(57)【要約】  本発明は、美白及び抗酸化活性がある新規フェノール酸類誘導体化合物、及びその用途に関し、より詳細には、下記の化学式１で表される化合物、その異性体、またはその塩である。本発明に係る化合物は、チロシナーゼを抑制する皮膚美白活性を有するので、皮膚美白用薬学組成物又は化粧品に有用に使用できるだけでなく、抗酸化活性を有するので、皮膚の老化などの予防又は改善に有用に使用することができる。【選択図】図３
2019500421.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１で表される化合物、その異性体、またはその塩。
【化１】
2019500421.tif 000015
ここで、
ｎは、０または１、
Ｘは、ＮＨまたはＳ、
Ｙは、炭素数Ｃ１〜Ｃ２のアルキル、
Ｒ１は、炭素数Ｃ１〜Ｃ８のヒドロキシアルキル、炭素数Ｃ１〜Ｃ８のヒドロキシアリール、炭素数Ｃ１〜Ｃ８のヒドロキシアルキルアリール、アミノ基、またはアミド基、
Ｒ２は、Ｈ、または炭素数Ｃ１〜Ｃ３のアルキル、及び
Ｒ３は、メチルである。
【請求項２】
下記化学式２で表される、請求項１に記載の化合物、その異性体、またはその塩。
【化２】
2019500421.tif 000016
ここで、
Ｒ２は、Ｈ、または炭素数Ｃ１〜Ｃ３のアルキル、
Ｒ３はメチル、及び
Ｒ４は、ヒドロキシメチル、またはヒドロキシエチルである。
【請求項３】
下記化学式３で表される、請求項１に記載の化合物、その異性体、またはその塩。
【化３】
2019500421.tif 000017
ここで、
Ｒ２は、Ｈ、または炭素数Ｃ１〜Ｃ３のアルキル、
Ｒ３はメチル、及び
Ｒ５は、アミノ基、または炭素数Ｃ１〜Ｃ３のアミド基である。
【請求項４】
（Ｒ）−エチル−２−アミノ−３−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエート、（Ｒ）−メチル−２−アセトアミド−３−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエート、（Ｓ）−メチル−３−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエート、または（２Ｓ，３Ｒ）−メチル−３−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）ブタノエートであることを特徴とする、請求項１に記載の化合物、その異性体、またはその塩。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物、その異性体、またはその塩を有効成分として含有する、皮膚美白用化粧料組成物。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物、その異性体、またはその塩を有効成分として含有する、酸化関連症状の予防又は改善用抗酸化化粧料組成物。
【請求項７】
前記酸化関連症状は、皮膚の老化、しわの生成、及び皮膚色素沈着から選択されたいずれか１つ以上であることを特徴とする、請求項６に記載の抗酸化化粧料組成物。
【請求項８】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物、その異性体、またはその塩を、組成物の全重量を基準として０．０１〜１０重量％含む、化粧料組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、美白及び抗酸化活性がある新規フェノール酸類誘導体化合物、及びその用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
女性は、白玉のように白くて且つきれいな皮膚を好み、これを美の重要な基準にしているので、皮膚色素異常沈着の治療及び美容欲求充足のための美白剤に対する開発が盛んに行われている。
【０００３】
人の皮膚色は、メラニン色素、カロチン、ヘモグロビンの量に応じて決定され、これらの中でメラニン色素の皮膚色に対する影響が最も大きいので、メラニン色素の形成の制御が美白剤の開発の核心課題となる。
【０００４】
メラニン色素は、黒い色素とタンパク質との複合体の形態を有するフェノール系高分子物質であって、色素細胞内に存在するチロシナーゼの作用によってチロシンから複雑な過程を経て生成され、紫外線遮断の役割を果たすことで、皮膚細胞の保護に非常に重要であり、必ず必要な物質である。
【０００５】
ところが、皮膚が外部の刺激、例えば、紫外線、環境汚染またはストレスなどに反応する場合、メラニンが過剰に生成されて、皮膚の外に排出されずに角質形成細胞（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ）に伝達され、皮膚表皮層に蓄積されて、しみ、そばかす、及び老人性黒子などの深刻な美容上の問題を引き起こすだけでなく、皮膚の老化を促進し、皮膚癌を誘発することもある。
【０００６】
メラニン色素の形成を制御する方法としては、大きく、生成されたメラニン色素を還元させて脱色する方法、及びメラニン色素を形成する酵素であるチロシナーゼの活性を抑制する方法が知られており、メラニン色素を還元させるために使用されるトコフェロールやビタミン類などを使用した美白剤の場合、メラニン色素の脱色効果が極めて小さいと知られているため、チロシナーゼの活性を阻害させることによってメラニン色素の生成を抑制する阻害剤が注目を集めている。
【０００７】
従来の化粧品分野では、美白成分として、例えば、コウジ酸（Ｋｏｊｉｃ  ａｃｉｄ）、アルブチン（Ａｒｂｕｔｉｎ）などのようなチロシナーゼ酵素活性を抑制する物質、ハイドロキノン（Ｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）、ビタミンＣ（Ｌ−Ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）及びこれらの誘導体と各種植物抽出物が使用されてきた。しかし、処方系中での安定性が悪くて分解されて着色したり、異臭の発生、生体レベルでの効能、効果の不明及び安全性の問題などからその使用が制限されている実情である。また、コウジ酸は、チロシナーゼの活性部位に存在する銅イオンを吸着させて酵素活性を阻害するが、化粧品に配合時の不安定性などの問題がある。ビタミンＣ及びその誘導体は、酸化しやすい不安定性のため、化粧品の原料として使用が難しく、ハイドロキノンは、皮膚に対する美白効果は卓越しているが、アレルギーを誘発する性質、メラニン生成細胞に対する毒性、皮膚の永久脱色化など、皮膚に対する刺激性が高く、最近、発癌性物質として規定されて使用が禁止され、各国別に制限的な濃度のみを許可している。また、アルブチンは、ハイドロキノンにグルコピラノシド（Ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）が結合された誘導体であって、ハイドロキノンの使用時に現れる副作用が少なく、かつ人体に対する毒性なしにメラニン色素の合成を抑制する作用があるため、メラニン色素沈着が増加する皮膚疾患の治療剤としての利用可能性が提示されたが、皮膚酵素によって一部が分解されるという欠点がある。したがって、少量でも効能に優れ、副作用の少ない安全な代替美白剤の開発が至急に求められている実情である。
