(57)【要約】対象における心臓血管疾患または事象の診断及び／または予後のための組成物及び方法が、提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、特定のタンパク質の、他のタンパク質に対するレベルを測定及び比較することを含む。他の実施形態では、本方法は、臨床的変数の情報との比較を含む。【選択図】図１
2019507354.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における心臓血管疾患または転帰の診断及び／または予後を判定するための方法であって、
（ｉ）前記対象から得られた生物学的試料中の少なくとも２つのバイオマーカーのレベルを判定するステップであって、前記バイオマーカーが表１Ａ、１Ｂ、２Ａ、及び２Ｂに記載されるものからなる群から選択される、判定するステップと、
（ｉｉ）任意に、前記対象の少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定するステップであって、前記臨床的変数が表３Ａ、３Ｂ、４Ａ、及び４Ｂに記載されるものからなる群から選択される、判定するステップと、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉ）において判定された前記バイオマーカーのレベルと、任意にステップ（ｉｉ）において判定された前記臨床的変数（複数可）の状態とに基づいて、診断または予後スコアを計算するステップと、
（ｉｖ）陽性または陰性の結果として前記診断または予後スコアを分類するステップと、
（ｖ）前記陽性または陰性の結果に基づいて、治療的または診断的介入レジメンを決定するステップと、を含む、方法。
【請求項２】
前記バイオマーカーが、０．１未満、０．０５未満、０．０１未満、または０．００１未満のｐ値を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記少なくとも１つの臨床的変数が、０．１未満、０．０５未満、０．０１未満、または０．００１未満のｐ値を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記方法が、前記対象における閉塞性冠動脈疾患の診断を提供する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記方法が、心筋梗塞（ＭＩ）、脳卒中、心臓血管死、あらゆる原因による死亡、またはこれらの複合の危険性の予後を提供する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ステップ（ｉ）が、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、デコリン、インターロイキン−８、腎臓損傷分子−１、マトリックスメタロプロテイナーゼ９、ミッドカイン、ミオグロビン、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、肺界面活性物質関連タンパク質Ｄ、幹細胞因子、メタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−１）、トロポニン、及び血管細胞接着分子からなる群から選択される少なくとも２つのバイオマーカーのレベルを判定することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定する任意のステップ（ｉｉ）が、年齢、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）歴、２型糖尿病歴、血液透析歴、心筋梗塞（ＭＩ）歴、経皮的介入、例えば冠動脈ステント及び／または冠動脈血管形成術歴、ならびに性別から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
対象における閉塞性冠動脈疾患の存在を診断するための方法であって、
（ｉ）アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、デコリン、インターロイキン−８、腎臓損傷分子−１、マトリックスメタロプロテイナーゼ９、ミッドカイン、ミオグロビン、肺界面活性物質関連タンパク質Ｄ、幹細胞因子、及びトロポニンからなる群から選択される少なくとも２つのバイオマーカーのレベルを判定するステップと、
（ｉｉ）任意に、年齢、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）歴、２型糖尿病歴、血液透析歴、心筋梗塞（ＭＩ）歴、経皮的介入、例えば冠動脈ステント及び／または冠動脈血管形成術歴、ならびに性別からなる群から選択される少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定するステップと、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉ）において判定された前記バイオマーカーのレベルと、任意にステップ（ｉｉ）において判定された前記少なくとも１つの臨床的変数の状態とに基づいて、診断スコアを計算するステップと、
（ｉｖ）閉塞性冠動脈疾患の陽性または陰性の診断として前記診断または予後スコアを分類するステップと、
（ｖ）前記陽性または陰性の診断に基づいて、治療的または診断的介入レジメンを決定するステップと、を含む、方法。
【請求項９】
ステップ（ｉ）が、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、腎臓損傷分子−１、及びミッドカインからなる群から選択される少なくとも２つのバイオマーカーのレベルを判定することを含み、任意のステップ（ｉｉ）が、年齢、真性２型糖尿病歴、経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴、及び性別からなる群から選択される少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定することを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ステップ（ｉ）が、アディポネクチン、デコリン、及びミッドカインからなる群から選択される少なくとも２つのバイオマーカーのレベルを判定することを含み、任意のステップ（ｉｉ）が、心筋梗塞（ＭＩ）歴、経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴、及び性別からなる群から選択される少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定することを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
ステップ（ｉ）が、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−１、インターロイキン−８、腎臓損傷分子−１、及び幹細胞因子からなる群から選択される少なくとも４つのバイオマーカーのレベルを判定することを含み、任意のステップ（ｉｉ）が、年齢、経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴、及び性別からなる群から選択される少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定することを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
ステップ（ｉ）が、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−１、マトリックスメタロプロテイナーゼ９、ミッドカイン、ミオグロビン、肺界面活性物質関連タンパク質Ｄのレベルを判定することを含み、ステップ（ｉｉ）が、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）歴、経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴、及び性別からなる群から選択される少なくとも１つの臨床的変数を判定することを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
ステップ（ｉ）が、アディポネクチン、ミッドカイン、肺界面活性物質関連タンパク質Ｄ、及びトロポニンのレベルを判定することを含み、ステップ（ｉｉ）が、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）歴、血液透析歴、心筋梗塞歴、及び性別からなる群からなる群から選択される少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定することを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
前記対象における閉塞性冠動脈疾患の診断が、主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断を含む、請求項８〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記対象における陽性の診断が、診断的心臓カテーテル検査、経皮冠動脈介入（ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）、ならびに硝酸塩、ベータ遮断剤、ＡＣＥ阻害剤、及び脂質低下剤から選択される薬理学的製剤の投与のうちの１つ以上から選択される介入の必要性の医師による判定を容易にする、請求項８〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記対象における陰性の診断が、高血圧、糖尿病、及び喫煙を含む冠動脈危険因子の進行中のモニタリング及び管理、ならびに食生活の改善、運動、及び禁煙から選択される生活様式の改善のうちの１つ以上から選択される介入の必要性の医師による判定を容易にする、請求項８〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
時間エンドポイント内の対象における心臓転帰の予後のための方法であって、
（ｉ）前記対象から得られた生物学的試料中の少なくとも２つのバイオマーカーのレベルを判定するステップであって、前記バイオマーカーが、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ、腎臓損傷分子−１、ミッドカイン、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、メタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−１）、及び血管細胞接着分子からなる群から選択される、判定するステップと、
（ｉｉ）任意に、年齢、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）歴、２型糖尿病歴、血液透析歴、心筋梗塞（ＭＩ）歴、経皮的介入、例えば冠動脈ステント及び／または冠動脈血管形成術歴、ならびに性別からなる群から選択される少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定するステップと、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉ）において判定された前記バイオマーカーのレベルと、任意にステップ（ｉｉ）において判定された前記臨床的変数（複数可）の状態とに基づいて、予後スコアを計算するステップと、
（ｉｖ）陽性または陰性の予後として前記予後スコアを分類するステップと、
（ｖ）前記陽性または陰性の予後に基づいて、治療的または診断的介入レジメンを決定するステップと、を含む、方法。
【請求項１８】
心臓転帰の前記予後が、心筋梗塞（ＭＩ）、脳卒中、心臓血管死、あらゆる原因による死亡、またはこれらの複合の予後であり、さらに、前記時間エンドポイントが、０〜３６５日及び３〜３６５日からなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ステップ（ｉ）が、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ、腎臓損傷分子−１、ミッドカイン、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、メタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−１）、及び血管細胞接着分子からなる群から選択される２つ以上のバイオマーカーのレベルを判定することを含み、（ｉｉ）任意に、２型糖尿病歴の状態を判定することを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
ステップ（ｉ）が、腎臓損傷分子−１、ミッドカイン、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、メタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−１）のレベルを判定することを含み、前記予後が、心臓血管系死亡（ＣＶＤ）、心筋梗塞（ＭＩ）、または脳卒中の複合の３〜３６５日の予後である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
ステップ（ｉ）が、腎臓損傷分子−１、ミッドカイン、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、メタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−１）のレベルを判定することを含み、前記予後が、心臓血管系死亡（ＣＶＤ）、心筋梗塞（ＭＩ）、または脳卒中の複合の０〜３６５日の予後である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
ステップ（ｉ）が、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、及びオステオポンチンのレベルを判定することを含み、前記予後が、心臓血管系死亡（ＣＶＤ）または心筋梗塞（ＭＩ）の複合の３〜３６５日の予後である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
ステップ（ｉ）が、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）及びオステオポンチンのレベルを判定することを含み、前記予後が、心筋梗塞（ＭＩ）の３〜３６５日の予後である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
ステップ（ｉ）が、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ及びオステオポンチンのレベルを判定することを含み、前記予後が、心臓血管系死亡（ＣＶＤ）の３〜３６５日の予後である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
心臓転帰の陽性の予後が、ＥＣＧ応答を有する負荷試験または心筋灌流画像化、冠動脈コンピュータ断層撮影血管造影、診断的心臓カテーテル検査、経皮冠動脈介入、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）、臨床試験の登録、ならびに硝酸塩、ベータ遮断剤、ＡＣＥ阻害剤、抗血小板剤、及び脂質低下剤から選択されるが、これらに限定されない、薬剤の投与またはその効果のモニタリング、のうちの１つ以上から選択される介入の必要性の医師による判定を容易にする、請求項１７〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
心臓転帰の陰性の予後が、高血圧、糖尿病、脂質異常症、及び喫煙を含む冠動脈危険因子の進行中のモニタリング及び管理、ならびに食生活の改善、運動、及び禁煙から選択される生活様式の改善のうちの１つ以上から選択される介入の必要性の医師による判定を容易にする、請求項１７〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
閉塞性冠動脈疾患の診断のためのパネルであって、表１Ａ及び１Ｂに列挙されるものから選択される少なくとも２つのバイオマーカー、ならびに任意に、表３Ａ及び３Ｂに記載されるものからなる群から選択される少なくとも１つの臨床的変数を含む、パネル。
【請求項２８】
前記少なくとも２つのバイオマーカーが、０．１未満、０．０５未満、０．０１未満、または０．００１未満のｐ値を有する、請求項２７に記載のパネル。
【請求項２９】
前記少なくとも１つの臨床的変数が、０．１未満、０．０５未満、０．０１未満、または０．００１未満のｐ値を有する、請求項２７に記載のパネル。
【請求項３０】
前記少なくとも２つのバイオマーカーが、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、デコリン、インターロイキン−８、腎臓損傷分子−１、マトリックスメタロプロテイナーゼ９、ミッドカイン、ミオグロビン、肺界面活性物質関連タンパク質Ｄ、幹細胞因子、及びトロポニンからなる群から選択される、請求項２７に記載のパネル。
【請求項３１】
前記少なくとも１つの臨床的変数が、年齢、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）歴、２型糖尿病歴、血液透析歴、心筋梗塞（ＭＩ）歴、経皮的介入、例えば冠動脈ステント及び／または冠動脈血管形成術歴、ならびに性別からなる群から選択される、請求項２７に記載のパネル。
【請求項３２】
任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネルであって、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−１、腎臓損傷分子−１、及びミッドカインのためのバイオマーカー、ならびに経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴、及び性別の臨床的変数を含む、パネル。
【請求項３３】
任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネルであって、アディポネクチン、ミッドカイン、肺界面活性物質関連タンパク質Ｄ、及びトロポニンのためのバイオマーカー、ならびに冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）歴、血液透析歴、心筋梗塞歴、及び性別の臨床的変数を含む、パネル。
【請求項３４】
心臓転帰の予後のためのパネルであって、表２Ａ及び２Ｂに列挙されるバイオマーカーから選択される少なくとも２つのバイオマーカー、ならびに任意に、表４Ａ及び４Ｂに記載されるものからなる群から選択される少なくとも１つの臨床的変数を含む、パネル。
【請求項３５】
前記少なくとも２つのバイオマーカーが、０．１未満、０．０５未満、０．０１未満、または０．００１未満のｐ値を有する、請求項３４に記載のパネル。
【請求項３６】
前記少なくとも１つの臨床的変数が、０．１未満、０．０５未満、０．０１未満、または０．００１未満のｐ値を有する、請求項３４に記載のパネル。
【請求項３７】
前記少なくとも２つのバイオマーカーが、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ、腎臓損傷分子−１、ミッドカイン、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、メタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−１）、及び血管細胞接着分子からなる群から選択される、請求項３４に記載のパネル。
【請求項３８】
前記少なくとも１つの臨床的変数が、糖尿病歴である、請求項３７に記載のパネル。
【請求項３９】
心臓血管系死亡（ＣＶＤ）、心筋梗塞（ＭＩ）、または脳卒中の複合の予後のためのパネルであって、腎臓損傷分子−１、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、及びメタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−１）のためのバイオマーカーを含む、パネル。
【請求項４０】
心臓血管系死亡（ＣＶＤ）または心筋梗塞（ＭＩ）の複合の予後のためのパネルであって、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、及びオステオポンチンのためのバイオマーカーを含む、パネル。
【請求項４１】
心筋梗塞（ＭＩ）の予後のためのパネルであって、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）及びオステオポンチンのためのバイオマーカーを含む、パネル。
【請求項４２】
心臓血管系死亡（ＣＶＤ）の予後のためのパネルであって、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ及びオステオポンチンのためのバイオマーカーを含む、パネル。
【請求項４３】
請求項２７〜４２のいずれか一項に記載のパネルを含む、診察または予後キット。
【請求項４４】
閉塞性冠動脈疾患の診断に有用な診断キットであって、少なくとも２つの抗体またはその結合断片を含み、前記抗体またはその結合断片が、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、デコリン、インターロイキン−８、腎臓損傷分子−１、マトリックスメタロプロテイナーゼ９、ミッドカイン、ミオグロビン、肺界面活性物質関連タンパク質Ｄ、幹細胞因子、及びトロポニンからなる群から選択されるバイオマーカーに特異的である、キット。
【請求項４５】
心筋梗塞（ＭＩ）、脳卒中、心臓血管系死亡、あらゆる原因による死亡、またはこれらの複合の予後に有用な予後キットであって、少なくとも２つの抗体またはその結合断片を含み、前記抗体またはその結合断片が、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ、腎臓損傷分子−１、ミッドカイン、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、メタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤、及び血管細胞接着分子からなる群から選択されるバイオマーカーに特異的である、キット。
【請求項４６】
対象における心臓血管の状態を評価するための方法であって、
（ｉ）評価のために選択された対象から試料を得ることと、
（ｉｉ）（ａ）アッセイされるバイオマーカー（複数可）の検出に対して特異的に結合する１つ以上の抗体を、前記試料と接触させ、（ｂ）１つ以上のアッセイ結果を提供するためにそれぞれの抗体に対してアッセイされる各バイオマーカーの結合を示す１つ以上のアッセイ結果を生じる、アッセイ装置に、前記対象から得られた前記試料を導入することによって、表１Ａ、１Ｂ、２Ａ、及び２Ｂに記載されるものからなる群から選択される前記バイオマーカーを検出するように設定される１つ以上のアッセイを実施することと、
（ｉｉｉ）任意に、前記対象に対する少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定することであって、前記臨床的変数が、表３Ａ、３Ｂ、４Ａ、及び４Ｂに記載されるものからなる群から選択される、判定することと、
（ｉｖ）前記アッセイ装置によって生じる前記アッセイ結果（複数可）、及び任意に前記臨床的変数の状態を、前記対象の前記心臓血管の状態と相関させることであって、前記相関ステップが、前記アッセイ結果（複数可）を、前記対象の前記心臓血管の状態のリスク層化、予後、診断、分類、及びモニタリングのうちの１つ以上と相関させることを含み、前記相関ステップが、前記アッセイ結果（複数可）に基づいて、陽性または陰性の診断の可能性、または前記対象に対する心臓血管の状態の１つ以上の将来的な変化を割り当てることを含む、相関させることと、
（ｖ）患者が割り当てられた、個体の所定のサブ集団に基づいて、前記患者を治療することであって、前記治療が、治療的または診断的介入レジメンを含む、治療することと、を含む、方法。
【請求項４７】
対象における閉塞性冠動脈疾患を診断するための方法であって、
（ｉ）評価のために選択された対象から試料を得ることと、
（ｉｉ）（ａ）アッセイされるバイオマーカー（複数可）の検出に対して特異的に結合する１つ以上の抗体を、前記試料と接触させ、（ｂ）１つ以上のアッセイ結果を提供するためにそれぞれの抗体に対してアッセイされる各バイオマーカーの結合を示す１つ以上のアッセイ結果を生じる、アッセイ装置に、前記対象から得られた前記試料を導入することによって、表１Ａ及び１Ｂに記載されるものからなる群から選択される前記バイオマーカーを検出するように設定される１つ以上のアッセイを実施することと、
（ｉｉｉ）任意に、前記対象に対して少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定することであって、前記臨床的変数が、表３Ａ及び３Ｂに記載されるものからなる群から選択される、判定することと、
（ｉｖ）前記アッセイ装置によって生じる前記アッセイ結果（複数可）、及び任意に前記臨床的変数の状態を、閉塞性冠動脈疾患と相関させることであって、前記相関ステップが、前記アッセイ結果（複数可）及び任意に前記臨床的変数（複数可）を、診断スコアと相関させることを含み、前記相関ステップが、前記スコアを、陽性または陰性の結果に割り当てることを含む、相関させることと、
（ｖ）前記陽性または陰性の結果に基づいて、前記患者を治療することであって、前記治療が、治療的または診断的介入レジメンを含む、治療することと、を含む、方法。
【請求項４８】
時間エンドポイント内の対象における心臓転帰の予後のための方法であって、
（ｉ）評価のために選択された対象から試料を得ることと、
（ｉｉ）（ａ）アッセイされるバイオマーカー（複数可）の検出に対して特異的に結合する１つ以上の抗体を、前記試料と接触させ、（ｂ）１つ以上のアッセイ結果を提供するためにそれぞれの抗体に対してアッセイされる各バイオマーカーの結合を示す１つ以上のアッセイ結果を生じる、アッセイ装置に、前記対象から得られた前記試料を導入することによって、表２Ａ及び２Ｂに記載されるものからなる群から選択される前記バイオマーカーを検出するように設定される１つ以上のアッセイを実施することと、
（ｉｉｉ）任意に、前記対象に対して少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定することであって、前記臨床的変数が、表４Ａ及び４Ｂに記載されるものからなる群から選択される、判定することと、
（ｉｖ）前記アッセイ装置によって生じる前記アッセイ結果（複数可）及び任意に前記臨床的変数の状態を、前記対象における心臓転帰の可能性と相関させることであって、前記相関ステップが、前記アッセイ結果（複数可）及び任意に前記臨床的変数（複数可）を、予後スコアと相関させることを含み、前記相関ステップが、前記スコアを、陽性または陰性の結果に割り当てることを含む、相関させることと、
