(57)【要約】  ヒトＩＬ−２１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。これらの抗体は、ＩＬ−２１レベルのイムノアッセイ、ならびに／またはインビボ、エクスビボ、もしくはインビトロ免疫化学的方法、及びＩＬ−２１の存在の判定、及び／もしくはＩＬ−２１のレベルの定量のための他の撮像方法において、かつＩＬ−２１シグナル伝達が病因に関与する患者における診断、予後、及び予測目的、ならびにまたは治療投薬計画の最適化のために有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む、ヒトＩＬ−２１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記ＬＣＶＲは、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含み、前記ＨＣＶＲは、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）を含み、前記３つのＬＣＤＲ及び前記３つのＨＣＤＲのアミノ酸配列は、
ａ）ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１）、ＹＴＳＲＬＨＳ（配列番号２）、ＱＱＦＨＴＬＲＴＦ（配列番号３）、ＧＹＴＦＴＤＹＷＭＨ（配列番号４）、ＬＩＤＴＳＤＳＹＴＩＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号５）、及びＹＧＰＬＡＭＤＹ（配列番号６）、
ｂ）ＲＡＳＫＳＩＥＫＹＩＡ（配列番号７）、ＡＧＧＴＬＱＳ（配列番号８）、ＱＱＨＥＥＹＰＬＴ（配列番号９）、ＧＹＤＦＴＧＹＴＭＮ（配列番号１０）、ＬＩＮＰＹＮＧＧＴＡＹＳＰＫＦＫＧ（配列番号１１）、及びＴＨＹＹＧＳＥＹＴＧＭＤＹ（配列番号１２）、ならびに、
ｃ）ＫＳＳＱＳＬＬＤＶＤＧＫＴＹＬＮ（配列番号１３）、ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号１４）、ＷＱＧＴＨＦＰＹＴ（配列番号１５）、ＧＹＦＦＴＬＹＭＭＨ（配列番号１６）、ＹＩＮＰＳＳＧＹＴＥＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号１７）、及びＤＦＤＹ（配列番号１８）からなる群から選択される、抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
前記ＬＣＶＲ及び前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が、
ａ）配列番号１９のアミノ配列及び配列番号２０のアミノ配列、
ｂ）配列番号２１のアミノ配列及び配列番号２２のアミノ配列、ならびに
ｃ）配列番号２３のアミノ配列及び配列番号２４のアミノ配列からなる群から選択される、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
前記抗体が、軽鎖及び重鎖を含み、前記軽鎖及び前記重鎖のアミノ酸配列が、
ａ）配列番号２５のアミノ配列及び配列番号２６のアミノ配列、
ｂ）配列番号２７のアミノ配列及び配列番号２８のアミノ配列、ならびに
ｃ）配列番号２９のアミノ配列及び配列番号３０のアミノ配列からなる群から選択される、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４】
前記抗体が、２つの軽鎖及び２つの重鎖を含み、前記軽鎖の各々及び前記重鎖の各々のアミノ酸配列が、
ａ）配列番号２５のアミノ配列及び配列番号２６のアミノ配列、
ｂ）配列番号２７のアミノ配列及び配列番号２８のアミノ配列、ならびに
ｃ）配列番号２９のアミノ配列及び配列番号３０のアミノ配列からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のＬＣＶＲ及び／もしくはＨＣＶＲをコードするヌクレオチド配列、または軽鎖及び／もしくは重鎖を含むポリヌクレオチド。
【請求項６】
前記ポリヌクレオチドが、配列番号３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、または４２に示されるヌクレオチド配列を有する、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項７】
請求項５または請求項６に記載のポリヌクレオチドを含む、組換え発現ベクター。
【請求項８】
請求項７に記載のベクターによって形質転換された、宿主細胞。
【請求項９】
検出可能な標識をさらに含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１０】
前記検出可能な標識が、発色団、色素原、色素、蛍光剤、蛍光発生剤、リン光剤、化学発光剤、生物発光剤、放射性核種、陽電子放出断層撮影可能な造影剤、及び磁気共鳴断層撮影可能な造影剤からなる群から選択される、請求項９に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
インビトロでの診断、予後、及び／または患者モニタリング手順に使用するための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１２】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと、許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、組成物。
【請求項１３】
組織または体液の試料中のヒトＩＬ−２１を検出または定量するインビトロの方法であって、
ａ）前記試料を請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させることと、
ｂ）任意に、非特異的に結合した全ての抗体またはその抗原結合フラグメントを除去することと、
ｃ）前記試料中のヒトＩＬ−２１に特異的に結合している抗体またはその抗原結合フラグメントの量を検出または定量することと、を含む、方法。
【請求項１４】
前記方法は、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）からなる、請求項１３に記載のヒトＩＬ−２１を検出または定量する方法。
【請求項１５】
組織または体液の試料においてインビトロでヒトＩＬ−２１を検出または定量するのに使用するためのキットであって、
ａ）第１試薬であって、前記第１試薬は、配列番号２１のアミノ配列を有するＬＣＶＲ及び配列番号２２のアミノ配列を有するＨＣＶＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメントである、第１試薬と、
ｂ）第２試薬であって、前記第２試薬は、配列番号１９のアミノ配列を有するＬＣＶＲ及び配列番号２０のアミノ配列を有するＨＣＶＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメントである、第２試薬と、を含む、キット。
【請求項１６】
前記試料は、血漿試料または血清試料である、請求項１３に記載の方法または請求項１４のキット。
【請求項１７】
ヒト試料中のＩＬ−２１の量のインビトロでの測定に使用するための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬の分野に関する。より詳細には、本発明は、ヒトインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）と結合して、検出可能なＩＬ−２１／抗ＩＬ−２１抗体複合体であって、高感度（１ミリリットル当たりのピコグラム（ｐｇ／ｍｌ）未満）のヒト生物学的マトリックス中に見出されるＩＬ−２１レベルの測定に有用である、前記複合体を形成する抗体に関する。特に、本発明はＩＬ−２１のインビトロアッセイの１ミリリットル当たりのフェムトグラムレベルの測定に関する。
【０００２】
ＩＬ−２１はアレルギー疾患、癌、及び自己免疫疾患、特に、乾癬、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、慢性炎症性腸疾患及びシェーグレン症候群を含む炎症性疾患の病因に関与する重要なサイトカインである。ＩＬ−２１の上昇した血清レベルは、乾癬、ＳＬＥまたはシェーグレン症候群などの自己免疫疾患を有する患者における疾患の重症度と関連していることが報告されている。ヒトＩＬ−２１を検出するための酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）キットが市販されているが、それは１６ｐｇ／ｍｌの低い検出限界を有する（Ｗｅｉｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ６０（２０１２）２２０−２２５）。このキットは、しかし、患者試料中のＩＬ−２１の真のレベルを検出することができない。
【０００３】
したがって、ヒトＩＬ−２１に対してより高い結合親和性及び選択性を有し、ＩＬ−２１測定における感度を増強する抗ＩＬ−２１抗体が必要であるか、またはＥＬＩＳＡアッセイで使用される場合、最小限の干渉及び広範な希釈直線性を提供する必要がある。好ましくは、抗体はモノクローナル抗体であり、そして例えば、抗体の対がアッセイにおいてＩＬ−２１に同時に結合することができるようにＩＬ−２１上の２つの以上の異なるエピトープを認識する、２つ以上の異なる抗体を含む。
【０００４】
最小限の血漿タンパク質干渉で及び市販のアッセイより高い感度で、患者の治療前、治療中及び／または治療後のＩＬ−２１レベルの診断評価を可能にする、ＩＬ−２１に結合する抗ＩＬ−２１抗体が必要である。したがって、本発明は、ヒトＩＬ−２１に特異的に結合する別の抗ＩＬ−２１抗体を提供しようとするものである。さらに本発明は、１ミリリットル当たりのフェムトグラム（ｆｇ／ｍｌ）レベルで、インビトロでヒトＩＬ−２１を定量するための迅速かつ便利な方法を提供しようとするものである。
【０００５】
したがって、本発明の第１の態様は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含むヒトＩＬ−２１に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供し、前記ＬＣＶＲは、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含み、前記ＨＣＶＲは、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）を含み、前記３つのＬＣＤＲ及び前記３つのＨＣＤＲのアミノ酸配列は、
ａ）ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１）、ＹＴＳＲＬＨＳ（配列番号２）、ＱＱＦＨＴＬＲＴＦ（配列番号３）、ＧＹＴＦＴＤＹＷＭＨ（配列番号４）、ＬＩＤＴＳＤＳＹＴＩＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号５）、及びＹＧＰＬＡＭＤＹ（配列番号６）、
ｂ）ＲＡＳＫＳＩＥＫＹＩＡ（配列番号７）、ＡＧＧＴＬＱＳ（配列番号８）、ＱＱＨＥＥＹＰＬＴ（配列番号９）、ＧＹＤＦＴＧＹＴＭＮ（配列番号１０）、ＬＩＮＰＹＮＧＧＴＡＹＳＰＫＦＫＧ（配列番号１１）、及びＴＨＹＹＧＳＥＹＴＧＭＤＹ（配列番号１２）、ならびに、
ｃ）ＫＳＳＱＳＬＬＤＶＤＧＫＴＹＬＮ（配列番号１３）、ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号１４）、ＷＱＧＴＨＦＰＹＴ（配列番号１５）、ＧＹＦＦＴＬＹＭＭＨ（配列番号１６）、ＹＩＮＰＳＳＧＹＴＥＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号１７）、及びＤＦＤＹ（配列番号１８）からなる群から選択される。
【０００６】
さらなる実施形態では、本発明は、ヒトＩＬ−２１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ＬＣＶＲ及びＨＣＶＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、前記ＬＣＶＲ及び前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列は、
ａ）配列番号１９のアミノ配列及び配列番号２０のアミノ配列
ｂ）配列番号２１のアミノ配列及び配列番号２２のアミノ配列、ならびに
ｃ）配列番号２３のアミノ配列及び配列番号２４のアミノ配列からなる群から選択される。
【０００７】
