(57)【要約】  本発明は、細菌感染の治療又は予防に使用するための、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含む、組成物（医薬組成物を含む）を提供する。
2019522677.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含み、ただしニクロサミド及びコリスチンを含有していない医薬組成物。
【請求項２】
サリチルアミド化合物が、ニクロサミド、オキシクロザニド、ニタゾキサニド、及びクロサンテルからなる群より選択される、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤が、ポリミキシン、又は細胞膜の恒常性及び／若しくは極性を破壊する陽イオン性若しくは陰イオン性ペプチド、例えばグラミシジンである、請求項２記載の医薬組成物。
【請求項４】
ポリミキシンが、ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥ（コリスチンを含む）である、請求項３記載の医薬組成物。
【請求項５】
薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項６】
サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含む、配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（ただし、該配合製品、相乗作用を有する該配合剤、該抗菌剤、又は該組成物はニクロサミド及びコリスチンを含有していない）。
【請求項７】
（ｉ）ヒト若しくはヒト以外の動物における細菌感染を治療若しくは予防すること；又は
（ｉｉ）細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除すること
（該感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む）
に使用するための、請求項１〜５のいずれか一項記載の医薬組成物、又は請求項６記載の配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、若しくは組成物。
【請求項８】
抗菌有効量のサリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを投与する工程を含む、患者における細菌感染を治療若しくは予防するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための方法であって、該感染又はバイオフィルムは１つ以上のグラム陰性細菌を含む、前記方法。
【請求項９】
サリチルアミド化合物が、ニクロサミド、オキシクロザニド、ニタゾキサニド、及びクロサンテルからなる群より選択される、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤が、ポリミキシン、又は細胞膜の恒常性及び／又は極性を破壊する陽イオン性若しくは陰イオン性ペプチド、例えばグラミシジンである、請求項８又は請求項９記載の方法。
【請求項１１】
ポリミキシンが、ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥである、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
グラム陰性細菌が、エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）、エンテロバクター・クロアカ（Enterobacter cloacae）、サルモネラ・エンテリカ（Salmonella enterica）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、シュードモナス・シリンガエ（Pseudomonas syringae）、肺炎桿菌（Klebsiella pneumonia）、アシネトバクター・バウマンニ（Acinetobacter baumannii）からなる群より選択される、請求項８〜１１のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤が、相乗作用的な抗菌作用を生じるに十分な比率で使用される、請求項８〜１２のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤が、経口、非経口、吸入スプレーによる、局所、直腸、鼻腔内、バッカル、静脈内、筋肉内、皮内、皮下から選択された経路を介して、又は埋め込まれたリザーバーを介して患者に投与される、請求項８〜１３のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤を含有している梱包材を、説明書と一緒に含み、ただし梱包材はニクロサミド及びコリスチンを含有していない、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、該感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む、該製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本発明は一般的に、細菌感染の予防又は治療に有効である、細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤と組み合わせたサリチルアミド化合物、並びに、その組成物に関する。
【０００２】
発明の背景
多剤耐性細菌の増加（rise）は、２１世紀に人々が直面する健康に関する最大の懸念であるだろうことが広く予想される（Boucher et al. (2009) Clinical Infectious Diseases 48(1):1-12; Piddock (2012) Lancet Infect Dis. 12(3):249-53）。臨床医はすでに定期的に抗生物質耐性の症例に直面し、以前に処置の簡単であった感染症はより処置が困難となりつつあり、場合によっては処置不可能となっている。ほぼ全てのクラスの抗生物質が１９７０年以前に発見され、過去３０年間にわたり新規な主要なクラスの抗生物質は開発されていない。新規な抗生物質療法の大半の進展は近年、公知の抗生物質に対する類似体の開発を通した、抗生物質のクラス内のものである。しかしながら、耐性機序が発達したので、全てのクラスの抗生物質が特定の細菌に対して無効である。
【０００３】
抗生物質耐性の割合を減少させるために、抗生物質の適正使用に関する教育及び感染症の発症を促進するようなその使用の制限と共に、感染の蔓延及び発症を制限するためのより多くの措置がとられている。しかしながら、新規な抗生物質、特に感染症の負荷のかなりの比率を占めるグラム陰性細菌に対して有効である抗生物質が依然として必要である。
【０００４】
ニクロサミド（Ｎ−（２’−クロロ−４’−ニトロフェニル）−５−クロロサリチルアミド）は、サリチルアニリド化合物である。サリチルアニリドは、１９５０年代にビオンファラリア・グラブラータ（Biomphalaria glabrata）という貝類に対する２０，０００個の化合物のスクリーニング及び構造最適化の後に、貝類の殺滅に有用であるとして同定された（Gonnert (1961) Results of laboratory and field trials with the molluscicide Bayer 73）。Sun及びZhang（Sun and Zhang (1999) Tubercle and Lung Disease 79(5): 319-320）は、「抗酸性」細胞壁というグラム陽性細菌及びグラム陰性細菌の両方の特徴を有しているのにも関わらず、広義にはグラム陽性細菌として分類されている結核菌に対する活性について抗真菌薬及び抗蠕虫薬を調べた。彼らは、ニクロサミドが結核菌に対して非常に活性であることを発見し、ＭＩＣは０．５〜１．０μg/mLであった。ニクロサミドは、現在、結核菌感染の長期におよぶ処置の原因である、低酸素条件において増殖する非複製結核菌に対しても活性であった。これらの著者らは、組織培養液中で増殖したマクロファージに対する毒性を観察した。ニクロサミドのサリチルアニリド類似体を、結核菌の処置におけるその使用をさらに調べるためにスクリーニングした（Kratky et al. (2010) European Journal of Medicinal Chemistry 45(12):6106-6113; Kratky et al. (2012) Tuberculosis 92(5):434-439）。
【０００５】
de Carvalho et al.はまた、ニクロサミド及び構造類維体であるニタゾキサニドを、結核菌に対する有効性について調べた（de Carvalho et al. (2011)  ACS Medicinal Chemistry Letters 2(11):849-854.）。彼らは、ニクロサミド及びニタゾキサニドは、結核菌の膜電位を脱共役させたが、対照のリファンピシンは脱共役させなかったことを示した。
【０００６】
メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）の増殖阻止に有効な化合物を同定するための、ＦＤＡにより承認された市販薬物のライブラリーの近年のスクリーニングにおいて、Lau et al.は、ニクロサミドが、使用されるアッセイ条件下でマイクロモル未満の最小阻害濃度を示す、効果的な抗ＭＲＳＡ剤であることを示した（Lau et al. (2015) Antibiotics (Basel) 4(4):424-34）。
【０００７】
ニクロサミド及び関連するサリチルアニリドで抗蠕虫薬のオキシクロザニドもまた、Rajamuthiah et al.によって、ＭＲＳＡ並びに別のグラム陽性細菌であるエンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faecium）に対して直接有害であることが発見された（Rajamuthiah et al. (2015). PloS One 10(4):e0124595）。この研究は、別の関連するサリチルアニリド化合物であるクロサンテルも、ＭＲＳＡに対して有効であったという著者らの以前の所見に触発されたものである（Rajamuthiah et al. (2014) PLoS One 9(2):e89189）。しかしながら、Rajamuthiah et al.は、ニクロサミドもオキシクロザニドも、試験されたどのグラム陰性細菌株（すなわち、肺炎桿菌、アシネトバクター・バウマンニ（Acinetobacter baumannii）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、及びエンテロバクター・エロゲネス（Enterobacter aerogenes））の増殖を阻止するのにも有効ではなかったことを具体的に記述した。
【０００８】
グラム陰性細菌による病気発生の間接的阻害剤としてのニクロサミドの能力が近年、緑膿菌のクオラムセンシングシステムの何らかの阻害剤を同定するためにＦＤＡ承認薬をスクリーニングしたImperi et al.によって研究された（Imperi et al. (2013) Antimicrobial Agents Chemotherapy 57(2):996-1005）。試験された薬物の中で、ニクロサミドが最も高い抗クオラムセンシング活性を示した。さらなる分析により、ニクロサミドが、シグナル分子の合成ではなくむしろクオラムセンシングシグナルに対する応答を阻害することができることが決定された。しかしながら、著者らはニクロサミドの直接的な毒性作用の役割を考察せず、著者らのデータは、緑膿菌に対する何らかの直接的な毒性作用を有するニクロサミドと矛盾していた。事実、ニクロサミドは、報告されたアッセイにおいて緑膿菌の増殖を阻害することができなかった（例えば図２Ａ）。
【０００９】
出願人らは近年、ニクロサミド及び関連するサリチルアミドが驚くべきことに、排出ポンプ阻害剤、（例えば）ＴｏｌＣ排出ポンプ阻害剤と併用投与されると、グラム陰性細菌に対して直接毒性作用を示すことを発見した（ＰＣＴ／ＮＺ２０１５／０５０１９２；未公開）。この知見は、細菌学の分野の研究者には知られておらず、グラム陰性細菌に対する併用療法の開発に向けての意義ある前進である。
【００１０】
相乗作用機序を示す処置を含む併用療法は、抗生物質耐性の増加と戦うための最も有望な戦略の１つである（Lee et al. (2016) J Pharm Sci 105:1501-1512）。併用療法は、２つの顕著な特徴のために好まれる：（１）２つの化合物の複合作用がその個々の作用の合計よりも大きい相乗作用、例えば、ＤＮＡ合成阻害剤（Michail et al. (2013) Antimicrobial Agents and Chemotherapy 57:6028-6033）又はタンパク質合成を標的とする抗生物質（Rodriguez-Avial et al. (2015) Int. J. Antimicrob. Agents 46:616-621）と組み合わせた、細胞膜の完全性を標的とする治療薬；及び（２）耐性出現の減少、すなわち、２つの薬物に対する耐性の確率は、個々の療法のものより低い（Lee et al. (2009) J. Clin. Microbiol. 47:1611-1612, Khameneh et al. (2016) Microb. Pathog. 95:32-42）。
【００１１】
抗生物質耐性がヒト及び動物の健康に及ぼす重大なリスクを考えると、感染症を治療及び予防するための新規な薬物／抗菌アプローチを開発する必要性がある。また、最終手段である既存の薬物の毒性を軽減させる必要性もある。
【００１２】
本発明は、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含む、組成物及び配合製品を提供することによって、これらの必要性に対処することを探究する。
【００１３】
発明の要約
本明細書において記載及び特許請求された本発明は、この発明の要約に示されるか又は記載されているか又は参照されているものを含むがこれらに限定されない、多くの特質及び実施態様を有する。総括的であることは意図されておらず、本明細書に記載及び特許請求された発明は、限定ではなく単に説明のために含まれているこの発明の要約において同定された特徴若しくは実施態様に限定され、又はそれらによって限定されることはない。
【００１４】
１つの態様では、本発明は、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含む医薬組成物を提供する。
【００１５】
別の態様では、本発明は、ニクロサミド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物を提供する。
【００１６】
さらに別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物であって、式Ｉの化合物は、下記：
【化１】
2019522677.tif 000003
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で定義される通りである、医薬組成物を提供する。
【００１７】
さらに別の態様では、本発明は、オキシクロザニド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物を提供する。
【００１８】
さらに別の態様では、本発明は、ニタゾキサニド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物を提供する。
【００１９】
さらに別の態様では、本発明は、クロサンテル及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物を提供する。
【００２０】
別の態様では、本発明は、ニクロサミド及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物を提供する。
【００２１】
さらに別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物であって、式Ｉの化合物は、下記：
【化２】
2019522677.tif 000004
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で定義される通りである、医薬組成物を提供する。
【００２２】
さらに別の態様では、本発明は、オキシクロザニド及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物を提供する。
【００２３】
さらに別の態様では、本発明は、ニタゾキサニド及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物を提供する。
【００２４】
さらに別の態様では、本発明は、クロサンテル及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物を提供する。
【００２５】
本発明のさらなる態様では、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含む、配合製品が提供される。
【００２６】
本発明の他のさらなる態様では、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含む、相乗作用を示す配合剤が提供される。
【００２７】
本発明の他のさらなる態様では、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含む、抗菌剤が提供される。
【００２８】
他のさらなる態様では、本発明は、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含む、組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【００２９】
他のさらなる態様では、本発明は、ニクロサミド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【００３０】
さらに別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）であって、式Ｉの化合物は、下記：
【化３】
2019522677.tif 000005
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で定義される通りである、配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物を提供する。
【００３１】
さらに別の態様では、本発明は、オキシクロザニド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【００３２】
さらに別の態様では、本発明は、ニタゾキサニド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【００３３】
さらに別の態様では、本発明は、クロサンテル及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【００３４】
別の態様では、本発明は、ニクロサミド及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【００３５】
さらに別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）であって、式Ｉの化合物は、下記：
【化４】
2019522677.tif 000006
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で定義される通りである、配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物を提供する。
【００３６】
さらに別の態様では、本発明は、オキシクロザニド及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【００３７】
さらに別の態様では、本発明は、ニタゾキサニド及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【００３８】
さらに別の態様では、本発明は、クロサンテル及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【００３９】
さらに別の態様では、本発明は、
（ｉ）ヒト又はヒト以外の動物における細菌感染を治療若しくは予防すること；又は
（ｉｉ）細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除すること
（前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む）
に使用するための、本明細書に記載の医薬組成物、又は本明細書に記載の配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、若しくは組成物を提供する。
【００４０】
さらに別の態様では、本発明は、患者における細菌感染を治療若しくは予防するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための方法であって、抗菌有効量のサリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを投与する工程を含み、前記感染又はバイオフィルムは１つ以上のグラム陰性細菌を含む方法を提供する。
【００４１】
他のさらなる態様では、本発明は、サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。
【００４２】
別の態様では、本発明は、ニクロサミド及びポリミキシン（前記ポリミキシンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。
【００４３】
さらに別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）（前記ポリミキシンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含み、式Ｉの化合物は、下記：
【化５】
2019522677.tif 000007
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で定義される通りである、製品を提供する。
【００４４】
さらに別の態様では、本発明は、オキシクロザニド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）（前記ポリミキシンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。
