(57)【要約】  化学療法耐性癌を患う患者の治療における使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤であって、患者が第一の化学療法剤での治療に非反応性の癌と診断されており、前記癌が骨における固形腫瘍または転移でなく、そして前記患者が前記ＲＡＮＫＬ阻害剤と組み合わせて第二の化学療法剤を投与される、前記ＲＡＮＫＬ阻害剤。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学療法耐性癌を患う患者の治療における使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤であって、患者が第一の化学療法剤での治療に非反応性の癌と診断されており、前記癌が骨における固形腫瘍または転移でなく、そして前記患者が前記ＲＡＮＫＬ阻害剤と組み合わせて第二の化学療法剤を投与される、前記ＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項２】
前記患者が前記の第一の化学療法剤での治療に失敗している、請求項１記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項３】
前記癌が、ｅｘ  ｖｉｖｏアッセイにおいて決定した際に前記の第一の化学療法剤での治療に非反応性であり、そして／またはそうでなければ化学療法耐性であることが知られる、請求項１または２記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項４】
前記患者が、細胞傷害性化学療法措置を含む前記の第一の化学療法剤での前記治療、好ましくは前記癌のための１つの以前の細胞傷害性化学療法措置の最低２コースの後、疾患進行を患っている、請求項１〜３のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項５】
前記の第一の化学療法剤が、細胞分裂阻害性、細胞傷害性または癌疾患を治療するために用いられる任意の他の抗新生物化合物である、請求項１〜４のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項６】
前記の第二の化学療法剤が、前記ＲＡＮＫＬ阻害剤と組み合わせない標準化学療法に比較した際に、実質的に減少した用量で投与される、請求項１〜５のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項７】
前記の第一の化学療法剤が、前記の第二の化学療法剤と同じである、請求項１〜６のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項８】
前記癌が、上皮腫瘍、間葉系腫瘍、内胚葉、中胚葉および／または外胚葉起源の腫瘍、または血液由来癌からなる群より選択される固形腫瘍である、請求項１〜７のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項９】
前記患者が、乳癌、膵臓癌、胃癌、食道癌、腎細胞癌、肺癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、黒色腫、卵巣癌、肝臓癌、腎臓癌、腸癌、前立腺癌、または頭頸部癌のいずれかを患う癌患者である、請求項１〜８のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項１０】
前記患者が白血病またはリンパ腫を患う血液癌患者である、請求項１〜９のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項１１】
ＲＡＮＫＬ阻害剤が、ヒトまたはヒト化抗体、その抗原結合断片、ＲＡＮＫＬ受容体−Ｆｃ融合タンパク質、ＲＡＮＫＬ受容体の細胞外ドメインを含む分子、または小分子阻害剤のいずれかである、請求項１〜１０のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項１２】
ＲＡＮＫＬ阻害剤を、全身投与によって、好ましくは静脈内注入またはボーラス注射によって、療法的有効量で患者に投与する、請求項１〜１１のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項１３】
ＲＡＮＫＬ阻害剤および前記の第二の化学療法剤のそれぞれの量が、癌感受性を増加させ、そして／または化学療法剤に対する癌細胞耐性を治療するために有効である、請求項１〜１２のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項１４】
抗癌治療を、前記ＲＡＮＫＬ阻害剤との組み合わせを伴わない標準治療と比較した際に、実質的に減少した用量で投与する、抗癌治療と組み合わせた癌患者の治療における使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項１５】
前記癌が骨における固形腫瘍または転移ではない、請求項１４記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項１６】
癌を患っており、そして化学療法に対する癌細胞の増感のための療法から利益を得る可能性がある患者をスクリーニングするための方法であって、前記患者の生物学的試料における、ＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬの発現および／または活性のレベルを測定する工程を含み、ＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬの発現または過剰発現を示す患者を前記増感療法の候補として選択する、前記方法。
【請求項１７】
前記癌が骨における固形腫瘍または転移ではない、請求項１６の方法。
【請求項１８】
前記生物学的試料が、腫瘍細胞または腫瘍再発タンパク質および／または核酸などの腫瘍由来材料を含みうる、生検法から、または腫瘍塊を除去する外科処置から得られる組織試料、血液からなる群より選択される、請求項１６または１７記載の方法。
【請求項１９】
ＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬの発現レベルを閾値に比較する工程をさらに含み、そして前記閾値が健康であるかまたは癌から回復した患者集団の平均発現レベルである、請求項１６〜１８のいずれか一項記載の方法。
【請求項２０】
前記患者が、請求項１６〜１９のいずれか一項の方法にしたがって、前記治療の候補と同定されている、請求項１〜１４のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化学療法耐性癌を患う癌患者を治療する際に使用するための、核内因子カッパ−Ｂリガンドのヒト受容体活性化因子（ＲＡＮＫＬ）を認識し、そして場合によってこれを中和するＲＡＮＫＬ特異的阻害剤に関する。
【発明の概要】
【０００２】
広範囲の研究および開発が、癌の治療に重点を置いている。開発中の製品は、キナーゼ阻害剤から、血管新生阻害剤、腫瘍ターゲットに対するモノクローナル抗体、アポトーシス誘導剤、抗腫瘍ワクチン接種、ならびに多様な腫瘍ターゲットに対するものであり、そして多様な細胞傷害効果を持つ慣用的な化学療法剤に渡る。癌患者の予後は、主に、転移を発展させるリスクによって決定される。
【０００３】
骨転移は、重度の疾患負荷および疼痛を生じる、多くの癌の頻繁な合併症である。ＲＡＮＫ（ＮＦ−κＢの受容体活性化因子）リガンド（ＲＡＮＫＬ）による癌細胞遊走および骨転移の制御がＪｏｎｅｓら（Ｎａｔｕｒｅ  ２００６，  ４４０：６９２−６９６）に記載される。ＲＡＮＫＬは、受容体ＲＡＮＫを発現するヒト上皮癌細胞および黒色腫細胞の遊走を誘発する。ＲＡＮＫは一連の癌細胞株および患者における癌細胞上に発現される。黒色腫転移のマウスモデルにおいて、オステオプロテジェリンによるＲＡＮＫＬのｉｎ  ｖｉｖｏ中和は、骨における麻痺および腫瘍負荷の顕著な減少からの完全な保護を生じるが、他の臓器では生じない。骨微小環境によって産生されるＲＡＮＫＬは、ＲＡＮＫ陽性腫瘍細胞の温床と見なされる。
【０００４】
Ｄｏｕｇａｌｌら（ＢｏｎｅＫＥｙ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ２０１４，  ３：５１９）は、ＲＡＮＫＬを、同族受容体、ＲＡＮＫを通じて作用する、破骨細胞機能および生存の本質的な仲介因子と記載する。前臨床データは、ＲＡＮＫＬ阻害による腫瘍誘導性破骨細胞生成の遮断が、骨破壊に対して保護するだけでなく、確立された骨転移の進行も阻害し、そして癌モデルにおける新規骨転移の形成も遅延させることを確実に確立している。骨転移を伴う患者において、骨合併症は、破骨細胞活性増加によって駆動され、そして病的骨折、骨髄圧迫、ならびに骨に対する放射療法または整形外科手術の必要性（総合して、骨関連事象（ＳＲＥ）として知られる）を生じうる。ＲＡＮＫＬに対する完全ヒトモノクローナル抗体であり、そしてＲＡＮＫＬ阻害剤であるデノスマブは、骨に転移した固形腫瘍を伴う患者において、ＳＲＥを防止するかまたは遅延させると記載される。腫瘍誘導性骨溶解、骨破壊および骨腫瘍進行における中心的な役割に加えて、破骨細胞とは独立に、ＲＡＮＫＬの直接の腫瘍促進効果の証拠が出現しつつある。例えば、ＲＡＮＫＬはまた、ＲＡＮＫ発現癌細胞に対する活性を通じて転移を刺激し、浸潤および遊走の増加を生じる。
【０００５】
Ｔａｎら（Ｎａｔｕｒｅ  ２０１１，  ４７０（７３５５）：５４８−５５３）は、線維芽細胞に補充される腫瘍浸潤性ＣＤ４＋  Ｔ細胞が、ＲＡＮＫＬ−ＲＡＮＫシグナル伝達を通じて、乳癌転移を刺激すると記載する。
【０００６】
ＷＯ２０１２／０３８５０４は、ＲＡＮＫＬ阻害剤を用いて乳癌を治療する方法を開示する。乳癌細胞における、ＲＡＮＫＬまたはその受容体ＲＡＮＫの阻害または不活性化は、プロゲスチン誘導性増殖を防止すると記載される。ＲＡＮＫＬ阻害剤は、放射療法または化学療法と組み合わせて使用可能である。
【０００７】
ＳｈａｒｍａおよびＳｉｎｇｈ（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．  ２０１１；１０：３６）は、乳房腫瘍における、および乳癌細胞の化学療法耐性を仲介する際の、ＲＡＮＫ−ＲＡＮＫＬシグナル伝達の役割を概説する。乳房腫瘍がより侵襲性になるにつれて、乳房腫瘍におけるＲＡＮＫＬは喪失するが、ＲＡＮＫＬを保持するものは、より高い組織学的グレードであることが研究によって提唱される。
【０００８】
デノスマブは、固形腫瘍からの骨転移を伴う患者において、ＳＲＥの防止のため、商標名プロリアのもとに、そしてＸｇｅｖａとして、骨粗鬆症のリスクがある閉経後女性における使用に関して、米国食品医薬品局によって認可された。臨床試験は、とりわけ、巨細胞腫瘍、骨転移を伴う多発性骨髄腫、および悪性腫瘍の高カルシウム血症におけるデノスマブを調べている。
【０００９】
ＲＡＮＫ／ＲＡＮＫＬをターゲティングする療法は、例えば、ＲＡＮＫＬ特異的結合剤を含み、この中には、デノスマブ、組換えＲＡＮＫ−Ｆｃ（Ｓｃｈｍｉｅｄｅｌら  ２０１３，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ７３（２）：６８３−９４）、またはＲＡＮＫＬ−ナノボディ（ＷＯ２００８１４２１６４Ａ２）がある。ＲＡＮＫＬ結合ペプチドは、骨吸収および／または破骨細胞活性を阻害すると記載される（ＷＯ２０１２１６３８８７Ａ１）。
【００１０】
進行した固形腫瘍を伴う患者における骨転移に対するデノスマブの効果は、例えばＲｏｌｆｏ  Ｃｈｒｉｓｔｉａｎら（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  ｖｏｌ．  １４，  ｎｏ．  １，  ２０１４，  ｐｐ  １５−２６）、Ｓｃａｇｌｉｏｔｔｉ  Ｇｉｏｒｇｉｏ  Ｖｉｔｔｏｒｉｏら（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｈｏｒａｃｉｃ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，  ｖｏｌ．  ７，  ｎｏ．  １２，  ２０１２，  ｐｐ  １８２３−１８２９）、Ｍｏｒｉｋａｗａ  Ｋ．ら（Ｄａｔａｂａｓｅ  Ｅｍｂａｓｅ，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，  ＸＰ００２７３６１３６；およびＪａｐａｎｅｓｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ，  ｖｏｌ．  ５２，  ｎｏ．  ７，  ２０１２，  ｐｐ  １０３５−１０４０）、Ｔａｋｅｓｈｉ  Ｙｕａｓａら（Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  ｖｏｌ．  ５，  ２０１２，  ｐｐ  ２２１−２２９）、Ｈｉｌｂｅ  Ｗｏｌｆｇａｎｇら（Ｍａｇａｚｉｎｅ  ｏｆ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，  ＡＴ，  ｖｏｌ．  ６，  ｎｏ．  ２，  ２０１３，  ｐｐ  ７５−８２）、Ｌａｓｚｌо  Ｋｏｐｐｅｒ（Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ＆  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ｖｏｌ．  １８，  ｎｏ．  ４，  ２０１２，  ｐｐ  ７４３−７４７）、Ｓｏｎｙａ  Ｊ．  Ｓｎｅｄｅｃｏｒら（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  ｖｏｌ．  ３４，  ｎｏ．  ６，  ２０１２，  ｐｐ  １３３４−１３４９）、Ｓａｒａｈ  Ｐａｙｔｏｎ（Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｕｒｏｌｏｇｙ，  ｖｏｌ．  ９，  ｎｏ．  １，  ２０１１，  ｐｐ  １−１）、ＷＯ  ２０１３／１７６４６９およびＤＡＴＡＢＡＳＥ  ＷＰＩ，  Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ｌｏｎｄｏｎ，  ＧＢ，  ＸＰ００２７３６１３８；  ＵＳ  ２０１２／１１４６６５  Ａ１およびＷＯ  ０１／０８６９９  Ａ１）に記載される。
【００１１】
Ｍｏｒｉｋａｗａら（Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ，  ｖｏｌ．  ５２，  ｎｏ．  ７，  ２０１２，  ｐｐ  １０３５−１０４０）は、化学療法が無効であった場合、骨転移のための療法的代替法としてのデノスマブの潜在能力を記載する。
【００１２】
Ｃａｔｈｏｍａｓら（Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２０１５，  ８８（４）：  ２５７−２６０）は、ソラフェニブと組み合わせたデノスマブを用いたＲＡＮＫＬ遮断による、切除不能な骨肉腫の治療を記載する。
【００１３】
