(57)【要約】本開示は、変数が本明細書で定義される式の、医薬剤を提供する。そのような医薬剤を含む、医薬組成物、キットおよび製造品も提供される。様々な疾患および障害を処置するために医薬剤を使用する方法も、提供される。下記の式において、Ａは、Ｃ−Ｈ、Ｃ−ＯＨ、またはＮであり；Ｒ’は、水素、アルキル（Ｃ≦８）、置換アルキル（Ｃ≦８）、またはｉｎ  ｖｉｖｏで水素に変換可能な置換基であり；ＸおよびＹは、それぞれ独立して、シアノ、ハロ、フルオロアルコキシ（Ｃ１〜２）、アルキル（Ｃ１〜２）、またはフルオロアルキル（Ｃ１〜２）であり、但しＸおよびＹが両方ともシアノまたはアルキル（Ｃ１〜２）ではないことを条件とする。2019500355.tif 000138
2019500355.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１１４】
2019500355.tif 000133
の化合物、または上記式の薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であって、式中、
Ａは、Ｃ−Ｈ、Ｃ−ＯＨ、またはＮであり、
Ｒ’は、水素、アルキル（Ｃ≦８）、置換アルキル（Ｃ≦８）、またはｉｎ  ｖｉｖｏで水素に変換可能な置換基であり、
ＸおよびＹは、それぞれ独立して、シアノ、ハロ、フルオロアルコキシ（Ｃ１〜２）、アルキル（Ｃ１〜２）、またはフルオロアルキル（Ｃ１〜２）であり、但しＸおよびＹが両方ともシアノまたはアルキル（Ｃ１〜２）ではないことを条件とする、
化合物、または薬学的に許容される塩もしくは互変異性体。
【請求項２】
以下：
【化１１５】
2019500355.tif 000134
とさらに定義される、請求項１に記載の化合物、または上記式の薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であって、式中、
Ａは、Ｃ−ＯＨまたはＮであり、
Ｒ’は、水素、アルキル（Ｃ≦８）、置換アルキル（Ｃ≦８）、またはｉｎ  ｖｉｖｏで水素に変換可能な置換基であり、
ＸおよびＹは、それぞれ独立して、シアノ、ハロ、フルオロアルコキシ（Ｃ１〜２）、アルキル（Ｃ１〜２）、またはフルオロアルキル（Ｃ１〜２）であり、但しＸおよびＹが両方ともシアノまたはアルキル（Ｃ１〜２）ではないことを条件とする、
化合物、または薬学的に許容される塩もしくは互変異性体。
【請求項３】
ＡがＮである、請求項１または請求項２のいずれかに記載の化合物。
【請求項４】
ＡがＣ−ＯＨである、請求項１または請求項２のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ’が水素である、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｘがハロである、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｘが、−Ｆ、−Ｃｌ、または−Ｂｒである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｘが−Ｆである、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｘが−Ｃｌである、請求項７に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｘが−Ｂｒである、請求項７に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｘがフルオロアルコキシ（Ｃ１〜２）である、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｘが−ＯＣＦ３である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｘがフルオロアルキル（Ｃ１〜２）である、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｘが−ＣＨＦ２である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｘが−ＣＦ３である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｘがアルキル（Ｃ１〜２）である、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｘが−ＣＨ３である、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｙがハロである、請求項１から１７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｙが−Ｆ、−Ｃｌ、または−Ｂｒである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｙが−Ｆである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｙが−Ｃｌである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｙが−Ｂｒである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｙがフルオロアルコキシ（Ｃ１〜２）である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｙが−ＯＣＦ３である、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｙがフルオロアルキル（Ｃ１〜２）である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｙが−ＣＨＦ２である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｙが−ＣＦ３である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｙがアルキル（Ｃ１〜２）である、請求項１から１５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｙが−ＣＨ３である、請求項２８に記載の化合物。
【請求項３０】
ＸおよびＹが、それぞれ独立して、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＯＣＦ３、−ＣＨ３、−ＣＨＦ２、および−ＣＦ３からなる群より選択され、但しＸおよびＹが両方とも−ＣＨ３ではない、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３１】
