(57)【要約】本発明は、一態様では、概して、合成オプシンによって細胞活性を調節するための組成物及び方法に関する。更に、本発明は、視力回復及び他の用途の合成オプシンの使用方法を提供し、合成オプシンのアミノ酸配列は、増強された光感受性、動態及びイオン選択性を提供するように改変される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
組換え周辺光活性化可能な高速多特性オプシン（ＭＣＯ１）タンパク質であって、
ＭＣＯ１タンパク質のイオン選択性、光感受性又は動態のうちの少なくとも１つを調節するために変異させた１４回膜貫通ドメインを含むＭＣＯ１タンパク質を含む、タンパク質。前記ＭＣＯ１タンパク質が、配列番号１を有する、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項２】
単一の変異又は変異の組み合わせのうちの１つ以上が、イオン選択性、光感受性又は動態を調節し、前記変異は、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸１３２に対応するアミノ酸残基におけるＳからＣへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸１２３に対応するアミノ酸残基におけるＥからＡへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸２５３に対応するアミノ酸残基におけるＤからＡへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸１２０に対応するアミノ酸残基におけるＲからＡへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸５６に対応するアミノ酸残基におけるＱからＡへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸９３に対応するアミノ酸残基におけるＫからＡへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸９０に対応するアミノ酸残基におけるＥからＡへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸９０に対応するアミノ酸残基におけるＥからＱへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸９７に対応するアミノ酸残基におけるＥからＡへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸１０１に対応するアミノ酸残基におけるＥからＡへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸２５８に対応するアミノ酸残基におけるＮからＤへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸８３に対応するアミノ酸残基におけるＥからＴへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸１２３に対応するアミノ酸残基におけるＥからＴへの置換、又は
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸６３に対応するアミノ酸残基におけるＳからＤへの置換、のうちの少なくとも１つから選択される、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項３】
組換え周辺光活性化可能な低速多特性オプシン（ＭＣＯ２）タンパク質（配列番号３）であって、
１４回膜貫通ドメインを含み、
３０９〜３１５の７つのアミノ酸残基（ＶＮＫＧＴＧＫ）は、膜上の遺伝子発現を改善するために請求項１に記載の前記分子中で欠失しており、
Ｓ１３２Ｌ変異は、網膜への結合親和性及び光感受性を向上させるため、配列番号１の膜貫通ドメイン２において実施され、
前記オプシンは、６５８個のアミノ酸でコードされ、
前記ＭＣＯ２感作細胞は、白色光のパルスに対する初期の高速電流応答後に、ゆっくりと減衰する内向き電流を生成する、タンパク質。
【請求項４】
単一の変異又は変異の組み合わせが、前記分子のイオン選択性、光感受性又は動態のうちの少なくとも１つを更に調節する、配列番号３のＥ４７３Ａ、Ｄ６０３Ａ、Ｒ４６９Ａから選択される、請求項３に記載の分子。
【請求項５】
膜貫通配列
（ＴＰＡＲＷＶＷＩＳＬＹＹＡＡＦＹＶＶＭＴＧＬＦＡＬＣＩＹＶＬＭＱＴＩ）が、ＭＣＯ１（配列番号５）中のアミノ酸残基３１５又はＭＣＯ２（配列番号７）中のアミノ酸残基３０８の後に挿入される、請求項１〜４に記載の分子。
【請求項６】
配列番号１のＭＣＯ１を含む、組換え周辺光活性化可能な高速増強型多特性オプシン（ｅＭＣＯ１、配列番号１１）。
【請求項７】
前記安定化バイオマーカーが、配列番号１０の２２７個のアミノ酸であること、
前記安定化バイオマーカーが、連結配列によって前記１４回膜貫通ドメインの下流に接続されていること、
前記安定化バイオマーカーから放出される光が、膜におけるより高い割合のβシート及びより低い割合の不規則構造を有するｅＭＣＯ１発現を安定化させ、かつ、非改変ＭＣＯ１より開裂させにくいこと、
前記安定化バイオマーカー分子が、膜を横切るｅＭＣＯ１のより良好な配向安定化によって、ｅＭＣＯ１を発現する細胞中の光誘導性電流を増強すること、
前記安定化バイオマーカー分子が、前記安定化バイオマーカー分子から放出／再放出される光によって、ｅＭＣＯ１を発現する細胞中の光誘導性電流を増強すること、
プロモーターが、特定の細胞を標的にするために、ｅＭＣＯ１の上流で使用されること、
前記プロモーター−ｅＭＣＯ１遺伝子が、ウイルスベクターにパッケージングされること、
細胞が、化学的、ウイルス的又は物理的トランスフェクションを使用して、前記プロモーター−ｅＭＣＯ１遺伝子でトランスフェクトされ得ること、
網膜における安定化バイオマーカー発現を含有するｅＭＣＯ１の検査（眼底検査による）が、標的組織への遺伝子送達の有効性を判定するための指標であること、
前記安定化バイオマーカーによって放出／再放出される光が、ｅＭＣＯ１発現の存在を判定するために使用されること、又は
発現の喪失が、標的細胞に再び光感受性を与える／標的細胞を機能させるために、前記プロモーター−ｅＭＣＯ１遺伝子の再送達を必要とすること、のうちの少なくとも１つを更に含む、請求項６に記載の組換えｅＭＣＯ１。
【請求項８】
細胞発現／活性化を検出するために、前記ＭＣＯ遺伝子の下流にあるレポーター遺伝子を更に含み、前記プロモーター−ＭＣＯ−レポーター遺伝子は、ウイルスベクターにパッケージングされ、細胞は化学的、ウイルス的又は物理的方法のいずれかを使用して前記プロモーター−ＭＣＯ−レポーター遺伝子によってトランフェクトされ得る、請求項１〜６に記載の組換えＭＣＯ。
【請求項９】
ＭＣＯ感作細胞が、光に対して高い感受性を有し、低強度（〜０．０２ｍＷ／ｍｍ２）の周辺光で活性化され得る、請求項１〜８に記載の分子。
【請求項１０】
ＭＣＯ感作網膜ニューロン（例えば、網膜神経節細胞、双極細胞）が、野生型光受容体桿体信号と同様の白色光に対する初期応答後に、より低速な脱分極相を生成する、請求項３〜５に記載の分子。
【請求項１１】
前記オプシンが、可視及び近赤外範囲の光の任意の波長に感受性がある、請求項１〜８に記載の分子。
【請求項１２】
前記オプシンが、可視及び近赤外範囲の直接及び間接（例えば、蛍光、燐光、アップ／ダウン変換）照明光によって活性化される、請求項１〜８に記載の分子。
【請求項１３】
喪失又は低下した視力を回復するための、請求項１〜８に記載の分子の使用。
【請求項１４】
視力喪失が、何らかの変性網膜疾患によるものであり、
標的細胞への組換えＭＣＯ遺伝子の送達は、送達効率を高めるためのプロナーゼＥ若しくはα−アミノアジピン酸（ＡＡＡ）又はその両方と組み合わせた、眼内のプロモーター−ＭＣＯ遺伝子を担持するウイルスの硝子体内／網膜下注射によって実施されるか、
前記ＭＣＯ遺伝子の送達は、眼内のプロモーター−ＭＣＯ遺伝子プラスミドの硝子体内／網膜下注射に続く、化学的若しくは物理的形質導入方法又はこれらの組み合わせによって実施されるか、
プロモーター−ＭＣＯ遺伝子を担持するウイルス又は眼内の前記プロモーター−ＭＣＯ遺伝子プラスミドの前記送達は、内境界膜の剥離が先行し得るか、
眼内への前記ＭＣＯ遺伝子の送達は、非標的細胞及び器官における望まれない発現、又は前記治療された眼内における何らかの有害反応若しくは細胞毒性のいずれにも起因しないか、
ＭＣＯ遺伝子の送達後に、視覚的に誘導された有意な行動改善が観察されるか、又は
前記ＭＣＯ遺伝子の再注射及びトランスフェクションは、ＭＣＯ遺伝子発現不足の場合に実施される、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
視力喪失を防止又は遅延させるための前記分子の使用であって、前記ＭＣＯ遺伝子の送達は、進行性の光受容体の喪失の間に網膜細胞に対して実施され、前記ＭＣＯ感作網膜細胞の光刺激は、前記光受容体の喪失を防止又は遅延させるために実施され、前記光刺激用量は、最大効果のために最適化される、請求項１〜８に記載の組換え分子の使用。
【請求項１６】
損傷したＲＧＣ軸索を再生することによって視力を回復させるための前記分子の使用であって、
前記ＭＣＯ遺伝子の送達が、軸索変性の間又はその後に網膜神経節細胞に対して実施され、前記ＭＣＯ感作ＲＧＣの光刺激は、前記軸索の変性速度を遅延させ、かつ／又は前記軸索を再生するために実施され、前記光刺激用量は、前記変性を最小限に抑える、かつ／又は前記軸索再生を最大化するために最適化される、請求項１〜８に記載の分子の使用。
【請求項１７】
ニューロン、心臓細胞を含む異なる種類の興奮性細胞を刺激するための前記分子の使用であって、
前記使用は、化学的、ウイルス的又は物理的形質導入方法のいずれかによる前記ＭＣＯ遺伝子の送達を含み、
ＭＣＯの活性化は、光の照明時に達成され、
前記効果は、電気／光生理学的に測定される、請求項１〜８に記載の分子の使用。
【請求項１８】
疾患の治療のための前記分子の使用であって、
前記使用は、化学的、ウイルス的又は物理的形質導入方法のいずれかによる異なる器官への前記ＭＣＯ遺伝子の送達を含み、
ＭＣＯの活性化は、光の照明時に達成され、
効果は、電気生理学的又は他の機能的及び行動的分析によって測定される、請求項１〜８に記載の分子の使用。
【請求項１９】
配列番号１、３、５、７又は１１のうちの少なくとも１つのタンパク質の光感受性特性を呈する、前記配列番号１、３、５、７又は１１に対して少なくとも７５％、８５％、９５％又は１００％の同一性を含む配列を含む、ポリペプチド。
【請求項２０】
請求項１９に記載のポリペプチドをコードする組換え核酸。
【請求項２１】
前記核酸が、配列番号２、４、６、８又は１２のうちの少なくとも１つを有する、請求項２０に記載の核酸。
【請求項２２】
請求項２１に記載の核酸を含むベクター。
【請求項２３】
前記ベクターが、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス又はレンチウイルスベクターから選択される、請求項２２に記載のベクター。
【請求項２４】
失明の治療を必要とする患者に、請求項２３に記載のベクターを投与することを含む、失明を治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、合成オプシンによって細胞活性を調節するための組成物及び方法に関する。より具体的には、本発明は、視力回復及び他の治療用途のために、ニューロンに対する光感受性の増強を提供する。
【電子的に提出されたテキストファイルの説明】
【０００２】
本明細書に電子的に提出されたテキストフィールドの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。配列表のコンピュータ可読フォーマットコピー（ファイル名：ＮＡＴＥ２０００ＷＯ＿ＳＬｒｔｆ、日付記録：１１／０３／１７、ファイルサイズ４８キロバイト）。
【背景技術】
【０００３】
乾燥加齢黄斑変性（ＡＭＤ）及び網膜色素変性（ＲＰ）などの網膜変性疾患において、光から電気化学信号への変換に関与する光受容体（例えば、桿体及び錐体）が変性する。これにより、網膜における光誘導性信号の生成が防止され、視覚系内で次々に起こる視覚感覚に関する事象が破壊される。光受容体細胞の消失及び／又は光受容体細胞の機能の消失は、光感受性の低下及び失明の主な原因である。
【発明の概要】
【０００４】
視力喪失の課題を満たすために、本開示の原理は、いくつかの光感受性イオンチャンネル分子、並びにそれらの調製方法及び視力回復を含む異なる使用方法を提供する。本発明はまた、本発明の光感受性イオンチャンネルをコードする単離核酸配列、及びかかる核酸配列を含む構築物を含む。
【０００５】
一態様では、本開示は、（ｉ）複数の可視波長で高い光感受性を有し、（ｉｉ）安全なウイルスにパッケージングされ得るプラスミドサイズを有する、光感受性イオンチャンネル（多特性オプシン）を合成的に提供する。
【０００６】
加えて、いくつかの態様において本開示は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏでの細胞内の多特性オプシン（ＭＣＯ）の発現、並びにこれらの合成オプシンによって細胞活性を調節するための方法を提供する。一態様では、多特性オプシンは、可視光及び周辺光活性化に対して高い感受性を有する。いくつかの態様では、細胞内の特定のＭＣＯの発現は、特徴的な光受容体桿体信号と同様の白色光に応答して、長期持続性の内向き電流を生成する。
【０００７】
別の態様では、本開示は、より高い割合のβシート及びより低い割合の不規則構造（すなわち、開裂しにくい）を有する膜上の総タンパク分子（ｅＭＣＯ１）発現を安定化させ、かつｅＭＣＯ１を発現している細胞中の光誘導性電流を増加させる中で、積極的な役割を果たす安定化バイオマーカーを有する、合成型周辺光活性化可能な高速増強型多特性オプシン（ｅＭＣＯ１）を提供する。
【０００８】
別の態様では、本開示は、標的細胞における遺伝子発現を確認するための安定化バイオマーカーを有する合成型周辺光活性化可能な高速増強型多特性オプシン（ｅＭＣＯ１）を提供する。
【０００９】
本発明の別の態様によれば、増強型多特性オプシン（ｅＭＣＯ１）内に存在する安定化バイオマーカーから放出される光は、安定化バイオマーカー分子から放出／再放出される光によってｅＭＣＯ１を発現する細胞中の光誘導性電流を増強する。
【００１０】
本発明の別の態様によれば、開示される発明は、視力回復及び他の用途の合成オプシンの使用方法を提供し、合成オプシンのアミノ酸配列は、増強された光感受性、動態及びイオン選択性を提供するように改変される。
【００１１】
本開示は、光感受性を回復させるために、変性した網膜にＭＣＯを送達する方法を提供する。本明細書に提示される結果は、ＭＣＯを担持するアデノ関連ウイルスの硝子体内注射後のマウス網膜におけるＭＣＯ−レポーターの効率的で安定なｉｎ  ｖｉｖｏ発現を示す。結果はまた、網膜変性のマウスモデルの網膜におけるＭＣＯの発現が、視力の行動回復を可能にすることを実証した。変性した網膜を有するマウスへのＭＣＯの送達後に、放射状アーム水迷路におけるエラーアームの数及びプラットフォームに到達するまでの時間が有意に減少した。特に、視覚的に誘導された行動の改善は、チャネルロドプシン−２オプシンに必要とされるよりもはるかに低い光強度レベルでも観察された。
【００１２】
更に別の態様によれば、本開示は、ヒトの視力を効率的に回復する方法を提供する。この方法は、網膜細胞内で発現されたとき、特徴的な光受容体桿体信号と同様の白色光に対する初期応答後に、より低速な脱分極相を生成するＭＣＯの使用と、眼内にプロモーター−ＭＣＯ遺伝子を担持するアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）による、かつ／又はヒトにおける厚い内境界膜を横切る標的網膜層への送達効率を高めるためのプロナーゼＥ若しくはα−アミノアジピン酸（ＡＡＡ）と組み合わせた、ｉｎ  ｖｉｖｏでのオプシンの網膜細胞への送達と、を含む。
【００１３】
ｑＰＣＲ分析を使用した生体分布研究は、ＭＣＯ遺伝子を担持するｒＡＡＶを硝子体内に注射されたマウスの異なる組織中のＭＣＯ遺伝子の量が無視できることを示した。安全なウイルス媒介性のＭＣＯ送達は、患者における多様な網膜変性の効果的な遺伝子治療の可能性を有する。
【００１４】
別の態様では、本開示は、光に対する初期応答後により低速な脱分極相を生成しないオプシンの既存の使用とは対照的に、特徴的な光受容体桿体信号と同様の白色光に対する初期応答後に、より低速な脱分極相を生成するオプシンの使用、ひいては盲目の個人の視力回復を提供する。
【００１５】
本開示は、本明細書に記載のポリペプチドのいずれかをコードする核酸分子を提供する。また、核酸分子は、薬学的に許容される担体を更に含み得る。
【００１６】
本開示は、細胞が、本発明の単離ポリペプチド分子をコードする単離核酸分子と接触しているか、又はこれを含む方法を提供する。好ましくは、細胞は、桿体双極細胞、ＯＮ型網膜神経節細胞又はＯＮ型双極細胞である。
【００１７】
更に広い態様では、本開示は、オプシンを使用して細胞及び組織の機能を調節するため、及び疾患の診断及び治療に使用するための方法を提供する。
【００１８】
一実施形態では、本発明は、ＭＣＯ１タンパク質のイオン選択性、光感受性又は動態のうちの少なくとも１つを調節するように変異させた１４回膜貫通ドメインを含むＭＣＯ１タンパク質を含む、組換え周辺光活性化可能な高速多特性オプシン（ＭＣＯ１）タンパク質を含む。ＭＣＯ１タンパク質は配列番号１、３、５、７又は１１を有する、請求項１に記載のタンパク質である。一態様では、以下の単一の変異又は変異の組み合わせのうちの１つ以上が、イオン選択性、光感受性又は動態を調節し、この変異は、ＭＣＯ１配列のアミノ酸１３２に対応するアミノ酸残基におけるＳからＣへの置換、ＭＣＯ１配列のアミノ酸１２３に対応するアミノ酸残基におけるＥからＡへの置換、ＭＣＯ１配列のアミノ酸２５３に対応するアミノ酸残基におけるＤからＡへの置換、ＭＣＯ１配列のアミノ酸１２０に対応するアミノ酸残基におけるＲからＡへの置換、ＭＣＯ１配列のアミノ酸５６に対応するアミノ酸残基におけるＱからＡへの置換、ＭＣＯ１配列のアミノ酸９３に対応するアミノ酸残基におけるＫからＡへの置換、ＭＣＯ１配列のアミノ酸９０に対応するアミノ酸残基におけるＥからＡへの置換、ＭＣＯ１配列のアミノ酸９０に対応するアミノ酸残基におけるＥからＱへの置換、ＭＣＯ１配列のアミノ酸９７に対応するアミノ酸残基におけるＥからＡへの置換、ＭＣＯ１配列のアミノ酸１０１に対応するアミノ酸残基におけるＥからＡへの置換、ＭＣＯ１配列のアミノ酸２５８に対応するアミノ酸残基におけるＮからＤへの置換、ＭＣＯ１配列のアミノ酸８３に対応するアミノ酸残基におけるＥからＴへの置換、ＭＣＯ１配列のアミノ酸１２３に対応するアミノ酸残基におけるＥからＴへの置換、又はＭＣＯ１配列のアミノ酸６３に対応するアミノ酸残基におけるＳからＤへの置換のうちの少なくとも１つから選択される。
【００１９】
別の実施形態では、本発明は、１４回膜貫通ドメインを含み、３０９〜３１５の７つのアミノ酸残基（ＶＮＫＧＴＧＫ）が、膜上の遺伝子発現を改善するために請求項１に記載の分子中で欠失しており、Ｓ１３２Ｌ変異は、網膜への結合親和性及び光感受性を向上させるため、配列番号１の膜貫通ドメイン２において実施され、オプシンは６５８個のアミノ酸にコードされ、かつ、ＭＣＯ２感作細胞は、白色光のパルスに対する初期の急速電流応答後に、ゆっくりと減衰する内向き電流を生成する、組換え周辺光活性化可能な低速多特性オプシン（ＭＣＯ２）タンパク質を含む。一態様では、単一の変異又は変異の組み合わせは、分子のイオン選択性、光感受性又は動態のうちの少なくとも１つを更に調節する配列番号１のＥ４７３Ａ、Ｄ６０３Ａ、Ｒ４６９Ａから選択される。別の態様では、膜貫通配列（ＴＰＡＲＷＶＷＩＳＬＹＹＡＡＦＹＶＶＭＴＧＬＦＡＬＣＩＹＶＬＭＱＴＩ）は、ＭＣＯ１（配列番号１又は２）中のアミノ酸残基３１５又はＭＣＯ２（配列番号３又は４）中のアミノ酸残基３０８の後に挿入される。
【００２０】
別の実施形態では、本発明は、ＭＣＯ１配列（配列番号１）及び安定化バイオマーカー配列を含む、組換え周辺光活性化可能な高速増強型多特性オプシン（ｅＭＣＯ１）を含む。一態様では、組換えｅＭＣＯ１は、
安定化バイオマーカーが、配列番号１１の９００個のアミノ酸であること、安定化バイオマーカーが、連結配列によって１４回膜貫通ドメインの下流に接続されていること、安定化バイオマーカーから放出される光が、膜におけるより高い割合のβシート及びより低い割合の不規則構造を有するｅＭＣＯ１発現を安定化させ、かつ非改変ＭＣＯ１より開裂させにくいこと、安定化バイオマーカー分子が、膜を横切るｅＭＣＯ１のより良好な配向安定化によって、ｅＭＣＯ１を発現する細胞中の光誘導性電流を増強すること、安定化バイオマーカー分子が、安定化バイオマーカー分子から放出／再放出される光によって、ｅＭＣＯ１を発現する細胞中の光誘導性電流を増強すること、プロモーターが、特定の細胞を標的にするために、ｅＭＣＯ１の上流に使用されていること、プロモーター−ｅＭＣＯ１遺伝子がウイルスベクターにパッケージングされていること、細胞が、化学的、ウイルス的又は物理的トランスフェクションを使用して、プロモーター−ｅＭＣＯ１遺伝子でトランスフェクトされ得ること、網膜における安定化バイオマーカー発現を含有するｅＭＣＯ１の検査（眼底検査による）が、標的組織への遺伝子送達の有効性を決定するための指標であること、安定化バイオマーカーによって放出／再放出される光が、ｅＭＣＯ１発現の存在を判別するために監視され、使用されること、又は発現の喪失が、標的細胞に再び光感受性を与える／標的細胞を機能させるために、プロモーター−ｅＭＣＯ１遺伝子の再送達を必要とすること、のうちの少なくとも１つを更に含む。別の態様では、組換えｃＭＯＣ１は、レポーター遺伝子が、細胞発現／活性化を検出するためにＭＣＯ１遺伝子から下流にあることを更に含み、プロモーター−ＭＣＯ１−レポーター遺伝子は、ウイルスベクターにパッケージングされ、かつ、細胞は、化学的、ウイルス的又は物理的方法のいずれかを使用してプロモーター−ＭＣＯ１−レポーター遺伝子によりトランスフェクトされ得る。別の態様では、ＭＣＯ感作細胞は、光に対して高い感受性を有し、低強度（−０．０２ｍＷ／ｍｍ２）の周辺光で活性化され得る。別の態様では、ＭＣＯ感作網膜ニューロン（例えば、網膜神経節細胞、双極細胞）は、野生型光受容体桿体信号と同様の白色光に対する初期応答後に、より低速な脱分極相を生成する。別の態様では、オプシンは、可視及び近赤外範囲の光の任意の波長に感受性がある。別の態様では、オプシンは、可視及び近赤外範囲内の直接及び間接（例えば、蛍光、燐光、アップ／ダウン転換）照明光を含む単一光子によって活性化される。
【００２１】
別の実施形態では、本発明は、喪失した視力を回復するための方法と、そのためのＭＣＯ１、ＭＣＯ２若しくはｅＭＣＯ１、又はその突然変異体の使用と、を含む。一態様では、視力喪失は、何らかの変性網膜疾患によるものであり、標的細胞への組換えＭＣＯ遺伝子の送達は、送達効率を高めるためのプロナーゼＥ若しくはα−アミノアジピン酸（ＡＡＡ）又はその両方と組み合わせた、眼内のプロモーター−ＭＣＯ遺伝子を担持するウイルスの硝子体内／網膜下注射によって実施されるか、ＭＣＯ遺伝子の送達は、眼内のプロモーター−ＭＣＯ遺伝子プラスミドの硝子体内／網膜下注射に続く、化学的若しくは物理的形質導入方法又はこれらの組み合わせのいずれかによって実施されるか、眼内へのＭＣＯ遺伝子の送達は、非標的細胞及び器官における望まれない発現、又は治療された眼内における何らかの有害反応若しくは細胞毒性のいずれにも起因しないか、ＭＣＯ遺伝子の送達後に、視覚的に誘導された有意な行動改善が観察されるか、又は、ＭＣＯ遺伝子の再注射及びトランスフェクションは、ＭＣＯ遺伝子発現不足の場合に実施される。
【００２２】
別の実施形態では、本発明は、視力喪失を防止又は遅延させるための方法とそのためのＭＣＯ１、ＭＣＯ２、又はｅＭＣＯ１の使用と、を含み、ＭＣＯ遺伝子の送達は、進行性の光受容体喪失の間に網膜細胞に対して実施され、ＭＣＯ感作網膜細胞の光刺激は、光受容体の喪失を防止又は遅延させるために実施され、かつ、光刺激用量は、最大効果のために最適化される。
【００２３】
別の実施形態では、本発明は、損傷したＲＧＣ軸索を再生することによる視力回復のための方法とそのためのＭＣＯ１、ＭＣＯ２又はｅＭＣＯ１の使用と、を含み、ＭＣＯ遺伝子の送達は、軸索変性の間又はその後に網膜神経節細胞に対して実施され、ＭＣＯ感作ＲＧＣの光刺激は、変性速度を遅延させ、かつ／又は軸索を再生するために実施され、光刺激用量は、変性を最小限に抑える、かつ／又は軸索再生を最大化するために最適化される。
