(57)【要約】  本明細書には、タンパク質の発現を増加するための、および、被験体、例えばタンパク質発現が不足している被験体または肝臓病の被験体を処置するための、方法と組成物が提供される。【選択図】図１
2019500345.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体の細胞により標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現を増加させることによって被験体の肝臓病を処置する方法であって、
ここで、前記細胞は、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体）を有し、該ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含み、
ここで、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードし、
前記方法は、
被験体の細胞を、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的なアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）と接触させる工程を含み、それによって、保持されたイントロンは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体から構成的にスプライシングされ、それにより、被験体の細胞内で、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡのレベルを増加させ、標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現を増加させる、方法。
【請求項２】
肝臓病は、グリシン脳症、ツェルヴェーガー症候群、ハイムラー症候群、アデノシンデアミナーゼ欠損症、異型ポルフィリン症、晩発性皮膚ポルフィリン症、急性間欠性ポルフィリン症、超長鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠損症、イソ吉草酸血症、高カイロミクロン血症、高トリグリセリド血症、ガラクトース血症、高コレステロール血症、若年発症成人型１型糖尿病、若年発症成人型２型糖尿病、若年発症成人型３型糖尿病、非インスリン依存型糖尿病、インスリン依存性糖尿病１、インスリン依存性糖尿病２０、若年発症成人型糖尿病を伴うファンコーニ尿細管症候群４、家族性高インスリン低血糖症３、永続的な新生児糖尿病、肝腺腫、ダウリング・デゴス病４、ＳＨＯＲＴ症候群、免疫不全症３６、無ガンマグロブリン血症７、脂質代謝欠失、肝臓炎症、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、血小板減少症、非アルコール性脂肪肝疾患、ウィルソン病、チロシン血症１型、アルギニノコハク酸リアーゼ欠損症、ヘモクロマトーシスＩ型、アルストレーム症候群、先天性の胆汁酸合成欠損症１、脂肪性肝炎、インシュリン抵抗性、耐糖能障害、ＩＩ型糖尿病、あるいは肝臓癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体）を有している細胞によって、標的タンパク質の発現を増加させる方法であって、
該ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含み、ここで、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は標的タンパク質をコードし、
前記方法は、
細胞を、標的タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的なアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）と接触させる工程を含み、それによって、保持されたイントロンは、標的タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体から構成的にスプライシングされ、それにより、細胞内で標的タンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルを増加させ、標的タンパク質の発現を増加させ、
ここで、標的タンパク質は、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲン・オキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソバレリルＣｏＡ脱水素酵素、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジリルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝性核因子−１−アルファアルブミン近位因子、Ｏグルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子ベータ−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１，３−β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体デルタ、インターロイキン６、セラミド合成酵素２、あるいは核受容体コアクチベーター５である、方法。
【請求項４】
標的タンパク質は、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲン・オキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソバレリルＣｏＡ脱水素酵素、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジリルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝性核因子−１−アルファアルブミン近位因子、タンパク質Ｏグルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子ベータ−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１，３−β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体デルタ、インターロイキン６、セラミド合成酵素２、あるいは核受容体コアクチベーター５である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
標的タンパク質または機能的ＲＮＡは、被験体において量あるいは活性が不足している標的タンパク質あるいは機能的ＲＮＡを機能的に増大させるか、これに取って代わる、補償タンパク質あるいは補償機能的ＲＮＡである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項６】
細胞は、標的タンパク質の量または活性の不足によって引き起こされた疾病を有する被験体内にあるか、または被験体に由来する、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
標的タンパク質の量の不足は、標的タンパク質のハプロ不全によって引き起こされ、ここで被験体は、機能的な標的タンパク質をコードする第１の対立遺伝子、標的タンパク質が生成されない第２の対立遺伝子、または非機能的な標的タンパク質をコードする第２の対立遺伝子を有し、アンチセンスオリゴマーは、第１の対立遺伝子から転写されたＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に結合する、請求項１乃至６の何れか１つに記載の方法。
【請求項８】
被験体は、標的タンパク質の量または機能の不足に起因する障害により引き起こされた疾病を抱えており、ここで、被験体は、
（ａ）
（ｉ）標的タンパク質が野生型対立遺伝子からの生成と比較して、減少したレベルで生成され、
（ｉｉ）標的タンパク質が同等の野性型タンパク質と比較して機能が低下した形態で生成され、あるいは、
（ｉｉｉ）標的タンパク質が生成されない
第１の変異対立遺伝子と、
（ｂ）
（ｉ）標的タンパク質が野生型対立遺伝子からの生成と比較して、減少したレベルで生成され、
（ｉｉ）標的タンパク質が同等の野性型タンパク質と比較して、機能が低下した形態で生成され、あるいは、
（ｉｉｉ）標的タンパク質が生成されない
第２の変異対立遺伝子とを有し、
ここで、被験体が第１の変異対立遺伝子（ａ）（ｉｉｉ）を有するとき、第２の変異対立遺伝子は（ｂ）（ｉ）あるいは（ｂ）（ｉｉ）であり、ここで、被験体が第２の変異対立遺伝子（ｂ）（ｉｉｉ）を有するとき、第１の変異対立遺伝子は（ａ）（ｉ）あるいは（ａ）（ｉｉ）であり、ここで、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）（ｉ）あるいは（ａ）（ｉｉ）である第１の変異対立遺伝子、および／または、（ｂ）（ｉ）あるいは（ｂ）（ｉｉ）である第２の変異対立遺伝子から転写される、請求項１乃至６の何れか１つに記載の方法。
【請求項９】
標的タンパク質は、同等の野性型タンパク質と比較して、機能が低下した形態で生成される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
標的タンパク質は、同等の野性型タンパク質と比較して、十分に機能的な形態で生成される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋６〜保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−１６までの領域内の保持されたイントロンにある、請求項１乃至１０の何れか１つに記載の方法。
【請求項１２】
ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋６９〜保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−７９までの領域内の保持されたイントロンにある、請求項１乃至１０の何れか１つに記載の方法。
【請求項１３】
ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、
（ａ）保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する、＋６から＋１００の領域；あるいは
（ｂ）保持されたイントロンの３’スプライス部位に対する−１６から−１００の領域
の内部の保持されたイントロンにある、請求項１乃至１０の何れか１つに記載の方法。
【請求項１４】
ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、
（ａ）保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ〜−４ｅの領域；あるいは
（ｂ）保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ〜−４ｅの領域
の内部にある、請求項１乃至１０の何れか１つに記載の方法。
【請求項１５】
アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイントロンの５’スプライス部位の約５００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持されたイントロンの３’スプライス部位の約５００ヌクレオチド上流までの領域内にあるＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする、請求項１乃至１０の何れか１つに記載の方法。
【請求項１６】
アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイントロンの５’スプライス部位の約１００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持されたイントロンの３’スプライス部位の約１００ヌクレオチド上流までの領域内にあるＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする、請求項１乃至１０の何れか１つに記載の方法。
【請求項１７】
標的タンパク質は、（ａ）ＡＭＴ、（ｂ）ＡＤＡ、（ｃ）ＰＰＯＸ、（ｄ）ＵＲＯＤ、（ｅ）ＨＭＢＳ、（ｆ）ＡＣＡＤＶＬ、（ｇ）ＰＣ、（ｈ）ＩＶＤ、（ｉ）ＡＰＯＡ５、（ｊ）ＧＡＬＴ、（ｋ）ＬＤＬＲＡＰ１、（ｌ）ＨＮＦ４Ａ、（ｍ）ＧＣＫ、（ｎ）ＰＯＧＬＵＴ１、（ｏ）ＰＩＫ３Ｒ１、（ｐ）ＨＮＦ１Ａ、（ｑ）ＴＲＩＢ１、（ｒ）ＴＧＦＢ１、（ｓ）ＨＡＭＰ、（ｔ）ＴＨＰＯ、（ｕ）ＰＮＰＬＡ３、（ｖ）ＡＴＰ７Ｂ、（ｗ）ＦＡＨ、（ｘ）ＡＳＬ、（ｙ）ＨＦＥ、（ｚ）ＡＬＭＳ１、（ａａ）ＰＰＡＲＤ、（ｂｂ）ＩＬ６、（ｃｃ）ＨＳＤ３Ｂ７、（ｄｄ）ＣＥＲＳ２、または（ｅｅ）ＮＣＯＡ５である、請求項１乃至１６の何れか１つに記載の方法。
【請求項１８】
ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ２８１３−３９１０のいずれか１つ、（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６５８４７−６７２８１のいずれか１つ、（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １９００−２５９９のいずれか１つ、（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９２６−１７７９のいずれか１つ、（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３７４８３−３８０４４のいずれか１つ、（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４９４２３−４９９６９のいずれか１つ、（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３５９００−３６２９２のいずれか１つ、（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４４６２６−４７０１３のいずれか１つ、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３６２９３−３７４８２のいずれか１つ、（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３４５２１−３５８９９のいずれか１つ、（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １３１−９２５のいずれか１つ、（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５８９５８−６５８４６、あるいは６７５３２−７７３７４のいずれか１つ、（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２５０５８−３０９７６のいずれか１つ、（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３９１１−５２６４のいずれか１つ、（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４４７３−１４８７６のいずれか１つ、（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３８０４５−４２１０５のいずれか１つ、（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３２４６９−３４５２０のいずれか１つ、（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５１９７２−５２０２５のいずれか１つ、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５１６７０−５１９７１のいずれか１つ、（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５２６５−１４４７２のいずれか１つ、（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７７３７５−７８３４８のいずれか１つ、（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４２１０６−４４３７０のいずれか１つ、（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４４３７１−４４６２５のいずれか１つ、（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３０９７７−３２４６８のいずれか１つ、（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２１８１０−２３４８５のいずれか１つ、（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２６００−２８１２のいずれか１つ、（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４８７７−２１８０９のいずれか１つ、（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２３４８６−２５０５７のいずれか１つ、（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４７０１４−４９４２２のいずれか１つ、（ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １７８０−１８９９のいずれか１つ、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６７２８２−６７５３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または１００％相補的な配列を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４８３、７８４６５、または７８４３４；（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３８５、７８４８２、または７８３６９；（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４６１、７８４７３、７８４８０、または７８４２１；（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４１０、７８３８６、７８４１１、７８４６０、または７８４６３；（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３５５、７８４６７、または７８４５４；（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３６７、７８３７６、７８４４０、７８４４８、７８４７７、７８４８５、７８４９６、７８４２２、または７８４１２；（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４９５；（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４６４、７８３７５、または７８３８０；（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４０７、７８４９９、７８４２０、７８３７２、または７８３９７；（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４８９、７８４１６、７８４７６、７８３５２、７８４３５、７８４９３、７８４２３、７８４３７、または７８４４９；（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３５４、または７８４５９；（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４４１、７８３９２、７８４５６、７８４２８、７８４９１、７８５０１、７８３６０、７８４２９、７８３５８、７８３６４、７８４７５、７８３９１、７８４７９、７８４０１、７８３７３、または７８４５０；（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４４５、７８４８１、７８３７９、７８４３１、７８４６９、７８４０８、７８３７７、７８４１７、７８３８７、７８４５５、７８４８４、または７８３７０；（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３６８、７８３５０、７８４３２、７８４３９、または７８３８９；（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３９０、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４１８；（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４６２、７８４６８、７８４５３、７８３６１、７８３６３、７８４３３、７８４３８、７８４３０、７８４８８、７８４０５、７８４９２、または７８４２７；（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４８７、７８４８６、または７８４７４；（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４５８；（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４９７、または７８４２６；（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４２５、７８４００、７８３９３、７８３５１、７８３８１、７８３６６、７８４５７、７８４４３、７８３６２、または７８４４６；（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３８８、７８４０２、７８４７１、または７８３５６；（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４２７、７８３８３、７８４４４、または７８３９４；（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３８２；（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４９４、７８４０４、７８３７１、７８３６５、または７８３５３；（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４１９、７８３８４、７８５００、７８４２４、または７８４６６；（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３９９；（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４１４、７８４７８、７８４７２、７８３５９、７８３９５、７８３５７、７８３７４、または７８４９０；（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４３６、７８４１３、７８４１５、７８３９８、または７８４０３；（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３４９、７８４７０、７８４９８、７８４０６、７８４４２、７８４５１、７８３９６、７８４０９、または７８３７８；���ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４４７；またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４５２の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項１７又は１８に記載の方法。
【請求項２０】
ＡＳＯは、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ２８１３−３９１０のいずれか１つ、（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６５８４７−６７２８１のいずれか１つ、（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １９００−２５９９のいずれか１つ、（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９２６−１７７９のいずれか１つ、（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３７４８３−３８０４４のいずれか１つ、（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４９４２３−４９９６９のいずれか１つ、（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３５９００−３６２９２のいずれか１つ、（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４４６２６−４７０１３のいずれか１つ、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３６２９３−３７４８２のいずれか１つ、（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３４５２１−３５８９９のいずれか１つ、（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １３１−９２５のいずれか１つ、（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５８９５８−６５８４６、あるいは６７５３２−７７３７４のいずれか１つ、（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２５０５８−３０９７６のいずれか１つ、（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３９１１−５２６４のいずれか１つ、（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４４７３−１４８７６のいずれか１つ、（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３８０４５−４２１０５のいずれか１つ、（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３２４６９−３４５２０のいずれか１つ、（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５１９７２−５２０２５のいずれか１つ、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５１６７０−５１９７１のいずれか１つ、（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５２６５−１４４７２のいずれか１つ、（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７７３７５−７８３４８のいずれか１つ、（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４２１０６−４４３７０のいずれか１つ、（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４４３７１−４４６２５のいずれか１つ、（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３０９７７−３２４６８のいずれか１つ、（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２１８１０−２３４８５のいずれか１つ、（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２６００−２８１２のいずれか１つ、（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４８７７−２１８０９のいずれか１つ、（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２３４８６−２５０５７のいずれか１つ、（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４７０１４−４９４２２のいずれか１つ、（ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １７８０−１８９９のいずれか１つ、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６７２８２−６７５３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項１７乃至１９の何れか１つに記載の方法。
【請求項２１】
ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４１−４４、（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２８  １２１−１２４、（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ３７または３８、（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ３３または３４、（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９２−９５、（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０９−１１２、（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８７−８９、（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０４または１０５、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９０または９１、（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８５または８６、（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３２、（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １１５−１２０、あるいは１２６−１２９、（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７６−７８、（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４５または４６、（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５７−６０、（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９６または９７、（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８３または８４、（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １１４、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２２３、（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４７−５６、（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １３０、（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９８−１０２、（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０３、（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８０−８２、（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６６−７３、（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３９、（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６１−６５、（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７４または７５、（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０６−１０８、（ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３５または３６、あるいはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １２５のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項１７乃至２０の何れか１つに記載の方法。
【請求項２２】
ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６、（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２８、（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４、（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２、（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １９、（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２５、（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １７、（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２３、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １８、（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １６、（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １、（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３０、（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １３、（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７、（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９、（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２０、（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １５、（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２７、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２６、（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８、（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３１、（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２１、（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２２、（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４、（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １１、（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５、（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０、（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １２、（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２４、（ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３、または（ｅｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２９に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた遺伝子配列によってコードされる、請求項１７乃至２１の何れか１つに記載の方法。
【請求項２３】
アンチセンスオリゴマーは、機能的ＲＮＡまたは標的タンパク質をコードする遺伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングを調節することにより、標的タンパク質または機能的ＲＮＡの量を増加させない、請求項１乃至２２の何れか１つに記載の方法。
【請求項２４】
アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子の突然変異に起因する異常なスプライシングを調節することにより、標的タンパク質または機能的ＲＮＡの量を増加させない、請求項１乃至２３の何れか１つに記載の方法。
【請求項２５】
ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、全長のｍＲＮＡ前駆体の部分的なスプライシング、または野生型のｍＲＮＡ前駆体の部分的なスプライシングによって生成された、請求項１乃至２４の何れか１つに記載の方法。
【請求項２６】
標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡは、全長の成熟ｍＲＮＡ、あるいは野生型の成熟ｍＲＮＡである、請求項１乃至２５の何れか１つに記載の方法。
【請求項２７】
生成された標的タンパク質は全長のタンパク質あるいは野生型のタンパク質である、請求項１乃至２６の何れか１つに記載の方法。
【請求項２８】
アンチセンスオリゴマーと接触させた細胞において生成された標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡの総量は、対照細胞において生成された標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡの総量と比較して、約１．１〜約１０倍、約１．５〜約１０倍、約２〜約１０倍、約３〜約１０倍、約４〜約１０倍、約１．１〜約５倍、約１．１〜約６倍、約１．１〜約７倍、約１．１〜約８倍、約１．１〜約９倍、約２〜約５倍、約２〜約６倍、約２〜約７倍、約２〜約８倍、約２〜約９倍、約３〜約６倍、約３〜約７倍、約３〜約８倍、約３〜約９倍、約４〜約７倍、約４〜約８倍、約４〜約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、あるいは少なくとも約１０倍増加する、請求項１乃至２７の何れか１つに記載の方法。
【請求項２９】
アンチセンスオリゴマーと接触させた細胞によって生成された標的タンパク質の総量は、対照細胞によって生成された標的タンパク質の総量と比較して、約１．１〜約１０倍、約１．５〜約１０倍、約２〜約１０倍、約３〜約１０倍、約４〜約１０倍、約１．１〜約５倍、約１．１〜約６倍、約１．１〜約７倍、約１．１〜約８倍、約１．１〜約９倍、約２〜約５倍、約２〜約６倍、約２〜約７倍、約２〜約８倍、約２〜約９倍、約３〜約６倍、約３〜約７倍、約３〜約８倍、約３〜約９倍、約４〜約７倍、約４〜約８倍、約４〜約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、あるいは少なくとも約１０倍増加する、請求項１乃至２８の何れか１つに記載の方法。
【請求項３０】
アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホスホロジアミデート結合を含む骨格修飾を含む、請求項１乃至２９の何れか１つに記載の方法。
【請求項３１】
アンチセンスオリゴマーはホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチド核酸、２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ、あるいは２’−Ｏ−メトキシエチル部分を含む、請求項１乃至３０の何れか１つに記載の方法。
【請求項３２】
アンチセンスオリゴマーは少なくとも１つの修飾された糖部を含む、請求項１乃至３１の何れか１つに記載の方法。
【請求項３３】
それぞれの糖部は修飾された糖部である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
アンチセンスオリゴマーは、８〜５０の核酸塩基、８〜４０の核酸塩基、８〜３５の核酸塩基、８〜３０の核酸塩基、８〜２５の核酸塩基、８〜２０の核酸塩基、８〜１５の核酸塩基、９〜５０の核酸塩基、９〜４０の核酸塩基、９〜３５の核酸塩基、９〜３０の核酸塩基、９〜２５の核酸塩基、９〜２０の核酸塩基、９〜１５の核酸塩基、１０〜５０の核酸塩基、１０〜４０の核酸塩基、１０〜３５の核酸塩基、１０〜３０の核酸塩基、１０〜２５の核酸塩基、１０〜２０の核酸塩基、１０〜１５の核酸塩基、１１〜５０の核酸塩基、１１〜４０の核酸塩基、１１〜３５の核酸塩基、１１〜３０の核酸塩基、１１〜２５の核酸塩基、１１〜２０の核酸塩基、１１〜１５の核酸塩基、１２〜５０の核酸塩基、１２〜４０の核酸塩基、１２〜３５核酸塩基、１２〜３０核酸塩基、１２〜２５の核酸塩基、１２〜２０の核酸塩基、あるいは１２〜１５の核酸塩基からなる、請求項１乃至３３の何れか１つに記載の方法。
【請求項３５】
アンチセンスオリゴマーは、タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、あるいは１００％相補的である、請求項１乃至３４の何れか１つに記載の方法。
【請求項３６】
細胞は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子から転写されたＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団を含み、ここで、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団は２つ以上の保持されたイントロンを含み、および、ここで、アンチセンスオリゴマーは、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団で最も豊富な保持されたイントロンに結合する、請求項１乃至３５の何れか１つに記載の方法。
【請求項３７】
最も豊富な保持されたイントロンに対するアンチセンスオリゴマーの結合は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡを生成するＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団からの２つ以上の保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
細胞は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子から転写されたＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団を含み、ここで、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団は２つ以上の保持されたイントロンを含み、および、ここで、アンチセンスオリゴマーは、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団で２番目に豊富な保持されたイントロンに結合する、請求項１乃至３５の何れか１つに記載の方法。
【請求項３９】
２番目に豊富な保持されたイントロンに対するアンチセンスオリゴマーの結合は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡを生成するＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団からの２つ以上の保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
疾病は疾患または障害である、請求項６乃至３９の何れか１つに記載の方法。
【請求項４１】
疾患または障害は肝臓病である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
肝臓病は、グリシン脳症、ツェルヴェーガー症候群、ハイムラー症候群、アデノシンデアミナーゼ欠損症、異型ポルフィリン症、晩発性皮膚ポルフィリン症、急性間欠性ポルフィリン症、超長鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠損症、イソ吉草酸血症、高カイロミクロン血症、高トリグリセリド血症、ガラクトース血症、高コレステロール血症、若年発症成人型１型糖尿病、若年発症成人型２型糖尿病、若年発症成人型３型糖尿病、非インスリン依存型糖尿病、インスリン依存性糖尿病１、インスリン依存性糖尿病２０、若年発症成人型糖尿病を伴うファンコーニ尿細管症候群４、家族性高インスリン低血糖症３、永続的な新生児糖尿病、肝腺腫、ダウリング・デゴス病４、ＳＨＯＲＴ症候群、免疫不全症３６、無ガンマグロブリン血症７、脂質代謝欠失、肝臓炎症、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、血小板減少症、非アルコール性脂肪肝疾患、ウィルソン病、チロシン血症１型、アルギニノコハク酸リアーゼ欠損症、ヘモクロマトーシスＩ型、アルストレーム症候群、先天性の胆汁酸合成欠損症１、脂肪性肝炎、インシュリン抵抗性、耐糖能障害、ＩＩ型糖尿病、あるいは肝臓癌である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
標的タンパク質およびＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は遺伝子によってコードされ、遺伝子は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記方法はタンパク質発現を評価する工程をさらに含む、請求項１乃至４３の何れか１つに記載の方法。
【請求項４５】
被験体はヒトである、請求項１乃至４４の何れか１つに記載の方法。
【請求項４６】
被験体はヒト以外の動物である、請求項１乃至４４の何れか１つに記載の方法。
【請求項４７】
被験体は胎児、胚、あるいは子供である、請求項１乃至４５の何れか１つに記載の方法。
【請求項４８】
細胞はエクスビボである、請求項１乃至４６の何れか１つに記載の方法。
【請求項４９】
アンチセンスオリゴマーは、被験体の腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、あるいは静脈内注射によって投与される、請求項１乃至４６の何れか１つに記載の方法。
【請求項５０】
５’スプライス部位に隣接するエクソンの−３ｅ〜−１ｅと、保持されたイントロンの＋１〜＋６にある９つのヌクレオチドは、対応する野性型配列と同一である、請求項１乃至４９の何れか１つに記載の方法。
【請求項５１】
保持されたイントロンの−１５〜−１と３’スプライス部位に隣接するエクソンの＋１ｅにある１６のヌクレオチドは、対応する野性型配列と同一である、請求項１乃至５０の何れか１つに記載の方法。
【請求項５２】
請求項１乃至５１の何れか１つに記載された方法で使用されるアンチセンスオリゴマー。
【請求項５３】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１−７８３４８のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む、アンチセンスオリゴマー。
【請求項５４】
請求項５２または５３に記載されたアンチセンスオリゴマーと賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項５５】
腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、あるいは静脈内注射によって請求項５４に記載された医薬組成物を投与することにより、被験体を処置する方法。
【請求項５６】
不足しているタンパク質または不足している機能的ＲＮＡに関連付けられる被験体の肝臓病を処置するために細胞によって標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現を増加させる方法で使用するためのアンチセンスオリゴマーを含む組成物であって、
ここで、不足しているタンパク質または不足している機能的ＲＮＡは、被験体において量あるいは活性が不足しており、ここで、アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体）の構成的スプライシングを増強し、
ここで、標的タンパク質は：
（ａ）不足しているタンパク質；あるいは
（ｂ）被験体において不足しているタンパク質を機能的に増大させるか、これに取って代わる、補償タンパク質
であり、
ここで、機能的ＲＮＡは：
（ａ）不足しているＲＮＡ；あるいは
（ｂ）被験体の不足している機能的ＲＮＡを機能的に増大させるか、これに取って代わる、補償機能的ＲＮＡ
であり、
ここでＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含み、保持されたイントロンは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体からスプライシングされ、それによって、被験体において標的タンパク質または機能的ＲＮＡの産生または活性を増加させる、組成物。
【請求項５７】
肝臓病は、グリシン脳症、ツェルヴェーガー症候群、ハイムラー症候群、アデノシンデアミナーゼ欠損症、異型ポルフィリン症、晩発性皮膚ポルフィリン症、急性間欠性ポルフィリン症、超長鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠損症、イソ吉草酸血症、高カイロミクロン血症、高トリグリセリド血症、ガラクトース血症、高コレステロール血症、若年発症成人型１型糖尿病、若年発症成人型２型糖尿病、若年発症成人型３型糖尿病、非インスリン依存型糖尿病、インスリン依存性糖尿病１、インスリン依存性糖尿病２０、若年発症成人型糖尿病を伴うファンコーニ尿細管症候群４、家族性高インスリン低血糖症３、永続的な新生児糖尿病、肝腺腫、ダウリング・デゴス病４、ＳＨＯＲＴ症候群、免疫不全症３６、無ガンマグロブリン血症７、脂質代謝欠失、肝臓炎症、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、血小板減少症、非アルコール性脂肪肝疾患、ウィルソン病、チロシン血症１型、アルギニノコハク酸リアーゼ欠損症、ヘモクロマトーシスＩ型、アルストレーム症候群、先天性の胆汁酸合成欠損症１、脂肪性肝炎、インシュリン抵抗性、耐糖能障害、ＩＩ型糖尿病、あるいは肝臓癌である、請求項５６に記載の組成物。
【請求項５８】
被験体において標的タンパク質に関係する疾病を処置する方法に使用するためのアンチセンスオリゴマーを含む組成物であって、
前記方法は、被験体の細胞によって標的タンパク質の発現を増加させる工程であって、ここで、細胞は、保持されたイントロン、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含む、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体）を有し、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、標的タンパク質をコードする、工程と、細胞をアンチセンスオリゴマーと接触させる工程であって、それによって、保持されたイントロンは、標的タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の転写産物から構成的にスプライシングされ、それにより、被験体の細胞内で、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡのレベルを増加させ、標的タンパク質の発現を増加させる、工程とを含む、組成物。
