(57)【要約】  本発明の側面は、インターロイキン17受容体（IL-17R）および他の標的を指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドに関する。アンチセンスオリゴヌクレオチドの球状核酸製剤または組成物、および処置の関係する方法もまた提供される。
2019522462.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
10-30個の連結されたヌクレオシドからなる一本鎖修飾オリゴヌクレオチドであって、
2つから8つの連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントセグメントと；連結されたヌクレオシド同士からなる5'ウイングセグメントと；連結されたヌクレオシド同士からなる3'ウイングセグメントとを有し；
ギャップセグメントが、5'ウイングセグメントと3'ウイングセグメントとの間に位置し；各ウイングセグメントの少なくともいくつかのヌクレオシドが修飾ヌクレオチドを含み；ギャップセグメント内のヌクレオシド間連結部とギャップセグメントを3'ウイングセグメントに繋ぐ連結部とが全てホスホロチオエート連結部（*）であり；5'および3'ウイングセグメント両方のヌクレオシドの残りを繋ぐヌクレオシド間連結部がホスホジエステル連結部であり；オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号302の等しい長さの部分に対して相補的な10-30個の隣り合う核酸塩基からなる、
を有する前記オリゴヌクレオチド、またはその薬学的に受け入れられる塩。
【請求項２】
オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がGCUUGGGCAGGTGGUGAA（配列番号225）である、
請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項３】
オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がCCCACAGGGGCATGUAGU（配列番号288）である、
請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４】
オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がGUAGGGCGUGTGTGGGUC（配列番号291）である、
請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項５】
オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がmGmCmUmUmGmGG*C*A*G*G*T*mGmGmUmGmAmA（配列番号225）である、
請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項６】
オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がmCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU（配列番号288）である、
請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項７】
オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がmGmUmAmGmGmGmCmGmUG*T*G*T*G*G*mGmUmC（配列番号291）である、
請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項８】
化合物が長さ20ヌクレオチドである、
請求項1〜7のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項９】
さらに分子種を末端の1つに含む、
請求項1〜7のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
化合物がさらに分子種を両方の末端に含む、
請求項1〜7のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
分子種が、スペーサー、脂質、ステロール、コレステロール、ステアリル、C16アルキル鎖、胆汁酸、コール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸、オレイルリトコール酸、オレオイルコレン酸、糖脂質、リン脂質、スフィンゴ脂質、イソプレノイド、例えばステロイド、ビタミン、例えばビタミンE、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、脂肪酸エステル、例えばトリグリセリド、ピレン、ポルフィリン、テキサフィリン、アダマンタン、アクリジン、ビオチン、クマリン、フルオレセイン、ローダミン、Texas-Red、ジゴキシゲニン、ジメトキシトリチル、t-ブチルジメチルシリル、t-ブチルジフェニルシリル、シアニン色素（例えばCy3またはCy5）、ヘキスト33258色素、ソラレン、およびイブプロフェンからなる群から選択される、
請求項9〜10のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１２】
分子種が、親油性部分；葉酸ラジカル；ステロイドラジカル；炭水化物ラジカル；ビタミンAラジカル；ビタミンEラジカル；またはビタミンKラジカルからなる群から選択される、
請求項9〜10のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１３】
分子種が、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、およびアミド連結部からなる群から選択される連結部を介して化合物に直接的に繋がれる、
請求項9〜10のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１４】
分子種がリンカーを介して化合物に間接的に繋がれる、
請求項9〜10のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１５】
リンカーが非ヌクレオチド系リンカーであり、脱塩基残基（dスペーサー）、オリゴエチレングリコール、例えばトリエチレングリコール（スペーサー9）またはヘキサエチレングリコール（スペーサー18）、およびアルカンジオール、例えばブタンジオールからなる群から選択される、
請求項14に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１６】
オリゴヌクレオチドの3'末端が、ヘキサエチレングリコール（スペーサー18）である2つの連続したリンカーに繋がれ、第1のヘキサエチレングリコールがオリゴヌクレオチドの3'末端に繋がれ、第2のヘキサエチレングリコールが第1のヘキサエチレングリコールに繋がれ、第2のヘキサエチレングリコールがコレステロールに繋がれる、
請求項15に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１７】
オリゴヌクレオチドが17-21個の連結されたヌクレオシドからなる、
請求項1および9〜16のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１８】
オリゴ（olio）ヌクレオチドが、6つの連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントを有する、
請求項1および9〜17のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１９】
各ウイングセグメントのヌクレオシドの全てが修飾ヌクレオチドを含む、
請求項1および9〜18のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項２０】
各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが2'O-メチルリボヌクレオシド（m）を含む、
請求項1および9〜19のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項２１】
オリゴヌクレオチドが最高で12個の2'O-メチルリボヌクレオシドを有する、
請求項20に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項２２】
オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号302の等しい長さの部分に対して相補的な17-21個の隣り合う核酸塩基からなる、
請求項1および9〜21のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項２３】
mGmCmUmUmGmGG*C*A*G*G*T*mGmGmUmGmAmA/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号225）を含み、オリゴヌクレオチドが長さ20ヌクレオチドであり、mが2'Oメチルであり、*がホスホロチオエート修飾である、
オリゴヌクレオチド。
【請求項２４】
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号288）を含み、オリゴヌクレオチドが長さ20ヌクレオチドであり、mが2'Oメチルであり、*がホスホロチオエート修飾である、
オリゴヌクレオチド。
【請求項２５】
mGmUmAmGmGmGmCmGmUG*T*G*T*G*G*mGmUmC/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号291）を含み、オリゴヌクレオチドが長さ20ヌクレオチドであり、mが2'Oメチルであり、*がホスホロチオエート修飾である、
オリゴヌクレオチド。
【請求項２６】
コアの外面上に位置するインターロイキン17受容体（IL-17RA）を標的化した長さ18から21個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドから構成されるオリゴヌクレオチドシェルを有するコアを含む、
安定な自己集合するナノ構造。
【請求項２７】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが長さ18ヌクレオチドである、
請求項20に記載のナノ構造。
【請求項２８】
IL-17RAが配列番号302の配列を有する、
請求項26または27に記載のナノ構造。
【請求項２９】
ヌクレオシド間連結部の全てよりも少しがホスホジエステルである、
請求項28に記載のナノ構造。
【請求項３０】
アンチセンスオリゴヌクレオチドがホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を有する、
請求項26または27に記載のナノ構造。
【請求項３１】
ヌクレオシド間連結部の全てよりも少しがホスホロチオエートである、
請求項30に記載のナノ構造。
【請求項３２】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが2'Oメチル修飾を有する、
請求項26〜31のいずれか一項に記載のナノ構造。
【請求項３３】
ヌクレオチドの全てよりも少しが2'Oメチル修飾を包含する、
請求項32に記載のナノ構造。
【請求項３４】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが17個のヌクレオシド間連結部を有し、中央の6つのヌクレオシド間連結部がホスホロチオエートである、
請求項26に記載のナノ構造。
【請求項３５】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号302に記載されている配列の少なくとも8つの隣り合う核酸塩基を含む配列に対して相補的な核酸塩基配列を有する、
請求項26〜34のいずれか一項に記載のナノ構造。
【請求項３６】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが、
mGmCmUmUmGmGG*C*A*G*G*T*mGmGmUmGmAmA/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号225）；
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号288）；および
mGmUmAmGmGmGmCmGmUG*T*G*T*G*G*mGmUmC/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号291）
からなる群から選択され、
-がホスホジエステル結合を言い、*がホスホロチオエート結合を言い、mがOメチルを言う、
請求項35に記載のナノ構造。
【請求項３７】
ナノ構造がアンチセンスオリゴヌクレオチドの2-1,000コピーを包含する、
請求項26〜36のいずれか一項に記載のナノ構造。
【請求項３８】
ナノ構造が少なくとも2つの異なるアンチセンスオリゴヌクレオチドを包含する、
請求項37に記載のナノ構造。
【請求項３９】
コアが中実または中空コアである、
請求項26〜38のいずれか一項に記載のナノ構造。
【請求項４０】
コアが中実コアであり、さらに、コアを取り囲む脂質二重層を含む、
請求項26〜38のいずれか一項に記載のナノ構造。
【請求項４１】
中実コアが、金および銀を包含する貴金属、鉄およびコバルトを包含する遷移金属、シリカを包含する金属酸化物、ポリマー、またはその組み合わせから構成される、
請求項40に記載のナノ構造。
【請求項４２】
コアがポリマー系コアであり、ポリマー系コアが、両親媒性ブロックコポリマー、ポリスチレン、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸-co-グリコール酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（カプロラクトン）を包含する疎水性ポリマー、および他の生体適合性ポリマーから構成される、
請求項40に記載のナノ構造。
【請求項４３】
コアがリポソーム系コアである、
請求項26〜38のいずれか一項に記載のナノ構造。
【請求項４４】
リポソーム系コアが1つ以上の脂質から構成され：1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DOPC）、1,2-ジミリストイル-sn-ホスファチジルコリン（DMPC）、1-パルミトイル-2-オレオイル-sn-ホスファチジルコリン（POPC）、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホ-（l'-rac-グリセロール）（DSPG）、1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホ-（1'-rac-グリセロール）（DOPG）、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DSPC）、1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DPPC）、1,2-ジ-（9Z-オクタデセノイル）-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン（DOPE）、および1,2-ジヘキサデカノイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン（DPPE）、スフィンゴ脂質、例えば、種々の長さおよび飽和状態のスフィンゴシン、スフィンゴシンリン酸、メチル化スフィンゴシンおよびスフィンガニン、セラミド、セラミドリン酸、1-Oアシルセラミド、ジヒドロセラミド、2-ヒドロキシセラミド、スフィンゴミエリン、グリコシル化スフィンゴ脂質、スルファチド、ガングリオシド、スフィンゴリン脂質、およびフィトスフィンゴシン、ならびにそれらの誘導体、リン脂質、例えば、種々の長さ、飽和状態のホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、ホスファチジン酸、リゾホスファチジン酸、環式LPA、ホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、リゾホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、リゾホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、イノシトールリン酸、LPI、カルジオリピン、リゾカルジオリピン、ビス（モノアシルグリセロ）リン酸、（ジアシルグリセロ）リン酸、エーテル脂質、ジフィタニルエーテル脂質、およびプラズマローゲン、ならびにそれらの誘導体、ステロール、例えば、異なる長さ、飽和状態のコレステロール、デスモステロール、スティグマステロール、ラノステロール、ラトステロール、ジオスゲニン、シトステロール、チモステロール、チモステノール、14-デメチル-ラノステロール、コレステロール硫酸、DHEA、硫酸DHEA、14-デメチル-14-デヒドロ（dehydr）ラノステロール、シトスタノール、カンペステロール、アニオン性エーテル脂質、カチオン性エーテル脂質、ランタニドキレート脂質、A環置換オキシステロール、B環置換オキシステロール、D環置換オキシステロール、側鎖置換オキシステロール、二重置換オキシステロール、コレスタン酸誘導体、フッ素化ステロール、蛍光ステロール、スルホン酸化ステロール、リン酸化ステロール、および多価不飽和ステロール、ならびにその誘導体から選択される、
請求項43に記載のナノ構造。
【請求項４５】
コアがニオソームである、
請求項26〜38のいずれか一項に記載のナノ構造。
【請求項４６】
第1の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドと第2の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドとから構成されるオリゴヌクレオチドシェルを有するコアを含み、
コアが、脂質二重層によって取り囲まれた固体またはリポソームもしくはリポプレックス複合体コアであり、オリゴヌクレオチドシェルがコアの外面上に位置する、
多重アンチセンスオリゴヌクレオチド球状核酸（mASO-SNA）。
【請求項４７】
第1の遺伝子および第2の遺伝子がある疾患に関連する、
請求項46に記載のmASO-SNA。
【請求項４８】
疾患が炎症性障害である、
請求項46または47に記載のmASO-SNA。
【請求項４９】
疾患が乾癬である、
請求項46または47に記載のmASO-SNA。
【請求項５０】
第1の遺伝子および第2の遺伝子がある標的経路に関連する、
請求項46〜49のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
【請求項５１】
さらに、第3の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、
請求項46〜50のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
【請求項５２】
第1の遺伝子がインターロイキン17受容体（IL-17RA）である、
請求項46〜51のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
【請求項５３】
第2の遺伝子がTNFである、
請求項46〜52のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
【請求項５４】
第1の遺伝子および第2の遺伝子がおよその等モル量でオリゴヌクレオチドシェル中に存在する、
請求項46〜53のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
【請求項５５】
障害を有する対象に、第1の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドと第2の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドとから構成されるオリゴヌクレオチドシェルを有するコアを含む、多重アンチセンスオリゴヌクレオチド球状核酸（mASO-SNA）を、障害を処置するための有効量で投与することを含み、
コアが、脂質二重層によって取り囲まれた固体またはリポソームもしくはリポプレックス複合体コアであり、オリゴヌクレオチドシェルがコアの外面上に位置する、
障害を処置するための方法。
【請求項５６】
障害が炎症性障害である、
請求項55に記載の方法。
【請求項５７】
mASO-SNAが第1および第2の遺伝子の同時的なmRNAノックダウンを生ずる、
請求項55に記載の方法。
【請求項５８】
第1の遺伝子および第2の遺伝子がある標的経路に関連する、
請求項55に記載の方法。
【請求項５９】
mASO-SNAが標的経路の相加的ノックダウンを生ずる、
請求項58に記載の方法。
【請求項６０】
障害が乾癬である、
請求項55〜59のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
炎症性障害を有する対象に、請求項1〜25のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドまたは請求項26〜44のいずれか一項に記載のナノ構造を含む組成物を、炎症性障害を処置するための有効量で投与することを含む、
炎症性障害を処置するための方法。
【請求項６２】
炎症性障害が、自己免疫疾患、感染性疾患、移植拒絶または移植片対宿主病、悪性腫瘍、肺障害、腸障害、心臓障害、敗血症、脊椎関節症、代謝障害、貧血、痛み、肝障害、皮膚の障害、爪の障害、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎との組み合わせとしての乾癬、潰瘍性大腸炎、クローン病、血管炎、ベーチェット病、強直性脊椎炎、喘息、慢性閉塞性肺障害（COPD）、特発性肺線維症（IPF）、再狭窄、糖尿病、貧血、痛み、クローン病に関係する障害、若年性関節リウマチ（JRA）、C型肝炎ウイルス感染、乾癬性関節炎、および慢性尋常性乾癬からなる群から選択される、
請求項61に記載の方法。
【請求項６３】
炎症性障害が、関節リウマチ、リウマチ性脊椎炎、変形性関節症、痛風性関節炎、アレルギー、多発性硬化症、自己免疫性糖尿病、自己免疫性ぶどう膜炎、および腎炎症候群からなる群から選択される、
請求項61に記載の方法。
【請求項６４】
対象に、請求項1〜25のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドまたは請求項26〜44のいずれか一項に記載のナノ構造を含む組成物を、インビボのIL-17受容体レベルを縮減するための有効量で投与することを含む、
インビボのIL-17受容体の発現レベルを縮減するための方法。
【請求項６５】
第1の遺伝子、第2の遺伝子、および第3の遺伝子がある標的経路に関連する、
請求項46〜54のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
【請求項６６】
第1の遺伝子および第2の遺伝子同士が異なる標的経路に関連する、
請求項46〜54のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
【請求項６７】
第1の遺伝子、第2の遺伝子、および第3の遺伝子同士が異なる標的経路に関連する、
請求項46〜54のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
【請求項６８】
第1の遺伝子がインターロイキン-4受容体（IL-4R）である、
請求項46〜51のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
【請求項６９】
第2の遺伝子がインターロイキン-1ベータ（IL-1β）である、
請求項46〜53のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
【請求項７０】
第3の遺伝子が結合組織成長因子（CTGF）である、
請求項46〜54のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
【請求項７１】
第1の遺伝子、第2の遺伝子、および第3の遺伝子がおよその等モル量でオリゴヌクレオチドシェル中に存在する、
請求項46〜54のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
【請求項７２】
自己集合するナノ構造が、コアの外面上に位置するインターロイキン17受容体（IL-17R）を標的化した長さ18から21個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドから構成されるオリゴヌクレオチドシェルを有するコアを含む、
安定な自己集合するナノ構造を含む医薬組成物。
【請求項７３】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが長さ18ヌクレオチドである、
請求項72に記載の医薬組成物。
【請求項７４】
IL-17RAが配列番号302の配列を有する、
請求項72または73に記載の医薬組成物。
【請求項７５】
ヌクレオシド間連結部の全てよりも少しがホスホジエステルである、
請求項72〜74のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７６】
アンチセンスオリゴヌクレオチドがホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を有する、
請求項72〜74のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７７】
ヌクレオシド間連結部の全てよりも少しがホスホロチオエートである、
請求項76に記載の医薬組成物。
【請求項７８】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが2'Oメチル修飾を有する、
請求項72〜77のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７９】
ヌクレオチドの全てよりも少しが2'Oメチル修飾を包含する、
請求項78に記載の医薬組成物。
【請求項８０】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが17個のヌクレオシド間連結部を有し、中央の6つのヌクレオシド間連結部がホスホロチオエートである、
請求項72に記載の医薬組成物。
【請求項８１】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号302に記載されている配列の少なくとも8つの隣り合う核酸塩基を含む配列に対して相補的な核酸塩基配列を有する、
請求項72〜80のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８２】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが、
mGmCmUmUmGmGG*C*A*G*G*T*mGmGmUmGmAmA/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号225）；
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号288）；および
mGmUmAmGmGmGmCmGmUG*T*G*T*G*G*mGmUmC/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号291）
からなる群から選択され、
-がホスホジエステル結合を言い、*がホスホロチオエート結合を言い、mがOメチルを言う、
請求項81に記載の医薬組成物。
【請求項８３】
医薬組成物がゲル基剤を含む、
請求項72〜82のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８４】
医薬組成物が、1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DOPC）、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、メチルパラベン、プロピルパラベン、EDTA二ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、および水の1つ以上を含む、
請求項72〜82のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８５】
医薬組成物が、少なくとも0.00007%の
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号288）、少なくとも0.0003801%のDOPC、少なくとも25%のジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、少なくとも5%のグリセリン、少なくとも1%のヒドロキシエチルセルロース、少なくとも0.15%のメチルパラベン、少なくとも0.05%のプロピルパラベン、少なくとも0.1%のEDTA二ナトリウム、少なくとも0.2%のピロ亜硫酸ナトリウム、および少なくとも68.5%の水を含む、
請求項84に記載の医薬組成物。
【請求項８６】
医薬組成物が、少なくとも0.007%の
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号288）、少なくとも0.03801%のDOPC、少なくとも25%のジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、少なくとも5%のグリセリン、少なくとも1%のヒドロキシエチルセルロース、少なくとも0.15%のメチルパラベン、少なくとも0.05%のプロピルパラベン、少なくとも0.1%のEDTA二ナトリウム、少なくとも0.2%のピロ亜硫酸ナトリウム、および少なくとも68.45%の水を含む、
請求項84に記載の医薬組成物。
【請求項８７】
医薬組成物が、少なくとも0.01419%の
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号288）、少なくとも0.2655%のDOPC、少なくとも25%のジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、少なくとも5%のグリセリン、少なくとも1%のヒドロキシエチルセルロース、少なくとも0.15%のメチルパラベン、少なくとも0.05%のプロピルパラベン、少なくとも0.1%のEDTA二ナトリウム、少なくとも0.2%のピロ亜硫酸ナトリウム、および少なくとも68.2%の水を含む、
請求項84に記載の医薬組成物。
【請求項８８】
医薬組成物が、少なくとも0.1419%の
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号288）、少なくとも2.655%のDOPC、少なくとも25%のジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、少なくとも5%のグリセリン、少なくとも1%のヒドロキシエチルセルロース、少なくとも0.15%のメチルパラベン、少なくとも0.05%のプロピルパラベン、少なくとも0.1%のEDTA二ナトリウム、少なくとも0.2%のピロ亜硫酸ナトリウム、および少なくとも65.7%の水を含む、
請求項84に記載の医薬組成物。
【請求項８９】
医薬組成物が、少なくとも1.419%の
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号288）、少なくとも26.55%のDOPC、少なくとも25%のジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、少なくとも5%のグリセリン、少なくとも1%のヒドロキシエチルセルロース、少なくとも0.15%のメチルパラベン、少なくとも0.05%のプロピルパラベン、少なくとも0.1%のEDTA二ナトリウム、少なくとも0.2%のピロ亜硫酸ナトリウム、および少なくとも40.5%の水を含む、
請求項84に記載の医薬組成物。
【請求項９０】
請求項1〜25のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドを含む、医薬組成物。
【請求項９１】
医薬組成物がさらにゲル基剤を含む、
請求項90に記載の医薬組成物。
【請求項９２】
医薬組成物が1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DOPC）、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、メチルパラベン、プロピルパラベン、EDTA二ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、および水の1つ以上を含む、
請求項90または91に記載の医薬組成物。
【請求項９３】
請求項46-54のいずれか一項に記載のmASO-SNAを含む医薬組成物。
【請求項９４】
医薬組成物がさらにゲル基剤を含む、
請求項93に記載の医薬組成物。
【請求項９５】
医薬組成物が1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DOPC）、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、メチルパラベン、プロピルパラベン、EDTA二ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、および水の1つ以上を含む、
請求項93または94に記載の医薬組成物。
【請求項９６】
障害を有する対象に、第1の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドと第2の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドとから構成されるオリゴヌクレオチドシェルを有するコアを含む、多重アンチセンスオリゴヌクレオチド球状核酸（mASO-SNA）を含む医薬組成物を、障害を処置するための有効量で投与することを含み、
コアが、脂質二重層によって取り囲まれた固体またはリポソームもしくはリポプレックス複合体コアであり、オリゴヌクレオチドシェルがコアの外面上に位置する、
障害を処置するための方法。
【請求項９７】
医薬組成物がさらにゲル基剤を含む、
請求項96に記載の方法。
【請求項９８】
医薬組成物が1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DOPC）、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、メチルパラベン、プロピルパラベン、EDTA二ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、および水の1つ以上を含む、
請求項96に記載の方法。
【請求項９９】
障害が炎症性障害である、
請求項96〜98のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
mASO-SNAが第1および第2の遺伝子の同時的なmRNAノックダウンを生ずる、
請求項96〜99のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
第1の遺伝子および第2の遺伝子がある標的経路に関連する、
請求項96〜100のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
mASO-SNAが標的経路の相加的ノックダウンを生ずる、
請求項101に記載の方法。
【請求項１０３】
障害が乾癬である、
請求項96〜102のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
炎症性障害を有する対象に、請求項1〜25のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、請求項26〜44のいずれか一項に記載のナノ構造、または請求項46〜54のいずれか一項に記載のmASO-SNAを含む医薬組成物を、炎症性障害を処置するための有効量で投与することを含む、
炎症性障害を処置するための方法。
【請求項１０５】
医薬組成物がさらにゲル基剤を含む、
請求項104に記載の方法。
【請求項１０６】
医薬組成物が、1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DOPC）、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、メチルパラベン、プロピルパラベン、EDTA二ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、および水の1つ以上を含む、
請求項104に記載の方法。
【請求項１０７】
炎症性障害が、自己免疫疾患、感染性疾患、移植拒絶または移植片対宿主病、悪性腫瘍、肺障害、腸障害、心臓障害、敗血症、脊椎関節症、代謝障害、貧血、痛み、肝障害、皮膚の障害、爪の障害、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎との組み合わせとしての乾癬、潰瘍性大腸炎、クローン病、血管炎、ベーチェット病、強直性脊椎炎、喘息、慢性閉塞性肺障害（COPD）、特発性肺線維症（IPF）、再狭窄、糖尿病、貧血、痛み、クローン病に関係する障害、若年性関節リウマチ（JRA）、C型肝炎ウイルス感染、乾癬性関節炎、および慢性尋常性乾癬からなる群から選択される、
請求項104〜106のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
炎症性障害が、関節リウマチ、リウマチ性脊椎炎、変形性関節症、痛風性関節炎、アレルギー、多発性硬化症、自己免疫性糖尿病、自己免疫性ぶどう膜炎、および腎炎症候群からなる群から選択される、
請求項104〜106のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
対象に、請求項1〜25のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、請求項26〜44のいずれか一項に記載のナノ構造、または請求項46〜54のいずれか一項に記載のmASO-SNAを含む医薬組成物を、インビボのIL-17受容体レベルを縮減するための有効量で投与することを含む、
インビボのIL-17受容体の発現レベルを縮減するための方法。
