(57)【要約】ラッカーゼ反応性官能基を有する薬物と、ラッカーゼ（EC.10.3.2）とを含む、薬学的組成物、および、そのような組成物を製造するための方法が開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラッカーゼ反応性官能基を有する薬物と、ラッカーゼ（EC 1.10.3.2）とを含む、薬学的組成物。
【請求項２】
前記ラッカーゼ反応性官能基を有する薬物が、フェノール性ヒドロキシル基を有する物質、アミノフェノール、ベンゼンチオール、ジフェノールまたはポリフェノール、メトキシ置換フェノール、アミノフェノール、ジアミン、芳香族アミン、ポリアミン、アスコルベート、ヒドロキシインドール、アリールジアミン、およびアニリンを含む群より選択され、好ましくは、フェノール性ヒドロキシル基を有する物質である、請求項1に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記ラッカーゼが、フルイカワラタケ（Trametes villosa）由来のラッカーゼ、ミセリオフトラ・サーモフィラ（Myceliophthora thermophila）由来のラッカーゼ、およびプレウロタス・オストレアタス（Pleurotus ostreatus）由来のラッカーゼの群より選択される、請求項1または2に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記薬物が、ラッカーゼ反応性官能基を有するオピオイド薬物であり、好ましくは、モルヒネ、タペンタドール、ヒドロモルホン、エトルフィン、デソモルヒネ、オキシモルホン、ブプレノルフィン、フェニルアラニン残基を含むオピオイドペプチド、例えば、アドレノルフィン、アミドルフィン（amidorphin）、カソモルフィン、DADLE（[D-Ala2,D-Leu5]-エンケファリン）、DAMGO（[D-Ala2,N-MePhe4,Gly-オール]-エンケファリン）、デルモルフィン、エンドモルフィン、モルフィセプチン、およびTRIMU 5（L-チロシル-N-{[(3-メチルブチル)アミノ]アセチル}-D-アラニンアミド）；オリパビン、6-MDDM（6-メチレンジヒドロデスオキシモルヒネ）、クロルナルトレキサミン、ジヒドロモルヒネ、ヒドロモルフィノール、メチルデソルフィン、N-フェネチルノルモルヒネ、RAM-378（7,8-ジヒドロ-14-ヒドロキシ-N-フェネチルノルモルヒネ）、ヘテロコデイン、7-スピロインダニルオキシモルホン、モルフィノン、ペンタモルホン、セモルホン（semorphone）、クロロモルフィド、ナルブフィン、オキシモルファゾン、1-ヨードモルヒネ、モルヒネ-6-グルクロニド、6-モノアセチルモルヒネ、ノルモルヒネ、モルヒネ-N-オキシド、シクロルファン（cyclorphan）、デクストラロルファン、レボルファノール、レボフェナシルモルファン、ノルレボルファノール、オキシロルファン、フェノモルファン、フレチルノルレボルファノール（furethylnorlevorphanol）、キソルファノール、ブトルファノール、6,14-エンドエテノテトラヒドロオリパビン、BU-48（N-シクロプロピルメチル-[7α,8α,2',3']-シクロヘキサノ-1'[S]-ヒドロキシ-6,14-エンド-エテノテトラヒドロノルオリパビン）、シプレノルフィン、ジヒドロエトルフィン、ノルブプレノルフィン、5'-グアニジノナルトリンドール、ジプレノルフィン、レバロルファン、メプタジノール、メチルナルトレキソン、ナルフラフィン、ナルメフェン、ナロキサゾン、ナロキソン、ナロルフィン、ナルトレキソン、ナルトリベン、ナルトリンドール、6β-ナルトレキソール-d4、プソイドモルフィン、ナロキソナジン、ノルビナルトルフィミン、アラゾシン、ブレマゾシン、デゾシン、ケタゾシン、メタゾシン、ペンタゾシン、フェナゾシン、シクラゾシン、ヒドロキシペチジン（ベミドン）、ケトベミドン、メチルケトベミドン、プロピルケトベミドン、アルビモパン、ピセナドール、ならびにその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、エステル、プロドラッグ、および混合物の群より選択され、より好ましくは、モルヒネ、タペンタドール、ブプレノルフィン、オキシモルホン、ペンタゾシン、レボルファノール、ヒドロモルホンであり、特にモルヒネである、請求項1〜3のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
錠剤、ミニ錠剤、コートコア錠（コーティングされた錠剤）、二層錠、多層錠、カプセル剤、ペレット、MUPS（多単位ペレットシステム）、顆粒剤（granulate）、散剤、特にそれらのコーティングされた形態、糖衣形態、および/または機能的にコーティングされた形態（例えば、腸溶性形態）より選択される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
コーティングされたラッカーゼを含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記薬物が、1投与単位あたり0.1〜5000mg、好ましくは0.5〜1000mg、特に1〜500mgの量で含まれる、請求項1〜6のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記ラッカーゼが、1〜1.000ユニット、好ましくは10〜100ユニットの量で含まれる、請求項1〜7のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
物理的障壁または化学的障壁、特に、錠剤硬度の増大、薬物アンタゴニスト、嫌悪構成要素、乱用防止送達システム、およびプロドラッグの群より好ましくは選択されるさらなる乱用防止特性、特に物理的障壁または嫌悪構成要素、特にゲル化剤および/または非ゲル化増粘剤を含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
1〜80重量％の1つまたは複数の疎水性ポリマーまたは親水性ポリマーを含むマトリックス、好ましくは、寒天、アラミン酸（alamic acid）、アルギン酸、カルメロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボマー、カラゲナン、キトサン、特にカルボキシメチルキトサン、カテコール、コポビドン、デキストリン、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メタクリル酸コポリマー、メチルセルロース誘導体、結晶セルロース、ポリアクリル酸、ポリアルキレンオキシド、特にポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリ酢酸ビニル、ポビドン、アルギン酸プロピレングリコール、ポリビニルカプロラクタム-ポリ酢酸ビニル-ポリエチレングリコールグラフトコポリマー、プルラン、二酸化ケイ素、アルギン酸ナトリウム、デンプン、ビニルピロリドン-酢酸ビニルコポリマーを含む、マトリックス、または、非ポリマーマトリックス形成剤、好ましくは、微晶ろう、脂肪アルコール、および脂肪酸、特に、ステアリルアルコール、セチルステアリルアルコール、ステアリン酸、パルミチン酸、もしくはその塩および混合物、炭素原子16〜22個の鎖長を有する飽和脂肪酸のモノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリド、ならびにそのようなモノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリドの混合物のマトリックスを含む、請求項1〜9のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
好ましくは、25℃、乾燥条件下での6ヶ月間の貯蔵後に、ラッカーゼでプロセシングされた薬物を5％未満、特に1％未満含んでいることで、貯蔵安定性である、請求項1〜10のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
ヒドロゲル形成構成要素および/もしくは架橋剤、好ましくはキトサンおよび/もしくはカテコールまたはカルボキシメチルキトサンおよび/もしくはバニリンをさらに含む、請求項1〜11のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
前記薬物を前記ラッカーゼと混合する段階、および、混合物を1つの薬学的組成物に仕上げる段階を含む、請求項1〜12のいずれか一項に記載の薬学的組成物を製造するための方法。
【請求項１４】
隔離された形態で前記薬物および前記ラッカーゼを提供する段階、および、隔離された該薬物および該ラッカーゼを1つの薬学的組成物に仕上げる段階を含む、請求項1〜12のいずれか一項に記載の薬学的組成物を製造するための方法。
【請求項１５】
疼痛および/または薬物依存症の処置に用いるための、請求項1〜12のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、オピオイドを含む乱用防止薬学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
処方箋オピオイド製品は現代の疼痛管理の重要な構成要素である。しかし、これらの製品の乱用および誤用は、重大なかつ拡大する公衆衛生上の問題を作り出した。より安全なオピオイド鎮痛剤を作製するゴールへの1つの可能性のある重要な段階は、乱用を防止するよう製剤化されたオピオイドの開発であった。これらの製品の開発は、例えば、US FDAによって公衆衛生上の高い優先事項として考えられている（''Abuse-Deterrent Opioids - Evaluation and Labeling''; Guidance for Industry FDA April 2015, FDA; ''FDA Guidance''参照）。
【０００３】
オピオイド製品は、乱用のために様々な投与経路によって操作されること、または操作されて長期放出（ER）特性を無効にすることが多いため、今日までに開発されたほとんどの乱用防止技術は、操作をより困難にすることを意図するもの、または操作された製品の乱用を、あまり魅力的でないものにすること、もしくは価値のないものにすることを意図するものである。これらの技術は、乱用の最も一般的形態、すなわち多幸感を達成するためにインタクトなカプセル剤または錠剤のいくつかを飲み込むことを防止するのに今のところ成功していることが証明されていないことに留意すべきである。さらに、製品が乱用防止特性を有するという事実は、乱用のリスクがないことを意味するものではない。むしろ、乱用のリスクが、そのような特性がない場合に比べて低いことを意味する。オピオイド製品は最終的にオピオイドを患者に送達することができなければならないため、これらの製品のいくらかの乱用が常にある可能性がある。
【０００４】
FDAガイダンスにおいて、乱用防止特性は、乱用を完全に阻止しないとしても、乱用を有意に防止することが示される特性として定義される。乱用なる用語は、たとえ1回でも、所望の心理的または生理的効果を達成するための、薬物製品または物質の意図的で非治療的な使用と定義される。乱用は、誤用と同じではなく、誤用は薬物製品の不適切なやり方での意図的治療的使用を意味し、特に乱用の定義を除外する。「開封防止（tamper-resistant）」なる用語は、一定のクラスの薬物、デバイス、および化粧品に適用可能な包装要件を意味するため、またはそれらに関連して使用されるため、FDAガイダンスは、この用語よりも「乱用防止」なる用語を使用する。
【０００５】
乱用防止の科学は、比較的新しく、製剤化技術と、それらの技術を評価するための分析、臨床、および統計法との両方が急速に発展している。FDAガイダンスは乱用防止製剤の7つのカテゴリーを特定している。
1.  物理的/化学的障壁 - 物理的障壁は、剤形の咀嚼、破砕、切断、すりおろし、または粉砕を阻止することができる。ゲル化剤などの化学的障壁は、水、模擬生体媒質、アルコール、または他の有機溶媒のような一般的溶媒を用いたオピオイドの抽出に抵抗することができる。物理的障壁および化学的障壁は、機械的操作後の薬物放出を制限して、または薬物の物理的形態を変化させて、乱用に対する適合性を低下させることができる。
2.  アゴニスト/アンタゴニストの組み合わせ - オピオイドアンタゴニストを加えて、乱用に関連する多幸感を妨害、低減、または打破することができる。アンタゴニストを隔絶し、製品の操作後にのみ放出することができる。例えば、薬物製品を嚥下した場合（すなわち、所期のやり方でかつインタクトな状態で投与した場合）、アンタゴニストとして作用する物質は臨床上活性ではないが、製品を破砕して注射または吸入すると活性になるように、薬物製品を製剤化することができる。