【０００８】
一方、皮膚は、活性酸素による皮膚の酵素的、非酵素的抗酸化防御系の崩壊により、結果的にタンパク質、脂質、ＤＮＡのような細胞成分が損傷し（非特許文献１）、このような細胞成分の損傷は、酸化性関連疾患、すなわち、皮膚の老化、しわ、色素沈着などの生成を意味するものである。
【０００９】
抗酸化能力は、活性酸素を除去して身体内の細胞の酸化又は老化作用を防ぐ作用が核心であるため、抗酸化活性を有する物質による活性酸素の消去能力は、皮膚保護能力と関連付けることができる。また、メラニンは、表皮の基底層にあるメラニン細胞（Ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ）によって合成され、活性酸素などによって引き起こされた炎症媒介物質は、メラニン細胞でのメラニンの生成を誘導し、促進させると知られているため、抗酸化物質が直接的な美白効果を示しはしなくても、色素沈着の抑制効果に関連付けることができる。
【００１０】
このような観点から、抗酸化剤は自由ラジカルと反応することによって、自由ラジカルによる酸化的細胞損傷を防止する目的で使用される。食品又は医薬品などに多く使用される合成抗酸化剤としては、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ、Ｂｕｔｙｌａｔｅｄ  ｈｙｄｒｏｘｙａｎｉｓｏｌｅ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ、Ｂｕｔｙｌａｔｅｄ  ｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅ）、プロピルガレート（ＰＧ、Ｐｒｏｐｙｌ  ｇａｌｌａｔｅ）、第三ブチルヒドロキノン（ＴＢＨＱ、Ｔｅｒｔｉａｒｙ  ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）などがあるが、これらを実験動物に高濃度で投与する場合には、肝肥大症を誘発したり、発癌性を示したりするものと知られている。特にブチル化ヒドロキシトルエンは、様々な研究結果を通じて、実験動物の肝でミクロソーム酵素活性（ｍｉｃｒｏｓｏｍａｌ  ｅｎｚｙｍｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）を増加させるということが知られ、これらのフェノール系合成抗酸化剤の安全性に対して論難が提起されて、現在はその使用量が法的に規制されている（非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４）。これによって、抗酸化効果が高く、安全かつ経済的な植物由来の天然抗酸化剤を開発しようとする多くの研究が期待の中で進んでいる（非特許文献５）。最近、天然物を対象とした研究が盛んに行われながら、天然物に含有されている２次代謝産物が生理活性物質として主要な関心事となっており、特に、抗酸化性物質に対する研究が盛んに行われており、今まで知られた天然抗酸化物質としては、トコフェロール（ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ）類、フラボノイド（ｆｌａｖｏｎｏｉｄ）類、ゴシポール（ｇｏｓｓｙｐｏｌ）、セサモール（ｓｅｓａｍｏｌ）、オリザノール（ｏｒｙｚａｎｏｌ）、及びビタミンＣなどが挙げられる（非特許文献６、非特許文献７、非特許文献８、非特許文献９）。その中でトコフェロール（ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ）とＬ−アスコルビン酸（Ｌ−ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）が天然抗酸化剤として好まれており、その中でトコフェロールは、安全性が高いが、単独では酸化反応阻止能力が低く（非特許文献１０）、高価であるという欠点がある。
【００１１】
したがって、酸化的損傷による老化を含む様々な症状及び疾患を予防するための代替的な抗酸化物質の開発が必要な実情である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｋｏｒ．Ｊ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，（米），２００５，Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．１，ｐ．４０−４５
【非特許文献２】Ｂｒａｎｎｅｎ  ＡＬ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｏｉｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｓ'  Ｓｏｃｉｅｔｙ，（米），１９７５，Ｖｏｌ．５２，ｐ．５９−６３
【非特許文献３】Ｉｔｏ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，（英），１９８３，Ｖｏｌ．７０，ｐ．３４３
【非特許文献４】Ｃｈａｎ  ＫＭ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，（米），１９９３，Ｖｏｌ．５８，ｐ．１−４
【非特許文献５】Ｌａｒｓｏｎ  ＲＡ，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（蘭），１９８８，Ｖｏｌ．２７，ｐ．９６９−９７８
【非特許文献６】Ｈｕｓｏｎ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（蘭），１９８７，Ｖｏｌ．１９，ｐ．５３７−５４１
【非特許文献７】Ｆｒａｎｋｅｌ，Ｅ．Ｎ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（蘭），１９９６，Ｖｏｌ．５７，ｐ．５１
【非特許文献８】Ｇｉｅｓｅ  Ｊ，Ｆｏｏｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，（米），１９９６，Ｖｏｌ．５，ｐ．７３−８１
【非特許文献９】Ｐｓｚｃｃｚｏｌａ  ＤＥ，Ｆｏｏｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，（米），２００１，Ｖｏｌ．５５，ｐ．５１−５９
【非特許文献１０】Ｈａｌｌｉｗｅｌｌ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（米），１９８８，Ｖｏｌ．２，ｐ．２８６７−２８７０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の目的は、皮膚美白活性を有する新規化合物を提供することにある。
【００１４】
また、本発明の他の目的は、抗酸化活性を有する新規化合物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明の上述した従来技術の問題点を解決するために、
