(57)【要約】本発明は、がん、感染疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、および免疫不全、またはそれらに関連する病態の治療、予防、または改善のための養子Ｔ細胞療法のための組成物の改善を提供する。本発明は、部分的には、ＴＧＦβシグナルコンバーター（キメラＴＧＦβレセプターまたはＣＴＢＲ）、遺伝子修飾された細胞、組成物、およびそれらを用いる方法の改善に関する。種々の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１のポリペプチドと、ポリペプチド切断シグナルと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２のポリペプチドと、を含むことが企図される。【選択図】図１
2019535275.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）第１のポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、
（ｂ）ポリペプチド切断シグナルと、
（ｃ）第２のポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第２のポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項２】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、サイトカイン受容体、インターロイキン受容体、パターン認識受容体、またはＴｏｌｌ様受容体から単離されている、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項３】
前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、サイトカイン受容体、インターロイキン受容体、パターン認識受容体、またはＴｏｌｌ様受容体から単離されている、請求項１または請求項２に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−１２Ｒβ２細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−１２Ｒβ１細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインが、ＩＬ−１２Ｒβ２膜貫通ドメインを含む、請求項４に記載の融合ポリペプチド。
【請求項６】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインが、ＩＬ−１２Ｒβ１膜貫通ドメインを含む、請求項４または請求項５に記載の融合ポリペプチド。
【請求項７】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−１２Ｒβ１細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−１２Ｒβ２細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項８】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−１２Ｒβ１膜貫通ドメインを含む、請求項７に記載の融合ポリペプチド。
【請求項９】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインが、ＩＬ−１２Ｒβ２膜貫通ドメインを含む、請求項７または請求項８に記載の融合ポリペプチド。
【請求項１０】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−７Ｒα細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項１１】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−７Ｒα膜貫通ドメインを含む、請求項１０に記載の融合ポリペプチド。
【請求項１２】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインが、ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメインを含む、請求項１０または請求項１１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項１３】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−７Ｒα細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項１４】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメインを含む、請求項１３に記載の融合ポリペプチド。
【請求項１５】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインが、ＩＬ−７Ｒα膜貫通ドメインを含む、請求項１３または請求項１４に記載の融合ポリペプチド。
【請求項１６】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−２Ｒβ細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項１７】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−２Ｒβ膜貫通ドメインを含む、請求項１６に記載の融合ポリペプチド。
【請求項１８】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインが、ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメインを含む、請求項１６または請求項１７に記載の融合ポリペプチド。
【請求項１９】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−２Ｒβ細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２０】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメインを含む、請求項１９に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２１】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−２Ｒβ膜貫通ドメインを含む、請求項１９または請求項２０に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２２】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−２１Ｒ細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２３】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−２１Ｒ膜貫通ドメインを含む、請求項２２に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２４】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメインを含む、請求項２２または請求項２３に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２５】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−２１Ｒ細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２６】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメインを含む、請求項２５に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２７】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−２１Ｒ膜貫通ドメインを含む、請求項２５または請求項２６に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２８】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−１８Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−１８ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２９】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−１８Ｒ１膜貫通ドメインを含む、請求項２８に記載の融合ポリペプチド。
【請求項３０】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−１８ＲＡＰ膜貫通ドメインを含む、請求項２８または請求項２９に記載の融合ポリペプチド。
【請求項３１】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−１８ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−１８Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項３２】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−１８ＲＡＰ膜貫通ドメインを含む、請求項３１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項３３】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−１８Ｒ１膜貫通ドメインを含む、請求項３１または請求項３２に記載の融合ポリペプチド。
【請求項３４】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−１Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−１ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項３５】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−１Ｒ１膜貫通ドメインを含む、請求項３４に記載の融合ポリペプチド。
【請求項３６】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−１ＲＡＰ膜貫通ドメインを含む、請求項３４または請求項３５に記載の融合ポリペプチド。
【請求項３７】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−１ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−１Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項３８】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−１ＲＡＰ膜貫通ドメインを含む、請求項３７に記載の融合ポリペプチド。
【請求項３９】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−１Ｒ１膜貫通ドメインを含む、請求項３７または請求項３８に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４０】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−１ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−１ＲＬ２細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４１】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−１ＲＡＰ膜貫通ドメインを含む、請求項２２に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４２】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−１ＲＬ２膜貫通ドメインを含む、請求項４０または請求項４１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４３】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−１ＲＬ２細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＬ−１ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４４】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−１ＲＬ２膜貫通ドメインを含む、請求項４３に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４５】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＬ−１ＲＡＰ膜貫通ドメインを含む、請求項４３または請求項４４に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４６】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＦＮＡＲ１細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＦＮＡＲ２細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４７】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＦＮＡＲ１膜貫通ドメインを含む、請求項４６に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４８】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＦＮＡＲ２膜貫通ドメインを含む、請求項４６または請求項４７に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４９】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＦＮＡＲ２細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＦＮＡＲ１細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５０】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＦＮＡＲ２膜貫通ドメインを含む、請求項４９に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５１】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＩＦＮＡＲ１膜貫通ドメインを含む、請求項４９または請求項５０に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５２】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ１細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ１細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５３】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ１膜貫通ドメインを含む、請求項５２に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５４】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ１膜貫通ドメインを含む、請求項５２または請求項５３に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５５】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ２細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ２細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５６】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ２膜貫通ドメインを含む、請求項５５に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５７】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ２膜貫通ドメインを含む、請求項５５または請求項５６に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５８】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ３細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ３細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項５９】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ３膜貫通ドメインを含む、請求項５８に記載の融合ポリペプチド。
【請求項６０】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ３膜貫通ドメインを含む、請求項５８または請求項５９に記載の融合ポリペプチド。
【請求項６１】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ４細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ４細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項６２】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ４膜貫通ドメインを含む、請求項６１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項６３】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ４膜貫通ドメインを含む、請求項６１または請求項６２に記載の融合ポリペプチド。
【請求項６４】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ５細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ５細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項６５】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ５膜貫通ドメインを含む、請求項６４に記載の融合ポリペプチド。
【請求項６６】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ５膜貫通ドメインを含む、請求項６４または請求項６５に記載の融合ポリペプチド。
【請求項６７】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ６細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ６細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項６８】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ６膜貫通ドメインを含む、請求項６７に記載の融合ポリペプチド。
【請求項６９】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ６膜貫通ドメインを含む、請求項６７または請求項６８に記載の融合ポリペプチド。
【請求項７０】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ７細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ７細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項７１】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ７膜貫通ドメインを含む、請求項７０に記載の融合ポリペプチド。
【請求項７２】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ７膜貫通ドメインを含む、請求項７０または請求項７１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項７３】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ８細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ８細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項７４】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ８膜貫通ドメインを含む、請求項７３に記載の融合ポリペプチド。
【請求項７５】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ８膜貫通ドメインを含む、請求項７３または請求項７４に記載の融合ポリペプチド。
【請求項７６】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ９細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ９細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項７７】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ９膜貫通ドメインを含む、請求項７６に記載の融合ポリペプチド。
【請求項７８】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ９膜貫通ドメインを含む、請求項７６または請求項７７に記載の融合ポリペプチド。
【請求項７９】
前記第１のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ１０細胞内シグナル伝達ドメインであり、前記第２のポリペプチドの前記免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ１０細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項８０】
前記第１のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ１０膜貫通ドメインを含む、請求項７９に記載の融合ポリペプチド。
【請求項８１】
前記第２のポリペプチドの前記膜貫通ドメインがＴＬＲ１０膜貫通ドメインを含む、請求項７９または請求項８０に記載の融合ポリペプチド。
【請求項８２】
前記ポリペプチド切断シグナルがウイルス自己切断型ポリペプチドである、請求項１〜８１のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項８３】
前記ポリペプチド切断シグナルがウイルス自己切断型２Ａポリペプチドである、請求項１〜８２のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項８４】
前記ポリペプチド切断シグナルが、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａ）ウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群から選択される、ウイルス自己切断型ペプチドである、請求項１〜８３のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項８５】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−１２Ｒβ２膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−１２Ｒβ２細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−１２Ｒβ１膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−１２Ｒβ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項８６】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−１２Ｒβ１膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−１２Ｒβ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−１２Ｒβ２膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−１２Ｒβ２細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項８７】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−７Ｒα膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−７Ｒα細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項８８】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−７Ｒα膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−７Ｒα細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項８９】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−２Ｒβ膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−２Ｒβ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項９０】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−２Ｒβ膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−２Ｒβ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項９１】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−２１Ｒ膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−２１Ｒ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項９２】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−２１Ｒ膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−２１Ｒ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項９３】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−１８Ｒ１膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−１８Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−１８ＲＡＰ膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−１８ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項９４】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−１８ＲＡＰ膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−１８ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−１８Ｒ１膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−１８Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項９５】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−１Ｒ１膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−１Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−１ＲＡＰ膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−１ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項９６】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−１ＲＡＰ膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−１ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＬ−１Ｒ１膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ−１Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項９７】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＦＮＡＲ１膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＦＮＡＲ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＦＮＡＲ２膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＦＮＡＲ２細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項９８】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＦＮＡＲ２膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＦＮＡＲ２細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＩＦＮＡＲ１膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＦＮＡＲ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項９９】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ１膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ１膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項１００】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ２膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ２細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ２膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ２細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項１０１】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ３膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ３細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ３膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ３細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項１０２】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ４膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ４細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ４膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ４細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項１０３】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ５膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ５細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ５膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ５細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項１０４】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ６膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ６細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ６膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ６細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項１０５】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ７膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ７細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ７膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ７細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項１０６】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ８膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ８細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ８膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ８細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項１０７】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ９膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ９細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ９膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ９細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項１０８】
（ａ）ＴＧＦβＲ２ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ１０膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ１０細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、
（ｂ）ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、
（ｃ）ＴＧＦβＲ１ポリペプチドであって、
（ｉ）ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、
（ｉｉ）ＴＬＲ１０膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＴＬＲ１０細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
【請求項１０９】
前記ウイルス自己切断型２Ａポリペプチドが、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａ）ウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群から選択される、請求項８５〜１０８のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項１１０】
遺伝子操作された抗原受容体および第２のウイルス自己切断型２Ａポリペプチドをさらに含む、請求項１〜１０９のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
【請求項１１１】
前記第２のウイルス自己切断型２Ａポリペプチドが、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａ）ウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群から選択される、請求項１１０に記載の融合ポリペプチド。
【請求項１１２】
前記遺伝子操作された抗原受容体が、遺伝子操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ＤＡＲＩＣ受容体もしくはその構成成分、およびキメラサイトカイン受容体からなる群から選択され、任意選択的に、前記遺伝子操作された抗原受容体が、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、αｖβ６インテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）を含むＥＧＦＲファミリー、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児性ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｇｌｙｐｉｃａｎ−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２、ラムダ、ルイス−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、Ｓｕｒｖｉｖｉｎ、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、ＶＥＧＦＲ２、およびＷＴ−１からなる群から選択される抗原を認識する、請求項１１０または請求項１１１に記載のポリペプチド。
【請求項１１３】
配列番号２６〜３５のいずれか１つに示すアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項１１４】
請求項１〜１１３のいずれか一項に記載のＴＧＦβＲ２ポリペプチドおよびＴＧＦβＲ１ポリペプチドを含む、ポリペプチド複合体。
【請求項１１５】
請求項１〜１１３のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項１１６】
請求項１〜１１３のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、または請求項１１４に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項１１７】
請求項１〜１１３のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項１１３に記載のポリペプチド複合体、請求項１１４に記載のポリヌクレオチド、または請求項１１５に記載のベクターを含む、細胞。
【請求項１１８】
前記細胞が造血細胞である、請求項１１７に記載の細胞。
【請求項１１９】
前記細胞がＴ細胞である、請求項１１７または１１８に記載の細胞。
【請求項１２０】
前記細胞がＣＤ３＋、ＣＤ４＋、および／またはＣＤ８＋細胞である、請求項１１７〜１１９のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１２１】
前記細胞が免疫エフェクター細胞である、請求項１１７〜１２０のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１２２】
前記細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、またはヘルパーＴ細胞である、請求項１１７〜１２１のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１２３】
前記細胞がナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である、請求項１１７〜１２２のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１２４】
前記細胞の源が、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍である、請求項１１７〜１２３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１２５】
遺伝子操作された抗原受容体をさらに含む、請求項１１７〜１２４のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１２６】
前記遺伝子操作された抗原受容体が、遺伝子操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ＤＡＲＩＣ受容体、またはその構成要素、およびキメラサイトカイン受容体からなる群から選択される、請求項１２５に記載の細胞。
【請求項１２７】
請求項１〜１１３のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項１１４に記載のポリペプチド複合体、請求項１１５に記載のポリヌクレオチド、請求項１１６に記載のベクター、または請求項１１７〜１２６のいずれか一項に記載の細胞を含む、組成物。
【請求項１２８】
薬学的に許容される担体と、請求項１〜１１３のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項１１３に記載のポリペプチド複合体、請求項１１４に記載のポリヌクレオチド、請求項１１５に記載のベクター、または請求項１１７〜１２６のいずれか一項に記載の細胞と、を含む、薬学的組成物。
【請求項１２９】
治療を必要とする対象を治療する方法であって、有効量の請求項１２８に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１３０】
がん、感染疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、および免疫不全症、またはそれらに関連する病態のうちの少なくとも１つの症状を治療、予防、または改善する方法であって、有効量の請求項１２８に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１３１】
固形がんを治療する方法であって、有効量の請求項１２８に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１３２】
前記固形がんが、肝臓がん、膵臓がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、精巣がん、膀胱がん、脳腫瘍、肉腫、頭頸部がん、骨がん、甲状腺がん、腎臓がん、または皮膚がんを含む、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３３】
前記固形がんが膵臓がん、肺がん、または乳がんである、請求項１３１または１３２に記載の方法。
【請求項１３４】
血液悪性腫瘍を治療する方法であって、有効量の請求項１２８に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１３５】
前記血液悪性腫瘍が白血病、リンパ腫、または多発性骨髄腫である、請求項１３４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
背景
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年３月６日出願の米国仮特許出願第６２／４６７，４９６号の米国特許法第１１９条（ｅ）、および２０１６年１１月１７日出願の米国仮特許出願第６２／４２３，５６５号の下で利益を主張するものであり、それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表に関する陳述
本出願に関連する配列表は、ハードコピーの代わりにテキスト形式で提供され、参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むこのテキストファイル名は、ＢＬＢＤ＿０８０＿０２ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。本テキストファイルは２１５ＫＢであり、２０１７年１１月１７日に作成され、本明細書の出願と同時に、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出されている。
【０００３】
本開示は、養子細胞療法の改善に関する。より具体的には、本開示は、シグナル伝達分子、細胞、およびそれらを用いる方法の改善に関する。
【背景技術】
【０００４】
がんの世界的な負担は１９７５年〜２０００年の間に２倍となった。がんは、世界中の疾病率および死亡率の２番目に高い要因であり、２０１２年において新たな症例はおよそ１４１０万件、がん関連死は８２０万件となっている。最もよく見られるがんは、乳がん、肺および気管支がん、前立腺がん、結腸および直腸がん、膀胱がん、皮膚の黒色腫、非ホジキンリンパ腫、甲状腺がん、腎臓および腎盂がん、子宮内膜がん、白血病、ならびに膵臓がんである。新たながん症例件数は、今後２０年以内で２２００万件に上昇すると予想される。
【０００５】
免疫系は、ヒトがんの検出および撲滅において主要な役割を有する。形質転換細胞の大部分は、免疫センチネルによって迅速に検出され、クローン的に発現されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を介した抗原特異的Ｔ細胞の活性化を通して破壊される。したがって、がんは、免疫学的障害、すなわち、この疾患を恒久的に抑制および排除するために必要な抗腫瘍応答を開始する免疫系の機能障害とみなすことができる。がんをより有効に撲滅するために、過去数十年間にわたって開発されたある特定の免疫療法介入は、Ｔ細胞免疫性を強化することに特に注力してきた。これらの治療は、疾患寛解の孤発例をもたらしてきたのみであり、実質的な全体的奏功は達成していない。ＣＴＬＡ−４またはＰＤ−１などのＴ細胞活性化を阻害する分子を標的とするモノクローナル抗体を使用する、より最近の療法は、より実質的な抗腫瘍効果を示してきたが、これらの治療はまた、全身免疫活性化に起因する実質的な毒性にも関連する。
【０００６】
より最近では、Ｔ細胞の単離、修飾、増殖、および再注入に基づく養子細胞免疫療法戦略が探索されており、初期段階の臨床試験で試験されている。Ｔ細胞はしばしば、それらの選択的認識および強力なエフェクター機構に起因して、がん免疫療法のための一般的に好まれるエフェクター細胞となっている。これらの治療は、まちまちな奏効率を示してきたが、少数の患者は長期寛解を経験しており、Ｔ細胞系の免疫療法のいまだ実現していない可能性を強調している。
【０００７】
細胞溶解性Ｔ細胞による腫瘍細胞関連抗原の成功裏の認識は、標的とする腫瘍の溶解を惹起し、任意の有効ながん免疫療法アプローチを実証する。腫瘍浸潤Ｔ細胞（ＴＩＬ）は、腫瘍関連抗原に特異的に標的されたＴＣＲを発現するが、実質的なＴＩＬ数は、少数のヒトがんのみに限定される。遺伝子操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、多くのがんおよび他の免疫障害に対するＴ細胞ベースの免疫療法の適用性を増加させる可能性がある。
【０００８】
その上、最新技術による遺伝子操作されたＴ細胞は依然として、がん細胞、炎症性細胞、間質細胞、およびサイトカインからなる複合の免疫抑制腫瘍微小環境によって調節される。これらの構成要素のうち、がん細胞、炎症性細胞、および抑制性サイトカインが、Ｔ細胞表現型および機能に悪影響を与える。集合的に、腫瘍微小環境は、Ｔ細胞が疲弊したＴ細胞へと最終的に分化するよう駆り立てる。
【０００９】
Ｔ細胞疲弊は、阻害性受容体の増加した発現または阻害性受容体による増加したシグナル伝達、低減されたエフェクターサイトカイン産生、および持続してがんを排除する能力の減少によって特徴付けられる慢性的環境における、Ｔ細胞機能不全の状態である。疲弊したＴ細胞はまた、階層的様態で機能喪失を示す。すなわち、減少したＩＬ−２産生およびエクスビボでの殺傷能力が疲弊の早期段階で失われ、ＴＮＦ−α産生が中間段階で失われ、ＩＦＮ−γおよびＧｚｍＢ産生が疲弊の後期段階で失われる。腫瘍微小環境におけるほとんどのＴ細胞は、疲弊したＴ細胞へと分化し、がんを排除する能力を失い、最終的には取り除かれる。
【００１０】
形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）は、腫瘍微小環境内で免疫抑制シグナル伝達分子として関与する多面発現性サイトカインである。ＴＧＦβは、ＴＧＦβＲ１およびＴＧＦβＲ２セリン／スレオニンキナーゼ受容体複合体に結合し、下流転写因子Ｓｍａｄ２およびＳｍａｄ３の受容体媒介性のリン酸化をもたらす。多くの腫瘍は、ＴＧＦβＲ２レセプターおよび／または下流Ｓｍａｄシグナル伝達タンパク質における変異を得ることによって、ＴＧＦβの細胞増殖抑制性および抗増殖性作用を回避する。ＴＧＦβは、ＩＦＮγ分泌などの、インビトロでのＴ細胞のエフェクター活性および細胞溶解性活性に関与する主要分子を抑制する。
【００１１】
これまでに、中和Ａｂまたはキナーゼ阻害剤を用いたＴＧＦβシグナル伝達の阻害を対象とした臨床試験は、不本意な結果に終わり、有意な治療的有用性はまだ報告されていない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、部分的には、ＴＧＦβシグナルコンバーター（キメラＴＧＦβレセプターまたはＣＴＢＲ）、遺伝子修飾された細胞、組成物、およびそれらを用いる方法の改善に関する。
【００１３】
種々の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１のポリペプチドと、ポリペプチド切断シグナルと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２のポリペプチドと、を含むことが企図される。
【００１４】
追加の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、サイトカイン受容体、インターロイキン受容体、パターン認識受容体、またはＴｏｌｌ様受容体から単離されている。
【００１５】
特定の実施形態において、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、サイトカイン受容体、インターロイキン受容体、パターン認識受容体、またはＴｏｌｌ様受容体から単離されている。
【００１６】
いくつかの実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−１２Ｒβ２細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−１２Ｒβ１細胞内シグナル伝達ドメインである。種々の実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−１２Ｒβ２膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−１２Ｒβ１膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ１２またはＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００１７】
ある特定の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−１２Ｒβ１細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−１２Ｒβ２細胞内シグナル伝達ドメインである。さらなる実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−１２Ｒβ１膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−１２Ｒβ２膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ１２またはＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００１８】
追加の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−７Ｒα細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−７Ｒα膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ７またはＣＴＢＲ７シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００１９】
種々の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−７Ｒα細胞内シグナル伝達ドメインである。さらなる実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−７Ｒα膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ７またはＣＴＢＲ７シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００２０】
追加の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−２Ｒβ細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメインである。種々の実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−２Ｒβ膜貫通ドメインを含む。種々の実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ１５またはＣＴＢＲ１５シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００２１】
特定の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−２Ｒβ細胞内シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−２Ｒβ膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ１５またはＣＴＢＲ１５シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００２２】
さらなる実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−２１Ｒ細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメインである。特定の実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−２１Ｒ膜貫通ドメインを含む。種々の実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ２１またはＣＴＢＲ２１シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００２３】
