’、（ｉｉ）Ｃ２’とＣ３’、及び（ｉｉｉ）Ｃ２’とＲ２’のうちの１つの間で破線によって示されるような、任意の二重結合を含む。Ｒ１２は、Ｎ１０’とＣ１１’との間の結合が二重結合であるとき、不在であるか、または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｌ及び−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｒ１０から選択される。
【００１５】
Ｌは、ジスルフィド部分、ペプチド部分、及びペプチド模倣部分のうちの少なくとも１つを含む、自壊性リンカーである。Ｍ１及びＭ２は、部分−Ｑ−Ｔ−Ｑ’−（式中、Ｑ及びＱ’は、独立して、Ｏ、ＮＨ、及びＳから選択され、Ｔは、１つ以上のヘテロ原子及び／または芳香環によってさらに任意に中断される、任意に置換されたＣ１−１２アルキレン基である）によってＣ８位で結合される。
【００１６】
各アスタリスクは、独立して、ラセミまたは未定義の立体化学のキラル中心を表す。
【００１７】
いくつかの他の実施形態において、上述のＰＢＤプロドラッグ二量体−抗体コンジュゲート化合物と、薬学的に許容可能な希釈剤、抗体、または賦形剤と、を含む、薬学的組成物が提供される。
【００１８】
いくつかの他の実施形態において、患者に、上述の薬学的組成物を投与することを含む、がんを治療する方法が提供される。
【００１９】
他の実施形態において、哺乳動物におけるがんの治療のための医薬品の製造における、上述の抗体−薬物コンジュゲート化合物の使用が提供される。
【００２０】
さらに他の実施形態において、がんを治療するための方法において使用するための、上述の抗体−薬物コンジュゲート化合物が提供される。
【００２１】
他の実施形態において、上述の薬学的組成物と、容器と、薬学的組成物ががんを治療するために使用され得ることを示す添付文書またはラベルと、を含む、製造品が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】ＫＰＬ−４細胞に対するＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ活性［％］対プロドラッグ濃度（モル／リットル）の対数のプロットを示し、ＫＰＬ−４細胞に対するＰＢＤ単量体のＩＣ５０効力の表をさらに示す。
【図２】ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞に対するＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ活性［％］対プロドラッグ濃度（モル／リットル）の対数のプロットを示し、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞に対するＰＢＤ単量体のＩＣ５０効力の表をさらに示す。
【図３】ＳＫ−ＢＲ−３細胞生存率（対照（％））対μｇ／ｍＬ基準のＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ濃度のプロットを示す。
【図４】４及び２４時間間隔で評価されたヒト及びラット全血におけるＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグの安定性のプロットを示し、これらの結果は、時間ゼロと比較して残りの親化合物のパーセントとして提示される。
【図５】ＳＫ−ＢＲ−３細胞生存率（対照（％））対ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ濃度（マイクロモル）及びＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ濃度（μｇ／ｍＬ）のプロットを示す。
【図６】ＫＰＬ−４細胞生存率（対照（％））対ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ濃度（マイクロモル）及びＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ濃度（μｇ／ｍＬ）のプロットを示す。
【図７】ＵＡＣＣ−２５７及びＩＧＲＯＶ−１相対細胞生存率（対照（％））対ＰＢＤ二量体非プロドラッグ対照濃度（ｎＭ）のプロットを示し、ＵＡＣＣ−２５７及びＩＧＲＯＶ−１細胞に対するＰＢＤ二量体のＩＣ５０の効力の表をさらに示す。
【図８】一方のＰＢＤ単量体にＮ１０位でジスルフィドプロドラッグを有し、他方のＰＢＤ単量体にプロドラッグを有しない、ＰＢＤ二量体の濃度（ｎＭ）に対するＵＡＣＣ−２５７及びＩＧＲＯＶ−１相対細胞生存率（対照（％））のプロットを示し、ＵＡＣＣ−２５７及びＩＧＲＯＶ−１細胞に対して示されたＧＳＨ濃度に対するＰＢＤ二量体のＩＣ５０の効力ならびにＩＣ５０比の表をさらに示す。ＩＣ５０比は、図７に示されるＰＢＤ二量体非プロドラッグ対照に対するデータと比較して決定される。
【図９】両方のＰＢＤ単量体にＮ１０位でジスルフィドプロドラッグを有するＰＢＤ二量体の濃度（ｎＭ）に対するＵＡＣＣ−２５７及びＩＧＲＯＶ−１相対細胞生存率（対照（％））のプロットを示し、ＵＡＣＣ−２５７及びＩＧＲＯＶ−１に対して示されたＧＳＨ濃度に対するＰＢＤ二量体のＩＣ５０の効力ならびにＩＣ５０比の表をさらに示す。ＩＣ５０比は、図７に示されるＰＢＤ二量体非プロドラッグ対照に対するデータと比較して決定される。
【図１０】（ｉ）非プロドラッグのＰＢＤ二量体、（ｉｉ）一方のＰＢＤ単量体にＮ１０位でジスルフィドプロドラッグを有し、他方のＰＢＤ単量体にプロドラッグを有しない、ＰＢＤ二量体、及び（ｉｉｉ）両方のＰＢＤ単量体にＮ１０位でジスルフィドプロドラッグを有するＰＢＤ二量体の濃度（ｎＭ）に対してＳＫ−ＢＲ３相対細胞生存率（対照（％））のプロットを示す。
【図１１】（ｉ）７Ｃ２ＨＣ  Ａ１４０Ｃペプチド結合ジスルフィドシクロペンチルプロドラッグＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、（ｉｉ）７Ｃ２ＬＣ  Ｋ１４９Ｃペプチド結合ジスルフィドチオ−フェノールプロドラッグＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、（ｉｉｉ）プロドラッグ部分を有しない７Ｃ２ＨＣ  Ａ１４０Ｃ  ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、及び（ｉｖ）プロドラッグ部分を有しないＣＤ２２ＨＣ  Ａ１４０Ｃ  ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体の濃度に対するＳＫ−ＢＲ−３細胞生存率（対照（％））のプロットを示す。
【図１２】（ｉ）７Ｃ２ＨＣ  Ａ１４０Ｃペプチド結合ジスルフィドシクロペンチルプロドラッグＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、（ｉｉ）７Ｃ２ＬＣ  Ｋ１４９Ｃペプチド結合ジスルフィドチオ−フェノールプロドラッグＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、（ｉｉｉ）プロドラッグ部分を有しない７Ｃ２ＨＣ  Ａ１４０Ｃ  ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、及び（ｉｖ）プロドラッグ部分を有しないＣＤ２２ＨＣ  Ａ１４０Ｃ  ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体の濃度に対するＫＰＬ−４細胞生存率（対照（％））のプロットを示す。
【図１３】（ｉ）７Ｃ２ＬＣ  Ｋ１４９Ｃペプチド結合ジスルフィドシクロブチルプロドラッグＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、（ｉｉ）７Ｃ２ＬＣ  Ｋ１４９Ｃペプチド結合ジスルフィドシクロペンチルプロドラッグＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、（ｉｉｉ）７Ｃ２ＬＣ  Ｋ１４９Ｃペプチド結合ジスルフィドチオ−フェノールプロドラッグＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、（ｉｖ）７Ｃ２ＬＣ  Ｋ１４９Ｃペプチド結合ジスルフィドイソプロピルプロドラッグＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、（ｖ）プロドラッグ部分を有しない４Ｄ５ＨＣ  Ａ１１８Ｃ  ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、及び（ｖｉ）プロドラッグ部分を有しない４Ｄ５ＬＣ  Ｖ２０５Ｃ  ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体の濃度に対するＳＫ−ＢＲ−３細胞生存率（対照（％））のプロットを示す。
【図１４】（ｉ）７Ｃ２ＬＣ  Ｋ１４９Ｃペプチド結合ジスルフィドシクロブチルプロドラッグＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、（ｉｉ）７Ｃ２ＬＣ  Ｋ１４９Ｃペプチド結合ジスルフィドシクロペンチルプロドラッグ  ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、（ｉｉｉ）７Ｃ２ＬＣ  Ｋ１４９Ｃペプチド結合ジスルフィドチオ−フェノールプロドラッグＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、（ｉｖ）７Ｃ２ＬＣ  Ｋ１４９Ｃペプチド結合ジスルフィドイソプロピルプロドラッグＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、（ｖ）プロドラッグ部分を有しない４Ｄ５ＨＣ  Ａ１１８Ｃ  ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、及び（ｖｉ）プロドラッグ部分を有しない４Ｄ５ＬＣ  Ｖ２０５Ｃ  ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体の濃度に対するＫＰＬ−４細胞生存率（対照（％））のプロットを示す。
【図１５Ａ】（ｉ）一方のＰＢＤ単量体（陰性対照）のギ酸ベンジル（Ｃ６Ｈ５−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−）部分をＮ１０位で有するＣＤ２２抗体ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、（ｉｉ）ＣＤ２２抗体ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体アリールボロン酸プロドラッグ（（ＯＨ）２Ｂ−Ｃ６Ｈ４−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−）、及び（ｉｉｉ）プロドラッグ部分（陽性対照）を有しないＣＤ２２抗体ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体の濃度に対する時間ゼロで細胞数と比較して、３日後に生存細胞のＷＳＵ−ＤＬＣＬ正規化パーセントのプロットを示す。
【図１５Ｂ】（ｉ）ボロン酸プロドラッグ（ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸プロドラッグ１Ａ）を有するＣＤ２２抗体ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、（ｉｉ）ボロン酸プロドラッグ（ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸プロドラッグ１Ｂ）を有するＬｙ６Ｅ抗体ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、（ｉｉｉ）プロドラッグ部分（ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸対照２）（陽性対照）を有しないＣＤ２２抗体ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、及び（ｉｖ）空白対照への曝露から３日後、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ細胞死滅対薬物濃度（μｇ／ｍＬ）のプロットを示す。
【図１５Ｃ】（ｉ）ＰＢＤ単量体対照、（ｉｉ）Ｎ１０ＰＢＤ位でギ酸ベンジル部分を有するＰＢＤ単量体対照、及び（ｉｉｉ）ＰＢＤ単量体のボロン酸プロドラッグへの曝露から３日後、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞死滅対薬物濃度（μＭ）のプロットを示す。
【図１５Ｄ】（ｉ）シルベストロール、（ｉｉ）ＰＢＤ単量体対照、（ｉｉｉ）Ｎ１０ＰＢＤ位でギ酸ベンジル部分を有するＰＢＤ単量体対照、（ｉｖ）ＰＢＤ単量体ボロン酸プロドラッグ、（ｖ）ＰＢＤ単量体対照及びシルベストロール、（ｖｉ）Ｎ１０ＰＢＤ位でギ酸ベンジル部分を有するＰＢＤ単量体対照及びシルベストロール、ならびに（ｖｉｉ）ＰＢＤ単量体ボロン酸プロドラッグ及びシルベストロールへの曝露から３日後、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞死滅対薬物濃度（μＭ）のプロットを示す。７
【図１６】（ｉ）一方のＰＢＤ単量体（陰性対照）のギ酸ベンジル（Ｃ６Ｈ５−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−）部分をＮ１０位で有するＣＤ２２抗体ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、（ｉｉ）ＣＤ２２抗体ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体アリールボロン酸プロドラッグ（（ＯＨ）２Ｂ−Ｃ６Ｈ４−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−）、及び（ｉｉｉ）プロドラッグ部分（陽性対照）を有しないＣＤ２２抗体ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体の濃度に対する時間ゼロで細胞数と比較して、３日後に生存細胞のＢＪＡＢ正規化パーセントのプロットを示す。
【図１７】（ｉ）一方のＰＢＤ単量体のキノンプロドラッグをＮ１０位で有し、他方のＰＢＤ単量体のプロドラッグもリンカーもＮ１０位で有しない、ＰＢＤ二量体、及び（ｉｉ）プロドラッグもリンカーも有しないＰＢＤ二量体の濃度（Ｍ）に対するＫＰＬ−４細胞に対する活性［％］のプロットを示す。図１７は、ＫＰＬ−４細胞に対するＰＢＤ二量体ジアフォラーゼプロドラッグ及び対照のＩＣ５０の効力及びＩＣ５０比の表をさらに示す。ＩＣ５０比は、ＰＢＤ二量体対照と比較して、プロドラッグのＩＣ５０値に基づいている。
【図１８】（ｉ）一方のＰＢＤ単量体のキノンプロドラッグをＮ１０位で有し、他方のＰＢＤ単量体のプロドラッグもリンカーもＮ１０位で有しない、ＰＢＤ二量体、及び（ｉｉ）プロドラッグもリンカーも有しないＰＢＤ二量体の濃度（Ｍ）に対するＷＳＵ細胞に対する活性［％］のプロットを示す。図１８は、ＫＰＬ−４細胞に対するＰＢＤ二量体ジアフォラーゼプロドラッグ及び対照のＩＣ５０の効力及びＩＣ５０比の表をさらに示す。ＩＣ５０比は、ＰＢＤ二量体対照と比較して、プロドラッグのＩＣ５０値に基づいている。
【図１９】（ｉ）キノンプロドラッグをＮ１０で有するＰＢＤ単量体及び（ｉｉ）プロドラッグもリンカーも有しないＰＢＤ単量体の濃度（Ｍ）に対するＫＰＬ−４細胞に対する活性［％］のプロットを示す。図１９は、ＫＰＬ−４細胞に対するＰＢＤ二量体ジアフォラーゼプロドラッグ及び対照のＩＣ５０の効力及びＩＣ５０比の表をさらに示す。ＩＣ５０比は、ＰＢＤ二量体対照と比較して、プロドラッグのＩＣ５０値に基づいている。
【図２０】（ｉ）キノンプロドラッグをＮ１０で有するＰＢＤ単量体、及び（ｉｉ）プロドラッグもリンカーも有しないＰＢＤ単量体の濃度（Ｍ）に対するＷＳＵ細胞に対する活性［％］のプロットを示す。図２０は、ＷＳＵ細胞に対するＰＢＤ二量体ジアフォラーゼプロドラッグ及び対照のＩＣ５０の効力及びＩＣ５０比の表をさらに示す。ＩＣ５０比は、ＰＢＤ二量体対照と比較して、プロドラッグのＩＣ５０値に基づいている。
【図２１】（ｉ）７Ｃ２ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ  ＶＣ−ＰＢＤ  ＤＴジアフォラーゼキノンプロドラッグＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、（ｉｉ）Ｌｙ６Ｅ  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ  ＶＣ−ＰＢＤ  ＤＴジアフォラーゼキノンプロドラッグＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、及び（ｉｉｉ）プロドラッグ部分を有しない４Ｄ５ＨＣ  Ａ１１８Ｃ  ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体の濃度（μｇ／ｍＬ）に対するＳＫ−ＢＲ−３細胞生存率（対照（％））のプロットを示す。
【図２２】（ｉ）７Ｃ２ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ  ＶＣ−ＰＢＤ  ＤＴジアフォラーゼキノンプロドラッグＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、（ｉｉ）Ｌｙ６Ｅ  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ  ＶＣ−ＰＢＤ  ＤＴジアフォラーゼキノンプロドラッグＡＤＣ  ＰＢＤ二量体、及び（ｉｉｉ）プロドラッグ部分を有しない４Ｄ５ＨＣ  Ａ１１８Ｃ  ＡＤＣ  ＰＢＤ二量体の濃度（μｇ／ｍＬ）に対するＫＰＬ−４細胞生存率（対照（％））のプロットを示す。
【図２３】（ｉ）ヒスチジン緩衝液ビヒクル、（ｉｉ）非プロドラッグ抗ＣＤ２２ＨＣ−Ａ１１８Ｃ  ＰＢＤ二量体ＡＤＣ、（ｉｉｉ）抗ＣＤ２２ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ  ＰＤＢ二量体ボロン酸プロドラッグＡＤＣ、（ｉｖ）抗Ｌｙ６Ｅ  ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ  ＰＤＢ二量体ボロン酸プロドラッグＡＤＣ、（ｖ）非プロドラッグ抗ＣＤ２２ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ  ＰＤＢ二量体ＡＤＣ、及び（ｖｉ）非プロドラッグ抗Ｈｅｒ２ＨＣ−Ａ１１８Ｃ  ＰＢＤ二量体ＡＤＣで、ＢＪＡＢ−ｌｕｃヒトバーキットリンパ腫を有するＳＣＩＤマウスに対して治療後の日数に対して腫瘍体積（ｍｍ３）のプロットを示す。
【図２４】（ｉ）ヒスチジン緩衝液ビヒクル、（ｉｉ）非プロドラッグ抗ＣＤ２２ＨＣ−Ａ１１８Ｃ  ＰＢＤ二量体ＡＤＣ、（ｉｉｉ）抗ＣＤ２２ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ  ＰＤＢ二量体ボロン酸プロドラッグＡＤＣ、（ｉｖ）抗Ｌｙ６Ｅ  ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ  ＰＤＢ二量体ボロン酸プロドラッグＡＤＣ、（ｖ）非プロドラッグ抗ＣＤ２２ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ  ＰＤＢ二量体ＡＤＣ、及び（ｖｉ）非プロドラッグ抗Ｈｅｒ２ＨＣ−Ａ１１８Ｃ  ＰＢＤ二量体ＡＤＣで、ＢＪＡＢ−ｌｕｃヒトバーキットリンパ腫を有するＳＣＩＤマウスへの治療後の日数に対する体重変化（％）のプロットを示す。
【図２５】（ｉ）ビヒクル、（ｉｉ）非プロドラッグ抗Ｈｅｒ２ＨＣ−Ａ１４０Ｃ  ＰＢＤ二量体ＡＤＣ、及び（ｉｉｉ）抗Ｈｅｒ２ＨＣ−Ａ１４０Ｃ  ＰＢＤチオ−フェノールプロドラッグＡＤＣで、ＫＰＬ−４ヒト乳房腫瘍を有するＳＣＩＤ−ベージュマウスへの治療後の日数に対する腫瘍体積への治療後の日数に対する腫瘍体積（ｍｍ３）のプロットを示す。
【図２６】（ｉ）ビヒクル、（ｉｉ）非プロドラッグ抗Ｈｅｒ２ＨＣ−Ａ１４０Ｃ  ＰＢＤ二量体ＡＤＣ、及び（ｉｉｉ）抗Ｈｅｒ２ＨＣ−Ａ１４０Ｃ  ＰＢＤチオ−フェノールプロドラッグＡＤＣで、ＫＰＬ−４ヒト乳房腫瘍を有するＳＣＩＤ−ベージュマウスへの治療後の日数に対する体重変化（％）のプロットを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
これより本発明の特定の実施形態を詳細に参照するが、それらの例は、添付の構造及び式に例証されている。本発明は、列挙される実施形態と組み合わせて説明されるが、それらは、本発明をそれらの実施形態に限定することを意図するものではないことを理解されたい。逆に、本発明は、全ての代替形、修正形、及び同等物を網羅することが意図されており、それらは、特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内に含まれ得る。
【００２４】
当業者であれば、本発明の実施に使用することができる、本明細書に記載されるものに類似または同等である多くの方法及び材料を理解するであろう。本発明は、決して記載される方法及び材料に限定されるものではない。
【００２５】
いくつかの実施形態において、本開示は、概して、式（ＩＩ）のＰＢＤ単量体プロドラッグ化合物を対象とし、
2019534238.tif 000006
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｘ、Ｒ１０、Ｒ１１、及び＊は、本明細書の別の箇所でより詳細に定義される。
【００２６】
いくつかの実施形態において、本開示は、Ｎ１０位でＲ１０を有する第１のＰＢＤ単量体を含むＰＢＤ二量体プロドラッグ化合物を対象とする。二量体は、さらに、Ｎ１０位で、（１）置換なし、（２）Ｒ１０、または（３）リンカーを有する、第２のＰＢＤ単量体を含む。ＰＢＤ二量体は、概して、以下の２つの構造のうちの１つであり、
2019534238.tif 000007
式中、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ６、Ｒ６’、Ｒ７、Ｒ７’、Ｒ９、Ｒ９’、Ｘ、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１１’、Ｑ、Ｑ’、Ｔ、＊、及びリンカーは、本明細書の別の箇所でより詳細に定義される。
【００２７】
いくつかの実施形態において、本開示は、Ｎ１０位で、（ｉ）ＧＳＨ活性化ジスルフィドトリガーを含む保護基、（ｉｉ）ＤＴＤ活性化キノントリガーを含む保護基、または（ｉｉｉ）ＲＯＳ活性化アリールボロン酸もしくはアリールボロン酸エステルトリガーを含む保護基を有する第１のＰＢＤ単量体を含むＰＢＤ二量体プロドラッグ化合物を対象とする。二量体は、さらに、Ｎ１０位で、抗体スルフヒドリル部分にコンジュゲートされるリンカーを有する第２のＰＢＤ単量体を含む。ＰＢＤ二量体は、概して、以下のとおりであり、
2019534238.tif 000008
式中、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ６、Ｒ６’、Ｒ７、Ｒ７’、Ｒ９、Ｒ９’、Ｘ、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１１’、Ｔ、＊、リンカー、抗体、及びｐは、本明細書の別の箇所でより詳細に定義される。
【００２８】
Ｉ．定義
別段定義されない限り、本明細書で使用される技術的及び科学的な用語は、本開示が属する分野の当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有し、それらは、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ、及びＪａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋと一致する。
【００２９】
本明細書に定義される「プロドラッグ」は、トリガーを含む保護基で、Ｎ１０位で置換されたＰＢＤであり、保護基は、薬物毒性を隠す。保護基は、酵素（例えば、ＤＴＤ）、ＲＯＳ、またはＧＳＨなどのトリガーへの刺激の適用によって活性薬物を生成するために、酵素的または化学的に活性化される（切断される）。いくつかの実施形態において、トリガーは、ジスルフィド、環式ジオン（例えば、キノン）、またはアリールボロン酸もしくはアリールボロン酸エステルである。
【００３０】
本明細書に定義される「保護基」とは、特定の官能性を遮断または保護する官能基の化学修飾によって薬物分子に導入される部分を指す。
【００３１】
「ＤＴＤ」とは、ＤＴ−ジアフォラーゼを指し、「ＲＯＳ」とは、活性酸素種を指し、「ＧＳＨ」とは、グルタチオンを指す。
【００３２】
「リンカー」（Ｌ）は、１つ以上の薬物部分（Ｄ）を抗体（Ａｂ）に連結して、一般式、
抗体−［Ｌ−Ｄ］ｐ
（式中、ｐは、１、２、３、４、５、６、７、または８であり得る）の担体−リンカー−薬物コンジュゲートを形成するために使用することができる、二機能性または多機能性部分である。リンカーは、概して、抗体（Ａｂ）への接続、任意の抗体スペーサ単位、犠牲を提供するための任意のトリガー単位、任意の薬物（Ｄ）スペーサ単位、及び薬物への接続を含み、以下の一般の構造からなる。
Ａｂ−［Ａｂ接続］−［Ａｂスペーサ］ｏｐｔ−［トリガー］ｏｐｔ−［Ｄスペーサ］ｏｐｔ−［Ｄ接続］−Ｄ
【００３３】
いくつかの実施形態において、抗体−Ｄコンジュゲートは、薬物に及び抗体に共有結合するための反応性官能基を有するリンカーを使用して調製することができる。例えば、いくつかの実施形態において、システイン操作された抗体（Ａｂ）のシステインチオールは、リンカーの反応性官能基または薬物−リンカー中間体と結合を形成して、ＡＤＣを作製することができる。一実施形態において、リンカーは、抗体上に存在する遊離システインと反応して、共有ジスルフィド結合を形成することができる官能性を有する（例えば、Ｋｌｕｓｓｍａｎ，ｅｔ  ａｌ（２００４），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１５（４）：７６５−７７３の７６６頁のコンジュゲーション方法及び本明細書の実施例を参照されたく、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態において、リンカーは、ペプチド、ペプチド模倣物、またはジスルフィドトリガーなどの切断可能な犠牲部分を含んでもよい。リンカーは、任意に、犠牲部分と薬物部分（ｐ−アミノ−ベンジル（「ＰＡＢ」））との間、及び／または犠牲部分と抗体（カプロン酸に由来する部分などの）との間に１つ以上の「スペーサ」単位を含んでもよい。スペーサの非限定的な例としては、バリン−シトルリン（「ｖａｌ−ｃｉｔ」または「ｖｃ」）、アラニン−フェニルアラニン（「ａｌａ−ｐｈｅ」）、及びｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢＣ」）が挙げられる。いくつかの実施形態において、スペーサは、犠牲性であってもよい。
【００３４】
「犠牲性」及び「犠牲」とは、酵素（例えば、プロテアーゼまたはＤＴＤ）、ＧＳＨ、ＲＯＳ、及び／またはｐＨ変化などによって、インビボ及び／またはインビトロで切断可能であるリンカー、スペーサ、及び／またはプロドラッグなどの部分を指す。犠牲部分の例には、ジスルフィド、ペプチド、及びペプチド模倣物が含まれる。
【００３５】
「ペプチド」とは、アミド（ペプチド）結合によって連結された、２つ以上のアミノ酸の単量体の短鎖を指す。アミノ酸の単量体は、天然型及び／または非天然型アミノ酸類似体であり得る。
【００３６】
「ペプチド模倣物」とは、アミノ酸またはペプチドの一般の化学構造とは異なるが、天然型アミノ酸またはペプチドと同様の様式で機能する、構造を有する一群または部分を指す。
【００３７】
「束縛リンカー」とは、ジスルフィド結合を形成することができる硫黄を有する炭素原子を有するリンカーを指し、炭素原子は、Ｈ以外の少なくとも１つの置換基で置換され、より具体的には、本明細書の以下でさらに詳述されるように、ヒドロカルビルまたは置換ヒドロカルビル部分で置換される。
【００３８】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との単一結合部位の間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。別途指示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）で表され得る。親和性は、本明細書に記載される方法を含む当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。
【００３９】
「細胞標的部分」とは、抗原を発現する標的に対する結合親和性を有する抗体を指す。
【００４０】
「を主に含む」とは、引用に基づいて、例えば、非限定的に、重量％、体積％、重量体積％、モル％、または当量％などに基づいて、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の参照構成成分を指す。「から本質的になる」は一般に、特徴、化合物、組成物、または方法を引用される要素及び／またはステップに限定するが、引用される特徴、化合物、組成物、または方法の機能、組成、及び／または特徴に実質的に影響を与えない追加の要素及び／またはステップの可能性は除外しない。
【００４１】
本明細書における「抗体」及び「Ａｂ」という用語は、最も広義に使用され、それらが所望される生物活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二量体、多量体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を具体的に網羅する（Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊｏｕｒ．ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１７０：４８５４−４８６１）。抗体は、マウス、ヒト、ヒト化、キメラであり得るか、または他の種に由来するものであり得る。抗体は、特定の抗原を認識し、それに結合することができる、免疫系によって生成されるタンパク質である（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。標的抗原は一般に、複数の抗体のＣＤＲによって認識されるエピトープとも呼ばれる多数の結合部位を有する。異なるエピトープに特異的に結合する各抗体は、異なる構造を有する。したがって、１つの抗原は、２つ以上の対応する抗体を有し得る。抗体は、完全長免疫グロブリン分子、または完全長免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、対象となる標的抗原またはその一部に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含有する分子を含み、そのような標的としては、自己免疫疾患に関連する自己免疫抗体を産生するがん細胞（複数可）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に開示される免疫グロブリンは、免疫グロブリン分子の任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、またはサブクラスのものであり得る。免疫グロブリンは、任意の種に由来し得る。しかしながら、一実施形態において、免疫グロブリンは、ヒト、マウス、またはウサギ起源のものである。
【００４２】
「抗体断片」は、完全長抗体の一部分、一般にはその抗原結合領域または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、ダイアボディ、線状抗体、ミニボディ（Ｏｌａｆｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓｉｇｎ＆Ｓｅｌ．１７（４）：３１５−３２３）、Ｆａｂ発現ライブラリによって産生される断片、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、ＣＤＲ（相補性決定領域）、及びがん細胞抗原、ウイルス抗原、または微生物抗原に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されるもののうちのいずれかのエピトープ結合断片、一本鎖抗体分子、ならびに抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【００４３】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、その集団からなる個々の抗体は、少量で存在し得る天然に存在する変異の可能性を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位を対象としている。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらが他の抗体が混入することなく合成され得るという点で有利である。「モノクローナル」という修飾語句は、実質的に同種の抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５によって最初に説明されたハイブリドーマ法によって作製され得るか、または組換えＤＮＡ法（例えば、ＵＳ４８１６５６７、ＵＳ５８０７７１５を参照されたい）によって作製され得る。モノクローナル抗体はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７に説明される技術を使用して、ファージ抗体ライブラリから単離され得る。
【００４４】
本明細書におけるモノクローナル抗体には、特に、重鎖及び／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来するかまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または同種であり、一方で鎖（複数可）の残りが別の種に由来するかまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または同種である、「キメラ」抗体、ならびにそのような抗体の断片が含まれるが、これは、それらが所望される生物学的活性を呈する限りにおいてである（ＵＳ４８１６５６７及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５）。本明細書において対象となるキメラ抗体としては、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿など）に由来する可変ドメイン抗原結合配列と、ヒト定常領域配列とを含む、「霊長類化」抗体が挙げられる。
【００４５】
本明細書における「無傷抗体」は、ＶＬ及びＶＨドメイン、ならびに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含むものである。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒトの天然配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。無傷抗体は、１つ以上の「エフェクター機能」を有し得、この機能は、抗体のＦｃ定常領域（天然配列のＦｃ領域またはアミノ酸配列バリアントのＦｃ領域）に起因し得る生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞毒性、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、食作用、ならびにＢ細胞受容体及びＢＣＲなどの細胞表面受容体の下方制御が挙げられる。
【００４６】
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、無傷抗体には、異なる「クラス」が割り当てられ得る。無傷免疫グロブリン抗体には、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭの５つの主要なクラスが存在し、これらのうちのいくつかは、「サブクラス」（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２にさらに分けられ得る。抗体の異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元構成は、周知である。Ｉｇの形態は、ヒンジ修飾またはヒンジなしの形態を含む（Ｒｏｕｘ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：４０８３−４０９０、Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６７：７２４６−７２５６、ＵＳ２００５／００４８５７２、ＵＳ２００４／０２２９３１０）。
【００４７】
「システイン操作抗体」または「システイン操作抗体バリアント」は、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている抗体である。本開示に従って、システイン操作された抗体のチオール基（複数可）は、本開示のプロドラッグにコンジュゲートされて、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）ＡＤＣ（すなわち、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）薬物コンジュゲート（ＴＤＣ））を形成し得る。特定の実施形態において、置換された残基は、抗体の利用しやすい部位で生じる。それらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基がそれにより抗体の到達可能な部位に位置付けられ、本明細書にさらに記載されるように、それを使用して、抗体を薬物部分にコンジュゲートして、免疫コンジュゲートを作製することができる。例えば、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、軽鎖内での非システイン天然残基のシステインへの単一の変異（例えば、Ｋａｂａｔ番号付けによるＧ６４Ｃ、Ｋ１４９Ｃ、もしくはＲ１４２Ｃ）または重鎖内でのもの（例えば、Ｋａｂａｔ番号付けによるＤ１０１ＣもしくはＶ１８４ＣもしくはＴ２０５Ｃ）を有する抗体であり得る。具体的な例において、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、重鎖または軽鎖のいずれかに単一のシステイン変異を有し、そのために各完全長抗体（すなわち、２つの重鎖及び２つの軽鎖を有する抗体）は、２つの操作されたシステイン残基を有することになる。システイン操作された抗体及び調製方法は、ＵＳ２０１２／０１２１６１５Ａ１（その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）によって開示されている。
【００４８】
「がん」及び「がん性」という用語は、未制御の細胞成長／増殖を典型的に特徴とする、哺乳動物における生理学的病態を指すか、または説明する。がんの例としては、癌腫、リンパ腫（例えば、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、ならびに白血病が挙げられるが、これらに限定されない。そのようながんのより具体的な例としては、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、慢性骨髄増殖性障害、血小板性白血病、前駆体Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（ｐｒｅ−Ｂ−ＡＬＬ）、前駆体Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（ｐｒｅＴ−ＡＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、肥満細胞疾患、肥満細胞性白血病、肥満細胞肉腫、骨髄性肉腫、リンパ性白血病、及び未分化白血病が挙げられる。いくつかの実施形態において、がんは、骨髄性白血病である。いくつかの実施形態において、がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。
【００４９】
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部が特定の源または種に由来し、一方で重鎖及び／または軽鎖の残りが異なる源または種に由来する抗体を指す。
【００５０】
抗体の「クラス」は、その重鎖が所有する定常ドメインまたは定常領域の種類を指す。抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分けることができる。異なるクラスの免役グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００５１】
「エフェクター機能」は、抗体アイソタイプにより異なる抗体のＦｃ領域に帰せられる生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
【００５２】
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」とは、必要な投与量で必要な期間にわたって所望の治療または予防結果を達成するのに有効な量を指す。
【００５３】
「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位を指す。いくつかの実施形態において、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位は、ヒドロキシルラジカルフットプリント法によって決定される。
【００５４】
本明細書の「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。本用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異型Ｆｃ領域を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端までに及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在することもあれば、しないこともある。本明細書において別段明記されない限り、Ｆｃ領域または定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載される、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。
【００５５】
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは一般に、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４の４つのＦＲドメインからなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）において次の配列中に出現する：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
【００５６】
「完全長抗体」、「無傷抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書で、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、または本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように同義に使用される。
【００５７】
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は、同義に使用され、外因性核酸が中に導入されている細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞は、初代形質転換細胞及び継代の数に関わらずそれに由来する子孫を含む、「形質転換体」及び「形質転換細胞」を含む。子孫は、核酸含有量が親細胞と完全に同一ではない場合があるが、突然変異を含み得る。最初に形質転換された細胞についてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物活性を有する変異子孫が、本明細書に含まれる。
【００５８】
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞により産生された抗体、またはヒト抗体レパートリーもしくは他のヒト抗体コード配列を利用する非ヒト源に由来する抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。
【００５９】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列のセレクションにおいて最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列のセレクションは、可変ドメイン配列の下位群に由来する。一般に、この配列の下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３にある下位群である。一実施形態において、ＶＬについては、下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（上記参照）における下位群カッパＩである。一実施形態において、ＶＨについては、下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（上記参照）における下位群ＩＩＩである。
【００６０】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲからのアミノ酸残基及びヒトＦＲからのアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、及び典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、そのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意で、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含み得る。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化型」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
【００６１】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は一般に、類似の構造を有し、各ドメインが４つの保存フレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ｐａｇｅ９１（２００７）を参照されたい。）単一のＶＨドメインまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、ＶＨドメインまたはＶＬドメインを使用して抗原に結合する抗体から単離されて、それぞれ相補的ＶＬドメインまたはＶＨドメインのライブラリをスクリーニングすることができる。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ１５０：８８０−８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。
【００６２】
「ベクター」という用語は、本明細書で使用される場合、それが連結している別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、及びそれが導入される宿主細胞のゲノム内に組み込まれたベクターを含む。ある特定のベクターは、それらが作動可能に結合している核酸の発現を誘導することができる。かかるベクターは、本明細書で「発現ベクター」と称される。
【００６３】
本明細書で使用される場合、「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、配列が超可変である、及び／または構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する、抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般に、天然４本鎖抗体は、６つのＨＶＲを含み、３つがＶＨにあり（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、３つがＶＬにある（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。ＨＶＲは一般に、超可変ループ及び／または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）からのアミノ酸残基を含み、後者は、最も高い配列可変性を有する、及び／または抗原認識に関与する。例示的な超可変ループは、アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）において生じる。（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）。）例示的なＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、８９〜９７（Ｌ３）、３１〜３５Ｂ（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）に生じる。（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）。）ＶＨ内のＣＤＲ１を除いて、ＣＤＲは一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲはまた、抗原と接触する残基である「特異性決定残基」または「ＳＤＲ」も含む。ＳＤＲは、短縮−ＣＤＲ、またはａ−ＣＤＲと呼ばれるＣＤＲの領域内に収容される。例示的なａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基３１〜３４（Ｌ１）、５０〜５５（Ｌ２）、８９〜９６（Ｌ３）、３１〜３５Ｂ（Ｈ１）、５０〜５８（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）に生じる。（Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい。）本明細書で別途示されない限り、可変ドメイン中のＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（上記参照）に従って本明細書において番号付けされる。
【００６４】
「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物としては、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、ならびに齧歯類（例えば、マウス及びラット）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、個体または対象は、ヒトである。
【００６５】
「単離された抗体」は、その天然環境の構成成分から分離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動法（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動法）またはクロマトグラフ（例えば、イオン交換もしくは逆相ＨＰＬＣ）によって決定される、９５％または９９％を超える純度に精製される。抗体の純度を評価するための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。
【００６６】
「天然抗体」は、異なる構造を有する天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖で構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、その後に３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）が続く。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、その後に定常軽（ＣＬ）ドメインが続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの種類のうちの１つに割り当てられ得る。
【００６７】
「添付文書」という用語は、そのような治療製品の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症、及び／またはその使用に関する警告についての情報を含有する、治療製品の商業用パッケージに通例含まれる指示書を指すために使用される。
【００６８】
基準ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大の配列同一性パーセントを達成するように、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後に、かついかなる保存的置換も配列同一性の一部とは見なさずに、候補配列内のアミノ酸残基が、基準ポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一であるパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するための整列は、当業者が備えている技能の範囲内の様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成され得る。当業者であれば、比較されている配列の完全長にわたって最大の整列を達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列を整列させるための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって記述され、ソースコードは、ユーザ文書とともに米国著作権庁（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，２０５５９）に提出されており、米国著作権番号ＴＸＵ５１００８７の下に登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に入手可能であるか、またはソースコードからコンパイルされ得る。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ  Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用する場合はコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムにより設定されており、変動しない。
【００６９】
アミノ酸配列比較のためにＡＬＩＧＮ−２が用いられる状況下で、所与のアミノ酸配列Ａの、所与のアミノ酸配列Ｂへの、所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ｂに対するアミノ酸配列同一性％（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂへの、所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ｂに対するある特定のアミノ酸配列同一性％を有するか、または含む所与のアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、以下のように計算される：１００×分数Ｘ／Ｙ。式中、Ｘは、配列整列プログラムＡＬＩＧＮ−２によってそのプログラムのＡとＢとの整列において完全な一致とスコア化されるアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ内のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性％が、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％と等しくないことが理解される。別途具体的に明記されない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落に記載されるようにＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られる。
【００７０】
「薬学的製剤」という用語は、その中に含有される活性成分の生物学的活性が有効となるような形態であり、かつ製剤が投与され得る対象に許容できない毒性を有する追加の成分を含有しない、調製物を指す。
【００７１】
「薬学的に許容される担体」は、対象にとって無毒である、活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝液、賦形剤、安定剤、または保存剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００７２】
「治療する」及び「治療」という用語は、治療的処置及び予防的または防止的処置の両方を指し、その目的は、所望されない生理学的変化または障害（がんの発症または伝播など）を予防または減速（緩和）することである。本開示の目的では、有益または所望される臨床結果としては、検出可能であるか検出不能であるかに関わらず、症状の軽減、疾患の程度の減弱、安定化した（すなわち、悪化していない）疾患状態、疾患進行の遅延または緩徐化、疾患状態の緩和または緩解、及び（部分的であるか完全であるかに関わらず）寛解が挙げられるが、これらに限定されない。「治療」はまた、治療を受けていなかった場合に予想される生存期間と比較して、生存期間を延長することも意味し得る。治療を必要とする者としては、病態もしくは障害を既に有する者、及び病態もしくは障害を有する傾向にある者、または病態もしくは障害を予防する必要がある者が挙げられる。
【００７３】
「治療有効量」という用語は、哺乳動物において疾患または障害を治療するのに有効な薬物の量を指す。がんの場合、治療有効量の薬物は、がん細胞の数を低下、腫瘍サイズを低下、末梢器官へのがん細胞浸潤を阻害（すなわち、ある程度の減速及び好ましくは停止）、腫瘍転移を阻害（すなわち、ある程度の減速及び好ましくは停止）、腫瘍成長をある程度阻害、及び／またはがんに関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減し得る。薬物が既存のがん細胞の成長の予防及び／またはそれらの殺滅を行うことができる限り、この薬物は細胞増殖抑制性及び／または細胞毒性であり得る。がん療法に関して、有効性は、例えば、疾患進行までの時間（ＴＴＰ）の評価及び／または奏効率（ＲＲ）の決定によって、測定することができる。
【００７４】
本明細書で使用される場合、「離脱基」という用語は、本明細書に記載される基に関与する化学反応の過程で離れる、部分を指す。
【００７５】
本明細書で使用される場合、「ヒドロカルビル」という用語は、専ら水素及び水素の元素のみからなる有機化合物またはラジカルを説明する。これらの部分としては、アルキル、アルケニル、アルキニル、及びアリール部分が挙げられるが、これらに限定されない。これらの部分はまた、アルカリル、アルケンアリール、及びアルキンアリールなどの他の脂肪族もしくは環式炭化水素基で置換された、アルキル、アルケニル、アルキニル、及びアリール部分も含む。別段示されない限り、これらの部分は、好ましくは、１〜２０個の炭素原子、１〜１０個の炭素原子、または１〜６個の炭素原子を含む。
【００７６】
本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、別段指示されない限り、表記される炭素原子の数（すなわち、Ｃ１−８は、１〜８個の炭素を意味する）を有する直鎖または分岐鎖炭化水素を意味する。アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチルなどが挙げられる。別段示されない限り、本明細書に記載されるアルキル基は、好ましくは、主鎖に１〜１０個または１〜８個の炭素原子を含有する低級アルキルである。それらは、直鎖もしくは分岐鎖、または環式であり得、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、アリール、ベンジル、ヘキシルなどを含むが、これらに限定されない。アルキル部分は、任意に、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１個以上のヘテロ原子を含んでもよく、「ヘテロアルキル」と称される。
【００７７】
「炭素環」、「カルボシクリル」、「環式炭素」、及び「シクロアルキル」という用語は、単環式環として３〜１２個の炭素原子（Ｃ３−１２）または二環式環として７〜１２個の炭素原子を有する一価の非芳香族の飽和環または部分的不飽和環を指す。７〜１２個の原子を有する二環式炭素環は、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、もしくは［６，６］系として配置することができ、９もしくは１０個の環原子を有する二環式炭素環は、ビシクロ［５，６］もしくは［６，６］系として、またはビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタン、及びビシクロ［３．２．２］ノナンなどの架橋系として配置することができる。単環式炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペンタ−１−エニル、１−シクロペンタ−２−エニル、１−シクロペンタ−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキサ−１−エニル、１−シクロヘキサ−２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、シクロウンデシル、及びシクロドデシルなどが挙げられるが、これらに限定されない。炭素環及びシクロアルキル部分は、任意に、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１個以上のヘテロ原子を含んでもよい。
【００７８】
「アルコキシ」という用語は、酸素原子を介して分子の残りの部分に付加されるアルキル基を指す。アルコキシ部分は、任意に、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１個以上のヘテロ原子を含んでもよく、「ヘテロアルコキシ」と称される。
【００７９】
「アルキレン」という用語は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−などのアルカンに由来する二価のラジカルを意味する。
【００８０】
別段示されない限り、本明細書に記載されるアルキニル基は、好ましくは、主鎖に２〜８個の炭素原子及び最大２０個の炭素原子を含有する低級アルキニルである。それらは、直鎖または分岐鎖であり得、エチニル、プロピニル、ブチニル、イソブチニル、ヘキシニルなどを含むが、これらに限定されない。
【００８１】
本明細書で使用される場合、単独での、または別の基の一部としての「アリール」という用語は、任意で置換された同素環芳香族基、好ましくは環部分内に５〜２０個の炭素、５〜１０個の炭素、または５〜６個の炭素を含有する単環式基または二環式基（フェニル、ビフェニル、ナフチル、置換フェニル、置換ビフェニル、または置換ナフチルを含むが、これらに限定されない）を表す。アリール部分は、任意に、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１個以上のヘテロ原子を含んでもよく、「ヘテロアリール」または「ヘテロ二環式」と称される。そのようなヘテロ芳香族は、環内に１個または２個の窒素原子、１個または２個の硫黄原子、１個または２個の酸素原子、及びこれらの組み合わせを含んでもよく、各ヘテロ原子は、炭素を通して分子の残りに結合する。非限定的な代表的な基としては、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピラゾール、ピロール、イミダゾール、チオペン（ｔｈｉｏｐｅｎｅ）、チオピリリウム（ｔｈｉｏｐｙｒｒｉｌｉｕｍ）、ピラチアジン、インドール、プリン、ベンゾイミダゾール、キノロン、フェノチアジンが挙げられる。非限定的な例示の置換基としては、以下の基：ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、アルキル、アルコキシ、アシル、アシルオキシ、アルケニル、アルケノキシ、アリール、アリールオキシ、アミノ、アミド、アセタール、カルバミル、カルボシクロ、シアノ、エステル、エーテル、ハロゲン、ヘテロシクロ、ヒドロキシ、ケト、ケタール、ホスホ、ニトロ、及びチオのうちの１つ以上が挙げられる。
【００８２】
「アリールアルキル」という用語は、本明細書で使用される場合、少なくとも１つのアルキル基で置換され、任意に、さらに置換されたアリール部分を指す。アリールアルキルの一例は、フェニルメチルであり、ベンジル（Ｃ６Ｈ５ＣＨ３）またはベンジレン（−Ｃ６Ｈ４ＣＨ２−）とも称される。
【００８３】
本明細書に記載される「置換」部分は、炭素以外の少なくとも１つの原子で置換されるヒドロカルビル、アルキル、ヘテロアリール、二環式、及びヘテロ二環式などの部分であり、炭素鎖原子が、窒素、酸素、ケイ素、亜リン酸、ホウ素、硫黄、またはハロゲン原子などのヘテロ原子で置換される部分を含む。これらの置換基としては、ハロゲン、ヘテロシクロ、アルコキシ、アルケンオキシ、アルキンオキシ、アリールオキシ、ヒドロキシ、ケト、アシル、アシルオキシ、ニトロ、第三級アミノ、アミド、ニトロ、シアノ、チオ、スルフィネート、スルホンアミド、ケタール、アセタール、エステル、エーテルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８４】
本明細書で使用される場合、単独での、または別の基の一部としての「ハロゲン」及び「ハロ」という用語は、塩素、臭素、フッ素、及びヨウ素を指す。
【００８５】
「環式ジオン」という用語は、偶数の−Ｃ（Ｏ）−基を有する環式及び複素環式化合物を指す。いくつかの実施形態において、この環式化合物は、アリール（キノン）である。いくつかの実施形態において、複素環式化合物ヘテロアリール。環式ジオンの非限定的な一覧には、ナフトキノン及びインドールジオンが含まれる。
【００８６】
Ｕとして表される、「薬学的に許容可能なカチオン」という用語は、一価カチオンを指す。薬学的に許容可能な一価カチオンの例は、Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６，１−１９（１９７７）に論じられており、これは参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、薬学的に許容可能なカチオンは、アルカリ金属イオン（例えば、ナトリウムイオンまたはカリウムイオン）及びアンモニアが挙げられるが、これらに限定されない、無機である。例えば、いくつかの態様では、部分ＳＯｚＵは、ＳＯ３Ｎａ、ＳＯ３Ｋ、またはＳＯ３ＮＨ４であり得る。
【００８７】
本開示のある特定の化合物は、非対称炭素原子（光学中心）または二重結合を有し得る。同じ分子式を有するが、その原子の結合の性質もしくは配列、または空間内におけるその原子の配置が異なる化合物は、「異性体」と称される。空間内におけるその原子の配置が異なる異性体は、「立体異性体」と称される。ジアステレオマーは、鏡像異性体ではない、１個以上のキラル中心において逆の配置を有する立体異性体である。互いの重ね合わせることができない鏡像である１個以上の非対称中心を有する立体異性体は、「鏡像異性体」と称される。化合物が非対称中心を有するとき、例えば、炭素原子が４個の異なる基に結合している場合、１対の鏡像異性体が可能である。鏡像異性体は、その非対称中心（複数可）の絶対配置によって特徴付けることができ、そして、Ｃａｈｎ、Ｉｎｇｏｌｄ、及びＰｒｅｌｏｇのＲ−及びＳ−配列ルールによって、または分子が偏光面を回転させる方式によって説明され、そして、右旋性または左旋性（すなわち、それぞれ（＋）または（−）異性体）と表される。キラル化合物は、いずれかの個々の鏡像異性体として、またはその混合物として存在し得る。等比率の鏡像異性体を含有する混合物を「ラセミ混合物」と呼ぶ。ある特定の実施態様では、化合物は、単一のジアステレオマーまたは鏡像異性体が少なくとも約９０重量％まで富化される。他の実施態様では、化合物は、単一のジアステレオマーまたは鏡像異性体が少なくとも約９５重量％、９８重量％、または９９重量％まで富化される。本開示の化合物は、ラセミ体、ジアステレオマー、幾何異性体、位置異性体、及びそれらの個々の異性体（例えば、別個の鏡像異性体）は、全て、本開示の範囲内に包含されることを意図する。
【００８８】
ＩＩ．プロドラッグ単量体、二量体、及びコンジュゲート
