(57)【要約】  本発明は、スルホンアミド系化合物を有効成分として含む癌の治療及び転移抑制用薬学的組成物に関する発明で、より詳細にはスルホンアミド系抗生剤のスルフィソキサゾール（Sulfisoxazole）又はスルファドキシン（sulfadoxine）の新しい使用の癌の予防、治療、及び転移抑制効果に関するものである。本発明のスルホンアミド系化合物は、従来知られたいた抗菌効果に加えて、癌細胞の増殖、浸潤、及び移動を阻害する効果が優れて、最適な投与量や副作用等が既に確立されている薬剤であるため、臨床で癌の治療及び転移抑制用組成物に活用できる可能性が極めて高い。
2019500382.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１又は２で表示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、癌の治療用薬学的組成物。
【化１８】
2019500382.tif 000020
【請求項２】
前記癌治療用薬学的組成物が、癌細胞の成長抑制効果、浸潤抑制効果及び転移抑制効果を有することを特徴とする、請求項1記載の組成物。
【請求項３】
前記癌は、子宮頸癌、肺癌、膵臓癌、非小細胞性肺癌、肝臓癌、結腸癌、骨癌、皮膚癌、頭部癌、頸部癌、皮膚黒色腫、眼球内黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肝臓癌、脳腫瘍、膀胱癌、血液癌、胃癌、肛門付近癌、結腸癌、乳癌、卵管癌、子宮内膜癌、膣癌、陰門癌、ホジキン病（Hodgkin’s disease）、食道癌、小腸癌、内分泌腺癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、尿管癌、腎細胞癌腫、腎臟骨盤癌腫、中枢神経系（CNS：central nervous system）腫瘍、中枢神経系原発リンパ腫、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫及び脳下垂体腺腫からなる群より選ばれることを特徴とする請求項1記載の組成物。
【請求項４】
下記化学式１又は２で表示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、癌の転移抑制用薬学的組成物。
【化１９】
2019500382.tif 000021
【請求項５】
前記癌は、子宮頸部癌、肺癌、膵臓癌、非小細胞性肺癌、肝臓癌、結腸癌、骨癌、皮膚癌、頭部癌、頸部癌、皮膚黒色腫、眼球内黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肝臓癌、脳腫瘍、膀胱癌、血液癌、胃癌、肛門付近癌、結腸癌、乳癌、卵管癌、子宮内膜癌、膣癌、陰門癌腫、ホジキン病（Hodgkin’s disease）、食道癌、小腸癌、内分泌腺癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、尿管癌、腎細胞癌腫、腎臟骨盤腫癌、中枢神経系（CNS：central nervous system）腫瘍、中枢神経系原発リンパ腫、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫及び脳下垂体腺腫からなる群より選ばれることを特徴とする、請求項4記載の組成物。
【請求項６】
癌の治療用製剤を製造するための、下記化学式１又は２で表示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
【化２０】
2019500382.tif 000022
【請求項７】
下記化学式１又は２で表示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む組成物の有効量を、これを必要とする個体に投与することを特徴とする、癌の治療方法。
【化２１】
2019500382.tif 000023
【請求項８】
癌の転移抑制用製剤を製造するための、下記化学式１又は２で表示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
【化２２】
2019500382.tif 000024
【請求項９】
下記化学式１又は２で表示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む組成物の有効量を、これを必要とする個体に投与することを特徴とする、癌の転移抑制方法。
【化２３】
2019500382.tif 000025
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スルホンアミド系化合物を有効成分として含む、癌の治療及び転移抑制用薬学的組成物に関する発明で、より詳細には、スルホンアミド系抗生物質であるスルフィソキサゾール（Sulfisoxazole）又はスルファドキシン（Sulfadoxine）の新しい用途の癌の予防、治療及び転移抑制効果に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