追加の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−２１Ｒ細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメインを含む。さらなる実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−２１Ｒ膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ２１またはＣＴＢＲ２１シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００２４】
種々の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−１８Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−１８ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−１８Ｒ１膜貫通ドメインを含む。種々の実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−１８ＲＡＰ膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ１８またはＣＴＢＲ１８シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００２５】
いくつかの実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−１８ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−１８Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメインである。追加の実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−１８ＲＡＰ膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−１８Ｒ１膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ１８またはＣＴＢＲ１８シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００２６】
ある特定の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−１Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−１ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメインである。さらなる実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−１Ｒ１膜貫通ドメインを含む。種々の実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−１ＲＡＰ膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ１またはＣＴＢＲ１シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００２７】
ある特定の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−１ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−１Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメインである。種々の実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−１ＲＡＰ膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−１Ｒ１膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ１またはＣＴＢＲ１シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００２８】
追加の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−１ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−１ＲＬ２細胞内シグナル伝達ドメインである。種々の実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−１ＲＡＰ膜貫通ドメインを含む。さらなる実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−１ＲＬ２膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ３６またはＣＴＢＲ３６シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００２９】
特定の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−１ＲＬ２細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−１ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−１ＲＬ２膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＬ−１ＲＡＰ膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ３６またはＣＴＢＲ３６シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００３０】
種々の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＦＮＡＲ１細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＦＮＡＲ２細胞内シグナル伝達ドメインである。さらなる実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＦＮＡＲ１膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＦＮＡＲ２膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲＩＦＮ１またはＣＴＢＲＩＦＮ１シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００３１】
種々の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＦＮＡＲ２細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＦＮＡＲ１細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＦＮＡＲ２膜貫通ドメインを含む。種々の実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＩＦＮＡＲ１膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＩＦＮ１またはＣＴＢＲ．ＩＦＮ１シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００３２】
さらなる実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ１細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ１細胞内シグナル伝達ドメインである。追加の実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ１膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ１膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ１またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ１シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００３３】
特定の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ２細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ２細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ２膜貫通ドメインを含む。さらなる実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ２膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ２またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ２シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００３４】
種々の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ３細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ３細胞内シグナル伝達ドメインである。さらなる実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ３膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ３膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ３またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ３シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００３５】
種々の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ４細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ４細胞内シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ４膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ４膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ４またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ４シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００３６】
追加の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ５細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ５細胞内シグナル伝達ドメインである。特定の実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ５膜貫通ドメインを含む。種々の実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ５膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ５またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ５シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００３７】
いくつかの実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ６細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ６細胞内シグナル伝達ドメインである。さらなる実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ６膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ６膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ６またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ６シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００３８】
いくつかの実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ７細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ７細胞内シグナル伝達ドメインである。種々の実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ７膜貫通ドメインを含む。さらなる実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ７膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ７またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ７シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００３９】
ある特定の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ８細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ８細胞内シグナル伝達ドメインである。特定の実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ８膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ８またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ８シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００４０】
種々の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ９細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ９細胞内シグナル伝達ドメインである。さらなる実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ９膜貫通ドメインを含む。追加の実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ９膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ９またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ９シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００４１】
ある特定の実施形態において、第１のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ１０細胞内シグナル伝達ドメインであり、第２のポリペプチドの免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ１０細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態において、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ１０膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインは、ＴＬＲ１０膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ１０またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ１０シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００４２】
さらなる実施形態において、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断型ポリペプチドである。
【００４３】
様々な実施形態において、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断型２Ａポリペプチドである。
【００４４】
さらなる実施形態において、ポリペプチド切断シグナルは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａ）ウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群から選択される、ウイルス自己切断型ペプチドである。
【００４５】
特定の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−１２Ｒβ２膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ２細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−１２Ｒβ１膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ１細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ１２またはＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００４６】
様々な実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−１２Ｒβ１膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ１細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−１２Ｒβ２膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ２細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ１２またはＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００４７】
追加の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−７Ｒα膜貫通ドメイン、およびＩＬ−７Ｒα細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ７またはＣＴＢＲ７シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００４８】
特定の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−７Ｒα膜貫通ドメイン、およびＩＬ−７Ｒα細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ７またはＣＴＢＲ７シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００４９】
ある特定の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−２Ｒβ膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒβ細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ１５またはＣＴＢＲ１５シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００５０】
種々の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−２Ｒβ膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒβ細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ１５またはＣＴＢＲ１５シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００５１】
いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−２１Ｒ膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２１Ｒ細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ２１またはＣＴＢＲ２１シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００５２】
ある特定の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−２１Ｒ膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２１Ｒ細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ２１またはＣＴＢＲ２１シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００５３】
種々の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−１８Ｒ１膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１８Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−１８ＲＡＰ膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１８ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ１８またはＣＴＢＲ１８シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００５４】
追加の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−１８ＲＡＰ膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１８ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−１８Ｒ１膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１８Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ１８またはＣＴＢＲ１８シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００５５】
特定の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−１Ｒ１膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−１ＲＡＰ膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ３６またはＣＴＢＲ３６シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００５６】
ある特定の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−１ＲＡＰ膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＬ−１Ｒ１膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ３６またはＣＴＢＲ３６シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００５７】
種々の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＦＮＡＲ１膜貫通ドメイン、およびＩＦＮＡＲ１細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＦＮＡＲ２膜貫通ドメイン、およびＩＦＮＡＲ２細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＩＦＮ１またはＣＴＢＲ．ＩＦＮ１シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００５８】
いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＦＮＡＲ２膜貫通ドメイン、およびＩＦＮＡＲ２細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＩＦＮＡＲ１膜貫通ドメイン、およびＩＦＮＡＲ１細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。
【００５９】
さらなる実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ１膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ１細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ１膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ１細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ１またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ１シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００６０】
特定の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ２膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ２細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ２膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ２細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ２またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ２シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００６１】
種々の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ３膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ３細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ３膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ３細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ３またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ３シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００６２】
ある特定の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ４細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ４細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ４またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ４シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００６３】
追加の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ５膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ５細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ５膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ５細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ５またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ５シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００６４】
種々の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ６膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ６細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ６膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ６細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ６またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ６シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００６５】
いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ７膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ７細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ７膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ７細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ７またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ７シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００６６】
特定の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ８膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ８細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ８膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ８細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ８またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ８シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００６７】
追加の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ９膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ９細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ９膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ９細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ９またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ９シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００６８】
種々の実施形態において、融合ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ１０膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ１０細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ２ポリペプチドと、ウイルス自己切断型２Ａペプチドと、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、ＴＬＲ１０膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ１０細胞内シグナル伝達ドメインを含むＴＧＦβＲ１ポリペプチドと、を含む。特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲ１０またはＣＴＢＲ．ＴＬＲ１０シグナルコンバーターと呼ばれる。
【００６９】
いくつかの実施形態において、ウイルス自己切断型２Ａポリペプチドは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａ）ウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群から選択される。
【００７０】
さらなる実施形態において、本明細書で企図される融合ポリペプチドは、遺伝子操作された抗原受容体および第２のウイルス自己切断型２Ａポリペプチドをさらに含む。
【００７１】
ある特定の実施形態において、第２のウイルス自己切断型２Ａポリペプチドは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａ）ウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群から選択される。
【００７２】
特定の実施形態において、遺伝子操作された抗原受容体が、遺伝子操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ＤＡＲＩＣ受容体もしくはその構成成分、およびキメラサイトカイン受容体からなる群から選択され、任意選択的に、遺伝子操作された抗原受容体が、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、αｖβ６インテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）を含むＥＧＦＲファミリー、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児性ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｇｌｙｐｉｃａｎ−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２、ラムダ、ルイス−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、Ｓｕｒｖｉｖｉｎ、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、ＶＥＧＦＲ２、およびＷＴ−１からなる群から選択される抗原を認識する。
【００７３】
さらなる実施形態において、融合ポリペプチドは、配列番号２６〜３５のいずれか一つに示すアミノ酸配列を含む。
【００７４】
種々の実施形態において、本明細書で企図される融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが提供される。
【００７５】
追加の実施形態において、本明細書で企図されるポリヌクレオチドまたは融合ポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。
【００７６】
特定の実施形態において、本明細書で企図される融合ポリペプチド、ポリヌクレオチド、またはベクターを含む細胞が提供される。
【００７７】
さらなる実施形態において、細胞は造血細胞である。
【００７８】
ある特定の実施形態において、細胞はＴ細胞である。
【００７９】
種々の実施形態において、細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、および／またはＣＤ８＋細胞である。
【００８０】
いくつかの実施形態において、細胞は免疫エフェクター細胞である。
【００８１】
追加の実施形態において、細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、またはヘルパーＴ細胞である。
【００８２】
さらなる実施形態において、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である。
【００８３】
特定の実施形態において、本細胞の源は、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺問題（ｉｓｓｕｅ）、感染部位由来組織、復水、胸水、脾臓組織、または腫瘍である。
【００８４】
いくつかの実施形態において、本明細書で企図される融合ポリペプチドを含む細胞は、遺伝子操作された抗原受容体をさらに含む。
【００８５】
種々の実施形態において、遺伝子操作された抗原受容体は、遺伝子操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ＤＡＲＩＣ受容体もしくはその構成要素、またはキメラサイトカイン受容体である。
【００８６】
追加の実施形態において、本明細書で企図される融合ポリペプチド、ポリヌクレオチド、ベクター、または細胞を含む組成物が提供される。
【００８７】
特定の実施形態において、本明細書で企図される、薬学的に許容される担体および融合ポリペプチド、ポリヌクレオチド、ベクター、または細胞を含む薬学的組成物が提供される。
【００８８】
ある特定の実施形態において、それを必要とする対象を治療する方法は、本明細書で企図される有効量の組成物または薬学的組成物を対象に投与することを含む。
【００８９】
いくつかの実施形態において、がん、感染疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、および免疫不全症、またはそれらに関連する病態のうちの少なくとも１つの症状を治療、予防、または改善する方法は、本明細書で企図される有効量の組成物または薬学的組成物を対象に投与することを含む。
【００９０】
追加の実施形態において、固形がんを治療する方法は、本明細書で企図される有効量の組成物または薬学的組成物を対象に投与することを含む。
【００９１】
種々の実施形態において、固形がんは、肝臓がん、膵臓がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、精巣がん、膀胱がん、脳腫瘍、肉腫、頭頸部がん、骨がん、甲状腺がん、腎臓がん、または皮膚がんを含む。
【００９２】
特定の実施形態において、固形がんは、膵臓がん、肺がん、または乳がんである。
【００９３】
ある特定の実施形態において、本明細書で企図される有効量の組成物または薬学的組成物を対象に投与することを含む、血液悪性腫瘍を治療する方法が提供される。
【００９４】
種々の実施形態において、血液悪性腫瘍は、白血病、リンパ腫、または多発性骨髄腫である。
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１】キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびＴＧＦβ優性陰性受容体（ＣＡＲ．ＤＮＲ）、ＣＡＲおよびＴＧＦβＲ２サブユニット（Ｒ２）、ＣＡＲおよびＣＴＢＲ１２シグナルコンバーター（ＣＡＲ．ＣＴＢＲ１２）、ならびにＣＡＲおよびＣＴＢＲ７シグナルコンバーター（ＣＡＲ．ＣＴＢＲ７）をコードするポリペプチドの略画を示す。
【図２】抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ単独、ならびにＴＧＦβ  ＤＮＲ、ＴＧＦβＲ２サブユニット、およびＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターと組み合わせて抗ＲＯＲ１  ＣＡＲを形質導入した、初代ヒトＴ細胞におけるＣＡＲおよびＴＧＦβＲ２サブユニットの発現を示す。
【図３】抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ単独、ならびにＴＧＦβ  ＤＮＲ、ＴＧＦβＲ２サブユニット、およびＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターと組み合わせて抗ＲＯＲ１  ＣＡＲを形質導入し、未処置細胞との対比でＴＧＦβ１で処置した、初代ヒトＴ細胞におけるリン酸化ＳＭＡＤ２／３の発現を示す。
【図４】抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ単独、ならびにＴＧＦβ  ＤＮＲ、ＴＧＦβＲ２サブユニット、およびＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターと組み合わせて抗ＲＯＲ１  ＣＡＲを形質導入し、ＩＬ−１２（上段）またはＴＧＦβ１（下段）のいずれかで処置した、初代ヒトＴ細胞におけるリン酸化ＳＴＡＴ４の発現を示す。
【図５】抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターを形質導入し、ＩＬ−１２（左パネル）またはＴＧＦβ１（右パネル）のいずれかで処置した、初代ヒトＴ細胞におけるリン酸化ＳＴＡＴ４およびリン酸化ＳＴＡＴ５の発現を示す。
【図６−１】ＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターと組み合わせて抗ＲＯＲ１  ＣＡＲを形質導入し、ＴＧＦβ１の存在下または非存在下にて２１日間ＲＯＲ１を発現する標的細胞で連続的に再刺激した、初代ヒトＴ細胞からの遺伝子発現分析を示す。
【図６−２】ＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターと組み合わせて抗ＲＯＲ１  ＣＡＲを形質導入し、ＴＧＦβ１の存在下または非存在下にて２１日間ＲＯＲ１を発現する標的細胞で連続的に再刺激した、初代ヒトＴ細胞からの遺伝子発現分析を示す。
【図７】抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ単独およびＴＧＦβ  ＤＮＲまたはＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターと組み合わせた抗ＲＯＲ１  ＣＡＲを形質導入し、ＴＧＦβ１の存在下または不存在下にてＣＤ３またはＲＯＲ１でコーティングしたプレートで培養した、初代ヒトＴ細胞からのＩＦＮγ分泌を示す。
【図８】抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ単独、およびＴＧＦβ  ＤＮＲまたはＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターと組み合わせた抗ＲＯＲ１  ＣＡＲを形質導入し、ＴＧＦβ１の存在下または不存在下にてＲＯＲ１を発現する標的細胞で連続的に再刺激した、初代ヒトＴ細胞の増殖曲線を示す。
【図９】抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ単独、ならびにＴＧＦβ  ＤＮＲおよびＣＴＢＲ７シグナルコンバーターと組み合わせた抗ＲＯＲ１  ＣＡＲを形質導入した初代ヒトＴ細胞におけるＣＡＲおよびＴＧＦβＲ２サブユニットの発現を示す。
【図１０】抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ単独、ならびにＴＧＦβ  ＤＮＲおよびＣＴＢＲ７シグナルコンバーターと組み合わせた抗ＲＯＲ１  ＣＡＲを形質導入し、ＴＧＦβ１で処置した、初代ヒトＴ細胞におけるリン酸化ＳＭＡＤ２／３の発現を示す。
【図１１】抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ単独、ならびにＴＧＦβ  ＤＮＲおよびＣＴＢＲ７シグナルコンバーターと組み合わせた抗ＲＯＲ１  ＣＡＲを形質導入し、ＴＧＦβ１で処置した、初代ヒトＴ細胞におけるリン酸化ＳＴＡＴ５の発現を示す。
【図１２】抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ単独、およびＴＧＦβ  ＤＮＲおよびＣＴＢＲ７シグナルコンバーターと組み合わせて抗ＲＯＲ１  ＣＡＲを形質導入し、ＴＧＦβ１で処置した、初代ヒトＴ細胞におけるＢＣＬ２の発現を示す。
【図１３】ＴＧＦβ１の存在下または不存在下にて、抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ単独、およびＴＧＦβ  ＤＮＲまたはＣＴＢＲ７シグナルコンバーターと組み合わせて抗ＲＯＲ１  ＣＡＲを形質導入した、初代ヒトＴ細胞の増殖曲線を示す。
【図１４】抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ単独、およびＴＧＦβ  ＤＮＲまたはＣＴＢＲ７シグナルコンバーターと組み合わせて抗ＲＯＲ１  ＣＡＲを形質導入し、ＴＧＦβ１の存在下または不存在下にてＲＯＲ１を発現する標的細胞で連続的に再刺激した、初代ヒトＴ細胞の増殖曲線を示す。
【図１５】抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ単独、ならびにＴＧＦβ  ＤＮＲ、ＣＴＢＲ１２シグナルコンバーター、およびＣＴＢＲ７シグナルコンバーター（上段パネル）と組み合わせて抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲを形質導入した、初代ヒトＴ細胞におけるＣＡＲおよびＴＧＦβＲ２サブユニットの発現を示す。図１５はまた、抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ単独、およびＴＧＦβ  ＤＮＲ、ＣＴＢＲ１２シグナルコンバーター、およびＣＴＢＲ７シグナルコンバーターと組み合わせて抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲを形質導入し、未処置細胞との対比でＴＧＦβ１（下段パネル）で処置した、初代ヒトＴ細胞におけるリン酸化ＳＭＡＤ２／３の発現を示す。
【図１６】抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ単独、ＴＧＦβ  ＤＮＲ、およびＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターと組み合わせて抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲを形質導入し、ＩＬ−１２またはＴＧＦβ１のいずれかで処置した、初代ヒトＴ細胞におけるリン酸化ＳＴＡＴ４の発現を示す。
【図１７】抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ単独、ならびにＴＧＦβ  ＤＮＲおよびＣＴＢＲ７シグナルコンバーターと組み合わせて抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲを形質導入し、ＩＬ−７またはＴＧＦβ１のいずれかで処置した、初代ヒトＴ細胞におけるリン酸化ＳＴＡＴ５の発現を示す。
【図１８】抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ単独、ならびにＴＧＦβ  ＤＮＲまたはＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターと組み合わせて抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲを形質導入し、ＴＧＦβ１のの存在下または不存在下にてＥＧＦＲ（−）またはＥＧＦＲ（＋）細胞株と共に培養した、初代ヒトＴ細胞からのＩＦＮγ分泌を示す。
【図１９】抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ単独、およびＴＧＦβ  ＤＮＲ、ＣＴＢＲ１２シグナルコンバーター、またはＣＴＢＲ７シグナルコンバーターと組み合わせて抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲを形質導入し、ＴＧＦβ１の存在下または不存在下にてＥＧＦＲを発現する標的細胞で連続的に再刺激した、初代ヒトＴ細胞の増殖曲線を示す。
【図２０】ＮＹ−ＥＳＯ１（Ａ２）、ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲおよびＴＧＦβ優性陰性受容体（ＮＹ−ＥＳＯ１．ＤＮＲ）、ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲおよびＣＴＢＲ７シグナルコンバーター（ＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ７）、ならびにＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲおよびＣＴＢＲ１２シグナルコンバーター（ＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ１２）を認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードするポリペプチドの略画を示す。
【図２１】ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲ、ＮＹ−ＥＳＯ１．ＤＮＲ、ＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ７、およびＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ１２を形質導入し、未処置細胞との対比でＴＧＦβ１で処置した、初代ヒトＴ細胞におけるリン酸化ＳＭＡＤ２／３の発現を示す。
【図２２】ＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ７を形質導入し、ＩＬ−７またはＴＧＦβ１（上段パネル）のいずれかで処置した、初代ヒトＴ細胞におけるリン酸化ＳＴＡＴ５の発現を示す。図２２はまた、ＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ１２を形質導入し、ＩＬ−１２またはＴＧＦβ１（下段パネル）のいずれかで処置した、初代ヒトＴ細胞におけるリン酸化ＳＴＡＴ４の発現を示す。
【図２３】ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲ、ＮＹ−ＥＳＯ１．ＤＮＲ、ＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ７、およびＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ１２を形質導入し、ＴＧＦβ１の存在下または不存在下にてＡ２（＋）ＮＹ−ＥＳＯ１（＋）細胞株と共に培養した、初代ヒトＴ細胞からのＩＦＮγ分泌を示す。
【発明を実施するための形態】
【００９６】
配列識別の簡単な説明
配列番号１は、ヒトＴＧＦβＲ１のポリペプチド配列を示す。
配列番号２は、ヒトＴＧＦβＲ２のポリペプチド配列を示す。
配列番号３は、ヒトＩＬ−１２Ｒβ１（ＣＤ２１２）のポリペプチド配列を示す。
配列番号４は、ヒトＩＬ−１２Ｒβ２のポリペプチド配列を示す。
配列番号５は、ヒトＩＬ−７Ｒα（ＣＤ１２７）のポリペプチド配列を示す。
配列番号６は、ヒトＩＬ−２Ｒγ（ＣＤ１３２）のポリペプチド配列を示す。
配列番号７は、ヒトＩＬ−２Ｒβ（ＣＤ１２２）のポリペプチド配列を示す。
配列番号８は、ヒトＩＬ−２１Ｒ（ＣＤ３６０）のポリペプチド配列を示す。
配列番号９は、ヒトＩＬ−１８Ｒ１（ＣＤ２１８ａ）のポリペプチド配列を示す。
配列番号１０は、ヒトＩＬ−１８ＲＡＰ（ＣＤ２１８ｂ）のポリペプチド配列を示す。
配列番号１１は、ヒトＩＬ−１Ｒ１（ＣＤ１２１ａ）のポリペプチド配列を示す。
配列番号１２は、ヒトＩＬ−１ＲＡＰのポリペプチド配列を示す。
配列番号１３は、ヒトＩＦＮＡＲ１のポリペプチド配列を示す。
配列番号１４は、ヒトＩＦＮＡＲ２のポリペプチド配列を示す。
配列番号１５は、ヒトＩＬ−１ＲＬ２のポリペプチド配列を示す。
配列番号１６は、ヒトＴＬＲ１（ＣＤ２８１）のポリペプチド配列を示す。
配列番号１７は、ヒトＴＬＲ２（ＣＤ２８２）のポリペプチド配列を示す。
配列番号１８は、ヒトＴＬＲ３（ＣＤ２８３）のポリペプチド配列を示す。
配列番号１９は、ヒトＴＬＲ４（ＣＤ２８４）のポリペプチド配列を示す。
配列番号２０は、ヒトＴＬＲ５（ＣＤ２８５）のポリペプチド配列を示す。
配列番号２１は、ヒトＴＬＲ６（ＣＤ２８６）のポリペプチド配列を示す。
配列番号２２は、ヒトＴＬＲ７（ＣＤ２８７）のポリペプチド配列を示す。
配列番号２３は、ヒトＴＬＲ８（ＣＤ２８８）のポリペプチド配列を示す。
配列番号２４は、ヒトＴＬＲ９（ＣＤ２８９）のポリペプチド配列を示す。
配列番号２５は、ヒトＴＬＲ１０（ＣＤ２９０）のポリペプチド配列を示す。
配列番号２６は、ヒトＴＧＦβＲ１の細胞外ドメイン、ならびにヒトＩＬ−１２Ｒβ１の膜貫通および細胞内ドメインを含む融合タンパク質のポリペプチド配列を示す。
配列番号２７は、ヒトＴＧＦβＲ２の細胞外ドメイン、ならびにヒトＩＬ−１２Ｒβ２の膜貫通および細胞内ドメインを含む融合タンパク質のポリペプチド配列を示す。
配列番号２８は、ヒトＴＧＦβＲ２の細胞外ドメイン、ならびにヒトＩＬ−１２Ｒβ２の膜貫通および細胞内ドメイン、ポリペプチド切断配列、ならびにヒトＴＧＦβＲ１の細胞外ドメイン、ならびにヒトＩＬ−１２Ｒβ１の膜貫通および細胞内ドメインを含む融合タンパク質のポリペプチド配列を示す。
配列番号２９は、キメラ抗原受容体、ポリペプチド切断配列、ヒトＴＧＦβＲ２の細胞外ドメイン、ならびにヒトＩＬ−１２Ｒβ２の膜貫通および細胞内ドメイン、ポリペプチド切断配列、ならびにヒトＴＧＦβＲ１の細胞外ドメイン、ならびにヒトＩＬ−１２Ｒβ１の膜貫通および細胞内ドメインを含む融合タンパク質のポリペプチド配列を示す。
配列番号３０は、キメラ抗原受容体、ポリペプチド切断配列、ヒトＴＧＦβＲ２の細胞外ドメイン、ならびにヒトＩＬ−１２Ｒβ２の膜貫通および細胞内ドメイン、ポリペプチド切断配列、ならびにヒトＴＧＦβＲ１の細胞外ドメイン、ならびにヒトＩＬ−１２Ｒβ１の膜貫通および細胞内ドメインを含む融合タンパク質のポリペプチド配列を示す。Ｘは、任意のｓｃＦｖ配列を表す。
配列番号３１は、ヒトＴＧＦβＲ１の細胞外ドメイン、ならびにヒトＩＬ−２Ｒγの膜貫通および細胞内ドメインを含む融合タンパク質のポリペプチド配列を示す。
配列番号３２は、ヒトＴＧＦβＲ２の細胞外ドメイン、ならびにヒトＩＬ−７Ｒαの膜貫通および細胞内ドメインを含む融合タンパク質のポリペプチド配列を示す。
配列番号３３は、ヒトＴＧＦβＲ２の細胞外ドメイン、ならびにヒトＩＬ−７Ｒαの膜貫通および細胞内ドメイン、ポリペプチド切断配列、ならびにヒトＴＧＦβＲ１の細胞外ドメイン、ならびにヒトＩＬ−２Ｒγの膜貫通および細胞内ドメインを含む融合タンパク質のポリペプチド配列を示す。
配列番号３４は、キメラ抗原受容体、ポリペプチド切断配列、ヒトＴＧＦβＲ２の細胞外ドメイン、ならびにヒトＩＬ−７Ｒαの膜貫通および細胞内ドメイン、ポリペプチド切断配列、ならびにヒトＴＧＦβＲ１の細胞外ドメイン、ならびにヒトＩＬ−２Ｒγの膜貫通および細胞内ドメインを含む融合タンパク質のポリペプチド配列を示す。
配列番号３５は、キメラ抗原受容体、ポリペプチド切断配列、ヒトＴＧＦβＲ２の細胞外ドメイン、ならびにヒトＩＬ−７Ｒαの膜貫通および細胞内ドメイン、ポリペプチド切断配列、ならびにヒトＴＧＦβＲ１の細胞外ドメイン、ならびにヒトＩＬ−２Ｒγの膜貫通および細胞内ドメインを含む融合タンパク質のポリペプチド配列を示す。
配列番号３６〜４６は、種々のリンカーのアミノ酸配列を示す。
配列番号４７〜７１は、プロテアーゼ切断部位および自己切断型ポリペプチド切断部位のアミノ酸配列を示す。
【００９７】
Ａ．概要
キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）は、血液悪性腫瘍における有意な抗腫瘍活性を示す。しかし、固形腫瘍における活性は、免疫抑制性の固形腫瘍微小環境（ＴＭＥ）のために部分的に制限を受ける。腫瘍細胞および腫瘍浸潤リンパ球によるＴＧＦβを含む免疫抑制サイトカインの過剰産生は、免疫抑制腫瘍微小環境に貢献する。ＴＧＦβは、様々なメカニズムを介してＴ細胞機能を阻害する。ＴＧＦβは、しばしば、がんに罹患している患者における免疫細胞の機能および不良な予後を阻害する、腫瘍転移および浸潤に関連する。腫瘍特異的ＣＴＬ中のＴＧＦβＲ２を介したＴＧＦβシグナル伝達は、腫瘍におけるそれらの機能および頻度を弱め、モノクローナル抗体によるＣＤ８＋Ｔ細胞上のＴＧＦβシグナル伝達の遮断は、腫瘍部位でより急速な腫瘍監視およびさらに多くのＣＴＬの存在をもたらす。これまでに、臨床環境においてＴＧＦβを阻害する戦略は有意な治療効果が得られなかった。
【００９８】
本開示は、一般に、免疫抑制ＴＧＦβシグナルを免疫刺激シグナルおよびポリペプチドを発現する細胞に変換するポリペプチドに関する。いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、本明細書で企図されるポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１およびＴＧＦβＲ２のＴＧＦβ結合ドメインを含むＴＧＦβシグナルコンバーターであり、それは、免疫刺激エンドドメインに連結され、免疫エフェクター細胞で共発現される場合、免疫抑制シグナルによるＴＧＦβ曝露を、免疫エフェクター細胞の活性および機能を刺激する免疫刺激シグナルに変換することができる。免疫エフェクター細胞におけるＴＧＦβシグナルコンバーターポリペプチドの共発現は、例えば、炎症性サイトカインを回復または増加させることによって、細胞をＴＧＦβの免疫抑制性の影響力に対して抵抗性にする。特定の好ましい実施形態において、ＴＧＦβシグナルコンバーターポリペプチドはキメラＴＧＦβ受容体またはＣＴＢＲと呼ばれる。
【００９９】
種々の実施形態において、本開示は、部分的には、免疫抑制ＴＧＦβシグナルを１つ以上の免疫受容体のうちの１つ以上の細胞内ドメインを介してまたはそれによって媒介された免疫刺激シグナルに変換するポリペプチドを企図する。
【０１００】
種々の実施形態において、本開示は、部分的には、免疫抑制ＴＧＦβシグナルを１つ以上のサイトカイン受容体のうちの１つ以上の細胞内ドメインを介してまたはそれによって媒介された免疫刺激シグナルに変換するポリペプチドを企図する。
【０１０１】
種々の実施形態において、本開示は、部分的には、免疫抑制ＴＧＦβシグナルを１つ以上のインターロイキン受容体のうちの１つ以上の細胞内ドメインを介してまたはそれによって媒介された免疫刺激シグナルに変換するポリペプチドを企図する。
【０１０２】
種々の実施形態において、本開示は、部分的には、免疫抑制ＴＧＦβシグナルを１つ以上のパターン認識受容体のうちの１つ以上の細胞内ドメインを介してまたはそれによって媒介された免疫刺激シグナルに変換するポリペプチドを企図する。
【０１０３】
種々の実施形態において、本開示は、部分的には、免疫抑制ＴＧＦβシグナルを１つ以上のＴｏｌｌ様受容体のうちの１つ以上の細胞内ドメインを介してまたはそれによって媒介された免疫刺激シグナルに変換するポリペプチドを企図する。
【０１０４】
特定の実施形態において、本開示は、部分的には、ＴＧＦβ、膜貫通ドメイン、および１つ以上の免疫受容体のうちの１つ以上の細胞内ドメインに結合するＴＧＦβＲ１細胞外ドメインを含むポリペプチド、ならびにＴＧＦβ、膜貫通ドメイン、および１つ以上の免疫受容体のうちの１つ以上の細胞内ドメインに結合するＴＧＦβＲ２細胞外ドメインを含むポリペプチド、を企図する。一実施形態において、ポリペプチドは、ポリペプチド切断シグナル、例えば、２Ａポリペプチド切断シグナルによって、互いに連結される。
【０１０５】
特定の実施形態において、本開示は、部分的には、ＴＧＦβ、膜貫通ドメイン、および１つ以上の免疫受容体のうちの１つ以上の細胞内ドメインに結合するＴＧＦβＲ１細胞外ドメインを含むポリペプチド、ならびにＴＧＦβ、膜貫通ドメイン、および１つ以上の免疫受容体のうちの１つ以上の細胞内ドメインに結合するＴＧＦβＲ２細胞外ドメインを含むポリペプチド、を発現する免疫エフェクター細胞、例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞を企図する。
【０１０６】
特定の実施形態において、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−１２受容体、ＩＬ−７受容体、ＩＬ−１５受容体、ＩＬ−２１受容体、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−１受容体、ＩＬ−１８受容体、ＩＬ−３６受容体、Ｉ型ＩＦＮ受容体、ＴＬＲ１受容体、ＴＬＲ２受容体、ＴＬＲ３受容体、ＴＬＲ４受容体、ＴＬＲ５受容体、ＴＬＲ６受容体、ＴＬＲ７受容体、ＴＬＲ８受容体、ＴＬＲ９受容体、またはＴＬＲ１０受容体から単離された。
【０１０７】
特定の実施形態において、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＬ−１２Ｒβ２、ＩＬ−７Ｒα、ＩＬ−２Ｒγ、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−２１Ｒ、ＩＬ−１８Ｒ１、ＩＬ−１８ＲＡＰ、ＩＬ−１Ｒ１、ＩＬ−１ＲＡＰ、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＬ−１ＲＬ２、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、またはＴＬＲ１０から単離される。
【０１０８】
特定の実施形態の実践は、特にそれとは反対の指定がない限り、当業者の技能の範囲内にある、化学、生化学、有機化学、分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ技法、遺伝学、免疫学、および細胞生物学の従来の方法を用いることになり、これらの多くが例示説明の目的で下記に記載される。かかる技法は、文献において十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄＥｄｉｔｉｏｎ，２００１）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９）、Ｍａｎｉａｔｉｓｅｔａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８２）、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，ｕｐｄａｔｅｄ  Ｊｕｌｙ  ２００８）、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ＢｉｏｌｏｇｙＡ  Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｒｏｍ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；Ｇｌｏｖｅｒ，ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ＆ＩＩ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８５）；Ａｎａｎｄ，Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｇｅｎｏｍｅｓ，（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９９２）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．，１９８４）、Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９８）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｑ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ  ａｎｄ  Ｗ．Ｓｔｒｏｂｅｒ，ｅｄｓ．，１９９１）、Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、ならびにＡｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙなどの学術誌における研究論文を参照されたい。
【０１０９】
Ｂ．定義
別途規定されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと同様または同等のいずれの方法および材料も、特定の実施形態の実践または試験において使用することができるが、組成物、方法、および材料の好ましい実施形態が本明細書に記載される。本開示において、次の用語が下記で定義される。
【０１１０】
冠詞「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、その冠詞の文法上の目的語の１つまたは１つよりも多く（すなわち、少なくとも１つ、または１つ以上）を指すように本明細書で使用される。例として、「（ａｎ）要素」は、１つの要素または１つ以上の要素を意味する。
【０１１１】
二者択一（例えば、「または」）の使用は、その二者択一対象の一方、両方、またはそれらの任意の組み合わせのいずれかを意味するように理解されるべきである。
【０１１２】
「および／または」という用語は、その二者択一対象の一方、または両方のいずれかを意味するように理解されるべきである。
【０１１３】
本明細書で使用されるとき、「約」または「およそ」という用語は、参照の数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さに対して最大１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％異なる、数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さを指す。一実施形態において、「約」または「およそ」という用語は、参照の数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さの±１５％、±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±４％、±３％、±２％、または±１％の数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さの範囲を指す。
【０１１４】
本明細書全体を通して、文脈上他の解釈を要する場合を除き、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、および「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という語は、述べられる工程もしくは要素または工程または要素の群を包含するが、任意の他の工程もしくは要素または工程もしくは要素の群は排除することを暗示することが理解されよう。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」とは、何であれ「からなる」という語句に続くものを含み、かつそれらに限定されることを意味する。故に、「からなる」という語句は、列挙される要素が必要とされるか、または必須であること、かつ他の要素が何ら存在してはならないことを示す。「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」とは、その語句の後に列挙される任意の要素を含み、かつ、その列挙される要素に関して本開示で指定される活性または作用に干渉しないまたは寄与しない他の要素に限定されることを意味する。故に、「から本質的になる」という語句は、列挙される要素が必要とされるか、または必須であること、ただし、列挙される要素の活性または作用に実質的に影響を及ぼす他の要素が何ら存在しないことを示す。
【０１１５】
本明細書全体を通して、「一実施形態」、「ある実施形態」、「特定の実施形態」、「関連する実施形態」、「ある特定の実施形態」、「追加の実施形態」、もしくは「さらなる実施形態」、またはそれらの組み合わせへの言及は、その実施形態に関連して記載される特定の特徴、構造、または特性が少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。故に、本明細書全体を通した種々の箇所での上述の語句の出現は、必ずしも全てが同じ実施形態を指しているわけではない。さらに、それらの特定の特徴、構造、または特性は、１つ以上の実施形態において任意の好適な様態で組み合わされてもよい。一実施形態におけるある特徴の肯定的列挙が、特定の実施形態におけるその特徴の排除の根拠としての機能を果たすことも理解される。
【０１１６】
「抗原（Ａｇ）」は、動物において抗体の産生またはＴ細胞応答を刺激し得る、化合物、組成物、または物質を指し、動物に注射されるかまたは動物に吸収される組成物（腫瘍特異的タンパク質を含むもの等）を含む。例示的な抗原としては、脂質、炭水化物、多糖類、糖タンパク質、ペプチド類、または核酸が挙げられるが、これらに限定されない。抗原は、開示される抗原などの異種抗原によって誘導されるものを含めて、特異的な液性免疫または細胞性免疫の産物と反応する。
【０１１７】
「標的抗原」または「目的とする標的抗原」は、本明細書で企図される結合ドメインが結合するように設計される、抗原である。特定の実施形態において、標的抗原は、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、αｖβ６インテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩを含むＥＧＦＲファミリー、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ２、ＧＤ３、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２、ラムダ、ルイス−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＳＴｎ、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、ＶＥＧＦＲ２、およびＷＴ−１からなる群から選択される抗原に結合する。
【０１１８】
一実施形態において、抗原は、ＭＨＣ−ペプチド複合体、例えば、クラスＩ  ＭＨＣ−ペプチド複合体またはクラスＩＩ  ＭＨＣ−ペプチド複合体である。
【０１１９】
本明細書で使用されるとき、「結合ドメイン」、「細胞外ドメイン」、「抗原結合ドメイン」、「細胞外結合ドメイン」、「細胞外抗原特異的結合ドメイン」、「抗原特異的結合ドメイン」、および「細胞外抗原特異的結合ドメイン」という用語は、同じ意味で用いられ、目的となる標的抗原に特異的に結合する能力を有するポリペプチドを提供する。結合ドメインは、天然、合成、半合成、または組換え源のいずれかに由来し得る。結合ドメインの例示的な例としては、抗体およびその抗原結合断片、ＦＮ３ドメイン、およびＤＡＲＰｉｎが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１２０】
本明細書で使用される「特異的結合親和性」または「特異的に結合する」または「特異的に結合した」または「特異的結合」または「特異的に標的とする」という用語は、バックグラウンド結合よりも高い結合親和性で、抗体またはその抗原結合断片の標的抗原への結合を説明する。結合ドメインは、それが、例えば、約１０５Ｍ−１以上の親和性またはＫａ（すなわち、１／Ｍの単位での特定の結合相互作用の平衡会合定数）で抗原に結合または会合する場合、標的抗原に「特異的に結合する」。ある特定の実施形態において、結合ドメイン（またはその融合タンパク質）は、約１０６Ｍ−１、１０７Ｍ−１、１０８Ｍ−１、１０９Ｍ−１、１０１０Ｍ−１、１０１１Ｍ−１、１０１２Ｍ−１、１０１３Ｍ−１以上のＫａで、標的に結合する。「高親和性」結合ドメイン（またはその一本鎖融合タンパク質）とは、少なくとも１０７Ｍ−１、少なくとも１０８Ｍ−１、少なくとも１０９Ｍ−１、少なくとも１０１０Ｍ−１、少なくとも１０１１Ｍ−１、少なくとも１０１２Ｍ−１、少なくとも１０１３Ｍ−１、またはそれ以上のＫａの高親和性結合ドメインを指す。
【０１２１】
代替的に、親和性は、Ｍの単位での特定の結合相互作用（例えば、１０−５Ｍ〜１０−１３Ｍ、またはそれ未満）の平衡解離定数（Ｋｄ）として定義されてもよい。結合ドメインポリペプチドの親和性は、従来の技法、例えば、競合ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）によって、または標識リガンドを使用した、もしくはＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪから入手可能）などの表面プラズモン共鳴デバイス、もしくはＥＰＩＣシステムもしくはＥｎＳｐｉｒｅ（それぞれＣｏｒｎｉｎｇおよびＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒから入手可能）などの光バイオセンサー技術を使用した、結合会合、または置換アッセイによって、容易に決定することができる（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９４９）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０、および米国特許第５，２８３，１７３号、同第５，４６８，６１４号、または同等の文献を参照）。
【０１２２】
一実施形態において、特異的結合の親和性は、バックグラウンド結合よりも約２倍高い、バックグラウンド結合よりも約５倍高い、バックグラウンド結合よりも約１０倍高い、バックグラウンド結合よりも約２０倍高い、バックグラウンド結合よりも約５０倍高い、バックグラウンド結合よりも約１００倍高い、もしくはバックグラウンド結合よりも約１０００倍高い、またはそれを超える。
【０１２３】
「抗体」は、脂質、炭水化物、多糖、糖タンパク質、ペプチド、または抗原決定基を含有する核酸、例えば、免疫細胞によって認識されるものである、抗原のエピトープを特異的に認識および結合する少なくとも軽鎖または重鎖免疫グロブリン可変領域を含むポリペプチドである結合剤を指す。
【０１２４】
「エピトープ」または「抗原決定基」は、結合因子が結合する抗原の領域を指す。
【０１２５】
抗体は、その抗原結合断片、例えば、ラクダＩｇ、ＩｇＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆ（ａｂ）’３断片、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖタンパク質類（「ｓｃＦｖ」）、ビス−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、および単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、Ｎａｎｏｂｏｄｙ）または抗原結合を担う全長抗体の部分を含む。用語はまた、キメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体）、ヘテロ共役抗体（二重特異性抗体など）、およびその抗原結合断片などの遺伝子操作された形態も含む。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃａｔａｌｏｇ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，１９９４−１９９５（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）、Ｋｕｂｙ，Ｊ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９７も参照されたい。
【０１２６】
当業者により理解され、本明細書の他の箇所で記載のとおり、完全抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む。各重鎖は、可変領域および第１の、第２の、および第３の定常領域からなり、各軽鎖は、可変領域および定常領域からなる。哺乳動物の重鎖は、α、δ、ε、γ、およびμと分類された。哺乳動物の軽鎖は、λまたはκと分類された。α、δ、ε、γ、およびμ重鎖を含む免疫グロブリンは、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ａ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭと分類された。完全抗体は、「Ｙ」形状を形成する。Ｙの幹は、互いと結合した２つの重鎖の第２および第３の定常領域（および、ＩｇＥおよびＩｇＭに関しては第４の定常領域）からなり、ヒンジにおいてジスルフィド結合（鎖間）が形成される。重鎖γ、α、およびδは、３つのタンデムな（直列に）Ｉｇドメイン、および追加の柔軟性のためのヒンジ領域で構成される定常領域を有し、重鎖μおよびεは、４つの免疫グロブリンドメインで構成される定常領域を有する。第２のおよび第３の定常領域は、それぞれ「ＣＨ２ドメイン」および「ＣＨ３ドメイン」と呼ばれる。Ｙの各腕は、１本の軽鎖の可変領域および定常領域に結合された１本の重鎖の可変領域および第１の定常領域を含む。軽鎖および重鎖の可変領域は、抗原結合を担う。
【０１２７】
軽鎖および重鎖可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とも呼ばれる、３つの超可変領域によって中断された「フレームワーク」領域を含有する。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（Ｗｕ，ＴＴ  ａｎｄ  Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１３２（２）：２１１−５０，（１９７０）、Ｂｏｒｄｅｎ，Ｐ．ａｎｄ  ＫａｂａｔＥ．Ａ．，ＰＮＡＳ，８４：２４４０−２４４３（１９８７）、（参照として本明細書に組み込まれている、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９９１を参照）による配列、またはＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６（４）：９０１−９１７（１９８７）、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７−８８３（１９８９））による構造などの、従来の方法によって規定または識別され得る。
【０１２８】
軽鎖ＣＤＲを予測するための法則の例示的な例としては、以下が挙げられる：ＣＤＲ−Ｌ１は、約残基２４で開始し、Ｃｙｓが先行し、約１０〜１７残基であり、Ｔｒｐが続き（通常はＴｒｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎだが、Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ、Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ、Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕも続く）、ＣＤＲ−Ｌ２は、ＣＤＲ−Ｌ１の端部の後の約１６残基で開始し、一般にＩｌｅ−Ｔｙｒが先行するが、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ、Ｉｌｅ−Ｐｈｅも先行し、７残基であり、およびＣＤＲ−Ｌ３は、ＣＤＲ−Ｌ２の端部の後の約３３残基で開始し、Ｃｙｓが先行し、７〜１１残基であり、Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＸＸＸ−Ｇｌｙが続く（ＸＸＸは任意のアミノ酸である）［配列番号７３］。
【０１２９】
重鎖ＣＤＲを予測するための法則の例示的な例としては、以下が挙げられる：ＣＤＲ−Ｈ１は、約残基２６で開始し、Ｃｙｓ−ＸＸＸ−ＸＸＸ−ＸＸＸ（配列番号７４）が先行し、１０〜１２残基であり、Ｔｒｐが続き（通常はＴｒｐ−Ｖａｌだが、Ｔｒｐ−Ｉｌｅ、Ｔｒｐ−Ａｌａも続く）、ＣＤＲ−Ｈ２は、ＣＤＲ−Ｈ１の端部の後の約１５残基で開始し、一般にＬｅｕ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ（配列番号７５）、またはいくつかの変化が先行し、１６〜１９残基であり、Ｌｙｓ／Ａｒｇ−Ｌｅｕ／Ｉｌｅ／Ｖａｌ／Ｐｈｅ／Ｔｈｒ／Ａｌａ−Ｔｈｒ／Ｓｅｒ／Ｉｌｅ／Ａｌａが続き、およびＣＤＲ−Ｈ３は、ＣＤＲ−Ｈ２の端部の後の約３３残基で開始し、Ｃｙｓ−ＸＸＸ−ＸＸＸ（通常はＣｙｓ−Ａｌａ−Ａｒｇ）が先行し、３〜２５残基であり、Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−ＸＸＸ−Ｇｌｙ（配列番号７６）が続く。
【０１３０】
一実施形態において、軽鎖ＣＤＲおよび重鎖ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ法に従って決定される。
【０１３１】
一実施形態において、軽鎖ＣＤＲならびに重鎖ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、Ｋａｂａｔ法に従って決定され、重鎖ＣＤＲ１は、ＡｂＭ法に従って決定され、これは、Ｋａｂａｔ法およびＣｌｏｔｈｉａ法との間に含まれる。例えば、Ｗｈｉｔｅｌｅｇｇ  Ｎ  ＆  Ｒｅｅｓ  ＡＲ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．２０００  Ｄｅｃ；１３（１２）：８１９−２４およびＭｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２００４；２４８：５１−９１を参照されたい。例えば、ＡｂＹｓｉｓ（ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｙｓｉｓ／）などの、ＣＤＲを予測するためのプログラムが公的に利用可能である。
【０１３２】
異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は、ヒトなどの種内に比較的保存される。抗体のフレームワーク領域、すなわち構成要素の軽鎖および重鎖を混ぜ合わせたフレームワーク領域は、三次元空間におけるＣＤＲを位置づけ整列させるのに役立つ。ＣＤＲは、抗原のエピトープへの結合を主に担う。各鎖のＣＤＲは通常、Ｎ末端から開始して順次付番されＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と称され、また通常は、特定のＣＤＲが位置する鎖によって特定される。したがって、抗体の重鎖の可変ドメインに位置するＣＤＲは、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３と呼ばれる一方、抗体の軽鎖の可変ドメインに位置するＣＤＲは、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３と呼ばれる。異なる特異性（すなわち、異なる抗原に対する異なる結合部位）を有する抗体は、異なるＣＤＲを有する。抗体間で異なるのはＣＤＲであるが、ＣＤＲ内の限定された数のアミノ酸位置のみが、抗原結合に直接関与する。ＣＤＲ内のこれらの位置は特異性決定残基（ＳＤＲ）と呼ばれる。
【０１３３】
「ＶＬ」または「ＶＬ」への言及は、免疫グロブリン軽鎖の可変領域を指し、本明細書に開示の抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、または他の抗体断片の可変領域を包含する。
【０１３４】
「ＶＨ」または「ＶＨ」への言及は、免疫グロブリン重鎖の可変領域を指し、本明細書に開示の抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、または他の抗体断片の可変領域を包含する。
【０１３５】
「モノクローナル抗体」は、Ｂリンパ球の単一のクローンによって、または単一の抗体の軽鎖遺伝子および重鎖遺伝子がトランスフェクトされた細胞によって産生される抗体である。モノクローナル抗体は、例えば、免疫脾臓細胞と骨髄腫細胞との融合からハイブリッド抗体を形成する細胞を作製することによって、当業者に周知の方法により産生される。モノクローナル抗体は、ヒト化モノクローナル抗体を含む。
【０１３６】
「キメラ抗体」は、１つの種、例えばヒトなどに由来するフレームワーク残基と、別の種、例えばマウスなどに由来するＣＤＲ（一般に、抗原結合を付与する）を有する。特に好ましい実施形態において、抗原特異性結合ドメインは、キメラ抗体またはその抗原結合断片である。
【０１３７】
特定の実施形態において、抗体は、標的抗原に特異的に結合するヒト抗体（例えばヒトモノクローナル抗体）またはその抗原結合断片である。ヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列（複数可）を、上述のような既知のヒト定常ドメイン配列（複数可）と組み合わせることによって構築することができる。あるいは、ヒトモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法によって作製してよい。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫およびマウス−ヒト異種骨髄腫の細胞株は、例えば、Ｋｏｚｂｏｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）、およびＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）によって説明されている。加えて、トランスジェニック動物（例えば、マウス）を使用して、内因性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の完全なレパートリーを産生することができる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５（１９９３）、Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７：３３（１９９３）を参照されたい。ヒト抗体が、非ヒト抗体の開始に対して同様の親和性および特異性を有する場合、遺伝子シャフリングを用いて、非ヒト、例えば齧歯類の抗体からヒト抗体を誘導することもできる。１９９３年４月１日公開のＰＣＴ  ＷＯ９３／０６２１３を参照されたい。伝統的なＣＤＲ移植による非ヒト抗体のヒト化と異なり、この技術により、非ヒト起源のＦＲまたはＣＤＲ残基を全く有しない完全なヒト抗体が得られる。
【０１３８】
「ヒト化」抗体は、ヒトフレームワーク領域および非ヒト（例えば、マウス、ラット、または合成）免疫グロブリン由来の１つ以上のＣＤＲを含む免疫グロブリンである。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンは、「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは、「アクセプター」と呼ばれる。一実施形態において、すべてのＣＤＲはヒト化免疫グロブリン内のドナー免疫グロブリン由来である。定常領域は存在する必要がなくが、存在する場合は、それらは、ヒト免疫グロブリン定常領域と実質的に同一、すなわち、少なくとも約８５〜９０％、例えば約９５％以上同一でなければならない。したがって、場合によりＣＤＲ以外は、ヒト化免疫グロブリンのすべての部分は、天然ヒト免疫グロブリン配列の対応する部分と実質的に同一である。ヒト化または他のモノクローナル抗体は追加の保存的アミノ酸置換を有することができ、実質的に抗原結合または他の免疫グロブリン機能に対して影響力を有さない。ヒト化抗体は、遺伝子操作を用いて構築することができる（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号を参照のこと）。
【０１３９】
本明細書で使用される「ラクダＩｇ」または「ラクダ科ＶＨＨ」は、重鎖抗体の最小の既知の抗原結合単位を指す（Ｋｏｃｈ−Ｎｏｌｔｅ，ｅｔ  ａｌ，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．，２１：３４９０−３４９８（２００７））。「重鎖抗体」または「ラクダ科抗体」とは、２つのＶＨドメインを含有し、軽鎖を含有しない抗体を指す（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：２５〜３８（１９９９）、ＷＯ９４／０４６７８、ＷＯ９４／２５５９１、米国特許第６，００５，０７９号）。
【０１４０】
「免疫グロブリン新抗原受容体」の「ＩｇＮＡＲ」は、１つの可変新抗原受容体（ＶＮＡＲ）ドメイン、および５つの定常新抗原受容体（ＣＮＡＲ）ドメインのホモ二量体からなる、サメ免疫レパートリー由来の抗体のクラスを指す。ＩｇＮＡＲは、最小の既知の免疫グロブリン系のタンパク質足場の一部を表し、非常に安定であり、かつ効率的な結合特性を有する。本質的な安定性は、（ｉ）マウス抗体に見られる従来の抗体のＶＨおよびＶＬドメインと比較して相当数の荷電した親水性の表面露出残基を提示する、基礎となるＩｇ足場、および（ｉｉ）ループ間ジスルフィド架橋、およびループ内水素結合のパターンを含む、相補性決定領域（ＣＤＲ）ループ内の安定化する構造的特徴の両方に起因し得る。
【０１４１】
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる、それぞれが単一の抗原結合部位を有する２つの同一の抗原結合断片、および容易に結晶化する能力を反映する名称である残りの「Ｆｃ」断片を産生する。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有しながらも抗原に架橋結合することのできるＦ（ａｂ’）２断片をもたらす。
【０１４２】
「Ｆｖ」は、完全な抗原結合部位を含む最小の抗体断片である。一実施形態において、二本鎖Ｆｖ種は、緊密な非共有結合性会合をなした一つの重鎖および一つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）種では、軽鎖および重鎖が二本鎖Ｆｖ種におけるものと類似の「二量体」構造に会合することができるように、柔軟なペプチドリンカーによって１つの重鎖および１つの軽鎖可変ドメインを共有結合性に会合することができる。各可変ドメインの３つの超可変領域（ＨＶＲ）がＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を規定するように相互作用するのは、この立体配置にある。集合的に、６つのＨＶＲは抗体に特異的な抗原結合を付与する。しかしながら、結合部位全体よりも低い親和性ではあるが、単一の可変ドメイン（または抗原に対して特異的な３つのＨＶＲのみを含むＦｖの半分）でさえ、抗原を認識しそれに結合する能力を有する。
【０１４３】
Ｆａｂ断片は、重鎖および軽鎖可変ドメインを含有し、また軽鎖および重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端におけるいくつかの残基の付加により、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を保有するＦａｂ’に対する、本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、ヒンジシステインをそれらの間に有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学結合もまた知られている。
【０１４４】
「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を含む抗体断片を指し、断片は、同一のポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）における軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に結合された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間で対形成を可能にするには短すぎるリンカーを用いることによって、ドメインは、別の鎖の相補ドメインと対形成するよう強いられ、２つの抗原結合部位を生成する。ダイアボディは、二価または二重特異性であってよい。ダイアボディについては、例えばＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）により詳細に記載されている。トリアボディおよびテトラボディについては、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）にも記載されている。
【０１４５】
「単一ドメイン抗体」または「ｓｄＡｂ」または「ナノボディ」は、抗体重鎖の可変領域（ＶＨドメイン）または抗体軽鎖の可変領域（ＶＬドメイン）からなる抗体断片を指す（Ｈｏｌｔ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２１（１１）：４８４−４９０）。
【０１４６】
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖中に、いずれかの方向（例えば、ＶＬ−ＶＨまたはＶＨ−ＶＬ）で存在する。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することを可能にする、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖの総説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９４），ｐｐ．２６９−３１５を参照されたい。
【０１４７】
一本鎖抗体は、所望の標的に特異的なハイブリドーマのＶ領域遺伝子からクローニングしてもよい。このようなハイブリドーマの作製は、日常的なものになる。可変領域重鎖（ＶＨ）および可変領域軽鎖（ＶＬ）のクローニングに使用することのできる技術は、例えば、Ｏｒｌａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，１９８９；８６：３８３３−３８３７に記載されている。
【０１４８】
「リンカー」とは、種々のポリペプチドドメイン間の、例えば、分子の適切な間隔および立体構造のために付加された、ＶＨおよびＶＬドメイン間の複数のアミノ酸残基を指す。特定の実施形態において、リンカーは配列に連結する可変領域である。「可変領域連結配列」は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインに接続し、得られるポリペプチドが、同じ軽鎖および重鎖可変領域を含む抗体と同じ標的分子に特異的結合親和性を保持するように、２つのサブ結合ドメインの相互作用に適合性のあるスペーサー機能を提供するアミノ酸配列である。特定の実施形態において、リンカーは、１つ以上の重鎖または軽鎖可変ドメイン、ヒンジドメイン、多量体ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激性ドメイン、および／または一次シグナル伝達ドメインを分離する。
【０１４９】
本明細書で企図される特定の実施形態での使用に好適なリンカーの例示的な例としては、ＧＧＧ、ＤＧＧＧＳ（配列番号３６）、ＴＧＥＫＰ（配列番号３７）（例えば、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ５５２５−５５３０（１９９７）を参照）、ＧＧＲＲ（配列番号３８）（上記Ｐｏｍｅｒａｎｔｚ  ｅｔ  ａｌ．１９９５）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、式中、ｎ＝１、２、３、４または５である（配列番号３７）（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ９３，１１５６−１１６０（１９９６）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＶＤ（配列番号４０）（Ｃｈａｕｄｈａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：１０６６−１０７０）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号４１）（Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３−４２６）、ＧＧＲＲＧＧＧＳ（配列番号４２）、ＬＲＱＲＤＧＥＲＰ（配列番号４３）、ＬＲＱＫＤＧＧＧＳＥＲＰ（配列番号４４）、ＬＲＱＫＤ（ＧＧＧＳ）２ＥＲＰ（配列番号４５）のアミノ酸配列が挙げられるが、これらに限定されない。代替として、可撓性リンカーは、ＤＮＡ結合部位およびペプチド自体の両方をモデリングし得るコンピュータプログラム（Ｄｅｓｊａｒｌａｉｓ  ＆  Ｂｅｒｇ，  ＰＮＡＳ  ９０：２２５６−２２６０（１９９３）、ＰＮＡＳ  ９１：１１０９９−１１１０３（１９９４）を使用して、またはファージディスプレイ方法によって理性的に設計され得る。一実施形態において、リンカーは、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号４６）のアミノ酸配列を含む（Ｃｏｏｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０１（４）：１６３７−１６４４（２００３））。
【０１５０】
「スペーサードメイン」とは、２つのドメインを分離するポリペプチドを指す。一実施形態において、スペーサードメインは、抗原結合ドメインをエフェクター細胞表面から離して、適切な細胞／細胞接触、抗原結合、および活性化を可能にする（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１９９９；６：４１２−４１９）。特定の実施形態において、スペーサードメインは、１つ以上の重鎖または軽鎖可変ドメイン、多量体ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激性ドメイン、および／または一次シグナル伝達ドメインを分離する。スペーサードメインは、天然、合成、半合成、または組換え源のいずれかに由来し得る。ある特定の実施形態において、スペーサードメインは、１つ以上の重鎖定常領域、例えば、ＣＨ２およびＣＨ３が挙げられるが、これらに限定されない、免疫グロブリンの部分である。スペーサードメインは、天然に存在する免疫グロブリンヒンジ領域または変化した免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含み得る。
【０１５１】
一実施形態において、適切な細胞／細胞接触、抗原結合、および活性化を可能にするためにエフェクター細胞表面から離れて抗原結合ドメインを位置決めする役割を果たす、ポリペプチドを指す。特定の実施形態において、ポリペプチドは、結合ドメインと多量体化ドメインとの間、結合ドメインと膜貫通ドメイン（ＴＭ）との間、または多量体化ドメインと膜貫通ドメインとの間に１つ以上のヒンジドメインを含み得る。ヒンジドメインは、天然、合成、半合成、または組換え源のいずれかに由来し得る。ヒンジドメインは、天然に存在する免疫グロブリンヒンジ領域または変化した免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含み得る。
【０１５２】
「変更されたヒンジ領域」とは、（ａ）最大３０％のアミノ酸の変化（例えば、最大２５％、２０％、１５％、１０％、もしくは５％のアミノ酸の置換もしくは欠失）を有する天然に存在するヒンジ領域、（ｂ）最大３０％のアミノ酸の変化（例えば、最大２５％、２０％、１５％、１０％、もしくは５％アミノ酸の置換もしくは欠失）を有する、長さが少なくとも１０アミノ酸（例えば、少なくとも１２、１３、１４もしくは１５アミノ酸）である天然に存在するヒンジ領域の一部、または（ｃ）コアヒンジ領域（長さが４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５、または少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５アミノ酸であり得る）を含む天然に存在するヒンジ領域の一部を指す。ある特定の実施形態において、天然の免疫グロブリンヒンジ領域の１つ以上のシステイン残基は、１つ以上の他のアミノ酸残基（例えば、１つ以上のセリン残基）によって置換されていてよい。変更された免疫グロブリンヒンジ領域は、別のアミノ酸残基（例えば、セリン残基）によって置換された、野生型免疫グロブリンヒンジ領域のプロリン残基を代替的にまたは追加的に有し得る。
【０１５３】
本発明で使用するとき、「多量体ドメイン」とは、直接的または架橋分子により、別の異なるポリペプチドと優先的に相互作用するか、またはそれと会合するポリペプチドを指し、異なる多量体ドメインの相互作用は、多量体化に実質的に寄与し、それを効率的に促進する（すなわち、二量体、三量体、または多複合体の形成、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ホモ三量体、ヘテロ三量体、ホモ多量体、ヘテロ多量体であってもよい）。多量体ドメインは、天然、合成、半合成、または組換え源のいずれかに由来し得る。
【０１５４】
本明細書で企図される特定の実施形態で使用するのに適した多量体ドメインの例示的な例は、ＦＫＢＰポリペプチド、ＦＲＢポリペプチド、カルシニューリンポリペプチド、シクロフィリンポリペプチド、細菌ＤＨＦＲポリペプチド、ＰＹＬ１ポリペプチド、ＡＢＩ１ポリペプチド、ＧＩＢ１ポリペプチド、ＧＡＩポリペプチド、またはそれらのバリアントを含む。
【０１５５】
「架橋因子」は、２つ以上の多量体ドメインと会合し、それらの間に配置される分子を指す。特定の実施形態において、多量体化ドメインは、架橋因子の存在下で、ポリペプチド複合体の形成に実質的に寄与または効率的に促進する。特定の実施形態において、多量体化ドメインは、架橋因子の不在下ではポリペプチド複合体の形成に寄与も効率的に促進もしない。本明細書で企図される特定の実施形態で使用するのに適した架橋因子の例示的な例としては、ラパマイシン（シロリムス）またはそのラパログ、クーママイシンまたはその誘導体、ジベレリンまたはその誘導体、アブシジン酸（ＡＢＡ）またはその誘導体、メトトレキサートまたはその誘導体、シクロスポリンＡまたはその誘導体、ＦＫＣｓＡまたはその誘導体、ＦＫＢＰ（ＳＬＦ）のためのトリメトプリム（Ｔｍｐ）−合成リガンドまたはその誘導体、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１５６】
ラパマイシン類似体（ラパログ）は、米国特許第６，６４９，５９５号に開示されるものを含むが、これに限定されず、ラパログ構造は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態において、架橋因子は、ラパマイシンと比較して、実質的に低減された免疫抑制効果を有するラパログである。好ましい実施形態において、ラパログは、ＡＰ２１９６７誘導体である（Ｃ−１６−（Ｓ）−７−メチルインドールラパマイシン、ＩＣ５０＝１０ｎＭ、化学修飾した非免疫抑制性ラパマイシン類似体としても既知）。
【０１５７】
「実質的に低減された免疫抑制効果」は、臨床的にまたは適切なインビトロ（例えば、Ｔ細胞増殖の阻害）またはインビボでのヒト免疫抑制活性の代替のいずれかで測定される、同一用量について観察または予測された、少なくとも０．１〜０．００５倍未満の免疫抑制効果を指す。
【０１５８】
本明細書で使用されるとき、「アンカードメイン」とは、二量体化可能な受容体の、細胞表面へのテザリング、アンカリング、または会合を促進する、アミノ酸配列、または他の分子を指す。例示的なアンカードメインは、細胞膜内で安定な構造を伴うアミノ酸配列、または糖脂質（グリコシルホスファチジルイノシトールまたはＧＰＩとしても既知）の付加を促進するアミノ酸配列などを含む。ある特定の実施形態において、アンカードメインは、疎水性ドメイン（例えば、膜貫通ドメイン）またはＧＰＩシグナル配列である。いくつかの実施形態において、本明細書で企図されるポリペプチドをコードする核酸分子は、アンカードメインを含み、任意選択的に、アンカードメインはＧＰＩ分子である。
【０１５９】
「膜貫通ドメイン」または「ＴＭドメイン」は、ポリペプチドを細胞の原形質膜に繋留するドメインである。ＴＭドメインは、天然、合成、半合成、または組換え源のいずれかに由来し得る。
【０１６０】
「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞を、特殊機能を行うように誘導するタンパク質の部分を指す。通常は、細胞内シグナル伝達ドメイン全体を使用することができるが、多くの場合、ドメイン全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分を使用する範囲内で、そのような切断部分を、エフェクター機能シグナルを伝達する限りは、ドメイン全体の代わりに使用することができる。細胞内シグナル伝達ドメインという用語は、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意の切断部分を含むことを意味する。
【０１６１】
「エフェクター機能」または「エフェクター細胞機能」という用語は、免疫エフェクター細胞の特殊機能を指す。エフェクター機能は、細胞傷害性因子の放出、または免疫エフェクター細胞で発現された受容体への抗原結合で誘発される他の細胞応答を含む、活性化、サイトカイン産生、増殖、および細胞傷害活性を含むが、これらに限定されない。
【０１６２】
ＴＣＲ単独によって生成されるシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化に不十分であり、二次または共刺激シグナルも必要であることが公知である。したがって、Ｔ細胞活性化は、２つの異なるクラスの細胞内シグナル伝達ドメイン、すなわちＴＣＲ（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体）によって抗原依存的一次活性化を開始する一次シグナル伝達ドメイン、および抗原非依存的に作用して二次または共刺激シグナルをもたらす共刺激シグナル伝達ドメインによって媒介されるということができる。
【０１６３】
「一次シグナル伝達ドメイン」は、ＴＣＲ複合体の一次活性化を刺激性に、または阻害性に調節する。刺激性に作用する主要シグナル伝達ドメインは、免疫受容体活性化チロシン依存性モチーフまたはＩＴＡＭとして公知であるシグナル伝達モチーフを含有し得る。特定の実施形態での使用に好適な一次シグナル伝達ドメインを含有するＩＴＡＭの例示的な例には、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられるが、これらに限定されるものではない
【０１６４】
本明細書で使用される、「共刺激シグナル伝達ドメイン」、または「共刺激ドメイン」という用語は、共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインを指す。共刺激性分子は、抗原に結合するとＴリンパ球の効率的な活性化および機能に必要な第２のシグナルを提供する、抗原受容体またはＦｃ受容体以外の細胞表面分子である。このような共刺激性ドメインが単離され得る共刺激性分子の例示的な例としては、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ、ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、およびＺＡＰ７０が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６５】
「免疫障害」は、免疫系からの応答を喚起する疾患を指す。特定の実施形態において、「免疫障害」という用語は、がん、自己免疫疾患、または免疫不全を指す。一実施形態において、免疫障害は、感染疾患を包含する。
【０１６６】
本明細書で使用されるとき、「がん」という用語は一般に、異常な細胞が制限なく分裂し、近隣組織に浸潤し得る、疾患または病態の分類を指す。
【０１６７】
本明細書で使用されるとき、「悪性」という用語は、腫瘍細胞の群が無制限の成長（すなわち、正常な限度を超えた分裂）、浸潤（すなわち、隣接組織への侵入およびその破壊）、および転移（すなわち、リンパまたは血液を介した体内の他の場所への広がり）のうちの１つ以上を示す、がんを指す。本明細書で使用されるとき、「転移する」という用語は、身体の１つの部分から別の部分へのがんの広がりを指す。広がった細胞によって形成される腫瘍は、「転移性腫瘍」または「転移」と呼ばれる。転移性腫瘍は、原発（一次）腫瘍と同様である細胞を含む。
【０１６８】
本明細書で使用されるとき、「両性」または「非悪性」という用語は、より大きく成長し得るが、身体の他の部分には広がらない腫瘍を指す。両性腫瘍は、自己制限的であり、典型的には浸潤または転移しない。
【０１６９】
「がん細胞」は、がん性成長または組織を伴う個々の細胞を指す。がん細胞は、固形がんおよび液性がんの両方を含む。「腫瘍」または「腫瘍細胞」は一般に、細胞の異常な成長によって形成される腫脹または病変を指し、それは良性、前悪性、または悪性であり得る。ほとんどのがんが腫瘍を形成するが、液性がん、例えば、白血病は、必ずしも腫瘍を形成しない。腫瘍を形成するがんに関して、がん（細胞）および腫瘍（細胞）という用語は、交換可能に使用される。個体における腫瘍の量は、腫瘍の数、体積、または重量として測定され得る「腫瘍負荷」である。
【０１７０】
「再発」という用語は、改善または寛解の期間後の、がんの、再発の診断、または再発の兆候および症状を指す。
【０１７１】
「寛解」は、「臨床的寛解」とも称され、部分的かつ完全な寛解の両方を含む。部分的な寛解期には、がんの兆候および症状のすべてではなく一部が消失する。完全寛解期には、がんのすべての兆候および症状が消失するが、がんは依然として体内に存在し得る。
【０１７２】
「抵抗性」とは、特定の治療薬による治療法に対して抵抗性であるか、または無反応であるがんを指す。がんは、治療開始時（すなわち、治療薬への最初の曝露に無反応）から、または治療薬抵抗性を生じた結果として、第１の治療期間の過程もしくはその後の治療期間中のいずれかで、抵抗性であり得る。
【０１７３】
「抗原陰性」とは、抗原を発現しないか、または検出不能で無視できる量の抗原を発現する、細胞を指す。一実施形態において、抗原陰性細胞は、抗原を対象とする受容体に結合しない。一実施形態において、抗原陰性細胞は、抗原を対象とする受容体に実質的に結合しない。
【０１７４】
「自己免疫疾患」は、身体がその自己の組織の一部の構成要素に対する免疫原性（すなわち、免疫系）応答を生み出す疾患を指す。換言すると、免疫系は、体内の一部の組織または系を「自己」として認識するその能力を喪失し、それをあたかも異物であるかのように標的とし攻撃する。自己免疫疾患は、主として１つの臓器が侵されるもの（例えば、溶血性貧血および抗免疫甲状腺炎）と、自己免疫疾患過程が多くの組織にわたって拡散するもの（例えば、全身性エリテマトーデス）とに分類され得る。例えば、多発性硬化症は、Ｔ細胞が脳および脊髄の神経線維を包囲する鞘を攻撃することによって引き起こされると考えられている。これは、協調運動の喪失、衰弱、および視朦をもたらす。自己免疫疾患は当該技術分野で知られており、例えば、橋本甲状腺炎、グレーブス病、狼瘡、多発性硬化症、関節リウマチ、溶血性貧血、抗免疫甲状腺炎、全身性エリテマトーデス、セリアック病、クローン病、大腸炎、糖尿病、強皮症、乾癬などが含まれる。
【０１７５】
「免疫不全」は、疾患によってまたは化学物質の投与によって免疫系が損なわれた患者の状態を意味する。この病態では、系は、異物に対して防御するのに必要とされる血球の数および種類が不足するようになる。免疫不全病態または疾患は当該技術分野で知られており、例えば、ＡＩＤＳ（後天性免疫不全症候群）、ＳＣＩＤ（重症複合免疫不全症）、選択的ＩｇＡ欠損症、分類不能型免疫不全症、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症、慢性肉芽腫性疾患、高ＩｇＭ症候群、および糖尿病が含まれる。
【０１７６】
「感染疾患」は、人から人へと、または生物から生物へと伝染し得、微生物またはウイルス因子によって引き起こされる疾患（例えば、感冒）を指す。感染疾患は当該技術分野で知られており、例えば、肝炎、性行為感染症（例えば、クラミジア感染症、淋病）、結核症、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、ジフテリア、肝炎Ｂ、肝炎Ｃ、コレラ、およびインフルエンザが含まれる。
【０１７７】
本明細書で使用されるとき、「個体」および「対象」という用語は、多くの場合同じ意味で用いられ、本明細書の他の箇所で企図される組成物および方法で治療され得る、がんまたは他の免疫障害の症状を呈する任意の動物を指す。好適な対象（例えば、患者）には、実験動物（マウス、ラット、ウサギ、またはモルモットなど）、家畜、および飼育動物またはペット（ネコまたはイヌなど）が含まれる。非ヒト霊長類、および好ましくは、ヒト患者が含まれる。典型的な対象には、がんもしくは別の免疫障害を有する、そうであると診断された、またはそれを有する危険性があるヒト患者が含まれる。
【０１７８】
本明細書で使用されるとき、「患者」という用語は、本明細書の他の箇所で開示される組成物および方法で治療され得る、がんまたは別の免疫障害であると診断された対象を指す。
【０１７９】
本明細書で使用されるとき、「治療」または「治療すること」は、疾患または病理学的状態の症状または病理に対する有益または望ましいいかなる効果も含み、治療されている疾患または病態の１つ以上の測定可能マーカーにおける最小限の低減さえも含み得る。治療には、任意選択で、疾患もしくは病態の低減、または疾患もしくは病態の進行を遅延、例えば、腫瘍増殖の遅延のいずれかに関わり得る。「治療」は必ずしも、疾患もしくは病態、またはその関連する症状の完全な撲滅または治癒を指すものではない。
【０１８０】
本明細書で使用されるとき、「予防」、および「予防される」、「予防すること」などと同様の語は、疾患または病態の発生または再発の可能性を予防、阻害、または低減するための手法を指す。それはまた、疾患もしくは病態の発症もしくは再発を遅延させること、または疾患もしくは病態の症状の発生もしくは再発を遅延させることも指す。本明細書で使用されるとき、「予防」および同様の語は、疾患または病態の発症または再発前に疾患または病態の強度、影響、症状、および／または負荷を低減することも含む。
【０１８１】
本明細書で使用されるとき、「〜の少なくとも１つの症状を改善すること」という語句は、対象が治療されている疾患または病態の１つ以上の症状を減少させることを指す。特定の実施形態において、治療されている疾患または病態はがんであり、改善される１つ以上の症状には、衰弱、疲労、息切れ、打撲および出血の起こりやすさ、頻繁な感染、腫脹したリンパ節、膨張したまたは痛みのある腹部（肥大した腹部臓器に起因）、骨または関節痛、骨折、意図しない体重減少、食欲不振、寝汗、持続する微熱、および減少した排尿（腎機能不全に起因）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８２】
