(57)【要約】  本発明は、軟骨損傷または関節炎の処置のための方法および組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト対象において関節炎または軟骨損傷を処置する方法であって、表１に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む約０．２〜２００ｍｇの関節内用量のポリペプチドを、前記ヒト対象の関節に投与することを含み、前記ポリペプチドが、配列番号１に関して決定されたときに、ＫまたはＲ以外の極性アミノ酸であるアミノ酸を４２３位に含み、前記ポリペプチドが軟骨形成活性を有する、方法。
【請求項２】
前記ポリペプチド中の配列番号１の４２３位に対応するアミノ酸がＱもしくはＳであるか、または欠失している、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ポリペプチドが表１に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ポリペプチドが表１に記載されるアミノ酸配列からなる、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ポリペプチドが配列番号１７を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ポリペプチドが配列番号１７からなる、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記関節内用量が約０．２〜６０ｍｇである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記関節内用量が約０．２〜４０ｍｇである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記関節内用量が約２〜４０ｍｇである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記関節内用量が約１０〜４０ｍｇである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記関節内用量が約２０〜４０ｍｇである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記関節内用量が約４０〜６０ｍｇである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記関節内用量が約０．２ｍｇである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記関節内用量が約２ｍｇである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記関節内用量が約１０ｍｇである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記関節内用量が約２０ｍｇである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記関節内用量が約４０ｍｇである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記関節内用量が約６０ｍｇである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ポリペプチドが前記ヒト対象の関節に単回注射で投与される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ポリペプチドが前記ヒト対象の関節に複数回注射で投与される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ポリペプチドが、前記関節炎または軟骨損傷を処置するのに十分な期間にわたって、２週間に１回前記ヒト対象の関節に投与される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ポリペプチドが、前記関節炎または軟骨損傷を処置するのに十分な期間にわたって、月１回前記ヒト対象の関節に投与される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記対象の罹患関節に対して外科手術を実施することをさらに含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ポリペプチドの投与が前記外科手術の前、最中または後に行われる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ポリペプチドの投与が、骨髄刺激、軟骨置換、自家軟骨細胞移植（ＡＣＩ）、またはマトリックス誘導自家軟骨細胞移植（ＭＡＣＩ）のいずれか１つと併用して行われる、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ポリペプチドの投与が、自家軟骨細胞移植（ＡＣＩ）と併用して行われる、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記ヒト対象が、変形性関節炎、外傷性関節炎、または自己免疫性関節炎を有する、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ヒト対象が軟骨損傷を有する、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
ヒト対象における関節炎または軟骨損傷の処置において使用するための、表１に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む約０．２〜２００ｍｇのポリペプチドを含む組成物であって、前記ポリペプチドが、配列番号１に関して決定されたときに、ＫまたはＲ以外の極性アミノ酸であるアミノ酸を４２３位に含み、前記ポリペプチドが関節内に投与される、組成物。
【請求項３０】
前記ポリペプチド中の配列番号１の４２３位に対応するアミノ酸がＱもしくはＳであるか、または欠失している、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記ポリペプチドが表１に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３２】
前記ポリペプチドが表１に記載されるアミノ酸配列からなる、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３３】
前記ポリペプチドが配列番号１７を含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３４】
前記ポリペプチドが配列番号１７からなる、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３５】
前記組成物が約０．２〜６０ｍｇの前記ポリペプチドを含む、請求項２９〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３６】
前記組成物が約０．２〜４０ｍｇの前記ポリペプチドを含む、請求項２９〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３７】
前記組成物が約２〜４０ｍｇの前記ポリペプチドを含む、請求項２９〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３８】
前記組成物が約１０〜４０ｍｇの前記ポリペプチドを含む、請求項２９〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３９】
前記組成物が約２０〜４０ｍｇの前記ポリペプチドを含む、請求項２９〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４０】
前記組成物が約４０〜６０ｍｇの前記ポリペプチドを含む、請求項２９〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４１】
前記組成物が約０．２ｍｇの前記ポリペプチドを含む、請求項２９〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４２】
前記組成物が約２ｍｇの前記ポリペプチドを含む、請求項２９〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４３】
前記組成物が約１０ｍｇの前記ポリペプチドを含む、請求項２９〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４４】
前記組成物が約２０ｍｇの前記ポリペプチドを含む、請求項２９〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４５】
前記組成物が約４０ｍｇの前記ポリペプチドを含む、請求項２９〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４６】
前記組成物が約６０ｍｇの前記ポリペプチドを含む、請求項２９〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４７】
前記ポリペプチドが単回注射で関節内に投与される、請求項２９〜４６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４８】
前記ポリペプチドが複数回注射で関節内に投与される、請求項２９〜４６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４９】
前記ポリペプチドが、前記関節炎または軟骨損傷を処置するのに十分な期間にわたって、２週間に１回関節内に投与される、請求項２９〜４６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５０】
前記ポリペプチドが、前記関節炎または軟骨損傷を処置するのに十分な期間にわたって、月１回関節内に投与される、請求項２９〜４６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５１】
外科手術の前、最中または後に、前記関節炎または軟骨損傷の処置において使用するための、請求項２９〜５０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５２】
前記処置が、骨髄刺激、軟骨置換、自家軟骨細胞移植（ＡＣＩ）またはマトリックス誘導自家軟骨細胞移植（ＭＡＣＩ）と併用して行われる、請求項２９〜５０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５３】
前記関節炎が、変形性関節炎、外傷性関節炎、または自己免疫性関節炎である、請求項２９〜５２のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願はＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照によって本明細書に援用される。２０１７年１０月２６日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、ＰＡＴ０５７５１３−ＷＯ−ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔと命名され、９５，２４４バイトのサイズである。
【０００２】
本発明は、軟骨損傷（例えば、関節軟骨損傷）または関節炎の処置のための方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
変形性関節炎（ＯＡ）は最も一般的な筋骨格障害を表す。約４０００万人のアメリカ人が現在罹患しており、高齢化する人口および平均余命の増加の結果として、次の２０年以内に数は６０００万人まで上昇し、身体障害の第４の主要原因になることが予想される。ＯＡは、関節軟骨（関節の潤滑および緩衝を生じる細胞およびマトリックスを含有する）と、関節軟骨の下側の軟骨下骨との両方を含む関節の緩徐な変性破壊を特徴とする。ＯＡは、種々の病因因子の結果であると考えることができる。例えば、ＯＡは、異常な生体力学的ストレス、または関節軟骨もしくは骨の遺伝的もしくは後天的異常によって起こり得る。
【０００４】
また、関節損傷、例えば、半月板断裂もしくは靱帯裂傷などの急性関節傷害、または関節内骨折も、関節炎、例えば、外傷後関節炎をもたらし得る。関節軟骨は修復する能力が限られているので、検出不能の小さい損傷でも、多くの場合、時間と共に悪化し、ＯＡに至り得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
外科技術および再生技術は、軟骨の回復、変性の緩徐化、および関節損傷（例えば、関節軟骨損傷）の修復改善においてある程度の進歩をもたらしたが、軟骨再生、関節損傷（例えば、関節軟骨損傷）またはＯＡの処置のための組成物および方法の改善が継続して必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、軟骨形成活性を有する関節内用量のプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを対象の関節に投与することにより、対象（例えば、ヒト対象）において関節炎または軟骨損傷（例えば、関節軟骨損傷）を処置するための方法および組成物を提供する。
【０００７】
表１に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む約０．２〜２００ｍｇの関節内用量のポリペプチドをヒト対象の関節に投与することにより、ヒト対象において関節炎または軟骨損傷を処置する方法が本明細書において提供されており、ここで、ポリペプチドは、配列番号１に関して決定されたときに、ＫまたはＲ以外の極性アミノ酸であるアミノ酸を４２３位に含み、ポリペプチドは軟骨形成活性を有する。いくつかの実施形態では、ヒト対象は軟骨損傷を有する。いくつかの実施形態では、ヒト対象は、変形性関節炎、外傷性関節炎、または自己免疫性関節炎を有する。
【０００８】
いくつかの実施形態では、配列番号１の４２３位に対応するポリペプチド中のアミノ酸は、ＱもしくはＳであるか、または欠失している。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、表１に記載されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、表１に記載されるアミノ酸配列からなる。
【０００９】
いくつかの実施形態では、約０．２〜２００ｍｇの関節内用量の配列番号１７を含むポリペプチドをヒト対象の関節に投与することにより、ヒト対象において関節炎または軟骨損傷を処置する方法が本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、約０．２〜２００ｍｇの関節内用量の配列番号１７からなるポリペプチドをヒト対象の関節に投与することにより、ヒト対象において関節炎または軟骨損傷を処置する方法が本明細書において提供される。
【００１０】
いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約０．２〜１００ｍｇである。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約０．２〜６０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約０．２〜４０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約２〜４０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約１０〜４０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約２０〜４０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約４０〜６０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約０．２ｍｇである。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約２ｍｇである。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約１０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約２０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約４０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約６０ｍｇである。
【００１１】
いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、対象の関節に単回注射で投与される。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、対象の関節に複数回注射で投与される。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、関節炎または軟骨損傷を処置するのに十分な期間にわたって、２週間に１回投与される。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、関節炎または軟骨損傷を処置するのに十分な期間にわたって、月１回投与される。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、関節炎または軟骨損傷を処置するのに十分な期間にわたって、週１回投与される。
【００１２】
いくつかの実施形態では、本方法はさらに、対象の罹患関節に対して外科手術を実施することを含む。ポリペプチドは、外科手術の前、最中または後に投与することができる。
【００１３】
いくつかの実施形態では、本方法はさらに、付加的な手順を含む。例えば、ポリペプチドまたは組成物は、骨髄刺激、軟骨置換、自家軟骨細胞移植（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅ  ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）（ＡＣＩ）、またはマトリックス誘導自家軟骨細胞移植（ｍａｔｒｉｘ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅ  ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）（ＭＡＣＩ）のいずれか１つと併用して投与することができる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドまたは組成物は、ＡＣＩと併用して投与することができる。
【００１４】
また、ヒト対象における関節炎または軟骨損傷の処置において使用するために、表１に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む約０．２〜２００ｍｇのポリペプチドを含む組成物も本明細書において提供されており、ここで、ポリペプチドは、配列番号１に関して決定されたときに、ＫまたはＲ以外の極性アミノ酸であるアミノ酸を４２３位に含み、ポリペプチドは関節内に投与される。関節炎は、変形性関節炎、外傷性関節炎、または自己免疫性関節炎であり得る。
【００１５】
いくつかの実施形態では、配列番号１の４２３位に対応するポリペプチド中のアミノ酸は、ＱもしくはＳであるか、または欠失している。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、表１に記載されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、表１に記載されるアミノ酸配列からなる。
【００１６】