【００２４】
別の実施形態では、本発明は、ニューロン、心臓細胞を含む異なるタイプの興奮性細胞の刺激のための方法とそのためのＭＣＯ１、ＭＣＯ２又はｅＭＣＯ１の使用と、を含み、この使用は、化学的、ウイルス的又は物理的形質導入方法のいずれかによるＭＣＯ遺伝子の送達を含み、ＭＣＯの活性化は、光の照明によって達成され、その効果は、電気／光生理学的に測定される。
【００２５】
別の実施形態では、本発明は、疾患の治療の方法とそのためのＭＣＯ１、ＭＣＯ２又はｅＭＣＯ１の使用と、を含み、この使用は、化学的、ウイルス的又は物理的形質導入方法のいずれかによる異なる器官へのＭＣＯ遺伝子の送達を含み、ＭＣＯの活性化は、光の照明によって達成され、その効果は、電気生理学的又は他の機能的及び行動的分析によって測定される。
【００２６】
別の実施形態では、本発明は、配列番号１、３、５、７又は１１に対して少なくとも７５％、８５％、９５％又は１００％の同一性を含む配列を含むポリペプチドを含み、当該ポリペプチドは、配列番号１、３、５、７又は１１のうちの少なくとも１つのタンパク質の光感受性特性を呈する。別の実施形態では、本発明は、配列番号１、３、５、７又は１１に対して少なくとも７５％、８５％、９５％又は１００％の同一性を有するポリペプチドをコードしている組換え核酸を含み、当該ポリペプチドは、配列番号１、３、５、７又は１１のうちの少なくとも１つのタンパク質の光感受性特性を呈する。一態様では、核酸は、配列番号２、４、６又は８に対して７５％、８５％、９５％又は１００％の同一性のうちの少なくとも１つを有する。別の実施形態では、本発明は、配列番号１、３、５、７又は１１のうちの少なくとも１つに対して７５％、８５％、９５％又は１００％の同一性を有する核酸を含むベクターを含む。一態様では、ベクターは、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス又はレンチウイルスベクターから選択される。
【００２７】
別の実施形態では、本発明は、失明の治療を必要とする患者に、配列番号１、３、５、７又は１１のうちの少なくとも１つに対して７５％、８５％、９５％又は１００％の同一性を有する核酸を含むベクターを投与することを含む、失明の治療する方法を含む。
【００２８】
上及びその他の箇所に記載される実施形態と関連する詳細を以下に記載する。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
以下の図面は、一例を示し、限定するものではない。簡潔さ及び明瞭さのために、所与の構造の全ての特徴が、その構造が現れる全ての図面に常に示されているわけではない。
【００３０】
表１〜表４は、多特性オプシン（ＭＣＯ）のアミノ酸配列、ＭＣＯ１、ＭＣＯ２、ＭＣＯ１Ｔ、ＭＣＯ２Ｔを示す。ＭＣＯ２は、３０８後のＭＣＯ１の変異（Ｓ  １３２  Ｌ）及び７つのアミノ酸残基（ＶＮＫＧＴＧＫ（配列番号１３））の欠失を含有する。ＭＣＯ１Ｔ及びＭＣＯ２Ｔは、それぞれ３１５及び３０８のアミノ酸残基の後に、追加の膜貫通配列（ＴＰＡＲＷＶＷＩＳＬＹＹＡＡＦＹＶＶＭＴＧＬＦＡＬＣＩＹＶＬＭＱＴＩ（配列番号１４））を含有する。
【００３１】
表０５は、一例として特定の細胞を標的化するためのＭＣＯ配列の上流で使用されるプロモーター（ｍＧｌｕＲ６）のＤＮＡ配列を示し、表０６は、一例として特定の細胞における発現を確認するためにＭＣＯ配列の下流で使用されるレポーター（ｍＣｈｅｒｒｙ）のＤＮＡ配列を示す。
【００３２】
表０６は、一例として特定の細胞における発現を確認するためにＭＣＯ配列の下流で使用されるレポーター安定化（ｍＣｈｅｒｒｙ）のＤＮＡ配列を示す。
【００３３】
表０７は、増強型多特性オプシン−１（ｅＭＣＯ１）のアミノ酸及びＤＮＡ配列を示す。これは、連結配列を有するＭＣＯ１配列（表０１）及びバイオマーカー安定剤配列（表０６）を含有する。
【００３４】
表０８は、ＲａｐｔｏｒＸによる理論モデリングを用いた二次構造及び折り畳みに基づくＭＣＯ１及びｅＭＣＯ１の安定性の比較を示す。
【００３５】
【図１Ａ】レポータータンパク質を有する多特性オプシン（ＭＣＯ）のドメイン構成を示す。
【図１Ｂ】制限部位（ＢａｍＨ  Ｉ及びＳａｌ  Ｉ）でクローン化されたＭＣＯ遺伝子の挿入を示す典型的な円形マップを示す。
【図２Ａ】多特性オプシンのアミノ酸鎖の三次元配置の理論モデリングを示す。多特性オプシン、ＭＣＯ１のアミノ酸鎖の三次元配置の理論モデリングを示す。
【図２Ｂ】多特性オプシンのアミノ酸鎖の三次元配置の理論モデリングを示す。多特性オプシン、ＭＣＯ２のアミノ酸鎖の三次元配置の理論モデリングを示す。
【図２Ｃ】多特性オプシン、ｅＭＣＯ１のアミノ酸鎖の三次元配置の理論モデリングを示す。
【図３Ａ】モデルＨＥＫ２９３細胞におけるＭＣＯ１の発現を示す。ＭＣＯ１の発現は、形質膜内に局在化されている。ｍＧｌｕＲ６−ＭＣＯ１−ｍＣｈｅｒｒｙでトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞の共焦点蛍光画像である。
【図３Ｂ】モデルＨＥＫ２９３細胞におけるＭＣＯ１の発現を示す。代表的な細胞を横切る線に沿ったＭＣＯ１レポーター蛍光の強度である。
【図４Ａ】多特性オプシン（ＭＣＯ１）の機能を示す。光（平均強度：０．０２４ｍＷ／ｍｍ２）に応答したＭＣＯ１発現細胞における内向き電流プロファイルを示す。
【図４Ｂ】多特性オプシン（ＭＣＯ１）の機能を示す。ＭＣＯ１の活性化スペクトルである。平均±ＳＥＭ。
【図５Ａ】細胞活性によって測定されたＭＣＯ１機能に対するｍＣｈｅｒｒｙの存在の効果を示す。Ｐｏｒｔ−ａ−Ｐａｔｃｈ（ポートアパッチ）自動パッチクランプ電気生理学によって測定されたＨＥＫ細胞中の内向き電流プロファイル。ｍＧｌｕＲ６−ＭＣＯ１−ｍＣｈｅｒｒｙでトランスフェクトされた細胞において、白色光の強度０．０２ｍＷ／ｍｍ２で測定された光電流を示す。
【図５Ｂ】細胞活性によって測定されたＭＣＯ１機能に対するｍＣｈｅｒｒｙの存在の効果を示す。Ｐｏｒｔ−ａ−Ｐａｔｃｈ（ポートアパッチ）自動パッチクランプ電気生理学によって測定されたＨＥＫ細胞中の内向き電流プロファイル。ｍＧｌｕＲ６−ＭＣＯ１でトランスフェクトされた細胞において、白色光強度０．０２ｍＷ／ｍｍ２で測定された光電流を示す。
【図６Ａ】多特性オプシン（ＭＣＯ２）の機能を示す。ＨＥＫ２９３細胞へのＭＣＯ２−ｍＣｈｅｒｒｙのリポフェクション上の蛍光を示す。
【図６Ｂ】多特性オプシン（ＭＣＯ２）の機能を示す。パッチクランプ電気生理学によって測定された、光（平均強度：０．０２４ｍＷ／ｍｍ２）に応答したＭＣＯ２発現細胞における内向き電流を示す。
【図７Ａ】細胞のｖＭＣＯ１トランフェクションを示す。ＨＥＫ２９３細胞におけるｖＭＣＯ１−ｍＣｈｅｒｒｙ発現の三次元再構成、スケールバー：３０μｍを示す。
【図７Ｂ】細胞のｖＭＣＯ１トランフェクションを示す。網膜カップ全体におけるｖＭＣＯ１−ｍＣｈｅｒｒｙ発現の三次元再構成、スケールバー：０．８ｍｍを示す。
【図８Ａ】ＭＣＯ１でトランスフェクトされた網膜のパッチクランプ記録を示す。マウス網膜外植片の細胞におけるＭＣＯ−１発現を示す。
【図８Ｂ】ＭＣＯ１でトランスフェクトされた網膜のパッチクランプ記録を示す。光パルス（１００ｍｓ）列によって誘導された内向き光電流を示す。
【図９Ａ】ｖＭＣＯ１注射後のｒｄ１０マウスにおけるＭＣＯ１の用量及び時間依存の層特異的発現を示す。硝子体内ｖＭＣＯ注射の１週間後のｒｄ１０マウス網膜カップの蛍光共焦点画像を示す。
【図９Ｂ】ｖＭＣＯ１注射後のｒｄ１０マウスにおけるＭＣＯ１の用量及び時間依存の層特異的発現を示す。ｖＭＣＯ１の硝子体内注射の８週間後の、ｒｄ１０マウス網膜カップの蛍光共焦点画像を示す。スケールバー：２００μｍ。
【図９Ｃ】ｖＭＣＯ１注射後のｒｄ１０マウスにおけるＭＣＯ１の用量及び時間依存の層特異的発現を示す。１．６×１０１１ＶＧ／ｍＬの用量で、ｖＭＣＯ１でトランスフェクトされた網膜カップの折り畳み縁部の焦点蛍光画像を示す。スケールバー：１００μｍ。
【図９Ｄ】ｖＭＣＯ１注射後のｒｄ１０マウスにおけるＭＣＯ１の用量及び時間依存の層特異的発現を示す。１．６×１０１２ＶＧ／ｍＬの用量での硝子体内注射の１６週間後の網膜におけるｖＭＣＯ１発現の断面図を示す。スケールバー：５０μｍ。
【図９Ｅ】ｖＭＣＯ１注射後のｒｄ１０マウスにおけるＭＣＯ１の用量及び時間依存の層特異的発現を示す。ｖＭＣＯ１の２つの異なる用量でのｒｄ１０マウス網膜におけるＭＣＯ１発現の動態を示す。平均±ＳＤ。
【図９Ｆ】ｖＭＣＯ１注射後のｒｄ１０マウスにおけるＭＣＯ１の用量及び時間依存の層特異的発現を示す。１．６×１０１２ＶＧ／ｍＬの用量でのトランスフェクションの１６週間後のｒｄ１０マウスの網膜におけるＭＣＯ１−ｍＣｈｅｒｒｙ発現（バックグラウンド除去法後）の動物間変動を示す。平均＋ＳＤ。＊ｐ＜０．０１  ｖＭＣＯ１注射済み対非注射。
【図１０Ａ】放射状水迷路におけるｒｄ１０マウスの行動における視覚的に誘導された改善を示す。硝子体内ｖＭＣＯ１注射前の、白色ＬＥＤ光を備えた放射状水迷路における、視覚的に誘導されたｒｄ１０マウスの行動の時間経過画像を示す。
【図１０Ｂ】放射状水迷路におけるｒｄ１０マウスの行動における視覚的に誘導された改善を示す。ｖＭＣＯ１注射の６週間後の、ＬＥＤ光が点灯した状態でのｒｄ１０マウスの行動を示す。
【図１０Ｃ】放射状水迷路におけるｒｄ１０マウスの行動における視覚的に誘導された改善を示す。光あり及び光なしの状態で迷路の中心にて落下した、ｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスがプラットフォームを見つけるまでの時間を示す。平均±ＳＥＭ。マウスごとにＮ＝５。
【図１０Ｄ】放射状水迷路におけるｒｄ１０マウスの行動における視覚的に誘導された改善を示す。光あり及び光なしの状態で迷路のサイドアーム２及び４にて落下した、ｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスがプラットフォームを見つけるまでの時間を示す。平均±ＳＥＭ。マウスごとにＮ＝５。
【図１０Ｅ】放射状水迷路におけるｒｄ１０マウスの行動における視覚的に誘導された改善を示す。光あり及び光なしの状態で迷路の縁部アーム３にて落下した、ｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスがプラットフォームを見つけるまでの時間を示す。平均±ＳＥＭ。マウスごとにＮ＝５。
【図１０Ｆ】放射状水迷路におけるｒｄ１０マウスの行動における視覚的に誘導された改善を示す。光の存在下及び非存在下でプラットフォームを見つける前に中心にて落下した、ｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスが通過したエラーアームの数を示す。平均±ＳＥＭ。マウスごとにＮ＝５。
【図１０Ｇ】放射状水迷路におけるｒｄ１０マウスの行動における視覚的に誘導された改善を示す。光の存在下及び非存在下でプラットフォームを見つける前にサイドアームにて落下した、ｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスが通過したエラーアームの数を示す。平均±ＳＥＭ。マウスごとにＮ＝５。
【図１０Ｈ】放射状水迷路におけるｒｄ１０マウスの行動における視覚的に誘導された改善を示す。光の存在下及び非存在下でプラットフォームを見つける前に縁部で落下した、ｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスが通過したエラーアームの数を示す。平均±ＳＥＭ。マウスごとにＮ＝５。
【図１１Ａ】放射状水迷路におけるｒｄ１０マウスの行動における視覚的に誘導された改善の追跡研究を示す。ｖＭＣＯ１を注射されたｒｄ１０マウスの視覚的に誘導された行動の改善を試験するために使用される放射状アーム水迷路の概略図を示す。
【図１１Ｂ】放射状水迷路におけるｒｄ１０マウスの行動における視覚的に誘導された改善の追跡研究を示す。ｖＭＣＯ１注射前に迷路の中心（光強度：０．００７ｍＷ／ｍｍ２）から、注射後期間に応じて、ｒｄ１０マウスがプラットフォームに到達するまでの時間を示す。Ｎ＝５；平均±Ｓ．Ｄ。＊Ｐ＜０．０５。
【図１１Ｃ】ｖＭＣＯ１注射前に迷路の近傍アーム（光強度：０．０１４ｍＷ／ｍｍ２）から、注射後期間に応じて、ｒｄ１０マウスがプラットフォームに到達するまでの時間を示す。Ｎ＝５；平均±Ｓ．Ｄ。＊Ｐ＜０．０５。
【図１１Ｄ】ｖＭＣＯ１注射前にサイドアーム（光強度：０．００４ｍＷ／ｍｍ２）から、注射後期間に応じて、ｒｄ１０マウスがプラットフォームに到達するまでの時間を示す。Ｎ＝５；平均±Ｓ．Ｄ。＊Ｐ＜０．０５。
【図１２】放射状水迷路におけるｒｄ１０マウスの行動の改善の光強度依存性を示す。２つの異なる光強度間での、注射後の期間に応じた、迷路の中心からプラットフォームに到達するまでの時間の比較である。平均±Ｓ．Ｄ。＊Ｐ＜０．０１。Ｌ０＝０．０００５ｍＷ／ｍｍ２；Ｌ２＝０．００７ｍＷ／ｍｍ２。明るい周囲レベルは、約０．０１ｍＷ／ｍｍ２である。
【図１３Ａ】ｒｄ１０及びＭＣＯ感作ｒｄ１０マウスの視動性評価を示す。１ｒｐｍでの垂直ストライプの回転速度におけるｖＭＣＯ１注射の前及び８週間後の、ｒｄ１０マウスの頭部運動数の定量比較を示す。Ｎ＝４マウス。平均＋ＳＤ。＊ｐ＜０．０５。チャンバの中心における光強度は、０．００１ｍＷ／ｍｍ２である。
【図１３Ｂ】ｒｄ１０及びＭＣＯ感作ｒｄ１０マウスの視動性評価を示す。２ｒｐｍでの垂直ストライプの回転速度におけるｖＭＣＯ１注射の前及び８週間後の、ｒｄ１０マウスの頭部運動数の定量比較を示す。Ｎ＝４マウス。平均＋ＳＤ。＊ｐ＜０．０５。チャンバの中心における光強度は、０．００１ｍＷ／ｍｍ２である。
【図１４Ａ】慢性光曝露後のＭＣＯ１感作網膜細胞の生存性を示す。野生型（非盲検）マウスと同様に、ｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスは、光から離れ、遮断することにより（矢印に示されるように、床敷材料を積み上げて）明るい光を回避することを示す。
【図１４Ｂ】慢性光曝露後のＭＣＯ１感作網膜細胞の生存性を示す。１日８時間の白色光（強度：０．１ｍＷ／ｍｍ２）の照明の４週間後の、ｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスのカスパーゼ−３（緑色）で染色された網膜の蛍光画像を示す。
【図１４Ｃ】慢性光曝露後のＭＣＯ１感作網膜細胞の生存性を示す。１日８時間の白色光（強度：０．１ｍＷ／ｍｍ２）の照明の４週間後の、野生型マウスのカスパーゼ−３（緑色）で染色された網膜の蛍光画像を示す。
【図１４Ｄ】慢性光曝露後のＭＣＯ１感作網膜細胞の生存性を示す。野生型マウスとｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスとの間のアポトーシス網膜細胞の％の定量比較を示す。ｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスの内核層内のアポトーシス細胞は０％である。
【図１５Ａ】ｒｄ１０マウスにおけるｖＭＣＯ１注射後の網膜の構造的一体性の評価の結果を示す。ｖＭＣＯ１注射後のｒｄ１０マウス網膜のＯＣＴ画像を示す。
【図１５Ｂ】ｒｄ１０マウスにおけるｖＭＣＯ１注射後の網膜の構造的一体性の評価の結果を示す。注射の前及び１週間後の、４匹の異なるｒｄ１０マウスの網膜厚の比較を示す。Ｎ＝１０  Ｂ−スキャン／マウス。平均＋ＳＤ。
【図１６Ａ】ｖＭＣＯ１を注射されたｒｄ１０マウスにおける免疫毒性の結果を示す。ｖＭＣＯ１注射前、７日後及び１４日後の群１（１．６×１０１０ＶＧ／ｍＬ）と群２（１．６×１０１１ＶＧ／ｍＬ）との間の血漿中のＩＬ−６（プロ炎症マーカー）の定量比較を示す。Ｎ＝５マウス／群。平均±ＳＤ。
【図１６Ｂ】ｖＭＣＯ１を注射されたｒｄ１０マウスにおける免疫毒性の結果を示す。ｖＭＣＯ１注射の前、７日後及び１４日後の群１（１．６×１０１０ＶＧ／ｍＬ）と群２（１．６×１０１１ＶＧ／ｍＬ）との間の血漿中のＩＬ−１０（抗炎症マーカー）の定量比較を示す。Ｎ＝５マウス／群。平均±ＳＤ。
【図１６Ｃ】ｖＭＣＯ１を注射されたｒｄ１０マウスにおける免疫毒性の結果を示す。ｖＭＣＯ１注射の前、７日後及び１４日後の群１（１．６×１０１０ＶＧ／ｍＬ）と群２（１．６×１０１１ＶＧ／ｍＬ）との間の血漿中のＩＦＮ−Ｙ（プロ炎症マーカー）の定量比較を示す。Ｎ＝５マウス／群。平均±ＳＤ。
【図１７】ＡＡＶ２にパッケージングされた多特性オプシン（ｖＭＣＯ１）の生体分布を示す。異なる用量及び注射後の期間でのｒｄ１０マウスにおけるベクター配列のＱＰＣＲ検出による、処置された眼の外側の組織におけるベクターＤＮＡは、ごく少量又は検出不可能な量である。Ｎ＝５マウス／用量／時間点。
【図１８Ａ】ｖＭＣＯ１を注射されたｒｄ１０マウスの眼の免疫組織化学を示す。ＭＣＯ−ｍＣｈｅｒｒｙ（赤色）が、選択的に標的化され、ｖＭＣＯ１の硝子体内注射の８週間後に、ｒｄ１０マウスのＩＮＬで発現されることを示す。アレスチン（緑色）の不在は、光受容体の完全な消失を示唆する。
【図１８Ｂ】ｖＭＣＯ１を注射されたｒｄ１０マウスの眼の免疫組織化学を示す。ｖＭＯ１の硝子体内注射の８週間後の、ｒｄ１０マウスにおけるｍＣｈｅｒｒｙ（赤色、内因性）を発現する桿体双極細胞中のＰＫＣａ染色（緑色）を示す。
【図１８Ｃ】ｖＭＣＯ１を注射されたｒｄ１０マウスの眼の免疫組織化学を示す。ｖＭＣ０１の硝子体内注射の８週間後の、ｒｄ１０マウスにおけるｍＣｈｅｒｒｙ（赤色）を発現するＯＮ型双極細胞中のｍＧｌｕＲ６染色（緑色）を示す。
【図１８Ｄ】ｖＭＣＯ１を注射されたｒｄ１０マウスの眼の免疫組織化学を示す。ｖＭＣＯ１のｒｄ１０マウスへの硝子体内送達の８週間後の、ｒｄ１０網膜におけるｍＣｈｅｒｒｙ（緑色の免疫染色）発現を示す。
【図１８Ｅ】ｖＭＣＯ１を注射されたｒｄ１０マウスの眼の免疫組織化学を示す。光受容体が変性した網膜で報告されるように、ｖＭＣＯ１の硝子体内注射の１８週間後のｒｄ１０マウスにおけるＧＦＡＰ（緑色）を示す。
【図１８Ｆ】ｖＭＣＯ１を注射されたｒｄ１０マウスの眼の免疫組織化学を示す。ＣＤ４５（緑色）の発現がないことを示し、ｖＭＣＯ１の硝子体内注射の８週間後のｒｄ１０マウスに免疫細胞がないことを示唆している。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
電気的及び他の手段による細胞活性の調節は、疾患の進行に関連付けられた細胞特性及び変化の定量的評価を可能にしてきた。光と組み合わせたオプシン（光感受性イオンチャンネルタンパク質）は、細胞活性の調節に使用されてきた。これは、細胞又はネットワーク機能のより良好な理解をもたらし、視力回復、並びに薬物スクリーニングを含む治療用途の可能性を有する。
【００３７】
より高次のニューロンは、変性した網膜の中で無傷であるため、いくつかの刺激方法は、より高次のニューロン（例えば、双極細胞及び網膜神経節細胞）を標的としており、これらは、視覚野に視覚情報を運ぶ。直接的な電気刺激手法は、網膜細胞に電極を機械的に接触させる必要があるが、間接的な刺激手法（例えば、光遺伝学的な刺激）は、このような物理的な接触の必要がない。したがって、間接的な方法は、非侵襲性であるという明確な利点を与える。これに加えて、光遺伝学的刺激を用いつつ、細胞特異性及び高い（単一細胞）解像度を達成することができる。
【００３８】
網膜ニューロンの光遺伝学的刺激を得るために、細胞は概して、オプシン（光感受性分子イオンチャンネル）を発現するようにウイルスによってトランスフェクトされ、活性化されると、オプシンの特徴である特定の可視波長の光に照射されたときに、オプシン発現細胞を脱分極する。例えば、チャネルロドプシン−２（ＣｈＲ２）を発現する網膜細胞は、青色光に感受性がある。
【００３９】
細胞の光感受性を高めるため、又は異なる波長の可視光によって活性化されるように、種々の光によって活性化されるイオンチャンネル（オプシン）が開発されてきた。広帯域可視光によって活性化するために、３つのオプシン（青色のＣｈＲ２、緑色のＣ１Ｖ１、赤色のＲｅａＣｈｒの光感受性）の複合体は、化学的又は物理的方法によって細胞に送達されてきた。しかしながら、このような大型の複合体は、安全なウイルスベクター（すなわち、アデノ関連ウイルス）にパッケージングすることができない。更に、化学的又は物理的な送達方法の使用は、効率性が低く、かつ／又は細胞生存性を損なうため、それらの迅速な有用性は制限される。
【００４０】
これまで視力回復のために開発され利用されたオプシンは、光によって刺激されたときに、特徴的な光受容体桿体信号を生成しない。すなわち、電圧信号は、初期の高速応答後のより低速な脱分極相を有しない。したがって、低光レベルでの有効な光遺伝学的視覚回復は、本発明までは示されてこなかった。
【００４１】
これまで視力回復のために採用されたオプシンは、オプシン感作細胞を刺激するために周辺光レベルを上回る光強度を必要とするため、オプシン感作網膜ニューロンをｉｎ  ｖｉｖｏで刺激するために、外部の活性刺激装置が設計されてきた（２）。
【００４２】
ヒトにおいては、ウイルス手段（例えば、組換えアデノ関連ウイルス、ｒＡＡＶ）を介した眼の硝子体へのオプシン又は他の遺伝子の送達による、光遺伝学的治療又は他の遺伝子治療方法による視力回復が提案されてきた。しかしながら、ヒトに存在する厚い内境界膜（ＩＬＭ）のため（３）、ｒＡＡＶ単独による治療用遺伝子の正常な送達は疑わしい。
【００４３】
本アプローチの利点は、特徴的な光受容体桿体信号を生成し、外部の活性刺激装置を必要とせず、結果として既存のオプシンに基づくアプローチによって遭遇する又は今後遭遇する多くの障害を回避し、結果として本発明は、網膜変性疾患による視力喪失の回復に適用可能である、という事実を含む。本発明の更なる利点は、オプシン／他の治療遺伝子を送達する方法が、ヒトの眼の内境界膜を一時的に透過させることができるｒＡＡＶと化学薬剤との組み合わせを含む点である。
【００４４】
現在、活性化／阻害と組み合わせた網膜細胞の光遺伝学的感作の使用によって、網膜インプラントの代わりとなる可能性が認められ、高解像度（４）のためにそれぞれ単一のニューロンの付近に電極を配置する必要性が排除されている。光遺伝的刺激は、光活性化可能な分子チャンネル（例えば、チャネルロドプシン−２、ＣｈＲ２；ハロロドプシン、ＮｐＨＲ）を遺伝子標的化により細胞に導入することによって、高い時間精度（５〜１０）を提供する。高い時間的及び空間的な解像度に加え、光遺伝学は、細胞特異性（例えば、使われていない錐体、神経節又は双極細胞）などの電気刺激及び最小限の侵襲性といういくつかの利点を有する（１１）。非選択的なカチオンチャンネルであるＣｈＲ２の光誘発活性化は、ＣｈＲ２を発現するこれらの細胞のみを脱分極させる。ｍｓ−パルス状の青色光によるニューロンの選択的な活性化は、培養物（９）、脳切片並びに小動物（１２〜１５）で示されている。この光遺伝学的活性化方法は、発光ダイオード（ＬＥＤ）又はレーザー（５、６）から送達することが可能な中強度の光（約０．１ｍＷ／ｍｍ２）のみを必要とするため、細胞活性をｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで制御するために非常に有望である。
【００４５】
本開示は、（ｉ）複数の可視波長で高い光感受性を有し、（ｉｉ）安全なアデノ関連ウイルスにパッケージングされるほど小さいプラスミドサイズを有する、合成手段によって作製されるいくつかの光感受性イオンチャンネル分子（多特性オプシン）を提供する。本発明はまた、本発明の光感受性イオンチャンネルをコードする単離核酸配列、及びかかる核酸配列を含む構築物を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法を使用して見い出すＭＣＯは、表１〜４、７に示される、かつ配列番号１、３、５、７又は１１で表される、アミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ＭＣＯは、配列番号１、３、５、７又は１１に示される配列に対して少なくとも約７０、又は７５、又は８０、又は８５、又は９０、又は９５、又は９６、又は９７、又は９８、又は９９％の同一性を有し、当該ＭＣＯは、配列番号１、３、５、７又は１１の光感受性特性を有する。いくつかの実施形態では、ＭＣＯは、表１〜４、７に示される、かつ配列番号２、４、６、８又は１２で表される、核酸によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＭＣＯをコードする核酸は、配列番号２、４、６、８又は１２に示される配列に対して少なくとも約７０、又は７５、又は８０、又は８５、又は９０、又は９５、又は９６、又は９７、又は９８、又は９９％の同一性を有し、当該コードされるＭＣＯは、配列番号１、３、５、７又は１１の光感受性特性を有する。
【００４６】
