(57)【要約】  α−ＫＧのＤ−２−ＨＧへの変換を阻害する化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物または立体異性体、および化合物を含む医薬組成物が開示される。化合物および医薬組成物は、がんを含むＩＤＨ関連疾患を効果的に処置することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物：
【化１】
2019522056.tif 000116
または薬学的に許容されるその塩、エステル、水和物、もしくは溶媒和物
［式中、
ＺおよびＱは、独立に、ＣおよびＮから選択され；
Ａは、Ｏ、Ｓ、またはＮＲａであり；
Ｗは、直鎖状または分岐状Ｃ１〜６アルキレンであり；
Ｘは、Ｃ６〜１２アリール、Ｃ６〜１２ヘテロアリール、３〜１０員飽和または不飽和シクロアルキル、３〜１０員飽和または不飽和ヘテロシクロアルキルであり；
Ｙは、ハロ、シアノ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ６〜１２アリール、Ｃ１〜１２アルコキシル、Ｃ６〜１２アリールオキシル、３〜１０員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、３〜１０員飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｂ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｄであり、これらは、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ５〜１０アリール、Ｃ１〜１２アルコキシ、３〜１０員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、３〜１０員ヘテロシクロアルキル、または３〜１０員ヘテロアリール、Ｃ５〜１０アリールオキシルのうちの１つまたは複数によって一置換または独立に多置換されていてもよく；
Ｒ１は、Ｃ１〜１２アルキル、３〜１０員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、アラルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアラルキル、または−ＮＲｅＲｆであり；
Ｒ２は、水素、−ＮＲｇＲｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｂ、または−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｄであり；
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｆ、ＲｇおよびＲｈは、独立に、水素、Ｃ１〜１２アルキル、３〜１０員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、Ｃ６〜１２アリールから選択され、これらは、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ５〜１０アリール、Ｃ１〜１２アルコキシ、３〜１０員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、３〜１０員ヘテロシクロアルキル、または３〜１０員ヘテロアリール、Ｃ５〜１０アリールオキシルによって一置換または独立に多置換されていてもよく；
ＲｃおよびＲｄは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｓ、およびＯから選択される１つまたは複数の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい４〜８員ヘテロシクリルを形成していてもよく、
ＲｇおよびＲｈは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｓ、およびＯから選択される１つまたは複数の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい４〜８員ヘテロシクリルを形成していてもよく；
ｎは、０、１または２である］。
【請求項２】
式（Ｉａ）に示す化学構造を有する化合物：
【化２】
2019522056.tif 000117
または薬学的に許容されるその塩、エステル、水和物、もしくは溶媒和物である、請求項１に記載の化合物
［式中、
Ｗは、直鎖状または分岐状Ｃ１〜６アルキレンであり；
Ｘは、Ｃ６〜１２アリール、Ｃ６〜１２ヘテロアリール、３〜１０員飽和または不飽和シクロアルキル、３〜１０員飽和または不飽和ヘテロシクロアルキルであり；
Ｙは、ハロ、シアノ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ６〜１２アリール、Ｃ１〜１２アルコキシル、Ｃ６〜１２アリールオキシル、３〜１０員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、３〜１０員飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｂ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｄであり、これらは、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ５〜１０アリール、Ｃ１〜１２アルコキシ、３〜１０員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、３〜１０員ヘテロシクロアルキル、または３〜１０員ヘテロアリール、Ｃ５〜１０アリールオキシルのうちの１つまたは複数によって一置換または独立に多置換されていてもよく；
Ｒ１は、Ｃ１〜１２アルキル、３〜１０員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、アラルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアラルキル、または−ＮＲｅＲｆであり；
Ｒ２は、水素、−ＮＲｇＲｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｂ、または−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｄであり；
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｆ、ＲｇおよびＲｈは、独立に、水素、Ｃ１〜１２アルキル、３〜１０員飽和または不飽和シクロアルキル、Ｃ６〜１２アリールから選択され、これらは、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ５〜１０アリール、Ｃ１〜１２アルコキシ、３〜１０員飽和または不飽和シクロアルキル、３〜１０員ヘテロシクロアルキル、または３〜１０員ヘテロアリール、Ｃ５〜１０アリールオキシルによって一置換または独立に多置換されていてもよく；
ＲｃおよびＲｄは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｓ、およびＯから選択される１つまたは複数の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい４〜８員ヘテロシクリルを形成していてもよく、
ＲｇおよびＲｈは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｓ、およびＯから選択される１つまたは複数の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい４〜８員ヘテロシクリルを形成していてもよく；
ｎは、０、１または２である］。
【請求項３】
Ｒａが水素である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｗが分岐状Ｃ１〜３アルキレンである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘが、Ｃ６〜１２アリールまたはＣ６〜１２ヘテロアリールである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項６】
Ｘが、フェニル、ピリジニルまたはピラゾリルである、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｙが、以下：
【化３】
2019522056.tif 000118
からなる群から選択される、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項８】
（Ｒ）−立体配置、（Ｓ）−立体配置またはこれらの混合を有する請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
以下：
【化４】
2019522056.tif 000119
2019522056.tif 000120
2019522056.tif 000121
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
第１の有効成分としての、請求項１から９のいずれか一項に記載の、１種もしくは複数の化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物または立体異性体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１１】
疾患を処置する方法であって、請求項１から９のいずれか一項に記載の１種もしくは複数の化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物または立体異性体の有効量、または請求項１０に記載の医薬組成物を対象に投与することを含み、疾患が、α−ＫＧのＤ−２−ＨＧへの変換と関連する疾患、好ましくはがんである、方法。
【請求項１２】
α−ＫＧのＤ−２−ＨＧへの変換を阻害する方法であって、請求項１から９のいずれか一項に記載の１種もしくは複数の化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物または立体異性体、または請求項１０に記載の医薬組成物を使用することによる、方法。
【請求項１３】
変異体ＩＤＨ、野生型ＩＤＨまたは両方を阻害する方法であって、請求項１から９のいずれか一項に記載の１種もしくは複数の化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物または立体異性体、または請求項１０に記載の医薬組成物を使用することによる、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、α−ケトグルタレート（α−ＫＧ）の、Ｄ−２−ＨＧなどの２−ヒドロキシグルタレート（２−ＨＧ）への変換を阻害する化合物、１種または複数の前記化合物を有効成分として含む医薬組成物、およびα−ＫＧのＤ−２−ＨＧへの変換と関連する疾患を処置するための医薬の製造における前記化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
イソクエン酸脱水素酵素（ＩＤＨ）は、トリカルボン酸（ＴＣＡ）サイクルにおける細胞呼吸のための必須酵素である。ＴＣＡは、イソシトレートの酸化的脱カルボキシル化を触媒し、アルファ−ケトグルタレート（α−ケトグルタレート、α−ＫＧ）およびＣＯ２を産生する。ヒトにおいて、ＩＤＨは３種類のアイソフォームとして存在し、ＩＤＨ３は、ミトコンドリアで、クエン酸サイクルの第３のステップを触媒し、同時にＮＡＤ＋をＮＡＤＨに変換する。アイソフォームのＩＤＨ１およびＩＤＨ２は、クエン酸サイクルと関連なく同じ反応を触媒し、かつ補助因子としてＮＡＤ＋の代わりにＮＡＤＰ＋を使用する。これらは、細胞質ゾルならびにミトコンドリアおよびペルオキシソームに局在する。
【０００３】
ＩＤＨ１の特異的変異は、星状細胞腫、乏突起膠腫および多形性神経膠芽腫を含むいくつかの脳腫瘍で認められ、同時に変異は、より低グレードの神経膠腫から発生したほぼすべての場合の二次性膠芽腫で認められるが、高グレードの原発性多形性神経膠芽腫ではほとんど認められない。その腫瘍がＩＤＨ１変異を有する患者は、生存期間が長い［「Ａｎ  ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ｇｅｎｏｍｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ」、Ｐａｒｓｏｎｓ，Ｄ．Ｗ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、（２００８年）；「Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＩＤＨ１  ｃｏｄｏｎ  １３２  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｂｒａｉｎ  ｔｕｍｏｒｓ」、Ｂａｌｓｓ，Ｊ．ら、Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ、（２００８年）；Ｂｌｅｅｋｅｒ，Ｆ．Ｅ．ら、「ＩＤＨ１  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ａｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｐ．Ｒ１３２（ＩＤＨ１（Ｒ１３２））ｏｃｃｕｒ  ｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙ  ｉｎ  ｈｉｇｈ−ｇｒａｄｅ  ｇｌｉｏｍａｓ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｉｎ  ｏｔｈｅｒ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ」、Ｈｕｍ  Ｍｕｔａｔ、（２００９年）］。ＩＤＨ１およびＩＤＨ２変異は、ｐ５３変異および１ｐ／１９ｑ染色体損失の前に生じ、神経膠腫発生の第１の事象と考えられている［「ＩＤＨ１  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ａｒｅ  ｅａｒｌｙ  ｅｖｅｎｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｓｔｒｃｙｔｏｍａｓ  ａｎｄ  ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｇｌｉｏｍａｓ」、Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｔ．ら、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ、（２００９年）；「Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｌａｎｄｓｃａｐｅ  ａｎｄ  ｃｌｏｎａｌ  ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ  ｉｎ  ｇｒａｄｅ  ＩＩ  ａｎｄ  ＩＩＩ  ｇｌｉｏｍａｓ」、Ｓｕｚｕｋｉ，Ｈ．ら、Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ、（２０１５年）；「Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ，Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｄｉｆｆｕｓｅ  Ｌｏｗｅｒ−Ｇｒａｄｅ  Ｇｌｉｏｍａｓ」、Ｂｒａｔ，Ｄ．Ｊ．ら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ、（２０１５年）］。さらに、ＩＤＨ２およびＩＤＨ１の変異は、細胞遺伝学上正常な急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の最大で２０％に認められている［「Ｒｅｃｕｒｒｉｎｇ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｆｏｕｎｄ  ｂｙ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ａｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｇｅｎｏｍｅ」、Ｍａｒｄｉｓ，Ｅ．Ｒ．ら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ、（２００９年）］。いくつかの独立した追跡調査によれば、細胞遺伝学的に正常なＡＭＬにおけるＩＤＨ１およびＩＤＨ２の変異率は、およそ２０％である［「Ｒｅｃｕｒｒｉｎｇ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｆｏｕｎｄ  ｂｙ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ａｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｇｅｎｏｍｅ」、Ｍａｒｄｉｓ，Ｅ．Ｒ．ら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，（２００９年）；「Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ＩＤＨ２  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｎｏｒｍａｌ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ」、Ｔｈｏｌ，Ｆ．ら、Ｂｌｏｏｄ、（２０１０年）；「Ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅｓ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ＩＤＨ１  ａｎｄ  ＩＤＨ２  ｂｏｔｈ  ���ｒｅ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ａｂｅｒｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ：ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｖａｌｕｅ」、Ａｂｂａｓ，Ｓ．ら、Ｂｌｏｏｄ、（２０１０年）；「Ｔｈｅ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  ＩＤＨ１  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｙｏｕｎｇｅｒ  ａｄｕｌｔ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｉｓ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｎ  ＦＬＴ３／ＩＴＤ  ｓｔａｔｕｓ」、Ｇｒｅｅｎ，Ｃ．Ｌ．ら、Ｂｌｏｏｄ、（２０１０年）；「ＩＤＨ１  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ａｒｅ  ｄｅｔｅｃｔｅｄ  ｉｎ  ６．６％  ｏｆ  １４１４  ＡＭＬ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ａｎｄ  ａｒｅ  ａｓｓｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ  ｒｉｓｋ  ｋａｒｙｏｔｙｐｅ  ａｎｄ  ｕｎｆａｖｏｒａｂｌｅ  ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  ｉｎ  ａｄｕｌｔｓ  ｙｏｕｎｇｅｒ  ｔｈａｎ  ６０  ｙｅａｒｓ  ａｎｄ  ｕｎｍｕｔａｔｅｄ  ＮＰＭ１  ｓｔａｔｕｓ」、Ｓｃｈｎｉｔｔｇｅｒ，Ｓ．ら、Ｂｌｏｏｄ、（２０１０年）；「Ｇｅｎｏｍｉｃ  ａｎｄ  ｅｐｉｇｅｎｏｍｉｃ  ｌａｎｄｓｃａｐｅｓ  ｏｆ  ａｄｕｌｔ  ｄｅ  ｎｏｖｏ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ」、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ、（２０１３年）］。ＩＤＨ変異は、７５％の軟骨肉腫［「ＩＤＨ１  ａｎｄ  ＩＤＨ２  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ａｒｅ  ｆｒｅｑｕｅｎｔ  ｅｖｅｎｔｓ  ｉｎ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｃｈｏｎｄｒｏｓａｒｃｏｍａ  ａｎｄ  ｃｅｎｔｒａｌ  ａｎｄ  ｐｅｒｉｏｓｔｅａｌ  ｃｈｏｎｄｒｏｍａｓ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｉｎ  ｏｔｈｅｒ  ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  ｔｕｍｏｕｒｓ」、Ａｍａｒｙ，Ｍ．Ｆ．ら、Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ、（２０１１年）；「Ｏｌｌｉｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｍａｆｆｕｃｃｉ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ａｒｅ  ｃａｕｓｅｄ  ｂｙ  ｓｏｍａｔｉｃ  ｍｏｓａｉｃ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ＩＤＨ１  ａｎｄ  ＩＤＨ２」、Ａｍａｒｙ，Ｍ．Ｆ．ら、Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ、（２０１１年）］、１０〜２３％の肝内胆管細胞癌［「Ｆｒｅｑｕｅｎｔ  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｓｏｃｉｔｒａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  ＩＤＨ１  ａｎｄ  ＩＤＨ２  ｉｎ  ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｂｒｏａｄ−ｂａｓｅｄ  ｔｕｍｏｒ  ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ」、Ｂｏｒｇｅｒ、Ｄ．Ｒ．ら、Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ、（２０１２年）；「Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｉｓｏｃｉｔｒａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  １  ａｎｄ  ２  ｏｃｃｕｒ  ｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙ  ｉｎ  ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ  ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ  ａｎｄ  ｓｈａｒｅ  ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｗｉｔｈ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａｓ」、Ｗａｎｇ、Ｐ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、（２０１２年）］、および血管免疫芽細胞性Ｔ細胞リンパ腫および黒色腫の一部の患者［「Ｔｈｅ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｃｏｄｉｎｇ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ａｎｄ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒｓ」、Ｓｊｏｂｌｏｍ，Ｔ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、（２００６年）］を含む他のタイプのがんでも��告されている。現在のところ、ＩＤＨ１およびＩＤＨ２は、ヒトがんにおいて最も高い頻度で変異する代謝酵素遺伝子である。
【０００４】
これらの変異が、α−ＫＧを２−ＨＧ（例えばＤ−２−ＨＧ）にさらに変換することは知られている。Ｄ−２−ＨＧは非常に高濃度で蓄積され、アルファ−ケトグルタレートに依存する酵素の機能を阻害する。これによってＤＮＡおよびヒストンの過剰メチル化状態が生じ、癌遺伝子を活性化しかつ腫瘍抑制遺伝子を不活性化する場合がある別の遺伝子発現につながる。最終的に、これは上記で開示されたタイプのがんをもたらすことになる［「Ｔｈｅ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｃｏｄｉｎｇ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ａｎｄ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒｓ」、Ｓｊｏｂｌｏｍ，Ｔ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、（２００６年）］。
【０００５】
したがって、α−ＫＧをＤ−２−ＨＧに変換するプロセスを阻害する阻害剤を開発することが望まれる。
【発明の概要】
【０００６】
１つの態様において、本開示は、式（Ｉ）：
【０００７】
【化１】
2019522056.tif 000002
によって表される化合物または薬学的に許容されるその塩、エステル、水和物、溶媒和物もしくは立体異性体を提供する。
【０００８】
別の態様において、本開示は、式（Ｉ）の化合物を製造する方法を提供する。
【０００９】
別の態様において、本開示は、１種または複数の式（Ｉ）の化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物または立体異性体を含む医薬組成物をさらに提供する。
【００１０】
さらに別の態様において、本開示は、α−ＫＧのＤ−２−ＨＧへの変換と関連する疾患、例えばがんを処置するための医薬の製造における、式（Ｉ）の化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物もしくは立体異性体、または本開示の医薬組成物の使用を提供する。
【００１１】
さらなる態様において、本開示は、α−ＫＧのＤ−２−ＨＧへの変換を阻害する方法を提供する。
【００１２】
別の態様において、本開示は、α−ＫＧのＤ−２−ＨＧへの変換と関連する疾患を処置する方法であって、式（Ｉ）の化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物もしくは立体異性体または本開示の医薬組成物を使用することによる方法を提供する。
【００１３】
別の態様において、本開示は、変異体ＩＤＨ、野生型ＩＤＨまたは両方を阻害する方法であって、式（Ｉ）の化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物もしくは立体異性体または本開示の医薬組成物を使用することによる方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】野生型および変異体ＩＤＨ１／２によって触媒される代表的な反応を示す図である。
【図２Ａ】親ＨＴ１０８０細胞およびＦｌａｇ標識Ｄ−２−ＨＧ ＤＨを過剰発現している安定ＨＴ１０８０における２−ＨＧの細胞内レベルを、ＧＣ−ＭＳ分析によって決定したことを示す図である（「Ｄ−２−ｈｙｄｒｏｘｙｇｌｕｔａｒａｔｅ  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ  ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｙ  ｏｆ  ｍｕｔａｎｔ  ＩＤＨ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｂｕｔ  ｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ」、Ｍａ，Ｓ．ら、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ、（２０１５年）を改良した）。
【図２Ｂ】２−ＨＧピークを、Ｄ−２−ＨＧ標準によってさらに確認し、主要フラグメントｍ／ｚ４３３を使用して定量が行われたことを示すグラフである。
【図３】ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈ、ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｃ、およびＩＤＨ１−ＷＴタンパク質それぞれに関するクーマシー染色を示す写真である。
【図４Ａ】マウスの肝ミクロソームにおける、インキュベート時間の関数としての本開示の例示的化合物の基質（本開示の例示的化合物）の残存百分率（％）の自然対数（すなわち、Ｌｎ（残存％））を示すグラフである。
