(57)【要約】本発明は、黄体化ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）又はＬＨＲＨ類似体；並びにクルクミン又はクルクミン類似体を含めた組合せ及び製剤を提供する。ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体は、クルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートすることができる。発明の組合せ及び製剤は、抗細胞増殖薬を含むこともできる。発明の組合せ及び製剤は、細胞の増殖を阻害する；過剰増殖性障害を処置する；及び新生物、腫瘍、がん又は悪性腫瘍を処置するために使用することができる。【選択図】  図２２Ａ
2019507749.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）黄体化ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）又はＬＨＲＨ類似体；及び
ｂ）クルクミン又はクルクミン類似体
ここで、前記ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体は、前記クルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートされている；並びに
ｃ）抗細胞増殖薬
を含む組合せ又は製剤。
【請求項２】
前記ＬＨＲＨ類似体が、［Ｄ−Ａｌａ６］−ＬＨＲＨ；［ＤＬｙｓ６］−ＬＨＲＨ；［Ｄ−Ｔｒｐ６］−ＬＨＲＨ；［Ｔｒｐ６］−ＬＨＲＨ；［Ｄ−Ｐｈｅ６］−ＬＨＲＨ；［Ｄ−Ｌｅｕ６］−ＬＨＲＨ；［Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）６］−ＬＨＲＨ；［Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨＲＨ；［Ｄ−Ｎａｌ（２）６］−ＬＨＲＨ；［Ｇｌｎ８］−ＬＨＲＨ；［Ｈｉｓ（３−メチル）２］−ＬＨＲＨ；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ａｌａ６］−ＬＨＲＨエチルアミド；［−Ｍｅ−Ｌｅｕ７］−ＬＨＲＨ；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｈｉｓ２、Ｄ−Ｔｒｐ６、Ｐｒｏ９］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｐｈｅ６］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ａｚａ−Ｇｌｙ１０］−ＬＨＲＨ；；［Ｄ−Ａｌａ６、Ｎ−Ｍｅ−Ｌｅｕ７］−ＬＨＲＨ；［Ｄ−Ｈｉｓ（ベンジル）６］−ＬＨＲＨ断片３−９エチルアミド；［Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨＲＨ断片１−７；［Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨＲＨ断片２−９；［Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨＲＨ断片４−９；［ＤＨｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨＲＨ断片５−９；［Ｄ−ｐＧｌｕ１、ＤＰｈｅ２，Ｄ−Ｔｒｐ３，６］−ＬＨＲＨ；［Ｄ−Ｓｅｒ４］−ＬＨＲＨ；［Ｄ−Ｔｒｐ６］−ＬＨＲＨ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ２；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ａｌａ６］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０，１２Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｈｉｓ２、Ｄ−Ｔｒｐ６、Ｐｒｏ９］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｐｈｅ６］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｓｅｒ４、Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６、Ｐｒｏ９］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｓｅｒ４、Ｄ−Ｔｒｐ６、Ｐｒｏ９］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｔｒｐ６、Ｄ−Ｌｅｕ７、Ｐｒｏ９］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｔｒｐ６］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｔｙｒ５、Ｄ−Ｔｒｐ６、Ｐｒｏ９］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−ｐＧｌｕ１］−ＬＨＲＨ；［Ｈｉｓ（３−メチル）２］−ＬＨＲＨ；［Ｈｙｐ９］−ＬＨＲＨ；ホルミル−［Ｄ−Ｔｒｐ６］−ＬＨＲＨ断片２−１０；ＬＨＲＨ断片１−２；ＬＨＲＨ断片１−４；ＬＨＲＨ断片４−１０；ＬＨＲＨ断片７−１０ジヒドロクロリド；［Ｄ−Ｔｒｐ６］−ＬＨＲＨ断片１−６；ナファレリン（シナレル（商標））；デスロレリン；ＥＨＷＳＹＧＬＲＰＧ配列；リュープロリド；酢酸ロイプロリド（ルプロン（商標））；ゴセレリン（ゾラデクス（商標））；ヒストレリン（スプレリン（商標））；トリプトレリン（トレルスター（商標））；ブセレリン（スプレファクト（商標））；セトロレリクス（セトロチデ（商標））；ガニレリクス（アンタゴン（商標））；アンチド（Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｌａ）；アバレリクス（プレナキス（商標））；テベレリクス（アンタレリスク（商標））；デガレリクス（フィルマゴン（商標））；Ｎａｌ−Ｇｌｕ（Ｄ−２−Ｎａｌ−ｐ−クロロ−Ｄ−Ｐｈｅ−ベータ−（３−ピリジル）−Ｄ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ）；又はエラゴリクス（ＮＢＩ−５６４１８）を含む請求項１に記載の組合せ又は製剤。
【請求項３】
前記ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体がナトリウム又はアセテート塩を含む、請求項１に記載の組合せ又は製剤。
【請求項４】
前記ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体が任意の残基でＤ−アミノ酸を有する、請求項１に記載の組合せ又は製剤。
【請求項５】
前記クルクミンが：
【化１】
2019507749.tif 000008
を含む、請求項１に記載の組合せ又は製剤。
【請求項６】
前記クルクミン類似体が：テトラヒドロクルクミン；６−ヒドロキシジベンゾイルメタン；コーヒー酸；３，４−メチレンジオキシケイ皮酸；３，４−ジメトキシケイ皮酸；ケイ皮酸；ジンゲロン；４−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−２−ブタノン；４−（ヒドロキシフェニル）−３−ブテン−２−オン；４’−ヒドロキシバレロフェノン；４−１３ヒドロキシベンジルアセトン；４−ヒドロキシベンゾフェノン；１，５−ビス（４−ジメチルアミノフェニル）−１，４−ペンタジエン−３−オン；４−ヒドロキシフェネチルアルコール；４−ヒドロキシフェニルピルビン酸；３，４−ジヒドロキシヒドロケイ皮酸；２−ヒドロキシケイ皮酸；３−ヒドロキシケイ皮酸；４−ヒドロキシケイ皮酸又はオイゲノールを含む、請求項１に記載の組合せ又は製剤。
【請求項７】
前記クルクミン類似体が：
【化２】
2019507749.tif 000009
を含む、請求項１に記載の組合せ又は製剤。
【請求項８】
前記ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体が、共有結合によって前記クルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートされている、請求項１に記載の組合せ又は製剤。
【請求項９】
前記ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体が、ペプチド又は非ペプチドリンカーによって前記クルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートされている、請求項１に記載の組合せ又は製剤。
【請求項１０】
前記ペプチドリンカーが１〜２５個のアミノ酸残基の長さを有する、請求項８の組合せ又は製剤。
【請求項１１】
前記ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体が、１個又は複数のＡ、Ｓ又はＧアミノ酸残基を含むペプチドリンカーによって前記クルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートされている、請求項１に記載の組合せ又は製剤。
【請求項１２】
前記ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体が：ＧＳＧＧＳ（配列番号）又はＡＳＡＡＳ（配列番号）を含む又はからなるペプチドリンカーによって前記クルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートされている、請求項１に記載の組合せ又は製剤。
【請求項１３】
前記ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体が、直鎖状炭素鎖によって前記クルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートされている、請求項１に記載の組合せ又は製剤。
【請求項１４】
請求項１に記載の組合せ又は製剤を含む医薬組成物。
【請求項１５】
前記抗細胞増殖薬が、抗がん薬又は抗腫瘍薬を含む、請求項１に記載の組合せ又は製剤。
【請求項１６】
前記抗細胞増殖薬が、アルキル化剤、抗代謝物、植物抽出物、植物アルカロイド、ニトロソ尿素、ホルモン、ヌクレオシド類似体又はヌクレオチド類似体を含む、請求項１に記載の組合せ又は製剤。
【請求項１７】
前記抗細胞増殖薬が、ゲムシタビン、５−フルオロウラシル、シクロホスファミド、アザチオプリン、シクロスポリンＡ、プレドニゾロン、メルファラン、クロランブシル、メクロレタミン、ブスルファン、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、チオグアニン、シトシンアラビノシド、ＡＺＴ、５−アザシチジン（５−ＡＺＣ）、ブレオマイシン、アクチノマイシンＤ、ミトラマイシン、マイトマイシンＣ、カルムスチン、ロリムスチン、セムスチン、ストレプトゾトシン、ヒドロキシ尿素、シスプラチン、カルボプラチン、オキシプラチン、ミトタン、プロカルバジン、ダカルバジン、タキソール（パクリタキセル）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ジブロモマンニトール、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、テニポシド又はペメトレキセドを含む、請求項１に記載の組合せ又は製剤。
【請求項１８】
ａ）ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体に結合する受容体を発現する細胞を、クルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートされているＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体と接触させるステップ；及び
ｂ）前記細胞を抗細胞増殖薬と接触させるステップ
を含む、細胞の増殖を低減又は阻害するための方法。
【請求項１９】
ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体に結合する受容体を発現する細胞を、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組合せ又は製剤と接触させるステップを含む、細胞の増殖を低減又は阻害するための方法。
【請求項２０】
細胞の増殖を低減又は阻害する方法における、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組合せ又は製剤の使用。
【請求項２１】
前記細胞が対象中にある、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ａ）ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体に結合する受容体を発現する過剰増殖性障害の細胞を、クルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートされているホルモン（ＬＨＲＨ）又はＬＨＲＨ類似体と接触させるステップ；及び
ｂ）過剰増殖性障害の前記細胞を、抗細胞増殖薬と接触させるステップ
を含む、過剰増殖性障害を処置するための方法。
【請求項２３】
ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体に結合する受容体を発現する過剰増殖性障害の細胞を、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組合せ又は製剤と接触させるステップを含む、過剰増殖性障害を処置するための方法。
【請求項２４】
過剰増殖性障害を処置する方法における、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組合せ又は製剤の使用。
【請求項２５】
ａ）クルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートされているＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体を対象に投与するステップ；及び
ｂ）前記対象に抗細胞増殖薬を投与するステップ
を含む、ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体に結合する受容体を発現する新生物、腫瘍、がん又は悪性腫瘍を処置するための方法。
【請求項２６】
ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体に結合する受容体を発現する新生物、腫瘍、がん又は悪性腫瘍を処置するための方法であって、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組合せ又は製剤を、前記新生物、腫瘍、がん又は悪性腫瘍に投与するステップを含む方法。
【請求項２７】
新生物、腫瘍、がん又は悪性腫瘍を処置する方法における、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組合せ又は製剤の使用。
【請求項２８】
クルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートされている前記ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体が、前記抗細胞増殖薬の投与より前に、実質的に同時に又は続いて投与される、請求項１８、２２又は２５のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項２９】
前記ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体に結合する前記受容体がＬＨＲＨ−受容体である、請求項１８〜２７のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３０】
前記ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体に結合する前記受容体が前記細胞表面に存在する、請求項１８〜２７のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３１】
前記ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体に結合する前記受容体が細胞内にある、請求項１８〜２７のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３２】
前記細胞又は過剰増殖性障害が、肺、甲状腺、頭又は首、鼻咽腔、咽頭、鼻又は副鼻腔、脳、脊椎、乳房、副腎、下垂体、甲状腺、リンパ、胃腸、口、食道、胃、十二指腸、回腸、空腸、小腸、結腸、直腸、泌尿生殖路、子宮、卵巣、頸部、子宮内膜、膀胱、精巣、前立腺、腎臓、膵臓、肝臓、骨、骨髄、リンパ、血液、皮膚又は筋肉に存在する、請求項１８〜２４又は２８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３３】
前記新生物、腫瘍、がん又は悪性腫瘍が、肺、甲状腺、頭又は首、鼻咽腔、咽頭、鼻又は副鼻腔、脳、脊椎、乳房、副腎、下垂体、甲状腺、リンパ、胃腸、口、食道、胃、十二指腸、回腸、空腸、小腸、結腸、直腸、泌尿生殖路、子宮、卵巣、頸部、子宮内膜、膀胱、精巣、前立腺、腎臓、膵臓、肝臓、骨、骨髄、リンパ、血液、皮膚又は筋肉新生物、腫瘍、がん又は悪性腫瘍を含む、請求項２５〜２８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３４】
前記新生物、腫瘍、がん又は転移が、ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ又はＶの新生物、腫瘍、がん又は転移を含む、請求項２５〜２８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３５】
前記新生物、腫瘍、がん又は転移が、進行的に悪化している又は寛解中である、請求項２５〜２８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３６】
前記細胞、過剰増殖性障害又は新生物、腫瘍、がん若しくは悪性腫瘍が転移性である、請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３７】
前記細胞、過剰増殖性障害又は新生物、腫瘍、がん若しくは悪性腫瘍が、固体細胞の新生物、腫瘍、がん又は悪性腫瘍を含む、請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３８】
前記細胞、過剰増殖性障害又は新生物、腫瘍、がん若しくは悪性腫瘍が、リンパ又は造血細胞の新生物、腫瘍、がん又は悪性腫瘍を含む、請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３９】
前記造血性の新生物、腫瘍、がん又は悪性腫瘍が、骨髄腫、リンパ腫又は白血病を含む、請求項３８に記載の方法又は使用。
【請求項４０】
前記細胞、過剰増殖性障害又は新生物、腫瘍、がん若しくは悪性腫瘍が、癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病、腺腫、腺癌腫、メラノーマ、神経膠腫、神経膠芽腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、星状細胞腫、オリゴデンドロサイト、中皮腫、細網内皮新生物、腫瘍、がん又は悪性腫瘍を含む、請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項４１】
前記肉腫が、リンパ肉腫、脂質肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫又は線維肉腫を含む、請求項４０に記載の方法又は使用。
【請求項４２】
前記抗細胞増殖薬が、ゲムシタビン、５−フルオロウラシル、シクロホスファミド、アザチオプリン、シクロスポリンＡ、プレドニゾロン、メルファラン、クロランブシル、メクロレタミン、ブスルファン、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、チオグアニン、シトシンアラビノシド、ＡＺＴ、５−アザシチジン（５−ＡＺＣ）、ブレオマイシン、アクチノマイシンＤ、ミトラマイシン、マイトマイシンＣ、カルムスチン、ロリムスチン、セムスチン、ストレプトゾトシン、ヒドロキシ尿素、シスプラチン、カルボプラチン、オキシプラチン、ミトタン、プロカルバジン、ダカルバジン、タキソール（パクリタキセル）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ジブロモマンニトール、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、テニポシド又はペメトレキセドを含む、請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項４３】
前記抗細胞増殖薬が、約２５〜２５０、２５０〜５００、５００〜１０００、１０００〜２５００又は２５００〜５０００、５０００〜２５，０００、５０００〜５０，０００ｐｇ／ｋｇ；約５０〜５００、５００〜５０００、５０００〜２５，０００又は２５，０００〜５０，０００ｎｇ／ｋｇ；及び約２５〜２５０、２５０〜５００、５００〜１０００、１０００〜２５００又は２５００〜５０００、５０００〜２５，０００、５０００〜５０，０００μｇ／ｋｇの用量で、前記対象に投与される、請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項４４】
クルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートされている前記ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体が、約２５〜２５０、２５０〜５００、５００〜１０００、１０００〜２５００又は２５００〜５０００、５０００〜２５，０００、５０００〜５０，０００ｐｇ／ｋｇ；約５０〜５００、５００〜５０００、５０００〜２５，０００又は２５，０００〜５０，０００ｎｇ／ｋｇ；及び約２５〜２５０、２５０〜５００、５００〜１０００、１０００〜２５００又は２５００〜５０００、５０００〜２５，０００、５０００〜５０，０００μｇ／ｋｇの用量で前記対象に投与される、請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項４５】
前記新生物、腫瘍、がん又は悪性腫瘍の再発又は進行を阻害又は低減する、請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項４６】
前記新生物、腫瘍、がん若しくは悪性細胞の塊、体積、サイズ若しくは細胞数の部分的若しくは完全な破壊、新生物、腫瘍、がん若しくは悪性細胞の壊死、溶解若しくはアポトーシスを刺激、誘発若しくは増加させること、新生物、腫瘍、がん若しくは悪性腫瘍の体積サイズ、細胞塊を低減すること、新生物、腫瘍、がん若しくは悪性腫瘍の体積、塊、サイズ若しくは細胞数における進行若しくは増加を阻害又は防止すること、又は寿命を延長することをもたらす、請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項４７】
前記新生物、腫瘍、がん若しくは悪性腫瘍、又は疼痛、不快感、吐き気、脱力若しくは嗜眠に関連する又は引き起こされる有害症状又は合併症の重篤度、持続期間又は頻度を低減又は減少させる、請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項４８】
対象のエネルギー、食欲、改善された移動性又は心理的幸福を増加させる、請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項４９】
前記細胞、過剰増殖性障害又は新生物、腫瘍、がん若しくは悪性腫瘍が哺乳動物に存在する、請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項５０】
前記対象又は哺乳動物がヒトである、請求項２１又は４８に記載の方法又は使用。
【請求項５１】
前記対象又は哺乳動物が家庭又は農場（家畜）用動物である、請求項２１又は４８に記載の方法又は使用。
【請求項５２】
前記家庭動物がイヌ又はネコである、請求項５１に記載の方法又は使用。
【請求項５３】
クルクミン若しくはクルクミン類似体又は抗細胞増殖薬に融合又はコンジュゲートされている前記ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体が、対象又は哺乳動物に、局所に、領域に又は全身的に、或いは細胞、過剰増殖性障害若しくは新生物、腫瘍、がん又は転移に投与される、請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項５４】
１種又は複数の追加の抗細胞増殖又は免疫増強薬を含む、請求項１に記載の組合せ又は製剤。
【請求項５５】
前記１種又は複数の追加の抗細胞増殖薬が、抗がん薬又は抗腫瘍薬を含む、請求項５４に記載の組合せ又は製剤。
【請求項５６】
前記１種又は複数の追加の抗細胞増殖薬が、アルキル化剤、抗代謝物、植物抽出物、植物アルカロイド、ニトロソ尿素、ホルモン、ヌクレオシド又はヌクレオチド類似体を含む、請求項５４に記載の組合せ又は製剤。
【請求項５７】
前記１種又は複数の追加の抗細胞増殖薬が、ゲムシタビン、５−フルオロウラシル，シクロホスファミド、アザチオプリン、シクロスポリンＡ、プレドニゾロン、メルファラン、クロランブシル、メクロレタミン、ブスルファン、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、チオグアニン、シトシンアラビノシド、ＡＺＴ、５−アザシチジン（５−ＡＺＣ）、ブレオマイシン、アクチノマイシンＤ、ミトラマイシン、マイトマイシンＣ、カルムスチン、ロリムスチン、セムスチン、ストレプトゾトシン、ヒドロキシ尿素、シスプラチン、カルボプラチン、オキシプラチン、ミトタン、プロカルバジン、ダカルバジン、タキソール（パクリタキセル）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ジブロモマンニトール、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、テニポシド又はペメトレキセドを含む、請求項５４に記載の組合せ又は製剤。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