（ｖ）前記陽性または陰性の結果に基づいて、前記患者を治療することであって、前記治療が、治療的または診断的介入レジメンを含む、治療することと、を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年２月１日に出願された米国特許仮出願第６２／２８９，５１３号及び２０１６年８月２３日に出願された特許仮出願第６２／３７８，５３５号への優先権及びその利益を主張するものであり、これらの内容が、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本開示は、患者における心臓血管疾患または転帰の診断及び／または予後を判定するためのバイオマーカーパネル、アッセイ、及びキット、ならびにその方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
例えば、閉塞性冠動脈疾患（ＣＡＤ）、心筋梗塞（ＭＩ）、脳卒中、及び心臓血管系死亡（ＣＶＤ）を含む、アテローム性心臓血管疾患（ＡＳＣＶＤ）及びその関連心臓血管事象（ＣＶＥ）は、主に、ヒト体において複数の血管床においてアテローム性硬化プラーク形成をもたらす、脂質材料及び他のタンパク質の堆積をもたらす基礎の血管内皮プロセスによって引き起こされる。このプロセスは、識別可能かつ修正可能な危険因子と関連しているが、上述のこの疾患のプロセス及びその関連事象は、依然として、世界的に主な死亡原因及び重度の身体障害となっている（Ｙｕｓｕｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ  ｍｏｄｉｆｉａｂｌｅ  ｒｉｓｋ  ｆａｃｔｏｒｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ５２  ｃｏｕｎｔｒｉｅｓ（ｔｈｅ  ＩＮＴＥＲＨＥＡＲＴ  ｓｔｕｄｙ）：ｃａｓｅ−ｃｏｎｔｒｏｌ  ｓｔｕｄｙ，Ｌａｎｃｅｔ，３６４：９３７−５２（２００４））。
【０００４】
西欧諸国では、心臓血管疾患は、一般的に、原因となっているアテローム性動脈硬化症と関連しており、主な死亡原因である（Ｍａｒｔｉｎ−Ｖｅｎｔｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｒｅｖ．Ｅｓｐ．Ｃａｒｄｉｏｌ  ６２（６）：６７７−６８８，ｃｉｔｉｎｇ  Ｍｕｒｒａｙ  ａｎｄ  Ｌｏｐｅｚ，１９９７，Ｌａｎｃｅｔ  ３４９：１２６９−１２７６）。心疾患のリスク因子は周知であり、これには、高血圧、糖尿病、喫煙、コレステロール値の上昇、肥満、及び家族歴が含まれる。しかしながら、閉塞性冠動脈疾患（ＣＡＤ）の有病率及びその危険因子の正しい評価にもかかわらず、症状の発現と介入を必要とする心事象との関連が、依然として分かりにくいままである。症状は、胸部重圧感のように非特異的であり得、ＣＡＤに反映し得るが、胃部不快感によって説明され得、左腕の疼痛は、心起源であり得るか、または関節炎によって引き起こされ得る。疼痛が心起源である可能性が高い場合でさえも、必要とされる治療の種類及び強度に関して疑問があり得、いくつかの状況においては、薬物療法は十分であり得るが、その他の状況においては、介入戦略が、ＣＶＥを回避するために必要である。
【０００５】
多くの技術が、有害な心事象の危険性が高い患者を特定するために開発されてきた。これらは、ＥＣＧ応答、超音波を用いた心臓壁運動応答、及び核画像技術を用いた心筋潅流の変化の評価を用いた運動及び薬理学的応力試験が含まれる。最も侵襲的アプローチである冠動脈造影法は、冠動脈解剖、心構造、及び機能を評価するための「究極の判断基準」の診断ツールと見なされているが、それは、侵襲的で高価であり、定義された合併症を有し、操作者依存性の変動に供される（Ｓｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｖａｓｃ．Ｈｅａｌｔｈ  Ｒｉｓｋ  Ｍａｎａｇ．６：３０７−３１６）。冠動脈コンピュータ断層撮影血管造影法（Ｓｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，上記参照、Ｃｕｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００８．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．１５（４）：５６４−５７５）、バイオマーカー（例えば、Ｍａｒｔｉｎ−Ｖｅｎｔｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｒｅｖ．Ｅｓｐ．Ｃａｒｄｉｏｌ  ６２（６’）：６７７−６８８）、アデノシン応力磁気共振灌流画像法（Ｉｎｇｋａｎｉｓｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．４７（７）：１４２７−１４３２）、臨床的予測因子の使用（Ｔａｄｒｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００３．Ｓｏｕｔｈ  Ｍｅｄ．Ｊ．９６（１１）：１１１３−１１２０、Ｓｃｈｉｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｗｉｅｎ  Ｋｌｉｎ．Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ．１１６（３）：８３−８９）、ならびに血小板活性の指標（Ｍａｒｃｕｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１９：２３７−２４２（２００８年１２月３１日に元来オンライン公開された）、Ｓｅｌｖａｒａｊ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｊ．Ｔｈｒｏｍ．Ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｓｉｓ  １８（２）：１０９−１１５）を含む、他の新しい低侵襲的な選択肢が、探査されている。
したがって、心臓血管病理の診断及びＣＶＥの予測を改善するために単純かつ信頼できる方法が必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｙｕｓｕｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ  ｍｏｄｉｆｉａｂｌｅ  ｒｉｓｋ  ｆａｃｔｏｒｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ５２  ｃｏｕｎｔｒｉｅｓ（ｔｈｅ  ＩＮＴＥＲＨＥＡＲＴ  ｓｔｕｄｙ）：ｃａｓｅ−ｃｏｎｔｒｏｌ  ｓｔｕｄｙ，Ｌａｎｃｅｔ，３６４：９３７−５２（２００４）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示は、対象における心臓血管疾患または転帰の診断及び／または予後を判定するための方法を提供し、本方法は、（ｉ）対象から得られた生物学的試料中の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つもしくは４つを超えるバイオマーカーのレベルを判定するステップであって、バイオマーカーが、表１Ａ、１Ｂ、２Ａ、及び２Ｂに記載されるものからなる群から選択される、判定するステップと、（ｉｉ）任意に、対象の少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定するステップであって、臨床的変数が、表３Ａ、３Ｂ、４Ａ、及び４Ｂに記載されるものからなる群から選択される、判定するステップと、（ｉｉｉ）少なくとも１つのバイオマーカーの判定されたレベルと、任意にステップ（ｉｉ）において判定された臨床的変数（複数可）の状態とに基づいて対象の診断または予後スコアを計算するステップと、（ｉｖ）陽性または陰性の結果として診断または予後スコアを分類するステップと、（ｖ）陽性または陰性の結果に基づいて、治療的または診断的介入レジメンを決定するステップと、を含む。
【０００８】
本開示の方法によって提供される診断または予後は、心臓血管系死亡、心筋梗塞（ＭＩ）、脳卒中、あらゆる原因による死亡、またはこれらの複合の冠動脈疾患の陽性の診断及び／または陽性の予後を受容する患者に対して前方へ治療経路を定義及び決定する際に特に重要である。このようにして、対象における心臓血管疾患または転帰の判定された診断及び／または予後は、対象における治療的または診断的介入の必要性の医師による判定を容易にする。
【０００９】
あるさらに特定の実施形態では、本方法に使用されるバイオマーカーは、表１Ａ、１Ｂ、２Ａ、及び２Ｂに列挙されるバイオマーカー、特に、０．１未満、０．０５未満、０．０１未満、または０．００１未満のｐ値を有するものから選択される。
【００１０】
特定の一実施形態では、本方法は、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、デコリン、インターロイキン−８、腎臓損傷分子−１、マトリックスメタロプロテイナーゼ９（ＭＭＰ−９）、ミッドカイン、ミオグロビン、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、肺界面活性物質関連タンパク質Ｄ、幹細胞因子、メタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−１）、トロポニン、及び血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ）からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、３つ、少なくとも４つ、または４つを超えるバイオマーカーのレベルを判定することを含む。
【００１１】
さらに他の実施形態では、生物学的試料中のバイオマーカーレベルを判定することに加えて、本方法は、表３Ａ、３Ｂ、４Ａ、及び４Ｂに列挙されるもの、特に、０．１未満、０．０５未満、０．０１未満、または０．００１未満のｐ値を有するもの等の少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定することをさらに含む。
【００１２】
さらに特定の実施形態では、本方法は、年齢、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）歴、２型糖尿病歴、血液透析歴、心筋梗塞（ＭＩ）歴、経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴、及び性別からなる群から選択される少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定することを含む。
【００１３】
本開示のさらに他の実施形態では、本方法のステップ（ｉ）は、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、デコリン、インターロイキン−８、腎臓損傷分子−１、マトリックスメタロプロテイナーゼ９（ＭＭＰ−９）、ミッドカイン、ミオグロビン、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、肺界面活性物質関連タンパク質Ｄ、幹細胞因子、メタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−１）、トロポニン、及び血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ）からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または４つを超えるバイオマーカーのレベルを判定することを含み、ステップ（ｉｉ）は、年齢、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）歴、２型糖尿病歴、血液透析歴、心筋梗塞（ＭＩ）歴、経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴、及び性別から選択される少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定することを含む。
【００１４】
本方法は、対象における閉塞性冠動脈疾患の診断を有利に提供する。あるさらに特定の実施形態では、対象における閉塞性冠動脈疾患の診断は、主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断を含む。
【００１５】
本開示のさらに追加の実施形態では、本方法のステップ（ｉ）は、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、デコリン、インターロイキン−８、腎臓損傷分子−１、マトリックスメタロプロテイナーゼ９、ミッドカイン、ミオグロビン、肺界面活性物質関連タンパク質Ｄ、幹細胞因子、及びトロポニンからなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または４つを超えるバイオマーカーのレベルを判定することを含む。
【００１６】
さらに特定の実施形態では、本方法は、心臓転帰、例えば、心臓血管系死亡、心筋梗塞（ＭＩ）、脳卒中、あらゆる原因による死亡、またはそれらの複合から選択される転帰に対する可能性の予後を提供する。
【００１７】
本発明の別の態様によれば、対象における閉塞性冠動脈疾患の存在下で診断するための方法を提供し、（ｉ）対象から得られた生物学的試料中の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または４つを超えるバイオマーカーのレベルを判定することであって、バイオマーカーが、表１Ａ及び１Ｂに列挙されるバイオマーカーからなる群から選択される、判定することと、（ｉｉ）任意に、対象に対して少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定することであって、臨床的変数が、表３Ａ及び３Ｂに列挙される臨床的変数からなる群から選択される、判定することと、（ｉｉｉ）少なくとも１つのバイオマーカーの決定されたレベル及び任意に少なくとも１つの臨床的変数の状態に基づいて対象のための診断スコアを計算することと、（ｉｖ）閉塞性冠動脈疾患の陽性または陰性の診断としてスコアを分類することと、（ｉｖ）陽性または陰性の診断に基づいて治療的または診断的介入レジメンを決定することと、を含む。
【００１８】
あるさらに特定の実施形態では、バイオマーカーは、０．１未満、０．０５未満、０．０１未満、または０．００１未満のｐ値を有する表１Ａ及び１Ｂに列挙されるものから選択される。
【００１９】
他のさらに特定の実施形態では、本方法のステップ（ｉ）は、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、デコリン、インターロイキン−８、腎臓損傷分子−１、マトリックスメタロプロテイナーゼ９、ミッドカイン、ミオグロビン、肺界面活性物質関連タンパク質Ｄ、幹細胞因子、及びトロポニンからなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または４つを超えるバイオマーカーのレベルを判定することを含む。
【００２０】
他の実施形態では、本方法に従って評価される臨床的変数（複数可）は、０．１未満、０．０５未満、０．０１未満、または０．００１未満のｐ値を有する表３Ａ及び３Ｂに列挙されるものから選択される。
【００２１】
さらに他の実施形態では、本方法のステップ（ｉｉ）は、年齢、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）歴、２型糖尿病歴、血液透析歴、心筋梗塞（ＭＩ）歴、経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴、及び性別からなる群から選択される少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定することを含む。
【００２２】
さらなる実施形態では、本方法のステップ（ｉ）は、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、デコリン、インターロイキン−８、腎臓損傷分子−１、マトリックスメタロプロテイナーゼ９、ミッドカイン、ミオグロビン、肺界面活性物質関連タンパク質Ｄ、幹細胞因子、及びトロポニンからなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または４つを超えるバイオマーカーのレベルを判定することを含み、ステップ（ｉｉ）は、年齢、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）歴、２型糖尿病歴、血液透析歴、心筋梗塞（ＭＩ）歴、経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴、及び性別から選択される少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定することを含む。
【００２３】
他の実施形態では、対象における閉塞性冠動脈疾患の陽性の診断は、介入またはさらなる試験の必要性の医師による判定を容易にする。介入またはさらなる試験は、診断的心臓カテーテル検査（「ｃａｔｈ」とも称される）、経皮冠動脈介入（ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）、ならびに硝酸塩、ベータ遮断剤、ＡＣＥ阻害剤、及び脂質低下剤のうちの１つ以上から選択されるもの等の薬理学的薬剤の投与のうちの１つ以上が含まれ得るが、これらに限定されない。
【００２４】
他の実施形態では、対象における閉塞性冠動脈疾患の陰性の診断は、介入またはさらなる試験の必要性の医師による判定を容易にする。介入またはさらなる試験は、高血圧、糖尿病、及び喫煙を含む冠動脈危険因子の進行中のモニタリング及び管理、ならびに食生活の改善、運動、及び禁煙から選択される生活様式の改善のうちの１つ以上が含まれ得るが、これらに限定されない。
【００２５】
本開示の別の態様は、対象における心臓転帰の予後のための方法を提供し、（ｉ）対象から得られた生物学的試料中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを判定することであって、バイオマーカーが、表２Ａ及び２Ｂに列挙されるバイオマーカーからなる群から選択される、判定することと、（ｉｉ）任意に、対象に対して少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定することであって、臨床的変数が、表４Ａ及び４Ｂに列挙される臨床的変数からなる群から選択される、判定することと、（ｉｉｉ）少なくとも１つのバイオマーカーの少なくとも１つの所定のレベル及びステップ（ｉｉ）において決定される臨床的変数（複数可）の状態に基づいて対象のための予後スコアを計算することと、（ｉｖ）陽性または陰性の予後として予後スコアを分類することと、（ｖ）陽性または陰性の予後に基づいて治療的または診断的介入レジメンを決定することと、を含む。
【００２６】
より特定の実施形態では、本方法で評価されるバイオマーカーは、０．１未満、０．０５未満、０．０１未満、または０．００１未満のｐ値を有する表２Ａ及び２Ｂに列挙されるものから選択される。
【００２７】
他の実施形態では、本方法に従って評価される臨床的変数（複数可）は、０．１未満、０．０５未満、０．０１未満、または０．００１未満のｐ値を有する表４Ａ及び４Ｂに列挙されるものから選択される。
【００２８】
他の特定の実施形態では、本方法のステップ（ｉ）は、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ、腎臓損傷分子−１、ミッドカイン、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、メタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−１）、及び血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ）からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または４つを超えるバイオマーカーのレベルを判定することを含む。
【００２９】
さらに他の実施形態では、心臓転帰の予後は、心臓血管系死亡、心筋梗塞（ＭＩ）、脳卒中、あらゆる原因による死亡、またはこれらの複合の予後である。
【００３０】
さらなる実施形態では、心臓転帰の陽性の予後は、介入またはさらなる試験の必要性の医師による判定を容易にする。介入またはさらなる試験は、ＥＣＧ応答を有する負荷試験または心筋灌流画像化、冠動脈コンピュータ断層撮影血管造影、診断的心臓カテーテル検査、経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）、臨床試験の登録、ならびに硝酸塩、ベータ遮断剤、ＡＣＥ阻害剤、抗血小板剤、及び脂質低下剤から選択されるが、これらに限定されない、薬剤の投与またはその効果のモニタリング、のうちの１つ以上が含まれ得るが、これらに限定されない。
【００３１】
他の実施形態では、心臓転帰の陰性の予後は、介入またはさらなる試験の必要性の医師による判定を容易にする。介入またはさらなる試験は、高血圧、糖尿病、脂質異常症、及び喫煙を含む冠動脈危険因子の進行中のモニタリング及び管理、ならびに食生活の改善、運動、及び禁煙から選択される生活様式の改善のうちの１つ以上が含まれ得るが、これらに限定されない。
【００３２】
他の態様では、本開示は、バイオマーカーのパネル、及び任意に記載されるような臨床的変数を含む診断用キットまたは予後キットを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ１３９／６８５（実施例１に記載される）に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８７のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図２】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、ＣＡＤパネルＦＭ１３９／６８５（実施例１に記載される）の分布を示す。二峰性分布が顕著であり、より高いスコアで分布された有意なＣＡＤを有する圧倒的多数のものを有する。陽性＝７０％以上の少なくとも１つの冠動脈狭窄を有する対象、陰性＝７０％以上の冠動脈狭窄を有しない対象。
【図３】内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、ＣＡＤパネルＦＭ１３９／６８５（実施例１に記載される）を、ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の予測可能性の５つのカテゴリーに分割する結果を示す。そうすることで、４２％の対象は、重度ＣＡＤに対しては、それぞれ、９３％のＰＰＶ及び９１％のＮＰＶを有する、「含める」または「除外され」得る。
【図４】パネルＦＭ１３９／６８５（実施例１に記載される）における、ＣＡＤスコアの関数として偶発的な急性ＭＩに対する時間を示すカプランマイヤー生存曲線を示す。ＣＡＤの診断ツールとして開発されたが、スコアはまた、追跡調査中の偶発的な急性ＭＩも予測した。
【図５】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ１４４／６９６に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８７のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図６】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ１４５／７０１に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．７２の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図７】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ１４６／６９０に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．６９の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図８】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ１５２／７５７に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．７３の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図９】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ１１７ａ／６５７に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８４のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図１０】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ１３９ＣＬａ／６５８に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８０のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図１１】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ１３９ＣＬｂ／７５０に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８４のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図１２】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ１３９ＣＬｃ／７５１に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８３のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図１３】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ１１７ｂ／６６３に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８５のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図１４】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ１３９ＣＬｄ／７５２に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８６のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図１５】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ１３９ＣＬｅ／７５３に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８５のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図１６】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ１３９ＣＬｆ／７５４に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８６のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図１７】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ１３９ＣＬｇ／７５５に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８６のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図１８】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ４６／５７２（実施例２に記載される）に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８４のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図１９】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、ＣＡＤパネルＦＭ４６／５７２（実施例２に記載される）の分布を示す。二峰性分布が顕著であり、より高いスコアで分布された有意なＣＡＤを有する圧倒的多数のものを有する。陽性＝７０％以上の少なくとも１つの冠動脈狭窄を有する対象、陰性＝７０％以上の冠動脈狭窄を有しない対象