【図４Ｂ】ラットの肝ミクロソームにおける、インキュベート時間の関数としての本開示の例示的化合物のＬｎ（残存％）を示すグラフである。
【図４Ｃ】イヌの肝ミクロソームにおける、インキュベート時間の関数としての本開示の例示的化合物のＬｎ（残存％）を示すグラフである。
【図４Ｄ】サルの肝ミクロソームにおける、インキュベート時間の関数としての本開示の例示的化合物のＬｎ（残存％）を示すグラフである。
【図４Ｅ】ヒトの肝ミクロソームにおける、インキュベート時間の関数としての本開示の例示的化合物のＬｎ（残存％）を示すグラフである。
【図５】マウス血漿における、インキュベート時間の関数としての本開示の例示的化合物のＬｎ（残存％）を示すグラフである。
【図６】本開示の例示的化合物１０ｍｇ・ｋｇ−１の単回ｐ．ｏ．用量をＩＣＲマウスに投与した後の、時間の関数としての平均血漿濃度を示すグラフである。
【図７】本開示の例示的化合物２ｍｇ・ｋｇ−１の単回ｉ．ｖ．用量をＩＣＲマウスに投与した後の、時間の関数としての平均血漿濃度を示すグラフである。
【図８Ａ】３回繰り返して試験が行われた化合物１６の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈの酵素活性を示すグラフである。
【図８Ｂ】３回繰り返して試験が行われた化合物１６の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈの酵素活性を示すグラフである。
【図８Ｃ】３回繰り返して試験が行われた化合物１６の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈの酵素活性を示すグラフである。
【図９Ａ】３回繰り返して試験が行われた化合物２１の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈの酵素活性を示すグラフである。
【図９Ｂ】３回繰り返して試験が行われた化合物２１の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈの酵素活性を示すグラフである。
【図９Ｃ】３回繰り返して試験が行われた化合物２１の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈの酵素活性を示すグラフである。
【図１０Ａ】３回繰り返して試験が行われた化合物２２の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈの酵素活性を示すグラフである。
【図１０Ｂ】３回繰り返して試験が行われた化合物２２の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈの酵素活性を示すグラフである。
【図１０Ｃ】３回繰り返して試験が行われた化合物２２の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈの酵素活性を示すグラフである。
【図１１Ａ】３回繰り返して試験が行われた化合物２３の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈの酵素活性を示すグラフである。
【図１１Ｂ】３回繰り返して試験が行われた化合物２３の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈの酵素活性を示すグラフである。
【図１１Ｃ】３回繰り返して試験が行われた化合物２３の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈの酵素活性を示すグラフである。
【図１２Ａ】３回繰り返して試験が行われた化合物２４の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈの酵素活性を示すグラフである。
【図１２Ｂ】３回繰り返して試験が行われた化合物２４の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈの酵素活性を示すグラフである。
【図１２Ｃ】３回繰り返して試験が行われた化合物２４の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈの酵素活性を示すグラフである。
【図１３Ａ】３回繰り返して試験が行われた化合物３１の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈの酵素活性を示すグラフである。
【図１３Ｂ】３回繰り返して試験が行われた化合物３１の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈの酵素活性を示すグラフである。
【図１３Ｃ】３回繰り返して試験が行われた化合物３１の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈの酵素活性を示すグラフである。
【図１４Ａ】３回繰り返して試験が行われた化合物１６の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの酵素活性を示すグラフである。
【図１４Ｂ】３回繰り返して試験が行われた化合物１６の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの酵素活性を示すグラフである。
【図１４Ｃ】３回繰り返して試験が行われた化合物１６の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの酵素活性を示すグラフである。
【図１５Ａ】３回繰り返して試験が行われた化合物２１の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの酵素活性を示すグラフである。
【図１５Ｂ】３回繰り返して試験が行われた化合物２１の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの酵素活性を示すグラフである。
【図１５Ｃ】３回繰り返して試験が行われた化合物２１の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの酵素活性を示すグラフである。
【図１６Ａ】３回繰り返して試験が行われた化合物２２の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの酵素活性を示すグラフである。
【図１６Ｂ】３回繰り返して試験が行われた化合物２２の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの酵素活性を示すグラフである。
【図１６Ｃ】３回繰り返して試験が行われた化合物２２の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの酵素活性を示すグラフである。
【図１７Ａ】３回繰り返して試験が行われた化合物２３の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの酵素活性を示すグラフである。
【図１７Ｂ】３回繰り返して試験が行われた化合物２３の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの酵素活性を示すグラフである。
【図１７Ｃ】３回繰り返して試験が行われた化合物２３の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの酵素活性を示すグラフである。
【図１８Ａ】３回繰り返して試験が行われた化合物２４の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの酵素活性を示すグラフである。
【図１８Ｂ】３回繰り返して試験が行われた化合物２４の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの酵素活性を示すグラフである。
【図１８Ｃ】３回繰り返して試験が行われた化合物２４の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの酵素活性を示すグラフである。
【図１９Ａ】３回繰り返して試験が行われた化合物３１の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの酵素活性を示すグラフである。
【図１９Ｂ】３回繰り返して試験が行われた化合物３１の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの酵素活性を示すグラフである。
【図１９Ｃ】３回繰り返して試験が行われた化合物３１の濃度の対数の関数としてプロットされた、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの酵素活性を示すグラフである。
【図２０】１０μＭの各化合物１〜２０および陰性対照（ＤＭＳＯ）で処置した後のＤ−２−ＨＧ濃度を示すグラフである。
【発明の具体的な説明】
【００１５】
化合物
１つの態様において、本開示は、式（Ｉ）：
【００１６】
【化２】
2019522056.tif 000003
［式中、
ＺおよびＱは、独立に、ＣおよびＮから選択され；
Ａは、Ｏ、Ｓ、またはＮＲａであり；
Ｗは、直鎖状または分岐状Ｃ１〜６アルキレンであり；
Ｘは、Ｃ６〜１２アリール、Ｃ６〜１２ヘテロアリール、３〜１０員飽和または不飽和シクロアルキル、３〜１０員飽和または不飽和ヘテロシクロアルキルであり；
Ｙは、ハロ、シアノ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ６〜１２アリール、Ｃ１〜１２アルコキシル、Ｃ６〜１２アリールオキシル、３〜１０員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、３〜１０員飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｂ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｄであり、これらは、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ５〜１０アリール、Ｃ１〜１２アルコキシ、３〜１０員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、３〜１０員ヘテロシクロアルキル、または３〜１０員ヘテロアリール、Ｃ５〜１０アリールオキシルのうちの１つまたは複数によって一置換または独立に多置換されていてもよく；
Ｒ１は、Ｃ１〜１２アルキル、３〜１０員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、Ｃ６〜１２アラルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアラルキル、または−ＮＲｅＲｆであり；
Ｒ２は、水素、−ＮＲｇＲｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｂ、または−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｄであり；
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｆ、ＲｇおよびＲｈは、独立に、水素、Ｃ１〜１２アルキル、３〜１０員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、Ｃ６〜１２アリールから選択され、これらは、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ５〜１０アリール、Ｃ１〜１２アルコキシ、３〜１０員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、３〜１０員ヘテロシクロアルキル、または３〜１０員ヘテロアリール、Ｃ５〜１０アリールオキシルによって一置換または独立に多置換されていてもよく；
ＲｃおよびＲｄは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｓ、およびＯから選択される１つまたは複数の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい４〜８員ヘテロシクリルを形成してもよく、
ＲｇおよびＲｈは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｓ、およびＯから選択される１つまたは複数の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい４〜８員ヘテロシクリルを形成していてもよく；
ｎは０、１または２である］
の化合物および薬学的に許容されるその塩、エステル、水和物、または溶媒和物または立体異性体を提供する。
【００１７】
いくつかの実施形態において、ＺはＮである。
【００１８】
いくつかの実施形態において、ＱはＮである。
【００１９】
いくつかの実施形態において、ＡはＮＲａである。いくつかの実施形態において、ＡはＮＨである。
いくつかの実施形態において、本開示の化合物は式（Ｉａ）：
【００２０】
【化３】
2019522056.tif 000004
［式中、
Ｗは、直鎖状または分岐状Ｃ１〜６アルキレンであり；
Ｘは、Ｃ６〜１２アリール、Ｃ６〜１２ヘテロアリール、３〜１０員飽和または不飽和シクロアルキル、３〜１０員飽和または不飽和ヘテロシクロアルキルであり；
Ｙは、ハロ、シアノ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ６〜１２アリール、Ｃ１〜１２アルコキシル、Ｃ６〜１２アリールオキシル、３〜１０員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、３〜１０員飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｂ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｄであり、これらは、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ５〜１０アリール、Ｃ１〜１２アルコキシ、３〜１０員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、３〜１０員ヘテロシクロアルキル、または３〜１０員ヘテロアリール、Ｃ５〜１０アリールオキシルのうちの１つまたは複数によって一置換または独立に多置換されていてもよく；
Ｒ１は、Ｃ１〜１２アルキル、３〜１０員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、Ｃ６〜１２アラルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアラルキル、または−ＮＲｅＲｆであり；
Ｒ２は、水素、−ＮＲｇＲｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｂ、または−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｄであり；
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｆ、ＲｇおよびＲｈは、独立に、水素、Ｃ１〜１２アルキル、３〜１０員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、Ｃ６〜１２アリールから選択され、これらは、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、Ｃ５〜１０アリール、Ｃ１〜１２アルコキシ、３〜１０員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、３〜１０員ヘテロシクロアルキル、または３〜１０員ヘテロアリール、Ｃ５〜１０アリールオキシルによって一置換または独立に多置換されていてもよく；
ＲｃおよびＲｄは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｓ、およびＯから選択される１つまたは複数の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい４〜８員ヘテロシクリルを形成していてもよく、
ＲｇおよびＲｈは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｓ、およびＯから選択される１つまたは複数の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい４〜８員ヘテロシクリルを形成していてもよく；
ｎは０、１または２である］
によって表される化合物および薬学的に許容されるその塩、エステル、水和物、溶媒和物または立体異性体である。
【００２１】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）中のＡは、ＮＲａである。いくつかの実施形態において、式（Ｉ）または式（Ｉａ）中のＲａは、水素である。
【００２２】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）または式（Ｉａ）中のＷは、分岐状Ｃ１〜３アルキレンである。いくつかの実施形態において、式（Ｉ）または式（Ｉａ）中のＷは、メチレン、エチレン、またはプロピレンである。いくつかの実施形態において、Ｗは、１，１−エチレン、１，２−エチレン、１，１−プロピレン、１，２−プロピレン、１，３−プロピレン、または２，２−プロピレンである。いくつかの実施形態において、Ｗは１，１−エチレンである。
【００２３】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）または式（Ｉａ）中のＸは、Ｃ６〜１２アリールまたはＣ６〜１２ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｘは、フェニル、ピリジニルまたはピラゾリルである。
【００２４】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）または式（Ｉａ）中のＹは、以下：
【００２５】
【化４】
2019522056.tif 000005
からなる群から選択される。
【００２６】
いくつかの実施形態において、本開示の化合物は、（Ｒ）−立体配置、（Ｓ）−立体配置またはこれらの混合を有することができる。
【００２７】
特に、本開示の式（Ｉ）または式（Ｉａ）の化合物は、以下の化合物１〜３７とすることができる。
【００２８】
【表１】
2019522056.tif 000006
2019522056.tif 000007
2019522056.tif 000008
2019522056.tif 000009
2019522056.tif 000010
2019522056.tif 000011
2019522056.tif 000012
2019522056.tif 000013
2019522056.tif 000014
2019522056.tif 000015
2019522056.tif 000016
2019522056.tif 000017
2019522056.tif 000018
2019522056.tif 000019
【００２９】
簡潔にするために単一の実施形態の文脈において開示される本開示のさまざまな特徴は、個別にまたは任意の好適なサブコンビネーションで提供することもできる。
【００３０】
本明細書において使用される「置換されている」という用語は、化学基を指すときに、化学基が、置換基によって除去され、置き換えられた、１つまたは複数の水素原子を有することを意味する。本明細書において使用される「置換基」という用語は、当技術分野において公知の一般的な意味を有し、かつ親基に共有結合している、または適切な場合は縮合している化学的部分を指す。本明細書において使用される「置換されていてもよい」という用語は、化学基が置換基を有さない場合がある（すなわち置換されていない）または１つまたは複数の置換基を有する場合がある（すなわち置換されている）ことを意味する。所与の原子での置換は、原子価によって制限されることを理解されたい。
【００３１】
本明細書において使用される「Ｃｉ〜ｊ」という用語は、炭素原子数の範囲を示し、式中、ｉおよびｊは整数であり、かつ炭素原子数の範囲には、両端値（すなわちｉおよびｊ）および間の各整数点が含まれ、ここで、ｉ∈｛１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０｝であり、ｊはｉよりも大きく、ｊ∈｛２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０｝である。例えば、Ｃ１〜６は、１〜６個の炭素原子の範囲を示し、それには、１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子、４個の炭素原子、５個の炭素原子および６個の炭素原子が含まれる。
【００３２】
本明細書において使用される「アルキル」という用語は、他の用語の一部としてであろうとなかろうと、または独立に使用されていてもされていなくても、直鎖または分岐鎖であってもよい飽和または不飽和炭化水素基を指す。「Ｃｉ〜ｊアルキル」という用語は、ｉ〜ｊ個の炭素原子を有するアルキルを指す。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１〜１２、１〜８、１〜６、１〜４、１〜３、または１〜２個の炭素原子を含む。飽和アルキル基の例としては、これらに限定されるものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルなどの化学基；２−メチル−１−ブチル、ｎ−ペンチル、３−ペンチル、ｎ−ヘキシル、および１，２，２−トリメチルプロピルなどの高次ホモログなどが挙げられる。不飽和アルキル基の例としては、これらに限定されるものではないが、エテニル、ｎ−プロペニル、イソプロペニル、ｎ−ブテニル、ｓｅｃ−ブテニル、エチニル、プロピン−１−イル、およびプロピン−２−イルなどの化学基が挙げられる。
【００３３】
本明細書において使用される「アルキレン」という用語は、他の用語の一部であろうとなかろうと、または独立に使用されていてもされていなくても、二価アルキルを指す。アルキレン基の例としては、これらに限定されるものではないが、メチレン、１，１−エチレン、１，２−エチレン、１，１−プロピレン、１，２−プロピレン、１，３−プロピレン、および２，２−プロピレンなどが挙げられる。
【００３４】
本明細書において使用される「アリール」または「芳香族」という用語は、他の用語の一部としてであろうとなかろうと、または独立に使用されていてもされていなくても、環を形成する炭素原子間に二重結合および単結合を交互に有する単環式または多環式炭素環式環系ラジカルを指す。いくつかの実施形態において、アリール環系は、１つまたは複数の環中に、５〜１２、５〜１０、または５〜８、６〜１２、６〜１０、または６〜８個の炭素原子を有する。アリール基の例としては、これらに限定されるものではないが、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、およびイデニル（ｉｄｅｎｙｌ）などの化学基が挙げられる。
【００３５】
本明細書において使用される「アラルキル」または「アリールアルキル」という用語は、他の用語の一部としてであろうとなかろうと、または独立に使用されていてもされていなくても、式−アルキル−アリールの基を指す。「Ｃｉ〜ｊアラルキル」という用語は、ｉからｊの間の合計炭素数を有するアラルキルを指す。いくつかの実施形態において、アルキル部分は、１〜６、１〜４、１〜３、または１〜２個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態において、アラルキル基は、６〜１２、６〜１１、６〜１０、６〜９、６〜８、または６〜７個の炭素原子を有する。アラルキル基の例としては、これらに限定されるものではないが、さまざまな−アルキル−ベンゼンおよび−アルキル−ナフタレンが挙げられる。
【００３６】
本明細書において使用される「アルケニル」という用語は、１つまたは複数の二重結合を有する直鎖または分岐状炭化水素鎖を指す。「Ｃｉ〜ｊアルケニル」という用語は、ｉからｊの間の合計炭素数を有するアルケニルを指す。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、２〜１２、２〜１１、２〜１０、２〜９、２〜８、２〜７、２〜６、２〜５、２〜４または２〜３個の炭素原子を有する。アルケニル基の例としては、これらに限定されるものではないが、アリル、プロペニル、２−ブテニル、３−ヘキセニル、および３−オクテニルなどが挙げられる。二重結合炭素のうちの１つは、アルケニル置換基の連結点であってもよい。
【００３７】
本明細書において使用される「アルキニル」という用語は、１つまたは複数の三重結合を有する直鎖または分岐状炭化水素鎖を指す。「Ｃｉ〜ｊアルキニル」という用語は、ｉからｊの間の合計炭素数を有するアルキニルを指す。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、２〜１２、２〜１１、２〜１０、２〜９、２〜８、２〜７、２〜６、２〜５、２〜４または２〜３個の炭素原子を有する。アルキニル基の例としては、これらに限定されるものではないが、エチニル、プロパルギル、および３−ヘキシニルなどが挙げられる。三重結合炭素のうちの１つは、任意選択で、アルキニル置換基の連結点であってもよい。
【００３８】
本明細書において使用される「シクロアルキル」という用語は、他の用語の一部としてであろうとなかろうと、または独立に使用されていてもされていなくても、環化アルキルおよび／またはアルケニル基を含む非芳香族環状炭化水素を指す。シクロアルキル基としては、単環式または多環式（例えば、２、３または４個の縮合環を有する）基およびスピロ環があり得る。いくつかの実施形態において、シクロアルキルは飽和シクロアルキルである。「ｉ〜ｊ員シクロアルキル」という用語は、ｉ〜ｊ個の環形成員を有するシクロアルキルを指す。シクロアルキル基は、３、４、５、６、７、８個の環形成炭素（Ｃ３〜８）を有することができる。シクロアルキル基の例としては、これらに限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、およびシクロヘプタトリエニルなどが挙げられる。いくつかの実施形態において、本明細書において使用されるシクロアルキルは、１つまたは複数の芳香環、例えば、シクロペンタンおよびシクロヘキサンなどのベンゾまたはチエニル誘導体と縮合されていてもよい（すなわち、共通の結合を有する）。いくつかの実施形態において、縮合芳香環を含むシクロアルキル基は、縮合芳香環の環形成原子を含む、任意の環形成原子を介して連結することができる。
【００３９】
本明細書において使用される「ヘテロシクロアルキル」という用語は、環系中の少なくとも１つの環原子がヘテロ原子であり、かつ残りの環原子が炭素原子であるシクロアルキル基を指す。「ｉ〜ｊ員ヘテロシクロアルキル」という用語は、ｉ〜ｊ個の環形成員を有するヘテロシクロアルキルを指す。さらに、環は、１つまたは複数の二重結合を有していてもよいが、完全な共役系は有さない。いくつかの実施形態において、ヘテロシクロアルキルは、飽和ヘテロシクロアルキルである。ヘテロ原子の例としては、これらに限定されるものではないが、酸素、硫黄、窒素、およびリンなどが挙げられる。いくつかの実施形態において、ヘテロシクロアルキルは、３〜８、３〜６、または４〜６個の環形成炭素を有する。ヘテロシクロアルキルの例としては、これらに限定されるものではないが、アゼチジン、アジリジン、ピロリジル、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、およびホモピペラジニルなどが挙げられる。
【００４０】
本明細書において使用される「カルボシクリル」という用語は、すべての環原子が炭素であり、かつ３から１２個の間の環炭素原子、３から１０個の間の炭素原子、３から８個の間の炭素原子、および４から８個の間の炭素原子を含む、任意の環系を指す。カルボシクリル基は、飽和または部分不飽和であってもよいが、芳香環は含まない。カルボシクリル基の例としては、単環式、二環式、および三環式環系が挙げられる。他のカルボシクリル基としては、架橋環系（例えばビシクロ［２，２，１］ヘプテニル）が挙げられる。カルボシクリル基の具体例はシクロアルキルである。
【００４１】
本明細書において使用される「ヘテロシクリル」という用語は、１つまたは複数（例えば１、２または３個）の環原子が、ヘテロ原子によって置き換えられたカルボシクリル基を指し、ヘテロ原子としては、これらに限定されるものではないが、酸素、硫黄、窒素、およびリンなどが挙げられる。ヘテロシクリル基の具体例は、１つまたは複数の環原子がヘテロ原子によって置き換えられたシクロアルキル基である。１個のヘテロ原子を含む例示的なヘテロシクリル基としては、ピロリジン、テトラヒドロフランおよびピペリジンがあり、かつ２個のヘテロ原子を含む例示的なヘテロシクリル基としては、モルホリンおよびピペラジンが挙げられる。ヘテロシクリル基のさらなる具体例は、１つまたは複数の環原子がヘテロ原子によって置き換えられたシクロアルケニル基である。
【００４２】
本明細書において使用される「アルコキシ」という用語は、他の用語の一部としてであろうとなかろうと、または独立に使用されていてもされていなくても、式−Ｏ−アルキルの基を指す。「Ｃｉ〜ｊアルコキシ」という用語は、アルコキシ基のアルキル部分がｉ〜ｊ個の炭素原子を有することを意味する。いくつかの実施形態において、アルキル部分は、１〜６、１〜５、１〜４、１〜３または１〜２個の炭素原子を有する。アルコキシ基の例としては、これらに限定されるものではないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（例えば、ｎ−プロポキシおよびイソプロポキシ）、およびｔ−ブトキシなどが挙げられる。