別の実施形態では、本発明は、ヒトＩＬ−２１に結合する抗体を提供し、前記抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、前記軽鎖及び前記重鎖のアミノ酸配列は、
ａ）配列番号２５のアミノ配列及び配列番号２６のアミノ配列、
ｂ）配列番号２７のアミノ配列及び配列番号２８のアミノ配列、ならびに
ｃ）配列番号２９のアミノ配列及び配列番号３０のアミノ配列からなる群から選択される。
【０００８】
別の実施形態では、本発明は、ヒトＩＬ−２１に結合する抗体を提供し、前記抗体は、２つの軽鎖及び２つの重鎖を含み、前記軽鎖及び前記重鎖のそれぞれのアミノ酸配列は、
ａ）配列番号２５のアミノ配列及び配列番号２６のアミノ配列、
ｂ）配列番号２７のアミノ配列及び配列番号２８のアミノ配列、ならびに
ｃ）配列番号２９のアミノ配列及び配列番号３０のアミノ配列からなる群から選択される。
【０００９】
本発明はまた、本発明の抗体のＬＣＶＲ及び／もしくはＨＣＶＲをコードするヌクレオチド配列、または軽鎖及び／もしくは重鎖を含むポリヌクレオチドを提供し、前記ポリヌクレオチドは、配列番号３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、または４２に示されるヌクレオチド配列を有する。
【００１０】
本発明はまた、本発明の抗体のＬＣＶＲ及び／もしくはＨＣＶＲをコードするポリヌクレオチド、または軽鎖及び／もしくは重鎖を含む組換え発現ベクターを提供する。
【００１１】
別の実施形態では、本発明は、本発明の抗体のＬＣＶＲ及び／もしくはＨＣＶＲをコードするポリヌクレオチド、または軽鎖及び／もしくは重鎖を含む発現ベクターによって形質転換された宿主細胞を提供する。
【００１２】
別の実施形態では、本発明は、検出可能な標識を含む抗体または抗原結合フラグメントをさらに提供し、前記検出可能な標識は、発色団、色素原、色素、蛍光剤、蛍光発生剤、リン光剤、化学発光剤、生物発光剤、放射性核種、陽電子放出断層撮影可能な造影剤、及び磁気共鳴断層撮影可能な造影剤を含む。
【００１３】
一実施形態において、本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントと、許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、組成物を提供する。
【００１４】
別の実施形態では、本発明は、組織または体液の試料中のヒトＩＬ−２１を検出または定量するインビトロの方法を提供し、該方法は、前記試料を本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させることと、任意に、非特異的に結合した全ての抗体またはその抗原結合フラグメントを除去することと、前記試料中のヒトＩＬ−２１に特異的に結合している抗体またはその抗原結合フラグメントの量を、定量的、半定量的、または定性的に検出または定量することと、を含む。
【００１５】
別の態様では、本発明は、インビトロでの診断、予後、及び／または患者モニタリング手順に使用するための、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
【００１６】
別の態様では、本発明は、組織または体液の試料中のヒトＩＬ−２１をインビトロで検出または定量するのに使用するためのキットを提供し、該キットは、
ａ）第１試薬であって、前記第１試薬は、配列番号２１のアミノ配列を有するＬＣＶＲ及び配列番号２２のアミノ配列を有するＨＣＶＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメントである、第１試薬と、
ｂ）第２試薬であって、前記第２試薬は、配列番号１９のアミノ配列を有するＬＣＶＲ及び配列番号２０のアミノ配列を有するＨＣＶＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメントである、第２試薬と、を含む。
【００１７】
好ましくは、組織または体液の試料は、血漿試料または血清試料である。
【００１８】
本発明のさらに別の態様によれば、ヒト試料中のＩＬ−２１の量のインビトロでの測定に使用するための本発明による抗体が提供される。
【００１９】
本明細書で使用する場合、「ＩＬ−２１」（インターロイキン−２１としても知られている）という用語は、自然免疫応答及び適応免疫応答の両方に多面的効果を及ぼすＩ型サイトカインを意味する。ＩＬ−２１は、ろ胞性Ｔヘルパー及びＴｈ１７細胞を含む活性化ＣＤ４陽性Ｔ細胞によって産生される。ヒトＩＬ−２１のアミノ酸及びｃＤＮＡ配列は、それぞれ配列番号４３及び４５として列記されている。
【００２０】
抗体または全長抗体は、ジスルフィド結合によって相互に接続される２つの重鎖と、２つの軽鎖と、を含む、免疫グロブリン分子である。各鎖のアミノ末端部分は、その中に含まれる相補性決定領域（ＣＤＲ）を介した抗原認識を主に担う約１００〜約１１０アミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクタ機能を主に担う定常領域を画定する。本発明の抗体は、モノクローナル抗体（「ｍＡｂ」）である。モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ技術、例えばＣＤＲ移植、または当該技術分野で既知のこのような技術もしくは他の技術の組み合わせによって産生することができる。本発明の別の実施形態において、抗体、またはそれをコードする核酸が、単離された形態で提供される。本明細書で使用する場合、「単離された」という用語は、天然では見出されない、及び細胞環境において見出される他の巨大分子種を含まないかまたは実質的に含まない、タンパク質、ペプチド、または核酸を指す。「実質的に含まない」は、本明細書で使用する場合、関心対象のタンパク質、ペプチド、または核酸が、存在する巨大分子種の８０％超（モルベース）、好ましくは９０％超、より好ましくは９５％超を含むことを意味する。
【００２１】
「抗原結合フラグメント」は、本明細書で使用する場合、抗体の抗原結合フラグメント、すなわち全長抗体によって結合された抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体フラグメントを指す。抗原結合フラグメントの例には、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、及び一本鎖Ｆｖフラグメントが含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、抗体フラグメントは、Ｆａｂフラグメントである。
【００２２】
ＣＤＲには、フレーム領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が散在している。各軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順にアミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される。軽鎖の３つのＣＤＲは、「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３」と称され、重鎖の３つのＣＤＲは、「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３」と称される。ＣＤＲは、抗原と特異的な相互作用を形成する残基の大部分を含む。抗体のＣＤＲ割り当ての３つのシステムが、一般に配列描写に使用される。ＫａｂａｔのＣＤＲ定義（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））は、抗体配列変異性に基づく。ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ定義（Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９６，９０１−９１７（１９８７）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｔａｎｄａｒｄ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２７３，９２７−９４８（１９９７））は、抗体の３次元構造及びＣＤＲループのトポロジーに基づく。ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ定義は、ＨＣＤＲ１及びＨＣＤＲ２を除いて、ＫａｂａｔのＣＤＲ定義と同一である。ＮｏｒｔｈのＣＤＲ定義（Ｎｏｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａ  Ｎｅｗ  Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＣＤＲ  Ｌｏｏｐ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，４０６，２２８−２５６（２０１１））は、多数の結晶構造での親和性伝播クラスタリングに基づく。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ定義は、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａで定義されたＨＣＤＲ１を除いて、本発明で使用される。
【００２３】
本発明の別の態様は、上記の抗ＩＬ−２１抗体のいずれかをコードする単離された核酸分子、この核酸分子を含む発現ベクター、及び核酸分子を含む宿主細胞に関する。さらに、本発明は、発現配列、プロモーター及び／またはエンハンサー配列のような制御配列に作動可能に連結された先に記載されたポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターを提供する。原核生物系、例えば細菌、及び酵母および哺乳動物細胞培養系を含むがこれに限定されない真核細胞系、における抗体ポリペプチドの効率的な合成のための様々な発現ベクターが開発されている。本発明のベクターは、染色体、非染色体及び合成ＤＮＡ配列のセグメントを含むことができる。
【００２４】
抗体及び抗原結合フラグメントを産生及び精製するための方法は当技術分野で公知であり、例えばＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｃｈａｐｔｅｒｓ  ５−８  ａｎｄ  １５，ＩＳＢＮ  ０−８７９６９−３１４−２に見出すことができる。抗原結合フラグメントは、従来の方法によっても調製することができる。本発明はまた、先に記載した組換えベクターを含有する組換え宿主細胞を提供する。特に好ましい細胞株は、高レベルの発現、目的のタンパク質の恒常的発現及び宿主タンパク質からの最小限の汚染に基づいて選択される。発現のための宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は、当技術分野で周知であり、多くの不死化細胞株例えばＣＯＳ−７細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞及び、リンパ系起源の細胞株例えばリンパ腫、骨髄腫、またはハイブリドーマ細胞を含む他の多くのものを含むが、これらに限定するものではない。本発明のベクターの形質転換及び発現のための好ましい宿主細胞は、哺乳動物細胞、例えばＮＳＯ細胞（非分泌性（０）マウス骨髄腫細胞）、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）２９３、ＳＰ２０及びチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞及びリンパ系起源の他の細胞株、例えばリンパ腫、骨髄腫、またはハイブリドーマ細胞である。本発明の抗体は、ハイブリドーマ以外の細胞株で発現させることができる。他の真核宿主、例えば酵母を代替的に使用することができる。抗体及びより具体的にはその抗原結合フラグメントはまた、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉのような原核細胞から産生され得る。本発明による抗体をコードする配列を含む核酸は、適切な哺乳動物宿主細胞の形質転換に使用することができる。
【００２５】
本発明はさらに、上記の抗ＩＬ−２１抗体のいずれかを精製する方法を提供する。本発明の操作された抗体または抗原結合フラグメントは、既知の方法を用いて調製及び精製され得る。
【００２６】