【図２０】ＣＡＤスコアパネルＦＭ  ４６／５７２（実施例２に記載される）の関数として偶発的な急性ＭＩに対する時間を示すカプランマイヤー生存曲線を示す。ＣＡＤの診断ツールとして開発されたが、スコアはまた、追跡調査中の偶発的な急性ＭＩも予測した。
【図２１】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ４６Ｆｄ／５８６に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８４のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図２２】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ４６Ｆｅ／５８７に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８３のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図２３】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ４６Ｆｆ／５８８に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８０のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図２４】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ１８６／７９６に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８４のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図２５】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ１８９／７９８に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８３のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図２６】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ１８７／７９２に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８５のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図２７】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ１８８／７９４に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８５のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図２８】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２４３）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ０２／４１０（実施例３に記載される通り）に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８９のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図２９】重度ＣＡＤ（任意の血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための内部検証セット（Ｎ＝２４３）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ  ＣＡＤパネルＦＭ０１／３９０に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８７のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図３０】心臓血管系死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合の１年（３〜３６５日）の予後のための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ１６０／０２（実施例４に記載される）に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．７９の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図３１】心臓血管系死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合の１年（０〜３６５日）の予後のための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ９６／０４（実施例５に記載される）に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．７７の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図３２】心臓血管系死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合の１年（３〜３６５日）の予後のための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ１９０／３３に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．７８の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図３３】心臓血管系死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合の１年（０〜３６５日）の予後のための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ９８／０３に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．７５の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図３４】あらゆる原因による死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合の１年（３〜３６５日）の予後のための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ２０９／０２に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．７９の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図３５】あらゆる原因による死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合の１年（０〜３６５日）の予後のための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ１１１／０５に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．７７の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図３６】あらゆる原因による死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合の１年（３〜３６５日）の予後のための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ２１０／０３に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．７８の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図３７】あらゆる原因による死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合の１年（０〜３６５日）の予後のための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ１１０／０４に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．７５の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図３８】心臓血管系死亡または心筋梗塞の複合の１年（３〜３６５日）の予後のための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ２１１／０３に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．７９の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図３９】心臓血管系死亡または心筋梗塞の複合の１年（０〜３６５日）の予後のための内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ７７／２６に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．７７の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図４０】心臓血管系死亡または心筋梗塞の複合の１年（３〜３６５日）の予後の内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ２１２／０２に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．７９の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図４１】心筋梗塞の１年（３〜３６５日）の予後の内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ２０１／ＭＩ００２に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．７６の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図４２】心筋梗塞の１年（３〜３６５日）の予後の内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ２０４／ＭＩ００３に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．７６の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図４３】心筋梗塞の１年（３〜３６５日）の予後の内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ２０２／ＭＩ００５に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．７５の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図４４】心筋梗塞の１年（３〜３６５日）の予後の内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ２０５／ＭＩ００７に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．７５の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図４５】心筋梗塞の１年（０〜３６５日）の予後の内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ６３／６４に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．７３の曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図４６】心臓血管系死亡の１年（０〜３６５日）の予後の内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ５２／２４４に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８０のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図４７】心臓血管系死亡の１年（３〜３６５日）の予後の内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ１９４／ＣＶＤ００１に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８０のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図４８】心臓血管系死亡の１年（３〜３６５日）の予後の内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ１９３／Ｒ０８に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８０のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図４９】心臓血管系死亡の１年（０〜３６５日）の予後の内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ５３／２３７に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８１のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図５０】心臓血管系死亡の１年（３〜３６５日）の予後の内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ１９５／ＣＶＤ００２に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８１のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図５１】心臓血管系死亡の１年（３〜３６５日）の予後の内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ２０７／０４に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８３のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【図５２】心臓血管系死亡の１年（３〜３６５日）の予後の内部検証セット（Ｎ＝２７８）における、Ｐｒｅｖｅｎｃｉｏ予後パネルＦＭ２０８／Ｒ０５に対する受信者操作特性曲線を示す。パネルは、０．８２のロバストな曲線下面積（ＡＵＣ）を有した。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
本発明の実施は、反対に明確に示されない限り、当業者の技量の範囲内である、従来の化学、生物化学、有機化学、分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ技法、遺伝学、免疫学、及び細胞生物学の方法が用いられ、これらの多くは、例示の目的について以下に記載されるよう。かかる技法は、文献内に十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９）、Ｍａｎｉａｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８２）、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、２００８年７月に更新）、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｒｏｍ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｇｌｏｖｅｒ，ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ  ＆  ＩＩ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８５）、Ａｎａｎｄ，Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｇｅｎｏｍｅｓ，（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９２）、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．，１９８４）、Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）、及びＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９８）を参照のこと。
【００３５】
本明細書に言及され、上記及び下記に参照される、全ての特許、特許出願、論文、及び刊行物は、参照によりそれらの全体が本明細書に明確に組み込まれる。
【００３６】
本明細書において定義しない限り、全ての技術的及び科学的用語は、本開示が属する技術分野における当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に含まれる用語を含む様々な科学的辞書は、当業者には既知であり、利用可能である。本明細書に記載されるものに類似するまたは等価の任意の方法及び材料を、本開示の実践または試験で使用することができるが、いくつかの好ましい方法及び材料が、説明されている。したがって、直下に定義される用語は、概して、本明細書を参照することによってより十分に理解される。説明される特定の方法論、プロトコル、及び試薬は、これらが当業者によって使用される文脈に応じて変動し得ることから、本開示は、それらに限定されないことは理解されるべきである。
【００３７】
本明細書に使用される、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数形の用語は、別途明確に示されない限り、複数形の照応を含む。
【００３８】
本明細書で使用される、「発明」または「本発明」という用語は、非限定的用語であり、特定の発明の任意の単一の実施形態を指すことを意図されないが、本明細書及び特許請求の範囲に説明される、全ての可能な実施形態を包含する。
【００３９】
本明細書を通じて、例えば、「ある実施形態」、「一実施形態」、「別の実施形態」、「特定の実施形態」、「関連した実施形態」、「ある特定の実施形態」、「追加の実施形態」、もしくは「さらなる実施形態」、またはこれらの組み合わせへの言及は、実施形態に関連して説明される特定の特性、構造、または特徴が本発明の少なくとも１つの実施形態において含まれることを意味する。したがって、本明細書を通じて、様々な箇所の前述の言い回しの出現が、必ずしも全てが同じ実施形態を指しているものではない。さらに、特定の特性、構造、または特徴は、１つ以上の実施形態においてあらゆる好適な様式で組み合わせることができる。
【００４０】
本明細書に使用される、「約」または「およそ」という用語は、参照の量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量、または長さに対して３０、２５、２０、２５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１％と同じ程度で変動する量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量、または長さを指す。特定の実施形態では、数値の前の「約」または「およそ」という用語は、プラスまたはマイナス１５％、１０％、５％、または１％の範囲の値を示す。
【００４１】
本明細書を通じて、文脈にそうでないことが必要とされない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ、ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という語は、言明されたステップもしくは要素またはステップもしくは要素の群の包含を含意し、任意の他のステップもしくは要素またはステップもしくは要素の群の除外を含意しないことが理解されよう。「からなる」とは、「からなる」という語句に後続するいかなる内容も含まれるがこれらに限定されないことを意味する。したがって、「からなる」という語句は、列挙された要素が必要または必須であり、他のいかなる要素も存在し得ないことを示す。「から本質的になる」とは、語句の後に列挙され、列挙された要素について開示で指定された活動または作用に干渉しないかまたはこれに寄与する他の要素に限定される、いかなる要素も含まれることを意味する。したがって、「から本質的になる」という語句は、列挙された要素が必要または必須であるが、他の要素が任意選択ではなく、存在してもよいか、存在しなくてもよいかは、列挙された要素の活動または作用に影響を及ぼすのかどうかに応じて異なることを示す。
【００４２】
心臓血管疾患及び事象
本開示は、概して、心臓血管疾患及び／または有害な心臓血管事象の診断及び／または予後に関する。本明細書に使用される、「診断」という用語は、対象における心臓血管疾患または事象の存在の特定または可能性を指す。また、本明細書に使用される、「予後」という用語は、特定の結果または特定の事象を発生する対象の可能性または危険性を指す。
【００４３】
「心臓血管疾患」という用語は、心臓または血管を伴う疾患のクラスを指す。心臓血管疾患には、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、心筋梗塞（心臓発作として一般的に知られている）、脳卒中、高血圧性心疾患、リウマチ性心疾患、心筋症、心不整脈（すなわち、心房細動、心室性頻拍症等）、脳血管疾患、末梢動脈疾患、及び動脈血栓症が含まれる。
【００４４】
本明細書で使用される「心臓血管事象」という用語は、心臓血管系に関する様々な有害結果を示す。これらの事象としては、心筋梗塞、心臓血管系死亡、及び脳卒中が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４５】
「冠動脈疾患」または「ＣＡＤ」という用語は、特定の種類の心臓血管疾患を指す。「閉塞性冠動脈疾患」は、冠動脈内のアテローム性動脈硬化の閉塞を特徴とする。このような閉塞は、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、または１００％のレベルで臨床的に関連し得る。アテローム性動脈硬化プラークは、アテローム性動脈硬化症の顕著な特徴であり、冠動脈内腔を次第に狭くし、順行性心筋血流を減じる。冠動脈流の減少は、症候性または無症候性であり得る。冠動脈閉塞症の症状は、典型的には、労作時に生じるが、安静時に生じ得、閉塞の重症度及び進展の速さに応じて、心筋梗塞、脳卒中、及び／または心臓血管系死亡に至る場合がある。
【００４６】
本明細書で使用される、「心臓血管系死亡」または「ＣＶ死亡」、または「ＣＶＤ」という用語は、急性心筋梗塞（ＭＩ）によって生じる死亡、突然心臓死、心不全（ＨＦ）による死亡、脳卒中による死亡、心臓血管（ＣＶ）手術による死亡、ＣＶ血栓症もしくは出血による死亡、心臓感染症による死亡、及び試験試料が得られた後の特定の期間内に引き起こされる他の認識されたＣＶによる死亡を指す。
【００４７】
「心筋梗塞」または「ＭＩ」及び「急性心筋梗塞」または「ＡＭＩ」という用語は、一般に、心臓発作として知られており、血流が心臓の一部に限定されるときに生じ、心筋肉への損傷を引き起こす。最も一般的な症状は、肩、腕、背中、首、または顎に移行し得る胸痛または不快感である。しばしば、その症状は、胸部の中心または左側にあり、数分以上続く。不快感は、しばしば、胸焼けのように感じる場合がある。他の症状は、息切れ、吐き気、卒倒、冷汗、または疲労感を含み得る。ほとんどのＭＩは、閉塞性冠動脈疾患により生じる。閉塞性冠動脈疾患の特定された危険因子は、とりわけ、高血圧、喫煙、糖尿病、運動不足、肥満、高い血中コレステロール、貧しい食生活、早期心臓血管系死亡または心筋梗塞の家族歴、及び過剰なアルコール摂取を含む。ＭＩの機序は、しばしば、冠動脈の完全な遮断を引き起こすアテローム性硬化プラークの進行または破裂を伴う。ＭＩは、一般的ではないが、とりわけ、コカイン等の薬物、著しい感情的ストレス、及び極寒によるものであり得る、冠動脈のけいれんによって引きこされる。
【００４８】
脳血管発作（ＣＶＡ）、脳循環不全（ＣＶＩ）、または脳発作としても知られている「脳卒中」という用語は、脳への不十分な血流が、脳細胞死を招く場合の状況を指す。血栓症または塞栓によって引き起こされる血流の不足による虚血性、及び出血による出血性の２つの主な種類の脳卒中がある。それらは、典型的には、冒された脳の部分において著しい機能障害をもたらす。脳卒中の兆候及び症状は、とりわけ、体の片側における触覚、熱い冷たいという感覚、または痛みを移動させることまたは経験ができないこと、理解もしくは会話の問題、世界が回転しているような感覚、または片方の視力低下を含み得る。兆候及び症状は、しばしば、脳卒中が発生した直後に現れる。
【００４９】
「あらゆる原因による死亡」または「あらゆる原因による死亡率」という用語は、試験試料が得られた後の特定の期間内に、ＣＶ死を含むあらゆる非外傷関連の原因からの死亡として定義される。