本出願は、2015年12月31日に出願された大韓民国特許出願第10-2015-0191448号及び2016年10月31日に出願された大韓民国特許出願10-2016-0143546号に基づく優先権を主張し、前記明細書全体は参照により本出願に援用する。
【０００３】
癌とは、主に制御されていない細胞の増殖から始まり、周囲の正常組織又は器官に浸潤して破壊し、新たな成長場所を作成することができる、個体の命を奪う疾患群を総称する。過去10年余りの間、癌を克服するために、細胞周期及び細胞死滅（apoptosis）の調節、並びに、発癌遺伝子及び癌抑制遺伝子を含む新しい標的の模索において、目覚ましい発展を遂げたにもかかわらず、癌の発生率は、文明の発達に伴い、増加している。
【０００４】
癌の治療方法には、化学療法、手術療法及び放射線治療法等が使用されている。この中で、化学療法は、抗癌剤を利用する方法であって、癌の治療に最も多く使用されている。今日に至っては、約60種余りの様々な抗癌剤が臨床に使用されていて、癌の発生及び癌細胞の特性に対する新しい知見が得られ、新たな抗癌剤が継続的に開発されている。しかし、現在臨床で使用されている抗癌剤の多くは、化学的に合成された物質で、悪心、嘔吐、口腔及び小腸の潰瘍、下痢、脱毛、血液の有効成分の生産が低下する骨髄抑制等の副作用を伴う場合が多い。例えば、マイトマイシンＣ（mitomycin-C）は腎不全症、アドリアマイシン（adriamycin）は骨髄抑制作用等の副作用が知られている。特に、これまでに開発された抗癌剤の中で最も有用な薬剤であるシスプラチン（cisplatin）は、睾丸癌、卵巣癌、肺癌、頭頸部癌、膀胱癌、胃癌、及び子宮頸部癌等の治療に広く使用されているが、貧血等の造血毒性、嘔吐及び吐き気等の消化器毒性、腎臓尿細管の損傷等の腎毒性、難聴、体内の電解質異常、ショック、末梢神経異常等の副作用の発生が大きな問題となっている（非特許文献１）。
【０００５】
従って、従来の抗癌剤が有している副作用及び毒性を解決できる、安全性に優れた新しい抗癌剤の開発が切実に求められている。
【０００６】
一方、既存薬再開発（Drug repositioning）という概念は、臨床で失敗した薬剤又は市販されている既存の医薬品等、既に開発が完了した医薬品を再評価して新しい薬効を発掘して、他の疾病の治療剤として使おうとする試みを意味する。現在、新薬開発のための初期投資費用は増大する一方、失敗の割合は大幅に増え、生産性と収益性が急激に悪化している。このような危機を克服するために、既存薬再開発戦略に使用される既存の薬剤を選択することは、薬剤開発にかかる時間とコストを削減し、開発成功確率を高めることができる、今後の新薬開発の選択肢になり得ると期待される新たなパラダイムと言うことができる。本来、高血圧及び狭心症の治療剤として開発されたが、勃起不全治療剤として広く使用されるバイアグラや、頭痛薬として効能を発揮してきたが、最近は心血管疾患にも効能を示すことが明らかになったアスピリン等がその良い例である。
【０００７】
従って、最適投与量や副作用等が既に確立されている従来の医薬品等を、既存薬再開発を通じて抗癌剤としての新たな用途を発掘して開発することは、抗癌新薬を開発するに当たり、薬剤開発にかかる時間とコストを削減し、副作用に対する予測が可能で、臨床にすぐに応用できる点で好ましいことである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】R.T. Skeel, Handbook of Cancer Chemotherapy, pp.89-91, 1999
【発明の概要】
【０００９】
［発明の詳細な説明］
［技術的課題］
そこで、本発明者らは、FDA承認ライブラリの中で感染症と関連した薬剤243種について抗癌剤としての可能性を探索する中で、スルホンアミド系抗生物質であるスルフィソキサゾール（Sulfisoxazole）又はスルファドキシン（Sulfadoxine）が、癌細胞の増殖、浸潤及び遊走を抑制する効果が優れていることを発見して、本発明を完成した。
【００１０】
本発明の目的は、下記化学式１又は２で表示される化合物、又はこれの薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、癌の治療用薬学的組成物を提供することである。
【００１１】
【化１】
2019500382.tif 000003
【００１２】
本発明の他の目的は、下記化学式１又は２で表示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、癌の転移抑制用薬学的組成物を提供することである。
【００１３】
【化２】
2019500382.tif 000004
【００１４】
本発明の他の目的は、癌の治療用製剤を製造するための、下記化学式１又は２で表示される化合物、又はこの薬学的に許容可能な塩の使用を提供することである。
【００１５】
【化３】
2019500382.tif 000005
【００１６】
