(57)【要約】本発明は眼の治療法の分野に関する。特に、それは、後眼部線維症を妨害するための胎盤増殖因子のアンタゴニストに関する。【選択図】図４
2019507746.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体の後眼部線維症(ocular posterior fibrosis)の治療、予防、またはその進行の遅延における使用のための、単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニスト。
【請求項２】
被験体における後眼部神経変性(ocular posterior neurodegeneration)を誘導せずに、後眼部線維症の治療、予防、またはその進行の遅延における使用のための、単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニスト。
【請求項３】
後眼部炎症および／または後眼部新生血管形成および／または血管漏出をさらに治療するか、予防するか、またはそれらの進行を遅延させる、請求項１〜２のいずれか一項に記載の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニスト。
【請求項４】
網膜が損傷された眼を備えた被験体の視力をさらに維持するかまたは改善する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニスト。
【請求項５】
前記単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストが単独で眼へ投与される点をさらに特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニスト。
【請求項６】
前記単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストが、先に眼へ投与された血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたはＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストのウォッシュアウト後に、該眼へ投与される点をさらに特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニスト。
【請求項７】
先に眼へ投与された前記単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストのウォッシュアウト後に、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたはＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストが、該眼へ投与される点をさらに特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニスト。
【請求項８】
前記単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストが、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストと異なり、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストと異なる、第２の活性化合物と組み合わせて眼へ投与される点をさらに特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニスト。
【請求項９】
前記単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストが、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストと異なり、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストと異なる、第２の活性化合物と組み合わせて眼へ投与され、前記投与が、該眼へ先に投与された血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたはＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストのウォッシュアウト後である点をさらに特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニスト。
【請求項１０】
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストと異なり、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストとは異なる、第２の活性化合物と組み合わせて、先に眼へ投与された前記単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストのウォッシュアウト後に、該眼へ血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたはＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストが投与される点をさらに特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニスト。
【請求項１１】
前記単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストおよび前記第２の活性化合物が、各々分離した組成物で眼へ投与される点をさらに特徴とする、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニスト。
【請求項１２】
前記単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストおよび前記第２の活性化合物が、単一組成物で組み合わせられて眼へ投与される点をさらに特徴とする、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニスト。
【請求項１３】
前記第２の活性化合物が、抗炎症化合物、抗血管新生性化合物、抗線維化化合物、ＡＧＥ阻害化合物、ＡＬＥ阻害化合物、ＡＧＥ破壊化合物、炭酸脱水酵素阻害物質、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト、カイニン酸受容体アンタゴニスト、ＡＭＰＡ受容体アンタゴニスト、神経保護剤、眼内圧の制御のための薬剤、抗アポトーシス剤、抗ウイルス性化合物、抗生化合物、抗真菌化合物、抗ヒスタミン物質、抗凝固剤、血栓溶解化合物、抗有糸分裂剤、麻酔剤、および瞳孔拡大を誘導する薬剤、毛様筋麻痺を誘導する薬剤、後部硝子体剥離を誘導する薬剤（完全または不完全）、硝子体液化を誘導する薬剤、インテグリン阻害物質、抗浮腫剤である点をさらに特徴とする、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニスト。
【請求項１４】
光線力学療法、レーザー光凝固術、放射線療法または硝子体外科手術と組み合わせられる、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニスト。
【請求項１５】
前記後眼部線維症が網膜損傷と同時にまたはその後に起こっている点をさらに特徴とする、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニスト。
【請求項１６】
前記後眼部線維症が、加齢関連黄斑浮腫、糖尿病網膜症、（糖尿病）黄斑浮腫、任意のタイプの網膜症、新生血管緑内障、網膜剥離または網膜出血において起こっている点をさらに特徴とする、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニスト。
【請求項１７】
前記単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）が、ＰｌＧＦ中和抗体もしくは抗体のＰｌＧＦ中和断片、アンチセンスＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ、アプタマー、またはリボザイムである点をさらに特徴とする、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニスト。
【請求項１８】
配列番号：７において定義される重鎖中に含まれる３つの重鎖ＣＤＲおよび配列番号：８において定義される軽鎖中に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲを含む、ＰｌＧＦ中和抗体またはＰｌＧＦ中和抗体断片である、点をさらに特徴とする、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニスト。
【請求項１９】
配列番号：１２において定義される重鎖中に含まれる３つの重鎖ＣＤＲおよび配列番号：１３において定義される軽鎖中に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲを含む、単離されたＰｌＧＦ中和抗体またはそのＰｌＧＦ中和抗体断片。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は眼の治療法の分野に関する。特に、それは、後眼部線維症(posterior ocular fibrosis)を妨害するための胎盤増殖因子のアンタゴニストに関する。
【背景技術】
【０００２】
眼の網膜（眼の最も後部のセグメント；眼の裏面）は、中枢神経系（ＣＮＳ）の一部である。それゆえ、網膜の創傷治癒応答は、Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒがグリオーシス（グリア細胞によって媒介される線維症）と称する脳の創傷治癒応答に類似するものである。これは、線維症（線維芽細胞によって媒介される線維症）と称される、非ＣＮＳ組織または一般な器官、ならびに特に角膜および線維柱帯網等の前眼部分（眼の正面）における創傷治癒応答とは対照的である（Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ  ２００７，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，１１７：５７６−５８６）。
【０００３】
炎症および／もしくは新生血管形成が付随するか、またはそれらによって引き起こされる、任意の型の網膜の疾患または障害は、グリオーシスおよび線維性瘢痕化を導く。最終的に、このグリオーシスまたは後眼部線維症は重度の視覚喪失および失明を導く。多くの薬物は新生血管形成を抑制するために利用可能であるが（例えばペガプタニブナトリウム、ラニビズマブ；および適応外使用のベバシズマブ；すべて血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を標的とする）、これらはグリオーシス／後眼部線維症を最小限に抑えない（Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００７，１１７：５７６−５８６）。抗ＶＥＧＦ療法の長期使用は後眼部線維症の増加さえ導き得ることが記載される。ＣＡＴＴ治験から、例えば、加齢関連黄斑浮腫（ＡＭＤ）に罹患する患者の２４．７％は、２年間の抗ＶＥＧＦ療法（ベバシズマブまたはラニビズマブ）後に、後部の線維性瘢痕を発症するであろうことが公知である（Ｄａｎｉｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ２０１４，１２１：６５６−６６６）。
【０００４】
近年、Ｖａｎ  Ｂｅｒｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ２０１５，５６：５２８０−５２８９）は、レーザー誘導脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）の実験的なマウスモデルを使用して、ＬＯＸ（リシルオキシダーゼ）またはＬＯＸＬ２（リシルオキシダーゼ様２）を標的とする抗体を用いた後眼部線維症の低減を実証した。類似のモデルにおいて、Ｒａｋｉｃ  ｅｔ  ａｌ．（Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ２００３，４４：３１８６−３１９３）は、ＣＮＶに寄与する、特にレーザー損傷の誘導１４日後の新生血管形成および病巣サイズに寄与する、増殖因子の１つとして胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）を同定した。Ｈｏｌｌｂｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｇｒａｅｆｅ’ｓ  Ａｒｃｈ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２００６，２４４：７３２−７４１）は、トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）によって刺激されたインビトロで増殖させたヒトの網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞がＰｌＧＦおよびＶＥＧＦを増加した量で産生することを決定し、そのことは、糖尿病網膜症の間の、ＴＧＦ−βが引き起こすＲＰＥ細胞によるＰｌＧＦ分泌は、線維性血管膜の形成の一部としての細胞移動に寄与し得るという示唆をもたらす。これらの膜中の筋線維芽細胞の存在は牽引性網膜剥離および網膜出血を引き起こし得る。
【０００５】
Ｃａｏ  ｅｔ  ａｌ．（Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ２０１０，５１：６００９−６０１７）は、マトリゲルの網膜下注射によって誘導されたＣＮＶに対する、ＶＥＧＦトラップ（ＶＥＧＦおよびＰｌＧＦ両方の結合）の効果を調査した。この著者らは、ＣＮＶ増殖の阻止ならびに炎症性応答および線維化応答の低減を観察した。しかしながら、マトリゲルは、複数の増殖因子（塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、表皮増殖因子（ＥＧＦ）、インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ−１）、ＴＧＦ−β、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、神経増殖因子（ＮＧＦ）、および結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）が挙げられる）を含有する（Ｈｕｇｈｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ２０１０，１０：１８８６−１８９０）。したがって、このモデルにより得られた結果は、眼中に増殖因子の外部混液を導入しないレーザー誘導ＣＮＶモデルにより得られた結果に比較することができない。
【０００６】
ＰｌＧＦ中和抗体の有益な効果は、多くの障害（病理学的血管新生、病理学的動脈新生、炎症、腫瘍形成、血管漏出および肺高血圧症（ＷＯ０１／８５７９６）、骨粗鬆症（ＷＯ２００４／００２５２４）、組織癒着（ＷＯ０３／０６３９０４）、肝硬変（ＷＯ２００７／００３６０９）、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ染色体陽性白血病（ＷＯ２０１０／０３７８６４）ならびに線維柱帯切除術転帰（ＷＯ２０１３／０７９７１）が挙げられる）について記載されている。Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｅｌｌ  ２００７，１３１：４６３−４７５）、Ｖａｎ  Ｓｔｅｅｎｋｉｓｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ２００９，１３７：２１１２−２１２４）、Ｃｏｅｎｅｇｒａｃｈｔｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１０，７０：６５３７−６５４７）、Ｖａｎ  ｄｅ  Ｖｅｉｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｅｌｌ  ２０１０，１４１：１７８−１９０）、Ｓｃｈｍｉｄｔ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２０１１，１９：７４０−５３）、Ｓｎｕｄｅｒｌ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｅｌｌ  ２０１３，１５２：１０６５−１０７６）、Ｖａｎ  Ｂｅｒｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ２０１３，１７：１６３２−１６４３）も参照されたい。
【０００７】
具体的には、Ｖａｎ  ｄｅ  Ｖｅｉｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）は、レーザー誘導ＣＮＶ後の眼血管新生、眼炎症および脈絡膜血管漏出のＰｌＧＦ中和抗体による阻害を指摘した（したがってＲａｋｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ２００３，４４：３１８６−３１９３のデータを部分的に確認し拡張するものである）。
【０００８】
術後組織癒着（ＷＯ０３／０６３９０４）および線維柱帯切除術の失敗（Ｖａｎ  Ｂｅｒｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ２０１３，１７：１６３２−１６４３））に対するＰｌＧＦ中和抗体の有益な効果は、線維芽細胞媒介性線維症の見かけ上の阻害に少なくとも部分的に起因し得る。
【０００９】
瘢痕化（線維症）は緑内障濾過手術／線維柱帯切除術後の濾過胞消失の一因となると考えられる（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．２００６；Ｆｒｅｅ  ｐａｐｅｒｓ  Ｇｌａｕｃｏｍａ：ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｂｌｏｏｄｆｌｏｗ  ａｎｄ  ＩＯＰ；Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｐｌａｃｅｎｔａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｇｌａｕｃｏｍａ  ａｎｄ  ｓｃａｒ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ｇｌａｕｃｏｍａ  ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  ｓｕｒｇｅｒｙ）。この文脈において、ＶＥＧＦ−Ｒ２受容体を遮断する抗体は、緑内障濾過手術／線維柱帯切除術後の濾過胞存続を増加させる（瘢痕化を減少させる）ことが、ＰｌＧＦ中和抗体よりも低い程度とはいえ、示された（ＷＯ２０１３／０７９７１）。したがってＶＥＧＦ−Ｒ２受容体を遮断する抗体およびＰｌＧＦ中和抗体の両方は前眼部線維症を減少させることができた。Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００７，１１７：５７６−５８６）は、後眼部線維症に対するＶＥＧＦアンタゴニストの作用の欠如を要約した。後眼部線維症および前眼部線維症に対するＶＥＧＦアンタゴニストの作用における差は、後眼部線維症と前眼部線維症との間のプロセスにおける差を指摘する。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、被験体における後眼部線維症の治療、予防、またはその進行の遅延における使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストに関する。あるいは、単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストは、被験体における後眼部神経変性を誘導せずに、後眼部線維症の治療、予防、またはその進行の遅延における使用のためのものである。さらなる実施形態として、上記の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストは、後眼部炎症および／もしくは後眼部新生血管形成および／もしくは血管漏出のさらなる治療、予防、もしくは進行の遅延、ならびに／または網膜が損傷される眼を備えた被験体の視力の維持もしくは改善における使用のためのものを意図する。