【００４３】
本明細書において使用される「アリールオキシル」という用語は、式−Ｏ−アリールの基を指し、式中、アリール基はすでに開示されているとおりである。「Ｃｉ〜ｊアリールオキシル」は、アリールオキシル基のアリール部分がｉ〜ｊ個の炭素原子を有することを意味する。いくつかの実施形態において、アリール部分は、５〜１０、５〜８、または５〜６個の炭素原子を有する。
【００４４】
本明細書において使用される「ｎ員」という用語は（ここで、ｎは整数である）、典型的には、環系と組み合わせて用い、環系中の環形成原子の数を表す。例えば、ピペリジニルは、６員ヘテロシクロアルキル環の例であり、ピラゾリルは５員ヘテロアリール環の例であり、ピリジルは６員ヘテロアリール環の例であり、かつ１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレンは１０員シクロアルキル基の例である。
【００４５】
本明細書において使用される「ヘテロアリール」という用語は、芳香環中の少なくとも１つの環原子がヘテロ原子であり、かつ残りの環原子が炭素原子であるアリール基を指す。「ｉ〜ｊ員ヘテロアリール」という用語は、ｉ〜ｊ個の環形成員を有するヘテロアリールを指す。ヘテロ原子の例としては、これらに限定されるものではないが、酸素、硫黄、窒素、およびリンなどが挙げられる。いくつかの実施形態において、ヘテロアリールは、５〜１０、５〜８、または５〜６個の環形成員を有することができる。いくつかの実施形態において、ヘテロアリールは、５員または６員ヘテロアリールである。ヘテロアリールの例としては、これらに限定されるものではないが、フラニル、チエニル、ピリジル、ピロリル、Ｎ−低級アルキルピロリル、ピリジル−Ｎ−酸化物、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、およびインドリルなどが挙げられる。
【００４６】
いくつかの実施形態において、５員ヘテロアリールは、５個の環原子を有する環を含むヘテロアリールとすることができ、１つまたは複数（例えば、１、２、または３個）の環原子は、Ｎ、Ｏ、Ｐ、およびＳから独立に選択することができる。例示的な５員ヘテロアリールは、チエニル、フリル、ピロリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、１，２，３−トリアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、１，３，４−トリアゾリル、テトラゾリル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、および１，３，４−オキサジアゾリルなどである。
【００４７】
いくつかの実施形態において、６員ヘテロアリールは、６個の環原子を有する環を含むヘテロアリールとすることができ、１つまたは複数（例えば、１、２、または３個）の環原子は、Ｎ、Ｏ、Ｐ、およびＳから独立に選択することができる。例示的な６員ヘテロアリールは、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、トリアジニルおよびピリダジニルである。
【００４８】
本明細書において使用される「ハロ」および「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から選択される原子を指す。
【００４９】
本明細書において使用される「シアノ」という用語は、式−ＣＮの基を指す。
【００５０】
本明細書において使用される「ヒドロキシル」という用語は、式−ＯＨの基を指す。
【００５１】
本明細書において使用される「化合物」という用語は、すべての立体異性体（例えば、エナンチオマーおよびジアステレオマー）、幾何異性体、互変異性体、および図示される構造の同位体を含むことを意味する。１つの特定の互変異性形態として、名称または構造によって特定された本明細書における化合物は、特に規定がない限り、他の互変異性形態を含むことを意図する。
【００５２】
本明細書において開示される化合物は、不斉とする（例えば、１つまたは複数の立体中心を有する）ことができる。特に指示がない限り、エナンチオマーおよびジアステレオマーなどのすべての立体異性体が意図される。非対称的に置換されている炭素原子を含む本開示の化合物は、光学活性でまたはラセミ形態で単離することができる。光学不活性出発材料から光学活性形態を調製する方法は、ラセミ混合物の分解によってまたは立体選択的な合成によってなど、当技術分野において公知である。オレフィンおよび炭素−炭素二重結合などの多くの幾何異性体も、本明細書において開示される化合物に含むことができ、かつすべてのこのような安定な異性体が本開示で考慮される。本出願の化合物のシスおよびトランス幾何異性体が開示され、かつ異性体の混合物としてまたは分離された異性体形態として単離されてもよい。
【００５３】
いくつかの実施形態において、本明細書において開示される化合物は、（Ｒ）−立体配置を有する。いくつかの実施形態において、本明細書において開示される化合物は（Ｓ）−立体配置を有する。
【００５４】
本明細書において開示される化合物としてはまた、互変異性形態が挙げられる。互変異性形態としては、同じ実験式および総電荷を有する異性体プロトン化状態であるプロトトロピー互変異性体が挙げられる。プロトトロピー互変異性体の例としては、ケトン−エノール対、アミド−イミド酸対、ラクタム−ラクチム対、エナミン−イミン対、ならびにプロトンが、複素環系、例えば、１Ｈ−および３Ｈ−イミダゾール、１Ｈ−、２Ｈ−および４Ｈ−１，２，４−トリアゾール、１Ｈ−および２Ｈ−イソインドール、ならびに１Ｈ−および２Ｈ−ピラゾールのうちの２つ以上の位置を占めることができる環状形態が挙げられる。互変異性形態は、平衡状態または適切な置換によって１つの形態に立体的に固定されたものとすることができる。
【００５５】
本明細書において開示される化合物としてはまた、中間体または最終化合物において生じる原子のすべての同位体があり得る。同位体としては、同じ原子番号であるが異なる質量数を有する原子が挙げられる。例えば、水素の同位体としては、プロチウム、ジューテリウムおよびトリチウムが挙げられる。いくつかの実施形態において、水素の同位体は、プロチウムおよびジューテリウムである。
【００５６】
本開示の化合物はまた、薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物または代謝産物の形態として使用してもよい。薬学的に許容される塩は、無機酸および有機酸のアルカリ塩を含み、酸には、これらに限定するものではないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エチルスルホン酸、リンゴ酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、マレイン酸、サリチル酸、安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸が含まれる。本開示の化合物がカルボキシルなどの酸性官能基を含むときに、好適な薬学的に許容されるカルボキシルの陽イオンは、当業者であれば周知であり、カルボキシルの陽イオンとしては、アルカリ、アルカリ土類、アンモニウム、第４級アンモニウムの陽イオンが挙げられる。
【００５７】
特に規定がない限り、「ＩＤＨ」または「野生型ＩＤＨ」は、イソシトレートのα−ＫＧへの変換を触媒する正常ＩＤＨ酵素を指す。例示的な正常ＩＤＨ酵素としては、
ヒトＩＤＨ１タンパク質（ＮＣＢＩ登録番号：Ｏ７５８７４．２、配列番号：１）
1    mskkisggsv vemqgdemtr iiwelikekl ifpyveldlh sydlgienrd atndqvtkda
61   aeaikkhnvg vkcatitpde krveefklkq mwkspngtir nilggtvfre aiickniprl
121  vsgwvkpiii grhaygdqyr atdfvvpgpg kveitytpsd gtqkvtylvh nfeegggvam
181  gmynqdksie dfahssfqma lskgwplyls tkntilkkyd grfkdifqei ydkqyksqfe
241  aqkiwyehrl iddmvaqamk seggfiwack nydgdvqsds vaqgygslgm mtsvlvcpdg
301  ktveaeaahg tvtrhyrmyq kgqetstnpi asifawtrgl ahrakldnnk elaffanale
361  evsietieag fmtkdlaaci kglpnvqrsd ylntfefmdk lgenlkikla qakl
ヒトＩＤＨ２タンパク質（ＮＣＢＩ登録番号：Ｐ４８７３５．２、配列番号：２）
1    magylrvvrs lcrasgsrpa wapaaltapt sqeqprrhya dkrikvakpv vemdgdemtr
61   iiwqfikekl ilphvdiqlk yfdlglpnrd qtddqvtids alatqkysva vkcatitpde
121  arveefklkk mwkspngtir nilggtvfre piickniprl vpgwtkpiti grhahgdqyk
181  atdfvadrag tfkmvftpkd gsgvkewevy nfpaggvgmg myntdesisg fahscfqyai
241  qkkwplymst kntilkaydg rfkdifqeif dkhyktdfdk nkiwyehrli ddmvaqvlks
301  sggfvwackn ydgdvqsdil aqgfgslglm tsvlvcpdgk tieaeaahgt vtrhyrehqk
361  grptstnpia sifawtrgle hrgkldgnqd lirfaqmlek vcvetvesga mtkdlagcih
421  glsnvklneh flnttdfldt iksnldralg rq
が挙げられる。
【００５８】
本明細書において使用される「ＩＤＨ変異」という用語は、ＩＤＨ酵素に対する任意の変異を指し、その変異は、「ＩＤＨ変異体」、「変異体ＩＤＨ」または「変異ＩＤＨ」が、α−ＫＧのＤ−２−ＨＧへの変換を触媒することを可能にする。いくつかの実施形態において、「変異体ＩＤＨ」は、α−ＫＧのＤ−２−ＨＧへの変換と、イソシトレートのα−ＫＧへの変換の両方を触媒する。このような変異としては、これらに限定されるものではないが、ＩＤＨ１におけるＲ１３２Ｈ、Ｒ１３２Ｃ、Ｒ１３２Ｇ、Ｒ１３２Ｌ、Ｒ１３２Ｓ；またはＩＤＨ２におけるＲ１７２Ｋ、Ｒ１７２Ｍ、Ｒ１７２Ｗが挙げられる。
【００５９】
いくつかの実施形態において、本開示の化合物は、α−ＫＧのＤ−２−ＨＧへの変換を阻害する。いくつかの実施形態において、本開示の化合物は、イソシトレートのα−ＫＧへの変換を阻害する。いくつかの実施形態において、本開示の化合物は、α−ＫＧのＤ−２−ＨＧへの変換と、イソシトレートのα−ＫＧへの変換の両方を阻害する。いくつかの実施形態において、本開示の化合物は、α−ＫＧのＤ−２−ＨＧへの変換を選択的に阻害することができるが、イソシトレートのα−ＫＧへの変換は選択的に阻害できない。
【００６０】
いくつかの実施形態において、本開示の化合物は、変異体ＩＤＨを阻害する。いくつかの実施形態において、本開示の化合物は、野生型ＩＤＨを阻害する。いくつかの実施形態において、本開示の化合物は、変異体ＩＤＨと野生型ＩＤＨの両方を阻害する。いくつかの実施形態において、本開示の化合物は、変異体ＩＤＨを選択的に阻害することができるが、野生型ＩＤＨは選択的に阻害できない。
【００６１】
いくつかの実施形態において、本開示の化合物は、０．０１〜１０００μＭ、好ましくは０．０１〜５００μＭ、０．０１〜１００μＭ、０．０１〜８０μＭ、０．０１〜５０μＭ、０．０１〜４０μＭ、０．０１〜３０μＭ、または０．０１〜２０μｍＭ、より好ましくは０．０１〜１０μＭ、０．０１〜５μＭ、または０．０１〜１μＭのＩＣ５０値で、野生型ＩＤＨおよび／または変異体ＩＤＨを阻害する。
【００６２】
本明細書において使用される「選択的に阻害する」という用語は、野生型ＩＤＨに対する化合物のＩＣ５０が、ＩＤＨ変異体に対する化合物のＩＣ５０よりも少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、好ましくは１０倍、２０倍、３０倍または５０倍高いことを意味する。
【００６３】
合成方法
その塩、エステル、水和物、または溶媒和物または立体異性体を含む、本明細書において提供される化合物の合成は、以下の一般的な合成スキームで示される。本明細書において提供される化合物は、任意の公知の有機合成技術を使用して調製することができ、かつ多数の可能な合成経路のいずれかに従って合成することができ、したがって、これらのスキームは、単なる例示にすぎず、かつ本明細書において提供される化合物の調製に使用することができる他の可能な方法を限定することを意味するものではない。さらに、スキーム中のステップはさらに例示するためのものであり、必要に応じて変更することができる。例中の化合物の実施形態は、研究のために、かつ規制当局へ提出の可能性があるために、中国で合成した。
【００６４】
本開示の化合物を調製するための反応は、好適な溶媒中で行うことができ、好適な溶媒は、有機合成の当業者によって容易に選択することができる。好適な溶媒は、反応が行われる温度で、例えば、溶媒の凍結温度〜溶媒の沸騰温度の範囲とすることができる温度で、出発材料（反応物）、中間体、または生成物と実質的に非反応性とすることができる。所与の反応は、１種類の溶媒または１種類を超える溶媒の混合物中で行うことができる。特定の反応ステップに応じて、特定の反応ステップのための好適な溶媒を当業者によって選択することができる。
【００６５】
本開示の化合物の調製は、さまざまな化学基の保護および脱保護を伴うことができる。保護および脱保護の必要性、および適切な保護基の選択は、当業者によって容易に決定することができる。保護基の化学構造は、例えば、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９９年）で見い出すことができ、この文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【００６６】
反応は、当技術分野において公知の任意の好適な方法に従ってモニターすることができる。例えば、生成物の形成は、核磁気共鳴分光法（例えば、１Ｈまたは１３Ｃ）、赤外線分光法、分光光度法（例えば、ＵＶ〜可視）、質量分析法などの分光学的手段によって、または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、液体クロマトグラフィー−質量分光法（ＬＣＭＳ）、もしくは薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）などのクロマトグラフィー法によってモニターすることができる。化合物は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ＬＣ−ＭＳ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ」、Ｋａｒｌ  Ｆ．Ｂｌｏｍ、Ｂｒｉａｎ  Ｇｌａｓｓ、Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｓｐａｒｋｓ、Ａｎｄｒｅｗ  Ｐ．Ｃｏｍｂｓ  Ｊ．Ｃｏｍｂｉ．Ｃｈｅｍ．２００４年、６（６）、８７４〜８８３頁、この文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるものとする）および順相シリカクロマトグラフィーを含むさまざまな方法で、当業者によって精製することができる。
【００６７】
式（Ｉａ）の中間体化合物は、スキーム１〜５で示すように合成することができ、式（Ｉａ）の化合物は、スキーム６〜１１で示すように合成することができる。
【００６８】
スキーム１：式（Ｉａ）の中間体の合成
【００６９】
【化５】
2019522056.tif 000020
【００７０】
ステップ１：化合物１００１を、ＮＢＳおよびＢＰＯと、ＣＣｌ４中で反応させ、化合物１００２を得た（式中、Ｒ２の定義は上記で開示されるとおりである）。
ステップ２：化合物１００２を、Ｒ１ＮＨ２ ＨＣｌと、Ｃｓ２ＣＯ３の存在下で反応させ、化合物１００４を得た（式中、Ｒ１の定義は上記で開示されるとおりである）。
【００７１】
スキーム２：式（Ｉａ）の中間体の合成
【００７２】
【化６】
2019522056.tif 000021
【００７３】
ステップ１：ＤＣＭ中の化合物１００５を、ｍ−トリルボロン酸、Ｃｕ（ＯＡｃ）２およびＴＥＡと反応させ、化合物１００６を得た。
ステップ２：ＴＨＦ中の化合物１００６を、（Ｒ）−（＋）−２−メチル−２−プロパンスルフィンアミドと、Ｔｉ（ＯＥｔ）４の存在下で反応させ、化合物１００７を得た。
ステップ３：無水ＴＨＦ中の化合物１００７を、Ｌ−セレクトリドと反応させ、化合物１００８を得た。
ステップ４：ＭｅＯＨ中の化合物１００８を、ＨＣｌ／ＭｅＯＨと反応させ、化合物１００９を得た。
【００７４】
スキーム３：式（Ｉａ）の中間体の合成
【００７５】
【化７】
2019522056.tif 000022
【００７６】
ステップ１：トルエン中の化合物１０１０を、ｐ−クレゾール、ＣｕＩおよびＣｓ２ＣＯ３と反応させ、化合物１０１１を得た。
ステップ２：ＴＨＦ中の化合物１０１１を、（Ｒ）−（＋）−２−メチル−２−プロパンスルフィンアミドと、Ｔｉ（ＯＥｔ）４の存在下で反応させ、化合物１０１２を得た。
ステップ３：無水ＴＨＦ中の化合物１０１２を、Ｌ−セレクトリドと反応させ、化合物１０１３を得た。
ステップ４：ＭｅＯＨ中の化合物１０１３を、ＨＣｌ／ＭｅＯＨと反応させ、化合物１０１４を得た。
【００７７】
スキーム４：式（Ｉａ）の中間体の合成
【００７８】
【化８】
2019522056.tif 000023
【００７９】
ステップ１：トルエン中の化合物１０１５を、１−メチルピペラジンおよびＫ２ＣＯ３と反応させ、化合物１０１６を得た。
ステップ２：ＴＨＦ中の化合物１０１６を、（Ｒ）−（＋）−２−メチル−２−プロパンスルフィンアミドと、Ｔｉ（ＯＥｔ）４の存在下で反応させ、化合物１０１７を得た。
ステップ３：無水ＴＨＦ中の化合物１０１７を、Ｌ−セレクトリドと反応させ、化合物１０１８を得た。
ステップ４：ＭｅＯＨ中の化合物１０１８を、ＨＣｌ／ＭｅＯＨと反応させ、化合物１０１９を得た。
【００８０】
スキーム５：式（Ｉａ）の中間体の合成
【００８１】
【化９】
2019522056.tif 000024
【００８２】
ステップ１：ＤＣＭ中の化合物１０２０を、（４−フルオロフェニル）ボロン酸、Ｃｕ（ＯＡｃ）２およびＴＥＡと反応させ、化合物１０２１を得た。
ステップ２：ＴＨＦ中の化合物１０２１を、（Ｒ）−（＋）−２−メチル−２−プロパンスルフィンアミドと、Ｔｉ（ＯＥｔ）４の存在下で反応させ、化合物１０２２を得た。
ステップ３：無水ＴＨＦ中の化合物１０２２を、Ｌ−セレクトリドと反応させ、化合物１０２３を得た。
ステップ４：ＭｅＯＨ中の化合物１０２３を、ＨＣｌ／ＭｅＯＨと反応させ、化合物１０２４を得た。
【００８３】
スキーム６：式（Ｉａ）の化合物の合成
【００８４】
【化１０】
2019522056.tif 000025
【００８５】
エチレングリコール中の化合物１００４を、化合物１０２５およびＴＥＡと反応させ、標的化合物を得た（式中、Ｒ１、Ｒ２、ＸおよびＹの定義は、上記で開示されたとおりである）。
【００８６】
スキーム７：式（Ｉａ）の化合物の合成
【００８７】
【化１１】
2019522056.tif 000026
【００８８】
ステップ１：ＴＨＦ中の化合物１０２６を、水中のＮａＯＨと反応させ、化合物１０２７を得た。
ステップ２：ＤＭＦ中の化合物１０２７を、アニリン、ＤＩＰＥＡおよびＨＡＴＵと反応させ、標的化合物を得た。
【００８９】
スキーム８：式（Ｉａ）の化合物の合成
【００９０】
【化１２】
2019522056.tif 000027
【００９１】
ジオキサン／Ｈ２Ｏ中の化合物１０２８を、水中の１−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、Ｃｓ２ＣＯ３およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２と反応させ、標的化合物を得た。
【００９２】
スキーム９：式（Ｉａ）の化合物の合成
【００９３】
【化１３】
2019522056.tif 000028
【００９４】
ステップ１：ジオキサン中の化合物１０２９を、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメート、ｔ−ＢｕＯＫ、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４およびＸ−ｐｈｏｓと反応させ、化合物１０３０を得た。
ステップ２：ＭｅＯＨ中の化合物１０３０を、ＨＣｌ／ＭｅＯＨと反応させ、標的化合物を得た。
【００９５】
スキーム１０：式（Ｉａ）の化合物の合成
【００９６】
【化１４】
2019522056.tif 000029
ＴＨＦ中の化合物１０３１を、Ａｃ２Ｏ、ＴＥＡおよびＤＭＡＰと反応させ、標的化合物を得た。
【００９７】
スキーム１１：式（Ｉａ）の化合物の合成
【００９８】
【化１５】
2019522056.tif 000030
【００９９】
ＴＨＦ中の化合物１０３２を、水中のＮａＯＨと反応させ、標的化合物を得た。
【０１００】
医薬組成物
本開示は、本明細書において開示される少なくとも１種の化合物を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、本明細書において開示される１種を超える化合物を含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、本明細書において開示される１種または複数の化合物と、薬学的に許容される担体とを含む。
【０１０１】
薬学的に許容される担体は、医薬分野において周知の様式で調製することができる、当技術分野における従来の医薬担体である。いくつかの実施形態において、本明細書において開示される化合物を、薬学的に許容される担体と混ぜて、医薬組成物を調製してもよい。
【０１０２】
本明細書において使用される「薬学的に許容される」という表現は、健全な医学的判断の範囲内で、ヒトおよび動物の組織と接触させて使用するために好適であり、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、もしくは他の問題または合併症がなく、妥当な利点／リスク比に見合う、化合物、材料、組成物、および／または剤形を指す。いくつかの実施形態において、薬学的に許容される化合物、材料、組成物、および／または剤形は、動物、より詳細にはヒトに使用するための、規制当局（米国食品医薬品局、中国食品医薬品局または欧州医薬品庁など）によって承認されたもの、または一般的に認識されている薬局方（米国薬局方、中国薬局方または欧州薬局方など）に記載されているものを指す。
【０１０３】
本明細書において使用される「薬学的に許容される担体」という用語は、本明細書において提供される化合物の、一方の位置、体液、組織、臓器（内部または外部）、または身体の一部から、もう一方の位置、体液、組織、臓器、または身体の一部への送達または運搬に関与する、液体もしくは固体フィラー、希釈剤、賦形剤、溶媒または封入材料などの薬学的に許容される材料、組成物またはビヒクルを指す。薬学的に許容される担体は、動物組織への接触に使用することができ、過剰な毒性または有害効果がない、ビヒクル、希釈剤、賦形剤、または他の材料とすることができる。例示的な薬学的に許容される担体としては、糖、デンプン、セルロース、モルト、トラガカント、ゼラチン、リンガー溶液、アルギン酸、等張生理食塩水、および緩衝剤などが挙げられる。本開示において用いることができる薬学的に許容される担体としては、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ（１９９１年）で開示されているものなどの、当技術分野において一般的に知られているものがあり、この文献は、参照によって本明細書に組み込まれるものとする。
【０１０４】
薬学的に許容される担体として役割を果たすことができる材料のいくつかの例としては：（１）ラクトース、グルコースおよびスクロースなどの糖；（２）コーンスターチおよびジャガイモデンプンなどのデンプン；（３）セルロース、ならびにナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどのセルロースの誘導体；（４）トラガカント末；（５）モルト；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）ココアバターおよび坐剤ワックスなどの賦形剤、；（９）落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油およびダイズ油などの油、；（１０）プロピレングリコールなどのグリコール；（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなどのポリオール；（１２）オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル；（１３）寒天；（１４）水酸物マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；（１５）アルギン酸；（１６）発熱因子不含水；（１７）等張生理食塩水；（１８）リンガー溶液；（１９）エチルアルコールおよびプロパンアルコールなどのアルコール；（２０）リン酸緩衝液；および（２１）アセトンなどの医薬製剤で用いられる他の非毒性適合物質が挙げられる。
【０１０５】
医薬組成物は、ｐＨ調整剤および緩衝剤、ならびに毒性調整剤など、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、および乳酸ナトリウムなどの生理学的条件に近づけるために必要とされるような薬学的に許容される補助物質を含んでいてもよい。
【０１０６】
医薬組成物の形態は、多数の基準によって決まり、その基準としては、これらに限定されないが、投与経路、疾患の程度、または投与する用量が挙げられる。
【０１０７】
医薬組成物は、経口、経鼻、直腸、経皮、静脈内、または筋肉内投与用に製剤化することができる。所望の投与経路に従って、医薬組成物は、錠剤、カプセル剤、丸剤、糖衣錠剤、粉末剤、顆粒剤、サッシェ剤、カシェ剤、ロゼンジ剤、懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ剤、エアロゾル剤（固体としてまたは液体媒体で）、噴霧剤、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、パッチ剤、吸入剤、または坐剤の形態で製剤化することができる。
【０１０８】
医薬組成物は、当技術分野において公知の手順を用いることによって患者に投与した後に、有効成分の迅速な、持続的なまたは遅延的な放出を提供するように製剤化することができる。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、持続放出形態で製剤化される。本明細書において使用される「持続放出形態」という用語は、その有効成分が主に対象の胃腸管で長時間にわたって（徐放）、または特定の位置で（制御放出）、対象において生物学的吸収に関して利用可能となるように、活性薬剤が医薬組成物から放出されることを指す。いくつかの実施形態において、長時間は、約１時間〜２４時間、２時間〜１２時間、３時間〜８時間、４時間〜６時間、１〜２日以上とすることができる。特定の実施形態において、長時間は、少なくとも約４時間、少なくとも約８時間、少なくとも約１２時間、または少なくとも約２４時間である。医薬組成物は、錠剤の形態で製剤化することができる。例えば、活性薬剤の放出速度は、胃腸液での活性薬剤の溶解、およびその後の錠剤または丸剤から外へのｐＨとは無関係な拡散によって制御することができるだけではなく、錠剤の崩壊および浸食の物理的なプロセスによって影響を与えることもできる。いくつかの実施形態において、「Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ」、ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編）、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４年）；「Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ」、Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ、ＳｍｏｌｅｎおよびＢａｌｌ（編）、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４年）；ＲａｎｇｅｒおよびＰｅｐｐａｓ、１９８３年、Ｊ  Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ  Ｃｈｅｍ．２３：６１；Ｌｅｖｙら、１９８５年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０も参照のこと；Ｄｕｒｉｎｇら、１９８９年、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１；Ｈｏｗａｒｄら、１９８９年、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５で開示されるようなポリマー材料を、持続放出のために使用することができる。上記の参考文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるものとする。