【請求項１１０】
対象が哺乳動物である、
請求項109に記載の方法。
【請求項１１１】
対象がヒトである、
請求項109に記載の方法。
【請求項１１２】
医薬組成物が少なくとも24時間に渡って対象の細胞との接触をする、
請求項109〜111に記載の方法。
【請求項１１３】
医薬組成物が外用医薬組成物である、
請求項109〜112のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１４】
細胞を、請求項1〜25のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、請求項26〜44のいずれか一項に記載のナノ構造、または請求項46〜54のいずれか一項に記載のmASO-SNAと、インビトロのIL-17Rレベルを縮減するための有効量で接触させることを含む、
インビトロのIL-17受容体（IL-17R）の発現レベルを縮減するための方法。
【請求項１１５】
細胞がヒト包皮角化細胞（HFK）である、
請求項114に記載の方法。
【請求項１１６】
細胞が、1nM、10nM、100nM、または1000nMの濃度でオリゴヌクレオチド、ナノ構造、またはmASO-SNAと接触させられる、
請求項114または115に記載の方法。
【請求項１１７】
細胞が、オリゴヌクレオチド、ナノ構造、またはmASO-SNAと24時間に渡って接触させられる、
請求項114〜116のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、2016年5月6日出願の米国仮出願通しNo.62/333,082の米国特許法第119条（e）の下における利益を請求し、その内容全体は参照によって本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
急性または慢性どちらかとして分類され得る炎症には、例えば病原体、感染、刺激物、または細胞のダメージなどの有害刺激に応答した免疫系の活性化が関与する。急性炎症は、顆粒球によって媒介され、一方で、慢性炎症は単球およびリンパ球などの単核細胞によって媒介される。
【０００３】
急性炎症のプロセスは、マクロファージ、樹状細胞、組織球、クッパー細胞、マスト細胞、血管内皮細胞、および血管平滑筋細胞などの細胞によって開始される。有害刺激の始まりに、これらの細胞は活性化を受けて、例えば炎症促進性サイトカイン、炎症促進性プロスタグランジン、ロイコトリエン、ヒスタミン、セロトニン、中性プロテアーゼ、ブラジキニン、および一酸化窒素などの炎症性媒介および増感分子を放出する。これらの炎症性分子は、局所血管系、免疫系、および損傷組織部位の細胞性および無細胞性コンポーネントが関わる複雑な一連の生物学的事象を調節して、炎症応答を伝達し、成熟させる。
【０００４】
重度のまたは長期的な刺激は、組織損傷の部位に存在する細胞の型の進行性シフトに至る慢性炎症応答をもたらす。慢性炎症は、炎症プロセスからの組織の同時的な破壊および治癒として描写され得、修復を媒介するよりもむしろ損傷を誘発するという正味の結果を有する。炎症応答は体のいずれの部位でも生起し得るので、慢性炎症は、ヒト疾患の大きい多彩な群の裏にあるさまざまな一見関連しない障害の病態生理への関与が推察される。例えば、慢性炎症は、乾癬、心血管疾患、癌、アレルギー、肥満、糖尿病、消化器系疾患、変性疾患、自己免疫障害、およびアルツハイマー病までの多様な疾患に関わる。
【発明の概要】
【０００５】
本開示は、いくつかの側面において、10-30個の連結されたヌクレオシドからなる一本鎖修飾オリゴヌクレオチド、またはその薬学的に受け入れられる塩を包含し：2つから8つの連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと；連結されたヌクレオシド同士からなる5'ウイングセグメントと；連結されたヌクレオシド同士からなる3'ウイングセグメントとを有し；ギャップセグメントは5'ウイングセグメントと3'ウイングセグメントとの間に位置し；各ウイングセグメントの少なくともいくつかのヌクレオシドは修飾ヌクレオチドを含み；ギャップセグメント内のヌクレオシド間連結部とギャップセグメントを3'ウイングセグメントに繋ぐ連結部とは全てホスホロチオエート連結部（*）であり；5'および3'ウイングセグメント両方のヌクレオシドの残りを繋ぐヌクレオシド間連結部はホスホジエステル連結部であり；オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号302の等しい長さの部分に対して相補的な10-30個の隣り合う核酸塩基からなる。
【０００６】
いくつかの態様において、一本鎖修飾オリゴヌクレオチドは17-21個の連結されたヌクレオシドからなる。他の態様において、ギャップセグメントは6つの連結されたデオキシヌクレオシドからなる。尚他の態様において、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは修飾ヌクレオチドを含む。他の態様において、修飾ヌクレオチドは2'O-メチルリボヌクレオシド（m）である。他の態様において、オリゴヌクレオチドは12個の2'O-メチルリボヌクレオシドを有する。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号302の等しい長さの部分に対して相補的な17-21個の隣り合う核酸塩基からなる。
【０００７】
1つの態様において、オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列はGCUUGGGCAGGTGGUGAA（配列番号225）である。別の態様において、オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列はCCCACAGGGGCATGUAGU（配列番号288）である。追加の態様は、GUAGGGCGUGTGTGGGUC（配列番号291）の核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを包含する。別の態様において、オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列はmGmCmUmUmGmGG*C*A*G*G*T*mGmGmUmGmAmA（配列番号225）である。さらなる態様において、オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列はmCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU（配列番号288）である。尚別の態様において、オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列はmGmUmAmGmGmGmCmGmUG*T*G*T*G*G*mGmUmC（配列番号291）である。
【０００８】
いくつかの態様において、化合物は長さ20ヌクレオチドである。
【０００９】
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドはさらに分子種を末端の1つに含む。別の態様において、化合物はさらに分子種を両方の末端に含む。
【００１０】
いくつかの態様において、分子種は、スペーサー、脂質、ステロール、コレステロール、Nアセチルガラクトサミン（GalNAc）、修飾GalNAc、誘導体化または置換GalNAc、ステアリル、C16アルキル鎖、胆汁酸、コール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸、オレイルリトコール酸、オレオイルコレン酸、糖脂質、リン脂質、スフィンゴ脂質、イソプレノイド、例えばステロイド、ビタミン、例えばビタミンE、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、脂肪酸エステル、例えばトリグリセリド、ピレン、ポルフィリン、テキサフィリン、アダマンタン、アクリジン、ビオチン、クマリン、フルオレセイン、ローダミン、Texas-Red、ジゴキシゲニン、ジメトキシトリチル、t-ブチルジメチルシリル、t-ブチルジフェニルシリル、シアニン色素（例えばCy3またはCy5）、ヘキスト33258色素、ソラレン、およびイブプロフェンからなる群から選択される。
【００１１】
他の態様において、分子種は、親油性部分；葉酸ラジカル；ステロイドラジカル；炭水化物ラジカル；ビタミンAラジカル；ビタミンEラジカル；またはビタミンKラジカルからなる群から選択される。
【００１２】
いくつかの態様において、分子種は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、およびアミド連結部からなる群から選択される連結部を介して化合物に直接的に繋がれる。
【００１３】
別の態様において、分子種はリンカーを介して化合物に間接的に繋がれる。いくつかの態様において、リンカーは非ヌクレオチド系リンカーであり、脱塩基残基（dスペーサー）、オリゴエチレングリコール、例えばトリエチレングリコール（スペーサー9）またはヘキサエチレングリコール（スペーサー18）、およびアルカンジオール、例えばブタンジオールからなる群から選択される。
【００１４】
いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドの3'末端はヘキサエチレングリコール（スペーサー18）である2つの連続したリンカーに繋がれ、第1のヘキサエチレングリコールはオリゴヌクレオチドの3'末端に繋がれ、第2のヘキサエチレングリコールは第1のヘキサエチレングリコールに繋がれ、第2のヘキサエチレングリコールはコレステロールにに繋がれる。
【００１５】
本開示の別の側面は、mGmCmUmUmGmGG*C*A*G*G*T*mGmGmUmGmAmA/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号225）を含むオリゴヌクレオチドを包含し、オリゴヌクレオチドは長さ20ヌクレオチドであり、mは2'Oメチルであり、*はホスホロチオエート修飾である。
【００１６】
本開示の追加の側面は、mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号288）を含むオリゴヌクレオチドを包含し、オリゴヌクレオチドは長さ20ヌクレオチドであり、mは2'Oメチルであり、*はホスホロチオエート修飾である。
【００１７】
本開示のさらなる側面は、
mGmUmAmGmGmGmCmGmUG*T*G*T*G*G*mGmUmC/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号291）を含むオリゴヌクレオチドを包含し、オリゴヌクレオチドは長さ20ヌクレオチドであり、mは2'Oメチルであり、*はホスホロチオエート修飾である。
【００１８】
本開示の別の側面は、安定な自己集合するナノ構造を包含し、コアの外面上に位置するインターロイキン17受容体（IL-17R、IL-17RA）を標的化した長さ18から21個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドから構成されるオリゴヌクレオチドシェルを有するコアを含む。いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは長さ18ヌクレオチドである。他の態様において、IL-17RAは配列番号302の配列を有する。
【００１９】
別の態様において、ヌクレオシド間連結部の全てよりも少しはホスホジエステルである。いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドはホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を有する。他の態様において、ヌクレオシド間連結部の全てよりも少しはホスホロチオエートである。別の態様において、オリゴヌクレオチドは立体的に濃縮された少なくとも1つのヌクレオシド間ホスホロチオエート連結部を有する。別の態様において、オリゴヌクレオチドは全て立体的に濃縮されたヌクレオシド間ホスホロチオエート連結部を有する。立体的に濃縮されたホスホロチオエート連結部はRpジアステレオマーまたはSpジアステレオマーであり得る。
【００２０】
いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは2'Oメチル修飾を有する。他の態様において、ヌクレオチドの全てよりも少しは2'Oメチル修飾を包含する。
【００２１】
いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは2'Oアルキル修飾を有する。他の態様において、ヌクレオチドの全てよりも少しは2'Oアルキル修飾を包含する。
【００２２】
いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは17個のヌクレオシド間連結部を有し、中央の6つのヌクレオシド間連結部はホスホロチオエートである。
【００２３】
いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号302に記載されている配列の少なくとも8つの隣り合う核酸塩基を含む配列に対して相補的な核酸塩基配列を有する。他の態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、
mGmCmUmUmGmGG*C*A*G*G*T*mGmGmUmGmAmA/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号225）；
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号288）；および
mGmUmAmGmGmGmCmGmUG*T*G*T*G*G*mGmUmC/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号291）からなる群から選択され、-はホスホジエステル結合を言い、*はホスホロチオエート結合を言い、mはOメチルを言う。
【００２４】
いくつかの態様において、ナノ構造はアンチセンスオリゴヌクレオチドの2-1,000コピーを包含する。他の態様において、ナノ構造は少なくとも2つの異なるアンチセンスオリゴヌクレオチドを包含する。
【００２５】
いくつかの態様において、コアは中実または中空コアである。他の態様において、コアは中実コアであり、さらに、コアを取り囲む脂質二重層を含む。別の態様において、中実コアは、金および銀を包含する貴金属、鉄およびコバルトを包含する遷移金属、シリカを包含する金属酸化物、ポリマー、またはその組み合わせから構成される。いくつかの態様において、コアはポリマー系コアであり、ポリマー系コアは、両親媒性ブロックコポリマー、ポリスチレン、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸-co-グリコール酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（カプロラクトン）を包含する疎水性ポリマー、および他の生体適合性ポリマーから構成される。
【００２６】
他の態様において、コアはリポソーム系コアである。いくつかの態様において、リポソーム系コアは1つ以上の脂質から構成され：1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DOPC）、1,2-ジミリストイル-sn-ホスファチジルコリン（DMPC）、1-パルミトイル-2-オレオイル-sn-ホスファチジルコリン（POPC）、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホ-（1'-rac-グリセロール）（DSPG）、1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホ-（1'-rac-グリセロール）（DOPG）、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DSPC）、1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DPPC）、1,2-ジ-（9Z-オクタデセノイル）-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン（DOPE）、および1,2-ジヘキサデカノイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン（DPPE）、スフィンゴ脂質、例えば、種々の長さおよび飽和状態のスフィンゴシン、スフィンゴシンリン酸、メチル化スフィンゴシンおよびスフィンガニン、セラミド、セラミドリン酸、1-Oアシルセラミド、ジヒドロセラミド、2-ヒドロキシセラミド、スフィンゴミエリン、グリコシル化スフィンゴ脂質、スルファチド、ガングリオシド、スフィンゴリン脂質、およびフィトスフィンゴシン、ならびにそれらの誘導体、リン脂質、例えば、種々の長さ、飽和状態のホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、ホスファチジン酸、リゾホスファチジン酸、環式LPA、ホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、リゾホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、リゾホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、イノシトールリン酸、LPI、カルジオリピン、リゾカルジオリピン、ビス（モノアシルグリセロ）リン酸、（ジアシルグリセロ）リン酸、エーテル脂質、ジフィタニルエーテル脂質、およびプラズマローゲン、ならびにそれらの誘導体、ステロール、例えば、異なる長さ、飽和状態のコレステロール、デスモステロール、スティグマステロール、ラノステロール、ラトステロール、ジオスゲニン、シトステロール、チモステロール、チモステノール、14-デメチル-ラノステロール、コレステロール硫酸、DHEA、硫酸DHEA、14-デメチル-14-デヒドロ（dehydr）ラノステロール、シトスタノール、カンペステロール、アニオン性エーテル脂質、カチオン性エーテル脂質、ランタニドキレート脂質、A環置換オキシステロール、B環置換オキシステロール、D環置換オキシステロール、側鎖置換オキシステロール、二重置換オキシステロール、コレスタン酸誘導体、フッ素化ステロール、蛍光ステロール、スルホン酸化ステロール、リン酸化ステロール、および多価不飽和ステロール、ならびにその誘導体から選択される。
【００２７】
本開示は、いくつかの側面において、多重アンチセンスオリゴヌクレオチド球状核酸（mASO-SNA）を包含し、第1の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドと第2の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドとから構成されるオリゴヌクレオチドシェルを有するコアを含み、コアは、脂質二重層によって取り囲まれた固体またはリポソームもしくはリポプレックス複合体コアであり、オリゴヌクレオチドシェルはコアの外面上に位置する。
【００２８】
いくつかの態様において、第1の遺伝子および第2の遺伝子はある疾患に関連する。ある態様において、疾患は炎症性障害である。別の態様において、疾患は乾癬である。
【００２９】
いくつかの態様において、第1の遺伝子および第2の遺伝子はある標的経路に関連する。
【００３０】
別の態様において、mASO-SNAは、さらに、第3の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、第1の遺伝子はインターロイキン17受容体（IL-17RA）である。他の態様において、第2の遺伝子はTNFである。いくつかの態様において、第1の遺伝子および第2の遺伝子はおよその等モル量でオリゴヌクレオチドシェル中に存在する。
【００３１】
別の態様において、mASO-SNAは、4つ以上の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。
【００３２】
本開示は、いくつかの側面において、障害を処置するための方法を提供し：障害を有する対象に、第1の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドと第2の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドとから構成されるオリゴヌクレオチドシェルを有するコアを含む、多重アンチセンスオリゴヌクレオチド球状核酸（mASO-SNA）を、障害を処置するための有効量で投与することを含み、コアは、脂質二重層によって取り囲まれた固体またはリポソームもしくはリポプレックス複合体コアであり、オリゴヌクレオチドシェルはコアの外面上に位置する。
【００３３】
いくつかの態様において、障害は炎症性障害である。
【００３４】
他の態様において、mASO-SNAは、第1および第2の遺伝子の同時的なmRNAノックダウンを生ずる。別の態様において、第1の遺伝子および第2の遺伝子はある標的経路に関連する。いくつかの態様において、mASO-SNAは標的経路の相加的ノックダウンを生ずる。
【００３５】
他の態様において、障害は乾癬である。
【００３６】
本開示の別の側面は、炎症性障害を処置するための方法を提供し、炎症性障害を有する対象に、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドまたはナノ構造を含む組成物を、炎症性障害を処置するための有効量で投与することを包含する。
【００３７】
いくつかの態様において、炎症性障害は、自己免疫疾患、感染性疾患、移植拒絶または移植片対宿主病、悪性腫瘍、肺障害、腸障害、心臓障害、敗血症、脊椎関節症、代謝障害、貧血、痛み、肝障害、皮膚の障害、爪の障害、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎との組み合わせとしての乾癬、潰瘍性大腸炎、クローン病、血管炎、ベーチェット病、強直性脊椎炎、喘息、慢性閉塞性肺障害（COPD）、特発性肺線維症（IPF）、再狭窄、糖尿病、貧血、痛み、クローン病に関係する障害、若年性関節リウマチ（JRA）、C型肝炎ウイルス感染、乾癬性関節炎、および慢性尋常性乾癬からなる群から選択される。
【００３８】
他の態様において、炎症性障害は、関節リウマチ、リウマチ性脊椎炎、変形性関節症、痛風性関節炎、アレルギー、多発性硬化症、自己免疫性糖尿病、自己免疫性ぶどう膜炎、および腎炎症候群からなる群から選択される。
【００３９】
本開示の追加の側面は、インビボのIL-17受容体の発現レベルを縮減するための方法を包含し、対象に、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドまたはナノ構造を含む組成物をインビボのIL-17受容体レベルを縮減するための有効量で投与することを包含する。
【００４０】
いくつかの態様において、第1の遺伝子、第2の遺伝子、および第3の遺伝子はある標的経路に関連する。いくつかの態様において、第1の遺伝子および第2の遺伝子同士は異なる標的経路に関連する。いくつかの態様において、第1の遺伝子、第2の遺伝子、および第3の遺伝子同士は異なる標的経路に関連する。いくつかの態様において、第1の遺伝子はインターロイキン-4受容体（IL-4R）である。いくつかの態様において、第2の遺伝子はインターロイキン-1ベータ（IL-1β）である。いくつかの態様において、第3の遺伝子は結合組織成長因子（CTGF）である。
【００４１】
いくつかの態様において、第1の遺伝子、第2の遺伝子、および第3の遺伝子はおよその等モル量でオリゴヌクレオチドシェル中に存在する。
【００４２】
別の側面に従うと、医薬組成物が本明細書において提供される。いくつかの態様において、医薬組成物は安定な自己集合するナノ構造を包含し、自己集合するナノ構造は、コアの外面上に位置するインターロイキン17受容体（IL-17R）を標的化した長さ18から21個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドから構成されるオリゴヌクレオチドシェルを有するコアを含む。
【００４３】
いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは長さ18ヌクレオチドである。いくつかの態様において、IL-17Rは配列番号302の配列を有する。
【００４４】
いくつかの態様において、ヌクレオシド間連結部の全てよりも少しはホスホジエステルである。いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドはホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を有する。いくつかの態様において、ヌクレオシド間連結部の全てよりも少しはホスホロチオエートである。
【００４５】
いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは2'Oメチル修飾を有する。いくつかの態様において、ヌクレオチドの全てよりも少しは2'Oメチル修飾を包含する。
【００４６】
いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは17個のヌクレオシド間連結部を有し、中央の6つのヌクレオシド間連結部はホスホロチオエートである。いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号302に記載されている配列の少なくとも8つの隣り合う核酸塩基を包含する配列に対して相補的な核酸塩基配列を有する。
【００４７】
いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、
mGmCmUmUmGmGG*C*A*G*G*T*mGmGmUmGmAmA/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号225）；
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号288）；および
mGmUmAmGmGmGmCmGmUG*T*G*T*G*G*mGmUmC/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号291）からなる群から選択され、-はホスホジエステル結合を言い、*はホスホロチオエート結合を言い、mはOメチルを言う。
【００４８】
いくつかの態様において、医薬組成物はゲル基剤を包含する。いくつかの態様において、医薬組成物は1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DOPC）、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、メチルパラベン、プロピルパラベン、EDTA二ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、および水の1つ以上を包含する。ある種の態様においては、医薬組成物は、少なくとも0.00007%の
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号288）、少なくとも0.0003801%のDOPC、少なくとも25%のジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、少なくとも5%のグリセリン、少なくとも1%のヒドロキシエチルセルロース、少なくとも0.15%のメチルパラベン、少なくとも0.05%のプロピルパラベン、少なくとも0.1%のEDTA二ナトリウム、少なくとも0.2%のピロ亜硫酸ナトリウム、および少なくとも68.5%の水を包含する。
【００４９】
いくつかの態様において、医薬組成物は、少なくとも0.007%の
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号288）、少なくとも0.03801%のDOPC、少なくとも25%のジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、少なくとも5%のグリセリン、少なくとも1%のヒドロキシエチルセルロース、少なくとも0.15%のメチルパラベン、少なくとも0.05%のプロピルパラベン、少なくとも0.1%のEDTA二ナトリウム、少なくとも0.2%のピロ亜硫酸ナトリウム、および少なくとも68.45%の水を包含する。
【００５０】
いくつかの態様において、医薬組成物は、少なくとも0.01419%の
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号288）、少なくとも0.2655%のDOPC、少なくとも25%のジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、少なくとも5%のグリセリン、少なくとも1%のヒドロキシエチルセルロース、少なくとも0.15%のメチルパラベン、少なくとも0.05%のプロピルパラベン、少なくとも0.1%のEDTA二ナトリウム、少なくとも0.2%のピロ亜硫酸ナトリウム、および少なくとも68.2%の水を含む。
【００５１】
いくつかの態様において、医薬組成物は、少なくとも0.1419%の
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号288）、少なくとも2.655%のDOPC、少なくとも25%のジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、少なくとも5%のグリセリン、少なくとも1%のヒドロキシエチルセルロース、少なくとも0.15%のメチルパラベン、少なくとも0.05%のプロピルパラベン、少なくとも0.1%のEDTA二ナトリウム、少なくとも0.2%のピロ亜硫酸ナトリウム、および少なくとも65.7%の水を含む。
【００５２】
いくつかの態様において、医薬組成物は、少なくとも1.419%の
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号288）、少なくとも26.55%のDOPC、少なくとも25%のジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、少なくとも5%のグリセリン、少なくとも1%のヒドロキシエチルセルロース、少なくとも0.15%のメチルパラベン、少なくとも0.05%のプロピルパラベン、少なくとも0.1%のEDTA二ナトリウム、少なくとも0.2%のピロ亜硫酸ナトリウム、および少なくとも40.5%の水を含む。
【００５３】
いくつかの態様において、医薬組成物は本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドを包含する。
【００５４】
いくつかの態様において、医薬組成物はさらにゲル基剤を包含する。いくつかの態様において、医薬（phamaceutical）組成物は1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DOPC）、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、メチルパラベン、プロピルパラベン、EDTA二ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、および水の1つ以上を包含する。
【００５５】
いくつかの態様において、医薬組成物は本明細書に記載されるmASO-SNAを包含する。
【００５６】
いくつかの態様において、医薬組成物はさらにゲル基剤を包含する。いくつかの態様において、医薬組成物は1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DOPC）、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、メチルパラベン、プロピルパラベン、EDTA二ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、および水の1つ以上を含む。
【００５７】
別の側面に従うと、医薬組成物を用いて障害を処置するための方法もまた本明細書において開示される。いくつかの態様において、障害を処置するための方法は、障害を有する対象に、第1の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドと第2の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドとから構成されるオリゴヌクレオチドシェルを有するコアを包含する、多重アンチセンスオリゴヌクレオチド球状核酸（mASO-SNA）を包含する医薬組成物を、障害を処置するための有効量で投与することを含み、コアは、脂質二重層によって取り囲まれた固体またはリポソームもしくはリポプレックス複合体コアであり、オリゴヌクレオチドシェルはコアの外面上に位置する。
【００５８】
いくつかの態様において、医薬組成物はさらにゲル基剤を含む。いくつかの態様において、医薬組成物は1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DOPC）、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、メチルパラベン、プロピルパラベン、EDTA二ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、および水の1つ以上を含む。
【００５９】
いくつかの態様において、障害は炎症性障害である。
【００６０】
いくつかの態様において、mASO-SNAは第1および第2の遺伝子の同時的なmRNAノックダウンを生ずる。いくつかの態様において、第1の遺伝子および第2の遺伝子はある標的経路に関連する。いくつかの態様において、mASO-SNAは標的経路の相加的ノックダウンを生ずる。
【００６１】
いくつかの態様において、障害は乾癬である。
【００６２】
別の側面に従うと、医薬組成物を用いて炎症性障害を処置するための方法もまた本明細書において開示される。いくつかの態様において、炎症性障害を処置するための方法は、炎症性障害を有する対象に、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド、ナノ構造、またはmASO-SNAを包含する医薬組成物を、炎症性障害を処置するための有効量で投与することを包含する。
【００６３】
いくつかの態様において、医薬組成物はさらにゲル基剤を包含する。いくつかの態様において、医薬組成物は1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DOPC）、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Transcutol P）、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、メチルパラベン、プロピルパラベン、EDTA二ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、および水の1つ以上を包含する。
【００６４】
いくつかの態様において、炎症性障害は、自己免疫疾患、感染性疾患、移植拒絶または移植片対宿主病、悪性腫瘍、肺障害、腸障害、心臓障害、敗血症、脊椎関節症、代謝障害、貧血、痛み、肝障害、皮膚の障害、爪の障害、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎との組み合わせとしての乾癬、潰瘍性大腸炎、クローン病、血管炎、ベーチェット病、強直性脊椎炎、喘息、慢性閉塞性肺障害（COPD）、特発性肺線維症（IPF）、再狭窄、糖尿病、貧血、痛み、クローン病に関係する障害、若年性関節リウマチ（JRA）、C型肝炎ウイルス感染、乾癬性関節炎、および慢性尋常性乾癬からなる群から選択される。
【００６５】
いくつかの態様において、炎症性障害は、関節リウマチ、リウマチ性脊椎炎、変形性関節症、痛風性関節炎、アレルギー、多発性硬化症、自己免疫性糖尿病、自己免疫性ぶどう膜炎、および腎炎症候群からなる群から選択される。
【００６６】
別の側面に従うと、インビボのIL-17受容体の発現を縮減するための方法が本明細書において提供される。いくつかの態様において、インビボのIL-17受容体の発現レベルを縮減するための方法は、対象に、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド、ナノ構造、またはmASO-SNAを包含する医薬組成物を、インビボのIL-17受容体レベルを縮減するための有効量で投与することを包含する。
【００６７】
いくつかの態様において、対象は哺乳動物である。いくつかの態様において、対象はヒトである。
【００６８】
いくつかの態様において、医薬組成物は少なくとも24時間に渡って対象の細胞との接触をする。
【００６９】
いくつかの態様において、医薬組成物は外用医薬組成物である。
【００７０】
別の側面に従うと、インビトロのIL-17受容体（IL-17R）の発現レベルを縮減するための方法が本明細書において提供される。
【００７１】
いくつかの態様において、インビトロのIL-17Rの発現レベルを縮減するための方法は、細胞を、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド、ナノ構造、またはmASO-SNAと、インビトロのIL-17Rレベルを縮減するための有効量で接触させることを包含する。
【００７２】
いくつかの態様において、細胞はヒト包皮角化細胞（HFK）である。
【００７３】
いくつかの態様において、細胞は、オリゴヌクレオチド、ナノ構造、またはmASO-SNAと1nM、10nM、100nM、または1000nMの濃度で接触させられる。
【００７４】
いくつかの態様において、細胞は、オリゴヌクレオチド、ナノ構造、またはmASO-SNAと24時間に渡って接触させられる。
【００７５】
本発明の限定のそれぞれは本発明の種々の態様を包摂し得る。ゆえに、いずれか1つの要素または要素の組み合わせが関わる本発明の限定のそれぞれは、本発明の各側面に包含され得るということが予期されている。本発明は、その適用において、次の記載において提出または図面において図解されているコンポーネントの構築および配置の詳細に限定されない。本発明は、他の態様、および種々のやり方で実践または実行されることができる。
【図面の簡単な説明】
【００７６】
付随する図面は同縮尺で描画されることを意図されてはいない。図面において、種々の図において図解されている同一のまたは同一に近い各コンポーネントは、同類の数字によって表される。明瞭性の目的のために、あらゆる図面においてあらゆるコンポーネントが標識されるわけではなくあり得る。図面において：