ＭＣＯをコードする核酸は、それを必要とする患者に送達するためのベクターに組み込まれたときの使用を見い出す。いくつかの実施形態では、ベクターは、当該技術分野において既知であるような、適切なプロモーターを有するプラスミドである。いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。本明細書に開示される方法での使用を見出すウイルスベクターとしては、アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベクターなどが挙げられる。
【００４７】
本発明は、いくつかの態様では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏでの細胞内の多特性オプシン（ＭＣＯ）の発現、並びにこれらの合成オプシンによって細胞活性を調節するための方法を含む。
【００４８】
ＭＣＯが疾患の治療に使用される実施例のうちの１つは、網膜の変性疾患に起因する失明である。網膜色素変性（ＲＰ）及び加齢黄斑変性（ＡＭＤ）は、眼内の光受容体の変性を特徴とする疾患を指し、非機能性のニューロン活性及び視覚野へのシグナルの伝播によって視力が損なわれる（１６〜２０）。ＡＭＤは、６５歳より上の約１５００万人において新しい視力喪失の主原因であり（２１）、ＲＰの有病率は、世界中で少なくとも１００万人である（２２、２３）。ＲＰは、常染色体潜性遺伝として最も多くは遺伝しており、症例の大多数が、この遺伝の形態を有する（１８、２２、２４）。更に、視力喪失の程度は、加齢と共に上がっていき（２５）、これは、高齢の集団への人口統計学上の変化の主な関心事である。
【００４９】
ほとんどの現行の臨床的治療は、主に、疾患の進行を遅らせることに集中しており（２６）、変性を止めることができる治療がなく（２７）、変性に起因する視力喪失を回復させることができる網膜プロテーゼ以外の治療がない（２８）。部分的な視力回復は、網膜インプラントの侵襲的外科処置を伴う（２９）。２つの異なるタイプの網膜インプラント、網膜下インプラント及び網膜上インプラントが開発されている（３０）。網膜下インプラントは、光受容体細胞が存在する網膜の領域内で、色素上皮と双極細胞との間に位置付けられる（３１）。これらの網膜プロテーゼは、盲目被験体における視覚の生成に成功している（３２〜３４）。このような網膜下インプラントを使用する不利益としては、（ｉ）埋め込まれた電極が慢性的に損傷することと、（ｉｉ）周辺光からのマイクロフォトダイオードによって生成された電流が、隣接するニューロンを刺激するのに不十分であることと、が挙げられる（３５、３６）。網膜上インプラントは、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の領域内に配置され、装置は、眼の外側又は眼内レンズ内に配置されたカメラから得た入力に応答して、ＲＧＣを刺激することによって機能する（３６、３７）。網膜上インプラントの欠点としては、（ｉ）外科的埋め込みによる細胞増殖と、（ｉｉ）ＲＧＣの軸索及び細胞体の両方の電気刺激から生じる不規則な刺激パターンと、が挙げられる（３６）。
【００５０】
本質的に侵襲性である以外に、盲目患者における視力回復のためのこれらの方法は、非特異的な細胞活性化に基づくものであり、低数の電極による低空間分解能を有し（より多くの数又はより高い密度の電極は、より多くの電力を必要とし、熱による神経組織の損傷をもたらす）、したがって、低空間分解能で視力を改善することができる。
【００５１】
光遺伝学的方法は、網膜の非特異的な刺激（３８）、又はＲＧＣのためのＴｈｙ１を含むプロモーター特異的な様式で（３９〜４３）、ＯＮ型双極細胞を標的とするｍＧｌｕＲ６（４４、４５）のいずれかによる、盲目マウスモデルにおける視力回復のために採用されてきた。メラノプシン（４６）又は光化学遺伝学（４７）の使用によってＲＧＣを刺激するための企てもなされてきた。更に、長時間続く錐体光受容体（４８）中で発現する、塩素チャンネルであるオプシン（ハロロドプシン）の活性な光刺激の使用は、視力回復のための治療介入の新しい可能性を示している（４９）。再感作された光受容体は、網膜回路の機能が働き、皮質回路を活性化させ、視覚によって導かれる行動を媒介することが示されている。
【００５２】
網膜細胞の光遺伝学的刺激による視力回復のための早期のアプローチは、例えば、ＣｈＲ２（３８）及びその他の、周辺光条件より高い光強度を必要とするオプシンを使用する。したがって、視力回復のための周囲環境におけるこのようなオプシン分子の臨床的成功はまだ達成されていない。更に、外部光源又は装置（例えば、ＬＥＤアレイ（５０））を使用したそのようなオプシンの活性化は、長期使用時に網膜細胞を実質的に損傷させ得る。加えて、これらのオプシン（視力回復のために使用される）は、光パルスに対する高速（ミリ秒）のＯＮ及びＯＦＦ応答を有する。すなわち、オプシン感作細胞を光で刺激したときに、特徴的な光受容体桿体信号は生成されない。すなわち、電圧信号は、光パルスに対する初期の高速応答後のより低速な脱分極相を有しない。したがって、周辺光レベルでの有効な光遺伝学的視覚回復は、本発明までは示されてこなかった。
【００５３】
開示される発明は、極めて光感受性の高いイオンチャンネルの調製方法及び視力回復を含む異なる使用を含む。いくつかの態様では、細胞内の特定のＭＣＯの発現は、特徴的な光受容体桿体信号と同様の白色光に応答して、長期持続性の内向き電流を生成する。本発明の別の態様によれば、開示される発明は、視力回復及び他の用途のための合成オプシンの使用方法を提供し、合成オプシンのアミノ酸配列は、増強された光感受性、動態及びイオン選択性を提供するように改変される。
【００５４】
本発明で示される結果は、ＭＣＯを担持するアデノ関連ウイルスの硝子体内注射後のマウス網膜におけるＭＣＯ受容体タンパク質の効率的で安定なｉｎ  ｖｉｖｏ発現を示す。結果はまた、網膜変性のマウスモデルの網膜におけるＭＣＯの発現が、視力の行動回復を可能にすることを実証した。変性した網膜を有するマウスへのＭＣＯの送達後に、放射状アーム水迷路におけるエラーアームの数及びプラットフォームに到達するまでの時間が有意に減少した。特に、視覚的に誘導された行動の改善は、チャネルロドプシン−２オプシン（１）に必要とされるよりもはるかに低い光強度レベルでも観察された。
【００５５】
本発明の更に別の態様によれば、ヒトにおいて効率的に視力を回復する方法が提供される。この方法は、網膜細胞内で発現されたとき、特徴的な光受容体桿体信号と同様の白色光に対する初期応答後に、より低速な脱分極相を生成するＭＣＯの使用と、眼内にプロモーター−ＭＣＯ遺伝子を担持するアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）による、かつ／又はヒトにおける厚い内境界膜を横切る標的網膜層への送達効率を高めるためのプロナーゼＥ若しくはα−アミノアジピン酸（ＡＡＡ）と組み合わせた、ｉｎ−ｖｉｖｏでのオプシンの網膜細胞への送達と、を含む。
【００５６】
ここで、本開示は、添付の図面を参照しつつ、以下に更に完全に記載し、本発明のいくつかの例示的な実施形態が示される。しかし、本発明は、多くの異なる形態で具現化されてもよく、本明細書に記載する実施形態に限定されるものと解釈すべきではない。むしろ、これらの実施形態は、本開示が十分に完全であり、当業者に本発明の範囲を完全に伝えるように与えられる。
【実施例】
【００５７】
実施例１−図１Ａは、レポータータンパク質を有する多特性オプシン（ＭＣＯ）のドメイン構成を示す。これらのＭＣＯは、図１Ｂに示されている、制限部位でクローン化されたＭＣＯ遺伝子の挿入を伴う典型的な円形マップを使用して合成した。ＭＣＯ遺伝子を、ＤＮＡ合成装置を使用して合成し、配列を確認した。ゲル電気泳動を、０．８％のアガロースを使用して、増幅したＭＣＯ１遺伝子（制限断片を有する制限酵素ＢａｍＨ  Ｉ及びＳａｌ  Ｉによって分類された）に対して実施した。ウエスタンブロットを行って、ＭＣＯが網膜細胞で発現されていることを確認した。マウスの網膜を、リポフェクタミンを使用してトランスフェクトし、発現したタンパク質をウエスタンブロット用に抽出した。ウエスタンブロットは、１ステップＮＢＴ／ＢＣＩＰ基質を有する一次（抗ｍＣｈｅｒｒｙポリクローナル）抗体及び二次（ヤギ抗ウサギＩｇＧ）抗体を使用して開発した。
【００５８】
実施例２−図２は、ウェブベースのプロトコル（ＲａｐｔｏｒＸ）を使用した多特性オプシンのアミノ酸鎖の三次元配置の理論モデリングを示す。ＲａｐｔｏｒＸは、条件付き神経場（ＣＮＦ）、条件付き確率場の変異体、及びＭＣＯの以下の予測される構造を開発するための複数のテンプレート処理手順を使用する。図２Ａは、多特性オプシンＭＣＯ１のアミノ酸鎖の三次元配置の理論モデリングを示す。図２Ｂは、多特性オプシン、ＭＣＯ２のアミノ酸鎖の三次元配置の理論モデリングを示す。図２Ｃは、多特性オプシン、ｅＭＣＯ１のアミノ酸鎖の三次元配置の理論モデリングを示す。遺伝子の発現とＭＣＯ１及びｅＭＣＯ１の機能とを調査した。ｅＭＣＯ１は、膜内でより良好に折り畳み／発現し、したがって、ＭＣＯ１と比較して効果的に機能することが見出された。ｅＭＣＯ１設計では、ＭＣＯ１とｍＣｈｅｒｒｙとの間に特別な要素が配置され、結果としてＭＣＯ１遺伝子とｍＣｈｅｒｒｙとの間の相互作用が増し、ｍＣｈｅｒｒｙに、膜内の治療用分子全体（ｅＭＣＯ１）の安定化において積極的な役割を果たさせることになった。表０８は、ＭＣＯ１と比較して、ｅＭＣＯ１において、より高い割合のβシート及びより低い割合の不規則構造（すなわち、開裂しにくい）を示す。更に、ｅＭＣＯ１中のｍＣｈｅｒｒｙの存在は、標的組織への遺伝子送達の有効性を決定するための指標として、かつ、異なる時点におけるオプシンの存在を判定するのに役立つ。したがって、オプシン発現喪失の場合、標的細胞の再光感作のためにオプシン遺伝子の再注射を実施することができる。例えば、初期の改善（ｖＭＣＯ−１の注射による）後、視力が経時的に低下する又は失われる場合、網膜におけるｍＣｈｅｒｒｙ発現の検査（眼底検査による）は、ｖＭＣＯ−１発現が失われた（再注射を必要とする）かどうかを判定するバイオマーカーとして役立つ。ｍＣｈｅｒｒｙ発現が損なわれていない（しかし、視力の改善が失われる／低下する）場合、標的化された網膜細胞が、視覚情報を視覚的皮質に伝える網膜神経節細胞との接続を失っていることを示唆する。
【００５９】
実施例３−ＭＣＯの膜輸送を評価するために、トランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞の細胞膜（対細胞質）におけるＭＣＯの発現を、レポータータンパク質（ｍＣｈｅｒｒｙ）の蛍光強度を用いて定量化した。ＨＥＫ２９３細胞を、リポフェクタミン３０００（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してＭＣＯ構築物でトランスフェクトした。トランスフェクション後、ＨＥＫ２９３細胞を、ペトリ皿で１０％のウシ胎児血清、０．２ｍｇ／ｍＬのゲンタマイシンを含むＤＭＥＭ／Ｆ−１２中に維持した。培養物を５％のＣ０２加湿大気中に３７℃で維持した。細胞をトランスフェクション後に４８時間インキュベートして、ＭＣＯ発現を可能にした。レポーター（ｍＣｈｅｒｙ）蛍光の可視化を落射蛍光顕微鏡下で実施した。ＭＣＯ１及びＭＣＯ２を発現しているＨＥＫ２９３細胞の蛍光画像を、それぞれ図３Ａ及び図６Ａに示す。更に、細胞膜及び細胞内成分におけるＭＣＯ１の相対的発現を定量化するために、強度プロファイルがプロットされている。図３Ｂは、ｍＧｌｕＲ６−ＭＣＯ１−ｍＣｈｅｒｒｙでトランスフェクトされた代表的なＨＥＫ２９３細胞を横切る線に沿った、ＭＣＯ１レポーター蛍光の強度を示す。原形質膜へのＭＣＯの有効な交通を暗に意味する有意な細胞内（細胞質）凝集は、観察されなかった。
【００６０】
実施例４−光依存性の内向き光電流を決定するために、ＭＣＯ−発現細胞を、０．０２４ｍＷ／ｍｍ２の強度を有する光のパルスに曝露した。超連続レーザー光源（ＮＫＴ  Ｐｈｏｔｏｎｉｃｓ）に結合された単一モード光ファイバは、光遺伝学的刺激のため、広帯域光を試料に送達した。電力計（８１８−ＳＬ、Ｎｅｗｐｏｒｔ）を使用して、試料平面における光強度を定量化した。光パルス幅を、Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｄｉｇｉｄａｔａシステム（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）によって制御された電気生理学的記録システムと同期させた。ＭＣＯでトランスフェクトされた細胞を、オールトランスレチナール（ＡＴＲ、１μＭ）を用いて４時間インキュベートした後、パッチクランプ実験を行った。
【００６１】
パッチクランプ記録セットアップは、増幅器システム（Ａｘｏｎ  Ｍｕｌｔｉｃｌａｍｐ  ７００Ｂ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用した倒立型Ｎｉｋｏｎ蛍光顕微鏡（ＴＳ  １００）プラットフォームを含む。１３０Ｋ−グルコン酸、７ＫＣ１、２ＮａＣｌ、１Ｍｇ  Ｃｌ２、０．４  ＥＧＴＡ、１０  ＨＥＰＥＳ、２  ＡＴＰ−Ｍｇ、０．３ＧＴＰ−トリス及び２０スクロース（ｍＭ単位）を含有する溶液で満たしたときに、３〜５ＭΩの抵抗性を達成するため、２段階ピペットプラー（Narshinghe）を使用してマイクロピペットを引っ張った。マイクロピペット電極をマイクロマニピュレータ上に取り付けた。１５０ＮａＣｌ、１０グルコース、５ＫＣ１、２ＣａＣｌ２、１ＭｇＣｌ２を（ｍＭ単位で）含有する細胞外溶液を、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）で緩衝した。−７０ｍＶで電圧クランプ内に細胞を保持しながら、光電流を測定した。増幅器からの電気生理学的信号を、パッチクランプソフトウェア（Ｃｌａｍｐｅｘ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）とインターフェース接続したＤｉｇｉｄａｔａ  １４４０（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用してデジタル化した。ＭＣＯ発現細胞の活性化のため、光刺激ビームを光ファイバによって送達した。ｐＣｌａｍｐ  １０ソフトウェアをデータ分析に使用した。図４Ａは、パッチクランプ電気生理学によって測定された、光（平均強度：０．０２４ｍＷ／ｍｍ２）に応答したＭＣＯ１発現細胞における代表的な内向き電流を示す。内向き光電流は、ＣｈＲ２発現細胞中よりもＭＣＯ１感作細胞中がはるかに高いことが見い出された。周辺光レベル（０．０２ｍＷ／ｍｍ２）でのＭＣＯ１感作細胞中の内向き光電流（１９５±３２ｐＡ）は、ＣｈＲ２及び白色オプシンで感作された細胞中とは異なり、活動電位（ＡＰ）の閾値を上回る（５１）。オプシン感作細胞の光誘発性スパイクの良好な忠実度には、より速い応答時間が必要であることに留意されたい。周辺光活性化可能なＭＣＯ１（図２Ｄ）のオン応答時間は、２．９４±０．７０ｍｓと測定され、これは、他の高速オプシンについて測定されたものと同様である（５２）。しかしながら、オン応答時間は、活性化光の強度に依存し、光強度が低下するにつれて増大することが知られている（５３）。
【００６２】
ＭＣＯ１の活性化スペクトルを得るために、内向き光電流を、異なる波長（帯域幅：３０ｍｍ）の刺激光を使用して測定した。図４Ｂでは、ＭＣＯ１の正規化された活性化スペクトルを示す。安定化バイオマーカーとして作用することに加えて、ｍＣｈｅｒｒｙは、（ｉ）膜を横切るＭＣＯ１のより良好な配向安定化により、及び（ｉｉ）安定化バイオマーカー分子から放出／再放出される光がＭＣＯ１の活性化を増強することにより、ＭＣＯ１を発現する細胞中の光誘導性電流を増強する。図５は、Ｎａｎｉｏｎ  Ｐｏｒｔ−ａ−Ｐａｔｃｈ自動パッチクランプ電気生理学によって測定されたＨＥＫ細胞における内向き電流プロファイルを示す。図５Ａは、ｍＧｌｕＲ６−ＭＣＯ１−ｍＣｈｅｒｒｙでトランスフェクトされた細胞において、白色光強度０．０２ｍＷ／ｍｍ２で測定された光電流を示す。図５Ｂは、ｍＧｌｕＲ６−ＭＣＯ１でトランスフェクトされた細胞において、白色光強度０．０２ｍＷ／ｍｍ２で測定された光電流を示す。増強型ＭＣＯ１機能に対するｍＣｈｅｒｒｙの存在の効果は、ここで明確に実証されている。ＭＣＯ１は、白色の周辺光に一致する広い活性化スペクトルを有することが見出された。
【００６３】
同じ平均強度（０．０２４ｍＷ／ｍｍ２）の光に応答したＭＣＯ２発現細胞内の内向き光電流を図６Ｂに示す。０．０２４ｍＷ／ｍｍ２の光強度でＭＣＯ１細胞中に生成されたピーク光電流は、ＭＣＯ２発現細胞中の−３２０ｐＡに比べ、−１６０ｐＡであった。光に応答したＭＣＯ１及びＭＣＯ２発現細胞における誘導性光電流のオン率は有意には異ならなかったが、ＭＣＯ２のオフ応答（光の不在下での電流の減衰）は、ＭＣＯ１より有意に遅いことが見出された（図６Ｂ、図４Ａ）。ＨＥＫ２９３細胞を発現するＭＣＯ２では、活動電位を生成するための閾値ピーク電流（５４）は、周辺光レベルである０．０２ｍＷ／ｍｍ２の光強度で達成することができる。したがって、周辺光は、網膜細胞を発現するＭＣＯにおいて十分な光電流（活動電位について）を生成することが期待される。図８は、ＭＣＯ１がトランスフェクトされたｒｄマウス網膜のパッチクランプ記録を示す。図８Ａは、マウス網膜外植片の細胞におけるｅＭＣＯ−１発現を示す。図８Ｂは、光パルス（１００ｍｓ）列によって誘導された内向き光電流を示す。ｅＭＣＯ１の高速の動態及び小さいサイズ（ＡＡＶによるパッケージングを可能にする）と組み合わされたスペクトル及び強度感度は、網膜変性を有する被験体の高次網膜ニューロンに光感受性を与えるのに比類なく好適であり、周辺光環境における視力回復を可能にする。
【００６４】
実施例５−ＭＣＯ１及びＭＣＯ２プラスミドを、ｍＧｌｕＲ６プロモーター及びｍＣｈｅｒｒｙレポーターと共に、アデノ関連ウイルス（血清型２）にパッケージングした。合成プラスミドを、ＢａｍＨｌ及びＳａｉｌ部位を介してｐＡＡＶ  ＭＣＳベクターにクローニングした。ＡＡＶ物理的力価を、ＡＡＶ逆位末端配列を選択的に結合するよう設計されたプライマを使用して、定量ＰＣＲにより得た。ＴＣＩＤ５０アッセイを、ＡＴＣＣプロトコルに従って実施した。精製したウイルスの純度の検証をＳＤＳ／ＰＡＧＥにより確認した。図７Ａは、ＡＡＶ２−ｍＧｌｕＲ６−ＭＣＯ１−ｍＣｈｅｒｒｙでのトランスフェクションの２日後の、ｍＣｈｅｒｒｙを発現するＨＥＫ２９３細胞の蛍光画像を示す。堅牢な発現が、形態の検出可能な変化がない状態で観察され、トランスフェクトされた細胞が健康であることを確認した。ｒｄ１０マウスのｉｎ  ｖｉｖｏトランスフェクションの場合、１μＬのＡＡＶ２−ｍＧｌｕＲ６−ＭＣＯ１−ｍＣｈｅｒｒｙ（ｖＭＣＯ１）の硝子体内注射をＯＮ型双極細胞における標的発現のために実施した。ＭＣＯ発現の均一性を、ｖＭＣＯ１を硝子体内に注射したｒｄ１０マウスの網膜カップ全体のｚ−スライスにおける共焦点ｍＣｈｅｒｒｙ発現からの３Ｄ再構築によって確認した（図７Ｂ）。実施例６−ｒｄ１０マウス（網膜変性１０、Ｐｄｅ６ｂにおける自然発生的なミスセンス点変異）は、遅発型の進行性網膜変性を有しており、これはヒトの網膜光変性の表現型とよく似ている。ｒｄ１０マウスの麻酔後、ＡＡＶ２−ｍＧｌｕＲ６−ＭＣＯ１−ｍＣｈｅｒｒｙ（１μＬ）溶液（１．６×１０１２ＧＣ／ｍｌ）を、強膜を通して硝子体腔に挿入されたＨａｍｉｌｔｏｎ注射器の滅菌針によって注射した。ＡＡＶ２−ｍＧｌｕＲ６−ＭＣＯ１−ｍＣｈｅｒｒｙ溶液を両眼に注射した。全手技の間、緩衝化された塩溶液を用いて角膜を湿ったままの状態にした。ｒｄ１０マウス網膜におけるｖＭＣＯ１のｉｎ  ｖｉｖｏトランスフェクションを、４つの異なる最終用量のｖＭＣＯ１について実施した。ｖＭＣＯ１注射後の異なる時点で、それぞれの群のマウスを安楽死させ、網膜組織を採取した。共焦点蛍光顕微鏡を、網膜におけるＭＣＯ１発現の分析のために実施した。ＭＣＯの保持を評価するために、共焦点顕微鏡を用いて、トランスフェクトされた網膜のレポーター蛍光発現レベル（蛍光強度）を評価した。ｖＭＣＯ１注射後の異なる時点で、マウスを屠殺し、網膜を抽出し、共焦点顕微鏡法により撮像した。ＭＣＯでトランスフェクトされたｒｄ１０マウス網膜は、標的細胞層における細胞膜上のレポーター（ｍＣｈｅｒｒｙ）の明確な発現を示した。ｖＭＣＯ１を注射した眼内での有意な発現とは対照的に、最大１６週間監視した、ＰＢＳを注射した眼内には、特徴的なｍＣｈｅｒｒｙ発現（バックグラウンド自己蛍光のみ）は観察されなかった。更に、３つの異なるｖＭＣＯ１用量の注射の１週間後、ｍＣｈｅｒｒｙ発現（バックグラウンド自己蛍光のみ）の有意な増加は観察されなかった。ＭＣＯ１発現は、ｖＭＣＯ１の硝子体内注射後４〜８週目に有意に高くなった（図９Ｂ）。ｉｎ  ｖｉｖｏウイルストランスフェクションを、ｒｄ１０マウスモデルの網膜内の双極細胞への���ＣＯ１の送達のために行った。ＭＣＯ１発現は、標的化された網膜細胞に局在化されることが見出された（図９Ｃ）。図９Ｄは、１．６×１０１２ＶＧ／ｍＬの用量での硝子体内注射の１６週間後の網膜におけるＭＣＯ１発現の断面図を示す。更に、発現レベルは、注射の４ヶ月後でさえも有意であった。図９Ｅは、２つの異なる用量のｖＭＣＯ１におけるｒｄ１０マウス網膜内のＭＣＯ１発現の動態を示す。図９Ｆは、１．６×１０１２ＶＧ／ｍＬの用量でのｖＭＣＯ１のトランスフェクションから１６週間後のｒｄ１０マウスの網膜におけるＭＣＯ１−ｍＣｈｅｒｒｙ発現（バックグラウンド除去法後）の動物間変動を示す。
【００６５】
実施例７−光に向かう、ｖＭＣＯで処置されたｒｄ１０マウスの空間的記憶及び学習能力を試験するために、可視の放射状アーム水迷路を使用した（５５）。簡潔に述べると、マウスは迷路の中心に配置され、プラットフォームは、アームのうちの１つの端部で水の表面のすぐ下に配置される。マウスは、視覚的キュー（可視スペクトルを有する光を放出するＬＥＤ）を利用することによって、プラットフォームの位置を決定することを迅速に学習する。プラットフォーム（アームのうちの１つ）は、泳がなければならない代わりに休憩できるという報酬をマウスに提供した。プラットフォームに到達するまでの時間及びプラットフォームを見つける前に行われたエラーの数は、光の点灯及び消灯条件の両方について定量化された。データ（ビデオ）記録は、マウスがプラットフォームを見つけたとき、又はマウスが泳ぎ疲れることを防止するため、マウスを水中に落下させてから６０秒経過する前に停止した。落下場所（中心、サイド、縁部）の選択は、マウスごと及び試験ごとにランダムであった。除外基準は、泳がない（浮く）マウスからなる。この試験における視力は、プラットフォームに到達するまでの時間と、視覚刺激（キュー）の品質が低下するにつれて、マウスがプラットフォームに到達する前に行うエラーの数と、を測定することによって判定された。出生後約１０週間で、ｒｄ１０マウスに、双極細胞を標的とするｖＭＣＯを硝子体内注射した。プラットフォームは、マウスが泳がなければならない代わりに休憩できるという報酬を提供した。ＭＣＯを担持するウイルスの硝子体内注射は、放射状アーム水迷路アッセイによって評価するとき、ｒｄ１０マウスの視覚的に誘導された行動の有意な改善をもたらした。出生後約８週間で、ｒｄ１０マウスに、網膜内の双極細胞に標的化されたＭＣＯを担持するＡＡＶを硝子体内注射した。図１０は、放射状水迷路におけるｒｄ１０マウスの行動における視覚的に誘導された改善を示す。図１０Ａは、硝子体内ｖＭＣＯ１注射前の、白色ＬＥＤ光を備えた放射状水迷路における、視覚的に誘導されたｒｄ１０マウスの行動の時間経過画像を示す。図１０Ｂは、ｖＭＣＯ１注射の６週間後の、ＬＥＤ光が点灯した状態でのｒｄ１０マウスの行動を示す。プラットフォームに到着する前にＭＣＯでトランスフェクトされたｒｄ１０マウスが移動した距離及び時間は、ｒｄ１０マウスよりもはるかに短かった。図１０Ｃは、光あり及び光なしの状態で迷路の中心にて落下した、ｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスがプラットフォームを見つけるまでの時間を示す。平均±ＳＥＭ。マウスごとにＮ＝５。図１０Ｄは、光あり及び光なしの状態で迷路のサイドアーム２及び４にて落下した、ｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスがプラットフォームを見つけるまでの時間を示す。図１０Ｅは、光あり及び光なしの状態で、迷路の縁部アーム３で落下した、ｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスがプラットフォームを見つけるまでの時間を示す。プラットフォームを見つけるまでの時間と一貫して、ＭＣＯでトランフェクトされたｒｄ１０マウスが、プラットフォームに到着する前に行ったエラーの数は、トランスフェクションなしのマウス（＞２）（５６）のそれよりも���意に小さい（＜１）。図１０Ｆは、光の存在下及び非存在下でプラットフォームを見つける前に中心で落下した、ｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスが通過したエラーアームの数を示す。図１０Ｇは、光の存在下及び非存在下でプラットフォームを見つける前にサイドアームにて落下した、ｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスが通過したエラーアームの数を示す。平均±ＳＥＭ。マウスごとにＮ＝５。図１０Ｈは、光の存在下及び非存在下でプラットフォームを見つける前に縁部で落下した、ｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスが通過したエラーアームの数を示す。平均±ＳＥＭ。マウスごとにＮ＝５。