［関連出願］
[0001]本出願は、２０１６年２月１２日に出願された米国仮特許出願第６２／２９４，４９７号に対する優先権を請求し、この出願は、全ての文章、表、配列表及び図面を含めて参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
[0002]膵臓癌腫は破壊的な悪性腫瘍であり、副作用が低減された有効な処置の開発は挑戦であることが判明した。膵臓がんは、ステージＩで１４％未満及びステージＩＶで１％未満の５年生存率である最も致命的なヒト悪性腫瘍のうちの１つである。ほとんどの場合は進行型ステージで診断されるという事実により、膵臓がんのための処置選択肢は制限され、主に対症的である。膵臓がんの分子及び遺伝子の基礎が広範に研究されてきたが、処置選択肢はまだ制限されている。膵臓がん発症の陰での遺伝子及び分子の事象における著しい発見にもかかわらず、予後は過去数十年間依然として大きく変わることはなかった。これは、一部には、膵臓がんのリスクが増加した患者を同定する助けとなる特定の検出可能なバイオマーカーがないこと、及び膵臓がんは高異質性であり、標的化治療をより困難にしているという事実による。
【０００３】
[0003]現在、ゲムシタビン（２’，２’−ジフルオロ２’デオキシシチジン）は、第１選択の薬物であり、生活の質において短期改善を提供し、長期生存に少し影響を有する。ゲムシタビン及び５−フルオロウラシル（５ＦＵ）−ベースの組合せ治療により、生存を増加させようと試みられているが、これらの治療は毒性の増加をしばしば伴う。ゲムシタビン及び５ＦＵ−コンビナトリアル治療が試みられて全生存にわずかな改善があるが、それらも著しい毒性を伴う。したがって、良好な全身状態を有する患者だけが、これらの治療から恩恵を被ることができる。
【０００４】
[0004]ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ、黄体ホルモン放出ホルモン又はＬＨＲＨとも呼ばれる）及びＬＨＲＨ受容体（ＬＨＲＨＲ）は、生殖及びいくつかの悪性の腫瘍、例えば子宮内膜、卵巣、乳房、前立腺及びメラノーマのがんにおいて重要な役割を果たす。近年まで、膵臓がんにおけるＬＨＲＨ及びＬＨＲＨの同族受容体ＬＨＲＨＲの役割は、ほとんど注目を受けてこなかった。
【０００５】
[0005]疫学及び動物の研究は、天然化合物が、がんを防止及び処置する助けとなり得ることを示した。これらの化合物の一部は、インビトロ及び前臨床試験の両方で著しい抗腫瘍活性を示した。クルクミンは、ウコン（クルクミンロンガ（Ｃｕｒｃｕｍｉｎ  ｌｏｎｇａ））に存在するジアリールヘプタノイドであり、インビトロにおいてがん細胞に対して強力な抗増殖性及びプロアポトーシスの効果を有することが報告されている。クルクミンは薬理学的に安全である一方で、クルクミンは水中で低い可溶性を有し、そのため、乏しい生物学的利用能を有し、静脈内に投与することができない。
【発明の概要】
【０００６】
[0006]本明細書において開示されている研究は、黄体ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）にコンジュゲートされているクルクミンの可溶形、別名ＬＨＲＨ−クルクミンは、単独及びゲムシタビンとの組合せで、膵臓細胞株成長に対して驚くべき影響を有する。三次元（３Ｄ）ハイスループットアッセイプラットフォームを使用して、ＬＨＲＨにコンジュゲートされているクルクミン（ＬＨＲＨ−クルクミン）の可溶形及び抗細胞増殖薬ゲムシタビン（２’，２’−ジフルオロ２’デオキシシチジン）は、ＬＨＲＨ受容体（ＬＨＲＨＲ）を発現する膵臓がん細胞に対して、クルクミン又はＬＨＲＨ−クルクミン単独よりも有効である。ＬＨＲＨ−クルクミンは、ゲムシタビンと一緒の組合せ治療のための優れた候補である。本発明は、ＬＨＲＨ−受容体標的化クルクミン及び抗細胞増殖薬、例えばゲムシタビンが、膵臓がんなどのＬＨＲＨＲを発現するがんに対する実現可能な治療であること、及び該組合せが、薬物細胞毒性の低減で有効な治療を提供することを確立する。
【０００７】
[0007]本発明によると、ＬＨＲＨ−クルクミン、ＬＨＲＨ−クルクミン類似体、ＬＨＲＨ類似体−クルクミン及び／又はＬＨＲＨ類似体−クルクミン類似体コンジュゲート又は融合体、及び１種又は複数の抗細胞増殖薬の組合せ及び製剤が提供される。一実施形態において、組合せ及び製剤は、ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体；及びクルクミン又はクルクミン類似体を含み、ここで、ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体は、クルクミン又はクルクミン類似体；及び抗細胞増殖薬に融合又はコンジュゲートされている。
【０００８】
[0008]コンジュゲート又は融合体におけるＬＨＲＨ類似体としては、限定されないが、以下が挙げられる：［Ｄ−Ａｌａ６］−ＬＨＲＨ；［ＤＬｙｓ６］−ＬＨＲＨ；［Ｄ−Ｔｒｐ６］−ＬＨＲＨ；［Ｔｒｐ６］−ＬＨＲＨ；［Ｄ−Ｐｈｅ６］−ＬＨＲＨ；［Ｄ−Ｌｅｕ６］−ＬＨＲＨ；［Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）６］−ＬＨＲＨ；［Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨＲＨ；［Ｄ−Ｎａｌ（２）６］−ＬＨＲＨ；［Ｇｌｎ８］−ＬＨＲＨ；［Ｈｉｓ（３−メチル）２］−ＬＨＲＨ；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ａｌａ６］−ＬＨＲＨエチルアミド；［−Ｍｅ−Ｌｅｕ７］−ＬＨＲＨ；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｈｉｓ２、Ｄ−Ｔｒｐ６、Ｐｒｏ９］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｐｈｅ６］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ａｚａ−Ｇｌｙ１０］−ＬＨＲＨ；；［Ｄ−Ａｌａ６、Ｎ−Ｍｅ−Ｌｅｕ７］−ＬＨＲＨ；［Ｄ−Ｈｉｓ（ベンジル）６］−ＬＨＲＨ断片３−９エチルアミド；［Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨＲＨ断片１−７；［Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨＲＨ断片２−９；［Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨＲＨ断片４−９；［ＤＨｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨＲＨ断片５−９；［Ｄ−ｐＧｌｕ１、ＤＰｈｅ２，Ｄ−Ｔｒｐ３，６］−ＬＨＲＨ；［Ｄ−Ｓｅｒ４］−ＬＨＲＨ；［Ｄ−Ｔｒｐ６］−ＬＨＲＨ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ２；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ａｌａ６］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０，１２Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｈｉｓ２、Ｄ−Ｔｒｐ６、Ｐｒｏ９］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｐｈｅ６］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｓｅｒ４、Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６、Ｐｒｏ９］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｓｅｒ４、Ｄ−Ｔｒｐ６、Ｐｒｏ９］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｔｒｐ６、Ｄ−Ｌｅｕ７、Ｐｒｏ９］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｔｒｐ６］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｔｙｒ５、Ｄ−Ｔｒｐ６、Ｐｒｏ９］−ＬＨＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−ｐＧｌｕ１］−ＬＨＲＨ；［Ｈｉｓ（３−メチル）２］−ＬＨＲＨ；［Ｈｙｐ９］−ＬＨＲＨ；ホルミル−［Ｄ−Ｔｒｐ６］−ＬＨＲＨ断片２−１０；ＬＨＲＨ断片１−２；ＬＨＲＨ断片１−４；ＬＨＲＨ断片４−１０；ＬＨＲＨ断片７−１０ジヒドロクロリド；［Ｄ−Ｔｒｐ６］−ＬＨＲＨ断片１−６；ナファレリン（シナレル（Ｓｙｎａｒｅｌ）（商標））；デスロレリン；ＥＨＷＳＹＧＬＲＰＧ配列；リュープロリド；酢酸ロイプロリド（ルプロン（Ｌｕｐｒｏｎ）（商標））；ゴセレリン（ゾラデクス（Ｚｏｌａｄｅｘ）（商標））；ヒストレリン（スプレリン（Ｓｕｐｐｒｅｌｉｎ）（商標））；トリプトレリン（トレルスター（Ｔｒｅｌｓｔａｒ）（商標））；ブセレリン（スプレファクト（Ｓｕｐｒｅｆａｃｔ）（商標））；セトロレリクス（セトロチデ（Ｃｅｔｒｏｔｉｄｅ）（商標））；ガニレリクス（アンタゴン（Ａｎｔａｇｏｎ）（商標））；Ａｎｔｉｄｅ（Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｌａ）；アバレリクス（プレナキス（Ｐｌｅｎａｘｉｓ）（商標））；テベレリクス（アンタレリスク（Ａｎｔａｒｅｌｉｘ）（商標））；デガレリクス（フィルマゴン（Ｆｉｒｍａｇｏｎ）（商標））；Ｎａｌ−Ｇｌｕ（Ｄ−２−Ｎａｌ−ｐ−クロロ−Ｄ−Ｐｈｅ−ベータ−（３−ピリジル）−Ｄ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ）；又はエラゴリクス（ＮＢＩ−５６４１８）。
【０００９】
[0009]ＬＨＲＨ及びＬＨＲＨ類似体は、塩形態、例えばナトリウム塩又はアセテート塩を含む。ＬＨＲＨ及びＬＨＲＨ類似体は、アミノ酸が任意の残基に存在することができるＤ−アミノ酸も含む。
【００１０】
[0010]コンジュゲート又は融合体におけるクルクミン構造としては、限定されないが、以下の構造が挙げられる：
【化１】
2019507749.tif 000003
【００１１】
[0011]コンジュゲート又は融合体におけるクルクミン類似体としては、限定されないが、以下が挙げられる：テトラヒドロクルクミン；６−ヒドロキシジベンゾイルメタン；コーヒー酸；３，４−メチレンジオキシケイ皮酸；３，４−ジメトキシケイ皮酸；ケイ皮酸；ジンゲロン；４−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−２−ブタノン；４−（ｐヒドロキシフェニル）−３−ブテン−２−オン；４’−ヒドロキシバレロフェノン；４-１３ヒドロキシベンジルアセトン；４−ヒドロキシベンゾフェノン；１，５−ビス（４−ジメチルアミノフェニル）−１，４−ペンタジエン−３−オン；４−ヒドロキシフェネチルアルコール；４−ヒドロキシフェニルピルビン酸；３，４−ジヒドロキシヒドロケイ皮酸；２−ヒドロキシケイ皮酸；３−ヒドロキシケイ皮酸；４−ヒドロキシケイ皮酸又はオイゲノール。
【００１２】
[0012]コンジュゲート又は融合体におけるクルクミン類似体構造としては、限定されないが、以下の構造：
【化２】
2019507749.tif 000004
も挙げられる。
【００１３】
[0013]本発明のコンジュゲート又は融合体において、ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体は、結合によってクルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートすることができる。結合の非限定的な例としては、共有結合性、イオン性又は疎水性の結合が挙げられる。
【００１４】
[0014]本発明のコンジュゲート又は融合体において、ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体は、直鎖状炭素鎖、ペプチド又は非ペプチドリンカーによってクルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートすることができる。直鎖状炭素鎖は、Ｃ１〜２５によって表される１〜２５個の炭素であり得る。代表的なペプチドリンカーは、約１〜２５個のアミノ酸残基の長さを有することができる。結合又はリンカーを含むアミノ酸は、１個又は複数のＡ、Ｓ又はＧアミノ酸残基を含む。
【００１５】
[0015]本発明の組成物及び製剤は、医薬組成物及び医薬製剤を含む。ある特定の実施形態において、医薬組成物又は医薬製剤は、コンジュゲート又は融合体及び１種若しくは複数の抗細胞増殖薬の組合せを含む。
【００１６】
[0016]特別な態様において、抗細胞増殖薬は、抗がん薬又は抗腫瘍薬を含む。より特別な態様において、抗細胞増殖薬は、アルキル化剤、抗代謝物、植物抽出物、植物アルカロイド、ニトロソ尿素、ホルモン、ヌクレオシド類似体又はヌクレオチド類似体を含む。抗細胞増殖薬の特別な非限定的な例としては、以下が挙げられる：ゲムシタビン、５−フルオロウラシル、シクロホスファミド、アザチオプリン、シクロスポリンＡ、プレドニゾロン、メルファラン、クロランブシル、メクロレタミン、ブスルファン、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、チオグアニン、シトシンアラビノシド、ＡＺＴ、５−アザシチジン（５−ＡＺＣ）、ブレオマイシン、アクチノマイシンＤ、ミトラマイシン、マイトマイシンＣ、カルムスチン、ロリムスチン、セムスチン、ストレプトゾトシン、ヒドロキシ尿素、シスプラチン、カルボプラチン、オキシプラチン、ミトタン、プロカルバジン、ダカルバジン、タキソール（パクリタキセル）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ジブロモマンニトール、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、テニポシド又はペメトレキセド。
【００１７】
[0017]本発明によると、細胞の増殖を低減又は阻害するための方法及び使用が提供される。一実施形態において、方法又は使用は、ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体に結合する受容体を発現する細胞を、クルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートされているＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体と接触させること；及び該細胞を抗細胞増殖薬と接触させることを含む。こうした方法及び使用は、限定せずに、哺乳動物、例えばヒトなどの対象においてインビボでの細胞と、コンジュゲート又は融合体及び１種又は複数の抗細胞増殖薬の組合せ又は製剤との接触を含む。
【００１８】
[0018]本発明によると、過剰増殖性障害を処置するための方法及び使用も提供される。こうした方法及び使用は、限定せずに、哺乳動物、例えばヒトなどの対象におけるインビボでの過剰増殖細胞と、コンジュゲート又は融合体及び１種又は複数の抗細胞増殖薬の組合せ又は製剤との接触を含む。一実施形態において、方法又は使用は、ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体に結合する受容体を発現する過剰増殖性障害の細胞を、クルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートされているホルモン（ＬＨＲＨ）又はＬＨＲＨ類似体と接触させること；及び過剰増殖性障害の前記細胞を抗細胞増殖薬と接触させることを含む。該細胞は、組合せで、又は別々の投与、例えば、時間によって分離される接触を介して、コンジュゲート又は融合体及び１種又は複数の抗細胞増殖薬と接触させることができる。
【００１９】
[0019]本発明によると、ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体に結合する受容体を発現する新生物、腫瘍、がん又は悪性腫瘍を処置するための方法及び使用がさらに提供される。一実施形態において、方法又は使用は、クルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートされているＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体を、哺乳動物、例えばヒトなどの対象に投与すること；及び抗細胞増殖薬を対象に投与することを含む。こうした方法及び使用は、限定せずに、組合せで、又は別々の投与、例えば、時間によって分離される投与を介して、コンジュゲート又は融合体及び１種又は複数の抗細胞増殖薬の製剤を用いる、哺乳動物、例えばヒトなどの対象への投与を含む。
【００２０】
[0020]ある特定の実施形態において、コンジュゲート又は融合体、例えば、クルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートされているＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体は、１種又は複数の抗細胞増殖薬の投与より前に投与される。ある特定の実施形態において、コンジュゲート又は融合体、例えば、クルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートされているＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体は、１種又は複数の抗細胞増殖薬の投与と実質的に同時に投与される。
【００２１】
[0021]ある特定の実施形態において、コンジュゲート又は融合体、例えば、クルクミン又はクルクミン類似体に融合又はコンジュゲートされているＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体は、１種又は複数の抗細胞増殖薬の投与に続いて投与される。
【００２２】
[0022]ＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体に結合する受容体は、ＬＨＲＨ−受容体を含む。ある特定の実施形態において、ＬＨＲＨ−受容体などの受容体は、細胞表面に存在することができる。
【００２３】
[0023]細胞、過剰増殖性障害及び新生物、腫瘍、がん及び悪性腫瘍は、対象の全身に、領域に、局所に、又は特別な組織若しくは器官に存在し得る。ある特定の実施形態において、細胞、過剰増殖性障害、新生物、腫瘍、がん又は悪性腫瘍は、肺、甲状腺、頭又は首、鼻咽腔、咽頭、鼻又は副鼻腔、脳、脊椎、乳房、副腎、下垂体、甲状腺、リンパ、胃腸、口、食道、胃、十二指腸、回腸、空腸、小腸、結腸、直腸、泌尿生殖路、子宮、卵巣、頸部、子宮内膜、膀胱、精巣、前立腺、腎臓、膵臓、肝臓、骨、骨髄、リンパ、血液、皮膚又は筋肉に存在する。
【００２４】
[0024]ある特定の実施形態において、過剰増殖性障害、新生物、腫瘍、がん及び悪性腫瘍は、進行的に悪化しつつあり得るか、又は寛解中である。ある特定の実施形態において、細胞、過剰増殖性障害又は新生物、腫瘍、がん若しくは悪性腫瘍は、転移性である。ある特定の実施形態において、細胞、過剰増殖性障害又は新生物、腫瘍、がん若しくは悪性腫瘍は、固体細胞の新生物、腫瘍、がん若しくは悪性腫瘍、又はリンパ若しくは造血細胞の新生物、腫瘍、がん若しくは悪性腫瘍、例えば、骨髄腫、リンパ腫又は白血病などを含む。
【００２５】
[0025]ある特定の実施形態において、細胞、過剰増殖性障害又は新生物、腫瘍、がん若しくは悪性腫瘍は、癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病、腺腫、腺癌腫、メラノーマ、神経膠腫、神経膠芽腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、星状細胞腫、オリゴデンドロサイト、中皮腫、細網内皮新生物、腫瘍、がん又は悪性腫瘍を含む。
【００２６】
[0026]ある特定の実施形態において、肉腫は、リンパ肉腫、脂質肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫又は線維肉腫を含む。
【００２７】
[0027]ある特定の実施形態において、抗細胞増殖薬は、以下を含む：ゲムシタビン、５−フルオロウラシル、シクロホスファミド、アザチオプリン、シクロスポリンＡ、プレドニゾロン、メルファラン、クロランブシル、メクロレタミン、ブスルファン、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、チオグアニン、シトシンアラビノシド、ＡＺＴ、５−アザシチジン（５−ＡＺＣ）、ブレオマイシン、アクチノマイシンＤ、ミトラマイシン、マイトマイシンＣ、カルムスチン、ロリムスチン、セムスチン、ストレプトゾトシン、ヒドロキシ尿素、シスプラチン、カルボプラチン、オキシプラチン、ミトタン、プロカルバジン、ダカルバジン、タキソール（パクリタキセル）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ジブロモマンニトール、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、テニポシド又はペメトレキセド。
【００２８】
[0028]ある特定の実施形態において、方法又は使用は、新生物、腫瘍、がん又は悪性腫瘍の再発又は進行を阻害又は低減する。
【００２９】
[0029]ある特定の実施形態において、方法又は使用は、新生物、腫瘍、がん又は悪性細胞の塊、体積、サイズ若しくは細胞数の部分的若しくは完全な破壊、新生物、腫瘍、がん若しくは悪性細胞の壊死、溶解若しくはアポトーシスを刺激、誘発若しくは増加させること、新生物、腫瘍、がん若しくは悪性腫瘍の体積サイズ、細胞塊を低減すること、新生物、腫瘍、がん若しくは悪性腫瘍の体積、塊、サイズ若しくは細胞数における進行若しくは増加を阻害又は防止すること、或いは寿命を延長することをもたらす。
【００３０】
[0030]ある特定の実施形態において、方法又は使用は、新生物、腫瘍、がん若しくは悪性腫瘍に関連がある若しくは引き起こされる有害症状若しくは合併症、又は疼痛、不快感、吐き気、脱力若しくは嗜眠の重篤度、持続期間又は頻度を低減又は減少させる。
【００３１】
[0031]ある特定の実施形態において、方法又は使用は、対象のエネルギー、食欲、改善された移動性又は心理的幸福を増加させる。
【００３２】
[0032]ある特定の実施形態において、細胞、過剰増殖性障害又は新生物、腫瘍、がん若しくは悪性腫瘍は、哺乳動物に存在する。
【００３３】
[0033]ある特定の実施形態において、対象又は哺乳動物は、ヒトである。ある特定の実施形態において、対象若しくは哺乳動物は、家庭又は農場（家畜）用動物である。ある特定の実施形態において、家庭動物は、イヌ又はネコである。
【００３４】
[0034]ある特定の実施形態において、クルクミン若しくはクルクミン類似体及び／又は抗細胞増殖薬に融合又はコンジュゲートされているＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体は、対象若しくは哺乳動物に、局所に、領域に若しくは全身に、或いは細胞、過剰増殖性障害若しくは新生物、腫瘍、がん又は転移に投与される。
【００３５】
[0035]ある特定の実施形態において、本明細書において説明されている組合せ若しくは製剤、方法又は使用は、１種若しくは複数の追加の抗細胞増殖若しくは免疫増強薬、又は１種若しくは複数の追加の抗細胞増殖若しくは免疫増強薬の投与を含む。
【００３６】
[0036]ある特定の実施形態において、追加の抗細胞増殖薬は、抗がん薬又は抗腫瘍薬を含む。
【００３７】
[0037]ある特定の実施形態において、追加の抗細胞増殖薬は、アルキル化剤、抗代謝物、植物抽出物、植物アルカロイド、ニトロソ尿素、ホルモン、ヌクレオシド又はヌクレオチド類似体を含む。
【００３８】
[0038]ある特定の実施形態において、追加の抗細胞増殖薬は、ゲムシタビン、５−フルオロウラシル，シクロホスファミド、アザチオプリン、シクロスポリンＡ、プレドニゾロン、メルファラン、クロランブシル、メクロレタミン、ブスルファン、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、チオグアニン、シトシンアラビノシド、ＡＺＴ、５−アザシチジン（５−ＡＺＣ）、ブレオマイシン、アクチノマイシンＤ、ミトラマイシン、マイトマイシンＣ、カルムスチン、ロリムスチン、セムスチン、ストレプトゾトシン、ヒドロキシ尿素、シスプラチン、カルボプラチン、オキシプラチン、ミトタン、プロカルバジン、ダカルバジン、タキソール（パクリタキセル）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ジブロモマンニトール、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、テニポシド又はペメトレキセドを含む。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１Ａ】Ｉｎｃｕｃｙｔｅプラットフォームを使用する、スフェロイド成長の自動化測定を示す図である。
【図１Ｂ】Ｉｎｃｕｃｙｔｅプラットフォームを使用する、スフェロイド成長の自動化測定を示す図である。
【図２Ａ】ＬＨＲＨ−クルクミン、クルクミン単独又はＤＭＳＯ対照を用いる用量依存（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）処置に続くＰａｎｃ−１スフェロイド成長を示す図である。
【図２Ｂ】ＬＨＲＨ−クルクミン、クルクミン単独又はＤＭＳＯ対照を用いる用量依存（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）処置に続くＭｉａ−ＰａＣａ−２スフェロイド成長を示す図である。
