(57)【要約】本発明は、ＪＡＫキナーゼの阻害剤である、式（Ｉ）の化合物（式中、変数は明細書中に定義される）またはその薬学的に許容され得る塩を提供する。本発明は、そのような化合物を含む薬学的組成物、胃腸炎症性疾患および他の炎症性疾患を処置するためにそのような化合物を使用する方法、ならびにそのような化合物の調製に有用なプロセスおよび中間体も提供する。本発明は、哺乳動物の胃腸炎症性疾患、特に、潰瘍性大腸炎を処置する方法であって、この方法が、本発明の化合物または薬学的組成物をその哺乳動物に投与する工程を含む、方法も提供する。2019514903.tif 000058
2019514903.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
【化３８】
2019514903.tif 000049
（式中、
Ｒ１は、
（ａ）−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４（ここで、Ｒ４は、
Ｃ１−４アルキル（ここで、Ｃ１−４アルキルは、−ＣＮ、−ＯＣ１−３アルキルまたはＣ３−６シクロアルキルで必要に応じて置換される）、
１つの窒素原子を含む４〜６つの環原子を含むヘテロシクリル（ここで、任意のヘテロシクリルが、−ＣＮで必要に応じて置換される）、
Ｃ３−６シクロアルキル、
ピリジニル（ここで、ピリジニルは、フルオロで必要に応じて置換される）、および
フェニル
から選択される）；
（ｂ）Ｃ１−４アルキル（ここで、Ｃ１−４アルキルは、−ＣＮ、
【化３９】
2019514903.tif 000050
またはピリジニル（ここで、ピリジニルは、−ＣＮで必要に応じて置換される）で必要に応じて置換される）；および
（ｃ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ５（ここで、Ｒ５は、
Ｃ１−４アルキル（ここで、Ｃ１−４アルキルは、Ｃ３−６シクロアルキルまたは１つもしくは２つのフルオロで必要に応じて置換される）、
−ＯＣ１−４アルキル、
Ｃ３−６シクロアルキル、および
モルホリニル
から選択される）
から選択され；
Ｒ２は、水素またはメチルであり；
Ｒ３は、Ｃ１−３アルキルであり；
ｎは、１または２である）
またはその薬学的に許容され得る塩もしくは立体異性体。
【請求項２】
Ｒ３が、メチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２が、メチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ｎが、２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１が、
（ａ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ４（ここで、Ｒ４は、
Ｃ１−２アルキル（ここで、Ｃ１−２アルキルは、−ＣＮ、−ＯＣＨ３またはシクロプロピルで必要に応じて置換される）、
アゼチジニルもしくはピロリジニル（ここで、アゼチジニルは、−ＣＮで必要に応じて置換される）、
シクロプロピル、
ピリジニル（ここで、ピリジニルは、フルオロで必要に応じて置換される）、および
フェニル
から選択される）；
（ｂ）Ｃ１−４アルキル（ここで、Ｃ１−４アルキルは、−ＣＮ、
【化４０】
2019514903.tif 000051
またはピリジニル（ここで、ピリジニルは、−ＣＮで必要に応じて置換される）で必要に応じて置換される）；および
（ｃ）Ｃ（Ｏ）Ｒ５（ここで、Ｒ５は、
Ｃ１−２アルキル（ここで、Ｃ１−２アルキルは、シクロプロピルまたは１つもしくは２つのフルオロで必要に応じて置換される）、
−ＯＣ１−４アルキル、
Ｃ３−６シクロアルキル、および
モルホリニル
から選択される）
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
前記化合物が、
１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリル、
１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリル、
（３−（（６−メトキシ−２−（メチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（メチルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（６−メトキシ−２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（（２−メトキシエチル）スルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
３−（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−イル）プロパンニトリル、
５−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）メチル）ピコリノニトリル、
５−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）メチル）ニコチノニトリル、
イソブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボキシレート、
２，２−ジフルオロ−１−（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）エタン−１−オン、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（アゼチジン−１−イルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリル、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（（５−フルオロピリジン−３−イル）スルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（６−メトキシ−２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（フェニルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（エチルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（（シクロプロピルメチル）スルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（６−メトキシ−２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（ピリジン−３−イルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
３−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）−スルホニル）プロパンニトリル、
（３−（（６−メトキシ−２−（メチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（ピロリジン−１−イルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（シクロプロピルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（６−メトキシ−２−（メチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（ピリジン−３−イルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（６−メトキシ−２−（メチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（フェニルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（アゼチジン−１−イルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（（シクロプロピルメチル）スルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（（５−フルオロピリジン−３−イル）スルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
４−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）メチル）ピコリノニトリル、
（３−（（６−メトキシ−２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（ピリジン−３−イルメチル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
３−（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）プロパンニトリル、
１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）メチル）シクロプロパン−１−カルボニトリル、
（３−（（６−メトキシ−２−（メチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（ピリジン−４−イルメチル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
４−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）メチル）ピコリノニトリル、
２，２−ジフルオロ−１−（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）エタン−１−オン、
イソブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボキシレート、
メチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボキシレート、
（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシ−ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）（モルホリノ）メタノン、
２−シクロプロピル−１−（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）エタン−１−オン、
シクロペンチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）メタノン、および
シクロブチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）メタノン、
ならびにそれらの薬学的に許容され得る塩
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
前記化合物が、式（ＩＩ）の化合物：
【化４１】
2019514903.tif 000052
またはその薬学的に許容され得る塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ４が、メチル、エチル、アゼチジニル、ピロリジニル、シクロプロピル、ピリジニルまたはフェニルであり、ここで、エチルは、メトキシで必要に応じて置換され、アゼチジニルは、−ＣＮで必要に応じて置換され、ピリジニルは、フルオロで必要に応じて置換される、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
前記化合物が、
１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリル、
（３−（（６−メトキシ−２−（メチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（メチルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（６−メトキシ−２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（（２−メトキシエチル）スルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
３−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシ−ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）−スルホニル）プロパンニトリル、
（３−（（６−メトキシ−２−（メチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（ピロリジン−１−イルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（シクロプロピルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（６−メトキシ−２−（メチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（ピリジン−３−イルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（６−メトキシ−２−（メチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（フェニルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（アゼチジン−１−イルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（（シクロプロピルメチル）スルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、および
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（（５−フルオロピリジン−３−イル）スルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
ならびにそれらの薬学的に許容され得る塩
から選択される、請求項７に記載の化合物。
【請求項１０】
式：
【化４２】
2019514903.tif 000053
の１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリルまたはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項１１】
１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリル。
【請求項１２】
１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリルの結晶形態であって、前記結晶形態は、８．８９±０．２０、１２．９９±０．２０、１３．４４±０．２０および２０．１６±０．２０の２θ値に回折ピークを含む粉末Ｘ線回折を特徴とする、１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリルの結晶形態。
【請求項１３】
前記粉末Ｘ線回折パターンが、１０．６４±０．２０、１０．９９±０．２０、１５．０２±０．２０、１５．７４±０．２０、１６．４７±０．２０、２０．９３±０．２０、２２．２２±０．２０、および２６．２５±０．２０から選択される２θ値において２つまたはそれを超えるさらなる回折ピークを有することをさらに特徴とする、請求項１２に記載の結晶形態。
【請求項１４】
前記結晶形態が、ピーク位置が図１に示されているパターンのピーク位置と実質的に一致する粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする、請求項１２に記載の結晶形態。
【請求項１５】
前記結晶形態が、約２３５℃〜約２４５℃の温度において吸熱熱流の最大値を示す、１０℃／分の加熱速度で記録された示差走査熱量測定トレースを特徴とする、請求項１２に記載の結晶形態。
【請求項１６】
前記結晶形態が、図２に示されている示差走査熱量測定トレースと実質的に一致する示差走査熱量測定トレースを特徴とする、請求項１５に記載の結晶形態。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物および薬学的に許容され得るキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項１８】
胃腸炎症性疾患の処置に有用な１つまたはそれを超える他の治療剤をさらに含む、請求項１７に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
式（Ｉ）の化合物：
【化４３】
2019514903.tif 000054
またはその薬学的に許容され得る塩を調製するためのプロセスであって、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびｎは、請求項１において定義されたとおりであり、前記プロセスは、
（ａ）式（ＩＩＩ）の化合物：
【化４４】
2019514903.tif 000055
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびｎは、請求項１において定義されたとおりである）を
（ｉ）Ｃｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４（式中、Ｒ４は、請求項１において定義されたとおりである）；
（ｉｉ）式Ｌ−ＲＡの化合物（式中、Ｌは、脱離基であり、ＲＡは、Ｃ１−４アルキル（ここで、Ｃ１−４アルキルは、−ＣＮ、
【化４５】
2019514903.tif 000056
またはピリジニル（ここで、ピリジニルは、−ＣＮで必要に応じて置換される）で必要に応じて置換される）である）；
（ｉｉｉ）Ｃｌ−Ｃ（Ｏ）Ｒ５（ここで、Ｒ５は、請求項１において定義されたとおりである）；または
（ｉｖ）ＨＯ−Ｃ（Ｏ）Ｒ５（ここで、Ｒ５は、請求項１におけるように定義されたとおりである）
と反応させる工程；および
（ｂ）必要に応じて、薬学的に許容され得る塩を形成することにより、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を提供する工程
を含む、プロセス。
【請求項２０】
式（ＩＩＩ）の化合物：
【化４６】
2019514903.tif 000057
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびｎは、請求項１において定義されたとおりである）。
【請求項２１】
Ｒ２およびＲ３が、それぞれメチルである、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
請求項１２において定義されたような１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリルの結晶形態を調製する方法であって、前記方法は、
（ａ）１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリルを、Ｎ−メチルピロリドンおよびジメチルホルムアミドから選択される希釈剤に溶解して、反応混合物を形成する工程；
（ｂ）前記反応混合物にアセトンおよび水を加える工程；および
（ｃ）前記反応混合物から前記結晶形態を単離する工程
を含む、方法。
【請求項２３】
哺乳動物の胃腸炎症性疾患の処置において使用するための、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２４】
前記胃腸炎症性疾患が、潰瘍性大腸炎である、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
前記化合物が、胃腸炎症性疾患の処置に有用な１つまたはそれを超える他の治療剤との併用において使用するためのものである、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２６】
哺乳動物の胃腸炎症性疾患を処置するための薬を製造するための請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項２７】
前記胃腸炎症性疾患が、潰瘍性大腸炎である、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
哺乳動物の皮膚の炎症性疾患の処置において使用するための、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２９】
前記皮膚の炎症性疾患が、アトピー性皮膚炎である、請求項２８に記載の化合物。
【請求項３０】
哺乳動物の皮膚の炎症性疾患を処置するための薬を製造するための請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項３１】
前記皮膚の炎症性疾患が、アトピー性皮膚炎である、請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
哺乳動物の胃腸炎症性疾患を処置する方法であって、該方法は、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物および薬学的に許容され得るキャリアを該哺乳動物に投与する工程を含む、方法。
【請求項３３】
前記方法が、胃腸炎症性疾患の処置に有用な１つまたはそれを超える他の治療剤を投与する工程をさらに含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記胃腸炎症性疾患が、潰瘍性大腸炎である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
哺乳動物の皮膚の炎症性疾患を処置する方法であって、前記方法は、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物を含む薬学的組成物を前記哺乳動物の皮膚に塗布する工程を含む、方法。
【請求項３６】
前記炎症性疾患が、アトピー性皮膚炎である、請求項３５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
発明の分野
本発明は、ＪＡＫキナーゼ阻害剤として有用なピリミジン化合物に関する。本発明は、そのような化合物を含む薬学的組成物、炎症性疾患を処置するためにそのような化合物を使用する方法、ならびにそのような化合物の調製に有用なプロセスおよび中間体にも関する。
【背景技術】
【０００２】
当該分野の状況
潰瘍性大腸炎は、結腸の慢性炎症性疾患である。この疾患は、直腸および大腸の粘膜層の炎症および潰瘍化を特徴とする。一般的な症候としては、下痢、血便および腹痛が挙げられる。臨床経過は、間欠性であり、悪化と緩解の期間を交互に繰り返すことによって特徴付けられる。発生率は、開発途上国よりも先進国においてより高いと見られる。主要な先進工業国の推定１２０万人が潰瘍性大腸炎に罹患しており、その数は、人口増加に伴って増加すると予想される。潰瘍性大腸炎を有する患者は、直腸結腸がんを発症するリスクが高い（例えば、Ｄａｎｅｓｅら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，２０１１，３６５，１７１３−１７２５）。
【０００３】
患者の潰瘍性大腸炎（ＵＣ）の緩解を促し、維持する種々の治療法の選択肢が存在するが、いずれも理想的ではない。スルファサラジン関連の処置は、軽度のＵＣに有効であることが多いが、中程度から重度の疾患ではそれほど有効ではない。中程度から重度のＵＣを有する患者において緩解を迅速に誘導するためには、コルチコステロイドが使用されることが多い。しかしながら、緩解を維持するためのステロイドの慢性使用は、長期間の有害作用（例えば、骨粗鬆症および骨折、感染症、白内障、より緩やかな創傷治癒および副腎ホルモン産生の抑制）との関連に起因して、推奨されない。全身免疫抑制剤（例えば、アザチオプリン、シクロスポリンおよびメトトレキサート）は、中程度から重度のＵＣ患者において遅発性の中程度の有効性を有するが、長期使用は、長期間の全身免疫抑制の結果（例えば、感染症およびリンパ腫のリスク増大）に起因して問題になり得る。抗ＴＮＦα抗体（例えば、インフリキシマブおよびアダリムマブ）は、高価であり、皮下投与または静脈内投与が必要であるが、中程度から重度の疾患を有するＵＣ患者のおよそ６０〜７０％において有効である。しかしながら、最大３分の１の患者が適切に反応せず、別の３分の１の最初の反応者は数週間にわたって耐性を示す（Ａｌｌｅｚら、Ｊ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  Ｃｏｌｉｔｉｓ，２０１０，４，３５５−３６６；Ｒｕｔｇｅｅｒｔｓら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，２００５，３５３，２４６２−２４７６）。最近承認されたＵＣ治療のベドリズマブという抗インテグリンα４β７抗体は、中程度から重度のＵＣ患者において有効であるが、その非経口経路が最適には及ばず、この機序を介した長期間の免疫抑制の結果は、依然として確定していない。既存の治療法の選択肢があるにもかかわらず、ＵＣ患者の約１０〜２０％は、依然として、診断から１０年以内に結腸切除術が必要になる（Ｔａｒｇｏｗｎｉｋら、Ａｍ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２０１２，１０７，１２２８−１２３５）。慢性の全身免疫抑制に起因する安全性の懸念なしに、中程度から重度のＵＣの緩解を促進し、維持するための有効な治療に対して未だ対処されていない医学的ニーズが残っていることは明らかである。