いくつかの実施形態において、薬物は、ＰＢＤ単量体またはＰＢＤ二量体である。いくつかの実施形態において、ＰＤＢ二量体は、特定のＤＮＡ配列を認識し、それに結合する。天然産物アントラマイシンであるＰＢＤは、１９６５年に最初に報告された（Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９６５）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７：５７９３−５７９５、Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９６５）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７：５７９１−５７９３）。それ以来、いくつかのＰＢＤ（天然に存在するもの及び類似体の両方）が報告されている（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９４，４３３−４６５（ＵＳ６８８４７９９、ＵＳ７０４９３１１、ＵＳ７０６７５１１、ＵＳ７２６５１０５、ＵＳ７５１１０３２、ＵＳ７５２８１２６、ＵＳ７５５７０９９）。いかなる特定の理論にも拘束されることを意図するものではないが、二量体構造が、Ｂ型ＤＮＡの副溝との等螺旋性（ｉｓｏｈｅｌｉｃｉｔｙ）に適切な三次元形状を付与し、それによって結合部位において滑合がもたらされると考えられている（Ｋｏｈｎ，Ｉｎ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ＩＩＩ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３−１１（１９７５）、Ｈｕｒｌｅｙ  ａｎｄ  Ｎｅｅｄｈａｍ−ＶａｎＤｅｖａｎｔｅｒ，（１９８６）Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，１９：２３０−２３７）。Ｃ２アリール置換基を有する二量体ＰＢＤ化合物は、細胞傷害性薬剤として有用であることが示されてきた（Ｈａｒｔｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ（２０１０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７０（１７）：６８４９−６８５８、Ａｎｔｏｎｏｗ（２０１０）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５３（７）：２９２７−２９４１、Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ（２００９）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ１９（２２）：６４６３−６４６６）。この段落に引用される各参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００８９】
本開示の範囲内のＰＢＤ単量体及びＰＢＤ二量体が、知られている。例えば、ＵＳ２０１０／０２０３００７、ＷＯ２００９／０１６５１６、ＵＳ２００９／３０４７１０、ＵＳ２０１０／０４７２５７、ＵＳ２００９／０３６４３１、ＵＳ２０１１／０２５６１５７、ＷＯ２０１１／１３０５９８）、ＷＯ００／１２５０７、ＷＯ２００５／０８５２５０、及びＷＯ２００５／０２３８１４（これらの各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。本開示の範囲内のＰＢＤ二量体は、各ＰＢＤ単量体のＣ８炭素原子で連結された２つのＰＢＤ単量体から形成される。
【００９０】
Ａ．コンジュゲート
いくつかの実施形態において、ＰＢＤプロドラッグ二量体−抗体コンジュゲートは、第１のＰＢＤプロドラッグ単量体Ｍ１と、第２のＰＢＤ抗体単量体Ｍ２と、を含む式（Ｉ）のコンジュゲートである。
2019534238.tif 000009
【００９１】
Ｍ１は、ＰＢＤ単量体（式中、破線は、（ｉ）Ｃ１とＣ２、（ｉｉ）Ｃ２とＣ３、及び（ｉｉｉ）Ｃ２とＲ２のうちの１つの間で、任意の二重結合を表す）である。いくつかの実施形態において、Ｃ１とＣ２との間の結合は、単結合であり、Ｃ２とＣ３との間の結合は、単結合であり、Ｃ２とＲ２との間の結合は、単結合である。
【００９２】
Ｒ２は、−Ｈ、＝ＣＨ２、−ＣＮ、−Ｒ、＝ＣＨＲ、アリール、ヘテロアリール、二環式環、及びヘテロ二環式環から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ２は、＝ＣＨ２、
2019534238.tif 000010
である。
【００９３】
Ｒ３は、水素であり、Ｘは、Ｓ、Ｏ、及びＮＨから選択され、Ｒ１１は、から選択され、（ｉ）ＸがＯまたはＮＨであるとき、Ｈ及びＲ、ならびに（ｉｉ）ＸがＳであるとき、Ｈ、Ｒ、及びＯｚＵ（式中、ｚは、２または３であり、Ｕは、一価の薬学的に許容可能なカチオンである）から選択される。
【００９４】
Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９は、独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ハロ、アミノ、ニトロ、ＳＨ、及びＳＲから選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ６及びＲ９は、Ｈである。いくつかの実施形態において、Ｒ７は、ＯＣＨ３である。
【００９５】
Ｒ１０は、本明細書の別の箇所でより詳細に記載される、（ｉ）グルタチオン活性化ジスルフィド、（ｉｉ）ＤＴ−ジアフォラーゼ活性化キノン、または（ｉｉｉ）活性酸素種活性化アリールボロン酸もしくはアリールボロン酸エステルを含む、プロドラッグ部分である。
【００９６】
Ｒは、１〜１０個の炭素原子を有する低級アルキル基、及び最大１２個の炭素原子のアリールアルキル基から選択され、（ｉ）式中、アルキル基は、任意に、１つ以上の炭素−炭素二重もしくは三重結合、または最大１２個の炭素原子のアリール基を含有し、（ｉｉ）式中、Ｒは、任意に、１つ以上のハロ、ヒドロキシ、アミノ、またはニトロ基によって置換され、任意に、１つ以上のヘテロ原子を含有する。
【００９７】
Ｍ２は、ＰＢＤ単量体（式中、破線は、（ｉ）Ｃ１’とＣ２’、（ｉｉ）Ｃ２’とＣ３’、及び（ｉｉｉ）Ｃ２’とＲ２’のうちの１つの間で、任意の二重結合を表す）である。いくつかの実施形態において、Ｃ１’とＣ２’との間の結合は、単結合であり、Ｃ２’とＣ３’との間の結合は、単結合であり、Ｃ２’とＲ２’との間の結合は、二重結合である。
【００９８】
Ｒ２’、Ｒ３’、Ｒ６’、Ｒ７’、Ｒ９’、Ｒ１１’、及びＸ’は、それぞれ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１１、及びＸに対応し、それらと同じように定義される。
【００９９】
Ｌは、ジスルフィド部分、ペプチド部分、及びペプチド模倣部分のうちの少なくとも１つを含む、自壊性リンカーである。いくつかの実施形態において、リンカーは、ジスルフィド部分またはペプチド部分を含む。
【０１００】
各アスタリスクは、独立して、ラセミまたは未定義の立体化学のキラル中心を表す。
【０１０１】
Ｍ１及びＭ２は、部分−Ｑ−Ｔ−Ｑ’−（式中、Ｑ及びＱ’は、独立して、Ｏ、ＮＨ、及びＳから選択され、Ｔは、１つ以上のヘテロ原子及び／または芳香環によってさらに任意に中断される、任意に置換されたＣ１−１２アルキレン基である）によってＣ８位で結合される。いくつかの実施形態において、Ｑ及びＱ’は、Ｏであり、Ｔは、Ｃ３アルキレンまたはＣ５アルキレンである。
【０１０２】
Ａｂは、本明細書の別の箇所に定義される抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、少なくとも１つのシステインスルフヒドリル部分を含み、抗体は、（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質受容体−ＩＢ型）、（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５）、（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原）、（４）ＭＵＣ１６（０７７２Ｐ、ＣＡ１２５）、（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン）、（６）Ｎａｐｉ２ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質輸送体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ）、（７）Ｓｅｍａ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ  Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７回トロンボスポンジン反復（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）、及び短い細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ）、（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）、（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）、（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮説上のタンパク質ＦＬＪ２０３１５）、（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺の６回膜貫通上皮抗原２、６回膜貫通前立腺タンパク質）、（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４）、（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌種由来の成長因子）、（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）もしくはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／Ｅｐｓｔｅｉｎ  Ｂａｒｒウイルス受容体）またはＨｓ７３７９２）、（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９）、（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）、（１７）ＨＥＲ２、（１８）ＮＣＡ、（１９）ＭＤＰ、（２０）ＩＬ２０Ｒα、（２１）Ｂｒｅｖｉｃａｎ、（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ、（２３）ＡＳＬＧ６５９、（２４）ＰＳＣＡ、（２５）ＧＥＤＡ、（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３）、（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム）、（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ）、（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１）、（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ＭＨＣクラスＩＩ分子のベータサブユニット（Ｉａ抗原））、（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型イオンチャネル５）、（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）、（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチ反復（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質）、（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タ��パク質１）、（３５）ＦｃＲＨ５（ＩＲＴＡ２、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２）、（３６）ＴＥＮＢ２（推定上の膜貫通プロテオグリカン）、（３７）ＰＭＥＬ１７（ｓｉｌｖｅｒ相同体、ＳＩＬＶ、Ｄ１２Ｓ５３Ｅ、ＰＭＥＬ１７、ＳＩ、ＳＩＬ）、（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様ドメイン及び２つのフォリスタチン様ドメイン１を有する膜貫通タンパク質１、トモレグリン−１）、（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１、ＧＦＲＡ１、ＧＤＮＦＲ、ＧＤＮＦＲＡ、ＲＥＴＬ１、ＴＲＮＲ１、ＲＥＴ１Ｌ、ＧＤＮＦＲ−アルファ１、ＧＦＲ−ＡＬＰＨＡ−１）、（４０）Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合物、遺伝子座Ｅ、Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）、（４１）ＴＭＥＭ４６（ｓｈｉｓａ相同体２（Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｌａｅｖｉｓ）、ＳＨＩＳＡ２）、（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ、Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）、（４３）ＬＧＲ５（ロイシンリッチ反復含有Ｇタンパク質共役型受容体５、ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）、（４４）ＲＥＴ（ｒｅｔがん原遺伝子、ＭＥＮ２Ａ、ＨＳＣＲ１、ＭＥＮ２Ｂ、ＭＴＣ１、ＰＴＣ、ＣＤＨＦ１２、Ｈｓ．１６８１１４、ＲＥＴ５１、ＲＥＴ−ＥＬＥ１）、（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ、ＬＹ６Ｋ、ＨＳＪ００１３４８、ＦＬＪ３５２２６）、（４６）ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質結合型受容体１９、Ｍｍ．４７８７）、（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＧＰＲ５４、ＨＯＴ７Ｔ１７５、ＡＸＯＲ１２）、（４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータヒドロキシラーゼドメイン含有１、ＬＯＣ２５３９８２）、（４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ、ＯＣＡＩＡ、ＯＣＡ１Ａ、チロシナーゼ、ＳＨＥＰ３）、（５０）ＴＭＥＭ１１８（ｒｉｎｇフィンガータンパク質、膜貫通２、ＲＮＦＴ２、ＦＬＪ１４６２７）、（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質結合型受容体１７２Ａ、ＧＰＣＲ４１、ＦＬＪ１１８５６、Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）、（５２）ＣＤ３３、及び（５３）ＣＬＬ−１から選択される１つ以上の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、コンジュゲーションのために操作される。いくつかの実施形態において、抗体は、ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ、ＨＣ  Ａ１１８Ｃ、ＨＣ  Ａ１４０Ｃ、またはＬＣ  Ｖ２０５Ｃをリンカーコンジュゲートの部位として含む、システイン操作抗体である。いくつかの実施形態において、抗体またはシステイン操作抗体は、抗ＨＥＲ２、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗Ｎａｐｉ２ｂ、抗Ｌｙ６Ｅ、及び抗ＣＬＬ−１から選択される。
【０１０３】
整数ｐは、１、２、３、４、５、６、７、または８である。いくつかの実施形態において、ｐは、１、２、３、または４である。いくつかの実施形態において、ＰＢＤプロドラッグ二量体−抗体コンジュゲートの混合物を含む組成物が提供され、コンジュゲート化合物の混合物中の１抗体当たりの平均薬物負荷は、約２〜約５である。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、Ｒ７、及びＲ７’は、−ＯＣＨ３であり、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ６、Ｒ６’、Ｒ９、及びＲ９’は、Ｈであり、Ｒ２及びＲ２’は、＝ＣＨ２、
2019534238.tif 000011
である。
【０１０５】
いくつかの実施形態において、Ｍ１のＣ１とＣ２との間の結合は、単結合であり、Ｍ１のＣ２とＣ３との間の結合は、単結合であり、Ｍ２のＣ１’とＣ２’との間の結合は、単結合であり、Ｍ２のＣ２’とＣ３’との間の結合は、単結合であり、Ｍ１のＣ３は、２つのＲ３基で置換され、これらの各々はＨであり、Ｍ２のＣ３’は、２つのＲ３’基で置換され、これらの各々はＨであり、Ｍ１のＣ２とＲ２との間の結合は、二重結合であり、Ｍ２のＣ２’とＲ２’との間の結合は、二重結合である。
【０１０６】
いくつかの実施形態において、ＰＢＤプロドラッグ二量体−抗体コンジュゲート化合物は、式（Ｉａ）の化合物であり、
2019534238.tif 000012
式中、Ｒ１０、Ｌ、ｐ、及びＡｂは、本明細書で他に定義されるとおりである。
【０１０７】
Ｂ．単量体
いくつかの実施形態において、ＰＢＤ単量体化合物は、式（ＩＩ）の化合物であり、
2019534238.tif 000013
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｘ、＊、及びピロリジン環Ａにおける結合スキームは、ＰＢＤ二量体に関連して本明細書の別の箇所で記載されるとおりである。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、ＰＢＤ単量体化合物は、式（ＩＩａ）の化合物であり、
2019534238.tif 000014
式中、Ｒ１０は、本明細書で他に定義されるとおりである。
【０１０９】
Ｃ．二量体
いくつかの実施形態において、ＰＢＤプロドラッグ二量体化合物は、第１のＰＢＤプロドラッグ単量体Ｍ１と、第２のＰＢＤ単量体Ｍ２と、を含む、式（ＶＩＩＩ）の化合物であり、
2019534238.tif 000015
式中、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ６、Ｒ６’、Ｒ７、Ｒ７’、Ｒ９、Ｒ９’、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１１’、Ｘ、Ｘ’、Ｑ、Ｑ’、Ｔ、＊、ならびにピロリジン環Ａ及びＢにおける結合スキームは、ＰＢＤ二量体に関連して本明細書の別の箇所で記載されるとおりである。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、Ｒ１２は、不在であり、Ｎ１０’とＣ１１’との間の結合は、二重結合である。いくつかの実施形態において、Ｒ１２は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｌ及び−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｒ１０から選択され、式中、Ｒ１０は、本明細書の別の箇所に記載されるプロドラッグ部分である。Ｌは、本明細書で他に定義されるとおりである。
【０１１１】
いくつかの実施形態において、ＰＢＤプロドラッグ二量体化合物は、式（ＶＩＩＩａ）の化合物であり、
2019534238.tif 000016
式中、Ｒ１０は、本明細書で他に定義されるとおりである。
【０１１２】
いくつかの実施形態において、ＰＢＤプロドラッグ二量体化合物は、式（ＶＩＩｂ）の化合物であり、
2019534238.tif 000017
式中、Ｒ１０及びＬは、本明細書で他に定義されるとおりである。
【０１１３】
ＩＩＩ．プロドラッグ保護基−トリガー
本開示の範囲内のトリガーを含むプロドラッグ保護基は、ジスルフィド、環式ジオン、アリールボロン酸、及びアリールボロン酸エステルを含む。トリガーを含むプロドラッグ保護基は、カルバメート部分によって、Ｎ１０位でＰＢＤにコンジュゲートされる。保護基は、酵素（例えば、ＤＴＤ）、ＲＯＳ、またはＧＳＨなどの刺激の適用によって活性薬物を生成するために、酵素的または化学的に切断される。
【０１１４】
Ａ．ジスルフィド保護基−トリガー
本開示のジスルフィド保護基−トリガーＲ１０部分は、一般式（Ｖ）のものであり、
2019534238.tif 000018
式中、波線は、ＰＢＤ  Ｎ１０位（すなわち、
2019534238.tif 000019
）への結合点を示す。
【０１１５】
Ｒ５０は、任意に置換されたＣ１−８アルキルまたはＣ２−６アルキル、任意に置換されたＣ１−８またはＣ２−６ヘテロアルキル、２〜６個の炭素原子を含む任意に置換されたシクロアルキル、及び２〜６個の炭素原子を含む任意に置換されたヘテロシクロアルキルから選択される。いくつかの特定の実施形態において、Ｒ５０は、−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、及び３〜６員シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択される。いくつかの実施形態において、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキルＲ５０部分は、以下から選択される。
2019534238.tif 000020
いくつかの実施形態において、Ｒ５０は、ＣＨ３ＣＨ２−、（ＣＨ３）２ＣＨ−、及び（ＣＨ３）３Ｃ−から選択される。
【０１１６】
Ｒ５１は、任意に置換されたＣ２アルキレンまたは任意に置換されたベンジレンである。いくつかのかかる実施形態において、Ｒ５１は、式のものである。
2019534238.tif 000021
【０１１７】
いくつかの実施形態において、Ｒ６１及びＲ６２は、独立して、Ｈ、及び任意に置換されたＣ１−６アルキル、及び任意に置換されたＣ１−６ヘテロアルキルから選択される。いくつかの特定の実施形態において、Ｒ６１及びＲ６２は、独立して、Ｈ、及び任意に置換されたＣ１−４アルキル、及び任意に置換されたＣ１−４エーテルまたは第三級アミンから選択される。いくつかの他の特定の実施形態において、Ｒ６１及びＲ６２の一方は、Ｈである。さらに他の特定の実施形態において、Ｒ６１及びＲ６２の一方は、Ｈであり、Ｒ６１及びＲ６２のもう一方は、−ＣＨ３、Ｃ１−４エーテルまたはＣ第三級アミンである。いくつかの他の特定の実施形態において、Ｒ６１及びＲ６２は、それぞれ、Ｈであるか、またはＲ６１及びＲ６２は、それぞれ、ＣＨ３である。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、Ｒ６１及びＲ６２は、それらが結合している炭素原子で一緒に、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリール部分を形成し、各環置換は、２〜６個の炭素原子を含む。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、Ｒ６３及びＲ６４は、独立して、Ｈ及びＣＨ３から選択される。いくつかの他の特定の実施形態において、Ｒ６３及びＲ６４は、Ｈである。
【０１２０】
例示的なＲ５１部分の非限定的な一覧は、以下のとおりである。
2019534238.tif 000022
【０１２１】
いくつかの代替の実施形態において、Ｒ５１は、アリールアルキルである。１つのかかる実施形態において、Ｒ５１は、
2019534238.tif 000023
である。
【０１２２】
例示的なジスルフィド保護基−トリガー部分の非限定的な一覧は、以下のとおりである。
2019534238.tif 000024
2019534238.tif 000025
【０１２３】
本開示に従い、現在までのインビトロ実験的証拠に基づいて、本開示のジスルフィド保護基−トリガーが、上昇したＧＳＨを発現する、がん細胞などの増殖細胞において細胞内に切断され、概して、正常ＧＳＨレベルを発現する非増殖細胞、ならびに全血／血漿において一般に安定していることが発見されている。より具体的には、ＧＳＨの血液濃度は、非常に低い（マイクロモル範囲内など）ことが知られている一方で、細胞内ＧＳＨ濃度は典型的には、最大３桁より大きい（ミリモル範囲内など）。がん細胞内のＧＳＨ濃度は、還元酵素の活性の増加のために、さらにより大きいとさらに考えられる。
【０１２４】
増殖細胞と非増殖細胞との間の細胞内還元電位（ｍＶで表された）間の差は、増殖細胞中のジスルフィドトリガー活性化及び薬物放出に影響を及ぼすように利用され得るが、非増殖細胞、全血、及び血漿中のプロドラッグの安定性を提供することがさらに発見されている。より具体的には、ＧＳＨ／ＧＳＳＧレドックス対における低減されたＧＳＨ対酸化されたＧＳＨの比（ＧＳＨジスルフィドまたは「ＧＳＳＧ」とも称される）、典型的には、ｍＶで表される、還元電位と相関されることが考えられる。ある特定のＧＳＨ／ＧＳＳＧ比は、増殖細胞の特徴であるとさらに考えられる。ＧＳＨ／ＧＳＳＧの比が増加するにつれて（すなわち、ＧＳＨの増加の相対濃度が増加するにつれて）、還元電位に否定性が増加する。典型的なＧＳＨ／ＧＳＳＧの還元電位をが、以下の表に示す。
2019534238.tif 000026
【０１２５】
システイン（Ｃｙｓ）及びシステインジスルフィド（ＣｙＳＳ）レドックス対の還元電位はまた、ジスルフィドプロドラッグからの細胞内薬物放出に影響を及ぼし得、血液／血漿Ｃｙｓ／ＣｙＳＳの還元電位は、典型的には、−８０ｍＶ〜０ｍＶであり、細胞質中のＣｙｓ／ＣｙＳＳの還元電位は、典型的には、約−１６０ｍＶである。
【０１２６】
Ｂ．環式ジオン保護基−トリガー
いくつかの実施形態において、Ｒ１０環式ジオン保護基−トリガーは、以下の一般式の１，４−または１，２−キノンである。
2019534238.tif 000027
Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、及びＪは、独立して、Ｃ及びＮから選択され、Ｎは、第二級アニメ、第三級アミン、またはイミン（＝Ｎ−）である。各ｍは、独立して、０及び１から選択される。破線は、Ｅ−ＤまたはＤ−Ａのいずれかの間の任意の二重結合を表す。ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＧ、及びＲＪは、存在するとき、独立して、Ｈ、ＯＨ、任意に置換されたＣ１−４アルキルもしくはヘテロアルキル、Ｃ１−４アルコキシもしくはヘテロアルコキシ、及びハロゲンから選択されるが、但し、ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＧ、及びＲＪのうちの少なくとも１つは、ＰＢＤのＮ１０位でカルバメート部分の酸素原子に共有結合しているＣ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーである。いくつかの実施形態において、ＲＡ、ＲＤ、及びＲＥのうちの１つは、Ｃ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーである。いくつかの他の実施形態において、Ａ−（ＲＡ）ｍ、Ｄ−（ＲＤ）ｍ、及びＥ−（ＲＥ）ｍのうちの１つは、
2019534238.tif 000028
である。いくつかの他の実施形態において、Ａ−（ＲＡ）ｍは、
2019534238.tif 000029
であり、Ｄは、Ｃであり、ＲＤは、Ｃ１リンカーであり、Ｅ−（ＲＥ）ｍは、
2019534238.tif 000030
であり、ＤとＥとの間の結合は、二重結合である。他の実施形態において、Ｇ及びＪは、Ｃ（炭素）である。他の実施形態において、Ｇ及びＪは、Ｃであり、ＲＧ及びＲＪのうちの１つは、−Ｏ−ＣＨ３である。いくつかの実施形態において、環式ジオンは、１，４−環式ジオンである。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、環式ジオンプロドラッグ部分は、
2019534238.tif 000031
から選択されるキノンであり、式中、ヒドロキシル部分は、ＰＢＤへの結合点を提供する。
【０１２８】
いくつかの特定の実施形態において、環式ジオンは、以下の式のうちの１つのインドールジオンであり、
2019534238.tif 000032
式中、波線は、ＰＢＤのＮ１０位（すなわち、
2019534238.tif 000033
）で酸素原子への結合点を示す。
【０１２９】
いくつかの実施形態において、Ｒ１０環式ジオン保護基−トリガーは、以下の式の１，４−または１，２−環式ジオンである。
2019534238.tif 000034
Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、及びＪは、独立して、Ｃ及びＮから選択され、Ａ、Ｄ、Ｅ、及びＦの少なくとも１つは、Ｃであり、Ｇ及びＪの少なくとも１つは、Ｃであり、Ｎは、第二級アニメ、第三級アミン、またはイミン（＝Ｎ−）である。各ｎは、独立して、０及び１から選択される。破線は、任意の二重結合を表す。ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、ＲＧ、及びＲＪは、存在するとき、独立して、Ｈ、ＯＨ、任意に置換されたＣ１−４アルキルもしくはヘテロアルキル、Ｃ１−４アルコキシもしくはヘテロアルコキシ、及びハロゲンから選択されるが、但し、ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、ＲＧ、及びＲＪのうちの少なくとも１つが、存在し、ＰＢＤのＮ１０位でカルバメート部分の酸素原子に共有結合しているＣ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーである。いくつかの実施形態において、ＲＡ、ＲＤ、ＲＥ、及びＲＦのうちの１つは、Ｃ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーである。いくつかの実施形態において、Ｄ−ＲＤまたはＥ−ＲＥは、Ｃ１−４の任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキルリンカーに結合する炭素原子を有する部分であり、Ａ、Ｆのうちの少なくとも一方、ならびにＤ及びＥのうちの他方は、Ｎである。いくつかの実施形態において、ＲＡ、ＲＥ、及びＲＦのうちの１つは、独立して、Ｈ、任意に置換されたＣ１−４アルキルもしくはヘテロアルキル、及び任意に置換されたＣ１−４アルコキシもしくはヘテロアルコキシから選択され、Ｄは、Ｃであり、ＲＤは、Ｃ１リンカーである。いくつかの他の実施形態において、Ｇ−（ＲＧ）ｎ及びＪ−（ＲＪ）ｎのうちの少なくとも１つは、
2019534238.tif 000035
である。いくつかの他の実施形態において、Ｇ−ＲＧ及びＪ−ＲＪのうちの一方は、Ｃ−Ｏ−ＣＨ３であり、Ｇ−ＲＧ及びＪ−ＲＪのうちの他方は、ＣＨであり、ＧとＪとの間の結合は、二重結合である。いくつかの他の実施形態において、Ａ、Ｄ、Ｅ、及びＦから形成された環は、不飽和であるか、または部分的に飽和される。他の実施形態において、Ａ、Ｂ、Ｄ、及びＥから形成された環は、不飽和であるか、または部分的に飽和される。
【０１３０】
環式ジオン保護基−トリガーを有するプロドラッグは、多くのヒト腫瘍及び血管の内皮細胞内で過剰発現されると考えられているＤＴＤの２電子還元酵素で活性化され得る。ＤＴＤは、補因子としてＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨを用いてキノンの直接２電子移動を触媒するＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：キノン酸化還元酵素Ｉ型（ＮＱＯ１）酵素（ＥＣ１．６．９９．２）である（例えば、Ｍｅｎｄｏｚａ，ｅｔ  ａｌ．，“Ｈｕｍａｎ  ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：ｑｕｉｎｏｎｅ  ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ  ｔｙｐｅ  Ｉ（ＨＮＱＯ１）ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｑｕｉｎｏｎｅ  ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｔｒｉｇｇｅｒ  ｇｒｏｕｐｓ”，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１２ Ｏｃｔｏｂｅｒ９；５１（４０）：８０１４−８０２６を参照されたく、参照により本明細書に組み込まれる）。ＤＴＤは、好気性及び低酵素条件下でプロドラッグ活性化剤であると考えられる。
【０１３１】
ヒト乳癌及び肺癌は、高いＤＴＤレベルを発現することが知られている。例えば、ＮＱＯ１発現のｎＲＰＫＭ（ｎＲＰＫＭは、マッピングされた１００万読み取り当たりの転写長のＫｂ当たりの読み取りを指す）は、典型的には、約０．５〜約２０の範囲であるｎＲＰＫＭ値を有する血液癌及びリンパ癌と比較して、約３０〜２０００である。以下の表に開示されるように、ＤＴＤは、多くのがんにおいて正常組織と比較して過剰発現され（Ｓ．Ｄａｎｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，“ＤＴ−ｄｉａｐｈｏｒａｓｅ：ａ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ｎｅｗ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇｓ”，Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（２００４）３０，４３７−４４９を参照されたい）、ここで、「ＮＳ」は、有意でないことを指す。
2019534238.tif 000036
【０１３２】
いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、細胞内放出機構は、あるキノン種によって表されるように、以下の機構に従って、通常進行すると考えられており、プロドラッグキノントリガー活性化及び薬物放出は、ＤＴＤ２つの電子還元によって媒介される。
2019534238.tif 000037
【０１３３】
Ｃ．アリールボロン酸及びアリールボロン酸エステル保護基−トリガー
本開示のアリールボロン酸及びアリールボロン酸エステル保護基−トリガーＲ１０部分は、一般式（ＩＶａ）のものであり、
2019534238.tif 000038
、
式中、波線は、ＰＢＤのＮ１０位（すなわち、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ１０＜ＰＢＤ）で酸素原子への結合点を示す。Ｒ２０及びＲ２１は、独立して、Ｈ、任意に置換されたアルキルまたはヘテロアルキル、任意に置換されたシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル、及び任意に置換されたアリールまたはヘテロアリールから選択される。あるいは、Ｒ２０及びＲ２１はともに、任意に置換された部分−（ＣＨ２）ｎ−（式中、ｎは、２または３である）であり、前記部分は、それらが結合するＯ原子と一緒に、Ｂ原子とヘテロシクロアルキル環を形成する。ヘテロシクロアルキル環は、任意に、縮合ヘテロアルキル環、縮合アリール環、または縮合ヘテロアリール環を含んでもよい。波線は、ＰＢＤ  Ｎ１０位への結合点を示す。
【０１３４】
いくつかの実施形態において、アリールボロン酸及びアリールボロン酸エステルトリガーは、式のものであり、
2019534238.tif 000039
式中、Ｒ３０、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３、Ｒ４０、Ｒ４１、Ｒ４２、Ｒ４３、Ｒ４４、及びＲ４５は、独立して、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ２Ｃｌ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ２、任意に置換されたＣ１−８アルキルもしくはヘテロアルキル、２〜７個の炭素原子を含む任意に置換されたシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリールまたはヘテロアリールから選択される。いくつかの実施形態において、（ｉ）Ｒ３０もしくはＲ３１のうちの１つ及びＲ３２もしくはＲ３３のうちの１つ、（ｉｉ）Ｒ４０もしくはＲ４１のうちの１つ及びＲ４２もしくはＲ４３のうちの１つ、ならびに／または（ｉｉｉ）Ｒ４２もしくはＲ４３のうちの１つ及びＲ４４もしくはＲ４５のうちの１つは、２〜７個の炭素原子を有する、任意に置換された縮合シクロアルキル環、縮合ヘテロシクロアルキル環、縮合アリール環、もしくは縮合ヘテロアリール環を形成する。波線は、ＰＢＤ  Ｎ１０位への結合点を示す。
【０１３５】
例示的なアリールボロン酸及びアリールボロン酸エステル保護基−トリガーの非限定的な一覧は、以下のとおりである。
2019534238.tif 000040
【０１３６】
一実施形態において、保護基−トリガーは、アリールボロン酸であり、すなわち、Ｒ２０及びＲ２１は、Ｈである。
【０１３７】
アリールボロン酸またはアリールボロン酸エステル保護基−トリガーを有するプロドラッグは、Ｈ２Ｏ２などのＲＯＳで活性化され得る。（例えば、Ｋｕａｎｇ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｈｙｄｒｏｇｅｎ  Ｐｅｒｏｘｉｄｅ  Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ＤＮＡ  Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ：Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ”，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（２０１１），１３３（４８），１９２７８−１９２８１、Ｐｅｎｇ，Ｘ．，ｅｔ  ａｌ．，“ＲＯＳ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ：ａ  ｎｅｗ  ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｆｏｒ  ｔｕｍｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｄａｍａｇｅ”，Ｔｈｅｒ  Ｄｅｌｉｖ．（２０１２），３（７），８２３−８３３、及びＣｈｅｎ，Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｏｘｙｇｅｎ  Ｓｐｅｃｉｅｓ（ＲＯＳ）Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ＤＮＡ  Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｎｏｒｍａｌ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ”，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２０１４），５７，４４９８−４５１０（これらの各々は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。）
【０１３８】
がん細胞は、正常な非がん性細胞と比較して酸化的ストレスの増加を示すと考えられ、Ｈ２Ｏ２などのＲＯＳの細胞内濃度を増加していると考えられ、Ｈ２Ｏ２濃度は、がん細胞中で最大０．５ｎｍｏｌ／１０４細胞／時などの１０倍増加し得る。（例えば、Ｐｅｎｇ；Ｃｈｅｎ；Ｚｉｅｂａ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｐｅｒｏｘｉｄｅ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｃｏｎｔｅｎｔ  ｏｆ  ｌｉｐｉｄ  ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｉｎ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｉｓｓｕｅ  ａｎｄ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｐａｒｅｎｃｈｙｍａ”，Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０００），９４，８００−８０５、Ｓｚａｔｒｏｗｓｋｉ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｒｇｅ  Ａｍｏｕｎｔｓ  ｏｆ  Ｈｙｄｒｏｇｅｎ  Ｐｅｒｏｘｉｄｅ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌｓ”，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９１），５１，７９４−７９８（これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。）がん細胞中の高いＲＯＳ濃度、及び同時ＲＯＳシグナル伝達は、ＤＮＡ変異を介して腫瘍形成、発達、増殖、及び生存、転移、血管新生、及び治療剤への感受性の低下の主要な要因であることが考えられる（例えば、Ｐｅｎｇを参照されたい）。
【０１３９】
いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、ＲＯＳ活性化細胞内プロドラッグ放出機構は、以下の機構に従って進行すると考えられている。
2019534238.tif 000041
【０１４０】
ＩＶ．リンカー
本開示のリンカーは、酸部分分子への抗体及び薬物（「Ｄ」）を一緒に共有結合させることができる二官能性化学部分である。本開示の範囲内のリンカーは、狭く制限されず、以下の構造からのものであり、
Ａｂ−［Ａｂ接続］−［Ａｂスペーサ］ｏｐｔ−［トリガー］ｏｐｔ−［Ｄスペーサ］ｏｐｔ−［Ｄ接続］−Ｄ
Ａｂ接続、任意のＡｂスペーサ単位、任意の犠牲（トリガー）単位、及び任意の薬物スペーサ、及び薬物接続を含む。
【０１４１】
いくつかの実施形態において、リンカーは、自壊性部分（トリガー）を含む。本開示の範囲内の自壊性部分の非限定的な例には、ペプチド、ペプチド模倣物、及びジスルフィドが含まれる。
【０１４２】
いくつかの実施形態において、リンカーは、例えば、プロテアーゼによるリンカーの切断を可能にし、それによって、リソソーム酵素などの細胞内プロテアーゼへの曝露時に免疫コンジュゲートからの薬物の放出を容易にする（Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：７７８−７８４）。例示的なペプチド単位としては、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、及びペンタペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。例示的なジペプチドとしては、バリン−シトルリン（ｖｃまたはｖａｌ−ｃｉｔ）、バリン−アラニン（ｖａまたはｖａｌ−ａｌａ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｆまたはａｌａ−ｐｈｅ）、フェニルアラニン−リジン（ｆｋまたはｐｈｅ−ｌｙｓ）、フェニルアラニン−ホモリジン（ｐｈｅ−ｈｏｍｏｌｙｓ）、及びＮ−メチル−バリン−シトルリン（Ｍｅ−ｖａｌ−ｃｉｔ）が挙げられるが、これらに限定されない。例示的なトリペプチドには、グリシン−バリン−シトルリン（ｇｌｙ−ｖａｌ−ｃｉｔ）及びグリシン−グリシン−グリシン（ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ）が含まれるが、これらに限定されない。ペプチド単位は、自然発生アミノ酸残基、及び／または微量アミノ酸、及び／またはシトルリン等の非自然発生アミノ酸類似体を含んでもよい。ペプチド単位は、特定の酵素、例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ、及びＤ、またはプラスミンプロテアーゼによる酵素的切断のために設計して最適化することができる。
【０１４３】
いくつかの実施形態において、リンカーは、リンカーの切断を可能にする犠牲ペプチド模倣単位を含む。例示的なペプチド模倣単位としては、トリアゾール、シクロブタン−１−１−ジカルバルデヒド、シクロブタン−１−１−ジカルバルデヒド−シトルリン、アルケン、ハロアルケン、及びイソオキサゾールが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかのペプチド模倣単位の例には、以下のものを含み、ペプチド模倣単位の左側の波線は、スペーサまたは抗体接続部分への接続点であり、ペプチド模倣単位の右側の波線は、スペーサまたは薬物接続部分への接続点である。
2019534238.tif 000042
【０１４４】
本開示の範囲内のいくつかのＡｂ−［ペプチド模倣リンカー単位］−薬物基は、以下のとおりであり、式中、「ＡＡ」はアミノ酸を指し、ＡＡ１及びＡＡ２は、同じまたは異なる天然または非天然アミノ酸であり得る。
2019534238.tif 000043
【０１４５】
いくつかの実施形態において、リンカーは、リンカーの切断を可能にする犠牲ジスルフィド単位を含む。ジスルフィドリンカーは、式のものである。
2019534238.tif 000044
式中、ＳＣは、抗体システイン硫黄原子であり、Ｒ７０及びＲ７１は、独立して、Ｈ及びＣ１−３アルキルから選択され、式中、Ｒ７０及びＲ７１のうちの１つのみがＨであり得るか、またはＲ７０及びＲ７１は、それらが結合する炭素原子と一緒に、酸素ヘテロ原子を任意に含む４〜６員環を形成し、波線は、ＰＢＤ  Ｎ１０位にカルバメート部分の酸素原子への結合点を示す。いくつかの他の実施形態において、Ｒ７０及びＲ７１は、独立して、Ｈ、−ＣＨ３、及び−ＣＨ２ＣＨ３から選択され、Ｒ７０及びＲ７１のうちの１つのみがＨであり得るか、またはＲ７０及びＲ７１は、それらが結合する炭素原子と一緒に、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、テトラヒドロフラン、及びテトラヒドロピランから選択される環を形成する。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、リンカーは、スペーサ単位を含み得る。いくつかの実施形態において、スペーサ単位は、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）である。いくつかのかかる実施形態において、ｐ−アミノベンジルアルコールスペーサ単位は、アミド結合を介してアミノ酸単位に結合し、カルバミン酸塩、メチルカルバミン酸塩、または炭酸塩が、ベンジルアルコールと薬物との間に作製される（Ｈａｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ（２００５）１５：１０８７−１１０３）。他の実施形態において、リンカー抗体部分は、以下のとおりに、ＰＢＤ  Ｎ１０位にカルバメート部分の酸素原子に結合される。
2019534238.tif 000045
【０１４７】
いくつかの他の実施形態において、スペーサとしては、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体などの、ＰＡＢ基と電子的に同様である芳香族化合物（米国特許第７，３７５，０７８号、Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２３７）及びオルト−またはパラ−アミノベンジルアセタールが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、置換及び非置換４−アミノ酪酸アミド（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ（１９９５）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｂｉｏｌｏｇｙ２：２２３）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］及びビシクロ［２．２．２］環系（Ｓｔｏｒｍ  ｅｔ  ａｌ（１９７２）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９４：５８１５）、ならびに２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Ａｍｓｂｅｒｒｙ，ｅｔ  ａｌ（１９９０）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：５８６７）など、アミド結合加水分解により環化されるスペーサが用いられ得る。グリシン残基のアルファ−炭素への薬物の結合は、有用であり得るスペーサの別の例である（Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙ  ｅｔ  ａｌ（１９８４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７：１４４７）。いくつかの態様において、スペーサ単位は、自壊性である。
【０１４９】
リンカーは、抗体への共有結合コンジュゲーションに好適な反応基を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、少なくとも１つの反応性スルフヒドリル部分を含み、リンカーは、反応性硫黄原子、マレイミド、ブロムアセトアミド、及びヨードアセトアミド、またはアルケンを含み、抗体は、当業者に既知の方法に従って、抗体反応性スルフヒドリルと、リンカー反応性硫黄原子、マレイミド、ブロムアセトアミド、ヨードアセトアミド、またはアルケンとの反応によって形成される共有結合によってリンカーにコンジュゲートされる。
【０１５０】
薬物−リンカー部分に反応性スルフヒドリル部分を有する抗体をコンジュゲートするためのスキームの非限定的な例は、以下のとおりに示される。
2019534238.tif 000046
【０１５１】
いくつかの特定の薬物−［Ｌ］コンジュゲートの例は、以下のとおりであり、式中、ｘは、１〜８であり、［Ｃｏｎｊ］は、本明細書の別の箇所で記載される反応基を指す。
2019534238.tif 000047
【０１５２】
犠牲性ジスルフィドを含む実施形態において、Ａｂへのコンジュゲーションは、出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０１５／０９２０８４号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載の方法に従って行うことができる。全般に、以下の式の活性化脱離基−ジスルフィド−薬物化合物は、
2019534238.tif 000048
少なくとも１つのスルフヒドリル部分を有する抗体と接触され、脱離基（ＸＬ）が置換され、硫黄原子は、スルフヒドリル硫黄原子に共有結合して、ジスルフィドを形成する。上記の式において、ＸＬは、チオール脱離基であり、脱離基及びリンカーは、ジスルフィド結合を介して結合され、Ｒ７０及びＲ７１は、本明細書の別の箇所に定義されるとおりであり、Ｓｐは、本明細書の別の箇所で記載される任意のスペーサであり、ｎは、０または１である。Ｒ７０及びＲ７１のうちの１つは、Ｈであり得るため、リンカーは、束縛リンカーであると考えられ得る。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、脱離基は、以下のものから好適に選択され得る。
2019534238.tif 000049
そのような実施形態において、波線は、脱離基の束縛リンカーＳ原子への結合点を示し、それによりジスルフィド結合を形成する。Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、及びＸ５は、独立して、Ｃ、Ｎ、Ｓ、またはＯであり、但し、Ｘ１〜Ｘ５のうちの少なくとも１つがＮであることを条件とし、破線は、任意の二重結合を表し、Ａは、６員環を表す。Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、及びＹ４は、独立して、Ｃ、Ｎ、Ｓ、またはＯであり、但し、Ｙ１〜Ｙ４のうちの少なくとも１つがＮであることを条件とし、破線は、任意の二重結合を表し、Ｂは、５員環を表す。Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６は、独立して、Ｃ、Ｎ、Ｓ、またはＯであり、但し、Ｚ１及びＺ２のうちの少なくとも１つがＮであることを条件とし、破線は、任意の二重結合を表し、Ｃは、６員環を表し、Ｄは、縮合５員環を表す。各Ｒ３は独立して、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｒ５Ｓ（Ｏ）（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）（Ｒ５）、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＮ、及び−Ｂｒから選択される。各Ｒ５は独立して、Ｈ、任意に置換されたＣ１−６ヒドロカルビル、任意に置換されたＣ５−６炭素環、及び任意に置換されたＣ５−６複素環から選択され、ｑは、１、２、または３である。脱離基１、脱離基２、脱離基３、及び／または脱離基４の環構造内の各炭素原子は、任意に、Ｒ５で置換される。脱離基１、脱離基２、脱離基３、及び／または脱離基４の環構造内の各窒素原子は、任意に、Ｒ５で置換されて、第三級アミンまたは第四級アミンを形成する。
【０１５４】
いくつかの特定のそのような実施形態において、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、及びＸ５は独立して、ＣまたはＮであり、Ｘ１〜Ｘ５のうちの２つ以下は、Ｎであり、環Ａは、不飽和である。他の特定の実施形態において、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、及びＹ４は独立して、ＣまたはＮであり、Ｂ環は、不飽和である。さらに他の特定の実施形態において、Ｚ１は、Ｎであり、Ｚ２は、Ｎ、Ｓ、及びＯから選択され、Ｚ３〜Ｚ６は、Ｃ及びＮから選択され、Ｚ３〜Ｚ６のうちの２つ以下は、Ｎであり、環Ｃは、不飽和である。さらに他の特定の実施形態において、各Ｒ３は独立して、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｈ３ＣＳ（Ｏ）（Ｏ）−、及び−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）２から選択される。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、脱離基は、
2019534238.tif 000050
であり、式中、波線は、脱離基の束縛リンカーＳ原子への結合点を示し、それによりジスルフィド結合を形成する。いくつかの特定の実施形態において、Ｃ１−４アルキルは、メチルである。
【０１５６】
本開示の脱離基のいくつかの例を、以下に例示する。
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2019534238.tif 000052
【０１５７】
束縛ジスルフィドリンカーの例は以下のとおりであり、式中、硫黄原子の波線は、本明細書の他の箇所で定義される脱離基への結合点を指し、カルボニル部分の波線は、ＰＢＤ  Ｎ１０原子への結合点を指す。
2019534238.tif 000053
【０１５８】
Ｖ．抗体
本開示の抗体は、１つ以上の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体に結合する任意の細胞標的化生物学的化合物であり、抗体は、リンカーへのコンジュゲーションに好適な少なくとも１つの反応性システインスルフヒドリル部分を含む。
【０１５９】
がん細胞などのある特定の種類の細胞は、周辺組織と比較して特有である表面分子（抗原）を発現する。これらの表面分子に結合する細胞標的化部分は、本明細書で他に記載される薬物の、特に標的細胞への標的化された送達を可能にする。例えばかつ非限定的に、細胞標的化部分は、肺、乳房、脳、前立腺、脾臓、膵臓、子宮頸部、卵巣、頭頸部、食道、肝臓、皮膚、腎臓、白血病、骨、精巣、結腸、または膀胱細胞に結合し、それによって内部移行され得る。
【０１６０】
Ａ．腫瘍関連抗原
本開示のいくつかの特定の態様において、標的細胞は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を発現するか、または細胞表面受容体を含む、がん細胞である。腫瘍関連抗原は、当該技術分野において既知であり、当該技術分野において周知の方法及び情報を使用して抗体を生成する上で使用するために調製され得る。がんの診断及び療法のための有効な細胞標的を発見する試みとして、研究者らは、１つ以上の正常な非がん性細胞（複数可）と比較して、１つ以上の特定の種類（複数可）のがん細胞の表面上で特異的に発現される膜貫通ポリペプチドまたはさもなければ腫瘍関連ポリペプチドを特定しようとした。多くの場合、そのような腫瘍関連ポリペプチドは、非がん性細胞の表面上と比較して、がん細胞の表面上でより豊富に発現される。そのような腫瘍関連細胞表面の抗原ポリペプチドの特定により、抗体に基づく療法を介してがん細胞の破壊のために特異的に標的とする能力が生じた。
【０１６１】
腫瘍関連抗原ＴＡＡの例としては、本明細書に列挙されるＴＡＡ（１）〜（５３）が挙げられるが、これらに限定されない。便宜上、これらの抗原（これら全てが当該技術分野において既知である）に関する情報を本明細書に列挙し、この情報は、名称、別称、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号及び主な参考文献（複数可）に続き、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）の核酸及びタンパク質配列を特定する慣例を含む。ＴＡＡ（１）〜（５３）に対応する核酸及びタンパク質配列は、ＧｅｎＢａｎｋなどの公的データベースにおいて入手可能である。抗体によって標的とされる腫瘍関連抗原としては、引用される参考文献において特定されている配列と比較して、少なくとも約７０％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を保有する全てのアミノ酸配列バリアント及びアイソフォーム、または引用される参考文献中に見出される配列を有するＴＡＡと実質的に同じ生物学的特性もしくは特徴を呈するものが挙げられる。例えば、バリアント配列を有するＴＡＡは一般に、列挙されている対応する配列を有するＴＡＡに特異的に結合する抗体に特異的に結合することができる。本明細書に具体的に引用される参考文献中の配列及び開示は、参照により明示的に組み込まれる。
【０１６２】
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質受容体−ＩＢ型、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１２０３）ｔｅｎ  Ｄｉｊｋｅ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２６４（５１５５）：１０１−１０４（１９９４）、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ１４（１１）：１３７７−１３８２（１９９７））、ＷＯ２００４／０６３３６２（請求項２）、ＷＯ２００３／０４２６６１（請求項１２）、ＵＳ２００３／１３４７９０−Ａ１（３８〜３９頁）、ＷＯ２００２／１０２２３５（請求項１３、２９６頁）、ＷＯ２００３／０５５４４３（９１〜９２頁）、ＷＯ２００２／９９１２２（実施例２、５２８〜５３０頁）、ＷＯ２００３／０２９４２１（請求項６）、ＷＯ２００３／０２４３９２（請求項２、図１１２）、ＷＯ２００２／９８３５８（請求項１、１８３頁）、ＷＯ２００２／５４９４０（１００〜１０１頁）、ＷＯ２００２／５９３７７（３４９〜３５０頁）、ＷＯ２００２／３０２６８（請求項２７、３７６頁）、ＷＯ２００１／４８２０４（実施例、図４）ＮＰ＿００１１９４骨形成タンパク質受容体、ＩＢ型／ｐｉｄ＝ＮＰ＿００１１９４．１−相互参照：ＭＩＭ：６０３２４８、ＮＰ＿００１１９４．１、ＡＹ０６５９９４。
【０１６３】
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００３４８６）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５５（２），２８３−２８８（１９９９）、Ｎａｔｕｒｅ３９５（６６９９）：２８８−２９１（１９９８）、Ｇａｕｇｉｔｓｃｈ，Ｈ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７（１６）：１１２６７−１１２７３）、ＷＯ２００４／０４８９３８（実施例２）、ＷＯ２００４／０３２８４２（実施例ＩＶ）、ＷＯ２００３／０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２００３／０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２／７８５２４（実施例２）、ＷＯ２００２／９９０７４（請求項１９、１２７〜１２９頁）、ＷＯ２００２／８６４４３（請求項２７、２２２、３９３頁）、ＷＯ２００３／００３９０６（請求項１０、２９３頁）、ＷＯ２００２／６４７９８（請求項３３、９３〜９５頁）、ＷＯ２０００／１４２２８（請求項５、１３３〜１３６頁）、ＵＳ２００３／２２４４５４（図３）、ＷＯ２００３／０２５１３８（請求項１２、１５０頁）、ＮＰ＿００３４７７溶質担体ファミリー７（カチオン性アミノ酸輸送体、ｙ＋システム）、メンバー５／ｐｉｄ＝ＮＰ＿００３４７７．３−Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ、相互参照：ＭＩＭ：６００１８２、ＮＰ＿００３４７７．３、ＮＭ＿０１５９２３、ＮＭ＿００３４８６＿１。
【０１６４】
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１２４４９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１（１５），５８５７−５８６０（２００１）、Ｈｕｂｅｒｔ，Ｒ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９６（２５）：１４５２３−１４５２８）、ＷＯ２００４／０６５５７７（請求項６）、ＷＯ２００４／０２７０４９（図１Ｌ）、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、ＷＯ２００４／０１６２２５（請求項２）、ＷＯ２００３／０４２６６１（請求項１２）、ＵＳ２００３／１５７０８９（実施例５）、ＵＳ２００３／１８５８３０（実施例５）、ＵＳ２００３／０６４３９７（図２）、ＷＯ２００２／８９７４７（実施例５、６１８〜６１９頁）、ＷＯ２００３／０２２９９５（実施例９；図１３Ａ、実施例５３；１７３頁、実施例２；図２Ａ）、ＮＰ＿０３６５８１前立腺の６回膜貫通上皮抗原、相互参照：ＭＩＭ：６０４４１５、ＮＰ＿０３６５８１．１、ＮＭ＿０１２４４９＿１。
【０１６５】
（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５、ＭＵＣ１６、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ３６１４８６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２９）：２７３７１−２７３７５（２００１））、ＷＯ２００４／０４５５５３（請求項１４）、ＷＯ２００２／９２８３６（請求項６、図１２）、ＷＯ２００２／８３８６６（請求項１５、１１６〜１２１頁）、ＵＳ２００３／１２４１４０（実施例１６）、ＵＳ７９８９５９。相互参照：ＧＩ：３４５０１４６７、ＡＡＫ７４１２０．３、ＡＦ３６１４８６＿１。
【０１６６】
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００５８２３）Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（２），８０５−８０８（１９９４），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９６（２０）：１１５３１−１１５３６（１９９９），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９３（１）：１３６−１４０（１９９６），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０（３７）：２１９８４−２１９９０（１９９５））、ＷＯ２００３／１０１２８３（請求項１４）、（ＷＯ２００２／１０２２３５（請求項１３、２８７〜２８８頁）、ＷＯ２００２／１０１０７５（請求項４、３０８〜３０９頁）、ＷＯ２００２／７１９２８（３２０〜３２１頁）、ＷＯ９４１０３１２（５２〜５７頁）、相互参照：ＭＩＭ：６０１０５１、ＮＰ＿００５８１４．２、ＮＭ＿００５８２３＿１。
【０１６７】
（６）Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質輸送体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００６４２４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（２２）：１９６６５−１９６７２（２００２）、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ６２（２）：２８１−２８４（１９９９）、Ｆｅｉｌｄ，Ｊ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５８（３）：５７８−５８２）、ＷＯ２００４／０２２７７８（請求項２）、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、ＷＯ２００２／１０２２３５（請求項１３、３２６頁）、ＥＰ８７５５６９（請求項１、１７〜１９頁）、ＷＯ２００１／５７１８８（請求項２０、３２９頁）、ＷＯ２００４／０３２８４２（実施例ＩＶ）、ＷＯ２００１／７５１７７（請求項２４、１３９〜１４０頁）、相互参照：ＭＩＭ：６０４２１７、ＮＰ＿００６４１５．１、ＮＭ＿００６４２４＿１。
【０１６８】
（７）Ｓｅｍａ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ  Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７回トロンボスポンジン反復（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）、及び短い細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＢ０４０８７８）Ｎａｇａｓｅ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．（２０００）ＤＮＡ  Ｒｅｓ．７（２）：１４３−１５０）、ＷＯ２００４／０００９９７（請求項１）、ＷＯ２００３／００３９８４（請求項１）、ＷＯ２００２／０６３３９（請求項１、５０頁）、ＷＯ２００１／８８１３３（請求項１、４１〜４３頁、４８〜５８頁）、ＷＯ２００３／０５４１５２（請求項２０）、ＷＯ２００３／１０１４００（請求項１１）、受託番号：Ｑ９Ｐ２８３、ＥＭＢＬ、ＡＢ０４０８７８、ＢＡＡ９５９６９．１．Ｇｅｎｅｗ；ＨＧＮＣ：１０７３７。
【０１６９】
（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ２７０００５０Ｃ１２遺伝子、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＹ３５８６２８）、Ｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２：２５４６−２５５３、ＵＳ２００３／１２９１９２（請求項２）、ＵＳ２００４／０４４１８０（請求項１２）、ＵＳ２００４／０４４１７９（請求項１１）、ＵＳ２００３／０９６９６１（請求項１１）、ＵＳ２００３／２３２０５６（実施例５）、ＷＯ２００３／１０５７５８（請求項１２）、ＵＳ２００３／２０６９１８（実施例５）、ＥＰ１３４７０４６（請求項１）、ＷＯ２００３／０２５１４８（請求項２０）、相互参照：ＧＩ：３７１８２３７８、ＡＡＱ８８９９１．１、ＡＹ３５８６２８＿１。
【０１７０】
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＹ２７５４６３）、Ｎａｋａｍｕｔａ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７７，３４−３９，１９９１、Ｏｇａｗａ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７８，２４８−２５５，１９９１、Ａｒａｉ  Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊｐｎ．Ｃｉｒｃ．Ｊ．５６，１３０３−１３０７，１９９２、Ａｒａｉ  Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，３４６３−３４７０，１９９３、Ｓａｋａｍｏｔｏ  Ａ．，Ｙａｎａｇｉｓａｗａ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７８，６５６−６６３，１９９１、Ｅｌｓｈｏｕｒｂａｇｙ  Ｎ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，３８７３−３８７９，１９９３、Ｈａｅｎｄｌｅｒ  Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０，ｓ１−Ｓ４，１９９２、Ｔｓｕｔｓｕｍｉ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ２２８，４３−４９，１９９９、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  Ｒ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９，１６８９９−１６９０３，２００２、Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓ  Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８２，３１１６−３１２３，１９９７、Ｏｋａｍｏｔｏ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２１５８９−２１５９６，１９９７、Ｖｅｒｈｅｉｊ  Ｊ．Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．Ａｍ．Ｊ．"Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．１０８，２２３−２２５，２００２、Ｈｏｆｓｔｒａ  Ｒ．Ｍ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．５，１８０−１８５，１９９７、Ｐｕｆｆｅｎｂｅｒｇｅｒ  Ｅ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ７９，１２５７−１２６６，１９９４、Ａｔｔｉｅ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．４，２４０７−２４０９，１９９５、Ａｕｒｉｃｃｈｉｏ  Ａ．，ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５：３５１−３５４，１９９６、Ａｍｉｅｌ  Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５，３５５−３５７，１９９６、Ｈｏｆｓｔｒａ  Ｒ．Ｍ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１２，４４５−４４７，１９９６、Ｓｖｅｎｓｓｏｎ  Ｐ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１０３，１４５−１４８，１９９８、Ｆｕｃｈｓ  Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７，１１５−１２４，２００１、Ｐｉｎｇａｕｌｔ  Ｖ．，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１１１，１９８−２０６、ＷＯ２００４／０４５５１６（請求項１）、ＷＯ２００４／０４８９３８（実施例２）、ＷＯ２００４／０４００００（請求項１５１）、ＷＯ２００３／０８７７６８（請求項１）、ＷＯ２００３／０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００３／０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２／６１０８７（図１）、ＷＯ２００３／０１６４９４（図６）、ＷＯ２００３／０２５１３８（請求項１２、１４４頁）、ＷＯ２００１／９８３５１（請求項１、１２４〜１２５頁）、ＥＰ５２２８６８（請求項８、図２）、ＷＯ２００１／７７１７２（請求項１、２９７〜２９９頁）、ＵＳ２００３／１０９６７６、ＵＳ６５１８４０４（図３）、ＵＳ５７７３２２３（請求項１ａ、３１〜３４欄）、ＷＯ２００４／００１００４。