本発明の他の目的は、下記化学式１又は２で表示される化合物、又はこの薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む組成物の有効量を、これを必要とする個体に投与することを特徴とする、癌の治療方法を提供することである。
【００１７】
【化４】
2019500382.tif 000006
【００１８】
本発明の他の目的は、癌の転移抑制用製剤を製造するための、下記化学式１又は２で表示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の使用を提供することである。
【００１９】
【化５】
2019500382.tif 000007
【００２０】
本発明の他の目的は、下記化学式１又は２で表示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む組成物の有効量を、これを必要とする個体に投与することを特徴とする、癌の転移抑制方法を提供することである。
【００２１】
【化６】
2019500382.tif 000008
【００２２】
［技術的解決方法］
本発明は、前記の目的を達成するために、下記化学式１又は２で表示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、癌の治療用薬学的組成物を提供する。
【００２３】
【化７】
2019500382.tif 000009
【００２４】
本発明の他の目的を達成するために、下記化学式１又は２で表示される化合物、又はこれの薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、癌の転移抑制用薬学的組成物を提供する。
【００２５】
【化８】
2019500382.tif 000010
【００２６】
本発明の他の目的を達成するために、癌の治療用製剤を製造するための、下記化学式１又は２で表示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。
【００２７】
【化９】
2019500382.tif 000011
【００２８】
本発明の他の目的を達成するために、下記化学式１又は２で表示される化合物、又はこれの薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む組成物の有効量を、これを必要とする個体に投与することを特徴とする、癌の治療方法を提供する。
【００２９】
【化１０】
2019500382.tif 000012
【００３０】
本発明の他の目的を達成するために、癌の転移抑制用製剤を製造するための、下記化学式１又は２で表示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。
【００３１】
【化１１】
2019500382.tif 000013
【００３２】
本発明の他の目的を達成するために、下記化学式１又は２で表示される化合物、又はこれの薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む組成物の有効量を、これを必要とする個体に投与することを特徴とする、癌の転移抑制方法を提供する。
【００３３】
【化１２】
2019500382.tif 000014
【００３４】
前記化学式１は、スルホンアミド系抗生物質であるスルフィソキサゾール（sulfisoxazole）であって、グラム陰性菌及びグラム陽性菌に対して、広範囲な抗菌効果を示す薬剤として使用されており、本発明の技術分野で通常の知識を有する者であれば、公知の方法により製造することができる。例えば、前記化学式１の化合物は、米国特許第2,430,094号に開示された方法により製造することができる。
【００３５】
前記化学式２の化合物は、スルホンアミド系抗生物質であるスルファドキシン（sulfadoxine）であって、主にマラリアを治療するために使用された長期持続型の抗生物質であり、現在は広範囲な耐性のために使用が推奨されていない薬剤である。前記化学式２の化合物は、本発明の技術分野で通常の知識を有する者であれば、公知の方法により製造することができ、例えば、米国特許第3,132,139号に開示された方法により製造することができる。
【００３６】
最近では、スルホンアミド系化合物の抗癌効果が報告されている。特にN-（3-クロロ-1H-インドール-7-イル）-4-スルファモイルベンゼンスルホンアミド、N-（3-シアノ-4-メチル-1H-インドール-7-イル）-3-シアノベンゼンスルホンアミド、N-[[（4-クロロフェニル）アミノ]カルボニル]-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-5-スルホンアミド、N-[[（3,4-ジクロロフェニル）アミノ]カルボニル]-2,3-ジヒドロベンゾフラン-5-スルホンアミド、N-（2,4-ジクロロベンゾイル）-4-クロロフェニルスルホンアミド、N-（2,4-ジクロロベンゾイル）-5-ブロモチオフェン-2-スルホンアミド、2-スルファニルアミド-5-クロロキノキサリン等は、多様なタイプの腫瘍に活性を示すことが報告されているが、前記化学式１又は化学式２で表示される化合物の抗腫瘍活性については報告されたことがなく、これは本発明で初めて公開されるものである。
