(57)【要約】  本発明は、患者の肺高血圧症（ＰＨ）の診断方法、患者の肺高血圧症の過程をモニタリングする方法、患者の肺高血圧症の重症度を決定する方法、ならびに肺高血圧症と、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患およびメタボリック症候群からなる群から選択される少なくとも１つの状態とを識別する方法に関する。加えて、本発明は、上記方法を実施するための手段を含むキットに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）のレベルを決定するステップを含む、患者の肺高血圧症（ＰＨ）の診断方法。
【請求項２】
トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定するステップをさらに含み、
好ましくは、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルと、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルとの比を決定するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定する前記ステップが、
１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベルおよび１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含み、
好ましくは、前記方法が、１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベルと、１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルとの比を決定するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップ
を含む、患者の肺高血圧症の過程をモニタリングする方法。
【請求項５】
トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定するステップをさらに含み、
好ましくは、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルと、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルとの比を決定するステップをさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定する前記ステップが、
１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベルおよび１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含み、
好ましくは、前記方法が、１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベルと、１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルとの比を決定するステップをさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップ
を含む、患者の肺高血圧症の重症度を決定する方法。
【請求項８】
トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定するステップ
をさらに含み、
好ましくは、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルと、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルとの比を決定するステップをさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定する前記ステップが、
１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベルおよび１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含み、
好ましくは、前記方法が、１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベルと、１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルとの比を決定するステップをさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含む、肺高血圧症と、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患およびメタボリック症候群からなる群から選択される少なくとも１つの状態とを識別する方法。
【請求項１１】
トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定するステップをさらに含み、
好ましくは、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルと、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルとの比を決定するステップをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定する前記ステップが、
１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベルおよび１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含み、
好ましくは、前記方法が、１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベルと、１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルとの比を決定するステップをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するための手段を含むキット。
【請求項１４】
トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定するための手段をさらに含む、請求項１３に記載のキット。
【請求項１５】
患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するための前記手段が、
１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベルを決定するための手段と、
１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルを決定するための手段と、を含む、請求項１３または１４に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、患者の肺高血圧症（ＰＨ：Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）の診断方法、患者の肺高血圧症の過程をモニタリングする方法、患者の肺高血圧症の重症度を決定する方法、ならびに肺高血圧症と、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患およびメタボリック症候群からなる群から選択される少なくとも１つの状態とを識別する方法に関する。加えて、本発明は、上記方法を実施するための手段を含むキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
肺高血圧症（ＰＨ）は、生命を脅かす肺循環の慢性障害である。これは、多様な病因および病原の血行力学的異常であり、診断および処置の両方で医師にとって難題である（Ｓｉｍｏｎｎｅａｕら、２０１３）。予後は不良であり、特定の処置を用いないと、１年、３年および５年生存率は、それぞれ６８％、４８％および３４％である（Ｄ’Ａｌｏｎｚｏら、１９９１）。
【０００３】
肺高血圧症は、肺循環圧において異常上昇を呈する臨床状態群を定義する。安静時の正常な平均肺動脈圧（ｍＰＡＰ：ｍｅａｎ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ａｒｔｅｒｙ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ）は、１４±３．３ｍｍＨｇであり、正常の上限は２０．６ｍｍＨｇであるが、ＰＨは、右心カテーテル法によって判定される場合、安静時のｍＰＡＰ≧２５ｍｍＨｇの上昇と定義される。
【０００４】
特発性肺動脈高血圧症（ＩＰＡＨ：Ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ａｅｔｅｒｙ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）を有する患者は、特に、疾患の後期段階で診断される可能性が高い。なぜならば、これらの症状は非特異的であり、診断は、複雑なまたは侵襲的な試験を必要とする。肺疾患または左心疾患によって引き起こされるより、患者が一般的な形態の肺高血圧症を有する場合、ＰＨは、重要な予後因子である。これにより、より良好な認識ツールの必要性が高まっている（Ｆｏｒｉｓら、２０１３）。
【０００５】
現在、ＩＰＡＨの有病率は１百万人当たり約１０〜２５人、肺動脈高血圧（ＰＡＨ：Ｐｕｌｍｏａｒｙ  Ａｒｔｅｒｙ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）については１百万当たり約５０人であると推定されているが、これらの有病率は、かなり過小評価されていると予想される。ＰＨは頻繁に誤診され、通常、診断時までの間に後期段階に進行している。ＩＰＡＨおよびＰＡＨについて、生存期間を延長するための治療には、１患者１年当たり、最大２５０．０００ユーロの高コストが必要となる。診断が疾患の早期段階で行われれば、高価な治療は回避することができる。
【０００６】
現在までのところ、安価で非侵襲的な特定のスクリーニング・ツールは存在しない。肺動脈圧の上昇は、経胸壁心エコー検査によって推定することができる。これは現在スクリーニングのために使用されているが、ＰＨを有する患者においてはしばしば、肺動脈圧および心拍出量を過大または過小評価してしまう。それでもなお、心エコー検査は、一般に好まれるＰＨスクリーニングのための非侵襲的撮像方式である。右心カテーテル法は、診断のための基準診断法であるが、侵襲的であるため、スクリーニングには適当でない。これを念頭に置けば、該疾患の早期認識は優先順位が高く、追加の診断的および非侵襲的スクリーニング・ツールが開発される必要がある。
【０００７】
疾患、疾患段階、および特定の治療に対する処置応答を特異的に示すバイオマーカーは、肺高血圧症管理の最適化のための理想的なツールである。加えて、バイオマーカーを介する肺高血圧症のモニタリングは、どのような治療も困難な疾患を有する患者の肺移植の緊急性を、より良く判定するために重要である。
【０００８】
本発明の発明者らは、驚くべきことに、患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸（ＦＦＡ：Ｆｒｅｅ  Ｆａｔｔｙ  Ａｃｉｄｓ）のレベルの決定が、肺高血圧症の診断を可能にすることを見出した。加えて、本発明の発明者らは、驚くべきことに、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルの決定が、肺高血圧症をモニタリングすること、肺高血圧症の重症度を決定すること、および肺高血圧症とメタボリック症候群とを識別することを可能にすることを見出した。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】“Ａ  ｍｕｌｔｉｌｉｎｇｕａｌ  ｇｌｏｓｓａｒｙ  ｏｆ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｔｅｒｍｓ：（ＩＵＰＡＣ  Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ）”，Ｌｅｕｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｈ．Ｇ．Ｗ，Ｎａｇｅｌ，Ｂ．ａｎｄ  Ｋｏｌｂｌ，Ｈ．ｅｄｓ．（１９９５），Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ，ＣＨ−４０１０  Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ
【発明の概要】
【００１０】
第１の態様において、本発明は、患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）のレベルを決定するステップを含む、患者における肺高血圧症（ＰＨ）の診断方法に関する。
【００１１】
第２の態様において、本発明は、患者由来の生体試料における１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含む、患者における肺高血圧症の過程をモニタリングする方法に関する。
【００１２】
第３の態様において、本発明は、患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含む、患者における肺高血圧症の重症度を決定する方法に関する。
【００１３】
第４の態様において、本発明は、患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含む、肺高血圧症と、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患およびメタボリック症候群からなる群から選択される少なくとも１つの状態とを識別する方法に関する。
【００１４】
第５の態様において、本発明は、患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するための手段を含むキットに関する。
【００１５】
本発明のこの概要は、本発明の全ての特色を必ずしも記載するものではない。他の実施形態が、この後の詳細な記載の概説から明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】遊離脂肪酸、これらの同義語名および化学総和式の概要を示す図である。
【図２】参照生体試料（健康、血清）および患者生体試料（ＩＰＡＨ、血清）の、単一遊離脂肪酸、一群の遊離脂肪酸および第１の遊離脂肪酸のレベルと第２の遊離脂肪酸のレベルとの比の実施例レベルを示す図である。中央参照レベルに対比する患者の比としての参照レベルとの比較が、ｘ倍増加として示されている。中央参照値に対比する患者値の中央の比較は、ｘ倍増加の統計的有意性を示す。
【図３】参照生体試料（健康、血清）および患者生体試料（ＩＰＡＨ、血清）の、第１の遊離脂肪酸のレベルと第２の遊離脂肪酸のレベルとの実施例比、ならびに遊離脂肪酸のレベルと脂質、膜脂質またはリゾ脂質のレベルとの実施例比を示す図である。中央参照レベルと対比した患者の比としての参照レベルとの比較が、ｘ倍増加として示されている。中央参照値と対比した患者値の中央の比較は、ｘ倍増加の統計的有意性を示す。
【図４】参照生体試料（健康、血清）および患者生体試料（ＩＰＡＨ、血清）の、第１の遊離脂肪酸のレベルと第２の遊離脂肪酸のレベルとの実施例比の散布図である。参照生体試料についての値は白丸によってマークされており、患者生体試料についての値はｘマークによってマークされている。点線は各グループについての中央値をマークしており、細線は対応する標準偏差をマークしている。
【図５】参照生体試料（健康、血清）および患者生体試料（ＩＰＡＨ、血清）の、第１の遊離脂肪酸のレベルと第２の遊離脂肪酸のレベルとの実施例比の、現在の最先端技術において疾患を診断し重症度にアクセスするものである平均ＰＡＰ（ｍｍＨｇ）との相関を示す図である。２５ｍＰＡＰを超える値がＰＨを診断する（縦の破線によってマークされている）。健康なボランティアの右心カテーテル法を行うことは非倫理的であるので、ｍＰＡＰ値は参照文献に基づいて推定された（ランダム値は、±３．３ｍｍＨｇの二重標準偏差の範囲内における１４ｍｍＨｇの平均値をもたらしている）。参照生体試料についての値は白丸によってマークされており、患者生体試料については黒色のｘマークである。比の例のｍＰＡＰとのピアソン相関は、実線として示され、７７％のＲ２を達成し、比が疾患重症度を診断できることおよび疾患重症度にアクセスできることを示す。
【図６】参照生体試料（健康、血清）、患者生体試料（ＩＰＡＨ、血清）およびメタボリック症候群生体試料（糖尿病および／または肥満、血清）の、第１の遊離脂肪酸のレベルと第２の遊離脂肪酸のレベルとの実施例比を示す図である。参照値の中央と対比した患者値の中央の比としての比較、およびメタボリック症候群値の中央と対比した患者値の中央の比較は、ｘ倍増加の統計的有意性を示す。
【図７】灰色で表示された健康な対照対象と比較した、黒色で表示された左心疾患を有する肺高血圧症患者（ＰＨ  ＬＶ）の脂肪酸プロファイルの主成分分析（ＰＣＡ）を示す図である。２つの第１の主成分がプロットされている：ｘ軸上でＰＣＡ１およびｙ軸上でＰＣＡ２。明らかなグループ分離が観察され得る。
【図８】灰色で表示された健康な対照対象と比較した、黒色で表示された肺動脈高血圧患者（ＰＡＨ）の脂肪酸プロファイルの主成分分析（ＰＣＡ）を示す図である。２つの第１の主成分がプロットされている：ｘ軸上でＰＣＡ１およびｙ軸上でＰＣＡ２。明らかなグループ分離が観察され得る。
【図９】灰色で表示された健康な対照対象と比較した、黒色で表示された肺高血圧症を有する慢性閉塞性肺疾患患者（ＰＨ  ＣＯＰＤ）の脂肪酸プロファイルの主成分分析（ＰＣＡ）を示す図である。２つの第１の主成分がプロットされている：ｘ軸上でＰＣＡ１およびｙ軸上でＰＣＡ２。明らかなグループ分離が観察され得る。
【図１０】黒色で表示された肺高血圧症を有する慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）患者（ＰＨ  ＣＯＰＤ）と比較した、灰色で表示された慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）患者の脂肪酸プロファイルの主成分分析（ＰＣＡ）を示す図である（ＣＯＰＤ患者とＰＨ  ＣＯＰＤ患者との間の識別診断）。２つの第１の主成分がプロットされている：ｘ軸上でＰＣＡ１およびｙ軸上でＰＣＡ２。グループ分離が観察され得る。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明の詳細な記載
定義
本発明が下で詳細に記載される前に、この発明は、本明細書に記載されている特定の方法、プロトコールおよび試薬に限定されないことが理解されるべきであり、というのは、これらは様々であってもよいからである。本明細書において使用されている用語は、特定の実施形態を記載するだけを目的とし、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することは意図されないことも理解されるべきである。別段に定義されていない限り、本明細書において使用されている全ての技術的および化学的用語は、当業者によって共通して理解されているのと同じ意味を有する。
【００１８】
好ましくは、本明細書において使用されている用語は、非特許文献１に記載されたように定義される。
【００１９】
この明細書の文章全体にわたり、いくつかの文書が引用される。本明細書において引用される文書の各々（全ての特許、特許出願、科学的刊行物、製造者の仕様書、指示書、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号配列提出物などを含める）は、前出または後出であっても、本明細書によって参照によりその全体が組み込まれる。本明細書において、いかなるものも、本発明が先行発明によりこうした開示に先行する権利が与えられていないという承認として解釈されるべきでない。こうした組み込まれた参照の定義または教示と、本明細書において列挙されている定義または教示との間に不一致がある場合には、本明細書の文章が優先する。
【００２０】
本発明による「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、明記された整数または整数のグループの包含を意味するが、任意の他の整数または整数のグループの除外を意味しない。本発明による「から本質的になること」という用語は、明記された整数または整数のグループの包含を意味するが、明記された整数に実質的に影響するまたは明記された整数を変える改変または他の整数を除外する。本発明による「からなること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」という用語または「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｏｆ）」などの変形は、明記された整数または整数のグループの包含および任意の他の整数または整数のグループの除外を意味する。
【００２１】
本発明を記載することに関して（特に、特許請求の範囲に関して）使用される「ａ」および「ａｎ」ならびに「ｔｈｅ」という用語、ならびに同様の言及は、別段に本明細書において表示されていない限り、または明らかに文脈と矛盾していない限り、単数および複数の両方を含むと解釈されるべきである。
【００２２】
「肺高血圧症（ＰＨ）」という用語は、本明細書で使用される場合、肺動脈における血圧の増加を特徴とする疾患を指す。肺高血圧症は、右心カテーテル法によって測定される平均肺動脈圧（ｍＰＡＰ）が、安静時に≧２５ｍｍＨｇである場合に決定される。肺動脈血圧における増加は、息切れ、眩暈、失神、脚の腫脹、および他の症状に至ることがある。肺高血圧症は、顕著に減少した運動耐容能を有する重度の疾患であり得る（Ｓｉｍｏｎｎｅａｕら、２０１３）。該疾患は遺伝性であり得る。世界保健機関（ＷＨＯ：Ｗｏｒｌｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）の最も近年の分類によると、肺高血圧症は、以下の異なる型：肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）、左心疾患による肺高血圧症、肺疾患および／もしくは低酸素症による肺高血圧症（例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ：Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｏｂｓｔｕｃｔｉｖｅ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ）による肺高血圧症（ＰＨ）または間質性肺疾患（ＩＬＤ：Ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ  Ｌｕｎｇ  Ｄｉｓｅａｓｅ）によるＰＨ）、慢性血栓塞栓性肺高血圧症（ＣＴＥＰＨ：Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｔｈｒｏｍｂｏｅｎｂｏｌｉｃ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ）、または不明な多因子機序を有する肺高血圧症（グループ５）、の１つであり得る。
【００２３】
「肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）」という用語は、本明細書で使用される場合、肺動脈における血圧の増加を特徴とする疾患を指し、ここで、左心疾患、肺疾患、ＣＴＥＰＨ、およびグループ５疾患のような根底にある原因は含まれていない。肺動脈高血圧症は多数のサブグループを含む。特に、これは、特発性肺動脈高血圧症（ＩＰＡＨ）、遺伝性ＰＡＨ、および薬物もしくは毒素、結合組織病、ＨＩＶ感染症、門脈高血圧症、先天性心疾患または住血吸虫症に関連し得る随伴性ＰＡＨ（ＡＰＡＨ：Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｐｕｌｍｏａｒｙ  Ａｒｔｅｒｙ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）を包含する。ＰＡＨグループは、肺静脈閉塞性疾患（ＰＶＯＤ：Ｐｕｒｍｏｎａｒｙ  Ｖｅｉｎ  Ｏｃｃｕｌｕｓｉｖｅ  ＨＤｉｓｅａｓｅ）、肺毛細血管腫症（ＰＣＨ：Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｃａｐｉｌｌａｒｙ  Ｈｅｍａｎｓｉｏｍａｔｏｓｉｓ）、および新生児の遷延性肺高血圧症（ＰＰＨＮ：Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｗｂｏｒｎ）も含む。
【００２４】
「特発性肺動脈高血圧症（ＩＰＡＨ）」という用語は、本明細書で使用される場合、根底にある重大な心肺疾患または他の内科疾患の非存在下における肺動脈圧および肺血管抵抗の上昇を特徴とする疾患を指す。該用語は、原因となる遺伝子異常が同定されていないおよび／またはファミリーメンバーがまだ該疾患で同定されていない遺伝性ＰＡＨを含んでもよい。この点において、「特発性」は、肺動脈高血圧症の原因が知られていないことを意味する。特発性肺動脈高血圧症は、右室不全および死亡にしばしば進行する進行性障害である。さらに、特発性肺動脈高血圧症を有する患者は、呼吸困難および疲労によって労作を重度に制限されるので、ＱＯＬ（Ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ）が悪くなる。同じことが遺伝性ＰＡＨについても言える。特発性動脈高血圧症および遺伝性肺動脈高血圧症は、以前には原発性肺高血圧症（ＰＰＨ）として知られていた。肺高血圧症が、根底にある疾患または薬物もしくは毒素によって引き起こされる場合には、続発性肺高血圧症（ＳＰＨ：Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）と呼ばれる。なお、ＰＰＨおよびＳＰＨという用語は、最後の肺高血圧症の国際学会において廃止された（Ｇａｌｉｅら、２０１５）。
【００２５】
「肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患」という用語は、本明細書で使用される場合、将来、肺高血圧症に至る恐れがある任意の状態を指す。特に、該用語は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患（ＩＬＤ：Ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ  Ｌｕｎｇ  Ｄｉｓｅａｓｅ、線維症）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ：Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｖｉｒｕｓ）感染症、薬物乱用、結合組織病、遺伝子突然変異、慢性溶血性貧血および／または心疾患を包含する。
【００２６】
「メタボリック症候群」という用語は、本明細書で使用される場合、代謝プロセスの調節解除を特徴とする任意の状態を指す。特に、該用語は、糖尿病Ｉ型、糖尿病ＩＩ型、グリコーゲン蓄積症、ゴーシェ病、甲状腺疾患および肥満からなる群から選択される疾患を包含する。前記疾患は、組合せ、例えば糖尿病ＩＩ型および肥満または糖尿病Ｉ型および肥満で生じることもある。
【００２７】
「肺高血圧症を診断する」という用語は、本明細書で使用される場合、患者が肺高血圧症の兆候を示すか、または患っているかどうかを決定することを意味する。
【００２８】
「肺動脈高血圧症を診断する」という用語は、本明細書で使用される場合、患者が肺動脈高血圧症の兆候を示すか、または患っているかどうかを決定することを意味する。
【００２９】
「特発性肺動脈高血圧症を診断する」という用語は、本明細書で使用される場合、患者が特発性肺動脈高血圧症の兆候を示すか、または患っているどうかを決定することを意味する。
【００３０】
「肺高血圧症と、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患およびメタボリック症候群からなる群から選択される少なくとも１つの状態とを識別する」という用語は、本明細書で使用される場合、肺高血圧症と、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患およびメタボリック症候群からなる群から選択される少なくとも１つの状態とを識別診断することを意味する。前記識別診断は、患者が肺高血圧症もしくは肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患（例えば、ＣＯＰＤまたは間質性肺疾患（ＩＬＤ、線維症））を患っているかどうか、または患者が肺高血圧症もしくはメタボリック症候群（例えば、糖尿病ＩＩ型）を患っているかどうかを決定するのを可能にする。前記識別診断は、患者が肺高血圧症、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患（例えば、ＣＯＰＤまたは間質性肺疾患（ＩＬＤ、線維症））、またはメタボリック症候群（例えば、糖尿病ＩＩ型）を患っているかどうかを決定するのも可能にする。