【図３】ＬＨＲＨ単独（３０μＭ）又はＬＨＲＨ−クルクミン（３０μＭ）を用いる処置に続くＰａｎｃ−１スフェロイド成長を示す図である。ＤＭＳＯを対照として使用した。
【図４】ＬＨＲＨ−クルクミンとの組合せでゲムシタビン（５μＭ）、ＬＨＲＨ−クルクミン（３０μＭ）又はゲムシタビンを用いる処置に続くＰａｎｃ−１スフェロイド成長を示す図である。ＤＭＳＯを対照として使用した。
【図５Ａ】ゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミン（１２０ｈ）で処置されたＭｉａＰａｃａ−２スフェロイドの定量化を示す図である。
【図５Ｂ】ゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミン（１２０ｈ）で処置されたＰａｎｃ−１スフェロイドの定量化を示す図である。
【図５Ｃ】ゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミン（１２０ｈ）で処置されたＡｓＰＣ−１スフェロイドの定量化を示す図である。
【図６Ａ】５ＦＵ（２．５μＭ）、ＬＨＲＨ−クルクミン（１０μＭ）、又はＬＨＲＨ−クルクミンとの組合せで５ＦＵを用いる処置に続くＰａｎｃ−１スフェロイド成長を示す図である。ＤＭＳＯを対照として使用した。
【図６Ｂ】５ＦＵ（２．５μＭ）、ＬＨＲＨ−クルクミン（１０μＭ）、又はＬＨＲＨ−クルクミンとの組合せで５ＦＵを用いる処置に続くＭｉａ−Ｐａｃａ−２スフェロイド成長を示す図である。ＤＭＳＯを対照として使用した。
【図７Ａ】ＬＨＲＨ単独（３０μＭ）、ＬＨＲＨ−クルクミン（３０μＭ）又はクルクミン単独（３０μＭ）を用いる処置に続くＰａｎｃ−１スフェロイド（非標的対照［ＮＴ］）成長を示す図である。ＤＭＳＯを対照として使用した。
【図７Ｂ】ＬＨＲＨ単独（３０μＭ）、ＬＨＲＨ−クルクミン（３０μＭ）又はクルクミン単独（３０μＭ）を用いる処置に続くＰａｎｃ−１スフェロイド（ＬＨＲＨＲノックダウン［ＫＤ］）成長を示す図である。ＤＭＳＯを対照として使用した。
【図８Ａ】ＬＨＲＨ受容体を有する４５ｋＤタンパク質の検出及びこの受容体の非常に低い存在を示す図である。
【図８Ｂ】がん細胞におけるＬＨＲＨ受容体の発現におけるノックダウンを実証するウエスタンブロット分析を示す図である。
【図８Ｃ】がん細胞の細胞表面でのＬＨＲＨ受容体の極めて低い発現を示す図である。
【図９Ａ】ゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンで処置されたＭｉａＰａｃａ−２細胞のＣｅｌｌｏｍｉｃｓ核定量化を示す図である。
【図９Ｂ】ゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンで処置されたＰａｎｃ−１細胞のＣｅｌｌｏｍｉｃｓ核定量化を示す図である。
【図９Ｃ】ゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンで処置されたＡｓＰＣ−１細胞のＣｅｌｌｏｍｉｃｓ核定量化を示す図である。
【図９Ｄ】ゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンで処置されたＢｘＰＣ−３細胞のＣｅｌｌｏｍｉｃｓ核定量化を示す図である。
【図１０Ａ】ゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミン（２４時間）で処置されたＭｉａＰａｃａ−２細胞におけるアポトーシスマーカーを示す図である。
【図１０Ｂ】ゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミン（２４時間）で処置されたＰａｎｃ−１細胞におけるアポトーシスマーカーを示す図である。
【図１０Ｃ】ゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミン（２４時間）で処置されたＡｓＰＣ−１細胞におけるアポトーシスマーカーを示す図である。
【図１０Ｄ】ゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミン（２４時間）で処置されたＢｘＰＣ−３細胞におけるアポトーシスマーカーを示す図である。
【図１１Ａ】組合せ処置（２４時間）で処置されたＭｉａＰａｃａ−２細胞におけるアポトーシスマーカーを示す図である。
【図１１Ｂ】組合せ処置（２４時間）で処置されたＰａｎｃ−１細胞におけるアポトーシスマーカーを示す図である。
【図１１Ｃ】組合せ処置（２４時間）で処置されたＡｓＰＣ−１細胞におけるアポトーシスマーカーを示す図である。
【図１１Ｄ】組合せ処置（２４時間）で処置されたＢｘＰＣ−３細胞におけるアポトーシスマーカーを示す図である。
【図１２Ａ】組合せ処置（７２時間）で処置されたＭｉａＰａｃａ−２細胞におけるアポトーシスマーカーを示す図である。
【図１２Ｂ】組合せ処置（７２時間）で処置されたＰａｎｃ−１細胞におけるアポトーシスマーカーを示す図である。
【図１３Ａ】クルクミン及びＬＨＲＨ−クルクミン（２４時間）で処置されたＰａｎｃ−１細胞におけるアポトーシス阻害剤ＸＩＡＰの相対的なｍＲＮＡレベルを示す図である。
【図１３Ｂ】クルクミン及びＬＨＲＨ−クルクミン（２４時間）で処置されたＰａｎｃ−１細胞におけるアポトーシス阻害剤ｃＩＡＰ１の相対的なｍＲＮＡレベルを示す図である。
【図１３Ｃ】クルクミン及びＬＨＲＨ−クルクミン（２４時間）で処置されたＰａｎｃ−１細胞におけるアポトーシス阻害剤ｃＩＡＰ２の相対的なｍＲＮＡレベルを示す図である。
【図１４】膵臓がん細胞及び正常細胞におけるＬＨＲＨ受容体発現を示す図である。
【図１５】低用量のゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンを用いる処置中のマウス体重における変化を示す図である：ビヒクル単独（対照）、ゲムシタビン（５０ｍｇ／ｋｇ、週１回）、ＬＨＲＨ−クルクミン（２０ｍｇ／ｋｇ、週２回）、又はゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンの組合せを用いる腹腔内注射（ＩＰ）で、ＳＣＩＤ／ｂｇマウスを毎週処置した。腫瘍移植後２０日目に開始して６週間、マウスをモニタリングした。いずれかゲムシタビン若しくはＬＨＲＨ−クルクミン、又は該２種の化合物の組合せを用いるマウスの治療的処置は、体重又は身体状態に対して負の影響を及ぼさない。
【図１６】インビボでのヒト膵臓がん細胞Ｍｉａ−Ｐａｃａ−２に対する、低用量ゲムシタビン／ＬＨＲＨ−クルクミン処置の効果を示す図である：ビヒクル単独（対照）、ゲムシタビン（５０ｍｇ／ｋｇ、週１回）、ＬＨＲＨクルクミン（２０ｍｇ／ｋｇ、週２回）、又はゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンの組合せを用いる腹腔内注射（ＩＰ）で、マウスを毎週処置した。腫瘍移植後２０日目から開始して５週間、マウスをモニタリングした。５５日目に、移植後の腫瘍を剖検で除去した。ビヒクル処置、ゲムシタビン単独、ＬＨＲＨ−クルクミン単独及び組合せの処置からの代表的な画像は、ゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンの組合せで処置されたマウスにおける腫瘍サイズの明らかな低減を示す。
【図１７】低用量のゲムシタビン／ＬＨＲＨ−クルクミン組合せ処置が、インビボでの膵臓がん細胞Ｍｉａ−Ｐａｃａ−２の成長を防止することを示す図である：ビヒクル単独（対照）、ゲムシタビン（オレンジ色の矢印、５０ｍｇ／ｋｇ、週１回）、ＬＨＲＨ−クルクミン（灰色の矢印、２０ｍｇ／ｋｇ、毎週２回）、又はゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンの組合せを用いる腹腔内注射を受けたＳＣＩＤ／ｂｇマウスにおける腫瘍体積の変化。データは、腫瘍体積（ｎ＝８）の平均±ＳＤとして表示されている。
【図１８Ａ】低用量のゲムシタビン／ＬＨＲＨ−クルクミン組合せ処置が、膵臓がん細胞Ｍｉａ−Ｐａｃａ−２インビボの成長を防止することを示す図である：図１８Ａ、剖検での腫瘍体積。処置は、表示されている通りに行った。データは、腫瘍体積（ｎ＝８）の平均±ＳＤとして表示されている。剖検での腫瘍体積は、ゲムシタビン単独、ＬＨＲＨクルクミン単独において、又は組合せ処置群において有意に低減された（＊＊、ｐ＜０．０２５）。重要なことに、組合せ処置群は、ゲムシタビン又はＬＨＲＨ−クルクミン単独よりも有意に低い、腫瘍成長の最も有効な低減を示した（＊、ｐ＜０．０５）。図１８Ｂ、剖検での腫瘍重量。データは、腫瘍重量（ｎ＝８）の平均±ＳＤとして表示されている。組合せ処置群は、対照群（＊＊、ｐ＜０．０２５）と比較して、及びゲムシタビン又はＬＨＲＨ−クルクミン処置単独（＊、ｐ＜０．０５）と比較して、腫瘍成長の有意な低減を示している。
【図１８Ｂ】低用量のゲムシタビン／ＬＨＲＨ−クルクミン組合せ処置が、膵臓がん細胞Ｍｉａ−Ｐａｃａ−２インビボの成長を防止することを示す図である：図１８Ａ、剖検での腫瘍体積。処置は、表示されている通りに行った。データは、腫瘍体積（ｎ＝８）の平均±ＳＤとして表示されている。剖検での腫瘍体積は、ゲムシタビン単独、ＬＨＲＨクルクミン単独において、又は組合せ処置群において有意に低減された（＊＊、ｐ＜０．０２５）。重要なことに、組合せ処置群は、ゲムシタビン又はＬＨＲＨ−クルクミン単独よりも有意に低い、腫瘍成長の最も有効な低減を示した（＊、ｐ＜０．０５）。図１８Ｂ、剖検での腫瘍重量。データは、腫瘍重量（ｎ＝８）の平均±ＳＤとして表示されている。組合せ処置群は、対照群（＊＊、ｐ＜０．０２５）と比較して、及びゲムシタビン又はＬＨＲＨ−クルクミン処置単独（＊、ｐ＜０．０５）と比較して、腫瘍成長の有意な低減を示している。
【図１９】高用量のゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンを用いる処置中のマウス体重における変化を示す図である：ビヒクル単独（対照）、ゲムシタビン（１００ｍｇ／ｋｇ、週１回）、ＬＨＲＨ−クルクミン（４０ｍｇ／ｋｇ、週２回）、又はゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンの組合せを用いる腹腔内注射（ＩＰ）で、ＳＣＩＤ／ｂｇマウスを毎週処置した。腫瘍移植後２０日目に開始して５週間、マウスをモニタリングした。より高い用量のゲムシタビン若しくはＬＨＲＨ−クルクミン、又は該２種の化合物の組合せを用いるマウスの治療的処置は、体重又は身体状態に対して負の影響を及ぼさない。
【図２０】インビボでのヒト膵臓がん細胞Ｍｉａ−Ｐａｃａ−２に対する高用量ゲムシタビン／ＬＨＲＨ−クルクミン処置の効果を示す図である：ビヒクル単独で（対照）、ゲムシタビン（１００ｍｇ／ｋｇ、週１回）、ＬＨＲＨクルクミン（４０ｍｇ／ｋｇ、週２回）又はゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンの組合せを用いる腹腔内注射（ＩＰ）で、マウスを毎週処置した。腫瘍移植後２０日目に開始して４週間、マウスをモニタリングした。４８日目に、移植後の腫瘍を剖検で除去した。ビヒクル処置、ゲムシタビン単独、ＬＨＲＨ−クルクミン単独及び組合せ処置からの代表的な画像は、より高い用量のゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンの組合せで処置されたマウスにおける腫瘍サイズの明らかな低減を示す。
【図２１】高用量のゲムシタビン／ＬＨＲＨ−クルクミン組合せ処置が、膵臓がん細胞Ｍｉａ−Ｐａｃａ−２インビボの成長を防止することを示す図である：ビヒクル単独（対照）、ゲムシタビン（オレンジ色の矢印、１００ｍｇ／ｋｇ、週１回）、ＬＨＲＨ−クルクミン（灰色の矢印、４０ｍｇ／ｋｇ、週２回）、又はゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンの組合せを用いる腹腔内注射を受けたＳＣＩＤ／ｂｇマウスにおける腫瘍体積の変化。データは、腫瘍体積（ｎ＝８）の平均±ＳＤとして表示されている。
【図２２Ａ】ゲムシタビン／ＬＨＲＨ−クルクミン組合せ処置が、膵臓がん細胞Ｍｉａ−Ｐａｃａ−２インビボの成長を防止することを示す図である：図２２Ａ、剖検での腫瘍体積。処置を表示されている通りに行った。データは、腫瘍体積（ｎ＝８）の平均±ＳＤとして表示されている。剖検での腫瘍体積は、ゲムシタビン単独、ＬＨＲＨクルクミン単独又は組合せ処置群（＊＊、ｐ＜０．０２５）において有意に低減された。重要なことに、組合せ処置群は、ゲムシタビン又はＬＨＲＨ−クルクミン単独（＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０２５）よりも有意に低い、腫瘍成長の最も有効な低減を示した。図２２Ｂ、剖検での腫瘍重量。データは、腫瘍重量（ｎ＝８）の平均±ＳＤとして表示されている。組合せ処置群は、対照群（＊＊、ｐ＜０．０２５）と比較して、及びゲムシタビン又はＬＨＲＨ−クルクミン処置単独（＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０２５）と比較して、腫瘍成長の有意な低減を示す。
【図２２Ｂ】ゲムシタビン／ＬＨＲＨ−クルクミン組合せ処置が、膵臓がん細胞Ｍｉａ−Ｐａｃａ−２インビボの成長を防止することを示す図である：図２２Ａ、剖検での腫瘍体積。処置を表示されている通りに行った。データは、腫瘍体積（ｎ＝８）の平均±ＳＤとして表示されている。剖検での腫瘍体積は、ゲムシタビン単独、ＬＨＲＨクルクミン単独又は組合せ処置群（＊＊、ｐ＜０．０２５）において有意に低減された。重要なことに、組合せ処置群は、ゲムシタビン又はＬＨＲＨ−クルクミン単独（＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０２５）よりも有意に低い、腫瘍成長の最も有効な低減を示した。図２２Ｂ、剖検での腫瘍重量。データは、腫瘍重量（ｎ＝８）の平均±ＳＤとして表示されている。組合せ処置群は、対照群（＊＊、ｐ＜０．０２５）と比較して、及びゲムシタビン又はＬＨＲＨ−クルクミン処置単独（＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０２５）と比較して、腫瘍成長の有意な低減を示す。
【図２３Ａ】ＬＨＲＨ−クルクミン対フリークルクミンのクロマトグラフィー特徴を示す図である：高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析は、フリークルクミン図２３Ａ及びＬＨＲＨタグ化クルクミン図２３Ｂについて特有のピークを示す。
【図２３Ｂ】ＬＨＲＨ−クルクミン対フリークルクミンのクロマトグラフィー特徴を示す図である：高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析は、フリークルクミン図２３Ａ及びＬＨＲＨタグ化クルクミン図２３Ｂについて特有のピークを示す。
【図２４】対照処置マウス由来の腫瘍組織のＨＰＬＣ分析を示す図である：特有のピークは、対照処置マウスにおける腫瘍から抽出された組織において１６．５〜１７分で検出されなかった。
【図２５】ＬＨＲＨ−クルクミン−処置マウス由来の腫瘍組織のＨＰＬＣ分析を示す図である：ＬＨＲＨ−クルクミンで週２回（２０ｍｇ／ｋｇ）処置された４匹の異なるマウス由来の腫瘍組織をＨＰＬＣ分析にかけた。全ての試料は、抽出物に存在するフリークルクミンを示す、およそ１６．５分でピークを示す。標的より前の広域ピークは、対照処置試料に存在しなかった可能な代謝物を示唆する。
【図２６】ＩｎｃｕｃｙｔｅＺｏｏｍソフトウェアを使用して、細胞増殖／成長の定量化を示す図である：６８時間の時間経過中に獲得された画像を使用して、パーセント（％）コンフルエンスを作成した。１処置につき８つのレプリケートを定量化のために使用した。ＰＡＴＣ５３は、ＭＤ  Ａｎｄｅｒｓｏｎから得られた患者由来膵臓がん細胞である。ＬＨＲＨＲ受容体発現の前の分析は、ＰＡＴＣ５３が、低レベルのＬＨＲＨＲ受容体を有するとともに、細胞死及び／又は細胞増殖に対する効果を検出するために、より高い用量のＬＨＲＨ−クルクミンを必要とすることを示唆する。ゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンの組合せは、単独で使用された薬物のいずれよりも、細胞増殖阻害に対して大きな効果を有する。
【図２７】ＰＡＴＣ５３膵臓がん細胞スフェロイド成長を示す図である。ゲムシタビン単独（１μＭ）、ＬＨＲＨ−クルクミン単独（３０μＭ）及び組合せを使用して、ＰＡＴＣ５３細胞によって形成されたスフェロイドを処置した。培地単独を対照として使用した。スフェロイドを定量化の前に８０時間の間成長させた。スフェロイド成長に対する効果を検出するために、より高い用量のＬＨＲＨ−クルクミンが使用される。ゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンの組合せは、単独で使用された薬物のいずれよりも、スフェロイド成長阻害に対して大きな効果を有する。
【図２８Ａ】ＴＧＦβ及びＬＨＲＨ−クルクミン４８時間の間で処置されたＰＡＴＣ５３膵臓がん細胞における定量的ＰＣＲ分析を示す図である。図２８Ａ、ＴＧＦβ（１００ｎｇ／ｍｌ）及びＬＨＲＨ−クルクミン（２０μＭ及び５０μＭ）で処置されたがん細胞におけるＴＧＦβ経路に関与する遺伝子のｍＲＮＡレベルの定量的ＰＣＲ分析。細胞を２４時間及び４８時間の間それぞれ、呈示されている通りに処置した。ＧＡＰＤＨを参照として使用した。ＴＧＦβシグナリング経路に重要な遺伝子は、ＳＭＡＤ３、転写因子ＳＮＡＩ１（Ｓｎａｉｌ）及びＳＮＡＩ２（Ｓｌｕｇ）並びにＴＧＦβ受容体（ＴＧＦＢＲＩ及びＴＧＦＢＲＩＩ）を含めて、ＬＨＲＨクルクミン処置によって下方調節された；図２８Ｂ、細胞周期停止（ＧＡＤＤ４５）及びアポトーシスの阻害（ＸＩＡＰ）に関与する遺伝子も、ＬＨＲＨ−クルクミン処置によって影響された。
【図２８Ｂ】ＴＧＦβ及びＬＨＲＨ−クルクミン４８時間の間で処置されたＰＡＴＣ５３膵臓がん細胞における定量的ＰＣＲ分析を示す図である。図２８Ａ、ＴＧＦβ（１００ｎｇ／ｍｌ）及びＬＨＲＨ−クルクミン（２０μＭ及び５０μＭ）で処置されたがん細胞におけるＴＧＦβ経路に関与する遺伝子のｍＲＮＡレベルの定量的ＰＣＲ分析。細胞を２４時間及び４８時間の間それぞれ、呈示されている通りに処置した。ＧＡＰＤＨを参照として使用した。ＴＧＦβシグナリング経路に重要な遺伝子は、ＳＭＡＤ３、転写因子ＳＮＡＩ１（Ｓｎａｉｌ）及びＳＮＡＩ２（Ｓｌｕｇ）並びにＴＧＦβ受容体（ＴＧＦＢＲＩ及びＴＧＦＢＲＩＩ）を含めて、ＬＨＲＨクルクミン処置によって下方調節された；図２８Ｂ、細胞周期停止（ＧＡＤＤ４５）及びアポトーシスの阻害（ＸＩＡＰ）に関与する遺伝子も、ＬＨＲＨ−クルクミン処置によって影響された。
【図２９】ＰＡＴＣ５３細胞のウエスタンブロット分析を示す図である。ＰＡＴＣ５３細胞を記載されている通りに処置し、処置の２４時間後にアポトーシスマーカー（切断ＰＡＲＰ）及びアポトーシスの阻害剤（ＸＩＡＰ及びｃＩＡＰ２）を検出するためにウエスタンブロットを行った。アクチンを負荷対照として使用した。ＰＡＴＣ５３細胞は、処置中初期に、ゲムシタビン及びより低い用量のクルクミン及びＬＨＲＨクルクミンの両方に対して耐性を示す。クルクミン及びＬＨＲＨ−クルクミンの両方を用いる５０μＭで開始して、アポトーシスのマーカーを検出した。
【図３０】ＰＡＴＣ５３細胞のウエスタンブロット分析を示す図である。ＰＡＴＣ５３細胞を表示されている通りに処置し、処置の４８時間後にアポトーシスマーカー（切断ＰＡＲＰ）及びアポトーシスの阻害剤（ＸＩＡＰ及びｃＩＡＰ２）を検出するためにウエスタンブロットを行った。アクチンを負荷対照として使用した。アポトーシス阻害剤の中程度の低減を３０μＭのＬＨＲＨ−クルクミンで検出した。結果は、ＰＡＴＣ５３が、ＬＨＲＨＲの低い発現により、より低い用量でのＬＨＲＨ−クルクミン処置に耐性であることを示唆する。
【図３１】ＬＨＲＨ−クルクミン単独、又は他の薬剤との組合せでのエクスビボ研究の模式を示す図である。
【図３２】ＬＨＲＨ−クルクミンのエクスビボ試験を示す図である。示されている異種移植片からの組織薄片を７２時間の間ＬＨＲＨ−クルクミンで処置し、組織薄片生存能をＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ（２時間のインキュベーション）で測定した。処置群と対照群との間の組織薄片生存能における差異の有意性をスチューデントｔ試験で分析した。組織薄片は、ｐ＜０．０５と生存能が少なくとも３０パーセント阻害されたとの両方であったならば、感受性であると定義される。＊ｐ＜０．０５。
【図３３】ＬＨＲＨ−クルクミン及びゲムシタビンの組合せを示す図である。示されている異種移植片からの組織薄片を、ＬＨＲＨ−クルクミン（０μＭ、３μＭ、１０μＭ及び３０μＭ）、又は１０μＭのゲムシタビン（ＧＥＭ）、又は組合せで７２時間の間処置し、組織薄片生存能をＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ（２時間のインキュベーション）で測定した。処置群と対照群との間の組織薄片生存能における差異の有意性をスチューデントｔ試験で分析した。組織薄片は、ｐ＜０．０５と生存能が少なくとも３０パーセント阻害されたとの両方であったならば、感受性として定義される。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００５。
【図３４】ＬＨＲＨ−クルクミン及びゲムシタビンの組合せを示す図である。示されている異種移植片からの組織薄片を、ＬＨＲＨ−クルクミン（０μＭ、３μＭ、１０μＭ及び３０μＭ）、又は１０μＭのゲムシタビン（ＧＥＭ）、又は組合せで７２時間の間処置し、組織薄片生存能をＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ（２時間インキュベーション）で測定した。処置群と対照群との間の組織薄片生存能における差異の有意性をスチューデントｔ試験で分析した。組織薄片は、ｐ＜０．０５と生存能が少なくとも３０パーセント阻害されたとの両方であったならば、感受性として定義される。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００５。
【図３５】ＬＨＲＨ−Ｒ発現レベルの例示を示す図である。免疫組織化学染色を使用して、ＰＤＸ  ＴＭＡをＬＨＲＨ−Ｒ発現について染色した。染色を顕微鏡下で分析し、強度スコア方法でスコア化した、０：非染色性；１：弱い染色；２：中程度の染色；３：強い染色。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
[0093]本発明は、腫瘍成長に対する効果的な処置を提供する。黄体ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）をクルクミン（ＬＨＲＨ−クルクミン）にコンジュゲートすることは、水溶性を増強し（未変性の非コンジュゲートクルクミンと比較）、黄体ホルモン放出ホルモン受容体（ＬＨＲＨＲ）を発現する細胞にクルクミンを標的化し、静脈内投与を容易にし、クルクミンの抗がん活性を維持しながら、より低い投与量で生物学的利用能を増強する。クルクミンは、正常の（非がん性）細胞においてアポトーシスを誘発するように思われない。したがって、ＬＨＲＨ−クルクミンは、ＬＨＲＨＲ発現がん細胞、例えばヒト膵臓がん細胞及びＬＨＲＨ受容体を発現する他のがん細胞においてアポトーシスを標的化及び誘発すると信じられている。ＬＨＲＨデカペプチド（及びその類似体）は、標的細胞表面受容体に使用され得ることで、抗がん薬は、ＬＨＲＨ受容体を発現するがん細胞に特異的に送達され、該細胞としては、以下に限定されないが、膵臓、前立腺、乳房、精巣、子宮、卵巣及びメラノーマが挙げられる。
【００４１】
[0094]こうした標的化治療は、膵臓、前立腺、乳房、精巣、子宮及び卵巣の腫瘍など、ＬＨＲＨＲを発現する腫瘍の初期（例えば、原発性）、進行性（例えば、領域性）又は進行型（転移性）のステージを有する患者にとって大きな利益になる。ＬＨＲＨ−クルクミン又はＬＨＲＨ−クルクミン類似体は、がん細胞の膜受容体に結合し、該細胞によって内部移行され、がん細胞をアポトーシスに対してより感受性にする。したがって、本発明は、第２化学療法との組合せを含めて、ＬＨＲＨ−クルクミン及びＬＨＲＨ−クルクミン類似体コンジュゲートの組成物、並びに腫瘍の初期（例えば、原発性）、進行性（例えば、領域性）又は進行型（転移性）のステージ、又はがんの進行、転移若しくは再発生を防止、処置又は低減するための方法を提供する。
【００４２】
[0095]本明細書で使用される場合、「コンジュゲート」又は「融合体」という用語及びその文法的変化は、互いに別個であるとともに典型的には本来一緒に存在しない２つの分子的実体から由来する、得られる若しくは単離される、又は基づく若しくはモデルにする部分又は切片を含有する分子又はコンストラクトを意味する。すなわち、例えば、コンジュゲート又は融合体の１つの部分は、クルクミン又はクルクミン類似体を含む又はからなり、コンストラクトの第２部分は、ＬＨＲＨＲに対して結合親和性を有するＬＨＲＨ又はＬＨＲＨ類似体を含む又はからなり、ドメインの各々は構造的に別個である。２つの分子的実体の「コンジュゲート」である化合物は、直接的に又はリンカーを介してのいずれかで互いに共有結合された２つの実体（又は部分）を有することができる。コンジュゲート又は融合体の特別な非限定的な例は以下である：ＬＨＲＨ−クルクミン、ＬＨＲＨ−クルクミン類似体、ＬＨＲＨ類似体−クルクミン及びＬＨＲＨ類似体−クルクミン類似体。
【００４３】
[0096]ＬＨＲＨ−受容体（表示「ＬＨＲＨＲ」）などの「受容体」は、細胞上（例えば、膜受容体）又は細胞内に典型的に存在する。受容体は、細胞膜表面と結びつく又は細胞膜を横切ることができる。例えば、タンパク質受容体は、任意選択で細胞質若しくは細胞外又は両方である部分とともに、細胞膜を横切る膜貫通ドメインを有することができる。受容体は、そのため、細胞外、膜貫通又は細胞質の部分を含有する全長インタクトな未変性受容体、並びにトランケート形態又はその断片（例えば、細胞外、膜貫通若しくは細胞質の部分、又は受容体単独のサブ配列、或いは組合せで）を含む。
【００４４】