3.  嫌悪 - 剤形を操作するとまたは説明よりも高い用量で使用すると、不快な効果を生じるように、物質を製品に加えることができる。例えば、製剤は、粉砕して吸入すると鼻粘膜に刺激を与える物質を含むことができる。
4.  送達システム（デポー注射用製剤および埋込物の使用を含む） - 一定の薬物放出デザインまたは薬物送達法は、乱用に対する抵抗を提供することができる。例えば、徐放性デポー注射用製剤または皮下埋込物は操作が困難であり得る。
5.  新規の分子化合物およびプロドラッグ - 新規分子化合物（NME）またはプロドラッグの特性は酵素活性化、異なる受容体結合プロファイル、中枢神経系へのより遅い浸透、または他の新規効果の必要性を含み得る。乱用防止特性を有するプロドラッグは、インビトロでの親オピオイドへの変換に対する化学的障壁を提供し得、これは親オピオイドの乱用を防止し得る。新規分子化合物およびプロドラッグは規制物質法（CSA）のために乱用可能性についての評価に供する。
6.  組み合わせ - 前述の方法の2つまたはそれ以上を組み合わせて乱用を防止することができる。
7.  新規アプローチ - このカテゴリーは、先のカテゴリーには入らない新規アプローチまたは技術を含む。
【０００６】
前記カテゴリー1〜5に基づいて利用可能ないくつかの提案がすでにあるが、これらの方法およびアプローチの効率的組み合わせを提供する、特に新規アプローチを提供する、まだ対処されていない必要性がある。
【０００７】
Rodriguez-Delgado et al.（Trends Anal. Chem. 74 (2015): p. 21-45）の論文は、食品産業におけるフェノール化合物の検出のための、ならびに環境および医学的適用のための、ラッカーゼに基づくバイオセンサー、とりわけ、ラッカーゼが固定されたクラーク酸素電極（Bauer et al., Fresenius J. Anal. Chem. 364 (1999); 179-183）を開示している。
【０００８】
WO 98/18909 A1は、ピリジンヌクレオチド補因子間の還元当量を移動させることができる酵素で形質変換されたトランスジェニック生物を開示している。
【０００９】
EP 0 032 286 A2、US 3 852 157 A、およびUS 4 391 904 Aは、試料中の抗体を検出するために試験表面を用いた免疫学的対、とりわけ、モルヒネ：ホースラディッシュペルオキシダーゼ結合体およびカルボキシメチル-モルヒネ：グリオキサート（glyoxate）レダクターゼの一員に対する分析法を開示している。
【００１０】
WO 2012/122422 A2およびUS 2011/262359 A1は、経口摂取後にいったんプロドラッグが胃腸管に入れば、胃腸酵素によって酵素的に切断されうる、複素環式リンカーを有する活性物質プロドラッグを開示している。プロドラッグから薬物を提供するために、プロドラッグを切断して薬物を制御可能に放出する酵素の作用が必要である。実際の薬物の乱用を防止するためにも、そのようなプロドラッグの提供が用いられる。
【００１１】
US 2014/330021 A1は、乱用を防止するための戦略として、ヒドロモルホンに化学的に結合したアリールカルボン酸を開示している。
【００１２】
US 2005/176644 A1およびUS 2012/178773 A1は、乱用を防止するため、またはオキシコドンの薬理活性を実質的に低下させるための、オキシコドンに連結した化学部分を有するオキシコドン誘導体を開示している。
【００１３】
AU 2012/201 450 A1およびWO 2006/058249 A2は、ゲル形成ポリマー、鼻粘膜刺激性界面活性剤、およびフラッシング剤を、乱用可能性を有する薬物と共に含む、乱用防止経口剤形に言及している。
【００１４】
これらの文献はすべて、オキシコドンなどの、乱用可能性を有するこれらの薬物の乱用を防止するための、一般的かつ公知の戦略に関する。
【００１５】
非関連分野における先行技術は、様々な用途のために酵素を作用物質または組成物と組み合わせる、様々な組成物を開示している。
【００１６】
WO 00/27204 A1は、オキシドレダクターゼおよびN-ヒドロキシアニリド型の増強剤を含む、抗菌組成物に関する。WO 00/27204 A1の組成物は、界面活性剤または洗浄組成物として意図されるが、殺菌剤としての使用、または塗料、食品、飲料などの保存用でもある。
【００１７】
WO 01/98518 A2は、抗生物質などの生物活性成分を、ラッカーゼおよびマンガネーゼペルオキシダーゼ酵素により変換するための方法に関する。WO 01/98518 A2に従い、公知の活性成分をラッカーゼ/マンガネーゼペルオキシダーゼにより変換してさらなる官能基を導入し、特性が改変された（例えば、一定の抗生物質に対する耐性を克服するため）新しい活性物質を生じる。
【００１８】
EP 0 919 628 A1は、ラッカーゼなどのポリフェノール酸化活性を有する酵素の作用により、フェノール化合物または芳香族アミン化合物を「高分子化する」方法を開示している。EP 0 919 628 A1は、したがって、抗菌剤またはウイルス感染阻害物質を含む一定の物質を、より高い分子量を有する物質に変換するための酵素的方法も開示しており、これらは次いで増粘剤、安定化剤として用い得るが、抗菌剤またはウイルス感染阻害物質としても用い得る。また、高分子化によりフェノール化合物または芳香族アミン化合物を除去するために、廃水を処理することも示唆している。EP 0 919 628 A1は、開示する方法のために（工業的に）用い得る酵素として、ラッカーゼ、カテコールオキシダーゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、アスコルビン酸オキシダーゼ、またはビリルビンオキシダーゼを示唆している。
【００１９】
WO 97/41215 A1は、工業的酵素技術およびそのような酵素の貯蔵/送達に関する問題に関する。これらの酵素は乾燥形態（粉塵形成が不都合であると報告されている）または液体製剤（酵素が、貯蔵安定性ではなく、そしてその活性状態で存在する、すなわち基質と反応するという2つの欠点がある）のいずれかで送達される。この基質との早期の作用を阻止する上で、WO 97/41215 A1は、水性条件で反応するが、無水液体組成物中では反応しない、酵素および基質を実質的に無水の液体組成物中で提供することを示唆している。
【００２０】
DE 10 2006 048 833 A1は、コラーゲンおよびカルシウム含有物質（主要活性物質として）に加えて、架橋剤（例えば、ポリヒドロキシ芳香族化合物）と架橋剤を架橋することができる架橋反応の触媒（例えば、ラッカーゼなどの酵素）とを含む架橋剤を含む、骨粗鬆症の処置のための薬学的調製物を開示している。DE 10 2006 048 833 A1の目的は、骨支持のための3次元マトリックス（「液状骨（liquid bone）」）を確立することである。
【００２１】
WO 97/27841 A1は、貯蔵することができかつ二成分分配装置（「ディスペンサー」）により容易に利用可能にすることができる、安定化酵素製剤に関する。したがって、この文献は一般には、例えば、洗浄液、シャンプー、またはビタミン調製物における、（例えば）オキシドレダクターゼまたはプロテアーゼなどの酵素の提供に関する。
【００２２】
WO 2005/063037は、酵素を含み得るチューインガムに関する。分解に対する酵素の触媒効果のため、酵素はチューインガムに組み込まれる。事実上すべての可能な酵素が、他の物質との注釈（「ペアリング」）なしにこの文献に列挙されている。WO 2005/063037のチューインガムは、酵素といかなる相関もない物質の膨大なリストより選択される薬学的、美容的、または生物学的活性物質をさらに含み得る。
【００２３】
また、WO 2007/143989 A1は、生分解性ポリマーと（とりわけ）疎水性酵素製剤としてチューインガム中に含まれる酵素とを含む、チューインガムに関する。ここでも、酵素はチューインガム（その中の生分解性ポリマー）を分解するために提供される。疎水性酵素製剤における酵素の提供は、したがって、早期分解を阻止するために行われる。
【００２４】
WO 2012/003367 A2は、複数のフィラメントを有する不織ウェブが活性物質を含み、活性物質のフィラメントからの放出が酵素によって誘発され得る、薬物送達法に関する。この不織フィラメントは経口摂取には適さない。
【００２５】
WO 00/02464 A1は、タバコ中のフェノール化合物を酸化するためのフェノール酸化酵素を用いることによる、タバコの処置の方法に言及している。
【発明の概要】
【００２６】
したがって、本発明の目的は、乱用防止薬物に対する、特に乱用防止オピオイド製剤に対する新しいアプローチおよび技術を提供することである。
【００２７】
したがって、本発明は、ラッカーゼ反応性官能基を有する薬物と、ラッカーゼ（EC 1.10.3.2）とを含む薬学的組成物を提供する。
【００２８】
ラッカーゼ（EC 1.10.3.2；CAS登録番号80498-15-3）は、多くの植物、真菌、および微生物中で見出される、記載され、分析されることの多い銅含有オキシダーゼ酵素である（Riva, Trends in Biotechnology 24 (2006), 219-226）。ラッカーゼは、フェノールおよび類似の分子に作用して、1電子酸化を行う。BRENDAデータベースに従い、ラッカーゼの組織名はベンゼンジオール：酸素オキシドレダクターゼである。ラッカーゼは、o-およびp-キノールの両方に作用し、しばしばアミノフェノールおよびフェニレンジアミンにも作用する、低特異性のマルチ銅タンパク質のグループと定義される。セミキノンは酵素的または非酵素的のいずれかでさらに反応し得る。
【００２９】
加えて、いくつかの非ラッカーゼ基質を反応のメディエーターを用いて酸化することができる。これらの確立されたラッカーゼメディエーターをラッカーゼにより酸化すると、強力な酸化反応性種（ラジカル、ラジカルキノン、およびキノン）を生成し、これらは非ラッカーゼ基質とさらに反応し得る。ラッカーゼにより酸化されたメディエーターをその元の化合物に還元し戻すと、これはラッカーゼにより再酸化されて反応性種を生成し、これは再度別の分子を酸化することができる。そのようなラッカーゼメディエーターは、ラッカーゼにより直接酸化することができない分子を酸化することができる。芳香族中心メディエーター（ArOH；例えば、フェルラ酸、シリンガアルデヒド）および窒素中心メディエーター（RNOH；例えば、ビオルル酸、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール）を含む、ラッカーゼ製剤に用いられる多くの種類のメディエーターがある。
【００３０】
適切なメディエーターが本技術分野において広く利用可能である。例えば、オキシドレダクターゼ、特にラッカーゼなどのフェノール酸化酵素の活性を増強することができるメディエーターが、WO 95/01426 A1、WO 96/10079 A1、またはWO 2012/085016 A1に開示されている。
【００３１】
別の戦略は、ラッカーゼと併せての補助基質の使用に関与する。補助基質を反応に加え、それらはラッカーゼにより酸化され、続いて非ラッカーゼ基質と反応し、共有結合を形成して、オリゴマーまたはポリマーを生じる。一般に、多くのラッカーゼ基質は補助基質として作用して、フェノール類（カテコール）、芳香族アミン、アルケンなどの非ラッカーゼ基質に結合し得る。
【００３２】
ラッカーゼは、天然フェノールのファミリーであるモノリグノールの酸化的カップリングを促進することにより、リグニンの生成において役割を果たす。ラッカーゼはポリマーであり得、酵素的活性型は二量体または三量体であり得る。真菌プレウロタス・オストレアタス（Pleurotus ostreatus）によって産生されるものなどの他のラッカーゼが、リグニンの分解において役割を果たし、したがってリグニン修飾酵素の広いカテゴリーに含まれ得る。ラッカーゼはオキシダーゼ酵素ファミリーに属するため、酵素作用のための第2の基質として酸素を必要とする。分光光度法を用い、基質ABTS（2,2'-アジノ-ビス-(3-エチルベンゾチアゾリン-6-スルホン酸）、シリンガアルデヒド、2,6-ジメトキシフェノール、およびジメチル-p-フェニレンジアミンを用いて、ラッカーゼを検出することができる。基質の酸化は、酸素の水への還元と対をなすため、活性を酸素センサーによりモニターすることもできる。
【００３３】
本発明は、乱用防止薬学的薬物製剤、特にオピオイド製剤の新規アプローチとしてのラッカーゼを提供する。そのような原理は先行技術ではまだ提唱も示唆もされていない。したがって、先行技術の組成物（例えば、前述のもの）には、ラッカーゼ反応性官能基を有する薬物と、ラッカーゼとを含む組成物であって、ラッカーゼ反応性官能基を有する薬物が、貯蔵安定性で酵素反応性の状態で、かつラッカーゼ反応性官能基を有する薬物に影響を及ぼす酵素活性がない条件下で、薬学的組成物中にラッカーゼと共に含まれる、組成物を提唱も示唆もされたものはない。
【００３４】