【００３１】
「患者」という用語は、本明細書で使用される場合、彼女または彼が、肺動脈高血圧症、例えば特発性肺動脈高血圧症などの肺高血圧症を患っているかどうか、または肺動脈高血圧症、例えば特発性肺動脈高血圧症などの肺高血圧症のリスクがあるかどうかを知ることが所望される任意の対象を指す。特に、「患者」という用語は、本明細書で使用される場合、肺動脈高血圧症、例えば特発性肺動脈高血圧症などの肺高血圧症に罹患している疑いがある対象を指す。患者は、肺高血圧症に罹患している、即ち病気であると診断することができるか、または肺高血圧症に罹患していない、即ち健康であると診断することができる。患者は、肺動脈高血圧症、例えば特発性肺動脈高血圧症などの肺動脈高血圧症を発症するとさらに予後診断することができる。「患者」という用語は、本明細書で使用される場合、肺動脈高血圧症、例えば特発性肺動脈高血圧症などの肺高血圧症に罹患している、即ち病気である対象も指す。患者は、肺高血圧症について再試験することができ、例えば治療的介入後に、肺高血圧症にまだ罹患している、即ち病気であると診断するか、または肺高血圧症にもはや罹患していない、即ち健康であると診断することができる。「患者」という用語は、本明細書で使用される場合、マススクリーニングに参加する対象も含む。健康である、即ち肺高血圧症を患っていない、または健康を維持している、即ち肺高血圧症を発症していないと診断される患者は、試験されていない／知られていない別の疾患を患う可能性があることに留意するべきである。肺高血圧症と、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患およびメタボリック症候群からなる群から選択される少なくとも１つの状態とを識別診断する場合において、患者は、肺高血圧症、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患（例えば、ＣＯＰＤまたは間質性肺疾患（ＩＬＤ、線維症））、またはメタボリック症候群（例えば、糖尿病ＩＩ型）に罹患している疑いがある対象であり得る。患者は、ヒトおよび別の哺乳動物の両方、例えばウサギ、マウス、ラットまたはサルなどの動物を含めて、任意の哺乳動物であり得るが、ヒト患者が特に好ましい。
【００３２】
「（対照）対象」という用語は、本明細書で使用される場合、肺動脈高血圧症、例えば特発性肺動脈高血圧症（陽性対照）などの肺高血圧症に罹患している、即ち病気であることが知られている対象を指す。「（対照）対象」という用語は、本明細書で使用される場合、肺動脈高血圧症、例えば特発性肺動脈高血圧症（陰性対照）などの肺高血圧症に罹患していない、即ち健康であることが知られている対象も指す。したがって、「健康な対象」という用語は、本明細書で使用される場合、肺動脈高血圧症、例えば特発性肺動脈高血圧症などの肺高血圧症に罹患していないことが知られている対象を意味する。健康である、即ち肺動脈高血圧症、例えば特発性肺動脈高血圧症などの肺高血圧症を患っていないことが知られている（対照）対象は、おそらく、試験されていない／知られていない別の疾患を患っていることがあることが留意されるべきである。肺高血圧症を診断するため、肺高血圧症をモニタリングするため、または肺高血圧症の重症度を決定するため、参照として使用される（対照）対象は、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患（例えば、ＣＯＰＤまたは間質性肺疾患（ＩＬＤ、線維症））またはメタボリック症候群（例えば、糖尿病Ｉ型、糖尿病ＩＩ型、および／または肥満）を患っていない対象であることが特に好ましい。肺高血圧症と、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患およびメタボリック症候群からなる群から選択される少なくとも１つの状態とを識別診断する場合において、（対照）対象は、肺高血圧症、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患（例えば、ＣＯＰＤまたは間質性肺疾患（ＩＬＤ、線維症））、またはメタボリック症候群（例えば糖尿病ＩＩ型）に罹患していることが知られている対象であってよい。（対照）対象は、ヒトおよび別の哺乳動物の両方、例えばウサギ、マウス、ラットまたはサルなどの動物を含めて、任意の哺乳動物であってよい。ヒト（対照）対象が特に好ましい。
【００３３】
「処置」、特に「治療的処置」という用語は、本明細書で使用される場合、健康状態を改善するおよび／または患者の寿命を延長する（増加させる）任意の治療を指す。前記治療は、患者における疾患を排除すること、患者における疾患の発症を停止もしくは遅延すること、患者における疾患の発症を阻害もしくは遅延すること、患者における症状の頻度もしくは重症度を減少すること、および／または疾患を現在有するもしくは前に有していた患者における再発を減少することができる。肺高血圧症の処置は、薬物（例えば、承認薬物または開発中の薬物）の投与、外科手術、移植、運動訓練、身体的リハビリテーションおよび／またはバルーン血管形成術を包含する。
【００３４】
「生体試料」という用語は、本明細書で使用される場合、１種または複数の遊離脂肪酸を含有する、患者または（対照）対象由来の任意の生体試料を指す。好ましい実施形態において、「生体試料」という用語は、１種または複数の遊離脂肪酸ならびにトリアシルグリセロール（ＴＡＧ：Ｔｒｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌｅｓ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ：Ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌｅｓ）、脂質、特に膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物を含有する、患者または（対照）対象由来の任意の生体試料を指す。生体試料は、体液試料、体内ガス試料、体組織試料または体細胞試料であり得る。例えば、本発明によって包含される生体試料は、組織（例えば、切片または外植片）試料、単一細胞試料、細胞コロニー試料、細胞培養試料、血液（例えば、全血、または血液細胞画分、血清もしくは血漿などの血液画分）試料、尿試料、または他の末梢性供給源からの試料である。前記生体試料は、混合またはプールすることができ、例えば、試料は、血液試料および尿試料の混合物であってよい。前記生体試料は、患者または（対照）対象から体液、細胞（単数または複数）、細胞コロニー、外植片または切片を取り出すことによって提供されてもよいが、前に単離された試料を使用することによって提供されてもよい。例えば、組織試料は、従来の生検技法によって患者もしくは（対照）対象から取り出すことができ、または血液試料は、従来の採血技法によって患者もしくは（対照）対象から採取することができる。生体試料、例えば尿試料、組織試料または血液試料は、治療的処置の開始より前に、治療的処置中に、および／または治療的処置の後に、患者または（対照）対象から得ることができる。生体試料が、１人または複数の（対照）対象から、例えば少なくとも１人、２人、３人、４人、５人、６人、７人、８人、９人、１０人、２０人、３０人、４０人、５０人、６０人、７０人、８０人、９０人、１００人、１５０人、２００人、２５０人、３００人、４００人、５００人、１，０００人、２，０００人、３，０００人、４，０００人、５，０００人または１０，０００人の（対照）対象（単数または複数）から得られるならば、これは「参照生体試料」と指定される。好ましくは、参照生体試料は、試験される患者の生体試料と同じ供給源由来であり、例えば、両方とも血液試料、脳脊髄液（ＣＳＦ）試料または尿試料である。両方とも同じ種から、例えばヒト由来であることがさらに好ましい。試験される患者の参照生体試料および生体試料の測定値は同一であり、例えば、両方とも同一の体積を有することも（代替としてまたは追加として）好ましい。参照生体試料および生体試料は、同じ性別および年齢の患者／（対照）対象由来であることが特に好ましい。
【００３５】
「体液試料」という用語は、本明細書で使用される場合、１種または複数の遊離脂肪酸を含有する、患者または（対照）対象の身体に由来する任意の液体試料を指す。好ましい実施形態において、「体液試料」という用語は、１種または複数の遊離脂肪酸ならびにトリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、特に膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物を含有する、患者または（対照）対象の身体に由来する任意の液体試料を指す。前記体液試料は、尿試料、血液試料、痰試料、乳房乳試料、脳脊髄液（ＣＳＦ：Ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ  Ｆｌｕｉｄ）試料、耳垢（耳あか）試料、胃液試料、粘液試料、内リンパ液試料、外リンパ液試料、腹水試料、胸膜液試料、唾液試料、皮脂（皮膚油）試料、精液試料、汗試料、涙試料、頬スワブ、腟分泌試料、リキッドバイオプシーまたは嘔吐試料であってよく、これらの成分または画分を含める。「体液試料」という用語は、体液画分、例えば血液画分または痰画分も包含する。体液試料は、混合またはプールすることができる。したがって、体液試料は、血液および尿試料の混合物または血液および脳脊髄液試料の混合物であり得る。前記体液試料は、患者または（対照）対象から身体液体を取り出すことによって提供され得るが、前に単離された体液試料材料を使用することによっても提供され得る。体液試料は、患者の非侵襲的な分析を可能にする。体液試料は、０．０１ｍｌから２０ｍｌ、より好ましくは０．１ｍｌから１０ｍｌ、いっそう好ましくは０．５ｍｌから８ｍｌ、最も好ましくは１ｍｌから５ｍｌの体積を有することが、さらに好ましい。体液試料が、１人または複数の対照対象から、例えば少なくとも１人、２人、３人、４人、５人、６人、７人、８人、９人、１０人、２０人、３０人、４０人、５０人、６０人、７０人、８０人、９０人、１００人、１５０人、２００人、２５０人、３００人、４００人、５００人、１．０００人、２．０００人、３．０００人、４．０００人、５．０００人または１０．０００人の対照対象（単数または複数）から得られるならば、これは「参照体液試料」と指定される。「血液試料」という用語は、本明細書で使用される場合、全血試料または血液細胞画分、血清もしくは血漿の試料などの血液画分試料を包含する。造血細胞としても知られている血液細胞が使用され得る。前記血液細胞は、赤血球、白血球および／または血小板、例えばこれらの混合物であってよい。リンパ球、単球またはマクロファージなどの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ：Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｃｅｌｌｓ）も使用することができる。血清または血漿試料は、０．０１ｍｌから２０ｍｌ、より好ましくは０．１ｍｌから１０ｍｌ、いっそう好ましくは０．５ｍｌから８ｍｌ、最も好ましくは１ｍｌから５ｍｌの体積を有することが好ましい。
【００３６】
「体内ガス試料」という用語は、本明細書で使用される場合、１種または複数の遊離脂肪酸を含有する、患者または（対照）対象の身体に由来する任意のガス試料を指す。好ましい実施形態において、「体内ガス試料」という用語は、１種または複数の遊離脂肪酸ならびにトリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、特に膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物を含有する、患者または（対照）対象の身体に由来する任意のガス試料を指す。前記体内ガス試料は、呼気凝縮液および呼気ガスを包含する。体内ガス試料が、１人または複数の対照対象から、例えば少なくとも１人、２人、３人、４人、５人、６人、７人、８人、９人、１０人、２０人、３０人、４０人、５０人、６０人、７０人、８０人、９０人、１００人、１５０人、２００人、２５０人、３００人、４００人、５００人、１．０００人、２．０００人、３．０００人、４．０００人、５．０００人または１０．０００人の対照対象（単数または複数）から得られるならば、これは「参照体内ガス試料」と指定される。
【００３７】
「体組織試料」という用語は、本明細書で使用される場合、１種または複数の遊離脂肪酸を含有する、患者または（対照）対象の身体に由来する任意の組織試料を指す。好ましい実施形態において、「体組織試料」という用語は、１種または複数の遊離脂肪酸ならびにトリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、特に膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物を含有する、患者または（対照）対象の身体に由来する任意の組織試料を指す。前記体組織試料は、皮膚フレーク、皮膚生検、毛包、生検組織、組織外植片および組織切片を包含する。好ましくは、患者または（対照）対象由来の組織試料は、０．１ｍｇから５００ｍｇ、より好ましくは０．５ｍｇから２５０ｍｇ、最も好ましくは１ｍｇから５０ｍｇ、即ち０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、４００ｍｇ、４２５ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇまたは５００ｍｇの重量を有する。体組織試料が、１人または複数の対照対象から、例えば少なくとも１人、２人、３人、４人、５人、６人、７人、８人、９人、１０人、２０人、３０人、４０人、５０人、６０人、７０人、８０人、９０人、１００人、１５０人、２００人、２５０人、３００人、４００人、５００人、１．０００人、２．０００人、３．０００人、４．０００人、５．０００人または１０．０００人の対照対象（単数または複数）から得られるならば、該体組織試料は「参照体組織試料」と指定される。
【００３８】
「脂肪酸」という用語は、本明細書で使用される場合、炭素酸部分（ＣＯＯＨ）を含む頭部基および尾部領域（連続した炭素水素鎖）を含み、少なくとも１個の炭素原子および最大３６個までの炭素原子、例えば２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個または３６個の炭素原子の炭素原子（頭部＋尾部）総数を有する化学物質を指す。鎖領域において、シスまたはトランス位置においてゼロまたは最大６個までの二重結合、例えば０個、１個、２個、３個、４個、５個または６個の二重結合が生じることがあり、本明細書において飽和（０個の二重結合）または不飽和（少なくとも１個の二重結合）、例えばモノ不飽和（正確に１個の二重結合）、ジ不飽和（正確に２個の二重結合）またはポリ不飽和（少なくとも３個の二重結合）と分類される。鎖領域は、直鎖または分岐の形態を有することがあり、分岐化は、尾部領域内の任意の位置で生じ得、最も多くはアンテイソ（最後から２番目）またはイソ（最後の炭素）において生じ得る。
【００３９】
「奇数鎖脂肪酸」という用語は、本明細書で使用される場合、炭素原子の総数が奇数である脂肪酸を指す。
【００４０】
「偶数鎖脂肪酸」という用語は、本明細書で使用される場合、炭素原子が偶数である脂肪酸を指す。
【００４１】
「遊離脂肪酸」という用語は、本明細書で使用される場合、別の分子、例えばタンパク質を伴わない脂肪酸を指す。前記遊離脂肪酸は、遊離奇数鎖脂肪酸または遊離偶数鎖脂肪酸であってよい。
【００４２】
１種または複数の遊離脂肪酸ならびにトリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、特に膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物は、本明細書において言及される場合、本発明に関しては生体分子と指定され得る。生体分子、例えば脂肪酸は、前記生体分子の異性体の和を表すこともできる。前記異性体は、一部の場合において同一の分析特性を当然呈し、そのため、下に記載されている添付の実施例に適用されているものを含めて様々な分析方法によって区別することができない。しかしながら、該異性体は、少なくとも同一の総和式パラメータを共有するので、脂肪酸の場合において、同一の鎖長および同一の数の二重結合であるが異なる二重結合位置を有する脂肪酸、または同一の鎖長であるが直鎖もしくは分岐の尾部領域を有する脂肪酸は、「脂肪酸」という用語によって包含される。
【００４３】
「１種または複数の遊離脂肪酸（例えば、第１の遊離脂肪酸または第２の遊離脂肪酸）のレベル」という用語は、前記１種または複数の遊離脂肪酸の量（例えば、グラム、モル、またはイオン数で測定される）または濃度を指す。１種を超える遊離脂肪酸が測定されるならば、レベルは、合計された各遊離脂肪酸の個々のレベルの和、中央値、平均または積である。「レベル」という用語は、本明細書で使用される場合、スケール変更された、正規化された、またはスケール変更および正規化された値または量も含む。
【００４４】
「トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、特に膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル」という用語は、前記１種または複数の化合物の量（例えば、グラム、モル、またはイオン数で測定される）または濃度を指す。１種超える化合物が測定されるならば、レベルは、合計された各化合物の個々のレベルの和、中央値、平均または積である。「レベル」という用語は、本明細書で使用される場合、スケール変更された、正規化された、またはスケール変更および正規化された値または量も含む。
【００４５】
本発明において、［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比、または［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比が決定される。したがって、「比」という用語は、本明細書で使用される場合、第１の対の四角括弧によって定義されているレベルは、第２の対の四角括弧によって定義されているレベルで割られるという点で理解されなければならない。しかしながら、本発明の文脈内において、第２の対の四角括弧によって定義されているレベルは、第１の対の四角括弧によって定義されているレベルによって割られ、これによって逆比を得ることも企図される。例えば、比を比較する場合、参照比を上回る比は、患者が、本明細書に記載されている疾患、障害または症候群（例えば肺高血圧症）を有することを示す。対照的に、逆比を比較する場合、逆参照比を下回る逆比は、患者が、本明細書に記載されている疾患、障害または症候群（例えば肺高血圧症）を有することを示す。
【００４６】
「質量分光分析法（ＭＳ：Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）」という用語は、本明細書で使用される場合、表面上の試料から気相イオンを発生させるためのイオン化源の使用、および質量分析計で気相イオンを検出することを指す。質量分光分析法はレーザー脱離質量分光分析法であってよい。「レーザー脱離質量分光分析法」という用語は、本明細書で使用される場合、表面上の試料から気相イオンを発生させるためのイオン化源としてのレーザーの使用、および質量分析計で気相イオンを検出することを指す。質量分光分析法は、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化質量分光分析法即ちＭＡＬＤＩ（Ｍａｔｒｉｘ−Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｌａｓｅｒ  Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）であってよい。ＭＡＬＤＩにおいて、分析物は、典型的に、乾燥させることで分析物と共結晶化するマトリックス材料と混合される。マトリックス材料は、エネルギー源からエネルギーを吸収し、さもなければエネルギー源は不安定な生体分子または分析物を断片化するであろう。質量分光分析法は、表面増強レーザー脱離／イオン化質量分光分析法またはＳＥＬＤＩ（Ｓｕｒｆａｃｅ−Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｌａｓｅｒ  Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）であってもよい。ＳＥＬＤＩにおいて、分析物が適用される表面は、分析物の捕捉および／または脱離に積極的役割を果たす。
【００４７】
「タンデム質量分光分析法（ＭＳ／ＭＳ：Ｔａｎｄｅｍ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）」という用語は、本明細書で使用される場合、ある形態の分子断片化によって通常分離される複数回の質量分光分析法を指す。例えば、１つの質量分析器は、質量分析計に入る多くの分析物から１つの分析物を単離することができる。第２の質量分析器が次いで分析物イオンを安定化し、他方で、これらはガスと衝突し、これらが衝突誘発解離（ＣＩＤ：Ｃｏｌｌｉｓｏｎ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｉｎ）によって断片化するのを引き起こす。第３の質量分析器が次いで、分析物によって生成された断片を選別する。タンデムＭＳは、四重極イオントラップにおける通り、経時的に単一の質量分析器において行うこともできる。衝突誘発解離（ＣＩＤ）、電子捕獲解離（ＥＣＤ：Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）、電子移動解離（ＥＴＤ：Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）、赤外多光子解離（ＩＲＭＰＤ：Ｉｎｆｒａｒｅｄ  Ｍｕｌｔｉｐｈｏｔｏｎ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）、黒体赤外放射解離（ＢＩＲＤ：Ｂｌａｃｋｂｏｄｙ  Ｉｎｆｒａｒｅｄ  Ｒａｄｉａｔｉｖｅ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）、電子脱離解離（ＥＤＤ：Ｅｌｅｃｔｒｏｎ−Ｄｅｔａｃｈｅｍｅｎｔ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）および表面誘発解離（ＳＩＤ：Ｓｕｒｆａｃｅ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）を含めて、タンデムＭＳ用に分子を断片化するための様々な方法がある。
【００４８】
本発明の文脈において、「パーツキット（手短に言えば、キット）」という用語は、本明細書において特定される構成成分の少なくとも一部の任意の組合せであると理解され、該構成成分は、空間的に共存しながら機能的ユニットに組み合わせられ、さらなる構成成分を含有し得る。
本発明の実施形態
【００４９】
本発明がここでさらに記載される。以下の節において、本発明の異なる態様が、より詳細に定義されている。そのように定義されている各態様は、明らかに反対に示されない限り任意の他の態様（単数または複数）と組み合わせることができる。特に、好ましいまたは有利であると示されている任意の特色は、明らかに反対に示されない限り、好ましいまたは有利であると示されている任意の他の特色（単数または複数）と組み合わせることができる。
【００５０】
本発明の発明者らは、驚くべきことに、患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）のレベルの決定が、肺高血圧症の診断を可能にすることを見出した。加えて、本発明の発明者らは、驚くべきことに、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルの決定が、肺高血圧症をモニタリングすること、肺高血圧症の重症度を決定すること、および肺高血圧症とメタボリック症候群とを識別することを可能にすることを見出した。
【００５１】
したがって、第１の態様において、本発明は、患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）のレベルを決定するステップを含む、患者における肺高血圧症（ＰＨ）の診断方法に関する。
【００５２】
好ましくは、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルと比較される。特に、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、前記１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルと比較される。したがって、患者における肺高血圧症の診断方法は、
（ｉ）患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップと、
（ｉｉ）１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを、（前記）１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルと比較するステップと、を含むことが好ましい。
【００５３】
この比較は、患者における肺高血圧症を診断するのを可能にする。
【００５４】
参照レベルは、１人または複数の健康な対象由来の１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定されるレベルであることが、さらに好ましい。好ましくは、前記参照生体試料は、少なくとも２個の参照生体試料、より好ましくは少なくとも２個から１００個の参照生体試料、いっそう好ましくは少なくとも１０個から５００個の参照生体試料、最も好ましくは少なくとも５０個から１０．０００個の参照生体試料、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００個の参照生体試料である。好ましくは、前記健康な対象は、少なくとも２人の健康な対象、より好ましくは少なくとも２人から１００人の健康な対象、いっそう好ましくは少なくとも１０人から５００人の健康な対象、最も好ましくは少なくとも５０人から１０．０００人の健康な対象、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の健康な対象である。分析用に１対象当たり１個の参照生体試料を採取するのが実践可能である。追加の参照生体試料が、例えば異なる参照生体試料の参照レベルを決定するために必要とされるならば、同じ対象が（再）試験され得る。前記参照レベルは、平均参照レベルであってよい。該レベルは、参照レベルを測定することおよびこれらの「平均」値（例えば中間値、中央値またはモーダル値）を算出することによって決定することができる。
【００５５】
上に記述されている通り、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、（前記）１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルと比較される。前記参照レベルは、参照生体試料を測定することによって決定されるレベルである。例えば、ＦＦＡ１５：０のレベルが、患者由来の生体試料において決定されるならば、該レベルは、参照生体試料において決定されたＦＦＡ１５：０の参照レベルと比較される。代替として、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１９：０およびＦＦＡ２１：０の総和レベルが、患者由来の生体試料において決定される場合、該レベルは、参照生体試料において決定されたＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１９：０およびＦＦＡ２１：０の総和参照レベルと比較される。参照生体試料は、生体試料、例えば血液試料と同じ型であってよい。
【００５６】
参照レベルを上回る１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、患者が肺高血圧症を有することを示すことが、代替としてまたは追加として好ましい。好ましくは、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、参照レベルを少なくとも１．１５倍、少なくとも１．５倍または少なくとも２倍上回り、より好ましくは参照レベルを少なくとも３倍上回り、いっそう好ましくは参照レベルを少なくとも４倍上回り、最も好ましくは参照レベルを少なくとも５倍または少なくとも１０倍上回る。
【００５７】