Ｍｉｌｌｅｒら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ２００８，  ７（７）：  ２１６０−２１６９）は、前立腺癌骨転移のネズミモデルにおける、ＲＡＮＫＬ阻害剤、オステオプロテジェリン−Ｆｃ（ＯＰＧ−Ｆｃ）とドセタキセルの併用を記載する。
【００１４】
Ｒｏｕｓｓｅａｕら（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｏｎｅ  ａｎｄ  Ｍｉｎｅｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１１，  ２６（１０）：  ２４５２−２４６２）は、骨肉腫モデルにおいて、化学療法反応を増進するためのＲａｎｋｌをターゲティングするｓｉＲＮＡを記載する。
【００１５】
Ｂａｇｏ−Ｈｏｒｖａｔｈら（Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ２０１４，  ４６（５）：  ４１１−４１５）は、骨肉腫における化学療法反応に対するＲＡＮＫシグナル伝達の影響を記載する。
【００１６】
化学療法耐性は、特に骨肉腫、骨癌または骨転移以外の癌における、癌療法の成功の主な障害である。腫瘍の化学耐性を克服するか、あるいは抗新生物または化学療法薬剤に対する腫瘍の感受性を増加させる、新規療法を開発する緊急の必要性がある。
【００１７】
発明の要旨
本発明の目的は、癌患者における化学療法耐性の改善された治療、およびそれぞれの化学療法併用療法を提供することである。
【００１８】
この目的は、本発明の主題によって解決される。
本発明は、化学療法耐性癌を患う患者の治療における使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤であって、患者が第一の化学療法剤での治療に非反応性の癌と診断されており、前記癌が骨における固形腫瘍または骨における転移でなく、そして前記患者が前記ＲＡＮＫＬ阻害剤と組み合わせて第二の化学療法剤を投与される、前記ＲＡＮＫＬ阻害剤を提供する。
【００１９】
特に、癌は、ヒトの体の骨以外の任意の部分に位置する、固形腫瘍または固形腫瘍と関連する疾患である。特に、骨肉腫または骨格起源および／または骨に位置する固形腫瘍は、本明細書に記載するような治療から排除される。
【００２０】
特に、癌は、ヒトの体の骨以外の任意の部分に位置する、転移または転移に関連する疾患である。特に、骨転移または骨に位置する転移は、本明細書に記載するような治療から排除される。
【００２１】
特に、治療は、骨癌、骨転移、骨肉腫または骨原性肉腫のいずれか、あるいは前述のいずれかを患う患者をターゲットとしない。
特に、癌患者は、癌腫と診断されているかまたは癌腫を患う。癌腫は、一般的に、上皮細胞から発展するタイプの癌と理解され、そしてこれには、例えば、皮膚、頭部、頸部、肺、乳房、膵臓、結腸、前立腺、卵巣、肝臓、腎臓、腸、ならびに他の臓器および腺の癌が含まれる。特に、癌腫は、腺癌、扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、未分化癌、巨細胞癌、または小細胞癌のいずれかである。
【００２２】
特に、癌患者は、一般的に血液学的悪性腫瘍の任意の種類として理解される、血液癌と診断されるかまたは血液癌を患う。特に、血液癌は、白血病またはリンパ腫（またはリンパ球の癌）のいずれかである。特に白血病は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、または急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）のいずれかである。特に、リンパ腫は、ホジキンリンパ腫（すべてのサブタイプ）、または非ホジキンリンパ腫（すべてのサブタイプ）のいずれかである。
【００２３】
特に、癌はＲＡＮＫ陽性またはＲＡＮＫ発現癌である。
特に、癌はＲＡＮＫ陰性癌である。ＲＡＮＫＬは、例えばＲＡＮＫ陽性間質によって、または腫瘍微小環境に存在する癌細胞および間質細胞の間の相互作用によって、癌細胞において逆シグナル伝達されうる。
【００２４】
特に、前記患者は、前記の第一の化学療法剤での治療に失敗し、そして／または癌細胞の非反応性がｅｘ  ｖｉｖｏアッセイにおいて決定され、そして／またはそうでなければ化学療法耐性であることが知られる。特に、前記癌は、ｅｘ  ｖｉｖｏアッセイにおいて、あるいは以前のまたは歴史的な実験データによって決定されるように、前記ＲＡＮＫＬ阻害剤と組み合わされない、前記の第一の化学療法剤に対して耐性である。
【００２５】
こうしたｅｘ  ｖｉｖｏアッセイは、典型的には、細胞株の癌細胞、癌患者からの生物学的試料または単離物、およびＲＡＮＫＬ阻害剤を伴うまたは伴わない、化学療法剤、例えば細胞傷害性小分子（有機）薬剤の存在下での、こうした癌細胞の感受性または耐性を決定するための手段を使用する。
【００２６】
特に、前記癌は、前記の第一の化学療法剤に関して化学療法耐性であることが知られているか、または化学療法剤が、本明細書に記載するようなＲＡＮＫＬ阻害剤と組み合わされずに前記患者に投与されることがないように、少なくとも実質的に化学療法耐性であることが知られる。特に、前記患者に投与される前記の第一の化学療法剤の投与される用量または量が、本明細書に記載するようなＲＡＮＫＬ阻害剤と組み合わされた際に減少するように、前記癌は、前記の第一の化学療法剤に関する化学療法に対して、増感される。
【００２７】
特に、前記患者は、細胞傷害性化学療法措置を含む前記の第一の化学療法剤での前記治療、好ましくは前記癌のための１つの以前の細胞傷害性化学療法措置の最低２または３コースの後、疾患進行を患っている。細胞傷害性化学療法措置は、典型的には、１またはそれより多い細胞傷害性剤を伴う。例は、転移性乳癌の治療に一般的に用いられる、ＦＥＣ（フルオロウラシル、エピルビシン、シクロホスファミド）措置である。この措置において、フルオロウラシル、エピルビシン、シクロホスファミドは、２１日ごとに、全部で６〜８サイクル、適用される。別の例は、転移性結腸直腸癌の治療のための化学療法として用いられるＦＯＬＦＩＲＩ（フォリン酸、フルオロウラシル、イリノテカン）措置である。この措置は、多数のサイクルで２週ごとに投与される。
【００２８】
特に、前記の第一の化学療法剤は、細胞分裂阻害性、細胞傷害性または癌疾患を治療するために用いられる任意の他の抗新生物化合物である。
例示的な化学療法剤は、５−フルオロウラシル、カペシタビン、カルボプラチン、シスプラチン、ゲムシタビン、イリノテカン、オキサリプラチン、トポテカン、６−チオグアニン、マイトマイシン−ｃ、パクリタキセル、ドセタキセル、ダカルバジン、エトポシド、ペメトレキセド、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、アムルビシン、テモゾロミド、白金剤、および前述のいずれかの組み合わせからなる群より選択される。
【００２９】
特に、前記の第二の化学療法剤は、前記ＲＡＮＫＬ阻害剤との組み合わせを伴わない標準化学療法と比較した際、実質的にまたは有意に減少した用量で、例えば少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％のいずれかで減少した用量で；あるいは化学療法の頻度または治療サイクルの数を実質的に減少させることによって、投与される。
【００３０】
特に、前記の第一の化学療法剤は、前記の第二の化学療法剤と同じかまたは異なる。
特定の例にしたがって、患者は、パクリタキセルでの治療に非反応性であり、そしてＲＡＮＫＬ阻害剤と組み合わせてパクリタキセルで治療される、乳癌を患う。特に、乳癌患者は、（第一の化学療法剤として）パクリタキセルを使用する第一の治療を経て、その後、（第二の化学療法剤として）パクリタキセルをＲＡＮＫＬ阻害剤、例えばＲＡＮＫＬをターゲティングする抗体、例えばデノスマブと同時に用いる第二の治療が続く。
【００３１】
さらなる特定の例にしたがって、患者は、ドキソルビシンでの治療に非反応性であり、そしてＲＡＮＫＬ阻害剤と組み合わせてドキソルビシンで治療される、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を患う。特に、ＡＭＬ患者は、（第一の化学療法剤として）ドキソルビシンを使用する第一の治療を経て、その後、（第二の化学療法剤として）ドキソルビシンをＲＡＮＫＬ阻害剤、例えばＲＡＮＫＬをターゲティングする抗体、例えばデノスマブと同時に用いる第二の治療が続く。
【００３２】
特定の側面にしたがって、前記癌は、上皮腫瘍、間葉系腫瘍、内胚葉、中胚葉および／または外胚葉起源の腫瘍、あるいは血液由来癌、例えば白血病またはリンパ腫からなる群より選択される固形腫瘍である。特に、前記患者は、こうした固形腫瘍または血液癌のいずれかを患い、そして前記ＲＡＮＫＬ阻害剤と組み合わせることによって、前記化学療法剤に対して増感するための、化学療法剤を含む、本明細書に記載するような併用療法で治療される。特に、前記ＲＡＮＫＬ阻害剤は、改善された化学療法のため、前記癌を増感させるために有効な量で投与される。
【００３３】
特に、患者は、乳癌、膵臓癌、胃癌、食道癌、腎細胞癌、肺癌、結腸／直腸／結腸直腸癌、黒色腫、卵巣癌、肝臓癌、腎臓癌、腸癌、前立腺癌、頭頸部癌、リンパ腫または白血病を患う。特に、患者は、原発性固形腫瘍、あるいは血液またはリンパ系の癌を患う。
【００３４】
特に、癌は、ＲＡＮＫ陽性癌または転移細胞によって特徴付けられる。癌細胞は、ＲＡＮＫ陽性腫瘍形成癌細胞または腫瘍細胞、特に固形腫瘍細胞、あるいは血液および血液形成臓器に関与するＲＡＮＫ陽性癌細胞、例えば白血病であってもよい。特に、癌は、例えば遠位臓器または骨転移において、それによって癌転移を促進するかまたは転移が発展するリスクを増加させる、活性化血小板−癌細胞凝集物または循環転移前細胞クラスター形成ニッチを決定することによって同定される、転移前病変の存在によって特徴付けられる。
【００３５】
特に、癌患者は、最小残渣疾患および／または転移性疾患の再発を患うリスクがあるかまたは患っており、場合によってここで、患者は例えば全血またはその血液分画における播種性腫瘍細胞の数によって、あるいは特異的腫瘍細胞マーカーによって決定されるように、血液試料中の循環腫瘍細胞の検出可能なレベルを有する。腫瘍細胞の検出可能な数は、例えば少なくとも５ｍＬ、または７．５ｍＬ、または１０ｍＬの全血試料中の、１０未満、あるいは５または４、３、２、または１未満の循環腫瘍細胞である。
【００３６】
特定の側面にしたがって、ＲＡＮＫＬ阻害剤は、抗体、抗体断片、受容体融合タンパク質、例えばＲＡＮＫ−Ｆｃ融合タンパク質、ペプチド、例えばオステオプロテジェリンの不活性化型、またはその断片、小分子、例えばＲＡＮＫ特異的有機小分子、またはアプタマーからなる群より選択される。例示的な小分子は、ＲＡＮＫＬおよびＴＮＦの小分子阻害剤であり、例えばＣｏｓｔｅ  Ｅ．ら（Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  ２０１５；７４：２２０−２２６）に記載される。特定の例は、ＩκＢおよび細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）のＲＡＮＫＬ誘導性リン酸化を阻害可能である、ブタンジオールビフェニルカルボン酸エステルの誘導体である。例えば、エステル結合がケトンに置換された化合物が使用可能であり、これには例えば、以下の式によって特徴付けられるＡＢＤ３２８およびＡＢＤ３４５がある：
【００３７】
【化１】
2019516732.tif 000002
【００３８】
特に、ＲＡＮＫＬ阻害剤は、ヒトまたはヒト化抗体、その抗原結合断片、あるいはＲＡＮＫＬ受容体−Ｆｃ融合タンパク質、例えばＲＡＮＫ−Ｆｃ融合タンパク質またはＬＧＲ４−Ｆｃ融合タンパク質、ＲＡＮＫＬ受容体、例えばＲＡＮＫまたはＬＧＲ４の細胞外ドメインを含む分子、あるいは小分子阻害剤、例えばＲＡＮＫ特異的有機小分子のいずれかである。
【００３９】
特定の例にしたがって、ＲＡＮＫＬ阻害剤は、ヒトまたはヒト化抗体、例えばデノスマブ、ジェネリックまたはバイオ後続品型、またはその機能的変異体、または前述のいずれかの抗原結合断片、またはＲＡＮＫ−Ｆｃ融合タンパク質である。デノスマブ（Ａｍｇｅｎ、米国カリフォルニア州サウザンドオークス）は、ＲＡＮＫＬに特異的な完全ヒトＩｇＧ２モノクローナル抗体であり、多様な転移性腫瘍を伴う患者における骨吸収マーカーを抑制すると記載され、そして骨転移の防止および治療のための多数の臨床試験において調べられている。化学的には、これは、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる。各軽鎖は２１５アミノ酸からなる。各重鎖は、４つの分子内ジスルフィドを含む、４４８アミノ酸からなる。重鎖アミノ酸配列は配列番号１によって同定され；軽鎖アミノ酸配列は配列番号２によって同定される。
【００４０】
特に、剤は、Ｆｃエフェクター機能を減少させる（例えばＦｃガンマＲＩＩＩａまたはＣＤ１６に特異的に結合しない）ように操作され、そしてしたがって有意な抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を示さないＦｃ抗体断片、例えばヒトＩｇＧ１  Ｆｃを含む。Ｆｃエフェクター機能を減少させる点突然変異を含む、例示的なＦｃ断片は、以下の突然変異：Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、デルタＧ２３６、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓの少なくとも１つによって特徴付けられ、ここで命名はＫａｂａｔのＥＵインデックスにしたがう。
【００４１】
あるいは、剤は、Ｆｃエフェクター機能（例えばＦｃガンマＲＩＩＩａまたはＣＤ１６への結合）、例えばＡＤＣＣを持つＦｃ抗体断片、例えばヒトＩｇＧ１  Ｆｃを含む。こうした剤は、免疫系のエフェクター細胞が、血小板および／または癌細胞、好ましくは癌−血小板凝集物である、ターゲット細胞を活発に破壊する、細胞仲介性免疫防御のさらなる利点を有するであろう。
【００４２】
ＲＡＮＫＬ阻害剤は、可溶性ＲＡＮＫＬ（ｓＲＡＮＫＬ）および／または細胞膜結合性ＲＡＮＫＬ（ｍＲＡＮＫＬ）、および／または血小板結合性ＲＡＮＫＬ（ｐＲＡＮＫＬ）を特異的に認識し、そして中和することも可能である。
【００４３】
特に、ＲＡＮＫＬ阻害剤は、ＲＡＮＫＬポリペプチドを認識し、該ポリペプチドは、ヒトＲＡＮＫＬの全長アミノ酸配列（配列番号３）、または膜結合性ＲＡＮＫＬの細胞外部分におけるエピトープ、例えば配列番号３のＡＡ６９〜ＡＡ３１７を含むことも可能であり、特にＲＡＮＫＬへのＲＡＮＫの結合と競合し、そしてそれによって、癌細胞におけるＲＡＮＫ−ＲＡＮＫＬシグナル伝達を実質的に阻害する。特に、ＲＡＮＫＬ阻害剤はＲＡＮＫＬに結合し、それによってＲＡＮＫＬが、癌細胞上、例えば初代腫瘍細胞、播種または転移腫瘍細胞上の受容体を活性化することを阻害する。
【００４４】
特に、ＲＡＮＫＬ阻害剤は、ＲＡＮＫＬ単量体または多量体、例えば凝集細胞表面上で相互作用するＲＡＮＫＬ分子の多量体を認識し、そしてこれに結合可能である。こうした多量体は、二量体または三量体またはより高次の多量体であってもよく、好ましくは膜結合性ＲＡＮＫＬおよび／または可溶性ＲＡＮＫＬと複合体を形成する。例えば、結合は、血小板および癌細胞の間の微小環境において、または循環において、例えば血小板表面上で起こりうる。