【０１０９】
ある実施形態において、医薬組成物は、本明細書において提供される化合物を約０．０１ｍｇ〜約１０００ｍｇ（例えば約０．０１ｍｇ〜約１０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、約５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約５ｍｇ〜約２０ｍｇ、約５ｍｇ〜約３０ｍｇ、約５ｍｇ〜約４０ｍｇ、約５ｍｇ〜約５０ｍｇ、約１０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約２０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約３０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約４０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約５０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約５０ｍｇ〜約２００ｍｇ、約５０ｍｇ〜約３００ｍｇ、約５０ｍｇ〜約４００ｍｇ、約５０ｍｇ〜約５００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約２００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約３００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約４００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約５００ｍｇ、約２００ｍｇ〜約５００ｍｇ、約３００ｍｇ〜約５００ｍｇ、約４００ｍｇ〜約５００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約６００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約７００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約８００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、または約９００ｍｇ〜約１０００ｍｇ）を含む。１日当たりの対象１名当たりの好適な投与量は約５ｍｇ〜約５００ｍｇ、好ましくは約５ｍｇ〜約５０ｍｇ、約５０ｍｇ〜約１００ｍｇ、または約５０ｍｇ〜約５００ｍｇとすることができる。
【０１１０】
特定の実施形態において、医薬組成物は単位剤形で製剤化することができ、各投与量は、本明細書において開示される化合物約０．０１ｍｇ〜約１０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、約５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約５ｍｇ〜約２０ｍｇ、約５ｍｇ〜約３０ｍｇ、約５ｍｇ〜約４０ｍｇ、約５ｍｇ〜約５０ｍｇ、約１０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約２０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約３０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約４０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約５０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約５０ｍｇ〜約２００ｍｇ、約５０ｍｇ〜約３００ｍｇ、約５０ｍｇ〜約４００ｍｇ、約５０ｍｇ〜約５００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約２００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約３００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約４００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約５００ｍｇ、約２００ｍｇ〜約５００ｍｇ、約３００ｍｇ〜約５００ｍｇ、約４００ｍｇ〜約５００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約６００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約７００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約８００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、または約９００ｍｇ〜約１０００ｍｇを含む。「単位剤形」という用語は、ヒト対象および他の哺乳動物用の単位投与量として好適な、物理的に個別の単位を指し、各単位は、好適な医薬担体と共同で所望の治療的効果を得るように計算された所定量の活性材料を含む。
【０１１１】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、本明細書において開示される１種または複数の化合物を第１の有効成分として含み、かつ第２の有効成分をさらに含む。第２の有効成分は、当技術分野において公知の任意の抗がん剤とすることができる。がんまたは腫瘍を処置するための抗がん剤の代表的な例としては、これらに限定されるものではないが、細胞シグナル伝達阻害剤（例えば、イマチニブ、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ダサチニブ、ボリノスタット、ラパチニブ、テムシロリムス、ニロチニブ、エベロリムス、パゾパニブ、トラスツズマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、ラニビズマブ、ペガプタニブ、およびパニツムマブなど）、有糸分裂阻害剤（例えば、パクリタキセル、ビンクリスチン、およびビンブラスチンなど）、アルキル化剤（例えば、シスプラチン、シクロホスファミド、クロラムブシル、およびカルムスチンなど）、代謝産物拮抗物質（例えば、メトトレキサート、および５−ＦＵなど）、インターカレート抗がん剤（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｉｎｇ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｇｅｎｔ）、（例えば、アクチノマイシン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、およびマイトマイシン−Ｃなど）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、イリノテカン、トポテカン、およびテニポシドなど）、免疫療法剤（例えば、インターロイキン、およびインターフェロンなど）および抗ホルモン剤（例えば、タモキシフェン、およびラロキシフェンなど）があり得る。いくつかの実施形態において、第２の活性薬剤は、イブルチニブ、ベネトクラックス、イマチニブメシレート、ニロチニブ塩酸塩、ボスチニブ、ダサチニブ、エトポシド、リン酸フルダラビン、ポナチニブ、ビンクリスチンスルフェート、メトトレキサート、シクロホスファミド、ロムスチン、テニポシド、テモゾロミド、フォテムスチン、カルムスチン、ベバシズマブ、ピシバニール、フルオロウラシル、メルファラン、ゲムシタビン塩酸塩のうちの１種または複数である。
【０１１２】
処置方法
本開示は、ＩＤＨと関連する疾患を処置する方法であって、１種または複数の化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物もしくは立体異性体または本明細書において開示される医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む方法を提供する。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、１種または複数の化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物もしくは立体異性体または本明細書において提供される医薬組成物は、非経口経路または非経口ではない経路を介して投与される。いくつかの実施形態において、１種または複数の化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物もしくは立体異性体、または医薬組成物は、経口で、経腸で、経頬側で、経鼻で、経鼻腔で、経粘膜で、経表皮で（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｌｙ）、経皮で（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｌｙ）、経皮で（ｄｅｒｍａｌｌｙ）、経眼で、経肺で、経舌下で、経直腸で、経膣で、局所に、皮下に、静脈内に、筋肉内に、動脈内に、髄腔内に、関節包内に（ｉｎｔｒａｃａｐｓｕｌａｒｌｙ）、眼窩内に、心臓内に（ｉｎｔｒａｃａｒｄｉａｃａｌｌｙ）、皮内に、腹腔内に、経気管で、表皮下に、関節内に、被膜下に、クモ膜下に、髄腔内に、または胸骨内に投与される。
【０１１４】
本明細書において提供される化合物は、純粋な形態で、他の有効成分と組み合わせてまたは本開示の医薬組成物の形態で投与することができる。いくつかの実施形態において、本明細書において提供される化合物は、当技術分野において公知の１種または複数の抗がん剤と、同時にまたは連続的に組み合わせて、必要とする対象に投与することができる。いくつかの実施形態において、投与は、１日１回、１日２回、１日３回、または２日ごとに１回、３日ごとに１回、４日ごとに１回、５日ごとに１回、６日ごとに１回、１週に１回で行われる。
【０１１５】
特定の実施形態において、本開示は、化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物もしくは立体異性体、または本開示の医薬組成物の、α−ＫＧのＤ−２−ＨＧへの変換と関連する疾患を処置するための医薬の製造における使用を提供する。特定の実施形態において、本開示は、化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物もしくは立体異性体、または本開示の医薬組成物の、変異体ＩＤＨと関連する疾患を処置するための医薬の製造における使用を提供する。
【０１１６】
特定の実施形態において、α−ＫＧのＤ−２−ＨＧへの変換と関連する疾患は、がんを含む、変異体ＩＤＨと関連する疾患である。
【０１１７】
特に、がんとしては、これらに限定されるものではないが、白血病、神経膠芽腫、黒色腫、軟骨肉腫、胆管細胞癌、骨肉腫、リンパ腫、肺がん、腺腫、骨髄腫、肝細胞癌、副腎皮質癌、膵臓がん、乳がん、前立腺がん、肝臓がん、胃がん、結腸がん、直腸結腸がん、卵巣がん、子宮頸がん、脳がん、食道がん、骨がん、精巣がん、皮膚がん、腎臓がん、中皮腫、神経芽細胞腫、甲状腺がん、頭頚部がん、食道がん、眼がん、前立腺がん、鼻咽頭がん、または口腔がんが挙げられる。いくつかの実施形態において、がんは、白血病、神経膠芽腫、または胆管細胞癌である。
【０１１８】
本開示における化合物およびその医薬組成物は、哺乳動物における、特にヒトにおける、α−ＫＧのＤ−２−ＨＧへの変換と関連する疾患または状態のいずれかの発症または発生の予防または処置に使用することができる。いくつかの実施形態において、本開示における化合物およびその医薬組成物は、哺乳動物における、特にヒトにおける、変異体ＩＤＨと関連する疾患または状態のいずれかの発症または発生の予防または処置に使用することができる。
【０１１９】
このような状況において、本開示はまた、本開示の化合物または医薬組成物を単独でまたは他の成分（例えば第２の有効成分、例えば抗がん剤）と組み合わせて処置するために好適な患者をスクリーニングする方法を提供する。この方法には、患者からの腫瘍試料をシーケンシングすること、および、患者におけるＤ−２−ＨＧの蓄積を検出すること、または患者におけるＩＤＨの変異状態を検出することが含まれる。
【実施例】
【０１２０】
以下で本開示の一般的な方法をさらに説明する。本開示の化合物は、当技術分野において公知の方法によって調製してもよい。以下で本開示の好ましい化合物の詳細な調製方法を例示する。しかし、これらは決して本開示の化合物の調製方法を限定するものではない。
【０１２１】
合成例
以下の例における化合物の構造を、核磁気共鳴（ＮＭＲ）または／および質量分析法（ＥＳＩ）によって特性決定した。ＮＭＲシフト（δ）を１０−６（ｐｐｍ）の単位で得た。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを、ジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）またはＣＤＣｌ３中、Ｖａｒｉａｎ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  ＶＸ  ４００分光器で、内部標準としてテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を用いて記録した。
【０１２２】
ＥＳＩ−ＨＲＭＳ測定を、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２６０−６２３０  ＴＯＦ  ＬＣ−ＭＳ質量分光器を用いて行った。
【０１２３】
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）測定を、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００  ＬＣで、Ｐｈｅｎｏｍｅｎ  Ｃ１８カラム（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、０．４μｍ）を使用して行った。
【０１２４】
薄層クロマトグラフィーを、Ｙａｎｔａｉ  Ｈｕａｎｇｈａｉ  ＨＳＧＦ２５４シリカゲルプレートを使用して行った。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）に使用したシリカゲルプレートは、０．１５ｍｍ〜０．２ｍｍであった。ＴＬＣによる生成物の分離および精製に使用したシリカゲルプレートは、０．４ｍｍ〜０．５ｍｍであった。
【０１２５】
精製クロマトグラフィーカラムには、担体としてシリカゲルを使用する（２００〜３００メッシュ、Ｙａｎｔａｉ  Ｈｕａｎｇｈａｉ  ｃｏ．製）。
【０１２６】
本開示の公知の出発材料は、当技術分野において公知の方法を使用することによってもしくはその方法に従って合成することができる、またはＡｌｆａ  Ａｅｓａｒ、Ｌａｎｇｃａｓｔｅｒ、ＴＣＩ、Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂｅｐｈａｒｍ、およびＳｃｏｈｅｍから購入することができる。
【０１２７】
特に規定がない限り、例における反応は、アルゴンまたは窒素雰囲気下ですべて行った。アルゴンまたは窒素雰囲気は、反応フラスコが約１Ｌの体積を有するアルゴンまたは窒素バルーンに連結されていることを指す。水素添加は、通常、真空下で水素を充填し、３回繰り返して行った。特に規定がない限り、例における反応温度は、周囲温度であり、その周囲温度は２０℃〜３０℃であった。
【０１２８】
例における反応の進行は、ＴＬＣによって監視した。反応に使用した溶離液系としては、ジクロロメタン−メタノール系および石油エーテル−酢酸エチル系が挙げられる。溶媒の体積比は、化合物の異なる極性によって調整した。
【０１２９】
化合物の精製に使用したカラムクロマトグラフィーの溶離系およびＴＬＣの溶離液系としては、ジクロロメタン−メタノール系および石油エーテル−酢酸エチル系が挙げられる。溶媒の体積比は、化合物の異なる極性によって調整した。トリエチルアミンおよび酢酸などの少量のアルカリ性または酸性剤を添加して、調整することができる。
【０１３０】
合成例１
【０１３１】
【化１６】
2019522056.tif 000031
（Ｓ）−４−（１−（４−ブロモフェニル）エチルアミノ）−２−エチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物１を、スキーム１および６に従って調製した。
【０１３２】
ステップ１
【０１３３】
【化１７】
2019522056.tif 000032
メチル３−（ブロモメチル）−２−クロロイソニコチネート
メチル２−クロロ−３−メチルイソニコチネート（６．００ｇ、３２．３２ｍｍｏｌ）のＣＣｌ４（３０ｍＬ）中溶液に、ＮＢＳ（６．０６ｇ、３３．９４ｍｍｏｌ）およびＢＰＯ（７８０ｍｇ、３．２３ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、反応混合物を３時間加熱還流した。ＴＬＣによって、出発材料が消費されたことが示された。次いで、それを周囲温度に冷却し、得られた沈殿物をろ過によって除去し、ＣＣｌ４（５ｍＬ）で洗浄した。ろ液を真空中で濃縮し、粗製生成物メチル３−（ブロモメチル）−２−クロロイソニコチネートを黄色油状物として得、それをさらに精製することなく次のステップで使用した。
【０１３４】
ステップ２
【０１３５】
【化１８】
2019522056.tif 000033
４−クロロ−２−エチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
上記粗製生成物をＴＨＦ（５０ｍＬ）中に溶解した。エタンアミン塩酸塩（２．６４ｇ、３２．３２ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（４２．１２ｇ、１２９．２８ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。それを周囲温度で１２時間撹拌した。ＴＬＣによって、出発材料が消費されたことが示された。固形物をろ過によって除去し、酢酸エチル（１０ｍＬ）で洗浄し、ろ液を真空中で濃縮した。粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１で溶離させた）で精製し、所望の生成物を淡黄色固形物として得た（２．３１ｇ、収率３６．２％、２ステップで）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.51 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 7.64 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 4.40 (s, 2H), 3.67 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 1.28 (t, J= 7.2 Hz, 3H).
【０１３６】
ステップ３
【０１３７】
【化１９】
2019522056.tif 000034
（Ｓ）−４−（（１−（４−ブロモフェニル）エチル）アミノ）−２−エチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
４−クロロ−２−エチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン（１５０ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）のエチレングリコール（１５ｍＬ）中溶液に、（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）エタンアミン（２２９ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（２３２ｍｇ、２．２９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１５０℃に加熱し、５時間撹拌した。それを周囲温度に冷却し、水３０ｍＬで希釈し、酢酸エチル（２５ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。粗製生成物を、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）で精製し、所望の生成物を白色固形物として得た（８０ｍｇ、収率２９．１％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.13 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.04 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 6.84 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.24 (br, 1H), 4.72 - 4.52 (m, 1H), 4.21 (s, 2H), 3.40 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.05 (s, 3H), 1.54 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.14 (t, J = 7.1 Hz, 3H). ESI-MS m/z 360.1 [M+H].
【０１３８】
合成例２
【０１３９】
【化２０】
2019522056.tif 000035
（Ｓ）−２−エチル−４−（１−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物１を、スキーム１および６に従って調製した。合成方法は、（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）エタンアミンを（Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）エタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例１と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.14 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 7.42-7.31(m, 2H), 7.27-7.09 (m, 2H), 6.99 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 5.28 (br, 1H), 4.61-4.41 (m, 1H), 4.15 (s, 2H), 3.51 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.35 (s, 3H), 1.58 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.12 (t, J = 7.2 Hz, 3H). ESI-MS m/z 300.1 [M+H].
【０１４０】
合成例３
【０１４１】
【化２１】
2019522056.tif 000036
（Ｓ）−２−エチル−４−（１−ｐ−トリルエチルアミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物３を、スキーム１および６に従って調製した。合成方法は、（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）エタンアミンを（Ｓ）−１−（４−メチルフェニル）エタンアミンで置き換えたことを除いて合成例１と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.14 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.07 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 6.94 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.27 (br, 1H), 4.69 - 4.42 (m, 1H), 4.12 (s, 2H), 3.56 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.52 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.16 (t, J = 7.4 Hz, 3H). ESI-MS m/z 296.2 [M+H].
【０１４２】
合成例４
【０１４３】
【化２２】
2019522056.tif 000037
（Ｓ）−２−シクロプロピル−４−（１−フェニルエチルアミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物４を、スキーム１および６に従って調製した。合成方法は、エタンアミン塩酸塩をシクロプロパンアミン塩酸塩で置き換え、かつ（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）エタンアミンを（Ｓ）−１−フェニルエタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例１と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.12 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.24 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.20 - 7.13 (m, 1H), 6.91 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.30 (p, J = 7.0 Hz, 1H), 4.54 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.07 (s, 2H), 2.81 (h, J = 4.7, 3.6 Hz, 1H), 1.52 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.88 - 0.69 (m, 4H). ESI-MS m/z 294.2 [M+H].
【０１４４】
合成例５
【０１４５】
【化２３】
2019522056.tif 000038
（Ｓ）−２−ブチル−４−（１−フェニルエチルアミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物５を、スキーム１および６に従って調製した。合成方法は、エタンアミン塩酸塩をｎ−ブチルアミン塩酸塩で置き換え、かつ（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）エタンアミンを（Ｓ）−１−フェニルエタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例１と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.14 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.22 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.12 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.41-5.22 (m, 1H), 4.07 (s, 2H), 3.62 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.61-1.68 (m, 2H), 1.35-1.42 (m, 2H), 0.95 (t, J = 7.4 Hz, 3H). ESI-MS m/z 310.2 [M+H].
【０１４６】
合成例６
【０１４７】
【化２４】
2019522056.tif 000039
（Ｓ）−２−ベンジル−４−（１−フェニルエチルアミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物６を、スキーム１および６に従って調製した。合成方法は、エタンアミン塩酸塩をベンジルアミンで置き換え、かつ（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）エタンアミンを（Ｓ）−１−フェニルエタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例１と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.14 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.37 - 7.11 (m, 10H), 7.09 - 6.94 (m, 1H), 5.23 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 4.69 (d, J = 2.7 Hz, 2H), 4.09 (s, 2H), 1.53 (s, 3H). ESI-MS m/z 344.2 [M+H].