【０１７１】
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮説上のタンパク質ＦＬＪ２０３１５、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１７７６３）、ＷＯ２００３／１０４２７５（請求項１）、ＷＯ２００４／０４６３４２（実施例２）、ＷＯ２００３／０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２００３／０８３０７４（請求項１４、６１頁）、ＷＯ２００３／０１８６２１（請求項１）、ＷＯ２００３／０２４３９２（請求項２、図９３）、ＷＯ２００１／６６６８９（実施例６）、相互参照：遺伝子座ＩＤ：５４８９４、ＮＰ＿０６０２３３．２、ＮＭ＿０１７７６３＿１。
【０１７２】
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺の６回膜貫通上皮抗原２、６回膜貫通前立腺タンパク質、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ４５５１３８）Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．８２（１１）：１５７３−１５８２（２００２））、ＷＯ２００３／０８７３０６、ＵＳ２００３／０６４３９７（請求項１、図１）、ＷＯ２００２／７２５９６（請求項１３、５４〜５５頁）、ＷＯ２００１／７２９６２（請求項１、図４Ｂ）、ＷＯ２００３／１０４２７０（請求項１１）、ＷＯ２００３／１０４２７０（請求項１６）、ＵＳ２００４／００５５９８（請求項２２）、ＷＯ２００３／０４２６６１（請求項１２）、ＵＳ２００３／０６０６１２（請求項１２、図１０）、ＷＯ２００２／２６８２２（請求項２３、図２）、ＷＯ２００２／１６４２９（請求項１２、図１０）、相互参照：ＧＩ：２２６５５４８８、ＡＡＮ０４０８０．１、ＡＦ４５５１３８＿１。
【０１７３】
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１７６３６）Ｘｕ，Ｘ．Ｚ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８（１９）：１０６９２−１０６９７（２００１），Ｃｅｌｌ１０９（３）：３９７−４０７（２００２），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８（３３）：３０８１３−３０８２０（２００３））、ＵＳ２００３／１４３５５７（請求項４）、ＷＯ２０００／４０６１４（請求項１４、１００〜１０３頁）、ＷＯ２００２／１０３８２（請求項１、図９Ａ）、ＷＯ２００３／０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２００２／３０２６８（請求項２７、３９１頁）、ＵＳ２００３／２１９８０６（請求項４）、ＷＯ２００１／６２７９４（請求項１４、図１Ａ〜Ｄ）、相互参照：ＭＩＭ：６０６９３６、ＮＰ＿０６０１０６．２、ＮＭ＿０１７６３６＿１。
【０１７４】
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌種由来の成長因子、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００３２０３またはＮＭ＿００３２１２）Ｃｉｃｃｏｄｉｃｏｌａ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．ＥＭＢＯＪ．８（７）：１９８７−１９９１（１９８９），Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．４９（３）：５５５−５６５（１９９１））、ＵＳ２００３／２２４４１１（請求項１）、ＷＯ２００３／０８３０４１（実施例１）、ＷＯ２００３／０３４９８４（請求項１２）、ＷＯ２００２／８８１７０（請求項２、５２〜５３頁）、ＷＯ２００３／０２４３９２（請求項２、図５８）、ＷＯ２００２／１６４１３（請求項１、９４〜９５、１０５頁）、ＷＯ２００２／２２８０８（請求項２、図１）、ＵＳ５８５４３９９（実施例２、１７〜１８欄）、ＵＳ５７９２６１６（図２）、相互参照：ＭＩＭ：１８７３９５、ＮＰ＿００３２０３．１、ＮＭ＿００３２１２＿１。
【０１７５】
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）もしくはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／Ｅｐｓｔｅｉｎ  Ｂａｒｒウイルス受容体）またはＨｓ．７３７９２Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｍ２６００４）Ｆｕｊｉｓａｋｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４（４）：２１１８−２１２５）、Ｗｅｉｓ  Ｊ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７，１０４７−１０６６，１９８８、Ｍｏｏｒｅ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４，９１９４−９１９８，１９８７、Ｂａｒｅｌ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５，１０２５−１０３１，１９９８、Ｗｅｉｓ  Ｊ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３，５６３９−５６４３，１９８６、Ｓｉｎｈａ  Ｓ．Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０，５３１１−５３２０、ＷＯ２００４／０４５５２０（実施例４）、ＵＳ２００４／００５５３８（実施例１）、ＷＯ２００３／０６２４０１（請求項９）、ＷＯ２００４／０４５５２０（実施例４）、ＷＯ９１０２５３６（図９．１〜９．９）、ＷＯ２００４／０２０５９５（請求項１）、受託番号：Ｐ２００２３、Ｑ１３８６６、Ｑ１４２１２、ＥＭＢＬ、Ｍ２６００４、ＡＡＡ３５７８６．１。
【０１７６】
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９b、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００６２６または１１０３８６７４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（２００３）１００（７）：４１２６−４１３１，Ｂｌｏｏｄ（２００２）１００（９）：３０６８−３０７６、Ｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（６）：１６２１−１６２５）、ＷＯ２００４／０１６２２５（請求項２、図１４０）、ＷＯ２００３／０８７７６８、ＵＳ２００４／１０１８７４（請求項１、１０２頁）、ＷＯ２００３／０６２４０１（請求項９）、ＷＯ２００２／７８５２４（実施例２）、ＵＳ２００２／１５０５７３（請求項５、１５頁）、ＵＳ５６４４０３３、ＷＯ２００３／０４８２０２（請求項１、３０６及び３０９頁）、ＷＯ９９／５５８６５８、ＵＳ６５３４４８２（請求項１３、図１７Ａ／Ｂ）、ＷＯ２０００／５５３５１（請求項１１、１１４５〜１１４６頁）、相互参照：ＭＩＭ：１４７２４５、ＮＰ＿０００６１７．１、ＮＭ＿０００６２６＿１。
【０１７７】
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０３０７６４，ＡＹ３５８１３０）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０（２００３）、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ５４（２）：８７−９５（２００２）、Ｂｌｏｏｄ９９（８）：２６６２−２６６９（２００２）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８（１７）：９７７２−９７７７（２００１）、Ｘｕ，Ｍ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２８０（３）：７６８−７７５、ＷＯ２００４／０１６２２５（請求項２）、ＷＯ２００３／０７７８３６、ＷＯ２００１／３８４９０（請求項５、図１８Ｄ−１〜１８Ｄ−２）、ＷＯ２００３／０９７８０３（請求項１２）、ＷＯ２００３／０８９６２４（請求項２５）、相互参照：ＭＩＭ：６０６５０９、ＮＰ＿１１０３９１．２、ＮＭ＿０３０７６４＿１。
【０１７８】
（１７）ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｍ１１７３０）Ｃｏｕｓｓｅｎｓ  Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８５）２３０（４７３０）：１１３２−１１３９）、Ｙａｍａｍｏｔｏ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ３１９，２３０−２３４，１９８６、Ｓｅｍｂａ  Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２，６４９７−６５０１，１９８５、Ｓｗｉｅｒｃｚ  Ｊ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１６５，８６９−８８０，２００４、Ｋｕｈｎｓ  Ｊ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，３６４２２−３６４２７，１９９９、Ｃｈｏ  Ｈ．−Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ４２１，７５６−７６０，２００３、Ｅｈｓａｎｉ  Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ１５，４２６−４２９、ＷＯ２００４／０４８９３８（実施例２）、ＷＯ２００４／０２７０４９（図１Ｉ）、ＷＯ２００４／００９６２２、ＷＯ２００３／０８１２１０、ＷＯ２００３／０８９９０４（請求項９）、ＷＯ２００３／０１６４７５（請求項１）、ＵＳ２００３／１１８５９２、ＷＯ２００３／００８５３７（請求項１）、ＷＯ２００３／０５５４３９（請求項２９、図１Ａ〜Ｂ）、ＷＯ２００３／０２５２２８（請求項３７、図５Ｃ）、ＷＯ２００２／２２６３６（実施例１３、９５〜１０７頁）、ＷＯ２００２／１２３４１（請求項６８、図７）、ＷＯ２００２／１３８４７（７１〜７４頁）、ＷＯ２００２／１４５０３（１１４〜１１７頁）、ＷＯ２００１／５３４６３（請求項２、４１〜４６頁）、ＷＯ２００１／４１７８７（１５頁）、ＷＯ２０００／４４８９９（請求項５２、図７）、ＷＯ２０００／２０５７９（請求項３、図２）、ＵＳ５８６９４４５（請求項３、３１〜３８欄）、ＷＯ９６３０５１４（請求項２、５６〜６１頁）、ＥＰ１４３９３９３（請求項７）、ＷＯ２００４／０４３３６１（請求項７）、ＷＯ２００４／０２２７０９、ＷＯ２００１／００２４４（実施例３、図４）、受託番号：Ｐ０４６２６、ＥＭＢＬ、Ｍ１１７６７、ＡＡＡ３５８０８．１．ＥＭＢＬ、Ｍ１１７６１、ＡＡＡ３５８０８．１。
【０１７９】
（１８）ＮＣＡ（ＣＥＡＣＡＭ６、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｍ１８７２８）、Ｂａｒｎｅｔｔ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ３，５９−６６，１９８８、Ｔａｗａｒａｇｉ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５０，８９−９６，１９８８、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  Ｒ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９：１６８９９−１６９０３，２００２、ＷＯ２００４／０６３７０９、ＥＰ１４３９３９３（請求項７）、ＷＯ２００４／０４４１７８（実施例４）、ＷＯ２００４／０３１２３８、ＷＯ２００３／０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２００２／７８５２４（実施例２）、ＷＯ２００２／８６４４３（請求項２７、４２７頁）、ＷＯ２００２／６０３１７（請求項２）、受託番号：Ｐ４０１９９；Ｑ１４９２０、ＥＭＢＬ、Ｍ２９５４１、ＡＡＡ５９９１５．１．ＥＭＢＬ、Ｍ１８７２８。
【０１８０】
（１９）ＭＤＰ（ＤＰＥＰ１、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＢＣ０１７０２３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９（２６）：１６８９９−１６９０３（２００２））、ＷＯ２００３／０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２／６４７９８（請求項３３、８５〜８７頁）、ＪＰ０５００３７９０（図６〜８）、ＷＯ９９４６２８４（図９）、相互参照：ＭＩＭ：１７９７８０、ＡＡＨ１７０２３．１、ＢＣ０１７０２３＿１。
【０１８１】
（２０）ＩＬ２０Ｒa（ＩＬ２０Ｒａ、ＺＣＹＴＯＲ７、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ１８４９７１）、Ｃｌａｒｋ  Ｈ．Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３，２２６５−２２７０，２００３、Ｍｕｎｇａｌｌ  Ａ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ４２５，８０５−８１１，２００３、Ｂｌｕｍｂｅｒｇ  Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ１０４，９−１９，２００１、Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７，３５４５−３５４９，２００１、Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋ  Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７，４７５１７−４７５２３，２００２、Ｐｌｅｔｎｅｖ  Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ４２：１２６１７−１２６２４、Ｓｈｅｉｋｈ  Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２，２００６−２０１０、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、ＵＳ２００４／００５３２０（実施例５）、ＷＯ２００３／０２９２６２（７４〜７５頁）、ＷＯ２００３／００２７１７（請求項２、６３頁）、ＷＯ２００２／２２１５３（４５〜４７頁）、ＵＳ２００２／０４２３６６（２０〜２１頁）、ＷＯ２００１／４６２６１（５７〜５９頁）、ＷＯ２００１／４６２３２（６３〜６５頁）、ＷＯ９８３７１９３（請求項１、５５〜５９頁）、受託番号：Ｑ９ＵＨＦ４、Ｑ６ＵＷＡ９、Ｑ９６ＳＨ８、ＥＭＢＬ、ＡＦ１８４９７１、ＡＡＦ０１３２０．１。
【０１８２】
（２１）Ｂｒｅｖｉｃａｎ（ＢＣＡＮ、ＢＥＨＡＢ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ２２９０５３）Ｇａｒｙ  Ｓ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ２５６，１３９−１４７，２０００、Ｃｌａｒｋ  Ｈ．Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３，２２６５−２２７０，２００３、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  Ｒ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９，１６８９９−１６９０３，２００２、ＵＳ２００３／１８６３７２（請求項１１）、ＵＳ２００３／１８６３７３（請求項１１）、ＵＳ２００３／１１９１３１（請求項１、図５２）、ＵＳ２００３／１１９１２２（請求項１、図５２）、ＵＳ２００３／１１９１２６（請求項１）、ＵＳ２００３／１１９１２１（請求項１、図５２）、ＵＳ２００３／１１９１２９（請求項１）、ＵＳ２００３／１１９１３０（請求項１）、ＵＳ２００３／１１９１２８（請求項１、図５２）、ＵＳ２００３／１１９１２５（請求項１）、ＷＯ２００３／０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２／０２６３４（請求項１）。
【０１８３】
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ（ＤＲＴ、ＥＲＫ、Ｈｅｋ５、ＥＰＨＴ３、Ｔｙｒｏ５、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００４４４２）Ｃｈａｎ，Ｊ．ａｎｄ  Ｗａｔｔ，Ｖ．Ｍ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ６（６），１０５７−１０６１（１９９１）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ１０（５）：８９７−９０５（１９９５），Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２１：３０９−３４５（１９９８），Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．１９６：１７７−２４４（２０００））、ＷＯ２００３／０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２０００／５３２１６（請求項１、４１頁）、ＷＯ２００４／０６５５７６（請求項１）、ＷＯ２００４／０２０５８３（請求項９）、ＷＯ２００３／００４５２９（１２８〜１３２頁）、ＷＯ２０００／５３２１６（請求項１、４２頁）、相互参照：ＭＩＭ：６００９９７、ＮＰ＿００４４３３．２、ＮＭ＿００４４４２＿１。
【０１８４】
（２３）ＡＳＬＧ６５９（Ｂ７ｈ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＸ０９２３２８）ＵＳ２００４／０１０１８９９（請求項２）、ＷＯ２００３／１０４３９９（請求項１１）、ＷＯ２００４／０００２２１（図３）、ＵＳ２００３／１６５５０４（請求項１）、ＵＳ２００３／１２４１４０（実施例２）、ＵＳ２００３／０６５１４３（図６０）、ＷＯ２００２／１０２２３５（請求項１３、２９９頁）、ＵＳ２００３／０９１５８０（実施例２）、ＷＯ２００２／１０１８７（請求項６、図１０）、ＷＯ２００１／９４６４１（請求項１２、図７ｂ）、ＷＯ２００２／０２６２４（請求項１３、図１Ａ〜１Ｂ）、ＵＳ２００２／０３４７４９（請求項５４、４５〜４６頁）、ＷＯ２００２／０６３１７（実施例２；３２０〜３２１頁、請求項３４；３２１〜３２２頁）、ＷＯ２００２／７１９２８（４６８〜４６９頁）、ＷＯ２００２／０２５８７（実施例１、図１）、ＷＯ２００１／４０２６９（実施例３、１９０〜１９２頁）、ＷＯ２０００／３６１０７（実施例２、２０５〜２０７頁）、ＷＯ２００４／０５３０７９（請求項１２）、ＷＯ２００３／００４９８９（請求項１）、ＷＯ２００２／７１９２８（２３３〜２３４、４５２〜４５３頁）、ＷＯ０１１６３１８。
【０１８５】
（２４）ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原前駆体、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＪ２９７４３６）Ｒｅｉｔｅｒ  Ｒ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９５，１７３５−１７４０，１９９８、Ｇｕ  Ｚ．，ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ１９，１２８８−１２９６，２０００、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．（２０００）２７５（３）：７８３−７８８、ＷＯ２００４／０２２７０９、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、ＵＳ２００４／０１８５５３（請求項１７）、ＷＯ２００３／００８５３７（請求項１）、ＷＯ２００２／８１６４６（請求項１、１６４頁）、ＷＯ２００３／００３９０６（請求項１０、２８８頁）、ＷＯ２００１／４０３０９（実施例１、図１７）、ＵＳ２００１／０５５７５１（実施例１、図１ｂ）、ＷＯ２０００／３２７５２（請求項１８、図１）、ＷＯ９８５１８０５（請求項１７、９７頁）、ＷＯ９８５１８２４（請求項１０、９４頁）、ＷＯ９８４０４０３（請求項２、図１Ｂ）、受託番号：Ｏ４３６５３、ＥＭＢＬ、ＡＦ０４３４９８、ＡＡＣ３９６０７．１。
【０１８６】
（２５）ＧＥＤＡ（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＹ２６０７６３）、ＡＡＰ１４９５４脂肪腫ＨＭＧＩＣ融合パートナー様タンパク質／ｐｉｄ＝ＡＡＰ１４９５４．１−Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ種：Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）ＷＯ２００３／０５４１５２（請求項２０）、ＷＯ２００３／０００８４２（請求項１）、ＷＯ２００３／０２３０１３（実施例３、請求項２０）、ＵＳ２００３／１９４７０４（請求項４５）、相互参照：ＧＩ：３０１０２４４９、ＡＡＰ１４９５４．１、ＡＹ２６０７６３＿１。
【０１８７】
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ１１６４５６）、ＢＡＦＦ受容体／ｐｉｄ＝ＮＰ＿４４３１７７．１−Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２９３（５５３７），２１０８−２１１１（２００１）、ＷＯ２００４／０５８３０９、ＷＯ２００４／０１１６１１、ＷＯ２００３／０４５４２２（実施例、３２〜３３頁）、ＷＯ２００３／０１４２９４（請求項３５、図６Ｂ）、ＷＯ２００３／０３５８４６（請求項７０、６１５〜６１６頁）、ＷＯ２００２／９４８５２（Ｃｏｌ１３６〜１３７）、ＷＯ２００２／３８７６６（請求項３、１３３頁）、ＷＯ２００２／２４９０９（実施例３、図３）、相互参照：ＭＩＭ：６０６２６９、ＮＰ＿４４３１７７．１、ＮＭ＿０５２９４５＿１、ＡＦ１３２６００。
【０１８８】
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム、ＢＬ−ＣＡＭ、Ｌｙｂ−８、Ｌｙｂ８、ＳＩＧＬＥＣ−２、ＦＬＪ２２８１４、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＫ０２６４６７）、Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１３７−１４６、ＷＯ２００３／０７２０３６（請求項１、図１）、相互参照：ＭＩＭ：１０７２６６、ＮＰ＿００１７６２．１、ＮＭ＿００１７７１＿１。
【０１８９】
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９a、免疫グロブリン関連アルファ、Ｉｇベータ（ＣＤ７９Ｂ）と共有結合により相互作用し、ＩｇＭ分子と表面上で複合体を形成し、Ｂ細胞分化に関与するシグナルを伝達するＢ細胞特異的タンパク質）、ｐＩ：４．８４、分子量：２５０２８、ＴＭ：２［Ｐ］遺伝子染色体：１９ｑ１３．２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１７７４．１０）ＷＯ２００３／０８８８０８、ＵＳ２００３／０２２８３１９、ＷＯ２００３／０６２４０１（請求項９）、ＵＳ２００２／１５０５７３（請求項４、１３〜１４頁）、ＷＯ９９５８６５８（請求項１３、図１６）、ＷＯ９２０７５７４（図１）、ＵＳ５６４４０３３、Ｈａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５２６−１５３１、Ｍｕｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２：１６２１−１６２５、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ４０（４）：２８７−２９５、Ｐｒｅｕｄ’ｈｏｍｍｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９０（１）：１４１−１４６、Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（２）６３３−６３７、Ｓａｋａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）ＥＭＢＯＪ．７（１１）：３４５７−３４６４。
【０１９０】
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１、ＣＸＣＬ１３ケモカインによって活性化され、リンパ球移動及び体液性防御において機能し、ＨＩＶ−２感染症、ならびに恐らく、ＡＩＤＳ、リンパ腫、骨髄腫、及び白血病の発症に役割を果たすＧタンパク質共役型受容体）、３７２ａａ，ｐＩ：８．５４分子量：４１９５９ＴＭ：７［Ｐ］遺伝子染色体：１１ｑ２３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１７０７．１）ＷＯ２００４／０４００００、ＷＯ２００４／０１５４２６、ＵＳ２００３／１０５２９２（実施例２）、ＵＳ６５５５３３９（実施例２）、ＷＯ２００２／６１０８７（図１）、ＷＯ２００１／５７１８８（請求項２０、２６９頁）、ＷＯ２００１／７２８３０（１２〜１３頁）、ＷＯ２０００／２２１２９（実施例１、１５２〜１５３頁、実施例２、２５４〜２５６頁）、ＷＯ９９２８４６８（請求項１、３８頁）、ＵＳ５４４００２１（実施例２、ｃｏｌ４９〜５２）、ＷＯ９４２８９３１（５６〜５８頁）、ＷＯ９２１７４９７（請求項７、図５）、Ｄｏｂｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：２７９５−２７９９、Ｂａｒｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０９：７７３−７７９。
【０１９１】
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ペプチドに結合し、ＣＤ４＋Ｔリンパ球にそれらを提示する、ＭＨＣクラスＩＩ分子のベータサブユニット（Ｉａ抗原））、２７３ａａ、ｐＩ：６．５６、分子量：３０８２０ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：６ｐ２１．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００２１１１．１）Ｔｏｎｎｅｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）ＥＭＢＯＪ．４（１１）：２８３９−２８４７、Ｊｏｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ２９（６）：４１１−４１３、Ｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２８：４３３−４４１、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ９９：１６８９９−１６９０３、Ｓｅｒｖｅｎｉｕｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：８７５９−８７６６、Ｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５５：１−１３、Ｎａｒｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ５９：５１２−５１９、ＷＯ９９５８６５８（請求項１３、図１５）、ＵＳ６１５３４０８（３５〜３８欄）、ＵＳ５９７６５５１（１６８〜１７０欄）、ＵＳ６０１１１４６（１４５〜１４６欄）、Ｋａｓａｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ３０（１）：６６−６８、Ｌａｒｈａｍｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０（２６）：１４１１１−１４１１９。
【０１９２】
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型イオンチャネル５、シナプス伝達及び神経発生に関与し得る、細胞外ＡＴＰによって開閉されるイオンチャネル、欠損すると特発性の排尿筋不安定の病態生理に寄与し得る）、４２２ａａ）、ｐＩ：７．６３、分子量：４７２０６、ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１７ｐ１３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００２５５２．２）Ｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．４１８（１−２）：１９５−１９９、ＷＯ２００４／０４７７４９、ＷＯ２００３／０７２０３５（請求項１０）、Ｔｏｕｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１０：１６５−１７３、ＷＯ２００２／２２６６０（請求項２０）、ＷＯ２００３／０９３４４４（請求項１）、ＷＯ２００３／０８７７６８（請求項１）、ＷＯ２００３／０２９２７７（８２頁）。
【０１９３】
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  Ｆｕｌｌ  ｍａｅａｉｔｙ．．．ｔａｆｒｆｐｄ（１．．３５９；３５９ａａ）、ｐＩ：８．６６、分子量：４０２２５ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：９ｐ１３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１７７３．１）ＷＯ２００４／０４２３４６（請求項６５）、ＷＯ２００３／０２６４９３（５１〜５２、５７〜５８頁）、ＷＯ２０００／７５６５５（１０５〜１０６頁）、Ｖｏｎ  Ｈｏｅｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４（１２）：４８７０−４８７７、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ９９：１６８９９−１６９０３。
【０１９４】
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチ反復（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質、Ｂ細胞の活性化及びアポトーシスを制御し、機能喪失は、全身性エリテマトーデスを有する患者における疾患活性の増加に関連する）、６６１ａａ、ｐＩ：６．２０、分子量：７４１４７、ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：５ｑ１２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５５７３．１）ＵＳ２００２／１９３５６７、ＷＯ９７０７１９８（請求項１１、３９〜４２頁）、Ｍｉｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ３８（３）：２９９−３０４、Ｍｉｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｂｌｏｏｄ９２：２８１５−２８２２、ＷＯ２００３／０８３０４７、ＷＯ９７４４４５２（請求項８、５７〜６１頁）、ＷＯ２０００／１２１３０（２４〜２６頁）。
【０１９５】
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１、Ｃ２型Ｉｇ様ドメイン及びＩＴＡＭドメインを含有する免疫グロブリンＦｃドメインの推定上の受容体は、Ｂ−リンパ球分化において役割を有し得る）、４２９ａａ、ｐＩ：５．２８、分子量：４６９２５、ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１ｑ２１−１ｑ２２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿４４３１７０．１）ＷＯ２００３／０７７８３６、ＷＯ２００１／３８４９０（請求項６、図１８Ｅ−１〜１８−Ｅ−２）、Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ９８（１７）：９７７２−９７７７、ＷＯ２００３／０８９６２４（請求項８）、ＥＰ１３４７０４６（請求項１）、ＷＯ２００３／０８９６２４（請求項７）。
【０１９６】
（３５）ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２、Ｂ細胞の成長及びリンパ腫形成に潜在的な役割を有する推定上の免疫受容体、転座による遺伝子の制御解除が一部のＢ細胞悪性腫瘍で生じる）、９７７ａａ、ｐＩ：６．８８分子量：１０６４６８ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１ｑ２１、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｈｕｍａｎ：ＡＦ３４３６６２、ＡＦ３４３６６３、ＡＦ３４３６６４、ＡＦ３４３６６５、ＡＦ３６９７９４、ＡＦ３９７４５３、ＡＫ０９０４２３、ＡＫ０９０４７５、ＡＬ８３４１８７、ＡＹ３５８０８５、Ｍｏｕｓｅ：ＡＫ０８９７５６、ＡＹ１５８０９０、ＡＹ５０６５５８、ＮＰ＿１１２５７１．１。ＷＯ２００３／０２４３９２（請求項２、図９７）、Ｎａｋａｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２７７（１）：１２４−１２７、ＷＯ２００３／０７７８３６、ＷＯ２００１／３８４９０（請求項３、図１８Ｂ−１〜１８Ｂ−２）。
【０１９７】
（３６）ＴＥＮＢ２（ＴＭＥＦＦ２、トモレグリン、ＴＰＥＦ、ＨＰＰ１、ＴＲ、推定上の膜貫通プロテオグリカン、成長因子のＥＧＦ／ヘレグリンファミリー及びフォリスタチンに関連する）、３７４ａａ、ＮＣＢＩ受託番号：ＡＡＤ５５７７６、ＡＡＦ９１３９７、ＡＡＧ４９４５１、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０５７２７６、ＮＣＢＩ遺伝子：２３６７１、ＯＭＩＭ：６０５７３４、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  Ｑ９ＵＩＫ５、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ１７９２７４、ＡＹ３５８９０７、ＣＡＦ８５７２３、ＣＱ７８２４３６ＷＯ２００４／０７４３２０（配列番号８１０）、ＪＰ２００４／１１３１５１（配列番号２、４、８）、ＷＯ２００３／０４２６６１（配列番号５８０）、ＷＯ２００３／００９８１４（配列番号４１１）、ＥＰ１２９５９４４（６９〜７０頁）、ＷＯ２００２／３０２６８（３２９頁）、ＷＯ２００１／９０３０４（配列番号２７０６）、ＵＳ２００４／２４９１３０、ＵＳ２００４／０２２７２７、ＷＯ２００４／０６３３５５、ＵＳ２００４／１９７３２５、ＵＳ２００３／２３２３５０、ＵＳ２００４／００５５６３、ＵＳ２００３／１２４５７９、Ｈｏｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ６７：１４６−１５２、Ｕｃｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２６６：５９３−６０２、Ｌｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：４９０７−１２、Ｇｌｙｎｎｅ−Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．Ｏｃｔ１５；９４（２）：１７８−８４。
【０１９８】
（３７）ＰＭＥＬ１７（ｓｉｌｖｅｒ相同体、ＳＩＬＶ、Ｄ１２Ｓ５３Ｅ、ＰＭＥＬ１７、ＳＩ、ＳＩＬ）、ＭＥ２０、ｇｐ１００）ＢＣ００１４１４、ＢＴ００７２０２、Ｍ３２２９５、Ｍ７７３４８、ＮＭ＿００６９２８、ＭｃＧｌｉｎｃｈｅｙ，Ｒ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０６（３３），１３７３１−１３７３６、Ｋｕｍｍｅｒ，Ｍ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８４（４），２２９６−２３０６。
【０１９９】
（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様ドメイン及び２つのフォリスタチン様ドメイン１を有する膜貫通タンパク質１、トモレグリン−１）、Ｈ７３６５、Ｃ９ｏｒｆ２、Ｃ９ＯＲＦ２、Ｕ１９８７８、Ｘ８３９６１、ＮＭ＿０８０６５５、ＮＭ＿００３６９２、Ｈａｒｍｓ，Ｐ．Ｗ．（２００３）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１７（２１），２６２４−２６２９、Ｇｅｒｙ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ２２（１８）：２７２３−２７２７。
【０２００】
（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１、ＧＦＲＡ１、ＧＤＮＦＲ、ＧＤＮＦＲＡ、ＲＥＴＬ１、ＴＲＮＲ１、ＲＥＴ１Ｌ、ＧＤＮＦＲ−アルファ１、ＧＦＲ−ＡＬＰＨＡ−１）、Ｕ９５８４７、ＢＣ０１４９６２、ＮＭ＿１４５７９３ＮＭ＿００５２６４、Ｋｉｍ，Ｍ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２９（８），２２６４−２２７７、Ｔｒｅａｎｏｒ，Ｊ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ３８２（６５８６）：８０−８３。
【０２０１】
（４０）Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ、Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）、ＮＰ＿００２３３７．１、ＮＭ＿００２３４６．２、ｄｅ  Ｎｏｏｉｊ−ｖａｎ  Ｄａｌｅｎ，Ａ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ１０３（６），７６８−７７４、Ｚａｍｍｉｔ，Ｄ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２２（３）：９４６−９５２。
【０２０２】
（４１）ＴＭＥＭ４６（ｓｈｉｓａ相同体２（Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｌａｅｖｉｓ）、ＳＨＩＳＡ２）、ＮＰ＿００１００７５３９．１、ＮＭ＿００１００７５３８．１、Ｆｕｒｕｓｈｉｍａ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．３０６（２），４８０−４９２、Ｃｌａｒｋ，Ｈ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０。
【０２０３】
（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ、Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）、ＮＰ＿０６７０７９．２、ＮＭ＿０２１２４６．２、Ｍａｌｌｙａ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ８０（１）：１１３−１２３、Ｒｉｂａｓ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３（１）：２７８−２８７。
【０２０４】
（４３）ＬＧＲ５（ロイシンリッチ反復含有Ｇタンパク質共役型受容体５、ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）、ＮＰ＿００３６５８．１、ＮＭ＿００３６６７．２、Ｓａｌａｎｔｉ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ａｍ．Ｊ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１７０（５）：５３７−５４５、Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ３７（３）：５２８−５３３。
【０２０５】
（４４）ＲＥＴ（ｒｅｔがん原遺伝子、ＭＥＮ２Ａ、ＨＳＣＲ１、ＭＥＮ２Ｂ、ＭＴＣ１、ＰＴＣ、ＣＤＨＦ１２、Ｈｓ．１６８１１４、ＲＥＴ５１、ＲＥＴ−ＥＬＥ１）、ＮＰ＿０６６１２４．１、ＮＭ＿０２０９７５．４、Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ．１００（１０）：１８９５−１９０１、Ｎａｒｉｔａ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ２８（３４）：３０５８−３０６８。
【０２０６】
（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ、ＬＹ６Ｋ、ＨＳＪ００１３４８、ＦＬＪ３５２２６）、ＮＰ＿０５９９９７．３、ＮＭ＿０１７５２７．３、Ｉｓｈｉｋａｗａ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６７（２４）：１１６０１−１１６１１、ｄｅ  Ｎｏｏｉｊ−ｖａｎ  Ｄａｌｅｎ，Ａ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ１０３（６）：７６８−７７４。
【０２０７】
（４６）ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質共役型受容体１９、Ｍｍ．４７８７）、ＮＰ＿００６１３４．１、ＮＭ＿００６１４３．２、Ｍｏｎｔｐｅｔｉｔ，Ａ．ａｎｄ  Ｓｉｎｎｅｔｔ，Ｄ．（１９９９）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１０５（１−２）：１６２−１６４、Ｏ’Ｄｏｗｄ，Ｂ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３９４（３）：３２５−３２９。
【０２０８】
（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＧＰＲ５４、ＨＯＴ７Ｔ１７５、ＡＸＯＲ１２）、ＮＰ＿１１５９４０．２、ＮＭ＿０３２５５１．４、Ｎａｖｅｎｏｔ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７５（６）：１３００−１３０６、Ｈａｔａ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２９（２）：６１７−６２３。
【０２０９】
（４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータヒドロキシラーゼドメイン含有１、ＬＯＣ２５３９８２）、ＮＰ＿８５９０６９．２、ＮＭ＿１８１７１８．３、Ｇｅｒｈａｒｄ，Ｄ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１４（１０Ｂ）：２１２１−２１２７。
【０２１０】
（４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ、ＯＣＡＩＡ、ＯＣＡ１Ａ、チロシナーゼ、ＳＨＥＰ３）、ＮＰ＿０００３６３．１、ＮＭ＿０００３７２．４、Ｂｉｓｈｏｐ，Ｄ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．４１（８）：９２０−９２５、Ｎａｎ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ１２５（４）：９０９−９１７。
【０２１１】
（５０）ＴＭＥＭ１１８（ｒｉｎｇフィンガータンパク質、膜貫通２、ＲＮＦＴ２、ＦＬＪ１４６２７）、ＮＰ＿００１１０３３７３．１、ＮＭ＿００１１０９９０３．１、Ｃｌａｒｋ，Ｈ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０、Ｓｃｈｅｒｅｒ，Ｓ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｎａｔｕｒｅ４４０（７０８２）：３４６−３５１。
【０２１２】
（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質結合型受容体１７２Ａ、ＧＰＣＲ４１、ＦＬＪ１１８５６、Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）、ＮＰ＿０７８８０７．１、ＮＭ＿０２４５３１．３、Ｅｒｉｃｓｓｏｎ，Ｔ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１００（１１）：６７５９−６７６４、Ｔａｋｅｄａ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．５２０（１−３）：９７−１０１。
【０２１３】
（５２）シアル酸に結合する免疫グロブリン様レクチンファミリーのメンバーであるＣＤ３３は、６７ｋＤａのグリコシル化膜貫通タンパク質である。ＣＤ３３は、拘束された骨髄単球性前駆細胞及び赤血球前駆細胞に加えて、ほとんどの骨髄性白血病細胞及び単球性白血病細胞上で発現される。これは、最初期の多能性幹細胞、成熟顆粒球、リンパ系細胞、または非造血系細胞には見られない（Ｓａｂｂａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７５：７５６−５６、Ａｎｄｒｅｗｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｂｌｏｏｄ６８：１０３０−５）。ＣＤ３３は、その細胞質尾部に２つのチロシン残基を含有し、これらの各々に、多くの阻害性受容体に見られる免疫受容体チロシン系阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）に類似する疎水性残基が続いている。
【０２１４】
（５３）ＣＬＬ−１（ＣＬＥＣ１２Ａ、ＭＩＣＬ、及びＤＣＡＬ２）は、Ｃ型レクチン／Ｃ型レクチン様ドメイン（ＣＴＬ／ＣＴＬＤ）スーパーファミリーのメンバーをコードする。このファミリーのメンバーは、共通のタンパク質折り畳みを共有し、細胞接着、細胞間シグナル伝達、糖タンパク質代謝回転、ならびに炎症及び免疫応答における役割などの多様な機能を有する。この遺伝子によってコードされるタンパク質は、顆粒球及び単球の機能の負の制御因子である。この遺伝子のいくつかの代替的なスプライス転写物バリアントが記載されているが、これらのバリアントのうちのいくつかに関しては完全長の性質が決定されていない。この遺伝子は、染色体１２ｐ１３上のナチュラルキラー遺伝子複合体領域内の他のＣＴＬ／ＣＴＬＤスーパーファミリーメンバーに緊密に連結している（Ｄｒｉｃｋａｍｅｒ  Ｋ（１９９９）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．９（５）：５８５−９０、ｖａｎ  Ｒｈｅｎｅｎ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ１１０（７）：２６５９−６６、Ｃｈｅｎ  ＣＨ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｂｌｏｏｄ１０７（４）：１４５９−６７、Ｍａｒｓｈａｌｌ  ＡＳ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６（８）：２１５９−６９、Ｂａｋｋｅｒ  ＡＢ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４（２２）：８４４３−５０、Ｍａｒｓｈａｌｌ  ＡＳ，，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（１５）：１４７９２−８０２）。ＣＬＬ−１は、単一のＣ型レクチン様ドメイン（カルシウムまたは糖類のいずれにも結合することが予測されていない）、ストーク領域、膜貫通ドメイン、及びＩＴＩＭモチーフを含有する短い細胞質尾部を含む、ＩＩ型膜貫通受容体であることが示されている。
【０２１５】
本開示の抗体の実施形態のいずれにおいても、抗体は、ヒト化されている。一実施形態において、抗体は、本開示の実施形態のいずれかにおけるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、以下の変異のうちのいずれか１つを含む、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。
【０２１６】
別の実施形態において、抗体は、本明細書に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨと、本明細書に提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬとを含む。
【０２１７】
本開示のさらなる一実施形態において、本明細書の実施形態のいずれかに従う抗体は、ヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施形態において、抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。いくつかの特定の実施形態において、抗体は、抗ＨＥＲ２、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗Ｎａｐｉ２ｂ、及び抗ＣＬＬ−１から選択される。
【０２１８】
さらなる一実施形態において、本明細書の実施形態のいずれかに従う抗体は、本明細書に記載される特徴のうちのいずれかを、単独で、または組み合わせて組み込むことができる。
【０２１９】
Ｂ．抗体親和性
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下の解離定数（Ｋｄ）を有し、任意に、１０−１３Ｍ以下である（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）。
【０２２０】
一実施形態において、Ｋｄは、以下のアッセイによって説明されるように、対象となる抗体のＦａｂバージョン及びその抗原によって実行される放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、Ｆａｂを、未標識抗原の一連の滴定の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原と平衡化し、次いで抗Ｆａｂ抗体コーティングプレートと結合した抗原を捕捉することによって、測定される（例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい）。アッセイのための条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸塩（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍｌの捕捉用抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、続いて、室温（約２３℃）で２〜５時間、ＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンによってブロッキングする。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ番号＃２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭ［１２５Ｉ］−抗原を、目的とするＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）の抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ−１２の評価と一致する）。次に、目的とするＦａｂを一晩インキュベートするが、このインキュベーションは、平衡が達成されることを確実にするために、より長い期間（例えば、約６５時間）継続し得る。その後、混合物を、室温でのインキュベーション（例えば、１時間）のため、捕捉プレートに移す。次いで、溶液を除去し、プレートをＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）を付加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）上で１０分間、計数する。２０％以下の最大結合を付与する各Ｆａｂの濃度を競合結合アッセイにおける使用のために選択する。
【０２２１】
別の実施形態に従うと、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００，ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−Ｔ２００、またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用する表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、２５℃で、約１０応答単位（ＲＵ）で固定化された抗原ＣＭ５チップによって測定される。簡潔には、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、供給業者の指示に従って、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗原を１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍＬ（約０．２μＭ）になるまで、及び／またはＨＢＳ−Ｐ（０．０１ＭのＨｅｐｅｓ（ｐＨ７．４）、０．１５ＭのＮａＣｌ、０．００５％の界面活性剤Ｐ２０）で希釈した後に、５μＬ／分及び／または３０μｌ／分の流量で注入して、およそ１０の応答単位（ＲＵ）の共役タンパク質を達成する。抗原の注射に続いて、１Ｍのエタノールアミンを注射して、未反応群をブロッキングする。動態測定のために、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を、２５℃の０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を有するＰＢＳ中約２５μＬ／分の流量で注入する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、会合センサグラム及び解離センサグラムを同時に適合することによって、単純１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して計算する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として計算される。例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい。本明細書に記載される表面プラズモン共鳴アッセイによる会合速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、会合速度は、ストップフローを備えた分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または撹拌キュベットを有する８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計で測定される場合に、増加する抗原濃度の存在下で、２５℃で、ＰＢＳ中２０ｎＭの抗−抗原抗体（Ｆａｂ形態）（ｐＨ７．２）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または減少を測定する蛍光消光技術を使用して決定することができる。
【０２２２】
Ｃ．抗体断片
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに本明細書に記載される他の断片が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の抗体フラグメントの概説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。ｓｃＦｖの概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈuｎ，ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたく、ＷＯ９３／１６１８５ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加したインビボ半減期を有する、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
【０２２３】
ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、及びＨｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８（１９９３）においてより十分に記載されている。トリアボディ及びテトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。
【０２２４】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部、または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部を含む、抗体断片である。ある特定の実施形態において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照されたい）。
【０２２５】
抗体断片は、本明細書に記載の、無傷抗体のタンパク質消化、ならびに組換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはファージ）による産生を含むが、これらに限定されない、種々の技術によって作製され得る。
【０２２６】
Ｄ．キメラ抗体及びヒト化抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または非ヒト霊長類、例えばサルに由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスから変化した「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体には、その抗原結合断片が含まれる。
【０２２７】
ある特定の実施形態において、キメラ抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、非ヒト親抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減させるために、ヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはその一部）が非ヒト抗体に由来し、及びＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列に由来する１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意選択で、ヒト定常領域の少なくとも一部も含むことになる。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体中のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を復元または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
【０２２８】
ヒト化抗体及びそれらの作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に概説され、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３−３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：２５−３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）グラフトについて記載）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「表面再構成」について記載）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」について記載）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングへの「誘導選択」アプローチについて記載）にさらに記載されている。
【０２２９】
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域は、「ベスト−フィット」方法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖可変領域または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）、ならびにＦＲライブラリのスクリーニングから得られるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２３０】
Ｅ．ヒト抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の種々の技法を使用して産生することができる。ヒト抗体は、概して、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載されている。
【０２３１】
ヒト抗体は、抗原投与に応答して、無傷ヒト抗体またはヒト可変領域を有する無傷抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製され得る。かかる動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、または染色体外に存在するかもしくは動物の染色体内にランダムに組み込まれているヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有する。かかるトランスジェニックマウスにおいて、内因性免疫グロブリン遺伝子座は一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照されたい。例えば、米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載）、米国特許第５，７７０，４２９号（ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載）、米国特許第７，０４１，８７０号（Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載）、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号（ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載）も参照されたい。かかる動物により生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによりさらに修飾され得る。
【０２３２】
ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によっても作製され得る。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が説明されている。（例えば、ＫｏｚｂｏｒＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい。）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成されるヒト抗体についても、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生について記載）及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマについて記載）に記載されるものが挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）については、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５：９１（２００５）にも記載されている。
【０２３３】
ヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても生成され得る。次いで、かかる可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わせられ得る。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技術が、本明細書に記載される。
【０２３４】
Ｆ．ライブラリ由来抗体
本開示の抗体は、コンビナトリアルライブラリを所望される活性（複数可）を有する抗体についてスクリーニングすることによって、単離することができる。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、所望の結合特性を保有する抗体に関してかかるライブラリをスクリーニングするための様々な方法が当該技術分野で既知である。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ１７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説され、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）にさらに記載されている。
【０２３５】
ある特定のファージ提示法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別個にクローニングされ、ファージライブラリ内で無作為に組み換えられ、これがその後、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングされ得る。ファージは典型的には、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片のいずれかとして抗体断片をディスプレイする。免疫化源由来のライブラリは、ハイブリドーマの構築を必要とすることなく、高親和性抗体を免疫原に提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載されるように、ナイーブレパートリーは、（例えば、ヒトから）クローニングされて、いかなる免疫化も伴わずに、幅広い非自己抗原及び自己抗原に対する抗体の単一源を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されるように、幹細胞からの再編成されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して高度に可変的なＣＤＲ３領域をコードし、インビトロでの再編成を達成することによってナイーブライブラリを合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリを説明している特許公開には、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