【００４５】
特定の側面にしたがって、ＲＡＮＫＬ阻害剤は、全身投与によって、好ましくは静脈内注入またはボーラス注射によって、療法的有効量で患者に投与される。
デノスマブを用いた先行技術の療法は、典型的には皮下治療を伴うであろう。本発明は、ＲＡＮＫＬを発現する活性化循環血小板、または循環血小板−癌細胞凝集物をターゲットとするであろう。したがって、静脈内経路が特に好ましい。
【００４６】
好ましいＲＡＮＫＬ阻害剤用量は、例えば０．５〜１０００ｍｇ、好ましくは１〜４００ｍｇの範囲である。皮下投与された際、好ましい投薬量は０．５〜４００ｍｇの範囲である。
【００４７】
特に、ＲＡＮＫＬ阻害剤および前記の第二の化学療法剤のそれぞれの量は、癌感受性を増加させ、そして／または化学療法剤に対する癌細胞耐性を治療するために有効である。
特定の態様にしたがって、ＲＡＮＫＬ阻害剤および前記の第二の化学療法剤は、同時に投与される。同時治療は、特に、ＲＡＮＫＬ阻害剤および化学療法剤の各々を短い時間枠内で投与する治療措置で提供される。同時投与は、典型的には、各々、同じ時間経過内での、例えば１２または２４時間以内、あるいは１またはさらに数日以内、例えば１、２、３、４、５、６、または７日以内での、ＲＡＮＫＬ阻害剤での静脈内治療、および化学療法剤の経口または非経口投与による。
【００４８】
別の特定の態様にしたがって、ＲＡＮＫＬ阻害剤は、前記の第二の化学療法剤の前に、それと同時に、そして／またはその後に投与される。組み合わせた投与は、例えば、両方の活性剤の１またはそれより多い交換投与（ｉｎｔｅｒｃｈａｎｇｉｎｇ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、そして特に、１２時間以内のＲＡＮＫＬ阻害剤を投与するｉ．ｖ．治療経過、および１〜３日以内（短期）あるいは４、５、または６日より長い期間（長期、維持）の、化学療法剤での別の短期または維持治療（同時、前または後）を伴うことも可能である。組み合わせ投与は、適切な間隔を使用することも可能である。
【００４９】
特定の側面にしたがって、ＲＡＮＫＬ阻害剤は、アジュバントまたはネオアジュバント併用療法と組み合わせて、好ましくはキナーゼ阻害剤療法および／または免疫療法とさらに組み合わせて、患者に投与される。こうした併用療法は、癌細胞、例えば任意の腫瘍関連抗原、例えば上皮癌細胞マーカー、可溶性因子、または抗血管新生療法からなる群より選択されるものを特異的にターゲティングするであろう。
【００５０】
特定の側面にしたがって、治療は、腫瘍の少なくとも部分を除去する外科介入と組み合わされ、そして／または放射療法と組み合わされ、そしてＲＡＮＫＬ阻害剤は、ネオアジュバントまたはアジュバント療法のために投与される。したがって、患者は、特に、外科介入および／または放射療法に備えまたはこれらを経ているか、あるいは、外科介入および／または放射療法によって治療されたことがあり、そしてさらに、手術の前または後に、本発明にしたがったＲＡＮＫＬ阻害剤で治療される。特定の例にしたがって、こうした治療は、手術の１〜３０日前、または手術中、または術後１〜３０日以内に開始されてもよく、そしてＲＡＮＫＬ阻害剤は、連続した期間、例えば１〜１２ヶ月またはそれよりさらに長い間、投与されてもよく、ここで、ＲＡＮＫＬ阻害剤は定期的な間隔で投与される。外科介入は、例えば、腫瘍塊の療法的除去または生検である。手術は、腫瘍細胞を血流内に播種し、それによって血小板−腫瘍細胞凝集物形成を誘発する、特定のリスク要因と見なされる。同様に、放射療法は、腫瘍細胞の血行性伝播を誘発しうる。したがって、本発明の方法は、特に、固形腫瘍細胞を潜在的に播種する手術および／または放射療法と組み合わせて必要とされる。
【００５１】
本発明は、抗癌治療と組み合わせた癌患者の治療における使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤であって、抗癌治療が、前記のＲＡＮＫＬ阻害剤との組み合わせを伴わない標準治療と比較した際に、実質的に減少した用量で投与される、前記阻害剤をさらに提供する。標準用量は、化学療法剤または免疫療法調製物または薬剤のような薬学的化合物の用量、ならびに／あるいは物理的治療、例えば照射の用量のいずれであってもよい。特に、前記癌は、骨における固形腫瘍または骨における転移を除く、本明細書に記載するような任意の癌または癌と関連する疾患である。
【００５２】
本発明は、化学療法剤と組み合わせた癌患者の治療における使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤であって、化学療法剤が、前記のＲＡＮＫＬ阻害剤との組み合わせを伴わない標準化学療法と比較した際に、実質的に減少した用量で投与される、前記阻害剤をさらに提供する。特に、前記化学療法剤は、前記ＲＡＮＫＬ阻害剤との組み合わせを伴わない標準化学療法と比較した際、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％のいずれかに減少された用量で；あるいは化学療法の頻度または治療サイクル数を実質的に減少させることによって、投与される。特に、前記癌は、骨における固形腫瘍または骨における転移を除く、本明細書に記載するような任意の癌または癌と関連する疾患である。
【００５３】
同様に、ＲＡＮＫＬ阻害剤は、（有効）用量を、許容されうる用量まで低下させる必要がある任意の他の抗癌治療、例えば照射治療および／または免疫療法と組み合わせて用いられうる。こうした用量減少は、治療停止を引き起こすほど、患者がこうした抗癌治療の副作用を患っている場合に、特に必要とされる。
【００５４】
本発明は、癌を患っており、そして化学療法に対する癌細胞の増感のための療法から利益を得る可能性がある患者をスクリーニングする方法であって、前記患者の生物学的試料における、ＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬの発現および／または活性のレベルを測定する工程を含み、ＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬの発現または過剰発現を示す患者を前記増感療法の候補として選択する、前記方法をさらに提供する。特に、前記癌は、骨における固形腫瘍または骨における転移を除く、本明細書に記載するような任意の癌または癌と関連する疾患である。
【００５５】
増感療法には、特に、本明細書に記載するような化学療法剤と組み合わせたＲＡＮＫＬ阻害剤の投与が含まれる。したがって、特定の側面は、癌患者を治療する際に使用するためのＲＡＮＫＬ阻害剤であって、患者がまず、化学増感療法の候補と同定され、その後、化学療法剤と組み合わせてＲＡＮＫＬ阻害剤の有効量を投与する療法が続く。化学増感療法は、場合によって、アジュバントまたはネオアジュバント療法として提供される。
【００５６】
特に、本発明は、本明細書に記載するような使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤であって、患者が本明細書に記載するような治療、特にＲＡＮＫＬ阻害剤を用いた化学増感治療の候補と同定されている、前記阻害剤を提供する。
【００５７】
特に、第一の工程において、患者の生物学的試料において、ＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬの過剰発現を測定することによって、癌患者が化学増感療法の候補として同定され；そして第二の工程において、患者を有効量のＲＡＮＫＬ阻害剤で治療して、癌を化学療法剤に反応性にする方法を提供する。特に、ＲＡＮＫＬ阻害剤でのこうした治療は、化学療法剤と組み合わせられ、それによって、こうした治療に対する有効な反応を生じる。
【００５８】
患者をスクリーニングする方法は、特に、腫瘍または癌の転移潜在能力を予測する方法に基づく予後アッセイをさらに使用してもよく、このアッセイを用いて、患者が化学療法剤で適切に治療されるかどうかを決定し、癌または癌に関連する他の障害、例えば転移性疾患を治療することも可能である。例えば、こうしたアッセイを用いて、患者に化学療法剤を投与すべきかどうかを決定することも可能である。
【００５９】
例えば、ＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬの発現および／または活性レベルを試料内のまたは試料から単離された癌細胞において決定し、そして参照値、例えばあらかじめ決定された化学感受性癌細胞（参照細胞として働く）におけるＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬの発現に際して得られたものに比較する。
【００６０】
ＲＡＮＫＬ発現レベルを、例えば、ＲＡＮＫＬ発現の指標となるかまたはＲＡＮＫＬ（または相補配列）をコードするヌクレオチド配列の発現によって、あるいはＲＡＮＫＬポリペプチドまたはその断片によって決定する。レベルを定性的に決定してもよいが、また半定量的または定量的に決定してもよい。
【００６１】
陽性または陰性対照、あるいは両方から、参照値を得てもよい。陽性対照は、例えば、化学耐性癌細胞上のＲＡＮＫＬ発現レベルを示し、例えばこうした化学耐性を患う癌患者から得られる。陰性対照は、例えば、化学感受性癌細胞上のＲＡＮＫＬ発現レベルを示すか、または健康な対照被験体の組織から得られる。
【００６２】
特に、前記生物学的試料は、腫瘍細胞または腫瘍再発タンパク質および／または核酸のような腫瘍由来材料を含みうる、生検法から得られた組織試料、または腫瘍塊を除去するための外科処置から得られる試料、血液からなる群より選択される。
【００６３】
特に、前記方法は、ＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬの発現レベルを閾値に比較する工程をさらに含み、そしてここで前記閾値は健康であるかまたは癌から回復した患者集団の平均発現レベルである。
【００６４】
特定のさらなる側面にしたがって、本発明は、癌患者における化学療法治療の有効性を増加させる方法であって、前記の化学療法治療後のセカンドライン治療として、有効量のＲＡＮＫＬ阻害剤を患者に投与する工程を含む、前記方法を提供する。特に、前記癌は、骨における固形腫瘍または骨における転移を除く、本明細書に記載するような任意の癌または癌と関連する疾患である。
【００６５】
特定のさらなる側面にしたがって、本発明は、癌患者において、化学療法治療に耐性である癌の発展を遅延させ、そして／または防止する方法であって、前記の化学療法治療後のセカンドライン治療として、有効量のＲＡＮＫＬ阻害剤を患者に投与する工程を含む、前記方法を提供する。特に、前記癌は、骨における固形腫瘍または骨における転移を除く、本明細書に記載するような任意の癌または癌と関連する疾患である。
【００６６】
特定のさらなる側面にしたがって、本発明は、癌患者において、化学療法治療に対する感受性を増加させる方法であって、前記の化学療法治療後のセカンドライン治療として、有効量のＲＡＮＫＬ阻害剤を患者に投与する工程を含む、前記方法を提供する。特に、前記癌は、骨における固形腫瘍または骨における転移を除く、本明細書に記載するような任意の癌または癌と関連する疾患である。
【００６７】
特に、本明細書記載の任意の治療法は、化学療法剤の投与を含む化学療法治療を含み、そして前記化学療法剤の有効量を患者に投与する工程をさらに含む。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１−１】ＲＡＮＫＬは、化学療法治療に対する悪性細胞の耐性を仲介する。９４％の芽細胞（白血病細胞）を含有する急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を患う患者の血液を、治療前の診断時点で得て、そして密度勾配遠心分離によって、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を得た。示すように、ドキソルビシン（ｄоｘ、１μＭ）および／または可溶性ＲＡＮＫＬ（ｓＲＡＮＫＬ、５００ｎｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下でＰＢＭＣを培養した。生存および細胞死を、フローサイトメトリーによって４８時間後に分析し（７ＡＡＤおよびアネキシン−Ｖ−ＰＥ染色）、そして輪郭プロット（上部パネル）および分析細胞の割合（下部パネル）として示す。提示する結果は、ＲＡＮＫＬが化学療法治療の効果から悪性細胞を保護し、すなわち治療耐性を仲介することを立証する。
【図１−２】ＲＡＮＫＬは、化学療法治療に対する悪性細胞の耐性を仲介する。９４％の芽細胞（白血病細胞）を含有する急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を患う患者の血液を、治療前の診断時点で得て、そして密度勾配遠心分離によって、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を得た。示すように、ドキソルビシン（ｄоｘ、１μＭ）および／または可溶性ＲＡＮＫＬ（ｓＲＡＮＫＬ、５００ｎｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下でＰＢＭＣを培養した。生存および細胞死を、フローサイトメトリーによって４８時間後に分析し（７ＡＡＤおよびアネキシン−Ｖ−ＰＥ染色）、そして輪郭プロット（上部パネル）および分析細胞の割合（下部パネル）として示す。提示する結果は、ＲＡＮＫＬが化学療法治療の効果から悪性細胞を保護し、すなわち治療耐性を仲介することを立証する。
【図２−１】デノスマブによるＲＡＮＫＬの遮断は、化学療法治療に対する耐性を克服する。示すように、ＭＣＦ１０Ａ乳房腫瘍細胞を、ｓＲＡＮＫＬ（１００ｎｇ／ｍｌ）および／またはデノスマブ（２０μｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下で、４８時間培養した。最初の２４時間の培養の後、示す場合には、パクリタキセル（１０ｎＭ）を添加した。次いで、７ＡＡＤとともにフローサイトメトリーを用いて、生存および死亡細胞の割合を決定した。結果を輪郭プロット（上部パネル）、ならびに生存（７ＡＡＤ陰性）および死亡（７ＡＡＤ陽性）細胞の割合（下部パネル）として示す。提示する結果は、ＲＡＮＫＬが化学療法治療の影響から悪性細胞を保護し、そしてデノスマブによるＲＡＮＫＬの中和が、治療に対する感受性を回復するように働くことを立証する。
【図２−２】デノスマブによるＲＡＮＫＬの遮断は、化学療法治療に対する耐性を克服する。示すように、ＭＣＦ１０Ａ乳房腫瘍細胞を、ｓＲＡＮＫＬ（１００ｎｇ／ｍｌ）および／またはデノスマブ（２０μｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下で、４８時間培養した。最初の２４時間の培養の後、示す場合には、パクリタキセル（１０ｎＭ）を添加した。次いで、７ＡＡＤとともにフローサイトメトリーを用いて、生存および死亡細胞の割合を決定した。結果を輪郭プロット（上部パネル）、ならびに生存（７ＡＡＤ陰性）および死亡（７ＡＡＤ陽性）細胞の割合（下部パネル）として示す。提示する結果は、ＲＡＮＫＬが化学療法治療の影響から悪性細胞を保護し、そしてデノスマブによるＲＡＮＫＬの中和が、治療に対する感受性を回復するように働くことを立証する。