【００１１】
本発明は、網膜が損傷された眼を備えた被験体の視力の維持または改善における使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストにさらに関する。
【００１２】
上記のもののうちの任意のものにおいて、単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストは単独で眼へ投与され得る。
【００１３】
あるいは、上記の使用において、単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストは、同じ眼へ以前に投与された血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたはＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストのウォッシュアウト後に、眼へ投与され得る。
【００１４】
さらなる代替案において、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたはＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストは、同じ眼へ以前に投与された単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストのウォッシュアウト後に、眼へ投与される。
【００１５】
さらなる代替案は、単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストおよび第２の活性化合物の組み合わせ投与を含むことが意図される。それゆえ、上記の使用のうちの任意のものにおいて、単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストは第２の活性化合物と組み合わせて眼へ投与され得、そこで、前記第２の活性化合物は血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストとは異なり、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストとは異なる。
【００１６】
あるいは、単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストは第２の活性化合物と組み合わせて眼へ投与され、そこで、前記第２の活性化合物は血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストとは異なり、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストとは異なり；前記投与は、同じ眼へ以前に投与された血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたはＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストのウォッシュアウト後である。
【００１７】
さらなる代替案において、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたはＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストは、第２の活性化合物と組み合わせて、同じ眼へ以前に投与された単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストのウォッシュアウト後に、眼へ投与され、そこで、前記第２の活性化合物は血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストとは異なり、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストとは異なる。
【００１８】
単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストが第２の活性化合物と組み合わせられる場合に、両者は各々分離した組成物で眼へ投与され得る。第２の活性薬剤は、単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストの投与の前に、それと同時に、またはその後に投与され得る。
【００１９】
あるいは、両者は単一組成で組み合わせて眼へ投与され得る。この文脈において、第２の活性化合物は１つの活性化合物または２つ以上の活性化合物の組み合わせであり得る。特に、かかる第２の活性化合物は、抗炎症化合物、抗血管新生性化合物、抗線維化化合物、ＡＧＥ阻害化合物、ＡＬＥ阻害化合物、ＡＧＥ破壊化合物、炭酸脱水酵素阻害物質、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト、カイニン酸受容体アンタゴニスト、ＡＭＰＡ受容体アンタゴニスト、神経保護剤、眼内圧の制御のための薬剤、抗アポトーシス剤、抗ウイルス性化合物、抗生化合物、抗真菌化合物、抗ヒスタミン物質、抗凝固剤、血栓溶解化合物、抗有糸分裂剤、麻酔剤、および瞳孔拡大を誘導する薬剤、毛様筋麻痺を誘導する薬剤、後部硝子体剥離を誘導する薬剤（完全または不完全）、硝子体液化を誘導する薬剤、インテグリン阻害物質、抗浮腫剤であり得るがこれらに限定されない。
【００２０】
上記のような単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストの任意の使用は、光線力学療法、レーザー光凝固術、放射線療法または硝子体外科手術とさらに組み合わせられ得る。
【００２１】
上記のような任意の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストは、後眼部線維症が網膜損傷と同時にまたはその後に起こっているという点でさらに特徴づけられ得る。かかる後眼部線維症は、例えば加齢関連黄斑浮腫、糖尿病網膜症、（糖尿病）黄斑浮腫、任意のタイプの網膜症、新生血管緑内障、網膜剥離または網膜出血において起こっているだろう。
【００２２】
上記のような任意の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストは、それがＰｌＧＦ中和抗体もしくは抗体のＰｌＧＦ中和断片、アンチセンスＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ、アプタマー、またはリボザイムであるという点でさらに特徴づけられ得る。本明細書において、ＰｌＧＦ中和抗体またはＰｌＧＦ中和抗体断片は、配列番号：７において定義される重鎖および配列番号：８において定義される軽鎖中に含まれる６つのＣＤＲを含むものであり得る。特に、これらのＣＤＲは、ＩＭＧＴ方法を配列番号：７および８へ適用する場合に、配列番号：１〜６におけるように定義される。
【００２３】
本発明は、配列番号：１２において定義される重鎖中に含まれる３つの重鎖ＣＤＲおよび配列番号：１３において定義される軽鎖中に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲを含む、単離されたＰｌＧＦ中和抗体、またはそのＰｌＧＦ中和抗体断片にも関する。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】レーザー誘導ＣＮＶモデルにおける白血球浸潤。（Ａ）ＣＮＶモデルにおいて、レーザー処理の５日後に、ＩｇＧ処理マウスに比較して、抗ＰｌＧＦ抗体５Ｄ１１Ｄ４（１．５および３．１μｇ）による処理は、白血球浸潤を減少させた（Ｐ＜０．０５）。アフリベルセプト（２．４および２０μｇ）およびトリアムシノロンアセトニド（ＴＡＡＣ；４０μｇ）の高用量は、同等の効果を示した。抗ＶＥＧＦＲ２抗体ＤＣ１０１の投与（３．１μｇ）は抗炎症効果を示さなかった。（Ｂ）レーザー処理の５日後の等モルの比較。ＩｇＧ処理マウスに比較して、抗ＰｌＧＦ抗体５Ｄ１１Ｄ４（３．１μｇ）による処理は白血球浸潤を減少させた（Ｐ＜０．０５）。アフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））（２．４μｇ）の等モルの濃度は類似する効果を示した。抗ＶＥＧＦＲ２抗体ＤＣ１０１（３．１μｇ）およびＴＡＡＣ（４μｇ）の投与は抗炎症効果を示さなかった。データは平均±ＳＥＭである。
【図２】レーザー誘導ＣＮＶモデルにおける後眼部コラーゲン沈着。（Ａ）ＣＮＶモデルにおいて、レーザー処理の３０日後に、ＰＢＳ処理マウスに比較して、抗ＰｌＧＦの抗体５Ｄ１１Ｄ４（１．５および３．１μｇ）による処理は、コラーゲン沈着を減少させた（Ｐ＜０．０５）。それはトリアムシノロンアセトニド（ＴＡＡＣ；４０μｇ）の高モル濃度の効果へ類似していた。抗ＶＥＧＦＲ２抗体ＤＣ１０１およびアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））の投与（両方とも３．１μｇ）は、抗線維化効果を示さなかった。（Ｂ）レーザー処理の３０日後の等モルの比較。ＩｇＧ処理マウスに比較して、抗ＰｌＧＦ抗体５Ｄ１１Ｄ４（３．１μｇ）による処理はコラーゲン沈着を減少させた（Ｐ＜０．０５）。抗ＶＥＧＦＲ２抗体ＤＣ１０１（３．１μｇ）、アフリベルセプト（２．４μｇ）およびＴＡＡＣ（４μｇ）の投与は、抗線維化効果を示さなかった。データは平均±ＳＥＭである。
【図３】網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の生存。網膜神経節細胞の生存は、対照ＩｇＧ、抗ＰｌＧＦ抗体５Ｄ１１Ｄ４および抗ＶＥＧＦ−Ｒ２抗体ＤＣ１０１（すべて２５ｍｇ／ｋｇ、１週間あたり３回）による腹腔内投与後に、２週間（図３Ａ）、４週間（図３Ｂ）および６週間（図３Ｃ）で査定された。ＲＧＣ／網膜面積は、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおいて２、４および６週間後に３つの処理群の間で有意に異ならなかった（Ｎ＝６；Ｐ＞０．０５）が、Ｓｗｉｓｓマウスにおいて有意な低減があった（Ｎ＝６；Ｐ＜０．０５）。図３Ｄ中で示されるように、神経細胞層における網膜面積あたりのアポトーシスを起こした細胞の数を確認するＴＵＮＥＬ染色は、６週間後の抗ＰｌＧＦ抗体５Ｄ１１Ｄ４処理マウスｖｓ対照ＩｇＧ処理マウスにおいて同等であった（Ｎ＝６；Ｐ＞０．０５）。アポトーシスを起こした細胞の増加の傾向性は、抗ＶＥＧＦ−Ｒ２抗体ＤＣ１０１処理Ｃ５７Ｂｌ／６マウスについて存在した（ｎ＝６；Ｐ＝０．１０）が、この増加はＳｗｉｓｓ群において有意であった（ｎ＝６；Ｐ＜０．００１）。データは平均±ＳＥＭを表わす。
【図４】レーザー誘導ＣＮＶマウスモデルにおける後眼部コラーゲン沈着。後眼部コラーゲン沈着（ＰＢＳ処理眼と比較して）を、抗マウスＰｌＧＦ抗体５Ｄ１１Ｄ４、抗ヒトＰｌＧＦ抗体１６Ｄ３、抗マウスＶＥＧＦ抗体Ｂ２０（すべて３．１μｇ／眼）、アフリベルセプト（等モル量の２．４μｇ／眼）、およびトリアムシノロンアセトニド（ＴＡＡＣ；４０μｇ／眼）の硝子体内投与後に査定した。両方の抗ＰｌＧＦ抗体はコラーゲン沈着を有意に減少させた（Ｐ＜０．０５）。それはＴＡＡＣ（４０μｇ／眼）の投与へ類似していた。アフリベルセプトまたは抗ＶＥＧＦ抗体Ｂ２０の等モル量の投与は、ＰＢＳ処理眼に比較して、線維症を減少させなかった（Ｐ＜０．０５）。データは平均±ＳＥＭを表わす。
【図５】糖尿病マウス（ストレプトゾトシン誘発糖尿病）の眼中のＲＧＣ密度。糖尿病の開始後８週間で、ＲＧＣの数（視神経のいずれかの側から２５０μｍ）は、処理を受けない眼（−−−）、抗ＰｌＧＦ抗体５Ｄ１１Ｄ４の硝子体内投与（５．４μｇ／眼）を受けた眼、またはＰＢＳ注射を受けた眼の間で有意に異ならなかった。これとは対照的に、抗ＶＥＧＦＲ２抗体ＤＣ１０１の投与はＲＧＣ密度を２０％で有意に低減した（Ｐ＜０．０５）。データは平均±ＳＥＭを表わす。
【図６】レーザー誘導ＣＮＶマウスモデルにおける網膜血管における周皮細胞被覆。抗ＰｌＧＦ抗体５Ｄ１１Ｄ４による処理（２５ｍｇ／ｋｇ）は、レーザー処理後１４日で分析されるように、ＣＮＶ中の血管成熟を増加させる。抗ＰｌＧＦ抗体の腹腔内投与（１週間あたり３回）をレーザー処理直後に開始し、屠殺に際してまで行った。対照ＩｇＧ抗体１Ｃ８による処理（「ＩｇＧ」、ｎ＝１０、Ｐ＜０．０５）に比較して、抗ＰｌＧＦ抗体５Ｄ１１Ｄ４による処理（２５ｍｇ／ｋｇ）は、αＳＭＡ（平滑筋細胞アクチン）陽性面積を増加させた。対照ＩｇＧの投与（ｎ＝１０、Ｐ＞０．０５）に比較して、抗ＶＥＧＦ−Ｒ２抗体ＤＣ１０１の投与（２５ｍｇ／ｋｇ）処理の効果は、有意ではなかった。データは平均±ＳＥＭを表わす。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明を導く研究において、レーザー誘導脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）の異なる態様に対する異なる血管新生阻害物質の効果が比較された。
【００２６】
包含される血管新生阻害物質は、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦ−Ｒ２）（ＶＥＧＦ−Ａの受容体）を遮断する抗体、マウス胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）中和抗体（ＷＯ０１／８５７９６中で記載されるような；および以下参照）、ヒトＰｌＧＦ中和抗体（ＷＯ２００６／０９９６９８中で記載されるような；および以下参照）、抗マウスＶＥＧＦ抗体Ｂ２０（Ｌｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００６，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８１：９５１−９６１）、およびアフリベルセプト（ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂの両方およびＰｌＧＦを捕捉する；商品名Ｅｙｌｅａ（登録商標））である。研究されるＣＮＶの態様は、炎症、新生血管形成、血管漏出（血管周皮細胞に対する効果が含まれる）、および後眼部線維症である。網膜神経節細胞に対する効果は、ナイーブマウスおよび糖尿病マウスモデルにおいて調査された。ＶＥＧＦＲ−２に対するマウス抗体およびＰｌＧＦに対するマウス抗体に加えて、アフリベルセプトは、すべて新生血管形成および血管漏出を低減した。驚くべきことに、アフリベルセプトおよびＰｌＧＦ中和抗体のみが炎症を減少させることができた（同等の用量で同等の低減）が、ＶＥＧＦ−Ｒ２の受容体を遮断する抗体は炎症を減少させなかった。アフリベルセプトの炎症を低減する効果は、したがって、ＰｌＧＦを捕捉する特色に帰すことができる。ＰｌＧＦ中和抗体に関連して、これらのデータは先に出版された観察を確認するものである（Ｖａｎ  ｄｅ  Ｖｅｉｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ２０１０，１４１：１７８−１９０）。
【００２７】
それとの印象的な対比において、しかしながら、現在の研究は、後眼部線維症を低減することができる唯一の薬剤としてＰｌＧＦ阻害物質を同定した。かかる効果はアフリベルセプトで観察されず、ＶＥＧＦを遮断する抗体およびＶＥＧＦ−Ｒ２受容体を遮断する抗体のどちらでも観察されなかった。アフリベルセプトはＰｌＧＦを中和できるが、後眼部線維症を低減しなかったので、これは非常に意外である。これは、ＰｌＧＦおよびＶＥＧＦがＶＥＧＦ−ＶＥＧＦＲ経路において同様に作用する単に代替の増殖因子であるという確信が時々持たれたり示されたりしたが、それに反するものである。これらの結果は、眼の裏面におけるＰｌＧＦ作用の遮断が後眼部線維症を停止させる能力を維持することを指摘するので、後眼部線維症と前眼部線維症との間の差の確認という点で、このことはさらに意外であり、これはＶＥＧＦ阻害（後眼部線維症を増加させる可能性がある、背景技術のセクションを参照）とは対照的である。
【００２８】
この研究においてさらに観察されたものはＲＧＣについてのＰｌＧＦアンタゴニストの毒性の欠如であり、これはＶＥＧＦ−Ｒ２受容体を遮断する抗体によって誘導された有意なＲＧＣアポトーシス率とは対照的であった。
【００２９】
上記のことを考慮して、したがって、本発明は、被験体における後眼部線維症の治療、予防、またはその進行の遅延における使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストに関する。あるいは、単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストは、被験体における後眼部神経変性を誘導せずに、後眼部線維症の治療、予防、またはその進行の遅延における使用のためのものである。さらなる実施形態として、上記の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストは、後眼部炎症および／または後眼部新生血管形成および／または血管漏出のさらなる治療、予防、またはそれらの進行の遅延を意図する。
【００３０】
後眼部線維症は、任意の網膜の創傷、損傷または外傷（本明細書において網膜損傷と集合的に称される）の治癒と関連する。眼の裏面（眼の後部帯）で起こる治癒応答／治癒プロセスに起因して起こる線維症は、Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００７，１１７：５７６−５８６）によってグリオーシス（グリア細胞によって媒介される線維症）と称される（上の背景技術のセクションも参照）。
【００３１】
特異的なアンタゴニストとは、アンタゴニストの標的分子の作用を遮断、中和もしくはそうでなければ消失（例えば阻害）し、または別の分子（それは非標的分子）の作用を遮断、中和、もしくは消失しないかまたは有意にそのようしないアンタゴニストである。したがって標的分子の作用の遮断、中和またはそうでなければ消失は選択的である。標的分子の作用の遮断、中和またはそうでなければ消失は、部分的であり得るか（例えば５％〜９５％の間の任意の範囲の残存活性が残される＝９５％〜５％の間の任意の範囲の阻害）、またはほぼ完全であり得る（例えば９５％を超える阻害）。
【００３２】
リガンド−受容体相互作用の事例において、リガンドは受容体の唯一のリガンド（必ずしも唯一である必要はない）であり得るか；または、複数のリガンドは同じ受容体へ結合することができ、その事例において、すべてもしくはいくつかのリガンドは受容体の同じ部位へ結合し得るか、または各々のすべてもしくはいくつかのリガンドは受容体の異なる部位へ結合し得る。リガンドの特異的なアンタゴニズムは常に可能である。特異的な受容体阻害の事例においては、これは、唯一の受容体の事例で、または標的リガンドについての受容体中のユニークな結合部位の標的化の事例で、のいずれかで、標的化することによって可能だろう。
【００３３】