「強化する」もしくは「促進する」、または「増加させる」もしくは「増殖させる」とは、一般に、ビヒクルまたは対照分子／組成物のいずれかによって引き起こされる応答と比較してより高い生理的応答（すなわち、下流効果）を生み出す、引き出す、または引き起こす、本明細書で企図される組成物の能力を指す。測定可能な生理的応答には、当該技術分野における理解から明らかであり、かつ本明細書に記載されるものの中でもとりわけ、Ｔ細胞増殖、活性化、持続性、サイトカイン分泌の増加、および／またはがん細胞死滅能力の増加が含まれ得る。「増加した」または「強化された」量は、典型的に「統計的に有意な」量であり、ビヒクルまたは対照組成物によって生み出される応答の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０倍またはそれを超える倍率（例えば、５００、１０００倍）（１を超えるすべての整数かつそれらの間の小数点、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８等）である増加を含み得る。
【０１８３】
「減少させる」もしくは「低下させる」、または「減らす」もしくは「低減する」とは、一般に、ビヒクルまたは対照分子／組成物のいずれかによって引き起こされる応答と比較してより低い生理的応答（すなわち、下流効果）を生み出す、引き出す、または引き起こす、本明細書で企図される組成物の能力を指す。「減少する」または「低減された」量は、典型的に「統計的に有意な」量であり、ビヒクル、対照組成物、または特定の細胞系譜における応答によって生み出される応答（参照応答）の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０倍またはそれを超える倍率（例えば、５００、１０００倍）（１を超えるすべての整数およびそれらの間の小数点、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８等）である減少を含み得る。
【０１８４】
「維持する」、または「保存する」、または「維持」、または「変化なし」、または「実質的な変化なし」、または「実質的な減少なし」とは、一般に、ビヒクル、対照分子／組成物のいずれかによって引き起こされる応答、または特定の細胞系譜における応答と比較して、細胞において実質的に同様のまたは同等の生理的応答（すなわち、下流作用）を生み出す、引き出す、または引き起こす、本明細書で企図される組成物の能力を指す。同等の応答は、参照応答と有意に異なるまたは測定可能異なることはないものである。
【０１８５】
Ｃ．ＴＧＦβシグナルコンバーター（キメラＴＧＦβ受容体）
特定の実施形態において、ＴＧＦβ１を含むがこれに限定されない、ＴＧＦβに曝露すると免疫刺激シグナルを形質導入するＴＧＦβシグナルコンバーターが企図される。本明細書で使用されるとき、「ＴＧＦβシグナルコンバーター」という用語は、腫瘍微小環境からのＴＧＦβ免疫抑制シグナルを、例えば、免疫エフェクター細胞活性および機能を刺激する、Ｔ細胞中の免疫刺激シグナルに変換する１つ以上の非天然ポリペプチドを指し、炎症性サイトカインの産生および／または分泌を増加させる。特定の実施形態において、「ＴＧＦβシグナルコンバーター」という用語は、「キメラＴＧＦβ受容体（複数可）」または「ＣＴＢＲ」または「ＣＴＢＲシグナルコンバーター」と同じ意味で用いられる。
【０１８６】
特定の実施形態において、ＣＴＢＲシグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン、膜貫通ドメイン、サイトカイン受容体、インターロイキン受容体、パターン認識受容体、およびＴｏｌｌ様受容体を含むが、これらに限定されない、免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、ポリペプチド切断シグナル、ならびに、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびサイトカイン受容体、インターロイキン受容体、パターン認識受容体、およびＴｏｌｌ様受容体を含むが、これらに限定されない、免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、を含むポリペプチドである。
【０１８７】
特定の実施形態において、ＣＴＢＲシグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ結合ドメインと、膜貫通ドメインと、サイトカイン受容体、インターロイキン受容体、パターン認識受容体、およびＴｏｌｌ様受容体を含むが、これらに限定されない、免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、第１のポリペプチドと、ポリペプチド切断シグナルと、ならびに、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ結合ドメインと、膜貫通ドメインと、およびサイトカイン受容体、インターロイキン受容体、パターン認識受容体、およびＴｏｌｌ様受容体を含むが、これらに限定されない、免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、第２のポリペプチドと、を含む融合ポリペプチドである。
【０１８８】
他の特定の実施形態において、ＣＴＢＲシグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ結合ドメインと、膜貫通ドメインと、およびサイトカイン受容体、インターロイキン受容体、パターン認識受容体、およびＴｏｌｌ様受容体を含むが、これらに限定されない、免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、ポリペプチドと、ならびに、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ結合ドメインと、膜貫通ドメインと、およびサイトカイン受容体、インターロイキン受容体、パターン認識受容体、およびＴｏｌｌ様受容体を含むが、これらに限定されない、免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、ポリペプチドと、を含むポリペプチドの複合体である。
【０１８９】
本明細書で使用されるとき、「免疫受容体」という用語は、その同族リガンドに結合すると、免疫応答を調節する免疫細胞の表面上に発現される受容体を指す。特定の実施形態においてに使用するのに適した免疫受容体としては、サイトカイン受容体、インターロイキン受容体、パターン認識受容体、およびＴｏｌｌ様受容体が挙げられるが、これらに限定されるものでなく、免疫受容体を介したシグナル伝達は免疫応答を刺激する。
【０１９０】
本明細書で企図される特定の実施形態で使用可能な免疫受容体の膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインの例示的な例としては、ＩＬ−１２受容体、ＩＬ−７受容体、ＩＬ−１５受容体、ＩＬ−２１受容体、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−１受容体、ＩＬ−１８受容体、ＩＬ−３６受容体、Ｉ型ＩＦＮ受容体、ＴＬＲ１受容体、ＴＬＲ２受容体、ＴＬＲ３受容体、ＴＬＲ４受容体、ＴＬＲ５受容体、ＴＬＲ６受容体、ＴＬＲ７受容体、ＴＬＲ８受容体、ＴＬＲ９受容体、またはＴＬＲ１０受容体から単離された膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１９１】
さらに、本明細書で企図される特定の実施形態で使用可能な免疫受容体の膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン例示的な例としては、ＩＬ−１２Ｒβ２、ＩＬ−７Ｒα、ＩＬ−２Ｒγ、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−２１Ｒ、ＩＬ−１８Ｒ１、ＩＬ−１８ＲＡＰ、ＩＬ−１Ｒ１、ＩＬ−１ＲＡＰ、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＬ−１ＲＬ２、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、またはＴＬＲ１０から単離された膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１９２】
本明細書で企図される特定の実施形態で使用可能なサイトカイン受容体の膜貫通および細胞内シグナル伝達ドメインの例示的な例としては、ＩＬ−１２Ｒβ２、ＩＬ−７Ｒα、ＩＬ−２Ｒγ、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−２１Ｒ、ＩＬ−１８Ｒ１、ＩＬ−１８ＲＡＰ、ＩＬ−１Ｒ１、ＩＬ−１ＲＡＰ、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、およびＩＬ−１ＲＬ２から単離された膜貫通および細胞内シグナル伝達ドメインが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１９３】
本明細書で企図される特定の実施形態で使用可能なインターロイキン受容体の膜貫通および細胞内シグナル伝達ドメインの例示的な例としては、ＩＬ−１２Ｒβ２、ＩＬ−７Ｒα、ＩＬ−２Ｒγ、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−２１Ｒ、ＩＬ−１８Ｒ１、ＩＬ−１８ＲＡＰ、ＩＬ−１Ｒ１、ＩＬ−１ＲＡＰ、およびＩＬ−１ＲＬ２から単離された膜貫通および細胞内シグナル伝達ドメインが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１９４】
本明細書で企図される特定の実施形態で使用可能なＴｏｌｌ様受容体受容体の膜貫通および細胞内シグナル伝達ドメインの例示的な例としては、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、およびＴＬＲ１０から単離された膜貫通および細胞内シグナル伝達ドメインが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１９５】
１．ＣＴＢＲ１２シグナルコンバーター
インターロイキン１２（ＩＬ−１２）は、部分的には、ＩＦＮγ発現を増加、Ｔ細胞増殖を増加、およびＩＬ−１２シグナル伝達を増強することによって、Ｔ細胞機能および活性を促進するサイトカインである。ＩＬ−１２は、インターロイキン１２受容体、ベータ１（ＩＬ−１２Ｒβ１、ＣＤ２１２としても既知）およびインターロイキン１２受容体、ベータ２（ＩＬ−１２Ｒβ２）に結合する。
【０１９６】
ＩＬ−１２Ｒβ１およびＩＬ−１２Ｒβ２を介したＩＬ−１２シグナル伝達は、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、およびＳＴＡＴ５リン酸化をもたらす。リン酸化ＳＴＡＴ３／ＳＴＡＴ４は核へ転座し、ＩＦＮγプロモーターに結合してＩＦＮγ発現を増加させる。リン酸化ＳＴＡＴ４はまた、Ｊｕｎがん遺伝子（ｃ−Ｊｕｎ）をＩＦＮγプロモーターに動員してＩＦＮγ発現を増加させ、ＩＬ−１２Ｒβ２の転写を増加させることによってＩＬ−１２シグナル伝達を増強する。ＳＴＡＴ５リン酸化は、Ｔ細胞増殖を増加させる。
【０１９７】
ＩＬ−１２シグナル伝達はまた、ＳＴＡＴ４およびｃ−ＪｕｎをＩＬ−２Ｒのプロモーターに動員することによって、インターロイキン２受容体、アルファ（ＩＬ−２Ｒ）の発現を増加させ、それによってＴ細胞増殖を増強する。
【０１９８】
種々の実施形態において、遺伝子操作された抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞を包含する、１つ以上の免疫エフェクター細胞は、ＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターをコードする１つ以上のポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって修飾される。種々の実施形態において、１つ以上の免疫エフェクター細胞は、ＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターおよび遺伝子操作された抗原受容体をコードする１つ以上のポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって修飾される。
【０１９９】
特定の実施形態において、ＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターは、免疫抑制ＴＧＦβシグナルをＩＬ−１２媒介性免疫刺激シグナルに変換する。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ１細胞内シグナル伝達ドメイン、ポリペプチド切断シグナル、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ２細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ２細胞内シグナル伝達ドメイン、ポリペプチド切断シグナル、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む。
【０２００】
特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ポリペプチド切断シグナルと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ２細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第２のポリペプチド、を含む、融合ポリペプチドを含む。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ２細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ポリペプチド切断シグナルと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第２のポリペプチド、を含む、融合ポリペプチドを含む。
【０２０１】
特定の実施形態において、ＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ２細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ポリペプチド、を含む、ポリペプチドの複合体である。特定の実施形態において、ＣＴＢＲ１２シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ２細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ポリペプチド、を含む、ポリペプチドの複合体である。
【０２０２】
ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１またはＴＧＦβＲ２の膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、ＩＬ−１２Ｒβ１またはＩＬ−１２Ｒβ２の膜貫通ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ１膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ２膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ２膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−１２Ｒβ１膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０２０３】
さらなる実施形態において、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断型ポリペプチド、より好ましくは、ウイルス自己切断型２Ａポリペプチド、およびより好ましくは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａ）ウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群から選択される、ウイルス自己切断型ペプチドである。一実施形態において、ポリペプチド切断シグナルはＰ２ＡまたはＴ２Ａウイルス自己切断型ポリペプチドである。
【０２０４】
２．ＣＴＢＲ７シグナルコンバーター
インターロイキン（ＩＬ−７）は、部分的には、Ｔ細胞前駆体の生存および増殖を向上することによって、Ｔ細胞機能および活性を促進するサイトカインである。ＩＬ−７は、インターロイキン７受容体アルファ（ＩＬ−７Ｒα、ＣＤ１２７としても既知）およびインターロイキン２受容体、共通γ鎖（ＩＬ−２Ｒγ、ＣＤ１３２およびγｃとしても既知）に結合する。ＩＬ−７シグナル伝達は、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ、ＰＩ−３Ｋ、およびＳｒｃキナーゼ経路を活性化し、抗アポトーシス遺伝子およびＴ細胞前駆体の増殖を促進する遺伝子の転写をもたらす。
【０２０５】
種々の実施形態において、遺伝子操作された抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞を包含する、１つ以上の免疫エフェクター細胞は、ＣＴＢＲ７シグナルコンバーターをコードする１つ以上のポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって修飾される。種々の実施形態において、１つ以上の免疫エフェクター細胞は、ＣＴＢＲ７シグナルコンバーターおよび遺伝子操作された抗原受容体をコードする１つ以上のポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって修飾される。
【０２０６】
特定の実施形態において、ＴＧＦβシグナルコンバーターは、免疫抑制ＴＧＦβシグナルをＩＬ−７媒介性免疫刺激シグナルに変換する。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ７シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−７Ｒα細胞内シグナル伝達ドメイン、ポリペプチド切断シグナル、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ７シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、ポリペプチド切断シグナル、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−７Ｒα細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む。
【０２０７】
特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ７シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−７Ｒα細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ポリペプチド切断シグナルと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第２のポリペプチド、を含む、融合ポリペプチドを含む。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ７シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ポリペプチド切断シグナルと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−７Ｒα細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第２のポリペプチド、を含む、融合ポリペプチドを含む。
【０２０８】
特定の実施形態において、ＣＴＢＲ７シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−７Ｒα細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ポリペプチド、を含む、ポリペプチドの複合体である。特定の実施形態において、ＣＴＢＲ７シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−７Ｒα細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ポリペプチド、を含む、ポリペプチドの複合体である。
【０２０９】
ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１またはＴＧＦβＲ２の膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、ＩＬ−７ＲαまたはＩＬ−２Ｒγの膜貫通ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−７Ｒα膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−７Ｒα膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０２１０】
さらなる実施形態において、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断型ポリペプチド、より好ましくは、ウイルス自己切断型２Ａポリペプチド、およびより好ましくは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａ）ウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群から選択される、ウイルス自己切断型ペプチドである。一実施形態において、ポリペプチド切断シグナルはＰ２ＡまたはＴ２Ａウイルス自己切断型ポリペプチドである。
【０２１１】
３．ＣＴＢＲ１５シグナルコンバーター
インターロイキン（ＩＬ−１５）は、部分的には、Ｔ細胞前駆体の生存および増殖を向上することによってＴ細胞機能および活性を促進するサイトカインである。ＩＬ−１５は、ＩＬ−１５Ｒα（ＣＤ２１５としても既知）に高親和性で結合し、次いで、同一細胞または異なる細胞のいずれかで発現される、ＩＬ−２Ｒβ（ＩＬ−１５ＲβおよびＣＤ１２２としても既知）およびＩＬ−２Ｒγ（ＣＤ１３２およびγｃとしても既知）を含む複合体と会合する。ＩＬ−１５シグナル伝達は、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ、ＰＩ−３Ｋ、およびＳｒｃキナーゼ経路を活性化し、抗アポトーシス遺伝子およびＴ細胞前駆体の増殖を促進する遺伝子の転写をもたらす。
【０２１２】
種々の実施形態において、遺伝子操作された抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞を包含する、１つ以上の免疫エフェクター細胞は、ＣＴＢＲ１５シグナルコンバーターをコードする１つ以上のポリヌクレオチドまたはベクター、および任意選択的に、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドをコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって修飾される。種々の実施形態において、１つ以上の免疫エフェクター細胞は、ＣＴＢＲ１５シグナルコンバーターおよび遺伝子操作された抗原受容体をコードする１つ以上のポリヌクレオチドまたはベクター、ならびに任意選択的に、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドをコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって修飾される。
【０２１３】
特定の実施形態において、ＴＧＦβシグナルコンバーターは、免疫抑制ＴＧＦβシグナルをＩＬ−１５媒介性免疫刺激シグナルに変換する。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ１５シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒβ細胞内シグナル伝達ドメイン、ポリペプチド切断シグナル、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ１５シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、ポリペプチド切断シグナル、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒβ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む。
【０２１４】
特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ１５シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒβ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ポリペプチド切断シグナルと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第２のポリペプチド、を含む、融合ポリペプチドを含む。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ１５シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ポリペプチド切断シグナルと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒβ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第２のポリペプチド、を含む、融合ポリペプチドを含む。
【０２１５】
特定の実施形態において、ＣＴＢＲ１５シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒβ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ポリペプチド、を含む、ポリペプチドの複合体である。特定の実施形態において、ＣＴＢＲ１５シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒβ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ポリペプチド、を含む、ポリペプチドの複合体である。
【０２１６】
ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１またはＴＧＦβＲ２の膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、ＩＬ−２ＲβまたはＩＬ−２Ｒγの膜貫通ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−２Ｒβ膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−２Ｒβ膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０２１７】
さらなる実施形態において、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断型ポリペプチド、より好ましくは、ウイルス自己切断型２Ａポリペプチド、およびより好ましくは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａ）ウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群から選択される、ウイルス自己切断型ペプチドである。一実施形態において、ポリペプチド切断シグナルはＰ２ＡまたはＴ２Ａウイルス自己切断型ポリペプチドである。
【０２１８】
４．ＣＴＢＲ２１シグナルコンバーター
インターロイキン２１（ＩＬ−２１）は、部分的には、Ｔ細胞前駆体の生存および増殖を向上することによって、Ｔ細胞機能および活性を促進するサイトカインである。ＩＬ−２１は、インターロイキン２１受容体（ＩＬ−２１Ｒ、ＣＤ３６０としても既知）およびＩＬ−２Ｒγ（ＣＤ１３２およびγｃ）に結合する。ＩＬ−２１シグナル伝達は、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ、ＰＩ−３Ｋ、およびＳｒｃキナーゼ経路を活性化し、抗アポトーシス遺伝子およびＴ細胞前駆体の増殖を促進する遺伝子の転写をもたらす。
【０２１９】
種々の実施形態において、遺伝子操作された抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞を包含する、１つ以上の免疫エフェクター細胞は、ＣＴＢＲ２１シグナルコンバーターをコードする１つ以上のポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって修飾される。種々の実施形態において、１つ以上の免疫エフェクター細胞は、ＣＴＢＲ２１シグナルコンバーターおよび遺伝子操作された抗原受容体をコードする１つ以上のポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって修飾される。
【０２２０】
特定の実施形態において、ＴＧＦβシグナルコンバーターは、免疫抑制ＴＧＦβシグナルをＩＬ−２１媒介性免疫刺激シグナルに変換する。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ２１シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２１Ｒ細胞内シグナル伝達ドメイン、ポリペプチド切断シグナル、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ２１シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、ポリペプチド切断シグナル、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２１Ｒ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む。
【０２２１】
特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ２１シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２１Ｒ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ポリペプチド切断シグナルと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第２のポリペプチド、を含む、融合ポリペプチドを含む。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ２１シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ポリペプチド切断シグナルと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２１Ｒ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第２のポリペプチド、を含む、融合ポリペプチドを含む。
【０２２２】
特定の実施形態において、ＣＴＢＲ２１シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２１Ｒ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ポリペプチド、を含む、ポリペプチドの複合体である。特定の実施形態において、ＣＴＢＲ２１シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−２１Ｒ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ポリペプチド、を含む、ポリペプチドの複合体である。
【０２２３】
ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１またはＴＧＦβＲ２の膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態において、ポリペプチドはＩＬ−２１ＲまたはＩＬ−２Ｒγの膜貫通ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−２１Ｒ膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−２Ｒγ膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−２１Ｒ膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０２２４】
さらなる実施形態において、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断型ポリペプチド、より好ましくは、ウイルス自己切断型２Ａポリペプチド、およびより好ましくは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａ）ウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群から選択される、ウイルス自己切断型ペプチドである。一実施形態において、ポリペプチド切断シグナルはＰ２ＡまたはＴ２Ａウイルス自己切断型ポリペプチドである。
【０２２５】
５．ＣＴＢＲ１８シグナルコンバーター
インターロイキン１８（ＩＬ−１８）は、部分的には、ＩＦＮγ発現を増加し、Ｔ細胞増殖を増加し、活性化誘導細胞死（ＡＩＣＤ）から保護することによって、Ｔ細胞機能および活性を促進するサイトカインである。ＩＬ−１８は、インターロイキン１８受容体１（ＩＬ−１８Ｒ１、ＣＤ２１８ａとしても既知）およびインターロイキン１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ−１８ＲＡＰ、ＣＤ２１８ｂ）に結合する。
【０２２６】
ＩＬ−１８Ｒ１およびＩＬ−１８ＲＡＰによるＩＬ−１８シグナル伝達は、ＭｙＤ８８アダプタタンパク質およびＩＲＡＫ４リン酸化による活性化をもたらす。ＩＲＡＫ４のリン酸化および後続のＩＲＡＫ１／２のリン酸化は、最終的にはＮＦ−カッパＢおよびＡＰ−１転写因子の活性化を引き起こし、ＩＦＮγ発現を増加させＩＬ−１２の感受性を増加させる。ＩＬ−１８によって誘導された転写プログラムはまた、細胞増殖を増大させＡＩＣＤから保護する。
【０２２７】
種々の実施形態において、遺伝子操作された抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞を包含する、１つ以上の免疫エフェクター細胞は、ＣＴＢＲ１８シグナルコンバーターをコードする１つ以上のポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって修飾される。種々の実施形態において、１つ以上の免疫エフェクター細胞は、ＣＴＢＲ１８シグナルコンバーターおよび遺伝子操作された抗原受容体をコードする１つ以上のポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって修飾される。
【０２２８】
特定の実施形態において、ＴＧＦβシグナルコンバーターは、免疫抑制ＴＧＦβシグナルをＩＬ−１８媒介性免疫刺激シグナルに変換する。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ１８シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１８ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメイン、ポリペプチド切断シグナル、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１８Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ１８シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１８Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメイン、ポリペプチド切断シグナル、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１８ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む。
【０２２９】
特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ１８シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１８Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ポリペプチド切断シグナルと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１８ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第２のポリペプチド、を含む、融合ポリペプチドを含む。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ１８シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１８ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ポリペプチド切断シグナルと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１８Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第２のポリペプチド、を含む、融合ポリペプチドを含む。
【０２３０】
特定の実施形態において、ＣＴＢＲ１８シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１８ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１８Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ポリペプチド、を含む、ポリペプチドの複合体である。特定の実施形態において、ＣＴＢＲ１８シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１８Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１８ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ポリペプチド、を含む、ポリペプチドの複合体である。
【０２３１】
ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１またはＴＧＦβＲ２の膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態において、ポリペプチドはＩＬ−１８Ｒ１またはＩＬ−１８ＲＡＰの膜貫通ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−１８ＲＡＰ膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−１８Ｒ１膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−１８Ｒ１膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−１８ＲＡＰ膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０２３２】
さらなる実施形態において、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断型ポリペプチド、より好ましくは、ウイルス自己切断型２Ａポリペプチド、およびより好ましくは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａ）ウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群から選択される、ウイルス自己切断型ペプチドである。一実施形態において、ポリペプチド切断シグナルはＰ２ＡまたはＴ２Ａウイルス自己切断型ポリペプチドである。
【０２３３】
６．ＣＴＢＲ１シグナルコンバーター
インターロイキン−１（ＩＬ−１）は、部分的には、ＩＦＮγ発現を増加し、Ｔ細胞増殖を増加し、活性化誘導細胞死（ＡＩＣＤ）から保護することを増強することによって、Ｔ細胞機能および活性を促進するサイトカインである。ＩＬ−１は、インターロイキン１受容体１（ＩＬ−１Ｒ１、ＣＤ１２１ａとしても既知）およびインターロイキン１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ−１ＲＡＰ）に結合する。
【０２３４】
ＩＬ−１Ｒ１およびＩＬ−１ＲＡＰによるＩＬ−１シグナル伝達は、ＭｙＤ８８アダプタタンパク質およびＩＲＡＫ４リン酸化による活性化をもたらす。ＩＲＡＫ４のリン酸化および後続のＩＲＡＫ１／２のリン酸化は、最終的にはＮＦ−カッパＢおよびＡＰ−１転写因子の活性化を引き起こし、ＩＦＮγ発現を増加させＩＬ−１２の感受性を増加させる。ＩＬ−１によって誘導された転写プログラムはまた、細胞増殖を増大させＡＩＣＤから保護する。
【０２３５】
種々の実施形態において、遺伝子操作された抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞を包含する、１つ以上の免疫エフェクター細胞は、ＣＴＢＲ１シグナルコンバーターをコードする１つ以上のポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって修飾される。種々の実施形態において、１つ以上の免疫エフェクター細胞は、ＣＴＢＲ１シグナルコンバーターおよび遺伝子操作された抗原受容体をコードする１つ以上のポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって修飾される。
【０２３６】
特定の実施形態において、ＴＧＦβシグナルコンバーターは、免疫抑制ＴＧＦβシグナルをＩＬ−１媒介性免疫刺激シグナルに変換する。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ１シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメイン、ポリペプチド切断シグナル、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ１シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメイン、ポリペプチド切断シグナル、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む。
【０２３７】
特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ１シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ポリペプチド切断シグナルと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第２のポリペプチド、を含む、融合ポリペプチドを含む。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ１シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ポリペプチド切断シグナルと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第２のポリペプチド、を含む、融合ポリペプチドを含む。
【０２３８】
特定の実施形態において、ＣＴＢＲ１シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ポリペプチド、を含む、ポリペプチドの複合体である。特定の実施形態において、ＣＴＢＲ１シグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１Ｒ１細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＩＬ−１ＲＡＰ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ポリペプチド、を含む、ポリペプチドの複合体である。
【０２３９】
ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１またはＴＧＦβＲ２の膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態において、ポリペプチドはＩＬ−１Ｒ１またはＩＬ−１ＲＡＰの膜貫通ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−１ＲＡＰ膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−１Ｒ１膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−１Ｒ１膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＩＬ−１ＲＡＰ膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０２４０】
さらなる実施形態において、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断型ポリペプチド、より好ましくは、ウイルス自己切断型２Ａポリペプチド、およびより好ましくは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａ）ウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群から選択される、ウイルス自己切断型ペプチドである。一実施形態において、ポリペプチド切断シグナルはＰ２ＡまたはＴ２Ａウイルス自己切断型ポリペプチドである。
【０２４１】
７．ＣＴＢＲ．ＴＬＲシグナルコンバーター
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ１からＴＬＲ１０）は、侵入病原体を検出し自然免疫応答および適応免疫応答を活性化するパターン認識受容体である。種々のリガンドによるＴＬＲの活性化は、炎症促進性転写プログラムの誘導および複数の炎症性サイトカインの発現を引き起こす。
【０２４２】
ＴＬＲシグナル伝達は、ＭｙＤ８８アダプタタンパク質およびＩＲＡＫ４リン酸化による活性化をもたらす、ＴＬＲシグナル伝達ドメインホモ二量体化により生じる。ＩＲＡＫ４のリン酸化および後続のＩＲＡＫ１／２のリン酸化は、最終的にはＮＦ−カッパＢおよびＡＰ−１転写因子の活性化を引き起こし、炎症性サイトカイン産生を増加させ増殖を誘発させる。ＴＬＲ活性化はまた、ＩＲＦ３およびＩＲＦ７転写因子の活性化を引き起こす。
【０２４３】
種々の実施形態において、遺伝子操作された抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞を包含する、１つ以上の免疫エフェクター細胞は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲシグナルコンバーターをコードする１つ以上のポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって修飾される。種々の実施形態において、１つ以上の免疫エフェクター細胞は、ＣＴＢＲ．ＴＬＲシグナルコンバーターおよび遺伝子操作された抗原受容体をコードする１つ以上のポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって修飾される。
【０２４４】
特定の実施形態において、ＴＧＦβシグナルコンバーターは、免疫抑制ＴＧＦβシグナルをＴＬＲ媒介性免疫刺激シグナルに変換する。特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ．ＴＬＲシグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、ポリペプチド切断シグナル、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＴＬＲシグナル伝達ドメイン、を含む。
【０２４５】
特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲ．ＴＬＲシグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ポリペプチド切断シグナルと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および同一ＴＬＲシグナル伝達ドメイン、を含む、第２のポリペプチド、を含む、融合ポリペプチドを含む。
【０２４６】
特定の実施形態において、ＣＴＢＲ．ＴＬＲシグナルコンバーターは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、第１のポリペプチドと、ならびにＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および同一ＴＬＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む、ポリペプチド、を含む、ポリペプチドの複合体である。
【０２４７】
ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１またはＴＧＦβＲ２の膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態において、ポリペプチドはＴＬＲの膜貫通ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＴＬＲ膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ１結合ドメイン、およびＴＬＲ膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０２４８】
さらなる実施形態において、ポリペプチド切断シグナルは、ウイルス自己切断型ポリペプチド、より好ましくは、ウイルス自己切断型２Ａポリペプチド、およびより好ましくは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａ）ウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群から選択される、ウイルス自己切断型ペプチドである。一実施形態において、ポリペプチド切断シグナルはＰ２ＡまたはＴ２Ａウイルス自己切断型ポリペプチドである。
【０２４９】
Ｄ．遺伝子操作された抗原受容体
特定の実施形態において、ポリペプチドは、遺伝子操作された抗原受容体、ポリペプチド切断シグナル、およびＣＴＢＲを含む。他の特定の実施形態において、ＣＴＢＲをコードするポリヌクレオチドまたはベクターは、遺伝子操作された抗原受容体を含む免疫エフェクター細胞内に導入される。いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、当技術分野で既知の任意の機構を使用して、同一免疫エフェクター細胞または細胞集団内で、遺伝子操作された抗原受容体およびＣＴＢＲを導入して共発現し、ＴＭＥに対する免疫エフェクター細胞の耐性を増加させ、免疫エフェクター細胞応答の効率、効力および耐久性を増強および増加できることが特定の実施形態で企図される。
【０２５０】
特定の実施形態において、本明細書で企図される免疫エフェクター細胞は、遺伝子操作された抗原受容体およびＣＴＢＲを含む。特定の実施形態において、遺伝子操作された抗原受容体は、遺伝子操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ＤＡＲＩＣ受容体もしくはそれらの構成要素、またはゼータカインである。
【０２５１】
１．遺伝子操作されたＴＣＲ
特定の実施形態において、本明細書で企図される免疫エフェクター細胞は、遺伝子操作されたＴＣＲおよびＣＴＢＲシグナルコンバーターを含む。一実施形態において、Ｔ細胞は、遺伝子操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドまたはベクター、および１つ以上のポリペプチド切断シグナルによって分離されたＣＴＢＲシグナルコンバーターを導入することによって遺伝子操作される。一実施形態において、Ｔ細胞は、遺伝子操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドまたはベクター、ならびにＣＴＢＲシグナルコンバーターをコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって遺伝子操作される。一実施形態において、遺伝子操作されたＴＣＲを発現するよう遺伝子操作されたＴ細胞は、ＣＴＢＲシグナルコンバーターをコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによってさらに遺伝子操作される。
【０２５２】
天然Ｔ細胞受容体は、２つのサブユニット、アルファ鎖およびベータ鎖サブユニットを含み、これらのそれぞれは、各Ｔ細胞のゲノムにおいて組換え事象によって産生される固有のタンパク質である。ＴＣＲのライブラリは、特定の標的抗原に対してそれらの選択性についてスクリーニングされ得る。このように、標的抗原に対して高い結合活性および反応性を有する天然ＴＣＲは、選択され、クローン化され、その後、養子免疫療法に対して使用されるＴ細胞の集団内に導入され得る。
【０２５３】
一実施形態において、Ｔ細胞は、標的抗原を発現する腫瘍細胞に対してＴ細胞への特異性を与えるＴＣＲを形成する能力を有するＴＣＲサブユニットを導入することによって修飾される。特定の実施形態において、サブユニットは、サブユニットが、ＴＣＲを形成する能力を保持し、トランスフェクトＴ細胞が標的細胞に誘導される能力を与え、免疫学的に関連するサイトカインシグナル伝達に関与する限り、天然サブユニットと比較して、１つ以上のアミノ酸置換、欠失、挿入、または修飾を有する。遺伝子操作されたＴＣＲはまた、好ましくは、高い結合活性を有する関連のある腫瘍関連ペプチドを表示する標的細胞に結合し、および任意選択で、インビボで関連ペプチドを提示する標的細胞の効率的な殺傷を媒介する。
【０２５４】
遺伝子操作されたＴＣＲをコードする核酸は、好ましくは、Ｔ細胞の（天然に存在する）染色体においてそれらの天然の状況から単離され、本明細書の他の箇所で記載される、好適なベクターに組み込まれ得る。それらを含む核酸およびベクターの両方が、細胞に、好ましくは、特定の実施形態において、Ｔ細胞に移動され得る。次いで、修飾Ｔ細胞は、形質導入された核酸または核酸によってコードされるＴＣＲのうちの１つ以上の鎖を発現することができる。好ましい実施形態において、遺伝子操作されたＴＣＲは、特定のＴＣＲを正常に発現しないＴ細胞内に導入されるため、外因性ＴＣＲである。遺伝子操作されたＴＣＲの本質的態様は、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）または同様の免疫学的構成要素によって提示される腫瘍抗原に対して高い結合活性を有することである。遺伝子操作されたＴＣＲとは対照的に、ＣＡＲは、ＭＨＣの独立した様式で標的抗原に結合するように遺伝子操作される。
【０２５５】
ＴＣＲは、結合したさらなるポリペプチドが、機能的Ｔ細胞受容体およびＭＨＣ依存性抗原認識を形成するアルファ鎖またはベータ鎖の能力に干渉しない限り、ＴＣＲのアルファ鎖またはベータ鎖のアミノ末端またはカルボキシル末端部分に結合するさらなるポリペプチドで発現され得る。
【０２５６】
特定の実施形態で企図される遺伝子操作されたＴＣＲによって認識される抗原としては、血液がんおよび固形腫瘍の両方における抗原を含む、がん抗原が挙げられるが、これに限定されない。例示的な抗原としては、アルファ葉酸受容体、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、αｖβ６インテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩを含むＥＧＦＲファミリー、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ２、ＧＤ３、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２、ラムダ、ルイス−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、ＶＥＧＦＲ２、およびＷＴ−１が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５７】
２．キメラ抗原受容体
種々の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、腫瘍細胞に対して細胞傷害性をリダイレクトするＣＡＲを発現する。ＣＡＲは、特異的抗腫瘍細胞性免疫活性を示すキメラタンパク質を生成するために、Ｔ細胞受容体を活性化する細胞内ドメインを有する標的抗原（例えば、腫瘍抗原）に対する抗体系特異性を組み合わせる分子である。本明細書で使用される、「キメラ」という用語は、異なるタンパク質の部分または異なる起源からのＤＮＡからなることを説明する。
【０２５８】