本明細書中に開示される抗ＩＬ−２１抗体は、インビボ及び／または様々な形態のエクスビボ調製物中に存在するかどうかにかかわらず、細胞、組織または器官中または上に、及び体液中に存在するＩＬ−２１のレベルを検出することによって診断、予後、及び／または患者モニタリング手順に有用である。「体液」という用語は、血液、血清、血漿、リンパ液、骨髄、尿、唾液、涙、脳脊髄液、乳、羊水、胆汁、尿、気管支液、腹水、膿、及び任意の他の生物学的流体産物などの正常または疾患の対象の身体に由来する任意の流体または流体様物質を指す。流体様物質の意味には、器官または組織抽出物、及び対象からの細胞または組織調製物がインキュベートされた培養培地も含まれる。本明細書に記載の抗ＩＬ−２１抗体は、酵素にコンジュゲートされ、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）において使用され得る。このようなアッセイは、例えば、Ｂｕｔｌｅｒ（１９９４）“ＥＬＩＳＡ”（Ｃｈａｐｔｅｒ  ２９），Ｉｎ：ｖａｎ  Ｏｓｓ，Ｃ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．７５９−８０３に詳細に記載される。本発明の抗ＩＬ−２１抗体は、ＩＬ−２１発現のラジオイムノアッセイ及び蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）分析にも使用することができる。
【００２７】
本明細書で使用する場合、「接触させる」という用語は、抗体またはその抗原結合フラグメントと、抗原または標的タンパク質、例えばＩＬ−２１とを、組織または体液の試料中の抗原または標的タンパク質をインビトロアッセイで検出または定量するのに有用である検出可能な抗原／抗体複合体を形成するような方法で一緒にすることを指す。そのような接触は、インビトロで、例えば試験管、マイクロプレートなどで行うことができる。あるいは、「接触させる」とは、抗体またはその抗原結合フラグメントを血清または血漿などの液体と一緒にインビトロアッセイで混合することを意味する。
【００２８】
抗体組成物及び方法
当業者が、安定した検出可能な抗原−抗体複合体を形成するために使用することができる周知の方法が当技術分野において存在する（検出可能な抗原／抗体複合体の形成を可能にする条件については、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｂｙ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（ｃｕｒｒｅｎｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい）。
【００２９】
本明細書に記載の本発明の抗ＩＬ−２１抗体またはその抗原結合フラグメントまたはＩＬ−２１／抗ＩＬ−２１抗体複合体は、任意の当該技術分野で公知の手段を用いて検出可能に標識することができる（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｖｏｌｕｍｅ  ２，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒｏｌａｎｄ；Ｄｕｂｅｌ，Ｓｔｅｆａｎ（Ｅｄｓ．）を参照されたい）。標識は、例えば、発光または光吸収剤、発色団、色素原、磁性または鉄粒子、色素、蛍光剤、フルオロフォア、リン光剤、化学発光剤、生物発光剤、放射性核種、酵素、陽電子放出断層撮影可能な造影剤、磁性マイクロビーズ、フェロ流体ナノ粒子、二次抗体、及び磁気共鳴断層撮影可能な造影剤であってよいが、これらに限定されない。
【００３０】
「検出可能に標識した」という用語は、本発明の抗ＩＬ−２１抗体またはその抗原結合フラグメント、またはＩＬ−２１／抗ＩＬ−２１抗体の複合体が共有結合または非共有結合のいずれかで有用な検出可能な標識と結合していることを意味する。直接結合標識抗体法（ｄｉｒｅｃｔ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ−ｌａｂｅｌｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｅｔｈｏｄ）では、例えば、補欠分子族複合体、発色団、色素原（発色基質）、色素、蛍光化合物、蛍光発生化合物、放射性同位体、常磁性同位体、及び陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）および磁気共鳴断層撮影法（ＭＲＩ）によって画像化することができる化合物を含む、多くの様々な有用な標識を用いることができる。ガンマカウンター、シンチレーションカウンター、ＰＥＴスキャニング、またはオートラジオグラフィーによって単に検出される有用な放射性標識には、３Ｈ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、及び１４Ｃが含まれる。インビボ診断のために、放射性核種は、ＤＴＰＡ及びＥＤＴＡのようなキレート剤を用いて、抗体または抗原結合フラグメントに直接または間接的に結合させることができる。このような放射性核種の例には、９９Ｔｃ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９７Ｒｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、及び２０１Ｔｌが含まれる。他の適切な標識は当該分野で公知であるか、または日常的な実験によって決定することができる。間接的方法では、二次抗体は、例えば、これらに限定されないが酵素または蛍光標識とコンジュゲートすることができる次いで、標的抗原に結合している一次抗体への二次抗体の結合は、適切な条件下で酵素の発色基質との反応で検出可能なシグナルを得ることによって検出できる。
【００３１】
高吸光係数を有する発色団を有するか、または結果として生じる発色性化合物を使用することにより、容易に検出可能な比色検出を使用することができる。適当な反応条件下でその基質に後に曝露されると、酵素は基質と反応して、例えば分光光度法、蛍光光度法、または視覚的手段によって検出することができる化学標識を生成する。
【００３２】
この目的に一般的に使用される酵素には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ−Ｖ−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α−グリセロホスフェートデヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコアミラーゼ、及びアセチルコリンエステラーゼが含まれる。適切な補欠分子族複合体の例としては、例えば、これに限定されないが、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが挙げられる。色素源の使用は、それらを使用するアッセイが臨床診断検査室で容易に実施され、これらの検査室で一般的に利用可能な装置を用いて病理学者によって再検討されるので好ましい。一般的に使用される色素原には、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）、強化されたＤＡＢ、３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）、４−クロロ−１−ナフトール（４−ＣＮ）、Ｈａｎｋｅｒ−Ｙａｔｅｓ試薬、アルファ−ナフトールピロニン、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、ファストブルーＢＢ、ファーストレッドＴＲ、ニューフクシン、ＢＣＩＰ−ＮＢＴ、テトラゾリウム、テトラニトブルーテトラゾリウム（ＴＮＢＴ）、銀増強イムノゴールドが含まれる。
【００３３】
有用な蛍光標識には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ローダミン、ダンシル基、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルアルデヒド、フルオレサミン及びＣｙ５が含まれる（Ｈａｕｇｌａｎｄ（１９９６）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅ．）。
【００３４】
本発明の抗ＩＬ−２１抗体またはその抗原結合フラグメント、またはＩＬ−２１／抗ＩＬ−２１抗体複合体はまた、１５２Ｅｕ＋またはランタニド系列の他のメンバーのような蛍光発光金属を使用して、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような金属キレート基を用いて、それらを付着させることによって、検出可能に標識することができる。
【００３５】
本発明の抗ＩＬ−２１抗体またはその抗原結合フラグメント、またはＩＬ−２１／抗ＩＬ−２１抗体複合体はまた、化学反応の過程で生じるリン光またはルミネセンスによって検出することができる、リン光性または化学発光性の化合物に、それらをカップリングすることによって検出可能に標識することもできる。有用な化学発光化合物の例としては、ルミノール、イソルミノール、テロマティック（ｔｈｅｒｏｍａｔｉｃ）アクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩、及びシュウ酸エステルが含まれる。同様に、ルシフェリン、ルシフェラーゼまたはエクオリンのような生物発光化合物を用いて、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントを標識することができる。生物発光タンパク質の存在は、発光の存在を検出することによって決定される。
【００３６】
本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、標的抗原のイムノアッセイまたは精製に特に有用な固体支持体に結合させることもできる。このような固体支持体には、ビーズ、例えば顕微鏡常磁性ビーズ、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、またはポリプロピレンが含まれるが、これらに限定されない。
【００３７】
イムノアッセイにおける本発明の抗体の使用
ＩＬ−２１などの特定のタンパク質は、例えば、限定されないが、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降素反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体固定アッセイ、イムノラジオメトリックアッセイ、蛍光イムノアッセイ、およびプロテインＡイムノアッセイを含むが、これらに限定されるものではない、技術を用いた、競合アッセイ及び非競合アッセイシステムなどを含む様々なイムノアッセイ法によって測定することができる。一般的な免疫学的及びイムノアッセイ手順の概説については、例えば、Ｓｔｉｔｅｓ  ａｎｄ  Ｔｅｒｒ（ｅｄｓ．）（１９９１）Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（７ｔｈ  ｅｄ．）を参照されたい。さらに、本発明のイムノアッセイは、当技術分野で知られているような多くの構成で実施することができる（例えば、Ｍａｇｇｉｏ（ｅｄ．）（１９８０）Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．；Ｇｏｓｌｉｎｇ  Ｊ  Ｐ  ２０００  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  Ｓｅｒｉｅｓ）Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ  Ｐｒｅｓｓ；Ｄｉａｍａｎｄｉｓ＆Ｃｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｕｓ，１９９６  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．を参照されたい）。
【００３８】
定量のためのイムノアッセイは、種々の当該分野で公知の方法によって行うことができる。要するに、ＩＬ−２１を測定するためのイムノアッセイは、競合的または非競合的結合アッセイのいずれかであり得る。競合結合アッセイでは、分析される試料は、固体表面に結合した捕捉剤上の特異的結合部位について標識された分析物と競合する。好ましくは、捕捉剤は、ＩＬ−２１に特異的に結合する本発明の抗体、例えばＡｂ２−１である。捕捉剤に結合した標識された分析物の濃度は、試料中に存在する遊離の分析物の量に反比例する。
【００３９】