βと標識された炭素原子が、Ｓ立体配置にある、請求項１から３０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３２】
以下：
【化１１６】
2019500355.tif 000135
【化１１７】
2019500355.tif 000136
【化１１８】
2019500355.tif 000137
とさらに定義される、請求項１に記載の化合物、または上記式のいずれかの薬学的に許容される塩もしくは互変異性体。
【請求項３３】
前記化合物が、α５β１、αｖβ１、α８β１、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、およびαｖβ８からなる群より選択される３種またはそれよりも多くのＲＧＤインテグリンを阻害するのに有効であり、前記化合物の有効性が、それぞれのインテグリンの機能に関して固相受容体アッセイ（ＳＰＲＡ）を使用して測定したときに、前記３種またはそれよりも多くのＲＧＤインテグリンのそれぞれに関して１０ｎＭ未満のＩＣ５０値に相当する、請求項１から３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３４】
ラット１ｋｇ当たり化合物１ｍｇを含むｉｖボーラスを使用してラットで測定したときに、少なくとも２時間の持続的な血漿中半減期を有する、請求項１から３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３５】
ａ）請求項１から３４のいずれか一項に記載の化合物と、
ｂ）賦形剤と
を含む、医薬組成物。
【請求項３６】
疾患または障害の処置および／または予防を必要とする患者において前記疾患または前記障害を処置および／または予防する方法であって、請求項１から３４のいずれか一項に記載の化合物を、前記疾患または前記障害を処置および／または予防するのに十分な量で前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項３７】
前記疾患または前記障害が血管新生に関連する、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記疾患または前記障害が線維症に関連する、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記疾患または前記障害が、線維症および／または血管新生に関連する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
前記疾患または前記障害が、肺、肝臓、腎臓、心臓、および膵臓の線維症、強皮症、瘢痕化、未熟児網膜症、家族性滲出性硝子体網膜症、増殖性硝子体網膜症、黄斑変性症、糖尿病性網膜症、がん、骨粗しょう症、自己免疫疾患、悪性体液性高カルシウム血症、パジェット病、歯周病、乾癬、関節炎、再狭窄、および感染である、請求項３６から３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記疾患または前記障害が、肺線維症である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記疾患または前記障害が、肝線維症である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記疾患または前記障害が、心線維症である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記疾患または前記障害が、腎線維症である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
前記疾患または前記障害が、膵線維症である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４６】
前記疾患または前記障害が、強皮症である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４７】
前記疾患または前記障害が、瘢痕化である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４８】
前記瘢痕化が皮膚瘢痕化である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記瘢痕化が網膜瘢痕化である、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
前記瘢痕化が角膜瘢痕化である、請求項４７に記載の方法。
【請求項５１】
前記疾患または前記障害が、未熟児網膜症である、請求項４０に記載の方法。
【請求項５２】
前記疾患または前記障害が、家族性滲出性硝子体網膜症である、請求項４０に記載の方法。
【請求項５３】
前記疾患または前記障害が、増殖性硝子体網膜症である、請求項４０に記載の方法。
【請求項５４】
前記疾患または前記障害が、黄斑変性症である、請求項４０に記載の方法。
【請求項５５】
前記疾患または前記障害が、糖尿病性網膜症である、請求項４０に記載の方法。
【請求項５６】
前記疾患または前記障害が、がんである、請求項４０に記載の方法。
【請求項５７】
前記がんが、充実性腫瘍増殖または新形成を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記がんが、腫瘍の病部転位を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
前記がんが、膀胱、血液、骨、脳、乳房、中枢神経系、頚部、結腸、子宮内膜、食道、胆のう、生殖器、尿生殖路、頭、腎臓、喉頭、肝臓、肺、筋組織、首、口または鼻の粘膜、卵巣、膵臓、前立腺、皮膚、脾臓、小腸、大腸、胃、精巣、または甲状腺のがんである、請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
前記がんが、癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、またはセミノーマである、請求項５６に記載の方法。
【請求項６１】
前記疾患または前記障害が、骨粗しょう症である、請求項４０に記載の方法。
【請求項６２】
前記疾患または前記障害が、自己免疫疾患である、請求項４０に記載の方法。
【請求項６３】
前記自己免疫障害が、多発性硬化症である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記疾患または前記障害が、悪性体液性高カルシウム血症である、請求項４０に記載の方法。
【請求項６５】
前記疾患または前記障害が、パジェット病である、請求項４０に記載の方法。
【請求項６６】
前記疾患または前記障害が、歯周病である、請求項４０に記載の方法。