【００３７】
本発明の一実施例によれば、前記化学式１又は２の化合物は、乳癌細胞株であるMDA-MB231細胞の細胞増殖を効果的に抑制し、癌細胞の浸潤及び遊走を抑制する効果が極めて優れていることが確認された。
【００３８】
また、本発明の他の一実施例によれば、前記化学式１の化合物は、癌細胞が移植されたin vivo 動物モデルにおいて、癌の成長を効果的に阻害し、癌の治療効果を示すことを確認した。
【００３９】
本発明で、前記化学式１又は２の化合物は、癌細胞におけるエキソソームの分泌を抑制することにより、癌細胞の増殖、浸潤及び遊走を抑制する効果を発揮することを特徴とすることができる。エキソソームは身体内の殆どの細胞において分泌され、特に癌細胞において分泌されたエキソソームは、癌の進行過程において、癌の分化、成長、転移、新生血管形成等に影響を与えることが知られている。従って、これらの癌細胞由来のエキソソームの分泌を、薬剤を通じて調節すると、癌の分化、成長、転移等を抑制することができるようになる。
【００４０】
本発明の一実施例によれば、前記化学式１又は２の化合物は、癌細胞におけるエキソソームの分泌を抑制する効果があることが確認され、これらの効果が癌細胞の増殖、浸潤及び遊走を阻害する結果で示されたものと考えられる。
【００４１】
本発明で使用される用語「癌」とは、細胞の死滅調節と関連した疾患であって、正常な細胞死滅（apoptosis）の均衡が崩れることで、細胞が過剰増殖することにより生じる疾病を意味する。これらの異常な過剰増殖した細胞は、場合によっては周囲の組織及び臓器に侵入して腫塊を形成し、体内の正常な構造の破壊や変形を誘発することがあり、このような状態を通称して癌という。
【００４２】
一般的に、腫瘍（tumor）とは、身体組織の自律的な過剰成長によって異常に育った塊を意味し、腫瘍は良性腫瘍（benign tumor）と悪性腫瘍（malignant tumor）とに区分することができる。悪性腫瘍は良性腫瘍に比べて成長速度が極めて速く、周辺の組織に浸潤しながら転移（metastasis）が起こり、生命を脅かすことになる。これらの悪性腫瘍を通常的に「癌」（cancer）と称する。
【００４３】
本発明で、癌の種類は特に制限されない。前記癌の非制限的な例として、子宮頸部癌、肺癌、膵臓癌、非小細胞性肺癌、肝臓癌、結腸癌、骨癌、皮膚癌、頭部癌、頸部癌、皮膚黒色腫、眼球内黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、脳腫瘍、膀胱癌、血液癌、胃癌、肛門付近癌、結腸癌、乳癌、ラッパ管癌腫、子宮内膜癌、膣癌、陰門癌腫、ホジキン病（Hodgkin's disease）、食道癌、小腸癌、内分泌腺癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、尿管癌、腎細胞癌腫、腎臟骨盤癌腫、中枢神経系腫瘍、中枢神経系原発リンパ腫、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫又は脳下垂体腺腫が挙げられる。好ましくは、前記癌は乳癌でもあり得るが、これに限定されるものではない。
【００４４】
本発明に係る薬学的組成物は、本発明の化学式１又は２の化合物、又はこれらの薬学的に許容可能な塩を単独で含むか、又は一つ以上の薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤をさらに含有することができる。
【００４５】
薬学的に許容される担体には、例えば、経口投与用担体又は非経口投与用担体をさらに含むことができる。経口投与用担体は、ラクトース、デンプン、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸等を含むことができる。また、非経口投与用担体は水、適切な油、食塩水、水性グルコース及びグリコール等を含むことができ、安定化剤及び保存剤をさらに含むことができる。適切な安定化剤には、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム又はアスコルビン酸のような抗酸化剤がある。適切な保存剤には塩化ベンザルコニウム、メチルパラベン又はプロピルパラベン及びクロロブタノールがある。その他の薬学的に許容される担体としては、次の文献に記載されていることを参考にすることができる（Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995）。
【００４６】
本発明の薬学的組成物は、ヒトをはじめとする哺乳動物に、如何なる方法でも投与することができる。例えば、経口又は非経口的に投与することができる。非経口的な投与方法としては、これに限定はされないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、頚膜内、心臓内、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、腸管、局所、舌下又は直腸内投与である。好ましくは、本発明の薬学的組成物は経口投与することができる。