【００４５】
さらに別の態様では、本発明は、ニタゾキサニド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）（前記ポリミキシンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。
【００４６】
さらに別の態様では、本発明は、クロサンテル及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）（前記ポリミキシンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。
【００４７】
別の態様では、本発明は、ニクロサミド及びグラミシジン（前記グラミシジンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。
【００４８】
さらに別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物及びグラミシジン（前記グラミシジンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含み、式Ｉの化合物は、下記：
【化６】
2019522677.tif 000008
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で定義される通りである、製品を提供する。
【００４９】
さらに別の態様では、本発明は、オキシクロザニド及びグラミシジン（前記グラミシジンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。
【００５０】
さらに別の態様では、本発明は、ニタゾキサニド及びグラミシジン（前記グラミシジンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。
【００５１】
さらに別の態様では、本発明は、クロサンテル及びグラミシジン（前記グラミシジンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。
【００５２】
本発明はさらに、ニクロサミド及びコリスチンを排除した、医薬組成物、配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、組成物（生物学的組成物を含む）、及び製品を意図する。
【００５３】
したがって、別の態様では、本発明は、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含み、ただし、ニクロサミド及びコリスチンを含有していない医薬組成物を提供する。
【００５４】
別の態様では、本発明は、ニクロサミド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）（前記ポリミキシンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含み、ただし、ポリミキシンはコリスチンではない、医薬組成物を提供する。
【００５５】
さらに別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物であって、式Ｉの化合物は、下記：
【化７】
2019522677.tif 000009
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で定義される通りであり、ただし、式Ｉの化合物はニクロサミドではない医薬組成物を提供する。
【００５６】
本発明のさらなる態様では、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含み、ただし、ニクロサミド及びコリスチンを含有していない、配合製品を提供する。
【００５７】
本発明の他のさらなる態様では、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含み、ただし、ニクロサミド及びコリスチンを含有していない、相乗作用を示す配合剤を提供する。
【００５８】
本発明の他のさらなる態様では、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含み、ただし、ニクロサミド及びコリスチンを含有していない、抗菌剤を提供する。
【００５９】
他のさらなる態様では、本発明は、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含み、ただし、ニクロサミド及びコリスチンを含有していない、組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【００６０】
他のさらなる態様では、本発明は、ニクロサミド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）（前記ポリミキシンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含み、ただし、ポリミキシンはコリスチンではない、配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【００６１】
さらに別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる、配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）であって、式Ｉの化合物は、下記：
【化８】
2019522677.tif 000010
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で定義される通りであり、ただし、式Ｉの化合物はニクロサミドではない、配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物を提供する。
【００６２】
さらに別の態様では、本発明は、
（ｉ）ヒト又はヒト以外の動物における細菌感染を治療若しくは予防すること；又は
（ｉｉ）細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除すること
（前記感染又はバイオフィルムは１つ以上のグラム陰性細菌を含む）
に使用するための、本明細書に記載の医薬組成物、又は本明細書に記載の配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、若しくは組成物を提供する。
【００６３】
他のさらなる態様では、本発明は、サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含み、ただし梱包材はニクロサミド及びコリスチンを含有していない製品を提供する。
【００６４】
別の態様では、本発明は、ニクロサミド及びポリミキシン（前記ポリミキシンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含み、ただしポリミキシンはコリスチンではない製品を提供する。
【００６５】
さらに別の態様では、式Ｉの化合物及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）（前記ポリミキシンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含み、式Ｉの化合物は、下記：
【化９】
2019522677.tif 000011
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で定義される通りであり、ただし、式Ｉの化合物はニクロサミドではない製品を提供する。
【００６６】
本発明はさらに、抗菌有効量のニクロサミド及びコリスチンを患者又はバイオフィルムに投与することによる、患者における細菌感染を治療若しくは予防するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための方法であって、ただし、感染又はバイオフィルム形成を引き起こす細菌は、肺炎桿菌及び／又はアシネトバクター・バウマンニではない方法を意図する。
【００６７】
したがって、さらに別の態様では、本発明は、患者における細菌感染を治療若しくは予防するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための方法であって、抗菌有効量のサリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤を患者又はバイオフィルムに投与する工程を含み、前記感染又はバイオフィルムは１つ以上のグラム陰性細菌を含み、またサリチルアミドがニクロサミドであり、かつ細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤がコリスチンである場合、グラム陰性細菌は肺炎桿菌及び／又はアシネトバクター・バウマンニではない方法を提供する。
【００６８】
他のさらなる態様では、本発明は、患者における細菌感染を治療若しくは予防するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための方法であって、抗菌有効量のニクロサミド及びコリスチンを患者又はバイオフィルムに投与する工程を含み、ただし、感染又はバイオフィルム形成を引き起こす細菌は、肺炎桿菌及び／又はアシネトバクター・バウマンニではない方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００６９】
【図１】Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５に対するニクロサミド／コリスチンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びコリスチンを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのＥ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５の増殖率を示す。データは４回の独立した反復実験の平均値である。Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びコリスチンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図２】Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５に対するニクロサミド及びコリスチンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図１のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びコリスチンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図１に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図３】Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５に対するニクロサミド／ポリミキシンＢの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びポリミキシンＢを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのＥ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５の増殖率を示す。データは４回の独立した反復実験の平均値である。Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなポリミキシンＢ及びコリスチンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図４】Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５に対するニクロサミド及びポリミキシンＢの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図３のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及ポリミキシンＢの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図３に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図５】Ｅ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０に対するニクロサミド／コリスチンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びコリスチンを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのＥ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０の増殖率を示す。データは２回の独立した反復実験（各々２つの技術的反復を含む）の平均値である。Ｅ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びコリスチンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、２００rpmで３時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図６】Ｅ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０に対するニクロサミド及びコリスチンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図５のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びコリスチンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図５に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図７】Ｅ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０に対するニクロサミド／ポリミキシンＢの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びポリミキシンＢを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのＥ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０の増殖率を示す。データは２回の独立した反復実験（各々２つの技術的反復を含む）の平均値である。Ｅ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びポリミキシンＢの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで３時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図８】Ｅ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０に対するニクロサミド及びポリミキシンＢの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図７のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びポリミキシンＢの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図７に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図９】β−ラクタム耐性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＮＺ単離株ＡＲＬ０６／６２４）に対するニクロサミド／コリスチンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びコリスチンを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのβ−ラクタム耐性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＮＺ単離株ＡＲＬ０６／６２４）の増殖率を示す。データは２回の独立した反復実験（各々２つの技術的反復を含む）の平均値である。β−ラクタム耐性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＮＺ単離株ＡＲＬ０６／６２４）の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びコリスチンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、２００rpmで３時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図１０】β−ラクタム耐性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＮＺ単離株ＡＲＬ０６／６２４）に対するニクロサミド及びコリスチンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図９のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及コリスチンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図９に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図１１】β−ラクタム耐性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＮＺ単離株ＡＲＬ０６／６２４）に対するニクロサミド／ポリミキシンＢの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びポリミキシンＢを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのβ−ラクタム耐性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＮＺ単離株ＡＲＬ０６／６２４）の増殖率を示す。データは２回の独立した反復実験（各々２つの技術的反復を含む）の平均値である。β−ラクタム耐性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＮＺ単離株ＡＲＬ０６／６２４）の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びポリミキシンＢの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで３時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図１２】β−ラクタム耐性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＮＺ単離株ＡＲＬ０６／６２４）に対するニクロサミド及びポリミキシンＢの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図１１のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及ポリミキシンＢの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図１１に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図１３】緑膿菌ＰＡＯ１に対するニクロサミド／コリスチンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びコリスチンを用いて示されているように改変されたＬＢ中での緑膿菌ＰＡＯ１の増殖率を示す。データは、４回の独立した反復実験の平均値である。緑膿菌ＰＡＯ１の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びコリスチンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図１４】緑膿菌ＰＡＯ１に対するニクロサミド及びコリスチンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図１３のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びコリスチンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図１３に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図１５】緑膿菌ＰＡＯ１に対するニクロサミド／ポリミキシンＢの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びポリミキシンＢを用いて示されているように改変されたＬＢ中での緑膿菌ＰＡＯ１の増殖率を示す。データは、４回の独立した反復実験の平均値である。緑膿菌ＰＡＯ１の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びポリミキシンＢの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図１６】緑膿菌ＰＡＯ１に対するニクロサミド及びポリミキシンＢの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図１５のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びポリミキシンＢの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図１５に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図１７】セフタジジム／ピペラシリン耐性緑膿菌（ＮＺ単離株ＡＲ００／５３７）に対するニクロサミド／コリスチンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びコリスチンを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのセフタジジム／ピペラシリン耐性緑膿菌（ＮＺ単離株ＡＲ００／５３７）の増殖率を示す。