【図１】図1は、標的化SNAを用いるインビトロのIL-17RA mRNAノックダウンを図示している。IL-17RA mRNA発現は、IL-17RAを標的化するASO配列を提示するSNAによって処置されたHFK細胞においては減少している。コントロールSNAによって処置された細胞は、IL-17RA mRNA発現のはっきりした減少を実証していない。
【図２】図2は、ヒト皮膚相当物EpiDerm-FT（商標）における外用適用される標的化SNAを用いるIL-17RA mRNAノックダウンを示している。IL-17RA mRNA発現は、ASO IL17RA_219またはASO IL17RA_282どちらかを提示するSNAによって48時間に渡って外用処置されたヒト皮膚相当物組織においては減少している。コントロールASOを提示するSNAによって処置された組織は、qRT-PCRによって測定されるIL-17RA mRNA発現のはっきりした減少を実証していない。示されているデータは、行われた2つの独立した実験を表している。
【図３】図3は、ヒト皮膚外植片における外用適用される標的化SNAを用いるエクスビボのIL-17RA mRNAノックダウンを示している。IL-17RA mRNA発現は、ASO IL17RA_219またはASO IL17RA_282どちらかを提示するSNAによって96時間に渡って外用処置されたヒト皮膚外植片生検においては減少している。コントロールASOを提示するSNAによって処置された生検は、qRT-PCRによって測定されるIL-17RA mRNA発現のはっきりした減少を実証していない。
【図４】図4はSNAの混合物を用いるTNF mRNAノックダウンを示している。TNF mRNA発現は、抗TNF-SNAおよび抗IL17RA-SNAの混合物によって処置されたHFK細胞においては減少している。コントロールSNAによって処置された細胞は、TNF mRNAレベルのはっきりした減少を実証していない。示されているデータは、行われた2つの独立した実験を表している。
【図５】図5は、SNAの混合物を用いるIL17RA mRNAノックダウンを示している。IL17RA mRNA発現は、抗TNF-SNAおよび抗IL17RA-SNAの混合物によって処置されたHFK細胞においては減少している。コントロールSNAによって処置された細胞は、TNF mRNAレベルのはっきりした減少を実証していない。示されているデータは、行われた2つの独立した実験を表している。
【図６】図6A-6Dは多重化SNAの構成を示している。リポソームを次の構成で表面機能化した：（図6A）33%TNF-ASO（A）および66%コントロール（D）；（図6B）33%IL17RA-ASO（B）および66%コントロール（D）；（図6C）33%TNF-ASO（A）、33%IL17RA-ASO（B）、および33%コントロール（D）；（図6D）100%コントロール（D）。
【図７】図7は多重化SNAを用いるTNF mRNAノックダウンの比較を示している。TNF mRNA発現は、抗TNF-SNAならびに抗TNFおよび抗IL17RA ASOを含有する多重化SNAによって処置されたHFK細胞においては減少している。抗IL17RA-SNAによって処置された細胞は、TNF mRNAレベルのはっきりした減少を実証していない。示されているデータは、行われた2つの独立した実験を表している。
【図８】図8は、相加的ノックダウン効果を実証する多重化SNAを用いるIL17RA mRNAノックダウンの比較を示している。IL17RA mRNA発現は、抗IL17RA-SNAならびに抗TNFおよび抗IL17RA ASOを含有する多重化SNAによって処置されたHFK細胞においては減少している。おそらくはTNFおよびIL17RAの関係する生物学的シグナル伝達経路が原因で、抗TNF-SNAによって処置された細胞は軽微な減少を実証している。細胞が抗IL17RA-SNAによって処置されたときには、より優れたIL17RA mRNAノックダウンが観察されている。TNFおよびIL17RA両方を標的化する多重化SNAは相加的効果を有し、抗TNFまたは抗IL17RAのみを標的化するSNAが単独で用いられたときよりも、IL17RA mRNAの優れたノックダウンを示している。示されているデータは、行われた少なくとも2つの独立した実験を表している。
【図９】図9はIL-17RA mRNA発現の阻害を図示している。グラフは、qRT-PCRによって測定される24時間処置後の健康なヒト皮膚外植片におけるIL-17RA mRNA発現を示している（未処置のパーセント±SEM）。各薬製品処置群、n=9サンプル。未処置群、n=8サンプル。一元配置ANOVA、31 DF、p=0.0011（未処置に対して0.007%）および****0%ゲルに対してp＜0.0001。
【図１０】図10はIL-17RA蛋白質発現の阻害を図示している。グラフは、ウエスタンブロットによって測定される、表3に記載されている製剤としてのIL17RA_282による24時間処置後の健康なヒト皮膚外植片におけるIL-17RA蛋白質発現を示している（未処置のパーセント）。各群とも、プールしたサンプル。
【図１１】図11はIL-17RA mRNA発現の阻害を示している。基剤と比較して*p＜0.05；**p＜0.01；****p＜0.0001。1標本t検定を用いた。
【図１２】図12A-12Dは多重化SNAの構成を示している。リポソームを次の構成で表面機能化した：一重SNA（図12A）；2つの標的化アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する多重SNA（図12B）；3つの標的化アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する多重SNA（図12C）；非標的化コントロールSNA（図12D）。
【図１３】図13は、種々の多重SNA構成によって処置された細胞におけるIL4R mRNAの阻害を示している。リポソームを種々の標的化アンチセンスオリゴヌクレオチド（単数もしくは複数）またはコントロールオリゴヌクレオチドによって表面機能化した。IL4R mRNAの発現は、細胞がIL4Rを標的化するSNAによって処置されたときに目立って縮減されている。コントロールSNAおよび非標的化オリゴヌクレオチドによって機能化されたSNAは、IL4R mRNA発現を同じ程度まで縮減しない。
【図１４】図14は、種々の多重SNA構成によって処置された細胞におけるIL1b mRNAの阻害を示している。リポソームを種々の標的化アンチセンスオリゴヌクレオチド（単数もしくは複数）またはコントロールオリゴヌクレオチドによって表面機能化した。IL1b mRNAの発現は、細胞がIL1bを標的化するSNAによって処置されたときに目立って縮減されている。コントロールSNAおよび非標的化オリゴヌクレオチドによって機能化されたSNAは、IL1b mRNA発現を同じ程度まで縮減しない。
【図１５】図15は、種々の多重SNA構成によって処置された細胞におけるCTGF mRNAの阻害を示している。リポソームを種々の標的化アンチセンスオリゴヌクレオチド（単数もしくは複数）またはコントロールオリゴヌクレオチドによって表面機能化した。CTGF mRNAの発現は、細胞がCTGFを標的化するSNAによって処置されたときに目立って縮減されている。コントロールSNAおよび非標的化オリゴヌクレオチドによって機能化されたSNAは、CTGF mRNA発現を同じ程度まで縮減しない。
【発明を実施するための形態】
【００７７】
本発明は、いくつかの側面において、全身性炎症に関わる細胞シグナル伝達蛋白質受容体、インターロイキン17受容体（IL-17RA）のアンチセンス阻害剤に関する。IL-17およびその標的受容体IL-17RAは、乾癬において重要な役割を果たす。IL-17はIL-17RAに結合することによってその効果を誘起し、これらの後者はほぼ専ら表皮内の角化細胞に発現されている。アンチセンステクノロジーは、メッセンジャーRNA（mRNA）を標的化しmRNAの翻訳を防止することによって特定の遺伝子産物の発現を縮減するための有用な手段である。しかしながら、特異的な治療上機能的なアンチセンスオリゴヌクレオチド（ASO）の選択は難題であり得る。さらに、直鎖状形態で治療上活性であるASOは、ナノ粒子または三次元提示フォーマットの他の型として製剤化されたときに必ずしも活性を保持しない。
【００７８】
本発明の側面においては、適当な構造特性を有するアンチセンスオリゴヌクレオチド（ASO）によって表面機能化された球状核酸（SNA）が、意図される標的mRNAの高度に有効な遺伝子ノックダウンを媒介し得るということが発見された。例えば、IL-17RA発現が、初代ヒト包皮角化細胞（HFK）において、ヒトIL-17RA（例えばGeneBankアクセッション番号NM_014339.6を見よ）mRNAを標的化するSNA（抗IL17RA-SNA）の使用によって、関連する毒性または免疫刺激性効果なしに阻害され得るということが本明細書において実証されている。さらに、抗IL-17RA SNAがヒト皮膚相当物モデルおよびヒト皮膚外植片においてmRNA発現を阻害するということが示されている。いくつかの態様において、応答、抗IL-17RA SNAはIL-17RA mRNA発現をドーズ依存的な様式で阻害する。本明細書に記載されるように、SNA幾何構造中に配置されたオリゴヌクレオチドは向上した透過および増大した細胞取り込みを見せる。
【００７９】
異なる治療標的を指向する異なるASO同士を有する多重SNAが有意な標的ノックダウンおよび治療効果を生じ得るということもまた発見された。それらが他のASOの活性に干渉しないやり方で、特定の量の異なるASO同士をあるSNAの表面上に担持させる能力は、意外であった。実施例において示されているように、抗IL-17RA-SNAが抗TNF-SNAと混合され、細胞に共に投与されたときには、各標的化された遺伝子の同時的なmRNAノックダウンが達成された。加えて、それぞれが異なるmRNAを標的化する2つ以上のASO配列を同じ粒子上において提示するSNAが細胞に投与されたときには、単一の粒子を用いて標的化される各遺伝子の同時的なmRNAノックダウンが同じ細胞において達成された。これらのSNAは多重化ASO-SNA（mASO-SNA）と言われる。さらにその上、mASO-SNAが、ある関係する生物学的経路に関わる遺伝子の2つのmRNAを標的化するASOによって多重化されたときには、相加的ノックダウン効果が観察された。2つのASOの共の提示は他の共に提示されたASOの活性に干渉しなかったのみならず、ある共通の経路を標的化するときには、mASO-SNAによって観察される治療効果はどちらかのASO-SNA単独によって観察されるよりも優れていた。
【００８０】
本発明は、いくつかの側面において、IL-17RAを縮減するための組成物、およびそれらの組成物を用いて炎症性障害を処置するための方法に関する。高度に有効なIL-17RA阻害剤が本発明の側面に従って同定された。IL-17RA阻害剤は核酸に基づくアンチセンス組成物である。用語「IL-17RA」はサイトカインIL-17の受容体を言う。
【００８１】
本明細書において用いられる「IL-17RA阻害剤」は、IL-17RA活性に干渉する核酸に基づく薬剤を言う。特に、本発明のIL-17RAアンチセンス阻害剤またはIL-17RAアンチセンスオリゴヌクレオチドはIL-17RA遺伝子の発現を縮減する。IL-17RA遺伝子の発現を縮減することによって、内在性IL-17は受容体とのその相互作用を介する細胞シグナル伝達を促進することが能わない。IL-17RAがIL-17への結合のために利用可能であるときには、IL17RAは活性化され、炎症性ケモカインおよびサイトカイン、例えばCXCL1、CXCL8／IL8、およびIL6の発現の誘導に至る。これらのシグナル伝達カスケードは本発明のASO-SNAを用いてブロッキングされ得る。
【００８２】
本発明のIL17RA阻害剤はアンチセンス核酸である。アンチセンス核酸は、典型的には修飾または未修飾のRNA、DNA、または混合ポリマー核酸を包含し、一次的にはマッチする配列に特異的に結合することによって機能し、ペプチド合成の調節をもたらす。アンチセンス核酸はワトソン・クリック塩基対形成によって標的RNAに結合し、立体障害的にブロッキングによってまたはRNase H酵素を活性化することによってどちらかで、結合された配列のリボソーム翻訳を防止することによって遺伝子発現をブロッキングする。アンチセンス分子は、RNAプロセシングまたは核から細胞質への輸送に干渉することによってもまた蛋白質合成を変改し得る。
【００８３】
いくつかの態様において、本発明は、インターロイキン-4受容体（IL-4R）（例えばGenBank：NM_000418（配列番号306）を見よ）を縮減するための組成物と、それらの組成物を用いて炎症性障害を処置するための方法とに関する。本発明の側面に従って、高度に有効なIL-4R阻害剤が同定された。IL-4R阻害剤は核酸に基づくアンチセンス組成物である。用語「IL-4R」はサイトカインIL-4またはIL-13の受容体を言う。
【００８４】
本明細書において用いられる「IL-4R阻害剤」はIL-4R活性に干渉する核酸に基づく薬剤を言う。特に、本発明のIL-4Rアンチセンス阻害剤またはIL-4RアンチセンスオリゴヌクレオチドはIL-4R遺伝子の発現を縮減する。いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは長さ18ヌクレオチドである。他の態様において、IL-17RAは配列番号302の配列を有する。IL-4R遺伝子の発現を縮減することによって、内在性IL-4またはIL-13は受容体とのその相互作用を介する細胞シグナル伝達を促進することが能わない。IL-4RがIL-4またはIL-13への結合のために利用可能であるときには、IL-4Rは活性化され、JAK1/2/3-STAT6経路へのカップリングに至る。IL4応答はTh2分化を促進することに関わっている。IL-4/IL-13応答は、IgE産生ならびにアレルギー性炎症の部位におけるケモカインおよび粘液産生を制御することに関わっている。ある種の細胞型においては、インスリン受容体基質IRS1/IRS2の活性化を介してシグナル伝達し得る。可溶性IL4R（sIL4R）はIL4によって媒介される細胞増殖とT細胞によるIL5上方制御とを阻害する（Keegan et al., Cell (1994) 76:811-820）。これらのシグナル伝達カスケードは本発明のASO-SNAを用いてブロッキングされ得る。
【００８５】
本発明のIL-4R阻害剤はアンチセンス核酸である。アンチセンス核酸は、典型的には修飾または未修飾のRNA、DNA、または混合ポリマー核酸を包含し、一次的にはマッチする配列に特異的に結合することによって機能し、ペプチド合成の調節をもたらす。アンチセンス核酸はワトソン・クリック塩基対形成によって標的RNAに結合し、立体障害的なブロッキングによってまたはRNase H酵素を活性化することによってどちらかで、結合された配列のリボソーム翻訳を防止することによって遺伝子発現をブロッキングする。アンチセンス分子は、RNAプロセシングまたは核から細胞質への輸送に干渉することによってもまた蛋白質合成を変改し得る。
【００８６】
いくつかの態様において、本発明は、インターロイキン-1ベータ（IL-1β）（例えばGenBank：NM_000576（配列番号307）を見よ）を縮減するための組成物と、それらの組成物を用いて炎症性障害を処置するための方法とに関する。本発明の側面に従って、高度に有効なIL-1β阻害剤が同定された。IL-1β阻害剤は核酸に基づくアンチセンス組成物である。用語「IL-1β」は、最初は主要な内在性発熱物質として発見された炎症促進性サイトカインを言い、プロスタグランジン合成、好中球流入および活性化、T細胞活性化およびサイトカイン産生、B細胞活性化および抗体産生、ならびに線維芽細胞増殖およびコラーゲン産生を誘導する。T細胞のTh17分化を促進する。
【００８７】
本明細書において用いられる「IL-1β阻害剤」は、IL-1β活性に干渉する核酸に基づく薬剤を言う。特に、本発明のIL-1βアンチセンス阻害剤またはIL-1βアンチセンスオリゴヌクレオチドはIL-1β遺伝子の発現を縮減する。IL-1β遺伝子の発現を縮減することによって、シグナル伝達は縮減されるかまたは実行されない（Van Damme et al., Nature (1985) 314:266-268；Piccioli et al., Semin Immunol (2013) 25(6):425-9）。IL-1βが関わるシグナル伝達カスケードは本発明のASO-SNAを用いてブロッキングされ得る。
【００８８】
本発明のIL-1β阻害剤はアンチセンス核酸である。アンチセンス核酸は、典型的には修飾または未修飾のRNA、DNA、または混合ポリマー核酸を包含し、一次的にはマッチする配列に特異的に結合することによって機能し、ペプチド合成の調節をもたらす。アンチセンス核酸はワトソン・クリック塩基対形成によって標的RNAに結合し、立体障害的なブロッキングによってまたはRNase H酵素を活性化することによってどちらかで、結合された配列のリボソーム翻訳を防止することによって遺伝子発現をブロッキングする。アンチセンス分子は、RNAプロセシングまたは核から細胞質への輸送に干渉することによってもまた蛋白質合成を変改し得る。
【００８９】
いくつかの態様において、本発明は、結合組織成長因子（CTGF）（例えばGenBank：NM_001901（配列番号308）を見よ）を縮減するための組成物と、それらの組成物を用いて障害（例えば、アテローム性動脈硬化、肺および腎線維化障害、ならびに癌）を処置するための方法とに関する。本発明の側面に従って、高度に有効なCTGF阻害剤が同定された。CTGF阻害剤は核酸に基づくアンチセンス組成物である。用語「CTGF」は、細胞（例えば、血管内皮細胞）によって分泌される結合組織誘引・分裂促進因子を言い、これは、とりわけ、軟骨細胞の増殖および分化を促進し；線維芽細胞、筋線維芽細胞、内皮および上皮細胞を包含する多くの細胞型において、ヘパリンおよび二価カチオン依存性の細胞接着を媒介し；線維芽細胞成長因子によって誘導されるDNA合成を向上させる。
【００９０】
本明細書において用いられる「CTGF阻害剤」はCTGF活性に干渉する核酸に基づく薬剤を言う。特に、本発明のCTGFアンチセンス阻害剤またはCTGFアンチセンスオリゴヌクレオチドはCTGF遺伝子の発現を縮減する。CTGF遺伝子の発現を縮減することによって、細胞シグナル伝達は促進されない。例えば、CTGFは成長因子、表面受容体、およびマトリックスコンポーネントと相互作用し、その幅広い発現が原因で胚発生ならびに正常な細胞および結合組織機能の維持において重要な役割を有する。CTGFは損傷後の組織修復にとってもまた重要であり、アテローム性動脈硬化、肺および腎線維化障害、ならびに癌を包含する広く知られた疾患への関与が推察されている（de Winter et al., Growth Factors (2008) 26(2):80-91）。CTGFが関わるシグナル伝達カスケードは本発明のASO-SNAを用いてブロッキングされ得る。
【００９１】
本発明のCTGF阻害剤はアンチセンス核酸である。アンチセンス核酸は、典型的には修飾または未修飾のRNA、DNA、または混合ポリマー核酸を包含し、一次的にはマッチする配列に特異的に結合することによって機能し、ペプチド合成の調節をもたらす。アンチセンス核酸はワトソン・クリック塩基対形成によって標的RNAに結合し、立体障害的なブロッキングによってまたはRNase H酵素を活性化することによってどちらかで、結合された配列のリボソーム翻訳を防止することによって遺伝子発現をブロッキングする。アンチセンス分子は、RNAプロセシングまたは核から細胞質への輸送に干渉することによってもまた蛋白質合成を変改し得る。
【００９２】
本明細書において用いられる用語「アンチセンス核酸」または「アンチセンスオリゴヌクレオチド」は、生理条件下において、具体的な遺伝子を含むDNAまたはその遺伝子のmRNA転写物、このケースではIL17RAにハイブリダイゼーションし、それによってその遺伝子の転写および／またはそのmRNAの翻訳を阻害する核酸を言い表している。アンチセンス分子は、標的遺伝子または転写物とのハイブリダイゼーションによって標的遺伝子の転写または翻訳に干渉するように設計される。当業者は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの厳密な長さとその標的に対するその相補性の度合いとが、標的の配列とその配列を含む具体的な塩基とを包含する、選択される特定の標的に依存するであろうということを認識するであろう。
【００９３】
「遺伝子発現の阻害」は、IL17RA遺伝子などの標的遺伝子からの蛋白質および／またはmRNA産物の非存在またはレベルの観察可能な減少を言う。「特異性」は、細胞の他の遺伝子への明白な効果なしに標的遺伝子を阻害する能力を言う。阻害の帰結は、細胞もしくは生物の外面的特性の検討によって、または生化学的技術、例えばRNA溶液ハイブリダイゼーション、ヌクレアーゼ保護、ノザンハイブリダイゼーション、逆転写、マイクロアレイによる遺伝子発現モニタリング、抗体結合、酵素結合免疫吸着法（ELISA）、ウエスタンブロッティング、ラジオイムノアッセイ（RIA）、他のイムノアッセイ、および蛍光活性化細胞分析（FACS）によって、確認され得る。
【００９４】
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドはIL17RA発現を阻害する。アッセイに依存して、遺伝子発現の量の定量化は、人が、本発明に従って処置されていない細胞と比較して5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、または99%よりも優れた阻害の度合いを決定することを許す。例として、阻害の効率は細胞内の遺伝子産物の量を算定することによって決定され得る。
【００９５】
本明細書に記載されるASOはその生物学的同等な化合物、塩、およびプロドラッグを包含する。本明細書において用いられる、薬学的に受け入れられる塩およびプロドラッグを包含する用語生物学的同等な化合物は、肝心のアンチセンスオリゴヌクレオチドと同じ一次構造を有するが、肝心のアンチセンスオリゴヌクレオチドと同じ型の生物学的効果を有するように切断または修飾され得る塩形態または構造を包含する、アンチセンスオリゴヌクレオチドを言う。これは、ヒトを包含する動物への投与によって生物学的に活性な代謝物質またはその残基を（直接的または間接的に）提供することができる、いずれかの薬学的に受け入れられる塩、エステル、もしくはかかるエステルの塩、またはいずれかの他の化合物を包摂することが意図されている。
【００９６】
「薬学的に受け入れられる塩」は、本発明の核酸の生理的および薬学的に受け入れられる塩：すなわち、肝心の化合物の所望の生物学的活性を保持し、望まれない毒物学的効果をそれに付与しない塩である。薬学的に受け入れられる塩は、（a）カチオン、例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、マグネシウム、カルシウム、ポリアミン、例えばスペルミンおよびスペルミジンなどによって形成される塩；（b）無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、および同類によって形成される酸付加塩；（c）例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸、および同類などの有機酸によって形成される塩；ならびに（d）元素アニオン、例えば塩素、臭素、およびヨウ素によって形成される塩を包含するが、これに限定されない。
【００９７】
本発明の化合物は「プロドラッグ」形態で送達されるようにもまた調製され得る。「プロドラッグ」は不活性形態で調製される治療薬剤であり、これが体またはその細胞内において内在性酵素もしくは他の化学物質および／または条件の作用によって活性形態（すなわち薬）に変換される。
【００９８】
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドはIL17RAアンチセンスオリゴヌクレオチドである。アンチセンスIL17RAオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドが典型的にはワトソン・クリック塩基対形成によってIL17RA標的mRNA配列にハイブリダイゼーションして、標的配列内にRNA：オリゴマーヘテロ2重鎖を形成することを許す、ヌクレオチド塩基の配列とサブユニットからサブユニットへのバックボーンとを有する化合物を言う。
【００９９】
その標的核酸IL17RA mRNAとのアンチセンスオリゴヌクレオチドの特異的ハイブリダイゼーションは、IL17RA mRNAの正常な機能に干渉する。それに特異的にハイブリダイゼーションする化合物による標的核酸の機能の調節は一般的に「アンチセンス」と言われる。干渉されるべきDNAの機能は複製および転写を包含する。干渉されるべきRNAの機能は、例えば蛋白質翻訳の部位へのRNAの移動、RNAからの蛋白質の翻訳、1つ以上のmRNA種を生むためのRNAのスプライシング、およびRNAによって実行または容易化され得る触媒活性などの、全ての不可欠な機能を包含する。標的核酸機能へのかかる干渉の総体的な効果はIL17RA蛋白質の発現の調節である。本発明の文脈において、「調節」は遺伝子の発現の減少または阻害を意味する。
【０１００】
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドが生理条件下においてIL17RA標的にハイブリダイゼーションし、実質的に37℃よりも優れ、好ましくは少なくとも45℃、典型的には50℃-80℃、またはより高い熱融解温度（Tm）を有する場合には、標的ポリヌクレオチドに「特異的にハイブリダイゼーションする」。かかるハイブリダイゼーションは好ましくは厳しいハイブリダイゼーション条件に対応し、定められたイオン強度およびpHにおける特異的配列のTmよりも約10℃、好ましくは約50℃低いように選択される。所与のイオン強度およびpHにおいて、Tmは標的配列の50%が相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイゼーションする温度である。
【０１０１】
ポリヌクレオチド同士は、ハイブリダイゼーションが2つの一本鎖ポリヌクレオチド間において逆平行構成で生起するときに、互いに「相補的」と言い表される。二本鎖ポリヌクレオチドは、ハイブリダイゼーションが第1のポリヌクレオチドの鎖の1つと第2のものとの間において生起し得る場合に、別のポリヌクレオチドに対して「相補的」であり得る。相補性（1つのポリヌクレオチドが別のものに対して相補的である度合い）は、一般的に認められた塩基対形成ルールに従って互いと水素結合を形成すると予想される対向する鎖同士の塩基の割合に換算して定量可能である。アンチセンス化合物は、2つの塩基配列同士が100%相補的ではない場合でさえも、化合物および転写物の間に形成されるヘテロ2重鎖構造が所望のTm安定性を有する限りは、標的転写物の標的領域に対して相補的であり得る。
【０１０２】
具体的な核酸を標的化するアンチセンスオリゴヌクレオチドを同定することはマルチステッププロセスであり得る。プロセスは、通常はその機能が調節されるべき核酸配列の同定から始まる。これは、例えば、その発現が具体的な炎症性の障害または疾患状態に関連する細胞の遺伝子（または遺伝子から転写されるmRNA）であり得る。標的化プロセスは、所望の効果、例えば蛋白質の発現の検出または調節がもたらされるようにアンチセンス相互作用が生起するためのこのIL17RA遺伝子内の部位（単数または複数）の決定をもまた包含する。
【０１０３】
いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトインターロイキン17受容体（IL-17RA）、例えば、下で提出されているインターロイキン17受容体A（IL-17RA）に対応する配列番号302のヌクレオチド配列を標的化するように設計される。ヒトIL-17RA cDNA配列はGenbankアクセッション番号NM_014339で開示されている。
1 ctgggcccgg gctggaagcc ggaagcgagc aaagtggagc cgactcgaac tccaccgcgg
61 aaaagaaagc ctcagaacgt tcgttcgctg cgtccccagc cggggccgag ccctccgcga
121 cgccagccgg gccatggggg ccgcacgcag cccgccgtcc gctgtcccgg ggcccctgct
181 ggggctgctc ctgctgctcc tgggcgtgct ggccccgggt ggcgcctccc tgcgactcct
241 ggaccaccgg gcgctggtct gctcccagcc ggggctaaac tgcacggtca agaatagtac
301 ctgcctggat gacagctgga ttcaccctcg aaacctgacc ccctcctccc caaaggacct
361 gcagatccag ctgcactttg cccacaccca acaaggagac ctgttccccg tggctcacat
421 cgaatggaca ctgcagacag acgccagcat cctgtacctc gagggtgcag agttatctgt
481 cctgcagctg aacaccaatg aacgtttgtg cgtcaggttt gagtttctgt ccaaactgag
541 gcatcaccac aggcggtggc gttttacctt cagccacttt gtggttgacc ctgaccagga
601 atatgaggtg accgttcacc acctgcccaa gcccatccct gatggggacc caaaccacca
661 gtccaagaat ttccttgtgc ctgactgtga gcacgccagg atgaaggtaa ccacgccatg
721 catgagctca ggcagcctgt gggaccccaa catcaccgtg gagaccctgg aggcccacca
781 gctgcgtgtg agcttcaccc tgtggaacga atctacccat taccagatcc tgctgaccag
841 ttttccgcac atggagaacc acagttgctt tgagcacatg caccacatac ctgcgcccag
901 accagaagag ttccaccagc gatccaacgt cacactcact ctacgcaacc ttaaagggtg
961 ctgtcgccac caagtgcaga tccagccctt cttcagcagc tgcctcaatg actgcctcag
1021 acactccgcg actgtttcct gcccagaaat gccagacact ccagaaccaa ttccggacta
1081 catgcccctg tgggtgtact ggttcatcac gggcatctcc atcctgctgg tgggctccgt
1141 catcctgctc atcgtctgca tgacctggag gctagctggg cctggaagtg aaaaatacag
1201 tgatgacacc aaatacaccg atggcctgcc tgcggctgac ctgatccccc caccgctgaa
1261 gcccaggaag gtctggatca tctactcagc cgaccacccc ctctacgtgg acgtggtcct
1321 gaaattcgcc cagttcctgc tcaccgcctg cggcacggaa gtggccctgg acctgctgga
1381 agagcaggcc atctcggagg caggagtcat gacctgggtg ggccgtcaga agcaggagat
1441 ggtggagagc aactctaaga tcatcgtcct gtgctcccgc ggcacgcgcg ccaagtggca
1501 ggcgctcctg ggccgggggg cgcctgtgcg gctgcgctgc gaccacggaa agcccgtggg
1561 ggacctgttc actgcagcca tgaacatgat cctcccggac ttcaagaggc cagcctgctt
1621 cggcacctac gtagtctgct acttcagcga ggtcagctgt gacggcgacg tccccgacct
1681 gttcggcgcg gcgccgcggt acccgctcat ggacaggttc gaggaggtgt acttccgcat
1741 ccaggacctg gagatgttcc agccgggccg catgcaccgc gtaggggagc tgtcggggga
1801 caactacctg cggagcccgg gcggcaggca gctccgcgcc gccctggaca ggttccggga
1861 ctggcaggtc cgctgtcccg actggttcga atgtgagaac ctctactcag cagatgacca
1921 ggatgccccg tccctggacg aagaggtgtt tgaggagcca ctgctgcctc cgggaaccgg
1981 catcgtgaag cgggcgcccc tggtgcgcga gcctggctcc caggcctgcc tggccataga
2041 cccgctggtc ggggaggaag gaggagcagc agtggcaaag ctggaacctc acctgcagcc
2101 ccggggtcag ccagcgccgc agcccctcca caccctggtg ctcgccgcag aggagggggc
2161 cctggtggcc gcggtggagc ctgggcccct ggctgacggt gccgcagtcc ggctggcact
2221 ggcgggggag ggcgaggcct gcccgctgct gggcagcccg ggcgctgggc gaaatagcgt
2281 cctcttcctc cccgtggacc ccgaggactc gccccttggc agcagcaccc ccatggcgtc
2341 tcctgacctc cttccagagg acgtgaggga gcacctcgaa ggcttgatgc tctcgctctt
2401 cgagcagagt ctgagctgcc aggcccaggg gggctgcagt agacccgcca tggtcctcac
2461 agacccacac acgccctacg aggaggagca gcggcagtca gtgcagtctg accagggcta
2521 catctccagg agctccccgc agccccccga gggactcacg gaaatggagg aagaggagga
2581 agaggagcag gacccaggga agccggccct gccactctct cccgaggacc tggagagcct
2641 gaggagcctc cagcggcagc tgcttttccg ccagctgcag aagaactcgg gctgggacac
2701 gatggggtca gagtcagagg ggcccagtgc atgagggcgg ctccccaggg accgcccaga
2761 tcccagcttt gagagaggag tgtgtgtgca cgtattcatc tgtgtgtaca tgtctgcatg
2821 tgtatatgtt cgtgtgtgaa atgtaggctt taaaatgtaa atgtctggat tttaatccca
2881 ggcatccctc ctaacttttc tttgtgcagc ggtctggtta tcgtctatcc ccaggggaat
2941 ccacacagcc cgctcccagg agctaatggt agagcgtcct tgaggctcca ttattcgttc
3001 attcagcatt tattgtgcac ctactatgtg gcgggcattt gggataccaa gataaattgc
3061 atgcggcatg gccccagcca tgaaggaact taaccgctag tgccgaggac acgttaaacg
3121 aacaggatgg gccgggcacg gtggctcacg cctgtaatcc cagcacactg ggaggccgag
3181 gcaggtggat cactctgagg tcaggagttt gagccagcct ggccaacatg gtgaaacccc
3241 atctccacta aaaatagaaa aattagccgg gcatggtgac acatgcctgt agtcctagct
3301 acttgggagg ctgaggcagg agaattgctt gaatctggga ggcagaggtt gcagtgagcc
3361 gagattgtgc cattgcactg cagcctggat gacagagcga gactctatct caaaaaaaaa
3421 aaaaaaaaaa gatggtcacg cgggatgtaa acgctgaatg ggccaggtgc agtggctcat
3481 gcttgtaatc ccagcacttt gggaaggcga ggcaggtgga ttgcttgagc tcaggagttc
3541 aagaccagcc tgggcgacat agtgagacct catctctacc taaatttttt tttagtcagt
3601 catggtggca catgcctgta gtcccagcta ctcgggaggc tgatgccaga tgatcacttg
3661 agcccaggag gtagaggctg cagtgagcta taatggtacc attgcaatcc agcctgggca
3721 gcagagtgag accctgtctc aaaaaaaata aaaaagtaga aagatggagt ggaagcctgc
3781 ccagggttgt gagcatgcac gggaaaggca cccaggtcag gggggatccc cgaggagatg
3841 cctgagctga aggattgtgg ttggggaaag cgtagtccca gcaaggaagc agtttgtggg
3901 taagtgctgg gaggtgagtg gagtgagctt gtcagggagc tgctggtgga gcctggaggg
3961 gaaggaggga ggcagtgaga gagatcgggg tggggggtgg ggggatgtcg ccagagctca
4021 ggggtgggga cagccttgtg cgcatcagtc ctgaggcctg gggcaccttt cgtctgatga
4081 gcctctgcat ggagagaggc tgagggctaa acacagctgg atgtcacctg agttcattta