【図３】配列  デノスマブ重鎖および軽鎖アミノ酸配列：  配列番号１：重鎖  配列番号２：軽鎖  ヒトＲＡＮＫＬアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＢ８６８１１．１）：  配列番号３：全長配列
【図４】デノスマブによるｐＲＡＮＫＬの中和に際しての、化学療法に対する悪性細胞の感受性増加  Ａ２７８０卵巣癌細胞（左）およびＭＣＦ１０Ａ乳癌細胞（右）を、ＲＡＮＫＬおよび化学療法耐性に関するその中和の影響を研究するモデルとして使用した。この目的に向けて、３０，０００の腫瘍細胞を、血小板およびデノスマブの存在下または非存在下で９６時間培養した。示す濃度のドキソルビシン（左）またはパクリタキセル（右）を、最後の２４時間添加した。次いで、各試料のＡＴＰ含量の分析（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイ、Ｐｒｏｍｅｇａ）によって、細胞生存度を決定した。未処理腫瘍細胞で得た値を１に設定した。
【発明を実施するための形態】
【００６９】
用語「アジュバント」は、本明細書において、例えば改善された療法のための、外科介入および／または放射療法中またはその後の癌治療を指すものとする。
用語「ネオアジュバント」は、本明細書において、例えば改善された療法のための、外科介入および／または放射療法前の癌治療を指すものとする。
【００７０】
用語「化学療法耐性」および「化学耐性」は、本明細書において交換可能に用いられ、そして化学療法で用いる剤に対してほとんどまたはまったく有意な検出可能な療法反応を示さない、腫瘍または癌細胞を指すものとする。
【００７１】
「化学療法耐性癌」は、本明細書において、癌細胞の増殖が、患者に対して許容されうる用量で、こうした癌を治療するために通常用いられる化学療法剤または化学療法剤の組み合わせによって、防止されるかまたは阻害されることが不可能な場合の、患者における癌と理解される。腫瘍は化学療法前に生得的に耐性であることも可能であるし、または最初は化学療法に感受性であった腫瘍により、耐性が治療中に獲得されることも可能である。薬剤耐性は、細胞死の所定のレベルを生じるために必要とされる抗癌薬剤の量によって定義可能である。臨床的薬剤耐性は、化学療法後の腫瘍サイズの減少の欠如として、または治療に対する最初の陽性反応後の、臨床的再発の発生としてのいずれかで、定義可能である。
【００７２】
用語「化学療法感受性」または「化学感受性」は、本明細書において交換可能に用いられ、そして化学療法で用いる剤に対して検出可能な療法反応を示す、腫瘍または癌細胞を指すものとする。
【００７３】
用語「化学療法感受性」は、本明細書において、化学療法剤の効果に反応性である、すなわち患者にとって許容されうる用量の前記化学療法剤によって癌細胞の増殖が防止可能である場合の、患者における癌と理解される。
【００７４】
「患者にとって許容されうる用量」によって、副作用のため、治療停止を引き起こさない用量を意味する。
用語「化学療法」は、本明細書において、例えば細胞再生に干渉することによって、癌に対して特異的な毒性効果を有する化学化合物での癌の治療を指すものとする。
【００７５】
用語「化学療法剤」は、本明細書において、活性物質、活性成分、あるいはそれぞれの薬剤または薬剤の組み合わせと理解され、そして腫瘍または癌細胞の成熟、成長または増殖を阻害するか、あるいは殺細胞を誘導する効果を有する抗新生物剤または抗腫瘍剤である。化学療法剤は、腫瘍または癌、例えば固形腫瘍または血液癌の発展または進行を阻害するかまたは逆転させることも可能である。
【００７６】
化学療法剤は、一般的に、細胞傷害性剤と理解され、そしてその作用様式によって分類される。抗新生物剤の多様なクラスには、特にＤＮＡ損傷剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗剤、有糸分裂阻害剤、および種々の抗新生物剤が含まれる。
【００７７】
ＤＮＡ損傷剤には、アルキル化剤およびトポイソメラーゼ阻害剤が含まれる。
アルキル化剤は、細胞中に存在する条件下で、多くの求核官能基をアルキル化する能力を有する。これらは、生物学的に関連する分子において、アミノ、カルボキシル、スルフィドリル、およびリン酸基と共有結合を形成することによって細胞機能を損なう。
【００７８】
抗腫瘍抗生物質には、アントラサイクリン、例えばドキソルビシン、および他の抗腫瘍抗生物質が含まれる。
代謝拮抗剤は、細胞の生存および分裂に必要な天然存在化合物に構造が似ている人工的化合物である。広い範囲の腫瘍細胞に対する最も重要な代謝拮抗剤の有効性は、ＤＮＡ合成に必要なプリンまたはピリミジンヌクレオシド合成経路の阻害に基づく。
【００７９】
有糸分裂阻害剤には、微小管に干渉し、それによって有糸分裂を阻害するかまたは停止する、例えばタキサン、例えばパクリタキセル、ドセタキセル、ミトキサントロン、ビンブラスチンおよびエストラムスチン、ならびにチューブリンの特定の部位に結合し、チューブリンの微小管への集合を阻害するビンカアルカロイドが含まれる。
【００８０】
用語「化学療法」は、本明細書において、腫瘍または癌疾患を患う患者への少なくとも１つの化学療法剤の投与を指すものとする。
用語、癌または腫瘍に関する「反応」または「反応性」は、本明細書において、こうした癌または腫瘍と診断された未治療患者に比較した際、あるいは前記治療の前の同じ被験体の臨床的パラメータに比較した際、少なくとも１つの関連する臨床的パラメータの改善がある、化学療法剤での治療の効果と理解される。
【００８１】
用語、化学療法剤での治療に対する「非反応」または「非反応性」は、本明細書において、臨床的パラメータの少なくとも１つの改善を経験していない、治療された癌患者を指すものとする。この用語はまた、療法に対する劣った反応も含み、これは、臨床的に有意または十分でない、非常に低レベルの反応を示す。例えば、化学療法剤治療に対する低反応性は、より少ない腫瘍縮小（例えばそれぞれの臨床研究の正の反応者または正の読み取り値に比較して）、または劣った生存によって反映されうる。
【００８２】
反応性または非反応性は、化学療法剤での患者のこうした治療およびそれぞれの臨床パラメータ、例えば全体の生存、無進行生存、疾患の等級または病期の評価に際して決定可能である。
【００８３】
反応性または非反応性はまた、それぞれの癌または腫瘍の細胞、例えば患者の癌または腫瘍の試料から得た細胞を用いたｅｘ  ｖｉｖｏアッセイによって予測可能である。化学療法剤に対するそれぞれの反応を示すパラメータは、例えばリン酸化状態を含む、細胞の生命維持特性または機能から得られうる。あるいは、生存、損傷または死亡細胞を決定し、そして区別するために、細胞を視覚的に調べることも可能である。
【００８４】
特定の例にしたがって、化学療法に対する患者の反応またはそれぞれの化学耐性は、クローン性細胞株、または患者の癌性組織の試料、例えば患者の原発性腫瘍由来の試料を使用して、免疫不全マウス内に移植した、患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルを用いて好適に決定される。こうしたＰＤＸモデルは、療法の有効性を調べることを可能にするが、また、治療に反応した癌生物学の基本的見解（ｔｅｎｅｔ）、例えば癌遺伝子発現プロファイルを調べることも可能にするであろう。
【００８５】
典型的には、特定の癌タイプの化学療法は、臨床試験からの実験的情報に基づいて提供されるが、患者間の化学感受性の不均一性は、周知の現象である。したがって、患者反応と前向きに相関させた腫瘍化学感受性アッセイが提供される（例えばＣｒｅｅら  １９９６  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ；７（６）：６３０−５）。多様な化学療法剤に対する所定の患者の固形腫瘍の感受性および耐性を予測するよう設計される、いくつかのｅｘ  ｖｉｖｏアッセイが当該技術分野で利用可能である。例えば、患者固形腫瘍の部分、例えば生検を、機械的に脱凝集させて、そして初代培養を確立し、ここで悪性上皮細胞は、腫瘍外植片から遊走して、単層を形成する。培養を上皮と検証し、そして増加する用量の選択した化学療法剤に曝露することも可能である。処理後に残った生存細胞数を、例えば自動化細胞計数ソフトウェアを用いて、顕微鏡で計数してもよい。処理したウェル中の生じた細胞数を、未処理対照ウェルのものと比較して、所定の患者標本上で試験した各化学療法剤に関する用量−反応曲線を生成することも可能である。各用量−反応曲線の特徴を用いて、各々のｅｘ  ｖｉｖｏ処理に対する腫瘍反応を、「反応性」、「中程度の反応」、または「非反応性」とスコア付けすることも可能である。総合して、こうしたスコアを用いて、腫瘍学者が治療決定を行う際に補助することも可能である。
【００８６】
化学療法剤での以前のまたは第一の治療が正の反応を生じるのに失敗した場合、本明細書に記載するような、異なる化学療法剤または併用治療のいずれかを用いた、本明細書において「セカンドライン治療」と理解されるさらなる治療ラインが、必要とされる可能性もある。セカンドライン治療は、本明細書において、特に、最初のまたは以前の治療（例えばファーストライン療法）が働かないかまたは作用を停止した場合に投与される治療と理解される。用語「セカンドライン」には、特に、第一のまたは以前の治療後の任意のさらなる治療ラインが含まれる。したがって、該用語には、ファーストライン治療後の任意のセカンドライン治療、およびセカンドライン治療に続きうる任意のさらなる１またはそれより多い治療ラインが含まれる。
【００８７】
ファーストライン療法またはさらなる療法ラインは、典型的には、有効性、安全性、および許容性のその最適に利用可能な組み合わせに関する臨床試験の証拠に基づいて正式に推奨されるか、または医師の臨床的経験に基づいて選択されるかのいずれかのため、他のオプションよりも選択される。化学療法が、問題を解決するのに失敗するか、または許容されえない副作用を生じるか、いずれかである場合、追加のさらなる（セカンドライン）療法で置換するかまたはさらなる療法を治療措置に付加してもよい。
【００８８】
用語「転移」は、本明細書において、例えば元来のまたは原発性腫瘍から離れた、続発性部位への悪性腫瘍の伝播を指すものとする。これは、通常、原発性腫瘍から癌細胞が脱離し、体の循環に進入し、そして体内のどこか別の場所で、正常組織に定着し、組織内で増殖することを伴う。こうした原発性腫瘍は、癌起源の部位で増殖している腫瘍と理解される。造血性疾患（白血病、リンパ腫および骨髄腫）は、診断時点で播種されていると見なされる。しかし、造血性癌は、転移性腫瘍もまた形成しうる。稀ではあるが、血液およびリンパ系癌の肺、心臓、中枢神経系、および他の組織への転移が報告されている。転移性腫瘍細胞は、転移を生じる能力を有する細胞と理解されるか、またはすでに転移性腫瘍の一部である。
【００８９】
特に、原発性癌細胞および／または転移は、本明細書において、例えば標準的免疫組織化学またはＰＣＲに基づく方法によって決定した際に、ＲＡＮＫ陽性である。
原発性間葉系腫瘍の例は、例えば筋肉、線維性組織、および血管組織に由来する、軟組織腫瘍である。
【００９０】
原発性中胚葉および／または外胚葉腫瘍は、それぞれ、黒色腫および／またはエナメル上皮腫、ならびに肺の原始神経外胚葉腫瘍である。
代表的な原発性上皮細胞癌には、とりわけ、乳癌、前立腺癌、肺癌、膀胱癌、子宮癌、卵巣癌、脳癌、頭頸部癌、食道癌、膵臓癌、胃癌、生殖細胞癌、および結腸直腸癌が含まれる。
【００９１】
特定の重要なＲＡＮＫ陽性腫瘍疾患は、乳癌、膵臓癌、胃癌、食道癌、腎細胞癌、肺癌、結腸／直腸／結腸直腸癌、黒色腫、前立腺癌、頭頸部癌、またはＲＡＮＫ陽性腫瘍実体に関連する他の疾患である。
【００９２】
血液癌の中には、白血病、リンパ腫、または骨髄腫がある。
白血病を患う患者は、本明細書に記載するような抗ＲＡＮＫＬ治療から特に利益を得る可能性があり、これは、白血病細胞へのＲＡＮＫシグナル伝達が、例えばその増殖潜在能力を増進し、そして／または例えば化学療法および／またはキナーゼ阻害剤を用いて、抗癌療法介入に対するその耐性を改変することも可能であるためである。
【００９３】
癌および原発性腫瘍のために治療される患者は、しばしば、癌に関連する最小限の残渣疾患を保持する。すなわち、患者が、治療に反応して、臨床的測定値により、疾患の完全な寛解を有しうる場合であってさえ、破壊を逃れた癌細胞のわずかな分画が残る可能性もある。残渣集団のタイプおよびサイズは、患者の連続した治療のための重要な予後要因である。
【００９４】
特定の態様において、患者は、一次癌療法（例えば化学療法、放射線療法および／または手術）後、最小限の残渣疾患を有する。本明細書に記載するようなアンタゴニスト剤は、最小残渣疾患を治療する、そして／または維持療法としての、例えば別の癌治療の中止後の延長されたまたは拡張された療法としての、特に細胞減少療法または他の療法介入、例えば免疫療法と組み合わされるであろう。さらに、アンタゴニスト剤は、癌または腫瘍の再増殖または再発、あるいは転移性疾患における転移形成の再発を、例えば少なくとも１ヶ月またはそれより長く遅延させるであろう。
【００９５】
用語「患者」は、本明細書において、温血哺乳動物、特にヒトを指すものとする。特に、本明細書に記載するような医学的使用、または治療のそれぞれの方法は、癌、腫瘍または転移性疾患の予防または治療の必要がある患者に当てはまる。患者は、初期段階または後期段階の疾患を患うことも可能であり、あるいはそうでなければ患者は、例えば遺伝的素因によって、こうした疾患の素因がある。
【００９６】
ＲＡＮＫＬ阻害剤は、本明細書において、特に、薬学的組成物中で提供される。用語「薬学的組成物」は、本明細書において、ヒトに投与するために適した組成物、すなわち薬学的に許容されうる構成要素を含有する組成物を指すものとする。好ましくは、薬学的組成物は、活性化合物またはその塩を、キャリアー、希釈剤または薬学的賦形剤、例えば緩衝剤、または浸透圧修飾剤と共に含む。
【００９７】
保存のために調製された安定な薬学的組成物が意図される。特定の態様において、所望の度合いの純度を有する剤を、薬学的に許容されうるキャリアー、賦形剤または安定化剤と混合し、そして凍結乾燥配合物、水溶液または水中油エマルジョンとして提供する。典型的には、こうした組成物は、許容されうる薬学的実施によって知られ、そして要求されるような、薬学的に許容されうるキャリアーを含む。例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  第１６版（１９８０）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏを参照されたい。こうしたキャリアーの例には、場合によって適切な緩衝剤で、５〜８の範囲内のｐＨに緩衝された、滅菌キャリアー、例えば生理食塩水、リンゲル溶液またはデキストロース溶液が含まれる。
【００９８】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に用いられるべき配合物は滅菌される必要があるであろう。これは、無菌濾過膜を通じた濾過または他の適切な方法によって容易に達成される。