本発明の新しい戦略は、薬物を非活性型（例えば、沈澱または不活化生成物）に変換して、使用不可能（例えば、不活性（または少なくとも活性が低い）形態に変換することにより、または薬物のシリンジによる注射を不可能にすることにより（インビトロ））にする、ラッカーゼ（またはラッカーゼを含む酵素システム）の使用に基づく。一方で、薬物を予期されるとおりに（例えば、経口で）投与すると、体からのプロテアーゼがラッカーゼを非活性化し、薬物は付随するラッカーゼによって不活化されることなく、その効果を展開することができる。プロテアーゼ分解性の改善のために、そのようなプロテアーゼへの曝露後にラッカーゼの分解速度を高めるように、ラッカーゼを（さらなる）プロテアーゼ切断部位の導入によって修飾してもよい。
【００３５】
本発明の乱用防止戦略の必要条件は、薬物が、ラッカーゼと反応する官能基を有することである。さらなる必要条件は、貯蔵中および使用前に、薬物とラッカーゼの組み合わせを含む本発明の組成物を、ラッカーゼが（まだ）薬物と反応していない環境において維持することである。これは、例えば、ラッカーゼが不活性な条件下で両方の構成要素を維持する（貯蔵する）ことにより、または2つの構成要素の空間的隔離により、保護することができる。例えば、組成物を乾燥形態で維持すると、ラッカーゼと薬物との反応は水性条件を必要とするため、ラッカーゼは薬物と反応することができない。本発明の乾燥組成物を水に溶解する（例えば、乱用のためにオピオイド薬物を抽出するために）とすぐに、ラッカーゼは薬物と反応して、薬物をその分解ゆえに、または重合されるため、もはや使用（乱用）不可能な分子に酵素的に変換することができる。ラッカーゼが薬物と反応するのを防止する別の例は、ここでも、組成物の水または同等の溶媒との接触後にのみ、ラッカーゼが薬物と反応し得るように、ラッカーゼを薬物から空間的に隔離することである。そのような空間的隔離は、例えば、ラッカーゼおよび薬物を薬学的製剤の異なる区画中に提供すること、特定のコーティングを提供すること、別々の造粒などにより、確立することができる。
【００３６】
一方で、本発明の組成物中のラッカーゼは、例えば、いったん水性環境に曝露されるとまたは所期の投与経路もしくは投与活動に沿わない他の状況に曝露されると（すなわち、乱用の可能性がある場合）、反応性でなければならず、付随する薬物の乱用を防止または少なくとも抑止するために、この薬物と反応しなければならない。
【００３７】
したがって、本発明の組成物に含まれる薬物は、ラッカーゼ活性がアクセスして調節し得る官能基を含まなければならない。したがって、本発明の薬学的組成物は、ラッカーゼ反応性官能基がフェノール性ヒドロキシル基である薬物を含み、さらに以下の有機物質はラッカーゼによって酸化され得る：アミノフェノール、ベンゼンチオール、ジフェノールまたはポリフェノール、メトキシ置換フェノール、アミノフェノール、ジアミン、芳香族アミン、ポリアミン、アスコルベート、ヒドロキシインドール、アリールジアミン、アニリン、好ましくはフェノール性ヒドロキシル基を有する物質（Morozova et al., Biochemistry (Moscow) 72 (2007), 1136-1150；Madhavi et al., Bioresources 4 (2009), 1694-1717；Alcalde, Industrial Enzymes, Springer Verlag, Chapter 26；Jeon et al., Trends in Biotechnology 31 (2013), 335-341）。したがって、本発明に従って用いる薬物は、ベンゼンチオール、モノフェノール、ジフェノール、およびポリフェノール、メトキシ置換フェノール、アミノフェノール、ジアミン、芳香族アミン、ポリアミン、アスコルベート、ヒドロキシインドール、アリールジアミン、ならびにアニリンの物質クラスに属する基および/または薬物を含むオピオイドである。
【００３８】
本発明の組成物において薬物とのラッカーゼ反応を仲介する反応メディエーターを用いることも可能である。
【００３９】
メディエーターは、電子シャトルシステムとして作用しかつより扱いにくい化合物の方へとラッカーゼの基質特異性を広げる、低分子量化合物である。多くの場合、これらの物質は酵素の活性部位に入ることができないか、またはそれらの酸化還元電位は高すぎる。メディエーターと組み合わせてラッカーゼを用いて、色素、多環式芳香族炭化水素、およびクロロフェノールのような芳香族混入物はうまく解毒され、同様に様々な有機リン化合物およびスルホンアミド抗生物質はうまく分解されることが明らかにされている（Morozova et al., Applied Biochemistry and Microbiology, 43/5 (2007), 523-535；Canas et al., Biotechnology Advances, 28 (2010), 694-705；Johannes et al., Applied and Environmental Microbiology, 66/2 (2000), 524-528；Trovaslet-Leroy et al., Chemico-Biological Interactions, 187/1-3 (2010), 393-396；Wenig et al., Bioresource Technology, 141 (2013), 152-159）。
【００４０】
本組成物に用いるラッカーゼは、容易に選択され、かつ、入手可能性、選択した薬物との反応性、ならびに計画した貯蔵および投与条件によって最適化されることができる。ラッカーゼは様々な供給源から、例えば、真菌、細菌、または植物から入手可能である。一般的なラッカーゼのほとんどは組換えによって産生することもできる。一定かつ持続的な量が必要な場合、および天然の供給源が、例えば、不純物の可能性によって問題となる場合、組換え産生が好ましい。工業的に用いられ、したがって大量生産に必要な量でも十分に入手可能な、いくつかのラッカーゼがある。例えば、真菌ラッカーゼは、モリノカレバタケ属（Collybia）、フォムス属（Fomus）、マツオウジ属（Lentinus）、ヒラタケ属（Pleurotus）、アスペルギルス属（Aspergillus）、ニューロスポラ属（Neurospora）、ポドスポラ属（Podospora）、シワウロコタケ属（Phlebia）（コガネシワウロコタケ（P. radiata））、カワラタケ属（アラゲカワラタケ（C. hirsitus））、ボトリティス属（Botrytis）、チョレイタケ属（P.ピンシタスまたはP.ベルシカラー、リゾクトニア・ソラニ（Rhizoctonia solani）、シタリディウム属（Scytalidium）（S.サーモフィリウム（S. thermophilium））、ピリキュラリア属（Pyricularia）（いもち病菌（P. oryzae））、ヒトヨタケ属（C. シネレウス（C. cinereus））、ホウロクタケ属（アラゲカワラタケ（T. hirsuta）、フルイカワラタケ（T. villosa）およびカワラタケ（T. versicolor））、センベイタケ属（Coriolopsis）（カタシラガタメ（C. gallica））、白色腐朽菌、マツノネクチタケ（Heterobasidion annosum）、スピニガー・メイネッケルス（Spiniger meineckellus）およびミセリオフトラ・サーモフィラ（Myceliophthora thermophila）から入手可能であり；細菌ラッカーゼは、桿菌、シュードモナス属（Pseudomonas）、ストレプトミセス属（Streptomyces）、およびアゾスピリルム属（Azospirillum）から入手可能である。特に好ましいラッカーゼは、フルイカワラタケ由来、ミセリオフトラ・サーモフィラ由来、およびプレウロタス・オストレアタス由来である。
【００４１】
好ましいラッカーゼは、すでに工業的に適用されているもの、例えば、Rodriguez-Delgado et al.（Trends Anal. Chem. 74 (2015), 21-45、特にこの文献の項目2および表2〜5）に概説されているようなラッカーゼベースのバイオセンサーで用いられるものである。さらに適切で好ましいラッカーゼの例は、WO 00/27204 A1に開示されており、例えば、真菌由来のラッカーゼは、アスペルギルス属、ニューロスポラ属、例えば、アカパンカビ（N. crassa）、ポドスポラ属、ボトリティス属、モリノカレバタケ属、フォメス属（Fomes）、マツオウジ属、ヒラタケ属、ホウロクタケ属、例えば、フルイカワラタケおよびカワラタケ、リゾクトニア属（Rhizoctonia）、例えば、R.ソラニ、ヒトヨタケ属、例えば、ウシグソヒトヨ、ササクレヒトヨタケ（C. comatus）、ヒメヒトヨタケ（C. friesii）、およびヒメヒガサヒトヨタケ（C. plicatilis）、ナヨタケ属（Psathyrella）、例えば、イタチタケ（P. condelleana）、ヒカゲタケ属（Panaeolus）、例えば、ワライタケ（P. papilionaceus）、ミセリオフトラ属（Myceliophthora）、例えば、ミセリオフトラ・サーモフィラ（M. thermophila）、スキタリジウム属（Schytalidium）、例えば、スキタリジウム・サーモフィルム（S. thermophilum）、チョレイタケ属、例えば、P.ピンシタス、シワウロコタケ属、例えば、コガネシワウロコタケ（WO 92/01046 A）、またはカワラタケ属、例えば、アラゲカワラタケ（JP 2-238885)の株に由来するラッカーゼを含み；細菌由来の例は桿菌の株に由来するラッカーゼを含み；ヒトヨタケ属、ミセリオフトラ属、チョレイタケ属、シュタケ属（Pycnoporus）、シタリディウム属、またはリゾクトニア属由来のラッカーゼ； ウシグソヒトヨ、ミセリオフトラ・サーモフィラ、ポリポラス・ピンシタス（Polyporus pinsitus）、シュタケ（Pycnoporus cinnabarinus）、シタリディウム・サーモフィルム（Scytalidium thermophilum）、またはリゾクトニア・ソラニ由来のラッカーゼ。
【００４２】
ラッカーゼ活性（LACU）の測定のための方法は、好気性条件下でのシリンガルダジンの酸化からのラッカーゼ活性の測定である。生じる紫色を530nmで分光光度的に測定する。分析条件は、19mMシリンガルダジン、23mM酢酸緩衝液、pH5.5、30℃、反応時間1分である。1ラッカーゼユニット（LACU）は、これらの条件で1分あたり1.0μmolシリンガルダジンの変換を触媒する酵素の量である（WO 00/27204 A1）。本発明と共に使用可能な薬物は、それがラッカーゼ活性により修飾可能な官能基を含むかぎり、重大ではない。当然のことながら、乱用防止製品のための本新アプローチに供される好ましい薬物は、公知の乱用のリスクがある薬物である。したがって、本発明の薬学的組成物に含まれる好ましい薬物は、ラッカーゼ反応性官能基を有するオピオイド薬物である。
【００４３】
オピオイドは、神経系において、モルヒネおよびコデインなどのオピエートと同様の様式で作用する物質である。したがって、オピエート、すなわち、ケシ（Papaver somniferum）において天然に見出される鎮痛性アルカロイド化合物は、オピオイドの下位群を形成する。したがって、オピオイドは、アヘンから抽出され得るか、または人工的に作製され得る。医学との関連において、オピオイドは主に疼痛の処置のために用いられる。鎮静作用および強い多幸感などの、オピオイドの重大な副作用も、これらの薬物を誤用および乱用に向ける。オピオイド依存性は継続している投与によって発生して、突然の中止による退薬症候群を引き起こし得る。例えば、モルヒネ様オピオイドは、それらの依存性、およびそれらの多幸感を生じる能力について周知されており、オピオイドを娯楽的に使用する動機を人に与えることがある。それらは過量で呼吸抑制による死亡をもたらし得る。2013年には、2800万〜3800万人がオピオイドを娯楽的に使用した（15〜65歳の世界人口の0.6％〜0.8％；World Drug Report 2015）。
【００４４】