[0097]ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートは、水溶性及び生理食塩水可溶性であり、静脈内注射又は他の経路によって容易に投与することができる。ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートの水溶性は、クルクミン誘導体を水溶性にするという前の試みが特に成功されていたわけではないので、それ自体驚くべきである。室温での生理食塩水（ＰＢＳ）におけるコンジュゲートの可溶度は、５０μＬ当たり少なくとも最大１．２ｍｇ（＝２４ｇ／Ｌ）であるが、可溶度の上限は研究されていない。
【００４５】
[0098]クルクミン及びＬＨＲＨに加えて、各構成成分の類似体も、本発明によるコンジュゲートに使用することができる。
【００４６】
[0099]クルクミンの類似体は、様々な刊行物に記載されている。例えば、クルクミンの類似体は、「Ｃｕｒｃｕｍｉｎ：Ｆｒｏｍ  ａｎｃｉｅｎｔ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ｔｏ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ」、  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ２００８；６５：１６３１〜１６５２、及びその参照１６０、１６１、１６２、１６９及び１７１に記載されている。Ａｇｇａｒｗａｌら、「Ｃｕｒｃｕｍｉｎ（ｄｉｆｅｒｕｌｏｙｌｍｅｔｈａｎｅ）ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎｔｉａｐｏｐｔｏｔｉｃ  及び  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｇｅｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｉ  ｛ｋａｐｐａ｝  Ｂ  ｛ａｌｐｈａ｝  ｋｉｎａｓｅ  ａｎｄ  ＡＫＴ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ」、  Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２００６；６９（１）：１９５〜２０６；米国特許第７，３５５，０８１号；及び公開されたＰＣＴ出願  国際公開第２００８／０４５５３４号も参照されたい。
【００４７】
[00100]クルクミン類似体を開示している他の参照としては、以下が挙げられる：Ｎａｋａｇａｗａ−Ｇｏｔｏら、「Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｇｅｎｔｓ．Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ  ａｎｄ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｅｔａｒｙ  ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ−ｔａｘｏｉｄ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ａｓ  ｎｏｖｅｌ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｇｅｎｔｓ」、  Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２００７；１７：５２０４〜５２０９；Ｌｉｕ、Ｊ．；Ｊｉａｎｇ、Ｆ．、「Ｄｅｓｉｇｎ、ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、ａｎｄ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｃｕｒｃｕｍｉｎ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ  ａｓ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ」、  Ｚｈｏｎｇｇｕｏ  Ｙａｏｓｈｉ（Ｗｕｈａｎ、Ｃｈｉｎａ）２００５；８：５４３〜５４５；Ｒｉｅｋｓら、「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｃｕｒｃｕｍｉｎ／ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｃｕｒｃｕｍｉｎ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｆｏｒ  ｕｓｅ  ｉｎ  ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ、ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ａｎｄ  ｆｏｒ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ」、ＷＯ２００４／０３１１２；Ｒｉｅｋｓら、「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｕｒｃｕｍｉｎ  ｅｓｔｅｒｓ  ｆｏｒ  ｕｓｅ  ｉｎ  ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ、ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ａｎｄ  ｆｏｏｄ  ａｄｄｉｔｉｖｅｓ」、独国特許出願公開第１０２４５９８８Ａ１号；Ｓｃａｒａｍｕｚｚｉｎｏ、Ｇ．、「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｉｔｒａｔｅ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ａｂｌｅ  ｔｏ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｉｎ  ａ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｗａｙ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｕｓｅ  ｆｏｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ、ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ａｎｄ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ」、欧州特許第１３３６６０２号；及びＳｅｔｈｉ、Ｓ．Ｃ．；Ｒａｏ、Ｂ．Ｃ．Ｓ．、「Ｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｖａｎａｓｐａｔｉ」、  Ｉｎｄｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １９６４；２：２０８。
【００４８】
[00101]クルクミン分子構造の一部分は、クルクミンの生理的効果（デサチュラーゼ阻害）の少なくとも一部に不可欠であることが報告されている。したがって、クルクミン分子のその半分にコンジュゲートされているＬＨＲＨは、有効な類似体であり得る。Ｋａｗａｓｈｉｍａ  ら、「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒａｔ  ｌｉｖｅｒ  ｍｉｃｒｏｓｏｍａｌ  ｄｅｓａｔｕｒａｓｅｓ  ｂｙ  ｃｕｒｃｕｍｉｎ  ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」、  Ｂｉｏｓｃｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９９６；６０（１）：１０８〜１０を参照されたい。
【００４９】
[00102]ＬＨＲＨの類似体、アゴニスト及びアンタゴニストの両方は、当技術分野において知られており、いずれもが、本発明を実践する際に使用することができる。例えば、「Ｃａｎｃｅｒ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅｉｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｏｎ  ｔｕｍｏｒｓ」、  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ（１９９９）１４１：１〜１４を参照されたい。ＬＨＲＨのアンタゴニストとしては、例えば、アンチド、ブセレリン、酢酸ロイプロリド塩、［Ｄ−Ａｌａ６］−ＬＨＲＨ、［Ｄ−Ｌｙｓ６］−ＬＨＲＨ、［Ｄ−Ｔｒｐ６］−ＬＨＲＨ、［Ｇｌｎ８］−ＬＨＲＨ、［Ｈｉｓ（３−メチル）２］−ＬＨＲＨ、［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ａｌａ６］−ＬＨＲＨエチルアミド、［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｈｉｓ２、Ｄ−Ｔｒｐ６、Ｐｒｏ９］−ＬＨＲＨエチルアミド、［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨＲＨエチルアミド、及び［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｐｈｅ６］−ＬＨＲＨエチルアミドが挙げられる。
【００５０】
[00103]ＬＨＲＨ類似体の多くの例の代表は、以下の文献に記載されている：Ｓ．Ｓｅａｌｆｏｎら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｌｉｇａｎｄ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ」、  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、１８巻、１８０〜２０５ページ（１９９７）は、とりわけ、ＧｎＲＨデカペプチドにおける個々のアミノ酸の各々の明らかな役割を考察するとともに類似体において行われ得る置換の型に対する広範なガイダンスを示す概説書である。特に１８４〜１９１ページ、及び１９０ページの図８に示される模式的概要を参照されたい。概説書、Ｍ．Ｋａｒｔｅｎら、「Ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｎａｌｏｇ  ｄｅｓｉｇｎ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｔｏｗａｒｄ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｇｏｎｉｓｔｓ  ａｎｄ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ：ｒａｔｉｏｎａｌｅ  ａｎｄ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ」、  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、７巻、４４〜６６ページ（１９８６）は、２０００種を超えるＧｎＲＨ類似体を記載又は引用した（４４ページ、１段落）。別の概説は、ＧｎＲＨ受容体構造の概説及び受容体発現の調節を提供する、Ｓ．Ｓｅａｌｆｏｎら、「Ｔｈｅ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｈｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｃｏｎｔｒｏｌ」、  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｕｐｄａｔｅ、１巻、２１６〜２３０ページ（１９９５）である。この概説は、数千のＧｎＲＨ類似体が合成及び研究されたことを記述している（２１６ページ）。
【００５１】
[00104]別の概説論文は、多数のＧｎＲＨアゴニスト、及びアゴニストを作製するために使用することができる修飾の型の例を考察する概説である、Ｍ．Ｆｉｌｉｃｏｒｉ、「Ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｇｏｎｉｓｔｓ：ａ  ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｕｓｅ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ」、Ｄｒｕｇｓ、４８巻、４１〜５８ページ（１９９４）である。記述されている例の中に、未変性ＧｎＲＨ配列の第１０アミノ酸（グリシン）をエチルアミド残基と置き換えること；又は第６アミノ酸残基（グリシン）をＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｌｅｕ若しくはＤ−Ｔｒｐなど、他のより親油性のＤ−アミノ酸と置換すること；又は６位における、より多くの複合アミノ酸、Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）、Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）若しくはＤ−Ｎａｌ（２）などの組込み；又は１０位におけるａｚａ−Ｇｌｙなど；又は７位におけるＮ−Ｍｅ−Ｌｅｕ修飾（４２及び４３ページを参照されたい）がある。これらの修飾は、未変性ＧｎＲＨ分子よりも安定である、より疎水性の化合物をもたらすとともに、したがって、より高い受容体親和性及びインビトロ効力を有すると言われていた。加えて、より疎水性のＧｎＲＨアゴニストは、酵素分解により耐性であるとともに血漿タンパク質及び体組織により強く結合し、したがって、腎排泄を減少させ、半減期を増加させると言われていた。この概説は、投与の様々な経路及び送達系も考察している。
【００５２】
[00105]またさらに、Ｐ．Ｃｏｎｎら、「Ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ」、  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３２４巻、９３〜１０３ページ（１９９１）は、９５ページの表１に示されている通り、類似体デカペプチル、リュープロリド、ブセレリン、ナファレリン、デスロレリン及びヒストレリン；並びに９９ページの追加の類似体を含めて、いくつかのＧｎＲＨ類似体を記載している。
【００５３】
[00106]Ａ．Ｎｅｃｈｕｓｈｔａｎら、「Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ａｒｅ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｎｅｗ  ＧｎＲＨ−ＰＥ６６  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｔｏｘｉｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅｓ」、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２９８巻、１１５９７〜１１６０３ページ（１９９７）は、トリプトファンが第６のアミノ酸としてグリシンを置き換えたＧｎＲＨ類似体を開示している。Ｇ．Ｅｍｏｎｓら、「Ｇｒｏｗｔｈ−ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｏｆ  ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｏｎ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ」、  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、８巻、３５５〜３６２ページ（１９９７）は、２つのヒト卵巣がん細胞株及び２つのヒト子宮内膜がん細胞株のインビトロ増殖がＬＨＲＨアゴニストトリプトレリンによって阻害されたこと；並びに卵巣及び子宮内膜のがん細胞株のインビトロ増殖がＬＨＲＨアンタゴニストセトロレリクスによって阻害されたことも開示している。前立腺がん細胞株に対するＬＨＲＨ類似体の抗増殖効果、及び可逆的方式において卵巣又は精巣の機能によって阻害されるＬＨＲＨアゴニストの慢性投与が報告されている。
【００５４】
[00107]Ｍ．Ｋｏｖａｃｓら、「Ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ａ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｎａｌｏｇ  ｏｆ  ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ」、  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９４巻、１４２０〜１４２５ページ（１９９７）は、下垂体における性腺刺激細胞を可逆的に（即ち、一時的に）阻害するための、担体アゴニスト［Ｄ−Ｌｙｓ６］ＬＨＲＨにコンジュゲートされているドキソルビシン誘導体を開示している。このＬＨＲＨ類似体−毒素コンジュゲートは、ラットにおいて前立腺腫瘍の成長を阻害することも報告された。
【００５５】
[00108]Ｊ．Ｊａｎｏｖｉｃｋら、「Ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｐｒｏｖｏｋｅｓ  ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｉｃｒｏａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ：ａｎ  ｅａｒｌｙ  ｅｖｅｎｔ  ｉｎ  ｓｅｖｅｎ−ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ」、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１３７巻、３６０２〜３６０５ページ（１９９６）は、アゴニストＤ−Ｌｙｓ６−ＧｎＲＨ−及びアンタゴニストＤ−ｐＧｌｕ１−Ｄ−Ｐｈｅ２−Ｄ−Ｔｒｐ３−Ｄ−Ｌｙｓ６−ＧｎＲＨを使用することを開示している。
【００５６】
[00109]Ｃ．Ａｌｂａｎｏら、「Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｄｏｓｅｓ  ｏｆ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ｃｅｔｒｏｒｅｌｉｘ  ｄｕｒｉｎｇ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｏｖａｒｉａｎ  ｈｙｐｅｒｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ」、  Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ、６７巻、９１７〜９２２ページ（１９９７）は、生殖技術の補助のために卵巣過刺激の制御を受ける患者における早期ＬＨサージを防止するための最小有効用量を決定するためにＧｎＲＨアンタゴニストセトロレリクスを用いる研究を報告している。
【００５７】
[00110]Ｌ．Ｍａｃｌｅｌｌａｎら、「Ｓｕｐｅｒｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｖａｒｉａｎ  ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｗｉｔｈ  ＦＳＨ、ｏｏｃｙｔｅ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ、ａｎｄ  ｅｍｂｒｙｏ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  Ｚｅｂｕ（Ｂｏｓ  ｉｎｄｉｃｕｓ）ｃａｌｖｅｓ：Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ａ  ＧｎＲＨ  Ａｇｏｎｉｓｔ  ｏｒ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ」、  Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ、４９巻、１３１７〜２９ページ（１９９８）は、仔ウシに投与されたＧｎＲＨアゴニスト（デスロレリン）又はＧｎＲＨアンタゴニスト（セトロレリクス）を用いる研究を報告している。
【００５８】
[00111]Ａ．Ｑａｙｕｍら、「Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｉｎ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ａｒｅ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔｕｍｏｕｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ」、  Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、６２巻、９６〜９９ページ（１９９０）は、前立腺がんに対するＧｎＲＨ類似体ブセレリンの使用を報告している。
【００５９】
[00112]Ａ．Ｃｏｒｎｅａら、「Ｒｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇｑ／１１α  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｅ  ｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ａ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｇｏｎｉｓｔ」、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１３９巻、３９７〜４０２ページ（１９９８）は、代謝的に安定なＧｎＲＨアゴニストであるブセレリンの効果を報告している。
【００６０】
[00113]前述に加えて、（ｉ）欧州特許第０２７７８２９号；（ｉｉ）Ｇｅｎａｒｏ  Ｇ、Ｌａｃｅｒｄａ  Ｎｅｔｏ  ＪＣ、Ｒｏｓａ  ｅ  Ｓｉｌｖａ  ＡＡ、「ＬＨ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ（ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）ｔｏ  ａｎ  ＬＨＲＨ  ａｇｏｎｉｓｔ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ｔｏ  ｄｏｍｅｓｔｉｃ  ｍａｌｅ  ｃａｔｓ」、  Ａｒｃｈ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２００３；１１１（３）：２５４〜８；（ｉｉｉ）Ｈｏｒｖａｔｈ  ＪＥ、Ｂａｊｏ  ＡＭ、Ｓｃｈａｌｌｙ  ＡＶ、Ｋｏｖａｃｓ  Ｍ、Ｈｅｒｂｅｒｔ  Ｆ、Ｇｒｏｏｔ  Ｋ、「Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ（ＬＨＲＨ）ａｇｏｎｉｓｔ  Ｄｅｃａｐｅｐｔｙｌ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ＬＨＲＨ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ｃｅｔｒｏｒｅｌｉｘ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  ＬＨＲＨ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｍＲＮＡ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｔｓ」、  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２００２；９９（２３）：１５０４８〜５３；（ｉｖ）Ｗｕ  ＴＪ、Ｍａｎｉ  ＳＫ、Ｇｌｕｃｋｓｍａｎ  ＭＪ、Ｒｏｂｅｒｔｓ  ＪＬ、「Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ（ＬＨＲＨ）ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ＧＴ１−７  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｉｔｓ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ、ＬＨＲＨ−（１−５）」、  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ２００５；１４６（１）：２８０〜６。
【００６１】