データは、２回の独立した反復実験（各々２つの技術的反復を含む）の平均値である。セフタジジム／ピペラシリン耐性緑膿菌（ＮＺ単離株ＡＲ００／５３７）の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで３時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びコリスチンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図１８】セフタジジム／ピペラシリン耐性緑膿菌（ＮＺ単離株ＡＲ００／５３７）に対するニクロサミド及びコリスチンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図１７のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びコリスチンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図１７に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図１９】セフタジジム／ピペラシリン耐性緑膿菌（ＮＺ単離株ＡＲ００／５３７）に対するニクロサミド／ポリミキシンＢの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びポリミキシンＢを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのセフタジジム／ピペラシリン耐性緑膿菌（ＮＺ単離株ＡＲ００／５３７）の増殖率を示す。データは、２回の独立した反復実験（各々２つの技術的反復を含む）の平均値である。セフタジジム／ピペラシリン耐性緑膿菌（ＮＺ単離株ＡＲ００／５３７）の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで３時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びポリミキシンＢの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図２０】β−ラクタム耐性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＮＺ単離株ＡＲＬ０６／６２４）に対するニクロサミド及びポリミキシンＢの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図１９のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びポリミキシンＢの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図１９に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図２１】肺炎桿菌ＡＴＣＣ ＢＡＡ−１７０５に対するニクロサミド／コリスチンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びコリスチンを用いて示されているように改変されたＬＢ中での肺炎桿菌ＡＴＣＣ ＢＡＡ−１７０５の増殖率を示す。データは、４回の独立した反復実験の平均値である。肺炎桿菌ＡＴＣＣ ＢＡＡ−１７０５の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びコリスチンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図２２】肺炎桿菌ＡＴＣＣ ＢＡＡ−１７０５に対するニクロサミド及びコリスチンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図２１のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びコリスチンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図２１に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図２３】肺炎桿菌ＡＴＣＣ ＢＡＡ−１７０５に対するニクロサミド／ポリミキシンＢの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びポリミキシンＢを用いて示されているように改変されたＬＢ中での肺炎桿菌ＡＴＣＣ ＢＡＡ−１７０５の増殖率を示す。データは、４回の独立した反復実験の平均値である。肺炎桿菌ＡＴＣＣ ＢＡＡ−１７０５の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びポリミキシンＢの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図２４】肺炎桿菌ＡＴＣＣ ＢＡＡ−１７０５に対するニクロサミド及びポリミキシンＢの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図２３のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びポリミキシンＢの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図２３に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図２５】β−ラクタム耐性肺炎桿菌（ＮＺ単離株ＮＩＬ０５／２６）に対するニクロサミド／コリスチンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びコリスチンを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのβ−ラクタム耐性肺炎桿菌（ＮＺ単離株ＮＩＬ０５／２６）の増殖率を示す。データは、２回の独立した反復実験（各々２つの技術的反復を含む）の平均値である。β−ラクタム耐性肺炎桿菌（ＮＺ単離株ＮＩＬ０５／２６）の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びコリスチンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで２時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図２６】β−ラクタム耐性肺炎桿菌（ＮＺ単離株ＮＩＬ０５／２６）に対するニクロサミド及びコリスチンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図２５のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びコリスチンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図２５に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図２７】β−ラクタム耐性肺炎桿菌（ＮＺ単離株ＮＩＬ０５／２６）に対するニクロサミド／ポリミキシンＢの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びポリミキシンＢを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのβ−ラクタム耐性肺炎桿菌（ＮＺ単離株ＮＩＬ０５／２６）の増殖率を示す。データは、２回の独立した反復実験（各々２つの技術的反復を含む）の平均値である。β−ラクタム耐性肺炎桿菌（ＮＺ単離株ＮＩＬ０５／２６）の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びポリミキシンＢの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで２時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図２８】β−ラクタム耐性肺炎桿菌（ＮＺ単離株ＮＩＬ０５／２６）に対するニクロサミド及びポリミキシンＢの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図２７のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びポリミキシンＢの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図２７に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図２９】エンテロバクター・クロアカ亜属クロアカＡＴＣＣ１３０４７に対するニクロサミド／コリスチンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びコリスチンを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのエンテロバクター・クロアカ亜属クロアカＡＴＣＣ１３０４７の増殖率を示す。データは、４回の独立した反復実験の平均値である。エンテロバクター・クロアカ亜属クロアカＡＴＣＣ１３０４７の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びコリスチンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図３０】エンテロバクター・クロアカ亜属クロアカＡＴＣＣ１３０４７に対するニクロサミド及びコリスチンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図２９のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びコリスチンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図２９に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図３１】エンテロバクター・クロアカ亜属クロアカＡＴＣＣ１３０４７に対するニクロサミド／ポリミキシンＢの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びポリミキシンＢを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのエンテロバクター・クロアカ亜属クロアカＡＴＣＣ１３０４７の増殖率を示す。データは、４回の独立した反復実験の平均値である。エンテロバクター・クロアカ亜属クロアカＡＴＣＣ１３０４７の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びポリミキシンＢの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図３２】エンテロバクター・クロアカ亜属クロアカＡＴＣＣ１３０４７に対するニクロサミド及びポリミキシンＢの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図３１のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びポリミキシンＢの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図３１に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図３３】サルモネラ・エンテリカ（Salmonella enterica）の血清型ティフィムリウム（Typhimurium）（ＳＬ１３４４）に対するニクロサミド／コリスチンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びコリスチンを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのサルモネラ・エンテリカの血清型ティフィムリウム（ＳＬ１３４４）の増殖率を示す。データは、４回の独立した反復実験の平均値である。サルモネラ・エンテリカの血清型ティフィムリウム（ＳＬ１３４４）の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びコリスチンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図３４】サルモネラ・エンテリカの血清型ティフィムリウム（ＳＬ１３４４）に対するニクロサミド及びコリスチンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図３３のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びコリスチンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図３３に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図３５】図３５は、サルモネラ・エンテリカの血清型ティフィムリウム（ＳＬ１３４４）に対するニクロサミド／ポリミキシンＢの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びポリミキシンＢを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのサルモネラ・エンテリカの血清型ティフィムリウム（ＳＬ１３４４）の増殖率を示す。データは、４回の独立した反復実験の平均値である。サルモネラ・エンテリカの血清型ティフィムリウム（ＳＬ１３４４）の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びポリミキシンＢの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図３６】サルモネラ・エンテリカの血清型ティフィムリウム（ＳＬ１３４４）に対するニクロサミド及びポリミキシンＢの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図３５のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びポリミキシンＢの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図３５に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図３７】アシネトバクター・バウマンニ（ＡＴＣＣ基準株１９６０６）に対するニクロサミド／コリスチンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びコリスチンを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのアシネトバクター・バウマンニ（ＡＴＣＣ基準株１９６０６）の増殖率を示す。データは、２回の独立した反復実験（各々２つの技術的反復を含む）の平均値である。アシネトバクター・バウマンニ（ＡＴＣＣ基準株１９６０６）の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで３時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びコリスチンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図３８】アシネトバクター・バウマンニ（ＡＴＣＣ基準株１９６０６）に対するニクロサミド及びコリスチンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図３７のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びコリスチンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図３７に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図３９】アシネトバクター・バウマンニ（ＡＴＣＣ基準株１９６０６）に対するニクロサミド／ポリミキシンＢの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びポリミキシンＢを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのアシネトバクター・バウマンニ（ＡＴＣＣ基準株１９６０６）の増殖率を示す。データは、２回の独立した反復実験（各々２つの技術的反復を含む）の平均値である。アシネトバクター・バウマンニ（ＡＴＣＣ基準株１９６０６）の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで３時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びポリミキシンＢの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図４０】アシネトバクター・バウマンニ（ＡＴＣＣ基準株１９６０６）に対するニクロサミド及びポリミキシンＢの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図３９のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びポリミキシンＢの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図３９に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図４１】Ｅ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０に対するニクロサミド／グラミシジンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びグラミシジンを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのＥ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０の増殖率を示す。データは、４回の独立した反復実験の平均値である（４０μMのニクロサミドの列（ここでは、データは２回の独立した反復実験の平均値である）を除く）。Ｅ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びグラミシジンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の３０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、２００rpmで４．５時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図４２】Ｅ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０に対するニクロサミド及びグラミシジンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図４１のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びグラミシジンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図４１に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図４３】セフタジジム／ピペラシリン耐性緑膿菌（ＮＺ単離株ＡＲ００／５３７）に対するニクロサミド／グラミシジンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニクロサミド及びグラミシジンを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのセフタジジム／ピペラシリン耐性緑膿菌（ＮＺ単離株ＡＲ００／５３７）の増殖率を示す。データは、４回の独立した反復実験の平均値である（４０μMのニクロサミドの列（ここでは、データは２回の独立した反復実験の平均値である）を除く）。セフタジジム／ピペラシリン耐性緑膿菌（ＮＺ単離株ＡＲ００／５３７）の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３７℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニクロサミド及びグラミシジンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の３０μLのアリコートを加える。プレートを３７℃、２００rpmで４．５時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図４４】セフタジジム／ピペラシリン耐性緑膿菌（ＮＺ単離株ＡＲ００／５３７）に対するニクロサミド及びグラミシジンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図４３のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニクロサミド及びグラミシジンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図４３に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図４５】Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５に対するオキシクロザニド／コリスチンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、オキシクロザニド及びコリスチンを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのＥ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５の増殖率を示す。データは、４回の独立した反復実験の平均値である。Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなオキシクロザニド及びコリスチンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図４６】Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５に対するオキシクロザニド／コリスチンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図４５のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、オキシクロザニド及びコリスチンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図４５に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図４７】セフタジジム／ピペラシリン耐性緑膿菌（ＮＺ単離株ＡＲ００／５３７）に対するオキシクロザニド／コリスチンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、オキシクロザニド及びコリスチンを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのセフタジジム／ピペラシリン耐性緑膿菌（ＮＺ単離株ＡＲ００／５３７）の増殖率を示す。データは、２回の独立した反復実験の平均値である。セフタジジム／ピペラシリン耐性緑膿菌（ＮＺ単離株ＡＲ００／５３７）の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３７℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなオキシクロザニド及びコリスチンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の３０μLのアリコートを加える。プレートを３７℃、２００rpmで４．５時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図４８】セフタジジム／ピペラシリン耐性緑膿菌（ＮＺ単離株ＡＲ００／５３７）に対するオキシクロザニド／コリスチンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図４７のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、オキシクロザニド及びコリスチンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図４７に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図４９】β−ラクタム耐性肺炎桿菌（ＮＺ単離株ＮＩＬ０５／２６）に対するオキシクロザニド／コリスチンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、オキシクロザニド及びコリスチンを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのβ−ラクタム耐性肺炎桿菌（ＮＺ単離株ＮＩＬ０５／２６）の増殖率を示す。データは、２回の反復実験の平均値である。β−ラクタム耐性肺炎桿菌（ＮＺ単離株ＮＩＬ０５／２６）の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなオキシクロザニド及びコリスチンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の３０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図５０】β−ラクタム耐性肺炎桿菌（ＮＺ単離株ＮＩＬ０５／２６）に対するオキシクロザニド／コリスチンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図４９のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、オキシクロザニド及びコリスチンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図４９に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図５１】アシネトバクター・バウマンニ（ＡＴＣＣ基準株１９６０６）に対するオキシクロザニド／コリスチンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、オキシクロザニド及びコリスチンを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのアシネトバクター・バウマンニ（ＡＴＣＣ基準株１９６０６）の増殖率を示す。データは、２回の反復実験の平均値である。アシネトバクター・バウマンニ（ＡＴＣＣ基準株１９６０６）の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなオキシクロザニド及びコリスチンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の３０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図５２】アシネトバクター・バウマンニ（ＡＴＣＣ基準株１９６０６）に対するオキシクロザニド／コリスチンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図５１のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、オキシクロザニド及びコリスチンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図５１に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図５３】Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５に対するニタゾキサニド／コリスチンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、ニタゾキサニド及びコリスチンを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのＥ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５の増殖率を示す。データは、４回の独立した反復実験の平均値である。Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなニタゾキサニド及びコリスチンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図５４】Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５に対するニタゾキサニド／コリスチンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図５３のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、ニタゾキサニド及びコリスチンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図５３に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図５５】Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５に対するクロサンテル／コリスチンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、クロサンテル及びコリスチンを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのＥ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５の増殖率を示す。データは、４回の独立した反復実験の平均値である。Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているようなクロサンテル及びコリスチンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図５６】Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５に対するクロサンテル及びコリスチンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図５５のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、クロサンテル及びコリスチンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図５５に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図５７】Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５に対する２，４−ジニトロフェノール／コリスチンの相乗作用のヒートマップを示す。この図は、未処置の対照と比較した、２，４−ジニトロフェノール及びコリスチンを用いて示されているように改変されたＬＢ中でのＥ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５の増殖率を示す。データは、４回の独立した反復実験の平均値である。Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５の一晩培養液を使用して、ＬＢ培地の新たなアリコートに接種し、これを３０℃、２００rpmで２時間インキュベートする。続いて、３８４ウェルのマイクロプレート中の、示されているような２，４−ジニトロフェノール及びコリスチンの２倍連続希釈液、又は０μMの対照を含有している、マルチプレックスアッセイの個々のウェルに、培養液の４０μLのアリコートを加える。プレートを３０℃、１２００rpmで４時間インキュベートする。培養液の濁度を、６００nmの光学密度によってモニタリングし、各株について０μMの対照と比較した増殖率を計算する。
【図５８】Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５に対する２，４−ジニトロフェノール及びコリスチンの作用のシナジー分析を示す。各表の各セルは、図５７のヒートマップ分析表における相当するセルに対応する。右側のパネルは、２，４−ジニトロフェノール及びコリスチンの作用が相加的であった場合の、マイクロプレートデータ平均値の予測される濁度減少率を示す。左側のパネルは、図５７に提示されたデータから導かれた、測定された実際の濁度減少率を記録する。左側のパネルの強調されたセルは、化合物の相乗作用が検出された、すなわち、測定された培養液の濁度減少率が、各化合物の作用が相加的であった場合に予想されるものより大きかった場合の濃度を示す。
【図５９】酸化還元感受性ＧＦＰを介して測定された、ニクロサミドを用いてチャレンジした後のＥ．ｃｏｌｉ株の細胞内酸化ストレス分析を示す。パネルＡは、１０mMのＨ２Ｏ２若しくは１mMのＤＴＴ（完全に酸化された、又は完全に還元された酸化還元シグナルを得るためのもの）、又は２００nM、１μM若しくは１０μMのニクロサミドを用いてチャレンジ（challenge）した後の、７ＫＯ：ｒｏＧＦＰ及び７ＴＬ：ｒｏＧＦＰの細胞内酸化ストレス応答を示す。パネルＢ及びＣは、ＡＭＮＩＳ ＩｍａｇｅＳｔｒｅａｍシステム（１時点及び１試験条件あたり、少なくとも１５，０００個の個々の細胞を分析する）を使用して測定された、ニクロサミドによるチャレンジに応答した７ＫＯΔｔｏｌＣ：ｒｏＧＦＰ株及び７ＫＯ：ｒｏＧＦＰ株の細菌内酸化還元能を示す。細胞を、ニクロサミドとのインキュベーション後の様々な時点において、Ｎ−エチルマレイミドを用いて固定し、その後、フローサイトメトリーシステムに通過させた。ＩｍａｇｅＳｔｒｅａｍは個々の細胞を各々記録し、全ての画像は自動的に処理された。各実験についての酸化還元能（４０５/４８０nmの比）を得、これらの結果を併せて、７ＫＯ：ｒｏＧＦＰ株及び７ＫＯΔｔｏｌＣ：ｒｏＧＦＰ株におけるニクロサミド応答を比較する「酸化還元ストレス」時系列を作成した（パネルＢ）。パネルＣは代表的な顕微鏡画像を示し、７ＫＯ：ｒｏＧＦＰでは、細胞内細菌は、ニクロサミドによるチャレンジ後には有意な酸化還元ストレスを経験しなかったが（パネルＣ、「野生型」）、７ＫＯΔｔｏｌＣ：ｒｏＧＦＰ（パネルＣ、「ｔｏｌＣ」）は、実験の時間経過と共に増加する酸化還元ストレスを経験した。
【図６０】酸化還元感受性ＧＦＰを介して測定された、ニクロサミドを用いてチャレンジした後のＥ．ｃｏｌｉ株の細胞内酸化ストレス分析を示す。パネルＡは、１０mMのＨ２Ｏ２若しくは１mMのＤＴＴ（完全に酸化された又は完全に還元された酸化還元シグナルを得るためのもの）、又は１μMのニクロサミドを用いてチャレンジした後の、７ＫＯ：ｒｏＧＦＰの細胞内酸化ストレス応答を示す。パネルＢは、１０mMのＨ２Ｏ２、又は１μMのニクロサミド、又は２５μMのＰＡβＮ、又は２５μMのＰＡβＮと１μMのニクロサミドの組み合わせに応答した、７ＫＯ：ｒｏＧＦＰの細胞内酸化ストレス応答を示す。パネルＣは、１０mMのＨ２Ｏ２又は１μMのニクロサミド、又は０．５μMのコリスチン、又は０．５μMのコリスチンと１μMのニクロサミドの組み合わせに応答した、７ＫＯ：ｒｏＧＦＰの細胞内酸化ストレス応答を示す。パネルＤは、１０mMのＨ２Ｏ２又は１μMのニクロサミド、又は０．５μMのポリミキシンＢ（「ポリミキシン」と標識されている）、又は０．５μMのポリミキシンＢと１μMのニクロサミドの組み合わせに応答した、７ＫＯ：ｒｏＧＦＰの細胞内酸化ストレス応答を示す。
【００７０】
選択された定義
特記しない限り、本明細書において使用する全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の専門家に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似しているか、又は等価であるあらゆるアッセイ、方法、装置及び材料を、本発明の実施又は試験に使用することができるが、様々なアッセイ、方法、装置及び材料をここに記載する。
【００７１】
本明細書に開示されている数字の範囲（例えば１〜１０）への言及は、その範囲内の全ての関連する数字（例えば、１、１．１、２、３、３．９、４、５、６、６．５、７、８、９、及び１０）、及びその範囲内の任意の有理数の範囲（例えば２〜８、１．５〜５．５、及び３．１〜４．７）への言及をも組み入れるものであることを意図しており、したがって、本明細書に明示的に開示されている全ての範囲の全ての下位範囲は、明示的に開示されている。これらは、具体的に意図されているものの単なる例であり、列挙されている最低値と最高値との間の全ての数値の可能な組み合わせが、本出願に同じように明示的に記述されていると見なされるべきものとする。
【００７２】
本明細書において使用する「含む」、「含んでいる」という単語及び類似した単語は、排他的意味又は網羅的意味で解釈されるべきではない。換言すれば、それらは「を含むがこれらに限定されない」ことを意味することを意図する。
【００７３】
本明細書において使用する「サリチルアミド化合物」という用語は、全てのサリチルアミド化合物及びサリチルアニリド化合物、並びに、その誘導体及び類似体を含む。サリチルアミド化合物の適切な誘導体及び類似体の例は、以下にさらに詳細に記載されている。
【００７４】
本明細書において使用する「サリチルアニリド化合物」という用語は、サリチル酸とアニリンのアミドである全ての化合物を含み、それ故、サリチルアミド及びアニリドの両方に分類され得る。「サリチルアニリド化合物」という用語は、全てのサリチルアニリド化合物並びにその誘導体及び類似体を含む。サリチルアニリド化合物の適切な誘導体及び類似体の例は、以下にさらに詳細に記載されている。
【００７５】
本明細書において使用する「細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤」という用語は、細菌の細胞膜を破壊することのできる、薬学的に又は生物学的に活性なあらゆる薬剤を含む。本発明による細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤の例としては、ポリミキシン（ポリミキシンＢ及びポリミキシンＥ（すなわちコリスチン）を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７６】
本明細書において使用する「透過性を増加させる」、「増加した透過性」などの用語は、薬物（抗生物質など）が、細胞障壁（例えば細胞膜又は細胞接合部）を通して、薬剤に曝露されていない細胞障壁の場合と比較して増加した量で、移動することを可能にする特性を有することと定義される。
【００７７】
詳細な説明
本発明は、細菌細胞膜の透過性を増加させる、薬物に基づいた薬剤の特定の組み合わせが、（例えば）ニクロサミド、ニタゾキサニド、オキシクロザニド及びクロサンテルをはじめとするサリチルアミド類などの、特定の抗生物質の効果を増強させることができ、これらを組み合わせると、グラム陰性細菌に対する殺菌活性を示すという、驚くべき、かつ予想外の発見に基づいている。
【００７８】
この知見は、２つのレベルにおいて全く予想外である。まず、ニクロサミドをはじめとするサリチルアミド類は、グラム陰性細菌に対して有効な抗生物質であることは知られていない。第二に、２０１５年という最近、文献において、従来の抗生物質と膜透過性抗菌ペプチドとを含む薬物の組み合わせには、相乗的な相互作用はないと報告された（He et al. (2015) Biochimica et Biophysica Acta 1848:8-15）。
【００７９】
重要なことには、出願人は、組み合わせ治療薬の投与が、多くの臨床的に意義のある薬物耐性細菌に対して有効であることを、ここに実証する。
【００８０】
具体的には、ニクロサミドは、（例えば）ポリミキシンＢ又はコリスチンなどのポリミキシンと併用された場合、エシェリヒア・コリ、緑膿菌、エンテロバクター・クロアカ、肺炎桿菌、サルモネラ・エンテリカ、及びアシネトバクター・バウマンニを含む（ただしこれらに限定されない）一連の様々なグラム陰性細菌に対して、相乗的な増殖阻害作用を提供する（図１〜４０）。有利なことには、ニクロサミドはヒトにおける高用量での耐容性があることが知られ、出願人の研究はまた、それが、コリスチン又はポリミキシンＢなどの、細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤と組み合わせて適用される、グラム陰性細菌に対して効果的な抗生物質であることも実証する。
【００８１】
ニクロサミド、及びコリスチンなどの細胞膜の完全性を標的とする化合物は、共にＦＤＡにより承認された薬物であるので、臨床へのその送達（route）は、低減された費用で促進され得る。
【００８２】
ポリミキシンファミリーを上回る、膜を透過性にする（membrane permeabilizing）薬物の、グラム陰性細菌をサリチルアミド薬物の抗菌作用に対して感受性にさせる一般的な能力が、膜を透過性にする抗生物質であるグラミシジン（グラミシジンＡ、Ｂ、Ｃ及びＤの混合物；カタログ番号Ｇ５００２、シグマ・アルドリッチ製）を使用してさらに実証された。グラミシジンは、Ｅ．ｃｏｌｉ実験株Ｗ３１１０及び緑膿菌の抗生物質耐性である臨床単離株を含む（これらに限定されない）、一連の様々なグラム陰性細菌に対する相乗的な増殖阻害効果を提供する（図４１〜４４）。
【００８３】
オキシクロザニド（図４５〜５２）、ニタゾキサニド（図５３及び５４）及びクロサンテル（図５５及び５６）の効果はさらに、ニクロサミドに関連したサリチルアミド化合物が、様々な膜を透過性にする抗生物質（例えばコリスチン）と組み合わせて使用されると、幅広いグラム陰性細菌に対し、同じような相乗効果を示すことを実証する。
【００８４】
図５７及び５８は、コリスチンと膜脱共役剤、すなわち２，４−ジニトロフェノールの組み合わせが、弱い相乗効果しか示さず、またコリスチンとニクロサミド（例えば図１、２、５、６、９、１０）、又はコリスチンとオキシクロザニド（図４５、４６）、又はコリスチンとニタゾキサニド（図５３、５４）、又はコリスチンとクロサンテル（図５５、５６）の組み合わせと比較して、類似した濃度では、Ｅ．ｃｏｌｉに対して同レベルの増殖阻害を達成しないことを実証する。
【００８５】
理論に拘束されることは望まないが、出願人は、細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤が、酸化還元ストレスの関与する機序を通して作用すると仮定している。例えば、実施例２並びに図５９及び６０を参照されたい。具体的には、ニクロサミドは、膜を透過性にする薬剤（例えばポリミキシンＢ、又はコリスチン）、又はグラム陰性細菌のＴｏｌＣ排出ポンプを阻害する薬剤（例えばＰＡβＮ）と組み合わせて投与された場合、あるいは、排出機序の損なわれた株（例えば、ネイティブなｔｏｌＣ遺伝子のインフレーム欠失を有する、Ｅ．ｃｏｌｉ株７ＫＯΔｔｏｌＣ）に投与された場合に、細胞内酸化還元ストレスの不可逆的な増加を引き起こす。
【００８６】
まとめると、これらのデータは、本明細書に記載の様々な抗菌組成物の相乗効果、及び幅広いグラム陰性細菌に対するそれらの特異的な活性を実証する、直接的かつ明確な証拠を提供する。
【００８７】
したがって、１つの態様では、本発明は、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含む医薬組成物を提供する。
【００８８】
関連した例において、サリチルアミド化合物は、下記：
【化１０】
2019522677.tif 000012
（式中、
Ａは、アリール環又はヘテロアリール環、例えばフェニル環であり、
（Ｒ）ｎは、前記アリール環又はヘテロアリール環が場合により、１つ以上の置換基で置換され得ることを示し、
Ｘは、酸素又は別のヘテロ原子、例えば硫黄である）
で定義される任意の化合物である。−Ｃ（＝ｘ）−ＮＨ−基は、炭素原子又は窒素原子を介してＡ環に連結されていてもよい。
【００８９】
さらなる関連した例では、サリチルアミド化合物はサリチルアニリドである。
【００９０】
他のさらなる関連した例では、サリチルアミド化合物は、ニクロサミド、オキシクロザニド、ニタゾキサニド、及びクロサンテルからなる群より選択される。
【００９１】
別の関連した例では、サリチルアミドはニクロサミド、又は式Ｉ：
【化１１】
2019522677.tif 000013
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で示される化合物によって定義されるニクロサミド類似体である。以下を参照されたい。
【００９２】
別の例では、細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤は、高張溶液、カルシウムイオンキレート剤、界面活性剤、細胞膜の恒常性及び／又は極性を破壊する陽イオン性又は陰イオン性ペプチド、並びに、細菌細胞膜の透過性を増加させる薬物に基づいた薬剤をはじめとする非／受容体媒介性透過剤、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される。