したがって、本発明による組成物中の薬物として使用される特に好ましいオピオイドは、フェノール性ヒドロキシ基を含むオピオイド、例えば、モルヒネ、タペンタドール、ヒドロモルホン、エトルフィン、デソモルヒネ、オキシモルホン、ブプレノルフィン、フェニルアラニン残基を含むオピオイドペプチド、例えば、アドレノルフィン、アミドルフィン（amidorphin）、カソモルフィン、DADLE（[D-Ala2,D-Leu5]-エンケファリン）、DAMGO（[D-Ala2,N-MePhe4,Gly-オール]-エンケファリン）、デルモルフィン、エンドモルフィン、モルフィセプチン、およびTRIMU 5（L-チロシル-N-{[(3-メチルブチル)アミノ]アセチル}-D-アラニンアミド）；オリパビン、6-MDDM（6-メチレンジヒドロデスオキシモルヒネ）、クロルナルトレキサミン、ジヒドロモルヒネ、ヒドロモルフィノール、メチルデソルフィン、N-フェネチルノルモルヒネ、RAM-378（7,8-ジヒドロ-14-ヒドロキシ-N-フェネチルノルモルヒネ）、ヘテロコデイン、ジヒドロヘテロコデイン、7-スピロインダニルオキシモルホン、モルフィノン、ペンタモルホン、セモルホン（semorphone）、クロロモルフィド、ナルブフィン、オキシモルファゾン、1-ヨードモルヒネ、モルヒネ-6-グルクロニド、6-モノアセチルモルヒネ、ノルモルヒネ、モルヒネ-N-オキシド、シクロルファン（cyclorphan）、デクストラロルファン、レボルファノール、レボフェナシルモルファン、ノルレボルファノール、オキシロルファン、フェノモルファン、メトルファン、モルファノール、フレチルノルレボルファノール（furethylnorlevorphanol）、キソルファノール、ブトルファノール、6,14-エンドエテノテトラヒドロオリパビン、BU-48（N-シクロプロピルメチル-[7α,8α,2',3']-シクロヘキサノ-1'[S]-ヒドロキシ-6,14-エンド-エテノテトラヒドロノルオリパビン）、ブプレノルフィン、シプレノルフィン、ジヒドロエトルフィン、ノルブプレノルフィン、5'-グアニジノナルトリンドール、ジプレノルフィン、レバロルファン、メプタジノール、メチルナルトレキソン、ナルフラフィン、ナルメフェン、ナロキサゾン、ナロキソン、ナロルフィン、ナルトレキソン、ナルトリベン、ナルトリンドール、6β-ナルトレキソール-d4、プソイドモルフィン、ナロキソナジン、ノルビナルトルフィミン、アラゾシン、ブレマゾシン、デゾシン、ケタゾシン、メタゾシン、ペンタゾシン、フェナゾシン、シクラゾシン、ヒドロキシペチジン（ベミドン）、ケトベミドン、メチルケトベミドン、プロピルケトベミドン、アルビモパン、ピセナドール、ならびにその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、エステル、プロドラッグ、および混合物、好ましくはモルヒネ、タペンタドール、オキシモルホン、ヒドロモルホン、ブプレノルフィン、特にモルヒネである。フェノール性アミン基を有するオピオイド薬物の例は、アニレリジンである。
【００４５】
本薬学的組成物は、必要があれば、本発明に適合させた（例えば、ラッカーゼおよび薬物が空間的に隔離されている場合）、所期の（非乱用防止）投与経路に従って製剤化することができる。好ましくは、本発明による薬学的組成物を用量単位として提供する。したがって、本組成物を錠剤、例えば、ミニ錠剤（すなわち、直径3mm以下の小さい錠剤）、コートコア錠（コーティングされた錠剤）、二層錠、多層錠、発泡錠、可溶性錠剤、分散性錠剤、カプセル剤、ペレット、MUPS（多単位ペレットシステム）、顆粒剤（granulate）、散剤、特にそれらのコーティングされた形態、糖衣形態、および/または機能的にコーティングされた形態（例えば、腸溶性形態）として提供することが好ましい。腸溶コーティングは、ラッカーゼの早期不活化、すなわち、生理的プロテアーゼがラッカーゼに作用する前の不活化の阻止のために、特に有利である。腸溶コーティングは一般には、薬物を胃の酸性度から保護するために、経口薬剤に適用するポリマーバリアと定義される。したがって、腸溶コーティングは通常は胃内で見出される高酸性度のpHでは安定であるが、腸内（すなわち、胃を出た後）の低い酸性度（相対的により塩基性；pH7〜9）のpHで速やかに分解する。そのような腸溶コーティングに用いる典型的な物質/材料は、例えば、シェラック、酢酸フタル酸セルロース（CAP）、ポリビニルアセテートフタレート（PVAP）、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびメタクリル酸エステルコポリマー、またはゼイン、ならびに疎水性ポリマーまたは親水性ポリマーおよび適切な場合そのような物質の混合物である。疎水性ポリマーコーティングには、アクリルポリマー、アクリルコポリマー、メタクリルポリマーまたはメタクリルコポリマー、例えば、Eudragit(登録商標) L100、Eudragit(登録商標) L100-55、Eudragit(登録商標) L 30 D-55、Eudragit(登録商標) S100、Eudragit(登録商標) 4135F、Eudragit(登録商標) RS、アクリル酸およびメタクリル酸コポリマー、メタクリル酸メチル、メタクリル酸メチルコポリマー、メタクリル酸エトキシエチル、メタクリル酸シアノエチル、メタクリル酸アミノアルキルコポリマー、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、メタクリル酸アルキルアミンコポリマー、ポリメタクリル酸メチル、ポリ無水メタクリル酸、ポリメタクリレート、ポリアクリルアミド、ポリ無水メタクリル酸およびメタクリル酸グリシジルコポリマー、アルキルセルロース、例えば、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、およびヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート、酢酸酪酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、および酢酸トリマレイン酸セルロース、ポリビニルアセテートフタレート、ポリエステル、ろう、シェラック、ゼインなどが含まれる。コーティングには、薬学的に許容される水溶性ポリマーなどの親水性材料、例えば、ポリエチレンオキシド（PEO）、エチレンオキシド-プロピレンオキシドコポリマー、ポリエチレン-ポリプロピレングリコール（例えば、ポロキサマー）、カルボマー、ポリカルボフィル、キトサン、ポリビニルピロリドン（PVP）、ポリビニルアルコール（PVA）、ヒドロキシアルキルセルロース、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（HPC）、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリアクリレート、例えば、カルボマー、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリホスファジン、ポリオキサゾリジン、ポリヒドロキシアルキルカルボン酸、アルギン酸およびその誘導体、例えば、カラゲネートアルギネート、アルギン酸アンモニウムおよびアルギン酸ナトリウム、デンプンおよびデンプン誘導体、多糖、カルボキシポリメチレン、ポリエチレングリコール、ポビドン、ゼラチンなども含まれ得る。
【００４６】
好ましい腸溶コーティング材料は、アクリル酸メチル-メタクリル酸コポリマー、酢酸コハク酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート、ポリビニルアセテートフタレート（PVAP）、メタクリル酸メチル-メタクリル酸コポリマー、シェラック、酢酸トリマレイン酸セルロース、アルギン酸ナトリウム、およびゼインである。
【００４７】
本発明による薬学的組成物のさらなる態様は、コーティングがラッカーゼを含む、コーティングされた組成物である。ラッカーゼは、コーティングされた組成物が（薬物（オピオイド）を抽出するための）水性液体に溶解されると、薬物に作用するが、ラッカーゼは、摂取後（指示された（経口）投与経路に従って）、胃内でまたはプロテアーゼによって腸内で、ただちに破壊または不活化される。
【００４８】
本発明による薬学的調製物は、その中に含まれる薬物を必要としているヒト患者に投与されると想定されるため、調製物は、好ましくは欧州局方によって提供される標準に従って、GMPに応じた薬学的調製物として製造して仕上げる。これは、本発明による薬学的調製物は、市販の薬物製品に対して規制当局が要求する、特にモルヒネまたはオキシコドンなどのオピオイド薬物に対してEMAが要求する、適切に無菌の、清浄な、かつ適切に包装された形態で市販されることを意味する。
【００４９】
特に好ましい態様は、計画された投与経路に従うかぎり、ラッカーゼを薬物に対して不活性の状態にしておくように、ラッカーゼがコーティングされている、すなわち、コーティングされている間、例えば、（まだコーティングされている）ラッカーゼが患者によって排出されるまでは、ラッカーゼ活性を薬物から回避させるが、乱用活動は、ラッカーゼが薬物にただちに作用するように、コーティングを破壊する。例えば、ラッカーゼを、腸溶コーティングのために用いられる前述の物質/材料の1つまたは複数でコーティングしてもよい。そのようなフィルムコーティングまたは封鎖材料の特に好ましい例は、Eudragit(登録商標) RS (30D)、Eudragit(登録商標) NE 30 D；エチルセルロース、ポリメタクリレート（すべてRowe et al.（Eds.) ''Handbook of Pharmaceutical Excipients'' 6th Ed. (2009), Pharmaceutical Press, pages 262ff., 525 ff.に開示されている）；またはオピオイドアンタゴニストをコーティングするために他のオピオイド組成物で用いられる物質（例えば、EP 2 034 975 B1、US 8,465,774 B2、およびWO 2004/026283 A1参照）であるが、当然かつ自動的に理解されるが、ラッカーゼ活性による分解リスクを有する物質は（例えば、それらは本発明による組成物中で提供されるラッカーゼによって変換される基を含むという理由から）除く。
【００５０】
前記薬学的組成物は好ましくは、元の非乱用防止組成物中で予期される量の薬物を含む。したがって、薬物は好ましくは、1投与単位あたり0.1〜5000mg（すなわち、0.1mg〜5g）、好ましくは0.5〜1000mg、特に1〜500mgの量で含まれる。通常の投与中、製剤におよび予想されるラッカーゼ活性に応じて、例えば、薬物活性の損失の可能性を補うために（そのような活性のわずかな損失の可能性がある場合、またはそのような活性のわずかな損失を完全に除外し得ない場合）、（元の非乱用防止組成物、すなわち、乱用防止特性のない薬物の薬学的製剤に比べた）薬物量の増大も提供され得る。
【００５１】
本薬学的組成物中のラッカーゼの量は、主に、薬物の量に基づいて、ラッカーゼの供給源に基づいて、および製剤の詳細に基づいて、調節することができる。好ましい態様に従い、ラッカーゼは1〜1000ユニット（すなわち、1u〜1ku）、好ましくは10〜100ユニットの量で含まれる。ラッカーゼ活性を測定するためにいくつかのやり方がある。本発明のために、ABTSの酸化を100mMリン酸ナトリウム緩衝液（pH7）中、25℃、420nm（ε＝11.4mL/μmol/cm）で分光光度的にモニターすることにより、活性を測定する。酵素活性はユニットで表すが、1ユニット（U）は1分あたり1μmolのABTSの変換を触媒する酵素の量（1U＝μmol/min）と定義する（以下、「本発明によるラッカーゼ試験」と呼ぶ）。
【００５２】
本発明による薬学的組成物は、通常は含水量が（大きく）10％を下回る、好ましくは含水量が5％を下回る、特に2％を下回る乾燥組成物である。含水量は好ましくは、例えば、欧州局方によって、本技術分野において認められた方法によって測定する。水分定量の特に好ましい方法は、結晶水の含有量がさらにまた含まれる、カール・フィッシャー滴定法（欧州局方8.5 (2015), 2.5.12：水の半定量）である。
【００５３】
本発明は乱用防止薬物のための完全に新しい戦略を提供するが、本新規アプローチは他の乱用防止戦略、例えば、FDA Guidance 2015またはSchaeffer, J. Med. Toxicol. 8 (2012), 400-407において特定されているものと組み合わせることができる。したがって、本発明による薬学的組成物は、好ましくは、さらなる乱用防止特性、例えば、物理的障壁または化学的障壁、特に錠剤硬度の増大、（ラッカーゼ非感受性）薬物アンタゴニスト、嫌悪構成要素、乱用防止送達システム、およびプロドラッグからなる群より選択される特性を含む。物理的障壁、特に錠剤硬度の増大、または嫌悪構成要素、特にゲル化剤および/もしくは非ゲル化増粘剤（例えば、λ-カラゲナン）または、例えば、催吐剤もしくは鼻刺激剤の提供が、特に好ましい。例えば、本組成物を、欧州局方（Ph.Eur.8 (2014) 2.9.8）に規定されるとおり、400Nを超える、特に500Nを超える抵抗を有する製剤として提供することができる。本発明と組み合わせることができる乱用防止特性のさらなる例は、親水性および疎水性の両方の材料（WO 2012/112952 A 1）、緩衝化成分を伴う酸可溶性成分（カチオンポリマー）（US 9,101,636 B2）、熱プロセスにより調製した一体型固化経口剤形（US 2008/0075771 A1）、催吐剤もしくは鼻刺激剤（US 2008/075771 A1）、押出製剤（US 2015/0057304 A1）、またはオピオイドの非晶質もしくは重合有機酸塩（US 2015/016835 A1）などの、分離した機械的補強粒子（WO 2012/061779 A1）の提供である。