【０１４８】
合成例７
【０１４９】
【化２５】
2019522056.tif 000040
（Ｓ）−２−（４−メトキシベンジル）−４−（１−フェニルエチルアミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物７を、スキーム１および６に従って調製した。合成方法は、エタンアミン塩酸塩を４−メトキシベンジルアミンで置き換え、かつ（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）エタンアミンを（Ｓ）−１−フェニルエタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例１と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.14 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.31 - 7.15 (m, 5H), 7.14 - 7.08 (m, 2H), 7.01 - 6.95 (m, 1H), 6.82 - 6.74 (m, 2H), 5.26 (p, J = 6.9 Hz, 1H), 4.61 (d, J = 2.5 Hz, 2H), 4.17 (s, 2H), 3.95 (s, 2H), 3.71 (d, J = 1.9 Hz, 3H), 1.49 (d, J = 6.6 Hz, 3H). ESI-MS m/z 374.2 [M+H].
【０１５０】
合成例８
【０１５１】
【化２６】
2019522056.tif 000041
（Ｓ）−２−イソプロピル−４−（１−フェニルエチルアミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物８を、スキーム１および６に従って調製した。合成方法は、エタンアミン塩酸塩をイソプロピルアミンで置き換え、かつ（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）エタンアミンを（Ｓ）−１−フェニルエタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例１と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.13 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.26 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.32 (p, J = 7.2 Hz, 1H), 4.68-4.49 (m, 2H), 4.07 (s, 2H), 1.54 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.18 (d, J = 6.7 Hz, 6H). ESI-MS m/z 296.2 [M+H].
【０１５２】
合成例９
【０１５３】
【化２７】
2019522056.tif 000042
（Ｓ）−２−（２−メトキシエチル）−４−（１−フェニルエチルアミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物９を、スキーム１および６に従って調製した。合成方法は、エタンアミン塩酸塩を２−メトキシエチルアミンで置き換え、かつ（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）エタンアミンを（Ｓ）−１−フェニルエタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例１と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.15 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.26 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 1H), 6.96 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.32 (p, J = 7.1 Hz, 1H), 4.38 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 3.70 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 3.53 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.27 (s, 3H), 1.54 (d, J = 6.7 Hz, 3H). ESI-MS m/z 312.2 [M+H].  
【０１５４】
合成例１０
【０１５５】
【化２８】
2019522056.tif 000043
（Ｓ）−２−エチル−４−（１−フェニルエチルアミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物１０を、スキーム１および６に従って調製した。合成方法は、（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）エタンアミンを（Ｓ）−１−フェニルエタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例１と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.15 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.32 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 7.30 (s, 2H), 7.19 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.32 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 4.46 (s, 1H), 4.13 (d, J = 3.0 Hz, 2H), 3.57 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.54 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.17 (t, J = 7.1 Hz, 3H). ESI-MS m/z 282.2 [M+H]. 
【０１５６】
合成例１１
【０１５７】
【化２９】
2019522056.tif 000044
（Ｓ）−２−エチル−４−（１−（４−メトキシフェニル）エチルアミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物１１を、スキーム１および６に従って調製した。合成方法は、（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）エタンアミンを（Ｓ）−１−（４−メトキシフェニル）エタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例１と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.22 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.02 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.33 (p, J = 6.9 Hz, 1H), 4.49 (s, 1H), 4.18 (s, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.64 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 1.59 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.29 - 1.23 (m, 3H). ESI-MS m/z 312.2 [M+H].  
【０１５８】
合成例１２
【０１５９】
【化３０】
2019522056.tif 000045
（Ｓ）−エチル−４−（１−（２−エチル−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−４−イルアミノ）エチル）ベンゾエート
本開示の化合物１２を、スキーム１および６に従って調製した。合成方法は、（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）エタンアミンを（Ｓ）−エチル−４−（（１−アミノ）エチル）ベンゾエートで置き換えたことを除いて、合成例１と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.16 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.00 (dd, J = 16.5, 8.2 Hz, 2H), 7.43 (t, J = 9.1 Hz, 2H), 7.01 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.41 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 4.70 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.34 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.24 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.63 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.58 (t, J = 7.6 Hz, 3H), 1.36 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.24 (t, J = 7.2 Hz, 3H). ESI-MS m/z 354.2 [M+H]. 
【０１６０】
合成例１３
【０１６１】
【化３１】
2019522056.tif 000046
（Ｓ）−４−（１−（２−エチル−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−４−イルアミノ）エチル）−Ｎ−フェニルベンズアミド
【０１６２】
化合物１２から出発し、スキーム７に従って本開示の化合物１３を調製した。
【０１６３】
ステップ１
【０１６４】
【化３２】
2019522056.tif 000047
（Ｓ）−４−（１−（（２−エチル−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−４−イル）アミノ）エチル）安息香酸
化合物１２（５００ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液に、ＮａＯＨ（１４１ｍｇ、３．５４ｍｍｏｌ）の水（５ｍＬ）中溶液を添加した。反応混合物を、周囲温度で５時間撹拌した。ＴＬＣによって、反応が完了したことが示された。混合物を濃縮し、大部分のＴＨＦを除去し、水（１０ｍＬ）で希釈し、２Ｎ  ＨＣｌ溶液を添加することによってｐＨ７に酸性化した。得られた沈殿物をろ過によって収集し、水（５ｍＬ）で洗浄し、真空中、７５℃で乾燥し、所望の生成物を白色固形物として得た（３３０ｍｇ、収率７１．７％）。
【０１６５】
ステップ２
【０１６６】
【化３３】
2019522056.tif 000048
（Ｓ）−４−（１−（（２−エチル−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−４−イル）アミノ）エチル）−Ｎ−フェニルベンズアミド
（Ｓ）−４−（１−（（２−エチル−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−４−イル）アミノ）エチル）安息香酸（３２０ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に、アニリン（１１０ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（２５４ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（５５９ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、それを周囲温度で１０時間撹拌した。ＴＬＣによって、反応が完了したことが示された。溶媒を真空中で濃縮することによって除去し、残渣を酢酸エチル（２０ｍＬ）中に溶解し、水（１５ｍＬ×２）および食塩水（１５ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層を濃縮し、粗製生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝３０：１で溶離させた）で精製し、所望の生成物を白色固形物として得た（１２０ｍｇ、収率３０．５％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.18 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.81 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.63 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.48 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.36 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 7.14 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.49 - 5.37 (m, 1H), 4.63 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 4.25 (d, J = 2.6 Hz, 2H), 3.64 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.31 - 3.23 (m, 1H), 1.61 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.25 (t, J = 7.3 Hz, 3H). ESI-MS m/z 401.2 [M+H].
【０１６７】
合成例１４
【０１６８】
【化３４】
2019522056.tif 000049
（Ｓ）−２−エチル−４−（１−（４−（１−メチル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）フェニル）エチルアミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
【０１６９】
化合物１から出発し、本開示の化合物１４を、スキーム８に従って調製した。
【０１７０】
化合物１（４００ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）のジオキサン／Ｈ２Ｏ（１５ｍＬ＋５ｍＬ）中溶液に、１−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール（３４８ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（７２４ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１６２ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１００℃で４時間加熱した。ＴＬＣによって、反応が完了したことが示された。溶媒を真空中で濃縮することによって除去し、残渣を酢酸エチル（２０ｍＬ）中に溶解し、水（１５ｍＬ）および食塩水（１５ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層を濃縮し、粗製生成物を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）で精製し、所望の生成物を白色固形物として得た（１５０ｍｇ、収率３７．３％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.20 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.71 (s, 1H), 7.45 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.03 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.40 (p, J = 6.8 Hz, 1H), 4.66 (s, 1H), 4.23 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 4.12 (d, J = 10.2 Hz, 3H), 3.68 - 3.59 (m, 2H), 1.62 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.24 (t, J = 7.2 Hz, 3H). ESI-MS m/z 363.2 [M+H].
【０１７１】
合成例１５
【０１７２】
【化３５】
2019522056.tif 000050
（Ｓ）−２−エチル−４−（１−（４−（ｍ−トリルオキシ）フェニル）エチルアミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
【０１７３】
本開示の化合物１５を、スキーム１、２および６に従って調製した。
【０１７４】
ステップ１
【０１７５】
【化３６】
2019522056.tif 000051
１−（４−（ｍ−トリルオキシ）フェニル）エタノン
１−（４−ヒドロキシフェニル）エタノン（３．００ｇ、２２．０３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）中溶液に、ｍ−トリルボロン酸（４．５０ｇ、３３．１０ｍｍｏｌ）、Ｃｕ（ＯＡｃ）２（８．００ｇ、４４．０７ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（１１．１５ｇ、１１０．１７ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、混合物を周囲温度で１２時間撹拌した。ＴＬＣによって、１−（４−ヒドロキシフェニル）エタノンが消費されたことが示された。固形物をろ過によって除去し、ＤＣＭ（１０ｍＬ）で洗浄し、ろ液を水（３０ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層を真空中で濃縮し、粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１で溶離させた）で精製し、所望の生成物を淡黄色固形物として得た（２．００ｇ、収率４０．１％）。
【０１７６】
ステップ２
【０１７７】
【化３７】
2019522056.tif 000052
（Ｒｓ）−２−メチル−Ｎ−（１−（４−（ｍ−トリルオキシ）フェニル）エチリデン）プロパン−２−スルフィンアミド
１−（４−（ｍ−トリルオキシ）フェニル）エタノン（１．５０ｇ、６．６３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、（Ｒ）−（＋）−２−メチル−２−プロパンスルフィンアミド（１．２１ｇ、９．９４ｍｍｏｌ）およびＴｉ（ＯＥｔ）４（４．５４ｇ、１９．８９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１６時間加熱還流した。ＴＬＣによって、出発材料が消費されたことが示された。それを周囲温度に冷却し、次いで水性飽和ＮａＣｌ溶液（５０ｍＬ）へ注ぎ入れた。得られた固形物をろ過によって除去し、酢酸エチル（１０ｍＬ）で洗浄した。そして、ろ液を酢酸エチル（４０ｍＬ）で抽出した。分離した有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮し、粗製生成物を得（１．６０ｇ、収率７３．３％）、それをさらに精製することなく次のステップで使用した。
【０１７８】
ステップ３
【０１７９】
【化３８】
2019522056.tif 000053
（Ｒｓ）−２−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（ｍ−トリルオキシ）フェニル）エチル）プロパン−２−スルフィンアミド
（Ｒｓ）−２−メチル−Ｎ−（１−（４−（ｍ−トリルオキシ）フェニル）エチリデン）プロパン−２−スルフィンアミド（８００ｍｇ、２．３０ｍｍｏｌ）および無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）の混合物を−５０℃に冷却し、Ｌ−セレクトリド（１Ｍ、４．６ｍｌ、４．６０ｍｍｏｌ）を混合物へ、Ｎ２下、−５０℃で撹拌しながら滴下した。混合物を１時間撹拌し、次いで周囲温度に加温した。完了時に、反応生成物を水（５０ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（６０ｍＬ）で抽出した。分離した有機層を真空中で濃縮した。粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１０で溶離させた）で精製し、所望の生成物を黄色固形物として得た（５００ｍｇ、収率６２．１％）。
【０１８０】
ステップ４
【０１８１】
【化３９】
2019522056.tif 000054
（Ｓ）−１−（４−（ｍ−トリルオキシ）フェニル）エタンアミン塩酸塩
（Ｒｓ）−２−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（ｍ−トリルオキシ）フェニル）エチル）プロパン−２−スルフィンアミド（４５０ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）中溶液に、ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（４Ｍ、３．２ｍＬ、１２．８０ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、それを周囲温度で１６時間撹拌した。ＭｅＯＨを真空下で除去した。酢酸エチル（１０ｍＬ）を残渣に添加し、３０分間撹拌した。酢酸エチルを真空下で除去し、次いでＭＴＢＥ（１０ｍＬ）を残渣に添加し、１時間撹拌した。生成物をろ過によって収集し、ＭＴＢＥ（５ｍＬ）で洗浄し、真空中で乾燥し、所望の生成物をオフホワイト色固形物として得た（３１０ｍｇ、収率８６．６％）。
【０１８２】
ステップ５
【０１８３】
【化４０】
2019522056.tif 000055
（Ｓ）−２−エチル−４−（（１−（４−（ｍ−トリルオキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
合成例１のように得た、４−クロロ−２−エチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン（１２０ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）のエチレングリコール（１０ｍＬ）中溶液に、（Ｓ）−１−（４−（ｍ−トリルオキシ）フェニル）エタンアミン塩酸塩（２０８ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（１８５ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１５０℃に加熱し、５時間撹拌した。それを周囲温度に冷却し、水３０ｍＬで希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。粗製生成物を、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）で精製し、所望の生成物を白色固形物として得た（７８ｍｇ、収率２６．４％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.23 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.20 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.91 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.86 - 6.75 (m, 2H), 5.46 - 5.31 (m, 1H), 4.49 (s, 1H), 4.21 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.65 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 2.32 (s, 3H), 1.61 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.25 (t, J = 7.3 Hz, 3H). ESI-MS m/z 388.2 [M+H].
【０１８４】
合成例１６
【０１８５】
【化４１】
2019522056.tif 000056
（Ｓ）−２−エチル−４−（１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エチルアミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物１６を、スキーム１、２および６に従って調製した。合成方法は、ｍ−トリルボロン酸をｐ−トリルボロン酸で置き換えたことを除いて、合成例１５と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.23 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.13 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.04 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.92 (dd, J = 13.5, 8.5 Hz, 4H), 5.37 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 4.50 (s, 1H), 4.20 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 3.65 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 2.33 (s, 3H), 1.60 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.25 (t, J = 7.3 Hz, 3H). ESI-MS m/z 388.2 [M+H].
【０１８６】
合成例１７
【０１８７】
【化４２】
2019522056.tif 000057
（Ｓ）−２−エチル−４−（１−（４−（ｏ−トリルオキシ）フェニル）エチルアミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物１７を、スキーム１、２および６に従って調製した。合成方法は、ｍ−トリルボロン酸をｏ−トリルボロン酸で置き換えたことを除いて、合成例１５と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.23 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.26 (dd, J = 8.7, 6.1 Hz, 1H), 7.20 - 7.11 (m, 2H), 7.06 (dd, J = 12.4, 6.1 Hz, 2H), 6.88 (t, J = 9.2 Hz, 2H), 5.37 (p, J = 6.7 Hz, 1H), 4.48 (s, 1H), 4.20 (d, J = 1.5 Hz, 2H), 3.65 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 2.36 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.23 (s, 3H), 1.59 (t, J = 9.8 Hz, 3H), 1.25 (t, J = 7.3 Hz, 3H). ESI-MS m/z 388.2 [M+H].
【０１８８】
合成例１８
【０１８９】
【化４３】
2019522056.tif 000058
（Ｓ）−２−エチル−４−（１−（４−フェノキシフェニル）エチルアミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物１８を、スキーム１、２および６に従って調製した。合成方法は、ｍ−トリルボロン酸をフェニルボロン酸で置き換えたことを除いて、合成例１５と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.23 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.41 - 7.28 (m, 4H), 7.10 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 11.8, 8.3 Hz, 4H), 5.39 (p, J = 7.0 Hz, 1H), 4.48 (s, 1H), 4.21 (s, 2H), 3.65 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 1.61 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H). ESI-MS m/z 374.2 [M+H].
【０１９０】
合成例１９
【０１９１】
【化４４】
2019522056.tif 000059
（Ｓ）−２−エチル−４−（１−（４−（４−メトキシフェノキシ）フェニル）エチルアミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物１９を、スキーム１、２および６に従って調製した。合成方法は、ｍ−トリルボロン酸を４−メトキシフェニルボロン酸で置き換えたことを除いて、合成例１５と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.22 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.04 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.88 (dd, J = 11.4, 8.8 Hz, 4H), 5.36 (p, J = 6.9 Hz, 1H), 4.49 (s, 1H), 4.19 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.65 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.60 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H). ESI-MS m/z 404.2 [M+H].
【０１９２】
合成例２０
【０１９３】
【化４５】
2019522056.tif 000060
（Ｓ）−２−エチル−４−（１−（４−（４−フルオロフェノキシ）フェニル）エチルアミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物２０を、スキーム１、２および６に従って調製した。合成方法は、ｍ−トリルボロン酸を４−フルオロフェニルボロン酸で置き換えたことを除いて、合成例１５と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.23 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.08 - 6.89 (m, 7H), 5.43 - 5.33 (m, 1H), 4.41 (s, 1H), 4.20 (s, 2H), 3.66 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.60 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.26 (t, J = 7.3 Hz, 3H). ESI-MS m/z 392.2 [M+H].