【００６６】
図１１は、放射状水迷路におけるｒｄ１０マウスの行動における視覚的に誘導された改善の追跡研究を示す。データを収集して、ベースライン（事前ウイルストランスフェクション）の及び経時的な（４週間ごとに４ヶ月間）視力を決定した。図１１Ａは、ｖＭＣＯ１を注射されたｒｄ１０マウスの視覚的に誘導された行動の改善を試験するために使用される放射状アーム水迷路の概略図を示す。注射の４週間後、全てのマウスは視覚的に誘導された行動を有意に回復し、１６週間の試験中継続した。ＭＣＯでトランフェクトされたｒｄ１０マウスが、プラットフォームに到着する前に行ったエラーの数は、トランスフェクションなしのマウス（＞２）（５６）のそれよりも有意に小さい（＜１）。エラーアームの数と一貫して、ＭＣＯでトランフェクトされたマウルが、プラットフォームに到着する前に移動した距離及び時間は、ｒｄ１０マウスよりもはるかに短い（両方の群についてｎ＝５）。図１１Ｂは、ｖＭＣＯ１注射前に迷路の中心（光強度：０．００７ｍＷ／ｍｍ２）から、注射後期間に応じて、ｒｄ１０マウスがプラットフォームに到着するまでの時間を示す。Ｎ＝５；平均±Ｓ．Ｄ。＊Ｐ＜０．０５。図１１Ｃは、ｖＭＣＯ１注射前に迷路の近傍アーム（光強度：０．０１４ｍＷ／ｍｍ２）から、注射後期間に応じて、ｒｄ１０マウスがプラットフォームに到達するまでの時間を示す。Ｎ＝５；平均±Ｓ．Ｄ。＊Ｐ＜０．０５。図１１Ｄは、ｖＭＣＯ１注射前にサイドアーム（光強度：０．００４ｍＷ／ｍｍ２）から、注射後期間に応じて、ｒｄ１０マウスがプラットフォームに到達するまでの時間を示す。Ｎ＝５；平均±Ｓ．Ｄ。＊Ｐ＜０．０５。
【００６７】
最も重要なことに、ＭＣＯで処置されたｒｄ１０マウスが一系列で放射状水迷路の５つの異なるアームにランダムに配置されたとき、マウスは、１回のエラーもなく全ての他のアームからプラットフォーム（６番目のアーム）を見つけることができた。更に、ＭＣＯで処置されたｒｄ１０マウスは、周辺光レベルに匹敵する低光強度（０．００５〜０．０１ｍＷ／ｍｍ２）であっても、視覚的に誘導された作業でより良い成績を収めた。ｖＭＣＯ１で処置したマウスに関する行動の改善の光強度依存性を判定するために、発散するＬＥＤ光の強度を０．０００５〜０．０３ｍＷ／ｍｍ２に変更した。ｖＭＣＯ１で処置したｒｄ１０マウスがプラットフォームに到着するまでにかかった平均時間は、周辺光の強度レベル０．００７ｍＷ／ｍｍ２で＜２０秒であった。行動スコアは、視覚的に誘導された行動の改善のための光強度及び閾値と相関し、０．００４ｍＷ／ｍｍ２であるものと決定された。図１２は、放射状水迷路におけるｒｄ１０マウスの行動の改善の光強度依存性を示す。２つの異なる光強度間での、注射後の期間に応じた、迷路の中心からプラットフォームに到達するまでの時間の比較である。このとき初めて、オプシンで処置されたマウスは、このような低光レベルで有意に良好な成績を収めることができた。ＣｈＲ２で処置したマウスを用いた早期の行動研究は、はるかに高い光強度を使用したが、これは、活性照明源を使用しない視力回復における光遺伝学の実際的応用に適していない。実施例８−視運動応答の測定は、ヒト及び動物における視覚系の閾値を測定するために一般的に使用されているため（５７、５８）、ＭＣＯ感作網膜を有するｒｄ１０マウスの視覚特性の改善を評価するのにこのツールを利用した。この方法の利点は、動物の事前の訓練を必要としないことである。簡潔に述べると、ｒｄ１０マウスを、回転ストライプに囲まれたプラットフォーム（ドラムの中心に）上に配置した（図１０）。様々な速度を有する視運動性刺激を適用し、平均視運動応答及びマウスのスコアを測定した。図１３は、ｒｄ１０マウス及びＭＣＯで感作したｒｄ１０マウスの視動性評価を示す。図１３Ａは、１ｒｐｍでの垂直ストライプの回転速度（０．０７ｃｐｄ）におけるｖＭＣＯ１注射の前及び８週間後の、ｒｄ１０マウスの頭部運動数の定量比較を示す。チャンバの中心における光強度は、０．００１ｍＷ／ｍｍ２である。図１３Ｂは、２ｒｐｍでの垂直ストライプの回転速度におけるｖＭＣＯ１注射の前及び８週間後の、ｒｄ１０マウスの頭部運動数の定量比較を示す。チャンバの中心における光強度は、０．００１ｍＷ／ｍｍ２である。この低光強度であっても、ＭＣＯで処置されたマウスは、回転ストライプに応答してその頭部を回転させ、改善された空間的視力を示唆した。実施例９−野生型（非盲検）マウスと同様に、ｖＭＣＯで処置されたｒｄ１０マウスは、光から離れ、遮断することにより、明るい光を回避することが観察された（図１４）。
【００６８】
実施例１０−オプシンでトランスフェトされた網膜細胞の光に対する慢性曝露は、それらの生存性に関する懸念を引き起こし得る。したがって、網膜細胞生存性に対する光曝露の何らかの有害効果を評価するため、野生型マウス及びＭＣＯが注射されたｒｄ１０マウスを、周辺光レベルの強度（すなわち、約０．０１ｍＷ／ｍｍ２）より約１０倍高い強度（すなわち、（０．１ｍＷ／ｍｍ２）を有する白色光に４週間（１日８時間）曝露した。光曝露の４週間後、ＭＣＯでトランスフェクトされたｒｄ１０及び野生型（対照）マウスを屠殺し、免疫組織化学分析用に網膜組織を採取した。網膜をアポトーシスマーカーで免疫染色し、共焦点顕微鏡法を用いて撮像した。図１４は、慢性光曝露後のＭＣＯ１感作網膜細胞の生存性を示す。図１４Ａは、野生型（非盲検）マウスと同様に、ｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスは、光から離れ、遮断することにより（矢印に示されるように、床敷材料を積み上げて）明るい光を回避することを示す。図１４Ｂは、１日８時間の白色光（強度：０．１ｍＷ／ｍｍ２）の照明から４週間後の、ｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスのカスパーゼ−３（緑色）で染色された網膜の蛍光画像を示す。図１４Ｃは、１日８時間の白色光（強度：０．１ｍＷ／ｍｍ２）の照明の４週間後の、野生型マウスのカスパーゼ−３（緑色）で染色された網膜の蛍光画像を示す。定量的比較（図１４Ｄ）は、野生型マウス又はＭＣＯが注射されたｒｄ１０マウスのいずれにも有意な細胞死が存在しないことを示しており、慢性光曝露下の細胞生存性が損なわれていないことを示している。ｖＭＣＯ１で処置されたｒｄ１０マウスの内核層内のアポトーシス細胞は０％である。更に、ＭＣＯ発現細胞の光感受性は、作用電位を生成するために必要な光強度を有意に低下させるため、ＭＣＯの使用は、網膜細胞に対する光誘発性の慢性損傷を最小限に抑えられる。
【００６９】
実施例１１−ＳＤＯＣＴを用いた光学切開／撮像を行って、ｖＭＣＯ１の硝子体内注射による眼構造の任意の変化を監視した。ｒｄ１０マウスにおける硝子体内ｖＭＣＯ注射後の角膜、レンズ、及び網膜ｌｗｋのＳＤＯＣＴ画像を、注射前の画像と比較した。図１５は、ｒｄ１０マウスにおけるｖＭＣＯ１注射後の網膜の構造的一体性の評価の結果を示す。図１５Ａは、ｖＭＣＯ１注射後のｒｄ１０マウス網膜のＯＣＴ画像を示す。図１５Ｂは、注射の前及び１週間後の、４匹の異なるｒｄ１０マウスの網膜厚の比較を示す。ｖＭＣＯの硝子体内注射後に、角膜、レンズ、又は網膜への検出可能な変化（例えば、剥離）は観察されなかった。ＩｍａｇｅＪを使用して、ＳＤＯＣＴ画像を分析した。ｖＭＣＯ１注射の前及び１週間後の網膜厚の定量的比較（図１５Ｄ）は、網膜厚の変化を示していない。
【００７０】
実施例１２−遺伝子治療は、過去１０年間望まれない副作用（５９、６０）により物議を醸してきたが、オプシン（例えば、ＣｈＲ２）は、非毒性であると報告され、免疫応答を生じず、安定した細胞膜特性を維持することが報告されている。したがって、マウスの健康を監視して、本アプローチの安全性を確認した。免疫毒性研究のために、血液を、２回の異なる用量（群１：１．６６×１０１０、群２：１．６６×１０１１ＧＣ／ｍＬ）のｖＭＣＯの硝子体内注射の前、７日後及び１４日後に、マウスから血液を採取した（Ｎ＝５／用量）。麻酔後、硝子体内注射の１週間前に、血液（−０．２ｍＬ）を顔面静脈（無菌動物ランセットを使用して）から採取した。ｖＭＣＯ１注射後、血液を分析のために採取した（表６．１）。研究期間の完了後、マウスを安楽死させた。マウスの顔面静脈から血液を採集するために、顎部の側の毛の少ない雀卵斑に場所を定め、ランセットで刺した。血漿中の炎症誘発性（ＩＬ−６及びＩＦＮ−ｙ）及び抗炎症性（ＩＬ−１０）サイトカインを、ＥＬＩＳＡキットを使用して定量化した。図１６は、ｖＭＣＯの硝子体内用量が安全限度内にあることを示す、炎症性サイトカインのＥＬＩＳＡ定量の結果を要約している。図１６Ａは、ｖＭＣＯ１注射の前、７日後及び１４日後の群１と群２との間の血漿中のＩＬ−６（炎症誘発性マーカー）の定量的比較を示す。図１６Ｂは、２つの群間の血漿中のＩＬ−１０（抗炎症性マーカー）の定量的比較を示す。図１６Ｃは、ｖＭＣＯ１注射の前、７日後及び１４日後の２つの群間の血漿中のＩＦＮ−Ｙ（炎症誘発性マーカー）の定量的比較を示す。
【００７１】
実施例１３−ＭＣＯの硝子体内注射による視力の行動的回復を監視した後、マウスを屠殺し、非標的組織試料（眼、心臓、肝臓、筋肉、皮膚など）におけるＭＣＯ発現の拡散を分析するために様々な器官を回収した。器官を１．８ｍＬのクライオバイアルに保存し、−８０℃で保管した。それぞれのバイアルに、研究番号、動物識別番号、抽出日及び器官名を示したラベルを適切に貼付した。注射後の異なる時点におけるｒｄ１０マウスにおけるベクター配列のｑＰＣＲ検出は、処置された眼の外側の組織にごく少量のＭＣＯ−１  ＤＮＡを示し、我々の分子及び治療方法の安全性が確認された。眼内のｖＭＣＯ１の硝子体内投与は、局所的に制限された分布をもたらし、オフターゲット効果を最小限に抑えた。図１７は、ＡＡＶ２にパッケージングされた多特性オプシン（ｖＭＣＯ１）の生体分布を示す。注射後（１週間）の固定時点において、眼内で測定されたベクトルコピー数は、注射量の減少と共に減少することが見出された。更に、注射の４〜８週間後、注射された眼内にはごく少量の又は検出不能な量のベクターＤＮＡが見出された。生体分布研究は、硝子体内注射されたｒｄ１０マウスの非標的器官におけるベクターの最小限の又は検出不可能なレベルを示した。異なる用量及び注射後の期間でのｒｄ１０マウスにおけるベクター配列のｑＰＣＲ検出による、処置された眼の外側の組織におけるベクターＤＮＡは、ごく少量又は検出不可能な量である。複数の時点における硝子体内投与を介したｖＭＣＯ１の投与後の生体分布プロファイル及び導入遺伝子発現の動態は、検出の開始、ピークベクトル／導入遺伝子レベル、及びこれらのレベルの低下／平坦域と一致する。
【００７２】
実施例１４−我々のオプシンの安全性、特異性、及び有効性を更に評価するために、ｖＭＣＯ１が注射されたｒｄ１０網膜の免疫組織化学を行った。図１８は、ｖＭＣＯ１が注射されたｒｄ１０マウスの眼の網膜切片の免疫組織化学を示す。図１８Ａは、ＭＣＯ−ｍＣｈｅｒｒｙ（赤色）が選択的に標的化され、ｖＭＣＯ１の硝子体内注射の８週間後に、ｒｄ１０マウスの内核層（ＩＮＬ）で発現されることを示す。アレスチン（緑色）の不在は、光受容体の完全な喪失を示唆している。図１８Ｂは、ｖＭＣＯ１の硝子体内注射の８週間後の、ｒｄ１０マウスにおけるｍＣｈｅｒｒｙ（赤色、内因性）を発現する桿体双極細胞中のＰＫＣａ染色（緑色）を示す。図１８Ｂは、ｖＭＣ０１の硝子体内注射の８週間後の、ｒｄ１０マウスにおけるｍＣｈｅｒｒｙ（赤色）を発現するＯＮ型双極細胞中のｍＧｌｕＲ６染色（緑色）を示す。図１８Ｄは、ｖＭＣＯ１のｒｄ１０マウスへの硝子体内送達の８週間後の、ｒｄ１０網膜におけるｍＣｈｅｒｒｙ（緑色の免疫染色）発現を示す。図１８Ｅは、光受容体が変性した網膜で報告されるように、ｖＭＣＯ１の硝子体内注射の１８週間後のｒｄ１０マウスにおけるＧＦＡＰ（緑色）を示す。図１８Ｆは、ＣＤ４５（緑色）の発現がないことを示し、ｖＭＣＯ１の硝子体内注射の８週間後のｒｄ１０マウスに免疫細胞がないことを示唆している。
【００７３】
本発明は、本明細書に記載の組成物のうちのいずれか１つを被験体に投与することを含む、視力を改善又は回復する方法を提供する。本発明のＭＣＯの方法の組成物は、（ｉ）ＭＣＯプラスミド、（ｉｉ）ｒＡＡＶ−ＭＣＯ、（ｉｉｉ）ｐＡＡＶ−ＭＣＯ及び（ｉｉｉ）Ｌｅｎｔｉ  Ｖｉｒｕｓ−ＭＣＯを含む、プラスミド又はウイルスベクターに送達及びパッケージングされ得る。本発明の送達は、本発明の分子−ＭＣＯ（裸のプラスミド又はウイルス）と共に最適化されたＡＡＡの製剤を使用して、網膜の内境界膜を一時的に透過させることにより、その場に応じて行われる。
【００７４】
視力回復のための多特性オプシンによる
光遺伝学的調節及びその別の用途
表０１：多特性オプシン−１（ＭＣＯ１）のアミノ酸及びＤＮＡ配列
アミノ酸配列：
ＭＤＹＧＧＡＬＳＡＶＧＲＥＬＬＦＶＴＮＰＶＶＶＮＧＳＶＬＶＰＥＤＱＣＹＣＡＧＷＩＥＳＲＧＴＮＧＡＱＴＡＳＮＶＬＱＷＬＡＡＧＦＳＩＬＬＬＭＦＹＡＹＱＴＷＫＳＴＣＧＷＥＥＩＹＶＣＡＩＥＭＶＫＶＩＬＥＦＦＦＥＦＫＮＰＳＭＬＹＬＡＴＧＨＲＶＱＷＬＲＹＡＥＷＬＬＴＣＰＶＩＳＩＨＬＳＮＬＴＧＬＳＮＤＹＳＲＲＴＭＧＬＬＶＳＤＩＧＴＩＶＷＧＡＴＳＡＭＡＴＧＹＶＫＶＩＦＦＣＬＧＬＣＹＧＡＮＴＦＦＨＡＡＫＡＹＩＥＧＹＨＴＶＰＫＧＲＣＲＱＶＶＴＧＭＡＷＬＦＦＶＳＷＧＭＦＰＩＬＦＩＬＧＰＥＧＦＧＶＬＳＶＹＧＳＴＶＧＨＴＩＩＤＬＭＳＫＮＣＷＧＬＬＧＨＹＬＲＶＬＩＨＥＨＩＬＩＨＧＤＩＲＫＴＴＫＬＮＩＧＧＴＥＩＥＶＥＴＬＶＥＤＥＳＥＡＧＳＶＮＫＧＴＧＫＭＡＥＬＩＳＳＡＴＲＳＬＦＡＡＧＧＩＮＰＷＰＮＰＹＨＨＥＤＭＧＣＧＧＭＴＰＴＧＥＣＦＳＴＥＷＷＣＤＰＳＹＧＬＳＤＡＧＹＧＹＣＦＶＥＡＴＧＧＹＬＶＶＧＶＥＫＫＱＡＷＬＨＳＲＧＴＰＧＥＫＩＧＡＱＶＣＱＷＩＡＦＳＩＡＩＡＬＬＴＦＹＧＦＳＡＷＫＡＴＣＧＷＥＥＶＹＶＣＣＶＥＶＬＦＶＴＬＥＩＦＫＥＦＳＳＰＡＴＶＹＬＳＴＧＮＨＡＹＣＬＲＹＦＥＷＬＬＳＣＰＶＩＬＩＲＬＳＮＬＳＧＬＫＮＤＹＳＫＲＴＭＧＬＩＶＳＣＶＧＭＩＶＦＧＭＡＡＧＬＡＴＤＷＬＫＷＬＬＹＩＶＳＣＩＹＧＧＹＭＹＦＱＡＡＫＣＹＶＥＡＮＨＳＶＰＫＧＨＣＲＭＶＶＫＬＭＡＹＡＹＦＡＳＷＧＳＹＰＩＬＷＡＶＧＰＥＧＬＬＫＬＳＰＹＡＮＳＩＧＨＳＩＣＥＩＩＡＫＥＦＷＴＦＬＡＨＨＬＲＩＫＩＨＥＨＩＬＩＨＧＤＩＲＫＴＴＫＭＥＩＧＧＥＥＶＥＶＥＥＦＶＥＥＥＤＥＤＴＶ（配列番号：１）
【００７５】
ＤＮＡ配列：
ＡＴＧＧＡＴＴＡＴＧＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＧＡＧＣＧＣＧＧＴＧＧＧＣＣＧＣＧＡＡＣＴＧＣＴＧＴＴＴＧＴＧＡＣＣＡＡＣＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＡＡＣＧＧＣＡＧＣＧＴＧＣＴＧＧＴＧＣＣＧＧＡＡＧＡＴＣＡＧＴＧＣＴＡＴＴＧＣＧＣＧＧＧＣＴＧＧＡＴＴＧＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＣＧＧＣＧＣＧＣＡＧＡＣＣＧＣＧＡＧＣＡＡＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＧＧＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＧＣＴＴＴＡＧＣＡＴＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＴＧＴＴＴＴＡＴＧＣＧＴＡＴＣＡＧＡＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＣＡＣＣＴＧＣＧＧＣＴＧＧＧＡＡＧＡＡＡＴＴＴＡＴＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＴＴＧＡＡＡＴＧＧＴＧＡＡＡＧＴＧＡＴＴＣＴＧＧＡＡＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＡＴＴＴＡＡＡＡＡＣＣＣＧＡＧＣＡＴＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＧＣＧＡＣＣＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＴＧＣＡＧＴＧＧＣＴＧＣＧＣＴＡＴＧＣＧＧＡＡＴＧＧＣＴＧＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＣＧＧＴＧＡＴＴＡＧＣＡＴＴＣＡＴＣＴＧＡＧＣＡＡＣＣＴＧＡＣＣＧＧＣＣＴＧＡＧＣＡＡＣＧＡＴＴＡＴＡＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＡＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＧＴＧＡＧＣＧＡＴＡＴＴＧＧＣＡＣＣＡＴＴＧＴＧＴＧＧＧＧＣＧＣＧＡＣＣＡＧＣＧＣＧＡＴＧＧＣＧＡＣＣＧＧＣＴＡＴＧＴＧＡＡＡＧＴＧＡＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＴＧＣＴＡＴＧＧＣＧＣＧＡＡＣＡＣＣＴＴＴＴＴＴＣＡＴＧＣＧＧＣＧＡＡＡＧＣＧＴＡＴＡＴＴＧＡＡＧＧＣＴＡＴＣＡＴＡＣＣＧＴＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＣＴＧＣＣＧＣＣＡＧＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＧＣＡＴＧＧＣＧＴＧＧＣＴＧＴＴＴＴＴＴＧＴＧＡＧＣＴＧＧＧＧＣＡＴＧＴＴＴＣＣＧＡＴＴＣＴＧＴＴＴＡＴＴＣＴＧＧＧＣＣＣＧＧＡＡＧＧＣＴＴＴＧＧＣＧＴＧＣＴＧＡＧＣＧＴＧＴＡＴＧＧＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＧＧＣＣＡＴＡＣＣＡＴＴＡＴＴＧＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＡＡＡＡＣＴＧＣＴＧＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＧＧＣＣＡＴＴＡＴＣＴＧＣＧＣＧＴＧＣＴＧＡＴＴＣＡＴＧＡＡＣＡＴＡＴＴＣＴＧＡＴＴＣＡＴＧＧＣＧＡＴＡＴＴＣＧＣＡＡＡＡＣＣＡＣＣＡＡＡＣＴＧＡＡＣＡＴＴＧＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＡＡＴＴＧＡＡＧＴＧＧＡＡＡＣＣＣＴＧＧＴＧＧＡＡＧＡＴＧＡＡＴＣＧＧＡＡＧＣＧＧＧＣＴＣＧＧＴＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＡＣＣＧＧＣＡＡＡＡＴＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧＣＧＣＣＡＣＣＡＧＡＴＣＴＣＴＧＴＴＴＧＣＣＧＣＣＧＧＡＧＧＣＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＧＧＣＣＴＡＡＣＣＣＣＴＡＣＣＡＣＣＡＣＧＡＧＧＡＣＡＴＧＧＧＣＴＧＴＧＧＡＧＧＡＡＴＧＡＣＡＣＣＴＡＣＡＧＧＣＧＡＧＴＧＣＴＴＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＴＧＧＴＧＧＴＧＴＧＡＣＣＣＴＴＣＴＴＡＣＧＧＡＣＴＧＡＧＣＧＡＣＧＣＣＧＧＡＴＡＣＧＧＡＴＡＴＴＧＣＴＴＣＧＴＧＧＡＧＧＣＣＡＣＡＧＧＣＧＧＣＴＡＣＣＴＧＧＴＣＧＴＧＧＧＡＧＴＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＣＡＧＣＡＧＡＧＧＣＡＣＡＣＣＡＧＧＡＧＡＡＡＡＧＡＴＣＧＧＣＧＣＣＣＡＧＧＴＣＴＧＣＣＡＧＴＧＧＡＴＴＧＣＴＴＴＣＡＧＣＡＴＣＧＣＣＡＴＣＧＣＣＣＴＧＣＴＧＡＣＡＴＴＣＴＡＣＧＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＴＧＧＡＡＧＧＣＣＡＣＴＴＧＣＧＧＴＴＧＧＧＡＧＧＡＧＧＴＣＴＡＣＧＴＣＴＧＴＴＧＣＧＴＣＧＡＧＧＴＧＣＴＧＴＴＣＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＴＣＴＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＣＣＣＣＧＣＣＡＣＡＧＴＧＴＡＣＣＴＧＴＣＴＡＣＣＧＧＣＡＡＣＣＡＣＧＣＣＴＡＴＴＧＣＣＴＧＣＧＣＴＡＣＴＴＣＧＡＧＴＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣＴＴＧＣＣＣＣＧＴＧＡＴＣＣＴＧＡＴＣＡＧＡＣＴＧＡＧＣＡＡＣＣＴＧＡＧＣＧＧＣＣＴＧＡＡＧＡＡＣＧＡＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＧＧＡＣＣＡＴＧＧＧＣＣＴＧＡＴＣＧＴＧＴＣＴＴＧＣＧＴＧＧＧＡＡＴＧＡＴＣＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＴＧＧＣＣＧＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＡＣＣＧＡＴＴＧＧＣＴＣＡＡＧＴＧＧＣＴＧＣＴＧＴＡＴＡＴＣＧＴＧＴＣＴＴＧＣＡＴＣＴＡＣＧＧＣＧＧＣＴＡＣＡＴＧＴＡＣＴＴＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＡＧＴＧＣＴＡＣＧＴＧＧＡＡＧＣＣＡＡＣＣＡＣＡＧＣＧＴＧＣＣＴＡＡＡＧＧＣＣＡＴＴＧＣＣＧＣＡＴＧＧＴＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＡＴＧＧＣＣＴＡＣＧＣＴＴＡＣＴＴＣＧＣＣＴＣＴＴＧＧＧＧＣＡＧＣＴＡＣＣＣＡＡＴＣＣＴＣＴＧＧＧＣＡＧＴＧＧＧＡＣＣＡＧＡＡＧＧＡＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣＣＣＴＴＡＣＧＣＣＡＡＣＡＧＣＡＴＣＧＧＣＣＡＣＡＧＣＡＴＣＴＧＣＧＡＧＡＴＣＡＴＣＧＣＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＴＧＧＡＣＣＴＴＣＣＴＧＧＣＣＣＡＣＣＡＣＣＴＧＡＧＧＡＴＣＡＡＧＡＴＣＣＡＣＧＡＧＣＡＣＡＴＣＣＴＧＡＴＣＣＡＣＧＧＣＧＡＣＡＴＣＣＧＧＡＡＧＡＣＣＡＣＣＡＡＧＡＴＧＧＡＧＡＴＣＧＧＡＧＧＣＧＡＧＧＡＧＧＴＧＧＡＡＧＴＧＧＡＡＧＡＧＴＴＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＣＧＡＧＧＡＣＡＣＡＧＴＧ（配列番号：２）
【００７６】
表０２：多特性オプシン−２（ＭＣＯ２）のアミノ酸及びＤＮＡ配列。ＭＣＯ１配列（表−０１）の３０８後の変異（Ｓ  １４２  Ｌ）及び７個のアミノ酸残基（ＶＮＫＧＴＧＫ）の欠失を含有する。
アミノ酸配列：
ＭＤＹＧＧＡＬＳＡＶＧＲＥＬＬＦＶＴＮＰＶＶＶＮＧＳＶＬＶＰＥＤＱＣＹＣＡＧＷＩＥＳＲＧＴＮＧＡＱＴＡＳＮＶＬＱＷＬＡＡＧＦＳＩＬＬＬＭＦＹＡＹＱＴＷＫＳＴＣＧＷＥＥＩＹＶＣＡＩＥＭＶＫＶＩＬＥＦＦＦＥＦＫＮＰＳＭＬＹＬＡＴＧＨＲＶＱＷＬＲＹＡＥＷＬＬＴＣＰＶＩＬＩＨＬＳＮＬＴＧＬＳＮＤＹＳＲＲＴＭＧＬＬＶＳＤＩＧＴＩＶＷＧＡＴＳＡＭＡＴＧＹＶＫＶＩＦＦＣＬＧＬＣＹＧＡＮＴＦＦＨＡＡＫＡＹＩＥＧＹＨＴＶＰＫＧＲＣＲＱＶＶＴＧＭＡＷＬＦＦＶＳＷＧＭＦＰＩＬＦＩＬＧＰＥＧＦＧＶＬＳＶＹＧＳＴＶＧＨＴＩＩＤＬＭＳＫＮＣＷＧＬＬＧＨＹＬＲＶＬＩＨＥＨＩＬＩＨＧＤＩＲＫＴＴＫＬＮＩＧＧＴＥＩＥＶＥＴＬＶＥＤＥＳＥＡＧＳＭＡＥＬＩＳＳＡＴＲＳＬＦＡＡＧＧＩＮＰＷＰＮＰＹＨＨＥＤＭＧＣＧＧＭＴＰＴＧＥＣＦＳＴＥＷＷＣＤＰＳＹＧＬＳＤＡＧＹＧＹＣＦＶＥＡＴＧＧＹＬＶＶＧＶＥＫＫＱＡＷＬＨＳＲＧＴＰＧＥＫＩＧＡＱＶＣＱＷＩＡＦＳＩＡＩＡＬＬＴＦＹＧＦＳＡＷＫＡＴＣＧＷＥＥＶＹＶＣＣＶＥＶＬＦＶＴＬＥＩＦＫＥＦＳＳＰＡＴＶＹＬＳＴＧＮＨＡＹＣＬＲＹＦＥＷＬＬＳＣＰＶＩＬＩＲＬＳＮＬＳＧＬＫＮＤＹＳＫＲＴＭＧＬＩＶＳＣＶＧＭＩＶＦＧＭＡＡＧＬＡＴＤＷＬＫＷＬＬＹＩＶＳＣＩＹＧＧＹＭＹＦＱＡＡＫＣＹＶＥＡＮＨＳＶＰＫＧＨＣＲＭＶＶＫＬＭＡＹＡＹＦＡＳＷＧＳＹＰＩＬＷＡＶＧＰＥＧＬＬＫＬＳＰＹＡＮＳＩＧＨＳＩＣＥＩＩＡＫＥＦＷＴＦＬＡＨＨＬＲＩＫＩＨＥＨＩＬＩＨＧＤＩＲＫＴＴＫＭＥＩＧＧＥＥＶＥＶＥＥＦＶＥＥＥＤＥＤＴＶ（配列番号：３）