本明細書に記載するような使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤を含む薬学的組成物の投与は特に、全身経路によるかまたは非経口投与により、例えば静脈内、筋内または皮下経路によるが、また経口、鼻内、耳内（ｉｎｔｒａｏｔｉｃａｌｌｙ）、経皮、粘膜、局所（例えばジェル、軟膏、ローション、クリーム等）、腹腔内、筋内、肺内、膣、非経口、直腸または眼内投与もある。非経口投与のために用いられるような例示的な配合物には、例えば無菌溶液または懸濁物としての、静脈内、筋内、または皮下注射に適したものが含まれる。
【００９９】
特に、例えば静脈内注入としてまたはボーラス注射としての静脈内投与が好ましい。デノスマブは、皮下経路によって投与されるべきであることが知られる。化学耐性治療の新規指示において、デノスマブ剤は、特に、長期間、循環において利用可能であるように投与され、したがって、皮下経路は特により好ましくないかまたは回避される。
【０１００】
本発明には、活性剤として、療法的有効量のＲＡＮＫＬ阻害剤を含有する薬学的調製物が含まれる。
用語「療法的有効量」は、本明細書において、用語、本明細書に記載するようなＲＡＮＫＬ阻害剤の「有効量」または「十分量」のいずれかと交換可能に用いられ、被験体に投与された際、臨床結果を含む有益なまたは望ましい結果を達成するために十分な量または活性であり、そしてこうしたものとして、有効量またはその同義語は、適用される背景に応じる。疾患背景において、ＲＡＮＫＬ阻害剤の療法的有効量を用いて、例えば少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％のいずれかで、化学療法剤の療法的有効用量を実質的に減少させるため；あるいは化学療法の頻度または治療サイクル数を有意に減少させるため；あるいは転移性疾患を防止するかまたは治療するため、化学耐性の下方制御または減少から利益を受ける疾患または状態を治療するか、調節するか、減弱させるか、逆転させるか、またはこれらに影響を及ぼすことも可能である。有効量は、こうした疾患または障害を治療するか、防止するかまたは阻害するために十分な化合物の量を意味するよう意図される。こうした量に相当するＲＡＮＫＬ阻害剤の量は、多様な要因、例えば投与される薬剤または化合物、薬学的配合物、投与経路、疾患または障害のタイプ、治療中の被験体または宿主の同一性等によって多様であろうが、にもかかわらず、当業者によってルーチンに決定可能である。
【０１０１】
さらに、ＲＡＮＫＬ阻害剤の療法的有効量での被験体（癌患者）の治療または防止措置は、単回投与からなることも可能であるし、または一連の適用を含むことも可能である。例えば、ＲＡＮＫＬ阻害剤を少なくとも年１回、少なくとも半年に１回または少なくとも月１回、投与してもよい。しかし、別の態様において、ＲＡＮＫＬ阻害剤を、所定の治療のため、ほぼ週１回〜ほぼ毎日、被験体に投与してもよい。治療期間の長さは、多様な要因、例えば疾患の重症度、患者の年齢、アンタゴニスト剤の濃度および活性に応じる。また、治療または予防に用いる有効投薬量が、特定の治療または予防措置の経過に渡って増加するかまたは減少することも可能であることもまた認識されるであろう。投薬量の変化が生じてもよく、そしてこれは当該技術分野に知られる標準診断アッセイによって明らかになりうる。いくつかの例において、長期投与が必要でありうる。
【０１０２】
治療の必要があるヒト患者に提供されるようなＲＡＮＫＬ阻害剤の療法的有効量は、特に、０．５〜１０００ｍｇ、好ましくは１〜４００ｍｇ、さらにより好ましくは、最大３００ｍｇ、最大２００ｍｇ、最大１００ｍｇまたは最大１０ｍｇでありうるが、例えば急性疾患状態を治療するためには、例えば外科介入のために準備する際、または外科介入の直後、手術後１〜７日以内に治療を開始する場合には、より高い用量が必要とされる可能性もある。皮下用量は、典型的には、０．５〜４００ｍｇの範囲内である。
【０１０３】
用語「治療」は、本明細書において、常に、予防的（すなわち疾患または疾患状態を防止する）または療法的（すなわち疾患または疾患状態を治療する）目的で、患者を治療することを指すものとする。患者の治療は、典型的には、癌の場合、療法的であろう。しかし、例えばＲＡＮＫ−ＲＡＮＫＬシグナル伝達効果に依存する、疾患進行のリスクあるいは続発性疾患状態または副作用を発展させるリスクがある、原発性疾患を患う患者の場合、治療は予防的であってもよい。予防のためのこうした治療もまた、本明細書において、例えば療法的有効量を使用した、治療または療法と称される。
【０１０４】
本明細書において、ＲＡＮＫＬ阻害剤は、限定されるわけではないが、標準治療、例えば悪性疾患を治療するための化学療法を含む、１またはそれより多い他の療法剤と組み合わせて投与される。
【０１０５】
用語「組み合わせて」は、投与に言及して用いた場合、本明細書において、限定されるわけではないが、２つの化合物、ＲＡＮＫＬ阻害剤および化学療法剤を含む、少なくとも２つの化合物の同時のあるいは本質的に同時のまたは連続した投与と理解される。こうした化合物を、互いに連続して投与してもよく、用語「組み合わせて」は、投与の順序を限定せず；化合物が、別の化合物の投与より前または後のいずれに投与される場合も含む。化合物はまた、どちらも本質的に同じ時または同時に投与される場合、別の化合物と「組み合わせて」投与されてもよく、これには、例えば適切な場合、どちらの化合物も単一投薬型として配合される場合が含まれる。別個の投薬型として配合される場合、投与は、本明細書にさらに記載するように、同じまたは異なる投与経路を通じてであってもよい。
【０１０６】
併用療法において、ＲＡＮＫＬ阻害剤を混合物として、あるいは１またはそれより多い他の療法措置と同時に、例えば化学療法の前、同時（同時発生的）または後に投与してもよい。同時投与は特に、短い期間、例えば１または２週以内での一方の後に他方の、同じ時点またはほぼ同じ時点での投与を含む。
【０１０７】
ＲＡＮＫＬ阻害剤の生物学的特性は、細胞、組織および全生物実験において、ｅｘ  ｖｉｖｏで特徴付けられることも可能である。当該技術分野に知られるように、疾患または疾患モデルに対する治療のための薬剤有効性を測定するか、あるいは薬剤の薬物動態学、薬力学、毒性、および他の特性を測定するため、薬剤は、しばしば、限定されるわけではないが、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、およびサルを含む動物において、ｉｎ  ｖｉｖｏで試験される。動物は、疾患モデルと称されることも可能である。療法は、しばしば、限定されるわけではないが、ヌードマウス、ＳＣＩＤマウス、異種移植マウス、およびトランスジェニックマウス（ノックインおよびノックアウトを含む）を含む、マウスにおいて試験される。こうした実験は、適切な半減期、エフェクター機能、アポトーシス活性およびＩｇＧ阻害活性を持つ療法剤として用いられるべき剤の潜在能力の決定のため、有意義なデータを提供しうる。任意の生物、好ましくは哺乳動物が試験に使用可能である。例えば、ヒトに対するその遺伝的類似性のため、霊長類、サルが適切な療法モデルである可能性があり、そしてしたがって活性剤の有効性、毒性、薬物動態学、薬力学、半減期または他の特性を試験するために使用可能である。最終的には、薬剤としての認可のため、ヒトにおける物質の試験が必要であり、そしてこれらの実験が本明細書に意図される。したがって、活性剤を動物モデルまたはヒトにおいて試験して、その療法的有効性、毒性、免疫原性、薬物動力学、および／または他の臨床特性を決定することも可能である。デノスマブは、よく確立された生物学的特性を持つ商業的に入手可能な製品であるが、化学耐性癌細胞を再増感させる効果は、驚くべきものであることがわかった。
【０１０８】
用語「ＲＡＮＫＬ阻害剤」は、本明細書において、ＲＡＮＫＬ特異的アンタゴニスト剤を指すものとし、本明細書において、また、「アンタゴニスト性ＲＡＮＫＬ阻害剤」と称され、特に、ＲＡＮＫＬを実質的に中和し、そして／またはＲＡＮＫＬのその受容体ＲＡＮＫへの結合を減少させるかまたは阻害し、それによってＲＡＮＫ−ＲＡＮＫＬシグナル伝達経路をアンタゴナイズし、そして／またはＲＡＮＫＬを実質的に中和させ、そして／またはロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体４（ＬＧＲ４、ＧＰＲ４８とも称される）である受容体へのＲＡＮＫＬの結合を阻害する化合物である。Ｌｕｏら  ２０１６，  Ｎａｔ  Ｍｅｄ，  ２２（５）：５３９−４６を参照されたい。
【０１０９】
ＲＡＮＫＬ阻害剤のアンタゴニスト機能は、特に、アゴニスト（ＲＡＮＫＬ）によって活性化される受容体（例えばＲＡＮＫまたはＬＧＲ４）に対する細胞反応を減少させるか、阻害するかまたは防止することによって特徴付けられる。アンタゴニストは特に、競合性アンタゴニストであり、同じ結合部位でＲＡＮＫＬに可逆的に結合可能であるか、または、必ずしも受容体を活性化することなく、内因性受容体として、結合部位（活性部位）と干渉することが可能である。
【０１１０】
さらに、ＲＡＮＫＬアンタゴニストはまた、ｍＲＡＮＫＬを発現する腫瘍細胞内へのＲＡＮＫＬ逆シグナル伝達の影響を防止するよう働くことも可能である。これは、限定されるわけではないが、免疫阻害性サイトカインのＲＡＮＫＬ誘導性分泌、上皮間葉移行（ＥＭＴ）の誘導、化学療法耐性、および免疫回避を含む（Ｓｃｈｍｉｅｄｅｌら，  ２０１３，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  １５：１９０（２）：８２１−３１）。
【０１１１】
ＲＡＮＫＬ阻害剤は、任意の適切な結合剤またはリガンドであってもよく、例えば有機または無機小分子、炭水化物、生物学的巨大分子、ペプチド、タンパク質（本明細書においてまたポリペプチドとも称される）、ペプチド類似体、ペプチド模倣体、抗体の抗原結合断片を含む抗体、核酸、核酸類似体、および前述のいずれかの組み合わせからなる群より選択される。いくつかの態様において、ＲＡＮＫＬ阻害剤は、免疫療法剤である。ＲＡＮＫＬ阻害剤の特定の例は、抗体、受容体またはオステオプロテジェリン（アゴニスト性ＲＡＮＫＬのその受容体ＲＡＮＫへの結合を回避するため、不活性であるかまたは不活性にされている）、受容体融合タンパク質、例えばＲＡＮＫ−Ｆｃ融合タンパク質、ペプチド、アプタマー、または小分子からなる群より選択される。
【０１１２】
アンタゴニスト性ＲＡＮＫＬ阻害剤を産生し、そして特徴付けるための方法は、当該技術分野に周知である。好ましい態様において、アンタゴニスト性結合剤を産生し、そして１またはそれより多い細胞に基づくアッセイを用いて、あらかじめ定義した特性に関してスクリーニングする。こうしたアッセイはしばしば、結合剤に対する細胞の反応、例えば細胞生存、細胞死、細胞形態の変化、免疫阻害性サイトカインのＲＡＮＫＬ誘導性分泌、ＥＭＴ誘導、化学療法耐性、および免疫回避、あるいは転写活性化、例えば天然遺伝子またはレポーター遺伝子の細胞発現の監視を伴う。
【０１１３】
組換えポリペプチドＲＡＮＫＬ阻害剤の産生は、好ましくは、例えばポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む発現構築物またはベクターを含む、組換えポリペプチドを産生するための発現系を使用する。
【０１１４】
１つの態様において、アンタゴニスト性ＲＡＮＫＬ阻害剤は、例えば潜在的な薬剤候補を含有するコンビナトリアルライブラリー（ランダムまたはセミランダム）、例えばペプチドライブラリー、抗体ライブラリー、または化学化合物ライブラリーを使用するスクリーニングを含む、薬剤発見プロセスを通じて、同定される。スクリーニングは、例えばフローサイトメトリーを用いたハイスループット方式で実行可能であり、そして場合によって、活性および非活性またはブロッキングされたＲＡＮＫ／ＲＡＮＫＬ相互作用の間を区別することも可能である。生物学的スクリーニングは、ＲＡＮＫＬを特異的にターゲティングする新規アンタゴニスト剤の発見を目的としてもよい。
【０１１５】
ＲＡＮＫ−ＲＡＮＫＬシグナル伝達、またはＲＡＮＫＬ−ＬＧＲ４相互作用を「実質的に減少させるかまたは阻害する」によって、アンタゴニスト性ＲＡＮＫＬ阻害剤が（ｉ）ＲＡＮＫＬのその受容体への結合を５０％以上、好ましくは６０％、７０％、８０％、９０％または９５％以上阻害するか、あるいは完全にこうした結合を阻害し；そして／または（ｉｉ）ＲＡＮＫＬ誘導性経路を機能的に阻害し、そして特に、ＲＡＮＫ刺激後のシグナル伝達、例えば転移形成に関与する、ＭＡＰＫ（マイトジェン活性化プロテインキナーゼ）またはＳＲＣキナーゼ、またはＮＦ−κＢシグナルの活性を阻害することを意味する。こうした機能的阻害は、例えば、約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または９５％以上、転移形成を阻害するか、あるいは完全に阻害する。
【０１１６】
あるいは、機能的阻害は、ｅｘ  ｖｉｖｏで決定してもよく、例えば標準アッセイにおいて、Ｅｒｋ１／２およびＳｒｃの活性化によってもたらされる細胞骨格再編成を通じた、癌細胞の遊走を決定することも可能である。特に、腫瘍細胞の遊走および浸潤潜在能力は、多孔性および／または細胞外マトリックス模倣バリアを通過した細胞の部分を決定することによって測定可能である。こうした機能的阻害は、例えば、約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または９５％以上、遊走および／または浸潤を阻害し、あるいは完全に阻害する。
【０１１７】
機能的阻害はまた、例えば定量的ＰＣＲに基づく方法によって、Ｅ−カドヘリン、クローディン、ＳＮＡＩＬ、またはフィブロネクチンのいずれかを決定して、ＲＡＮＫＬをターゲティングすることによる上皮間葉移行（ＥＭＴ）遺伝子シグネチャー、特に癌細胞における転移関連遺伝子の下方制御を測定することによっても決定可能である。
【０１１８】
用語「抗体」は、本明細書において、リンカー配列を伴うまたは伴わない、免疫グロブリンの重鎖および／または軽鎖の定常および／または可変ドメインと理解される、抗体ドメインからなるかまたは該ドメインを含む、ポリペプチドまたはタンパク質を指すものとする。抗体は、本明細書において、ＲＡＮＫＬ抗原あるいはこうした抗原の１またはそれより多いエピトープに結合する特異的抗原結合部位を有し、特に、単一可変抗体ドメインのＣＤＲ結合部位、例えばＶＨ、ＶＬまたはＶＨＨ、あるいは可変抗体ドメインの対の結合部位、例えばＶＬ／ＶＨ対、ＶＬ／ＶＨドメイン対および定常抗体ドメインを含む抗体、例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）、（Ｆａｂ）２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、あるいは全長抗体である。
【０１１９】