下記化学式１で表される化合物、その異性体、またはその塩を提供する。
【００１６】
【化１】
2019500421.tif 000003
【００１７】
ここで、
ｎは、０または１；
Ｘは、ＮＨまたはＳ；
Ｙは、炭素数Ｃ１〜Ｃ２のアルキル；
Ｒ１は、炭素数Ｃ１〜Ｃ８のヒドロキシアルキル、炭素数Ｃ１〜Ｃ８のヒドロキシアリール、炭素数Ｃ１〜Ｃ８のヒドロキシアルキルアリール、アミノ基、またはアミド基；
Ｒ２は、Ｈ、または炭素数Ｃ１〜Ｃ３のアルキル；及び
Ｒ３は、Ｈ、またはメチルである。
【００１８】
また、本発明において、下記化学式２で表される化合物、その異性体、またはその塩を提供する。
【００１９】
【化２】
2019500421.tif 000004
【００２０】
ここで、
Ｒ２は、Ｈ、または炭素数Ｃ１〜Ｃ３のアルキル；
Ｒ３は、Ｈ、またはメチル；及び
Ｒ４は、ベンジル、ヒドロキシメチル、またはヒドロキシエチルである。
【００２１】
また、本発明において、下記化学式３で表される化合物、その異性体、またはその塩を提供する。
【００２２】
【化３】
2019500421.tif 000005
【００２３】
ここで、
Ｒ２は、Ｈ、または炭素数Ｃ１〜Ｃ３のアルキル；
Ｒ３は、Ｈ、またはメチル；及び
Ｒ５は、アミノ基、または炭素数Ｃ１〜Ｃ３のアミド基である。
【００２４】
また、本発明において、（Ｓ）−エチル−３−フェニル−２−（３，４，５−トリヒドロキシベンズアミド）プロパノエート；（Ｒ）−エチル−２−アミノ−３−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエート；（Ｒ）−メチル−２−アセトアミド−３−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエート；（Ｓ）−メチル−３−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエート；または（２Ｓ，３Ｒ）−メチル−３−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）ブタノエートであることを特徴とする化合物、その異性体、またはその塩を提供する。
【００２５】
また、本発明の化合物、その異性体、またはその塩を有効成分として含有する皮膚美白用組成物を提供する。
【００２６】
また、本発明の化合物、その異性体、またはその塩を有効成分として含有する酸化関連症状又は疾患の予防又は治療用抗酸化組成物を提供する。
【００２７】
また、本発明において、前記酸化関連症状又は疾患は、皮膚の老化、しわの生成、及び皮膚色素沈着から選択されたいずれか１つ以上であることを特徴とする組成物を提供する。
【００２８】
また、本発明の化合物、その異性体、またはその塩を、組成物の全重量を基準として、０．０１〜１０重量％含む化粧料組成物を提供する。
【発明の効果】
【００２９】
本発明に係る化合物は、チロシナーゼ、及びメラニンの生成を抑制する皮膚美白活性を有するので、皮膚美白用薬学組成物又は化粧品に有用に使用できるだけでなく、抗酸化活性を有するので、皮膚の老化などの予防又は治療に有用に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】本発明の実施例化合物の抗酸化効果を測定した結果グラフである。
【図２】本発明の実施例化合物のチロシナーゼ活性阻害効果を測定した結果グラフである。
【図３】本発明の実施例化合物のメラニン生成抑制効果を測定した結果グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００３２】
本発明は、下記化学式４で表される化合物、その異性体、またはその塩である。
【００３３】
【化４】
2019500421.tif 000006
【００３４】
ここで、
ｎは、０または１；
Ｘは、ＮＨまたはＳ；
Ｙは、炭素数Ｃ１〜Ｃ２のアルキル；
Ｒ１は、炭素数Ｃ１〜Ｃ８のヒドロキシアルキル、炭素数Ｃ１〜Ｃ８のヒドロキシアリール、炭素数Ｃ１〜Ｃ８のヒドロキシアルキルアリール、アミノ基、またはアミド基；
Ｒ２は、Ｈ、または炭素数Ｃ１〜Ｃ３のアルキル；及び
Ｒ３は、Ｈ、またはメチルである。
【００３５】
前記化学式４の化合物は、天然に存在するフェノール酸類中の没食子酸（Ｇａｌｌｉｃ  Ａｃｉｄ）及びシリンガ酸（Ｓｙｒｉｎｇｉｃ  Ａｃｉｄ）を主骨格としてアミノ酸との反応を通じて得られる誘導体化合物であることが特徴である。天然に存在し、物質の毒性がよく知られた物質を合成の主原料としてデザインし、合成したので、合成されたフェノール酸類誘導体化合物が代謝や分解作用によって結合が分離されたときに生成される分解物質に対する薬理と毒性メカニズムがよく知られており、合成誘導体化合物を利用するにおいて安全性の確保が容易であるという利点がある。
【００３６】
このような観点から、アミノ酸の種類も、人体で代謝又は使用されるアミノ酸や必須アミノ酸などを使用することが好ましく、これに関する例示として、アラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、スレオニン、セレノシステイン、バリン、トリプトファン、チロシンなどが挙げられ、合成の容易性の面や効能・効果の面でシステイン（アセチル基で置換されたものを含む）、フェニルアラニン、セリン、スレオニンであることが好ましい。
【００３７】
前記化学式４の化合物は、下記反応式５に図式化したような例示を通じて合成され得る。
【００３８】
【化５】
2019500421.tif 000007
【００３９】
ここで、前記反応式５において、１）は、ヒドロキシ基を次の反応のためにアセチル保護基で置換するステップであり、２）は、安息香酸のカルボン酸の部分を活性化させてアミノ酸と反応させて結合化合物を合成するステップであり、３）は、アセチル基をヒドロキシ基で脱保護化してフェノール酸類誘導体化合物を合成するステップである。
【００４０】
通常、アミノ酸残基（ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｒｅｓｉｄｕｅ）は、ペプチド結合のアミノ基のＨとカルボキシル基のＯＨによって生成されるＨ２Ｏを除いた部分のことをいうが、本発明でのアミノ酸残基（ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｒｅｓｉｄｕｅ）は、アミノ酸の反応性官能基と没食子酸又はシリンガ酸が反応して残ったアミノ酸由来の残留構造物であって、アミノ酸の種類に応じて、様々な構造が形成され得、未反応反応性官能基を含むこともできる。これによって、アミノ酸の種類に応じて、アミノ酸と没食子酸又はシリンガ酸の組み合わせで、様々な物質が生成され得る。特に、合成が起こるアミノ酸の求核的（Ｎｕｃｌｅｏｐｈｉｌｉｃ）置換反応基に応じて硫黄またはアミンを含むものであってもよい。
【００４１】
具体的には、前記化学式４で表される化合物、その異性体、またはその塩は、下記化学式６又は下記化学式７で表される化合物、その異性体、またはその塩であってもよい。