【００９３】
関連した例では、細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤は、ポリミキシンＢ及びポリミキシンＥを含むがこれらに限定されないポリミキシン、並びに、その構造的及び／又は機能的類似体である。本発明によるポリミキシンＥの一例は、コリスチンである。実のところ、コリスチンはポリミキシンＥ１とポリミキシンＥ２の混合物であるが、両方の用語は当技術分野において互換的に使用される。
【００９４】
さらに関連した例では、細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤は、細胞膜の恒常性及び／又は極性を破壊する陽イオン性又は陰イオン性ペプチドを含み得る。本発明による陽イオン性ペプチドの一例は、グラミシジンである。（例えば）Hurdle et al. (2011) Nat. Rev. Microbiol. 9(1):62-75及びGuilhelemelli et al. (2013) Front Microbiol. 4:353（これらの総説は参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【００９５】
本発明による医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤又は担体を含有し得る。さらに、サリチルアミド化合物は、薬学的に許容される塩又はプロドラッグとして製剤化され得る。
【００９６】
別の態様では、本発明は、ニクロサミドとポリミキシンとを含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物を提供する。
【００９７】
さらに別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物とポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）とを含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物であって、式Ｉの化合物は、下記：
【化１２】
2019522677.tif 000014
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で定義される通りである、医薬組成物を提供する。
【００９８】
さらに別の態様では、本発明は、オキシクロザニド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物を提供する。
【００９９】
さらに別の態様では、本発明は、ニタゾキサニド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物を提供する。
【０１００】
さらに別の態様では、本発明は、クロサンテル及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物を提供する。
【０１０１】
別の態様では、本発明は、ニクロサミド及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物を提供する。
【０１０２】
さらに別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物であって、式Ｉの化合物は、下記：
【化１３】
2019522677.tif 000015
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で定義される通りである、医薬組成物を提供する。
【０１０３】
さらに別の態様では、本発明は、オキシクロザニド及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物を提供する。
【０１０４】
さらに別の態様では、本発明は、ニタゾキサニド及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物を提供する。
【０１０５】
さらに別の態様では、本発明は、クロサンテル及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物を提供する。
【０１０６】
さらなる態様では、本発明は、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含む配合製品を提供する。
【０１０７】
他のさらなる態様では、本発明は、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含む、相乗作用を示す配合剤を提供する。
【０１０８】
別の態様では、本発明は、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含む抗菌剤を提供する。
【０１０９】
さらに別の態様では、本発明は、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含む組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【０１１０】
他のさらなる態様では、本発明は、ニクロサミド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【０１１１】
さらに別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）であって、式Ｉの化合物は、下記：
【化１４】
2019522677.tif 000016
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で定義される通りである、配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物を提供する。
【０１１２】
さらに別の態様では、本発明は、オキシクロザニド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【０１１３】
さらに別の態様では、本発明は、ニタゾキサニド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【０１１４】
さらに別の態様では、本発明は、クロサンテル及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【０１１５】
別の態様では、本発明は、ニクロサミド及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【０１１６】
さらに別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）であって、式Ｉの化合物は、下記：
【化１５】
2019522677.tif 000017
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で定義される通りである、配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物を提供する。
【０１１７】
さらに別の態様では、本発明は、オキシクロザニド及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【０１１８】
さらに別の態様では、本発明は、ニタゾキサニド及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【０１１９】
さらに別の態様では、本発明は、クロサンテル及びグラミシジンを含み、前記グラミシジンが細菌細胞膜の透過性を増加させる配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【０１２０】
本発明の、また本明細書に記載の配合剤及び組成物は、特にヒトにおける感染の治療又は予防に、及び他の適用の中でも、バイオフィルム形成の予防、低減、又は排除に特に有用である。
【０１２１】
したがって、他のさらなる態様では、本発明は、抗菌有効量のサリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤を投与する工程を含む、患者における細菌感染を治療若しくは予防するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための方法であって、前記感染又はバイオフィルムは１つ以上のグラム陰性細菌を含む方法を提供する。
【０１２２】
関連した例では、サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤は、上記に定義されている通りである。
【０１２３】
別の例では、グラム陰性細菌としては、エシェリヒア・コリ（エシェリヒア・コリ株ＭＧ１６５５を含む）；エンテロバクター種（エンテロバクター・クロアカ亜属クロアカＡＴＣＣ１３０４７を含むがこれに限定されない）；サルモネラ・エンテリカ（サルモネラエンテリカの血清型ティフィムリウム（ＳＬ１３４４）を含む）；シュードモナス種（緑膿菌ＰＡＯ１及びシュードモナス・シリンガエ病原型アクチニダエを含むがこれらに限定されない）；肺炎桿菌（肺炎桿菌ＡＴＣＣ ＢＡＡ−１７０５を含む）；及びアシネトバクター・バウマンニ（アシネトバクター・バウマンニＡＴＣＣ基準株１９６０６を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。他の例では、細菌は、シゲラ属、ナイセリア属、モラクセラ属、レジオネラ属、セラチア属、ヘモフィルス属、エルシニア属、ボルデテラ属、ブルセラ属、カンピロバクター属、フランシセラ属、ヘリコバクター属、パスツレラ属、ビブリオ属、及び他のクレブシエラ属及びサルモネラ属に属するグラム陰性細菌からなる群より選択される。シゲラ属は、志賀赤痢菌（Shigella dysenteriae）、シゲラ・フレックスネリ（Shigella flexneri）、シゲラ・ボイディ（Shigella boydii）、シゲラ・ソネイ（Shigella sonnei）を含むがこれらに限定されない。ナイセリア属は、ナイセリア・ゴノレー（Neisseria gonorrhoeae）及び髄膜炎菌（Neisseria meningitidis）を含むがこれらに限定されない。モラクセラ属は、モラクセラ・カタラーリス（Moraxella catarrhalis）、モラクセラ・ラクナータ（Moraxella lacunata）、及びモラクセラ・ボビス（Moraxella bovis）を含むがこれらに限定されない。レジオネラ属は、レジオネラ・ニューモフィラ（Legionella pneumophila）を含むがこれに限定されない。セラチア属は、セラチア・マルセッセンス（Serratia marcescens）、セラチア・プリムシカ（Serratia plymuthica）、セラチア・リクファシエンス（Serratia liquefaciens）、セラチア・ルビデア（Serratia rubidaea）、及びセラチア・オドリフェラ（Serratia odoriferae）を含むがこれらに限定されない。ヘモフィルス属は、ヘモフィルス・エジプチウス（Haemophilus aegyptius）、ヘモフィルス・デュクレイ（Haemophilus ducreyi）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Haemophilus influenzae）、ヘモフィルス・ヘモリティカス（Haemophilus haemolyticus）、ヘモフィルス・パラインフルエンザ（Haemophilus parainfluenzae）、及びヘモフィルス・パラヘモリティカス（Haemophilus parahaemolyticus）を含むがこれらに限定されない。エルシニア属は、エルニシア・ペスチス（Yersinia pestis）及びエルシニア・シュードツベルクロシス（Yersinia pseudotuberculosis）を含むがこれらに限定されない。ボルデテラ属は、ボルデテラ・ブロンキセプチカ（Bordetella bronchiseptica）、百日咳菌（Bordetella pertussis）、及びパラ百日咳菌（Bordetella parapertussis）を含むがこれらに限定されない。ブルセラ属は、ブルセラ・メリテンシス（Brucella melitensis）及びブルセラ・アボルタス（Brucella abortus）を含むがこれらに限定されない。カンピロバクター属は、カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni ）及びカンピロバクター・コリ（Campylobacter coli）を含むがこれらに限定されない。フランシセラ属は、フランシセラ・ツラレンシス（Francisella tularensis）及びフランシセラ・ノビシダ（Francisella novicida）を含むがこれらに限定さ��ない。ヘリコバクター属は、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）を含むがこれに限定されない。パスツレラ属は、パスツレラ・マルトシダ（Pasteurella multocida）及びパスツレラ・ヘモリチカ（Pasteurella haemolytica）を含むがこれらに限定されない。ビブリオ属は、コレラ菌（Vibrio cholera）、ビブリオ・バルニフィカス（Vibrio vulnificus）、ビブリオ・フィシェリ（Vibrio fischeri）、及び腸炎ビブリオ菌（Vibrio parahaemolyticus）を含むがこれらに限定されない。クレブシエラ属は、肺炎桿菌（Klebsiella pneumoniae）の他に、クレブシエラ・グラニュロマティス（Klebsiella granulomatis）、クレブシエラ・オキシトカ（Klebsiella oxytoca）、クレブシエラ・ミシガネンシス（Klebsiella michiganensis）、及びクレブシエラ・バリコラ（Klebsiella variicola）を含むがこれらに限定されない。サルモネラ属は、サルモネラ・エンテリカ（Salmonella enterica）の他に、サルモネラ・ボンゴリ（Salmonella bongori）を含むがこれに限定されない。
【０１２４】
本発明による組成物及び方法は、動物（例えば乳牛の乳腺炎）、工業、及び基本的施設（例えば、浄水場、食品包装などにおけるバイオフィルムの防止）又は農業への適用に有用性を有し得る。
【０１２５】
したがって、本発明はさらに、動物の乳腺炎を治療又は予防するための、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含む、組成物、相乗作用を示す配合剤、又は抗菌剤を提供する。本発明はまた、抗菌有効量のサリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤を投与する工程を含む、動物の乳腺炎を治療又は予防するための方法であって、前記乳腺炎を引き起こす細菌は、１つ以上のグラム陰性細菌を含む方法を提供する。
【０１２６】
関連した例では、動物は雌牛である。
【０１２７】
さらなる関連した例では、サリチルアミド化合物はニクロサミドである。有利なことに、細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤の存在下における、グラム陰性細菌に対するその驚くべき／予想外の活性に加えて、ニクロサミドは、単独でも、グラム陽性細菌に対する殺菌活性を示す。したがって、本発明による組成物、相乗作用を示す配合剤、又は抗菌剤は、グラム陰性菌（例えばＥ．ｃｏｌｉ）とグラム陽性菌（例えば黄色ブドウ球菌及びＤ群連鎖球菌、例えばストレプトコッカス・ウベリス（Streptococcus uberis））の混合物が、雌牛の乳房／乳首の感染を引き起こしている可能性がある乳腺炎への適用において特に有用である。他のさらなる関連した例では、本発明による、乳腺炎を予防又は治療するのに使用するための相乗作用を示す配合剤又は抗菌剤は、スプレーとして雌牛の乳房／乳首に投与され得る。
【０１２８】
別の態様では、本発明は、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤の組み合わせ、又はサリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含む組成物の、医薬品としての使用を提供する。
【０１２９】
別の態様では、本発明は、医薬組成物の調製に使用するための、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤の組み合わせを提供する。
【０１３０】
バイオフィルムは、創傷／熱傷における感染を引き起こす可能性を有するか、又は留置医療器具上又は同器具内部の感染を引き起こす。あるいは、細菌バイオフィルムの形成は、食品産業用の製造機械内、食品産業によって使用される包装上、水若しくは他の液体のために使用される貯蔵タンク内、又は水処理プラントにおける機械内で起こり、これらは全て、ヒト又は動物と消費性商品との接触から生じる感染のリスクを増加させる可能性を有する。さらに、病院のベッド、浴室、及び病棟を接続しているドアなどの表面上における、バイオフィルム形成を介した細菌の蓄積もまた、ヒトが感染のリスクに曝される可能性を有する。
【０１３１】
したがって、ヒト（及び動物）における細菌感染を治療又は予防できるだけでなく、細菌バイオフィルムの形成を低減又は排除できることも、同等に重要な、本発明の配合製品及び組成物の使用について考慮すべきことである。
【０１３２】
特定の実施態様では、本発明による配合製品又は組成物はさらに、１つ以上の殺菌剤又は静菌剤を含み得る。殺菌剤の例としては、βラクタム抗生物質（例えば、ペニシリン誘導体、セファロスポリン、モノバクタム、カルバペネム）、バンコマイシン、ダプトマイシン、フルオロキノロン、メトロニダゾール、ニトロフラントイン、コトリモキサゾール、又はテリスロマイシンが挙げられるが、これらに限定されない。静菌剤の例としては、テトラサイクリン、マクロライド、スルホンアミド、リンコサミド、オキサゾリジノン、チゲサイクリン、ノボビオシン、ニトロフラントイン、スペクチノマイシン、トリメトプリム、クロラムフェニコール、エタンブトール、又はクリンダマイシンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３３】
抗生物質耐性の増加は、医療産業に対して強い影響を及ぼしつつあり、細菌感染と戦う（すなわち感染を治療又は予防する）ための代替的な医薬を提供する必要性がまずます重要となっている。したがって、別の態様では、本発明は、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤の、医薬品の製造における使用、又は、医薬品の製造に使用するための、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤の組み合わせの使用を提供する。
【０１３４】
さらに別の態様では、本発明は、患者における細菌感染を治療又は予防するための医薬品の製造における、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤の使用であって、前記感染を引き起こす細菌は、グラム陰性細菌を含む使用を提供する。
【０１３５】
他のさらなる態様では、本発明は、サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。
【０１３６】
別の態様では、本発明は、ニクロサミド及びポリミキシン（前記ポリミキシンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。
【０１３７】
さらに別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）（前記ポリミキシンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含み、式Ｉの化合物は、下記：
【化１６】
2019522677.tif 000018
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で定義される通りである、製品を提供する。
【０１３８】
さらに別の態様では、本発明は、オキシクロザニド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）（前記ポリミキシンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。
【０１３９】
さらに別の態様では、本発明は、ニタゾキサニド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）（前記ポリミキシンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。
【０１４０】
さらに別の態様では、本発明は、クロサンテル及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）（前記ポリミキシンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。
【０１４１】
別の態様では、本発明は、ニクロサミド及びグラミシジン（前記グラミシジンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。
【０１４２】
さらに別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物及びグラミシジン（前記グラミシジンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含み、式Ｉの化合物は、下記：
【化１７】
2019522677.tif 000019
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で定義される通りである、製品を提供する。
【０１４３】
さらに別の態様では、本発明は、オキシクロザニド及びグラミシジン（前記グラミシジンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。
【０１４４】
さらに別の態様では、本発明は、ニタゾキサニド及びグラミシジン（前記グラミシジンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。
【０１４５】
さらに別の態様では、本発明は、クロサンテル及びグラミシジン（前記グラミシジンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。
【０１４６】