いくつかの実施形態では、ヒト対象における関節炎または軟骨損傷の処置において使用するために、約０．２〜２００ｍｇの配列番号１７を含むポリペプチドを含む組成物が本明細書において提供されており、ここで、ポリペプチドは関節内に投与される。いくつかの実施形態では、ヒト対象における関節炎または軟骨損傷の処置において使用するために、約０．２〜２００ｍｇの配列番号１７からなるポリペプチドを含む組成物が本明細書において提供されており、ここで、ポリペプチドは関節内に投与される。
【００１７】
いくつかの実施形態では、ヒト対象における関節炎または軟骨損傷の処置において使用するために、約０．２〜６０ｍｇ（例えば、約０．２〜６０ｍｇ、約０．２〜５５ｍｇ、約０．２〜５０ｍｇ、約０．２〜４５ｍｇ、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜６０ｍｇ、約２〜５５ｍｇ、約２〜５０ｍｇ、約２〜４５ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜６０ｍｇ、約５〜５５ｍｇ、約５〜５０ｍｇ、約５〜４５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、約１０〜５５ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜４５ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜６０ｍｇ、約１５〜５５ｍｇ、約１５〜５０ｍｇ、約１５〜４５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜６０ｍｇ、約２０〜５５ｍｇ、約２０〜５０ｍｇ、約２０〜４５ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜６０ｍｇ、約３０〜５５ｍｇ、約３０〜５０ｍｇ、約３０〜４５ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜６０ｍｇ、約３５〜５５ｍｇ、約３５〜５０ｍｇ、約３５〜４５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約４０〜６０ｍｇ、約４０〜５５ｍｇ、約４０〜５０ｍｇ、約４０〜４５ｍｇ、約４５〜６０ｍｇ、約４５〜５５ｍｇ、約４５〜５０ｍｇ、約５０〜６０ｍｇ、約５０〜５５ｍｇ、約５５〜６０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ、約４１ｍｇ、約４２ｍｇ、約４３ｍｇ、約４４ｍｇ、約４５ｍｇ、約４６ｍｇ、約４７ｍｇ、約４８ｍｇ、約４９ｍｇ、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、約６０ｍｇ）の配列番号１７を含むポリペプチドを含む組成物が本明細書において提供されており、ここで、ポリペプチドは関節内に投与される。
【００１８】
いくつかの実施形態では、ヒト対象における関節炎または軟骨損傷の処置において使用するために、約０．２〜６０ｍｇ（例えば、約０．２〜６０ｍｇ、約０．２〜５５ｍｇ、約０．２〜５０ｍｇ、約０．２〜４５ｍｇ、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜６０ｍｇ、約２〜５５ｍｇ、約２〜５０ｍｇ、約２〜４５ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜６０ｍｇ、約５〜５５ｍｇ、約５〜５０ｍｇ、約５〜４５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、約１０〜５５ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜４５ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜６０ｍｇ、約１５〜５５ｍｇ、約１５〜５０ｍｇ、約１５〜４５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜６０ｍｇ、約２０〜５５ｍｇ、約２０〜５０ｍｇ、約２０〜４５ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜６０ｍｇ、約３０〜５５ｍｇ、約３０〜５０ｍｇ、約３０〜４５ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜６０ｍｇ、約３５〜５５ｍｇ、約３５〜５０ｍｇ、約３５〜４５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約４０〜６０ｍｇ、約４０〜５５ｍｇ、約４０〜５０ｍｇ、約４０〜４５ｍｇ、約４５〜６０ｍｇ、約４５〜５５ｍｇ、約４５〜５０ｍｇ、約５０〜６０ｍｇ、約５０〜５５ｍｇ、約５５〜６０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ、約４１ｍｇ、約４２ｍｇ、約４３ｍｇ、約４４ｍｇ、約４５ｍｇ、約４６ｍｇ、約４７ｍｇ、約４８ｍｇ、約４９ｍｇ、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、約６０ｍｇ）の配列番号１７からなるポリペプチドを含む組成物が本明細書において提供されており、ここで、ポリペプチドは関節内に投与される。
【００１９】
他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本発明が関連する技術分野の当業者によって一般に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似または等価の方法および材料を、本発明を実施するために使用することができるが、適切な方法および材料は以下に記載される。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、参照によってその全体が援用される。矛盾する場合、定義を含む本明細書が優先するであろう。さらに、材料、方法、および実施例は単なる実例であり、限定は意図されない。
【００２０】
本発明の１つまたは複数の実施形態の詳細は、添付の図面および以下の説明において示される。本発明の他の特徴、目的、および利点は、説明および図面、ならびに特許請求の範囲から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】人工膝関節全置換を受ける予定の一次性変形性関節症患者における、配列番号１７のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドのランダム化プラセボ対照二重盲検ファースト・イン・ヒューマン単回漸増用量研究の研究設計を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明は、軟骨形成活性を有する関節内用量のプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを対象の関節に投与することにより、対象（例えば、ヒト対象）において関節炎または軟骨損傷（例えば、関節軟骨損傷）を処置するための方法および組成物を提供する。
【００２３】
定義
当業者は、本明細書に記載されるものと類似または等価であって、本発明の実施において使用され得る多数の方法および材料を認識するであろう。実際、本発明は、記載される方法および材料に決して限定されない。
【００２４】
本明細書で使用される場合、文脈が明らかに他に指示しない限り、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は複数の指示対象を含む。
【００２５】
常に明記されるわけではないが、全ての数値表示が「約」という用語に先行されることは理解されるべきである。従って、反対のことが表示されない限り、本明細書および特許請求の範囲に示される数値パラメータは、本開示により得ることが求められる所望の特性に応じて変化し得る近似値である。「約」という用語は、測定可能な値に関する場合、特定の値からの＋／−１０％、より好ましくは＋／−５％、さらにより好ましくは＋／−１％、さらにより好ましくは＋／−０．１％の変動量を包含することを意味する。例えば、「約」という用語は、ｐＨに関する場合、特定のｐＨ値の＋／−０．３の変動量を包含することを意味する。
【００２６】
「ＡＮＧＰＴＬ３」は、分泌因子のアンジオポエチン様ファミリーの一員であるアンジオポエチン様３を指す。ＡＮＧＰＴＬ３は主に肝臓で発現され、シグナルペプチド、Ｎ末端コイルドコイルドメイン（ＣＣＤ）およびＣ末端フィブリノーゲン（ＦＢＮ）様ドメインからなるアンジオポエチンの特徴的な構造を有する。ＡＮＧＰＴＬ３はαＶ／β３インテグリンに結合することが示され、ＦＢＮ様ドメイン単独で、内皮細胞接着および生体内血管新生を誘導するのに十分であった（Ｃａｍｅｎｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：１７２８１−１７２９０，２００２）。内在性ＡＮＧＰＴＬ３は、一般に、生体内でアミノ末端断片およびカルボキシル末端断片に切断される。
【００２７】
ＡＮＧＰＴＬ３のアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＰ＿０５５３１０．１）は配列番号１で示され、その対応するポリヌクレオチド配列は配列番号２で示される（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＭ＿０１４４９５．３）。
アンジオポエチン関連タンパク質３プレプロタンパク質［ヒト，ＮＰ＿０５５３１０．１］
【化１】
2019535707.tif 000002
ヒトアンジオポエチン様３（ＡＮＧＰＴＬ３），ｃＤＮＡ［ＮＭ＿０１４４９５．３］
【化２】
2019535707.tif 000003
【００２８】
「ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチド」は、天然に存在するＡＮＧＰＴＬ３タンパク質またはその断片もしくは変異体を指す。本開示の目的のために、アミノ酸の番号付けは、通常、全長野生型ヒトＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチド配列（配列番号１）に関して決定される。従って、本発明のポリペプチドが全長ＡＮＧＰＴＬ３のＣ末端部分のみを含有し、Ｎ末端部分を含有しない実施形態において、ペプチドは４６０未満のアミノ酸長であるが、位置の番号付けは配列番号１に基づく。例えば、本発明のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチド自体はわずか２００のアミノ酸長であるかもしれないが、本発明のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの４２３位への言及は、配列番号１の４２３位を指す。配列番号１などの参照配列中の位置「に対応する」目的の配列中のアミノ酸の決定において、これは、例えば、デフォルトＣＬＵＳＴＡＬアライメントパラメータまたはデフォルトＢＬＡＳＴ２アライメントパラメータを用いて配列を最適に整列させ、配列を比較することによって実施される。例えば、「配列番号１に関して決定された」目的の配列中の４２３位、または配列番号１の４２３位「に対応する」アミノ酸は、目的の配列を配列番号１と最適に整列させたときに、配列番号１の４２３位と整列するアミノ酸を意味する。
【００２９】
本明細書で使用される「プロテアーゼ耐性」という用語は、トリプシン様プロテアーゼによる切断に対して、ポリペプチドの感受性を、対応する修飾されていない野生型ポリペプチドよりも低くする修飾を含むポリペプチドを指す。
【００３０】
「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」という用語は互換的に使用され、ペプチド結合によって共有結合されたアミノ酸残基で構成される化合物を指す。タンパク質またはペプチドは少なくとも２つのアミノ酸を含有しなければならず、タンパク質またはペプチドの配列を構成することができるアミノ酸の最大数に制限は課せられない。ポリペプチドは、ペプチド結合により互いに連結された２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチドまたはタンパク質を含む。本明細書で使用される場合、この用語は、当該技術分野では一般に例えばペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーとも呼ばれる短い鎖と、当該技術分野では通常タンパク質と呼ばれる（多数の種類がある）より長い鎖との両方を指す。「ポリペプチド」は、例えば、生物学的に活性な断片、実質的に相同のポリペプチド、オリゴペプチド、ホモダイマー、ヘテロダイマー、ポリペプチドの変異体、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質を特に含む。ポリペプチドは、天然ペプチド、組換えペプチド、またはこれらの組合せを含む。
【００３１】
「変異体」という用語は、参照ポリペプチドと実質的に同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドか、または実質的に同一のヌクレオチド配列によってコードされ、そして参照ポリペプチドの１つまたは複数の活性を有することができるポリペプチドを指す。例えば、変異体は、参照ポリペプチドの１つまたは複数の活性を保持しながら、参照ポリペプチドに対して約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有することができる。
【００３２】
「アミノ酸」という用語は、天然に存在するアミノ酸および合成アミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様にして機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣体を指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝コードによりコードされるアミノ酸、ならびに後で修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタマート、およびＯ−ホスホセリンである。アミノ酸類似体は、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、およびＲ基に結合したα炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。このような類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。天然にコードされるアミノ酸は、２０個の一般的なアミノ酸（アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリン）、ならびにピロリシン、ピロリン−カルボキシル−リシン、およびセレノシステインである。
【００３３】
「保存的に修飾された変異体」は、アミノ酸および核酸配列の両方に適用される。特定の核酸配列に関して、保存的に修飾された変異体は、同一または本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸を指すか、または核酸がアミノ酸配列をコードしない場合は、本質的に同一の配列を指す。遺伝コードの縮重のために、多数の機能的に同一の核酸が任意の所与のタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧおよびＧＣＵは、全てアミノ酸アラニンをコードする。従って、コドンによりアラニンが特定される全ての位置において、そのコドンは、コードされたポリペプチドを変更することなく記載される対応するコドンのいずれかに変更され得る。このような核酸バリエーションは、ある種の保存的に修飾された変異体バリエーションである「サイレントバリエーション」である。ポリヌクレオチドによりコードされる本明細書中の全てのポリペプチド配列は、可能性のある全ての核酸のサイレントバリエーションを包含する。当業者は、核酸中の各コドン（通常メチオニンの唯一のコドンであるＡＵＧと、通常トリプトファンの唯一のコドンであるＴＧＧとを除く）が修飾されて、機能的に同一の分子をもたらし得ることを認識するであろう。従って、ポリペプチドをコードする核酸の各サイレントバリエーションは、記載される各配列に潜在している。最初にコードされたアミノ酸配列に関して、単一のアミノ酸またはわずかな割合のアミノ酸を変更、付加または欠失させる核酸、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質配列に対する個々の置換、欠失または付加は、その変更が、化学的に類似したアミノ酸によるアミノ酸の置換、および／または最初のタンパク質に類似した機能活性を有する構造的に類似したタンパク質を生じるポリペプチド配列を生じる場合に「保存的に修飾された変異体」をもたらすことを、当業者は認識するであろう。機能的に類似したアミノ酸を提供する保存的置換表は、当該技術分野において周知である。このような保存的に修飾された変異体は、本発明の多型変異体、種間相同体、および対立遺伝子に追加されるものであり、これらを除外しない。
【００３４】
「保存的アミノ酸置換」という用語は、１つのこのようなグループからのアミノ酸の、同じグループからの異なるアミノ酸による置換（概念的または他の方法で）を指す。置換の一例は、相同の生物の対応するタンパク質間のアミノ酸変化の基準化された頻度の分析に基づく（例えば、Ｓｃｈｕｌｚ，Ｇ．Ｅ．ａｎｄ  Ｒ．Ｈ．Ｓｃｈｉｒｍｅｒ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇを参照）。このような分析に従って、グループ内のアミノ酸が互いに優先的に交換され、その結果、タンパク質構造全体に対するその影響において最も互いに似ているアミノ酸のグループが定義され得る（例えば、Ｓｃｈｕｌｚ，Ｇ．Ｅ．ａｎｄ  Ｒ．Ｈ．Ｓｃｈｉｒｍｅｒ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇを参照）。このような方法で定義されるアミノ酸グループのセットの一例としては、（ｉ）ＧｌｕおよびＡｓｐ、Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓからなる帯電したグループ、（ｉｉ）Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓからなる正に帯電したグループ、（ｉｉｉ）ＧｌｕおよびＡｓｐからなる負に帯電したグループ、（ｉｖ）Ｐｈｅ、ＴｙｒおよびＴｒｐからなる芳香族グループ、（ｖ）ＨｉｓおよびＴｒｐからなる窒素環グループ、（ｖｉ）Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅからなる大きい脂肪族非極性グループ、（ｖｉｉ）ＭｅｔおよびＣｙｓからなるわずかに極性のグループ、（ｖｉｉｉ）Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、ＧｌｎおよびＰｒｏからなる小残基グループ、（ｉｘ）Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ＭｅｔおよびＣｙｓからなる脂肪族グループ、ならびに（ｘ）ＳｅｒおよびＴｈｒからなる小ヒドロキシルグループが挙げられる。共有の物理特性に基づいた保存的置換の他の例は、以下のグループ内の置換である：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；および８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４）を参照）。
【００３５】