前記１種または複数の遊離脂肪酸は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種またはこれ以上の遊離脂肪酸であってよい。実際に、患者由来の生体試料に含まれる／検出可能な全ての遊離脂肪酸のレベルが決定され得る。前記１種または複数の遊離脂肪酸は、偶数鎖脂肪酸および／または奇数鎖脂肪酸であってよい。偶数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ２：０、ＦＦＡ４：０、ＦＦＡ６：０、ＦＦＡ８：０、ＦＦＡ１０：０、ＦＦＡ１２：０、ＦＦＡ１２：１、ＦＦＡ１２：２、ＦＦＡ１４：０、ＦＦＡ１４：１、ＦＦＡ１４：２、ＦＦＡ１６：０、ＦＦＡ１６：１、ＦＦＡ１６：２、ＦＦＡ１６：３、ＦＦＡ１８：０、ＦＦＡ１８：１、ＦＦＡ１８：２、ＦＦＡ１８：３、ＦＦＡ１８：４、ＦＦＡ２０：０、ＦＦＡ２０：１、ＦＦＡ２０：２、ＦＦＡ２０：３、ＦＦＡ２０：４、ＦＦＡ２０：５、ＦＦＡ２０：６、ＦＦＡ２２：０、ＦＦＡ２２：１、ＦＦＡ２２：２、ＦＦＡ２２：３、ＦＦＡ２２：４、ＦＦＡ２２：５、ＦＦＡ２２：６、ＦＦＡ２４：０、ＦＦＡ２４：１、ＦＦＡ２４：２、ＦＦＡ２４：３、ＦＦＡ２４：４、ＦＦＡ２４：５、ＦＦＡ２４：６、ＦＦＡ２６：０、ＦＦＡ２６：１、ＦＦＡ２６：２、ＦＦＡ２８：０、ＦＦＡ３０：０、ＦＦＡ３２：０、ＦＦＡ３４：０、ＦＦＡ３６：０、およびＦＦＡ３８：０からなる群から選択されてよく、および／または奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択されてよい。１種または複数の遊離脂肪酸は奇数鎖脂肪酸であるのが好ましい。好ましくは、奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択される。
【００５８】
別の好ましい実施形態において、該方法は、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定するステップをさらに含む。前記脂質は、グリセロ脂質、スフィンゴ脂質、ステロール、プレノールおよび／またはグリコシルグリセロールであってよい。前記膜脂質は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、セラミド（ＣＥＲ）および／またはホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）であってよい。加えて、前記リゾ脂質は、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾグリコスフィンゴ脂質、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）、リゾホスファチジルセリン（ＬＰＳ）、リゾグリセロリン脂質、リゾスフィンゴミエリンおよび／またはリゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）であってよい。前記１種または複数の化合物は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種またはこれ以上の化合物であってよい。したがって、患者における肺高血圧症の診断方法は、好ましくは、患者由来の生体試料において、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップと、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定するステップと、を含む。
【００５９】
該方法は、［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比を決定するステップをさらに含むことが好ましい。
【００６０】
［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比は、［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との参照比と比較されることが、さらに好ましい。特に、［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比は、［前記１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される前記１種または複数の化合物のレベル］との参照比と比較される。この比較は、患者における肺高血圧症を診断するのを可能にする。
【００６１】
参照比は、１人または複数の健康な対象由来の１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定される比であることも好ましい。好ましくは、前記参照生体試料は、少なくとも２個の参照生体試料、より好ましくは少なくとも２個から１００個の参照生体試料、いっそう好ましくは少なくとも１０個から５００個の参照生体試料、最も好ましくは少なくとも５０個から１０．０００個の参照生体試料、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００個の参照生体試料である。好ましくは、前記健康な対象は、少なくとも２人の健康な対象、より好ましくは少なくとも２人から１００人の健康な対象、いっそう好ましくは少なくとも１０人から５００人の健康な対象、最も好ましくは少なくとも５０人から１０．０００人の健康な対象、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の健康な対象である。分析用に１対象当たり１個の参照生体試料を採取するのが実践可能である。追加の参照生体試料が、例えば異なる参照生体試料の参照比を決定するのに必要とされるならば、同じ対象が（再）試験され得る。前記参照比は、平均参照比であってよい。該比は、参照比を決定することおよびこれらの「平均」比（例えば中間比、中央比またはモーダル比）を算出することによって達成することができる。
【００６２】
参照比を上回る［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比は、患者が肺高血圧症を有することを示すことが、代替としてまたは追加として好ましい。好ましくは、［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比は、参照比を少なくとも１．１５倍、少なくとも１．５倍または少なくとも２倍上回り、より好ましくは、参照比を少なくとも３倍上回り、いっそう好ましくは、参照比を少なくとも４倍上回り、最も好ましくは、参照比を少なくとも５倍または少なくとも１０倍上回る。
【００６３】
１種または複数の遊離脂肪酸は、奇数鎖脂肪酸であってよい。好ましくは、奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択される。
【００６４】
（ｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１７：０であり、化合物はリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）およびリゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）であり、
（ｉｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１７：０およびＦＦＡ１９：０であり、化合物はリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）およびリゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）であり、または
（ｉｉｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１７：０であり、化合物はスフィンゴミエリン（ＳＭ）であることが特に好ましい。
【００６５】
代替の好ましい実施形態において、患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップは、１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベルおよび１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含む。前記１種または複数の第１の遊離脂肪酸は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種もしくはこれ以上の第１の遊離脂肪酸であってよく、および／または前記１種もしくは複数の第２の遊離脂肪酸は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種もしくはこれ以上の第２の遊離脂肪酸であってよい。
【００６６】
該方法は、
［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比を決定するステップをさらに含むことが好ましい。１種または複数の第１の遊離脂肪酸は奇数鎖脂肪酸であってよい。奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択することができる。１種または複数の第２の遊離脂肪酸は偶数鎖脂肪酸であってよい。偶数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ２：０、ＦＦＡ４：０、ＦＦＡ６：０、ＦＦＡ８：０、ＦＦＡ１０：０、ＦＦＡ１２：０、ＦＦＡ１２：１、ＦＦＡ１２：２、ＦＦＡ１４：０、ＦＦＡ１４：１、ＦＦＡ１４：２、ＦＦＡ１６：０、ＦＦＡ１６：１、ＦＦＡ１６：２、ＦＦＡ１６：３、ＦＦＡ１８：０、ＦＦＡ１８：１、ＦＦＡ１８：２、ＦＦＡ１８：３、ＦＦＡ１８：４、ＦＦＡ２０：０、ＦＦＡ２０：１、ＦＦＡ２０：２、ＦＦＡ２０：３、ＦＦＡ２０：４、ＦＦＡ２０：５、ＦＦＡ２０：６、ＦＦＡ２２：０、ＦＦＡ２２：１、ＦＦＡ２２：２、ＦＦＡ２２：３、ＦＦＡ２２：４、ＦＦＡ２２：５、ＦＦＡ２２：６、ＦＦＡ２４：０、ＦＦＡ２４：１、ＦＦＡ２４：２、ＦＦＡ２４：３、ＦＦＡ２４：４、ＦＦＡ２４：５、ＦＦＡ２４：６、ＦＦＡ２６：０、ＦＦＡ２６：１、ＦＦＡ２６：２、ＦＦＡ２８：０、ＦＦＡ３０：０、ＦＦＡ３２：０、ＦＦＡ３４：０、ＦＦＡ３６：０、およびＦＦＡ３８：０からなる群から選択することができる。
【００６７】
好ましくは、
（ｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１９：１およびＦＦＡ１７：２であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２０：０であり、
（ｉｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０およびＦＦＡ１９：０であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２０：０であり、
（ｉｉｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１９：１およびＦＦＡ１７：２であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２４：１であり、または、
（ｉｖ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１７：１およびＦＦＡ１９：１であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２４：１である。
【００６８】
［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との参照比と比較されることが、さらに好ましい。特に、［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、［前記１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［前記１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との参照比と比較される。この比較は、患者における肺高血圧症を診断するのを可能にする。
【００６９】
参照比は、１人または複数の健康な対象由来の１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定される比であることも好ましい。好ましくは、前記参照生体試料は、少なくとも２個の参照生体試料、より好ましくは少なくとも２個から１００個の参照生体試料、いっそう好ましくは少なくとも１０個から５００個の参照生体試料、最も好ましくは少なくとも５０個から１０．０００個の参照生体試料、例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００個の参照生体試料である。好ましくは、前記健康な対象は、少なくとも２人の健康な対象、より好ましくは少なくとも２人から１００人の健康な対象、いっそう好ましくは少なくとも１０人から５００人の健康な対象、最も好ましくは少なくとも５０人から１０．０００人の健康な対象、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の健康な対象である。分析用に１対象当たり１個の参照生体試料を採取するのが実践可能である。追加の参照生体試料が、例えば異なる参照生体試料の参照比を決定するために必要とされるならば、同じ対象が（再）試験され得る。前記参照比は、平均参照比であってよい。該比は、参照比を決定することおよびこれらの「平均」比（例えば中間比、中央比またはモーダル比）を算出することによって達成することができる。
【００７０】
参照比を上回る［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、患者が肺高血圧症を有することを示すことが、代替としてまたは追加として好ましい。好ましくは、［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、参照比を少なくとも１．１５倍、少なくとも１．５倍または少なくとも２倍上回り、より好ましくは、参照比を少なくとも３倍上回り、いっそう好ましくは、参照比を少なくとも４倍上回り、最も好ましくは、参照比を少なくとも５倍または少なくとも１０倍上回る。
【００７１】
第２の態様において、本発明は、患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含む、患者における肺高血圧症の過程をモニタリングする方法に関する。
【００７２】
好ましくは、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルと比較される。特に、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、前記１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルと比較される。したがって、患者における肺高血圧症の過程をモニタリングする方法は、
（ｉ）患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップと、
（ｉｉ）１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを（前記）１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルと比較するステップと、を含むことが好ましい。
【００７３】
参照レベルは、１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定されるレベルであることが、さらに好ましい。特に、１個または複数の参照生体試料は、１人もしくは複数の健康な対象、または肺高血圧症を有する１人もしくは複数の対象由来である。
【００７４】
好ましくは、前記参照生体試料は、少なくとも２個の参照生体試料、より好ましくは少なくとも２個から１００個の参照生体試料、いっそう好ましくは少なくとも１０個から５００個の参照生体試料、最も好ましくは少なくとも５０個から１０．０００個の参照生体試料、例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００個の参照生体試料である。好ましくは、前記健康な対象は、少なくとも２人の健康な対象、より好ましくは少なくとも２人から１００人の健康な対象、いっそう好ましくは少なくとも１０人から５００人の参照の健康な対象、最も好ましくは少なくとも５０人から１０．０００人の健康な対象、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の健康な対象である。好ましくは、肺高血圧症を有する前記対象は、肺高血圧症を有する少なくとも２人の対象、より好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも２人から１００人の対象、いっそう好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも１０人から５００人の対象、最も好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも５０人から１０．０００人の対象、例えば、肺高血圧症を有する少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の対象である。分析用に１対象当たり１個の参照生体試料を採取するのが実践可能である。追加の参照生体試料が、例えば異なる参照生体試料の参照レベルを決定するために必要とされるならば、同じ対象が（再）試験され得る。前記参照レベルは平均参照レベルであってよい。該レベルは、参照レベルを測定することおよびこれらの「平均」値（例えば中間値、中央値またはモーダル値）を算出することによって決定することができる。
【００７５】
上に記述されている通り、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、（前記）１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルと比較される。前記参照レベルは、参照生体試料を測定することによって決定されるレベルである。例えば、ＦＦＡ１５：０のレベルが、患者由来の生体試料において決定されるならば、該レベルは、参照生体試料において決定されたＦＦＡ１５：０の参照レベルと比較される。代替として、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１９：０およびＦＦＡ１１：０の総和レベルが、患者由来の生体試料において決定されるならば、該レベルは、参照生体試料において決定されたＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１９：０およびＦＦＡ１１：０の総和参照レベルと比較される。参照生体試料は、生体試料、例えば血液試料と同じ型であってよい。
【００７６】
参照レベルを上回る１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、患者が肺高血圧症を有することを示すことが特に好ましい。参照レベルは、１人または複数の健康な対象由来の１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定されるレベルであってよい。好ましくは、該レベルは、参照レベルを少なくとも１．１５倍、少なくとも１．５倍または少なくとも２倍上回り、より好ましくは、参照レベルを少なくとも３倍上回り、いっそう好ましくは、参照レベルを少なくとも４倍上回り、最も好ましくは、参照レベルを少なくとも５倍または少なくとも１０倍上回る。
【００７７】
前記１種または複数の遊離脂肪酸は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種またはこれ以上の遊離脂肪酸であってよい。実際に、患者由来の生体試料に含まれる／検出可能な全ての遊離脂肪酸のレベルが決定され得る。前記１種または複数の遊離脂肪酸は、偶数鎖脂肪酸および／または奇数鎖脂肪酸であってよい。偶数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ２：０、ＦＦＡ４：０、ＦＦＡ６：０、ＦＦＡ８：０、ＦＦＡ１０：０、ＦＦＡ１２：０、ＦＦＡ１２：１、ＦＦＡ１２：２、ＦＦＡ１４：０、ＦＦＡ１４：１、ＦＦＡ１４：２、ＦＦＡ１６：０、ＦＦＡ１６：１、ＦＦＡ１６：２、ＦＦＡ１６：３、ＦＦＡ１８：０、ＦＦＡ１８：１、ＦＦＡ１８：２、ＦＦＡ１８：３、ＦＦＡ１８：４、ＦＦＡ２０：０、ＦＦＡ２０：１、ＦＦＡ２０：２、ＦＦＡ２０：３、ＦＦＡ２０：４、ＦＦＡ２０：５、ＦＦＡ２０：６、ＦＦＡ２２：０、ＦＦＡ２２：１、ＦＦＡ２２：２、ＦＦＡ２２：３、ＦＦＡ２２：４、ＦＦＡ２２：５、ＦＦＡ２２：６、ＦＦＡ２４：０、ＦＦＡ２４：１、ＦＦＡ２４：２、ＦＦＡ２４：３、ＦＦＡ２４：４、ＦＦＡ２４：５、ＦＦＡ２４：６、ＦＦＡ２６：０、ＦＦＡ２６：１、ＦＦＡ２６：２、ＦＦＡ２８：０、ＦＦＡ３０：０、ＦＦＡ３２：０、ＦＦＡ３４：０、ＦＦＡ３６：０、およびＦＦＡ３８：０からなる群から選択することができ、および／または奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択することができる。１種または複数の遊離脂肪酸は、奇数鎖脂肪酸であることが好ましい。好ましくは、奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択される。
【００７８】
前記モニタリングは、
第１の時点でレベルを決定すること、および少なくとも１つの第２の時点でレベルを決定すること、ここで、少なくとも１つの第２の時点は、第１の時点よりも後である、ならびに、異なる時点で決定されたレベルを比較すること、を含むことも好ましい。
【００７９】
この工程は、年間など長い時間期間にわたって、患者由来の生体試料、例えば血液試料におけるレベルをモニタリングすることを可能にする。
【００８０】
好ましくは、
（ｉ）経時的に増加するレベルは、患者が肺高血圧症を発症していること、もしくは、肺高血圧症が患者において悪化していることを示し、
（ｉｉ）経時的に変化しないレベルは、患者が安定していること、もしくは、肺高血圧症が患者において進行していないことを示し、または
（ｉｉｉ）経時的に減少するレベルは、肺高血圧症が患者において改善していることを示す。
【００８１】
上に記述されている通り、経時によるレベルの増加の検出は、患者が肺高血圧症を発症していることを示す。好ましくは、前記増加は、経時的に、少なくとも１．１５倍、少なくとも１．５倍または少なくとも２倍、より好ましくは少なくとも３倍、いっそう好ましくは少なくとも４倍、最も好ましくは少なくとも５倍または少なくとも１０倍である。
【００８２】
上に記述されている通り、経時的に変化しないレベルは、患者が安定していること、または肺高血圧症が患者において進行していないことを示す。「安定」は、この点において、レベルが、０％から＜２０％、例えば０％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、１９．９％、１９．９９％または１９．９９９％、経時的に変動することを意味し得る。「安定」は、この点において、検出されたレベル変動が測定の精度内であることも意味し得る。測定の精度は、使用された測定方法に依存する。好ましくは、レベルは経時的に一定である。
【００８３】
上に記述されている通り、経時によるレベル減少の検出は、肺高血圧症が患者において改善していることを示す。好ましくは、前記減少は、経時的に、少なくとも１．１５倍、少なくとも１．５倍または少なくとも２倍、より好ましくは少なくとも３倍、いっそう好ましくは少なくとも４倍、最も好ましくは少なくとも５倍または少なくとも１０倍である。
【００８４】
異なる時点間の時間期間は、好ましくは、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日（１週）、少なくとも２週、少なくとも３週、少なくとも４週、少なくとも１カ月、少なくとも２カ月、少なくとも３カ月、少なくとも４カ月、少なくとも５カ月、少なくとも６カ月、少なくとも７カ月、少なくとも８カ月、少なくとも９カ月、少なくとも１０カ月、少なくとも１１カ月、少なくとも１２カ月（１年）、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、少なくとも５年、少なくとも６年、少なくとも７年、少なくとも８年、少なくとも９年、または少なくとも１０年に達する。例えば、患者は、例えば年１回または２回、日常的にチェックすることができる。
【００８５】
好ましくは、
（ｉ）患者は第１の時点で健康であって、経時的に増加するレベルは、患者が肺高血圧症を発症していることを示し、
（ｉｉ）患者は第１の時点で肺高血圧症を有していて、経時的に増加するレベルは、肺高血圧症が患者において悪化していることを示し、
（ｉｉｉ）患者は第１の時点で健康であって、経時的に変化しないレベルは、患者が安定していることを示し、
（ｉｖ）患者は第１の時点で肺高血圧症を有していて、経時的に変化しないレベルは、肺高血圧症が患者において進行していないことを示し、または
（ｖ）患者は第１の時点で肺高血圧症を有していて、経時的に減少するレベルは、肺高血圧症が患者において改善していることを示す。
【００８６】
肺高血圧症の過程のモニタリングに加えて、この障害の処置はモニタリングすることができる。即ち、患者はモニタリング中に肺高血圧症の処置、特に治療的処置を受けるまたは受けたことがあるのが好ましい。肺高血圧症の処置は、薬物の投与、外科手術、移植、運動訓練、身体的リハビリテーションおよびバルーン血管形成術からなる群から選択することができる。
【００８７】
好ましくは、
（ｉ）患者は肺高血圧症のための処置を受けるもしくは受けていて、経時的に減少するレベルは、患者が処置に応答することを示し、
（ｉｉ）患者は肺高血圧症のための処置を受けるもしくは受けていて、経時的に変化しないレベルは、患者が前記処置に応答しないことを示し、または
（ｉｉｉ）患者は肺高血圧症のための処置を受けるもしくは受けていて、経時的に増加するレベルは、患者は前記処置に応答しないことを示す。
【００８８】
患者は、完全なモニタリングプロセス中に処置（例えば、薬物の投与）を受けることができる、または第１の時点の前に、第１の時点に、もしくは第１の時点の後に処置（例えば、外科手術）を受けることができ、少なくとも１つの第２の時点で再試験することができる。特に、前記第１の時点は、処置の開始の前であってよく、前記少なくとも１つの第２の時点は、処置中および／または処置後であってよい。処置が薬物の投与を包含し、患者が前記処置に応答するならば、薬物の用量は低減することができる、または薬物投与は中止することができる。処置が薬物の投与を包含し、患者が前記処置に応答しないならば、薬物の用量は増加することができ、薬物は変えることができ、または治療モードは、例えば薬物適用から外科手術に変えることができる。処置が侵襲的な手法、例えば外科手術を包含し、患者が前記処置に応答しないならば、侵襲的な手法は、例えばバルーン血管形成術に変えることができる。
【００８９】
別の好ましい実施形態において、該方法は、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定するステップをさらに含む。前記脂質は、グリセロ脂質、スフィンゴ脂質、ステロール、プレノールおよび／またはグリコシルグリセロールであってよい。前記膜脂質は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、セラミド（ＣＥＲ）および／またはホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）であってよい。加えて、前記リゾ脂質は、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾグリコスフィンゴ脂質、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）、リゾホスファチジルセリン（ＬＰＳ）、リゾグリセロリン脂質、リゾスフィンゴミエリンおよび／またはリゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）であってよい。前記１種または複数の化合物は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種またはこれ以上の化合物であってよい。したがって、患者における肺高血圧症の過程をモニタリングする方法は、好ましくは、患者由来の生体試料において、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップと、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定するステップと、を含む。
【００９０】
該方法は、［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比を決定するステップをさらに含むことが好ましい。
【００９１】
［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比は、［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との参照比と比較されることが、さらに好ましい。特に、［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比は、［前記１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される前記１種または複数の化合物のレベル］との参照比と比較される。