【請求項６７】
前記疾患または前記障害が、乾癬である、請求項４０に記載の方法。
【請求項６８】
前記疾患または前記障害が、関節炎である、請求項４０に記載の方法。
【請求項６９】
前記関節炎が、関節リウマチである、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記疾患または前記障害が、再狭窄である、請求項４０に記載の方法。
【請求項７１】
前記疾患または前記障害が、感染である、請求項４０に記載の方法。
【請求項７２】
前記患者が、ヒト、サル、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、モルモット、またはそれらのトランスジェニック種である、請求項３６から７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記患者が、サル、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、またはモルモットである、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記患者が、ヒトである、請求項７２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、２０１５年１２月３０日に出願された米国出願第６２／２７３，２４６号（この全体の内容は、参考として本明細書に援用される）への優先権の利益を主張する。
【０００２】
Ｉ．発明の分野
本開示は、医薬品、薬、および細胞生物学の分野に関する。より詳細には、本開示は、血管新生および線維症の病理学的過程を媒介する１種または複数のインテグリンのアンタゴニストとしての生物活性を備える、インテグリン受容体アンタゴニストとして有用な医薬剤（化合物）に関する。したがって、使用され得るこれらの化合物は、そのようなインテグリンの１種または複数によって媒介される状態を含む疾患および障害を処置するための医薬組成物および方法において、有用である。
【背景技術】
【０００３】
ＩＩ．関連分野の説明
インテグリンは、他の細胞とのおよび細胞外マトリクスとの細胞相互作用を媒介する、内在性細胞質膜タンパク質のファミリーである。インテグリンファミリーのメンバーのおよそ３分の１は、それらの同族タンパク質リガンドの配列内に含有される、特異的なアミノ酸モチーフ、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸（ＲＧＤ）に直接結合する。ＲＧＤ配列を含有するペプチドおよびＲＧＤ配列を模倣する合成小分子化合物は、これらのインテグリン受容体に、特異性の様々な程度で結合することが可能であり、それによって正常な生理学的リガンドへの結合が阻害されることが、当技術分野で確立されている（Ｍｉｌｌａｒｄ、２０１１年；Ｓｕｎら、２０１４年）。そのような薬剤による処置の生物学的効果は、ある期間にわたり体組織においてどの程度まで特定のインテグリンまたはインテグリンの組合せが阻害されるのかを決定する、構造に反映される固有の分子特性に依存する。
【０００４】
多くのヒト疾患は、２つの一般的に寄与する病理学的メカニズム：血管新生および線維症の、いずれかまたは両方によって特徴付けられる。ＲＧＤ結合インテグリンの異なるサブセットには、これらの二重プロセスを推進する際の主な役割があり、したがって血管新生および線維症の同時拮抗作用は、いくつかの標的インテグリンを強力に結合することが可能な薬剤を必要とする。これらの薬剤は、それらのより制限された作用メカニズムに起因していくつかの適用例ではそれほど有効ではないと考えられる、単一インテグリンに結合するよう特異的に設計された薬剤とは対照的である。
【０００５】
血管新生を促進させる際の役割があることが示されてきたインテグリンには、αｖβ３、αｖβ５、およびα５β１が含まれる。αｖβ３およびαｖβ５は、当初、角膜または漿尿膜（ｃｈｏｒｉａｌｌａｎｔｏｉｃ）モデルにおけるそれぞれｂＦＧＦ−およびＶＥＧＦ−誘導血管新生の媒介因子と記述された。これらのインテグリンに欠けるマウスを使用した研究からの後続のデータは、α５β１に関する重要な機能的役割も裏付ける。インテグリンα５β１（ＶＬＡ−５としても公知である。）はしばしば、この細胞外マトリクスタンパク質に対するその十分特徴付けられた相互作用を反映する、「古典的フィブロネクチン受容体」と呼ばれる。α５β１を発現する細胞は、第９および第１０のＩＩＩ型フィブロネクチン反復を組み込む領域でフィブロネクチンと結合し、その後者は、インテグリン結合に極めて重要なＲＧＤモチーフを含有する。フィブロネクチンに加え、α５β１は、フィブリノーゲン、変性コラーゲン、およびフィブリリン−１を含む他のＲＧＤ含有細胞外マトリクスタンパク質と相互作用することが報告されている（Ｂａｘら、２００３年；Ｐｅｒｄｉｈ、２０１０年；Ｓｕｅｈｉｒｏら、２０００年）。これらのリガンドは、組織における創傷治癒応答の部分として、細胞が設定した仮のマトリクスの構成成分である。この応答の重要な構成成分は、急性損傷の治癒に有益であるが多くの疾患の文脈では有害である可能性がある、血管新生（新しい血管の形成）および線維症（瘢痕の形成）である。
【０００６】
ＲＧＤ結合インテグリンのアンタゴニストは、それらの病理の主要な部分として血管新生または線維症がある、ヒト疾患の処置に有用であるべきである。特に、血管新生におけるα５β１の重要な役割は、数多くの研究によって裏付けされる。例えば、このインテグリンに欠けるマウスは、胚性および胚体外血管構造の両方に欠陥を含む表現型で、１０〜１１日目に胚性致死を示す（Ｙａｎｇら、１９９３年）。ｂＦＧＦ、ＩＬ−８、ＴＧＦβ、およびＴＮＦαなどの血管新生サイトカインは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでの内皮細胞でのα５β１の発現を上方調節し、免疫組織化学は、様々なタイプのヒト腫瘍生検および動物における異種移植腫瘍からの血管内のα５β１およびフィブロネクチン染色の両方で協調的な増加を示す（Ｃｏｌｌｏ、１９９９年；Ｋｉｍら、２０００年）。α５β１を特異的に阻害するモノクローナル抗体、およびα５β１阻害剤として記述されてきた化合物は、いくつかの実験モデルにおいて血管新生を著しく低減させる（Ｋｉｍら、２０００年；Ｂｈａｓｋａｒら、２００７年；Ｌｉｖａｎｔら、２０００年；Ｚａｈｎら、２００９年）。
【０００７】