【００７７】
ヌクレオチド配列：
ＡＴＧＧＡＣＴＡＴＧＧＣＧＧＡＧＣＡＴＴＧＡＧＴＧＣＡＧＴＴＧＧＧＣＧＡＧＡＡＴＴＧＣＴＧＴＴＣＧＴＧＡＣＧＡＡＴＣＣＣＧＴＴＧＴＴＧＴＡＡＡＣＧＧＡＡＧＴＧＴＡＣＴＧＧＴＧＣＣＡＧＡＡＧＡＣＣＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＣＧＣＧＧＧＣＴＧＧＡＴＡＧＡＧＴＣＧＣＧＣＧＧＡＡＣＧＡＡＴＧＧＡＧＣＡＣＡＧＡＣＡＧＣＧＴＣＣＡＡＣＧＴＡＣＴＧＣＡＡＴＧＧＣＴＣＧＣＣＧＣＴＧＧＴＴＴＣＴＣＴＡＴＣＣＴＧＴＴＧＴＴＧＡＴＧＴＴＣＴＡＣＧＣＡＴＡＴＣＡＡＡＣＧＴＧＧＡＡＡＡＧＣＡＣＣＴＧＣＧＧＧＴＧＧＧＡＧＧＡＡＡＴＡＴＡＴＧＴＧＴＧＴＧＣＣＡＴＣＧＡＧＡＴＧＧＴＡＡＡＡＧＴＡＡＴＴＴＴＡＧＡＧＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＡＴＴＣＡＡＧＡＡＣＣＣＣＴＣＡＡＴＧＴＴＧＴＡＣＣＴＴＧＣＴＡＣＧＧＧＧＣＡＴＡＧＡＧＴＴＣＡＡＴＧＧＣＴＴＣＧＧＴＡＴＧＣＧＧＡＡＴＧＧＣＴＣＴＴＧＡＣＡＴＧＴＣＣＡＧＴＡＡＴＡＣＴＡＡＴＴＣＡＴＣＴＴＡＧＴＡＡＣＴＴＡＡＣＧＧＧＡＣＴＣＴＣＴＡＡＣＧＡＣＴＡＴＴＣＡＣＧＧＣＧＴＡＣＣＡＴＧＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＴＧＴＣＡＧＡＣＡＴＴＧＧＧＡＣＧＡＴＡＧＴＡＴＧＧＧＧＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＧＣＡＡＴＧＧＣＴＡＣＡＧＧＣＴＡＣＧＴＡＡＡＧＧＴＴＡＴＣＴＴＴＴＴＣＴＧＣＣＴＣＧＧＧＣＴＴＴＧＴＴＡＣＧＧＣＧＣＧＡＡＴＡＣＣＴＴＣＴＴＴＣＡＴＧＣＣＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＡＣＡＴＡＧＡＧＧＧＴＴＡＣＣＡＴＡＣＣＧＴＡＣＣＧＡＡＡＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＧＧＣＡＡＧＴＣＧＴＣＡＣＡＧＧＡＡＴＧＧＣＴＴＧＧＣＴＣＴＴＣＴＴＴＧＴＧＡＧＴＴＧＧＧＧＡＡＴＧＴＴＣＣＣＴＡＴＣＣＴＡＴＴＴＡＴＣＴＴＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＧＧＴＴＴＣＧＧＣＧＴＧＣＴＴＡＧＴＧＴＴＴＡＣＧＧＣＡＧＴＡＣＧＧＴＣＧＧＴＣＡＣＡＣＧＡＴＣＡＴＣＧＡＣＣＴＧＡＴＧＴＣＡＡＡＧＡＡＴＴＧＣＴＧＧＧＧＣＴＴＧＣＴＴＧＧＴＣＡＴＴＡＴＴＴＧＣＧＴＧＴＧＴＴＡＡＴＣＣＡＣＧＡＡＣＡＴＡＴＴＣＴＧＡＴＴＣＡＴＧＧＴＧＡＣＡＴＣＣＧＡＡＡＡＡＣＴＡＣＣＡＡＡＣＴＣＡＡＴＡＴＴＧＧＣＧＧＣＡＣＡＧＡＧＡＴＡＧＡＧＧＴＴＧＡＡＡＣＧＴＴＧＧＴＣＧＡＧＧＡＣＧＡＧＴＣＴＧＡＡＧＣＧＧＧＧＴＣＡＡＴＧＧＣＧＧＡＡＣＴＡＡＴＴＴＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＡＣＧＧＴＣＧＣＴＡＴＴＴＧＣＴＧＣＣＧＧＧＧＧＧＡＴＡＡＡＴＣＣＣＴＧＧＣＣＣＡＡＣＣＣＧＴＡＴＣＡＣＣＡＣＧＡＡＧＡＴＡＴＧＧＧＡＴＧＣＧＧＡＧＧＧＡＴＧＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＴＴＴＣＧＡＣＣＧＡＡＴＧＧＴＧＧＴＧＴＧＡＣＣＣＣＴＣＧＴＡＣＧＧＧＴＴＡＴＣＡＧＡＴＧＣＡＧＧＣＴＡＴＧＧＴＴＡＴＴＧＴＴＴＣＧＴＧＧＡＧＧＣＣＡＣＧＧＧＴＧＧＴＴＡＴＴＴＡＧＴＣＧＴＡＧＧＧＧＴＡＧＡＧＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＣＡＴＧＧＣＴＴＣＡＴＴＣＣＣＧＧＧＧＡＡＣＣＣＣＣＧＧＧＧＡＧＡＡＡＡＴＴＧＧＡＧＣＴＣＡＧＧＴＡＴＧＣＣＡＧＴＧＧＡＴＡＧＣＧＴＴＴＴＣＴＡＴＣＧＣＧＡＴＡＧＣＴＣＴＣＣＴＧＡＣＴＴＴＴＴＡＴＧＧＡＴＴＴＴＣＧＧＣＴＴＧＧＡＡＧＧＣＣＡＣＧＴＧＣＧＧＡＴＧＧＧＡＡＧＡＧＧＴＡＴＡＣＧＴＡＴＧＴＴＧＣＧＴＣＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＴＣＧＴＡＡＣＴＣＴＧＧＡＡＡＴＡＴＴＴＡＡＡＧＡＡＴＴＣＴＣＡＡＧＴＣＣＧＧＣＣＡＣＡＧＴＴＴＡＴＴＴＧＡＧＣＡＣＴＧＧＣＡＡＣＣＡＣＧＣＣＴＡＴＴＧＴＴＴＧＣＧＧＴＡＴＴＴＴＧＡＧＴＧＧＣＴＡＴＴＡＴＣＴＴＧＣＣＣＴＧＴＴＡＴＴＣＴＴＡＴＡＣＧＧＴＴＡＴＣＡＡＡＣＣＴＡＴＣＧＧＧＴＣＴＧＡＡＧＡＡＴＧＡＴＴＡＴＴＣＣＡＡＧＡＧＡＡＣＣＡＴＧＧＧＣＣＴＡＡＴＴＧＴＣＡＧＴＴＧＣＧＴＣＧＧＧＡＴＧＡＴＣＧＴＧＴＴＣＧＧＧＡＴＧＧＣＣＧＣＧＧＧＴＣＴＴＧＣＡＡＣＧＧＡＣＴＧＧＣＴＴＡＡＧＴＧＧＣＴＡＴＴＡＴＡＣＡＴＣＧＴＣＡＧＣＴＧＣＡＴＴＴＡＣＧＧＴＧＧＴＴＡＣＡＴＧＴＡＣＴＴＴＣＡＡＧＣＧＧＣＴＡＡＧＴＧＣＴＡＴＧＴＧＧＡＧＧＣＧＡＡＣＣＡＴＴＣＡＧＴＣＣＣＧＡＡＡＧＧＣＣＡＣＴＧＴＣＧＣＡＴＧＧＴＧＧＴＴＡＡＧＴＴＡＡＴＧＧＣＧＴＡＴＧＣＧＴＡＣＴＴＣＧＣＴＴＣＧＴＧＧＧＧＴＴＣＡＴＡＴＣＣＡＡＴＣＣＴＧＴＧＧＧＣＧＧＴＣＧＧＡＣＣＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＡＡＡＣＴＧＡＧＣＣＣＣＴＡＴＧＣＧＡＡＣＴＣＣＡＴＡＧＧＡＣＡＴＴＣＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＴＣＡＴＣＧＣＣＡＡＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＡＣＣＴＴＣＴＴＡＧＣＴＣＡＣＣＡＴＴＴＧＣＧＧＡＴＴＡＡＧＡＴＣＣＡＴＧＡＡＣＡＣＡＴＴＣＴＣＡＴＴＣＡＣＧＧＴＧＡＴＡＴＴＡＧＧＡＡＡＡＣＴＡＣＣＡＡＧＡＴＧＧＡＧＡＴＡＧＧＴＧＧＡＧＡＡＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＡＧＡＡＧＡＧＴＴＴＧＴＡＧＡＡＧＡＧＧＡＧＧＡＣＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＴＡＧＴＡＴＣＡＡＡＧＧＧＧＧＡＡＧＡＡＧＡＣＡＡＴ（配列番号：４）
【００７８】
表０３：多特性オプシン−ＩＴ（ＭＣＯＩＴ）のアミノ酸及びＤＮＡ配列。これは、ＭＣＯ１の３１５個のアミノ酸残基（表−０１）の後の、追加の膜貫通配列（ＴＰＡＲＷＶＷＩＳＬＹＹＡＡＦＹＶＶＭＴＧＬＦＡＬＣＩＹＶＬＭＱＴＩ）を含有する。
アミノ酸配列：
ＭＤＹＧＧＡＬＳＡＶＧＲＥＬＬＦＶＴＮＰＶＶＶＮＧＳＶＬＶＰＥＤＱＣＹＣＡＧＷＩＥＳＲＧＴＮＧＡＱＴＡＳＮＶＬＱＷＬＡＡＧＦＳＩＬＬＬＭＦＹＡＹＱＴＷＫＳＴＣＧＷＥＥＩＹＶＣＡＩＥＭＶＫＶＩＬＥＦＦＦＥＦＫＮＰＳＭＬＹＬＡＴＧＨＲＶＱＷＬＲＹＡＥＷＬＬＴＣＰＶＩＳＩＨＬＳＮＬＴＧＬＳＮＤＹＳＲＲＴＭＧＬＬＶＳＤＩＧＴＩＶＷＧＡＴＳＡＭＡＴＧＹＶＫＶＩＦＦＣＬＧＬＣＹＧＡＮＴＦＦＨＡＡＫＡＹＩＥＧＹＨＴＶＰＫＧＲＣＲＱＶＶＴＧＭＡＷＬＦＦＶＳＷＧＭＦＰＩＬＦＩＬＧＰＥＧＦＧＶＬＳＶＹＧＳＴＶＧＨＴＩＩＤＬＭＳＫＮＣＷＧＬＬＧＨＹＬＲＶＬＩＨＥＨＩＬＩＨＧＤＩＲＫＴＴＫＬＮＩＧＧＴＥＩＥＶＥＴＬＶＥＤＥＳＥＡＧＳＶＮＫＧＴＧＫＴＰＡＲＷＶＷＩＳＬＹＹＡＡＦＹＶＶＭＴＧＬＦＡＬＣＩＹＶＬＭＱＴＩＭＡＥＬＩＳＳＡＴＲＳＬＦＡＡＧＧＩＮＰＷＰＮＰＹＨＨＥＤＭＧＣＧＧＭＴＰＴＧＥＣＦＳＴＥＷＷＣＤＰＳＹＧＬＳＤＡＧＹＧＹＣＦＶＥＡＴＧＧＹＬＶＶＧＶＥＫＫＱＡＷＬＨＳＲＧＴＰＧＥＫＩＧＡＱＶＣＱＷＩＡＦＳＩＡＩＡＬＬＴＦＹＧＦＳＡＷＫＡＴＣＧＷＥＥＶＹＶＣＣＶＥＶＬＦＶＴＬＥＩＦＫＥＦＳＳＰＡＴＶＹＬＳＴＧＮＨＡＹＣＬＲＹＦＥＷＬＬＳＣＰＶＩＬＩＲＬＳＮＬＳＧＬＫＮＤＹＳＫＲＴＭＧＬＩＶＳＣＶＧＭＩＶＦＧＭＡＡＧＬＡＴＤＷＬＫＷＬＬＹＩＶＳＣＩＹＧＧＹＭＹＦＱＡＡＫＣＹＶＥＡＮＨＳＶＰＫＧＨＣＲＭＶＶＫＬＭＡＹＡＹＦＡＳＷＧＳＹＰＩＬＷＡＶＧＰＥＧＬＬＫＬＳＰＹＡＮＳＩＧＨＳＩＣＥＩＩＡＫＥＦＷＴＦＬＡＨＨＬＲＩＫＩＨＥＨＩＬＩＨＧＤＩＲＫＴＴＫＭＥＩＧＧＥＥＶＥＶＥＥＦＶＥＥＥＤＥＤＴＶ（配列番号：５）
【００７９】
ヌクレオチド配列
ＡＴＧＧＡＴＴＡＣＧＧＡＧＧＡＧＣＡＣＴＧＡＧＣＧＣＴＧＴＴＧＧＣＣＧＣＧＡＧＴＴＧＣＴＡＴＴＴＧＴＧＡＣＣＡＡＣＣＣＣＧＴＣＧＴＧＧＴＣＡＡＴＧＧＣＡＧＣＧＴＣＣＴＴＧＴＧＣＣＴＧＡＧＧＡＴＣＡＡＴＧＴＴＡＴＴＧＣＧＣＴＧＧＧＴＧＧＡＴＴＧＡＡＴＣＣＣＧＡＧＧＴＡＣＡＡＡＴＧＧＴＧＣＣＣＡＧＡＣＧＧＣＡＡＧＣＡＡＣＧＴＴＴＴＧＣＡＡＴＧＧＣＴＡＧＣＡＧＣＴＧＧＧＴＴＴＴＣＡＡＴＴＣＴＡＣＴＴＴＴＡＡＴＧＴＴＴＴＡＣＧＣＴＴＡＴＣＡＡＡＣＣＴＧＧＡＡＧＡＧＴＡＣＡＴＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＧＧＡＡＡＴＴＴＡＴＧＴＣＴＧＣＧＣＴＡＴＴＧＡＡＡＴＧＧＴＴＡＡＡＧＴＡＡＴＴＴＴＧＧＡＡＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＡＴＴＴＡＡＧＡＡＴＣＣＡＴＣＡＡＴＧＴＴＧＴＡＴＣＴＴＧＣＣＡＣＡＧＧＴＣＡＣＡＧＧＧＴＣＣＡＡＴＧＧＣＴＣＣＧＡＴＡＣＧＣＧＧＡＡＴＧＧＣＴＴＣＴＡＡＣＴＴＧＣＣＣＴＧＴＴＡＴＴＴＣＣＡＴＴＣＡＣＣＴＡＡＧＣＡＡＴＣＴＧＡＣＴＧＧＣＣＴＴＴＣＧＡＡＴＧＡＣＴＡＴＡＧＣＡＧＡＣＧＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＣＴＧＴＴＡＧＴＴＡＧＴＧＡＣＡＴＡＧＧＧＡＣＴＡＴＡＧＴＴＴＧＧＧＧＴＧＣＣＡＣＴＡＧＣＧＣＣＡＴＧＧＣＧＡＣＣＧＧＴＴＡＴＧＴＴＡＡＡＧＴＡＡＴＴＴＴＴＴＴＣＴＧＣＣＴＴＧＧＧＴＴＧＴＧＴＴＡＴＧＧＣＧＣＴＡＡＣＡＣＴＴＴＴＴＴＣＣＡＣＧＣＴＧＣＴＡＡＡＧＣＡＴＡＴＡＴＡＧＡＡＧＧＧＴＡＣＣＡＴＡＣＧＧＴＧＣＣＣＡＡＡＧＧＡＡＧＡＴＧＴＣＧＣＣＡＡＧＴＡＧＴＴＡＣＡＧＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＣＴＧＴＴＣＴＴＴＧＴＧＡＧＣＴＧＧＧＧＧＡＴＧＴＴＣＣＣＴＡＴＡＣＴＧＴＴＴＡＴＣＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＡＧＧＧＴＴＴＴＧＧＡＧＴＣＣＴＡＡＧＣＧＴＧＴＡＣＧＧＣＡＧＴＡＣＴＧＴＴＧＧＧＣＡＴＡＣＴＡＴＡＡＴＡＧＡＴＴＴＧＡＴＧＡＧＣＡＡＡＡＡＣＴＧＣＴＧＧＧＧＧＣＴＴＣＴＣＧＧＧＣＡＴＴＡＴＴＴＡＣＧＡＧＴＴＣＴＴＡＴＴＣＡＣＧＡＡＣＡＴＡＴＴＴＴＡＡＴＴＣＡＴＧＧＧＧＡＴＡＴＣＡＧＡＡＡＡＡＣＡＡＣＧＡＡＡＣＴＡＡＡＴＡＴＡＧＧＡＧＧＣＡＣＧＧＡＡＡＴＡＧＡＧＧＴＴＧＡＡＡＣＧＣＴＣＧＴＣＧＡＡＧＡＣＧＡＡＴＣＡＧＡＧＧＣＣＧＧＣＴＣＣＧＴＧＡＡＴＡＡＧＧＧＡＡＣＴＧＧＴＡＡＡＡＣＴＣＣＴＧＣＴＣＧＣＴＧＧＧＴＡＴＧＧＡＴＡＴＣＧＣＴＴＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＣＡＴＴＴＴＡＣＧＴＡＧＴＴＡＴＧＡＣＴＧＧＧＣＴＴＴＴＴＧＣＴＴＴＧＴＧＣＡＴＡＴＡＣＧＴＧＣＴＡＡＴＧＣＡＧＡＣＧＡＴＴＡＴＧＧＣＴＧＡＧＣＴＡＡＴＴＴＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＴＡＧＡＴＣＣＣＴＴＴＴＣＧＣＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＡＴＣＡＡＣＣＣＣＴＧＧＣＣＣＡＡＴＣＣＡＴＡＴＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＡＴＡＴＧＧＧＣＴＧＴＧＧＣＧＧＴＡＴＧＡＣＣＣＣＡＡＣＴＧＧＴＧＡＧＴＧＣＴＴＴＴＣＴＡＣＣＧＡＡＴＧＧＴＧＧＴＧＴＧＡＴＣＣＧＡＧＴＴＡＣＧＧＴＣＴＧＴＣＡＧＡＴＧＣＴＧＧＧＴＡＴＧＧＴＴＡＴＴＧＣＴＴＴＧＴＣＧＡＡＧＣＣＡＣＧＧＧＧＧＧＡＴＡＣＣＴＴＧＴＣＧＴＣＧＧＡＧＴＡＧＡＧＡＡＡＡＡＡＣＡＧＧＣＣＴＧＧＣＴＣＣＡＴＴＣＣＣＧＧＧＧＧＡＣＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＡＡＧＡＴＡＧＧＧＧＣＣＣＡＡＧＴＴＴＧＣＣＡＧＴＧＧＡＴＣＧＣＡＴＴＴＡＧＴＡＴＴＧＣＧＡＴＣＧＣＡＴＴＡＣＴＧＡＣＡＴＴＣＴＡＴＧＧＴＴＴＣＴＣＡＧＣＧＴＧＧＡＡＧＧＣＡＡＣＣＴＧＣＧＧＣＴＧＧＧＡＧＧＡＧＧＴＴＴＡＣＧＴＡＴＧＣＴＧＴＧＴＴＧＡＧＧＴＡＣＴＧＴＴＣＧＴＡＡＣＣＣＴＴＧＡＧＡＴＴＴＴＣＡＡＡＧＡＧＴＴＴＴＣＴＴＣＴＣＣＧＧＣＧＡＣＧＧＴＣＴＡＴＣＴＣＡＧＴＡＣＣＧＧＴＡＡＣＣＡＴＧＣＡＴＡＴＴＧＴＴＴＡＣＧＴＴＡＴＴＴＣＧＡＡＴＧＧＴＴＧＣＴＴＴＣＴＴＧＣＣＣＡＧＴＧＡＴＴＴＴＧＡＴＡＣＧＣＴＴＧＡＧＴＡＡＴＴＴＡＴＣＴＧＧＣＣＴＡＡＡＧＡＡＣＧＡＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＧＡＡＣＣＡＴＧＧＧＡＣＴＴＡＴＴＧＴＡＴＣＴＴＧＴＧＴＴＧＧＣＡＴＧＡＴＡＧＴＴＴＴＴＧＧＴＡＴＧＧＣＡＧＣＣＧＧＧＣＴＣＧＣＣＡＣＴＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＧＴＧＧＴＴＧＣＴＣＴＡＴＡＴＡＧＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＴＴＡＴＧＧＴＧＧＣＴＡＣＡＴＧＴＡＣＴＴＴＣＡＧＧＣＧＧＣＣＡＡＧＴＧＴＴＡＣＧＴＴＧＡＡＧＣＡＡＡＣＣＡＴＴＣＧＧＴＡＣＣＴＡＡＡＧＧＡＣＡＴＴＧＣＣＧＴＡＴＧＧＴＡＧＴＴＡＡＧＣＴＧＡＴＧＧＣＧＴＡＴＧＣＧＴＡＣＴＴＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＧＣＡＧＣＴＡＣＣＣＣＡＴＴＣＴＧＴＧＧＧＣＧＧＴＧＧＧＡＣＣＡＧＡＧＧＧＧＴＴＡＣＴＴＡＡＧＴＴＧＴＣＧＣＣＣＴＡＴＧＣＴＡＡＴＴＣＡＡＴＡＧＧＣＣＡＴＡＧＣＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＴＴＡＴＣＧＣＧＡＡＧＧＡＡＴＴＴＴＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＧＣＡＣＡＴＣＡＣＣＴＴＣＧＡＡＴＴＡＡＡＡＴＡＣＡＣＧＡＡＣＡＣＡＴＡＣＴＣＡＴＴＣＡＣＧＧＧＧＡＣＡＴＡＣＧＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣＡＡＧＡＴＧＧＡＡＡＴＣＧＧＡＧＧＴＧＡＧＧＡＡＧＴＧＧＡＡＧＴＡＧＡＧＧＡＧＴＴＴＧＴＡＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＴＴ（配列番号：６）
【００８０】
表０４：多特性オプシン−２Ｔ（ＭＣＯ２Ｔ）のアミノ酸及びＤＮＡ配列。これは、ＭＣＯ２の３０８個のアミノ酸残基（表−０２）の後の追加の膜貫通配列（ＴＰＡＲＷＶＷＩＳＬＹＹＡＡＦＹＶＶＭＴＧＬＦＡＬＣＩＹＶＬＭＱＴＩ）を含有する。
アミノ酸配列：
ＭＤＹＧＧＡＬＳＡＶＧＲＥＬＬＦＶＴＮＰＶＶＶＮＧＳＶＬＶＰＥＤＱＣＹＣＡＧＷＩＥＳＲＧＴＮＧＡＱＴＡＳＮＶＬＱＷＬＡＡＧＦＳＩＬＬＬＭＦＹＡＹＱＴＷＫＳＴＣＧＷＥＥＩＹＶＣＡＩＥＭＶＫＶＩＬＥＦＦＦＥＦＫＮＰＳＭＬＹＬＡＴＧＨＲＶＱＷＬＲＹＡＥＷＬＬＴＣＰＶＩＬＩＨＬＳＮＬＴＧＬＳＮＤＹＳＲＲＴＭＧＬＬＶＳＤＩＧＴＩＶＷＧＡＴＳＡＭＡＴＧＹＶＫＶＩＦＦＣＬＧＬＣＹＧＡＮＴＦＦＨＡＡＫＡＹＩＥＧＹＨＴＶＰＫＧＲＣＲＱＶＶＴＧＭＡＷＬＦＦＶＳＷＧＭＦＰＩＬＦＩＬＧＰＥＧＦＧＶＬＳＶＹＧＳＴＶＧＨＴＩＩＤＬＭＳＫＮＣＷＧＬＬＧＨＹＬＲＶＬＩＨＥＨＩＬＩＨＧＤＩＲＫＴＴＫＬＮＩＧＧＴＥＩＥＶＥＴＬＶＥＤＥＳＥＡＧＳＰＡＲＷＶＷＩＳＬＹＹＡＡＦＹＶＶＭＴＧＬＦＡＬＣＩＹＶＬＭＱＴＩＭＡＥＬＩＳＳＡＴＲＳＬＦＡＡＧＧＩＮＰＷＰＮＰＹＨＨＥＤＭＧＣＧＧＭＴＰＴＧＥＣＦＳＴＥＷＷＣＤＰＳＹＧＬＳＤＡＧＹＧＹＣＦＶＥＡＴＧＧＹＬＶＶＧＶＥＫＫＱＡＷＬＨＳＲＧＴＰＧＥＫＩＧＡＱＶＣＱＷＩＡＦＳＩＡＩＡＬＬＴＦＹＧＦＳＡＷＫＡＴＣＧＷＥＥＶＹＶＣＣＶＥＶＬＦＶＴＬＥＩＦＫＥＦＳＳＰＡＴＶＹＬＳＴＧＮＨＡＹＣＬＲＹＦＥＷＬＬＳＣＰＶＩＬＩＲＬＳＮＬＳＧＬＫＮＤＹＳＫＲＴＭＧＬＩＶＳＣＶＧＭＩＶＦＧＭＡＡＧＬＡＴＤＷＬＫＷＬＬＹＩＶＳＣＩＹＧＧＹＭＹＦＱＡＡＫＣＹＶＥＡＮＨＳＶＰＫＧＨＣＲＭＶＶＫＬＭＡＹＡＹＦＡＳＷＧＳＹＰＩＬＷＡＶＧＰＥＧＬＬＫＬＳＰＹＡＮＳＩＧＨＳＩＣＥＩＩＡＫＥＦＷＴＦＬＡＨＨＬＲＩＫＩＨＥＨＩＬＩＨＧＤＩＲＫＴＴＫＭＥＩＧＧＥＥＶＥＶＥＥＦＶＥＥＥＤＥＤＴＶ（配列番号：７）
【００８１】
ヌクレオチド配列：
ＡＴＧＧＡＣＴＡＴＧＧＡＧＧＡＧＣＡＣＴＧＴＣＡＧＣＣＧＴＴＧＧＧＡＧＡＧＡＧＴＴＧＴＴＧＴＴＴＧＴＴＡＣＣＡＡＴＣＣＴＧＴＡＧＴＡＧＴＣＡＡＴＧＧＣＡＧＴＧＴＧＣＴＴＧＴＡＣＣＡＧＡＧＧＡＴＣＡＡＴＧＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＧＧＧＴＧＧＡＴＡＧＡＧＴＣＣＣＧＧＧＧＡＡＣＣＡＡＣＧＧＧＧＣＡＣＡＡＡＣＴＧＣＧＡＧＴＡＡＣＧＴＴＣＴＧＣＡＡＴＧＧＣＴＡＧＣＡＧＣＡＧＧＣＴＴＴＡＧＣＡＴＡＣＴＧＣＴＡＣＴＡＡＴＧＴＴＣＴＡＴＧＣＴＴＡＣＣＡＡＡＣＡＴＧＧＡＡＧＴＣＧＡＣＴＴＧＣＧＧＧＴＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＡＴＡＣＧＴＣＴＧＣＧＣＡＡＴＴＧＡＡＡＴＧＧＴＣＡＡＧＧＴＴＡＴＴＣＴＣＧＡＧＴＴＣＴＴＣＴＴＣＧＡＡＴＴＣＡＡＡＡＡＣＣＣＡＴＣＡＡＴＧＴＴＡＴＡＣＴＴＡＧＣＧＡＣＡＧＧＡＣＡＴＣＧＡＧＴＣＣＡＧＴＧＧＴＴＡＣＧＴＴＡＣＧＣＣＧＡＧＴＧＧＣＴＣＣＴＧＡＣＧＴＧＣＣＣＧＧＴＡＡＴＴＴＴＡＡＴＣＣＡＣＣＴＣＴＣＴＡＡＴＴＴＧＡＣＣＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＡＴＧＡＴＴＡＣＡＧＴＣＧＡＡＧＡＡＣＴＡＴＧＧＧＧＣＴＡＴＴＡＧＴＣＴＣＴＧＡＣＡＴＣＧＧＧＡＣＴＡＴＴＧＴＣＴＧＧＧＧＴＧＣＧＡＣＴＡＧＣＧＣＴＡＴＧＧＣＴＡＣＣＧＧＧＴＡＴＧＴＡＡＡＡＧＴＣＡＴＣＴＴＣＴＴＣＴＧＴＴＴＡＧＧＡＣＴＧＴＧＣＴＡＣＧＧＣＧＣＧＡＡＴＡＣＡＴＴＣＴＴＴＣＡＣＧＣＴＧＣＧＡＡＡＧＣＴＴＡＴＡＴＴＧＡＡＧＧＣＴＡＴＣＡＣＡＣＴＧＴＡＣＣＴＡＡＡＧＧＴＣＧＧＴＧＴＡＧＧＣＡＧＧＴＣＧＴＣＡＣＣＧＧＴＡＴＧＧＣＧＴＧＧＴＴＧＴＴＣＴＴＣＧＴＡＴＣＡＴＧＧＧＧＡＡＴＧＴＴＴＣＣＡＡＴＣＴＴＧＴＴＴＡＴＡＣＴＡＧＧＴＣＣＣＧＡＡＧＧＡＴＴＴＧＧＡＧＴＧＴＴＧＴＣＣＧＴＴＴＡＣＧＧＡＴＣＡＡＣＡＧＴＡＧＧＣＣＡＣＡＣＴＡＴＴＡＴＣＧＡＴＴＴＧＡＴＧＴＣＴＡＡＡＡＡＣＴＧＣＴＧＧＧＧＧＣＴＴＴＴＡＧＧＴＣＡＣＴＡＴＣＴＡＡＧＧＧＴＧＣＴＣＡＴＴＣＡＴＧＡＧＣＡＣＡＴＡＴＴＡＡＴＣＣＡＴＧＧＣＧＡＴＡＴＣＡＧＡＡＡＧＡＣＧＡＣＧＡＡＡＣＴＧＡＡＴＡＴＴＧＧＡＧＧＣＡＣＴＧＡＧＡＴＣＧＡＡＧＴＡＧＡＧＡＣＧＣＴＴＧＴＣＧＡＡＧＡＣＧＡＡＴＣＣＧＡＡＧＣＴＧＧＴＡＧＣＣＣＣＧＣＡＣＧＣＴＧＧＧＴＣＴＧＧＡＴＡＴＣＴＴＴＧＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＣＣＴＴＣＴＡＴＧＴＴＧＴＴＡＴＧＡＣＡＧＧＡＣＴＣＴＴＴＧＣＴＴＴＡＴＧＣＡＴＣＴＡＴＧＴＣＣＴＡＡＴＧＣＡＡＡＣＴＡＴＴＡＴＧＧＣＴＧＡＡＣＴＴＡＴＡＴＣＡＴＣＧＧＣＡＡＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＡＴＴＴＧＣＧＧＣＴＧＧＧＧＧＡＡＴＡＡＡＴＣＣＧＴＧＧＣＣＣＡＡＣＣＣＣＴＡＣＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＡＴＡＴＧＧＧＴＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＴＧＡＣＣＣＣＧＡＣＡＧＧＧＧＡＡＴＧＣＴＴＣＴＣＧＡＣＧＧＡＧＴＧＧＴＧＧＴＧＴＧＡＴＣＣＴＴＣＴＴＡＴＧＧＡＣＴＧＡＧＴＧＡＴＧＣＴＧＧＧＴＡＴＧＧＣＴＡＴＴＧＣＴＴＣＧＴＡＧＡＧＧＣＴＡＣＧＧＧＧＧＧＧＴＡＣＴＴＧＧＴＣＧＴＴＧＧＡＧＴＣＧＡＧＡＡＡＡＡＡＣＡＧＧＣＡＴＧＧＴＴＡＣＡＴＡＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＴＣＣＴＧＧＡＧＡＧＡＡＡＡＴＡＧＧＴＧＣＣＣＡＧＧＴＴＴＧＴＣＡＡＴＧＧＡＴＴＧＣＴＴＴＣＴＣＧＡＴＴＧＣＡＡＴＡＧＣＴＣＴＧＴＴＡＡＣＧＴＴＣＴＡＴＧＧＧＴＴＣＴＣＣＧＣＧＴＧＧＡＡＧＧＣＴＡＣＴＴＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＡＧＡＧＧＴＡＴＡＴＧＴＴＴＧＴＴＧＴＧＴＴＧＡＡＧＴＴＣＴＡＴＴＴＧＴＡＡＣＡＣＴＴＧＡＧＡＴＡＴＴＴＡＡＡＧＡＡＴＴＴＴＣＴＴＣＡＣＣＣＧＣＡＡＣＧＧＴＣＴＡＣＴＴＡＡＧＴＡＣＡＧＧＣＡＡＴＣＡＴＧＣＡＴＡＣＴＧＴＣＴＡＡＧＡＴＡＣＴＴＣＧＡＡＴＧＧＣＴＣＴＴＡＴＣＡＴＧＴＣＣＧＧＴＧＡＴＣＴＴＡＡＴＴＣＧＡＣＴＣＴＣＧＡＡＣＣＴＣＴＣＴＧＧＡＣＴＣＡＡＧＡＡＴＧＡＣＴＡＴＡＧＴＡＡＧＡＧＧＡＣＴＡＴＧＧＧＡＣＴＣＡＴＴＧＴＧＴＣＧＴＧＣＧＴＴＧＧＴＡＴＧＡＴＴＧＴＧＴＴＴＧＧＴＡＴＧＧＣＧＧＣＡＧＧＧＣＴＧＧＣＴＡＣＧＧＡＣＴＧＧＣＴＡＡＡＧＴＧＧＣＴＧＣＴＡＴＡＴＡＴＡＧＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＴＡＴＧＧＣＧＧＴＴＡＣＡＴＧＴＡＴＴＴＣＣＡＧＧＣＧＧＣＣＡＡＧＴＧＴＴＡＴＧＴＣＧＡＧＧＣＧＡＡＴＣＡＣＴＣＧＧＴＣＣＣＣＡＡＡＧＧＴＣＡＴＴＧＴＣＧＧＡＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＧＣＴＴＡＴＧＧＣＧＴＡＣＧＣＡＴＡＴＴＴＣＧＣＣＡＧＣＴＧＧＧＧＡＴＣＧＴＡＣＣＣＧＡＴＡＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＴＴＧＧＣＣＣＡＧＡＡＧＧＧＣＴＡＣＴＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＧＴＡＣＧＣＣＡＡＴＴＣＡＡＴＴＧＧＧＣＡＴＡＧＴＡＴＣＴＧＴＧＡＧＡＴＡＡＴＴＧＣＴＡＡＧＧＡＧＴＴＴＴＧＧＡＣＧＴＴＴＴＴＡＧＣＴＣＡＣＣＡＴＣＴＧＡＧＡＡＴＴＡＡＧＡＴＴＣＡＴＧＡＧＣＡＣＡＴＣＴＴＡＡＴＴＣＡＣＧＧＧＧＡＴＡＴＣＣＧＣＡＡＧＡＣＴＡＣＣＡＡＧＡＴＧＧＡＧＡＴＡＧＧＴＧＧＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＡＧＡＡＧＡＧＴＴＴＧＴＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＡＴＧＡＡＧＡＴＡＣＴＧＴＡ（配列番号：８）
【００８２】
表０５：一例として特定の細胞を標的化するためにＭＣＯ配列の上流で使用されるプロモーター（ｍＧｌｕＲ６ｍ）のＤＮＡ配列。
ＣＡＧＧＧＮＮＧＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＧＡＴＣＴＣＣＡＧＡＴＧＧＣＴＡＡＡＣＴＴＴＴＡＡＡＴＣＡＴＧＡＡＴＧＡＡＧＴＡＧＡＴＡＴＴＡＣＣＡＡＡＴＴＧＣＴＴＴＴＴＣＡＧＣＡＴＣＣＡＴＴＴＡＧＡＴＡＡＴＣＡＴＧＴＴＴＴＴＴＧＣＣＴＴＴＡＡＴＣＴＧＴＴＡＡＴＧＴＡＧＴＧＡＡＴＴＡＣＡＧＡＡＡＴＡＣＡＴＴＴＣＣＴＡＡＡＴＣＡＴＴＡＣＡＴＣＣＣＣＣＡＡＡＴＣＧＴＴＡＡＴＣ  ＴＧＣＴＡＡＡＧＴＡＣＡ（配列番号：９）
【００８３】
表０６：一例として特定の細胞における発現を確認するためにＭＣＯ配列の下流で使用されるレポーター安定化（ｍＣｈｅｒｒｙ）のＤＮＡ配列。
ＡＴＧＧＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＣＡＴＧＣＧＣＴＴＣＡＡＧＧＴＧＣＡＣＡＴＧＧＡＧＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＣＧＧＣＣＣＧＡＧＴＴＣＧＡＧＡＴＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＣＧＣＣＣＣＴＡＣＧＡＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＧＣＣＡＡＧＣＴＧＡＡＧＧＴＧＡＣＣＡＡＧＧＧＴＧＧＣＣＣＣＣＴＧＣＣＣＴＴＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＴＣＣＴＧＴＣＣＣＣＴＣＡＧＴＴＣＡＴＧＴＡＣＧＧＣＴＣＣＡＡＧＧＣＣＴＡＣＧＴＧＡＡＧＣＡＣＣＣＣＧＣＣＧＡＣＡＴＣＣＣＣＧＡＣＴＡＣＴＴＧＡＡＧＣＴＧＴＣＣＴＴＣＣＣＣＧＡＧＧＧＣＴＴＣＡＡＧＴＧＧＧＡＧＣＧＣＧＴＧＡＴＧＡＡＣＴＴＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＧＡＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＧＡＣＧＧＣＧＡＧＴＴＣＡＴＣＴＡＣＡＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＣＣＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＣＣＣＧＴＡＡＴＧＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＣＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＧＡＧＧＣＣＴＣＣＴＣＣＧＡＧＣＧＧＡＴＧＴＡＣＣＣＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＡＧＧＧＣＧＡＧＡＴＣＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＣＧＧＣＧＧＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＡＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＣＣＴＡＣＡＡＣＧＴＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧＴＴＧＧＡＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＣＡＣＡＡＣＧＡＧＧＡＣＴＡＣＡＣＣＡＴＣＧＴＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＧＡＡＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＧＣＣＧＣＣＡＣＴＣＣＡＣＣＧＧＣＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＴＡＣＡＡＧ  ＴＡＡ（配列番号：１０）
【００８４】
表０７：増強型多特性オプシン−１（ｅ−ＭＣＯ１）のアミノ酸及びＤＮＡ配列。これは、連結配列を有するＭＣＯ１配列（表０１）及びバイオマーカー安定剤配列（表０６）を含有する。
アミノ酸配列：
ＭＤＹＧＧＡＬＳＡＶＧＲＥＬＬＦＶＴＮＰＶＶＶＮＧＳＶＬＶＰＥＤＱＣＹＣＡＧＷＩＥＳＲＧＴＮＧＡＱＴＡＳＮＶＬＱＷＬＡＡＧＦＳＩＬＬＬＭＦＹＡＹＱＴＷＫＳＴＣＧＷＥＥＩＹＶＣＡＩＥＭＶＫＶＩＬＥＦＦＦＥＦＫＮＰＳＭＬＹＬＡＴＧＨＲＶＱＷＬＲＹＡＥＷＬＬＴＣＰＶＩＣＩＨＬＳＮＬＴＧＬＳＮＤＹＳＲＲＴＭＧＬＬＶＳＤＩＧＴＩＶＷＧＡＴＳＡＭＡＴＧＹＶＫＶＩＦＦＣＬＧＬＣＹＧＡＮＴＦＦＨＡＡＫＡＹＩＥＧＹＨＴＶＰＫＧＲＣＲＱＶＶＴＧＭＡＷＬＦＦＶＳＷＧＭＦＰＩＬＦＩＬＧＰＥＧＦＧＶＬＳＶＹＧＳＴＶＧＨＴＩＩＤＬＭＳＫＮＣＷＧＬＬＧＨＹＬＲＶＬＩＨＥＨＩＬＩＨＧＤＩＲＫＴＴＫＬＮＩＧＧＴＥＩＥＶＥＴＬＶＥＤＥＡＥＡＧＡＶＮＫＧＴＧＫＭＡＥＬＩＳＳＡＴＲＳＬＦＡＡＧＧＩＮＰＷＰＮＰＹＨＨＥＤＭＧＣＧＧＭＴＰＴＧＥＣＦＳＴＥＷＷＣＤＰＳＹＧＬＳＤＡＧＹＧＹＣＦＶＥＡＴＧＧＹＬＶＶＧＶＥＫＫＱＡＷＬＨＳＲＧＴＰＧＥＫＩＧＡＱＶＣＱＷＩＡＦＳＩＡＩＡＬＬＴＦＹＧＦＳＡＷＫＡＴＣＧＷＥＥＶＹＶＣＣＶＥＶＬＦＶＴＬＥＩＦＫＥＦＳＳＰＡＴＶＹＬＳＴＧＮＨＡＹＣＬＲＹＦＥＷＬＬＳＣＰＶＩＬＩＲＬＳＮＬＳＧＬＫＮＤＹＳＫＲＴＭＧＬＩＶＳＣＶＧＭＩＶＦＧＭＡＡＧＬＡＴＤＷＬＫＷＬＬＹＩＶＳＣＩＹＧＧＹＭＹＦＱＡＡＫＣＹＶＥＡＮＨＳＶＰＫＧＨＣＲＭＶＶＫＬＭＡＹＡＹＦＡＳＷＧＳＹＰＩＬＷＡＶＧＰＥＧＬＬＫＬＳＰＹＡＮＳＩＧＨＳＩＣＤＩＩＡＫＥＦＷＴＦＬＡＨＨＬＲＩＫＩＨＥＨＩＬＩＨＧＤＩＲＫＴＴＫＭＥＩＧＧＥＥＶＥＶＥＥＦＶＥＥＥＤＥＤＴＶＶＳＫＧＥＥＤＮＭＡＩＩＫＥＦＭＲＦＫＶＨＭＥＧＳＶＮＧＨＥＦＥＩＥＧＥＧＥＧＲＰＹＥＧＴＱＴＡＫＬＫＶＴＫＧＧＰＬＰＦＡＷＤＩＬＳＰＱＦＭＹＧＳＫＡＹＶＫＨＰＡＤＩＰＤＹＬＫＬＳＦＰＥＧＦＫＷＥＲＶＭＮＦＥＤＧＧＶＶＴＶＴＱＤＳＳＬＱＤＧＥＦＩＹＫＶＫＬＲＧＴＮＦＰＳＤＧＰＶＭＱＫＫＴＭＧＷＥＡＳＳＥＲＭＹＰＥＤＧＡＬＫＧＥＩＫＱＲＬＫＬＫＤＧＧＨＹＤＡＥＶＫＴＴＹＫＡＫＫＰＶＱＬＰＧＡＹＮＶＮＩＫＬＤＩＴＳＨＮＥＤＹＴＩＶＥＱＹＥＲＡＥＧＲＨＳＴＧＧＭＤＥＬＹＫ（配列番号：１１）
【００８５】
ヌクレオチド配列：
ＡＴＧＧＡＴＴＡＴＧＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＧＡＧＣＧＣＧＧＴＧＧＧＣＣＧＣＧＡＡＣＴＧＣＴＧＴＴＴＧＴＧＡＣＣＡＡＣＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＡＡＣＧＧＣＡＧＣＧＴＧＣＴＧＧＴＧＣＣＧＧＡＡＧＡＴＣＡＧＴＧＣＴＡＴＴＧＣＧＣＧＧＧＣＴＧＧＡＴＴＧＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＣＧＧＣＧＣＧＣＡＧＡＣＣＧＣＧＡＧＣＡＡＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＧＧＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＧＣＴＴＴＡＧＣＡＴＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＴＧＴＴＴＴＡＴＧＣＧＴＡＴＣＡＧＡＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＣＡＣＣＴＧＣＧＧＣＴＧＧＧＡＡＧＡＡＡＴＴＴＡＴＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＴＴＧＡＡＡＴＧＧＴＧＡＡＡＧＴＧＡＴＴＣＴＧＧＡＡＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＡＴＴＴＡＡＡＡＡＣＣＣＧＡＧＣＡＴＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＧＣＧＡＣＣＧＧＣＣＡＴＣＧＣＧＴＧＣＡＧＴＧＧＣＴＧＣＧＣＴＡＴＧＣＧＧＡＡＴＧＧＣＴＧＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＣＧＧＴＧＡＴＴＴＧＣＡＴＴＣＡＴＣＴＧＡＧＣＡＡＣＣＴＧＡＣＣＧＧＣＣＴＧＡＧＣＡＡＣＧＡＴＴＡＴＡＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＡＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＧＴＧＡＧＣＧＡＴＡＴＴＧＧＣＡＣＣＡＴＴＧＴＧＴＧＧＧＧＣＧＣＧＡＣＣＡＧＣＧＣＧＡＴＧＧＣＧＡＣＣＧＧＣＴＡＴＧＴＧＡＡＡＧＴＧＡＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＴＧＣＴＡＴＧＧＣＧＣＧＡＡＣＡＣＣＴＴＴＴＴＴＣＡＴＧＣＧＧＣＧＡＡＡＧＣＧＴＡＴＡＴＴＧＡＡＧＧＣＴＡＴＣＡＴＡＣＣＧＴＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＣＴＧＣＣＧＣＣＡＧＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＧＣＡＴＧＧＣＧＴＧＧＣＴＧＴＴＴＴＴＴＧＴＧＡＧＣＴＧＧＧＧＣＡＴＧＴＴＴＣＣＧＡＴＴＣＴＧＴＴＴＡＴＴＣＴＧＧＧＣＣＣＧＧＡＡＧＧＣＴＴＴＧＧＣＧＴＧＣＴＧＡＧＣＧＴＧＴＡＴＧＧＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＧＧＣＣＡＴＡＣＣＡＴＴＡＴＴＧＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＡＡＡＡＣＴＧＣＴＧＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＧＧＣＣＡＴＴＡＴＣＴＧＣＧＣＧＴＧＣＴＧＡＴＴＣＡＴＧＡＡＣＡＴＡＴＴＣＴＧＡＴＴＣＡＴＧＧＣＧＡＴＡＴＴＣＧＣＡＡＡＡＣＣＡＣＣＡＡＡＣＴＧＡＡＣＡＴＴＧＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＡＡＴＴＧＡＡＧＴＧＧＡＡＡＣＣＣＴＧＧＴＧＧＡＡＧＡＴＧＡＡＧＣＧＧＡＡＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＴＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＡＣＣＧＧＣＡＡＡＡＴＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧＣＧＣＣＡＣＣＡＧＡＴＣＴＣＴＧＴＴＴＧＣＣＧＣＣＧＧＡＧＧＣＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＧＧＣＣＴＡＡＣＣＣＣＴＡＣＣＡＣＣＡＣＧＡＧＧＡＣＡＴＧＧＧＣＴＧＴＧＧＡＧＧＡＡＴＧＡＣＡＣＣＴＡＣＡＧＧＣＧＡＧＴＧＣＴＴＣＡＧＣＡＣＣＧＡＧＴＧＧＴＧＧＴＧＴＧＡＣＣＣＴＴＣＴＴＡＣＧＧＡＣＴＧＡＧＣＧＡＣＧＣＣＧＧＡＴＡＣＧＧＡＴＡＴＴＧＣＴＴＣＧＴＧＧＡＧＧＣＣＡＣＡＧＧＣＧＧＣＴＡＣＣＴＧＧＴＣＧＴＧＧＧＡＧＴＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＣＡＧＣＡＧＡＧＧＣＡＣＡＣＣＡＧＧＡＧＡＡＡＡＧＡＴＣＧＧＣＧＣＣＣＡＧＧＴＣＴＧＣＣＡＧＴＧＧＡＴＴＧＣＴＴＴＣＡＧＣＡＴＣＧＣＣＡＴＣＧＣＣＣＴＧＣＴＧＡＣＡＴＴＣＴＡＣＧＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＴＧＧＡＡＧＧＣＣＡＣＴＴＧＣＧＧＴＴＧＧＧＡＧＧＡＧＧＴＣＴＡＣＧＴＣＴＧＴＴＧＣＧＴＣＧＡＧＧＴＧＣＴＧＴＴＣＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＴＣＴＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＣＣＣＣＧＣＣＡＣＡＧＴＧＴＡＣＣＴＧＴＣＴＡＣＣＧＧＣＡＡＣＣＡＣＧＣＣＴＡＴＴＧＣＣＴＧＣＧＣＴＡＣＴＴＣＧＡＧＴＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣＴＴＧＣＣＣＣＧＴＧＡＴＣＣＴＧＡＴＣＡＧＡＣＴＧＡＧＣＡＡＣＣＴＧＡＧＣＧＧＣＣＴＧＡＡＧＡＡＣＧＡＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＧＧＡＣＣＡＴＧＧＧＣＣＴＧＡＴＣＧＴＧＴＣＴＴＧＣＧＴＧＧＧＡＡＴＧＡＴＣＧＴＧＴＴＣＧＧＣＡＴＧＧＣＣＧＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＡＣＣＧＡＴＴＧＧＣＴＣＡＡＧＴＧＧＣＴＧＣＴＧＴＡＴＡＴＣＧＴＧＴＣＴＴＧＣＡＴＣＴＡＣＧＧＣＧＧＣＴＡＣＡＴＧＴＡＣＴＴＣＣＡＧＧＣＣＧＣＣＡＡＧＴＧＣＴＡＣＧＴＧＧＡＡＧＣＣＡＡＣＣＡＣＡＧＣＧＴＧＣＣＴＡＡＡＧＧＣＣＡＴＴＧＣＣＧＣＡＴＧＧＴＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＡＴＧＧＣＣＴＡＣＧＣＴＴＡＣＴＴＣＧＣＣＴＣＴＴＧＧＧＧＣＡＧＣＴＡＣＣＣＡＡＴＣＣＴＣＴＧＧＧＣＡＧＴＧＧＧＡＣＣＡＧＡＡＧＧＡＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣＣＣＴＴＡＣＧＣＣＡＡＣＡＧＣＡＴＣＧＧＣＣＡＣＡＧＣＡＴＣＴＧＣＧＡＣＡＴＣＡＴＣＧＣＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＴＧＧＡＣＣＴＴＣＣＴＧＧＣＣＣＡＣＣＡＣＣＴＧＡＧＧＡＴＣＡＡＧＡＴＣＣＡＣＧＡＧＣＡＣＡＴＣＣＴＧＡＴＣＣＡＣＧＧＣＧＡＣＡＴＣＣＧＧＡＡＧＡＣＣＡＣＣＡＡＧＡＴＧＧＡＧＡＴＣＧＧＡＧＧＣＧＡＧＧＡＧＧＴＧＧＡＡＧＴＧＧＡＡＧＡＧＴＴＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＣＧＡＧＧＡＣＡＣＡＧＴＧＧＴＧＡＧＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧＧＡＴＡＡＣＡＴＧＧＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＣＡＴＧＣＧＣＴＴＣＡＡＧＧＴＧＣＡＣＡＴＧＧＡＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＡＡＣＧＧＣＣＡＣＧＡＧＴＴＣＧＡＧＡＴＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＣＧＣＣＣＣＴＡＣＧＡＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＧＣＣＡＡＧＣＴＧＡＡＧＧＴＧＡＣＣＡＡＧＧＧＴＧＧＣＣＣＣＣＴＧＣＣＣＴＴＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＴＣＣＴＧＴＣＣＣＣＴＣＡＧＴＴＣＡＴＧＴＡＣＧＧＣＴＣＣＡＡＧＧＣＣＴＡＣＧＴＧＡＡＧＣＡＣＣＣＣＧＣＣＧＡＣＡＴＣＣＣＣＧＡＣＴＡＣＴＴＧＡＡＧＣＴＧＴＣＣＴＴＣＣＣＣＧＡＧＧＧＣＴＴＣＡＡＧＴＧＧＧＡＧＣＧＣＧＴＧＡＴＧＡＡＣＴＴＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＧＡＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＧＡＣＧＧＣＧＡＧＴＴＣＡＴＣＴＡＣＡＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＣＣＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＣＣＣＧＴＡＡＴＧＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＣＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＧＡＧＧＣＣＴＣＣＴＣＣＧＡＧＣＧＧＡＴＧＴＡＣＣＣＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＡＧＧＧＣＧＡＧＡＴＣＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＣＧＧＣＧＧＣＣＡＣＴＡＣＧＡＣＧＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＡＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＧＣＣＣＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＣＣＴＡＣＡＡＣＧＴＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧＴＴＧＧＡＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＣＡＣＡＡＣＧＡＧＧＡＣＴＡＣＡＣＣＡＴＣＧＴＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＧＡＡＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＧＣＣＧＣＣＡＣＴＣＣＡＣＣＧＧＣＧＧＣＡＴＧＧＡ  Ｃ  ＧＡＧＣＴＧＴＡＣＡＡＧＴＡＡ（配列番号：１２）
【００８６】
【表１】
2019535255.tif 000002
【００８７】
「１つ（a）」及び「１つ（an）」という用語は、本開示が明示的に他の意味であることを必要としていない限り、１つ以上であると定義される。用語「実質的に」は、当業者に理解されるように、必ずしも完全ではないが大部分は指定されているもの（及び指定されているものを含む、例えば、実質的に９０度は９０度を含み、実質的に平行は平行を含む）として定義される。任意の開示される実施形態では、「実質的に」、「おおよそ」、「約」という用語は、明記されているものの「〜［パーセント］以内に」と置き換えられてもよく、このパーセントは、０．１％、１％、５％、１０％を含む。
【００８８】
更に、特定の様式で構成される分子又は方法は、少なくともその様式で構成されるが、具体的に開示されるもの以外の様式で構成されてもよい。
【００８９】
「〜を含む（comprise）」（及び含む（comprise）の任意の形態、例えば、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」及び「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」）、「〜を有する（have）」（及び有する（have）の任意の形態、例えば、「ｈａｓ」及び「ｈａｖｉｎｇ」）、「〜を含む（include）」（及び含む（include）の任意の形態、例えば、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ」及び「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」）及び「〜を含有する（contain）」（及び含有する（contain）の任意の形態、例えば、「ｃｏｎｔａｉｎｓ」及び「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ」）との用語は、包括的な接続動詞である。結果として、１つ以上の要素「〜を含む（comprises）」、「〜を有する（has）」、「〜を含む（includes）」又は「〜を含有する（contains）」装置は、１つ以上の要素を含むが、１つ以上の要素のみを有することに限定されない。同様に、１つ以上の工程「〜を含む（comprises）」、「〜を有する（has）」、「〜を含む（includes）」又は「〜を含有する（contains）」方法は、１つ以上の工程を含むが、１つ以上の工程のみを有することに限定されない。
【００９０】
装置、システム及び方法のいずれかの実施形態が、記載されている工程、構成要素及び／又は特徴のいずれかを含む（comprise）／含む（include）／含有する／有するのではなく、これらからなるか、又は本質的にこれらからなっていてもよい。したがって、特許請求の範囲のいずれかにおいて、「〜からなる」又は「本質的に〜からなる」は、その他の様式で包括的な接続動詞を用いる所与の特許請求の範囲を変えるために、上に引用した包括的な任意の接続動詞で置き換えることができる。
【００９１】
記載されておらず、示されていない場合であっても、本開示によって明示的に禁止されていない限り、又は実施形態の性質から明示的に禁止されていない限り、ある実施形態の１つ以上の特徴を他の実施形態に適用してもよい。以下、ここに開示する発明を、単なる説明のために与えられる実施例として更に記載するが、したがって、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。
【００９２】
いくつかの参考文献は、刊行物、特許及び特許明細書を含んでいてもよく、
本発明の記載に引用され、記載されている。このような参考文献の引用及び／又は説明は、単に、本発明の説明を明確にするために与えられており、このような任意の参考文献が、本明細書に記載する本発明の「従来技術」であることを認めたものではない。本明細書で引用され、記載される全ての参考文献は、その全体が本明細書に参考として組み込まれ、それぞれの参考文献が、個々に参考として組み込まれるのと同じ程度まで、組み込まれる。
【００９３】
本明細書及び実施例は、実例となる実施形態の構造及び使用の完全な説明を与える。特定の具体性をもって、又は１つ以上の個々の実施形態を参照しつつ、特定の実施形態を記載してきたが、当業者は、本発明の範囲から逸脱することなく、開示された実施形態の多くの改変を行うことができる。このように、デバイスの種々の実例となる実施形態を、開示される特定の形態に限定することは意図していない。むしろ、特許請求の範囲に入る全ての改変及び代替を含み、示されているもの以外の実施形態は、示されている実施形態の特徴の一部又は全てを含んでいてもよい。例えば、構成要素は、省略されてもよく、又は単一の構造として合わされてもよく、及び／又は接続が置換されてもよい。更に、適切な場合、匹敵する特性又は異なる特性を有し、同じ問題又は異なる問題に対処する更なる実施例を作り出すために、上に記載されるいずれかの実施例の態様を、記載される任意の他の実施例の態様と組み合わせてもよい。同様に、上に記載した長所及び利点は、１つの実施形態に関連していてもよく、又はいくつかの実施形態に関連していてもよいことが理解されるだろう。
【００９４】
更に、特許請求の範囲は、「〜のための手段」又は「〜のための工程」という句をそれぞれ用い、所与の特許請求の範囲にこのような限定が明示的に引用されていない限り、ミーンズプラスファンクション又はステッププラスファンクションの限定を含むことを意図しておらず、また、含むと解釈すべきではない。
【００９５】
参考文献又は他の文献の具体的な開示内容が、本発明の任意の一般的な態様を予測するために考慮され得る程度まで、本発明の開示は、既に開示したこのような任意の種を放棄するという条件で含まれることを理解すべきである。本発明の態様は、このような文献の開示内容によって予測されないが、本明細書に開示された予想できない優れた結果の少なくとも一部分によって、これらの刊行物の開示内容から自明でもない。
【００９６】
特許請求の範囲のそれぞれについては、先行の請求項が請求の用語又は要素に関して適切な記載を先に提供している限り、それぞれの従属請求項は、独立請求項にも、また、それぞれの請求項に対する先行の従属請求項のそれぞれにも従属し得る。
【００９７】
参考文献
以下の参考文献は、上述のものに対する補助的な例示的な手順又は他の詳細を与える程度まで、具体的に参考として組み込まれる。
１．Ｐａｎ  Ｚ−Ｈ，Ｄｉｚｈｏｏｒ  ＡＭ．Ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｖｉｓｕａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｂｙ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｒｈｏｄｏｐｓｉｎ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ．Ｇｏｏｇｌｅ  Ｐａｔｅｎｔｓ；２０１３。
２．Ｂａｒｒｅｔｔ  ＪＭ，Ｂｅｒｌｉｎｇｕｅｒ−Ｐａｌｍｉｎｉ  Ｒ，Ｄｅｇｅｎａａｒ  Ｐ．Ｏｐｔｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｐｒｏｓｔｈｅｓｉｓ．Ｖｉｓｕａｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１４；３１（４〜５）：３４５〜５４。
３．Ｄｉｃｈｔｌ  Ａ，Ｊｏｎａｓ  ＪＢ，Ｎａｕｍａｎｎ  ＧＯ．Ｒｅｔｉｎａｌ  ｎｅｒｖｅ  ｆｉｂｅｒ  ｌａｙｅｒ  ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｅｙｅｓ．Ｇｒａｅｆｅ’ｓ  ａｒｃｈｉｖｅ  ｆｏｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．１９９９；２３７（６）：４７４〜９。
４．Ｂｕｓｓｋａｍｐ  Ｖ，Ｐｉｃａｕｄ  Ｓ，Ｓａｈｅｌ  ＪＡ，Ｒｏｓｋａ  Ｂ．Ｏｐｔｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２０１２；１９（２）：１６９〜７５。
５．Ｎａｇｅｌ  Ｇ，Ｓｚｅｌｌａｓ  Ｔ，Ｈｕｈｎ  Ｗ，Ｋａｔｅｒｉｙａ  Ｓ，Ａｄｅｉｓｈｖｉｌｉ  Ｎ，Ｂｅｒｔｈｏｌｄ  Ｐ，Ｏｌｌｉｇ  Ｄ，Ｈｅｇｅｍａｎｎ  Ｐ，Ｂａｍｂｅｒｇ  Ｅ．Ｃｈａｎｎｅｌｒｈｏｄｏｐｓｉｎ−２，ａ  ｄｉｒｅｃｔｌｙ  ｌｉｇｈｔ−ｇａｔｅｄ  ｃａｔｉｏｎ−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｃｈａｎｎｅｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．２００３；１００（２４）：１３９４０〜５。
６．Ｂｏｙｄｅｎ  ＥＳ，Ｚｈａｎｇ  Ｆ，Ｂａｍｂｅｒｇ  Ｅ，Ｎａｇｅｌ  Ｇ，Ｄｅｉｓｓｅｒｏｔｈ  Ｋ．Ｍｉｌｌｉｓｅｃｏｎｄ−ｔｉｍｅｓｃａｌｅ，ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｏｐｔｉｃａｌ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００５；８（９）：１２６３〜８。