[00114]以下のＬＨＲＨ類似体は、例えばＡｌｄｒｉｃｈから商業的に利用可能である：黄体ホルモン放出ホルモンヒトアセテート塩；黄体ホルモン放出ホルモンサケ；［Ｄ−Ａｌａ６、Ｎ−Ｍｅ−Ｌｅｕ７］−ＬＨ−ＲＨ；［Ｄ−Ａｌａ６］−ＬＨ−ＲＨアセテート塩水和物；［Ｄ−Ｈｉｓ（ベンジル）６］−ＬＨ−ＲＨ断片３−９エチルアミドトリフルオロアセテート塩；［Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨ−ＲＨ断片１−７；［Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨ−ＲＨ断片２−９；［Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨ−ＲＨ断片４−９エチルアミドトリフルオロアセテート塩；［Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨ−ＲＨ断片５−９エチルアミドトリフルオロアセテート塩；［Ｄ−Ｌｙｓ６］−ＬＨ−ＲＨ；［Ｄ−ｐＧｌｕ１、Ｄ−Ｐｈｅ２、Ｄ−Ｔｒｐ３．６］−ＬＨ−ＲＨ；［Ｄ−Ｓｅｒ４］−ＬＨ−ＲＨ；［Ｄ−Ｔｒｐ６］−ＬＨ−ＲＨ；［Ｄ−Ｔｒｐ６］−ＬＨ−ＲＨ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ２；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ａｌａ６］−ＬＨ−ＲＨエチルアミドアセテート塩水和物；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６］−ＬＨ−ＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｈｉｓ２、Ｄ−Ｔｒｐ６、Ｐｒｏ９］−ＬＨ−ＲＨエチルアミドトリフルオロアセテート塩；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｐｈｅ６］−ＬＨ−ＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｓｅｒ４、Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）６、Ｐｒｏ９］−ＬＨ−ＲＨエチルアミドアセテート塩；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｓｅｒ４、Ｄ−Ｔｒｐ６、Ｐｒｏ９］−ＬＨ−ＲＨエチルアミドトリフルオロアセテート塩；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｔｒｐ６、Ｄ−Ｌｅｕ７、Ｐｒｏ９］−ＬＨ−ＲＨエチルアミドトリフルオロアセテート塩；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｔｒｐ６］−ＬＨ−ＲＨエチルアミド；［ｄｅｓ−Ｇｌｙ１０、Ｄ−Ｔｙｒ５、Ｄ−Ｔｒｐ６、Ｐｒｏ９］−ＬＨ−ＲＨエチルアミドトリフルオロアセテート塩；［ｄｅｓ−ｐＧｌｕ１］−ＬＨ−ＲＨ；［Ｈｉｓ（３−メチル）２］−ＬＨ−ＲＨ；［Ｈｙｐ９］−ＬＨ−ＲＨ；ホルミル−［Ｄ−Ｔｒｐ６］−ＬＨ−ＲＨ断片２−１０；ＬＨ−ＲＨ断片１−２；ＬＨ−ＲＨ断片１−４；黄体ホルモン放出ホルモン断片４−１０；黄体ホルモン放出ホルモン断片７−１０ジヒドロクロリド；ブセレリン；酢酸ロイプロリド塩；［Ｄ−Ｔｒｐ６］−ＬＨＲＨ断片、１−６；及びアンチド（Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｌａ）。
【００６２】
[00115]本発明は、そのため、修飾及び変動、例えば置換、付加又は欠失を含む。したがって、ペプチド配列を含むコンジュゲート又は融合体は、任意の数の保存的又は非保存的なアミノ酸置換を組み込むことができるが、但し、こうした置換が活性（結合）を破壊しない限りである。したがって、例えば、修飾ＬＨＲＨは、少なくとも部分的なＬＨＲＨ−受容体（ＬＨＲＨＲ）結合活性を保持することができる。
【００６３】
[00116]「保存的置換」は、生物学的、化学的又は構造的に同様の残基による１つのアミノ酸の置き換えである。生物学的に同様とは、置換が生物学的活性、例えば、結合活性と適合性であることを意味する。構造的に同様とは、アミノ酸が、アラニン、グリシン及びセリンなど同様の長さを有する若しくは同様のサイズを有する側鎖を有すること、又は第１、第２若しくは追加のドメインの構造が維持されることを意味する。化学的相似点は、残基が同じ電荷を有する又は親水性若しくは疎水性の両方であることを意味する。特別な例としては、別の疎水性残基の代わりにイソロイシン、バリン、ロイシン若しくはメチオニンなど１個の疎水性残基の置換、又は別の極性残基の代わりに１個の極性残基の置換、例えばリジンの代わりにアルギニン、アスパラギン酸の代わりにグルタミン酸、若しくはアスパラギンの代わりにグルタミン、スレオニンの代わりにセリンなどの置換が挙げられる。修飾又は変動が活性、例えば結合活性を有するかどうかを決定するために、ルーチン的アッセイが使用され得る。
【００６４】
[00117]「アミノ酸配列」、「タンパク質」、「ポリペプチド」及び「ペプチド」という用語は、２つ以上のアミノ酸、又はアミド結合若しくは同等物によって共有結合的に連結される「残基」を指すために、本明細書において相互交換可能に使用される。アミノ酸配列は、例えば、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、二官能性マレイミド又はＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）で形成されるものを含めて、非天然及び非アミド化学結合によって連結することができる。非アミド結合としては、例えば、ケトメチレン、アミノメチレン、オレフィン、エーテル及びチオエーテルなどが挙げられる（例えば、Ｓｐａｔｏｌａ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、７巻、２６７〜３５７ページ（１９８３）、「Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｂａｃｋｂｏｎｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｃｋｅｒ、ＮＹを参照されたい）。
【００６５】
[00118]コンジュゲート及び融合体は、Ｌ−アミノ酸配列、Ｄ−アミノ酸配列、並びにＬ−アミノ酸及びＤ−アミノ酸の混合物を有するアミノ酸配列を含む。第１及び第２のドメインのアミノ酸配列は、別個の部分（例えば、第３、第４、第５、第６、第７などのドメイン）にコンジュゲートされている直鎖状又は環構造であり、分子内又は分子間にジスルフィド結合を形成し、その上、同じ若しくは異なるアミノ酸配列、又は他の分子とともに、より高い次数の多量体若しくはオリゴマーを形成することができる。
【００６６】
[00119]コンジュゲート及び融合体の例証的な長さとしては、約５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜５０、５０〜１００個、又はそれ以上のアミノ酸残基が挙げられる。特別な実施形態において、コンジュゲート又は融合体は、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９又は４０個のアミノ酸残基を有する。
【００６７】
[00120]「同一性」及び「類似性」という用語並びにその文法的変化は、２つ以上の参照実体が同じであることを意味する。したがって、２つのアミノ酸配列が同一である場合、それらは同じアミノ酸配列を有する。「同一性の部域、領域又はドメイン」は、２つ以上の参照実体の一部分が同じであることを意味する。したがって、２つのアミノ酸配列が、１つ又は複数の配列領域にわたって同一又は相同である場合、それらは、これらの領域において同一性を共有する。
【００６８】
[00121]２つの配列間の同一性の程度は、当技術分野において知られているコンピュータプログラム及び数学アルゴリズムを使用して確かめることができる。パーセント配列同一性（相同性）を算出するようなアルゴリズムは、一般に、比較領域にわたって配列ギャップ及びミスマッチを説明する。例えば、ＢＬＡＳＴ（例えば、ＢＬＡＳＴ  ２．０）検索アルゴリズム（例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３（１９９０）を参照されたい、ＮＣＢＩを介して公的に利用可能）は、以下の通りの例証的な検索パラメータを有する：ミスマッチ−２；ギャップオープン５；ギャップ伸長２。ポリペプチド配列比較のため、ＢＬＡＳＴＰアルゴリズムは、ＰＡＭ１００、ＰＡＭ２５０、ＢＬＯＳＵＭ６２又はＢＬＯＳＵＭ５０などのスコアリングマトリックスとの組合せで典型的に使用される。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２及びＦＡＳＴＡ３）及びＳＳＥＡＲＣＨ配列比較プログラムも、同一性の程度を定量化するために使用される（Ｐｅａｒｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：２４４４（１９８８）；Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．１３２：１８５（２０００）；及びＳｍｉｔｈら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９５（１９８１））。Ｄｅｌａｕｎａｙベースの位相マッピングを使用してタンパク質構造上の相似点を定量化するためのプログラムも開発された（Ｂｏｓｔｉｃｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．３０４：３２０（２００３））。
【００６９】
[0100]個々の残基及びコンジュゲート／融合体は、共有結合又は非共有結合によって形成することができる。共有結合の非限定的な例は、例えばグルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、二官能性マレイミド、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）又はＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）を含む、アミド結合、非天然及び非アミド化学結合である。アミド結合の代替の連結基としては、例えば、ケトメチレン（例えば、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−には−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−）、アミノメチレン（ＣＨ２−ＮＨ）、エチレン、オレフィン（ＣＨ＝ＣＨ）、エーテル（ＣＨ２−Ｏ）、チオエーテル（ＣＨ２−Ｓ）、テトラゾール（ＣＮ４−）、チアゾール、レトロアミド、チオアミド又はエステルが挙げられる（例えば、Ｓｐａｔｏｌａ（１９８３）、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、７巻、２６７〜３５７ページ、「Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｂａｃｋｂｏｎｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｃｋｅｒ、ＮＹを参照されたい）。
【００７０】
[0101]２つ以上の分子的実体は、直接的に接合すること、又は分子的実体間に位置されるヒンジ、スペーサー若しくはリンカーなど、介在領域によって分離することができる。一実施形態において、２つ以上の分子的実体は、アミノ酸、ペプチド又は非ペプチドヒンジ、スペーサー若しくはリンカーによって接合される。ペプチドヒンジ、スペーサー又はリンカーの配列は、任意の長さであってよいが、典型的には約１〜５、５〜１０、１０〜１５、１０〜２０、２０〜２５又は２５〜３０個のアミノ酸残基を範囲とする。特別な実施形態において、第１と第２のドメインとの間に位置されたペプチドヒンジ、スペーサー又はリンカーは、１〜２５個のＬ−若しくはＤ−アミノ酸残基、又は１〜６個のＬ−若しくはＤ−アミノ酸残基である。２つ以上の分子的実体間に位置された配列に含まれる特別なアミノ酸残基としては、Ｃ、Ａ、Ｓ又はＧアミノ酸残基の１つ又は複数が挙げられる。２つ以上の分子的実体間に位置されたペプチドの具体的な非限定的例は、以下の配列を含む又は以下が挙げられる：ＧＳＧＧＳ、ＡＳＡＡＳ若しくはＣＣＣＣＣＣ。
【００７１】
[0102]別の実施形態において、２つ以上の分子的実体は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６などとして表示することができる炭素鎖によって接合され、ここで、添字は鎖中の炭素の数を表示している。多炭素鎖は、カルボン酸（例えば、ジカルボン酸）、例えばグルタル酸、コハク酸及びアジピン酸を含む。
【００７２】
[0103]アミノ酸及びペプチドの誘導体は、２つ以上の分子的実体間に位置することができる。アミノ酸誘導体の具体的な非限定的例は、リジン誘導体、又は６個の炭素リンカー、例えばα−アミノ−カプロン酸である。
【００７３】
[0104]コンジュゲート及び融合体は、典型的に以下の３つの構造群である非天然構造構成成分の任意の組合せを含有することができる：ａ）天然アミド結合（「ペプチド結合」）連結以外の残基連結基；ｂ）自然発生アミノ酸残基の代わりに非天然残基；又はｃ）二次構造模倣を誘発する、即ち、二次構造を誘発若しくは安定化する残基。コンジュゲート及び融合体は、分子のアミノ末端及びカルボキシ末端の間の端末間アミド結合又は分子内若しくは分子間のジスルフィド結合（単数又は複数）などの環構造を含む。コンジュゲート及び融合体は、インビトロ又はインビボで修飾することで、例えば、翻訳後修飾することで、例えば、糖又は炭水化物残基、ホスフェート基、脂肪酸、脂質などを含むことができる。
【００７４】
[0105]アミノ酸配列、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド及びペプチド模倣物は、当技術分野において知られている方法を使用して、生成及び単離することができる。ペプチドは、当技術分野において知られている化学的方法を使用して、全体又は一部、合成することができる（例えば、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ（１９８０）．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．２１５；Ｈｏｒｎ（１９８０）；及びＢａｎｇａ、Ａ．Ｋ．、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ、Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ａｎｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９５）Ｔｅｃｈｎｏｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ、ＰＡを参照されたい）。ペプチド合成は、様々な固相技法を使用して行うことができ（例えば、Ｒｏｂｅｒｇｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６９：２０２（１９９５）；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２８９：３（１９９７）を参照されたい）、自動化合成は、例えば、ＡＢＩ  ４３１Ａ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して、製造者の指示に従って達成することができる。ペプチド及びペプチド模倣物は、コンビナトリアル方法論を使用して合成することもできる。模倣物を組み込む合成残基及びポリペプチドは、当技術分野において知られている様々な手順及び方法論を使用して合成することができる（例えば、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｖｅ  Ｖｏｌｕｍｅｓ、Ｇｉｌｍａｎら（編集）Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．、ＮＹを参照されたい）。修飾ペプチドは、化学的修飾方法によって生成することができる（例えば、Ｂｅｌｏｕｓｏｖ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３４４０（１９９７）；Ｆｒｅｎｋｅｌ、Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１９：３７３（１９９５）；及びＢｌｏｍｍｅｒｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３３：７８８６（１９９４）を参照されたい）。
【００７５】
[0106]コンジュゲート及び融合体は、単離及び精製の形態を含む。「単離された」という用語は、発明組成物のモディファイヤーとして使用される場合、組成物が人間の手によって作製されること、又は自然発生インビボ環境から実質的に完全に若しくは少なくとも部分的に分離されることを意味する。一般に、単離組成物は、それが本来正常に結びつく１種又は複数の材料、例えば、１種又は複数のタンパク質、核酸、脂質、炭水化物、細胞膜が実質的にない。「単離される」という用語は、多量体／オリゴマー、変異体、修飾若しくは誘導体化形態など組成物の代替の物理的形態、又は人間の手によって生成される宿主細胞において発現される形態を除外しない。「単離された」という用語は、いずれか１つが人間の手によって生成される組合せがある形態（例えば、医薬製剤、並びに互い又は他の組成物とのコンジュゲート及び融合体の組合せ）も除外しない。
【００７６】
[0107]「単離」組成物は、それが本来典型的に結びつく材料の一部、相当数、大部分又は全てがない場合にも、「精製する」ことができる。したがって、実質的に純粋でもある単離コンジュゲート又は融合体は、例えば、タンパク質ライブラリーのタンパク質又はゲノム若しくはｃＤＮＡライブラリーにおける核酸など、何百万もの他の配列に存在するポリペプチド又はポリヌクレオチドを含まない。「精製」組成物は、１個又は複数の他の分子と組み合わせることができる。
【００７７】
[0108]本発明によると、組合せ組成物におけるコンジュゲート又は融合体混合物が提供される。一実施形態において、混合物は、１つ又は複数のコンジュゲート又は融合体及び抗細胞増殖、抗腫瘍、抗がん又は抗新生物の処置又は薬剤を含む。代表的な非限定的組合せとしては、ゲムシタビン、例えばＬＨＲＨ−クルクミン及びゲムシタビンが挙げられる。別の実施形態において、混合物は、薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む。組合せの他の非限定的な例は、抗細胞増殖、抗腫瘍、抗がん又は抗新生物処置又は薬剤の１つ又は複数との、及び薬学的に許容される担体又は賦形剤における、１つ又は複数のコンジュゲート又は融合体が挙げられる。
【００７８】
[0109]本発明のコンジュゲート及び融合体は、溶解、細胞死又はアポトーシスに対して細胞を標的化するために使用することができる。こうした細胞は、選択的に標的化することができる。例えば受容体を発現する細胞は、コンジュゲート／融合体によって標的化され、それによって、受容体を検出可能に発現しない又はさほど発現しない細胞と比較して優先的に死滅され得る。
【００７９】
[0110]本発明によると、細胞の増殖を低減又は阻害する方法、及び細胞増殖を低減又は阻害する方法が提供される。一実施形態において、方法は、細胞をコンジュゲート又は融合体と、細胞の増殖を低減又は阻害するのに十分な量で接触させることを含む。別の実施形態において、方法は、細胞をコンジュゲート又は融合体と、細胞増殖を低減又は阻害するのに十分な量で接触させることを含む。
【００８０】
[0111]過剰増殖性細胞の増殖を低減又は阻害する方法、及び過剰増殖中の細胞の増殖を低減又は阻害する方法も提供される。一実施形態において、方法は、過剰増殖性細胞又は過剰増殖中の細胞をコンジュゲート又は融合体と、増殖を低減又は阻害するのに十分な量で接触させることを含む。
【００８１】
[0112]さらに提供されるのは、非転移性又は転移性の新生物性、がん、腫瘍及び悪性の細胞の増殖を低減又は阻害する方法である。一実施形態において、方法は、新生物性、がん、腫瘍又は悪性の細胞をコンジュゲート又は融合体と、細胞の増殖を低減又は阻害するのに十分な量で接触させることを含む。
【００８２】
[0113]追加的に提供されるのは、受容体、例えばＬＨＲＨＲを発現する細胞（例えば、過剰増殖中の細胞）の増殖を選択的に低減又は阻害する方法である。一実施形態において、方法は、該細胞をコンジュゲート又は融合体と、細胞（例えば、過剰増殖中の細胞）の増殖を低減又は阻害するのに十分な量で接触させることを含み、ここで、コンジュゲート又は融合体は、該細胞によって発現される受容体、例えばＬＨＲＨＲに結合する。
【００８３】
[0114]「接触させること」という用語は、２つ以上の実体間（例えば、コンジュゲート又は融合体と細胞との間）の直接的又は間接的な結合又は相互作用を意味する。接触させることは、本明細書で使用される場合、溶液中、固相中、インビトロ、エクスビボ、細胞中及びインビボを含む。インビボで接触させることは、投与すること又は投与と称することができる。
【００８４】
[0115]標的細胞は、ＬＨＲＨ及び／又はＬＨＲＨ類似体に結合する受容体を発現する細胞を含む。例としては、黄体ホルモン放出ホルモン受容体が挙げられる。
【００８５】
[0116]本発明のコンジュゲート及び融合体並びに方法は、望ましくない又は異常な細胞増殖及び過剰増殖性障害を処置することにも適用可能である。したがって、本発明によると、望ましくない又は異常な細胞増殖及び過剰増殖性障害を処置する方法が提供される。一実施形態において、方法は、望ましくない又は異常な細胞増殖又は過剰増殖性障害を処置するのに十分なコンジュゲート又は融合体の量を対象（処置を必要とする）に投与することを含む。
【００８６】
[0117]「過剰増殖性障害」という用語は、任意の望ましくない又は異常な細胞の生存（例えば、プログラム細胞死又はアポトーシスを受けないこと）、成長又は増殖を指す。こうした障害は、良性過形成、非転移性及び転移性の新生物、がん、腫瘍及び悪性腫瘍を含む。望ましくない又は異常な細胞増殖及び過剰増殖性障害は、対象における任意の細胞、組織、器官に影響し得る。望ましくない又は異常な細胞増殖及び過剰増殖性障害は、対象において、局所に、領域に又は全身に存在する。過剰増殖性障害は、以下に限定されないが、乳房、肺（例えば、小細胞又は非小細胞）、甲状腺、頭頸部、脳、鼻咽腔、咽頭、鼻又は副鼻腔、リンパ系、副腎、下垂体、甲状腺、リンパ、胃腸（口、食道、胃、十二指腸、回腸、空腸（小腸）、結腸、直腸）、泌尿生殖路（子宮、卵巣、腟頸部、子宮内膜、ファロピウス管、膀胱、精巣、陰茎、前立腺）、腎臓、膵臓、肝臓、骨、骨髄、リンパ、血液、筋肉、皮膚及び幹細胞を含めて、多数の組織及び器官から生じることがあり、他の続発の部位、領域又は位置に転移することがある又はない。
【００８７】
[0118]本発明のコンジュゲート及び融合体並びに方法は、任意の細胞、器官又は組織起源の転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物にも適用可能である。こうした障害は、実質的に任意の細胞又は組織型、例えば、癌腫、肉腫、メラノーマ、神経系の及び細網内皮系又は造血系の新生物障害（例えば、骨髄腫、リンパ腫又は白血病）に影響し得る。
【００８８】
[0119]「新生物」及び「腫瘍」という用語は、成長、増殖又は生存が、正常の対応細胞の成長、増殖又は生存よりも大きい細胞又は細胞の集団、例えば細胞増殖性又は分化性の障害を指す。腫瘍は、別個の塊又は成長を形成した新生物である。「がん」又は「悪性腫瘍」は、隣接する空隙、組織又は器官に侵入し得る新生物又は腫瘍を指す。「転移」は、対象内で、原発部位から１つ又は複数の続発の部位、位置又は領域に播種又は伝播した新生物、腫瘍、がん又は悪性腫瘍を指し、ここで、部位、位置又は領域は、原発の腫瘍又はがんと別個である。
【００８９】
[0120]新生物性、腫瘍、がん及び悪性細胞（転移性又は非転移性）は、休眠又は残留の新生物性、腫瘍、がん及び悪性細胞を含む。こうした細胞は、分裂していない（Ｇ０〜Ｇ１停止）残腫瘍細胞から典型的になる。これらの細胞は、原発部位において、或いは播種性の新生物性、腫瘍、がん若しくは悪性細胞として又は微小残存病変として存続し得る。これらの休眠の新生物、腫瘍、がん又は悪性細胞は、依然として非症候性であるが、一旦これらの細胞が増殖すると重篤な症状及び死亡を発症することがある。発明のコンジュゲート及び融合体並びに方法が使用されることで、休眠の新生物、腫瘍、がん又は悪性細胞の増殖を低減又は阻害し、このことが、次に、腫瘍若しくはがんの再発、又は腫瘍若しくはがんの転移若しくは進行を阻害又は低減することができる。
【００９０】
[0121]本発明によると、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物を有する対象を処置する方法が提供される。一実施形態において、方法は、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物を処置する（例えば、増殖を低減又は阻害する）のに十分なコンジュゲート又は融合体の量を、対象（処置を必要とする）に投与することを含む。
【００９１】
[0122]転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物は、任意のステージ、例えば、初期又は進行型、例えばステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ又はＶの腫瘍であり得る。転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物は、以前の処置を受けている、又は安定されている（非進行）若しくは寛解中であり得る。
【００９２】
[0123]転移の観点から、発明コンジュゲート、融合体及び方法が使用されることで、他の部位への原発腫瘍若しくはがんの転移、又は原発腫瘍若しくはがんから遠位の他の部位での転移性の腫瘍若しくはがんの形成若しくは樹立を低減又は阻害し、それによって、腫瘍若しくはがんの再発又は腫瘍若しくはがんの進行を阻害又は低減することができる。したがって、本発明のコンジュゲート、融合体、方法は、とりわけ、１）転移（例えば、播種性腫瘍細胞、ＤＴＣ）を潜在的に又は本当に発症する腫瘍又はがん細胞の成長、増殖、移動性又は侵入性を低減又は阻害すること；２）原発の腫瘍又はがんから、原発の腫瘍又はがんと別個である１つ又は複数の他の部位、位置又は領域に生じる転移の形成又は樹立を低減又は阻害すること；３）転移が形成した又は樹立された後、原発の腫瘍又はがんと別個である１つ又は複数の他の部位、位置又は領域での転移の成長又は増殖を低減又は阻害すること；及び４）転移が形成又は樹立された後、追加転移の形成又は樹立を低減又は阻害することを含む。
【００９３】
[0124]転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物の細胞は、「固体」細胞塊に凝集される又は分散若しくは拡散されることがある。「固体」腫瘍は、典型的に一緒に凝集し、塊を形成するがん、新生物又は転移を指す。具体的な非限定的例としては、内蔵腫瘍、例えばメラノーマ、乳房、膵臓、子宮及び卵巣のがん、精上皮腫を含めた精巣がん、胃又は結腸のがん、肝細胞腫、副腎、腎臓及び膀胱の癌腫、肺、頭頸部のがん及び脳腫瘍／がんが挙げられる。
【００９４】