α５β１の発現は内皮に限定されないので、血管新生に加えて他の機能的役割を有する。線維芽細胞、造血および免疫細胞、平滑筋細胞、上皮細胞、および腫瘍細胞を含む多くの細胞型で、様々な程度で発現する。腫瘍細胞上での発現は、腫瘍成長および転移の進行に関わっている（Ａｄａｃｈｉら、２０００年；Ｂｌａｓｅら、１９９５年；Ｄａｎｅｎら、１９９４年；Ｅｄｗａｒｄ、１９９５年）。ヒト線維芽細胞において、α５β１は、運動性および生存を促進させる（Ｌｏｂｅｒｔら、２０１０年）。膵臓の星細胞では、結合組織成長因子と相互作用して、接着、移行、および線維発生を刺激する（ＧａｏおよびＢｒｉｇｓｔｏｃｋ、２００６年）。α５β１の薬理学的拮抗作用は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのヒト網膜上皮細胞の付着  移行、および増殖を阻害し、網膜剥離のウサギの硝子体内に投与したときに網膜細胞増殖および瘢痕化を低減させることが示されてきた（Ｌｉら、２００９年；Ｚａｈｎら、２０１０年）。
【０００８】
α５β１の他に、器官損傷後に上方調節されるベータ−１ファミリーの別のＲＧＤ結合インテグリンは、α８β１である。研究は、このインテグリンが、線維症の主要な細胞媒介因子である組織筋線維芽細胞マーカーと、同時発現することを示している（Ｌｅｖｉｎｅら、２０００年；Ｂｏｕｚｅｇｈｒａｎｅら、２００４年）。細胞に与えられたα８β１の異所性発現は、ＲＧＤ依存性の主要な線維化促進サイトカインである潜在型ＴＧＦβの拡散および接着を増大させた（Ｌｕら、２００２年）。
【０００９】
アルファｖファミリーのＲＧＤ結合インテグリンは、潜在型線維化促進サイトカインＴＧＦβの生物学的活性化を促進させることに関係付けられている。これは、特にαｖβ６およびαｖβ８によって、しかし同様にαｖβ１、αｖβ３、およびαｖβ５によって、潜伏関連ペプチド（ＬＡＰ）に結合することにより媒介される。さらに、アルファｖインテグリンは、創傷修復過程に関連した多様な細胞型における付着、移行、増殖、およびその他の機能を媒介する。この機能的冗長性、差次的細胞発現、およびインテグリンノックアウトマウスの公知の線維症表現型は全て、このサブセット全体の非常に強力なアンタゴニストが、治療開発に特に有用になり得ることを示唆する。ＴＧＦβ活性化を達成するには、これらのインテグリンは全て、ＬＡＰに含有されるアミノ酸配列ａｒｇ−ｇｌｙ−ａｓｐ（ＲＧＤ）に決定的に依存する。事実、ＬＡＰのＲＧＤ配列中に変異を含有するマウスは、ＴＧＦβ活性化が不可能であり、ＴＧＦβ−ヌルマウスの表現型を再現する。具体的には、マウスの筋線維芽細胞からのアルファｖインテグリンの発現の遺伝子除去は、器官損傷のいくつかのモデルにおける線維症の発症に対する保護をもたらし、この効力は、ＣＷＨＭ−１２として公知のＲＧＤ結合インテグリンの小分子インテグリンアンタゴニストによる連続輸液処置によって、同様に与えられた（Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎら、２０１３年）。そのような研究は、複数のインテグリンの同時阻害に、ある範囲の線維化状態の予防または処置に対して特定の有用性があるという概念を裏付ける。
【００１０】
当技術分野で既に記述されたマルチインテグリン受容体アンタゴニスト化合物には、一般に、上述のＲＧＤインテグリンの全てに対して実証された広域スペクトル効力、または経口投薬による持続活性に適当な薬物動態特性のいずれか、またはその両方がない。経口投与後の、治療上有意な濃度での長い血漿中半減期は、臨床処置用の薬物製剤の開発に非常に望ましい性質であり、通常は医学的管理を必要とせずに、都合良く投与することが可能になる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｌｕら、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．（２００２）１１５：４６４１〜４６４８
【非特許文献２】Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．（２０１３）１９：１６１７〜１６２４
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本開示は、新規なインテグリン受容体アンタゴニスト、その医薬組成物、その製造方法、およびそれらの使用方法を提供する。
【００１３】
一部の態様では、本開示は、式：
【化１】
2019500355.tif 000003
（式中：
Ａは、Ｃ−Ｈ、Ｃ−ＯＨ、またはＮであり；
Ｒ’は、水素、アルキル（Ｃ≦８）、置換アルキル（Ｃ≦８）、またはｉｎ  ｖｉｖｏで水素に変換可能な置換基であり；
ＸおよびＹは、それぞれ独立して、シアノ、ハロ、フルオロアルコキシ（Ｃ１〜２）、アルキル（Ｃ１〜２）、またはフルオロアルキル（Ｃ１〜２）であり、但しＸおよびＹが両方ともシアノまたはアルキル（Ｃ１〜２）ではない）
の化合物、または上記式の薬学的に許容される塩もしくは互変異性体を提供する。
【００１４】
一部の実施形態では、化合物は：
【化２】
2019500355.tif 000004
（式中：
Ａは、Ｃ−ＯＨまたはＮであり；
Ｒ’は、水素、アルキル（Ｃ≦８）、置換アルキル（Ｃ≦８）、またはｉｎ  ｖｉｖｏで水素に変換可能な置換基であり；
ＸおよびＹは、それぞれ独立して、シアノ、ハロ、フルオロアルコキシ（Ｃ１〜２）、アルキル（Ｃ１〜２）、またはフルオロアルキル（Ｃ１〜２）であり、但しＸおよびＹが両方ともシアノまたはアルキル（Ｃ１〜２）ではない）
または上記式の薬学的に許容される塩もしくは互変異性体としてさらに定義される。
【００１５】
一部の実施形態では、ＡがＮである。他の実施形態では、ＡがＣ−ＯＨである。一部の実施形態では、Ｒ’が水素である。
【００１６】
一部の実施形態では、Ｘが、−Ｆ、−Ｃｌ、または−Ｂｒなどのハロである。一部の実施形態では、Ｘが−Ｆである。他の実施形態では、Ｘが−Ｃｌである。他の実施形態では、Ｘが−Ｂｒである。他の実施形態では、Ｘが、−ＯＣＦ３などのフルオロアルコキシ（Ｃ１〜２）である。他の実施形態では、Ｘが、フルオロアルキル（Ｃ１〜２）である。一部の実施形態では、Ｘが−ＣＨＦ２である。他の実施形態では、Ｘが−ＣＦ３である。他の実施形態では、Ｘが、−ＣＨ３などのアルキル（Ｃ１〜２）である。
【００１７】
一部の実施形態では、Ｙが、−Ｆ、−Ｃｌ、または−Ｂｒなどのハロである。一部の実施形態では、Ｙが−Ｆである。他の実施形態では、Ｙが−Ｃｌである。他の実施形態では、Ｙが−Ｂｒである。他の実施形態では、Ｙが、−ＯＣＦ３などのフルオロアルコキシ（Ｃ１〜２）である。他の実施形態では、Ｙがフルオロアルキル（Ｃ１〜２）である。一部の実施形態では、Ｙが−ＣＨＦ２である。他の実施形態では、Ｙが−ＣＦ３である。他の実施形態では、Ｙが、−ＣＨ３などのアルキル（Ｃ１〜２）である。
【００１８】
一部の実施形態では、ＸおよびＹは、それぞれ独立して、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＯＣＦ３、−ＣＨ３、−ＣＨＦ２、および−ＣＦ３からなる群より選択され、但しＸおよびＹが両方とも−ＣＨ３ではない。