【００９２】
参照比は、１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定される比であることも好ましい。特に、１個または複数の参照生体試料は、１人もしくは複数の健康な対象、または肺高血圧症を有する１人もしくは複数の対象由来である。好ましくは、前記参照生体試料は、少なくとも２個の参照生体試料、より好ましくは少なくとも２個から１００個の参照生体試料、いっそう好ましくは少なくとも１０個から５００個の参照生体試料、最も好ましくは少なくとも５０個から１０．０００個の参照生体試料、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００個の参照生体試料である。好ましくは、前記健康な対象は、少なくとも２人の健康な対象、より好ましくは少なくとも２人から１００人の健康な対象、いっそう好ましくは少なくとも１０人から５００人の健康な対象、最も好ましくは少なくとも５０人から１０．０００人の健康な対象、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の健康な対象である。好ましくは、肺高血圧症を有する前記対象は、肺高血圧症を有する少なくとも２人の対象、より好ましくは肺高血圧症を有する少なくとも２人から１００人の対象、いっそう好ましくは肺高血圧症を有する少なくとも１０人から５００人の対象、最も好ましくは肺高血圧症を有する少なくとも５０人から１０．０００人の対象、例えば、肺高血圧症を有する少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の対象である。分析用に１対象当たり１個の参照生体試料を採取するのが実践可能である。追加の参照生体試料が、例えば異なる参照生体試料の参照比を決定するために必要とされるならば、同じ対象が（再）試験され得る。前記参照比は平均参照比であってよい。該比は、参照比を決定することおよびこれらの「平均」比（例えば中間比、中央比またはモーダル比）を算出することによって達成することができる。
【００９３】
参照比を上回る［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比は、患者が肺高血圧症を有することを示すことが特に好ましい。この点において、参照比は、１人または複数の健康な対象由来の１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定される比であってよい。好ましくは、該比は、参照比を少なくとも１．１５倍、少なくとも１．５倍または少なくとも２倍上回り、より好ましくは、参照比を少なくとも３倍上回り、いっそう好ましくは、参照比を少なくとも４倍上回り、最も好ましくは、参照比を少なくとも５倍または少なくとも１０倍上回る。
【００９４】
１種または複数の遊離脂肪酸は、奇数鎖脂肪酸であってよい。好ましくは、奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択される。
【００９５】
（ｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１７：０であり、化合物はリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）およびリゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）であるか、
（ｉｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１７：０およびＦＦＡ１９：０であり、化合物は、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）およびリゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）であるか、または
（ｉｉｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１７：０であり、化合物はスフィンゴミエリン（ＳＭ）であることが特に好ましい。
【００９６】
前記モニタリングは、第１の時点で比を決定すること、および少なくとも１つの第２の時点で比を決定すること、ここで、少なくとも１つの第２の時点は、第１の時点より後であるか、異なる時点で決定された比を比較することを含むことが、代替としてまたは追加として好ましい。
【００９７】
この工程は、年間などの長い時間期間にわたって、患者由来の生体試料例えば血液試料におけるレベルをモニタリングすることを可能にする。
【００９８】
好ましくは、
（ｉ）経時的に増加する比は、患者が肺高血圧症を発症していること、もしくは肺高血圧症が患者において悪化していることを示し、
（ｉｉ）経時的に変化しない比は、患者が安定していること、もしくは肺高血圧症が患者において進行していないことを示し、または、
（ｉｉｉ）経時的に減少する比は、肺高血圧症が患者において改善していることを示す。
【００９９】
上に記述されている通り、経時による比の増加の検出は、患者が肺高血圧症を発症していることを示す。好ましくは、前記増加は、経時的に、少なくとも１．１５倍、少なくとも１．５倍または少なくとも２倍、より好ましくは少なくとも３倍、いっそう好ましくは少なくとも４倍、最も好ましくは少なくとも５倍または１０倍である。
【０１００】
上に記述されている通り、経時的に変化しない比は、患者が安定していることまたは肺高血圧症が患者において進行していないことを示す。「安定」は、この点において、比が、０から＜２０％、例えば０％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、１９．９％、１９．９９％または１９．９９９％、経時的に変動することを意味し得る。「安定」は、この点において、検出された比変動が、測定の精度内であることも意味し得る。測定の精度は、使用される測定方法に依存する。好ましくは、比は経時的に一定である。
【０１０１】
上に記述されている通り、経時による比の減少の検出は、肺高血圧症が患者において改善していることを示す。好ましくは、前記減少は、経時的に少なくとも１．１５倍、少なくとも１．５倍または少なくとも２倍、より好ましくは少なくとも３倍、いっそう好ましくは少なくとも４倍、最も好ましくは少なくとも５倍または少なくとも１０倍である。
【０１０２】
異なる時点間の時間期間は、好ましくは、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日（１週）、少なくとも２週、少なくとも３週、少なくとも４週、少なくとも１カ月、少なくとも２カ月、少なくとも３カ月、少なくとも４カ月、少なくとも５カ月、少なくとも６カ月、少なくとも７カ月、少なくとも８カ月、少なくとも９カ月、少なくとも１０カ月、少なくとも１１カ月、少なくとも１２カ月（１年）、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、少なくとも５年、少なくとも６年、少なくとも７年、少なくとも８年、少なくとも９年、または少なくとも１０年に達する。例えば、患者は、例えば年１回または２回、日常的にチェックすることができる。
【０１０３】
好ましくは、
（ｉ）患者は第１の時点で健康であって、経時的に増加する比は、患者が肺高血圧症を発症していることを示し、
（ｉｉ）患者は第１の時点で肺高血圧症を有していて、経時的に増加する比は、肺高血圧症が患者において悪化していることを示し、
（ｉｉｉ）患者は第１の時点で健康であって、経時的に変化しない比は、患者が安定していることを示し、
（ｉｖ）患者は第１の時点で肺高血圧症を有していて、経時的に変化しない比は、肺高血圧症が患者において進行していないことを示し、または
（ｖ）患者は第１の時点で肺高血圧症を有していて、経時的に減少する比は、肺高血圧症が患者において改善していることを示す。
【０１０４】
肺高血圧症の過程のモニタリングに加えて、この障害の処置は、モニタリングすることができる。即ち、患者は、モニタリング中に肺高血圧症の処置、特に治療的処置を受けるまたは受けたことがあるのが好ましい。肺高血圧症の処置は、薬物の投与、外科手術、移植、運動訓練、身体的リハビリテーションおよびバルーン血管形成術からなる群から選択することができる。
【０１０５】
好ましくは、
（ｉ）患者は肺高血圧症のための処置を受けるもしくは受けたことがあり、経時的に減少する比は、患者が処置に応答することを示し、
（ｉｉ）患者は肺高血圧症のための処置を受けるもしくは受けたことがあり、経時的に変化しない比は、患者は前記処置に応答しないことを示し、または
（ｉｉｉ）患者は肺高血圧症のための処置を受けるもしくは受けたことがあり、経時的に増加する比は、患者は前記処置に応答しないことを示す。
【０１０６】
患者は、完全なモニタリングプロセス中に処置（例えば、薬物の投与）を受けることができる、または第１の時点の前に、第１の時点で、もしくは第１の時点の後に処置（例えば外科手術）を受けることができ、少なくとも１つの第２の時点で再試験することができる。特に、前記第１の時点は、処置の開始の前であってよく、前記少なくとも１つの第２の時点は、処置中および／または処置後であってよい。処置が薬物の投与を包含し、患者が前記処置に応答するならば、薬物の用量は低減することができる、または薬物投与は中止することができる。処置が薬物の投与を包含し、患者は前記処置に応答しないならば、薬物の用量は増加することができ、薬物は変えることができる、または治療モードは、例えば薬物適用から外科手術に変えることができる。処置が侵襲的な手法、例えば外科手術を包含し、患者は前記処置に応答しないならば、侵襲的な手法は、例えばバルーン血管形成術に変えることができる。
【０１０７】
代替の好ましい実施形態において、患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップは、１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベルおよび１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含む。前記１種もしくは複数の第１の遊離脂肪酸は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種もしくはこれ以上の第１の遊離脂肪酸であってよく、および／または前記１種もしくは複数の第２の遊離脂肪酸は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種もしくはこれ以上の第２の遊離脂肪酸であってよい。
【０１０８】
該方法は、
［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比を決定するステップをさらに含むことが好ましい。１種または複数の第１の遊離脂肪酸は、奇数鎖脂肪酸であってよい。奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択することができる。１種または複数の第２の遊離脂肪酸は、偶数鎖脂肪酸であってよい。偶数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ２：０、ＦＦＡ４：０、ＦＦＡ６：０、ＦＦＡ８：０、ＦＦＡ１０：０、ＦＦＡ１２：０、ＦＦＡ１２：１、ＦＦＡ１２：２、ＦＦＡ１４：０、ＦＦＡ１４：１、ＦＦＡ１４：２、ＦＦＡ１６：０、ＦＦＡ１６：１、ＦＦＡ１６：２、ＦＦＡ１６：３、ＦＦＡ１８：０、ＦＦＡ１８：１、ＦＦＡ１８：２、ＦＦＡ１８：３、ＦＦＡ１８：４、ＦＦＡ２０：０、ＦＦＡ２０：１、ＦＦＡ２０：２、ＦＦＡ２０：３、ＦＦＡ２０：４、ＦＦＡ２０：５、ＦＦＡ２０：６、ＦＦＡ２２：０、ＦＦＡ２２：１、ＦＦＡ２２：２、ＦＦＡ２２：３、ＦＦＡ２２：４、ＦＦＡ２２：５、ＦＦＡ２２：６、ＦＦＡ２４：０、ＦＦＡ２４：１、ＦＦＡ２４：２、ＦＦＡ２４：３、ＦＦＡ２４：４、ＦＦＡ２４：５、ＦＦＡ２４：６、ＦＦＡ２６：０、ＦＦＡ２６：１、ＦＦＡ２６：２、ＦＦＡ２８：０、ＦＦＡ３０：０、ＦＦＡ３２：０、ＦＦＡ３４：０、ＦＦＡ３６：０、およびＦＦＡ３８：０からなる群から選択することができる。
【０１０９】
好ましくは、
（ｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１９：１およびＦＦＡ１７：２であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２０：０であるか、
（ｉｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０およびＦＦＡ１９：０であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２０：０であるか、
（ｉｉｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１９：１およびＦＦＡ１７：２であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２４：１であるか、または
（ｉｖ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１７：１およびＦＦＡ１９：１であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２４：１である。
【０１１０】
［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との参照比と比較されることが、さらに好ましい。特に、［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、［前記１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［前記１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との参照比と比較される。
【０１１１】
参照比は、１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定される比であることも好ましい。特に、１個または複数の参照生体試料は、１人もしくは複数の健康な対象、または肺高血圧症を有する１人もしくは複数の対象由来である。
【０１１２】
好ましくは、前記参照生体試料は、少なくとも２個の参照生体試料、より好ましくは少なくとも２個から１００個の参照生体試料、いっそう好ましくは少なくとも１０個から５００個の参照生体試料、最も好ましくは少なくとも５０個から１０．０００個の参照生体試料、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００個の参照生体試料である。好ましくは、前記健康な対象は、少なくとも２人の健康な対象、より好ましくは少なくとも２から１００人の健康な対象、いっそう好ましくは少なくとも１０から５００人の健康な対象、最も好ましくは少なくとも５０から１０．０００人の健康な対象、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の健康な対象である。好ましくは、肺高血圧症を有する前記対象は、肺高血圧症を有する少なくとも２人の対象、より好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも２人から１００人の対象、いっそう好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも１０人から５００人の対象、最も好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも５０人から１０．０００人の対象、例えば、肺高血圧症を有する少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の対象である。分析用に１対象当たり１個の参照生体試料を採取するのが実践可能である。追加の参照生体試料が、例えば異なる参照生体試料の参照比を決定するために必要とされるならば、同じ対象が（再）試験され得る。前記参照比は、平均参照比であってよい。該比は、参照比を決定することおよびこれらの「平均」比（例えば中間比、中央比またはモーダル比）を算出することによって達成することができる。
【０１１３】
参照比を上回る［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、患者が肺高血圧症を有することを示すことが特に好ましい。この点において、参照比は、１人または複数の健康な対象由来の１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定される比であってよい。好ましくは、該比は、参照比を少なくとも１．１５倍、少なくとも１．５倍または少なくとも２倍上回り、より好ましくは、参照比を少なくとも３倍上回り、いっそう好ましくは、参照比を少なくとも４倍上回り、最も好ましくは、参照比を少なくとも５倍または少なくとも１０倍上回る。
【０１１４】
前記モニタリングは、第１の時点で比を決定すること、および少なくとも１つの第２の時点で比を決定すること、ここで、少なくとも１つの第２の時点は、第１の時点より後であるか、異なる時点で決定された比を比較することを含むことが、代替としてまたは追加として好ましい。
【０１１５】
この工程は、年間などの長い時間期間にわたって、患者由来の生体試料、例えば血液試料のレベルをモニタリングすることを可能にする。
【０１１６】
好ましくは、
（ｉ）経時的に増加する比は、患者が肺高血圧症を発症していること、もしくは肺高血圧症が患者において悪化していることを示し、
（ｉｉ）経時的に変化しない比は、患者が安定していること、もしくは肺高血圧症が患者において進行していないことを示し、または
（ｉｉｉ）経時的に減少する比は、肺高血圧症が患者において改善していることを示す。
【０１１７】
上に記述されている通り、経時による比の増加の検出は、患者が肺高血圧症を発症していることを示す。好ましくは、前記増加は、経時的に、少なくとも１．１５倍、少なくとも１．５倍または少なくとも２倍、より好ましくは少なくとも３倍、いっそう好ましくは少なくとも４倍、最も好ましくは少なくとも５倍または１０倍である。
【０１１８】
上に記述されている通り、経時的に変化しない比は、患者が安定していることまたは肺高血圧症が患者において進行していないことを示す。「安定」は、この点において、比が、０から＜２０％、例えば０％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、１９．９％、１９．９９％または１９．９９９％、経時的に変動することを意味し得る。「安定」は、この点において、検出された比変動は、測定の精度内であることも意味し得る。測定の精度は、使用される測定方法に依存する。好ましくは、比は経時的に一定である。
【０１１９】
上に記述されている通り、経時による比減少の検出は、肺高血圧症が患者において改善していることを示す。好ましくは、前記減少は、経時的に、少なくとも１．１５倍、少なくとも１．５倍または少なくとも２倍、より好ましくは少なくとも３倍、いっそう好ましくは少なくとも４倍、最も好ましくは少なくとも５倍または少なくとも１０倍である。
【０１２０】
異なる時点間の時間期間は、好ましくは、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日（１週）、少なくとも２週、少なくとも３週、少なくとも４週、少なくとも１カ月、少なくとも２カ月、少なくとも３カ月、少なくとも４カ月、少なくとも５カ月、少なくとも６カ月、少なくとも７カ月、少なくとも８カ月、少なくとも９カ月、少なくとも１０カ月、少なくとも１１カ月、少なくとも１２カ月（１年）、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、少なくとも５年、少なくとも６年、少なくとも７年、少なくとも８年、少なくとも９年、または少なくとも１０年に達する。例えば、患者は、例えば年１回または２回、日常的にチェックすることができる。
【０１２１】
好ましくは、
（ｉ）患者は第１の時点で健康であって、経時的に増加する比は、患者が肺高血圧症を発症していることを示し、
（ｉｉ）患者は第１の時点で肺高血圧症を有していて、経時的に増加する比は、肺高血圧症が患者において悪化していることを示し、
（ｉｉｉ）患者は第１の時点で健康であって、経時的に変化しない比は、患者が安定していることを示し、
（ｉｖ）患者は第１の時点で肺高血圧症を有していて、経時的に変化しない比は、肺高血圧症が患者において進行していないことを示し、または
（ｖ）患者は第１の時点で肺高血圧症を有していて、経時的に減少する比は、肺高血圧症が患者において改善していることを示す。
【０１２２】
肺高血圧症の過程のモニタリングに加えて、この障害の処置は、モニタリングすることができる。即ち、患者は、モニタリング中に肺高血圧症の処置、特に治療的処置を受けるまたは受けたことがあることが好ましい。肺高血圧症の処置は、薬物の投与、外科手術、移植、運動訓練、身体的リハビリテーションおよびバルーン血管形成術からなる群から選択することができる。
【０１２３】
好ましくは、
（ｉ）患者は肺高血圧症のための処置を受けるもしくは受けたことがあり、経時的に減少する比は、患者が処置に応答することを示し、
（ｉｉ）患者は肺高血圧症のための処置を受けるもしくは受けたことがあり、経時的に変化しない比は、患者は前記処置に応答しないことを示し、または
（ｉｉｉ）患者は肺高血圧症のための処置を受けるもしくは受けたことがあり、経時的に増加する比は、患者は前記処置に応答しないことを示す。
【０１２４】
患者は、完全なモニタリングプロセス中に処置（例えば、薬物の投与）を受けることができる、または第１の時点の前に、第１の時点で、または第１の時点の後に処置（例えば、外科手術）を受けることができ、少なくとも１つの第２の時点で再試験することができる。特に、前記第１の時点は、処置の開始の前であってよく、前記少なくとも１つの第２の時点は、処置中および／または処置後であってよい。処置が薬物の投与を包含し、患者が前記処置に応答するならば、薬物の用量は低減することができる、または薬物投与は中止することができる。処置が薬物の投与を包含し、患者は前記処置に応答しないならば、薬物の用量は増加することができる、薬物は変えることができる、または治療モードは、例えば薬物適用から外科手術に変えることができる。処置が侵襲的な手法、例えば外科手術を包含し、患者は前記処置に応答しないならば、侵襲的な手法は、例えばバルーン血管形成術に変えることができる。
【０１２５】
第３の態様において、本発明は、患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含む、患者の肺高血圧症の重症度を決定する方法に関する。
【０１２６】
好ましくは、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルと比較される。特に、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、前記１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルと比較される。したがって、患者の肺高血圧症の重症度を決定する方法は、
（ｉ）患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップと、
（ｉｉ）１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを（前記）１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルと比較するステップと、を含むことが好ましい。
【０１２７】
参照レベルは、肺高血圧症を有する１人または複数の対象由来の１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定されるレベルであることが、さらに好ましい。好ましくは、前記参照生体試料は、少なくとも２個の参照生体試料、より好ましくは少なくとも２個から１００個の参照生体試料、いっそう好ましくは少なくとも１０個から５００個の参照生体試料、最も好ましくは少なくとも５０個から１０．０００個の参照生体試料、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００個の参照生体試料である。好ましくは、肺高血圧症を有する前記対象は、肺高血圧症を有する少なくとも２人の対象、より好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも２人から１００人の対象、いっそう好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも１０人から５００人の対象、最も好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも５０人から１０．０００人の対象、例えば、肺高血圧症を有する少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の対象である。分析用に１対象当たり１個の参照生体試料を採取するのが実践可能である。追加の参照生体試料が、例えば異なる参照生体試料の参照レベルを決定するために必要とされるならば、同じ対象が（再）試験され得る。前記参照レベルは、平均参照レベルであってよい。該レベルは、参照レベルを測定することおよびこれらの「平均」値（例えば中間値、中央値またはモーダル値）を算出することによって決定することができる。
【０１２８】
上に記述されている通り、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、（前記）１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルと比較される。前記参照レベルは、参照生体試料を測定することによって決定されるレベルである。例えば、ＦＦＡ１５：０のレベルが患者由来の生体試料において決定されるならば、該レベルは、参照生体試料において決定されたＦＦＡ１５：０の参照レベルと比較される。代替として、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１９：０およびＦＦＡ１１：０の総和レベルが患者由来の生体試料において決定されるならば、該レベルは、参照生体試料において決定されたＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１９：０およびＦＦＡ１１：０の総和参照レベルと比較される。参照生体試料は、生体試料、例えば血液試料と同じ型であってよい。
【０１２９】
参照レベルを上回る１種もしくは複数の遊離脂肪酸のレベルは、患者が重度の形態の肺高血圧症を有し、特に予後不良があることを示し、または参照レベルを下回る１種もしくは複数の遊離脂肪酸のレベルは、患者が軽度の形態の肺高血圧症を有し、特に予後良好があることを示すことが、代替としてまたは追加として好ましい。
【０１３０】
好ましくは、１種もしくは複数の遊離脂肪酸のレベルは、少なくとも参照レベルを１．１５倍、少なくとも１．５倍もしくは少なくとも２倍上回り、より好ましくは、参照レベルを少なくとも３倍上回り、いっそう好ましくは、参照レベルを少なくとも４倍上回り、最も好ましくは、参照レベルを少なくとも５倍もしくは少なくとも１０倍上回り、および／または１種もしくは複数の遊離脂肪酸のレベルは、参照レベルを少なくとも１．１５倍、少なくとも１．５倍もしくは少なくとも２倍下回り、より好ましくは、参照レベルを少なくとも３倍下回り、いっそう好ましくは、参照レベルを少なくとも４倍下回り、最も好ましくは、参照レベルを少なくとも５倍もしくは少なくとも１０倍下回る。
【０１３１】
前記１種または複数の遊離脂肪酸は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種またはこれ以上の遊離脂肪酸であってよい。実際に、患者由来の生体試料に含まれる／検出可能な全ての遊離脂肪酸のレベルが決定され得る。前記１種または複数の遊離脂肪酸は、偶数鎖脂肪酸および／または奇数鎖脂肪酸であってよい。偶数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ２：０、ＦＦＡ４：０、ＦＦＡ６：０、ＦＦＡ８：０、ＦＦＡ１０：０、ＦＦＡ１２：０、ＦＦＡ１２：１、ＦＦＡ１２：２、ＦＦＡ１４：０、ＦＦＡ１４：１、ＦＦＡ１４：２、ＦＦＡ１６：０、ＦＦＡ１６：１、ＦＦＡ１６：２、ＦＦＡ１６：３、ＦＦＡ１８：０、ＦＦＡ１８：１、ＦＦＡ１８：２、ＦＦＡ１８：３、ＦＦＡ１８：４、ＦＦＡ２０：０、ＦＦＡ２０：１、ＦＦＡ２０：２、ＦＦＡ２０：３、ＦＦＡ２０：４、ＦＦＡ２０：５、ＦＦＡ２０：６、ＦＦＡ２２：０、ＦＦＡ２２：１、ＦＦＡ２２：２、ＦＦＡ２２：３、ＦＦＡ２２：４、ＦＦＡ２２：５、ＦＦＡ２２：６、ＦＦＡ２４：０、ＦＦＡ２４：１、ＦＦＡ２４：２、ＦＦＡ２４：３、ＦＦＡ２４：４、ＦＦＡ２４：５、ＦＦＡ２４：６、ＦＦＡ２６：０、ＦＦＡ２６：１、ＦＦＡ２６：２、ＦＦＡ２８：０、ＦＦＡ３０：０、ＦＦＡ３２：０、ＦＦＡ３４：０、ＦＦＡ３６：０、およびＦＦＡ３８：０からなる群から選択することができ、および／または奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択することができる。１種または複数の遊離脂肪酸は、奇数鎖脂肪酸であるのが好ましい。好ましくは、奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択される。