4141 taggaagaga gaaatgtcga ggtgaaacgt aaaagcatct ggcaggaagg tgagtctgaa
4201 gccctgcacc cgcgttccga ctatcagtgg ggagctgtta gcacgtagga ttcttcagag
4261 cagctgggct ggagctcccc tgagctcagg aagccccagg gtgcaagggc aaggaaatga
4321 ggggtggtgg gtcagtgaag atctgggcag accttgtgtg gggaaggggt gctgctgtga
4381 cttcagggtc tgaggtccaa agacagcatt tgaaaagagg ctctgaagcc agtgtttgaa
4441 gaatttgttc ctgaagtacc tcctgggggt aggctagagg cttctggctt cagggtcctg
4501 aagaacacat tgaggtgccg tctgacactg gaatagggtg cccttcattc ctatgcctga
4561 gtccttaact atatttccaa cctccagtga ggaggagaag attcggaaat gtgacaggag
4621 agcaaacagg acagtttgca tgtgtgtgtg cgcacacata catgtgcgtg aaagattatc
4681 aataaaagtg cataaatttg ttgatctggt aagagtttct agcaggaagg tcgagccact
4741 tactgtaggt caagaagttg ctagttgcgg agttttttct tgcagttaga ctttacctag
4801 tggtagcagg gccaccaaag ctctgtgtcc cagatggtgt atggcccata atccacccaa
4861 cagcagcaaa ggaccaggca aaggagaaca ggagcagaag cctcccagcc actagccttt
4921 tgggctcagt ctctccaata atcctggaga ggggcttcgt tgggtctgga cacctaccat
4981 gcattctgtg acctttccct agcttccaat aaataactgt ttgacgccca gagtacagga
5041 taccacaatg cactcttcct gcgtagagca catgttccca tctgctccca ttcctcagga
5101 accttgaatt ctagctctgc tggcctttga gcccatgcca gtaaatgtcc tgatgggcat
5161 tgcctactat ctccagggca gctgcctttg tcctcctaac agctttattg gagtacagtt
5221 cacttaccat acaatccaca attgaccctg cacaatttga tgccggttta gtatagtcac
5281 agttcagcag ccatcagcac agtcagtctt agagtttact acccccaaaa gaaatccagc
5341 cccccttagt caccacccca acctccccat ccctaggcac ccctaggcta ctttgatctc
5401 tgtagacttg cctcttctgg acatgacata gagaaaggag tcataaattc tccaaggtgt
5461 ctgtttcttc tttaatgtca ttccctgttt ctcctcacat tccctcccca tttcctgggc
5521 ccagtctcac actggtcctt gcttacccta aatgctatta attccatcac tctgagtatg
5581 gtgtttgctg tccgctgaat gccaagagct tcaagagtgt gtgtaaataa agccacacct
5641 ttatttttgt attattctga accatggcta ataaattgtt tcaccaagaa atgtctctct
5701 aagaacaggt gccctccacg ctgtgcccct cccacctctt cagctcgtct cctgagtgtg
5761 cagaggtggt tccggttggg aaagaagcag cggagcatct aaccatgcct gtgtccaggc
5821 cgattatgca cgcagccacc aacaagctcc caactcccgc gtagagtttc atgacttttt
5881 cctgcctact atcttgatcc tagttttttt tttgtttttt ttttttttaa ggaataatta
5941 ctttgattca aaaccagttt ctcttttctg cataggaagg tccttgaagg tgtttagggt
6001 ctaaaaaggg tggtgttcgg tctctgaaac atccattcag cagtttgagc tgggatctct
6061 gaatgcaagg gtatgatgga tatacttctt tcttgctttt gttgtgtttt ggttttttgt
6121 ttgtttttaa gtcagggtct ctctgtcacc aggctgtatt acagtggtgc aatcatggct
6181 cactgcagcc tcgacctccc aggctcaagc catctttcca cctcagcctg ccagtggcta
6241 gaactacagg cgtgcaccac tgtgcccggc taatttgtgt gtatatattt tgtagaaatg
6301 gggtttcacc atgttgtcca ggctggtcac gaactcctgg gctcaagcca tctgcccgcc
6361 tcatcctccc aaagtgctgg gattataggc ctgagcccac cgtgcctggc ctttcctgtt
6421 tatctttgaa aattaaatag ggcataagag agaagaagat gtacttacaa tgcagtgggt
6481 ggttttaact ctatagcctt tgggctctgt ggttggtgct ccccttccta aataaatgag
6541 gtgtatgcag ggccctcttc tgccttagcg ccctgccagc tgggactcca gcaaggcccg
6601 gggcacctga ggacagagtg agatggaggg ccgctgctcc agcagccggg cctgcatccc
6661 acaagtcaac tgtgtcggac agaggatcct tacaaagaag aggcagcagg gttgggggct
6721 ggccagctgc tcgtccgccc taggtagctt gctcatctgt aaagtgggtg gggcaggagt
6781 tcccacctca tggggtcctg gcaagcctgc agtatccccg agtggcacca gcctgcttct
6841 ggggcagagc agtttgtgcc ccctgaggta ccactgatcc tctttccctg ctattaggta
6901 ttgctctctt cctccggtgt ttgccttttc agattataga agtaatatgt gttcccatat
6961 ttggcgtctc tcaggagctc aggaagtact tggctgagtg aacatgtcca ttgtggaaaa
7021 atggcaacaa tatggattcc atgggtatat tttatagaag aatatgaaga aaagcagcta
7081 cccctaaacc cattgcacaa gctgttcatg ttaattctgt acccgacgct ttccccacgg
7141 ggcctcccct cactctgaaa tggcatccag gtccatcttg ccctccacct ctgcatggct
7201 ctccatgccc catcgcctct cccagatcct agcactgggt ccacactctc gccctgtcca
7261 tttaggttga tgaaagcagg cagtcacccg ggtgggccag tcttgcctgt gggaggaaca
7321 tgcagtctcc tgtctcatgg tttgaagtgt gccaggaagc ctggcccagc ccacctcccc
7381 ctggagtcct tcccaggagg aataacccct taggtcattg actataagat gagttcgctc
7441 actggatcct tcctctctga tgagacagga agaaggtaca cagtgaccag gtaggaggag
7501 gagagggagt agaaaggagg gatgcgggtg gctggtccct gcatttgcct gcttccctgc
7561 acgggtgtcc cactggccgc ctctgctcac cagtgtcatg ggattctctc agaagatgaa
7621 aacagcccct gcttttttgc tagaatggct gagctttcat ggaaaggaag ctggacccaa
7681 gcaacagccg actaccgaag gttgcctgga gcagtgcaga tgtgggagga agaagggcct
7741 tggtgcacac tggcttttct tcctgactgc aatgtggcat tgtgccagct acctcctctt
7801 tctcggcctc aggaaaatgg agagaaagca gccctgaagg tggctgtgac gagggaaggg
7861 gcagagggcc tgacagtcaa ccacgcgcta tattttcctg ttcttcctta gggcaagaac
7921 tgcatggcca gactcaggca aggcctaggt gtgggctggg cattgcctac acgtgaagag
7981 atcactccgc gtccctactg cacctgtcac aaagtgcctt ctgatatgcc tggcaaacca
8041 aaatcggtga gcgccagctt gcttccctag aagacatttc taaatattca taacatgctt
8101 gctcaaatca atcaccttat tttacatccg ctccagggag aaatgaagac atggtcctac
8161 gttgttctgt aattattttc tatgtaaatt ttgttccttg ttacaattat atatgtctta
8221 ggggaaagga ccatttcaca tgtgtcacct catgtgattc tcaccacagc cctgtgattg
8281 ctcctgtttt ataaataatg acatagttcc agttgatggc caaagccaca gctaacgaga
8341 ggcagagaga gctcaggctc ccaggagctt ccactctcag accttgcctc ccgggctgcc
8401 ctgagtgaaa cgcctgctta gcatttggca cagccagaag cagcaagcta gggtcacaac
8461 acagagaggg gctgtgtaat actggctgcc tctgtgctaa gaaaaaaaaa aaatcactgt
8521 gtgtttgttt attttggtgc aggcccagtg ttcttgctta gacttaatac tacccttcat
8581 gttaaaataa aaccaaacaa aaacccat（配列番号302）
【０１０４】
いくつかの態様において、IL-17RA ASOは次の蛋白質配列をコードする核酸に対して相補的である：
MGAARSPPSAVPGPLLGLLLLLLGVLAPGGASLRLLDHRALVCSQPGLNCTVKNSTCLDDSWIHPRNLTPSSPKD
LQIQLHFAHTQQGDLFPVAHIEWTLQTDASILYLEGAELSVLQLNTNERLCVRFEFLSKLRHHHRRWRFTFSHFV
VDPDQEYEVTVHHLPKPIPDGDPNHQSKNFLVPDCEHARMKVTTPCMSSGSLWDPNITVETLEAHQLRVSFTLWN
ESTHYQILLTSFPHMENHSCFEHMHHIPAPRPEEFHQRSNVTLTLRNLKGCCRHQVQIQPFFSSCLNDCLRHSAT
VSCPEMPDTPEPIPDYMPLWVYWFITGISILLVGSVILLIVCMTWRLAGPGSEKYSDDTKYTDGLPAADLIPPPL
KPRKVWIIYSADHPLYVDVVLKFAQFLLTACGTEVALDLLEEQAISEAGVMTWVGRQKQEMVESNSKIIVLCSRG
TRAKWQALLGRGAPVRLRCDHGKPVGDLFTAAMNMILPDFKRPACFGTYVVCYFSEVSCDGDVPDLFGAAPRYPL
MDRFEEVYFRIQDLEMFQPGRMHRVGELSGDNYLRSPGGRQLRAALDRFRDWQVRCPDWFECENLYSADDQDAPS
LDEEVFEEPLLPPGTGIVKRAPLVREPGSQACLAIDPLVGEEGGAAVAKLEPHLQPRGQPAPQPLHTLVLAAEEG
ALVAAVEPGPLADGAAVRLALAGEGEACPLLGSPGAGRNSVLFLPVDPEDSPLGSSTPMASPDLLPEDVREHLEG
LMLSLFEQSLSCQAQGGCSRPAMVLTDPHTPYEEEQRQSVQSDQGYISRSSPQPPEGLTEMEEEEEEEQDPGKPA
LPLSPEDLESLRSLQRQLLFRQLQKNSGWDTMGSESEGPSA（配列番号305）．
【０１０５】
いくつかの態様において、本明細書において用いられるASOは次のIL-17RA ASOのいずれか1つ以上を包含する：
mGmCmUmUmGmGG*C*A*G*G*T*mGmGmUmGmAmA/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号225）；
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号288）；
mGmUmAmGmGmGmCmGmUG*T*G*T*G*G*mGmUmC/isp18//isp18//3CholTEG/（配列番号291）；
mGmCmUmUmGmGG*C*A*G*G*T*mGmGmUmGmAmA（配列番号225）；
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU（配列番号288）；
mGmUmAmGmGmGmCmGmUG*T*G*T*G*G*mGmUmC（配列番号291）；GCUUGGGCAGGTGGUGAA（配列番号225）；CCCACAGGGGCATGUAGU（配列番号288）；もしくはGUAGGGCGUGTGTGGGUC（配列番号291）、またはその塩。
【０１０６】
いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは下で提出されているIL-4Rに対応するヌクレオチド配列を標的化するように設計される。ヒトIL-4R cDNA配列はGenbankアクセッション番号NM_000418で開示されている。
1 gggtctccgc gcccaggaaa gccccgcgcg gcgcgggcca gggaagggcc acccaggggt
61 cccccacttc ccgcttgggc gcccggacgg cgaatggagc aggggcgcgc agataattaa
121 agatttacac acagctggaa gaaatcatag agaagccggg cgtggtggct catgcctata
181 atcccagcac ttttggaggc tgaggcgggc agatcacttg agatcaggag ttcgagacca
241 gcctggtgcc ttggcatctc ccaatggggt ggctttgctc tgggctcctg ttccctgtga
301 gctgcctggt cctgctgcag gtggcaagct ctgggaacat gaaggtcttg caggagccca
361 cctgcgtctc cgactacatg agcatctcta cttgcgagtg gaagatgaat ggtcccacca
421 attgcagcac cgagctccgc ctgttgtacc agctggtttt tctgctctcc gaagcccaca
481 cgtgtatccc tgagaacaac ggaggcgcgg ggtgcgtgtg ccacctgctc atggatgacg
541 tggtcagtgc ggataactat acactggacc tgtgggctgg gcagcagctg ctgtggaagg
601 gctccttcaa gcccagcgag catgtgaaac ccagggcccc aggaaacctg acagttcaca
661 ccaatgtctc cgacactctg ctgctgacct ggagcaaccc gtatccccct gacaattacc
721 tgtataatca tctcacctat gcagtcaaca tttggagtga aaacgacccg gcagatttca
781 gaatctataa cgtgacctac ctagaaccct ccctccgcat cgcagccagc accctgaagt
841 ctgggatttc ctacagggca cgggtgaggg cctgggctca gtgctataac accacctgga
901 gtgagtggag ccccagcacc aagtggcaca actcctacag ggagcccttc gagcagcacc
961 tcctgctggg cgtcagcgtt tcctgcattg tcatcctggc cgtctgcctg ttgtgctatg
1021 tcagcatcac caagattaag aaagaatggt gggatcagat tcccaaccca gcccgcagcc
1081 gcctcgtggc tataataatc caggatgctc aggggtcaca gtgggagaag cggtcccgag
1141 gccaggaacc agccaagtgc ccacactgga agaattgtct taccaagctc ttgccctgtt
1201 ttctggagca caacatgaaa agggatgaag atcctcacaa ggctgccaaa gagatgcctt
1261 tccagggctc tggaaaatca gcatggtgcc cagtggagat cagcaagaca gtcctctggc
1321 cagagagcat cagcgtggtg cgatgtgtgg agttgtttga ggccccggtg gagtgtgagg
1381 aggaggagga ggtagaggaa gaaaaaggga gcttctgtgc atcgcctgag agcagcaggg
1441 atgacttcca ggagggaagg gagggcattg tggcccggct aacagagagc ctgttcctgg
1501 acctgctcgg agaggagaat gggggctttt gccagcagga catgggggag tcatgccttc
1561 ttccaccttc gggaagtacg agtgctcaca tgccctggga tgagttccca agtgcagggc
1621 ccaaggaggc acctccctgg ggcaaggagc agcctctcca cctggagcca agtcctcctg
1681 ccagcccgac ccagagtcca gacaacctga cttgcacaga gacgcccctc gtcatcgcag
1741 gcaaccctgc ttaccgcagc ttcagcaact ccctgagcca gtcaccgtgt cccagagagc
1801 tgggtccaga cccactgctg gccagacacc tggaggaagt agaacccgag atgccctgtg
1861 tcccccagct ctctgagcca accactgtgc cccaacctga gccagaaacc tgggagcaga
1921 tcctccgccg aaatgtcctc cagcatgggg cagctgcagc ccccgtctcg gcccccacca
1981 gtggctatca ggagtttgta catgcggtgg agcagggtgg cacccaggcc agtgcggtgg
2041 tgggcttggg tcccccagga gaggctggtt acaaggcctt ctcaagcctg cttgccagca
2101 gtgctgtgtc cccagagaaa tgtgggtttg gggctagcag tggggaagag gggtataagc
2161 ctttccaaga cctcattcct ggctgccctg gggaccctgc cccagtccct gtccccttgt
2221 tcacctttgg actggacagg gagccacctc gcagtccgca gagctcacat ctcccaagca
2281 gctccccaga gcacctgggt ctggagccgg gggaaaaggt agaggacatg ccaaagcccc
2341 cacttcccca ggagcaggcc acagaccccc ttgtggacag cctgggcagt ggcattgtct
2401 actcagccct tacctgccac ctgtgcggcc acctgaaaca gtgtcatggc caggaggatg
2461 gtggccagac ccctgtcatg gccagtcctt gctgtggctg ctgctgtgga gacaggtcct
2521 cgccccctac aacccccctg agggccccag acccctctcc aggtggggtt ccactggagg
2581 ccagtctgtg tccggcctcc ctggcaccct cgggcatctc agagaagagt aaatcctcat
2641 catccttcca tcctgcccct ggcaatgctc agagctcaag ccagaccccc aaaatcgtga
2701 actttgtctc cgtgggaccc acatacatga gggtctctta ggtgcatgtc ctcttgttgc
2761 tgagtctgca gatgaggact agggcttatc catgcctggg aaatgccacc tcctggaagg
2821 cagccaggct ggcagatttc caaaagactt gaagaaccat ggtatgaagg tgattggccc
2881 cactgacgtt ggcctaacac tgggctgcag agactggacc ccgcccagca ttgggctggg
2941 ctcgccacat cccatgagag tagagggcac tgggtcgccg tgccccacgg caggcccctg
3001 caggaaaact gaggcccttg ggcacctcga cttgtgaacg agttgttggc tgctccctcc
3061 acagcttctg cagcagactg tccctgttgt aactgcccaa ggcatgtttt gcccaccaga
3121 tcatggccca cgtggaggcc cacctgcctc tgtctcactg aactagaagc cgagcctaga
3181 aactaacaca gccatcaagg gaatgacttg ggcggccttg ggaaatcgat gagaaattga
3241 acttcaggga gggtggtcat tgcctagagg tgctcattca tttaacagag cttccttagg
3301 ttgatgctgg aggcagaatc ccggctgtca aggggtgttc agttaagggg agcaacagag
3361 gacatgaaaa attgctatga ctaaagcagg gacaatttgc tgccaaacac ccatgcccag
3421 ctgtatggct gggggctcct cgtatgcatg gaacccccag aataaatatg ctcagccacc
3481 ctgtgggccg ggcaatccag acagcaggca taaggcacca gttaccctgc atgttggccc
3541 agacctcagg tgctagggaa ggcgggaacc ttgggttgag taatgctcgt ctgtgtgttt
3601 tagtttcatc acctgttatc tgtgtttgct gaggagagtg gaacagaagg ggtggagttt
3661 tgtataaata aagtttcttt gtctctttaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa（配列番号306）
【０１０７】
いくつかの態様において、IL-4R ASOは次の蛋白質配列をコードする核酸に対して相補的である：
MGWLCSGLLF PVSCLVLLQV ASSGNMKVLQ EPTCVSDYMS ISTCEWKMNG
PTNCSTELRL LYQLVFLLSE AHTCIPENNG GAGCVCHLLM DDVVSADNYT
LDLWAGQQLL WKGSFKPSEH VKPRAPGNLT VHTNVSDTLL LTWSNPYPPD
NYLYNHLTYA VNIWSENDPA DFRIYNVTYL EPSLRIAAST LKSGISYRAR
VRAWAQCYNT TWSEWSPSTK WHNSYREPFE QHLLLGVSVS CIVILAVCLL
CYVSITKIKK EWWDQIPNPA RSRLVAIIIQ DAQGSQWEKR SRGQEPAKCP
HWKNCLTKLL PCFLEHNMKR DEDPHKAAKE MPFQGSGKSA WCPVEISKTV
LWPESISVVR CVELFEAPVE CEEEEEVEEE KGSFCASPES SRDDFQEGRE
GIVARLTESL FLDLLGEENG GFCQQDMGES CLLPPSGSTS AHMPWDEFPS
AGPKEAPPWG KEQPLHLEPS PPASPTQSPD NLTCTETPLV IAGNPAYRSF
SNSLSQSPCP RELGPDPLLA RHLEEVEPEM PCVPQLSEPT TVPQPEPETW
EQILRRNVLQ HGAAAAPVSA PTSGYQEFVH AVEQGGTQAS AVVGLGPPGE
AGYKAFSSLL ASSAVSPEKC GFGASSGEEG YKPFQDLIPG CPGDPAPVPV
PLFTFGLDRE PPRSPQSSHL PSSSPEHLGL EPGEKVEDMP KPPLPQEQAT
DPLVDSLGSG IVYSALTCHL CGHLKQCHGQ EDGGQTPVMA SPCCGCCCGD
RSSPPTTPLR APDPSPGGVP LEASLCPASL APSGISEKSK SSSSFHPAPG
NAQSSSQTPK IVNFVSVGPT YMRVS（配列番号309）
【０１０８】
いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、下で提出されているIL-1βに対応するヌクレオチド配列を標的化するように設計される。ヒトIL-1β cDNA配列はGenbankアクセッション番号NM_000576で開示されている。
1 accaaacctc ttcgaggcac aaggcacaac aggctgctct gggattctct tcagccaatc
61 ttcattgctc aagtgtctga agcagccatg gcagaagtac ctgagctcgc cagtgaaatg
121 atggcttatt acagtggcaa tgaggatgac ttgttctttg aagctgatgg ccctaaacag
181 atgaagtgct ccttccagga cctggacctc tgccctctgg atggcggcat ccagctacga
241 atctccgacc accactacag caagggcttc aggcaggccg cgtcagttgt tgtggccatg
301 gacaagctga ggaagatgct ggttccctgc ccacagacct tccaggagaa tgacctgagc
361 accttctttc ccttcatctt tgaagaagaa cctatcttct tcgacacatg ggataacgag
421 gcttatgtgc acgatgcacc tgtacgatca ctgaactgca cgctccggga ctcacagcaa
481 aaaagcttgg tgatgtctgg tccatatgaa ctgaaagctc tccacctcca gggacaggat
541 atggagcaac aagtggtgtt ctccatgtcc tttgtacaag gagaagaaag taatgacaaa
601 atacctgtgg ccttgggcct caaggaaaag aatctgtacc tgtcctgcgt gttgaaagat
661 gataagccca ctctacagct ggagagtgta gatcccaaaa attacccaaa gaagaagatg
721 gaaaagcgat ttgtcttcaa caagatagaa atcaataaca agctggaatt tgagtctgcc
781 cagttcccca actggtacat cagcacctct caagcagaaa acatgcccgt cttcctggga
841 gggaccaaag gcggccagga tataactgac ttcaccatgc aatttgtgtc ttcctaaaga
901 gagctgtacc cagagagtcc tgtgctgaat gtggactcaa tccctagggc tggcagaaag
961 ggaacagaaa ggtttttgag tacggctata gcctggactt tcctgttgtc tacaccaatg
1021 cccaactgcc tgccttaggg tagtgctaag aggatctcct gtccatcagc caggacagtc
1081 agctctctcc tttcagggcc aatccccagc ccttttgttg agccaggcct ctctcacctc
1141 tcctactcac ttaaagcccg cctgacagaa accacggcca catttggttc taagaaaccc
1201 tctgtcattc gctcccacat tctgatgagc aaccgcttcc ctatttattt atttatttgt
1261 ttgtttgttt tattcattgg tctaatttat tcaaaggggg caagaagtag cagtgtctgt
1321 aaaagagcct agtttttaat agctatggaa tcaattcaat ttggactggt gtgctctctt
1381 taaatcaagt cctttaatta agactgaaaa tatataagct cagattattt aaatgggaat
1441 atttataaat gagcaaatat catactgttc aatggttctg aaataaactt cactgaag（配列番号307）
【０１０９】
いくつかの態様において、IL-1β ASOは次の蛋白質配列をコードする核酸に対して相補的である：
MAEVPELASE MMAYYSGNED DLFFEADGPK QMKCSFQDLD LCPLDGGIQL
RISDHHYSKG FRQAASVVVA MDKLRKMLVP CPQTFQENDL STFFPFIFEE
EPIFFDTWDN EAYVHDAPVR SLNCTLRDSQ QKSLVMSGPY ELKALHLQGQ
DMEQQVVFSM SFVQGEESND KIPVALGLKE KNLYLSCVLK DDKPTLQLES
VDPKNYPKKK MEKRFVFNKI EINNKLEFES AQFPNWYIST SQAENMPVFL
GGTKGGQDIT DFTMQFVSS（配列番号310）
【０１１０】
いくつかの態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは下で提出されているCTGFに対応するヌクレオチド配列を標的化するするように設計される。ヒトCTGF cDNA配列はGenbankアクセッション番号NM_001901で開示されている。
1 aaactcacac aacaactctt ccccgctgag aggagacagc cagtgcgact ccaccctcca
61 gctcgacggc agccgccccg gccgacagcc ccgagacgac agcccggcgc gtcccggtcc
121 ccacctccga ccaccgccag cgctccaggc cccgccgctc cccgctcgcc gccaccgcgc
181 cctccgctcc gcccgcagtg ccaaccatga ccgccgccag tatgggcccc gtccgcgtcg
241 ccttcgtggt cctcctcgcc ctctgcagcc ggccggccgt cggccagaac tgcagcgggc
301 cgtgccggtg cccggacgag ccggcgccgc gctgcccggc gggcgtgagc ctcgtgctgg
361 acggctgcgg ctgctgccgc gtctgcgcca agcagctggg cgagctgtgc accgagcgcg
421 acccctgcga cccgcacaag ggcctcttct gtgacttcgg ctccccggcc aaccgcaaga
481 tcggcgtgtg caccgccaaa gatggtgctc cctgcatctt cggtggtacg gtgtaccgca
541 gcggagagtc cttccagagc agctgcaagt accagtgcac gtgcctggac ggggcggtgg
601 gctgcatgcc cctgtgcagc atggacgttc gtctgcccag ccctgactgc cccttcccga
661 ggagggtcaa gctgcccggg aaatgctgcg aggagtgggt gtgtgacgag cccaaggacc
721 aaaccgtggt tgggcctgcc ctcgcggctt accgactgga agacacgttt ggcccagacc
781 caactatgat tagagccaac tgcctggtcc agaccacaga gtggagcgcc tgttccaaga
841 cctgtgggat gggcatctcc acccgggtta ccaatgacaa cgcctcctgc aggctagaga
901 agcagagccg cctgtgcatg gtcaggcctt gcgaagctga cctggaagag aacattaaga
961 agggcaaaaa gtgcatccgt actcccaaaa tctccaagcc tatcaagttt gagctttctg
1021 gctgcaccag catgaagaca taccgagcta aattctgtgg agtatgtacc gacggccgat
1081 gctgcacccc ccacagaacc accaccctgc cggtggagtt caagtgccct gacggcgagg
1141 tcatgaagaa gaacatgatg ttcatcaaga cctgtgcctg ccattacaac tgtcccggag
1201 acaatgacat ctttgaatcg ctgtactaca ggaagatgta cggagacatg gcatgaagcc
1261 agagagtgag agacattaac tcattagact ggaacttgaa ctgattcaca tctcattttt
1321 ccgtaaaaat gatttcagta gcacaagtta tttaaatctg tttttctaac tgggggaaaa
1381 gattcccacc caattcaaaa cattgtgcca tgtcaaacaa atagtctatc aaccccagac
1441 actggtttga agaatgttaa gacttgacag tggaactaca ttagtacaca gcaccagaat
1501 gtatattaag gtgtggcttt aggagcagtg ggagggtacc agcagaaagg ttagtatcat
1561 cagatagcat cttatacgag taatatgcct gctatttgaa gtgtaattga gaaggaaaat
1621 tttagcgtgc tcactgacct gcctgtagcc ccagtgacag ctaggatgtg cattctccag
1681 ccatcaagag actgagtcaa gttgttcctt aagtcagaac agcagactca gctctgacat
1741 tctgattcga atgacactgt tcaggaatcg gaatcctgtc gattagactg gacagcttgt
1801 ggcaagtgaa tttgcctgta acaagccaga ttttttaaaa tttatattgt aaatattgtg
1861 tgtgtgtgtg tgtgtgtata tatatatata tgtacagtta tctaagttaa tttaaagttg
1921 tttgtgcctt tttatttttg tttttaatgc tttgatattt caatgttagc ctcaatttct
1981 gaacaccata ggtagaatgt aaagcttgtc tgatcgttca aagcatgaaa tggatactta
2041 tatggaaatt ctgctcagat agaatgacag tccgtcaaaa cagattgttt gcaaagggga
2101 ggcatcagtg tccttggcag gctgatttct aggtaggaaa tgtggtagcc tcacttttaa
2161 tgaacaaatg gcctttatta aaaactgagt gactctatat agctgatcag ttttttcacc