特定の実施形態において、本明細書で企図される免疫エフェクター細胞は、ＣＡＲおよびＣＴＢＲシグナルコンバーターを含む。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＡＲ、および１つ以上のポリペプチド切断シグナルによって分離されたＣＴＢＲシグナルコンバーターをコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって遺伝子操作される。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＡＲおよびポリヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドもしくはベクター、またはＣＴＢＲシグナルコンバーターをコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって遺伝子操作される。一実施形態において、ＣＡＲを発現するよう遺伝子操作されたＴ細胞は、ＣＴＢＲシグナルコンバーターをコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによってさらに遺伝子操作される。
【０２５９】
種々の実施形態において、ＣＡＲは、特異的標的抗原（結合ドメインまたは抗原特異的結合ドメインとも称される）に結合する細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。ＣＡＲの主な特性は、免疫エフェクター細胞特異性を再指向するそれらの能力であり、それによって、主要組織適合性（ＭＨＣ）の独立した様式で、標的抗原を発現する細胞の細胞死を媒介し得る、分子の増殖、サイトカイン産生、食作用、または産生を引き起こし、モノクローナル抗体、可溶性リガンド、または細胞特異的共受容体の細胞特異的標的能力を利用する。
【０２６０】
特定の実施形態において、ＣＡＲは、標的ポリペプチド、例えば、腫瘍細胞上で発現される標的抗原に特異的に結合する細胞外結合ドメインを含む。本明細書で使用される、「結合ドメイン」、「細胞外ドメイン」、「細胞外結合ドメイン」、「抗原結合ドメイン」、「抗原特異的結合ドメイン」、および「細胞外抗原特異的結合ドメイン」という用語は、交換可能に使用され、キメラ受容体、例えば、目的となる標的抗原に特異的に結合する能力を有するＣＡＲまたはＤＡＲＩＣを提供する。結合ドメインは、生物学的分子（例えば、細胞表面受容体または腫瘍タンパク質、脂質、多糖、または他の細胞表面標的分子、またはその構成要素）に特異的に認識および結合する能力を有する、任意のタンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、またはペプチドを含み得る。結合ドメインは、目的となる生物学的分子に対する、任意に天然に存在する、合成、半合成、または組換え技術によって産生された結合パートナーを含む。
【０２６１】
特定の実施形態において、細胞外結合ドメインは、抗体またはその抗原結合断片を含む。
【０２６２】
「抗体」は、ペプチド、脂質、多糖、または抗原決定基を含有する核酸、例えば、免疫細胞によって認識されるものである、標的抗原のエピトープに特異的に認識および結合する少なくとも軽鎖または重鎖免疫グロブリン可変領域を含むポリペプチドである結合剤を指す。抗体には、抗原結合断片、例えば、ラクダＩｇ（ラクダ科抗体またはそのＶＨＨ断片）、Ｉｇ  ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆ（ａｂ）’３断片、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ抗体（「ｓｃＦｖ」）、ビス−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、および単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、Ｎａｎｏｂｏｄｙ）またはその他の抗体断片が含まれる。用語はまた、キメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体）、ヘテロ共役抗体（二重特異性抗体など）、およびその抗原結合断片などの遺伝子操作された形態も含む。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃａｔａｌｏｇ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，１９９４−１９９５（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，  Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，  ＩＬ）、Ｋｕｂｙ，Ｊ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９７も参照されたい。
【０２６３】
１つの好ましい実施形態において、結合ドメインは、ｓｃＦｖである。
【０２６４】
別の好ましい実施形態において、結合ドメインは、ラクダ科抗体である。
【０２６５】
特定の実施形態において、ＣＡＲは、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、αｖβ６インテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩを含むＥＧＦＲファミリー、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ２、ＧＤ３、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２、ラムダ、ルイス−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、ＶＥＧＦＲ２、およびＷＴ−１からなる群から選択される抗原に結合する細胞外ドメインを含む。
【０２６６】
特定の実施形態において、ＣＡＲは、細胞外結合ドメイン、例えば、抗原に結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、抗原は、クラスＩ  ＭＨＣ−ペプチド複合体またはクラスＩＩ  ＭＨＣ−ペプチド複合体などのＭＨＣ−ペプチド複合体である。
【０２６７】
ある特定の実施形態において、ＣＡＲは、様々なドメイン間のリンカー残基を含む。「可変領域連結配列」は、重鎖可変領域を軽鎖可変領域に接続し、得られるポリペプチドが、同じ軽鎖および重鎖可変領域を含む抗体と同じ標的分子に特異的結合親和性を保持するように、２つのサブ結合ドメインの相互作用に適合性のあるスペーサー機能を提供するアミノ酸配列である。特定の実施形態において、ＣＡＲは、１つの、２つの、３つの、４つの、または５つもしくはそれ以上のリンカーを含む。特定の実施形態において、リンカーの長さは、約１〜約２５のアミノ酸、約５〜約２０のアミノ酸、または約１０〜約２０のアミノ酸、またはアミノ酸の任意の介在する長さである。いくつかの実施形態において、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、またはそれ以上のアミノ酸長である。
【０２６８】
特定の実施形態において、ＣＡＲの結合ドメインの後ろに、１つ以上の「スペーサードメイン」が続き、これは、抗原結合ドメインをエフェクター細胞表面から離して適切な細胞／細胞接触、抗原結合および活性化を可能にする領域を指す（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１９９９；６：４１２−４１９）。スペーサードメインは、天然、合成、半合成、または組換え源のいずれかに由来し得る。ある特定の実施形態において、スペーサードメインは、１つ以上の重鎖定常領域、例えば、ＣＨ２およびＣＨ３が挙げられるが、これらに限定されない、免疫グロブリンの部分である。スペーサードメインは、天然に存在する免疫グロブリンヒンジ領域または変化した免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含み得る。
【０２６９】
一実施形態において、スペーサードメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、またはＩｇＤのＣＨ２およびＣＨ３を含む。
【０２７０】
一実施形態において、ＣＡＲの結合ドメインは、適切な細胞／細胞接触、抗原結合および活性化を可能にするためにエフェクター細胞表面から離れて抗原結合ドメインを位置決めする役割を果たす、１つ以上の「ヒンジドメイン」に連結される。ＣＡＲは、一般には、結合ドメインと膜貫通ドメイン（ＴＭ）との間に１つ以上のヒンジドメインを含む。ヒンジドメインは、天然、合成、半合成、または組換え源のいずれかに由来し得る。ヒンジドメインは、天然に存在する免疫グロブリンヒンジ領域または変化した免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含み得る。
【０２７１】
本明細書に記載のＣＡＲでの使用に好適な例示的なヒンジドメインは、ＣＤ８α、およびＣＤ４などの１型膜タンパク質の細胞外領域に由来するヒンジ領域を含み、これは、これらの分子から野生型ヒンジ領域であり得るか、または変化され得る。別の実施形態において、ヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジ領域を含む。
【０２７２】
一実施形態において、ヒンジは、ＰＤ−１ヒンジまたはＣＤ１５２ヒンジである。
【０２７３】
「膜貫通ドメイン」は、細胞外結合部分および細胞内シグナル伝達ドメインを融合し、ＣＡＲを免疫エフェクター細胞の形質膜に固定するＣＡＲの部分である。ＴＭドメインは、天然、合成、半合成、または組換え源のいずれかに由来し得る。
【０２７４】
例示的なＴＭドメインは、Ｔ細胞受容体、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＡＭＮ、およびＰＤ−１のアルファまたはベータ鎖の少なくとも膜貫通領域（複数可）に由来し得る（すなわち、それらを含む。
【０２７５】
一実施形態において、ＣＡＲは、ＣＤ８αに由来するＴＭドメインを含む。別の実施形態において、本明細書で企図されるＣＡＲは、好ましくは、ＴＭドメインおよびＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインに連結する、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸長のＣＤ８αおよび短オリゴまたはポリペプチドリンカーに由来するＴＭドメインを含む。グリシン−セリンリンカーは、特定の好適なリンカーを提供する。
【０２７６】
特定の実施形態において、ＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、標的抗原への有効なＣＡＲ結合のメッセージを、免疫エフェクター細胞の内部に形質導入して、エフェクター細胞機能、例えば、ＣＡＲ結合標的細胞への細胞傷害性因子の放出、または細胞外ＣＡＲドメインへの抗原結合で引き出される他の細胞応答を含む、活性化、サイトカイン産生、増殖、および細胞傷害性活性を引き出すことに関与するＣＡＲの部分を指す。
【０２７７】
「エフェクター機能」という用語は、該細胞の特殊機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、細胞溶解性活性またはサイトカインの分泌を含む、補助もしくは活性であり得る。故に、「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞を、特殊機能を行うように誘導するタンパク質の部分を指す。通常は、細胞内シグナル伝達ドメイン全体を使用することができるが、多くの場合、ドメイン全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分を使用する範囲内で、そのような切断部分を、エフェクター機能シグナルを伝達する限りは、ドメイン全体の代わりに使用することができる。細胞内シグナル伝達ドメインという用語は、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意の切断部分を含むことを意味する。
【０２７８】
ＴＣＲ単独によって生成されるシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化に不十分であること、および二次または共刺激シグナルも必要であることが公知である。故に、Ｔ細胞活性化は、２つの別個のクラスの細胞内シグナル伝達ドメイン：ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体）によって抗原依存的一次活性化を開始する主要シグナル伝達ドメインと、抗原非依存的に作用して二次または共刺激シグナルをもたらす共刺激シグナル伝達ドメインとによって媒介されるということができる。好ましい実施形態において、ＣＡＲは、１つ以上の「共刺激シグナル伝達ドメイン」および「主要シグナル伝達ドメイン」を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０２７９】
主要シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ複合体の一次活性化を刺激性に、または阻害性に調節する。刺激性に作用する主要シグナル伝達ドメインは、免疫受容体活性化チロシン依存性モチーフまたはＩＴＡＭとして公知であるシグナル伝達モチーフを含有し得る。
【０２８０】
特定の実施形態で企図されるＣＡＲでの使用に好適な主要シグナル伝達ドメインを含有するＩＴＡＭの例示的な例には、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。特に好ましい実施形態において、ＣＡＲは、ＣＤ３ζ主要シグナル伝達ドメインおよび１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。細胞内主要シグナル伝達および共刺激シグナル伝達ドメインは、任意の順序でタンデムに膜貫通ドメインのカルボキシル末端と連結することができる。
【０２８１】
特定の実施形態において、ＣＡＲは、ＣＡＲ受容体を発現するＴ細胞の有効性および増殖を増強するための１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。本明細書で使用される、「共刺激シグナル伝達ドメイン」、または「共刺激ドメイン」という用語は、共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインを指す。
【０２８２】
特定の実施形態で企図されるＣＡＲでの使用に好適なかかる共刺激分子の例示的な例としては、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ、ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、およびＺＡＰ７０が挙げられる。一実施形態において、ＣＡＲは、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、およびＣＤ１３４、およびＣＤ３ζ主要シグナル伝達ドメインからなる群から選択される１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。
【０２８３】
種々の実施形態において、ＣＡＲは、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＳＰＧ４、ＰＳＣＡ，ＲＯＲ１、およびＴＡＧ７２からなる群から選択される抗原に結合する細胞外ドメインと、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ１５４、およびＰＤ−１からなる群から選択されるポリペプチドから単離された膜貫通ドメインと、ＣＤ２８、ＣＤ１３４、およびＣＤ１３７からなる群から選択されるポリペプチドから単離された１つ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメインと、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄからなる群から選択されるポリペプチドから単離されたシグナル伝達ドメインと、を含む。
【０２８４】
３．ＤＡＲＩＣ
特定の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、１つ以上のＤＡＲＩＣ受容体の鎖を含む。本明細書で使用されるとき、「ＤＡＲＩＣ受容体」という用語は、多鎖の遺伝子操作された抗原受容体を指す。
【０２８５】
特定の実施形態において、本明細書で企図される免疫エフェクター細胞は、ＤＡＲＩＣ受容体およびＣＴＢＲシグナルコンバーターの１つ以上の鎖を含む。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＤＡＲＩＣ受容体の１つ以上の鎖および１つ以上のポリペプチド切断シグナルによって分離されたＣＴＢＲシグナルコンバーターをコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって遺伝子操作される。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＤＡＲＩＣ受容体の１つ以上の鎖をコードするポリヌクレオチドまたはベクター、およびＣＴＢＲシグナルコンバーターをコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって遺伝子操作される。一実施形態において、ＤＡＲＩＣ受容体の１つ以上の鎖を発現するよう遺伝子操作されたＴ細胞は、ＣＴＢＲシグナルコンバーターをコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによってさらに遺伝子操作される。
【０２８６】
ＤＡＲＩＣアーキテクチャおよび構成要素の例示的な例は、ＰＣＴ国際公開特許ＷＯ２０１５／０１７２１４および米国特許公開第２０１５０２６６９７３号に開示されており、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２８７】
一実施形態において、ドナー修復テンプレートは、第１の多量体化ドメイン、第１の膜貫通ドメイン、および１つ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、および／または一次シグナル伝達ドメインを含むシグナル伝達ポリペプチドと、結合ドメイン、第２の多量体化ドメイン、および任意選択で第２の膜貫通ドメインを含む結合ポリペプチドと、を含むＤＡＲＩＣ構成要素を含む。機能的ＤＡＲＩＣは、シグナル伝達ポリペプチドおよび結合ポリペプチドの多量体化ドメインに関連するおよびそれらとの間に配置される架橋因子を有する細胞表面上にＤＡＲＩＣ受容体複合体の形成を促進する架橋因子を含む。
【０２８８】
特定の実施形態において、第１のおよび第２の多量体化ドメインは、ラパマイシンまたはそのラパログ、クーママイシンまたはその誘導体、ジベレリンまたはその誘導体、アブシジン酸（ＡＢＡ）またはその誘導体、メトトレキサートまたはその誘導体、シクロスポリンＡまたはその誘導体、ＦＫＣｓＡまたはその誘導体、ＦＫＢＰ（ＳＬＦ）のためのトリメトプリム（Ｔｍｐ）−合成リガンドまたはその誘導体、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される架橋因子と関連する。
【０２８９】
ラパマイシン類似体（ラパログ）の例示的な例は、米国特許第６，６４９，５９５号に開示されるものを含み、ラパログ構造は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態において、架橋因子は、ラパマイシンと比較して、実質的に低減された免疫抑制効果を有するラパログである。「実質的に低減された免疫抑制効果」は、臨床的にまたはヒト免疫抑制活性の適切なインビトロ（例えば、Ｔ細胞増殖の阻害）もしくはインビボでのサロゲートで測定される、等モル量のラパマイシンに観察されたまたは期待された免疫抑制効果を少なくとも０．１〜０．００５倍未満有するラパログを指す。一実施形態において、「実質的に低減された免疫抑制効果」は、同じアッセイにおいてラパマイシンに観察されたＥＣ５０値よりも少なくとも１０〜２５０倍大きいインビトロアッセイにおいて、ＥＣ５０値を有するラパログを指す。
【０２９０】
ラパログの他の例示的な例としては、エベロリムス、ノボリムス、ピメクロリムス、リダフォロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、およびゾタロリムスが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２９１】
ある特定の実施形態において、多量体化ドメインは、ラパマイシンまたはそのラパログである架橋因子と関連があるであろう。例えば、第１のおよび第２の多量体化ドメインは、ＦＫＢＰおよびＦＲＢから選択される対である。ＦＲＢドメインは、ＦＫＢＰタンパク質およびラパマイシンまたはそのラパログとともに三部分複合体を形成することができるポリペプチド領域（タンパク質「ドメイン」）である。ＦＲＢドメインは、ヒトおよび他の種からのｍＴＯＲタンパク質（文献においてＦＲＡＰ、ＲＡＰＴ１、またはＲＡＦＴとも称される）、Ｔｏｒ１およびＴｏｒ２を含む酵母タンパク質、ならびにカンジダＦＲＡＰホモログを含む、多くの天然に存在するタンパク質中に存在する。ヌクレオチド配列、クローニング、およびこれらのタンパク質の他の態様に関する情報は、既に当該技術分野で既知である。例えば、ヒトｍＴＯＲのタンパク質配列アクセッション番号は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｌ３４０７５．１である（Ｂｒｏｗｎ  ｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３６９：７５６，１９９４）。
【０２９２】
本明細書で企図される特定の実施形態での使用に好適なＦＲＢドメインは、一般に、少なくとも約８５〜約１００個のアミノ酸残基を含有する。ある特定の実施形態において、本開示の融合タンパク質で使用するＦＲＢアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｌ３４０７５．１のアミノ酸配列に基づいて、９３アミノ酸配列Ｉｌｅ−２０２１〜Ｌｙｓ−２１１３およびＴ２０９８Ｌの変異を含む。特定の実施形態で企図されるＤＡＲＩＣで使用するＦＲＢドメインは、ラパマイシンまたはそのラパログに結合したＦＫＢＰタンパク質の複合体に結合することができる。ある特定の実施形態において、ＦＲＢドメインのペプチド配列は、（ａ）相同タンパク質のヒトｍＴＯＲの少なくとも示された９３アミノ酸領域または対応する領域に及ぶ天然に存在するペプチド配列、（ｂ）天然に存在するペプチドの、最大約１０個のアミノ酸、または約１〜約５個のアミノ酸または約１〜約３個のアミノ酸、またはいくつかの実施形態において、わずか１個のアミノ酸が、欠失、挿入、または置換されている天然に存在するＦＲＢのバリアント、または（ｃ）天然に存在するＦＲＢドメインをコードするＤＮＡ分子に選択的にハイブリダイズすることができる核酸分子によって、または遺伝コードの縮重がなかったら、天然に存在するＦＲＢドメインをコードするＤＮＡ分子に選択的にハイブリダイズすることができ得るＤＮＡ配列によってコードされるペプチドを含む。
【０２９３】
ＦＫＢＰ（ＦＫ５０６結合タンパク質）は、ＦＫ５０６、ＦＫ５２０、およびラパマイシンなどのマクロライドの細胞質受容体であり、種線にわたって高度に保存される。ＦＫＢＰは、ラパマイシンまたはそのラパログに結合し、ＦＲＢを含有するタンパク質または融合タンパク質を用いて三部分複合体をさらに形成することができるタンパク質またはタンパク質ドメインである。ＦＫＢＰドメインはまた、「ラパマイシン結合ドメイン」と称され得る。ヌクレオチド配列、クローニング、および種々のＦＫＢＰ種の他の態様に関する情報は、当該技術分野で既知である（例えば、Ｓｔａｅｎｄａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３４６：６７１，１９９０（ｈｕｍａｎ  ＦＫＢＰ１２）、Ｋａｙ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３１４：３６１，１９９６を参照のこと）。他の哺乳動物種、酵母、および他の生物における相同ＦＫＢＰタンパク質はまた、当該技術分野で既知であり、本明細書に開示されている融合タンパク質において使用され得る。特定の実施形態で企図されるＦＫＢＰドメインは、ラパマイシンまたはそのラパログに結合し、ＦＲＢを含有するタンパク質を用いて三部分複合体に関与することができるであろう（かかる結合を検出するために、任意の手段によって、直接または間接的に決定され得るように）。
【０２９４】
特定の実施形態で企図されるＤＡＲＩＣでの使用に好適なＦＫＢＰドメインの例示的な例としては、好ましくはヒトＦＫＢＰ１２タンパク質（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＡ５８４７６．１）から、またはそこから単離されたペプチド配列、別のヒトＦＫＢＰから、マウスもしくは他の哺乳動物ＦＫＢＰから、またはいくつかの他の動物、酵母、もしくは真菌ＦＫＢＰから単離された天然に存在するＦＫＢＰペプチド配列、天然に存在するペプチドの、最大約１０個のアミノ酸、または約１〜約５個のアミノ酸または約１〜約３個のアミノ酸、またはいくつかの実施形態において、わずか１個のアミノ酸が、欠失、挿入、または置換されている天然に存在するＦＫＢＰのバリアント、あるいは天然に存在するＦＫＢＰドメインをコードするＤＮＡ分子に選択的にハイブリダイズすることができる核酸分子によって、または遺伝コードの縮重がなかったら、天然に存在するＦＫＢＰをコードするＤＮＡ分子に選択的にハイブリダイズすることができ得るＤＮＡ配列によってコードされるペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２９５】
特定の実施形態で企図されるＤＡＲＩＣでの使用に好適な多量体化ドメインの他の例示的な例としては、ＦＫＢＰおよびＦＲＢ、ＦＫＢＰおよびカルシニューリン、ＦＫＢＰおよびシクロフィリン、ＦＫＢＰおよび細菌ＤＨＦＲ、カルシニューリンおよびシクロフィリン、ＰＹＬ１およびＡＢＩ１、またはＧＩＢ１およびＧＡＩ、またはそれらのバリアントが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２９６】
さらに他の実施形態において、抗架橋因子は、シグナル伝達ポリペプチドおよび結合ポリペプチドと架橋因子との関連性を遮断する。例えば、シクロスポリンまたはＦＫ５０６は、ラパマイシンを滴定するための抗架橋因子として使用され、したがって、１つの多量体化ドメインのみが結合するため、シグナル伝達を停止し得る。ある特定の実施形態において、抗架橋因子（例えば、シクロスポリン、ＦＫ５０６）は、免疫抑制剤である。例えば、免疫抑制抗架橋因子は、特定の実施形態で企図されるＤＡＲＩＣ構成要素の機能を遮断または最小限に抑え、同時に、臨床環境において望ましくないもしくは病理学的炎症応答を阻害または遮断するために使用され得る。
【０２９７】
一実施形態において、第１の多量体化ドメインは、ＦＲＢ  Ｔ２０９８Ｌを含み、第２の多量体化ドメインは、ＦＫＢＰ１２を含み、架橋因子は、ラパログＡＰ２１９６７である。
【０２９８】
別の実施形態において、第１の多量体化ドメインは、ＦＲＢを含み、第２の多量体化ドメインは、ＦＫＢＰ１２を含み、架橋因子は、ラパマイシン、テムシロリムス、またはエベロリムスである。
【０２９９】
特定の実施形態において、シグナル伝達ポリペプチド、第１の膜貫通ドメインおよび結合ポリペプチドは、第２の膜貫通ドメインまたはＧＰＩアンカーを含む。第１のおよび第２の膜貫通ドメインの例示的な例としては、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＡＭＮ、およびＰＤ−１からなる群から独立して選択されるポリペプチドから単離される。
【０３００】
一実施形態において、シグナル伝達ポリペプチドは、１つ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメインおよび／または主要シグナル伝達ドメインを含む。
【０３０１】
特定の実施形態で企図されるＤＡＲＩＣシグナル伝達の構成要素での使用に好適な一次シグナル伝達ドメインの例示的な例には、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄに由来するものが含まれる。特に好ましい実施形態において、ＤＡＲＩＣシグナル伝達の構成要素は、ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインおよび１つ以上のの共刺激シグナル伝達ドメインを含む。細胞内主要シグナル伝達および共刺激シグナル伝達ドメインは、任意の順序でタンデムに膜貫通ドメインのカルボキシル末端と連結することができる。
【０３０２】
特定の実施形態で企図されるＤＡＲＩＣシグナル伝達の構成要素での使用に好適なこのような共刺激分子の例示的な例としては、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ、ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、およびＺＡＰ７０が挙げられる。一実施形態において、ＤＡＲＩＣシグナル伝達の構成要素は、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、およびＣＤ１３４、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインからなる群から選択される１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。
【０３０３】
特定の実施形態において、ＤＡＲＩＣ結合の構成要素は、結合ドメインを含む。一実施形態において、結合ドメインは、抗体またはその抗原結合断片である。
【０３０４】
抗体またはその抗原結合断片は、ペプチド、脂質、多糖、または抗原決定基を含有する核酸、例えば、免疫細胞によって認識されるものである、標的抗原のエピトープに特異的に認識および結合する少なくとも軽鎖または重鎖免疫グロブリン可変領域を含む。抗体には、抗原結合断片、例えば、ラクダＩｇ（ラクダ科抗体またはそのＶＨＨ断片）、Ｉｇ  ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆ（ａｂ）’３断片、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ抗体（「ｓｃＦｖ」）、ビス−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、および単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、Ｎａｎｏｂｏｄｙ）またはその他の抗体断片が含まれる。用語はまた、キメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体）、ヘテロ共役抗体（二重特異性抗体など）、およびその抗原結合断片などの遺伝子操作された形態も含む。Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃａｔａｌｏｇ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，１９９４−１９９５（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，  ＩＬ）、Ｋｕｂｙ，Ｊ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９７も参照されたい。
【０３０５】
１つの好ましい実施形態において、結合ドメインは、ｓｃＦｖである。
【０３０６】
別の好ましい実施形態において、結合ドメインは、ラクダ科抗体である。
【０３０７】
特定の実施形態において、ＤＡＲＩＣ結合の構成要素は、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、αｖβ６インテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩを含むＥＧＦＲファミリー、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＲα、ＧＤ２、ＧＤ３、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ−Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ−Ａ１＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ２＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＬＡ−Ａ３＋ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒα２、ラムダ、ルイス−Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、ＶＥＧＦＲ２、およびＷＴ−１からなる群から選択される抗原に結合する細胞外ドメインを含む。
【０３０８】
一実施形態において、ＤＡＲＩＣ結合の構成要素は、細胞外ドメイン、例えば、クラスＩ  ＭＨＣ−ペプチド複合体またはクラスＩＩ  ＭＨＣ−ペプチド複合体などのＭＨＣ−ペプチド複合体に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。
【０３０９】
特定の実施形態において、本明細書で企図されるＤＡＲＩＣ構成要素は、２つのタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、ドメイン、領域、またはモチーフを接続するリンカーまたはスペーサーを含む。ある特定の実施形態において、リンカーは、約２〜約３５個のアミノ酸、または約４〜約２０個のアミノ酸または約８〜約１５個のアミノ酸または約１５〜約２５個のアミノ酸を含む。他の実施形態において、スペーサーは、抗体ＣＨ２ＣＨ３ドメイン、ヒンジドメインなどの特定の構造を有し得る。一実施形態において、スペーサーは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、またはＩｇＤのＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。
【０３１０】
特定の実施形態において、本明細書で企図されるＤＡＲＩＣ構成要素は、１つ以上の「ヒンジドメイン」を含み、適切な細胞／細胞接触、抗原結合および活性化を可能にするためにドメインを位置決めする役割を果たす。ＤＡＲＩＣは、結合ドメインと多量体化ドメインおよび／または膜貫通ドメイン（ＴＭ）との間、または多量体化ドメインと膜貫通ドメインとの間に１つ以上のヒンジドメインを含み得る。ヒンジドメインは、天然、合成、半合成、または組換え源のいずれかに由来し得る。ヒンジドメインは、天然に存在する免疫グロブリンヒンジ領域または変化した免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含み得る。特定の実施形態において、ヒンジは、ＣＤ８αヒンジまたはＣＤ４ヒンジである。
【０３１１】
一実施形態において、ＤＡＲＩＣは、シグナル伝達ポリペプチドを含み、シグナル伝達ポリペプチドは、ＦＲＢＴ２０９８Ｌの第１の多量体化ドメイン、ＣＤ８膜貫通ドメイン、４−１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含み、結合ポリペプチドは、ＣＤ１９に結合するｓｃＦｖ、ＦＫＢＰ１２の第２の多量体化ドメインおよびＣＤ４膜貫通ドメインを含み、架橋因子は、ラパログＡＰ２１９６７である。
【０３１２】
一実施形態において、ＤＡＲＩＣは、シグナル伝達ポリペプチドを含み、シグナル伝達ポリペプチドは、ＦＲＢの第１の多量体化ドメイン、ＣＤ８膜貫通ドメイン、４−１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含み、結合ポリペプチドは、ＣＤ１９に結合するｓｃＦｖ、ＦＫＢＰ１２の第２の多量体化ドメイン、およびＣＤ４膜貫通ドメインを含み、架橋因子は、ラパマイシン、テムシロリムス、またはエベロリムスである。
【０３１３】
４．ゼータカイン
種々の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、腫瘍細胞に対して細胞傷害性をリダイレクトするキメラサイトカイン受容体を含む。ゼータカインは、細胞外ドメインを細胞表面に連結することができる支援領域に連結された可溶性受容体リガンドを含む細胞外ドメインと、膜貫通領域と、細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ膜貫通免疫受容体である。ゼータカインは、Ｔリンパ球の表面上で発現されるとき、可溶性受容体リガンドが特異的である受容体を発現するような細胞に、Ｔ細胞活性を誘導する。ゼータカインキメラ免疫受容体は、様々ながんの治療への適用とともに、具体的には、ヒト悪性腫瘍によって利用される自己分泌／パラクリンサイトカイン系を介してＴ細胞の抗原特異性を再指向する。
【０３１４】
特定の実施形態において、本明細書で企図される免疫エフェクター細胞は、ゼータカイン受容体の１つ以上の鎖およびＣＴＢＲシグナルコンバーターを含む。一実施形態において、Ｔ細胞は、ゼータカイン受容体の１つ以上の鎖および１つ以上のポリペプチド切断シグナルによって分離されたＣＴＢＲシグナルコンバーターをコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって遺伝子操作される。一実施形態において、Ｔ細胞は、ゼータカイン受容体の１つ以上の鎖をコードするポリヌクレオチドまたはベクター、およびＣＴＢＲシグナルコンバーターをコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって遺伝子操作される。一実施形態において、ゼータカイン受容体の１つ以上の鎖を発現するよう遺伝子操作されたＴ細胞は、ＣＴＢＲシグナルコンバーターをコードするポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによってさらに遺伝子操作される。
【０３１５】
特定の実施形態において、ゼータカインは、免疫抑制サイトカインまたはそのサイトカイン受容体結合バリアント、リンカー、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０３１６】
特定の実施形態において、サイトカインまたはそのサイトカイン受容体結合バリアントは、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、およびインターロイキン−１３（ＩＬ−１３）からなる群から選択される。
【０３１７】
ある特定の実施形態において、リンカーは、ＣＨ２ＣＨ３ドメイン、ヒンジドメインなどを含む。さらなる実施形態において、リンカーは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、またはＩｇＤのＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。一実施形態において、リンカーは、ＣＤ８αまたはＣＤ４ヒンジドメインを含む。
【０３１８】
特定の実施形態において、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＡＭＮ、およびＰＤ−１のアルファまたはベータ鎖からなる群から選択される。
【０３１９】
特定の実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、主要シグナル伝達ドメインおよび／または共刺激ドメインを含有するＩＴＡＭからなる群から選択される。
【０３２０】
特定の実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄからなる群から選択される。
【０３２１】
特定の実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ、ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、およびＺＡＰ７０からなる群から選択される。
【０３２２】
一実施形態において、キメラサイトカイン受容体は、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、およびＣＤ１３４、およびＣＤ３ζ主要シグナル伝達ドメインからなる群から選択される１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。
【０３２３】
Ｅ．ポリペプチド
種々のポリペプチドが本明細書で企図され、ＴＧＦβシグナルコンバーターポリペプチド、ＣＴＢＲ、遺伝子操作されたＴＣＲ、ＣＡＲ、ＤＡＲＩＣ、ゼータカイン、上記のポリペプチドおよびそれらの断片を含む融合タンパク質を含むが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１〜７１のいずれか一つに記載されるアミノ酸配列を含む。「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、別段の規定がない限り、従来の意味に従って、すなわち、アミノ酸の配列と同じ意味で用いられる。一実施形態において、「ポリペプチド」は、融合ポリペプチドおよび他のバリアントを含む。ポリペプチドは、様々な公知の組換えおよび／または合成技術のうちのいずれかを用いて調製され得る。ポリペプチドは、特定の長さに限定されず、例えば、それらは、完全長タンパク質配列、完全長タンパク質の断片、または融合タンパク質を含み、ポリペプチドの翻訳後修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化など、ならびに天然または非天然の両方の、当該技術分野で既知の他の修飾を含み得る。
【０３２４】
本明細書で使用される、「単離ペプチド」または「単離ポリペプチド」等は、細胞環境からの、および本細胞の他の構成要素との会合からの、ペプチドまたはポリペプチド分子のインビトロ単離および／または精製を指す、すなわち、これは、インビボ物質とは著しく関係していない。
【０３２５】
ポリペプチドは、「ポリペプチドバリアント」を含む。ポリペプチドバリアントは、１つ以上の置換、欠失、付加、および／または挿入において天然に存在するポリペプチドとは異なり得る。このようなバリアントは、天然に存在し得るか、または例えば、上述のポリペプチド配列の１つ以上のアミノ酸を修飾することによって合成的に生成され得る。例えば、特定の実施形態において、ポリペプチドへの１つ以上の置換、欠失、付加、および／または挿入を導入することによって、ポリペプチドの結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。特定の実施形態において、ポリペプチドには、本明細書で企図される任意の参照配列のいずれかに対して、少なくとも約６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、８６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含み、典型的には、バリアントが、参照配列の少なくとも１つの生物学的活性を維持する。
【０３２６】
ポリペプチドバリアントは、生物学的に活性な「ポリペプチド断片」を含む。生物学的に活性なポリペプチド断片の例示的な例には、ＤＮＡ結合ドメイン、ヌクレアーゼドメインなどが挙げられる。本明細書で使用されるとき、「生物学的に活性な断片」または「最小の生物学的に活性な断片」という用語は、少なくとも１００％、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３０％、少なくとも２０％、少なくとも１０％、または少なくとも５％の天然に存在するポリペプチド活性を保持するポリペプチド断片を指す。ある特定の実施形態において、ポリペプチド断片は、少なくとも５〜約１７００アミノ酸長さのアミノ酸鎖を含み得る。ある特定の実施形態において、断片は、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００またはそれ以上のアミノ酸長であることが認識されよう。
【０３２７】
特定の実施形態において、本明細書に示すポリペプチドは、「Ｘ」で表す１つ以上のアミノ酸を含んでよい。「Ｘ」は、アミノ酸配列番号に存在する場合、１つ以上のアミノ酸のいずれかを指す。特定の実施形態において、融合タンパク質を表す配列番号は、任意のアミノ酸配列を累積的に表す一連の持続的なＸ残基を含む。
【０３２８】
上述のように、ポリペプチドは、アミノ酸置換、欠失、切断短縮、および挿入を含む様々な方法で変更することができる。かかる操作のための方法は、一般に当該技術分野で既知である。例えば、参照ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントは、ＤＮＡにおける変異によって調製され得る。変異誘発およびヌクレオチド配列変更は、当該技術分野で公知である。例えば、Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８２：４８８−４９２）、Ｋｕｎｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，１５４：３６７−３８２）、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，８７３，１９２、Ｗａｔｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，ＭｅｎｌｏＰａｒｋ，Ｃａｌｉｆ，１９８７）およびそこに引用される参考文献を参照されたい。目的となるタンパク質の生物学的活性に影響を及ぼさない適切なアミノ酸置換に対するガイダンスは、Ｄａｙｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７８）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）のモデルにおいて見出され得る。
【０３２９】
ある特定の実施形態において、ポリペプチドバリアントは、１つ以上の保存的置換を含む。「保存的置換」は、アミノ酸が同様の特性を有する別のアミノ酸で置換され、そのためペプチド化学分野の当業者によってポリペプチドの二次構造およびハイドロパシー特性が実質的に変化しないことが予期されるような置換である。修飾は、特定の実施形態で企図されるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの構造において行われ、望ましい特性を有するバリアントまたは誘導体ポリペプチドをコードする機能的分子を依然として含み得る。同等の、またはさらに改良された、バリアントポリペプチドを作製するためポリペプチドのアミノ酸配列を変更することが望ましいとき、当業者は、例えば、表１に従って例えば、コードするＤＮＡ配列のコドンのうちの１つ以上を変化させ得る。
【表１】
2019535275.tif 000003
【０３３０】
生物学的活性を消失することなく、置換、挿入、または欠失され得るアミノ酸残基を決定するガイダンスは、ＤＮＡＳＴＡＲ、ＤＮＡＳｔｒｉｄｅｒ、Ｇｅｎｅｉｏｕｓ、Ｍａｃベクター、またはベクターＮＴＩソフトウェアなどの当該技術分野で公知のコンピュータプログラムを用いて見出され得る。好ましくは、本明細書に開示されるタンパク質バリアントのアミノ酸変化は、保存的アミノ酸変化、すなわち、同様に荷電したまたは非荷電のアミノ酸の置換である。保存的アミノ酸変化は、それらの側鎖に関連するアミノ酸のファミリーのうちの１つの置換を伴う。天然に存在するアミノ酸は、一般に、４つのファミリー：酸性（アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩）、塩基性（リジン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性（アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、および非荷電極性（グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン）アミノ酸に分類される。フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは、しばしば、芳香族アミノ酸として一緒に分類される。ペプチドまたはタンパク質において、アミノ酸の好適な保存的置換は、当業者に知られており、一般に、得られる分子の生物学的活性を変更することなく行われ得る。当業者は、全般に、ポリペプチドの非必須領域における単一アミノ酸置換が、生物学的活性を実質的に変更しないことを認識する（例えば、Ｗａｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８７，Ｔｈｅ  Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４を参照されたい）。
【０３３１】
一実施形態において、２つ以上のポリペプチドの発現が所望される場合、それらをコードするポリヌクレオチド配列を、本明細書の他の箇所で開示されているＩＲＥＳ配列によって分離することができる。
【０３３２】
特定の実施形態で企図されるポリペプチドは、融合ポリペプチドを含む。特定の実施形態において、融合ポリペプチドおよび融合ポリヌクレオチドをコードするポリペプチドが、提供される。融合ポリペプチドおよび融合タンパク質は、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、または１０のポリペプチドセグメントを有するポリペプチドを指す。
【０３３３】
別の実施形態において、２つ以上のポリペプチドは、本明細書の他の箇所で開示される、１つ以上の自己切断型ポリペプチド配列を含む融合タンパク質として発現され得る。
【０３３４】
融合ポリペプチドは、シグナルペプチド、細胞透過性ペプチドドメイン（ＣＰＰ）、ＤＮＡ結合ドメイン、ヌクレアーゼドメイン等、エピトープタグ（例えば、マルトース結合タンパク質（「ＭＢＰ」）、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ＨＩＳ６、ＭＹＣ、ＦＬＡＧ、Ｖ５、ＶＳＶ−Ｇ、およびＨＡ）、ポリペプチドリンカー、およびポリペプチド切断シグナルを含むが、これらに限定されない、１つ以上のポリペプチドドメインまたはセグメント含むことができる。融合ポリペプチドは、Ｃ末端からＣ末端、Ｎ末端からＮ末端、またはＮ末端からＣ末端に連結することも可能であるが、それらは、典型的に、Ｃ末端からＮ末端に連結される。特定の実施形態において、融合タンパク質のポリペプチドは、任意の順番であり得る。融合ポリペプチドまたは融合タンパク質はまた、融合ポリペプチドの所望の活性が保存されている限りは、保守的に修飾されたバリアント、多型バリアント、対立遺伝子、変異体、部分配列、および種間ホモログも含むことができる。融合ポリペプチドは、化学的な合成方法によって、または２つの部分間の化学結合によって産生することができるか、または一般に、他の標準の技法を使用して調製することもできる。融合ポリペプチドを含むライゲーションされたＤＮＡ配列は、本明細書の他の箇所で開示されるように、好適な転写または翻訳制御要素に作動可能に連結されている。
【０３３５】
融合ポリペプチドは、任意選択で、１つ以上のポリペプチドまたはポリペプチド内のドメインを連結させるために使用することができるリンカーを含む。ペプチドリンカー配列は、ポリペプチドドメインがそれらの所望の機能を発揮することができるように、各ポリペプチドがその適切な二次および三次構造に折り畳むのを確保するのに十分な距離により、任意の２つ以上のポリペプチド構成要素を分離するために使用され得る。かかるペプチドリンカー配列は、当該技術分野で標準的な技術を使用して融合ポリペプチドに組み込まれる。適切なペプチドリンカー配列は、（１）可撓性拡張立体構造を採用する能力、（２）第１のおよび第２のポリペプチド上の機能性エピトープと相互作用し得る二次構造を採用できない能力、ならびに（３）ポリペプチドの機能性エピトープと反応し得る疎水性または荷電残基の欠如、の要素に基づいて選択され得る。好ましいペプチドリンカー配列は、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、およびＳｅｒ残基を含む。ＴｈｒおよびＡｌａなどの他の近い中性アミノ酸はまた、リンカー配列において使用され得る。リンカーとして有用に使用され得るアミノ酸配列は、Ｍａｒａｔｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  ４０：３９−４６，１９８５、Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８３：８２５８−８２６２，１９８６、米国特許第４，９３５，２３３号および米国特許第４，７５１，１８０号に開示されるものを含む。リンカー配列は、特定の融合ポリペプチドセグメントが、機能的ドメインを分離し、立体干渉を防ぐために使用され得る非必須Ｎ末端アミノ酸領域を含むとき、必要とされない。好ましいリンカーは、典型的に、組換え融合タンパク質の一部として合成される可撓性アミノ酸部分配列である。リンカーポリペプチドは、１〜２００アミノ酸長、１〜１００アミノ酸長、または１〜５０アミノ酸長であり得、その間の全ての整数値を含む。
【０３３６】
代表的なポリペプチド切断シグナルには、プロテアーゼ切断部位、ヌクレアーゼ切断部位（例えば、希な制限酵素認識部位、自己切断型リボザイム認識部位）、および自己切断型ウイルスオリゴペプチドなどのポリペプチド切断認識部位が含まれる（ｄｅＦｅｌｉｐｅ  ａｎｄ  Ｒｙａｎ，２００４．Ｔｒａｆｆｉｃ，５（８）；６１６−２６を参照されたい）。
【０３３７】
好適なプロテアーゼ切断部位および自己切断型ペプチドは、当業者に既知である（例えば、Ｒｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７Ｊ．Ｇｅｎｅｒ．Ｖｉｒｏｌ．７８，６９９−７２２、Ｓｃｙｍｃｚａｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．５，５８９−５９４を参照されたい）。代表的なプロテアーゼ切断部位としては、ポチウイルスＮＩａプロテアーゼ（例えば、タバコｅｔｃｈウイルスプロテアーゼ）、ポチウイルスＨＣプロテアーゼ、ポチウイルスＰ１（Ｐ３５）プロテアーゼ、ビオウイルス（ｂｙｏｖｉｒｕｓ）ＮＩａプロテアーゼ、ビオウイルスＲＮＡ−２コードプロテアーゼ、アフトウイルスＬプロテアーゼ、エンテロウイルス２Ａプロテアーゼ、ライノウイルス２Ａプロテアーゼ、ピコルナ３Ｃプロテアーゼ、コモウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ネポウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ＲＴＳＶ（イネツングロスフェリカルウイルス）３Ｃ様プロテアーゼ、ＰＹＶＦ（パースニップ黄斑ウイルス）３Ｃ様プロテアーゼ、ヘパリン、トロンビン、第Ｘａ因子、およびエンテロキナーゼの切断部位が挙げられるが、これらに限定されない。その高い切断厳密性により、ＴＥＶ（タバコｅｔｃｈウイルス）プロテアーゼ切断部位は、一実施形態において、例えば、ＥＸＸＹＸＱ（Ｇ／Ｓ）（配列番号４７）、例えば、ＥＮＬＹＦＱＧ（配列番号４８）およびＥＮＬＹＦＱＳ（配列番号４９）（式中、Ｘは、任意のアミノ酸を表す）（ＴＥＶによる切断は、ＱとＧまたはＱとＳとの間に生じる）が好ましい。
【０３３８】
ある特定の実施形態において、自己切断型ポリペプチド部位は、２Ａまたは２Ａ様部位、配列またはドメインを含む（Ｄｏｎｎｅｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００１．Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８２：１０２７−１０４１）。特定の実施形態において、ウイルス２Ａペプチドは、アフトウイルス２Ａペプチド、ポチウイルス２Ａペプチド、またはカルジオウイルス２Ａペプチドである。
【０３３９】
一実施形態において、ウイルス２Ａペプチドは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）（Ｆ２Ａ）ペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）（Ｅ２Ａ）ペプチド、ゾーシーアシグナウイルス（ＴａＶ）（Ｔ２Ａ）ペプチド、ブタテッショウウイルス−１（ＰＴＶ−１）（Ｐ２Ａ）ペプチド、タイロウイルス２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群から選択される。
【０３４０】
２Ａ部位の例示的な例を表２に提供する。
【表２】
2019535275.tif 000004
【０３４１】
好ましい実施形態において、ポリペプチドは、ＣＴＢＲシグナルコンバーターポリペプチドを含む。
【０３４２】
Ｆ．ポリヌクレオチド
特定の実施形態において、ＴＧＦβシグナルコンバーターポリペプチド、ＣＴＢＲ、遺伝子操作されたＴＣＲ、ＣＡＲ、ＤＡＲＩＣ、ゼータカイン、上記のポリペプチドおよびそれらの断片を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供する。本明細書で使用されるとき、「ポリヌクレオチド」または「核酸」という用語は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、およびＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドを指す。ポリヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖、および組換え、合成、または単離のいずれかであり得る。ポリヌクレオチドとしては、プレメッセンジャーＲＮＡ（プレ−ｍＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＲＮＡ、短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、ゲノムＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、プラス鎖ＲＮＡ（ＲＮＡ（＋））、マイナス鎖ＲＮＡ（ＲＮＡ（−））、ｔｒａｃｒＲＮＡ、ｃｒＲＮＡ、単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）、合成ＲＮＡ、合成ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）、ＰＣＲ増幅ＤＮＡ、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、合成ＤＮＡ、または組換えＤＮＡが挙げられるが、これらに限定されない。ポリヌクレオチドは、リボヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチドのいずれか、またはヌクレオチドのいずれかの種類の修飾形態である、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも１０００、少なくとも５０００、少なくとも１００００、または少なくとも１５０００またはそれ以上のヌクレオチド長、ならびに全ての中間の長さのヌクレオチドの多量体形態を指す。この文脈において、「中間の長さ」は、６、７、８、９などの、１０１、１０２、１０３などの、１５１、１５２、１５３などの、２０１、２０２、２０３などの引用された値の間の任意の長さを意味することは容易に理解されよう。特定の実施形態において、ポリヌクレオチドまたはバリアントは、参照配列に対して少なくともまたは約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％，７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％，８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【０３４３】