７．Ｍｉｌｌｅｒ  Ｇ．Ｓｈｉｎｉｎｇ  Ｎｅｗ  Ｌｉｇｈｔ  ｏｎ  Ｎｅｕｒａｌ  Ｃｉｒｃｕｉｔｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００６；３１４（５８０６）：１６７４〜６。
８．Ｚｈａｎｇ  Ｆ，Ａｒａｖａｎｉｓ  ＡＭ，Ａｄａｍａｎｔｉｄｉｓ  Ａ，ｄｅ  Ｌｅｃｅａ  Ｌ，Ｄｅｉｓｓｅｒｏｔｈ  Ｋ．Ｃｉｒｃｕｉｔ−ｂｒｅａｋｅｒｓ：ｏｐｔｉｃａｌ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｐｒｏｂｉｎｇ  ｎｅｕｒａｌ  ｓｉｇｎａｌｓ  ａｎｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００７；８（８）：５７７〜８１。
９．Ｚｈａｎｇ  Ｆ，Ｗａｎｇ  ＬＰ，Ｂｏｙｄｅｎ  ＥＳ，Ｄｅｉｓｓｅｒｏｔｈ  Ｋ．Ｃｈａｎｎｅｌｒｈｏｄｏｐｓｉｎ−２  ａｎｄ  ｏｐｔｉｃａｌ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｅｘｃｉｔａｂｌｅ  ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２００６；３（１０）：７８５〜９２。
１０．Ｍｏｈａｎｔｙ  ＳＫ，Ｒｅｉｎｓｃｈｅｉｄ  ＲＫ，Ｌｉｕ  Ｘ，Ｏｋａｍｕｒａ  Ｎ，Ｋｒａｓｉｅｖａ  ＴＢ，Ｂｅｒｎｓ  ＭＷ．Ｉｎ−Ｄｅｐｔｈ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｈａｎｎｅｌｒｈｏｄｏｐｓｉｎ  ２−Ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄ  Ｅｘｃｉｔａｂｌｅ  Ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  Ｈｉｇｈ  Ｓｐａｔｉａｌ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｕｓｉｎｇ  Ｔｗｏ−Ｐｈｏｔｏｎ  Ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｎｅａｒ−Ｉｎｆｒａｒｅｄ  Ｌａｓｅｒ  Ｍｉｃｒｏｂｅａｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｊ．２００８；９５（８）：３９１６〜２６。
１１．Ｚｈａｎｇ  Ｆ，Ａｒａｖａｎｉｓ  ＡＭ，Ａｄａｍａｎｔｉｄｉｓ  Ａ，ｄｅ  Ｌｅｃｅａ  Ｌ，Ｄｅｉｓｓｅｒｏｔｈ  Ｋ．Ｃｉｒｃｕｉｔ−ｂｒｅａｋｅｒｓ：ｏｐｔｉｃａｌ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｐｒｏｂｉｎｇ  ｎｅｕｒａｌ  ｓｉｇｎａｌｓ  ａｎｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００７；８（８）：５７７〜８１。
１２．Ｎａｇｅｌ  Ｇ，Ｂｒａｕｎｅｒ  Ｍ，Ｌｉｅｗａｌｄ  ＪＦ，Ａｄｅｉｓｈｖｉｌｉ  Ｎ，Ｂａｍｂｅｒｇ  Ｅ，Ｇｏｔｔｓｃｈａｌｋ  Ａ．Ｌｉｇｈｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈａｎｎｅｌｒｈｏｄｏｐｓｉｎ−２  ｉｎ  ｅｘｃｉｔａｂｌｅ  ｃｅｌｌｓ  ｏｆ  Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ  ｔｒｉｇｇｅｒｓ  ｒａｐｉｄ  ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ．２００５；１５（２４）：２２７９（−８４）。
１３．Ｓｃｈｒｏｌｌ  Ｃ，Ｒｉｅｍｅｎｓｐｅｒｇｅｒ  Ｔ，Ｂｕｃｈｅｒ  Ｄ，Ｅｈｍｅｒ  Ｊ，Ｖｏｌｌｅｒ  Ｔ，Ｅｒｂｇｕｔｈ  Ｋ，Ｇｅｒｂｅｒ  Ｂ，Ｈｅｎｄｅｌ  Ｔ，Ｎａｅｌ  Ｇ，Ｂｕｃｈｎｅｒ  Ｅ，Ｆｉａｌａ  Ａ．Ｌｉｇｈｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｔｒｉｇｇｅｒｓ  ａｐｐｅｔｉｔｉｖｅ  ｏｒ  ａｖｅｒｓｉｖｅ  ｌｅａｒｎｉｎｇ  ｉｎ  Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｌａｒｖａｅ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．２００６；１６（１７）：１７４１〜７。
１４．Ｃａｏ  Ｈ，Ｇｕ  Ｌ，Ｍｏｈａｎｔｙ  ＳＫ，Ｃｈｉａｏ  ＪＣ．Ａｎ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ｍｕ  ＬＥＤ  Ｏｐｔｒｏｄｅ  ｆｏｒ  Ｏｐｔｏｇｅｎｅｔｉｃ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ  Ｒｅｃｏｒｄｉｎｇ．ＩＥＥＥ  Ｔｒａｎｓ  Ｂｉｏ−Ｍｅｄ  Ｅｎｇ．２０１３；６０（ｌ）：２２５〜９。
１５．Ｄｈａｋａｌ  Ｋ，Ｇｕ  Ｌ，Ｓｈｉｖａｌｉｎｇａｉａｈ  Ｓ，Ｄｅｎｎｉｓ  Ｔ，Ｂｏｂｚｅａｎ  Ｓ，Ｐｅｒｒｏｔｔｉ  Ｌ，Ｍｏｈａｎｔｙ  Ｓ．Ｎｏｎ−ｓｃａｎｎｉｎｇ  ｆｉｂｅｒ−ｏｐｔｉｃ  ｎｅａｒ−ｉｎｆｒａｒｅｄ  ｂｅａｍ  ｌｅｄ  ｔｏ  ｔｗｏ−ｐｈｏｔｏｎ  ｏｐｔｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｐｌｏｓ  Ｏｎｅ．２０１４；９（１１），ｅ１１１４８８。
１６．Ｈａｒｔｏｎｇ  ＤＴ，Ｂｅｒｓｏｎ  ＥＬ，Ｄｒｙｊａ  ＴＰ．Ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ．Ｌａｎｃｅｔ．２００６；３６８（９５４９）：１７９５〜８０９。
１７．Ｓｕｇａｗａｒａ  Ｔ，Ｈａｇｉｗａｒａ  Ａ，Ｈｉｒａｍａｔｓｕ  Ａ，Ｏｇａｔａ  Ｋ，Ｍｉｔａｍｕｒａ  Ｙ，Ｙａｍａｍｏｔｏ  Ｓ．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｖｉｓｕａｌ  ｆｉｅｌｄ  ｌｏｓｓ  ａｎｄ  ｖｉｓｉｏｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  ｌｉｆｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ．Ｅｙｅ（Ｌｏｎｄ）．２０１０；２４（４）：５３５〜９。
１８．Ｄａｉｇｅｒ  ＳＰ，Ｂｏｗｎｅ  ＳＪ，Ｓｕｌｌｉｖａｎ  ＬＳ．Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｎ  ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｃａｕｓｉｎｇ  ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ．Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．２００７；１２５（２）：１５１〜８。
１９．Ｍｅｚｅｒ  Ｅ，Ｂａｂｕｌ−Ｈｉｒｊｉ  Ｒ，Ｗｉｓｅ  Ｒ，Ｃｈｉｐｍａｎ  Ｍ，ＤａＳｉｌｖａ  Ｌ，Ｒｏｗｅｌｌ  Ｍ，Ｔｈａｃｋｒａｙ  Ｒ，Ｓｈｕｍａｎ  ＣＴ，Ｌｅｖｉｎ  ＡＶ．Ａｔｔｉｔｕｄｅｓ  Ｒｅｇａｒｄｉｎｇ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｆｏｒ  Ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  Ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ．２００７；２８（１）：９〜１５）。
２０．Ｆｌａｎｎｅｒｙ  ＪＧ，Ｆａｒｂｅｒ  ＤＢ，Ｂｉｒｄ  ＡＣ，Ｂｏｋ  Ｄ．Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ａ  ｒｅｔｉｎａ  ａｆｆｅｃｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｕｔｏｓｏｍａｌ  ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ．Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．１９８９；３０（２）：１９１〜２１１。
２１．Ｃｕｒｃｉｏ  ＣＡ，Ｍｅｄｅｉｒｏｓ  ＮＥ，Ｍｉｌｌｉｃａｎ  ＣＬ．Ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｌｏｓｓ  ｉｎ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．１９９６；３７（７）：１２３６〜４９。
２２．Ｈａｒｔｏｎｇ  ＤＴ，Ｂｅｒｓｏｎ  ＥＬ，Ｄｒｙｊａ  ＴＰ．Ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ．Ｌａｎｃｅｔ．２００６；３６８（９５４９）：１７９５〜８０９。
２３．Ｃｈａｄｅｒ  ＧＪ．Ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌｓ  ｉｎ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｎ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓ：ｐａｓｔ  ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｈｏｐｅ．Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓ．２００２；４２（４）：３９３〜９．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１１８５３７５５。
２４．Ｌｉ  ＺＹ，Ｊａｃｏｂｓｏｎ  ＳＧ，Ｍｉｌａｍ  ＡＨ．Ａｕｔｏｓｏｍａｌ  ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ  ｃａｕｓｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ−１７−ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  ｒｈｏｄｏｐｓｉｎ  ｍｕｔａｔｉｏｎ：ｒｅｔｉｎａｌ  ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．１９９４；５８（４）：３９７〜４０８。
２５．Ｇｒｏｖｅｒ  Ｓ，Ｆｉｓｈｍａｎ  ＧＡ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＲＪ，Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ＫＲ，Ｄｅｒｌａｃｋｉ  ＤＪ．Ｒａｔｅ  ｏｆ  ｖｉｓｕａｌ  ｆｉｅｌｄ  ｌｏｓｓ  ｉｎ  ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．１９９７；１０４（３）：４６０〜５。
２６．Ｂａｕｍｇａｒｔｎｅｒ  ＷＡ．Ｅｔｉｏｌｏｇｙ，ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，ａｎｄ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ．Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．２０００；５４（５）：８１４〜２４。
２７．Ｓａｈａｂｏｇｌｕ  Ａ，Ｐａｑｕｅｔ−Ｄｕｒａｎｄ  Ｏ，Ｄｉｅｔｔｅｒ  Ｊ，Ｄｅｎｇｌｅｒ  Ｋ，Ｂｅｒｎｈａｒｄ−Ｋｕｒｚ  Ｓ，Ｅｋｓｔｒｏｍ  ＰＡ，Ｈｉｔｚｍａｎｎ  Ｂ，Ｕｅｆｆｉｎｇ  Ｍ，Ｐａｑｕｅｔ−Ｄｕｒａｎｄ  Ｆ．Ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ：ｒａｐｉｄ  ｎｅｕｒｏｄｅ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｉｓ  ｇｏｖｅｒｎｅｄ  ｂｙ  ｓｌｏｗ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｓ．２０１３；４：ｅ４８８。
２８．Ｈａｍｅｌ  Ｃ．Ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ．Ｏｒｐｈａｎｅｔ  Ｊ  Ｒａｒｅ  Ｄｉｓ．２００６；１：４０。
２９．Ｘｉａ  Ｙ，Ｐｅｎｇ  Ｘ，Ｒｅｎ  Ｑ．Ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ  ｐａｔｉｅｎｔｓ’ａｔｔｉｔｕｄｅｓ  ｔｏｗａｒｄ  ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｐｒｏｓｔｈｅｓｉｓ  ｔｒｉａｌｓ．Ｃｏｎｔｅｍｐ  Ｃｌｉｎ  Ｔｒｉａｌｓ．２０１２；３３（４）：６２８〜３２。
３０．Ｙａｎａｉ  Ｄ，Ｗｅｉｌａｎｄ  ＪＤ，Ｍａｈａｄｅｖａｐｐａ  Ｍ，Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ  ＲＪ，Ｆｉｎｅ  Ｉ，Ｈｕｍａｙｕｎ  ＭＳ．Ｖｉｓｕａｌ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｐｒｏｓｔｈｅｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｒｅｅ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ．Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．２００７；１４３（５）：８２０〜７。
３１．Ｋｕｓｎｙｅｒｉｋ  Ａ，Ｇｒｅｐｐｍａｉｅｒ  Ｕ，Ｗｉｌｋｅ  Ｒ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  ｓｕｂｒｅｔｉｎａｌ  ｉｍｐｌａｎｔｓ  ｉｎ  ｂｌｉｎｄ  ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｍｕｌｔｉｍｏｄａｌ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．２０１２；５３（７）：３７４８〜５５。
３２．Ｈｏｒｓａｇｅｒ  Ａ，Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ  ＳＨ，Ｗｅｉｌａｎｄ  ＪＤ，Ｈｕｍａｙｕｎ  ＭＳ，Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ  ＲＪ，ＭｃＭａｈｏｎ  ＭＪ，Ｂｏｙｎｔｏｎ  ＧＭ，Ｆｉｎｅ  Ｉ．Ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ  ｖｉｓｕａｌ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｐｒｏｓｔｈｅｓｉｓ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．２００９；５０（４）：１４８３〜９１。
３３．ｄｅ  Ｂａｌｔｈａｓａｒ  Ｃ，Ｐａｔｅｌ  Ｓ，Ｒｏｙ  Ａ，Ｆｒｅｄａ  Ｒ，Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ  Ｓ，Ｈｏｒｓａｇｅｒ  Ａ，Ｍａｈａｄｅｖａｐｐａ  Ｍ，Ｙａｎａｉ  Ｄ，ＭｃＭａｈｏｎ  ＭＪ，Ｈｕｍａｙｕｎ  ＭＳ，Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ  ＲＪ，Ｗｅｉｌａｎｄ  ＪＤ，Ｆｉｎｅ  Ｉ．Ｆａｃｔｏｒｓ  ａｆｆｅｃｔｉｎｇ  ｐｅｒｃｅｐｔｕａｌ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄｓ  ｉｎ  ｅｐｉｒｅｔｉｎａｌ  ｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓ．Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．２００８；４９（６）：２３０３〜１４。
３４．Ｚｒｅｎｎｅｒ  Ｅ，Ｂａｒｔｚ−Ｓｃｈｍｉｄｔ  ＫＵ，Ｂｅｎａｖ  Ｈ，Ｂｅｓｃｈ  Ｄ，Ｂｒｕｃｋｍａｎｎ  Ａ，Ｇａｂｅｌ  ＶＰ，Ｇｅｋｅｌｅｒ  Ｆ，Ｇｒｅｐｐｍａｉｅｒ  Ｕ，Ｈａｒｓｃｈｅｒ  Ａ，Ｋｉｂｂｅｌ  Ｓ，Ｋｏｃｈ  Ｊ，Ｋｕｓｎｙｅｒｉｋ  Ａ，Ｐｅｔｅｒｓ  Ｔ，Ｓｔｉｎｇｌ  Ｋ，Ｓａｃｈｓ  Ｈ，Ｓｔｅｔｔ  Ａ，Ｓｚｕｒｍａｎ  Ｐ，Ｗｉｌｈｅｌｍ  Ｂ，Ｗｉｌｋｅ  Ｒ．Ｓｕｂｒｅｔｉｎａｌ  ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  ｃｈｉｐｓ  ａｌｌｏｗ  ｂｌｉｎｄ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｔｏ  ｒｅａｄ  ｌｅｔｔｅｒｓ  ａｎｄ  ｃｏｍｂｉｎｅ  ｔｈｅｍ  ｔｏ  ｗｏｒｄｓ．Ｐｒｏｃ  Ｂｉｏｌ  Ｓｃｉ．２０１１；２７８（１７１１）：１４８９〜９７。
３５．Ｃｈｏｗ  ＡＹ，Ｐａｒｄｕｅ  ＭＴ，Ｐｅｒｌｍａｎ  ＪＩ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｕｂｒｅｔｉｎａｌ  ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｍｉｃｏｎｄｕｃｔｏｒ−ｂａｓｅｄ  ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅｓ：ｄｕｒａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｉｍｐｌａｎｔ  ｄｅｓｉｇｎｓ．Ｊ  Ｒｅｈａｂｉｌｉｔ  Ｒｅｓ  Ｄｅｖｅｌｏｐ．２００２；３９（３）：３１３〜２１。
３６．Ｚｒｅｎｎｅｒ  Ｅ．Ｗｉｌｌ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｉｍｐｌａｎｔｓ  Ｒｅｓｔｏｒｅ  Ｖｉｓｉｏｎ？  Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００２；２９５（５５５７）：１０２２〜５。
３７．Ｅｃｋｍｉｌｌｅｒ  Ｒ．Ｌｅａｒｎｉｎｇ  Ｒｅｔｉｎａ  Ｉｍｐｌａｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｅｐｉｒｅｔｉｎａｌ  Ｃｏｎｔａｃｔｓ．Ｏｐｈｔｈａｌ  Ｒｅｓ．１９９７；２９（５）：２８１〜９。
３８．Ｂｉ  ＡＤ，Ｃｕｉ  ＪＪ，Ｍａ  ＹＰ，Ｏｌｓｈｅｖｓｋａｙａ  Ｅ，Ｐｕ  ＭＬ，Ｄｉｚｈｏｏｒ  ＡＭ，Ｐａｎ  ＺＨ．Ｅｃｔｏｐｉｃ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｍｉｃｒｏｂｉａｌ−ｔｙｐｅ  ｒｈｏｄｏｐｓｉｎ  ｒｅｓｔｏｒｅｓ  ｖｉｓｕａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｗｉｔｈ  ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎｅｕｒｏｎ．２００６；５０（ｌ）：２３〜３３。
３９．Ｔｈｙａｇａｒａｊａｎ  Ｓ，ｖａｎ  Ｗｙｋ  Ｍ，Ｌｅｈｍａｎｎ  Ｋ，Ｌｏｗｅｌ  Ｓ，Ｆｅｎｇ  Ｇ，Ｗａｓｓｌｅ  Ｈ．Ｖｉｓｕａｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ  ｗｉｔｈ  Ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｈａｎｎｅｌｒｈｏｄｏｐｓｉｎ  ２  ｉｎ  Ｇａｎｇｌｉｏｎ  Ｃｅｌｌｓ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１０；３０（２６）：８７４５〜５８。
４０．Ｂｉ  Ａ，Ｃｕｉ  Ｊ，Ｍａ  ＹＰ，Ｏｌｓｈｅｖｓｋａｙａ  Ｅ，Ｐｕ  Ｍ，Ｄｉｚｈｏｏｒ  ＡＭ，Ｐａｎ  ＺＨ．Ｅｃｔｏｐｉｃ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｍｉｃｒｏｂｉａｌ−ｔｙｐｅ  ｒｈｏｄｏｐｓｉｎ  ｒｅｓｔｏｒｅｓ  ｖｉｓｕａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｗｉｔｈ  ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎｅｕｒｏｎ．２００６；５０（１）：２３〜３３。
４１．Ｚｈａｎｇ  Ｙ，Ｉｖａｎｏｖａ  Ｅ，Ｂｉ  Ａ，Ｐａｎ  Ｚ−Ｈ．Ｅｃｔｏｐｉｃ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｒｈｏｄｏｐｓｉｎｓ  Ｒｅｓｔｏｒｅｓ  ＯＮ  ａｎｄ  ＯＦＦ  Ｌｉｇｈｔ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  Ｒｅｔｉｎａｓ  ｗｉｔｈ  Ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００９；２９（２９）：９１８６〜９６。
４２．Ｔｏｍｉｔａ  Ｈ，Ｓｕｇａｎｏ  Ｅ，Ｉｓａｇｏ  Ｈ，Ｈｉｒｏｉ  Ｔ，Ｗａｎｇ  Ｚ，Ｏｈｔａ  Ｅ，Ｔａｍａｉ  Ｍ．Ｃｈａｎｎｅｌｒｈｏｄｏｐｓｉｎ−２  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ  ｉｎｔｏ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｇａｎｇｌｉｏｎ  ｃｅｌｌｓ  ｒｅｓｔｏｒｅｓ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｖｉｓｉｏｎ  ｉｎ  ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｂｌｉｎｄ  ｒａｔｓ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０１０；９０（３）：４２９〜３６。
４３．Ｔｏｍｉｔａ  Ｈ，Ｓｕｇａｎｏ  Ｅ，Ｆｕｋａｚａｗａ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．Ｖｉｓｕａｌ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｒａｔｓ  Ｈａｒｂｏｒｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｃｈａｎｎｅｌｒｈｏｄｏｐｓｉｎ−２  Ｇｅｎｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｔｈｙ−１．２  Ｐｒｏｍｏｔｅｒ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２００９；４（１１）。
４４．Ｌａｇａｌｉ  ＰＳ，Ｂａｌｙａ  Ｄ，Ａｗａｔｒａｍａｎｉ  ＧＢ，Ｍｕｎｃｈ  ＴＡ，Ｋｉｍ  ＤＳ，Ｂｕｓｓｋａｍｐ  Ｖ，Ｃｅｐｋｏ  ＣＬ，Ｒｏｓｋａ  Ｂ．Ｌｉｇｈｔ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｃｈａｎｎｅｌｓ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｏ  ＯＮ  ｂｉｐｏｌａｒ  ｃｅｌｌｓ  ｒｅｓｔｏｒｅ  ｖｉｓｕａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００８；１１（６）：６６７〜７５。