2221 tggaagcatt tgtttctact ttgatatgac tgtttttcgg acagtttatt tgttgagagt
2281 gtgaccaaaa gttacatgtt tgcacctttc tagttgaaaa taaagtgtat attttttcta
2341 taaaaaaaaa aaaaaaaa（配列番号308）
【０１１１】
いくつかの態様において、CTGF ASOは次の蛋白質配列をコードする核酸に対して相補的である：
MTAASMGPVR VAFVVLLALC SRPAVGQNCS GPCRCPDEPA PRCPAGVSLV
LDGCGCCRVC AKQLGELCTE RDPCDPHKGL FCHFGSPANR KIGVCTAKDG
APCIFGGTVY RSGESFQSSC KYQCTCLDGA VGCMPLCSMD VRLPSPDCPF
PRRVKLPGKC CEEWVCDEPK DQTVVGPALA AYRLEDTFGP DPTMIRANCL
VQTTEWSACS KTCGMGISTR VTNDNASCRL EKQSRLCMVR PCEADLEENI
KKGKKCIRTP KISKPIKFEL SGCTSMKTYR AKFCGVCTDG RCCTPHRTTT
LPVEFKCPDG EVMKKNMMFI KTCACHYNCP GDNDIFESLY YRKMYGDMA（配列番号311）
【０１１２】
本発明は、いくつかの側面において、複数の遺伝子標的の発現を縮減するための多重ASO-SNAに関する。いくつかの態様において、mASO-SNAはIL-17RAおよびTNFαを標的化するASOを包含する。これらの具体的なmASO-SNAは炎症性障害を処置することにとって特に有用である。本明細書において用いられる「TNFαアンチセンスオリゴヌクレオチド」または「TNF-α ASO」は、TNFα活性に干渉する核酸に基づく薬剤を言う。特に、本発明のTNFαアンチセンス阻害剤またはTNFαアンチセンスオリゴヌクレオチドはTNFα遺伝子の発現を縮減する。
【０１１３】
TNF-α（腫瘍壊死因子-アルファ）は活性化マクロファージ／単球およびリンパ球によって生ずる多機能性サイトカインであり、これは多くの場合には炎症応答を促進し、種々の疾患に至る。TNF-αはマクロファージ、単球、およびナチュラルキラー細胞から放出され、細菌および他の微生物感染の間の、および炎症性物質による刺激後の損傷組織への白血球のリクルートを包含する炎症および免疫応答において重要な役割を果たしている。過剰な数量で存在するときに、TNF-αは組織損傷を引き起こすことが公知であり、炎症性および自己免疫疾患に関連する病態への関与が推察されている。
【０１１４】
TNF-αは、2つの別個の膜蛋白質受容体TNF-RIおよびTNF-RIIを介して生物学的効果を媒介し、これらは配列および分子質量が異なる。TNF-RIは全てではないまでも大部分のヒト細胞型において低いレベルで存在することが報告されており、ヒトにおけるTNF-RI遺伝子の発現は、感染、インターフェロン、およびホルボールエステルなどのセカンドメッセンジャーの調節因子によって上方制御され得る。両方のTNF受容体の細胞外部分は可溶性形態でもまた存在し、それらは細胞表面における蛋白質加水分解的な切断によって受容体の膜結合形態に由来する。可溶性TNF受容体は溶液中においてTNF-αに結合する能力を保持している。可溶性TNF受容体は健康な個人からの尿および血清中に同定されており、いくつかの慢性疾患においておよびTNF-αを誘導する薬剤の接種後に上がることが示されている。
【０１１５】
いくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトTNFα、例えば下で提出されている配列番号304のヌクレオチド配列を標的化するように設計される。ヒトTNF-α cDNA配列はNedwin, G. E. et al.によって公開されており（Nucleic Acids Res. 1985, 13, 6361-6373）；Genbankアクセッション番号X02910およびNM_000594で開示されている。
1 gaattccggg tgatttcact cccggctgtc caggcttgtc ctgctacccc acccagcctt
61 tcctgaggcc tcaagcctgc caccaagccc ccagctcctt ctccccgcag gacccaaaca
121 caggcctcag gactcaacac agcttttccc tccaacccgt tttctctccc tcaacggact
181 cagctttctg aagcccctcc cagttctagt tctatctttt tcctgcatcc tgtctggaag
241 ttagaaggaa acagaccaca gacctggtcc ccaaaagaaa tggaggcaat aggttttgag
301 gggcatgggg acggggttca gcctccaggg tcctacacac aaatcagtca gtggcccaga
361 agacccccct cggaatcgga gcagggagga tggggagtgt gaggggtatc cttgatgctt
421 gtgtgtcccc aactttccaa atccccgccc ccgcgatgga gaagaaaccg agacagaagg
481 tgcagggccc actaccgctt cctccagatg agctcatggg tttctccacc aaggaagttt
541 tccgctggtt gaatgattct ttccccgccc tcctctcgcc ccagggacat ataaaggcag
601 ttgttggcac acccagccag cagacgctcc ctcagcaagg acagcagagg accagctaag
661 agggagagaa gcaactacag accccccctg aaaacaaccc tcagacgcca catcccctga
721 caagctgcca ggcaggttct cttcctctca catactgacc cacggcttca ccctctctcc
781 cctggaaagg acaccatgag cactgaaagc atgatccggg acgtggagct ggccgaggag
841 gcgctcccca agaagacagg ggggccccag ggctccaggc ggtgcttgtt cctcagcctc
901 ttctccttcc tgatcgtggc aggcgccacc acgctcttct gcctgctgca ctttggagtg
961 atcggccccc agagggaaga ggtgagtgcc tggccagcct tcatccactc tcccacccaa
1021 ggggaaatga gagacgcaag agagggagag agatgggatg ggtgaaagat gtgcgctgat
1081 agggagggat gagagagaaa aaaacatgga gaaagacggg gatgcagaaa gagatgtggc
1141 aagagatggg gaagagagag agagaaagat ggagagacag gatgtctggc acatggaagg
1201 tgctcactaa gtgtgtatgg agtgaatgaa tgaatgaatg aatgaacaag cagatatata
1261 aataagatat ggagacagat gtggggtgtg agaagagaga tgggggaaga aacaagtgat
1321 atgaataaag atggtgagac agaaagagcg ggaaatatga cagctaagga gagagatggg
1381 ggagataagg agagaagaag atagggtgtc tggcacacag aagacactca gggaaagagc
1441 tgttgaatgc tggaaggtga atacacagat gaatggagag agaaaaccag acacctcagg
1501 gctaagagcg caggccagac aggcagccag ctgttcctcc tttaagggtg actccctcga
1561 tgttaaccat tctccttctc cccaacagtt ccccagggac ctctctctaa tcagccctct
1621 ggcccaggca gtcagtaagt gtctccaaac ctctttccta attctgggtt tgggtttggg
1681 ggtagggtta gtaccggtat ggaagcagtg ggggaaattt aaagttttgg tcttggggga
1741 ggatggatgg aggtgaaagt aggggggtat tttctaggaa gtttaagggt ctcagctttt
1801 tcttttctct ctcctcttca ggatcatctt ctcgaacccc gagtgacaag cctgtagccc
1861 atgttgtagg taagagctct gaggatgtgt cttggaactt ggagggctag gatttgggga
1921 ttgaagcccg gctgatggta ggcagaactt ggagacaatg tgagaaggac tcgctgagct
1981 caagggaagg gtggaggaac agcacaggcc ttagtgggat actcagaacg tcatggccag
2041 gtgggatgtg ggatgacaga cagagaggac aggaaccgga tgtggggtgg gcagagctcg
2101 agggccagga tgtggagagt gaaccgacat ggccacactg actctcctct ccctctctcc
2161 ctccctccag caaaccctca agctgagggg cagctccagt ggctgaaccg ccgggccaat
2221 gccctcctgg ccaatggcgt ggagctgaga gataaccagc tggtggtgcc atcagagggc
2281 ctgtacctca tctactccca ggtcctcttc aagggccaag gctgcccctc cacccatgtg
2341 ctcctcaccc acaccatcag ccgcatcgcc gtctcctacc agaccaaggt caacctcctc
2401 tctgccatca agagcccctg ccagagggag accccagagg gggctgaggc caagccctgg
2461 tatgagccca tctatctggg aggggtcttc cagctggaga agggtgaccg actcagcgct
2521 gagatcaatc ggcccgacta tctcgacttt gccgagtctg ggcaggtcta ctttgggatc
2581 attgccctgt gaggaggacg aacatccaac cttcccaaac gcctcccctg ccccaatccc
2641 tttattaccc cctccttcag acaccctcaa cctcttctgg ctcaaaaaga gaattggggg
2701 cttagggtcg gaacccaagc ttagaacttt aagcaacaag accaccactt cgaaacctgg
2761 gattcaggaa tgtgtggcct gcacagtgaa gtgctggcaa ccactaagaa ttcaaactgg
2821 ggcctccaga actcactggg gcctacagct ttgatccctg acatctggaa tctggagacc
2881 agggagcctt tggttctggc cagaatgctg caggacttga gaagacctca cctagaaatt
2941 gacacaagtg gaccttaggc cttcctctct ccagatgttt ccagacttcc ttgagacacg
3001 gagcccagcc ctccccatgg agccagctcc ctctatttat gtttgcactt gtgattattt
3061 attatttatt tattatttat ttatttacag atgaatgtat ttatttggga gaccggggta
3121 tcctggggga cccaatgtag gagctgcctt ggctcagaca tgttttccgt gaaaacggag
3181 ctgaacaata ggctgttccc atgtagcccc ctggcctctg tgccttcttt tgattatgtt
3241 ttttaaaata tttatctgat taagttgtct aaacaatgct gatttggtga ccaactgtca
3301 ctcattgctg agcctctgct ccccagggga gttgtgtctg taatcgccct actattcagt
3361 ggcgagaaat aaagtttgct tagaaaagaa acatggtctc cttcttggaa ttaattctgc
3421 atctgcctct tcttgtgggt gggaagaagc tccctaagtc ctctctccac aggctttaag
3481 atccctcgga cccagtccca tccttagact cctagggccc tggagaccct acataaacaa
3541 agcccaacag aatattcccc atcccccagg aaacaagagc ctgaacctaa ttacctctcc
3601 ctcagggcat gggaatttcc aactctggga attc（配列番号304）
【０１１６】
本明細書に記載される（descried）ナノ構造は安定な自己集合するナノ構造であり得る。例えば、ナノ構造は本明細書に記載される配列を有する長さ18-21ヌクレオチドのアンチセンスオリゴヌクレオチドであり得、3'または5'末端の疎水性基が自己会合して、水または他の好適な溶媒中においてナノ構造のコアを形成する。本明細書において用いられる疎水性基は、コレステロール、コレステリルもしくは修飾コレステリル残基、アダマンタン（adamantine）、ジヒドロテストステロン（dihydrotesterone）、長鎖アルキル、長鎖アルケニル、長鎖アルキニル、オレイル-リトコール、コレン、オレオイル-コレン、パルミチル、ヘプタデシル、ミリスチル（myrisityl）、胆汁酸、コール酸もしくはタウロコール酸、デオキシコール酸、オレイルリトコール酸、オレオイルコレン酸、糖脂質、リン脂質、スフィンゴ脂質、イソプレノイド、例えばステロイド、ビタミン、例えばビタミンE、飽和もしくは不飽和どちらかの脂肪酸、脂肪酸エステル、例えばトリグリセリド、ピレン、ポルフィリン、テキサフィリン、アダマンタン、アクリジン、ビオチン、クマリン、フルオレセイン、ローダミン、Texas-Red、ジゴキシゲニン、ジメトキシトリチル、t-ブチルジメチルシリル、t-ブチルジフェニルシリル、シアニン色素（例えばCy3またはCy5）、ヘキスト33258色素、ソラレン、またはイブプロフェンを包含し得る。
【０１１７】
アンチセンスオリゴヌクレオチドは典型的には10-30または15-20塩基の長さを有し、一般的には、これは1つの相補的な配列を哺乳動物ゲノム中に有するためには十分長い。加えて、長さ少なくとも12、典型的には少なくとも15ヌクレオチドの長さを有するアンチセンス化合物は、それらの標的mRNAと良くハイブリダイゼーションする。それゆえに、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、典型的には長さ8-100ヌクレオチド、より好ましくは12-50ヌクレオチドのサイズ範囲である。本発明のいくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは長さ18-19ヌクレオチドである。アンチセンスオリゴヌクレオチドはオリゴヌクレオチドの5'および／または3'末端にさらなるヌクレオチドを包含し得る。しかしながら、長さ18ヌクレオチドに限定されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、分子の5'または3'末端にいずれかの追加のヌクレオチドを有さない。他の非ヌクレオチド分子がそれらのオリゴヌクレオチドの5'および／または3'末端に共有結合的または非共有結合的に連結され得る。
【０１１８】
用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、複数のヌクレオチドを意味するために交換可能に用いられる（すなわち、置換ピリミジン（例えば、シトシン（C）、チミン（T）、もしくはウラシル（U））または置換プリン（例えば、アデニン（A）もしくはグアニン（G）どちらかである交換可能な有機塩基とリン酸基とに連結された糖（例えば、リボースまたはデオキシリボース）を含む分子）。本明細書において用いられる用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」はオリゴリボヌクレオチドおよびオリゴデオキシリボヌクレオチドを言う。用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、ポリヌクレオシド（すなわち、ポリヌクレオチドマイナスリン酸）およびいずれかの他の有機塩基含有ポリマーをもまた包含するものとする。核酸分子は好ましくは合成である（例えば、核酸合成によって生ずる）。オリゴヌクレオチドは、アンチセンス効果を生ずることにとって有用ないずれかのサイズであり得る。いくつかの態様において、それらは長さ18-23ヌクレオチドである。他の態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは長さ18ヌクレオチドである。
【０１１９】
用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、置換または修飾を例えば塩基および／または糖に有する核酸またはオリゴヌクレオチドをもまた包摂し得る。例えば、それらは、2'位置のヒドロキシル基以外かつ5'位置のリン酸基またはヒドロキシ基以外の低分子量有機基に共有結合的に取り付けられたバックボーン糖を有する核酸を包含する。それゆえに、修飾核酸は2'-O-アルキル化リボース基を包含し得る。加えて、修飾核酸はリボースの代わりにヘキソース、2'-Fヘキソース、2'-アミノリボース、CEt-LNA、アラビノース、または2'-フルオロアラビノースなどの糖を包含し得る。それゆえに、核酸はバックボーン組成が不均質であり得、それによって、一緒に連結されたポリマー単位同士のいずれかの可能な組み合わせ、例えばペプチド核酸を含有する（これは核酸塩基を有するアミノ酸バックボーンを有する）。他の例は下でより詳細に記載される。
【０１２０】
オリゴヌクレオチドはDNA、RNA、PNA、LNA、ENA、またはハイブリッドであり得、そのいずれかの化学もしくは天然修飾を包含する。化学および天然修飾は当分野において周知である。かかる修飾は、例えば、標的鎖への結合を増大させる（すなわちそれらの融解温度を増大させる）ように、オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド-標的複合体の同定を支援するように、細胞透過を増大させるように、オリゴヌクレオチドを分解またはその構造もしくは活性に干渉するヌクレアーゼおよび他の酵素に対して安定化するように、ひとたび配列特異的に標的に結合すると遮断（終結事象）モードを提供するように、およびオリゴヌクレオチドの薬物動態特性を改善するように設計された修飾を包含する。
【０１２１】
修飾は、例えば、（a）末端修飾、例えば5'末端修飾（リン酸化、脱リン酸化、コンジュゲーション、逆位連結部など）、3'末端修飾（コンジュゲーション、DNAヌクレオチド、逆位連結部など）、（b）塩基修飾、例えば、修飾塩基、安定化塩基、不安定化塩基、もしくは拡大された相手のレパートリーと塩基対形成する塩基への取り替え、またはコンジュゲーションされた塩基、（c）糖修飾（例えば、2'位置もしくは4'位置における）または糖の取り替え、および（d）ホスホジエステル連結部の修飾または取り替えを包含するヌクレオシド間連結部修飾を包含するが、これに限定されない。かかる修飾が翻訳に干渉する（すなわち、例えばインビトロ翻訳アッセイにおいて、修飾の欠如に対して相対的に翻訳の50%、60%、70%、80%、もしくは90%、またはより多くの縮減をもたらす）程度に応じて、修飾は本明細書に記載される方法および組成物にとって最適ではなくあり得る。
【０１２２】
修飾ヌクレオシド間連結部の限定しない例は、正常な3'-5'連結部を有するホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、3'-アルキレンホスホネートおよびキラルホスホネートを包含するメチルおよび他のアルキルホスホネート、ホスフィネート、3'-アミノホスホロアミダートおよびアミノアルキルホスホロアミダートを包含するホスホロアミダート、チオノホスホロアミダート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、ならびにボラノホスフェート、それらの2'-5'連結アナログ、ならびにヌクレオシド単位の隣接するペア同士が3'-5'から5'-3'または2'-5'から5'-2'連結されている逆位の極性を有するものを包含する。種々の塩、混合塩、および遊離酸形態もまた包含される。
【０１２３】
いくつかの態様において、修飾オリゴヌクレオチドは一本鎖修飾オリゴヌクレオチドである。いくつかの態様において、一本鎖修飾オリゴヌクレオチドは10-30、10-35、10-40、10-45、10-50、10-60、10-70、10-80、10-90、10-100、または100個よりも多くの連結されたヌクレオシドからなり、ギャップセグメントを有する。いくつかの態様において、ギャップセグメントは、一本鎖修飾オリゴヌクレオチドなどの修飾オリゴヌクレオチドの中央または中央近くに所在する、デオキシヌクレオシドからなる1つ以上の連結された核酸を言う。いくつかの態様において、ギャップセグメントは2-3、2-4、2-5、2-6、2-7、2-8、2-9、2-10、2-20、2-30、2-40、2-50、10-20、10-30、10-40、または10-50個の連結されたデオキシヌクレオシドからなる。
【０１２４】
5'ウイングセグメントは、修飾オリゴヌクレオチドの5'末端からギャップセグメントの5'末端の最初の核酸の前の核酸までの、連結された核酸（例えばヌクレオシド）に対応する。3'ウイングセグメントは、修飾オリゴヌクレオチドの3'末端の最後の核酸までの、ギャップセグメントの3'末端の最後の核酸の後の連結された核酸（例えばヌクレオシド）に対応する。
【０１２５】
ギャップセグメントは5'ウイングセグメントと3'ウイングセグメントとの間に位置する。いくつかの態様においては、5'ウイングセグメントの少なくとも1つのヌクレオシドおよび／または3'ウイングセグメントの少なくとも1つのヌクレオシドは修飾ヌクレオシドを含む。いくつかの態様において、ギャップセグメント内のヌクレオシド間連結部とギャップセグメントを3'ウイングセグメントおよび／または5'ウイングセグメントに繋ぐ連結部とは、全てホスホロチオエート連結部（*）である。いくつかの態様において、5'および3'ウイングセグメント両方のヌクレオシドの残りを繋ぐヌクレオシド間連結部はホスホジエステル連結部である。いくつかの態様において、修飾オリゴヌクレオチド中のヌクレオシドは2'O-メチル基によって修飾される。修飾オリゴヌクレオシド中のヌクレオシドは本明細書に記載されるいずれかの他の修飾によってもまた修飾され得る。
【０１２６】
いくつかの態様において、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、10-30、10-35、10-40、10-45、10-50、10-60、10-70、10-80、10-90、10-100、または100個よりも多くの連結されたヌクレオシドからなり、IL-17R、例えばIL-17RA（例えば、IL-17RAのcDNA配列は配列番号302によって表される）、IL-17RB、IL-17RC、IL-17RD、もしくはIL-17RE）のコード配列（例えばcDNA）の等しい長さの部分に対して相補的なギャップセグメント（例えばJohansen et al., Br J Dermatol (2009) 160(2):319-24を見よ、またはその薬学的に受け入れられる塩を有する。
【０１２７】
その中にリン原子を包含しない修飾ヌクレオシド間連結部は、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結部、混合ヘテロ原子およびアルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結部、または1つ以上の短鎖ヘテロ原子式もしくはヘテロ環式ヌクレオシド間連結部によって形成されるヌクレオシド間連結部を有する。これらは、モルフォリノ連結部（部分的にヌクレオシドの糖部分から形成される）；シロキサンバックボーン；スルフィド、スルホキシド、およびスルホンバックボーン；ホルムアセチルおよびチオホルムアセチルバックボーン；メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチルバックボーン；アルケン含有バックボーン；スルファミン酸バックボーン；メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノバックボーン；スルホン酸およびスルホンアミドバックボーン；アミドバックボーン；ならびに混合N、O、S、およびCH2コンポーネント部を有する他のものを有するものを包含する。
【０１２８】
置換糖部分は2'位置における次の1つを包含するが、これに限定されない：H（デオキシリボース）；OH（リボース）；F、O、S、もしくはN-アルキル；O、S、もしくはN-アルケニル；O、S、もしくはN-アルキニル；またはO-アルキル-O-アルキル。アルキル、アルケニル、およびアルキニルは置換または無置換のC1からC10アルキルまたはC2からC10アルケニルおよびアルキニルであり得る。
【０１２９】
化学または天然修飾オリゴヌクレオチドは、例えば、糖の2'位置を修飾された少なくとも1つのヌクレオチド、最も好ましくは2'-O-アルキル、2'-O-アルキル-O-アルキル、もしくは2'-フルオロ修飾ヌクレオチド、または末端キャップを包含し得る。他の態様において、RNA修飾は、ピリミジンのリボース上の2'-フルオロ、2'-アミノ、および2'O-メチル修飾、脱塩基残基、またはRNAの3'末端の逆位塩基を包含する。
【０１３０】
本発明に従って有用なオリゴヌクレオチドは単一の修飾ヌクレオシドを包含し得る。他の態様において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも2つの修飾ヌクレオシド、少なくとも3、少なくとも4、少なくとも5、少なくとも6、少なくとも7、少なくとも8、少なくとも9、少なくとも10、少なくとも15、少なくとも20個以上のヌクレオシド、最高でオリゴヌクレオチドの全体の長さを包含し得る。
【０１３１】
ヌクレオシドまたは核酸塩基は、天然のプリン塩基アデニン（A）およびグアニン（G）、ならびにピリミジン塩基チミン（T）、シトシン（C）、およびウラシル（U）を包含する。修飾ヌクレオシドは、他の合成および天然核酸塩基、例えばイノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、ネブラリン（nubularine）、イソグアノシン（isoguanisine）、ツベルシジン、2-（ハロ）アデニン、2-（アルキル）アデニン、2-（プロピル）アデニン、2（アミノ）アデニン、2-（アミノアルキル（alkyll））アデニン、2（アミノプロピル）アデニン、2（メチルチオ）N6（イソペンテニル）アデニン、6（アルキル）アデニン、6（メチル）アデニン、7（デアザ）アデニン、8（アルケニル）アデニン、8-（アルキル）アデニン、8（アルキニル）アデニン、8（アミノ）アデニン、8-（ハロ）アデニン、8-（ヒドロキシル）アデニン、8（チオアルキル）アデニン、8-（チオール）アデニン、N6-（イソペンチル）アデニン、N6（メチル）アデニン、N6,N6（ジメチル）アデニン、2-（アルキル）グアニン、2（プロピル）グアニン、6-（アルキル）グアニン、6（メチル）グアニン、7（アルキル）グアニン、7（メチル）グアニン、7（デアザ）グアニン、8（アルキル）グアニン、8-（アルケニル）グアニン、8（アルキニル）グアニン、8-（アミノ）グアニン、8（ハロ）グアニン、8-（ヒドロキシル）グアニン、8（チオアルキル）グアニン、8-（チオール）グアニン、N（メチル）グアニン、2-（チオ）シトシン、3（デアザ）5（アザ）シトシン、3-（アルキル）シトシン、3（メチル）シトシン、5-（アルキル）シトシン、5-（アルキニル）シトシン、5（ハロ）シトシン、5（メチル）シトシン、5（プロピニル）シトシン、5（プロピニル）シトシン、5（トリフルオロメチル）シトシン、6-（アゾ）シトシン、N4（アセチル）シトシン、3（3アミノ-3カルボキシプロピル）ウラシル、2-（チオ）ウラシル、5（メチル）2（チオ）ウラシル、5（メチルアミノメチル）-2（チオ）ウラシル、4-（チオ）ウラシル、5（メチル）4（チオ）ウラシル、5（メチルアミノメチル）-4（チオ）ウラシル、5（メチル）2,4（ジチオ）ウラシル、5（メチルアミノメチル）-2,4（ジチオ）ウラシル、5（2-アミノプロピル）ウラシル、5-（アルキル）ウラシル、5-（アルキニル）ウラシル、5-（アリルアミノ）ウラシル、5（アミノアリル）ウラシル、5（アミノアルキル）ウラシル、5（グアニジニウムアルキル）ウラシル、5（1,3-ジアゾール-1-アルキル）ウラシル、5-（シアノアルキル）ウラシル、5-（ジアルキルアミノアルキル）ウラシル、5（ジメチルアミノアルキル）ウラシル、5-（ハロ）ウラシル、5-（メトキシ）ウラシル、ウラシル-5オキシ酢酸、5（メトキシカルボニルメチル）-2-（チオ）ウラシル、5（メトキシカルボニル-メチル）ウラシル、5（プロピニル）ウラシル、5（プロピニル）ウラシル、5（トリフルオロメチル）ウラシル、6（アゾ）ウラシル、ジヒドロウラシル、N3（メチル）ウラシル、5-ウラシル（すなわち、シュードウラシル）、2（チオ）シュードウラシル、4（チオ）シュードウラシル、2,4-（ジチオ）シュード（psuedo）ウラシル、5-（アルキル）シュードウラシル、5-（メチル）シュードウラシル、5-（アルキル）-2-（チオ）シュードウラシル、5-（メチル）-2-（チオ）シュードウラシル、5-（アルキル）-4（チオ）シュードウラシル、5-（メチル）-4（チオ）シュードウラシル、5-（アルキル）-2,4（ジチオ）シュードウラシル、5-（メチル）-2,4（ジチオ）シュードウラシル、1置換シュードウラシル、1置換2（チオ）-シュードウラシル、1置換4（チオ）シュードウラシル、1置換2,4-（ジチオ）シュードウラシル、1（アミノカルボニルエチレニル）-シュードウラシル、1（アミノカルボニルエチレニル）-2（チオ）-シュードウラシル、1（アミノカルボニルエチレニル）-4（チオ）シュードウラシル、1アミノカルボニルエチレニル）-2,4-（ジチオ）シュードウラシル、1（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）-シュードウラシル、1（アミノアルキルアミノ-カルボニルエチレニル）-2（チオ）-シュードウラシル、1（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）-4（チオ）シュードウラシル、1（アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル）-2,4-（ジチオ）シュードウラシル、1,3-（ジアザ）-2-（オキソ）-フェノキサジン-1-イル、1-（アザ）-2-（チオ）-3-（アザ）-フェノキサジン-1-イル、1,3-（ジアザ）-2-（オキソ）-フェンチアジン-1-イル、1-（アザ）-2-（チオ）-3-（アザ）-フェンチアジン-1-イル、7-置換1,3-（ジアザ）-2-（オキソ）-フェノキサジン-1-イル、7-置換1-（アザ）-2-（チオ）-3-（アザ）-フェノキサジン-1-イル、7-置換1,3-（ジアザ）-2-（オキソ）-フェンチアジン-1-イル、7-置換1-（アザ）-2-（チオ）-3-（アザ）-フェンチアジン-1-イル、7-（アミノアルキルヒドロキシ）-1,3-（ジアザ）-2-（オキソ）-フェノキサジン-1-イル、7-（アミノアルキルヒドロキシ）-1-（アザ）-2-（チオ）-3-（アザ）-フェノキサジン-1-イル、7-（アミノアルキルヒドロキシ）-1,3-（ジアザ）-2-（オキソ）-フェンチアジン-1-イル、7-（アミノアルキルヒドロキシ）-1-（アザ）-2-（チオ）-3-（アザ）-フェンチアジン-1-イル、7-（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）-1,3-（ジアザ）-2-（オキソ）-フェノキサジン-1-イル、7-（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）-1-（アザ）-2-（チオ）-3-（アザ）-フェノキサジン-1-イル、7-（グアニジニウムアルキル-ヒドロキシ）-1,3-（ジアザ）-2-（オキソ）-フェンチアジン-1-イル、7-（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）-1-（アザ）-2-（チオ）-3-（アザ）-フェンチアジン-1-イル、1,3,5-（トリアザ）-2,6-（ジオキサ）-ナフタレン、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、ネブラリン（nubularine）、ツベルシジン、イソグアノシン（isoguanisine）、イノシニル、2-アザ-イノシニル、7-デアザ-イノシニル、ニトロイミダゾリル、ニトロピラゾリル、ニトロベンズイミダゾリル、ニトロインダゾリル、アミノインドリル、ピロロピリミジニル、3-（メチル）イソカルボスチリル（isocarbostyrilyl）、5-（メチル）イソカルボスチリル（isocarbostyrilyl）、3-（メチル）-7-（プロピニル）イソカルボスチリル（isocarbostyrilyl）、7-（アザ）インドリル、6-（メチル）-7-（アザ）インドリル、イミダゾ（imidizo）ピリジニル、9-（メチル）-イミダゾ（imidizo）ピリジニル、ピロロピリジニル、イソカルボスチリル（isocarbostyrilyl）、7-（プロピニル）イソカルボスチリル（isocarbostyrilyl）、プロピニル-7-（アザ）インドリル、2,4,5-（トリメチル）フェニル、4-（メチル）インドリル、4,6-（ジメチル）インドリル、フェニル、ナフタレニル、アントラセニル、フェナントラセニル、ピレニル、スチルベニル、テトラセニル、ペンタセニル、ジフルオロ（diiluoro）トリル、4-（フルオロ（iluoro））-6-（メチル）ベンズイミダゾール、4-（メチル）ベンズイミダゾール、6-（アゾ）チミン、2-ピリジノン、5ニトロインドール、3ニトロピロール、6-（アザ）ピリミジン、2（アミノ）プリン、2,6-（ジアミノ）プリン、5置換ピリミジン、N2-置換プリン、N6-置換プリン、O6-置換プリン、置換1,2,4-トリアゾール、ピロロ-ピリミジン-2-オン-3-イル、6-フェニル-ピロロ-ピリミジン-2-オン-3-イル、パラ置換6-フェニル-ピロロ-ピリミジン-2-オン-3-イル、オルト置換6-フェニル-ピロロ-ピリミジン-2-オン-3-イル、ビス-オルト置換6-フェニル-ピロロ-ピリミジン-2-オン-3-イル、パラ-（アミノアルキルヒドロキシ）-6-フェニル-ピロロ-ピリミジン-2-オン-3-イル、オルト-（アミノアルキルヒドロキシ）-6-フェニル-ピロロ-ピリミジン-2-オン-3-イル、ビス-オルト-（アミノアルキルヒドロキシ）-6-フェニル-ピロロ-ピリミジン-2-オン-3-イル、ピリドピリミジン-3-イル、2-オキソ-7-アミノ-ピリドピリミジン-3-イル、2-オキソ-ピリドピリミジン-3-イル、またはそのいずれかのO-アルキル化もしくはN-アルキル化誘導体を包含する。
【０１３２】
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドはキメラ型オリゴヌクレオチドであり得る。本発明のキメラ型アンチセンス化合物は、上に記載されている2つ以上のオリゴヌクレオチド、修飾オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、および／またはオリゴヌクレオチドミメティックのコンポジット構造として形成され得る。かかる化合物は、当分野においてはハイブリッドもしくは混合バックボーンまたはキメラ型もしくはギャップマーともまた言われている。特に、ギャップマーは少なくとも3つの個別の部分を有するオリゴヌクレオチドであり、それらの2つは類似であり、すなわち1つ以上のバックボーン修飾を包含し、別個であるすなわちバックボーン修飾を包含しない領域を取り囲んでいる。
【０１３３】
オリゴヌクレオチドは、1つまたは両方の末端に、すなわち3'および／または5'末端に分子種を包含し得る。本明細書において用いられる分子種は、天然に生起するまたは天然に生起しないヌクレオチドではないいずれかの化合物を言う。分子種は、スペーサー、脂質、ステロール、脂質部分、例えばコレステロール部分、コール酸、チオエーテル、例えばヘキシル-S-トリチルチオール、チオコレステロール、脂肪族鎖、例えばドデカンジオールもしくはウンデシル残基、リン脂質、例えばジ-ヘキサデシル-rac-グリセロールもしくはトリエチルアンモニウム1,2-ジ-O-ヘキサデシル-rac-グリセロ-3-H-ホスホネート、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖、もしくはアダマンタン酢酸、パルミチル部分、オクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ-カルボニル-オキシコレステロール部分、ステアリル、C16アルキル鎖、胆汁酸、コール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸、オレイルリトコール酸、オレオイルコレン酸、糖脂質、リン脂質、スフィンゴ脂質、イソプレノイド、例えばステロイド、ビタミン、例えばビタミンE、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、脂肪酸エステル、例えばトリグリセリド、ピレン、ポルフィリン、テキサフィリン、アダマンタン、アクリジン、ビオチン、クマリン、フルオレセイン、ローダミン、Texas-Red、ジゴキシゲニン、ジメトキシトリチル、t-ブチルジメチルシリル、t-ブチルジフェニルシリル、シアニン色素（例えばCy3もしくはCy576）、ヘキスト33258色素、ソラレン、またはイブプロフェンを包含するが、これに限定されない。