【００５０】
バイオマーカー及び臨床的変数
本明細書に記載される、本発明のバイオマーカーは、心臓血管疾患及び事象の診断及び予後において有利に使用され得る。「マーカー」及び「バイオマーカー」という用語は、本開示を通して同義に使用される。本明細書に使用される、バイオマーカーは、概して、タンパク質またはポリペプチドを指し、このレベルまたは濃度が、特定の生物学的状態、特に、心臓血管疾患、事象、または結果と関連する状態と関連する。本発明のパネル、アッセイ、キット、及び方法は、抗体、その結合断片、または本明細書に記載されるバイオマーカーに対して特異的である、他の種類の結合剤を含み得る。
【００５１】
本明細書に同義に使用される「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、任意の長さのアミノ酸のポリマー形態を指し、それはコード化及び非コード化アミノ酸、化学的または生化学的に修飾または誘導体化されたアミノ酸、ならびに修飾ペプチド主鎖を有するポリペプチドを含み得る。様々な実施形態では、生物学的試料中の天然に存在するバイオマーカータンパク質のレベルの検出は、本明細書に開示される診断、予後、またはモニタリング方法で用いるために企図される。本用語はまた、異種アミノ酸配列を有する天然に存在する融合タンパク質、異種及び相同リーダー配列を有し、Ｎ末端メチオニン残基を有するかまたは有しない融合物を含むが、これらに限定されない融合タンパク質、免疫学的にタグをつけたタンパク質等も含む。
【００５２】
「実質的に単離された」または「単離された」物質は、自然に関連する周囲材料を実質的に含まないものである。実質的に含まないとは、自然に関連する材料が少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、さらにより好ましくは少なくとも９０％ないことを意味する。本明細書に使用される、「単離された」は、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体、細胞、試料等を指し得る。
【００５３】
本発明のある特定の例示的な診断バイオマーカーは、表１Ａ及び１Ｂに列挙されるものが見出され得、一方、ある特定の例示的な予後バイオマーカーは、表２Ａ及び２Ｂに列挙されるものが見出され得る。表１Ａ、１Ｂ、２Ａ、及び２Ｂの中の情報に基づいて、当業者は、本開示に従って、バイオマーカーまたはバイオマーカーの組み合わせを容易に特定、選択、及び実装することができる。
【００５４】
ある特定の実施形態では、本発明に従って使用されるバイオマーカーは、表１Ａ、１Ｂ、２Ａ、及び２Ｂ中に列挙されるもの、特に、０．１未満、０．０５未満、０．０１未満、または０．００１未満のｐ値と関連するものを含む。
【００５５】
他の特定の実施形態では、本開示に従って使用されるバイオマーカーは、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、デコリン、インターロイキン−８、腎臓損傷分子−１、マトリックスメタロプロテイナーゼ９、ミッドカイン、ミオグロビン、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、肺界面活性物質関連タンパク質Ｄ、幹細胞因子、メタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−１）、トロポニン、及び血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ）からなる群から選択される。
【００５６】
本明細書に使用される、「アディポネクチン」は、グルコースの調節、及び脂肪酸の分解に関与するタンパク質を指す。それはまた、ＧＢＰ−２８、ａｐＭ１、ＡｄｉｐｏＱ、及びＡｃｒｐ３０とも称される。アディポネクチンは、脂肪組織によって分泌される２４４のアミノ酸ペプチドであり、その役割には、グルコース及び脂肪酸代謝の調節が含まれる。
【００５７】
本明細書に使用される、「アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ」は、血漿中の高比重リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロールに見られるアポリポタンパク質を指す。
【００５８】
本明細書に使用される、「アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ」は、血漿中に通常見られるリポタンパク質のタンパク質成分であり、エステル化レシチンコレステロールの活性化及び組織からのコレステロールの除去に関与する。
【００５９】
本明細書に使用される、ＰＧ４０及びＰＧＳ２としても既知である「デコリン」は、小ロイシン豊富なプロテオグリカンファミリーに属するタンパク質である。それは、細胞外コラーゲンマトリックスの組み立てを調節する。
【００６０】
本明細書に使用される、ＩＬ８、好中球走化因子、ケモカインリガンド８、及びＣＸＣＬ８としても既知である「インターロイキン−８」は、マクロファージ、ならびに上皮細胞、気道平滑筋細胞、及び内皮細胞等の他の細胞型によって産生されるケモカインである。それは、標的細胞において、第一に、好中球であるが、他の顆粒球の走化性を誘導し、感染の部位に向かって移動させる。ＩＬ−８はまた、到着すると、ファゴサイトーシスを誘導する。ＩＬ−８はまた、血管新生の強力なプロモーターであることも既知である。標的細胞において、ＩＬ−８は、移動及びファゴサイトーシスに必要とされる一連の生理学的応答、例えば、細胞内Ｃａ２＋の増加、エクソサイトーシス（例えば、ヒスタミン放出）、及び呼吸バーストを誘導する。
【００６１】
本明細書に使用される、「ＫＩＭ−１」としても既知である「腎臓損傷分子−１」は、酸化リポタンパク質に対する受容体として役立つ１型細胞膜糖タンパク質であり、腎臓において機能的役割を果たす。ＫＩＭ−１は、濃度が急性腎臓傷害に連結されている近位尿細管マーカーである。
【００６２】
本明細書に使用される、ＭＭＰ−９、９２ｋＤＡのＩＶ型コラゲナーゼ、９２ｋＤａゼラチナーゼ、及びゼラチナーゼＢまたはＧＥＬＢとしても既知である「マトリックスメタロプロテイナーゼ９」は、細胞外マトリックスの分解に関与する亜鉛−メタロプロテイナーゼファミリーに属する酵素のクラスである、マトリキシンである。マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）ファミリーのタンパク質は、胚発育、再生、血管新生、骨発育、創傷治癒、細胞遊走、学習及びメモリのような正常な生理学的プロセスにおける、ならびに関節炎、脳内出血、及び転移のような病理学的プロセスにおける、細胞外マトリックスの分解に関与している。
【００６３】
本明細書に使用される、「神経突起成長促進因子２」または「ＮＥＧＦ２」としても既知である「ミッドカイン」は、低分子量の塩基性ヘパリン結合成長因子を指し、プレイオトロフィンを有するファミリーを形成する。ミッドカインは、１３ｋＤａの分子量を有するヘパリン結合サイトカイン／成長因子である。
【００６４】
本明細書に使用される、「ミオグロビン」は、一般に、ほぼ全ての哺乳動物の脊椎動物の筋肉組織に見られる鉄−及び酸素−結合タンパク質である。ミオグロビンは、損傷した筋肉組織（横紋筋融解症）から放出され、非常に高い濃度のミオグロビンを有する。放出されたミオグロビンは、腎臓によって濾過されるが、腎尿細管上皮に毒性であり、それで、急性腎臓傷害を引き起こし得る。それは、ミオグロビン自体ではなく、毒性がある（プロトキシンである）が、酸性環境（例えば、酸性尿、リソソーム）においてミオグロビンから分解されるフェリヘム酸塩（ｆｅｒｒｉｈｅｍａｔｅ）部分である。ミオグロビンは、筋肉損傷に対する感受性マーカーであり、胸痛を有する患者における心臓発作に対する潜在的なマーカーにする。
【００６５】
本明細書に使用される、「脳性ナトリウム利尿ペプチドのＮ末端プロホルモン」または「ＮＴ−ＰＢＮＰ」はまた、「ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ」または「ＢＮＰＴ」としても既知であり、ｐｒｏＢＮＰから切断され、脳性ナトリウム利尿ペプチドを放出するＮ末端不活性タンパク質を指す。
【００６６】
本明細書に使用される、骨芽細胞中で最初に特定される「骨シアロタンパク質Ｉ」、「ＢＳＰ−１」、「ＢＮＳＰ」、「初期Ｔリンパ球活性化」、「ＥＴＡ−１」、「分泌ホスホタンパク質１」、「ＳＰＰ１」、「２ａｒ」、「Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ耐性」、または「Ｒｉｃ」としても既知である「オステオポンチン」は、糖タンパク質（小インテグリン結合リガンドＮ結合型糖タンパク質）を指す。それは、全てのアイソフォーム及び翻訳後修飾を含む。
【００６７】
本明細書に使用される、界面活性剤、肺関連タンパク質Ｄ、またはＳＰ−ＤもしくはＳＦＴＰＤとも称される、「肺界面活性物質関連タンパク質Ｄ」は、吸入微生物、有機抗原、及び毒素に対する肺の防御に寄与するタンパク質である。
【００６８】
本明細書に使用される、ＳＣＦ、ＫＩＴ−リガンド、ＫＬ、及びスチール因子としても既知である「幹細胞因子」は、ｃ−ＫＩＴ受容体（ＣＤ１１７）に結合するサイトカインである。ＳＣＦは、膜貫通タンパク質及び可溶性タンパク質との両方とも存在し得る。このサイトカインは、造血（血液細胞の形成）、精子形成、及びメラニン形成において重要な役割を果たす。
【００６９】
本明細書に使用される、「ＴＩＭＰ−１」または「ＴＩＭＰメタロペプチダーゼ阻害剤１」としても既知である「メタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤」は、いくつかの組織で発現される糖タンパク質を指す。それは、細胞外マトリックスの分解に関与するペプチダーゼの一群のマトリックスメタロプロテイナーゼの天然阻害剤である。それは、広範囲の細胞型において細胞増殖を促進することができる。
【００７０】
本明細書に使用される、トロポニン複合体としても既知である「トロポニン」は、３つの調節タンパク質（トロポニンＣ、トロポニンＩ、及びトロポニンＴ）の複合体であり、骨格筋及び心筋の筋肉収縮に不可欠であるが、平滑筋には不可欠でない。本明細書に使用される、トロポニンバイオマーカーは、個々にまたは組み合わせて、これらのタンパク質のそれぞれを特定し得る。血液中のトロポニン循環の心タンパク質アイソフォームのレベルの増加は、心臓障害のバイオマーカーであることが示されており、このうちの最も重要なものが、心筋梗塞である。トロポニンレベルの上昇は、分子が心臓への損傷時に血液に放出される場合に心筋細胞死を示す。
【００７１】
本明細書に使用される、ＶＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ、分化クラスター１０６、及びＣＤ１０６としても既知である「血管細胞接着分子」は、細胞接着分子である。ＶＣＡＭ−１タンパク質は、リンパ球、単球、好酸球、及び好塩基球の血管内皮への接着を媒介する。それはまた、白血球−内皮細胞のシグナル伝達において機能し、アテローム性動脈硬化症及びリウマチ性関節炎の発症において役割を果たし得る。
【００７２】
本明細書に開示されるこれら及び他のバイオマーカー（例えば、表１Ａ、１Ｂ、２Ａ、及び２Ｂに記載されるもの）が、本明細書に提供される情報を考慮して本開示の文脈において、容易に特定され、作製され、使用され得ることが当業者には理解されるであろう。
【００７３】
本明細書に使用される、「スコア」という用語は、診断または予後の判定に関する場合の、２変数、複数レベル、または連続的結果を指す。
【００７４】
本明細書に使用される、「パネル」という用語は、対象における心臓血管疾患または転帰の診断または予後を判定するために使用されるバイオマーカー及び臨床的マーカーの特定の組み合わせを指す。「パネル」という用語はまた、対象における心臓血管疾患または転帰の診断または予後を判定するために使用される一連のバイオマーカーを含むアッセイも指し得る。
【００７５】
本明細書にさらに記載されるように、「訓練セット」は、最終診断または予後モデルを訓練する（すなわち、発生させる、評価する、及び構築する）プロセスにおいて使用される患者または患者試料のセットである。「検証セット」は、訓練プロセスから差し引かれる患者または患者試料のセットであり、最終診断モデルまたは予後モデルの性能を検証するためにのみ使用される。
【００７６】
本明細書にさらに記載されるように、本発明のバイオマーカーは、任意に、対象における心臓血管疾患または事象の改善された診断及び／または予後を提供するために、ある特定の臨床的変数と組み合わせて使用され得る。例えば、本開示の文脈において有用な例示的な臨床的変数が、見出され、表３Ａ、３Ｂ、４Ａ、及び４Ｂに列挙され得る。
【００７７】
以下の表１Ａは、任意の末梢カテーテルを伴ってまたは伴わずに、冠動脈カテーテルを受容した対象のコホートにおける訓練セット（Ｎ＝６４９）中で、７０％以上の少なくとも１つの冠動脈狭窄を有する者（Ｎ＝４２８）と、有しなかった者との間で異なる、バイオマーカー濃度及びそれらの診断的関連性を示す。
【００７８】
【表１Ａ−１】
2019507354.tif 000003
【表１Ａ−２】
2019507354.tif 000004
【表１Ａ−３】
2019507354.tif 000005
【表１Ａ−４】
2019507354.tif 000006
【表１Ａ−５】
2019507354.tif 000007
【表１Ａ−６】
2019507354.tif 000008
【００７９】
以下の表１Ｂは、冠動脈カテーテルのみを受容した対象のコホートにおける訓練セット（Ｎ＝５６６）中で、７０％以上の少なくとも１つの冠動脈狭窄を有する者（Ｎ＝３６１）と、有しなかった者との間で異なる、バイオマーカー濃度及びそれらの診断的関連性を示す。
【００８０】
【表１Ｂ−１】
2019507354.tif 000009
【表１Ｂ−２】
2019507354.tif 000010
【表１Ｂ−３】
2019507354.tif 000011
【表１Ｂ−４】
2019507354.tif 000012
【表１Ｂ−５】
2019507354.tif 000013
【表１Ｂ−６】
2019507354.tif 000014
【００８１】
表２Ａは、採血から３６５日以内に主要有害心臓事象（ＭＡＣＥ）を有する患者におけるバイオマーカー濃度及びそれらの予後関連性を示す（訓練セット、Ｎ＝６４９に対して）。この表の数字は、ＣＶ死亡、ＭＩ、または主要脳卒中による１年のＭＡＣＥの複合エンドポイントを用いて計算され、これらのタンパク質は、あらゆる原因による死亡、ＭＩ、及び／または主要脳卒中による１年のＭＡＣＥの複合エンドポイントを用いて同様の結果を生成する。
【００８２】
【表２Ａ−１】
2019507354.tif 000015
【表２Ａ−２】
2019507354.tif 000016
【表２Ａ−３】
2019507354.tif 000017
【表２Ａ−４】
2019507354.tif 000018
【表２Ａ−５】
2019507354.tif 000019
【００８３】
以下の表２Ｂは、訓練セット（Ｎ＝６４８）中で、採血から３〜３６５日の主要有害心臓事象（ＭＡＣＥ）を有する者と、有しなかった者との間で異なる、バイオマーカー濃度及びそれらの予後関連性を示す。この表の数字は、ＣＶ死亡、ＭＩ、または主要脳卒中による１年のＭＡＣＥの複合エンドポイントを用いて計算され、これらのタンパク質は、あらゆる原因による死亡、ＭＩ、及び／または主要脳卒中による１年のＭＡＣＥの複合エンドポイントを用いて同様の結果を生成する。
【００８４】
【表２Ｂ−１】
2019507354.tif 000020
【表２Ｂ−２】
2019507354.tif 000021
【表２Ｂ−３】
2019507354.tif 000022
【表２Ｂ−４】
2019507354.tif 000023
【表２Ｂ−５】
2019507354.tif 000024
【００８５】
以下の表３Ａは、任意の末梢カテーテルを伴ってまたは伴わずに、冠動脈カテーテルを受容した対象のコホートにおける訓練セット（Ｎ＝６４９）中で、７０％以上の少なくとも１つの冠動脈狭窄を有する者（Ｎ＝４２８）と、有しなかった者との間で異なる、ベースラインでの臨床的変数及びそれらの診断的関連性を示す。
【００８６】
【表３Ａ−１】
2019507354.tif 000025
【表３Ａ−２】
2019507354.tif 000026
【表３Ａ−３】
2019507354.tif 000027
【表３Ａ−４】
2019507354.tif 000028
全ての連続変数は、別途指定されない限り、平均±標準偏差として表される。ＢＰ＝血圧、ＭＩ＝心筋梗塞、ＣＯＰＤ＝慢性閉塞性肺疾患、ＣＶＡ／ＴＩＡ＝脳血管障害／一過性脳虚血発作、ＣＫＤ＝慢性腎臓疾患、ＣＡＢＧ＝冠動脈バイパス移植術、ＡＣＥ−Ｉ／ＡＲＢ＝アンジオテンシン変換酵素阻害剤／アンジオテンシン受容体遮断薬、ＣＣＢ＝カルシウムチャネル遮断薬、ＬＶＥＦ＝左心室駆出分画率、ＲＶＳＰ＝右心室収縮期圧、ｅＧＦＲ＝推定糸球体濾過量、ＬＤＬ＝低密度リポタンパク質、ＨＧＢ＝ヘモグロビン。
【００８７】
以下の表３Ｂは、冠動脈カテーテルのみを受容した対象のコホートにおける訓練セット（Ｎ＝５６６）中で、７０％以上の少なくとも１つの冠動脈狭窄を有する者（Ｎ＝３６１）と、有しなかった者との間で異なる、ベースラインの臨床的変数及びそれらの診断的関連性を示す。
【００８８】
【表３Ｂ−１】
2019507354.tif 000029
【表３Ｂ−２】
2019507354.tif 000030
【表３Ｂ−３】
2019507354.tif 000031
全ての連続変数は、別途指定されない限り、平均±標準偏差として表される。ＢＰ＝血圧、ＭＩ＝心筋梗塞、ＣＯＰＤ＝慢性閉塞性肺疾患、ＣＶＡ／ＴＩＡ＝脳血管障害／一過性脳虚血発作、ＣＫＤ＝慢性腎臓疾患、ＣＡＢＧ＝冠動脈バイパス移植術、ＡＣＥ−Ｉ／ＡＲＢ＝アンジオテンシン変換酵素阻害剤／アンジオテンシン受容体遮断薬、ＣＣＢ＝カルシウムチャネル遮断薬、ＬＶＥＦ＝左心室駆出分画率、ＲＶＳＰ＝右心室収縮期圧、ｅＧＦＲ＝推定糸球体濾過量、ＬＤＬ＝低密度リポタンパク質、ＨＧＢ＝ヘモグロビン。
【００８９】
以下の表４Ａは、訓練セット（Ｎ＝６４９）中で、採血から３６５日以内の主要有害心臓事象（ＭＡＣＥ）を有する患者における者との間で異なる、ベースラインの臨床的変数及びそれらの予後関連性を示す。この表の数字は、ＣＶ死亡、ＭＩ、または主要脳卒中による１年のＭＡＣＥの複合エンドポイントを用いて計算され、これらのタンパク質は、あらゆる原因による死亡、ＭＩ、及び／または主要脳卒中による１年のＭＡＣＥの複合エンドポイントを用いて同様の結果を生成する。
【００９０】
【表４Ａ−１】
2019507354.tif 000032
【表４Ａ−２】
2019507354.tif 000033
【表４Ａ−３】
2019507354.tif 000034
全ての連続変数は、別途指定されない限り、平均±標準偏差として表される。ＢＰ＝血圧、ＭＩ＝心筋梗塞、ＣＯＰＤ＝慢性閉塞性肺疾患、ＣＶＡ／ＴＩＡ＝脳血管障害／一過性脳虚血発作、ＣＫＤ＝慢性腎臓疾患、ＣＡＢＧ＝冠動脈バイパス移植術、ＡＣＥ−Ｉ／ＡＲＢ＝アンジオテンシン変換酵素阻害剤／アンジオテンシン受容体遮断薬、ＣＣＢ＝カルシウムチャネル遮断薬、ＬＶＥＦ＝左心室駆出分画率、ＲＶＳＰ＝右心室収縮期圧、ｅＧＦＲ＝推定糸球体濾過量、ＬＤＬ＝低密度リポタンパク質、ＨＧＢ＝ヘモグロビン。
【００９１】
以下の表４Ｂは、訓練セット（Ｎ＝６４８）中で、採血から３〜３６５日の主要有害心臓事象（ＭＡＣＥ）を有する者と、有しなかった者との間で異なる、ベースラインの臨床的変数及びそれらの予後関連性を示す。この表の数字は、ＣＶ死亡、ＭＩ、または主要脳卒中による１年のＭＡＣＥの複合エンドポイントを用いて計算され、これらのタンパク質は、あらゆる原因による死亡、ＭＩ、及び／または主要脳卒中による１年のＭＡＣＥの複合エンドポイントを用いて同様の結果を生成する。
【００９２】
【表４Ｂ−１】
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【表４Ｂ−２】
2019507354.tif 000036
【表４Ｂ−３】
2019507354.tif 000037
全ての連続変数は、別途指定されない限り、平均±標準偏差として表される。ＢＰ＝血圧、ＭＩ＝心筋梗塞、ＣＯＰＤ＝慢性閉塞性肺疾患、ＣＶＡ／ＴＩＡ＝脳血管障害／一過性脳虚血発作、ＣＫＤ＝慢性腎臓疾患、ＣＡＢＧ＝冠動脈バイパス移植術、ＡＣＥ−Ｉ／ＡＲＢ＝アンジオテンシン変換酵素阻害剤／アンジオテンシン受容体遮断薬、ＣＣＢ＝カルシウムチャネル遮断薬、ＬＶＥＦ＝左心室駆出分画率、ＲＶＳＰ＝右心室収縮期圧、ｅＧＦＲ＝推定糸球体濾過量、ＬＤＬ＝低密度リポタンパク質、ＨＧＢ＝ヘモグロビン。
【００９３】
診断及び予後方法
本発明の方法は、概して、対象における心臓血管疾患または転帰の診断及び／または予後を提供することに関し、本方法は、（ｉ）対象から得られた生物学的試料中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを判定するステップであって、特に、バイオマーカーが、表１Ａ、１Ｂ、２Ａ、及び２Ｂに記載されるものからなる群から選択される、判定するステップと、（ｉｉ）任意に、対象の少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定するステップであって、臨床的変数が、表３Ａ、３Ｂ、４Ａ、及び４Ｂに記載されるものからなる群から選択される、判定するステップと、（ｉｉｉ）ステップ（ｉ）において判定されたバイオマーカーのレベルと、任意にステップ（ｉｉ）において判定された臨床的変数（複数可）の状態とに基づいて、診断または予後スコアを計算するステップと、（ｉｖ）陽性または陰性の結果として診断または予後スコアを分類するステップと、（ｖ）陽性または陰性の結果に基づいて、治療的または診断的介入レジメンを決定するステップと、を含む。
【００９４】
本発明の実施形態は、対象における心臓血管の状態を評価するための方法を提供し、本方法は、（ｉ）評価のために選択された対象からの試料を得ることと、（ｉｉ）（ａ）アッセイされるバイオマーカー（複数可）の検出に対して特異的に結合する１つ以上の抗体を、試料と接触させ、（ｂ）１つ以上のアッセイ結果を提供するためにそれぞれの抗体に対してアッセイされる各バイオマーカーの結合を示す１つ以上のアッセイ結果を生じる、アッセイ装置に、対象から得られた試料を導入することによって、表１Ａ、１Ｂ、２Ａ、及び２Ｂに記載されるものからなる群から選択されるバイオマーカーを検出するように設定される１つ以上のアッセイを実施することと、（ｉｉｉ）任意に、対象の少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定することであって、臨床的変数が、表３Ａ、３Ｂ、４Ａ、及び４Ｂに記載されるものからなる群から選択される、判定することと、（ｉｖ）アッセイ装置によって生じるアッセイ結果（複数可）、及び任意に臨床的変数の状態を、対象の心臓血管の状態と相関させることであって、前記相関ステップが、アッセイ結果（複数可）を、対象の心臓血管の状態のリスク層化、予後、診断、分類、及びモニタリングのうちの１つ以上と相関させることを含み、前記相関ステップが、アッセイ結果（複数可）に基づいて、陽性または陰性の診断の可能性、または対象に対する心臓血管の状態の１つ以上の将来的な変化を割り当てることを含む、相関させることと、（ｖ）患者が割り当てられた、個体の所定のサブ集団に基づいて、患者を治療することであって、治療が、治療的または診断的介入レジメンを含む、治療することと、を含む。
【００９５】
本発明の実施形態は、対象における閉塞性冠動脈疾患を診断するための方法を提供し、（ｉ）評価のために選択された対象から試料を得ることと、（ｉｉ）（ａ）アッセイされるバイオマーカー（複数可）の検出に対して特異的に結合する１つ以上の抗体を、試料と接触させ、（ｂ）１つ以上のアッセイ結果を提供するためにそれぞれの抗体に対してアッセイされる各バイオマーカーの結合を示す１つ以上のアッセイ結果を生じる、アッセイ装置に、対象から得られた前記試料を導入することによって、表１Ａ及び１Ｂに記載されるものからなる群から選択されるバイオマーカーを検出するように設定される１つ以上のアッセイを実施することと、（ｉｉｉ）任意に、対象に対して少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定することであって、臨床的変数が、表３Ａ及び３Ｂに記載されるものからなる群から選択される、判定することと、（ｉｖ）アッセイ装置によって生じるアッセイ結果（複数可）、及び任意に臨床的変数の状態を、閉塞性冠動脈疾患と相関させることであって、前記相関ステップが、アッセイ結果（複数可）及び任意に臨床的変数（複数可）を、診断スコアと相関させることを含み、前記相関ステップが、スコアを、陽性または陰性の結果に割り当てることを含む、相関させることと、（ｖ）陽性または陰性の結果に基づいて、患者を治療することであって、治療が、治療的または診断的介入レジメンを含む、治療することと、を含む。
【００９６】
さらに他の実施形態では、本開示は、時間エンドポイント内の対象における心臓転帰の予後のための方法を提供し、（ｉ）評価のために選択された対象から試料を得ることと、（ｉｉ）（ａ）アッセイされるバイオマーカー（複数可）の検出に対して特異的に結合する１つ以上の抗体を、試料と接触させ、（ｂ）１つ以上のアッセイ結果を提供するためにそれぞれの抗体に対してアッセイされる各バイオマーカーの結合を示す１つ以上のアッセイ結果を生じる、アッセイ装置に、対象から得られた試料を導入することによって、表２Ａ及び２Ｂに記載されるものからなる群から選択されるバイオマーカーを検出するように設定される１つ以上のアッセイを実施することと、（ｉｉｉ）任意に、対象に対して少なくとも１つの臨床的変数の状態を判定することであって、臨床的変数が、表４Ａ及び４Ｂに記載されるものからなる群から選択される、判定することと、（ｉｖ）アッセイ装置によって生じるアッセイ結果（複数可）及び任意に臨床的変数の状態を、対象における心臓転帰の可能性と相関させることであって、前記相関ステップが、アッセイ結果（複数可）及び任意に臨床的変数（複数可）を、予後スコアと相関させることを含み、前記相関ステップが、スコアを、陽性または陰性の結果に割り当てることを含む、相関させることと、（ｖ）陽性または陰性の結果に基づいて、患者を治療することであって、治療が、治療的または診断的介入レジメンを含む、治療することと、を含む。
【００９７】
ある特定の実施形態では、臨床的変数と併せて任意に使用されるバイオマーカーは、閉塞性冠動脈疾患の診断のために本発明の方法において使用され得る。他の実施形態では、臨床的変数と併せて任意に使用されるバイオマーカーは、心臓血管系死亡、心筋梗塞、及び脳卒中を含むが、これらに限定されない心臓血管転帰の予後において使用され得る。本方法はまた、例えば、心臓血管系死亡、心筋梗塞、または脳卒中等の起こり得る様々な臨床的事象の組み合わせである、複合エンドポイントの危険性を予測するために使用され得、これらの事象のうちのいずれか１つが複合エンドポイントの一部として計数され得る。複合は、心臓血管系死亡を含む、あらゆる原因による死亡を含み得る。
【００９８】
ある特定の実施形態では、本発明の方法に従って使用されるバイオマーカー及び／または臨床的変数は、表１Ａ、１Ｂ、２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、及び４Ｂに列挙されるもの、特に、０．１未満、０．０５未満、０．０１未満、または０．００１未満のｐ値と関連しているものを含む。