選択的アンタゴニストによる標的分子の作用の遮断、中和またはそうでなければ消失は、通常アンタゴニストと標的分子との間の物理的相互作用を暗示する。このことは、選択的アンタゴニストの非標的分子への結合を除外しないが、そのとき後者の（生物学的）作用は、遮断、中和またはそうでなければ消失しないかまたは有意にそのようにしない。あるいは、標的分子の（生物学的）作用は、非標的分子の阻害に比較して、はるかに高い程度（例えば２５倍、５０倍、１００倍またはそれ以上の）で阻害され、したがって選択性が生じる。阻害の比較は、例えば分子の（生物学的）活性の５０％を阻害するのに要求されるアンタゴニストの濃度（ＩＣ５０値）に関して表現され得る。
【００３４】
特に、特異的なアンタゴニストは単一特異的アンタゴニストである。これは、アンタゴニストがただ１つの特異的な分子を標的としている（上記のような作用を遮断、中和、またはそうでなければ消失するという意味で）ことを暗示する。これは、（単一）特異的アンタゴニストの多価性を除外するものではない。かかるアンタゴニストはしたがって複数の結合部位を有することができ、これらのうちの各々は分子の同じ部分と相互作用するか、またはこれらのうちの各々もしくはこれらのうちのいくつかは標的分子の別個の部分と相互作用する。全体として、しかしながら、アンタゴニストは、１つの同じ分子（すなわち同じ標的分子）について、特異的または単一特異的である。特異性および単一特異性の概念は、さらに分子の複数のアイソフォームへ拡張される。例えば、ベバシズマブは、血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）の複数のアイソフォームを阻害するモノクローナル抗体であり、したがって単一特異的ＶＥＧＦ−Ａアンタゴニストである。
【００３５】
単一特異性の概念は抗体分野において周知であるが、それは、小分子（例えばクラスＩレチノイドは１つのタイプのみのレチノイン酸受容体の単一特異的（アンタゴニスト）アゴニストであり、これは非特異的であるクラスＩＩレチノイドへ比較される、Ｇｅｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  １９９９，６：５１９−５２９）に加えて、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡおよびアプタマー（従来は単一特異的であるが二重特異的のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡおよびアプタマーは公知であり、例えばそれぞれＲｕｂｅｎｓｔｅｉｎ  ＆  Ｇｕｉｎａｎ，Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ２０１０，２４：４８９−４９４；Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ２００３，１３：３０３−３１２；およびＳｃｈｒａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ  ２０１４，２：８６７−８７７）へ拡張される。三価であるが他の場合には単一特異的のリボザイムは、Ｂａｉ  ｅｔ  ａｌ．（ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ  Ｈｕｍ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒ  ２００１，１７：３８５−３９９）によって記載されている。
【００３６】
ヒト胎盤増殖因子（ｈＰｌＧＦ）は最初にＭａｇｌｉｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １９９１，８８：９２６７−９２７１）によって開示され、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ４９７６３下でアクセス可能なポリペプチドの４つのアイソフォームバリアントを指し、そのうちのＰｌＧＦ１およびＰｌＧＦ２（ＰｌＧＦ−１およびＰｌＧＦ−２とも称される）は最も周知のものである。ヒトＰｌＧＦ−２の全長参照配列（すなわち１８アミノ酸のシグナル配列を欠如する成熟タンパク質；ｈＰｌＧＦ２）は、以下に包含され、以下の通りである。
【化１】
2019507746.tif 000003
（配列番号：１０）。ｈＰｌＧＦ２に比較して、配列
【化２】
2019507746.tif 000004
（配列番号：１１）のヘパリン結合ドメインは、ｈＰｌＧＦ１中に存在しない。代替の略称「ＰＧＦ」は、最近胎盤増殖因子のために頻繁に使用されている。ＰｌＧＦの単一特異的アンタゴニストの文脈において、かかる単一特異性は、したがってＰｌＧＦのすべてアイソフォームへ拡張することができる。「ＰｌＧＦの特異的阻害物質」は、他の分子の生理機能を妨害することなしに、または有意に妨害することなしに（選択的に妨害して）、本明細書において使用される時、したがって、ＰｌＧＦの機能を阻害するか、ＰｌＧＦ発現を阻害するか、またはＰｌＧＦシグナリングを阻害する、分子または化合物である。特に、選択的ＰｌＧＦ阻害物質はＶＥＧＦの機能を妨害しない。したがって、非限定例として、ＰｌＧＦに対して特異的に向けられた化合物（例えば抗ＰｌＧＦ抗体）は、（単一）特異的阻害物質である一方で、ＶＥＧＦも標的とする化合物（ＶＥＧＦＲ１ベースの化合物およびＶＥＧＦトラップ化合物またはＶＥＧＦトラップ様化合物等）、またはＶＥＧＦ／ＰｌＧＦ共有受容体を標的とする化合物（例えばＶＥＧＦＲ１に対する抗体、またはｓＶＥＧＦＲ−１）は、これらは（単一）特異的ＰｌＧＦアンタゴニストではないので、典型的には非特異的阻害物質である。ＶＥＧＦアンタゴニストおよびＶＥＧＦ受容体アンタゴニストはしたがって（単一）特異的ＰｌＧＦアンタゴニストではない。
【００３７】
ＰｌＧＦ中和抗体は、例えばＷＯ０１／８５７９６、ＷＯ２００６／０９９６９８（Ｎｉｅｌｓｅｎ  ＆  Ｓｅｎｇｅｌｏｖ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２０１２，１２：７９５−８０４も参照）、ＷＯ２０１１／０８８１１１中で、および、例えばＢａｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｅｌｌ  ２０１０，１４１：１６６−１７７、これらのうちの１つ（Ｃ９．Ｖ２）はＳｎｕｄｅｒｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ２０１３，１５２：１０６５−１０７６によって使用されている）によって、開示されている。特に、ＷＯ２００６／０９９６９８中で開示されるヒトＰｌＧＦ中和抗体１６Ｄ３は、配列ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号：１）を備えたＶＨ  ＣＤＲ１、配列ＩＹＰＧＳＧＮＴ（配列番号：２）を備えたＶＨ  ＣＤＲ２、配列ＶＲＤＳＰＦＦＤＹ（配列番号：３）を備えたＶＨ  ＣＤＲ３、配列ＱＳＬＬＮＳＧＭＲＫＳＦ（配列番号：４）を備えたＶＬ  ＣＤＲ１、配列ＷＡＳ（配列番号：５）を備えたＶＬ  ＣＤＲ２、および配列ＫＱＳＹＨＬＦＴ（配列番号：６）を備えたＶＬ  ＣＤＲ３を含む。マウス抗体を発現するハイブリドーマは、生物寄託アクセッション番号ＬＭＢＰ  ６３９９ＣＢにより、２００５年３月２９日に、Ｔｈｒｏｍｂ−Ｘ（Ｈｅｒｅｓｔｒａａｔ  ４９、Ｂ−３０００  Ｌｅｕｖｅｎ）によって、ＢＣＣＭ／ＬＭＢＰ（Ｂｅｌｇｉａｎ  Ｃｏ−ｏｒｄｉｎａｔｅｄ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ／Ｐｌａｓｍｉｄ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｕｍ  ｖｏｏｒ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｉｒｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｅ）、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｇｈｅｎｔ（Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｐａｒｋ  ９２７、Ｂ−９０５２  Ｚｗｉｊｎａａｒｄｅ、ベルギー）に寄託された。
【００３８】
ＷＯ２００６／０９９６９８中の例示的なヒト化されたＶＨ、ＶＬおよびｓｃＦｖのアミノ酸配列は、
ヒト化ＶＨアミノ酸配列：
【化３】
2019507746.tif 000005
（配列番号：７）
ヒト化ＶＬアミノ酸配列：
【化４】
2019507746.tif 000006
（配列番号：８）
ヒト化ｓｃＦｖアミノ酸配列（ＷＯ２００６／０９９６９８中の配列に比較して６−Ｈｉｓタグが省かれる）：
【化５】
2019507746.tif 000007
（配列番号：９）
である。
【００３９】
ＷＯ０１／８５７９６中で使用されるようなマウスＰｌＧＦ中和抗体５Ｄ１１Ｄ４は、以下に与えられる重鎖および軽鎖のアミノ酸配列によって特徴づけられる。
重鎖５Ｄ１１Ｄ４：
【化６】
2019507746.tif 000008
【化７】
2019507746.tif 000009
（配列番号：１２）、そこで、ＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２、およびＣＤＲ  Ｈ３は、アミノ酸配列
【化８】
2019507746.tif 000010
（配列番号：１４）、
【化９】
2019507746.tif 000011
（配列番号：１５）、および
【化１０】
2019507746.tif 000012
（配列番号：１６）によってそれぞれ定義される。
軽鎖５Ｄ１１Ｄ４：
【化１１】
2019507746.tif 000013
【化１２】
2019507746.tif 000014
（配列番号：１３）、そこで、ＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２、およびＣＤＲ  Ｌ３は、アミノ酸配列
【化１３】
2019507746.tif 000015
（配列番号：１７）、（配列番号：１８）、および
【化１４】
2019507746.tif 000016
（配列番号：１９））によってそれぞれ定義される。
【００４０】
上記のマウスＰｌＧＦ中和抗体、加えてそのＰｌＧＦ中和断片、加えてかかる抗体または抗体断片のヒト化バージョンは、本発明のさらなる態様を形成する。特に、本発明は、配列番号：１２において定義される重鎖中に含まれる３つの重鎖ＣＤＲおよび配列番号：１３において定義される軽鎖中に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲを含む、単離されたＰｌＧＦ中和抗体、またはそのＰｌＧＦ中和抗体断片に関し、そこで、ＣＤＲは周知の方法論のうちの任意のものによって後述されるように描写される。特に、配列番号：１４〜１９において定義されるようなＣＤＲは、Ｋａｂａｔ方法を配列番号：１２および１３へ適用して、描写された。あるいは、本発明は、マウスＰｌＧＦへの結合または５Ｄ１１Ｄ４によって結合されるものと同じマウスＰｌＧＦエピトープへの結合を、５Ｄ１１Ｄ４と競合する、マウスＰｌＧＦ中和抗体またはマウスＰｌＧＦ中和抗体断片に関する。
【００４１】
抗体配列中のＣＤＲ領域の決定は、適用されるアルゴリズム／方法論（Ｋａｂａｔナンバリングスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキーム、Ｍａｒｔｉｎ（増強Ｃｈｏｔｈｉａ）ナンバリングスキーム、ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ）ナンバリングスキーム；例えばｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ＃ｋａｂａｔｎｕｍおよびｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ＩＭＧＴＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＣｈａｒｔ／Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ／ＩＭＧＴｎｕｍｂｅｒｉｎｇ．ｈｔｍｌを参照）に依存し、それはＣＤＲ配列長さおよび／または描写における差を生じさせ得る。したがって、ＷＯ０１／８５７９６およびＷＯ２００６／０９９６９８中で記載される抗ＰｌＧＦ抗体のＣＤＲは、あるいは、与えられたそれぞれの重鎖配列および軽鎖配列において存在するような、および周知の方法論に従って（Ｋａｂａｔナンバリングスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキーム、Ｍａｒｔｉｎ（増強Ｃｈｏｔｈｉａ）ナンバリングスキーム、またはＩＭＧＴナンバリングスキーム等に従って）決定または描写されるような、ＣＤＲ配列として記載され得る。配列番号：１〜６において定義されるＣＤＲ配列は、例えば記載されたＷＯ２００６／０９９６９８に従って、ＩＭＧＴ方法を用いて１６Ｄ３抗ＰｌＧＦ抗体から描写されたものである。別の方法の適用は、配列番号：１〜６において定義されるものとは（わずかに）異なるＣＤＲ配列をもたらし得る。
【００４２】
本明細書において、ＰｌＧＦ中和抗体またはＰｌＧＦ中和抗体断片は、抗ヒトＰｌＧＦ抗体１６Ｄ３の６つのＣＤＲ（すなわち配列番号：７において定義される重鎖中に含まれる３つのＶＨ  ＣＤＲおよび配列番号：８において定義される軽鎖中に含まれる３ＶＬ  ＣＤＲ）を含むものであり得、そこで、ＣＤＲは周知の方法論のうちの任意のものによって上記のように描写される。特に、これらのＣＤＲは、ＩＭＧＴ方法を配列番号：７および８へ適用する場合に、配列番号：１〜６におけるように定義される。相補性決定領域の外側および隣接して、ＰｌＧＦ中和抗体またはＰｌＧＦ中和抗体断片は、好適なフレームワーク領域（ＦＲ）（配列番号：７において定義されるＶＨおよび配列番号：８において定義されるＶＬから誘導可能なもの、またはその任意のヒト化バージョン等）を含み得る。あるいは、ＰｌＧＦ中和抗体またはＰｌＧＦ中和抗体断片は、ＰｌＧＦへの結合または１６Ｄ３によって結合されるものと同じＰｌＧＦエピトープへの結合を、１６Ｄ３と競合する、中和抗体であり得る。抗体１６Ｄ３はヒトＰｌＧＦへ結合し、加えてより低い親和性とはいえ、マウスＰｌＧＦへ結合する。
【００４３】
特に、前記中和抗ＰｌＧＦ抗体は、ＰｌＧＦへ結合することができ、ＰｌＧＦの活性を阻害できる、任意のタイプの抗体またはその任意のものの任意の断片であり得る。特に、前記抗ＰｌＧＦ抗体またはその断片は、ＰｌＧＦの活性を中和することができ、したがって中和抗ＰｌＧＦ抗体または中和抗ＰｌＧＦ抗体断片であり得る。かかる抗体には当技術分野において公知のすべてのタイプの抗体が含まれ、それらは、ヒト抗体またはヒト化抗体、ラクダ様抗体、サメ抗体、ナノボディ、（単一）ドメイン抗体、小型化された抗体（例えば小モジュール式免疫医薬品、ＳＭＩＰ）、ユニボディなど、およびその任意のものの任意の断片等である。例示的な抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ｓｃＦＶ−Ｆｃ、ミニボディ、Ｖ−ＮＡＲ、ＶｈＨが挙げられる（Ｎｅｌｓｏｎ，ｍＡｂｓ  ２０１０，２：７７−８３；Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ＆  Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２００５，２３：１１２６−１１３６）。
【００４４】
ＰｌＧＦアンチセンスＲＮＡは、ＲＮＡ干渉のためのＰｌＧＦ  ｓｉＲＮＡ（例えばＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２０１３，３２：２９５２−２９６２；Ｎｏｕｒｉｎｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｖｉｓ  Ｒｅｓ  ２０１３，８：４−８）および抗ＰｌＧＦリボザイム（例えばＣｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２００８，１０５：３１３−３２０）と同様に、当技術分野において公知である（例えばＹｏｎｅｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９９９，２７４：３５１７２−３５１７８；Ｌｅｖａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１１，３８：２４１−２４７）。
【００４５】
ＶＥＧＦ阻害化合物およびＶＥＧＦＲ阻害化合物の非網羅的なリストは以下に包含される。単一特異的ＶＥＧＦ阻害剤としては、抗体ベバシズマブ（すべてのＶＥＧＦ−Ａアイソフォームを結合する）、または抗体断片ラニビズマブ（すべてのＶＥＧＦ−Ａアイソフォームを結合する）、ＲＮＡアプタマーペガプタニブ（１つのＶＥＧＦ−Ａアイソフォームのみ結合する）、およびアビシパー（ａｂｉｃｉｐａｒ）（ＶＥＧＦ−Ａ特異的にデザインされたアンキリン反復タンパク質（ｄａｒｐｉｎ））が挙げられる。アフリベルセプトは、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂの両方およびＰｌＧＦを捕捉するマルチペシフィックな（ｍｕｌｔｉｐｅｃｉｆｉｃ）阻害物質である。ＶＥＧＦＲ−２（Ｆｌｋ−１）遮断剤としては、抗体ＤＣ１０１（ハイブリドーマ細胞株ＡＴＣＣ  ＨＢ−１１５３４によって産生される）が挙げられる。ＶＥＧＦＲ−１（Ｆｌｔ−１）遮断剤としては、ペプチド（Ｔａｙｌｏｒ  ＆  Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ  ２００７，Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  ６：５２４−５３１；Ｂａｅ  ｅｔ  ａｌ．２００５，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  １１：２６５１−２６６１；Ｐｏｎｔｉｃｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．２００８，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８３：３４２５０−３４２５９）および抗体（例えばＷＯ２００６／０５５８０９中で記載されるような）が挙げられる。
【００４６】
「治療／治療すること」は、無治療で放置された場合の疾患もしくは障害またはその単一症状の進行または予想される進行に比較して、疾患もしくは障害またはその単一症状の進行の低減、遅延または停滞の任意の率を指す。より望ましくは、治療は、疾患もしくは障害またはその単一症状の非進行／ゼロ進行（すなわち「阻害」）、または既に発症している疾患もしくは障害の退行の任意の率でさえ、または既に発症している疾患もしくは障害の単一症状の退行の任意の率をもたらす。治療／治療することは、疾患もしくは障害と関連する１つもしくは複数の臨床症状、またはその任意の単一症状の有意な寛解を達成することも指す。状況に依存して、有意な寛解は、定量的または定性的にスコアリングされ得る。定性的基準は例えば患者の幸福であり得る。定量的評価の事例において、有意な寛解は、典型的には、治療の前の状況よりも、１０％を超える、２０％を超える、２５％を超える、３０％を超える、４０％を超える、５０％を超える、６０％を超える、７０％を超える、７５％を超える、８０％を超える、９０％を超える、９５％を超える、または１００％以上の改善である。改善が評価される時間枠は、観察された基準／疾患のタイプに依存し、当業者によって決定することができる。
【００４７】