【００５４】
好ましい態様に従い、薬学的組成物は、1〜80重量％の1つまたは複数の疎水性ポリマーまたは親水性ポリマーを含むマトリックス、好ましくは、寒天、アラミン酸（alamic acid）、アルギン酸、カルメロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボマー（例えば、Carbopol(登録商標)カラゲナン、キトサン、特にカルボキシメチルキトサン、カテコール、コポビドン、デキストリン、ゼラチン、グアーガム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メタクリル酸コポリマー、メチルセルロース誘導体、結晶セルロース、ポリアクリル酸、ポリアルキレンオキシド、特にポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリ酢酸ビニル、ポビドン、アルギン酸プロピレングリコール、ポリビニルカプロラクタム-ポリ酢酸ビニル-ポリエチレングリコールグラフトコポリマー、プルラン、二酸化ケイ素、アルギン酸ナトリウム、デンプン、ビニルピロリドン-酢酸ビニルコポリマー、キサンタンガムを含む、マトリックス；または、微晶ろう、ステアリルアルコール、セチルステアリルアルコール、ステアリン酸、パルミチン酸のような脂肪アルコールおよび脂肪酸、もしくはその塩および混合物、炭素原子16〜22個の鎖長を有する飽和脂肪酸のモノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリド、ならびにそれぞれそのようなモノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリドの混合物のような非ポリマーマトリックス形成剤のマトリックスを含む。
【００５５】
本発明の好ましい態様に従い、薬学的組成物は、ヒドロゲル形成構成要素および/またはラッカーゼが乱用段階によっていったん活性化されると薬物の不溶性架橋ヒドロゲルの生成を可能にする適切な架橋剤を含む。好ましいヒドロゲル形成構成要素はキトサンおよびカルボキシメチルキトサンであり；好ましい架橋剤はフェノール架橋剤、特にカテコールおよびバニリンである。そのようなヒドロゲル/架橋剤組成物の好ましい例は、キトサンおよびカテコールを含む組成物またはカルボキシメチルキトサンおよびバニリンを含む組成物である。
【００５６】
本発明による薬学的組成物は、好ましくは、25℃、乾燥条件下での6ヶ月間の貯蔵後に、ラッカーゼでプロセシングされた薬物を5％未満、特に1％未満含んでいることで、好ましくは貯蔵安定組成物（ラッカーゼ活性は本発明によるラッカーゼ試験によって測定される）である。
【００５７】
一般に、ラッカーゼは、本組成物を投与する患者の胃液および/または腸環境に接触するとすぐに組成物のラッカーゼ活性がただちに不活化されるように、ラッカーゼは酸不安定性であることが好ましい。
【００５８】
本薬学的組成物は、調節放出組成物、特に持効放出組成物として提供することができる。「調節形態」なる用語は、加速放出、制御放出、および徐放形態を含むことを意味する。一定の放出形態は、それらの溶解プロファイルによって特徴決定することができる。「溶解プロファイル」とは、放出された活性成分の量の時間の関数としてのプロットを意味する（Ph.Eur.8 (2014) 2.9.3）。溶解プロファイルは、米国局方の標準試験USP 26（試験<711>）を組み込む、薬物放出試験<724>を用いて測定することができる。プロファイルは選択した試験条件によって特徴決定される。したがって、溶解プロファイルは、事前に選択した器具、シャフト速度、温度、体積、および溶解媒質のpHで生成することができる。第1の溶解プロファイルを、胃のpHレベルに近似のレベルで測定することができる。第2の溶解プロファイルを、腸内の1点のpHレベルに近似のレベル、または腸内の複数の点に近似のいくつかのpHレベルで測定することができる。高酸性pHは胃を模倣し得、低酸性から塩基性pHは腸を模倣することができる。「高酸性pH」なる用語は、約1〜約4のpHを意味する。「低酸性から塩基性pH」なる用語は、約4から約7.5、好ましくは約6から約7.5よりも高いpHを意味する。約1.2のpHを用いて胃のpHを模倣することができる。約6.0から約7.5、好ましくは約7.5のpHを用いて腸のpHを模倣することができる。
【００５９】
調節放出に対して、「即時放出」は、約50％もしくはそれ以上、またはより好ましくは約75％の本発明による薬物が、例えば、投与の2時間以内に、好ましくは投与の1時間以内に、特に投与の30分以内に放出される、通常の、または非調節放出形態である。「制御放出」とは、薬物放出が一定期間制御または調節される剤形を意味する。制御とは、例えば、特定の時点での加速放出、徐放、遅延放出、またはパルス放出を意味し得る。または、制御とは、薬物放出を、即時放出投与の場合よりも長く、すなわち、少なくとも数時間延長することを意味し得る。
【００６０】
「遅延放出」は、薬物の有意な血漿レベルが達成される前に時間遅延があることを示す。本発明による遅延放出製剤は、薬物の初期突発を回避するか、または胃内の薬物放出が回避されるように製剤化することができる。「パルス放出」製剤は、同じ剤形中に即時放出、徐放、および/または遅延放出製剤の組み合わせを含むことができる。「半遅延放出」製剤は、投与直後には中等度の用量が提供され、投与の数時間後にはより大きい用量が提供される、パルス放出製剤である。
【００６１】
「徐放」または「長期放出」なる用語は、定常状態での投与後、少なくとも約8時間、好ましくは少なくとも約12時間、特に少なくとも24時間（1日1回の投与レジメンが特に好ましい）、血液（例えば、血漿）レベルが治療範囲内であるが、毒性レベルよりも低く維持されるような速度での薬物の放出を含むことを意味する。「定常状態」なる用語は、所与の薬物の血漿レベルが、所与の薬物の最低有効治療レベル以上でありかつ最低毒性レベル未満または過量血漿レベル未満であるレベルに達し、このレベルが薬物のその後の投与でも維持されることを意味する。前述のポリマーマトリックスおよび非ポリマーマトリックス形成剤のほとんどは、本発明による製剤において所与の薬物の持効性放出または徐放能力を送達する能力を有する。
【００６２】
アクリル酸ポリマー系のモルヒネ阻止マトリックスの具体例がEP 0 682 945 B1に開示されており；HPMC系のタペンタドール阻止マトリックスがEP 1 439 829 B1に開示されている。
【００６３】
好ましい態様に従い、本発明による薬学的組成物は、標的薬物を単独で（唯一の有効成分として）または他の薬学的活性成分との組み合わせで、好ましくは非オピオイド鎮痛剤との、特にイブプロフェン、ジクロフェナク、ナプロキセン、パラセタモール、およびアセチルサリチル酸との組み合わせで含む。
【００６４】
好ましい態様において、組成物を所期のやり方でかつインタクトな状態で（すなわち、インタクトな状態で嚥下して）投与した場合、薬学的組成物中の酵素は本質的には、インビボで薬物（または薬学的組成物の任意の他の成分）に作用しない。
【００６５】
好ましくは、組成物を所期のやり方でかつインタクトな状態で（すなわち、インタクトな状態で嚥下して）投与した場合、本発明による薬学的組成物中の酵素は、本質的に放出不可能な形態で組成物中に存在する。
【００６６】
本発明の好ましい態様に従い、本薬学的組成物中のラッカーゼ酵素はインビボで非活性化される。
【００６７】
さらなる局面に従い、本発明は、薬物をラッカーゼと混合する段階、および、混合物を1つの薬学的組成物に仕上げる段階を含む、本発明による薬学的組成物を製造するための方法にも関する。または、本発明による薬学的組成物を製造するための方法は、隔離された形態で、薬物およびラッカーゼを提供する段階、ならびに、隔離された薬物およびラッカーゼを1つの薬学的組成物に仕上げる段階を含む。
【００６８】
別の局面に従い、本発明は、オピオイド薬物ならびにヒドロゲル形成構成要素および/または架橋剤を含む、組成物を提供する。ヒドロゲル形成構成要素および/または架橋剤は、薬学的組成物が乱用段階の過程で水性混合物と混合されると、薬物の、特にヒドロゲルとしての、不溶性架橋分子の生成を可能にする。好ましいヒドロゲル形成構成要素はキトサンおよびカルボキシメチルキトサンであり；好ましい架橋剤はフェノール架橋剤、特にカテコールおよびバニリンである。そのようなヒドロゲル/架橋剤組成物の好ましい例は、キトサンおよびカテコールを含む組成物、またはカルボキシメチルキトサンおよびバニリンを含む組成物である。
【００６９】
好ましくは、本発明による組成物をヒドロゲルとして提供する。これは、すなわち、反応溶液の流体力学的特性を変化させるシステムを作製するための、別の乱用防止アプローチ、すなわち、ヒドロゲルの生成の包含に関する。ヒドロゲルは非常に粘性であり、その結果、針で吸い上げるのは不可能である。
【００７０】
本発明はまたその性質により、本発明による（乱用防止）薬学的組成物（すなわち、ラッカーゼ反応性官能基を有する薬物と、ラッカーゼとを含み、ラッカーゼ反応性官能基を有する薬物が、貯蔵安定性でラッカーゼ反応性の状態で、かつ薬物に影響を及ぼすラッカーゼ活性がない条件下で、薬学的組成物中に含まれる）の、それを必要としている患者への投与の方法であって、有効量の本発明による薬学的組成物がこの患者に経口投与され、かつ、ラッカーゼが薬物に作用せずにかつしたがって薬物が患者においてその予定された効果を示すことができるように、ラッカーゼが、この経口投与の過程で（患者の胃腸管（口、食道、胃、および（小）腸）に存在する構成要素により、例えば、患者の唾液、胃液、および腸液ならびにその中に含まれる患者の酵素により）自動的に非活性化される、方法にも関する。
【００７１】
本発明は、以下の実施例および図面によってさらに例示されるがそれらに限定されることはない。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】薬物としてのモルヒネの例によって示す本発明の戦略を示す。本発明による乱用防止モルヒネ/ラッカーゼシステムは、モルヒネを沈澱生成物に変換するか、または添加物との組み合わせでヒドロゲルを作製し、これにより薬物をシリンジで注射することがもはや不可能となる。薬物を予期されるとおりに投与すると、体からのプロテアーゼがラッカーゼを非活性化し、薬物はその効果を展開する。
【図２】実施例において調査するオピオイド（モルヒネ（左）、タペンタドール（中央）、およびオキシコドン（右））を示す。
【図３】ミセリオフトラ・サーモフィラ（MtL）（紫）およびフルイカワラタケ（TvL）（緑）によるモルヒネのラッカーゼ酸化を示す。
【図４】MtL（紫）およびTvL（緑）によるタペンタドールのラッカーゼ酸化を示す。
【図５】MtL（緑）およびTvL（紫）によるオキシコドンのラッカーゼ酸化を示す。
【図６】異なる時点の酵素変換後のモルヒネのTLCを、基準としてのモルヒネ（第1レーン）と比較して示す。
【図７】異なる時点の酵素変換後のタペンタドールのTLCを、基準としてのタペンタドール（第1レーン）と比較して示す。
【図８】モルヒネ沈澱物のFTIRを示す（赤線：モルヒネ基準、青線：沈澱したモルヒネポリマー）。
【図９】酵素的に酸化したモルヒネのHPLC測定を示す。
【図１０】酵素変換後のモルヒネのGC-MSスペクトルを示す。
【図１１】GC-MSライブラリの中からのモルヒネのGC-MSスペクトルを示す：測定スペクトルとデータベーススペクトルとの比較。
【図１２】GC-MSにより検出した、ラッカーゼによるモルヒネの変換を示す。
【図１３】キトサン-カテコール-モルヒネヒドロゲルを示す。
【図１４】カルボキシメチルキトサン-モルヒネヒドロゲルを示す。
【図１５】様々なオピオイドおよびラッカーゼでの酸素濃度測定を示す。
【図１６】ラッカーゼメディエーターシステムの酸素濃度測定を示す。
【図１７】ラッカーゼメディエーターシステムおよびオキシコドンの酸素濃度測定を示し、メディエーターはバニリン、エチルバニリン、没食子酸、およびシリンガ酸である。
【図１８】オキシコドンおよびそれぞれの対照による様々なLMS実験のオキシコドン濃度％を示す。
【図１９】オキシモルホンの分子式C17H19NO4のMS-TOF分析によって見られるピーク面積[PA]を示す。
【図２０】ラッカーゼメディエーターシステムおよびメタドンの酸素濃度測定を、メディエーターABTSと共に示す。
【図２１】ジアセチルモルヒネのモルヒネへのエステラーゼによる酵素的脱アセチルの反応スキームを示す。次いで、モルヒネをラッカーゼにより酸化することができる。
【図２２】HPLC/RIにより測定した、異なる酵素および温度による経時的なアセテート収率を示す。
【図２３】異なる酵素および温度によるアッセイ法のDAMおよびモルヒネの濃度を示す。