【請求項５９】
標的タンパク質は、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲン・オキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソバレリルＣｏＡ脱水素酵素、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジリルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝性核因子−１−アルファアルブミン近位因子、タンパク質Ｏグルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子ベータ−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１，３−β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体デルタ、インターロイキン６、セラミド合成酵素２、あるいは核受容体コアクチベーター５である、請求項５６乃至５８の何れか１つに記載の組成物。
【請求項６０】
疾病は疾患または障害である、請求項５８に記載の組成物。
【請求項６１】
疾患または障害は肝臓病である、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６２】
肝臓病は、グリシン脳症、ツェルヴェーガー症候群、ハイムラー症候群、アデノシンデアミナーゼ欠損症、異型ポルフィリン症、晩発性皮膚ポルフィリン症、急性間欠性ポルフィリン症、超長鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠損症、イソ吉草酸血症、高カイロミクロン血症、高トリグリセリド血症、ガラクトース血症、高コレステロール血症、若年発症成人型１型糖尿病、若年発症成人型２型糖尿病、若年発症成人型３型糖尿病、非インスリン依存型糖尿病、インスリン依存性糖尿病１、インスリン依存性糖尿病２０、若年発症成人型糖尿病を伴うファンコーニ尿細管症候群４、家族性高インスリン低血糖症３、永続的な新生児糖尿病、肝腺腫、ダウリング・デゴス病４、ＳＨＯＲＴ症候群、免疫不全症３６、無ガンマグロブリン血症７、脂質代謝欠失、肝臓炎症、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、血小板減少症、非アルコール性脂肪肝疾患、ウィルソン病、チロシン血症１型、アルギニノコハク酸リアーゼ欠損症、ヘモクロマトーシスＩ型、アルストレーム症候群、先天性の胆汁酸合成欠損症１、脂肪性肝炎、インシュリン抵抗性、耐糖能障害、ＩＩ型糖尿病、あるいは肝臓癌である、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６３】
標的タンパク質およびＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は遺伝子によってコードされ、遺伝子は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５である、請求項６１又は６２に記載の組成物。
【請求項６４】
アンチセンスオリゴマーは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋６から、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−１６までの領域内の保持されたイントロンにあるＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする、請求項５６乃至６３の何れか１つに記載の組成物。
【請求項６５】
アンチセンスオリゴマーはＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とし、これは、
（ａ）保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する、＋６から＋１００の領域；あるいは
（ｂ）保持されたイントロンの３’スプライス部位に対する−１６から−１００の領域
の内部の保持されたイントロンにある、請求項５６乃至６３の何れか１つに記載の組成物。
【請求項６６】
アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイントロンの５’スプライス部位の約５００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持されたイントロンの３’スプライス部位の約５００ヌクレオチド上流までの領域内にあるＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする、請求項５６乃至６３の何れか１つに記載の組成物。
【請求項６７】
アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイントロンの５’スプライス部位の約１００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持されたイントロンの３’スプライス部位の約１００ヌクレオチド上流までの領域内にあるＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする、請求項５６乃至６３の何れか１つに記載の組成物。
【請求項６８】
ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、
（ａ）保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ〜−４ｅの領域；あるいは
（ｂ）保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ〜−４ｅの領域
の内部にある、請求項５６乃至６３の何れか１つに記載の組成物。
【請求項６９】
標的タンパク質は、（ａ）ＡＭＴ、（ｂ）ＡＤＡ、（ｃ）ＰＰＯＸ、（ｄ）ＵＲＯＤ、（ｅ）ＨＭＢＳ、（ｆ）ＡＣＡＤＶＬ、（ｇ）ＰＣ、（ｈ）ＩＶＤ、（ｉ）ＡＰＯＡ５、（ｊ）ＧＡＬＴ、（ｋ）ＬＤＬＲＡＰ１、（ｌ）ＨＮＦ４Ａ、（ｍ）ＧＣＫ、（ｎ）ＰＯＧＬＵＴ１、（ｏ）ＰＩＫ３Ｒ１、（ｐ）ＨＮＦ１Ａ、（ｑ）ＴＲＩＢ１、（ｒ）ＴＧＦＢ１、（ｓ）ＨＡＭＰ、（ｔ）ＴＨＰＯ、（ｕ）ＰＮＰＬＡ３、（ｖ）ＡＴＰ７Ｂ、（ｗ）ＦＡＨ、（ｘ）ＡＳＬ、（ｙ）ＨＦＥ、（ｚ）ＡＬＭＳ１、（ａａ）ＰＰＡＲＤ、（ｂｂ）ＩＬ６、（ｃｃ）ＨＳＤ３Ｂ７、（ｄｄ）ＣＥＲＳ２、または（ｅｅ）ＮＣＯＡ５である、請求項５６乃至６８の何れか１つに記載の組成物。
【請求項７０】
ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ２８１３−３９１０のいずれか１つ、（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６５８４７−６７２８１のいずれか１つ、（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １９００−２５９９のいずれか１つ、（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９２６−１７７９のいずれか１つ、（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３７４８３−３８０４４のいずれか１つ、（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４９４２３−４９９６９のいずれか１つ、（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３５９００−３６２９２のいずれか１つ、（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４４６２６−４７０１３のいずれか１つ、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３６２９３−３７４８２のいずれか１つ、（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３４５２１−３５８９９のいずれか１つ、（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １３１−９２５のいずれか１つ、（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５８９５８−６５８４６、あるいは６７５３２−７７３７４のいずれか１つ、（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２５０５８−３０９７６のいずれか１つ、（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３９１１−５２６４のいずれか１つ、（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４４７３−１４８７６のいずれか１つ、（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３８０４５−４２１０５のいずれか１つ、（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３２４６９−３４５２０のいずれか１つ、（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５１９７２−５２０２５のいずれか１つ、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５１６７０−５１９７１のいずれか１つ、（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５２６５−１４４７２のいずれか１つ、（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７７３７５−７８３４８のいずれか１つ、（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４２１０６−４４３７０のいずれか１つ、（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４４３７１−４４６２５のいずれか１つ、（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３０９７７−３２４６８のいずれか１つ、（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２１８１０−２３４８５のいずれか１つ、（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２６００−２８１２のいずれか１つ、（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４８７７−２１８０９のいずれか１つ、（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２３４８６−２５０５７のいずれか１つ、（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４７０１４−４９４２２のいずれか１つ、（ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １７８０−１８９９のいずれか１つ、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６７２８２−６７５３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％相補的な配列を含む、請求項６９に記載の組成物。
【請求項７１】
ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４８３、７８４６５、または７８４３４；（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３８５、７８４８２、または７８３６９；（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４６１、７８４７３、７８４８０、または７８４２１；（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４１０、７８３８６、７８４１１、７８４６０、または７８４６３；（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３５５、７８４６７、または７８４５４；（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３６７、７８３７６、７８４４０、７８４４８、７８４７７、７８４８５、７８４９６、７８４２２、または７８４１２；（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４９５；（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４６４、７８３７５、または７８３８０；（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４０７、７８４９９、７８４２０、７８３７２、または７８３９７；（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４８９、７８４１６、７８４７６、７８３５２、７８４３５、７８４９３、７８４２３、７８４３７、または７８４４９；（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３５４、または７８４５９；（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４４１、７８３９２、７８４５６、７８４２８、７８４９１、７８５０１、７８３６０、７８４２９、７８３５８、７８３６４、７８４７５、７８３９１、７８４７９、７８４０１、７８３７３、または７８４５０；（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４４５、７８４８１、７８３７９、７８４３１、７８４６９、７８４０８、７８３７７、７８４１７、７８３８７、７８４５５、７８４８４、または７８３７０；（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３６８、７８３５０、７８４３２、７８４３９、または７８３８９；（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３９０、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４１８；（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４６２、７８４６８、７８４５３、７８３６１、７８３６３、７８４３３、７８４３８、７８４３０、７８４８８、７８４０５、７８４９２、または７８４２７；（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４８７、７８４８６、または７８４７４；（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４５８、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４９７、または７８４２６；（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４２５、７８４００、７８３９３、７８３５１、７８３８１、７８３６６、７８４５７、７８４４３、７８３６２、または７８４４６；（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３８８、７８４０２、７８４７１、または７８３５６；（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４２７、７８３８３、７８４４４、または７８３９４；（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３８２；（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４９４、７８４０４、７８３７１、７８３６５、または７８３５３；（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４１９、７８３８４、７８５００、７８４２４、または７８４６６；（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３９９；（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４１４、７８４７８、７８４７２、７８３５９、７８３９５、７８３５７、７８３７４、または７８４９０；（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４３６、７８４１３、７８４１５、７８３９８、または７８４０３；（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３４９、７８４７０、７８４９８、７８４０６、７８４４２、７８４５１、７８３９６、７８４０９、または７８３７８；���ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４４７；またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４５２の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項６９又は７０に記載の組成物。
【請求項７２】
ＡＳＯは、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ２８１３−３９１０のいずれか１つ、（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６５８４７−６７２８１のいずれか１つ、（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １９００−２５９９のいずれか１つ、（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９２６−１７７９のいずれか１つ、（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３７４８３−３８０４４のいずれか１つ、（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４９４２３−４９９６９のいずれか１つ、（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３５９００−３６２９２のいずれか１つ、（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４４６２６−４７０１３のいずれか１つ、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３６２９３−３７４８２のいずれか１つ、（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３４５２１−３５８９９のいずれか１つ、（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １３１−９２５のいずれか１つ、（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５８９５８−６５８４６、あるいは６７５３２−７７３７４のいずれか１つ、（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２５０５８−３０９７６のいずれか１つ、（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３９１１−５２６４のいずれか１つ、（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４４７３−１４８７６のいずれか１つ、（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３８０４５−４２１０５のいずれか１つ、（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３２４６９−３４５２０のいずれか１つ、（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５１９７２−５２０２５のいずれか１つ、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５１６７０−５１９７１のいずれか１つ、（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５２６５−１４４７２のいずれか１つ、（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７７３７５−７８３４８のいずれか１つ、（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４２１０６−４４３７０のいずれか１つ、（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４４３７１−４４６２５のいずれか１つ、（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３０９７７−３２４６８のいずれか１つ、（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２１８１０−２３４８５のいずれか１つ、（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２６００−２８１２のいずれか１つ、（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４８７７−２１８０９のいずれか１つ、（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２３４８６−２５０５７のいずれか１つ、（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４７０１４−４９４２２のいずれか１つ、（ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １７８０−１８９９のいずれか１つ、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６７２８２−６７５３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項６９乃至７１の何れか１つに記載の組成物。
【請求項７３】
ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４１−４４、（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２８  １２１−１２４、（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ３７または３８、（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ３３または３４、（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９２−９５、（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０９−１１２、（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８７−８９、（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０４または１０５、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９０または９１、（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８５または８６、（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３２、（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １１５−１２０、あるいは１２６−１２９、（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７６−７８、（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４５または４６、（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５７−６０、（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９６または９７、（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８３または８４、（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １１４、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２２３、（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４７−５６、（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １３０、（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９８−１０２、（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０３、（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８０−８２、（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６６−７３、（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３９、（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６１−６５、（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７４または７５、（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０６−１０８、（ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３５または３６、あるいはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １２５のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項６９乃至７２の何れか１つに記載の組成物。
【請求項７４】
ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６、（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２８、（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４、（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２、（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １９、（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２５、（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １７、（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２３、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １８、（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １６、（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １、（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３０、（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １３、（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７、（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９、（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２０、（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １５、（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２７、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２６、（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８、（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３１、（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２１、（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２２、（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４、（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １１、（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５、（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０、（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １２、（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２４、（ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３、または（ｅｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２９に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた遺伝子配列によってコードされる、請求項６９乃至７３の何れか１つに記載の組成物。
【請求項７５】
アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングを調節することにより標的タンパク質または機能的ＲＮＡの量を増加させない、請求項５６乃至７４の何れか１つに記載の組成物。
【請求項７６】
アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子の突然変異に起因する異常なスプライシングを調節することにより、機能的ＲＮＡまたは機能的タンパク質の量を増加させない、請求項５６乃至７５の何れか１つに記載の組成物。
【請求項７７】
ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、全長のｍＲＮＡ前駆体、または野生型のｍＲＮＡ前駆体からの部分的なスプライシングによって生成された、請求項５６乃至７６の何れか１つに記載の組成物。
【請求項７８】
標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡは、全長の成熟ｍＲＮＡ、あるいは野生型の成熟ｍＲＮＡである、請求項５６乃至７７の何れか１つに記載の組成物。
【請求項７９】
生成された標的タンパク質は全長のタンパク質あるいは野生型のタンパク質である、請求項５６乃至７８の何れか１つに記載の組成物。
【請求項８０】
保持されたイントロンは律速イントロンである、請求項５６乃至７９の何れか１つに記載の組成物。
【請求項８１】
前記保持されたイントロンは前記ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体で最も豊富な保持されたイントロンである、請求項５６乃至８０の何れか１つに記載の組成物。
【請求項８２】
保持されたイントロンは前記ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体で２番目に豊富な保持されたイントロンである、請求項５６乃至８０の何れか１つに記載の組成物。
【請求項８３】
アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホスホロジアミデート結合を含む骨格修飾を含む、請求項５６乃至８２の何れか１つに記載の組成物。
【請求項８４】
前記アンチセンスオリゴマーはアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項５６乃至８３の何れか１つに記載の組成物。
【請求項８５】
アンチセンスオリゴマーはホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチド核酸、２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ、あるいは２’−Ｏ−メトキシエチル部分を含む、請求項５６乃至８４の何れか１つに記載の組成物。
【請求項８６】
アンチセンスオリゴマーは少なくとも１つの修飾された糖部を含む、請求項５６乃至８５の何れか１つに記載の組成物。
【請求項８７】
それぞれの糖部は修飾された糖部である、請求項８６に記載の組成物。
【請求項８８】
アンチセンスオリゴマーは、８〜５０の核酸塩基、８〜４０の核酸塩基、８〜３５の核酸塩基、８〜３０の核酸塩基、８〜２５の核酸塩基、８〜２０の核酸塩基、８〜１５の核酸塩基、９〜５０の核酸塩基、９〜４０の核酸塩基、９〜３５の核酸塩基、９〜３０の核酸塩基、９〜２５の核酸塩基、９〜２０の核酸塩基、９〜１５の核酸塩基、１０〜５０の核酸塩基、１０〜４０の核酸塩基、１０〜３５の核酸塩基、１０〜３０の核酸塩基、１０〜２５の核酸塩基、１０〜２０の核酸塩基、１０〜１５の核酸塩基、１１〜５０の核酸塩基、１１〜４０の核酸塩基、１１〜３５の核酸塩基、１１〜３０の核酸塩基、１１〜２５の核酸塩基、１１〜２０の核酸塩基、１１〜１５の核酸塩基、１２〜５０の核酸塩基、１２〜４０の核酸塩基、１２〜３５核酸塩基、１２〜３０核酸塩基、１２〜２５の核酸塩基、１２〜２０の核酸塩基、あるいは１２〜１５の核酸塩基からなる、請求項５６乃至８７の何れか１つに記載の組成物。
【請求項８９】
アンチセンスオリゴマーは、タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、あるいは１００％相補的である、請求項５６乃至８８の何れか１つに記載の組成物。
【請求項９０】
請求項５６乃至８９に記載された組成物のいずれかのアンチセンスオリゴマーと賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項９１】
腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、あるいは静脈内注射によって請求項９０に記載された医薬組成物を投与することにより、被験体を処置する方法。
【請求項９２】
医薬組成物であって、
不足しているＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするアンチセンスオリゴマーであって、不足しているＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡ転写産物が、保持されたイントロンを含み、アンチセンスオリゴマーが、不足しているＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡ転写産物から保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する、アンチセンスオリゴマーと、
薬学的に許容可能な賦形剤と
を含む医薬組成物。
【請求項９３】
不足しているＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡ転写産物は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の転写産物である、請求項９２に記載の医薬組成物。
【請求項９４】
ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ  ｍＲＮＡ転写産物の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋５００〜保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−５００の領域内で保持されたイントロン中にある、請求項９２又は９３に記載の医薬組成物。
【請求項９５】
ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する遺伝子配列によってコードされる、請求項９２又は９３に記載の医薬組成物。
【請求項９６】
ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２−１３０のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する配列を含む、請求項９２又は９３に記載の医薬組成物。
【請求項９７】
アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホスホロジアミデート結合を含む骨格修飾を含む、請求項９２に記載の医薬組成物。
【請求項９８】
アンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項９２に記載の医薬組成物。
【請求項９９】
アンチセンスオリゴマーは、ホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチド核酸、２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ、または２’−Ｏ−メトキシエチル部分を含む、請求項９２に記載の医薬組成物。
【請求項１００】
アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの修飾された糖部を含む、請求項９２に記載の医薬組成物。
【請求項１０１】
アンチセンスオリゴマーは、８〜５０の核酸塩基、８〜４０の核酸塩基、８〜３５の核酸塩基、８〜３０の核酸塩基、８〜２５の核酸塩基、８〜２０の核酸塩基、８〜１５の核酸塩基、９〜５０の核酸塩基、９〜４０の核酸塩基、９〜３５の核酸塩基、９〜３０の核酸塩基、９〜２５の核酸塩基、９〜２０の核酸塩基、９〜１５の核酸塩基、１０〜５０の核酸塩基、１０〜４０の核酸塩基、１０〜３５の核酸塩基、１０〜３０の核酸塩基、１０〜２５の核酸塩基、１０〜２０の核酸塩基、１０〜１５の核酸塩基、１１〜５０の核酸塩基、１１〜４０の核酸塩基、１１〜３５の核酸塩基、１１〜３０の核酸塩基、１１〜２５の核酸塩基、１１〜２０の核酸塩基、１１〜１５の核酸塩基、１２〜５０の核酸塩基、１２〜４０の核酸塩基、１２〜３５核酸塩基、１２〜３０核酸塩基、１２〜２５の核酸塩基、１２〜２０の核酸塩基、または１２〜１５の核酸塩基を含む、請求項９２に記載の医薬組成物。
【請求項１０２】
アンチセンスオリゴマーは、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部分に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％か、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補的である、請求項９２又は９３に記載の医薬組成物。
【請求項１０３】
ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８３４９−７８５０１から選択される配列内にある、請求項９２又は９３に記載の医薬組成物。
【請求項１０４】
アンチセンスオリゴマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１−７８３４８のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を備えたヌクレオチド配列を含む、請求項９２に記載の医薬組成物。
【請求項１０５】
アンチセンスオリゴマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１−７８３４８から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項９２に記載の医薬組成物。
【請求項１０６】
医薬組成物は、髄腔内注射、脳室内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、または静脈内注射のために製剤される、請求項９２乃至１０５の何れか１つに記載の医薬組成物。
【請求項１０７】
ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の機能形態をコードする、十分に処理されたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物を生成するために、保持されたイントロンの除去を促進する、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物の処理を誘発する方法であって、
該方法は、
（ａ）アンチセンスオリゴマーを被験体の標的細胞に接触させる工程；
（ｂ）アンチセンスオリゴマーを、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物にハイブリダイズさせる工程であって、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物が、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の機能形態をコードすることができ、少なくとも１つの保持されたイントロンを含む、工程；
（ｃ）ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の機能形態をコードする、十分に処理されたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物を産生するために、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物から少なくとも１つの保持されたイントロンを除去する工程；および
（ｄ）十分に処理されたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物から、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の機能形態を翻訳する工程
を含む方法。
【請求項１０８】
保持されたイントロンは、保持されたイントロン全体である、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物である、請求項１０７又は１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の量または活性の不足によって引き起こされた疾病を有する被験体を処置する方法であって、該方法は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１−７８３４８のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むアンチセンスオリゴマーを被験体に投与する工程を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１５年１２月１４日出願の米国仮特許出願第６１／２６７，２３８号、および２０１６年４月６日出願の米国仮特許出願第６２／３１９，０１５号の利益を主張するものであり、該出願は参照によって本明細書に組み込まれる。配列リストへの言及
【０００２】
本出願は配列表を包含しており、これは、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩフォーマットで提出され、その全体が引用により本明細書に組み込まれる。２０１６年１２月１２日に作成されたＡＳＣＩＩのコピーは、４７９９１−７１４＿６０１＿ＳＬ．ｔｘｔのファイル名であり、２４，３８５，３１４バイトのサイズである。前述のファイルは２０１６年１２月１２日に作成され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００３】
肝臓病は、推定死亡率が８０％の衰弱性で多くの場合致命的な疾病群である。肝臓は、限定されないが、血液から有害な毒素を取り除くこと、グルコースを放出すること、胆汁の生成、鉄分の貯蔵、および感染に対する抵抗を助けることを含む、身体の多くの機能にとって重要である。肝臓の機能不全は他の主要な器官の機能不全を引き起こし、最終的には死に至る。肝臓移植はしばしば死亡率を防ぐ一方で、ドナーの肝臓を受け取る見込みは一般に低い。
【０００４】
肝臓に関連する多くの疾患や疾病があるが、肝臓病の一部は、遺伝子の発現における欠失と同様に遺伝子産物における欠失によって進行することが分かっている。発現の増加により肝臓の疾患または疾病が恩恵を受けることができる遺伝子産物の例としては、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、およびＮＣＯＡ５が挙げられる。
【発明の概要】
【０００５】
１つの態様において、本明細書では、被験体の細胞により標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現を増加させることによって被験体の肝臓病を処置する方法が開示され、ここで、該細胞は、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体）を有し、該ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含み、ここで、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードし、該方法は、被験体の細胞を、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的なアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）と接触させる工程を含み、それによって、保持されたイントロンは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体から構成的にスプライシングされ、それにより、被験体の細胞内で、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡのレベルを増加させ、標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現を増加させる。
【０００６】
いくつかの実施形態において、肝臓病は、グリシン脳症、ツェルヴェーガー症候群、ハイムラー（Ｈｅｉｍｌｅｒ）症候群、アデノシンデアミナーゼ欠損症、異型ポルフィリン症、晩発性皮膚ポルフィリン症、急性間欠性ポルフィリン症、超長鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠損症、イソ吉草酸血症、高カイロミクロン血症、高トリグリセリド血症、ガラクトース血症、高コレステロール血症、若年発症成人型１型糖尿病、若年発症成人型２型糖尿病、若年発症成人型３型糖尿病、非インスリン依存型糖尿病、インスリン依存性糖尿病１、インスリン依存性糖尿病２０、若年発症成人型糖尿病を伴うファンコーニ尿細管症候群４（Ｆａｌｃｏｎｉ  ｒｅｎｏｔｕｂｕｌａｒ  ｓｙｍｄｒｏｍｅ）、家族性高インスリン低血糖症３、永続的な新生児糖尿病、肝腺腫、ダウリング・デゴス病４、ＳＨＯＲＴ症候群、免疫不全症３６、無ガンマグロブリン血症７、脂質代謝欠失、肝臓炎症、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、血小板減少症、非アルコール性脂肪肝疾患、ウィルソン病、チロシン血症１型、アルギニノコハク酸リアーゼ欠損症、ヘモクロマトーシスＩ型、アルストレーム症候群、先天性の胆汁酸合成欠損症１、脂肪性肝炎、インシュリン抵抗性、耐糖能障害、ＩＩ型糖尿病、あるいは肝臓癌である。
【０００７】
１つの態様において、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体）を有している細胞によって、標的タンパク質の発現を増加させる方法が本明細書で提供され、該ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含み、ここで、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は標的タンパク質をコードし、該方法は、細胞を、標的タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的なアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）と接触させる工程を含み、それによって、保持されたイントロンは、標的タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体から構成的にスプライシングされ、それにより、細胞内で標的タンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルを増加させ、標的タンパク質の発現を増加させ、ここで、標的タンパク質は、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲン・オキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソバレリルCoA脱水素酵素、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジリルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝性核因子−１−アルファアルブミン近位因子、Ｏグルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子ベータ−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１，３−β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体デルタ、インターロイキン６、セラミド合成酵素２、あるいは核受容体コアクチベーター５である。
【０００８】
いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲン・オキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソバレリルＣｏＡ脱水素酵素、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジリルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝性核因子−１−アルファアルブミン近位因子、タンパク質Ｏグルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子ベータ−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１，３−β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体デルタ、インターロイキン６、セラミド合成酵素２、あるいは核受容体コアクチベーター５である。