【０１３４】
分子種はオリゴヌクレオチドの種々の位置に取り付けられ得る。上に記載されているように、分子種はオリゴヌクレオチドの2'末端、3'末端、または5'末端に連結され得、そこでそれは3'または5'-エキソヌクレアーゼに対するオリゴマーの安定性を向上させる目的にもまた資する。代替的には、それは内部のヌクレオチドまたは分枝上のヌクレオチドに連結され得る。分子種はヌクレオチドの2'位に取り付けられ得る。分子種はヌクレオチドのヘテロ環式塩基にもまた連結され得る。
【０１３５】
分子種はリンカー部分によってオリゴヌクレオチドに繋がれ得る。任意に、リンカー部分は非ヌクレオチド系リンカー部分である。非ヌクレオチド系リンカーは、例えば脱塩基残基（dスペーサー）、オリゴエチレングリコール、例えばトリエチレングリコールもしくはヘキサエチレングリコール、またはアルカンジオール、例えばブタンジオールである。スペーサー単位は好ましくはホスホジエステル、ホスホロジチオエート、またはホスホロチオエート結合によって連結される。リンカー単位は、例えばホスホジエステル、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、またはアミド連結部を介して、分子中にちょうど1回出現し得るかまたは数回組み込まれ得る。
【０１３６】
本発明のオリゴヌクレオチドは（ヌクレオチドを分子種に繋ぐリンカーとは別に）、非ヌクレオチド系リンカー、特に脱塩基リンカー（dスペーサー）、トリエチレン（trietyhlen）グリコール単位、またはヘキサエチレングリコール単位をもまた含有し得る。さらなる好ましいリンカーは、アルキルアミノリンカー、例えばC3、C6、C12アミノリンカーであり、アルキルチオールリンカー、例えばC3またはC6チオールリンカーでもまたある。
【０１３７】
IL-17RAおよびTNFαは多種多様な炎症性障害において役割を果たしている。本明細書において用いられる炎症性障害は、IL-17またはTNFα活性が対象の具体的な生理学的機能にとって不利益である障害を言う。本明細書において用いられる用語「IL-17またはTNFα活性が不利益である障害」は、障害を患う対象において発現されているこれらのサイトカインのレベルが、障害の病態生理において、または障害の悪化もしくは維持に寄与する因子として役割を果たしている、疾患および他の障害を包含することが意図されている。従って、IL-17またはTNFα活性が不利益である障害は、IL-17/IL-17RAまたはTNFα活性の阻害が障害の少なくとも1つの症状および／または進行もしくは悪化を緩和すると予想される障害である。かかる障害は、例えば、障害を患う対象の生体液のIL-17またはTNFαの濃度の増大（例えば、対象の血清、血漿、滑液などのIL-17またはTNFαの濃度の増大）によって立証され得、これは、例えば、それぞれIL-17またはTNFαメッセージまたは蛋白質を検出するためのプローブまたは抗体を用いて検出され得る。
【０１３８】
炎症性障害は、敗血症、感染、自己免疫疾患、癌、移植拒絶および移植片対宿主病、移植拒絶、悪性腫瘍、肺障害、腸障害、心臓障害、敗血症、脊椎関節症、代謝障害、貧血、痛み、肝障害、皮膚の障害、爪の障害、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎との組み合わせとしての乾癬、潰瘍性大腸炎、クローン病、血管炎、ベーチェット病、強直性脊椎炎、喘息、慢性閉塞性肺障害（COPD）、特発性肺線維症（IPF）、再狭窄、糖尿病、貧血、痛み、クローン病に関係する障害、若年性関節リウマチ（JRA）、C型肝炎ウイルス感染、乾癬性関節炎、ならびに慢性尋常性乾癬を包含するが、これに限定されない。
【０１３９】
これらの疾患においてIL-17またはTNFαによって果たされる生物学的役割が公知である。これらの疾患においてIL-17RAおよび／またはTNFα発現を阻害することは、障害の治療処置を提供する。
【０１４０】
ASO-SNAおよびmASO-SNAは、単独で、または炎症性障害の処置のための別の治療薬剤と併せて投与され得る。本発明のASO-SNAおよびmASO-SNAが組み合わせられ得る治療薬剤の限定しない例は次を包含する：非ステロイド系抗炎症薬（単数もしくは複数）（NSAIDs）；サイトカイン抑制性抗炎症薬（単数もしくは複数）（CSAIDs）；CDP-571／BAY-10-3356（ヒト化抗TNFα抗体；Celltech／Bayer）；cA2／インフリキシマブ（キメラ型抗TNFα抗体；Centocor）；75kdTNFR-IgG／etanercept（75kD TNF受容体-IgG融合蛋白質；Immunex；55kdTNF-IgG（55kD TNF受容体-IgG融合蛋白質；Hoffmann-LaRoche）；IDEC-CE9／SB210396（非細胞除去型霊長類化抗CD4抗体；IDEC／SmithKline；DAB486-IL-2および／またはDAB 389-IL-2（IL-2融合蛋白質；Seragen；Anti-Tac（ヒト化抗IL-2Rα；Protein Design Labs／Roche）；IL-4（抗炎症性サイトカイン；DNAX／Schering）；IL-10（SCH52000；組換え体IL-10、抗炎症性サイトカイン；DNAX／Schering）；IL-4；IL-10および／またはIL-4アゴニスト（例えばアゴニスト抗体）；IL-1RA（IL-1受容体アンタゴニスト；Synergen／Amgen）；アナキンラ（Kineret／Amgen）；TNF-bp／s-TNF（可溶性TNF結合蛋白質）；R973401（ホスホジエステラーゼIV型阻害剤；MK-966（COX-2阻害剤；イロプロスト；メトトレキサート；サリドマイドおよびサリドマイドに関係する薬（例えばCelgen）；レフルノミド（抗炎症およびサイトカイン阻害剤；トラネキサム酸（プラスミノーゲン活性化の阻害剤；T-614（サイトカイン阻害剤；プロスタグランジンE1；Tenidap（非ステロイド系抗炎症薬；ナプロキセン（非ステロイド系抗炎症薬；メロキシカム（非ステロイド系抗炎症薬）；イブプロフェン（非ステロイド系抗炎症薬）；ピロキシカム（非ステロイド系抗炎症薬）；ジクロフェナク（非ステロイド系抗炎症薬）；インドメタシン（非ステロイド系抗炎症薬）；スルファサラジン；アザチオプリン；ICE阻害剤（酵素インターロイキン-1-ベータ変換酵素の阻害剤）；zap-70および／またはIck阻害剤（チロシンキナーゼzap-70またはIckの阻害剤）；VEGF阻害剤および／またはVEGF-R阻害剤（血管内皮細胞成長因子または血管内皮細胞成長因子受容体の阻害剤；血管新生の阻害剤）；コルチコステロイド抗炎症薬（例えばSB203580）；TNF変換酵素阻害剤；抗IL-12抗体；抗IL-18抗体；インターロイキン-11；インターロイキン-13；インターロイキン-17阻害剤；金；ペニシラミン；クロロキン；ヒドロキシクロロキン；クロラムブシル；シクロスポリン；シクロホスファミド；全リンパ組織照射；抗胸腺細胞グロブリン；抗CD4抗体；CD5-毒素；経口投与ペプチドおよびコラーゲン；ロベンザリット二ナトリウム；サイトカイン制御薬（CRA）HP228およびHP466（Houghten Pharmaceuticals, Inc.）；ICAM-1アンチセンスホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチド（ISIS 2302；Isis Pharmaceuticals, Inc.）；可溶性補体受容体1（TP10；T Cell Sciences, Inc.）；プレドニゾン；orgotein；多硫酸化グリコサミノグリカン；ミノサイクリン；抗IL2R抗体；海産性および植物性脂質（魚類および植物種子脂肪酸；オーラノフィン；フェニルブタゾン；メクロフェナム酸；フルフェナム酸；静注用免疫グロブリン；ジロートン；azaribine；ミコフェノール酸（RS-61443）；タクロリムス（FK-506）；シロリムス（ラパマイシン）；amiprilose（therafectin）；クラドリビン（2-クロロデオキシアデノシン）；メトトレキサート；抗ウイルス薬；ならび��免疫調節剤。
【０１４１】
本発明の予防および／または治療プロトコールの毒性および効能は、例えばLD50（集団の50%にとって致死的なドーズ）およびED50（集団の50%において治療有効なドーズ）を決定するための、細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的手続きによって決定され得る。毒性および治療効果の間のドーズ比が治療指数であり、これは比LD50／ED50として表現され得る。大きい治療指数を見せる予防および／または治療薬剤が好ましい。毒性副作用を見せる予防および／または治療薬剤は用いられ得るが、非感染細胞のあり得るダメージを最小化し、それによって副作用を縮減するために、かかる薬剤を患部組織の部位へと標的化する送達系を設計するよう配慮されるべきである。
【０１４２】
細胞培養アッセイおよび動物研究から得られるデータは、ヒトへの使用のための予防および／または治療薬剤の用量のある範囲を製剤化することに用いられ得る。かかる薬剤の用量は好ましくは、毒性がないかまたはほとんどないED50を包含する循環中濃度の範囲内に在る。用量は、使用される剤形および利用される投与経路に依存してこの範囲内で変わり得る。本発明の方法に用いられるいずれかの薬剤について、治療有効なドーズは最初に細胞培養アッセイから見積もられ得る。ドーズは、細胞培養によって決定されるIC50（すなわち、症状の半数阻害を達成する試験化合物の濃度）を包含する循環血漿中濃度範囲を達成するように、動物モデルにおいて処方され得る。かかる情報はヒトにおける有用なドーズをより正確に決定するために用いられ得る。血漿中のレベルは例えば高速液体クロマトグラフィーによって測定され得る。いくつもの研究がアンチセンスオリゴヌクレオチドの最適用量を検討してきた。
【０１４３】
ある種の態様においては、医薬組成物は例えば少なくとも約0.000001%（w/w）の活性化合物を含み得る。他の態様において、活性化合物は、単位（w/w）の重量の約2%から約75%の間、または約25%から約60%の間、および例えばその中の導出可能ないずれかの範囲を含み得る。いくつかの態様において、本明細書に記載される活性化合物（例えば、オリゴヌクレオチドまたはナノ構造）は、0.000001%および0.00001%の間、0.00001%および0.0001%の間、0.0001%および0.001%の間、0.001%および0.01%の間、0.01%および0.1%の間、0.1%および1%の間、1%および5%の間、5%および10%の間、10%および15%の間、15%および20%の間、20%および25%の間、25%および30%の間、30%および40%の間、40%および50%の間（w/w）、ならびにその間の導出可能ないずれかの範囲を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載される活性化合物（例えば、オリゴヌクレオチドまたはナノ構造）は、0.00007%、0.007%、0.01%、0.1%、1%（w/w）を含む
【０１４４】
本明細書に記載される化合物の対象ドーズは、典型的には約0.1μgから10,000mg、より典型的には約1μg/日から8000mg、最も典型的には約10μgから100μgの範囲である。対象体重に換算して書くと、典型的な用量は、投与あたり、約1マイクログラム/kg/体重、約5マイクログラム/kg/体重、約10マイクログラム/kg/体重、約50マイクログラム/kg/体重、約100マイクログラム/kg/体重、約200マイクログラム/kg/体重、約350マイクログラム/kg/体重、約500マイクログラム/kg/体重、約1ミリグラム/kg/体重、約5ミリグラム/kg/体重、約10ミリグラム/kg/体重、約50ミリグラム/kg/体重、約100ミリグラム/kg/体重、約200ミリグラム/kg/体重、約350ミリグラム/kg/体重、約500ミリグラム/kg/体重から、約1000mg/kg/体重、またはより多くまでの範囲であり、およびその中の導出可能ないずれかの範囲である。本明細書において挙げられている数の導出可能な範囲の限定しない例においては、約5mg/kg/体重から約100mg/kg/体重、約5マイクログラム/kg/体重から約500ミリグラム/kg/体重などの範囲が、上に記載されている数に基づいて投与され得る。絶対量は、並行しての処置、投薬数、ならびに年齢、身体状態、サイズ、および重量を包含する個々の患者パラメータを包含する、種々の因子に依存するであろう。これらは当業者に周知の因子であり、せいぜい通例の実験作業によって対処され得る。一般的には、最大ドーズ、すなわちしっかりした医学的判断に従う最も高い安全なドーズが用いられることが好ましい。
【０１４５】
本発明の分子の複数のドーズもまた企図される。いくつかの場合において、本発明の分子が別の治療薬、例えば抗炎症剤と投与されるときには、分子もしくは別の薬剤どちらかの治療用量未満、または両方の治療用量未満が、炎症性障害を有するかまたはそれを発生するリスクがある対象の処置に用いられる。薬の2つのクラスが一緒に用いられるときには、別の薬剤は望ましい治療結果を生ずるために治療ドーズ未満で投与され得る。本明細書において用いられる「治療ドーズ未満」は、別の薬剤の非存在下において投与される場合に対象に治療結果を生ずるであろう用量よりも少ない用量を言う。それゆえに、治療薬剤の治療ドーズ未満は、本発明の分子の投与の非存在下においては対象に所望の治療結果を生じないであろうものである。炎症性障害を処置することにとって有用な薬剤の治療ドーズは医学の分野において周知である。それらの用量は、Remington's Pharmaceutical Sciencesなどの参照；ならびに感染性疾患、癌、および自己免疫疾患の処置のガイダンスとして医者から頼られる多くの他の医学的参照に広範囲に記載されている。オリゴヌクレオチドの治療用量もまた当分野において記載されている。
【０１４６】
投薬レジメンは、1日数回、毎日、隔日、毎週、隔週、その間の回数のいずれか、またはより低頻度であり得る。本明細書において用いられる用語「隔週投薬」は、2週毎に1回対象に物質（例えば抗IL-17RA核酸）を投与する時系列を言う。オリゴヌクレオチドは例えば7-20日毎、11-17日毎、または13-15日毎に投与され得る。
【０１４７】
いくつかの態様において、本明細書に記載される化合物（例えば、オリゴヌクレオチド、ナノ構造など）は、ある投薬スケジュールにおいてドーズあたり4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、72、96、120、240、480時間、またはその間のいずれかの範囲に渡って投与される。
【０１４８】
オリゴヌクレオチドは有効量で投与される。本明細書に記載される疾患の処置における本発明の化合物の有効量は、用いられる特定の化合物、化合物の送達モード、およびそれが単独でまたは組み合わせとして用いられるかどうかに依存して変わり得る。いずれかの具体的な適用のための有効量もまた、処置されようとする疾患、投与されようとする具体的な化合物、対象のサイズ、または疾患もしくは状態の重さなどの因子に依存して変わり得る。当業者は、過度の実験作業をやむなくさせることなしに、本発明の具体的な分子の有効量を経験的に決定し得る。本明細書において提供される教示と組み合わせて、種々の活性化合物ならびに重み因子、例えば力価、相対的なバイオアベイラビリティ、患者体重、有害な副作用の重さ、および好ましい投与モードから選ぶことによって、実質的な毒性を引き起さず、具体的な対象を処置するために尚全く有効である、有効な予防または治療処置レジメンが計画され得る。
【０１４９】
いくつかの態様において、細胞は、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド、ナノ構造、またはmASO-SNAと、少なくとも0.001nM、少なくとも0.01nM、少なくとも0.1nM、少なくとも1nM、少なくとも10nM、少なくとも100nM、少なくとも1000nM、少なくとも10μM、少なくとも100μM、少なくとも1000μM、または1000μMよりも上の濃度で接触させられる。いくつかの態様において、細胞は、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド、ナノ構造、またはmASO-SNAと、0.001nMから0.01nM、0.01nMから0.1nM、0.1nMから1nM、1nMから10nM、10nMから100nM、100nMから1000nM、1000nMから10μM、10μMから100μM、または100μMから1000μMの濃度範囲で接触させられる。いくつかの態様において、細胞は、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド、ナノ構造、またはmASO-SNAと、0.001nM、0.01nM、0.1nM、1nM、10nM、100nM、1000nM、10μM、100μM、1000μM、または1000μMよりも上の濃度で接触させられる。
【０１５０】
本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、本明細書により詳細に記載されるように、単独で、または検出もしくは細胞毒性薬剤などの他の分子とのコンジュゲートとして、本発明の検出および処置方法に用いられ得る。
【０１５１】
例えば、オリゴヌクレオチドは、検出可能な標識にカップリングまたはコンジュゲーションされ得る。検出可能な標識は、その存在が直接的または間接的に確かめられ得る部分である。一般的には、標識の検出には標識によるエネルギーの放出が関わる。標識は、具体的な波長の光子または他の原子粒子を放出および／または吸収するその能力（例えば、放射能、ルミネッセンス、光学または電子密度など）によって直接的に検出され得る。標識は、それ自体が具体的な波長の光を放出または吸収し得る別の部分に結合する、それをリクルートする、およびいくつかのケースではそれを切断するその能力によって間接的に検出され得る（例えば、FLAGエピトープなどのエピトープタグ、西洋ワサビペルオキシダーゼなどの酵素タグなど）。間接的検出の例は、基質を切断して可視の産物にする第1の酵素標識の使用である。標識は化学物質、ペプチド、または核酸分子の性質であり得るが、そこに限定はされない。他の検出可能な標識は、P32もしくはH3などの放射能性の同位体、蛍光物質などのルミネッセンスマーカー、光学もしくは電子密度マーカーなど、またはFLAGエピトープもしくはHAエピトープなどのエピトープタグ、ビオチン、アビジン、および酵素タグ、例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ、β-ガラクトシダーゼなどを包含する。標識はその合成の間または後にオリゴヌクレオチドに結合され得る。当業者に公知の多くの異なる標識および標識方法がある。本発明に用いられ得る標識の型の例は、酵素、放射性同位体、蛍光化合物、金属コロイド、化学発光化合物、および生物発光化合物を包含する。当業者は、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのための他の好適な標識を知っているか、または通例の実験作業を用いてそれを確かめることが能うであろう。さらにその上、本発明のオリゴヌクレオチドへのこれらの標識のカップリングまたはコンジュゲーションは当業者に広く知られた標準的な技術を用いて行われ得る。
【０１５２】
検出可能な標識へのオリゴヌクレオチドのコンジュゲーションは、とりわけ診断アッセイへのかかる薬剤の使用を容易化する。検出可能な標識の別のカテゴリーは、診断およびイメージング標識（一般的に、インビボ検出可能な標識と言われる）、例えば核磁気共鳴イメージング（MRI）：Gd（DOTA）；核医学のためには：201Tl、ガンマ線放出放射性核種99mTc；ポジトロン断層法（PET）のためには：ポジトロン放出同位体、（18）F-フルオロデオキシグルコース（（18）FDG）、（18）F-フッ化物、銅-64、ガドジアミド、および203PbなどのPb(II)の放射性同位体；111Inを包含する。かかる場合において、オリゴヌクレオチドの使用は、オリゴヌクレオチドがアンチセンス効果を提供すると観察され得る。
【０１５３】
本明細書に記載されるコンジュゲーションまたは修飾は通例のケミストリーを使用し、このケミストリーは本発明の一部を形成せず、このケミストリーは化学の分野の業者に周知である。保護基ならびにホモ（mono）およびヘテロ二官能性リンカーなどの公知のリンカーの使用は文献中に良く記述されており、ここでは繰り返されない。
【０１５４】
本明細書において用いられる「コンジュゲーションされる」は、いずれかの物理化学的手段によって互いに安定に結合された2つの実体を意味する。取り付けの性質は、それがどちらかの実体の有効性を実質的に損なわないということが重要である。それらのパラメータに留意して、当業者に公知のいずれかの共有結合的または非共有結合的連結部が使用され得る。いくつかの態様においては、共有結合的な連結部が好ましい。非共有結合的なコンジュゲーションは、疎水性相互作用、イオン性相互作用、高親和性相互作用、例えばビオチン-アビジンおよびビオチン-ストレプトアビジン複合体形成、ならびに他の親和性相互作用を包含する。取り付けのかかる手段および方法は当業者に周知である。種々の方法が標識を検出するために用いられ得、標識および他のアッセイコンポーネントの性質に依存する。
【０１５５】
本発明の医薬組成物は、薬学的に受け入れられる担体中に溶解または分散した1つ以上の薬剤の有効量を含む。表現「薬学的に（pharmaceutical）または薬理学的に受け入れられる」は、例えばヒトなどの動物に適当に投与されたときに、有害な、アレルギー性の、または他の予想外の反応を生じない分子実体および組成物を言う。その上、動物（例えばヒト）投与のためには、調製物はFDA Office of Biological Standardsによって要求される無菌性、発熱性、一般的安全性、および純度規格に合うべきであるということは理解されるであろう。一般的に、化合物はヒトへの投与にとって好適である。この用語は、化合物または組成物のさらなる操作がヒトへの投与に先立って必要とされないように、化合物または組成物が無毒性かつ十分に純粋であるということを要求する。
【０１５６】
本明細書において用いられる「薬学的に受け入れられる担体」は、当業者に公知であろういずれかおよび全ての溶媒、分散媒体、コーティング、界面活性剤、抗酸化剤、保存料（例えば、抗細菌剤、抗菌剤）、等張化剤、吸収遅延剤、塩、保存料、薬、薬安定化剤、ゲル、結合剤、添加剤、崩壊剤、滑剤、甘味料、香料、色素、同類の材料、およびその組み合わせを包含する。
【０１５７】
薬剤は担体の異なる型を含み得、それが固体、液体、ゲル、クリーム、またはエアロゾル形態で投与されるべきかどうか、およびそれが注射などの投与経路のために無菌であることを必要とするかどうかに依存する。本発明は、静注、皮内、動脈内、病変内、腫瘍内、頭蓋内、髄腔内、関節内、前立腺内、胸腔内、気管内、鼻腔内、硝子体内、膣内、直腸内、外用、腫瘍内、筋肉内、腹腔内、皮下、結膜下、精嚢内、経粘膜、心膜内、臍内、眼内、点眼液によって、経口的に、外用、局所的に、吸入（例えばエアロゾル吸入）、注射、点滴、連続点滴、標的細胞を直接的に浸す限局的な灌流、カテーテルによって、洗浄によって、クリームによって、ゲルによって、脂質組成物（例えばリポソーム）によって、または当業者には公知であろう他の方法もしくは前述のいずれかの組み合わせによって投与され得る。
【０１５８】
いずれかのケースでは、組成物は1つ以上のコンポーネントの酸化を遅らせるための種々の抗酸化剤を含み得る。加えて、微生物の作用の防止は種々の抗細菌および抗菌剤などの保存料によって成し遂げられ得、パラベン（例えばメチルパラベン、プロピルパラベン）、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール、またはその組み合わせを包含するが、これに限定されない。
【０１５９】
薬剤は、自由な塩基、中性、または塩形態で組成物へと製剤化され得る。薬学的に受け入れられる塩は、酸付加塩、例えば蛋白質系組成物の自由なアミノ基によって形成されるか、あるいは例えば塩酸もしくはリン酸などの無機酸、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、もしくはマンデル酸などの有機酸によって形成されるものを包含する。自由なカルボキシル基によって形成される塩もまた、例えば、水酸化ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、もしくは第二鉄などの無機塩基；またはイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、もしくはプロカインなどの有機塩基に由来し得る。
【０１６０】
組成物が液体形態である態様において、担体は溶媒または分散媒体であり得、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、脂質（例えば、トリグリセリド、野菜油、リポソーム）、およびその組み合わせを含むが、これに限定されない。正しい流動性は、例えばレシチンなどのコーティングの使用によって；例えば液体ポリオールもしくは脂質などの担体中への分散による要求される粒子サイズの維持によって；例えばヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤の使用によって；またはかかる方法の組み合わせによって維持され得る。多くのケースでは、例えば糖、塩化ナトリウム、またはその組み合わせなどの等張化剤を包含することが好ましいであろう。
【０１６１】
本発明の化合物は組織に直接的に投与され得る。直接的な組織投与は直接注射、外用適用、または局所適用によって達成され得る。化合物は1回投与され得、または代替的にはそれらは複数の投与によって投与され得る。複数回投与される場合に、化合物は異なる経路によって投与され得る。例えば、最初の（または最初の数度の）投与は患部組織に直接的になされ得、一方、後の投与は全身的であり得る。
【０１６２】
本発明の製剤は薬学的に受け入れられる溶液として投与され、これは、薬学的に受け入れられる濃度の塩、緩衝剤、保存料、適合性の担体、アジュバント、および任意に他の治療成分を通例含有し得る。
【０１６３】
本発明の方法に従うと、化合物は医薬組成物として投与され得る。一般的に、医薬組成物は本発明の化合物と薬学的に受け入れられる担体とを含む。本明細書において用いられる薬学的に受け入れられる担体は、活性成分の生物学的活性の有効性に干渉しない無毒性材料を意味する。
【０１６４】
薬学的に受け入れられる担体は、希釈剤、フィラー、塩、緩衝液、安定化剤、可溶化剤、および当分野において周知の他の材料を包含する。通例、かかる調製物は塩、緩衝剤、保存料、適合性の担体、および任意に他の治療薬剤を含有し得る。医学に用いられるときに、塩は薬学的に受け入れられるべきであるが、薬学的に受け入れらない塩はその薬学的に受け入れられる塩を調製するために便利に用いられ得、本発明の範囲から排除されない。かかる薬理学的におよび薬学的に受け入れられる塩は次の酸から調製されるものを包含するが、これに限定されない：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、および同類。薬学的に受け入れられる塩は、アルカリ金属またはアルカリ土類塩、例えばナトリウム、カリウム、またはカルシウム塩としてもまた調製され得る。
【０１６５】
本発明の化合物は、固体、半固体、液体、または気体形態の調製物、例えば錠剤、カプセル、粉末、顆粒、軟膏、溶液、デポ、吸入薬、および注射へと、経口、非経口、または外科的投与のための通常のやり方で、製剤化され得る。本発明は、例えばインプラントによる局所投与のために製剤化される医薬組成物をもまた包摂する。
【０１６６】
経口投与にとって好適な組成物は、個別の単位、例えばそれぞれ所定量の活性薬剤を含有するカプセル、錠剤、ロゼンジとして提示され得る。他の組成物は、水性液体または非水性液体中の懸濁液、例えばシロップ、エリキシル剤、またはエマルションを包含する。
【０１６７】
経口投与のためには、化合物は、活性化合物を当分野において周知の薬学的に受け入れられる担体と組み合わせることによって難なく製剤化され得る。かかる担体は、本発明の化合物が錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、プルロニックF-127などの熱可逆性ハイドロゲル、シロップ、スラリー、懸濁液、および同類として、処置されるべき対象による経口摂取のために製剤化されることを可能にする。経口使用のための医薬調製物は、固体添加剤、任意にもたらされる混合物を磨砕し、所望の場合には好適な助剤を追加した後に顆粒の混合物を加工して錠剤または糖衣錠コアを得ると、得られ得る。好適な添加剤は、特にフィラー、例えばラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを包含する糖；例えばトウモロコシ澱粉、小麦澱粉、米澱粉、馬鈴薯澱粉、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン（PVP）などのセルロース調製物である。所望の場合には、崩壊剤、例えば架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムなどのその塩が追加され得る。任意に、経口製剤は、生理食塩水もしくは体内の酸性条件を中和するための緩衝液によってもまた製剤化され得、またはいずれかの担体なしで投与され得る。
【０１６８】
糖衣錠コアは好適なコーティングを提供される。この目的のためには、濃縮糖溶液が用いられ得、これは、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または酸化チタン、ラッカー溶液、および好適な有機溶媒もしくは溶媒混合物を任意に含有し得る。染料または顔料が、同定のために、または活性化合物ドーズの異なる組み合わせ同士を特徴づけるために錠剤または糖衣錠コーティングに追加され得る。
【０１６９】
経口的に用いられ得る医薬調製物は、ゼラチンから作られたプッシュフィットカプセル、ならびにゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤から作られた密閉ソフトカプセルを包含する。プッシュフィットカプセルは、活性成分を、ラクトースなどのフィラー、澱粉などの結合剤、および／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの滑剤、ならびに任意に安定化剤との混合物として含有し得る。ソフトカプセルでは、活性化合物は、好適な液体、例えば脂肪油、液体パラフィン、または液体ポリエチレングリコール中に溶解または懸濁され得る。加えて、安定化剤が追加され得る。経口投与のために製剤化されたマイクロスフェアもまた用いられ得る。かかるマイクロスフェアは当分野において良く定められている。経口投与のための全ての製剤はかかる投与にとって好適な用量であるべきである。
【０１７０】
バッカル投与のためには、組成物は従来の様式で製剤化された錠剤またはロゼンジの形態をとり得る。
【０１７１】
吸入による投与のためには、本発明に従う使用のための化合物は、加圧式パックまたはネブライザーからのエアロゾルスプレー提示の形態で、好適なプロペラント、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の好適なガスの使用によって、便利に送達され得る。加圧式エアロゾルのケースでは、用量単位は、定量を送達するためのバルブを提供することによって決定され得る。化合物とラクトースまたは澱粉などの好適な粉末ベースとの粉末ミックスを含有する、吸入器またはインサフレーターによる使用のための例えばゼラチンのカプセルおよびカートリッジが製剤化され得る。エアロゾル送達系を調製するための技術は当業者に周知である。
【０１７２】
化合物は、それらを全身送達することが望ましいときには、注射による、例えばボーラス注射または連続点滴による非経口投与のために製剤化され得る。注射のための製剤は、単位剤形として、例えばアンプルまたはマルチドーズ容器として提示され得、追加される保存料を有する。組成物は、油性または水性基剤中の懸濁液、溶液、またはエマルションなどの形態をとり得、懸濁、安定化、および／または分散剤などの製剤化助剤を含有し得る。
【０１７３】
非経口投与のための調製物は、無菌の水性または非水性溶液、懸濁液、およびエマルションを包含する。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの野菜油、およびオレイン酸エチルなどの注射用の有機エステルである。水性担体は、水、アルコール系／水性溶液、エマルション、または懸濁液を包含し、生理食塩水および緩衝化媒体を包含する。非経口基剤は、塩化ナトリウム溶液、ブドウ糖リンゲル液、ブドウ糖および塩化ナトリウム、乳酸リンゲル液、または不揮発油を包含する。静注基剤は、液および栄養素の補給液、電解質の補給液（例えば、ブドウ糖リンゲル液に基づくもの）、ならびに同類を包含する。例えば抗微生物薬、抗酸化剤、キレート剤、および不活性ガス、ならびに同類などの、保存料および他の添加剤もまた存在し得る。より低いドーズは、投与の他の形態、例えば静注投与からもたらされるであろう。対象の応答が適用される初期ドーズでは不十分である事象においては、より高いドーズ（または、異なるより限局的な送達経路による有効により高いドーズ）が、患者の忍容性が許容する程度に応じて使用され得る。日あたり複数のドーズが、化合物の適当な全身レベルを達成するために企図される。
【０１７４】
本発明の組成物は、皮膚または体腔への投与のための外用組成物として製剤化され得る。好適な外用基剤および基剤コンポーネントは化粧品および製薬分野において周知であり、水；プルロニックF-127などの熱可逆性ハイドロゲル、アルコールなどの有機溶媒（特に、皮膚から難なく蒸発することができる低級アルコール、例えばエタノール）、グリコール（例えばプロピレングリコール、ブチレングリコール、およびグリセリン）、脂肪族アルコール（例えばラノリン）；水および有機溶媒（例えば水およびアルコール）の混合物、ならびにアルコールおよびグリセリンなどの有機溶媒の混合物（任意に水をもまた有する）；脂質に基づく材料、例えば脂肪酸、アシルグリセロール（鉱油などの油および天然または合成起源の脂肪を包含する）、ホスホグリセリド、スフィンゴ脂質、およびろう；蛋白質に基づく材料、例えばコラーゲンおよびゼラチン；シリコーンに基づく材料（不揮発性および揮発性両方）、例えばシクロメチコン、ジメチコノール、およびジメチコンコポリオール（Dow Corning）；炭化水素に基づく材料、例えばペトロラタムおよびスクアレン；アニオン性、カチオン性、および両性界面活性剤および石鹸；徐放基剤、例えばマイクロスポンジおよびポリマーマトリックス；安定化および懸濁剤；乳化剤；ならびに皮膚への投与にとって好適である他の基剤および基剤コンポーネント、ならびに上で同定されているかまたはさもなければ当分野に公知の外用基剤コンポーネントの混合物、などの基剤（または基剤コンポーネント）を包含する。基剤は、さらに、適用される製剤の安定性または有効性を改善するように適合したコンポーネント、例えば保存料、抗酸化剤、皮膚透過向上剤、徐放材料、および同類を包含し得る。
【０１７５】
好適な基剤の選択肢は、製剤が達成するべき具体的な物理的形態および送達モードに依存するであろう。好適な形態の例は、液体（例えば、うがい液およびマウスウォッシュ。ストロンチウムカチオンの溶解形態、ならびに懸濁液、エマルション、および同類を包含する）；固体および半固体、例えばゲル、フォーム剤、ペースト剤、クリーム、軟膏、（リップスティックまたは腋用デオドラントスティックのような）「スティック」、粉末、および同類；リポソームまたは他の送達小胞を含有する製剤；直腸もしくは膣座薬、クリーム、フォーム剤、ゲル、または軟膏；ならびに他の形態を包含する。典型的な送達モードは、指を用いる適用；物理的アプリケータ、例えば布地、ティッシュ、綿棒、スティック、またはブラシを用いる適用（例えば、ちょうど適用に先立って製剤によってアプリケータを液浸することによって、またはすでに製剤を含有する調製されたアプリケータ−例えば処置もしくは予湿された包帯、ワイプ、ウォッシュクロス、もしくはスティック−を皮膚に適用もしくは接着することによって、達成される）；噴霧（ミスト、エアロゾル、または泡噴霧を包含する）；（例えば点耳液のような）点滴器適用；（製剤の好適な粉末形態のような）散布；ならびに液浸を包含する。
【０１７６】
外用製剤は直腸および膣投与のための製剤をもまた包含する。直腸投与のための製剤は、例えばココアバターを含む好適なベースによって座薬として提示され得る。膣投与にとって好適な製剤は、活性成分に加えて、適当であることが当分野において公知の担体を含有する錠剤、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト剤、フォーム剤、またはスプレー製剤として提示され得る。
【０１７７】
尚他の態様において、送達基剤は、哺乳動物レシピエントへの埋植にとって好適な生体適合性のマイクロ粒子またはインプラントである。他の送達系は時間放出、遅延放出、または徐放送達系を包含し得る。かかる系は化合物の繰り返しの投与を回避し得、対象および医師にとっての便利を増大させる。放出送達系の多くの型が利用可能であり、当業者に公知である。それらは、ポリマーベース系、例えばポリ（ラクチド-グリコリド）、コポリオキサレート、ポリカプロラクトン、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリヒドロキシ酪酸、およびポリ酸無水物を包含する。
【０１７８】
いくつかの態様において、本発明のアンチセンス核酸は安定な自己集合するナノ構造として製剤化される。ナノ構造はIL-17RAアンチセンスオリゴヌクレオチドを包含し、アンチセンスオリゴヌクレオチドはコアに結びつけられる。コアは、中実または中空コア、例えばリポソーム系コアであり得る。中実コアは中空の中心を有さない球状形状の材料である。本明細書において用いられる用語球状は一般的形状を言い、完璧な球体または円形形状を必須とせず、またはそれに限定されない。それは欠陥を包含し得る。
【０１７９】
中実コアは当業者に公知の多種多様な材料から構築され得る：貴金属（金、銀）、遷移金属（鉄、コバルト）、および金属酸化物（シリカ）を包含するが、これに限定されない。加えて、それらのコアは不活性、常磁性、または超磁性（supramagentic）であり得る。それらの中実コアは、記載されている材料の純粋な組成物から、またはいずれかの数の材料の混合物の組み合わせとしてもしくは材料の層状組成物としてどちらかで構築され得る。加えて、中実コアは、ポリマー系コア、例えば両親媒性ブロックコポリマー、疎水性ポリマー、例えばポリスチレン、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸-co-グリコール酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（カプロラクトン）、および当業者に公知の他の生体適合性ポリマーからでき得る。