【図２４】ヒト体内での酵素の不活化を示す。
【図２５】異なる酵素、すなわち、ミセリオフトラ・サーモフィララッカーゼMTL、フミコーラ・インソレンスクチナーゼHiCおよびホースラディッシュペルオキシダーゼHRPのタンパク質分解を示すSDS-Pageゲルを示す。
【図２６】基質としてABTSを用いたMTLのpH活性プロファイルを示す。
【図２７】異なるpHレベルにおける経時的なMTLの安定性プロファイルを示す。
【図２８】10U/mlのラッカーゼを用いた様々な濃度のモルヒネの除去を示す。
【図２９】ラッカーゼ濃度の増大はモルヒネ濃度の低減に比例することを示す（→10倍のラッカーゼは約10倍速い分解を引き起こす）。
【図３０】モルヒネのほぼ溶解限界である60000mg/Lのモルヒネによる結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【実施例】
【００７３】
乱用防止オピオイド製剤に用いるためのラッカーゼ
オピオイドは現代の疼痛管理の重要な構成要素であるが、これらの薬物の乱用および/または誤用は、拡大する公衆衛生上の問題を作り出した。この問題に対抗するために、オピオイドの乱用を阻止するための新しい技術に対する強い需要がある。したがって、本プロジェクトは、酵素の使用に基づく非常に独特のやり方でこの問題にアプローチしようと試みる。
【００７４】
オピオイドを重合してそれにより乱用を阻止する酵素の能力が調査された。これらの酵素は、オピオイドが正しく投与される場合は活性ではない。これらの可能性が本プロジェクトによって十分に調査される。
【００７５】
本実施例において、溶液からオピオイドを除去するための適切な酵素システムの開発を示す。さらに、注射による投与を阻止する、オピオイド溶液の有効な変換のための最適化された反応条件を提供する。最後に、薬物を予期されるとおりに投与した場合に、タンパク質分解によるオピオイド破壊酵素の不活化を示すことにより、システムの機能を検証する。
【００７６】
1.  材料
調査されたオピオイドは、図2に示すとおり、モルヒネ、タペンタドール、およびオキシコドンであった。
【００７７】
2つの異なるラッカーゼを用いてオピオイドの除去を達成し、それらの一方はフルイカワラタケ（TvL）由来であり、他方はミセリオフトラ・サーモフィラ（MtL）由来であった。
【００７８】
2.  酸素測定
所与のオピオイド（モルヒネ、タペンタドール、オキシコドン）のいずれかにラッカーゼが作用するかどうかを判定するために、光酸素センサーを用いた。ラッカーゼは電子受容体として酸素を用い、したがって基質の酸化後に酸素濃度が低下する。
【００７９】
以下の反応のための条件を表1に示す。
【００８０】
（表１）オピオイドのラッカーゼ触媒酸化の酸素測定のための条件
2019507172.tif 000002
【００８１】
図3において、2つの異なるラッカーゼ、すなわちミセリオフトラ・サーモフィラ（MtL）およびフルイカワラタケ（TvL）由来のラッカーゼによるモルヒネの酸化を示す。青および赤線は2つのブランクを示し、青は蒸留水および酵素、赤は蒸留水とモルヒネである。紫および緑線は酵素との2つの反応（紫：MtL、緑：TvL）を示す。約5分後、溶液中の酸素濃度の明らかな低下が見られ、ラッカーゼはモルヒネを反応生成物に変換していることを意味する。加えて、2つの溶液は混濁し、これは反応生成物が沈澱したことを意味する。2つの酵素の間で有意差はなかった。
【００８２】
図4において、タペンタドールのMtL（紫）およびTvL（緑）による酸化を示す。MtLによる酸素の減少は、TvLによる酸素の減少に比べてはるかに遅い。これは、TvLはMtLよりもはるかに高い酸化還元能力を有するためであると考えられる。異なる曲線は、2つの酵素の特異性がタペンタドールに対して非常に異なることも示す。TvLはタペンタドールをより良好に変換し、これは曲線の傾きならびにTvLの場合の曲線がほぼ0％酸素まで下がるという事実によって示される。
【００８３】
図5において、オキシコドンの酸化を示す。曲線はすべて同様に見え、2つの用いた酵素はオキシコドンを変換できないことを示している。その原因は、オキシコドンにおける、ラッカーゼに必要なフェノール性のOH基の欠如である（図2に示す）。
【００８４】
3.  薄層クロマトグラフィ
モルヒネおよびタペンタドールの反応を薄層クロマトグラフィによっても分析し、図6および7に示す。図6は、モルヒネの変換を示す。第1レーンは基準としてのモルヒネであるが、他のレーンは異なる時点（2、10、30、60、120分）で採取した試料を示す。わずか2分後に、2つの新しい点がTLCプレート上に現れ、モルヒネとの酵素反応から新しい生成物が生じることを示している。モルヒネ基準の点は30分後に消失し、これはモルヒネがすべて変換されたことを示す。同じ手順をタペンタドールについて図7に示す。タペンタドールの変換ははるかに遅いが、同様に新しい点が2分後に現れ、タペンタドールの点は120分後には消失しつつある。
【００８５】
4.  沈澱生成物の分析
前述のとおり、モルヒネの反応生成物は沈澱し、したがって、次の部分はこの沈澱の分析であった。反応のために以下の条件を用いた（表2）。
【００８６】
（表２）MtLを用いた酵素反応後に生成するモルヒネ沈殿物の分析のための条件
2019507172.tif 000003
【００８７】
24時間後、反応混合物を16.100rcf（相対遠心力）で15分間遠心分離した。上清を廃棄し、残りの沈澱を終夜凍結乾燥した。翌日、乾燥沈殿物を図8に示すとおりFTIRにより分析した。赤線はモルヒネを示し、青線は沈澱した反応生成物を示す。モルヒネの重合反応により、新しいピークが生じ、他のピークは低減していることがわかる。
【００８８】
さらなる分析のために、沈殿物の溶解度試験を実施した。表3に示すとおり、溶解度試験の結果は不確かであった。用いた溶媒のいずれでも、沈澱は溶解せず、おそらくは酵素反応後に高分子量の生成物が生じたことを意味している。これは、プロジェクトのメインゴールにとっては望ましいが、さらなる分析のために、溶解性の化合物が必要である。
【００８９】
（表３）モルヒネのラッカーゼ触媒酸化後に生成する沈殿物の溶解度試験
2019507172.tif 000004
【００９０】
5.  沈澱生成物の分析
第2のタスクに取り組むため、つまり、反応混合物の流体力学的特性の変化に取り組むために、異なる添加物を加えて、溶液の粘性を増大させた。試験した添加物を表4に示し、記載のとおりに反応に混合した。選択した添加物のほとんどは、薬学的適用においてすでに使用されている。望まれる粘性の増大は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（HPMC）を用いた場合にのみ達成された。
【００９１】
（表４）粘性を増大させるための、モルヒネ酵素反応用の添加物
2019507172.tif 000005
【００９２】
6.  HPLCおよびGCを用いた酵素変換の測定
モルヒネの酵素変換の速度論をHPLCおよびGC分析によって分析した。
【００９３】
反応中の異なる時点（0、2、5、10、15、30分）で試料を採取した。出発溶液は蒸留水中のモルヒネ0.2mg/mlであった。反応を開始するために、MtLを78.3U/mlの最終濃度まで加えた。100μLの試料を採取し、900μLのメタノール（MeOH）に加えて、酵素を沈澱させた。溶液を遠心分離し、上清を0.2μmフィルターを通してHPLCバイアルに移した。次いで、溶液を以下の表5に示すHPLC条件を用いて測定した。
【００９４】
（表５）酵素的に酸化したモルヒネ反応速度決定に関するHPLC測定のための条件
2019507172.tif 000006
【００９５】
HPLC測定の結果を図9に示す。モルヒネがラッカーゼによって変換されることが明らかである。15分後、モルヒネシグナルはもはや測定されなかった。これは、約15分後に100％のモルヒネが部分的に沈澱する生成物に変換されたことを意味する。正確な反応メカニズムおよび反応生成物についてのさらなる分析を行わなければならない。
【００９６】
HPLC法に加えて、GC-MS法を確立し、試料を以下の表6に示す条件を用いて分析した。
【００９７】
（表６）酵素的に酸化したモルヒネ反応速度決定のためのGC-MS条件
2019507172.tif 000007
【００９８】
図10のMSスペクトルは、反応後のモルヒネのGC-MS測定の結果を示す。右への鋭いピークはモルヒネを示し、これは図11に示すMSスペクトルライブラリーによって確認される。これは、モルヒネが検出されたという証明である。
【００９９】
図12において、モルヒネおよびミセリオフトラ・サーモフィラ由来のラッカーゼの反応の変換速度を示す。この反応のために、蒸留水中のモルヒネ2mg/mlの濃度を用いた。反応を開始するために、MtLを78.3U/mlの最終濃度まで加えた。試料調製のために、100μLの試料を採取し、900μLのメタノール（MeOH）に加えて、酵素を沈澱させた。溶液を遠心分離し、上清を0.2μmフィルターを通してHPLCバイアルに移した。バイアル中に、GCクロマトグラフに問題を引き起こし得る酵素からの残存水分を結合するためのNaSO4を加えた。
【０１００】
変換速度は、HPLCで測定した前述のものの条件に比べてはるかに遅い。30分後、約60％のモルヒネが変換される。この原因は、おそらくは、異なる酵素/基質比である。HPLC測定のために、GC測定用に調製した試料に比べてはるかに多い酵素を用いた。これは、酵素と基質との比率により変換速度に影響を及ぼし得ることを示す。
【０１０１】
7.  ヒドロゲル
好ましい態様に従い、本発明による組成物をヒドロゲルとして提供する。これは、すなわち、反応溶液の流体力学的特性を変化させるシステムを作製するための、別の乱用防止アプローチ、すなわち、ヒドロゲルの生成の包含に関する。ヒドロゲルは非常に粘性であり、その結果、針で吸い上げるのは不可能である。このために、表7に示す異なる構成を試行した。物質をゲルが生成するまで混合した。
【０１０２】
キトサンを用いた第1の試行によって約15分後にヒドロゲルが生成された。着想は、カテコールがキトサン分子を架橋するということ、およびモルヒネがマイケル型反応を介して共有結合により包埋されるということである。この試行は概念の証明に成功したが、カテコールは薬物添加物としてすでに用いられている他の分子に置き換える必要がある。
【０１０３】
カルボキシメチルキトサンを用いた第2の試行によって、約24時間後にモルヒネとのみヒドロゲルが生成された。このシステムは無害と考えられ、反応時間は最適化することができる。
【０１０４】
（表７）酵素的架橋ヒドロゲルのための条件
2019507172.tif 000008
【０１０５】
図13は、キトサン-カテコール-モルヒネヒドロゲルを示す。図14は、カルボキシメチルキトサン-モルヒネヒドロゲルを示す。いずれのヒドロゲルも注射不可能であり、もはや投与のために用いることはできない。
【０１０６】
考察：
この試験は、乱用防止オピオイドの開発のための、まったく新しい酵素的アプローチを示す。タペンタドールおよびモルヒネは酵素ラッカーゼによって順調に変換され、これは酸素消費量測定、TLC、HPLC-MS、FTIR、およびGC-MS分析によって確認された。
【０１０７】
モルヒネの酵素変換は非常に直接的であったため、この反応をさらなる分析のモデルとして選択した。モルヒネに対するミセリオフトラ・サーモフィラ由来のラッカーゼの反応速度を、HPLCおよびGC測定により分析した。約15分後、100％のモルヒネが生成物に変換され、沈澱した。沈澱した反応生成物をFTIRにより分析し、溶解度試験も実施した。沈殿物は用いた溶媒のいずれにもほとんど溶解せず、これは乱用阻止のために望ましい。
【０１０８】
全体的に見て、酵素重合に基づく所望の乱用阻止システムが順調に開発された。示した結果によれば、本システムは原理的にはすべての薬物に、特にラッカーゼ反応性官能基を有するすべてのオピオイドに拡張可能であるのはもっともである。
【０１０９】
8.  追加のラッカーゼO2測定
先の実験で収集した結果を確認するために、酸素濃度測定を行った。以下の追加のオピオイドを試験した：メタドン、ジヒドロコデイン、ジアセチルモルヒネ、およびヒドロモルホン。
【０１１０】
最終反応混合物：50mM NaPi緩衝液pH7中の1000mg/L オピオイド 1mlあたり10ユニットラッカーゼ。
【０１１１】
測定の結果を図15において見ることができる。反応はオキシコドン、タペンタドール、およびモルヒネの先の測定を確認し、酸素濃度の低下と、したがってラッカーゼ活性の低下は、フェノール基存在下でのみ証明することができた。新たに試験したオピオイドでは、もっぱらヒドロモルホンだけがラッカーゼ活性を示したが、他のすべてのオピオイドで濃度は一定のままであった。
【０１１２】
9.  ラッカーゼメディエーターシステム（LMS）：オピオイドの除去