【０００９】
いくつかの実施形態において、標的タンパク質または機能的ＲＮＡは、被験体において量あるいは活性が不足している標的タンパク質あるいは機能的ＲＮＡを機能的に増大させるか、これに取って代わる、補償タンパク質あるいは補償機能的ＲＮＡである。
【００１０】
いくつかの実施形態では、細胞は、標的タンパク質の量または活性の不足によって引き起こされた疾病を有する被験体内にあるか、または被験体に由来する。
【００１１】
いくつかの実施形態では、標的タンパク質の量の不足は、標的タンパク質のハプロ不全によって引き起こされ、ここで被験体は、機能的な標的タンパク質をコードする第１の対立遺伝子、標的タンパク質が産生されない第２の対立遺伝子、または非機能的な標的タンパク質をコードする第２の対立遺伝子を有し、アンチセンスオリゴマーは、第１の対立遺伝子から転写されたＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に結合する。
【００１２】
いくつかの実施形態において、被験体は、標的タンパク質の量または機能の不足に起因する障害により引き起こされた疾病を抱えており、ここで、被験体は、標的タンパク質が野生型対立遺伝子からの生成と比較して、減少したレベルで生成され、標的タンパク質が同等の野性型タンパク質と比較して機能が低下した形態で生成され、あるいは、標的タンパク質が生成されない、第１の変異対立遺伝子と、および、標的タンパク質が野生型対立遺伝子からの生成と比較して、減少したレベルで生成され、標的タンパク質が同等の野性型タンパク質と比較して、機能が低下した形態で生成され、あるいは、標的タンパク質が生成されない、第２の変異対立遺伝子とを有し、ここで、被験体が第１の変異対立遺伝子（ａ）（ｉｉｉ）を有するとき、第２の変異対立遺伝子は（ｂ）（ｉ）あるいは（ｂ）（ｉｉ）であり、ここで、被験体が第２の変異対立遺伝子（ｂ）（ｉｉｉ）を有するとき、第１の変異対立遺伝子は（ａ）（ｉ）あるいは（ａ）（ｉｉ）であり、ここで、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）（ｉ）あるいは（ａ）（ｉｉ）である第１の変異対立遺伝子、および／または、（ｂ）（ｉ）あるいは（ｂ）（ｉｉ）である第２の変異対立遺伝子から転写される。
【００１３】
いくつかの実施形態において、標的タンパク質は、同等の野性型タンパク質と比較して、機能が低下した形態で生成される。
【００１４】
いくつかの実施形態において、標的タンパク質は、同等の野性型タンパク質と比較して、十分に機能的な形態で生成される。
【００１５】
いくつかの実施形態において、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋６〜保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−１６までの領域内の保持されたイントロンにある。
【００１６】
いくつかの実施形態において、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋６９〜保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−７９までの領域内の保持されたイントロンにある。
【００１７】
いくつかの実施形態において、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、以下の内部の保持されたイントロンにある：保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する、＋６から＋１００の領域；あるいは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対する、−１６から−１００の領域。
【００１８】
いくつかの実施形態において、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、以下の内部にある：保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ〜−４ｅの領域；あるいは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ〜−４ｅの領域。
【００１９】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイントロンの５’スプライス部位の約５００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持されたイントロンの３’スプライス部位の約５００ヌクレオチド上流までの領域内にあるＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする。
【００２０】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイントロンの５’スプライス部位の約１００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持されたイントロンの３’スプライス部位の約１００ヌクレオチド上流までの領域内にあるＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする。
【００２１】
いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、（ａ）ＡＭＴ、（ｂ）ＡＤＡ、（ｃ）ＰＰＯＸ、（ｄ）ＵＲＯＤ、（ｅ）ＨＭＢＳ、（ｆ）ＡＣＡＤＶＬ、（ｇ）ＰＣ、（ｈ）ＩＶＤ、（ｉ）ＡＰＯＡ５、（ｊ）ＧＡＬＴ、（ｋ）ＬＤＬＲＡＰ１、（ｌ）ＨＮＦ４Ａ、（ｍ）ＧＣＫ、（ｎ）ＰＯＧＬＵＴ１、（ｏ）ＰＩＫ３Ｒ１、（ｐ）ＨＮＦ１Ａ、（ｑ）ＴＲＩＢ１、（ｒ）ＴＧＦＢ１、（ｓ）ＨＡＭＰ、（ｔ）ＴＨＰＯ、（ｕ）ＰＮＰＬＡ３、（ｖ）ＡＴＰ７Ｂ、（ｗ）ＦＡＨ、（ｘ）ＡＳＬ、（ｙ）ＨＦＥ、（ｚ）ＡＬＭＳ１、（ａａ）ＰＰＡＲＤ、（ｂｂ）ＩＬ６、（ｃｃ）ＨＳＤ３Ｂ７、（ｄｄ）ＣＥＲＳ２、または（ｅｅ）ＮＣＯＡ５である。
【００２２】
いくつかの実施形態では、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ２８１３−３９１０のいずれか１つ、（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６５８４７−６７２８１のいずれか１つ、（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １９００−２５９９のいずれか１つ、（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９２６−１７７９のいずれか１つ、（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３７４８３−３８０４４のいずれか１つ、（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４９４２３−４９９６９のいずれか１つ、（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３５９００−３６２９２のいずれか１つ、（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４４６２６−４７０１３のいずれか１つ、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３６２９３−３７４８２のいずれか１つ、（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３４５２１−３５８９９のいずれか１つ、（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １３１−９２５のいずれか１つ、（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５８９５８−６５８４６、あるいは６７５３２−７７３７４のいずれか１つ、（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２５０５８−３０９７６のいずれか１つ、（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３９１１−５２６４のいずれか１つ、（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４４７３−１４８７６のいずれか１つ、（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３８０４５−４２１０５のいずれか１つ、（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３２４６９−３４５２０のいずれか１つ、（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５１９７２−５２０２５のいずれか１つ、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５１６７０−５１９７１のいずれか１つ、（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５２６５−１４４７２のいずれか１つ、（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７７３７５−７８３４８のいずれか１つ、（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４２１０６−４４３７０のいずれか１つ、（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４４３７１−４４６２５のいずれか１つ、（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３０９７７−３２４６８のいずれか１つ、（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２１８１０−２３４８５のいずれか１つ、（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２６００−２８１２のいずれか１つ、（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４８７７−２１８０９のいずれか１つ、（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２３４８６−２５０５７のいずれか１つ、（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４７０１４−４９４２２のいずれか１つ、（ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １７８０−１８９９のいずれか１つ、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６７２８２−６７５３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または１００％相補的な配列を含む。
【００２３】
いくつかの実施形態では、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４８３、７８４６５、または７８４３４；（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３８５、７８４８２、または７８３６９；（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４６１、７８４７３、７８４８０、または７８４２１；（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４１０、７８３８６、７８４１１、７８４６０、または７８４６３；（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３５５、７８４６７、または７８４５４；（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３６７、７８３７６、７８４４０、７８４４８、７８４７７、７８４８５、７８４９６、７８４２２、または７８４１２；（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４９５、（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４６４、７８３７５、または７８３８０；（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４０７、７８４９９、７８４２０、７８３７２、または７８３９７；（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４８９、７８４１６、７８４７６、７８３５２、７８４３５、７８４９３、７８４２３、７８４３７、または７８４４９；（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３５４、または７８４５９；（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４４１、７８３９２、７８４５６、７８４２８、７８４９１、７８５０１、７８３６０、７８４２９、７８３５８、７８３６４、７８４７５、７８３９１、７８４７９、７８４０１、７８３７３、または７８４５０；（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４４５、７８４８１、７８３７９、７８４３１、７８４６９、７８４０８、７８３７７、７８４１７、７８３８７、７８４５５、７８４８４、または７８３７０；（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３６８、７８３５０、７８４３２、７８４３９、または７８３８９；（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３９０、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４１８、（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４６２、７８４６８、７８４５３、７８３６１、７８３６３、７８４３３、７８４３８、７８４３０、７８４８８、７８４０５、７８４９２、または７８４２７；（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４８７、７８４８６、または７８４７４；（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４５８、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４９７、または７８４２６；（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４２５、７８４００、７８３９３、７８３５１、７８３８１、７８３６６、７８４５７、７８４４３、７８３６２、または７８４４６；（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３８８、７８４０２、７８４７１、または７８３５６；（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４２７、７８３８３、７８４４４、または７８３９４；（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３８２；（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４９４、７８４０４、７８３７１、７８３６５、または７８３５３；（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４１９、７８３８４、７８５００、７８４２４、または７８４６６；（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３９９、（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４１４、７８４７８、７８４７２、７８３５９、７８３９５、７８３５７、７８３７４、または７８４９０；（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４３６、７８４１３、７８４１５、７８３９８、または７８４０３；（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３４９、７８４７０、７８４９８、７８４０６、７８４４２、７８４５１、７８３９６、７８４���９、または７８３７８；（ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４４７；またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４５２の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む。
【００２４】
いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ２８１３−３９１０のいずれか１つ、（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６５８４７−６７２８１のいずれか１つ、（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １９００−２５９９のいずれか１つ、（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９２６−１７７９のいずれか１つ、（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３７４８３−３８０４４のいずれか１つ、（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４９４２３−４９９６９のいずれか１つ、（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３５９００−３６２９２のいずれか１つ、（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４４６２６−４７０１３のいずれか１つ、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３６２９３−３７４８２のいずれか１つ、（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３４５２１−３５８９９のいずれか１つ、（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １３１−９２５のいずれか１つ、（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５８９５８−６５８４６、あるいは６７５３２−７７３７４のいずれか１つ、（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２５０５８−３０９７６のいずれか１つ、（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３９１１−５２６４のいずれか１つ、（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４４７３−１４８７６のいずれか１つ、（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３８０４５−４２１０５のいずれか１つ、（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３２４６９−３４５２０のいずれか１つ、（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５１９７２−５２０２５のいずれか１つ、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５１６７０−５１９７１のいずれか１つ、（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５２６５−１４４７２のいずれか１つ、（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７７３７５−７８３４８のいずれか１つ、（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４２１０６−４４３７０のいずれか１つ、（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４４３７１−４４６２５のいずれか１つ、（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３０９７７−３２４６８のいずれか１つ、（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２１８１０−２３４８５のいずれか１つ、（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２６００−２８１２のいずれか１つ、（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４８７７−２１８０９のいずれか１つ、（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２３４８６−２５０５７のいずれか１つ、（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４７０１４−４９４２２のいずれか１つ、（ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １７８０−１８９９のいずれか１つ、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６７２８２−６７５３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む。
【００２５】
いくつかの実施形態では、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４１−４４、（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２８  １２１−１２４、（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ３７または３８、（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ３３または３４、（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９２−９５、（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０９−１１２、（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８７−８９、（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０４または１０５、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９０または９１、（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８５または８６、（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３２、（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １１５−１２０、あるいは１２６−１２９、（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７６−７８、（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４５または４６、（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５７−６０、（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９６または９７、（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８３または８４、（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １１４、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２２３、（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４７−５６、（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １３０、（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９８−１０２、（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０３、（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８０−８２、（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６６−７３、（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３９、（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６１−６５、（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７４または７５、（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０６−１０８、（ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３５または３６、あるいはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １２５のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む。
【００２６】
いくつかの実施形態では、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６、（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２８、（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４、（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２、（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １９、（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２５、（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １７、（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２３、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １８、（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １６、（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １、（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３０、（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １３、（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７、（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９、（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２０、（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １５、（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２７、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２６、（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８、（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３１、（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２１、（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２２、（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４、（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １１、（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５、（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０、（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １２、（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２４、（ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３、または（ｅｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２９に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた遺伝子配列によってコードされる。
【００２７】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、機能的ＲＮＡまたは標的タンパク質をコードする遺伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングを調節することにより、標的タンパク質または機能的ＲＮＡの量を増加させない。
【００２８】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子の突然変異に起因する異常なスプライシングを調節することにより、標的タンパク質または機能的ＲＮＡの量を増加させない。
【００２９】
いくつかの実施形態において、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、全長のｍＲＮＡ前駆体の部分的なスプライシング、または野生型のｍＲＮＡ前駆体の部分的なスプライシングによって生成された。
【００３０】
いくつかの実施形態において、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡは、全長の成熟ｍＲＮＡ、あるいは野生型の成熟ｍＲＮＡである。
【００３１】
いくつかの実施形態において、生成された標的タンパク質は全長のタンパク質あるいは野生型のタンパク質である。
【００３２】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーと接触させた細胞において生成された標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡの総量は、対照細胞において生成された標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡの総量と比較して、約１．１〜約１０倍、約１．５〜約１０倍、約２〜約１０倍、約３〜約１０倍、約４〜約１０倍、約１．１〜約５倍、約１．１〜約６倍、約１．１〜約７倍、約１．１〜約８倍、約１．１〜約９倍、約２〜約５倍、約２〜約６倍、約２〜約７倍、約２〜約８倍、約２〜約９倍、約３〜約６倍、約３〜約７倍、約３〜約８倍、約３〜約９倍、約４〜約７倍、約４〜約８倍、約４〜約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、あるいは少なくとも約１０倍増加する。
【００３３】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーと接触させた細胞によって生成された標的タンパク質の総量は、対照細胞によって生成された標的タンパク質の総量と比較して、約１．１〜約１０倍、約１．５〜約１０倍、約２〜約１０倍、約３〜約１０倍、約４〜約１０倍、約１．１〜約５倍、約１．１〜約６倍、約１．１〜約７倍、約１．１〜約８倍、約１．１〜約９倍、約２〜約５倍、約２〜約６倍、約２〜約７倍、約２〜約８倍、約２〜約９倍、約３〜約６倍、約３〜約７倍、約３〜約８倍、約３〜約９倍、約４〜約７倍、約４〜約８倍、約４〜約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、あるいは少なくとも約１０倍増加する。
【００３４】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホスホロジアミデート結合を含む骨格修飾を含む。
【００３５】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーはホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチド核酸、２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ、あるいは２’−Ｏ−メトキシエチル部分を含む。
【００３６】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは少なくとも１つの修飾された糖部を含む。
【００３７】
いくつかの実施形態において、それぞれの糖部は修飾された糖部である。
【００３８】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、８〜５０の核酸塩基、８〜４０の核酸塩基、８〜３５の核酸塩基、８〜３０の核酸塩基、８〜２５の核酸塩基、８〜２０の核酸塩基、８〜１５の核酸塩基、９〜５０の核酸塩基、９〜４０の核酸塩基、９〜３５の核酸塩基、９〜３０の核酸塩基、９〜２５の核酸塩基、９〜２０の核酸塩基、９〜１５の核酸塩基、１０〜５０の核酸塩基、１０〜４０の核酸塩基、１０〜３５の核酸塩基、１０〜３０の核酸塩基、１０〜２５の核酸塩基、１０〜２０の核酸塩基、１０〜１５の核酸塩基、１１〜５０の核酸塩基、１１〜４０の核酸塩基、１１〜３５の核酸塩基、１１〜３０の核酸塩基、１１〜２５の核酸塩基、１１〜２０の核酸塩基、１１〜１５の核酸塩基、１２〜５０の核酸塩基、１２〜４０の核酸塩基、１２〜３５の核酸塩基、１２〜３０の核酸塩基、１２〜２５の核酸塩基、１２〜２０の核酸塩基、あるいは１２〜１５の核酸塩基からなる。
【００３９】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、あるいは１００％相補的である。
【００４０】
いくつかの実施形態において、細胞は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子から転写されたＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団を含み、ここで、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団は２つ以上の保持されたイントロンを含み、および、ここで、アンチセンスオリゴマーは、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団で最も豊富な保持されたイントロンに結合する。
【００４１】
いくつかの実施形態において、最も豊富な保持されたイントロンに対するアンチセンスオリゴマーの結合は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡを生成するＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団からの２つ以上の保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する。
【００４２】
いくつかの実施形態において、細胞は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子から転写されたＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団を含み、ここで、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団は２つ以上の保持されたイントロンを含み、および、ここで、アンチセンスオリゴマーは、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団で２番目に豊富な保持されたイントロンに結合する。
【００４３】
いくつかの実施形態において、２番目に豊富な保持されたイントロンに対するアンチセンスオリゴマーの結合は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡを生成するＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団からの２つ以上の保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する。
【００４４】
いくつかの実施形態では、疾病は疾患または障害である。
【００４５】
いくつかの実施形態において、疾患または障害は肝臓病である。
【００４６】
いくつかの実施形態において、肝臓病は、グリシン脳症、ツェルヴェーガー症候群、ハイムラー（Ｈｅｉｍｌｅｒ）症候群、アデノシンデアミナーゼ欠損症、異型ポルフィリン症、晩発性皮膚ポルフィリン症、急性間欠性ポルフィリン症、超長鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠損症、イソ吉草酸血症、高カイロミクロン血症、高トリグリセリド血症、ガラクトース血症、高コレステロール血症、若年発症成人型１型糖尿病、若年発症成人型２型糖尿病、若年発症成人型３型糖尿病、非インスリン依存型糖尿病、インスリン依存性糖尿病１、インスリン依存性糖尿病２０、若年発症成人型糖尿病を伴うファンコーニ尿細管症候群４（Ｆａｌｃｏｎｉ  ｒｅｎｏｔｕｂｕｌａｒ  ｓｙｍｄｒｏｍｅ）、家族性高インスリン低血糖症３、永続的な新生児糖尿病、肝腺腫、ダウリング・デゴス病４、ＳＨＯＲＴ症候群、免疫不全症３６、無ガンマグロブリン血症７、脂質代謝欠失、肝臓炎症、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、血小板減少症、非アルコール性脂肪肝疾患、ウィルソン病、チロシン血症１型、アルギニノコハク酸リアーゼ欠損症、ヘモクロマトーシスＩ型、アルストレーム症候群、先天性の胆汁酸合成欠損症１、脂肪性肝炎、インシュリン抵抗性、耐糖能障害、ＩＩ型糖尿病、あるいは肝臓癌である。
【００４７】
いくつかの実施形態では、標的タンパク質およびＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は遺伝子によってコードされ、遺伝子は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５が挙げられる。
【００４８】
いくつかの実施形態において、当該方法はタンパク質発現を評価する工程をさらに含む。
【００４９】
いくつかの実施形態では、被験体はヒトである。
【００５０】
いくつかの実施形態では、被験体はヒト以外の動物である。
【００５１】
いくつかの実施形態において、被験体は胎児、胚、あるいは子供である。
【００５２】
いくつかの実施形態では、細胞はエクスビボである。
【００５３】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、被験体の腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、あるいは静脈内注射によって投与される。
【００５４】
いくつかの実施形態において、５’スプライス部位に隣接するエクソンの−３ｅ〜−１ｅと、保持されたイントロンの＋１〜＋６にある９つのヌクレオチドは、対応する野性型配列と同一である。
【００５５】
いくつかの実施形態において、保持されたイントロンの−１５〜−１と３’スプライス部位に隣接するエクソンの＋１ｅにある１６のヌクレオチドは、対応する野性型配列と同一である。
【００５６】
１つの態様では、本明細書に記載された方法で使用されるようなアンチセンスオリゴマーが本明細書で提供される。
【００５７】
１つの態様では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１−７８３４８のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含むアンチセンスオリゴマーが本明細書で提供される。
【００５８】
１つの態様では、本明細書に記載されたアンチセンスオリゴマーと賦形剤を含む医薬組成物が本明細書に提供される。
【００５９】
１つの態様では、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、あるいは静脈内注射によって本明細書に記載された医薬組成物を投与することにより、被験体を処置する方法が本明細書に提供される。
【００６０】
１つの態様において、本明細書には、不足しているタンパク質または不足している機能的ＲＮＡに関連付けられる被験体の肝臓病を処置するために細胞によって標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現を増加させる方法で使用するためのアンチセンスオリゴマーを含む組成物が開示され、ここで、不足しているタンパク質または機能的ＲＮＡは、被験体において量あるいは活性が不足しており、ここで、アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体）の構成的のスプライシングを増強し、ここで、標的タンパク質は：不足しているタンパク質；あるいは、被験体において不足しているタンパク質を機能的に増大させるか、これに取って代わる、補償タンパク質であり、ここで、機能的ＲＮＡは：不足しているＲＮＡ；あるいは、被験体の不足している機能的ＲＮＡを機能的に増大させるか、これに取って代わる、補償機能的ＲＮＡであり、ここでＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含み、保持されたイントロンは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体からスプライシングされ、それによって、被験体において標的タンパク質または機能的ＲＮＡの産生または活性を増加させる。
【００６１】
いくつかの実施形態において、肝臓病は、グリシン脳症、ツェルヴェーガー症候群、ハイムラー（Ｈｅｉｍｌｅｒ）症候群、アデノシンデアミナーゼ欠損症、異型ポルフィリン症、晩発性皮膚ポルフィリン症、急性間欠性ポルフィリン症、超長鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠損症、イソ吉草酸血症、高カイロミクロン血症、高トリグリセリド血症、ガラクトース血症、高コレステロール血症、若年発症成人型１型糖尿病、若年発症成人型２型糖尿病、若年発症成人型３型糖尿病、非インスリン依存型糖尿病、インスリン依存性糖尿病１、インスリン依存性糖尿病２０、若年発症成人型糖尿病を伴うファンコーニ尿細管症候群４（Ｆａｌｃｏｎｉ  ｒｅｎｏｔｕｂｕｌａｒ  ｓｙｍｄｒｏｍｅ）、家族性高インスリン低血糖症３、永続的な新生児糖尿病、肝腺腫、ダウリング・デゴス病４、ＳＨＯＲＴ症候群、免疫不全症３６、無ガンマグロブリン血症７、脂質代謝欠失、肝臓炎症、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、血小板減少症、非アルコール性脂肪肝疾患、ウィルソン病、チロシン血症１型、アルギニノコハク酸リアーゼ欠損症、ヘモクロマトーシスＩ型、アルストレーム症候群、先天性の胆汁酸合成欠損症１、脂肪性肝炎、インシュリン抵抗性、耐糖能障害、ＩＩ型糖尿病、あるいは肝臓癌である。
【００６２】
１つの態様において、被験体において標的タンパク質に関係する疾病を処置する方法に使用するためのアンチセンスオリゴマーを含む組成物が本明細書で提供され、該方法は、被験体の細胞によって標的タンパク質の発現を増加させる工程を含み、ここで、細胞は、保持されたイントロン、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含む、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体）を有し、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、標的タンパク質をコードし、該方法は、細胞をアンチセンスオリゴマーと接触させる工程を含み、それによって、保持されたイントロンは、標的タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の転写産物から構成的にスプライシングされ、それにより、被験体の細胞内で、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡのレベルを増加させ、標的タンパク質の発現を増加させる。
【００６３】
いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲン・オキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソバレリルＣｏＡ脱水素酵素、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジリルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝性核因子−１−アルファアルブミン近位因子、タンパク質Ｏグルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子ベータ−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１，３−β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体デルタ、インターロイキン６、セラミド合成酵素２、あるいは核受容体コアクチベーター５である。
【００６４】
いくつかの実施形態では、疾病は疾患または障害である。
【００６５】
いくつかの実施形態において、疾患または障害は肝臓病である。
【００６６】
いくつかの実施形態において、肝臓病は、グリシン脳症、ツェルヴェーガー症候群、ハイムラー（Ｈｅｉｍｌｅｒ）症候群、アデノシンデアミナーゼ欠損症、異型ポルフィリン症、晩発性皮膚ポルフィリン症、急性間欠性ポルフィリン症、超長鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠損症、イソ吉草酸血症、高カイロミクロン血症、高トリグリセリド血症、ガラクトース血症、高コレステロール血症、若年発症成人型１型糖尿病、若年発症成人型２型糖尿病、若年発症成人型３型糖尿病、非インスリン依存型糖尿病、インスリン依存性糖尿病１、インスリン依存性糖尿病２０、若年発症成人型糖尿病を伴うファンコーニ尿細管症候群４（Ｆａｌｃｏｎｉ  ｒｅｎｏｔｕｂｕｌａｒ  ｓｙｍｄｒｏｍｅ）、家族性高インスリン低血糖症３、永続的な新生児糖尿病、肝腺腫、ダウリング・デゴス病４、ＳＨＯＲＴ症候群、免疫不全症３６、無ガンマグロブリン血症７、脂質代謝欠失、肝臓炎症、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、血小板減少症、非アルコール性脂肪肝疾患、ウィルソン病、チロシン血症１型、アルギニノコハク酸リアーゼ欠損症、ヘモクロマトーシスＩ型、アルストレーム症候群、先天性の胆汁酸合成欠損症１、脂肪性肝炎、インシュリン抵抗性、耐糖能障害、ＩＩ型糖尿病、あるいは肝臓癌である。
【００６７】
いくつかの実施形態では、標的タンパク質およびＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は遺伝子によってコードされ、遺伝子は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５が挙げられる。
【００６８】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋６から、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−１６までの領域内の保持されたイントロンにあるＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする。
【００６９】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーはＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とし、これは、以下の内部の保持されたイントロンにある：保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する、＋６から＋１００の領域；あるいは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対する−１６から−１００の領域。
【００７０】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイントロンの５’スプライス部位の約５００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持されたイントロンの３’スプライス部位の約５００ヌクレオチド上流までの領域内にあるＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする。
【００７１】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイントロンの５’スプライス部位の約１００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持されたイントロンの３’スプライス部位の約１００ヌクレオチド上流までの領域内にあるＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする。
【００７２】
いくつかの実施形態において、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、以下の内部にある：保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ〜−４ｅの領域；あるいは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ〜−４ｅの領域。
【００７３】
いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、（ａ）ＡＭＴ、（ｂ）ＡＤＡ、（ｃ）ＰＰＯＸ、（ｄ）ＵＲＯＤ、（ｅ）ＨＭＢＳ、（ｆ）ＡＣＡＤＶＬ、（ｇ）ＰＣ、（ｈ）ＩＶＤ、（ｉ）ＡＰＯＡ５、（ｊ）ＧＡＬＴ、（ｋ）ＬＤＬＲＡＰ１、（ｌ）ＨＮＦ４Ａ、（ｍ）ＧＣＫ、（ｎ）ＰＯＧＬＵＴ１、（ｏ）ＰＩＫ３Ｒ１、（ｐ）ＨＮＦ１Ａ、（ｑ）ＴＲＩＢ１、（ｒ）ＴＧＦＢ１、（ｓ）ＨＡＭＰ、（ｔ）ＴＨＰＯ、（ｕ）ＰＮＰＬＡ３、（ｖ）ＡＴＰ７Ｂ、（ｗ）ＦＡＨ、（ｘ）ＡＳＬ、（ｙ）ＨＦＥ、（ｚ）ＡＬＭＳ１、（ａａ）ＰＰＡＲＤ、（ｂｂ）ＩＬ６、（ｃｃ）ＨＳＤ３Ｂ７、（ｄｄ）ＣＥＲＳ２、または（ｅｅ）ＮＣＯＡ５である。