「相同」または「同一性」という用語は、２つのポリマー分子間、例えば、２つのＤＮＡ分子もしくは２つのＲＮＡ分子などの２つの核酸分子間、または２つのポリペプチド分子間のサブユニットの配列同一性を指す。２つの分子の両方におけるサブユニット位置が同じモノマーサブユニットによって占有される場合、例えば、２つのＤＮＡ分子のそれぞれにおける位置がアデニンにより占有されると、これらはその位置で相同、または同一である。２つの配列間の相同性は、一致する位置または相同位置の数の直接的な関数であり、例えば、２つの配列における位置の半分（例えば、１０サブユニット長のポリマーにおける５つの位置）が相同である場合、２つの配列は５０％相同であり、位置の９０％（例えば、１０中９）が一致するかまたは相同である場合、２つの配列は９０％相同である。「配列同一性」の割合は、２つの最適に整列された配列を比較ウインドウにわたって比較することによって決定することができ、比較ウインドウ内のアミノ酸配列の断片は、２つの配列の最適な整列のために参照配列（付加または欠失を含まない）と比較して付加または欠失（例えば、ギャップまたはオーバーハング）を含み得る。両方の配列において同一のアミノ酸残基が生じる位置の数を決定して、一致した位置の数をもたらし、一致した位置の数を比較ウインドウ内の位置の総数で除し、結果に１００を掛けて、配列同一性の割合をもたらすことによって、割合を計算することができる。結果は、クエリー配列に関する主題の配列の同一性パーセントである。
【００３６】
配列同一性および配列類似性パーセントを決定するのに適したアルゴリズムの２つの例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２、およびＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０にそれぞれ記載されるＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎによって公的に入手可能である。このアルゴリズムは、データベース配列内の同じ長さのワードと整列させたときに、いくらかの正の値のしきい値スコアＴと一致するかまたは満たす、クエリー配列内の長さＷの短いワードを同定することにより、高スコアの配列対（ＨＳＰ）を最初に同定することを含む。Ｔは、隣接ワードスコアしきい値と呼ばれる（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．、上記）。これらの初期隣接ワードヒットは、検索を開始して、これらを含有するより長いＨＳＰを見出すためのシードの役割を果たす。ワードヒットは、累積アライメントスコアを増大させ得る限り、各配列に沿って両方向に伸長される。累積スコアは、ヌクレオチド配列について、パラメータＭ（一致する残基の対に対する報酬スコア；常に＞０）およびＮ（ミスマッチ残基に対するペナルティスコア；常に＜０）を用いて計算される。アミノ酸配列については、スコアリングマトリックスを使用して、累積スコアを計算する。各方向におけるワードヒットの伸長は、累積アライメントスコアがその最大達成値から量Ｘだけ減少するとき、１つまたは複数の負のスコアの残基アライメントの蓄積により累積スコアがゼロ以下になるとき、またはいずれかの配列の末端に到達したときに停止される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ、およびＸは、アライメントの感度および速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）は、１１のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝−４および両鎖の比較をデフォルトとして使用する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、３のワード長、および１０の期待値（Ｅ）、およびＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５を参照）、５０のアライメント（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、および両鎖の比較をデフォルトとして使用する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間の類似性の統計的分析も実施する（例えば、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３−５７８７を参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの尺度は最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の一致が偶然に起こり得る確率の指標を提供する。例えば、核酸は、試験核酸と参照核酸との比較における最小合計確率が約０．２未満、より好ましくは約０．０１未満、最も好ましくは約０．００１未満である場合に、参照配列に類似していると考えら��る。
【００３７】
「単離」という用語は、核酸またはタンパク質に適用される場合、核酸またはタンパク質が、天然状態でそれが関連している他の細胞成分を本質的に含まないように精製されることを示す。多くの場合、均質またはほぼ均質な状態である。乾燥または水性溶液であり得る。純度および均質性は、当該技術分野において一般的に知られており、使用される分析化学技術、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、高速液体クロマトグラフィなどを用いて決定され得る。調製物中に存在する主な種であるタンパク質は実質的に精製される。「精製」という用語は、いくつかの実施形態において、タンパク質が電気泳動ゲル中に本質的に１つのバンドを生じさせることを示す。通常、これは、タンパク質が少なくとも８５％純粋である、より好ましくは少なくとも９５％純粋である、最も好ましくは少なくとも９９％純粋であることを意味する。
【００３８】
「対象」という用語は、本発明の方法に従う処置が提供される動物、ヒトまたは非ヒトを指す。獣医学的および非獣医学的用途が企図される。この用語は、哺乳類、例えば、ヒト、他の霊長類、ブタ、マウスおよびラットなどのげっ歯類、ウサギ、モルモット、ハムスター、雌ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ヒツジならびにヤギを含むが、これらに限定されない。典型的な対象は、ヒト、家畜、ならびにネコおよびイヌなどの家庭用ペットを含む。
【００３９】
「処置する」または「処置」という用語は、治療的処置および予防的または防止的対策の両方を指し、ここで、目的は、望まれない生理学的変化または障害を阻止または遅延させることである。本発明の目的のために、有利または望ましい臨床結果は、検出可能または検出不能にかかわらず、症状の軽減、疾患の程度の縮小、疾患の状態の安定化（すなわち、悪化しないこと）、疾患の進行の遅延または減速、病状の改善または緩和、および寛解（部分的または全体的にかかわらず）を含むが、これらに限定されない。
【００４０】
軟骨形成活性を有するプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチド
本開示は、軟骨損傷（例えば、関節軟骨損傷）または関節炎を処置するための、軟骨形成活性を有するプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの対象（例えば、ヒト対象）への関節内投与に関する。軟骨形成活性を有するプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、参照によってその全体が援用される国際公開第２０１４／１３８６８７号パンフレットに記載されている。
【００４１】
本明細書に記載されるＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは軟骨形成活性を有する。本明細書で定義されるように、軟骨形成または軟骨形成活性は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）からの軟骨細胞の発生を指す。間葉系幹細胞（ＭＳＣ）は成体の関節軟骨に存在し、単離すると、インビトロで軟骨細胞および他の間葉系細胞系列への分化を受けるようにプログラムすることが可能であり、軟骨再生のために使用され得る。軟骨形成活性の指標には、軟骨基質の産生が含まれるが、これに限定されない。軟骨基質の産生は、種々のマーカー、例えば、Ｓｏｘ９、ＩＩ型コラーゲン、またはグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の産生によって測定され得る。いくつかの実施形態では、ＩＩ型コラーゲンの発現が軟骨基質産生のマーカーとして測定される。いくつかの実施形態では、ＧＡＧの産生が軟骨基質産生のマーカーとして測定される。いくつかの実施形態では、軟骨特異的タンパク質発現によるＧＡＧ産生の３倍の増大は、明確な軟骨基質の産生を示す。
【００４２】
本明細書に記載されるＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドはプロテアーゼ耐性である。ポリペプチドは、トリプシンなどのセリンプロテアーゼによる切断を測定する任意の既知のアッセイを用いて、プロテアーゼ耐性について評価され得る。いくつかの実施形態では、タンパク質分解感受性を評価するために使用されるプロテアーゼは、セリンプロテアーゼトリプシンである。ポリペプチドは、その野生型対応物と比較したときにトリプシンに対する感受性が低下していれば、プロテアーゼ耐性であると考えられる。アッセイの一例は、対応する天然のヒトペプチドと比較して、ポリペプチドがある期間にわたってトリプシンにさらされたときに生成される切断産物の量を測定することである。切断は、任意の既知のアッセイ、例えば、ＳＤＳ  ＰＡＧＥまたはＬＣＭＳを用いて測定することができる。
【００４３】
説明的なアッセイにおいて、トリプシン分解による限定されたタンパク質分解は、１０ｎｇの評価されるタンパク質を、８０００：１（タンパク質：トリプシン）の質量比のトリプシンと共に室温で１時間インキュベートすることにより実施される。次に、トリプシン分解反応は、酢酸を添加して反応をｐＨ３．０にすることによってクエンチすることができる。次に、クエンチしたサンプルは、トリプシン切断により生成された断片の出現により、切断されたものから、切断に対して耐性であるタンパク質を同定するために、例えば４〜１２％のＴｒｉｓ−ＢｉｓゲルにおけるＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離分析される。その野生型対応物と比較して、プロテアーゼ耐性ポリペプチド中に切断産物は存在しないか、または低減されている。
【００４４】
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、表１に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、ポリペプチドは、配列番号１に関して決定されたときに、ＫまたはＲ以外の極性アミノ酸であるアミノ酸を４２３位に含み、ポリペプチドは軟骨形成活性を有する。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、表１に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号１の４２３位に対応するアミノ酸残基はＱもしくはＳであるか、または欠失している。
【００４５】
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、配列番号３〜３０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、ポリペプチドは、配列番号１に関して決定されたときに、ＫまたはＲ以外の極性アミノ酸であるアミノ酸を４２３位に含み、ポリペプチドは軟骨形成活性を有する。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、配列番号３〜３０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号１の４２３位に対応するアミノ酸残基はＱもしくはＳであるか、または欠失している。
【００４６】
さらなる実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、配列番号３〜１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、ポリペプチドは、配列番号１に関して決定されたときに、ＫまたはＲ以外の極性アミノ酸であるアミノ酸を４２３位に含み、ポリペプチドは軟骨形成活性を有する。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、配列番号３〜１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号１の４２３位に対応するアミノ酸残基はＱもしくはＳであるか、または欠失している。
【００４７】
さらなる実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、配列番号１７に対して少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、ポリペプチドは、配列番号１に関して決定されたときに、ＫまたはＲ以外の極性アミノ酸であるアミノ酸を４２３位に含み、ポリペプチドは軟骨形成活性を有する。さらなる実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、配列番号１７に対して少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号１の４２３位に対応するアミノ酸残基は、ＱもしくはＳであるか、または欠失している。
【００４８】
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、表１に記載される配列のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、配列番号３〜３０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、配列番号３〜１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは配列番号１７を含む。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは配列番号１８を含む。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは配列番号３７を含む。
【００４９】
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、表１に記載される配列のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、配列番号３〜３０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、配列番号３〜１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは配列番号１７からなる。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは配列番号１８からなる。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは配列番号３７からなる。
【００５０】
【表１】
2019535707.tif 000004
【００５１】
【表２】
2019535707.tif 000005
【００５２】
【表３】
2019535707.tif 000006
【００５３】
【表４】
2019535707.tif 000007
【００５４】
【表５】
2019535707.tif 000008
【００５５】
【表６】
2019535707.tif 000009
【００５６】
本明細書に記載されるＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、ポリペプチドをプロテアーゼ耐性にするためにポリペプチドのＣ末端部分に少なくとも１つの置換または欠失を有することができる。置換または欠失は、ポリペプチドがプロテアーゼ、例えばトリプシン様プロテアーゼに対して増大した耐性を有するように、ＲまたはＫ残基におけるものである。プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチド中のＲまたはＫに対して任意のアミノ酸が置換され得るか、あるいはＲまたはＫ残基は欠失され得る。いくつかの実施形態では、置換は、極性アミノ酸、例えば、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ａ、またはＹである。いくつかの実施形態では、置換は、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、またはＹである。いくつかの実施形態では、置換はＳまたはＱである。いくつかの実施形態では、置換はＱである。いくつかの実施形態では、置換はＳである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ペプチドは、配列番号１に関して４２３位に、ＫまたはＲ以外のアミノ酸を有する。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、４２３位（配列番号１に関して）に極性アミノ酸であるアミノ酸を含み、例えば、４２３位（配列番号１に関して）のアミノ酸は、ＱまたはＳまたは別の極性アミノ酸であり得る。特定の実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、４２３位（配列番号１に関して）にＱを有する。他の実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、４２３位（配列番号１に関して）にＳを有する。いくつかの実施形態では、４２３（配列番号１に関して）の置換に加えて、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ペプチドは、配列番号１またはその変異体のＣ末端における別のＲまたはＫの置換を有し、置換は、ＲまたはＫ以外の極性アミノ酸である。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ペプチドにおいて、４２３位（配列番号１に関して）の置換はＱまたはＳである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ペプチドにおいて、配列番号１の４２３位に対応するアミノ酸は欠失されている。
【００５７】
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、２５０以下のアミノ酸長であり、配列番号５〜１８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。
【００５８】
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、ヒトＡＮＧＰＴＬ３タンパク質のカルボキシル末端（Ｃ末端）断片（例えば、少なくとも１００、１５０、２００、２２０または２１５の隣接するアミノ酸）であるか、またはヒトＡＮＧＰＴＬ３タンパク質配列のＣ末端断片と実質的に同一の配列を有し、ここで、ポリペプチドは軟骨形成活性を保持する。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドはＣ末端配列の少なくとも一部を欠いており、例えば、配列番号１のＣ末端部から５、１０、１５、または２０のアミノ酸を欠いている（すなわち、配列番号１の４５６〜４６０、４５１〜４６０、４４６〜４６０または４４１〜４６０を欠いている）。
【００５９】