いくつかの事例において、治療は予防的であり得、それが、疾患もしくは障害またはその単一症状の開始の予防をもたらすことを意味する。この文脈において、例えば、後眼部線維症の発症は時間がかかり、原理上は、任意のタイプの網膜損傷と同時にまたはその後に起こり始めることが可能である。かかる網膜損傷が十分に早期に認識されるならば、次いでこれらの早期ステージの時点で単一選択的ＰｌＧＦアンタゴニストを投与して、後眼部線維症の有意な発症の開始を予防することができるだろう。同様に、１つの眼で網膜損傷と診断された患者（病理に起因する）において、他眼または僚眼が、おそらくまだ健康であるが、同じ網膜損傷（病理に起因する）を受けるようになり得ることが知られている（例えばＳｔａｌｍａｎｓ，Ｇｒａｅｆｅｓ  Ａｒｃｈ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２０１６、ｄｏｉ  １０．１００７／ｓ００４１７−０１６−３２９４−１）。かかる事例において、単一選択的ＰｌＧＦアンタゴニストによる他眼または僚眼の予防的治療は、網膜損傷が事実ならば、後眼部線維症が起こることを予防するために考慮され得る。換言すれば、単一選択的ＰｌＧＦアンタゴニストを使用して、後眼部線維症を予防することができるだろう。単一選択的ＰｌＧＦアンタゴニストを使用して後眼部線維症を予防できる別の状況は、外科的硝子体切除術と組み合わせられる（例えば直後に）。網膜損傷が外科的硝子体切除術の副作用として起こり得るので、かかる損傷への後眼部線維化応答の出現を予防することを意図できる。
【００４８】
任意の網膜への任意の損傷は、慢性的な創傷治癒応答（後眼部線維症および瘢痕化が挙げられる）のきっかけとなり得る。網膜および脈絡膜の血管における異常（すべて網膜を損傷する）は、多くの失明のおそれのある疾患（加齢黄斑変性症、糖尿病網膜症、末熟児網膜症、任意のタイプの網膜症、新生血管緑内障および黄斑浮腫、ならびに硝子体黄斑牽引または症候性硝子体黄斑癒着等の合併症（網膜上の硝子体の牽引を引き起こす）、網膜出血および硝子体出血、網膜剥離、黄斑円孔などが挙げられる）の基礎にある。網膜損傷は、硝子体黄斑牽引もしくは（症候性）硝子体黄斑癒着の結果または神経変性攻撃の結果でもあり得る（さらなる詳細を参照）。加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）は、萎縮型ＡＭＤ（非血管新生）および滲出型ＡＭＤ（血管新生）に分割される。
【００４９】
滲出型ＡＭＤは脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）によって特徴づけられる。先進国世界において、ＡＭＤは、中心視力の重症かつ不可逆的損失および最終的には失明の主要因のうちの１つである。ＣＮＶは、多くの場合、蛍光眼底血管造影法（過蛍光の急増および／または血管漏出によって証明される）または光コヒーレンストモグラフィー（ＯＣＴ）によって査定されるが、患者の視力決定は最も妥当な臨床的パラメーターである。ＣＮＶは、さらに病的近視または眼ヒストプラスマ症候群と共に発症し得る。網膜下線維症はＡＭＤの間に起こる（Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００７，１１７：５７６−５８６）。
【００５０】
ＡＭＤ（特に滲出型ＡＭＤ）を治療する複数の手法が以下の通り存在する。
−  光線力学療法（ＰＤＴ）：全身（例えば静脈内）投与できる感光性薬物（例えばベルテポルフィン）を使用し、後続して非熱性光線により活性化して、細動脈化新生血管の選択的血管閉塞（すなわちＣＮＶの選択的破壊）を達成する。
−  抗炎症剤：ステロイド、コルチコステロイドまたは他の免疫抑制物質、例えば硝子体内、テノン嚢下または結膜下のデキサメタゾン、トリアムシノロンアセトニドまたはフルオシノロンアセトニド（ＴＡＡＣ）；多くの場合、これらの薬剤は抗血管新生性効果、抗線維化効果および抗透過性（抗浮腫）効果も発揮する。持続放出性ステロイドインプラント（例えばＯｚｕｒｄｅｘ（登録商標）、Ｉｌｕｖｉｅｎ（登録商標））は、例えば複数回の硝子体内注射を上回る利点を提供する。他の抗炎症剤はサイトカイン（腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）等）を標的化することができる（例えばインフリキシマブ）（Ｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２００７，１２５：１２２１−１２２４）。補体系の阻害は、抗炎症効果を得るための別のルートである。補体系阻害物質としては、補体因子Ｃ５阻害アプタマーアバシンキャプタドペゴルナトリウム（ａｖａｃｉｎｃａｐｔａｄ  ｐｅｇｏｌ  ｓｏｄｉｕｍ）（Ｚｉｍｕｒａ（登録商標））；および補体因子Ｃ３の阻害物質（ＰＯＴ−４、環式ペプチドコンプスタチンの誘導体である）、が挙げられる（Ｑｕｅｒｑｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｒｅｓ  ２０１５，５３：１９４−１９９）。
−  抗ＶＥＧＦ剤：ベバシズマブ（適応外使用）、ラニビズマブ、アフリベルセプト、ペガプタニブナトリウム；または他のもの（ＤＡＲＰｉｎベースのアビシパーペゴル、一本鎖抗ＶＥＧＦ抗体ブロルシズマブ、ＶＥＧＦトラップバリアントコンバセプト等（Ｂａｒａｋａｔ  ＆  Ｄｕｇｅｌ，Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ  ２０１５，１２：２６−３６；Ｑｕｅｒｑｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｒｅｓ  ２０１５，５３：１９４−１９９）；またはＶＥＧＦトラップバリアントＶＥＧＦ−Ｇｒａｂ等（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  ２０１５，１４：４７０−４７９））。パゾパニブ（ＶＥＧＦＲ１受容体、ＶＥＧＦＲ２受容体、ＶＥＧＦＲ３受容体、ＰＤＧＦＲα受容体およびＰＤＧＦＲβ受容体を遮断するマルチチロシンキナーゼ阻害物質）は、同様に評価中である（Ｑｕｅｒｑｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｒｅｓ  ２０１５，５３：１９４−１９９）。
−  熱性レーザーアブレーション、レーザー光凝固術。
−  イオン化放射線療法／放射線療法（Ｆｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １９９６，１０３：８７８−８８９）。
−  抗ＶＥＧＦ剤以外の抗血管新生剤：例えば血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦβ）を阻害する薬剤；またはスクアラミン等（Ｂａｒａｋａｔ  ＆  Ｄｕｇｅｌ，Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ  ２０１５，１２：２６−３６）。臨床評価中の抗ＰＤＧＦ−Ｂ剤としては、ＰＥＧ化アプタマーペグプレラニブナトリウム（ｐｅｇｐｌｅｒａｎｉｂ  ｓｏｄｉｕｍ）（Ｆｏｖｉｓｔａ（登録商標））が挙げられる（Ｑｕｅｒｑｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｒｅｓ  ２０１５，５３：１９４−１９９）。
−  抗線維化剤：例えば結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）を阻害する薬剤；５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）。
−  組み合わせ療法：ＰＤＴ＋抗炎症剤；ＰＤＴ＋抗ＶＥＧＦ剤；ＰＤＴ＋抗炎症剤＋抗ＶＥＧＦ剤（Ｙｉｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２００９，９３：７５４−７５８；Ｓｈａｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｔｉｎａ  ２００９，２９：１３３−１４８）；抗ＶＥＧＦ剤＋抗ＰＤＧＦ剤（Ｓｐａｉｄｅ，Ｒｅｔｉｎａ  ２００９，２９：Ｓ５−Ｓ７中で言及される）。
−  硝子体外科手術（経毛様体扁平部硝子体切除術による中心窩下のＣＮＶの外科的切除；中心窩下のＣＮＶのための中心窩の移動術；次いでもたらされた傍中心窩または中心窩外のＣＮＶは標準的なレーザー光凝固術またはＰＤＴにより治療することができる）。
【００５１】
糖尿病網膜症（ＤＲ）は、ＡＭＤと同様に２つのステージに分割される。早期ステージは非血管新生性であり、非増殖糖尿病網膜症（ＮＰＤＲ）と称され、それ自体は軽症、中等症、および重症のＮＰＤＲへ細別される。進行したステージは血管新生性であり、増殖糖尿病網膜症（ＰＤＲ）と称される。一旦黄斑が侵されると（「糖尿病黄斑症」）、ＤＲに起因する（進行した）視覚喪失が起こり得る。糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）は任意のＤＲステージで起こり得るが、後期ステージのＤＲとより頻繁に関連し、黄斑の腫脹を導く血管漏出によって特徴づけられる。糖尿病黄斑症のさらなる分類には、中央で起こる（中心窩が侵される）ものまたは中央で起こらない（中心窩が冒されない）もの；局所性のものまたはびまん性のもの（浮腫の程度に依存して）；虚血性のものまたは非虚血性のもの；および牽引性のものまたは非牽引性のものが含まれる。多因子性ＤＲの重要な態様は神経変性である（Ｓｔｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２０１６  ５１：１５６−１８６）。網膜前線維症がＤＲの間に起こる（Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００７，１１７：５７６−５８６）。
【００５２】
ＤＲを治療する複数の手法が以下の通り存在する（Ｓｔｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２０１６，５１：１５６−１８６；Ｐａｒｋ  ＆  Ｒｏｈ，Ｊ  Ｄｉａｂｅｔ  Ｒｅｓ  ２０１６、論文ＩＤ１７５３５８４）。
−  糖尿病を一般的に制御すること（高血糖、脂質異常症、高血圧症、喫煙）。
−  ＤＭＥが起こる場合：レーザー光凝固術（局所レーザー治療もしくはグリッドレーザー治療、またはより新しい概念（ダイオードマイクロパルスレーザー閾値下光凝固術（ＳＤＭ）および網膜再生療法（２ＲＴ）および選択的網膜治療法（ＳＲＴ）等））、抗ＶＥＧＦ剤、およびコルチコステロイド（例えばトリアムシノロン、デキサメタゾン、フルオシノロン）もしくは非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、またはこれらのうちの任意のものの組み合わせ。抗ＶＥＧＦおよび抗炎症剤についてのより詳細な情報については、ＡＭＤについての本明細書におけるセクションも参照されたい。
−  ＰＤＲが起こる場合：汎網膜レーザー光凝固術；硝子体外科手術（硝子体切除術）；さらなる進行を停止させる抗ＶＥＧＦ剤またはステロイド。
【００５３】
任意の治療の目的は、患者の視力を安定化すること（すなわち視力のさらなる悪化を予防すること）であるが、理想的に、治療の開始での患者の視力へ比較して、患者の視力（ＶＡ）を改善することでもある。ＶＡを決定する異なる方法は、例えばＶａｎｄｅｎ  Ｂｏｓｃｈ  ａｎｄ  Ｗａｌｌ（Ｅｙｅ  １９９７，１１：４１１−４１７）によって論じられ、ＶＡを試験するコンピューター化された方法が導入された（例えばＢｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２００３，１３５：１９４−２０５）。
【００５４】
したがって、本発明は、網膜が損傷された眼を備えた被験体の視力の維持または改善における使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストにも関する。
【００５５】
網膜神経節細胞（ＲＧＣ）およびグリア細胞は代謝ストレス条件を受けやすい。これらの細胞の変性は、眼病変（糖尿病網膜症（ＤＲ）、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、および緑内障等）において起こっている。細胞死／アポトーシスの一因となる因子としては、終末糖化産物（ＡＧＥ）、終末脂質過酸化産物（ＡＬＥ）、フリーラジカル種、高い眼内圧（ＩＯＰ）、低酸素が挙げられる（Ｓｃｈｍｉｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２００８，６：１６４−１７８；Ｂａｒｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｇ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２００３，２７：２８３−２９０）。
【００５６】
多くのＡＧＥ阻害化合物が公知であり、アミノグアニジン（およびその誘導体）、ピリドキサミン、２，３ジアミノフェナジン（２，３ＤＡＰ）、チアゾリジン誘導体（例えばＯＰＢ−９１９５）、カルノシン、テニルセタム、チアミン、ベンフォチアミン、「Ｌａｌｅｚａｒｉ−Ｒａｈｂａｒ」（ＬＲ）化合物、およびエダラボンの誘導体が挙げられる（Ｎａｇａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ２０１２，６１：５４９−５５９中で概説される；例えばこの参照文献中の表１および図２を参照）。他のＡＧＥ阻害物質としては、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）の阻害物質（例えばラミプリル、ベナゼプリル、テモカプリラット、ＡＶＥ８０４８）；アンジオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢ）（例えばロサルタン、バルサルタン、オルメサルタン、Ｒ１４７１７６）；および降圧薬（例えばヒドララジン）が挙げられる（Ｎａｇａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ２０１２，６１：５４９−５５９中で概説される；例えばこの参照文献中の表１を参照）。
【００５７】
多くのＡＧＥ破壊化合物がさらに公知であり、Ｎ−フェナシルチアゾリウムブロミド、およびＡＬＴ−７１１またはアラゲブリウムとして公知のその誘導体、ならびにピリジニウムアナログＴＲＣ４１８６およびＴＲＣ４１４９が挙げられる（Ｎａｇａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ２０１２，６１：５４９−５５９中で概説される；例えばこの参照文献中の表１および図３を参照）。
【００５８】
大部分のＡＧＥ阻害物質は、ＡＬＥ阻害物質の可能性もあると考えられている（Ｂａｙｎｅｓ  ＆  Ｔｈｏｒｐｅ，Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ  ２０００，２８：１７０８−１７１６）。ＡＬＥ阻害物質としては、脂質過酸化から生成されたＡＬＥ前駆体を中和することができる化合物（例えばヒドラジンおよびヒドラジン誘導体（例えばヒドララジン、ジヒドララジン、アミノグアニジン、ＯＰＢ−９１９５）、ビタミンＢ６およびビタミンＢ６の誘導体（例えばピリドキサミン、ピリドキサールイソニコチルヒドラゾン））がさらに挙げられる。アミノ酸誘導体（カルノシン、ヒスチジルヒドラジド、Ｎ−アセチルシステインおよびＳ‐アデノシルメチオニン等）も、ＡＬＥ阻害物質として見なされている。さらなるＡＬＥ阻害物質としては、ＡＣＥ阻害薬（例えばカプトリル（ｃａｐｔｏｔｒｉｌ）、エナラプリル、フォシノプリル）、ＡＲＢ阻害物質（例えばロサルタン、カンデサルタン）、および抗酸化物質が挙げられる。上記のＡＬＥ阻害物質は、Ｎｅｇｒｅ−Ｓａｌｖａｙｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２００８，１５３：６−２０）によって概説された。
【００５９】
アポトーシスの低減を目的とする化合物（抗アポトーシス剤）としては、炭酸脱水酵素遮断薬（例えばドルゾラミド（Ｓｃｈｍｉｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  １９９８，８２：７５８−７６２））が挙げられる。開示された別の炭酸脱水酵素遮断薬（すなわちアセタゾラミド）は、色素性網膜炎に罹患する患者において、加えて糖尿病黄斑浮腫において、類嚢胞黄斑浮腫を減少させる（Ｇｉｕｓｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２００２，２４：７９−８８）。
【００６０】
代謝ストレスの間に放出された興奮性アミノ酸グルタメートは、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体（ＮＭＤＡ受容体）へ結合し、今度は過剰なレベルの細胞内カルシウムを導くことを介してＲＧＣ死の開始に寄与する。ＮＭＤＡ受容体の遮断薬はＲＧＣを保護することが公知であり、ＭＫ−８０１（ジゾシルピン；５−メチル−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジペンゾシクロヘプタ（ｄｉｐｅｎｚｏｃｙｃｌｏｈｅｐｔａ）−５，１０−イミノマレート）（例えばＷｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｒａｅｆｅｓ  Ａｒｃｈ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  １９９５，２３３：３６０−３６５）、メマンチン（例えばＶｏｒｗｅｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  １９９６，３７：１６１８−１６２４）、デキストロメトルファン（Ｙｏｏｎ  ＆  Ｍａｒｍｏｒ，Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  １９８９，１０７：４０９−４１１）、アミノ−ホスホノ吉草酸（ＤｅＶｒｉｅｓ  ＆  Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｎａｔｕｒｅ  １９９９，３９７：１５７−１６０）、およびケタミン（Ｓｌｅｉｇｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｒｅｎｄｓ  Ａｎａｅｓｔｈｅｓｉａ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  ２０１４，４：７６−８１）が挙げられる。カルシウム拮抗薬（ニモジピン等）もＲＧＣを保護する（例えばＧｒｏｓｓｋｒｅｕｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  １９９９，１８：３６３−３６７）。少なくとも２つの他の非ＮＭＤＡ興奮性アミノ酸受容体は網膜中で広がっており、光受容体または双極細胞と神経節細胞との間のシグナル伝達におそらく関与し、それらは、カイニン酸受容体および２−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチトル（ｍｅｔｈｙｔｌ）−４−イソオキサゾールプロピオン酸（ＡＭＰＡ）受容体である（ＤｅＶｒｉｅｓ  ＆  Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｎａｔｕｒｅ  １９９９，３９７：１５７−１６０）。これらの非ＮＭＤＡ興奮性アミノ酸受容体の阻害物質（例えばｃｉｓ−２−３−ピペリジンジカルボン酸（ｃｉｓ−ＰＤＡ））は、網膜神経保護効果を発揮する（Ｗｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｒａｅｆｅｓ  Ａｒｃｈ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  １９９５，２３３：３６０−３６５）。カイニン酸受容体およびＡＭＰＡ受容体の他の阻害物質としては６−シアノ−７−ニトロキノキサリン−２，３−ジオン（ＣＮＱＸ）が挙げられ、選択的ＡＭＰＡ受容体アンタゴニストの例は２，３−ベンゾジアゼピン化合物ＧＹＫＩ５２４６６およびＧＹＫＩ５３６５５である（Ｐａｔｅｒｎａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ  １９９５，１４：１８５−１８９）。