【００７４】
いくつかの実施形態において、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ２８１３−３９１０のいずれか１つ、（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６５８４７−６７２８１のいずれか１つ、（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １９００−２５９９のいずれか１つ、（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９２６−１７７９のいずれか１つ、（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３７４８３−３８０４４のいずれか１つ、（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４９４２３−４９９６９のいずれか１つ、（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３５９００−３６２９２のいずれか１つ、（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４４６２６−４７０１３のいずれか１つ、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３６２９３−３７４８２のいずれか１つ、（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３４５２１−３５８９９のいずれか１つ、（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １３１−９２５のいずれか１つ、（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５８９５８−６５８４６、あるいは６７５３２−７７３７４のいずれか１つ、（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２５０５８−３０９７６のいずれか１つ、（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３９１１−５２６４のいずれか１つ、（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４４７３−１４８７６のいずれか１つ、（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３８０４５−４２１０５のいずれか１つ、（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３２４６９−３４５２０のいずれか１つ、（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５１９７２−５２０２５のいずれか１つ、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５１６７０−５１９７１のいずれか１つ、（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５２６５−１４４７２のいずれか１つ、（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７７３７５−７８３４８のいずれか１つ、（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４２１０６−４４３７０のいずれか１つ、（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４４３７１−４４６２５のいずれか１つ、（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３０９７７−３２４６８のいずれか１つ、（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２１８１０−２３４８５のいずれか１つ、（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２６００−２８１２のいずれか１つ、（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４８７７−２１８０９のいずれか１つ、（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２３４８６−２５０５７のいずれか１つ、（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４７０１４−４９４２２のいずれか１つ、（ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １７８０−１８９９のいずれか１つ、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６７２８２−６７５３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％相補的な配列を含む。
【００７５】
いくつかの実施形態では、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４８３、７８４６５、または７８４３４；（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３８５、７８４８２、または７８３６９；（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４６１、７８４７３、７８４８０、または７８４２１；（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４１０、７８３８６、７８４１１、７８４６０、または７８４６３；（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３５５、７８４６７、または７８４５４；（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３６７、７８３７６、７８４４０、７８４４８、７８４７７、７８４８５、７８４９６、７８４２２、または７８４１２；（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４９５、（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４６４、７８３７５、または７８３８０；（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４０７、７８４９９、７８４２０、７８３７２、または７８３９７；（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４８９、７８４１６、７８４７６、７８３５２、７８４３５、７８４９３、７８４２３、７８４３７、または７８４４９；（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３５４、または７８４５９；（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４４１、７８３９２、７８４５６、７８４２８、７８４９１、７８５０１、７８３６０、７８４２９、７８３５８、７８３６４、７８４７５、７８３９１、７８４７９、７８４０１、７８３７３、または７８４５０；（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４４５、７８４８１、７８３７９、７８４３１、７８４６９、７８４０８、７８３７７、７８４１７、７８３８７、７８４５５、７８４８４、または７８３７０；（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３６８、７８３５０、７８４３２、７８４３９、または７８３８９；（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３９０、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４１８、（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４６２、７８４６８、７８４５３、７８３６１、７８３６３、７８４３３、７８４３８、７８４３０、７８４８８、７８４０５、７８４９２、または７８４２７；（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４８７、７８４８６、または７８４７４；（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４５８、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４９７、または７８４２６；（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４２５、７８４００、７８３９３、７８３５１、７８３８１、７８３６６、７８４５７、７８４４３、７８３６２、または７８４４６；（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３８８、７８４０２、７８４７１、または７８３５６；（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４２７、７８３８３、７８４４４、または７８３９４；（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３８２；（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４９４、７８４０４、７８３７１、７８３６５、または７８３５３；（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４１９、７８３８４、７８５００、７８４２４、または７８４６６；（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３９９、（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４１４、７８４７８、７８４７２、７８３５９、７８３９５、７８３５７、７８３７４、または７８４９０；（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４３６、７８４１３、７８４１５、７８３９８、または７８４０３；（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８３４９、７８４７０、７８４９８、７８４０６、７８４４２、７８４５１、７８３９６、７８４���９、または７８３７８；（ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４４７；またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７８４５２の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む。
【００７６】
いくつかの実施形態において、ＡＳＯは、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ２８１３−３９１０のいずれか１つ、（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６５８４７−６７２８１のいずれか１つ、（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １９００−２５９９のいずれか１つ、（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９２６−１７７９のいずれか１つ、（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３７４８３−３８０４４のいずれか１つ、（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４９４２３−４９９６９のいずれか１つ、（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３５９００−３６２９２のいずれか１つ、（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４４６２６−４７０１３のいずれか１つ、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３６２９３−３７４８２のいずれか１つ、（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３４５２１−３５８９９のいずれか１つ、（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １３１−９２５のいずれか１つ、（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５８９５８−６５８４６、あるいは６７５３２−７７３７４のいずれか１つ、（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２５０５８−３０９７６のいずれか１つ、（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３９１１−５２６４のいずれか１つ、（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４４７３−１４８７６のいずれか１つ、（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３８０４５−４２１０５のいずれか１つ、（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３２４６９−３４５２０のいずれか１つ、（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５１９７２−５２０２５のいずれか１つ、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５１６７０−５１９７１のいずれか１つ、（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５２６５−１４４７２のいずれか１つ、（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７７３７５−７８３４８のいずれか１つ、（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４２１０６−４４３７０のいずれか１つ、（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４４３７１−４４６２５のいずれか１つ、（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３０９７７−３２４６８のいずれか１つ、（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２１８１０−２３４８５のいずれか１つ、（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２６００−２８１２のいずれか１つ、（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４８７７−２１８０９のいずれか１つ、（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２３４８６−２５０５７のいずれか１つ、（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４７０１４−４９４２２のいずれか１つ、（ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １７８０−１８９９のいずれか１つ、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６７２８２−６７５３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む。
【００７７】
いくつかの実施形態では、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４１−４４、（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２８  １２１−１２４、（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ３７または３８、（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ３３または３４、（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９２−９５、（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０９−１１２、（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８７−８９、（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０４または１０５、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９０または９１、（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８５または８６、（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３２、（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １１５−１２０、あるいは１２６−１２９、（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７６−７８、（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４５または４６、（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５７−６０、（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９６または９７、（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８３または８４、（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １１４、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２２３、（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４７−５６、（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １３０、（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９８−１０２、（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０３、（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８０−８２、（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６６−７３、（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３９、（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６１−６５、（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７４または７５、（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０６−１０８、（ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３５または３６、あるいはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １２５のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む。
【００７８】
いくつかの実施形態では、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ６、（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２８、（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ４、（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２、（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １９、（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２５、（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １７、（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２３、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １８、（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １６、（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １、（ｌ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３０、（ｍ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １３、（ｎ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ７、（ｏ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ９、（ｐ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２０、（ｑ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １５、（ｒ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２７、（ｓ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２６、（ｔ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ８、（ｕ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３１、（ｖ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２１、（ｗ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２２、（ｘ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １４、（ｙ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １１、（ｚ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ５、（ａａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １０、（ｂｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  １２、（ｃｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２４、（ｄｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ３、または（ｅｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ  ２９に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた遺伝子配列によってコードされる。
【００７９】
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングを調節することにより標的タンパク質または機能的ＲＮＡの量を増加させない。
【００８０】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子の突然変異に起因する異常なスプライシングを調節することにより、機能的ＲＮＡまたは機能的タンパク質の量を増加させない。
【００８１】
いくつかの実施形態において、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、全長のｍＲＮＡ前駆体、または野生型のｍＲＮＡ前駆体の部分的なスプライシングによって生成された。
【００８２】
いくつかの実施形態において、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡは、全長の成熟ｍＲＮＡ、あるいは野生型の成熟ｍＲＮＡである。
【００８３】
いくつかの実施形態において、生成された標的タンパク質は全長のタンパク質あるいは野生型のタンパク質である。
【００８４】
いくつかの実施形態において、保持されたイントロンは律速イントロンである。
【００８５】
いくつかの実施形態において、前記保持されたイントロンは前記ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体で最も豊富な保持されたイントロンである。
【００８６】
いくつかの実施形態において、保持されたイントロンは前記ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体で２番目に豊富な保持されたイントロンである。
【００８７】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホスホロジアミデート結合を含む骨格修飾を含む。
【００８８】
いくつかの実施形態では、前記アンチセンスオリゴマーはアンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【００８９】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーはホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチド核酸、２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ、あるいは２’−Ｏ−メトキシエチル部分を含む。
【００９０】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは少なくとも１つの修飾された糖部を含む。
【００９１】
いくつかの実施形態において、それぞれの糖部は修飾された糖部である。
【００９２】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、８〜５０の核酸塩基、８〜４０の核酸塩基、８〜３５の核酸塩基、８〜３０の核酸塩基、８〜２５の核酸塩基、８〜２０の核酸塩基、８〜１５の核酸塩基、９〜５０の核酸塩基、９〜４０の核酸塩基、９〜３５の核酸塩基、９〜３０の核酸塩基、９〜２５の核酸塩基、９〜２０の核酸塩基、９〜１５の核酸塩基、１０〜５０の核酸塩基、１０〜４０の核酸塩基、１０〜３５の核酸塩基、１０〜３０の核酸塩基、１０〜２５の核酸塩基、１０〜２０の核酸塩基、１０〜１５の核酸塩基、１１〜５０の核酸塩基、１１〜４０の核酸塩基、１１〜３５の核酸塩基、１１〜３０の核酸塩基、１１〜２５の核酸塩基、１１〜２０の核酸塩基、１１〜１５の核酸塩基、１２〜５０の核酸塩基、１２〜４０の核酸塩基、１２〜３５の核酸塩基、１２〜３０の核酸塩基、１２〜２５の核酸塩基、１２〜２０の核酸塩基、あるいは１２〜１５の核酸塩基からなる。
【００９３】
いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、あるいは１００％相補的である。
【００９４】
１つの態様では、本明細書に記載された組成物のいずれかのアンチセンスオリゴマーと賦形剤を含む医薬組成物が本明細書に提供される。
【００９５】
１つの態様では、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、あるいは静脈内注射によって本明細書に記載された医薬組成物を投与することにより、被験体を処置する方法が本明細書に提供される。
【００９６】
１つの態様において、以下を含む医薬組成物が本明細書で提供される：不足しているＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするアンチセンスオリゴマーであって、不足しているＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５ｍＲＮＡ転写産物が、保持されたイントロンを含み、アンチセンスオリゴマーが、不足しているＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５転写産物から保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する、アンチセンスオリゴマーと、薬学的に許容可能な賦形剤。
【００９７】
いくつかの実施形態において、不足しているＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡ転写産物は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体転写産物である。
【００９８】
いくつかの実施形態において、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体転写産物の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋５００〜保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−５００の領域内で保持されたイントロン中にある。
【００９９】
幾つかの実施形態では、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する遺伝子配列によってコードされる。
【０１００】
幾つかの実施形態では、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２−１３０のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する配列を含む。
【０１０１】
幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホスホロジアミデート結合を含む骨格修飾を含む。
【０１０２】
幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【０１０３】
幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、ホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチド核酸、２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ、または２’−Ｏ−メトキシエチル部分を含む。
【０１０４】
幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの修飾された糖部を含む。
【０１０５】
幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、８〜５０の核酸塩基、８〜４０の核酸塩基、８〜３５の核酸塩基、８〜３０の核酸塩基、８〜２５の核酸塩基、８〜２０の核酸塩基、８〜１５の核酸塩基、９〜５０の核酸塩基、９〜４０の核酸塩基、９〜３５の核酸塩基、９〜３０の核酸塩基、９〜２５の核酸塩基、９〜２０の核酸塩基、９〜１５の核酸塩基、１０〜５０の核酸塩基、１０〜４０の核酸塩基、１０〜３５の核酸塩基、１０〜３０の核酸塩基、１０〜２５の核酸塩基、１０〜２０の核酸塩基、１０〜１５の核酸塩基、１１〜５０の核酸塩基、１１〜４０の核酸塩基、１１〜３５の核酸塩基、１１〜３０の核酸塩基、１１〜２５の核酸塩基、１１〜２０の核酸塩基、１１〜１５の核酸塩基、１２〜５０の核酸塩基、１２〜４０の核酸塩基、１２〜３５核酸塩基、１２〜３０核酸塩基、１２〜２５の核酸塩基、１２〜２０の核酸塩基、または１２〜１５の核酸塩基を含む。
【０１０６】
幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部分に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％か、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補的である。
【０１０７】
幾つかの実施形態では、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５ ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８３４９−７８５０１から選択される配列内にある。
【０１０８】
幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１−７８３４８のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０１０９】
幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１−７８３４８から選択されるヌクレオチド配列を含む。
【０１１０】
幾つかの実施形態では、医薬組成物は、髄腔内注射、脳室内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、または静脈内注射のために製剤される。
【０１１１】
一態様において、本明細書には、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の機能形態をコードする、十分に処理されたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物を産生するために、保持されたイントロンの除去を促進する、不足したＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物の処理を誘発する方法が提供され、該方法は、アンチセンスオリゴマーを被験体の標的細胞に接触させる工程；アンチセンスオリゴマーを、不足したＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物にハイブリダイズさせる工程であって、不足したＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物が、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の機能形態をコードすることができ、少なくとも１つの保持されたイントロンを含む、工程；ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の機能形態をコードする、十分に処理されたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物を産生するために、不足したＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物から少なくとも１つの保持されたイントロンを除去する工程；および十分に処理されたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物から、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の機能形態を翻訳する工程を含む。
【０１１２】
幾つかの実施形態では、保持されたイントロンは、保持されたイントロン全体である。
【０１１３】
幾つかの実施形態では、不足したＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物である。
【０１１４】
一態様において、本明細書には、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の量のまたは活性の不足によって引き起こされた疾病を有する被験体を処置する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１−７８３４８のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むアンチセンスオリゴマーを被験体に投与する工程を含む。
【０１１５】
＜引用による組み込み＞
本明細書で言及されるすべての公報、特許、および特許出願は、個々の公報、特許、特許出願が引用によって組み込まれるように具体的且つ個々に示される程度まで、引用によって本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１１６】
本発明の新規な特徴は、特に添付の請求項に明記されている。本発明の原則が利用される例示の実施形態について説明する以下の詳細な記載と、添付の図面を参照することで、本発明の特徴および利点についてのよりよい理解が得られるであろう。
【０１１７】
【図１】図１は、典型的な保持されたイントロン含有（ＲＩＣ）ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の概略図を示す。５’スプライス部位コンセンサス配列は、−３ｅから−１ｅおよび＋１から＋６（「ｅ」と標識された数字はエクソンであり、標識されていない数字はイントロンである）まで下線を引かれた文字（文字はヌクレオチドである；大文字：エクソン部分、および小文字：イントロン部分）で示されている。３’スプライス部位コンセンサス配列は、−１５から−１および＋１ｅ（「ｅ」と標識された数字はエクソンであり、標識されていない数字はイントロンである）まで下線を引かれた文字（文字はヌクレオチドである；大文字：エクソン部分、および小文字：イントロン部分）で示されている。ＡＳＯスクリ−ニングのためのイントロン標的領域は、保持されたイントロンの５’スプライス部位（左の矢印）に対するヌクレオチド＋６から、保持されたイントロンの３’スプライス部位（右の矢印）に対するヌクレオチド−１６までを含む。実施形態では、ＡＳＯスクリ−ニングのためのイントロン標的領域は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対するヌクレオチド＋６から＋１００、および保持されたイントロンの３’スプライス部位に対するヌクレオチド−１６から−１００を含む。エクソン標的部位は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接しているエクソンにおける＋２ｅから−４ｅ、および保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接しているエクソンにおける＋２ｅから−４ｅのヌクレオチドを含む。「ｎ」または「Ｎ」はヌクレオチドを表し、「ｙ」はピリミジンを表す。図示された配列は、哺乳動物のスプライス部位に対するコンセンサス配列を表わし、個々のイントロンおよびエクソンは、すべての位置でコンセンサス配列に一致する必要はなない。
【図２Ａ】図２Ａは、核内遺伝子出力の標的とされた増強（ＴＡＮＧＯ）の典型的な概略図を示す。図２Ａは、核と細胞質の区画に分割された細胞を示す。核内では、エクソン（長方形）およびイントロン（接続線）から成る標的遺伝子のｍＲＮＡ前駆体の転写産物が、ｍＲＮＡを産生するためにスプライシングを受け、このｍＲＮＡは、細胞質に輸送され、標的タンパク質に翻訳される。この標的遺伝子に関して、イントロン１のスプライシングは非効率的であり、保持されたイントロン含有（ＲＩＣ）ｍＲＮＡ前駆体は、主として核内に蓄積し、細胞質に輸送された場合は劣化し、標的タンパク質の産生にはつながらない。
【図２Ｂ】図２Ｂは、核内遺伝子出力の標的とされた増強（ＴＡＮＧＯ）の典型的な概略図を示す。図２Ｂは、核と細胞質の区画に分割された図２Ａと同じ細胞の一例を示す。アンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）での処置は、イントロン１のスプライシングを促進し、結果としてｍＲＮＡの増加をもたらし、これは順に、高レベルの標的タンパク質に翻訳される。
【図３Ａ】図３Ａは、ＮＭ＿００１１６４７１０、ＮＭ＿００１１６４７１．１、ＮＭ＿００１１６４７１２、ＮＭ＿０００４８１およびＮＲ＿０２８４３５に対応するＡＭＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲まれたイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される。
【図３Ｂ】図３Ｂは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン４−エクソン５のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン４なしでのＡＭＴ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。
【図３Ｃ】図３Ｃは、ＮＭ＿００１１６４７１０、ＮＭ＿００１１６４７１．１、ＮＭ＿００１１６４７１２、ＮＭ＿０００４８１およびＮＲ＿０２８４３５に対応するＡＭＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲まれたイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される。
【図４Ａ】図４Ａは、ＧＡＬＴ：ＮＭ＿０００１５５およびＮＭ＿００１２５８３３２に対応するＧＡＬＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＧＡＬＴイントロン２、ＮＭ＿０００１５５）。
【図４Ｂ】図４Ｂは、ＧＡＬＴ：ＮＭ＿０００１５５およびＮＭ＿００１２５８３３２に対応するＧＡＬＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＧＡＬＴイントロン３、ＮＭ＿０００１５５）。
【図４Ｃ】図４Ｃは、ＧＡＬＴ：ＮＭ＿０００１５５およびＮＭ＿００１２５８３３２に対応するＧＡＬＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＧＡＬＴイントロン４、ＮＭ＿０００１５５）。
【図４Ｄ】図４Ｄは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン４−エクソン５のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン４なしでのＧＡＬＴ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。
【図４Ｅ】図４Ｅは、ＧＡＬＴ：ＮＭ＿０００１５５およびＮＭ＿００１２５８３３２に対応するＧＡＬＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＧＡＬＴイントロン５、ＮＭ＿０００１５５）。
【図４Ｆ】図４Ｆは、ＧＡＬＴ：ＮＭ＿０００１５５およびＮＭ＿００１２５８３３２に対応するＧＡＬＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＧＡＬＴイントロン７、ＮＭ＿０００１５５）。
【図４Ｇ】図４Ｇは、ＧＡＬＴ：ＮＭ＿０００１５５およびＮＭ＿００１２５８３３２に対応するＧＡＬＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＧＡＬＴイントロン８、ＮＭ＿０００１５５）。
【図４Ｈ】図４Ｈは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン８−エクソン９のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン８なしでのＧＡＬＴ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。
【図４Ｉ】図４Ｉは、ＧＡＬＴ：ＮＭ＿０００１５５およびＮＭ＿００１２５８３３２に対応するＧＡＬＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＧＡＬＴイントロン９、ＮＭ＿０００１５５）。
【図４Ｊ】図４Ｊは、ＧＡＬＴ：ＮＭ＿０００１５５およびＮＭ＿００１２５８３３２に対応するＧＡＬＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＧＡＬＴイントロン１０、ＮＭ＿０００１５５）。
【図５Ａ】図５Ａは、ＰＣ：ＮＭ＿０００９２０、ＮＭ＿０２２１７２およびＮＭ＿００１０４０７１６に対応するＰＣに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＣイントロン１６、ＮＭ＿０２２１７２）。
【図５Ｂ】図５Ｂは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン１６−エクソン１７のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン１６なしでのＰＣ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。
【図６Ａ】図６Ａは、ＦＡＨ：ＮＭ＿０００１３７に対応するＦＡＨに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＦＡＨイントロン１、ＮＭ＿０００１３７）。
【図６Ｂ】図６Ｂは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン１−エクソン２のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン１なしでのＦＡＨ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。
【図７Ａ】図７Ａは、ＰＰＡＲＤ：ＮＭ＿００６２３８、ＮＭ＿１７７４３５、ＮＭ＿００１１７１８１８、ＮＭ＿００１１７１８１９およびＮＭ＿００１１７１８２０に対応するＰＰＡＲＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＡＲＤイントロン３、ＮＭ＿００６２３８）。
【図７Ｂ】図７Ｂは、偽処理した細胞と比較した、８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン３なしでのＰＰＡＲＤ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。
【図７Ｃ】図７Ｃは、ＰＰＡＲＤ：ＮＭ＿００６２３８、ＮＭ＿１７７４３５、ＮＭ＿００１１７１８１８、ＮＭ＿００１１７１８１９およびＮＭ＿００１１７１８２０に対応するＰＰＡＲＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＡＲＤイントロン４、ＮＭ＿００６２３８）。
【図７Ｄ】図７Ｄは、ＰＰＡＲＤ：ＮＭ＿００６２３８、ＮＭ＿１７７４３５、ＮＭ＿００１１７１８１８、ＮＭ＿００１１７１８１９およびＮＭ＿００１１７１８２０に対応するＰＰＡＲＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＡＲＤイントロン５、ＮＭ＿００６２３８）。
【図７Ｅ】図７Ｅは、ＰＰＡＲＤ：ＮＭ＿００６２３８、ＮＭ＿１７７４３５、ＮＭ＿００１１７１８１８、ＮＭ＿００１１７１８１９およびＮＭ＿００１１７１８２０に対応するＰＰＡＲＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＡＲＤイントロン６、ＮＭ＿００６２３８）。
【図７Ｆ】図７Ｆは、偽処理した細胞と比較した、８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン６なしでのＰＰＡＲＤ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。
【図７Ｇ】図７Ｇは、ＰＰＡＲＤ：ＮＭ＿００６２３８、ＮＭ＿１７７４３５、ＮＭ＿００１１７１８１８、ＮＭ＿００１１７１８１９およびＮＭ＿００１１７１８２０に対応するＰＰＡＲＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＡＲＤイントロン７、ＮＭ＿００６２３８）。
【図８Ａ】図８Ａは、ＡＣＡＤＶＬ：ＮＭ＿００１２７０４４８、ＮＭ＿００１２７０４４７、ＮＭ＿００００１８およびＮＭ＿００１０３３８５９に対応するＡＣＡＤＶＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＣＡＤＶＬイントロン３、ＮＭ＿００００１８）。
【図８Ｂ】図８Ｂは、ＡＣＡＤＶＬ：ＮＭ＿００１２７０４４８、ＮＭ＿００１２７０４４７、ＮＭ＿００００１８およびＮＭ＿００１０３３８５９に対応するＡＣＡＤＶＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＣＡＤＶＬイントロン５、ＮＭ＿００００１８）。
【図８Ｃ】図８Ｃは、ＡＣＡＤＶＬ：ＮＭ＿００１２７０４４８、ＮＭ＿００１２７０４４７、ＮＭ＿００００１８およびＮＭ＿００１０３３８５９に対応するＡＣＡＤＶＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＣＡＤＶＬイントロン８、ＮＭ＿００００１８）。
【図８Ｄ】図８Ｄは、ＡＣＡＤＶＬ：ＮＭ＿００１２７０４４８、ＮＭ＿００１２７０４４７、ＮＭ＿００００１８およびＮＭ＿００１０３３８５９に対応するＡＣＡＤＶＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＣＡＤＶＬイントロン９、ＮＭ＿００００１８）。
【図８Ｅ】図８Ｅは、ＡＣＡＤＶＬ：ＮＭ＿００１２７０４４８、ＮＭ＿００１２７０４４７、ＮＭ＿００００１８およびＮＭ＿００１０３３８５９に対応するＡＣＡＤＶＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＣＡＤＶＬイントロン１０、ＮＭ＿００００１８）。
【図８Ｆ】図８Ｆは、ＡＣＡＤＶＬ：ＮＭ＿００１２７０４４８、ＮＭ＿００１２７０４４７、ＮＭ＿００００１８およびＮＭ＿００１０３３８５９に対応するＡＣＡＤＶＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＣＡＤＶＬイントロン１３、ＮＭ＿００００１８）。
【図８Ｇ】図８Ｇは、ＡＣＡＤＶＬ：ＮＭ＿００１２７０４４８、ＮＭ＿００１２７０４４７、ＮＭ＿００００１８およびＮＭ＿００１０３３８５９に対応するＡＣＡＤＶＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＣＡＤＶＬイントロン１８、ＮＭ＿００００１８）。
【図８Ｈ】図８Ｈは、ＡＣＡＤＶＬ：ＮＭ＿００１２７０４４８、ＮＭ＿００１２７０４４７、ＮＭ＿００００１８およびＮＭ＿００１０３３８５９に対応するＡＣＡＤＶＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＣＡＤＶＬイントロン１９、ＮＭ＿００００１８）。
【図９Ａ】図９Ａは、ＨＭＢＳ：ＮＭ＿０００１９０、ＮＭ＿００１２５８２０８、ＮＭ＿００１０２４３８２およびＮＭ＿００１２５８２０９に対応するＨＭＢＳに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＨＭＢＳイントロン１０、ＮＭ＿０００１９０）。