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、アミノ酸領域：配列番号１のアミノ酸２４１〜４５５、または２４１〜４６０；配列番号１のアミノ酸２４２〜４５５、または２４２〜４６０；配列番号１のアミノ酸２３３〜４５５または２３３〜４６０；配列番号１のアミノ酸２２８〜４５５または２２８〜４６０、配列番号１のアミノ酸２２６〜４５５もしくは２２６〜２６０またはアミノ酸２２５〜４５５もしくは２２５〜２６０に対応する隣接したアミノ酸を含み、ここで、アミノ酸はＲまたはＫ残基に対して置換されているか、あるいはＲまたはＫ残基は欠失されている。いくつかの実施形態では、配列番号１に関して決定されたときに、置換または欠失は４２３位におけるものである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸領域２０７〜４５５または２０７〜４６０に対応する隣接したアミノ酸を含み、ここで、アミノ酸はＲまたはＫ残基に対して置換されているか、あるいはＲまたはＫ残基は欠失されている。いくつかの実施形態では、置換または欠失は４２３位におけるものである。いくつかの実施形態では、置換は、極性アミノ酸、例えば、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ａ、またはＹである。いくつかの実施形態では、置換は、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、またはＹである。いくつかの実施形態では、置換は、ＳまたはＱである。いくつかの実施形態では、置換はＱである。いくつかの実施形態では、配列番号１の４２３位に対応するアミノ酸残基は欠失している。
【００６０】
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸２４０〜４５４、配列番号１のアミノ酸２４１〜４５５、または配列番号１のアミノ酸２４２〜４５５に対して少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有し、配列番号１の４２３位に対応するアミノ酸における置換を有するアミノ酸配列を含み、置換されたアミノ酸はＲではなく、ポリペプチドは軟骨形成活性を有する。他の実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸２４０〜４５４、配列番号１のアミノ酸２４１〜４５５、または配列番号１のアミノ酸２４２〜４５５を含み、各ポリペプチドは配列番号１の４２３位に対応するアミノ酸における置換を有し、置換されたアミノ酸はＱまたはＳである。他の実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸２４０〜４５４、配列番号１のアミノ酸２４１〜４５５、または配列番号１のアミノ酸２４２〜４５５を含み、各ポリペプチドは、配列番号１の４２３位に対応するアミノ酸残基の欠失を有する。
【００６１】
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸アミノ酸２４２〜４５５または２４２〜４６０；配列番号１の２４１〜４５５または２４１〜４６０；配列番号１のアミノ酸２３３〜４５５または２３３〜４６０；配列番号１のアミノ酸２２８〜４５５または２２８〜４６０、配列番号１のアミノ酸２２６〜４５５もしくは２２６〜２６０、または配列番号１のアミノ酸２２５〜４５５もしくは２２５〜２６０に対して少なくとも９５％、または少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸はＲまたはＫに対して置換されている。いくつかの実施形態では、置換は４２３位におけるものである。いくつかの実施形態では、置換は、極性アミノ酸、例えば、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ａ、またはＹである。いくつかの実施形態では、置換は、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、またはＹである。いくつかの実施形態では、置換はＳまたはＱである。いくつかの実施形態では、置換はＱである。いくつかの実施形態では、配列番号１の４２３位に対応するアミノ酸残基は欠失している。
【００６２】
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドはペグ化される。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、異種ペプチドに融合される。特定の実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、免疫グロブリン重鎖定常領域（Ｆｃ）、ポリヒスチジン、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、チオレドキシン、タンパク質Ａ、タンパク質Ｇ、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、または上記の異種ポリペプチドのいずれかの断片のうちのいずれか１つに融合される。特定の実施形態では、異種ポリペプチドは、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドのアミノ末端部で融合される。付加的または代替的な実施形態において、異種ポリペプチドは、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドのカルボキシル末端部で融合される。
【００６３】
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、１、２、３、４、またはそれ以上の非天然アミノ酸を含む。タンパク質内に天然に存在しないアミノ酸を作成および導入する方法は既知である。例えば、米国特許第７，０８３，９７０号明細書および米国特許第７，５２４，６４７号明細書を参照されたい。１つまたは複数の所望の非天然アミノ酸を含むタンパク質を作るのに適した直交翻訳系の生成のための一般的な原理は、直交翻訳系を生成するための一般的な方法のように、当該技術分野において既知である。例えば、「ＭＥＴＨＯＤＳ  ＡＮＤ  ＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮ  ＦＯＲ  ＴＨＥ  ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ  ＯＦ  ＯＲＴＨＯＧＯＮＡＬ  ｔＲＮＡ−ＡＭＩＮＯＡＣＹＬ−ｔＲＮＡ  ＳＹＮＴＨＥＴＡＳＥ  ＰＡＩＲＳ」という表題の国際公開第２００２／０８６０７５号パンフレット；「ＩＮ  ＶＩＶＯ  ＩＮＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ  ＯＦ  ＵＮＮＡＴＵＲＡＬ  ＡＭＩＮＯ  ＡＣＩＤＳ」という表題の国際公開第２００２／０８５９２３号パンフレット；「ＥＸＰＡＮＤＩＮＧ  ＴＨＥ  ＥＵＫＡＲＹＯＴＩＣ  ＧＥＮＥＴＩＣ  ＣＯＤＥ」という表題の国際公開第２００４／０９４５９３号パンフレット；国際公開第２００５／０１９４１５号パンフレット（２００４年７月７日出願）；国際公開第２００５／００７８７０号パンフレット（２００４年７月７日出願）；国際公開第２００５／００７６２４号パンフレット（２００４年７月７日出願）；「ＯＲＴＨＯＧＯＮＡＬ  ＴＲＡＮＳＬＡＴＩＯＮ  ＣＯＭＰＯＮＥＮＴＳ  ＦＯＲ  ＴＨＥ  ＶＩＶＯ  ＩＮＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ  ＯＦ  ＵＮＮＡＴＵＲＡＬ  ＡＭＩＮＯ  ＡＣＩＤＳ」という表題の国際公開第２００６／１１０１８２号パンフレット（２００５年１０月２７日出願）、ならびに「ＳＹＳＴＥＭＳ  ＦＯＲ  ＴＨＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＯＦ  ＯＲＴＨＯＧＯＮＡＬ  ＴＲＡＮＳＬＡＴＩＯＮ  ＣＯＭＰＯＮＥＮＴＳ  ＩＮ  ＥＵＢＡＣＴＥＲＩＡＬ  ＨＯＳＴ  ＣＥＬＬＳ」という表題の国際公開第２００７／１０３４９０号パンフレット（２００７年３月７日出願）を参照されたい。非天然アミノ酸を組み込む直交翻訳系、ならびにその生成および使用方法の議論のために、Ｗａｎｇ  ａｎｄ  Ｓｃｈｕｌｔｚ，（２００５）“Ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｃｏｄｅ．”Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  ４４：３４−６６；Ｘｉｅ  ａｎｄ  Ｓｃｈｕｌｔｚ，（２００５）”Ａｎ  Ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｃｏｄｅ．”Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２２７−２３８；Ｘｉｅ  ａｎｄ  Ｓｃｈｕｌｔｚ，（２００５）”Ａｄｄｉｎｇ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ．”Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ９：５４８−５５４；およびＷａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，（２００６）”Ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｃｏｄｅ．”Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｔｒｕｃｔ  ３５：２２５−２４９；Ｄｅｉｔｅｒｓ，ｅｔ  ａｌ，（２００５）”Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｏ���  ａｎ  ａｌｋｙｎｅ  ｉｎｔｏ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ．”Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １５：１５２１−１５２４；Ｃｈｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，（２００２）”Ａｄｄｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐ−Ａｚｉｄｏ−Ｌ−ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｃｏｄｅ  ｏｆ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ．”Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １２４：９０２６−９０２７；および国際公開第２００６／０３４３３２号パンフレット（２００５年９月２０日出願）も参照されたい。付加的な詳細は、米国特許第７，０４５，３３７号明細書；米国特許第７，０８３，９７０号明細書；米国特許第７，２３８，５１０号明細書；米国特許第７，１２９，３３３号明細書；米国特許第７，２６２，０４０号明細書；米国特許第７，１８３，０８２号明細書；米国特許第７，１９９，２２２号明細書；および米国特許第７，２１７，８０９号明細書において見出される。
【００６４】
「天然にコードされないアミノ酸」は、一般的なアミノ酸またはピロリシン、ピロリン−カルボキシ−リシン、もしくはセレノシステインのうちの１つではないアミノ酸を指す。「天然にコードされないアミノ酸」という用語と同義に使用され得る他の用語は、「非天然（ｎｏｎ−ｎａｔｕｒａｌ）アミノ酸」、「非天然（ｕｎｎａｔｕｒａｌ）アミノ酸」、「天然に存在しないアミノ酸」、ならびにこれらの多様にハイフンでつながれたおよびハイフンでつながれていないバリエーションである。「天然にコードされないアミノ酸」という用語は、天然にコードされたアミノ酸（２０個の一般的なアミノ酸またはピロリシン、ピロリン−カルボキシ−リシン、およびセレノシステインを含むがこれらに限定されない）の修飾（例えば、翻訳後修飾）により生じるが、それら自体は翻訳複合体により成長するポリペプチド鎖中に天然に組み込まれないアミノ酸も含むが、これらに限定されない。このような天然に存在しないアミノ酸の例としては、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｌ−スレオニン、およびＯ−ホスホチロシンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６５】
天然にコードされないアミノ酸は、通常、２０個の天然アミノ酸で使用されるもの以外の任意の置換基側鎖を有する任意の構造である。天然にコードされないアミノ酸は通常、側鎖の構造だけが天然アミノ酸と異なるので、天然にコードされないアミノ酸は、天然に存在するポリペプチドにおいて形成されるのと同じ方法で、天然にコードされるアミノ酸またはコードされないアミノ酸を含むがこれらに限定されない他のアミノ酸とアミド結合を形成する。しかしながら、天然にコードされないアミノ酸は、これらを天然のアミノ酸と区別する側鎖基を有する。例えば、Ｒは、任意選択的に、アルキル−、アリール−、アシル−、ケト−、アジド−、ヒドロキシル−、ヒドラジン、シアノ−、ハロ−、ヒドラジド、アルケニル、アルキニル（ａｌｋｙｎｌ）、エーテル、チオール、セレノ−、スルホニル−、ボラート、ボロナート、ホスホ、ホスホノ、ホスフィン、複素環式、エノン、イミン、アルデヒド、エステル、チオ酸、ヒドロキシルアミン、アミノ基など、またはこれらの任意の組合せを含む。本発明で使用するのに適し得る他の天然に存在しない目的のアミノ酸には、光活性化可能なクロスリンカーを含むアミノ酸、スピン標識化アミノ酸、蛍光アミノ酸、金属結合アミノ酸、金属含有アミノ酸、放射性アミノ酸、新規の官能基を有するアミノ酸、他の分子と共有結合的または非共有結合的に相互作用するアミノ酸、フォトケージ化（ｐｈｏｔｏｃａｇｅｄ）および／または光異性化可能なアミノ酸、ビオチンまたはビオチン類似体を含むアミノ酸、糖置換セリンなどのグリコシル化アミノ酸、他の炭水化物修飾アミノ酸、ケト含有アミノ酸、ポリエチレングリコールまたはポリエーテルを含むアミノ酸、重原子置換アミノ酸、化学的切断可能および／または光切断可能なアミノ酸、約５を超えるまたは約１０を超える炭素を含む（限定はされない）ポリエーテルまたは長鎖炭化水素を含む（限定はされない）、天然アミノ酸と比べて長い側鎖を有するアミノ酸、炭素連結糖含有アミノ酸、酸化還元活性アミノ酸、アミノチオ酸含有アミノ酸、ならびに１つまたは複数の毒性部分を含むアミノ酸が含まれるが、これらに限定されない。
【００６６】
本発明で使用するのに適し得る、そして水溶性ポリマーとの反応のために有用である、天然にコードされない例示的なアミノ酸には、カルボニル、アミノオキシ、ヒドラジン、ヒドラジド、セミカルバジド、アジドおよびアルキン反応基を有するものが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、天然にコードされないアミノ酸は糖類部分を含む。このようなアミノ酸の例としては、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−ガラクトサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−スレオニン、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−アスパラギンおよびＯ−マンノサミニル−Ｌ−セリンが挙げられる。このようなアミノ酸の例には、アミノ酸と糖類との間の天然に存在するＮ−またはＯ−結合が、アルケン、オキシム、チオエーテル、アミドなどを含む（限定はされない）一般的に天然には見出されない共有結合によって置換された例も含まれる。このようなアミノ酸の例には、２−デオキシ−グルコース、２−デオキシガラクトースなどの一般的に天然に存在するタンパク質において見出されない糖類も含まれる。
【００６７】
例えば、生体内半減期を延長するために、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチド内（例えば、ポリペプチド鎖内またはＮ−末端もしくはＣ末端のいずれか）に任意選択的に導入され得る別のタイプの修飾は、ペグ化または長鎖ポリエチレングリコールポリマー（ＰＥＧ）の取込みである。ＰＥＧまたはＰＥＧの長鎖ポリマーの導入は、本ポリペプチドの有効分子量を増大させて、例えば、尿中への急速ろ過を防止する。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３配列内のリシン残基は、直接またはリンカーを介してＰＥＧに結合される。このようなリンカーは、例えば、適切に修飾されたＰＥＧ鎖への結合のためのチオール官能基を含有するＧｌｕ残基またはアシル残基であり得る。ＰＥＧ鎖を導入するための代替的な方法は、まず、ＡｒｇまたはＬｙｓ残基に対する置換など、Ｃ末端または溶媒露出残基にＣｙｓ残基を導入することである。このＣｙｓ残基は次に、例えば、マレイミド官能基を含有するＰＥＧ鎖に部位特異的に結合される。ＰＥＧまたはＰＥＧの長鎖ポリマーを取り込むための方法は、当該技術分野において周知であり（例えば、Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，Ｆ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．Ｔｏｄａｙ  １０：１４５１−８（２００５）；Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ，Ｒ．Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５５：２１７−５０（２００３）；Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｍ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．，５４：４５９−７６（２００２）に記載される）、その内容は、参照によって本明細書中に援用される。当該技術分野において既知のポリマー結合の他の方法も本発明において使用可能である。いくつかの実施形態では、ポリ（２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン）（ＰＭＰＣ）が、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドとのポリマー結合体として導入される（例えば、国際公開第２００８／０９８９３０号パンフレット；Ｌｅｗｉｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ．，１９：２１４４−５５（２００８）を参照）。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドとのホスホリルコリン含有ポリマーの結合体を本発明において使用することができる。当業者は、他の生体適合性ポリマー結合体が利用可能であることを容易に認識するであろう。
【００６８】
非天然アミノ酸（上記の通り）の取込みによりＰＥＧまたはＰＥＧポリマーを取り込むためのごく最近報告された代替のアプローチは、本ポリペプチドを用いて実施することができる。このアプローチは、発展した（ｅｖｏｌｖｅｄ）ｔＲＮＡ／ｔＲＮＡシンテターゼ対を利用し、アンバーサプレッサーコドンにより発現プラスミドにコードされる（Ｄｅｉｔｅｒｓ，Ａ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）．Ｂｉｏ−ｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１４，５７４３−５）。例えば、「ヒュスゲン［３＋２］付加環化」として知られている有機反応を促進するために、ｐ−アジドフェニルアラニンを本ポリペプチド内に取り込み、次に、還元剤および銅イオンの存在下で、アセチレン部分を有するＰＥＧポリマーと反応させることかできる。
【００６９】