【００４２】
【化６】
2019500421.tif 000008
【００４３】
ここで、
Ｒ２は、Ｈ、または炭素数Ｃ１〜Ｃ３のアルキル；
Ｒ３は、Ｈ、またはメチル；及び
Ｒ４は、ベンジル、ヒドロキシメチル、またはヒドロキシエチルである。
【００４４】
【化７】
2019500421.tif 000009
【００４５】
ここで、
Ｒ２は、Ｈ、または炭素数Ｃ１〜Ｃ３のアルキル；
Ｒ３は、Ｈ、またはメチル；及び
Ｒ５は、アミノ基、または炭素数Ｃ１〜Ｃ３のアミド基である。
【００４６】
より具体的には、前記化学式６又は化学式７で表される化合物、その異性体、またはその塩は、（Ｓ）−エチル−３−フェニル−２−（３，４，５−トリヒドロキシベンズアミド）プロパノエート；（Ｒ）−エチル−２−アミノ−３−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエート；（Ｒ）−メチル−２−アセトアミド−３−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエート；（Ｓ）−メチル−３−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエート；または（２Ｓ，３Ｒ）−メチル−３−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）ブタノエートであることを例示することができる。
【００４７】
本発明の化合物、その異性体、またはその塩は、メラニンの生成及びチロシナーゼを抑制することで、皮膚美白の用途に使用されてもよく、優れた抗酸化効果があるので、酸化関連症状又は疾患の予防又は治療の用途に使用されてもよい。前記酸化関連症状又は疾患は、皮膚の老化、しわの生成、皮膚色素沈着症、各種炎症性疾患、老人性退行性疾患、乾癬、湿疹などであり得るが、特に、皮膚の老化、しわ、または皮膚色素沈着症であり得る。
【００４８】
本発明の化合物、その異性体、またはその塩は、化粧料組成物が好ましいが、薬学組成物または健康機能性食品であってもよく、これを排除しない。
【００４９】
化粧料組成物である場合、当業界で通常製造されるいかなる剤形にも製造可能であり、例えば、溶液、懸濁液、乳濁液、ペースト、ゲル、クリーム、ローション、パウダー、オイル、粉末ファウンデーション、乳濁液ファウンデーション、ワックスファウンデーション及びスプレーなどに剤形化されてもよいが、これに限定されるものではない。より詳細には、サンクリーム、柔軟化粧水、収斂化粧水、栄養化粧水、栄養クリーム、マッサージクリーム、エッセンス、アイクリーム、パック、スプレー、またはパウダーの剤形に製造されてもよく、本発明の化合物、その異性体、またはその塩を、組成物の全重量を基準として、０．０１〜１０重量％含むことができる。０．０１重量％未満である場合、効果を示すには極めて少なく、１０重量％を超える場合、製剤の安定性及び保管安定性の面で良くないこともある。
【００５０】
薬学組成物である場合、それぞれ通常の方法によって散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアゾールなどの経口型剤形、外用剤、坐剤及び滅菌注射溶液の形態で剤形化して使用されてもよい。また、薬学組成物の製造に通常使用する適切な担体、賦形剤または希釈剤をさらに含むこともできる。本発明で使用可能な担体、賦形剤または希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルギン酸、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、または鉱物油などが挙げられる。
【００５１】
健康機能性食品である場合、粉末、顆粒、錠剤、カプセル、シロップ、または飲料の形態で提供されてもよく、前記健康食品は、有効成分である本発明に係る化合物以外に、他の食品又は食品添加物と共に使用され、通常の方法によって適切に使用され得る。有効成分の混合量は、その使用目的、例えば、予防、健康または治療的処置に応じて適切に決定され得る。
【００５２】
前記健康食品の種類には特に制限がなく、例としては、肉類、ソーセージ、パン、チョコレート、キャンデー類、スナック類、菓子類、ピザ、ラーメン、その他の麺類、ガム類、アイスクリーム類を含む酪農製品、各種スープ、飲料、茶、ドリンク剤、アルコール飲料、及びビタミン複合剤などが挙げられる。
【００５３】
以下、本発明について実施例を挙げてさらに詳細に説明する。但し、このような実施例は、発明のより詳細な説明のためのものに過ぎず、これによって権利範囲を制限しようとする意図ではないことを明らかにしておく。
【実施例１】
【００５４】
【化８】
2019500421.tif 000010
【００５５】
（Ｓ）−エチル−３−フェニル−２−（３，４，５−トリヒドロキシベンズアミド）プロパノエートの製造
（１）（Ｓ）−エチル−３−フェニル−２−（３，４，５−トリアセトキシベンズアミド）プロパノエートの製造
１００ｍＬのフラスコに３，４，５−トリアセトキシ安息香酸（３．５５ｇ）を入れ、ジクロロメタン（１２ｍＬ）とＤＭＦ（０．１ｍＬ）を入れた後、低温（５℃）で攪拌する。これに、塩化オキサリル（１．７ｍＬ）を滴加する。室温で６時間攪拌し、溶液を減圧濃縮して、３，４，５−トリアセトキシベンゾイルクロリドを得る。
【００５６】
１００ｍＬのフラスコに（Ｓ）−フェニルアラニンエチルエステル塩酸塩（２．７５ｇ）とジクロロメタン（１２ｍＬ）、そして、ジイソプロピルエチルアミン（６．２ｍＬ）を入れ、低温（５℃）で攪拌する。これに、先の反応で得た３，４，５−トリアセトキシベンゾイルクロリドをジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解した溶液を滴加する。室温で３時間攪拌し、反応液を減圧濃縮する。生成された固体をエチルアセテート（５０ｍＬ）に溶解し、水、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液、飽和塩水で洗浄する。有機溶液層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した後、液を減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィーで分離して、白色の固体４．４３ｇ（７８％）を得る。
【００５７】
（２）（Ｓ）−エチル−３−フェニル−２−（３，４，５−トリヒドロキシベンズアミド）プロパノエートの製造
（１）で得た（Ｓ）−エチル−３−フェニル−２−（３，４，５−トリアセトキシベンズアミド）プロパノエート（２．８３ｇ）をエタノール（６ｍＬ）に溶解し、塩酸溶液（１，４−ジオキサン４Ｍ溶液、１０ｍＬ）を加える。室温で８時間攪拌し、減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィーで分離して、目的物１．９ｇ（９２％）を得る。