【００１９】
一部の実施形態では、βと標識された炭素原子は、Ｓ型立体配置にある。一部の実施形態では、化合物は：
【化３】
2019500355.tif 000005
【化４】
2019500355.tif 000006
【化５】
2019500355.tif 000007
または上記式のいずれかの薬学的に許容される塩もしくは互変異性体としてさらに定義される。
【００２０】
一部の実施形態では、化合物は、α５β１、αｖβ１、α８β１、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、およびαｖβ８からなる群より選択される３種またはそれよりも多くのＲＧＤインテグリンを阻害するのに有効であり、化合物の有効性は、それぞれのインテグリンの機能に関して固相受容体アッセイ（ＳＰＲＡ）を使用して測定されたとき、３種またはそれよりも多くのＲＧＤインテグリンのそれぞれに関して１０ｎＭ未満のＩＣ５０値に対応する。
【００２１】
一部の実施形態では、化合物は、治療上有意な血漿中濃度を患者において経口投与後に２時間またはそれよりも長い期間にわたり達成させ、および／または持続させる、薬物動態特性を保有する。一部の実施形態では、化合物は、ラット１ｋｇ当たり化合物１ｍｇを含むｉ．ｖ．ボーラスを使用してラットで測定したとき、少なくとも２時間の持続的な血漿中半減期を有する。
【００２２】
さらに別の態様では、本開示は：
ａ）本明細書に記述される化合物；および
ｂ）賦形剤
を含む、医薬組成物を提供する。
【００２３】
さらになお別の態様では、本開示は、本明細書に記述される化合物または組成物を、疾患または障害を処置および／または予防するのに十分な量で患者に投与することを含む、それを必要とする患者の疾患または障害を処置および／または予防する方法を提供する。
【００２４】
一部の実施形態では、疾患または障害は、血管新生に関連付けられる。他の実施形態では、疾患または障害は、線維症に関連付けられる。一部の実施形態では、疾患または障害は、線維症および／または血管新生に関連付けられる。
【００２５】
一部の実施形態では、疾患または障害は、肺、肝臓、腎臓、心臓、および膵臓の線維症、強皮症、瘢痕化、未熟児網膜症、家族性滲出性硝子体網膜症、増殖性硝子体網膜症、黄斑変性症、糖尿病性網膜症、がん、骨粗しょう症、自己免疫疾患、悪性体液性高カルシウム血症（ｈｕｍｏｒａｌ  ｈｙｐｅｒｃａｌｃｅｍｉａ  ｏｆ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ）、パジェット病、歯周病、乾癬、関節炎、再狭窄、および感染である。一部の実施形態では、疾患または障害は肺線維症である。他の実施形態では、疾患または障害は肝線維症である。他の実施形態では、疾患または障害は心線維症である。他の実施形態では、疾患または障害は腎線維症である。他の実施形態では、疾患または障害は膵線維症である。
【００２６】
他の実施形態では、疾患または障害は強皮症である。他の実施形態では、疾患または障害は瘢痕化である。一部の実施形態では、瘢痕化は皮膚瘢痕化である。他の実施形態では、瘢痕化は網膜瘢痕化である。他の実施形態では、瘢痕化は角膜瘢痕化である。
【００２７】
他の実施形態では、疾患または障害は、未熟児網膜症である。他の実施形態では、疾患または障害は、家族性滲出性硝子体網膜症である。他の実施形態では、疾患または障害は、増殖性硝子体網膜症である。他の実施形態では、疾患または障害は、黄斑変性症である。他の実施形態では、疾患または障害は糖尿病性網膜症である。
【００２８】
他の実施形態では、疾患または障害はがんである。一部の実施形態では、がんは、充実性腫瘍増殖または新形成を含む。一部の実施形態では、がんは、腫瘍の病部転位（ｍｅｔａｔｈｅｓｉｓ）である。一部の実施形態では、がんは、膀胱、血液、骨、脳、乳房、中枢神経系、頚部（ｃｅｒｖｉｘ）、結腸、子宮内膜、食道、胆のう、生殖器、尿生殖路、頭、腎臓、喉頭、肝臓、肺、筋組織、首、口または鼻の粘膜、卵巣、膵臓、前立腺、皮膚、脾臓、小腸、大腸、胃、精巣、または甲状腺のがんである。一部の実施形態では、がんは、癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、またはセミノーマである。
【００２９】
他の実施形態では、疾患または障害は、骨粗しょう症である。他の実施形態では、疾患または障害は、自己免疫疾患である。一部の実施形態では、自己免疫障害は、多発性硬化症である。他の実施形態では、疾患または障害は、悪性体液性高カルシウム血症である。他の実施形態では、疾患または障害は、パジェット病である。他の実施形態では、疾患または障害は、歯周病である。他の実施形態では、疾患または障害は、乾癬である。他の実施形態では、疾患または障害は関節炎である。一部の実施形態では、関節炎が関節リウマチである。他の実施形態では、疾患または障害は再狭窄である。他の実施形態では、疾患または障害は感染である。
【００３０】
一部の実施形態では、患者は、ヒト、サル、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、モルモット、またはそれらのトランスジェニック種である。一部の実施形態では、患者は、サル、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、またはモルモットである。一部の実施形態では、患者がヒトである。
【００３１】
一部の態様では、本開示は、フェニル環と、β−アミノ酸上のアミノ酸主鎖との結合が、自由に回転しているという事実が企図される。したがって、一部の態様では、Ｘ基が主鎖に向かって配向され、Ｙが主鎖から離れて配向されるように、および下記の構造で示されるようなＸ基が主鎖に向かって配向され、Ｙが主鎖から離れて配向されることを示す本明細書で最も一般的に描かれる手法で、構造が回転してもよいことが企図される。主鎖中の炭素標識βと芳香族環中の１と標識された炭素とを接合する結合の自由回転を考慮すると、構造：
【化６】
2019500355.tif 000008
は、構造：
【化７】
2019500355.tif 000009
と等価である。
【００３２】
本開示の他の目的、特徴、および利点は、以下の詳細な説明から明らかにされよう。しかし、詳細な説明および特定の実施例は本開示の特定の実施形態を示すものであるが、この詳細な記述から本開示の精神および範囲内の様々な変更例および修正例が当業者に明らかにされるので、詳細な説明および特定の実施例は単なる例示として示すものであることを理解すべきである。特定の化合物は１つの特定の一般式に帰せられるというだけの理由で、その化合物は別の一般式に属すこともできないことを意味するものではないことに留意されたい。