特定の実施形態では、本発明は、ポリペプチドのグリコシル化を変更するようなＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの特定の突然変異も企図する。このような突然変異は、Ｏ結合またはＮ結合グリコシル化部位を含むが、これらに限定されない１つまたは複数のグリコシル化部位を導入または排除するように選択され得る。特定の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、グリコシル化部位と、天然に存在するＡＮＧＰＴＬ３タンパク質に対して変更されていないパターンとを有する。特定の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの変異体は、天然に存在するＡＮＧＰＴＬ３タンパク質に対してグリコシル化部位の数および／またはタイプが変更されたグリコシル化変異体を含む。特定の実施形態では、ポリペプチドの変異体は、天然ポリペプチドに対して、より多いまたはより少ない数のＮ結合グリコシル化部位を含む。Ｎ結合グリコシル化部位は、配列：Ａｓｎ−Ｘ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒによって特徴付けられ、ここで、Ｘとして指定されるアミノ酸残基は、プロリンを除く任意のアミノ酸残基であり得る。この配列を作るためのアミノ酸残基の置換は、Ｎ結合炭水化物鎖の付加のための潜在的な新しい部位を提供する。あるいは、この配列を排除する置換は、存在するＮ結合炭水化物鎖を除去するであろう。特定の実施形態では、Ｎ結合炭水化物鎖の転位が提供され、１つまたは複数のＮ結合グリコシル化部位（通常、天然に存在するもの）が除去されて、１つまたは複数の新しいＮ結合部位が作られる。
【００７０】
いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの機能性変異体または修飾形態は、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドおよび１つまたは複数の融合ドメインの融合タンパク質を含む。融合ドメインの周知の例としては、ポリヒスチジン、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、チオレドキシン、タンパク質Ａ、タンパク質Ｇ、免疫グロブリン重鎖定常領域（Ｆｃ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、および／またはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。融合ドメインまたはその断片は、所望の特性を付与するように選択され得る。例えば、いくつかの融合ドメインは、親和性クロマトグラフィによる融合タンパク質の単離のために特に有用である。親和性精製の目的のために、親和性クロマトグラフィのための関連のマトリックス、例えば、グルタチオン結合、アミラーゼ結合、およびニッケル結合またはコバルト結合樹脂などが使用される。このようなマトリックスの多くは、（ＨＩＳ６（配列番号４４））融合パートナーと共に有用であるＰｈａｒｍａｃｉａ  ＧＳＴ精製システムおよびＱＬＡｅｘｐｒｅｓｓＴＭシステム（Ｑｉａｇｅｎ）などの「キット」形態で入手可能である。別の例として、融合ドメインは、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの検出を容易にするように選択され得る。このような検出ドメインの例としては、種々の蛍光タンパク質（例えば、ＧＦＰ）および「エピトープタグ」が挙げられ、これらは通常、特異的な抗体を利用可能な短いペプチド配列である。特異的なモノクローナル抗体を容易に利用可能な周知のエピトープタグには、ＦＬＡＧ、インフルエンザウィルスヘマグルチニン（ＨＡ）、およびｃ−ｍｙｃタグが含まれる。場合により、融合ドメインは、Ｆａｃｔｏｒ  Ｘａまたはトロンビンなどに対するプロテアーゼ切断部位を有し、これは、関連のプロテアーゼが融合タンパク質を部分的に消化できるようにし、従って、組換えタンパク質がそこから遊離される。次に、遊離したタンパク質は、その後のクロマトグラフ分離によって融合ドメインから単離することができる。特定の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、生体内でＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを安定化するドメイン（「安定剤」ドメイン）と融合される。「安定化」とは、これが破壊の低下のためか、腎臓によるクリアランスの低下のためか、または他の薬物動態学的効果のためかにかかわらず、血清半減期を増大させるあらゆるものを意味する。免疫グロブリンのＦｃ部分との融合は、広範囲のタンパク質に対して望ましい薬物動態学的特性を付与することが知られている。同様に、ヒト血清アルブミンに対する融合は、望ましい特性を付与することができる。選択され得る他のタイプの融合ドメインには、多量体化（例えば、二量体化、四量体化）ドメインおよび機能性ドメイン（所望されるように、付加的な生物学的機能を付与する）が含まれる。融合は、異種ペプチドがＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドのアミノ末端および／またはＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドのカルボキシ末端に融合されるように構築され得る。
【００７１】
処置方法および治療的使用
本明細書に記載される軟骨形成（ｃｈｒｏｎｇｅｎｉｃ）活性を有するプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドまたは軟骨形成（ｃｈｒｏｎｇｅｎｉｃ）活性を有するプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む組成物の関節内用量を対象（例えば、ヒト対象）の関節に投与することを含む、対象（例えば、ヒト対象）において関節炎または軟骨損傷を処置する方法が本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、対象は軟骨損傷を有する。いくつかの実施形態では、対象は、関節炎、例えば、変形性関節炎、外傷性関節炎または自己免疫性関節炎を有する。いくつかの実施形態では、患者は関節炎または軟骨傷害を有する。いくつかの実施形態では、個人は関節炎または軟骨傷害を有さないが、そのリスクがある。
【００７２】
いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、本明細書に記載される投与計画に従って投与される。投与計画は、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するために調整される。本発明で使用されるＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの効率的な投薬量および投与計画は、処置される疾患または状態に依存する。
【００７３】
いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、対象（例えば、ヒト対象）の関節に単回注射で投与される。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、対象（例えば、ヒト対象）の関節に複数回注射で投与される。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、関節炎または軟骨損傷を処置するのに十分な期間にわたって、２週間に１回投与される。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、関節炎または軟骨損傷を処置するのに十分な期間にわたって、月１回投与される。いくつかの実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、関節炎または軟骨損傷を処置するのに十分な期間にわたって、週１回投与される。
【００７４】
従って、約０．２〜２００ｍｇの関節内用量の、本明細書に記載される軟骨形成（ｃｈｒｏｎｇｅｎｉｃ）活性を有するプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを対象の関節に投与することにより、対象（例えば、ヒト対象）において関節炎または軟骨損傷（例えば、関節軟骨損傷）を処置する方法が本明細書において提供される。例えば、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、約０．２〜２００ｍｇ、約０．２〜１５０ｍｇ、約０．２〜１２０ｍｇ、約０．２〜１００ｍｇ、約０．２〜９０ｍｇ、約０．２〜８０ｍｇ、約０．２〜７０ｍｇ、約０．２〜６０ｍｇ、約０．２〜５０ｍｇ、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜２００ｍｇ、約２〜１５０ｍｇ、約２〜１２０ｍｇ、約２〜１００ｍｇ、約２〜９０ｍｇ、約２〜８０ｍｇ、約２〜７０ｍｇ、約２〜６０ｍｇ、約２〜５０ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約１０〜２００ｍｇ、約１０〜１５０ｍｇ、約１０〜１２０ｍｇ、約１０〜１００ｍｇ、約１０〜９０ｍｇ、約１０〜８０ｍｇ、約１０〜７０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約２０〜２００ｍｇ、約２０〜１５０ｍｇ、約２０〜１２０ｍｇ、約２０〜１００ｍｇ、約２０〜９０ｍｇ、約２０〜８０ｍｇ、約２０〜７０ｍｇ、約２０〜６０ｍｇ、約２０〜５０ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約４０〜２００ｍｇ、約４０〜１５０ｍｇ、約４０〜１２０ｍｇ、約４０〜１００ｍｇ、約４０〜９０ｍｇ、約４０〜８０ｍｇ、約４０〜７０ｍｇ、約４０〜６０ｍｇ、約４０〜５０ｍｇ、約５０〜２００ｍｇ、約５０〜１５０ｍｇ、約５０〜１２０ｍｇ、約５０〜１００ｍｇ、約５０〜９０ｍｇ、約５０〜８０ｍｇ、約５０〜７０ｍｇ、約５０〜６０ｍｇ、約６０〜２００ｍｇ、約６０〜１５０ｍｇ、約６０〜１２０ｍｇ、約６０〜１００ｍｇ、約６０〜９０ｍｇ、約６０〜８０ｍｇ、約６０〜７０ｍｇ、約７０〜２００ｍｇ、約７０〜１５０ｍｇ、約７０〜１２０ｍｇ、約７０〜１００ｍｇ、約７０〜９０ｍｇ、約７０〜８０ｍｇ、約８０〜２００ｍｇ、約８０〜１５０ｍｇ、約８０〜１２０ｍｇ、約８０〜１００ｍｇ、約８０〜９０ｍｇ、約９０〜２００ｍｇ、約９０〜１５０ｍｇ、約９０〜１２０ｍｇ、約９０〜１００ｍｇ、約１００〜２００ｍｇ、約１００〜１５０ｍｇ、約１００〜１２０ｍｇ、約１２０〜２００ｍｇ、約１２０〜１５０ｍｇ、または約１５０〜２００ｍｇの用量で関節内に投与することができる。
【００７５】
いくつかの実施形態では、約０．２〜６０ｍｇの関節内用量の、本明細書に記載される軟骨形成（ｃｈｒｏｎｇｅｎｉｃ）活性を有するプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを対象の関節に投与することにより、対象（例えば、ヒト対象）において関節炎または軟骨損傷（例えば、関節軟骨損傷）を処置する方法が本明細書において提供される。例えば、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、約０．２〜６０ｍｇ、約０．２〜５５ｍｇ、約０．２〜５０ｍｇ、約０．２〜４５ｍｇ、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜６０ｍｇ、約２〜５５ｍｇ、約２〜５０ｍｇ、約２〜４５ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜６０ｍｇ、約５〜５５ｍｇ、約５〜５０ｍｇ、約５〜４５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、約１０〜５５ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜４５ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜６０ｍｇ、約１５〜５５ｍｇ、約１５〜５０ｍｇ、約１５〜４５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜６０ｍｇ、約２０〜５５ｍｇ、約２０〜５０ｍｇ、約２０〜４５ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜６０ｍｇ、約３０〜５５ｍｇ、約３０〜５０ｍｇ、約３０〜４５ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜６０ｍｇ、約３５〜５５ｍｇ、約３５〜５０ｍｇ、約３５〜４５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約４０〜６０ｍｇ、約４０〜５５ｍｇ、約４０〜５０ｍｇ、約４０〜４５ｍｇ、約４５〜６０ｍｇ、約４５〜５５ｍｇ、約４５〜５０ｍｇ、約５０〜６０ｍｇ、約５０〜５５ｍｇ、約５５〜６０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ、約４１ｍｇ、約４２ｍｇ、約４３ｍｇ、約４４ｍｇ、約４５ｍｇ、約４６ｍｇ、約４７ｍｇ、約４８ｍｇ、約４９ｍｇ、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、または約６０ｍｇの用量で関節内に投与することができる。
【００７６】
いくつかの実施形態では、約０．２〜４０ｍｇの関節内用量の、本明細書に記載される軟骨形成（ｃｈｒｏｎｇｅｎｉｃ）活性を有するプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを対象の関節に投与することにより、対象（例えば、ヒト対象）において関節炎または軟骨損傷（例えば、関節軟骨損傷）を処置する方法が本明細書において提供される。例えば、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、または約４０ｍｇの用量で関節内に投与することができる。
【００７７】
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約０．２〜１００ｍｇである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約０．２〜６０ｍｇである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約０．２〜４０ｍｇである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約２〜４０ｍｇである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約１０〜４０ｍｇである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約２０〜４０ｍｇである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約４０〜６０ｍｇである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約０．２ｍｇである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約２ｍｇである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約１０ｍｇである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約２０ｍｇである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約４０ｍｇである。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節内用量は約６０ｍｇである。
【００７８】
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、表１に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、ポリペプチドは、配列番号１に関して決定されたときに、ＫまたはＲ以外の極性アミノ酸であるアミノ酸を４２３位に含み、ポリペプチドは軟骨形成活性を有する。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、表１に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号１の４２３位に対応するアミノ酸残基はＱもしくはＳであるか、または欠失している。
【００７９】
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、表１に記載される配列のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、表１に記載される配列のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは配列番号１７を含む。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは配列番号１７からなる。
【００８０】
いくつかの実施形態では、約０．２〜２００ｍｇの関節内用量の配列番号１７を含むポリペプチドを対象の関節に投与することにより、対象（例えば、ヒト対象）において関節炎または軟骨損傷（例えば、関節軟骨損傷）を処置する方法が本明細書において提供される。例えば、配列番号１７を含むポリペプチドは、約０．２〜２００ｍｇ、約０．２〜１５０ｍｇ、約０．２〜１２０ｍｇ、約０．２〜１００ｍｇ、約０．２〜９０ｍｇ、約０．２〜８０ｍｇ、約０．２〜７０ｍｇ、約０．２〜６０ｍｇ、約０．２〜５０ｍｇ、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜２００ｍｇ、約２〜１５０ｍｇ、約２〜１２０ｍｇ、約２〜１００ｍｇ、約２〜９０ｍｇ、約２〜８０ｍｇ、約２〜７０ｍｇ、約２〜６０ｍｇ、約２〜５０ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約１０〜２００ｍｇ、約１０〜１５０ｍｇ、約１０〜１２０ｍｇ、約１０〜１００ｍｇ、約１０〜９０ｍｇ、約１０〜８０ｍｇ、約１０〜７０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約２０〜２００ｍｇ、約２０〜１５０ｍｇ、約２０〜１２０ｍｇ、約２０〜１００ｍｇ、約２０〜９０ｍｇ、約２０〜８０ｍｇ、約２０〜７０ｍｇ、約２０〜６０ｍｇ、約２０〜５０ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約４０〜２００ｍｇ、約４０〜１５０ｍｇ、約４０〜１２０ｍｇ、約４０〜１００ｍｇ、約４０〜９０ｍｇ、約４０〜８０ｍｇ、約４０〜７０ｍｇ、約４０〜６０ｍｇ、約４０〜５０ｍｇ、約５０〜２００ｍｇ、約５０〜１５０ｍｇ、約５０〜１２０ｍｇ、約５０〜１００ｍｇ、約５０〜９０ｍｇ、約５０〜８０ｍｇ、約５０〜７０ｍｇ、約５０〜６０ｍｇ、約６０〜２００ｍｇ、約６０〜１５０ｍｇ、約６０〜１２０ｍｇ、約６０〜１００ｍｇ、約６０〜９０ｍｇ、約６０〜８０ｍｇ、約６０〜７０ｍｇ、約７０〜２００ｍｇ、約７０〜１５０ｍｇ、約７０〜１２０ｍｇ、約７０〜１００ｍｇ、約７０〜９０ｍｇ、約７０〜８０ｍｇ、約８０〜２００ｍｇ、約８０〜１５０ｍｇ、約８０〜１２０ｍｇ、約８０〜１００ｍｇ、約８０〜９０ｍｇ、約９０〜２００ｍｇ、約９０〜１５０ｍｇ、約９０〜１２０ｍｇ、約９０〜１００ｍｇ、約１００〜２００ｍｇ、約１００〜１５０ｍｇ、約１００〜１２０ｍｇ、約１２０〜２００ｍｇ、約１２０〜１５０ｍｇ、または約１５０〜２００ｍｇの用量で関節内に投与することができる。
【００８１】