【０００４】
潰瘍性大腸炎の根底にある機序は、完全に理解されていないが、遺伝的に感受性の個体の環境要因が、免疫系による腸の微生物叢に対する不適当な（過剰な）反応を惹起して、結腸の炎症、組織損傷およびこの疾患に特有の関連症候が生じると考えられている。
【０００５】
ＵＣの正確な病原論は、明らかになっていないが、炎症促進性サイトカインが、免疫学的応答において中心的役割を果たしていることは明らかである（Ｓｔｒｏｂｅｒら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２０１１，１４０，１７５６−１７６７）。ＵＣにおいて最も一般的に上昇する炎症促進性サイトカインの多く（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＦＮγおよびレプチン）は、シグナル伝達について、チロシンキナーゼのＪＡＫファミリー（すなわち、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴｙｋ２）に依存する。サイトカインがＪＡＫ依存性サイトカインレセプターに結合すると、レセプターの二量体化が誘導され、それにより、ＪＡＫキナーゼ上のチロシン残基がリン酸化され、ＪＡＫの活性化がもたらされる。次に、リン酸化されたＪＡＫは、様々なＳＴＡＴタンパク質に結合してリン酸化し、そのＳＴＡＴタンパク質は、二量体化し、細胞核に内部移行して、遺伝子の転写を直接調節することにより、他の作用の中でも、炎症性疾患に関連する下流の作用をもたらす。これらのＪＡＫは、通常、２つ１組でホモ二量体またはヘテロ二量体として、サイトカインレセプターと会合する。特定のサイトカインが、特定のＪＡＫ対形成に関連する。
【０００６】
アトピー性皮膚炎（ＡＤ）は、米国だけで推定１４００万人が罹患している一般的な慢性炎症性皮膚疾患である。ＡＤは、先進国において小児の１０〜２０％および成人の１〜３％が罹患していると推定されており（Ｂａｏら、ＪＡＫ  ＳＴＡＴ，２０１３，２，ｅ２４１３７）、有病率は上昇している。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路に依存する炎症促進性サイトカイン（特に、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＦＮγおよびＴＳＬＰ）の増加は、ＡＤに関連している（Ｂａｏら、Ｌｅｕｎｇら、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，２００４，１１３，６５１−６５７）。さらに、ＪＡＫ対形成を介してシグナル伝達する別のサイトカインであるＩＬ−３１のアップレギュレーションが、ＡＤの慢性状態に関連するそう痒症において役割を果たすと示された（Ｓｕｎｋｏｌｙら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００６，１１７，４１１−４１７）。
【０００７】
ＪＡＫ酵素のファミリーを阻害すると、多くの重要な炎症促進性サイトカインのシグナル伝達が阻害され得る。したがって、ＪＡＫ阻害剤は、潰瘍性大腸炎および他の胃腸炎症性疾患（例えば、クローン病、および免疫チェックポイント阻害剤によって誘発される大腸炎）、アトピー性皮膚炎、および他の炎症性皮膚疾患、アレルギー性鼻炎、喘息、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））の処置において有用である可能性がある。しかしながら、免疫系に対するＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路の調節作用に起因して、ＪＡＫ阻害剤への全身曝露は、有害な全身性の免疫抑制（ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｉｖｅ）作用を及ぼし得る。ゆえに、著しい全身作用を起こさずに作用部位において効果を生じる新しいＪＡＫ阻害剤を提供することが望ましい。特に、潰瘍性大腸炎などの胃腸炎症性疾患の処置の場合、経口的に投与することができ、かつ最小の全身曝露で消化管において治療的に妥当な曝露を達成できる、新しいＪＡＫ阻害剤を提供することが望ましい。最小の全身曝露で局所的に投与できるアトピー性皮膚炎を処置するための新しいＪＡＫ阻害剤を提供することも望ましい。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｄａｎｅｓｅら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，２０１１，３６５，１７１３−１７２５
【非特許文献２】Ａｌｌｅｚら、Ｊ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  Ｃｏｌｉｔｉｓ，２０１０，４，３５５−３６６
【非特許文献３】Ｒｕｔｇｅｅｒｔｓら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，２００５，３５３，２４６２−２４７６
【非特許文献４】Ｔａｒｇｏｗｎｉｋら、Ａｍ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２０１２，１０７，１２２８−１２３５
【非特許文献５】Ｓｔｒｏｂｅｒら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２０１１，１４０，１７５６−１７６７
【非特許文献６】Ｂａｏら、ＪＡＫ  ＳＴＡＴ，２０１３，２，ｅ２４１３７
【非特許文献７】Ｂａｏら、Ｌｅｕｎｇら、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，２００４，１１３，６５１−６５７
【非特許文献８】Ｓｕｎｋｏｌｙら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００６，１１７，４１１−４１７
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
発明の要旨
１つの態様において、本発明は、ＪＡＫキナーゼ阻害剤としての活性を有する新規化合物を提供する。
【００１０】
したがって、本発明は、式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2019514903.tif 000003
（式中、
Ｒ１は、
（ａ）−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４（ここで、Ｒ４は、
Ｃ１−４アルキル（ここで、Ｃ１−４アルキルは、−ＣＮ、−ＯＣ１−３アルキルまたはＣ３−６シクロアルキルで必要に応じて置換される）、
１つの窒素原子を含む４〜６つの環原子を含むヘテロシクリル（ここで、任意のヘテロシクリルが、−ＣＮで必要に応じて置換される）、
Ｃ３−６シクロアルキル、
ピリジニル（ここで、ピリジニルは、フルオロで必要に応じて置換される）、および
フェニル
から選択される）；
（ｂ）Ｃ１−４アルキル（ここで、Ｃ１−４アルキルは、−ＣＮ、
【化２】
2019514903.tif 000004
またはピリジニル（ここで、ピリジニルは、−ＣＮで必要に応じて置換される）で必要に応じて置換される）；および
（ｃ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ５（ここで、Ｒ５は、
Ｃ１−４アルキル（ここで、Ｃ１−４アルキルは、Ｃ３−６シクロアルキルまたは１つもしくは２つのフルオロで必要に応じて置換される）、
−ＯＣ１−４アルキル、
Ｃ３−６シクロアルキル、および
モルホリニル
から選択される）
から選択され；
Ｒ２は、水素またはメチルであり；
Ｒ３は、Ｃ１−３アルキルであり；
ｎは、１または２である）
またはその薬学的に許容され得る塩もしくは立体異性体を提供する。
【００１１】
本明細書中以後において使用されるとき、句「式（Ｉ）の化合物」は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を意味し；すなわち、この句は、別段示されない限り、遊離塩基の形態または薬学的に許容され得る塩の形態の式（Ｉ）の化合物を意味する。
【００１２】
本発明は、本発明の化合物および薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物も提供する。
【００１３】
別の態様では、本発明は、結晶性の遊離塩基の形態の式（Ｉ）の特定の化合物を提供する。結晶性の１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリルは、約２３５℃〜約２４５℃、代表的には約２３７℃〜約２４２℃の範囲内に融解温度を有し、室温において約５％〜約９０％の相対湿度の範囲に曝露されたとき、約０．４％未満の重量変化を示すと見出されている。
【００１４】
本発明は、哺乳動物の胃腸炎症性疾患、特に、潰瘍性大腸炎を処置する方法であって、この方法が、本発明の化合物または薬学的組成物をその哺乳動物に投与する工程を含む、方法も提供する。
【００１５】
さらに別の方法の態様において、本発明は、哺乳動物の皮膚の炎症性疾患または炎症性障害、特に、アトピー性皮膚炎を処置する方法を提供し、その方法は、本発明の化合物または薬学的組成物を哺乳動物の皮膚に塗布する工程を含む。
【００１６】
別個の異なる態様では、本発明は、本発明の化合物の調製に有用な本明細書中に記載される合成プロセスおよび中間体も提供する。
【００１７】
本発明は、医学的治療において使用するための本明細書中に記載されるような本発明の化合物、ならびに哺乳動物の胃腸炎症性疾患を処置するための製剤または薬の製造における本発明の化合物の使用も提供する。本発明はさらに、皮膚の炎症性疾患を処置するための製剤または薬の製造における本発明の化合物の使用を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
本発明の様々な態様が、添付の図面を参照することにより例証される。
【００１９】
【図１】図１は、１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリルの結晶形態Ｉ［本明細書中以後（ｈｅｒｉｎａｆｔｅｒ）形態Ｉ］の粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを示している。
【００２０】
【図２】図２は、結晶形態Ｉの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）のサーモグラムを示している。
【００２１】
【図３】図３は、結晶形態Ｉの熱重量分析（ＴＧＡ）のプロットを示している。
【００２２】
【図４】図４は、約２５℃の温度において観測された結晶形態Ｉの動的水分吸着（ｄｙｎａｍｉｃ  ｍｏｉｓｔｕｒｅ  ｓｏｒｐｔｉｏｎ）（ＤＭＳ）の等温線を示している。
【００２３】
【図５】図５は、１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリルの結晶形態ＩＩの粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを示している。
【００２４】
【図６】図６は、結晶形態ＩＩの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）のサーモグラムを示している。
【００２５】
【図７】図７は、結晶形態ＩＩの熱重量分析（ＴＧＡ）のプロットを示している。
【００２６】
【図８】図８は、約２５℃の温度において観測された結晶形態ＩＩの動的水分吸着（ｄｙｎａｍｉｃ  ｍｏｉｓｔｕｒｅ  ｓｏｒｐｔｉｏｎ）（ＤＭＳ）の等温線を示している。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
発明の詳細な説明
他の態様の中でも、本発明は、式（Ｉ）のＪＡＫキナーゼ阻害剤、それらの薬学的に許容され得る塩およびそれらを調製するための中間体を提供する。以下の置換基および値は、本発明の様々な態様の代表例を提供することを意図している。これらの代表的な値は、そのような態様をさらに定義することを意図しているのであって、他の値を排除することまたは本発明の範囲を限定することを意図しているのではない。
【００２８】
本発明の１つの態様において、Ｒ１は、（ａ）−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４（ここで、Ｒ４は、Ｃ１−４アルキル（ここで、Ｃ１−４アルキルは、−ＣＮ、−ＯＣ１−３アルキルまたはＣ３−６シクロアルキルで必要に応じて置換される）；１つの窒素原子を含む４〜６つの環原子を含むヘテロシクリル（ここで、任意のヘテロシクリルが、−ＣＮで必要に応じて置換される）；Ｃ３−６シクロアルキル；ピリジニル（ここで、ピリジニルは、フルオロで必要に応じて置換される）；およびフェニルから選択される）；（ｂ）Ｃ１−４アルキル（ここで、Ｃ１−４アルキルは、−ＣＮ、
【化３】
2019514903.tif 000005
またはピリジニル（ここで、ピリジニルは、−ＣＮで必要に応じて置換される）で必要に応じて置換される）；および（ｃ）Ｃ（Ｏ）Ｒ５（ここで、Ｒ５は、Ｃ１−４アルキル（ここで、Ｃ１−４アルキルは、Ｃ３−６シクロアルキルまたは１つもしくは２つのフルオロで必要に応じて置換される）；−ＯＣ１−４アルキル；Ｃ３−６シクロアルキル；およびモルホリニルから選択される）から選択される。
【００２９】
別の態様において、Ｒ１は、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４（ここで、Ｒ４は、Ｃ１−４アルキル（ここで、Ｃ１−４アルキルは、−ＣＮ、−ＯＣ１−３アルキルまたはＣ３−６シクロアルキルで必要に応じて置換される）；１つの窒素原子を含む４〜６つの環原子を含むヘテロシクリル（ここで、任意のヘテロシクリルが、−ＣＮで必要に応じて置換される）；Ｃ３−６シクロアルキル；ピリジニル（ここで、ピリジニルは、フルオロで必要に応じて置換される）；およびフェニルから選択される）である。
【００３０】
さらに別の態様において、Ｒ１は、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４（ここで、Ｒ４は、Ｃ１−２アルキル（ここで、Ｃ１−２アルキルは、−ＣＮ、−ＯＣＨ３またはシクロプロピルで必要に応じて置換される）；アゼチジニル（ここで、アゼチジニルは、−ＣＮで必要に応じて置換される）；ピロリジニル；シクロプロピル；ピリジニル（ここで、ピリジニルは、フルオロで必要に応じて置換される）；およびフェニルから選択される）である。
【００３１】
なおも別の態様において、Ｒ１は、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４（ここで、Ｒ４は、メチル、エチル、アゼチジニル、ピロリジニル、シクロプロピル、ピリジニルまたはフェニルであり、ここで、エチルは、メトキシで必要に応じて置換され、アゼチジニルは、−ＣＮで必要に応じて置換され、ピリジニルは、フルオロで必要に応じて置換される）である。
【００３２】
１つの態様において、Ｒ１は、Ｃ１−４アルキル（ここで、Ｃ１−４アルキルは、−ＣＮ、
【化４】
2019514903.tif 000006
またはピリジニル（ここで、ピリジニルは、−ＣＮで必要に応じて置換される）で必要に応じて置換される）である。
【００３３】
別の態様において、Ｒ１は、Ｃ１−２アルキル（ここで、Ｃ１−２アルキルは、ＣＮ、
【化５】
2019514903.tif 000007
またはピリジニル（ここで、ピリジニルは、−ＣＮで必要に応じて置換される）で必要に応じて置換される）である。
【００３４】
１つの態様において、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ５（ここで、Ｒ５は、Ｃ１−４アルキル（ここで、Ｃ１−４アルキルは、Ｃ３−６シクロアルキルまたは１つもしくは２つのフルオロで必要に応じて置換される）；−ＯＣ１−４アルキル；Ｃ３−６シクロアルキル；およびモルホリニルから選択される）である。
【００３５】
別の態様において、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ５（ここで、Ｒ５は、Ｃ１−２アルキル（ここで、Ｃ１−２アルキルは、シクロプロピルまたは１つもしくは２つのフルオロで必要に応じて置換される）；−ＯＣ１−４アルキル；Ｃ３−６シクロアルキル；およびモルホリニルから選択される）である。
【００３６】
さらに別の態様において、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ５（ここで、Ｒ５は、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２−シクロプロピル、−ＯＣＨ３、−Ｏ−イソブチル、シクロブチル、シクロペンチルまたはモルホリニルである）である。
【００３７】
１つの態様において、Ｒ２は、水素またはメチルである。特定の態様において、Ｒ２は、メチルである。
【００３８】
１つの態様において、Ｒ３は、Ｃ１−３アルキルである。
【００３９】
別の態様において、Ｒ３は、メチルである。
【００４０】
１つの態様において、ｎは、１または２である。別の態様において、ｎは、２である。
【００４１】
ある特定の態様において、本発明は、式（ＩＩ）の化合物：
【化６】
2019514903.tif 000008
であって、式中、変数Ｒ４は、本明細書中で定義されるとおりである、
式（ＩＩ）の化合物を提供する。
【００４２】
１つの態様において、本発明は、下記の実施例１〜９および表１〜３の化合物を提供する。
【００４３】
別の態様において、本発明は、
１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリル、
１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリル、
（３−（（６−メトキシ−２−（メチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（メチルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（６−メトキシ−２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（（２−メトキシエチル）スルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
３−（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−イル）プロパンニトリル、
５−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）メチル）ピコリノニトリル、
５−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）メチル）ニコチノニトリル、
イソブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボキシレート、
２，２−ジフルオロ−１−（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）エタン−１−オン、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（アゼチジン−１−イルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリル、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（（５−フルオロピリジン−３−イル）スルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（６−メトキシ−２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（フェニルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（エチルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（（シクロプロピルメチル）スルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（６−メトキシ−２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（ピリジン−３−イルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
３−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）−スルホニル）プロパンニトリル、
（３−（（６−メトキシ−２−（メチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（ピロリジン−１−イルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（シクロプロピルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（６−メトキシ−２−（メチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（ピリジン−３−イルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（６−メトキシ−２−（メチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（フェニルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（アゼチジン−１−イルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（（シクロプロピルメチル）スルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（（５−フルオロピリジン−３−イル）スルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
４−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）メチル）ピコリノニトリル、
（３−（（６−メトキシ−２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（ピリジン−３−イルメチル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
３−（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）プロパンニトリル、
１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）メチル）シクロプロパン−１−カルボニトリル、
（３−（（６−メトキシ−２−（メチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（ピリジン−４−イルメチル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール、
４−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）メチル）ピコリノニトリル、
２，２−ジフルオロ−１−（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）エタン−１−オン、
イソブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボキシレート、
メチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボキシレート、
（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシ−ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）（モルホリノ）メタノン、
２−シクロプロピル−１−（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）エタン−１−オン、
シクロペンチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）メタノン、および
シクロブチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）メタノン
ならびにそれらの薬学的に許容され得る塩から選択される化合物を提供する。
【００４４】
化学構造は、本明細書中で、ＣｈｅｍＤｒａｗソフトウェア（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）に実装されているようなＩＵＰＡＣの慣例に従って命名される。例えば、実施例２の化合物：
【化７】
2019514903.tif 000009
は、１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリルと名付けられる。（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）という表記は、９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン基に対するピリミジニルアミノ基のｅｘｏ配向（ｅｘｏ  ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ）を説明し、８−アザビシクロ［３．２．１］基（すなわち、変数ｎ＝１）を含む化合物の場合も同様である。本発明の化合物のすべてが、ｅｘｏ配向である。
【００４５】
さらに、式（Ｉ）の化合物のピラゾリル部分は、互変異性体で存在する。例えば、実施例２の化合物は、
【化８】
2019514903.tif 000010
と等価に示され得る。
【００４６】
ＩＵＰＡＣの慣例によると、これらの表示は、ピラゾリル部分の原子の異なるナンバリングを生じさせる。上記の表示は、１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（３−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリルと名付けられ、ここで、下線は、第１の表示の名称と異なる箇所を特定している。構造は、ある特定の形態として示されているかまたは命名されているが、本発明は、それらの互変異性体も含むことが理解される。
【００４７】
本発明の化合物は、１つまたはそれを超えるキラル中心を含むので、そのような化合物（およびそれらの中間体）は、ラセミ混合物；純粋な立体異性体（すなわち、エナンチオマーまたはジアステレオマー）；立体異性体富化混合物などとして存在し得る。キラル中心に明確な立体化学なしに本明細書中に示されているまたは命名されているキラル化合物は、別段示されない限り、未確定の立体中心において存在し得る任意のまたはすべての立体異性体バリエーションを含むことを意図されている。特定の立体異性体の描写または呼称は、別段示されない限り、少量の他の立体異性体も存在し得ることの理解とともに、示されている立体中心が、指定の立体化学を有することを意味しているが、但し、描写されたまたは命名された化合物の有用性は、別の立体異性体の存在によって排除されない。
【００４８】
式（Ｉ）の化合物は、いくつかの塩基性基（例えば、アミノ基）も含むので、そのような化合物は、遊離塩基として、または様々な塩の形態（例えば、モノプロトン化塩の形態、ジプロトン化塩の形態、トリプロトン化塩の形態またはそれらの混合物）で存在し得る。別段示されない限り、そのような形態のすべてが、本発明の範囲内に含まれる。
【００４９】
本発明は、同位体で標識された式（Ｉ）の化合物、すなわち、原子が、同じ原子番号を有するが自然界で優勢である原子質量とは異なる原子質量を有する原子で置き換えられているかまたは富化されている式（Ｉ）の化合物も含む。式（Ｉ）の化合物に組み込まれ得る同位体の例としては、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、３５Ｓ、および１８Ｆが挙げられるが、これらに限定されない。トリチウムまたは炭素−１４に富化した式（Ｉ）の化合物が特に興味深く、それらの化合物は、例えば、組織分布研究において使用され得る。また、特に代謝部位においてジュウテリウムに富化した式（Ｉ）の化合物も特に興味深く、それらの化合物は、より高い代謝的安定性を有すると予想される。さらに、陽電子放出同位体（例えば、１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏおよび１３Ｎ）に富化した式（Ｉ）の化合物も特に興味深く、それらの化合物は、例えば、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）研究において使用され得る。
【００５０】
定義
様々な態様および実施形態を含む本発明を説明する際、以下の用語は、別段示されない限り、以下の意味を有する。
【００５１】
用語「アルキル」は、直鎖もしくは分枝鎖またはそれらの組み合わせであり得る一価の飽和炭化水素基を意味する。別段定義されない限り、そのようなアルキル基は、代表的には、１〜１０個の炭素原子を含む。代表的なアルキル基の例としては、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、ｎ−プロピル（ｎ−Ｐｒ）または（ｎＰｒ）、イソプロピル（ｉ−Ｐｒ）または（ｉＰｒ）、ｎ−ブチル（ｎ−Ｂｕ）または（ｎＢｕ）、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）または（ｔＢｕ）、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、２，２−ジメチルプロピル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、２−エチルブチル、２，２−ジメチルペンチル、２−プロピルペンチルなどが挙げられる。
【００５２】
具体的な数の炭素原子が、特定の用語に対して意図されているとき、炭素原子の数は、その用語の前に示される。例えば、用語「Ｃ１−３アルキル」は、１〜３個の炭素原子を有するアルキル基を意味し、ここで、それらの炭素原子は、直鎖または分枝鎖の配置を含む化学的に許容され得る任意の配置で存在する。
【００５３】
用語「アルコキシ」は、一価の基−Ｏ−アルキルを意味し、ここで、アルキルは、上記のように定義される。代表的なアルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシなどが挙げられる。
【００５４】
用語「シクロアルキル」は、単環式または多環式であり得る一価の飽和炭素環式基を意味する。別段定義されない限り、そのようなシクロアルキル基は、代表的には、３〜１０個の炭素原子を含む。代表的なシクロアルキル基の例としては、シクロプロピル（ｃＰｒ）、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、アダマンチルなどが挙げられる。
【００５５】
用語「複素環」、「複素環式」または「複素環式環」は、合計３〜１０個の環原子を有する一価の飽和または部分不飽和の環式の非芳香族基を意味し、ここで、その環は、２〜９個の炭素環原子、ならびに窒素、酸素および硫黄から選択される１〜４個の環ヘテロ原子を含む。複素環式基は、単環式または多環式（すなわち、縮合または架橋）であり得る。代表的な複素環式基の例としては、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、イミダゾリジニル、モルホリニル、チオモルホリル、インドリン−３−イル、２−イミダゾリニル、テトラヒドロピラニル、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−２−イル、キヌクリジニル、７−アザノルボルナニル、ノルトロパニルなどが挙げられ、ここで、結合点は、任意の利用可能な炭素または窒素環原子に存在する。状況によって複素環式基の結合点が明らかである場合、そのような基は、代わりに、無価種、すなわち、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾール、テトラヒドロピランなどと称され得る。
【００５６】
用語「治療有効量」は、処置を必要とする患者に投与されたとき、処置をもたらすのに十分な量を意味する。
【００５７】
用語「処置」は、本明細書中で使用されるとき、哺乳動物（特にヒト）などの患者における疾患、障害または病状（例えば、胃腸炎症性疾患）の処置を意味し、それには、以下のうちの１つまたはそれを超えるものが含まれる：
（ａ）疾患、障害または病状の発生を予防すること、すなわち、疾患もしくは病状の再発を予防すること、またはその疾患もしくは病状になりやすい患者の予防的処置；
（ｂ）疾患、障害または病状を回復させること、すなわち、患者の疾患、障害もしくは病状を排除するかまたはそれらを後退させること（他の治療剤の効果を相殺することを含む）；
（ｃ）疾患、障害または病状を抑制すること、すなわち、患者の疾患、障害または病状の発症を遅延させるかまたは停止させること；または
（ｄ）患者の疾患、障害または病状の症候を軽減すること。
【００５８】
用語「薬学的に許容され得る塩」は、患者または哺乳動物（例えば、ヒト）への投与が許容され得る塩（例えば、所与の投与レジメンについて許容され得る哺乳動物の安全性を有する塩）を意味する。代表的な薬学的に許容され得る塩としては、酢酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、エジシル酸（ｅｄｉｓｙｌｉｃ）、フマル酸、ゲンチシン酸、グルコン酸、グルクロン酸（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｃ）、グルタミン酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２，６−ジスルホン酸、ニコチン酸、硝酸、オロチン酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびキシナホ酸（ｘｉｎａｆｏｉｃ  ａｃｉｄ）などの塩が挙げられる。
【００５９】
用語「その塩」は、酸の水素がカチオン（例えば、金属カチオンまたは有機カチオンなど）によって置き換えられたときに形成される化合物を意味する。例えば、カチオンは、プロトン化型の式（Ｉ）の化合物、すなわち、１つまたはそれを超えるアミノ基が酸によってプロトン化されている形態であり得る。代表的には、塩は、薬学的に許容され得る塩であるが、これは、患者への投与が意図されていない中間体化合物の塩には求められない。
【００６０】
用語「アミノ保護基」は、アミノ窒素において望まれない反応を妨げるのに適した保護基を意味する。代表的なアミノ保護基としては、ホルミル；アシル基、例えば、アルカノイル基（例えば、アセチルおよびトリ−フルオロアセチル）；アルコキシカルボニル基（例えば、ｔｅｒｔブトキシカルボニル（Ｂｏｃ））；アリールメトキシカルボニル基（例えば、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）および９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ））；アリールメチル基（例えば、ベンジル（Ｂｎ）、トリチル（Ｔｒ）および１，１−ジ−（４’−メトキシフェニル）メチル）；シリル基（例えば、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳまたはＴＢＤＭＳ）、［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ））；などが挙げられるが、これらに限定されない。数多くの保護基ならびにそれらの導入および除去は、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに記載されている。
【００６１】
一般的な合成手順
本発明の化合物およびそれらの中間体は、商業的に入手可能なまたは日常的に調製される出発物質および試薬を使用して、以下の一般的な方法および手順に従って調製され得る。以下のスキームにおいて使用される置換基および変数（例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４など）は、別段示されない限り、本明細書中の他の箇所に定義される意味と同じ意味を有する。さらに、酸性または塩基性の原子または官能基を有する化合物は、別段示されない限り、塩として使用され得るかまたは生成され得る（場合によっては、特定の反応において塩を使用するためには、その反応を行う前に、日常的な手順を使用して、その塩から非塩形態、例えば、遊離塩基に変換することが必要である）。
【００６２】
本発明の特定の実施形態が、以下の手順に示され得るかまたは記載され得るが、当業者は、本発明の他の実施形態または態様も、そのような手順を用いて、または当業者に公知の他の方法、試薬および出発物質を用いて、調製され得ることを認識する。特に、本発明の化合物は、反応体が異なる順序で混和されることにより最終生成物を生成する途中で異なる中間体が提供される種々のプロセス経路によって調製され得ることが認識される。
【００６３】
本発明の最終的な化合物を調製する一般的な方法は、スキーム１に示されるような重要な中間体１を利用する。変数Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、およびｎは、式（Ｉ）におけるように定義され、ＲＡは、必要に応じて置換されるＣ１−４アルキルを表し、Ｌは、脱離基である。このスキームは、変数Ｒ３がメチルである化合物を示している。Ｒ３がＣ２−３アルキルである化合物も、同じように調製され得る。
スキーム１
【化９】
2019514903.tif 000011
【００６４】
Ｒ１が選択肢（ａ）におけるような−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４として定義されるスルホンアミド化合物は、代表的には、中間体１を、約１〜約１．１当量のＣｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４の形態のスルホニルクロリドと、過剰量の塩基の存在下、およそ０℃の温度において接触させることによって調製される。この反応は、代表的には、約１〜約２４時間または反応が実質的に完了するまで行われる。
【００６５】
Ｒ１が、選択肢（ｂ）において定義されたような必要に応じて置換されるアルキル基である化合物を調製するために、アルキル化反応は、代表的には、ハロ脱離基Ｌ、主にクロロまたはブロモを使用する。この反応は、代表的には、過剰量の塩基の存在下、不活性な希釈剤中で中間体１を過剰量の試薬Ｌ−ＲＡと接触させることによって行われる。この反応は、代表的には、約２０℃〜約６０℃の温度で約１０〜約２４時間または反応が実質的に完了するまで行われる。
【００６６】
あるいは、マイケル付加反応を用いて、Ｒ１がシアノエチル基である化合物を調製してもよい。例えば、下記の実施例に記載されるように、Ｒ１が−（ＣＨ２）２ＣＮである化合物を調製するために、過剰量の塩基、例えば、ジイソプロピルエチルアミンまたはジアゾビシクロウンデセンの存在下において、約１〜約１．５当量のアクリロニトリルと中間体１を接触させる。この反応は、代表的には、室温で約３〜約２４時間または反応が実質的に完了するまで行われる。
【００６７】
Ｒ１が−Ｃ（Ｏ）Ｒ５として定義される化合物は、Ｃｌ−Ｃ（Ｏ）Ｒ５の形態の塩化カルボニルを用いて、具体的には、Ｒ５が−ＯＣ１−４アルキルと定義されるとき、クロロホルメートを用いて、調製され得る。代表的には、中間体１は、過剰量の塩基の存在下、およそ０℃の温度において約１当量の塩化カルボニルと接触される。この反応は、代表的には、約１〜約３時間または反応が実質的に完了するまで行われる。
【００６８】
あるいは、Ｒ１が−Ｃ（Ｏ）Ｒ５と定義される化合物は、通常のアミドカップリング条件下において、適度に過剰量のカルボン酸試薬ＨＯ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ５と中間体１を接触させることによって調製され得る。この反応は、代表的には、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）などの活性化剤を使用して過剰量の塩基の存在下において行われる。この反応は、代表的には、室温で約３〜約２４時間または反応が実質的に完了するまで行われる。
【００６９】
変数Ｒ３がメチルである中間体１を調製するための例示的な反応をスキーム２に示す。
スキーム２
【化１０】
2019514903.tif 000012
【００７０】
工程１の芳香族置換反応において、トリクロロピリミジン２を、塩基の存在下において過剰量のアミノ−ピラゾール−メタノール中間体３と反応させて、中間体４を得る。次いで、Ｂｏｃ保護されたアミノ−アザ−ビシクロ中間体５を中間体４と反応させて、中間体６を得る。例えば、中間体４を、過剰量の塩基（例えば、ジイソプロピルエチルアミン（ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌｙａｍｉｎｅ））の存在下において約１〜約１．５当量のアザ−ビシクロ中間体５と混和する。この反応は、代表的には、約８５℃〜約１２０℃の高温で約６〜約１２時間または反応が実質的に完了するまで行われる。中間体６とナトリウムメトキシドとの反応によって、中間体７を得る。この反応は、代表的には、約８５℃〜約１２０℃の高温で約４〜約１０時間または反応が実質的に完了するまで密封管において行われる。最後の工程において、Ｂｏｃ基を、酸、代表的には、塩酸による標準的な処理によって除去して、中間体１を得ることができる。
【００７１】
あるいは、中間体１は、スキーム３に示される工程の順序によって調製され得る。
スキーム３
【化１１】
2019514903.tif 000013
ここで、ＲＢは、水素またはシリル酸素保護基（例えば、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）またはｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ））である。Ｂｏｃ保護されたアミノ−アザ−ビシクロ（ｂｉｃｙｌｏ）基５をジクロロ−メトキシピリミジン中間体８と混和して、中間体９を形成する。この反応は、代表的には、塩基の存在下において高温で行われる。次いで、中間体９を、標準的なＢｕｃｈｗａｌｄ条件下でアミノ−ピラゾール中間体３’と反応させて、中間体７を得る。例えば、中間体９を、塩基（例えば、炭酸セシウムまたは炭酸カリウム）およびパラジウム触媒の存在下において約１〜約１．５当量のピラゾール中間体３’と混和する。この反応は、代表的には、約８０℃〜約１１０℃の高温で約８〜約２４時間または反応が実質的に完了するまで行われる。最後の工程において、Ｂｏｃ保護基を、スキーム２におけるように除去する。ＲＢがシリル保護基であるとき、そのシリル基とＢｏｃ基は、同時に除去できる。
【００７２】
したがって、方法の態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を調製するための方法を提供し、その方法は、
式（ＩＩＩ）の化合物：
【化１２】
2019514903.tif 000014
を
（ｉ）Ｃｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、
（ｉｉ）式Ｌ−ＲＡの化合物（式中、Ｌは、脱離基であり、ＲＡは、Ｃ１−４アルキル（ここで、Ｃ１−４アルキルは、−ＣＮ、
【化１３】
2019514903.tif 000015
またはピリジニル（ここで、ピリジニルは、−ＣＮで必要に応じて置換される）で必要に応じて置換される）である）；
（ｉｉｉ）Ｃｌ−Ｃ（Ｏ）Ｒ５、または
（ｉｖ）ＨＯ−Ｃ（Ｏ）Ｒ５
（ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびｎは、上で定義されたとおりである）
と反応させる工程、および
必要に応じて、薬学的に許容され得る塩を形成することにより、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を得る工程を含む。
【００７３】
別個の異なる態様では、本発明は、式（ＩＩＩ）の化合物（式中、変数は、上に記載された値のいずれかをとる）および式（ＩＩＩ）の化合物（式中、Ｒ２およびＲ３は、それぞれメチルであり、ｎは１または２である）を提供する。
【００７４】
別の方法の態様において、本発明は、式１の化合物
【化１４】
2019514903.tif 000016
（式中、Ｒ２およびｎは、上で定義されたとおりである）を調製するための方法を提供し、その方法は、
（ａ）式９の化合物：
【化１５】
2019514903.tif 000017
を式３の化合物：
【化１６】
2019514903.tif 000018
（式中、ＲＢは、水素またはシリル酸素保護基である）と反応させて、式７の化合物：
【化１７】
2019514903.tif 000019
を形成する工程、および
（ｂ）式７の化合物から保護基（単数または複数）を除去して、式１の化合物を得る工程
を含む。
【００７５】
結晶形態
別の態様において、本発明は、１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリル（実施例２および１０〜１３を参照のこと）を結晶性遊離塩基形態Ｉおよび形態ＩＩとして提供する。
【００７６】
１つの態様において、結晶性遊離塩基形態Ｉは、他のピークの中でも、８．８９±０．２０、１２．９９±０．２０、１３．４４±０．２０および２０．１６±０．２０の２θ値において有意な回折ピークを有する粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを特徴とする。形態Ｉは、１０．６４±０．２０、１０．９９±０．２０、１５．０２±０．２０、１５．７４±０．２０、１６．４７±０．２０、２０．９３±０．２０、２２．２２±０．２０および２６．２５±０．２０から選択される２θ値において、２つまたはそれを超えるさらなる回折ピーク（３つまたはそれを超えるおよび４つまたはそれを超えるさらなる回折ピークを含む）を有するＰＸＲＤパターンをさらに特徴とし得る。別の態様において、形態Ｉは、８．８９±０．２０、１０．６４±０．２０、１０．９９±０．２０、１２．９９±０．２０、１３．４４±０．２０、１５．０２±０．２０、１５．７４±０．２０、１６．４７±０．２０、２０．１６±０．２０、２０．９３±０．２０、２２．２２±０．２０および２６．２５±０．２０の２θ値において回折ピークを有するＰＸＲＤパターンを特徴とする。
【００７７】
粉末Ｘ線回折の分野で周知であるように、ＰＸＲＤパターンのピーク位置は、相対的ピーク高さよりも、比較的、実験の詳細（例えば、サンプル調製および装置のジオメトリの詳細）に感受性でない。したがって、１つの態様において、結晶形態Ｉは、ピーク位置が、図１に示されるものと実質的に一致する粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする。
【００７８】
別の態様では、結晶形態Ｉは、高温に曝露されたときの挙動によって特徴付けられる。図２に示されているように、１０℃／分の加熱速度で記録された示差走査熱量測定（ＤＳＣ）トレースは、約２３７℃〜約２４２℃を含む約２３５℃〜約２４５℃の範囲内において、融解転移として特定される、吸熱熱流のピークを示す。図３の熱重量分析（ＴＧＡ）トレースは、融解後分解に対応する重量減少の開始を示す。
【００７９】
結晶形態Ｉは、吸湿性が例外的に小さい可逆的な吸着／脱着プロファイルを有すると実証された。形態Ｉは、５％〜９０％の相対湿度の湿度範囲において約０．４％未満の重量増加を示した。ヒステリシスは、吸着および脱着の２サイクルにおいて観測されなかった。形態Ｉは、非吸湿性であると考えられる。
【００８０】
さらに、結晶形態Ｉは、微粒子化に対して安定であると実証された。微粒子化されなかった材料の粉末Ｘ線回折パターンと、微粒子化後の形態Ｉの材料のパターンとの間に、差を観察することはできなかった。
【００８１】
結晶性遊離塩基形態ＩＩは、図５のＰＸＲＤパターンを特徴とし、さらに、高温に曝露されたときの挙動を特徴とする。図６に示されているように、１０℃／分の加熱速度で記録された示差走査熱量測定（ＤＳＣ）トレースは、約２０５℃〜約２４０℃の範囲内において吸熱熱流の広範なピークを示すが、これは、図７の熱重量分析（ＴＧＡ）トレースとともに、融解転移と分解とが合わさったものと解釈され得る。形態ＩＩは、吸着および脱着の２サイクルの間に小さなヒステリシスを示した、わずかに吸湿性の固体である。形態ＩＩは、５％〜９０％の相対湿度の湿度範囲において、約１．２％の重量増加を示した。
【００８２】
実施例１１および１２に記載されるように、形態Ｉは、当該化合物をＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、アセトンおよび水を貧溶媒として約１：１．５〜１：１．７５のアセトン：水の比で加えることによって、調製され得る。得られた反応混合物を、約４時間〜約２４時間撹拌し、濾過し、アセトンと水の混合物（例えば、アセトンと水の１：１．４混合物）で洗浄し、乾燥させることにより、結晶形態Ｉが得られる。結晶形態ＩＩを調製するためのプロセスは、実施例１３に記載される。