【００３３】
下記の図面は、本明細書の一部を形成し、本開示のある特定の態様をさらに実証するために含まれる。本開示は、これらの図面の１つまたは複数を、本明細書で提示される具体的な実施形態の詳細な記述と組み合わせて参照することにより、より良好に理解され得る。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】図１は、各インテグリンについて表１ＡおよびＢに示されている比較化合物（比較対象（ｃｏｍｐａｒａｔｏｒ））および実施例の効力を比較するドットプロットである。横線は、群平均を示す。統計分析は、群平均の比較のための両側標準ｔ検定を使用して実施した。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
本明細書には、疾患の処置および／または予防のためを含めた、インテグリン受容体アンタゴニスト特性を備えた新規化合物および組成物と、それらの製造方法と、それらの使用方法とが開示される。
【００３６】
Ｉ．化合物および合成方法
本開示により提供される化合物は、以下に概説されるおよび実施例のセクションでさらに記述される方法を使用して、作製されてもよい。表１に示され、表３〜５に列挙される比較化合物は、文献に開示されるように合成した。さらに、これらの比較化合物は、当業者が本明細書に記述される方法および手順を利用することにより容易に合成されてもよい。本開示で有用な化合物を調製するための一般的な合成順序を、スキームＩ〜ＶＩＩＩに概説する。本開示の様々な態様の説明およびそれら様々な態様のための実際の手順は共に、必要に応じて記述する。下記のスキームおよび実施例は、本開示を単に例示するものであり、本開示をその範囲または精神のいずれにおいても限定するものではない。当業者なら、スキームおよび実施例に記述される条件およびプロセスの公知の変形例を使用して、本開示の化合物を合成できることが、容易に理解されよう。用いられる出発材料および設備は、商業的に入手可能であるか、または既に報告され、容易に複製される方法によって当業者が調製した。
【化８】
2019500355.tif 000010
【００３７】
スキームＩは、本開示の式Ｉの、環状グアニジンで置換された左手側の芳香族酸部分であって、次いでＧｌｙ−β−アミノ酸エステルにまたはＧｌｙエステルに最初にカップリングすることができ、その後、（エステル加水分解後に）適当なβ−アミノ酸エステルにカップリングすることができるものを、調製するのに使用され得る一般的方法論を示す。簡単に言うと、スキームＩでは、適当なアミノ安息香（またはピリジン）酸を、高温の希塩酸中でチオシアン酸アンモニウムと反応させて、通常の後処理後に、結果として生じた３−チオ尿素安息香（またはピリジン）酸が得られる。出発アミノ安息香（またはピリジン）酸は、商業的に入手可能であるか、または対応するニトロ安息香（またはピリジン）酸の還元を介してそのようなアミノ安息香（またはピリジン）酸に変換することができるが、このニトロ安息香（またはピリジン）酸は、商業的に入手可能であるか、または適当な安息香（またはピリジン）酸をニトロ化することによって得られるものであり、その後、還元して所望のアミノ安息香（またはピリジン）酸にし、または当業者に公知のその他の報告された方法論によって合成することができる。このチオ尿素中間体は、還流下、エタノール中でのヨウ化メチルとの反応によって、Ｓ−メチル誘導体に変換される。適当な１，３−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパンを、高温ＤＭＡ（またはＤＭＦ）中で、この結果として生じた中間体と反応させる。冷却の際、沈殿物が形成され、両性イオン生成物を濾過によって単離する。ＨＣｌ塩は、希塩酸から凍結乾燥することによって得てもよい。あるいは、生成物は、揮発物を除去し濃縮することによって、当初の反応混合物から単離されてもよい。結果として生じた生成物を水にとり、ｐＨを、両性イオン生成物が沈殿する約５〜７に調整し、濾過によって単離する。ＨＣｌ塩は、先に述べたように、または単に希塩酸に溶解し固体まで濃縮して乾燥することにより、得てもよい。
【化９】
2019500355.tif 000011
【００３８】
スキームＩＩは、本開示の式Ｉのテトラヒドロピリミジノ安息香酸部分であって、次いでＧｌｙ−β−アミノ酸エステルにまたはＧｌｙエステルに最初にカップリングすることができ、その後、（エステル加水分解後に）適当なβ−アミノ酸エステルにカップリングすることができるものを、調製するのに使用され得る方法論を示す。簡単に言うと、スキームＩＩでは、３，５−ジヒドロキシ安息香酸が、Austr. J. Chem. １９８１年またはBeckerら、１９８３年に記載される手順を使用して、３−アミノ−５−ヒドロキシ−安息香酸に変換される。生成物を、室温のＤＭＦ中でイソチオシアン酸メチルと反応させて（Organic Process Research & Development、２００４年）、通常の後処理後に３−Ｎ’−メチルチオ尿素−５−ヒドロキシ安息香酸が得られる。このチオ尿素中間体は、４０℃よりも低い未処理のヨウ化メチルと反応させることによってＳ−メチル誘導体に変換される。１，３−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパンを、高温ＤＭＡ（またはＤＭＦ）中で、この結果として生じた中間体と反応させる。冷却後、沈殿物が形成され、両性イオン生成物が濾過によって単離される。ＨＣｌ塩は、希塩酸から凍結乾燥することによって得てもよい。あるいは、生成物は、揮発物を除去し濃縮することによって、当初の反応混合物から単離されてもよい。結果として生じた生成物を水にとり、ｐＨを、両性イオン生成物が沈殿する約５〜７に調整し、濾過によって単離する。ＨＣｌ塩は、先に述べたように、または単に希塩酸に溶解し固体を濃縮して乾燥することにより、得てもよい。
【化１０】
2019500355.tif 000012
【００３９】
スキームＩＩＩは、適当なベンズアルデヒドから出発して、本開示の式Ｉのベータアミノ酸エステル部分を合成するのに使用され得る、一般的方法論を示す。次いでこのベータアミノ酸エステルを、Ｂｏｃ−グリシンにカップリングし、その後（Ｂｏｃ保護基の除去後）、スキームＩおよびＩＩに記述される適当な芳香族酸に、またはグリシンにカップリングされた芳香族酸にカップリングすることができる。スキームＩＩＩで簡単に示されるように、イソプロパノール中の適当なベンズアルデヒドに酢酸アンモニウムを添加し、その後、マロン酸を添加する。反応混合物を還流下で撹拌し、結果として生じた沈殿物を濾過し、高温イソプロパノールで洗浄し、乾燥して、所望のラセミベータアミノ酸が得られる。エチルエステルは、過剰なＨＣｌ気体の存在下、過剰なエタノール中でこの酸を加熱することによって合成される。これらのラセミベータアミノ酸エステルは、参照により本明細書に組み込まれるFaulconbridgeら、２０００年またはLandisら、２００２年に記載されているキラルクロマトグラフ分離を介してまたは酵素的分解を介して、（Ｒ）および（Ｓ）鏡像異性体に分解することができる。一部の実施形態では、（Ｓ）鏡像異性体は、β−アミノ酸基の好ましい鏡像異性体である。