【０１３２】
別の好ましい実施形態において、該方法は、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定するステップをさらに含む。前記脂質は、グリセロ脂質、スフィンゴ脂質、ステロール、プレノールおよび／またはグリコシルグリセロールであってよい。前記膜脂質は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、セラミド（ＣＥＲ）および／またはホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）であってよい。加えて、前記リゾ脂質は、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾグリコスフィンゴ脂質、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）、リゾホスファチジルセリン（ＬＰＳ）、リゾグリセロリン脂質、リゾスフィンゴミエリンおよび／またはリゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）であってよい。前記１種または複数の化合物は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種またはこれ以上の化合物であってよい。したがって、患者の肺高血圧症の重症度を決定する方法は、好ましくは、患者由来の生体試料において、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップと、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定するステップと、を含む。
【０１３３】
該方法は、
［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比を決定するステップをさらに含むのが好ましい。
【０１３４】
［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比は、［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との参照比と比較されることが、さらに好ましい。特に、［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比は、［前記１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される前記１種または複数の化合物のレベル］との参照比と比較される。
【０１３５】
参照比は、肺高血圧症を有する１人または複数の対象由来の１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定される比であることも好ましい。好ましくは、前記参照生体試料は、少なくとも２個の参照生体試料、より好ましくは少なくとも２個から１００個の参照生体試料、いっそう好ましくは少なくとも１０個から５００個の参照生体試料、最も好ましくは少なくとも５０個から１０．０００個の参照生体試料、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００個の参照生体試料である。好ましくは、肺高血圧症を有する前記対象は、肺高血圧症を有する少なくとも２人の対象、より好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも２人から１００人の対象、いっそう好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも１０人から５００人の対象、最も好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも５０人から１０．０００人の対象、例えば、肺高血圧症を有する少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の対象である。分析用に１対象当たり１個の参照生体試料を採取するのが実践可能である。追加の参照生体試料が、例えば異なる参照生体試料の参照比を決定するために必要とされるならば、同じ対象が（再）試験され得る。前記参照比は、平均参照比であってよい。該比は、参照比を決定することおよびこれらの「平均」比（例えば中間比、中央比またはモーダル比）を算出することによって達成することができる。
【０１３６】
参照比を上回る［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比は、患者が重度の形態の肺高血圧症を有し、特に予後不良であることを示し、または参照比を下回る［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比は、患者が軽度の形態の肺高血圧症を有し、特に予後良好があることを示すことは、代替としてまたは追加として好ましい。
【０１３７】
好ましくは、該比は、参照比を少なくとも１．１５倍、少なくとも１．５倍もしくは少なくとも２倍上回り、より好ましくは、参照比を少なくとも３倍上回り、いっそう好ましくは、参照比を少なくとも４倍上回り、最も好ましくは、参照比を少なくとも５倍もしくは少なくとも１０倍上回り、および／または該比は、少なくとも参照比を１．１５倍、少なくとも１．５倍もしくは少なくとも２倍下回り、より好ましくは、参照比を少なくとも３倍下回り、いっそう好ましくは、参照比を少なくとも４倍下回り、最も好ましくは、参照比を少なくとも５倍もしくは少なくとも１０倍下回る。
【０１３８】
１種または複数の遊離脂肪酸は、奇数鎖脂肪酸であってよい。好ましくは、奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択される。
【０１３９】
（ｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１７：０であり、化合物はリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）およびリゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）であるか、
（ｉｉ）奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１７：０およびＦＦＡ１９：０であり、化合物はリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）およびリゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）であるか、または
（ｉｉｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１７：０であり、化合物はスフィンゴミエリン（ＳＭ）であることが特に好ましい。
【０１４０】
代替の好ましい実施形態において、患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップは、１種または複数の第１の遊離脂肪酸および１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルのレベルを決定するステップを含む。前記１種もしくは複数の第１の遊離脂肪酸は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種もしくはこれ以上の第１の遊離脂肪酸であってよく、および／または前記１種もしくは複数の第２の遊離脂肪酸は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種もしくはこれ以上の第２の遊離脂肪酸であってよい。
【０１４１】
該方法は、
［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比を決定するステップをさらに含むことが好ましい。１種または複数の第１の遊離脂肪酸は、奇数鎖脂肪酸であってよい。奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択することができる。１種または複数の第２の遊離脂肪酸は、偶数鎖脂肪酸であってよい。偶数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ２：０、ＦＦＡ４：０、ＦＦＡ６：０、ＦＦＡ８：０、ＦＦＡ１０：０、ＦＦＡ１２：０、ＦＦＡ１２：１、ＦＦＡ１２：２、ＦＦＡ１４：０、ＦＦＡ１４：１、ＦＦＡ１４：２、ＦＦＡ１６：０、ＦＦＡ１６：１、ＦＦＡ１６：２、ＦＦＡ１６：３、ＦＦＡ１８：０、ＦＦＡ１８：１、ＦＦＡ１８：２、ＦＦＡ１８：３、ＦＦＡ１８：４、ＦＦＡ２０：０、ＦＦＡ２０：１、ＦＦＡ２０：２、ＦＦＡ２０：３、ＦＦＡ２０：４、ＦＦＡ２０：５、ＦＦＡ２０：６、ＦＦＡ２２：０、ＦＦＡ２２：１、ＦＦＡ２２：２、ＦＦＡ２２：３、ＦＦＡ２２：４、ＦＦＡ２２：５、ＦＦＡ２２：６、ＦＦＡ２４：０、ＦＦＡ２４：１、ＦＦＡ２４：２、ＦＦＡ２４：３、ＦＦＡ２４：４、ＦＦＡ２４：５、ＦＦＡ２４：６、ＦＦＡ２６：０、ＦＦＡ２６：１、ＦＦＡ２６：２、ＦＦＡ２８：０、ＦＦＡ３０：０、ＦＦＡ３２：０、ＦＦＡ３４：０、ＦＦＡ３６：０、およびＦＦＡ３８：０からなる群から選択することができる。
【０１４２】
好ましくは、
（ｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１９：１およびＦＦＡ１７：２であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２０：０であるか、
（ｉｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０およびＦＦＡ１９：０であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２０：０であるか、
（ｉｉｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１９：１およびＦＦＡ１７：２であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２４：１であるか、または
（ｉｖ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１７：１およびＦＦＡ１９：１であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２４：１である。
【０１４３】
［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との参照比と比較されることが、さらに好ましい。特に、［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、［前記１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［前記１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との参照比と比較される。
【０１４４】
参照比は、肺高血圧症を有する１人または複数の対象由来の１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定される比であることも好ましい。好ましくは、前記参照生体試料は、少なくとも２個の参照生体試料、より好ましくは少なくとも２個から１００個の参照生体試料、いっそう好ましくは少なくとも１０個から５００個の参照生体試料、最も好ましくは少なくとも５０個から１０．０００個の参照生体試料、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００個の参照生体試料である。好ましくは、肺高血圧症を有する前記対象は、肺高血圧症を有する少なくとも２人の対象、より好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも２人から１００人の対象、いっそう好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも１０人から５００人の対象、最も好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも５０人から１０．０００人の対象、例えば、肺高血圧症を有する少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の対象である。分析用に１対象当たり１個の参照生体試料を採取するのが実践可能である。追加の参照生体試料が、例えば異なる参照生体試料の参照比を決定するために必要とされるならば、同じ対象が（再）試験され得る。前記参照比は、平均参照比であってよい。該比は、参照比を決定することおよびこれらの「平均」比（例えば中間比、中央比またはモーダル比）を算出することによって達成することができる。
【０１４５】
参照比を上回る［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、患者が重度の形態の肺高血圧症を有し、特に予後不良があることを示し、または参照比を下回る［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、患者が軽度の形態の肺高血圧症を有し、特に予後良好があることを示すことが、代替としてまたは追加として好ましい。
【０１４６】
好ましくは、該比は、参照比を少なくとも１．１５倍、少なくとも１．５倍もしくは少なくとも２倍上回り、より好ましくは、参照比を少なくとも３倍上回り、いっそう好ましくは、参照比を少なくとも４倍上回り、最も好ましくは、参照比を少なくとも５倍もしくは少なくとも１０倍上回り、および／または該比は、少なくとも参照比を１．１５倍、少なくとも１．５倍もしくは少なくとも２倍下回り、より好ましくは、参照比を少なくとも３倍下回り、いっそう好ましくは、参照比を少なくとも４倍下回り、最も好ましくは、参照比を少なくとも５倍もしくは少なくとも１０倍下回る。
【０１４７】
第４の態様において、本発明は、患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含む、肺高血圧症と、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患およびメタボリック症候群からなる群から選択される少なくとも１つの状態とを識別する方法に関する。
【０１４８】
この方法により、患者は、（ｉ）肺高血圧症もしくは肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患、（ｉｉ）肺高血圧症もしくはメタボリック症候群、または（ｉｉｉ）肺高血圧症、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患、もしくはメタボリック症候群を有すると分類することができる。
【０１４９】
好ましくは、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルと比較される。特に、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、前記１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルと比較される。したがって、肺高血圧症と、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患およびメタボリック症候群からなる群から選択される少なくとも１つの状態とを識別する方法は、
（ｉ）患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップと、
（ｉｉ）１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを（前記）１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルを比較するステップと、を含むのが好ましい。
【０１５０】
参照レベルは、１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定されるレベルであることが、さらに好ましい。特に、１個または複数の参照生体試料は、１人もしくは複数の健康な対象、肺高血圧症を有する１人もしくは複数の対象、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する１人もしくは複数の対象、および／またはメタボリック症候群を有する１人もしくは複数の対象由来である。
【０１５１】
好ましくは、前記参照生体試料は、少なくとも２個の参照生体試料、より好ましくは少なくとも２個から１００個の参照生体試料、いっそう好ましくは少なくとも１０個から５００個の参照生体試料、最も好ましくは少なくとも５０個から１０．０００個の参照生体試料、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００個の参照生体試料である。好ましくは、前記健康な対象は、少なくとも２人の健康な対象、より好ましくは少なくとも２から１００人の健康な対象、いっそう好ましくは少なくとも１０から５００人の参照の健康な対象、最も好ましくは少なくとも５０から１０．０００人の健康な対象、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の健康な対象である。好ましくは、肺高血圧症を有する前記対象は、肺高血圧症を有する少なくとも２人の対象、より好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも２人から１００人の対象、いっそう好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも１０人から５００人の対象、最も好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも５０人から１０．０００人の対象、例えば、肺高血圧症を有する少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の対象である。好ましくは、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する前記対象は、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する少なくとも２人の対象、より好ましくは、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する少なくとも２人から１００人の対象、いっそう好ましくは、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する少なくとも１０人から５００人の対象、最も好ましくは、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する少なくとも５０人から１０．０００人の対象、例えば、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の対象である。好ましくは、メタボリック症候群を有する前記対象は、メタボリック症候群を有する少なくとも２人の対象、より好ましくは、メタボリック症候群を有する少なくとも２人から１００人の対象、いっそう好ましくは、メタボリック症候群を有する少なくとも１０人から５００人の対象、最も好ましくは、メタボリック症候群を有する少なくとも５０人から１０．０００人の対象、例えば、メタボリック症候群を有する少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の対象である。分析用に１対象当たり１個の参照生体試料を採取するのが実践可能である。追加の参照生体試料が、例えば異なる参照生体試料の参照レベルを決定するために必要とされるならば、同じ対象が（再）試験され得る。前記参照レベルは、平均参照レベルであってよい。該レベルは、参照レベルを測定することおよびこれらの「平均」値（例えば中間値、中央値またはモーダル値）を算出することによって決定することができる。
【０１５２】
上に記述されている通り、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、（前記）１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルと比較される。前記参照レベルは、参照生体試料を測定することによって決定されるレベルである。例えば、ＦＦＡ１５：０のレベルが、患者由来の生体試料において決定されるならば、該レベルは、参照生体試料において決定されるＦＦＡ１５：０の参照レベルと比較される。代替として、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１９：０およびＦＦＡ１１：０の総和レベルが、患者由来の生体試料において決定されるならば、該レベルは、参照生体試料において決定されるＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１９：０およびＦＦＡ１１：０の総和参照レベルと比較される。参照生体試料は、生体試料、例えば血液試料と同じ型であってよい。
【０１５３】
（ｉ）肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患（ＩＬＤ、線維症）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症、薬物乱用、結合組織病、遺伝子突然変異、慢性溶血性貧血および心疾患からなる群から選択され、または
（ｉｉ）メタボリック症候群は、糖尿病Ｉ型、糖尿病ＩＩ型、グリコーゲン蓄積症、ゴーシェ病、甲状腺疾患および肥満からなる群から選択される疾患を含むことも好ましい。
【０１５４】
メタボリック症候群は、糖尿病ＩＩ型であってよい。この点において、糖尿病ＩＩ型を有する対象において参照レベルを上回る１種もしくは複数の遊離脂肪酸のレベルは、患者が肺高血圧症を有することを示す、または肺高血圧症を有する対象において参照レベルを下回る１種もしくは複数の遊離脂肪酸のレベルは、患者が糖尿病ＩＩ型を有することを示すことが特に好ましい。
【０１５５】
好ましくは、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、少なくとも参照レベルを１．１５倍、少なくとも１．５倍もしくは少なくとも２倍上回り、より好ましくは、参照レベルを少なくとも３倍上回り、いっそう好ましくは、参照レベルを少なくとも４倍上回り、最も好ましくは、参照レベルを少なくとも５倍もしくは少なくとも１０倍上回り、および／または１種もしくは複数の遊離脂肪酸のレベルは、参照レベルを少なくとも１．１５倍、少なくとも１．５倍もしくは少なくとも２倍下回り、より好ましくは、参照レベルを少なくとも３倍下回り、いっそう好ましくは、参照レベルを少なくとも４倍下回り、最も好ましくは、参照レベルを少なくとも５倍もしくは少なくとも１０倍下回る。
【０１５６】
前記１種または複数の遊離脂肪酸は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種またはこれ以上の遊離脂肪酸であってよい。実際に、患者由来の生体試料に含まれる／検出可能な全ての遊離脂肪酸のレベルが決定され得る。前記１種または複数の遊離脂肪酸は、偶数鎖脂肪酸および／または奇数鎖脂肪酸であってよい。偶数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ２：０、ＦＦＡ４：０、ＦＦＡ６：０、ＦＦＡ８：０、ＦＦＡ１０：０、ＦＦＡ１２：０、ＦＦＡ１２：１、ＦＦＡ１２：２、ＦＦＡ１４：０、ＦＦＡ１４：１、ＦＦＡ１４：２、ＦＦＡ１６：０、ＦＦＡ１６：１、ＦＦＡ１６：２、ＦＦＡ１６：３、ＦＦＡ１８：０、ＦＦＡ１８：１、ＦＦＡ１８：２、ＦＦＡ１８：３、ＦＦＡ１８：４、ＦＦＡ２０：０、ＦＦＡ２０：１、ＦＦＡ２０：２、ＦＦＡ２０：３、ＦＦＡ２０：４、ＦＦＡ２０：５、ＦＦＡ２０：６、ＦＦＡ２２：０、ＦＦＡ２２：１、ＦＦＡ２２：２、ＦＦＡ２２：３、ＦＦＡ２２：４、ＦＦＡ２２：５、ＦＦＡ２２：６、ＦＦＡ２４：０、ＦＦＡ２４：１、ＦＦＡ２４：２、ＦＦＡ２４：３、ＦＦＡ２４：４、ＦＦＡ２４：５、ＦＦＡ２４：６、ＦＦＡ２６：０、ＦＦＡ２６：１、ＦＦＡ２６：２、ＦＦＡ２８：０、ＦＦＡ３０：０、ＦＦＡ３２：０、ＦＦＡ３４：０、ＦＦＡ３６：０、およびＦＦＡ３８：０からなる群から選択することができ、および／または奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択することができる。１種または複数の遊離脂肪酸は、奇数鎖脂肪酸であるのが好ましい。好ましくは、奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択される。
【０１５７】
別の好ましい実施形態において、該方法は、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定するステップをさらに含む。前記脂質は、グリセロ脂質、スフィンゴ脂質、ステロール、プレノールおよび／またはグリコシルグリセロールであってよい。前記膜脂質は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、セラミド（ＣＥＲ）および／またはホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）であってよい。加えて、前記リゾ脂質は、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾグリコスフィンゴ脂質、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）、リゾホスファチジルセリン（ＬＰＳ）、リゾグリセロリン脂質、リゾスフィンゴミエリンおよび／またはリゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）であってよい。前記１種または複数の化合物は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種またはこれ以上の化合物であってよい。したがって、肺高血圧症と、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患およびメタボリック症候群からなる群から選択される少なくとも１つの状態とを識別する方法は、好ましくは、患者由来の生体試料において、１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップと、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定するステップと、を含む。
【０１５８】
該方法は、［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比を決定するステップをさらに含むことが好ましい。
【０１５９】
［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比は、［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との参照比と比較されることが、さらに好ましい。特に、［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比は、［前記１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［前記トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との参照比と比較される。
【０１６０】
参照比は、１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定される比であることも好ましい。特に、１個または複数の参照生体試料は、１人もしくは複数の健康な対象、肺高血圧症を有する１人もしくは複数の対象、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する１人もしくは複数の対象、および／またはメタボリック症候群を有する１人もしくは複数の対象由来である。
【０１６１】