特定の実施形態において、ポリヌクレオチドはコドン最適化され得る。本明細書で使用されるとき、「コドン最適化された」という用語は、ポリペプチドの発現、安定および／または活性を増加させるために、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドでコドンを置換することを指す。コドン最適化に影響を与える因子として、（ｉ）２つ以上の生物または遺伝子または合成的に構成されたバイアス表との間コドンバイアスの変動、（ｉｉ）生物、遺伝子、または遺伝子群内のコドンバイアスの程度における変動、（ｉｉｉ）コンテキストを含むコドンの系統的変動、（ｉｖ）それらの解読ｔＲＮＡによるコドンの変動、（ｖ）全体的、またはトリプレットの１つの位置のいずれかのＧＣ％によるコドンの変動、（ｖｉ）参照配列、例えば天然に存在する配列、に対する類似度の変動、（ｖｉｉ）コドン頻度中断の変動、（ｖｉｉｉ）ＤＮＡ配列由来の転写されたｍＲＮＡの構造特性、（ｉｘ）コドン置換群の設計の基になるＤＮＡ配列の機能についての事前知識、（ｘ）各アミノ酸のコドン群の系統的変動、および／または（ｘｉ）偽性翻訳開始部位の単離された除去、のうち１つ以上を含むが、これらに限定されるものではない。
【０３４４】
本明細書で使用するとき、「ヌクレオチド」という用語は、リン酸化糖とのＮ−グリコシド結合における複素環式窒素塩基を指す。ヌクレオチドは、天然塩基および多種多様の当技術分野において認識される修飾塩基を含むことが理解される。そのような塩基は、一般に、ヌクレオチド糖部分の１’位に位置する。ヌクレオチドは、一般に、塩基、糖、およびリン酸基を含む。リボ核酸（ＲＮＡ）では、糖は、リボースであり、また、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）では、糖は、デオキシリボース、すなわち、リボース中に存在するヒドロキシル基を欠く糖である。例示的な天然窒素塩基は、プリン、アデノシン（Ａ）、およびグアニジン（Ｇ）、ならびにピリミジン、シチジン（Ｃ）、およびチミジン（Ｔ）（またはＲＮＡの場合、ウラシル（Ｕ））を含む。デオキシリボースのＣ−１原子は、ピリミジンのＮ−１またはプリンのＮ−９に結合する。ヌクレオチドは、通常、一、二、または三リン酸エステルである。ヌクレオチドは、糖、リン酸、および／または塩基成分で未修飾または修飾することができる（ヌクレオチドアナログ、ヌクレオチド誘導体、修飾ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、および非標準ヌクレオチドとも同じ意味で呼ばれる。たとえばＷＯ９２／０７０６５およびＷＯ９３／１５１８７を参照されたい）。修飾核酸塩基の例は、Ｌｉｍｂａｃｈら（１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２２，２１８３−２１９６）によって要約される。
【０３４５】
ヌクレオチドはまた、糖のＣ−５に結合したヒドロキシル基に生じたエステル化により、ヌクレオシドのリン酸エステルと見なされてもよい。本明細書で使用するとき、「ヌクレオシド」という用語は、糖とのＮ−グリコシド結合における複素環式窒素塩基を指す。ヌクレオシドは、当該技術分野において天然塩基を含むこと、および公知の修飾塩基を含むことが認識される。そのような塩基は、一般に、ヌクレオシド糖部分の１’位に位置する。ヌクレオシドは、一般に、塩基および糖類を含む。ヌクレオシドは、糖、および／または塩基成分で未修飾または修飾することができる（ヌクレオシドアナログ、ヌクレオシド誘導体、修飾ヌクレオシド、非天然ヌクレオシド、または非標準ヌクレオチドとも同じ意味で呼ばれる）。上記にもあるとおり、修飾核酸塩基の例は、Ｌｉｍｂａｃｈら（１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２２，２１８３−２１９６）によって要約される。
【０３４６】
ポリヌクレオチドの例示的な例としては、配列番号１〜７１をコードするポリヌクレオチドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３４７】
種々の例示的な実施形態において、本明細書で企図されるポリヌクレオチドとしては、ＴＧＦβシグナルコンバーター、ＣＴＢＲシグナルコンバーター、遺伝子操作された抗原受容体、融合ポリペプチド、および発現ベクター、ウイルスベクターをコードするポリヌクレオチド、ならびに本明細書で企図されるポリヌクレオチドを含む転移プラスミドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３４８】
本明細書で使用されるとき、「ポリヌクレオチドバリアント」および「バリアント」などの用語は、以下に定義される厳密な条件下で、参照配列でハイブリダイズする参照ポリヌクレオチド配列またはポリヌクレオチドで実質的な配列同一性を示すポリヌクレオチドを指す。これらの用語はまた、少なくとも１つのヌクレオチドの付加、欠失、置換、または修飾によって参照ポリヌクレオチドと区別されるポリヌクレオチドも包含する。したがって、「ポリヌクレオチドバリアント」および「バリアント」という用語には、１つ以上のヌクレオチドが、付加または欠失され、または修飾される、または異なるヌクレオチドで置き換えられるポリヌクレオチドが含まれる。これに関して、変異、付加、欠失、および置換を含む、ある特定の変更が、参照ポリヌクレオチドに行われ得、それによって、変更されたポリヌクレオチドが、参照ポリヌクレオチドの生物学的機能または活性を保持することが当該技術分野で十分に理解される。
【０３４９】
一実施形態において、ポリヌクレオチドは、厳密な条件下で、標的核酸配列にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む。「厳密な条件」下でハイブリダイズすることは、互いに少なくとも６０％と同一するヌクレオチド配列がハイブリダイズのままである、ハイブリダイゼーションプロトコルを説明する。一般に、厳密な条件は、定義されたイオン強度およびｐＨで特異的な配列に対して熱融解点（Ｔｍ）よりも約５℃低くなるように選択される。Ｔｍは、標的配列に相補的なプローブの５０％が平衡状態で標的配列にハイブリダイズする温度（定義されたイオン強度、ｐＨ、および核酸濃度下で）である。標的配列が、一般に過剰に存在するため、Ｔｍでは、プローブの５０％が、平衡状態で占有されている。
【０３５０】
本明細書で使用される、「配列同一性」または、例えば、「配列５０％同一性」という記述は、比較ウィンドウ上のヌクレオチドベースまたはアミノ酸ベースで同一である程度を指す。故に、「配列同一性の割合」は、比較ウィンドウ上の２つの最適に整列させた配列を比較し、同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）または同一のアミノ酸残基（例えば、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ、およびＭｅｔ）が両方の配列中に生じる位置の数を決定し、一致した位置の数を得、その一致した位置の数を比較ウィンドウ（すなわち、ウィンドウサイズ）中の位置の総数で割り、その結果に１００を乗じることによって計算し、配列同一性の割合を得ることができる。本明細書に記載の任意の参照配列に対して少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、８６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するヌクレオチドおよびポリペプチドを含み、典型的には、ポリペプチドバリアントが、参照ポリペプチドの少なくとも１つの生物学的活性を維持する。
【０３５１】
２つ以上のポリヌクレオチドまたはポリペプチド間の配列関係を説明するために使用される用語には、「参照配列」、「比較ウィンドウ」、「配列同一性」、「配列同一性の割合」、および「実質的な同一性」が含まれる。「参照配列」は、ヌクレオチドおよびアミノ酸残基を含めて、長さが少なくとも１２個、しばしば、１５〜１８個、多くの場合、少なくとも２５個のモノマー単位である。２つのポリヌクレオチドは、それぞれ、（１）２つのポリヌクレオチド間で類似性がある配列（すなわち、完全なポリヌクレオチド配列の一部のみ）、および（２）２つのポリヌクレオチド間で多様性がある配列を含み得るため、２つ（またはそれ以上）のポリヌクレオチド間の配列比較は、典型的には、配列類似性の局所領域を特定および比較するために、「比較ウィンドウ」上の２つのポリヌクレオチドを比較することによって行われる。「比較ウィンドウ」は、２つの配列を最適に整列させた後に、配列が同数の連続した位置の参照配列と比較される少なくとも６個の連続した位置、一般的には約５０〜約１００個、より一般的には約１００〜約１５０個の概念セグメントを指す。比較ウィンドウは、２つの配列の最適なアライメントのために、（付加または欠失を含まない）参照配列と比較して約２０％以下の付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含んでもよい。比較ウィンドウを整列させるための配列の最適なアライメントは、アルゴリズム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ７．０、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ）のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）のコンピュータ実装によって、または検査および選択された様々な方法のいずれかによって生成された最良のアライメント（すなわち、比較ウィンドウ上で最も高い割合の相同性を生じること）によって行うことができる。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９によって開示されるようなプログラムのＢＬＡＳＴファミリーも参照することができる。配列分析の詳細な考察は、Ｕｎｉｔ  １９．３  ｏｆ  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．，１９９４−１９９８，Ｃｈａｐｔｅｒ  １５に見出すことができる。
【０３５２】
本明細書で使用されるとき、「単離されたポリヌクレオチド」は、自然発生状態でその両側に位置する配列から精製されたポリヌクレオチド、例えば、ある断片に通常は隣接している配列から取り出されたそのＤＮＡ断片を指す。「単離されたポリヌクレオチド」はまた、自然界には存在せず、人為的に作製された、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、組換えＤＮＡ、または他のポリヌクレオチドも指す。
【０３５３】
種々の実施形態において、ポリヌクレオチドは、本明細書で企図されるポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。ある特定の実施形態において、ｍＲＮＡは、キャップ、１つ以上のヌクレオチド、およびポリ（Ａ）テイルを含む。
【０３５４】
ポリヌクレオチドの方向を説明する用語としては、５’（通常は、遊離リン酸基を有するポリヌクレオチド末端）および３’（通常は、遊離ヒドロキシル（ＯＨ）基を有するポリヌクレオチド末端）が挙げられる。ポリヌクレオチド配列は、５’から３’の方向または３’から５’の方向で注記され得る。ＤＮＡおよびｍＲＮＡについて、５’から３’の鎖は、「センス」、「プラス」、または「コード」鎖と呼ばれ、これは、その配列が、［ＤＮＡのチミン（Ｔ）の代わりのＲＮＡのウラシル（Ｕ）を除いて］プレメッセンジャー（プレｍＲＮＡ）の配列と同一であるからである。ＤＮＡおよびｍＲＮＡについては、ＲＮＡポリメラーゼによって転写される鎖である相補的な３’から５’の鎖は、「鋳型」、「アンチセンス」、「マイナス」、または「非コード」鎖と呼ばれる。本明細書で使用されるとき、「逆方向」という用語は、３’から５’の方向で書かれた５’から３’の配列または５’から３’の方向で書かれた３’から５’の配列を指す。
【０３５５】
「相補的」および「相補性」という用語は、塩基対合則によって関連するポリヌクレオチド（すなわち、ヌクレオチドの配列）を指す。例えば、ＤＮＡ配列５’  Ａ  Ｇ  Ｔ  Ｃ  Ａ  Ｔ  Ｇ  ３’の相補的鎖は、３’  Ｔ  Ｃ  Ａ  Ｇ  Ｔ  Ａ  Ｃ  ５’である。後者の配列は、左に５’末端および右に３’末端を有する逆相補鎖、５’  Ｃ  Ａ  Ｔ  Ｇ  Ａ  Ｃ  Ｔ  ３’として書かれることが多い。その逆相補鎖に等しい配列は、回文配列と言われる。相補性は、核酸の塩基のいくつかのみが塩基対合則に従ってマッチしている、「部分的」であり得る。または、核酸の間に「完璧な」または「完全な」相補性が存在し得る。
【０３５６】
さらに、本明細書に記載されるように、遺伝子コードの縮重の結果として、ポリペプチドまたはそのバリアントの断片をコードする多くのヌクレオチド配列があることは、当業者によって理解されるであろう。これらのポリヌクレオチドのいくつかは、いかなる天然遺伝子のヌクレオチド配列に対しても最小の相同性を有する。それにもかかわらず、コドン使用における相違により変動するポリヌクレオチド、例えば、ヒトおよび／または霊長類コドン選択に最適化されるポリヌクレオチドは、特定の実施形態で具体的に企図される。特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、発現および／または安定に関してコドン最適化されている。さらに、本明細書で提供されるポリヌクレオチド配列を含む遺伝子の対立遺伝子を使用してもよい。対立遺伝子は、ヌクレオチドの欠失、付加、および／または置換などの１つ以上の変異の結果として変更される内在性遺伝子である。
【０３５７】
本明細書で使用される、「核酸カセット」または「発現カセット」という用語は、ＲＮＡを発現し、その後ポリペプチドを発現することができる、ベクター内の遺伝子配列を指す。一実施形態において、核酸カセットは、目的となる遺伝子（複数可）、例えば、目的となるポリヌクレオチド（複数可）を含む。別の実施形態において、核酸カセットは、１つ以上の発現対照配列、例えば、プロモーター、エンハンサー、ポリ（Ａ）配列、および目的となる遺伝子（複数可）、例えば、目的となるポリヌクレオチド（複数可）を含む。ベクターは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０またはそれ以上の核酸カセットを含み得る。核酸カセットは、カセット内の核酸がＲＮＡに転写され、必要であればタンパク質またはポリペプチドに翻訳され、形質転換された細胞における活性のために必要な適切な翻訳後修飾を受け、かつ、適切な細胞内区画への標的化または細胞外区画への分泌によって生物学的活性のために適した区画に転座され得るような位置および配列でベクター内に方向付けられる。好ましくは、カセットは、ベクターへの即座の挿入に適合させたその３’および５’末端を有し、例えば、カセットは、各末端に制限エンドヌクレアーゼ部位を有する。好ましい実施形態において、核酸カセットは、遺伝的障害を治療、予防、または改善するために使用される治療遺伝子の配列を含有する。カセットを除去し、単一ユニットとしてプラスミドまたはウイルスベクターに挿入することができる。
【０３５８】
ポリヌクレオチドは、目的となるポリヌクレオチド（複数可）を含む。本明細書で使用されるとき、「目的となるポリヌクレオチド」という用語は、本明細書で企図される、阻害性ポリヌクレオチドの転写のためのテンプレートとして機能するポリペプチドまたは融合ポリペプチドまたはポリヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
【０３５９】
コード配列それ自体の長さに関わらず、本明細書で企図されるポリヌクレオチドは、本明細書の他の箇所で開示または当該技術分野で既知の、プロモーターおよび／またはエンハンサー、非翻訳領域（ＵＴＲ）、シグナル配列、Ｋｏｚａｋ配列、ポリアデニル化シグナル、追加の制限酵素部位、多重クローニング部位、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、リコンビナーゼ認識部位（例えば、ＬｏｘＰ、ＦＲＴ、およびＡｔｔ部位）、終止コドン、転写終結シグナル、および自己切断型ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、エピトープタグなどの、他のＤＮＡ配列と組み合わされ、それにより、それらの全体的な長さが大幅に変動し得る。したがって、調製の容易さおよび意図される組換えＤＮＡプロトコルの使用によって全長が好ましくは制限されている状態で、ほとんどいかなる長さのポリヌクレオチド断片も使用できることが企図される。
【０３６０】
ポリヌクレオチドは、当該技術分野で既知であり、入手可能な様々な十分に確立された技術のいずれかを使用して、調製、操作、発現、および／または送達され得る。所望のポリペプチドを発現するために、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、適切なベクターに挿入され得る。
【０３６１】
ベクターの例示的な例としては、プラスミド、自律的に複製する配列、および置き換え可能な要素、例えば、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ、ＰｉｇｇｙＢａｃが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３６２】
ベクターの追加の例示的な例としては、プラスミド、ファージミド、コスミド、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来の人工染色体（ＰＡＣ）等の人工染色体、ラムダファージまたはＭ１３ファージ等のバクテリオファージ、および動物ウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３６３】
ベクターとして有用なウイルスの例示的な例としては、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、およびパポーバウイルス（例えば、ＳＶ４０）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３６４】
発現ベクターの例示的な例としては、哺乳動物細胞における発現のためのｐＣｌｎｅｏベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）、哺乳動物細胞におけるレンチウイルス媒介遺伝子導入および発現のためのｐＬｅｎｔｉ４／Ｖ５−ＤＥＳＴ（商標）、ｐＬｅｎｔｉ６／Ｖ５−ＤＥＳＴ（商標）、およびｐＬｅｎｔｉ６．２／Ｖ５−ＧＷ／ｌａｃＺ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、本明細書に開示されるポリペプチドのコード配列は、哺乳動物細胞におけるポリペプチドの発現のためのかかる発現ベクターにライゲーションされ得る。
【０３６５】
特定の実施形態において、ベクターは、エピソームベクター、または染色体外に維持されるベクターである。本明細書で使用されるとき、「エピソーム」という用語は、宿主の染色体ＤＮＡ内に組み込むことなしに、および宿主細胞の分裂により徐々に失われることなく複製することができるベクターを指し、前記ベクターは染色体外またはエピソームで複製することも意味する。
【０３６６】
発現ベクター中に存在する「発現制御配列」、「制御要素」、または「調節配列」は、転写および翻訳を実行するために宿主細胞タンパク質と相互作用する、複製のベクター起点のそれらの非翻訳領域、選択カセット、プロモーター、エンハンサー、翻訳開始シグナル（Ｓｈｉｎｅ  Ｄａｌｇａｒｎｏ配列またはＫｏｚａｋ配列）イントロン、ポリアデニル化配列、５’および３’非翻訳領域である。かかる要素は、それらの強度および特異性が異なり得る。利用されるベクター系および宿主に応じて、遍在性プロモーターおよび誘導性プロモーターを含む、任意の数の好適な転写および翻訳要素を使用することができる。
【０３６７】
特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、発現ベクターおよびウイルスベクターを含むが、これらに限定されないベクターを含む。ベクターは、プロモーターおよび／またはエンハンサーなどの１つ以上の外因性、内在性、または異種制御配列を含む。「内在性制御配列」は、ゲノムにおいて所与の遺伝子と自然に連結するものである。「外因性制御配列」は、その遺伝子の転写が連結されたエンハンサー／プロモーターにより指向されるように、遺伝子操作の手段（すなわち、分子生物学的技法）により遺伝子と並立に配置されるものである。「異種制御配列」は、遺伝子操作された細胞とは異なる種からの外因性配列である。「合成」制御配列は、もう１つの内在性および／または外因性配列、ならびに／またはインビトロもしくはインシリコで特定の療法のための最適なプロモーターおよび／またはエンハンサー活性を提供することが決定された配列の要素を含んでもよい。
【０３６８】
本明細書で使用される「プロモーター」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼが結合するポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）の認識部位を指す。ＲＮＡポリメラーゼは、プロモーターに作動可能に連結されたポリヌクレオチドを開始および転写する。特定の実施形態において、哺乳動物細胞において作動されるプロモーターは、転写が開始される部位からおよそ２５〜３０塩基上流に位置するＡＴリッチな領域を含み、および／または転写の開始から７０〜８０塩基上流に見出される別の配列は、ＣＮＣＡＡＴ領域であり、式中、Ｎは、任意のヌクレオチドであってよい。
【０３６９】
「エンハンサー」という用語は、転写の増強をもたらすことができる配列を含有し、いくつかの場合には別の制御配列に対するその方向とは独立して機能することができるＤＮＡのセグメントを指す。エンハンサーは、プロモーターおよび／または他のエンハンサー要素と協同的または相加的に機能することができる。「プロモーター／エンハンサー」という用語は、プロモーター機能およびエンハンサー機能の両方をもたらすことができる配列を含有するＤＮＡのセグメントを指す。
【０３７０】
「作動可能に連結した」という用語は、記載されている構成要素が、それらの意図された様式で機能することを可能にする関係にある並置を指す。一実施形態において、この用語は、核酸発現制御配列（プロモーター、および／またはエンハンサーなど）と第２のポリヌクレオチド配列、例えば、目的となるポリヌクレオチドとの間の機能的連結であって、発現制御配列により、第２の配列に対応する核酸の転写が指向される機能的連結を指す。
【０３７１】
本明細書で使用されるとき、「構成的発現制御配列」という用語は、作動可能に連結した配列の転写を継続的または連続的に可能にするプロモーター、エンハンサー、またはプロモーター／エンハンサーを指す。構成的発現制御配列は、多種多様な細胞および組織型における発現を可能にする「遍在」プロモーター、エンハンサー、またはプロモーター／エンハンサーであってもよく、制限された様々な細胞および組織型をそれぞれ可能にする、「細胞特異的」、「細胞型特異的」、「細胞系列特異的」、または「組織特異的」プロモーター、エンハンサー、またはプロモーター／エンハンサーであってもよい。
【０３７２】
特定の実施形態での使用に好適な例示的な遍在発現制御配列としては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター、ウイルスシリアンウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば、初期または後期）、Ｍｏｌｏｎｅｙマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）ＬＴＲプロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）（チミジンキナーゼ）プロモーター、ワクシニアウイルスからのＨ５、Ｐ７．５、およびＰ１１プロモーター、伸長因子１−アルファ（ＥＦ１ａ）プロモーター、初期増殖応答１（ＥＧＲ１）、フェリチンＨ（ＦｅｒＨ）、フェリチンＬ（ＦｅｒＬ）、グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）、真核生物翻訳開始因子４Ａ１（ＥＩＦ４Ａ１）、熱ショック７０ｋＤａタンパク質５（ＨＳＰＡ５）、熱ショックタンパク質９０ｋＤａベータ、メンバー１（ＨＳＰ９０Ｂ１）、熱ショックタンパク質７０ｋＤａ（ＨＳＰ７０）、β−キネシン（β−ＫＩＮ）、ヒトＲＯＳＡ２６遺伝子座（Ｉｒｉｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２５，１４７７−１４８２（２００７））、ユビキチンＣプロモーター（ＵＢＣ）、ホスホグリセリン酸キナーゼ−１（ＰＧＫ）プロモーター、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリβ−アクチン（ＣＡＧ）プロモーター、β−アクチンプロモーターおよび骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、負の制御領域の欠失した、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合部位が置換された（ＭＮＤ）プロモーター（Ｃｈａｌｌｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．６９（２）：７４８−５５（１９９５））が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３７３】
一実施形態において、ベクターはＭＮＤプロモーターを含む。
【０３７４】
一実施形態において、ベクターは、ヒトＥＦ１ａ遺伝子の第１のイントロンを含むＥＦ１ａプロモーターを含む。
【０３７５】
一実施形態において、ベクターは、ヒトＥＦ１ａ遺伝子の第１のイントロンを欠くＥＦ１ａプロモーターを含む。
【０３７６】
特定の実施形態において、所望のポリヌクレオチド配列の細胞型特異的、細胞系列特異的、または組織特異的な発現を達成するために（例えば、ポリペプチドをコードする特定の核酸を細胞型、細胞系列、または組織のサブセットにおいてのみ、または特定の発生段階に発現させるために）細胞、細胞型、細胞系列、または組織特異的発現制御配列を使用することが望ましい場合がある。
【０３７７】
特定の実施形態において、ポリヌクレオチド、Ｔ細胞特異的プロモーターを発現するのに望ましい場合がある。
【０３７８】
本明細書で使用される、「条件発現」は、誘導性発現、抑圧可能な発現、特定の生理学的、生物学的、または疾患の状態を有する細胞または組織における発現などが挙げられるが、これらに限定されない、任意の種類の条件発現を指し得る。この定義は、細胞型または組織特異的発現を除外することを意図しない。ある特定の実施形態は、例えば、細胞、組織、生物体などを、ポリヌクレオチドの発現を引き起こす処理もしくは条件、または目的となるポリヌクレオチドによってコードされるポリヌクレオチドの発現の増大または減少を引き起こす処理または条件に供することによって発現が制御される、目的となるポリヌクレオチドの条件発現を提供する。
【０３７９】
誘導性プロモーター／系の例示的な例としては、ステロイド誘導性プロモーター、例えば、グルココルチコイドまたはエストロゲン受容体をコードする遺伝子のプロモーターなど（対応するホルモンで処理することによって誘導される）、メタロチオネイン（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｉｎｅ）プロモーター（種々の重金属で処理することによって誘導される）、ＭＸ−１プロモーター（インターフェロンによって誘導される）、「遺伝子スイッチ」ミフェプリストン調節可能系（Ｓｉｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，Ｇｅｎｅ，３２３：６７）、クメート（ｃｕｍａｔｅ）誘導性遺伝子スイッチ（ＷＯ２００２／０８８３４６）、テトラサイクリン依存性調節系などが挙げられるが、これらに限定されない。誘発剤には、グルココルチコイド、エストロゲン、ミフェプリストン（ＲＵ４８６）、金属類、インターフェロン、小分子、ｃｕｍａｔｅ、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、およびそれらのバリアントが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０３８０】
条件発現はまた、部位特異的ＤＮＡリコンビナーゼを使用することによって達成することもできる。ある特定の実施形態によれば、ベクターは、部位特異的リコンビナーゼによって媒介される組換えのための少なくとも１つの（典型的に、２つの）部位（複数可）を含む。本明細書で使用されるとき、「リコンビナーゼ」または「部位特異的リコンビナーゼ」という用語は、野生型タンパク質であってよい、１つ以上の組換え部位（例えば、２、３、４、５、７、１０、１２、１５、２０、３０、５０等）が関与する組換え反応に関与する切除的または統合的なタンパク質、酵素、補因子または関連するタンパク質（Ｌａｎｄｙ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ３：６９９−７０７（１９９３）を参照のこと）、または変異体、誘導体（例えば、組換えタンパク質配列またはその断片を含む融合タンパク質）、それらの断片、および変異体を含む。特定の実施形態での使用に好適なリコンビナーゼの例示的な例としては、Ｃｒｅ、Ｉｎｔ、ＩＨＦ、Ｘｉｓ、Ｆｌｐ、Ｆｉｓ、Ｈｉｎ、Ｇｉｎ、ΦＣ３１、Ｃｉｎ、Ｔｎ３リゾルバーゼ、ＴｎｄＸ、ＸｅｒＣ、ＸｅｒＤ、ＴｎｐＸ、Ｈｊｃ、Ｇｉｎ、ＳｐＣＣＥ１、およびＰａｒＡが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３８１】
ポリヌクレオチドは、多種多様な部位特異的リコンビナーゼのいずれかのための１つ以上の組換え部位を含んでもよい。部位特異的リコンビナーゼの標的部位が、ベクター、例えば、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターの組込みのために必要な任意の部位（複数可）に加えたものであることが理解されるべきである。本明細書で使用されるとき、「組換え配列」、「組換え部位」、または「部位特異的組換え部位」という用語は、リコンビナーゼが認識し、結合する特定の核酸配列を指す。
【０３８２】
例えば、Ｃｒｅリコンビナーゼのための１つの組換え部位は、８塩基対コア配列と隣接した２つの１３塩基対の逆方向反復（リコンビナーゼ結合部位としての機能を果たす）を含む３４塩基対の配列であるｌｏｘＰである（Ｓａｕｅｒ，Ｂ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ５：５２１−５２７（１９９４）の図１を参照されたい）。他の代表的なｌｏｘＰ部位としては、ｌｏｘ５１１（Ｈｏｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６、Ｂｅｔｈｋｅ  ａｎｄ  Ｓａｕｅｒ，１９９７）、ｌｏｘ５１７１（Ｌｅｅ  ａｎｄ  Ｓａｉｔｏ，１９９８）、ｌｏｘ２２７２（Ｌｅｅ  ａｎｄ  Ｓａｉｔｏ，１９９８）、ｍ２（Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）、ｌｏｘ７１（Ａｌｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）、およびｌｏｘ６６（Ａｌｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３８３】
ＦＬＰリコンビナーゼに好適な認識部位としては、ＦＲＴ（ＭｃＬｅｏｄ，ｅｔ  ａｌ．，１９９６）、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３（Ｓｃｈｌａｋｅ  ａｎｄ  Ｂｏｄｅ，１９９４）、Ｆ４、Ｆ５（Ｓｃｈｌａｋｅ  ａｎｄ  Ｂｏｄｅ，１９９４）、ＦＲＴ（ＬＥ）（Ｓｅｎｅｃｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８）、ＦＲＴ（ＲＥ）（Ｓｅｎｅｃｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３８４】
認識配列の他の例は、ａｔｔＢ、ａｔｔＰ、ａｔｔＬ、およびａｔｔＲ配列であり、これらは、リコンビナーゼ酵素λインテグラーゼ、例えば、ｐｈｉ−ｃ３１によって認識される。φＣ３１ＳＳＲは、ヘテロタイプの部位ａｔｔＢ（長さ３４ｂｐ）とａｔｔＰ（長さ３９ｂｐ）との間の組換えのみを媒介する（Ｇｒｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。ａｔｔＢおよびａｔｔＰは、それぞれ、細菌ゲノムおよびファージゲノムに対するファージインテグラーゼの付着部位に対して名づけられ、どちらも、φＣ３１ホモ二量体が結合する可能性がある不完全な逆方向反復を含有する（Ｇｒｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。産物の部位であるａｔｔＬおよびａｔｔＲは、さらなるφＣ３１媒介性組換えに対して有効に不活性であり（Ｂｅｌｔｅｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）、それにより反応が不可逆的になる。挿入を触媒するために、ゲノムのａｔｔＰ部位へのａｔｔＢを有するＤＮＡの挿入が、ゲノムのａｔｔＢ部位へのａｔｔＰ部位の挿入よりも容易であることが見出されている（Ｔｈｙａｇａｒａｊａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１、Ｂｅｌｔｅｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。故に、典型的な戦略では、相同組換えによってａｔｔＰを有する「ドッキング部位」を定義済みの遺伝子座に位置付け、次いでそれを挿入のために、ａｔｔＢを有する入ってくる配列とパートナーにする。
【０３８５】
本明細書で使用される、「内部リボソーム侵入部位」または「ＩＲＥＳ」は、ＡＴＧなどの開始コドンへのシストロン（タンパク質をコードする領域）の直接内部リボソーム侵入を促進し、それにより、キャップに依存しない遺伝子の翻訳を導く要素を指す。例えば、Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｃｉ  １５（１２）：４７７−８３）およびＪａｃｋｓｏｎ  ａｎｄ  Ｋａｍｉｎｓｋｉ．１９９５．ＲＮＡ  １（１０）：９８５−１０００を参照されたい。当業者によって一般に用いられるＩＲＥＳの例は、米国特許第６，６９２，７３６号に記載されるものを含む。当該技術分野で既知の「ＩＲＥＳ」のさらなる例としては、ピコルナウイルスから得られるＩＲＥＳ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０）およびウイルスまたは細胞ｍＲＮＡ源から得られるＩＲＥＳ、例えば、免疫グロブリン重鎖結合タンパク質（ＢｉＰ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）（Ｈｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．１９９８．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１８（１１）：６１７８−６１９０）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ−２）、およびインスリン様増殖因子（ＩＧＦＩＩ）、翻訳開始因子ｅＩＦ４Ｇ、ならびに酵母転写因子ＴＦＩＩＤおよびＨＡＰ４、Ｎｏｖａｇｅｎから市販されている脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）（Ｄｕｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ  ６６（３）：１６０２−９）およびＶＥＧＦ  ＩＲＥＳ（Ｈｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ１８（１１）：６１７８−９０）が挙げられるが、これらに限定されない。ＩＲＥＳはまた、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｄｉｃｉｓｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ、およびＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ種のウイルスゲノム、およびＨＣＶ、Ｆｒｉｅｎｄマウス白血病ウイルス（ＦｒＭＬＶ）およびＭｏｌｏｎｅｙマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）において報告されている。
【０３８６】
一実施形態において、本明細書で企図されるポリヌクレオチドに使用されるＩＲＥＳは、ＥＭＣＶ  ＩＲＥＳである。
【０３８７】
特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、コンセンサスＫｏｚａｋ配列を有し、所望のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。本明細書で使用されるとき、「Ｋｏｚａｋ配列」という用語は、リボソームの小さなサブユニットに対するｍＲＮＡの初期結合を大幅に促進し、翻訳を増加させる、短ヌクレオチド配列を指す。コンセンサスＫｏｚａｋ配列は、（ＧＣＣ）ＲＣＣＡＴＧＧ（配列番号７２）であり、式中、Ｒは、プリン（ＡまたはＧ）である（Ｋｏｚａｋ，１９８６．Ｃｅｌｌ．４４（２）：２８３−９２、およびＫｏｚａｋ，１９８７．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５（２０）：８１２５−４８）。
【０３８８】
異種核酸転写物の効率的な終止およびポリアデニル化を指向する要素は、異種遺伝子の発現を増加させる。転写終止シグナルは、一般に、ポリアデニル化シグナルの下流に見出される。特定の実施形態において、ベクターは、発現されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのポリアデニル化配列３’を含む。本明細書で使用される、「ポリＡ部位」または「ポリＡ配列」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩによる新生ＲＮＡ転写産物の終結およびポリアデニル化の両方を導くＤＮＡ配列を指す。ポリアデニル化配列は、コード配列の３’末端へのポリＡテイルの添加によりｍＲＮＡの安定性を促進し、それ故に、転写効率の増加に寄与することができる。切断およびポリアデニル化は、ＲＮＡのポリ（Ａ）配列によって誘導される。哺乳動物プレ−ｍＲＮＡのコアなポリ（Ａ）配列は、切断−ポリアデニル化部位に隣接する２つの認識要素を有する。典型的には、ほぼ不変のＡＡＵＡＡＡ六量体は、２０〜５０ヌクレオチド上流のＵまたはＧＵ残基に富むより可変の要素に位置する。新生転写産物の切断はこれら２つの要素間で生じ、５’切断産物への最大２５０個のアデノシンの付加に関連する。特定の実施形態では、コアなポリ（Ａ）配列は、理想的なポリＡ配列（例えば、ＡＡＴＡＡＡ、ＡＴＴＡＡＡ、ＡＧＴＡＡＡ）である。特定の実施形態において、ポリ（Ａ）配列は、ＳＶ４０ポリＡ配列、ウシ成長ホルモンポリＡ配列（ＢＧＨｐＡ）、ウサギβ−グロビンポリＡ配列（ｒβｇｐＡ）、または当該技術分野で既知の別の好適な異種または内在性ポリＡ配列である。
【０３８９】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドまたは細胞は、直接毒性および／または制御されていない増殖のリスクを低減させるために、誘導性自殺遺伝子を含む、自殺遺伝子を用いる。特定の実施形態において、自殺遺伝子は、ポリヌクレオチドまたは細胞を含む宿主に対して免疫原性ではない。使用され得る自殺遺伝子のある特定の例は、カスパーゼ−９またはカスパーゼ−８またはシトシンデアミナーゼである。カスパーゼ−９は、二量化の特定の活性化された化学誘導物質（ＣＩＤ）を使用して活性化され得る。
【０３９０】
ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、インビボでネガティブ選択の影響を受けやすい、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞を生じる遺伝子セグメントを含む。「ネガティブ選択」は、個体のインビボでの状態の変化の結果として除去され得る注入された細胞を指す。陰性の選択可能な表現型は、投与された薬剤、例えば、化合物に対する感受性を付与する遺伝子の挿入から生じ得る。ネガティブ選択可能な遺伝子は、当該技術分野で既知であり、とりわけ、ガンシクロビル感受性を付与する単純ヘルペスウイルスＩ型チミジンキナーゼ（ＨＳＶ−ＩＴＫ）遺伝子（Ｗｉｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ１１：２２３，１９７７）、細胞ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）遺伝子、細胞アデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＡＰＲＴ）遺伝子、および細菌シトシンデアミナーゼ（Ｍｕｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８９：３３（１９９２））を含む。
【０３９１】
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞などの遺伝子修飾された免疫エフェクター細胞は、インビトロでネガティブ選択可能な表現型の細胞の選択を可能にするポジティブマーカーをさらに含むポリヌクレオチドを含む。ポジティブ選択可能なマーカーは、宿主細胞内に導入されたとき、その遺伝子を有する細胞のポジティブ選択を可能にする優性表現型を発現する遺伝子であってもよい。この型の遺伝子は当技術分野で既知であり、とりわけ、ハイグロマイシンＢに対する耐性を与える、ハイグロマイシンＢホスホトランスフェラーゼ遺伝子（ｈｐｈ）、抗生物質Ｇ４１８に対する耐性をコードするＴｎ５由来のアミノグリコシドホスホトランスフェラーゼ遺伝子（ｎｅｏまたはａｐｈ）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子、アデノシンデアミナーゼ遺伝子（ＡＤＡ）、および多剤耐性（ＭＤＲ）遺伝子が挙げられる。
【０３９２】
一実施形態において、ポジティブ選択可能なマーカーおよびネガティブ選択可能な要素は、ネガティブ選択可能な要素の消失がまた必ず、ポジティブ選択可能なマーカーの消失を伴うように連結される。特定の実施形態において、ポジティブおよびネガティブ選択可能なマーカーは、一方の消失が、義務的に、他方の消失をもたらすように、融合される。発現産物として、上述の所望のポジティブ選択特徴およびネガティブ選択特徴の両方を与えるポリペプチドを生じる融合ポリヌクレオチドの例は、ハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ・チミジンキナーゼ融合遺伝子（ＨｙＴＫ）である。この遺伝子の発現は、インビトロでのポジティブ選択のためのハイグロマイシンＢ耐性、およびインビボでのネガティブ選択のためのガンシクロビル感受性を与えるポリペプチドを生じる。優性ポジティブ選択可能なマーカーをネガティブ選択可能なマーカーと融合することに由来する二機能性選択可能な融合遺伝子の使用について記載する、Ｓ．Ｄ．ＬｕｐｔｏｎによるＰＣＴ  ＵＳ９１／０８４４２およびＰＣＴ／ＵＳ９４／０５６０１の刊行物も参照されたい。
【０３９３】
好ましいポジティブ選択可能なマーカーは、ｈｐｈ、ｎｃｏ、およびｇｐｔからなる群から選択される遺伝子に由来し、好ましいネガティブ選択可能なマーカーは、シトシンデアミナーゼ、ＨＳＶ−Ｉ  ＴＫ、ＶＺＶ  ＴＫ、ＨＰＲＴ、ＡＰＲＴおよびｇｐｔからなる群から選択される遺伝子に由来する。特定の実施形態で企図される代表的な二機能性選択可能な融合遺伝子としては、ポジティブ選択可能なマーカーが、ｈｐｈまたはｎｅｏに由来し、ネガティブ選択可能なマーカーが、シトシンデアミナーゼまたはＴＫ遺伝子または選択可能なマーカーに由来する遺伝子が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３９４】
特定の実施形態において、１つ以上のポリペプチド、または融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが、非ウイルス方法およびウイルス方法の両方によって、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞内に導入され得る。特定の実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドは、同じ方法によってもしくは異なる方法によって、および／または同じベクターもしくは異なるベクターによって提供されてよい。
【０３９５】
「ベクター」という用語は、別の核酸分子を移入または輸送することができる核酸分子を指すように本明細書で使用される。移入された核酸は、一般に、ベクター核酸分子に連結され、例えば、それに挿入される。ベクターは、細胞中に自律複製を指向する配列を含んでもよいか、または宿主細胞ＤＮＡへの組込みを可能にするのに十分な配列を含んでもよい。特定の実施形態において、非ウイルスベクターは、本明細書で企図される１つ以上のポリヌクレオチドをＴ細胞に送達するために使用される。
【０３９６】
非ウイルスベクターの例示的な例としては、プラスミド（例えば、ＤＮＡプラスミドまたはＲＮＡプラスミド）、トランスポゾン、コスミド、および細菌人工染色体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３９７】
特定の実施形態で企図されるポリヌクレオチドの非ウイルス送達の例示的な方法としては、電気穿孔、ソノポレーション、リポフェクション、マイクロインジェクション、微粒子銃、ウイロソーム、リポソーム、イムノリポソーム、ナノ粒子、ポリカチオンまたは脂質：核酸共役体、裸のＤＮＡ、人工ビリオン、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介移入、遺伝子銃、および熱ショックが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３９８】
特定の実施形態で企図される特定の実施形態での使用に好適なポリヌクレオチド送達系の例示的な例としては、Ａｍａｘａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｘｃｙｔｅ，Ｉｎｃ．、ＢＴＸ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、およびＣｏｐｅｒｎｉｃｕｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｉｎｃによって提供されるものが挙げられるが、これらに限定されない。リポフェクション試薬は、市販されている（例えば、Ｔｒａｎｓｆｅｃｔａｍ（商標）およびＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（商標））。ポリヌクレオチドの効率的な受容体認識リポフェクションに好適なカチオン性および中性脂質は、文献に記載されている。例えば、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ．１０：１８０−１８７、およびＢａｌａｚｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ．２０１１：１−１２を参照されたい。抗体標的のバクテリア由来の非生存のナノ細胞系送達もまた、特定の実施形態で企図される。
【０３９９】
特定の実施形態で企図されるポリヌクレオチドを含むウイルスベクターは、以下に記載されるように、個々の患者への投与によって、典型的に、全身投与（例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、または頭蓋内注入）または局所適用によって、インビボで送達され得る。代替として、ベクターは、個々の患者から外植された細胞（例えば、動員された末梢血、リンパ球、骨髄穿刺液、組織生検）などの細胞にエクスビボで、または万能ドナー造血幹細胞に送達し、続いて、患者に細胞を再移植することができる。
【０４００】
一実施形態において、ヌクレアーゼバリアントおよび／またはドナー修復テンプレートを含むウイルスベクターは、インビボで細胞の形質導入のために生物に直接投与される。代替として、裸のＤＮＡを投与することができる。投与は、注射、注入、局所適用、および電気穿孔が挙げられるが、これらに限定されない、血液または組織細胞との最終接触に分子を導入するために通常用いられる任意の経路による。かかる核酸を投与する好適な方法は、利用可能でかつ当業者に周知であり、１つを超える経路を用いて特定の組成物を投与することができるが、特定の経路は、別の経路よりもさらに即時的かつさらに有効な反応を提供し得る場合が多い。
【０４０１】
特定の実施形態で企図される特定の実施形態での使用に好適なウイルスベクター系の例示的な例としては、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、およびワクシニアウイルスベクターが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４０２】
種々の実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドは、１つ以上のポリヌクレオチドを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）で細胞を形質導入することによって、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞に導入される。
【０４０３】
ＡＡＶは、小さな（約２６ｎｍ）複製欠損、主に、エピソーム性の非エンベロープウイルスである。ＡＡＶは、分裂細胞および非分裂細胞の両方を感染させることができ、そのゲノムを宿主細胞のゲノムに組み込み得る。組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）は、典型的に、最低限で、導入遺伝子およびその調節配列、ならびに５’および３’ＡＡＶ逆方向末端反復（ＩＴＲ）からなる。ＩＴＲ配列は、長さが約１４５ｂｐである。特定の実施形態において、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、またはＡＡＶ１０から単離される、ＩＴＲおよびカプシド配列を含む。
【０４０４】
いくつかの実施形態において、キメラｒＡＡＶが使用され、ＩＴＲ配列は、１つのＡＡＶ血清型から単離され、カプシド配列は、異なるＡＡＶ血清型から単離される。例えば、ＡＡＶ２に由来するＩＴＲ配列およびＡＡＶ６に由来するカプシド配列を有するｒＡＡＶは、ＡＡＶ２／ＡＡＶ６と称される。特定の実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２からのＩＴＲ、およびＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、またはＡＡＶ１０のうちの任意の１つからのカプシドタンパク質を含み得る。好ましい実施形態において、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ２に由来するＩＴＲ配列およびＡＡＶ６に由来するカプシド配列を含む。好ましい実施形態において、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ２に由来するＩＴＲ配列およびＡＡＶ２に由来するカプシド配列を含む。
【０４０５】
いくつかの実施形態において、遺伝子操作されたおよび選択方法を、ＡＡＶカプシドに適用して、それらを目的となる細胞を伝達する
【０４０６】
ｒＡＡＶベクターの構築、産生、およびその精製は、例えば、米国特許第９，１６９，４９４号、同第９，１６９，４９２号、同第９，０１２，２２４号、同第８，８８９，６４１号、同第８，８０９，０５８号、および同第８，７８４，７９９号に開示されており、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０４０７】
種々の実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドは、１つ以上のポリヌクレオチドを含むレトロウイルス、例えばレンチウイルスで細胞を形質導入することによって、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞に導入される。
【０４０８】
本明細書で使用されるとき、「レトロウイルス」という用語は、そのゲノムＲＮＡを直鎖二本鎖ＤＮＡコピーに逆転写し、その後、そのゲノムＤＮＡを宿主ゲノムに共有結合するＲＮＡウイルスを指す。特定の実施形態での使用に好適な例示的なレトロウイルスとしては、Ｍｏｌｏｎｅｙマウス白血病ウイルス（Ｍ−ＭｕＬＶ）、Ｍｏｌｏｎｅｙマウス肉腫ウイルス（ＭｏＭＳＶ）、Ｈａｒｖｅｙマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、ネコ白血病ウイルス（ＦＬＶ）、スプマウイルス、Ｆｒｉｅｎｄマウス白血病ウイルス、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）およびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ））およびレンチウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４０９】
本明細書で使用されるとき、「レンチウイルス」という用語は、複合レトロウイルスの群（または族）を指す。例示的なレンチウイルスとしては、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス、ＨＩＶ１型およびＨＩＶ２型を含む）、ビスナ−マエディウイルス（ＶＭＶ）ウイルス、ヤギ関節炎−脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウマ感染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、ＨＩＶベースのベクター骨格（すなわち、ＨＩＶシス作用配列要素）が、好ましい。
【０４１０】
種々の実施形態において、本明細書で企図されるレンチウイルスベクターは、本明細書の他の箇所で論じられるように、１つ以上のＬＴＲ、およびアクセサリー要素：ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ、プシー（Ψ）パッケージングシグナル、輸出要素、ポリ（Ａ）配列のうちの１つ以上または全てを含み、任意選択で、ＷＰＲＥまたはＨＰＲＥ、絶縁体要素、選択可能なマーカー、および細胞自殺遺伝子を含み得る。
【０４１１】
特定の実施形態において、本明細書で企図されるレンチウイルスベクターは、組込みまたは非組込みまたは組込み欠損レンチウイルスであり得る。本明細書で使用されるとき、「組込み欠損レンチウイルス」または「ＩＤＬＶ」という用語は、ウイルスゲノムを宿主細胞のゲノムに組み込む能力を欠いているインテグラーゼを有するレンチウイルスを指す。組込み−インコンピテントウイルスベクターは、特許出願ＷＯ２００６／０１０８３４に記載されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０４１２】
インテグラーゼ活性を低下させるのに適したＨＩＶ−１  ｐｏｌ遺伝子における例示的な変異としては、Ｈ１２Ｎ、Ｈ１２Ｃ、Ｈ１６Ｃ、Ｈ１６Ｖ、Ｓ８１Ｒ、Ｄ４１Ａ、Ｋ４２Ａ、Ｈ５１Ａ、Ｑ５３Ｃ、Ｄ５５Ｖ、Ｄ６４Ｅ、Ｄ６４Ｖ、Ｅ６９Ａ、Ｋ７１Ａ、Ｅ８５Ａ、Ｅ８７Ａ、Ｄ１１６Ｎ、Ｄ１１６１、Ｄ１１６Ａ、Ｎ１２０Ｇ、Ｎ１２０１、Ｎ１２０Ｅ、Ｅ１５２Ｇ、Ｅ１５２Ａ、Ｄ３５Ｅ、Ｋ１５６Ｅ、Ｋ１５６Ａ、Ｅ１５７Ａ、Ｋ１５９Ｅ、Ｋ１５９Ａ、Ｋ１６０Ａ、Ｒ１６６Ａ、Ｄ１６７Ａ、Ｅ１７０Ａ、Ｈ１７１Ａ、Ｋ１７３Ａ、Ｋ１８６Ｑ、Ｋ１８６Ｔ、Ｋ１８８Ｔ、Ｅ１９８Ａ、Ｒ１９９ｃ、Ｒ１９９Ｔ、Ｒ１９９Ａ、Ｄ２０２Ａ、Ｋ２１１Ａ、Ｑ２１４Ｌ、Ｑ２１６Ｌ、Ｑ２２１Ｌ、Ｗ２３５Ｆ、Ｗ２３５Ｅ、Ｋ２３６Ｓ、Ｋ２３６Ａ、Ｋ２４６Ａ、Ｇ２４７Ｗ、Ｄ２５３Ａ、Ｒ２６２Ａ、Ｒ２６３Ａ、およびＫ２６４Ｈが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４１３】
「長い末端反復（ＬＴＲ）」という用語は、それらの天然の配列の状況では、直接反復であり、Ｕ３、ＲおよびＵ５領域を含有する、レトロウイルスＤＮＡの末端に位置する塩基対のドメインを指す。
【０４１４】