【００４７】
本発明の薬学的組成物は、上述した通り、投与経路により、経口投与用又は非経口投与用製剤に製剤化することができる。
【００４８】
経口投与用製剤の場合、本発明の組成物は、粉末、顆粒、錠剤、丸剤、糖衣錠剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁液等、当業界に公知された方法を利用して剤形化することができる。例えば、経口用製剤は、活性成分を固体賦形剤と配合して、これを粉砕して適切な補助剤を添加した後、顆粒混合物に加工することにより、錠剤又は糖衣錠剤を得ることができる。適切な賦形剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、及びマルチトール等を含む糖類と、トウモロコシ澱粉、小麦澱粉、米澱粉、及びジャガ芋澱粉等を含む澱粉類、セルロース、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、及びヒドロキシプロピルメチルセルロース等を含むセルロース類、ゼラチン、ポリビニルピロリドン等の充填剤を含むことができる。また、場合によっては、架橋結合ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸又はアルギン酸ナトリウム等を崩解剤として添加することができる。さらに、本発明の薬学的組成物は、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤及び防腐剤等をさらに含むことができる。
【００４９】
非経口投与用製剤の場合、注射剤、クリーム剤、ローション剤、外用軟膏剤、オイル剤、保湿剤、ゲル剤、エアロゾル及び鼻腔吸込器の形で、当業界に公知された方法で剤形化することができる。これらの剤形は、全ての製薬化学において一般的に公知された処方書である文献（Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87：Blaug, Seymour）に記載されている。
【００５０】
本発明の薬学的組成物の総有効量は、単回投与（single dose）で患者に投与でき、複数回投与（multiple dose）で長期間投与される分割治療方法（fractionated treatment protocol）によって投与することもできる。本発明の薬学的組成物は、疾患の程度に応じて有効成分の含量を変えることができる。好ましくは、本発明の好ましい全容量は、1日当たり患者の体重１kg当たり約0.01ug乃至1000mg、最も好ましくは0.1μg乃至100mgである。しかし、前記本発明の薬学的組成物の投与量は、投与経路及び治療回数だけでなく、患者の年齢、体重、健康状態、性別、疾患の重症度、食餌及び排泄率等、多様な要因を考慮して、患者に対する有効投与量が決定されるので、これらの点を考慮すると、当分野の通常の知識を有する者であれば、前記本発明の薬学的組成物について、癌の予防及び治療剤としての特定の用途に応じた適切な有効投与量を決定することができる。本発明に係る薬学的組成物は、本発明の効果を示す限り、その剤形、投与経路及び投与方法に特に制限されない。
【００５１】
本発明の薬学的組成物は、前記化学式１又は２の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩以外に、公知の抗癌剤又は血管新生阻害剤をさらに含むことができ、癌の治療のために公知の他の治療と併用することができる。他の治療には、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、骨髄移植、幹細胞代替療法、他の生物学的治療、免疫治療等が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００５２】
本発明の薬学的組成物に含まれ得る抗がん剤の例には、メクロエタミン（mechloethamine）、クロラムブチル（chlorambucil）、フェニルアラニン（phenylalanine）、ムスタド（mustard）、シクロホスファミド（cyclophosphamide）、イホスファミド（ifosfamide）、カルムスチン（carmustine：BCNU）、ロムスチン（lomustine：CCNU）、ストレプトゾトシン（streptozotocin）、ブスルファン（busulfan）、チオテーパー（thiotepa）、シスプラチン（cisplatin）及びカルボプラチン（carboplatin）等のDNAアルキル化剤（DNA alkylating agents）;ドクチノマイシン（dactinomycin：actinomycin D）、ドキソルビシン（doxorubicin：adriamycin）、ダウノルビシン（daunorubicin）、イダルビシン（idarubicin）、ミトキサントロン（mitoxantrone）、プリカマイシン（plicamycin）、マイトマイシン（mitomycin）及びＣブレオマイシン（C