メディエーターを電子シャトルとして用いて複合基質の酸化を促進することができ、そうでなければラッカーゼ単独によってではこの複合基質を酸化することができない。フェノール基を含むオピオイドは容易にラッカーゼの基質として働くが、オキシコドン、メタドン、またはジヒドロコデインなどの他のオピオイドはそれほど容易に酸化されない。ラッカーゼの基質範囲はメディエーターによって増大し得る。これらの多くの場合小分子は第1段階でラッカーゼにより酸化され、次いでそれらの酸化状態で多様な標的基質と反応する。
【０１１３】
反応中、酸素は電子受容体として作用し、ラッカーゼによって水へと還元される一方で、メディエーターは酸化される。酸素の濃度を前述のとおりに測定した。酸素はメディエーターが完全に酸化されるまで消費される。開放実験装置を選択し；したがって、酸素濃度はその出発値に回復することができる。反応の第2の段階を、標的基質の添加により開始し、これはその結果、メディエーターによって酸化される。ここで還元されたメディエーターは再度ラッカーゼの標的となり得、これによりもう一度酸素濃度の低下が起こる（図16参照）。
【０１１４】
本実験において、最終反応混合物は0.2〜6mMのメディエーター、1mlあたり1〜10ユニットのラッカーゼおよび100〜3000mg/Lのオピオイドを含んだ。
【０１１５】
9.1.  LMSおよびオキシコドン
図17は、ラッカーゼメディエーターシステムにおけるオキシコドンの場合の酸素濃度レベルを示す。異なるメディエーターを2mMの濃度で、1mlあたり10ユニットのラッカーゼおよび1000mg/Lのオキシコドンと共に用いた。酸素濃度の第1の低下は、それぞれのメディエーターのラッカーゼによる酸化を意味し、オピオイド添加の直後に起こった第2の低下は、その後のオピオイドの酸化によるものであった。
【０１１６】
メディエーターであるバニリン、エチルバニリン、およびシリンガ酸は、オキシコドン添加後に酸素濃度の低下を示し、これは図17で見ることができる。これはオキシコドンの酸化を示す。
【０１１７】
オキシコドンの酸化および除去をさらに確認するために、HPLC-MS/TOF測定を行った。
【０１１８】
Agilentの液体クロマトグラフィ-エレクトロスプレーイオン化-飛行時間（HPLC-ESI-TOF）質量分析計（A1260シリーズ、Agilent US）を用いて濃度を測定した。試料中に含まれる物質をZorbax Hilic Plus、2.1×100mm、3.5μm（Agilent, US）カラムにより分離した。40℃、流速0.4mL/分で、100％移動相A（65mMギ酸アンモニウムpH3.2）から、15分で100％移動相B（アセトニトリル）に、勾配を変更するよう設定し、注入量は1μLとした。1秒あたり2スペクトルの走査速度において100〜3000のm/z範囲で、スペクトルを取得した。対応する標準が0.001〜50mg/Lの範囲である各オピオイドの標準曲線を成し遂げた。
【０１１９】
図17に示す反応に加えて、メディエーターであるバニリンをより高い濃度（6mM）で用いた。結果は図18および図19で見ることができる。オキシコドン濃度の低下が確認された。オキシコドンの主な分解生成物の1つであるオキシモルホンがすべての試料中で見られた。オキシモルホンはオキシコドンの不純物であり、したがってラッカーゼまたはメディエーターを用いなかった対照中にも存在する。しかし、経時的なオキシモルホンのピーク面積の増大は、ラッカーゼメディエーターシステムと組み合わせたオキシコドンでのみ観察することができる。オキシコドンに明白な効果がない唯一のメディエーターは没食子酸であり、これは酸素濃度測定およびMS-TOF分析の両方により支持される知見であった。
【０１２０】
9.2.  LMSおよびメタドン
メタドンについて、酸素測定を行ったが、メディエーターの拡大パレットを用いた。前述のメディエーターに加えて、シリンガ酸、TEMPO、シリンゴール、およびABTSを試験した。最良の効果は、図20に見られるとおり、ABTSで観察された。ここでも、酸素濃度の低下は、標的物質の酸化を示す。
【０１２１】
10.  ジアセチルモルヒネ（DAM）エステラーゼAPI酵素カップル
API酵素カップルの2段階反応のための一例として、ジアセチルモルヒネを調査した。第1の反応において、エステラーゼを用いてジアセチルモルヒネをモノアセチルモルヒネへ、続いてモルヒネへと脱アセチルする。一般反応スキームは図21で見ることができる。次いで、前述のとおり、ラッカーゼによってモルヒネを酸化することができる。
【０１２２】
HPLC MS-TOF定量に加えて、DAMの脱アセチルから生じるアセテートをHPLC/RIによって測定した。
【０１２３】
10.1.  エステラーゼ活性アッセイ法
エステラーゼ活性を50mMリン酸ナトリウム緩衝液（pH7）中で、基質として酢酸p-ニトロフェノール（pNPA）を用いて測光法により測定した。用いた方法はHuggins et al., J. Biol. Chem. 170 (1947) 467-482により記載されたものにいくらかの改変を加えた（Herrero Acero et al., Macromolecules 44 (2011), 4632-4640）。エステラーゼはpNPAを酢酸およびp-ニトロフェノールへと加水分解することができる。さらに、p-ニトロフェノールの吸光度の増大を測定することができる。
【０１２４】
8.3mM pNPAの保存溶液をDMSO中で調製し、リン酸ナトリウム緩衝液中で希釈した。最終反応混合物は200μlのpNPA溶液および20μlの適切に希釈した酵素溶液を含んだ。遊離したp-ニトロフェノールの吸光度を30℃、405nm（pH7でε＝90.32mL/μmol/cm）で、マルチモードマイクロプレートリーダーを用いて測定した。エステラーゼ活性1ユニットは、アッセイ条件下での1分あたり1μmolのp-ニトロフェノールを遊離する酵素の量と定義された。ブランクのために、酵素溶液を水に代えた以外は同じやり方で、反応混合物を調製した。ブランクを試料の代わりに20μlの緩衝液を用いて測定した。容積測定による酵素活性は、ランベルト・ベールの法則（Hughes et al., Anal. Chem. 24 (1952), 1349-1354）の改変を用いて算出した。
【０１２５】
10.2.  モルヒネへのジアセチルモルヒネの酵素変換
フミコーラ・インソレンスクチナーゼ（HiC）はNovozymes（Denmark）から購入し、サーモビフィダ・セルロシリティカ（Thermobifida cellulosilytica）クチナーゼ1（THC）はHerrero Acero et al., 2011による記載のとおりに生成し、精製した。これらの酵素は過去に複雑な構造を加水分解し得ることが明らかにされている（Perz et al., Nat. Biotechnol. 33, (2016), 295-304）。両酵素の活性をpNPA活性アッセイ法によって測定した。
【０１２６】
モルヒネへのジアセチルモルヒネの酵素変換を2つの異なるエステラーゼであるHiCおよびTHCを用いて実施した。50mMリン酸ナトリウム緩衝液（pH7）中15mgのジアセチルモルヒネを10U/mlのそれぞれの酵素と共に室温および50℃で5日間インキュベートすることにより、加水分解反応を実施した。反応混合物の最終量は10mLであり、これを実験の間中400rpmで振盪した。酢酸は揮発性であるため、反応は気密封止ガラスチューブ中で実施しなければならなかった。各時点で1mLの試料を取り出し、シリンジおよび0.45μmの孔径のろ過膜によってろ過し、続いてCarrez沈澱を用いて沈澱させて、酵素を除去した。20μLのCarrez試薬1（10.6％w/vヘキサシアノ鉄(II)酸カリウム3水和物）を1mLの試料に添加し、ボルテックスした。1分後、20μLのC2（28.8％w/v硫酸亜鉛6水和物）を添加し、ボルテックスし、さらに5分間インキュベートした後、13000rpmで30分間遠心分離した。上清をさらなる分析のために用いた。
【０１２７】
得られた酢酸の量を、高性能液体クロマトグラフィ（パラメーターは以下に記載する）による分離後、RI検出器によって検出した。得られた酢酸の量をHPLC-RI分析によって検出した。定量のために、酢酸標準を超純水中1g/L〜0.01g/Lの範囲で調製した。HPLC分析の前に、10〜20μlの1M HClの添加によって各試料のpHを4〜6に調節しなければならなかった。すべての実験は二つ組で行った。陽性対照として、ジアセチルモルヒネを、Nakamura et al.（Nakamura et al., J. Chromatogr. 110 (1975), 81-89）による記載のとおり、0.1M NaOH中で化学的に加水分解した。
【０１２８】
10.3.  HPLCによる脱アセチルの定量
得られた生成物をAgilent（A1100シリーズ、Agilent US）の高性能液体クロマトグラフィ（HPLC）により分離した。これはTransgenomic（US）から供給されるICSep ION 300、7.8×300mm、7μmカラムにより行った。移動相として0.01N H2SO4を、45℃、流速0.325mL/分で用いた。注入量は試料40μLであり、実行時間60分であった。酢酸の量を装置のRI検出器で測定した。この方法を10mg/L〜1000mg/Lの範囲内の酢酸標準を用いて較正した。
【０１２９】
10.4.  結果
経時的な全アセテート収率は図22で見ることができる。50℃の温度で、両酵素はジアセチルモルヒネの50％超を加水分解することができ、モルヒネへの完全な脱アセチルを示している。
【０１３０】
オピオイド濃度の直接測定は、この仮定を確認し、これは図23で見ることができる。すべての試料中でDAM濃度は低下するが、モルヒネ濃度は50℃でインキュベートした試料中でのみ増大する。より低い温度では、モノアセチルモルヒネだけが生成するように考えられる。
【０１３１】
11.  酵素の不活化 - SGFおよびプロテアーゼ
薬物を予期されるとおりに投与した場合、酵素の不活化は本発明の必須の部分である。不活化は酸性変性およびタンパク質分解の両方によって達成することができる(図24）。
【０１３２】
不活化法の実行可能性を評価するために、プロテアーゼ消化アッセイ法、ならびに様々なpHレベルにおける酵素安定性試験を行った。
【０１３３】
11.1.  ペプシン消化アッセイ法
MTLのペプシン消化を示すために用いる方法は、Thomas et al.（Thomas et al., Regul. Toxicol. Pharmacol. 39 (2004), 87-98）によって記載され、人口胃液（SGF）を用いた標準化プロトコールである。SGFは、米国薬局方（1995）に従い、反応混合物ごとに0.084M HCl、0.035M NaCl、4000Uのペプシンを含み、pHレベル1.2を有する。1mgの試験タンパク質に対し10000ユニットのペプシン活性の比をアッセイ法全体を通して用い、これは米国薬局方（第24版、2000）において推奨されるペプシンの平均活性の評価にいくらかの改変を加えたものに基づく。ペプシン（照会番号P7000）はSigma-Aldrich（US）から購入した。使用したすべてのタンパク質は5mg/mLの濃度で50mMトリス-HCl（pH9.5）に溶解した。反応混合物は、あらかじめ37℃に加温した1.52mLのSGFを含み、続いて0.08mLのタンパク質溶液を加えた（Thomas et al., 2004）。混合物を37℃のサーモミキサーに入れ、400rpmで振盪した。変性SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）分析のために、開始後0分、0.5分、および15分で160μlの試料を取り出した。
【０１３４】
11.2  SDS-PAGE分析
SDS-PAGEを実施して、タンパク質バンドが消化アッセイ法後でもまだ完全であるか、または断片化されているかを分析し、染色タンパク質バンドを目視検査した。4〜15％ポリアクリルアミドを含む既製のトリス-グリシンゲル（照会番号456-1086）、10×トリス-グリシン-SDS（TGS）緩衝液（照会番号1610772）、および4×Laemmli試料緩衝液（照会番号1610747）はBio-Rad Laboratories（Hercules, USA）から購入した。4×Laemmli緩衝液を使用前に2-メルカプトエタノールで10：1希釈した。以下の試料調製法はThomas et al（Thomas et al. 2004）によって記載されていた。
【０１３５】