本明細書で使用されるとき、「ＦＬＡＰ要素」または「ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ」という用語は、配列が、レトロウイルス、例えば、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２の中央ポリプリン区域および中央終止配列（ｃＰＰＴおよびＣＴＳ）を含む核酸を指す。好適なＦＬＡＰ要素は、米国特許第６，６８２，９０７号およびＺｅｎｎｏｕ，ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１：１７３に記載されている。
【０４１５】
本明細書で使用されるとき、「パッケージングシグナル」または「パッケージング配列」という用語は、ウイルスカプシドまたは粒子へのウイルスＲＮＡの挿入に必要とされるレトロウイルスゲノム内に位置するプシー［Ψ］配列を指す。例えば、Ｃｌｅｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５．Ｊ．ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６９，Ｎｏ．４；ｐｐ．２１０１−２１０９を参照されたい。
【０４１６】
「輸送要素」という用語は、核から細胞の細胞質へのＲＮＡ転写物の輸送を調節するシス作用性転写後調節要素を指す。ＲＮＡ輸送要素の例としては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ｒｅｖ応答要素（ＲＲＥ）（例えば、Ｃｕｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６５：１０５３、およびＣｕｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１．Ｃｅｌｌ５８：４２３を参照）、およびＢ型肝炎ウイルス転写後調節調節要素（ＨＰＲＥ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４１７】
特定の実施形態において、ウイルスベクターにおける異種配列の発現は、転写後調節要素、効率的なポリアデニル化部位、および任意選択で、転写終止シグナルをベクターに組み込むことによって増大する。様々な転写後調節要素は、例えば、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節要素（ＷＰＲＥ；Ｚｕｆｆｅｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７３：２８８６）、Ｂ型肝炎ウイルスに存在する転写後調節要素（ＨＰＲＥ）（Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，５：３８６４）、および同様のもの（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．，９：１７６６）タンパク質における異種核酸の発現が増大し得る。
【０４１８】
レンチウイルスベクターは、好ましくは、ＬＴＲの改変の結果としていくつかの安全性の増強を含有する。「自己不活性化」（ＳＩＮ）ベクターは、複製欠損性ベクター、例えば、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターを指し、例えば、１回目のウイルス複製を越えてウイルスが転写されることを防ぐために、Ｕ３領域として既知の右側の（３’）ＬＴＲエンハンサー−プロモーター領域が修飾されている（例えば、欠失または置換によって）。自己不活性化は、ベクターＤＮＡ、すなわちベクターＲＮＡを産生するために用いられるＤＮＡの３’ＬＴＲのＵ３領域における欠失の導入を通じて達成されることが好ましい。したがって、逆転写反応の間、この欠失をプロウイルスＤＮＡの５’ＬＴＲに移した。特定の実施形態において、ＬＴＲの転写活性を全部大いに減少または消失させるように十分なＵ３配列を排除し、それによって形質導入された細胞において、全長ベクターＲＮＡの産生を大いに減少または消失させることが望ましい。ＨＩＶ系レンチベクターの場合、このようなベクターは、ベクター力価の大幅な減少なくＬＴＲ  ＴＡＴＡボックスの除去（例えば、−４１８から−１８の欠失）などの重要なＵ３欠失を許容することがわかっている。
【０４１９】
追加の安全性の増強は、ウイルス粒子の産生時にウイルスゲノムの転写を駆動させるために、５’ＬＴＲのＵ３領域を異種プロモーターで置き換えることによって提供される。使用することができる異種プロモーターの例は、例えば、ウイルスサルウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば、早期または後期）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（例えば、最初期）、Ｍｏｌｏｎｅｙマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、および単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）（チミジンキナーゼ）プロモーター。
【０４２０】
本明細書で使用される、「シュードタイプ」または「シュードタイピング」という用語は、ウイルスエンベロープタンパク質が、好ましい特性を保有する別のウイルスのウイルスエンベロープタンパク質で置換されたウイルスを指す。例えば、ＨＩＶは、水疱性口内炎ウイルスＧ−タンパク質（ＶＳＶ−Ｇ）エンベロープタンパク質を用いてシュードタイピングすることができ、これにより、ＨＩＶエンベロープタンパク質（ｅｎｖ遺伝子によってコードされる）は通常ウイルスをＣＤ４＋提示細胞に標的化されるため、ＨＩＶがより広い範囲の細胞に感染することが可能になる。
【０４２１】
ある特定の実施形態において、レンチウイルスベクターは、既知の方法に従って産生される。例えば、Ｋｕｔｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００９；９：１０．ｄｏｉ：１０．１１８６／１４７２−６７５０−９−１０；Ｋｕｔｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２００９；４（４）：４９５−５０５．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｐｒｏｔ．２００９．２２を参照されたい。
【０４２２】
本明細書で企図されるある特定の実施形態によれば、ウイルスベクター骨格配列のほとんどまたは全てが、レンチウイルス、例えば、ＨＩＶ−１に由来する。しかしながら、レトロウイルスおよび／またはレンチウイルス配列の多くの異なる源を用いることができるか、またはある特定のレンチウイルス配列の組み合わせられたおよび多数の置換および変更を、移入ベクターの本明細書に記載の機能を行う能力を損なうことなく適応させることができることが理解されるべきである。さらに、様々なレンチウイルスベクターが、当該技術分野で既知であり、Ｎａｌｄｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６ａ、１９９６ｂ、および１９９８）、Ｚｕｆｆｅｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）、Ｄｕｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８、米国特許第６，０１３，５１６号および同第５，９９４，１３６号を参照されたく、これらの多くは、本明細書で企図されるウイルスベクターまたは転移プラスミドを生成するために適合され得る。
【０４２３】
種々の実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドは、１つ以上のポリヌクレオチドを含むアデノウイルスで細胞を形質導入することによって、免疫エフェクター細胞に導入される。
【０４２４】
アデノウイルスベースのベクターは、多くの細胞型において極めて高い形質導入効率が可能であり、細胞分裂を必要しない。かかるベクターを用いて、高力価かつ高レベルの発現が得られている。このベクターは、比較的単純なシステムにおいて大量に生成することができる。ほとんどのアデノウイルスベクターが、導入遺伝子がＡｄ  Ｅ１ａ、Ｅ１ｂ、および／またはＥ３遺伝子を置き換えるように遺伝子操作され、その後、複製欠損ベクターは、欠失した遺伝子機能をトランスで供給するヒト２９３細胞において増幅する。Ａｄベクターは、肝臓、腎臓、および筋肉に見出されるもの等の非分裂の分化細胞を含む複数の種類の組織をインビボで形質導入することができる。従来のＡｄベクターは、高い輸送能力を有する。
【０４２５】
複製欠損である現行のアデノウイルスベクターの作製および増殖は、Ａｄ５  ＤＮＡ断片によってヒト胎児腎臓細胞から形質転換されて、Ｅ１タンパク質を構造的に発現する２９３と呼ばれる特有のヘルパー細胞株を利用し得る（Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９７７）。Ｅ３領域は、アデノウイルスゲノムから可欠であるため（Ｊｏｎｅｓ  ＆  Ｓｈｅｎｋ，１９７８）、現行のアデノウイルスベクターは２９３細胞を利用して、Ｅ１、Ｄ３または両方の領域に外来ＤＮＡを運搬する（Ｇｒａｈａｍ  ＆  Ｐｒｅｖｅｃ，１９９１）。アデノウイルスベクターは、真核性遺伝子発現（Ｌｅｖｒｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１、Ｇｏｍｅｚ−Ｆｏｉｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）およびワクチン開発（Ｇｒｕｎｈａｕｓ  ＆  Ｈｏｒｗｉｔｚ、１９９２、Ｇｒａｈａｍ  ＆  Ｐｒｅｖｅｃ，１９９２）に使用されている。組換えアデノウイルスを異なる組織に投与した研究には、気管点滴（Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１、Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）、筋肉注射（Ｒａｇｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）、末梢静脈内注入（Ｈｅｒｚ  ＆  Ｇｅｒａｒｄ，１９９３）、および脳内への定位接種（Ｌｅ  Ｇａｌ  Ｌａ  Ｓａｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）が含まれる。臨床試験におけるＡｄベクターの使用の例は、筋肉内注射での抗腫瘍免疫のためのポリヌクレオチド療法を含んだ（Ｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．７：１０８３−９（１９９８））。
【０４２６】
種々の実施形態において、１つ以上のポリヌクレオチドは、１つ以上のポリヌクレオチドを含む単純ヘルペスウイルス、例えば、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２で形質導入することによって、免疫エフェクター細胞に導入される。
【０４２７】
成熟ＨＳＶビリオンは、１５２ｋｂである直鎖二本鎖ＤＮＡ分子からなるウイルスゲノムを含むエンベロープで覆われた二十面体カプシドからなる。一実施形態において、ＨＳＶベースのウイルスベクターは、１つ以上の必須または非必須ＨＳＶ遺伝子において欠損している。一実施形態において、ＨＳＶベースのウイルスベクターは、複製欠損である。ほとんどの複製欠損ＨＳＶベクターは、複製を防止するために１つ以上の最初期、早期、または後期ＨＳＶ遺伝子を除去するための欠失を含む。例えば、ＨＳＶベクターは、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される前初期遺伝子において欠損され得る。ＨＳＶベクターの利点は、長期間のＤＮＡ発現をもたらすことができる潜伏期に入る能力、および最大２５ｋｂの外因性ＤＮＡを収容することができるその大きなウイルスＤＮＡゲノムである。ＨＳＶ系のベクターは、例えば、米国特許第５，８３７，５３２号、同第５，８４６，７８２号、および同第５，８０４，４１３号、ならびに国際特許出願第ＷＯ９１／０２７８８号、同第ＷＯ９６／０４３９４号、同第ＷＯ９８／１５６３７号、および同第ＷＯ９９／０６５８３号に記載されており、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０４２８】
Ｇ．遺伝子修飾された細胞
種々の実施形態において、がんの治療にて使用するために、本明細書で企図される、ＴＧＦβシグナルコンバーターポリペプチド、ＣＴＢＲ、遺伝子操作されたＴＣＲ、ＣＡＲ、ＤＡＲＩＣ、ゼータカイン、および融合タンパク質を発現するように、細胞は、修飾される。細胞は、本明細書で企図されるポリペプチドを発現するように非遺伝子修飾であってもよく、特に好ましい実施形態において、細胞は、本明細書で企図されるポリペプチドを発現するように遺伝子修飾であってもよい。本明細書で使用されるとき、「遺伝子操作された」または「遺伝子修飾された」という用語は、ＤＮＡまたはＲＮＡの形態での外部遺伝物質の、細胞内の総遺伝物質への付加を指す。「遺伝子修飾された細胞」、「修飾された細胞」、および「リダイレクトされた細胞」という用語は、特定の実施形態で同じ意味で用いられる。
【０４２９】
特定の実施形態において、ＴＧＦβによって媒介されたＴＭＥ中の免疫抑制シグナルに対する細胞の抵抗性を向上させるために、本明細書で企図されるＣＴＢＲシグナルコンバーターポリペプチドを、免疫エフェクター細胞内に導入および発現する。特定の実施形態において、ＣＴＢＲシグナルコンバーターポリペプチドは、細胞内で遺伝子操作された抗原受容体を同時発現するおかげで標的細胞にリダイレクトされた免疫エフェクター細胞内で導入および発現された。
【０４３０】
「免疫エフェクター細胞」は、１つ以上のエフェクター機能（例えば、細胞傷害性細胞殺傷活性、サイトカインの分泌、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣの誘導）を有する免疫系の任意の細胞である。本明細書で企図される例示的な免疫エフェクター細胞は、Ｔリンパ球、特に細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ、すなわちＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＴＩＬ、およびヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ、すなわちＣＤ４＋Ｔ細胞）である。一実施形態において、免疫エフェクター細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。一実施形態において、免疫エフェクター細胞は、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞を含む。免疫エフェクター細胞は、自己移植／自家（「自己」）または非自己移植（「非自己」、例えば、同種、同系、または異種）であり得る。
【０４３１】
本明細書で使用される、「自己移植」は、同じ対象からの細胞を指す。本明細書で使用される、「自家」は、相対的に遺伝的に細胞とは異なる同じ種の細胞を指す。本明細書で使用される、「同系」は、相対的に遺伝的に細胞と同一である異なる対照の細胞を指す。本明細書で使用される、「異種」は、相対的に細胞に異なる種の細胞を指す。好ましい実施形態において、細胞は、自己移植である。
【０４３２】
本明細書で企図されるＣＴＢＲシグナルコンバーターポリペプチドを導入するのに適している、例示的な免疫エフェクター細胞は、Ｔリンパ球を含む。「Ｔ細胞」または「Ｔリンパ球」という用語は、当該技術分野で認識されており、胸腺細胞、未成熟Ｔリンパ球、成熟Ｔリンパ球、休止Ｔリンパ球、または活性化Ｔリンパ球を含むことを意図する。Ｔ細胞は、Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞、例えばＴヘルパー１（Ｔｈ１）またはＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞であり得る。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ、すなわちＣＤ４＋Ｔ細胞）ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ、すなわちＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４−ＣＤ８−Ｔ細胞、またはＴ細胞の任意の他のサブセットであり得る。特定の実施形態において使用するのに好適なＴ細胞の他の例示的な集団には、ナイーブＴ細胞およびメモリーＴ細胞が含まれる。
【０４３３】
当業者により理解されるとおり、他の細胞はさらに、本明細書で企図されるＣＴＢＲシグナルコンバーターポリペプチドを有する免疫エフェクター細胞としても使用することができる。特に、免疫エフェクター細胞はまた、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、好中球、およびマクロファージを含む。免疫エフェクター細胞はまた、エフェクター細胞の前駆体を含み、このような前駆細胞を誘導して、インビボまたはインビトロで免疫エフェクター細胞に分化できる。したがって、特定の実施形態において、対象に投与すると成熟免疫エフェクター細胞に分化するか、またはインビトロで誘導されて成熟免疫エフェクター細胞に分化する、臍帯血、骨髄、または動員末梢血由来の細胞のＣＤ３４＋集団内に含有された造血幹細胞（ＨＳＣ）などの免疫エフェクター細胞の前駆体を、免疫エフェクター細胞は含む。
【０４３４】
本明細書で使用される場合、特異的なキメラ受容体を含有するよう遺伝子操作された免疫エフェクター細胞は、「抗原特異的リダイレクト免疫エフェクター細胞」と呼ばれ得る。
【０４３５】
本発明で使用するとき、「ＣＤ３４＋細胞」という用語は、その細胞表面上にＣＤ３４タンパク質を発現する細胞を指す。本発明で使用される「ＣＤ３４」は、多くの場合細胞間接着因子として作用し、リンパ節へのＴ細胞進入に関与する、細胞表面糖タンパク質（例えば、シアロムチンタンパク質）を指す。ＣＤ３４＋細胞集団は、造血幹細胞（ＨＳＣ）を含有し、それは患者に投与すると分化し、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、好中球、および単球／マクロファージの細胞系譜を含む、すべての造血系譜に寄与する。
【０４３６】
本明細書で企図されるＴＧＦβシグナルコンバーターポリペプチドを発現する免疫エフェクター細胞を作製するための方法が、特定の実施形態において提供される。一実施形態において、方法は、本明細書で企図されるように、免疫エフェクター細胞が１つ以上のＴＧＦβシグナルコンバーターポリペプチドを発現するように、個体から単離された免疫エフェクター細胞をトランスフェクトまたは形質導入することを含む。一実施形態において、方法は、免疫エフェクター細胞が、本明細書で企図される、１つ以上のＴＧＦβシグナルコンバーターポリペプチドおよび遺伝子操作された抗原受容体を発現するように、個体から単離された免疫エフェクター細胞をトランスフェクトまたは形質導入することを含む。ある特定の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、個体から単離され、インビトロでのさらなる操作を伴わずに遺伝子修飾される。次いで、このような細胞を個体に直接的再投与し得る。さらなる実施形態において、免疫エフェクター細胞を、遺伝子修飾される前に、まず活性化および刺激して、インビトロで増殖させる。これに関して、免疫エフェクター細胞は、遺伝子修飾される前および／またはその後に培養されてもよい。
【０４３７】
特定の実施形態において、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞のインビトロ操作または遺伝子修飾より前に、細胞の供給源を対象から得た。特定の実施形態において、修飾免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞を含む。
【０４３８】
Ｔ細胞は、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺問題（ｉｓｓｕｅ）、感染部位由来組織、復水、胸水、脾臓組織、および腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない、多くの源から得ることができる。ある特定の実施形態において、Ｔ細胞は、沈降、例えば、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離などの当業者に既知の任意の数の技法を使用して、対象から収集した血液単位から得ることができる。
【０４３９】
他の実施形態において、Ｔ細胞の単離または精製された集団が、使用される。いくつかの実施形態において、ＰＢＭＣを単離した後、細胞傷害性およびヘルパーＴリンパ球の両方を、活性化、増殖、および／または遺伝子改変の前またはその後に、ナイーブ、メモリー、およびエフェクターＴ細胞サブ集団に選別することができる。
【０４４０】
一実施形態において、Ｔ細胞の単離または精製された集団は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない、マーカーのうちの１つ以上を発現する。
【０４４１】
ある特定の実施形態において、Ｔ細胞は、個体から単離され、修飾されてＴＧＦβシグナルコンバーターポリペプチドを発現する前に、まず活性化および刺激して、インビトロで増殖させる。
【０４４２】
Ｔ細胞組成物の十分な治療量を達成するために、Ｔ細胞は、しばしば、刺激、活性化、および／または増殖の１つ以上のラウンドに供される。Ｔ細胞は、一般に、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号、同第６，５３４，０５５号、同第６，９０５，６８０号、同第６，６９２，９６４号、同第５，８５８，３５８号、同第６，８８７，４６６号、同第６，９０５，６８１号、同第７，１４４，５７５号、同第７，０６７，３１８号、同第７，１７２，８６９号、同第７，２３２，５６６号、同第７，１７５，８４３号、同第５，８８３，２２３号、同第６，９０５，８７４号、同第６，７９７，５１４号、および同第６，８６７，０４１号（これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載される、方法を使用して、活性化し、増殖させ得る。特定の実施形態において、ＴＧＦβシグナルコンバーターポリペプチドをコードするベクターまたはポリヌクレオチドを導入する前に、Ｔ細胞を、約６時間、約１２時間、約１８時間、または約２４時間活性化し、増殖させる。任意選択的に、本明細書で企図される遺伝子操作された抗原受容体と組み合わせる。
【０４４３】
一実施形態において、組成物を修飾するのと同時に、Ｔ細胞が活性化される。
【０４４４】
種々の実施形態において、免疫エフェクター細胞を生成する方法は、Ｔ細胞を含む細胞集団を活性化し、Ｔ細胞の集団を増殖することを含む。Ｔ細胞活性化は、Ｔ細胞ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を通して一次刺激シグナルをもたらすことによって、およびアクセサリー分子、例えば、ＣＤ２８を通して二次共刺激シグナルをもたらすことによって達成され得る。
【０４４５】
ＴＣＲ／ＣＤ３複合体は、Ｔ細胞を、好適なＣＤ３結合剤、例えば、ＣＤ３リガンドまたは抗ＣＤ３モノクローナル抗体と接触させることによって刺激され得る。ＣＤ３抗体の例示的な例としては、ＯＫＴ３、Ｇ１９−４、ＢＣ３、および６４．１が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４４６】
ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介して提供される一次刺激シグナルに加えて、Ｔ細胞応答の誘発は、二次共刺激シグナルを必要とする。特定の実施形態において、ＣＤ２８結合剤は、共刺激シグナルを提供するために使用され得る。ＣＤ２８結合剤の例示的な例としては、天然のＣＤ２８リガンド、例えば、ＣＤ２８の天然リガンド（例えば、Ｂ７−１（ＣＤ８０）およびＢ７−２（ＣＤ８６）などのタンパク質のＢ７ファミリーのメンバー；ＣＤ２８分子を架橋することができる抗ＣＤ２８モノクローナル抗体またはその断片、例えば、モノクローナル抗体９．３、Ｂ−Ｔ３、ＸＲ−ＣＤ２８、ＫＯＬＴ−２、１５Ｅ８、２４８．２３．２、およびＥＸ５．３Ｄ１０が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４４７】
一実施形態において、一次刺激シグナルを提供する分子、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を通して刺激を提供する分子、および共刺激分子は、同じ表面に結合される。
【０４４８】
ある特定の実施形態において、刺激および共刺激シグナルを提供する結合剤は、細胞の表面上に局在化される。これは、細胞表面上でのその発現に好適な形態で、結合剤をコードする核酸を細胞にトランスフェクトまたは形質導入することにより、または代替として、結合剤を細胞表面に結合することにより達成され得る。
【０４４９】
別の実施形態において、一次刺激シグナルを提供する分子、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を通して刺激を提供する分子、および共刺激分子は、抗原提示細胞上に表示される。
【０４５０】
一実施形態において、一次刺激シグナルを提供する分子、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を通して刺激を提供する分子、および共刺激分子が、別個の表面上に提供される。
【０４５１】
ある特定の実施形態において、刺激および共刺激シグナルを提供する結合剤のうちの１つは、可溶性（溶液で提供される）であり、他の薬剤（複数可）が、１つ以上の表面上に提供される。
【０４５２】
特定の実施形態において、刺激および共刺激シグナルを提供する結合剤は、両方とも可溶形態で提供される（溶液で提供される）。
【０４５３】
種々の実施形態において、本明細書で企図されるＴ細胞を作製するための方法は、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体でＴ細胞を活性化することを含む。
【０４５４】
一実施形態において、本明細書で企図される方法によって活性化されたＴ細胞の増幅は、数時間（約３時間）〜約７日〜約２８日間、またはそれらの間の任意の時間単位の整数値の間、Ｔ細胞を含む細胞集団を培養することをさらに含む。別の実施形態において、Ｔ細胞組成物は、１４日間培養され得る。特定の実施形態において、Ｔ細胞は、約２１日間培養され得る。別の実施形態において、Ｔ細胞組成物は、約２〜３日間培養される。Ｔ細胞の培養時間が６０日以上であり得るように、数サイクルの刺激／活性化／増殖が望ましい場合もある。
【０４５５】
特定の実施形態において、Ｔ細胞培養に適切な条件は、適切な培地（例えば、最小必須培地、またはＲＰＭＩ  Ｍｅｄｉａ  １６４０、もしくはＸ−ｖｉｖｏ１５，（Ｌｏｎｚａ））、ならびに血清（例えば、ウシ胎仔またはヒト血清）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インスリン、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＧＦβ、およびＴＮＦ−α、または当業者に既知の細胞の成長に好適な任意の他の添加剤を含むが、これらに限定されない、増殖および生存能に必要な１つ以上の因子を含む。
【０４５６】
細胞培養培地のさらに例示的な例としては、ＲＰＭＩ１６４０、Ｃｌｉｃｋｓ、ＡＩＭ−Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、ａ−ＭＥＭ、Ｆ−１２、Ｘ−Ｖｉｖｏ１５、およびＸ−Ｖｉｖｏ２０、Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒが挙げられるが、これらに限定されるものではなく、これにアミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、およびビタミンが添加され、無血清、または適切な量の血清（もしくは血漿）もしくは定義されたホルモン一式、ならびに／またはＴ細胞の成長および増殖に十分な量のサイトカイン（複数可）を補充されるかのいずれかである。
【０４５７】
抗生物質、例えば、ペニシリンおよびストレプトマイシンは、実験培地にのみ含まれ、対象に注入される細胞の培養物には含まれない。標的細胞は、成長を支持するのに必要な条件下、例えば、適切な温度（例えば、３７℃）および雰囲気（例えば、空気＋５％Ｃ０２）下で維持される。
【０４５８】
特定の実施形態において、ＰＢＭＣまたは単離されたＴ細胞は、ＩＬ−２、ＩＬ−７、および／またはＩＬ−１５などの適切なサイトカインを含む培養培地において、一般にビーズまたは他の表面に結合される抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体などの刺激剤および共刺激剤と接触させられる。
【０４５９】
他の実施形態において、様々な共刺激分子およびサイトカインの安定した発現および分泌を指向するために、Ｋ５６２、Ｕ９３７、７２１．２２１、Ｔ２、およびＣ１Ｒ細胞を遺伝子操作することによって人工ＡＰＣ（ａＡＰＣ）。特定の実施形態において、Ｋ３２またはＵ３２  ａＡＰＣは、ＡＡＰＣ細胞表面上に１つ以上の抗体ベースの刺激分子の表示を指向するために使用される。Ｔ細胞集団は、ＣＤ１３７Ｌ（４−１ＢＢＬ）、ＣＤ１３４Ｌ（ＯＸ４０Ｌ）、および／またはＣＤ８０もしくはＣＤ８６が挙げられるが、これらに限定されない、様々な共刺激分子を発現するａＡＰＣによって増幅され得る。最後に、ａＡＰＣは、遺伝子修飾されたＴ細胞を増殖し、ＣＤ８Ｔ細胞上のＣＤ２８の発現を維持するために、効率的なプラットホームを提供する。ａＡＰＣは、ＷＯ０３／０５７１７１およびＵＳ２００３／０１４７８６９で提供され、参考としてその全体が本明細書に組み込まれる。
【０４６０】
特定の実施形態において、ＴＧＦβシグナルコンバーターおよび遺伝子操作された抗原受容体をコードするポリヌクレオチドは、Ｔ細胞集団内に導入される。特定の実施形態において、ＴＧＦβシグナルコンバーターをコードするポリヌクレオチドは、遺伝子操作された抗原受容体を発現するＴ細胞集団内に導入される。ポリヌクレオチドは、マイクロインジェクション、トランスフェクション、リポフェクション、熱ショック、エレクトロポレーション、形質導入、遺伝子銃、マイクロインジェクション、ＤＥＡＥデキストラン媒介移入などによってＴ細胞内に導入することができる。
【０４６１】
好ましい実施形態において、ポリヌクレオチドは、ウイルス形質導入によってＴ細胞内に導入される。
【０４６２】
ポリヌクレオチドを免疫エフェクター細胞またはＣＤ３４＋細胞に導入するのに好適なウイルスベクター系の例示的な例としては、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、遺伝子導入のためのワクシニアウイルスベクターが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４６３】
一実施形態において、ポリヌクレオチドは、ＡＡＶ形質導入によってＴ細胞内に導入される。
【０４６４】
一実施形態において、ポリヌクレオチドは、レトロウイルス形質導入によってＴ細胞内に導入される。
【０４６５】
一実施形態において、ポリヌクレオチドは、レンチウイルス形質導入によってＴ細胞内に導入される。
【０４６６】
一実施形態において、ポリヌクレオチドは、アデノウイルス形質導入によってＴ細胞内に導入される。
【０４６７】
一実施形態において、ポリヌクレオチドは、単純ヘルペスウイルス形質導入によってＴ細胞内に導入される。
【０４６８】
一実施形態において、ポリヌクレオチドは、ワクシニアウイルス形質導入によってＴ細胞内に導入される。
【０４６９】
Ｈ．組成物および製剤
本明細書で企図される組成物は、１つ以上のポリペプチド、ポリヌクレオチド、それを含むベクター、および遺伝子修飾された免疫エフェクター細胞を含むことができる。組成物としては、薬学的組成物が挙げられるが、これに限定されない。「薬学的組成物」は、単独でまたは療法の１つ以上の他のモダリティと組み合わせて、細胞または動物への投与のために、薬学的に許容されるまたは生理学的に許容される溶液中に製剤化される組成物を指す。必要に応じて、組成物が、例えば、サイトカイン、成長因子、ホルモン、小分子、化学療法薬、プロドラッグ、薬物、抗体、または他の種々の薬学的に活性な薬剤などの他の薬剤と組み合わせて投与することができることも理解されよう。組成物に含めることができる他の構成成分に対する限定は、追加の薬剤が、組成物の意図された療法を送達する能力に悪影響を及ぼさないのであれば、実質的に存在しない。
【０４７０】
「薬学的に許容される」という語句は、健全な医学的判断の範囲内において、過度の毒性、炎症、アレルギー反応、または妥当な利益／リスク比に釣り合った他の問題もしくは合併症などを伴うことなく、ヒトおよび動物の組織との接触での使用に好適である、これらに組成物、材料、組成物、および／または剤形を指すように本明細書で使用される。
【０４７１】
「薬学的に許容される担体」という用語は、希釈剤、補助剤、賦形剤、または、ビヒクルを指し、それらと共に、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、それを含むベクター、または遺伝子修飾された免疫エフェクター細胞を投与する。薬学的担体の例示的な例は、細胞培養培地、水および油（石油、動物、植物または合成起源の油を含む、例えば、ピーナツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油等）のような滅菌液体であり得る。食塩溶液、ならびに水性デキストロースおよびグリセロール溶液はまた、特に注射溶液用の液体担体として用いることができる。特定の実施形態で好適な薬学的賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセリン、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール等を含む。従来の任意の媒体および薬剤が活性成分と不適合である場合を除いて、治療組成物中でのその使用を企図している。補助的な活性成分もまた、組成物中に組み込むことができる。
【０４７２】
一実施形態において、薬学的に許容される担体を含む組成物は、対象に投与するのに適している。特定の実施形態において、担体を含む組成物は、非経口投与、例えば、血管内（静脈内または動脈内）、腹腔内または筋肉内投与、に適している。特定の実施形態において、薬学的に許容される担体を含む組成物は、脳室内、脊髄内、または髄腔内投与に適している。薬学的に許容される担体としては、滅菌水溶液、細胞培養培地、または分散剤を含む。薬学的に活性な物質へのそのような培地および薬剤の使用は、当該技術分野で周知である。従来の任意の媒体または薬剤が、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、それを含むベクター、または遺伝子修飾された免疫エフェクター細胞と適合しない場合を除いて、薬学的組成物中のそれらの使用が企図される。
【０４７３】
特定の実施形態において、本明細書で企図される組成物は、遺伝子修飾されたＴ細胞および薬学的に許容される担体を含む。本明細書で企図される、細胞ベースの組成物を含む組成物は、経腸投与方法もしくは非経口投与方法によって別々に、または所望の治療目的に影響を及ぼすように他の好適な化合物と組み合わせて投与することができる。
【０４７４】
薬学的に許容される担体は、処置されるヒト対象への投与に適したものとするために、十分に高い純度と十分に低い毒性のものでなければならない。それは、さらに、組成物の安定性を維持するか、または増加させるべきである。薬学的に許容される担体は、液体または固体であり、計画された投与法を考慮して、組成物の他の構成要素と組み合わせたときに、所望の嵩、一貫性等を提供するように選択される。例えば、薬学的に許容される担体は、限定されないが、結合剤（例えば、糊化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、またはヒドロキシプロピルメチルセルロース等）、充填剤（例えば、ラクトースおよび他の糖類、微結晶性セルロース、ペクチン、ゼラチン、硫酸カルシウム、エチルセルロース、ポリアクリレート、リン酸水素カルシウム等）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸、ステアリン酸金属塩、水素化植物油、トウモロコシデンプン、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム等）、崩壊剤（例えば、デンプン、デンプングリコール酸ナトリウム等）、または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム等）であり得る。本明細書で企図される組成物のために他の好適な薬学的に許容される担体としては、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等が挙げられるが、これに限定されない。
【０４７５】
そのような担体溶液はまた、緩衝液、希釈剤、および他の好適な添加剤を含むことができる。本明細書で使用される「緩衝液」という用語は、ｐＨの著しい変化なく、化学組成が酸または塩基を中和する、溶液または液体を指す。本明細書で企図される緩衝液の例としては、ダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、リンガー液、５％ブドウ糖液（Ｄ５Ｗ）、正常／生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４７６】
薬学的に許容される担体は、約７の組成物のｐＨを維持するのに十分な量で存在し得る。あるいは、組成物は、約６．８〜約７．４の範囲内、例えば、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、および７．４のｐＨを有する。さらに別に実施形態において、組成物は、約７．４のｐＨを有する。
【０４７７】
本明細書で企図される組成物は、非毒性の薬学的に許容される培地を含み得る。組成物は、懸濁液であり得る。本明細書で使用される「懸濁液」という用語は、細胞が、固体支持体に結合されない非接着性状態を指す。例えば、懸濁液として維持される細胞は、混合または撹拌でき、培養皿等の支持体に接着しない。
【０４７８】
特定の実施形態において、本明細書で企図される組成物は、懸濁液中に製剤化され、修飾Ｔ細胞は、許容される液体培地または溶液、例えば、静脈内（ＩＶ）バッグ等の生理食塩水または無血清培地内で分散される。許容される希釈剤としては、水、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ、リンガー溶液、等張塩化ナトリウム（生理食塩水）溶液、無血清細胞培養培地、および極低温保存に好適な培地、例えば、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ（登録商標）培地が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４７９】
ある特定の実施形態において、薬学的に許容される担体は、実質的には、ヒトまたは動物起源の天然タンパク質がなく、修飾Ｔ細胞の集団を含む組成物を保存するのに好適である。治療組成物は、ヒト患者へ投与されることが意図され、それ故に、実質的に、ウシ血清アルブミン、ウマ血清、およびウシ胎仔血清等の細胞培養構成要素がない。
【０４８０】
一実施形態において、組成物は、薬学的に許容される細胞培養培地で製剤化される。かかる組成物は、ヒト対象への投与のために好適である。特定の実施形態において、薬学的に許容される細胞培養培地は、無血清培地である。
【０４８１】
無血清培地は、簡易化およびより良好な定義された組成物、低減された度合いの汚染物質、感染剤の潜在源の除外、およびより低い費用を含む、血清含有培地にわたっていくらかの利点を有する。種々の実施形態において、無血清培地は、動物質を含まず、任意選択で、タンパク質を含み得ない。任意選択で、培地は、生物薬学的に許容される組換えタンパク質を含有し得る。「動物質を含まない」培地は、構成要素が非動物源に由来する培地を指す。組換えタンパク質は、動物質を含まない培地中の天然動物タンパク質に置き換え、栄養素は、合成、植物、または微生物源から得られる。対照的に、「タンパク質を含まない」培地は、タンパク質を実質的に含まないと定義される。
【０４８２】
特定の組成物中に使用された無血清培地の例示的な例としては、ＱＢＳＦ−６０（Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、Ｉｎｃ．）、ＳｔｅｍＰｒｏ−３４（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、およびＸ−ＶＩＶＯ  １０が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４８３】
好ましい実施形態において、修飾Ｔ細胞を含む組成物は、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ中で製剤される。
【０４８４】
種々の実施形態において、修飾Ｔ細胞を含む組成物は、凍結保存培地中で製剤化される。例えば、凍結保存剤を含む凍結保存培地は、解凍後に、高い細胞生存率の結果を維持するために使用され得る。特定の組成物中に使用された凍結保存培地の例示的な例としては、ＣｒｙｏＳｔｏｒ  ＣＳ１０、ＣｒｙｏＳｔｏｒ  ＣＳ５、およびＣｒｙｏＳｔｏｒ  ＣＳ２が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４８５】
一実施形態において、組成物は、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅＡとＣｒｙｏＳｔｏｒＣＳ１０を５０：５０で含む溶液中で製剤化される。
【０４８６】
特定の実施形態において、組成物は、マイコプラズマ、エンドトキシン、および微生物の汚染が実質的にない。内毒素について「実質的に含まない」とは、１日当たり体重１ｋｇ当たり５ＥＵの総内毒素、平均７０ｋｇのヒトについて細胞の全用量当たり３５０ＥＵである、生物製剤についてＦＤＡにより認可されているものより少ない、細胞の１用量当たりの内毒素が存在することを意味する。特定の実施形態において、本明細書で企図されるレトロウイルスベクターで形質導入した造血幹細胞または前駆細胞を含む組成物は、約０．５ＥＵ／ｍＬ〜約５．０ＥＵ／ｍＬ、または約０．５ＥＵ／ｍＬ、１．０ＥＵ／ｍＬ、１．５ＥＵ／ｍＬ、２．０ＥＵ／ｍＬ、２．５ＥＵ／ｍＬ、３．０ＥＵ／ｍＬ、３．５ＥＵ／ｍＬ、４．０ＥＵ／ｍＬ、４．５ＥＵ／ｍＬ、または５．０ＥＵ／ｍＬを含有する。
【０４８７】
特定の実施形態において、薬学的に許容される担体溶液の製剤は、本明細書に記載される特定の組成物を、例えば、腸内および非経口、例えば、血管内、静脈内、動脈内、骨内、および髄内への投与および製剤を含めた種々の治療レジメンにおいて使用するための好適な投薬および治療レジメンの開発と同様に当業者に周知である。本明細書で企図される特定の実施形態は、例えば、製薬技術分野で周知であるものなど他の製剤を含み、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，ｖｏｌｕｍｅ  Ｉ  ａｎｄ  ｖｏｌｕｍｅ  ＩＩ．２２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  ＬｏｙｄＶ．Ａｌｌｅｎ  Ｊｒ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ；２０１２に記載され、その全体が参照により本明細書に組み込まれることが当業者によって理解されるだろう。
【０４８８】
特定の実施形態において、組成物は、本明細書で企図される、ＣＴＢＲシグナルコンバーターを発現するＣＡＲ  Ｔ細胞を包む、ある量の免疫エフェクター細胞を含む。本明細書で使用されるとき、「量」という用語は、臨床結果を含む有益なまたは所望の予防結果または治療結果を達成するために、本明細書で企図されるＣＴＢＲシグナルコンバーター等を含む「有効量（ａｍｏｕｎｔ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ）」または「有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」の細胞を指す。
【０４８９】
「予防上有効量」とは、所望の予防的結果を達成するのに有効な、本明細書で企図されるＣＴＢＲシグナルコンバーターを含む細胞のある量を指す。必然的ではないが典型的には、疾患の前またはその早期に予防的用量が対象において使用されるため、予防上有効量は、治療上有効量よりも少ない。
【０４９０】
「治療上有効量」とは、対象（例えば、患者）を「治療」するのに有効である、本明細書で企図されるＣＴＢＲシグナルコンバーターを含む細胞のある量を指す。治療的量が指示されるとき、投与されるべき組成物の正確な量は、医師によって、患者（対象）の年齢、重量、腫瘍サイズ、感染または転移の程度、および病態における個体差を考慮して決定され得る。本明細書に記載の免疫エフェクター細胞を含む薬学的組成物は、１０２〜１０１０細胞／ｋｇ体重、好ましくは１０５〜１０６細胞／ｋｇ体重、これらの範囲内のすべての整数値を含む投与量で投与され得ることが一般的に説明され得る。細胞の数は、組成物の最終的な用途に依存するであろうし、それに含まれる細胞の型も同様であろう。本明細書に提供される使用については、細胞は、一般に、１リットル以下の体積であり、５００ｍＬ以下、さらに２５０ｍＬまたは１００ｍＬ以下であり得る。したがって、所望の細胞の密度は、典型的に、約１０６細胞／ｍＬより大きく、一般には、約１０７細胞／ｍＬより大きく、一般には、約１０８細胞／ｍＬまたはそれ以上である。臨床的に関連する数の免疫細胞を、複数回に分わけて注入することができ、これを累積すると、約１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、または１０１２細胞に等しいか、あるいはそれを上回る。いくつかの実施形態において、特に、注入された細胞のすべてが、特定の標的抗原に対してリダイレクトされるであろうとの理由から、１０６／キログラム（患者当たり１０６〜１０１１）の範囲のより少数の細胞が投与され得る。必要に応じて、治療はまた、免疫応答の誘導を増強する、本明細書に記載のマイトジェン（例えば、ＰＨＡ）またはリンホカイン、サイトカイン、および／またはケモカイン（例えば、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−１８、およびＴＮＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、Ｆｌｔ３−Ｌ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ１αなど）の投与も含んでよい。
【０４９１】
一般に、本明細書に記載される、活性化し、増大させた細胞を含む組成物を、免疫障害を持つ個体において生じる疾患の治療および予防において利用することができる。特に、本明細書で企図される組成物は、がんの治療において使用される。特定の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、単独で、あるいは、担体、希釈剤、賦形剤、および／またはＩＬ−２もしくは他のサイトカインもしくは細胞集団などの他の構成要素と組み合わせた薬学的組成物として投与することができる。
【０４９２】
特定の実施形態において、薬学的組成物は、１つ以上の薬学的にまたは生理学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて、ある量の遺伝子修飾されたＴ細胞を含む。
【０４９３】
特定の実施形態において、組成物は、単独で、または１つ以上の治療剤、例えば、放射線治療、化学療法、移植、免疫療法、ホルモン治療法、光治療等と組み合わせて、本明細書で企図されるＣＴＢＲシグナルコンバーターを含む有効量の免疫エフェクター細胞を含む。組成物はまた、抗生物質と組み合わせて投与され得る。かかる治療剤は特定のがんなどの本明細書に記載の特定の疾患状態に対する標準的な治療として当該技術分野で許容され得る。企図される例示的な治療剤には、サイトカイン、成長因子、ステロイド、ＮＳＡＩＤ、ＤＭＡＲＤ、抗炎症剤、化学療法剤、放射線療法剤、治療用抗体、または他の活性作用物質および補助的作用物質が挙げられる。
【０４９４】
ある特定の実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲシグナルコンバーターを含む免疫エフェクター細胞を含む組成物は、任意の数の化学療法剤と組み合わせて投与することができる。化学療法剤の例示的な例には、チオテパおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））などのアルキル化剤；アルキルスルホナート、例えば、ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ、およびウレドパ；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホラミド（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈａｏｒａｍｉｄｅ）およびトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含む、エチレンイミンおよびメチルメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅｓ）；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノブエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン；抗生物質、例えば、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗剤、例えば、メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリンアナログ、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジン、５−ＦＵ；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充剤、例えば、フォリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビスアントレン；エダトレキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デホファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エフロルニチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エ���プチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ、例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチロールニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸誘導体、例えば、Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（商標）（ベキサロテン）、Ｐａｎｒｅｔｉｎ（商標）（アリトレチノイン）；ＯＮＴＡＫ（商標）（デノロイキンディフティトックス）；エスペラマイシン；カペシタビン；および上記のいずれかの薬学的に許容され得る塩、酸または誘導体が挙げられる。この定義には、抗エストロゲンなどのがんに対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤も含まれ、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害性４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）、およびフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリドなどの抗アンドロゲン剤、およびゴセレリン、ならびに上記いずれかの薬学的に許容される塩、酸、または、誘導体が含まれる。
【０４９５】
様々な他の治療剤は、本明細書で企図される組成物と組み合わせて投与することができる。一実施形態において、本明細書で企図されるＣＴＢＲシグナルコンバーターを含む免疫エフェクター細胞を含む組成物は、抗炎症剤と共に投与される。抗炎症剤または薬物としては、ステロイドおよびグルココルチコイド（ベータメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンを含む）、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、メトトレキサート、スルファサラジン、レフルノミド、抗ＴＮＦ薬剤、シクロホスファミド、およびミコフェノーレートを含む非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４９６】
他の代表的なＮＳＡＩＤは、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、ＶＩＯＸＸ（登録商標）（ロフェコキシブ）およびＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）（セレコキシブ）などのＣｏｘ−２阻害剤、およびシアリレートからなる群から選択される。代表的な鎮痛剤は、アセトアミノフェン、オキシコドン、塩酸プロポキシフェンのトラマドールからなる群から選択される。代表的なグルココルチコイドは、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、またはプレドニゾンからなる群から選択される。代表的な生物学的反応修飾物質としては、細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ４、ＣＤ５など）に対する分子、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））およびインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））などのサイトカイン阻害剤、ケモカイン阻害剤、および接着分子阻害剤が挙げられる。生物学的反応修飾物質としては、モノクローナル抗体ならびに組換え型の分子が挙げられる。代表的なＤＭＡＲＤとしては、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキサート、ペニシラミン、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、Ｇｏｌｄ（経口用（オーラノフィン）および筋肉内）およびミノサイクリンが挙げられる。
【０４９７】
本明細書で企図されるＣＴＢＲシグナルコンバーターを含む修飾Ｔ細胞と組み合わせるのに好適な治療用抗体の例示的な例としては、バビツキシマブ、ベバシズマブ（アバスチン）、ビバツズマブ、ブリナツモマブ、コナツムマブ、ダラツムマブ、ドゥリゴツマブ、ダセツズマブ、ダロツズマブ、エロツズマブ（ＨｕＬｕｃ６３）、ゲムツズマブ、イブリツモマブ、インダツキシマブ、イノツズマブ、ロルボツズマブ、ルカツムマブ、ミラツズマブ、モキセツモマブ、オカラツズマブ、オファツムマブ、リツキシマブ、シルツキシマブ、テプロツムマブ、およびウブリツキシマブが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４９８】
ある特定の実施形態において、本明細書で企図される組成物は、サイトカインと組み合わせて投与される。本明細書で使用される「サイトカイン」とは、１つの細胞集団により放出され、細胞間メディエーターとして別の細胞に作用するタンパク質に対する一般的な用語を意味する。このようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、および従来のポリペプチドホルモンである。サイトカインには、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体形成ホルモン（ＬＨ）などの糖タンパク質ホルモン；肝臓増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子−アルファおよび腫瘍壊死因子−ベータ；ミュラー阻害物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−ベータなどの神経増殖因子；血小板増殖因子；ＴＧＦ−アルファおよびＴＧＦ−ベータなどの形質転換増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様増殖因子−Ｉおよびインスリン様増殖因子−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導性因子；インターフェロン−アルファ、インターフェロン−ベータ、およびインターフェロン−ガンマなどのインターフェロン；マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；ＩＬ−１、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５などのインターロイキン（ＩＬ）、ＴＮＦ−アルファまたはＴＮＦ−ベータなどの腫瘍壊死因子；ならびにＬＩＦおよびｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子が含まれる。本明細書で使用される、サイトカインという用語は、天然源または組換え細胞培養からのタンパク質、および天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。
【０４９９】
Ｉ．治療方法
本明細書で企図されるＣＴＢＲを含むＣＡＲ  Ｔ細胞を含む、免疫エフェクター細胞は、がんの予防、治療、および改善に使用するための、またはがんに関連する少なくとも１つの症状を予防、治療、もしくは改善するための、養子免疫療法の方法の向上を提供する。
【０５００】