【０２３６】
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体または抗体断片は、本明細書でヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
【０２３７】
Ｇ．多重特異性抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。「多重特異性抗体」という用語は、最も広義に使用され、多重エピトープ特異性を有する（すなわち、１つの生物学的分子上の２つもしくはそれ以上の異なるエピトープに特異的に結合することができるか、または２つもしくはそれ以上の異なる生物学的分子上のエピトープに特異的に結合することができる）抗原結合ドメインを含む抗体を具体的に網羅する。いくつかの実施形態において、多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、多重特異性抗体（二重特異性抗体など）の抗原結合ドメインは、２つのＶＨ／ＶＬ単位を含み、第１のＶＨ／ＶＬ単位は、第１のエピトープに特異的に結合し、第２のＶＨ／ＶＬ単位は、第２のエピトープに特異的に結合し、各ＶＨ／ＶＬ単位は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。そのような多重特異性抗体としては、完全長抗体、２つ以上のＶＬ及びＶＨドメインを有する抗体、抗体断片（Ｆａｂ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、二重特異性ダイアボディ、及びトリアボディなど）、共有結合的または非共有結合的に連結されている抗体断片が挙げられるが、これらに限定されない。重鎖可変領域の少なくとも一部分及び／または軽鎖可変領域の少なくとも一部分をさらに含むＶＨ／ＶＬ単位はまた、「アーム」または「ヘミマー」または「半抗体」とも称され得る。いくつかの実施形態において、ヘミマーは、第２のヘミマーとの分子内ジスルフィド結合が形成されることを可能にするのに十分な重鎖可変領域の一部分を含む。いくつかの実施形態において、ヘミマーは、例えば、相補的ホール変異またはノブ変異を含む第２のヘミマーまたは半抗体とのヘテロ二量体化を可能にする、ノブ変異またはホール変異を含む。ノブ変異及びホール変異は、本明細書においてさらに考察される。
【０２３８】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される多重特異性抗体は、二重特異性抗体であり得る。「二重特異性抗体」という用語は、最も広義に使用され、１つの生物学的分子上の２つの異なるエピトープに特異的に結合することができるか、または２つの異なる生物学的分子上のエピトープに特異的に結合することができる抗原結合ドメインを含む多重特異性抗体を網羅する。二重特異性抗体はまた、本明細書において、「二重特異性」を有するもの、または「二重特異性」であるとも称される。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製され得る。本明細書で使用される場合、「二重パラトピック抗体」という用語は、第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインが、同じ抗原分子上の２つの異なるエピトープに結合する二重特異性抗体を指すか、またはそれは、２つの異なる抗原分子上のエピトープに結合してもよい。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、二重パラトピック抗体の第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、１つかつ同一の抗原分子内の２つのエピトープに結合してもよい（分子内結合）。例えば、二重パラトピック抗体の第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、同じ抗体分子上の２つの異なるエピトープに結合してもよい。ある特定の実施形態において、二重パラトピック抗体が結合する２つの異なるエピトープは、通常１つの単一特異性抗体（例えば、従来の抗体など）または１つの免疫グロブリンの単一可変ドメインに同時には結合しないエピトープである。
【０２４０】
いくつかの実施形態において、二重パラトピック抗体の第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、２つの別個の抗原分子内に位置するエピトープに結合してもよい。
【０２４１】
多重特異性抗体を作製するための技術としては、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ３０５：５３７（１９８３））、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯＪ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、ならびに「ノブインホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号）、ＷＯ２００９／０８９００４、ＵＳ２００９／０１８２１２７、ＵＳ２０１１／０２８７００９、Ｍａｒｖｉｎ  ａｎｄ  Ｚｈｕ，Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．Ｓｉｎ．（２００５）２６（６）：６４９−６５８、及びＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ（２００５）Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．，２６：１−９を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、「ノブイントゥホール」または「ＫｎＨ」技術という用語は、２つのポリペプチドを、それらが相互作用する界面で一方のポリペプチドに隆起（ノブ）を導入し、他方のポリペプチドに空洞（ホール）を導入することによって、インビトロまたはインビボでの対合を指向する技術を指す。例えば、ＫｎＨは、抗体のＦｃ：Ｆｃ結合界面、ＣＬ：ＣＨ１界面、またはＶＨ／ＶＬ界面に導入されている（例えば、ＵＳ２０１１／０２８７００９、ＵＳ２００７／０１７８５５２、ＷＯ９６／０２７０１１、ＷＯ９８／０５０４３１、及びＺｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ６：７８１−７８８を参照されたい）。いくつかの実施形態において、ＫｎＨにより、多重特異性抗体の製造中に２つの異なる重鎖の対合が駆動される。例えば、それらのＦｃ領域内にＫｎＨを有する多重特異性抗体は、各Ｆｃ領域に連結された単一可変ドメインをさらに含み得るか、または類似のもしくは異なる軽鎖可変ドメインと対合する異なる重鎖可変ドメインをさらに含み得る。ＫｎＨ技術を使用して、２つの異なる受容体細胞外ドメインをともに、または異なる標的認識配列を含む（例えば、アフィボディ、ペプチボディ、及び他のＦｃ融合を含む）任意の他のポリペプチド配列を対合させることもできる。
【０２４２】
本明細書で使用される「ノブ変異」という用語は、ポリペプチドが別のポリペプチドと相互作用する界面で隆起（ノブ）をポリペプチドに導入する変異を指す。いくつかの実施形態において、他のポリペプチドは、ホール変異を有する。
【０２４３】
「隆起」は、第１のポリペプチドの界面から突出し、したがって、隣接界面（すなわち、第２のポリペプチドの界面）の補償空洞内に位置付け可能となることで、例えば、ヘテロ多量体を安定させ、それによりホモ多量体形成よりもヘテロ多量体形成が好都合になる、少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。隆起は、元の界面に存在し得るか、または合成的に（例えば、界面をコードする核酸を改変することによって）導入され得る。いくつかの実施形態において、第１のポリペプチドの界面をコードする核酸は、隆起をコードするように改変される。これを達成するために、第１のポリペプチドの界面の少なくとも１つの「元の」アミノ酸残基をコードする核酸が、元のアミノ酸残基よりも大きい側鎖体積を有する少なくとも１つの「移入」アミノ酸残基をコードする核酸で置き換えられる。２つ以上の元の残基及び対応する移入残基が存在し得ることが理解されるだろう。様々なアミノ残基の側鎖体積は、例えば、ＵＳ２０１１／０２８７００９の表１に示される。「隆起」を導入する変異は、「ノブ変異」と称され得る。
【０２４４】
いくつかの実施形態において、隆起の形成のための移入残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、及びトリプトファン（Ｗ）から選択される天然に存在するアミノ酸残基である。いくつかの実施形態において、移入残基は、トリプトファンまたはチロシンである。いくつかの実施形態において、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、トレオニン、またはバリンなどの隆起の形成のための元の残基は、小さい側鎖体積を有する。
【０２４５】
「空洞」は、第２のポリペプチドの界面から凹んでおり、したがって、隣接する第１のポリペプチドの界面上の対応する隆起を収容する少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。空洞は、元の界面に存在し得るか、または合成的に（例えば、界面をコードする核酸を改変することによって）導入され得る。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドの界面をコードする核酸は、空洞をコードするように改変される。これを達成するために、第２のポリペプチドの界面の少なくとも１つの「元の」アミノ酸残基をコードする核酸が、元のアミノ酸残基よりも小さい側鎖体積を有する少なくとも１つの「移入」アミノ酸残基をコードするＤＮＡで置き換えられる。２つ以上の元の残基及び対応する移入残基が存在し得ることが理解されるだろう。いくつかの実施形態において、空洞の形成のための移入残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、及びバリン（Ｖ）から選択される天然に存在するアミノ酸残基である。いくつかの実施形態において、移入残基は、セリン、アラニン、またはトレオニンである。いくつかの実施形態において、チロシン、アルギニン、フェニルアラニン、またはトリプトファンなどの空洞の形成のための元の残基は、大きい側鎖体積を有する。「空洞」を導入する変異は、「ホール変異」と称され得る。
【０２４６】
隆起は、空洞内で「位置付け可能」であり、これは、それぞれ、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドの界面の隆起及び空洞の空間的位置、ならびに隆起及び空洞の大きさが、界面での第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの正常な会合を著しく乱すことなく隆起が空洞内に位置し得るようなものであることを意味する。Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、及びＴｒｐなどの隆起は典型的には、界面の軸から垂直には延びず、好ましい立体構造を有さず、隆起と対応する空洞との整列は、場合によっては、Ｘ線結晶学または核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって得られるものなどの三次元構造に基づいて隆起／空洞の対をモデル化することに依存し得る。これは、当該技術分野で広く受け入れられている技術を使用して達成され得る。
【０２４７】
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１定常領域内のノブ変異は、Ｔ３６６Ｗである。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖから選択される１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む。
【０２４８】
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４定常領域内のノブ変異は、Ｔ３６６Ｗである。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖから選択される１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む。
【０２４９】
多重特異性抗体はまた、静電ステアリング効果を操作して抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製すること（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）、２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、ＵＳ４６７６９８０及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい）、「ダイアボディ」技術を使用して二重特異性抗体断片を作製すること（Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３））、ならびに一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４））、ならびに例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されている三重特異性抗体を調製することによって作製してもよい。
【０２５０】
「オクトパス抗体」または「二重可変ドメイン免疫グロブリン」（ＤＶＤ）を含む３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体もまた、本明細書に含まれる（ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１、及びＷｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）。
【０２５１】
ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸修飾が、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによりＦｃ領域バリアントが生成され得る。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４Ｆｃ領域）を含み得る。
【０２５２】
特定の実施形態において、本開示は、全てではないが一部のエフェクター機能を有し、それによりインビボでの抗体の半減期が重要であるが、特定のエフェクター機能（例えば補体及びＡＤＣＣなど）が不要または有害である用途にとって望ましい候補となる、抗体バリアントを企図する。インビトロ及び／またはインビボ細胞傷害性アッセイを行って、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／欠乏を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実行して、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（故にＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞がＦｃ（ＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、Ｆｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ、及びＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。対象となる分子のＡＤＣＣ活性を評定するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、ＵＳ５５００３６２（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照されたい）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：１４９９−１５０２（１９８５）、５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いてもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照のこと）。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、または加えて、目的とする分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示される動物モデルにおいて評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイを実行して、抗体がＣ１ｑに結合することができないためにＣＤＣ活性を欠くことを確認することもできる。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイが行われ得る（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ１０１：１０４５−１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ１０３：２７３８−２７４３（２００４））。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期決定もまた、当該技術分野において既知である方法を使用して実行することができる（Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６））。
【０２５３】
低減したエフェクター機能を有する抗体としては、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上の置換を有する抗体が挙げられる（ＵＳ６，７３７，０５６（参照によりその全体が組み込まれる））。そのようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、及び３２７位のうちの２つ以上に置換を有するＦｃ変異体を含む（ＵＳ７３３２５８１（参照によりその全体が組み込まれる））。
【０２５４】
ある特定の実施形態において、野生型ヒトＦｃ領域のＰｒｏ３２９が、グリシンもしくはアルギニン、または、Ｆｃのプロリン３２９とＦｃｇＲＩＩＩのトリプトファン残基Ｔｒｐ８７及びＴｒｐ１１０との間に形成される、Ｆｃ／Ｆｃγ受容体界面内のプロリンサンドイッチを破壊するのに十分に大きなアミノ酸残基で置換される（Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．：Ｎａｔｕｒｅ４０６，２６７−２７３（２０００年７月２０日））。さらなる一実施形態において、Ｆｃバリアント内の少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、またはＰ３３１Ｓであり、さらに別の実施形態において、該少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ、またはヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅである（ＵＳ８９６９５２６（参照によりその全体が組み込まれる））。
【０２５５】
ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域のＦｃ変異体を含み、このポリペプチドは、グリシンで置換されたヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域のＰｒｏ３２９を有し、Ｆｃバリアントは、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ、またはヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅにおいて少なくとも２つのさらなるアミノ酸置換を含み、残基は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番される（米国特許第８，９６９，５２６号、これは参照によりその全体が組み込まれる）。ある特定の実施形態において、Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａの置換を含むポリペプチドは、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＡに対する親和性の低減を示し、野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域を含むポリペプチドによって誘発されるＡＤＣＣの少なくとも２０％にＡＤＣＣを下方調節し、かつ／またはＡＤＣＰを下方調節する（米国特許第８，９６９，５２６号、これは参照によりその全体が組み込まれる）。
【０２５６】
特定の一実施形態において、野生型ヒトＦｃポリペプチドのＦｃバリアントを含むポリペプチドは、三重変異、つまり、Ｐｒｏ３２９位におけるアミノ酸置換、Ｌ２３４Ａ変異、及びＬ２３５Ａ変異（Ｐ３２９／ＬＡＬＡ）を含む（米国特許第８，９６９，５２６号、これは参照によりその全体が組み込まれる）。特定の実施形態において、ポリペプチドは、以下のアミノ酸置換、つまり、Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａを含む。
【０２５７】
ＦｃＲへの結合が改善または低減されたある特定の抗体バリアントが記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたい）。
【０２５８】
ある特定の実施形態において、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／または３３４位（残基のＥＵ番号付け）での置換を有するＦｃ領域を含む。
【０２５９】
いくつかの実施形態において、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、改変（すなわち、改善または縮小のいずれか）したＣ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）をもたらす改変が、Ｆｃ領域内で行われる。
【０２６０】
母体ＩｇＧの胎児への移入に関与する、増加した半減期及び新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合を有する抗体（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）、及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））については、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。それらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する、１つ以上の置換を内部に有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃバリアントは、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上での置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものを含む（米国特許第７，３７１，８２６号）。
【０２６１】
Ｆｃ領域バリアントの他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。
【０２６２】
Ｈ．システイン操作された抗体バリアント
特定の実施形態において、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作された抗体、例えば、「ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態において、置換された残基は、抗体の利用しやすい部位で生じる。それらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基がそれにより抗体の到達可能な部位に位置付けられ、本明細書にさらに記載されるように、それを使用して、抗体を薬物部分にコンジュゲートして、免疫コンジュゲートを作製することができる。ある特定の実施形態において、以下の残基、軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）、軽鎖のＫ１４９（Ｋａｂａｔ番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）のいずれか１つ以上が、システインで置換され得る。システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号で説明されているように生成し得る。
【０２６３】
いくつかの実施形態において、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、以下の表Ａに列挙される重鎖及び軽鎖システイン置換のうちの１つを含む。
2019534238.tif 000054
【０２６４】
他の実施形態において、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、表Ｂに列挙される重鎖システイン置換のうちの１つを含む。
2019534238.tif 000055
【０２６５】
いくつかの他の実施形態において、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、表Ｃに列挙される軽鎖システイン置換のうちの１つを含む。
2019534238.tif 000056
【０２６６】
いくつかの他の実施形態において、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、表Ｄに列挙される重鎖及び軽鎖システイン置換のうちの１つを含む。
2019534238.tif 000057
【０２６７】
がんの治療における本開示の抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）に有用であり得るシステイン操作された抗体としては、細胞表面受容体及び腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に対する抗体が挙げられるが、これらに限定されない。腫瘍関連抗原は、当該技術分野において既知であり、当該技術分野において周知の方法及び情報を使用して抗体を生成する上で使用するために調製され得る。がんの診断及び療法のための有効な細胞標的を発見する試みとして、研究者らは、１つ以上の正常な非がん性細胞（複数可）と比較して、１つ以上の特定の種類（複数可）のがん細胞の表面上で特異的に発現される膜貫通ポリペプチドまたはさもなければ腫瘍関連ポリペプチドを特定しようとした。多くの場合、そのような腫瘍関連ポリペプチドは、非がん性細胞の表面上と比較して、がん細胞の表面上でより豊富に発現される。そのような腫瘍関連細胞表面の抗原ポリペプチドの特定により、抗体に基づく療法を介してがん細胞の破壊のために特異的に標的とする能力が生じた。
【０２６８】
腫瘍関連抗原ＴＡＡの例としては、本明細書に列挙されるＴＡＡ（１）〜（５３）が挙げられるが、これらに限定されない。便宜上、これらの抗原（これら全てが当該技術分野において既知である）に関する情報を本明細書に列挙し、この情報は、名称、別称、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号及び主な参考文献（複数可）に続き、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）の核酸及びタンパク質配列を特定する慣例を含む。ＴＡＡ（１）〜（５３）に対応する核酸及びタンパク質配列は、ＧｅｎＢａｎｋなどの公的データベースにおいて入手可能である。抗体によって標的とされる腫瘍関連抗原としては、引用される参考文献において特定されている配列と比較して、少なくとも約７０％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を保有する全てのアミノ酸配列バリアント及びアイソフォーム、または引用される参考文献中に見出される配列を有するＴＡＡと実質的に同じ生物学的特性もしくは特徴を呈するものが挙げられる。例えば、バリアント配列を有するＴＡＡは一般に、列挙されている対応する配列を有するＴＡＡに特異的に結合する抗体に特異的に結合することができる。本明細書に具体的に引用される参考文献中の配列及び開示は、参照により明示的に組み込まれる。
【０２６９】
ＶＩ．プロドラッグ調製
本開示の範囲内に、ＰＢＤ単量体プロドラッグ及びＰＢＤ二量体プロドラッグの調製のための方法は、本明細書の別の箇所で記載されている。
【０２７０】
ＶＩＩ．リンカー−薬物コンジュゲーション
リンカーのＰＢＤアミンへのコンジュゲーションは、ＷＯ２０１３／０５５９８７、ＷＯ２０１５／０２３３５５、及びＷＯ２０１５／０９５２２７（これらの各々は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）の方法に従って好適に行うことができる。
【０２７１】
いくつかのそのような実施形態において、本明細書の別の箇所で記載される活性化リンカーをＰＢＤ単量体または二量体の溶液と組み合わせて、リンカー−ＰＢＤコンジュゲートを形成する。一般に、１リットル当たり約０．０５〜約１モルのＰＢＤを含む溶液を提供することができる任意の溶媒が好適である。いくつかの実施形態において、溶媒は、ＤＣＭである。いくつかの他のリンカー−ＰＢＤコンジュゲーションの実施形態において、ＰＢＤの溶液、化学量論過剰のトリホスゲン（またはジホスゲンもしくはホスゲン）、塩基（例えば、４−ジメチルアミノピリジン）は、溶媒（例えば、乾燥ＤＣＭ）中で形成される。（本明細書の別の箇所で記載される）アルコール部分を有するリンカー中間体をＰＢＤ溶液と組み合わせて、反応混合物を形成し、これを反応が完了するまで撹拌して、リンカー−ＰＢＤコンジュゲートを含む生成混合物を形成する。反応混合物は、１リットルのＰＢＤ当たり約０．００５モル〜１リットル当たり約０．５モルであり、１当量のＰＢＤ当たり約２〜約１０当量のリンカー中間体、約０．０２〜約０．５当量の塩基を好適に含み得る。反応の完了後、リンカー−ＰＢＤコンジュゲートは、溶媒蒸発などによって単離され、抽出、逆相高圧液体クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、またはフラッシュクロマトグラフィーのうちの１つ以上などの当該技術分野において既知の方法によって精製され得る。
【０２７２】
ＶＩＩＩ．ジスルフィドコンジュゲート化合物の調製
いくつかの実施形態において、本開示の式のジスルフィドコンジュゲート化合物は、
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（１）水を含む、溶媒系、（２）スルフヒドリル部分を有する少なくとも１つのシステインを含む、抗体源、及び（３）以下の式の、化学量論過剰のリンカー−ＰＢＤコンジュゲートの源を含む、反応混合物を形成することによって調製され得る。
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抗体、ＸＬ、Ｒ１、Ｒ２、Ｓｐ、ｎ、及びＤは、本明細書の別の箇所で記載されるとおりである。反応混合物を反応させて、式（ＩＩ）（式中、ｐは、１、２、３、４、５、６、７、または８である）のジスルフィドコンジュゲート化合物を含む混合物を形成する。混合物中の個々のジスルフィドコンジュゲート化合物は、１〜８のｐ値を有してもよく、そのような混合物中のいくつかの抗体分子は、コンジュゲートされていなくてもよいものの（ｐ＝０）、ＰＢＤ当量対抗体当量の比として表される、生成混合物中の複数の形成されたジスルフィドコンジュゲート化合物のＰＢＤ対抗体比は、約１〜約５、約１．５〜約３、約１．５〜約２．５、約１．７〜約２．３、約１．８〜約２．２、または約２である。
【０２７３】
そのような実施形態の様々な実施形態のいずれにおいても、抗体源は、水性緩衝液中の溶液中に提供され得る。いくつかのそのような実施形態において、緩衝液は、好適に、Ｎ−（２−アセトアミド）−アミノエタンスルホン酸（「ＡＣＥＳ」）；酢酸塩；Ｎ−（２−アセトアミド）−イミノ二酢酸（「ＡＤＡ」）；２−アミノエタンスルホン酸、タウリン（「ＡＥＳ」）；２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール（「ＡＭＰ」）；２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール、アメジオール（Ａｍｍｅｄｉｏｌ）（「ＡＭＰＤ」）；Ｎ−（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（「ＡＭＰＳＯ」）；Ｎ，Ｎ−ビス−（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（「ＢＥＳ」）；Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシエチル）−グリシン（「ビシン」）；［ビス−（２−ヒドロキシエチル）−イミノ］−トリス−（ヒドロキシメチルメタン）（「ビス−トリス」）；１，３−ビス［トリス（ヒドロキシメチル）−メチルアミノ］プロパン（「ビス−トリス−プロパン」）；ジメチルアルシン酸（「カコジル酸」）；３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（「ＣＡＰＳＯ」）；シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸（「ＣＨＥＳ」）；クエン酸塩；３−［Ｎ−ビス（ヒドロキシエチル）アミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（「ＤＩＰＳＯ」）；Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−エタンスルホン酸（「ＨＥＰＥＳ」）；Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−３−プロパンスルホン酸（「ＨＥＰＰＳ、ＥＰＰＳ」）；Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（「ＨＥＰＰＳＯ」）；２−（Ｎ−モルホリノ）−エタンスルホン酸（「ＭＥＳ」）；３−（Ｎ−モルホリノ）−プロパンスルホン酸（「ＭＯＰＳ」）；３−（Ｎ−モルホリノ）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（「ＭＯＰＳＯ」）；ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）（「ＰＩＰＥＳ」）；ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）（「ＰＯＰＳＯ」）；コハク酸塩；３−｛［トリス（ヒドロキシメチル）−メチル］−アミノ｝−プロパンスルホン酸（「ＴＡＰＳ」）；３−［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）−メチルアミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（「ＴＡＰＳＯ」）；２−アミノエタンスルホン酸、ＡＥＳ（「タウリン」）；トリエタノールアミン（「ＴＥＡ」）；２−［トリス（ヒドロキシメチル）−メチルアミノ］−エタンスルホン酸（「ＴＥＳ」）；Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）−メチル］−グリシン（「トリシン」）；トリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン（「トリス」）であり得る。いくつかのかかる実施形態において、緩衝液は、コハク酸またはトリスであり得る。緩衝液濃度は、好適に、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約５０ｍＭ、約１００ｍＭ、または約１５０ｎＭ（約５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約５ｍＭ〜約３０ｍＭ、約５ｍＭ〜約２０ｍＭ、約５ｍＭ〜約１０ｍＭ、または約５０ｍＭ〜約１００ｎＭなど）である。緩衝液中の抗体の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬまたはそれ以上であり得る。抗体溶液のｐＨは、好適に、約４〜約８、約４〜約６、または約５である。
【０２７４】
そのような実施形態の様々な実施形態のいずれにおいても、リンカー−ＰＢＤコンジュゲート化合物（「活性化リンカー−ＰＢＤコンジュゲート」）源は、一般に、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、アセトン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコール、エチレングリコール、及びジクロロメタンから選択される少なくとも１つの極性非プロトン溶媒を含む溶媒中に、活性化束縛リンカー−ＰＢＤコンジュゲートを溶解することによって形成され得る。いくつかの実施形態において、溶媒は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド及び／またはジメチルアセトアミドを含むか、主にそれを含むか、またはそれから本質的になる。
【０２７５】
抗体源及び活性化リンカー−ＰＢＤコンジュゲート源を好適に混合して、反応混合物を形成し得る。反応混合物中の抗体濃度は、好適に、約１ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、または約２５ｍｇ／ｍＬ、及びそれらの範囲（約１ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、または約５ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬなど）である。活性化リンカー−ＰＢＤコンジュゲート対抗体の当量比は、好適に、約２：１、約３：１、約５：１、約１０：１、約１５：１、または約２０：１、及びそれらの範囲（約２：１〜約２０：１、約３：１〜約１５：１、約３：１〜約１０：１、または約５：１〜約１０：１など）である。本開示のいくつかの実施形態において、反応混合物溶媒系は、主に水を含む。いくつかの他の実施形態において、反応混合物溶媒系は、一般に、少なくとも７５体積％の本明細書の別の箇所で記載される緩衝液と、約５体積％、約１０体積％、約１５体積％、約２０体積％、約２５体積％、または約３０体積％、及びそれらの範囲（約５体積％〜約３０体積％、約５体積％〜約２０体積％、約５体積％〜約１５体積％、または約１０体積％など）の本明細書の別の箇所で記載される極性非プロトン溶媒と、を含み得る。いくつかの他の実施形態において、反応混合物溶媒系は、一般に、少なくとも５０体積％の本明細書の別の箇所で記載される緩衝液と、約１０体積％〜約５０体積％（約１０体積％、約２０体積％、約３０体積％、約４０体積％、または５０体積％超など）のプロピレングリコールまたはエチレングリコールと、を含み得る。換言すると、反応混合物溶媒系は、約５０体積％、約６０体積％、約７０体積％、７５体積％、約８０体積％、約８５体積％、約９０体積％、または約９５体積％の水から、約９５体積％及びその範囲の水（約５０体積％〜約９５体積％の水、約７５体積％〜約９５体積％の水、約８０体積％〜約９５体積％の水、または約８５体積％〜約９５体積％の水）を含み得る。反応混合物のｐＨは、好適に、約５．０、約５．５、約６．０、約６．５、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５、または約９．０、及びその範囲（約５．０〜約９．０、約５．０〜約９．０、約６．０〜約９．０、約６．５〜約９．０、または約７．０〜約９．０、または約７．５〜約８．５など）である。
【０２７６】
反応混合物を、約１０℃、約１５℃、約２０℃、約２５℃、約３０℃、約３５℃、約４０℃、約４５℃、または約５０℃、及びその範囲（約１０℃〜約５０℃、約１５℃〜約４５℃、約１５℃〜約４０℃、約２０℃〜約４０℃、約２０℃〜約３５℃、または約２０℃〜約３０℃など）で、約０．５時間、約１時間、約４時間、約８時間、約１２時間、約１８時間、約２４時間、約３６時間、約４８時間、及びその範囲（約０．５時間〜約４８時間、または約１時間〜約２４時間など）インキュベートして、式（ＩＩ）のジスルフィドコンジュゲート化合物を含む生成混合物を形成する。
【０２７７】
生成混合物は、ＭＳ／ＬＣによって決定される、少なくとも６０Ａ％、少なくとも６５面積％、少なくとも７０面積％、少なくとも７５面積％、少なくとも８０面積％、少なくとも８５面積％、または少なくとも９０面積％の抗体−リンカー−ＰＢＤコンジュゲートを含み得る。生成混合物は、少なくとも１つの脱離基副生成物種をさらに含み得る。いくつかの実施形態において、ＭＳ／ＬＣによって測定される、形成されたジスルフィドコンジュゲート化合物の面積パーセンテージと比較して、全脱離基副生成物種の面積パーセンテージは、１０面積％未満、５面積％未満、４面積％未満、３面積％未満、２面積％未満、１面積％未満、０．５面積％未満である。抗体の場合、現在までの実験的証拠に基づいて、脱離基副生成物種は、
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と、を含み得、式中、ＸＬは、本明細書の他の箇所で定義されるとおりであり、Ｑは、硫黄連結原子を有しないＸＬ部分を指す。例示的なＸ及び対応するＱを、以下に例示する。
2019534238.tif 000061
【０２７８】
反応混合物は、（ｉ）２つのシステインスルフヒドリル部分の反応によって形成される、少なくとも１つのジスルフィド結合を含む非コンジュゲート抗体単量体種と、（ｉｉ）２つのシステインスルフヒドリル部分の反応によって形成される、少なくとも１つのジスルフィド結合を含む非コンジュゲート抗体二量体種と、（ｉｉｉ）非コンジュゲート抗体単量体種と非コンジュゲート抗体二量体種との組み合わせと、を含む、非コンジュゲート抗体化合物をさらに含み得る。いくつかの実施形態において、ＭＳ／ＬＣによって測定される、形成されたジスルフィドコンジュゲート化合物の面積パーセンテージと比較して、非コンジュゲート抗体化合物の合計濃度は、１０面積％未満、５面積％未満、４面積％未満、３面積％未満、２面積％未満、１面積％未満、０．５面積％未満、０．３面積％未満、０．１面積％未満であるか、または検出不能である。
【０２７９】
ＩＸ．ＰＢＤプロドラッグでの治療方法
本開示のＰＢＤプロドラッグコンジュゲート化合物は、例えば、腫瘍抗原の過剰発現を特徴とする、様々な疾患または障害を治療するために使用され得ることが企図される。例示的な病態または過剰増殖性障害としては、良性または悪性の固形腫瘍、ならびに白血病及びリンパ系腫瘍などの血液疾患が挙げられる。他には、ニューロン性、膠細胞性、星状細胞性、視床下部性、腺性、マクロファージ性、上皮性、間質性、胞胚腔性、炎症性、血管新生性、及び免疫性（自己免疫性を含む）障害が挙げられる。
【０２８０】
一実施形態において、本明細書に提供されるＰＢＤプロドラッグコンジュゲート化合物は、がん細胞の増殖を阻害する方法において使用され、この方法は、抗体または抗体−プロドラッグコンジュゲートの、細胞表面上の腫瘍関連抗原への結合を許容する条件下で、細胞を抗体−プロドラッグコンジュゲートに曝露し、それにより細胞の増殖を阻害することを含む。特定の実施形態において、この方法は、インビトロ方法またはインビボ方法である。さらなる実施形態において、細胞は、リンパ球、リンパ芽球、単球、または骨髄単球細胞である。
【０２８１】
インビトロでの細胞増殖の阻害は、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）から市販されている、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙアッセイを使用してアッセイされてもよい。そのアッセイは、代謝的に活性な細胞を示す、存在するＡＴＰの定量に基づいて、培養物中の生存細胞の数を決定する。Ｃｒｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６０：８１−８８、米国特許第６６０２６７７を参照されたい。アッセイは９６ウェルまたは３８４ウェル形式で実行して、自動化高スループットスクリーニング（ＨＴＳ）にとって扱いやすくしてもよい。Ｃｒｅｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ６：３９８−４０４を参照されたい。アッセイ手順は、単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を培養細胞に直接添加することを伴う。これにより、細胞溶解及びルシフェラーゼ反応によって産生される発光シグナルの生成がもたらされる。発光シグナルは存在するＡＴＰの量に比例し、これは培養物中に存在する生細胞の数に直接比例する。データは、ルミノメーターまたはＣＣＤカメラ画像化デバイスによって記録することができる。発光出力は、相対発光単位（ＲＬＵ）として表される。
【０２８２】
別の実施形態において、医薬品として使用するためのＰＢＤプロドラッグコンジュゲート化合物が提供される。さらなる実施形態において、治療方法において使用するためのＰＢＤプロドラッグコンジュゲート化合物が提供される。ある特定の実施形態において、がんの治療において使用するためのＰＢＤプロドラッグコンジュゲート化合物が提供される。ある特定の実施形態において、本開示は、個体に有効量のＰＢＤプロドラッグコンジュゲート化合物を投与することを含む、個体を治療する方法において使用するためのＰＢＤプロドラッグコンジュゲート化合物を提供する。
【０２８３】
本開示のＰＢＤプロドラッグコンジュゲート化合物は、単独で、または治療における他の薬剤と組み合わせてのいずれかで使用することができる。例えば、本開示の抗体または免疫コンジュゲートは、少なくとも１つの追加の治療剤と同時投与されてもよい。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、アントラサイクリンである。いくつかの実施形態において、アントラサイクリンは、ダウノルビシンまたはイダルビシンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、シタラビンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、クラドリビンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、フルダラビンまたはトポテカンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、５−アザシチジンまたはデシタビンである。
【０２８４】
本明細書に記述されるそのような併用治療法は、併用投与（２つ以上の治療薬が同一または別個の製剤に含まれる）及び個別投与を包含し、個別投与の場合、本開示の組成物の投与は、追加の治療剤及び／またはアジュバントの投与前、投与と同時、及び／または投与後に生じ得る。本開示の化合物はまた、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
【０２８５】
本開示の化合物（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内を含み、局所治療に所望される場合、病巣内投与を含む、任意の好適な手段によって投与され得る。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与を含む。投薬は、部分的には、投与が短時間であるか、または慢性的であるかに応じて、例えば、任意の好適な経路によるもの、例えば、静脈内注射または皮下注射などの注射によるものであり得る。単回または様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むがこれらに限定されない、様々な投薬スケジュールが本明細書で企図される。
【０２８６】
本開示の化合物は、良好な医療行為と一致する様式で、製剤化され、投薬され、投与されるだろう。この背景で検討する因子には、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療従事者に既知である他の因子が含まれる。本開示の化合物、必ずしもそうである必要はないが、任意で、問題の障害を予防または治療するために現在使用されている１つ以上の薬剤とともに製剤化される。有効量のそのような他の薬剤は、製剤中に存在する本開示の化合物の量、障害または治療の種類、及び本明細書で考察される他の要素に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載のものと同じ投薬量で、本明細書記載の投与経路によって、または本明細書に記載の投薬量の約１〜９９％、または適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量及び任意の経路で使用される。
【０２８７】
疾患の予防または治療に関して、本開示の化合物の適切な投薬量は（単独で、または１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、治療される疾患の種類、化合物の種類、疾患の重症度及び経過、化合物が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴、及び化合物への応答、ならびに主治医の裁量に左右される。化合物は、一度に、または一連の治療にわたって患者に好適に投与される。疾患の種類及び重症度によって、例えば、１回以上の別個の投与によるものであれ、連続注入によるものであれ、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）の本開示の化合物が、患者への投与のための初回候補投薬量であり得る。１つの典型的な１日投薬量は、本明細書において言及される要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。数日以上にわたって繰り返される投与に関して、状態に応じて、処置は、疾患の症状の所望される抑制が発生するまで、一般に持続される。化合物の１つの例示的な投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内である。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ（またはこれらの任意の組み合わせ）のうちの１つ以上の用量が、患者に投与され得る。そのような用量は、断続的に、例えば、毎週または３週間毎（例えば、患者が約２〜約２０回、または例えば、約６回の用量の抗体を受けるように）投与されてもよい。最初のより高い負荷用量が投与され得て、１つ以上のより低い用量が続く。しかしながら、他の投与量レジメンは有用であり得る。この療法の進行は、従来の技術及び解析によって容易に監視される。
【０２８８】
標的細胞中のＰＢＤプロドラッグコンジュゲート化合物から薬物の細胞内放出は、リンカー犠牲と、（ｉ）ジスルフィドトリガーのＧＳＨ活性化、（ｉｉ）キノントリガーのＤＴＤ活性化、または（ｉｉｉ）アリールボロン酸もしくはアリールボロン酸エステルトリガーのＲＯＳ活性化との組み合わせから生じると考えられている。
【０２８９】
ジスルフィド部分を含むリンカーに関連して、ＧＳＨ媒介放出は、酸不安定性ヒドラジンリンカーなどの先行技術において既知のある特定のリンカーと比較して、利点を提供する。より具体的には、ＧＳＨの血液濃度は、非常に低い（マイクロモル範囲内など）ことが知られている一方で、細胞内ＧＳＨ濃度は典型的には、最大３桁より大きい（ミリモル範囲内など）。がん細胞内のＧＳＨ濃度は、還元酵素の活性の増加のために、さらにより大きいとさらに考えられる。硫黄原子を有するリンカー炭素原子の立体束縛は、改善された血流安定性及び改善された細胞内放出を提供すると依然さらに考えられる。したがって、本開示のジスルフィドコンジュゲート化合物は、血流中での改善された安定性及び改善された細胞内放出速度を提供すると考えられる。
【０２９０】
ＰＢＤプロドラッグに関連して、ＰＢＤ  Ｎ１０保護基のＧＳＨ−、ＤＴＤ−、またはＲＯＳ−活性化は、血流及び血漿中の毒性を覆い、保護するプロドラッグ部分を含まないＰＢＤ薬物と比較して、選択的毒性利点を提供する。より具体的には、ＧＳＨ、ＤＴＤ、及びＲＯＳの血液濃度は、がん細胞と比較して低いことが知られている。したがって、本開示のＰＢＤプロドラッグコンジュゲート化合物は、血流中での毒性の減少及びＰＢＤへの標的された細胞内活性化を提供すると考えられる。
【０２９１】
Ｘ．製造品
本開示の別の態様では、本明細書に記載される障害の治療、予防、及び／または診断に有用な材料を含有する製造品が提供される。製造品は、容器と、容器上のもしくは容器に関連するラベルまたは添付文書とを含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、静脈注射用溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチック等の様々な材料から形成され得る。容器は、それ自体で、または別の組成物との組み合わせで、障害の治療、予防、及び／または診断に有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈注射用溶液バッグまたは皮下注射針によって穿孔可能な栓を有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本開示のＰＢＤプロドラッグコンジュゲート化合物である。ラベルまたは添付文書は、組成物が、選択される病態を治療するために使用されることを示す。さらに、製造品は、（ａ）本開示のＰＢＤプロドラッグコンジュゲート化合物を含む組成物をその中に収容した第１の容器と、（ｂ）さらなる細胞傷害性剤、またはさもなければ治療剤を含む組成物をその中に収容した第２の容器と、を含み得る。本発明のこの実施形態における製造品は、組成物が特定の病態を治療するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含み得る。あるいは、または加えて、製造品は、注入用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、またはデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝液を含む第２の（または第３の）容器をさらに含んでもよい。製品は、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的観点及びユーザの観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
【実施例】
【０２９２】
以下は、本開示の方法及び化合物の実施例である。本明細書に提供される概要を考慮して、様々な他の実施形態が実施され得ることが理解される。
【０２９３】
本実施例に開示されるＰＢＤ単量体及び二量体化合物の構造は、対応する参照タグとともに以下に示され、アスタリスクは、ラセミまたは未定義立体化学のキラル中心を指す。
2019534238.tif 000062
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【０２９４】
実施例１：ＡＤＣ調製のための一般方法
システイン操作された抗体（表Ａ〜Ｄに列挙されるものなど）を、ＤＴＴ（クリーランド試薬、ジチオスレイトール）またはＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩などの還元剤で処理することによって、本開示のいくつかの態様においてリンカー−薬物中間体とのコンジュゲーションのために反応性にし（Ｇｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｖｏｌ２７３：７３−８０（参照により本明細書に組み込まれる）、Ｓｏｌｔｅｃ  Ｖｅｎｔｕｒｅｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）を参照されたい）、その後、デヒドロアスコルビン酸などの穏やかな酸化体で鎖間ジスルフィド結合を再形成（再酸化）した。ＣＨＯ細胞中で発現された完全長のシステイン操作されたモノクローナル抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標））（Ｇｏｍｅｚ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇ．１０５（４）：７４８−７６０（参照により本明細書に組み込まれる）、及びＧｏｍｅｚ  ｅｔ  ａｌ（２０１０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２６：１４３８−１４４５（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）を、例えば、２ｍＭのＥＤＴＡを有する５０ｍＭのトリス（ｐＨ８．０）中、約５０倍過剰のＤＴＴで、室温で一晩還元し、これにより、システイン及びＧＳＨ付加物を除去し、抗体内の鎖間ジスルフィド結合を低減した。付加物の除去を、ＰＬＲＰ−Ｓカラムを使用する逆相液体クロマトグラフィー／質量分析（「ＬＣ／ＭＳ」）によって監視した。還元されたＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を希釈し、少なくとも４体積の１０ｍＭのコハク酸ナトリウム（ｐＨ５）緩衝液に添加することによって酸性にした。あるいは、抗体を希釈し、少なくとも４体積の１０ｍＭのコハク酸（ｐＨ５）に添加し、ｐＨが約５になるまで１０％の酢酸によって滴定することによって酸性にした。ｐＨを下げ、希釈したＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を、その後、ＨｉＴｒａｐ  Ｓカチオン交換カラムに負荷し、数カラム体積の１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ５）で洗浄し、５０ｍＭのトリス（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭの塩化ナトリウムで溶出した。
【０２９５】
再酸化を実行することによって、親Ｍａｂ内に存在するシステイン残基間のジスルフィド結合を再度確立した。溶出され、還元された上述のＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を、１５×デヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡＡ）で約３時間、またはあるいは、２００ｎＭ〜２ｍＭの硫酸銅水溶液（ＣｕＳＯ４）で、室温で一晩処理した。当該技術分野において既知である他の酸化体（すなわち、酸化剤）及び酸化条件が使用され得る。周囲空気酸化もまた、効果的であり得る。この穏やかな部分的再酸化ステップにより、高い忠実度で鎖内ジスルフィドが効率的に形成された。再酸化は、ＰＬＲＰ−Ｓカラムを使用する逆相ＬＣ／ＭＳによって監視した。再酸化したＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を上述のコハク酸緩衝液で希釈して、約ｐＨ５に到達させ、１０ｍＭのコハク酸（ｐＨ５）、１０ｍＭのコハク酸（ｐＨ５）（緩衝液Ａ）中３００ｍＭの塩化ナトリウム（緩衝液Ｂ）の勾配で溶出を実行したことを除いて、上述のようにＳカラムで精製を実行した。２ｍＭの最終濃度になるまで、溶出したＴＨＩＯＭＡＢ（商標）にＥＤＴＡを添加し、必要に応じて５ｍｇ／ｍＬ超の最終濃度に到達するまで濃縮した。
【０２９６】
コンジュゲーションに好適な、結果として得られたＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を、アリコートで、−２０℃で保管した。６２００シリーズＴＯＦまたはＱＴＯＦ  Ａｇｉｌｅｎｔ  ＬＣ／ＭＳにおいてＬＣ／ＭＳ分析を実行した。８０℃まで加熱したＰＲＬＰ−Ｓ（登録商標）１０００Ａ、ミクロボアカラム（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓｈｒｏｐｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で試料のクロマトグラフィーを行った。３０〜４０％のＢという線形勾配（溶媒Ａ、水中の０．０５％ＴＦＡ、溶媒Ｂ、アセトニトリル中０．０４％ＴＦＡ）を使用し、溶離液を、エレクトロスプレー源を用いて直接イオン化させた。データを回収し、ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒソフトウェアによってデコンボリューションした。ＬＣ／ＭＳ分析前、抗体または薬物コンジュゲート（５０マイクログラム）を、ペプチドＮ−グルコシダーゼＦ（「ＰＮＧａｓｅ  Ｆ」）（２単位／ｍｌ、ＰＲＯｚｙｍｅ，Ｓａｎ  Ｌｅａｎｄｒｏ，ＣＡ）で、３７℃で２時間処理して、Ｎ連結炭水化物を除去した。あるいは、抗体または薬物コンジュゲートをＬｙｓＣ（５０ｕｇの抗体またはコンジュゲート当たり０．２５ｕｇ）で、３７Ｃで１５分間部分的に消化させて、ＬＣ／ＭＳによって分析するためのＦａｂ及びＦｃ断片をもたらした。デコンボリューションしたＬＣ／ＭＳスペクトルのピークを割り当て、定量化した。観察された全てのピークと比較して、薬物−コンジュゲートされた抗体に対応するピーク（複数可）の強度の比率を計算することによって、薬物対抗体比（ＤＡＲ）を計算した。
【０２９７】
１０ｍＭのコハク酸（ｐＨ５）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＥＤＴＡ中、コンジュゲーションのためのＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を、１ＭのトリスでｐＨ７．５〜８．５に調整した。約３〜２０モル当量の過剰の、チオール−反応性ピリジルジスルフィド基を有する本開示のリンカー−薬物中間体を、ＤＭＦまたはＤＭＡ中に溶解し、還元、再酸化、及びｐＨ調整した抗体に添加した。反応を室温または３７℃でインキュベートし、反応混合物のＬＣ／ＭＳ分析によって決定される完了まで（１〜約２４時間）監視した。反応の完了時、いくつかの方法のうちの１つまたは任意の組み合わせによってコンジュゲートを精製して、残りの未反応リンカー−薬物中間体及び凝集タンパク質（有意なレベルで存在する場合）を除去し得る。例えば、コンジュゲートを、最終ｐＨが約５．５になるまで10ｍＭのヒスチジン−酢酸（ｐＨ５．５）で希釈し、Ａｋｔａ精製システムに接続されたＨｉＴｒａｐ  Ｓカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）またはＳマキシスピンカラム（Ｐｉｅｒｃｅ）のいずれかを使用するＳカチオン交換カラムクロマトグラフィーによって精製し得る。あるいは、コンジュゲートを、Ａｋｔａ精製システムに接続されたＳ２００カラムまたはＺｅｂａスピンカラムを使用するゲル濾過クロマトグラフィーによって精製し得る。あるいは、透析を使用してもよい。ゲル濾過または透析のいずれかを使用して、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）薬物コンジュゲートを、２４０ｍＭのスクロースを有する２０ｍＭのＨｉｓ／酢酸（ｐＨ５）中に製剤化した。精製されたコンジュゲートを、遠心分離限外濾過によって濃縮し、無菌条件下で０．２μｍのフィルターを通して濾過し、保管のために凍結する。抗体−薬物コンジュゲートをＢＣＡアッセイによって特性評価して、タンパク質濃度を決定し、凝集分析のために分析的ＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィー）を行い、リジンＣエンドペプチダーゼ（ＬｙｓＣ）での処理後にＬＣ／ＭＳを行って、ＤＡＲを計算した。
【０２９８】
０．７５ｍｌ／分の流量で、０．２５ｍＭの塩化カリウム及び１５％のＩＰＡを有する０．２Ｍのリン酸カリウム（ｐＨ６．２）中、Ｓｈｏｄｅｘ  ＫＷ８０２．５カラムを使用して、コンジュゲートに対してサイズ排除クロマトグラフィーを実行した。コンジュゲートの凝集状態を、２８０ｎｍでの溶出ピーク面積吸光度の積分によって決定した。
【０２９９】
Ａｇｉｌｅｎｔ  ＱＴＯＦ６５２０ＥＳＩ機器を使用して、コンジュゲートに対してＬＣ／ＭＳ分析を実行し得る。一例として、抗体−薬物コンジュゲートを、トリス（ｐＨ７．５）中、１：５００ｗ／ｗエンドプロテイナーゼＬｙｓ  Ｃ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で３７℃で３０分間処理した。結果として得られた切断断片を、８０℃に加熱した１０００Å（Ａｎｇｓｔｒｏｍ）、８μｍ（ミクロン）ＰＬＲＰ−Ｓ（高度架橋ポリスチレン）カラムに負荷し、３０％のＢ〜４０％のＢまでの勾配で５分間溶出した。移動相Ａは、０．０５％のＴＦＡを有するＨ２Ｏであり、移動相Ｂは、０．０４％のＴＦＡを有するアセトニトリルであった。流量は、０．５ｍｌ／分であった。タンパク質溶出を、２８０ｎｍでのＵＶ吸光度検出によって、エレクトロスプレーイオン化及びＭＳ分析の前に監視した。非コンジュゲートＦｃ断片、残渣非コンジュゲートＦａｂ、及び薬物化Ｆａｂのクロマトグラフィー分解が、通常達成された。得られたｍ／ｚスペクトルを、Ｍａｓｓ  Ｈｕｎｔｅｒ（商標）ソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してデコンボリューションして、抗体断片の質量を計算した。
【０３００】
実施例２：ハーセプチンＡ１１８Ｃ抗体−プローブコンジュゲート
リンカー及びチオール脱離基を含む様々なプローブ化合物を、ハーセプチンＡ１１８Ｃとコンジュゲートした。各コンジュゲーションにおいて、溶媒系中５ｍｇ／ｍＬの抗体をプローブ−リンカー−脱離基化合物と１０：１のプローブ化合物対抗体の当量比で接触させた（プローブ−リンカーは、ジスルフィド結合を介して抗体にコンジュゲートされる）。溶媒系は、７５ｍＭのトリス（ｐＨ８．５）及び１０体積％のＤＭＦを含んだ。コンジュゲーション反応を、室温で２４時間実行した。反応生成混合物をＬＣ／ＭＳによって分析して、薬物対抗体比（ＤＡＲ）、抗体−プローブコンジュゲートとの比較での脱離基副生成物の面積パーセント、抗体−プローブコンジュゲートとの比較での非コンジュゲート二量体の面積パーセント、及び抗体−プローブコンジュゲートとの比較での非コンジュゲート単量体の面積パーセントを決定した。
【０３０１】
プローブは、以下の式のものであった（式中、波線はリンカーへの結合点を示す）。
2019534238.tif 000078
評価したプローブ−リンカー−脱離基化合物としては、
2019534238.tif 000079
2019534238.tif 000080
が含まれる。
【０３０２】
結果を以下の表１に報告し、「ＤＡＲ」は薬物−抗体比を指し、「ＬＧ（％）」は、脱離基副産物の割合を指し、「非コンジュゲート二量体（％）」は、非コンジュゲート抗体二量体の割合を指し、「非コンジュゲート単量体（％）は、非コンジュゲート抗体二量体の割合を指す。
2019534238.tif 000081
【０３０３】
実施例３：ハーセプチンＫ１４９Ｃ抗体−プローブコンジュゲート
実施例２の反応条件下、ジスルフィド結合を介したハーセプチンＫ１４９Ｃへのコンジュゲーションについて、実施例２のプローブ化合物を評価した。反応生成混合物をＬＣ／ＭＳによって分析して、薬物対抗体比（ＤＡＲ）、及び抗体−プローブコンジュゲートとの比較での脱離基副生成物の面積パーセントを決定した。結果を以下の表２に報告する。
2019534238.tif 000082
【０３０４】
実施例４：ハーセプチンＡ１１８Ｃ  ＡＤＣ
リンカー及び５−ニトロＰＤＳチオール脱離基を含む様々な薬物化合物を、ジスルフィド結合を介してハーセプチン２  ４Ｄ５ＨＣ  Ａ１１８Ｃ抗体とコンジュゲートした。各コンジュゲーションにおいて、溶媒系中５ｍｇ／ｍＬの抗体を薬物−リンカー−脱離基化合物と３：１の薬物−リンカー−脱離基化合物対抗体の当量比で接触させた。溶媒系は、７５ｍＭのトリス（ｐＨ８．５）を含んだ。コンジュゲーション反応を、室温で３時間実行した。反応生成混合物をＬＣ／ＭＳによって分析して、薬物対抗体比（ＤＡＲ）、及び抗体−プローブコンジュゲートとの比較での脱離基副生成物の面積パーセントを決定した。
【０３０５】
薬物は、以下の式のものであった（式中、波線はリンカーへの結合点を示す）。
2019534238.tif 000083
評価した薬物−リンカー−脱離基化合物が、含まれ、式中、「Ｄ」は、薬物を示す。
2019534238.tif 000084
2019534238.tif 000085
【０３０６】
結果を以下の表３に報告する。
2019534238.tif 000086
【０３０７】
実施例５：ｘＣＤ２２Ｋ１４９Ｃ  ＡＤＣ
第１の評価において、メチルスルホン酸脱離基（ＭＴＳ）（リンカー１）を含むリンカー−薬物化合物を、ジスルフィド結合を介してｘＣＤ２２Ｋ１４９Ｃ抗体とコンジュゲートした。第２の評価において、第２の評価において、ＭＴＳ脱離基（リンカー２）を含むリンカー−薬物化合物を抗体とコンジュゲートした。各コンジュゲーションにおいて、溶媒系中５ｍｇ／ｍＬの抗体を薬物−リンカー−脱離基化合物と３：１のプローブ化合物対抗体の当量比で接触させた。溶媒系は、７５ｍＭのトリス（ｐＨ８．５）を含んだ。コンジュゲーション反応を、室温で３時間実行した。リンカー１及び２を、以下に例示する。
2019534238.tif 000087
【０３０８】