【０１８０】
コアは代替的には中空コアであり得、これは少なくともいくらかの空間をシェル材料の中心領域に有する。中空コアはリポソーム系コアおよびニオソームを包含する。本明細書において用いられるリポソーム系コアは、脂質二重層を形成する脂質またはリン脂質のコンポーネントによって形成された、中心に所在するコア区画を言う。「リポソーム」は種々のサイズおよび構造の人工の自己閉鎖した小胞構造であり、1つまたは数個の膜が水性コアをカプセル封入している。最も典型的には、リポソーム膜は脂質二重層の膜から形成され、親水性頭部基は水性環境に向かって定位し、脂質鎖は親油性コアに埋め込まれる。リポソームは、他の両親媒性モノマーおよびポリマー分子、例えばブロックコポリマーのようなポリマーまたはポリペプチドからも形成され得る。単層小胞はリポソームであり、水性空間を封入する単一の膜によって定められる。対照的に、オリゴまたは多層小胞は数個の膜から組み上げられている。典型的には、膜は大体4nmの厚さであり、リン脂質などの天然または合成起源の両親媒性脂質からできている。任意に、膜特性はステロールまたはコール酸誘導体などの他の脂質の組み込みによって改変され得る。
【０１８１】
脂質二重層は脂質分子の2つの層からできている。層中の各脂質分子は隣接する脂質二重層に対して実質的に平行に定位し、二重層を形成する2つの層は、水相に露出したそれらの分子の極性末端と、互いに隣接する非極性末端とを有する。リポソーム系コアの水性中心領域は、空であるか、あるいは水、水性エマルション、オリゴヌクレオチド、または他の治療もしくは診断薬剤によって充分にまたは部分的に満たされ得る。
【０１８２】
ニオソームは、二重層として定位した非イオン性界面活性剤から形成される小胞である。普通は、ニオソームは添加剤として追加されるコレステロールを有するが、他の脂質に基づくおよび脂質に基づかない構成成分もまた包含され得る。ニオソームの調製のための方法は当分野において公知である。いくつかの態様においては、ポリエチレングリコール（PEG）がニオソーム調製の間またはその後に包含される。ニオソーム小胞は構造的および機能的にリポソームに相似であるが、一次的な構成成分（constiuent）としては脂質よりもむしろ非イオン性界面活性剤に基づく。用いられる広く知られた非イオン性界面活性剤はソルビタン（span）またはポリソルベート（tween）を包含する；しかしながら、多種多様な非イオン性界面活性剤がニオソームを調製するために用いられ得る。
【０１８３】
「脂質」は、脂肪、脂質、原形質のアルコール・エーテル可溶性の構成成分を包摂する総称的な用語としてのその従来の意味を言い、それらは水に不溶性である。通常は、脂質は親水性および疎水性部分からなる。水中において、脂質は自己組織化して二重層の膜を形成し得、親水性部分（頭部基）は水相に向かって定位し、親油性部分（アシル鎖）は二重層のコアに埋め込まれる。脂質は2つの親水性部分をも含み得る（双頭型両親媒性分子）。そのケースでは、膜は二重層ではなく単一の脂質層から形成され得る。本文脈における脂質の典型例は、脂肪、脂肪油、精油、ろう、ステロイド、ステロール、リン脂質、糖脂質、スルホ脂質、アミノ脂質、脂質色素、および脂肪酸である。用語は、天然に生起するおよび合成の脂質両方を包摂する。本発明との繋がりで好ましい脂質は：ステロイドおよびステロール、特にコレステロール、ホスファチジル、ホスファチジルコリン、およびホスファチジルエタノールアミンを包含するリン脂質、ならびにスフィンゴミエリンである。脂肪酸があるところでは、それらは最高で6つの二重結合を含有する、長さ約12-24炭素鎖であり得る。脂肪酸はバックボーンに連結され、これはグリセロールに由来し得る。1つの脂質中の脂肪酸同士は異なり得（非対称）、または1つの脂肪酸鎖のみが存在し得る。例えばリゾレシチンである。特に、非カチオン性脂質が天然供給源、例えば卵黄、ウシ心臓、脳、肝臓、または大豆から精製されたレシチン（ホスファチジルコリン）に由来するときには、混合製剤もまた可能である。
【０１８４】
リポソーム系コアは、当業者に公知の1つ以上の脂質から構築され得る：1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DOPC）、1,2-ジミリストイル-sn-ホスファチジルコリン（DMPC）、1-パルミトイル-2-オレオイル-sn-ホスファチジルコリン（POPC）、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホ-（1'-rac-グリセロール）（DSPG）、1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホ-（1'-rac-グリセロール）（DOPG）、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DSPC）、1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DPPC）、1,2-ジ-（9Z-オクタデセノイル）-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン（DOPE）、および1,2-ジヘキサデカノイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン（DPPE）、スフィンゴ脂質、例えば、種々の長さおよび飽和状態のスフィンゴシン、スフィンゴシンリン酸、メチル化スフィンゴシンおよびスフィンガニン、セラミド、セラミドリン酸、1-Oアシルセラミド、ジヒドロセラミド、2-ヒドロキシセラミド、スフィンゴミエリン、グリコシル化スフィンゴ脂質、スルファチド、ガングリオシド、スフィンゴリン脂質、およびフィトスフィンゴシン、ならびにそれらの誘導体、リン脂質、例えば、種々の長さ、飽和状態のホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、ホスファチジン酸、リゾホスファチジン酸、環式LPA、ホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、リゾホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、リゾホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、イノシトールリン酸、LPI、カルジオリピン、リゾカルジオリピン、ビス（モノアシルグリセロ）リン酸、（ジアシルグリセロ）リン酸、エーテル脂質、ジフィタニルエーテル脂質、およびプラズマローゲン、ならびにそれらの誘導体、ステロール、例えば、異なる長さ、飽和状態のコレステロール、デスモステロール、スティグマステロール、ラノステロール、ラトステロール、ジオスゲニン、シトステロール、チモステロール、チモステノール、14-デメチル-ラノステロール、コレステロール硫酸、DHEA、硫酸DHEA、14-デメチル-14-デヒドロ（dehydr）ラノステロール、シトスタノール、カンペステロール、アニオン性エーテル脂質、カチオン性エーテル脂質、ランタニドキレート脂質、A環置換オキシステロール、B環置換オキシステロール、D環置換オキシステロール、側鎖置換オキシステロール、二重置換オキシステロール、コレスタン酸誘導体、フッ素化ステロール、蛍光ステロール、スルホン酸化ステロール、リン酸化ステロール、および多価不飽和ステロール、ならびにそれらの誘導体を包含するが、これに限定されない。
【０１８５】
ある種の態様においては、コアの直径は、平均直径1nmから約250nm、平均直径約1nmから約240nm、平均直径約1nmから約230nm、平均直径約1nmから約220nm、平均直径約1nmから約210nm、平均直径約1nmから約200nm、平均直径約1nmから約190nm、平均直径約1nmから約180nm、平均直径約1nmから約170、平均直径約1nmから約160nm、平均直径約1nmから約150nm、平均直径約1nmから約140nm、平均直径約1nmから約130nm、平均直径約1nmから約120nm、平均直径約1nmから約110nm、平均直径約1nmから約100nm、平均直径約1nmから約90nm、平均直径約1nmから約80nm、平均直径約1nmから約70nm、平均直径約1nmから約60nm、平均直径約1nmから約50nm、平均直径約1nmから約40nm、平均直径約1nmから約30nm、または平均直径約1nmから約20nm、または平均直径約1nmから約10nmである。
【０１８６】
オリゴヌクレオチドは、コアの外面上、コアの壁内、および／またはコアの中心に位置し得る。典型的には、コア上に位置するオリゴヌクレオチドはコアにカップリングされていると言われる。カップリングされることは直接的または間接的であり得る。いくつかの態様においては、少なくとも5、10、15、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、5000、もしくは10,000個のオリゴヌクレオチド、またはそのいずれかの範囲の組み合わせがコアの外面上にある。いくつかの態様においては、1-1000、10-500、50-250、または50-300個のオリゴヌクレオチドが表面上に存在する。
【０１８７】
オリゴヌクレオチドシェルのオリゴヌクレオチドは種々の方向に定位し得る。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは外向きに放射状に定位する。それらのオリゴヌクレオチドの定位は、コアとの関係では5'遠位／3'末端もしくはコアとの関係では3'遠位／5'末端どちらかであるか、またはコアの周りに水平的に定位し得る。1つの態様においては、1つのまたは多種の異なるオリゴヌクレオチドが単一のSNAの同じ表面上に存在する。全てのケースでは、少なくとも1つのオリゴヌクレオチドが表面上に存在するが、最高で10,000個が存在し得る。
【０１８８】
オリゴヌクレオチドは、直接的にまたはリンカーを介して間接的にどちらかで、コアにもしくは互いにおよび／または活性薬剤などの他の分子に連結され得る。オリゴヌクレオチドは5'末端または3'末端を介してリンカーにコンジュゲーションされ得、例えば［配列、5'-3'］-リンカーまたはリンカー-［配列、5'-3'］である。ナノ構造のオリゴヌクレオチドのいくつかまたは全ては、共有結合的または非共有結合的な連結部を介して、直接的または間接的にどちらかで互いに連結され得る。1つのオリゴヌクレオチドから別のオリゴヌクレオチドへの連結部は、そのオリゴヌクレオチドからリポソーム系コアへの連結部に加えて、またはそれとは代替的にであり得る。
【０１８９】
オリゴヌクレオチドシェルは、1つまたは複数のリンカー分子を介してコアの表面に係留され得る：1つまたは複数のチオールを含有するいずれかの化学構造、例えば種々の鎖長のアルカンチオール、環式ジチオール、リポ酸、または当業者に公知の他のチオールリンカーを包含するが、これに限定されない。
【０１９０】
リポソーム系コアを含有するある態様においては、オリゴヌクレオチドシェルは、1つのまたは多種のリンカー分子へのコンジュゲーションを介してリポソーム系コアの表面に係留され得る：トコフェロール、スフィンゴ脂質、例えば、種々の長さおよび飽和状態のスフィンゴシン、スフィンゴシンリン酸、メチル化スフィンゴシンおよびスフィンガニン、セラミド、セラミドリン酸、1-Oアシルセラミド、ジヒドロセラミド、2-ヒドロキシセラミド、スフィンゴミエリン、グリコシル化スフィンゴ脂質、スルファチド、ガングリオシド、スフィンゴリン脂質、およびフィトスフィンゴシン、ならびにそれらの誘導体、リン脂質、例えば、種々の長さ、飽和状態のホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、ホスファチジン酸、リゾホスファチジン酸、環式LPA、ホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、リゾホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、リゾホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、イノシトールリン酸、LPI、カルジオリピン、リゾカルジオリピン、ビス（モノアシルグリセロ）リン酸、（ジアシルグリセロ）リン酸、エーテル脂質、ジフィタニルエーテル脂質、およびプラズマローゲン、ならびにそれらの誘導体、ステロール、例えば、異なる長さ、飽和状態のコレステロール、デスモステロール、スティグマステロール、ラノステロール、ラトステロール、ジオスゲニン、シトステロール、チモステロール、チモステノール、14-デメチル-ラノステロール、コレステロール硫酸、DHEA、硫酸DHEA、14-デメチル-14-デヒドロ（dehydr）ラノステロール、シトスタノール、カンペステロール、アニオン性エーテル脂質、カチオン性エーテル脂質、ランタニドキレート脂質、A環置換オキシステロール、B環置換オキシステロール、D環置換オキシステロール、側鎖置換オキシステロール、二重置換オキシステロール、コレスタン酸誘導体、フッ素化ステロール、蛍光ステロール、スルホン酸化ステロール、リン酸化ステロール、および多価不飽和ステロール、ならびにそれらの誘導体を包含するが、これに限定されない。
【０１９１】
オリゴヌクレオチドは、コア（リポソーム系コア）に埋め込まれることによってもまたコアに結びつけられ得、あるいはそれは間接的に（すなわち、リンカーなどの他の分子を介して非共有結合的もしくは共有結合的に）または直接的に（すなわち共有結合的に）どちらかで取り付けられるかまたは連結され得る。
【０１９２】
本発明は製造品をもまた包含し、これはコンポーネントのいずれか1つまたは集まりを言う。いくつかの態様において、製造品はキットである。製造品は、本発明の医薬または診断グレード化合物を1つ以上の容器中に包含し得る。製造品は、本発明の化合物の使用を促進または記載する取扱説明またはラベルを包含し得る。
【０１９３】
本明細書において用いられる「促進される」は、炎症性障害の処置との繋がりで本発明の組成物に関連する、教育、病院、および他の臨床取扱説明の方法を包含するビジネスをする全ての方法、製薬販売を包含する製薬産業活動、ならびにいずれかの形態の書面、口頭、および電子式コミュニケーションを包含するいずれかの広告または他の促進活動を包含する。
【０１９４】
「取扱説明」は、促進のコンポーネントを定め得、典型的には、本発明の組成物のパッケージ上のまたはそれに付いている書面の取扱説明が関わる。取扱説明は、いずれかの様式で提供されるいずれかの口頭または電子式取扱説明をもまた包含し得る。
【０１９５】
それゆえに、本明細書に記載される薬剤は、いくつかの態様において、治療、診断、または研究適用へのそれらの使用を容易化するための医薬または診断もしくは研究キットへと組み立てられ得る。キットは、本発明のコンポーネントを収容する1つ以上の容器と使用のための取扱説明とを包含し得る。具体的には、かかるキットは、本明細書に記載される1つ以上の薬剤を、それらの薬剤の意図される治療適用および正しい投与を記載する取扱説明と一緒に包含し得る。ある種の態様においては、キット内の薬剤は、薬剤の具体的な適用と投与の方法とにとって好適な医薬製剤または医薬組成物および用量であり得る。
【０１９６】
キットは、本明細書に記載される方法の医師による使用を容易化するように設計され得、多くの形態をとり得る。キットの組成物のそれぞれは、適用可能なところでは、液体形態で（例えば溶液で）または固体形態（例えば乾燥粉末）で提供され得る。ある種のケースでは、組成物のいくつかは、水戻し用であるかまたは別様に（例えば活性形態に）加工可能であり得る。例えば好適な溶媒または他の種（例えば、水もしくは細胞培養培地）の追加により、これはキットに提供されているかまたはされずにあり得る。本明細書において用いられる「取扱説明」は、取扱説明および／または促進のコンポーネントを定め得、典型的には、本発明のパッケージ上のまたはそれに付いている書面の取扱説明が関わる。取扱説明は、取扱説明がキットに関連しているということをユーザーが明瞭に認識するようないずれかの様式で提供されるいずれかの口頭または電子式取扱説明、例えば視聴覚材料（例えば、ビデオテープ、DVDなど）、インターネット、および／またはウェブに基づくコミュニケーションなどをもまた包含し得る。書面の取扱説明は、医薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を取り締まる政府官庁によって規定された形態であり得、この取扱説明はヒト投与のための製造、使用、または販売の官庁による承認をもまた反映し得る。
【０１９７】
キットは、本明細書に記載されるコンポーネントのいずれか1つ以上を1つ以上の容器に含有し得る。例として、1つの態様においては、キットは、キットの1つ以上のコンポーネントを混合すること、ならびに／またはサンプルを単離および混合することと、対象に適用することとのための取扱説明を包含し得る。キットは本明細書に記載される薬剤を収容する容器を含み得る。薬剤は無菌的に調製され、シリンジとしてパッケージされ、冷蔵で運送され得る。代替的には、それはバイアルまたは他の保管容器内に収容され得る。第2の容器は無菌的に調製された他の薬剤を有し得る。代替的には、キットは、プレミックスされ、シリンジ、バイアル、チューブ、または他の容器によって運送される活性薬剤を包含し得る。
【０１９８】
キットは、種々の形態、例えばブリスターパウチ、シュリンク包装パウチ、真空密閉可能なパウチ、密閉可能な熱成形トレイ、または類似のパウチもしくはトレイ形態を有し得、付属品はパウチ、1つ以上のチューブ、容器、箱、またはバッグ内にばらばらにパックされる。キットは付属品が追加された後に滅菌され得、それによって容器内の個々の付属品がさもなければ未包装であることを許す。キットは、いずれかの適当な滅菌技術、例えば放射線滅菌、熱滅菌、または当分野において公知の他の滅菌方法を用いて滅菌され得る。キットは、特定の適用に依存して、他のコンポーネント、例えば、容器、細胞培地、塩、緩衝液、試薬、シリンジ、針、消毒剤を適用するまたは取り除くためのガーゼなどの布類、使い捨て手袋、投与に先立つ薬剤の支持体などをもまた包含し得る。
【０１９９】
キットの組成物は、いずれかの好適な形態で、例えば液体溶液または乾燥粉末として提供され得る。提供される組成物が乾燥粉末であるときには、粉末は好適な溶媒の追加によって水戻しされ得、これもまた提供され得る。組成物の液体形態が用いられる（sued）態様において、液体形態は濃縮されているかまたは調整不要であり得る。溶媒は化合物と使用または投与モードとに依存するであろう。薬組成物のための好適な溶媒は周知であり、文献から利用可能である。溶媒は化合物および使用または投与モードに依存するであろう。
【０２００】
キットは、態様の1つのセットにおいて、1つ以上の容器手段、例えばバイアル、チューブ、および同類を詰め込んで受け入れるように区画化されている運搬手段を含み得、容器手段のそれぞれは方法に用いられるべき別々の要素の1つを含む。例えば、容器の1つはアッセイの正のコントロールを含み得る。加えて、キットは、他のコンポーネント、例えばアッセイに有用な緩衝液のために、容器を包含し得る。
【０２０１】
本発明は、パッケージおよびラベル付けされた完成医薬製品をもまた包摂する。この製造品は、適当な単位剤形を、適当なベッセルまたは容器、例えばガラスバイアルまたは気密密閉される他の容器内に包含する。非経口投与にとって好適な剤形のケースでは、活性成分は無菌であり、微粒子不含溶液としての投与にとって好適である。換言すると、本発明は、非経口溶液および凍結乾燥粉末両方を包摂し、それぞれは無菌であり、後者は注射に先立つ水戻しにとって好適である。代替的には、単位剤形は、経口、経皮、外用、または経粘膜送達にとって好適な固体であり得る。
【０２０２】
好ましい態様において、単位剤形は静注、筋肉内、または皮下送達にとって好適である。それゆえに、本発明は各送達経路にとって好適な好ましくは無菌の溶液を包摂する。
【０２０３】
いずれかの医薬製品のように、パッケージ材料および容器は保管および運送の間に製品の安定性を保護するように設計される。さらに、本発明の製品は、使用のための取扱説明、またはいかにして炎症性疾患もしくは障害を適当に防止もしくは処置するかについて医師、技師、もしくは患者に助言する他の情報材料を包含する。換言すると、製造品は、実際のドーズ、モニタリング手続き、および他のモニタリング情報を包含するがこれに限定されない投薬レジメンを指示または示唆する取扱説明手段を包含する。
【０２０４】
より具体的には、本発明は、パッケージ材料、例えば箱、ボトル、チューブ、バイアル、容器、噴霧器、インサフレーター、静注（i.v.）バッグ、封筒、および同類と；前記パッケージ材料中に含有される医薬薬剤の少なくとも1つの単位剤形とを含む製造品を提供する。本発明は、パッケージ材料、例えば箱、ボトル、チューブ、バイアル、容器、噴霧器、インサフレーター、静注（i.v.）バッグ、封筒、および同類と；前記パッケージ材料中に含有される各医薬薬剤の少なくとも1つの単位剤形とを含む製造品をもまた提供する。本発明は、さらに、パッケージ材料、例えば箱、ボトル、チューブ、バイアル、容器、噴霧器、インサフレーター、静注（i.v.）バッグ、封筒、および同類と；前記パッケージ材料中に含有される各医薬薬剤の少なくとも1つの単位剤形とを含む製造品を提供する。本発明は、さらに、好ましくは無菌形態でパッケージされた製剤の注射のための針またはシリンジ、および／またはパッケージされたアルコールパッドを含む製造品を提供する。
【０２０５】
本発明は、その適用において、次の記載において提出または図面において図解されているコンポーネントの構築および配置の詳細に限定されない。本発明は、他の態様、および種々のやり方で実践または実行されることができる。本明細書において用いられる言い回しおよび術語もまた記載の目的のためであり、限定すると見なされるべきではない。「包含する」、「含む」、または「有する」、「含有する」、「関わる」、およびその変形の使用は、本明細書においては、その後に挙げられている項目およびその均等物、ならびに追加の項目を包摂することが意味される。
【０２０６】
当業者は、本明細書に記載される本発明の特定の態様の多くの均等物を認識するか、またはせいぜい通例の実験作業を用いて確かめることが能うであろう。かかる均等物は次の請求項によって包摂されることを意図されている。
【０２０７】
特許文書を包含する本明細書において開示される全ての参照は、それらの全体が参照によって組み込まれる。
【実施例】
【０２０８】
例1．インターロイキン17受容体mRNAの特異的ノックダウンのためのアンチセンスオリゴヌクレオチド（ASO）を提示するリポソーム系球状核酸（SNA）構築物
結果
実験1．標的化SNAを用いるインビトロのIL-17RA mRNAノックダウン
HFK細胞を、表1の配列の1つのASO配列それぞれを提示する294個のSNAによって処置し、ヒトIL-17RA mRNA発現をqRT-PCRによって測定した。これは2回行い、複数のアッセイにおいてIL-17RA mRNAの最も優れた阻害を示しかつ低いオフターゲット効果を有する3つのSNAを、化学修飾によるさらなる最適化のために選んだ。HFK細胞を、より大きいドーズ範囲において、IL17RA_219、IL17RA_282、IL17RA_285、または非相補的なコントロールどちらかの1つのASO配列を提示するSNAによって処置した。標的化SNAは、標的特異的なmRNA阻害をドーズ依存的な様式で実証しており、一方、非相補的なコントロールSNAは試験した全ての濃度において大した阻害を有さない（図1）。標的化SNAはHEKa細胞において類似のIL-17RA mRNA阻害を実証している。用量反応データを非線形当てはめとして分析することおよび半数阻害濃度（IC50）を計算することは、それぞれIL17RA_285、IL17RA_219、およびIL17RA_282について124.2、9.57、および34.64nMというIC50値をもたらす。これらの結果は、IL-17RA mRNAを標的化するSNAがHFK細胞において特異的な様式で遺伝子発現を有効に阻害し得るということを実証している。
【０２０９】
実験2．ヒト皮膚相当物EpiDerm-FT（商標）における外用適用される標的化SNAを用いるIL-17RA mRNAノックダウン
ヒトIL-17RA mRNAを標的化するASO配列IL17RA_219またはIL17RA_282どちらかを提示するSNAによって外用処置されたヒト皮膚相当物モデルは、標的mRNA特異的な阻害をもたらした。実験1で収集された効能データを考慮に入れた後に、IL17RA_219およびIL17RA_282をさらなる試験のためのリード候補化合物として選んだ。ASOのIL17RA_219およびIL17RA_282は、IC50値と他のヒトmRNA配列に対する相同性（BLASTによって決定）と種間保存とのもっとも良好な組み合わせを見せた。IL-17RA mRNA発現は、ASO IL17RA_219またはASO IL17RA_282どちらかを提示するSNAによって48時間に渡って外用処置されたヒト皮膚相当物組織においては減少している。コントロールASOを提示するSNAによって処置された組織は、qRT-PCRによって測定されるIL-17RA mRNA発現のはっきりした減少を実証しない（図2）。さらに、IL17RA_219およびIL17RA_282は、HFKにおける毒性ならびにHFK、HEKa細胞、および4人の異なるドナーからのPBMCにおけるサイトカイン誘導を、最高で20μMのDNA濃度まで見せなかった。これらの理由で、IL17RA_219およびIL17RA_282がさらなる試験のために選ばれた。外用送達されるIL-17RAを標的化するSNAは、ヒト皮膚相当物モデルにおいてmRNA発現を特異的に阻害することが示された。
【０２１０】
実験3．ヒト皮膚外植片における外用適用される標的化SNAを用いるエクスビボのIL-17RA mRNAノックダウン
ヒトIL-17RA mRNAを標的化するASO配列IL17RA_219またはASO配列IL17RA_282どちらかを提示するSNAによって外用処置されたヒト皮膚外植片は、標的mRNA特異的な阻害をもたらした。IL-17RA mRNA発現は、ASO IL17RA_219またはASO IL17RA_282どちらかを提示するSNAによって96時間に渡って外用処置されたヒト皮膚外植片生検においては減少している。コントロールASOを提示するSNAによって処置された生検は、qRT-PCRによって測定されるIL-17RA mRNA発現のはっきりした減少を実証しない（図3）。外用送達されるIL-17RAを標的化するSNAは、ヒト皮膚外植片におけるmRNA発現を特異的に阻害し得る。
【０２１１】
実験4．SNAの混合物を用いるTNF mRNAノックダウン
抗TNFまたは抗IL17RA ASO配列どちらかを提示するSNA同士を一緒に混合し、HFK細胞に共に投与した。混合SNAは、ASO配列同一性に対応する標的mRNA特異的なノックダウンを実証した（図4、図5）。
図4は、TNF mRNA発現が、抗TNF-SNAおよび抗IL17RA-SNAの混合物によって処置されたHFK細胞において減少したということを示している。図5は、IL17RA mRNA発現が、抗TNF-SNAおよび抗IL17RA-SNAの混合物によって処置されたHFK細胞において減少しているということを示している。コントロールSNAによって処置された細胞はTNF mRNAレベルのはっきりした減少を実証しない。
これらの結果は、1つよりも多くのmRNAを標的化するSNAの混合物が共に投与され、各標的に関して遺伝子ノックダウンを行い得るということを実証している。
【０２１２】
実験5．多重化SNAを用いるTNF mRNAノックダウンおよびIL17RAノックダウンの比較
1つ、2つ、または3つのASO配列を提示するSNAは、ASO配列同一性に対応するHFK細胞における標的mRNA特異的なノックダウンを実証した。2つのASO配列によって多重化されたSNAを用いて得られたデータのみ。SNAは、複数の治療モダリティーを提示することができるプラットフォームとして資することが示された。これらの結果は、1つよりも多くのmRNAを標的化するASO配列が同じSNA粒子上において共に送達され、各標的に関して遺伝子ノックダウンを行い得るということを実証している（図7、図8）。
2つの遺伝子標的が、ある関係する生物学的経路にある場合には、下流標的について相加的ノックダウン効果が観察され得る（図8）。TNFおよびIL17Aサイトカインシグナル伝達は、それらの炎症促進性特性について相加的および相乗的効果を有するということが示されている（3）。この関係性は、ある共有されるまたは高度に関係するシグナル伝達経路を指示しているが、厳密な関係性は良く理解されていない（4）。TNFサイトカインのmRNAおよびIL17Aの受容体IL17RAを標的化した。分泌されるTNFサイトカインの縮減はIL17RA受容体ターンオーバーおよび発現への効果を有するということが蓋然的である。
材料および方法
【０２１３】
アンチセンス配列設計．ヒトIL-17RA mRNA（GeneBankアクセッションNo.NM_014339.6）を標的化する長さ18ヌクレオチドのアンチセンス配列を、次のパラメータに基づいて決定した：Sfoldアルゴリズム（2）、%GC含有量、開始コドンへの近接性、およびCpGモチーフの排除（表1）。別様に注意されない限り、アンチセンスオリゴヌクレオチド配列は3つの領域に分割される：内部のホスホロチオエート連結された「ギャップ」領域が、2つの外側の2'-O-メチル「ウイング」によって挟まれている。この「ギャップマー」配列は、2つの連続したヘキサ（エチレングリコール）スペーサーおよび末端コレステロールによって3'末端を修飾される。
【０２１４】
アンチセンスオリゴヌクレオチド合成．全てのオリゴヌクレオチドは、ユニバーサルUnyLinker支持体1000Å（ChemGenes）を使用してBioautomation MerMade 48オリゴヌクレオチド合成機によって1μモルスケールで合成した。DNA、RNA、2'-O-Meモノマー、ヘキサ（エチレングリコール）スペーサー、およびコレステロール修飾剤は、ChemGenes Corporationから得た。カップリング時間は標準的なDNA塩基では1分間、修飾塩基では3分間であった。連結部は、標準的なホスホジエステル、または硫化剤としての1：1ルチジン：ACN中の0.2Mフェニルアセチルジスルフィド（PADS）によって作られたホスホロチオエートどちらかであった。合成はDMTオフで5'から3'方向に行った。合成後に、オリゴヌクレオチドを支持体から切断し、水酸化アンモニウムおよびエタノールの4：1混合物を用いて55℃で16時間に渡って脱保護した。オリゴヌクレオチドは高速液体クロマトグラフィー（HPLC）技術によって精製した。分子量および吸光係数はIDT OligoAnalyzerを用いて決定した。オリゴヌクレオチド分子量の検証はマトリックス支援レーザー脱離イオン化（MALDI）を用いて行った。オリゴヌクレオチド濃度は、IDT OligoAnalyzerからの計算された吸光係数と一緒に、マイクロプレートリーダー（BioTek）による260nmでのUV吸光度によって決定した。全てのオリゴヌクレオチドは0.2μmシリンジフィルター（VWR）を用いて無菌濾過した。オリゴヌクレオチド配列は表1に挙げられている。
【０２１５】
リポソーム合成．リポソームは、50nmポアを有する47mm直径ポリカーボネート膜（Sterlitech）を用いて、リン酸緩衝生理食塩水溶液（PBS）（137mM NaCl、10mMリン酸、2.7mM KCl、pH7.4、Hyclone）によって水和した1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DOPC）の押出によって合成した。リポソーム直径は、Malvern Zetasizer Nano（Malvern Instruments）を用いる動的光散乱を用いて測定した。脂質濃度はリン脂質アッセイキット（Sigma）を用いて決定した。
【０２１６】
細胞培養．ヒト新生児包皮角化細胞（HFK）および成人ヒト表皮角化細胞（HEKa）は、ヒト角化細胞成長サプリメント（Life Technologies）、0.07mMのCaCl2、10μg/mLゲンタマイシン、および0.25μg/mLアムホテリシンBを補ったM154培地（Life Technologies）によって培養した。細胞は5%CO2加湿インキュベータ内で37℃に維持した。4人の異なるドナーからのフレッシュな初代ヒト末梢血単核細胞（PBMC）（Zenbio）を、10%ウシ胎児血清、2mMのL-グルタミン、50U/mLペニシリン、および50mg/mLストレプトマイシンを補ったRPMIによって培養した。細胞は5%CO2加湿インキュベータ内で37℃に維持した。
【０２１７】
EpiDerm-FT（商標）ヒト皮膚相当物培養．ヒト皮膚相当物モデルEpiDerm-FT（商標）（Mattek）組織は製造者の取扱説明に従って培養した。手短には、受領後に、組織を5%CO2加湿インキュベータ内において37℃で供給された維持培地と一晩インキュベーションした。次の日、および実験の間はずっとその後毎日、培地をフレッシュな培地と取り替えた。組織は実験の間はずっと5%CO2加湿インキュベータ内で37℃に維持した。
【０２１８】
ヒト皮膚外植片培養．フレッシュなヒト皮膚外植片（Zenbio）を受領後に清浄化した。8mmパンチ生検を外植片からとり、培養のためにトランズウェルスタンド中に置いた。2%FBS、10μg/mLゲンタマイシン、および0.25μg/mLアムホテリシンBを補ったDMEMを生検の下側に供給し、実験の間はずっと毎日交換した。生検は実験の間はずっと5%CO2加湿インキュベータ内で37℃に維持した。
【０２１９】
SNA合成．SNAは、100×モル過剰（別様に書かれていない限り）のコレステロール修飾オリゴヌクレオチドをPBS中のリポソーム懸濁液に混合することと、それらを光から保護して4℃で一晩保管することとによって製剤化した。ヒトIL-17RA mRNAを特異的に標的化する294個の異なるオリゴヌクレオチド（表1）と、既知のヒト遺伝子に対していずれかの相補性を有さない（BLASTによって確認）同じ長さおよび「ギャップマー」化学スキームのコントロールオリゴヌクレオチドとを合成プロセスに用いた。
【０２２０】
多重SNA合成．SNAは、200×モル過剰（別様に書かれていない限り）のコレステロール修飾オリゴヌクレオチドをPBS中のリポソーム懸濁液に混合することと、それらを光から保護して4℃で一晩保管することとによって製剤化した。4つの異なるオリゴヌクレオチドを合成プロセスに用いた：ヒトIL-17RAを標的化するアンチセンスオリゴヌクレオチド、ヒトTNFを標的化するアンチセンスオリゴヌクレオチド、ヒトIL22RA1を標的化するアンチセンスオリゴヌクレオチド、および既知遺伝子に対していずれかの相補性を有さない（BLASTによって確認）同じ長さのコントロールオリゴヌクレオチド。一重SNAでは、オリゴヌクレオチド集団は33%の標的化アンチセンスオリゴヌクレオチドと66%のコントロールオリゴヌクレオチドとからなった。2つの異なる標的化アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する多重SNAでは、オリゴヌクレオチド集団は33%の各標的化アンチセンスオリゴヌクレオチドと残りの33%のコントロールオリゴヌクレオチドとからなった（図6）。3つの異なる標的化アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する多重SNAでは、オリゴヌクレオチド集団は33%の各標的化アンチセンスオリゴヌクレオチドからなった。コントロールSNAは100%のコントロールオリゴヌクレオチドからなった（図6D）。
【０２２１】
細胞培養研究．HFKを、5継代で、96ウェル組織培養プレートにウェルあたり17,000細胞の細胞密度で播種した。HEKa細胞は、5継代で、96ウェル組織培養プレートにウェルあたり17,000細胞の細胞密度で播種した。フレッシュなPBMCを遠心によって細胞懸濁液から単離し、96ウェル組織培養プレートにウェルあたり200,000細胞の細胞密度で播種した。プレーティング後に、細胞をインキュベータ内に一晩静置した。細胞を、IL-17RA標的化アンチセンスSNAまたは同じ「ギャップマー」設計および3'化学修飾を含む非相補的なコントロールSNA（NCBI Blastによって確認）どちらかによって、フレッシュな維持培地中において処置した。別様に書かれていない限り、全ての処置は24時間続いた。
ヒト皮膚相当物モデルEpiDerm-FT（商標）およびヒト皮膚外植片組織については、処置は生物学的トリプリケートで適用した。組織を、IL17RA_219 ASOを提示するSNA、IL17RA_282 ASOを提示するSNA、非相補的なコントロールASOを提示するSNAどちらかによって外用処置し、または未処置のままにした。EpiDerm-FT（商標）組織は48時間に渡って処置し、ヒト皮膚外植片組織は96時間に渡って処置した。
多重SNA実験のためには、HFKを、5継代で、96ウェル組織培養プレートにウェルあたり17,000細胞の細胞密度で播種した。プレーティング後に、細胞をインキュベータ内に一晩静置した。細胞を、トリプリケートで、IL-17RA標的化アンチセンスSNA、TNF標的化アンチセンスSNA、1つよりも多くの転写物を標的化する多重SNA、または同じ「ギャップマー」設計および3'化学修飾を含む非相補的なコントロールSNA（NCBI Blastによって確認）どちらかによって、1000、100、10、および1nMの濃度で、フレッシュな維持培地中において処置した。
【０２２２】
Alamar Blue（登録商標）生存能アッセイ．生存能研究のためには、HFKを、5継代で、96ウェル組織培養プレートにウェルあたり15,000細胞の細胞密度で播種した。プレーティング後に、細胞をインキュベータ内に一晩静置した。細胞を、トリプリケートで、IL-17RA標的化アンチセンスSNAまたは同じ「ギャップマー」設計および3'化学修飾を含む非相補的なコントロール（NCBI Blastによって確認）どちらかによって、20、10、2、および1μMの濃度で24時間に渡って処置した。手短に、処置を取り除き、M154維持培地中のAlamarBlue（登録商標）試薬の10%溶液に取り替えた。細胞を5%CO2加湿インキュベータ内において37℃で3時間に渡ってインキュベーションした後に、各ウェルの蛍光（励起570nm、放出585nm）をマイクロプレートリーダー（BioTek）によって測定した。パーセント生存能を、各処置の蛍光値を未処置細胞のものと比較することによって計算した。
【０２２３】