【００９９】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのバイオマーカーは、本明細書に記載される方法において使用される。他の実施形態では、使用されるバイオマーカーの数は、異なり得、少なくとも５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０またはそれ以上を含み得る。さらに他の実施形態では、バイオマーカーの数は、少なくとも１５、２０、２５、または５０もしくはそれ以上を含み得る。
【０１００】
より特定の実施形態では、本発明の診断方法において使用されるバイオマーカーは、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、デコリン、インターロイキン−８、腎臓損傷分子−１、マトリックスメタロプロテイナーゼ９、ミッドカイン、ミオグロビン、肺界面活性物質関連タンパク質Ｄ、幹細胞因子、及びトロポニンから選択される。
【０１０１】
他の特定の実施形態では、本発明の予後方法で使用されるバイオマーカーは、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ、腎臓損傷分子−１、ミッドカイン、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、メタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−１）、及び血管細胞接着分子から選択される。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、診断または予後モデルは、例えば、陽性予測値（ＰＰＶ）、陰性予測値（ＮＰＶ）、感度（Ｓｎ）、もしくは特異度（Ｓｐ）、または特定の期間内に生じる心臓血管事象の危険性が含まれるが、これらに限定されない、ＣＡＤの可能性の患者のレベルに関する数値またはカテゴリースコアをもたらすであろう。診断モデルによって使用されるレベルの数は、わずか２つ（「陽性」対「陰性」）であり得るか、または多くとも臨床的に関連すると見なされ得、例えば、ＣＡＤの診断モデルは、５つのレベルのスコアをもたらし得、より高いスコアは、疾患のより高い可能性を示す。具体的には、スコア１は、（試験のＮＰＶによって判定される）ＣＡＤの低い可能性への強い信頼度を示し、スコア５は、（試験のＰＰＶによって判定される）ＣＡＤの高い可能性への強い信頼度を示し、スコア３は、ＣＡＤの中程度の可能性を示す。
【０１０３】
さらに、ある特定の実施形態では、本明細書に開示される方法に従って対象における閉塞性冠動脈疾患に対して陽性診断を行う際に、医師は、対象における治療、診断、または他の介入、特に、診断的心臓カテーテル検査、経皮冠動脈介入（ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）、ならびに硝酸塩、ベータ遮断剤、ＡＣＥ阻害剤、及び脂質低下剤から選択される薬理学的製剤の投与のうちの１つ以上から選択される介入の必要性を特定するための診断を有利に使用し得る。
【０１０４】
さらになお、ある特定の関連実施形態では、本明細書に開示される方法に従って対象における閉塞性冠動脈疾患のための陰性の診断を行う際に、医師は、対象における介入、例えば、高血圧、糖尿病、及び喫煙を含む冠動脈危険因子の進行中のモニタリング及び管理、ならびに食生活の改善、運動、及び禁煙から選択される生活様式の改善のうちの１つ以上から選択される介入の必要性を特定するために、それによって得られた情報を有利に使用し得る。
【０１０５】
さらに他の実施形態では、本明細書に開示される方法に従って心臓転帰の陽性の予後（例えば、心臓血管系死亡、心筋梗塞（ＭＩ）、脳卒中、あらゆる原因による死亡、またはこれらの複合の予後）を作成する際に、医師は、それによって得られた予後情報を有利に使用し得る。対象における介入、例えば、ＥＣＧ応答を有する負荷試験または心筋灌流画像化、冠動脈コンピュータ断層撮影血管造影、診断的心臓カテーテル検査、経皮冠動脈（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）、臨床試験の登録、ならびに硝酸塩、ベータ遮断剤、ＡＣＥ阻害剤、抗血小板剤、及び脂質低下剤から選択される薬剤の、それらから選択される薬剤でるが、これらに限定されない、薬剤の投与またはその効果のモニタリング、のうちの１つ以上から選択される介入の必要性を特定するために、それによって得られた情報を有利に使用し得る。
【０１０６】
さらなる関連実施形態では、本明細書に記載される方法に従って心臓転帰の陰性の予後を作成する際に、医師は、介入、特に、高血圧、糖尿病、脂質異常症、及び喫煙を含む冠動脈危険因子の進行中のモニタリング及び管理、ならびに食生活の改善、運動、及び禁煙から選択される生活様式の改善のうちの１つ以上から選択される介入の必要性を特定するために、それによって得られた情報を有利に使用し得る。
【０１０７】
本明細書に使用される、「生物学的試料」は、本明細書に記載される診断または予後方法において使用され得る対象から得られた本質的に任意の試料型を包含する。生物学的試料は、臨床的に関連するバイオマーカーレベルが判定され得る、任意の体液、組織、または任意の他の試料であり得る。この定義は、生物学的起源の血液及び他の液体試料、固形組織試料、例えば、生検標本またはそれに由来する組織培養物もしくは細胞、ならびにそれらの子孫を包含する。この定義はまた、試薬での処置、可溶化、またはポリヌクレオチド等のある特定の成分についての濃縮等によって、それらの取得後に任意の方法において操作された試料を含む。「生物学的試料」という用語は、臨床的試料を包含するが、場合によっては、培養における細胞、細胞上清、細胞溶解物、血液、血清、血漿、尿、脳脊髄液、体液、及び組織試料も含む。試料は、必要に応じて、適切な緩衝溶液中で希釈によって前処理され得るか、または必要に応じて濃縮され得る。好ましくは生理学的ｐＨのリン酸塩、トリス等の様々な緩衝液の１つを使用するいくつかの標準的な水性緩衝溶液のいずれかが使用され得る。生物学的試料は、静脈穿刺、腰椎穿刺、唾液もしくは尿等の流体試料、または組織生検等の周知の技術を使用して患者から得られ得る。
【０１０８】
ある特定の実施形態では、本開示の方法において使用される生物学的試料としては、全血、血漿、血清、または尿が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、試料は、全血である。いくつかの実施形態では、試料は、血漿である。他の実施形態では、試料は、血清または尿である。
【０１０９】
対象から得られた試料中のバイオマーカーレベルの判定は、当業者に既知の利用可能な標準的な技術に従って達成され得る。多くの場合、これは、生物学的試料中に存在するタンパク質バイオマーカーの定量的尺度を提供する、タンパク質検出方法を実行することを含むであろう。
【０１１０】
本開示の多くの実施形態は、一部分において、本明細書に記載されるバイオマーカーに対して特異的に結合し、それによって、生物学的試料中のバイオマーカーのレベルの判定を可能にする、結合剤の使用に基づいている。例えば、抗体、ポリペプチド、糖、及び核酸を含む、様々な結合剤のうちのいずれかが、使用され得る。
【０１１１】
本開示の特定の一実施形態では、結合剤は、本開示のバイオマーカーに対して特異的に結合し、生物学的試料中で結合するバイオマーカーのレベルを判定するのに有効である、抗体またはその断片である。
【０１１２】
２つの分子間の結合相互作用の文脈において、「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｂｉｎｄｓ）」または「特異的に結合する（ｂｉｎｄｓ  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ）」という用語は、抗体（または他の結合剤）の、バイオマーカーの特定のポリペプチド部分配列またはエピトープへの高い結合活性及び／または高い親和性結合を指す。特定のバイオマーカー配列におけるエピトープへの抗体結合（本明細書において「エピトープ」とも称される）は、好ましくは、同じ抗体の、任意の他のエピトープ、特に、対象となる特定のバイオマーカーと関連して、またはそれと同じ試料中の分子に存在し得るものへの結合よりも強い。対象となるバイオマーカーに対して特異的に結合する抗体は、弱い、さらに検出可能なレベル（例えば、対象となるポリペプチドに示される結合の１０％以下、５％以下、１％以下）で他のポリペプチドの結合が可能であり得る。かかる弱い結合またはバックグラウンド結合は、例えば、適切な対照の使用によって、対象となる化合物またはポリペプチドに対して特異的な抗体結合から容易に認識できる。概して、１０７モル／Ｌ以上、好ましくは１０８モル／Ｌ以上の結合親和性を有する特異的なバイオマーカータンパク質に結合する本発明の組成物及び方法において使用される抗体は、特異的なバイオマーカータンパク質に対して特異的に結合すると言われている。
【０１１３】
一実施形態では、バイオマーカーに対する抗体または他の結合剤の特異的な結合の親和性は、バックグラウンド結合よりも約２倍超、バックグラウンド結合よりも約５倍超、バックグラウンド結合よりも約１０倍超、バックグラウンド結合よりも約２０倍超、バックグラウンド結合よりも約５０倍超、バックグラウンド結合よりも約１００倍超、またはバックグラウンド結合よりも約１０００倍超、またはそれ以上である。
【０１１４】
別の実施形態では、バイオマーカーに対する抗体または他の結合剤の特異的な結合の親和性は、バックグラウンド結合よりも約２倍〜約１０００倍超、バックグラウンド結合よりも約２倍〜５００倍超、バックグラウンド結合よりも約２倍〜約１００倍超、バックグラウンド結合よりも約２倍〜約５０倍超、バックグラウンド結合よりも約２倍〜約５０倍超、バックグラウンド結合よりも約２倍〜約２０倍超、またはバックグラウンド結合よりも約２倍〜約１０倍超、また任意の介入する範囲の親和性である。
【０１１５】
本明細書において「抗体」という用語は、最も広義に使用され、具体的には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの無傷抗体から形成された多特異的抗体（例えば、二重特異性抗体）、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、及びそれらが所望の生物学的特異性を示す限り抗体断片を含むが、これらに限定されない。
【０１１６】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、集団を含む個々の抗体は、少量で存在し得る天然に存在し得る変異体が可能性を除いては、同一である。ある特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、本明細書に記載されるバイオマーカーに対して特異的な抗体である。
【０１１７】
モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対するものである。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的には含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物と対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原の単一の決定基に対するものである。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらがハイブリドーマ培養によって合成され、他の免疫グロブリンによる混入がないという点で有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体の特徴を示すものであって、ある特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるものではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）に最初に記載されたハイブリドーマ法によって作成してもよいし、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）、または当該技術分野で既知の利用可能な任意の他の好適な方法によって作成してもよい。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載される技術を用いてファージ抗体ライブラリーから単離され得る。
【０１１８】
本明細書においてモノクローナル抗体は、具体的には、「キメラ」抗体を含み、重鎖及び／または軽鎖の一部が特定の種から誘導されたまたは特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同であるが、鎖（複数可）の残りの部分は別の種から誘導されたまたは別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体、ならびにそれらが所望の生物学的活性及び／または特異性を示す限りにおいて、それらの抗体の断片の対応する配列と同一または相同である（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））。キメラ抗体の作製方法は、当該技術分野で既知である。
【０１１９】
抗体の「機能的断片」はまた、生物学的試料中のバイオマーカーのレベルの判定を許容するためにバイオマーカーに対して十分な結合親和性及び特異性を保持するような断片を使用し、含むことができる。場合によっては、機能的断片は、それらが誘導され得る無傷な完全な鎖分子と実質的に同じ親和性及び／または特異性を有するバイオマーカーに結合するであろう。
【０１２０】
「単離された」抗体は、その天然環境の成分から特定、分離、及び／または回収されたものである。その天然環境の夾雑成分とは、抗体に対する診断または予後の使用を妨げ得る物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質を含み得る。特定の実施形態では、抗体は、例えば、Ｌｏｗｒｙ法によって判定されるように、９５重量％超、最も好ましくは９９重量％超まで精製されよう。
【０１２１】
「検出可能に標識される抗体」という用語は、本明細書に記載されるバイオマーカーに対して結合特異性を保持し、かつ結合した検出可能な標識を有する抗体（または抗体断片）を指す。検出可能な標識は、任意の好適な手段、例えば、化学的結合または遺伝子工学技術によって結合させることができる。検出可能に標識されるタンパク質の産生方法は、当該技術分野で既知である。検出可能な標識は、当該技術分野で既知の様々なこのような標識から選択され得、これには、ハプテン、放射性同位体、フルオロフォア、常磁性標識、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ）、または検出可能なシグナル（例えば、放射能、蛍光発光、色）を発光するか、または標識のその基質への曝露後に検出可能なシグナルを発光する他の部分もしくは化合物が含まれるが、これらに限定されない。様々な検出可能な標識／基質の対（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ／ジアミノベンジジン、アビジン／ストレプトアビジン、ルシフェラーゼ／ルシフェリン））、抗体を標識するための方法、及び標識された抗体を使用するための方法は、当該技術分野で既知である（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，ｅｄｓ．（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８８）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）を参照のこと）。
【０１２２】
ある特定の実施形態では、本開示のタンパク質バイオマーカーのレベルは、例えば、免疫学的検定、ＥＬＩＳＡサンドイッチアッセイ、側方流動アッセイ、フローサイトメトリー、質量分光検出、熱量測定アッセイ、タンパク質アレイ（例えば、抗体アレイ）への結合、単一分子検出法、ナノテクノロジーに基づいた検出方法、または蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）が含まれるが、これらに限定されない、アッセイまたは形式を用いて判定される。いくつかの実施形態では、アプローチは、ＥＬＩＳＡ、抗体標識蛍光ビーズアレイ、抗体アレイ、またはＦＡＣＳスクリーンで、１つ以上のバイオマーカータンパク質のエピトープを認識する標識された親和性試薬（例えば、抗体、小分子等）の使用を含む。上述のように、本明細書においてバイオマーカーを検出及び定量化するための抗体を産生、評価、及び／または使用するための多くの例示的な方法のうちのいずれは、当該技術分野で既知であり、利用可能である。本明細書に記載される方法に従って、タンパク質の検出及び定量化が、単一アッセイ形式、多重形式、または他の既知の形式において実行され得ることも理解されよう。
【０１２３】
多くの好適なハイスループット多重形式は、開示されるバイオマーカーを評価するために存在する。典型的には、「ハイスループット」という用語は、１日当たり多数のアッセイ、例えば、１日当たり少なくとも１００個のアッセイ、１０００個のアッセイ、多くとも１０，０００個のアッセイまたはそれ以上を行う形式を指す。アッセイを列挙する場合、アッセイされる試料の数またはマーカーの数が、見られ得る。
【０１２４】
本発明のいくつかの実施形態では、試料は、アッセイ装置上で分析される。例えば、アッセイ装置は、例えば、単一マイクロプレートウェル中でタンパク質を複数の検体を同時に測定する多重分析器であり得る。アッセイ形式は、受容体−リガンドアッセイ、免疫学的検定、及び酵素アッセイであり得る。このような分析器の一例は、３つのｘＭＡＰ（登録商標）技術の組み合わせであるＬｕｍｉｎｅｘ（登録商標）１００／２００システムである。第１は、アッセイを構築するために識別子及び固体表面の両方の役目を果たす、一連の蛍光染色したミクロンサイズのポリスチレンミクロスフェアである、ｘＭＡＰミクロスフェアである。第２は、レーザー、視覚、流体、及び高速デジタルシグナルプロセッサ等の重要なｘＭＡＰ（登録商標）検出要素を一体化する、フローサイトメトリーに基づいた装置、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）１００／２００分析器である。第３の要素は、ロバストなデータ回帰分析を有するプロトコルに基づいたデータ取得に対して設計される、ｘＰＯＮＥＮＴ（登録商標）ソフトウェアである。
【０１２５】
対象に対してバイオマーカーのレベル及び任意に臨床的変数の状態を判定することによって、データセットは、生物学的試料を、対象の心臓血管の状態のリスク層化、予後、診断、及びモニタリングのうちの１つ以上に分類するために生成され、使用され得（本明細書にさらに記載される）、陽性または陰性の診断の可能性、結果、または対象に対する心臓血管状態の１つ以上の将来的な変化をさらに割り当てて、それによって本明細書に記載される、心臓血管疾患及び／または結果の診断及び／または予後を構築する。当然のことながら、データセットは、自動化または手動方法を介して得られ得る。
【０１２６】
統計学的分析
本明細書に記載される、バイオマーカー及び任意に臨床的変数の組み合わせを分析することによって、本発明の方法は、異なるエンドポイント間で差異を見分けることができる。エンドポイントは、例えば、閉塞性冠動脈疾患（ＣＡＤ）、心臓血管系死亡（ＣＶＤ）、心筋梗塞（ＭＩ）、脳卒中、これらの複合、ならびにあらゆる原因による死亡のさらなる複合を含み得る。マーカー及びそれらの対応する特性（例えば、濃度、定量的レベル）の同一性は、患者の臨床的に関連するクラス間で差異を見分ける、分析プロセスまたは複数の分析プロセスを開発及び実装する際に使用される。
【０１２７】
バイオマーカー及び臨床的変数のデータセットは、アッセイ装置によって生じるアッセイ結果（複数可）、及び任意に臨床的変数の状態を、対象の心臓血管状態と相関させることであって、前記相関ステップが、アッセイ結果（複数可）を、対象の心臓血管状態のリスク層化、予後、診断、分類、及びモニタリングのうちの１つ以上と相関させることを含み、前記相関ステップが、アッセイ結果（複数可）に基づいて、陽性または陰性の診断の可能性、または対象に対する心臓血管状態の１つ以上の将来的な変化を割り当てることを含む、相関させるための分析プロセスにおいて使用され得る。
【０１２８】
バイオマーカー及び臨床的変数のデータセットは、診断及び／または予後の結果またはスコアを生成するための分析プロセスにおいて使用され得る。例えば、例示的な分析プロセスは、各構成成分（タンパク質レベルまたは臨床学的因子）に対して１つの期間を有する線形モデルを含み得る。モデルの結果は、診断及び／または予後を生成する数である。結果はまた、マルチレベルまたは連続的なスコアを提供し得、より高い数が、疾患のより高い可能性または事象の危険性を示す。
【０１２９】
以下の実施例は、データ分析アルゴリズムが多くのこのような分析プロセスを構築するために使用することができる。実施例に記載されるデータ分析アルゴリズムのそれぞれが、訓練集団にわたって本明細書で特定されるマーカーのサブセットの特性（例えば、定量的タンパク質レベル及び／または臨床学的因子）を使用する。本明細書に開示される対象間で差異を見分ける、分析プロセスまたは複数の分析プロセスを構築するための特定のデータ分析アルゴリズムは、以下の小区分において記載されるであろう。一旦分析プロセスがこれらの例示的なデータ分析アルゴリズムまたは当該技術分野で既知の他の技法を用いて構築されると、分析プロセスは、試験対象を２つ以上の表現型クラスのうちの１つ以上に分類する、及び／または血液検査が得られた後の特定の期間内に、生存率／死亡率もしくは重度の医療事象を予測するために使用することができる。これは、試験対象から得られた１つ以上のマーカープロファイル（複数可）に１つ以上の分析プロセスを適用することによって達成される。したがって、このような分析プロセスは、診断的または予後の指標として大量の値を有する。
【０１３０】
したがって、本発明は、上述のように、バイオマーカーのパネルのレベルを、患者が閉塞性冠動脈疾患であると診断されるか、または有害な心臓血管事象を発症する危険性の予後を有するかどうかを判定するために使用され得るスコアに変換するために使用され得るアルゴリズムをさらに提供する。
【０１３１】
このデータは、分析プロセス前に処理される。各データセット中のデータは、各マーカーに対する値を測定することによって、通常二重または三重または複数の複製で回収される。データは、操作されてもよく、例えば、生データは、標準曲線、及び各患者の平均及び標準偏差を計算するために使用された反復測定値の平均を用いて変換されてもよい。これらの値は、モデルにおいて使用される前に変換、例えばログ変換され、ウィンザライズ等の標準尺度に正規化されてよい。データは、コンピュータソフトウェアを介して変換される。次いで、このデータは、規定されたパラメータを用いて分析プロセスに入力され得る。
【０１３２】
タンパク質の直接レベル（ログ変換及び正規化後）、２変数形式（例えば性別）で表される臨床学的因子及び／または定量的形式（例えば、ＢＭＩ、年齢）における臨床学的因子の存在／不在は、ソフトウェアによって提供される診断モデルに入力される値を提供し、その結果は、診断または予後を判定するために、１つ以上のカットオフに対して評価あされる。
【０１３３】
以下は、開示された方法、パネル、アッセイ、及びキットの実施を助けるために当業者に利用可能である統計学的分析方法のタイプの例である。統計学的分析は、２つのタスクのうちの１つまたはその両方に適用され得る。第一に、これら及びその他の統計学的方法は、好ましいサブセットのマーカー及び好ましいデータセットを形成するであろう他の指標を特定するために使用され得る。さらに、これら及びその他の統計学的方法は、結果を生成するためにデータセットとともに使用されるであろう分析プロセスを生成するために使用され得る。本明細書で表される、またはそうでなければ当該技術分野で利用可能ないくつかの統計学的方法は、これらのタスクの両方を行い、本明細書に開示される方法の実践のための分析プロセスとしての使用に好適であるモデルをもたらすであろう。
【０１３４】
分析前に、データは、訓練セット及び検証セットに分けられる。訓練セットは、最終の診断または予後モデルを訓練、評価、及び構築するために使用される。検証セットは、訓練プロセス中に全く使用されず、最終の診断または予後モデルを検証するためにのみ使用される。明確に言及される場合を除いて、以下の全てのプロセスは、訓練セットのみの使用を含む。
【０１３５】
訓練及び検証セットの作成は、無作為抽出を通じて行われる。これらのセットが決定された後に、様々な結果（例えば、７０％以上の閉塞の存在、１年以内のＭＩの発生等）のバランスは、対象となる結果が各データセットに適切に表されることを確認すると考えられている。
【０１３６】
診断及び／または予後モデルの特性（例えば、タンパク質及び／または臨床学的因子）は、最小角回帰法（ＬＡＲＳ、段階的前進選択に基づいた手順）、最小絶対収縮及び選択操作者（ＬＡＳＳＯ）等の統計学的学習法における収縮、有意性検定、及び専門家の意見を含む、分析プロセスの組み合わせを用いて各結果に対して選択される。
【０１３７】
結果（分類、特定の期間内の生存率／死亡率等）を生成するために使用される統計学的学習法は、試料を分類するために有用な結果を提供することができる任意の種類のプロセス（例えば、線形モデル、確率的モデル、決定木アルゴリズム、または得られたデータセットと参照データセットとの比較）であり得る。
【０１３８】
特性における診断または予後シグナルは、相互検証手順を用いてこれらの統計学的学習法を用いて評価される。各相互検証の折り畳みのために、この訓練セットは、訓練セット及び検証セット（本明細書では、ＣＶ−訓練データセット及びＣＶ−検証データセットと呼ばれる）にさらに分割される。
【０１３９】
相互検証の各折り畳みのために、診断または予後モデルは、ＣＶ−訓練データを用いて構築され、ＣＶ−検証データで評価される。
【０１４０】
相互検証プロセス中のモデルは、分類精度の標準的な評価指標、例えば、ＲＯＣ曲線下面積（ＡＵＣ）、感度（Ｓｎ）、特異度（Ｓｐ）、陽性予測値（ＰＰＶ）、及び陰性予測値（ＮＰＶ）で評価される。
【０１４１】
一旦一連の特性（例えば、定量的タンパク質レベル及び任意に臨床学的因子）が最終の診断または予後パネルを構成するために選択されると、最終の予測モデルは、訓練データの全てを用いて構築される。
【０１４２】
患者データ（例えば、定量的タンパク質レベル及び／または臨床学的因子）の最終予測モデルへの適用により、分類結果をもたらす。これらの結果は、ある特定のクラス内の試料を分類するための閾値（例えば、陽性もしくは陰性の診断及び／もしくは予後、または重症度／可能性スコア）に対して比較され得る。
【０１４３】
最終モデルは、検証データセットで評価される。検証データセットの権限を順守するために、情報を訓練プロセスに戻し入れることは、反復方法で使用されない。それは、分析パイプラインの完全停止としてのみ使用される。
【０１４４】