Bleomycin）等の抗癌抗生剤 （anti-cancer antibiotics）;及びビンクリスチン（vincristine）、ビンブラスチン（vinblastine）、パクリタキセル（paclitaxel）、ドセタキセル（docetaxel）、エトポーサイド（etoposide）、テニフォーサイド（teniposide）、トポテカン（topotecan）及びイリドテカン（iridotecan）等の植物アルカロイド（plant alkaloids）等が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００５３】
本発明は、また、下記化学式１又は２で表示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、癌の転移抑制用薬学的組成物を提供する。
【００５４】
【化１３】
2019500382.tif 000015
【００５５】
癌転移は、原発性癌から癌細胞が他の臓器に広がって新しい癌を形成するものである。転移は、様々な癌患者の命に対する大きな脅威であるため、転移を予防し、調節することは、癌研究分野の重要目標である。転移がない初期に診断された場合には、手術、化学治療、又は放射線治療が効果的ではあるが、診断時に転移がある場合には、これらの治療効果は減少する。これだけでなく、診断時に転移を確認できなかったが、転移が治療中や治療後に確認される場合もしばしばある。臨床的に癌の転移の重要性が高いものの、転移過程は未だ完全には理解されていない状態である。
【００５６】
転移は、浸透（invasion）、血管内流入（intravasation）、停止（arrest）、血管外排出（extravasation）、及び、定着（colonization）等の連続的な段階で構成されており、この過程を通じて、原発臓器から始まり、最終的に他の臓器に癌を形成することになる。最初の段階の浸透は転移の初期段階で、癌細胞の細胞間又は細胞外基質との相互作用の変化、周辺組織の分解、そして組織内への癌細胞の遊走等を含む。第二段階である血管内流入は、癌細胞が血管やリンパ管の内皮細胞を通過して、全身的な循環に含まれることである。流入した癌細胞の内、ごく一部分だけが循環過程で生き残ることが確認されている。生き残った一部の癌細胞は、他の部位の毛細管内皮細胞を透過する血管外排出に成功して新しい環境に適応し、増殖して転移癌を形成する。
【００５７】
本発明の一実施例によると、本発明者らは、マトリゲル浸潤分析法（Matrigel invasion assay）によって、前記化学式１又は２の化合物が、癌細胞の細胞外基質を浸潤する能力を大幅に減少させる効果があることを発見した。癌細胞が遠隔部位に転移するためには、原発腫瘍から血管及びリンパ管に浸潤しなければならず、血管及びリンパ管から遠隔部位に再度浸潤して入らなければならないが、この過程は、原発腫瘍と血管及びリンパ管を囲む基底膜（basement membrane）を分解してこそ可能である。マトリゲルは基底膜を構成する成分と類似した細胞外基質（extracellular matrix）成分で構成されているので、マトリゲルを浸潤する能力は、転移能力を示す重要な指標として活用することができる。
【００５８】
本発明の他の一実施例によれば、前記化学式１又は２の化合物を癌細胞に処理した結果、癌細胞の遊走が顕著に減少することを確認した。
【００５９】
つまり、前記化学式１又は２の化合物は、癌細胞の浸潤及び遊走を阻害して癌細胞の転移を抑制する効果が優れている。
【００６０】
本発明で前記薬学的組成物に対する内容は前述した通りである。
【００６１】
本発明は、癌の治療用製剤を製造するための下記化学式１又は２で表示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。
【００６２】
【化１４】
2019500382.tif 000016
【００６３】
本発明は、下記化学式１又は２で表示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む組成物の有効量を、これを必要とする個体に投与することを特徴とする、癌の治療方法を提供する。
【００６４】
【化１５】
2019500382.tif 000017
【００６５】
本発明は、癌の転移抑制用製剤を製造するための、下記化学式１又は２で表示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。
【００６６】
【化１６】
2019500382.tif 000018
【００６７】
本発明は、化学式１又は２で表示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む組成物の有効量を、これを必要とする個体に投与することを特徴とする、癌の転移抑制方法を提供する。
【００６８】
【化１７】