いくつかの実施形態において、体液、例えば血清または血漿中のヒトＩＬ−２１は、ｆｇ／ｍｌレベルでタンパク質定量を可能にすることができるＱｕａｎｔｅｒｉｘのＳＩＭＯＡ（商標）技術を用いて定量することができる。ＳＩＭＯＡ（商標）技術（単一分子アレイに由来する）は、標準的なＥＬＩＳＡ試薬を用いて常磁性ビーズ上の個々の免疫複合体を単離することに基づいている。Ｓｉｍｏａと従来のイムノアッセイの主な違いは、フェムトリットルサイズのウェルに単一の分子を捕捉する能力にあり、個々のビーズが標的分析物に結合しているか否かを決定するための「デジタル」読出しを可能にする。この技術のデジタル特性は、ＣＶが１０％未満の従来のアッセイよりも平均１０００倍の感度増加を可能にする。商業的に入手可能なＳＩＭＯＡ（商標）技術プラットフォームは、様々な分析パネル上で最大１０倍の多重化オプションを提供し、アッセイを自動化することができる。多重化実験は大量のデータを生成する可能性がある。したがって、いくつかの実施形態では、データ収集設定、構成、及び解釈を自動化及び制御するためにコンピュータシステムが利用される。
【００４０】
さらなる実施形態において、ＩＬ−２１  Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ  ＳＩＭＯＡ（商標）アッセイにおける、ヒト正常対照からの及び様々な疾患（例えば乾癬、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、慢性炎症性腸疾患及びシェーグレン症候群などの自己免疫疾患において）を有する患者からの試料を分析することができる。ＩＬ−２１の「上昇したレベル」は、罹患試料を健常対照試料と比較することによって決定することができる。「上昇したレベル」という用語は、ＩＬ−２１に結合する治療用抗体の投与によって、患者が治療に優先的に応答することができる「カットポイント」を意味する。好ましくは、「カットポイント」は、健常対照の平均を上回る２標準偏差（ＳＤ）であり、より好ましくは健常対照の平均を上回る３標準偏差（ＳＤ）である。
【００４１】
健常対照対象と比較して、自己免疫疾患における血漿ＩＬ−２１のいずれかの観察された有意な増加は、それにより、臨床試験におけるＩＬ−２１測定に基づく「カットポイント」が決定される、患者のテーラーリング（ｔａｉｌｏｒｉｎｇ）に使用することができる。これに関して、ＩＬ−２１レベルは、治療に優先的に応答する患者のサブグループを同定するために使用することができる。この同定は、ＩＬ−２１レベル単独で、または他のベースラインの患者の特徴またはバイオマーカー、例えば、ＣＲＰと組み合わせて行うことができる。
【００４２】
様々なアプローチを用いて、各疾患状態または関心のある徴候における応答する患者サブグループを規定するＩＬ−２１カットポイントを同定することができる（Ｌｉｐｋｏｖｉｃｈ  Ｉ，Ｄｍｉｔｒｉｅｎｋｏ  Ａ，Ｄ’Ａｇｏｓｔｉｎｏ  ＢＲ．Ｔｕｔｏｒｉａｌ  ｉｎ  ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ：  ｄａｔａ−ｄｒｉｖｅｎ  ｓｕｂｇｒｏｕｐ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ｉｎ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１７；３６（１）：ｄｏｉ：１０．１００２／ｓｉｍ．７０６４；Ｆｏｓｔｅｒ  ＪＣ，Ｔａｙｌｏｒ  ＪＭＧ，Ｒｕｂｅｒｇ  ＳＪ．Ｓｕｂｇｒｏｕｐ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌ  ｄａｔａ．  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ｉｎ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１１；３０（２４）：１０．１００２／ｓｉｍ．４３２２．ｄｏｉ：１０．１００２／ｓｉｍ．４３２２；Ｒｕｂｅｒｇ  ＳＪ，Ｃｈｅｎ  Ｌ，Ｗａｎｇ  Ｙ．Ｔｈｅ  ｍｅａｎ  ｄｏｅｓ  ｎｏｔ  ｍｅａｎ  ａｓ  ｍｕｃｈ  ａｎｙｍｏｒｅ：  ｆｉｎｄｉｎｇ  ｓｕｂ−ｇｒｏｕｐｓ  ｆｏｒ  ｔａｉｌｏｒｅｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ．２０１０；７（５）：ｄｏｉ：１０．１１７７／１７４０７７４５１０３６９３５０を参照されたい。
【００４３】
従って、本発明は、このような乾癬、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、クローン病、慢性炎症性腸疾患及びシェーグレン症候群などの自己免疫疾患を有する及び上昇したＩＬ−２１レベルを有する患者集団を選択する方法であって、患者からの血漿試料をアッセイし、存在するＩＬ−２１のレベルを決定し、そして血漿ＩＬ−２１レベルが上昇したときに有効量の治療用ＩＬ−２１抗体を投与することを含む方法を提供する。
【００４４】
本発明の別の実施形態は、患者における乾癬、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、クローン病、慢性炎症性腸疾患及びシェーグレン症候群）のような自己免疫疾患の治療に使用するためのヒトＩＬ−２１に特異的に結合する治療用抗体を提供する。
【００４５】
治療用ＩＬ−２１抗体の例は、ＷＯ２０１５／１４２６３７（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ＆Ｃｏｍｐａｎｙ）に開示されているものである。そのような抗体は、２つの抗体重鎖及び２つの抗体軽鎖からなり、各重鎖はＷＯ２０１５／１４２６３７に開示された配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含み、各軽鎖は軽鎖可変ドメインを含み、そのアミノ酸配列はＷＯ２０１５／１４２６３７に開示された配列番号２の配列である。
【００４６】
以下の実施例は、例示のみを目的として提供され、本発明の範囲を限定するものではない。
【００４７】
実施例１
抗体の発現及び精製
重鎖及び軽鎖の可変領域のポリペプチド、抗ヒトＩＬ−２１抗体の完全重鎖及び軽鎖アミノ酸配列、ＡｂＭ２、Ａｂ２−１、及びＡｂ３−１、ならびにそれをコードするヌクレオチド配列が、以下の「配列表」と題する節に列挙される。ＡｂＭ２、Ａｂ２−１、及びＡｂ３−１のＣＤＲのアミノ酸配列及び対応する配列番号を、以下の表１Ａ及び１Ｂに示し、ＡｂＭ２、Ａｂ２−１、及びＡｂ３−１の軽鎖及び重鎖の可変領域及び全長のアミノ酸配列ならびにそれらをコードするＤＮＡ配列の配列番号を表１Ｃに示す。
表１Ａ
【表１Ａ】
2019514349.tif 000002
表１Ｂ
【表１Ｂ】
2019514349.tif 000003
表１Ｃ
【表１Ｃ】
2019514349.tif 000004
【００４８】
ＡｂＭ２、Ａｂ２−１、及びＡｂ３を含むがこれらに限定されない本発明の抗ヒトＩＬ−２１抗体は、標準的なトランスフェクション手順にしたがって、ＨＥＫ２９３またはＣＨＯ細胞中での発現に適していることが当該分野で公知のベクターを用いて、ＨＥＫ２９３またはＣＨＯ細胞中で一時的に発現され得る。簡潔には、配列番号３３及び配列番号３４、または配列番号３７及び配列番号３８、または配列番号４１及び配列番号４２を含む組換えベクターまたはベクターを構築し、ＨＥＫ２９３  ＥＢＮＡ細胞を一時的にトランスフェクトするために使用し得る。トランスフェクトした細胞を、トランスフェクション後３７℃で４８〜１２０時間、ジェネテシン（Ｇ４１８）とトブラマイシンを含む標準的な無血清培地１０で培養する。抗ヒトＩＬ−２１抗体は、ＰＢＳ、ｐＨ７．２で予め平衡化したプロテインＡ  ＭａｂＳｅｌｅｃｔクロマトグラフィー樹脂（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、＃１７−５１９９−０１）、またはＰＢＳ、ｐＨ７．２で予め平衡化したＨｉＬｏａｄ  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  ２６／６０分取グレードサイズ排除クロマトグラフィーカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、＃２８−９８９３−３６）を使用して精製することができる。その後、結合したタンパク質を１０ｍＭクエン酸、ｐＨ３で溶出させ、プールした画分を１Ｍトリス（ｐＨ８）の１：１０希釈で直ちに中和する。中和したプールをＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５濃縮器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、＃ＵＦＣ９０３０２４）を用いて濃縮する。
【００４９】
実施例２
ＩＬ−２１抗体ペアリング解析
ＥＬＩＳＡベースのアッセイにおいて対形成する（または同時に結合する）抗体を、ＨＢＳ−Ｐ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ｃａｔａｌｏｇ  ＢＲ−１００３−６８，  １０  ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４＋１５０ｍＭ  ＮａＣｌ＋０．０００５％ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  Ｐ２０）ランニング緩衝液でプライミングした及び２５℃の分析温度でのＢｉａｃｏｒｅ  ２０００装置で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイを用いて決定した。固定されたヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  ｃａｔａｌｏｇ  １１５−００５−００８）を含むＣＭ４チップを用いて、ＩＬ−２１に対する抗体を捕捉する。ＩＬ−２１抗体は、試験フローセル上に捕捉される。過剰なマウスＩｇＧアイソタイプ対照抗体を注入して、抗体を捕捉する残存容量をブロックする。ヒトＩＬ−２１は、ＩＬ−２１抗体によって捕捉される。捕捉されたＩＬ−２１への付加的結合を試験するために、第２の抗体を注入する。
【００５０】
本発明の抗体、ＡｂＭ２、Ａｂ２−１、及びＡｂ３−１は、ビーズ（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ  Ｃａｔ＃１０１３６０）に０．５ｍｇ／ｍＬでコンジュゲートされ、製造業者のプロトコールに従ってビオチン対抗体４０対１の比でビオチン化される。３つの抗体対の９つの組み合わせを作製し、組換えＩＬ−２１参照曲線（１００ｎｇ／ｍＬ〜１．０μｇ／ｍＬ）に対して分析する。ビーズをビーズ希釈剤（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ、Ｃａｔ＃１００４５８）で希釈し、検出抗体を試料／検出緩衝液（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ、Ｃａｔ＃１０１３５９）で希釈する。ｆｇ／ｍＬの範囲のＩＬ−２１濃度を識別する能力により、２対の抗体をさらに最適化に移す。第１の対は、どちらの方向でも良好に機能するＡｂ２−１及びＡｂＭ２である。第２の対は、捕捉としてＡｂ３−２１であり、検出としてＡｂ２−１である。
【００５１】
感度及び回収率の両方を高めるために、抗体対のさらなる最適化が行われる。最適な感度を決定するために、捕捉抗体と検出抗体の両方の濃度を一連の実験で変化させる。捕捉抗体は、３つの抗体濃度（０．１、０．５、及び１．０ｍｇ／ｍｌ）で試験する。検出抗体は、４０倍ビオチン対抗体比を用いて、３つの濃度（０．５、１．０、及び１．５ｍｇ／ｍｌ）で試験される。組み合わせにより、１８組の異なる抗体の組み合わせが得られる。組換えヒトＩＬ−２１タンパク質は、１０，０００〜０．６４ｆｇ／ｍｌの範囲で標準として使用される。抗原をアッセイ希釈剤（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ）（それぞれＧｉｂｃｏ  Ｃａｔ＃２００１２−０４３及びＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｃａｔ＃Ｒ９３ＢＡ−１）で希釈する。捕捉抗体をビーズ希釈剤（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ、Ｃａｔ＃１００４５８）で希釈し、検出抗体を試料／検出緩衝液（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ、Ｃａｔ＃１０１３５９）で希釈する。最適な対の抗体及び抗体濃度は、ビーズ上の捕捉抗体としてのＡｂ２−１（１．０ｍｇ／ｍｌ）であり、検出としてのビオチン化されたＡｂＭ２（０．５ｍｇ／ｍｌ）であると決定される。