４５．Ｄｏｒｏｕｄｃｈｉ  ＭＭ，Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ  ＫＰ，Ｌｉｕ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．．Ｖｉｒａｌｌｙ  ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ  Ｃｈａｎｎｅｌｒｈｏｄｏｐｓｉｎ−２  Ｓａｆｅｌｙ  ａｎｄ  Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ  Ｒｅｓｔｏｒｅｓ  Ｖｉｓｕａｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  Ｂｌｉｎｄｎｅｓｓ．Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１１；１９（７）：１２２０〜９。
４６．Ｋｏｉｚｕｍｉ  Ａ，Ｔａｎａｋａ  ＫＦ，Ｙａｍａｎａｋａ  Ａ．Ｔｈｅ  ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｕｒａｌ  ａｎｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｂｙ  ｅｃｔｏｐｉｃ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｌａｎｏｐｓｉｎ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｒｅｓ．２０１３；７５（１）：３〜５。
４７．Ｆｅｈｒｅｎｔｚ  Ｔ，Ｓｃｈｏｎｂｅｒｇｅｒ  Ｍ，Ｔｒａｕｎｅｒ  Ｄ．Ｏｐｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ．Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  Ｅｎｇｌ．２０１１；５０（５１）：１２１５６〜８２。
４８．Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ  ｄｅ  Ｃａｓｔｒｏ  ＪＰ，Ｓｃｏｔｔ  ＰＡ，Ｆｒａｎｓｅｎ  ＪＷ，Ｄｅｍａｓ  Ｊ，ＤｅＭａｒｃｏ  ＰＪ，Ｋａｐｌａｎ  ＨＪ，ＭｃＣａｌｌ  ＭＡ．Ｃｏｎｅ  ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｄｅｖｅｌｏｐ  ｎｏｒｍａｌｌｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｂｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｒｏｄ  ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ａ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｓｗｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ．Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．２０１４；５５（４）：２４６０〜８。
４９．Ｂｕｓｓｋａｍｐ  Ｖ，Ｄｕｅｂｅｌ  Ｊ，Ｂａｌｙａ  Ｄ，Ｆｒａｄｏｔ  Ｍ，Ｖｉｎｅｙ  ＴＪ，Ｓｉｅｇｅｒｔ  Ｓ，Ｇｒｏｎｅｒ  ＡＣ，Ｃａｂｕｙ  Ｅ，Ｆｏｒｓｔｅｒ  Ｖ，Ｓｅｅｌｉｇｅｒ  Ｍ，Ｂｉｅｌ  Ｍ，Ｈｕｍｐｈｒｉｅｓ  Ｐ，Ｐａｑｕｅｓ  Ｍ，Ｍｏｈａｎｄ−Ｓａｉｄ  Ｓ，Ｔｒｏｎｏ  Ｄ，Ｄｅｉｓｓｅｒｏｔｈ  Ｋ，Ｓａｈｅｌ  ＪＡ，Ｐｉｃａｕｄ  Ｓ，Ｒｏｓｋａ  Ｂ．Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｏｎｅ  Ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  Ｒｅｓｔｏｒｅｓ  Ｖｉｓｕａｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  Ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  Ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１０；３２９（５９９０）：４１３〜７。
５０．Ｄｅｇｅｎａａｒ  Ｐ，Ｇｒｏｓｓｍａｎ  Ｎ，Ｍｅｍｏｎ  ＭＡ，Ｂｕｒｒｏｎｅ  Ｊ，Ｄａｗｓｏｎ  Ｍ，Ｄｒａｋａｋｉｓ  Ｅ，Ｎｅｉｌ  Ｍ，Ｎｉｋｏｌｉｃ  Ｋ．Ｏｐｔｏｂｉｏｎｉｃ  ｖｉｓｉｏｎ−ａ  ｎｅｗ  ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｌｉｇｈｔ  ｏｎ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｐｒｏｓｔｈｅｓｉｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒａｌ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．２００９；６（３）：０３５００７。
５１．Ｂａｔａｂｙａｌ  Ｓ，Ｃｅｒｖｅｎｋａ  Ｇ，Ｂｉｒｃｈ  Ｄ，Ｋｉｍ  Ｙ−ｔ，Ｍｏｈａｎｔｙ  Ｓ．Ｂｒｏａｄｂａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｗｈｉｔｅ−ｏｐｓｉｎ  ｌｏｗｅｒｓ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ．Ｓｃｉ  Ｒｅｐ−Ｕｋ．２０１５；５：１７８５７。
５２．Ｋｌａｐｏｅｔｋｅ  ＮＣ，Ｍｕｒａｔａ  Ｙ，Ｋｉｍ  ＳＳ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｐｔｉｃａｌ  ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｎｅｕｒａｌ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｎａｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１４；１１（３）：３３８〜４６。
５３．Ｌｉｎ  ＪＹ，Ｋｎｕｔｓｅｎ  ＰＭ，Ｍｕｌｌｅｒ  Ａ，Ｋｌｅｉｎｆｅｌｄ  Ｄ，Ｔｓｉｅｎ  ＲＹ．ＲｅａＣｈＲ：ａ  ｒｅｄ−ｓｈｉｆｔｅｄ  ｖａｒｉａｎｔ  ｏｆ  ｃｈａｎｎｅｌｒｈｏｄｏｐｓｉｎ  ｅｎａｂｌｅｓ  ｄｅｅｐ  ｔｒａｎｓｃｒａｎｉａｌ  ｏｐｔｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ．Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１３；１６（１０）：１４９９〜５０８。
５４．Ｗａｒｒｅｎ  ＥＪ，Ａｌｌｅｎ  ＣＮ，Ｂｒｏｗｎ  ＲＬ，Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ＤＷ．Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ  ｌｉｇｈｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｏｆ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｇａｎｇｌｉｏｎ  ｃｅｌｌｓ  ｐｒｏｊｅｃｔｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｃｉｒｃａｄｉａｎ  ｓｙｓｔｅｍ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００３；１７（９）：１７２７〜３５。
５５．Ｈｏｄｇｅｓ  Ｈ．Ｍａｚｅ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ：ｔｈｅ  ｒａｄｉａｌ−ａｒｍ  ａｎｄ  ｗａｔｅｒ  ｍａｚｅ  ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  Ｃｏｇｎ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１９９６；３（３〜４）：１６７〜８１。
５６．Ｗｒｉｇｈｔ  Ｗ，Ｇａｊｊｅｒａｍａｎ  Ｓ，Ｂａｔａｂｙａｌ  Ｓ，Ｐｒａｄｈａｎ  Ｓ，Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ  Ｓ，Ｍａｈａｐａｔｒａ  Ｖ，Ｔｒｉｐａｔｈｙ  Ａ，Ｍｏｈａｎｔｙ  Ｓ．Ｒｅｓｔｏｒｉｎｇ  ｖｉｓｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｗｉｔｈ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ｍｕｌｔｉｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ  ｏｐｓｉｎ．Ｎｅｕｒｏｐｈｏｔｏｎｉｃｓ．２０１７；４（４）：０４１４１２。
５７．Ｐｒｕｓｋｙ  ＧＴ，Ａｌａｍ  ＮＭ，Ｂｅｅｋｍａｎ  Ｓ，Ｄｏｕｇｌａｓ  ＲＭ．Ｒａｐｉｄ  ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｄｕｌｔ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  ｍｏｕｓｅ  ｓｐａｔｉａｌ  ｖｉｓｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｖｉｒｔｕａｌ  ｏｐｔｏｍｏｔｏｒ  ｓｙｓｔｅｍ．Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．２００４；４５（１２）：４６１１〜６。
５８．Ｄｏｕｇｌａｓ  ＲＭ，Ａｌａｍ  ＮＭ，Ｓｉｌｖｅｒ  ＢＤ，ＭｃＧｉｌｌ  ＴＪ，Ｔｓｃｈｅｔｔｅｒ  ＷＷ，Ｐｒｕｓｋｙ  ＧＴ．Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｖｉｓｕａｌ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｗｏ  ｅｙｅｓ  ｏｆ  ｆｒｅｅｌｙ  ｍｏｖｉｎｇ  ｒａｔｓ  ａｎｄ  ｍｉｃｅ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｖｉｒｔｕａｌ−ｒｅａｌｉｔｙ  ｏｐｔｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｓｙｓｔｅｍ．Ｖｉｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００５；２２（５）：６７７〜８４。
５９．Ｌｉ  Ｓ，Ｈｕａｎｇ  Ｌ．Ｎｏｎｖｉｒａｌ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ：ｐｒｏｍｉｓｅｓ  ａｎｄ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２０００；７（１）：３１〜４。
６０．Ｔｈｏｍａｓ  ＣＥ，Ｅｈｒｈａｒｄｔ  Ａ，Ｋａｙ  ＭＡ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｂｌｅｍｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｖｉｒａｌ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｇｅｎｅｔ．２００３；４（５）：３４６〜５８。
【図１Ａ】
2019535255.tif 000003
【図１Ｂ】
2019535255.tif 000004
【図２Ａ】
2019535255.tif 000005
【図２Ｂ】
2019535255.tif 000006
【図２Ｃ】
2019535255.tif 000007
【図３Ａ】
2019535255.tif 000008
【図３Ｂ】
2019535255.tif 000009
【図４Ａ】
2019535255.tif 000010
【図４Ｂ】
2019535255.tif 000011
【図５Ａ】
2019535255.tif 000012
【図５Ｂ】
2019535255.tif 000013
【図６Ａ】
2019535255.tif 000014
【図６Ｂ】
2019535255.tif 000015
【図７Ａ−７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図９Ｅ】
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【図９Ｆ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【図１０Ｆ】
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【図１０Ｇ】
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【図１０Ｈ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１７】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図１８Ｄ】
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【図１８Ｅ】
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【図１８Ｆ】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年6月10日(2019.6.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組換え周辺光活性化可能な高速多特性オプシン（ＭＣＯ１）タンパク質であって、
ＭＣＯ１タンパク質のイオン選択性、光感受性又は動態のうちの少なくとも１つを調節するために変異させた１４回膜貫通ドメインを含むＭＣＯ１タンパク質を含み、ここで、前記ＭＣＯ１タンパク質が、配列番号１を有する、ＭＣＯ１タンパク質。
【請求項２】
単一の変異又は変異の組み合わせのうちの１つ以上が、イオン選択性、光感受性又は動態を調節し、前記変異は、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸１３２に対応するアミノ酸残基におけるＳからＣへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸１２３に対応するアミノ酸残基におけるＥからＡへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸２５３に対応するアミノ酸残基におけるＤからＡへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸１２０に対応するアミノ酸残基におけるＲからＡへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸５６に対応するアミノ酸残基におけるＱからＡへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸９３に対応するアミノ酸残基におけるＫからＡへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸９０に対応するアミノ酸残基におけるＥからＡへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸９０に対応するアミノ酸残基におけるＥからＱへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸９７に対応するアミノ酸残基におけるＥからＡへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸１０１に対応するアミノ酸残基におけるＥからＡへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸２５８に対応するアミノ酸残基におけるＮからＤへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸８３に対応するアミノ酸残基におけるＥからＴへの置換、
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸１２３に対応するアミノ酸残基におけるＥからＴへの置換、又は
前記ＭＣＯ１配列のアミノ酸６３に対応するアミノ酸残基におけるＳからＤへの置換、のうちの少なくとも１つから選択される、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項３】
組換え周辺光活性化可能な低速多特性オプシン（ＭＣＯ２）タンパク質（配列番号３）であって、
１４回膜貫通ドメインを含み、
３０９〜３１５の７つのアミノ酸残基（ＶＮＫＧＴＧＫ）は、膜上の遺伝子発現を改善するために請求項１に記載の前記分子中で欠失しており、
Ｓ１３２Ｌ変異は、網膜への結合親和性及び光感受性を向上させるため、配列番号１の膜貫通ドメイン２において実施され、
前記オプシンは、６５８個のアミノ酸でコードされ、
前記ＭＣＯ２感作細胞は、白色光のパルスに対する初期の高速電流応答後に、ゆっくりと減衰する内向き電流を生成する、タンパク質。
【請求項４】
単一の変異又は変異の組み合わせが、前記分子のイオン選択性、光感受性又は動態のうちの少なくとも１つを更に調節する、配列番号３のＥ４７３Ａ、Ｄ６０３Ａ、Ｒ４６９Ａから選択される、請求項３に記載の分子。
【請求項５】
膜貫通配列
（ＴＰＡＲＷＶＷＩＳＬＹＹＡＡＦＹＶＶＭＴＧＬＦＡＬＣＩＹＶＬＭＱＴＩ）が、ＭＣＯ１（配列番号５）中のアミノ酸残基３１５又はＭＣＯ２（配列番号７）中のアミノ酸残基３０８の後に挿入される、請求項１〜４に記載の分子。
【請求項６】
配列番号１のＭＣＯ１を含む、組換え周辺光活性化可能な高速増強型多特性オプシン（ｅＭＣＯ１、配列番号１１）。
【請求項７】
前記安定化バイオマーカーが、配列番号１０の２２７個のアミノ酸であること、
前記安定化バイオマーカーが、連結配列によって前記１４回膜貫通ドメインの下流に接続されていること、
前記安定化バイオマーカーから放出される光が、膜におけるより高い割合のβシート及びより低い割合の不規則構造を有するｅＭＣＯ１発現を安定化させ、かつ、非改変ＭＣＯ１より開裂させにくいこと、
前記安定化バイオマーカー分子が、膜を横切るｅＭＣＯ１のより良好な配向安定化によって、ｅＭＣＯ１を発現する細胞中の光誘導性電流を増強すること、
前記安定化バイオマーカー分子が、前記安定化バイオマーカー分子から放出／再放出される光によって、ｅＭＣＯ１を発現する細胞中の光誘導性電流を増強すること、
プロモーターが、特定の細胞を標的にするために、ｅＭＣＯ１の上流で使用されること、
前記プロモーター−ｅＭＣＯ１遺伝子が、ウイルスベクターにパッケージングされること、
細胞が、化学的、ウイルス的又は物理的トランスフェクションを使用して、前記プロモーター−ｅＭＣＯ１遺伝子でトランスフェクトされ得ること、
網膜における安定化バイオマーカー発現を含有するｅＭＣＯ１の検査（眼底検査による）が、標的組織への遺伝子送達の有効性を判定するための指標であること、
前記安定化バイオマーカーによって放出／再放出される光が、ｅＭＣＯ１発現の存在を判定するために使用されること、又は
発現の喪失が、標的細胞に再び光感受性を与える／標的細胞を機能させるために、前記プロモーター−ｅＭＣＯ１遺伝子の再送達を必要とすること、のうちの少なくとも１つを更に含む、請求項６に記載の組換えｅＭＣＯ１。
【請求項８】
細胞発現／活性化を検出するために、前記ＭＣＯ遺伝子の下流にあるレポーター遺伝子を更に含み、前記プロモーター−ＭＣＯ−レポーター遺伝子は、ウイルスベクターにパッケージングされ、細胞は化学的、ウイルス的又は物理的方法のいずれかを使用して前記プロモーター−ＭＣＯ−レポーター遺伝子によってトランフェクトされ得る、請求項１〜６に記載の組換えＭＣＯ。
【請求項９】
ＭＣＯ感作細胞が、光に対して高い感受性を有し、低強度（〜０．０２ｍＷ／ｍｍ２）の周辺光で活性化され得る、請求項１〜８に記載の分子。
【請求項１０】
ＭＣＯ感作網膜ニューロン（例えば、網膜神経節細胞、双極細胞）が、野生型光受容体桿体信号と同様の白色光に対する初期応答後に、より低速な脱分極相を生成する、請求項３〜５に記載の分子。
【請求項１１】
前記オプシンが、可視及び近赤外範囲の光の任意の波長に感受性がある、請求項１〜８に記載の分子。
【請求項１２】
前記オプシンが、可視及び近赤外範囲の直接及び間接（例えば、蛍光、燐光、アップ／ダウン変換）照明光によって活性化される、請求項１〜８に記載の分子。
【請求項１３】
喪失又は低下した視力を回復させる際に使用するための、請求項１〜８に記載の分子。
【請求項１４】
視力喪失が、何らかの変性網膜疾患によるものであり、
標的細胞への組換えＭＣＯ遺伝子の送達は、送達効率を高めるためのプロナーゼＥ若しくはα−アミノアジピン酸（ＡＡＡ）又はその両方と組み合わせた、眼内のプロモーター−ＭＣＯ遺伝子を担持するウイルスの硝子体内／網膜下注射によって実施されるか、
前記ＭＣＯ遺伝子の送達は、眼内のプロモーター−ＭＣＯ遺伝子プラスミドの硝子体内／網膜下注射に続く、化学的若しくは物理的形質導入方法又はこれらの組み合わせによって実施されるか、
プロモーター−ＭＣＯ遺伝子を担持するウイルス又は眼内の前記プロモーター−ＭＣＯ遺伝子プラスミドの前記送達は、内境界膜の剥離が先行し得るか、
眼内への前記ＭＣＯ遺伝子の送達は、非標的細胞及び器官における望まれない発現、又は前記治療された眼内における何らかの有害反応若しくは細胞毒性のいずれにも起因しないか、
ＭＣＯ遺伝子の送達後に、視覚的に誘導された有意な行動改善が観察されるか、又は
前記ＭＣＯ遺伝子の再注射及びトランスフェクションは、ＭＣＯ遺伝子発現不足の場合に実施される、請求項１３に記載の分子。
【請求項１５】
視力喪失を防止又は遅延させる際に使用する組換え分子であって、ここで、前記ＭＣＯ遺伝子の送達は、進行性の光受容体の喪失の間に網膜細胞に対して実施され、前記ＭＣＯ感作網膜細胞の光刺激は、前記光受容体の喪失を防止又は遅延させるために実施され、前記光刺激用量は、最大効果のために最適化される、請求項１〜８に記載の組換え分子。
【請求項１６】
損傷したＲＧＣ軸索を再生することによって視力を回復させる際に使用する分子であって、
ここで、前記ＭＣＯ遺伝子の送達が、軸索変性の間又はその後に網膜神経節細胞に対して実施され、前記ＭＣＯ感作ＲＧＣの光刺激は、前記軸索の変性速度を遅延させ、かつ／又は前記軸索を再生するために実施され、前記光刺激用量は、前記変性を最小限に抑える、かつ／又は前記軸索再生を最大化するために最適化される、請求項１〜８に記載の分子。
【請求項１７】
ニューロン、心臓細胞を含む異なる種類の興奮性細胞を刺激する際に使用する分子であって、
ここで、前記使用は、化学的、ウイルス的又は物理的形質導入方法のいずれかによる前記ＭＣＯ遺伝子の送達を含み、
ＭＣＯの活性化は、光の照明時に達成され、
前記効果は、電気／光生理学的に測定される、請求項１〜８に記載の分子。
【請求項１８】
疾患の治療の際に使用する分子であって、
ここで、前記使用は、化学的、ウイルス的又は物理的形質導入方法のいずれかによる異なる器官への前記ＭＣＯ遺伝子の送達を含み、
ＭＣＯの活性化は、光の照明時に達成され、
効果は、電気生理学的又は他の機能的及び行動的分析によって測定される、請求項１〜８に記載の分子。
【請求項１９】
配列番号１、３、５、７又は１１のうちの少なくとも１つのタンパク質の光感受性特性を呈する、前記配列番号１、３、５、７又は１１に対して少なくとも７５％、８５％、９５％又は１００％の同一性を含む配列を含む、ポリペプチド。
【請求項２０】
任意選択的に、配列番号２、４、６、８又は１２のうちの少なくとも１つを有する、請求項１９に記載のポリペプチドをコードする組換え核酸。
【請求項２１】
任意選択的に、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス又はレンチウイルスベクターから選択される、請求項２０に記載の核酸を含むベクター。
【国際調査報告】
2019535255.tif 000056
2019535255.tif 000057
2019535255.tif 000058
2019535255.tif 000059
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