【図９Ｂ】図９Ｂは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン１０−エクソン１１のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン１０なしでのＨＭＢＳ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。
【図９Ｃ】図９Ｃは、ＨＭＢＳ：ＮＭ＿０００１９０、ＮＭ＿００１２５８２０８、ＮＭ＿００１０２４３８２およびＮＭ＿００１２５８２０９に対応するＨＭＢＳに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＨＭＢＳイントロン１１、ＮＭ＿０００１９０）。
【図１０Ａ】図１０Ａは、ＵＲＯＤ：ＮＭ＿０００３７４およびＮＲ＿０３６５１０に対応するＵＲＯＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＵＲＯＤイントロン３、ＮＭ＿０００３７４）。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、ＵＲＯＤ：ＮＭ＿０００３７４およびＮＲ＿０３６５１０に対応するＵＲＯＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＵＲＯＤイントロン４、ＮＭ＿０００３７４）。
【図１０Ｃ】図１０Ｃは、ＵＲＯＤ：ＮＭ＿０００３７４およびＮＲ＿０３６５１０に対応するＵＲＯＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＵＲＯＤイントロン５、ＮＭ＿０００３７４）。
【図１０Ｄ】図１０Ｄは、ＵＲＯＤ：ＮＭ＿０００３７４およびＮＲ＿０３６５１０に対応するＵＲＯＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＵＲＯＤイントロン６、ＮＭ＿０００３７４）。
【図１０Ｅ】図１０Ｅは、ＵＲＯＤ：ＮＭ＿０００３７４およびＮＲ＿０３６５１０に対応するＵＲＯＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＵＲＯＤイントロン７、ＮＭ＿０００３７４）。
【図１１Ａ】図１１Ａは、ＡＬＭＳ１：ＮＭ＿０１５１２０に対応するＡＬＭＳ１に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＬＭＳ１イントロン２１、ＮＭ＿０１５１２０）。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン２１−エクソン２２のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＨｕｈ７細胞におけるイントロン２１なしでのＡＬＭＳ１ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。
【図１２Ａ】図１２Ａは、ＡＳＬ：ＮＭ＿００００４８、ＮＭ＿００１０２４９４３、ＮＭ＿００１０２４９４４およびＮＭ＿００１０２４９４６に対応するＡＳＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＳＬイントロン７、ＮＭ＿００００４８）。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン７−エクソン８のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン７なしでのＡＳＬ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。
【図１２Ｃ】図１２Ｃは、ＡＳＬ：ＮＭ＿００００４８、ＮＭ＿００１０２４９４３、ＮＭ＿００１０２４９４４およびＮＭ＿００１０２４９４６に対応するＡＳＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＳＬイントロン８、ＮＭ＿００００４８）。
【図１２Ｄ】図１２Ｄは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン８−エクソン９のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン８なしでのＡＳＬ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。
【図１２Ｅ】図１２Ｅは、ＡＳＬ：ＮＭ＿００００４８、ＮＭ＿００１０２４９４３、ＮＭ＿００１０２４９４４およびＮＭ＿００１０２４９４６に対応するＡＳＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＳＬイントロン９、ＮＭ＿００００４８）。
【図１２Ｆ】図１２Ｆは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン９−エクソン１０のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン７なしでのＡＳＬ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。
【図１２Ｇ】図１２Ｇは、ＡＳＬ：ＮＭ＿００００４８、ＮＭ＿００１０２４９４３、ＮＭ＿００１０２４９４４およびＮＭ＿００１０２４９４６に対応するＡＳＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＳＬイントロン１６、ＮＭ＿００００４８）。
【図１３Ａ】図１３Ａは、ＡＴＰ７Ｂ１：ＮＭ＿００１２４３１８２、ＮＭ＿００００５３、ＮＭ＿００１００５９１８、ＮＭ＿００１３３０５７９およびＮＭ＿００１３３０５７８に対応するＡＴＰ７Ｂ１に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＴＰ７Ｂ１イントロン７、ＮＭ＿００００５３）。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは、ＡＴＰ７Ｂ１：ＮＭ＿００１２４３１８２、ＮＭ＿００００５３、ＮＭ＿００１００５９１８、ＮＭ＿００１３３０５７９およびＮＭ＿００１３３０５７８に対応するＡＴＰ７Ｂ１に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＴＰ７Ｂ１イントロン１３、ＮＭ＿００００５３）。
【図１３Ｃ】図１３Ｃは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン１３−エクソン１４のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン１３なしでのＡＴＰ７Ｂ１ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。
【図１４】図１４は、ＨＦＥ：ＮＭ＿１３９００７、ＮＭ＿１３９００６、ＮＭ＿１３９００４、ＮＭ＿１３９００３、ＮＭ＿００１３００７４９、ＮＭ＿１３９００９、ＮＭ＿１３９００８およびＮＭ＿０００４１０に対応するＨＦＥに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略図を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＨＦＥイントロン２、ＮＭ＿０００４１０）。
【図１５Ａ】図１５Ａは、ＨＳＤ３Ｂ７：ＮＭ＿００１１４２７７７、ＮＭ＿００１１４２７７８およびＮＭ＿０２５１９３に対応するＨＳＤ３Ｂ７に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＨＳＤ３Ｂ７イントロン１、ＮＭ＿００１１４２７７７）。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、ＨＳＤ３Ｂ７：ＮＭ＿００１１４２７７７、ＮＭ＿００１１４２７７８およびＮＭ＿０２５１９３に対応するＨＳＤ３Ｂ７に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＨＳＤ３Ｂ７イントロン１、ＮＭ＿００１１４２７７７）。
【図１５Ｃ】図１５Ｃは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン２−エクソン３のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン２なしでのＨＳＤ３Ｂ７ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。
【図１５Ｄ】図１５Ｄは、ＨＳＤ３Ｂ７：ＮＭ＿００１１４２７７７、ＮＭ＿００１１４２７７８およびＮＭ＿０２５１９３に対応するＨＳＤ３Ｂ７に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＨＳＤ３Ｂ７イントロン３、ＮＭ＿００１１４２７７７）。
【図１５Ｅ】図１５Ｅは、ＨＳＤ３Ｂ７：ＮＭ＿００１１４２７７７、ＮＭ＿００１１４２７７８およびＮＭ＿０２５１９３に対応するＨＳＤ３Ｂ７に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＨＳＤ３Ｂ７イントロン４、ＮＭ＿００１１４２７７７）。
【図１５Ｆ】図１５Ｆは、偽処理した細胞と比較した（エクソン４−エクソン５のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン４なしでのＨＳＤ３Ｂ７ ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。
【図１５Ｇ】図１５Ｇは、ＨＳＤ３Ｂ７：ＮＭ＿００１１４２７７７、ＮＭ＿００１１４２７７８およびＮＭ＿０２５１９３に対応するＨＳＤ３Ｂ７に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＨＳＤ３Ｂ７イントロン５、ＮＭ＿０２５１９３）。
【図１５Ｈ】図１５Ｈは、ＨＳＤ３Ｂ７：ＮＭ＿００１１４２７７７、ＮＭ＿００１１４２７７８およびＮＭ＿０２５１９３に対応するＨＳＤ３Ｂ７に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＨＳＤ３Ｂ７イントロン６、ＮＭ＿０２５１９３）。
【図１６】図１６は、ＮＣＯＡ５：ＮＭ＿０２０９６７に対応するＮＣＯＡ５に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略図を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＮＣＯＡ５イントロン２、ＮＭ＿０２０９６７）。
【図１７Ａ】図１７Ａは、ＰＰＯＸ：ＮＭ＿０００３０９およびＮＭ＿００１１２２７６４に対応するＰＰＯＸに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＯＸイントロン３、ＮＭ＿０００３０９）。
【図１７Ｂ】図１７Ｂは、ＰＰＯＸ：ＮＭ＿０００３０９およびＮＭ＿００１１２２７６４に対応するＰＰＯＸに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＯＸイントロン４、ＮＭ＿０００３０９）。
【図１７Ｃ】図１７Ｃは、ＰＰＯＸ：ＮＭ＿０００３０９およびＮＭ＿００１１２２７６４に対応するＰＰＯＸに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＯＸイントロン５、ＮＭ＿０００３０９）。
【図１７Ｄ】図１７Ｄは、ＰＰＯＸ：ＮＭ＿０００３０９およびＮＭ＿００１１２２７６４に対応するＰＰＯＸに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＯＸイントロン７、ＮＭ＿０００３０９）。
【図１７Ｅ】図１７Ｅは、ＰＰＯＸ：ＮＭ＿０００３０９およびＮＭ＿００１１２２７６４に対応するＰＰＯＸに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＯＸイントロン８、ＮＭ＿０００３０９）。
【図１７Ｆ】図１７Ｆは、ＰＰＯＸ：ＮＭ＿０００３０９およびＮＭ＿００１１２２７６４に対応するＰＰＯＸに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＯＸイントロン１０、ＮＭ＿０００３０９）。
【図１７Ｇ】図１７Ｇは、ＰＰＯＸ：ＮＭ＿０００３０９およびＮＭ＿００１１２２７６４に対応するＰＰＯＸに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＯＸイントロン１２、ＮＭ＿０００３０９）。
【発明を実施するための形態】
【０１１８】
肝臓疾患は、米国だけで１年当たり概算で６０，０００人の死亡を結果的にもたらす、衰弱した疾病である。多くの場合では、肝不全を患う人にとって唯一の望みは、肝臓移植であるが、ドナープールは、およそ４，０００のみであると推測される。それ故、移植を受ける確率は低く、移植を受けることができない人の状態を改善することができる処置はほとんどない。それ故、肝臓疾患を処置するための組成物および方法が必要とされている。
【０１１９】
１つまたは１つを超えるイントロンを有するタンパク質コード遺伝子の一次転写産物における個々のイントロンは、異なる効率性を有する一次転写産物からスプライシングされる。ほとんどの場合、完全にスプライシングされたｍＲＮＡだけが、続く細胞質での翻訳のために核膜孔を通って輸送される。スプライシングされていない及び部分的にスプライシングされた転写産物は、核内で検出可能である。完全にスプライシングされていない転写産物の核内蓄積が、タンパク質に翻訳され得る細胞質中の有害である可能性のあるｍＲＮＡの蓄積を防ぐメカニズムであると一般的に考えられる。幾つかの遺伝子に関して、最も効率性の低いイントロンのスプライシングは、細胞質中での翻訳に先立つ、遺伝子発現における転写後の律速の工程である。
【０１２０】
肝臓疾患のサブセットにおいて不足しているタンパク質をコードする、かなりのレベルの遺伝子の部分的にスプライシングされた転写産物が、ヒト細胞の核内で発見されてきた。これらのｍＲＮＡ前駆体の種は、少なくとも１つの保持されたイントロンを含む。本発明は、完全にスプライシングされた成熟ｍＲＮＡの安定した状態の産生を増加させる、およびそれ故、翻訳されたタンパク質レベルを増加させるために、遺伝子発現の核段階に対して律速的である１つ以上の保持されたイントロンのスプライシングをアップレギュレートするための組成物および方法を提供する。これらの組成物および方法は、核内に蓄積する保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体のイントロンスプライス部位で構成的スプライシングを促進するアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）を活用する。したがって、実施形態では、タンパク質不足によって引き起こされた疾病を処置するために本発明の方法を使用して、タンパク質が増加される。
【０１２１】
本明細書に記載される本発明によって処置することができる肝臓疾患は、被験体において遺伝子産物が不足している疾患であり、ここで遺伝子産物の不足は肝臓疾患を引き起こす。
【０１２２】
これらのＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２およびＮＣＯＡ５のｍＲＮＡ前駆体の種は、少なくとも１つの保持されたイントロンを含む。本発明は、完全にスプライシングされた成熟ｍＲＮＡの安定した状態の産生を増加させる、およびそれ故、翻訳されたアミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソヴァレリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝核因子１−αアルブミン近接因子、タンパク質Ｏ−グルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子β−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１、３−β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δ、インターロイキン６、セラミドシンターゼ２または核内受容体コアクチベーター５タンパク質のレベルを増加させるために、遺伝子発現の核段階に対して律速的である１つ以上の保持されたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２およびＮＣＯＡ５のイントロンのスプライシングをアップレギュレートするための組成物および方法を提供する。これらの組成物および方法は、核内に蓄積する保持されたイントロン含有ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２およびＮＣＯＡ５のｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）のイントロンスプライス部位での構成的スプライシングを促進するアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）を利用することができる。したがって、実施形態では、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソヴァレリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝核因子１−αアルブミン近接因子、タンパク質Ｏ−グルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子β−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１、３−β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δ、インターロイキン６、セラミドシンターゼ２または核内受容体コアクチベーター５タンパク質は、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソヴァレリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝核因子１−αアルブミン近接因子、タンパク質Ｏ−グルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子β−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１、３−β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δ、インターロイキン６、セラミドシンターゼ２または核内受容体コアクチベーター５の不足によって引き起こされた疾病を処置するために本発明の方法を使用して増加され得る。
【０１２３】
幾つかの実施形態では、本明細書には、完全にスプライシングされた成熟ｍＲＮＡの安定した状態の産生を増加させる、およびそれ故、翻訳されたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質レベルを増加させるために、遺伝子発現の核段階に対して律速的である１つ以上の保持されたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のイントロンのスプライシングをアップレギュレートするための組成物および方法が開示される。これらの組成物および方法は、核内に蓄積する保持されたイントロン含有ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）のイントロンスプライス部位での構成的スプライシングを促進するアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）を利用することができる。したがって、実施形態では、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５の不足によって引き起こされた疾病を処置するために本発明の方法を使用して増加され得る。
【０１２４】
他の実施形態では、本発明の方法は、必要としている被験体内の疾病を処置するために、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソヴァレリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝核因子１−αアルブミン近接因子、タンパク質Ｏ−グルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子β−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１、３−β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δ、インターロイキン６、セラミドシンターゼ２または核内受容体コアクチベーター５の産生を増加させるために使用され得る。実施形態では、被験体は、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソヴァレリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝核因子１−αアルブミン近接因子、タンパク質Ｏ−グルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子β−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１、３−β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δ、インターロイキン６、セラミドシンターゼ２または核内受容体コアクチベーター５が、野生型と比較して必ずしも不足していないが、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソヴァレリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝核因子１−αアルブミン近接因子、タンパク質Ｏ−グルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子β−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１、３−β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δ、インターロイキン６、セラミドシンターゼ２または核内受容体コアクチベーター５の増加が、それにもかかわらず疾病を軽減する、疾病を有する。実施形態では、疾病は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２およびＮＣＯＡ５のハプロ不全によって引き起こされ得る。
【０１２５】
実施形態では、記載される組成物および方法は、標的タンパク質の不足によって引き起こされる肝疾患を有する被験体または患者を処置するために使用される。実施形態では、記載される組成物および方法は、標的タンパク質の不足によって引き起こされない肝疾患を有する被験体または患者を処置するために使用される。実施形態では、肝疾患を有する被験体または患者は、標的タンパク質の正常な産生を補足することによって標的タンパク質の産生の増加から恩恵を得ることができる。関連する実施形態では、肝疾患を有する被験体または患者は、成熟ｍＲＮＡ産生を増加させる及び／又は標的タンパク質の正常な産生を補足することによって、標的タンパク質の産生の増加から恩恵を得ることができる。特定の実施形態では、必ずしも標的タンパク質の不足によって引き起こされないが、それにもかかわらず、本発明の方法を使用して標的タンパク質の産生を増加することによって処置される疾病において、標的タンパク質は、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５である。実施形態では、標的タンパク質は、被験体の肝疾患を改善または処置するために、二次標的に作用する。実施形態では、被験体において二次標的タンパク質が不足している。実施形態では、被験体において二次標的タンパク質は不足していない。
【０１２６】
＜グリシン脳症＞
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される本発明は、常染色体劣性肝臓障害であるグリシン脳症（ＧＣＥ）を処置するために使用され得る。ＧＣＥの優位な表現型は、生涯の早期に現われる、新生児表現型である。この表現型の症状は、嗜眠、筋緊張低下、ミオクローヌス発作、発作、精神遅滞、無呼吸およびしばしば死亡を含む。他の事例では、ＧＣＥは、軽度精神遅滞、せん妄、舞踏病、および垂直注視麻痺を含む症状とともに、小児期に現われる。ＧＣＥの遅発型は、痙攣性両側麻痺および視神経萎縮を結果としてもたらすが、典型的には精神遅滞または発作にはつながらない。
【０１２７】
ＧＣＥは、肝臓におけるグリシン切断系における欠乏症の結果明示することができる。
タンパク質アミノメチルトランスフェラーゼ（ＡＭＴ）の不足はＧＣＥの進行に関係する。また、試験はＡＭＴ欠乏症およびＧＣＥの進行をリンクした。ＡＭＴは、肝細胞のミトコンドリア内のグリシン切断系の構成要素である。ＡＭＴタンパク質をコードするＡＭＴ遺伝子は、３ｐ２１．２に位置する９つのエクソンに及ぶ６ｋｂ遺伝子である。ＡＭＴ遺伝子の突然変異は、ＧＣＥに関係する臨床表現型を引き起こすと示された。１つの試験では、患者はＧ２６９Ｄ突然変異に対してヘテロ接合性である。他の試験は、ＧＣＥの進行を結果としてもたらすＡＭＴの他のミスセンス変異を検査し、それによって、ＡＭＴ不足とＧＣＥの進行との間の明確な関係（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｌｉｎｋ）を確立する。
【０１２８】
＜ツェルヴェーガー症候群／ハイムラー症候群＞
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される本発明は、常染色体劣性肝臓障害のツェルヴェーガー症候群を処置するために使用され得る。ツェルヴェーガー症候群は、重度の神経機能障害、頭蓋顔面奇形、および肝機能障害を特徴とする、重度のペルオキシソーム形成異常症である。標準的なツェルヴェーガー症候群の表現型に罹患した患者は、典型的に１年以内に死亡する。
【０１２９】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される本発明は、常染色体劣性肝臓障害のハイムラー症候群を処置するために使用され得る。ハイムラー症候群は、感音性聴力損失、第二生歯のエナメル質形成不全および爪異常を特徴とするペルオキシソーム形成異常症の最も軽度な形態である。
【０１３０】
＜アデノシンデアミナーゼ欠損症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性肝疾患のアデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）欠損症を処置するために使用されうる。ＡＤＡ欠損症は一般的には幼児期に現われ、かつ一般的には命取りになるが、患者の小さなサブセット、一般的には乳児型よりも軽度なその病気の遅発型を示す。ＡＤＡ欠損症の遅発型に悩む患者は、典型的には、緩やかに免疫学的劣化を示し、それは多数の二次感染を導く。
【０１３１】
ＡＤＡタンパク質の欠損症はＡＤＡ欠損症において示される臨床症状を結果として生じる。２０ｑ１３に位置し、１０エクソンに及ぶＡＤＡ遺伝子は、ＡＤＡタンパク質をコードする。不十分な量のＡＤＡタンパク質を結果としてもたらすＡＤＡ遺伝子の変異が、ＡＤＡ欠損症の進行の原因であることが示されてきた。ある研究では、ＡＤＡ欠損症と診断された１組の子供たちが調査された。両方の親が中レベルのＡＤＡタンパク質を持つと分かっていたが、両方の子供はＡＤＡタンパク質の濃度が減少したことが分かった。この発見は、その病気のために提案された遺伝の劣性パターンを立証し、減少したＡＤＡタンパク質とＡＤＡ欠損症の臨床症状との間の明確な関係を提供する。
【０１３２】
＜異型ポルフィリン症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、異型ポルフィリン症（ｐｏｒｐｈｙｒｉａ ｖａｒｉｅｇａｔｅ）（ＶＰ）を処置するために使用されうる。ＶＰは、増加した光線過敏症、水疱形成、皮膚脆弱性および炎症後色素沈着などの皮膚症状によって特徴づけられる。更なる病状は、急性の肝性ポルフィリン症を特徴づける腹痛症、暗色尿、および精神神経症状を含む。
【０１３３】
プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ（ＰＰＯＸ）タンパク質の欠損症は、ＶＰにおいて示される臨床症状を結果として生じる。１ｑ２３．３に位置し、１３エクソンに及ぶＰＰＯＸ遺伝子は、ＰＰＯＸタンパク質をコードする。不十分な量のＰＰＯＸタンパク質を結果としてもたらすＰＰＯＸ遺伝子の変異が、ＶＰの進行の原因であることが示されてきた。ＶＰのホモ接合型もまれに存在しているが、「古典的な」ＶＰは、ＰＰＯＸ遺伝子の単一の対立遺伝子における突然変異によって特徴づけられ、したがって、ハプロ不全の機構によって進行する。いくつかの研究では、ＰＰＯＸにおけるヘテロ接合変異がＶＰの進行に関連付けられてきており、この進行は、ＶＰに悩む患者において発見されたＰＰＯＸタンパク質の減少したレベルの結果である。
【０１３４】
＜晩発性皮膚ポルフィリン症＞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載された本発明は常染色体優性肝疾患の晩発性皮膚ポルフィリン症（ＰＣＴ）を処置するために使用することができる。ＰＣＴは、尿中のウロポルフィリンの排出および感光性皮膚炎によって特徴づけられる。
【０１３５】
ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ（ＵＲＯＤ）タンパク質の欠損症は、ＰＣＴにおいて示される臨床症状を結果として生じる。１ｐ３４．１に位置し、１０エクソンに及ぶＵＲＯＤ遺伝子は、ＵＲＯＤタンパク質をコードする。不十分な量のＵＲＯＤタンパク質を結果としてもたらすＵＲＯＤ遺伝子の変異が、ＰＣＴの進行の原因であることが示されてきた。ある研究では、ＵＲＯＤ遺伝子におけるＧ３８１Ｖ突然変異は、ＰＣＴの家族性バージョン（ｆａｍｉｌｉａｌ ｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ＰＣＴ）を持つ患者において示され、これがＵＲＯＤタンパク質の減少したレベルを結果としてもたらした。他の研究では、減少したＵＲＯＤタンパク質のレベルとＰＣＴの進行との間の相互関係も示されてきた。
【０１３６】
＜急性間欠性ポルフィリン症＞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載された本発明は常染色体優性肝疾患の急性間欠性ポルフィリン症（ＡＩＰ）を処置するために使用することができる。ＡＩＰは、ヘム生合成の欠損によって特徴づけられる。ＡＩＰの臨床症状は、腹痛症、消化管障害、および死に至る精神異常を含む。
【０１３７】
ポルフォビリノーゲンデアミナーゼ（ＨＭＢＳ）タンパク質（非赤血球、あるいは赤血球および非赤血球の両方）の欠損症は、ＡＩＰにおいて示される臨床症状を結果としてもたらす。１ｑ２３．３に位置し、１５エクソンに及ぶＨＭＢＳ遺伝子は、ＨＭＢＳタンパク質をコードする。ＨＭＢＳはポルフォビリノーゲンデアミナーゼ（ＰＢＧＤ）とも呼ばれる。不十分な量のＨＭＢＳタンパク質を結果としてもたらすＨＭＢＳ遺伝子の変異が、ＡＩＰの進行の原因であることが示されてきた。ある研究では、ＨＭＢＳにおける１９の独立した突然変異がＡＩＰを示す２８組の家族で発見され、ＨＭＢＳ欠損症とＡＩＰとの間の関係をさらに提供した。
【０１３８】
＜超長鎖アシルＣｏＡ脱水素酵素欠損症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性肝疾患の超長鎖アシルＣｏＡ脱水素酵素（ＶＬＣＡＤ）欠損症を処置するために使用されうる。ＶＬＣＡＤは、ミトコンドリアの脂肪酸酸化の欠損に起因する病状であると考えられる非ケトン性低血糖症、心肺停止、肝腫大、心臓肥大、および低血圧症に特徴づけられる。
【０１３９】
ＶＬＣＡＤタンパク質の欠損症はＶＬＣＡＤ欠損症において示される臨床症状を結果として生じる。１７ｐ１３．１に位置し、２０エクソンに及ぶＡＣＡＤＶＬ遺伝子は、ＶＬＣＡＤタンパク質をコードする。不十分な量のＶＬＣＡＤタンパク質を結果としてもたらすＡＣＡＤＶＬ遺伝子の変異が、ＶＬＣＡＤ欠損症の進行の原因であることが示されてきた。ある研究では、ＶＬＣＡＤ欠損症を示す２人の患者が、ＡＣＡＤＶＬ遺伝子中の１０５ｂｐの欠損部分を有することが分かった。別の研究では、２１つの様々なミスセンス変異が、ＶＬＣＡＤ欠損症を示す１８人の子供で見つかった。全体として、これらのような研究は、ＶＬＣＡＤの不足と、ＶＬＣＡＤ欠損症を示す患者で見られる臨床症状との間の明確な関係を示してきた。
【０１４０】
＜ピルビン酸カルボキシラーゼ欠損症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性肝疾患のピルビン酸カルボキシラーゼ（ＰＣ）欠損症を処置するために使用されうる。ＰＣ欠損症は３つの表現型のサブタイプへと分類される。北アメリカにおいてより流行しているタイプＡの患者は、乳酸血症（ｌａｃｔｉｃ ａｃａｄｅｍｉａ）および精神運動発達遅滞を示す。タイプＡよりも重症で、フランスと英国においてより流行しているタイプＢの患者は、増加した血清乳酸、アンモニア、シトルリン、およびリジン、ならびに死の確率がより高い細胞内酸化還元の障害を示す。タイプＣは、より軽度のＰＣ欠損症であり、一般的には良性である。
【０１４１】
ピルビン酸カルボキシラーゼ（ＰＣ）タンパク質の不足は、ＰＣ欠損症において示される臨床症状を結果として生じる。１１ｑ１３．２に位置し、１９エクソンに及ぶＰＣ遺伝子は、ＰＣタンパク質をコードする。家族性の遺伝は常染色体劣性の機構を介して進行すると考えられ、かつ保因頻度は、特定の家族中１０人に１人と同じくらい高いと推測される。不十分な量のＰＣタンパク質を結果としてもたらすＰＣ遺伝子の変異が、ＰＣ欠損症の進行の原因であることが示されてきた。ある研究では、タイプＡ ＰＣ欠損症に苦しむ患者のＰＣ遺伝子においてミスセンス変異が発見され、それによってＰＣタンパク質レベルの不足と、ＰＣ欠損症に関係する臨床症状との間の関係が提供される。
【０１４２】
＜イソ吉草酸血症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性肝疾患のイソ吉草酸血症（ｉｓｏｖａｌｅｒｉｃ ａｃａｄｅｍｉａ）（ＩＶＡ）を処置するために使用されうる。ＩＶＡは２つの表現型のサブタイプへと分類される：急性・慢性のサブタイプ。急性のサブタイプは、大規模な代謝性アシドーシスを引き起こし、最終的に死に至る。慢性のサブタイプは、無症状の期間の後に、重症のケトアシドーシスの発作の期間を結果としてもたらす。ＩＶＡの臨床症状は、特異臭、食物タンパク質に対する嫌悪感、および嘔吐を含む。
【０１４３】
イソバレリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ（ＩＶＤ）タンパク質の不足は、ＩＶＡにおいて示される臨床症状を結果として生じる。１５ｑ１３に位置し、１２エクソンに及ぶＩＶＤ遺伝子は、ＩＶＤタンパク質をコードする。不十分な量のＩＶＤタンパク質を結果としてもたらすＩＶＤ遺伝子の変異が、ＩＶＡ欠損症の進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究では、ＩＶＤ欠損症を結果としてもたらすＩＶＤの多数の様々な突然変異が調査され、突然変異がＩＶＡで見られる臨床症状を引き起こすＩＶＤタンパク質の量の欠失を結果としてもたらすことを示してきた。
【０１４４】
＜高カイロミクロン血症／高トリグリセリド血症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体優性肝疾患の高カイロミクロン血症を処置するために使用されうる。高カイロミクロン血症は、血漿中の、カイロミクロンおよび超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の量の増加、並びにＬＤＬおよび高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）の低下によって特徴づけられる。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体優性肝疾患の高トリグリセリド血症を処置するために使用されうる。高トリグリセリド血症に苦しむ患者は、一般的には、コレステロールのレベルが正常であるが、トリグリセリドのレベルの上昇を示す。トリグリセリドの上昇以外は、患者は一般的には無症状である。
【０１４６】
アポリポタンパク質Ａ−Ｖ（ＡＰＯＡ５）タンパク質の不足は、高カイロミクロン血症と高トリグリセリド血症との両方において示される臨床症状を結果として生じる。１１ｑ２３．３に位置し、４エクソンに及ぶＡＰＯＡ５遺伝子は、ＡＰＯＡ５タンパク質をコードする。不十分な量のＡＰＯＡ５ タンパク質を結果としてもたらすＡＰＯＡ５ 遺伝子の変異が、高カイロミクロン血症および高トリグリセリド血症の両方の進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究では、高カイロミクロン血症および高トリグリセリド血症の両方を結果としてもたらすＡＰＯＡ５の多数の様々な突然変異が調査されてきた。例えば、ある研究では、ＡＰＯＡ５におけるＳ１９Ｗの突然変異は、ＡＰＯＡ５のタンパク質の量の欠損を結果としてもたらすことが示され、これは患者の家族において高カイロミクロン血症として現われた。
【０１４７】
＜ガラクトース血症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性肝疾患のガラクトース血症を処置するために使用されうる。ガラクトース血症は一般的には新生児の発達中に現われ、黄疸、肝脾腫、肝細胞機能不全、食物不耐性、低血糖症、腎尿細管機能障害、筋緊張低下、敗血症、および白内障によって特徴づけられる。経時的に、ガラクトース血症に悩む患者は、精神遅滞、言語協調障害、運動異常、および高ゴナドトロピン性性腺機能低下症を経験する。
【０１４８】
ガラクトース−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ（ＧＡＬＴ）タンパク質の不足は、ガラクトース血症において示される臨床症状を結果として生じる。１５ｑ１１．２に位置し、１１エクソンに及ぶＧＡＬＴ遺伝子は、ＧＡＬＴタンパク質をコードする。不十分な量のＧＡＬＴタンパク質を結果としてもたらすＧＡＬＴ遺伝子の変異が、ガラクトース血症の進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究では、ガラクトース血症を結果としてもたらすＧＡＬＴの多数の様々な突然変異が調査され、突然変異がガラクトース血症で見られる臨床症状を引き起こすＧＡＬＴタンパク質の量の欠失を結果としてもたらすことを示してきた。ある研究では、Ｍ１４２Ｋ突然変異が、正常なレベルのおよそ４％までＧＡＬＴタンパク質の量を低下させることが分かり、これによって、ＧＡＬＴタンパク質の量の不足と、ガラクトース血症の臨床的進行との間の明確な関係が提供される。
【０１４９】
＜高コレステロール血症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性肝疾患の高コレステロール血症（ＡＲＨ ）を処置するために使用されうる。ＡＲＨは、ひどく上昇した血漿低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）のコレステロール、結節状のおよび腱の黄色腫、ならびに早発性アテローム動脈硬化症によって特徴づけられる。
【０１５０】
低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１（ＬＤＬＲＡＰ１）であるタンパク質の不足は、ＡＲＨにおいて示される臨床症状を結果として生じる。１ｐ３６．１１に位置し、９エクソンに及ぶＬＤＬＲＡＰ１遺伝子は、ＬＤＬＲＡＰ１タンパク質をコードする。不十分な量のＬＤＬＲＡＰ１タンパク質を結果としてもたらすＬＤＬＲＡＰ１遺伝子の変異が、ＡＲＨの進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究では、ＡＲＨを結果としてもたらすＬＤＬＲＡＰ１の多数の様々な突然変異が調査され、ＬＤＬＲＡＰ１タンパク質の量の欠失を結果としてもたらす突然変異が、ＡＲＨで見られる臨床症状を引き起こすことを示してきた。多くの研究で、ＬＤＬＲＡＰ１タンパク質の量の実質的な減少を結果としてもたらすＬＤＬＲＡＰ１遺伝子における保存されたナンセンス変異を検査する、すなわちＡＲＨに関係する臨床症状が検査された。
【０１５１】
＜糖尿病＞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載された発明は、若年発症成人型糖尿病タイプ１（ＭＯＤＹ１）を処置するために使用することができる．他の実施形態では、本明細書に記載された発明は、若年発症成人型糖尿病タイプ２（ＭＯＤＹ２）を処置するために使用することができる．他の実施形態では、本明細書に記載された発明は、若年発症成人型糖尿病タイプ３（ＭＯＤＹ３）を処置するために使用することができる．他の実施形態では、本明細書に記載された発明は、インスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）を処置するために使用することができる．他の実施形態では、本明細書に記載された発明は、インスリン依存性糖尿病１（ＩＤＤＭ１）を処置するために使用することができる．他の実施形態では、本明細書に記載された発明は、インスリン依存性糖尿病２０（ＩＤＤＭ２０）を処置するために使用することができる．他の実施形態では、本明細書に記載された発明は、若年発症成人型糖尿病と共にファルコーニ腎尿細管症候群４（Ｆａｌｃｏｎｉ ｒｅｎｏｔｕｂｕｌａｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ４ ）（ＦＲＴＳ４）を処置するために使用することができる．他の実施形態では、本明細書に記載された発明は、家族性高インスリン性低血糖症３（ＨＨＦ３）を処置するために使用することができる．他の実施形態では、本明細書に記載された発明は、永続型新生児糖尿病（ＰＮＤＭ）を処置するために使用することができる．糖尿病は、頻尿症、多渇症、空腹の増長、糖尿病性ケトアシドーシス、循環器疾患、脳卒中、慢性腎不全、足潰瘍、目への損傷を含む症状と共に、高血糖によって特徴づけられる代謝疾患のグループである。
【０１５２】
糖尿病の進行の一因となりうる多数の因子が存在する一方、タンパク質である肝細胞核因子４アルファ（ＨＮＦ４Ａ）の不足は、ＭＯＤＹ１、ＮＩＤＤＭ、およびＦＲＴＳ４の発生率に相互に関連することが示されてきた。２０ｑ１３．１２に位置し、１２エクソンに及ぶＨＮＦ４Ａ遺伝子は、ＨＮＦ４Ａタンパク質をコードする。不十分な量のＨＮＦ４Ａタンパク質を結果としてもたらすＨＮＦ４Ａ遺伝子の変異が、ＭＯＤＹ１、ＮＩＤＤＭ、およびＦＲＴＳ４の進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究では、ＭＯＤＹ１、ＮＩＤＤＭ、およびＦＲＴＳ４を結果としてもたらすＨＮＦ４Ａの多数の様々な突然変異が調査され、ＨＮＦ４Ａタンパク質の量の欠失を結果としてもたらす突然変異が、糖尿病で見られる臨床症状を引き起こすことを示してきた。例えば、１つの研究はそれを実証した。Ｑ２６８におけるナンセンス変異は、ＭＯＤＹ１に悩む大規模な患者の集団において存在した。別の研究では、著者は、ＨＮＦ４Ａにおける突然変異が増大した出生時体重および巨人症に関連し、その突然変異は、最終的には糖尿病で悩む患者において見られる高インスリン血症へと発展すると、結論を下した。このような研究およびその他の研究は、発現したＨＮＦ４Ａタンパク質の量の不足と、糖尿病の進行との相互関係を明確に示した。
【０１５３】
タンパク質であるグルコキナーゼ（ＧＣＫ）の不足は、ＮＩＤＤＭ、ＭＯＤＹ２、ＨＨＦ３、およびＰＮＤＭの発生率に相互に関連することが示されてきた。７ｐ１３に位置し、１２エクソンに及ぶＧＣＫ遺伝子は、ＧＣＫタンパク質をコードする。不十分な量のＧＣＫＡタンパク質を結果としてもたらすＧＣＫ遺伝子の変異が、ＮＩＤＤＭ、ＭＯＤＹ２、ＨＨＦ３、およびＰＮＤＭの進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究では、ＮＩＤＤＭ、ＭＯＤＹ２、ＨＨＦ３、およびＰＮＤＭを結果としてもたらすＧＣＫ の多数の様々な突然変異が調査され、発現したＧＣＫタンパク質の量の不足と、糖尿病の進行との相互関係が明確に示されてきた。
【０１５４】
タンパク質である、肝核因子−１−アルファアルブミン近位因子（ａｌｂｕｌｉｍ ｐｒｏｘｉｍａｌ ｆａｃｔｏｒ ）（ＨＮＦ１Ａ）の不足は、ＭＯＤＹ３、ＩＤＤＭ２０、ＩＤＤＭ１、およびＮＩＤＤＭの発生率に相互に関連すると示されてきた。１２ｑ２４．３１に位置し、１０エクソンに及ぶＨＮＦ１Ａ遺伝子は、ＨＮＦ１Ａタンパク質をコードする。不十分な量のＨＮＦ１Ａタンパク質を結果としてもたらすＨＮＦ１Ａ遺伝子の変異が、ＭＯＤＹ３、ＩＤＤＭ２０、ＩＤＤＭ１、およびＮＩＤＤＭの進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究では、ＭＯＤＹ３、ＩＤＤＭ２０、ＩＤＤＭ１、およびＮＩＤＤＭを結果としてもたらすＨＮＦ１Ａの多数の様々な突然変異が調査され、発現したＨＮＦ１Ａタンパク質の量の不足と、糖尿病の進行との相互関係が明確に示されてきた。
【０１５５】
タンパク質である核受容体コアクチベーター５（ＮＣＯＡ５）の不足は、タイプＩＩ糖尿病、耐糖能障害、および最終的には肝臓癌の発生率に相互に関連すると示されてきた。２０ｑ１３．１２に位置し、８エクソンに及ぶＮＣＯＡ５遺伝子は、ＮＣＯＡ５タンパク質をコードする。不十分な量のＮＣＯＡ５タンパク質を結果としてもたらすＮＣＯＡ５遺伝子の変異が、糖尿病の進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究では、糖尿病を結果としてもたらす糖尿病の多数の様々な突然変異が調査され、発現した糖尿病タンパク質の量の不足と、糖尿病の進行との相互関係が明確に示されてきた。
【０１５６】
＜肝腺腫＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体優性肝疾患の肝腺腫を処置するために使用されうる。肝腺腫は、悪性転換のリスクが非常に低い珍しい良性の肝腫瘍である。肝腺腫に悩む患者は、腫瘍が出血し始めなければ一般的には無症状であるが、出血すれば、低血圧症、頻脈症、および発汗を引き起こす可能性がある。
【０１５７】
ＨＮＦ１Ａタンパク質中の不足は、肝腺腫の進行を結果としてもたらしうる。不十分な量のＨＮＦ１Ａタンパク質を結果としてもたらすＨＮＦ１Ａ遺伝子の変異が、肝腺腫の進行の原因であることが示されてきた。
【０１５８】
＜ダウリング−デゴス病４＞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載された発明は常染色体優性肝疾患のダウリング−デゴス病４（ＤＤＤ４）を処置するために使用することができる。ＤＤＤ４は、成人期に、特に皮膚のひだに現れる網様色素沈着（ｒｅｔｒｉｃｕｌａｒ ｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ）によって特徴づけられる。病状が体細胞に影響を与えている一方、色素沈着は肝臓の機能不全に起因する。
【０１５９】
タンパク質であるＯ−グルコシルトランスフェラーゼ１（ＬＤＬＲＡＰ１）の不足は、ＤＤＤ４において示される臨床症状を結果として生じる。３ｑ１３．３３に位置し、１１エクソンに及ぶＰＯＧＬＵＴ１遺伝子は、ＰＯＧＬＵＴ１タンパク質をコードする。不十分な量のＰＯＧＬＵＴ１タンパク質を結果としてもたらすＰＯＧＬＵＴ１遺伝子の変異が、ＤＤＤ４の進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究では、ＤＤＤ４を結果としてもたらすＰＯＧＬＵＴ１の多数の様々な突然変異が調査され、ＰＯＧＬＵＴ１タンパク質の量の欠失を結果としてもたらす突然変異が、ＤＤＤ４で見られる臨床症状を引き起こすことを示してきた。
【０１６０】
＜ＳＨＯＲＴ症候群／免疫不全３６／無ガンマグロブリン血症７＞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される発明は、ＳＨＯＲＴ症候群を治療するために使用される。ＳＨＯＲＴ症候群は、低身長、関節の過伸展および／または鼡径ヘルニア、眼球陥凹、リーガー異常、および歯生遅延を含む疾病に関係する臨床症状のアクロニムである。ＳＨＯＲＴ症候群に特有な他の症状は、三角形の顔、くぼみのある小さなあご、皮下脂肪の欠損、耳の異常な位置、聴力損失、および言語障害を含む。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載された発明は、常染色体優性の疾患である免疫不全３６（ＩＭＤ３６）を処置するために使用することができる。ＩＭＤ３６は、損なわれたＢ細胞の機能、低ガンマグロブリン血症、および反復感染によって特徴づけられる。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載された発明は、常染色体劣性の疾患である無ガンマグロブリン血症７（ＡＧＭ７）を処置するために使用することができる。ＡＧＭ７は、損なわれたＢ細胞の機能、低ガンマグロブリン血症、および反復感染によって特徴づけられる。ＡＧＭ７は、低血清抗体および低循環のＢ細胞によって特徴づけられる免疫不全疾患であり、反復感染を結果としてもたらす。
【０１６３】
タンパク質であるホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１（ＰＩＫ３Ｒ１）の不足は、ＳＨＯＲＴ症候群、ＩＭＤ３６、およびＡＧＭ７において示される臨床症状を結果として生じる。５ｑ１３．１に位置し、１６エクソンに及ぶＰＩＫ３Ｒ１遺伝子は、ＰＩＫ３Ｒ１タンパク質をコードする。不十分な量のＰＩＫ３Ｒ１タンパク質を結果としてもたらすＰＩＫ３Ｒ１遺伝子の変異がＳＨＯＲＴ症候群、ＩＭＤ３６、およびＡＧＭ７の進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究ではＳＨＯＲＴ症候群、ＩＭＤ３６、およびＡＧＭ７を結果としてもたらすＰＩＫ３Ｒ１の多数の様々な突然変異が調査されてきた。ある研究では、ＰＩＫ３Ｒ１におけるＲ６４９Ｗの突然変異は、ＳＨＯＲＴ症候群と診断された無関係な個体の集団において発見された。同じ突然変異が感染していた母および彼女の２人の息子において見つかり、これにより、ＳＨＯＲＴ症候群の遺伝の常染色体優性パターンの証拠がもたらされた。
【０１６４】
＜脂質代謝障害＞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載された発明は、タンパク質であるＴｒｉｂｂｌｅｓ−１（ＴＲＩＢ１）の不足によって引き起こされる脂質代謝欠損症を処置するために使用することができる。８ｑ２４．１３に位置し、３エクソンに及ぶＴＲＩＢ１遺伝子によりコードされるＴＲＩＢ１タンパク質の量の欠失は、アテローム動脈硬化症の増大したリスクに関連づけられることが示されてきた。ＴＲＩＢ１が欠如したマウスは、脂肪分解の増加に伴って脂肪組織量を減少させることが示され、これにより、ＴＲＩＢ１の減少したレベルと、脂質代謝の機能不全とが明確に関連付けられた。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載された発明は、タンパク質であるペルオキシソーム増殖因子活性化受容体デルタ（ＰＰＡＲＤ）の不足によって引き起こされる脂質代謝欠損症を処置するために使用することができる。染色体６に位置し、８エクソンに及ぶＰＰＡＲＤ遺伝子によりコードされるＰＰＡＲＤタンパク質の量の欠失は、増大した脂質代謝の機能障害に関連づけられることが示されてきた。
【０１６６】
＜肝臓炎＞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される発明は、タンパク質である形質転換増殖因子ベータ−１（ＴＧＦＢ１）の不足によって引き起こされる肝臓炎を処置するために使用することができる。１９ｑ１３．２に位置し、７エクソンに及ぶＴＧＢＦ１遺伝子によりコードされるＴＧＢＦ１タンパク質の量の欠失は、アテローム動脈硬化症の増大したリスクに関連づけられることが示されてきた。ＴＧＢＦ１（−／−）遺伝子型を示すノックアウトマウスは、ＣＤ４（＋）Ｔ細胞媒介性炎症により重度の肝臓炎を発現させることが示された。そのような研究によって、ＴＧＢＦ１タンパク質の量の不足と、肝臓炎の増加した発生率との間の正相関が提供された。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載された発明は、タンパク質であるインターロイキン６（ＩＬ６）の不足によって引き起こされる脂質炎症を処置するために使用することができる。７ｐ１５．３に位置し、５エクソンに及ぶＩＬ６遺伝子によりコードされるＩＬ６タンパク質の量の欠失は、した脂質炎症に関連づけられることが示されてきた。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載された発明は、セラミドシンターゼ２（ＣＥＲＳ２）タンパク質の不足によって引き起こされる脂質代謝または脂肪性肝炎を処置するために使用することができる。１ｑ２１．３に位置し、１１エクソンに及ぶＣＥＲＳ２遺伝子によりコードされるＣＥＲＳ２タンパク質の量の欠失は、脂肪性肝炎およびインスリン抵抗性に関連づけられることが示されてきた。