【００８３】
別の態様において、本発明は、結晶形態Ｉを調製する方法を提供し、その方法は、（ａ）１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリルを、Ｎ−メチルピロリドンおよびジメチルホルムアミドから選択される希釈剤に溶解して、反応混合物を形成する工程；（ｂ）その反応混合物にアセトンおよび水を加える工程；および（ｃ）その反応混合物から結晶形態Ｉを単離する工程を含む。
【００８４】
薬学的組成物
本発明の化合物およびそれらの薬学的に許容され得る塩は、通常、薬学的組成物または製剤の形態で使用される。そのような薬学的組成物は、任意の許容され得る投与経路によって患者に投与されてよく、その投与経路としては、経口、局所（経皮を含む）直腸、経鼻、吸入、および非経口的な投与形式が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８５】
したがって、上記組成物の態様の１つにおいて、本発明は、薬学的に許容され得るキャリアまたは賦形剤および式（Ｉ）の化合物を含む薬学的組成物に関し、ここで、上で定義されたように、「式（Ｉ）の化合物」は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を意味する。必要に応じて、そのような薬学的組成物は、所望であれば、他の治療剤および／または製剤化剤を含んでもよい。組成物およびその使用を論じる際、「本発明の化合物」は、本明細書中で「活性な作用物質」と称されることがある。本明細書中で使用されるとき、用語「本発明の化合物」は、式（Ｉ）によって包含されるすべての化合物、ならびに式（ＩＩ）において具体化される種ならびにそれらの薬学的に許容され得る塩を含むことを意図されている。
【００８６】
本発明の薬学的組成物は、通常、治療有効量の本発明の化合物を含む。しかしながら、薬学的組成物は、治療有効量より多い、すなわち、大量の組成物または治療有効量より少ない、すなわち、治療有効量を達成するための複数回投与のためにデザインされた個別の単位用量を含むことがあることを当業者は認識する。
【００８７】
代表的には、そのような薬学的組成物は、約０．１〜約９５重量％の活性な作用物質（約５〜約７０重量％の活性な作用物質を含む）を含む。
【００８８】
任意の従来のキャリアまたは賦形剤を、本発明の薬学的組成物において使用してもよい。特定のキャリアもしくは賦形剤、またはキャリアもしくは賦形剤の組み合わせの選択は、特定の患者を処置するために用いられる投与様式、または病状もしくは疾患状態のタイプに依存する。この点において、特定の投与様式に対して好適な薬学的組成物の調製法は、十分に薬学分野の当業者の技術の範囲内である。さらに、本発明の薬学的組成物において使用されるキャリアまたは賦形剤は、商業的に入手可能である。さらなる例証として、従来の製剤化の手法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（２０００）；およびＨ．Ｃ．Ａｎｓｅｌら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９９９）に記載されている。
【００８９】
薬学的に許容され得るキャリアとして機能し得る材料の代表例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：糖（例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース）；デンプン（例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン）；セルロース（例えば、微結晶性セルロース）およびその誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース）；トラガント末；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤（例えば、カカオバターおよび坐剤ろう）；油（例えば、落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油）；グリコール（例えば、プロピレングリコール）；ポリオール（例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール）；エステル（例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル）；寒天；緩衝剤（例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム）；アルギン酸；発熱物質非含有水；等張食塩水；リンガー溶液；エチルアルコール；リン酸緩衝液；および薬学的組成物において使用される他の無毒性の適合性物質。
【００９０】
薬学的組成物は、代表的には、活性な作用物質を薬学的に許容され得るキャリアおよび１つまたはそれを超える必要に応じた成分と十分かつ完全に混合または混和することによって調製される。次いで、得られた均一に混和された混合物は、従来の手順および器具を用いて、錠剤、カプセル剤、丸剤などに成形または充填され得る。
【００９１】
本発明の薬学的組成物は、好ましくは、単位剤形に包装される。用語「単位剤形」とは、患者への投与に適した物理的に別々の単位のことを指し、すなわち、各単位は、単独でまたは１つもしくはそれを超えるさらなる単位と組み合わさって所望の治療効果をもたらすように計算された所定の量の活性な作用物質を含む。例えば、そのような単位剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤など、または非経口投与に適した単位パッケージであり得る。
【００９２】
１つの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、経口投与に適している。経口投与に好適な薬学的組成物は、カプセル剤、錠剤、丸剤、舐剤、カシェ剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤の形態であり得るか；または水性もしくは非水性液体における溶液または懸濁液として存在し得るか；または水中油型もしくは油中水型の液体エマルジョンとして存在し得るか；またはエリキシル剤もしくはシロップ剤などとして存在し得；それらの各々は、所定の量の本発明の化合物を活性成分として含んでいる。
【００９３】
固形剤形（すなわち、カプセル剤、錠剤、丸剤など）での経口投与が意図されているとき、本発明の薬学的組成物は、通常、活性な作用物質および１つまたはそれを超える薬学的に許容され得るキャリアを含む。必要に応じて、そのような固形剤形は、充填剤または増量剤（例えば、デンプン、微結晶性セルロース、ラクトース、リン酸二カルシウム、スクロース、グルコース、マンニトールおよび／またはケイ酸）；結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシア）；保湿剤（例えば、グリセロール）；崩壊剤（例えば、クロスカルメロース（ｃｒｏｓｓｃａｒｍｅｌｌｏｓｅ）ナトリウム、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のシリケートおよび／または炭酸ナトリウム）；溶解遅延剤（例えば、パラフィン）；吸収促進剤（例えば、四級アンモニウム化合物）；湿潤剤（例えば、セチルアルコールおよび／またはモノステアリン酸グリセロール）；吸収剤（例えば、カオリンおよび／またはベントナイト粘土）；滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよび／またはそれらの混合物）；着色剤；および緩衝剤を含み得る。
【００９４】
離型剤、湿潤剤、コーティング剤、甘味料、香味料および香料、保存剤ならびに酸化防止剤も、本発明の薬学的組成物に存在し得る。薬学的に許容され得る酸化防止剤の例としては、水溶性の酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど）；油溶性の酸化防止剤（例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロールなど）；および金属キレート剤（例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸、ソルビトール、酒石酸、リン酸など）が挙げられる。錠剤、カプセル剤、丸剤などのためのコーティング剤としては、腸溶コーティングのために使用されるもの（例えば、セルロースアセテートフタレート、ポリビニルアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メタクリル酸、メタクリル酸エステル共重合体、セルロースアセテートトリメリテート、カルボキシメチルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートなど）が挙げられる。
【００９５】
本発明の薬学的組成物はまた、例えば、様々な比率でヒドロキシプロピルメチルセルロース；または他のポリマーマトリックス、リポソームおよび／もしくはミクロスフェアを用いて、活性な作用物質の持続放出または制御放出を提供するように製剤化され得る。さらに、本発明の薬学的組成物は、必要に応じて不透明化剤を含んでもよく、消化管のある特定の部分において、必要に応じて遅延様式で、活性成分だけを放出するようにまたは活性成分を優先的に放出するように製剤化され得る。使用され得る包埋組成物の例としては、ポリマー物質およびろうが挙げられる。活性な作用物質は、適切な場合、上に記載された賦形剤の１つまたはそれ超とともに、マイクロカプセル化された形態でも存在し得る。
【００９６】
経口投与に好適な液体剤形としては、例証として、薬学的に許容され得るエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が挙げられる。液体剤形は、代表的には、活性な作用物質および不活性な希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、落花生油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、オレイン酸、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物を含む。あるいは、ある特定の液体製剤は、例えば噴霧乾燥によって、粉末に変換され得、その粉末は、従来の手順によって固形剤形を調製するために使用される。
【００９７】
懸濁剤は、活性成分に加えて、懸濁化剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガント、ならびにそれらの混合物を含み得る。
【００９８】
本発明の化合物は、非経口的に（例えば、静脈内、皮下、筋肉内または腹腔内注射によって）も投与され得る。非経口投与の場合、活性な作用物質は、代表的には、非経口投与に好適なビヒクルと混合され、そのビヒクルの例としては、滅菌水溶液、食塩水、低分子量アルコール、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、ゼラチン、脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルなどが挙げられる。非経口製剤は、１つまたはそれを超える酸化防止剤、可溶化剤、安定剤、保存剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝剤または分散剤も含み得る。これらの製剤は、滅菌された注射可能な媒質、滅菌剤の使用、濾過、照射または加熱によって、滅菌され得る。
【００９９】
あるいは、本発明の薬学的組成物は、吸入による投与のために製剤化される。吸入による投与に好適な薬学的組成物は、代表的には、エアロゾルまたは粉末の形態であり得る。そのような組成物は、一般に、周知の送達デバイス（例えば、定量吸入器、乾燥粉末吸入器、噴霧器または同様の送達デバイス）を用いて投与される。
【０１００】
加圧容器を用いて吸入によって投与されるとき、本発明の薬学的組成物は、代表的には、活性成分および好適な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の好適なガス）を含み得る。さらに、薬学的組成物は、本発明の化合物および粉末吸入器での使用に適した粉末を含むカプセルまたはカートリッジ（例えばゼラチンでできたもの）の形態であり得る。好適な粉末基剤の例としては、ラクトースまたはデンプンが挙げられる。
【０１０１】
本発明の化合物は、皮膚への局所投与のために軟膏またはクリームとしても製剤化され得る。軟膏製剤は、代表的には透明の油性または脂肪性の材料の基剤を有する半固体の調製物である。軟膏製剤において使用するめに適した油性材料としては、ペトロラタム（ペトロレアムゼリー）、蜜ろう、カカオバター、シアバターおよびセチルアルコールが挙げられる。軟膏は、所望であれば、必要に応じてさらに軟化薬および浸透促進剤を含んでもよい。
【０１０２】
クリーム製剤は、代表的には精製水を含む、油相および水相を含むエマルジョンとして調製され得る。クリーム製剤の構成要素としては、油性基剤（例えば、ペトロラタム（ｐｅｔｒｏｌａｔｒｕｍ）、鉱油、植物油および動物油ならびにトリグリセリド）；クリーム基剤（例えば、ラノリンアルコール、ステアリン酸およびセトステアリルアルコール）；ゲル基剤（例えば、ポリビニルアルコール）；溶媒（例えば、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコール）；乳化剤（例えば、ポリソルベート、ステアレート（例えば、ステアリン酸グリセリル、ヒドロキシステアリン酸オクチル（octylhydroxystearate）、ステアリン酸ポリオキシル、ＰＥＧステアリルエーテル、パルミチン酸イソプロピルおよびモノステアリン酸ソルビタン））；安定剤（例えば、多糖および亜硫酸ナトリウム）；軟化薬（すなわち、保湿剤（例えば、中鎖トリグリセリド、ミリスチン酸イソプロピルおよびジメチコーン））；硬化剤（例えば、セチルアルコールおよびステアリルアルコール）；抗菌剤（例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン、フェノキシエタノール、ソルビン酸、ジアゾリジニル尿素およびブチル化ヒドロキシアニソール）；浸透促進剤（例えば、Ｎ−メチルピロリドン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールモノラウレートなど）；およびキレート剤（例えば、エデト酸二ナトリウム）が挙げられ得る。
【０１０３】
以下の非限定的な例は、本発明の代表的な薬学的組成物を例証する。
【０１０４】
錠剤経口固形剤形
本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩は、例えば、錠剤１つあたり５ｍｇ、２０ｍｇまたは４０ｍｇの活性な作用物質という単位投与量が提供されるように、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドンおよびクロスカルメロースナトリウムと４：５：１：１の比で乾式混合され、錠剤に圧縮される。
【０１０５】
カプセル経口固形剤形
本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩は、例えば、カプセル１つあたり５ｍｇ、２０ｍｇまたは４０ｍｇの活性な作用物質という単位投与量が提供されるように、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドンおよびクロスカルメロースナトリウムと４：５：１：１の比で湿式造粒によって混和され、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースのカプセルに充填される。
【０１０６】
液体製剤
本発明の化合物（０．１％）、水（９８．９％）およびアスコルビン酸（１．０％）を含む液体製剤が、本発明の化合物を水とアスコルビン酸との混合物に加えることによって形成される。
【０１０７】
腸溶コーティングされた経口剤形
本発明の化合物を、ポリビニルピロリドンを含む水溶液に溶解し、１：５ｗ／ｗという活性な作用物質：ビーズの比で微結晶性セルロース上または糖のビーズ上にスプレーコーティングし、次いで、アクリル共重合体、例えば、商品名Ｅｕｄｒａｇｉｔ−Ｌ（登録商標）およびＥｕｄｒａｇｉｔ−Ｓ（登録商標）として入手可能なアクリル共重合体の組み合わせまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートを含む腸溶コーティングのおよそ５％重量増加を適用する。腸溶コーティングされたビーズを、例えば、カプセル１つあたり３０ｍｇの活性な作用物質という単位投与量が提供されるように、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースのカプセルの中に充填する。
【０１０８】
腸溶コーティングされた経口剤形
Ｅｕｄｒａｇｉｔ−Ｌ（登録商標）とＥｕｄｒａｇｉｔ−Ｓ（登録商標）との組み合わせまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートを含む腸溶コーティングを、上に記載された錠剤経口剤形またはカプセル経口剤形に適用する。
【０１０９】
局所投与用の軟膏製剤
本発明の化合物は、重量基準で０．０５％〜５％の活性な作用物質を含む組成物が提供されるように、ペトロラタム、Ｃ８−Ｃ１０トリグリセリド、ヒドロキシステアリン酸オクチルおよびＮ−メチルピロリドンと、ある比で混和される。
【０１１０】
局所投与用の軟膏製剤
本発明の化合物は、重量基準で０．０５％〜５％の活性な作用物質を含む組成物が提供されるように、白色ワセリン、プロピレングリコール、モノ−およびジ−グリセリド、パラフィン、ブチル化ヒドロキシトルエンおよびエデト酸カルシウム二ナトリウムと、ある比で混和される。
【０１１１】
局所投与用の軟膏製剤
本発明の化合物は、重量基準で０．０５％〜５％の活性な作用物質を含む組成物が提供されるように、鉱油、パラフィン、炭酸プロピレン、白色ワセリンおよび白ろうと混和される。
【０１１２】
局所投与用のクリーム製剤
鉱油が、本発明の化合物、プロピレングリコール、パルミチン酸イソプロピル、ポリソルベート６０、セチルアルコール、モノステアリン酸ソルビタン、ステアリン酸ポリオキシル４０、ソルビン酸、メチルパラベンおよびプロピルパラベンと混和されて、油相が形成され、それが、重量基準で０．０５％〜５％の活性な作用物質を含む組成物が提供されるように、剪断混合（ｓｈｅａｒ  ｂｌｅｎｄｉｎｇ）によって精製水と混和される。
【０１１３】
局所投与用のクリーム製剤
本発明の化合物、ベンジルアルコール、セチルアルコール、無水クエン酸、モノグリセリドおよびジグリセリド、オレイルアルコール、プロピレングリコール、硫酸セトステアリルナトリウム、水酸化ナトリウム、ステアリルアルコール、トリグリセリドならびに水を含むクリーム製剤は、重量基準で０．０５％〜５％の活性な作用物質を含む。
【０１１４】
局所投与用のクリーム製剤
本発明の化合物、セトステアリルアルコール、ミリスチン酸イソプロピル、プロピレングリコール、セトマクロゴール１０００、ジメチコーン３６０、クエン酸、クエン酸ナトリウムおよび精製水を、保存剤としてイミド尿素、メチルパラベンおよびプロピルパラベンとともに含むクリーム製剤は、重量基準で０．０５％〜５％の活性な作用物質を含む。
【０１１５】
有用性
本発明の化合物は、ＪＡＫファミリーの酵素：ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２の強力な阻害剤であると示された。ＪＡＫ酵素のファミリーが阻害されると、多くの重要な炎症促進性サイトカインのシグナル伝達が阻害され得る。したがって、本発明のＪＡＫ阻害剤は、炎症性疾患（例えば、潰瘍性大腸炎および他の胃腸炎症性疾患（例えば、クローン病および免疫チェックポイント阻害剤によって誘発される大腸炎））の処置において有用であると予想される。本ＪＡＫ阻害剤は、アトピー性皮膚炎ならびに他の炎症性皮膚疾患およびそう痒性皮膚疾患の処置、および呼吸器の症状（例えば、アレルギー性鼻炎、喘息および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））の処置においても有用であると予想される。
【０１１６】
胃腸炎症性疾患
本発明の化合物は、ＪＡＫ酵素の強力な阻害を提供することに加えて、全身曝露が最小となるように不十分にしか吸収されないようにデザインされている。カニューレ処置されたラットにおいて試験された選択された化合物は、経口バイオアベイラビリティが低かった。さらに、それらの化合物は、作用部位、例えば、結腸において効果を及ぼすようにデザインされている。下記のアッセイ６および７に記載されるように、実施例２の化合物は、ラットにおいて約５％未満の経口バイオアベイラビリティを示し、経口投与されたとき、約２５０を超える、結腸における曝露と血漿における曝露との比を示した。
【０１１７】
オキサゾロン誘発大腸炎は、ヒト潰瘍性大腸炎と組織学的類似点を有する実験モデルである。下記に記載されるように、実施例２の化合物は、本発明の他の化合物の中でも、マウスのオキサゾロン誘発大腸炎モデルにおいて活性を示した。さらに、その化合物は、全身性の機能活性を探索するマウスの免疫抑制モデルにおいて試験されたとき、オキサゾロンモデルにおいて有効性を示すために必要とされた同じ用量において、最小の免疫抑制効果を示した。したがって、その化合物は、前臨床モデルにおいて、全身作用を示さずに抗大腸炎（ａｎｔｉ−ｃｏｌｉｔｉｃ）活性を示した。
【０１１８】
高い結腸対血漿比は、全身性に引き起こされる関連の有害作用なしに、管腔に引き起こされる（ｌｕｍｉｎａｌｌｙ−ｄｒｉｖｅｎ）ロバストな抗炎症活性を提供することが予想される。このような化合物は、種々の胃腸炎症性適応症に有用であると予想され、それらの適応症としては、潰瘍性大腸炎（直腸Ｓ状結腸炎、汎大腸炎、潰瘍性直腸炎および左側大腸炎）、クローン病、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、ベーチェット病、セリアック病、免疫チェックポイント阻害剤によって誘発される大腸炎、回腸炎、好酸球性食道炎、移植片対宿主病関連大腸炎および感染性大腸炎が挙げられるが、これらに限定されない。潰瘍性大腸炎（Ｒｅｉｍｕｎｄら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９６，１６，１４４−１５０）、クローン病（Ｗｏｙｗｏｄｔら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９９，１１，２６７−２７６）、コラーゲン蓄積大腸炎（Ｋｕｍａｗａｔら、Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１３，５５，３５５−３６４）、リンパ球性大腸炎（Ｋｕｍａｗａｔら、２０１３）、好酸球性食道炎（Ｗｅｉｎｂｒａｎｄ−Ｇｏｉｃｈｂｅｒｇら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ，２０１３，５６，２４９−２６０）、移植片対宿主病関連大腸炎（Ｃｏｇｈｉｌｌら、Ｂｌｏｏｄ，２００１，１１７，３２６８−３２７６）、感染性大腸炎（Ｓｔａｌｌｍａｃｈら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｄｉｓ，２００４，１９，３０８−３１５）、ベーチェット病（Ｚｈｏｕら、Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  Ｒｅｖ，２０１２，１１，６９９−７０４）、セリアック病（ｄｅ  Ｎｉｔｔｏら、Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００９，１５，４６０９−４６１４）、免疫チェックポイント阻害剤によって誘発される大腸炎（例えば、ＣＴＬＡ−４阻害剤によって誘発される大腸炎；（Ｙａｎｏら、Ｊ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  Ｍｅｄ，２０１４，１２，１９１）ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤によって誘発される大腸炎）および回腸炎（Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｄｉｇ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ，２００８，４０，２５３−２５９）は、ある特定の炎症促進性サイトカインのレベルの上昇を特徴とする。多くの炎症促進性サイトカインが、ＪＡＫの活性化を介してシグナル伝達するので、本願に記載される化合物は、炎症を軽減することおよび症候の軽減を提供することができ得る。
【０１１９】
特に、本発明の化合物は、潰瘍性大腸炎の緩解の誘導および維持、ならびにクローン病、免疫チェックポイント阻害剤によって誘発される大腸炎および移植片対宿主病における胃腸の有害作用の処置に有用であると予想される。