好ましくは、前記参照生体試料は、少なくとも２個の参照生体試料、より好ましくは少なくとも２個から１００個の参照生体試料、いっそう好ましくは少なくとも１０個から５００個の参照生体試料、最も好ましくは少なくとも５０個から１０．０００個の参照生体試料、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００個の参照生体試料である。好ましくは、前記健康な対象は、少なくとも２人の健康な対象、より好ましくは少なくとも２人から１００人の健康な対象、いっそう好ましくは少なくとも１０人から５００人の参照の健康な対象、最も好ましくは少なくとも５０人から１０．０００人の健康な対象、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の健康な対象である。好ましくは、肺高血圧症を有する前記対象は、肺高血圧症を有する少なくとも２人の対象、より好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも２人から１００人の対象、いっそう好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも１０人から５００人の対象、最も好ましくは、肺高血圧症を有する少なくとも５０人から１０．０００人の対象、例えば、肺高血圧症を有する少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の対象である。好ましくは、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する前記対象は、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する少なくとも２人の対象、より好ましくは、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する少なくとも２人から１００人の対象、いっそう好ましくは、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する少なくとも１０人から５００人の対象、最も好ましくは、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する少なくとも５０人から１０．０００人の対象、例えば、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の対象である。好ましくは、メタボリック症候群を有する前記対象は、メタボリック症候群を有する少なくとも２人の対象、より好ましくは、メタボリック症候群を有する少なくとも２人から１００人の対象、いっそう好ましくは、メタボリック症候群を有する少なくとも１０人から５００人の対象、最も好ましくは、メタボリック症候群を有する少なくとも５０人から１０．０００人の対象、例えば、メタボリック症候群を有する少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の対象である。分析用に１対象当たり１個の参照生体試料を採取するのが実践可能である。追加の参照生体試料が、例えば異なる参照生体試料の参照比を決定するために必要とされるならば、同じ対象が（再）試験され得る。前記参照比は、平均参照比であってよい。該比は、参照比を決定することおよびこれらの「平均」比（例えば中間比、中央比またはモーダル比）を算出することによって達成することができる。
【０１６２】
（ｉ）肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患（ＩＬＤ、線維症）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症、薬物乱用、結合組織病、遺伝子突然変異、慢性溶血性貧血および心疾患からなる群から選択することができるか、または
（ｉｉ）メタボリック症候群は、糖尿病Ｉ型、糖尿病ＩＩ型、グリコーゲン蓄積症、ゴーシェ病、甲状腺疾患および肥満からなる群から選択される疾患を含むことができる。
【０１６３】
メタボリック症候群は、糖尿病ＩＩ型であってよい。
【０１６４】
１種または複数の遊離脂肪酸は奇数鎖脂肪酸であることが、代替としてまたは追加として好ましい。好ましくは、奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択される。
【０１６５】
（ｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１７：０であり、化合物はリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）およびリゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）であるか、
（ｉｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１７：０およびＦＦＡ１９：０であり、化合物はリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）およびリゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）であるか、または
（ｉｉｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１７：０であり、化合物はスフィンゴミエリン（ＳＭ）であることが特に好ましい。
【０１６６】
代替として好ましい実施形態において、患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップは、１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベルおよび１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含む。前記１種もしくは複数の第１の遊離脂肪酸は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種もしくはこれ以上の第１の遊離脂肪酸であってよく、および／または前記１種もしくは複数の第２の遊離脂肪酸は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種もしくはこれ以上の第２の遊離脂肪酸であってよい。
【０１６７】
該方法は、
［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比を決定するステップをさらに含むことが好ましい。１種または複数の第１の遊離脂肪酸は、奇数鎖脂肪酸であってよい。奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択することができる。１種または複数の第２の遊離脂肪酸は、偶数鎖脂肪酸であってよい。偶数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ２：０、ＦＦＡ４：０、ＦＦＡ６：０、ＦＦＡ８：０、ＦＦＡ１０：０、ＦＦＡ１２：０、ＦＦＡ１２：１、ＦＦＡ１２：２、ＦＦＡ１４：０、ＦＦＡ１４：１、ＦＦＡ１４：２、ＦＦＡ１６：０、ＦＦＡ１６：１、ＦＦＡ１６：２、ＦＦＡ１６：３、ＦＦＡ１８：０、ＦＦＡ１８：１、ＦＦＡ１８：２、ＦＦＡ１８：３、ＦＦＡ１８：４、ＦＦＡ２０：０、ＦＦＡ２０：１、ＦＦＡ２０：２、ＦＦＡ２０：３、ＦＦＡ２０：４、ＦＦＡ２０：５、ＦＦＡ２０：６、ＦＦＡ２２：０、ＦＦＡ２２：１、ＦＦＡ２２：２、ＦＦＡ２２：３、ＦＦＡ２２：４、ＦＦＡ２２：５、ＦＦＡ２２：６、ＦＦＡ２４：０、ＦＦＡ２４：１、ＦＦＡ２４：２、ＦＦＡ２４：３、ＦＦＡ２４：４、ＦＦＡ２４：５、ＦＦＡ２４：６、ＦＦＡ２６：０、ＦＦＡ２６：１、ＦＦＡ２６：２、ＦＦＡ２８：０、ＦＦＡ３０：０、ＦＦＡ３２：０、ＦＦＡ３４：０、ＦＦＡ３６：０、およびＦＦＡ３８：０からなる群から選択することができる。
【０１６８】
好ましくは、
（ｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１９：１およびＦＦＡ１７：２であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２０：０であるか、
（ｉｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０およびＦＦＡ１９：０であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２０：０であるか、
（ｉｉｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１９：１およびＦＦＡ１７：２であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２４：１であるか、または
（ｉｖ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１７：１およびＦＦＡ１９：１であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２４：１である。
【０１６９】
［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との参照比と比較されることが、さらに好ましい。特に、［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、［前記１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［前記１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との参照比と比較される。
【０１７０】
参照比は、１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定される比であることも好ましい。特に、１個または複数の参照生体試料は、１人もしくは複数の健康な対象、肺高血圧症を有する１人もしくは複数の対象、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する１人もしくは複数の対象、および／またはメタボリック症候群を有する１人もしくは複数の対象由来である。
【０１７１】
好ましくは、前記参照生体試料は、少なくとも２個の参照生体試料、より好ましくは少なくとも２個から１００個の参照生体試料、いっそう好ましくは少なくとも１０個から５００個の参照生体試料、最も好ましくは少なくとも５０個から１０．０００個の参照生体試料、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００個の参照生体試料である。好ましくは、前記健康な対象は、少なくとも２人の健康な対象、より好ましくは少なくとも２人から１００人の健康な対象、いっそう好ましくは少なくとも１０人から５００人の参照の健康な対象、最も好ましくは少なくとも５０人から１０．０００人の健康な対象、例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の健健康な対象である。好ましくは、肺高血圧症を有する前記対象は、肺高血圧症を有する少なくとも２人の対象、より好ましくは肺高血圧症を有する少なくとも２人から１００人の対象、いっそう好ましくは肺高血圧症を有する少なくとも１０人から５００人の対象、最も好ましくは肺高血圧症を有する少なくとも５０人から１０．０００人の対象、例えば、肺高血圧症を有する少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の対象である。好ましくは、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する前記対象は、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する少なくとも２人の対象、より好ましくは、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する少なくとも２人から１００人の対象、いっそう好ましくは、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する少なくとも１０人から５００人の対象、最も好ましくは、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する少なくとも５０人から１０．０００人の対象、例えば、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の対象である。好ましくは、メタボリック症候群を有する前記対象は、メタボリック症候群を有する少なくとも２人の対象、より好ましくは、メタボリック症候群を有する少なくとも２人から１００人の対象、いっそう好ましくは、メタボリック症候群を有する少なくとも１０人から５００人の対象、最も好ましくは、メタボリック症候群を有する少なくとも５０人から１０．０００人の対象、例えば、メタボリック症候群を有する少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、または１０，０００人の対象である。分析用に１対象当たり１個の参照生体試料を採取するのが実践可能である。追加の参照生体試料が、例えば異なる参照生体試料の参照比を決定するために必要とされるならば、同じ対象が（再）試験され得る。前記参照比は、平均参照比であってよい。該比は、参照比を決定することおよびこれらの「平均」比（例えば中間比、中央比またはモーダル比）を算出することによって達成することができる。
【０１７２】
（ｉ）肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患（ＩＬＤ、線維症）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症、薬物乱用、結合組織病、遺伝子突然変異、慢性溶血性貧血および心疾患からなる群から選択され、または
（ｉｉ）メタボリック症候群は、糖尿病Ｉ型、糖尿病ＩＩ型、グリコーゲン蓄積症、ゴーシェ病、甲状腺疾患および肥満からなる群から選択される疾患を含むことが、代替としてまたは追加として好ましい。
【０１７３】
メタボリック症候群は、糖尿病ＩＩ型であってよい。この点において、糖尿病ＩＩ型を有する対象において参照比を上回る［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、患者が肺高血圧症を有することを示し、または肺高血圧症を有する対象において参照比を下回る［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、患者が糖尿病ＩＩ型有することを示すことが特に好ましい。
【０１７４】
好ましくは、該比は、参照比を少なくとも１．１５倍、少なくとも１．５倍もしくは少なくとも２倍上回り、より好ましくは、参照比を少なくとも３倍上回り、いっそう好ましくは、参照比を少なくとも４倍上回り、最も好ましくは、参照比を少なくとも５倍もしくは少なくとも１０倍上回り、および／または該比は、少なくとも参照比を１．１５倍、少なくとも１．５倍もしくは少なくとも２倍下回り、より好ましくは、参照比を少なくとも３倍下回り、いっそう好ましくは、参照比を少なくとも４倍下回り、最も好ましくは、参照比を少なくとも５倍もしくは少なくとも１０倍下回る。
【０１７５】
本発明の第１から第４の態様において、肺高血圧症は、好ましくは、肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）、左心疾患による肺高血圧症、肺疾患および／または低酸素症による肺高血圧症（例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）による肺高血圧症（ＰＨ）、または間質性肺疾患（ＩＬＤ）による肺高血圧症（ＰＨ））、慢性血栓塞栓性肺高血圧症（ＣＴＥＰＨ）、ならびに不明な多因子機序を有する肺高血圧症からなる群から選択される。より好ましくは、肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）は、特発性動脈高血圧症（ＩＰＡＨ）、遺伝性ＰＡＨ、薬物または毒素誘発ＰＡＨ、結合組織病関連ＰＡＨ、ＨＩＶ感染症関連ＰＡＨ、門脈高血圧症関連ＰＡＨ、先天性心疾患関連ＰＡＨ、住血吸虫症関連ＰＡＨ、慢性溶血性貧血関連ＰＡＨ、新生児の遷延性肺高血圧症、肺静脈閉塞性疾患（ＰＶＯＤ）および肺毛細血管腫症（ＰＣＨ）からなる群から選択される。いっそう好ましくは、肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）は特発性動脈高血圧症（ＩＰＡＨ）である。特に、肺高血圧症（ＰＨ）は、肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）、特異的特発性動脈高血圧症（ＩＰＡＨ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）による肺高血圧症（ＰＨ）および左心疾患（ＬＶ：Ｌｅｆｔ  Ｈｅａｒｔ  Ｄｉｓｅａｓｅ）による肺高血圧症（ＰＨ）からなる群から選択される。
【０１７６】
本発明の第１から第４の態様において、患者は、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。
【０１７７】
本発明の第１から第４の態様において、生体試料は、好ましくは、体液試料、体組織試料および体内ガス試料からなる群から選択される。より好ましくは、
（ｉ）体液試料は、血液、脳脊髄液（ＣＳＦ）、尿、痰、母乳、耳垢（耳あか）、内リンパ液、外リンパ液、胸膜液、腹水、胃液、粘液、唾液、精液、汗、頬スワブ、涙およびリキッドバイオプシーからなる群から選択され、
（ｉｉ）体組織試料は、皮膚フレーク、皮膚生検、毛包、生検組織、組織外植片および組織切片からなる群から選択され、または
（ｉｉｉ）体内ガス試料は、呼気凝縮液および呼気ガスからなる群から選択される。
【０１７８】
いっそう好ましくは、血液試料は、全血または血液画分である。最も好ましくは、血液画分は、血液細胞画分、血清および血漿からなる群から選択される。
【０１７９】
好ましくは、前に記述の生体試料は、これらが本発明の方法において使用される前に予備処理される。前記予備処理としては、１種もしくは複数の遊離脂肪酸ならびに／またはトリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種もしくは複数の化合物を分離するため、あるいは過剰な材料または廃物を除去するために必要とされる処理が挙げられ得る。さらに、予備処理は、生体試料を滅菌するおよび／または所望されない細胞、細菌もしくはウイルスなどの異物を除去する狙いがあり得る。適当な技法は、化合物の遠心分離、抽出、分別、限界濾過、タンパク質沈殿、続いて、濾過および精製および／または濃縮を含む。さらに、他の予備処理は、１種もしくは複数の遊離脂肪酸ならびに／またはトリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種もしくは複数の化合物を、分析に適当な形態または濃度で提供するために実施される。例えば、ガス−クロマトグラフィー結合質量分光分析法が使用されるならば、１種もしくは複数の遊離脂肪酸ならびに／またはトリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種もしくは複数の化合物を、前記ガスクロマトグラフィーより前に誘導体化することが必要とされる。
【０１８０】
別の種類の予備処理は、適当な貯蔵条件下での生体試料の貯蔵であり得る。本明細書において言及される貯蔵条件としては、貯蔵温度、圧力、湿度、時間、ならびに保存剤を用いる貯蔵生体試料の処理が挙げられる。適当なおよび必要な予備処理は、本発明の方法を実施するために使用される手段にも依存し、当業者によく知られている。前に記載されている通りの予備処理試料は、本発明に従って使用されている通りの「生体試料」または「参照生体試料」という用語によっても含まれる。
【０１８１】
本発明の第１から第４の態様において、１種または複数の遊離脂肪酸（例えば、１種もしくは複数の第１の遊離脂肪酸および／または１種もしくは複数の第２の遊離脂肪酸）のレベルは、分光分析法、クロマトグラフィー、酵素的方法、免疫化学的方法、重量測定的方法、化学センサ方法、またはこれらの組合せによって決定されることが好ましい。１種または複数の遊離脂肪酸のレベルならびにトリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルは、分光分析法、クロマトグラフィー、酵素的方法、免疫化学的方法、重量測定的方法、化学センサ方法、またはこれらの組合せによって決定されることが特に好ましい。
【０１８２】
適当な技法としては、液体クロマトグラフィー（ＬＣ：Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ：Ｇａｓ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、薄層クロマトグラフィー、またはサイズ排除もしくはアフィニティークロマトグラフィーなど、全てのクロマトグラフィー分離技法が挙げられる。これらの技法は、当技術分野においてよく知られており、特に問題なく当業者によって適用され得る。こうした決定のための適当な装置も、当技術分野においてよく知られている。例えば、質量分光分析法、特にガスクロマトグラフィー質量分光分析法（ＧＣ−ＭＳ：Ｇａｓ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、液体クロマトグラフィー質量分光分析法（ＬＣ−ＭＳ：Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、直接注入質量分光分析法もしくはフーリエ変換イオン−サイクロトロン−共鳴質量分光分析法（ＦＴ−ＩＣＲ−ＭＳ：Ｆｏｕｒｉｅｒ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍ  Ｉｏｎ-Ｃｙｃｌｏｔｒｏｎｅ-Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、キャピラリー電気泳動質量分光分析法（ＣＥ−ＭＳ：Ｃａｐｏｌｌａｒｙ  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、高速液体クロマトグラフィー結合質量分光分析法（ＨＰＬＣ−ＭＳ：Ｈｉｇｈ-ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、四重極質量分光分析法、任意の順次結合質量分光分析法、例えばＭＳ−ＭＳもしくはＭＳ−ＭＳ−ＭＳ、誘導結合プラズマ質量分光分析法（ＩＣＰ−ＭＳ：Ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙ  Ｃｏｕｐｌｅｄ  Ｐｌａｓｍａ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、熱分解質量分光分析法（Ｐｙ−ＭＳ：Ｐｙｒｏｌｙｓｉｓ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、イオン移動度質量分光分析法、または飛行時間質量分光分析法（ＴＯＦ：Ｔｉｍｅ  ｏｆ  Ｆｌｉｇｈｔ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）が使用される。代替の質量分光分析法技法としてまたは質量分光分析法技法に加えて、以下の技法が決定のために使用され得る：核磁気共鳴（ＮＭＲ：Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ：Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｉｍａｇｉｎｇ）、フーリエ変換赤外分析（ＦＴ−ＩＲ：Ｆｏｕｒｉｅｒ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍ  Ｉｎｆｒａｒｅｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）、紫外（ＵＶ：Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ）分光法、屈折率（Ｒｌ：Ｒｅｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｉｎｄｅｘ）、蛍光検出、放射化学的検出、電気化学的検出、光散乱（ＬＳ：Ｌｉｇｈｔ  Ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ）、分散的ラマン分光法または炎イオン化検出（ＦＩＤ：Ｆｌａｍｅ  Ｉｏｎｉｓａｔｉｏｎ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）。これらの技法は、当業者によく知られており、特に問題なく適用され得る。本発明の方法は、好ましくは、自動化によって当然補助される。例えば、生体試料の加工または予備処理は、ロボット工学によって自動化することができる。データの加工および比較は、好ましくは、適当なコンピュータープログラムおよびデータベースによっ���補助される。自動化は、高スループット手法において本発明の方法を使用することを可能にする。
【０１８３】
さらに、１種または複数の遊離脂肪酸ならびにトリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物は、特定の化学的または生物学的アッセイによって決定することもできる。前記アッセイは、生体試料の遊離脂肪酸または化合物を特異的に検出するのを可能にする手段を当然含む。好ましくは、前記手段は、遊離脂肪酸または化合物の化学構造を特異的に認識できる、または他の化合物と反応するというこれの能力または生物学的読み取り系（例えば、レポーター遺伝子の誘発）において応答を導出するというこれの能力に基づいて遊離脂肪酸または化合物を特異的に同定できる。遊離脂肪酸または化合物の化学構造を特異的に認識できる手段は、好ましくは、抗体、または化学構造と特異的に相互作用する他のタンパク質、例えば受容体もしくは酵素である。前記抗体としては、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方、ならびにこれらの断片、例えば抗原またはハプテンを結合できるＦｖ、ＦａｂおよびＦ（ａｂ）２断片が挙げられる。遊離脂肪酸または化合物を特異的に認識できる適当なタンパク質は、好ましくは、前記遊離脂肪酸または化合物の代謝変換に関与する酵素である。前記酵素は、基質として遊離脂肪酸または化合物を使用することができる。さらに、前記抗体は、遊離脂肪酸または化合物を特異的に認識するオリゴペプチドを発生させる基礎として使用することができる。これらのオリゴペプチドは、例えば、遊離脂肪酸または化合物のための酵素の結合性ドメインまたはポケットを当然含む。適当な抗体および／または酵素ベースのアッセイは、ＲＩＡ（ラジオイムノアッセイ）、ＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ：酵素連結免疫吸着アッセイ）、サンドイッチ酵素免疫試験、電気化学発光法サンドイッチイムノアッセイ（Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｓａｎｄｗｉｔｃｈ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ：ＥＣＬＩＡ）、解離増強ランタニドフルオロ免疫アッセイ（Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ−Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｌａｎｔａｎｉｄｅ  Ｆｌｕｏｒｏ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ａｓｓａｙ：ＤＥＬＦＩＡ）または固相免疫試験であってよい。さらに、遊離脂肪酸または化合物は、他の分子と反応するというこれの能力に基づいて、即ち、特定の化学反応によって決定することもできる。さらに、遊離脂肪酸または化合物は、生物学的読み取り系において応答を導出するというこれの能力により、生体試料において決定することができる。生物学的応答は、読み取られた通りに当然検出され、生体試料に含まれる遊離脂肪酸または化合物の存在および／または量を示す。好ましくは、遊離脂肪酸または化合物の決定は、例えば試料の遊離脂肪酸または化合物の量の決定も可能にする定量プロセスである。これらの技法をどのように適用するかは、当業者によく知られている。さらに、適当な装置が市販されている。
【０１８４】
上に記述されている通り、質量分光分析法および／または液体クロマトグラフィーが使用され得る。好ましくは、
（ｉ）分光分析法は、質量分光分析法（ＭＳ）、好ましくはタンデム質量分光分析法（ＭＳ／ＭＳ）であるか、
（ｉｉ）クロマトグラフィーは、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）もしくはアフィニティークロマトグラフィーであるか、または
（ｉｉｉ）クロマトグラフィーは、分光分析法、好ましくは質量分光分析法（ＭＳ）と組み合わされ、より好ましくは液体クロマトグラフィー−質量分光分析法（ＬＣ−ＭＳ）、最も好ましくは液体クロマトグラフィー−タンデム質量分光分析法（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）である。
【０１８５】