モデルは、ＡＵＣ、感度、特異度、陽性予測値、及び／または陰性予測値を含む、制度の評価指標を用いた検証データセットで評価される。ハザード比、相対的危険度、及び正味再分類指数等の精度の他の評価指標は、対象となるモデルに対して別個に考慮する。
【０１４５】
この最終モデルまたは特定のバイオマーカープラットフォームに対して最適化されたモデルは、臨床的背景で使用される場合に、アッセイハードウェアプラットフォームまたは独自のシステム上のいずれかで直接起動している、ソフトウェアシステムとして実装され得る。モデルは、アッセイプラットフォームまたはデータ転送の他の手段から直接的にタンパク質レベルまたは濃度データを受容し得、患者の臨床的データは、患者の医療記録の電子、手動、または他のクエリーを介してまたは操作者による対話式入力によって受容され得る。この患者データは、処理され、最終モデルを要約し得、これは、意思決定支援の目的のために臨床医及び医療スタッフへの結果を提供するであろう。
【０１４６】
パネル、アッセイ、及びキット
本発明は、本開示に従って診断または予後の発見を支援または容易にするための、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または４つを超えるバイオマーカー及び／または臨床的変数（複数可）を含むパネル、アッセイ、及びキットをさらに提供する。例えば、いくつかの実施形態では、診断または予後パネルまたはキットは、表１Ａ、１Ｂ、２Ａ、及び２Ｂに記載される１つまたは複数のバイオマーカー、ならびに表３Ａ、３Ｂ、４Ａ、及び４Ｂに記載される１つまたは複数の適切な臨床的変数を含む。
【０１４７】
多くの実施形態では、本明細書に記載されるパネル、アッセイ、及びキットは、抗体、その結合断片、及び／または表１Ａ、１Ｂ、２Ａ、及び２Ｂのバイオマーカーに対して特異的であり、本明細書に記載される方法に従って生物学的試料中で対応するバイオマーカーのレベルを判定するのに有用である、他の種類の結合剤を含むことが理解されよう。したがって、１つまたは複数のバイオマーカーを含むパネル、アッセイ、またはキットの本明細書に記載される各々において、全く同じパネル、アッセイ、またはキットが、加えてまたは代わりに、１つまたは複数の抗体、その結合断片、及び／または表１Ａ、１Ｂ、２Ａ、及び２Ｂのバイオマーカーに対して特異的である、他の種類の結合剤を有利に含み得ることが理解されよう。当然のことながら、このパネル、アッセイ、及びキットは、表３Ａ、３Ｂ、４Ａ、及び４Ｂに記載されるような１つまたは複数の適切な臨床的変数の判定をさらに含む、含む、または推奨することができる。
【０１４８】
ある特定の実施形態では、パネル、アッセイ、またはキットとともに使用されるバイオマーカー及び／または臨床的変数は、それぞれ、表１Ａ、１Ｂ、２Ａ、２Ｂ、表３Ａ、３Ｂ、４Ａ、及び４Ｂに列挙されるもの、特に、０．１未満、０．０５未満、０．０１未満、または０．００１未満のｐ値と関連しているものを含む。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、パネル、アッセイ、及びキットは、本明細書に記載される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのバイオマーカーを含み得る。他の実施形態では、使用されるバイオマーカーの数は、少なくとも５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、または１０もしくはそれ以上を含み得る。さらに他の実施形態では、使用されるバイオマーカーの数は、少なくとも１５、２０、２５、または５０もしくはそれ以上を含み得る。
【０１５０】
表１Ａ、１Ｂ、２Ａ、及び２Ｂに開示されるバイオマーカーに加えて、パネル、アッセイ、またはキットは、本明細書に具体的に記載されない、特に、パネル中のバイオマーカー自体は、対象となる診断または予後に関する統計学的に有意な情報、例えば、患者が、１年以内、１年で、または１年を超えて、冠動脈疾患を有するか、または心臓血管疾患及び／もしくは有害心臓血管事象の危険性を増加し得るかどうかを提供する、さらなるバイオマーカー（またはそれに加えて結合剤）を含み得る。
【０１５１】
本明細書に記載される、本開示のパネル、アッセイ、及びキットは、対象における心臓血管疾患の存在、特に、閉塞性冠動脈疾患の存在を特定する及び／または心臓事象を予測するために使用され得る。いくつかの実施形態では、診断パネル、アッセイ、またはキットは、対象において、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の存在を特定する。
【０１５２】
他の実施形態では、予後パネル、アッセイ、またはキットは、試料が採取された日から１年、約１年、約２年、約３年、約４年、約５年またはそれ以上以内に、心臓血管疾患または事象の危険性を予測するために使用される。時間エンドポイントは、試料採取からと定義され、１年未満、１年、及び１年を超えるものを含む。１年未満または１年以内は、試料採取時間から３６５日（同日を含む）までのあらゆる時間であり得る。例えば、パネル結果は、試料採取時間から３０日、６０日、９０日、１２０日、１５０日、１８０日、２１０日、２４０日、２７０日、３００日、３３０日、３６０日、３６５日までの心臓血管疾患または事象の危険性を予測し得る。さらに他の実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後から３０日、６０日、９０日、１２０日、１５０日、１８０日、２１０日、２４０日、２７０日、３００日、３３０日、３６０日、３６５日までと定義される。
【０１５３】
特定の実施形態では、閉塞性ＣＡＤの診断のためのパネル、アッセイ、及びキットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または４つを超えるバイオマーカー、または抗体、その結合断片、またはバイオマーカーに対して特異的である、他の種類の結合剤を含み、このバイオマーカーは、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、デコリン、インターロイキン−８、腎臓損傷分子−１、マトリックスメタロプロテイナーゼ９、ミッドカイン、ミオグロビン、肺界面活性物質関連タンパク質Ｄ、幹細胞因子、及びトロポニンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される少なくとも１つの臨床的変数は、判定されたバイオマーカーレベルとともに使用される。他の実施形態では、臨床的変数は、年齢、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）歴、２型糖尿病歴、血液透析歴、心筋梗塞（ＭＩ）歴、経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴、及び性別からなる群から選択される。
【０１５４】
特定の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−１、腎臓損傷分子−１、及びミッドカインのためのバイオマーカー、ならびに経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴及び性別の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５、実施例１、及び図１〜４中のパネルＦＭ１３９／６８５によって表される。
【０１５５】
特定の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−１、腎臓損傷分子−１、及びミッドカインのためのバイオマーカー、ならびに経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴、性別、及び年齢の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図５中のパネルＦＭ１４４／６９６によって表される。
【０１５６】
別の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、腎臓損傷分子−１、及びミッドカインのためのバイオマーカー、ならびに性別及び年齢の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図６中のパネルＦＭ１４５／７０１によって表される。
【０１５７】
別の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、腎臓損傷分子−１、及びミッドカインのためのバイオマーカーを含む。このバイオマーカーの組み合わせは、表２５及び図７中のパネルＦＭ１４６／６９０によって表される。
【０１５８】
別の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アディポネクチン、腎臓損傷分子−１、及びミッドカインのためのバイオマーカー、ならびに２型真性糖尿病歴、性別、及び年齢の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図８中のパネルＦＭ１５２／７５７によって表される。
【０１５９】
本発明の実施形態は、少なくとも１つのバイオマーカー及び１つ以上の臨床的変数を含む、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、及びキットを含む。
【０１６０】
特定の一実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、ミッドカインのためのバイオマーカー、ならびに経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴及び性別の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図９中のパネルＦＭ１１７ａ／６５７によって表される。
【０１６１】
特定の一実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アディポネクチンのためのバイオマーカー、ならびに経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴及び性別の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図１０中のパネルＦＭ１３９ＣＬａ／６５８によって表される。
【０１６２】
特定の一実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アポリポタンパク質Ｃ−１のためのバイオマーカー、ならびに経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴及び性別の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図１１中のパネルＦＭ１３９ＣＬｂ／７５０によって表される。
【０１６３】
特定の一実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、腎臓損傷分子−１のためのバイオマーカー、ならびに経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴及び性別の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図１２中のパネルＦＭ１３９ＣＬｃ／７５１によって表される。
【０１６４】
さらに他の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アディポネクチン及びミッドカインのためのバイオマーカー、ならびに経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴及び性別の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図１３中のパネルＦＭ１１７ｂ／６６３によって表される。
【０１６５】
別の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ及びミッドカインのためのバイオマーカー、ならびに経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴及び性別の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図１４中のパネルＦＭ１３９ＣＬｄ／７５２によって表される。
【０１６６】
別の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、腎臓損傷分子−１及びミッドカインのためのバイオマーカー、ならびに経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴及び性別の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図１５中のパネルＦＭ１３９Ｃｌｅ／７５３によって表される。
【０１６７】
さらなる一実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、及びミッドカインのためのバイオマーカー、ならびに経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴及び性別の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図１６中のパネルＦＭ１３９ＣＬｆ／７５４によって表される。
【０１６８】
さらに別の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アディポネクチン、腎臓損傷分子−１、及びミッドカインのためのバイオマーカー、ならびに経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴及び性別の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図１７中のパネルＦＭ１３９ＣＬｇ／７５５によって表される。
【０１６９】
さらに別の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アディポネクチン、デコリン、及びミッドカインのためのバイオマーカー、ならびに心筋梗塞（ＭＩ）歴、経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴、及び性別の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５、実施例２、及び図１８〜２０中のパネルＦＭ４６／５７２によって表される。
【０１７０】
さらに別の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アディポネクチン及びミッドカインのためのバイオマーカー、ならびに心筋梗塞（ＭＩ）歴、経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴、及び性別の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図２１中のパネルＦＭ４６Ｆｄ／５８６によって表される。
【０１７１】
さらに別の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、デコリン及びミッドカインのためのバイオマーカー、ならびに心筋梗塞（ＭＩ）歴、経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴、及び性別の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図２２中のパネルＦＭ４６Ｆｅ／５８７によって表される。
【０１７２】
さらに別の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アディポネクチン及びデコリンのためのバイオマーカー、ならびに心筋梗塞（ＭＩ）歴、経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴、及び性別の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図２３中のパネルＦＭ４６Ｆｆ／５８８によって表される。
【０１７３】
さらに別の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アディポネクチン、インターロイキン−８、腎臓損傷分子−１、及び幹細胞因子のためのバイオマーカー、ならびに経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴、性別、及び年齢の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図２４中のパネルＦＭ１８６／７９６によって表される。
【０１７４】
さらに別の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アディポネクチン、インターロイキン−８、腎臓損傷分子−１、及び幹細胞因子のためのバイオマーカー、ならびに経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴及び性別の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図２５中のパネルＦＭ１８９／７９８によって表される。
【０１７５】
さらに別の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−１，インターロイキン−８、腎臓損傷分子−１、及び幹細胞因子のためのバイオマーカー、ならびに経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴、性別、及び年齢の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図２６中のパネルＦＭ１８７／７９２によって表される。
【０１７６】
さらに別の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−１、インターロイキン−８、腎臓損傷分子−１、及び幹細胞因子のためのバイオマーカー、ならびに経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴及び性別の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図２７中のパネルＦＭ１８８／７９４によって表される。
【０１７７】
さらに別の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−１、マトリックスメタロプロテイナーゼ９、ミッドカイン、ミオグロビン、及び肺界面活性物質関連タンパク質Ｄのためのバイオマーカー、ならびに冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）歴、経皮冠動脈介入（例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術）歴、及び性別の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５、実施例３、及び図２８中のパネルＦＭ０２／４１０によって表される。
【０１７８】
さらに別の実施形態では、任意の主要心外膜血管中の７０％以上の閉塞の診断のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アディポネクチン、ミッドカイン、肺界面活性物質関連タンパク質Ｄ、及びトロポニンのためのバイオマーカー、ならびに冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）歴、血液透析歴、心筋梗塞歴、及び性別の臨床的変数を含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図２９中のパネルＦＭ０１／３９０によって表される。
【０１７９】
本発明の実施形態はまた、心臓血管系死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合の予後のためのパネル、アッセイ、及びキットも提供し、パネルは、１つ以上のバイオマーカーまたは抗体、その結合断片、または本明細書に開示されるバイオマーカーに対して特異的である、他の種類の結合剤を含む。このようなパネル、アッセイ、及びキットは、対象における特定の時間内、例えば、１年以内、または３年以内に、例えば、心臓血管系死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合の危険性の予後を判定するために使用され得る。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から開始するものと定義される。他の実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。
【０１８０】
ある特定の実施形態では、心臓血管系死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合の予後のためのパネル、アッセイ、またはキットは、腎臓損傷分子−１、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、及びメタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−１）のバイオマーカーを含む。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。このバイオマーカーの組み合わせは、表２５、実施例４、及び図３０中のパネルＦＭ１６０／０２によって表される。
【０１８１】
ある特定の実施形態では、心臓血管系死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合の予後のためのパネル、アッセイ、またはキットは、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、及びメタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−１）のバイオマーカーを含む。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取（表２５、実施例５、及び図３１中のパネルＦＭ９６／０４に記載される）から開始するものと定義される。他の実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。このバイオマーカーの組み合わせは、表２５及び図３２中のパネルＦＭ１９０／３３によって表される。
【０１８２】
別の特定の実施形態では、心臓血管系死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合の予後のためのパネル、アッセイ、またはキットは、少なくともＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ及びオステオポンチンを含む。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から開始するものと定義される。このバイオマーカーの組み合わせは、表２５及び図３３中のパネルＦＭ９８／０３によって表される。
【０１８３】
本発明の実施形態はまた、あらゆる原因による死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合エンドポイントの予後のためのパネル、アッセイ、及びキットも提供し、このパネルは、１つ以上のバイオマーカーまたは抗体、その結合断片、または本明細書に開示されるバイオマーカーに対して特異的である、他の種類の結合剤を含む。このようなパネル、アッセイ、及びキットは、例えば、対象における特定の時間内、例えば、１年以内、または３年以内に、例えば、あらゆる原因による死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合エンドポイントの危険性の予後を判定するために使用され得る。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から開始するものと定義される。他の実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。
【０１８４】
ある特定の実施形態では、あらゆる原因による死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合エンドポイントの危険性の予後のためのパネル、アッセイ、またはキットは、腎臓損傷分子−１、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、及びメタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−１）のためのバイオマーカーを含む。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。このバイオマーカーの組み合わせは、表２５及び図３４中のパネルＦＭ２０９／０２によって表される。
【０１８５】
ある特定の実施形態では、あらゆる原因による死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合エンドポイントの危険性の予後のためのパネル、アッセイ、またはキットは、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、及びメタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−１）を含む。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から開始するものと定義される。（表２５及び図３５中のパネルＦＭ１１１／０５に記載される）。他の実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。このバイオマーカーの組み合わせは、表２５及び図３６中のパネルＦＭ２１０／０３によって表される。
【０１８６】
別の特定の実施形態では、あらゆる原因による死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合エンドポイントの予後のためのパネル、アッセイ、またはキットは、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ及びオステオポンチンを含む。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から開始するものと定義される。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図３７においてパネルＦＭ１１０／０４によって表される。
【０１８７】
本発明の実施形態はまた、心臓血管系死亡または心筋梗塞の複合エンドポイントの予後のためのパネル、アッセイ、またはキットも提供し、このパネル、アッセイ、及びキットは、１つ以上のバイオマーカーまたは抗体、その結合断片、または本明細書に開示されるバイオマーカーに対して特異的である、他の種類の結合剤を含む。このようなパネル、アッセイ、及びキットは、例えば、対象における特定の時間内、例えば、１年以内、または３年以内に、例えば、心臓血管系死亡または心筋梗塞の危険性の予後を判定するために使用され得る。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から開始するものと定義される。他の実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。