【０１２０】
ゆえに、１つの態様において、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）の胃腸炎症性疾患を処置する方法であって、その方法が、本発明の化合物または薬学的に許容され得るキャリアおよび本発明の化合物を含む薬学的組成物をその哺乳動物に投与する工程を含む、方法を提供する。
【０１２１】
本発明はさらに、哺乳動物の潰瘍性大腸炎を処置する方法であって、その方法が、本発明の化合物または薬学的に許容され得るキャリアおよび本発明の化合物を含む薬学的組成物をその哺乳動物に投与する工程を含む、方法を提供する。
【０１２２】
本発明の化合物は、潰瘍性大腸炎を処置するために使用されるとき、通常、１日１回または１日あたり複数回で経口的に投与され得るが、他の投与形態を使用してもよい。１回に投与される活性な作用物質の量または１日あたりに投与される総量は、通常、処置される症状、選択される投与経路、投与される実際の化合物およびその相対的な活性、個別の患者の年齢、体重および反応、患者の症候の重症度などを含む関連する状況に照らして、医師によって決定される。
【０１２３】
潰瘍性大腸炎および他の胃腸炎症性障害の処置に好適な用量は、平均的な７０ｋｇのヒトの場合、約５〜約３００ｍｇ／日および約２０〜約７０ｍｇ／日という活性な作用物質を含む、約１〜約４００ｍｇ／日という活性な作用物質の範囲であると予想される。
【０１２４】
併用療法
本発明の化合物はまた、胃腸炎症性障害の処置をもたらすために、同じ機序または異なる機序によって作用する１つまたはそれを超える作用物質と併用して使用され得る。併用療法に有用な作用物質のクラスとしては、アミノサリチレート、ステロイド、全身免疫抑制剤、抗ＴＮＦα抗体、抗ＶＬＡ−４抗体、抗インテグリンα４β７抗体、抗菌薬および止痢薬が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２５】
本ＪＡＫ阻害剤化合物と併用して使用され得るアミノサリチレートとしては、メサラミン、オルサラジン（ｏｓａｌａｚｉｎｅ）およびスルファサラジンが挙げられるが、これらに限定されない。ステロイドの例としては、プレドニゾン、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、ブデソニド（ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ）、ベクロメタゾンおよびフルチカゾンが挙げられるが、これらに限定されない。炎症性障害の処置に有用な全身免疫抑制剤としては、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、６−メルカプトプリンおよびタクロリムスが挙げられるが、これらに限定されない。さらに、インフリキシマブ、アダリムマブ、ゴリムマブ（ｇｏｌｉｍｕｍａｂ）およびセルトリズマブを含むがこれらに限定されない抗ＴＮＦα抗体も、併用療法において使用され得る。他の機序によって作用する有用な化合物としては、抗ＶＬＡ−４抗体（例えば、ナタリズマブ）、抗インテグリンα４β７抗体（例えば、ベドリズマブ）、抗菌薬（例えば、リファキシミン）および止痢薬（例えば、ロペラミド）が挙げられる。（Ｍｏｚａｆｆａｒｉら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０１４，１４，５８３−６００；Ｄａｎｅｓｅ，Ｇｕｔ，２０１２，６１，９１８−９３２；Ｌａｍら、Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，２０１４，６，９６３−９７１．）
【０１２６】
ゆえに、別の態様では、本発明は、胃腸炎症性障害の処置において使用するための治療的組み合わせを提供し、その組み合わせは、本発明の化合物および胃腸炎症性障害の処置に有用な１つまたはそれを超える他の治療剤を含む。例えば、本発明は、本発明の化合物、ならびにアミノサリチレート、ステロイド、全身免疫抑制剤、抗ＴＮＦα抗体、抗ＶＬＡ−４抗体、抗インテグリンα４β７抗体、抗菌薬および止痢薬から選択される１つまたはそれを超える作用物質を含む組み合わせを提供する。第２の作用物質（単数または複数）は、含められるとき、治療有効量で、すなわち、本発明の化合物と共投与されたときに治療的に有益な効果をもたらす任意の量で存在する。
【０１２７】
ゆえに、本発明の化合物および胃腸炎症性障害の処置に有用な１つまたはそれを超える他の治療剤を含む薬学的組成物も提供される。
【０１２８】
さらに、方法の態様において、本発明は、胃腸炎症性障害を処置する方法であって、その方法が、本発明の化合物および胃腸炎症性障害の処置に有用な１つまたはそれを超える他の治療剤を哺乳動物に投与する工程を含む、方法を提供する。
【０１２９】
それらの作用物質は、併用療法において使用されるとき、上に開示されたような単一の薬学的組成物として製剤化されてもよいし、それらの作用物質は、同時にまたは別々の時点において同じまたは異なる投与経路によって投与される別個の組成物として提供されてもよい。それらの作用物質は、別々に投与されるとき、所望の治療効果が提供されるように十分に近い時点において投与される。そのような組成物は、別々に包装されてもよいし、キットとして一緒に包装されてもよい。キットの中の２つまたはそれを超える治療剤は、同じ投与経路によって投与されてもよいし、異なる投与経路によって投与されてもよい。
【０１３０】
炎症性皮膚疾患
例えば、アトピー性皮膚炎は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路に依存する炎症促進性サイトカイン（特に、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＩＦＮγ）の増加に関連する。本発明の化合物は、４つすべてのＪＡＫ酵素に対して強力な阻害を示すので、それらは、アトピー性皮膚炎および他の炎症性皮膚疾患に特徴的な炎症促進性サイトカインを強力に阻害すると予想される。特に、実施例２に開示される化合物１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリルは、アッセイ４、２および５に記載されている細胞アッセイにおいて、それぞれＩＬ−４、ＩＬ−１３およびＩＦＮγの阻害に対して５０ｎＭまたはそれ未満のＩＣ５０値を示した。この化合物は、マウスのＴＰＡ誘発刺激性接触皮膚炎モデルにおいて、用量依存的および濃度依存的効果も示した。さらに、実施例２の化合物のモデルクリーム製剤およびモデル軟膏製剤は、検出可能な血漿曝露なしに、マウスでは少なくとも２日間およびミニブタでは少なくとも７日間にわたって持続性の皮膚レベルを示した。
【０１３１】
有意な全身レベルの非存在下における持続性の皮膚レベルのＪＡＫ阻害剤は、全身で引き起こされる有害作用なしに、皮膚において強力な局所的抗炎症活性および抗そう痒活性をもたらすと予想される。そのような化合物は、いくつかの皮膚炎症性症状または皮膚そう痒性症状において有益であると予想され、それらの症状としては、アトピー性皮膚炎、円形脱毛症、白斑、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、結節性痒疹、扁平苔癬、原発性限局性皮膚アミロイドーシス、水疱性類天疱瘡、移植片対宿主病の皮膚発現、類天疱瘡、円板状狼瘡、環状肉芽腫、慢性単純性苔癬、外陰部／陰嚢／肛門周囲のそう痒、硬化性苔癬、帯状疱疹後神経痛かゆみ、毛孔性扁平苔癬および脱毛性毛包炎（ｆｏｌｉｃｕｌｉｔｉｓ  ｄｅｃａｌｖａｎｓ）が挙げられるが、これらに限定されない。特に、アトピー性皮膚炎（Ｂａｏら、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ，２０１３，２，ｅ２４１３７）、円形脱毛症（Ｘｉｎｇら、Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２０１４，２０，１０４３−１０４９）、白斑（Ｃｒａｉｇｌｏｗら、ＪＡＭＡ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０１５，１５１，１１１０−１１１２）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（Ｎｅｔｃｈｉｐｏｒｏｕｋら、Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ．２０１４；１３，３３３１−３３３５）、結節性痒疹（Ｓｏｎｋｏｌｙら、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６，１１７，４１１−４１７）、扁平苔癬（Ｗｅｌｚ−Ｋｕｂｉａｋら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．２０１５，ＩＤ：８５４７４７）、原発性限局性皮膚アミロイドーシス（Ｔａｎａｋａら、Ｂｒ  Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００９，１６１，１２１７−１２２４）、水疱性類天疱瘡（Ｆｅｌｉｃｉａｎｉら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９９，１２，５５−６１）および移植片対宿主病の皮膚発現（Ｏｋｉｙａｍａら、Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０１４，１３４，９９２−１０００）は、ＪＡＫの活性化を介してシグナル伝達するある特定のサイトカインの増加を特徴とする。したがって、本発明の化合物は、これらのサイトカインによって引き起こされる関連する皮膚の炎症またはそう痒症を軽減することができ得る。特に、本発明の化合物は、アトピー性皮膚炎および他の炎症性皮膚疾患の処置に有用であると予想される。
【０１３２】
ゆえに、１つの態様において、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）の炎症性皮膚疾患を処置する方法を提供し、その方法は、本発明の化合物および薬学的キャリアを含む薬学的組成物を哺乳動物の皮膚に塗布する工程を含む。１つの態様において、炎症性皮膚疾患は、アトピー性皮膚炎である。
【０１３３】
本発明の化合物は、炎症性皮膚疾患を処置するためにグラム陽性抗生物質（例えば、ムピロシンおよびフシジン酸）と併用しても使用され得る。ゆえに、１つの態様において、本発明は、哺乳動物の炎症性皮膚疾患を処置する方法を提供し、その方法は、本発明の化合物およびグラム陽性抗生物質を哺乳動物の皮膚に塗布する工程を含む。別の態様において、本発明は、本発明の化合物、グラム陽性抗生物質および薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物を提供する。
【０１３４】
本発明の化合物は、以下の実施例に記載されるように、酵素結合アッセイにおいてＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２酵素の強力な阻害剤であると実証され、細胞アッセイにおいて細胞傷害性なしに強力な機能活性を有すると実証された。
【実施例】
【０１３５】
以下の合成および生物学の実施例は、本発明を例証するために提供されるのであって、決して本発明の範囲を限定すると解釈されるべきでない。下記の実施例では、以下の省略形は、別段示されない限り、以下の意味を有する。下記に定義されない省略形は、それらの一般に認められている意味を有する。
ＡＣＮ＝アセトニトリル
ＣＰＭＥ＝シクロペンチルメチルエーテル
ｄ＝日数
ＤＩＰＥＡ＝Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ＥｔＯＨ＝エチルアルコール
ｈ＝時間
ＨＡＴＵ＝Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＩＰＡ＝イソプロピルアルコール
ＭｅＯＨ＝メタノール
ｍｉｎ＝分
ＮＭＰ＝Ｎ−メチルピロリドン
ＲＴ＝室温
ＴＥＡ＝トリエチルアミン
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
キサントホス（Ｘａｎｔｐｈｏｓ）＝４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン
Ｘｐｈｏｓ＝ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル
ＸＰｈｏｓＰｄ  Ｇ２＝クロロ（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル）［２−（２’−アミノ−１，１’−ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）
【０１３６】
試薬および溶媒は、商業的供給業者（Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｆｌｕｋａ、Ｓｉｇｍａなど）から購入し、さらに精製せずに使用した。反応混合物の進行は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、分析用高速液体クロマトグラフィー（ａｎａｌ．ＨＰＬＣ）および質量分析法によってモニターした。反応混合物は、各反応において具体的に記載されるようにワークアップした；通常、それらは、抽出および他の精製方法（例えば、温度依存性および溶媒依存性の結晶化および沈殿）によって精製した。さらに、反応混合物は、代表的にはＣ１８またはＢＤＳカラムパッキングおよび従来の溶離剤を用いる、カラムクロマトグラフィーまたは分取ＨＰＬＣによって通例のように精製した。代表的な分取ＨＰＬＣ条件は、下記に記載される。
【０１３７】
反応生成物の特徴付けは、質量分析法および１Ｈ−ＮＭＲ分光法によって通例のように行った。ＮＭＲ解析の場合、サンプルを重水素化溶媒（例えば、ＣＤ３ＯＤ、ＣＤＣｌ３またはｄ６−ＤＭＳＯ）に溶解し、標準的な観測条件下でＶａｒｉａｎ  Ｇｅｍｉｎｉ  ２０００装置（４００ＭＨｚ）を用いて１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを取得した。化合物の質量分析同定は、自動精製システムに連結された、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）のモデルＡＰＩ  １５０  ＥＸ装置またはＷａｔｅｒｓ（Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）の３１００装置を用いるエレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＭＳ）によって行った。
【０１３８】
別段示されない限り、以下の条件を分取ＨＰＬＣ精製のために使用した。
カラム：Ｃ１８、５μｍ  ２１．２×１５０ｍｍまたはＣ１８、５μｍ  ２１×２５０ｍｍまたはＣ１４  ５μｍ  ２１×１５０ｍｍ
カラム温度：室温
流速：２０．０ｍＬ／分
移動相：Ａ＝水＋０．０５％ＴＦＡ
Ｂ＝ＡＣＮ＋０．０５％ＴＦＡ、
注入体積：（１００〜１５００μＬ）
検出器の波長：２１４ｎｍ
【０１３９】
粗化合物を約５０ｍｇ／ｍＬで１：１水：酢酸に溶解した。４分間の分析スケールの試験ランを、２．１×５０ｍｍ  Ｃ１８カラムを用いて行った後、１５または２０分間の分取スケールのランを、分析スケールの試験ランの％Ｂ保持に基づくグラジエントを伴う１００μＬの注入を用いて行った。正確なグラジエントは、サンプル依存的であった。近くを流れる（ｃｌｏｓｅ  ｒｕｎｎｉｎｇ）不純物を含むサンプルは、最善の分離のために２１×２５０ｍｍ  Ｃ１８カラムおよび／または２１×１５０ｍｍ  Ｃ１４カラムを用いて調べた。所望の生成物を含む画分を質量分析によって特定した。
【０１４０】
分析用ＨＰＬＣ条件
方法Ａ
カラム：ＬＵＮＡ  Ｃ１８（２）、１５０×４．６０ｍｍ、３μｍ
カラム温度：３７℃
流速：１．０ｍＬ／分
注入体積：５μＬ
サンプル調製：１：１ＡＣＮ：水に溶解
移動相：Ａ＝水：ＡＣＮ：ＴＦＡ（９８：２：０．０５）
Ｂ＝水：ＡＣＮ：ＴＦＡ（２：９８：０．０５）
検出器の波長：２５０ｎｍ
グラジエント：全３２分（時間（分）／％Ｂ）：０／２、１０／２０、２４／９０、２９／９０、３０／２、３２／２
【０１４１】
方法Ｂ
カラム：ＬＵＮＡ  Ｃ１８（２）、１５０×４．６０ｍｍ、３μｍ
カラム温度：３７℃
流速：１．０ｍＬ／分
注入体積：１０μＬ
サンプル調製：１：１ＡＣＮ：水に溶解
移動相：Ａ＝水：ＡＣＮ：ＴＦＡ（９８：２：０．０５）
Ｂ＝水：ＡＣＮ：ＴＦＡ（１０：９０：０．０５）
検出器の波長：２５４ｎｍ
グラジエント：全３５分（時間（分）／％Ｂ）：０／２、２０／２５、２３／９０、２６／９０、２７／２、３５／２
【０１４２】
調製法１：（３−（（２，６−ジクロロピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール
【化１８】
2019514903.tif 000020
【０１４３】
２，４，６−トリクロロピリミジン（８．０ｇ，４３．７ｍｍｏｌ）および（３−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール（７．４ｇ，６５．４ｍｍｏｌ）を含むＥｔＯＨ（８０ｍＬ）の混合物に、ＤＩＰＥＡ（１１．３ｇ，８７．２ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を２０℃で１２時間撹拌し、濾過して、表題中間体（６．５ｇ，５７％収率）を白色固体として得た。Ｃ８Ｈ７Ｃｌ２Ｎ５Ｏの（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値２６０．００、実測値２６０．０。
【０１４４】
調製法２：（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール
【化１９】
2019514903.tif 000021
【０１４５】
（ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−クロロ−６−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）アミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボキシレート
（３−（（２，６−ジクロロピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール（６．０ｇ，２３．１ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−アミノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボキシレート（６．３ｇ，２７．７ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（６．０ｇ，４６．２ｍｍｏｌ）を含むＤＭＳＯ（６０ｍＬ）の混合物を、１００℃で１２時間撹拌した。その反応混合物を、パイロットスケールのランの生成物と合わせ、水（８００ｍＬ）に注ぎ込んだ。沈殿物を濾過し、真空中で乾燥させた。残渣を、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）および石油エーテル（５００ｍＬ）から再結晶化して、表題中間体（５．６ｇ，５０％収率）を灰色固体として得た。構造をＮＭＲで確認した。
【０１４６】
（ｂ）ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）アミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボキシレート
ナトリウムメトキシド（２．４ｇ，４４．５ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ（３０ｍＬ）の溶液に、前の工程の生成物（２．０ｇ，４．４５ｍｍｏｌ）を２０℃で加えた。その反応混合物を密封管において１００℃で８時間撹拌した。その反応混合物を、パイロットスケールのランの生成物と合わせ、水（３０ｍＬ）に注ぎ込み、ＥｔＯＡｃで抽出した（３×５０ｍＬ）。有機層をブラインで洗浄し（２×３０ｍＬ）、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（Ｄａｉｓｏ  ２５０×５０ｍｍ  １０μｍ、８０ｍＬ／分、３０〜５５％ＡＣＮ＋０．１％ＴＦＡ／ＡＣＮ）によって精製して、表題中間体（０．７ｇ，３２％収率）を白色固体として得た。Ｃ２１Ｈ３１Ｎ７Ｏ４の（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値４４６．２４、実測値４４６．２。
【０１４７】
（ｃ）（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール
４Ｍ  ＨＣｌのＥｔＯＡｃ溶液（２０ｍＬ）中の前の工程の生成物（０．７ｇ，１．５７ｍｍｏｌ）の溶液を、２０℃で２時間撹拌し、真空中で濃縮して、表題化合物のＨＣｌ塩（０．６ｇ，９９％収率）を白色固体として得た。Ｃ１６Ｈ２３Ｎ７Ｏ２の（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値３４６．１９、実測値３４６．２。
【０１４８】
調製法３：ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（メチルアミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボキシレート
【化２０】
2019514903.tif 000022
【０１４９】
（ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−アミノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボキシレート（５．２１ｇ，２３．００ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１１５ｍｌ）およびトリエチルアミン（６．４１ｍＬ，４６．０ｍｍｏｌ）の溶液を、ＲＴで１５分間撹拌した。クロロギ酸ベンジル（３．５６ｍＬ，２５．３ｍｍｏｌ）を滴下して加え、その反応混合物をＲＴで３時間撹拌し、水でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した（４×２０ｍＬ）。合わせた有機画分をブラインで洗浄し（２×２０ｍＬ）、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、黄色油状物を得て、それをカラムクロマトグラフィー（１２０ｇカラム；０〜７０％ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液）によって精製して、表題中間体を濃厚な透明油状物として得た（３．７９ｇ，３６％収率；７９％純度）。Ｃ２０Ｈ２８Ｎ２Ｏ４の（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値３６１．２０、実測値３６１．２。
【０１５０】
（ｂ）ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボキシレート
前の工程の生成物（２．９９ｇ，８．２９ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（４１．５ｍＬ）の溶液を、０℃に冷却し、水素化ナトリウム、６０％鉱油分散物（０．３９８ｇ，１６．５８ｍｍｏｌ）を一度に加えた。得られた懸濁液を０℃で１５分間撹拌し、次いで、ヨードメタン（１．０３ｍＬ，１６．５８ｍｍｏｌ）を滴下して加え、得られた濁った薄黄色混合物を０℃で１５分間撹拌し、ＲＴに加温し、２時間撹拌した。その反応混合物を水でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した（４×２０ｍＬ）。合わせた有機画分をブラインで洗浄し（２×２０ｍＬ）、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、透明の薄黄色油状物を得て、それをカラムクロマトグラフィー（８０ｇカラム；０〜７０％ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液）によって精製して、表題中間体を無色透明の濃厚な油状物として得た（２．０７ｇ，６５％収率；９７％純度）。Ｃ２１Ｈ３０Ｎ２Ｏ４の（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値３７５．２２、実測値３７５．５。
【０１５１】
（ｃ）ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（メチルアミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボキシレート
１００ｍＬフラスコに、１０％ｗｔ．炭素担持パラジウム（０．５７７ｇ，０．５４２ｍｍｏｌ）を加えた。その材料を窒素に曝露し、次いで、前の工程の生成物（１．０１５ｇ，２．７１ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ（５４．２ｍＬ）の溶液をピペットによってゆっくり加えた。水素ガスバルーンを取り付けた。そのフラスコを真空にし、３回水素で満たし直した後、その雰囲気を完全にＨ２ガスに曝した。その反応混合物をＲＴで１６時間撹拌し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドで濾過し、濃縮して、透明油状物を得て、それをカラムクロマトグラフィー（４０ｇカラム；０〜１００％ＭｅＯＨのＤＣＭ溶液）によって精製して、生成物を透明油状物として得た。そのカラムに１０：１ＭｅＯＨ：ＴＥＡを流した。濾液を濃縮して、濃厚な透明油状物を白色固体とともに得て、その白色固体をＥｔＯＡｃに溶解し、濾過し、透明油状物の生成物と合わせ、濃縮して、表題中間体を得た（０．５５９ｇ，８６％収率）。Ｃ１３Ｈ２４Ｎ２Ｏ２の（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値２４１．１８、実測値２４１．３。
【０１５２】
調製法４：（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール
【化２１】
2019514903.tif 000023
【０１５３】
（ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−クロロ−６−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボキシレート
【０１５４】
（３−（（２，６−ジクロロピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール（２００ｍｇ，０．７７ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（メチルアミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボキシレート（１９４ｍｇ，０．８１ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（０．２９ｍＬ，１．９２ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＳＯ（５ｍＬ）中で６０℃において一晩撹拌した。その反応混合物を真空中で濃縮した。粗残渣を逆相クロマトグラフィーによって精製して、表題中間体を得て（１４３ｍｇ，０．３１ｍｍｏｌ，４０％収率）、それを次の工程で直接使用した。
【０１５５】
（ｂ）（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−クロロピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール
ＡＣＮ（３．０ｍＬ）に溶解された前の工程の生成物（１４３ｍｇ，０．３１ｍｍｏｌ）に、４Ｎ  ＨＣｌのジオキサン溶液（１．１５６ｍＬ  ４．６２ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合物をＲＴで３０分間撹拌した。その反応混合物を真空中で濃縮して、表題中間体のＨＣｌ塩を得て、それを精製せずに次の工程で使用した。
【０１５６】
（ｃ）（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール
前の工程の生成物（１１２ｍｇ，０．２８０ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ（５ｍＬ）の撹拌溶液に、５０％ナトリウムメトキシドのＭｅＯＨ溶液（０．９６０ｍＬ，８．３９ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を、密封バイアルにおいて８０℃で一晩加熱した。その反応混合物を真空中で濃縮し、粗残渣を逆相クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物を得た（２７ｍｇ，０．０５７ｍｍｏｌ，２０％収率）。
【０１５７】
調製法５：（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール
【化２２】
2019514903.tif 000024
【０１５８】
（ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−クロロ−６−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボキシレート
（３−（（２，６−ジクロロピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール（３．７ｇ，１４．２ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−アミノ−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボキシレート（４．１ｇ，１７．０ｍｍｏｌ）を含むＤＭＳＯ（３７ｍＬ）の混合物に、ＤＩＰＥＡ（３．７ｇ，２８．４ｍｍｏｌ）を窒素下で加えた。その反応物を１２０℃で１２時間撹拌し、水（８０ｍＬ）に注ぎ込み、ＥｔＯＡｃで抽出し（３×１００ｍＬ）、乾燥させ、濃縮して、粗生成物を得て、それをＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で洗浄して、表題中間体（３．８ｇ，５６％収率）を白色固体として得た。
【０１５９】
（ｂ）ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボキシレート
４つの反応を並行して行った。前の工程の生成物（０．９５ｇ，２．０ｍｍｏｌ）を含むナトリウムメトキシドのＭｅＯＨ溶液（１０ｍＬ）の混合物を、密封管において１２０℃で３時間撹拌した。その反応混合物を水（５０ｍＬ）に加え、ＥｔＯＡｃで抽出した（３×５０ｍＬ）。有機層をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（Ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２５０×５０ｍｍ  １０μｍ，ＡＣＮ＋０．１％ＴＦＡ／ＡＣＮ）によって精製して、表題中間体（合わせて１．２ｇの生成物，２８％収率）を茶色固体として得た。Ｃ２２Ｈ３３Ｎ７Ｏ４の（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値４６０．２６、実測値４６０．３。
【０１６０】
（ｃ）（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール
前の工程の生成物（１．２ｇ，２．５ｍｍｏｌ）に、４Ｍ  ＨＣｌのＥｔＯＡｃ溶液（５０ｍＬ）を加えた。その反応物を２５℃で２時間撹拌した。残渣を、１．５ｍｍｏｌスケールの調製法の生成物と合わせ、濃縮して、表題中間体（２．０ｇ，１００％収率）を淡黄色固体として得た。Ｃ１７Ｈ２５Ｎ７Ｏ２の（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値３６０．４３、実測値３６０．４。
【０１６１】
調製法６：（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール
【化２３】
2019514903.tif 000025
【０１６２】
（ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−クロロ−６−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボキシレート
（３−（（２，６−ジクロロピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール（６．５ｇ，２４．９ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（メチルアミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボキシレート（６．９ｇ，２７．４ｍｍｏｌ）を含むＤＭＳＯ（８０ｍＬ）の混合物に、ＤＩＰＥＡ（６．４ｇ，４９．８ｍｍｏｌ）を窒素下で加えた。その反応混合物を１２０℃で８時間撹拌し、水（８０ｍＬ）に注ぎ込み、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で抽出し、乾燥させ、濃縮して、粗生成物を得た。その粗生成物を、同じスケールの別個の調製法の生成物と合わせ、分取ＨＰＬＣ（Ｄａｉｓｏ  １５０×２５ｍｍ  ５μｍ、８０ｍＬ／分、３５〜６０％ＡＣＮ＋０．１％ＴＦＡ／ＡＣＮ）によって精製して、表題中間体（１６．０ｇ，６４％収率）を淡黄色固体として得た。Ｃ２２Ｈ３２ＣｌＮ７Ｏ３の（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値４７８．２３、実測値４７８．２。
【０１６３】
（ｂ）ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボキシレート
前の工程の生成物（２．０ｇ，４．１９ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ（２０ｍＬ）の混合物に、ナトリウムメトキシド（２．２ｇ，４１．９ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を１２０℃で６時間、密封管において１２時間撹拌し、水（１００ｍＬ）に注ぎ込み、ＥｔＯＡｃ（８００ｍＬ）で希釈し、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、濃縮して、粗生成物を得た。その粗生成物を、２ｍｍｏｌスケールの別個の調製法の生成物と合わせ、分取ＨＰＬＣ（Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｍａｘ−ＲＰ、２５０×５０ｍｍ  １０μｍ、８０ｍＬ／分、２５〜５０％ＡＣＮ＋０．１％ＴＦＡ／ＡＣＮ）によって精製して、表題中間体（２．１ｇ，７１％収率）を白色固体として得た。
【０１６４】
（ｃ）（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール
前の工程の生成物（２．１ｇ，４．４３ｍｍｏｌ）を含むＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）の混合物に、４Ｍ  ＨＣｌのＥｔＯＡｃ溶液（２０ｍＬ）を加え、その反応物を２０℃で３時間撹拌し、濃縮して、生成物のＨＣｌ塩（２．０ｇ，１００％収率）を白色固体として得た。Ｃ１８Ｈ２７Ｎ７Ｏ２の（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値３７４．２２、実測値３７４．１。
【０１６５】
実施例１：１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリル
【化２４】
2019514903.tif 000026
【０１６６】
（３−（（２−（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−イル（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール（１５ｍｇ，０．０４２ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（４．０ｍＬ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．０２２ｍｌ，０．１２５ｍｍｏｌ）を加えた後、３−シアノ−１−アゼチジンスルホニルクロリド（７．５４ｍｇ，０．０４２ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物をＲＴで一晩撹拌した。溶媒を真空中で除去し、粗残渣を逆相ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（３．２ｍｇ）を得た。Ｃ２１Ｈ２９Ｎ９Ｏ４Ｓの（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値５０４．２１、実測値５０４．１。
【０１６７】
実施例２：１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリル
【化２５】
2019514903.tif 000027
【０１６８】
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノールＨＣｌ（１５０ｍｇ，０．４０２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．３５１ｍＬ，２．００８ｍｍｏｌ）を含む０℃のＤＭＦ（３ｍＬ）の溶液に、３−シアノ−１−アゼチジンスルホニルクロリド（７２．５ｍｇ，０．４０２ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合物を０℃で１０分間撹拌し、次いで、ＲＴで１５時間撹拌した。その反応混合物を真空中で濃縮して、赤色液体を得て、それを分取ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（７２．４ｍｇ，０．１１５ｍｍｏｌ，２８．５％収率）を白色固体として得た。Ｃ２２Ｈ３１Ｎ９Ｏ４Ｓの（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値５１８．２２、実測値５１８。
【０１６９】
実施例３：（３−（（６−メトキシ−２−（メチル（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（メチルスルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール
【化２６】
2019514903.tif 000028
【０１７０】
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノールＨＣｌ（２５０ｍｇ，０．６６９ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（７．０ｍＬ）の溶液を、０℃に冷却し、ＤＩＰＥＡ（０．３５ｍＬ，２．００８ｍｍｏｌ）を一度に加えた後、塩化メタンスルホニル（０．０５３ｍＬ，７７ｍｇ，０．６７６ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。その反応混合物を一晩撹拌し、１：１酢酸：水（６ｍＬ）に溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（９４ｍｇ，３１％収率）を白色粉末として得た。Ｃ１９Ｈ２９Ｎ７Ｏ４Ｓの（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値４５２．１５、実測値４５２．２。
【０１７１】
実施例４：（３−（（６−メトキシ−２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−（（２−メトキシエチル）スルホニル）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール
【化２７】
2019514903.tif 000029
【０１７２】
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノールＨＣｌ（２５０ｍｇ，０．７０３ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（７．０ｍＬ）の溶液を、０℃に冷却し、ＤＩＰＥＡ（０．３５ｍＬ，２．００８ｍｍｏｌ）を一度に加えた後、２−メトキシ−エタンスルホニルクロリド（１１１ｍｇ，０．６７６ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。その反応混合物を一晩撹拌し、１：１酢酸：水（６ｍＬ）に溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（４１ｍｇ，１２％収率）を白色固体として得た。Ｃ２１Ｈ３３Ｎ７Ｏ５Ｓの（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値４９６．２３、実測値４９６．２。
【０１７３】
実施例５：３−（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−イル）−プロパンニトリル
【化２８】
2019514903.tif 000030
【０１７４】
（３−（（２−（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−イル（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール（１５ｍｇ，０．０４２ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ（４．０ｍＬ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．０２２ｍＬ，０．１２５ｍｍｏｌ）を加えた後、アクリロニトリル（２．７０μＬ、０．０４２ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物をＲＴで一晩撹拌し、真空中で濃縮し、逆相ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（４．３ｍｇ）を得た。Ｃ２０Ｈ２８Ｎ８Ｏ２の（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値４１３．２３、実測値４１３．２。
【０１７５】
実施例６：５−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）メチル）ピコリノニトリル
【化２９】
2019514903.tif 000031
【０１７６】
ジイソプロピルアミン（０．０３２ｍＬ，０．２２５ｍｍｏｌ）（０．２５６ｍＬ）を、ＤＭＦ中の（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール（２９．８ｍｇ，０．０７５ｍｍｏｌ）の０．１５Ｍ溶液に加え、すべての材料が溶解するようにその溶液をかき混ぜた。その溶液に、ＤＭＦ中の４−（クロロメチル）−ピコリノニトリル）の０．２３Ｍ溶液（０．５ｍＬ，３４ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合物をＲＴで一晩撹拌した。ポリスチレン−チオフェノール樹脂（０．１１５ｇ，０．１５０ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合物をＲＴで４時間撹拌し、濾過した。その反応容器をＤＭＦ（０．５ｍＬ）で洗浄し、洗液を合わせ、ロータリーエバポレーションによって濃縮し、１：１酢酸：水に溶解し、濾過し、逆相ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（６．４ｍｇ）を得た。Ｃ２４Ｈ２９Ｎ９Ｏ２の（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値４７６．２４、実測値４７６．１。
【０１７７】
実施例７：５−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）メチル）ニコチノニトリル
【化３０】
2019514903.tif 000032
【０１７８】
（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノールＨＣｌ（２０ｍｇ，０．０５４ｍｍｏｌ）、５−（ブロモメチル）ニコチノニトリル（１０．５５ｍｇ，０．０５４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（２２．２０ｍｇ，０．１６１ｍｍｏｌ）の溶液を、６０℃のＤＭＦ（６．０ｍＬ）中で一晩撹拌した。その反応混合物を真空中で濃縮し、逆相ＨＰＬＣによって精製して、表題中間体のＴＦＡ塩（３．７ｍｇ）を得た。Ｃ２５Ｈ３１Ｎ９Ｏ２の（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値４９０．２６、実測値４９０．２。
【０１７９】
実施例８：イソブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボキシレート
【化３１】
2019514903.tif 000033
【０１８０】
（３−（（２−（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール，ＨＣｌ（２５ｍｇ，０．０６１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（４２．６μＬ、０．２４４ｍｍｏｌ）を含む０℃のＤＭＦ（３０５μＬ）の溶液に、クロロギ酸イソブチル（１０ｍｇ，０．０７３ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（３０５μＬ）を滴下して加えた。その反応混合物を０℃で５分間撹拌し、次いで、ＲＴに到達させた。２４時間後、その反応混合物を濃縮し、１：１ＡＣＮ：水に溶解し、逆相ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（６．４ｍｇ）を得た。Ｃ２３Ｈ３５Ｎ７Ｏ４の（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値４７４．２８、実測値４７４．２。
【０１８１】
実施例９：２，２−ジフルオロ−１−（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）エタン−１−オン
【化３２】
2019514903.tif 000034
【０１８２】
ＨＡＴＵ（０．０２９ｇ，０．０７７ｍｍｏｌ）を、２，２−ジフルオロ酢酸（６．７２ｍｇ，０．０７０ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（３ｍＬ）の溶液に加え、その反応混合物をＲＴで５分間撹拌して、活性化された酸の０．１４Ｍ溶液を調製した。その活性化された酸の０．１４Ｍ溶液（０．５ｍＬ，０．０７０ｍｍｏｌ）を、（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノールＨＣｌ（２９ｍｇ，０．０７０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０４９ｍＬ，０．２８０ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦの溶液に加え、その反応混合物をＲＴで３０分間撹拌し、真空中で濃縮し、得られた残渣を１：１酢酸：水に溶解し、逆相ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩（３．９ｍｇ）を得た。Ｃ２０Ｈ２７Ｎ７Ｏ３の（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値４５２．２１、実測値４５２．１。
【０１８３】
同様の合成方法を用いて、表１〜３の化合物を調製した。
【表１】
2019514903.tif 000035
【０１８４】
【表２】
2019514903.tif 000036
【０１８５】
【表３】
2019514903.tif 000037
【０１８６】
実施例１０：１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリル
【化３３】
2019514903.tif 000038
【０１８７】
（ａ）５−（（（トリイソプロピルシリル）オキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（３’）
【化３４】
2019514903.tif 000039
１００ｍＬフラスコに、（３−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール（５．８ｇ，５１．３ｍｍｏｌ）、１−メチル−２−ピロリジノン（５８．０ｍＬ）およびイミダゾール（４．５４ｇ，６６．７ｍｍｏｌ）を加えた後、トリイソプロピルシリルクロリド（１１．９５ｍＬ，５６．４ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を２２℃で一晩撹拌し、次いで、ＥｔＯＡｃ（１４５ｍＬ）および水（１４５ｍＬ）を加えた。層を分離し、有機層を水（１４５ｍＬ）およびブライン（１５％，１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発させて、表題中間体（１３．３３ｇ，４９．５ｍｍｏｌ，９６％収率）を得た。ＨＰＬＣ方法Ａ、保持時間１９．００分。
【０１８８】
（ｂ）ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−クロロ−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボキシレート（９’）