第５の態様において、本発明は、患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するための手段を含むキットに関する。前記１種または複数の遊離脂肪酸は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種またはこれ以上の遊離脂肪酸であってよい。実際に、患者由来の生体試料に含まれる／検出可能な全ての遊離脂肪酸のレベルは、該手段によって決定することができる。前記１種または複数の遊離脂肪酸は、偶数鎖脂肪酸および／または奇数鎖脂肪酸であってよい。偶数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ２：０、ＦＦＡ４：０、ＦＦＡ６：０、ＦＦＡ８：０、ＦＦＡ１０：０、ＦＦＡ１２：０、ＦＦＡ１２：１、ＦＦＡ１２：２、ＦＦＡ１４：０、ＦＦＡ１４：１、ＦＦＡ１４：２、ＦＦＡ１６：０、ＦＦＡ１６：１、ＦＦＡ１６：２、ＦＦＡ１６：３、ＦＦＡ１８：０、ＦＦＡ１８：１、ＦＦＡ１８：２、ＦＦＡ１８：３、ＦＦＡ１８：４、ＦＦＡ２０：０、ＦＦＡ２０：１、ＦＦＡ２０：２、ＦＦＡ２０：３、ＦＦＡ２０：４、ＦＦＡ２０：５、ＦＦＡ２０：６、ＦＦＡ２２：０、ＦＦＡ２２：１、ＦＦＡ２２：２、ＦＦＡ２２：３、ＦＦＡ２２：４、ＦＦＡ２２：５、ＦＦＡ２２：６、ＦＦＡ２４：０、ＦＦＡ２４：１、ＦＦＡ２４：２、ＦＦＡ２４：３、ＦＦＡ２４：４、ＦＦＡ２４：５、ＦＦＡ２４：６、ＦＦＡ２６：０、ＦＦＡ２６：１、ＦＦＡ２６：２、ＦＦＡ２８：０、ＦＦＡ３０：０、ＦＦＡ３２：０、ＦＦＡ３４：０、ＦＦＡ３６：０、およびＦＦＡ３８：０からなる群から選択することができ、および／または奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択することができる。１種または複数の遊離脂肪酸は、奇数鎖脂肪酸であるのが好ましい。好ましくは、奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択される。
【０１８６】
キットは、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定する手段をさらに含むことが好ましい。前記脂質は、グリセロ脂質、スフィンゴ脂質、ステロール、プレノールおよび／またはグリコシルグリセロールであってよい。前記膜脂質は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、セラミド（ＣＥＲ）および／またはホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）であってよい。加えて、前記リゾ脂質は、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾグリコスフィンゴ脂質、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）、リゾホスファチジルセリン（ＬＰＳ）、リゾグリセロリン脂質、リゾスフィンゴミエリンおよび／またはリゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）であってよい。前記１種または複数の化合物は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種またはこれ以上の化合物であってよい。
【０１８７】
患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するための手段は、１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベルを決定するための手段、および１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルを決定するための手段を含むことが、追加としてまたは代替として好ましい。
【０１８８】
前記１種もしくは複数の第１の遊離脂肪酸は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種もしくはこれ以上の第１の遊離脂肪酸であってよく、および／または前記１種もしくは複数の第２の遊離脂肪酸は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、３０種、４０種、５０種、６０種、７０種、８０種、９０種、１００種もしくはこれ以上の第２の遊離脂肪酸であってよい。
【０１８９】
１種または複数の第１の遊離脂肪酸は、奇数鎖脂肪酸であってよい。奇数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択することができる。１種または複数の第２の遊離脂肪酸は、偶数鎖脂肪酸であってよい。偶数鎖脂肪酸は、ＦＦＡ２：０、ＦＦＡ４：０、ＦＦＡ６：０、ＦＦＡ８：０、ＦＦＡ１０：０、ＦＦＡ１２：０、ＦＦＡ１２：１、ＦＦＡ１２：２、ＦＦＡ１４：０、ＦＦＡ１４：１、ＦＦＡ１４：２、ＦＦＡ１６：０、ＦＦＡ１６：１、ＦＦＡ１６：２、ＦＦＡ１６：３、ＦＦＡ１８：０、ＦＦＡ１８：１、ＦＦＡ１８：２、ＦＦＡ１８：３、ＦＦＡ１８：４、ＦＦＡ２０：０、ＦＦＡ２０：１、ＦＦＡ２０：２、ＦＦＡ２０：３、ＦＦＡ２０：４、ＦＦＡ２０：５、ＦＦＡ２０：６、ＦＦＡ２２：０、ＦＦＡ２２：１、ＦＦＡ２２：２、ＦＦＡ２２：３、ＦＦＡ２２：４、ＦＦＡ２２：５、ＦＦＡ２２：６、ＦＦＡ２４：０、ＦＦＡ２４：１、ＦＦＡ２４：２、ＦＦＡ２４：３、ＦＦＡ２４：４、ＦＦＡ２４：５、ＦＦＡ２４：６、ＦＦＡ２６：０、ＦＦＡ２６：１、ＦＦＡ２６：２、ＦＦＡ２８：０、ＦＦＡ３０：０、ＦＦＡ３２：０、ＦＦＡ３４：０、ＦＦＡ３６：０、およびＦＦＡ３８：０からなる群から選択することができる。
【０１９０】
好ましくは、
（ｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１９：１およびＦＦＡ１７：２であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２０：０であるか、
（ｉｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０およびＦＦＡ１９：０であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２０：０であるか、
（ｉｉｉ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１９：１およびＦＦＡ１７：２であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２４：１であるか、または
（ｉｖ）奇数鎖脂肪酸はＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１７：１およびＦＦＡ１９：１であり、偶数鎖脂肪酸はＦＦＡ２４：１である。
【０１９１】
患者は、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。
【０１９２】
生体試料は、好ましくは、体液試料、体組織試料および体内ガス試料からなる群から選択される。より好ましくは、
（ｉ）体液試料は、血液、脳脊髄液（ＣＳＦ）、尿、痰、母乳、耳垢（耳あか）、内リンパ液、外リンパ液、胸膜液、腹水、胃液、粘液、唾液、精液、汗、頬スワブ、涙およびリキッドバイオプシーからなる群から選択され、
（ｉｉ）体組織試料は、皮膚フレーク、皮膚生検、毛包、生検組織、組織外植片、および組織切片からなる群から選択され、または
（ｉｉｉ）体内ガス試料は、呼気凝縮液および呼気ガスからなる群から選択される。
【０１９３】
いっそう好ましくは、血液試料は、全血または血液画分である。最も好ましくは、血液画分は、血液細胞画分、血清および血漿からなる群から選択される。
【０１９４】
キットは、本発明の第１から第４の態様による方法を行うのに有用であり得る。
【０１９５】
キットは、
（ｉ）容器、および／または
（ｉｉ）データキャリア
をさらに含むことができる。
【０１９６】
前記データキャリアは、非電子的データキャリア、例えばグラフィックデータキャリア、例えば情報リーフレット、情報シート、バーコードもしくはアクセスコード、または電子的データキャリア、例えばフロッピーディスク、コンパクトディスク（ＣＤ）、デジタル多用途ディスク（ＤＶＤ）、マイクロチップ、もしくは別の半導体ベースの電子的データキャリアであってよい。アクセスコードは、データベース、例えばインターネットデータベース、集中型または分散型データベースへのアクセスを可能にすることができる。アクセスコードは、コンピューターがコンピューターユーザーのためにタスクを実行するのを引き起こすアプリケーションソフトウェア、またはスマートフォンおよび他の可動装置で実行するように設計されたソフトウェアである可動アプリケーションへのアクセスも可能にする。
【０１９７】
前記データキャリアは、
（ｉ）１種もしくは複数の遊離脂肪酸の参照レベル、
（ｉｉ）［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との参照比、ならびに／または
（ｉｉ）［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、脂質、好ましくは膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との参照比をさらに含むことができる。
【０１９８】
データキャリアが、データベースへのアクセスを可能にするアクセスコードを含む場合において、前記参照レベルおよび／または参照比は、このデータベースに寄託される。
【０１９９】
加えて、データキャリアは、本発明の第１から第４の態様による方法をどのように実施するかについての情報または指示を含むことができる。
【０２００】
前記キットは、上に記述されているレベルまたは比を決定するための緩衝液（単数または複数）、試薬（単数または複数）および／または希釈液（単数または複数）を含めて、商業および使用者の見地から望ましい材料を含むこともできる。
【０２０１】
最終的に、本発明は、以下の通りに要約される：
１．患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）のレベルを決定するステップを含む、患者の肺高血圧症（ＰＨ）の診断方法。
２．１種または複数の遊離脂肪酸のレベルが、１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルと比較される、項目１の方法。
３．参照レベルが、１人または複数の健康な対象由来の１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定されるレベルである、項目２の方法。
４．参照レベルを上回る１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、患者が肺高血圧症を有することを示す、項目２または３の方法。
５．１種または複数の遊離脂肪酸が、奇数鎖脂肪酸である、項目１から４のいずれか１つの方法。
６．奇数鎖脂肪酸が、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択される、項目５の方法。
７．トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定するステップをさらに含む、項目１、５または６のいずれか１つの方法。
８．［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比を決定するステップをさらに含む、項目７の方法。
９．［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比が、［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との参照比と比較される、項目８の方法。
１０．参照比が、１人または複数の健康な対象由来の１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定される比である、項目９の方法。
１１．患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップが、１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベルおよび１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含む、項目１の方法。
１２．［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比を決定するステップをさらに含む、項目１１の方法。
１３．１種または複数の第１の遊離脂肪酸が、奇数鎖脂肪酸である、項目１１または１２の方法。
１４．奇数鎖脂肪酸が、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択される、項目１３の方法。
１５．１種または複数の第２の遊離脂肪酸が、偶数鎖脂肪酸である、項目１１から１４のいずれか１つの方法。
１６．偶数鎖脂肪酸が、ＦＦＡ２：０、ＦＦＡ４：０、ＦＦＡ６：０、ＦＦＡ８：０、ＦＦＡ１０：０、ＦＦＡ１２：０、ＦＦＡ１２：１、ＦＦＡ１２：２、ＦＦＡ１４：０、ＦＦＡ１４：１、ＦＦＡ１４：２、ＦＦＡ１６：０、ＦＦＡ１６：１、ＦＦＡ１６：２、ＦＦＡ１６：３、ＦＦＡ１８：０、ＦＦＡ１８：１、ＦＦＡ１８：２、ＦＦＡ１８：３、ＦＦＡ１８：４、ＦＦＡ２０：０、ＦＦＡ２０：１、ＦＦＡ２０：２、ＦＦＡ２０：３、ＦＦＡ２０：４、ＦＦＡ２０：５、ＦＦＡ２０：６、ＦＦＡ２２：０、ＦＦＡ２２：１、ＦＦＡ２２：２、ＦＦＡ２２：３、ＦＦＡ２２：４、ＦＦＡ２２：５、ＦＦＡ２２：６、ＦＦＡ２４：０、ＦＦＡ２４：１、ＦＦＡ２４：２、ＦＦＡ２４：３、ＦＦＡ２４：４、ＦＦＡ２４：５、ＦＦＡ２４：６、ＦＦＡ２６：０、ＦＦＡ２６：１、ＦＦＡ２６：２、ＦＦＡ２８：０、ＦＦＡ３０：０、ＦＦＡ３２：０、ＦＦＡ３４：０、ＦＦＡ３６：０、およびＦＦＡ３８：０からなる群から選択される、項目１５の方法。
１７．［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比が、［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との参照比と比較される、項目１２から１６のいずれか１つの方法。
１８．参照比が、１人または複数の健康な対象由来の１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定される比である、項目１７の方法。
１９．参照比を上回る［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、患者が肺高血圧症を有することを示す、項目１７または１８の方法。
２０．患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含む、患者の肺高血圧症の過程をモニタリングする方法。
２１．１種または複数の遊離脂肪酸のレベルが、１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルと比較される、項目２０の方法。
２２．参照レベルが、１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定されるレベルである、項目２１の方法。
２３．１個または複数の参照生体試料が、１人もしくは複数の健康な対象、または肺高血圧症を有する１人もしくは複数の対象由来である、項目２２の方法。
２４．１種または複数の遊離脂肪酸が奇数鎖脂肪酸である、項目２０から２３のいずれか１つの方法。
２５．奇数鎖脂肪酸が、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択される、項目２４の方法。
２６．前記モニタリングが、第１の時点でレベルを決定すること、および少なくとも１つの第２の時点でレベルを決定すること、ここで、少なくとも１つの第２の時点は、第１の時点より後である、ならびに異なる時点で決定されたレベルを比較することを含む、項目２０から２５のいずれか１つの方法。
２７．（ｉ）経時的に増加するレベルが、患者が肺高血圧症を発症している、もしくは肺高血圧症が患者において悪化していることを示し、（ｉｉ）経時的に変化しないレベルは、患者が安定している、もしくは肺高血圧症が患者において進行していないことを示し、または（ｉｉｉ）経時的に減少するレベルが、肺高血圧症が患者において改善していることを示す、項目２６の方法。
２８．（ｉ）患者が第１の時点で健康であって、経時的に増加するレベルは、患者が肺高血圧症を発症していることを示し、（ｉｉ）患者が第１の時点で肺高血圧症を有していて、経時的に増加するレベルが、肺高血圧症が患者において悪化していることを示し、（ｉｉｉ）患者が第１の時点で健康であって、経時的に変化しないレベルは、患者が安定していることを示し、（ｉｖ）患者が第１の時点で肺高血圧症を有していて、経時的に変化しないレベルが、肺高血圧症が患者において進行していないことを示し、または（ｖ）患者が第１の時点で肺高血圧症を有していて、経時的に減少するレベルが、肺高血圧症が患者において改善していることを示す、項目２７の方法。
２９．患者が、肺高血圧症の処置を受けるまたは受けたことがある、項目２０から２８のいずれか１つの方法。
３０．肺高血圧症の処置が、薬物の投与、外科手術、移植、運動訓練、身体的リハビリテーションおよびバルーン血管形成術からなる群から選択される、項目２９の方法。
３１．（ｉ）患者が肺高血圧症のための処置を受けるもしくは受けたことがあり、経時的に減少するレベルは、患者が処置に応答することを示し、（ｉｉ）患者が肺高血圧症のための処置を受けるもしくは受けたことがあり、経時的に変化しないレベルが、患者は前記処置に応答しないことを示し、または（ｉｉｉ）患者が肺高血圧症のための処置を受けるまたは受けたことがあり、経時的に増加するレベルは、患者が前記処置に応答しないことを示す、項目２９または３０の方法。
３２．トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定するステップをさらに含む、項目２０、２４または２５のいずれか１つの方法。
３３．［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比を決定するステップをさらに含む、項目３２の方法。
３４．［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比が、［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との参照比と比較される、項目３３の方法。
３５．参照比が、１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定される比である、項目３４の方法。
３６．１個または複数の参照生体試料が、１人もしくは複数の健康な対象、または肺高血圧症を有する１人もしくは複数の対象由来である、項目３５の方法。
３７．前記モニタリングが、第１の時点で比を決定すること、および少なくとも１つの第２の時点で比を決定すること、ここで、少なくとも１つの第２の時点は第１の時点より後である、ならびに異なる時点で決定された比を比較することを含む、項目３３から３６のいずれか１つの方法。
３８．患者が肺高血圧症の処置を受けるまたは受けたことがある、項目３２から３７のいずれか１つの方法。
３９．肺高血圧症の処置が、薬物の投与、外科手術、移植、運動訓練、身体的リハビリテーションおよびバルーン血管形成術からなる群から選択される、項目３８の方法。
４０．患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップが、１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベルおよび１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含む、項目２０の方法。
４１．［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比を決定するステップをさらに含む、項目４０の方法。
４２．１種または複数の第１の遊離脂肪酸が奇数鎖脂肪酸である、項目４０または４１の方法。
４３．奇数鎖脂肪酸が、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択される、項目４２の方法。
４４．１種または複数の第２の遊離脂肪酸が偶数鎖脂肪酸である、項目４０から４３のいずれか１つの方法。
４５．偶数鎖脂肪酸が、ＦＦＡ２：０、ＦＦＡ４：０、ＦＦＡ６：０、ＦＦＡ８：０、ＦＦＡ１０：０、ＦＦＡ１２：０、ＦＦＡ１２：１、ＦＦＡ１２：２、ＦＦＡ１４：０、ＦＦＡ１４：１、ＦＦＡ１４：２、ＦＦＡ１６：０、ＦＦＡ１６：１、ＦＦＡ１６：２、ＦＦＡ１６：３、ＦＦＡ１８：０、ＦＦＡ１８：１、ＦＦＡ１８：２、ＦＦＡ１８：３、ＦＦＡ１８：４、ＦＦＡ２０：０、ＦＦＡ２０：１、ＦＦＡ２０：２、ＦＦＡ２０：３、ＦＦＡ２０：４、ＦＦＡ２０：５、ＦＦＡ２０：６、ＦＦＡ２２：０、ＦＦＡ２２：１、ＦＦＡ２２：２、ＦＦＡ２２：３、ＦＦＡ２２：４、ＦＦＡ２２：５、ＦＦＡ２２：６、ＦＦＡ２４：０、ＦＦＡ２４：１、ＦＦＡ２４：２、ＦＦＡ２４：３、ＦＦＡ２４：４、ＦＦＡ２４：５、ＦＦＡ２４：６、ＦＦＡ２６：０、ＦＦＡ２６：１、ＦＦＡ２６：２、ＦＦＡ２８：０、ＦＦＡ３０：０、ＦＦＡ３２：０、ＦＦＡ３４：０、ＦＦＡ３６：０、およびＦＦＡ３８：０からなる群から選択される、項目４４の方法。
４６．［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比が、［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との参照比と比較される、項目４１から４５のいずれか１つの方法。
４７．参照比が、１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定される比である、項目４６の方法。
４８．１個または複数の参照生体試料が、１人もしくは複数の健康な対象、または肺高血圧症を有する１人もしくは複数の対象由来である、項目４７の方法。
４９．前記モニタリングが、第１の時点で比を決定すること、および少なくとも１つの第２の時点で比を決定すること、ここで、少なくとも１つの第２の時点は第１の時点より後である、ならびに異なる時点で決定された比を比較することを含む、項目４１から４８のいずれか１つの方法。
５０．（ｉ）経時的に増加する比は、患者が肺高血圧症を発症している、もしくは肺高血圧症が患者において悪化していることを示す、（ｉｉ）経時的に変化しない比は、患者が安定している、もしくは肺高血圧症が患者において進行していないことを示し、（ｉｉｉ）経時的に減少する比は、肺高血圧症が患者において改善していることを示す、項目４９の方法。
５１．（ｉ）患者が第１の時点で健康であって、経時的に増加する比は、患者が肺高血圧症を発症していることを示し、（ｉｉ）患者が第１の時点で肺高血圧症を有していて、経時的に増加する比が、肺高血圧症が患者において悪化していることを示し、（ｉｉｉ）患者が第１の時点で健康であって、経時的に変化しない比は、患者が安定していることを示し、（ｉｖ）患者が第１の時点で肺高血圧症を有していて、経時的に変化しない比が、肺高血圧症が患者において進行していないことを示し、または（ｖ）患者が第１の時点で肺高血圧症を有していて、経時的に減少する比が、肺高血圧症が患者において改善していることを示す、項目５０の方法。
５２．患者が肺高血圧症の処置を受けるまたは受けたことがある、項目４０から５１のいずれか１つの方法。
５３．肺高血圧症の処置が、薬物の投与、外科手術、移植、運動訓練、身体的リハビリテーションおよびバルーン血管形成術からなる群から選択される、項目５２の方法。
５４．（ｉ）患者が肺高血圧症のための処置を受けるまたは受けたことがあり、経時的に減少する比は、患者が処置に応答することを示し、（ｉｉ）患者が肺高血圧症のための処置を受けるまたは受けたことがあり、経時的に変化しない比が、患者は前記処置に応答しないことを示し、または（ｉｉｉ）患者が肺高血圧症のための処置を受けるまたは受けたことがあり、経時的に増加する比は、患者は前記処置に応答しないことを示す、項目５２または５３の方法。
５５．患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含む、患者の肺高血圧症の重症度を決定する方法。
５６．１種または複数の遊離脂肪酸のレベルが、１種または複数の遊離脂肪酸の参照レベルと比較される、項目５５の方法。
５７．参照レベルが、肺高血圧症を有する１人または複数の対象由来の１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定されるレベルである、項目５６の方法。
５８．参照レベルを上回る１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、患者が肺高血圧症の重度の形態を有し、予後不良があることを示し、または参照レベルを下回る１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、患者が肺高血圧症の軽度の形を有し予後良好があることを示す項目５６または５７の方法。
５９．１種または複数の遊離脂肪酸が奇数鎖脂肪酸である、項目５５から５８のいずれか１つの方法。
６０．奇数鎖脂肪酸が、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択される、項目５９の方法。
６１．トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定するステップをさらに含む、項目５５、５９または６０のいずれか１つの方法。
６２．［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比を決定するステップをさらに含む、項目６１の方法。
６３．［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比が、［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との参照比と比較される、項目６２の方法。
６４．参照比が、肺高血圧症を有する１人または複数の対象由来の１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定される比である、項目６３の方法。
６５．患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップが、１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベルおよび１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含む、項目５５の方法。
６６．［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比を決定するステップをさらに含む、項目６５の方法。
６７．１種または複数の第１の遊離脂肪酸が奇数鎖脂肪酸である、項目６５または６６の方法。
６８．奇数鎖脂肪酸が、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択される、項目６７の方法。
６９．１種または複数の第２の遊離脂肪酸が偶数鎖脂肪酸である、項目６５から６８のいずれか１つの方法。
７０．偶数鎖脂肪酸が、ＦＦＡ２：０、ＦＦＡ４：０、ＦＦＡ６：０、ＦＦＡ８：０、ＦＦＡ１０：０、ＦＦＡ１２：０、ＦＦＡ１２：１、ＦＦＡ１２：２、ＦＦＡ１４：０、ＦＦＡ１４：１、ＦＦＡ１４：２、ＦＦＡ１６：０、ＦＦＡ１６：１、ＦＦＡ１６：２、ＦＦＡ１６：３、ＦＦＡ１８：０、ＦＦＡ１８：１、ＦＦＡ１８：２、ＦＦＡ１８：３、ＦＦＡ１８：４、ＦＦＡ２０：０、ＦＦＡ２０：１、ＦＦＡ２０：２、ＦＦＡ２０：３、ＦＦＡ２０：４、ＦＦＡ２０：５、ＦＦＡ２０：６、ＦＦＡ２２：０、ＦＦＡ２２：１、ＦＦＡ２２：２、ＦＦＡ２２：３、ＦＦＡ２２：４、ＦＦＡ２２：５、ＦＦＡ２２：６、ＦＦＡ２４：０、ＦＦＡ２４：１、ＦＦＡ２４：２、ＦＦＡ２４：３、ＦＦＡ２４：４、ＦＦＡ２４：５、ＦＦＡ２４：６、ＦＦＡ２６：０、ＦＦＡ２６：１、ＦＦＡ２６：２、ＦＦＡ２８：０、ＦＦＡ３０：０、ＦＦＡ３２：０、ＦＦＡ３４：０、ＦＦＡ３６：０、およびＦＦＡ３８：０からなる群から選択される、項目６９の方法。
７１．［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比が、［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との参照比と比較される、項目６６から７０のいずれか１つの方法。
７２．参照比が、肺高血圧症を有する対象由来の１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定される比である、項目７１の方法。
７３．参照比を上回る［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、患者が肺高血圧症の重度の形態を有し、予後不良があることを示し、または参照比を下回る［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、患者が肺高血圧症の軽度の形態を有し予後良好があることを示す、項目７１または７２の方法。