反応生成混合物をＬＣ／ＭＳによって分析して、薬物対抗体比（ＤＡＲ）、及び抗体−プローブコンジュゲートとの比較での脱離基副生成物の面積パーセントを決定した。リンカー１については、薬物対抗体比は、２．０であり、抗体−薬物コンジュゲートの面積パーセントは、約９１％であり、非コンジュゲートの面積パーセントは、０．１％未満であり、ＭＴＳ副生成物の面積パーセントは、約０．５％であった。リンカー２については、薬物対抗体比は、１．５であり、抗体−薬物コンジュゲートの面積パーセントは、約９１％であり、非コンジュゲートの面積パーセントは、０．１％未満であり、ＭＴＳ副生成物の面積パーセントは、約０．５％であった。
【０３０９】
実施例６：ＫＰＬ−４及びＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞株に対するＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグの毒性
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ及びジアフォラーゼプロドラッグの毒性を、ＫＰＬ−４、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２、ＨＣＴ−１１６、ＨＣＣ１３９５、及びＪｕｒｋａｔ細胞培養に対して評価した。ＫＰＬ−４（乳癌細胞株）は、Ｈｅｒ２を発現し、約１２〜約２４ｍＭの高いＧＳＨレベルを示す。ＫＰＬ−４細胞は、およそ約８３９ｎＲＰＫＭのＤＴＤの高い発現をさらに有する（ｎＲＰＫＭは、マッピングされた１００万読み取り当たりの転写長のＫｂ当たりの読み取りを指す）。ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２（非ホジキンリンパ腫細胞株）は、約１．４ｍＭの低いＧＳＨレベル及び約１．４ｎＲＰＫＭの低いＤＴＤ発現を示す。
【０３１０】
ジスルフィド及びＤＴ−ジアフォラーゼプロドラッグの効力を、以下のプロトコルを用いる細胞増殖アッセイによって測定した（ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ  ＧＬＯ（商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ，Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．）。第１に、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞の約８０００個の細胞（低いＮＱＯ１遺伝子及びＧＳＨレベル）、ＲＰＭＩ−１６４０培養培地（１０％ウシ胎仔血清、２ｍＭのグルタミン、５０ｕＭのシスチン、及び０．０１５ｇ／ＬのＬ−メチオニンを補充した）中のＫＰＬ−４（高いＮＱＯ１遺伝子及びＧＳＨレベル）、ＨＣＴ−１１６細胞、ＨＣＣ１３９５細胞、またはＪｕｒｋａｔ細胞の４０００個の細胞を含有する、４０ｕｌの細胞培養のアリコートを、３８４ウェルの平坦な透明な底部白色ポリスチレン組織培養処理済みのマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）の各ウェルに堆積させた。第２に、細胞を有する、及び有しない、培地を含有する、対照ウェルを調製した。第３に、ジスルフィドまたはＤＴ−ジアフォラーゼプロドラッグ（ｎ＝３）を有する、及び有しない、化合物を、ＥＣＨＯ音響液体処理技術（Ｌａｂｃｙｔｅ  Ｉｎｃ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を使用する実験ウェルに添加して、１：３×連続希釈で三重に１０点用量応答曲線を作製した。第４に、細胞を、３７℃に設定された加湿インキュベータ中に培養し、５％ＣＯ２の雰囲気を維持した。第５に、プレートを、約３０分間室温で平衡化した。第６に、各ウェル内に存在する細胞培養培地の体積と等しい体積のＣＥＬＬＴＩＴＥＲ  ＧＬＯ（商標）試薬を添加した。第７に、暗室中の軌道振盪機で内容物を１０分間混合して、細胞溶解を誘導した。第８に、プレートを室温で３０分間インキュベートして、発光シグナルを安定化した。第９に、発光を記録し、活性％としてグラフで報告し、ＲＬＵ（相対発光単位）は対照に対して正規化した（化合物なし対照マイナス細胞なし対照）。第１０に、データは、例えば、各繰り返しセットの発光の平均として、標準偏差誤差範囲を伴って、各抗体について各反復（ｎ＝３）における個々の点としてプロットした。
【０３１１】
ＩＣ５０の効力の結果を、以下の表４にｎＭで示し、括弧内のデータは、反復評価におけるＩＣ５０の結果を表す。
2019534238.tif 000088
【０３１２】
ＫＰＬ−４に対する、ＰＢＤ単量体対照１及びＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ１〜４の結果を、図１に示し、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２に対する、ＰＢＤ単量体対照１及びＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ１〜４の結果を、図２に示し、各図は、活性［％］対プロドラッグ濃度の対数（モル／リットル）のプロットである。活性［％］は、細胞生存率の低下を指す負の値について報告される。例えば、−５０の活性［％］は、細胞生存率の５０％の低下を指す。プロドラッグ４を除いて、ＫＰＬ−４、プロドラッグ１〜３については、最大のＩＣ５０を有するプロドラッグ（プロドラッグ２）に対する親化合物の比は、約１．５であった。プロドラッグ４を除いて、ＷＳＵ−ＤＬＤＬ２、プロドラッグ１〜３については、最大のＩＣ５０を有するプロドラッグ（プロドラッグ２）に対する親化合物の比は、約９．６であった。分化のジスルフィドプロドラッグ活性化は、高いＧＳＨ細胞株（ＫＰＬ−４）及び低いＧＳＨ細胞株（ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２）の両方で観察された。ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞株と比較して、分化は、ＫＰＬ−４細胞株に対してあまり観察されなかった。
【０３１３】
効力評価に加えて、ＰＢＤ二量体ジアフォラーゼプロドラッグ１の放出を評価した。この放出は、以下の方法に従って９０分間のインキュベーション後に、１２％であると測定された。第１に、０．５ｕＭのＰＢＤプロドラッグ、５０ｕＭのＰＢＤ、２００ｍＭのＮＡＤＰＨを含有する、主な混合反応を、調製し、反応停止処理し、９６ウェルポリプロピレンプレート中で４０ｕＬの０．１％ギ酸で希釈した。第２に、反応混合物を、室温で、５、３０、９０分間インキュベートした。第３に、ＤＭＳＯ中の標準物質を、ＥＣＨＯ音響液体処理技術（Ｌａｂｃｙｔｅ  Ｉｎｃ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を使用して、０．１％ギ酸中で調製して、９６ウェルポリプロピレンプレート中で１：２．５×連続希釈で三重に１０点用量応答曲線を作製した。第４に、１０ｕＬの試料及び標準物質を、液体クロマトグラフィーに結合されたＡＢ  ＳＣＩＥＸ  ＱＴＲＡＰ（登録商標）６５００質量分光計に注入した。使用したＬＣ勾配は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｋｉｎｅｔｅｘ  Ｃ１８、１．７μｍ、１００Å、１００×２．１ｍｍのカラムであり、移動相Ａ（水中の０．１％のギ酸）及びＢ（アセトニトリル中０．１％のギ酸）が、０〜０．５分の５％のＢ、１〜１．１０分の７０〜９５％のＢ、２．４９〜２．５分の９５％のＢ、２．５〜３．０分の９５〜５％のＢ、０．８ｍＬ／分の流量（３０℃のカラム温度）を有した。保持時間は、１．０６分であった。ＭＳの多重反応監視（ＭＲＭ）移行は、（５８５／２５７．０）及び（５８５／５０４．２）であった。ＭＲＭ（５８５／２５７．０）における化合物依存性のＭＳパラメータは、ＣＥ、ＣＸＰ、ＤＰ、及びＥＰについては、それぞれ、５１、２０、２０６、及び１０であり、ＭＲＭ（５８５／５０４．２）では、ＣＥ、ＣＸＰ、ＤＰ、及びＥＰについては、それぞれ、２７、１２、２０６、及び１０であった。最終的に、データは、ＭｕｌｔｉＱｕａｎｔ分析ソフトウェアを用いて分析し、標準は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ６直線回帰適合を使用して計算した。
【０３１４】
実施例７：ＳＫ−ＢＲ−３細胞株に対するＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグの毒性
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ１〜４、ＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ１及び４、ＰＢＤ単量体対照１及びＰＢＤ二量体対照１の毒性を、ＳＫ−ＢＲ−３細胞培養に対して評価した。ＳＫ−ＢＲ−３細胞株は、ＨＥＲ２を過剰発現し、約３〜約１０ｍＭのＧＳＨレベルを示す、乳腺腺癌である。ＨＥＲ２陽性乳癌細胞株であるＳＫ−ＢＲ−３を、配列分析によって検証された後に、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈで内部に得た。細胞を、このアッセイ期間にわたって、２ｍＭのＬ−グルタミンを補充したＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ中で、３７℃で成長させた。「−１日目」と示された実験の第１日目に、ＳＫ−ＢＲ−３細胞を、組織培養フラスコから採取し、計数し、次いで、１ウェル当たり７，５００個の細胞の濃度で９６ウェルプレートに播種した。「０日目」と示された、翌日、細胞培養培地を、細胞から除去し、以下の表５中の連続希釈（１：３）の化合物を含有する１００ｕＬの新鮮な培地と置き換えた。次いで、プレートを３７℃のインキュベータに戻し、３日間インキュベートした。アッセイの「３日目」に、プレートを、インキュベータから取り出し、室温で１００ｕＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加する前に、室温まで平衡化した。次いで、プレートを、３００ｒｐｍで１０分間振とうした。この反応から生じた発光シグナルを、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）上に記録した。データをＥｘｃｅｌ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ）で配置し、Ｋａｌｅｉｄａｇｒａｐｈ（Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）でグラフ化した。
【０３１５】
ＩＣ５０の効力結果を、以下の表５に表す。
2019534238.tif 000089
【０３１６】
ＳＫ−ＢＲ−３の結果を、図３及び１０に示し、図は、細胞生存率（対照（％））対ｎＭ基準のＰＢＤ化合物濃度のプロットを示す。結果に基づいて、よりかさ高いジスルフィドプロドラッグ部分が効力を低減していると考えられる。さらに、これまでの実験結果に基づいて、効力がジスルフィド安定性と相関すると考えられる。
【０３１７】
実施例８：ＰＢＤ単量体及び二量体プロドラッグの全血安定性
本発明の様々なＰＢＤ単量体及びＰＢＤ二量体プロドラッグの全血安定性を評価した。
【０３１８】
全血安定性試料を、以下のとおりに調製した。マウス（ＣＢ１７ＳＣＩＤ）、ラット（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）、カニクイザル、及びヒト全血血漿ならびに緩衝液中の安定性試料を生成した（０時間及び２４時間）。血液はＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎにより採取し、次いで一晩冷却輸送され、全血の到着後即座に試料を作成した。安定性試料を作製するために、全ての分子が１ｍｇ／ｍＬの濃度となるように、原料物質の緩衝液（１倍ＰＢＳ、０．５％ＢＳＡ、１５ＰＰＭ  Ｐｒｏｃｌｉｎ）中への初回希釈物を作製した。次いで、１：１０倍希釈（３６ｕＬの１ｍｇ／ｍＬ初回希釈物＋３２４ｕＬの血液もしくは緩衝液）を行って、１００ｕｇ／ｍＬの最終濃度で安定性試料を生成した。混合した後、１５０μＬの全血／緩衝液の安定性試料を、２つの異なる時点で２つの別個のチューブセットにアリコートした。次いで、０時間の時点で、−８０℃のフリーザーに入れ、２４時間の時点で、３７℃のインキュベータの振盪機上に置いた。所与の時点に達したときに、２４時間の試料も−８０℃のフリーザーに入れた。
【０３１９】
全血安定性試料を、親和性捕捉ＬＣ−ＭＳアッセイによって評価した。第１に、ストレプトアビジンでコーティングした磁気ビーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）を、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）で２回洗浄し、次いで、ＫｉｎｇＦｉｓｈｅｒ  Ｆｌｅｘ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を用いてビオチニル化したＣＤ２２の抗イディオタイプ抗体と混合し、穏やかに撹拌しながら室温で２時間インキュベートした。２時間後に、ＳＡビーズ／ビオチンｘＩｄ  Ａｂ複合体を、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液で２回洗浄し、希釈した全血安定性試料と混合し、次いで、穏やかに撹拌しながら室温で２時間インキュベートした。２時間後に、ＳＡビーズ／ビオチンｘＩｄ  Ａｂ／試料複合体を、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液で２回洗浄し、脱グリコシル化酵素ＰＮＧａｓｅ  Ｆ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ，Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ）と混合し、次いで、穏やかに撹拌しながら３７℃で一晩インキュベートした。一晩インキュベーションした後に、脱グリコシル化ＳＡビーズ／Ｂｉｏｔｉｎ−ｘＩｄ  Ａｂ／試料の複合体を、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液で２回洗浄し、続いて、水（Ｏｐｔｉｍａ  Ｈ２Ｏ，Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）で２回洗浄し、最終的に、１０％アセトニトリルで１回洗浄した。次いで、溶出のためにビーズを３０％アセトニトリル／０．１％ギ酸に入れ、穏やかに撹拌しながら室温で３０分間インキュベートした後、ビーズを回収した。溶出した試料を注入し、６５℃で維持した、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＰｅｐＳｗｉｆｔ  ＲＰモノリシックカラム（５００μｍ×５ｃｍ）に充填した。試料を、２０μＬ／分の流量で、勾配：０〜２分で２０％のＢ（９５％アセトニトリル＋０．１％ギ酸）、２．５分で３５％のＢ、５分で６５％のＢ、５．５分で９５％のＢ、６分で５％のＢを伴って、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣシステムを用いてカラム上で分離した。カラムを、５００〜５０００Ｔｈ（ｍ／ｚ）の獲得質量範囲で正のＥＳＩで操作されたＷａｔｅｒｓ  Ｓｙｎａｐｔ  Ｇ２−ＳＱ−ＴｏＦ質量分析計を用いてオンライン検出のために直接結合した。
【０３２０】
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ２〜６、８、１０、及び１３、ならびにＰＢＤ単量体対照１のインビトロ全血安定性は、ヒト及びラットにおいて、４及び２４時間間隔で評価した。これらの結果は、時間ゼロと比較して残りの親化合物のパーセントとして図４に提示される。
【０３２１】
ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸プロドラッグ１、ＰＢＤ二量体ＡＤＣジアフォラーゼプロドラッグ１Ｂ、ならびにＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグ１、２Ａ、２Ｂ、及び３〜５のインビトロ全血安定性は、マウス、ラット、カニクイザル、及びヒトにおいて評価し、これらの結果を、以下の表６に提示し、「ＤＡＲ」は、薬物対抗体比を指し、「デルタ％ＤＡＲ２」は、０時間で緩衝液と比較して２４時間でデルタＤＡＲ２を指し、「プロドラッグ損失」は、０時間で緩衝液と比較して２４時間でプロドラッグ損失を指す。
2019534238.tif 000090
2019534238.tif 000091
【０３２２】
実施例９：様々な細胞株に対してＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ及びＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグの毒性
様々なＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ及びＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグの毒性を、ＵＡＣＣ−２５７、Ｉｇｒｏｖ−１、及びＡ２０５８細胞株で評価した。細胞を、３８４ウェルプレートで播種し、薬物で２４時間後に処理した。４日間の薬物インキュベーション後、ＡＴＰレベルを測定する（細胞数の間接的測定）Ｐｒｏｍｅｇａ  ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光試薬を使用して細胞生存率を決定した。ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎリーダーで発光強度を測定した。非薬物処理対照に対して正規化することによって相対的細胞生存率を計算し、ＫｌｅｉｄａＧｒａｐｈソフトウェアパッケージを使用してグラフ化した。ＩＣ５０値を濃度として決定して、５０％の最大細胞殺滅を得た。
【０３２３】
ＩＣ５０の結果を、以下の表７Ａに示す。
2019534238.tif 000092
【０３２４】
ＩＣ５０比がそれぞれの対照と比較して各プロドラッグについて計算され得ることに留意する。例えば、ＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ１のＩＣ５０比は、以下のとおりに計算される、細胞株ＵＡＣＣ−２５７及びＩＧＲＯＶ−１については、それぞれ、２．３及び３．４である：（ＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ１  ＵＡＣＣ−２５７  ２．２のＩＣ５０）／（ＰＢＤ二量体対照１ＵＡＣＣ−２５７  ０．９５のＩＣ５０）＝２．３の比）；及び（ＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ１  ＩＧＲＯＶ−１  ０．２１のＩＣ５０）／（ＰＢＤ二量体対照１ＩＧＲＯＶ−１  ０．０６１のＩＣ５０）＝３．４の比）。
【０３２５】
ＰＢＤ二量体対照１及びＰＢＤ二量体対照２を、多数の細胞株に対して標準細胞パネルにおいてさらに評価した。ＩＣ５０の結果を、以下の表７Ｂに報告する。
2019534238.tif 000093
【０３２６】
ＳＫ−ＢＲ−３に対する、ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ２、３、５、６、ＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ１〜３、ＰＢＤ単量体対照１、及びＰＢＤ二量体対照１の結果を、図５に示し、ＫＰＬ−４の結果を、図６に示し、各図は、細胞生存率（対照の（％））対ＰＢＤ化合物濃度（μｇ／ｍＬ）のプロットである。分化のジスルフィドプロドラッグ活性化は、高いＧＳＨ細胞株（ＫＰＬ−４）及び低いＧＳＨ細胞株（ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２）の両方で観察された。ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞株と比較して、分化は、ＫＰＬ−４細胞株に対してあまり観察されなかった。
【０３２７】
ＵＡＣＣ−２５７及びＩＧＲＯＶ−１細胞株に対するＰＢＤ二量体対照１の結果を、図７に示す。ＵＡＣＣ−２５７及びＩＧＲＯＶ−１細胞株に対するＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ化合物１の結果を、図８に示す。ＵＡＣＣ−２５７及びＩＧＲＯＶ−１細胞株に対するＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ化合物４の結果を、図９に示す。
【０３２８】
実施例１０；ＳＫ−ＢＲ−３及びＫＰＬ−４細胞株に対してＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ−抗体コンジュゲートの毒性
様々なＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグ、ＰＢＤ二量体ＡＤＣジアフォラーゼプロドラッグ、及び非プロドラッグＰＢＤ二量体ＡＤＣ対照の毒性を、ＫＰＬ−４及びＳＫ−ＢＲ−３細胞培養に対して評価した。細胞を、黒色壁９６ウェルプレート（ＳＫ−ＢＲ−３について４０００／ウェル、ＫＰＬ−４について１２００細胞／ウェル）中に播種し、５％ＣＯ２の加湿雰囲気中で、３７℃で一晩付着させた。次いで、培地を除去し、異なる濃度のＡＤＣを含有する新鮮な培養培地で置き換えた。５日後、細胞力価−Ｇｌｏ試薬を、室温で１０分間ウェルに添加し、発光シグナルを、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＥｎＶｉｓｉｏｎを使用して測定した。
【０３２９】
ＩＣ５０の結果を、以下の表８に示す。
2019534238.tif 000094
【０３３０】
ＳＫ−ＢＲ−３に対する、ＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグ２Ａ、ＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグ１Ｂ、非プロドラッグＰＢＤ二量体ＡＤＣ対照１、及び非プロドラッグＰＢＤ二量体ＡＤＣ対照２の結果を、図１１に示し、ＫＰＬ−４の結果を、図１２に示し、各図は、５日後の細胞生存率（対照の（％））対ＰＢＤ化合物濃度（μｇ／ｍＬ）のプロットである。分化のジスルフィドプロドラッグ活性化は、ＨＥＲ２細胞株においてＨＥＲ２コンジュゲートで観察された。
【０３３１】
実施例１１：ＳＫ−ＢＲ−３及びＫＰＬ−４細胞株に対してＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ−抗体コンジュゲートの毒性
ＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグ１、２Ｂ、３、及び４ならびに非プロドラッグＰＢＤ二量体ＡＤＣ対照１及び２の毒性を、５日後、細胞生存率について、ＳＫ−ＢＲ−３及びＫＰＬ−４細胞株に対して評価した。細胞を、黒色壁９６ウェルプレート（ＳＫ−ＢＲ−３について４０００／ウェル、ＫＰＬ−４について１２００細胞／ウェル）中に播種し、５％ＣＯ２の加湿雰囲気中で、３７℃で一晩付着させた。次いで、培地を除去し、異なる濃度のＡＤＣを含有する新鮮な培養培地で置き換えた。５日後、細胞力価−Ｇｌｏ試薬を、室温で１０分間ウェルに添加し、発光シグナルを、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＥｎＶｉｓｉｏｎを使用して測定した。
【０３３２】
これらの結果を、図１３及び１４に報告する。
【０３３３】
実施例１２：ＰＢＤ二量体−抗体コンジュゲートジスルフィドプロドラッグの全血安定性
ＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグ１及び２Ｂの安定性を、緩衝液（「緩衝液」）、カニクイザル全血（「カニクイザルＷＢ」）、ヒト全血（「ヒトＷＢ）、マウス全血（「マウスＷＢ」）、及びラット全血（「ラットＷＢ」）において評価した。実験プロトコルを、実施例８に記載する。結果を以下の表９に報告し、パーセント損失は、時間ゼロでプロドラッグ濃度と比較して、プロドラッグの全喪失を指す。プロドラッグの損失は、イミン形態（すなわち、Ｎ１０プロドラッグ置換点に隣接するＣ１１でヒドロキシル部分）の損失を含む。
2019534238.tif 000095
【０３３４】
実施例１３：ＲＯＳ活性化ＰＢＤ二量体−抗体コンジュゲートアリールボロン酸プロドラッグの全血安定性の毒性
様々なＰＢＤ単量体及び二量体ボロン酸プロドラッグ化合物の毒性を、細胞毒性について評価した。インビトロ細胞死滅アッセイにおいて、細胞を、８，０００細胞／ウェルで９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに添加し、５％ＣＯ２の加湿雰囲気中で、３７℃で一晩インキュベートした。細胞を示されたプロドラッグ、陽性対照、及び陰性対照化合物の様々な濃度に曝露した。シルベストロールを評価し、１：３の連続希釈を使用した。３日間インキュベーションした後、細胞力価Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ  ＷＩ）を、１００μＬ／ウェルでウェルに添加し、続いて、室温で１０分間インキュベーションし、発光シグナルを、Ｐａｃｋａｒｄ／Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ＴｏｐＣｏｕｎｔを使用して測定した。
【０３３５】
ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸プロドラッグ１Ａ及び１Ｂの毒性を、細胞生存率について、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ及びＢＪＡＢ腫瘍細胞株に対して評価した。ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸対照１Ａを、陰性対照として使用し、ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸対照２を、陽性対照として使用した。これらの結果を、投与量（μｇ／ｍＬ）に対する時間ゼロでの細胞数と比較して、３日後の生存細胞の正規化した割合として、図１５Ａ、１５Ｂ、及び１６に報告する。ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸プロドラッグ１Ａは、１．７０１ｎＭのＥＣ５０を提供し、非プロドラッグＰＢＤ二量体ＡＤＣ対照２は、０．０２３６ｎＭのＥＣ５０を提供した。ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸プロドラッグ１Ａは、０．０５０９ｎＭのＥＣ５０を提供し、ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸プロドラッグ１Ｂは、１５．８６ｎＭのＥＣ５０を提供し、ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸対照２は、０．０２７４のＥＣ５０を提供した。
【０３３６】
ＰＢＤ単量体ボロン酸プロドラッグ１の毒性を、細胞生存率について、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３腫瘍細胞株に対して評価した。ＰＢＤ単量体対照１を、陽性対照として使用し、ＰＢＤ単量体対照２を、陰性対照として使用した。毒性研究を繰り返し、ＰＢＤプロドラッグ及び対照を、シルベストロールと組み合わせて投与した。図１５Ｃは、（ｉ）ＰＢＤ単量体対照、（ｉｉ）Ｎ１０ＰＢＤ位でギ酸ベンジル部分を有するＰＢＤ単量体対照、及び（ｉｉｉ）ＰＢＤ単量体のボロン酸プロドラッグへの曝露から３日後、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞死滅対薬物濃度（μＭ）のプロットを示す。図１５Ｄは、（ｉ）シルベストロール、（ｉｉ）ＰＢＤ単量体対照、（ｉｉｉ）Ｎ１０ＰＢＤ位でギ酸ベンジル部分を有するＰＢＤ単量体対照、（ｉｖ）ＰＢＤ単量体ボロン酸プロドラッグ、（ｖ）ＰＢＤ単量体対照及びシルベストロール、（ｖｉ）Ｎ１０ＰＢＤ位でギ酸ベンジル部分を有するＰＢＤ単量体対照及びシルベストロール、ならびに（ｖｉｉ）ＰＢＤ単量体ボロン酸プロドラッグ及びシルベストロールへの曝露から３日後、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞死滅対薬物濃度（μＭ）のプロットを示す。ＰＢＤ単量体対照１は、０．１６３５ｎＭのＥＣ５０を提供し、ＰＢＤ単量体ボロン酸プロドラッグ１は、１．８４６ｎＭのＥＣ５０を提供し、ＰＢＤ単量体プロドラッグ２は、２６７，３５６ｎＭのＥＣ５０を提供した。
【０３３７】
これらの結果は、ＲＯＳアリールボロン酸プロドラッグが陰性対照と比較して細胞死滅の増加を提供したことを示す。
【０３３８】
実施例１４：抗ＣＤ２２及び抗Ｈｅｒ２抗体薬物コンジュゲートの有効性
抗ＣＤ２２抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の有効性を、ＢＪＡＢ−ｌｕｃヒトバーキットリンパ腫のマウス異種移植片モデルにおいて調査した。ＢＪＡＢ−ｌｕｃ細胞株を、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ細胞株レポジトリから得た。この細胞株は、Ｐｒｏｍｅｇａ  ＰｏｗｅｒＰｌｅｘ１６Ｓｙｓｔｅｍを使用して短いタンデム反復（ＳＴＲ）プロファイリングにより認証され、細胞株の外部ＳＴＲプロファイルと比較して細胞株の先祖を判定した。ＢＪＡＢ−ｌｕｃ細胞株は、ＦＡＣＳ及びＩＨＣによって決定される、ＣＤ２２を発現する。異種移植片モデルを確立するために、雌Ｃ．Ｂ−１７ＳＣＩＤマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に、それぞれ、ＢＪＡＢ−ｌｕｃ細胞（０．２ｍＬのハンクス平衡塩溶液に懸濁された２０００万個の細胞；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で側面領域に皮下的に接種した。
【０３３９】
抗Ｈｅｒ２抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の有効性を、ＫＰＬ４ヒト乳癌のマウス異種移植片モデルにおいて調査した。ＫＰＬ４細胞株を、Ｄｒ．Ｊ．Ｋｕｒｅｂａｙａｓｈｉ  ｌａｂ（Ｊａｐａｎ）から得、この細胞株は、ＦＡＣＳ及びＩＨＣによって決定される、ＨＥＲ２を発現する。異種移植片モデルを確立するために、雌Ｃ．Ｂ−１７ＳＣＩＤ−ベージュ色マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に、それぞれ、ＫＰＬ４細胞（０．２ｍＬのハンクス平衡塩溶液の１：１の混合物に懸濁された３００万個の細胞；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ａｎｄ  Ｍａｔｒｉｇｅｌ；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で胸部乳房脂肪パッド領域に接種した。ＫＰＬ４異種移植片は、動物が腫瘍それ自体に応答してそれらの初期体重を約５％減少した悪液質誘導モデルである。抗Ｈｅｒ２ＡＤＣの投与は、この腫瘍関連の体重減少を減少させ、動物において十分許容された。
【０３４０】
腫瘍が１００〜３００ｍｍ３の平均腫瘍体積に到達したとき（０日目と称される）に、動物を各々５〜１０匹のマウスの群に無作為に分け、ＡＤＣの単回静脈内注射を施した。図２３及び２４に示される第１の評価において、マウスを、ビヒクル（ヒスチジン緩衝液＃８、１００μＬの静脈内１回）、非プロドラッグＰＢＤ二量体ＡＤＣ対照２（０．１ｍｇ／ｋｇ及び０．２ｍｇ／ｋｇの静脈内１回）、ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸プロドラッグ１Ａ（０．２、０．５、１、２、及び５ｍｇ／ｋｇの静脈内１回）、ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸対照１Ａ（１ｍｇ／ｋｇの静脈内１回）、ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸プロドラッグ１Ｂ（１ｍｇ／ｋｇの静脈内１回）、及び非プロドラッグＰＢＤ二量体ＡＤＣ対照３（０．２及び１ｍｇ／ｋｇの静脈内１回）で処理した。図２５及び２６に示される第２の評価において、マウスを、ビヒクル（ヒスチジン緩衝液＃８、１００μＬの静脈内１回）、非プロドラッグＰＢＤ二量体ＡＤＣ対照１（０．３、１、及び３ｍｇ／ｋｇの静脈内１回）ならびにＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグ１Ｂ（１、３、６、及び１０ｍｇ／ｋｇの静脈内１回）で処理した。研究を通して、マウスの腫瘍及び体重を１週間に１〜２回測定した。体重減少がそれらの出発体重の２０％を超えたとき、マウスを即座に殺処分した。腫瘍が３０００ｍｍ３に到達するか、または切迫した潰瘍化の兆候を示す前に、全ての動物を殺処分した。腫瘍体積を、カリパスを使用して２次元（長さ及び幅）で測定し、その腫瘍体積を、以下の式を使用して計算した。腫瘍サイズ（ｍｍ３）＝０．５×（長さ×幅×幅）。
【０３４１】
これらの結果を、図２３〜２６に示す。
【０３４２】
図２３は、ＢＪＡＢ−ｌｕｃヒトバーキットリンパ腫を有するＣ．Ｂ−１７ＳＣＩＤマウスにおける抗ＣＤ２２ＡＤＣの有効性を示す。評価された最高用量（０．２ｍｇ／ｋｇ）で非プロドラッグＰＢＤ二量体ＡＤＣ対照２のみが、適度な腫瘍成長遅延をもたらした。対照的に、ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸プロドラッグ１Ａは、非常に効果的であり、低くても０．２ｍｇ／ｋｇの用量で腫瘍退縮をもたらした。ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸対照１は、腫瘍成長へのいかなる効果を示さなかった。ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸プロドラッグ１Ａ及び非プロドラッグＰＢＤ二量体ＡＤＣ対照３コンジュゲートは、いくつかの抗腫瘍活性を有したが、一致した用量レベルで抗ＣＤ２２コンジュゲートの活性は、さらに優れた。
【０３４３】
図２４は、ＢＪＡＢ−ｌｕｃヒトバーキットリンパ腫を有するＣ．Ｂ−１７ＳＣＩＤマウスの体重における抗ＣＤ２２ＡＤＣ（１）非プロドラッグＰＢＤ二量体ＡＤＣ対照２、（２）ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸プロドラッグ１Ａ、及び（３）ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸対照１の効果を示す。抗ＣＤ２２ＡＤＣの投与は、体重減少が観察されなかった動物において十分許容された。
【０３４４】
図２５は、ＫＰＬ−４ヒト乳房腫瘍を有するＣ．Ｂ−１７ＳＣＩＤ−ベージュ色マウスにおける抗Ｈｅｒ２ＡＤＣの有効性を示す。非プロドラッグＰＢＤ二量体ＡＤＣ対照１は、腫瘍成長の用量依存的阻害を示し、１ｍｇ／ｋｇ以上で腫瘍退縮を有した。同様に、ＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグ１はまた、用量依存的有効性も示し、６ｍｇ／ｋｇ以上で腫瘍退縮を有した。
【０３４５】
図２６は、ＫＰＬ４ヒト乳房腫瘍を有するＣ．Ｂ−１７ＳＣＩＤ−ベージュ色の体重における非プロドラッグＰＢＤ二量体ＡＤＣ対照１及びＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグ１（抗Ｈｅｒ２ＡＤＣ）の効果を示す。ＫＰＬ４異種移植片は、動物が腫瘍それ自体に応答してそれらの初期体重を約５％減少した悪液質誘導モデルである。抗Ｈｅｒ２ＡＤＣの投与は、この腫瘍関連の体重減少を減少させ、動物において十分許容された。
【０３４６】
実施例１５：ＤＴＤ活性化ＰＢＤ単量体及び二量体キノンプロドラッグの毒性
ＰＢＤ二量体ジアフォラーゼプロドラッグ１、ＰＢＤ単量体ジアフォラーゼプロドラッグ２、ＰＢＤ二量体対照１、及びＰＢＤ単量体対照１の毒性を、細胞生存率について、ＫＰＬ−４及びＷＳＵ細胞株に対して評価した。ＫＰＬ−４細胞株は、８３９のＮＱＯ１ｎＲＰＫＭを特徴とする高いＤＴＤ細胞株であり、ＷＳＵ細胞株は、１．３６のＮＱＯ１ｎＲＰＫＭを特徴とする低いＤＴＤ細胞株であるであった。ＩＣ５０比は、ＰＢＤ二量体対照と比較して、プロドラッグのＩＣ５０値に基づいている。
【０３４７】
これらの結果を、以下の表１０及び図１７〜２０に報告する。
2019534238.tif 000096
【０３４８】
実施例１６：ＤＴＤ活性化ＰＢＤ単量体及び二量体キノンプロドラッグの毒性
ＰＢＤ二量体ＡＤＣジアフォラーゼプロドラッグ１Ａ及び１Ｂならびに非プロドラッグＰＢＤ二量体ＡＤＣ対照５の毒性を、細胞生存率について、ＫＰＬ−４及びＳＫ−ＢＲ−３細胞株に対して評価した。ＫＰＬ−４細胞株は、８３９のＮＱＯ１ｎＲＰＫＭを特徴とする高いＤＴＤ細胞株であり、ＳＫ−ＢＲ０３細胞株は、１７１のＮＱＯ１ｎＲＰＫＭを特徴とする低いＤＴＤ細胞株であった。これらの結果を、以下の図２１及び２２に報告する。
【０３４９】
実施例１７：ＰＢＤ類似体のジスルフィド切断及びＤＮＡオリゴ結合
システイン及びグルタチオン（ＧＳＨ）への曝露から２４時間後に、本開示の様々なプロドラッグジスルフィド化合物を評価し、ＰＢＤ類似体のＤＮＡ結合を評価した。
【０３５０】
ジスルフィド切断の決定のために、化合物を、５％のメタノールを含有する１００ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ７．０）中、０．２ｍＭのシステインまたは４ｍＭのＧＳＨとともに、３７℃、１５μＭでインキュベートした。アリコートを指定の時点で取得し、試料を、Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  Ｇｏｌｄ  Ｃ１８カラム（１００×２．１、１．９μＭ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上、Ｓｃｉｅｘ  ＴｒｉｐｌｅＴＯＦ５６００でＬＣ／ＭＳによって分析した。緩衝液Ａ（１０ｍＭの酢酸アンモニウム中０．１％のギ酸）から緩衝液Ｂ（９０％のアセトニトリル中、１０ｍＭの酢酸アンモニウム中０．１％のギ酸）への勾配、０．４ｍＬ／分で、５％のＢ０〜０．５分、５〜２５％のＢ０．５〜８分、２５〜７５％のＢ８〜１３分、及び７５〜９５％のＢ１３〜１３．５分、９５％のＢ１３．５〜１４．５分、９５〜５％のＢ１４．５〜１５分によってカラムを溶出した。全ての生成物を、分離し、陽性ＥＳＩイオンモードのＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって特徴付けした。全ての分析物は、主要な種としてプロトン化した分子ＭＨ＋を有し、源断片化をほとんど有しなかった。フルスキャン精密質量ピーク面積を使用して、各構成成分の相対存在量を推定した。
【０３５１】
ＤＮＡ結合の決定のために、化合物を、１００μＭの二重ストランドＤＮＡオリゴ１及び２とともに１００μＭで、１０ｍＭのビス−トリス（ｐＨ７．１）中、３７℃で１時間インキュベートした。単一ストランドＤＮＡオリゴ（５’−ＴＡＴＡＧＡＡＴＣＴＡＴＡ−３’及び３’−ＡＴＡＴＣＴＴＡＧＡＴＡＴ−５’）を、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈで合成した。試料を、Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  Ｇｏｌｄ  Ｃ１８カラム（１００×２．１、１．９μＭ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上、Ｓｃｉｅｘ  ＴｒｉｐｌｅＴＯＦ５６００でＬＣ／ＭＳ／ＵＶ（２１０〜４５０ｎｍ）によって分析した。緩衝液Ａ（５０ｍＭのヘキサフルオロ−イソプロパノール及び１５ｍＭのジイソプロピルエチルアミン）から緩衝液Ｂ（５０％のＡ及び５０％の１：１のメタノール：アセトニトリル）への勾配、０．４ｍＬ／分で、５％の０〜０．５分、５〜２５％のＢ０．５〜２５分、２５〜９５％のＢ２５〜４０分、及び９５％のＢ４０〜４２分によって、カラムを溶出した。残りの割合（％）は、インキュベーション中に残存する開始ＤＮＡオリゴの平均であった（ｎ＝２）。生成物を、陰性ＥＳＩイオンモードのＬＣ／ＭＳによって特徴付けした。
【０３５２】
これらの結果を、以下の表１１に報告する。
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2019534238.tif 000098
【０３５３】
実施例１８：キノンのＧＳＨ付加物形成及び安定性
ＧＳＨ及び関連するＧＳＨ付加物形成への曝露時に、本開示の範囲内のキノンならびにＰＢＤ単量体及び二量体ジアフォラーゼプロドラッグの安定性を、評価した。
【０３５４】
分解分析のために、化合物を、５％のメタノールを含有する２００ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ７．０）中、１５ｍＭのＧＳＨとともに、３７℃で３時間、２５μＭでインキュベートした。対照インキュベーションを、ＧＳＨを有しないで行った。試料を、Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  Ｇｏｌｄ  Ｃ１８カラム（１００×２．１、１．９μＭ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上、Ｓｃｉｅｘ  ＴｒｉｐｌｅＴＯＦ５６００でＬＣ／ＭＳによって分析した。緩衝液Ａ（１０ｍＭの酢酸アンモニウム中０．１％のギ酸）から緩衝液Ｂ（９０％のアセトニトリル中、１０ｍＭの酢酸アンモニウム中０．１％のギ酸）への勾配、０．４ｍＬ／分で、５％のＢ０〜０．５分、５〜２５％のＢ０．５〜８分、２５〜７５％のＢ８〜１３分、及び７５〜９５％のＢ１３〜１３．５分、９５％のＢ１３．５〜１４．５分、９５〜５％のＢ１４．５〜１５分によってカラムを溶出した。全ての生成物を、分離し、陽性ＥＳＩイオンモードのＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって特徴付けした。フルスキャン精密質量ピーク面積を使用して、各構成成分の相対存在量を推定した。
【０３５５】
インビトロＤＴジアフォラーゼ活性化薬物放出アッセイを使用して、ＮＡＤＰＨ枯渇を測定した。ノルフロキサシン及び負荷量（ＰＢＤ）のＤＴジアフォラーゼ活性化放出を、ＮＡＤＰＨのインビトロでの枯渇によって測定した。アッセイ方法は、化合物の干渉により、Ａ３４０でＮＡＤＰＨの吸光測定から修正された（Ｏｓｍａｎ  ｅｔ．ａｌ，Ｃｈｅｍｉｃｏ−Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ１４７（２００４）９９−１０８）。ＮＡＤＰＨの枯渇は、３４０ｎＭで励起された後に、４８０ｎｍでＮＡＤＰＨの蛍光の減少を観察することによって測定された。材料及び試薬は、以下のとおりであった：（１）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）：Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ７０３０−５０Ｇ（９８％以上（アガロースゲル電気泳動）、凍結乾燥粉末、本質的に脂肪酸フリー、本質的にグロブリンフリー、（２）アッセイ緩衝液：５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ／０．００７％ＢＳＡ緩衝液（ｐＨ７．４）、（３）ＤＴジアフォラーゼ調製：５０Ｕ／０．２ｍｇ／ｍｌ（６．２５ｕＭのタンパク質）として８．１ｍｌのＨ２Ｏ中の凍結乾燥したヒトＤＴジアフォラーゼ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｄ１３１５、ロット番号ＳＬＢＪ９７２３Ｖ、分子量＝３２，２５３Ｕ／ｍｇ、１．６ｍｇのタンパク質／バイアル、１つの単位は、３７℃でメナジオン基質の存在下で毎分１マイクロモルのシトクロムＣを低減するであろう）を溶解し、−２０℃でアリコートを保存する。アッセイ前に、５倍の希釈標準溶液（２０Ｕ／ｍＬ、２．５ｕＭ、０．０８ｕｇ／ｍＬ）としてアッセイ緩衝液中の保存液を２．５倍に希釈する、（４）β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスファート（ＮＡＤＰＨ、ジナトリウム塩水和物の低下、カタログ番号Ｎ６５０５−５Ｇ、＞＝９４％（ＨＰＬＣ）：アッセイ緩衝液中の４８ｍＭのＮＡＤＰＨ保存液を調製し、−２０Ｃで保存する。アッセイ前に、５倍の希釈標準溶液として１ｍＭになるまで保存液を希釈する、（５）ＤＴジアフォラーゼ特異的阻害剤：０．１３ＮのＮａＯＨ中の４０ｍＭのジクマロール保存液（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｍ１３９０−５Ｇ、分子量＝３３６．２９）を調製し、４℃で保存した。５倍の希釈標準溶液として２５０ｕＭになるまで保存液を希釈する、（６）化合物：５倍の希釈標準溶液として２５０ｕＭになるまでアッセイ緩衝液中のノルフロキサシン及びＰＢＤコンジュゲート化合物を希釈する、（７）透明な底部を有する３８４ウェル黒色プレート。アッセイ手順については、（１）０．５ｕＭのＤＴ−Ｄ、５０ｕＭの化合物、２００ｍＭのＮＡＤＰＨを含有する反応混合物を、５０ｕｌ／ウェルで３８４ウェルプレート中に設定した。ＤＴジアフォラーゼ阻害剤を有する対照については、ジクマロールを、各化合物については最終の５０ｕＭで反応混合物に添加した。ＮＡＤＰＨ及び化合物のみを含有する反応混合物もまた、ベースライン対照として添加した。ＤＴジアフォラーゼを、最後のステップに添加した、（２）反応混合物を、室温で、５、３０、９０分間インキュベートした。ＤＮＡＰＨの蛍光強度（ＲＦＵ）を、３４０ｎＭで励起及び４８０ｎＭで発光を有するＭ１０００プレートリーダー（Ｔｅｃａｎ）に記録した。データ分析については、データを分析し、Ｐｒｉｓｍ  ＧｒａｐｈＰａｄ６を用いてプロットした。ＮＡＤＰＨの枯渇を、９０分の反応時点で以下の式によって計算した：ＮＡＤＰＨの枯渇（％）＝［ＲＦＵ阻害剤を有しない−（ＲＦＵ阻害剤を有する／ＲＦＵ阻害剤を有しない）］＊１００。
【０３５６】
これらの結果を、以下の表１２に報告し、「Ｒｅｍの割合（％）」は、３時間後の残りの割合を指し、「Ｄｅｇｒ」は、分解を指し、「Ｐａｙ．Ｒｅｌ」は、出発材料の２μＭに基づいて負荷量放出（ＭＲＭ  Ｑｕｎａｔ）（０時間と比較して９０分での回収（％））を指し、「ＮＡＤＰＨ  Ｄｅｐ.」は、９０分でのＮＡＤＰＨの枯渇を指す。
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【０３５７】
実施例１９：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグの調製
実施例１９一般スキーム１
一般スキーム１のための全反応スキームは、以下のとおりであった。
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【０３５８】
実施例１９一般スキーム１のステップ１：
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【０３５９】
ＴＨＦ（１０Ｌ）中の化合物１（１．１３ｋｇ、４．５９ｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、２つの分量（ＬｉＢＨ４の添加時にほとんど温度で荷電しない）で、ＬｉＢＨ４（９９．９０ｇ、４．５９ｍｏｌ、１．００当量）を０℃で添加した。懸濁液を、０℃で１時間、次いで、１０〜２０℃で１８時間撹拌した。混合物を、０℃に冷却し、ＮＨ４Ｃｌ水溶液（５Ｌ）を添加した。層を分離し、水性層をＥＡ（５Ｌ×３）で抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮して、透明油として化合物２（１６００ｇ、７．３６ｍｏｌ、収率８０．２２％）を得た。
【０３６０】
実施例１９一般スキーム１のステップ２：
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【０３６１】
５０Ｌのフラスコに、化合物２（１．６０ｋｇ、７．３６ｍｏｌ、１．００当量）、ＤＣＭ（２０Ｌ）を充填し、続いて、０℃で撹拌しながら、ＴＥＡ（１．１２ｋｇ、１１．０５ｍｏｌ、１．５０当量）及び塩化アセチル（６３５．５４ｇ、８．１０ｍｏｌ、１．１０当量）を滴加した。添加後、得られた溶液を、１５〜２５℃で１８時間撹拌し、５Ｌの水の添加によって反応停止処理し、３×２ＬのＤＣＭで抽出した。合わせた有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮して、無色油として化合物３（２．４６ｋｇ、９．４９ｍｏｌ、収率１２８．９０％）を得た。
【０３６２】
実施例１９一般スキーム１のステップ３：
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【０３６３】
２０Ｌの３口丸底フラスコに、ＤＣＭ（１２Ｌ）中の化合物３（１．２３ｋｇ、４．７５ｍｏｌ、１．００当量）を充填し、続いて、いくつかのバッチにおいて、ＰＣＣ（１．５４ｋｇ、７．１３ｍｏｌ）を１５℃で添加した。得られた溶液を、１５〜２５℃で１８時間撹拌した。固体を濾過し、濾液を真空下で濃縮した。残渣を、酢酸エチル：石油エーテル（１：５）で溶出するシリカゲルカラム上で精製して、淡黄色液体として化合物４（１．１３ｋｇ、４．３８ｍｏｌ、収率４６．１５％）を得た。
【０３６４】
実施例１９一般スキーム１のステップ４：
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【０３６５】
１０Ｌの３口丸底フラスコに、メチル（トリフェニル）臭化ホスホニウム（９５８．０３ｇ、２．６８ｍｏｌ）、ＴＨＦ（２．５Ｌ）を充填し、続いて、２時間にわたって、少量に分けてｔ−ＢｕＯＨ（３００．９４ｇ、２．６８ｍｏｌ）を０℃で添加した。これに、ＴＨＦ（２．５Ｌ）中の溶液化合物４（４６０．００ｇ、１．７９ｍｏｌ）を、０℃で撹拌しながら、滴加した。得られた溶液を、−５〜０℃で２０分間撹拌し、５００ｍＬの水の添加によって反応停止処理し、３×５００ｍＬの酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣を、酢酸エチル：石油エーテル（１：２０）で溶出するシリカゲルカラム上で精製して、淡黄色液体として化合物５（２７５．００ｇ、１．０８ｍｏｌ、３０．０９％）を得た。
【０３６６】
実施例１９一般スキーム１のステップ５：
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【０３６７】
ＨＣｌ（ガス）／ＥｔＯＡｃ（３Ｌ、４Ｍ／Ｌ）中の化合物５（３３０．００ｇ、１．２９ｍｏｌ）の混合物を、０℃で２０分間撹拌した。次いで、混合物を、１０〜３０℃で１時間撹拌した。混合物を、真空中で濃縮して、黄色固体として化合物６（２５０．００ｇ、１．３０ｍｏｌ、１０１．１２％）を得、これを精製することなく、次のステップで使用する。
【０３６８】
実施例１９一般スキーム１のステップ６：
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【０３６９】
窒素不活性雰囲気でパージされ、維持された３０００ｍＬの３口丸底フラスコに、ＴＨＦ（１．５Ｌ）中の化合物７（３５４．４２ｇ、１．５６ｍｏｌ、１．３０当量）の溶液を充填し、続いて、撹拌しながら、ＳＯＣｌ２（１．７１ｋｇ、１４．３３ｍｏｌ、１１．９４当量）を滴加した。得られた溶液を、２０〜３０℃で４時間撹拌し、次いで、真空下で濃縮した。窒素不活性雰囲気でパージされ、維持された別の３０００ｍＬの３口丸底フラスコに、ＤＣＭ（２．５Ｌ）中の化合物６（２３０．００ｇ、１．２０ｍｏｌ、１．００当量）の溶液を充填した。これに、Ｅｔ３Ｎ（４８５．７５ｇ、４．８０ｍｏｌ、４．００当量）を、−４０℃で撹拌しながら、添加し、続いて、−４０℃で第１のフラスコにこの溶液を添加した。温度を、自然に０℃まで加温し、３０００ｍＬの水／氷の添加により反応停止処理し、３×１０００ｍＬのジクロロメタンで抽出した。合わせた有機層を、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣を、ＥｔＯＡｃ：ＰＥ（１：３）で溶出するシリカゲルカラム上で精製して、薄茶色油として化合物８（２１０．００ｇ）を得、これを精製することなく、次のステップで使用した。
【０３７０】
実施例１９一般スキーム１のステップ７：
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【０３７１】
ＴＨＦ（４００ｍＬ）中の化合物８（９０．００ｇ、２４７．０２ｍｍｏｌ、１．００当量）、ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（４００ｍＬ）の混合物に、ＮａＯＨ（２９．６４ｇ、７４１．０５ｍｍｏｌ、３．００当量）を０℃で一度に添加した。混合物を、２０〜３０℃で１８時間撹拌した。水性相を、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を、飽和ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、黄色固体として化合物９（９０．２６ｇ、粗物）を得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。
【０３７２】
実施例１９一般スキーム１のステップ８：
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【０３７３】
温度プローブ、磁気撹拌器、及び窒素入口を装備した２０００ｍＬの３口丸底フラスコに、ＤＭＦ（１Ｌ）中のＴＢＤＭＳＣｌ（１２６．６２ｇ、８４０．１２ｍｍｏｌ）、イミダゾール（５７．２０ｇ、８４０．１２ｍｍｏｌ、３．００当量）を添加した。次いで、ＤＭＦ（１Ｌ）中の化合物９（９０．２６ｇ、２８０．０４ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液を、０℃で混合物に添加した。得られた反応混合物を、２５〜３０℃で２時間撹拌した。反応混合物を氷水（１Ｌ）中に注ぎ、次いで、ＤＣＭ（２００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機相を、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮して、残渣を得、黄色油として化合物１０（１２６．００ｇ）を得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。
【０３７４】
実施例１９一般スキーム１のステップ９：
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【０３７５】
ＡｃＯＨ（１Ｌ）中の化合物１０（１２６．００ｇ、２８８．６１ｍｍｏｌ、１．００当量）の混合物に、３０℃以下の温度を維持することによって、Ｚｎ（１８８．７２ｇ、２．８９ｍｏｌ）を少量ずつ添加した。混合物を、２０〜３０℃で３０分間撹拌した。残渣を、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）中に注ぎ、濾過した。濾液を真空中で濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１０／１、１／１）によって精製して、黄色油として１１（５８．００ｇ、１４２．６４ｍｍｏｌ、収率４９％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）ｄ  ｐｐｍ６．７１（ｓ，１Ｈ）６．２２（ｓ，１Ｈ）４．８５−４．９７（ｍ，２Ｈ）４．５２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）４．１４−４．２３（ｍ，１Ｈ）３．９９−４．１３（ｍ，１Ｈ）３．８２（ｓ，３Ｈ）３．７７（ｓ，３Ｈ）３．５９（ｄ，Ｊ＝５．７３Ｈｚ，１Ｈ）２．６３−２．７２（ｍ，２Ｈ）２．０１−２．０４（ｍ，１Ｈ）１．２３（ｔ，Ｊ＝７．０６Ｈｚ，１Ｈ）０．８５（ｓ，９Ｈ）−０．０６−０．０６（ｍ，５Ｈ）。
【０３７６】
実施例１９以下のとおりに、一般スキーム２は、本開示のＰＢＤジスルフィドプロドラッグを調製するための一般スキームである。
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構造Ｃにおける、及び実施例１９に示される他の箇所のアスタリスクは、キラル中心を表す。いくつかの態様において、上記のスキームに記載されるＲ１は、本明細書に記載されるＲ６１に対応し、上記のスキームに記載されるＲ２は、本明細書に記載されるＲ６２に対応し、上記のスキームに記載されるＲ３は、本明細書に記載されるＲ５０に対応する。
【０３７７】
実施例１９Ａ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ１０の調製
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【０３７８】
実施例１９Ａ一般的な手順ＩＡ−カーボネート法Ａの形成：
（２−アミノ−４，５−ジメトキシ−フェニル）−［（２Ｓ）−２−［［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］−４−メチレン−ピロリジン−１−イル］メタノン（２２２ｍｇ、０．５４６０ｍｍｏｌ）を、３ｍＬのＤＣＭに溶解し、次いで、Ｅｔ３Ｎを、ピペットを介して添加し、続いて、トリホスゲンを添加した。合計２０分後、２ｍＬのＤＣＭ（０．５ｍＬのすすぎを含む）中の２−（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）−２−メチル−プロパン−１−オール（Ｂ、１．０５当量、０．５７３３ｍｍｏｌ、１００質量％）を添加し、続いて、１０ｕＬのジブチル錫ジアセテート（２０μＬ、０．０７４８７ｍｍｏｌ）を添加した。約１．５時間後、別の３５ｕＬ（２８ｍｇ）のジスルフィドアルコール及び８ｕＬのジブチル錫ジアセテート（２：５７ｐｍ）を添加し、反応物を一晩撹拌した。反応物をＥｔＯＡｃで稀釈し、次いで、１Ｎ  ＨＣｌ溶液で洗浄した。有機物を飽和重炭酸ナトリウムで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、次いで、濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（２５ｇシリカゲル、２０％−３０％−５０％ＥｔＯＰｃ／Ｈｅｐｔ）によって精製して、無色油として所望のカーボネート（２２７ｍｇ、収率６７％）を得た。
【０３７９】
実施例１９Ａ一般的な手順ＩＩ−ＨＯＡｃによるＴＢＳ基の除去：
［２−（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）−２−メチル−プロピル］Ｎ−［２−［（２Ｓ）−２−［［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］−４−メチレン−ピロリジン−１−カルボニル］−４，５−ジメトキシ−フェニル］カルバメート（２００ｍｇ、０．３１９ｍｍｏｌ）を、３ｍＬのＴＨＦに溶解し、次いで、水（０．８ｍＬ）及び酢酸（３．４ｍＬ）を室温で添加した。反応が終了した後、炭酸ナトリウムを添加して、酢酸を中和した。混合物をＥｔＯＡｃで３回抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ抽出物を、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、粗アルコール（２３３ｍｇ）を得、これを精製することなく次のステップで使用した。
【０３８０】
実施例１９Ａ一般的な手順ＩＩＩ−ＤＭＰの酸化及び環化：
ＤＣＭ（３．５ｍＬ中の２−（イソプロピルジスルファニル）−２−メチル−プロピル］Ｎ−［２−［（２Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチレン−ピロリジン−１−カルボニル］−４，５−ジメトキシ−フェニル］カルバメート（９９．２ｍｇ、０．１９９ｍｍｏｌ、１００質量％）に、デスマーチンペルヨージナン（８６．１ｍｇ、０．２０３ｍｍｏｌ、１．０２当量）を室温で添加した。反応混合物を、ＤＣＭで希釈し、次いで、混合した飽和ＮａＨＣＯ３（約３ｍＬ）及び１Ｍ亜硫酸ナトリウム（約３ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、約１２０ｍｇの粗（油）を得、これを逆相ＨＰＬＣによって精製して、回収されたアルコール出発材料（１０．３ｍｇ）とともに所望のカルバメート（２８．９ｍｇ）を得た。ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝２．６９分，ｍ／ｚ＝４９７［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０８（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６４（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），５．４９−５．３３（ｍ，１Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），４．２１−４．０５（ｍ，２Ｈ），４．０４−３．９１（ｍ，１Ｈ），３．８１（ｓ，４Ｈ），３．７９−ｚ３．７２（ｍ，１Ｈ），３．４６（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．３１（ｓ，３Ｈ），２．９９−２．７６（ｍ，２Ｈ），２．６３−２．５１（ｍ，１Ｈ），１．３８−０．９４（ｍ，１２Ｈ）。
【０３８１】
実施例１９Ｂ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ４の調製
2019534238.tif 000115
【０３８２】
以下の一般的な手順ＩＢを、ジスルフィド形成のために使用したことを除いて、表題化合物は、実施例１９Ａと同じ様式で合成した。
【０３８３】
実施例１９Ｂ一般的な手順Ｉｂ−カーボネート法Ｂの形成：
（２−アミノ−４，５−ジメトキシ−フェニル）−［（２Ｓ）−２−［［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］−４−メチレン−ピロリジン−１−イル］メタノン（１２１ｍｇ、０．２９７６ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（３当量、０．８９２８ｍｍｏｌ）を、３ｍＬのＴＨＦ中で混合し、次いで、（４−ニトロフェニル）カルボノクロリデート（７５ｍｇ、０．３７２０ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を、７５℃まで加熱した。約１時間５０分後、１．５ｍＬのＴＨＦ中の２−（イソプロピルジスルファニル）−２−メチル−プロパン−１−オール（７１ｍｇ、０．３９３８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、７５℃で一晩撹拌し、室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、１Ｎ  ＨＣｌ及び飽和重炭酸ナトリウムで洗浄した。溶液を濃縮し、得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（２０％、次いで３０％、次いで５０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｐｔ）によって精製して、ジスルフィド（３４ｍｇ、収率１９％）を得た。
【０３８４】
ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝２．７８分，ｍ／ｚ＝５１１［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０８（ｓ，１Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），６．６３（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），５．４９−５．３４（ｍ，１Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），４．１９−３．９１（ｍ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．７８−３．６７（ｍ，１Ｈ），３．４６（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），３．３２（ｓ，３５Ｈ），２．９６−２．８２（ｍ，１Ｈ），２．６１−２．５３（ｍ，１Ｈ），１．１８（ｓ，９Ｈ），１．０４（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，６Ｈ）。
【０３８５】
実施例１９Ｃ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ１５の調製
2019534238.tif 000116
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ１５を、以下の反応スキーム３に従って調製した。
2019534238.tif 000117
【０３８６】
トリホスゲン（１１６ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を２ｍＬのＤＣＭに溶解し、次いで、２ｍＬのＤＣＭ中の（２Ｒ）−２−［（５−ニトロ−２−ピリジル）ジスルファニル］プロパン−１−オール（２７７ｍｇ、１．１２５ｍｍｏｌ）及びピリジン（０．１４ｍＬ、１．７６１ｍｍｏｌ）を添加した。３０分後、この溶液を、（２−アミノ−４，５−ジメトキシ−フェニル）−［（２Ｓ）−２−［［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］−４−メチレン−ピロリジン−１−イル］メタノン（４１０ｍｇ、０．９７８ｍｍｏｌ、９７質量％）の溶液、及び３ｍＬのＤＣＭ（＋０．５ｍＬのすすぎ）中に添加した。反応が終了した後、混合物を、ＥｔＯＡｃで稀釈し、１Ｎ  ＨＣｌ水溶液で洗浄し、次いで、飽和重炭酸ナトリウムで洗浄した。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（２５ｇシリカゲル、３０％、次いで４０％、次いで５０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｐｔ）によって精製して、［（２Ｒ）−２−［（５−ニトロ−２−ピリジル）ジスルファニル］プロピル］Ｎ−［２−［（２Ｓ）−２−［［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］−４−メチレン−ピロリジン−１−カルボニル］−４，５−ジメトキシ−フェニル］カルバメート（４８０ｍｇ、収率７２％）を得た。
【０３８７】
ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の［（２Ｒ）−２−［（５−ニトロ−２−ピリジル）ジスルファニル］プロピル］Ｎ−［２−［（２Ｓ）−２−［［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］−４−メチレン−ピロリジン−１−カルボニル］−４，５−ジメトキシ−フェニル］カルバメート（４５ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ、１００質量％）に、いかなる溶媒を用いずに、シリンジを介してプロパン−２−チオール（４０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、密封バイアル中で５９℃に加熱した。反応が終了した後、混合物を減圧下で濃縮し、トルエンで１回共沸した（ａｚｏｔｒｏｐｅ）。得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇシリカゲル、２０％−３５％−５０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｐｔ）によって精製して、黄色油として［（２Ｒ）−２−（イソプロピルジスルファニル）プロピル］Ｎ−［２−［（２Ｓ）−２−［［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］−４−メチレン−ピロリジン−１−カルボニル］−４，５−ジメトキシ−フェニル］カルバメート（１３４ｍｇ、収率８９％）を得た。
【０３８８】
次いで、ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ１５を、実施例１９Ａの一般的な手順ＩＩ及びＩＩＩに従って調製した。
【０３８９】
ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝２．５８分，ｍ／ｚ＝４８３［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０７（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６３（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），５．３８（ｄｄ，Ｊ＝９．７，６．１Ｈｚ，１Ｈ），５．２０−５．０７（ｍ，２Ｈ），４．２０（ｄｄ，Ｊ＝１１．１，６．１Ｈｚ，１Ｈ），４．１５−４．０５（ｍ，１Ｈ），３．９７（ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ），３．４５（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．１０−２．８２（ｍ，３Ｈ），２．５８−２．５３（ｍ，１Ｈ），１．１８（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，７Ｈ），１．０４（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）。
【０３９０】
実施例１９Ｄ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ１３の調製
2019534238.tif 000118