【化１１】
2019500355.tif 000013
【００４０】
スキームＩＶは、本開示の式Ｉのエチル−Ｎ−Ｇｌｙ−ベータアミノ酸部分であって、スキームＩおよびＩＩに記述される式Ｉの芳香族酸部分にカップリングすることができるものを調製するのに使用され得る一般的方法論を示す。この方法は、グリシンに対するベータアミノ酸エステルのカップリングについて記述する。簡単に言うと、所望のベータアミノ酸エステル（上記スキームＩＩＩに記述される）は、活性化Ｂｏｃグリシンで処理される。Ｂｏｃ保護基の除去（例えば、エタノール／ＨＣｌでの処理による）は、対応するベータアミノ酸エステルのグリシンアミドを与える（（Ｓ）鏡像異性体は、上記スキームに記述される（Ｓ）−ベータアミノ酸エステルを利用することによって得られる）。
【化１２】
2019500355.tif 000014
【００４１】
スキームＶは、本開示の様々な化合物を調製するのに使用され得る一般的方法論を示す。簡単に言うと、式Ｉの環状グアニジンで置換された左手側の芳香族酸部分（スキームＩおよびＩＩに記述される）は、公知の方法を使用してカップリングのために活性化される。したがって、ＤＭＡなどの適切な溶媒に溶解した後、等量のＮＭＭを添加する。反応混合物を氷浴温度に冷却し、ＩＢＣＦを添加する。混合無水中間体に、Ｇｌｙ−β−アミノ酸エステル（スキームＩＶに記述される）およびＮＭＭを添加する。反応の終了の際、生成物を、分取ＨＰＬＣにより精製し、適切な溶媒（ジオキサン／水またはアセトニトリル／水）中でＬｉＯＨなどの塩基で処理することにより、エステルを酸に加水分解する。あるいは、ＴＦＡなどの適切な酸を使用することができる。生成物は、分取ＨＰＬＣによって、またはｐＨ５〜７で両性イオンを単離し、標準的な手順で所望の塩に変換することによって、単離される（（Ｓ）鏡像異性体は、上記スキームに記述される（Ｓ）−ベータアミノ酸エステルを利用することによって得られる）。
【化１３】
2019500355.tif 000015
【００４２】
スキームＶＩは、本開示の様々な化合物を調製するのに使用され得る一般的方法論を例示する。簡単に言うと、３−ヒドロキシ−５−［（１，４，５，６−テトラヒドロ−５−ヒドロキシ−２−ピリミジニル）アミノ］安息香酸（スキームＩＩに記述される）は、公知の方法を使用してカップリングするために活性化される。したがって、ＤＭＡなどの適切な溶媒に溶解後、等量のＮＭＭを添加する。反応混合物を氷浴温度に冷却し、ＩＢＣＦを添加する。混合無水中間体に、Ｇｌｙ−β−アミノ酸エステル（スキームＩＶに記述される）およびＮＭＭを添加する。反応終了の際、生成物を、分取ＨＰＬＣにより精製し、適切な溶媒（ジオキサン／水またはアセトニトリル／水）中でＬｉＯＨなどの塩基で処理することにより、エステルを酸に加水分解する。あるいは、ＴＦＡなどの適切な酸を使用することができる。生成物は、分取ＨＰＬＣによって、またはｐＨ５〜７で両性イオンを単離し、標準的な手順で所望の塩に変換することによって、単離される（（Ｓ）鏡像異性体は、上記スキームに記述される（Ｓ）−ベータアミノ酸エステルを利用することによって得られる）。
【化１４】
2019500355.tif 000016
【００４３】
スキームＶＩＩは、本開示の様々な化合物を調製するのに使用され得る一般的方法論を例示する。簡単に言うと、式Ｉの環状グアニジンで置換された左手側の芳香族酸部分（例えばスキームＩおよびＩＩに記述される）は、公知の方法を使用してカップリングのために活性化される。したがって、ＤＭＡなどの適切な溶媒に溶解した後、等量のＮＭＭを添加する。反応混合物を氷浴温度に冷却し、ＩＢＣＦを添加する。混合無水中間体に、エチルグリシネートＨＣｌおよびＮＭＭを添加する。反応の終了の際、生成物を、分取ＨＰＬＣにより精製し、適切な溶媒（水、ジオキサン／水、またはアセトニトリル／水）中でＮａＯＨなどの塩基で処理することにより、エステルを酸に加水分解し、その後、酸性化する。次いでこのＧｌｙ付加物を、公知の方法を使用してカップリングするために活性化する。したがって、ＤＭＡなどの適切な溶媒に溶解後、等量のＮＭＭを添加する。反応混合物を氷浴温度に冷却し、ＩＢＣＦを添加する。混合無水中間体に、適切なベータアミノ酸エステル塩（上記スキームＩＩＩに記述される）およびＮＭＭを添加する。反応の終了の際、生成物を、分取ＨＰＬＣにより精製し、適切な溶媒（ジオキサン／水またはアセトニトリル／水）中でＬｉＯＨなどの塩基で処理することにより、エステルを酸に加水分解する。あるいは、ＴＦＡなどの適切な酸を使用することができる。生成物は、分取ＨＰＬＣによって、またはｐＨ５〜７で両性イオンを単離し、標準的な手順で所望の塩に変換することによって、単離される（（Ｓ）鏡像異性体は、上記スキームに記述される（Ｓ）−ベータアミノ酸エステルを利用することによって得られる）。
【化１５】
2019500355.tif 000017
【００４４】
スキームＶＩＩＩは、本明細書に記述される様々な化合物を調製するのに有用であり得る一般的方法論を例示する。簡単に言うと、３−ヒドロキシ−５−［（１，４，５，６−テトラヒドロ−５−ヒドロキシ−２−ピリミジニル）アミノ］安息香酸（スキームＩＩに記述される）は、公知の方法を使用してカップリングするために活性化される。したがってＤＭＡなどの適切な溶媒に溶解した後、等量のＮＭＭを添加する。反応混合物を氷浴温度に冷却し、ＩＢＣＦを添加する。混合無水中間体に、エチルグリシネートＨＣｌおよびＮＭＭを添加する。反応終了の際、生成物を、分取ＨＰＬＣによって精製し、適切な溶媒（水、ジオキサン／水、またはアセトニトリル／水）中でＮａＯＨなどの塩基で処理することにより、エステルを酸に加水分解し、その後、酸性化する。次いでこのＧｌｙ付加物を、公知の方法を使用してカップリングするために活性化する。したがって、ＤＭＡなどの適切な溶媒に溶解後、等量のＮＭＭを添加する。反応混合物を氷浴温度に冷却し、ＩＢＣＦを添加する。混合無水中間体に、適切なベータアミノ酸エステル塩（上記スキームＩＩＩに記述される）およびＮＭＭを添加する。反応の終了の際、生成物を、分取ＨＰＬＣにより精製し、適切な溶媒（ジオキサン／水またはアセトニトリル／水）中でＬｉＯＨなどの塩基で処理することにより、エステルを酸に加水分解する。あるいは、ＴＦＡなどの適切な酸を使用することができる。生成物は、分取ＨＰＬＣによって、またはｐＨ５〜７で両性イオンを単離し、標準的な手順で所望の塩に変換することによって、単離される（（Ｓ）鏡像異性体は、上記スキームに記述される（Ｓ）−ベータアミノ酸エステルを利用することによって得られる）。