本発明はさらに、ニクロサミド及びコリスチンを排除した、医薬組成物、配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、組成物（生物学的組成物を含む）、及び製品を意図する。
【０１４７】
したがって、別の態様では、本発明は、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含み、ただし、ニクロサミド及びコリスチンを含有していない医薬組成物を提供する。
【０１４８】
別の態様では、本発明は、ニクロサミド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）（前記ポリミキシンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含み、ただし、ポリミキシンはコリスチンではない、医薬組成物を提供する。
【０１４９】
さらに別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる医薬組成物であって、式Ｉの化合物は、下記：
【化１８】
2019522677.tif 000020
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で定義される通りであり、ただし、式Ｉの化合物はニクロサミドではない医薬組成物を提供する。
【０１５０】
本発明のさらなる態様では、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含み、ただし、ニクロサミド及びコリスチンを含有していない、配合製品を提供する。
【０１５１】
本発明の他のさらなる態様では、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含み、ただし、ニクロサミド及びコリスチンを含有していない、相乗作用を示す配合剤を提供する。
【０１５２】
本発明の他のさらなる態様では、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含み、ただし、ニクロサミド及びコリスチンを含有していない、抗菌剤を提供する。
【０１５３】
他のさらなる態様では、本発明は、サリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤とを含み、ただし、ニクロサミド及びコリスチンを含有していない、組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【０１５４】
他のさらなる態様では、本発明は、ニクロサミド及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）（前記ポリミキシンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含み、ただし、ポリミキシンはコリスチンではない、配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）を提供する。
【０１５５】
さらに別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）を含み、前記ポリミキシンが細菌細胞膜の透過性を増加させる、配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物（生物学的組成物を含む）であって、式Ｉの化合物は、下記：
【化１９】
2019522677.tif 000021
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で定義される通りであり、ただし、式Ｉの化合物はニクロサミドではない、配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、又は組成物を提供する。
【０１５６】
さらに別の態様では、本発明は、
（ｉ）ヒト又はヒト以外の動物における細菌感染を治療若しくは予防すること；又は
（ｉｉ）細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除すること
（前記感染又はバイオフィルムは１つ以上のグラム陰性細菌を含む）
に使用するための、本明細書に記載の医薬組成物、又は本明細書に記載の配合製品、相乗作用を示す配合剤、抗菌剤、若しくは組成物を提供する。
【０１５７】
他のさらなる態様では、本発明は、サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含み、ただし梱包材はニクロサミド及びコリスチンを含有していない製品を提供する。
【０１５８】
別の態様では、本発明は、ニクロサミド及びポリミキシン（前記ポリミキシンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含み、ただしポリミキシンはコリスチンではない製品を提供する。
【０１５９】
さらに別の態様では、式Ｉの化合物及びポリミキシン（ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含む）（前記ポリミキシンは細菌細胞膜の透過性を増加させる）を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含み、式Ｉの化合物は、下記：
【化２０】
2019522677.tif 000022
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は表１に定義されている通りである）
で定義される通りであり、ただし、式Ｉの化合物はニクロサミドではない製品を提供する。
【０１６０】
本発明はさらに、抗菌有効量のニクロサミド及びコリスチンを患者又はバイオフィルムに投与することによる、患者における細菌感染を治療若しくは予防するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための方法であって、ただし、感染又はバイオフィルム形成を引き起こす細菌は、肺炎桿菌及び／又はアシネトバクター・バウマンニではない方法を意図する。
【０１６１】
したがって、さらに別の態様では、本発明は、患者における細菌感染を治療若しくは予防するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための方法であって、抗菌有効量のサリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤を患者又はバイオフィルムに投与する工程を含み、前記感染又はバイオフィルムは１つ以上のグラム陰性細菌を含み、またサリチルアミドがニクロサミドであり、かつ細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤がコリスチンである場合、グラム陰性細菌は肺炎桿菌及び／又はアシネトバクター・バウマンニではない方法を提供する。
【０１６２】
他のさらなる態様では、本発明は、患者における細菌感染を治療若しくは予防するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための方法であって、抗菌有効量のニクロサミド及びコリスチンを患者又はバイオフィルムに投与する工程を含み、ただし、感染又はバイオフィルム形成を引き起こす細菌は、肺炎桿菌及び／又はアシネトバクター・バウマンニではない方法を提供する。
【０１６３】
サリチルアミド
当業者は、抗菌活性を有する任意の適切なサリチルアミド化合物、並びにその誘導体又は類似体が、本発明の配合剤及び組成物に使用され得ることを理解するだろう。特定の例では、サリチルアミド化合物は、グラム陰性細菌に対する抗菌活性を示す。本発明に使用するのに適したサリチルアミド化合物は、好ましくは以下：
【化２１】
2019522677.tif 000023
（式中、
Ａは、アリール環又はヘテロアリール環、例えばフェニル環であり、
（Ｒ）ｎは、前記アリール環又はヘテロアリール環が、場合により１つ以上の置換基で置換され得ることを示し、
Ｘは、酸素又は別のヘテロ原子、例えば硫黄である）
の構造部分を含む。−Ｃ（＝ｘ）−ＮＨ−基は、炭素原子又は窒素原子を介してＡ環に連結されていてもよい。好ましくは、サリチルアミド化合物は１つ以上のニトロ基を含む。
【０１６４】
特定の例では、サリチルアミド化合物は、２つ以上のアリール基、例えば２つ以上のフェニル環（各々場合により、例えば以下の式（Ｉ）に示されているように置換されていてもよい）を含む、サリチルアニリド化合物である。あるいは、サリチルアミド化合物は、１つ以上のヘテロアリール基を含み得る。サリチルアミド化合物は、アミド基の酸素の代わりに、硫黄などのヘテロ原子を含んでいてもよい。「サリチルアミド化合物」という用語は、全てのこのような誘導体及び類似体を含むことを意図する。
【０１６５】
好ましいサリチルアミド化合物は、サリチルアニリド化合物のニクロサミド（Ｎ−（２’−クロロ−４’−ニトロフェニル）−５−クロロサリチルアミド）であり、その構造は以下：
【化２２】
2019522677.tif 000024
に示されている。
【０１６６】
エタノールアミン塩及びピペリジン塩をはじめとする、ニクロサミドの塩形が知られている。さらに、ニクロサミドの一水和物形も知られている。塩又は水和物を含む、任意の適切な薬学的に許容される賦形剤を、本発明の組成物及び配合剤に使用し得る。
【０１６７】
サリチルアミド化合物の他の例としては、ニクロサミドの類似体が挙げられる。サリチルアミド化合物の類似体、例えば米国公開公報第２０１１／０１８３８８９号（参照により本明細書に組み入れられる）に記載のものが知られる。本発明の組成物及び配合剤に使用するのに適したニクロサミド類似体としては、以下の表１に列挙されているものをはじめとする、一般式（Ｉ）（式中、Ｒ１〜Ｒ１０は本明細書において定義されている通りである）によって記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない。本発明に使用するのに適した他のニクロサミド類似体としては、ニクロサミドの承認された薬物類似体が挙げられる。
【化２３】
2019522677.tif 000025
【０１６８】
【表１】
2019522677.tif 000026
2019522677.tif 000027
2019522677.tif 000028
【０１６９】
本発明の配合剤及び組成物に使用するのに適した他のサリチルアミド化合物としては、オキシクロザニド（２，３，５−トリクロロ−Ｎ−（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）−６−ヒドロキシベンズアミド）、クロサンテル（Ｎ−［５−クロロ−４−［（４−クロロフェニル）−シアノメチル］−２−メチルフェニル］−２−ヒドロキシ−３，５−ジヨードベンズアミド）、ラフォキサニド（Ｎ−［３−クロロ−４−（４−クロロフェノキシ）フェニル］−２−ヒドロキシ−３，５−ジヨードベンズアミド）、フルサラン（３，５−ジブロモ−２−ヒドロキシ−Ｎ−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミド）、トリブロムサラン（３，５−ジブロモ−Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシベンズアミド）、ジブロムサラン（５−ブロモ−Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシベンズアミド）、レゾランテル（Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２，６−ジヒドロキシベンズアミド）、クリオキサニド（酢酸２−（４−クロロ−フェニルカルバモイル）−４，６−ジヨード−フェニルエステル）、４’−クロロ−５−ニトロサリチルアニリド、２’−クロロ−５’−メトキシ−３−ニトロサリチルアニリド、２’−メトキシ−３，４’−ジニトロサリチルアニリド、２’、４’−ジメチル−３−ニトロサリチルアニリド、４’，５’−ジブロモ−３−ニトロサリチルアニリド、２’−クロロ−３，４’−ジニトロサリチルアニリド、２’−エチル−３−ニトロサリチルアニリド、２’−ブロモ−３−ニトロサリチルアニリドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７０】
オキシクロザニドの構造を以下に示す。
【化２４】
2019522677.tif 000029
【０１７１】
クロサンテルの構造を以下に示す。
【化２５】
2019522677.tif 000030
【０１７２】
本発明はまた、１つ以上のヘテロアリール環を含有しているものなどの、他のサリチルアミド化合物も含む。ヘテロアリール環は、１つ以上の置換基を有していてもよい。このような化合物の一例は、以下に示される、ニタゾキサニド（２−アセチルオキシ−Ｎ−（５−ニトロ−２−チアゾリル）ベンズアミド）である。
【化２６】
2019522677.tif 000031
【０１７３】
本発明はさらに、アミド基の酸素が、別のヘテロ原子によって置換されているものなどの、他のサリチルアミド化合物も含む。このような化合物の一例は、以下に示されるブロチアニド（３，４’−ジブロモ−５−クロロチオサリチルアニリド）である。
【化２７】
2019522677.tif 000032
【０１７４】
上記サリチルアミド化合物のうちいくつかは市販されている。他のものは、当業者には公知である方法によって容易に調製され得る。例えば、国際公開公報第２００４／００６９０６号（これは参照により本明細書に組み入れられる）は、ニクロサミド類似体の調製法を記載している。
【０１７５】
細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤
細菌をはじめとする原核生物の細胞は、主に二つのリン脂質の層から構成される細胞膜によって囲まれている。この膜は、インタクトである場合には、特定のクラスの化合物が細胞に進入するのを防ぐ。膜を容易に通過することができ、かつ細胞に進入又は細胞から去ることのできる化合物は、膜透過性であると言われる。膜不透過性化合物は、細胞外にある場合にはインタクトな膜によって排除され、及び／又は、内在性代謝活性によって、若しくは、投与された透過性化合物から不透過性化合物への細胞内転換によって、細胞内で形成された場合には、膜によって保持されるものである。
【０１７６】
ある種の化合物に対する透過性には細胞間で差があるが、特定のクラスの化合物、例えば、少なくとも２つの正電荷を有する有機化合物及び負に荷電した有機化合物の大半は、細菌、原生生物、真菌、植物、及び動物の細胞に不透過性であると広く考えられている。
【０１７７】
細菌細胞及び真菌細胞では、膜がインタクトなら、典型的には細胞膜を隔てての電位差が存在し、内部は外部に対して５〜２００mVだけ負である。この膜電位は、膜透過性が制限されている無機イオンの、膜の内外での濃度差によって発生する。膜電位は、無機イオンの自由な横断を許容するに十分なほどに大きな穴が膜に開いた場合に０まで減少し（これは、細胞が加熱によって、又は凍結と解凍によって死亡させられた場合に起こり得る）；これらの環境下では、膜は典型的には、ヨウ化プロピジウムなどの色素に透過性となる。いくつかのクラスの化合物もまた、膜電位を変化させることができ；これらには、膜を通して無機イオンを運搬するか、又は無機イオンが容易に通過することを可能とするチャネルを膜内に形成する、イオノフォアが挙げられる。
【０１７８】
驚くべきことに、出願人は、細菌細胞膜の透過性を増加させる薬物に基づいた薬剤の特定の組み合わせが、（例えば）サリチルアミドをはじめとする、特定のクラスの抗生物質の効果を増強させることができ、これは組み合わせた場合に、グラム陰性細菌に対する予想外の殺菌活性を示すことを発見した。
【０１７９】
当業者は、本発明の組成物及び配合剤に使用される細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤が、細胞膜の完全性を破壊するに十分なあらゆる薬剤を含むことを理解するだろう。細胞膜の増加した透過性を通して、グラム陰性細菌は、例えば本明細書に記載のサリチルアミド化合物をはじめとする抗生物質に対して、驚く程により感受性となる。
【０１８０】
本明細書において使用する「増加した透過性」という用語は、薬物（抗生物質など）が、細胞障壁を通して、薬剤に曝されていなかった細胞障壁の場合と比較して増加した量で、移動することを可能とする特性を有することと定義される。細胞障壁は、膜接合部及び／又は細胞膜などの、それがなければ、例えば能動拡散又は受動拡散を通して起こるであろう、細胞内への、又は細胞間の薬物の移動を阻害するように作用する細胞構造を指す。膜接合部は、隣接する細胞の細胞膜間の接合部、例えば密着接合部、デスモソーム、及びギャップ接合部を指す。明瞭なことであるが、細胞膜は、細胞質及び核などの細胞の内容物を封入する形質膜を指す。例えば、細菌によって取り込まれる薬物／抗生物質の量は、その細胞膜の透過性を増加させる薬剤に曝露されたものでは、上記薬剤に曝露されていなかった細菌細胞の２〜２０倍多くなり得る。
【０１８１】
細胞膜の透過性を増加させる薬剤は、細菌細胞膜の透過性を増加させるに十分な濃度で適用されなければならず、これにより、細菌細胞膜は、抗生物質又は抗生物質配合剤などの特定の薬物に対して感受性、又はより感受性となる。細胞膜の透過性を増加させる薬剤の適用は、薬物の投与と同時であるか、又は薬物の投与後であり、これにより、上記薬物が細胞質内に浸透し、その細胞内標的に対して作用を及ぼすことが可能となる。多様な種類の化合物を、細胞膜の透過性を増加させるための薬剤として使用し得、様々な装置を使用して、これらの薬剤及び／又は薬物を送達し得る。さらに、本発明は、多くの様々な、可能性ある臨床適用を有する。
【０１８２】
細胞膜の透過性を増加させる薬剤の投与と同時に、又はその後に投与される薬物の量もまた個別に決定され得、少なくとも部分的には、個体の大きさ、具体的な疾患、処置すべき症状の重症度、求める結果、及び他の因子の考慮に基づく。用量を決定するための実験動物を使用した標準的な薬物動態試験手順は、当業者によって理解される。
【０１８３】
本発明に記載の組成物、配合剤、及び方法に使用される細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤の例としては、高張溶液、カルシウムイオンキレート剤、界面活性剤、細胞膜の恒常性及び／又は極性を破壊する陽イオン性又は陰イオン性ペプチド（グラミシジンを含む）、並びに、細菌細胞膜の透過性を増加させる薬物に基づいた薬剤をはじめとする、受容体媒介型の透過性にする薬剤、並びにそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８４】
この目的のために有用なカルシウムイオンキレート剤の例としては、イミノジ酢酸（ＩＤＡ）、ニトリロ酢酸（ＮＴＡ）、エチレンジアミン一酢酸（ＥＤＭＡ）、エチレンジアミン二酢酸（ＥＤＤＡ）、及びエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）が挙げられる。
【０１８５】
ＥＤＴＡの使用に関する多くの文献が入手可能である。なぜなら、それは多くの薬物組成物における賦形剤として使用されているからである。一例では、細胞内カルシウムイオン濃度を減少させるのに必要とされるカルシウムイオンキレート剤の濃度は、約０．０１mM〜１M、例えば約１mMであり得る。
【０１８６】
有用なイオン性界面活性剤の例としては、タウロジヒドロフシジン酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、カプリン酸ナトリウム、及びグリココール酸ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない。有用な非イオン性界面活性剤の例としては、コリルサルコシン、ミリスチン酸イソプロピル、部分的に加水分解されたトリグリセリド、脂肪酸糖誘導体、及びオレイン酸誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。これらの界面活性剤は、０．０００１％〜１０％、より狭くは約０．００１〜１％の範囲内の濃度、例えば約０．１％で投与され得る。イオン性界面活性剤は、膜の流動化において僅かにより効果的である傾向があるが、それらはまた僅かにより刺激性である傾向もある。
【０１８７】
細胞膜の恒常性及び／又は極性を破壊する陽イオン性又は陰イオン性ペプチドの例は、（例えば）Hurdle et al. (2011)及びGuihelemelli et al.（2013）（同上）に記載され、これはグラミシジンを含む。
【０１８８】
本発明に記載の組成物、配合剤、及び方法に有用な細菌細胞膜の透過性を増加させる薬物に基づいた薬剤の例としては、ポリミキシンＢ及びポリミキシンＥ（例えばコリスチン）をはじめとするポリミキシンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８９】
具体的には、臨床で使用するために入手可能な２つのポリミキシン、すなわちポリミキシンＢ及びポリミキシンＥ（すなわちコリスチン）が存在し；それらは、長い疎水性尾部を有する環状ペプチドからなる。コリスチン及びポリミキシンＢはどちらも１９４０年代に発見され、グラム陰性感染と戦うために広く使用されている。しかしながら、腎毒性及び神経毒性の副作用から、それらの使用は１９７０年代を通して衰えた（Velkov et al. (2013) Future Microbiol. 8(6):711-24）。より近年になって、第一線の抗生物質に対して耐性の細菌が広く蔓延したために、最終手段の抗生物質としてのそれらの使用が増加している（例えば、Li et al. (2006) Lancet Infect. Dis. 6(9):589-601）。多くの多剤耐性腸内細菌科細菌（特に肺炎桿菌及びエシェリヒア・コリ）に対し、ポリミキシン抗生物質は、唯一残っている治療選択肢である（Velkov et al. (2013)、同上）。
【０１９０】
Ｎ末端脂肪酸アシル基並びに６位及び７位のアミノ酸残基において異なる、ポリミキシンＢの構造的／機能的類似体としては、ポリミキシンＢ１［脂肪酸アシル＝（Ｓ）−６−メチルオクタノイル；Ｐｏｓ−６＝Ｄ−Ｐｈｅ；Ｐｏｓ−７＝Ｌｅｕ］、ポリミキシンＢ１−Ｉｌｅ［脂肪酸アシル＝（Ｓ）−６−メチルオクタノイル；Ｐｏｓ−６＝Ｄ−Ｐｈｅ；Ｐｏｓ−７＝Ｉｌｅ］、ポリミキシンＢ２［脂肪酸アシル＝６−メチルヘプタノイル；Ｐｏｓ−６＝Ｄ−Ｐｈｅ；Ｐｏｓ−７＝Ｌｅｕ］、ポリミキシンＢ３［脂肪酸アシル＝オクタノイル；Ｐｏｓ−６＝Ｄ−Ｐｈｅ；Ｐｏｓ−７＝Ｌｅｕ］、ポリミキシンＢ４［脂肪酸アシル＝ヘプタノイル；Ｐｏｓ−６＝Ｄ−Ｐｈｅ；Ｐｏｓ−７＝Ｌｅｕ］、ポリミキシンＢ５［脂肪酸アシル＝ノナノイル；Ｐｏｓ−６＝Ｄ−Ｐｈｅ；Ｐｏｓ−７＝Ｌｅｕ］及びポリミキシンＢ６［脂肪酸アシル＝３−ヒドロキシ−６−メチルオクタノイル；Ｐｏｓ−６＝Ｄ−Ｐｈｅ；Ｐｏｓ−７＝Ｌｅｕ］が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９１】