【０１９４】
合成例２１
【０１９５】
【化４６】
2019522056.tif 000061
（Ｓ）−２−エチル−４−（（１−（４−（３−フルオロフェノキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物２１を、スキーム１、２および６に従って調製した。化合物２１の合成および特性決定方法は、ｍ−トリルボロン酸を３−フルオロフェニルボロン酸で置き換えたことを除いて、合成例１５と同様であった。
【０１９６】
合成例２２
【０１９７】
【化４７】
2019522056.tif 000062
（Ｓ）−２−エチル−４−（（１−（４−（２−フルオロフェノキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物２２を、スキーム１、２および６に従って調製した。化合物２２の合成および特性決定方法は、ｍ−トリルボロン酸を２−フルオロフェニルボロン酸で置き換えたことを除いて、合成例１５と同様であった。
【０１９８】
合成例２３
【０１９９】
【化４８】
2019522056.tif 000063
（Ｓ）−２−エチル−４−（（１−（３−フルオロ−４−フェノキシフェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物２３を、スキーム１、２および６に従って調製した。化合物２３の合成および特性決定方法は、１−（４−ヒドロキシフェニル）エタノンを１−（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）エタノンで置き換え、かつｍ−トリルボロン酸をフェニルボロン酸で置き換えたことを除いて、合成例１５と同様であった。
【０２００】
合成例２４
【０２０１】
【化４９】
2019522056.tif 000064
（Ｓ）−２−エチル−４−（（１−（３−フルオロ−４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物２４を、スキーム１、２および６に従って調製した。化合物２４の合成および特性決定方法は、１−（４−ヒドロキシフェニル）エタノンを１−（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）エタノンで置き換え、かつｍ−トリルボロン酸をｐ−トリルボロン酸で置き換えたことを除いて、合成例１５と同様であった。
【０２０２】
合成例２５
【０２０３】
【化５０】
2019522056.tif 000065
（Ｓ）−２−エチル−４−（（１−（６−（ｐ−トリルオキシ）ピリジン−３−イル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物２５を、スキーム１、３および６に従って調製した。
【０２０４】
ステップ１
【０２０５】
【化５１】
2019522056.tif 000066
１−（６−（ｐ−トリルオキシ）ピリジン−３−イル）エタノン
１−（６−クロロピリジン−３−イル）エタノン（２．００ｇ、１２．８５ｍｍｏｌ）のトルエン（２０ｍＬ）中溶液に、ｐ−クレゾール（２．０９ｇ、１９．２８ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（４５０ｍｇ、２．５７ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（８．３８ｇ、２５．７１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５時間加熱還流した。ＴＬＣによって、反応が完了したことが示された。固形物をろ過によって除去し、トルエン（５ｍＬ）で洗浄した。ろ液を飽和ＮａＨＣＯ３水性溶液（１５ｍＬ）および食塩水（１５ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層を濃縮し、粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝６：１で溶離させた）で精製し、所望の生成物を白色固形物として得た（１．８０ｇ、収率６１．６％）。
【０２０６】
ステップ２
【０２０７】
【化５２】
2019522056.tif 000067
（Ｒｓ）−２−メチル−Ｎ−（１−（６−（ｐ−トリルオキシ）ピリジン−３−イル）エチリデン）プロパン−２−スルフィンアミド
１−（６−（ｐ−トリルオキシ）ピリジン−３−イル）エタノン（１．５０ｇ、６．６０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、（Ｒ）−（＋）−２−メチル−２−プロパンスルフィンアミド（１．２０ｇ、９．９０ｍｍｏｌ）およびＴｉ（ＯＥｔ）４（４．５２ｇ、１９．８０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１６時間加熱還流した。ＴＬＣによって、出発材料が消費されたことが示された。それを周囲温度に冷却し、次いで水性飽和ＮａＣｌ溶液（５０ｍＬ）に注ぎ入れた。得られた固形物をろ過によって除去し、酢酸エチル（１０ｍＬ）で洗浄した。そして、ろ液を酢酸エチル（４０ｍＬ）で抽出した。分離した有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮し、粗製生成物を得（１．７０ｇ、収率７７．９％）、それをさらに精製することなく次のステップで使用した。
【０２０８】
ステップ３
【０２０９】
【化５３】
2019522056.tif 000068
（Ｒｓ）−２−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（６−（ｐ−トリルオキシ）ピリジン−３−イル）エチル）プロパン−２−スルフィンアミド
（Ｒｓ）−２−メチル−Ｎ−（１−（６−（ｐ−トリルオキシ）ピリジン−３−イル）エチリデン）プロパン−２−スルフィンアミド（８００ｍｇ、２．４２ｍｍｏｌ）および無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）の混合物を−５０℃に冷却し、Ｌ−セレクトリド（１Ｍ、４．６ｍｌ、４．６０ｍｍｏｌ）を混合物へ、Ｎ２下、−５０℃で撹拌しながら滴下した。混合物を１時間撹拌し、次いで周囲温度に加温した。完了時に、反応生成物を水（５０ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（６０ｍＬ）で抽出した。分離した有機層を真空中で濃縮した。粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１０で溶離させた）で精製し、所望の生成物を黄色固形物として得た（５００ｍｇ、収率６２．１％）。
【０２１０】
ステップ４
【０２１１】
【化５４】
2019522056.tif 000069
（Ｓ）−１−（６−（ｐ−トリルオキシ）ピリジン−３−イル）エタンアミン二塩酸塩
（Ｒｓ）−２−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（６−（ｐ−トリルオキシ）ピリジン−３−イル）エチル）プロパン−２−スルフィンアミド（４５０ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）中溶液に、ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（４Ｍ、３．４ｍＬ、１３．５０ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、それを周囲温度で１６時間撹拌した。ＭｅＯＨを真空下で除去した。酢酸エチル（１０ｍＬ）を残渣に添加し、３０分間撹拌した。酢酸エチルを真空下で除去し、次いでＭＴＢＥ（１０ｍＬ）を残渣に添加し、１時間撹拌した。生成物をろ過によって収集し、ＭＴＢＥ（５ｍＬ）で洗浄し、真空中で乾燥し、所望の生成物をオフホワイト色固形物として得た（３１０ｍｇ、収率７６．０％）。
【０２１２】
ステップ５
【０２１３】
【化５５】
2019522056.tif 000070
（Ｓ）−２−エチル−４−（（１−（６−（ｐ−トリルオキシ）ピリジン−３−イル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
４−クロロ−２−エチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン（１２０ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）のエチレングリコール（１０ｍＬ）中溶液に、（Ｓ）−１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エタンアミン塩酸塩（２７６ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（２４７ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１５０℃に加熱し、５時間撹拌した。それを周囲温度に冷却し、水３０ｍＬで希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。粗製生成物を、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）で精製し、化合物２５を白色固形物として得（６０ｍｇ、２５．３％）、それをＮＭＲおよびＭＳによってさらに特性決定した。
【０２１４】
合成例２６
【０２１５】
【化５６】
2019522056.tif 000071
（Ｓ）−２−エチル−４−（（１−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物２６を、スキーム１、４および６に従って調製した。
【０２１６】
ステップ１
【０２１７】
【化５７】
2019522056.tif 000072
１−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）エタノン
１−（４−（ブロモメチル）フェニル）エタノン（５．００ｇ、２３．４７ｍｍｏｌ）のトルエン（５０ｍＬ）中溶液に、１−メチルピペラジン（２．３５ｇ、２３．４７ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（３．８９ｇ、２８．１６ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、それを７０℃で３時間加熱した。ＴＬＣによって、反応が完了したことが示された。固形物をろ過によって除去し、トルエン（５ｍＬ）で洗浄した。ろ液を真空中で濃縮し、粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１で溶離させた）で精製し、所望の生成物を淡黄色油状物として得た（２．８０ｇ、収率５１．４％）。
【０２１８】
ステップ２
【０２１９】
【化５８】
2019522056.tif 000073
（Ｒｓ）−２−メチル−Ｎ−（１−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）エチリデン）プロパン−２−スルフィンアミド
１−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）エタノン（１．５０ｇ、６．４６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、（Ｒ）−（＋）−２−メチル−２−プロパンスルフィンアミド（１．１７ｇ、９．６８ｍｍｏｌ）およびＴｉ（ＯＥｔ）４（４．４２ｇ、１９．３７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１６時間加熱還流した。ＴＬＣによって、出発材料が消費されたことが示された。それを周囲温度に冷却し、次いで水性飽和ＮａＣｌ溶液（５０ｍＬ）に注ぎ入れた。得られた固形物をろ過によって除去し、酢酸エチル（１０ｍＬ）で洗浄した。そして、ろ液を酢酸エチル（４０ｍＬ）で抽出した。分離した有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮し、粗製生成物を得（１．７０ｇ、収率７８．５％）、それをさらに精製することなく次のステップで使用した。
【０２２０】
ステップ３
【０２２１】
【化５９】
2019522056.tif 000074
（Ｒｓ）−２−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）エチル）プロパン−２−スルフィンアミド
（Ｒｓ）−２−メチル−Ｎ−（１−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）エチリデン）プロパン−２−スルフィンアミド（８００ｍｇ  ２．３８ｍｍｏｌ）および無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）の混合物を−５０℃に冷却し、Ｌ−セレクトリド（１Ｍ、４．８ｍｌ、４．７６ｍｍｏｌ）を混合物へＮ２下、−５０℃で撹拌しながら滴下した。混合物を１時間撹拌し、次いで周囲温度に加温した。完了時に、反応生成物を水（５０ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（６０ｍＬ）で抽出した。分離した有機層を真空中で濃縮した。粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１で溶離させた）で精製し、所望の生成物を黄色固形物として得た（５５０ｍｇ、収率６８．３％）。
【０２２２】
ステップ４
【０２２３】
【化６０】
2019522056.tif 000075
（Ｓ）−１−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）エタンアミン三塩酸塩
（Ｒｓ）−２−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）エチル）プロパン−２−スルフィンアミド（４５０ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）中溶液に、ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（４Ｍ、３．３ｍＬ、１３．３０ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、それを周囲温度で１６時間撹拌した。ＭｅＯＨを真空下で除去した。酢酸エチル（１０ｍＬ）を残渣に添加し、３０分間撹拌した。酢酸エチルを真空下で除去し、次いでＭＴＢＥ（１０ｍＬ）を残渣に添加し、１時間撹拌した。生成物をろ過によって収集し、ＭＴＢＥ（５ｍＬ）で洗浄し、真空中で乾燥し、所望の生成物をオフホワイト色固形物として得た（３５０ｍｇ、収率７６．６％）。
【０２２４】
ステップ５
【０２２５】
【化６１】
2019522056.tif 000076
（Ｓ）−２−エチル−４−（（１−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
４−クロロ−２−エチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン（１２０ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）のエチレングリコール（１０ｍＬ）中溶液に、（Ｓ）−１−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）エタンアミン三塩酸塩（３１４ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（２４７ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１５０℃に加熱し、５時間撹拌した。それを周囲温度に冷却し、水３０ｍＬで希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。粗製生成物を、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）で精製し、化合物２６を白色固形物として得（５２ｍｇ、収率２１．７％）、それをＮＭＲおよびＭＳによってさらに特性決定した。
【０２２６】
合成例２７
【０２２７】
【化６２】
2019522056.tif 000077
（Ｓ）−２−エチル−４−（（１−（１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物２７を、スキーム１、５および６に従って調製した。
【０２２８】
ステップ１
【０２２９】
【化６３】
2019522056.tif 000078
１−（１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン
１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（５．００ｇ、４５．４１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）中溶液に、（４−フルオロフェニル）ボロン酸（９．５３ｇ、６８．１１ｍｍｏｌ）、Ｃｕ（ＯＡｃ）２（１６．５０ｇ、９０．８２ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（２２．９７ｇ、２２７．０４ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、混合物を周囲温度で１２時間撹拌した。ＴＬＣによって、１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノンが消費されたことが示された。固形物をろ過によって除去し、ＤＣＭ（２０ｍＬ）で洗浄し、ろ液を水（５０ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層を真空中で濃縮し、粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１で溶離させた）で精製し、所望の生成物を淡黄色固形物として得た（３．１ｇ、収率３３．４％）。
【０２３０】
ステップ２
【０２３１】
【化６４】
2019522056.tif 000079
（Ｒｓ）−Ｎ−（１−（１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチリデン）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド
１−（１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（１．５０ｇ、７．３５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、（Ｒ）−（＋）−２−メチル−２−プロパンスルフィンアミド（１．３４ｇ、１１．０２ｍｍｏｌ）およびＴｉ（ＯＥｔ）４（５．０３ｇ、２２．０４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１６時間加熱還流した。ＴＬＣによって、出発材料が消費されたことが示された。それを周囲温度に冷却し、次いで水性飽和ＮａＣｌ溶液（５０ｍＬ）に注ぎ入れた。得られた固形物をろ過によって除去し、酢酸エチル（１０ｍＬ）で洗浄した。そして、ろ液を酢酸エチル（４０ｍＬ）で抽出した。分離した有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮し、粗製生成物を得（１．９０ｇ、収率８４．２％）、それをさらに精製することなく次のステップで使用した。
【０２３２】
ステップ３
【０２３３】
【化６５】
2019522056.tif 000080
（Ｒｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド
（Ｒｓ）−Ｎ−（１−（１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチリデン）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（８００ｍｇ  ２．６０ｍｍｏｌ）および無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）の混合物を−５０℃に冷却し、Ｌ−セレクトリド（１Ｍ、５．２ｍＬ、５．２０ｍｍｏｌ）を混合物に、Ｎ２下、−５０℃で、撹拌しながら滴下した。混合物を１時間撹拌し、次いで周囲温度に加温した。完了時に、反応生成物を水（５０ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（６０ｍＬ）で抽出した。分離した有機層を真空中で濃縮した。粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１５で溶離させた）で精製し、所望の生成物を黄色固形物として得た（３６０ｍｇ、収率４４．７％）。
【０２３４】
ステップ４
【０２３５】
【化６６】
2019522056.tif 000081
（Ｓ）−１−（１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタンアミン塩酸塩
（Ｒｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（３６０ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）中溶液に、ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（４Ｍ、２．９ｍＬ、１１．６０ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、それを周囲温度で１６時間撹拌した。ＭｅＯＨを真空下で除去した。酢酸エチル（１０ｍＬ）を残渣に添加し、３０分間撹拌した。酢酸エチルを真空下で除去し、次いでＭＴＢＥ（１０ｍＬ）を残渣に添加し、１時間撹拌した。生成物をろ過によって収集し、ＭＴＢＥ（５ｍＬ）で洗浄し、真空中で乾燥し、所望の生成物をオフホワイト色固形物として得た（２４０ｍｇ、収率８５．３％）。
【０２３６】
ステップ５
【０２３７】
【化６７】
2019522056.tif 000082
（Ｓ）−２−エチル−４−（（１−（１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
４−クロロ−２−エチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン（１２０ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）のエチレングリコール（１０ｍＬ）中溶液に、（Ｓ）−１−（１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタンアミン塩酸塩（２２１ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（１８５ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１５０℃に加熱し、５時間撹拌した。それを周囲温度に冷却し、水３０ｍＬで希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。粗製生成物を、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）で精製し、化合物２７を白色固形物として得（４０ｍｇ、１７．９％）、それをＮＭＲおよびＭＳによってさらに特性決定した。
【０２３８】
合成例２８
【０２３９】
【化６８】
2019522056.tif 000083
（Ｓ）−Ｎ−シクロヘキシル−４−（１−（（２−エチル−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−４−イル）アミノ）エチル）ベンズアミド
化合物１２から出発し、本開示の化合物２８を、スキーム７に従って調製した。合成および特性決定方法は、アニリンをシクロヘキシルアミンで置き換えたことを除いて、合成例１３と同様であった。
【０２４０】
合成例２９
【０２４１】
【化６９】
2019522056.tif 000084
（Ｓ）−Ｎ−シクロヘキシル−４−（１−（（２−エチル−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−４−イル）アミノ）エチル）−２−フルオロベンズアミド
本開示の化合物２９を、スキーム１、６および７に従って調製した。化合物２９を調製するための出発化合物（スキーム７に示す１０２６と同様である）を、（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）エタンアミンを（Ｓ）−エチル−２−フルオロ−４−（（１−アミノ）エチル）−ベンゾエートで置き換えたことを除いて、合成例１のように合成した。得られた出発化合物を使用して、化合物２９を、アニリンをシクロヘキシルアミンで置き換えたことを除いて、合成例１３のように調製し、ＮＭＲおよびＭＳによってさらに特性決定した。
【０２４２】
合成例３０
【０２４３】
【化７０】
2019522056.tif 000085
（Ｓ）−２−メチル−４−（（１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物３０を、スキーム１、２および６に従って調製した。合成方法は、ｍ−トリルボロン酸をｐ−トリルボロン酸で置き換え、かつ４−クロロ−２−エチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オンを４−クロロ−２−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オンで置き換えたことを除いて、合成例１５と同様であり、４−クロロ−２−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オンは、エタンアミン塩酸塩をメチルアミンで置き換えたことを除いて合成例１のように得た。化合物３０を、ＮＭＲおよびＭＳによってさらに特性決定した。
【０２４４】
合成例３１
【０２４５】
【化７１】
2019522056.tif 000086
（Ｓ）−２−イソプロピル−４−（（１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物３１を、スキーム１、２および６に従って調製した。合成方法は、ｍ−トリルボロン酸をｐ−トリルボロン酸で置き換え、かつ４−クロロ−２−エチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オンを４−クロロ−２−イソプロピル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オンで置き換えたことを除いて、合成例１５と同様であり、４−クロロ−２−イソプロピル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オンは、エタンアミン塩酸塩をイソプロピルアミンで置き換えたことを除いて、合成例１のように得た。化合物３１をＮＭＲおよびＭＳによってさらに特性決定した。
【０２４６】
合成例３２
【０２４７】
【化７２】
2019522056.tif 000087
（Ｓ）−２−（２−ヒドロキシエチル）−４−（（１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物３２を、スキーム１、２および６に従って調製した。合成方法は、ｍ−トリルボロン酸をｐ−トリルボロン酸で置き換え、かつ４−クロロ−２−エチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オンを４−クロロ−２−（２−ヒドロキシエチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オンで置き換えたことを除いて、合成例１５と同様であり、４−クロロ−２−（２−ヒドロキシエチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オンは、エタンアミン塩酸塩を２−ヒドロキシエタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例１のように得た。化合物３２をＮＭＲおよびＭＳによってさらに特性決定した。