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【００６９】
本発明の前記“有効量”とは個体に投与したとき、癌の改善、治療、予防、検出、診断、又は癌転移抑制又は減少効果を示す量を意味し、前記“個体”とは、動物、好ましくは哺乳動物、特に、人間を含む動物であることができ、動物から由来した細胞、組織、器官等であってもよい。前記個体は前記の効果が必要な患者（patient）であってもよい。
【００７０】
本発明の前記“治療”とは、癌又は癌関連疾患又は癌関連疾患の症状を改善させることを包括的に指称して、これらの疾患を治癒したり、実質的に予防するか又は状態を改善させることを含むことができ、癌又は癌関連疾患から始まった一つの症状又は殆どの症状を緩和させたり、癒したり、予防することを含むものの、これに制限されるものではない。
【００７１】
［有利な効果］
本発明のスルホンアミド系化合物は、従来知られた抗菌効果に加えて、癌細胞の増殖、浸潤及び遊走を阻害する効果が優れており、最適な投与量や副作用等が既に確立されている薬剤であるため、臨床で癌の予防、治療及び転移抑制用組成物に活用することができる可能性が極めて優れている。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】図１は、スルフィソキサゾール（Sulfisoxazole）のMDA-MB231癌細胞の増殖抑制能を評価した結果である。
【図２】図２は、スルファドキシン（Sulfadoxine）のMDA-MB231癌細胞の増殖抑制能を評価した結果である。
【図３】図３は、スルフィソキサゾール（Sulfisoxazole）の癌細胞浸潤抑制効果をマトリゲル浸潤分析法で確認した結果である。
【図４】図４は、スルファドキシン（Sulfadoxine）の癌細胞浸潤抑制効果をマトリゲル浸潤分析法で確認した結果である。
【図５】図５は、スルフィソキサゾール（Sulfisoxazole）の癌細胞の遊走能抑制効果を評価した結果である（A：顕微鏡観察の結果、B：Ｔスクラッチ定量結果）。
【図６】図６は、スルファドキシン（Sulfadoxine）の癌細胞の遊走能抑制効果を評価した結果である（A：顕微鏡観察の結果、B：Ｔスクラッチ定量結果）。
【図７】図７は、MDA-MB231細胞が移植された動物モデルで、スルフィソキサゾール（Sulfisoxazole、SFS）投与による癌の成長阻害効果を評価した結果である（A：投薬終了時点での腫瘍サイズの平均値、B：投薬終了時点での各マウスの腫瘍サイズ、C：時間の経過に伴うマウス群別の腫瘍サイズの平均値）。
【図８】図８は、黒色腫細胞であるSK-MEL-28、乳癌細胞であるMDA-MB231、MCF7及びSK-BR3、大腸癌細胞であるHCT116及びHT-29、肺癌細胞であるH157、H460、前立腺癌細胞であるLNCaP、正常細胞であるL132で、スルフィソキサゾール（Sulfisoxazole）処理によるエキソソーム分泌抑制効果を評価した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００７３】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００７４】
但し、下記の実施例は、本発明を例示するものであり、本発明の内容が下記の実施例に限定されるものではない。
【００７５】
＜実施例１＞
＜１−１＞  試料の準備
スルフィソキサゾール（Sulfisoxazole）はsigma（31739）、スルファドキシン（Sulfadoxin）はsigma（S7821）、ドセタキセル（Docetaxel）はsigma（01885）から購入した。細胞実験のためにDMSO（Dimethylsulfoxide）に溶かして使用した。
【００７６】
＜１−２＞  細胞培養
黒色腫細胞であるSK-MEL-28、乳癌細胞であるMDA-MB231、MCF7及びSK-BR3、大腸癌細胞であるHCT116及びHT-29、肺癌細胞であるH157及びH460、前立腺癌細胞であるLNCaP、正常細胞であるL132は、American Tissue Culture Collection（ATCC）から分譲を受けた。MDA-MB231、MCF7、HCT116、HT-29及びL132細胞は、高グルコースDMEM（Hyclone）に10％ウシ胎児血清（Hyclone）、グルタミン、ペニシリン及びストレプトマイシンを入れて培養して使用した。SK-MEL-28細胞は、MEM/EBSS（Hyclone）に10％ウシ胎児血清（Hyclone）、グルタミン、ペニシリン及びストレプトマイシンを入れて培養して使用した。SK-BR3、H157、H460及びLNCaP細胞は、RPMI（Hyclone）に10％ウシ胎児血清（Hyclone）、グルタミン、ペニシリン及びストレプトマイシンを入れて培養して使用した。
【００７７】
＜実施例２＞  癌細胞増殖抑制効果