【０１６９】
＜ヘモクロマトーシス２Ｂ型＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性肝疾患のヘモクロマトーシス２Ｂ型（ＨＦＥ２Ｂ）を処置するために使用されうる。ＨＦＥ２Ｂ（そうでなければ鉄過剰として知られる）は、関節痛、疲労および脱力感によって特徴づけられ、最終的に器官障害を結果としてもたらす。
【０１７０】
タンパク質であるヘプシジン抗菌ペプチド（ＨＡＭＰ）の不足は、ＨＦＥ２Ｂにおいて示される臨床症状を結果として生じる。１９ｑ１３．１２に位置し、３エクソンに及ぶＨＡＭＰ遺伝子は、ＨＡＭＰタンパク質をコードする。不十分な量のＨＡＭＰタンパク質を結果としてもたらすＨＡＭＰ遺伝子の変異が、ＨＦＥ２Ｂの進行の原因であることが示されてきた。ＨＦＥ２Ｂに悩む患者のＧ９３およびＲ５６のナンセンス変異が報告されてきたが、Ｇ７１Ｄなどのミスセンス変異も発見されてきた。減少した量のＨＡＭＰタンパク質を結果としてもたらすこれらの突然変異がＨＦＥ２Ｂの直接的な原因であることが提唱され、それによってＨＡＭＰのレベルの減少と、ＨＦＥ２Ｂの発生率との間の直接的な相関が提供された。
【０１７１】
＜血小板減少症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体優性の血小板減少症を処置するために使用されうる。血小板減少症は、血液中の血小板の量の減少によって特徴づけられる。血小板減少症の多くの場合が無症状であるが、いくらかの患者は鼻出血などの外出血、倦怠感、疲労および一般的な脱力感を経験する。
【０１７２】
タンパク質であるトロンボポイエチン（ＴＨＰＯ）の不足は、血小板減少症の発生率に関連づけられると示されてきた。３ｑ２７．１に位置し、６エクソンに及ぶＴＨＰＯ遺伝子は、ＴＨＰＯタンパク質をコードする。不十分な量のＴＨＰＯタンパク質を結果としてもたらすＴＨＰＯ遺伝子の変異が、血小板減少症の進行の原因であることが示されてきた。ある研究では、単一のヌクレオチド欠失が、血小板減少症に悩む家族の３世代で見られた。この研究によって、欠損の結果としてのＴＨＰＯタンパク質レベルの不足と、血小板減少症の発生率とは関連づけられた。
【０１７３】
＜非アルコール性脂肪性肝疾患＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を処置するために使用されうる。ＮＡＦＬＤは、肝臓における過剰なトリグリセリドの蓄積によって特徴づけられ、インスリン抵抗性および脂質異常症などの有害な代謝結果と関係しうる。ＮＡＦＬＤの進行に影響を与えうる因子は、肥満症、糖尿病、およびインスリン抵抗性を含む。いくつかの例では、肝臓に凝集した脂肪性沈着物よって炎症反応が促進される可能性があり、硬変または肝臓癌に進行しうる。
【０１７４】
タンパク質であるパタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３（ＰＮＰＬＡ３）の不足は、ＮＡＦＬＤの発生率に関連づけられることが示された。２２ｑ１３に位置し、９エクソンに及ぶＰＮＰＬＡ３遺伝子は、ＰＮＰＬＡ３タンパク質をコードする。不十分な量のＰＮＰＬＡ３タンパク質を結果としてもたらすＰＮＰＬＡ３遺伝子の変異が、ＮＡＦＬＤの進行の原因であることが示されてきた。Ｃ９９Ｇ、Ｇ１１５Ｃ、Ｉ１４８Ｍ、Ｔ２１６Ｐ、およびＫ４３４Ｅなどの多型は、ＮＡＦＬＤの症状を表わす集団で発見された。これらのミスセンス変異はＰＮＰＬＡ３のレベルの減少を結果としてもたらすと示され、これにより、ＰＮＰＬＡ３タンパク質の不足とＮＡＦＬＤの進行との間の相関が提供される。
【０１７５】
＜ウィルソン病＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性障害のウィルソン病を処置するために使用されうる。ウィルソン病は、細胞内の肝銅の劇的な蓄積と、続いて起こる肝臓異常および神経異常によって特徴づけられる。ウィルソン病はそれ自体で、患者において、疲労、出血傾向もしくは錯乱の増加（肝性脳症による）、および門脈圧亢進症を示すこともある。
【０１７６】
タンパク質である銅輸送ＡＴＰアーゼ２（ＡＴＰ７Ｂ）の不足は、ウィルソン病の発生率に関連づけられることが示されてきた。１３ｑ１４．３に位置し、２１エクソンに及ぶＡＴＰ７Ｂ遺伝子は、ＡＴＰ７Ｂタンパク質をコードする。不十分な量のＡＴＰ７Ｂタンパク質を結果としてもたらすＡＴＰ７Ｂ遺伝子の変異が、ウィルソン病の進行の原因であることが示されてきた。Ｌ４９２Ｓ、Ｙ５３２Ｈ、Ｇ５９１Ｄ、Ｒ６１６Ｑ、およびＧ６２６ＡなどのＡＴＰ７Ｂの突然変異は、ウィルソン病の症状を表わす集団で発見された。これらのミスセンス変異はＡＴＰ７Ｂのレベルの減少を結果としてもたらすと示され、これにより、ＡＴＰ７Ｂタンパク質の不足とウィルソン病の進行との間の相関が提供される。
【０１７７】
＜チロシン血症＞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される発明は、チロシン血症を治療するために使用される。チロシン血症は、進行性の肝疾患、および低リン血症性くる病を引き起こす続発性の腎尿細管機能障害によって特徴づけられる。発現は幼時から青年期までと様々である。最も急性な型において、患者は出生後に数週間以内にひどい肝不全を示す一方で、くる病が慢性のチロシン血症における主要症状でありうる。未処置の場合、患者は硬変または肝細胞癌によって若くして死亡する。
【０１７８】
タンパク質であるフマリルアセトアセターゼ（ＦＡＨ）の不足は、チロシン血症の発生率に関連づけられると示されてきた。１５ｑ２５．１に位置し、１４エクソンに及ぶＦＡＨ遺伝子は、ＦＡＨタンパク質をコードする。不十分な量のＦＡＨタンパク質を結果としてもたらすＦＡＨ遺伝子の変異が、ＦＡＨの進行の原因であることが示されてきた。Ｎ１６Ｉ、Ａ１３４Ｄ、Ｃ１９３Ｒ、Ｄ２３３Ｖ、およびＱ２７９Ｒなどの多型は、ＦＡＨの症状を表わす集団で発見された。これらのミスセンス変異はＦＡＨのレベルの減少を結果としてもたらすと示され、これにより、チロシン血症タンパク質の不足とＦＡＨの進行との間の相関が提供される。
【０１７９】
＜アルギニノコハク酸分解酵素欠損症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性障害のアルギニノコハク酸分解酵素欠損症を処置するために使用されうる。アルギニノコハク酸分解酵素欠損症は、精神遅滞および発育障害、肝腫大、皮膚病変、結節性裂毛症を微視的に示しかつ赤色蛍光を発するぱさつく毛、痙攣、ならびに一時的な意識消失によって特徴づけられる。
【０１８０】
タンパク質であるフマリルアセトアセターゼ（ＡＳＬ）の不足は、アルギニノコハク酸分解酵素欠損症の発生率に関連づけられると示されてきた。７ｑ１１．２１に位置し、１７エクソンに及ぶＡＳＬ遺伝子は、ＡＳＬタンパク質をコードする。不十分な量のＡＳＬタンパク質を結果としてもたらすＡＳＬ遺伝子の変異が、アルギニノコハク酸分解酵素欠損症の進行の原因であることが示されてきた。Ｒ１１３Ｑ、Ｖ１７８Ｍ、Ｒ１８２Ｑ、Ｒ２３６Ｗ、Ｑ２８６Ｒ、およびＲ４５６Ｗなどの多型は、アルギニノコハク酸分解酵素欠損症の症状を表わす集団で発見された。これらのミスセンス変異はＡＳＬのレベルの減少を結果としてもたらすと示され、これにより、ＡＳＬタンパク質の不足とアルギニノコハク酸分解酵素欠損症の進行との間の相関が提供される。
【０１８１】
＜ヘモクロマトーシス１型＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性障害のヘモクロマトーシス１型を処置するために使用されうる。ヘモクロマトーシス１型は鉄過剰によって特徴づけられる。過剰な鉄分は、様々な器官に蓄積しそれらの機能不全を引き起こし、かつ硬変、肝細胞癌、糖尿病、心筋症、関節炎、および低ゴナドトロピン性性腺機能低下症を含む深刻な病気を結果としてもたらす。進行性の鉄分蓄積の数十年間後まで、通常その病気の重大な影響は現われない。
【０１８２】
遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質の不足は、ヘモクロマトーシス１型の発生率に関連づけられると示されてきた。６ｐ２２．２に位置し、６エクソンに及ぶＨＦＥ遺伝子は、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質をコードする。不十分な量の遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質を結果としてもたらすＡＳＬ遺伝子の変異が、ヘモクロマトーシス１型欠損症の進行の原因であることが示されてきた。Ｓ６５Ｃ、Ｑ１２７Ｈ、Ａ１７６Ｖ、Ｃ２８２Ｙ、Ｑ２８３Ｐ、およびＶ２９５Ａなどの多型は、ヘモクロマトーシス１型の症状を表わす集団で発見された。これらのミスセンス変異は遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質のレベルの減少を結果としてもたらすと示され、これにより、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質の不足とヘモクロマトーシス１型の進行との間の相関が提供される。
【０１８３】
＜アルストレーム症候群＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性障害のアルストレーム症候群を処置するために使用されうる。アルストレーム症候群は、進行性の錐体杆体網膜ジストロフィー、感音難聴、幼児期の肥満症、および２型糖尿病によって特徴づけられる。拡張型心筋症、黒色表皮腫、男性性腺機能低下症、甲状腺機能低下症、発育遅延、および肝機能障害はまた、その症候群に関連付けられうる。
【０１８４】
タンパク質であるアルストレーム症候群タンパク質１の不足は、アルストレーム症候群の発生率に関連づけられると示されてきた。２ｐ１３．１に位置し、２３エクソンに及ぶＡＬＭＳ１遺伝子は、アルストレーム症候群タンパク質をコードする。不十分な量のアルストレーム症候群タンパク質１を結果としてもたらすＡＬＭＳ１遺伝子の変異が、アルストレーム症候群の進行の原因であることが示されてきた。Ｖ６７１Ｇ、Ｇ１４１２Ａ、Ｉ１８７５Ｖ、Ｓ２１１１Ｒ、Ｄ２６７２Ｈ、およびＫ３４３４Ｅなどの多型は、アルストレーム症候群の症状を表わす集団で発見された。これらのミスセンス変異はアルストレーム症候群タンパク質１のレベルの減少を結果としてもたらすと示され、これにより、アルストレーム症候群タンパク質１の不足とアルストレーム症候群の進行との間の相関が提供される。
【０１８５】
＜先天性胆汁酸合成障害１＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記述される発明は、常染色体劣性障害の先天性胆汁酸合成障害１（ＣＢＡＳ１）を処置するために使用することができる。ＣＢＡＳ１は、進行性の肝疾患を引き起こす胆汁合成の一次欠陥である。臨床的特徴は、新生児黄疸、重度の肝内胆汁うっ滞、硬変を含む。
【０１８６】
タンパク質である３β−水酸化ステロイド脱水素酵素７型（３ＢＨＳ７）の不足は、ＣＢＡＳ１の発生率に関連づけられると示されてきた。１６ｐ１１．２に位置し、６エクソンに及ぶＨＳＤ３Ｂ７遺伝子は、３ＢＨＳ７タンパク質をコードする。不十分な量の３ＢＨＳ７タンパク質を結果としてもたらすＨＳＤ３Ｂ７遺伝子の変異が、ＣＢＡＳ１の進行の原因であることが示されてきた。Ｇ１９Ｓ、Ｅ１４７Ｋ、Ｔ２５０Ａ、およびＬ３４７Ｐなどの多型はＣＢＡＳ１の症状を表わす集団で発見された。これらのミスセンス変異は３ＢＨＳ７のレベルの減少を結果としてもたらすと示され、これにより、３ＢＨＳ７タンパク質の不足とＣＢＡＳ１の進行との間の相関が提供される。
【０１８７】
＜保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）＞
実施形態では、本明細書の方法は、細胞核において、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５の遺伝子から転写され、かつアミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソバレリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝核因子１−αアルブミン近接因子、タンパク質であるＯ−グルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子ベータ−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸分解酵素、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１、３β−水酸化ステロイド脱水素酵素７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体デルタ、インターロイキン６、セラミドシンターゼ２、または核受容体コアクチベーター５タンパク質をコードする、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体）の存在を活用しうる。成熟し、完全にスプライスされたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡを産生するための、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体種のスプライシングは、保持されたイントロンのスプライシングアウトを刺激するＡＳＯを使用して誘発させることができる。結果としてもたらされる成熟したＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡは、細胞質に輸送され、翻訳され、それによって、患者の細胞中で、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ポルフォビリノーゲンデアミナーゼ、超長鎖アシルＣｏＡ脱水素酵素、ピルビン酸カルボキシラーゼイソバレリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４アルファ、グルコキナーゼ、肝核因子−１−αアルブミン近位因子、タンパク質であるＯ−グルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子ベータ−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、タンパク質銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギノコハク酸分解酵素、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１、３β−水酸化ステロイド脱水素酵素７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体デルタ、インターロイキン６、セラミドシンターゼ２、または核受容体コアクチベーター５タンパク質の量を増大させ、各タンパク質の不足により引き起こされた、ＣＮＳの疾患または疾病の症状を緩和することができる。この方法は、以下で更に説明され、核内遺伝子出力の標的化増大（ＴＡＮＧＯ）として知られる。
【０１８８】
ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５の遺伝子によって、イントロン保持事象を分析することができる。場合によっては、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５の遺伝子によって、イントロン保持事象を分析することができる。ＲＮＡ配列決定（ＲＮＡｓｅｑ）は、ＵＣＳＣゲノムブラウザにおいて視覚化することができる、ヒト肝細胞中で発現し、細胞質または核分画のいずれかにおいて局在する、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５の転写産物を示しうる。いくつかの実施形態では、保持されたイントロンを含有するｍＲＮＡ前駆体転写産物は、核中に保持され、細胞質に輸送されない。
【０１８９】
実施形態では、保持されたイントロンは、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％あるいは少なくとも約５０％の保定の保持率に基づき、保持されたイントロンとして特定されたイントロンである。実施形態では、保持されたイントロンはすなわち、約５％から約１００％、約５％から約９５％、約５％から約９０％、約５％から約８５％、約５％から約８０％、約５％から約７５％、約５％から約７０％、約５％から約６５％、約５％から約６０％、約５％から約６５％、約５％から約６０％、約５％から約５５％、約５％から約５０％、約５％から約４５％、約５％から約４０％、約５％から約３５％、約５％から約３０％、約５％から約２５％、約５％から約２０％、約５％から約１５％、約１０％から約１００％、約１０％から約９５％、約１０％から約９０％、約１０％から約８５％、約１０％から約８０％、約１０％から約７５％、約１０％から約７０％、約１０％から約６５％、約１０％から約６０％、約１０％から約６５％、約１０％から約６０％、約１０％から約５５％、約１０％から約５０％、約１０％から約４５％、約１０％から約４０％、約１０％から約３５％、約１０％から約３０％、約１０％から約２５％、約１０％から約２０％、約１５％から約１００％、約１５％から約９５％、約１５％から約９０％、約１５％から約８５％、約１５％から約８０％、約１５％から約７５％、約１５％から約７０％、約１５％から約６５％、約１５％から約６０％、約１５％から約６５％、約１５％から約６０％、約１５％から約５５％、約１５％から約５０％、約１５％から約４５％、約１５％から約４０％、約１５％から約３５％、約１５％から約３０％、約１５％から約２５％、約２０％から約１００％、約２０％から約９５％、約２０％から約９０％、約２０％から約８５％、約２０％から約８０％、約２０％から約７５％、約２０％から約７０％、約２０％から約６５％、約２０％から約６０％、約２０％から約６５％、約２０％から約６０％、約２０％から約５５％、約２０％から約５０％、約２０％から約４５％、約２０％から約４０％、約２０％から約３５％、約２０％から約３０％、約２５％から約１００％、約２５％から約９５％、約２５％から約９０％、約２５％から約８５％、約２５％から約８０％、約２５％から約７５％、約２５％から約７０％、約２５％から約６５％、約２５％から約６０％、約２５％から約６５％、約２５％から約６０％、約２５％から約５５％、約２５％から約５０％、約２５％から約４５％、約２５％から約４０％、あるいは約２５％から約３５％の保定の保持率に基づき、保持されたイントロンとして特定されたイントロンである。複数の実施形態では、この目的に有用な他のＡＳＯは、例えば、本明細書に記載の方法を用いて特定される。
【０１９０】
実施形態では、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のイントロンの番号付けは、表１または表２に示される１以上のｍＲＮＡ配列に対応する。実施形態では、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、表１または表２に示されるような１以上のイントロン中にある。実施形態では、ＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に対するＡＳＯのハイブリダイゼーションは、表１または表２に示されるような１以上の保持されたイントロンのスプライス部位（５’スプライス部位または３’スプライス部位）のスプライシングの増強を結果としてもたらし、その後、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のタンパク質産生を増大させる。イントロンの番号付けは、様々なＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のアイソフォーム配列を参照して変化することが理解される。当業者は、本明細書で提供されるイントロン配列に基づき、あるいは表１または表２において示される１以上のｍＲＮＡ配列を参照して得られる番号を使用することで、任意のアイソフォームにおける対応するイントロン番号を判定することができる。当業者は、本発明の方法を使用して、本明細書において提供されるイントロン配列に基づいて、または表１または表２に示される１以上のｍＲＮＡ配列を参照して得られるイントロンの番号を使用して、標的とするためのＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のアイソフォーム���隣接するエクソンの配列を判定することができる。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＯは、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のゲノム配列から転写されるＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体を標的とする。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＯは、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の配列を標的とする。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＯは、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のゲノム配列によってコードされるＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体転写産物の配列を標的とする。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＯは、表１または表２に示されるような保持されたイントロンを含む、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のゲノム配列によってコードされるＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体転写産物を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−３１よってコードされたＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体を標的とする。
【０１９３】
幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２−１３０のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示されるような保持されたイントロンを含む、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２−１３０のＲＩＣ ｍＲＮＡ前駆体の転写産物を標的とする。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８３４９−７８５０１を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１−７８３４８のうちいずれか１つの配列を含む。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示される保持されたイントロンを含むＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５  ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の、表１または表２に示される保持されたイントロン上流のエクソン配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示される保持されたイントロンを含むＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５  ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の、表１または表２に示される保持されたイントロンの５’スプライス部位から上流（あるいは５’）のエクソン配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示される保持されたイントロンを含むＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５  ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の、５’スプライス部位から約４から約１０００のヌクレオチド上流（あるいは５’）のエクソン配列を標的とする。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示される保持されたイントロンを含むＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５  ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の、表１または表２に示される保持されたイントロン上流のイントロン配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示される保持されたイントロンを含むＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５  ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の、表１または表２に示される保持されたイントロンの５’スプライス部位から下流（あるいは３’）のイントロン配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示される保持されたイントロンを含むＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の、５’スプライス部位よりも約６から約５００のヌクレオチド下流（あるいは３’）のエクソン配列を標的とする。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示される保持されたイントロンを含むＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５  ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の、表１または表２に示される保持されたイントロン下流のエクソン配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示される保持されたイントロンを含むＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５  ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の、表１または表２に示される保持されたイントロンの３’スプライス部位から下流（あるいは３’）のエクソン配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示される保持されたイントロンを含むＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５  ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の、３’スプライス部位よりも約２から約１０００のヌクレオチド下流（あるいは３’）のエクソン配列を標的とする。
タンパク質発現
【０１９７】
実施形態では、本明細書に記載される方法は、機能的タンパク質産生を増加させるために使用される。本明細書において使用されるように、用語「機能的」は、処置される疾病の１つ以上の症状を除去するのに必要なタンパク質の活性または機能の量を指す。実施形態では、部分的機能的タンパク質の産生を増加させるために、前記方法は使用される。本明細書において使用されるように、用語「部分的機能的」は、疾患または疾病の１つ以上の症状を除去あるいは予防するために必要な活性または機能の量未満の、タンパク質の活性または機能の量を指す。いくつかの実施形態では、部分的機能的タンパク質またはＲＮＡは、完全な機能的タンパク質またはＲＮＡに比して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％少ない活性を持つだろう。
【０１９８】
実施形態では、該方法は、タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体を有する被験体の細胞によって、タンパク質の発現を増加させる方法であり、該被験体は、本明細書に記載されたタンパク質の活性量の不足に起因する、本明細書に記載の疾病を有する。いくつかの実施形態では、タンパク質量の不足は、タンパク質のハプロ不全に起因する。そのような実施形態では、被験体は、機能的タンパク質をコードする第１の対立遺伝子と、タンパク質が産生されない第２の対立遺伝子とを有する。別のそのような実施形態では、被験体は、機能的タンパク質をコードする第１の対立遺伝子と、非機能的タンパク質をコードする第２の対立遺伝子を有する。別のそのような実施形態では、被験体は、機能的タンパク質をコードする第１の対立遺伝子と、部分的機能的タンパク質をコードする第２の対立遺伝子を有する。これらの実施形態のいずれの場合でも、アンチセンスオリゴマーは、第１の対立遺伝子（機能的タンパク質をコードする）から転写されたＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に結合し、それによって、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンの構成的スプライシングを誘発し、機能的タンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡレベルの増加と、被験体の細胞中のタンパク質発現の増加をもたらす。
【０１９９】
実施形態では、被験体は、機能的タンパク質をコードする第１の対立遺伝子と、部分的機能的タンパク質をコードする第２の対立遺伝子を有し、アンチセンスオリゴマーは、第１の対立遺伝子から転写されたＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分、あるいは第２の対立遺伝子（部分的機能的タンパク質をコードする）から転写されたＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に結合し、それによって、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンの構成的スプライシングを誘発し、タンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡレベルの増加と、被験体の細胞中の機能的あるいは部分的機能的タンパク質発現の増加をもたらす。
【０２００】
関連する実施形態では、前記方法は、タンパク質あるいは機能的ＲＮＡの発現を増加させるためにＡＳＯを用いる方法である。実施形態では、ＡＳＯは、タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体を有する被験体の細胞における、本明細書に記載のタンパク質の発現を増加させるために使用され、該被験体は、タンパク質の量または機能の不足を有する。
【０２０１】
実施形態では、疾患または疾病の原因となる、タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、本明細書に記載されるＡＳＯによって標的化される。いくつかの実施形態では、疾患の原因ではない、タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、ＡＳＯによって標的化される。例えば、特定の経路における第１のタンパク質の突然変異または不足の結果として生じる疾患は、第２のタンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体を標的とすることによって改善され得、それによって第２のタンパク質産生は増加する。いくつかの実施形態では、第２のタンパク質の機能は、（疾患または疾病の原因である）第１のタンパク質の突然変異または不足を補うことができる。
【０２０２】
実施形態では、被験体は：
ａ）
ｉ）タンパク質が、野生型対立遺伝子からの産生と比較して、減少したレベルで産生され、
ｉｉ）タンパク質が、同等の野生型タンパク質と比較して機能が低下した形態で産生され、あるいは
ｉｉｉ）タンパク質または機能的ＲＮＡが産生されない、第１の変異対立遺伝子；および
ｂ）
ｉ）タンパク質が、野生型対立遺伝子からの産生と比較して、減少したレベルで産生され、
ｉｉ）タンパク質が、同等の野生型タンパク質と比較して機能が低下した形態で産生され、あるいは
ｉｉｉ）タンパク質が産生されない、第２の変異対立遺伝子を有し；
ここでＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、第１の対立遺伝子および／または第２の対立遺伝子から転写される。これらの実施形態では、ＡＳＯは、第１の対立遺伝子または第２の対立遺伝子から転写されたＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に結合することで、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンの構成的スプライシングを誘発し、タンパク質をコードするｍＲＮＡレベルの増加を引き起こし、被験体の細胞中の標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現の増加をもたらす。これらの実施形態では、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンの構成的スプライシングの結果として生じる、発現レベルの増加を有する標的タンパク質あるいは機能的ＲＮＡは、同等の野性型タンパク質と比較して機能性の低い形態（部分的機能的）、あるいは同等の野性型タンパク質と比較して完全な機能性を有する（完全機能的）、のいずれかで有り得る。
【０２０３】
実施形態では、本明細書に記載のタンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルは、例えば、アンチセンスオリゴマーで処置されない、あるいはＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分と結合しないアンチセンスオリゴマーで処置された対照細胞内で産生されたタンパク質をコードするｍＲＮＡの量と比較した場合、１．１倍から１０倍に増加する。
【０２０４】
実施形態では、タンパク質の量あるいは活性の不足に起因する疾病は、ＡＳＯが標的とされる保持されたイントロンの選択的スプライシングあるいは異常スプライシングに起因する疾病ではない。実施形態では、タンパク質の量あるいは活性の不足に起因する疾病は、タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体内の保持されたイントロンの選択的スプライシングあるいは異常スプライシングに起因する疾病ではない。実施形態では、選択的スプライシングあるいは異常スプライシングが、遺伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体に生じ得る。しかしながら、本発明の組成物および方法は、ｍＲＮＡ前駆体内の選択的スプライシングあるいは異常スプライシングを予防しないし、修正しない。
【０２０５】
実施形態では、本発明の方法を使用して処置された被験体は、１つの対立遺伝子から部分的機能的タンパク質を発現し、その部分的機能的タンパク質は、フレームシフト変異、ナンセンス変異、ミスセンス変異、あるいは部分的な遺伝子欠失に起因する。実施形態では、本発明の方法を使用して処置された被験体は、１つの対立遺伝子から非機能的タンパク質を発現し、その非機能的タンパク質は、１つの対立遺伝子におけるフレームシフト変異、ナンセンス変異、ミスセンス変異、部分的な遺伝子欠失に起因する。実施形態では、本発明の方法を用いて処置された被験体は、１つの対立遺伝子に全遺伝子欠失を有する。
タンパク質発現を増加させるためのＴＡＮＧＯの使用
【０２０６】
前述したように、実施形態では、核内遺伝子出力の標的とされた増強（ＴＡＮＧＯ）は、タンパク質の発現を増加させるために、本発明の方法において使用される。これらの実施形態では、タンパク質をコードする保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体）は、細胞の核内にある。タンパク質をコードする、保持されたイントロン、５’スプライス部位に隣接するエクソン、および３’スプライス部位に隣接するエクソンを含むＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体を有する細胞を、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に対して相補的なアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）と接触させる。ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分へのＡＳＯのハイブリダイゼーションは、保持されたイントロンのスプライス部位（５’スプライス部位あるいは３’スプライス部位）のスプライシングを増強し、その後の標的タンパク質産生を増加させる。
【０２０７】
用語「ｍＲＮＡ前駆体」および「ｍＲＮＡ前駆体の転写産物」は、交換可能に使用され、少なくとも１つのイントロンを含むｍＲＮＡ前駆体種を指す。実施形態では、ｍＲＮＡ前駆体またはｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、５’−７−メチルグアノシンキャップ、および／またはポリＡ末端を含む。実施形態では、ｍＲＮＡ前駆体またはｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、５’−７−メチルグアノシンキャップおよびポリＡ末端の両方を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、５’−７−メチルグアノシンキャップ、および／またはポリＡ末端を含まない。タンパク質に翻訳されない場合（あるいは核から細胞質へと輸送された場合）、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物は非生産的メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子である。
【０２０８】
本明細書において使用されるように、「保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体」（「ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体」）は、少なくとも１つの保持されたイントロンを含むｍＲＮＡ前駆体の転写産物である。ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接するエクソン、保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接するエクソンを含み、標的タンパク質をコードする。「標的タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体」は、完全にスプライシングされた場合に、標的タンパク質をコードすると解される。「保持されたイントロン」は、同じ遺伝子によってコードされた、隣接するイントロン等の１つ以上の他のイントロンが、同じｍＲＮＡ前駆体の転写産物からスプライシングアウトされた場合に、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物に存在するイントロンである。いくつかの実施形態では、保持されたイントロンは、標的タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体において最も豊富なイントロンである。実施形態では、保持されたイントロンは、細胞内の標的タンパク質をコードする遺伝子から転写されたＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団において最も豊富なイントロンであり、当該ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団は２つ以上の保持されたイントロンを含む。実施形態では、標的タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の集団において最も豊富なイントロンに標的とされたアンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴマーが標的とされた、あるいは結合する保持されたイントロンを含む集団内の、２つ以上の保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する。実施形態では、標的タンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡは、それによって産生される。「成熟ｍＲＮＡ」および「完全にスプライシングされたｍＲＮＡ」の用語は、標的タンパク質をコードする完全に処理されたｍＲＮＡ（例えば、核から細胞質へと輸送され、標的タンパク質に翻訳されたｍＲＮＡ）、あるいは完全に処理された機能的ＲＮＡを記載するように、本明細書において交換可能に使用される。用語「生産的ｍＲＮＡ」もまた、標的タンパク質をコードする完全に処理されたｍＲＮＡについて記載するように使用することができる。実施形態では、標的領域は、タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体に最も豊富に存在する保持されたイントロンにある。
【０２０９】
本明細書において使用されるように、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、あるいは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等の変化形は、列挙された特徴（例えば、アンチセンスオリゴマーの場合、定義された核酸塩基配列）を含むが、他のいかなる特徴をも除外しないことを示すと解されるべきである。したがって、本明細書において使用されるように、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は包含的で、追加の列挙されていない特徴（例えば、アンチセンスオリゴマーの場合、追加の列挙されていない核酸塩基の存在）を除外しない。
【０２１０】
本明細書において提供される組成物および方法のいずれかの実施形態において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は「から本質的に成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」または「から成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」と置換可能である。「から本質的に成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」という句は、特定された特徴（例えば核酸塩基配列）と共に、請求される本発明の性質または機能に実質的に影響しない特徴も必要とするために本明細書で使用される。本明細書で使用されるように、用語「成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」は、列挙された特徴（例えば核酸塩基配列）単独の存在を示すために使用される（その結果、特定された核酸塩基配列から成るアンチセンスオリゴマーの場合には、追加の列挙されていない核酸塩基の存在は除外される）。
【０２１１】
実施形態では、標的領域は、本明細書に記載のタンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体に２番目に豊富に存在するイントロンである保持されたイントロンにある。例えば、２番目に豊富な保持されたイントロンは、最も豊富な保持されたイントロンよりむしろ標的とされ得る。その要因は、２番目に豊富な保持されたイントロンのヌクレオチド配列の独自性、特定のヌクレオチド配列を標的とするＡＳＯ設計の容易さ、および／またはＡＳＯによりイントロンを標的とすることから生じるタンパク質産生量の増加である。実施形態では、保持されたイントロンは、細胞内の標的タンパク質をコードする遺伝子から転写されたＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体集団において２番目に豊富なイントロンであり、そのＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体集団は、２つ以上の保持されたイントロンを含む。実施形態では、標的タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体集団における２番目に豊富なイントロンを標的とするアンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴマーが標的とする、または結合する保持されたイントロンを含む集団において、２つ以上の保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する。それによって、実施形態では、標的タンパク質をコードする完全にスプライシングされた（成熟）ＲＮＡが産生される。
【０２１２】
実施形態では、ＡＳＯは、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の保持されていないイントロン内にある標的領域に相補的である。実施形態では、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は：保持されていないイントロンの５’スプライス部位に対する＋６から＋１００の領域；または保持されていないイントロンの３’スプライス部位に対する−１６から−１００の領域内にある。実施形態では、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されていないイントロンの５’スプライス部位に対する＋１００の領域から、保持されていないイントロンの３’スプライス部位に対する−１００の領域内にある。領域または配列の位置を特定するために使用されるように、「内（ｗｉｔｈｉｎ）」は、列挙される位置の残基を含むと理解される。例えば、＋６から＋１００の領域は、＋６および＋１００の位置の残基を含む。それによって、実施形態では、標的タンパク質をコードする完全にスプライシングされた（成熟）ＲＮＡが産生される。
【０２１３】
実施形態では、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の保持されたイントロンは、非効率的にスプライシングされたイントロンである。本明細書で使用されるように、「非効率的にスプライシングされた」は、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体における別のスプライス部位でのスプライシングの頻度と比較して、保持されたイントロンに隣接するスプライス部位（５’スプライス部位または３’スプライス部位）でのスプライシングの頻度が比較的低いことを指し得る。用語「非効率的にスプライシングされた」はまた、スプライス部位でのスプライシングの相対速度または動態（ｋｉｎｅｔｉｃｓ）を指し得る。この「非効率的にスプライシングされた」イントロンは、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体における別のイントロンと比較して、より遅い速度でスプライシングあるいは除去され得る。
【０２１４】
実施形態では、５’スプライス部位に隣接するエクソンの−３ｅから−１ｅ、および保持されたイントロンの＋１から＋６の９−ヌクレオチド配列は、対応する野生型配列と同一である。実施形態では、保持されたイントロンの−１５から−１および３’スプライス部位に隣接するエクソンの＋１ｅの１６ヌクレオチド配列は、対応する野生型配列と同一である。本明細書で使用される「野生型配列」は、生体および科学の情報のＮＣＢＩリポジトリ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，８６００  Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ  Ｐｉｋｅ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ  ＵＳＡ  ２０８９４によって運営される）に寄託された公開された参照ゲノムにおける標的遺伝子に対するヌクレオチド配列を指す。さらに本明細書で使用されるように、「ｅ」で示されたヌクレオチド位置は、ヌクレオチドがエクソン（例えば、５’スプライス部位に隣接するエクソン、または３’スプライス部位に隣接するエクソン）の配列中に存在することを示す。
【０２１５】
該方法では、細胞を、本明細書に記載のタンパク質をコードするｍＲＮＡ前駆体の一部に相補的であるＡＳＯと接触させる工程であって、結果としてタンパク質発現が増加する工程を含む。本明細書で使用されるように、細胞に「接触させる」または投与することは、ＡＳＯと細胞が相互作用するように、ＡＳＯを細胞に即座に近接させる方法を指す。ＡＳＯと接触させられる細胞は、ＡＳＯを細胞へと取り込む又は輸送する。該方法は、疾病または疾患に関係する、あるいは疾病または疾患に関連する細胞を、ＡＳＯと接触させる工程を含む。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＡＳＯを細胞型に対して標的とする、ＡＳＯと疾病または疾患に関係する又は疾病または疾患に関連する細胞との間の接触を増強する、またはＡＳＯの取り込みを増強するために、さらに修飾され得るかまたは別の分子に結合され得る（例えば、共有結合される）。
【０２１６】
本明細書で使用されるように、用語「タンパク質産生を増加させる」または「標的タンパク質の発現を増加させる」は、細胞中のｍＲＮＡから翻訳されるタンパク質の量を増加させることを意味する。「標的タンパク質」は、発現／産生の増加が望まれるタンパク質で有り得る。
【０２１７】
実施形態では、例えば、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体を発現する細胞を、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部分に相補的であるＡＳＯと接触させる工程は、結果として、ｍＲＮＡ前駆体によってコードされるタンパク質（例えば標的タンパク質）の量の測定可能な増加をもたらす。タンパク質の産生を測定または検出する方法は、当業者に明白となり、あらゆる既知の方法、例えば、ウェスタンブロッティング、フローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡検査法、およびＥＬＩＳＡを含む。
【０２１８】