本発明にしたがって、特定の抗体形式を用いてもよく、例えば、単一可変抗体ドメイン、例えばＶＨ、ＶＬまたはＶＨＨ、あるいは可変抗体ドメイン対を含む、連結配列またはヒンジ領域を伴うまたは伴わない、可変および／または定常抗体ドメインの組み合わせ、例えばＶＬ／ＶＨ対、ＶＬ／ＶＨドメイン対および定常抗体ドメインを含むかまたはこれらからなる抗体、例えば重鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）、（Ｆａｂ）２、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、Ｆｖ、あるいは例えばＩｇＧ型（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブタイプ）、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭ抗体の全長抗体を用いてもよい。用語「全長抗体」は、Ｆｃドメインの少なくとも大部分および天然存在抗体単量体に一般的に見られる他のドメインを含む、任意の抗体分子を指すよう使用可能である。この句は、本明細書において、特定の抗体分子が抗体断片でないことを強調するために用いられる。
【０１２０】
用語「抗体」には、特に、異なるターゲット抗原に対して向けられるかまたは抗体ドメインの異なる配置を含む他の抗体を実質的に含まない、単離型の抗体が含まれるものとする。それでもなお、単離抗体は、例えば少なくとも１つの他の抗体、例えば異なる特異性を有するモノクローナル抗体または抗体断片を含む、単離抗体の組み合わせを含有する、組み合わせ調製物中に含まれることも可能である。
【０１２１】
用語「抗体」は、ヒト種を含む、例えば哺乳動物、例えばヒトまたはネズミ、あるいは鳥類、例えば雌鶏などの動物起源の抗体に当てはまり、該用語には特に、動物起源の配列、例えばヒト配列に基づく組換え抗体が含まれるものとする。
【０１２２】
用語「抗体」は、さらに、異なる種起源の配列、例えばネズミおよびヒト起源の配列を持つキメラ抗体に当てはまる。
用語、抗体に関する「キメラ」は、本明細書において、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列各々の１つの部分が、特定の種に由来するかまたは特定のクラスに属す抗体中の対応する配列に相同である一方、鎖の残りの部分が、別の種またはクラスの対応する配列に相同である抗体を指す。典型的には、軽鎖および重鎖両方の可変領域は、哺乳動物の１つの種由来の抗体の可変領域を模倣する一方、定常部分は、別のもの由来の抗体の配列に相同である。例えば、可変領域は、非ヒト宿主生物由来の容易に入手可能なＢ細胞またはハイブリドーマを用いて現在知られる供給源から得られることも可能であり、例えばヒト細胞調製物由来の定常領域と組み合わされる。
【０１２３】
用語「抗体」は、さらに、ヒト化抗体に当てはまりうる。
用語「ヒト化」は、本明細書において、非ヒト種由来の免疫グロブリンに実質的に由来する抗原結合部位を有し、分子の残りの免疫グロブリン構造は、ヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づく分子を指す。抗原結合部位は、定常ドメインに融合した完全可変ドメインを含むか、または可変ドメイン中の適切なフレームワーク領域（ＦＲ）上に移植された相補性決定領域（ＣＤＲ）のみを含むか、いずれであってもよい。抗原結合部位は、野生型、あるいは１またはそれより多いアミノ酸置換によって修飾されていてもよく、好ましくはヒト免疫グロブリンにより近く似るように修飾されてもよい。ヒト化抗体のいくつかの型は、すべてのＣＤＲ配列を保持する（例えば、マウス抗体由来の６つのＣＤＲすべてを含有するヒト化マウス抗体）。他の型は、元来の抗体に関して改変された１またはそれより多いＣＤＲを有する。
【０１２４】
用語「抗体」は、さらにヒト抗体に当てはまる。
抗体に関して用いられる用語「ヒト」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変および定常領域を有する抗体を含むと理解される。本発明のヒト抗体には、例えばＣＤＲにおける、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列にコードされないアミノ酸残基（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏでのランダムまたは部位特異的突然変異誘発によって、あるいはｉｎ  ｖｉｖｏでの体細胞突然変異によって導入される突然変異）が含まれてもよい。ヒト抗体には、ヒト免疫グロブリンライブラリーから、あるいは１またはそれより多いヒト免疫グロブリンに関してトランスジェニックである動物から単離された抗体が含まれる。
【０１２５】
用語「抗体」は、特に、任意のクラスまたはサブクラスの抗体に当てはまる。重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、抗体は、抗体ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭの主要クラスに割り当てられることも可能であり、そしてこれらのいくつかはさらに、サブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２に分けられうる。
【０１２６】
該用語はさらに、モノクローナルまたはポリクローナル抗体、特に組換え抗体に当てはまり、該用語には、組換え手段によって調製されるか、発現されるか、生成されるか、または単離されるすべての抗体および抗体構造、例えば異なる起源由来の遺伝子または配列を含む動物、例えばヒトを含む哺乳動物から生じる抗体、例えばネズミ、キメラ、ヒト化抗体、またはハイブリドーマ由来抗体が含まれる。さらなる例は、抗体を発現するよう形質転換された宿主細胞から単離された抗体、あるいは抗体または抗体ドメインの組換えコンビナトリアルライブラリーから単離された抗体、あるいは抗体遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う、任意の他の手段によって調製されるか、発現されるか、生成されるかまたは単離された抗体を指す。
【０１２７】
抗体ドメインは、天然構造であってもよいし、あるいは突然変異誘発または誘導体化によって修飾されて、例えば抗原結合特性または任意の他の特性、例えば安定性または機能特性、例えばＦｃ受容体ＦｃＲｎおよび／またはＦｃガンマ受容体（ＦＣＧＲ）への結合が修飾されていてもよい。ポリペプチド配列は、ループ配列によって連結される抗体ドメイン構造の少なくとも２つのベータ鎖からなるベータ−バレル構造を含む場合、抗体ドメインと見なされる。
【０１２８】
用語「抗体」はまた、抗体誘導体、特に本明細書において、抗体の機能的変異体とも称される機能的活性誘導体も指すことが理解される。抗体誘導体は、抗体の任意のドメインが、１またはそれより多い他のタンパク質、例えば他の抗体の任意の位、例えばＣＤＲループを含む結合構造、受容体ポリペプチドと融合されていてもよいが、またリガンド、足場タンパク質、酵素、毒素等とも融合されていてもよい、１またはそれより多い抗体ドメインまたは抗体および／または融合タンパク質の任意の組み合わせと理解される。抗体の誘導体は、多様な化学技術、例えば共有カップリング、静電相互作用、ジスルフィド結合等による、他の物質との会合または結合によって、得られうる。抗体に結合する他の物質は、脂質、炭水化物、核酸、有機および無機分子またはその任意の組み合わせ（例えばＰＥＧ、プロドラッグまたは薬剤）であってもよい。特定の態様において、抗体は、例えば抗体−薬剤コンジュゲートを得るため、薬剤を含む誘導体である。特に、抗体は、タグとともに使用可能である。したがって、抗体は、例えばｉｎ  ｖｉｖｏ診断剤として使用するためを含む、分析または診断目的などのため、タグを含む誘導体であってもよい。タグがターゲット抗原への抗体の結合に全く影響がないか許容しうる負の影響しかない限り、使用可能なタグに関する特定の制限はない。適切なタグの例には、Ｈｉｓタグ、Ｍｙｃタグ、ＦＬＡＧタグ、Ｓｔｒｅｐタグ、カルモジュリン−タグ、ＧＳＴタグ、ＭＢＰタグおよびＳタグが含まれる。別の特定の態様において、抗体は、標識を含む誘導体である。用語「標識」は、本明細書において、「標識」抗体を生じるように、抗体に直接または間接的にコンジュゲート化される検出可能な化合物または組成物を指す。標識は、それ自体検出可能であってもよく、例えば放射性同位体標識または蛍光標識でもよく、あるいは酵素標識の場合、標識は、検出可能な基質化合物または組成物の化学的改変を触媒してもよい。
【０１２９】
用語、誘導体にはまた、例えば特定のグリコシル化パターンを持つ、例えば糖操作によって産生された、機能的であり、そして例えば特異的ターゲットに結合して、機能的変異体として働きうる、抗体の断片、変異体、類似体または相同体も含まれる。
【０１３０】
用語、抗体配列に関する「糖操作された」は、糖操作の結果として、修飾された免疫原性特性、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣを有するグリコシル化変異体を指すものとする。すべての抗体は、重鎖定常領域の保存された位で炭水化物構造を含有し、各アイソタイプは、異なるアレイのＮ連結炭水化物構造を所持し、これらは、タンパク質集合、分泌または機能活性に多様な影響を及ぼす。ＩｇＧ１型抗体は、各ＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に保存されたＮ連結グリコシル化部位を有する糖タンパク質である。Ａｓｎ２９７に付着した２つの複雑な二分岐オリゴ糖が、ＣＨ２ドメインの間に包埋され、ポリペプチド主鎖と広範囲の接触を形成し、そしてその存在は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）などのエフェクター機能を抗体が仲介するために必須である。例えばＮ２９７の例えばＡへの、またはＴ２９９の突然変異を通じた、Ｎ２９７でのＮ−グリカンの除去は、典型的には、ＡＤＣＣが減少した無グリコシル化抗体を生じる。
【０１３１】
抗体グリコシル化の大きな相違は、細胞株間で起こり、そして異なる培養条件下で増殖させた所定の細胞株に関してさえ、軽微な相違が見られる。細菌細胞における発現は、典型的には、無グリコシル化抗体を提供する。
【０１３２】
抗体は、活性Ｆｃ部分を欠くことも可能であり、したがって、ＦＣＧＲ結合部位を持たない抗体ドメインで構成され、特にＣＨ２およびＣＨ３ドメインの鎖を欠く任意の抗体を含むか、あるいは例えばＦｃエフェクター機能を減少させる、特にＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を無効にするかまたは減少させる修飾によって、Ｆｃエフェクター機能を欠く抗体ドメインを含むか、いずれかであることも可能である。こうした修飾は、Ｆｃエフェクター機能の減少またはＦｃエフェクター機能の欠如を達成するような、突然変異誘発、例えばＦＣＧＲ結合部位における突然変異によって、あるいは抗体のＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性に干渉する誘導体または剤によって、達成可能であり、これは、典型的には、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性によって測定した際の非修飾（野生型）抗体の１０％未満のＦｃエフェクター機能、好ましくは５％未満を指すと理解される。
【０１３３】
本発明の抗体は、Ｆｃエフェクター機能を示してもまたは示さなくてもよい。作用様式は、主に、Ｆｃエフェクター機能を伴わずに、腫瘍細胞微小環境におけるＲＡＮＫＬ−ＲＡＮＫシグナル伝達を阻害することによって仲介されるが、Ｆｃは、補体を補充し、そして免疫複合体形成を通じて、循環からのターゲット血小板−腫瘍細胞凝集物の排除を補助することも可能である。
【０１３４】
例示的な抗体は、例えばＦｃＲｎへの結合部位を維持し、それによってｉｎ  ｖｉｖｏで十分な半減期を持つ抗体を得るために、Ｆｃ断片またはＦｃ断片の少なくとも部分を含む。
【０１３５】
さらなる例は、ありうるＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性の減少を得るための、例えばＩｇＧ１からＩｇＧ２サブタイプへのスイッチによる、あるいはＦｃ受容体への結合を減少させる修飾による、例えばヒトＩｇＧ１  ＦｃにおけるＥ２３３Ｐおよび／またはＬ２３４Ｖおよび／またはＬ２３５Ａおよび／またはＤ２６５Ｇおよび／またはＡ３２７Ｑおよび／またはＡ３３０Ａおよび／またはＧ２３６、欠失および／またはＡ３２７Ｇおよび／またはＡ３３０Ｓによる、Ｆｃの修飾を指し、ここで番号付けはＫａｂａｔ［ＥＵインデックス］にしたがう。
【０１３６】
さらなる例は、例えばレクチン受容体への損なわれた結合を提供する、Ｎ２９７Ｑなどのグリコシル化部位ノックアウトによる、免疫原性を減少させる修飾を指す。
例示的な抗体は、デノスマブ、あるいはその機能的変異体、または例えばＩｇＧ２もしくは任意の他の免疫グロブリンタイプもしくはサブタイプのフレームワーク内に取り込まれた、その抗原結合断片である。例えば、デノスマブ抗原結合部位またはＣＤＲ配列は、Ｆｃエフェクター機能を伴いまたは伴わずに、ＩｇＧ１抗体内に取り込まれてもよい。
【０１３７】
用語「抗体」はまた、親ＣＤＲ配列の機能的活性ＣＤＲ変異体を含む抗体、および親抗体の機能的活性変異体抗体を含む、抗体の変異体も指す。例えば、デノスマブの機能的変異体を操作して、そして本明細書にさらに記載するように用いてもよい。
【０１３８】
特に、本発明の抗体由来の抗体変異体は、少なくとも１またはそれより多い（親抗体の）ＣＤＲ領域またはＣＤＲ変異体、例えば重鎖可変領域の少なくとも３のＣＤＲおよび／または軽鎖可変領域の少なくとも３のＣＤＲを、ＣＤＲまたはＦＲ領域の少なくとも１つにおける、あるいは重鎖（ＨＣ）または軽鎖（ＬＣ）の定常領域における少なくとも１つの点突然変異とともに含み、機能的に活性である、例えばＲＡＮＫＬ抗原に特異的に結合するものであってもよい。
【０１３９】
用語「変異体」は、特に、例えば特に抗体安定性、エフェクター機能または半減期を操作するため、定常ドメインにおいて、あるいは抗原結合特性を改善するため可変ドメインにおいて、例えば当該技術分野において利用可能なアフィニティ成熟技術によって、特定のアミノ酸配列または領域を欠失させ、交換し、これらに挿入物を導入するか、あるいはアミノ酸配列を化学的に誘導体化した、例えば突然変異誘発法によって得られる、突然変異抗体または抗体断片などの抗体を指すものとする。例えばランダム化技術によって得られる、所望の位での点突然変異を含む、任意の既知の突然変異誘発法が使用可能である。いくつかの例において、位は、ランダムに選択され、例えば任意のありうるアミノ酸、または抗体配列をランダム化するために好ましいアミノ酸の選択のいずれであってもよい。用語「突然変異誘発」は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列を改変するための任意の当該技術分野に認識される技術を指す。好ましいタイプの突然変異誘発には、エラープローンＰＣＲ突然変異誘発、飽和突然変異誘発、または他の部位特異的突然変異誘発が含まれる。
【０１４０】