【００５８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．３５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），３．１０−３．１７（ｍ，２Ｈ），４．０７−４．１３（ｍ，２Ｈ），４．９０−４．９５（ｍ，２Ｈ），６．８３（ｓ，２Ｈ），７．０１−７．２０（ｍ，５Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６５−７．２５（ｂｒ，３Ｈ）；［α］２０．０Ｄ＝−４２．９７（ｃ＝１，ＣＨ３ＯＨ）；ＦＴ−ＩＲ（Ｎｅａｔ）３３５８．４３ｃｍ−１，２９８３．３４ｃｍ−１，１７２８．８７ｃｍ−１，１６０１．５９ｃｍ−１，１５１４．８１ｃｍ−１，１４４４．４２ｃｍ−１，１３２４．８６ｃｍ−１，１２７４．７２ｃｍ−１，１２０３．３６ｃｍ−１，１０９２．４８ｃｍ−１，１０３４．６２ｃｍ−１，８６２．９９ｃｍ−１，７４８．２５ｃｍ−１，７０１．９６ｃｍ−１；ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３４６．１［Ｍ＋Ｈ］＋
【実施例２】
【００５９】
【化９】
2019500421.tif 000011
【００６０】
（Ｒ）−エチル−２−アミノ−３−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエートの製造
（１）（Ｒ）−エチル−２−アミノ−３−（４−アセトキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエートの製造
１００ｍＬのフラスコに４−アセトキシ−３，５−ジメトキシ安息香酸（４．８ｇ）を入れ、ジクロロメタン（２０ｍＬ）とＤＭＦ（０．１ｍＬ）を入れた後、低温（５℃）で攪拌する。これに、塩化オキサリル（２．４ｍＬ）を滴加する。室温で６時間攪拌し、溶液を減圧濃縮して、４−アセトキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルクロリドを得る。
【００６１】
１００ｍＬのフラスコに（Ｒ）−Ｎ−アセチルシステインエチルエステル（３．６ｇ）とジクロロメタン（２０ｍＬ）、そして、ジイソプロピルエチルアミン（１０ｍＬ）を入れ、低温（５℃）で攪拌する。これに、先の反応で得た４−アセトキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルクロリドをジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解した溶液を滴加する。室温で３時間攪拌し、反応液を減圧濃縮する。生成された固体をエチルアセテート（１５０ｍＬ）に溶解し、水、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液、飽和塩水で洗浄する。有機溶液層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した後、液を減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィーで分離して、白色の固体６．８ｇ（８７％）を得る。
【００６２】
（２）（Ｒ）−エチル−２−アミノ−３−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエートの製造
（１）で得た（Ｒ）−エチル−２−アミノ−３−（４−アセトキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエート（３．０ｇ）をエタノール（７ｍＬ）に溶解し、ヒドラジン水和物（０．８ｍＬ）を加える。室温で４時間攪拌し、減圧濃縮する。生成された固体をエチルアセテート（５０ｍＬ）に溶解し、水、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液、飽和塩水で洗浄する。有機溶液層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した後、液を減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィーで分離して、目的物２．０ｇ（８３％）を得る。
【００６３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．３５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），３．０９−３．２２（ｍ，２Ｈ），３．９６（ｓ，６Ｈ），４．２５−４．３７（ｍ，２Ｈ），５．０３−５．０５（ｍ，１Ｈ），５．８６（ｓ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｓ，２Ｈ）；［α］２２．３Ｄ＝−４．８０（ｃ＝１，ＣＨ３ＯＨ）；ＦＴ−ＩＲ（ＫＢｒ）３３６４．２１ｃｍ−１，３３０２．５ｃｍ−１，２９９６．８４ｃｍ−１，２９７７．５５ｃｍ−１，２９６３．０９ｃｍ−１，２９３１．２７ｃｍ−１，２８３４．８５ｃｍ−１，２５７０．６５ｃｍ−１，１７２４．０５ｃｍ−１，１６４８．８４ｃｍ−１，１６０９．３１ｃｍ−１，１５０９．０３ｃｍ−１，１４５８．８９ｃｍ−１，１４２１．２８ｃｍ−１，１３６８．２５ｃｍ−１，１３４７．０３ｃｍ−１，１３２２．９３ｃｍ−１，１３０４．６１ｃｍ−１，１２８４．３６ｃｍ−１，１２４５．７９ｃｍ−１，１２２４．５８ｃｍ−１，１２１３．９７ｃｍ−１，１１９３．７２ｃｍ−１，１１２０．４４ｃｍ−１，７６４．６４ｃｍ−１，７５２．１０ｃｍ−１，７２０．２８ｃｍ−１；ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３２９．９［Ｍ＋Ｈ］＋
【実施例３】
【００６４】
【化１０】
2019500421.tif 000012
【００６５】
（Ｒ）−メチル−２−アセトアミド−３−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエートの製造
（１）（Ｒ）−メチル−２−アセトアミド−３−（４−アセトキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエートの製造
１００ｍＬのフラスコに４−アセトキシ−３，５−ジメトキシ安息香酸（３．６ｇ）を入れ、ジクロロメタン（１５ｍＬ）とＤＭＦ（０．１ｍＬ）を入れた後、低温（５℃）で攪拌する。これに、塩化オキサリル（１．６ｍＬ）を滴加する。室温で６時間攪拌し、溶液を減圧濃縮して、４−アセトキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルクロリドを得る。
【００６６】