[0125]上皮又は内分泌組織の悪性腫瘍を指す癌腫としては、呼吸系癌腫、胃腸管系癌腫、尿生殖器系癌腫、精巣癌腫、乳癌腫、前立腺癌腫、内分泌系癌腫及びメラノーマが挙げられる。例証的な癌腫としては、子宮、頸部、肺、前立腺、乳房、頭頸部、結腸、膵臓、精巣、副腎、腎臓、食道、胃、肝臓及び卵巣から形成するものが挙げられる。該用語は、例えば癌性及び肉腫性の組織で構成される悪性の腫瘍を含む癌肉腫も含む。腺癌腫は、腺組織の癌腫、又は腫瘍が腺様構造を形成する癌腫を含む。
【００９５】
[0126]肉腫は、間葉系細胞起源の悪性の腫瘍を指す。例証的な肉腫としては、例えば、リンパ肉腫、脂質肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫及び線維肉腫が挙げられる。
【００９６】
[0127]神経系新生物としては、神経膠腫、神経膠芽腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、星状細胞腫及びオリゴデンドロサイトが挙げられる。
【００９７】
[0128]「液体腫瘍」は、分散される又は本来拡散性である新生物を指し、その理由は、それらは固体塊を典型的に形成しないからである。特別な例としては、細網内皮系又は造血系の新生物、例えばリンパ腫、骨髄腫及び白血病が挙げられる。白血病の非限定的な例としては、急性及び慢性のリンパ芽球性、骨髄芽球性及び多発性の骨髄腫が挙げられる。典型的に、こうした疾患は、低分化型急性白血病、例えば、赤芽球性白血病及び急性巨核芽球性白血病から生じる。具体的な骨髄障害としては、以下に限定されないが、急性前骨髄性白血病（ＡＰＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）が挙げられる。リンパ系悪性腫瘍としては、以下に限定されないが、Ｂ系統ＡＬＬ及びＴ系統ＡＬＬを含む急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＬＬ）及びワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）が挙げられる。具体的な悪性リンパ腫としては、非ホジキンリンパ腫及び変異体、末梢Ｔ細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、大顆粒リンパ球性白血病（ＬＧＦ）、ホジキン病及びリード・シュテルンベルグ病が挙げられる。
【００９８】
[0129]抗細胞増殖の活性又は効果を有する任意の組成物、処置、プロトコール、治療又はレジメンは、コンジュゲート／融合体と組み合わせること、又は本発明の方法における組合せに使用することができる。本発明のコンジュゲート、融合体及び方法は、そのため、抗細胞増殖、抗腫瘍、抗がん、抗新生物及び抗転移の処置、プロトコール及び治療を含み、該処置、プロトコール及び治療は、インビトロ又はインビボにおける、腫瘍、がん、悪性物又は新生物の成長、進行、転移、増殖若しくは生存、又は悪化などの過剰増殖性障害を阻害、減少、減速、緩徐、低減又は防止する任意の他の組成物、処置、プロトコール又は治療的レジメンを含む。抗細胞増殖（例えば、腫瘍）治療の特別な非限定的な例としては、化学療法、免疫治療、放射線治療（イオン化又は化学的）、局所熱（高体温）治療、外科的切除及びワクチン接種が挙げられる。コンジュゲート又は融合体は、抗細胞増殖、抗新生物、抗腫瘍、抗がん、抗転移又は免疫増強の処置又は治療の投与より前に、実質的に同時に、又は続いて投与することができる。コンジュゲート又は融合体は、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物に対する、抗細胞増殖、抗新生物、抗腫瘍、抗がん、抗転移又は免疫増強の処置又は治療との組合せ組成物として投与することができる。
【００９９】
[0130]抗細胞増殖、抗新生物、抗腫瘍、抗がん及び抗転移の組成物、治療、プロトコール又は処置は、細胞周期進行又は細胞増殖防止、妨害、中断、阻害又は遅延させるもの；アポトーシス又は細胞死を刺激又は増強するもの、核酸又はタンパク質の合成又は代謝を阻害するもの、細胞分裂を阻害するもの、或いは細胞生存、又は必要な細胞生存因子、成長因子若しくはシグナリング経路（細胞外又は細胞内）の生成若しくは利用を減少、低減又は阻害するものを含む。抗細胞増殖、抗新生物、抗腫瘍、抗がん及び抗転移の活性を有する化学剤部類の非限定的な例としては、アルキル化試薬、抗代謝物、植物抽出物、植物アルカロイド、ニトロソ尿素、ホルモン、ヌクレオシド及びヌクレオチド類似体が挙げられる。
【０１００】
[0131]本発明のコンジュゲート、融合及び方法、例えば処置方法は、検出可能又は測定可能な治療的利益又は改善を対象に提供することができる。治療的利益又は改善は、対象への任意の測定可能又は検出可能な、客観的又は主観的な、一過性の、一時的な又はより長い期間の利益、或いは対象の組織、器官、細胞又は細胞集団における任意の程度の状態、障害若しくは疾患、有害症状、帰結又は根本原因における改善である。治療的利益及び改善は、以下に限定されないが、障害、疾患若しくは状態、又は根本原因、或いは障害、疾患又は状態の必然の効果に関連する１つ又は複数の症状又は合併症の発生、頻度、重篤度、進行又は持続期間を低減又は減少させることを含む。本発明のコンジュゲート、融合及び方法は、そのため、治療的利益又は改善を対象に提供することを含む。
【０１０１】
[0132]治療的利益又は改善が所望の予後である本発明の方法において、コンジュゲート／融合体は、十分又は有効な量で、それを必要とする対象に投与することができる。「十分な量」又は「有効な量」は、単一又は複数の用量で、典型的に１種又は複数の他の組成物（化学療法薬又は免疫刺激薬などの治療剤）、処置、プロトコール、又は治療的レジメン薬剤との組合せにおいて、任意の持続時間期間（長期又は短期）の検出可能な応答、任意の測定可能又は検出可能な程度の又は任意の持続時間期間（例えば、時間、日、月、年、又は治癒された）の間の、対象における所望予後又は対象に対する利益を提供するために期待される量を指す。処置のための（例えば、治療的利益又は改善を提供するための）用量又は「十分な量」若しくは「有効量」は、障害、疾患若しくは状態、又は障害、疾患若しくは状態の１つ、複数若しくは全ての有害症状、帰結若しくは合併症を、測定可能な程度まで寛解させるのに有効であることが典型的には期待されるが、障害、疾患若しくは状態又は症状の進行又は悪化を低減又は阻害することが満足な予後と考えられる。
【０１０２】
[0133]「寛解させる」という用語は、対象の状態における検出可能な客観的又は主観的な改善を意味する。検出可能な改善は、障害、疾患又は状態に引き起こされる又は関連する症状の発生、頻度、重篤度、進行又は持続期間における主観的又は客観的な低減、根本原因又は障害、疾患若しくは状態の帰結における改善、或いは障害、疾患又は状態の逆転を含む。
【０１０３】
[0134]処置は、そのため、障害、疾患若しくは状態、又は関連の症状若しくは帰結、又は根本原因を阻害、低減又は防止すること；障害、疾患、状態、症状若しくは帰結の進行若しくは悪化又は根本原因を阻害、低減又は防止すること；或いは障害の１つ又は複数の追加の症状、疾患状態、又は症状のさらなる悪化又は発生をもたらし得る。したがって、成功処置予後は、「治療効果」若しくは「利益」、或いは１つ若しくは複数の症状の発生、頻度、重篤度、進行若しくは持続期間、又は対象における状態、障害、疾患若しくは症状の根本原因若しくは帰結を阻害、低減又は防止することに至る。状態、障害、疾患又は症状の１つ又は複数の根本原因に影響する処置方法は、そのため、有益であると考えられる。障害又は状態の進行又は悪化を安定化又は阻害することも、成功処置予後である。
【０１０４】
[0135]治療的利益又は改善は、状態、障害又は疾患に関連する任意の１つ、大部分又は全ての症状、合併症、帰結又は根本原因の完全な消失である必要はない。したがって、満足なエンドポイントは、対象の状態における漸進的な改善、或いは発生、頻度、重篤度、進行若しくは持続期間における部分的な低減、或いは１つ又は複数の関連の有害症状若しくは合併症又は帰結若しくは根本原因、短い又は長い持続時間期間（時間、日、週、月など）にわたる障害又は疾患の生理的、生化学的又は細胞の徴候又は特徴の１つ又は複数の悪化又は進行の阻害又は逆転（例えば、状態、障害又は疾患の１つ又は複数の症状又は合併症を安定化すること）がある場合に達成される。
【０１０５】
[0136]特別な実施形態において、処置の方法は、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性又は新生物の細胞の塊、体積、サイズ又は細胞数の部分的又は完全な破壊をもたらし；転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性又は新生物の細胞の壊死、溶解又はアポトーシスを刺激、誘発又は増加させることをもたらし；転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性物又は新生物の体積、サイズ、細胞塊を低減することをもたらし；転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性物又は新生物の体積、塊、サイズ又は細胞数における進行又は増加を阻害又は防止することをもたらし；対象における他の（続発の）部位、領域、組織若しくは器官への過剰増殖中の細胞の拡散若しくは播種（例えば、転移）、又は対象における他の（続発の）部位、領域、組織若しくは器官での過剰増殖中の細胞の樹立（例えば、転移）を阻害又は減少させることをもたらし；或いは対象の寿命を延長することをもたらす。追加の特別な実施形態において、処置の方法は、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物に関連する又は引き起こされる有害症状又は合併症の重篤度、持続期間又は頻度を低減又は減少させることをもたらす。
【０１０６】
[0137]十分な量又は有効な量は、単回投与で提供することができるが必ずしもそうである必要はなく、別の組成物（例えば、化学療法又は薬剤）、処置、プロトコール又は治療的レジメンとの組合せで投与することができるが必ずしもそうである必要はない。例えば、該量は、対象の必要性、処置された障害、疾患若しくは状態のステータス、又は処置の副作用によって示される通りに比例して増加することができる。加えて、十分な量又は有効な量は、第２の組成物（例えば、化学療法剤）、処置、プロトコール又は治療的レジメンを用いずに単一又は複数の用量で与えられるならば、必ずしも十分又は有効である必要がなく、その理由は、こうした用量をはるかに超える追加の用量、量若しくは持続期間、又は追加の組成物（例えば、化学療法剤）、処置、プロトコール若しくは治療的レジメンが含まれ得ることで、所与の対象において有効又は十分だと考えられるからである。十分と考えられる量は、別の処置、治療的レジメン又はプロトコールの使用の低減をもたらす量も含む。
【０１０７】
[0138]十分な量又は有効な量は、予防的又は治療的に処置された各々及びあらゆる対象にも、所与の群又は集団における大多数の処置対象にも必ずしも有効である必要がない。処置又は治療方法について典型的である通り、一部の対象は、所与の処置、治療的レジメン又はプロトコールに対してより大きい又はより少ない応答を呈する。十分な量又は有効な量は、群又は一般人口でなく、特別な対象における十分性又は有効性を指す。こうした量は、処置される状態、例えば望ましくない又は異常な細胞増殖又は過剰増殖性障害の型又はステージ（例えば、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物）、所望される治療効果、並びに個々の対象（例えば、対象内の生物学的利用能、性別、年齢など）に一部依存する。
【０１０８】
[0139]望ましくない又は異常な細胞増殖、例えば過剰増殖性障害（例えば、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物）についての治療的利益又は改善の特別な非限定的な例としては、細胞サイズ、塊又は体積の低減、細胞サイズ、塊又は体積の増加を阻害すること、悪化又は進行の減速又は阻害、細胞壊死、溶解又はアポトーシスを刺激すること、新生物又は腫瘍の悪性度又は転移を低減又は阻害すること、死亡率を低減すること、及び対象の寿命を延長することが挙げられる。したがって、細胞サイズ、塊、体積又は転移（安定化）の増加を阻害又は遅延させることは、数日、数週又は数カ月の間だけであっても、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物の完全な消失が発生していなくても、寿命を増加させる（死亡率を低減する）ことができる。低減又は減少させることができる過剰増殖性障害（例えば、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物）と関連する有害症状及び合併症としては、例えば、疼痛、吐き気、不快感、食欲の欠如、嗜眠及び脱力が挙げられる。過剰増殖性障害（例えば、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物）など望ましくない又は異常な細胞増殖の症状の発生、頻度、重篤度、進行又は持続期間における低減、例えば、主観的な感情における改善（例えば、エネルギー、食欲の増加、吐き気の低減、移動性又は心理的幸福の改善など）は、そのため、全て治療的利益又は改善の例である。
【０１０９】
[0140]例えば、投与の結果により、過剰増殖性障害（例えば、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物）など望ましくない又は異常な細胞増殖の処置に必要とされるのが、より少ない化学療法薬、放射線又は免疫治療であるならば、コンジュゲート又は融合体の十分又は有効な量は治療効果を有すると考えられる。
【０１１０】
[0141]「対象」という用語は、動物、典型的に哺乳動物、例えばヒト、非ヒト霊長類（類人猿、テナガザル、チンパンジー、オランウータン、マカク）、家庭動物（イヌ及びネコ）、農場動物（ウマ、乳牛、ヤギ、ヒツジ、ブタ）及び実験動物（マウス、ラット、ウサギ、モルモット）を指す。対象は、動物疾患モデル、例えば、インビボにおけるコンジュゲート及び融合体の分析のための、過剰増殖性障害（例えば、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物）など望ましくない又は異常な細胞増殖の動物モデルを含む。
【０１１１】
[0142]処置に適切な対象は、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性又は新生物の細胞を有する又は有するリスクがあるもの、抗細胞を受けるもの、並びに抗細胞を受けている最中である又は受けたことがあるものを含む。
【０１１２】
[0143]腫瘍が寛解中である対象を含めた、増殖（例えば、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物）治療。「リスクのある」対象は、望ましくない又は異常な細胞増殖、過形成の発症（例えば、腫瘍）と関連する危険因子を典型的に有する。
【０１１３】
[0144]リスクのある又は候補対象の特別な例としては、コンジュゲート又は融合体が結合する受容体、リガンド、抗原又は抗体を発現する細胞を有するものが挙げられ、特にここで、壊死、溶解、死滅又は破壊に対して標的化された細胞は、非標的細胞よりも大きい数又は量の受容体、リガンド、抗原又は抗体を発現する。こうした細胞は、壊死、溶解又は死滅に対して選択的又は優先的に標的化することができる。
【０１１４】
[0145]リスクのある対象は、外科的切除、化学療法、免疫治療、イオン化若しくは化学的な放射線治療、局所熱若しくは領域熱（高体温）の治療、又はワクチン接種のための候補であるもの、及びそれらを受けたことがあるものも含む。本発明は、そのため、例えば安定性又は寛解の期間に続く転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物の再出現又は再成長により、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍若しくは新生物、又は転移性若しくは非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍若しくは新生物と関連する合併症のリスクがある対象を処置することに適用可能である。
【０１１５】
[0146]危険因子は、性別、生活様式（食事、喫煙）、職業（医療及び臨床職員、農業及び家畜労働者）、環境因子（発癌性物質曝露）、家族歴（自己免疫障害、糖尿病など）、遺伝性素因などを含む。例えば、メラノーマを発症するリスクのある対象は、過剰の日光曝露（紫外放射線）、色白の肌、多数の母斑（異形成母斑）、患者表現型、家族歴、又は前のメラノーマの病歴を含む。がんを発症するリスクのある対象は、そのため、生活様式、職業、環境因子、家族歴、及び腫瘍関連遺伝子、遺伝子欠失又は遺伝子突然変異についての遺伝子スクリーンによって同定することができる。乳がんを発症するリスクのある対象は、例えばＢｒｃａ１を欠如している。結腸がんを発症するリスクのある対象は、例えば、初期年齢若しくは高頻度のポリープ形成、又は欠失若しくは突然変異腫瘍サプレッサー遺伝子、例えば腺腫性大腸ポリポーシス（ＡＰＣ）を有する。
【０１１６】
[0147]対象は、他の処置から除かれた対象も含む。例えば、ある特定の対象は、外科的切除、化学療法、免疫治療、イオン化若しくは化学的な放射線治療、局所熱若しくは領域熱（高体温）の治療、又はワクチン接種のための良好な候補でなくてもよい。したがって、本発明による処置のための候補対象は、外科的切除、化学療法、免疫治療、イオン化若しくは化学的な放射線治療、局所熱若しくは領域熱（高体温）の治療、又はワクチン接種のための候補でないものを含む。
【０１１７】
[0148]コンジュゲート及び融合体は、単位用量又は単位剤形で製剤化することができる。特別な実施形態において、融合体は、抗細胞増殖薬（例えば、ゲムシタビン）との組合せで、望ましくない又は異常な細胞増殖又は過剰増殖性障害を有する対象を処置するのに有効な量である。追加の特別な実施形態において、コンジュゲート又は融合体は、抗細胞増殖薬（例えば、ゲムシタビン）との組合せで、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物を有する対象を処置するのに有効な量で存在する。コンジュゲート及び融合体（例えば、ＬＨＲＨ−クルクミン、ＬＨＲＨ−クルクミン類似体、ＬＨＲＨ類似体−クルクミン及びＬＨＲＨ類似体−クルクミン類似体）及び／又は抗細胞増殖薬（例えば、ゲムシタビン）の例証的な単位用量は、約２５〜２５０、２５０〜５００、５００〜１０００、１０００〜２５００又は２５００〜５０００、５０００〜２５，０００、５０００〜５０，０００ｎｇ；及び約２５〜２５０、２５０〜５００、５００〜１０００、１０００〜２５００又は２５００〜５０００、５０００〜２５，０００、５０００〜５０，０００μｇを範囲とする。
【０１１８】
[0149]本発明の組成物及び方法は、インビトロ、エクスビボ又はインビボにおいて接触又は提供することができる。組成物は、単一又は複数の投与量として、例えば、有効又は十分な量で、意図される効果を提供するために投与することができる。コンジュゲート／融合体及び／又は抗細胞増殖薬（例えば、ゲムシタビン）の例証的な用量は、同じ日、連続した日若しくは隔日に、又は間欠的に、約２５〜２５０、２５０〜５００、５００〜１０００、１０００〜２５００又は２５００〜５０００、５０００〜２５，０００、５０００〜５０，０００ｐｇ／ｋｇ；約５０〜５００、５００〜５０００、５０００〜２５，０００又は２５，０００〜５０，０００ｎｇ／ｋｇ；及び約２５〜２５０、２５０〜５００、５００〜１０００、１０００〜２５００又は２５００〜５０００、５０００〜２５，０００、５０００〜５０，０００μｇ／ｋｇを範囲とする。単一又は複数の用量は、同じ日、連続した日、隔日に、又は間欠的に投与することができる。
【０１１９】
[0150]任意の経路によって、全身、領域又は局所の投与を介して、組成物は投与することができ、方法は実践することができる。例えば、コンジュゲート又は融合体は、全身的に、領域に又は局所に、静脈内に、経口的に（例えば、経口摂取又は吸入）、筋肉内に、腹腔内に、皮内に、皮下に、空内に、頭蓋内に、経皮的に（局所的）、非経口的に、例えば経粘膜的に又は直腸的に投与することができる。医薬製剤を含めた本発明の組成物及び方法は、（マイクロ）カプセル化送達系を介して投与すること又は投与のために移植片中にパッケージ化することができる。
【０１２０】
[0151]本発明は、コンジュゲート又は融合体及び方法をさらに提供し、ここで、該コンジュゲート又は融合体は医薬組成物中に含まれる。医薬組成物は、「薬学的に許容される」及び「生理学的に許容される」担体、希釈剤又は賦形剤を指す。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」及び「生理学的に許容される」という用語は、担体、希釈剤又は賦形剤を指す場合、医薬投与と及び該製剤の他の構成成分と適合性のある溶媒（水性又は非水性）、洗剤、溶液、エマルジョン、分散媒、コーティング、等張及び吸収の促進剤又は遅延剤を含む。こうした製剤は、錠剤（コーティング又は非コーティング）、カプセル（硬質又は軟質）、マイクロビーズ、エマルジョン、粉末、顆粒、結晶、懸濁液、シロップ又はエリキシルに含有させることができる。
【０１２１】
[0152]医薬組成物は、特別な投与経路と適合性があるように製剤化することができる。非経口、皮内又は皮下の投与のための組成物は、滅菌希釈液、例えば水、生理食塩溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒を含むことができる。調製物は、微生物体成長を防止するための１種又は複数の保存料（例えば、ベンジルアルコール又はメチルパラベンなどの抗細菌剤；アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート化剤；アセテート、シトレート又はホスフェートなどの緩衝液、及び塩化ナトリウム又はデキストロースなど張度の調整のための薬剤）を含有することができる。
【０１２２】
[0153]注射のための医薬組成物は、滅菌（例えば、水性）溶液（水溶性の場合）又は分散液、及び滅菌注射可能溶液又は分散液の即時調製のための滅菌粉末を含む。静脈内投与のため、適当な担体は、生理的食塩水、静細菌性の水、クレモフォルＥＬ（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ）（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含む。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及びポリエチレングリコール）、及びそれらの適当な混合物を含有する溶媒又は分散媒であり得る。流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって又は界面活性剤の使用によって、維持することができる。抗細菌剤及び抗真菌剤としては、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸及びチメロサールが挙げられる。吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを含むことは、注射可能な組成物の吸収を延長することができる。
【０１２３】
[0154]本発明によるコンジュゲート又は融合体は、薬学的に許容される塩に製剤化することができる。塩としては、例えば、限定せずに、無機酸、例えば塩酸若しくはリン酸、又は有機酸、例えば酢酸、シュウ酸若しくは酒石酸で形成される酸付加塩が挙げられる。塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム又は第二鉄の水酸化物などの無機塩基、及びイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどの有機塩基から形成されるものも挙げられる。
【０１２４】
[0155]追加の医薬製剤及び送達系は、当技術分野において知られており、本発明の方法に適用可能である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）第１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ；Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ（１９９６）第１２編集、Ｍｅｒｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ、Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ、ＮＪ；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｓｏｌｉｄ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ、Ｔｅｃｈｎｏｎｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｉｎｃ．、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ、Ｐａ．、（１９９３）；及びＰｏｚｎａｎｓｋｙら、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｒ．Ｌ．Ｊｕｌｉａｎｏ、編集、Ｏｘｆｏｒｄ、Ｎ．Ｙ．（１９８０）、２５３〜３１５ページを参照されたい）。
【０１２５】
[0156]本発明は、適当なパッケージ材料にパッケージ化された本発明のコンジュゲート及び融合体、その組合せ組成物及び医薬製剤を含めたキットを提供する。キットは、構成成分の記載又は構成成分のインビトロ、インビボ若しくはエクスビボにおける使用のための指示を含めた標識又はパッケージ挿入物を任意選択で含む。例証的な指示としては、細胞の増殖を低減又は阻害するための、過剰増殖中の細胞など望ましくない又は異常な細胞の増殖を低減又は阻害するための、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性の又は新生物細胞の増殖を低減又は阻害するための、過剰増殖性障害を有する対象を処置するための、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物を有する対象を処置するための指示が挙げられる。