用語、抗体の「機能的活性変異体」は、１またはそれより多いアミノ酸の挿入、欠失または置換による、あるいはアミノ酸配列中の１もしくはそれより多いアミノ酸残基またはヌクレオチド配列内のヌクレオチド、あるいは配列の遠位端のいずれかまたは両方、例えばＣＤＲ配列中のＮ末端および／またはＣ末端の１、２、３、または４アミノ酸、および／または中央の１、２、３、または４アミノ酸（すなわちＣＤＲ配列中央）の化学的誘導体化による、この配列（親抗体または親配列）の修飾から生じる配列を意味し、そしてこの修飾は、この配列の活性に影響を及ぼさず、特に損なわない。選択したターゲット抗原に対する特異性を有する結合部位の場合、抗体の機能的活性変異体はなお、あらかじめ決定した特異性、または実質的に同じ生物学的活性を有するが、これは、変化されてもよく、例えば特定のエピトープに対する細かい特異性、アフィニティ、アビディティ、ＫｏｎまたはＫｏｆｆ速度等が変化していてもよい。例えば、アフィニティ成熟抗体は、特に、機能的活性変異体抗体と理解される。したがって、アフィニティ成熟抗体における修飾ＣＤＲ配列は、機能的活性ＣＤＲ変異体と理解される。
【０１４１】
好ましくは、高アフィニティで、特に高いオンおよび／または低いオフ速度で、または高い結合アビディティで、ＲＡＮＫＬに結合する剤を用いる。結合アフィニティは、通常、解離定数（Ｋｄ、またはＫＤ）として知られる、結合部位の半分が占められる剤の濃度に関して特徴付けられる。通常、結合剤は、Ｋｄ＜１０−８Ｍ、好ましくはＫｄ＜１０−９Ｍで高アフィニティ結合剤と見なされ、さらにより好ましくはＫｄ＜１０−１０Ｍである。
【０１４２】
さらに、別の好ましい態様において、個々の抗原結合アフィニティは、中程度のアフィニティ、例えば少なくとも２つの抗原に結合した際、例えば１０−６Ｍ未満から最大１０−８ＭのＫｄである。
【０１４３】
用語「実質的に同じ生物学的活性」は、本明細書において、匹敵する抗体または親抗体に関して決定した際、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、例えば少なくとも１００％、または少なくとも１２５％、または少なくとも１５０％、または少なくとも１７５％、または例えば最大２００％の活性である、実質的に同じ活性によって示されるような活性を指す。
【０１４４】
好ましい態様において、親抗体の機能的活性変異体は
ａ）抗体の生物学的活性断片であって、分子の配列の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％、そして最も好ましくは少なくとも９７％、９８％、または９９％を含む断片であり；
ｂ）少なくとも１つのアミノ酸置換、付加および／または欠失によって抗体から得られ、ここで、機能的活性変異体は、少なくとも５０％の配列同一性、好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、さらにより好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、そして最も好ましくは少なくとも９７％、９８％または９９％の配列同一性の抗体など、抗体の分子またはその部分に配列同一性を有し；そして／または
ｃ）抗体またはその機能的活性変異体、およびさらにポリペプチドまたはヌクレオチド配列に異種性の少なくとも１つのアミノ酸またはヌクレオチドからなる。
【０１４５】
本発明の１つの好ましい態様において、本発明記載の抗体の機能的活性変異体は、上記の変異体と本質的に同一であるが、異なる種の相同配列に由来するように、それぞれそのポリペプチドまたはヌクレオチド配列と異なる。これらは、天然存在変異体または類似体と称される。
【０１４６】
用語「機能的活性変異体」にはまた、天然存在アレル変異体、ならびに突然変異体または任意の他の非天然存在変異体も含まれる。当該技術分野に知られるように、アレル変異体は、本質的にはポリペプチドの生物学的機能を改変しない、１またはそれより多いアミノ酸の置換、欠失、または付加を有すると特徴付けられる、（ポリ）ペプチドの代替型である。
【０１４７】
機能的活性変異体は、ポリペプチドまたはヌクレオチド配列の配列改変によって、例えば１またはそれより多い点突然変異によって得られることも可能であり、ここで配列改変は、本発明の組み合わせで用いた際、改変されないポリペプチドまたはヌクレオチド配列の機能を保持するかまたは改善する。こうした配列改変には、限定されるわけではないが、（保存的）置換、付加、欠失、突然変異および挿入が含まれることも可能である。
【０１４８】
保存的置換は、側鎖および化学的特性において関連するアミノ酸ファミリー内で行われるものである。こうしたファミリーの例は、塩基性側鎖、酸性側鎖、非極性脂肪族側鎖、非極性芳香族側鎖、非荷電極性側鎖、小分子側鎖、大分子側鎖等を持つアミノ酸である。
【０１４９】
点突然変異は、特に、異なるアミノ酸に関する、１またはそれより多い単一アミノ酸（非保存的）または２つ組のアミノ酸の置換または交換、欠失または挿入における非操作アミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列の発現を生じるポリヌクレオチドの操作と理解される。
【０１５０】
好ましい点突然変異は、同じ極性および／または電荷のアミノ酸の交換を指す。これに関連して、アミノ酸は、６４のトリプレットコドンによってコードされる、２０の天然存在アミノ酸を指す。これらの２０のアミノ酸は、中性電荷、陽性電荷、および陰性電荷を有するものに分けられうる：
「中性」アミノ酸を、それぞれの３文字および１文字コードおよび極性とともに以下に示す：
アラニン：（Ａｌａ、Ａ）非極性、中性；
アスパラギン：（Ａｓｎ、Ｎ）極性、中性；
システイン：（Ｃｙｓ、Ｃ）非極性、中性；
グルタミン：（Ｇｌｎ、Ｑ）極性、中性；
グリシン：（Ｇｌｙ、Ｇ）非極性、中性；
イソロイシン：（Ｉｌｅ、Ｉ）非極性、中性；
ロイシン：（Ｌｅｕ、Ｌ）非極性、中性；
メチオニン：（Ｍｅｔ、Ｍ）非極性、中性；
フェニルアラニン：（Ｐｈｅ、Ｆ）非極性、中性；
プロリン：（Ｐｒｏ、Ｐ）非極性、中性；
セリン：（Ｓｅｒ、Ｓ）極性、中性；
スレオニン：（Ｔｈｒ、Ｔ）極性、中性；
トリプトファン：（Ｔｒｐ、Ｗ）非極性、中性；
チロシン：（Ｔｙｒ、Ｙ）極性、中性；
バリン：（Ｖａｌ、Ｖ）非極性、中性；および
ヒスチジン：（Ｈｉｓ、Ｈ）極性、正（１０％）中性（９０％）。
【０１５１】
「正」荷電アミノ酸は以下の通りである：
アルギニン：（Ａｒｇ、Ｒ）極性、正；および
リジン：（Ｌｙｓ、Ｋ）極性、正。
【０１５２】
「負」荷電アミノ酸は以下の通りである：
アスパラギン酸：（Ａｓｐ、Ｄ）極性、負；および
グルタミン酸：（Ｇｌｕ、Ｅ）極性、負。
【０１５３】
本明細書記載の抗体配列および相同体に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、配列を整列させ、そして必要であればギャップを導入して、最大パーセント配列同一性を達成した後、そして配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮せずに、特定のポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基の割合と定義される。当業者は、比較しようとする配列の全長に渡って、最大整列を達成するために必要な任意のアルゴリズムを含めて、整列を測定するための適切なパラメータを決定することも可能である。
【０１５４】
用語「抗原」は、本明細書において、用語「ターゲット」または「ターゲット抗原」と交換可能に用いられ、全ターゲット分子、あるいは抗原を特異的に認識するかまたはターゲットに特異的に結合可能な剤、例えば抗体結合部分による結合を通じて抗原を認識する抗体によって認識されるこうした分子の断片を指すものとする。特に、免疫学的に適切である、一般的に「エピトープ」、例えばＢ細胞エピトープまたはＴ細胞エピトープと称される、抗原の部分構造、例えばポリペプチドまたは炭水化物構造は、こうした結合部位によって認識されうる。用語「エピトープ」は、本明細書において、特に、本明細書に記載するような剤の結合部位に対する特異的結合パートナーを完全に構成してもよいし、または特異的結合パートナーの一部であってもよい、分子構造を指すものとする。エピトープは、炭水化物、ペプチド性構造、脂肪酸、有機、生化学的または無機物質またはその誘導体、およびその任意の組み合わせのいずれで構成されてもよい。エピトープが、ペプチド性構造、例えばペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質で構成される場合、通常、これには、少なくとも３アミノ酸、好ましくは５〜４０アミノ酸、そしてより好ましくは約１０〜２０の間のアミノ酸が含まれるであろう。エピトープは直鎖またはコンホメーションエピトープのいずれかであってもよい。直鎖エピトープは、ポリペプチドまたは炭水化物鎖の一次配列の単一セグメントで構成される。直鎖エピトープは隣接していてもまたは重複していてもよい。コンホメーションエピトープは、ポリペプチドをフォールディングして、三次構造を形成することによって寄せ集められたアミノ酸または炭水化物で構成され、そしてアミノ酸は、直鎖配列においては、互いに必ずしも隣接しない。
【０１５５】
本明細書に記載するようなＲＡＮＫＬ阻害剤のターゲットは、特に、ヒトＲＡＮＫＬ、特に血小板結合性ＲＡＮＫＬ、ｐＲＡＮＫＬ、可溶性ｓＲＡＮＫＬ、および／またはｍＲＡＮＫＬの任意の１またはそれより多くである。例示的なＲＡＮＫＬは、配列番号３と同定されるＲＡＮＫＬアミノ酸配列によって特徴付けられるヒトＲＡＮＫＬ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＢ８６８１１．１）、あるいはＲＡＮＫＬの免疫関連エピトープを取り込むその任意の断片または誘導体である。
【０１５６】
用語「ＲＡＮＫＬ」には、細胞によって天然に発現され、そして例えばヒト血小板、腫瘍細胞、または転移細胞の表面に結合するか、あるいは末梢血の試料において決定されるように、可溶性ＲＡＮＫＬとして循環中に存在するヒトＲＡＮＫＬの任意の変異体、アイソフォームおよび種相同体が含まれる。
【０１５７】
ＲＡＮＫＬの好ましいエピトープは、ＲＡＮＫＬ抗原の細胞外部分に、特にｐＲＡＮＫＬの細胞外部分、または膜貫通ＲＡＮＫＬの細胞外部分に取り込まれ、例えば、血小板または細胞の表面上でアクセス可能であるエピトープである。
【０１５８】
本明細書に記載されるようなアンタゴニスト性ＲＡＮＫＬ阻害剤は、ＲＡＮＫＬエピトープに結合可能であり、これはその受容体、例えばＲＡＮＫへのＲＡＮＫＬ結合の実質的な阻害を導き、それによって、シグナル伝達経路、またはＬＧＲ４を阻害する。ＲＡＮＫＬは、ＲＡＮＫを発現する多様な癌細胞の生存を促進し、そして遊走を誘導するため、本明細書に記載するようなアンタゴニスト性ＲＡＮＫＬ阻害剤は、癌または腫瘍細胞の転移前遊走および凝集を防止するかまたは減少させることによって、癌細胞の増殖および転移に干渉するであろう。
【０１５９】
ヒトｐＲＡＮＫＬは、ヒト血小板（ｂｌｏｏｄ  ｐｌａｔｅｌｅｔ、ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｅとも称される）から生じるＲＡＮＫＬ、例えば好ましくはそれに結合するアンタゴニストでターゲティング可能である、活性化血小板によって、ヒト血小板の表面上で発現される抗原と理解される。血小板はまた、（ＲＡＮＫＬ陰性）癌細胞と相互作用して、こうした癌細胞を、それ自体、ＲＡＮＫＬを発現可能である転移前病変に変換することも可能である。したがって、ＲＡＮＫＬ阻害剤は、ｓＲＡＮＫＬをターゲティング可能であり、そしてまた、ｐＲＡＮＫＬおよびＲＡＮＫＬを発現する癌細胞もターゲティング可能である。ｍＲＡＮＫＬは、組織または癌細胞によって発現されることが可能であり、そしてさらに血小板および／または別の癌細胞と相互作用可能である。
【０１６０】
ＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬの過剰発現は、本明細書において、細胞によるＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬ産生レベルの増加と理解され、例えばそれによって細胞培養または生物学的試料における検出可能レベルの上昇を得る。
【０１６１】
用語ＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬ「過剰発現」は、本明細書において、ＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬのいずれかのより高い量を発現する試料または細胞を指すものとし、特に、参照値に比較した際に有意により高い量であって、ゼロまたはより高く、閾値またはカットオフ値よりも高く、あるいは匹敵する試料から得た参照値よりも高い量を指すものとする。過剰発現はまた、内部または外部標準を含む、標準に比較することによって、決定可能である。
【０１６２】
本明細書において、用語、ＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬのレベルに関して「高い」、「上昇した」、または「増加した」は、野生型に比較した遺伝子産物／タンパク質の増加した量または機能（例えば活性）の獲得を指す。
【０１６３】
用語、バイオマーカーの過剰発現に関する「有意により高い」または「有意」は、本明細書において、標準偏差の少なくとも２倍より高い量、好ましくは少なくとも３倍の相違を指すものとする。例えば標準、トレーニングデータまたは閾値から得られるものなどの特定の参照値に関して、有意に増加した量は、少なくとも１．５倍より高い量、好ましくは少なくとも２または３倍の相違を指すと理解される。
【０１６４】
ＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬレベルの上昇を検出するいくつかの方法が当該技術分野に知られる。いくつかの態様において、過剰発現は、ＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬ  ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質のレベル上昇を検出することによって検出される。ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質のレベルは、標準技術を用いて検出可能である。
【０１６５】
いくつかの態様において、生物学的試料中の過剰発現を遺伝子発現アッセイにおいて検出する。いくつかの態様において、遺伝子発現アッセイは、ハイブリダイゼーションアッセイ、核酸増幅、定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）分析、ＲＮＡ−配列、またはノーザンブロット分析を含む。いくつかの態様において、遺伝子発現アッセイは、マイクロアレイ分析を含む。
【０１６６】
いくつかの態様において、生物学的試料中の過剰発現をタンパク質発現アッセイにおいて検出する。いくつかの態様において、タンパク質発現アッセイは、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、または他の抗体に基づくタンパク質発現アッセイを含む。いくつかの態様において、生物学的試料中の過剰発現をフローサイトメトリー、ＦＡＣＳ（蛍光活性化細胞ソーティング）、免疫組織化学またはＲＮＡ  ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションによって検出する。