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ１３を、実施例１９Ｃの方法に従って調製した。ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝２．７０分，ｍ／ｚ＝４９７［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０７（ｓ，１Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），６．６５（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），５．３８（ｄｄ，Ｊ＝９．７，５．９Ｈｚ，１Ｈ），５．１９−５．０４（ｍ，２Ｈ），４．２０（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，５．９Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０４−３．９１（ｍ，２Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ），３．４５（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．０４−２．８２（ｍ，２Ｈ），２．５８−２．５３（ｍ，１Ｈ），１．２３（ｓ，９Ｈ），１．０３（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）。
【０３９１】
実施例１９Ｅ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ２の調製
2019534238.tif 000119
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ２を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000120
いくつかの態様において、Ｒ３は、本明細書の別の箇所で記載されるＲ５０に対応する。
【０３９２】
トリホスゲン（２６８ｍｇ、０．９０４６ｍｍｏｌ、１００質量％）を、フラスコ内で３ｍＬのＤＣＭに溶解し、次いで、６ｍＬのＤＣＭ中の２−［（５−ニトロ−２−ピリジル）ジスルファニル］エタノール（６０４ｍｇ、２．６０１ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、純粋なピリジン（１．８当量、４．０７１ｍｍｏｌ、１００質量％）を添加した。３０分後、この溶液を、（２−アミノ−４，５−ジメトキシ−フェニル）−［（２Ｓ）−２−［［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］−４−メチレン−ピロリジン−１−イル］メタノン（９４８ｍｇ、２．２６２ｍｍｏｌ）の溶液、及び５ｍＬのＤＣＭ（＋０．８ｍＬのすすぎ）中に添加した。約２０分後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、１Ｎ  ＨＣｌ及び飽和重炭酸ナトリウムで洗浄した。有機物を、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、カラムして（４０ｇシリカゲル、２５％次いで４５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｐｔ）、綿毛状の黄色固体としてカルバメート（１．０７ｇ、収率７１％）を得た。
【０３９３】
２−［（５−ニトロ−２−ピリジル）ジスルファニル］エチルＮ−［２−［（２Ｓ）−２−［［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］−４−メチレン−ピロリジン−１−カルボニル］−４，５−ジメトキシ−フェニル］カルバメート（１．０６７ｇ、１．６１ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦに溶解し、次いで、水（１．５ｍＬ）を添加し、続いて、酢酸（８ｍＬ）を室温で添加した。混合物を、５５℃に加熱し、一晩撹拌した。混合物を室温に冷却した後、炭酸ナトリウムを添加して、酢酸を中和した。混合物をＥｔＯＡｃで３回抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ抽出物を、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、粗アルコール（１．２６ｇ）を得、これを精製することなく次のステップで使用した。
【０３９４】
ＤＣＭ（１６ｍＬ）中の上記のアルコール（８８４ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）に、デスマーチンペルヨージナン（７１５ｍｇ、１．６８５ｍｍｏｌ）を室温で添加した。約７０分後、さらに１０５ｍｇのＤ−Ｍペルヨージナンを添加した。２．５時間後、さらに７６ｍｇのＤ−Ｍペルヨージナンを添加した。全ての出発材料が消費されるとすぐに、混合物をＤＣＭで希釈し、次いで、混合した飽和ＮａＨＣＯ３（約６ｍＬ）及び１Ｍ亜硫酸ナトリウム（約６ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。得られた残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（４０ｇシリカゲル、５０％、次いで８０％、次いで１００％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｐｔ）によって精製して、黄色固体として２−［（５−ニトロ−２−ピリジル）ジスルファニル］エチル（６Ｓ，６ａＲ）−６，６ａ−ジヒドロキシ−２，３−ジメトキシ−８−メチレン−１１−オキソ−７，９−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−カルボキシレート（７６５ｍｇ、収率８４％）を得た。
【０３９５】
０．２ｍＬのＤＭＳＯ中の２−［（５−ニトロ−２−ピリジル）ジスルファニル］エチル（６ａＳ）−６−ヒドロキシ−２，３−ジメトキシ−８−メチレン−１１−オキソ−６，６ａ，７，９−テトラヒドロピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−カルボキシレート（６３ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）に、シリンジを介してプロパン−２−チオール（０．５ｍＬ）を添加し、次いで、５９℃に加熱した。反応が終了した後、混合物を、室温まで冷却し、ロータバップ中でＥｔＯＡｃを２回共蒸発させて、可能な限りチオールを除去した。得られた残渣を、逆相ＨＰＬＣによって精製して、２−スルファニルエチル（６ａＳ）−６−ヒドロキシ−２，３−ジメトキシ−８−メチレン−１１−オキソ−６，６ａ，７，９−テトラヒドロピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−カルボキシレート（３８．６ｍｇ）を得た。
【０３９６】
ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝２．４２分，ｍ／ｚ＝４６９［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０６（ｓ，１Ｈ），６．８０（ｓ，１Ｈ），６．６２（ｓ，１Ｈ），５．３７（ｄｄ，Ｊ＝９．６，５．４Ｈｚ，１Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），４．３７（ｄｔ，Ｊ＝１２．２，６．３Ｈｚ，１Ｈ），４．１４−３．９３（ｍ，４Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ），３．４５（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．０１−２．８３（ｍ，３Ｈ），１．２３−１．１６（ｍ，６Ｈ）。
【０３９７】
実施例１９Ｆ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ１６の調製
2019534238.tif 000121
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ１６を、実施例１９Ｅの方法に従って調製した。ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝２．５６分，ｍ／ｚ＝４８３［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０６（ｓ，１Ｈ），６．７９（ｓ，１Ｈ），６．６２（ｓ，１Ｈ），５．３７（ｄｄ，Ｊ＝９．７，５．９Ｈｚ，１Ｈ），５．１６−５．０９（ｍ，２Ｈ），４．３５（ｄｔ，Ｊ＝１２．２，６．３Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９８（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ），３．４４（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），２．８８（ｔ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，３Ｈ），２．５４（ｓ，１Ｈ），１．２５（ｓ，９Ｈ），０．０８（ｓ，１Ｈ）。
【０３９８】
実施例１９Ｇ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ２９の調製
2019534238.tif 000122
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ２９を、実施例１９Ｅの方法に従って調製した。ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝１．７２分，ｍ／ｚ＝４７１［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０６（ｓ，１Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），６．６２（ｓ，１Ｈ），５．３７（ｄｄ，Ｊ＝９．７，５．８Ｈｚ，１Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），４．８８−４．８０（ｍ，１Ｈ），４．４５−４．３４（ｍ，１Ｈ），４．１４−４．０５（ｍ，１Ｈ），４．０２−３．９３（ｍ，１Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ），３．７９−３．７８（ｍ，１Ｈ），３．６０（ｄｑ，Ｊ＝１４．２，６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．４９−３．４０（ｍ，１Ｈ），２．９４−２．６９（ｍ，４Ｈ），２．５４（ｓ，１Ｈ）。
【０３９９】
実施例１９Ｈ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ２８の調製
2019534238.tif 000123
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ２８を、実施例１９Ｄの方法に従って調製した。ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝２．６８分，ｍ／ｚ＝４９５［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０６（ｓ，１Ｈ），６．８０（ｓ，１Ｈ），６．６２（ｓ，１Ｈ），５．３７（ｄｄ，Ｊ＝９．７，５．８Ｈｚ，１Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），４．４４−４．３３（ｍ，１Ｈ），４．１５−４．０５（ｍ，１Ｈ），４．０２−３．９３（ｍ，１Ｈ），３．８１（ｓ，６Ｈ），３．４４（ｔ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），２．８８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，３Ｈ），２．５５（ｄｔ，Ｊ＝５．７，２．５Ｈｚ，２Ｈ），２．４８−２．４２（ｍ，１Ｈ），１．８９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），１．６４（ｓ，２Ｈ），１．５３（ｓ，４Ｈ）。
【０４００】
実施例１９Ｉ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ２７の調製
2019534238.tif 000124
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ２７を、実施例１９Ｅの方法に従って調製した。ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝１．８３分，ｍ／ｚ＝４９９［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０６（ｓ，１Ｈ），６．８０（ｓ，１Ｈ），５．３７（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），５．１６−５．０９（ｍ，２Ｈ），４．４５−４．３４（ｍ，１Ｈ），４．１６−３．９３（ｍ，２Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ），３．４４（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），３．０５−２．７９（ｍ，５Ｈ），２．６５−２．５０（ｍ，１Ｈ），２．４６（ｓ，１Ｈ），２．０７（ｓ，３Ｈ）。
【０４０１】
実施例１９Ｊ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ７の調製
2019534238.tif 000125
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ７を、実施例１９Ｅの方法に従って調製した。ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝２．６２分，ｍ／ｚ＝４９５［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０７（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６６−６．６０（ｍ，１Ｈ），５．４１−５．３６（ｍ，１Ｈ），５．１６−５．０９（ｍ，２Ｈ），４．３０（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．１５−４．０６（ｍ，１Ｈ），４．０２−３．８８（ｍ，２Ｈ），３．８１（ｓ，６Ｈ），３．４５（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），２．９１（ｔｄ，Ｊ＝１６．０，８．６Ｈｚ，２Ｈ），２．５７−２．５３（ｍ，１Ｈ），１．１４（ｄｄ，Ｊ＝１１．４，６．６Ｈｚ，６Ｈ），０．９６−０．８１（ｍ，４Ｈ）。
【０４０２】
実施例１９Ｋ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ１の調製
2019534238.tif 000126
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ１を、実施例１９Ｅの方法に従って調製した。ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝２．２０分，ｍ／ｚ＝４５５［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０６（ｓ，１Ｈ），６．８０（ｓ，１Ｈ），６．６２（ｓ，１Ｈ），５．３７（ｄｄ，Ｊ＝９．７，５．１Ｈｚ，１Ｈ），５．１６−５．０９（ｍ，２Ｈ），４．３９（ｄｔ，Ｊ＝１２．２，６．３Ｈｚ，１Ｈ），４．１５−３．９３（ｍ，３Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ），３．４５（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），２．８８（ｄｄ，Ｊ＝１６．１，９．０Ｈｚ，３Ｈ），２．６５（ｑ，Ｊ＝１２．６，６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．５４（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），１．２３−１．１４（ｍ，３Ｈ）。
【０４０３】
実施例１９Ｌ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ２６の調製
2019534238.tif 000127
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ２６を、実施例１９Ｅの方法に従って調製した。ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝２．０８分，ｍ／ｚ＝４９７［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０８（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６５（ｓ，１Ｈ），５．３８（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），４．７７（ｓ，３Ｈ），４．４５−４．３４（ｍ，１Ｈ），４．２６−４．０６（ｍ，３Ｈ），４．０２−３．９３（ｍ，１Ｈ），３．８１（ｓ，６Ｈ），３．４５（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．０９（ｓ，１Ｈ），２．９４−２．８３（ｍ，１Ｈ），２．６２−２．５３（ｍ，１Ｈ），１．０４（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），−０．０３−−０．１３（ｍ，１Ｈ）。
【０４０４】
実施例１９Ｍ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ２５の調製
2019534238.tif 000128
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ２５を、実施例１９Ｅの方法に従って調製した。ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝２．１６分，ｍ／ｚ＝４９９［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０７（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），５．３８（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），５．１４（ｓ，２Ｈ），４．２−４．１（ｍ，２Ｈ），３．９９（ｓ，１Ｈ），３．８１（ｓ，６Ｈ），３．４６（ｓ，４Ｈ），３．２２（ｓ，３Ｈ），２．７９（ｓ，２Ｈ），２．６９−２．５４（ｍ，３Ｈ），１．０５（ｓ，２Ｈ）。
【０４０５】
実施例１９Ｎ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ２４の調製
2019534238.tif 000129
【０４０６】
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ２４を、実施例１９Ｅの方法に従って調製した。
【０４０７】
チオールを、以下のスキームに従って合成した。
2019534238.tif 000130
【０４０８】
ＭＴＢＥ（５０ｍＬ）中のテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルバルデヒド１４ａ（５ｇ、４３．８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｓ２Ｃｌ２（２．９６ｇ、２１．９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、窒素下、５５℃で１６時間撹拌し、次いで、反応混合物を、周囲温度まで冷却し、真空下で溶媒を除去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカ：２００〜３００メッシュ、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝５／１）によって精製して、黄色油としてジスルフィド１４ｂ（５ｇ、５８％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．０５（ｓ，１Ｈ），３．９２−３．４２（ｍ，８Ｈ），２．２２−１．５８（ｍ，８Ｈ）。
【０４０９】
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の４，４’−ジスルファンジイルビス（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルバルデヒド）７（５ｇ、１２．８２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＬｉＡｌＨ４（０．９７ｇ、２５．６４ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加した。添加後、反応混合物を周囲温度で２時間撹拌し、次いで、反応混合物を、ＰＨ＝６までＨＣｌ（３Ｎ）で酸性化し、エチルアセテート（３０ｍＬ×３）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカ：２００〜３００メッシュ、ＰＥ／ＥＡ＝１０／１）で精製して、黄色油としてチオール１４ｃ（２．０２ｇ、３４％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ３．８６−．３８３（ｍ，４Ｈ），３．５３（ｓ，２Ｈ），２．２５（ｓ，１Ｈ），１．８６−１．４３（ｍ，５Ｈ）。ＧＣＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＝１４８。
【０４１０】
ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝２．２４分，ｍ／ｚ＝５２５［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０７（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６１（ｓ，１Ｈ），５．３７（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），４．２３（ｄｄ，Ｊ＝１１．１，６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），４．０２−３．８３（ｍ，４Ｈ），３．８１（ｓ，６Ｈ），３．４５（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．０２（ｄｔ，Ｊ＝１１．１，４．１Ｈｚ，１Ｈ），２．９４−２．８３（ｍ，２Ｈ），２．５９−２．５２（ｍ，２Ｈ），１．９５−１．７６（ｍ，２Ｈ），１．５５−１．３７（ｍ，２Ｈ），１．２７−１．２１（ｍ，１Ｈ），１．０５（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）。
【０４１１】
実施例１９Ｏ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグの調製
2019534238.tif 000131
上記のＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグを、実施例１９Ｅの方法に従って調製した。ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝１．８６分，ｍ／ｚ＝４８５［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０６（ｓ，１Ｈ），６．７９（ｓ，１Ｈ），６．６２（ｓ，１Ｈ），５．３７（ｄｄ，Ｊ＝９．７，６．０Ｈｚ，１Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），４．８８（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），４．３８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１６−３．９５（ｍ，２Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ），３．４６（ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，２Ｈ），３．３８−３．３４（ｍ，１Ｈ），２．８６（ｓ，４Ｈ），２．５８−２．５３（ｍ，１Ｈ），１．１９（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，６．６Ｈｚ，３Ｈ）。
【０４１２】
実施例１９Ｐ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ１２の調製
2019534238.tif 000132
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ１２を、実施例１９Ｅの方法に従って調製した。ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝２．４０分，ｍ／ｚ＝４６９［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０７（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６３（ｓ，１Ｈ），５．３８（ｄｄ，Ｊ＝９．７，５．９Ｈｚ，１Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），４．２１（ｄｄ，Ｊ＝１１．１，６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９７（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，２Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，６Ｈ），３．４５（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．０５（ｓ，１Ｈ），２．９４−２．８３（ｍ，１Ｈ），２．７０−２．５３（ｍ，３Ｈ），２．４５（ｐ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），１．１６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０８−１．０２（ｍ，２Ｈ）。
【０４１３】
実施例１９Ｑ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ３の調製
2019534238.tif 000133
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ３を、実施例１９Ｅの方法に従って調製した。
【０４１４】
パラ−ニトロピリジンジスルフィドを、以下のスキームに従って合成した。
2019534238.tif 000134
【０４１５】
ＭＴＢＥ（８０ｍＬ）中のシクロブタンカルバルデヒド１７ａ（９．８ｇ、１２０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｓ２Ｃｌ２（８．１ｇ、６０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、窒素下、５５℃で１６時間撹拌した。反応混合物を周囲温度まで冷却し、真空下で溶媒を除去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカ：２００〜３００メッシュ、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝２０／１）で精製して、茶色油として１，１’−ジスルファンジイルジクロロブタンカルバルデヒド（１１．２ｇ、８３％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．２８（ｓ，２Ｈ），３．０６−１．２０（ｍ，１２Ｈ）。
【０４１６】
ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の１，１’−ジスルファンジシクロブタンカルバルデヒド５（１１．２ｇ、４９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＬｉＡｌＨ４（３．７ｇ、９７ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加した。添加後、反応混合物を周囲温度で２時間撹拌した。反応混合物を、ｐＨ＝６までＨＣｌ（３Ｎ）で酸性化し、エチルアセテート（２００ｍＬ×３）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を除去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカ：２００〜３００メッシュ、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１０／１）で精製して、黄色油としてチオール１７ｃ（３．８ｇ、３３％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ３．６４（ｓ，２Ｈ），２．３５−２．０９（ｍ，５Ｈ），２．０５−１．８７（ｍ，２Ｈ），１．８１（ｓ，１Ｈ）。ＧＣＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝＋１１８。
【０４１７】
ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中の１７ｃ（４．８８ｇ、４１．３５ｍｍｏｌ）及び１，２−ビス（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファン（１２．８２ｇ、４１．３５ｍｍｏｌ）の混合物を、窒素下、周囲温度で１６時間撹拌した。溶液を、真空下で濃縮し、残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカ：２００〜３００メッシュ、ＰＥ／ＥＡ＝１０／１）によって精製して、黄色固体として標的化合物１７ｄ（２．０１ｇ、１８％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ９．３０（ｓ，１Ｈ），８．３４（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．５７（ｓ，２Ｈ），３．４１（ｓ，１Ｈ），２．２７−２．１４（ｍ，５Ｈ），２．０８−１．９３（ｍ，１Ｈ）。；ＬＣＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝＋２７３（Ｍ＋１）。
【０４１８】
ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝２．６１分，ｍ／ｚ＝４９５［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０８（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６４（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），５．４５−５．３６（ｍ，１Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），４．３０（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．９７（ｄ，Ｊ＝１３．７Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ），３．４６（ｔｄ，Ｊ＝９．５，１．８Ｈｚ，１Ｈ），２．８９（ｄｄ，Ｊ＝１５．８，９．２Ｈｚ，１Ｈ），２．６２−２．５２（ｍ，２Ｈ），１．９１（ｓ，６Ｈ），１．６３（ｓ，１Ｈ），１．１３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）。
【０４１９】
実施例１９Ｒ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ５の調製
2019534238.tif 000135
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ５を、実施例１９Ｅの方法に従って調製した。
【０４２０】
パラ−ニトロピリジンジスルフィドを、以下のスキームに従って合成した。
2019534238.tif 000136
【０４２１】
ＭＴＢＥ（３０ｍＬ）中のシクロペンタンカルバルデヒド１８ａ（９．０ｇ、９２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｓ２Ｃｌ２（７．４ｇ、５５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、窒素下、５５℃で１６時間撹拌した。反応混合物を周囲温度まで冷却し、真空下で溶媒を除去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカ：２００〜３００メッシュ、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝８０／１）で精製して、茶色油として１，１’−ジスルファンジイルジシクロペンタンカルバルデヒド１８ｂ（５．５ｇ、４６％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．２３（ｓ，２Ｈ），２．４１−１．５１（ｍ，１６Ｈ）。
【０４２２】
ＴＨＦ（６０ｍＬ）中の１，１’−ジスルファンジイルジシクロペンタンカルバルデヒド１８ｂ（８．５ｇ、３２．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＬｉＡｌＨ４（２．５ｇ、６５．８ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加した。添加後、反応混合物を周囲温度で２時間撹拌し、次いで、溶液を、ＰＨ＝６までＨＣｌ（３Ｎ）で酸性化し、エチルアセテート（１５０ｍＬ×２）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を除去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカ：２００〜３００メッシュ、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝２０／１）によって精製して、黄色油として１８ｃ（５．５ｇ、６３％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ３．５１（ｓ，２Ｈ），２．０４（ｓ，１Ｈ），１．８５−１．６７（ｍ，７Ｈ），１．６４（ｓ，１Ｈ）。ＧＣＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝＋１３２。
【０４２３】
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中の１８ｃ（３．５ｇ、２６．５ｍｍｏｌ）及び１，２−ビス（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファン３（１２．３ｇ、３９．８ｍｍｏｌ）の混合物を、窒素下、周囲温度で１６時間撹拌した。反応が完了した後、溶液を真空下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカ：２００〜３００メッシュ、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１０／１）で精製して、黄色固体として標的化合物１８ｄ（１．９ｇ、２５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：δ９．２４−９．２０（ｍ，１Ｈ），８．５８（ｄｄ，Ｊ＝８．９，２．７Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄｄ，Ｊ＝８．９，０．５Ｈｚ，１Ｈ），５．１８（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），３．４０（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６３−１．８２（ｍ，８Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝＋２８７（Ｍ＋１）。
【０４２４】
ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝２．４８分，ｍ／ｚ＝５０９［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０８（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．７３−６．６０（ｍ，１Ｈ），５．４０（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），４．２２（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），４．０１−３．８４（ｍ，２Ｈ），３．８１（ｓ，６Ｈ），３．４６（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），２．８８（ｄｄ，Ｊ＝１５．９，９．３Ｈｚ，１Ｈ），２．５５（ｄｄ，Ｊ＝４．１，２．３Ｈｚ，２Ｈ），１．８１−１．３９（ｍ，１０Ｈ），１．１２（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ）。
【０４２５】
実施例１９Ｓ：ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ１１及び３０の調製
2019534238.tif 000137
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ１１及び３０は、上記の構造に対応し、アスタリスクで表されるキラル中心のうちの１つ以上に異なる立体配置を有するジアステレオマーである。化合物は、実施例１９Ｅの方法に従って調製した。
【０４２６】
パラ−ニトロピリジンジスルフィドを、実施例１９Ｎに記載される手順を用いて以下のスキームに従って合成した。
2019534238.tif 000138
【０４２７】
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ１１ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝１．９５分，ｍ／ｚ＝５１１［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０８（ｓ，１Ｈ），６．８３（ｓ，１Ｈ），６．６４（ｓ，１Ｈ），５．３９（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），４．３４（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９８（ｔ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，２Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，６Ｈ），３．７８−３．７２（ｍ，１Ｈ），３．６３（ｓ，１Ｈ），３．５４（ｓ，２Ｈ），３．４６（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），２．８９（ｄｄ，Ｊ＝１５．７，９．４Ｈｚ，１Ｈ），２．６２−２．５０（ｍ，３Ｈ），１．８３（ｄ，Ｊ＝３７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．１２（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ）。
【０４２８】
ＰＢＤ単量体ジスルフィドプロドラッグ３０ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，５分），ＲＴ＝１．９９分，ｍ／ｚ＝５１１［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．０８（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），５．４８−５．３４（ｍ，１Ｈ），５．２１−５．０７（ｍ，２Ｈ），４．３３（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１８−３．９１（ｍ，３Ｈ），３．８１（ｓ，６Ｈ），３．７９−３．７０（ｍ，０Ｈ），３．４８（ｄ，Ｊ＝１７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．９７−２．８２（ｍ，１Ｈ），２．５５（ｄｄ，Ｊ＝４．２，２．２Ｈｚ，２Ｈ），２．４７−２．２９（ｍ，１Ｈ），１．８５（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ），１．１３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）。
【０４２９】
実施例２０：ＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグの調製
実施例２０Ａ：ＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ４の調製
ＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ４を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000139
【０４３０】
上記構造における、及び実施例２０に示される他の箇所のアスタリスクは、キラル中心を表す。
【０４３１】
ＤＣＭ（２．０ｍＬ）中のトリホスゲン（８３．２ｍｇ、０．２８０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（３．０ｍＬ）中の化合物Ａ２及びピリジンの溶液を０℃で添加した。混合物を、２０℃で３０分間撹拌し、真空中で濃縮した。それを、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）に溶解し、ピリジン（１８．５ｍｇ、０．２３４ｍｍｏｌ）及び化合物Ａ１（１２４ｍｇ、０．５１６ｍｍｏｌ）の溶液に２０℃で滴加した。反応混合物を、２０℃で２時間撹拌した後、それを、真空中で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜５０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、黄色固体として化合物Ａ３（１５０ｍｇ、５４％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．４１９分，ｍ／ｚ＝１２６１．４［Ｍ＋１］＋。
【０４３２】
ＴＨＦ（４．０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（４．０ｍＬ）、及びＨＯＡｃ（６．０ｍＬ）中の化合物Ａ３（１５０ｍｇ、０．１１９ｍｍｏｌ）の溶液を、１０℃で８時間撹拌した。混合物を、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）、及びブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中の５％ＣＨ３ＯＨ）によって精製して、無色油として化合物Ａ４（７５ｍｇ、６０．４％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．９４１分，ｍ／ｚ＝１０３３．３［Ｍ＋１］＋。
【０４３３】
ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の化合物Ａ４（４４ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）及びＤＭＰ（５４ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の混合物を、１３℃で１６時間撹拌した。反応混合物を、真空中で濃縮し、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中の５．６％  ＭｅＯＨ  Ｒｆ＝０．５）によって精製し、続いて、分取ＨＰＬＣ（１０ｍＭ、ＮＨ４ＨＣＯ３−ＡＣＮ）によって精製して、白色固体としてＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ４（１５ｍｇ、３４％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．９４１分，ｍ／ｚ＝１０５１．２［Ｍ＋２３］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．１９（ｓ，２Ｈ），６．７３（ｓ，２Ｈ），５．５９−５．５７（ｍ，２Ｈ），５．１２（ｓ，４Ｈ），４．４３（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，２Ｈ），４．２６−４．１５（ｍ，１Ｈ），４．１１（ｓ，１Ｈ），４．０２−３．９８（ｍ，３Ｈ），３．９６（ｓ，４Ｈ），３．８８（ｓ，６Ｈ），３．８０−３．６５（ｍ，２Ｈ），３．６２（ｍ，２Ｈ），２．９０−２．８０（ｍ，２Ｈ），２．７２−２．６０（ｍ，６Ｈ），２．１８（ｂｒ，２Ｈ），２．０２−１．９２（ｂｒ，１３Ｈ），１．７０−１．６３（ｍ，３Ｈ），１．２２−１．１９（ｍ，６Ｈ）。
【０４３４】
実施例２０Ｂ：ＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ１の調製
ＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ１を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000140
ＤＣＭ（４．０ｍＬ）中のトリホスゲン（４２．０２ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（４ｍＬ）中の化合物Ａ１（３００．０ｍｇ、０．３１０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（６３．６８ｍｇ、０．６３０ｍｍｏｌ）の溶液を滴加した。混合物を０℃で３０分間撹拌した後、ＤＣＭ（２．０ｍＬ）中の化合物Ａ２（１１２．１６ｍｇ、０．６３０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１２７ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、混合物を１８℃で１８時間撹拌した。混合物を、水（２０．０ｍＬ）とＤＣＭ（４０．０ｍＬ）との間に分配し、有機層を、水（２０．０ｍＬ）、ブライン（２０．０ｍＬ）で洗浄し、濃縮した。それを、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：石油エーテル１：２）上で精製して、黄色油として化合物Ａ３（２４０ｍｇ、６５％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．２９６分，ｍ／ｚ＝１１５７．４［Ｍ＋１］＋。
【０４３５】
ＴＨＦ（１．５ｍＬ）中の化合物Ａ３（２４０．０ｍｇ、０．２１０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＡｃ／Ｈ２Ｏの混合物（４．０ｍＬ、３／１）を添加した。混合物を、８℃で１８時間撹拌した。ＮａＨＣＯ３溶液を用いて、ｐＨが８になるまで調節し、それを、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。それを、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）によって精製して、黄色油として化合物Ａ４（１３０ｍｇ、６８％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．８６８分，ｍ／ｚ＝９２９．３［Ｍ＋１］＋。
【０４３６】
ＤＣＭ（６．０ｍＬ）中の化合物Ａ４（６０．０ｍｇ，０．０６００ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＰ（９５．８３ｍｇ、０．２３０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を、１８℃で１．０時間撹拌した。混合物を濾過し、Ｎａ２ＳＯ３水溶液（２０．０ｍＬ）、ブライン（２０．０ｍＬ）、及び水（２０．０ｍＬ）で洗浄した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中の７％ＭｅＯＨ）によって精製して、白色固体として化合物Ａ５（３０ｍｇ、４９％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．８０４分，ｍ／ｚ＝９２５．３［Ｍ＋１］＋。
【０４３７】
ＴＦＡ（１．０ｍＬ）を、化合物Ａ５（３０．０ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）に０℃で滴加した。それを２０分間撹拌した後、混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（４０．０ｍＬ）に０℃で滴加し、ＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中の１８％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．６）によって精製して、白色固体としてＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ１（５．８ｍｇ、２２％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．８９０分，ｍ／ｚ＝８０７．２［Ｍ＋１］＋。
【０４３８】
実施例２０Ｃ：ＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ２の調製
ＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ２を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000141
【０４３９】
ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中のトリホスゲン（８９．４３ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）及び４Å分子篩（５０ｍｇ）の溶液に、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中の化合物Ａ２（１６５．０ｍｇ、０．７１０ｍｍｏｌ）及びピリジン（１６８．５８ｍｇ、２．１３ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を０℃で３０分間撹拌した。得られた混合物を、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中の化合物Ａ１（７４５ｍｇ、０．７８０ｍｍｏｌ）、ピリジン（１６９ｍｇ、２．１３ｍｍｏｌ）、及び４ÅＭＳの溶液に添加した。それを、０℃で３０分間撹拌し、水（５．０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の５％ＭｅＯＨ）によって精製して、黄色油として生成物Ａ３（６９８ｍｇ、８１％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．１８７分，ｍ／ｚ＝６０６．５［Ｍ／２＋１］＋。
【０４４０】
ＤＣＭ（１０．０ｍＬ）中の化合物Ａ３（６９８．０ｍｇ、０．５８０ｍｍｏｌ）の溶液に、２−プロパンエチオール（４３９ｍｇ、５．７６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２０℃で１時間撹拌した後、ＭｎＯ２（１００ｍｇ）を添加し、５分間撹拌し、濾過した。濾液を、濃縮し、分取ＴＬＣ（石油エーテル中の５０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、黄色固体として化合物Ａ５（６２０ｍｇ、９５％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．２２１分，ｍ／ｚ＝１１３１．４［Ｍ＋１］＋。
【０４４１】
ＴＨＦ（６．０ｍＬ）及び水（６．０ｍＬ）中の化合物Ａ５（６２０．０ｍｇ、０．５５０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＡｃ（３．２９ｇ、５４．８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、４０℃で１６時間撹拌し、濃縮した。それを、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ）によって精製して、黄色油として化合物Ａ６（２０８ｍｇ、４２％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．８５４分，ｍ／ｚ＝９０３．３［Ｍ＋１］＋。
【０４４２】
ＤＣＭ（８．０ｍＬ）中の化合物Ａ６（２０８．０ｍｇ、０．２３０ｍｍｏｌ）の溶液に、４Å分子篩、ＤＭＰ（２２４．７ｍｇ、０．５３０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、２０℃で２時間撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ３及びＮａ２Ｓ２Ｏ３溶液（２．０ｍＬ／２．０ｍＬ）で反応停止処理した。それを、５分間撹拌し、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）を添加し、分離した。ＤＣＭ相を、水（２×５ｍＬ）で洗浄した。それを、乾燥させ、濃縮し、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中の５％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．２）によって精製して、淡黄色発泡体として化合物Ａ７（１２１ｍｇ、５８％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７８３分，ｍ／ｚ＝７８１．３［Ｍ−１００＋１］＋。
【０４４３】
ＴＦＡ（１．０ｍＬ、１３．５ｍｍｏｌ）を、化合物Ａ７（１２１．０ｍｇ、０．１３０ｍｍｏｌ）に０℃で添加した。混合物を１０分間撹拌した後、それを、冷飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２０ｍＬ）に添加し、ＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、濃縮し、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．２）によって精製し、続いて、分取ＨＰＬＣ（ＡＣＮ、アセトニトリル：４２〜６２％、０．２２５％ＦＡ）によって精製して、ＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ２（７．２ｍｇ、７．０％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．８６８分，ｍ／ｚ＝７８１．３［Ｍ＋１］＋。
【０４４４】
実施例２０Ｄ：ＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ３の調製
ＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ３を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000142
【０４４５】
ＤＣＭ（２．０ｍＬ）中のトリホスゲン（６５．３７ｍｇ、０．２２０ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＣＭ（３．０ｍＬ）中の化合物Ａ１（４２０．０ｍｇ、０．４４０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（８９．１６ｍｇ、０．８８０ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ２下、０℃で添加した。混合物を、２１℃で３０分間撹拌した後、それを濃縮し、ＤＣＭ（１８ｍＬ）を添加した。ＤＣＭ（２．０ｍＬ）中のＡ２（７５．０ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（７８．９１ｍｇ、０．７８０ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｎ２下、０℃で添加した。反応混合物を２０℃で１時間撹拌した後、それを真空中で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜５０％ＥｔＯＡＣ）によって精製して、化合物Ａ３（３５０ｍｇ、７４％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．３７９分，ｍ／ｚ＝１１７１．５［Ｍ＋１］＋。
【０４４６】
ＴＨＦ（３０ｍＬ）及び水（１５ｍＬ）中の化合物Ａ３（４１５．２ｍｇ、０．３５０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＡｃ（２．０２ｍＬ、３５．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を、２０℃で１２時間撹拌した。それを、真空中で濃縮し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（２×１００ｍＬ）で洗浄し、次いで、ＮａＨＣＯ３水溶液（２×６０ｍＬ）で洗浄した。ＥｔＯＡｃ層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。それを、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０〜１０％ＭｅＯＨ）によって精製して、黄色固体として化合物Ａ４（３２０ｍｇ、８７．１％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．０８０分，ｍ／ｚ＝９４３．５［Ｍ＋１］＋。
【０４４７】
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の化合物Ａ４（１７０．０ｍｇ、０．１８０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＰ（２２９．３ｍｇ、０．５４０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、１８℃で１時間撹拌し、それを、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）及びＮａ２ＳＯ３水溶液（２０ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）を添加した。混合物を、ＥｔＯＡｃ（３×６０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０〜５％ＭｅＯＨ）によって精製して、白色固体として化合物Ａ５（１５０ｍｇ、７５％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．８１４分，ｍ／ｚ＝９６１．５［Ｍ＋２３］＋。
【０４４８】
ＴＦＡ（９．５ｍＬ）及び水（０．５０ｍＬ）中の化合物Ａ５（７５．０ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）の溶液を、１４℃で１時間撹拌した。反応混合物を、冷飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）中に注ぎ、ＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濃縮し、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中の４％ＭｅＯＨ  Ｒｆ＝０．５）によって精製して、続いて、分取ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８  １５０＊３０  ５ｕ、条件：０．２２５％ＦＡ−ＣＡＮ）によって精製して、白色固体としてＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ３（９．５ｍｇ、１４％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．９５６分，ｍ／ｚ＝８２１．３［Ｍ＋２３］＋。
【０４４９】
実施例２０Ｅ：ＰＢＤ二量体対照１の調製
ＰＢＤ二量体対照１を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000143
2019534238.tif 000144
【０４５０】
ＨＯＡｃ／ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（９．０ｍＬ／４．５ｍＬ／３．０ｍＬ）中の化合物Ａ１（１．８０ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）の溶液を、室温で４８時間撹拌した。溶液を、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（４×４０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３水溶液（４×４０ｍＬ）、及びＨ２Ｏ（４０ｍＬ）で洗浄した。ＥｔＯＡｃ層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、油として化合物Ａ２（１．３８ｇ、９１％）を得た。
【０４５１】
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の化合物Ａ２（８００ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＭＰ（１．２６ｇ、２．９７ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。それを、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、Ｎａ２ＳＯ３水溶液（３０ｍＬ）で、０℃で反応停止処理した。有機層を、Ｈ２Ｏ（３×３０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３水溶液（３０ｍＬ）、及びＨ２Ｏ（３０ｍＬ）で洗浄した。それを、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１５：１）によって精製して、無色固体として化合物Ａ３（４００ｍｇ、５０．０％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，５−９５ＡＢ／１．５分）：ＲＴ＝０．７６７分，［Ｍ＋Ｎａ］＋＝８４３．４。
【０４５２】
９５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ（４．０ｍＬ）中の化合物Ａ３（３００ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で２時間撹拌した。次いで、溶液を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１２０ｍＬ）に０℃で滴加した。混合物を、ＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、乾燥させ、濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して、白色固体としてＰＢＤ二量体対照１（７０ｍｇ、３３％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，５−９５ＡＢ／１．５分）：ＲＴ＝０．７６７分，［Ｍ＋Ｎａ］＋＝８４３．４  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．６９（ｄ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ，２Ｈ），７．５０（ｓ，２Ｈ），６．８１（ｓ，２Ｈ），５．１９（ｄ，Ｊ＝１０．８０Ｈｚ，４Ｈ），４．２９（ｓ，５Ｈ），４．０２−４．１９（ｍ，４Ｈ），３．９４（ｓ，６Ｈ），３．８３−３．９２（ｍ，３Ｈ），３．０９−３．１６（ｍ，２Ｈ），２．９０−２．９９（ｍ，２Ｈ），１．９８−１．９４（ｍ，４Ｈ），１．６６−１．７０（ｍ，２Ｈ）。
【０４５３】
実施例２０Ｆ：ＰＢＤ二量体対照２の調製
ＰＢＤ二量体対照２を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000145
2019534238.tif 000146
2019534238.tif 000147
【０４５４】
ＨＯＡｃ／ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（９．０ｍＬ／４．５ｍＬ／３．０ｍＬ）中の化合物Ａ１（１．８０ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）の溶液を、室温で、４８時間撹拌した。それを、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（４×４０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３水溶液（２×４０ｍＬ）、及びＨ２Ｏ（４０ｍＬ）で洗浄した。ＥｔＯＡｃ層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、油として化合物２（１．３８ｇ、９１％）を得た。
【０４５５】
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の化合物Ａ２（８００ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＭＰ（１．２６ｇ、２．９７ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。次いで、混合物を、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、Ｎａ２ＳＯ３水溶液（３０ｍＬ）で、０℃で反応停止処理した。有機層を、Ｈ２Ｏ（３×３０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（３０ｍＬ）、及びＨ２Ｏ（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１５：１）によって精製して、無色固体として化合物Ａ３（４００ｍｇ、５０．０％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，５−９５ＡＢ／１．５分）：ＲＴ＝０．８６７分，［Ｍ＋Ｎａ］＋＝８４３．４。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２０（ｓ，２Ｈ），６．６１（ｓ，２Ｈ），５．４９（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），５．１４（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，４Ｈ），４．３２−４．１４（ｍ，５Ｈ），４．０７−３．９９（ｍ，５Ｈ），３．９０（ｓ，６Ｈ），３．６２（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），２．９６−２．８９（ｍ，２Ｈ），２．７３−２．６９（ｍ，２Ｈ），１．９８−１．９４（ｍ，４Ｈ），１．６９−１．６７（ｍ，２Ｈ），１．３７（ｓ，１８Ｈ）。
【０４５６】
９５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ（２．０ｍＬ）中の化合物Ａ３（１２０ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で２時間撹拌した。次いで、溶液を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１２０ｍＬ）に０℃で滴加した。混合物を、ＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、粗生成物として化合物４（８６ｍｇ、１００％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，５−９５ＡＢ／１．５分）：ＲＴ＝０．７６４分，［Ｍ＋Ｈ］＋＝５８５．３。
【０４５７】