【０２４８】
合成例３３
【０２４９】
【化７３】
2019522056.tif 000088
（Ｓ）−２−ベンジル−４−（（１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物３３を、スキーム１、２および６に従って調製した。合成方法は、ｍ−トリルボロン酸をｐ−トリルボロン酸で置き換え、かつ４−クロロ−２−エチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オンを４−クロロ−２−ベンジル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オンで置き換えたことを除いて、合成例１５と同様であり、４−クロロ−２−ベンジル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オンは、エタンアミン塩酸塩をベンジルアミンで置き換えたことを除いて、合成例１のように得た。化合物３３を、ＮＭＲおよびＭＳによってさらに特性決定した。
【０２５０】
合成例３４
【０２５１】
【化７４】
2019522056.tif 000089
（Ｓ）−２−フェネチル−４−（（１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物３４を、スキーム１、２および６に従って調製した。合成方法は、ｍ−トリルボロン酸をｐ−トリルボロン酸で置き換え、かつ４−クロロ−２−エチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オンを４−クロロ−２−フェネチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オンで置き換えたことを除いて、合成例１５と同様であり、４−クロロ−２−フェネチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オンは、エタンアミン塩酸塩をフェネチルアミンで置き換えたことを除いて、合成例１のように得た。化合物３４をＮＭＲおよびＭＳによってさらに特性決定した。
【０２５２】
合成例３５
【０２５３】
【化７５】
2019522056.tif 000090
（Ｓ）−６−アミノ−２−エチル−４−（（１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
本開示の化合物３５を、スキーム１、２、６および９に従って調製した。
【０２５４】
ステップ１
【０２５５】
【化７６】
2019522056.tif 000091
メチル３−（ブロモメチル）−２，６−ジクロロイソニコチネート
メチル２，６−ジクロロ−３−メチルイソニコチネート（１０．００ｇ、４５．４４ｍｍｏｌ）のＣＣｌ４（１００ｍＬ）中溶液に、ＮＢＳ（８．９０ｇ、４９．９９ｍｍｏｌ）およびＢＰＯ（５５０ｍｇ、２．２７ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、反応混合物を４時間加熱還流した。ＴＬＣによって、出発材料が消費されたことが示された。次いで、それを周囲温度に冷却し、得られた沈殿物をろ過によって除去し、ＣＣｌ４（１０ｍＬ）で洗浄した。ろ液を真空中で濃縮し、粗製生成物を黄色固形物として得、それをさらに精製することなく次のステップで使用した。
【０２５６】
ステップ２
【０２５７】
【化７７】
2019522056.tif 000092
４，６−ジクロロ−２−エチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
上記粗製生成物をＴＨＦ（１００ｍＬ）中に溶解した。エタンアミン塩酸塩（３．７１ｇ、４５．４４ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（５９．２３ｇ、１８１．７７ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。それを周囲温度で１２時間撹拌した。ＴＬＣによって、出発材料が消費されたことが示された。固形物をろ過によって除去し、酢酸エチル（１５ｍＬ）で洗浄し、ろ液を真空中で濃縮した。粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１で溶離させた）で精製し、所望の生成物を淡黄色固形物として得た（５．４０ｇ、収率５１．４％、２ステップで）。
【０２５８】
ステップ３
【０２５９】
【化７８】
2019522056.tif 000093
（Ｓ）−６−クロロ−２−エチル−４−（（１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
４，６−ジクロロ−２−エチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン（４．００ｇ、１７．３１ｍｍｏｌ）のエチレングリコール（４０ｍＬ）中溶液に、（Ｓ）−１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エタンアミン（５．１２ｇ、２２．５０ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（２．６３ｇ、２５．９７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１５０℃に加熱し、７時間撹拌した。それを周囲温度に冷却し、水８０ｍＬで希釈し、酢酸エチル（１００ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝３０：１で溶離させた）で精製し、所望の生成物を得た（３．２０ｇ、収率４３．８％）。
【０２６０】
ステップ４
【０２６１】
【化７９】
2019522056.tif 000094
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（２−エチル−１−オキソ−４−（（１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−６−イル）カルバメート
（Ｓ）−６−クロロ−２−エチル−４−（（１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン（２．００ｇ、４．７４ｍｍｏｌ）のジオキサン（２０ｍＬ）中溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメート（１．１１ｇ、９．５０ｍｍｏｌ）、ｔ−ＢｕＯＫ（１．４２ｇ、１２．６７ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（５４８ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）およびＸ−ｐｈｏｓ（２２６ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を添加した。それをＮ２雰囲気下、８０℃で５時間加熱した。ＴＬＣによって、反応が完了したことが示された。溶媒を真空中で濃縮することによって除去し、残渣をＤＣＭ（１５０ｍＬ）中に溶解し、水（１００ｍＬ×２）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層を濃縮し、粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝３０：１で溶離させた）で精製し、所望の生成物を黄色固形物として得た（１．５０ｇ、収率６３．０％）。
【０２６２】
ステップ５
【０２６３】
【化８０】
2019522056.tif 000095
（Ｓ）−６−アミノ−２−エチル−４−（（１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−１−オン
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（２−エチル−１−オキソ−４−（（１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−６−イル）カルバメート（１．００ｇ、１．９９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中溶液に、ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（４Ｍ、５．０ｍＬ、１９．９０ｍｍｏｌ）を添加した。それを周囲温度で５時間撹拌した。溶媒を真空中で濃縮し、粗製生成物をＤＣＭ（５０ｍＬ）中に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水性溶液（３０ｍＬ）および食塩水（３０ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮し、化合物３５を白色固形物として得（５３０ｍｇ、収率６６．２％）、それをＮＭＲおよびＭＳによってさらに特性決定した。
【０２６４】
合成例３６
【０２６５】
【化８１】
2019522056.tif 000096
（Ｓ）−Ｎ−（２−エチル−１−オキソ−４−（（１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−６−イル）アセトアミド
化合物３５から出発し、本開示の化合物３６を、スキーム１０に従って調製した。
【０２６６】
化合物３５（２００ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液に、Ａｃ２Ｏ（７６ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１０１ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、それを周囲温度で５時間撹拌した。ＴＬＣによって、反応が完了したことが示された。溶媒を真空中で濃縮することによって除去し、残渣をＤＣＭ（２０ｍＬ）中に溶解し、水（１０ｍＬ×２）および食塩水（１０ｍＬ）で洗浄した。分離した有機層を濃縮し、粗製生成物を、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）で精製し、化合物３６を白色固形物として得（４０ｍｇ、収率１８％）、それをＮＭＲおよびＭＳによってさらに特性決定した。
【０２６７】
合成例３７
【０２６８】
【化８２】
2019522056.tif 000097
（Ｓ）−２−エチル−１−オキソ−４−（（１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸
本開示の化合物３７を、スキーム１、２、６および１１に従って調製した。
【０２６９】
ステップ１
【０２７０】
【化８３】
2019522056.tif 000098
ジメチル５−（ブロモメチル）−６−クロロピリジン−３，４−ジカルボキシレート
ジメチル６−クロロ−５−メチルピリジン−３，４−ジカルボキシレート（５．００ｇ、２０．５２ｍｍｏｌ）のＣＣｌ４（３０ｍＬ）中溶液に、ＮＢＳ（４．０２ｇ、２２．５７ｍｍｏｌ）およびＢＰＯ（２４９ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、反応混合物を３時間加熱還流した。ＴＬＣによって、出発材料が消費されたことが示された。次いで、それを周囲温度に冷却し、得られた沈殿物をろ過によって除去し、ＣＣｌ４（５ｍＬ）で洗浄した。ろ液を真空中で濃縮し、粗製生成物を黄色固形物として得、それをさらに精製することなく次のステップで使用した。
【０２７１】
ステップ２
【０２７２】
【化８４】
2019522056.tif 000099
メチル４−クロロ−２−エチル−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−７−カルボキシレート
上記粗製生成物をＴＨＦ（１５０ｍＬ）中に溶解した。エタンアミン塩酸塩（１．６７ｇ、２０．５２ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（２６．７５ｇ、８２．０９ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。それを周囲温度で１２時間撹拌した。ＴＬＣによって、出発材料が消費されたことが示された。固形物をろ過によって除去し、酢酸エチル（１０ｍＬ）で洗浄し、ろ液を真空中で濃縮した。粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１で溶離させた）で精製し、所望の生成物を淡黄色固形物として得た（３．２０ｇ、収率６１．２％、２ステップで）。
【０２７３】
ステップ３
【０２７４】
【化８５】
2019522056.tif 000100
（Ｓ）−メチル２−エチル−１−オキソ−４−（（１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−７−カルボキシレート
メチル４−クロロ−２−エチル−１−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−７−カルボキシレート（１．１０ｇ、４．３２ｍｍｏｌ）のエチレングリコール（２０ｍＬ）中溶液に、（Ｓ）−１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エタンアミン塩酸塩（１．７１ｇ、６．４８ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（８７４ｍｇ、８．６４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１５０℃に加熱し、５時間撹拌した。それを周囲温度に冷却し、水５０ｍＬで希釈し、酢酸エチル（８０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１で溶離させた）で精製し、所望の生成物を白色固形物として得た（１．２０ｇ、収率６２．４％）。
【０２７５】
ステップ４
【０２７６】
【化８６】
2019522056.tif 000101
（Ｓ）−２−エチル−１−オキソ−４−（（１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸
（Ｓ）−メチル２−エチル−１−オキソ−４−（（１−（４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル）エチル）アミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピリジン−７−カルボキシレート（３００ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を溶解させたＴＨＦ（１５ｍＬ）中溶液に、ＮａＯＨ（５４ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）の水（５ｍＬ）中溶液を添加した。添加後、それを周囲温度で５時間撹拌した。ＴＬＣによって、反応が完了したことが示された。有機溶媒を真空中で濃縮することによって除去し、残渣を水（１０ｍＬ）で希釈し、ＭＴＢＥ（８ｍＬ）を混合物に添加し、１０分間撹拌した。次いで有機層を抽出することによって除去し、水性層を、２Ｎ  ＨＣｌ水性溶液を添加することによってｐＨ７に酸性化した。得られた沈殿物をろ過によって収集し、水（５ｍＬ）で洗浄し、真空中で乾燥し、化合物３７を白色固形物として得（９０ｍｇ、収率３１．０％）、それをＮＭＲおよびＭＳによってさらに特性決定した。
【０２７７】
生物学的評価
試験１：野生型および変異体ＩＤＨタンパク質の精製
ＩＤＨ１タンパク質の精製
本開示は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）における変異体および野生型組換えＩＤＨ１タンパク質を精製する方法を提供する。
【０２７８】
野生型または変異体ヒトＩＤＨ１  ｃＤＮＡ配列を含むｐＳＪ３プラスミドを、ＢＬ２１株に形質転換する。単一コロニーを、ＬＢ培地５ｍｌで、３７℃で一晩培養する。開始培養物５ｍｌを、培養物の密度が０．５〜０．６  ＯＤ６００に到達するまで、ＬＢ培地２Ｌ中で使い切る。タンパク質発現を、０．５ｍＭ  ＩＰＴＧによって２０℃で一晩誘発する。細胞を、スピンさせて収集し、プロテイナーゼ阻害剤ＰＭＳＦが補充されたＴＢＳ緩衝液（５０ｍＭ  トリス  ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）中に再懸濁する。細胞溶解物を超音波処理によって調製し、スピンさせて透明にする。上澄みをＮｉ  Ｓｅｐａｒｏｓｅ  ４Ｂカラム（ＧＥ  Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅから購入）に負荷する。カラムを、ＴＢＳ溶液中の３０ｍＭイミダゾールで洗浄し、ＩＤＨタンパク質を、ＴＢＳ溶液中の３００ｍＭイミダゾールで溶離させる。イミダゾールを、Ａｍｉｃｏｎ  ３，０００Ｄａ  ＭＷＣＯフィルターユニットによってろ過除去する。タンパク質を、１０％グリセロールを含むＴＢＳ溶液中、−８０℃で保管する。タンパク質濃度の定量化は、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｓａｎｇｏｎ製のブラッドフォードキットによって行う。
【０２７９】
ＩＤＨ２タンパク質の精製
ＩＤＨ２タンパク質は、そのＮ−末端ミトコンドリア標的化シグナルのため、不溶性であり、かつ大腸菌から精製することができない。本開示は、昆虫細胞におけるバキュロウイルスを利用することによって、ＩＤＨ２タンパク質を発現させ、精製する新規な方法を提供する。その同じ技術を使用して、ＩＤＨ１（Ｒ１３２）変異体と類似しているヒトＩＤＨ２（Ｒ１７２ＫまたはＲ１７２Ｓ）変異体も発現させ、精製することができる。
【０２８０】
ＩＤＨ２タンパク質を精製するための別の方法は、ヒト２９３−Ｆ懸濁細胞を使用して安定細胞を確立し、野生型および変異体ＩＤＨ２を発現させ、続いて、アフィニティーおよびイオン交換精製することである。
【０２８１】
試験２：肝ミクロソームにおける代謝安定性アッセイ
マウス、ラット、イヌ、サルおよびヒトの肝ミクロソームを、Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．から購入し、使用前は−６０℃で保管した。アセトニトリルおよびＮＡＤＰＨは、Ｈｏｎｅｙｗｅｌｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、Ｕ．Ｓ．）およびＲｏｃｈｅ  Ｉｎｃ．（Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｓｓ）から購入した。ミダゾラムは陽性対照として使用し、かつＮａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｆｏｒ  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ）から購入した。
【０２８２】
試験化合物または対照化合物ミダゾラムを、３ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含むＰＢＳ（１００ｍＭ、ｐＨ７．４）中の、０．５ｍｇ・ｍＬ−１（試験化合物用）または０．２ｍｇ・ｍＬ−１（対照用）のマウス、ラット、イヌ、サルまたはヒトの肝ミクロソームと、３７℃の水浴槽中、１μＭの事前設定した初期濃度でそれぞれ共インキュベートした。反応を、ＮＡＤＰＨを添加し、１ｍＭの最終濃度にすることによって開始した。各反応混合物の最終体積は０．２ｍｌであり、かつすべての反応を２回繰り返して行った。各設定時点（０、５、１５、３０および６０分）で、少量のアリコート（例えば、２０μｌ）を、反応系からアセトニトリルを含む氷冷内部標準（ＩＳ）へ移し、反応をクエンチし、タンパク質を沈殿させた。ボルテックスをし、３７００ｒｐｍで１０分間遠心分離した後、上澄みをＬＣ−ＭＳ／ＭＳに注入して、分析した。
【０２８３】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのミクロソームクリアランスを、それらの初期濃度からの化合物消失の排出半減期（Ｔ１／２）の判定に基づいて推定した。各化合物（試験または対照）対ＩＳのピーク面積比を計算した。Ｌｎ（％対照）対インキュベート時間（分）の曲線をプロットし、フィッティング直線の傾きを計算した。薬物排出速度定数ｋ（分−１）、Ｔ１／２（分）、およびｉｎ  ｖｉｔｒｏでの固有クリアランスＣＬｉｎｔ（ｍＬ・分−１・ｍｇ−１タンパク質）を、以下の式に従って計算した。
ｋ＝−傾き
Ｔ１／２＝０．６９３／ｋ
ＣＬｉｎｔ＝ｋ／Ｃタンパク質
［式中、Ｃタンパク質（ｍｇ・ｍＬ−１）は、インキュベート系中のミクロソームタンパク質濃度である］。
【０２８４】
試験３：マウス血漿における代謝安定性アッセイ
ブランク雄／雌マウス血漿は、３Ｄ  ＢｉｏＯｐｔｉｍａ（Ｓｕｚｈｏｕ、Ｃｈｉｎａ）より提供され、使用前に新たに採取した。アセトニトリルは、Ｈｏｎｅｙｗｅｌｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、Ｕ．Ｓ．）から購入した。
【０２８５】
各試験化合物を、マウス血漿と、３７℃の水浴槽中で、２μＭの事前設定した初期濃度で２時間共インキュベートし、各インキュベートミックスの最終体積は０．３ｍＬであった。各設定時点（０、１５、３０、６０、１２０分）で、少量のアリコート（それぞれ２０μＬ）を、血漿試料から、マイクロ遠心管に移し、次いで、アセトニトリルを含むＩＳ２００μＬに添加して、タンパク質を沈殿させた。ボルテックスをし、３７００ｒｐｍで１０分間遠心分離した後に、上澄みをＬＣ−ＭＳ／ＭＳに注入して、分析した。すべてのインキュベートは２回繰り返して行った。Ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの化合物の安定性を、以下の式を使用することによって計算した。
【０２８６】
【数１】
2019522056.tif 000102
【０２８７】
式中、Ｃｔは、インキュベートしてから０．５、１、１．５および２時間後の、試料対ＩＳの面積比であり、かつＣ０は、インキュベート前の０時間での、試料対ＩＳの面積比である。
【０２８８】
試験４：Ｉｎ  ｖｉｖｏでの薬物動態アッセイ
本開示の化合物の薬物動態特性を、ＩＣＲマウス（雄、６〜８週齢、２０．０〜２５．３ｇ）において、ｐ．ｏ．およびｉ．ｖ．投与後に評価した。
【０２８９】
ＩＣＲマウスを、Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．（Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ）から購入し、研究活動によって中断が必要になるときを除いて、滅菌床敷を備えた硬床式ポリプロピレンケージで、室内を湿度４０％〜７０％、室温２０〜２５℃、１０〜２０回の換気／時間、および１２時間明／暗サイクルに維持して飼育した。マウスにＳｈａｎｇｈａｉ  ＳＬＡＣ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．（Ｓｈａｎｇｈａｉ、Ｃｈｉｎａ）製の滅菌飼料および滅菌水を与えた。すべての動物を受け入れ時に検査し、少なくとも３日間順化させた。健康全般、体重、または必要に応じて他の関連データに基づいて、健康であると思われるもののみ選択して、研究した。各群の個々の動物を刻耳によって識別した。
【０２９０】
処置前にマウスを一晩絶食させたが、水はすべての時間で自由に摂取させた。投薬する前に、各マウスを秤量し、各マウスに関する実用量体積を、以下の式を使用することによって計算した。
用量体積（ｍＬ）＝［名目用量（ｍｇ・ｋｇ−１）／用量濃度（ｍｇ・ｍＬ−１）］×動物体重（ｋｇ）
【０２９１】
実際の体重および実用量体積を、適宜に記録した。
【０２９２】
各試験群に関しては、９匹のマウスを使用し、異なる群のマウスに１０ｍｇ・ｋｇ−１の単回ｐ．ｏ用量の、または２ｍｇ・ｋｇ−１の単回ｉ．ｖ．用量の試験化合物をそれぞれ与えた。血液試料（例えば、少なくとも１２０μｇ）を、あらかじめ決定された時点、例えば、投薬前、投薬から５分、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、８時間、１２時間、および２４時間後でＥＤＴＡ−Ｋ２管に採取した。各マウスの血液試料を３つの不連続の時点で収集し、各時点で３匹のマウスをサンプリングに使用した。採取した試料を５５００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、血漿試料を得、それを後でＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって測定した。血漿濃度対時間のデータを、直線回帰分析によって処理した。すべての薬物動態パラメーターを、Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｐｈｏｅｎｉｘ  ６．３の非コンパートメントモデルを使用して計算した。
【０２９３】
試験５：化合物のＩＤＨ阻害および選択性に関する生化学的アッセイ
本開示は、ＩＤＨ酵素活性を直接検出することによって、化合物のＩＤＨ阻害および選択性を検出するための生化学的アッセイ方法を提供する。
【０２９４】
図１は、野生型および変異体ＩＤＨ１／２によって触媒される反応を示す。野生型ＩＤＨ酵素がα−ＫＧ産生反応を触媒する場合、その酵素はＮＡＤＰ＋をＮＡＤＰＨに変換できるであろう。変異体ＩＤＨ酵素がＤ−２−ＨＧ産生反応を触媒する場合、その酵素はＮＡＤＰＨをＮＡＤＰ＋へ変換するはずである。こうして、野生型および変異体ＩＤＨ１／２の活性は、野生型ＩＤＨ１／２によって触媒される反応におけるＮＡＤＰＨレベル変化を監視することによって測定することができ、新たに生成されたＮＡＤＰＨは、ジアフォラーゼ−レザズリン結合反応によってすぐに利用され、蛍光性（励起５４４ｎｍ、放出５９０ｎｍで）であるレゾルフィンを生成し、したがってＮＡＤＰＨは間接的に監視され；一方で、変異体ＩＤＨ１／２によって触媒される反応の間は、ＮＡＤＰＨが蛍光（励起３４０ｎｍ、放出４６０ｎｍで）であるために、そのＮＡＤＰＨは直接的に監視される。反応におけるＮＡＤＰＨレベルの変化を監視することによって、酵素活性を急速におよび効率的に決定することができ、化合物のＩＣ５０もアッセイすることができるであろう。
【０２９５】
試験化合物をＤＭＳＯ中の５０ｍＭ原液に調製し、−２０℃で保管した。各試験化合物原液（ｓｔｏｃｋ）をさらに希釈し、２００μＭ、１００μＭ、５０μＭ、２５μＭ、１２．５μＭ、６．２５μＭおよび３．１２５μＭの濃度の１００×原液をそれぞれ得て、試験日に最終的に使用した。
【０２９６】
野生型ＩＤＨ１の阻害：
溶液Ａを、１Ｍトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．５（３００μＬ）、５Ｍ  ＮａＣｌ（４５０μＬ）、１Ｍ  ＭｇＣｌ２（１５０μＬ）、１Ｍ  ＤＴＴ（１５μＬ）、２０ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ（３７．５μＬ）、５０ｍＭ  ＮＡＤＰ（２０μＬ）、８０ｍＭイソシトレート（２０μＬ）、１００ｍＭレザズリン（２０μＬ）および０．１単位／μＬジアフォラーゼ（５０μＬ）を合わせ、続いて、脱イオン水を添加し、最終体積を１５ｍＬとすることによって調製した。
【０２９７】