MDA-MB231細胞を、24-ウェルプレートに1×104/ウェルで植えた後、12時間培養して細胞の安定化時間を確保した。12時間培養後、スルフィソキサゾールとスルファドキシンを25、50、100、200μMで処理した後、24時間ごとに薬剤を再処理した。その後、各時間別にMTTテトラゾリウム試薬で処理した後、4時間培養した。4時間後、還元されたMTTホルマザン（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide）を495nm吸光度で測定して、細胞増殖効果を確認した。現在使用されている抗癌剤であるドセタキセル（10μM）を対照群として使用した。
【００７８】
これに対する結果を図１及び図２に示した。
【００７９】
図１に示した通り、スルフィソキサゾールを処理したMDA-MB231細胞株の増殖が濃度依存的に抑制される結果が現れ、図２に示した通り、スルファドキシンを処理したMDA-MB231細胞株の増殖も、対照群と比べて著しく抑制されることが確認できた。
【００８０】
＜実施例３＞  癌細胞の浸潤抑制効果
24-ウェルプレートに8ポアサイズのインサートを配置した後、無血清培地とマトリゲルを利用してコーティングし、37℃に4時間置いて固めた。下側チャンバーに10％FBSを800μL入れて、上側チャンバーにはMDA-MB231細胞を1×104個入れて、スルフィソキサゾール又はスルファドキシン薬剤を25、50、100、200μMで処理した。48時間後、インサート内のマトリゲルを除去し、PBSで洗浄した後、チャンバーの下の部分を60％エタノールで固定し、クリスタルバイオレットで染色した。
【００８１】
これに対する結果を図３及び図４に示した。
【００８２】
図３及び図４に示した通り、スルフィソキサゾール又はスルファドキシンを処理したグループで、対照群と比べて癌細胞の浸潤が著しく抑制されたことを確認できた。
【００８３】
＜実施例４＞  癌細胞の遊走抑制効果
MDA-MB231細胞を、24-ウェルプレートに各ウェル当り2×105個植えた後、単層で増殖させるために24時間培養した。24時間培養後、イエローチップを用いて直線で掻き出した。浮遊している細胞を除去するためにPBSで洗浄した後、写真撮影をして（0h）、その後2％血清が入っている培地に薬剤を入れて細胞に処理して、24時間培養した。24時間後、同じ位置で写真を撮影して（24h）、細胞遊走能を比較した。細胞遊走能の測定はＴスクラッチプログラムを用いた。
【００８４】
これに対する結果を図５及び図６に示した。
【００８５】
図５及び図６に示した通り、対照群は多くの癌細胞が中央に遊走したが、スルフィソキサゾール又はスルファドキシンを処理したグループでは、濃度依存的に癌細胞の遊走能が抑制されたことが確認できた。
【００８６】
＜実施例５＞  動物モデルでの薬剤の抗癌効果
乳癌細胞株であるMDA-MB231細胞をBalb/cヌード免疫不全マウス皮下に5×106個植えた後、腫瘍塊が3〜4mmになった時、薬剤投与を開始した。スルフィソキサゾールは口腔投与で生理食塩水と共に、1日1回、合計21回投与し、3日に一度カリパスを利用して腫瘍体積（tumor volume）を測定した。また、薬剤投与最終日に、各個体別に腫瘍体積を測定した後、グラフで示した。これに対する結果を図７に示した。
【００８７】
図７に示した通り、食塩水のみを投与したマウスでは、時間の経過に応じて癌組織の成長がはっきり現れ、一方、スルフィソキサゾールを0.5g/kg投与したマウスでは、癌組織の成長が大幅に減少したことを確認することができた。
【００８８】
＜実施例６＞  エキソソーム分泌抑制効果
黒色腫細胞であるSK-MEL-28、乳癌細胞であるMDA-MB231、MCF7及びSK-BR3、大腸癌細胞であるHCT116及びHT-29、肺癌細胞であるH157及びH460、前立腺癌細胞であるLNCaP、正常細胞であるL132を15cmプレートに5×106個植えた後、24時間培養した。24時間培養後、培地を除去し、PBSで細胞を洗浄し、無血清培地と共に薬剤を25、50、100μMの濃度で処理した。24時間培養後、培地を除去して300xgで3分、2500xgで15分、10,000xgで30分遠心分離した後、上澄み液を200nmシリンジフィルターでろ過し、120,000xgで90分の超高速遠心分離を行い、エキソソームを得た。その後ナノサイトLM10（Malvern）を用いて、細胞が分泌したエキソソームの数を測定した。
【００８９】
これに対する結果を図８に示した。
【００９０】
図８に示した通り、薬剤を処理した細胞では、対照群と比べて、濃度依存的にエキソソームの分泌を抑制することを確認できた。
【産業上の利用可能性】
【００９１】
本発明のスルホンアミド系化合物は、従来知られていた抗菌効果に加えて、癌細胞の増殖、浸潤、及び遊走を阻害する効果が優れており、最適な投与量や副作用等が既に確立されている薬剤であるため、臨床で癌の予防、治療及び転移抑制用組成物に活用できる可能性が極めて優れており、産業上の利用可能性が高い。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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