【００５２】
配列番号４４に示される組換えヒトＩＬ−２１タンパク質（２５−１５５）は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉで発現され、不溶性封入体として見出され得る。封入体を単離し、高濃度の尿素緩衝液に可溶化し、可溶化した物質をイオン交換クロマトグラフィーで精製する。得られた主ピーク画分をプールし、順次透析リフォールディングプロセスに付す。次いで主ピーク画分を逆相クロマトグラフィーを用いて均質に精製する。主要なピーク画分をプールし、凍結乾燥により凍結乾燥し、ＰＢＳ、ｐＨ７．２緩衝液に再懸濁し、作業アリコートとして−８０℃で保存する。
【００５３】
実施例３
Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ  Ｓｉｍｏａ（商標）アッセイ
抗ＩＬ−２１抗体Ａｂ２−１を、標準Ｑｕａｎｔｅｒｉｘプロトコールに従って、カルボキシル化常磁性ビーズ（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ  Ｃａｔ＃１００４５１）に１．０ｍｇ／ｍｌでコンジュゲートさせる。抗ＩＬ−２１抗体ＡｂＭ２を標準Ｑｕａｎｔｅｒｉｘプロトコールに従ってビオチン化する（４０：１ビオチン比）。Ｑｕａｎｔｅｒｉｘにおける各実行のために、Ａｂ２−１ビーズ（約５００万ビーズ／ｍｌ）のビーズ希釈剤（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘカタログ番号１００４５８）で調製し及びビオチン化ＡｂＭ２抗体（０．５μｇの／ｍＬ）を（試料／検出緩衝液（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ  Ｃａｔ＃１０１３５９）で希釈して適切な容量に希釈する。ストレプトアビジン−β−ガラクトシダーゼ（ＳＢＧ）（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ  Ｃａｔ＃１００４３９）をＳＢＧ希釈剤（ＱｕａｎｔｅｒｉｘＣａｔ＃１００３７６）で、１５０ｐＭで調製する。ＩＬ−２１組換えタンパク質または試料を、適切な希釈度で、アッセイ緩衝液（６００ｍＭ  ＮａＣｌ、０．５％Ｔｗｅｅｎ  ２０、２５％ＦＢＳ、２％ＢＳＡ及び２００μｇ／ｍｌ  ＨＢＲのＰＢＳ液）で希釈する（それぞれＢｏｓｔｏｎ  ＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔｓ  Ｃａｔ＃  ＢＭ−２４４、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃａｔ  ＃２８３２０、Ｇｉｂｃｏ  Ｃａｔ＃  １６０１０−１５９、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｃａｔ＃  Ｒ９３ＢＡ−２、Ｓｃａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｃａｔ＃  ３ＫＣ５３４−０７５  及びＨｙｃｌｏｎｅ  Ｃａｔ＃  ＳＨ３０２５８．０１）。Ａｂ２−１ビーズ、ビオチン化ＡｂＭ２抗体、キャリブレーター、ＳＢＧ、および供給されたレゾルフィン−ベータ−Ｄガラクトピラノシド（ＲＧＰ）（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ  Ｃａｔ＃１００３０）試薬を装置に導入し、Ｓｉｍｏａ（商標）ＨＤ−１  Ａｎａｌｙｚｅｒ  ユーザーガイドに従って室温でｔｗｏ−ｓｔｅｐ  Ｈｏｍｅｂｒｅｗ法として実行する。組換えヒトＩＬ−２１タンパク質へのＡｂ２−１の結合データを表１及び図１に示す。Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ  Ｓｉｍｏａアッセイにおけるスパイク及び回収を決定するために、様々な量の組換えＩＬ−２１をヒト血清マトリックスに添加する。回収率を表２ならびに図２及び３に要約する。血清マトリックス中のＬＬＯＱは３０ｆｇ／ｍｌとして計算された。探索的検証もまた、ヘパリン血漿中で行われ、希釈直線性、スパイク回収及び全誤差について同等の結果が得られている。
表１．ＩＬ−２１  Ｑｕａｎｔｅｒｉｘアッセイ結合データ
【表２】
2019514349.tif 000005
＊ＡＥＢ＝ビーズ当たりの平均酵素
【００５４】
表１及び図１のデータは、ＩＬ−２１  Ｑｕａｎｔｅｒｉｘアッセイが、血清マトリックス中で計算した定量下限０．０３ｐｇ／ｍｌを有する０．０００３〜５ｐｇ／ｍｌのＩＬ−２１の大きなダイナミックレンジを有することを示している。
表２．ヒト血清中のＩＬ−２１スパイク及び回収
【表３】
2019514349.tif 000006
開発されたＩＬ−２１  Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ  Ｓｉｍｏａアッセイは、血清中の所定量のＩＬ−２１に対する許容可能な回収率を示す。
【００５５】
実施例４
ＩＬ−２１  Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ  ＳＩＭＯＡ（商標）アッセイにおけるヒト正常対照試料及び罹患試料の分析
健常者１３人、シェーグレン１１人、ＳＬＥ血清試料１４人を含むヒト正常対照試料及びシェーグレン及びＳＬＥ患者試料は、ＩＬ−２１  Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ  ＳＩＭＯＡ（商標）Ｈｏｍｅｂｒｅｗアッセイで実行される。試料は、ＰＢＳ中のＩＬ−２１アッセイ緩衝液：ＮａＣｌ（６００ｍＭ，Ｂｏｓｔｏｎ  ＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔｓ，Ｃａｔ＃ＢＭ−２４４），新生仔牛血清（２５％，Ｇｉｂｃｏ，Ｃａｔ＃１６０１０−１５９），ｔｗｅｅｎ  ２０（０．５％，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃２８３２０），ＢＳＡ（２％，ＭＳＤ，Ｃａｔ＃Ｒ９３ＢＡ−２），及びヘテロフィリックブロッカー（２００ｕｇ／ｍｌ，Ｓｃａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃａｔ＃３ＫＣ５３４−０７５）のＰＢＳ液（１ｘ，Ｈｙｃｌｏｎｅ，ｃａｔ＃ＳＨ３０２５８．０１）での１：２希釈でＱｕａｎｔｅｒｉｘ  ＳＩＭＯＡ（商標）Ｈｏｍｅｂｒｅｗアッセイで実行されるＡｂ２．１抗体は捕捉のためにビーズにコンジュゲートされ、検出のためにビオチン化ＡｂＭ２にコンジュゲートされる。結果を図１に示す。正常な健常対照と、シェーグレン及びＳＬＥ患者の血清の両方の間でＩＬ−２１レベルに有意差がある。これに関して、健常対照対象に対し自己免疫疾患対象における血漿ＩＬ−２１の有意な増加が観察された。
【００５６】
【表４】
2019514349.tif 000007
【００５７】
配列表
配列番号１、ＰＲＴ１、人工配列
ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ
配列番号２、ＰＲＴ１、人工配列
ＹＴＳＲＬＨＳ
配列番号３、ＰＲＴ１、人工配列
ＱＱＦＨＴＬＲＴＦ
配列番号４、ＰＲＴ１、人工配列
ＧＹＴＦＴＤＹＷＭＨ
配列番号５、ＰＲＴ１、人工配列
ＬＩＤＴＳＤＳＹＴＩＹＮＱＫＦＫＧ
配列番号６、ＰＲＴ１、人工配列
ＹＧＰＬＡＭＤＹ
配列番号７、ＰＲＴ１、人工配列
ＲＡＳＫＳＩＥＫＹＩＡ
配列番号８、ＰＲＴ１、人工配列
ＡＧＧＴＬＱＳ
配列番号９、ＰＲＴ１、人工配列
ＱＱＨＥＥＹＰＬＴ
配列番号１０、ＰＲＴ１、人工配列
ＧＹＤＦＴＧＹＴＭＮ
配列番号１１、ＰＲＴ１、人工配列
ＬＩＮＰＹＮＧＧＴＡＹＳＰＫＦＫＧ
配列番号１２、ＰＲＴ１、人工配列
ＴＨＹＹＧＳＥＹＴＧＭＤＹ
配列番号１３、ＰＲＴ１、人工配列
ＫＳＳＱＳＬＬＤＶＤＧＫＴＹＬＮ
配列番号１４、ＰＲＴ１、人工配列
ＬＶＳＫＬＤＳ
配列番号１５、ＰＲＴ１、人工配列
ＷＱＧＴＨＦＰＹＴ
配列番号１６、ＰＲＴ１、人工配列
ＧＹＦＦＴＬＹＭＭＨ
配列番号１７、ＰＲＴ１、人工配列
ＹＩＮＰＳＳＧＹＴＥＹＮＱＫＦＫＤ
配列番号１８、ＰＲＴ１、人工配列
ＤＦＤＹ
配列番号１９、ＰＲＴ１、人工配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＦＨＴＬＲＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２０、ＰＲＴ１、人工配列
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＬＩＤＴＳＤＳＹＴＩＹＮＱＫＦＫＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＧＰＬＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２１、ＰＲＴ１、人工配列
ＤＩＱＭＮＱＳＰＳＹＬＡＡＳＰＧＥＴＩＴＩＮＣＲＡＳＫＳＩＥＫＹＩＡＷＹＱＥＫＰＧＫＴＮＫＬＬＩＹＡＧＧＴＬＱＳＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＭＹＹＣＱＱＨＥＥＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
配列番号２２、ＰＲＴ１、人工配列
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＭＫＩＳＣＫＡＳＧＹＤＦＴＧＹＴＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＮＬＥＷＩＧＬＩＮＰＹＮＧＧＴＡＹＳＰＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＶＹＭＥＬＬＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＨＣＡＲＴＨＹＹＧＳＥＹＴＧＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
配列番号２３、ＰＲＴ１、人工配列
ＤＩＱＶＴＱＴＰＬＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＶＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫ
配列番号２４、ＰＲＴ１、人工配列
ＱＶＱＬＫＱＳＡＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＦＦＴＬＹＭＭＨＷＡＫＱＲＰＧＱＮＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＳＧＹＴＥＹＮＱＫＦＫＤＫＴＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＩＹＹＣＬＴＤＦＤＹＷＧＱＧＴＳＬＴＶＳＳ
配列番号２５、ＰＲＴ１、人工配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＦＨＴＬＲＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２６、ＰＲＴ１、人工配列
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＬＩＤＴＳＤＳＹＴＩＹＮＱＫＦＫＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＧＰＬＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
配列番号２７、ＰＲＴ１、人工配列
ＤＩＱＭＮＱＳＰＳＹＬＡＡＳＰＧＥＴＩＴＩＮＣＲＡＳＫＳＩＥＫＹＩＡＷＹＱＥＫＰＧＫＴＮＫＬＬＩＹＡＧＧＴＬＱＳＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＭＹＹＣＱＱＨＥＥＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ
配列番号２８、ＰＲＴ１、人工配列
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＭＫＩＳＣＫＡＳＧＹＤＦＴＧＹＴＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＮＬＥＷＩＧＬＩＮＰＹＮＧＧＴＡＹＳＰＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＶＹＭＥＬＬＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＨＣＡＲＴＨＹＹＧＳＥＹＴＧＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＥＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ
配列番号２９、ＰＲＴ１、人工配列
ＤＩＱＶＴＱＴＰＬＴＬＳＶＴＩＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＶＤＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＫＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ
配列番号３０、ＰＲＴ１、人工配列
ＱＶＱＬＫＱＳＡＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＦＦＴＬＹＭＭＨＷＡＫＱＲＰＧＱＮＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＳＧＹＴＥＹＮＱＫＦＫＤＫＴＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＩＹＹＣＬＴＤＦＤＹＷＧＱＧＴＳＬＴＶＳＳＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＥＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴ  ＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ
配列番号３１、ＤＮＡ、人工配列
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＡＧＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＧＡＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＴＡＴＴＴＡＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＴＡＣＡＣＡＴＣＡＡＧＡＴＴＡＣＡＣＴＣＡＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＴＴＣＡＣＡＣＧＣＴＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡ
配列番号３２、ＤＮＡ、人工配列
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＴＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＡＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＣＴＧＡＴＴＧＡＴＡＣＴＴＣＴＧＡＴＡＧＴＴＡＴＡＣＴＡＴＣＴＡＣＡＡＴＣＡＡＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＡＧＧＧＡＣＡＣＧＴＣＣＡＣＧＡＧＣＡＣＡＧＴＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＴＡＴＧＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号３３、ＤＮＡ、人工配列
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＡＧＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＧＡＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＴＡＴＴＴＡＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＴＡＣＡＣＡＴＣＡＡＧＡＴＴＡＣＡＣＴＣＡＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＴＴＣＡＣＡＣＧＣＴＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＧＧＣＧＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＣＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
配列番号３４、ＤＮＡ、人工配列
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＴＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＡＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＣＴＧＡＴＴＧＡＴＡＣＴＴＣＴＧＡＴＡＧＴＴＡＴＡＣＴＡＴＣＴＡＣＡＡＴＣＡＡＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＡＧＧＧＡＣＡＣＧＴＣＣＡＣＧＡＧＣＡＣＡＧＴＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＴＡＴＧＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＧＣＴＡＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴ
配列番号３５、ＤＮＡ、人工配列
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＡＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＴＴＡＴＣＴＴＧＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＴＧＧＡＧＡＡＡＣＣＡＴＴＡＣＴＡＴＴＡＡＴＴＧＣＡＧＧＧＣＡＡＧＴＡＡＧＡＧＣＡＴＴＧＡＧＡＡＡＴＡＴＡＴＣＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＧＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＧＡＡＡＡＣＴＡＡＴＡＡＧＣＴＴＣＴＴＡＴＣＴＡＣＧＣＡＧＧＡＧＧＣＡＣＴＴＴＧＣＡＡＴＣＴＧＧＡＡＴＴＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＴＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＴＡＧＣＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＣＡＴＧＡＧＧＡＡＴＡＣＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ
配列番号３６、ＤＮＡ、人工配列
ＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＧＣＴＴＣＡＡＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＣＣＡＴＧＧＡＡＡＧＡＡＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＣＴＴＡＴＴＡＡＴＣＣＴＴＡＣＡＡＴＧＧＴＧＧＴＡＣＴＧＣＣＴＡＣＡＧＣＣＣＴＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＡＡＣＴＧＴＡＧＡＣＡＡＧＴＣＡＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＴＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＣＣＴＣＡＧＴＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＡＴＣＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＧＡＣＴＣＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＡＡＧＴＧＡＡＴＡＣＡＣＴＧＧＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号３７、ＤＮＡ、人工配列
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＡＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＴＴＡＴＣＴＴＧＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＴＧＧＡＧＡＡＡＣＣＡＴＴＡＣＴＡＴＴＡＡＴＴＧＣＡＧＧＧＣＡＡＧＴＡＡＧＡＧＣＡＴＴＧＡＧＡＡＡＴＡＴＡＴＣＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＧＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＧＡＡＡＡＣＴＡＡＴＡＡＧＣＴＴＣＴＴＡＴＣＴＡＣＧＣＡＧＧＡＧＧＣＡＣＴＴＴＧＣＡＡＴＣＴＧＧＡＡＴＴＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＴＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＴＡＧＣＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＣＡＴＧＡＧＧＡＡＴＡＣＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡＣＧＧＧＣＴＧＡＴＧＣＧＧＣＧＣＣＣＡＣＴＧＴＡＴＣＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＡＧＣＡＧＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＣＴＡＧＣＧＴＣＧＴＧＴＧＣＴＴＣＴＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＴＧＴＣＡＡＧＴＧＧＡＡＧＡＴＴＧＡＴＧＧＣＡＧＴＧＡＡＣＧＡＣＡＡＡＡＴＧＧＣＧＴＣＣＴＧＡＡＣＡＧＴＴＧＧＡＣＴＧＡＴＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＡＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＡＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＣＡＣＧＴＴＧＡＣＣＡＡＧＧＡＣＧＡＧＴＡＴＧＡＡＣＧＡＣＡＴＡＡＣＡＧＣＴＡＴＡＣＣＴＧＴＧＡＧＧＣＣＡＣＴＣＡＣＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＴＴＧＴＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＡＡＴＧＡＧＴＧＴ
配列番号３８、ＤＮＡ、人工配列
ＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＧＣＴＴＣＡＡＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＣＣＡＴＧＧＡＡＡＧＡＡＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＣＴＴＡＴＴＡＡＴＣＣＴＴＡＣＡＡＴＧＧＴＧＧＴＡＣＴＧＣＣＴＡＣＡＧＣＣＣＴＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＡＡＣＴＧＴＡＧＡＣＡＡＧＴＣＡＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＴＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＣＣＴＣＡＧＴＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＡＴＣＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＧＡＣＴＣＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＡＡＧＴＧＡＡＴＡＣＡＣＴＧＧＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＡＡＡＡＣＧＡＣＡＣＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＡＴＣＣＧＣＴＡＧＣＣＣＣＴＧＧＡＴＣＴＧＣＣＧＣＣＣＡＧＡＣＣＡＡＣＡＧＣＡＴＧＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＡＣＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＡＣＣＴＧＧＡＡＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＴＣＴＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＡＴＴＣＣＣＴＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＡＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＣＡＴＧＧＣＣＴＡＧＣＧＡＧＡＣＣＧＴＧＡＣＡＴＧＣＡＡＣＧＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＣＴＴＣＴＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＴＧＣＣＣＡＧＡＧＡＣＴＧＣＧＧＣＴＧＣＡＡＧＣＣＴＴＧＣＡＴＣＴＧＣＡＣＣＧＴＧＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＣＡＡＧＣＣＣＡＡＧＧＡＣＧＴＧＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＣＣＣＡＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＴＧＴＴＧＴＧＧＴＡＧＡＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＡＴＧＡＴＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＴＧＴＡＧＡＴＧＡＴＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＣＡＧＣＴＣＡＧＡＣＧＣＡＡＣＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＴＴＴＣＣＧＣＴＣＡＧＴＣＡＧＴＧＡＡＣＴＴＣＣＣＡＴＣＡＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＣＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＴＣＡＡＡＴＧＣＡＧＧＧＴＣＡＡＣＡＧＴＧＣＡＧＣＴＴＴＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＡＡＡＧＧＣＡＧＡＣＣＧＡＡＧＧＣＴＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＡＴＴＣＣＡＣＣＴＣＣＣＡＡＧＧＡＧＣＡＧＡＴＧＧＣＣＡＡＧＧＡＴＡＡＡＧＴＣＡＧＴＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＴＧＡＴＡＡＣＡＧＡＣＴＴＣＴＴＣＣＣＴＧＡＡＧＡＣＡＴＴＡＣＴＧＴＧＧＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＡＧＣＧＧＡＧＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＡＣＡＣＴＣＡＧＣＣＣＡＴＣＡＴＧＧＡＣＡＣＡＧＡＴＧＧＣＴＣＴＴＡＣＴＴＣＧＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＡＴＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＣＴＧＧＧＡＧＧＣＡＧＧＡＡＡＴＡＣＴＴＴＣＡＣＣＴＧＣＴＣＴＧＴＧＴＴＡＣＡＴＧＡＧＧＧＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＣＡＴＡＣＴＧＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＡＣＴＣＴＣＣＴＧＧＴＡＡＡ
配列番号３９、ＤＮＡ、人工配列
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＧＴＧＡＣＴＣＡＧＡＣＴＣＣＡＣＴＣＡＣＴＴＴＧＴＣＧＧＴＴＡＣＣＡＴＴＧＧＡＣＡＡＣＣＡＧＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＴＴＧＣＡＡＧＴＣＡＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＣＴＴＡＧＡＴＧＴＧＧＡＴＧＧＡＡＡＧＡＣＡＴＡＴＴＴＧＡＡＴＴＧＧＴＴＧＴＴＡＣＡＧＡＧＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＧＣＣＴＡＡＴＣＴＡＴＣＴＧＧＴＧＴＣＴＡＡＡＣＴＧＧＡＣＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＣＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＧＡＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＴＴＧＧＧＡＧＴＴＴＡＴＴＡＴＴＧＣＴＧＧＣＡＡＧＧＴＡＣＡＣＡＴＴＴＴＣＣＴＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＧＡＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ
配列番号４０、ＤＮＡ、人工配列
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＣＴＧＧＣＡＡＧＡＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＴＴＴＴＴＴＴＡＣＣＣＴＧＴＡＣＡＴＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＣＡＡＡＡＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＡＡＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＡＣＡＴＴＡＡＴＣＣＴＡＧＣＡＧＴＧＧＡＴＡＴＡＣＴＧＡＡＴＡＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＴＴＣＴＧＣＧＡＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＴＡＡＣＧＧＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＧＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号４１、ＤＮＡ、人工配列
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＧＴＧＡＣＴＣＡＧＡＣＴＣＣＡＣＴＣＡＣＴＴＴＧＴＣＧＧＴＴＡＣＣＡＴＴＧＧＡＣＡＡＣＣＡＧＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＴＴＧＣＡＡＧＴＣＡＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＣＴＴＡＧＡＴＧＴＧＧＡＴＧＧＡＡＡＧＡＣＡＴＡＴＴＴＧＡＡＴＴＧＧＴＴＧＴＴＡＣＡＧＡＧＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＧＣＣＴＡＡＴＣＴＡＴＣＴＧＧＴＧＴＣＴＡＡＡＣＴＧＧＡＣＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＣＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＧＡＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＴＴＧＧＧＡＧＴＴＴＡＴＴＡＴＴＧＣＴＧＧＣＡＡＧＧＴＡＣＡＣＡＴＴＴＴＣＣＴＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＧＡＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡＣＧＧＧＣＴＧＡＴＧＣＴＧＣＧＣＣＣＡＣＴＧＴＡＴＣＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＡＧＣＡＧＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＣＴＡＧＣＧＴＣＧＴＧＴＧＣＴＴＣＴＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＴＧＴＣＡＡＧＴＧＧＡＡＧＡＴＴＧＡＴＧＧＣＡＧＴＧＡＡＣＧＡＣＡＡＡＡＴＧＧＣＧＴＣＣＴＧＡＡＣＡＧＴＴＧＧＡＣＴＧＡＴＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＡＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＡＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＣＡＣＧＴＴＧＡＣＣＡＡＧＧＡＣＧＡＧＴＡＴＧＡＡＣＧＡＣＡＴＡＡＣＡＧＣＴＡＴＡＣＣＴＧＴＧＡＧＧＣＣＡＣＴＣＡＣＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＴＴＧＴＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＡＡＴＧＡＧＴＧＴ
配列番号４２、ＤＮＡ、人工配列
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＣＴＧＧＣＡＡＧＡＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＴＴＴＴＴＴＴＡＣＣＣＴＧＴＡＣＡＴＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＣＡＡＡＡＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＡＡＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＡＣＡＴＴＡＡＴＣＣＴＡＧＣＡＧＴＧＧＡＴＡＴＡＣＴＧＡＡＴＡＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＴＴＣＴＧＣＧＡＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＴＡＡＣＧＧＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＧＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＡＡＡＡＣＧＡＣＡＣＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＡＴＣＣＧＣＴＡＧＣＣＣＣＴＧＧＡＴＣＴＧＣＣＧＣＣＣＡＧＡＣＣＡＡＣＡＧＣＡＴＧＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＡＣＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＡＣＣＴＧＧＡＡＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＴＣＴＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＡＴＴＣＣＣＴＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＡＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＣＡＴＧＧＣＣＴＡＧＣＧＡＧＡＣＣＧＴＧＡＣＡＴＧＣＡＡＣＧＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＣＴＴＣＴＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＴＧＣＣＣＡＧＡＧＡＣＴＧＣＧＧＣＴＧＣＡＡＧＣＣＴＴＧＣＡＴＣＴＧＣＡＣＣＧＴＧＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＣＡＡＧＣＣＣＡＡＧＧＡＣＧＴＧＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＣＣＣＡＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＴＧＴＴＧＴＧＧＴＡＧＡＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＡＴＧＡＴＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＴＧＴＡＧＡＴＧＡＴＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＣＡＧＣＴＣＡＧＡＣＧＣＡＡＣＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＴＴＴＣＣＧＣＴＣＡＧＴＣＡＧＴＧＡＡＣＴＴＣＣＣＡＴＣＡＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＣＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＴＣＡＡＡＴＧＣＡＧＧＧＴＣＡＡＣＡＧＴＧＣＡＧＣＴＴＴＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＡＡＡＧＧＣＡＧＡＣＣＧＡＡＧＧＣＴＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＡＴＴＣＣＡＣＣＴＣＣＣＡＡＧＧＡＧＣＡＧＡＴＧＧＣＣＡＡＧＧＡＴＡＡＡＧＴＣＡＧＴＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＴＧＡＴＡＡＣＡＧＡＣＴＴＣＴＴＣＣＣＴＧＡＡＧＡＣＡＴＴＡＣＴＧＴＧＧＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＡＧＣＧＧＡＧＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＡＣＡＣＴＣＡＧＣＣＣＡＴＣＡＴＧＧＡＣＡＣＡＧＡＴＧＧＣＴＣＴＴＡＣＴＴＣＧＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＡＴＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＣＴＧＧＧＡＧＧＣＡＧＧＡＡＡＴＡＣＴＴＴＣＡＣＣＴＧＣＴＣＴＧＴＧＴＴＡＣＡＴＧＡＧＧＧＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＣＡＴＡＣＴＧＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＡＣＴＣＴＣＣＴＧＧＴＡＡＡ
配列番号４３、ＰＲＴ１、ホモサピエンス
ＭＲＳＳＰＧＮＭＥＲＩＶＩＣＬＭＶＩＦＬＧＴＬＶＨＫＳＳＳＱＧＱＤＲＨＭＩＲＭＲＱＬＩＤＩＶＤＱＬＫＮＹＶＮＤＬＶＰＥＦＬＰＡＰＥＤＶＥＴＮＣＥＷＳＡＦＳＣＦＱＫＡＱＬＫＳＡＮＴＧＮＮＥＲＩＩＮＶＳＩＫＫＬＫＲＫＰＰＳＴＮＡＧＲＲＱＫＨＲＬＴＣＰＳＣＤＳＹＥＫＫＰＰＫＥＦＬＥＲＦＫＳＬＬＱＫＭＩＨＱＨＬＳＳＲＴＨＧＳＥＤＳ
配列番号４４、ＰＲＴ１、人工配列
ＭＱＤＲＨＭＩＲＭＲＱＬＩＤＩＶＤＱＬＫＮＹＶＮＤＬＶＰＥＦＬＰＡＰＥＤＶＥＴＮＣＥＷＳＡＦＳＣＦＱＫＡＱＬＫＳＡＮＴＧＮＮＥＲＩＩＮＶＳＩＫＫＬＫＲＫＰＰＳＴＮＡＧＲＲＱＫＨＲＬＴＣＰＳＣＤＳＹＥＫＫＰＰＫＥＦＬＥＲＦＫＳＬＬＱＫＭＩＨＱＨＬＳＳＲＴＨＧＳＥＤＳ
配列番号４５、ＤＮＡ、ホモサピエンス
ＡＴＧＡＧＡＴＣＣＡＧＴＣＣＴＧＧＣＡＡＣＡＴＧＧＡＧＡＧＧＡＴＴＧＴＣＡＴＣＴＧＴＣＴＧＡＴＧＧＴＣＡＴＣＴＴＣＴＴＧＧＧＧＡＣＡＣＴＧＧＴＣＣＡＣＡＡＡＴＣＡＡＧＣＴＣＣＣＡＡＧＧＴＣＡＡＧＡＴＣＧＣＣＡＣＡＴＧＡＴＴＡＧＡＡＴＧＣＧＴＣＡＡＣＴＴＡＴＡＧＡＴＡＴＴＧＴＴＧＡＴＣＡＧＣＴＧＡＡＡＡＡＴＴＡＴＧＴＧＡＡＴＧＡＣＴＴＧＧＴＣＣＣＴＧＡＡＴＴＴＣＴＧＣＣＡＧＣＴＣＣＡＧＡＡＧＡＴＧＴＡＧＡＧＡＣＡＡＡＣＴＧＴＧＡＧＴＧＧＴＣＡＧＣＴＴＴＴＴＣＣＴＧＣＴＴＴＣＡＧＡＡＧＧＣＣＣＡＡＣＴＡＡＡＧＴＣＡＧＣＡＡＡＴＡＣＡＧＧＡＡＡＣＡＡＴＧＡＡＡＧＧＡＴＡＡＴＣＡＡＴＧＴＡＴＣＡＡＴＴＡＡＡＡＡＧＣＴＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＣＣＡＣＣＴＴＣＣＡＣＡＡＡＴＧＣＡＧＧＧＡＧＡＡＧＡＣＡＧＡＡＡＣＡＣＡＧＡＣＴＡＡＣＡＴＧＣＣＣＴＴＣＡＴＧＴＧＡＴＴＣＴＴＡＴＧＡＧＡＡＡＡＡＡＣＣＡＣＣＣＡＡＡＧＡＡＴＴＣＣＴＡＧＡＡＡＧＡＴＴＣＡＡＡＴＣＡＣＴＴＣＴＣＣＡＡＡＡＧＡＴＧＡＴＴＣＡＴＣＡＧＣＡＴＣＴＧＴＣＣＴＣＴＡＧＡＡＣＡＣＡＣＧＧＡＡＧＴＧＡＡＧＡＴＴＣＣＴＧＡ
【図面の簡単な説明】
【００５８】
原文に記載なし。
【図１】
2019514349.tif 000008
【配列表】
2019514349000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年9月11日(2018.9.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む、ヒトＩＬ−２１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記ＬＣＶＲは、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含み、前記ＨＣＶＲは、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）を含み、前記３つのＬＣＤＲ及び前記３つのＨＣＤＲのアミノ酸配列は、
ａ）ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１）、ＹＴＳＲＬＨＳ（配列番号２）、ＱＱＦＨＴＬＲＴＦ（配列番号３）、ＧＹＴＦＴＤＹＷＭＨ（配列番号４）、ＬＩＤＴＳＤＳＹＴＩＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号５）、及びＹＧＰＬＡＭＤＹ（配列番号６）、
ｂ）ＲＡＳＫＳＩＥＫＹＩＡ（配列番号７）、ＡＧＧＴＬＱＳ（配列番号８）、ＱＱＨＥＥＹＰＬＴ（配列番号９）、ＧＹＤＦＴＧＹＴＭＮ（配列番号１０）、ＬＩＮＰＹＮＧＧＴＡＹＳＰＫＦＫＧ（配列番号１１）、及びＴＨＹＹＧＳＥＹＴＧＭＤＹ（配列番号１２）、ならびに、
ｃ）ＫＳＳＱＳＬＬＤＶＤＧＫＴＹＬＮ（配列番号１３）、ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号１４）、ＷＱＧＴＨＦＰＹＴ（配列番号１５）、ＧＹＦＦＴＬＹＭＭＨ（配列番号１６）、ＹＩＮＰＳＳＧＹＴＥＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号１７）、及びＤＦＤＹ（配列番号１８）からなる群から選択される、抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
前記ＬＣＶＲ及び前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が、
ａ）配列番号１９のアミノ配列及び配列番号２０のアミノ配列、
ｂ）配列番号２１のアミノ配列及び配列番号２２のアミノ配列、ならびに
ｃ）配列番号２３のアミノ配列及び配列番号２４のアミノ配列からなる群から選択される、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
前記抗体が、軽鎖及び重鎖を含み、前記軽鎖及び前記重鎖のアミノ酸配列が、
ａ）配列番号２５のアミノ配列及び配列番号２６のアミノ配列、
ｂ）配列番号２７のアミノ配列及び配列番号２８のアミノ配列、ならびに
ｃ）配列番号２９のアミノ配列及び配列番号３０のアミノ配列からなる群から選択される、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４】
前記抗体が、２つの軽鎖及び２つの重鎖を含み、前記軽鎖の各々及び前記重鎖の各々のアミノ酸配列が、
ａ）配列番号２５のアミノ配列及び配列番号２６のアミノ配列、
ｂ）配列番号２７のアミノ配列及び配列番号２８のアミノ配列、ならびに
ｃ）配列番号２９のアミノ配列及び配列番号３０のアミノ配列からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のＬＣＶＲ及び／もしくはＨＣＶＲをコードするヌクレオチド配列、または軽鎖及び／もしくは重鎖を含むポリヌクレオチド。
【請求項６】
前記ポリヌクレオチドが、配列番号３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、または４２に示されるヌクレオチド配列を有する、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項７】
請求項５または請求項６に記載のポリヌクレオチドを含む、組換え発現ベクター。
【請求項８】
請求項７に記載のベクターによって形質転換された、宿主細胞。
【請求項９】
検出可能な標識をさらに含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１０】
前記検出可能な標識が、発色団、色素原、色素、蛍光剤、蛍光発生剤、リン光剤、化学発光剤、生物発光剤、放射性核種、陽電子放出断層撮影可能な造影剤、及び磁気共鳴断層撮影可能な造影剤からなる群から選択される、請求項９に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
インビトロでの診断、予後、及び／または患者モニタリング手順に使用するための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１２】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと、許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、組成物。
【請求項１３】
組織または体液の試料中のヒトＩＬ−２１を検出または定量するインビトロの方法であって、
ａ）前記試料を請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させることと、
ｂ）任意に、非特異的に結合した全ての抗体またはその抗原結合フラグメントを除去することと、
ｃ）前記試料中のヒトＩＬ−２１に特異的に結合している抗体またはその抗原結合フラグメントの量を検出または定量することと、を含む、方法。
【請求項１４】
前記方法は、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）からなる、請求項１３に記載のヒトＩＬ−２１を検出または定量する方法。
【請求項１５】
組織または体液の試料においてインビトロでヒトＩＬ−２１を検出または定量するのに使用するためのキットであって、
ａ）第１試薬であって、前記第１試薬は、配列番号２１のアミノ配列を有するＬＣＶＲ及び配列番号２２のアミノ配列を有するＨＣＶＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメントである、第１試薬と、
ｂ）第２試薬であって、前記第２試薬は、配列番号１９のアミノ配列を有するＬＣＶＲ及び配列番号２０のアミノ配列を有するＨＣＶＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメントである、第２試薬と、を含む、キット。
【請求項１６】
前記試料は、血漿試料または血清試料である、請求項１３に記載の方法または請求項１５のキット。
【請求項１７】
ヒト試料中のＩＬ−２１の量のインビトロでの測定に使用するための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗体。
【国際調査報告】
2019514349.tif 000009
2019514349.tif 000010
2019514349.tif 000011