１００ｍＬのフラスコに（Ｒ）−Ｎ−アセチルシステインメチルエステル（２．７ｇ）とジクロロメタン（１５ｍＬ）、そして、ジイソプロピルエチルアミン（４ｍＬ）を入れ、低温（５℃）で攪拌する。これに、先の反応で得た４−アセトキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルクロリドをジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解した溶液を滴加する。室温で３時間攪拌し、反応液を減圧濃縮する。生成された固体をエチルアセテート（１００ｍＬ）に溶解し、水、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液、飽和塩水で洗浄する。有機溶液層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した後、液を減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィーで分離して、白色の固体４．４ｇ（７３％）を得る。
【００６７】
（２）（Ｒ）−メチル−２−アセトアミド−３−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエートの製造
（１）で得た（Ｒ）−メチル−２−アミノ−３−（４−アセトキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエート（２．４ｇ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶解し、ヒドラジン水和物（０．７ｍＬ）を加える。室温で８時間攪拌し、減圧濃縮する。生成された固体を水とヘキサンで洗浄し、分離して、目的物１．４ｇ（７４％）を得る。
【００６８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．８４（ｓ，３Ｈ），３．２１（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．４８（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｓ，６Ｈ），４．４３−４．４８（ｍ，１Ｈ），７．１５（ｓ，２Ｈ），８．４７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），９．５７（ｓ，１Ｈ）；［α］２０．２Ｄ＝−４．３９（ｃ＝１，ＣＨ３ＯＨ）；ＦＴ−ＩＲ（ＫＢｒ）３４９７．２７ｃｍ−１，３２８５．１４ｃｍ−１，３０６８．１９ｃｍ−１，２９５８．２７ｃｍ−１，２９３４．１６ｃｍ−１，２８３７．７４ｃｍ−１，１７４９．１２ｃｍ−１，１６４１．１３ｃｍ−１，１６１４．１３ｃｍ−１，１５４１．８１ｃｍ−１，１５１１．９２ｃｍ−１，１４５７．９２ｃｍ−１，１４２１．２８ｃｍ−１，１４０２．０ｃｍ−１，１３７８．８５ｃｍ−１，１３２６．７９ｃｍ−１，１３１１．３６ｃｍ−１，１２８２．４３ｃｍ−１，１２５５．４３ｃｍ−１，１２２３．６１ｃｍ−１，１１８９．８６ｃｍ−１，１１４３．５８ｃｍ−１，１１０６．９４ｃｍ−１，９９８．９５ｃｍ−１，８５１．４２ｃｍ−１，８３４．０６ｃｍ−１，７７２．３５ｃｍ−１，６９０．３９ｃｍ−１；ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３５７．８［Ｍ＋Ｈ］＋
【実施例４】
【００６９】
【化１１】
2019500421.tif 000013
【００７０】
（Ｓ）−メチル−３−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエートの製造
（１）（Ｓ）−メチル−３−ヒドロキシ−２−（４−アセトキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエートの製造
１００ｍＬのフラスコに４−アセトキシ−３，５−ジメトキシ安息香酸（２．４ｇ）を入れ、ジクロロメタン（１０ｍＬ）とＤＭＦ（０．１ｍＬ）を入れた後、低温（５℃）で攪拌する。これに、塩化オキサリル（１．２ｍＬ）を滴加する。室温で６時間攪拌し、溶液を減圧濃縮して、４−アセトキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルクロリドを得る。
【００７１】
１００ｍＬのフラスコに（Ｓ）−セリンメチルエステル（１．５５ｇ）とジクロロメタン（１５ｍＬ）、そして、トリエチルアミン（２．８ｍＬ）を入れ、低温（５℃）で攪拌する。これに、先の反応で得た４−アセトキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルクロリドをジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解した溶液を滴加する。室温で３時間攪拌し、反応液を減圧濃縮する。生成された固体をエチルアセテート（１００ｍＬ）に溶解し、水、１Ｍ−塩酸水溶液、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液、飽和塩水で洗浄する。有機溶液層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した後、液を減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィーで分離して、白色の固体２．５ｇ（７３％）を得る。
【００７２】
（２）（Ｓ）−メチル−３−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエートの製造
（１）で得た（Ｓ）−メチル−３−ヒドロキシ−２−（４−アセトキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）プロパノエート（１．４ｇ）をメタノール（８ｍＬ）に溶解し、ヒドラジン水和物（０．４ｍＬ）を加える。室温で４時間攪拌し、減圧濃縮する。生成された固体を水とヘキサンで洗浄して、目的物０．８５ｇ（６９％）を得る。
【００７３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ３．６５（ｓ，３Ｈ），３．７７−３．８２（ｍ，８Ｈ），４．５０−４．５４（ｍ，１Ｈ），５．０７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｓ，２Ｈ），８．４４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），８．９９（ｓ，１Ｈ）；［α］２０．２Ｄ＝−４．３９（ｃ＝１，ＣＨ３ＯＨ）；ＦＴ−ＩＲ（ＫＢｒ）３４７２．２０ｃｍ−１，３２８１．２９ｃｍ−１，３１７２．３３ｃｍ−１，３０３４．４４ｃｍ−１，３０１７．０９ｃｍ−１，３００１．６６ｃｍ−１，２９７５．６２ｃｍ−１，２９４８．６３ｃｍ−１，２９０７．１６ｃｍ−１，２８４４．４９ｃｍ−１，１７４９．１２ｃｍ−１，１６３４．３８ｃｍ−１，１６０６．４１ｃｍ−１，１５３６．９９ｃｍ−１，１５０９．９９ｃｍ−１，１４７０．４６ｃｍ−１，１４５１．１７ｃｍ−１，１４２４．１７ｃｍ−１，１３７５．０ｃｍ−１，１３４８．０ｃｍ−１，１３１４．２５ｃｍ−１，１２９４．０ｃｍ−１，１２４１．９３ｃｍ−１，１２２７．４７ｃｍ−１，１１８７．９４ｃｍ−１，１１４１．６５ｃｍ−１，１１２０．４４ｃｍ−１，１０５９．６９ｃｍ−１，１０２７．８７ｃｍ−１，９７２．９１ｃｍ−１，８４９．４９ｃｍ−１，７７７．１７ｃｍ−１；ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２９９．９［Ｍ＋Ｈ］＋