反応緩衝液を、１Ｍトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．５（２００μＬ）、５Ｍ  ＮａＣｌ（３００μＬ）、１Ｍ  ＭｇＣｌ２（１００μＬ）、１Ｍ  ＤＴＴ（１０μＬ）および２０ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ（２５μＬ）を合わせ、続いて脱イオン水を添加し、最終体積を１０ｍＬとすることによって調製した。
【０２９８】
溶液Ｂを、反応緩衝液（５ｍＬ）および１０７μＭ野生型ＩＤＨ１（０．３７μＬ）を合わせることによって調製した。
【０２９９】
溶液Ａ  １４８μＬを、９６−ウェルプレートＰ１の各試料ウェルに添加し、次いで、各濃度の試験化合物溶液２μＬおよびＤＭＳＯ（陰性対照／ブランク）２μＬを個々の試料ウェルにそれぞれ添加した。溶液Ｂ  ５０μＬを、試験化合物を有する各試料ウェルおよびＤＭＳＯのみを有する１つの試料ウェルに添加し、反応緩衝液５０μＬを、ＤＭＳＯのみを有する別の試料ウェルにそれぞれ添加した。Ｐ１をＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ４マイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．、Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、Ｕ．Ｓ．）へ入れ、プログラムを以下のとおりにセットした。３７℃、プレートの振とう  ５秒、実行  動的様式、総検出時間  ２０分、検出間隔  ４０秒、検出様式  蛍光（励起５４４ｎｍ、放出５９０ｎｍで）。データをエクスポートし、試験化合物に関する相対酵素活性および５０％最大阻害濃度（ＩＣ５０）を計算した。相対酵素活性を、時間に対してプロットされた各ウェルの放出５９０の読取り値の傾きの絶対値（これは野生型ＩＤＨ１によって触媒されるＮＡＤＰＨの産生率を表す）として計算した。用量反応曲線を描き、フィッティングによってＩＣ５０を計算した。各試験化合物のＩＤＨ阻害および選択性は、ＩＤＨ酵素活性に対する化合物の効果に従って評価することができる。
【０３００】
変異体ＩＤＨ１（Ｒ１３２ＨまたはＲ１３２Ｃ）の阻害：
溶液Ａを、１Ｍトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．５（３００μＬ）、５Ｍ  ＮａＣｌ（４５０μＬ）、１Ｍ  ＭｇＣｌ２（１５０μＬ）、１Ｍ  ＤＴＴ（１５μＬ）、２０ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ（３７．５μＬ）、２０ｍＭ  ＮＡＤＰＨ（２０μＬ）、および０．５ｍＭ  α−ＫＧ（４０μＬ）を合わせ、続いて、脱イオン水を添加し、最終体積を１５ｍＬとすることによって調製した。
【０３０１】
反応緩衝液を、１Ｍトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．５（２００μＬ）、５Ｍ  ＮａＣｌ（３００μＬ）、１Ｍ  ＭｇＣｌ２（１００μＬ）、１Ｍ  ＤＴＴ（１０μＬ）および２０ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ（２５μＬ）を合わせ、続いて脱イオン水を添加し、最終体積を１０ｍＬとすることによって調製した。
【０３０２】
溶液Ｂを、反応緩衝液（５ｍＬ）および１９２μＭ  ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈ（５．２１μＬ）または１０７μＭ  ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｃ（４．６７μＬ）を合わせることによって調製した。
【０３０３】
溶液Ａ  １４８μＬを、９６−ウェルプレートＰ１の各試料ウェルに添加し、次いで、各濃度の試験化合物溶液２μＬおよびＤＭＳＯ（陰性対照／ブランク）２μＬを個々の試料ウェルにそれぞれ添加した。溶液Ｂ  ５０μＬを、試験化合物を有する各試料ウェルおよびＤＭＳＯのみを有する１つの試料ウェルに添加し、反応緩衝液５０μＬを、ＤＭＳＯのみを有する別の試料ウェルにそれぞれ添加した。Ｐ１をＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ４マイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．、Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、Ｕ．Ｓ．）へ入れ、プログラムを以下のとおりにセットした。３７℃、プレートの振とう  ５秒、実行  動的様式、総検出時間  ２０分、検出間隔  ４０秒、検出様式  蛍光（励起３４０ｎｍ、放出４６０ｎｍで）。データをエクスポートし、試験化合物に関する相対酵素活性および５０％最大阻害濃度（ＩＣ５０）を計算した。相対酵素活性を、時間に対してプロットされた各ウェルの放出４６０の読取り値の傾きの絶対値（これはＩＤＨ１が調節するＮＡＤＰＨの利用を介したα−ＫＧの２−ＨＧへの変換率を表す）として計算した。用量反応曲線を描き、フィッティングによってＩＣ５０を計算した。各試験化合物のＩＤＨ阻害および選択性は、ＩＤＨ酵素活性に対する化合物の効果に従って評価することができる。
【０３０４】
試験６：化合物のＩＤＨ阻害および選択性に関する細胞ベースのアッセイ
本開示はまた、内因性ヘテロ接合ＩＤＨ１  Ｒ１３２ＣおよびＲ１３２Ｈ変異をそれぞれ保持し、かつＤ−２−ＨＧを蓄積する、ヒト線維肉腫細胞株ＨＴ１０８０および胆管細胞癌細胞株ＨＣＣＣ９８１０において、化合物のＩＤＨ阻害および選択性をアッセイするための細胞ベースの方法を提供する。腫瘍由来のＩＤＨ変異体は、α−ＫＧを産生するその正常な活性を損失しており、かつＤ−２−ＨＧを産生する新規の活性を獲得している。Ｄ−２−ＨＧは、ＩＤＨ変異腫瘍試料で特に高く認められる代謝産物である。正常な組織におけるその濃度はごくわずかであり、かつ正常な組織において知られている生理学的機能を有さない。変異体ＩＤＨ１およびＩＤＨ２は、正常な細胞における機能を有さない新規の触媒活性を獲得するために、その結果として、変異体ＩＤＨ酵素の阻害剤は、変異体ＩＤＨを発現している腫瘍細胞の成長を効果的に阻害するが、正常な細胞の成長に影響を与えないであろう。したがって、本方法を使用し、変異体ＩＤＨを有する細胞に高い特異性を有し、かつ正常な細胞に低い毒性を有する化合物をスクリーニングすることができる。
【０３０５】
ＨＴ１０８０およびＨＣＣＣ９８１０細胞を、効果的なＩＤＨ阻害剤で処置することによって、Ｄ−２−ＨＧの合成はブロックされ、かつＤ−２−ＨＧ脱水素酵素で触媒される酸化反応によって、Ｄ−２−ＨＧの濃度は減少する。したがって、本開示の化合物のＩＤＨ阻害活性および選択性は、細胞代謝産物におけるＤ−２−ＨＧの減少によってアッセイすることができる。
【０３０６】
細胞ベースのＩＤＨ阻害剤アッセイを行うために、ＨＴ１０８０およびＨＣＣＣ９８１０細胞（または異なるＩＤＨ変異を保持する他の細胞株）を、１０％ＦＢＳが補充されたＤＭＥＭ中で培養する。細胞を、さまざまな異なる濃度の本開示の化合物で処置する。処置後のさまざまな時点（４から２４時間の間）で、細胞培養上澄みを取り出し、細胞をＰＢＳで１回または２回洗浄した。細胞代謝産物を、８０％メタノール（−８０℃未満にあらかじめ冷却された）を細胞に添加することによって抽出し、４℃の温度で６０分間抽出し、遠心分離し、すべての不溶性構成成分を除去する。代謝産物（前述のステップからの透明な上澄み）を凍結乾燥し、２０ｍｇ／ｍｌ  Ｏ−メトキシアミンＨＣｌを含むピリジン中で復元し、７０℃で４０分間インキュベートする。室温に冷却後、ＭＴＢＳＴＦＡ（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−Ｎ−メチルトリフルオロアセトアミド、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を４：７の体積比（例えば、ＭＴＢＳＴＦＡ２０μＬ対２０ｍｇ／ｍｌ  Ｏ−メトキシアミンＨＣｌ溶液３５μＬ）で添加し、７０℃で３０分間、誘導を行う。Ｄ−２−ＨＧを含む誘導された代謝産物をＡｇｉｌｅｎｔ  ７８９０Ａ−５７５０  ＧＣ／ＭＳシステムによって分析する。誘導された代謝産物１μｌをＡｇｉｌｅｎｔ  ７８９０Ａ−５７５０に注入して、Ｄ−２−ＨＧの濃度を分析する。ＧＣオーブン温度を、１０℃／分で１４０℃〜２６０℃、８℃／分で２６０℃〜３１０℃、および３１０℃を５分間保持にプログラムする。キャリアガスの流速は１ｍｌ／分である。質量分光器を、７０ｅＶの電子衝撃（ＥＩ）様式で操作する。Ｄ−２−ＨＧを内因性グルタミン酸に対して正規化する。
【０３０７】
異なる濃度の各化合物の存在下でのＩＤＨの活性は、陰性対照試料に対する相対Ｄ−２−ＨＧ濃度、およびＩＣ５０値によって表すことができ、各化合物に関する阻害および選択性を評価することができる。
【０３０８】
試験７：化合物のＩＤＨ阻害および選択性に関する改善された細胞ベースのアッセイ
本開示はまた、ＨＴ１０８０およびＨＣＣＣ９８１０細胞におけるＤ−２−ＨＧ脱水素酵素の安定な過剰発現に関与する化合物の、ＩＤＨ阻害および選択性に関する改善された細胞ベースのアッセイを提供する。
【０３０９】
以前の報告によれば、Ｄ−２−ＨＧ脱水素酵素が過剰発現すると、ＨＴ１０８０細胞におけるＤ−２−ＨＧの半減期が減少し（図２Ａおよび図２Ｂ）［「Ｄ−２−ｈｙｄｒｏｘｙｇｌｕｔａｒａｔｅ  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ  ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｙ  ｏｆ  ｍｕｔａｎｔ  ＩＤＨ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｂｕｔ  ｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ」、Ｍａ，Ｓ．ら、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ、（２０１５年）］、細胞を、変異体ＩＤＨ１阻害剤によるＤ−２−ＨＧ合成遮断に対してより感受性にする。それによって、この細胞ベースのアッセイの感受性および正確性が大きく高められることになる。改善された細胞ベースのアッセイでは、すべての他のステップは試験６で開示されたように行われる。
【０３１０】
試験８：ＩＤＨ変異体細胞の足場非依存性成長の阻害
足場非依存性細胞成長ががん細胞の基本的な特性であることは、十分に確立されている。足場非依存性成長の能力は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍細胞の腫瘍形成能および転移能と密接に関連する。
【０３１１】
先行研究では、ＨＴ１０８０における変異体ＩＤＨ１の欠失は、正常な培養条件での細胞増殖にわずかな影響を有するが、ＩＤＨ１  Ｈ１３２Ｃ変異を有するＨＴ１０８０細胞株の足場非依存性成長を強く阻害することが示されている［「Ｄ−２−ｈｙｄｒｏｘｙｇｌｕｔａｒａｔｅ  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ  ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｙ  ｏｆ  ｍｕｔａｎｔ  ＩＤＨ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｂｕｔ  ｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ」、Ｍａ，Ｓ．ら、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ、（２０１５年）］。変異体ＩＤＨ１の欠失はまた、ＨＴ１０８０細胞におけるＤ−２−ＨＧ産生をなくす。本開示において、足場非依存性成長（軟寒天でのコロニー形成）をまた、好都合なかつ有益なｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイとして使用して、腫瘍阻害における化合物の活性を測定する。
【０３１２】
本開示の化合物を使用し、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃを含むＨＴ１０８０およびＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈを含むＨＣＣＣ９８１０などのＩＤＨ−変異体がん細胞株を処置し、化合物が軟寒天における細胞成長に影響を与えるかどうかを試験する。化合物を、軟寒天中にならびに軟寒天上の培地に、試験５および６の結果から各化合物に関して計算されたＩＣ５０値よりも高い濃度で添加する。コロニー形成を顕微鏡によって可視化する。実験終了時に、軟寒天プレートをクリスタルバイオレットで染色し、細胞コロニーを可視化して、定量化する。ＩＤＨ１阻害が、軟寒天アッセイにおける足場非依存性成長を抑制することが実証されると、腫瘍阻害における変異体ＩＤＨ阻害剤の活性をアッセイするために有益な、有効な、かつ好都合なアッセイが得られる。このアッセイは、変異体ＩＤＨ１の阻害が、正常な培養条件下でＨＴ１０８０細胞成長に影響を与えないために、特に有益である。
【０３１３】
試験９：患者由来異種移植モデルにおけるＩＤＨ変異体腫瘍成長の阻害
先行研究では、変異体ＩＤＨ  Ｒ１３２Ｃを阻害すると、ＨＴ１０８０の腫瘍成長を抑制できるであろうことが異種移植実験によって示されている［「Ｄ−２−ｈｙｄｒｏｘｙｇｌｕｔａｒａｔｅ  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ  ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｙ  ｏｆ  ｍｕｔａｎｔ  ＩＤＨ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｂｕｔ  ｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ」、Ｍａ，Ｓ．ら、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ、（２０１５年）］。患者由来異種移植マウス（ＰＤＸ）モデルを、腫瘍阻害における化合物の活性を測定するための、好都合なかつ有益なｉｎ  ｖｉｖｏアッセイとして本明細書において使用する。最初の実験として、ＩＤＨ１変異体神経膠腫ＰＤＸモデルを、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈ変異を有するＢｔ１４２神経膠腫脳幹細胞株から確立する［「Ａｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｐａｔｉｅｎｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ＩＤＨ１−ｍｕｔａｎｔ  ｇｌｉｏｍａ」、Ｌｕｃｈｍａｎ，Ｈ．Ａ．ら、Ｎｅｕｒｏ  Ｏｎｃｏｌ、（２０１２年）］。このマウスモデルを使用し、ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈ変異を有する神経膠腫の抑制における本開示の化合物の有効性を試験する。本開示の化合物は、異種移植モデルにおいてＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈ変異を保持する腫瘍の成長を阻害する。
【０３１４】
実施例1：ＩＤＨ１  ＷＴ／Ｒ１３２Ｈ／Ｒ１３２Ｃタンパク質の精製
ｐＳＪ３−ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈ、ｐＳＪ３−ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｃ、およびｐＳＪ３−ＩＤＨ１−ＷＴプラスミドを、ＢＬ２１株にそれぞれ形質転換した。ＩＤＨ１  ＷＴ／Ｒ１３２Ｈ／Ｒ１３２Ｃタンパク質を、生物学的評価の項の試験１で開示された方法に従って、誘発し、精製した。各精製タンパク質に関する濃度をブラッドフォードアッセイによって判定した。図３は、ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｈ、ＩＤＨ１−Ｒ１３２Ｃ、およびＩＤＨ１−ＷＴタンパク質それぞれに関するクーマシー染色を示し、タンパク質の発現および精製が成功したことを証明する。
【０３１５】
実施例２：Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ代謝安定性研究
２．１  肝ミクロソームにおける代謝安定性
本研究において、化合物の代謝安定性を、生物学的評価の項の試験２で開示された方法に従って、マウス、ラット、イヌ、サルおよびヒトの肝ミクロソームで評価した。ミダゾラムを陽性対照として使用した。
【０３１６】
各実験を、２回繰り返して独立に行い（＃１および＃２としてそれぞれ示す）、かつ例示的化合物１６に関して得られたデータを表１〜表５および図４Ａ〜図４Ｆに示す。陽性対照の結果と比較した、化合物１６の代謝安定性の結果の概要を表６に示す。表６に示したすべての結果は、２つの独立した実験からの結果の平均値である。
【０３１７】
【表２】
2019522056.tif 000103
【０３１８】
【表３】
2019522056.tif 000104
【０３１９】
【表４】
2019522056.tif 000105
【０３２０】
【表５】
2019522056.tif 000106
【０３２１】
【表６】
2019522056.tif 000107
【０３２２】
【表７】
2019522056.tif 000108
【０３２３】
結果より、化合物１６は、異なる種の肝ミクロソームにおいて異なる代謝安定性を示し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、サル、マウス、ラット、ヒトおよびイヌのように、速いクリアランスから遅いクリアランス（すなわち、サル＞マウス＞ラット＞ヒト＞イヌ）を伴う。陽性対照のミダゾラムと比較すると、ヒト肝ミクロソームにおける化合物１６のクリアランスは遅く、化合物１６がヒト肝ミクロソームにおいて中等度の安定性を有することが示される。
【０３２４】
２．２  血漿における代謝安定性
本研究において、マウス血漿における化合物の代謝安定性を、生物学的評価の項の試験３で開示された方法に従って評価した。
【０３２５】
各実験を、２回繰り返して独立に行った（＃１および＃２としてそれぞれ示す）。例示的化合物１６に関して得られた結果を表７および図５に示す。
【０３２６】
【表８】
2019522056.tif 000109
【０３２７】
結果より、化合物１６の残存平均百分率は、２時間以内で９８．５％を超え、化合物１６が、少なくとも２時間にわたってマウス血漿中で安定なままであることが示される。
【０３２８】
実施例３：Ｉｎ  ｖｉｖｏ薬物動態研究
化合物の薬物動態（ＰＫ）研究を、生物学的評価の項の試験４で開示された方法に従って、１０ｍｇ・ｋｇ−１単回ｐ．ｏ．用量または２ｍｇ・ｋｇ−１の単回ｉ．ｖ．用量が投与されたＩＣＲマウス（雄、６〜８週齢、２０．０〜２５．３ｇ、Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）において行った。
【０３２９】
各実験を、３回繰り返して独立に行った。図６において、１０ｍｇ・ｋｇ−１をＩＣＲマウスにｐ．ｏ．投与した後の例示的化合物２３の血漿濃度を、時間の関数としてプロットした。図７において、２ｍｇ・ｋｇ−１をＩＣＲマウスにｉ．ｖ．注射した後の例示的化合物２３の血漿濃度を、時間の関数としてプロットした。各データは、エラーバーとして標準誤差（ＳＥＭ）を有する、３回の実験の平均血漿濃度を表す。
【０３３０】
化合物２３のＰＫパラメーターを、ｐ．ｏ．およびｉ．ｖ．投与に関してそれぞれ表８Ａおよび表８Ｂに示す。
【０３３１】
【表９】
2019522056.tif 000110
【０３３２】
【表１０】
2019522056.tif 000111
【０３３３】
実施例４：化合物は、ＩＤＨ１  Ｒ１３２ＨおよびＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃの活性を阻害する
化合物のＩＤＨ阻害活性を、生物学的評価の項の試験５に従って評価した。各化合物の変異体ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈ／Ｒ１３２Ｃ阻害に関する試験を３回繰り返して行った。ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈに関しては、例示的化合物１６、２１、２２、２３、２４および３１の酵素活性を、図８Ａ〜図８Ｃ、図９Ａ〜図９Ｃ、図１０Ａ〜図１０Ｃ、図１１Ａ〜図１１Ｃ、図１２Ａ〜図１２Ｃおよび図１３Ａ〜図１３Ｃの化合物の濃度の対数の関数としてそれぞれプロットする。ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈに対する化合物１６、２１、２２、２３、２４および３１のＩＣ５０値は１．０μＭ未満である。ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃに関しては、例示的化合物１６、２１、２２、２３、２４および３１の酵素活性を、図１４Ａ〜図１４Ｃ、図１５Ａ〜図１５Ｃ、図１６Ａ〜図１６Ｃ、図１７Ａ〜図１７Ｃ、図１８Ａ〜図１８Ｃおよび図１９Ａ〜図１９Ｃの化合物の濃度の対数の関数としてそれぞれプロットする。ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃに対する化合物１６、２１、２２、２３、２４および３１のＩＣ５０値は１．５μＭ未満である。ＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｃに対する化合物のＩＣ５０値を表９に示す。
【０３３４】
【表１１】
2019522056.tif 000112
【０３３５】
化合物の野生型ＩＤＨ１阻害に関する試験も行った。その試験によって、化合物が、試験濃度（０．０３１２５μＭ〜２μＭ）では野生型ＩＤＨ１に対して阻害効果を示さないことが示される。
【０３３６】
従来の化学療法は、通常は、患者に対して一般的な非特異的効果および毒性効果を有する。この例で試験された化合物は、変異体ＩＤＨの標的化においては野生型ＩＤＨよりも高い特異性を示した。このようなより高い特異性によって、比較的低用量での化合物の使用が可能になり、内因性野生型酵素を阻害することによって生じる副作用が回避される。その結果、変異体ＩＤＨの標的化により、薬物設計およびプロセシングにおいて柔軟性が得られる。
【０３３７】
実施例５：化合物はＩＤＨ１  Ｒ１３２ＣのＤ−２−ＨＧ産生活性を阻害する
ＨＴ１０８０細胞を３５ｍｍプレートで培養し、１０μＭの各化合物１〜３７で１２時間処置し、Ｄ−２−ＨＧ濃度を、生物学的評価の項の試験６で開示された方法に従って分析した。いくつかの化合物で処置した後のＤ−２−ＨＧ濃度を図２０に示した。
【０３３８】
化合物のＤ−２−ＨＧ阻害活性をまた、生物学的評価の項の試験７で開示された方法に従って改善された細胞ベースのアッセイで評価した。Ｄ−２−ＨＧ脱水素酵素を過剰発現しているＨＴ１０８０細胞を３５ｍｍプレートで培養し、０．５μＭ、１μＭ、２．５μＭおよび５μＭの濃度の各化合物１〜３７で１２時間、それぞれ処置し、Ｄ−２−ＨＧ濃度を分析した。異なる濃度の例示的化合物１６、２１〜２４および３１による、ＨＴ１０８０細胞におけるＤ−２−ＨＧの阻害比を表１０に示した。
【０３３９】
【表１２】
2019522056.tif 000113
【０３４０】
結果より、化合物は、ＩＤＨ１  Ｒ１３２ＣのＤ−２−ＨＧ産生活性を効果的に阻害したことが示され、化合物の阻害活性は、化合物の濃度の増加に従って増加する。５μＭの濃度では、すべての例示的化合物が７０％超の阻害活性を示した。
【０３４１】
実施例６：化合物は、ＨＴ１０８０細胞の足場非依存性成長を阻害する
ＨＴ１０８０細胞を３５ｍｍプレートで培養し、指数成長期で回収し、生物学的評価の項の試験８の記載に従って軟寒天で使用する。本開示の化合物は、ＩＤＨ−変異体がん細胞の足場非依存性成長を阻害する。
【０３４２】
実施例７：化合物は、ＰＤＸモデルにおけるＩＤＨ変異体腫瘍の成長を阻害する
生物学的評価の項の試験９の記載に従って動物試験を行う。本開示の化合物は、ＰＤＸモデルにおいてＩＤＨ１  Ｒ１３２Ｈ変異を保持している腫瘍の成長を阻害する。
【０３４３】
参考文献
2019522056.tif 000114
2019522056.tif 000115
【図１】
2019522056.tif 000122
【図２Ａ】
2019522056.tif 000123
【図２Ｂ】
2019522056.tif 000124
【図３】
2019522056.tif 000125
【図４Ａ】
2019522056.tif 000126
【図４Ｂ】
2019522056.tif 000127
【図４Ｃ】
2019522056.tif 000128
【図４Ｄ】
2019522056.tif 000129
【図４Ｅ】
2019522056.tif 000130
【図５】
2019522056.tif 000131
【図６】
2019522056.tif 000132
【図７】
2019522056.tif 000133
【図８Ａ】
2019522056.tif 000134
【図８Ｂ】
2019522056.tif 000135
【図８Ｃ】
2019522056.tif 000136
【図９Ａ】
2019522056.tif 000137
【図９Ｂ】
2019522056.tif 000138
【図９Ｃ】
2019522056.tif 000139
【図１０Ａ】
2019522056.tif 000140
【図１０Ｂ】
2019522056.tif 000141
【図１０Ｃ】
2019522056.tif 000142
【図１１Ａ】
2019522056.tif 000143
【図１１Ｂ】
2019522056.tif 000144
【図１１Ｃ】
2019522056.tif 000145
【図１２Ａ】
2019522056.tif 000146
【図１２Ｂ】
2019522056.tif 000147
【図１２Ｃ】
2019522056.tif 000148
【図１３Ａ】
2019522056.tif 000149
【図１３Ｂ】
2019522056.tif 000150
【図１３Ｃ】
2019522056.tif 000151
【図１４Ａ】
2019522056.tif 000152
【図１４Ｂ】
2019522056.tif 000153
【図１４Ｃ】
2019522056.tif 000154
【図１５Ａ】
2019522056.tif 000155
【図１５Ｂ】
2019522056.tif 000156
【図１５Ｃ】
2019522056.tif 000157
【図１６Ａ】
2019522056.tif 000158
【図１６Ｂ】
2019522056.tif 000159
【図１６Ｃ】
2019522056.tif 000160
【図１７Ａ】
2019522056.tif 000161
【図１７Ｂ】
2019522056.tif 000162
【図１７Ｃ】
2019522056.tif 000163
【図１８Ａ】
2019522056.tif 000164
【図１８Ｂ】
2019522056.tif 000165
【図１８Ｃ】
2019522056.tif 000166
【図１９Ａ】
2019522056.tif 000167
【図１９Ｂ】
2019522056.tif 000168
【図１９Ｃ】
2019522056.tif 000169
【図２０】
2019522056.tif 000170
【国際調査報告】
2019522056.tif 000171
2019522056.tif 000172
2019522056.tif 000173