いくつかの実施形態では、約０．２〜６０ｍｇの関節内用量の配列番号１７を含むポリペプチドを対象の関節に投与することにより、対象（例えば、ヒト対象）において関節炎または軟骨損傷（例えば、関節軟骨損傷）を処置する方法が本明細書において提供される。例えば、配列番号１７を含むポリペプチドは、約０．２〜６０ｍｇ、約０．２〜５５ｍｇ、約０．２〜５０ｍｇ、約０．２〜４５ｍｇ、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜６０ｍｇ、約２〜５５ｍｇ、約２〜５０ｍｇ、約２〜４５ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜６０ｍｇ、約５〜５５ｍｇ、約５〜５０ｍｇ、約５〜４５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、約１０〜５５ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜４５ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜６０ｍｇ、約１５〜５５ｍｇ、約１５〜５０ｍｇ、約１５〜４５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜６０ｍｇ、約２０〜５５ｍｇ、約２０〜５０ｍｇ、約２０〜４５ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜６０ｍｇ、約３０〜５５ｍｇ、約３０〜５０ｍｇ、約３０〜４５ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜６０ｍｇ、約３５〜５５ｍｇ、約３５〜５０ｍｇ、約３５〜４５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約４０〜６０ｍｇ、約４０〜５５ｍｇ、約４０〜５０ｍｇ、約４０〜４５ｍｇ、約４５〜６０ｍｇ、約４５〜５５ｍｇ、約４５〜５０ｍｇ、約５０〜６０ｍｇ、約５０〜５５ｍｇ、約５５〜６０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ、約４１ｍｇ、約４２ｍｇ、約４３ｍｇ、約４４ｍｇ、約４５ｍｇ、約４６ｍｇ、約４７ｍｇ、約４８ｍｇ、約４９ｍｇ、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、または約６０ｍｇの用量で関節内に投与することができる。
【００８２】
いくつかの実施形態では、約０．２〜４０ｍｇの関節内用量の配列番号１７を含むポリペプチドを対象の関節に投与することにより、対象（例えば、ヒト対象）において関節炎または軟骨損傷（例えば、関節軟骨損傷）を処置する方法が本明細書において提供される。例えば、配列番号１７を含むポリペプチドは、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、または約４０ｍｇの用量で関節内に投与することができる。
【００８３】
いくつかの実施形態では、約０．２〜２００ｍｇの関節内用量の配列番号１７からなるポリペプチドを対象の関節に投与することにより、対象（例えば、ヒト対象）において関節炎または軟骨損傷（例えば、関節軟骨損傷）を処置する方法が本明細書において提供される。例えば、配列番号１７からなるポリペプチドは、約０．２〜２００ｍｇ、約０．２〜１５０ｍｇ、約０．２〜１２０ｍｇ、約０．２〜１００ｍｇ、約０．２〜９０ｍｇ、約０．２〜８０ｍｇ、約０．２〜７０ｍｇ、約０．２〜６０ｍｇ、約０．２〜５０ｍｇ、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜２００ｍｇ、約２〜１５０ｍｇ、約２〜１２０ｍｇ、約２〜１００ｍｇ、約２〜９０ｍｇ、約２〜８０ｍｇ、約２〜７０ｍｇ、約２〜６０ｍｇ、約２〜５０ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約１０〜２００ｍｇ、約１０〜１５０ｍｇ、約１０〜１２０ｍｇ、約１０〜１００ｍｇ、約１０〜９０ｍｇ、約１０〜８０ｍｇ、約１０〜７０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約２０〜２００ｍｇ、約２０〜１５０ｍｇ、約２０〜１２０ｍｇ、約２０〜１００ｍｇ、約２０〜９０ｍｇ、約２０〜８０ｍｇ、約２０〜７０ｍｇ、約２０〜６０ｍｇ、約２０〜５０ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約４０〜２００ｍｇ、約４０〜１５０ｍｇ、約４０〜１２０ｍｇ、約４０〜１００ｍｇ、約４０〜９０ｍｇ、約４０〜８０ｍｇ、約４０〜７０ｍｇ、約４０〜６０ｍｇ、約４０〜５０ｍｇ、約５０〜２００ｍｇ、約５０〜１５０ｍｇ、約５０〜１２０ｍｇ、約５０〜１００ｍｇ、約５０〜９０ｍｇ、約５０〜８０ｍｇ、約５０〜７０ｍｇ、約５０〜６０ｍｇ、約６０〜２００ｍｇ、約６０〜１５０ｍｇ、約６０〜１２０ｍｇ、約６０〜１００ｍｇ、約６０〜９０ｍｇ、約６０〜８０ｍｇ、約６０〜７０ｍｇ、約７０〜２００ｍｇ、約７０〜１５０ｍｇ、約７０〜１２０ｍｇ、約７０〜１００ｍｇ、約７０〜９０ｍｇ、約７０〜８０ｍｇ、約８０〜２００ｍｇ、約８０〜１５０ｍｇ、約８０〜１２０ｍｇ、約８０〜１００ｍｇ、約８０〜９０ｍｇ、約９０〜２００ｍｇ、約９０〜１５０ｍｇ、約９０〜１２０ｍｇ、約９０〜１００ｍｇ、約１００〜２００ｍｇ、約１００〜１５０ｍｇ、約１００〜１２０ｍｇ、約１２０〜２００ｍｇ、約１２０〜１５０ｍｇ、または約１５０〜２００ｍｇの用量で関節内に投与することができる。
【００８４】
いくつかの実施形態では、約０．２〜６０ｍｇの関節内用量の配列番号１７からなるポリペプチドを対象の関節に投与することにより、対象（例えば、ヒト対象）において関節炎または軟骨損傷（例えば、関節軟骨損傷）を処置する方法が本明細書において提供される。例えば、配列番号１７からなるポリペプチドは、約０．２〜６０ｍｇ、約０．２〜５５ｍｇ、約０．２〜５０ｍｇ、約０．２〜４５ｍｇ、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜６０ｍｇ、約２〜５５ｍｇ、約２〜５０ｍｇ、約２〜４５ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜６０ｍｇ、約５〜５５ｍｇ、約５〜５０ｍｇ、約５〜４５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、約１０〜５５ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜４５ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜６０ｍｇ、約１５〜５５ｍｇ、約１５〜５０ｍｇ、約１５〜４５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜６０ｍｇ、約２０〜５５ｍｇ、約２０〜５０ｍｇ、約２０〜４５ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜６０ｍｇ、約３０〜５５ｍｇ、約３０〜５０ｍｇ、約３０〜４５ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜６０ｍｇ、約３５〜５５ｍｇ、約３５〜５０ｍｇ、約３５〜４５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約４０〜６０ｍｇ、約４０〜５５ｍｇ、約４０〜５０ｍｇ、約４０〜４５ｍｇ、約４５〜６０ｍｇ、約４５〜５５ｍｇ、約４５〜５０ｍｇ、約５０〜６０ｍｇ、約５０〜５５ｍｇ、約５５〜６０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ、約４１ｍｇ、約４２ｍｇ、約４３ｍｇ、約４４ｍｇ、約４５ｍｇ、約４６ｍｇ、約４７ｍｇ、約４８ｍｇ、約４９ｍｇ、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、または約６０ｍｇの用量で関節内に投与することができる。
【００８５】
いくつかの実施形態では、約０．２〜４０ｍｇの関節内用量の配列番号１７からなるポリペプチドを対象の関節に投与することにより、対象（例えば、ヒト対象）において関節炎または軟骨損傷（例えば、関節軟骨損傷）を処置する方法が本明細書において提供される。例えば、配列番号１７からなるポリペプチドは、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、または約４０ｍｇの用量で関節内に投与することができる。
【００８６】
いくつかの実施形態では、配列番号１７を含むかまたは配列番号１７からなるポリペプチドの関節内用量は約０．２〜１００ｍｇである。いくつかの実施形態では、配列番号１７を含むかまたは配列番号１７からなるポリペプチドの関節内用量は約０．２〜６０ｍｇである。いくつかの実施形態では、配列番号１７を含むかまたは配列番号１７からなるポリペプチドの関節内用量は約０．２〜４０ｍｇである。いくつかの実施形態では、配列番号１７を含むかまたは配列番号１７からなるポリペプチドの関節内用量は約２〜４０ｍｇである。いくつかの実施形態では、配列番号１７を含むかまたは配列番号１７からなるポリペプチドの関節内用量は約１０〜４０ｍｇである。いくつかの実施形態では、配列番号１７を含むかまたは配列番号１７からなるポリペプチドの関節内用量は約２０〜４０ｍｇである。いくつかの実施形態では、配列番号１７を含むかまたは配列番号１７からなるポリペプチドの関節内用量は約４０〜６０ｍｇである。いくつかの実施形態では、配列番号１７を含むかまたは配列番号１７からなるポリペプチドの関節内用量は約０．２ｍｇである。いくつかの実施形態では、配列番号１７を含むかまたは配列番号１７からなるポリペプチドの関節内用量は約２ｍｇである。いくつかの実施形態では、配列番号１７を含むかまたは配列番号１７からなるポリペプチドの関節内用量は約１０ｍｇである。いくつかの実施形態では、配列番号１７を含むかまたは配列番号１７からなるポリペプチドの関節内用量は約２０ｍｇである。いくつかの実施形態では、配列番号１７を含むかまたは配列番号１７からなるポリペプチドの関節内用量は約４０ｍｇである。いくつかの実施形態では、配列番号１７を含むかまたは配列番号１７からなるポリペプチドの関節内用量は約６０ｍｇである。
【００８７】
いくつかの実施形態では、本方法はさらに、対象の罹患関節に対して外科手術を実施することを含む。ポリペプチドまたは組成物は、外科手術の前、最中または後に投与することができる。
【００８８】
いくつかの実施形態では、本方法はさらに、付加的な手順を含む。例えば、ポリペプチドまたは組成物は、骨髄刺激、軟骨置換、自家軟骨細胞移植（ＡＣＩ）、またはマトリックス誘導自家軟骨細胞移植（ＭＡＣＩ）のいずれか１つと併用して投与することができる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドまたは組成物は、ＡＣＩと併用して投与することができる。
【００８９】
また、関節炎または軟骨損傷（例えば、関節軟骨損傷）の処置において使用するための、本明細書に記載される軟骨形成（ｃｈｒｏｎｇｅｎｉｃ）活性を有するプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む組成物も提供される。例えば、このような組成物は、表１に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含むことができ、ここで、ポリペプチドは、配列番号１に関して決定されたときに、ＫまたはＲ以外の極性アミノ酸であるアミノ酸を４２３位に含み、ポリペプチドは軟骨形成活性を有する。いくつかの実施形態では、このような組成物は、表１に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含み、ここで、配列番号１の４２３位に対応するアミノ酸残基はＱもしくはＳであるか、または欠失している。いくつかの実施形態では、このような組成物は、表１に記載される配列のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、このような組成物は、表１に記載される配列のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列からなるＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。
【００９０】
このような組成物は、約０．２〜２００ｍｇ（例えば、０．２〜２００ｍｇ、約０．２〜１５０ｍｇ、約０．２〜１２０ｍｇ、約０．２〜１００ｍｇ、約０．２〜９０ｍｇ、約０．２〜８０ｍｇ、約０．２〜７０ｍｇ、約０．２〜６０ｍｇ、約０．２〜５０ｍｇ、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜２００ｍｇ、約２〜１５０ｍｇ、約２〜１２０ｍｇ、約２〜１００ｍｇ、約２〜９０ｍｇ、約２〜８０ｍｇ、約２〜７０ｍｇ、約２〜６０ｍｇ、約２〜５０ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約１０〜２００ｍｇ、約１０〜１５０ｍｇ、約１０〜１２０ｍｇ、約１０〜１００ｍｇ、約１０〜９０ｍｇ、約１０〜８０ｍｇ、約１０〜７０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約２０〜２００ｍｇ、約２０〜１５０ｍｇ、約２０〜１２０ｍｇ、約２０〜１００ｍｇ、約２０〜９０ｍｇ、約２０〜８０ｍｇ、約２０〜７０ｍｇ、約２０〜６０ｍｇ、約２０〜５０ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約４０〜２００ｍｇ、約４０〜１５０ｍｇ、約４０〜１２０ｍｇ、約４０〜１００ｍｇ、約４０〜９０ｍｇ、約４０〜８０ｍｇ、約４０〜７０ｍｇ、約４０〜６０ｍｇ、約４０〜５０ｍｇ、約５０〜２００ｍｇ、約５０〜１５０ｍｇ、約５０〜１２０ｍｇ、約５０〜１００ｍｇ、約５０〜９０ｍｇ、約５０〜８０ｍｇ、約５０〜７０ｍｇ、約５０〜６０ｍｇ、約６０〜２００ｍｇ、約６０〜１５０ｍｇ、約６０〜１２０ｍｇ、約６０〜１００ｍｇ、約６０〜９０ｍｇ、約６０〜８０ｍｇ、約６０〜７０ｍｇ、約７０〜２００ｍｇ、約７０〜１５０ｍｇ、約７０〜１２０ｍｇ、約７０〜１００ｍｇ、約７０〜９０ｍｇ、約７０〜８０ｍｇ、約８０〜２００ｍｇ、約８０〜１５０ｍｇ、約８０〜１２０ｍｇ、約８０〜１００ｍｇ、約８０〜９０ｍｇ、約９０〜２００ｍｇ、約９０〜１５０ｍｇ、約９０〜１２０ｍｇ、約９０〜１００ｍｇ、約１００〜２００ｍｇ、約１００〜１５０ｍｇ、約１００〜１２０ｍｇ、約１２０〜２００ｍｇ、約１２０〜１５０ｍｇ、約１５０〜２００ｍｇ）の、本明細書に記載される軟骨形成活性を有するプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含むことができる。
【００９１】
いくつかの実施形態では、このような組成物は、約０．２〜６０ｍｇ（例えば、約０．２〜６０ｍｇ、約０．２〜５５ｍｇ、約０．２〜５０ｍｇ、約０．２〜４５ｍｇ、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜６０ｍｇ、約２〜５５ｍｇ、約２〜５０ｍｇ、約２〜４５ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜６０ｍｇ、約５〜５５ｍｇ、約５〜５０ｍｇ、約５〜４５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、約１０〜５５ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜４５ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜６０ｍｇ、約１５〜５５ｍｇ、約１５〜５０ｍｇ、約１５〜４５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜６０ｍｇ、約２０〜５５ｍｇ、約２０〜５０ｍｇ、約２０〜４５ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜６０ｍｇ、約３０〜５５ｍｇ、約３０〜５０ｍｇ、約３０〜４５ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜６０ｍｇ、約３５〜５５ｍｇ、約３５〜５０ｍｇ、約３５〜４５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約４０〜６０ｍｇ、約４０〜５５ｍｇ、約４０〜５０ｍｇ、約４０〜４５ｍｇ、約４５〜６０ｍｇ、約４５〜５５ｍｇ、約４５〜５０ｍｇ、約５０〜６０ｍｇ、約５０〜５５ｍｇ、約５５〜６０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ、約４１ｍｇ、約４２ｍｇ、約４３ｍｇ、約４４ｍｇ、約４５ｍｇ、約４６ｍｇ、約４７ｍｇ、約４８ｍｇ、約４９ｍｇ、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、約６０ｍｇ）の、本明細書に記載される軟骨形成活性を有するプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。
【００９２】
いくつかの実施形態では、このような組成物は、約０．２〜４０ｍｇ（例えば、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ）の、本明細書に記載される軟骨形成活性を有するプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む。
【００９３】
いくつかの実施形態では、関節炎または軟骨損傷（例えば、関節軟骨損傷）の処置において使用するための、配列番号１７を含むポリペプチドを含む組成物が提供される。いくつかの実施形態では、関節炎または軟骨損傷（例えば、関節軟骨損傷）の処置において使用するための、配列番号１７からなるポリペプチドを含む組成物が提供される。
【００９４】
このような組成物は、約０．２〜２００ｍｇ（例えば、０．２〜２００ｍｇ、約０．２〜１５０ｍｇ、約０．２〜１２０ｍｇ、約０．２〜１００ｍｇ、約０．２〜９０ｍｇ、約０．２〜８０ｍｇ、約０．２〜７０ｍｇ、約０．２〜６０ｍｇ、約０．２〜５０ｍｇ、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜２００ｍｇ、約２〜１５０ｍｇ、約２〜１２０ｍｇ、約２〜１００ｍｇ、約２〜９０ｍｇ、約２〜８０ｍｇ、約２〜７０ｍｇ、約２〜６０ｍｇ、約２〜５０ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約１０〜２００ｍｇ、約１０〜１５０ｍｇ、約１０〜１２０ｍｇ、約１０〜１００ｍｇ、約１０〜９０ｍｇ、約１０〜８０ｍｇ、約１０〜７０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約２０〜２００ｍｇ、約２０〜１５０ｍｇ、約２０〜１２０ｍｇ、約２０〜１００ｍｇ、約２０〜９０ｍｇ、約２０〜８０ｍｇ、約２０〜７０ｍｇ、約２０〜６０ｍｇ、約２０〜５０ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約４０〜２００ｍｇ、約４０〜１５０ｍｇ、約４０〜１２０ｍｇ、約４０〜１００ｍｇ、約４０〜９０ｍｇ、約４０〜８０ｍｇ、約４０〜７０ｍｇ、約４０〜６０ｍｇ、約４０〜５０ｍｇ、約５０〜２００ｍｇ、約５０〜１５０ｍｇ、約５０〜１２０ｍｇ、約５０〜１００ｍｇ、約５０〜９０ｍｇ、約５０〜８０ｍｇ、約５０〜７０ｍｇ、約５０〜６０ｍｇ、約６０〜２００ｍｇ、約６０〜１５０ｍｇ、約６０〜１２０ｍｇ、約６０〜１００ｍｇ、約６０〜９０ｍｇ、約６０〜８０ｍｇ、約６０〜７０ｍｇ、約７０〜２００ｍｇ、約７０〜１５０ｍｇ、約７０〜１２０ｍｇ、約７０〜１００ｍｇ、約７０〜９０ｍｇ、約７０〜８０ｍｇ、約８０〜２００ｍｇ、約８０〜１５０ｍｇ、約８０〜１２０ｍｇ、約８０〜１００ｍｇ、約８０〜９０ｍｇ、約９０〜２００ｍｇ、約９０〜１５０ｍｇ、約９０〜１２０ｍｇ、約９０〜１００ｍｇ、約１００〜２００ｍｇ、約１００〜１５０ｍｇ、約１００〜１２０ｍｇ、約１２０〜２００ｍｇ、約１２０〜１５０ｍｇ、約１５０〜２００ｍｇ）の配列番号１７を含むポリペプチドを含むことができる。
【００９５】