【０１２６】
[0157]キットは、こうした構成成分の集合体、例えば、コンジュゲート若しくは融合体及び抗細胞増殖薬（例えば、ゲムシタビン）、又は２つ以上のコンジュゲート及び融合体を単独で、若しくは別の治療的に有用な組成物（例えば、抗細胞増殖薬）との組合せで含有することができる。
【０１２７】
[0158]「パッケージ材料」という用語は、キットの構成成分を収容する物理的構造を指す。パッケージ材料は、構成成分を滅菌で維持することができ、こうした目的のために共通して使用される材料（例えば、紙、波形繊維、ガラス、プラスチック、箔、アンプル、バイアル、チューブなど）で作製することができる。
【０１２８】
[0159]本発明のキットは、標識又は挿入物を含むことができる。標識又は挿入物は、別々である又は構成成分、キット若しくは梱包材料（例えば、ボックス）に貼付される、或いはキット構成成分を含有するアンプル、チューブ又はバイアルに付着される「印刷物」、例えば紙又はボール紙を含む。標識又は挿入物は、コンピュータ可読媒体、例えばディスク（例えば、フロッピーディスケット、ハードディスク、ＺＩＰディスク）、光学ディスク、例えばＣＤ−若しくはＤＶＤ−ＲＯＭ／ＲＡＭ、ＤＶＤ、ＭＰ３、磁気テープ、又は電気記憶媒体、例えばＲＡＭ及びＲＯＭ若しくはこれらのハイブリッド、例えば磁気／光学記憶媒体、ＦＬＡＳＨ媒体若しくはメモリ型カードを追加的に含むことができる。
【０１２９】
[0160]標識又は挿入物は、１種又は複数の構成成分の、投薬量の、作用機序、薬物動態及び薬力学を含めた活性成分（単数又は複数）の臨床薬理学の同定情報を含むことができる。標識又は挿入物は、製造者情報、ロット番号、製造者場所及び日付を同定する情報を含むことができる。
【０１３０】
[0161]標識又は挿入物は、キット構成成分が使用され得る状態、障害、疾患又は症状に関する情報を含むことができる。標識又は挿入物は、臨床医のための、又は方法、処置プロトコール若しくは治療的レジメンにおけるキット構成成分の１種若しくは複数を使用するための対象のための指示を含むことができる。指示は、投与量、頻度又は持続期間、及び本明細書において説明されている方法、処置プロトコール又は治療体制のいずれかを実践するための指示を含むことができる。例証的な指示としては、望ましくない又は異常な細胞増殖、過剰増殖中の細胞、及び障害（例えば、転移性又は非転移性の腫瘍、がん、悪性腫瘍又は新生物）を処置するための指示が挙げられる。本発明のキットは、そのため、処置方法を含めて、本明細書に記載されている本発明の方法のいずれかを実践するための標識又は指示を追加的に含むことができる。
【０１３１】
[0162]標識又は挿入物は、構成成分が提供し得る任意の利益、例えば予防的又は治療的利益に関する情報を含むことができる。標識又は挿入物は、潜在的な有害副作用に関する情報、例えば、特別な組成物を使用することが適切でない状況に関して対象又は臨床医への警告を含むことができる。有害副作用は、対象が、組成物と不適合であり得る１種若しくは複数の他の薬物療法を有する、受ける予定がある若しくは現在受けている場合、又は対象が、組成物と不適合である別の処置プロトコール若しくは治療的レジメンを有する、受ける予定がある若しくは現在受けている場合に発生することもあり、そのため、指示は、こうした不適合性に関した情報を含むことができる。
【０１３２】
[0163]発明キットは、他の構成成分を追加的に含むことができる。該キットの各構成成分は個々の容器内に封入することができ、様々な容器の全てが単一パッケージ内にあってもよい。発明キットは、滅菌貯蔵、安定貯蔵及び／又は冷蔵貯蔵のために設計することができる。該キット中の細胞は、使用されるまで適切な貯蔵条件下で維持することができる。
【０１３３】
[0164]別段に定義されていない限り、本明細書において使用されている全ての技術的及び科学的用語は、この発明が属する当業者によって共通して理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと同様又は同等の方法及び材料は、本発明の実践又は試験に使用することができるが、適当な方法及び材料は本明細書に記載されている。
【０１３４】
[0165]本明細書において引用されている全ての出願、刊行物、特許及び他の参照、ＧｅｎＢａｎｋ引用及びＡＴＣＣ引用は、参照によりそれら全体で組み込まれる。不一致の場合において、定義を含めて本明細書が統制する。
【０１３５】
[0166]本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「及び」、及び「ｔｈｅ」は、別段に文脈が明らかに示していない限り複数の参照対象を含む。したがって、例えば、「コンジュゲート」又は「融合」又は「抗細胞増殖薬」への言及は、複数のこうしたコンジュゲート、融合又は抗細胞増殖薬、その他もろもろを含む。
【０１３６】
[0167]本明細書で使用される場合、全ての数値又は数値範囲は、別段に文脈が明らかに示していない限り、こうした範囲内の整数及び範囲内の値又は整数の分数を含む。したがって、例えば、９０〜１００％の範囲への言及は、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９５％、９７％など、並びに９１．１％、９１．２％、９１．３％、９１．４％、９１．５％など、９２．１％、９２．２％、９２．３％、９２．４％、９２．５％など、その他もろもろを含む。
【０１３７】
[0168]本発明は、多数の実施形態を記載するために肯定的（affirmative）な言語を使用して、本明細書において全体的に開示されている。本発明は、物質又は材料、方法ステップ及び条件、プロトコール、手順、アッセイ又は分析など、特別な対象物が全部又は一部除外される実施形態も具体的に含む。したがって、本発明が含んでいないものの観点から、本発明が本明細書において全体的に表現されていなくても、本発明において明確に含まれていない態様は、それでもなお本明細書に開示されている。
【０１３８】
[0169]本発明の多数の実施形態が記載されてきた。それでもなお、様々な修飾が本発明の趣旨及び範疇から逸脱することなく行われ得ることを理解されよう。したがって、以下の実施例は、請求項に記載されている発明の範疇を例示しているが制限しないと意図される。
【実施例】
【０１３９】
[0170]以下の実施例は、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートが組合せ治療にとって魅力的な候補であることを示すデータを記載する。三次元（３Ｄ）ハイスループットアッセイプラットフォーム（ＩｎｃｕＣｙｔｅ  ＺＯＯＭ−Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）は、ＬＨＲＨ−クルクミンが、同じ濃度で、ＬＨＲＨＲを発現する膵臓がん細胞株においてクルクミンよりも有効であることを示した。ゲムシタビンと一緒のＬＨＲＨ−クルクミンは、３Ｄ膵臓がん細胞スフェロイドの成長を減速するのに、単独で投与されたいずれの化合物よりも実質的に有効であることが示された。
【０１４０】
[0171]組合せ治療としてのＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートは、より低い毒性及びより高い腫瘍成長阻害により魅力的である。受容体は細胞表面にほとんどないように見えるが、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートがＬＨＲＨ受容体と相互作用することも、データは示している。データは、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートが切断され得ること、及び両部分が独立して作用し得ることをさらに示す。
【０１４１】
実施例１
[0172]この実施例は、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートがＰａｎｃ−１細胞スフェロイド成長に対してクルクミン単独よりも有効であることを示すデータを含む。
【０１４２】
[0173]９６ウェルプレートにおけるマトリゲルにおける同一サイズの単一がん細胞スフェロイドの成長を可能にするプロトコールは開発されている。３Ｄ培養手法は、ヒト患者におけるがん薬物の効力を予測する際に２Ｄ手法よりもしばしば優位である。
【０１４３】
[0174]Ｐａｎｃ−１及びＭｉａ−Ｐａｃａ−２を１０％ＦＢＳ  ＤＭＥＭ中で細胞を成長させた。トリプシン処理後に細胞を回収し、１０％  ＦＢＳを有するフェノールレッドフリーＤＭＥＭ中に再懸濁した。細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒ  Ｒｅｄ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｍｏｌｏｇｉｅｓ）で５分間標識化した。標識化した後、細胞をＰＢＳで洗浄し、１０％ＦＢＳ及び５％マトリゲルを有する１００μｌのフェノールレッドフリー培地において１，０００細胞／ウェルで９６ウェルのＣｏｒｎｉｎｇ  ７００７  ＵＬＡ丸底プレートに移した。スフェロイドが樹立された後（２４時間後）、以下の処置を適用した（１群当たり８つのスフェロイド）：（１）ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲート（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）；（２）クルクミン（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）及び（３）ＤＭＳＯ対照。スフェロイドを３７℃及び５％  ＣＯ２でＩｎｃｕＣｙｔｅ  ＺＯＯＭ（Ｅｓｓｅｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）において成長させた。画像を処置後１２０時間の期間の間４時間毎に獲得し、ウェル中の赤色物体を同定するように設計されたソフトウェア分析をした。ＩｎｃｕＣｙｔｅソフトウェア分析によって決定された「ウェル中の平均赤色物体面積」を使用して、処置の終わりに、データをスフェロイドサイズにおける倍増加として表した。再現性を３つの独立した実験において確認した。スフェロイドは均一速度で成長した（図１）。
【０１４４】
[0175]ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートを用いる処置は、用量依存的方式で、Ｐａｎｃ−１細胞によって形成されたスフェロイドのサイズを有意に減少させた。さらに、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートは、３Ｄ培養で成長するＰａｎｃ−１膵臓がん細胞株において、クルクミンよりも有効である。結果は図２Ａに示されている。興味深いことに、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートは、Ｐａｎｃ−１細胞に対して、Ｍｉａ−ＰａＣａ−２細胞よりも効果的であり、ＬＨＲＨ−受容体（ＬＨＲＨＲ）発現が、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲート処置の効力における決定因子であることを示唆している。結果は図２Ｂに表示されている。
【０１４５】
実施例２
[0176]この実施例は、ＬＨＲＨ処置がＰａｎｃ−１細胞スフェロイド成長に対する阻害効果を有することを示すデータを含む。
【０１４６】
[0177]ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートの効果が、細胞表面ＬＨＲＨ受容体に結合することと関連することを立証するため、Ｐａｎｃ−１スフェロイドをフリーＬＨＲＨで処置し、スフェロイド成長を測定した。フリーＬＨＲＨは、細胞表面でのＬＨＲＨＲの存在と一致するスフェロイド成長に対する阻害効果を有する。さらに、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートの効果は、ＬＨＲＨの効果よりも優位であった。結果は図３に示されている。再現性を３つの独立した実験において確認した。これらの観察は、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートが、受容体に結合することによってＬＨＲＨ受容体を発現する細胞に優先的に影響する機序と一致する。
【０１４７】
実施例３
[0178]この実施例は、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲート及びゲムシタビンの組合せがＰａｎｃ−１スフェロイド成長に対してより有効であることを示すデータを含む。
【０１４８】
[0179]Ｐａｎｃ−１スフェロイドを９６ウェルの丸底プレート中で、記載されている通りに形成した。スフェロイドが樹立された後、以下の処置を適用した（１群当たり８つのスフェロイド）：（１）ゲムシタビン（５μＭ）；（２）ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲート（３０μＭ）；（３）ゲムシタビンプラスＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲート；（４）ＤＭＳＯ対照。
【０１４９】
[0180]分析は、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートプラスゲムシタビン処置スフェロイドが、単独で投与されたＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲート又はゲムシタビンのいずれかで処置されたスフェロイドよりも有意に小さかったことを示す。結果は図４に表示されている。再現性を３つの独立した実験において確認した。
【０１５０】
[0181]これらの結果は、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートが、ゲムシタビンとの組合せにおける場合にＰａｎｃ−１スフェロイド成長を強く阻害するとともにＬＨＲＨ受容体を発現する他のがん細胞において組合せ治療に使用することができることを示している。
【０１５１】
実施例４
[0182]この実施例は、低用量でのＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲート及びゲムシタビンの組合せが、Ｐａｎｃ−１、Ｍｉａ−Ｐａｃａ−２及びＡｓＰＣ−１のスフェロイド成長に対して、より有効であることを示すデータを含む。
【０１５２】
[0183]Ｐａｎｃ−１、Ｍｉａ−Ｐａｃａ−２及びＡｓＰＣ−１のスフェロイドを９６ウェルの丸底プレート中で、記載されている通りに形成した。スフェロイドが樹立された後、以下の処置を適用した（１群当たり８つのスフェロイド）：ゲムシタビン単独及びＬＨＲＨ−クルクミン（１０μＭ及び２０μＭ）との組合せを用いる用量依存（０．５μＭ、１．０μＭ及び５．０μＭ）処置に続く。培地単独を対照として使用した。スフェロイドを定量化の前に５日間成長させた。ゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンの両方を水中に希釈した。スフェロイドを以下の通りに処置した：
１．モック
２．ゲムシタビン０．５ｕＭ
３．ゲムシタビン１ｕＭ
４．ゲムシタビン５ｕＭ
５．ＬＨＲＨ−クルクミン１０．０ｕＭ
６．ＬＨＲＨ−クルクミン２０．０ｕＭ
７．ゲムシタビン（０．５）＋ＬＨＲＨ−ｃ（１０）
８．ゲムシタビン（１）＋ＬＨＲＨ−ｃ（１０）
９．ゲムシタビン（５）＋ＬＨＲＨ−ｃ（１０）
１０．ゲムシタビン（０．５）＋ＬＨＲＨ−ｃ（２０）
１１．ゲムシタビン（１）＋ＬＨＲＨ−ｃ（２０）
１２．ゲムシタビン（５）＋ＬＨＲＨ−ｃ（２０）
【０１５３】
[0184]「ウェル中の平均赤色物体面積」モジュールを使用するＩｎｃｕｃｙｔｅＺＯＯＭソフトウェア分析は、ゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンを用いる処置が、用量依存的方式で、ＭｉａＰａｃａ−２、Ｐａｎｃ−１及びＡｓＰＣ−１細胞によって形成されたスフェロイドのサイズを減少させることを示す。ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートプラスゲムシタビン処置スフェロイドは、単独で投与されたＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲート又はゲムシタビンのいずれかで処置されたスフェロイドよりも有意に小さかった。結果は図５Ａ（Ｍｉａ−Ｐａｃａ−２）、図５Ｂ（Ｐａｎｃ−１）及び図５Ｃ（ＡｓＰＣ−１）に表示されている。
【０１５４】
[0185]これらの結果は、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートが、低用量でのゲムシタビンとの組合せにおける場合、Ｐａｎｃ−１、Ｍｉａ−Ｐａｃａ−２及びＡｓＰＣ−１スフェロイド成長を強く阻害すること、及びスフェロイドサイズを低減することにおいて、単独で投与されたいずれの化合物よりも有意に有効であったことを示している。こうしたＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲート／ゲムシタビン組合せ治療は、ＬＨＲＨ受容体を発現する他のがん細胞において使用されることで、化学療法の副作用を低減しながら良好な腫瘍成長阻害を提供し得る。
【０１５５】
実施例５
[0186]この実施例は、組合せＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲート及び５ＦＵが、Ｐａｎｃ−１及びＭｉａ−Ｐａｃａ−２スフェロイド成長に対して、より有効であることを示すデータを含む。
【０１５６】
[0187]Ｐａｎｃ−１及びＭｉａ−Ｐａｃａ２スフェロイドを９６ウェルの丸底プレート中で、記載されている通りに形成した。スフェロイドが樹立された後、以下の処置を適用した（１群当たり８つスフェロイド）：（１）５ＦＵ（２．５μＭ）；（２）ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲート（１０μＭ）；（３）５ＦＵプラスＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲート；（４）ＤＭＳＯ対照。
【０１５７】
[0188]分析は、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートプラス５ＦＵ処置スフェロイドが、単独で投与されたいずれかの化合物で処置されたスフェロイドよりも有意に小さかったことを示す。結果は図６Ａ（Ｐａｎｃ−１）及び図６Ｂ（Ｍｉａ−Ｐａｃａ−２）に表示されている。
【０１５８】
[0189]これらの結果は、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートが、５ＦＵとの組合せにおける場合、Ｐａｎｃ−１及びＭｉａ−Ｐａｃａ２スフェロイド成長を強く阻害すること、及び暗に、ＬＨＲＨ受容体を発現するがん細胞における治療に使用され得ることを示唆する。
【０１５９】
実施例６
[0190]この実施例は、ＬＨＲＨ−受容体が、Ｐａｎｃ−１細胞スフェロイド成長に対するＬＨＲＨ及びＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートの阻害効果に必要とされることを示すデータを含む。
【０１６０】
[0191]ＬＨＲＨ及びＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートの効果が、細胞表面ＬＨＲＨ受容体に結合することに起因したことを立証するため、非標的対照（ＮＴ））Ｐａｎｃ−１スフェロイド及びＬＨＲＨＲノックダウン（ＫＤ）Ｐａｎｃ−１スフェロイドをＬＨＲＨ、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲート及びクルクミン単独で処置し、スフェロイド成長を測定した（図７）。データは、フリーＬＨＲＨが、細胞表面でのＬＨＲＨＲの存在と一致するＮＴ  Ｐａｎｃ−１スフェロイド成長に対する阻害効果を有することを示す。その上、前に示された通り、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートの効果は、ＬＨＲＨ又はクルクミン単独の効果よりも優位であった（図７Ａ）。しかしながら、ＬＨＲＨの阻害効果は、ＬＨＲＨＲ  ＫＤ  Ｐａｎｃ−１スフェロイドにおいて消失された。なおいっそう、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートは、ＬＨＲＨＲ  ＫＤ細胞によって形成されたスフェロイド成長に対する効果をまだ有しているが、それの効果はクルクミン単独の効果よりも劣っており、少なくとも部分的には、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートの効果が細胞表面で受容体上に結合することに起因することを示唆している（図７Ｂ）。
【０１６１】
[0192]これらの観察は、ＬＨＲＨ−クルクミンコンジュゲートがＬＨＲＨ受容体に結合することによってがん細胞に優先的に影響する機序と一致する。
【０１６２】
実施例７
[0193]この実施例は、ＬＨＲＨ受容体が、４５ｋＤの分子量を有するとともにごく一部だけが細胞表面にあるように見えることを示すデータを含む。
【０１６３】
[0194]ＬＨＲＨＲの分子量は、大体において、非常に非特定である抗体に基づいた結論である３５ｋＤから７０ｋＤ超のどこかであると予測されていた。図８Ｂは、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ抗体が強いバンド６６ｋＤを認識する一方でＡｂＣａｍ抗体が約４５ｋＤで主要なバンドを認識することを実証する膵腫瘍細胞可溶化物のウエスタンブロットである。細胞から血清を洗い流すことは、６６ｋＤバンドを排除し、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ抗体が血清アルブミンを最も認識している可能性が高いことを示唆している。
【０１６４】
[0195]図８Ｂは、ＬＨＲＨＲに対してｓｈＲＮＡをコード化するレンチウイルスに感染された細胞において、４５ｋＤバンドが、ウイルスクローンの一部を使用して低減されることを実証し、ＡｂＣａｍ抗体によって認識された４５ｋＤバンドが真正受容体であることを強く示唆している。これは、我々の知識の限りでは、ＬＨＲＨＲ抗体の特異性及び４５ｋＤタンパク質がこの受容体を表すことを実証する最初の検証された実験である。
【０１６５】
[0196]ＬＨＲＨＲの細胞表面発現の実際レベルについて意見の相違があった。一部のグループは、該受容体の大部分が細胞表面に常在すると主張し、他方、他のグループは、５％未満が細胞表面に常に存在し、残部は小胞体と結びついていると言う。細胞表面ＬＨＲＨＲを決定するため、ビオチンを細胞表面に付着させ、ビオチン化タンパク質を回収し、ウエスタンブロット分析によって、合計のＬＨＲＨＲ発現と対比した細胞表面のＬＨＲＨＲのレベルを比較した。対照は、細胞表面で主に見出された発癌性受容体ｃ−Ｍｅｔであった。
【０１６６】
[0197]図８Ｃは、５つの腫瘍細胞株において、検出可能な表面発現ＬＨＲＨＲが見出されなかったことを実証する。これは、発現ＬＨＲＨＲが細胞の表面に発現されることはほとんどないという、フローサイトメトリー分析及び共焦点顕微鏡法を使用する他の観察と一致する。これは重要な情報であり、その理由は、それは、ＬＨＲＨＲの表面発現を増加させること及び標的化薬剤の効力を増加させることがある薬理学的シャペロンが発見され得ることを示唆するからである。
【０１６７】
実施例８
[0198]この実施例は、実施例９〜１４において使用された様々な材料及び方法の簡単な記載を含む。
【０１６８】
[0199]細胞増殖分析：膵臓細胞をトリプシン処理後に回収し、処置の前２４時間の間９６ウェルプレートに播種した。図の説明に記載されている通りに、処置を行った。パラホルムアルデヒド固定及びＤＡＰＩ染色後、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ  ＶＴＩソフトウェアの「Ｏｂｊｅｃｔ  Ｃｏｕｎｔ」モジュールを使用して、細胞数を定量化した。グラフは、同じ処置条件下での８つのウェルの平均及び標準偏差を表す。
【０１６９】
[0200]ウエスタンブロット分析：膵臓細胞をトリプシン処理後に回収し、処置の前２４時間の間１２ウェルプレートに播種した。図の説明に記載されている通りに、処置を行った。処置に続いて、全細胞可溶化物をラエムリ緩衝液中に回収し、ウエスタンブロットによって分析した。以下の一次抗体を使用した：ＸＩＡＰ、ｃ−ＩＡＰ２、切断ＰＡＲＰ、カスパーゼ−３（全てＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇより）、アクチン（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）及びＬＨＲＨＲ（Ａｂｃａｍ）。
【０１７０】
[0201]定量的ＰＣＲ分析：ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒからのＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘを使用する定量的リアルタイムＰＣＲによって、ＸＩＡＰ、ｃ−ＩＡＰ１及びｃ−ＩＡＰ２のｍＲＮＡレベルを決定した。以下の条件下で、ＢｉｏＲａｄからのＣＦＸシステムを使用して、熱サイクリングを実施した：１０分間９５℃、並びに１５秒間９５℃及び６０秒間５５℃で４０サイクル。任意の所与の遺伝子についてのｍＲＮＡ発現は、ＤＭＳＯ−処置細胞との比較として表される。ＧＡＰＤＨを参照のハウスキーピング遺伝子として使用した。
【０１７１】
実施例９
[0202]この実施例は、ゲムシタビンとＬＨＲＨ−クルクミンとの組合せが、細胞増殖を阻害する及び／又は細胞死を誘発する際に、より効果的であることを示すデータを含む。
【０１７２】
[0203]ＤＡＰＩ染色後の核カウント、並びにゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンを単独及び組合せで用いる処置後の、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ  ＶＴＩ画像化システム及びソフトウェアを使用する細胞増殖／成長の定量化。核のＤＡＰＩ染色後に、細胞数を決定した。図１に記載されている通り、細胞を処置した。