７４．患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含む、肺高血圧症と、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患およびメタボリック症候群からなる群から選択される少なくとも１つの状態とを識別する方法。
７５．１種または複数の遊離脂肪酸のレベルが、１種または複数の遊離脂肪酸の少なくとも１つの参照レベルと比較される、項目７４の方法。
７６．少なくとも１つの参照レベルが、１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定されるレベルである、項目７５の方法。
７７．１個または複数の参照生体試料が、１人もしくは複数の健康な対象、肺高血圧症を有する１人もしくは複数の対象、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する１人もしくは複数の対象、および／またはメタボリック症候群を有する１人または複数の対象由来である、項目７６の方法。
７８．（ｉ）肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患（ＩＬＤ、線維症）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症、薬物乱用、結合組織病、遺伝子突然変異、慢性溶血性貧血および心疾患からなる群から選択され、または（ｉｉ）メタボリック症候群が、糖尿病Ｉ型、糖尿病ＩＩ型、グリコーゲン蓄積症、ゴーシェ病、甲状腺疾患および肥満からなる群から選択される疾患を含む項目７４から７７のいずれか１つの方法。
７９．糖尿病ＩＩ型を有する対象において参照レベルを上回る１種もしくは複数の遊離脂肪酸のレベルは、患者が肺高血圧症を有することを示すか、または肺高血圧症を有する対象において参照レベルを下回る１種または複数の遊離脂肪酸のレベルは、患者が糖尿病ＩＩ型有することを示す、項目７８の方法。
８０．１種または複数の遊離脂肪酸が奇数鎖脂肪酸である、項目７４から７９のいずれか１つの方法。
８１．奇数鎖脂肪酸が、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択される、項目８０の方法。
８２．トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定するステップをさらに含む、項目７４、８０または８１のいずれか１つの方法。
８３．［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との比を決定するステップをさらに含む、項目８２の方法。
８４．［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルの］との比が、［１種または複数の遊離脂肪酸のレベル］と［トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベル］との少なくとも１つの参照比と比較される、項目８３の方法。
８５．少なくとも１つの参照比が、１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定される比である、項目８４の方法。
８６．１個または複数の参照生体試料が、１人もしくは複数の健康な対象、肺高血圧症を有する１人もしくは複数の対象、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する１人もしくは複数の対象、および／またはメタボリック症候群を有する１人もしくは複数の対象由来である、項目８５の方法。
８７．（ｉ）肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患（ＩＬＤ、線維症）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症、薬物乱用、結合組織病、遺伝子突然変異、慢性溶血性貧血および心疾患からなる群から選択され、または（ｉｉ）メタボリック症候群が、糖尿病Ｉ型、糖尿病ＩＩ型、グリコーゲン蓄積症、ゴーシェ病、甲状腺疾患および肥満からなる群から選択される疾患を含む、項目８２から８６のいずれか１つの方法。
８８．患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップが、１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベルおよび１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルを決定するステップを含む、項目７４の方法。
８９．［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比を決定するステップをさらに含む、項目８８の方法。
９０．１種または複数の第１の遊離脂肪酸が奇数鎖脂肪酸である、項目８８または８９の方法。
９１．奇数鎖脂肪酸が、ＦＦＡ１：０、ＦＦＡ３：０、ＦＦＡ５：０、ＦＦＡ７：０、ＦＦＡ９：０、ＦＦＡ１１：０、ＦＦＡ１３：０、ＦＦＡ１３：１、ＦＦＡ１３：２、ＦＦＡ１５：０、ＦＦＡ１５：１、ＦＦＡ１５：２、ＦＦＡ１７：０、ＦＦＡ１７：１、ＦＦＡ１７：２、ＦＦＡ１７：３、ＦＦＡ１９：０、ＦＦＡ１９：１、ＦＦＡ１９：２、ＦＦＡ１９：３、ＦＦＡ２１：０、ＦＦＡ２１：１、ＦＦＡ２１：２、ＦＦＡ２１：３、ＦＦＡ２１：４、ＦＦＡ２１：５、ＦＦＡ２１：６、ＦＦＡ２３：０、ＦＦＡ２３：１、ＦＦＡ２３：２、ＦＦＡ２３：３、ＦＦＡ２３：４、ＦＦＡ２３：５、ＦＦＡ２３：６、ＦＦＡ２５：０、ＦＦＡ２５：１、ＦＦＡ２５：２、ＦＦＡ２５：３、ＦＦＡ２７：０、ＦＦＡ２７：１、ＦＦＡ２９：０、ＦＦＡ３１：０、ＦＦＡ３３：０、ＦＦＡ３５：０、およびＦＦＡ３７：０からなる群から選択される、項目９０の方法。
９２．１種または複数の第２の遊離脂肪酸が偶数鎖脂肪酸である、項目８８から９１のいずれか１つの方法。
９３．偶数鎖脂肪酸が、ＦＦＡ２：０、ＦＦＡ４：０、ＦＦＡ６：０、ＦＦＡ８：０、ＦＦＡ１０：０、ＦＦＡ１２：０、ＦＦＡ１２：１、ＦＦＡ１２：２、ＦＦＡ１４：０、ＦＦＡ１４：１、ＦＦＡ１４：２、ＦＦＡ１６：０、ＦＦＡ１６：１、ＦＦＡ１６：２、ＦＦＡ１６：３、ＦＦＡ１８：０、ＦＦＡ１８：１、ＦＦＡ１８：２、ＦＦＡ１８：３、ＦＦＡ１８：４、ＦＦＡ２０：０、ＦＦＡ２０：１、ＦＦＡ２０：２、ＦＦＡ２０：３、ＦＦＡ２０：４、ＦＦＡ２０：５、ＦＦＡ２０：６、ＦＦＡ２２：０、ＦＦＡ２２：１、ＦＦＡ２２：２、ＦＦＡ２２：３、ＦＦＡ２２：４、ＦＦＡ２２：５、ＦＦＡ２２：６、ＦＦＡ２４：０、ＦＦＡ２４：１、ＦＦＡ２４：２、ＦＦＡ２４：３、ＦＦＡ２４：４、ＦＦＡ２４：５、ＦＦＡ２４：６、ＦＦＡ２６：０、ＦＦＡ２６：１、ＦＦＡ２６：２、ＦＦＡ２８：０、ＦＦＡ３０：０、ＦＦＡ３２：０、ＦＦＡ３４：０、ＦＦＡ３６：０、およびＦＦＡ３８：０からなる群から選択される、項目９２の方法。
９４．［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比が、［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との少なくとも１つの参照比と比較される、項目８９から９３のいずれか１つの方法。
９５．少なくとも１つの参照比が、１個または複数の参照生体試料を測定することによって決定される比である、項目９４の方法。
９６．１個または複数の参照生体試料が、１人もしくは複数の健康な対象、肺高血圧症を有する１人もしくは複数の対象、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患を有する１人もしくは複数の対象、および／またはメタボリック症候群を有する１人もしくは複数の対象由来である、項目９５の方法。
９７．（ｉ）肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患（ＩＬＤ、線維症）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症、薬物乱用、結合組織病、遺伝子突然変異、慢性溶血性貧血および心疾患からなる群から選択され、または（ｉｉ）メタボリック症候群が、糖尿病Ｉ型、糖尿病ＩＩ型、グリコーゲン蓄積症、ゴーシェ病、甲状腺疾患および肥満からなる群から選択される疾患を含む、項目８８から９６のいずれか１つの方法。
９８．糖尿病ＩＩ型を有する対象において参照比を上回る［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、患者が肺高血圧症を有することを示し、または肺高血圧症を有する対象において参照比を下回る［１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベル］と［１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベル］との比は、患者が糖尿病ＩＩ型有することを示す、項目９７の方法。
９９．肺高血圧症が、肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）、左心疾患による肺高血圧症、肺疾患および／または低酸素症による肺高血圧症（例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）による肺高血圧症（ＰＨ）または間質性肺疾患（ＩＬＤ）による肺高血圧症（ＰＨ））、慢性血栓塞栓性肺高血圧症（ＣＴＥＰＨ）、ならびに不明な多因子機序を有する肺高血圧症からなる群から選択される、項目１から９８のいずれか１つの方法。
１００．肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）が、特発性動脈高血圧症（ＩＰＡＨ）、遺伝性ＰＡＨ、薬物または毒素誘発ＰＡＨ、結合組織病関連ＰＡＨ、ＨＩＶ感染症関連ＰＡＨ、門脈高血圧症関連ＰＡＨ、先天性心疾患関連ＰＡＨ、住血吸虫症関連ＰＡＨ、慢性溶血性貧血関連ＰＡＨ、新生児の遷延性肺高血圧症、肺静脈閉塞性疾患（ＰＶＯＤ）および肺毛細血管腫症（ＰＣＨ）からなる群から選択される、項目９９の方法。
１０１．患者が哺乳動物、好ましくはヒトである、項目１から１００のいずれか１つの方法。
１０２．生体試料が、体液試料、体組織試料および体内ガス試料からなる群から選択される、項目１から１０１のいずれか１つの方法。
１０３．（ｉ）体液試料が、血液、脳脊髄液（ＣＳＦ）、尿、痰、母乳、耳垢（耳あか）、内リンパ液、外リンパ液、胸膜液、腹水、胃液、粘液、唾液、精液、汗、頬スワブ、涙、およびリキッドバイオプシーからなる群から選択され、（ｉｉ）体組織試料が、皮膚フレーク、皮膚生検、毛包、生検組織、組織外植片および組織切片からなる群から選択され、または（ｉｉｉ）体内ガス試料が、呼気凝縮液および呼気ガスからなる群から選択される、項目１０２の方法。
１０４．血液試料が全血または血液画分である、項目１０３の方法。
１０５．血液画分が、血液細胞画分、血清および血漿からなる群から選択される、項目１０４の方法。
１０６．１種または複数の遊離脂肪酸のレベルが、分光分析法、クロマトグラフィー、酵素的方法、免疫化学的方法、重量測定的方法、化学センサ方法、またはこれらの組合せによって決定される、項目１から１０５のいずれか１つの方法。
１０７．
（ｉ）分光分析法が、質量分光分析法（ＭＳ）、好ましくはタンデム質量分光分析法（ＭＳ／ＭＳ）であり、（ｉｉ）クロマトグラフィーが、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）もしくはアフィニティークロマトグラフィーであり、または（ｉｉｉ）クロマトグラフィーが、分光分析法、好ましくは質量分光分析法（ＭＳ）と組み合わされ、より好ましくは液体クロマトグラフィー−質量分光分析法（ＬＣ−ＭＳ）、最も好ましくは液体クロマトグラフィー−タンデム質量分光分析法（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）である、項目１０６の方法。
１０８．患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するための手段を含むキット。
１０９．トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、膜脂質およびリゾ脂質からなる群から選択される１種または複数の化合物のレベルを決定するための手段をさらに含む、項目１０８のキット。
１１０．患者由来の生体試料の１種または複数の遊離脂肪酸のレベルを決定するための手段が、１種または複数の第１の遊離脂肪酸のレベルを決定するための手段、および１種または複数の第２の遊離脂肪酸のレベルを決定するための手段を含む、項目１０８または１０９のキット。
１１１．項目１から１０７のいずれか１つに従った方法を行うのに有用である、項目１０８から１１０のいずれか１つのキット。
１１２．（ｉ）容器、および／または（ｉｉ）データキャリアをさらに含む、項目１０８から１１１のいずれか１つのキット。
１１３．データキャリアが、項目１から１０７のいずれか１つに従った方法をどのように実施するのかについての指示を含む、項目１１２のキット。
【０２０２】
本発明の様々な改変および変形は、発明の範囲から逸脱することなく、当業者に明らかである。本発明は、特定の好ましい実施形態と関連付けて記載されてきたが、請求されている本発明は、こうした特定の実施形態に不当に限定されるべきでないことが理解されるべきである。実際に、関連分野の当業者に明らかである、本発明を実施するための記載されているモードの様々な改変は、本発明によって包含されていると意図される。
【０２０３】
以下の図は、本発明の単に例示であり、いかなるやり方においても、添付の特許請求の範囲によって示されている本発明の範囲を限定すると解釈されるべきでない。
【実施例】
【０２０４】
下記に示されている実施例は、単に例示的な目的のためであり、いかなるやり方においても、上に記載されている本発明を限定しない。
【実施例１】
【０２０５】
肺高血圧症サブクラス特発性肺動脈高血圧（ＩＰＡＨ）の診断のための代謝バイオマーカーを分析する実験設計
８人のＩＰＡＨ患者および８人の健康なボランティアを、両グループが性別、年齢および肥満度指数（ＢＭＩ）的に一致するように採用した。いずれの当業者にも知られている治験ルーチン標準業務手順書（ＳＯＰ）に従って、全ての人から血液試料を採取し、血清を得た。血清をアリコートし、分析まで−８０℃で貯蔵した。ＬＣ−ＭＳ分析のための試料調製、ＬＣ−ＭＳ分析およびデータ分析を、実施例３に記載されている通りに行った。
【０２０６】
この実験は、健康なヒトと対照的に、肺高血圧症、サブクラスＩＰＡＨを安全に診断できるバイオマーカーを同定し、このバイオマーカーで疾患重症度を判定するように設計した。参照生体試料（健康、血清）および患者生体試料（ＩＰＡＨ、血清）の、単一遊離脂肪酸のレベル（遊離脂肪酸、同義語名および化学総和式の概要は、図１に示されており、単一遊離脂肪酸のレベルについては、図２を参照されたい）、一群の遊離脂肪酸のレベル（図２を参照されたい）、および第１の遊離脂肪酸のレベルと第２の遊離脂肪酸のレベルとの比のレベルを、ｘ倍増加で見出した（図２、図３および図４を参照されたい）。中央参照レベルと対比した患者の中央比の比較は、驚くべきことに見出されたｘ倍増加の統計的有意性を示す。遊離脂肪酸のレベルと、脂質、膜脂質および／またはリゾ脂質のレベルとの比の比較（具体例については、図３を参照されたい）は、驚くべきことに見出されたｘ倍増加の統計的有意性を示す。これらのｘ倍増加は、ＰＨ、具体的にはＩＰＡＨを有する患者を安全に診断でき、該疾患をモニタリングするのに適当である。これらのレベルおよび比は、疾患重症度にアクセスするのに適当であり（こうした実施例比は図５に示されている）、というのは、該レベルおよび比はｍＰＡＰと相関する、即ち、増加するｍＰＡＰとともに増加するからである。ｍＰＡＰは、疾患重症度にアクセスするための現在使用されているパラメータの１つである。しかしながら、ｍＰＡＰを決定することは、右心カテーテル法による決定に起因してより高価であり、侵襲的であり、患者の健康にリスクを課す。そのため、ｍＰＡＰは、スクリーニングのために使用することができず、数日、数週または数カ月など短時間期間において該方法を反復する必要がある疾患モニタリングにも使用することができない。対照的に、ここに表されているレベルおよび比は簡便に、コスト効果的に、かつ患者にとってリスク無く決定することができ、疾患重症度を診断スクリーニングすること、モニタリングすることおよびアクセスすることを可能にする。
【実施例２】
【０２０７】
肺高血圧症の代謝バイオマーカーを用いる、肺高血圧症と、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患およびメタボリック症候群からなる群から選択される少なくとも１つの状態とを識別するための実験設計。
１０人のＩＰＡＨ患者、１３人の健康なボランティア、ならびに糖尿病ＩＩ型および／または肥満を有する９人の患者を、全てのグループが性別、年齢および肥満度指数（ＢＭＩ）的に一致するように採用した。いずれの当業者にも知られている治験ルーチン標準業務手順書（ＳＯＰ）に従って、全ての人から血液試料を採取するとともに血清を得た。血清をアリコートし、分析まで−８０℃で貯蔵した。ＬＣ−ＭＳ分析のための試料調製、ＬＣ−ＭＳ分析およびデータ分析を、実施例３に記載されている通りに行った。
【０２０８】
健康なヒトと対照して、およびメタボリック症候群（糖尿病ＩＩ型および／または肥満）と対照して、肺高血圧症、サブクラスＩＰＡＨを安全に診断できるバイオマーカーを同定するように、この実験を設計した。糖尿病ＩＩ型および肥満は、生体試料の脂質および脂肪酸レベルの増加と相関することがよく知られている。
【０２０９】
患者生体試料（ＩＰＡＨ、血清）の第１の遊離脂肪酸のレベルと第２の遊離脂肪酸のレベルとの比は、参照生体試料（健康、血清）およびメタボリック症候群生体試料（糖尿病および／または肥満、血清）の比に対して、ｘ倍増加で統計的に有意であると見出されており（図６）、疾患肺高血圧症と、肺高血圧症を発症するリスクを伴う疾患およびメタボリック症候群からなる群から選択される少なくとも１つの状態とを安全に識別するためのバイオマーカーを示す。
【実施例３】
【０２１０】
ＬＣ−ＭＳ分析のための試料調製、ＬＣ−ＭＳ分析およびデータ分析
ＬＣ−ＭＳ分析のための試料調製
以下に記載されている通り、高分解能質量分光分析法（ＨＲＭＳ）と連結されている標的化親水性相互作用液体クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）によって、血清試料由来の代謝物を分析した。
【０２１１】
冷メタノールによる代謝物抽出は、公知の記載と同様であった（Ｙｕａｎら、２０１２）。各５０μｌの試料に、予備冷却した（−８０℃）メタノール２００μｌの体積を添加し、混合し、８時間から１６時間（終夜）−８０℃でインキュベートした。タンパク質沈殿物を１０分の遠心分離によって１３，０００ｇで除去し、上澄みを窒素流下で乾燥させ、試料を５０μｌの３０％メタノール中で再構成した。
【０２１２】
ＬＣ−ＭＳ分析
公知の記載（Ｂａｊａｄら、２００６）と同様にして、クロマトグラフィー分離によって、市販のＬｕｎａ  ＮＨ２カラム（２×１５０ｍｍ；３μｍ；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＵＳＡ）上で、Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ３０００  ＵＨＰＬＣシステム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いるＨＩＬＩＣによって、再構成試料を分析した。再構成試料を最大１０μＬまで注入し、分離を１５０μｌ／ｍｉｎの流速、および８５％溶離液Ｂ／１５％溶離液Ａから０％溶離液Ｂ／１００％溶離液Ａの１５分勾配溶出で行い、溶離液Ａは２０ｍＭ酢酸アンモニウム、２０ｍＭ水酸化アンモニウム、９５％水／５％アセトニトリル（ｐＨ９，４５）であり、溶離液Ｂは純粋なアセトニトリルであった。ＵＨＰＬＣシステムを高分解能質量分光計Ｑ−Ｅｘａｃｔｉｖｅ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｂｒｅｍｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に連結した。データ依存断片化を使用して、１４０，０００の分解能にて（ｍ／ｚ２００で）、ｍ／ｚ７０〜１０５０の陽および陰エレクトロスプレーで、フルスキャンスペクトルを記録した。
【０２１３】
試料を、３つの試料のブロックに測定ランダム化し、１つはブランクであり、１つは中間のＱＣであり（全ての試料抽出物から等量のプール）、１つは測定系列の最初と最後にブランク／ＱＣ対であった。
【０２１４】
データ分析
生データをｍｓＣｏｎｖｅｒｔ（ＰｒｏｔｅｏＷｉｚａｒｄ  Ｔｏｏｌｋｉｔ  ｖ３．０．５）（Ｃｈａｍｂｅｒｓ  ２０１２）によってｍｚＸＭＬに変換し、代謝物を自家開発ツールＰｅａｋＳｃｏｕｔによって標的検索した。全ての物質についての分子質量を、文献および利用可能なオンラインデータベース（例えば、ＨＭＤＢ、ＫＥＧＧ、Ｍｅｔｌｉｎ；ＰｕｂＣｈｅｍ）から得た。参照物質を同じシステムで実行することで、保持時間および断片化スペクトルを得た。ＰｅａｋＳｃｏｕｔは、参照リストに従って、標的化質量の±５０ｐｐｍのｍｚ部分を有するクロマトグラムを切り取った。１試料当たり１物質当たりのピーク面積を自動統合し、手動で確認した。断片化スペクトルを適宜手動で再チェックすることで、正確な代謝物同定を確実にした。低い分析品質を有する代謝物を、正確な質量に対するｐｐｍ差異、ピーク保持時間の相対的標準偏差、中央ＱＣピーク面積からの中央ブランクピーク面積の百分率、ＱＣピーク面積の相対的標準偏差、および欠測データの百分率に基づいて取り除いた。
【０２１５】
Ｔｉｂｃｏ（登録商標）Ｓｐｏｔｆｉｒｅ（登録商標）（ｖ７．０．０）を使用するＲ（ｖ３．２．１、パッケージｓｔａｔｓ、ｍｉｓｓＭＤＡ、ｎｌｍｅ）で、結果を統計的に評価した。統計分析より前に、データをｌｏｇ１０変換することで、より良好に正常分布および等分散性に接近した。ｐ値を搬送する分散（ＡＮＯＶＡ、Ｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｏｖ）モデルの簡易分析、続いて、ｑ値を搬送する多重比較のためのＢｅｎｊａｍｉｎｉ−Ｈｏｃｈｂｅｒｇ（Ｒ関数ｐ．ａｄｊｕｓｔ）事後試験によって、非依存性グループ間の差異を分析した。
【実施例４】
【０２１６】
ＰＨを発症するリスクを伴う他の疾患に対する、ＰＨ決定および識別のためのバイオマーカー適合性の確認。
ＰＨを発症するリスクを伴う他の疾患に対するＰＨ決定および識別のためのバイオマーカー適合性の確認に寄与するため、以下の研究を行った。
【０２１７】
試料生成および患者群特徴付け
治験ルーチン標準業務手順書（ＳＯＰ）に従って、全ての個体から血液試料を採取し、血漿（ヘパリンまたはＥＤＴＡ）を得た。血漿試料をアリコートし、分析まで−８０℃で貯蔵した。ＬＣ−ＭＳ分析のための試料調製およびデータ分析を、下に記載されている通りに行った。
【０２１８】
合計で、肺高血圧症患者の３つのサブグループを分析した。特に、
−  肺高血圧症および慢性閉塞性肺疾患を有する１０人の患者（ＰＨ  ＣＯＰＤ）、
−  肺高血圧症および左心疾患を有する１０人の患者（ＰＨ  ＬＶ）、ならびに
−  肺動脈高血圧を有する１１人の患者（ＰＨ  ＰＡＨ）
を分析した。
【０２１９】
性別、年齢およびＢＭＩ的に全ての患者に一致する４５人の健康な対照を該研究に含めた。
【０２２０】
追加として、異なる型の肺疾患を有するが、肺高血圧症を発症するリスクが増加した患者の１つのグループを検査した。特に、
−  慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を有するが、肺高血圧症の兆候を示さない１２人の患者を、肺高血圧症および慢性閉塞性肺疾患（ＰＨ  ＣＯＰＤ）を有する１０人の患者と比較した。
【０２２１】
高分解能質量分光分析法（ＭＳ）と連動した逆相液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用する、ヒト血漿試料の代謝物分析
冷メタノールによる代謝物抽出を、Ｙｕａｎら、２０１２に従って行った。４００μｌの予備冷却メタノールを１００μｌの試料に添加し、混合し、終夜（少なくとも１６時間）−８０℃でインキュベートした。沈殿タンパク質を除去するため、試料を１０分間１７０００ｇにて室温で遠心分離した。ＨＰＬＣ−ＭＳによる遊離脂肪酸の決定のため、上澄みを使用した。
【０２２２】
Ｄｉｏｎｅｘ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ３０００  ＨＰＬＣシステム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（商標）、Ｗａｌｔｈａｍ、ＵＳＡ）を用いて市販されているＡｔｌａｎｔｉｓ  Ｔ３  Ｃ１８カラム（１５０×２．１ｍｍ、３μｍ；Ｗａｔｅｒｓ、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＵＳＡ）上のクロマトグラフィー分離によって、代謝物試料を分析した。注入体積は１試料当たり５μｌであった。代謝物のクロマトグラフィー分離を、均一濃度で３００μｌ／ｍｉｎの流速および４５℃にて１０分内に行った（４５％溶離液Ａ（８０％ＡＣＮ、０．５ｍＭのＮＨ４Ａｃ）、５５％溶離液Ｂ（９９％ＡＣＮ、１％０．５ｍＭのＮＨ４Ａｃ））。質量分析検出をＥｘａｃｔｉｖｅ（商標）Ｏｒｂｉｔｒａｐシステム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（商標）、Ｗａｌｔｈａｍ、ＵＳＡ）で行った。７０．０〜１，１００ｍ／ｚの負の荷電質量を、１０，０００の分解能（＠２００ｍ／ｚ）にて、１０Ｈｚで走査した。
【０２２３】
該測定のため、５つの試料および１つのブランクおよび１つの品質対照試料（ＱＣ、各試料の定義量のプール）、または１つの血漿ウルトラミックス試料と交互に含有するブロックに、試料を層別ランダム化した（ＵＭ、系適合性対照として使用される異なる哺乳動物血漿試料の由来である試料）。
【０２２４】
データ分析
生データをｍｓＣｏｎｖｅｒｔ（ＰｒｏｔｅｏＷＩｚａｒｄ  Ｔｏｏｌｋｉｔ  ｖ  ３．０．５）（Ｃｈａｍｂｅｒｓ  ２０１２）によってｍｚＸＭＬに変換し、自家開発ツールＰｅａｋＳｃｏｕｔを介して標的化代謝物分析を行った。関心対象の代謝物についての分子質量を文献および利用可能なオンラインデータベース（例えばＨＭＤＢ、ＫＥＧＧ、Ｍｅｔｌｉｎ、ＰｕｂＣｈｅｍ）から得た。参照物質の保持時間を代謝物検出のために使用した。
【０２２５】
ＰｅａｋＳｃｏｕｔソフトウェアは、参照リストに従って標的の質量の±５０ｐｐｍのｍｚ部分を有するクロマトグラムを切り取った。１試料当たり１代謝物当たりのピーク面積は、自動統合され、使用者によって確認された。低い分析品質を有する代謝物を、ｐｐｍ差異、ピーク保持時間の相対的標準偏差、および欠測データの百分率に基づいて取り除いた。
【０２２６】
決定されたピーク面積は、代謝物濃度に相関する。これらのピーク面積を使用することで、異なる統計的方法によって試料グループを相対的に比較した。Ｔｉｂｃｏ（登録商標）Ｓｐｏｔｆｉｒｅ（登録商標）ｖ  ７．０．０を使用してＲ（ｃ３．２．１、パッケージｓｔａｔｓ、ｍｉｓｓＭＤＡ、ｎｌｍｅ）を用いて結果を統計的に算出した。統計分析より前に、データをｌｏｇ１０変換することで、より良好に正常分布および等分散性に接近させた。主成分分析（ＰＣＡ）を行い、単位分散（Ｒ関数ｐｒｃｏｍｐ）に中心化およびスケール化した。
【０２２７】
結論として、主成分分析（ＰＣＡ）は、
ＰＨ  ＬＶグループが健康な対照グループと明らかに区別可能であったこと（図７を参照されたい）、
ＰＨ  ＰＡＨグループが健康な対照グループと明らかに区別可能であったこと（図８を参照されたい）、および
ＰＨ  ＣＯＰＤグループが健康な対照グループと明らかに区別可能であったこと（図９を参照されたい）
を示した。
【０２２８】
したがって、本明細書に記載されているバイオマーカーは、ＰＨ  ＬＶ、ＰＨ  ＰＡＨ、およびＰＨ  ＣＯＰＤの診断を可能にする。図７から図９における灰色スポットは、健康な対照グループを表し、図７から図９における黒色スポットは、それぞれの罹患グループを表す。
【０２２９】
加えて、ＰＣＡは、ＣＯＰＤグループがＰＨ  ＣＯＰＤグループと区別可能であることを示した。したがって、本明細書に記載されているバイオマーカーは、ＣＯＰＤとＰＨ  ＣＯＰＤとの識別診断を可能にする。図１０における灰色スポットは、ＣＯＰＤグループを表し、図１０における黒色スポットは、ＰＨ  ＣＯＰＤグループを表す。
【０２３０】
参考文献
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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2019514020.tif 000013
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