遺伝子操作された受容体および本明細書で企図されるＣＴＢＲを含む免疫エフェクター細胞は、がん、ＧＶＨＤ、感染疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、または免疫不全症うちの少なくとも１つの症状の予防、治療、または改善にて使用する製剤の改善を提供する。本明細書で使用されるとき、「製剤」という用語は、本明細書で企図される組成物および方法を用いて産生された修飾された細胞を指す。特定の実施形態では、製剤は、遺伝子修飾された免疫エフェクター細胞、遺伝子操作された受容体を含むＴ細胞、またはＣＴＢＲシグナルコンバーターを発現するようにさらに修飾されたＣＡＲ  Ｔ細胞、を含む。さらに、特定の実施形態で企図される修飾Ｔ細胞は安全かつより効果的な養子細胞療法を提供する。なぜなら、修飾されたＴ細胞は、Ｔ細胞の消耗に対して抵抗性であり、持続的な治療をもたらすことができる腫瘍微小環境において耐久性および持続性を示すからである。
【０５０１】
特定の実施形態では、有効量の修飾された免疫エフェクター細胞、または遺伝子操作された受容体およびＣＴＢＲシグナルコンバーターを含むＴ細胞を対象に投与して、がん、ＧＶＨＤ、感染疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、または免疫不全症のうちの少なくとも１つの症状を予防、治療、または改善する。
【０５０２】
特定の実施形態において、がんの少なくとも１つの症状を予防、治療、および改善する方法は、有効量の修飾された免疫エフェクター細胞もしくはＣＴＢＲシグナルコンバーターおよび遺伝子操作されたＴＣＲ、ＣＡＲ、またはＤａｒｉｃを含むＴ細胞、または腫瘍もしくはがんに細胞をリダイレクトする他の治療用導入遺伝子、を対象に投与することを含む。遺伝子修飾された細胞は、より耐久性と持続性があるより製剤である。なぜなら、当該細胞は、免疫抑制ＴＧＦβシグナルを免疫刺激シグナルに変換するおかげで、腫瘍微小環境からの免疫抑制シグナルに対してより抵抗性であるからである。
【０５０３】
特定の実施形態において、本明細書で企図される修飾免疫エフェクター細胞は、固形腫瘍またはがんの治療で使用される。
【０５０４】
特定の実施形態において、本明細書で企図される修飾免疫エフェクター細胞は、副腎がん、副腎皮質がん、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳／ＣＮＳがん、乳がん、気管支腫瘍、心臓腫瘍、子宮頸がん、胆管がん、軟骨肉腫、脊索腫、結腸がん、結腸直腸がん、頭蓋咽頭腫、非浸潤性乳管がん（ＤＣＩＳ）子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、鼻腔神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、眼がん、卵管がん、線維性組織肉腫、線維肉腫、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、胚細胞腫瘍、神経膠腫、膠芽腫、頭頸部がん、血管芽細胞腫、肝細胞がん、下咽頭がん、眼内黒色腫、カポジ肉腫、腎臓がん、喉頭がん、平滑筋肉腫、口唇がん、脂肪肉腫、肝臓がん、肺がん、非小細胞肺がん、肺カルチノイド腫瘍、悪性中皮腫、髄様がん、髄芽細胞腫、髄膜腫、黒色腫、メルケル細胞がん、正中線管がん、口腔がん、粘液肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性腫瘍、鼻腔および副鼻腔がん、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、乏突起神経膠腫、口腔がん、口腔がん、口腔咽頭がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、膵島細胞腫瘍、乳頭がん、傍神経節腫、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、松果体腫、下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、原発性腹膜がん、前立腺がん、直腸がん、網膜芽細胞腫、腎細胞がん、腎盂および尿管がん、横紋筋肉腫、唾液腺がん、脂腺がん、皮膚がん、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞がん腫、小細胞肺がん、小腸がん、胃がん、汗腺がん、滑膜腫、精巣がん、咽喉がん、胸腺がん、甲状腺がん、尿道がん、子宮がん、子宮肉腫、膣がん、膣がん、外陰がん、およびウィルムス腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない、固形腫瘍またはがんの治療で使用される。
【０５０５】
特定の実施形態において、本明細書で企図される修飾免疫エフェクター細胞は、肝臓がん、膵臓がん、肺がん、乳がん、膀胱がん、脳がん、骨がん、甲状腺がん、腎臓がん、または皮膚がんが挙げられるが、これらに限定されない、固形腫瘍またはがんの治療で使用される。
【０５０６】
特定の実施形態において、本明細書で企図される修飾免疫エフェクター細胞は、膵臓、膀胱、および肺が挙げられるが、これらに限定されない、様々ながんの治療で使用される。
【０５０７】
特定の実施形態において、本明細書で企図される修飾免疫エフェクター細胞は、液性がんまたは血液がんの治療で使用される。
【０５０８】
特定の実施形態において、本明細書で企図される修飾免疫エフェクター細胞は、白血病、リンパ腫、および多発性骨髄腫が挙げられるが、これらに限定されない、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療で使用される。
【０５０９】
特定の実施形態において、本明細書で企図される修飾免疫エフェクター細胞は、白血病、リンパ腫、および多発性骨髄腫：急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、赤白血病、有毛細胞性白血病（ＨＣＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）および真性赤血球増加症、ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽細胞性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、菌状息肉腫、未分化大細胞リンパ腫、セザリー症候群、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫、多発性骨髄腫、顕性多発性骨髄腫、くすぶり型多発性骨髄腫、形質細胞性白血病、非分泌性骨髄腫、ＩｇＤ骨髄腫、骨硬化性骨髄腫、骨の孤立性形質細胞腫、および髄外性形質細胞腫が挙げられるが、これらに限定されない、液性がんの治療で使用される。
【０５１０】
本明細書で企図される方法で使用するための好ましい細胞は、自己移植／自家（「自己」）の細胞、好ましくは造血細胞、より好ましくはＴ細胞、およびより好ましくは免疫エフェクター細胞を含む。
【０５１１】
特定の実施形態において、本明細書で企図される治療有効量の修飾免疫エフェクター細胞またはそれを含む組成物を、単独でまたは１つ以上の治療剤と組み合わせてそれを必要とする患者に投与することを含む方法が、提供される。ある特定の実施形態において、本細胞は、がん、ＧＶＨＤ、感染疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、または免疫不全症を発症するリスクがある患者の治療に使用される。したがって、特定の実施形態は、本明細書で企図される治療有効量のゲノム編集された細胞を、それを必要とする対象に投与することを含む、がん、感染疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、または免疫不全症のうちの少なくとも１つの症状の治療または予防または改善を含む。
【０５１２】
一実施形態において、治療を必要とする対象におけるがん、ＧＶＨＤ、感染疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、または免疫不全症を治療する方法は、有効量、例えば、本明細書で企図される、治療上有効量の修飾免疫エフェクター細胞を含む組成物を投与することを含む。投与の量および頻度は、適切な投与量が臨床試験によって決定され得るが、患者の状態、ならびに患者の疾患の種類および重症度のような因子によって決定されよう。
【０５１３】
一例示的な実施形態において、対象に提供された有効量の修飾免疫エフェクターが、少なくとも２×１０６細胞／ｋｇ、少なくとも３×１０６細胞／ｋｇ、少なくとも４×１０６細胞／ｋｇ、少なくとも５×１０６細胞／ｋｇ、少なくとも６×１０６細胞／ｋｇ、少なくとも７×１０６細胞／ｋｇ、少なくとも８×１０６細胞／ｋｇ、約９×１０６細胞／ｋｇ、もしくは約１０×１０６細胞／ｋｇ、またはそれ以上の細胞／ｋｇであり、すべての介在する用量の細胞を含む。
【０５１４】
別の例示的な実施形態において、対象に提供された有効量の修飾免疫エフェクター細胞が、約２×１０６細胞／ｋｇ、約３×１０６細胞／ｋｇ、約４×１０６細胞／ｋｇ、約５×１０６細胞／ｋｇ、約６×１０６細胞／ｋｇ、約７×１０６細胞／ｋｇ、約８×１０６細胞／ｋｇ、約９×１０６細胞／ｋｇ、もしくは約１０×１０６細胞／ｋｇ、またはそれ以上の細胞／ｋｇであり、すべての介在する用量の細胞を含む。
【０５１５】
別の例示的な実施形態において、対象に提供された有効量の修飾免疫エフェクター細胞が、約２×１０６細胞／ｋｇ〜約１０×１０６細胞／ｋｇ、約３×１０６細胞／ｋｇ〜約１０×１０６細胞／ｋｇ、約４×１０６細胞／ｋｇ〜約１０×１０６細胞／ｋｇ、約５×１０６細胞／ｋｇ〜約１０×１０６細胞／ｋｇ、約２×１０６細胞／ｋｇ〜約６×１０６細胞／ｋｇ、約２×１０６細胞／ｋｇ〜約７×１０６細胞／ｋｇ、約２×１０６細胞／ｋｇ〜約８×１０６細胞／ｋｇ、約３×１０６細胞／ｋｇ〜約６×１０６細胞／ｋｇ、約３×１０６細胞／ｋｇ〜約７×１０６細胞／ｋｇ、約３×１０６細胞／ｋｇ〜約８×１０６細胞／ｋｇ、約４×１０６細胞／ｋｇ〜約６×１０６細胞／ｋｇ、約４×１０６細胞／ｋｇ〜約７×１０６細胞／ｋｇ、約４×１０６細胞／ｋｇ〜約８×１０６細胞／ｋｇ、約５×１０６細胞／ｋｇ〜約６×１０６細胞／ｋｇ、約５×１０６細胞／ｋｇ〜約７×１０６細胞／ｋｇ、約５×１０６細胞／ｋｇ〜約８×１０６細胞／ｋｇ、または約６×１０６細胞／ｋｇ〜約８×１０６細胞／ｋｇであり、すべての介在する用量の細胞を含む。
【０５１６】
当業者は、特定の実施形態で企図される組成物の複数回投与が所望の療法に影響を及ぼすために必要とされ得ることを認識するであろう。例えば、組成物は、１週間、２週間、３週間、１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、１年間、２年間、５年間、１０年間、またはそれ以上の間にわたって、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回またはそれ以上投与され得る。
【０５１７】
ある特定の実施形態において、活性化されたＴ細胞を対象に投与し、その後、再採血し（またはアフェレーシスを実施し）、その血液からＴ細胞を活性化し、患者にこれらの活性化し、増大させたＴ細胞を再注入することが望ましい場合がある。このプロセスは、数週間ごとに複数回行うことができる。ある特定の実施形態において、Ｔ細胞は、１０ｃｃ〜４００ｃｃの採血から活性化され得る。ある特定の実施形態において、Ｔ細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、１００ｃｃ、１５０ｃｃ、２００ｃｃ、２５０ｃｃ、３００ｃｃ、３５０ｃｃ、または４００ｃｃもしくはそれ以上採血から活性化される。理論に拘束されるものではないが、この複数の採血／複数の再注入プロトコルを使用することは、ある特定のＴ細胞の集団を選択するのに役立ち得る。
【０５１８】
一実施形態において、がんと診断された対象を治療する方法は、対象から免疫エフェクター細胞を取り出すことと、遺伝子操作された抗原受容体およびＴＧＦβシグナルコンバーターをコードする１つ以上のベクターを導入するによって免疫エフェクター細胞を修飾して、修飾された免疫エフェクター細胞の集団を産生することと、修飾された免疫エフェクター細胞の集団を同じ対象に投与することと、を含む。好ましい実施形態において、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞を含む。
【０５１９】
特定の実施形態で企図される細胞組成物を投与するための方法は、エクスビボで修飾免疫エフェクター細胞の再導入、または対象に導入されると、成熟免疫エフェクター細胞に分化する、免疫エフェクター細胞の修飾前駆体の再導入をもたらすために有効な任意の方法を含む。１つの方法は、遺伝子操作された抗原受容体およびＴＧＦβシグナルコンバーターをコードする１つ以上のベクターを導入することによって、エクスビボで末梢血Ｔ細胞を修飾すること、および形質導入された細胞を対象に戻すことを含む。
【０５２０】
本明細書において引用される刊行物、特許出願、および発行特許は全て、個々の刊行物、特許出願、または発行された特許のそれぞれが参照により組み込まれることが具体的にかつ個別に示されているかのように参照により本明細書に組み込まれる。
【０５２１】
前述の実施形態は、明瞭な理解のために図解および実施例により少し詳細に記載されているが、本明細書で企図される教示を考慮して、添付の特許請求の範囲の精神または範囲から逸脱することなく、それらに対してある特定の変化および改変を成すことができることが当業者には容易に明らかになろう。以下の実施例は、単に例示として提供され、限定としては提供されない。基本的に同様の結果を得るために変化または改変され得る種々の重大でないパラメータは当業者には容易に認識されよう。
【実施例】
【０５２２】
実施例１
Ｔ細胞を発現するＴＧＦβＩＬ−１２Ｒシグナルコンバーター（ＣＴＢＲ１２）およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
例示的なＴＧＦβＩＬ−１２Ｒ系のシグナルコンバーター構築物を図１に示されるように設計した。
【０５２３】
最適なＩＬ−１２受容体シグナル伝達は、ＩＬ−１２ライゲーション後、ＩＬ−１２Ｒβ１およびＩＬ−１２Ｒβ２サブユニットの細胞内ドメインの二量化によって開始される。ＴＧＦβに曝露後、ＴＧＦβシグナルをＩＬ−１２受容体シグナル伝達を誘発するように変換するために、ＴＧＦβ受容体１（ＴＧＦβＲ１）およびＴＧＦβ受容体２（ＴＧＦβＲ２）の細胞内ドメインをそれぞれＩＬ−１２Ｒβ１およびＩＬ−１２Ｒβ２シグナル伝達ドメインに置換した。ＩＬ−１２Ｒβ１およびＩＬ−１２Ｒβ２の膜貫通ドメインおよびシグナル伝達ドメインを、ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターにクローニングして、２Ａ自己切断型ポリペプチド配列によって分離した（ＣＡＲ．ＣＴＢＲ１２）。
【０５２４】
健常ドナーＰＢＭＣからの初代ヒトＴ細胞を可溶性抗ＣＤ３（１μｇ／ｍｌ）および抗ＣＤ２８（５μｇ／ｍｌ）で活性化し、ビヒクルまたは（ｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ、（ｉｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよび優性陰性ＴＧＦβ受容体（抗ＲＯＲ１．ＤＮＲ）、（ｉｉｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＴＧＦβＲ２サブユニット、もしくは（ｉｖ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ１２（抗ＲＯＲ１．ＣＴＢＲ１２）を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。ＩＬ−２含有増殖培地で１０日培養後、抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＴＧＦβＲ２を発現する細胞表面をフローサイトメトリーによって決定した。Ｒ−フィリコエリトリン（Ｒ−ＰＥ）に共役された組換えヒトＲＯＲ１タンパク質を使用して、抗ＲＯＲ１  ＣＡＲを発現するＴ細胞を特異的に染色した。ＴＧＦＢＲ２に対する市販の抗体を使用して、ＣＴＢＲ１２を検出した。代表的な発現データを図２に示す。
【０５２５】
抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ１２をコードするレンチウイルスベクターを形質導入したＴ細胞の５０％は、抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ１２（図２の右端のパネル）を共発現した。対照的に、未形質導入のＴ細胞では抗ＲＯＲ１  ＣＡＲもＣＴＢＲ１２もどちらも検出されず、ＴＧＦＢＲ２に対する抗体が内因性ＴＧＦＢＲ２を検出しなかったことを示している。
【０５２６】
実施例２
ＣＴＢＲ１２によって阻害された免疫抑制ＴＧＦβシグナル伝達
２ユニットのＴＧＦβＲ１および２ユニットのＴＧＦβＲ２を含有する四量体複合体に対するＴＧＦβ１ライゲーションは、ＳＭＡＤ２およびＳＭＡＤ３のリン酸化を誘導し、細胞核へ免疫抑制シグナルを伝搬する。切断型ＴＧＦβＲ２（優性陰性ＴＧＦβ受容体−ＤＮＲ）の過剰発現は、ＴＧＦβ処置に応答したＳＭＡＤ２／３リン酸化の喪失によって、Ｔ細胞をＴＧＦβに対して非感受性にする。したがって、リン酸化リン酸化ＳＭＡＤ２／３発現を使用して、ＴＧＦβシグナル伝達経路の活性化を調べた。
【０５２７】
健常ドナーＰＢＭＣ由来の初代ヒトＴ細胞を可溶性抗ＣＤ３（１μｇ／ｍＬ）および抗ＣＤ２８（５μｇ／ｍｌ）で活性化し、ビヒクルまたは（ｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ、（ｉｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよび優性陰性ＴＧＦβ受容体（抗ＲＯＲ１．ＤＮＲ）、（ｉｉｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＴＧＦβＲ２サブユニット、もしくは（ｉｖ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ１２（抗ＲＯＲ１．ＣＴＢＲ１２）を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。ＩＬ−２含有増殖培地で１０日培養後、培養物を１０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＧＦβ１で２０分間処理した。ＳＭＡＤ２／３のリン酸化をリン酸化したＳＭＡＤ２／３に特異的な抗体で評価した。ＣＴＢＲ１２またはＤＮＲのいずれかを発現するＴ細胞をＳＭＡＤ２／３のリン酸化から完全に保護した（図３）。これらのデータは、ＣＴＢＲ１２の発現が、抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ  Ｔ細胞をＴＧＦβ免疫抑制シグナル伝達に対して非感受性にすることを示した。
【０５２８】
実施例３
ＴＧＦβ１に曝露するとＣＴＢＲ１２はＩＬ−１２Ｒシグナル伝達を伝達する。
ＩＬ−１２に対する細胞応答は、受容体の二量化ならびにＳＴＡＴ４およびＳＴＡＴ５のリン酸化によって開始される。したがって、リン酸化ＳＴＡＴ４およびリン酸化ＳＴＡＴ５の発現を使用して、ＩＬ−１２受容体シグナル伝達経路の活性化を評価した。
【０５２９】
健常ドナーＰＢＭＣ由来の初代ヒトＴ細胞を可溶性抗ＣＤ３（１μｇ／ｍｌ）および抗ＣＤ２８（５μｇ／ｍｌ）で活性化し、ビヒクルまたは（ｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ、（ｉｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよび優性陰性ＴＧＦβ受容体（抗ＲＯＲ１．ＤＮＲ）、（ｉｉｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＴＧＦβＲ２サブユニット、もしくは（ｉｖ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ１２（抗ＲＯＲ１．ＣＴＢＲ１２）を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。ＩＬ−２含有増殖培地で１０日培養後、培養物を５０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ−１２でまたは１０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＧＦβ１で２０分間処理した。
【０５３０】
抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ細胞を発現するＴ細胞はリン酸化ＳＴＡＴ４のレベル増加を示した（図４、上段、未形質導入対照（ＵＴＤ）と右端４パネルを比較のこと）。ＣＴＢＲ１２を発現するＣＡＲ  Ｔ細胞のみが、組換えヒトＴＧＦβ１で処置された場合、リン酸化ＳＴＡＴ４発現の検出可能なレベルを示した（図４、下段、右端のパネルを他のパネルと比較のこと）。対照的に、シグナルコンバーターのＴＧＦβＲ２部分のみを発現するＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＴＧＦβ処置に応答してＳＴＡＴ４をリン酸化しなかった（図４、下段、右から４番目のパネル）。
【０５３１】
ＣＴＢＲ１２を発現するＣＡＲ  Ｔ細胞はまた、ＩＬ−１２またはＴＧＦβ１のいずれかで処置された場合にリン酸化ＳＴＡＴ５の検出可能なレベルを示し、変換されたＴＧＦβシグナルが内因性ＩＬ−１２受容体シグナル伝達を誘発することを確認した（図５）。
【０５３２】
抗ＲＯＲ１．ＣＴＢＲ１２を発現するＣＡＲ  Ｔ細胞の遺伝子発現を、ＴＧＦβ１の存在下または不存在下にて、抗原駆動の連続増殖アッセイで測定した。簡潔に説明すると、ヒトＲＯＲ１抗原を発現する、ＧＦＰ標識されたＫ５６２標的細胞を使用して、組換えヒトＴＧＦβ１の存在下または不存在下にて、ＣＡＲ  Ｔ細胞を連続的に増殖した。５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＧＦβ１の存在下または不存在下にて、ＣＡＲ  Ｔ細胞を、７日おきに１：１の比で標的細胞で刺激した。Ｔ細胞を播種し、最初の刺激２１日後に、遺伝子発現解析のためのｍＲＮＡを分離した。Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇ免疫プロファイリングパネルを使用して遺伝子発現解析を実施した。ＴＧＦβ１処置によって駆動した有意な遺伝子発現の変化を抗ＲＯＲ１．ＣＴＢＲ１２発現細胞内に同定し（図６、左パネル）、既知のＩＬ−１２Ｒ調節された転写産物、ＩＦＮＧ、ＳＥＬＬ、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＩＬ１８Ｒ１、およびＩＬ２１Ｒのアップレギュレーションを包含する（図６、右パネル）。
【０５３３】
実施例４
ＣＴＢＲ１２を発現するＣＡＲ  Ｔ細胞は、抗原およびＴＧＦβ１に曝露するとＩＦＮγの増加を分泌する。
ヒトＴ細胞におけるＩＬ−１２受容体シグナル伝達は、ＴＨ１の分化を促進し、エフェクター機能増大させる。ＩＬ−１２受容体シグナル伝達は、ＴＣＲシグナルと協力して、抗原刺激に応答したＩＦＮγの放出を増大させることができる。
【０５３４】
組換えヒトＴＧＦβ１の存在下で、ＴＣＲまたはＣＡＲのいずれかを介してＴ細胞を刺激した場合、Ｒ２／Ｒ１シグナルコンバーターは、ＩＦＮγ産生を増幅させる。健常ドナーＰＢＭＣ由来の初代ヒトＴ細胞を可溶性抗ＣＤ３（１μｇ／ｍｌ）および抗ＣＤ２８（５μｇ／ｍｌ）で活性化し、ビヒクルまたは（ｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ、（ｉｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよび優性陰性ＴＧＦβ受容体（抗ＲＯＲ１．ＤＮＲ）、もしくは（ｉｉｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ１２（抗ＲＯＲ１．ＣＴＢＲ１２）を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。ＩＬ−２含有増殖培地で１０日培養後、５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＧＦβ１の存在下または不存在下にて、細胞をプレート結合抗ＣＤ３抗体（１μｇ／ｍｌ）または組換えヒトＲＯＲ１タンパク質（１００ｎｇ／ｍＬ）のいずれかに播種した。播種後４８時間で、上清を回収し、可溶性サイトカイン含有量について、Ｌｕｍｉｎｅｘで分析した。
【０５３５】
組換えヒトＴＧＦβ１の存在下で、ＴＣＲまたはＣＡＲのいずれかを介して刺激した場合、ＣＴＢＲ１２発現細胞は他方の細胞型より有意に大量のＩＦＮγを産生した（図７）。
【０５３６】
実施例５
ＣＴＢＲ１２を発現するＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＴＧＦβ１免疫抑制シグナルに対して抵抗性である。
ＴＧＦβシグナル伝達は、抗原刺激に応答したＴ細胞増殖を減少させる。対照的に、ＩＬ−１２シグナル伝達は、Ｔ細胞増殖を増大させ、長期の抗原曝露から生じるＴ細胞の機能不全を低減する。
【０５３７】
健常ドナーＰＢＭＣ由来の初代ヒトＴ細胞を可溶性抗ＣＤ３（１μｇ／ｍｌ）および抗ＣＤ２８（５μｇ／ｍｌ）で活性化し、ビヒクルまたは（ｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ、（ｉｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよび優性陰性ＴＧＦβ受容体（抗ＲＯＲ１．ＤＮＲ）、もしくは（ｉｉｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ１２（抗ＲＯＲ１．ＣＴＢＲ１２）を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。ＩＬ−２含有増殖培地で１０日培養後、細胞はインビトロ連続再刺激アッセイを受けた。
【０５３８】
簡潔に説明すると、ヒトＲＯＲ１抗原を発現する、ＧＦＰ標識されたＫ５６２標的細胞を使用して、組換えヒトＴＧＦβ１の存在下または不存在下にて、ＣＡＲ  Ｔ細胞を連続的に増殖した。５ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＴＧＦβ１の存在下または不存在下にて、ＣＡＲＴ細胞を７日おきに１：１の比で標的細胞で刺激した対照抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、アッセイの過程で、５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＧＦβ１の存在下で、最小の増殖を示した。対照的に、ＴＧＦβ  ＤＮＲまたはＣＴＢＲ１２のいずれかを共発現する抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ  Ｔ細胞を、免疫抑制ＴＧＦβ１媒介性シグナル伝達から有意に保護した。図８これらの結果は、ＳＭＡＤのリン酸化を遮断するＤＮＲおよびＣＴＢＲ１２両方の能力と相関する（図８）。
【０５３９】
実施例６
ＴＧＦβ−ＩＬ−７ＲシグナルコンバーターＲ２／Ｒ１（ＣＴＢＲ７）およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞
例示的なＴＧＦβＩＬ−７Ｒ系のシグナルコンバーター（ＣＴＢＲ７）構築物を図１に示されるように設計した。
【０５４０】
最適なＩＬ−７受容体シグナル伝達は、ＩＬ−７ライゲーション後のＩＬ−７Ｒαおよび共通γ鎖（γｃ、ＩＬ−２Ｒγ）の細胞内ドメインの二量化によって開始される。ＴＧＦβに曝露後、ＴＧＦβシグナルをＩＬ−７受容体シグナル伝達を誘発するように変換するために、ＴＧＦβ受容体１（ＴＧＦβＲ１）およびＴＧＦβ受容体２（ＴＧＦβＲ２）の細胞内ドメインをそれぞれＩＬ−２ＲγおよびＩＬ−７Ｒαシグナル伝達ドメインに置換し、ＩＬ−７シグナル伝達キメラＴＧＦβ受容体（ＣＴＢＲ７）産生した。ＩＬ−２ＲγおよびＩＬ−７Ｒαの膜貫通ドメインおよびシグナル伝達ドメインを、ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターにクローニングして、２Ａ自己切断型ポリペプチド配列によって分離した（ＣＡＲ．ＣＴＢＲ７）。
【０５４１】
健常ドナーＰＢＭＣ由来の初代ヒトＴ細胞を可溶性抗ＣＤ３（１μｇ／ｍｌ）および抗ＣＤ２８（５μｇ／ｍｌ）で活性化し、ビヒクルまたは（ｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ、（ｉｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよび優性陰性ＴＧＦβ受容体（抗ＲＯＲ１．ＤＮＲ）、（ｉｉｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ７（抗ＲＯＲ１．ＣＴＢＲ７）を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。ＩＬ−２含有増殖培地で１０日培養後、抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＴＧＦβＲ２を発現する細胞表面をフローサイトメトリーによって決定した。Ｒ−フィリコエリトリン（Ｒ−ＰＥ）に共役された組換えヒトＲＯＲ１タンパク質を使用して、抗ＲＯＲ１  ＣＡＲを発現するＴ細胞を特異的に染色した。ＴＧＦＢＲ２に対する市販の抗体を使用して、ＣＴＢＲ７を検出した。代表的な発現データを図９に示す。
【０５４２】
抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ７をコードするレンチウイルスベクターを形質導入したＴ細胞の４０％は、抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ７（図９の右端のパネル）を共発現した。対照的に、未形質導入のＴ細胞では抗ＲＯＲ１  ＣＡＲもＣＴＢＲ７もどちらも検出されず、ＴＧＦＢＲ２に対する抗体が内因性ＴＧＦＢＲ２を検出しなかったことを示している。
【０５４３】
実施例７
ＣＴＢＲ７によって阻害された免疫抑制ＴＧＦβシグナル伝達
２ユニットのＴＧＦβＲ１および２ユニットのＴＧＦβＲ２を含有する四量体複合体に対するＴＧＦβ１ライゲーションは、ＳＭＡＤ２およびＳＭＡＤ３のリン酸化を誘導し、細胞核へ免疫抑制シグナルを伝搬する。切断型ＴＧＦβＲ２（優性陰性ＴＧＦβ受容体−ＤＮＲ）の過剰発現は、ＴＧＦβ処置に応答したＳＭＡＤ２／３リン酸化の喪失によって、Ｔ細胞をＴＧＦβに対して非感受性にする。したがって、リン酸化リン酸化ＳＭＡＤ２／３発現を使用して、ＴＧＦβシグナル伝達経路の活性化を調べた。
【０５４４】
健常ドナーＰＢＭＣ由来の初代ヒトＴ細胞を可溶性抗ＣＤ３（１μｇ／ｍｌ）および抗ＣＤ２８（５μｇ／ｍｌ）で活性化し、ビヒクルまたは（ｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ、（ｉｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよび優性陰性ＴＧＦβ受容体（抗ＲＯＲ１．ＤＮＲ）、（ｉｉｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ７（抗ＲＯＲ１．ＣＴＢＲ７）を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。ＩＬ−２含有増殖培地で１０日培養後、培養物を１０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＧＦβ１で２０分間処理した。ＳＭＡＤ２／３のリン酸化をリン酸化したＳＭＡＤ２／３に特異的な抗体で評価した。ＣＴＢＲ７またはＤＮＲのいずれかを発現するＴ細胞をＳＭＡＤ２／３のリン酸化から保護した（図１０）。これらのデータは、ＣＴＢＲ７の発現が、抗ＲＯＲ１  ＣＡＲＴ細胞をＴＧＦβ免疫抑制シグナル伝達に対して非感受性にすることを示した。
【０５４５】
実施例８
ＴＧＦβ１に曝露するとＣＴＢＲ７はＩＬ−７Ｒシグナル伝達を伝達する。
ＩＬ−７に対する細胞応答は、受容体の二量化およびＳＴＡＴ５のリン酸化によって開始される。したがって、リン酸化ＳＴＡＴ５の発現を使用して、ＣＴＢＲ７を発現するＴ細胞について、ＩＬ−７受容体シグナル伝達経路の活性化を評価した。
【０５４６】
健常ドナーＰＢＭＣ由来の初代ヒトＴ細胞を可溶性抗ＣＤ３（１μｇ／ｍｌ）および抗ＣＤ２８（５μｇ／ｍｌ）で活性化し、ビヒクルまたは（ｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ、（ｉｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよび優性陰性ＴＧＦβ受容体（抗ＲＯＲ１．ＤＮＲ）、（ｉｉｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ７（抗ＲＯＲ１．ＣＴＢＲ７）を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。ＩＬ−２含有増殖培地で１０日培養後、培養物を１０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＧＦβ１で２０分間処理した。ＣＴＢＲ７を発現するＣＡＲ  Ｔ細胞のみが、組換えヒトＴＧＦβ１で処置された場合に、検出可能なレベルのリン酸化ＳＴＡＴ５発現を示した（図１１、右端のパネルを他のパネルと比較のこと）。
【０５４７】
さらに変化されたＩＬ−７Ｒシグナル伝達を調べるために、連続的なＴＧＦβ１曝露に応答してＢｃｌ−２タンパク質発現をアップレギュレートするＣＴＢＲ７発現細胞の能力を決定した。対照ＣＡＲ  Ｔ細胞またはＤＮＲ（抗ＲＯＲ１．ＤＮＲ）またはＣＴＢＲ７（抗ＲＯＲ１．ＣＴＢＲ７）のいずれかを共発現するＣＡＲ  Ｔ細胞は、外因性サイトカイン支持の不在下で、およびＴＧＦβ１の存在下または不存在下のいずれかで、抗原駆動の連続増殖アッセイを受けた。簡潔に説明すると、ヒトＲＯＲ１抗原を発現する、ＧＦＰ標識されたＫ５６２標的細胞を使用して、組換えヒトＴＧＦβ１の存在下または不存在下にて、ＣＡＲ  Ｔ細胞を連続的に増殖した。５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＧＦβ１の存在下または不存在下にて、ＣＡＲ  Ｔ細胞を、７日おきに１：１の比で標的細胞で刺激した。第２の刺激の６日後、Ｂｃｌ−２タンパク質発現について、抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ、抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ．ＤＮＲ、または抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ．ＣＴＢＲ７Ｔ細胞をフローサイトメトリーで調べた。ＣＴＢＲ７を発現するＣＡＲ  Ｔ細胞のみが、ＴＧＦβ１の存在下で増殖された場合に、Ｂｃｌ−２タンパク質発現レベルの増加を示した（図１２）。
【０５４８】
実施例９
ＣＴＢＲ７を共発現するＣＡＲ  Ｔ細胞は、外因性ＩＬ−２の非存在下およびＴＧＦβ１の存在下で、持続性のエフェクター活性を示す。
ＴＧＦβシグナル伝達は、抗原刺激に応答したＴ細胞増殖を減少させる。対照的に、ＩＬ−７シグナル伝達は、Ｔ細胞の増殖および生存、特にメモリＴ細胞集団について明らかな活性を誘導することができる。ＣＴＢＲ７シグナル伝達が、ＴＧＦβ１の存在下で、ＣＡＲ  Ｔ細胞エフェクター活性を増加させることができるかどうかを評価するために、外因性ＩＬ−２サイトカイン支持が提供されない場合に、連続再刺激アッセイにおいて、対照ＣＡＲ  Ｔ細胞およびＣＡＲ．ＤＮＲＴ細胞に対するＣＡＲ．ＣＴＢＲ７増殖および抗腫瘍活性を比較した。
【０５４９】
健常ドナーＰＢＭＣ由来の初代ヒトＴ細胞を可溶性抗ＣＤ３（１μｇ／ｍｌ）および抗ＣＤ２８（５μｇ／ｍｌ）で活性化し、ビヒクルまたは（ｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ、（ｉｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよび優性陰性ＴＧＦβ受容体（抗ＲＯＲ１．ＤＮＲ）、もしくは（ｉｉｉ）抗ＲＯＲ１  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ７（抗ＲＯＲ１．ＣＴＢＲ７）を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。ＩＬ−２含有増殖培地で１０日培養後、外因性ＩＬ−２サイトカイン支持の不在下で、細胞はインビトロ連続再刺激アッセイを受けた。
【０５５０】
簡潔に説明すると、ヒトＲＯＲ１抗原を発現する、ＧＦＰ標識されたＫ５６２標的細胞を使用して、組換えヒトＴＧＦβ１の存在下または不存在下にて、ＣＡＲ  Ｔ細胞を連続的に増殖した。５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＧＦβ１の存在下または不存在下にて、ＣＡＲ  Ｔ細胞を、７日おきに１：１の比で標的細胞で刺激した。外因性ＩＬ−２はこのアッセイの支持に使用されない。対照抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、アッセイの過程で、５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＧＦβ１の存在下で、最小の増殖を示した。ＤＮＲを共発現するＣＡＲ  Ｔ細胞はまた、ＴＧＦβ１の存在下で増殖させた場合、増殖の低下を示した。対照的に、ＣＴＢＲ７を共発現する抗ＲＯＲ１  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＴＧＦβ１の不在下で増殖した同一細胞と比較して、増殖の増強を示した（図１３）。これらのデータは、活性ＣＴＢＲ７シグナル伝達がＣＡＲ単独と比較してＴ細胞増殖を増加させることを示した。
【０５５１】
ＣＴＢＲ７を共発現するＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＩＬ−２支持を伴うことなく上述の連続再刺激アッセイで培養物から腫瘍細胞を除去する。２度目の刺激の後、ＣＴＢＲ７を共発現しＴＧＦβ１で処置したＣＡＲ  Ｔ細胞のみが、腫瘍集団を除去する（培養物内に残存するＧＦＰ陽性腫瘍細胞の存在によってモニターされる）（図１３）。これらのデータは、ＣＡＲシグナル伝達単独では十分ではない条件下で、ＣＴＢＲ７シグナル伝達がエフェクター機能を支持するのに十分であることを示した。
【０５５２】
実施例１０
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびＣＴＢＲ１２またはＣＴＢＲ７を発現するＴ細胞
例示的なＴＧＦβＩＬ−１２ＲまたはＴＧＦβＩＬ−７Ｒのシグナルコンバーター構築物を図１に示されるように設計した。
【０５５３】
ＩＬ−１２Ｒβ１およびＩＬ−１２Ｒβ２の膜貫通ドメインおよびシグナル伝達ドメインを抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターにクローニングして、２Ａ自己切断型ポリペプチド配列によって分離した（抗ＥＧＦＲ．ＣＴＢＲ１２）。
【０５５４】
ＩＬ−２ＲγおよびＩＬ−７Ｒαの膜貫通ドメインおよびシグナル伝達ドメインを抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターにクローニングして、２Ａ自己切断型ポリペプチド配列によって分離した（抗ＥＧＦＲ．ＣＴＢＲ７）。
【０５５５】
健常ドナーＰＢＭＣ由来の初代ヒトＴ細胞を可溶性ＣＤ３（１μｇ／ｍｌ）およびＣＤ２８（５μｇ／ｍｌ）で活性化し、ビヒクルまたは（ｉ）抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ、（ｉｉ）抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲおよび優性陰性ＴＧＦβ受容体（抗ＥＧＦＲ．ＤＮＲ）、（ｉｉｉ）抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ１２（抗ＥＦＧＲ．ＣＴＢＲ１２）、および（ｉｖ）抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ７（抗ＥＦＧＲ．ＣＴＢＲ７）を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。ＩＬ−２含有増殖培地で１０日培養後、抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲおよびＴＧＦβＲ２を発現する細胞表面をフローサイトメトリーによって決定した。代表的な発現データを図１５（上段パネル）に示す。
【０５５６】
実施例１１
抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ１２または抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ７を発現するＴ細胞によって阻害された免疫抑制ＴＧＦβシグナル伝達
健常ドナーＰＢＭＣ由来の初代ヒトＴ細胞を可溶性ＣＤ３（１μｇ／ｍｌ）およびＣＤ２８（５μｇ／ｍｌ）で活性化し、ビヒクルまたは（ｉ）抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ、（ｉｉ）抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲおよび優性陰性ＴＧＦβ受容体（抗ＥＧＦＲ．ＤＮＲ）、（ｉｉｉ）抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ１２（抗ＥＦＧＲ．ＣＴＢＲ１２）、および（ｉｖ）抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ７（抗ＥＦＧＲ．ＣＴＢＲ７）を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。ＩＬ−２含有増殖培地で１０日培養後、培養物を１０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＧＦβ１で２０分間処理した。ＳＭＡＤ２／３のリン酸化をリン酸化したＳＭＡＤ２／３に特異的な抗体で評価した。ＤＮＲ、ＣＴＢＲ１２またはＣＴＢＲ７を発現するＴ細胞をＳＭＡＤ２／３のリン酸化から完全に保護した（図１５、下段パネル）。これらのデータは、ＣＴＢＲ１２またはＣＴＢＲ７のいずれかの発現が、抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞をＴＧＦβ免疫抑制シグナル伝達に対して非感受性にすることを示した。
【０５５７】
実施例１２
ＣＴＢＲはＴＧＦβ１に曝露するとＩＬ−Ｒシグナル伝達を伝達する
ＩＬ−１２に対する細胞応答は、受容体の二量化ならびにＳＴＡＴ４およびＳＴＡＴ５のリン酸化によって開始される。リン酸化ＳＴＡＴ４の発現を使用して、抗ＥＧＦＲ．ＣＴＢＲ１２を発現するＴ細胞についてＩＬ−１２受容体シグナル伝達経路の活性化を評価した。
【０５５８】
ＩＬ−７に対する細胞応答は、受容体の二量化およびＳＴＡＴ５のリン酸化によって開始される。したがって、リン酸化ＳＴＡＴ５の発現を使用して、抗ＥＧＦＲ．ＣＴＢＲ７を発現するＴ細胞について、ＩＬ−７受容体シグナル伝達経路の活性化を評価した。
【０５５９】
健常ドナーＰＢＭＣ由来の初代ヒトＴ細胞を可溶性ＣＤ３（１μｇ／ｍｌ）およびＣＤ２８（５μｇ／ｍｌ）で活性化し、ビヒクルまたは（ｉ）抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ、（ｉｉ）抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ１２（抗ＥＦＧＲ．ＣＴＢＲ１２）、および（ｉｉｉ）抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ７（抗ＥＦＧＲ．ＣＴＢＲ７）を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。ＩＬ−２含有増殖培地で１０日培養後、Ｔ細胞培養物を組換えヒトＩＬ−１２または組換えヒトＴＧＦβ１で２０分間（図１６）または組換えヒトＩＬ−７または組換えヒトＴＧＦβ１で２０分間（図１７）処理した。
【０５６０】
抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲまたは抗ＥＧＦＲ．ＣＴＢＲ１２を発現するＴ細胞は、ＩＬ−１２の存在下でリン酸化されたＳＴＡＴ４のレベルの増加を示し（図１６、左パネル）、抗ＥＧＦＲ．ＣＴＢＲ１２を発現するＴ細胞のみが、ＴＧＦβ１の存在下でリン酸化されたＳＴＡＴ４のレベルの増加を示す（図１６、右下パネル）。
【０５６１】
抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲまたは抗ＥＧＦＲ．ＣＴＢＲ７を発現するＴ細胞は、ＩＬ−７の存在下でリン酸化されたＳＴＡＴ５のレベルの増加を示し（図１７、左パネル）、抗ＥＧＦＲ．ＣＴＢＲ７を発現するＴ細胞のみが、ＴＧＦβ１の存在下でリン酸化されたＳＴＡＴ４のレベルの増加を示す（図１７、右下パネル）。
【０５６２】
実施例１３
ＣＴＢＲ１２を発現するＣＡＲ  Ｔ細胞は、抗原およびＴＧＦβ１に曝露するとＩＦＮγの増加を分泌する。
健常ドナーＰＢＭＣ由来の初代ヒトＴ細胞を可溶性ＣＤ３（１μｇ／ｍｌ）およびＣＤ２８（５μｇ／ｍｌ）で活性化し、ビヒクルまたは（ｉ）抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ、（ｉｉ）抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲおよび優性陰性ＴＧＦβ受容体（抗ＥＧＦＲ．ＤＮＲ）、もしくは（ｉｉｉ）抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ１２（抗ＥＦＧＲ．ＣＴＢＲ１２）を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。ＩＬ−２含有増殖培地で１０日培養後、ＣＡＲおよびＣＴＢＲを発現するＴ細胞を、５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＧＦβ１の存在下または不存在下ののいずれかで、ジャーカット細胞（ＥＧＦＲ（−））、Ａ５４９細胞（ＥＧＦＲ（＋））、またはＨＴ１０８０細胞（ＥＧＦＲ（＋））と共に４８時間培養した。上清を回収し、可溶性サイトカイン含有量について、Ｌｕｍｉｎｅｘで分析した。
【０５６３】
組換えヒトＴＧＦβ１の存在下で、ＥＧＦＲ（−）細胞株と比較してＥＧＦＲ（＋）細胞株と共に培養した場合に、ＣＴＢＲ１２発現細胞は、より有意に大量のＩＦＮγを産生した（図１８）。
【０５６４】
実施例１４
ＣＴＢＲを共発現する抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、外因性ＩＬ−２の非存在下およびＴＧＦβ１の存在下で、持続性のエフェクター活性を示す。
健常ドナーＰＢＭＣ由来の初代ヒトＴ細胞を可溶性ＣＤ３（１μｇ／ｍｌ）およびＣＤ２８（５μｇ／ｍｌ）で活性化し、ビヒクルまたは（ｉ）抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ、（ｉｉ）抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲおよび優性陰性ＴＧＦβ受容体（抗ＥＧＦＲ．ＤＮＲ）、（ｉｉｉ）抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ１２（抗ＥＦＧＲ．ＣＴＢＲ１２）、および（ｉｖ）抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲおよびＣＴＢＲ７（抗ＥＦＧＲ．ＣＴＢＲ７）を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。ＩＬ−２含有増殖培地で１０日培養後、外因性ＩＬ−２サイトカイン支持の不在下で、細胞はインビトロ連続再刺激アッセイを受けた。
【０５６５】
簡潔に説明すると、ヒトＥＧＦＲ抗原を発現する、ＧＦＰ標識された標的細胞を使用して、組換えヒトＴＧＦβ１の存在下または不存在下にて、ＣＡＲ  Ｔ細胞を連続的に増殖させた。５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＧＦβ１の存在下または不存在下にて、ＣＡＲ  Ｔ細胞を、７日おきに１：１の比で標的細胞で刺激した。外因性ＩＬ−２はこのアッセイの支持に使用されない。対照抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、第１の刺激を介して５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＧＦβ１の存在下で、最小の増殖を示し、さらなる培養は行わなかった。ＤＮＲを共発現するＣＡＲ  Ｔ細胞はまた、ＴＧＦβ１の存在下で増殖させた場合、増殖の低下を示した。対照的に、ＣＴＢＲ１２またはＣＴＢＲ７を共発現する抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＴＧＦβ１の不在下で増殖した同一細胞と比較して、増殖の増強を示した（図１９）。これらのデータが、活性ＣＴＢＲ１２またはＣＴＢＲ７シグナル伝達が、ＣＡＲ単独と比較してＴ細胞増殖を増加させたことを示した。
【０５６６】
実施例１５
ＣＴＢＲを共発現するＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲＴ細胞は、外因性ＩＬ−２の非存在下およびＴＧＦβ１の存在下で、持続性のエフェクター活性を示す。
例示的なＴＣＲ系のＴＧＦβＩＬ−１２ＲおよびＴＧＦβＩＬ−Ｒシグナルコンバーター構築物を図２０に示されるように設計した。
【０５６７】
ＩＬ−１２Ｒβ１およびＩＬ−１２Ｒβ２の膜貫通ドメインおよびシグナル伝達ドメインを抗ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲをコードするレンチウイルスベクターにクローニングして、２Ａ自己切断型ポリペプチド配列によって分離した（ＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ１２）。
【０５６８】
ＩＬ−２ＲγおよびＩＬ−７Ｒαの膜貫通ドメインおよびシグナル伝達ドメインをＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲをコードするレンチウイルスベクターにクローニングして、２Ａ自己切断型ポリペプチド配列によって分離した（ＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ７）。
【０５６９】
健常ドナーＰＢＭＣ由来の初代ヒトＴ細胞を可溶性ＣＤ３（１μｇ／ｍｌ）およびＣＤ２８（５μｇ／ｍｌ）で活性化し、ビヒクルまたは（ｉ）ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲ、（ｉｉ）ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲおよび優性陰性ＴＧＦβ受容体（ＮＹ−ＥＳＯ１．ＤＮＲ）、（ｉｉｉ）ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲおよびＣＴＢＲ１２（ＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ１２）、および（ｉｖ）ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲおよびＣＴＢＲ７（ＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ７）を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。ＩＬ−２含有増殖培地で１０日培養後、ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲＲおよびＴＧＦβＲ２を発現する細胞表面をフローサイトメトリーによって決定した。すべての構築物を発現した。
【０５７０】
実施例１６
ＮＹ−ＥＳＯＴＣＲおよびＣＴＢＲ１２またはＮＹ−ＥＳＯＴＣＲおよびＣＴＢＲ７を発現するＴ細胞によって阻害された免疫抑制ＴＧＦβシグナル伝達
健常ドナーＰＢＭＣ由来の初代ヒトＴ細胞を可溶性ＣＤ３（１μｇ／ｍｌ）およびＣＤ２８（５μｇ／ｍｌ）で活性化し、ビヒクルまたは（ｉ）ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲ、（ｉｉ）ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲおよび優性陰性ＴＧＦβ受容体（ＮＹ−ＥＳＯ１．ＤＮＲ）、（ｉｉｉ）ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲおよびＣＴＢＲ１２（ＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ１２）、および（ｉｖ）ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲおよびＣＴＢＲ７（ＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ７）を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。ＩＬ−２含有増殖培地で１０日培養後、培養物を１０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＧＦβ１で２０分間処理した。ＳＭＡＤ２／３のリン酸化をリン酸化したＳＭＡＤ２／３に特異的な抗体で評価した。ＤＮＲ、ＣＴＢＲ１２またはＣＴＢＲ７を発現するＴ細胞をＳＭＡＤ２／３のリン酸化から完全に保護した（図２１）。これらのデータは、ＣＴＢＲ１２またはＣＴＢＲ７のいずれかの発現が、ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲＴ細胞をＴＧＦβ免疫抑制シグナル伝達に対して非感受性にすることを示した。
【０５７１】
実施例１７
ＣＴＢＲはＴＧＦβ１に曝露するとＩＬ−Ｒシグナル伝達を伝達する
ＩＬ−１２に対する細胞応答は、受容体の二量化ならびにＳＴＡＴ４およびＳＴＡＴ５のリン酸化によって開始される。リン酸化ＳＴＡＴ４の発現を使用して、ＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ１２を発現するＴ細胞について、ＩＬ−１２受容体シグナル伝達経路の活性化を評価した。
【０５７２】
ＩＬ−７に対する細胞応答は、受容体の二量化およびＳＴＡＴ５のリン酸化によって開始される。したがって、リン酸化ＳＴＡＴ５の発現を使用して、ＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ７を発現するＴ細胞について、ＩＬ−７受容体シグナル伝達経路の活性化を評価した（させた）
【０５７３】
健常ドナーＰＢＭＣ由来の初代ヒトＴ細胞を可溶性ＣＤ３（１μｇ／ｍｌ）およびＣＤ２８（５μｇ／ｍｌ）で活性化し、ビヒクルまたは（ｉ）ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲおよびＣＴＢＲ１２（ＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ１２）、および（ｉｉ）ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲおよびＣＴＢＲ７（ＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ７）を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。ＩＬ−２含有増殖培地で１０日培養後、Ｔ細胞培養物を組換えヒトＩＬ−７または組換えヒトＴＧＦβ１で２０分間（図２２、上段パネル）または組換えヒトＩＬ−１２または組換えヒトＴＧＦβ１で２０分間（図２２、下段パネル）処理した。
【０５７４】
実施例１８
ＣＴＢＲ１２を発現するＣＡＲ  Ｔ細胞は、抗原およびＴＧＦβ１に曝露するとＩＦＮγの増加を分泌する。
健常ドナーＰＢＭＣ由来の初代ヒトＴ細胞を可溶性ＣＤ３（１μｇ／ｍｌ）およびＣＤ２８（５μｇ／ｍｌ）で活性化し、ビヒクルまたは（ｉ）ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲ、（ｉｉ）ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲおよび優性陰性ＴＧＦβ受容体（ＮＹ−ＥＳＯ１．ＤＮＲ）、（ｉｉｉ）ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲおよびＣＴＢＲ１２（ＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ１２）、および（ｉｖ）ＮＹ−ＥＳＯ１ＴＣＲおよびＣＴＢＲ７（ＮＹ−ＥＳＯ１．ＣＴＢＲ７）を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。ＩＬ−２含有増殖培地で１０日培養後、ＣＡＲおよびＣＴＢＲを発現するＴ細胞を、５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＧＦβ１の存在下または不存在下のいずれかで４８時間、、標的細胞に対してＴ細胞５：１の比で、ＳａＯｓ２細胞（Ａ２、ＮＹ−ＥＳＯ１（＋））またはＡ５４９  Ａ２  ＮＹ−ＥＳＯ１細胞（Ａ２、ＮＹ−ＥＳＯ１（＋））と共に培養した。上清を回収し、可溶性サイトカイン含有量について、Ｌｕｍｉｎｅｘで分析した。
【０５７５】
Ａ２およびＮＹ−ＥＳＯ１（＋）細胞株と比較して組換えヒトＴＧＦβ１の存在下で、Ａ２およびＮＹ−ＥＳＯ１（＋）細胞株と共に培養した場合に、ＣＴＢＲ１２発現細胞は、より有意に大量のＩＦＮγを産生した（図２３）。ＣＴＢＲ発現細胞は、免疫抑制ＴＧＦβシグナル伝達に対する抵抗性を示す。
【０５７６】
全般に、以下の特許請求の範囲において、使用された用語は、本明細書および特許請求の範囲に開示されている特定の実施形態への特許請求の範囲に限定するものと解釈されるべきではないが、そのような特許請求の範囲が権利を与える等価物の完全な範囲とともに全ての可能な実施形態を含むものと解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は、本開示によって限定されない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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