実施形態では、細胞を、ＲＩＣ  ｍＲＮＡの転写産物の標的部分に相補的であるＡＳＯに接触させる工程は、結果として、ＡＳＯの欠如／処置の欠如下における細胞によって産生されたタンパク質の量と比較して、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、８０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、または１０００％の、産生されたタンパク質の量の増加をもたらす。実施形態では、アンチセンスオリゴマーが接触させられた細胞によって産生されたタンパク質の合計量は、対照化合物により産生された標的タンパク質の量と比較して、約１．１倍から約１０倍、約１．５倍から約１０倍、約２倍から約１０倍、約３倍から約１０倍、約４倍から約１０倍、約１．１倍から約５倍、約１．１倍から約６倍、約１．１倍から約７倍、  約１．１倍から約８倍、約１．１倍から約９倍、約２倍から約５倍、約２倍から約６倍、約２倍から約７倍、約２倍から約８倍、約２倍から約９倍、約３倍から約６倍、約３倍から約７倍、約３倍から約８倍、約３倍から約９倍、約４倍から約７倍、  約４倍から約８倍、約４倍から約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも４倍、少なくとも約５倍、または少なくとも約１０倍に増加する。対照化合物は、例えば、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的でないオリゴヌクレオチドで有り得る。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、細胞を、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部分に相補的であるＡＳＯと接触させる工程は、結果として、標的タンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡを含む、タンパク質をコードするｍＲＮＡ量の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質をコードするｍＲＮＡ、またはタンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡの量はＡＳＯの欠如／処置の欠如下における細胞によって産生されたタンパク質の量と比較して、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、８０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、または１０００％増加する。いくつかの実施形態では、タンパク質をコードするｍＲＮＡ、アンチセンスオリゴマーが接触させられた細胞において産生されたタンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡの合計量は、例えば、処置されていない細胞または対照化合物で処置された細胞などの、処置されていない細胞で産生された成熟ＲＮＡ量と比較して、約１．１倍から約１０倍、約１．５倍から約１０倍、約２倍から約１０倍、約３倍から約１０倍、約４倍から約１０倍、約１．１倍から約５倍、約１．１倍から約６倍、約１．１倍から約７倍、約１．１倍から約８倍、約１．１倍から約９倍、約２倍から約５倍、約２倍から約６倍、約２倍から約７倍、約２倍から約８倍、約２倍から約９倍、約３倍から約６倍、約３倍から約７倍、約３倍から約８倍、約３倍から約９倍、約４倍から約７倍、約４倍から約８倍、約４倍から約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、または少なくとも約１０倍に増加する。対照化合物は、例えば、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的でないオリゴヌクレオチドでもよい。
ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンの構成的スプライシング
【０２２０】
本明細書で提供される方法およびアンチセンスオリゴヌクレオチド組成物は、タンパク質をコードするｍＲＮＡ、またはタンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡのレベルを増加させることによって、例えば、本明細書に記載のタンパク質の量または活性の不足がもたらす本明細書に記載の疾病を有する被験体において、細胞内のタンパク質の発現を増加させることに有用である。特に、本明細書に記載される方法および組成物は、タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の転写産物からの保持されたイントロンの構成的スプライシングを誘発し、それによって、タンパク質をコードするｍＲＮＡ、またはタンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡのレベルが増加し、タンパク質の発現が増加する。
【０２２１】
ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンの構成的スプライシングは、保持されたイントロンをＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体から正しく除去し、ここで保持されたイントロンは、野生型スプライス配列を有する。構成的スプライシングは、本明細書で使用されるように、遺伝子または対立遺伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングまたは異常スプライシングを引き起こす突然変異を有する遺伝子または対立遺伝子から転写されたＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンのスプライシングを包含しない。例えば、本明細書で提供される方法およびアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用して誘発された、保持されたイントロンの構成的スプライシングは、ｍＲＮＡ前駆体における異常スプライシングを訂正しない、またはｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングに影響せず、結果的に標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現が増加する。
【０２２２】
実施形態では、構成的スプライシングは、保持されたイントロンをＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体から正しく除去し、ここでＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、野生型の遺伝子または対立遺伝子、あるいは多形性の遺伝子または対立遺伝子から転写され、完全に機能的な標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードし、遺伝子または対立遺伝子は、保持されたイントロンの選択的スプライシングまたは異常スプライシングを引き起こす突然変異を有さない。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンの構成的スプライシングは、タンパク質をコードするＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体から、保持されたイントロンを正しく除去し、ここでＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、野生型対立遺伝子からの産生と比較して減少したレベルで標的遺伝子あるいは機能的ＲＮＡを産生する遺伝子または対立遺伝子から転写され、および遺伝子または対立遺伝子は、保持されたイントロンの選択的スプライシングまたは異常スプライシングを引き起こす突然変異を有さない。これらの実施形態では、構成的スプライシングをされた保持されたイントロンの正しい除去は、結果として、同等の野生型タンパク質または機能的ＲＮＡと比較したときに機能的である標的タンパク質または機能的ＲＮＡの産生をもたらす。
【０２２４】
他の実施形態では、構成的スプライシングは、保持されたイントロンをＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体から正しく除去し、ここでＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、同等の野生型タンパク質または機能的ＲＮＡと比較して、機能の低下した形態で産生された標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子または対立遺伝子から転写され、遺伝子または対立遺伝子は、保持されたイントロンの選択的スプライシングまたは異常スプライシングを引き起こす突然変異を有さない。これらの実施形態では、構成的にスプライシングされた保持されたイントロンの正しい除去は、結果として、部分的に機能的な標的タンパク質、または同等の野生型タンパク質または機能的ＲＮＡと比較したときに部分的に機能的である機能的ＲＮＡの産生をもたらす。
【０２２５】
構成的スプライシングによる保持されたイントロンの「正しい除去」は、エクソンのいかなる部分も除去することのない、全イントロンの除去を指す。
【０２２６】
実施形態では、本明細書に記載されるような、または本明細書に記載される方法に使用されるアンチセンスオリゴマーは、遺伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングまたは異常スプライシングを調節することによって、タンパク質をコードするｍＲＮＡの量、またはタンパク質の量を増加させない。選択的スプライシングまたは異常スプライシングの調節は、ＲＮＡ種の配列および長さを解析する既知の方法を使用して、例えば、ＲＴ−ＰＣＲによって、および本明細書および文献中で別記される方法を使用して測定することができる。実施形態では、選択的スプライシングまたは異常スプライシングの調節は、対象となるスプライシングされた種の量の、少なくとも１０％または１．１倍の増加または減少に基づいて判定される。実施形態では、調節は、本発明の方法においてタンパク質をコードするｍＲＮＡの増加の判定に関して本明細書に記載されるように、少なくとも１０％から１００％または１．１倍から１０倍のレベルでの増加または減少に基づいて判定される。
【０２２７】
実施形態では、該方法は、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体が、野生型ｍＲＮＡ前駆体の部分的スプライシングによって産生された方法である。実施形態では、該方法は、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体が、全長の野生型ｍＲＮＡ前駆体の部分的スプライシングによって産生された方法である。実施形態では、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は、全長のｍＲＮＡ前駆体の部分的スプライシングによって産生された。これらの実施形態では、全長のｍＲＮＡ前駆体は、野生型スプライス部位配列を有する保持されたイントロンのスプライシングと比較して、保持されたイントロンの正しいスプライシングを損なわない保持されたイントロンのスプライス部位に多型を有し得る。
【０２２８】
実施形態では、タンパク質をコードするｍＲＮＡは、全長の成熟ｍＲＮＡまたは野生型成熟ｍＲＮＡである。これらの実施形態では、全長の成熟ｍＲＮＡは、野生型成熟ｍＲＮＡによってコードされたタンパク質の活性と比較して、成熟ｍＲＮＡによってコードされた標的タンパク質または機能的ＲＮＡの活性に影響しない多型を有し得る。
アンチセンスオリゴマー
【０２２９】
本開示の一態様は、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に結合することによってスプライシングを増強するアンチセンスオリゴマーを含む組成物である。本明細書で使用されるように、用語「ＡＳＯ」および「アンチセンスオリゴマー」は交換可能に使用され、ワトソン・クリック塩基対またはゆらぎ塩基対（Ｇ−Ｕ）によって標的核酸（例えば、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体）配列にハイブリダイズする、核酸塩基を含む、ポリヌクレオチドなどのオリゴマーを指す。ＡＳＯは、標的配列に相補的な、またはほぼ相補的（例えば、標的配列に結合し、スプライス部位でスプライシングを増強させるのに十分な相補性）である正確な配列を有し得る。ＡＳＯは、標的核酸（例えば、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的とされた部分）に結合し（ハイブリダイズし）、生理学的条件下でハイブリダイズされたままであるように設計されている。典型的に、ＡＳＯは、意図した（標的とされた）核酸配列以外の部位にハイブリダイズする場合、標的核酸でない限られた数の配列に（標的核酸以外の少数の部位に）ハイブリダイズする。ＡＳＯの設計は、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的とされた部分の核酸配列、あるいはゲノムまたは細胞のｍＲＮＡ前駆体またはトランスクリプトームにおける他の場所での十分に類似した核酸配列の発生を考慮に入れることができ、その結果、ＡＳＯが他の部位に結合し「オフターゲット」効果を引き起こす可能性は限定される。例えば、発明の名称「Ｒｅｄｕｃｉｎｇ  Ｎｏｎｓｅｎｓｅ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｍＲＮＡ  Ｄｅｃａｙ」のＷＯ２０１５／０３５０９１として公開されたＰＣＴ国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０５４１５１におけるものなどの、当業者に既知のアンチセンスオリゴマーは、本明細書に記載される方法を実施するために使用され得る。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、標的核酸またはＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的とされた部分に「特異的にハイブリダイズする」または「特異的である」。典型的に、そのようなハイブリダイゼーションは、３７℃より実質的に高い融解温度（Ｔｍ）で、好ましくは少なくとも５０℃で、および典型的に６０℃からおよそ９０℃の間で生じる。そのようなハイブリダイゼーションは、好ましくは、厳しいハイブリダイゼーション条件に対応している。与えられたイオン強度およびｐＨで、Ｔｍは、標的配列の５０％が相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズする温度である。
【０２３１】
オリゴヌクレオチドなどのオリゴマーは、ハイブリダイゼーションが２つの一本鎖ポリヌクレオチド間の逆平行構成で生じるときに、互いに「相補的」である。二本鎖ポリヌクレオチドは、ハイブリダイゼーションが第１のポリヌクレオチドの鎖の１つと第２のポリヌクレオチドの鎖の１つとの間に生じる場合に、別のポリヌクレオチドに「相補的」であり得る。相補性（１つのポリヌクレオチドが別のポリヌクレオチドと相補的である程度）は、一般に容認された塩基対合則に従って、互いに水素結合を形成すると予期される対向する鎖における塩基の割合（例えばパーセンテージ）の点から数量化できる。アンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）の配列は、ハイブリダイズするその標的核酸の配列に１００％相補的である必要はない。特定の実施形態では、ＡＳＯは、標的とされる標的核酸配列内の標的部分に対する、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列相補性を含み得る。例えば、オリゴマー化合物の２０の核酸塩基のうちの１８が標的領域に相補的であり、それゆえに特異的にハイブリダイズするＡＳＯは、９０パーセントの相補性を表わす。この例において、残りの相補的でない核酸塩基は、ともにクラスター化され得るか、または相補的な核酸塩基と分散され（ｉｎｔｅｒｓｐｅｒｓｅｄ）、互いに又は相補的な核酸塩基に隣接している必要はない。ＡＳＯの標的核酸の領域とのパーセント相補性は、ＢＬＡＳＴプログラム（基礎的なローカルアライメント検索ツール）および当該技術分野で既知のＰｏｗｅｒＢＬＡＳＴプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９０，２１５，４０３−４１０；Ｚｈａｎｇ  ａｎｄ  Ｍａｄｄｅｎ，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．，１９９７，７，６４９−６５６）を慣例的に使用して判定され得る。
【０２３２】
ＡＳＯは、標的配列におけるすべての核酸塩基にハイブリダイズする必要はなく、それがハイブリダイズする核酸塩基は、隣接しているか又は隣接していないこともある。ＡＳＯは、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の１つ以上のセグメントにわたってハイブリダイズし得、その結果、介在する又は隣接するセグメントは、ハイブリダイゼーション事象に関係しない（例えば、ループ構造またはヘアピン構造が形成され得る）。特定の実施形態では、ＡＳＯは、標的ｍＲＮＡ前駆体の転写産物において隣接していない核酸塩基にハイブリダイズする。例えば、ＡＳＯは、ＡＳＯがハイブリダイズしない１つ以上の核酸塩基によって分離される、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物における核酸塩基にハイブリダイズすることができる。
【０２３３】
本明細書に記載されるＡＳＯは、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に存在する核酸塩基に相補的である核酸塩基を含む。用語「ＡＳＯ」は、オリゴヌクレオチド、および標的ｍＲＮＡ上の相補的な核酸塩基にハイブリダイズすることができる核酸塩基を含むが、ペプチド核酸（ＰＮＡ）などの糖部を含まない、他のオリゴマー分子を具体化する。ＡＳＯは、自然発生のヌクレオチド、ヌクレオチドアナログ、修飾されたヌクレオチド、またはそれらの２つ又は３つの任意の組み合わせを含み得る。用語「自然発生のヌクレオチド」は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む。用語「修飾されたヌクレオチド」は、修飾された又は置換された糖類及び／又は修飾された骨格を有するヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡＳＯのヌクレオチドのすべてが、修飾されたヌクレオチドである。本明細書に記載される方法および組成物と適合性のあるＡＳＯの化学修飾およびＡＳＯの成分は、当業者に明白となり、例えば、米国特許第８，２５８，１０９号  Ｂ２、米国特許第５，６５６，６１２号、米国特許公開番号２０１２／０１９０７２８、およびＤｉａｓ  ａｎｄ  Ｓｔｅｉｎ，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．２００２，３４７−３５５に見出すことができ、それら全体が引用によって本明細書に組み込まれる。
【０２３４】
ＡＳＯの核酸塩基は、アデニン、グアニン、シトシン、チミンおよびウラシルなどの自然発生の未修飾の核酸塩基、または標的ｍＲＮＡ前駆体上に存在する核酸塩基との水素結合が可能であるように未修飾の核酸塩基に十分に類似している合成または修飾された核酸塩基であり得る。修飾された核酸塩基の例としては、限定されないが、ヒポキサンチン、キサンチン、７−メチルグアニン、５，６−ジヒドロウラシル、５−メチルシトシン、および５−ヒドロキシメチルシトシンが挙げられる。
【０２３５】
本明細書に記載されるＡＳＯはまた、オリゴマーの成分に結合する骨格構造を含む。用語「骨格構造」および「オリゴマー結合」は、交換可能に使用され、ＡＳＯの単量体間の結合を指し得る。自然発生のオリゴヌクレオチドでは、骨格は、オリゴマーの糖部を結合する３’−５’ホスホジエステル結合を含む。本明細書に記載されるＡＳＯの骨格構造またはオリゴマー結合は、（限定されないが）ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホラニラデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｎｉｌａｄａｔｅ）、ホスホラミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ）などを含む。例えば、ＬａＰｌａｎｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：９０８１（１９８６）；Ｓｔｅｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：６０７７（１９８４），Ｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：３２０９（１９８８），Ｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ６：５３９（１９９１）；Ｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｐｐ．８７−１０８（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９１））；Ｓｔｅｃ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，１５１，５１０号；Ｕｈｌｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｐｅｙｍａｎ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ９０：５４３（１９９０）を参照されたい。幾つかの実施形態では、ＡＳＯの骨格構造は、亜リン酸を含有していないが、例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、またはカルバミン酸塩、アミド、および直鎖および環式の炭化水素基を含む連結基において、ペプチド結合を含有している。幾つかの実施形態では、骨格修飾は、ホスホロチオエート結合である。幾つかの実施形態では、骨格修飾は、ホスホラミデート結合である。
【０２３６】
実施形態では、ＡＳＯ骨格のリンヌクレオチド間の結合の各々での立体化学は、ランダムである。実施形態では、ＡＳＯ骨格のリンヌクレオチド間の結合の各々での立体化学は、制御され、ランダムではない。例えば、引用によって本明細書に組み込まれた米国特許公開番号２０１４／０１９４６１０、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ」は、核酸オリゴマーにおいて各リン原子でキラリティーの利き手（ｈａｎｄｅｄｎｅｓｓ）を独立して選択する方法について記載している。実施形態では、本発明の方法において使用されるＡＳＯは、ランダムではないリンヌクレオチド間の結合を有するＡＳＯを含む。実施形態では、本発明の方法に使用される組成物は、純粋なジアステレオマーＡＳＯを含む。実施形態では、本発明の方法に使用される組成物は、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、約１００％、約９０％から約１００％、約９１％から約１００％、約９２％から約１００％、約９３％から約１００％、約９４％から約１００％、約９５％から約１００％、約９６％から約１００％、約９７％から約１００％、約９８％から約１００％、または約９９％から約１００％のジアステレオマー純度を有するＡＳＯを含む。
【０２３７】
実施形態では、ＡＳＯは、そのリンヌクレオチド間の連鎖でＲｐおよびＳｐの構成のランダムでない混合物を有している。例えば、ＲｐとＳｐの混合物が、アンチセンスオリゴヌクレオチドにおいて、優れた活性とヌクレアーゼ安定性との間のバランスを達成するために必要であることが示唆されてきた（Ｗａｎ，ｅｔ  ａｌ．，２０１４，「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｓｅｃｏｎｄ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｃｈｉｒａｌ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ  ｌｉｎｋａｇｅｓ」Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４２（２２）：１３４５６−１３４６８、引用によって本明細書に組み込まれる）。実施形態では、本発明の方法において使用されるＡＳＯは、約５〜１００％のＲｐ、少なくとも約５％のＲｐ、少なくとも約１０％のＲｐ、少なくとも約１５％のＲｐ、少なくとも約２０％のＲｐ、少なくとも約２５％のＲｐ、少なくとも約３０％のＲｐ、少なくとも約３５％のＲｐ、少なくとも約４０％のＲｐ、少なくとも約４５％のＲｐ、少なくとも約５０％のＲｐ、少なくとも約５５％のＲｐ、少なくとも約６０％のＲｐ、少なくとも約６５％のＲｐ、少なくとも約７０％のＲｐ、少なくとも約７５％のＲｐ、少なくとも約８０％のＲｐ、少なくとも約８５％のＲｐ、少なくとも約９０％のＲｐ、または少なくとも約９５％のＲｐと、残りのＳｐ、あるいは約１００％のＲｐを含む。実施形態では、本発明の方法で使用されるＡＳＯは、約１０％から約１００％のＲｐ、約１５％から約１００％のＲｐ、約２０％から約１００％のＲｐ、約２５％から約１００％のＲｐ、約３０％から約１００％のＲｐ、約３５％から約１００％のＲｐ、約４０％から約１００％のＲｐ、約４５％から約１００％のＲｐ、約５０％から約１００％のＲｐ、約５５％から約１００％のＲｐ、約６０％から約１００％のＲｐ、約６５％から約１００％のＲｐ、約７０％から約１００％のＲｐ、約７５％から約１００％のＲｐ、約８０％から約１００％のＲｐ、約８５％から約１００％のＲｐ、約９０％から約１００％のＲｐ、約９５％から約１００％のＲｐ、約２０％から約８０％のＲｐ、約２５％から約７５％のＲｐ、約３０％から約７０％のＲｐ、約４０％から約６０％のＲｐ、または約４５％から約５５％のＲｐと、残りのＳｐを含む。
【０２３８】
実施形態では、本発明の方法で使用されるＡＳＯは、約５〜１００％のＳｐ、少なくとも約５％のＳｐ、少なくとも約１０％のＳｐ、少なくとも約１５％のＳｐ、少なくとも約２０％のＳｐ、少なくとも約２５％のＳｐ、少なくとも約３０％のＳｐ、少なくとも約３５％のＳｐ、少なくとも約４０％のＳｐ、少なくとも約４５％のＳｐ、少なくとも約５０％のＳｐ、少なくとも約５５％のＳｐ、少なくとも約６０％のＳｐ、少なくとも約６５％のＳｐ、少なくとも約７０％のＳｐ、少なくとも約７５％のＳｐ、少なくとも約８０％のＳｐ、少なくとも約８５％のＳｐ、少なくとも約９０％のＳｐ、または少なくとも約９５％のＳｐと、残りのＲｐ、あるいは約１００％のＳｐを含む。実施形態では、本発明の方法で使用されるＡＳＯは、約１０％から約１００％のＳｐ、約１５％から約１００％のＳｐ、約２０％から約１００％のＳｐ、約２５％から約１００％のＳｐ、約３０％から約１００％のＳｐ、約３５％から約１００％のＳｐ、約４０％から約１００％のＳｐ、約４５％から約１００％のＳｐ、約５０％から約１００％のＳｐ、約５５％から約１００％のＳｐ、約６０％から約１００％のＳｐ、約６５％から約１００％のＳｐ、約７０％から約１００％のＳｐ、約７５％から約１００％のＳｐ、約８０％から約１００％のＳｐ、約８５％から約１００％のＳｐ、約９０％から約１００％のＳｐ、または約９５％から約１００％のＳｐ、約２０％から約８０％のＳｐ、約２５％から約７５％のＳｐ、約３０％から約７０％のＳｐ、約４０％から約６０％のＳｐ、または約４５％から約５５％のＳｐと、残りのＲｐを含む。
【０２３９】
本明細書に記載されるＡＳＯのいずれかは、自然発生のヌクレオチド中に存在するような、リボースまたはデオキシリボースを含む糖部、あるいはモルホリン環を含む、修飾された糖部または糖アナログを含有し得る。修飾された糖部の限定しない例は、２’−Ｏ−メチル（２’−Ｏ−Ｍｅ）、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノエチル、２’Ｆ；Ｎ３’−＞Ｐ５’ホスホラミデート、２’ジメチルアミノオキシエトキシ、２’ジメチルアミノエトキシエトキシ、２’−グアニジニウム（ｇｕａｎｉｄｉｎｉｄｉｕｍ）、２’−Ｏ−グアニジニウムエチル、カルバミン酸塩修飾した糖、および二環式修飾した糖などの、２’置換基を含む。幾つかの実施形態では、糖部修飾は、２’−Ｏ−Ｍｅ、２’Ｆ、および２’ＭＯＥから選択される。幾つかの実施形態では、糖部修飾は、ロックド核酸（ＬＮＡ）におけるような追加の架橋結合である。幾つかの実施形態では、糖アナログは、ホスホロジアミデートモルホリノ（ＰＭＯ）などのモルホリン環を含有している。幾つかの実施形態では、糖部は、リボフラノシルまたは２’デオキシリボフラノシルの修飾を含む。幾つかの実施形態では、糖部は、２’４’抑制された（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ）２’Ｏ−メチルオキシエチル（ｃＭＯＥ）修飾を含む。幾つかの実施形態では、糖部は、ｃＥｔ  ２’，４抑制された２’−ＯエチルＢＮＡ修飾を含む。幾つかの実施形態では、糖部は、トリシクロＤＮＡ（ｔｃＤＮＡ）修飾を含む。幾つかの実施形態では、糖部は、エチレン核酸（ＥＮＡ）修飾を含む。幾つかの実施形態では、糖部は、ＭＣＥ修飾を含む。修飾は当該技術分野では既知であり、例えば、この目的のための参照によって本明細書に組み込まれた文献、Ｊａｒｖｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，「Ａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ｆｏｒ  Ｅｘｏｎ  Ｓｋｉｐｐｉｎｇ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ２４（１）：３７−４７に記載されている。
【０２４０】
幾つかの例では、ＡＳＯの各単量体は、同じ方法で修飾され、例えば、ＡＳＯの骨格の各結合はホスホロチオエート結合を含み、または各リボース糖部は２’Ｏ−メチル修飾を含む。ＡＳＯの単量体成分の各々の上に存在する、そのような修飾は、「均一な修飾」と呼ばれる。幾つかの例では、異なる修飾の組み合わせが望まれ得、例えば、ＡＳＯは、ホスホロジアミデート結合とモルホリン環を含む糖部（モルホリノ）との組み合わせを含み得る。ＡＳＯへの異なる修飾の組み合わせは、「混合修飾」または「混合化学作用」と呼ばれる。
【０２４１】
幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、１つ以上の骨格修飾を含む。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、１つ以上の糖部修飾を含む。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、１つ以上の骨格修飾および１つ以上の糖部修飾を含む。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、２’ＭＯＥ修飾およびホスホロチオエート骨格を含む。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、ホスホロジアミデートモルホリノ（ＰＭＯ）を含む。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、ペプチド核酸（ＰＮＡ）を含む。本明細書に記載されるＡＳＯのいずれか又はＡＳＯの成分（例えば、核酸塩基、糖部、骨格）は、ＡＳＯの望ましい特性または活性を達成するために、あるいはＡＳＯの望ましくない特性または活性を減少させるために修飾されてもよい。例えば、ＡＳＯまたはＡＳＯの１つ以上の成分は、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物上の標的配列への結合親和性を増強する；非標的配列への結合を減少させる；細胞のヌクレアーゼ（つまり、ＲＮａｓｅ  Ｈ）による分解を減少させる；細胞および／または細胞の核へのＡＳＯの取り込みを改善する；ＡＳＯの薬物動態（ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ）または薬力（ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ）を変更する；およびＡＳＯの半減期を調節するために修飾され得る。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）（ＭＯＥ）ホスホロチオエート修飾されたヌクレオチドで構成される。そのようなヌクレオチドで構成されたＡＳＯは、特に、本明細書で開示される方法によく適しており、そのような修飾を有するオリゴマーは、ヌクレアーゼ分解に対する著しく増強された耐性および増加したバイオアベイラビリティを有すると示されており、これによって、例えば、本明細書に記載される幾つかの実施形態における経口送達に適するようになる。例えば、Ｇｅａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．２００１；２９６（３）：８９０−７；Ｇｅａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．２００１；２９６（３）：８９８−９０４を参照。
【０２４３】
ＡＳＯを合成する方法は当業者に既知である。代替的に又は加えて、ＡＳＯは商用源から得てもよい。
【０２４４】
他に明記されない限り、一本鎖核酸（例えば、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物、オリゴヌクレオチド、ＡＳＯなど）配列の左端は、５’末端であり、一本鎖または二本鎖の核酸配列の左方向は、５’方向と呼ばれる。同様に、核酸配列（一本鎖または二本鎖）の右端または右方向は、３’末端または３’方向である。一般に、核酸中の基準点に対する５’にある領域または配列は、「上流」として言及され、核酸中の基準点に対する３’にある領域または配列は、「下流」として言及される。一般に、ｍＲＮＡの５’方向または５’末端は、開始コドン（ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ  ｏｒ  ｓｔａｒｔ  ｃｏｄｏｎ）が位置する場所であり、一方で、３’末端または３’方向は、終止コドンが位置する場所である。幾つかの態様では、核酸中の基準点の上流にあるヌクレオチドは、負の数によって指定され、基準点の下流にあるヌクレオチドは、正の数によって指定され得る。例えば、基準点（例えば、ｍＲＮＡ中のエクソン−エクソン連結）は「ゼロ」部位として指定され得、基準点に直接隣接し且つその上流にあるヌクレオチドは、「マイナス１」、例えば「−１」と指定され、一方で、基準点に直接隣接し且つその下流にあるヌクレオチドは、「プラス１」、例えば「＋１」と指定される。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５  ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体内に保持されたイントロンの５’スプライス部位の下流（３’方向）である、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ５Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ３  ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分（例えば、５’スプライ部位に対して、正の数で示された方向）に対して相補的である（および結合する）（図１）。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋１６から＋１００の領域内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、あるいはＮＣＯＡ５  ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に対して相補的である。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、５’スプライス部位に対して、＋１から＋５までのヌクレオチド（５’スプライス部位の下流に位置付けられた最初の５つのヌクレオチド）に対して相補的ではない。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して、＋６から＋５０までのヌクレオチドの領域内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５  ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に対して相補的であり得る。いくつかの態様では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋６から＋５００、＋６から＋４００、＋６から＋３００、＋６から＋２００、あるいは＋６から＋９０、＋６から＋８０、＋６から＋７０、＋６から＋６０、＋６から＋５０、＋６から＋４０、＋６から＋３０、あるいは＋６から＋２０の領域内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７��、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５  ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体標的部分に対して相補的である。
【０２４６】
幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体における保持されたイントロンの３’スプライス部位の上流（５’の方向（ｒｅｌａｔｉｖｅ））である、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的領域（例えば、負の数により示された方向）に相補的である（図１）。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して領域−１６〜−５００、−１６〜−４００、−１６〜−３００、−６〜−２００、または−１６〜−１００の内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、３’スプライス部位に対して、−１〜−１５までのヌクレオチド（３’スプライス部位の上流に位置付けられた最初の１５のヌクレオチド）には相補的ではない。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−１６〜−５０の領域内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。幾つかの態様では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−１６〜−９０、−１６〜−８０、−１６〜−７０、−１６〜−６０、−１６〜−５０、−１６〜−４０、または−１６〜−３０の領域内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮ���ＯＡ５のＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。
【０２４７】
幾つかの実施形態では、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋１００の領域から、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−１００までの領域内にある。
【０２４８】
幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位（上流）に隣接するエクソン内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接するエクソンの＋２ｅ〜−４ｅの領域内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対するヌクレオチド−１ｅ〜−３ｅに相補的ではない。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して−４ｅ〜−１００ｅ、−４ｅ〜−９０ｅ、−４ｅ〜−８０ｅ、−４ｅ〜−７０ｅ、−４ｅ〜−６０ｅ、−４ｅ〜−５０ｅ、−４ｅ〜−４０ｅ、−４ｅ〜−３０ｅ、または−４ｅ〜−２０ｅの領域内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。
【０２４９】
幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接するエクソン内（下流）にあるＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である（図１）。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接するエクソンの＋２ｅ〜−４ｅの領域内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対するヌクレオチド＋１ｅに相補的ではない。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して＋２ｅ〜＋１００ｅ、＋２ｅ〜＋９０ｅ、＋２ｅ〜＋８０ｅ、＋２ｅ〜＋７０ｅ、＋２ｅ〜＋６０ｅ、＋２ｅ〜＋５０ｅ、＋２ｅ〜＋４０ｅ、の＋２ｅ〜＋３０ｅ、または＋２ｅ〜＋２０ｅの領域内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。ＡＳＯは、スプライシングの特異的結合および効果的な増強作用に適する任意の長さでもよい。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは８から５０の核酸塩基から成る。例えば、ＡＳＯは、長さが、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、４５または５０の核酸塩基でもよい。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは５０より多くの核酸塩基から成る。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、長さが８〜５０の核酸塩基、８〜４０の核酸塩基、８〜３５の核酸塩基、８〜３０の核酸塩基、８〜２５の核酸塩基、８〜２０の核酸塩基、８〜１５の核酸塩基、９〜５０の核酸塩基、９〜４０の核酸塩基、９〜３５の核酸塩基、９〜３０の核酸塩基、９〜２５の核酸塩基、９〜２０の核酸塩基、９〜１５の核酸塩基、１０〜５０の核酸塩基、１０〜４０の核酸塩基、１０〜３５の核酸塩基、１０〜３０の核酸塩基、１０〜２５の核酸塩基、１０〜２０の核酸塩基、１０〜１５の核酸塩基、１１〜５０の核酸塩基、１１〜４０の核酸塩基、１１〜３５の核酸塩基、１１〜３０の核酸塩基、１１〜２５の核酸塩基、１１〜２０の核酸塩基、１１〜１５の核酸塩基、１２〜５０の核酸塩基、１２〜４０の核酸塩基、１２〜３５の核酸塩基、１２〜３０の核酸塩基、１２〜２５の核酸塩基、１２〜２０の核酸塩基、１２〜１５の核酸塩基、１３〜５０の核酸塩基、１３〜４０の核酸塩基、１３〜３５の核酸塩基、１３〜３０の核酸塩基、１３〜２５の核酸塩基、１３〜２０の核酸塩基、１４〜５０の核酸塩基、１４〜４０の核酸塩基、１４〜３５の核酸塩基、１４〜３０の核酸塩基、１４〜２５の核酸塩基、１４〜２０の核酸塩基、１５〜５０の核酸塩基、１５〜４０の核酸塩基、１５〜３５の核酸塩基、１５〜３０の核酸塩基、１５〜２５の核酸塩基、１５〜２０の核酸塩基、２０〜５０の核酸塩基、２０〜４０の核酸塩基、２０〜３５の核酸塩基、２０〜３０の核酸塩基、２０〜２５の核酸塩基、２５〜５０の核酸塩基、２５〜４０の核酸塩基、２５〜３５の核酸塩基、または２５〜３０の核酸塩基である。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが３０のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２９のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２８のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２７のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２６のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２５のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２４のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２３のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２２のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２１のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２０のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１９のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１８のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１７のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１６のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１５のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１４のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１３のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１２のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１１のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１０のヌクレオチドである。
【０２５０】
幾つかの実施形態では、異なる化学的性質を有するが、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の同じ標的部分に対して相補的である２つ以上のＡＳＯが使用される。幾つかの実施形態では、ＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体の異なる標的部分に対して相補的である２つ以上のＡＳＯが使用される。
【０２５１】
実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の部分または抱合体、例えば、オリゴヌクレオチドの活性または細胞取り込みを増強する標的部分または他の抱合体に化学的に連結される。そのような部分には、限定されないが、例えば、コレステロール部分、コレステリル部分、例えばドデカンジオールまたはウンデシル残基などの脂肪族鎖、ポリアミンまたはポリエチレングリコール鎖、または、アダマンタン酢酸として、脂質部分が含まれる。親油性部分を含むオリゴヌクレオチドおよび調製方法は、公開された文献に記載されている。実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、限定されないが、脱塩基ヌクレオチド、ポリエーテル、ポリアミン、ポリアミド、ペプチド、炭水化物、例えばＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ−Ａｃ−グルコサミン（ＧｌｕＮＡｃ）、またはマンノース（例えばマンノース６−リン酸）、脂質、またはポリ炭化水素化合物を含む部分と結合する。当該技術分野で理解され且つ文献に記載されるように、例えばリンカーを用いて、抱合体は、糖、塩基またはリン酸基上のいくつかの位置のうちのいずれかでアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む任意のヌクレオチドの１つ以上に連結することができる。リンカーは二価または三価の分枝リンカーを含み得る。実施形態では、抱合体はアンチセンスオリゴヌクレオチドの３’末端に付けられている。オリゴヌクレオチド抱合体を調製する方法は、例えば、米国特許第８，４５０，４６７号「Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ａｓ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」に記載され、これは参照により本明細書に組み込まれる。
【０２５２】
幾つかの実施形態では、ＡＳＯによって標的とされる核酸は、真核細胞などの細胞内に発現したＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体である。幾つかの実施形態では、用語「細胞」は、細胞の集団を指すこともある。幾つかの実施形態では、細胞は被験体内に存在する。幾つかの実施形態では、細胞は被験体から単離されている。幾つかの実施形態では、細胞はエクスビボである。幾つかの実施形態では、細胞は疾病関連細胞もしくは疾患関連の細胞、または細胞株である。幾つかの実施形態では、細胞はインビトロである（例えば細胞培養液中にある）。
【０２５３】
＜医薬組成物＞
記載された組成物のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、上記方法のいずれかにおいて使用するための医薬組成物または製剤は、医薬品産業において周知の従来技術に従って調製することができ、且つ公開文献においても記載されている。実施形態において、被験体を処置するための医薬組成物または医薬製剤は、上記のような任意のアンチセンスオリゴマー、またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、水和物、またはエステルの有効量、および薬学的に許容可能な希釈剤を含む。医薬製剤のアンチセンスオリゴマーはさらに、薬学的に許容可能な賦形剤、希釈剤または担体を含み得る。
【０２５４】
薬学的に許容可能な塩は、過度の毒性反応、刺激反応、アレルギー反応等を持たないヒトおよび下等動物の組織に接する使用に適しており、かつ適切なベネフィット・リスク比に相応している（例えば、この目的のための参照によって本明細書に組み込まれる、Ｓ．  Ｍ．  Ｂｅｒｇｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ６６：  １−１９  （１９７７）を参照）。塩は、化合物の最終的な分離および精製中にインサイチュで、または遊離基機能を適切な有機酸と反応させることによって別々に調製され得る。薬学的に許容可能で無毒な酸付加塩の例は、塩化水素、臭化水素酸、リン酸、硫酸、および過塩素酸などの無機酸か、酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸もしくはマロン酸などの有機酸か、またはイオン交換などの他の文書で立証された方法を用いることによって形成されたアミノ基の塩である。他の薬学的に許容可能な塩は、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などを含む。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属の塩は、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどを含む。更に薬学的に許容可能な塩は、適切な場合、ハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、低級アルキルスルホン酸塩、およびアリールスルホン酸塩などの対イオンを使用して形成された、無毒なアンモニウム、第四級アンモニウム、およびアミンのカチオンを含む。
【０２５５】
実施形態において、組成物は、限定されないが、錠剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、液体シロップ剤、ソフトゲル剤、坐薬および浣腸剤などの多くの可能な剤形いずれかへと製剤される。実施形態において、組成物は、水性媒体、非水性媒体、または混合媒体状の懸濁液として製剤される。水性懸濁液は、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、および／またはデキストランを含む、懸濁液の粘度を増加させる物質をさらに含むこともある。その懸濁液は、安定化剤も含むこともある。実施形態において、本発明の医薬製剤または組成物は、限定されないが、溶液、エマルジョン、マイクロエマルジョン、発泡体またはリポソーム含有製剤（例えばカチオンリポソームまたは非カチオンリポソーム）を含む。
【０２５６】
本発明の医薬組成物または製剤は、適切で且つ当業者に周知なように、または公開文献において記載されているように、１つ以上の透過促進剤、担体、賦形剤、または他の有効成分もしくは非有効成分を含むこともある。実施形態において、リポソームは立体的に安定したリポソーム、例えば１つ以上の特定の脂質を含むリポソームも含む。これらの特定の脂質は、循環寿命が増強されたリポソームを結果としてもたらす。実施形態において、立体的に安定したリポソームは、１つ以上の糖脂質を含むか、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分などの１つ以上の親油性高分子を用いて誘導される。実施形態において、界面活性剤は医薬製剤または医薬組成物中に含まれる。薬物製品、製剤およびエマルジョンにおける界面活性剤の使用は、当技術分野で周知である。実施形態では、本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの効率的な送達を達成する、例えば、細胞膜にわたる拡散を助ける及び／又は脂溶性薬物の浸透性を増強するために、浸透促進剤を利用する。実施形態では、浸透促進剤は、界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート剤、または非キレート性の非界面活性剤である。