【０１８８】
ある特定の実施形態では、心臓血管系死亡または心筋梗塞の複合エンドポイントの予後のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、及びオステオポンチンのためのバイオマーカーを含む。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。このバイオマーカーの組み合わせは、表２５及び図３８中のパネルＦＭ２１１／０３によって表される。
【０１８９】
他の特定の実施形態では、心臓血管系死亡または心筋梗塞の複合エンドポイントの予後のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ、ミッドカイン、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、及びオステオポンチンのためのバイオマーカーを含む。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から開始するものと定義される（表２５及び図３９中のパネルＦＭ７７／２６に記載される）。他の実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。このバイオマーカーの組み合わせは、表２５及び図４０中のパネルＦＭ２１２／０２によって表される。
【０１９０】
本発明の実施形態はまた、心筋梗塞（ＭＩ）の予後のためのパネル、アッセイ、及びキットも提供し、このパネルは、１つ以上のバイオマーカーまたは抗体、その結合断片、または本明細書に開示されるバイオマーカーに対して特異的である、他の種類の結合剤を含む。これらは、例えば、対象における特定の時間内、例えば、１年以内、または３年以内に、心筋梗塞の危険性の予後を判定するために使用され得る。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から開始するものと定義される。他の実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。
【０１９１】
ある特定の実施形態では、心筋梗塞の予後のためのパネル、アッセイ、またはキットは、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）及びオステオポンチンのためのバイオマーカーを含む。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。このバイオマーカーの組み合わせは、表２５及び図４１中のパネルＦＭ２０１／ＭＩ００２によって表される。
【０１９２】
ある特定の実施形態では、心筋梗塞の予後のためのパネル、アッセイ、またはキットは、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、及び血管細胞接着分子のためのバイオマーカーを含む。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。このバイオマーカーの組み合わせは、表２５及び図４２中のパネルＦＭ２０４／ＭＩ００３によって表される。
【０１９３】
ある特定の実施形態では、心筋梗塞の予後のためのパネル、アッセイ、またはキットは、腎臓損傷分子−１、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、及び血管細胞接着分子のためのバイオマーカーを含む。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。このバイオマーカーの組み合わせは、表２５及び図４３中のパネルＦＭ２０２／ＭＩ００５によって表される。
【０１９４】
ある特定の実施形態では、心筋梗塞の予後のためのパネル、アッセイ、またはキットは、腎臓損傷分子−１、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、及びオステオポンチンのためのバイオマーカーを含む。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。このバイオマーカーの組み合わせは、表２５及び図４４中のパネルＦＭ２０５／ＭＩ００７によって表される。
【０１９５】
ある特定の実施形態では、心筋梗塞の予後のためのパネル、アッセイ、またはキットは、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）のためのバイオマーカーを含む。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から開始するものと定義される。このバイオマーカーの組み合わせは、表２５及び図４５中のパネルＦＭ６３／６４によって表される。
【０１９６】
本発明の実施形態は、心臓血管系死亡の予後のためのパネル、アッセイ、及びキットをさらに提供し、このパネルは、１つ以上のバイオマーカーまたは抗体、その結合断片、または本明細書に開示されるバイオマーカーに対して特異的である、他の種類の結合剤を含む。このようなパネル、アッセイ、及びキットは、例えば、対象における特定の時間内、例えば、１年以内、または３年以内に、例えば、心臓血管系死亡の予後を判定するために使用され得る。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から開始するものと定義される。他の実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される少なくとも１つの臨床的変数は、判定されたバイオマーカーレベルとともに使用される。特定の一実施形態では、臨床的変数は、２型真性糖尿病歴である。
【０１９７】
ある特定の実施形態では、心臓血管系死亡の予後のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ及びオステオポンチンのためのバイオマーカーを含む。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から開始するものと定義される。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から開始するものと定義される（表２５及び図４６中のパネルＦＭ５２／２４４に記載される）。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。このバイオマーカーの組み合わせは、表２５及び図４７中のパネルＦＭ１９４／ＣＶＤ００１によって表される。特定の一実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義され、２型真性糖尿病歴の臨床的変数をさらに含む。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図４８中のパネルＦＭ１９３／Ｒ０８によって表される。
【０１９８】
ある特定の実施形態では、心臓血管系死亡の予後のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ、ミッドカイン、及びオステオポンチンのためのバイオマーカーを含む。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から開始するものと定義される。このバイオマーカーの組み合わせは、表２５及び図４９中のパネルＦＭ５３／２３７によって表される。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。これは、表２５及び図５０中のパネルＦＭ１９５／ＣＶＤ００２によって表される。
【０１９９】
ある特定の実施形態では、心臓血管系死亡の予後のためのパネル、アッセイ、またはキットは、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、及びメタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤のためのバイオマーカーを含む。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。このバイオマーカーの組み合わせは、表２５及び図５１中のパネルＦＭ２０７／Ｒ０４によって表される。
【０２００】
ある特定の実施形態では、心臓血管系死亡の予後のためのパネル、アッセイ、またはキットは、Ｎ末端プロホルモン脳性ナトリウム利尿タンパク質（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、オステオポンチン、及びメタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤のためのバイオマーカーを含む。いくつかの実施形態では、時間エンドポイントは、試料採取から３日後に開始するものと定義される。このバイオマーカーの組み合わせは、表２５及び図５２中のパネルＦＭ２０８／Ｒ０５によって表される。
【０２０１】
ある特定の実施形態では、パネル、アッセイ、またはキットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または４つを超える抗体またはその結合断片、または他の種類の結合剤を含み、この抗体、結合断片、または他の種類の結合剤は、表１Ａ、１Ｂ、２Ａ、及び２Ｂのバイオマーカーに対して特異的である。
【０２０２】
本開示のパネル、アッセイ、及びキットが、実質的には、本開示に従って診断または予後の判定を容易にする際に必要または所望され得る、任意の他の化合物、組成物、構成成分、取扱説明書等をさらに含み得ることが理解されよう。これらは、パネル、アッセイ、またはキットを用いるための取扱説明書、（例えば、診断または予後スコアを計算することによって）診断または予後の判定を行うための取扱説明書、診断または予後の判定を考慮して対象における治療的または診断的介入の好ましいまたは所望のモードに関して医師のための取扱説明書もしくはその他の提案等を含んでもよい。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、本発明のパネル、アッセイ、及びキットは、本明細書に開示されるバイオマーカーの検出を容易にするであろう。このような血液、血漿、及び／または血清レベルを測定するための手段は、当該技術分野で既知であり、例えば、免疫学的検定の使用を含む。使用され得る標準的な技法は、例えば、酵素結合免疫吸着法（「ＥＬＩＳＡ」）またはウェスタンブロットを含む。
【０２０４】
上述の方法に加えて、試料中のタンパク質のレベルを定量的に測定するための当該技術分野で既知の任意の方法、例えば非抗体に基づいた方法は、本発明の方法及びキットで使用することができる。例えば、質量分析に基づいた（例えば、多重反応モニタリング（ＭＲＭ）質量分析等）またはＨＰＬＣに基づいた方法を使用することができる。タンパク質の定量法は、例えば、Ｌｉｎｇ−Ｎａ  Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｊ．ｏｆ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ａｔｏｍｉｃ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，２６，１２３３−１２３６、Ｖａｕｄｅｌ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，Ｖｏｌ．１０：４、Ｐａｎ，Ｓ．，２００９  Ｊ．Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ；８（２）：７８７−９７、Ｗｅｓｔｅｒｍｅｉｅｒ  ａｎｄ  Ｍａｒｏｕｇａ，２００５，Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｐｏｒｔｓ，Ｖｏｌ．２５，Ｎｏｓ．１／２、Ｃａｒｒ  ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，２００８，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．５４：１７４９−１７５２、及びＡｅｂｅｒｓｏｌｄ  ａｎｄ  Ｍａｎｎ，２００３，Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．４２２において説明されている。
【０２０５】
さらに、プロテオーム分野及び他の領域で使用されるもの等の技法はまた、本発明の方法、キット、及び他の態様において具体化され得る。かかる技法には、例えば、米国特許出願第２００８／０２０２９２７号、同第２０１４／０２５６５７３号、同第２０１６／０１５３９８０号、ＷＯ２０１６／００１７９５、米国特許出願第２００８／０１８５２９５号、同第２０１０／００４７９０１号、同第２０１０／０２３１２４２号、同第２０１１／０１５４６４８号、同第２０１３／０３０６４９１号、同第２０１０／０３２９９２９号、同第２０１３／０２６１００９号、Ｓｏｒｇｅｒ，２００８，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６：１３４５−１３４６、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  １．２：１５７、Ｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｊ．Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｒｅｓ．５（１０）：２７５４−２７５９、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ１（８）：９７５−９８６、Ｒａｍｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７５（１５）：３７５８−３７６４、Ａｒｍｅｎｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  ３０（７）：１１４５−１１５６、Ｌｙｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ４（６）：１６９５−１７０２、Ｋｉｎｇｓｍｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４（１）：７４−８１）に記載される、マイクロ−及びナノ−流体チップ、バイオセンサー、及び他の技法の使用が含まれる。
【実施例】
【０２０６】
実施例１：閉塞性冠動脈疾患（ＣＡＤ）、パネルＦＭ１３９／６８５を診断するための臨床的及びバイオマーカー採点システム
２００８年〜２０１１年の間に介入を伴うまたは伴わない冠動脈及び／または末梢血管造影法を受けている１２５１人の患者の便宜な試料は、予め登録された。末梢血管造影法のみを受けているまたは全くカテーテル術を受けていない患者は、この分析から除外された（Ｎ＝２４４）。さらに、冠動脈または末梢カテーテル術のいずれかを受けたことがある、年代順のサブセットの最終１５３人の患者は、これらのモデルのさらなる検証においてそれらの潜在的な使用のために、この分析から除外された。患者は、多くの理由のためにこれらの手順に関して言及され、これには、心筋梗塞（ＭＩ）、不安定狭心症、及び心不全（ＨＦ）等の急性プロセス後の血管造影を含むが、非急性プロセスのために、例えば、安定した胸部疼痛の診断的評価、応力試験の失敗、または心臓弁膜手術前に予め手術で含まれる。
【０２０７】
インフォームドコンセントが得られた後、詳細の臨床及び履歴変数、ならびに血管造影のための照会の理由を、手順の時点で記録した。冠動脈血管造影法の結果はまた、各主要冠動脈またはそれらの分岐内の最も高いパーセントの狭窄で記録された。この分析の目的のために、著しい冠動脈狭窄は、７０％以上の内腔の閉塞を特徴とした。
【０２０８】
登録時から追跡の終了時までの診療記録の再調査を行った。臨床エンドポイントの特定については、診療記録の再調査、ならびに患者の電話による追跡及び／または医師の管理を行った。社会保障死亡指数及び／または死の発表のポスティングを使用して、生存状態を確認した。以下の臨床的終了事象は、研究治験責任医師によって特定、判定、及び記録された：死亡、非致死性ＭＩ、ＨＦ、脳卒中、一過性脳虚血発作、末梢動脈合併症、及び心不整脈。任意の再燃事象のために、各離散的事象が記録された。さらに、死亡は、心臓血管系死亡の存在／不在のために判定された。
【０２０９】
１５ｍＬの血液を、中央に位置する血管アクセスシースを通して血管造影手順前及びその直後に得た。血液を、直ちに、１５分間遠心分離し、バイオマーカー測定まで、血清及び血漿を、氷上にアリコートし、−８０℃で凍結した。手順直前に得られた血液のみを、この分析のために使用した。
【０２１０】
単一の凍結融解サイクル後に、２００ｕｌの血漿を、Ｌｕｍｉｎｅｘ  １００／２００  ｘＭＡＰ技術プラットフォーム上に１００超のタンパク質バイオマーカーに対して分析した。この技術は、単一の反応容器中で、多重、ミクロスフェアに基づいたアッセイを使用する。それは、光学分類スキーム、生化学的アッセイ、フローサイトメトリー、ならびに高度なデジタルシグナル処理ハードウェア及びソフトウェアを組み合わせる。多重化は、各タンパク質特異的なアッセイを、固有の蛍光サインで標識されるミクロスフェアセットに割り当てることによって達成される。アッセイ特異的捕捉抗体は、各固有のミクロスフェアセットに共有結合的にコンジュゲートされる。各ミクロスフェア上のアッセイ特異的捕捉抗体は、対象となるタンパク質と結合する。アッセイ特異的なビオチン化検出抗体の混合物を、ミクロスフェア混合物と反応させ、続いて、ストレプトアビジン標識蛍光「レポーター」分子と反応させる。フローサイトメーターと同様に、各個々のミクロスフェアが一連の励起ビームを通過する場合、それは、サイズに対して分析し、蛍光サインをコードし、生成された蛍光の量は、タンパク質レベルに比例する。各固有のセットからの最低限の１００個の個々のミクロスフェアを分析し、タンパク質特異的な蛍光の中央値をログ化する。既知の量の内部制御を用いて、感度及び定量的結果は、１データポイント当たり１００個のミクロスフェアの分析によって強化される精度で達成される。
【０２１１】
分析のために選択された患者は、冠動脈血管造影を受容した年代順に若い９２７人の患者からなった。これらはまた、末梢血管造影を付随して受容し得る。
【０２１２】
分析のために選択された９２７人の患者は、訓練セット（７０％、またはＮ＝６４９）及びホールドアウト検証セット（３０％、またはＮ＝２７８）に無作為に分けられた。少なくとも１つの主要心外膜冠動脈において、７０％以上の冠動脈狭窄を有する者と有しない者との間のベースラインの臨床的特性及びタンパク質濃度が、比較され（表１Ａ、３Ａ、５、及び６）、二分変数は、両側フィッシャー直接確率検定を用いて比較され、一方、連続変数は、両側２試料Ｔ検定を用いて比較された。比較されたバイオマーカーは、それらの濃度が正常に分布していなかったため、ウィルコクソン順位和検定で試験した。測定不可能なあらゆるマーカー結果については、検出限界を５０％下回る濃度を帰属させる標準的なアプローチを利用した。
【０２１３】
バイオマーカー選択及び診断モデルの発育のための全ての作業は、訓練セットにおいて単独に行われた。全てのタンパク質に対するレベルまたは濃度値は、以下の変換を行い、予測分析を容易にした：（ａ）それらは、正規分布を達成するためにログ変換した、（ｂ）異常値は、中央絶対偏差を３倍の値で切り取った、（ｃ）値を、ゼロ平均及び単位分散を有する分布に再計量した。タンパク質及び臨床的特性の候補パネルは、最小角回帰法（ＬＡＲＳ）を介して選択され、モデルは、ロジスティック回帰とともに最小絶対収縮及び選択操作者（ＬＡＳＳＯ）を用い、４００反復を有するＭｏｎｔｅ  Ｃａｒｌｏ相互検証を用いて生成された。候補は、赤池情報量基準またはベイズ情報量基準（ＡＩＣ、ＢＩＣ）の最小化及びＨｏｓｍｅｒ−Ｌｅｍｅｓｈｏｗ検定による適合度によってそれらの付加からの較正の改善の評価とともに、バイオマーカーのベースモデルへの付加に伴う曲線下面積（ＡＵＣ）の変化を評価する、反復モデル構築を介して識別のさらなる評価に供された。
【０２１４】
一旦最終パネルが選択されると、最終モデルは、訓練データの全てを用いて構築された。多変数のロジスティック回帰は、訓練セット中、概して、いくつかの関連のサブグループ中のモデルの性能を評価して、男性対女性において、ＣＡＤ歴を有する者対ＣＡＤ歴を有しなかった者において、ならびに心筋梗塞を有する及び有しないことを示す者において、モデルがいかによく実行されたかを判定した。９５％の信頼区間（ＣＩ）を有する診断オッズ比（ＯＲ）を、生成した。その後に、最終モデルは、検証セットで評価された：そうすることで、検証コホート内でスコア分布を生成し、続いて、ＡＵＣの関数としてスコアの値を用いて受信者動作特性（ＲＯＣ）検定を行った。スコアの動作特性は、生成された、感度（Ｓｎ）、特異度（Ｓｐ）、陽性及び陰性予測値（ＰＰＶ、ＮＰＶ）を用いて計算した。また、単一の診断スコアを、可能性のレベル（例えば、５レベルのスコアであり、スコア１は、患者がＣＡＤを全く有しないことを意味し、スコア５は、患者がＣＡＤを有すること可能性が極めて高いことを意味する）に変換するための方法を考察し、これらのレベルのそれぞれを上の動作特性で評価した（図３及び表９）。ＣＡＤスコアの予後の有意性を評価するために、ＣＡＤ診断に対する最適閾値を上回るスコアはまた、将来の急性ＭＩを予測したかどうかを評価するために、年齢−及びＣＡＤ−スコアを調整したＣｏｘ比例ハザード分析を行い、上昇したＣＡＤスコアならびに９５％  ＣＩを有する単位スコア当たりの増加におけるハザード比（ＨＲ）を推定した。最後に、上昇したＣＡＤスコアの関数として第１の急性ＭＩ事象までの時間を計算し、カプランマイヤー生存曲線として表し、ログランク検定を用いて比較した（図４）。
【０２１５】
全ての統計学を、Ｒソフトウェア、バージョン３．３（Ｒ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ，Ｖｉｅｎｎａ，ＡＴ）を用いて行い、ｐ値は、両側であり、０．０５未満の値が、有意であると見なされる。
【０２１６】
表１Ａは、任意の末梢カテーテルを伴ってまたは伴わずに、冠動脈カテーテルを受容した対象のコホートにおける訓練セット（Ｎ＝６４９）中で、７０％以上の少なくとも１つの冠動脈狭窄を有する者（Ｎ＝４２８）と、有しなかった者との間で異なる、バイオマーカー濃度及びそれらの診断的関連性を示す。
【０２１７】
とりわけ、訓練セット中で測定された全てのタンパク質バイオマーカー（表１Ａ）のうちで、重度ＣＡＤを有した者が、低濃度のアディポネクチン及びアポリポタンパク質Ｃ−Ｉ（ａｐｏ  Ｃ−Ｉ）、ならびに高濃度の腎臓損傷分子−１及びミッドカインを有した。
【０２１８】
検証セット（Ｎ＝２７８）中の対象のベースライン臨床的変数は、訓練セット中のものと同様であり、表５（診断的タンパク質バイオマーカーに対して）及び表６（臨床的変数に対して）に含まれる。以下の表５は、任意の末梢カテーテルを伴ってまたは伴わずに、冠動脈カテーテルを受容した対象のコホートにおける検証セット（Ｎ＝２７８）中で、７０％以上の少なくとも１つの冠動脈狭窄を有する者（Ｎ＝１７８）と、有しなかった者との間で異なる、タンパク質バイオマーカー濃度及びそれらの診断的関連性を示す。
【０２１９】
【表５−１】
2019507354.tif 000038
【表５−２】
2019507354.tif 000039
【表５−３】
2019507354.tif 000040
【表５−４】
2019507354.tif 000041
【表５−５】
2019507354.tif 000042
【表５−６】
2019507354.tif 000043
【０２２０】
以下の表６は、任意の末梢カテーテルを伴ってまたは伴わずに、冠動脈カテーテルを受容した対象のコホートにおける検証セット（Ｎ＝２７８）中で、７０％以上の少なくとも１つの冠動脈狭窄を有する者（Ｎ＝１７８）と、有しなかった者との間で異なる、ベースラインでの臨床的変数及びそれらの診断的関連性を示す。
【０２２１】
【表６−１】
2019507354.tif 000044
【表６−２】
2019507354.tif 000045
【表６−３】
2019507354.tif 000046
【表６−４】
2019507354.tif 000047
【０２２２】
記載される方法に従って、訓練コホート（Ｎ＝６４９）から、任意の１つの血管中の７０％以上のＣＡＤの独立予測因子は、４つのバイオマーカー（アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、腎臓損傷分子−１、及びミッドカイン）ならびに臨床的変数（経皮冠動脈介入、例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術歴、及び性別）を含んだ。このタンパク質バイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図１〜４に示される、パネルＦＭ１３９／６８５によって表される。
【０２２３】
ＡＩＣまたはＢＩＣの最小化によって、及びＨｏｓｍｅｒ−Ｌｅｍｅｓｈｏｗ検定による同時適合度で実証されるように、各個々のバイオマーカーの臨床的変数の臨床的変数への付加が判別を改善する一方、同時に、７０％以上の冠動脈狭窄のための較正を改善することを示す、モデルフィッティングを、表７に示す。バイオマーカーに関して、候補者がモデルを強化し、及び／または較正を改善した場合、候補者を保持した。
【０２２４】
【表７】
2019507354.tif 000048
【０２２５】
多変量ロジスティック回帰では、訓練コホートの中で、我々のスコアは、全ての対象における重度ＣＡＤを強く予測した（ＯＲ＝９．７４、９５％  ＣＩ  ６．０５〜１６．１、Ｐ＜０．００１）。様々なサブグループにおけるスコアの性能をより良好に理解するために、男性（ＯＲ＝７．８８、９５％  ＣＩ＝４．３１〜１４．９、Ｐ＜０．００１）、女性（ＯＲ＝２４．８、９５％  ＣＩ＝７．１１〜１１１．６、Ｐ＜０．００１）、ならびにＣＡＤの前歴を有しない者（ＯＲ＝８．６７、９５％  ＣＩ＝４．３８〜１７．９、Ｐ＜０．００１）におけるスコア性能を試験した。
【０２２６】
検証コホートにおける、個々のスコアを計算し、ＣＡＤの存在の関数として結果を表した。そうすることで、二峰性スコア分布を明らかにし（図２）、より高いスコアを有する者において重度ＣＡＤのより高い有病率を有し、より低いスコアを有する者の中でより低い有病率を有した。ＲＯＣ検定では、任意の主要心外膜冠動脈の７０％以上の狭窄の究極の判断基準の診断については、生成されたスコアは、０．８７のＡＵＣを有した（図１、Ｐ＜０．００１）。
【０２２７】