160μlの消化試料のそれぞれに、中和段階として56μlの200mM NaHCO3をそして電気泳動のために56μlの4×Laemmli（Laemmli 1970）緩衝液を加えることにより、反応停止した。試料をただちに99℃で10分間加熱して、直接分析するか、または-20℃で貯蔵した。ペプシンおよび試験タンパク質安定性のための対照試料（ペプシンは含まないが、試験タンパク質を含むSGF）を前述と同じやり方で処理した。ペプシンは溶液になればただちに消化を開始して自己消化するため、ゼロ時点の消化試料を別に調製した。試験タンパク質の添加前に、ペプシンは停止溶液中ですでに変性し、99℃で5分間加熱した。その後、試料を再度5分間加熱して、試験タンパク質の適切な変性を確認した。15μlの各試料および5μlの着色タンパク質マーカーIV（照会番号27-2110、Peqlab）をゲルに載せ、続いてトリス-グリシン泳動緩衝液中、200Vで30〜45分間泳動させた。可視化のために、ゲルをクーマシーブルー染色溶液（0.1％w/vクーマシーR250、10％v/v酢酸、45％v/vメタノール）と共に30分間インキュベートした後、脱染段階（10％v/v酢酸、40％v/vメタノール）を10〜30分間行った。
【０１３６】
酵素によるタンパク質分解の結果は図25で見ることができる。MTLおよびHRPのそれぞれのタンパク質バンドは30秒以内に消失したため、これらは非常にタンパク質分解されやすい。HiCは中等度の濃度低下を示した。
【０１３７】
11.3  ラッカーゼ安定性アッセイ法
MTLのpHプロファイルを確立するために、基質としてABTSを用い、酸性から中性（pH2.5〜pH7）の異なるpHレベルで経時的に酵素活性を測定した。すべてのpHレベルについて、MTLをそれぞれの緩衝液中で1：100に希釈し、室温で1時間インキュベートした。酵素活性を特定の時点で測定した。活性を測定し、ABTSアッセイ法（前述）により、各pHレベルについて異なる吸光係数（pH7：ε＝11.38mL/μmol/cm、pH6：ε＝23.34mL/μmol/cm、pH5：ε＝32.03mL/μmol/cm、pH4：ε＝35.49mL/μmol/cm、pH3、2：ε＝36.00mL/μmol/cmを用いて算出した；修士論文（''Laccases as effective siccatives in alkyd resins''）, Scholz, 2015。
【０１３８】
MTLのpHプロファイルは図26で見ることができ、一方で異なるpHレベルにおける経時的な安定性プロファイルは図27に示す。MTLは、2つの活性最大値を有し、1つはpH7での活性最大値で2つめはpH3での活性最大値であり、SGF媒質状態では活性を示さない。安定性プロファイルは、MTLはpH4〜7の範囲でその活性のほとんどを維持するが、より低いpHではかなり急速に活性を失うことを示す。
【０１３９】
12.  さらなるラッカーゼ - モルヒネ試験（高濃度）
いくつかのさらなる実験を、モルヒネおよびラッカーゼの様々な濃度を用いて行った。以下の実施例および図面において示した結果は、分解の速度はラッカーゼの量ならびにオピオイド濃度に直接相関するとの主張を支持する。本実施例はより信頼性があり、改善された分析論にも基づいている。
【０１４０】
12.1.  ミセリオフトラ・サーモフィラ由来のラッカーゼによるモルヒネの重合
モルヒネ重合を、1mg/l〜60000mg/lの範囲のモルヒネ濃度を用いて、異なるアプローチで実施した。反応を50mMリン酸ナトリウム緩衝液pH7中で実施した。酸化工程を、ラッカーゼMTLを最終活性10U〜100Uで加えることにより開始した。様々な濃度のモルヒネを図28に示す。
【０１４１】
図29は、ラッカーゼ濃度の増大はモルヒネ濃度の低下に比例する（すなわち、10倍多いラッカーゼは約10倍速い分解をもたらす）ことを示す。図30は、モルヒネのほぼ溶解限度である60000mg/Lのモルヒネの変換を示す。
【０１４２】
したがって、これらの結果は、前記I.6と完全に一致している。
【０１４３】
好ましい態様：
したがって、本発明は以下の好ましい態様に関する。
1.  ラッカーゼ反応性官能基を有する薬物と、ラッカーゼ（EC 1.10.3.2）とを含む、薬学的組成物。
2.  前記ラッカーゼ反応性官能基を有する薬物が、フェノール性ヒドロキシル基を有する物質、アミノフェノール、ベンゼンチオール、ジフェノールまたはポリフェノール、メトキシ置換フェノール、アミノフェノール、ジアミン、芳香族アミン、ポリアミン、アスコルベート、ヒドロキシインドール、アリールジアミン、およびアニリンを含む群より選択され、好ましくは、フェノール性ヒドロキシル基を有する物質である、態様1に記載の薬学的組成物。
3.  前記ラッカーゼが、フルイカワラタケ（Trametes villosa）由来のラッカーゼ、ミセリオフトラ・サーモフィラ由来のラッカーゼ、およびプレウロタス・オストレアタス由来のラッカーゼの群より選択される、態様1または2に記載の薬学的組成物。
4.  前記薬物が、ラッカーゼ反応性官能基を有するオピオイド薬物であり、好ましくは、モルヒネ、タペンタドール、ヒドロモルホン、エトルフィン、デソモルヒネ、オキシモルホン、ブプレノルフィン、フェニルアラニン残基を含むオピオイドペプチド、例えば、アドレノルフィン、アミドルフィン、カソモルフィン、DADLE（[D-Ala2,D-Leu5]-エンケファリン）、DAMGO（[D-Ala2,N-MePhe4,Gly-オール]-エンケファリン）、デルモルフィン、エンドモルフィン、モルフィセプチン、およびTRIMU 5（L-チロシル-N-{[(3-メチルブチル)アミノ]アセチル}-D-アラニンアミド）；オリパビン、6-MDDM（6-メチレンジヒドロデスオキシモルヒネ）、クロルナルトレキサミン、ジヒドロモルヒネ、ヒドロモルフィノール、メチルデソルフィン、N-フェネチルノルモルヒネ、RAM-378（7,8-ジヒドロ-14-ヒドロキシ-N-フェネチルノルモルヒネ）、ヘテロコデイン、7-スピロインダニルオキシモルホン、モルフィノン、ペンタモルホン、セモルホン、クロロモルフィド、ナルブフィン、オキシモルファゾン、1-ヨードモルヒネ、モルヒネ-6-グルクロニド、6-モノアセチルモルヒネ、ノルモルヒネ、モルヒネ-N-オキシド、シクロルファン（cyclorphan）、デクストラロルファン、レボルファノール、レボフェナシルモルファン、ノルレボルファノール、オキシロルファン、フェノモルファン、フレチルノルレボルファノール、キソルファノール、ブトルファノール、6,14-エンドエテノテトラヒドロオリパビン、BU-48（N-シクロプロピルメチル-[7α,8α,2',3']-シクロヘキサノ-1'[S]-ヒドロキシ-6,14-エンド-エテノテトラヒドロノルオリパビン）、シプレノルフィン、ジヒドロエトルフィン、ノルブプレノルフィン、5'-グアニジノナルトリンドール、ジプレノルフィン、レバロルファン、メプタジノール、メチルナルトレキソン、ナルフラフィン、ナルメフェン、ナロキサゾン、ナロキソン、ナロルフィン、ナルトレキソン、ナルトリベン、ナルトリンドール、6β-ナルトレキソール-d4、プソイドモルフィン、ナロキソナジン、ノルビナルトルフィミン、アラゾシン、ブレマゾシン、デゾシン、ケタゾシン、メタゾシン、ペンタゾシン、フェナゾシン、シクラゾシン、ヒドロキシペチジン（ベミドン）、ケトベミドン、メチルケトベミドン、プロピルケトベミドン、アルビモパン、ピセナドール、ならびにその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、エステル、プロドラッグ、および混合物の群より選択され、より好ましくは、モルヒネ、タペンタドール、ブプレノルフィン、オキシモルホン、ペンタゾシン、レボルファノール、ヒドロモルホンであり、特にモルヒネである、態様1〜3のいずれかに記載の薬学的組成物。
5.  錠剤、ミニ錠剤、コートコア錠（コーティングされた錠剤）、二層錠、多層錠、カプセル剤、ペレット、MUPS（多単位ペレットシステム）、顆粒剤、散剤、特にそれらのコーティングされた形態、糖衣形態、および/または機能的にコーティングされた形態（例えば、腸溶性形態）より選択される、態様1〜4のいずれかに記載の薬学的組成物。
6.  コーティングされたラッカーゼを含む、態様1〜5のいずれかに記載の薬学的組成物。
7.  前記薬物が1投与単位あたり0.1〜5000mg、好ましくは0.5〜1000mg、特に1〜500mgの量で含まれる、態様1〜6のいずれかに記載の薬学的組成物。
8.  前記ラッカーゼが1〜1000ユニット、好ましくは10〜100ユニットの量で含まれる、態様1〜7のいずれかに記載の薬学的組成物。
9.  物理的障壁または化学的障壁、特に、錠剤硬度の増大、薬物アンタゴニスト、嫌悪構成要素、乱用防止送達システム、およびプロドラッグの群より好ましくは選択されるさらなる乱用防止特性、特に物理的障壁または嫌悪構成要素、特にゲル化剤および/または非ゲル化増粘剤を含む、態様1〜8のいずれかに記載の薬学的組成物。
10.  1〜80重量％の1つまたは複数の疎水性ポリマーまたは親水性ポリマーを含むマトリックス、好ましくは、寒天、アラミン酸、アルギン酸、カルメロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボマー、カラゲナン、キトサン、特にカルボキシメチルキトサン、カテコール、コポビドン、デキストリン、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メタクリル酸コポリマー、メチルセルロース誘導体、結晶セルロース、ポリアクリル酸、ポリアルキレンオキシド、特にポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリ酢酸ビニル、ポビドン、アルギン酸プロピレングリコール、ポリビニルカプロラクタム-ポリ酢酸ビニル-ポリエチレングリコールグラフトコポリマー、プルラン、二酸化ケイ素、アルギン酸ナトリウム、デンプン、ビニルピロリドン-酢酸ビニルコポリマーを含む、マトリックス、または、非ポリマーマトリックス形成剤、好ましくは、微晶ろう、脂肪アルコールおよび脂肪酸、特に、ステアリルアルコール、セチルステアリルアルコール、ステアリン酸、パルミチン酸、もしくはその塩および混合物、炭素原子16〜22個の鎖長を有する飽和脂肪酸のモノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリド、ならびにそのようなモノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリドの混合物のマトリックスを含む、態様1〜9のいずれかに記載の薬学的組成物。
11.  好ましくは、25℃、乾燥条件下での6ヶ月間の貯蔵後に、ラッカーゼでプロセシングされた薬物を5％未満、特に1％未満含んでいることで、貯蔵安定性である、態様1〜10のいずれかに記載の薬学的組成物。
12.  ヒドロゲル形成構成要素および/もしくは架橋剤、好ましくはキトサンおよび/もしくはカテコールまたはカルボキシメチルキトサンおよび/もしくはバニリンをさらに含む、態様1〜11のいずれかに記載の薬学的組成物。
13.  調節放出組成物、特に持効性放出組成物である、態様1〜12のいずれかに記載の薬学的組成物。
14.  即時放出、調節放出、またはそれらの組み合わせをもたらす、態様1〜13のいずれかに記載の薬学的組成物。
15.  オピオイド鎮痛剤を単独でまたは非オピオイド鎮痛剤との組み合わせ、特にイブプロフェン、ジクロフェナク、ナプロキセン、パラセタモール、およびアセチルサリチル酸との組み合わせで含む、態様1〜14のいずれかに記載の薬学的組成物。
16.  薬物依存症の処置に用いるための、態様1〜15のいずれかに記載の薬学的組成物。
17.  疼痛の処置に用いるための、態様1〜15のいずれかに記載の薬学的組成物。
18.  前記組成物を所期のやり方でかつインタクトな状態で投与した場合、薬物プロセシング酵素が本質的には、インビボで薬物に作用しない、態様1〜15のいずれかに記載の薬学的組成物。
19.  前記組成物を所期のやり方でかつインタクトな状態で投与した場合、薬物プロセシング酵素が、本質的に放出不可能な形態で製剤中に存在する、態様1〜15のいずれかに記載の薬学的組成物。
20.  薬物プロセシング酵素がインビボで非活性化される、態様1〜15のいずれかに記載の薬学的組成物。
21.  含水量が10％未満、好ましくは含水量が5％未満、特に含水量が2％未満である、態様1〜20のいずれかに記載の薬学的組成物。
22.  前記薬物を前記ラッカーゼと混合する段階、および、混合物を1つの薬学的組成物に仕上げる段階を含む、態様1〜21のいずれかに記載の薬学的組成物を製造するための方法。
23.  隔離された形態で前記薬物および前記ラッカーゼを提供する段階、および、隔離された該薬物および該ラッカーゼを1つの薬学的組成物に仕上げる段階を含む、態様1〜21のいずれかに記載の薬学的組成物を製造するのための方法。
24.  それを必要としている患者への態様1〜21のいずれかに記載の薬学的組成物の投与の方法であって、有効量の該薬学的組成物がこの患者に経口投与され、かつ前記ラッカーゼがこの経口投与の過程で自動的に非活性化される、方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【国際調査報告】
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