【実施例５】
【００７４】
【化１２】
2019500421.tif 000014
【００７５】
（２Ｓ，３Ｒ）−メチル−３−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）ブタノエートの製造
（１）（２Ｓ，３Ｒ）−メチル−３−ヒドロキシ−２−（４−アセトキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）ブタノエートの製造
１００ｍＬのフラスコに４−アセトキシ−３，５−ジメトキシ安息香酸（２．６４ｇ）を入れ、ジクロロメタン（１１ｍＬ）とＤＭＦ（０．１ｍＬ）を入れた後、低温（５℃）で攪拌する。これに、塩化オキサリル（１．２ｍＬ）を滴加する。室温で６時間攪拌し、溶液を減圧濃縮して、４−アセトキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルクロリドを得る。
【００７６】
１００ｍＬのフラスコに（Ｓ）−スレオニンメチルエステル（１．８７ｇ）、ジクロロメタン（１０ｍＬ）、テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）、及びトリエチルアミン（３．２ｍＬ）を入れ、低温（５℃）で攪拌する。これに、先の反応で得た４−アセトキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルクロリドをジクロロメタン（１１ｍＬ）に溶解した溶液を滴加する。室温で３時間攪拌し、反応液を減圧濃縮する。生成された固体をエチルアセテート（１００ｍＬ）に溶解し、水、１Ｍ−塩酸水溶液、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液、飽和塩水で洗浄する。有機溶液層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した後、液を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーで分離して、白色の固体２．４５ｇ（６６％）を得る。
【００７７】
（２）（２Ｓ，３Ｒ）−メチル−３−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）ブタノエートの製造
（１）で得た（２Ｓ，３Ｒ）−メチル−３−ヒドロキシ−２−（４−アセトキシ−３，５−ジメトキシベンゾイルチオ）ブタノエート（２．１ｇ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶解し、ヒドラジン水和物（０．６ｍＬ）を加える。室温で３時間攪拌し、減圧濃縮する。生成された固体をエチルアセテート（５０ｍＬ）に溶解し、水、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液、飽和塩水で洗浄する。有機溶液層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した後、液を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーで分離して、目的物１．４ｇ（７６％）を得る。
【００７８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．３０（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），２．５０−３．００（ｂｒ，１Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．９１（ｓ，６Ｈ），４．４４−４．４６（ｍ，１Ｈ），４．８２（ｄ，Ｊ＝９．２，１Ｈ），５．９８−６．０３（ｂｒ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｓ，２Ｈ）；［α］２１．２Ｄ＝−４．４５（ｃ＝１，ＣＨ３ＯＨ）；ＦＴ−ＩＲ（Ｎｅａｔ）３３６６．１４ｃｍ−１，２９７５．６２ｃｍ−１，２８４４．４９ｃｍ−１，１７４２．３７ｃｍ−１，１６４０．１６ｃｍ−１，１６０４．４８ｃｍ−１，１５４２．７ｃｍ−１７，１５０８．０６ｃｍ−１，１４５９．８５ｃｍ−１，１４２３．２１ｃｍ−１，１３３９．３２ｃｍ−１，１２１４．９３ｃｍ−１，１１５８．０４ｃｍ−１，１１１６．５８ｃｍ−１，１０１４．３７ｃｍ−１，９１２．１７ｃｍ−１，８６３．９５ｃｍ−１，７５８．８５ｃｍ−１，６９６．１８ｃｍ−１；ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３１３．９［Ｍ＋Ｈ］＋
【００７９】
［試験例１］−フェノール酸類誘導体化合物の抗酸化効果
前記実施例で説明したフェノール酸類誘導体化合物に対するＤＰＰＨラジカル消去活性を測定して、自由ラジカルに対する抗酸化力を測定し、陽性対照群としてアスコルビン酸（Ａｓｃｏｒｂｉｃ  Ａｃｉｄ）を使用した。
【００８０】
試験に必要な１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（１，１−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ；ＤＰＰＨ）ラジカルは、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（ＵＳＡ）から、対照物質として使用したＬ−アスコルビン酸（Ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）はＳｉｇｍａ（ＵＳＡ）から購入した。
【００８１】
９６−培養容器に、メタノールで溶解させた０．２ｍＭ  ＤＰＰＨ溶液１００μｌと様々な濃度の合成化合物１００μｌをそれぞれ分注した後、室温で１０ｍｉｎ間反応させた後、５１７ｎｍで吸光度を測定した。
【００８２】
測定から出た吸光度と化合物の濃度を関連付けて、図１に図で示した。
【００８３】
図１から分かるように、ほとんどの実施例化合物に対しては、アスコルビン酸に比べて少ない活性を示したが、実施例１の化合物は、対照群であるアスコルビン酸に比べて高い活性を示した。
【００８４】
したがって、本発明に係るフェノール酸類誘導体化合物は、強力な抗酸化力が確認されることで、酸化関連疾患、すなわち、皮膚の老化、しわ、皮膚色素沈着などの予防又は治療の用途への使用可能性を示した。
【００８５】
［試験例２］−フェノール酸類誘導体化合物の細胞内チロシナーゼの活性阻害効果
前記実施例で合成した化合物に対して細胞内でのチロシナーゼ生成抑制効果を測定してみた。
【００８６】