【００６１】
ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストおよび非ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストの組み合わせは、網膜神経変性に対する保護を増加させることができる（Ｍｏｓｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ  １９９１，１１３：１０−１７）。
【００６２】
他の神経保護因子としては、インスリン、ニューロプロテクチンＤ１、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、神経増殖因子（ＮＧＦ）、アドレノメデュリン（ＡＭ）、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）、ソマトスタチン（ＳＳＴ）、間質レチノール結合タンパク質（ＩＲＢＰ）が挙げられる（Ｓｉｍｏ  ＆  Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂｏｌ  ２０１４，２５：２３−３３）。
【００６３】
それらの作用を考慮して、上記の例示的な化合物（非網羅的なリスト）のうちの任意のものはいくらかの程度で神経細胞（特に網膜神経細胞）を保護することができ、群全体はしたがって、この文脈において、神経保護化合物（特に網膜神経保護化合物）と定義される。
【００６４】
既に指摘されるように、本発明は、被験体における後眼部線維症の治療、予防、またはその進行の遅延における使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストに関する。あるいは、単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストは、被験体における後眼部神経変性を誘導せずに、後眼部線維症の治療、予防、またはその進行の遅延における使用のためのものである。さらなる実施形態として、上記の使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストは、後眼部炎症および／または後眼部新生血管形成および／または血管漏出のさらなる治療、予防、またはそれらの進行の遅延を意図する。
【００６５】
本発明は、網膜が損傷された眼を備えた被験体の視力の維持または改善における使用のための単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストにも関する。
【００６６】
上記において、単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストは単独で眼へ投与され得ることは明らかである（すなわち単一特異的ＰｌＧＦアンタゴニストとは異なる別の化合物の投与なしに）。
【００６７】
あるいは、単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストは、同じ眼へ以前に投与された血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたはＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストのウォッシュアウト後に、眼へ投与され得る。
【００６８】
さらなる代替案において、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたはＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストは、同じ眼へ以前に投与された単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストのウォッシュアウト後に、眼へ投与される。
【００６９】
さらなる代替案は、単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストおよび第２の活性化合物の組み合わせ投与を含むことが意図される。それゆえ、上記の使用のうちの任意のものにおいて、単一特異性胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストは第２の活性化合物と組み合わせて眼へ投与され得、そこで、前記第２の活性化合物は血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストとは異なり、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストとは異なる。
【００７０】
あるいは、単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストは第２の活性化合物と組み合わせて眼へ投与され、そこで、前記第２の活性化合物は血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストとは異なり、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストとは異なり；前記投与は、同じ眼へ以前に投与された血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたはＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストのウォッシュアウト後である。
【００７１】
さらなる代替案において、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたはＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストは、第２の活性化合物と組み合わせて、同じ眼へ以前に投与された単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストのウォッシュアウト後に、眼へ投与され、そこで、前記第２の活性化合物は血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストとは異なり、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストとは異なる。
【００７２】
単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストが第２の活性化合物と組み合わせられる場合に、両者は各々分離した組成物で眼へ投与され得る（各々は同じ薬学的に許容される製剤または異なる薬学的に許容される製剤中で）。第２の活性薬剤は、単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストの投与の前に、それと同時に、またはその後に投与され得る。あるいは、両者は単一組成物で組み合わせられて眼へ投与され得る（同じ薬学的に許容される製剤中で）。
【００７３】
ＰｌＧＦアンタゴニスト（さらなる第２の活性化合物有りまたは無しで）およびＶＥＧＦアンタゴニストまたはＶＥＧＦＲアンタゴニストの組み合わせは、上記のように多くの形態をとることができる。例えば、一方でＰｌＧＦアンタゴニストの投与、および他方でＶＥＧＦアンタゴニストまたはＶＥＧＦＲアンタゴニストの投与は、交互に起こり得る（第１の投与において、どちらかものでスタートする）。あるいは、ＰｌＧＦアンタゴニストの第１の投与、またはＶＥＧＦアンタゴニストもしくはＶＥＧＦＲアンタゴニストの第１の投与はそれぞれ、ＶＥＧＦアンタゴニストもしくはＶＥＧＦＲアンタゴニストの複数の続いて行われる投与、またはＰｌＧＦアンタゴニストの複数の続いて行われる投与がそれぞれ後続し得る。さらなる代替案において、ＰｌＧＦアンタゴニストの第１および第２の投与、またはＶＥＧＦアンタゴニストもしくはＶＥＧＦＲアンタゴニストの第１および第２の投与はそれぞれ、ＶＥＧＦアンタゴニストもしくはＶＥＧＦＲアンタゴニストの複数の続いて行われる投与、またはＰｌＧＦアンタゴニストの複数の続いて行われる投与のそれぞれによって、分離され得る。
【００７４】
この文脈における第２の活性化合物は、１つの活性化合物または２つ以上の活性化合物の組み合わせであり得る。特に、かかる第２の活性化合物は、抗炎症化合物、抗血管新生性化合物、抗線維化化合物、ＡＧＥ阻害化合物、ＡＬＥ阻害化合物、ＡＧＥ破壊化合物、炭酸脱水酵素阻害物質、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト、カイニン酸受容体アンタゴニスト、ＡＭＰＡ受容体アンタゴニスト、神経保護剤、眼内圧の制御のための薬剤、抗アポトーシス剤、抗ウイルス性化合物、抗生化合物、抗真菌化合物、抗ヒスタミン物質、抗凝固剤、血栓溶解化合物、抗有糸分裂剤、麻酔剤、および瞳孔拡大を誘導する薬剤、毛様筋麻痺を誘導する薬剤、後部硝子体剥離を誘導する薬剤（完全または不完全）、硝子体液化を誘導する薬剤、インテグリン阻害物質、抗浮腫剤であり得るがこれらに限定されない。
【００７５】
最先端技術を考慮して、上記のような単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストの任意の使用は、光線力学療法、レーザー光凝固術、放射線療法または硝子体外科手術ともちろん組み合わせられ得る。
【００７６】
上記のような単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストの任意の使用は、被験体の視力が安定化または改善されるという点でさらに特徴づけられ得る（例えば寛解＝改善の説明について「治療／治療すること」を参照）。
【００７７】
上記のもののうちの任意のものは、被験体における後眼部線維症の治療、予防、またはその進行の遅延のための方法として書き直すことができる。特に、被験体は、哺乳動物、特にヒトである。
【００７８】
「投与」は、薬剤（例えば単一特異的ＰｌＧＦアンタゴニスト）または薬剤を含む組成物（医薬品等）と対象物（細胞、組織、器官、体腔）との間の相互作用をもたらし、それにより前記薬剤または組成物が接触させられる、任意の接触様式を意味する。薬剤または組成物と対象物との間の相互作用は、薬剤もしくは組成物の投与により直ちにもしくはほぼ直ちにスタートして起こり得るか、延長した期間にわたって起こり得るか（薬剤または組成物の投与により直ちにまたはほぼ直ちにスタートして）、または薬剤もしくは組成物の投与の時間と比べて遅れ得る。より具体的には、「接触」は、対象物への薬剤、組成物または医薬品の有効量の送達をもたらす。
【００７９】
「有効量」という用語は、薬剤（例えば単一特異的ＰｌＧＦアンタゴニスト）または薬剤を含む組成物（例えば医薬品）の投薬レジメンを指す。有効量は一般的には、接触様式または投与様式に依存し、それらへの調整を必要とするだろう。薬剤、組成物または医薬品（さらに特にその活性成分）の有効量は、有意または不必要な毒性効果を引き起こさずに、所望される臨床転帰または治療効果もしくは予防効果を得るのに要求される量である。有効量を得るかまたは維持するために、薬剤、組成物または医薬品は、単一用量としてまたは複数用量で投与され得る。有効量は、治療される必要のある病態の重症度、または予防もしくは治療される必要のある病態の予想される重症度に依存して、さらに変動し得る。これは患者の全般的な健康および身体条件に依存し、通常、治療する医者または内科医の査定は、有効量はどれだけかを確立することが要求されるだろう。有効量は、異なるタイプの接触または投与の組み合わせによってさらに得ることができる。本明細書の文脈において、有効量は、さらに特に、局所点眼剤の投与、前眼房への注射による投与、結膜下注射による投与、硝子体内注射による投与、全身投与、持続的投与または遅延放出投与（例えば再充填可能な眼用インプラント、薬剤を発現する組換え細胞を備えた容器、薬剤をロードした侵食性ゲルインプラント、遺伝子療法形式）のうちのいずれかの１つまたは複数によって得ることができる。眼注射を用いた単一特異的ＰｌＧＦアンタゴニスト（第２の活性薬剤の投与有りまたは無しで）の投与は典型的には最小限に抑えられ（すなわち反復注入の頻度は最小限に抑えられ）、眼疾患もしくは眼障害のさらなる経過、またはその任意の単一症状に対して調整することができる。
【００８０】
この文脈におけるウォッシュアウト期間は、眼に投与された薬剤が、例えば眼からの消去に起因して（例えば全身循環または涙液の中へ）、または眼内分解もしくは眼内中和に起因して、眼からウォッシュアウトされる期間である。実際面では、ウォッシュアウト期間（すなわちウォッシュアウトの時間または日の数）は、治療法が送達されない間の期間、または活性化合物の濃度が有効濃度までもしくはそれ未満に減少した終了時の期間である。あるいは、ウォッシュアウト期間は、同じであり得るかまたは異なり得る治療剤の２回の送達の間の期間である。ウォッシュアウト期間は通常、薬剤の性質および投薬（すなわちその薬物動態学的特性によって）に依存し、それは可能性のある新しい薬物の（前）臨床開発の間に決定される。特に注射による眼薬物の投与の事例において、ウォッシュアウト期間は、好ましくは、高頻度の反復注射を避けるように十分に長い。
【００８１】
「眼内圧の制御のための薬剤」は、眼内圧を安定化または低下させる薬剤である。かかる医薬品としては、アドレナリン作用遮断剤（β遮断薬または交感神経遮断薬（ベタキソロール、カルテオロール、レボブノロール、メチパノロール（ｍｅｔｉｐａｎｏｌｏｌ）およびチモロール等））、アドレナリン作用刺激剤（交感神経様作用薬（アプロクロニジン（ａｐｒｏｃｌｏｎｉｄｉｎｅ）、エピネフリン、ハイドロキシアンフェタミン、フェニレフリン、ナファゾリンおよびテトラヒドロザリン（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｚａｌｉｎｅ）等））、炭酸脱水酵素阻害物質（全身性アセトゾラミド（ａｃｅｔｏｚｏｌａｍｉｄｅ）ならびに局所用ブリンゾラミドおよびドルゾラミド等）、縮瞳薬（コリン作用刺激剤、副交感神経様作用薬（カルバコールおよびピロカルピン等））、浸透圧剤（グリセリンおよびマンニトール等）、プロスタグランジンおよびプロスタグランジンアナログ（プロスタミド、ビマトプロスト、イソプロピルウノプロストン、トラボプロスト、ラタノプロスト、天然のプロスタグランジン、プロスタグランジンＦ２α、およびＦＰプロスタノイド受容体アゴニスト）が挙げられる。かかる医薬品が有効でない（またはこれ以上有効でない）場合に、そのとき緑内障濾過手術は実行可能な治療である。
【００８２】
「抗凝固剤」としては、ヒルジン、ヘパリン、クマリン、低分子ヘパリン、トロンビン阻害物質、血小板阻害物質、血小板凝集阻害物質、凝固因子阻害物質、抗フィブリン抗体、および第ＶＩＩＩ因子阻害物質（ＷＯ０１／０４２６９およびＷＯ２００５／０１６４５５中で記載されるもの等）が挙げられる。
【００８３】
「血栓溶解剤」としては、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）およびスタフィロキナーゼ、またはその任意のものの任意のバリアントもしくは誘導体（ＡＰＳＡＣ（アニソイル化プラスミノゲンストレプトキナーゼ活性化物質複合体）、アルテプラーゼ、レテプラーゼ、テネクテプラーゼおよびｓｃｕＰＡ（一本鎖ｕＰＡ）等）、プラスミンまたはその任意の短縮バリアント（ミディプラスミン、ミニプラスミン、デルタプラスミンおよびマイクロプラスミン等）が挙げられる。
【００８４】
「抗炎症剤」としては、ステロイド（例えばプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、トリアムシノロン、デキサメタゾン）および非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ；例えばアセトアミノフレン（ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｒｅｎ）、イブプロフェン、アスピリン）が挙げられる（上記の薬剤も参照）。
【００８５】
「抗ウイルス剤」としては、トリフルリジン、ビダラビン、アシクロビル、バラシクロビル、ファムシクロビル、およびドクスウリジン（ｄｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）が挙げられる。
【００８６】
「抗菌剤」または抗生物質としては、アンピシリン、ペニシリン、テトラサイクリン、オキシテトラサイクリン、フラミセチン、ガチフロキサシン、ゲンタミシン、トブラマイシン、バシトラシン、ネオマイシンおよびポリミキシンが挙げられる。
【００８７】
「抗真菌剤／静真菌剤／抗カビ剤」としては、フルコナゾール、アンフォテリシン、クロトリマゾール、エコナゾール、イトラコナゾール、ミコナゾール、５−フルオロサイトシン、ケトコナゾールおよびナタマイシンが挙げられる。
【００８８】
「抗血管新生剤」としては、上記の薬剤に加えて、ミニ−トリプソファニル（ｔｒｙｐｔｈｏｐｈａｎｙｌ）−ｔＲＮＡ合成酵素（ＴｒｐＲＳ）（Ｗａｋａｓｕｇｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２００２，９９：１７３−１７７）、酢酸アネコルタブ、コンブレスタチンＡ４プロドラッグ、ＡｄＰＥＤＦ（色素上皮由来因子を発現することができるアデノベクター）、ＴＧＦ−βの阻害物質、シロリムス（ラパマイシン）、エンドスタチン、およびおそらくインテグリン阻害物質（ＵＳ９，０１８，３５２）が挙げられる。
【００８９】
「抗有糸分裂剤」としては、マイトマイシンＣおよび５−フルオロウラシル（ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｙｌ）が挙げられる。
【００９０】
「抗ヒスタミン物質」としては、ケチトフェン（ｋｅｔｉｔｏｆｅｎ）フマル酸塩およびマレイン酸フェニラミンが挙げられる。
【００９１】
「麻酔物質」としては、ベンゾカイン、ブタンベン、ジブカイン、リドカイン、ベノキシネート、プラモキシン、プロパラカイン、プロキシメタカイン、テトラカインおよびアメソカイン塩酸塩が挙げられる。
【００９２】
単一特異的ＰｌＧＦアンタゴニストと併用して使用することができる他の補助剤薬剤または薬物としては、瞳孔拡大（散瞳）および／または毛様筋麻痺（眼の焦点を合わせる筋肉の麻痺）を誘導する、スコポロアミン（ｓｃｏｐｏｌｏａｍｉｎｅ）、アトロピンまたはトロピカミドが挙げられる。
【００９３】
「抗浮腫剤」としては、血漿カリクレインの阻害物質（例えばエカランチド；およびＤＭＥの治療のためのフェーズＩにおけるＫＶＤ００１、ＫａｌＶｉｓｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ；ＷＯ２０１４／００６４１４を参照）およびいくつかの抗炎症剤が挙げられる（上を参照）。
【００９４】
硝子体液化は後部硝子体剥離（ＰＶＤ）の誘導のための前提条件のように思われるが、液化それ自体ではＰＶＤを導かず、それはヒアルロニダーゼの硝子体内投与によって確立された。このプロテアーゼは硝子体液化を誘導することができるが、内境界膜（ＰＶＤ）からの後部の硝子体の分離を生じない（Ｓｅｂａｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓ  Ａｍ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｓｏｃ  ２００５，１０３：４７３−４９４；Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ２００８，１０８：１９０２−１９０５；Ｌｏｐｅｚ−Ｌｏｐｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｖ  ２００９，５：５７−６２）。コンドロイチナーゼＡＢＣおよびＭＭＰ−３を組み合わせた眼注射がウサギの眼においてＰＶＤを導き得ることが実証されている。さらに、この研究は、ＭＭＰ−３と一緒のコンドロイチナーゼＡＢＣの硝子体内注射が処理されたすべての眼（１００％）において液化をもたらす一方で、注射された眼の６２．５％のみがＰＶＤを示すことも指摘し、実験した眼の３７．５％は、硝子体液化のみを提示しＰＶＤはないことを指摘した（Ｍｅｎｇ  ＆  Ｚｅｎｇ，Ｚｈｏｎｇｈｕａ  Ｙａｎ  Ｋｅ  Ｚａ  Ｚｈｉ  ２００４，４０：６２５−６３１）。