表８は、様々なスコアにわたるＦＭ１３９／６８５  ＣＡＤアルゴリズムの操作特性を示す。感度及び特異度においては、９５％の信頼区間が括弧内に列挙される。最適なスコアのカットポイントで、重度ＣＡＤに対して７７％の感度、８４％の特異度、９０％のＰＰＶ、及び６７％のＮＰＶを見出した。ＣＡＤ歴を有する対象において、このスコアは、ＣＡＤの予測に対して８４％の感度、６６％の特異度、９０％のＰＰＶ、及び５３％のＮＰＶを有した。ＣＡＤ歴を有しない対象において、このスコアは、ＣＡＤの予測に対して７８％の感度、８０％の特異度、８０％のＰＰＶ、及び７８％のＮＰＶを有した。ＣＡＤスコアはまた、ＭＩを有する及び有しないことを提示する患者における性能についても試験した。急性ＭＩを有しないことを提示する対象における重度ＣＡＤを予測するために、ＡＵＣのスコアは、０．８７（Ｐ＜０．００１）であった。
【０２２８】
【表８−１】
2019507354.tif 000049
【表８−２】
2019507354.tif 000050
【０２２９】
以下の表９は、５レベルの採点システムを用いるスコアリングモデルを示し、未加工の診断値は、５レベルのスコアに分割される場合のモデルの性能を示し、それぞれ、異なる操作特性及び診断の信頼度に最適化され、より高いスコアは、ＣＡＤの存在に対する危険性の増加を示す。スコア１〜２は、陰性の診断を示し、スコア４〜５は、陽性の診断を示し、スコア３は、中程度の危険性の診断を示す。スコアレベル１及び２のカットオフは、ＮＰＶ（それぞれ、０．９及び０．８）に対して最適化され、それぞれ、０．９１及び０．７６のＮＰＶ値を有する検証セット中で試験した。スコアレベル４及び５のカットオフは、ＰＰＶ（それぞれ、０．９及び０．９５）に対して最適化され、それぞれ、０．８５及び０．９３のＰＰＶ値を有する検証セット中で試験した。これはまた、図３に示す。
【０２３０】
【表９】
2019507354.tif 000051
【０２３１】
特に、フラミンガム危険スコアを計算するために利用可能なデータを有する者（Ｎ＝５７７）の中で、ＣＡＤの存在を予測するフラミンガム危険スコアの能力にわたって、一貫性のある優れたＡＵＣを有するようなＣＡＤアルゴリズムを見出した（０．８７対０．５２、Ｐ＜０．００１）。訓練セット中の６４９のうちで、１５４は、画像を伴わない運動負荷試験を有し、１７４は、心臓核医学検査を有し、検証セット中の２７８人の患者のうちで、４７は、画像を伴わない運動負荷試験を有し、６１は、心臓核医学検査を有した。標準的治療当たりの心臓負荷試験を受けている患者の中で、ＣＡＤスコアは、実質的には、重度ＣＡＤを血管造影法によって予測するためにより正確であった（再度、０．８７対０．５２；ＡＵＣにおける差異において、Ｐ＜０．００１）。
【０２３２】
３．６年の追跡期間中に、対象のコホート全体において、ＣＡＤ診断採点システムは、独立して、年齢及びスコア調節モデルにおけるその後の偶発的な急性ＭＩを予測した（ＨＲ＝２．３９、９５％  ＣＩ＝１．６５〜３．４７、Ｐ＜０．００１）。連続変数としてモデル化した場合、このスコアは、より高いスコアが、偶発的な急性ＭＩに対してより高い危険性を予測することが同様に予測された（ＨＲ＝１．１９／単位スコアの増加、９５％  ＣＩ＝１．０９〜１．３１、Ｐ＜０．００１）。二分法によって上昇したスコアを有するものは、カプランマイヤー生存曲線の急速かつ持続的な発散によって証明されるように、より低いＣＡＤスコアを有する者よりも第１の事象に対してより短い期間を有した（図４、対数ランクｐ値＜０．００１）。
【０２３３】
広範囲の兆候に対して冠動脈造影法に紹介される患者を用いて、重度の心外膜ＣＡＤ（少なくとも１つの主要血管中の７０％以上の狭窄）の存在を診断するための新規の採点システムを説明する。このスコアは、臨床的変数と、４つの生物学的に関連したバイオマーカーの濃度との組み合わせからなった。任意の主要心外膜冠動脈の７０％以上の狭窄の診断において、生成されたスコアは、検証セット中で０．８７のＲＯＣ曲線下面積を有し、最適なカットポイントで、このスコアはともに、ＣＡＤの診断に対して高感度（７７％）及び特異的（８４％）であり、９０％のＰＰＶを有した。重要なことには、ＣＡＤスコアは、女性において特によく実施されたが、一方、スコアの１つの要素は、経皮冠動脈介入（ＰＣＩとしても称される）歴であり、スコア性能は、ＣＡＤ歴を有しない対象または診断時にＭＩを有しない者と同様であった。フラミンガム危険スコアを計算するために利用可能なデータを有するものの中で、ＣＡＤスコアは、フラミンガム危険スコアよりもＣＡＤの存在を予測する場合に著しく高いＡＵＣを有し、このようなデータは、フラミンガムスコアがＣＴ血管造影で検出された一般的な冠動脈プラーク負荷を判定するにはあまり正確でないことを見出した、Ｐｅｎ及び同業者と同様である。スコアはまた、負荷試験よりもＣＡＤの診断については著しく良好に実行した。
【０２３４】
本明細書に開示される臨床的及びバイオマーカー採点戦略は、重度の心外膜ＣＡＤの存在を確実に診断することができる。ＣＡＤの存在を診断するために確実な臨床的及びバイオマーカースコアの利点は、このような技術が費用効率が高い様式で広範囲に広まり、容易に解釈され得るという事実を含み、明確な一連の治療ステップと関連している。
【０２３５】
実施例２：閉塞性冠動脈疾患（ＣＡＤ）、パネルＦＭ４６／５７２を診断するための臨床的及びバイオマーカー採点システム
【０２３６】
この実施例は、解剖学的に有意なＣＡＤの存在を診断する際に、及び心臓血管事象の予後を提供する際に、とりわけ、高精度を提供する臨床的及びバイオマーカー採点システムを用いるさらに別の非侵襲的方法を示す。この実施例は、実施例１と同じ記載方法（研究設計及び参加者、データ取得、追跡、バイオマーカー試験、統計及び結果（表１Ａ、３Ａ、５、及び６、図１８〜２０）を利用した。実施例１と実施例２との間の主な差異は、利用された臨床的変数及びタンパク質である。
【０２３７】
記載される方法に従って、訓練コホート（Ｎ＝６４９）から、任意の１つの血管中の７０％以上のＣＡＤの独立予測因子は、３つのバイオマーカー（アディポネクチン、デコリン、及びミッドカイン）ならびに３つの臨床的変数（心筋梗塞歴、経皮冠動脈介入歴、及び性別）を含んだ。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図１８〜２０に示されるパネルＦＭ４６／５７２によって表される。
【０２３８】
ＡＩＣまたはＢＩＣの最小化によって、及びＨｏｓｍｅｒ−Ｌｅｍｅｓｈｏｗ検定による同時適合度で実証されるように、各個々のバイオマーカーの臨床的変数の臨床的変数への付加が判別を改善する一方、同時に、７０％以上の冠動脈狭窄のための較正を改善することを示す、モデルフィッティングを、表１０に示す。バイオマーカーに関して、候補者がモデルを強化し、及び／または較正を改善した場合、候補者を保持した。
【０２３９】
【表１０−１】
2019507354.tif 000052
【表１０−２】
2019507354.tif 000053
【０２４０】
とりわけ、重度ＣＡＤを有する者は、低濃度のアディポネクチンならびに高濃度のミッドカイン及びデコリンを有した。冠動脈狭窄を有する及び有しない訓練セット中で対象におけるバイオマーカー及びそれらの濃度を、表１Ａに示し、訓練セット中のベースラインの臨床的変数値が、表３Ａに見られる。検証セット（Ｎ＝２７８）中の対象のベースラインバイオマーカー及び臨床的変数は、それぞれ、表５及び６に含まれる。
【０２４１】
検証コホートにおける、ＲＯＣ検定では、任意の主要心外膜冠動脈の７０％以上の狭窄の究極の判断基準の診断については、生成されたスコアは、０．８４のＡＵＣを有した（図１８、Ｐ＜０．００１）。検証コホートにおける、個々のスコアを計算し、ＣＡＤの存在の関数として結果を表した。そうすることで、二峰性スコア分布を明らかにし（図１９）、より高いスコアを有する者において重度ＣＡＤのより高い有病率を有し、より低いスコアを有する者の中でより低い有病率を有した。
【０２４２】
以下の表１１は、様々なスコアにわたるＦＭ４６／５７２  ＣＡＤアルゴリズムの操作特性を示す。感度及び特異度においては、９５％の信頼区間が括弧内に列挙される。最適なスコアのカットポイントで、重度ＣＡＤに対して６９．７％の感度、８１．０％の特異度、８６．７％のＰＰＶ、及び６０．０％のＮＰＶを見出した。
【０２４３】
【表１１−１】
2019507354.tif 000054
【表１１−２】
2019507354.tif 000055
【０２４４】
以下の表１２は、３レベルの採点システムを用いるスコアリングモデルを示し、未加工の診断値は、３レベルのスコアに分割される場合のモデルの性能を示し、それぞれ、異なる操作特性及び診断の信頼度に最適化され、より高いスコアは、ＣＡＤの存在に対する危険性の増加を示す。３レベルのスコアでは、スコア１は、ＣＡＤ診断の陰性または低い可能性を示し、スコア３は、ＣＡＤ診断の陽性または高い可能性を示し、スコア２は、ＣＡＤ診断の中程度の可能性の診断を示す。スコアレベル１のカットオフは、訓練セットにおいて０．８のＮＰＶに対して最適化され、スコアレベル３のカットオフは、訓練セットにおいて０．９５のＰＰＶに対して最適化された。
【０２４５】
【表１２−１】
2019507354.tif 000056
【表１２−２】
2019507354.tif 000057
【０２４６】
特に、フラミンガム危険スコアを計算するために利用可能なデータを有する者（Ｎ＝５７７）の中で、ＣＡＤの存在を予測するフラミンガム危険スコアの能力にわたって、一貫性のある優れたＡＵＣを有するようなＣＡＤアルゴリズムを見出した（０．８４対０．５２、Ｐ＜０．００１）。訓練セット中の６４９のうちで、１５４は、画像を伴わない運動負荷試験を有し、１７４は、心臓核医学検査を有し、検証セット中の２７８人の患者のうちで、４７は、画像を伴わない運動負荷試験を有し、６１は、心臓核医学検査を有した。標準的治療当たりの心臓負荷試験を受けている患者の中で、ＣＡＤスコアは、実質的には、重度ＣＡＤを血管造影法によって予測するためにより正確であった（再度、０．８４対０．５２；ＡＵＣにおける差異において、Ｐ＜０．００１）。
【０２４７】
３．６年の追跡期間中に、対象のコホート全体において、ＣＡＤ採点システムは、独立して、年齢及びスコア調節モデルにおけるその後の偶発的な急性ＭＩを予測した（ＨＲ＝１．８５、９５％  ＣＩ＝１．２８〜２．６７、Ｐ＜０．００１）。連続変数としてモデル化した場合、このスコアは、より高いスコアが、偶発的な急性ＭＩに対してより高い危険性を予測することが同様に予測された（ＨＲ＝１．１９／単位スコアの増加、９５％  ＣＩ＝１．０８〜１．３０、Ｐ＜０．００１）。二分法によって上昇したスコアを有するものは、カプランマイヤー生存曲線の急速かつ持続的な発散によって証明されるように、より低いＣＡＤスコアを有する者よりも第１の事象に対してより短い期間を有した（図２０、対数ランクｐ値＜０．００１）。
【０２４８】
実施例３：閉塞性冠動脈疾患（ＣＡＤ）、パネルＦＭ０２／４１０を診断するための臨床的及びバイオマーカー採点システム
【０２４９】
この実施例は、解剖学的に有意なＣＡＤの存在を診断する際に、及び心臓血管事象の予後を提供する際に、とりわけ、高精度を提供する臨床的及びバイオマーカー採点システムを用いるさらに別の非侵襲的方法を示す。
【０２５０】
この実施例は、対象を除いて、実施例１及び２と同じ記載方法（研究設計、データ取得、追跡、バイオマーカー試験、統計及び結果）を利用した。この実施例は、冠動脈カテーテル法のみを有した対象、Ｎ＝８０９（対冠動脈カテーテル法及び任意に末梢カテーテル法を有した対象を含んだ（表１Ｂ、３Ｂ、１３、１４、１５、及び１６ならびに図２８）。
【０２５１】
分析のために選択された患者は、冠動脈血管造影のみを受容した年代順に若い８０９人の患者からなった。末梢血管造影を付随して受容した恐れのある患者は、除外された。
【０２５２】
分析のために選択された８０９人の患者は、訓練セット（７０％、またはＮ＝５６６、表１Ｂ及び３Ｂ）及びホルドウォット検証セット（３０％、またはＮ＝２４３、表１３及び１４）に無作為に分けられた。少なくとも１つの主要心外膜冠動脈において、７０％以上の冠動脈狭窄を有する者とそれを有しない者との間のベースラインのタンパク質及び臨床的特性が、比較され、二分変数は、両側フィッシャー直接確率検定を用いて比較され、一方、連続変数は、両側２試料Ｔ検定を用いて比較された。比較されたバイオマーカーは、それらの濃度が正常に分布していなかったため、ウィルコクソン順位和検定で試験した。測定不可能なあらゆるマーカー結果については、検出限界を５０％下回る濃度を帰属させる標準的なアプローチを利用した。
【０２５３】
以下の表１３は、冠動脈カテーテルのみを受容した対象のコホートにおける検証セット（Ｎ＝２４３）中で、７０％以上の少なくとも１つの冠動脈狭窄を有する者（Ｎ＝１４８）と、有しなかった者との間で異なる、バイオマーカー濃度及びそれらの診断的関連性を示す。
【０２５４】
【表１３−１】
2019507354.tif 000058
【表１３−２】
2019507354.tif 000059
【表１３−３】
2019507354.tif 000060
【表１３−４】
2019507354.tif 000061
【表１３−５】
2019507354.tif 000062
【表１３−６】
2019507354.tif 000063
【０２５５】
以下の表１４は、冠動脈カテーテルのみを受容した対象のコホートにおける検証セット（Ｎ＝２４３）中で、７０％以上の少なくとも１つの冠状動脈狭窄症（Ｎ＝１４８）を有する者と、有しなかった者との間で異なる、ベースラインの臨床的変数及びそれらの診断的関連性を示す。
【０２５６】
【表１４−１】
2019507354.tif 000064
【表１４−２】
2019507354.tif 000065
【表１４−３】
2019507354.tif 000066
【０２５７】
実施例３（実施例１及び２において比較されるように）のさらなる差異は、臨床的変数及びタンパク質であり、これらは、パネル（ＦＭ０２／４１０）において利用された。記載される方法に従って、訓練コホート（Ｎ＝５６６）から、任意の１つの血管中の７０％以上のＣＡＤの独立予測因子は、６つのバイオマーカー（アディポネクチン、アポリポタンパク質Ｃ−１、マトリックスメタロプロテイナーゼ９、ミッドカイン、ミオグロビン、及び肺界面活性剤タンパク質Ｄ）、ならびに３つの臨床的変数（冠動脈バイパス移植術［ＣＡＢＧ］歴、経皮冠動脈介入［例えば、ステント留置術を有するまたは有しないバルーン血管形成術］歴、及び性別）を含んだ。このバイオマーカーと臨床的変数との組み合わせは、表２５及び図２８に示されるパネルＦＭ０２／４１０によって表される。
【０２５８】
以下の表１５は、様々なスコアにわたるＦＭ０２／４１０  ＣＡＤアルゴリズムの操作特性を示す。感度及び特異度においては、９５％の信頼区間が括弧内に列挙される。最適なスコアのカットポイントで、重度ＣＡＤに対して８４．５％の感度、７７．９％の特異度、８５．６％のＰＰＶ、及び７６．３％のＮＰＶを見出した。
【０２５９】
【表１５−１】
2019507354.tif 000067
【表１５−２】
2019507354.tif 000068
【０２６０】
表１６は、３レベルの採点システムを用いるスコアリングモデルを示し、未加工の診断値は、３レベルのスコアに分割される場合のモデルの性能を示し、それぞれ、異なる操作特性及び診断の信頼度に最適化され、より高いスコアは、ＣＡＤの存在に対する危険性の増加を示す。３レベルのスコアでは、スコア１は、ＣＡＤ診断の陰性または低い可能性を示し、スコア３は、ＣＡＤ診断の陽性または高い可能性を示し、スコア２は、ＣＡＤ診断の中程度の可能性の診断を示す。スコアレベル１のカットオフは、訓練セットにおいて０．８のＮＰＶに対して最適化され、スコアレベル３のカットオフは、訓練セットにおいて０．９５のＰＰＶに対して最適化された。
【０２６１】
【表１６】
2019507354.tif 000069
【０２６２】
実施例４：心臓血管系死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合（ＦＭ１６０／０２）の試料採取から３日〜１年（３〜３６５日）後の危険性を予測するためのバイオマーカー採点システム
【０２６３】
この実施例は、心臓血管系死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合の１年の危険性の予後を提供する際に、とりわけ、高精度を提供するバイオマーカー採点システムを用いる非侵襲的方法を示す。この実施例は、実施例１と同じ記載方法（研究設計及び対象、データ取得、追跡、バイオマーカー試験、統計及び結果（表２Ｂ、４Ｂ、１７、１８、１９、及び２０ならびに図３０）を利用した。
【０２６４】
分析のために選択された患者は、冠動脈血管造影のみを受容した年代順に若い９２７人の患者からなった。末梢血管造影を付随して受容した恐れのある患者は、除外された。
【０２６５】
分析のために選択された９２７人の患者は、訓練セット（７０％、またはＮ＝６４９、表２Ｂ及び４Ｂ）及びホールドアウト検証セット（３０％、またはＮ＝２７８、表１７及び１８）に無作為に分けられた。訓練セットは、カテーテル手術後（すなわち、３日目の前）に死亡した１人の対象を有し、そのため、この患者は、訓練セットから除外され、結果としてＮ＝６４８の集団になった。ＭＡＣＥを有する者とそれを有しない者との間のベースラインの臨床的変数が、比較され（表４Ｂ及び１８）、二分変数は、両側フィッシャー直接確率検定を用いて比較され、一方、連続変数は、両側２試料Ｔ検定を用いて比較された。比較されたバイオマーカーは、それらの濃度が正常に分布していなかったため、ウィルコクソン順位和検定で試験した。測定不可能なあらゆるマーカー結果については、検出限界を５０％下回る濃度を帰属させる標準的なアプローチを利用した。
【０２６６】
以下の表１７は、検証セット（Ｎ＝２７８）における、採血から３〜３６５日の主要有害心臓事象（ＭＡＣＥ）を有する者と、有しなかった者との間で異なる、バイオマーカー濃度及びそれらの予後関連性を示す。この表の数字は、ＣＶ死亡、ＭＩ、または主要脳卒中による１年のＭＡＣＥの複合エンドポイントを用いて計算され、これらのタンパク質は、あらゆる原因による死亡、ＭＩ、及び／または主要脳卒中による１年のＭＡＣＥの複合エンドポイントを用いて同様の結果を生成する。
【０２６７】
【表１７−１】
2019507354.tif 000070
【表１７−２】
2019507354.tif 000071
【表１７−３】
2019507354.tif 000072
【表１７−４】
2019507354.tif 000073
【表１７−５】
2019507354.tif 000074
【表１７−６】
2019507354.tif 000075
【０２６８】
以下の表１８は、検証セット（Ｎ＝２７８）中で、採血から３〜３６５日の主要有害心臓事象（ＭＡＣＥ）を有する者と、有しなかった者との間で異なる、ベースラインの臨床的変数及びそれらの予後関連性を示す。この表の数字は、ＣＶ死亡、ＭＩ、または主要脳卒中による１年のＭＡＣＥの複合エンドポイントを用いて計算され、これらのタンパク質は、あらゆる原因による死亡、ＭＩ、及び／または主要脳卒中による１年のＭＡＣＥの複合エンドポイントを用いて同様の結果を生成する。
【０２６９】
【表１８−１】
2019507354.tif 000076
【表１８−２】
2019507354.tif 000077
【表１８−３】
2019507354.tif 000078
【０２７０】
以下の表１９は、様々なスコアにわたるＦＭ１６０／０２  ＭＡＣＥ予後アルゴリズムの操作特性を示す。感度及び特異度においては、９５％の信頼区間が括弧内に列挙される。最適なスコアのカットポイントで、ＣＶ死亡、ＭＩ、または主要な脳卒中を有する１年のＭＡＣＥの複合エンドポイントに対して、６３．９％の感度、７７．３％の特異度、２９．５％のＰＰＶ、及び９３．５％のＮＰＶを見出した。
【０２７１】
【表１９】
2019507354.tif 000079
【０２７２】
以下の表２０は、３レベルの採点システムを用いるスコアリングモデルを示し、未加工の予後値は、３レベルのスコアに分割される場合のモデルの性能を示し、それぞれ、異なる操作特性及び予後の信頼に最適化され、より高いスコアは、複合のＭＡＣＥに対する危険性の増加を示す。３レベルのスコアでは、スコア１は、低い危険性または陰性の予後を示し、スコア３は、高い危険性または陽性の予後を示し、スコア２は、中程度の危険性の予後を示す。スコアレベル１のカットオフは、訓練セットにおいて０．９７のＮＰＶに対して最適化され、スコアレベル３のカットオフは、訓練セットにおいて０．４５のＰＰＶに対して最適化された。
【０２７３】
【表２０】
2019507354.tif 000080
【０２７４】
実施例５：心臓血管系死亡、心筋梗塞、または脳卒中の複合（ＦＭ９６／０４）の１年（０日〜３６５日）の危険性を予測するためのバイオマーカー採点システム
【０２７５】
この実施例は、心臓血管系死亡、心筋梗塞、または脳卒中のＭＡＣＥ複合の１年の危険性（０〜３６５日）の予後を提供する際に、とりわけ、高精度を提供するバイオマーカー採点システムを用いる非侵襲的方法を示す。この実施例は、実施例１に記載されたものと同じ方法（研究設計及び対象、データ取得、追跡、バイオマーカー試験、統計及び結果（表２Ａ、４Ａ、２１、２２、２３、及び２４ならびに図３１）を利用した。
【０２７６】
分析のために選択された患者は、冠動脈血管造影のみを受容した年代順に若い９２８人の患者からなった。患者はまた、末梢血管造影を付随して受容し得る。
【０２７７】
分析のために選択された９２８人の患者は、訓練セット（７０％、またはＮ＝６４９、表２Ａ）及びホールドアウト検証セット（３０％、またはＮ＝２７９、表２１）に無作為に分けられた。
【０２７８】
ＭＡＣＥを有する者とそれを有しない者との間のベースラインの特性が、比較され、二分変数は、両側フィッシャー直接確率検定を用いて比較され、一方、連続変数は、両側２試料Ｔ検定を用いて比較された。比較されたバイオマーカーは、それらの濃度が正常に分布していなかったため、ウィルコクソン順位和検定で試験した。測定不可能なあらゆるマーカー結果については、検出限界を５０％下回る濃度を帰属させる標準的なアプローチを利用した。
【０２７９】
以下の表２１は、検証セット（Ｎ＝２７８）中で、０〜３６５日の主要有害心臓事象（ＭＡＣＥ）を有する者と、有しなかった者との間で異なる、バイオマーカー濃度及びそれらの予後関連性を示す。この表の数字は、ＣＶ死亡、ＭＩ、または主要脳卒中による１年のＭＡＣＥの複合エンドポイントを用いて計算され、これらのタンパク質は、あらゆる原因による死亡、ＭＩ、及び／または主要脳卒中による１年のＭＡＣＥの複合エンドポイントを用いて同様の結果を生成する。
【０２８０】
【表２１−１】
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【表２１−２】
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【表２１−３】
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【表２１−４】
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【表２１−５】
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【０２８１】
以下の表２２は、検証セット（Ｎ＝２７８）中で、０〜３６５日の主要有害心臓事象（ＭＡＣＥ）を有する者と、有しなかった者との間で異なる、ベースラインの臨床的変数及びそれらの予後関連性を示す。この表の数字は、ＣＶ死亡、ＭＩ、または主要脳卒中による１年のＭＡＣＥの複合エンドポイントを用いて計算され、これらのタンパク質は、あらゆる原因による死亡、ＭＩ、及び／または主要脳卒中による１年のＭＡＣＥの複合エンドポイントを用いて同様の結果を生成する。
【０２８２】
【表２２−１】
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【表２２−２】
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【表２２−３】
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【表２２−４】
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【０２８３】
以下の表２３は、様々なスコアにわたるＦＭ９６／０４  ＭＡＣＥ予後アルゴリズムの操作特性を示す。感度及び特異度においては、９５％の信頼区間が括弧内に列挙される。最適なスコアのカットポイントで、ＣＶ死亡、ＭＩ、または主要な脳卒中を有する１年（０〜３６５）のＭＡＣＥの複合エンドポイントに対して、６６．７％の感度、７６．６％の特異度、３１．７％のＰＰＶ、及び９３．４％のＮＰＶを見出した。
【０２８４】
【表２３−１】
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【表２３−２】
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【０２８５】
以下の表２４は、３レベルの採点システムを用いるスコアリングモデルを示し、未加工の予後値は、３レベルのスコアに分割される場合のモデルの性能を示し、それぞれ、異なる操作特性及び予後の信頼に最適化され、より高いスコアは、複合のＭＡＣＥに対する危険性の増加を示す。３レベルのスコアでは、スコア１は、低い危険性または陰性の予後を示し、スコア３は、高い危険性または陽性の予後を示し、スコア２は、中程度の危険性の予後を示す。スコアレベル１のカットオフは、訓練セットにおいて０．９７のＮＰＶに対して最適化され、スコアレベル３のカットオフは、訓練セットにおいて０．４のＰＰＶに対して最適化された。
【０２８６】
【表２４】
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【０２８７】
実施例６：診断心臓血管疾患のための臨床及びバイオマーカー分析を用いる方法のさらなる実証方法
【０２８８】
表２５は、タンパク質バイオマーカー、及び任意に、所与の結果のための対応するＡＵＣを有する臨床的変数を含む異なるパネルのチャートである。これらは、前述の実施例１〜５、ならびに本明細書に提供される方法及び分析を使用して生成されるさらなるパネルに反映する。
【０２８９】
【表２５−１】
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【表２５−２】
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【表２５−３】
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【表２５−４】
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【表２５−５】
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【表２５−６】
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【表２５−７】
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【表２５−８】
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【表２５−９】
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【表２５−１０】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【国際調査報告】
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