Ｎ末端脂肪酸アシル基並びに６位及び７位のアミノ酸残基において異なる、ポリミキシンＥの構造的／機能的類似体としては、ポリミキシンＥ１［脂肪酸アシル＝（Ｓ）−６−メチルオクタノイル；Ｐｏｓ−６＝Ｄ−Ｌｅｕ；Ｐｏｓ−７＝Ｌｅｕ］、ポリミキシンＥ２［脂肪酸アシル＝６−メチルヘプタノイル；Ｐｏｓ−６＝Ｄ−Ｌｅｕ；Ｐｏｓ−７＝Ｌｅｕ］、ポリミキシンＥ３［脂肪酸アシル＝オクタノイル；Ｐｏｓ−６＝Ｄ−Ｌｅｕ；Ｐｏｓ−７＝Ｌｅｕ］、ポリミキシンＥ４［脂肪酸アシル＝ヘプタノイル；Ｐｏｓ−６＝Ｄ−Ｌｅｕ；Ｐｏｓ−７＝Ｌｅｕ］、ポリミキシンＥ７［脂肪酸アシル＝７−メチルオクタノイル；Ｐｏｓ−６＝Ｄ−Ｌｅｕ；Ｐｏｓ−７＝Ｌｅｕ］、ポリミキシンＥ１−Ｉｌｅ［脂肪酸アシル＝（Ｓ）−６−メチルオクタノイル；Ｐｏｓ−６＝Ｄ−Ｌｅｕ；Ｐｏｓ−７＝Ｉｌｅ］、ポリミキシンＥ１−Ｖａｌ［脂肪酸アシル＝（Ｓ）−６−メチルオクタノイル；Ｐｏｓ−６＝Ｄ−Ｌｅｕ；Ｐｏｓ−７＝Ｖａｌ］、ポリミキシンＥ１−Ｎｖａ［脂肪酸アシル＝（Ｓ）−６−メチルオクタノイル；Ｐｏｓ−６＝Ｄ−Ｌｅｕ；Ｐｏｓ−７＝Ｎｖａ］、ポリミキシンＥ２−Ｉｌｅ［脂肪酸アシル＝６−メチルヘプタノイル；Ｐｏｓ−６＝Ｄ−Ｌｅｕ；Ｐｏｓ−７＝Ｉｌｅ］、ポリミキシンＥ２−Ｖａｌ［脂肪酸アシル＝６−メチルヘプタノイル；Ｐｏｓ−６＝Ｄ−Ｌｅｕ；Ｐｏｓ−７＝Ｖａｌ］、及びポリミキシンＥ８−Ｉｌｅ［脂肪酸アシル＝７−メチルナノイル；Ｐｏｓ−６＝Ｄ−Ｌｅｕ；Ｐｏｓ−７＝Ｉｌｅ］が挙げられるが、これらに限定されない。Velkov et al.（2013）（同上）の表１を参照されたい。
【０１９２】
ポリミキシンＥ／コリスチンは細菌細胞膜に作用し、外膜のリポ多糖分子と相互作用し、その結果、細胞透過性の増加、細胞内容物の漏出、細胞の溶解、及び最終的には細菌細胞の死が起こる（Velkov et al.（2013）（同上））。親水性抗生物質（リファンピシン、カルバペネム、グリコペプチド、及びテトラサイクリン）は、コリスチンによる膜完全性の破壊により、相乗的に作用することができる。コリスチンの使用は、１９７０年代から２０００年代初期にかけて減少した。なぜなら、より安全／より低毒性のアミノグリコシド及び抗シュードモナス剤が利用可能になったからである（Li et al.（2006）（同上））。
【０１９３】
コリスチンは、２つの環状ペプチド（コリスチンＡ及びコリスチンＢ）から構成される多成分ポリペプチド性抗生物質である。コリスチメタートナトリウムは、投与形のコリスチンであり、これはインビボで変換されてコリスチンを形成する。コリスチンは、経口、局所（コリスチン硫酸塩として耳用溶液及びスキンパウダーとして）、筋肉内、吸入を介して、くも膜下腔内、及びコリスチメタートナトリウムとして静脈内に投与され得る。コリスチンは主に、腸内細菌科細菌をはじめとするグラム陰性臨床単離株に対して活性である。非発酵性の緑膿菌及びアシネトバクター種は生来、コリスチンに対して感受性である。コリスチンはまた、ヘモフィルス・インフルエンザ、Ｅ．ｃｏｌｉ、サルモネラ属、シゲラ属、クレブシエラ属、レジオネラ・ニューモフィラ、エロモナス属、シトロバクター属、百日咳菌、及びカンピロバクター種に対しても有効である。
【０１９４】
製品
本発明はさらに、サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤を含有している梱包材を、説明書と一緒に含む、患者における細菌感染の治療若しくは予防に使用するための、又は細菌バイオフィルムの形成を低減若しくは排除するための製品であって、前記感染又はバイオフィルムは、１つ以上のグラム陰性細菌を含む製品を提供する。サリチルアミド化合物（例えばニクロサミド、オキシクロザニド、ニタゾキサニド、クロサンテル）及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤（例えば、ポリミキシンＢ及びポリミキシンＥをはじめとする薬物に基づいた薬剤）の例は、何処か他の場所にさらに詳細に示されている。
【０１９５】
サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤は、別々に、順次、又は同時に投与され得る。例えば、サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤の組み合わせは、患者への投与用の組成物として一緒に製剤化されてもよい。あるいは、サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤は各々、患者に別々に、又は順次投与するために、別々に製剤化されてもよい。
【０１９６】
サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤は、経口、非経口、吸入スプレーによるもの、局所、直腸、鼻腔内、バッカル、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、又は埋め込まれたリザーバーを介するものをはじめとする様々な経路によって、好ましくは静脈内で、患者に投与され得る。投与すべき各化合物の量は、患者の性質並びに処置すべき障害の性質及び程度に応じて幅広く変更されるだろう。成人のヒトへの典型的な用量は、サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤について０．００１μg/mLから１００μg/mLであろう。任意の特定の患者に必要とされる具体的な用量は、患者の年齢、体重、全般的な健康状態、性別などをはじめとする様々な因子に依存するだろう。
【０１９７】
別々の、順次の、又は同時の経口投与のために、サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤は、固形又は液体形の調製物、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、液剤、懸濁剤、及び分散剤へと製剤化され得る。このような調製物は、ここに列挙されていない他の経口投薬処方計画と同様に、当技術分野において周知である。錠剤の形態においては、上記化合物を、結合剤、崩壊剤、及び滑沢剤と一緒に、乳糖、ショ糖、及びコーンスターチなどの従来の錠剤基剤を用いて錠剤化し得る。結合剤は、例えば、コーンスターチ又はゼラチンであり得、崩壊剤はジャガイモデンプン又はアルギン酸であり得、滑沢剤はステアリン酸マグネシウムであり得る。カプセル剤の形態での経口投与のために、乳糖及び乾燥コーンスターチなどの希釈剤が使用され得る。また、着色剤、甘味剤、又は芳香剤などの他の成分も添加してもよい。
【０１９８】
水性懸濁液が経口使用のために要求される場合、サリチルアミド化合物、又はサリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤は、水及びエタノールなどの担体と配合され得、乳化剤、懸濁化剤及び／又は界面活性剤を使用してもよい。着色剤、甘味剤、又は芳香剤を添加してもよい。
【０１９９】
サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤はまた、水又は食塩水などの生理的に許容される希釈剤中で、別々に、順次、又は同時に注射によって投与されてもよい。希釈剤は、エタノール、プロピレングリコール、油、又は薬学的に許容される界面活性剤などの、１つ以上の他の成分を含み得る。一例では、上記化合物は、別々に、順次、又は同時に静脈内注射によって投与され、前記希釈剤は、ショ糖、Ｌ−ヒスチジン、及び薬学的に許容される界面活性剤、例えばＴｗｅｅｎ２０の水溶液を含む。
【０２００】
サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤はまた、別々に、順次、又は同時に局所投与されてもよい。上記化合物の局所投与のための担体としては、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス、及び水が挙げられる。上記化合物は、皮膚又は粘膜への局所投与のための、ローション又はクリーム中の成分として存在してもよい。このようなクリームは、１つ以上の薬学的に許容される担体中に懸濁又は溶解させた活性化合物を含有し得る。適切な担体としては、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、及び水が挙げられる。
【０２０１】
サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤はさらに、別々に、順次、又は同時に、持続放出システムを用いて投与されてもよい。例えば、それらは徐々に溶解する錠剤又はカプセル剤中に取り込まれていてもよい。
【０２０２】
植物の感染、例えば、マタタビ（Actinidia）属のキウイフルーツ植物において、シュードモナス・シリンガエ病原型アクチニダエ（Ｐｓａ−Ｖ）によって引き起こされる細菌感染の処置のために、サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤は場合により、１つ以上の担体を用いて、例えば植物への適用のためのスプレー剤として製剤化され得る。上記化合物は、別々に、順次、又は同時に適用され得る。植物への適用のために、本発明の配合剤及び組成物はさらに、植物への適用に適した１つ以上の補助剤、例えば乳化剤、分散剤、鉱油、及び植物油、又はそれらの混合物を含み得る。上記配合剤及び組成物はまた、果樹園間の細菌感染の蔓延を防ぐための現場用の用具（例えば剪定ばさみ）のための消毒剤として使用され得る。
【０２０３】
動物の感染、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉをはじめとするグラム陰性細菌によって引き起こされる、乳牛における乳腺炎感染の処置のために、サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤は場合により、１つ以上の担体を用いて、雌牛の乳房／乳首への適用のためのスプレー剤として製剤化され得る。上記化合物は別々に、順次、又は同時に投与され得、動物への適用に適した１つ以上の補助剤、例えば乳化剤、分散剤、鉱油、及び植物油、又はそれらの混合物をさらに含み得る。
【０２０４】
本発明はまた、細菌感染を治療又は予防するための器具及びキットにも関する。適切なキットは、治療／予防を実施するための説明書と一緒に、別々に、順次、又は同時に使用するための、少なくとも１つの細菌感染の処置に十分な、少なくとも１つのサリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる少なくとも１つの薬剤を含む。
【０２０５】
キットの使用及び細菌感染の治療／予防のための説明書は、ラベル貼付の形態であり得、これは、その製造、輸送、販売、又は使用中の任意の時点でキットに貼付け、又は別の方法で添えられた、任意の文書又は記録材料を指す。例えば、「ラベル貼付」という用語は、広告用チラシ及びパンフレット、梱包材、説明書、録音カセット又はビデオカセット、コンピューターディスク、並びにキット上に直接印刷された文書を包含する。
【０２０６】
本明細書に提示された出願人の結果は、細菌が、ニトロ−プロドラッグ抗生物質、並びに１つ以上のニトロ基を含有しているサリチルアミド（例えばニクロサミド及びニクロサミド類似体）をはじめとする、特定の薬物をどのように代謝するのかに関する、分子上の基礎に対する驚く程興味深い洞察を提供する。理論に拘束されることは望まないが、出願人は、内因性ニトロ還元酵素遺伝子の自然突然変異によって、ニトロ−プロドラッグ抗生物質を用いての処置に対して耐性となった細菌はその後、１つ以上のニトロ基を含有しているサリチルアミド化合物を用いての処置に対し、ニトロ還元を介して上記化合物を解毒する能力を失うことにより感受性となるであろうことを提唱する。一方で、野生型と比較しての内因性ニトロ還元酵素活性の欠失又は減少は、細菌細胞がニトロ−プロドラッグ抗生物質に対して耐性であることを意味する。なぜなら、一旦細菌細胞内に入ると、プロドラッグは、切断されて毒性の抗生物質を生じようがないからである（例えば、５−ニトロイミダゾール抗生物質のプロドラッグであるチニダゾールを用いた、Ｅ．ｃｏｌｉのニトロ還元酵素欠損株について、Prosser, G.A., Williams, E., M., Sissons, J., A., Walmsley, K., E., Parker, M., R., and Ackerley, D.F. (2015). A gain-of-function positive-selection expression plasmid that enables high-efficiency cloning. Biotechnology Letters 37:383-389に記載されているように）。他方、内因性ニトロ還元酵素活性の欠失又は減少は、細菌細胞が、１つ以上のニトロ基を含有しているサリチルアミド化合物、例えばニクロサミド及びニクロサミド類似体に対してより感受性であることを意味する。なぜなら、ニトロ還元酵素活性の非存在下では、細菌細胞は、毒性のニクロサミドを無毒性のニトロ還元形へと変換することがもはやできないからである。膜透過剤を場合により、上記１つ以上のニトロ基を含有しているサリチルアミド化合物に含めることにより、薬物に対する感度を増強させることができる。
【０２０７】
したがって、さらに別の態様では、本発明は、患者における細菌感染（前記細菌は、ニトロ−プロドラッグ抗生物質を用いての処置に対して耐性となっている）を治療又は予防するための方法であって、感染を治療又は予防するに十分な量の少なくとも１つのサリチルアミド化合物（前記サリチルアミド化合物は、１つ以上のニトロ基を含む）を患者に投与する工程を含む方法を提供する。場合により、前記方法は、少なくとも１つの膜透過剤を投与する工程をさらに含む。
【０２０８】
さらに別の態様では、本発明は、細菌バイオフィルム（前記細菌は、ニトロ−プロドラッグ抗生物質を用いての処置に対して耐性となっている）の形成を低減又は排除するための方法であって、バイオフィルムの形成を低減又は排除するのに十分な量の少なくとも１つのサリチルアミド化合物（前記サリチルアミド化合物は１つ以上のニトロ基を含む）を投与する工程を含む方法を提供する。場合により、前記方法は、少なくとも１つの膜透過剤を投与する工程をさらに含む。
【０２０９】
逆に、１つ以上のニトロ基を含有しているサリチルアミド化合物を用いての処置に対して耐性となった細菌は、ニトロ還元酵素活性の増加を引き起こす内因性ニトロ還元酵素遺伝子の突然変異を介してそのようになった可能性がある。一方で、野生型と比較した内因性ニトロ還元酵素活性の増加は、細菌細胞が、ニトロ基を含有しているサリチルアミド化合物に対して耐性であることを意味する。なぜなら、細菌細胞はもはや、毒性のニトロ基を含有しているサリチルアミド化合物、例えばニクロサミド及びニクロサミド類似体を無毒性形へと変換することができないからである。他方、内因性ニトロ還元酵素活性の増加は、細菌細胞が、１つ以上のニトロ−プロドラッグ抗生物質に対してより感受性であることを意味する。なぜなら、それはプロドラッグを活性化して、活性形の抗生物質を形成するだろうからである。
【０２１０】
したがって、さらに別の態様では、本発明は、患者における細菌感染（前記細菌は、少なくとも１つのサリチルアミド化合物（前記サリチルアミド化合物は、１つ以上のニトロ基を含む）及び細菌細胞膜の透過性を増加させる少なくとも１つの薬剤を用いての処置に対して耐性となっている）を治療又は予防するための方法であって、感染を治療又は予防するに十分な量のニトロ−プロドラッグ抗生物質を患者に投与する工程を含む方法を提供する。
【０２１１】
さらに別の態様では、本発明は、細菌バイオフィルム（前記細菌は、少なくとも１つのサリチルアミド化合物、又は少なくとも１つのサリチルアミド化合物と細菌細胞膜の透過性を増加させる少なくとも１つの薬剤との組み合わせ（前記サリチルアミド化合物は、１つ以上のニトロ基を含む）を用いての処置に対して耐性となっている）の形成を低減又は排除するための方法であって、バイオフィルムの形成を低減又は排除するに十分な量のニトロ−プロドラッグ抗生物質を投与する工程を含む方法を提供する。
【０２１２】
製品：医療器具
本発明による組成物及び配合剤は、グラム陰性細菌によって引き起こされる感染を予防又は治療するために、留置医療器具などに配置し得る。これは、例えば外科的処置又は術式後の細菌バイオフィルムの形成を含む。特定の態様では、本発明による組成物及び配合剤は、感染から守るために、カテーテル、ステント、医療用インプラント（例えば人工股関節など）に配置され得る。
【０２１３】
当業者は、本発明による組成物及び配合剤が、その抗菌活性を最適化する方法で、（例えば）インプラント、ステント、医療用インプラントなどの医療器具上のコーティングとして、製剤化され得ることを理解するだろう。
【０２１４】
剤形及び製剤及び投与
本発明の化合物は、単離された形で、又は実質的若しくは本質的に純粋な形で存在し得る。製品は、製品の意図する目的を妨害しないであろう担体又は希釈剤と混合され得、依然として単離されている、又は実質的に純粋であると見なし得ることが理解されるだろう。本発明の製品は、好ましくは、約８０％、８５％、又は９０％（例えば、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％）の化合物、又は乾燥重量の調製物を含むか、又は実質的にそれからなる、実質的に又は本質的に純粋な形であり得る。
【０２１５】
目的の投与経路に応じて、本発明の医薬製品、医薬組成物、配合調製物、及び医薬品は、例えば、液剤、懸濁剤、点滴液、持続放出製剤、又は散剤の剤形を取り得、典型的には約０．１％〜９５％、好ましくは約０．２％〜７０％の活性成分を含有している。他の適切な製剤としては、注射及び点滴に基づいた製剤が挙げられる。他の有用な製剤としては、持続放出調製物、例えば、放出制御調製物、徐放性調製物、又は遅延放出調製物が挙げられる。
【０２１６】
本発明の態様は、サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤を含有している、制御された又はそうでない用量の（controlled or other doses）、剤形、製剤、組成物、及び／又は器具を含む。本発明は、例えば、少なくとも経口投与、経皮送達、局所適用、坐剤による送達、経粘膜送達、注射（例えば、皮下投与、真皮下投与、筋肉内投与、デポー投与、及び静脈内投与（ボーラス、緩徐な静脈内注射、及び静脈内点滴を介した送達を含む））、輸液器具（埋め込み型輸液器具、能動型及び受動型の両方）、吸入又はガス注入による投与、バッカル投与、及び舌下投与のための用量及び剤形を含む。本明細書に記載の剤形、組成物、製剤、又は器具のいずれも、特に静脈内投与用のものは、適用可能な場合又は所望の場合に、本明細書において意図され、又は一般的に使用されている、他のいずれかの経路による投与のための剤形、組成物、製剤、又は用具に使用され得ることが理解されるだろう。例えば、一回分又は複数回分を、非経口投与に適した剤形（経口投与に適した剤形に関して記載された特徴又は組成を取り込んでいてもよい）を使用して非経口投与してもよく、あるいは、持続的剤形（例えば改変放出、延長放出、遅延放出、緩徐放出、又は反復作用剤形など）で送達してもよい。
【０２１７】
好ましくは、本発明のサリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤を、薬学的に許容される担体又は希釈剤と組み合わせることにより、医薬組成物を生成する。適切な担体及び希釈剤としては、等張食塩水、例えばリン酸緩衝食塩水が挙げられる。適切な希釈剤及び賦形剤としてはまた、例えば、水、食塩水、デキストロース、グリセロールなど、及びその組み合わせが挙げられる。さらに、所望であれば、湿潤剤又は乳化剤、安定化剤又はｐＨ緩衝剤などの物質も存在してもよい。
【０２１８】
「薬学的に許容される担体」という用語は、任意の有用な担体、賦形剤、又は安定化剤であって、使用される用量及び濃度で、それに曝された宿主細胞又はヒト又はそれ以外の動物（non/human animal）に対して無毒性であるものを指し、上記組成物を受容する個体に対して有害な抗体の産生を誘導しない薬学的担体を含む。適切な担体は、大型で緩徐に代謝される巨大分子、例えばタンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、及びアミノ酸コポリマーであり得る。生理的に許容される担体はしばしば、ｐＨ緩衝化水溶液である。生理的に許容される担体の他の例は、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などの緩衝剤；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、又はリジン；単糖、二糖、及び他の糖質、例えばグルコース、マンノース、又はデキストリン；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖アルコール、例えばマンニトール又はソルビトール；塩形成対イオン、例えばナトリウム；並びに／あるいは、非イオン性界面活性剤、例えばＴｗｅｅｎ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びプルロニックを含むものである。
【０２１９】
薬学的に許容される塩、例えば、鉱酸塩、例えば塩化水素塩、臭化水素塩、リン酸塩、硫酸塩など；及び、有機酸の塩、例えば酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩なども存在し得る。
【０２２０】
適切な担体材料としては、局所投与用のクリーム剤、ローション剤、ゲル剤、乳剤、又は塗布剤のための基剤として一般的に使用される任意の担体又はビヒクルが挙げられる。例としては、乳化剤、不活性担体、例えば炭化水素基剤、乳化基剤、無毒性溶媒、又は水溶性基剤が挙げられる。特に適した例としては、プルロニック、ＨＰＭＣ、ＣＭＣ及び他のセルロース系成分、ラノリン、硬パラフィン、流動パラフィン、黄色軟パラフィン、又は白色軟パラフィン、白色ミツロウ、黄色ミツロウ、セトステアリルアルコール、セチルアルコール、ジメチコン、乳化ワックス、ミリスチン酸イソプロピル、微結晶ワックス、オレイルアルコール、及びステアリルアルコールが挙げられる。
【０２２１】
カゼイン、ゼラチン、アルブミン、にかわ、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、又はポリビニルアルコールなどの補助剤も、本発明の製剤に含まれ得る。
【０２２２】
本発明の剤形、製剤、器具、及び／又は組成物は、バイオアベイラビリティを最適化させるために、及び例えばより長い期間におよび、治療範囲内に血漿中濃度を維持するために製剤化され得る。持続送達調製物、例えば送達制御調製物もまた、例えば作用部位における薬物濃度を最適化し、投薬不足及び投薬過剰の期間を最小限にする。