【００９５】
複数の酵素（プラスミン、コラゲナーゼ、ヒアルロニダーゼ、ディスパーゼ、コンドロイチナーゼ、ウロキナーゼおよびナットウキナーゼが挙げられる）は、薬理学的ビトレオライシスを誘導する能力について分析された。プラスミンおよびその短縮形態のマイクロプラスミンは、死後のヒト眼に加えて動物モデルにおいてＰＶＤを誘導する能力を有することが実証された（ＵＳ５，３０４，１１８；ＧＢ２３９３１２１；ＷＯ２００４／０５２２２８；Ｓｔａｌｍａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１２，３６７：６０６−６１５）。オクリプラスミン（Ｊｅｔｒｅａ（登録商標）、ＴｈｒｏｍｂｏＧｅｎｉｃｓ  ＮＶ）は、実際、局所性症候性硝子体黄斑癒着（ｓＶＭＡ）のための非外科的治療として使用できる最初の承認薬である。他の非酵素的なＰＶＤを誘導する薬剤としては、尿素および尿素誘導体（例えばＷＯ００／５１６２０）、ならびにインテグリン阻害物質（例えばＵＳ９，０１８，３５２）が挙げられる。
【００９６】
硝子体液は、レンズと網膜との間の空間を占める透明なゲルであり、それは眼が円形を維持することを支援する。硝子体ゲルは、主として水分子および１％のみのマクロ分子（コラーゲン、ヒアルロン酸および糖タンパク質等）からなる。これらのマクロ分子はネットワークを形成し、安定的なゲル様構造を確立する。硝子体−網膜界面での正常な癒着は、後部硝子体皮質と網膜の内境界膜との間の相互作用によって媒介される（Ｓｅｂａｇ  ｅｔ  ａｌ．２００５，Ｔｒａｎｓ  Ａｍ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｓｏｃ  １０３：４７３−４９４）。内境界膜は、主としてコラーゲン、フィブロネクチンおよびラミニンからなる。硝子体−網膜疾患は眼障害を含み、それは、内境界膜と硝子体ゲル／後部硝子体皮質との間の異常な相互作用に起因して、視覚喪失を引き起こし得る。かかる異常な相互作用は多くの場合網膜損傷を誘導し、次に後眼部線維化応答を誘導する。硝子体−網膜界面での異常は視覚の永久喪失を導き、症状または疾患（部分的後部硝子体剥離、網膜裂傷、網膜剥離、症候性硝子体黄斑癒着／牽引、黄斑円孔、特発性および続発性の網膜上膜、増殖性硝子体網膜症、増殖糖尿病網膜症、糖尿病黄斑浮腫、類嚢胞黄斑浮腫、ならびに加齢黄斑変性症等）を導き得る。網膜上の硝子体の異常な機械的牽引は、多くの眼の疾患／眼に関する疾患／網膜の疾患および黄斑変性症における基礎的要素であると推定される（Ｓｋｅｉｅ  ＆  Ｍａｈａｊａｎ，ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ  ２０１３，８：ｅ８２１４０；Ｓｈａｏ  ＆  Ｗｅｉ，Ｃｈｉｎ  Ｍｅｄ  Ｊ  ２０１４，１２７：１５６６−１５７１）。網膜上の硝子体の牽引部位に依存して、異なる効果は出現し得る。血管上での引張りは網膜出血および硝子体出血を引き起こし、網膜の新生血管形成を刺激し得る。黄斑領域における牽引は、硝子体−黄斑牽引症候群、黄斑ひだ、黄斑円孔、および／または糖尿病黄斑浮腫を引き起こし得る。牽引部位が周辺部であるならば、網膜裂傷および／または網膜剥離が起こり得る。視神経円板が硝子体の異常な牽引によって影響を受けるならば、硝子体−乳頭牽引症候群および視神経円板の新生血管形成の増悪、増殖性糖尿病硝子体網膜症ならびに／または網膜中心静脈閉塞症が、もたらされ得る（Ｓｅｂａｇ，Ｇｒａｅｆｅ’ｓ  Ａｒｃｈ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２００４，２４２：６９０−６９８）。
【００９７】
症候性硝子体黄斑癒着（ｓＶＭＡ）は、硝子体ゲルが網膜への異常に強い癒着を有する眼病態である。経時的に、ゲルは前方へ引張る傾向があり、これは網膜の歪みを引き起こす場合があり、視覚的障害（すなわち変形視）をもたらす。より進行したステージにおいて、ｓＶＭＡ（時には硝子体黄斑牽引（ＶＭＴ）と称される）は局所性網膜裂傷または黄斑円孔でさえ引き起こす場合があり、それは失明を導き得る。ＶＭＴに関連する黄斑円孔について典型的なことは、網膜が全層にわたって分断されないということである（網膜の層がすべて分断される全層黄斑円孔とは対照的である）。硝子体牽引は、硝子体切除術として公知の外科的介入を用いて治療され得る。外科的硝子体切除術はｓＶＭＡのための標準的な治療である。しかし、硝子体牽引を軽減するこの機械的手順は依然として危険であり、網膜への損傷の高いリスクをもたらす。この理由のために、複数のプロテアーゼは、硝子体切除術の補助剤もしくは場合によっては硝子体切除術の置換として、および／または薬理学的ビトレオライシスもしくは薬理学的後部硝子体剥離（ＰＶＤ）の誘導について、試験された。分子療法は、視覚の転帰を改善し、外科的／機械的な硝子体切除術と関連するリスクを克服する能力を有する。複数の酵素（プラスミン、コラゲナーゼ、ヒアルロニダーゼ、ディスパーゼ、コンドロイチナーゼ、ウロキナーゼおよびナットウキナーゼ等）は、薬理学的ビトレオライシスを誘導する能力について分析された。上で論じられるように、オクリプラスミン（プラスミンの短縮バリアント）は最近登録されており、ＰＶＤを誘導でき、黄斑円孔閉鎖を促進できる現在利用可能な唯一の製品である。ＶＭＡについての可能な同義語は異常なＰＶＤであり、黄斑部における網膜への硝子体の持続する接着と同時に起こる部分的ＰＶＤとして定義された。接着は異常な強度であり、網膜の変形をもたらし得る。部分的ＰＶＤは、さらに特に中心窩周囲領域において起こる。任意の症状（複数可）および／または疾患（複数可）と関連する場合に、ＶＭＡは症候性ＶＭＡ（ｓＶＭＡ）になる。局所性または広範囲の（ｓ）ＶＭＡは、それぞれ１５００μｍ以下または１５００μｍを超える距離にわたって起こり得る。定義および分類についての詳細は、Ｄｕｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ２０１３，１２０：２６１１−２６１９）中で見出すことができる。ＰＶＤまたは（ｓ）ＶＭＡの（全層のうちの部分的な）存在の決定のための現在の標準的な技術は、光コヒーレンストモグラフィー（ＯＣＴ）である。
【００９８】
硝子体切除術、ビトレオライシス、硝子体液化および／またはＰＶＤの誘導は多くの眼の病態（飛蚊症（視覚を損ない得る、通常は透明な硝子体液内の硝子体の運動性の残骸／沈着物）、網膜剥離（例えば硝子体牽引によって引き起こされ得る失明性の病態）、黄斑ひだ（黄斑上の瘢痕組織；黄斑はシャープな中心視力のために要求される；黄斑ひだは、網膜上膜または網膜前膜、セロファン黄斑症、網膜のしわ、表面にしわのある網膜症（ｓｕｒｆａｃｅ  ｗｒｉｎｋｌｉｎｇ  ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、黄斑前線維症、または内境界膜疾患としても公知である）、硝子体出血および／または網膜上の繊維状瘢痕組織の形成（それは網膜剥離を引き起こ得る）をもたらし得る糖尿病網膜症（増殖性または非増殖性）、黄斑円孔（盲点を引き起こす黄斑における穴であり、硝子体牽引、傷または外傷性事象によって引き起こされる；全層または全層でない）、硝子体出血（糖尿病網膜症、傷、網膜剥離もしくは網膜裂傷、クモ膜下出血（Ｔｅｒｓｏｎ症候群）、または遮断された血管によって引き起こされる）、硝子体下出血（硝子体を包む硝子体膜下の出血）、黄斑浮腫（眼の黄斑上またはその下での液体および／またはタンパク質の沈着）、および黄斑変性症（ドルーゼンの形成によりスタートする；萎縮型および滲出型で起こる；年齢と相関するならば加齢黄斑変性症という言葉が使われる）等）に利益がある。
【００９９】
全層黄斑円孔は、小さな（２５０μｍ以下）、中間（２５０μｍを超えるが４００μｍ以下）または大きな（４００μｍを超える）ものとして分類される（Ｄｕｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ２０１３，１２０：２６１１−２６１９）。
【０１００】
加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）および糖尿病網膜症（ＤＲ）の患者は、追加の硝子体−網膜合併症（ＰＶＤまたはｓＶＭＡ消失もしくはＶＭＴ消失が有益になり得る、牽引により部分的に剥離した硝子体、網膜上膜、牽引性網膜剥離または黄斑円孔等）に悩まされ得る。ＡＭＤおよびＤＲは両方とも多因子性眼障害であり、虚血性損傷はそれらの病態生理学において主要な役割を果たす。ＰＶＤは硝子体および網膜の酸素供給の増加と関連するので、外科的および酵素的なＰＶＤ（またはｓＶＭＡ消失もしくはＶＭＴ消失）は、ＡＭＤおよびＤＲにおける低酸素誘導性合併症に対する保護的役割を有するように思われる。さらに、滲出性ＡＭＤおよび増殖性ＤＲへ進むリスクの増加と、異常に強く接着する硝子体および／または硝子体黄斑牽引が、相関していることが記載されている（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ２００１，１０８：１９０２−１９０５；Ｈａｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ２０１０，１１７：１０８７−１０９３；Ｒｏｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ２０１０，１１７：１３８１−１３８６）。さらに、硝子体−網膜牽引は、糖尿病黄斑浮腫を誘導し得るので、ＤＲにおける視覚的障害の主要な病理学的原因である。ＰＶＤを用いた網膜上の機械的牽引の解放は糖尿病黄斑浮腫の低減を導き得ることが、実際観察された（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ２００１，１０８：１９０２−１９０５；Ｈａｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ２０１０，１１７：１０８７−１０９３）。
【０１０１】
科学文献から、外科的硝子体切除術がおびただしい数の眼の疾患および障害の治療において成功していることが指摘される。例示的な参照文献としては、硝子体切除術（薬理学的硝子体切除術が含まれる）の幅広い治療適用可能性を支持するものが、以下に挙げられる。Ｏｎｄｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊｐｎ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２０００，４４：９１−９３）は、ＰＶＤの頻度が正常な眼においてよりも加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）のある眼においてより少ないことについて論じ、硝子体網膜の接着（すなわちＰＶＤの非存在）がＡＭＤにネガティブに影響を及ぼすメカニズムを提案する。Ｓｔｅｆａｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  １９９０，３１：２８４−２８９）は、硝子体切除術による糖尿病網膜新生血管の停止（すなわち低酸素の予防）について可能なメカニズムを開示する。低酸素は、静脈閉塞症（網膜または他の）の合併症として代償性の新生血管形成を誘導することが公知の因子である。Ｓｔｅｆａｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９０は網膜静脈閉塞症を実験的に誘導し、網膜の酸素枯渇が、硝子体切除術を行った眼においてあまり重症でないことを指摘した。網膜静脈閉塞症の新生血管形成合併症を明確に予防することは、治療の方法である。さらに、新しく形成された網膜血管はしばしば脆性であり、そのために閉塞または破裂の傾向がある。例えばＳｎｉｐ  ｅｔ  ａｌ．（Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  １９７６，８２：６９９−７０４）は、抗生物質と組み合わせた硝子体切除術による眼内炎の治療成功を開示する。Ｔａｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｓｅｍｉｎ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  １９９８，１３：２０−３０）は、自然な硝子体剥離または硝子体切除術後に、糖尿病黄斑浮腫の改善を観察した。レーザー治療へ応答性でない糖尿病黄斑浮腫の制御は、ビトレオライシスからの利益が同様に報告された（Ｌｏｖｅｓｔａｍ−Ａｄｒｉａｎ  ＆  Ｌａｒｓｓｏｎ，Ｉｎｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２００５，２６：２１−２６）。例えばＦｅｄｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １９８０，８７：６２２−６２８）によって記載されるように、硝子体切除術後に視力の改善に加えて類嚢胞黄斑浮腫の消失が得られた。Ｖａｌｌａｔ（Ｇｒａｅｆｅｓ  Ａｒｃｈ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  １９８６，２２４：２３８−２３９）は、硝子体牽引によって引き起こされた黄斑円孔からの網膜の剥離の、硝子体切除術を用いた成功した外科治療を記載する。増殖糖尿病網膜症に対する硝子体切除術の効果は、例えばＦｅｄｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １９７９，８６：２７６−２８２）中で論じられ、この効果は、疾患の継続的な退行が硝子体切除術後に経時的に観察されるようなものである。類似の結論は、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ２０１３，５４：４９６４−４９７０）による薬理学的ビトレオライシスについて得られた。Ｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２００１，１３１：１３３−１３４）は、色素性網膜炎の合併症として発症し得る視覚的に重要な硝子体混濁の治療における硝子体切除術の有用性を開示する。
【０１０２】
薬理学的ビトレオライシス（単独でまたは外科的硝子体切除術への補助剤として）は、場合によっては早期の眼疾患における異常なＰＶＤ、硝子体牽引またはＶＭＴの副作用に取り組むために（眼疾患の進行を予防するために等）推奨される（Ｓｅｂａｇ，Ｇｒａｅｆｅ’ｓ  Ａｒｃｈ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２００４，２４２：６９０−６９８）。
【０１０３】
「薬学的に許容される製剤」は、本発明の文脈において、さらに特に、「眼科的に許容される製剤」である。製剤は、一般に、製剤化される１つまたは複数の活性成分と適合性のある担体、希釈剤またはアジュバントを含む組成物であり、全体の製剤は意図される組織または器官などにおける意図される使用と適合性がある。薬学的に許容される製剤の例に加えて、それらを製作する方法は、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（例えば第２０版；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、２０００年）または任意の薬局方ハンドブック（例えば米国薬局方、欧州薬局方または国際薬局方）中で見出すことができる。
【０１０４】
「滑沢剤」としては、プロピレングリセロール、グリセリン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、大豆レシチン、ポリビニルアルコール、白色ペトロラタム、鉱物油、ポビドン、カルボポール９８０、ポリソルベート８０、デキストラン７０が挙げられる。
【実施例】
【０１０５】
１．序論
本研究は、マウスＣＮＶモデルにおける、新生血管形成、炎症およびコラーゲン沈着のうちの１つまたは複数に対する、抗ＰｌＧＦ抗体（マウスＰＬＧＦ阻害抗体５Ｄ１１Ｄ４またはヒトＰｌＧＦ阻害抗体１６Ｄ３、ＴｈｒｏｍｂｏＧｅｎｉｃｓ、Ｌｅｕｖｅｎ、ベルギー）によるＰｌＧＦ阻害の用量応答有効性を調査し；それを、抗ＶＥＧＦ−Ｒ２抗体（ＤＣ１０１、ハイブリドーマ細胞株ＡＴＣＣ  ＨＢ−１１５３４によって産生される）、アフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標）、Ｂａｙｅｒ）、トリアムシノロンアセトニド（ＴＡＡＣ；Ｋｅｎａｃｏｒｔ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、および抗マウスＶＥＧＦ抗体Ｂ２０（Ｌｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００６，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８１：９５１−９６１）の等モル濃度の効果へ比較した。ＴＡＡＣを炎症および線維症のための参照として使用した。１μＬのＴＡＡＣの単一注射の治療スケジュールは、Ｔａｋａｔａ  ｅｔ  ａｌ．（Ｔａｋａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｒｅｐ  ２０１５，５：９８９８）によって記載されるマウスＣＮＶモデルにおける活性に基づいて選択した。網膜神経節細胞の生存に対する抗ＰｌＧＦ抗体５Ｄ１１Ｄ４および抗ＶＥＧＦ−Ｒ２抗体ＤＣ１０１の効果を、ナイーブマウスおよび糖尿病マウスにおいて調査した。
【０１０６】
以下で、例えば抗ＰｌＧＦ（または５Ｄ１１Ｄ４もしくは１６Ｄ３）の注射もしくはそれらによる注射または抗ＶＥＧＦＲ２（またはＤＣ１０１）の注射もしくはそれらによる注射を指す場合に、これは、上記の抗ＰｌＧＦ抗体５Ｄ１１Ｄ４もしくは抗ＰｌＧＦ抗体１６Ｄ３の注射もしくはそれらによる注射または上記の抗ＶＥＧＦ−Ｒ２抗体ＤＣ１０１の注射もしくはそれらによる注射として理解される。同様に、例えば抗ＰｌＧＦ、５Ｄ１１Ｄ４または１６Ｄ３により処理される、は、上記の抗ＰｌＧＦ抗体５Ｄ１１Ｄ４または上記の抗ＰｌＧＦ抗体１６Ｄ３により処理される、として理解される。
【０１０７】
２．材料および方法
すべての実験動物手順は、２０１０／６３／ＥＵ  Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅに従ってＫＵ  ＬｅｕｖｅｎのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ａｄｖｉｓｏｒｙ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認された。すべての動物手順は、ｔｈｅ  ＡＲＶＯ  Ｓｔａｔｅｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌｓ  ｉｎ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ａｎｄ  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈに従って遂行された。
【０１０８】
２．１．マウスＣＮＶモデル
マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、オス、８〜１０週齢）に、塩酸ケタミン（Ａｎｅｓｋｅｔｉｎ；１１５ｍｇ／Ｌ）およびメデトミジン（Ｄｏｍｉｔｏｒ；１ｍｇ／ｍＬ）の混合物の腹腔内投与（１３５μＬ）によって麻酔をかけ、瞳孔を、１滴の点眼薬（５０μＬ）トロピカミド（Ｔｒｏｐｉｃｏｌ（商標）；５ｍｇ／ｍＬ；Ｔｈｅａ、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｐｅｒｓ  Ｃｌｅｒｍｏｎｔ−Ｆｅｒｒａｎｄ、フランス）により拡大した。スリットランプデリバリーシステムを使用してグリーンレーザーにより、視神経円板の周囲の９時、１２時、３時の位置で３つのレーザー熱傷を１つの眼に行い、このとき、Ｇｅｎｔｅａｌ  Ｇｅｌ（商標）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、Ｖｉｌｖｏｏｒｄｅ、ベルギー）により湿らせられたコンタクトレンズとして手持ち式カバースライドを用いた。各々のスポットを、１００μｍのスポットサイズ、５０ミリ秒のレーザー継続時間および３２０ｍＷの電力で置いた。バブル産生（ブルッフ膜の破裂の徴候、ならびに新生血管形成、炎症および線維症の誘発のために必要であることが公知）が示されたスポットのみを組入れた。最終的に、３００μＬのアチパメゾール（Ａｎｔｉｓｅｄａｎ；５ｍｇ／ｍＬ）を腹腔内に注射して、メデトミジンの効果を回復させ、鎮静作用時間を低減させた。
【０１０９】
２．２．硝子体内投与
レーザー処理後の異なるタイムポイントで、化合物を硝子体内に（ＩＶＴ）投与した。動物に塩酸ケタミン／メデトミジンの混合物により麻酔をかけ、１滴の０．４％のベノキシネート（Ｕｎｉｃａｉｎｅ；Ｔｈｅａ  Ｐｈａｒｍａ）により眼を処理した。１つの眼への硝子体内注射（１μＬ）は表１〜３に従い、ＵＭＰ３Ｉ  Ｍｉｃｒｏｓｙｒｉｎｇｅ  ＩｎｊｅｃｔｏｒおよびＭｉｃｒｏ４  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｒ（すべてＷｏｒｌｄ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．、Ｈｅｒｔｆｏｒｄｓｈｉｒｅ、英国から）によって制御され、末端で５０〜７０μｍの直径を備えたａｎａｌｙｔｉｃ  ｓｃｉｅｎｃｅシリンジ（ＳＧＥ  Ａｎａｌｙｔｉｃ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）およびガラスキャピラリーを使用することによって遂行した。最終的に、アチパメゾール（Ａｎｔｉｓｅｄａｎ）を腹腔内に注射して、メデトミジンの効果を回復させ、鎮静作用時間を低減させた。
【０１１０】
２．３．プロセシングおよび組織学
屠殺の日に、マウスを頸椎脱臼によって殺し、レーザー処理した眼を摘出し、１％（ｗ／ｖ）のパラホルムアルデヒド中で一晩固定した。異なる化合物のインビボの有効性を分析するために、解剖した後部セグメントから網膜を取り出した。これらの後部眼杯（網膜色素上皮（ＲＰＥ）、脈絡膜および強膜を含む）をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中で貯蔵した。
【０１１１】
２．３．１．炎症の定量化
レーザー処理の５日後に、トリス緩衝食塩水（ＴＢＳ）−トリトン０．３％（ｖ／ｖ）中で希釈した、ラット抗マウスＣＤ４５抗体およびラット抗マウスＦ４／８０抗体（１／１００；ｈａｒｍｉｎｇｅｎ、Ｅｒｅｍｂｏｄｅｇｅｍ、ベルギー）を一晩使用して、それぞれすべての白血球およびマクロファージを染色した。翌日、ＴＢＳ−トリトン０．３％中で希釈したウサギ抗ラットビオチン標識抗体（１／３００；ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ  Ａ／Ｓ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、デンマーク）により、組織を２時間インキュベーションした。抗体結合は、ＴＢＳ−トリトン０．３％中のストレプトアビジン−Ａｌｅｘａ−５６８（１／２００；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ、米国）を２時間使用して、蛍光染色によって可視化した。後部眼杯のフラットマウントを、４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）含有Ｐｒｏｌｏｎｇ  Ｇｏｌｄ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）によりマウントした。画像はデジタルカメラを備えた顕微鏡を使用して得た。
表１。研究デザイン
【表１】
2019507746.tif 000017
ＩｇＧ：無関係のＩｇＧ抗体１Ｃ８；ＤＣ１０１：マウス抗マウスＶＥＧＦＲ−２抗体；ＴＡＡＣ（Ｋｅｎａｃｏｒｔ（登録商標））：トリアムシノロンアセトニド；５Ｄ１１Ｄ４：マウス抗マウスＰｌＧＦ抗体；ＰＢＳ：リン酸緩衝食塩水；ＩＶＴ：硝子体内；Ｃｏｌ１ａ：コラーゲン１ａ；アフリベルセプト：Ｅｙｌｅａ（登録商標）；Ｄ０、Ｄ４、Ｄ５、Ｄ７、Ｄ１０、Ｄ２０、Ｄ３０：それぞれ、０日目、４日目、５日目、７日目、１０日目、２０日目、３０日目；ＦＩＴＣ：フルオレセインイソチオシアネートコンジュゲートデキストラン；ＦＡ：蛍光眼底血管造影法。
【０１１２】
（Ａｘｉｏｃａｍ  ＭｒＣ５；Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ、Ｏｂｅｒｋｏｃｈｅｎ、ドイツ）２０×の倍率で。形態測定のスクリーニング分析は商業的ソフトウェア（Ａｘｉｏｖｉｓｉｏｎ；Ｚｅｉｓｓ、Ｏｂｅｒｋｏｃｈｅｎ、ドイツ）を使用して遂行した。炎症の密度は、全病巣の比率としてＣＤ４５陽性面積の計算によって決定した。
【０１１３】
２．３．２．新生血管形成の定量化
レーザー処理の７日後に、２００μＬのフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）コンジュゲートデキストラン（５０ｍｇ／ｍＬ、分子量２×１０６Ｄａ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｄｉｅｇｅｍ、ベルギー）による球後灌流を２分間使用して、血管新生を調査した。後部眼杯のフラットマウントを、４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）含有Ｐｒｏｌｏｎｇ  Ｇｏｌｄ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）によりマウントした。画像は、デジタルカメラを備えた顕微鏡（Ａｘｉｏｃａｍ  ＭｒＣ５；Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ、Ｏｂｅｒｋｏｃｈｅｎ、ドイツ）を使用して２０倍の倍率で得た。形態測定のスクリーニング分析は商業的ソフトウェア（Ａｘｉｏｖｉｓｉｏｎ；Ｚｅｉｓｓ、Ｏｂｅｒｋｏｃｈｅｎ、ドイツ）を使用して遂行した。血管の密度は、サンプルにおける全ＣＮＶ病巣領域への比率としてＦＩＴＣデキストラン陽性面積の計算によって定量化した。蛍光眼底血管造影法（ＦＡ）をレーザーの６日目後に遂行して、血管漏出を調査した。
【０１１４】
２．３．３．コラーゲン沈着の定量化
レーザーの３０日後にレーザースポットにおける１型コラーゲン（Ｃｏｌ１ａ）タンパク質の存在について染色するために、トリス緩衝食塩水（ＴＢＳ）−トリトン０．５％（ｖ／ｖ）中で希釈したウサギ抗コラーゲン抗体（Ａｂｃａｍ、１／２７０）を、４℃で一晩使用した。翌日、組織を、ＴＢＳ−トリトン０．３％（ｖ／ｖ）中で１／１００希釈したヤギ抗ウサギＩｇＧ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５５５（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ａ−２１４２８）により４℃で２時間インキュベーションした。後部眼杯のフラットマウントを、４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）含有Ｐｒｏｌｏｎｇ  Ｇｏｌｄ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）によりマウントした。画像は、デジタルカメラを備えた顕微鏡（Ａｘｉｏｃａｍ  ＭｒＣ５；Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ、Ｏｂｅｒｋｏｃｈｅｎ、ドイツ）を使用して２０倍の倍率で得た。形態測定のスクリーニング分析は商業的ソフトウェア（Ａｘｉｏｖｉｓｉｏｎ；Ｚｅｉｓｓ、Ｏｂｅｒｋｏｃｈｅｎ、ドイツ）を使用して遂行した。コラーゲン沈着の密度は、全病巣の比率としてＣｏｌ１ａ陽性面積の計算によって決定した。
【０１１５】
２．４．神経網膜の安全性
網膜神経節細胞層に対する、抗ＰｌＧＦおよび抗ＶＥＧＦ−Ｒ２の安全性を調査するために、ナイーブマウス（Ｃ７５Ｂｌ／６またはＳｗｉｓｓマウス）に、２５ｍｇ／ｋｇの抗ＰｌＧＦ、抗ＶＥＧＦ−Ｒ２または対照のＩｇＧを１週間につき３回６週間注射した。その後、マウスを屠殺し、神経マーカーＮｅｕＮについての免疫組織化学を遂行した。サンプルを、１／５００の一次マウス抗ＮｅｕＮ（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  ＭＡＢ３７７）により一晩インキュベーションした。二次抗体として、１／４００のビオチン標識ウサギ抗マウス（Ｄａｋｏ  Ｅ０６４６）を４５分間添加した。続いて、切片を３０分間ＴＮＢ中の１／１００のストレプトアビジンＨＲＰによりインキュベーションし、後続して、増幅バッファー中の１／５０のビオチン（キットＮＥＬ７００）による増幅を８分間行い、再び１／１００のストレプトアビジンＨＲＰにより３０分間インキュベーションした（すべてＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓから）。この後、３，３−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）染色（Ｆｌｕｋａ−Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を過酸化物の組織への添加によって遂行し、対比染色をハリス・ヘマトキシリン（Ｍｅｒｃｋ）により行った。生存能力のあるＲＧＣを、視神経のいずれかの側の網膜の定義された長さ（２５０μｍ）で同じ連続切片上で２回定量化した。
【０１１６】
ＴＵＮＥＬ（ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ媒介性ビオチン化ＵＴＰニック末端標識）染色を遂行して、アポトーシスを起こしたシグナルを調査した。連続切片を脱パラフィンし、洗浄し、プロテイナーゼＫ（１／５００；Ｑｉａｇｅｎ、Ｖｅｎｌｏ、オランダ）により１５分間処理した。次に、切片を、ＴＵＮＥＬ反応混合物（Ｉｎ  Ｓｉｔｕ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ、ＰＯＤ；Ｒｏｃｈｅ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、ドイツ）により３７℃で１時間インキュベーションした。その後、スライドを、ＤＡＰＩを含有するＰｒｏｌｏｎｇ  Ｇｏｌｄ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）によりマウントした。各々の切片を、アポトーシスを表す蛍光細胞について側頭部から鼻側鋸状縁へ系統的にスキャンした。ＩＮＬ中の陽性標識細胞をカウントした。
【０１１７】
２．５．ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）誘発糖尿病マウスモデル
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（オス、３〜５週齢、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）を、５０ｍｇ／ｋｇのストレプトゾトシン（ＳＴＺ；Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、米国）の連続５日の腹腔内投与により糖尿病にした。ＳＴＺを６．６ｍＬのクエン酸ナトリウム（ＣＡＭ）バッファー中で新鮮に溶解し（使用の１５〜２０分前）、４．７のｐＨの７．５ｍｇ／ｍＬの濃度をもたらした。対照の非糖尿病マウスは、ＣＡＭバッファー単独の５回の連続注射を受けた。糖尿病の発症は血糖レベルによって３００ｍｇ／ｄＬ以上と定義し、第１のＳＴＺまたはＣＡＭ注射後にグルコース計およびストリップ（Ｇｌｕｃｏｍｅｎ、Ｍｅｎａｒｉｎｉ）の使用によって週１回モニタリングした。３週間の間一貫してグルコースレベルが上昇した動物のみを研究中で使用した。糖尿病開始後７週間で、異なる糖尿病群のマウスを様々な治療群について無作為化した。１０倍希釈した（６０ｍｇ／ｋｇの最終用量）ペントバルビタールナトリウム（ネンブタール、６０ｍｇ／ｍＬ；ＣＥＶＡ、Ｓａｎｔｅ  Ａｎｉｍａｌｅ、Ｂｒｕｓｓｅｌｓ、ベルギー）の腹腔内投与を使用して、全身麻酔を誘導し、一滴の０．４％のユニカイン（ｕｎｉｃａｉｎ）（Ｔｈｅａ  Ｐｈａｒｍａ、フランス）により眼を処理した。５Ｄ１１Ｄ４（５．４μｇ、抗ＰｌＧＦ抗体）、ＤＣ１０１（６．２μｇ、抗ＶＥＧＦＲ−２抗体）またはＰＢＳの硝子体内注射（複数可）を、１つの眼中に投与した（表２を参照）。糖尿病開始（ＩＶＴ処理開始の１週間後）の８週間後に、マウスを屠殺して、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）密度を調査した。屠殺の日に、マウスを頸椎脱臼によって殺し、眼を摘出し、１％（ｗ／ｖ）のパラホルムアルデヒド中で一晩固定した。
表２。マウスＳＴＺモデルの研究デザイン
【表２】
2019507746.tif 000018
ＤＣ１０１：マウス抗マウスＶＥＧＦＲ−２抗体；５Ｄ１１Ｄ４：マウス抗マウスＰｌＧＦ抗体；ＰＢＳ：リン酸緩衝食塩水；ＩＶＴ：硝子体内；Ｂｒｎ３ａ：２．５．１を参照；ＲＧＣ：網膜神経節細胞；Ｗ８：８週間。
【０１１８】
２．５．１．マウスＳＴＺモデルにおけるＲＧＣ密度の定量化。
マウスＳＴＺモデルにおいて、生存能力のあるＲＧＣを、糖尿病開始（ＩＶＴ注射開始の１週間後）の８週間後に、Ｂｒｎ３ａ免疫染色によって可視化した。眼を摘出し、１％（ｗ／ｖ）のホルムアルデヒド中に一晩置いた。注射された眼の網膜の切片（７μｍ）をＢｒｎ３ａマウスモノクローナル抗体（希釈１／１００、ＭＡＢ１５８５−Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）により染色して、生存能力のあるＲＧＣを可視化した。Ｖｅｃｔｏｒ（登録商標）Ｍ．Ｏ．Ｍ．（商標）Ｉｍｍｕｎｏｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＢＭＫ−２２０２）を使用して、網膜の横断切片をＢｒｎ３ａ免疫反応性のためにプロセシングした。ＢＲＮ３Ａ（ＰＯＵ４Ｆ１）は、発生中の感覚神経系ならびにＢリンパ球およびＴリンパ球の系譜の細胞において高度に発現される、クラスＩＶ  ＰＯＵドメイン含有転写因子であり（Ｇｅｒｒｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．１９９３，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０：１０８４１−１０８４５）、網膜神経節細胞についての信頼できるマーカーである（Ｎａｄａｌ−Ｎｉｃｏｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．２００９，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ５０：３８６０−３８６８）。Ｍｅｔａｍｏｒｐｈソフトウェア（Ｌｅｉｃａ、Ｗｅｔｚｌａｒ、ドイツ）を使用して生存能力のあるＲＧＣをカウントした。ＲＧＣ密度は、このモデルにおける血管漏出の局在化に基づいて、２つの所在位置で（視神経の前部側および後部側で）、中心網膜において、マスクされたリーダーによって測定した。視神経頭を含有する３つの異なる連続切片の画像を使用した（合計で６つの測定）。ＲＧＣ密度を定量化するために、神経節細胞核は、網膜の定義された長さで視神経頭から２５０μｍ（視神経頭のいずれの側の２５０μｍ）でカウントした。
【０１１９】
２．６．マウスＣＮＶモデルにおける、周皮細胞被覆および後部線維症
実施例２．１中で記載されるようなマウスＣＮＶモデルを使用した。レーザー処理後の異なるタイムポイントで、化合物を、表３中で指摘されるように腹腔内（ＩＰ）または硝子体内に（ＩＶＴ）投与した。
表３。マウスＣＮＶモデルの研究デザイン
【表３】
2019507746.tif 000019
ＩｇＧ：無関係のＩｇＧ抗体１Ｃ８；ＤＣ１０１：マウス抗マウスＶＥＧＦＲ−２抗体；ＴＡＡＣ：トリアムシノロンアセトニド；５Ｄ１１Ｄ４：マウス抗マウスＰｌＧＦ抗体；１６Ｄ３：マウス抗ヒトＰｌＧＦ抗体；Ｂ２０：マウス抗マウスＶＥＧＦ抗体；ＰＢＳ：リン酸緩衝食塩水；ＩＰ：腹腔内；ＩＶＴ：硝子体内；ＳＭＡ：平滑筋細胞アクチン；Ｃｏｌ１ａ：コラーゲン１ａ；Ｄ０、Ｄ４、Ｄ１０、Ｄ１４、Ｄ２０、Ｄ３０：それぞれ、０日目、４日目、１０日目、１４日目、２０日目、３０日目；
【０１２０】
２．６．１．マウスＣＮＶ中の周皮細胞被覆の定量化。
血管成熟のマーカーとして周皮細胞被覆を研究するために、平滑筋細胞アクチン（ＳＭＡ）を、連続する７ｍｍのパラフィン切片上で検査した。一次抗体としてトリス塩化ナトリウムブロッキング試薬（ＴＮＢ）中で１／５００に希釈したラット抗αＳＭＡ抗体（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、および４５分間の免疫前マウス血清１０％（ｖ／ｖ）含有ＴＮＢ中の１／１００の二次抗体として標識されたウサギ抗マウスＨＲＰ（ホースラディシュペルオキシダーゼ）（Ｄａｋｏ）により、免疫組織化学を遂行した。病巣中に存在するＳＭＡ細胞の量を、商業的ソフトウェア（Ａｘｉｏｖｉｓｉｏｎ；Ｚｅｉｓｓ、Ｏｂｅｒｋｏｃｈｅｎ、ドイツ）の使用によって決定した。
【０１２１】
２．７．マウスＣＮＶモデルにおける抗ＰｌＧＦおよび抗ＶＥＧＦの交替
表１および表３中で描写されるようなものへ類似する研究デザインにおいて、そしてコラーゲン沈着／後眼部線維症に対する効果を決定する目的のために、抗ＰｌＧＦ抗体５Ｄ１１Ｄ４および抗ＶＥＧＦ抗体Ｂ２０の異なる投薬レジメンを比較する。１つのかかる研究デザインを表４中で示す。この研究の群１は、アフリベルセプトにより得られるものへ類似する結果をもたらすと予想される。この研究は、部分的には（群２）、ウォッシュアウト期間（マウス眼から）の決定を開始するものであり、それに加えて、本明細書における上記のような抗ＰｌＧＦ／抗ＶＥＧＦの組み合わせを交替する調査を開始するものである。
表４。マウスＣＮＶモデルの研究デザイン
【表４】
2019507746.tif 000020
【０１２２】
２．８．統計解析
２つの実験群の間の比較は、対応のないＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定を使用して遂行した。２を超える群を比較するために、変数として処理を用いた一元配置分散分析は、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ事後解析検定によりＧｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５を使用して遂行した。
【０１２３】
「Ｌｅｕｖｅｎ  Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｃｅｎｔｒｅ」（Ｌ−ＢｉｏＳｔａｔ）のデータセットを使用して、統計的検出力を決定した。独立した両側ｔ検定について０．０５のαで検出力を与えて、等分散および等しい群サイズを想定する２つの群の間の平均値における差を検出した。データは、特別に明記されない限り、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として表わされる。
【０１２４】
３．結果