サイトカインQ-Plexアレイ．24時間の処置の後に、96ウェル組織培養プレートの細胞を遠心によってペレット化した；上清を新たなプレートに移し、-80℃で保管した。上清のサイトカイン定量を、製造者の取扱説明に倣ってQ-Plex化学発光アレイ（Quansys）を用いて行った。各プレートは、各ウェル内のIL-12p40、TNF、IP-10、IL-6、RANTES、IL-4、IL-5、IL-10、IL-17、IL-22、およびMCP-1の検出を許すようにカスタムで組んだ。手短には、既知濃度のサイトカインストックを用いて、それを指示されているように希釈することによって、標準曲線を作成した。細胞培養上清を提供されたサンプル緩衝液を用いて1：2希釈した。細胞培養サンプルおよび標準曲線サンプルを96ウェルQ-plexプレートに追加し、振盪しながら室温で1時間に渡ってインキュベーションした。それから、プレートを提供された洗浄緩衝液によって3回洗浄した。それから、提供された検出ミックスの50μLを各ウェルに追加し、再び、プレートを振盪しながら室温で1時間に渡ってインキュベーションした。再び、プレートを洗浄緩衝液によって3回洗浄し、次に、振盪しながら室温における15分間の提供されたストレプトアビジン-HRP溶液の50μLとのインキュベーションをした。最後に、プレートを洗浄緩衝液によって6回洗浄し、調製された基質の50μLを各ウェルに追加した。15分以内に、プレートをBio-Rad ChemiDoc XRS+イメージャーを用いてイメージングし、Q-viewソフトウェア（Quansys）を用いて分析した。全てのデータは各個々のサイトカインについて標準曲線に当てはめ、未処置細胞と比較してプロットした。
【０２２４】
RNA抽出および定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（qRT-PCR）．HFKおよびHEKa細胞をトランスフェクション後24時間でRLT緩衝液（Qiagen）によってリシスした。EpiDerm-FT（商標）組織およびヒト皮膚外植片組織を、それぞれ処置の48および96時間でRLT緩衝液中でビーズ式ホモジナイゼーションした。RNAを製造者の取扱説明に従ってRNEasy 96ウェルキット（Qiagen）を用いてライセートから単離した。それから、cDNAをcDNA High Capacity逆転写キット（Life Technologies）を用いてRNA単離物から合成した。サンプルをサーモサイクラーによって25℃で10分間、37℃で90分間、85℃で5分間ランし、4℃でホールドして、cDNAを生成した。合成されたcDNAの6μL、4.66μLのLightCycler480プローブマスターミックス（Roche）、0.47μLの標的特異的なFAM標識プローブおよびプライマー、ならびに0.37μLのヒトグリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ（GAPDH）特異的なHEX標識プローブおよびプライマーを384ウェルオプティカル反応プレート（Roche）の反応ウェルあたり用いて、qPCRを行った。IL-17RAのプライマーおよびプローブセットはThermoFisher Scientificから購入した（カタログ番号Hs01064648_ml）。TNFおよびGAPDHのプライマーおよびプローブセットは既知のヒトゲノム配列（それぞれNCBI参照配列NM_000594.3およびNM_002046.5）を用いて設計し、「blastn」分析（NCBI）によって特異的であることが見出された。TNFに用いたオリゴヌクレオチド配列は：フォワード5'-GCT GCA CTT TGG AGT GAT CG-3'（配列番号1）、リバース5'-GTT TGC TAC AAC ATG GGC TAC AG-3'（配列番号2）、プローブ5'-FAM-CCC AGG CAG TCA GAT CAT CTT CTC GA-BHQ1-3'（配列番号3）であった。GAPDHに用いたオリゴヌクレオチド配列は：フォワード5'-CAA GGT CAT CCA TGA CAA CTT TG-3'（配列番号4）、リバース5'-GGG CCA TCC ACA GTC TTC T-3'（配列番号5）、プローブ5'-HEX-ACC ACA GTC CAT GCC ATC ACT GCC A-BHQ1-3'（配列番号6）であった。FAMは6-フルオレセインアミダイトであり、HEXはヘキサクロロフルオレセインであり、BHQ1はブラックホールクエンチャー1である。qPCR反応を、技術的デュプリケートで、次の条件下においてRoche Lightcycler 480によって実行した：95℃での10分間の初期変性、それから、95℃での10秒間の変性、60℃での30秒間のアニーリング、および72℃での1秒間の伸長の50サイクル。Cp値は二次導関数法による分析によって得た。相対的な遺伝子発現はハウスキーピング遺伝子（GAPDH）による正規化およびΔΔ-Ct法によって決定した。各処置をそのそれぞれの濃度コントロールと比較した。
【表１−１】
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【表１−２】
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【表１−３】
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【表１−４】
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【表１−５】
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【表１−６】
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【表１−７】
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【表１−８】
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【表１−９】
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【表１−１０】
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【表１−１１】
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【表１−１２】
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【表１−１３】
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【表１−１４】
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【表１−１５】
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【表１−１６】
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【表１−１７】
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【表１−１８】
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【表１−１９】
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【表１−２０】
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【表２−１】
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【表２−２】
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【０２２５】
例2．ゲル基剤によって製剤化したSNAを用いるヒト皮膚のIL-17RA mRNAノックダウン
方法および材料
組織培養．単一のドナーからフレッシュに取得したエクスビボの健康なヒト皮膚を実験開始の日に受け入れ、直ちに調製した。使用に先だって、広範囲の伸展線条または傷のいずれかの面積に注意しながら皮膚を点検し、可視の穴またはダメージを有するいずれかの区域を取り除いた。ダーマトームを用いてドナーサンプルから全厚の皮膚を切り出した。もたらされた組織はインタクトな角質層、表皮、および真皮を含有した。外科的外植片からの皮下組織は残らなかった。皮膚を注意深く適当なサイズに切り、それをフランツセル中に置くときには皮膚を伸展させないように配慮した。それから、皮膚をフランツセル内にクランプ固定した。次に、37℃に予め加温した撹拌子およびレシーバー培地を各フランツセルに追加した。レシーバー培地は、2%ウシ胎児血清、50U/mLペニシリン、50mg/mLストレプトマイシン、0.25μg/mLアムホテリシンB、および10μg/mLゲンタマイシンを補ったダルベッコ改変イーグル培地からなった。フランツセル、外植片、およびレシーバー培地が平衡化することを最小で30分間に渡って許し、その後で各セルの培地の温度が37±1℃であることを検証した。セルの組み立ての間に導入されたいずれかの気泡を取り除いた。皮膚のインテグリティーは、セルをひっくり返すことによって、研究を開始することに先立って確認した。漏れが同定された場合には、漏れがなくなるまで皮膚およびドナーチャンバーを置き直した。実験の間中、皮膚は周囲湿度かつ32℃の表皮表面温度に維持し、これは外植片の真皮部分に接触する細胞培養培地を含有するレセプターチャンバーの37℃ウォータージャケット被覆を用いて制御した。
【０２２６】
SNA合成．オリゴヌクレオチドは、標準的なUniLinker支持体（ChemGenes）を使用して1mモルスケールで合成した。DNA、2'-O-Me RNAモノマー、およびヘキサ（エチレングリコール）スペーサーはChemGenes Corporationから得た。コレステロール修飾剤はGlen Researchから得た。連結部は、標準的なホスホジエステル、または1：1ルチジン：ACNの混合物中の0.2Mフェニルアセチルジスルフィド（PADS）の溶液によって調製したホスホロチオエートであった。合成はDMTオフで3'から5'方向に行った。合成後に、オリゴヌクレオチドを支持体から切断し、水酸化アンモニウムおよびエタノールの4：1混合物を用いて55℃で16時間に渡って脱保護した。オリゴヌクレオチドを高速液体クロマトグラフィー（HPLC）技術によって精製した。分子量および吸光係数はIDT OligoAnalyzerを用いて計算した。オリゴヌクレオチド産物分子量の検証はエレクトロスプレーイオン化質量分析（ESI-MS）を用いて行った。最後に、オリゴヌクレオチド濃度をマイクロプレートリーダー（BioTek）によって260nmにおけるUV吸光度によって決定した。
リポソームを、第1に250mgの1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DOPC）をクロロホルム中に50mg/mLの終濃度に溶解することによって製剤化した。それから、溶媒を窒素下において取り除いて、薄い脂質フィルムを形成した。フィルムを一晩凍結乾燥して、全ての溶媒が取り除かれたことを保証した。爾後に、脂質フィルムを10mMリン酸緩衝生理食塩水（PBS）によって水和し、ソニケーション／凍結割断を用いて大きい単層小胞を形成した。それから、20nmという所望の個数平均直径が達成されるまで、それらの小胞を最高で25kpsiでマイクロフルイダイザーによって連続ホモジナイゼーションした。リポソーム濃度はコリン定量アッセイを用いて決定し、粒子サイズおよび分散は動的光散乱（DLS）によって測定した。
ヒトIL-17RAを標的化するSNA、化合物IL17RA_282を、30倍モル過剰のコレステロール修飾オリゴヌクレオチド配列番号288をPBS中のリポソーム懸濁液に混合し、次に4℃における一晩のインキュベーションをすることによって製剤化した。
【０２２７】
皮膚への薬適用．ゲル基剤を用いてIL17RA_282を皮膚に適用した。予め製剤化されたSNAをゲル基剤に混合し、0、0.00007、および0.007%w/w（オリゴヌクレオチド重量）という3つの薬製品含量をもたらした。それらの薬製品の組成は表3に見出され得る。
それから、それらの薬製品を皮膚外植片に外用適用した。薬製品を投薬に先立ってピペットチップを用いて手短に混合した。ポジティブディスプレイスメントピペットを用いて、各薬製品の40μLを各フランツセルに外用投薬した。ピペットチップを用いて薬製品を均一に広げ、皮膚の露出表面積全体（1.0cm2）をカバーした。投薬後に、サンプリングポートを閉めて、研究の間の溶媒蒸発を防止した。実際の投薬時間を記録し、外植片は24時間に渡って周囲湿度かつ32℃の表皮表面温度に維持した。
【０２２８】
RNA抽出およびqRT-PCR．24時間インキュベーション期間の結末に、フランツセルをばらし、皮膚を各セルから注意深く取り除いた。PBSによって濡らした木綿の綿棒を用いて薬製品を取り除き、それから適用面積の水気を吸って乾かした。4mm生検パンチを用いて1.0cm2投薬面積から3つのサンプルを切った。生検パンチがとられている間は、皮膚は伸展させなかった。それから、生検パンチをビーズ式ホモジナイザーによってRLT緩衝液（Qiagen）中でリシスした。RNAを、製造者の取扱説明に従ってRNEasy 96ウェルキット（Qiagen）を用いてライセートから単離した。それから、cDNAをcDNA high capacity逆転写キット（Life Technologies）を用いてRNA単離物から合成した。cDNAをサーモサイクラーによって次の温度プログラムで調製した：25℃10分間、37℃90分間、85℃5分間、次に4℃ホールド。もたらされたcDNAをヌクレアーゼ不含水によって8倍希釈した。希釈されたcDNAの6μL、4.66μLのLightCycler480プローブマスターミックス（Roche）、0.47μLのヒトIL-17RA特異的なFAM標識プローブおよびプライマー、ならびに0.37μLのヒトグリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ（GAPDH）特異的なHEX標識プローブおよびプライマーを384ウェルオプティカル反応プレート（Roche）の反応ウェルあたり用いて、qPCRを行った。IL-17RAのプライマーおよびプローブセットは市販購入した（Hs01064648_ml、Thermo Fisher Scientific）。GAPDHのプライマーおよびプローブセットは既知ヒトゲノム配列（NCBI参照配列NM_002046.5）を用いて設計し、「blastn」分析（NCBI）によって特異的であることが見出された。GAPDHに用いたオリゴヌクレオチド配列は：フォワード5'-CAA GGT CAT CCA TGA CAA CTT TG-3'（配列番号4）、リバース5'-GGG CCA TCC ACA GTC TTC T-3'（配列番号5）、プローブ5'-HEX-ACC ACA GTC CAT GCC ATC ACT GCC A-BHQl-3'（配列番号6）であった。qPCR反応を、技術的デュプリケートで、次の条件下においてRoche Lightcycler 480によって実行した：95℃での10分間の初期変性、それから、95℃での10秒間の変性、60℃での30秒間のアニーリング、および72℃での1秒間の伸長の50サイクル。Cp値は二次導関数法による分析によって得た。相対的な遺伝子発現はハウスキーピング遺伝子（GAPDH）による正規化およびΔΔ-Ct法によって決定した。統計分析は一元配置ANOVAを行うことによってした。
【０２２９】
蛋白質単離およびウエスタンブロット．トータル蛋白質をアセトン沈殿によって生検ライセートから単離した。蛋白質を単離する前に、各処置群からのライセートをプールして蛋白質収量を増大させた。手短には、4体積の氷冷アセトンをライセートに追加し、-20℃で30分間に渡ってインキュベーションした。サンプルを遠心および傾瀉し、ペレットを1体積の氷冷エタノールによって洗浄した。再びサンプルを遠心し、ペレットが風乾することを許した。ペレットを1%β-メルカプトエタノールを含有する1体積のLaemmliサンプル緩衝液中に再懸濁した。サンプルが完全に溶解したことを保証するために、それらを95℃で10分間に渡って煮沸し、爾後に遠心していずれかの未溶解の残骸を取り除いた。
蛋白質単離物を10%SDS-PAGEゲルにローディングし、ランし、Immobilon PSQ PVDF膜（ISEQ00010、Millipore）に一晩トランスファーした（22V）。膜を、Tween 20を含有するトリス緩衝生理食塩水（もたらされる緩衝液はTBSTと言われる）中において5%ドライミルクによって1時間に渡ってブロッキングし、次にTBSTによる5分洗浄をした。IL-17RAまたはβ-アクチン蛋白質を標的化するヒト特異的抗体を用いて、それらの特定の蛋白質の存在を探査した。IL-17RA蛋白質は抗IL-17RAウサギモノクローナル一次抗体を用いて検出され、150kDaという予測される分子量を有する蛋白質を検出することが示された（12661、Cell Signaling）。この抗体は使用に先立ってブロッキング緩衝液（TBST中の5%ドライミルク）によって1：500の比で希釈した。β-アクチン蛋白質は抗β-アクチンウサギモノクローナル一次抗体を用いて検出され、45kDaという予測される分子量を有する蛋白質を検出することが示された（4970、Cell Signaling）。この抗体は使用に先立ってブロッキング緩衝液によって1：1000の比で希釈した。一次抗体インキュベーションは4℃で一晩生起した。
インキュベーション期間後に、膜をTBSTによって2回リンスし、次に15分および5分のTBSTによる2つの連続した洗浄をした。次に、膜を、使用に先立ってブロッキング緩衝液によって1：1000の比で希釈した抗ウサギHRP二次抗体（7074、Cell Signaling）とインキュベーションした。二次抗体インキュベーションは室温で90分間に渡って生起した。それから、膜をTBSTによって2回リンスし、次に15分間および5分間のTBSTによる2つの連続した洗浄をした。それから、膜を蒸留水によって5分間に渡ってさらに2回洗浄した。爾後に、GE AmershamプライムECL試薬（RPN2232）を膜に追加し、室温で5分間に渡ってインキュベーションした。それから、膜を20秒の露光インターバルを用いて最高で2分間に渡ってBioRad GelDocイメージャーによってイメージングした。最後に、イメージをデンシトメトリーによって分析し、IL-17RAシグナルをβ-アクチンシグナルに対して正規化して、発現レベルを処置間で比較した。
【表３】
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【０２３０】
結果
ゲル基剤によって薬製品として製剤化されたIL-17RA mRNA標的化SNA（化合物IL17RA_282）は、24時間のみの処置後に、健康なヒト皮膚外植片においてIL-17RA mRNAのドーズ依存的なノックダウンを示した（図9）。ノックダウンは、未処置皮膚および0%含量薬製品両方と比較したときに観察された。0.007%含量薬製品による処置は、一元配置ANOVAによって未処置（p=0.0011）および0%含量薬製品（p＜0.0001）と比較して統計的に有意なIL-17RA mRNA阻害をもたらした。ゲル基剤によって薬製品として製剤化されたIL-17RA mRNA標的化SNA（化合物IL17RA_282）は、24時間のみの処置後に、健康なヒト皮膚外植片においてIL-17RA蛋白質発現の阻害を示した（図10）。ノックダウンは、未処置皮膚および0%含量薬製品両方と比較したときに観察された。グラフは、ウエスタンブロット（挿入図）から収集された分析されたデンシトメトリーデータを表している。0.0007%ゲルによって処置された皮膚サンプルについては、蛋白質レベル分析を行うためには不十分な材料があった。
【０２３１】
考察および結論
臨床データは、IL-17シグナル伝達経路が乾癬疾患状態を持続させることに有意な役割を果たしているということを示唆している。brodalumabのような現行のモノクローナル抗体治療は非常に有効な処置オプションを提供するが、それらは厄介な副作用プロファイルをもまた呈する。これはより安全な代替の治療ニーズを提示している。アンチセンステクノロジーは細胞のmRNAの発現を縮減し得る；しかしながら、アンチセンスオリゴヌクレオチドは一般的には細胞および皮膚への不良な取り込みを有する。対照的に、オリゴヌクレオチドがSNA幾何構造中に配置されるときには、それらは皮膚透過特性および増大した細胞取り込みを見せるということが見出された。これらの利点および乾癬処置の治療ニーズを考えると、皮膚のヒトIL-17RAを標的化するアンチセンスSNAに基づく治療は乾癬の有効な処置となり得る。
ここでは、ゲル基剤によって薬製品として製剤化されたIL-17RA mRNA標的化SNA（化合物IL17RA_282）が健康なヒト皮膚外植片に外用適用されるときには、IL-17RA mRNAおよび蛋白質両方のレベルで見られる薬力学的効果があるということが示された。薬製品の含量を増大させることは減少したIL-17RA発現をもたらす。
この研究において観察された応答は24時間処置のみを表している。複数のドーズによるより長い処置は、観察された阻害をさらに向上させるであろうということが予想される。乾癬において観察された疾患状態を維持することにおけるIL-17シグナル伝達の重要性を考えると、乾癬の処置のための強力な外用薬製品候補が提示されている。
【０２３２】
例3．ゲル基剤によって製剤化されたSNAを用いるヒト乾癬皮膚のIL-17RA mRNAノックダウン
方法および材料
組織培養．4つの皮膚生検（3mm直径）を、軽度から中等度の尋常性乾癬を有する8人の異なる患者のそれぞれから得た。生検は乾癬プラークから直接的にとった。単一の患者からとられ得る生検の限定された数が原因で、4つの生検のみが個人あたりとられた。生検はボランティアから約45分インターバルでとられ、研究室に輸送された（無菌の湿ガーゼで巻いた）。生検をとることとインキュベーションを開始することとの間の時間は5および7.5時間の間であった。生検をインサートウェルの膜内に位置させ、周囲CO2および湿度によって32℃で12ウェルプレート中においてインキュベーションした。膜を1mL細胞培養培地（ダルベッコ改変イーグル培地、1%ウシ胎児血清、1.25μg/mLアムホテリシンB、50μg/mLゲンタマイシン、および0.1U/mLペニシリン／ストレプトマイシン）中に浸漬して、真皮がウェル中において培地に接触し、表皮が空気に露出されるようにした。ウェルあたり1生検があった。12ウェルプレートの蓋を2つの無菌の1mLピペットチップを用いて上げて、水蒸気増加を限定した。薬製品によって処置された皮膚の合計のインキュベーション時間は21時間15分であった。
【０２３３】
SNA合成．オリゴヌクレオチドの配列番号288を標準的な固相ホスホロアミダイトケミストリーによって合成した。分子は、脱保護、モノマー付加、キャッピング、および酸化の逐次的なサイクルによって合成した。DNAおよび2'-O-Me RNAモノマーはSigma Aldrich Biochemie（独国）から得た。ヘキサ（エチレングリコール）スペーサーおよびコレステロール修飾剤はChemGenes Corporationから得た。連結部は、標準的なホスホジエステル、または1：1ルチジン：ACNの混合物中の0.2Mフェニルアセチルジスルフィド（PADS）の溶液によって調製したホスホロチオエートどちらかであった。合成はDMTオフで3'から5'方向に行った。合成後に、オリゴヌクレオチドを支持体から切断し、水酸化アンモニウムおよびエタノールの3：1混合物を用いて65℃で17時間に渡って脱保護した。オリゴヌクレオチドをアニオン交換高速液体クロマトグラフィー（AX-HPLC）技術によって精製した。それから、オリゴヌクレオチド溶液を完全に乾燥粉末になるまで凍結乾燥した。オリゴヌクレオチド産物分子量の検証はエレクトロスプレーイオン化質量分析（ESI-MS）およびデュアルMSを用いて行い、シーケンシングを行ってオリゴヌクレオチド配列を確認した。オリゴヌクレオチド濃度は260nmにおけるUV吸光度によって決定した。
リポソームはAvanti Polar Lipids（アラバマ、USA）によって製剤化された。第1に、500gの1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン（DOPC）をクロロホルム中に50mg/mLの終濃度に溶解した。それから、溶媒を窒素下において取り除いて、薄い脂質フィルムを形成した。フィルムを一晩凍結乾燥して、全ての溶媒が取り除かれたことを保証した。爾後に、脂質フィルムをHyclone無菌ヌクレアーゼ不含水（SH30538.03、GE）によって100mg/mLの濃度で水和し、ソニケーション／凍結割断を用いて大きい単層小胞を形成した。それから、20nmという個数平均直径が達成されるまで、それらの小胞を最高で25kpsiでマイクロフルイダイザーによって連続ホモジナイゼーションした。リポソーム溶液をタンジェンシャルフロー濾過（TFF）によって208mg/mLの脂質終濃度にさらに濃縮した。脂質濃度はコリン定量アッセイおよび核磁気共鳴分光法を用いて決定した。粒子サイズおよび分散は動的光散乱（DLS）によって測定した。
30倍モル過剰のコレステロール修飾全長オリゴヌクレオチドをHyclone無菌ヌクレアーゼ不含水（SH30538.03、GE）中のリポソーム懸濁液に混合し、次に4℃における一晩インキュベーションをすることによって、ヒトIL-17RAを標的化するSNAを製剤化した。
【０２３４】
皮膚への薬適用．ヒトIL-17RAを標的化する予め製剤化されたSNAをゲル基剤中に混合し、0、0.01、0.1、および1.0%w/w（全長オリゴヌクレオチド重量）という4つのIL17RA_282ゲル中含量をもたらした。これらの薬製品の組成は表4に見出され得る。
それから、IL17RA_282ゲルを8レプリケートで皮膚外植片に外用適用した。サンプル処理の間に、1.0%群の1つのサンプルが失われ、この群では7レプリケートのみをもたらした。各レプリケートは患者特異的な応答の正確な描写および比較のために異なる患者からとられた。IL17RA_282ゲルを投薬に先立ってピペットチップを用いて手短に混合した。各薬製品の10μLをポジティブディスプレイスメントピペットを用いて各3mm生検に外用投薬した。ピペットチップを用いて薬製品を均一に広げ、皮膚の露出表面積全体をカバーした。実際の投薬時間を記録し、外植片を21時間に渡って32℃かつ周囲湿度に維持した。
21時間インキュベーション期間の結末に、生検を各膜から取り除いた。PBSによって濡らした木綿の綿棒を用いて薬製品を取り除き、それから適用面積の水気を吸って乾かした。生検パンチをビーズ式ホモジナイザーによってRLT緩衝液（Qiagen）中でリシスし、ドライアイス上で研究施設に運送されるまで-80℃で凍結保管した。
【０２３５】
RNA抽出およびqRT-PCT．RNAを製造者の取扱説明に従ってRNEasy 96ウェルキット（Qiagen）を用いてライセートから単離した。それから、cDNAをcDNA high capacity逆転写キット（Life Technologies）を用いてRNA単離物から合成した。cDNAはサーモサイクラーによって次の温度プログラムで調製した：25℃10分間、37℃90分間、85℃5分間、次に4℃ホールド。もたらされたcDNAをヌクレアーゼ不含水によって8倍希釈した。希釈されたcDNAの6μL、4.66μLのLightCycler480プローブマスターミックス（Roche）、0.47μLのヒトIL-17RA特異的なFAM標識プローブおよびプライマー、ならびに0.37μLのヒトグリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ（GAPDH）特異的なHEX標識プローブおよびプライマーを384ウェルオプティカル反応プレート（Roche）の反応ウェルあたり用いて、qPCRを行った。IL-17RAのプライマーおよびプローブセットは市販購入した（Hs01064648_ml、Thermo Fisher Scientific）。GAPDHのプライマーおよびプローブセットは既知のヒトゲノム配列（NCBI参照配列NM_002046.5）を用いて設計し、「blastn」分析（NCBI）によって特異的であることが見出された。GAPDHに用いたオリゴヌクレオチド配列は：フォワード5'-CAA GGT CAT CCA TGA CAA CTT TG-3'（配列番号4）、リバース5'-GGG CCA TCC ACA GTC TTC T-3'（配列番号5）、プローブ5'-HEX-ACC ACA GTC CAT GCC ATC ACT GCC A-BHQ1-3'（配列番号6）であった。qPCR反応を、技術的デュプリケートで、次の条件下においてRoche Lightcycler 480によって実行した：95℃での10分間の初期変性、それから、95℃での10秒間の変性、60℃での30秒間のアニーリング、および72℃での1秒間の伸長の50サイクル。Cp値は二次導関数法による分析によって得た。相対的な遺伝子発現はハウスキーピング遺伝子（GAPDH）による正規化およびΔΔ-Ct法によって決定した。統計分析は1標本t検定を行うことによってした。
【表４】
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【０２３６】
結果
IL17RA_282ゲルは、21時間の処置後のヒト乾癬皮膚生検におけるIL-17RA mRNAのドーズ依存的なノックダウンを示した（図11）。ノックダウンは、IL17RA_282含有ゲルを0%ゲル中含量処方と比較したときに観察された。IL17RA_282ゲルによる処置はIL-17RA mRNAの統計的に有意な縮減をもたらした。
【０２３７】
考察および結論
ここでは、IL17RA_282ゲルがエクスビボのヒト乾癬皮膚生検に外用適用されるときには、IL-17RA mRNAのレベルで見られる薬力学的効果があるということが示された。この研究において観察された応答は21時間処置のみを表している。複数のドーズによるより長い処置は、観察された阻害をさらに向上させるであろうということが予想される。乾癬において観察される疾患状態を維持することにおけるIL-17シグナル伝達の重要性を考えると、乾癬の処置のための強力な外用薬製品候補が提示されている。
【０２３８】
例4．3つの異なるmRNAを標的化する多重SNA
材料および方法
多重SNA合成．SNAは、100×モル過剰（別様に書かれていない限り）のコレステロール修飾オリゴヌクレオチドをPBS中のリポソーム懸濁液に混合することと、それらを光から保護して4℃で一晩保管することとによって製剤化した。4つの異なるオリゴヌクレオチドを合成プロセスに用いた：ヒトIL-4Rを標的化するアンチセンスオリゴヌクレオチド、ヒトIL-1βを標的化するアンチセンスオリゴヌクレオチド、ヒトCTGFを標的化するアンチセンスオリゴヌクレオチド、および既知の遺伝子に対していずれかの相補性を有さない（BLASTによって確認）同じ長さのコントロールオリゴヌクレオチド。一重SNAでは、オリゴヌクレオチド集団は33%の標的化アンチセンスオリゴヌクレオチドと66%のコントロールオリゴヌクレオチドとからなった。2つの異なる標的化SNAアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する多重SNAでは、オリゴヌクレオチド集団は33%の各標的化SNAアンチセンスオリゴヌクレオチドと残りの33%のコントロールオリゴヌクレオチドとからなった（図12）。3つの異なる標的化SNAアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する多重SNAでは、オリゴヌクレオチド集団は33%の各標的化SNAアンチセンスオリゴヌクレオチドからなった。コントロールSNAは100%のコントロールオリゴヌクレオチドからなった（図9）。
【０２３９】
細胞培養研究．初代ヒト包皮角化細胞（HFK）を、5継代で、96ウェル組織培養プレートにウェルあたり17,000細胞の細胞密度で播種した。プレーティング後に、細胞をインキュベータ内に一晩静置した。細胞を、トリプリケートで、IL-4R標的化アンチセンスSNA、IL-1β標的化アンチセンスSNA、CTGF標的化アンチセンスSNA、1つよりも多くの転写物を標的化する多重SNA、または同じ「ギャップマー」設計および3'化学修飾を含む非相補的なコントロールSNA（NCBI Blastによって確認）どちらかによって、1000、100、10、および1nMの濃度でフレッシュな維持培地中において処置した。別様に書かれていない限り、全ての処置は24時間続いた。
【０２４０】
RNA抽出および定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（qRT-PCR）．HFK細胞をトランスフェクション後24時間でRLT緩衝液（Qiagen）によってリシスした。RNAを、製造者の取扱説明に従ってRNEasy 96ウェルキット（Qiagen）を用いてライセートから単離した。それから、cDNAをcDNA High Capacity逆転写キット（Life Technologies）を用いてRNA単離物から合成した。サンプルをサーモサイクラーによって25℃で10分間、37℃で90分間、85℃で5分間ランし、4℃でホールドして、cDNAを生成した。合成されたcDNAの6μL、4.66μLのLightCycler480プローブマスターミックス（Roche）、0.47μLの標的特異的なFAM標識プローブおよびプライマー、ならびに0.37μLのヒトグリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ（GAPDH）特異的なHEX標識プローブおよびプライマーを384ウェルオプティカル反応プレート（Roche）の反応ウェルあたり用いて、qPCRを行った。IL-4R、IL-1β、およびCTGFのプライマーおよびプローブセットはThermoFisher Scientificから購入した（それぞれカタログ番号Hs00166237_ml、Hs01555410_ml、およびHs01026927_gl）。GAPDHのプライマーおよびプローブセットは既知ヒトゲノム配列（NCBI参照配列NM_002046.5）を用いて設計し、「blastn」分析（NCBI）によって特異的であることが見出された。GAPDHに用いたオリゴヌクレオチド配列は：フォワード5'-CAA GGT CAT CCA TGA CAA CTT TG-3'（配列番号4）、リバース5'-GGG CCA TCC ACA GTC TTC T-3'（配列番号5）、プローブ5'-HEX-ACC ACA GTC CAT GCC ATC ACT GCC A-BHQ1-3'（配列番号6）であった。qPCR反応は、技術的デュプリケートで、次の条件下においてRoche Lightcycler 480によって実行した：95℃での10分間の初期変性、それから、95℃での10秒間の変性、60℃での30秒間のアニーリング、および72℃での1秒間の伸長の50サイクル。Cp値は二次導関数法による分析によって得た。相対的な遺伝子発現はハウスキーピング遺伝子（GAPDH）による正規化およびΔΔ-Ct法によって決定した。各処置をそのそれぞれの濃度コントロールと比較した。
【０２４１】
結果
7つの異なるSNA構成を作って、3つの異なるmRNAが単一のSNA構築物を用いて標的化され得るかどうかを試験した。発現が機能的に互いに依存的でなくかつ単一の既知経路にはない3つのmRNAを選んだ。ある種のケースでは、特定の経路をコントロールするために、同じ経路の一部であるmRNA同士、例えばTNF、IL17、IL22を標的化することが有利であり得る。各個々のmRNA単独、mRNAの3つのペアを標的化するSNA、および全ての3つのmRNAを標的化し得る1つのSNA構成を合成した。コントロールオリゴヌクレオチドを用いて、各SNA構成が同じ数の標的化および非標的化オリゴヌクレオチドを有することを保証した。
細胞培養実験からの結果は、3つの異なるmRNAを標的化する単一のSNAが製剤化され得るということを実証している。選んだmRNAはインターロイキン4受容体（IL4R）、インターロイキン1ベータ（IL1b）、および結合組織成長因子（CTGF）であった。これらの標的は、他の実験において、これらのmRNAのいずれか1つをノックダウンすることが他の2つのレベルを有意に縮減しなかったということが注意されたので選ばれた。結果は、いずれかの単一のmRNAを標的化するアンチセンスオリゴヌクレオチドがSNA上に存在するときに、そのmRNAの発現がドーズ依存的な様式で縮減されるということを示している（IL4Rは図13、IL1bは図14、CTGFは図15）。この構成は3つよりも多くのmRNAを標的化するように拡張され得る。SNAあたりの合計のアンチセンス担持は、単一のSNA構成によって標的化され得るmRNAの数の理論的限界であり得る。
【０２４２】
参照
1. Banga RJ, Chernyak N, Narayan SP, Nguyen ST, Mirkin CA. Liposomal Spherical Nucleic Acids. J. Am. Chem. Soc. 2014 136: 9866-9869.
2. Ding Y and LawrenceCE. A Statistical Sampling Algorithm for RNA Secondary Structure Prediction. Nucleic Acids Res. 2003: 31: 7280-7301.
3. Chabaud Ml, Fossiez F, Taupin JL, Miossec P. Enhancing effect of IL-17 on IL-l-induced IL-6 and leukemia inhibitory factor production by rheumatoid arthritis synoviocytes and its regulation by Th2 cytokines. J Immunol. 1998 Jul 1;161(1):409-14.
4. Miossec P. Interleukin-17 in rheumatoid arthritis: if T cells were to contribute to inflammation and destruction through synergy. Arthritis Rheum. 2003 Mar;48(3):594-601.
均等物
【０２４３】
当業者は、本明細書に記載される本発明の特定の態様の多くの均等物を認識するか、またはせいぜい通例の実験作業を用いて確かめることが能うであろう。かかる均等物は次の請求項によって包摂されることを意図されている。
【０２４４】
特許文書を包含する本明細書において開示される全ての参照は、それらの全体が参照によって組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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