【化３５】
2019514903.tif 000040
【０１８９】
２，４−ジクロロ−６−メトキシピリミジン（２０ｇ，１１２ｍｍｏｌ）および（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（メチルアミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボキシレート（３６．９ｇ，１４５ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ（３００ｍＬ）の混合物に、ＤＩＰＥＡ（３９．０ｍＬ，２２３ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合物を２０〜２５℃で一晩撹拌した。さらなる（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（メチルアミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボキシレート（４．２６ｇ，１６．７６ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合物を５５℃に加温し、２．５時間撹拌し、ＲＴに冷却し、２日間撹拌した。ヘプタン（４００ｍＬ）を３０分間にわたって加え、その反応混合物を濾過した。液相を、約２００〜３００ｍＬまでＩＰＡ（３００ｍＬ、次いで２００ｍＬ）と共沸し、５℃で一晩撹拌し、濾過して、表題中間体（２９．２ｇ，７１．４ｍｍｏｌ，６３．９％収率）を得た。ＨＰＬＣ方法Ａ、保持時間２８．２７分。
【０１９０】
（ｃ）ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−メトキシ−６−（（５−（（（トリイソプロピルシリル）オキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−カルボキシレート（７’）
【化３６】
2019514903.tif 000041
【０１９１】
２５０ｍＬフラスコに、前の工程の生成物（９’）（８ｇ，２０．１６ｍｍｏｌ）、工程（ａ）の生成物（３’）（６．７９ｇ，２５．２ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（１３．１３ｇ，４０．３ｍｍｏｌ）、Ｘｐｈｏｓ  Ｐｄ  Ｇ２（０．７９３ｇ，１．００８ｍｍｏｌ）およびＸＰｈｏｓ（０．４８０ｇ，１．００８ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合物を３回脱気し、１，４−ジオキサン（８０ｍＬ）および水（８．００ｍＬ）を加えて、懸濁液を得た。その反応混合物を真空下および窒素下で３回脱気し、１００℃に加熱し、一晩還流し、３５℃に冷却した。ＳｉｌｉａＭｅｔＳ（登録商標）チオール官能化シリカ（４ｇ）を加え、その反応混合物を６５℃に加温し、２時間撹拌し、５０℃に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）（５ｇ）で濾過した。水（２００ｍＬ）および酢酸イソプロピル（２００ｍＬ）を加え、層を分離し、有機層を２０％ＮａＨＳＯ３で洗浄した。層を分離し、有機層をブラインで洗浄した。再度、層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、粗生成物（約２０ｇ）を得た。メタノール（５０ｍＬ）を加え、その反応混合物をＲＴで撹拌し、濾過し、メタノール（１０ｍＬ）で洗浄して、固体を除去することにより、表題化合物をメタノール溶液として得て、それを次の工程で直接使用した。ＨＰＬＣ方法Ａ：保持時間１６．０５分。
【０１９２】
（ｄ）（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール（１）
【化３７】
2019514903.tif 000042
【０１９３】
２５０ｍＬフラスコに、メタノール（５０ｍＬ）中の前の工程の粗生成物（７’）（１２．６８ｇ，２０．１３６ｍｍｏｌ）および３Ｍ  ＨＣｌのＣＰＭＥ溶液（６７．１ｍＬ，２０１ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合物をＲＴで２時間撹拌し、濾過して、表題化合物の粗３ＨＣｌ塩（４．８ｇ，９．９４ｍｍｏｌ，４９．４％収率）を得た。
【０１９４】
フラスコに、上記の粗３ＨＣｌ塩（２ｇ，４．１４ｍｍｏｌ）を加えた後、水（３０ｍＬ）およびＳｉｌｉａＭｅｔＳチオール官能化シリカ４０％ｗ／ｗ（０．８ｇ，４．１４ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合物を６５℃に加温し、１６時間撹拌し、Ｃｅｌｉｔｅで濾過し、水（１．５ｍＬ）で洗浄した。アセトン（１２０ｍＬ）を加え、その反応混合物をＲＴで一晩撹拌し、濾過し、アセトン（１０ｍＬ）で洗浄し、５０℃の真空中で乾燥させて、表題化合物の精製された３ＨＣｌ塩（１．０５ｇ，２．１７５ｍｍｏｌ，５２．５％収率）を得た。ＨＰＬＣ方法Ａ：保持時間１０．０９分。
【０１９５】
（ｅ）１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリル
【０１９６】
バイアルに、前の工程の生成物（１）（０．８３ｇ，１．７１９ｍｍｏｌ）およびＮＭＰ（８．３ｍＬ）を加えた後、ＴＥＡ（１．４４ｍＬ，１０．３１ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を５〜１０分間撹拌した。３−シアノアゼチジン−１−スルホニルクロリド（０．４６６ｇ，２．５８ｍｍｏｌ）を２２℃において加えた。２時間後、水（２５ｍＬ）を３０分間にわたって加え、その反応混合物を２２時間撹拌した。その反応混合物を濾過し、水（２ｍＬ）で洗浄して、表題生成物（０．９ｇ，１．７０４ｍｍｏｌ，９９％収率）を白色固体として得た。ＨＰＬＣ方法Ａ：保持時間１６．１８分。
【０１９７】
実施例１１：結晶性１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリル形態Ｉ
【０１９８】
１００ｍＬフラスコに、１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（３−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリル（１ｇ，１．９３２ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（３．００ｍＬ）を加えた後、アセトン（４ｍＬ）を加えた。次いで、水（６ｍＬ）を５分間にわたって加え、その反応混合物を一晩撹拌し、濾過し、固体を水およびアセトンで洗浄し、３０分間乾燥させて、表題化合物（０．９４ｇ，１．８１６ｍｍｏｌ，９４％収率）を得た。ＨＰＬＣ方法Ａ：保持時間１６．３０分。
【０１９９】
実施例１２：結晶性１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリル形態Ｉ
【０２００】
２０Ｌフラスコに、（３−（（２−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−３−イル）（メチル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−４−イル）アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メタノール（１）（１．２０ｋｇ，２．６９ｍｏｌ）、ＮＭＰ（４．８ｋｇ）およびＴＥＡ（１．３６ｋｇ，１３．４５ｍｏｌ）を加え、その反応混合物をＲＴで２時間撹拌した。次に、ＮＭＰ（２．４ｋｇ）を加え、その反応混合物を撹拌し、約１時間にわたって５〜１０℃に冷却した。３−シアノアゼチジン−１−スルホニルクロリド（０．５８ｋｇ，３．２３ｍｏｌ）を０．５時間ごとに３回に分けて加え、その反応混合物を２時間撹拌し、ＲＴに加温した。メタノール（４．２ｋｇ）を加え、その反応混合物を０．５時間撹拌した。水（２１．６ｋｇ）を３時間にわたって加え、その反応混合物を０．５時間撹拌し、濾過した。固体をメタノール（１．０ｋｇ）でリンスして、粗表題化合物（１．３３ｋｇ）を得て、そのうち１．２０ｋｇをＮＭＰ（３．６ｋｇ）に溶解した。アセトン（３．８ｋｇ）を加え、その溶液を濾過し、濾液を、撹拌しながら４５〜５５℃に加熱した。水（６．６ｋｇ）を６時間にわたって加え、その混合物を撹拌し、２５〜３０℃に冷却し、濾過した。固体を４：５．５アセトン：水（１．５Ｌ）でリンスし、乾燥させて、表題化合物（１．２１ｋｇ，９９％純度，８５％収率）を得た。ＨＰＬＣ方法Ｂ：保持時間１５．２３分。生成物を、エアジェットミリングプロセスを用いて、以下の粒径分布に微粒子化した：Ｘ１０＝０．７０μｍ、Ｘ５０＝２．１７μｍおよびＸ９０＝６．１５μｍ、ここで、Ｘｎは、ｎより小さい粒子のパーセンテージ％として定義される。
【０２０１】
実施例１３：結晶性１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリル形態ＩＩ
【０２０２】
フラスコに、１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリル（１６ｇ，３０．９ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１６０ｍＬ）を加え、その反応混合物を濾過した。その溶液に、水（４８０ｍＬ）を３０分間にわたって加え、その反応混合物を６５℃に加温し、一晩撹拌し、ＲＴに冷却し、２０時間撹拌し、濾過した。固体を一晩乾燥させて、表題中間体（１１．８ｇ，２２．８０ｍｍｏｌ，７３．８％収率）を得た。ＨＰＬＣ方法Ａ：保持時間１６．１９分。
【０２０３】
実施例１４〜１６：本発明の固体形態の特性
実施例１２および１３の１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリルのそれぞれ形態Ｉおよび形態ＩＩの結晶性遊離塩基のサンプルを、粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）および動的水分吸着（ＤＭＳ）によって解析した。
【０２０４】
実施例１４  粉末Ｘ線回折
図１および５の粉末Ｘ線回折パターンは、４５ｋＶの出力電圧および４０ｍＡの電流でＣｕ−Ｋα線（λ＝１．５４０５１Å）を使用するＢｒｕｋｅｒ  Ｄ８−Ａｄｖａｎｃｅ  Ｘ線回折計を用いて得た。この装置を、サンプルにおいて強度が最大となるように入射スリット、発散スリットおよび散乱スリットを設定したＢｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏジオメトリで作動した。計測のために、少量の粉末（５〜２５ｍｇ）をサンプルホルダー上に静かに押し込んで、滑らかな表面を形成させ、Ｘ線曝露に供した。サンプルを、２°から３５°（単位：２θ）まで０．０２°の刻み幅および１工程あたり０．３０°秒の走査速度での２θ−２θモードで走査した。データ取得を、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤｉｆｆｒａｃＳｕｉｔｅ計測ソフトウェアによって制御し、Ｊａｄｅソフトウェア（バージョン７．５．１）によって解析した。上記装置は、コランダム標準を用いて±０．０２°２シータ角以内に較正した。結晶形態Ｉおよび結晶形態ＩＩに対して観測されたＰＸＲＤの２θピーク位置およびｄ間隔をそれぞれ表４および５に示す。  表４に列挙される形態Ｉの微粒子化材料の２−シータピーク位置を、同じ合成プロセスによって調製された微粒子化されていないサンプルのピーク位置と比較した。観察された２−シータピーク位置の最も大きな差は、０．０４度であった。
【０２０５】
【表４】
2019514903.tif 000043
【０２０６】
【表５】
2019514903.tif 000044
【０２０７】
実施例１５：熱分析
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を、Ｔｈｅｒｍａｌ  Ａｎａｌｙｓｔコントローラを備えたＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｍｏｄｅｌ  Ｑ−１００モジュールを用いて行った。データを収集し、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアを用いて解析した。各結晶形態のサンプルを、ふた付きのアルミニウムパンに正確に秤量した。５℃での５分間の等温平衡期間の後、サンプルを１０℃／分の線形加熱勾配で０℃から３００℃に加熱した。本発明の形態Ｉおよび形態ＩＩの結晶性遊離塩基の代表的なＤＳＣサーモグラムを図２および６に示す。
【０２０８】
熱重量分析（ＴＧＡ）の計測は、高分解能を備えるＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｍｏｄｅｌ  Ｑ−５０モジュールを用いて行った。データを、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ａｎａｌｙｓｔコントローラを用いて収集し、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアを用いて解析した。秤量したサンプルを白金パン上に置き、周囲温度から３００℃まで１０℃の加熱速度で走査した。使用中、天秤および炉チャンバーに窒素流をパージした。本発明の形態Ｉおよび形態ＩＩの結晶性遊離塩基の代表的なＴＧＡトレースを図３および７に示す。
【０２０９】
実施例１６：動的水分吸着の評価
動的水分吸着（ＤＭＳ）の計測を、ＶＴＩ大気微量天秤ＳＧＡ−１００システム（ＶＴＩ  Ｃｏｒｐ．，Ｈｉａｌｅａｈ，ＦＬ  ３３０１６）を使用して行った。秤量したサンプルを使用し、解析の開始時の湿度は、可能な限り最低の値（０％ＲＨに近い値）であった。ＤＭＳ解析は、１２０分間にわたる最初の乾燥工程（０％ＲＨ）の後、５％ＲＨ〜９０％ＲＨの湿度範囲にわたる５％ＲＨ／工程という走査速度での吸着および脱着の２サイクルからなった。ＤＭＳの実行は、２５℃の等温で行われた。本発明の形態Ｉおよび形態ＩＩの結晶性遊離塩基の代表的なＤＭＳトレースをそれぞれ図４および８に示す。
【０２１０】
生物学的アッセイ
本発明の化合物を、以下の生物学的アッセイのうちの１つまたはそれを超えるアッセイにおいて特徴付けた。
【０２１１】
アッセイ１：生化学的ＪＡＫおよびオフターゲットキナーゼアッセイ
４つのＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ  ＪＡＫ生化学的アッセイのパネル（ＪＡＫ１、２、３およびＴｙｋ２）を、通常のキナーゼ反応緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．５、０．０１％Ｂｒｉｊ−３５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１ｍＭ  ＥＧＴＡ）に含めた。組換えＧＳＴタグ化ＪＡＫ酵素およびＧＦＰタグ化ＳＴＡＴ１ペプチド基質をＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手した。
【０２１２】
段階希釈した化合物を、それらの４つのＪＡＫ酵素の各々および基質とともに、白色３８４ウェルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）において周囲温度で１時間プレインキュベートした。続いて、ＡＴＰを加えて、１％ＤＭＳＯを含む１０μＬの総体積でキナーゼ反応を開始した。ＪＡＫ１、２、３およびＴｙｋ２に対する最終的な酵素濃度は、それぞれ４．２ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭおよび０．２５ｎＭであり；使用された対応するＫｍ
ＡＴＰ濃度は、２５μＭ、３μＭ、１．６μＭおよび１０μＭであり；基質濃度は、４つすべてのアッセイについて２００ｎＭである。キナーゼ反応を周囲温度で１時間進めた後、ＴＲ−ＦＲＥＴ希釈緩衝液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中のＥＤＴＡ（最終濃度１０ｍＭ）およびＴｂ−抗ｐＳＴＡＴ１（ｐＴｙｒ７０１）抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，最終濃度２ｎＭ）の１０μＬ調製物を加えた。そのプレートを周囲温度で１時間インキュベートした後、ＥｎＶｉｓｉｏｎリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）において読み出した。発光シグナル比（Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｒａｔｉｏ  ｓｉｇｎａｌｓ）（５２０ｎｍ／４９５ｎｍ）を記録し、それを用いて、ＤＭＳＯに基づくパーセント阻害値およびバックグラウンドコントロールを算出した。
【０２１３】
用量反応解析の場合、パーセント阻害のデータを化合物の濃度に対してプロットし、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて、４パラメータのロバストな適合モデルからＩＣ５０値を決定した。結果は、ｐＩＣ５０（ＩＣ５０の対数に負号をつけたもの）として表され、続いてＣｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式を用いてｐＫｉ（解離定数Ｋｉの対数に負号をつけたもの）に変換した。
【０２１４】
４つのＪＡＫアッセイの各々においてより高いｐＫｉ値を有する試験化合物は、ＪＡＫ活性のより大きな阻害を示す。このアッセイにおいて試験された本発明の化合物は、代表的には、約７．５〜約１０．３のｐＫｉ値を示した。
【０２１５】
オフターゲットチロシンキナーゼアッセイのパネル（ＡＢＬ１、Ｆｌｔ３、ＲＥＴ、ＦＧＦＲ２、ＮＴＲＫ１およびｐＤＧＦＲβ）を、同様の方法を用いて作製し、組換え酵素は、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手し、ビオチン化ペプチド基質は、ＡｎａＳｐｅｃにおいて合成された。すべてのアッセイを、１００μＭというＡＴＰの最終濃度を用いて周囲温度において行った。Ｅｕ−抗ホスホチロシン（ｐＹ２０）抗体およびＳｕｒｅＬｉｇｈｔ  ＡＰＣ−ＳＡを含む検出試薬は、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒから購入した。発光シグナル比（６６５ｎｍ／６１５ｎｍ）を記録し、それをデータ解析に使用し、最終的な結果は、ｐＩＣ５０として表した。このアッセイにおいて試験された選択された化合物は、代表的に約５〜約６．５のｐＩＣ５０値を示した。
【０２１６】
アッセイ２：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＩＬ−１３の阻害
ＪＡＫ依存性サイトカインインターロイキン−１３（ＩＬ−１３）の阻害に対する試験化合物の効力を、ＩＬ−１３（ＩＬ−１３，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって誘導されたＳＴＡＴ６のリン酸化をＨＴ−２９ヒト結腸直腸腺癌細胞（ＡＴＣＣ）において計測することによって、評価した。
【０２１７】
抗ＳＴＡＴ６抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）をＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアクセプタービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）に結合体化し、抗ｐＳＴＡＴ６（ｐＴｙｒ６４１）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、ＥＺ−Ｌｉｎｋ  Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−Ｂｉｏｔｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてビオチン化した。
【０２１８】
ＨＴ−２９細胞を、３７℃の５％ＣＯ２加湿恒温器内にて、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および２ｍＭ  ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が補充されたマッコイ５ａ改変培地（ＡＴＣＣ）中で生育した。アッセイの１日目に、細胞を、２５μＬの培地が入った、ポリ−Ｄ−リジンでコーティングされた白色３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に７，５００細胞／ウェルの密度で播種し、恒温器内で一晩接着させた。アッセイの２日目に、培地を除去し、試験化合物の用量反応物を含む１２μＬのアッセイ緩衝液（ハンクス平衡塩類溶液／ＨＢＳＳ、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン／ＢＳＡ）と交換した。化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、次いで、最終ＤＭＳＯ濃度が０．１％になるようにさらに培地で１０００倍希釈した。細胞を３７℃で１時間、試験化合物とインキュベートした後、刺激のために、予め加温した１２μＬのＩＬ−１３（アッセイ緩衝液中１２ｎｇ／ｍｌ）を加えた。３７℃で３０分間インキュベートした後、アッセイ緩衝液（化合物およびＩＬ−１３を含む）を除去し、１０μＬの細胞溶解緩衝液（２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１％ＳＤＳ、１％ＮＰ−４０、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１．３ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、ならびにＲｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ製のＣｏｍｐｌｅｔｅ  Ｕｌｔｒａミニプロテアーゼ阻害剤およびＰｈｏｓＳＴＯＰによる補充）。プレートを周囲温度で３０分間振盪した後、検出試薬を加えた。まず、ビオチン−抗ｐＳＴＡＴ６および抗ＳＴＡＴ６結合体化アクセプタービーズの混合物を加え、周囲温度で２時間インキュベートした後、ストレプトアビジン結合体化ドナービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を加えた。最低２時間のインキュベーションの後、アッセイプレートをＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーにおいて読み出した。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎルミネセンスシグナルを記録し、それを用いて、ＤＭＳＯに基づくパーセント阻害値およびバックグラウンドコントロールを算出した。
【０２１９】
用量反応解析の場合、パーセント阻害データを化合物の濃度に対してプロットし、Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて、４パラメータのロバストな適合モデルからＩＣ５０値を決定した。結果は、ＩＣ５０値の対数に負号をつけたものであるｐＩＣ５０として表した。
【０２２０】
このアッセイにおいてより高いｐＩＣ５０値を有する試験化合物は、ＩＬ−１３によって誘導されるＳＴＡＴ６のリン酸化のより大きな阻害を示す。このアッセイにおいて試験された本発明の化合物は、代表的には、約６．０〜約７．８のｐＩＣ５０値を示した。
【０２２１】
アッセイ３：ＪＡＫ細胞傷害性アッセイ
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光細胞生存能／細胞傷害性アッセイを、通常の生育条件下のＢＥＡＳ−２Ｂヒト肺上皮細胞（ＡＴＣＣ）において行った。
【０２２２】
細胞を、３７℃の５％ＣＯ２加湿恒温器内にて、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および２ｍＭ  ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が補充された５０％ＤＭＥＭ／５０％Ｆ−１２培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で生育した。アッセイの１日目に、細胞を、２５μＬの培地が入った、白色３８４ウェル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に５００細胞／ウェルの密度で播種し、恒温器内で一晩接着させた。アッセイの２日目に、試験化合物の用量反応物を含む５μＬの培地を加え、３７℃で４８時間インキュベートした。その後、３０μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ検出液（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加え、オービタルシェーカー上で５分間混合し、さらに１０分間インキュベートした後、ＥｎＶｉｓｉｏｎリーダーにおいて読み出した。ルミネセンスシグナルを記録し、パーセントＤＭＳＯコントロール値を算出した。