【０２２３】
本発明において有用である剤形、器具、及び／又は組成物は、サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤の、定期的投与（例えば、１日１回の投与）、低用量の制御された及び／又は低用量の長時間持続するインビボにおける放出のために提供され得る。
【０２２４】
経口投与に適した剤形の例としては、治療有効量のサリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤を提供することのできる、錠剤、カプセル剤、ロゼンジ剤など、又は任意の液体剤形、例えばシロップ剤、水性液剤、エマルション剤などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２５】
経皮投与に適した剤形の例としては、経皮吸収パッチ、経皮吸収包帯などが挙げられるが、これらに限定されない。本発明において有用な、化合物及び製剤の局所投与に適した剤形の例は、皮膚に直接適用されるものであれ、媒介物（intermed）を介して適用されるものであれ、任意のローション剤、スティック剤、スプレー剤、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ゲル剤などである。
【０２２６】
本発明において有用な、化合物及び製剤の坐剤による投与に適した剤形の例としては、人体の開口部（bodily orifice）に挿入される任意の固形剤形、特に直腸、膣、及び尿道に挿入される剤形が挙げられる。
【０２２７】
本発明において有用な、化合物及び製剤の経粘膜送達に適した剤形の例としては、活性成分に加えて、当技術分野において適切であることが知られている担体を含有している、浣腸用の貯蔵溶液、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、発泡剤、噴霧溶液、散剤、及び類似の製剤が挙げられる。
【０２２８】
本発明において有用な、化合物及び製剤の注射に適した剤形の例としては、ボーラスを介した送達（静脈内注射による単回又は複数回投与など）、皮下、真皮下、及び筋肉内投与又は経口投与が挙げられる。
【０２２９】
本発明において有用な、化合物及び製剤のデポー投与に適した剤形の例としては、ペレット状又は小型円筒状の活性薬剤又は固形剤（活性薬剤は、生分解性ポリマーのマトリックス、マイクロエマルション、リポソームに封入されているか、又はマイクロカプセル化されている）が挙げられる。
【０２３０】
本発明において有用な、化合物及び製剤のための輸液器具の例としては、サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤及び／又は予め複合化された化合物／薬剤を、所望の投与回数、又は定常状態での投与に必要な量で含有している輸液ポンプ（埋め込み可能な薬物ポンプを含む）が挙げられる。
【０２３１】
本発明において有用な、化合物及び製剤のための埋め込み可能な輸液器具の例としては、活性薬剤が生分解性ポリマー又は合成ポリマー、例えばシリコン、シリコンゴム、シラスティック又は類似したポリマー内に被包されているか又は分散されている、任意の固形剤形が挙げられる。
【０２３２】
本発明において有用な、化合物及び製剤の吸入又はガス注入に適した剤形の例としては、薬学的に許容される水性溶媒又は有機溶媒又はその混合物中の溶液及び／又は懸濁液、並びに／又は散剤を含む組成物が挙げられる。
【０２３３】
本発明において有用な、化合物及び製剤のバッカル投与に適した剤形の例としては、ロゼンジ剤、錠剤など、薬学的に許容される水性溶媒又は有機溶媒又はその混合物中の溶液及び／又は懸濁液を含む組成物、並びに／あるいは散剤が挙げられる。
【０２３４】
本発明において有用な、化合物及び製剤の舌下投与に適した剤形の例としては、ロゼンジ剤、錠剤など、薬学的に許容される水性溶媒又は有機溶媒又はその混合物中の溶液及び／又は懸濁液を含む組成物、並びに／あるいは散剤が挙げられる。
【０２３５】
本発明において有用な、化合物及び製剤の送達のための制御された薬物製剤の例は、例えば、Sweetman, S.C. (Ed.).  Martindale.  The Complete Drug Reference, 33rd Edition, Pharmaceutical Press, Chicago, 2002, 2483 pp.; Aulton, M.  E.  (Ed.) Pharmaceutics.  The Science of Dosage Form Design.  Churchill Livingstone, Edinburgh, 2000, 734 pp.；及びAnsel, H.  C., Allen, L.  V. and Popovich, N.  G.  Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th Ed., Lippincott 1999, 676 ppに見られる。薬物送達システムの製造に使用される賦形剤は、例えば、Kibbe, E.  H.  Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd Ed., American Pharmaceutical Association, Washington, 2000, 665 pp.を含む、当業者には公知の様々な刊行物に記載されている。ＵＳＰもまた、錠剤又はカプセル剤として製剤化されたものを含む、放出の改変された経口剤形の例を提供する。例えば、The United States Pharmacopeia 23/National Formulary 18, The United States Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville MD, 1995（本明細書では以後「ＵＳＰ」）を参照されたい。これもまた、延長放出及び遅延放出錠剤及びカプセル剤の薬物放出能を決定するための具体的な試験を記載している。延長放出剤形の分析に関するさらなる指針はＦＤＡによって提供されている。Guidance for Industry.  Extended release oral dosage forms: development, evaluation, and application of in vitro/in vivo correlations.  Rockville, MD: Center for Drug Evaluation and Research, Food and Drug Administration（1997）を参照されたい。
【０２３６】
本発明の方法に有用な剤形のさらなる例としては、改変放出（ＭＲ）剤形、例えば遅延放出（ＤＲ）剤形；延長作用（ＰＡ）剤形；制御放出（ＣＲ）剤形；延長放出（ＥＲ）剤形；時間放出（ＴＲ）剤形；及び長時間作用型（ＬＡ）剤形が挙げられるが、これらに限定されない。これらの用語は、殆どは、経口投与される剤形を説明するために使用されるが、これらの用語は本明細書に記載の剤形、製剤、組成物、及び／又は器具のいずれにも適用可能であり得る。これらの製剤は、薬物の投与後しばらくの間薬物総量の放出を遅延させ、及び／又は投与後に断続的に少しずつ薬物を放出し、及び／又は送達システムによって支配される制御速度で緩徐に薬物を放出し、及び／又は変化しない一定速度で薬物を放出し、及び／又は通常の製剤よりも有意に長時間におよんで薬物を放出する。
【０２３７】
本発明の改変放出剤形は、慣用的な剤形又は即時放出剤形によっては提供されない治療目的又は利便性の目的を達成するために設計された、時間、経過、及び／又は場所に基づいた薬物放出の特徴を有する剤形を含む。例えば、Bogner, R.H. U.S.  Pharmacist 22 (Suppl.):3-12 (1997); Scale-up of oral extended-release drug delivery systems: part I, an overview, Pharmaceutical Manufacturing 2:23-27（1985）を参照されたい。
本発明の延長放出剤形は、例えば、アメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）によって定義されているように、投与頻度を、慣用的な剤形、例えば液剤形又は即時放出剤形などが示すものにまで減少させることを可能にする剤形を含む。例えば、Bogner, R.H.（1997）（同上）を参照されたい。本発明の反復作用剤形は、例えば、投薬１回分を２組（１つは即時放出用、２つ目は遅延放出用）含有している剤形を含む。例えば、１つの薬物の層は即時放出用であり、第二の層は第二の投薬分として、又は延長放出様式のいずれかで、薬物を後で放出するように設計されている、二層錠剤を調製し得る。本発明の標的化放出剤形は、例えば、薬物放出を促進し、かつ、吸収又は薬物作用のために、ある体内領域、組織、又は部位において薬物を単離又は集中させることを指向した製剤を含む。
【０２３８】
サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤及び／又は予め複合化した化合物／薬剤を含有している、コーティングされたビーズ、顆粒、又はミクロスフィアもまた、本発明において有用であり、これを使用して、コーティングされたビーズ、顆粒、又はミクロスフィアへの薬物の取り込みにより、改変された放出を達成し得る。このようなシステムでは、サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤を、ビーズ、ペレット、顆粒、又は他の粒子状システムに分布させる。Ansel, H.C., Allen, L.V. and Popovich, N.G., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th Ed., Lippincott 1999, p.232を参照されたい。
【０２３９】
ヒト及び他の動物への経口投与に適した、サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤の改変放出剤形を作製するために、多くの方法が使用され得る。改変放出薬物送達を達成するために利用可能な２つの基本的な機序は、薬物及び賦形剤の改変された溶出又は拡散を含む。この文脈において、例えば、４つのプロセスを同時に又は連続的に使用し得る。これらは以下の通りである：（ｉ）器具への水分補給（例えば、マトリックスの膨潤）；（ｉｉ）器具内部への水の拡散；（ｉｉｉ）制御された又は遅延した薬物の溶出；及び（ｉｖ）溶解した又は可溶化された薬物の、制御された又は遅延した器具外への拡散。
【０２４０】
一連の投与量を策定するために、細胞培養アッセイ及び動物試験を使用することができる。このような化合物の用量は、好ましくは、個体群の少なくとも５０％にとって治療的に有効であり、かつこのレベルで殆ど又は全く毒性を示さない、用量範囲内にある。
【０２４１】
本発明の方法及び組成物に使用される、サリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤の有効用量は、使用される具体的なサリチルアミド化合物及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤、投与様式、投与頻度、処置される容態、処置される容態の重症度、投与経路、処置される予定の患者亜個体群の要求、又は個々の患者の要求（年齢、性別、体重、患者に特有の関連した医学的状態に起因して様々な要求があり得る）をはじめとする、多くの因子に応じて変更され得る。
【０２４２】
適切な用量は、約０．００１〜約１又は約１０mg/kg（体重）、例えば約０．０１〜約０．５mg/kg（体重）であり得る。しかしながら、適切な用量は約０．００１〜約０．１mg/kg（体重）、例えば約０．０１〜約０．０５mg/kg（体重）であり得る。約１〜１００、１００〜２００、２００〜３００、３００〜４００、及び４００〜５０mgの用量が適切であり、約５００〜７５０mg及び約７５０〜１０００mgの用量も同様である。他の有用な用量としては、約３００〜約１０００ピコモル/１回投与、及び約０．０５〜約０．２ナノモル/１回投与が挙げられる。さらに他の用量も以下の特許請求の範囲内である。
【０２４３】
用量は、１回の適用で、又は分割した適用で投与され得る。用量は、１回投与されても、又は反復適用されてもよい。
【０２４４】
本明細書に記載の投与経路及び用量は、単に指針として意図されるものである。なぜなら、当業者は、任意の特定の患者及び容態についての最適な投与経路及び用量を考慮するであろうからである。
【０２４５】
本明細書における先行技術文書への言及はいずれも、このような先行技術が広く知られているか、又はこの分野における共通の一般的知識の一部を形成することの自認と見なされるべきではない。
【０２４６】
本発明は以下の実施例を参照してさらに記載される。特許請求された本発明は、いかなる形でも、これらの実施例によって制限されるものではないことが理解されるだろう。
【０２４７】
実施例
実施例１：抗生物質の組み合わせ／増殖アッセイ
この手順は、図１〜５２に示された実験に適用される。所望の細菌株を３mLのＬＢに接種し、２５０rpmで振盪しながら３０℃で１６時間インキュベートする。各々の一晩培養液の５００μLのアリコートを使用して、５０mLのバイオリアクターチューブ中のＬＢ ２０mlに接種し、２５０rpmで３０℃で２時間、さもなくば、図の説明で記載されたようにインキュベートする。次いで、各培養液 ４０μLを、３８４ウェルのプレートフォーマット中の、サリチルアミド（例えばニクロサミド、オキシクロザニド、ニタゾキサニド、又はクロサンテル）及び細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤（例えばポリミキシンＢ、ポリミキシンＥ（コリスチン）、グラミシジン）のマルチプレックスアッセイに加える（４回分）。３８４ウェルプレートの各ウェルは、所望の最終濃度の２倍の所望の薬物の組み合わせを用いて改変されたＬＢ ４０μLを含有し、これにより、細菌培養液による２：１の希釈が可能となる。ＯＤ６００を測定し（ｔ＝０）、培養液を１２００rpmで３０℃で４時間、さもなくば図の説明に記載されている通りにインキュベートする。次いで、最終ＯＤ６００（例えばｔ＝４における）を記録する。増殖阻害を計算するために、ｔ＝０値を最終のＯＤ６００値から差し引く。次いで、薬物の組み合わせ０μMのウェル（これは１００％の増殖率を示す）と比較した増殖率を計算する。
【０２４８】
試験フォーマットは、２次元の３８４ウェルのプレートアッセイであり、各試験株のレプリカ培養液を、横軸の漸増濃度の膜透過剤及び縦軸の漸増濃度のサリチルアミドを用いてチャレンジする（challenged）（それぞれ、膜透過製剤では右から左へと、サリチルアミドでは下から上へと、２倍連続希釈液として調製されている）。
【０２４９】
結果を図１〜５６に提示する。
【０２５０】
具体的には、ニクロサミドは、（例えば）ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥ（コリスチン）などのポリミキシンと共に使用されると、抗生物質耐性及び実験株のエシェリヒア・コリ、抗生物質耐性及び実験株の緑膿菌、抗生物質耐性及び実験株の肺炎桿菌、エンテロバクター・クロアカ、サルモネラ・エンテリカ、及びアシネトバクター・バウマンニを含む（これらに限定されない）、一連の様々なグラム陰性細菌に対する相乗的な増殖阻害効果を提供する（図１〜４０）。
【０２５１】
ポリミキシンファミリーを上回る、膜を透過性にする薬物の、グラム陰性細菌をサリチルアミド薬物の抗菌作用に対して感受性にさせる一般的能力を、膜を透過性にする抗生物質のグラミシジン（グラミシジンＡ、Ｂ、Ｃ及びＤの混合物；カタログ番号Ｇ５００２、シグマ・アルドリッチ製）を使用してさらに実証した。グラミシジンは、Ｅ．ｃｏｌｉ実験株Ｗ３１１０及び緑膿菌の抗生物質耐性臨床単離株を含む（これらに限定されない）、一連の様々なグラム陰性細菌に対する相乗的な増殖阻害作用を提供する（図４１〜４４）。
【０２５２】
さらに、オキシクロザニド（図４５〜５２）、ニタゾキサニド（図５３及び５４）、及びクロサンテル（図５５及び５６）の効果は、ニクロサミドに関連したサリチルアミド化合物が、様々な膜を透過性にする抗生物質（例えばコリスチン）と組み合わせて使用された場合に、広範なグラム陰性細菌に対して、同じような相乗作用を示すことを実証する。
【０２５３】
図５７及び５８は、コリスチンと膜脱共役剤、すなわち２，４−ジニトロフェノールの組み合わせが、弱い相乗作用しか示さず、またコリスチンとニクロサミド（例えば図１、２、５、６、９、１０）、又はコリスチンとオキシクロザニド（図４５、４６）、又はコリスチンとニタゾキサニド（図５３、５４）、又はコリスチンとクロサンテル（図５５、５６）の組み合わせと比較して、類似した濃度では、Ｅ．ｃｏｌｉに対して同じレベルの増殖阻害を達成しないことを実証する。
【０２５４】
実施例２：インビボでの細菌内酸化還元能のリアルタイム測定
Ｅ．ｃｏｌｉ酸化還元スクリーニング株の作製
Ｒｅｄリコンビナーゼ法（Datsenko & Warner (2000) Proc Natl Acad Sci U S A 97, 6640-6645）を通じ、ＰＣＲで増幅させた破壊カセットを使用するインフレーム欠失によって、酸化還元スクリーニング株を作製した。Ｅ．ｃｏｌｉ株７ＫＯは、以前にCopp et al.（Copp et al. (2014) Protein Eng. Des. Sel. 27, 399-403）によって記載されているようにして、ネイティブなｎｆｓＡ、ｎｆｓＢ、ａｚｏＲ、ｎｅｍＡ、ｙｉｅＦ、ｙｃａＫ及びｍｄａＢ遺伝子の欠失によって、Ｅ．ｃｏｌｉＷ３１１０から得られた。Ｅ．ｃｏｌｉ株７ＫＯΔｔｏｌＣは、ネイティブなｔｏｌＣ遺伝子の欠失によって、７ＫＯから誘導された。ｐＦＰＸ２５−ｒｏＧＦＰ２ベクター（van der Heijden et al. (2015) Proc Natl Acad Sci USA 112, 560-565）をＥ．ｃｏｌｉ株７ＫＯ及び７ＫＯΔｔｏｌＣにクローニングして、７ＫＯ：ｒｏＧＦＰ及び７ＫＯΔｔｏｌＣ：ｒｏＧＦＰをそれぞれ作製した。
【０２５５】
インビボでの細菌内酸化還元能のリアルタイム測定
細菌内酸化還元能のインビボでの分析を、Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１マルチモードプレートリーダー（バイオテック社）において３０℃で実施し、励起は４０５及び４８０nmで測定し、発光は５１０nmで測定した。対数増殖期の７ＫＯ：ｒｏＧＦＰ又は７ＫＯΔｔｏｌＣ：ｒｏＧＦＰの細菌培養液を、ＯＤ１．０で０．９％食塩水中に再懸濁し、アリコート １００μLを、黒色の透明底の９６ウェルプレートの個々のウェルに入れた。非蛍光（すなわちｐＲＳＥＴＢ−ＲｏＧＦＰ２なしの）対応株のバックグラウンドシグナルを、同じ実験で得た。蛍光シグナルを１６０〜１８０分間追跡し、結果として得られた４０５／４８０比のシグナルを計算した。１０分後に、９６ウェルプレートフォーマットにおいて、アリコート（重複して２組）を、ニクロサミド、及び／又は細菌細胞膜の透過性を増加させる薬剤（例えばポリミキシンＢ、又はポリミキシンＥ（コリスチン））、及び／又はグラム陰性細菌のＴｏｌＣ排出ポンプを阻害する薬剤（例えばＰＡβＮ）を用いてチャレンジした。１０mM Ｈ２Ｏ２又は１mM ＤＴＴの最終濃度をそれぞれ使用して、還元及び酸化された対照を各実験内で得た。全ての数値を、最大限に酸化された細菌培養液及び完全に還元された細菌培養液について得られた数値に対して正規化した。
【０２５６】
結果を図５９及び６０に提示する。
【０２５７】
具体的には、ニクロサミドは、膜を透過性にする薬剤（例えばポリミキシンＢ、又はポリミキシンＥ（コリスチン））、又はグラム陰性細菌のＴｏｌＣ排出ポンプを阻害する薬剤（例えばＰＡβＮ）と組み合わせて投与された場合、あるいは、排出機序の損なわれた株（例えば、ネイティブなｔｏｌＣ遺伝子のインフレーム欠失を有するＥ．ｃｏｌｉ株７ＫＯΔｔｏｌＣ）に投与された場合、細胞内酸化還元ストレスの不可逆的な増加を引き起こす。
【０２５８】
ＡＭＮＩＳ ＩｍａｇｅＳｔｒｅａｍ及びＩＤＥＡＳ／ＩｍａｇｅＪ分析
試料を、以前に記載されているようにして（van der Heijden et al. (2015) Proc Natl Acad Sci USA 112, 560-565）、ＡＭＮＩＳ ＩｍａｇｅＳｔｒｅａｍによって分析した。４０５、４８８、６５８、及び７８５nmのレーザー強度は、それぞれ、１００、１２０、２０及び３．８であった。ＡＭＮＩＳ社によって供給されるＩＤＥＡＳソフトウェア、バージョン６．０．１２９．０を使用して、データファイルをさらに分析した。細菌細胞を、６６０nmにおける蛍光に基づいて選択した。次いで、悪影響を受けている（infected）細胞の各画像を、６６０nmにおける蛍光強度に基づいたプログラムによって選択した。この選択に基づいて、４０５／４８０nmの比の分析に使用するマスクを作製した。結果として得られた４０５／４８０比のシグナルを、ヒストグラムにプロットした。還元及び酸化された対照を各実験内で得て、全ての数値を、酸化及び還元された比の数値に対して正規化した。以前に記載されているようにして（Morgan et al. (2011) Free Radical Biology and Medicine 51, 1943-1951）、疑似カラー化した比の画像を、ＩｍａｇｅＪを使用した分析を通じて作製した。
【０２５９】
細菌内酸化還元能のインビボでの分析を、Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１マルチモードプレートリーダー（バイオテック社）において３０℃で実施し、励起は４０５及び４８０nmで測定し、発光は５１０nmで測定した。対数増殖期の細菌培養液を、ＯＤ１．０で０．９％食塩水中に再懸濁し、１ウェルあたり２００μLを、黒色の透明底の９６ウェルプレートに入れた。非蛍光対応株のバックグラウンドシグナルを、同じ実験で得た。さらに、１０mM Ｈ２Ｏ２及び１mM ＤＴＴを実験開始時に細菌培養液に添加することによって、完全に酸化された細菌及び完全に還元された細菌のシグナルを、それぞれ得た。全ての数値を、最大限に酸化された細菌培養液及び完全に還元された細菌培養液について得られた数値に対して正規化した。
【０２６０】
本発明は例を用いて記載されているが、特許請求の範囲に定義されている本発明の範囲から逸脱することなく、変更及び改変を行ない得ることが理解されるべきである。さらに、特定の特徴に対して公知の均等物が存在する場合には、このような均等物も、本明細書に具体的に言及されているかのように組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【国際調査報告】
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