細胞実験に使用されたウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ；ＦＢＳ）、ダルベッコ改変イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ；ＤＭＥＭ）は、Ｇｉｂｃｏ（ＵＳＡ）から購入して使用し、細胞株は、韓国細胞株銀行から購入したマウス由来のＢ１６Ｆ１０（黒色腫細胞）を使用した。１０％のＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）及び１％のａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ（Ｇｉｂｃｏ）が添加されたＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）を使用して、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで培養し、３〜４日間隔で継代培養を施行した。培養されたＢ１６Ｆ１０細胞を０．０５％トリプシン（Ｔｒｙｐｓｉｎ）−ＥＤＴＡで剥離し、２４培養容器（ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ）に同じ数（１．０×１０５  ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）で接種した後、１６時間後、無血清培地に取り替えた。６時間追加培養した後、α−ＭＳＨ（１００ｎＭ）と試験薬物を処理し、３日間培養した。３日間の培養が終わった後、冷たいＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄ  ｂｕｆｆｅｒ  ｓａｌｉｎｅ）バッファーで２回洗浄した後、プロテアーゼインヒビター（ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を添加したＲＩＰＡ  ｂｕｆｆｅｒ（５０ｎＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１５０ｎＭ  ＮａＣｌ、２％  ＮＰ−４０、０．５％  Ｓｏｄｉｕｍ  ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ、０．１％  ＳＤＳ、ｐＨ７．４）を２００μｌ処理して、細胞を破砕した。回収した破砕溶液を４℃の条件で１３，０００ｒｐｍの速度で３０分間遠心分離を行って、タンパク質が存在する上層液のみを回収した。回収した上層液は、ブラッドフォードアッセイ（ｂｒａｄｆｏｒｄ  ａｓｓａｙ）を通じてタンパク質を定量した。２００μｇ／ｍｌのタンパク質１９８μｌと２ｍｇ／ｍｌ  Ｌ−ＤＯＰＡ  ２μｌを反応後、光が遮断されたクッキングホイルで覆って３７℃  ＣＯ２インキュベーターで１時間反応させた。その後、４０５ｎｍで吸光度値を測定した。
【００８７】
細胞内チロシナーゼ活性率（％）＝試料群／対照群（メラニン生合成関与因子処理）＊１００で計算し、対照群としてアルブチン（Ａｒｂｕｔｉｎ）を使用した。結果は、図２の通りである。
【００８８】
図２から分かるように、実施例化合物は、アルブチンに比べて高いチロシナーゼ活性阻害効果を示している。したがって、フェノール酸類誘導体化合物がチロシナーゼの活性を抑制し、メラニンの生成にも影響を及ぼすかを調べるために、細胞内メラニン生成量を確認する実験を追加で行った。
【００８９】
［試験例３］−フェノール酸類誘導体化合物のメラニン生成阻害効果
前記実施例で合成した化合物に対して、細胞内でのメラニン生成抑制効果をＣｈａｎｇ  ａｎｄ  Ｃｈｅｎの方法で測定した（Ｃｈａｎｇ  ａｎｄ  Ｃｈｅｎ，  「Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｈｏｍｏｃｈｌｏｒｃｙｃｌｉｚｉｎｅ  ｏｎ  ｍｅｌａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  α−ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ｍｏｕｓｅ  Ｂ１６  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ」，  Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，（独），２０１２年１月，  Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．１，  ｐ．１１９−１２７）。
【００９０】
細胞実験に使用されたウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ；ＦＢＳ）、ダルベッコ改変イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ；ＤＭＥＭ）は、Ｇｉｂｃｏ（ＵＳＡ）から購入して使用し、細胞株は、韓国細胞株銀行から購入したマウス由来のＢ１６Ｆ１０（黒色腫細胞）を使用した。１０％のＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）及び１％のａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ（Ｇｉｂｃｏ）が添加されたＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）を使用して、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで培養し、３〜４日間隔で継代培養を施行した。培養されたＢ１６Ｆ１０細胞を０．０５％トリプシン（Ｔｒｙｐｓｉｎ）−ＥＤＴＡで剥離し、２４培養容器（ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ）に同じ数（２．０×１０４  ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）で接種した後、２４時間後、α−ＭＳＨ（１００ｎＭ）と試験薬物を処理し、３日間培養した。３日間の培養が終わった後、１Ｎ  ＮａＯＨを処理して８０℃で１時間反応させることで、細胞に含まれたメラニンを溶かし出し、４０５ｎｍでの吸光度の測定を通じてメラニンの量を測定した。陽性対照群としてコウジ酸（Ｋｏｊｉｃ  ａｃｉｄ）とアルブチン（Ａｒｂｕｔｉｎ）を使用した。結果は、図３の通りである。
【００９１】
図３から分かるように、実施例化合物は、アルブチンに比べて高いメラニン生成阻害効果を示している。そして、コウジ酸よりも高い活性を示した実施例化合物も確認された。したがって、本発明で説明しているフェノール酸類誘導体化合物がメラニンの生成を抑制して美白効果を有することが分かる。
【図１】
2019500421.tif 000018
【図２】
2019500421.tif 000019
【図３】
2019500421.tif 000020
【国際調査報告】
2019500421.tif 000021
2019500421.tif 000022
2019500421.tif 000023
2019500421.tif 000024