いくつかの実施形態では、このような組成物は、約０．２〜６０ｍｇ（例えば、約０．２〜６０ｍｇ、約０．２〜５５ｍｇ、約０．２〜５０ｍｇ、約０．２〜４５ｍｇ、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜６０ｍｇ、約２〜５５ｍｇ、約２〜５０ｍｇ、約２〜４５ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜６０ｍｇ、約５〜５５ｍｇ、約５〜５０ｍｇ、約５〜４５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、約１０〜５５ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜４５ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜６０ｍｇ、約１５〜５５ｍｇ、約１５〜５０ｍｇ、約１５〜４５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜６０ｍｇ、約２０〜５５ｍｇ、約２０〜５０ｍｇ、約２０〜４５ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜６０ｍｇ、約３０〜５５ｍｇ、約３０〜５０ｍｇ、約３０〜４５ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜６０ｍｇ、約３５〜５５ｍｇ、約３５〜５０ｍｇ、約３５〜４５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約４０〜６０ｍｇ、約４０〜５５ｍｇ、約４０〜５０ｍｇ、約４０〜４５ｍｇ、約４５〜６０ｍｇ、約４５〜５５ｍｇ、約４５〜５０ｍｇ、約５０〜６０ｍｇ、約５０〜５５ｍｇ、約５５〜６０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ、約４１ｍｇ、約４２ｍｇ、約４３ｍｇ、約４４ｍｇ、約４５ｍｇ、約４６ｍｇ、約４７ｍｇ、約４８ｍｇ、約４９ｍｇ、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、約６０ｍｇ）の配列番号１７を含むポリペプチドを含む。
【００９６】
いくつかの実施形態では、このような組成物は、約０．２〜４０ｍｇ（例えば、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ）の配列番号１７を含むポリペプチドを含む。
【００９７】
このような組成物は、約０．２〜２００ｍｇ（例えば、０．２〜２００ｍｇ、約０．２〜１５０ｍｇ、約０．２〜１２０ｍｇ、約０．２〜１００ｍｇ、約０．２〜９０ｍｇ、約０．２〜８０ｍｇ、約０．２〜７０ｍｇ、約０．２〜６０ｍｇ、約０．２〜５０ｍｇ、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜２００ｍｇ、約２〜１５０ｍｇ、約２〜１２０ｍｇ、約２〜１００ｍｇ、約２〜９０ｍｇ、約２〜８０ｍｇ、約２〜７０ｍｇ、約２〜６０ｍｇ、約２〜５０ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約１０〜２００ｍｇ、約１０〜１５０ｍｇ、約１０〜１２０ｍｇ、約１０〜１００ｍｇ、約１０〜９０ｍｇ、約１０〜８０ｍｇ、約１０〜７０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約２０〜２００ｍｇ、約２０〜１５０ｍｇ、約２０〜１２０ｍｇ、約２０〜１００ｍｇ、約２０〜９０ｍｇ、約２０〜８０ｍｇ、約２０〜７０ｍｇ、約２０〜６０ｍｇ、約２０〜５０ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約４０〜２００ｍｇ、約４０〜１５０ｍｇ、約４０〜１２０ｍｇ、約４０〜１００ｍｇ、約４０〜９０ｍｇ、約４０〜８０ｍｇ、約４０〜７０ｍｇ、約４０〜６０ｍｇ、約４０〜５０ｍｇ、約５０〜２００ｍｇ、約５０〜１５０ｍｇ、約５０〜１２０ｍｇ、約５０〜１００ｍｇ、約５０〜９０ｍｇ、約５０〜８０ｍｇ、約５０〜７０ｍｇ、約５０〜６０ｍｇ、約６０〜２００ｍｇ、約６０〜１５０ｍｇ、約６０〜１２０ｍｇ、約６０〜１００ｍｇ、約６０〜９０ｍｇ、約６０〜８０ｍｇ、約６０〜７０ｍｇ、約７０〜２００ｍｇ、約７０〜１５０ｍｇ、約７０〜１２０ｍｇ、約７０〜１００ｍｇ、約７０〜９０ｍｇ、約７０〜８０ｍｇ、約８０〜２００ｍｇ、約８０〜１５０ｍｇ、約８０〜１２０ｍｇ、約８０〜１００ｍｇ、約８０〜９０ｍｇ、約９０〜２００ｍｇ、約９０〜１５０ｍｇ、約９０〜１２０ｍｇ、約９０〜１００ｍｇ、約１００〜２００ｍｇ、約１００〜１５０ｍｇ、約１００〜１２０ｍｇ、約１２０〜２００ｍｇ、約１２０〜１５０ｍｇ、約１５０〜２００ｍｇ）の配列番号１７からなるポリペプチドを含むことができる。
【００９８】
いくつかの実施形態では、このような組成物は、約０．２〜６０ｍｇ（例えば、約０．２〜６０ｍｇ、約０．２〜５５ｍｇ、約０．２〜５０ｍｇ、約０．２〜４５ｍｇ、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜６０ｍｇ、約２〜５５ｍｇ、約２〜５０ｍｇ、約２〜４５ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜６０ｍｇ、約５〜５５ｍｇ、約５〜５０ｍｇ、約５〜４５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、約１０〜５５ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜４５ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜６０ｍｇ、約１５〜５５ｍｇ、約１５〜５０ｍｇ、約１５〜４５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜６０ｍｇ、約２０〜５５ｍｇ、約２０〜５０ｍｇ、約２０〜４５ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜６０ｍｇ、約３０〜５５ｍｇ、約３０〜５０ｍｇ、約３０〜４５ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜６０ｍｇ、約３５〜５５ｍｇ、約３５〜５０ｍｇ、約３５〜４５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約４０〜６０ｍｇ、約４０〜５５ｍｇ、約４０〜５０ｍｇ、約４０〜４５ｍｇ、約４５〜６０ｍｇ、約４５〜５５ｍｇ、約４５〜５０ｍｇ、約５０〜６０ｍｇ、約５０〜５５ｍｇ、約５５〜６０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ、約４１ｍｇ、約４２ｍｇ、約４３ｍｇ、約４４ｍｇ、約４５ｍｇ、約４６ｍｇ、約４７ｍｇ、約４８ｍｇ、約４９ｍｇ、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、約６０ｍｇ）の配列番号１７からなるポリペプチドを含む。
【００９９】
いくつかの実施形態では、このような組成物は、約０．２〜４０ｍｇ（例えば、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ）の配列番号１７からなるポリペプチドを含む。
【０１００】
本発明のポリペプチド、組成物、および方法は、例えば、外傷性事象から生じる損傷または腱断裂もしくは靱帯裂傷を含む任意のタイプの関節軟骨損傷（例えば、関節損傷または傷害）を処置するために使用され得ることが企図される。いくつかの実施形態では、ポリペプチド、組成物および方法は、関節損傷（例えば、関節軟骨損傷）を処置するために使用される。特定の実施形態では、関節損傷は、外傷性関節傷害（例えば、外傷性軟骨損傷）である。他の実施形態では、関節損傷または関節軟骨損傷は、年齢または不活動または遺伝因子から生じる損傷である。さらに他の実施形態では、関節損傷または関節軟骨損傷は、自己免疫障害から生じる損傷である。本発明のいくつかの実施形態では、本発明のポリペプチド、組成物、および方法は、変形性関節炎を処置するために使用され得る。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチド、組成物、および方法は、例えば外傷または軟骨疾患により損傷された軟骨組織において軟骨細胞増殖および／または軟骨産生を刺激するための方法を提供する。特定の実施形態では、本発明のポリペプチド、組成物、および方法は、例えば、関節表面、例えば、脊椎、肩、肘、手首、指の関節、臀部、膝、足首、および足の関節における軟骨の損傷（例えば、関節軟骨損傷）の処置のために有用である。処置から利益を得ることができる疾患または障害の例としては、変形性関節炎、関節リウマチ、他の自己免疫疾患、または離断性骨軟骨炎が挙げられる。さらに、軟骨損傷または破壊は特定の遺伝または代謝性障害の結果として起こり、軟骨奇形はヒトでは小人症の形態で見られることが多く、かつ／あるいは軟骨損傷または破壊は再建手術の結果であることが多い。従って、ポリペプチド、組成物、および方法は、単独であるかまたは他のアプローチに関連するかにかかわらず、これらの患者における有用な治療であろう。
【０１０２】
さらに、本発明のポリペプチド、組成物、および方法は、種々の軟骨障害および／または関連の症状またはこのような状態の影響を処置するために使用され得ることが企図される。本明細書に記載されるポリペプチド、組成物、および方法による処置に対する例示的な状態または障害には、関節リウマチ、若年性慢性関節炎、変形性関節炎、変性円板疾患、脊椎関節症、Ｅｈｌｅｒｓ  Ｄａｎｌｏｓ症候群、全身性硬化症（強皮症）または腱疾患が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドおよび組成物は、関節滑液中への直接注射によって適用されるか、または軟骨欠損内へ直接適用される。また、本発明のポリペプチド、組成物、および方法は、罹患関節における外科手術と併用して使用することもできる。本発明のポリペプチドの投与は、外科手術の前、外科手術の最中、もしくは外科手術と併用して、および／または外科手術の後に行われ得る。例えば、本発明のポリペプチド、組成物および方法は、自己または同種間軟骨細胞移植のための培養物中の軟骨細胞集団を増殖させるために使用することができる。任意選択的に、本発明のポリペプチドおよび組成物の投与からなる併用処置と共に、軟骨細胞を移植することができる。これらの手順において、例えば、軟骨細胞は、損傷した関節の荷重負荷の小さい未損傷領域から関節鏡で回収することができ、任意選択的に、本発明のポリペプチドおよび組成物ならびに／または他の成長因子の存在下、移植の前に細胞の数を増大させるためにインビトロで培養することができる。増殖された培養物は次に、任意選択的に本発明のポリペプチドおよび組成物と混合され、かつ／あるいは関節腔または直接欠損に入れられる。特定の実施形態では、増殖された培養物（任意選択的に、本発明のポリペプチドと共に）は、マトリックスまたは膜内で懸濁された関節腔に入れられる。他の実施形態では、本発明のポリペプチドおよび組成物は、軟骨形成細胞を含有し、かつ／あるいは移植された軟骨細胞または軟骨細胞前駆体細胞を所定の位置に保持するのに役立つ１つまたは複数の骨膜または軟骨膜の移植片と組み合わせて使用することができる。いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドおよび組成物は、関節の洗浄、骨髄の刺激、アブレーション関節形成術（ａｂｒａｓｉｏｎ  ａｒｔｈｒｏｐｌａｓｔｙ）、軟骨下穿孔（ｓｕｂｃｈｏｎｄｒａｌ  ｄｒｉｌｌｉｎｇ）、または基部の軟骨下骨のマイクロフラクチャーを含むがこれらに限定されない他の手順と併用して、軟骨損傷（例えば、関節軟骨損傷）を修復するために使用される。任意選択的に、本発明のポリペプチドおよび組成物の投与ならびに軟骨の成長の後、付加的な外科処置は、新しく形成された軟骨表面を適切に輪郭付けるために有益であり得る。
【０１０４】
医薬組成物
また、本明細書に記載される軟骨形成活性を有する１つまたは複数のプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む組成物、例えば医薬組成物もここで提供される。このような組成物は、１つまたは複数の賦形剤または担体、例えば薬学的に許容可能な賦形剤または担体を含むことができる。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、治療的に有効な量のタンパク質またはペプチドを混合して含む医薬組成物は、投与モード、送達フォーマット、および所望の投薬量との適合性のために選択される１つまたは複数の薬学的に許容可能な賦形剤または担体と共に配合される。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、軟骨形成活性を有するプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む医薬組成物は、関節内投与に適している。
【０１０７】
医薬組成物は様々な形態であり得る。これらには、例えば、液体、半固体、または固体形態が含まれる。形態は、意図される投与モードおよび治療用途に依存する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は液体溶液、例えば、注射用溶液である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は粉末、例えば、凍結乾燥物である。凍結乾燥した医薬組成物は、通常、貯蔵のために冷凍などの特定の条件を必要としない。凍結乾燥は、再構成されて、注射により患者に投与される医薬製剤を開発するために有用である。例えば、凍結乾燥した製剤は、注射の直前に適切な投与希釈剤（例えば、滅菌水）を添加することにより再構成することができる。
【０１０８】
約０．２〜２００ｍｇの、本明細書に記載される軟骨形成活性を有するプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む組成物、例えば医薬組成物が本明細書において提供される。例えば、このような組成物は、約０．２〜２００ｍｇ、約０．２〜１５０ｍｇ、約０．２〜１２０ｍｇ、約０．２〜１００ｍｇ、約０．２〜９０ｍｇ、約０．２〜８０ｍｇ、約０．２〜７０ｍｇ、約０．２〜６０ｍｇ、約０．２〜５０ｍｇ、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜２００ｍｇ、約２〜１５０ｍｇ、約２〜１２０ｍｇ、約２〜１００ｍｇ、約２〜９０ｍｇ、約２〜８０ｍｇ、約２〜７０ｍｇ、約２〜６０ｍｇ、約２〜５０ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約１０〜２００ｍｇ、約１０〜１５０ｍｇ、約１０〜１２０ｍｇ、約１０〜１００ｍｇ、約１０〜９０ｍｇ、約１０〜８０ｍｇ、約１０〜７０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約２０〜２００ｍｇ、約２０〜１５０ｍｇ、約２０〜１２０ｍｇ、約２０〜１００ｍｇ、約２０〜９０ｍｇ、約２０〜８０ｍｇ、約２０〜７０ｍｇ、約２０〜６０ｍｇ、約２０〜５０ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約４０〜２００ｍｇ、約４０〜１５０ｍｇ、約４０〜１２０ｍｇ、約４０〜１００ｍｇ、約４０〜９０ｍｇ、約４０〜８０ｍｇ、約４０〜７０ｍｇ、約４０〜６０ｍｇ、約４０〜５０ｍｇ、約５０〜２００ｍｇ、約５０〜１５０ｍｇ、約５０〜１２０ｍｇ、約５０〜１００ｍｇ、約５０〜９０ｍｇ、約５０〜８０ｍｇ、約５０〜７０ｍｇ、約５０〜６０ｍｇ、約６０〜２００ｍｇ、約６０〜１５０ｍｇ、約６０〜１２０ｍｇ、約６０〜１００ｍｇ、約６０〜９０ｍｇ、約６０〜８０ｍｇ、約６０〜７０ｍｇ、約７０〜２００ｍｇ、約７０〜１５０ｍｇ、約７０〜１２０ｍｇ、約７０〜１００ｍｇ、約７０〜９０ｍｇ、約７０〜８０ｍｇ、約８０〜２００ｍｇ、約８０〜１５０ｍｇ、約８０〜１２０ｍｇ、約８０〜１００ｍｇ、約８０〜９０ｍｇ、約９０〜２００ｍｇ、約９０〜１５０ｍｇ、約９０〜１２０ｍｇ、約９０〜１００ｍｇ、約１００〜２００ｍｇ、約１００〜１５０ｍｇ、約１００〜１２０ｍｇ、約１２０〜２００ｍｇ、約１２０〜１５０ｍｇ、約１５０〜２００ｍｇの軟骨形成活性を有するプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含むことができる。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、約０．２〜６０ｍｇ（例えば、約０．２〜６０ｍｇ、約０．２〜５５ｍｇ、約０．２〜５０ｍｇ、約０．２〜４５ｍｇ、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜６０ｍｇ、約２〜５５ｍｇ、約２〜５０ｍｇ、約２〜４５ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜６０ｍｇ、約５〜５５ｍｇ、約５〜５０ｍｇ、約５〜４５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、約１０〜５５ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜４５ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜６０ｍｇ、約１５〜５５ｍｇ、約１５〜５０ｍｇ、約１５〜４５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜６０ｍｇ、約２０〜５５ｍｇ、約２０〜５０ｍｇ、約２０〜４５ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜６０ｍｇ、約３０〜５５ｍｇ、約３０〜５０ｍｇ、約３０〜４５ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜６０ｍｇ、約３５〜５５ｍｇ、約３５〜５０ｍｇ、約３５〜４５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約４０〜６０ｍｇ、約４０〜５５ｍｇ、約４０〜５０ｍｇ、約４０〜４５ｍｇ、約４５〜６０ｍｇ、約４５〜５５ｍｇ、約４５〜５０ｍｇ、約５０〜６０ｍｇ、約５０〜５５ｍｇ、約５５〜６０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ、約４１ｍｇ、約４２ｍｇ、約４３ｍｇ、約４４ｍｇ、約４５ｍｇ、約４６ｍｇ、約４７ｍｇ、約４８ｍｇ、約４９ｍｇ、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、約６０ｍｇ）の、本明細書に記載される軟骨形成活性を有するプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む組成物、例えば医薬組成物が本明細書において提供される。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、約０．２〜４０ｍｇ（例えば、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ）の、本明細書に記載される軟骨形成活性を有するプロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを含む組成物、例えば医薬組成物が本明細書において提供される。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、表１に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、ポリペプチドは、配列番号１に関して決定されたときに、ＫまたはＲ以外の極性アミノ酸であるアミノ酸を４２３位に含み、ポリペプチドは軟骨形成活性を有する。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、表１に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、配列番号１の４２３位に対応するアミノ酸残基はＱもしくはＳであるか、または欠失している。