無水ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（５．０ｍＬ／２．５ｍＬ）中の化合物Ａ４（８６ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ３ＣＮ（９２ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、室温で一晩撹拌した。それを濃縮し、残渣を、飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせたＤＣＭ層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（ＦＡ）によって精製して、白色固体としてＰＢＤ二量体対照２（１５．６ｍｇ、１８．１％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，５−９５ＡＢ／１．５分）：ＲＴ＝０．８０８分，［Ｍ＋Ｈ］＋＝５８９．３。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．５８（ｓ，２Ｈ），６．０５（ｓ，２Ｈ），５．０６（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，４Ｈ），４．４２−４．２７（ｍ，６Ｈ），３．９８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ），３．８４（ｓ，６Ｈ），３．５５（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，２Ｈ），３．３５−３．３０（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，９．６Ｈｚ，２Ｈ），２．９３−２．８７（ｍ，２Ｈ），２．４６−２．４２（ｍ，２Ｈ），１．９４−１．８９（ｍ，４Ｈ），１．６２−１．６０（ｍ，２Ｈ）。
【０４５８】
実施例２１：抗体へのコンジュゲーションのためのリンカーを含むＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグの調製
実施例２１Ａ：リンカーを含むＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ４の調製
リンカーを含むＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ４を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000148
上記構造における、及び実施例２１に示される他の箇所のアスタリスクは、キラル中心を表す。
【０４５９】
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のＡ６（４００．０ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）の混合物に、エタンチオールＡ７（２．７４ｇ、４４．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、４０℃で３０時間撹拌した。混合物を、ＭｎＯ２（０．２０ｇ）で５分間処理し、濾過した。濾液を濃縮し、残渣を、分取ＴＬＣ（１００％ＤＣＭ、Ｒｆ＝０．５）によって精製して、無色油として化合物Ａ２（１１０ｍｇ、４２％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ３．７４（ｓ，２Ｈ），２．７５−２．７０（ｍ，２Ｈ），２．１３−１．８７（ｍ，６Ｈ），１．８４（ｓ，１Ｈ），１．３０（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）。
【０４６０】
ＤＣＭ（４．０ｍＬ）中のトリホスゲン（８２．４ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（４．０ｍＬ）中のＡ２（１１０．０ｍｇ、０．６２０ｍｍｏｌ）及びピリジン（１４６．４ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）の溶液を滴加した。混合物を、１５℃で３０分間撹拌し、濃縮した。それを、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）に溶解し、ＤＣＭ（１５．０ｍＬ）中のＡ１（１．０５ｇ、１．２３ｍｍｏｌ）及びピリジン（１４５．８７ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で滴加した。混合物を１５℃で２時間撹拌した後、それを濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜５０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、黄色油としてＡ３（３１０ｍｇ、４５．８％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．１５１分，ｍ／ｚ＝１０５７．４［Ｍ＋１］＋。
【０４６１】
ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中のトリホスゲン（２６．５ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中のＡ３（２１０ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（６０．２８ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で添加した。反応混合物を、１５℃で３０分間撹拌した。上記の混合物に、ＤＭＳＯ（３．０ｍＬ）中のＭＣ−ＶＣ−ＰＡＢ（１６６．０ｍｇ、０．２９０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（５９．０ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）の溶液を滴加した。反応混合物を、４０℃で２時間撹拌した。混合物を、ＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈し、水（３×１０ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機層を、乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０〜１０％ＭｅＯＨ）によって精製して、黄色油としてＡ４（１６０ｍｇ、４８．４％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．２７１分，ｍ／ｚ＝８２８．６［Ｍ／２＋１］＋。
【０４６２】
ＴＨＦ（３．０ｍＬ）及び水（３．０ｍＬ）中のＡ４（１６０．０ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ）の混合物に、酢酸（４．５ｍＬ）を添加した。反応混合物を、１５℃で１５時間撹拌した。混合物を、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈し、水（２×１０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（２×１０ｍＬ）、及びブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。有機相を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、黄色油として粗物Ａ５（１２０ｍｇ、８２．７％）を得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．８０１分，ｍ／ｚ＝７１４．６［Ｍ／２＋１］＋。
【０４６３】
ＤＭＳＯ（３．０ｍＬ）中のＡ５（６０．０ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ）の混合物に、ＩＢＸ（５８．８ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、４０℃で１６時間撹拌した。混合物を、分取ＨＰＬＣ（ＡＣＮ４０〜７０％／水中の０．２２５％ＦＡ）によって精製して、白色固体として（１５ｍｇ、２５．１％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７５８分，ｍ／ｚ＝７１２．５［Ｍ／２＋１］＋。
【０４６４】
本開示のいくつかの態様において、リンカーを含むＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ４は、ＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグ４を形成するために、抗体にコンジュゲートされてもよい。
【０４６５】
実施例２１Ｂ：リンカーを含むＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ３の調製
リンカーを含むＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ３を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000149
【０４６６】
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のトリホスゲン（４８６．９ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の化合物Ａ１（１．４０ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（６６４ｍｇ、６．５６ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を、８℃で１０分間撹拌した。混合物を濃縮して、黄色固体として粗生成物（１．４８ｇ、９９．６％）を得た。ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の上記の粗生成物（１．４１ｇ、１．５６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（６．０ｍＬ）中の化合物Ａ２（１５０．０ｍｇ、０．７８０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１５８ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を８℃で１時間撹拌した後、それを濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の５０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、黄色固体として生成物化合物Ａ３（３００ｍｇ、３０％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．１９３分，ｍ／ｚ＝１０７１．５［Ｍ＋１］＋。
【０４６７】
ＤＣＭ（６．０ｍＬ）中のトリホスゲン（４１．６ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中の化合物Ａ３（３００ｍｇ、０．２８０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（５６．７ｍｇ、０．５６０ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を、８℃で１５分間撹拌した。混合物を濃縮して、黄色固体として粗生成物（３０７ｍｇ、９９．９％）を得、これを次のステップに直接使用した。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の粗生成物（３００．０ｍｇ、０．２７０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＦ（６．０ｍＬ）中のＭＣ＿ＶＣ＿ＰＡＢ（１５６ｍｇ、０．２７０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２７．７ｍｇ、０．２７０ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を８℃で１２時間撹拌した後、それを濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の６％ＭｅＯＨ）によって精製して、黄色固体として生成物化合物Ａ４（１４０ｍｇ、３１％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．３５４分，ｍ／ｚ＝８３６．４［Ｍ／２＋１］＋。
【０４６８】
ＴＨＦ（２．０ｍＬ）、水（２．０ｍＬ）、及び酢酸（３．０ｍＬ）中の化合物Ａ４（１４０．０ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）の混合物を、８℃で１２時間撹拌した。混合物を、ＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）で希釈し、水（３×５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を、乾燥させ、濃縮して、黄色固体として粗生成物化合物Ａ５（１２０ｍｇ、９９％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．９８３分，ｍ／ｚ＝７２２．０［Ｍ／２＋１］＋。
【０４６９】
ＤＭＳＯ（４．０ｍＬ）中の化合物Ａ５（１４０．０ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ）の溶液に、ＩＢＸ（１０８ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）を１８℃で添加した。反応混合物を、４０℃で８時間撹拌した。混合物を、分取ＨＰＬＣ（ＡＣＮ４０〜７０％／水中の０．２２５％ＦＡ）によって精製して、白色固体として、リンカーを含む生成物ＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ２（２０ｍｇ、１４％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７６０分，ｍ／ｚ＝７１９．７［Ｍ／２＋１］＋。
【０４７０】
本開示のいくつかの態様において、リンカーを含むＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ３は、ＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグ２ＡまたはＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグ２Ｂを形成するために、抗体にコンジュゲートされてもよい。
【０４７１】
実施例２１Ｃ：リンカーを含むＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ２の調製
リンカーを含むＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ２を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000150
【０４７２】
ＤＣＭ（２５．０ｍＬ）中の化合物Ａ８（３．１８ｇ、１０．２４ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物Ａ９（４００ｍｇ、５．１２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、８℃で１２時間撹拌した。混合物に、ＭｎＯ２（１００ｍｇ）を添加し、１０分間撹拌し、濾過した。濾液を、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（１００％ＤＣＭ）によって精製して、黄色固体として化合物２（６２０ｍｇ、２．６７ｍｍｏｌ、５２．１％）を得た。
【０４７３】
ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中のトリホスゲン（１９１．６ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中の化合物Ａ２（３００ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）及びピリジン（３０６ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を、８℃で１０分間撹拌した。得られた混合物を、ＤＣＭ（１５．０ｍＬ）中の化合物Ａ１（１．４３ｇ、１．６８ｍｍｏｌ）及びピリジン（３０６ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ）の溶液に滴加した。混合物を８℃で３０分間撹拌した後、それを濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の５０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、黄色油として生成物化合物Ａ３（０．５０ｇ、０．４２７ｍｍｏｌ、３３．１％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．０７７分，ｍ／ｚ＝１１１１．７［Ｍ＋１］＋。
【０４７４】
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の化合物Ａ３（３００ｍｇ、０．２７０ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物Ａ４（２０５ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、８℃で１０分間撹拌した。混合物に、ＭｎＯ２（１００ｍｇ）を添加し、１０分間撹拌し、濾過した。濾液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の５０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、黄色固体として生成物化合物Ａ５（２１０ｍｇ、０．２０４ｍｍｏｌ、７５．４％）を得た。
【０４７５】
ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中のトリホスゲン（３０．２ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中の化合物Ａ５（２１０ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（６１．７ｍｇ、０．６１０ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を８℃で３０分間撹拌した。次いで、混合物を、ＤＭＦ（５．０ｍＬ）中のＭＣ＿ＶＣ＿ＰＡＢ（１３９．８ｍｇ、０．２４０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（６１．７ｍｇ、０．６１０ｍｍｏｌ）の溶液に滴加した。混合物を、８℃で１２時間撹拌した。混合物を、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の８％ＭｅＯＨ）によって精製して、黄色油として生成物化合物Ａ６（１４０ｍｇ、０．０８５ｍｍｏｌ、４１．８％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．２４８分，ｍ／ｚ＝８１６．１［Ｍ／２＋１］＋。
【０４７６】
酢酸（３．０ｍＬ）、ＴＨＦ（２．０ｍＬ）、及び水（２．０ｍＬ）中の化合物Ａ６（１４０．０ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）の混合物を、８℃で８時間撹拌した。混合物を、ＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）で希釈し、水（３×５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、濃縮して、白色固体として生成物化合物Ａ７（１２０ｍｇ、０．０８５６ｍｍｏｌ、９９．７％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７８７分，ｍ／ｚ＝７０１．６［Ｍ／２＋１］＋。
【０４７７】
ＤＭＳＯ（３．０ｍＬ）中の化合物Ａ７（１３０．０ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＩＢＸ（１２９．９ｍｇ、０．４６０ｍｍｏｌ）を９℃で添加した。反応混合物を、５０℃で４８時間撹拌した。混合物を、分取ＨＰＬＣ（ＡＣＮ３５〜６５％／水中の０．２２５％ＦＡ）によって精製して、白色固体として、リンカーを含む生成物ＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ４（１０ｍｇ、０．００７１ｍｍｏｌ、７．６％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７２８分，ｍ／ｚ＝１３９７．９［Ｍ＋１］＋。
【０４７８】
本開示のいくつかの態様において、リンカーを含むＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ２は、ＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグ４を形成するために、抗体にコンジュゲートされてもよい。
【０４７９】
実施例２１Ｄ：二量体ジアフォラーゼプロドラッグ１Ａ及び１Ｂを形成するためにコンジュゲーションのためのリンカーを含み、構造、
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、
、及び名称：４−（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファネイル）ベンジル（１１ａＳ）−８−（（５−（（（１１ａＳ）−１０−（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート、を有する、ＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグの調製。
【０４８０】
リンカーを含むＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグを、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000152
【０４８１】
９５％ＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中のＡ７（２５０ｍｇ、１．７８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ａ８（２．０１ｍＬ、１７．８５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、０℃まで冷却し、混合物の色が無色から茶色に変化するまで、９５％ＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中のヨウ素（２００ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）の溶液を滴加した。それを２時間撹拌した後、ｐＨが７を超えるまで、飽和ＮａＨＣＯ３（２．０ｍＬ）を、０℃で添加した。溶液を、真空中で濃縮した。ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）を添加し、有機層を、１０％ＮａＨＣＯ３（３×１５ｍＬ）及びブラインで洗浄した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜３２％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、黄色油として化合物Ａ２（２８０ｍｇ、６８．８％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．５１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），４．５７（ｓ，２Ｈ），２．４０（ｂｒ，１Ｈ），１．２９（ｓ，９Ｈ）。
【０４８２】
ＤＣＭ（１．０ｍＬ）中のトリホスゲン（２６ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（４．０ｍＬ）中の化合物Ａ２（５０．０ｍｇ、０．２２０ｍｍｏｌ）及びピリジン（１８．０ｍｇ、０．２３０ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｎ２下、０℃で添加した。反応混合物を、Ｎ２下、０℃で５分間撹拌した後、それを、ピリジン（３４．０ｍｇ、０．４３０ｍｍｏｌ）及びＡ１（２７７ｍｇ、０．３２０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ２下、０℃で滴加した。反応混合物を、Ｎ２下、２０℃で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣を、分取ＴＬＣ（石油エーテル中の５０％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ＝０．４）によって精製して、黄色発泡体として化合物Ａ３（７０ｍｇ、２８．３％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．３２８分，ｍ／ｚ＝１１０８．７［Ｍ＋１］＋。
【０４８３】
ＤＣＭ（７．０ｍＬ）中のトリホスゲン（４６．０ｍｇ、０．１６０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（３．０ｍＬ）中の化合物Ａ３（４００．０ｍｇ、０．３６０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３７．０ｍｇ、０．３７０ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下、０℃で添加した。反応混合物を０℃で３０分間撹拌した後、ＤＭＦ（３．０ｍＬ）中のＭＣ−ＶＣ−ＰＡＢ（２４７．０ｍｇ、０．４３０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（７３．０ｍｇ、０．７２０ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｎ２下、２０℃で添加した。反応混合物を、Ｎ２下、４０℃で８時間撹拌した。混合物を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０〜６％ＭｅＯＨ）によって精製して、黄色固体として化合物Ａ４（１９０ｍｇ、３０．７％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．３０８分，ｍ／ｚ＝８５４．２［Ｍ／２＋１］＋。
【０４８４】
水（２．０ｍＬ）及びＴＨＦ（２ｍＬ）中の化合物Ａ４（４１５ｍｇ、０．２４０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＡｃ（６．４７ｍＬ、１１３ｍｍｏｌ）を、１５℃で添加した。反応混合物を、１５℃で７時間撹拌した後、それを、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈し、水（２×１５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１５ｍＬ）及びブライン（１５ｍＬ）で洗浄した。それを乾燥させ、濃縮して、黄色固体として粗化合物Ａ５（１５０ｍｇ、４１．７％）を得、これをさらに精製することなく次のステップに直接使用した。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．９９７分，ｍ／ｚ＝７３９．４［Ｍ／２＋１］＋。
【０４８５】
ＤＭＳＯ（３．０ｍＬ）中の化合物Ａ５（５０．０ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＩＢＸ（３８．０ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）を１８℃で添加した。反応混合物を、３７℃で８時間撹拌した。混合物を、分取ＨＰＬＣ（ＡＣＮ４０〜７０％／水中の０．２２５％ＦＡ）によって精製して、白色固体として、リンカーを含むＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ１（１７．２ｍｇ、３３．１％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．８０６分，ｍ／ｚ＝７３７．１［Ｍ／２＋１］＋。
【０４８６】
本開示のいくつかの態様において、リンカーを含むＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグは、ＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグ１ＡまたはＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグ１Ｂを形成するために、抗体にコンジュゲートされてもよい。
【０４８７】
実施例２１Ｅ：リンカーを含むＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ５の調製
リンカーを含むＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ５を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000153
【０４８８】
ＤＭＦ（４０ｍＬ）中のＴＢＤＰＳＣｌ（８．６２ｇ、３１．３６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＦ（３０ｍＬ）中の化合物Ａ８（２．２７ｇ、２９．０５ｍｍｏｌ）の溶液を滴加した。溶液を１０分間撹拌した後、ＤＭＦ（８．０ｍＬ）中のイミダゾール（４．２７ｇ、６２．７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を２０℃２４時間撹拌した。混合物を濃縮し、ＤＣＭ（３０ｍＬ）に取り込み、濾過し、Ｈ２Ｏ（３×３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を除去した。残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の３％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、無色油として化合物Ａ９（７．０ｇ、７６％）を得た。
【０４８９】
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の化合物Ａ９（１．００ｇ、３．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の化合物Ａ１０（１．９６ｍｇ、６．３２ｍｍｏｌ）の溶液を１５分間にわたって滴加した。混合物を２６℃でさらに１時間撹拌した後、二酸化マンガン（１．００ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）を添加し、黄色溶液が無色になるまで、１０分間撹拌した。二酸化マンガンを濾過し、濾液を濃縮した。ＭｅＯＨ（５．０ｍＬ）を添加し、固体を濾過して、化合物Ａ１０を除去した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜２．５％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、黄色固体として化合物Ａ１１（０．９０ｇ、６１％）を得た。
【０４９０】
ＤＣＭ（６．０ｍＬ）中の化合物Ａ１１（２５０ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（４．０ｍＬ）中の化合物Ａ１２（０．５０ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）の溶液を、１５分間にわたって滴加した。添加後、混合物を２６℃でさらに１時間撹拌した。二酸化マンガン（１．０ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）を添加した。黄色反応溶液が無色になるまで、混合物を、さらに１０分間撹拌した。二酸化マンガンを濾過し、濾液を濃縮し、ＭｅＯＨ（５．０ｍＬ）を添加した。固体を濾過し、残渣を、カラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜１４％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、黄色油として化合物Ａ２（０．５００ｇ、７１％）を得た。
【０４９１】
ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中のトリホスゲン（６９５ｍｇ、２．３４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の化合物Ａ１（２．０ｇ、２．３４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（７１１．０ｍｇ、７．０３ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で添加した。混合物を０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を濃縮し、ＤＣＭ（４．０ｍＬ）中の化合物Ａ２（６８０ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３０８ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を、２５℃で２時間撹拌し、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜５０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、黄色固体としてＡ３（７００ｍｇ、３３％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．４０１分，ｍ／ｚ＝１３２６．０［Ｍ＋１］＋。
【０４９２】
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のトリホスゲン（５４．０ｍｇ、０．１８０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中の化合物Ａ３（５００ｍｇ、０．４５０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（５０．０ｍｇ、０．４９０ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下、０℃で添加した。反応混合物を、０℃で３０分間撹拌した。反応混合物に、ＤＭＦ（３．０ｍＬ）中のＦｍｏｃ−ＶＣ＿ＰＡＢ（２６０．０ｍｇ、０．４５０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（７８．０ｍｇ、０．７７０ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を、４０℃で８時間撹拌し、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜８％ＭｅＯＨ）によって精製して、黄色固体として化合物Ａ４（１３０ｍｇ、１４％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．４７４分，ｍ／ｚ＝９７８．１［Ｍ／２＋１］＋。
【０４９３】
水（２．０ｍＬ）及びＴＨＦ（２．０ｍＬ）中の化合物Ａ４（１３０．０ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＡｃ（３．０ｍＬ、５２．５ｍｍｏｌ）を２６℃で添加し、２６℃で７時間撹拌した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、水（２×１５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）、及びブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。それを乾燥させ、濃縮して、黄色固体として粗化合物Ａ５（１３０ｍｇ、８３％）を得、これをさらに精製することなく次のステップに直接使用した。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．０６５分，ｍ／ｚ＝８６３．２［Ｍ／２＋１］＋。
【０４９４】
ＤＭＳＯ（３．０ｍＬ）中の化合物Ａ５（１３０．０ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）の溶液に、２−ヨードキシ安息香酸（８４．４ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）を２５℃で添加した。混合物を、４０℃で１０時間撹拌した後、それを、分取ＨＰＬＣ（ＡＣＮ８５〜１００％、水中の０．２２５％ＦＡ）によって精製して、白色固体として生成物Ａ６（６０ｍｇ、４５％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．１７８分，ｍ／ｚ＝８６１．４［Ｍ／２＋１］＋。
【０４９５】
ＴＨＦ（３．０ｍＬ）中の化合物Ａ６（６０．０ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＢＡＦ（３９．４ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）を２６℃で添加した。反応混合物を、２６℃で２時間撹拌した。反応混合物を、ＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、水（３×１５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、黄色油として粗化合物Ａ７（７０ｍｇ、粗物）を得た。
【０４９６】
ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中の化合物Ａ７（７０．０ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＭＣ＿ＯＳｕ（５１．４ｍｇ、０．１７０ｍｍｏｌ）を２６℃で添加した。混合物を、２６℃で２時間撹拌した。反応混合物を、分取ＨＰＬＣ（ＡＣＮ３５〜５５％／水中の０．２２５％ＦＡ）によって精製して、白色固体として（５．５ｍｇ、６．７％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．８５２分，ｍ／ｚ＝１４５３．５［Ｍ＋１］＋。
【０４９７】
本開示のいくつかの態様において、リンカーを含むＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ５は、ＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグ５を形成するために、抗体にコンジュゲートされてもよい。
【０４９８】
実施例２２：抗体へのコンジュゲーションのためのリンカーを含むＰＢＤ二量体ボロン酸プロドラッグの調製
実施例２２Ａ：リンカーを含むＰＢＤ二量体ボロン酸プロドラッグ１の調製
リンカーを含むＰＢＤ二量体ボロン酸プロドラッグ１を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000154
上記構造における、及び実施例２２に示される他の箇所のアスタリスクは、キラル中心を表す。
【０４９９】
ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のトリホスゲン（２２８ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ（５．０ｍＬ）中の溶液Ａ２（４５０ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ）及びピリジン（３０４ｍｇ、３．８４ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下、０℃で添加した。混合物を、Ｎ２下、０℃で２０分間撹拌し、ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のＡ１（２．０４ｇ、２．３９ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３８９ｍｇ、３．８４ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｎ２下、０℃で添加した。反応混合物を、１０℃で２時間撹拌した。混合物を濃縮し、分取ＴＬＣ（石油エーテル中の３０〜６０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、黄色固体として化合物Ａ３（５００ｍｇ、２６％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．２６８分，ｍ／ｚ＝１１１３．４［Ｍ＋１］＋。
【０５００】
ＤＣＭ（１５ｍＬ）中のトリホスゲン（５３ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中の化合物Ａ３（５００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（４５ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下、０℃で添加した。反応混合物を、０℃で３０分間撹拌した。この反応混合物に、ＤＭＳＯ（４．０ｍＬ）中のＭＣ＿ＶＣ＿ＰＡＢ（３０８ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（９０ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｎ２下、１０℃で添加した。反応混合物を、Ｎ２下、４０℃で６時間撹拌した。混合物を、ＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈し、水（２×１５ｍＬ）で洗浄し、水層をＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラム（ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）によって精製して、黄色固体として化合物８（３００ｍｇ、収率３４％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．２５３分，ｍ／ｚ＝８５７．１［Ｍ／２＋１］＋。
【０５０１】
水（２．０ｍＬ）及びＴＨＦ（２．０ｍＬ）中の化合物Ａ４（１００．０ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＡｃ（３．０ｍＬ）を１０℃で添加した。反応混合物を、１０℃で６時間撹拌した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、水（２×１５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１５ｍＬ）及びブライン（１５ｍＬ）で洗浄した。それを、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、黄色固体として粗化合物Ａ５（７１ｍｇ、収率９９．８％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．８２９分，ｍ／ｚ＝８５７．１［Ｍ／２−１７］＋。
【０５０２】
ＤＭＳＯ（３．０ｍＬ）中の化合物Ａ５（３６ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）の溶液に、２−ヨードキシ安息香酸（２２ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）を９℃で添加した。反応混合物を、４０℃で６時間撹拌した。混合物を、分取ＨＰＬＣ（ＡＣＮ２７〜４７％／水中の０．２２５％ＦＡ）によって精製して、白色固体として、リンカーを含むＰＢＤ二量体ボロン酸プロドラッグ１（２．０ｍｇ、５．５％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．８１３分，ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ＝１３９７．５９０６［Ｍ＋１］＋。
【０５０３】
本開示のいくつかの態様において、リンカーを含むＰＢＤ二量体ボロン酸プロドラッグ１は、ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸プロドラッグ１ＡまたはＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸プロドラッグ１Ｂを形成するために、抗体にコンジュゲートされてもよい。
【０５０４】
実施例２２Ｂ：リンカーを含むＰＢＤ二量体ボロン酸対照１の調製
リンカーを含むＰＢＤ二量体ボロン酸対照１を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000155
【０５０５】
ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中の化合物Ａ１（５００．０ｍｇ、０．５９０ｍｍｏｌ）に、Ｃｂｚ−ＯＳｕ（１６１ｍｇ、０．６４０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、５０℃で４時間撹拌した後、さらなるバッチのＣｂｚ−ＯＳｕ（１６１ｍｇ、０．６４０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、５０℃でさらに１６時間撹拌した後、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．８）によって精製し、続いて、分取ＨＰＬＣによって精製して、橙色油として化合物Ａ２（２２０ｍｇ、３５．２％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．０９７分，ｍ／ｚ＝９８７．５［Ｍ＋１］＋。
【０５０６】
ＤＣＭ（３．０ｍＬ）中のトリホスゲン（２６．４５ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）及び４ÅＭＳ（３０ｍｇ）の混合物に、ＤＣＭ（２．０ｍＬ）中の化合物Ａ２（２２０．０ｍｇ、０．２２０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２２．６ｍｇ、０．２２０ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で添加した。混合物を、０℃で１時間撹拌し、濃縮した。この溶液に、ＤＣＭ（６．０ｍＬ）中のこのイソシアネート（２２５．０ｍｇ、０．２２０ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中のＭＣ＿ＶＣ＿ＰＡＢ（３４．５９ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（２３ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、及び４ÅＭＳ（３０ｍｇ）の溶液を０℃で添加した。混合物を、２０℃で１６時間撹拌した後、それを水で反応停止処理した。ＤＣＭ（１０ｍＬ）を添加し、分離し、ＤＣＭ相を濃縮し、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中１５％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．４）によって精製して、淡黄色油として化合物Ａ３（７０ｍｇ、１９．８％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．１０７分，ｍ／ｚ＝７９３．９［Ｍ／２＋１］＋。
【０５０７】
ＴＨＦ（３．０ｍＬ）及び水（２．０ｍＬ）の混合物中の化合物Ａ３（７０．０ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ）を、ＨＯＡｃ（１．０ｍＬ、１７．４９ｍｍｏｌ）に添加し、混合物を４０℃で８時間撹拌した。混合物を濃縮し、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中１３％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．５）によって精製して、黄色油として化合物Ａ４（４０ｍｇ、６７．８％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７５１分，ｍ／ｚ＝６７９．６［Ｍ／２＋１］＋。
【０５０８】
ＤＭＳＯ（３．０ｍＬ）中の化合物Ａ４（３０．０ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）の溶液に、２−ヨードキシ安息香酸（３０．９ｍｇ、０．１１０ｍｍｏｌ）を１８℃で添加した。反応混合物を４０℃１６時間撹拌した後、それを、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．４）によって精製して、白色固体として、リンカーを含むＰＢＤ二量体ボロン酸対照１（１３ｍｇ、４３．５％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７２６分，ｍ／ｚ＝６７７．５［Ｍ／２＋１］＋。
【０５０９】
本開示のいくつかの態様において、リンカーを含むＰＢＤ二量体ボロン酸対照１は、ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸対照１ＡまたはＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸対照１Ｂを形成するために、抗体にコンジュゲートされてもよい。
【０５１０】
実施例２３：ＰＢＤ単量体及び二量体ジアフォラーゼプロドラッグの調製
実施例２３Ａ：ＰＢＤ単量体ジアフォラーゼプロドラッグ２の調製
ＰＢＤ単量体ジアフォラーゼプロドラッグ２を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000156
上記構造における、及び実施例２３に示される他の箇所のアスタリスクは、キラル中心を表す。
【０５１１】
ＤＣＭ（２．０ｍＬ）中のトリホスゲン（５８．３９ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中の化合物Ａ１を、Ｎ２下、０℃でゆっくりと添加し、混合物を、０℃で１時間撹拌した。ＤＣＭ（２．０ｍＬ）中の化合物Ａ２（１００．０ｍｇ、０．４５０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（９１．５ｍｇ、０．９００ｍｍｏｌ）を、上記の溶液に、１０分間にわたって０℃で滴加した。混合物を、０℃で１時間撹拌した。混合物を、水（５．０ｍＬ）で反応停止処理し、分離し、濃縮した。それを、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中の５％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．７）によって精製して、橙色固体として化合物Ａ３（６３ｍｇ、１９％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．００７分，ｍ／ｚ＝６５４．３［Ｍ＋１］＋。
【０５１２】
化合物Ａ３（６３．０ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（２．０ｍＬ）及び水（１．０ｍＬ）の溶液に、酢酸（２．０ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、１５℃で１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中の５％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．３）によって精製して、橙色固体としてＡ４（４０ｍｇ、７７％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７６１分，ｍ／ｚ＝５４０．１［Ｍ＋１］＋。
【０５１３】
ＤＣＭ（３．０ｍＬ）中の化合物Ａ４（２６．０ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）を、ＤＭＰ（４０．０ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）に添加し、混合物を、１０℃で１６時間撹拌した。混合物を、飽和Ｎａ２ＳＯ３及びＮａＨＣＯ３溶液の混合物（３．０ｍＬ／３．０ｍＬ）で反応停止処理した。有機相を、分離し、濃縮し、分取ＨＰＬＣ（Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ１５０＊２０ｍｍ＊５ｕｍ、０．２２５％ＦＡ−ＡＣＮ、ＡＣＮ２３〜５３％）によって精製して、橙色固体としてＰＢＤ単量体ジアフォラーゼプロドラッグ２（２０ｍｇ、７４％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７４７分，ｍ／ｚ＝５３８．１［Ｍ＋１］＋。
【０５１４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２２（ｓ，１Ｈ），６．６４（ｓ，１Ｈ），６．５２（ｓ，１Ｈ），５．６９（ｓ，１Ｈ），５．５９−５．５７（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．３０−５．２７（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），５．１６−５．１５（ｍ，２Ｈ），４．９４−４．９０（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３２−４．２７（ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，１Ｈ），４．１７−４．１３（ｄ，Ｊ＝１６．４，１Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ），３．７８−３．７６（ｍ，６Ｈ），３．６４−３．５９（ｍ，１Ｈ），２．４７（ｍ，１Ｈ），２．９６−２．８９（ｍ，１Ｈ），２．７３−２．６９（ｍ，１Ｈ）。
【０５１５】
実施例２３Ｂ：ＰＢＤ二量体ジアフォラーゼプロドラッグ１の調製
ＰＢＤ二量体ジアフォラーゼプロドラッグ１を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000157
【０５１６】
ＤＣＭ（２．０ｍＬ）中のトリホスゲン（５６．０３ｍｇ、０．１９０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中の化合物Ａ１（４００ｍｇ、０．４２０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミンの溶液を、０℃で滴加した。混合物を、１９℃で１時間撹拌した後、ＤＭＳＯ（０．５０ｍＬ）／ＤＣＭ（２．５０ｍＬ）中の化合物Ａ２（９２．８ｍｇ、０．４２０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（４２．５ｍｇ、０．４２０ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を、１９℃で２．０時間撹拌した。混合物を、ＤＣＭ（２０．０ｍＬ）で希釈し、水（２×１０．０ｍＬ）で洗浄し、分離した。水層を、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中の２０％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．７）によって精製して、化合物Ａ３（１５０ｍｇ、３０％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．１１８分，ｍ／ｚ＝１２０１．７［Ｍ＋１］＋。
【０５１７】
ＴＨＦ（２．０ｍＬ）中の化合物Ａ３（１３０．０ｍｇ、０．１１０ｍｍｏｌ）の溶液に、酢酸（３．０ｍＬ）及び水（１．０ｍＬ）を添加した。混合物を、１８℃で１８時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３を添加して、ｐＨ＝８に調整し、混合物を、ＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ブライン（３０ｍＬ）及び水（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。それを、濃縮し、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中の６．７％ＭｅＯＨ）によって精製して、黄色固体として化合物Ａ４（７２ｍｇ、６８％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７６６分，ｍ／ｚ＝９７２．３［Ｍ＋１］＋。
【０５１８】
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の化合物４（５０．０ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＰ（７６．３６ｍｇ、０．１８０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１８℃で１８時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を、飽和Ｎａ２ＣＯ３（２０．０ｍＬ）で洗浄した。水層を、ＤＣＭ（２×２０．０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。それを、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中の６．７％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．５）によって精製して、黄色固体として化合物Ａ５（４０ｍｇ、７４％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７３１分，ｍ／ｚ＝９９０．２［Ｍ＋２３］＋。
【０５１９】
ＴＦＡ（１．０ｍＬ）を、化合物Ａ５（４０．０ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ）に０℃で滴加した。混合物を０℃で３０分間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３を、混合物に０℃で滴加して、ｐＨ＝７に調整した。それを、ＤＣＭ（３×２０．０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を、ブライン（２０．０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣を、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中の６．７％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．６）によって精製して、黄色固体としてＰＢＤ二量体ジアフォラーゼプロドラッグ１（４．９ｍｇ、１４％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．８０７分，ｍ／ｚ＝８５０．２［Ｍ＋２３］＋。
【０５２０】
実施例２３Ｃ：ＰＢＤ単量体ジアフォラーゼプロドラッグ３の調製
ＰＢＤ単量体ジアフォラーゼプロドラッグ３を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000158
【０５２１】
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の化合物Ａ１（２８０ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（４９０ｍｇ、３．７９ｍｍｏｌ）及びビス（４−ニトロフェニル）カーボネート（７７０ｍｇ、２．５３ｍｍｏｌ）を１６℃で添加した。反応混合物を、Ｎ２下、１６℃で２時間撹拌した。反応溶液を、濃縮し、ＭＴＢＥで洗浄して、橙色固体として化合物Ａ２（５００ｍｇ、７８％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７２６分，ｍ／ｚ＝４９１．０［Ｍ＋２３］＋。
【０５２２】
ＤＭＦ（８．０ｍＬ）中の化合物Ａ２（５００ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）、化合物Ａ３（２４０ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ）、及びＨＯＢｔ（１３ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（３４０ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ）を１６℃で添加した。反応混合物を、Ｎ２下、５０℃で２時間撹拌した。反応物を濃縮し、残渣を、ＭｅＣＮ（３×８ｍＬ）で洗浄して、橙色固体として化合物Ａ４（３５０ｍｇ、９５％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７４５分，ｍ／ｚ＝３９３．１［Ｍ＋２３］＋。
【０５２３】
ＤＣＭ（８．０ｍＬ）中のトリホスゲン（５８ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（１．５ｍＬ）中の化合物Ａ５（２００ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（６０．０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｎ２下、０℃で添加した。反応混合物を、Ｎ２下、１２℃で３０分間撹拌し、ＤＣＭ（１．５ｍＬ）及びＤＭＳＯ（１．０ｍＬ）中の化合物Ａ４（９１ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（７５ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）、及びＤＭＡＰ（６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｎ２下、０℃で添加した。反応混合物を、Ｎ２下、１２℃で６時間撹拌し、それを、ＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈し、水（２×１５ｍＬ）で洗浄した。水層を、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、分取ＨＰＬＣ（ＡＣＮ６６〜８６％／水中の０．２２５％ＦＡ）によって精製して、橙色固体として化合物Ａ６（６０ｍｇ、１２％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．０５１分，ｍ／ｚ＝８０３．２［Ｍ＋１］＋。
【０５２４】
水（１．０ｍＬ）及びＴＨＦ（１．０ｍＬ）中の化合物Ａ６（４０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＡｃ（１．５ｍＬ、２６ｍｍｏｌ）を１０℃で添加した。反応混合物を、１０℃で６時間撹拌した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、水（２×１５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１５ｍＬ）、及びブライン（１５ｍＬ）で洗浄した。それを、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中の６．２５％ＭｅＯＨ）によって精製して、橙色固体として化合物Ａ７（３５ｍｇ、９７％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．８１９分，ｍ／ｚ＝６８９．１［Ｍ＋１］＋。
【０５２５】
ＤＣＭ（４．０ｍＬ）中の化合物Ａ７（３５ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＰ（６１ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を、１０℃で１０時間撹拌した。反応物を、飽和ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＳＯ３（４．０ｍＬ／４．０ｍＬ）で反応停止処理し、ＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＳＯ３（４．０ｍＬ／４．０ｍＬ）、ブライン（７．０ｍＬ）で洗浄した。それを、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、分取ＨＰＬＣ（ＡＣＮ３０〜６０％／水中の０．２２５％ＦＡ）によって精製して、橙色固体としてＰＢＤ単量体ジアフォラーゼプロドラッグ３（１５ｍｇ、４５％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．８０６分，ｍ／ｚ＝６８７．２［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３０−７．２５（ｍ，２Ｈ），７．１８−７．１５（Ｍ，４Ｈ），６．７７（ｓ，１Ｈ），６．６９（Ｓ，１Ｈ），６．５０（ｓ，１Ｈ），５．６７（ｓ，１Ｈ），５．５６（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），５．２７（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），５．１７−５．１２（ｍ，４Ｈ），４．８１（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２７（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１２（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．３３（ｓ，３Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．６８−３．５９（ｍ，４Ｈ），２．９３−２．８７（ｍ，１Ｈ），２．６９（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ）。
【０５２６】
実施例２３Ｄ：ＰＢＤ二量体ジアフォラーゼプロドラッグ２の調製
ＰＢＤ二量体ジアフォラーゼプロドラッグ２を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000159
【０５２７】
ＤＣＭ（１２ｍＬ）中のトリホスゲン（６２．０ｍｇ、０．２１０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（２．０ｍＬ）中の化合物Ａ１（５００．０ｍｇ、０．５２０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（６３．０ｍｇ、０．６２０ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｎ２下、０℃で添加した。反応混合物を、Ｎ２下、１２℃で３０分間撹拌し、ＤＣＭ（１．５ｍＬ）及びＤＭＳＯ（０．６０ｍＬ）中の化合物Ａ２（９７．０ｍｇ、０．２６０ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（６．０ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）、及びトリエチルアミン（７９．０ｍｇ、０．７８０ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｎ２下、０℃で添加した。反応混合物を、Ｎ２下、１２℃で６時間撹拌した。それを、ＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈し、水（２×１５ｍＬ）で洗浄した。水層を、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出し、有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。それを、シリカクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の３％ＭｅＯＨ）によって精製して、橙色固体として化合物Ａ３（２００ｍｇ、４９％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．２９４分，ｍ／ｚ＝１３４９．６［Ｍ＋１］＋。
【０５２８】
水（２．０ｍＬ）及びＴＨＦ（２．０ｍＬ）中の化合物Ａ３（２０６．９ｍｇ、０．１３０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＡｃ（３．０ｍＬ、５２．４６ｍｍｏｌ）を９℃で添加した。反応混合物を、９℃で１０時間撹拌した。それを、ＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、混合物を、ＮａＨＣＯ３（２×１５ｍＬ）、水（１５ｍＬ）で洗浄した。それを、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中の６．２５％ＭｅＯＨ）によって精製して、黄色固体として化合物Ａ４（１００ｍｇ、６６％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．９３２分，ｍ／ｚ＝１１２１．６［Ｍ＋１］＋。
【０５２９】