【０２５７】
実施形態において、医薬製剤は複数のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは他の薬物または治療剤と組み合わせて投与される。実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、当技術分野において知られている任意の方法によって、血液脳関門を介する主題のアンチセンスオリゴヌクレオチドの浸透を促進することができる１つ以上の薬剤と共に投与される。例えば、筋組織内の運動ニューロンへアデノウイルスベクターを投与することによる薬剤の送達は、引用によって本明細書に組み込まれる米国特許第６，６３２，４２７号「Ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ−ｖｅｃｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｉｎｔｏ  ｍｅｄｕｌｌａｒｙ  ｍｏｔｏｒ  ｎｅｕｒｏｎｓ」に記載されている。脳、例えば、線条体、視床、海馬、または黒質への直接のベクターの送達は、例えば、引用によって本明細書に組み込まれる米国特許第６，７５６，５２３号「Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｏｆ  ｆｏｒｅｉｇｎ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎｔｏ  ｃｅｌｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ  ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙ  ｉｎ  ｂｒａｉｎ」に記載される。
【０２５８】
実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、望ましい薬理学的性質または薬力学的性質を提供する薬剤に結合されるか抱合される。実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、血液脳関門を介する浸透または輸送を促進すると当技術分野において知られている物質、例えばトランスフェリン受容体の抗体に結合される。実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、アンチセンス化合物をより効果的にするために、または血液脳関門を介する輸送を増加させるためにウイルスベクターに結合される。実施形態において、浸透性の血液脳関門の崩壊は、砂糖、例えばメソエリスリトール、キシリトール、Ｄ（＋）ガラクトース、Ｄ（＋）ラクトース、Ｄ（＋）キシロース、ズルシトール、ミオ−イノシトール、Ｌ（−）フルクトース、Ｄ（−）マンニトール、Ｄ（＋）グルコース、Ｄ（＋）アラビノース、Ｄ（−）アラビノース、セロビオース、Ｄ（＋）マルトース、Ｄ（＋）ラフィノース、Ｌ（＋）ラムノース、Ｄ（＋）メリビオース、Ｄ（−）リボース、アドニトール、Ｄ（＋）アラビトール、Ｌ（−）アラビトール、Ｄ（＋）フコース、Ｌ（−）フコース、Ｄ（−）リキソース、Ｌ（＋）リキソース、およびＬ（−）リキソース、または  アミノ酸、例えばグルタミン、リジン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、チロシン、バリン、およびタウリンを注入することにより促進される。血液脳関門浸透を増強する方法及び材料は、例えば、各々が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第４８６６０４２号「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｍａｔｅｒｉａｌ  ａｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ  ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ」、第６，２９４，５２０号「Ｍａｔｅｒｉａｌ  ｆｏｒ  ｐａｓｓａｇｅ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ」、及び第６，９３６，５８９「Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ」に記載される。
【０２５９】
実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の部分または抱合体、例えば、オリゴヌクレオチドの活性または細胞取り込みを増強する標的部分または他の抱合体に化学的に連結される。そのような部分には、限定されないが、例えば、コレステロール部分、コレステリル部分、例えばドデカンジオールまたはウンデシル残基などの脂肪族鎖、ポリアミンまたはポリエチレングリコール鎖、または、アダマンタン酢酸として、脂質部分が含まれる。親油性部分を含むオリゴヌクレオチドおよび調製方法は、公開された文献に記載されている。実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、限定されないが、脱塩基ヌクレオチド、ポリエーテル、ポリアミン、ポリアミド、ペプチド、炭水化物、例えばＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ−Ａｃ−グルコサミン（ＧｌｕＮＡｃ）、またはマンノース（例えばマンノース６−リン酸）、脂質、またはポリ炭化水素化合物を含む部分と結合する。抱合体は、例えばリンカーを使用して、当技術分野において理解され且つ文献中に記載されるように、砂糖、塩基またはリン酸基上のいかなるいくつかの位置においても、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む任意のヌクレオチドの１つ以上に連結され得る。リンカーは二価または三価の分枝したリンカーを含むことができる。実施形態において、抱合体はアンチセンスオリゴヌクレオチドの３’末端に結合している。オリゴヌクレオチド抱合体を調製する方法は、例えば、引用により本明細書に組み込まれる米国特許第８，４５０，４６７号の「Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ａｓ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」に記載されている。
【０２６０】
被験体の処置
本明細書に提供される組成物のうちのいずれかが個体に投与されうる。「個体」は、「被験体」または「患者」と互換的に使用されてもよい。個体は、哺乳動物、例えば、ヒト、またはヒト以外の霊長類、げっ歯類、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ロバ、ヤギ、ネコ、イヌ、ウシ、ブタ、またはヒツジなどの動物であってもよい。実施形態では、個体はヒトである。実施形態では、個体は胎児、多型、または小児である。他の実施形態では、個体は植物などの別の真核生物かもしれない。幾つかの実施形態では、本明細書で提供される化合物は細胞にエクスビボで投与される。
【０２６１】
幾つかの実施形態では、本明細書に提供される組成物は、疾患または障害を処置する方法として個体に投与される。幾つかの実施形態では、個体は、本明細書に記載された疾患のいずれかなどの遺伝病を有する。幾つかの実施形態では、個体は、本明細書に記載された疾患のいずれかなどの疾患を有するリスクがある。幾つかの実施形態では、個体は、不十分な量のタンパク質または不十分な活性のタンパク質により引き起こされる疾患または障害を有するリスクが増加している。個体が、不十分な量のタンパク質または不十分な活性のタンパク質により引き起こされる疾患または障害を有するリスクが増加している場合、方法は防止的または予防的な処置を含む。例えば、個体は、その疾患の家族歴のために、そのような疾患または障害を有するリスクが増加している場合がある。典型的には、そのような疾患または障害を有するリスクが増加している個体は、予防的処置（例えば、疾患または障害の発症または悪化を予防するかまたは遅らせることによる）から利益を受ける。
【０２６２】
本発明のＡＳＯの投与に適切な経路は、ＡＳＯの送達が所望される細胞型に応じて変わり得る。多数の組織および器官は本明細書に記載される疾病にて影響を受け、肝臓が最も著しく影響を受ける組織である。本発明のＡＳＯは、例えば、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射または静脈内注射によって、患者に非経口的に投与されてもよい。実施形態では、送達は心臓または肝臓に対して行なわれる。実施形態では、胎児は、例えばＡＳＯ組成物を胎児に対して直接または間接的（例えば母体を介して）に投与することにより、子宮内で処置される。
【０２６３】
スプライシングを増強する追加のＡＳＯを識別する方法
本発明の範囲内にはまた、特に標的イントロンにおけるＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体のスプライシングを増強する追加のＡＳＯを識別する（判定する）方法がある。ｍＲＮＡ前駆体の標的領域内で様々なヌクレオチドを特異的にハイブリダイズさせるＡＳＯは、標的イントロンのスプライシングの速度および／または程度を改善するＡＳＯを識別する（判定する）ためにスクリーニングされてもよい。幾つかの実施形態では、ＡＳＯはスプライシング抑制因子／サイレンサーの結合部位で遮断または妨害することもある。当該技術分野において既知の任意の方法は、イントロンの標的領域にハイブリダイズされた時に所望の効果（例えばスプライシング、タンパク質または機能的ＲＮＡの生産の向上）をもたらすＡＳＯを識別する（判定する）ために使用されてもよい。これらの方法はまた、保持されたイントロンに隣接するエクソン中、または保持されていないイントロン中の標的領域へ結合することにより、保持されたイントロンのスプライシングを増強するＡＳＯを識別するために使用することができる。使用され得る方法の一例が下記に提供される。
【０２６４】
ｍＲＮＡ前駆体の標的領域にハイブリダイズするように設計されたＡＳＯを用いて、ＡＳＯ「ｗａｌｋ」と呼ばれる１ラウンドのスクリーニングを行うこともある。例えば、ＡＳＯ  ｗａｌｋに使用されるＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位のおよそ１００のヌクレオチド上流（例えば、標的とされた／保持されたイントロンの上流に位置するエクソンの配列の一部）から標的とされた／保持されたイントロンの５’スプライス部位のおよそ１００のヌクレオチド下流まで、および／または、保持されたイントロンの３’スプライス部位のおよそ１００のヌクレオチド上流から標的とされた／保持されたイントロンの３’スプライス部位のおよそ１００のヌクレオチド下流（例えば、標的とされた／保持されたイントロンの下流に位置するエクソンの配列の一部）まで、５つのヌクレオチドごとに敷き詰められ得る。例えば、１５のヌクレオチドの長さの第１のＡＳＯは、標的とされた／保持されたイントロンの５’スプライス部位に対するヌクレオチド＋６〜＋２０まで特異的にハイブリダイズするように設計され得る。第２のＡＳＯは、標的とされた／保持されたイントロンの５’スプライス部位に対するヌクレオチド＋１１〜＋２５まで特異的にハイブリダイズするように設計されている。ＡＳＯは、ｍＲＮＡ前駆体の標的領域に及ぶように設計されている。実施形態では、ＡＳＯは、より密に、例えば、１、２、３、または４つのヌクレオチドごとに敷き詰められ得る。さらに、ＡＳＯは、５’スプライス部位の下流の１００のヌクレオチドから３’スプライス部位の上流の１００のヌクレオチドまで敷き詰められ得る。
【０２６５】
１つ以上のＡＳＯ、または１つの対照ＡＳＯ（標的領域にハイブリダイズするとは予期されていない配列である、スクランブル配列を有するＡＳＯ）は、例えばトランスフェクションによって、標的ｍＲＮＡ前駆体（例えば、本明細書で別記されるＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体）を発現する疾患関連の細胞株へと送達される。ＡＳＯの各々のスプライシングを誘発する効果は、本明細書で記載されるように、当該技術分野で既知の方法、例えば、スプライスジャンクションに及ぶプライマーを使用する逆転写酵素（ＲＴ）−ＰＣＲによって評価され得る（「イントロン保持事象の特定」を参照）。対照ＡＳＯで処理された細胞と比較して、ＡＳＯで処理された細胞におけるスプライスジャンクションに及ぶプライマーを使用して生成されたＲＴ−ＰＣＲ産物が減少または欠如することは、標的イントロンのスプライシングが増強されたことを示している。幾つかの実施形態では、スプライシング効率、スプライシングされていないｍＲＮＡ前駆体に対するスプライシングされたｍＲＮＡ前駆体の比率、スプライシングの速度、またはスプライシングの程度は、本明細書に記載されるＡＳＯを使用して改善され得る。標的ｍＲＮＡ前駆体によってコードされるタンパク質または機能的ＲＮＡの量も、各ＡＳＯが所望の効果（例えば、タンパク質生成の増強）を達成したかどうかを判定するために評価され得る。ウェスタンブロッティング、フローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡検査法、およびＥＬＩＳＡなどの、タンパク質生成を評価し及び／又は定量するための、当該技術分野で既知の方法も使用することができる。
【０２６６】
ＡＳＯ「ミクロウォーク」（ｍｉｃｒｏ−ｗａｌｋ）と呼ばれる第２ラウンドのスクリーニングは、ｍＲＮＡ前駆体の標的領域にハイブリダイズするように設計されたＡＳＯを使用して実行され得る。ＡＳＯマイクロウォークに使用されるＡＳＯは、ＡＳＯでハイブリダイズされたときに結果的にスプライシングを増強させるｍＲＮＡ前駆体のヌクレオチド酸配列をさらに改良する（ｒｅｆｉｎｅ）ために、１つのヌクレオチドごとに敷き詰められる。
【０２６７】
標的イントロンのスプライシングを促進するＡＳＯによって定義される領域は、１−ｎｔステップ（１−ｎｔ  ｓｔｅｐｓ）で配置されたＡＳＯ、ならびに、典型的には１８−２５ｎｔである、より長いＡＳＯを含む、ＡＳＯ「ミクロウォーク」によって、より詳細に調査される。
【０２６８】
上記でＡＳＯ  ｗａｌｋに関して記載されたように、１つ以上のＡＳＯ、または対照ＡＳＯ（標的領域にハイブリダイズすると予期されていない配列である、スクランブル配列を有するＡＳＯ）を、例えばトランスフェクションによって、標的ｍＲＮＡ前駆体を発現する疾患関連細胞株へと送達することにより、ＡＳＯミクロウォークが実行される。ＡＳＯの各々のスプライシングを誘発する効果は、本明細書で記載されるように、当該技術分野で既知の方法、例えば、スプライスジャンクションに及ぶプライマーを使用する逆転写酵素（ＲＴ）−ＰＣＲによって評価され得る（「イントロン保持事象の特定」を参照）。対照ＡＳＯで処理された細胞と比較して、ＡＳＯで処理された細胞におけるスプライスジャンクションに及ぶプライマーを使用して生成されたＲＴ−ＰＣＲ産物が減少または欠如することは、標的イントロンのスプライシングが増強されたことを示している。幾つかの実施形態では、スプライシング効率、スプライシングされていないｍＲＮＡ前駆体に対するスプライシングされたｍＲＮＡ前駆体の比率、スプライシングの速度、またはスプライシングの程度は、本明細書に記載されるＡＳＯを使用して改善され得る。標的ｍＲＮＡ前駆体によってコードされるタンパク質または機能的ＲＮＡの量も、各ＡＳＯが所望の効果（例えば、タンパク質生成の増強）を達成したかどうかを判定するために評価され得る。ウェスタンブロッティング、フローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡検査法、およびＥＬＩＳＡなどの、タンパク質生成を評価し及び／又は定量するための、当該技術分野で既知の方法も使用することができる。
【０２６９】
ｍＲＮＡ前駆体の領域にハイブリダイズされたときに、結果的にスプライシングを増強させ、タンパク質生成を増加させるＡＳＯは、動物モデル、例えば、全長ヒト遺伝子がノックインされたトランスジェニックマウスモデルまたは疾患のヒト化マウスモデルを使用して、インビボで試験され得る。ＡＳＯの投与に適した経路は、ＡＳＯの送達が望まれる疾患及び／又は細胞型に応じて変化し得る。ＡＳＯは、例えば、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射または静脈内注射によって投与されてもよい。投与後に、モデル動物の細胞、組織、及び／又は臓器は、当該技術分野に既知の方法および本明細書に記載される方法によって、例えば、スプライシング（効率、速度、程度）およびタンパク質生成を評価することにより、ＡＳＯ処置の効果を判定するために評価され得る。動物モデルはまた、疾患または疾患重症度の表現型または行動的徴候であり得る。本発明の好ましい実施形態が本明細書中で示され且つ記載されてきたが、このような実施形態はほんの一例として提供されるものであることは、当業者に明らかであろう。多数の変形、変更、及び置き換えは、本発明から逸脱することなく、当業者によって現在想到されるものである。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代案が、本発明の実施において利用されるかもしれないことを理解されたい。以下の特許請求の範囲は本発明の範囲を定義するものであり、この特許請求の範囲及びその同等物の範囲内の方法及び構造は、それにより包含されることが、意図されている。
【実施例】
【０２７０】
本発明は、以下の実施例によってより具体的に例証されるだろう。しかしながら、本発明がいかなる方法においてもこれらの実施例によって限定されないことが理解されるべきである。
【０２７１】
実施例１：次世代配列決定を使用するＲＮＡｓｅｑによる、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、およびＮＣＯＡ５の転写産物のイントロン保持事象の特定
全体のトランスクリプトームショットガン配列決定は、イントロン保持事象を特定するために、本明細書に記載されるＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、およびＮＣＯＡ５の遺伝子により生成された転写産物のスナップショットを明らかにするための次世代配列決定を使用して実行された。この目的のために、ポリＡ＋ＲＮＡをＴＨＬＥ−３（ヒトの肝臓上皮）細胞の核および細胞質の分画から分離し、Ｉｌｌｕｍｉｎａ’ｓ  ＴｒｕＳｅｑ  Ｓｔｒａｎｄｅｄ  ｍＲＮＡ  ｌｉｂｒａｒｙ  Ｐｒｅｐ  Ｋｉｔを使用して、ｃＤＮＡライブラリを構築した。ライブラリに対してペア−エンド配列決定（ｐａｉｒ−ｅｎｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）を行い、結果として、ヒトゲノム（２００９年２月、ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９アセンブリ）にマッピングされた１００のヌクレオチドの読み取りをもたらした。マッピングされた読み取りは、（ＵＣＳＣ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｇｒｏｕｐ（Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，  Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，  １１５６  Ｈｉｇｈ  Ｓｔｒｅｅｔ，  Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，  ＣＡ  ９５０６４）によって操作され、且つ、例えばＲｏｓｅｎｂｌｏｏｍ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１５，“Ｔｈｅ  ＵＣＳＣ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｒｏｗｓｅｒ  ｄａｔａｂａｓｅ：  ２０１５  ｕｐｄａｔｅ，”Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４３，  Ｄａｔａｂａｓｅ  Ｉｓｓｕｅ  （ｄｏｉ：１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｕ１１７７）に記載された）ＵＣＳＣのゲノムブラウザを使用して視覚化され、読み取りの範囲および数はピーク信号によって推論された。ピークの高さは、特定の領域における読み取り密度によって与えられた発現のレベルを示している。ピークがエクソンおよびイントロンの領域に一致することができるように、遺伝子の概略図をＵＣＳＣゲノムブラウザにより提供した。このディスプレイに基づいて、イントロンは、ＴＨＬＥ−３細胞の核分画に高度な読み取り密度を持つと特定されたが、これら細胞の細胞質分画には非常に低い読み取り〜読み取りなしであったことが特定された（得られたパーセントイントロン保持（ＰＩＲ）データについては表１および２、そして図面を参照）。このことは、これらのイントロンが保持されること、およびイントロン含有転写産物が細胞核中に残存していることを示し、且つ、それらが細胞質へと運び出されないため、これらの保持されたＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は非生産的であることを示唆している。
【０２７２】
実施例２：次世代配列決定を使用したＲＮＡｓｅｑによるＡＰＯＡ５、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＨＮＦ１Ａ、ＨＡＭＰ、およびＴＨＰＯの転写産物のイントロン保持事象の特定
全体のトランスクリプトームショットガン配列は、イントロン保持事象を特定するために、転写産物、例えば、本明細書に記載されるＡＰＯＡ５、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＨＮＦ１Ａ、ＨＡＭＰ、およびＴＨＰＯの遺伝子により生成されるもののスナップショットを明らかにするための次世代配列決定を使用して実行された。この目的のために、ポリＡ＋ＲＮＡをＴＨＬＥ−３（ヒトの肝臓上皮）細胞の核および細胞質の分画から分離し、Ｉｌｌｕｍｉｎａ’ｓ  ＴｒｕＳｅｑ  Ｓｔｒａｎｄｅｄ  ｍＲＮＡ  ｌｉｂｒａｒｙ  Ｐｒｅｐ  Ｋｉｔを使用して、ｃＤＮＡライブラリを構築した。ライブラリに対してペア−エンド配列決定（ｐａｉｒ−ｅｎｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）を行い、結果として、ヒトゲノム（２００９年２月、ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９アセンブリ）にマッピングされた１００のヌクレオチドの読み取りをもたらした。マッピングされた読み取りは、（ＵＣＳＣ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｇｒｏｕｐ（Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，  Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，  １１５６  Ｈｉｇｈ  Ｓｔｒｅｅｔ，  Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，  ＣＡ  ９５０６４）によって操作され、且つ、例えばＲｏｓｅｎｂｌｏｏｍ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１５，“Ｔｈｅ  ＵＣＳＣ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｒｏｗｓｅｒ  ｄａｔａｂａｓｅ：  ２０１５  ｕｐｄａｔｅ，”Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４３，  Ｄａｔａｂａｓｅ  Ｉｓｓｕｅ  （ｄｏｉ：１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｕ１１７７）に記載された）ＵＣＳＣのゲノムブラウザを使用して視覚化され、読み取りの範囲および数はピーク信号によって推論された。ピークの高さは、特定の領域における読み取り密度によって与えられた発現のレベルを示している。ピークがエクソンおよびイントロンの領域に一致することができるように、遺伝子の概略図をＵＣＳＣゲノムブラウザにより提供した。このディスプレイに基づいて、イントロンは、ＴＨＬＥ−３細胞の核分画に高度な読み取り密度を持つと特定されたが、これら細胞の細胞質分画には非常に低い読み取り〜読み取りなしであったことが特定された（得られたパーセントイントロン保持（ＰＩＲ）データについては表１および２、そして図面を参照）。このことは、これらのイントロンが保持されること、およびイントロン含有転写産物が細胞核中に残存したことを示し、且つ、それらが細胞質へと運び出されないため、これらの保持されたＲＩＣ  ｍＲＮＡ前駆体は非生産的であったことを示唆している。
【０２７３】
実施例３：保持されたイントロンを標的とするＡＳＯ  ｗａｌｋの設計
ＡＳＯ  ｗａｌｋは、本明細書に記載される方法を使用して、保持されたイントロンを標的とするように設計された。イントロン５’スプライス部位の直ぐ下流、例えばヌクレオチド＋６〜＋６９に及ぶ領域、及び、イントロン３’スプライス部位の直ぐ上流、例えばヌクレオチド−１６〜−７９に及ぶ領域を、２’−Ｏ−Ｍｅ  ＲＮＡ、ＰＳ骨格、５のヌクレオチド間隔でシフトされた１８−ｍｅｒ  ＡＳＯを用いて標的とした。表１は、ＴＨＬＥ−３細胞中の対象の遺伝子において保持されたイントロンを列挙する。表２は、設計された例示的なＡＳＯおよびそれらの標的配列を列挙する。
【０２７４】
【表１−１】
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【０２７５】
【表１−２】
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【０２７６】
【表１−３】
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【０２７７】
【表２−１】
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【０２７８】
【表２−２】
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【０２７９】
【表２−３】
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【０２８０】
【表２−４】
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【０２８１】
【表２−５】
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【０２８２】
【表２−６】
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【０２８３】
【表２−７】
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【０２８４】
【表２−８】
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【０２８５】
【表２−９】
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【０２８６】
【表２−１０】
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【０２８７】
【表２−１１】
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【０２８８】
【表２−１２】
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【０２８９】
【表２−１３】
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【０２９０】
実施例４：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化により改善したスプライシング効率はＡＭＴ転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＡＭＴの発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用された。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＡＭＴ標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭ  ＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図３Ａおよび図３Ｂ）。Ｔａｑｍａｎ  ｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＡＭＴ遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＡＭＴを標的とするＡＳＯトランスフェクトされた細胞からのＣｔ値はＲＰＬ３２に対し正規化され、偽処理細胞からの正規化されたｑＰＣＲ産物に対してプロットされる。この分析の結果は、いくつかのＡＭＴ標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いてＡＭＴ遺伝子中の律速のイントロンのスプライシング効率を改善すると、ＡＭＴ遺伝子発現が増加することを示している。
【０２９１】
実施例５：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＧＡＬＴ転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＧＡＬＴの発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用される。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＧＡＬＴ標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭ  ＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図４ＣおよびＤ、図４Ｇおよび４Ｈ）。Ｔａｑｍａｎ  ｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＧＡＬＴ遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＧＡＬＴ標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＧＡＬＴ標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いてＧＡＬＴ遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＧＡＬＴ遺伝子発現が増加することを示している。
【０２９２】
実施例６：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＰＣ転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＰＣの発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用される。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＰＣ標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭ  ＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図５ＡおよびＢ）。Ｔａｑｍａｎ  ｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＰＣ遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＰＣ標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＰＣ標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いでＰＣ遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＰＣ遺伝子発現が増加することを示している。
【０２９３】
実施例７：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＦＡＨ転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＦＡＨの発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用される。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＦＡＨ標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭ  ＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図６ＡおよびＢ）。Ｔａｑｍａｎ  ｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＦＡＨ遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＦＡＨ標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＦＡＨ標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いてＦＡＨ遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＦＡＨ遺伝子発現が増加することを示している。
【０２９４】
実施例８：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＰＰＡＲＤ転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＰＰＡＲＤの発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用される。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＰＰＡＲＤ標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭ  ＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図７ＡおよびＢ、図７ＥおよびＦ）。Ｔａｑｍａｎ  ｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＰＰＡＲＤ遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＰＰＡＲＤ標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＰＰＡＲＤ標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いてＰＰＡＲＤ遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＰＰＡＲＤ遺伝子発現が増加することを示している。
【０２９５】
実施例９：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＨＭＢＳ転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＨＭＢＳの発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用される。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＨＭＢＳ標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭ  ＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図９ＡおよびＢ）。Ｔａｑｍａｎ  ｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＨＭＢＳ遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＨＭＢＳ標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＨＭＢＳ標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いてＨＭＢＳ遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＨＭＢＳ遺伝子発現が増加することを示している。
【０２９６】
実施例１０：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＡＬＭＳ１転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＡＬＭＳ１の発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用される。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＡＬＭＳ１標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭ  ＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図１１ＡおよびＢ）。Ｔａｑｍａｎ  ｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＡＬＭＳ１遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＡＬＭＳ１標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＡＬＭＳ１標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いてＡＬＭＳ１遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＡＬＭＳ１遺伝子発現が増加することを示している。
【０２９７】
実施例１１：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＡＳＬ転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＡＳＬの発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用される。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＡＳＬ標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭ  ＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図１２ＡおよびＢ、図１２ＣおよびＤ、図１２ＥおよびＦ）。Ｔａｑｍａｎ  ｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＡＳＬ遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＡＳＬ標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＡＳＬ標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いてＡＳＬ遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＡＳＬ遺伝子発現が増加することを示している。
【０２９８】
実施例１２：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＡＴＰ７Ｂ転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＡＴＰ７Ｂの発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用される。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＡＴＰ７Ｂ標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭ  ＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図１３ＢおよびＣ）。Ｔａｑｍａｎ  ｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＡＴＰ７Ｂ遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＡＴＰ７Ｂ標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＡＴＰ７Ｂ標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いてＡＴＰ７Ｂ遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＡＴＰ７Ｂ遺伝子発現が増加することを示している。
【０２９９】
実施例１３：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＨＳＤ３Ｂ７転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＨＳＤ３Ｂ７の発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用される。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＨＳＤ３Ｂ７標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭ  ＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図１５ＢおよびＣ、図１５ＥおよびＦ）。Ｔａｑｍａｎ  ｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＨＳＤ３Ｂ７遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＨＳＤ３Ｂ７標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＨＳＤ３Ｂ７標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いてＨＳＤ３Ｂ７遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＨＳＤ３Ｂ７遺伝子発現が増加することを示している。
【０３００】
実施例１４：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率は転写レベルを増大させる
ＡＳＯでのイントロンスプライシング効率の改善により標的遺伝子の発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法を使用した。ＡＲＰＥ−１９細胞、すなわちヒトの網膜の上皮細胞株（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），ＵＳＡ）、またはＨｕｈ−７、すなわちヒトの肝細胞腫細胞株（ＮＩＢＩＯＨＮ、Ｊａｐａｎ）、またはＳＫ−Ｎ−ＡＳ、すなわちヒトの神経芽細胞腫細胞株（ＡＴＣＣ）は、図３−１７、および表１および２に記載の標的化ＡＳＯで偽トランスフェクトされるか、またはトランスフェクトされる。細胞を、供給元の仕様書に従って、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ＲＮＡｉＭａｘトランスフェクション試薬（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いてトランスフェクトした。簡潔に述べると、ＡＳＯを９６ウェル組織培養プレートに播種し、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ中に希釈したＲＮＡｉＭａｘと組み合わせた。トリプシンを用いて細胞を剥離し、完全培地に再懸濁し、約２５，０００個の細胞をＡＳＯトランスフェクション混合物に加えた。トランスフェクション実験は三通りのプレート複製において実行された。最終的なＡＳＯ濃度は８０ｎＭであった。供給元の仕様書に従って、培地をトランスフェクションの６時間後に交換し、細胞をＣｅｌｌｓ−ｔｏ−Ｃｔ溶解試薬を用い、ＤＮＡｓｅ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で試薬を補充し、２４時間で採取した。供給元の仕様書に従い、ｃＤＮＡをＣｅｌｌｓ−ｔｏ−Ｃｔ  ＲＴ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で生成した。対象のイントロンでのスプライシングの量を定量化するために、表１および２に列挙した、保持されたイントロンの対応するエクソン−エクソンジャンクションに及ぶプローブによるＴａｑｍａｎアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、定量ＰＣＲが実行される。Ｔａｑｍａｎアッセイは、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ    ７Ｆｌｅｘ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲシステム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）上で、供給元の仕様書に従い実行される。標的遺伝子アッセイ値を、ＲＰＬ３２（ｄｅｌｔａＣｔ）およびプレート一致偽トランスフェクションサンプル（ｄｅｌｔａ−ｄｅｌｔａ  Ｃｔ）に対して正規化し、モック定量（２  ＾−（ｄｅｌｔａ−ｄｅｌｔａ  Ｃｔ）に対して倍率変化を生成する。３つのプレート複製のモックに対する平均倍率変化をプロットした。（図３Ｂ、図４Ｄ、図４Ｈ、図５Ｂ、図６Ｂ、図７Ｆ、図９Ｂ、図１１Ｂ、図１２Ｂ、図１２Ｄ、図１２Ｆ、図１３Ｃ、図１５Ｃおよび図１５Ｆ）。標的遺伝子発現を増加させるいくつかのＡＳＯが特定され、その標的イントロンでのスプライシングの増加が示唆された。標的イントロン（図３−１７）の保持を示す全トランスクリプトームデータと共に、これらの結果は、ＡＳＯが律速イントロンのスプライシング効率を改善し得ることを確認する。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
2019500345.tif 000021
【図３Ａ】
2019500345.tif 000022
【図３Ｂ】
2019500345.tif 000023
【図３Ｃ】
2019500345.tif 000024
【図４Ａ】
2019500345.tif 000025
【図４Ｂ】
2019500345.tif 000026
【図４Ｃ】
2019500345.tif 000027
【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
2019500345.tif 000029
【図４Ｆ】
2019500345.tif 000030
【図４Ｇ】
2019500345.tif 000031
【図４Ｈ】
2019500345.tif 000032
【図４Ｉ】
2019500345.tif 000033
【図４Ｊ】
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【図５Ａ】
2019500345.tif 000035
【図５Ｂ】
2019500345.tif 000036
【図６Ａ】
2019500345.tif 000037
【図６Ｂ】
2019500345.tif 000038
【図７Ａ】
2019500345.tif 000039
【図７Ｂ】
2019500345.tif 000040
【図７Ｃ】
2019500345.tif 000041
【図７Ｄ】
2019500345.tif 000042
【図７Ｅ】
2019500345.tif 000043
【図７Ｆ】
2019500345.tif 000044
【図７Ｇ】
2019500345.tif 000045
【図８Ａ】
2019500345.tif 000046
【図８Ｂ】
2019500345.tif 000047
【図８Ｃ】
2019500345.tif 000048
【図８Ｄ】
2019500345.tif 000049
【図８Ｅ】
2019500345.tif 000050
【図８Ｆ】
2019500345.tif 000051
【図８Ｇ】
2019500345.tif 000052
【図８Ｈ】
2019500345.tif 000053
【図９Ａ】
2019500345.tif 000054
【図９Ｂ】
2019500345.tif 000055
【図９Ｃ】
2019500345.tif 000056
【図１０Ａ】
2019500345.tif 000057
【図１０Ｂ】
2019500345.tif 000058
【図１０Ｃ】
2019500345.tif 000059
【図１０Ｄ】
2019500345.tif 000060
【図１０Ｅ】
2019500345.tif 000061
【図１１Ａ】
2019500345.tif 000062
【図１１Ｂ】
2019500345.tif 000063
【図１２Ａ】
2019500345.tif 000064
【図１２Ｂ】
2019500345.tif 000065
【図１２Ｃ】
2019500345.tif 000066
【図１２Ｄ】
2019500345.tif 000067
【図１２Ｅ】
2019500345.tif 000068
【図１２Ｆ】
2019500345.tif 000069
【図１２Ｇ】
2019500345.tif 000070
【図１３Ａ】
2019500345.tif 000071
【図１３Ｂ】
2019500345.tif 000072
【図１３Ｃ】
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【図１４】
2019500345.tif 000074
【図１５Ａ】
2019500345.tif 000075
【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
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【図１５Ｅ】
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【図１５Ｆ】
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【図１５Ｇ】
2019500345.tif 000081
【図１５Ｈ】
2019500345.tif 000082
【図１６】
2019500345.tif 000083
【図１７Ａ】
2019500345.tif 000084
【図１７Ｂ】
2019500345.tif 000085
【図１７Ｃ】
2019500345.tif 000086
【図１７Ｄ】
2019500345.tif 000087
【図１７Ｅ】
2019500345.tif 000088
【図１７Ｆ】
2019500345.tif 000089
【図１７Ｇ】
2019500345.tif 000090
【配列表】
2019500345000001.app
【国際調査報告】
2019500345.tif 000091
2019500345.tif 000092
2019500345.tif 000093
2019500345.tif 000094
2019500345.tif 000095
2019500345.tif 000096
2019500345.tif 000097