【０１７３】
[0204]１処置につき８つのレプリケートを定量化のために使用した。結果は図９Ａ（ＭｉａＰａｃａ−２細胞）、図９Ｂ（Ｐａｎｃ−１細胞）、図９Ｃ（ＡｓＰＣ−１細胞）及び図９Ｄ（ＢｘＰＣ−３細胞）に表示されている。核の定量化は、ＩｎｃｕｃｙｔｅＺＯＯＭで得られた結果を裏付けしており、がん細胞が用量依存的方式で処置に感受性であること、並びにゲムシタビンとＬＨＲＨ−クルクミンとの組合せが、細胞増殖を阻害する及び／又は細胞死を誘発する際に、より効果的であることをさらに確認する。
【０１７４】
実施例１０
[0205]この実施例は、処置の２４時間後の、アポトーシスマーカー（切断ＰＡＲＰ）及びアポトーシスの阻害剤（ＸＩＡＰ及びｃＩＡＰ２）の分析を含む。
【０１７５】
[0206]ウエスタンブロット分析。アクチン、ＧＡＰＤＨ及びポンソー染色を負荷対照として使用した。ゲムシタビンを水中に希釈した。クルクミン及びＬＨＲＨ−クルクミンをＤＭＳＯ中に希釈した。細胞を以下の通りに処置した：
１．ゲムシタビン１ｕＭ
２．ゲムシタビン５ｕＭ
３．ゲムシタビン１０ｕＭ
４．ゲムシタビン２０ｕＭ
５．ＤＭＳＯ
６．クルクミン１０ｕＭ
７．クルクミン２０ｕＭ
８．クルクミン５０ｕＭ
９．クルクミン１００ｕＭ
１０．ＬＨＲＨ−クルクミン１０ｕＭ
１１．ＬＨＲＨ−クルクミン２０ｕＭ
１２．ＬＨＲＨ−クルクミン５０ｕＭ
１３．ＬＨＲＨ−クルクミン１００ｕＭ
【０１７６】
[0207]結果は、図１０Ａ（ＭｉａＰａｃａ−２細胞）、図１０Ｂ（Ｐａｎｃ−１細胞）、図１０Ｃ（ＡｓＰＣ−１細胞）及び図１０Ｄ（ＢｘＰＣ−３細胞）に表示されている。ＭｉａＰａｃａ−２、Ｐａｎｃ−１、ＡｓＰＣ−１及びＢｘＰＣ−３を含めて、全ての膵臓細胞株は、クルクミン及びＬＨＲＨ−クルクミン処置に感受性であり、
処置の２４時間後、切断ＰＡＲＰの存在によって例示される通りにアポトーシスを惹起する。より高い用量のクルクミン及びＬＨＲＨ−クルクミン、それぞれ５０ｕＭ及び１００ｕＭは、処置の２４時間後に細胞死を惹起する際に、より効果的である。
【０１７７】
[0208]Ｐａｎｃ−１及びＭｉａＰａｃａ−２膵臓細胞株は、ゲムシタビン処置に、より抵抗性であり、その理由は、最も高い用量のゲムシタビン（２０ｕＭ）でさえも、処置の２４時間後にアポトーシスを誘発するのに失敗したからである。ウエスタンブロット分析によって例示されている通り、切断ＰＡＲＰは、ゲムシタビンを用いる処置の２４時間後のＰａｎｃ−１及びＭｉａＰａｃａ−２細胞において検出されなかった。低レベルの切断ＰＡＲＰは、より高い用量でのゲムシタビンで処置されたＡｓＰＣ−１及びＢｘＰＣ−３において検出された。アポトーシスタンパク質のＸＩＡＰ及びｃ−ＩＡＰ２阻害剤は、処置の２４時間後の全ての膵臓細胞株において、高用量のクルクミン及びＬＨＲＨ−クルクミン（５０ｕＭ及び１００ｕＭ）単独によって下方調節され、使用された全ての膵臓がん細胞株がクルクミン及びＬＨＲＨ−クルクミンの両方に感受性であることをさらに確認している。ゲムシタビン単独は、処置の２４時間後のＸＩＡＰ及びｃ−ＩＡＰ２レベルに影響しない。
【０１７８】
実施例１１
[0209]この実施例は、処置の２４時間後のアポトーシスマーカー（切断ＰＡＲＰ）及びアポトーシスの阻害剤（ＸＩＡＰ及びｃＩＡＰ２）の分析を含む。
【０１７９】
[0210]ウエスタンブロット分析。アクチン、ＧＡＰＤＨ及びポンソー染色を負荷対照として使用した。ゲムシタビンを水中に希釈した。クルクミン及びＬＨＲＨ−クルクミンをＤＭＳＯ中に希釈した。細胞を以下の通りに処置した：
１．ゲムシタビン５ｕＭ
２．ＬＨＲＨ−クルクミン２０ｕＭ
３．ＬＨＲＨ−クルクミン５０ｕＭ
４．クルクミン２０ｕＭ
５．クルクミン５０ｕＭ
６．ゲムシタビン（５）＋クルクミン（２０）
７．ゲムシタビン（５）＋クルクミン（５０）
８．ゲムシタビン（５）＋ＬＨＲＨ−クルクミン（２０）
９．ゲムシタビン（５）＋ＬＨＲＨ−クルクミン（５０）
１０．ＤＭＳＯ
【０１８０】
[0211]結果は、図１１Ａ（ＭｉａＰａｃａ−２細胞）、図１１Ｂ（Ｐａｎｃ−１細胞）、図１１Ｃ（ＡｓＰＣ−１細胞）及び図１１Ｄ（ＢｘＰＣ−３細胞）に表示されている。アポトーシスタンパク質のＸＩＡＰ及びｃ−ＩＡＰ２阻害剤は、処置の２４時間後の全ての膵臓細胞株におけるゲムシタビン（５ｕＭ）の存在下でさえ、高用量のクルクミン及びＬＨＲＨ−クルクミン（５０ｕＭ）によって下方調節される。全ての細胞株がクルクミン及びＬＨＲＨクルクミンの存在下でＸＩＡＰ及びｃ−ＩＡＰ２を下方調節する一方で、切断ＰＡＲＰによって明らかにされた通りの２４時間でのアポトーシスの惹起は、４つの膵臓細胞株の中で別個であり、異なる薬物用量がアポトーシスを誘発するのに必要とされ得ることを示唆している。
【０１８１】
実施例１２
[0212]この実施例は、処置の７２時間後のアポトーシスマーカー（切断ＰＡＲＰ、切断カスパーゼ−３）及びアポトーシスの阻害剤（ＸＩＡＰ及びｃＩＡＰ２）の分析を含む。
【０１８２】
[0213]ウエスタンブロット分析。アクチンを負荷対照として使用した。ゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンの両方を水中に希釈した。細胞を以下の通りに処置した：
１．モック
２．ゲムシタビン１ｕＭ
３．ゲムシタビン５ｕＭ
４．ゲムシタビン１０ｕＭ
５．ＬＨＲＨ−クルクミン１０．０ｕＭ
６．ＬＨＲＨ−クルクミン２０．０ｕＭ
７．ゲムシタビン（１）＋ＬＨＲＨ−ｃ（１０）
８．ゲムシタビン（５）＋ＬＨＲＨ−ｃ（１０）
９．ゲムシタビン（１０）＋ＬＨＲＨ−ｃ（１０）
１０．ゲムシタビン（１）＋ＬＨＲＨ−ｃ（２０）
１１．ゲムシタビン（５）＋ＬＨＲＨ−ｃ（２０）
１２．ゲムシタビン（１０）＋ＬＨＲＨ−ｃ（２０）
【０１８３】
[0214]結果は、図１２Ａ（ＭｉａＰａｃａ−２細胞）及び図１２Ｂ（Ｐａｎｃ−１細胞）に表示されている。アポトーシスタンパク質のＸＩＡＰ及びｃ−ＩＡＰ２阻害剤は、ＭｉａＰａｃａ−２及びＰａｎｃ−１の細胞において処置の７２時間後にゲムシタビン（５ｕＭ及び１０ｕＭ）の存在下で低用量のＬＨＲＨ−クルクミン（１０ｕＭ及び２０ｕＭ）によって下方調節される。より高いレベルの切断ＰＡＲＰ及び切断カスパーゼ３によって例示される７２時間でのアポトーシスの増加は、細胞が、低用量のＬＨＲＨ−クルクミンとの組合せにおける低用量のゲムシタビンで処置される場合に検出される。このデータは、より低い用量を用いる該組合せ処置が、潜在的に低減される副作用で長期結果を誘発する際に有効であり得ることを示す。
【０１８４】
実施例１３
[0215]この実施例は、クルクミン、ＬＨＲＨ−クルクミン及びＤＭＳＯ対照で処置されたＰａｎｃ−１細胞におけるアポトーシスの阻害剤ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１及びｃＩＡＰ２のｍＲＮＡレベルの定量的ＰＣＲ分析を示す。
【０１８５】
[0216]細胞を呈示されている通りに２４時間の間処置した。ＧＡＰＤＨを参照として使用した。結果は、図１２Ａ（ＸＩＡＰ相対ｍＲＮＡレベル）、図１２Ｂ（ｃＩＡＰ１相対ｍＲＮＡレベル）、図１２Ｃ（ｃＩＡＰ２相対ｍＲＮＡレベル）に表示した。
【０１８６】
[0217]定量的ＰＣＲ分析は、アポトーシスのＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１及びｃ−ＩＡＰ２阻害剤のｍＲＮＡレベルが、処置の２４時間後のＰａｎｃ−１膵臓細胞株において高用量のクルクミン及びＬＨＲＨ−クルクミン（５０ｕＭ）によって下方調節されることを明らかにする。ＱＰＣＲ分析は、ウエスタンブロット分析を裏付けし（図１０及び図１１）、クルクミン及びＬＨＲＨ−クルクミンが、ＲＮＡ及びタンパク質レベルの両方でアポトーシスの阻害剤ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１及びｃ−ＩＡＰ２を下方調節することを示唆する。
【０１８７】
実施例１４
[0218]この実施例は、ＨＰＮＥ正常膵臓細胞株及びがん膵臓細胞株（ＭｉａＰａｃａ−２、Ｐｎａｃ−１、ＡｓＰＣ−１及びＢｘＰＣ−３）におけるＬＨＲＨＲタンパク質発現を示すデータを含む。
【０１８８】
[0219]結果は図１４に表示されている。ＬＨＲＨ−受容体（ＬＨＲＨＲ）は、正常膵臓細胞株及びがん細胞株において異なるレベルで発現される。ＭｉａＰａｃａ−２及びＰａｎｃ−１のがん細胞株は、最も高いレベルでＬＨＲＨＲを発現した。
【０１８９】
実施例１５
[0220]この実施例は、実施例１６及び図１５〜３０に展開されたデータのために使用されたある特定の材料及び方法を列挙する。
【０１９０】
動物
[0221]雄性ＳＣＩＤ／ｂｇマウス（５週齢；Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＮＹ）を、１２時間の明暗サイクル下にて一定温度及び湿度で維持された部屋における標準的なマウスＰｌｅｘｉｇｌａｓケージに収容した。実験プロトコールは、ＬＳＵＨＳＣ  Ｓｈｒｅｖｅｐｏｒｔにて動物実験委員会によって審査及び承認された。
【０１９１】
Ｍｉａ−ＰａＣａ−２細胞の皮下移植
[0222]Ｍｉａ−ＰａＣａ−２細胞をトリプシン処理後に細胞培養から収集した。細胞を血清フリー培地中で１回洗浄し、ＨＢＳＳ中に再懸濁した。＞９０％生存能を有する単一細胞からなる懸濁液だけを注射のために使用した。マウスに、２６Ｇａシリンジで５０％マトリゲル／ＨＢＳＳ中５×１０６のＭＩＡ−ＰａＣａ細胞（ＡＴＣＣ、ＶＡ）を右後側腹部にｓ．ｃ．で注射した。
【０１９２】
実験プロトコール
[0223]２１日目に、腫瘍細胞移植後、１００〜２００ｍｍ３の間の腫瘍を担持するマウスを、以下の処置群に無作為化した（ｎ＝８）：ビヒクル対照；ゲムシタビン処置（５０ｍｇ／ｋｇ又は１００ｍｇ／ｋｇ）；ＬＨＲＨ−クルクミン処置（２０ｍｇ／ｋｇ又は４０ｍｇ／ｋｇ）；ゲムシタビン／ＬＨＲＨクルクミン処置する。処置を１００μＬのＰＢＳ中で行い、４週間、ゲムシタビンについては毎週１回及びＬＨＲＨ−クルクミンについては毎週２回、注射によって腹腔内に与えられた。ビヒクル処置群は、同等量のＰＢＳを受けた。腫瘍体積を週１回ノギスで測定し、マウスの体重を週１回測定した。腫瘍体積を式：Ｖ（ｍｍ３）＝（長さ×幅＊２）／２によって算出し、ここで、幅はミリメートルで最も短い測定値であった。低用量処置について最終処置の１０日後（無作為化後３５日目及び腫瘍細胞移植から５５日目）又は高用量処置について最終処置の２日後（無作為化後２８日目及び腫瘍細胞移植から４８日目）に、マウスを剖検した。腫瘍を解剖し、秤量し、写真を撮った。
【０１９３】
ＨＰＬＣ腫瘍抽出方法
[0224]腫瘍組織の試料を秤量し、次いで、液体窒素中で３〜５分冷却されたＢｅｓｓｍａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｐｕｌｖｅｒｉｚｅｒを使用して微粉砕した。その結果得られた粉末を次いでガラス均質化チャンバーに入れ、２０％溶液にＰＢＳ中で混合し、破砕することで、最終ホモジネートを生成した。２００ΜｌアリコートのホモジネートをＡｘｙｇｅｎの２ｍＬクリアマイクロチューブ中に分注した（Ｐａｒｔ番号：ＭＣＴ−２００−Ｃ−Ｓ）。各試料を１ｍＬの１０％メタノール／９０％酢酸エチルで抽出し、ボルテックスし、冷室にて遠心分離によって１４，０００ｒｐｍで３０分回転させた。上部有機相層を次いで除去し、別々の微量遠心機チューブに入れた。該手順を反復し、Ｓａｖａｎｔ  ＳｐｅｅｄＶａｃを使用して、プールした腫瘍抽出物を濃縮した。試料を１ｍＭアスコルビン酸性ＭｅＯＨ（ｐＨ４．６）１００μＬ中で再構成し、超音波処理浴中で２分間混合し、７５μＬをオンカラムで注射した。周囲温度で操作されるＴｈｅｒｍｏ  ＯＤＳ  Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  ５μｍ  ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ分析カラム（Ｐａｒｔ番号：３０１０５−２５２１３０）を用いる逆相ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズ）を使用することで、腫瘍中のクルクミンを定量化した。移動相は、０．１％ＴＦＡ（移動Ａ）、及び０．０８％ＴＦＡとのアセトニトリル（移動Ｂ）であった。９０％移動Ａ／１０％移動Ｂで出発し、０〜１５分で３５％移動Ａ／６５％移動Ｂに、及び最終的に２５分で３１．４％Ａ／６８．６％Ｂに増加する勾配を使用して、抽出された腫瘍試料を溶出した。２０分間１００％移動Ｂ中のイソプロパノール１００μＬの注射を使用して、カラムから残留のクルクミンを清浄した。０．５ｍＬ／ｍｉｎの流量及びＥｘ  ４２０ｎｍ及びＥｍ  ５２４ｎｍでの蛍光検出で行われた全ての分析を用いて、クルクミンが約１６．５分で溶出した。
【０１９４】
細胞増殖分析
[0225]膵臓がん細胞をトリプシン処理後に回収し、処置の前２４時間の間９６ウェルプレート中に播種した。図の説明に記載されている通りに、処置を行った。処置に続いて、「Ｐｈａｓｅ  Ｏｂｊｅｃｔ  Ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｅ」ＩｎｃｕｃｙｔｅＺＯＯＭソフトウェアのモジュールを使用して、細胞増殖を分析した。
【０１９５】
ウエスタンブロット分析
[0226]膵臓がん細胞をトリプシン処理後に回収し、処置の前２４時間の間１２ウェルプレートに播種した。図の説明に記載されている通りに、処置を行った。処置に続いて、全細胞可溶化物をラエムリ緩衝液中に回収し、ウエスタンブロットによって分析した。以下の一次抗体を使用した：切断ＰＡＲＰ、ｃ−ＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、切断Ｐａｒｐ−１（全てＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇから）、アクチン（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）。
【０１９６】
定量的ＰＣＲ分析
[0227]Ｒｏｃｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｐｒｏｂｅプロトコールを使用する定量的リアルタイムＰＣＲによって、Ｓｍａｄ３、ＳＮＡＩ１、ＳＮＡＩ２、ＴＧＦＢＲＩ、ＴＧＦＢＲＩＩ、ＧＡＤＤ４５及びＸＩＡＰのｍＲＮＡレベルを決定した。以下の条件下で、ＲｏｃｈｅからのＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ９６システムを使用して、熱サイクリングを実施した：１０分間９５℃、並びに１５秒間９５℃及び６０秒間５５℃で４０サイクル。任意の所与の遺伝子についてのｍＲＮＡ発現は、対照処置細胞との比較として表される。ＧＡＰＤＨを参照のハウスキーピング遺伝子として使用した。
【０１９７】
実施例１６
[0228]この実施例は、腫瘍成長を強く阻害した、組合せで投与された低い及び高い用量のゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンのインビボ研究の結果の記載である。
【０１９８】
[0229]簡潔には、組合せにおける低い及び高い用量のゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンの腹腔内注射は、ＳＣＩＤマウスにおけるＭｉａ−ＰａＣａ−２がん細胞異種移植片の成長を強く阻害した。ゲムシタビン単独、ＬＨＲＨ−クルクミン単独及び薬物組合せの処置マウスの腫瘍の平均体積及び平均重量は、ビヒクル処置対照マウスの腫瘍体積及び腫瘍重量に比較して、有意に（ｐ＝０．０２５）低減された。重要なことに、薬物の組合せで処置された腫瘍の平均体積及び平均重量は、単一薬物で処置されたマウスのものよりも有意に小さかった。
【０１９９】
[0230]低用量のゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンは、腫瘍成長を完全に防止することがなかった一方で、両薬物の組合せは、腫瘍サイズに対して、個々の処置のいずれよりも有意に強い効果を有した。より高い用量の薬物は、より甚大な効果を腫瘍成長に対して示す。高用量のゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンの組合せで処置されたマウスは、対照マウスと比較した場合、腫瘍サイズで４〜５倍の低減を示す。
【０２００】
[0231]薬物処置は単独又は組合せで、マウスの健康に影響せず、マウスの体重又は外見の有意な変化が検出されなかった。これは、より低い又はより高い用量のいずれかのゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンが、このマウスモデルにおいて副作用を著しく誘発することなく、腫瘍成長を低減するために有効に使用することができることを意味する。
【０２０１】
[0232]腫瘍におけるクルクミンの存在を具体的に検出するため、対照処置及びＬＨＲＨ−クルクミン処置のマウスからの腫瘍組織に、ＨＰＬＣ分析を行った。エステル結合は、［ＤＬｙｓ６］−ＬＨＲＨ−クルクミンの合成中に該コンジュゲートの２種の構成成分間に導入される。該結合は、該細胞内の細胞性エステラーゼによって加水分解され、フリークルクミンが細胞レベルで作用するのを可能にする。
【０２０２】
[0233]ＨＰＬＣ分析は、本明細書において、腫瘍組織に蓄積されたクルクミン、及びその上可能な代謝物の存在を明らかに示す。フリークルクミン及びそれの代謝物は、対照処置マウス由来の腫瘍組織に不在である。腫瘍組織におけるフリークルクミンの検出は、該薬物が、腫瘍部位へ効果的に送達され、腫瘍細胞増殖を阻害するとともに腫瘍細胞死滅を誘発するように作用することを意味する。
【０２０３】
[0234]全体的に、本明細書におけるインビボ結果は、ＬＨＲＨ−クルクミンの優位な有効性及び生物学的利用能を示し、この化合物を単一及び薬物組合せのがん処置のための優れた候補にする。
【０２０４】
[0235]患者由来膵臓がん細胞株のＰＡＴＣ５３に対するＬＨＲＨ−クルクミンの効果も検査した。ＰＡＴＣ５３細胞の前の分析は、この特別な細胞株が低レベルのＬＨＲＨＲを呈示することを示す。本明細書におけるデータは、前のデータと一致し、ＰＡＴＣ５３細胞が、細胞増殖及び／又は細胞死に対する効果を検出するために、より高いレベルのＬＨＲＨ−クルクミンを必要とすることを示す。高用量のＬＨＲＨ−クルクミンを用いる処置は、ＴＧＦβ経路誘発に関与する遺伝子の発現も阻害した。
【０２０５】
[0236]このデータは、ＬＨＲＨＲがより低いレベルで発現される場合でさえ、より高い用量でＬＨＲＨ−クルクミンを用いる処置がＴＧＦβ経路によって誘発される細胞成長及び転移をまだ阻害することを意味する。
【０２０６】
実施例１７
[0237]この実施例は、膵臓がん患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルにおけるＬＨＲＨ−クルクミン単独又は組合薬剤の抗腫瘍活性を検証するさらなる研究の記載である。
【０２０７】
ＰＤＸ腫瘍を成長させること：
[0238]動物実験プロトコールは、Ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ  ＭＤ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｈｏｕｓｔｏｎ、Ｔｅｘａｓ）施設審査委員会によって、及び国立衛生研究所によって発表されたＧｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓに従って、審査及び承認された。前の刊行物に記載されている通りに、ヌードマウスにおいて、凍結保存された初期継代のＰＤＸから、ＰＤＸを成長させた（Ｋｉｍ  ＭＰ、ら、Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ  ２００９；４（１１）：１６７０〜８０）。簡潔には、クリオストル（ＣｒｙｏＳｔｏｒ）（商標）ＣＳ１０貯蔵媒体に貯蔵された腫瘍試料を回収し、約２ｍｍ３の断片にカットし、マトリゲルに浸漬し、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスの皮下空隙に移植した（５匹のマウス／ＰＤＸ）。クワドルプリケートで薬物試験するための組織薄片を作製するため、腫瘍が直径１．５ｃｍに達した時に腫瘍を収集した。
【０２０８】
生組織感受性アッセイ（ＬＴＳＡ）：
[0239]組織スライサーで１個の腫瘍移植片から約１００個の組織薄片を生成し、前に確立された方法（Ｒｏｉｆｅ  Ｄ、ら、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１６）で９６ウェルプレートにアレイ化した。２時間のインキュベーション後、組織薄片をＬＨＲＨ−クルクミン（０μＭ、３μＭ、１０μＭ及び３０μＭ）、１０μＭのゲムシタビン、又は組合せで処置される。０．１％  ＤＭＳＯを有する同じ体積の培地を対照ウェルに添加した。７２時間後、組織生存能をＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ方法で測定した。対照（ＤＭＳＯ処置）薄片の生存能に対する、阻害剤で処置された組織薄片の生存能の正規化を介して、生存能阻害を算出する。生存能の阻害をｔ試験でさらに分析した。ｐ＜０．０５と平均で組織薄片生存能の少なくとも３０％が阻害されたとの両方であったならば、組織を該処置に感受性であるとして定義した。
【０２０９】
統計分析：
[0240]処置と対照との間の有意な差異をｔ試験で分析した。全ての統計分析をＧｒａｐｈＰａｄ  ８．０で行った。
【０２１０】
[0241]ＰＤＡＣ  ＰＤＸのサブセットは、ＬＨＲＨ−クルクミン及び組合せ処置に感受性であった。２５個のＰＤＸのパネルを研究のために移植した。ＬＴＳＡアッセイ（該方法）を用いて、合計１６個のＰＤＡＣ  ＰＤＸを、単独及びゲムシタビンとの組合せにおけるＬＨＲＨ−クルクミンへのＰＤＡＣ  ＰＤＸの応答について試験した。感受性基準（３０％生存能阻害及び０．０５未満のＰ値）に基づき、１６匹のうち８匹（５０％）のＰＤＸは、ＬＨＲＨ−クルクミン単一薬剤処置に感受性であった（図３２〜３４、及び表１）。加えて、ゲムシタビン（１０μＭ）の組合せは、ＰＴＡＸ１４１、１４８、１１２、１７６、１７３、１０２、及び１５３においてＬＨＲＨ−クルクミンの抗腫瘍活性をさらに増強させた。１４個のＰＤＸにおいて、試験された１０個のＰＤＸは組合せ処置に感受性であった（図３３及び３４、及び表２）。結果は、単一のＬＨＲＨ−クルクミンが、ＰＤＡＣ  ＰＤＸのサブセットにおいて活性であること、並びにゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンの組合せがＬＨＲＨ−クルクミンの抗腫瘍活性をさらに増強したことを示唆する。
【０２１１】
[0242]データは、約５０％のＰＤＸがＬＨＲＨ−クルクミン単一薬剤処置に感受性であったことを示す。したがって、ゲムシタビン及びＬＨＲＨ−クルクミンの組合せは、ＰＤＸのサブセットにおいてＬＨＲＨ−クルクミンの抗腫瘍活性を増強した。
【表１】
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【表２】
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【０２１２】
実施例１８
[0243]この実施例は、ＬＨＲＨ受容体発現を確かめるための研究の記載である。データは、ＬＨＲＨ受容体（ＬＨＲＨ−Ｒ）の発現がＬＨＲＨ−クルクミンへの応答と関連することを示す。
【０２１３】
組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）におけるＬＨＲＨ受容体アッセイ：
[0244]ＬＨＲＨ−受容体発現を、臨床的な組織病理学コア実験室において、確立された方法で測定した。非発現には０、低い発現には１、中程度の発現には２、及び高い発現には３のスコアを使用して、ＬＨＲＨ−Ｒの染色を顕微鏡下で定量化した。
【０２１４】
統計分析
[0245]Ｐｅａｒｓｏｎ相関関係を使用することで、ＬＨＲＨ−Ｒの発現とＬＨＲＨ−クルクミン又は組合せに対するＰＤＸの感受性との間の相関関係を分析した。全ての統計分析をＧｒａｐｈＰａｄ  ８．０で行った。
【０２１５】
[0246]２つの組織マイクロアレイにアレイ化された８８個のＰＤＸ腫瘍のパネルにおいて、ＬＨＲＨ−Ｒの発現を分析した。ＬＨＲＨ−Ｒの染色を顕微鏡下で検査し、スコア化した（図３５）。１２個の試験されたＰＤＸにおけるＬＨＲＨ−Ｒの発現をスコア化した。別の４個のＰＤＸ腫瘍はＴＭＡセットの中になかった。ＬＨＲＨ−Ｒの発現レベル及びＰＤＸ感受性は、表３に要約されている。相関関係分析は、ＬＨＲＨ−Ｒ発現が、ＬＨＲＨ−クルクミン単一薬剤処置に対するＰＤＸ腫瘍の感受性と強く関連していることを見出した。
【０２１６】
[0247]ＰＤＸモデルと組み合わせたエクスビボ生存腫瘍薬物感受性アッセイを使用して、１６人の異なる患者に由来する１６個のＰＤＡＣ  ＰＤＸ腫瘍を分析した。結果は、試験されたＰＤＸの約５０％が単一薬剤ＬＨＲＨ−クルクミン処置（３０μＭ）に感受性であり、ゲムシタビンと組み合わされた場合に、抗腫瘍活性がＰＤＸ腫瘍のサブセットにおいてさらに増強されたことを示し、ＰＤＸの約７０％が組合せ処置に感受性であったことを示す。
【０２１７】
[0248]ＰＤＸモデルは、治療剤の効力を判定するための最も信頼できるモデルであることが証明されているので、これらの結果は、ＬＨＲＨ−クルクミンが単独で又は他の薬剤との組合せで、膵臓がん処置のための有望な戦略であることを示す。結果は、ＬＨＲＨ受容体の発現がＬＨＲＨ−クルクミンへの応答と関連したことも示し、ＬＨＲＨ受容体レベルが、これらのレジメンを用いる将来の臨床試験における患者選択のための予測マーカーであり得ることを示す。
【表３】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１Ａ】
2019507749.tif 000034
【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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