ＣＮＶのマウスモデルにおけるＰｌＧＦ阻害の治療的な抗血管新生性、抗漏出性、抗炎症性および、抗線維化の能力を決定するために、マウスを、５Ｄ１１Ｄ４、１６Ｄ３、ＤＣ１０１、Ｂ２０、ＩｇＧ、アフリベルセプト、ＴＡＡＣ、およびそれぞれのバッファーのＩＶＴ注射またはＩＰ注射により処理した（表１）。すべての動物を１日おきに臨床的に検査し、炎症はレーザーの５日後に調査し、新生血管形成／漏出（周皮細胞被覆が含まれる）は７または１４日目で、線維症はレーザーの３０日後に調査した。１０、２０および３０日目で、処理前および処理後の体重における処理関連差は検出されなかった（データ不掲載）。
【０１２５】
３．１．炎症（研究デザイン：表１）
抗ＰｌＧＦがマクロファージの浸潤を４８％に有意に減少させることができたが、ＤＣ１０１は効果がなかったという以前に出版された結果（Ｖａｎ  ｄｅ  Ｖｅｉｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ２０１０，１４１：１７８−１９０）が、Ｆ４／８０染色の分析により確認された。ＩｇＧ（Ｐ＜０．０５）に比較して、アフリベルセプトの投与もマクロファージ浸潤を５２％に低減した。
【０１２６】
最初に、白血球の効果を調査した。レーザー処理の５日後に、ＣＤ４５免疫組織化学染色により、抗ＰｌＧＦ抗体により処理された群の眼において白血球浸潤の用量依存的有意な低減が示された。実際、炎症は、１．５μｇおよび３．１μｇの５Ｄ１１Ｄ４で、それぞれ３６％および４６％に有意に減少した（ｎ＝１０〜２５；Ｐ＜０．０５、ＩｇＧへ比較した）。これは、およそ５０％の類似する低減を誘導した２．４μｇおよび２０μｇのアフリベルセプトへそれぞれ同等であった（Ｐ＜０．０５）。ＴＡＡＣ（４０μｇ）の最も高い濃度のみが白血球浸潤（Ｐ＜０．０５）を減少させたが、より低い濃度は効果がなかった。重要なことには、ＤＣ１０１の単一投与は白血球浸潤に対する効果はなかった（図１Ａ）。異なる化合物の等モル濃度の効果を比較した後に、５Ｄ１１Ｄ４およびアフリベルセプトの両方は白血球浸潤を５０％に低減するが、ＤＣ１０１およびＴＡＡＣは効果がないことを結論できる（図１Ｂ）。注目すべきことには、４０μｇの最高用量で投与された場合にのみ、ＴＡＡＣは抗炎症効果を有していた。すべてのそれぞれのバッファー（ＰＢＳ、アフリベルセプト−バッファー、ＴＡＡＣ−バッファー）はＩｇＧとは異なっていなかった（Ｐ＞０．０５；データ不掲載）。
【０１２７】
３．２．新生血管形成および漏出（研究デザイン：表１）
ＰｌＧＦの阻害は、ＤＣ１０１に比較して、マウスＣＮＶモデルにおける新生血管形成および漏出を同等に低減したという以前に出版された結果を確認した（Ｖａｎ  ｄｅ  Ｖｅｉｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ２０１０，１４１：１７８−１９０）。これらの効果もアフリベルセプトのものに同等であった。
【０１２８】
３．３．コラーゲン沈着（研究デザイン：表１および３）
レーザー処理の３０日後に、免疫組織化学染色によるコラーゲン決定により、抗ＰｌＧＦ抗体により処理された群の眼において線維症の用量依存的で有意な低減が示された。実際、コラーゲン沈着は、１．５μｇおよび３．１μｇの５Ｄ１１Ｄ４で、それぞれ４３％および４４％に有意に減少した（ｎ＝５〜１８；Ｐ＜０．０５、ＩｇＧへ比較した）。これはＴＡＡＣの最も高い濃度（４０μｇ）へ同等であったが、より低い濃度は効果がなかった。これとは対照的に、ＤＣ１０１（３．１μｇ）およびアフリベルセプト（２．４μｇおよび２０μｇ）の反復投与は、コラーゲン沈着に対する効果がなかった（図２Ａ）。異なる化合物の等モル濃度の効果を比較した後に、５Ｄ１１Ｄ４のみが創傷治癒のプロセスを遅延させるが、アフリベルセプト、ＤＣ１０１およびＴＡＡＣは効果がないことが結論できる（図２Ｂ）。注目すべきことには、４０μｇの最高用量で投与された場合にのみ、ＴＡＡＣは抗線維化効果を有していた。すべてのそれぞれのバッファー（ＰＢＳ、アフリベルセプト−バッファー、ＴＡＡＣ−バッファー）はＩｇＧとは異なっていなかった（Ｐ＞０．０５；データ不掲載）。
【０１２９】
反復実験において、さらなる抗ＰｌＧＦ抗体（１６Ｄ３（抗ヒトＰｌＧＦ））および抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体（Ｂ２０）が含まれていた。レーザー処理の３０日後に、免疫組織化学染色によるコラーゲン決定により、両方の抗ＰｌＧＦ抗体により処理された群の眼において線維症の有意な低減が示された。実際、コラーゲン沈着は、３．１μｇ／眼の５Ｄ１１Ｄ４または１６Ｄ３で、それぞれ４４％および３４％に有意に減少した（ｎ＝５〜６；Ｐ＜０．０５、ＰＢＳへ比較した）。この効果はステロイド（ＴＡＡＣ（４０μｇ／眼））の投与に同等であり、コラーゲン沈着の４９％の有意な低減を示した（Ｐ＜０．０５、図４）。アフリベルセプト（２．４μｇ／眼）および抗ＶＥＧＦ抗体Ｂ２０（３．１μｇ／眼）の等モル量の投与は、ＰＢＳへ比較して、線維症を減少させなかった（Ｐ＜０．０５；図４）。
【０１３０】
３．４．神経網膜の安全性／ナイーブマウス
網膜神経節細胞（ＲＧＣ）に対するＰｌＧＦおよびＶＥＧＦ−Ｒ２の阻害の効果を研究するために、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに、２、４および６週間、５Ｄ１１Ｄ４、ＤＣ１０１またはイソタイプの一致した無関係の対照ＩｇＧを注射し（すべての３つの抗体を１週間あたり３回腹腔内に注射した）、ＮｅｕＮ染色についてのＲＧＣの数をカウントした。神経節細胞密度（ＲＧＣ／網膜面積）は、３つの記載されたタイムポイントで３つの処理群の間で有意に異ならなかった（対照ＩｇＧについて５１００  ｖｓ  ５Ｄ１１Ｄ４について４６００およびＤＣ１０１について５５００（ｎ＝６；Ｐ＝ＮＳ））。ＴＵＮＥＬ染色により、神経細胞層における網膜面積あたりのアポトーシスを起こした細胞の数は、６週間後にａＰｌＧＦ  ｖｓ対照ＩｇＧ処理マウスにおいて同等であったことが確認された（対照ＩｇＧについて１６±２  ｖｓ  ５Ｄ１１Ｄ４について２０±４  ）。アポトーシスを起こした細胞の増加の傾向性は、ＤＣ１０１処理マウスについて存在した（網膜面積あたり３５±４のアポトーシスを起こした細胞（ｎ＝６；Ｐ＝０．１０））。続いて、これらの実験を、網膜変性遺伝子突然変異（Ｒｄ遺伝子）を保有し、生後１９〜２４日齢で光受容体変性を発症するＳｗｉｓｓマウス（Ｃａｒａｖａｇｇｉｏ  ａｎｄ  Ｂｏｎｔｉｎｇ，Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  １９６３，２：１２−１９）において反復した。実際、ＤＣ１０１により処理されたＳｗｉｓｓマウスは、ＴＵＮＥＬ染色について神経細胞層におけるアポトーシスを起こした細胞の３３％増加した数（ｐ＜０．００１）、および４週間後の３２％低減したＲＧＣ密度（ｎ＝６、ｐ＝０．０５）を示した。これとは対照的に、抗ＰｌＧＦは、ＲＧＣ密度またはアポトーシスを起こした率の変化を誘導しなかった（図３Ａ〜Ｄ）。
【０１３１】
３．５．マウスＳＴＺモデルにおけるＲＧＣ密度（研究デザイン：表２）
化合物投与後にＲＧＣ密度を可視化するために、網膜の切片を、糖尿病開始の８週間後にＢｒｎ３ａマウスモノクローナル抗体により染色した。ＳＴＺを注射した（ＩＶＴではない）糖尿病マウスの中心網膜（視神経のいずれかの側上の視神経頭から２５０μｍ）におけるＲＧＣの数は、非糖尿病マウスへ比較して、有意により低かった（それぞれ１２．８±１．０／２５０μｍ網膜長ｖｓ  １５．７±０．８／２５０μｍ網膜長、Ｐ＝０．０５；図５）。５Ｄ１１Ｄ４の投与後のＲＧＣ密度は、ＰＢＳ注射マウスとは有意に異ならなかったが、ＤＣ１０１注射はバッファーに比較してＲＧＣ密度を有意に２０％低減した（Ｐ＜０．０５、図５）。
【０１３２】
３．６．マウスＣＮＶモデルにおける周皮細胞被覆（研究デザイン：表３）
周皮細胞被覆を、マウスＣＮＶモデルにおけるレーザー処理の１４日後に調査した。分析により、病巣内のαＳＭＡ陽性血管の面積は、ＩｇＧ処理マウスと抗ＶＥＧＦ−Ｒ２抗体（２５ｍｇ／ｋｇ）を注射したマウスとの間で同等だった（ｎ＝１０、ｐ＞０．０５）が、周皮細胞で被覆された血管の３５％の増加は抗ＰｌＧＦ処理群において存在したことが示された。これは、抗ＰｌＧＦ処理（２５ｍｇ／ｋｇ）が脈絡膜血管の成熟を改善したことを意味する（ｎ＝１０、ｐ＜０．０５；図６）。
【０１３３】
４．結論
ＰｌＧＦ阻害抗体またはＰｌＧＦ中和抗体は、線維症を減少させることに加えて、新生血管形成、漏出および炎症を低減させることができる（このすべてはＲＧＣ生存に影響することはない）と結論できる。
【０１３４】
これらのうちの、線維症に対する効果は、ＶＥＧＦ阻害物質（ＶＥＧＦ阻害物質およびＶＥＧＦＲ２阻害物質）および二重ＶＥＧＦ阻害物質／ＰｌＧＦ阻害物質によって共有されなかったので、単一特異的ＰｌＧＦアンタゴニストにユニークである。重要なことには、線維症は、レーザー処理の３０日後で（すなわちコラーゲン沈着が遅くなると思われるタイムポイントで）に研究された（Ｖａｎ  Ｂｅｒｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ２０１５，５６：５２８０−５２８９）。
【０１３５】
単一特異的ＰｌＧＦアンタゴニストの神経変性特性の非存在は、やはりＶＥＧＦ阻害物質によって共有されなかったので、さらに注目に値する。ＲＧＣに対する単一特異的ＰｌＧＦアンタゴニストの効果はこれまでに未知であった。Ｉｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．（Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ２０１５，５６：６９１４−６９２４）は、萎縮型加齢黄斑変性症（萎縮型ＡＭＤ）に似ている実験モデルにおける光線誘導性光受容体変性に対する抗ＰｌＧＦ抗体の保護的効果を、以前に報告している。抗ＰｌＧＦ抗体のこの特性は抗ＶＥＧＦ抗体と共有される（Ｃａｃｈａｆｅｉｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｓ  ２０１３，４：ｅ７８１）。本結果とは対照的に、Ｉｎｏｕｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｒｅｓ  ２０１４，９２：３２９−３３７）は、ＰｌＧＦそれ自体によって神経保護効果が発揮され、それは抗ＰｌＧＦによって打ち消されるように思われるることを報告した。これについての可能な説明は、Ｉｎｏｕｅ  ｅｔ  ａｌ．がインビトロの培養細胞（インビボで実行された本研究とは異なる）を使用したということである。二重特異的ＶＥＧＦ／ＰｌＧＦ阻害物質アフリベルセプトも網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞死を増加させることが報告された（Ｊｕｌｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２０１４，９８：８１３−８２５）。
【０１３６】
上記のことを考慮して、単一特異的ＰｌＧＦアンタゴニストは、現在臨床業務におけるゴールドスタンダード療法であるＶＥＧＦ阻害物質と差別化される。
【配列表フリーテキスト】
【０１３７】
配列番号７：＜２２３＞中和抗ＰｌＧＦ抗体のヒト化重鎖アミノ酸配列
配列番号８：＜２２３＞中和抗ＰｌＧＦ抗体のヒト化軽鎖アミノ酸配列
配列番号９：＜２２３＞中和抗ＰｌＧＦ抗体のヒト化ｓｃＦｖアミノ酸配列
配列番号１２：＜２２３＞ＶＨ  ５Ｄ１１Ｄ４
配列番号１３：＜２２３＞ＶＬ  ５Ｄ１１Ｄ４
配列番号１４：＜２２３＞ＶＨ  ＣＤＲ１  ５Ｄ１１Ｄ４
配列番号１５：＜２２３＞ＶＨ  ＣＤＲ２  ５Ｄ１１Ｄ４
配列番号１６：＜２２３＞ＶＨ  ＣＤＲ３  ５Ｄ１１Ｄ４
配列番号１７：＜２２３＞ＶＬ  ＣＤＲ１  ５Ｄ１１Ｄ４
配列番号１８：＜２２３＞ＶＬ  ＣＤＲ２  ５Ｄ１１Ｄ４
配列番号１９：＜２２３＞ＶＬ  ＣＤＲ３  ５Ｄ１１Ｄ４
【図１】
2019507746.tif 000021
【図２】
2019507746.tif 000022
【図３−１】
2019507746.tif 000023
【図３−２】
2019507746.tif 000024
【図４】
2019507746.tif 000025
【図５】
2019507746.tif 000026
【図６】
2019507746.tif 000027
【配列表】
2019507746000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年12月11日(2018.12.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体の後眼部線維症(ocular posterior fibrosis)の治療、予防、またはその進行の遅延における使用のための、単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストを含む医薬組成物。
【請求項２】
被験体における後眼部神経変性(ocular posterior neurodegeneration)を誘導せずに、後眼部線維症の治療、予防、またはその進行の遅延における使用のための、単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストを含む医薬組成物。
【請求項３】
後眼部炎症および／または後眼部新生血管形成および／または血管漏出をさらに治療するか、予防するか、またはそれらの進行を遅延させるための、請求項１又は２に記載する医薬組成物。
【請求項４】
網膜が損傷された眼を備えた被験体の視力をさらに維持するかまたは改善するための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
眼へ投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
先に眼へ投与された血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたはＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストのウォッシュアウト後に、該眼へ投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
先に眼へ投与された前記単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストのウォッシュアウト後に、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたはＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストが、該眼へ投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストと異なり、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストと異なる、第２の活性化合物と組み合わせて眼へ投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストと異なり、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストと異なる、第２の活性化合物と組み合わせて眼へ投与され、該投与が、該眼へ先に投与された血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたはＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストのウォッシュアウト後である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストと異なり、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストとは異なる、第２の活性化合物と組み合わせて、先に眼へ投与された前記単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストのウォッシュアウト後に、該眼へ血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたはＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）アンタゴニストが投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記第２の活性化合物が、分離した組成物で眼へ投与される、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記第２の活性化合物を含有する、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記第２の活性化合物が、抗炎症化合物、抗血管新生性化合物、抗線維化化合物、ＡＧＥ阻害化合物、ＡＬＥ阻害化合物、ＡＧＥ破壊化合物、炭酸脱水酵素阻害物質、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト、カイニン酸受容体アンタゴニスト、ＡＭＰＡ受容体アンタゴニスト、神経保護剤、眼内圧の制御のための薬剤、抗アポトーシス剤、抗ウイルス性化合物、抗生化合物、抗真菌化合物、抗ヒスタミン物質、抗凝固剤、血栓溶解化合物、抗有糸分裂剤、麻酔剤、および瞳孔拡大を誘導する薬剤、毛様筋麻痺を誘導する薬剤、後部硝子体剥離を誘導する薬剤（完全または不完全）、硝子体液化を誘導する薬剤、インテグリン阻害物質、抗浮腫剤である、請求項８〜１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
光線力学療法、レーザー光凝固術、放射線療法または硝子体外科手術と組み合わせて用いられる、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記後眼部線維症が網膜損傷と同時にまたはその後に起こっている、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記後眼部線維症が、加齢関連黄斑浮腫、糖尿病網膜症、（糖尿病）黄斑浮腫、任意のタイプの網膜症、新生血管緑内障、網膜剥離または網膜出血において起こっている、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストが、ＰｌＧＦ中和抗体もしくは抗体のＰｌＧＦ中和断片、アンチセンスＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ、アプタマー、またはリボザイムである、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストが、配列番号：１乃至６において定義される６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、ＰｌＧＦ中和抗体またはＰｌＧＦ中和抗体断片である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記単一特異的胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）アンタゴニストが、配列番号：１４乃至１９において定義される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、単離されたＰｌＧＦ中和抗体またはそのＰｌＧＦ中和抗体断片である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
抗ＶＥＧＦ治療の後に発生する、加齢黄斑変性症及び後眼部線維性瘢痕を有する対象の治療に使用するための、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
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