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の化合物Ａ４（１００．０ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＰ（１１３．０ｍｇ、０．２７０ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を、９℃で１０時間撹拌した。反応物を、飽和ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＳＯ３溶液（５．０ｍＬ／５．０ｍＬ）で反応停止処理し、ＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＳＯ３（５ｍＬ／５ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、濃縮した。残渣を、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中の６．２５％ＭｅＯＨ）によって精製して、橙色固体として化合物Ａ５（４５ｍｇ、４６％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．８８４分，ｍ／ｚ＝１１４０．０［Ｍ＋２３］＋。
【０５３０】
低温ＴＦＡ（水中９５％、２．０ｍＬ）を化合物Ａ１５（３５．０ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）に０℃で添加した。反応混合物を、０℃で１５分間撹拌した。反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（４．０ｍＬ）に、０℃で滴加し、ＤＣＭ（４×８．０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、ブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。それを、分取ＨＰＬＣ（ＡＣＮ３６〜６６／水中の０．２２５％ＦＡ）によって精製して、橙色固体としてＰＢＤ二量体ジアフォラーゼプロドラッグ２（６．１ｍｇ、１９％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．８３１分，ｍ／ｚ＝９９９．３［Ｍ＋１］＋。
【０５３１】
実施例２３Ｅ：ＰＢＤ二量体ジアフォラーゼプロドラッグ３の調製
ＰＢＤ二量体ジアフォラーゼプロドラッグ３を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000160
【０５３２】
ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中のトリホスゲン（２８．０ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（３．０ｍＬ）中の化合物Ａ１（２００ｍｇ、０．２１０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（４２．０ｍｇ、０．４２０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で添加した。それを、Ｎ２下、２６℃で２０分間撹拌した。混合物を濃縮し、ＤＣＭ（３．０ｍＬ）に溶解し、ＤＣＭ（３．０ｍＬ）中のトリエチルアミン（３８．０ｍｇ、０．３８０ｍｍｏｌ）及び化合物Ａ２（５１．０ｍｇ、０．２３０ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加した。それを、Ｎ２下、２６℃で２時間撹拌し、カラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜４０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、黄色固体として化合物Ａ３（２４０ｍｇ、９０％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．１５９分，ｍ／ｚ＝１２００．５［Ｍ＋１］＋。
【０５３３】
ＴＨＦ（４．０ｍＬ）及び水（４．０ｍＬ）中の化合物Ａ３（２４０．０ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）の溶液を、ＨＯＡｃ（６．０ｍＬ、１５３ｍｍｏｌ）に２５℃で添加した。混合物を、２５℃で１０時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）を添加した。それを、水（５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）、次いでブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮して、黄色固体として粗生成物化合物Ａ４（１９４ｍｇ、９９．８％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７６７分，ｍ／ｚ＝９７２．４［Ｍ＋１］＋。
【０５３４】
ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の化合物Ａ４（１９４．０ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＰ（２１１．６ｍｇ、０．５００ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、２６℃で１時間撹拌し、飽和Ｎａ２ＳＯ３／ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ／１０ｍＬ）で反応停止処理した。それを、ＤＣＭ（２×３０ｍＬ）で希釈し、分離した。ＤＣＭ相を、水（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、分取ＨＰＬＣ（ＡＣＮ４３〜６３／水中の０．２２５％ＦＡ）によって精製して、黄色固体として化合物Ａ５（７０ｍｇ、収率３６％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７３３分，ｍ／ｚ＝９６８．６［Ｍ＋１］＋。
【０５３５】
ＴＦＡ（０．２０ｍＬ、２．６８ｍｍｏｌ）を、化合物Ａ５（４０．０ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ）に０℃で添加した。反応混合物を、０℃で３０分間撹拌し、冷却飽和ＮａＨＣＯ３（２．０ｍＬ）で反応停止処理した。ＤＭＳＯ（２．０ｍＬ）を添加し、混合物を、分取ＨＰＬＣ（ＡＣＮ３６〜６６％／水中の１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）によって精製して、黄色固体としてＰＢＤ二量体ジアフォラーゼプロドラッグ３（９．９ｍｇ、２８％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．６９５分，ｍ／ｚ＝８５０．３［Ｍ＋１］＋。
【０５３６】
実施例２４：キノンの合成
実施例２４Ａ：キノン１の合成
キノン１を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000161
【０５３７】
ＤＭＦ（３００ｍＬ）中のＮａＨ（８．９ｇ、０．２２３ｍｏｌ）の懸濁液に、氷浴中で冷却した。これに、ＤＭＦ（１５０ｍＬ）中の出発アミン（３０ｇ、０．１７１ｍｏｌ）の溶液を滴加した。反応混合物を、室温で６０分間撹拌した。次いで、ヨードメタン（３１．５ｇ、０．２２３ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、室温で１時間撹拌した。次いで、混合物を、１０％のＮａＨＣＯ３水溶液に注ぎ、ＥＡで抽出した。合わせた有機相を、１０％のＮａＨＣＯ３水溶液、ブラインで洗浄し、乾燥させた。溶液を濃縮して、粗生成物を得、これを、ＥＡ／Ｈｅｘから粉砕して、淡黄色固体として生成物（２９．５ｇ、９１．２％）を得た。
【０５３８】
出発アルデヒド（２９．５ｇ、１５６ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、酢酸（３００ｍＬ）中の５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−３−カルバルデヒドを、１０℃まで冷却した。これに、酢酸（２０ｍＬ）中の硝酸（４．６ｍＬ）の混合物を添加した。次いで、反応混合物を、室温で１６時間撹拌した。黄色懸濁液を得、これを氷水混合物上に注ぎ、得られた結晶を、濾過し、乾燥させた。粗生成物を、ＥＡ／Ｈｅｘから粉砕して、黄色固体として生成物（３０．０ｇ、８２．１％）を得た。
【０５３９】
エタノール（６００ｍＬ）中の出発材料（１０ｇ、４３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、錫粉末（４４．２３ｇ、０．３７ｍｏｌ）を添加した。続いて、３Ｎ  ＨＣｌ（２００ｍＬ）を添加した。反応物を、室温で２時間撹拌した。溶液を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で希釈した。混合物を、濾過し、ＥＡで洗浄した。有機相を分離し、水性相を、ＥＡで抽出した。合わせた有機相を、ブラインで洗浄し、乾燥させ、濃縮して、粗生成物を得、これをＥＡ／Ｈｅｘ＝１／２０から粉砕して、灰色固体として生成物（６．０ｇ、６８．３％）を得た。
【０５４０】
出発アルデヒド（５．０ｇ、２４．５ｍｍｏｌ、１当量）を、１００ｍＬのＴＨＦに溶解した。２００ｍＬのＴＨＦ中のＬｉＡｌＨ４（１．８６ｇ、４９ｍｍｏｌ、２当量）の懸濁液に、０℃まで冷却した。アルデヒドの溶液を、ＬｉＡｌＨ４溶液に滴加した。反応物が、室温に達し、室温で３０分間撹拌した。それを、水で反応停止処理し、次いで、セライトを通して濾過し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。残渣を、次の反応で直接使用した。残渣を、３００ｍＬのアセトンに溶解した。３００ｍＬの０．３Ｍ  ＮａＨ２ＰＯ４の溶液に、１９．７ｇ（７３．５ｍｍｏｌ、３当量）のＦｒｅｍｙ塩を添加した。この混合物を、アセトン中の残渣に添加し、室温で０．５時間撹拌した。過剰アセトンを真空中で除去した。得られた残渣を、ジクロロメタンで抽出し、水で洗浄した。有機層を、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させた。粗生成物を、ＥＡ／Ｈｅｘから粉砕して、橙色固体として生成物（２．５１ｇ、４６．１％、２つのステップ）を得た。
【０５４１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ６．７０（ｓ，１Ｈ），５．６９（ｓ，１Ｈ），４．６４（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．７８（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０５４２】
実施例２４Ｂ：キノン２の合成
キノン２を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000162
【０５４３】
４．６ｇのシリカゲルを、エチル３−オキソブタノエート（５０ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）に添加した。これに、メチルアミン溶液（水性；４０％、３５．７ｇ、０．４６ｍｏｌ）を添加し、混合物を一晩撹拌した。反応混合物を、ＤＣＭで抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、無色油として生成物（５０ｇ、９２％）を得た。
【０５４４】
５０ｇ（０．３５ｍｏｌ１当量）のイミン及び３７．７（０．３５ｍｏｌ１当量）の１，４−ベンゾキノンを、４００ｍＬのニトロメタンに溶解する。混合物を、２４時間放置する（撹拌なし）。生成物の結晶を沈殿させる。それらを濾過し、ニトロメタンで洗浄し、ＥｔＯＡｃから再結晶化した。黄色固体、収率：２５ｇ、３０．６％。
【０５４５】
ＤＭＳＯ（２００ｍＬ）中のアルコール（２５ｇ、０．１１ｍｏｌ）及びＫＯＨ（２５．５ｇ、０．４６ｍｏｌ）の溶液に、室温で３０分間撹拌した。次いで、ヨードメタン（６２ｇ、０．４４ｍｏｌ）を添加した。混合物を、ＥＡ（７００ｍＬ）で希釈し、１Ｎ  ＨＣｌ、ブラインで洗浄し、乾燥させた。溶液を濃縮して、粗生成物を得、これを、シリカゲルカラムによって精製して、灰色固体として生成物（２０ｇ、７５．５％）を得た。
【０５４６】
０℃に冷却した、酢酸（２００ｍＬ）中の２０ｇ（８１ｍｍｏｌ、１当量）のエチル５−メトキシ−１，２−ジメチル−１Ｈ−インドール−３−カルボキシレートの溶液に、硝酸（４．６ｍＬ）及び酢酸（２０ｍＬ）の混合物を添加した。次いで、混合物を、室温で２時間撹拌した。黄色懸濁液を得、これを氷水混合物上に注ぎ、得られた結晶を、濾過し、乾燥させた。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、黄色固体として生成物（１４．０ｇ、５９．３％）を得た。
【０５４７】
エタノール（６００ｍＬ）中の出発エステル（８．０ｇ、２７ｍｍｏｌ）の懸濁液に、錫粉末（１４．６ｇ、０．１２３ｍｏｌ）を添加した。続いて、３Ｎ  ＨＣｌ（２００ｍＬ）を添加した。反応物を、室温で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣を、水で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３で中和させた。混合物を、濾過し、ＥＡで洗浄した。有機相を分離し、水性相を、ＥＡで抽出した。合わせた有機相を、ブラインで洗浄し、乾燥させ、濃縮して、粗生成物を得、これをＥＡ／Ｈｅｘ＝１／２０から粉砕して、灰色固体として生成物（５．０ｇ、７０．６％）を得た。
【０５４８】
５．０ｇ（１９．０６ｍｍｏｌ、１当量）の出発材料を、５０ｍＬのＴＨＦに溶解した。２．９ｇ（７６．２５ｍｍｏｌ、４当量）のＬｉＡｌＨ４を、２５０ｍＬのＴＨＦに溶解し、０℃に冷却した。出発材料の溶液を、ＬｉＡｌＨ４溶液に滴加した。反応物が、室温に達し、室温で３０分間撹拌した。それを、水、ＮａＯＨ、及びシリカゲルで反応停止処理した。それを、セライトを通して濾過し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。残渣を、次の反応で直接使用した。残渣を、３３０ｍＬのアセトンに溶解した。３３０ｍＬの０．３Ｍ  ＮａＨ２ＰＯ４の溶液に、１５．３２ｇ（５７．１８ｍｍｏｌ、３当量）のＦｒｅｍｙ塩を添加した。この混合物を、アセトン中のヒドロキシメチルインドールに添加し、室温で１時間撹拌した。過剰アセトンを真空中で除去した。得られた残渣を、ジクロロメタンで抽出し、水で洗浄した。有機層を、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、赤色固体として生成物（２．５１ｇ、５６％）を得た。
【０５４９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ５．６３（ｓ，１Ｈ），４．６１（ｓ，２Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），２．２３（ｓ，３Ｈ）。
【０５５０】
実施例２４Ｃ：キノン３の合成
キノン３を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000163
【０５５１】
４−メトキシアニリン（３２ｇ、２５９．２ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（３７％、６４ｍＬ）及び水（１１２ｍＬ）に溶解した。水（３２ｍＬ）中のＮａＮＯ２（１９．５ｇ、２８３．２ｍｍｏｌ）の溶液を、−５℃で滴加した。添加後、混合物を０℃で１５分間撹拌し、ＣＨ３ＣＯＯＮａ（１６．８ｇ、２０４．８ｍｍｏｌ）の添加により、ｐＨを３〜４にした。エチル−２−エチルアセトアセテート（４４．８ｇ、２８３．２ｍｍｏｌ）を、エタノール（２００ｍＬ）に０℃で溶解した。この溶液に、水（２４ｍＬ）中のＫＯＨ（１５．６ｇ、２８３．２ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。得られた溶液を、３２０ｇの氷で処理した。４−メトキシアニリンのジアゾニウム塩を、直ちに添加した。次いで、混合物を、ｐＨ５〜６に調節し、０℃で４時間撹拌した。溶液を、４℃で一晩保存し、ＥＡ（４×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を、ブラインで洗浄し、ＮａＳＯ４で乾燥させた。ほとんどの溶媒を蒸発させ、残渣を、次の反応（１８０ｍＬ）で直接使用した。
【０５５２】
（Ｚ）−エチル２−（２−（４−メトキシフェニル）ヒドラジノ）ブタノエート（１８０ｍＬ）を、３Ｍ  ＨＣｌ／ＥｔＯＨ（１８０ｍＬ）の溶液に８０℃で滴加した。添加後、混合物を、８０℃で３時間保持した。溶媒を蒸発させ、残渣を、水（６０ｍＬ）及びＤＣＭ（３００ｍＬ）で処理した。次いで、水層を、ＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、ブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させて、粗化合物を得、これをＨｅｘから粉砕して、黄色固体として生成物（３２．０ｇ、５３．２％）を得た。
【０５５３】
エチル５−メトキシ−３−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボキシレート（２０．０ｇ、８５．７ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２００ｍＬ）に溶解し、混合物を−２０℃まで冷却し、ＨＮＯ３（７０％、９ｍＬ）を添加し、混合物を２０分間撹拌した。それを、ＮａＨＯ３で中和させ、ＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出し、ＮａＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、黄色固体として生成物（１５．５ｇ、５９．３％）を得た。
【０５５４】
ＭｅＩ（３０ｍＬ）を、ＫＯＨ（１０ｇ．１７８ｍｍｏｌ）を含有するアセトン（５００ｍＬ）中のエチル５−メトキシ−３−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボキシレート（１４．５ｇ、５２．１ｍｍｏｌ）に添加した。添加後、混合物を、室温で１時間撹拌した。溶媒を、過剰ＫＯＨらデカントし、混合物をＨＣｌで中和させた。次いで、混合物を、ＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、ブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させて、粗化合物を得、これをＨｅｘ及びＤＣＭから粉砕して、黄色固体として生成物（１４．０ｇ、５３．２％）を得た。
【０５５５】
錫粉末（９．１４ｇ、７７ｍｏｌ）を、エタノール（５００ｍＬ）中のエチル５−メトキシ−１，３−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボキシレート（５．０ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。次いで、３Ｎ  ＨＣｌ（１３０ｍＬ）を添加した。反応物を、室温で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣を、水で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３で中和させた。混合物を、濾過し、ＤＣＭで洗浄した。有機相を分離し、水性相をＤＣＭで抽出した。合わせた有機相を、ブラインで洗浄し、乾燥させ、濃縮して、粗生成物を得、これをＥＡ／Ｈｅｘ＝１／２０から粉砕して、灰色固体として生成物（４．０ｇ、８０％）を得た。
【０５５６】
エチル４−アミノ−５−メトキシ−１，３−ジメチル−１Ｈ−インドール−２−カルボキシレート（１．５ｇ、５．７２ｍｍｏｌ）を、９０ｍＬのＴＨＦに溶解した。０．８８ｇ（２２．６８ｍｍｏｌ、４当量）のＬｉＡｌＨ４を、１８０ｍＬのＴＨＦに溶解し、０℃に冷却した。エチル４−アミノ−５−メトキシ−１，３−ジメチル−１Ｈ−インドール−２−カルボキシレートの溶液を、ＬｉＡｌＨ４溶液に滴加した。反応物が、室温に達し、室温で３０分間撹拌した。次いで、それを、水、ＮａＯＨ、及びシリカゲルで反応停止処理した。次いで、それを、セライトを通して濾過し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。残渣を、１７０ｍＬのアセトンに溶解し、次の反応で直接使用した。１８０ｍＬの０．３Ｍ  ＮａＨ２ＰＯ４の溶液に、Ｆｒｅｍｙ塩（４．６ｇ、１７．１６ｍｍｏｌ、３当量）を添加した。この混合物を、アセトン中のヒドロキシメチルインドールに添加し、室温で１時間撹拌した。過剰アセトンを真空中で除去した。得られた残渣を、ジクロロメタンで抽出し、水で洗浄した。有機層を、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、橙色固体として生成物（１．０ｇ、５６％）を得た。
【０５５７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ５．６３（ｓ，１Ｈ），４．６５（ｓ，２Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ）。
【０５５８】
実施例２４Ｄ：キノン４の合成
キノン４を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000164
【０５５９】
２５０ｍＬの丸底フラスコに、メタノール（１００ｍＬ）中の５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（１０ｇ、５２．３１ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液を入れ、撹拌しながら、塩化チオニル（１２．５ｇ、１０５．０７ｍｍｏｌ、２．００当量）を滴加した。得られた溶液を、４時間加熱還流し、真空下で濃縮して、灰色固体として１１ｇ（粗物）のメチル５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボキシレートを得た。
【０５６０】
窒素の雰囲気でパージされ、維持された５Ｌの４口丸底フラスコに、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２Ｌ）を入れ、続いて、撹拌しながら、いくつかのバッチにおいて、水素化ナトリウム（３７．６ｇ、１．１０ｍｏｌ、１．５０当量、７０％）を添加した。これに、１０℃未満で撹拌しながら、メチル５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボキシレート（１５０ｇ、７３０．９６ｍｍｏｌ、１．００当量）を滴加した。混合物を、０．５時間撹拌した。混合物に、撹拌しながら、ＭｅＩ（１２５ｇ、０．８８ｍｏｌ、１．２０当量）を滴加した。得られた溶液を、室温で一晩撹拌し、５Ｌの水で希釈した。固体を濾過によって収集し、３×１Ｌの水で洗浄し、乾燥させて、黄色固体として１６３ｇ（粗物）のメチル５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボキシレートを得た。
【０５６１】
窒素の雰囲気でパージされ、維持された５０００ｍＬの４口丸底フラスコに、テトラヒドロフラン（１５００ｍＬ）中のＬｉＡｌＨ４（１１１ｇ、２．９２ｍｏｌ、４．００当量）の溶液を入れ、３０分間にわたって０℃で撹拌しながら、テトラヒドロフラン（１０００ｍＬ）中のメチル５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボキシレート（１６０ｇ、７２９．８１ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液を滴加した。混合物を、０℃で１時間、室温で３時間撹拌した。次いで、混合物を、１１１ｇの水、３３３ｍＬのＮａＯＨ水溶液（１５％）、及び１１１ｇの水を０℃で添加することによって反応停止処理した。固体を濾過した。濾液を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮して、黄色固体として１００ｇ（７２％）の（５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）メタノールを得た。
【０５６２】
窒素の不活性雰囲気でパージされ、維持された３０００ｍＬの４口丸底フラスコに、ジクロロメタン（２０００ｍＬ）中の（５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）メタノール（１００ｇ、５２２．９４ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液を入れ、室温で撹拌しながら、トリエチルアミン（６１．６ｇ、６０８．７６ｍｍｏｌ、１．５０当量）を滴加した。混合物を３０分間撹拌した。これに、室温で撹拌しながら、塩化アセチル（７９ｇ、１．０１ｍｏｌ，１．５０当量）を滴加した。得られた溶液を、室温で３時間撹拌し、真空下で濃縮した。残渣を、酢酸エチル：石油エーテル（１：１０〜１：５）で溶出するシリカゲルカラム上で精製して、黄色固体として７５ｇ（６１％）の（５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテートを得た。
【０５６３】
窒素の雰囲気でパージされ、維持された２５０ｍＬの３口丸底フラスコに、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｇ、２７３．６４ｍｍｏｌ、６．００当量）を入れ、０℃で撹拌しながら、ＰＯＣｌ３（９．８５ｇ、０．０６４２ｍｏｌ、１．５０当量）を滴加した。混合物を、室温で３０分間撹拌した。これに、（５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテート（１０ｇ、４２．８７ｍｍｏｌ、１．００当量）を、０℃未満で撹拌しながら、少量ずつ添加した。得られた溶液を、室温で２時間撹拌し、１００ｍＬの水／氷によって反応停止処理した。溶液のｐＨ値を、水酸化ナトリウム水溶液（２Ｎ）で７〜８に調整した。得られた溶液を、３×２００ｍＬの酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣を、酢酸エチル：石油エーテル（１：３）で溶出するシリカゲルカラム上で精製して、黄色固体として９ｇ（８０％）の（３−ホルミル−５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテートを得た。
【０５６４】
窒素の不活性雰囲気でパージされ、維持された２５０ｍＬの３口丸底フラスコに、（３−ホルミル−５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテート（９ｇ、３．６０ｍｍｏｌ、１．００当量）、ＡｃＯＨ（１００ｍＬ）を入れ、続いて、５℃未満で撹拌しながら、ＡｃＯＨ（５０ｍＬ）中のＨＮＯ３（２０ｍＬ）の溶液を滴加した。得られた溶液を、室温で３０分間撹拌し、１０００ｍＬの水で希釈し、３０分間撹拌した。固体を濾過によって収集し、３×１００ｍＬの水で洗浄して、薄赤色固体として８．６ｇ（粗物）の（３−ホルミル−５−メトキシ−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテートを得た。
【０５６５】
窒素の不活性雰囲気でパージされ、維持された１０００ｍＬの３口丸底フラスコに、（３−ホルミル−５−メトキシ−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテート（８ｇ、２６．１２ｍｍｏｌ、１．００当量）、エタノール（４００ｍＬ）を入れ、続いて、０℃で撹拌しながら、Ｓｎ（３４．１ｇ、１１．００当量）を少量ずつ添加した。これに、撹拌しながら、塩化水素（４Ｎ）（４００ｍＬ）を滴加した。得られた溶液を、０℃で２時間撹拌し、真空下で濃縮し、５００ｍＬの水で希釈した。溶液のｐＨ値を、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で７〜８に調整した。固体を濾過し、３×５０ｍＬのＥＡで洗浄した。濾液を、４×２００ｍＬの酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣を、酢酸エチル：石油エーテル（１：２）で溶出するシリカゲルカラム上で精製して、黄色固体として６．５ｇ（９０％）の（４−アミノ−３−ホルミル−５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテートを得た。
【０５６６】
窒素の不活性雰囲気でパージされ、維持された２０００ｍＬの３口丸底フラスコに、（４−アミノ−３−ホルミル−５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテート（６ｇ、２１．７２ｍｍｏｌ、１．００当量）、アセトン（６００ｍＬ）を入れ、続いて、１０℃未満で撹拌しながら、ＮａＨ２ＰＯ４（０．４Ｍ）（１２００ｍＬ）中の（ＫＯ３Ｓ）２ＮＯ（１７．４８ｇ、６５．２ｍｏｌ、３．００当量）を滴加した。得られた溶液を、室温で２時間撹拌し、真空下で濃縮した。残渣を、３×３００ｍＬのジクロロメタンで抽出した。有機層を合わせ、３×３００ｍＬの水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣を、酢酸エチル：石油エーテル（１：２）で溶出するシリカゲルカラム上で精製して、黄色固体として３．５ｇ（５５％）の（３−ホルミル−５−メトキシ−１−メチル−４，７−ジオキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテートを得た。
【０５６７】
窒素の不活性雰囲気でパージされ、維持された５００ｍＬの３口丸底フラスコに、（３−ホルミル−５−メトキシ−１−メチル−４，７−ジオキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテート（３．５ｇ、１２．０２ｍｍｏｌ、１．００当量）、ＣＨ３ＣＮ（２００ｍＬ）、ＮａＨ２ＰＯ４（０．６ｇ、４ｍｍｏｌ、０．３０当量）、Ｈ２Ｏ２（２ｇ、５９ｍｍｏｌ、５．００当量）、ＮａＣｌＯ２（２．５ｇ、２８ｍｍｏｌ、２．４１当量）、及びＨ２Ｏ（５０ｍＬ）を入れた。得られた溶液を、室温で２時間撹拌し、５００ｍＬの水の添加によって反応停止処理した。溶液のｐＨ値を、ＨＣｌ（２ｍｏｌ／Ｌ）で２に調整した。得られた溶液を、４×３００ｍＬの酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、２×２００ｍＬのブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮して、赤色固体として３．５ｇ（９５％）の２−［（アセチルオキシ）メチル］−５−メトキシ−１−メチル−４，７−ジオキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸を得た。
【０５６８】
窒素の不活性雰囲気でパージされ、維持された２５０ｍＬの３口丸底フラスコに、２−［（アセチルオキシ）メチル］−５−メトキシ−１−メチル−４，７−ジオキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸（３．８ｇ、１２．３７ｍｍｏｌ、１．００当量）、メタノール（１００ｍＬ）、及び塩化水素（２０ｍＬ）を入れた。得られた溶液を、６０℃で４時間撹拌し、真空下で濃縮し、５００ｍＬの水の添加によって反応停止処理し、４×２００ｍＬの酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣を、酢酸エチル：石油エーテル（１：３）で溶出するシリカゲルカラム上で精製した。粗生成物を、分取ＨＰＬＣによって精製して、黄色固体として０．３ｇ（９％）のメチル２−（ヒドロキシメチル）−５−メトキシ−１−メチル−４，７−ジオキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−３−カルボキシレートを得た。
【０５６９】
ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ，ｍ／ｚ）：２８０［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ−ＮＭＲ−３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ５．７３（ｓ，１Ｈ），４．７７（ｓ，２Ｈ），４．０９（ｓ，３Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ）。
【０５７０】
実施例２４Ｅ：キノン５の合成
キノン５を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000165
【０５７１】
２５０ｍＬの丸底フラスコに、メタノール（１００ｍＬ）中の５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（１０ｇ、５２．３１ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液を入れ、撹拌しながら、塩化チオニル（１２．５ｇ、１０５．０７ｍｍｏｌ、２．００当量）を滴加した。得られた溶液を、４時間加熱還流し、真空下で濃縮して、灰色固体として１１ｇ（粗物）のメチル５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボキシレートを得た。
【０５７２】
窒素の雰囲気でパージされ、維持された５Ｌの４口丸底フラスコに、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２Ｌ）を入れ、続いて、撹拌しながら、いくつかのバッチにおいて、水素化ナトリウム（３７．６ｇ、１．１０ｍｏｌ、１．５０当量、７０％）を添加した。これに、１０℃未満で撹拌しながら、メチル５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボキシレート（１５０ｇ、７３０．９６ｍｍｏｌ、１．００当量）を滴加した。混合物を、０．５時間撹拌した。混合物に、撹拌しながら、ＭｅＩ（１２５ｇ、０．８８ｍｏｌ、１．２０当量）を滴加した。得られた溶液を、室温で一晩撹拌し、５Ｌの水で希釈した。固体を濾過によって収集し、３×１Ｌの水で洗浄し、乾燥させて、黄色固体として１６３ｇ（粗物）のメチル５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボキシレートを得た。
【０５７３】
窒素の雰囲気でパージされ、維持された５０００ｍＬの４口丸底フラスコに、テトラヒドロフラン（１５００ｍＬ）中のＬｉＡｌＨ４（１１１ｇ、２．９２ｍｏｌ、４．００当量）の溶液を入れ、３０分間にわたって０℃で撹拌しながら、テトラヒドロフラン（１０００ｍＬ）中のメチル５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボキシレート（１６０ｇ、７２９．８１ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液を滴加した。混合物を、０℃で１時間、室温で３時間撹拌した。次いで、混合物を、１１１ｇの水、３３３ｍＬのＮａＯＨ水溶液（１５％）、及び１１１ｇの水を０℃で添加することによって反応停止処理した。固体を濾過した。濾液を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮して、黄色固体として１００ｇ（７２％）の（５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）メタノールを得た。
【０５７４】
窒素の不活性雰囲気でパージされ、維持された３０００ｍＬの４口丸底フラスコに、ジクロロメタン（２０００ｍＬ）中の（５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）メタノール（１００ｇ、５２２．９４ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液を入れ、室温で撹拌しながら、トリエチルアミン（６１．６ｇ、６０８．７６ｍｍｏｌ、１．５０当量）を滴加した。混合物を３０分間撹拌した。これに、室温で撹拌しながら、塩化アセチル（７９ｇ、１．０１ｍｏｌ，１．５０当量）を滴加した。得られた溶液を、室温で３時間撹拌し、真空下で濃縮した。残渣を、酢酸エチル：石油エーテル（１：１０〜１：５）で溶出するシリカゲルカラム上で精製して、黄色固体として７５ｇ（６１％）の（５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテートを得た。
【０５７５】
窒素の雰囲気でパージされ、維持された２５０ｍＬの３口丸底フラスコに、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｇ、２７３．６４ｍｍｏｌ、６．００当量）を入れ、０℃で撹拌しながら、ＰＯＣｌ３（９．８５ｇ、０．０６４２ｍｏｌ、１．５０当量）を滴加した。混合物を、室温で３０分間撹拌した。これに、（５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテート（１０ｇ、４２．８７ｍｍｏｌ、１．００当量）を、０℃未満で撹拌しながら、少量ずつ添加した。得られた溶液を、室温で２時間撹拌し、１００ｍＬの水／氷によって反応停止処理した。溶液のｐＨ値を、水酸化ナトリウム水溶液（２Ｎ）で７〜８に調整した。得られた溶液を、３×２００ｍＬの酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣を、酢酸エチル：石油エーテル（１：３）で溶出するシリカゲルカラム上で精製して、黄色固体として９ｇ（８０％）の（３−ホルミル−５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテートを得た。
【０５７６】
窒素の不活性雰囲気でパージされ、維持された２５０ｍＬの３口丸底フラスコに、（３−ホルミル−５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテート（９ｇ、３．６０ｍｍｏｌ、１．００当量）、ＡｃＯＨ（１００ｍＬ）を入れ、続いて、５℃未満で撹拌しながら、ＡｃＯＨ（５０ｍＬ）中のＨＮＯ３（２０ｍＬ）の溶液を滴加した。得られた溶液を、室温で３０分間撹拌し、１０００ｍＬの水で希釈し、３０分間撹拌した。固体を濾過によって収集し、３×１００ｍＬの水で洗浄して、薄赤色固体として８．６ｇ（粗物）の（３−ホルミル−５−メトキシ−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテートを得た。
【０５７７】
窒素の不活性雰囲気でパージされ、維持された１０００ｍＬの３口丸底フラスコに、（３−ホルミル−５−メトキシ−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテート（８ｇ、２６．１２ｍｍｏｌ、１．００当量）、エタノール（４００ｍＬ）を入れ、続いて、０℃で撹拌しながら、Ｓｎ（３４．１ｇ、１１．００当量）を少量ずつ添加した。これに、撹拌しながら、塩化水素（４Ｎ）（４００ｍＬ）を滴加した。得られた溶液を、０℃で２時間撹拌し、真空下で濃縮し、５００ｍＬの水で希釈した。溶液のｐＨ値を、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で７〜８に調整した。固体を濾過し、３×５０ｍＬのＥＡで洗浄した。濾液を、４×２００ｍＬの酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣を、酢酸エチル：石油エーテル（１：２）で溶出するシリカゲルカラム上で精製して、黄色固体として６．５ｇ（９０％）の（４−アミノ−３−ホルミル−５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテートを得た。
【０５７８】
窒素の不活性雰囲気でパージされ、維持された２０００ｍＬの３口丸底フラスコに、（４−アミノ−３−ホルミル−５−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテート（６ｇ、２１．７２ｍｍｏｌ、１．００当量）、アセトン（６００ｍＬ）を入れ、続いて、１０℃未満で撹拌しながら、ＮａＨ２ＰＯ４（０．４Ｍ）（１２００ｍＬ）中の（ＫＯ３Ｓ）２ＮＯ（１７．４８ｇ、６５．２ｍｏｌ、３．００当量）を滴加した。得られた溶液を、室温で２時間撹拌し、真空下で濃縮した。残渣を、３×３００ｍＬのジクロロメタンで抽出した。有機層を合わせ、３×３００ｍＬの水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣を、酢酸エチル：石油エーテル（１：２）で溶出するシリカゲルカラム上で精製して、黄色固体として３．５ｇ（５５％）の（３−ホルミル−５−メトキシ−１−メチル−４，７−ジオキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテートを得た。
【０５７９】
２５０ｍＬの３口丸底フラスコに、（３−ホルミル−５−メトキシ−１−メチル−４，７−ジオキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−２−イル）メチルアセテート（３．５ｇ、１２．０２ｍｍｏｌ、１．００当量）、ジクロロメタン（４７ｍＬ）を入れ、撹拌しながら、メタノール（４０ｍＬ）中のＬｉＯＨ（３８０ｍｇ、１５．８７ｍｍｏｌ、１．３０当量）の溶液を滴加した。得られた溶液を、室温で３０分間撹拌し、８０ｍＬのＤＣＭで希釈し、３×１００ｍＬの水で洗浄した。有機相を、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣を、酢酸エチル：石油エーテル（１：２）で溶出するシリカゲルカラム上で精製して、黄色固体として１．１ｇ（３７％）の２−（ヒドロキシメチル）−５−メトキシ−１−メチル−４，７−ジオキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−３−カルバルデヒドを得た。
【０５８０】
ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ，ｍ／ｚ）：２５０［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ，ｐｐｍ）：δ１０．５５（ｓ，１Ｈ），５．７９（ｓ，１Ｈ），４．８３（ｓ，２Ｈ），４．０９（ｓ，３Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ）。
【０５８１】
実施例２４Ｆ：キノン６の合成
キノン６を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000166
【０５８２】
乾燥ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中の化合物１（３０ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ビス（４−ニトロフェニル）カーボネート（８２．５ｍｇ、０．２７１ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（８７．５ｍｇ、０．６７８ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、次いで、混合物を、Ｎ２下、２５℃で２時間撹拌した。混合物を、さらに精製することなく次のステップで使用した。
【０５８３】
上記の混合物に、化合物３（１００．２ｍｇ、０．８１４ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（８７．６ｍｇ、０．６７８ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（２．０ｍＬ）、及び触媒量のＨＯＢｔ（５．０ｍｇ）を０℃で添加した。次いで、混合物を、Ｎ２下、２５℃で１５時間撹拌した。それを、水（１５ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×４）で抽出した。合わせた有機相を、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、赤色固体として所望の生成物（２６ｍｇ、５２％）を得た。ＬＣＭＳ：（５−９５ＡＢ，１．５分），０．７１４分，ＭＳ＝３９２．８［Ｍ＋２３］。
【０５８４】
乾燥ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中の化合物４（２６ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）の溶液に、ビス（４−ニトロフェニル）カーボネート（４２．７ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（４５．４ｍｇ、０．３５１ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。次いで、混合物を、Ｎ２下、２５℃で１５時間撹拌した。混合物を、さらに精製することなく次のステップで使用した。
【０５８５】
乾燥ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中の化合物５（３７．５９ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）の溶液に、ノルフロキサシン（４４．８３ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（４５．３６ｍｇ、０．３５１ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。混合物を、Ｎ２下、２５℃で２時間撹拌した。それを濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣ（ＦＡ）によって精製して、黄色固体として生成物（３０ｍｇ、５９．７％）を得た。ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，１．５分），ＲＴ＝０．８６２分，ＭＳ＝７１５．９［Ｍ＋１］＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．８６（ｓ，１Ｈ），８．９５（ｓ，１Ｈ），８．２８（ｓ，１Ｈ），７．９５−７．９３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４６−７．４４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．３３−７．３１（ｄ，Ｊ＝８．０，２Ｈ），７．１９（ｓ，１Ｈ），６．６８（ｓ，１Ｈ），５．８５（ｓ，１Ｈ），５．２２（ｓ，２Ｈ），５．０４（ｓ，２Ｈ），４．５７（ｓ，２Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．６０（ｓ，８Ｈ），１．４０（ｓ，３Ｈ）。
【０５８６】
実施例２４Ｇ：キノン７の合成
キノン７を、以下の反応スキームに従って調製した。
2019534238.tif 000167
【０５８７】
乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の化合物１（１００ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）の溶液に、ビス（４−ニトロフェニル）カーボネート（２８０ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（１７５ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）を３０℃で添加した。混合物を、Ｎ２下、３０℃で１６時間撹拌した。それを、さらに精製することなく次のステップで使用した。
【０５８８】
乾燥ＤＭＦ（１０．０ｍＬ）中の化合物２、ノルフロキサシン（２８８ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（１１６ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）を３０℃で添加した。混合物を、３０℃で２時間撹拌し、それを濾過し、濾過ケーキを、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０／１）で洗浄し、次いで濃縮して、黄色固体として所望の生成物（１５０ｍｇ、５９％）を得た。
【０５８９】
ＬＣＭＳ：（５−９５，ＡＢ，１．５分），ＲＴ＝０．８２４分，ＭＳ＝５６６．９［Ｍ＋１］；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．８９（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．６３（ｓ，１Ｈ），５．８３（ｓ，１Ｈ），５．２２（ｓ，２Ｈ），４．５７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．９７（ｓ，２Ｈ），３．８０（ｓ，２Ｈ），３．６３（ｓ，３Ｈ），３．３７（ｓ，３Ｈ），３．２１（ｓ，４Ｈ），１．４６（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。
【０５９０】
実施例２４Ｈ：キノン８の合成
キノン８を、以下の反応スキームに従って調製した。
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2019534238.tif 000169
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【０５９１】
アルコール（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した。ｐ−ニトロフェニルカーボネート（６１０ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ、５当量）を添加し、続いて、ＤＩＰＥＡ（０．３５ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ、５当量）を添加し、反応物を室温で３時間撹拌した。反応物を濃縮して、粗物に移された。
【０５９２】
ノルフロキサシン（１３０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ、１当量）を、バイアルに添加し、続いて、出発カーボネート（２００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）に添加し、続いて、ＤＭＦ（３ｍＬ）に添加した。次いで、ＨＯＢｔ（１０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ、０．２当量）、ピリジン（０．３ｍＬ、４ｍｍｏｌ、１０当量）を添加し、反応物を室温で１９時間撹拌した。反応物を、ＨＰＬＣによって精製して、１３６ｍｇの生成物（２つのステップにわたり５７％）を得た。
【０５９３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．４０（ｓ，１Ｈ），８．９６（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），５．９９（ｓ，１Ｈ），５．４９（ｓ，２Ｈ），４．５８（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ），３．６３−３．４８（ｍ，５Ｈ），２．０７（ｓ，３Ｈ），１．４１（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。
【０５９４】
実施例２４Ｉ：キノン９の合成
キノン９を、以下の反応スキームに従って調製した。
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【０５９５】
アルコール（２００ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（４ｍＬ）に溶解した。ｐ−ニトロフェニルカーボネート（２８４ｍｇ、１ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加し、続いて、ＤＩＰＥＡ（０．３ｍＬ、１．７ｍｍｏｌ、２当量）を添加し、反応物を室温で１９時間撹拌した。反応物を濃縮して、粗物に移された。
【０５９６】
ノルフロキサシン（２９０ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ、１当量）をバイアルに添加し、続いて、出発カーボネート（３５０ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、ＤＭＦ（４ｍＬ）を添加した。ＨＯＢｔ（２５ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、０．２当量）を添加し、次いで、ピリジン（０．７４ｍＬ、９ｍｍｏｌ、１０当量）を添加し、反応物を、室温で２４時間撹拌した。反応物を、ＨＰＬＣによって精製して、１０３ｍｇの生成物（２つのステップにわたり２０％）を得た。
【０５９７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９９（ｓ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｓ，１Ｈ），７．２４（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），５．８６（ｓ，１Ｈ），５．１９（ｓ，２Ｈ），４．６１（ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，４Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．６３（ｓ，６Ｈ），１．５８−１．３３（ｍ，３Ｈ）。
【０５９８】
実施例２４Ｊ：キノン１０の合成
キノン１０を、以下の反応スキームに従って調製した。
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2019534238.tif 000174
【０５９９】
アルコール（１００ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した。ｐ−ニトロフェニルカーボネート（１４２ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加し、続いて、ＤＩＰＥＡ（０．１５ｍＬ、０．８５ｍｍｏｌ、２当量）を添加し、反応物を室温で１９時間撹拌した。反応物を濃縮して、粗物に移された。
【０６００】
ノルフロキサシン（１３６ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ、１当量）をバイアルに添加し、続いて、出発カーボネート（１７０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、ＤＭＦ（７ｍＬ）を添加した。ＨＯＢｔ（１２ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、０．２当量）を添加し、次いで、ピリジン（０．３５ｍＬ、４．３ｍｍｏｌ、１０当量）を添加し、反応物を、室温で２４時間撹拌した。反応物を、ＨＰＬＣによって精製して、１８ｍｇの生成物（２つのステップにわたり７％）を得た。
【０６０１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９５（ｓ，１Ｈ），８．４８（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８０（ｓ，１Ｈ），５．７８（ｓ，１Ｈ），５．１７（ｓ，２Ｈ），４．５８（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．７６（ｓ，４Ｈ），３．５３（ｓ，５Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ），１．４０（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）。
【０６０２】
実施例２４Ｋ：キノン１１の合成
キノン１１を、以下の反応スキームに従って調製した。
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【０６０３】
アルコール（１００ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した。ｐ−ニトロフェニルカーボネート（１４２ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加し、続いて、ＤＩＰＥＡ（０．１５ｍＬ、０．８５ｍｍｏｌ、２当量）を添加し、反応物を室温で１９時間撹拌した。反応物を濃縮して、粗物に移された。
【０６０４】
ノルフロキサシン（１３６ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ、１当量）をバイアルに添加し、続いて、出発カーボネート（１７０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、ＤＭＦ（７ｍＬ）を添加した。ＨＯＢｔ（１２ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、０．２当量）を添加し、次いで、ピリジン（０．３５ｍＬ、４．３ｍｍｏｌ、１０当量）を添加し、反応物を、室温で２４時間撹拌した。反応物を、ＨＰＬＣによって精製して、３１ｍｇの生成物（２つのステップにわたり１２％）を得た。
【０６０５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９５（ｓ，１Ｈ），８．４９（ｓ，２Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝１３．１Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｓ，２Ｈ），５．１９（ｓ，２Ｈ），４．５８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ），３．８３−３．６９（ｍ，５Ｈ），３．５８（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，４Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），１．４０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。
【０６０６】
実施例２４Ｌ：キノン１２の合成
キノン１２を、以下の反応スキームに従って調製した。
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【０６０７】
アルコール（１００ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した。ｐ−ニトロフェニルカーボネート（５４５ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ、５当量）を添加し、続いて、ＤＩＰＥＡ（０．３１ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ、５当量）を添加し、反応物を室温で３時間撹拌した。反応物を濃縮して、粗物に移された。
【０６０８】
ノルフロキサシン（１１０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、１当量）をバイアルに添加し、続いて、出発カーボネート（１６０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、ＤＭＦ（３ｍＬ）を添加した。ＨＯＢｔ（１０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ、０．２当量）を添加し、次いで、ピリジン（０．２９ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ、１０当量）を添加し、反応物を室温で１９時間撹拌した。さらにノルフロキサシン（１１０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、反応物を２．５日間撹拌した。反応物を、ＨＰＬＣによって精製して、８９ｍｇの生成物（２つのステップにわたり４０％）を得た。
【０６０９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９６（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝１３．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），５．９３（ｓ，１Ｈ），５．３２（ｓ，２Ｈ），４．５８（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），４．００（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，６Ｈ），３．６４−３．４９（ｍ，８Ｈ），１．４１（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。
【０６１０】
実施例２５：抗体へのコンジュゲーションのためのリンカーを含むＰＢＤ二量体ジスルフィドプロドラッグ１の合成
リンカーを含むＰＢＤ二量体ジアフォラーゼプロドラッグ１を、以下の反応スキームに従って調製した。
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上記構造における、及び実施例２５に示される他の箇所のアスタリスクは、キラル中心を表す。
【０６１１】
ＤＣＭ（３０ｍＬ）中の化合物Ａ１（１．００ｇ、１．１７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のトリホスゲン（３４７ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（３５６ｍｇ、３．５２ｍｍｏｌ）の溶液を３０℃で添加した。混合物を、３０℃で３０分間撹拌した後、それを濃縮し、ジブチル錫ジアセテート（０．３２ｍＬ、１．２２ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の化合物Ａ２（２１５ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（３６９ｍｇ、３．６５ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を、２５℃で１時間撹拌した。混合物を、水（１０ｍＬ）で希釈し、２０分間撹拌した。次いで、混合物を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０〜５％ＭｅＯＨ）によって精製して、黄色固体として化合物Ａ３（８００ｍｇ、２６．９％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．０３２分，ｍ／ｚ＝１１００．５［Ｍ＋１］＋。
【０６１２】
ＤＣＭ（１５ｍＬ）中のトリホスゲン（９７．１ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中の化合物Ａ３（８００．０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（９９．３１ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を、３０℃で３０分間撹拌し、それを濃縮した。上記の残渣に、ＤＭＦ（１５ｍＬ）中のＭＣ＿ＶＣ＿ＰＡＢ（３６８．０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（０．１４ｍＬ、０．９８ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を、２５℃で１２時間撹拌した。混合物を、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の５〜１０％ＭｅＯＨ）によって精製して、黄色固体としてＡ４（３００ｍｇ、３７％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．０２３分，ｍ／ｚ＝８５０．５［Ｍ／２＋１］＋。
【０６１３】
ＴＨＦ（１．０ｍＬ）中の化合物Ａ４（３００．０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、水（１．０ｍＬ）及びＨＯＡｃ（１．５ｍＬ）を添加し、２５℃で１２時間撹拌した。混合物を、ＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（３×４０ｍＬ）で洗浄し、濃縮して、赤色固体として化合物Ａ５（１６０ｍｇ、６１．７％）を得た。
【０６１４】
ＤＭＳＯ（５．０ｍＬ）中の化合物Ａ５（１４０．０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＩＢＸ（２６６ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、３８℃で１２時間撹拌した後、それを、分取ＨＰＬＣ（ＡＣＮ３７〜６７％／水中の０．２２５％ＦＡ）によって精製し、続いて、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．５）によって精製して、黄色固体として、リンカーを含むＰＢＤ二量体ジアフォラーゼプロドラッグ１（１５ｍｇ、１０．５％）を得た。ＬＣＭＳ（５−９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７１２分，ｍ／ｚ＝７３４．２［Ｍ／２＋１］＋。
【０６１５】
実施例２６：ＰＢＤ二量体プロドラッグ抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の合成
ＡＤＣ１Ａ及び１Ｂを、抗体及び実施例２１ＤのＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグリンカー−薬物中間体のコンジュゲーションによって調製し、以下の構造を有する。
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【０６１６】
ＡＤＣ２Ａ及び２Ｂを、抗体及び実施例２１ＢのＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグリンカー−薬物中間体のコンジュゲーションによって調製し、以下の構造を有する。
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【０６１７】
ＡＤＣ３を、抗体及び実施例２１ＡのＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグリンカー−薬物中間体のコンジュゲーションによって調製し、以下の構造を有する。
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【０６１８】
ＡＤＣ４を、抗体及び実施例２１ＣのＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグリンカー−薬物中間体のコンジュゲーションによって調製し、以下の構造を有する。
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【０６１９】
ＡＤＣ５を、抗体及び実施例２１ＥのＰＢＤ二量体ＡＤＣジスルフィドプロドラッグリンカー−薬物中間体のコンジュゲーションによって調製し、以下の構造を有する。
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【０６２０】
ＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸プロドラッグ１Ａ及び１Ｂを、抗体及び実施例２２ＡのＰＢＤ二量体ＡＤＣボロン酸プロドラッグリンカー−薬物中間体のコンジュゲーションによって調製し、以下の構造を有する。
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【０６２１】
ＰＢＤ二量体ＡＤＣジアフォラーゼプロドラッグ１Ａ及び１Ｂを、抗体及び実施例２５のＰＢＤ二量体ＡＤＣジアフォラーゼプロドラッグリンカー−薬物中間体のコンジュゲーションによって調製し、以下の構造を有する。
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【０６２２】
本開示の要素またはその好ましい実施形態（複数可）を導入するとき、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、「その」、及び「該」という冠詞は、１つ以上の要素が存在することを意味することが意図される。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「有する」という用語は、包括的であることが意図され、列挙される要素以外の追加の要素が存在し得ることを意味する。
【０６２３】
この明細書は、最良の様式を含む本発明を開示するため、かつ任意の当業者による任意のデバイスまたはシステムの作製及び使用、ならびに任意の組み込まれる方法の実行を含む、本発明の実施を可能にするために、実施例を使用する。本発明の特許取得の対象となる範囲は、特許請求の範囲によって定義され、当業者に想起される他の実施例を含み得る。そのような他の実施例は、それらが特許請求の範囲の文言と異ならない構造的要素を有する場合、またはそれらが特許請求の範囲の文言と実質的な差異を有さない同等の構造的要素を含む場合、特許請求の範囲内であることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【国際調査報告】
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