【０２２３】
用量反応解析の場合、パーセントＤＭＳＯコントロールデータを化合物の濃度に対してプロットして、各データポイントをつなぐ線によって用量反応曲線を作成した。各曲線が１５％阻害閾値を横断する濃度をＣＣ１５と定義する。結果は、ＣＣ１５値の対数に負号をつけたものであるｐＣＣ１５として表した。
【０２２４】
このアッセイにおいてより低いｐＣＣ１５値を示す試験化合物は、細胞傷害性を引き起こす可能性がより低いと予想される。このアッセイにおいて試験された本発明の化合物は、代表的には、５未満から約６のｐＣＣ１５値を示した。
【０２２５】
インビトロアッセイの結果
実施例１〜９および表１〜３の化合物のすべてを、上に記載されたアッセイの１つまたはそれ超において試験した。ＪＡＫ１酵素の効力は、アッセイ２に記載された細胞効力を予測すると見出されており、そのように理解されているので、ある特定の化合物の酵素の特徴付けを、ＪＡＫ１酵素に限定した。
【０２２６】
以下の表６において、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２酵素アッセイの場合、Ａは、≧１０のｐＫｉ値（≦０．１ｎＭのＫｉ）を表し、Ｂは、９〜１０のｐＫｉ値（１ｎＭ〜０．１ｎＭのＫｉ）を表し、Ｃは、８〜９のｐＫｉ値（１０ｎＭ〜１ｎＭのＫｉ）を表し、Ｄは、７．５〜８のｐＫｉ値（３１．６ｎＭ〜１０ｎＭのＫｉ）を表す。ＴＨＰ−１効力アッセイの場合、Ａは、≧７．５のｐＩＣ５０値（≦３２ｎＭのＩＣ５０）を表し、Ｂは、６．７〜７．５のｐＩＣ５０値（２００ｎＭ〜３２ｎＭのＩＣ５０）を表し、Ｃは、６〜６．７のｐＩＣ５０値（１μＭ〜２００ｎＭのＩＣ５０）を表す。
【０２２７】
【表６−１】
2019514903.tif 000045
【表６−２】
2019514903.tif 000046
【０２２８】
アッセイ４：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ−４で刺激されるｐＳＴＡＴ６の阻害
【０２２９】
インターロイキン−４（ＩＬ−４）で刺激されたＳＴＡＴ６リン酸化の阻害に対する試験化合物の効力を、フローサイトメトリーを用いて、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ）から単離されたヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）中のＣＤ３陽性（ＣＤ３＋）Ｔ細胞において計測した。ＩＬ−４は、ＪＡＫを介してシグナル伝達するので、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の尺度を提供する。
【０２３０】
ＣＤ３＋Ｔ細胞を、フィコエリトロビリン（ＰＥ）結合体化抗ＣＤ３抗体（Ｃｌｏｎｅ  ＵＣＨＴ１，ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて特定し、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７結合体化抗ｐＳＴＡＴ６抗体（ｐＹ６４１，Ｃｌｏｎｅ  １８／Ｐ，ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、ＳＴＡＴ６のリン酸化を検出した。
【０２３１】
ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、フィコール勾配を用いて健康ドナーのヒト全血から単離した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２加湿恒温器内において、１０％熱失活ウシ胎児血清（ＦＢＳ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が補充されたＲＰＭＩ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養した。細胞を、培地（２００μＬ）中に２５０，０００細胞／ウェルで播種し、１時間培養し、次いで、様々な濃度の試験化合物を含むアッセイ培地（５０μＬ）（０．１％ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１×Ｐｅｎｓｔｒｅｐが補充されたＲＰＭＩ）に再懸濁した。化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、次いで、アッセイ培地でさらに５００倍希釈した（２×最終アッセイ濃度になるように）。試験化合物（５０μＬ）を細胞とともに３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした後、予め加温したアッセイ培地中の５０μＬのＩＬ−４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度２０ｎｇ／ｍＬ）を３０分間加えた。サイトカイン刺激の後、細胞を、予め加温した固定液（１００μＬ）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で３７℃、５％ＣＯ２において１０分間固定し、ＦＡＣＳ緩衝液（１ｍＬ）（２％ＦＢＳのＤＰＢＳ溶液）で２回洗浄し、１０００μＬの氷冷Ｐｅｒｍ緩衝液ＩＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に４℃で３０分間再懸濁した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、次いで、抗ＣＤ３  ＰＥ（１：５０希釈）および抗ｐＳＴＡＴ６  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７（１：５希釈）を含む１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液に室温において６０分間、暗所にて再懸濁した。インキュベーションの後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて解析した。
【０２３２】
ＩＬ−４に応答した試験化合物の阻害性効力を測定するために、ｐＳＴＡＴ６の蛍光強度中央値（ＭＦＩ）をＣＤ３＋Ｔ細胞において計測した。化合物濃度に対するＭＦＩの阻害曲線の解析から、ＩＣ５０値を決定した。データは、ｐＩＣ５０（負の常用対数ＩＣ５０）値（平均値±標準偏差）として表される。実施例２の化合物は、このアッセイにおいて約７．３というｐＩＣ５０値を示した。
【０２３３】
アッセイ５：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＩＦＮγによって誘導されるｐＳＴＡＴ１の阻害
インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）で刺激されるＳＴＡＴ１リン酸化の阻害に対する試験化合物の効力を、フローサイトメトリーを用いて、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ）由来のＣＤ１４陽性（ＣＤ１４＋）単球において計測した。ＩＦＮγは、ＪＡＫを介してシグナル伝達するので、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の尺度を提供する。
【０２３４】
単球を、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）結合体化抗ＣＤ１４抗体（Ｃｌｏｎｅ  ＲＭ０５２，Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いて特定し、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７結合体化抗ｐＳＴＡＴ１抗体（ｐＹ７０１，Ｃｌｏｎｅ  ４ａ，ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、ＳＴＡＴ１のリン酸化を検出した。
【０２３５】
ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、フィコール勾配を用いて健康ドナーのヒト全血から単離した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２加湿恒温器内において、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が補充されたＲＰＭＩ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養した。細胞を、培地（２００μＬ）中に２５０，０００細胞／ウェルで播種し、２時間培養し、様々な濃度の試験化合物を含むアッセイ培地（５０μＬ）（０．１％ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１×Ｐｅｎｓｔｒｅｐが補充されたＲＰＭＩ）に再懸濁した。化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、次いで、培地でさらに１０００倍希釈して、最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％にした。試験化合物を細胞とともに３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした後、培地（５０μＬ）中の予め加温したＩＦＮγ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を０．６ｎｇ／ｍＬという最終濃度で３０分間加えた。サイトカイン刺激の後、細胞を、予め加温した固定液（１００μＬ）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で３７℃、５％ＣＯ２において１０分間固定し、ＦＡＣＳ緩衝液（１ｍＬ）（１％ＢＳＡのＰＢＳ溶液）で２回洗浄し、１：１０抗ＣＤ１４  ＦＩＴＣ：ＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）に再懸濁し、４℃で１５分間インキュベートした。細胞を１回洗浄し、次いで、氷冷Ｐｅｒｍ緩衝液ＩＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（１００μＬ）に４℃で３０分間、再懸濁した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、次いで、１：１０抗ｐＳＴＡＴ１  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７：ＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）にＲＴで３０分間、暗所にて再懸濁し、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて解析した。
【０２３６】
試験化合物の阻害性効力を測定するために、ｐＳＴＡＴ１の蛍光強度中央値（ＭＦＩ）をＣＤ１４＋単球において計測した。化合物濃度に対するＭＦＩの阻害曲線の解析から、ＩＣ５０値を決定した。データは、ｐＩＣ５０（負の常用対数ＩＣ５０）値（平均値±標準偏差）として表される。実施例２の化合物は、このアッセイにおいて約７．６というｐＩＣ５０値を示した。
【０２３７】
アッセイ６：カニューレ処置されたラットにおける吸収の決定
以下の２つの研究から、経口バイオアベイラビリティ（Ｆ％）、吸収率（Ｆａ％）および肝クリアランス回避率（Ｆｈ％）をＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおいて決定した。
【０２３８】
（１）試験化合物をＩＶ投与した後のラットにおける薬物動態：ＩＶ投与後、代表的には０〜６時間後に血漿サンプルを回収した。ＬＣ−ＭＳ−ＭＳ法を用いて薬物レベルを決定した。得られた薬物レベルを用いて、ＩＶ薬物動態パラメータ：ＡＵＣ  ＩＶおよびＤｏｓｅ  ＩＶを計算した。
（２）門脈（ＰＶ）および頚静脈（ＪＶ）においてカニューレ処置されたラットに試験化合物を経口的に投与した。経口投与後、代表的には０〜６時間後に、門脈と頚静脈の両方から血漿サンプルを回収した。ＬＣ−ＭＳ−ＭＳ法を用いて薬物レベルを決定した。得られた薬物レベルを用いて、以下の薬物動態パラメータ：ＡＵＣ  ＰＯ  ＰＶ、ＡＵＣ  ＰＯ  ＪＶおよびＤｏｓｅ  ＰＯを計算した。
【０２３９】
上記の研究から得られたデータを用いて、経口バイオアベイラビリティＦ％ならびに量Ｆａ％およびＦｈ％を以下の式から算出した：
Ｆ％＝（ＡＵＣ  ＰＯ  ＪＶ／ＡＵＣ  ＩＶ）×（Ｄｏｓｅ  ＩＶ／Ｄｏｓｅ  ＰＯ）×１００
Ｆａ％＝（ＡＵＣ  ＰＯ  ＰＶ／ＡＵＣ  ＩＶ）×（Ｄｏｓｅ  ＩＶ／Ｄｏｓｅ  ＰＯ）×１００
Ｆｈ％＝ＡＵＣ  ＰＯ  ＪＶ／ＡＵＣ  ＰＯ  ＰＶ
式中：
ＡＵＣ  ＰＯ  ＪＶ＝経口投与後の頚静脈から回収された血漿の曲線下面積
ＡＵＣ  ＰＯ  ＰＶ＝経口投与後の門脈から回収された血漿の曲線下面積
ＡＵＣ  ＩＶ＝静脈内投与後の曲線下面積
Ｄｏｓｅ  ＩＶ＝ｍｇ／ｋｇを単位とする静脈内用量
Ｄｏｓｅ  ＰＯ＝ｍｇ／ｋｇを単位とする経口用量
【０２４０】
実施例１〜４の化合物をこのアッセイにおいて試験したところ、約２５％未満の経口バイオアベイラビリティ（Ｆ％）を示した。特に、実施例１、２および４の化合物は、約５％未満のＦ％値を示した。さらに、実施例１および２の化合物は、約２５％未満の門脈における吸収（Ｆａ％）を示したが、実施例３および４の化合物は、４０％を超えるＦａ％値を示した。
【０２４１】
アッセイ７：ラットにおける結腸における薬物動態
試験化合物を、０．５％メチル−セルロースの水溶液において個別に製剤化し、経口胃管栄養法によって３．２ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇでＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに投与した。投与後の様々な時点（代表的には、０．５、１、３、６、２４時間後）において、血液サンプルを心臓穿刺によって取り出し、そのままの結腸をラットから切除した。血液サンプルを１５００×ｇで１５分間遠心分離して、血漿を回収した。結腸を氷冷リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、計量し、１：１０の希釈度でＰＢＳ中にてホモジナイズした。試験化合物の血漿中レベルおよび結腸中レベルを、試験マトリクスにおける検量線に作成された分析標準に対するＬＣ−ＭＳ解析によって決定した。結腸対血漿比を、μｇ  ｈｒ／ｇを単位とする、結腸ＡＵＣと血漿ＡＵＣとの比として決定した。、実施例２の化合物は、５ｍｇ／ｋｇで約２５０を上回る、および１００ｍｇ／ｋｇで約１２００を上回る結腸対血漿比を示した。
【０２４２】
アッセイ８：オキサゾロン（Ｏｘａｚａｌｏｎｅ）誘発大腸炎のマウスモデル
オキサゾロン誘発大腸炎は、ヒト潰瘍性大腸炎と組織学的類似点を有する実験モデルである（Ｈｅｌｌｅｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００２，１７，６２９−６３８）。Ｈａｒｌａｎから入手した成体ＢＡＬＢ／Ｃマウスをこのアッセイにおいて使用した。１日目に、動物をイソフルランで軽く麻酔し、肩の間の毛を慎重に除去した後、オキサゾロン（４％、１５０μＬ、４：１アセトン：オリーブ油製剤）またはビヒクル溶液を、皮膚感作のためにゆっくり塗布した。皮膚感作の７日後に、マウスを一晩絶食させ、イソフルラン吸入で麻酔し、オキサゾロン溶液で満たされた３．５−Ｆカテーテルが備え付けられた１ｍＬ注射器を慎重にマウスの結腸に約４ｃｍ挿入した。挿入後、５０μＬのオキサゾロン溶液（１％、１：１エタノール：水製剤）を結腸に非常にゆっくりと注入した（注射ポンプを用いて３０秒間にわたって）。カテーテルを除去し、マウスを垂直に（頭を下に）２分間保持して、確実に、すべてのオキサゾロン溶液が結腸内に残るようにした。オキサゾロンの直腸内（ＩＲ）チャレンジの前日から、薬物処置（ＰＯ、ＢＩＤまたはＴＩＤ）またはビヒクルを開始した。オキサゾロンの直腸内チャレンジの２日後に、各マウスについての処置に対して盲検化された実験者が、基準スコア：便の硬さスコア（０、正常；２、緩い；４、下痢）、総出血スコア（０、なし；２、血液混じり；４、あり）および体重減少スコア（０、なし；１、１％〜５％；２、５％〜１０％；３、１０％〜２０％；４、２０％超）に従って疾患活動性指標（ＤＡＩ）を評価した；ＤＡＩ＝（便の硬さスコア＋総出血スコア＋体重減少スコア）の平均値。
【０２４３】
本発明の選択された化合物をこのアッセイにおいて試験した。このモデルにおける有効性は、ビヒクルで処置された動物のスコアと比べたときのＤＡＩスコアの減少によって証明される。実施例２および４の化合物は、１、３および／または１０ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤの用量のオキサゾロンモデルにおいて、ビヒクルで処置された動物と比べてＤＡＩスコアの統計学的に有意な減少を示したのに対して、実施例１の化合物は、このアッセイにおいて試験された１０ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤまでの用量で統計学的に有意な減少を示さなかった。
【０２４４】
アッセイ９：マウス脾臓ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞における免疫抑制効果
マウス脾臓細胞の枯渇は、免疫抑制の実験モデルである（Ｋｕｄｌａｃｚら、Ａｍ．Ｊ．ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，２００４，４，５１−５７）。実施例２の化合物を、オキサゾロン誘発大腸炎モデル（アッセイ８）において使用されたものと同じ処置パラダイムに従ってマウス脾臓細胞モデルにおいて評価した。
【０２４５】
Ｈａｒｌａｎから入手した成体雄Ｂａｌｂ／Ｃマウス（１２〜１４週齢）をこの研究に使用した。化合物（１、１０および１００ｍｇ／ｋｇ，ＢＩＤ）およびポジティブコントロールとしてのトファシチニブ（３０および６０ｍｇ／ｋｇ，ＢＩＤ）を３日間、ナイーブマウスに経口的に投与した。最後の投与の１時間後に脾臓を摘出し、細胞サブタイプ染色（ｃｅｌｌ  ｓｕｂｔｙｐｅ  ｓｔａｉｎｉｎｇ）のために直ちに破砕した。フローサイトメーターにおいて同時に複数のサブタイプの％解析を可能にするために、固定の前に、ＣＤ１９（ＦＩＴＣ；Ｂ細胞）、ＣＤ３ｅ（ＰＥ；汎Ｔ細胞）およびＤＸ５（ＡＰＣ；ＮＫ細胞）に対するフルオロフォア標識抗体を、各動物由来の脾細胞サンプルとインキュベートした。各動物の総脾臓細胞数を、ＳｃｅｐｔｅｒＴＭ２．０手持ち型自動細胞計数器によって計測した。
【０２４６】
リンパ球のサブタイプ集団（例えば、脾臓のＢ、ＴおよびＮＫ細胞）の絶対数を、各動物の各サブタイプのパーセンテージに総脾臓細胞を掛けることによって算出した。１元配置ＡＮＯＶＡおよびＤｕｎｎｅｔｔの事後検定を用いて、ビヒクル群および試験化合物群の脾臓リンパ球数を比較した。αレベルをｐ＜０．０５に設定した。データを、各群に対して、平均値±ＳＥＭとして示した。
【０２４７】
ポジティブコントロールであるトファシチニブ（３０および６０ｍｇ／ｋｇ；ＰＯ、ＢＩＤ）は、脾臓ＮＫ細胞数を用量依存的かつ有意に減少させた。同じ研究において、脾臓ＮＫ細胞数は、１００ｍｇ／ｋｇ（試験された最高用量）に至るまで、ＰＯ（ＢＩＤ）投与の実施例２の化合物によって影響されなかった。いずれの化合物を用いた場合も、ＢおよびＴ細胞集団に対して処置の効果は観測されなかった。
【０２４８】
オキサゾロン誘発大腸炎のマウスモデル（アッセイ８）において有意な抗大腸炎効果を引き起こした１ｍｇ／ｋｇという最低用量と合わせて、このデータから、実施例２の化合物について、＞１００という機能的治療指数の計算が可能である。
【０２４９】
アッセイ１０：マウスおよびミニブタの皮膚における皮膚薬物動態
このアッセイの目的は、インタクトなマウスまたはミニブタの皮膚への２４時間曝露の後の試験化合物の表皮薬物動態、真皮薬物動態および血漿薬物動態を測定することであった。
【０２５０】
実施例１２において調製された化合物である１−（（（１Ｒ，３ｓ，５Ｓ）−３−（（４−（（５−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）−６−メトキシピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−イル）スルホニル）アゼチジン−３−カルボニトリルを、表７において製剤Ａまたは製剤Ｂとそれぞれ記載されるクリームまたは軟膏として０．５％（ｗ／ｗ）に製剤化した。
【０２５１】
投薬の２４時間前に、２５ｇの雄Ｂａｌｂ／ｃマウスの背中を剃毛して、少なくとも６ｃｍ２の面積（体表面の約１０％）を露出させ、別個の実験では、１０ｋｇのＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタの背中を剃毛して、少なくとも４５０ｃｍ２の面積（体表面の約１０％）を露出させた。時間０において、イソフルラン麻酔の後、試験化合物をマウスまたはミニブタの背中に２５μＬ／ｃｍ２の用量で塗布した。皮膚を接着性カバーで覆うことにより、ケージまたは寝わらへの化合物の喪失を防いだ。
【０２５２】
２４時間曝露の後、背中を石鹸および水で優しく洗浄して、吸収されなかった薬物を除去し、軽く押さえて乾燥させた。この洗浄の直後に、マウスからは心臓穿刺によっておよびミニブタからは静脈穿刺によって血液を採取した。次いで、外側の皮膚（角質層）を接着テープ剥離によって除去した。表皮を露出させたら、０．５ｃｍパンチバイオプシーを採取した。表皮および真皮を速やかに分離し、計量し、急速凍結した。同様のサンプルを、マウスでは投薬の４８時間後に、ならびにミニブタでは投薬の４８時間後、９４時間後および１６８時間後（７日後）に得た。
【０２５３】
表皮および真皮サンプルを、Ｃｏｖａｒｉｓ超音波ホモジナイザーを用いて１：１０（ｗ／ｖ）水において均質化した。サンプルを、３体積のアセトニトリルにおいて抽出し、ＬＣ−ＭＳ解析による検量線に対して定量した。下記の表８に示される、血漿、表皮および真皮に対する薬物動態パラメータＡＵＣ０−ｔによって証明されるように、有意な化合物曝露が、表皮および真皮層において示されたのに対して、血漿曝露は、マウスでは無視でき、ミニブタでは定量下限未満であった。
【０２５４】
【表７】
2019514903.tif 000047
【０２５５】
【表８】
2019514903.tif 000048
【０２５６】
アッセイ１１：マウスの局所的なＴＰＡ誘発刺激性接触皮膚炎モデル
このアッセイの目的は、アトピー性皮膚炎などの皮膚炎症症状に対して研究されている急性皮膚炎のモデル（Ｄｏｎｇら、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ，２０１３，３４４，４３６−４４６）において、試験化合物の抗炎症効果を評価することである。
【０２５７】
マウスにホルボールエステル１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート（ＴＰＡ）を局所皮膚塗布すると、初期（２〜２４時間）において浮腫および好中球流入ならびに後期（２４〜４８時間）において表皮細胞増殖を特徴とする炎症反応が引き起こされる（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ａｃｔｉｏｎｓ，１９８８，２５，３４４−３５１）。雌Ｂａｌｂ／ｃマウスの各耳に、ビヒクル（１：７  ＤＭＳＯ：アセトン）またはＴＰＡ（２．５μｇ）を含む２０μＬのビヒクル溶液を局所投与した。ＴＰＡ投与の３０分前および１５分後に、ビヒクル、またはビヒクル中３０、１００、３００、１０００および３０００μｇの用量の実施例２の化合物を、各耳に局所塗布した。炎症の程度を、ＴＰＡ塗布の６時間後の耳の厚さの変化として評価した。実施例２の化合物は、ＴＰＡによって誘発される耳の厚さの増加の用量依存的および濃度依存的阻害を示した。統計学的に有意な最大効果は、１０００μｇ用量において観察された４１％阻害であった。
【０２５８】
本発明は、その特定の態様または実施形態を参照して説明してきたが、本発明の真の趣旨および範囲から逸脱することなく、様々な変更が行われ得、等価物で置換され得ることが当業者によって理解される。さらに、適用される特許法および規則によって認められる限りにおいて、本明細書に引用されたすべての刊行物、特許および特許出願は、各文書が個別に参照により本明細書中に援用されるのと同程度に、その全体が参照により本明細書に援用される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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