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、表１に記載される配列のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは、表１に記載される配列のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは配列番号１７を含む。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ耐性ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドは配列番号１７からなる。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、約０．２〜６０ｍｇ（例えば、約０．２〜６０ｍｇ、約０．２〜５５ｍｇ、約０．２〜５０ｍｇ、約０．２〜４５ｍｇ、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜６０ｍｇ、約２〜５５ｍｇ、約２〜５０ｍｇ、約２〜４５ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜６０ｍｇ、約５〜５５ｍｇ、約５〜５０ｍｇ、約５〜４５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、約１０〜５５ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜４５ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜６０ｍｇ、約１５〜５５ｍｇ、約１５〜５０ｍｇ、約１５〜４５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜６０ｍｇ、約２０〜５５ｍｇ、約２０〜５０ｍｇ、約２０〜４５ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜６０ｍｇ、約３０〜５５ｍｇ、約３０〜５０ｍｇ、約３０〜４５ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜６０ｍｇ、約３５〜５５ｍｇ、約３５〜５０ｍｇ、約３５〜４５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約４０〜６０ｍｇ、約４０〜５５ｍｇ、約４０〜５０ｍｇ、約４０〜４５ｍｇ、約４５〜６０ｍｇ、約４５〜５５ｍｇ、約４５〜５０ｍｇ、約５０〜６０ｍｇ、約５０〜５５ｍｇ、約５５〜６０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ、約４１ｍｇ、約４２ｍｇ、約４３ｍｇ、約４４ｍｇ、約４５ｍｇ、約４６ｍｇ、約４７ｍｇ、約４８ｍｇ、約４９ｍｇ、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、約６０ｍｇ）の配列番号１７を含むポリペプチドを含む組成物、例えば医薬組成物が本明細書において提供される。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、約０．２〜６０ｍｇ（例えば、約０．２〜６０ｍｇ、約０．２〜５５ｍｇ、約０．２〜５０ｍｇ、約０．２〜４５ｍｇ、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜６０ｍｇ、約２〜５５ｍｇ、約２〜５０ｍｇ、約２〜４５ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜６０ｍｇ、約５〜５５ｍｇ、約５〜５０ｍｇ、約５〜４５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜６０ｍｇ、約１０〜５５ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜４５ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜６０ｍｇ、約１５〜５５ｍｇ、約１５〜５０ｍｇ、約１５〜４５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜６０ｍｇ、約２０〜５５ｍｇ、約２０〜５０ｍｇ、約２０〜４５ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜６０ｍｇ、約３０〜５５ｍｇ、約３０〜５０ｍｇ、約３０〜４５ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜６０ｍｇ、約３５〜５５ｍｇ、約３５〜５０ｍｇ、約３５〜４５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約４０〜６０ｍｇ、約４０〜５５ｍｇ、約４０〜５０ｍｇ、約４０〜４５ｍｇ、約４５〜６０ｍｇ、約４５〜５５ｍｇ、約４５〜５０ｍｇ、約５０〜６０ｍｇ、約５０〜５５ｍｇ、約５５〜６０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ、約４１ｍｇ、約４２ｍｇ、約４３ｍｇ、約４４ｍｇ、約４５ｍｇ、約４６ｍｇ、約４７ｍｇ、約４８ｍｇ、約４９ｍｇ、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、約６０ｍｇ）の配列番号１７からなるポリペプチドを含む組成物、例えば医薬組成物が本明細書において提供される。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、約０．２〜４０ｍｇ（例えば、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ）の配列番号１７を含むポリペプチドを含む組成物、例えば医薬組成物が本明細書において提供される。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、約０．２〜４０ｍｇ（例えば、約０．２〜４０ｍｇ、約０．２〜３５ｍｇ、約０．２〜３０ｍｇ、約０．２〜２５ｍｇ、約０．２〜２０ｍｇ、約０．２〜１５ｍｇ、約０．２〜１０ｍｇ、約０．２〜５ｍｇ、約０．２〜２ｍｇ、約２〜４０ｍｇ、約２〜３５ｍｇ、約２〜３０ｍｇ、約２〜２５ｍｇ、約２〜２０ｍｇ、約２〜１５ｍｇ、約２〜１０ｍｇ、約２〜５ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約５〜３５ｍｇ、約５〜３０ｍｇ、約５〜２５ｍｇ、約５〜２０ｍｇ、約５〜１５ｍｇ、約５〜１０ｍｇ、約１０〜４０ｍｇ、約１０〜３５ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、約１０〜２５ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、約１０〜１５ｍｇ、約１５〜４０ｍｇ、約１５〜３５ｍｇ、約１５〜３０ｍｇ、約１５〜２５ｍｇ、約１５〜２０ｍｇ、約２０〜４０ｍｇ、約２０〜３５ｍｇ、約２０〜３０ｍｇ、約２０〜２５ｍｇ、約２５〜６０ｍｇ、約２５〜５５ｍｇ、約２５〜５０ｍｇ、約２５〜４５ｍｇ、約２５〜４０ｍｇ、約２５〜３５ｍｇ、約２５〜３０ｍｇ、約３０〜４０ｍｇ、約３０〜３５ｍｇ、約３５〜４０ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ）の配列番号１７からなるポリペプチドを含む組成物、例えば医薬組成物が本明細書において提供される。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、組成物はさらに炭水化物を含む。いくつかの実施形態では、組成物はさらに緩衝液または緩衝成分を含む。いくつかの実施形態では、組成物はさらに界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０を含む。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、緩衝液または緩衝成分を含有する。生理学的に適合性のｐＨで薬物（例えば、ポリペプチド）を送達する（すなわち、耐容性を改善する）ための手段としても、薬物（例えば、ポリペプチド）の化学的安定性に好都合の溶液条件を提供するための手段としても、緩衝液はｐＨ調節のために周知である。
【０１１９】
本明細書に記載される組成物において使用可能な緩衝液の非限定的な例としては、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、乳酸緩衝液、酒石酸緩衝液、または塩酸緩衝液が挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物には、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、もしくは酢酸緩衝液、またはその成分から選択される緩衝液が含まれる。好ましい緩衝液はヒスチジン緩衝液であり、好ましい緩衝成分はヒスチジンである。
【０１２０】
ｐＨは、最適化されたタンパク質組成物、例えば、安定性が増大された液体タンパク質組成物を達成するのに重要であり得る。ｐＨは、タンパク質の立体構造および／または凝集および／または分解および／または反応性に影響を与えることにより機能することができる。ｐＨは好ましくは７．０未満であり、より好ましくは約５．０〜約７．０の範囲、より好ましくは約５．５〜約６．１の範囲、より好ましくは約５．８である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物のｐＨは５．５〜６．１の間であり、例えば、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１である。好ましくは、組成物のｐＨは約５．８である。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、組成物中に炭水化物が含まれる。炭水化物はタンパク質をより小型にすることができ、例えば、包埋するか、または他の方法で活性部分への接近を妨害することができる。これは、例えば、タンパク質の凝集を低減することにより、タンパク質の安定性を増大させることができる。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は炭水化物を含有する。好ましい炭水化物はスクロースである。使用に適した他の好ましい炭水化物には、トレハロース、マルトース、ラフィノース、グルコース、ソルビトール、デキストラン、シクロデキストリン、またはマンニトールが含まれる。タンパク質を安定化するために使用することができる他の適切な物質には、ラクトースおよびアラビノースなどの炭水化物；マンニトール、グリセロール、およびキシリトールなどのポリオール；グリシン、アルギニン、リシン、ヒスチジン、アラニン、メチオニン、およびロイシンなどのアミノ酸；ならびにＰＥＧ、ポロキソマー（ｐｏｌｏｘｏｍｅｒ）、デキストラン、ポリプロピレングリコール、多糖類、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、加水分解ゼラチン、およびヒトアルブミンなどのポリマーが含まれる。いくつかの実施形態では、これらの炭水化物の２つ以上の組合せ（例えば、スクロースおよびトレハロース）が本明細書に記載される組成物において使用される。組合せの適合性は、候補炭水化物に対して試験することができる。
【０１２３】
界面活性剤は、タンパク質の安定性を増大させるため、例えば、タンパク質の分解（例えば、振とう／出荷の際の空気／液体界面に起因する）を低減するために、組成物に添加することができる。組成物中で、タンパク質の安定性を増大させる、例えば、タンパク質の分解を引き起こさない界面活性剤が選択される。使用に適した界面活性剤は、例えば、ポリソルベート８０である。
【実施例】
【０１２４】
本発明はさらに、特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定しない以下の実施例において記載される。
【０１２５】
実施例１：一次性変形性関節症のヒト患者に対するＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの投与
人工膝関節全置換（ＴＫＲ）を受ける予定の一次性変形性関節症患者において、配列番号１７のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドのランダム化プラセボ対照二重盲検ファースト・イン・ヒューマン単回漸増用量研究が行われている。
【０１２６】
研究設計を図１に示した。これは、人工膝関節全置換（ＴＫＲ）において膝関節を除去する前に、一次性変形性関節症（ＯＡ）患者の膝関節内への１回の関節内（ｉ．ａ．）注射の後に、ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの安全性および耐容性を評価するために設計された。約２８人の患者が７つのコホートに登録される。各コホートにおいて、３人の患者をＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドで処置し、１人の患者をプラセボで処置する。コホート１の患者には、ＴＫＲの約７日前に、０．２ｍｇ／膝のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドまたはプラセボを関節内に注射した。コホート２の患者には、ＴＫＲの約７日前に、２ｍｇ／膝のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドまたはプラセボを関節内に注射した。コホート３の患者には、ＴＫＲの約７日前に、１０ｍｇ／膝のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドまたはプラセボを関節内に注射した。コホート４の患者には、ＴＫＲの約７日前に、２０ｍｇ／膝のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドまたはプラセボを関節内に注射した。コホート５〜７の用量および手術までの時間は、コホート１〜４の分析に基づいて選択した。コホート５の患者は、ＴＫＲの約２時間前に、２０ｍｇ／膝のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドまたはプラセボを関節内に注射されるであろう。コホート６の患者は、ＴＫＲの約２１日前に、２０ｍｇ／膝のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドまたはプラセボを関節内に注射されるであろう。コホート７の患者は、ＴＫＲの約７日前に、４０ｍｇ／膝のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドまたはプラセボを関節内に注射されるであろう。コホート１〜４の患者集団および人口統計情報は表２および表３に示される。
【０１２７】
ヒト患者に対する０．２ｍｇ／膝の開始用量は、ラットおよびイヌの投与研究から得られた安全性および効力データに基づいて選択されたものであり、適度な薬理学的効果をもたらすことが予想される。
【０１２８】
ヒト患者に対する２０ｍｇ／膝の用量は、関節滑液の体積および配列番号１７のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの関節滑液中の溶解度、ならびにイヌ関節内投与研究に基づいて選択した。イヌ膝内の軟骨の面積は１９６ｍｍ２であると推定されるが、ヒト膝軟骨の面積は１２１５ｍｍ２であると推定される。イヌ関節内の投与研究に基づいて、２０ｍｇ／膝の用量は、許容できる安全域を有する。
【０１２９】
ＴＫＲ手術来診までのコホート１〜４からの全ての患者を含む中間分析のために、全ての安全性エンドポイント（有害事象ＣＴＣ−ＡＥ、身体検査、バイタルサイン、ＥＣＧ、安全性研究所、およびＫＯＯＳを用いて測定される痛みを含む）を投与の７日後（その日を含む）まで測定した。処置に関連することが疑われる有害事象は報告されなかった。
【０１３０】
要約すると、コホート１〜４において重要な安全性の所見は観察されなかった。配列番号１７のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドを投与した１６人の患者において、免疫原性は観察されなかった。
【０１３１】
コホート４における２０ｍｇ／膝の試験用量は全ての処置患者（Ｎ＝３）において十分に耐容性であり、安全性に対する特定の懸念はなかったので、４０ｍｇ／膝までのさらなる用量の増大がコホート７に対して計画される。４０ｍｇ／膝の用量における推定の全身曝露は、イヌおよびラットでの毒性研究に基づいて、依然として十分な安全域に関連するであろう（表４を参照）。高い全身的な安全域に加えて、４０ｍｇ／膝を含むための理論的根拠は、（ｉ）配列番号１７のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドについて潜在的により効果的な用量の安全性を調べる必要性を正当化する前臨床薬理研究と、（ｉｉ）今まで実証された薬物関連の有害事象がない、２０ｍｇ／膝までの配列番号１７のＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドの有利な安全性プロファイルと、（ｉｉｉ）イヌ研究からの局所的な軟骨安全域とに基づく（表５を参照）。
【０１３２】
【表７】
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【０１３３】
【表８】
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【０１３４】
【表９】
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【０１３５】
【表１０】
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【０１３６】
他に定義されない限り、本明細書で使用される科学技術用語は、本開示が属する技術分野に精通した専門家によって通常理解されているものと同じ意味を有する。
【０１３７】
他に指示されない限り、具体的に詳細に記載されていない全ての方法、ステップ、技術および操作は、当業者には明らかであるように、それ自体が知られている方法で実施することができ、そして実施されている。例えば、標準的なハンドブックおよび本明細書に記載される一般的な背景技術ならびにそれらにおいて引用されるさらなる参考文献が再度参照される。他に指示されない限り、本明細書で引用される参考文献のそれぞれは、参照によってその全体が援用される。
【０１３８】
本発明に対する特許請求の範囲は非限定的であり、以下に提供される。
【０１３９】
特定の態様および特許請求の範囲が本明細書において詳細に開示されたが、これは単なる説明の目的のための例として行われたものであり、添付の特許請求の範囲、または任意の対応する将来の出願の特許請求の範囲の主題の範囲に関する限定であることは意図されない。特に、特許請求の範囲によって定義される本開示の趣旨および範囲から逸脱することなく、種々の置換、変更、および修正が本開示に成され得ることが、本発明者らによって企図される。核酸出発材料、目的のクローン、またはライブラリータイプの選択は、本明細書に記載される態様の知識を有する当業者にとって日常的なことであると考えられる。他の態様、利点、および修正は、以下の特許請求の範囲内に含まれると考えられる。当業者は、日常的な実験だけを用いて、本明細書に記載される本発明の特定の態様の多数の等価物を認識するかまたは確認することができるであろう。このような等価物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図される。後に出願される対応する出願における特許請求の範囲の書き直しは、各国の特許法による制限に起因する可能性があり、特許請求の範囲の主題を放棄すると解釈されてはならない。
【図１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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