【０１６７】
特定の側面にしたがって、活性増加は、ｍＲＮＡ増加および／またはタンパク質レベル増加によって引き起こされうる。ｍＲＮＡレベル増加は、例えば、遺伝子増幅および／または転写増加によって引き起こされうる。あるいは、いくつかの態様において、活性レベル増加は、ポリペプチド、またはポリペプチドをコードする核酸配列、またはポリペプチドの発現を調節する核酸における、点突然変異（例えば置換、ミスセンス突然変異、またはナンセンス突然変異）、挿入、および／または欠失、または再編成から生じる、機能獲得突然変異によって引き起こされうる。いくつかの態様において、過剰発現は、遺伝子ならびに／あるいは転写および／または翻訳の制御因子をコードする遺伝子における、単数または複数の突然変異と関連する。
【０１６８】
本明細書に記載するようなＲＡＮＫＬ特異的阻害剤または抗体に関する用語「特異的」は、分子の不均一集団において、関心対象の同族リガンド（ＲＡＮＫＬ）の決定要因である結合反応を指すものとする。したがって、示す条件下、例えばイムノアッセイ条件下で、特定のターゲットに特異的に結合する剤は、試料中に存在する他の分子に、有意な量では結合しない。
【０１６９】
特異的結合部位または特異的剤は、典型的にはターゲットのみを認識し、そして他のターゲットと交差反応しない。それでもなお、特異的結合部位は、ターゲットの１またはそれより多いエピトープ、アイソフォームまたは変異体に特異的に結合するか、あるいは他の関連ターゲット抗原、例えば相同体または類似体と交差反応する可能性もある。
【０１７０】
特異的結合は、結合が、選択されるように高い、中程度のまたは低い結合アフィニティまたはアビディティで、ターゲット同一性に関して選択的であることを意味する。選択的結合は、通常、結合定数または結合動力学が、少なくとも１０倍異なり、好ましくは相違が少なくとも１００倍であり、そしてより好ましくは少なくとも１０００倍である場合、達成される。
【０１７１】
したがって、本発明は、化学療法がＲＡＮＫＬ阻害剤、例えばデノスマブとの組み合わせによって改善される、新規治療法を提供する。驚くべきことに、化学耐性が、任意のこうした組み合わせによって有効に治療可能であることが立証されている。
【０１７２】
特定の例にしたがって、ｅｘ  ｖｉｖｏ癌細胞アッセイにおいて、ドキソルビシンの適用によって、生存ＡＭＬ細胞の量が減少することが示されてきている。この効果は、ｓＲＡＮＫＬの存在下で中和された。アポトーシスおよび／または壊死細胞の量は、ドキソルビシンの適用により高くなった。この効果はやはり、ｓＲＡＮＫＬによって弱められた。これらのデータは、ＲＡＮＫＬ阻害剤、例えばデノスマブによるＲＡＮＫＬの阻害および中和が、化学療法に対する腫瘍細胞の反応を改善する、すなわち化学耐性を克服することも可能であることを示す。
【０１７３】
さらに、デノスマブによるＲＡＮＫＬの阻害は、化学療法治療に対して、乳房腫瘍細胞を再増感することが立証されてきている。ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、パクリタキセルが乳癌細胞に適用され、そして生存および死亡細胞の割合が決定された。ＲＡＮＫＬは、化学療法の効果から悪性細胞を保護し、そしてデノスマブによるＲＡＮＫＬの阻害は、治療に対する感受性を回復することが立証された。
【０１７４】
前述の説明は、以下の実施例に関連してより完全に理解されるであろう。こうした実施例は、しかし、単に本発明の１またはそれより多い態様を実施する方法の代表であり、そして本発明の範囲の限定と解釈されてはならない。
【実施例】
【０１７５】
実施例１：ＲＡＮＫＬは、化学療法治療に対する悪性細胞の耐性を仲介する。
ＡＭＬを患う患者のＲＡＮＫ発現ＰＢＭＣ（フランス・アメリカ・イギリス（ＦＡＢ）分類：Ｍ４；９４％末梢血芽球）を、化学療法耐性モデルに供した（図１）。この目的に向けて、患者血液を治療前の診断時点で得て、そして密度勾配遠心分離によってＰＢＭＣを単離した。この疾患において、一般的に用いられるファーストライン療法剤、ドキソルビシン（１μＭ、ｃｅｌｌ  ｐｈａｒｍ）の適用により、初期アポトーシスおよび死亡細胞の割合は、治療４８時間後のフローサイトメトリー（ＰＥアネキシンＶアポトーシス検出キットＩ、ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）によって観察した際、対照群と比較して、非常に増進していた。化学療法治療の効果は、ｓＲＡＮＫＬ（５００ｎｇ／ｍｌ、組換えヒト可溶性ＲＡＮＫＬ、Ｉｍｍｕｎｏｔｏｏｌｓ、ドイツ）をこの措置に加えた際に、顕著に減少した、これは、生体に存在する局所および全身ＲＡＮＫＬの寄与を模倣する。この実験は、ＲＡＮＫＬの存在が化学感受性を減少させ、そしてしたがって、悪性細胞に化学耐性を与えることを立証する。ＦＡＢタイプＭ４のＡＭＬ細胞は、単球様細胞に似ているため、この実験は、ｓＲＡＮＫＬ（Ｓｅｓｈａｓａｙｅｅら  ２００４，  Ｊｏｕｒ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，  ２７９（２９）：３０２０２−９）が、おそらく抗アポトーシス性ＢＣＬ−２タンパク質の上方制御によって、生存促進因子として作用することを示す、健康な単球における研究と一致する。
【０１７６】
実施例２：デノスマブによるＲＡＮＫＬの遮断は、化学療法治療に対する耐性を克服する
化学療法耐性は、癌療法の成功の大きな障壁であるため、腫瘍の化学耐性を克服する、すなわち抗新生物または化学療法薬剤に対する腫瘍の感受性を増加させる新規療法を発展させる緊急の必要性がある。さらに、十分な抗腫瘍活性を達成するために必要な化学療法薬剤の用量の減少は、同時に副作用を減少させながら、有効性を維持するように働くであろう。
【０１７７】
この目的に向けて、ＲＡＮＫＬ誘導性化学耐性が、認可されたＲＡＮＫＬ抗体デノスマブの形でのＲＡＮＫＬ阻害剤の適用によって克服されうるかどうかを評価した。したがって、ＭＣＦ１０Ａ乳癌細胞を、示すように、ｓＲＡＮＫＬ（１００ｎｇ／ｍｌ、Ｉｍｍｕｎｏｔｏｏｌｓ）およびデノスマブ（２０μｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下で４８時間培養した。２４時間培養後、ファーストライン乳癌療法剤を代表するパクリタキセル（１０ｎＭ、Ｔａｘｏｍｅｄａｃ）を、示す箇所で添加した。生存および細胞死を、７ＡＡＤ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で染色したフローサイトメトリーによって、４８時間後に分析し、そして輪郭プロット（図２、上部パネル）および分析した細胞の割合（下部パネル）として示す。ＡＭＬのような血液由来癌におけるＲＡＮＫＬ誘導性化学耐性を示す実施例１と同様、やはりこの乳癌モデルにおいても、ｓＲＡＮＫＬは化学療法治療の効果から、悪性細胞を保護する。この知見は、ｓＲＡＮＫＬがＳＫＢＲ３乳癌細胞株を、ドキソルビシンによって誘導されるアポトーシスから保護することを見出した、Ｓｃｈｒａｍｅｋら（Ｎａｔｕｒｅ  ２０１０  ４６８（７３２０）：９８−１０２）と一致する。しかし、図２に示す実験は、ＲＡＮＫＬ阻害剤による、この場合はデノスマブによる、ＲＡＮＫＬ中和が、化学療法治療の効果を回復し、そしてさらに増加させ、そしてしたがって、化学感受性を回復して、癌における化学耐性を克服する、有効でそして実現可能な戦略であることをさらに立証する。
【０１７８】
実施例３：ｐＲＡＮＫＬの中和は、化学療法治療に対する感受性を増進させる
全身治療の背景において、ｐＲＡＮＫＬの役割を評価するため、卵巣および乳癌細胞の生存を分析した。細胞を、デノスマブの存在下または非存在下でヒト血小板とインキュベーションしてｐＲＡＮＫＬを中和し、癌患者における状況を模倣する。血小板の存在は、すでに化学療法治療を伴わない、腫瘍細胞生存／細胞活性を増進させ、そして同じことが化学療法治療に際して観察された。
【０１７９】
図４は、血小板由来ＲＡＮＫＬを培養中のデノスマブの存在によって中和した場合に、血小板の保護効果が、実質的に減少することを示す。これらのデータは、ｐＲＡＮＫＬのターゲティングが、化学療法治療に関して、癌細胞を再増感することを示す。デノスマブによるＲＡＮＫＬの中和は、化学療法治療による腫瘍細胞生存を、すなわち化学感受性を増加させる。
【０１８０】
例は、ＡＭＬモデルならびに卵巣癌および乳癌モデルにおける、ＲＡＮＫＬ阻害剤、例えばデノスマブの顕著な治療効果を示し、それぞれの癌患者における化学増感の概念を提供する。データは、それぞれの臨床モデルにおいて確認可能である。
【図１−１】
2019516732.tif 000003
【図１−２】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
2019516732000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成29年10月6日(2017.10.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学療法耐性癌を患う患者の治療における使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤であって、患者が第一の化学療法剤での治療に非反応性の癌と診断されており、前記癌が骨における固形腫瘍または骨における転移でなく、そして前記患者が前記ＲＡＮＫＬ阻害剤と組み合わせて第二の化学療法剤を投与され、前記ＲＡＮＫＬ阻害剤が、改善された化学療法のため前記癌を増感するために投与される、前記ＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項２】
前記患者が前記の第一の化学療法剤での治療に失敗している、請求項１記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項３】
前記癌が、ｅｘ  ｖｉｖｏアッセイにおいて決定した際に前記の第一の化学療法剤での治療に非反応性であり、そして／またはそうでなければ化学療法耐性であることが知られる、請求項１または２記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項４】
前記患者が、細胞傷害性化学療法措置を含む前記の第一の化学療法剤での前記治療、好ましくは前記癌のための１つの以前の細胞傷害性化学療法措置の最低２コースの後、疾患進行を患っている、請求項１〜３のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項５】
前記の第一の化学療法剤が、細胞分裂阻害性、細胞傷害性または癌疾患を治療するために用いられる任意の他の抗新生物化合物である、請求項１〜４のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項６】
前記の第二の化学療法剤が、前記ＲＡＮＫＬ阻害剤と組み合わせない標準化学療法に比較した際に、実質的に減少した用量で投与される、請求項１〜５のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項７】
前記の第一の化学療法剤が、前記の第二の化学療法剤と同じである、請求項１〜６のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項８】
前記癌が、上皮腫瘍、間葉系腫瘍、内胚葉、中胚葉および／または外胚葉起源の腫瘍、または血液由来癌からなる群より選択される固形腫瘍である、請求項１〜７のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項９】
前記患者が、乳癌、膵臓癌、胃癌、食道癌、腎細胞癌、肺癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、黒色腫、卵巣癌、肝臓癌、腎臓癌、腸癌、前立腺癌、または頭頸部癌のいずれかを患う癌患者である、請求項１〜８のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項１０】
前記患者が白血病またはリンパ腫を患う血液癌患者である、請求項１〜９のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項１１】
ＲＡＮＫＬ阻害剤が、ヒトまたはヒト化抗体、その抗原結合断片、ＲＡＮＫＬ受容体−Ｆｃ融合タンパク質、ＲＡＮＫＬ受容体の細胞外ドメインを含む分子、または小分子阻害剤のいずれかである、請求項１〜１０のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項１２】
ＲＡＮＫＬ阻害剤を、全身投与によって、好ましくは静脈内注入またはボーラス注射によって、療法的有効量で患者に投与する、請求項１〜１１のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項１３】
ＲＡＮＫＬ阻害剤および前記の第二の化学療法剤のそれぞれの量が、癌感受性を増加させ、そして／または化学療法剤に対する癌細胞耐性を治療するために有効である、請求項１〜１２のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項１４】
第二の化学療法剤を、前記ＲＡＮＫＬ阻害剤との組み合わせを伴わない標準治療と比較した際に、実質的に減少した用量で投与する、請求項１〜１３のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤であって、患者が骨における固形腫瘍または骨における転移ではない癌を患う患者をスクリーニングするための方法によって選択された候補であり、そして化学療法に対する癌細胞の増感のための療法から利益を得る可能性があり、前記方法が、前記患者の生物学的試料における、ＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬの発現および／または活性のレベルを測定する工程を含み、ＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬの発現または過剰発現を示す患者を前記増感療法の候補として選択する、前記ＲＡＮＫＬ阻害剤。
【請求項１６】
前記生物学的試料が、腫瘍細胞または腫瘍再発タンパク質および／または核酸などの腫瘍由来材料を含みうる、生検法から、または腫瘍塊を除去する外科処置から得られる組織試料、血液からなる群より選択される、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
ＲＡＮＫまたはＲＡＮＫＬの発現レベルを閾値に比較する工程をさらに含み、そして前記閾値が健康であるかまたは癌から回復した患者集団の平均発現レベルである、請求項１５〜１６のいずれか一項記載の方法。
【請求項１８】
前記患者が、請求項１５〜１７のいずれか一項の方法にしたがって、前記治療の候補と同定されている、請求項１〜１４のいずれか一項記載の使用のためのＲＡＮＫＬ阻害剤。
【国際調査報告】
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