【００４５】
一部の実施形態では、本開示の化合物は、表１Ａ（下記）、実施例、および特許請求の範囲に記述されるものである。
【表１−１】
2019500355.tif 000018
【表１−２】
2019500355.tif 000019
【表１−３】
2019500355.tif 000020
【表１−４】
2019500355.tif 000021
【表１−５】
2019500355.tif 000022
【表１−６】
2019500355.tif 000023
【表１−７】
2019500355.tif 000024
【表１−８】
2019500355.tif 000025
【表１−９】
2019500355.tif 000026
【表１−１０】
2019500355.tif 000027
【００４６】
上述のこれら全ての方法は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，０１３，６５１号および第６，０２８，２２３号に教示される原理および技法、ならびに当業者により適用される有機化学の原理および技法を使用して、さらに修正し最適化することができる。そのような原理および技法は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＭａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（２００７年）に教示される。
【００４７】
本開示の方法に用いられる化合物は、１個または複数の非対称に置換された炭素または窒素原子を含有していてもよく、光学的に活性なまたはラセミ形態で単離されてもよい。したがって、特定の立体化学または異性体形態が特に示されない限り、構造の全てのキラル、ジアステレオマー、ラセミ形態、エピマー形態、および全ての幾何学的異性体形態が意図される。一部の実施形態では、式Ｉのβ−アミノ酸部分が（Ｓ）立体配置にある。一部の実施形態では、（Ｓ）鏡像異性体が、β−アミノ酸基の好ましい鏡像異性体である。化合物は、ラセミ化合物およびラセミ混合物、単一鏡像異性体、ジアステレオマー混合物、および個々のジアステレオマーとして生じてもよい。一部の実施形態では、単一ジアステレオマーが得られる。本開示の化合物のキラル中心は、ＩＵＰＡＣ  １９７４年勧告によって定義されるように、ＳまたはＲ立体配置を有することができる。例えば、立体異性体の混合物は、以下の実施例のセクションに教示される技法、およびその修正例を使用して、分離されてもよい。互変異性体形態も、そのような異性体および互変異性体の薬学的に許容される塩と同様に含まれる。
【００４８】
本開示の化合物を構成する原子は、そのような原子の全ての同位体形態を含むものとする。本開示の化合物は、同位体修飾されたまたは同位体濃縮された１個または複数の原子を含むもの、特に薬学的に許容される同位体を含むものまたは薬学的調査に有用なものを含む。本明細書で使用される同位体は、同じ原子番号を有するが異なる質量数を有するような原子を含む。一般的な例として、限定することなく、水素の同位体には重水素およびトリチウムが含まれ、炭素の同位体には１３Ｃおよび１４Ｃが含まれる。同様に、本開示の化合物の１個または複数の炭素原子は、ケイ素原子により置き換えられてもよいことが企図される。さらに、本開示の化合物の１個または複数の酸素原子は、硫黄またはセレン原子により置き換えられてもよいことが企図される。
【００４９】
本開示の化合物は、プロドラッグ形態で存在していてもよい。プロドラッグは、医薬品の数多くの所望の品質（例えば、溶解度、バイオアベイラビリティー、製造など）を高めることが公知であるので、本開示のいくつかの方法で用いられる化合物は、望む場合には、プロドラッグ形態で送達されてもよい。したがって本開示は、本開示の化合物のプロドラッグおよびプロドラッグを送達する方法を企図する。本開示で用いられる化合物のプロドラッグは、通例の手作業でまたはｉｎ  ｖｉｖｏで修飾が切断されて親化合物になるように、化合物中に存在する官能基を修飾することによって調製されてもよい。したがってプロドラッグは、例えば、ヒドロキシ、アミノ、またはカルボキシ基が、プロドラッグが被験体に投与されたときに切断してヒドロキシ、アミノ、またはカルボン酸をそれぞれ形成する任意の基に結合される、本明細書に記述される化合物を含む。
【００５０】
この開示の任意の塩の一部を形成する特定の陰イオンまたは陽イオンは、塩が全体として薬理学的に許容される限り、極めて重要というわけではないことが理解されるべきである。薬学的に許容される塩とその調製および使用方法の追加の例は、参照により本明細書に組み込まれるHandbook of Pharmaceutical Salts: Properties, and Use（２００２年）に提示される。
【００５１】
本開示の化合物は、ｉｎ  ｖｉｖｏで水素に変換可能な置換基を含むようにさらに修飾されたものを含むことが、さらに理解されるべきである。この化合物は、加水分解および水素化分解を含むがこれらに限定することのない、酵素学的または化学的手段によって、水素原子に変換可能であってもよいような基を含む。例には、加水分解性基、例えばアシル基、オキシカルボニル基を有する基、アミノ酸残基、ペプチド残基、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、トリメチルシリル、テトラヒドロピラニル、およびジフェニルホスフィニルなどが含まれる。アシル基の例には、ホルミル、アセチル、およびトリフルオロアセチルなどが含まれる。オキシカルボニル基を有する基の例には、エトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３、Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ビニルオキシカルボニル、およびβ−（ｐ−トルエンスルホニル）エトキシカルボニルなどが含まれる。適切なアミノ酸残基には、Ｇｌｙ（グリシン）、Ａｌａ（アラニン）、Ａｒｇ（アルギニン）、Ａｓｎ（アスパラギン）、Ａｓｐ（アスパラギン酸）、Ｃｙｓ（システイン）、Ｇｌｕ（グルタミン酸）、Ｈｉｓ（ヒスチジン）、Ｉｌｅ（イソロイシン）、Ｌｅｕ（ロイシン）、Ｌｙｓ（リシン）、Ｍｅｔ（メチオニン）、Ｐｈｅ（フェニルアラニン）、Ｐｒｏ（プロリン）、Ｓｅｒ（セリン）、Ｔｈｒ（トレオニン）、Ｔｒｐ（トリプトファン）、Ｔｙｒ（チロシン）、Ｖａｌ（バリン）、Ｎｖａ（ノルバリン）、Ｈｓｅ（ホモセリン）、４−Ｈｙｐ（４−ヒドロキシプロリン）、５−Ｈｙｌ（５−ヒドロキシリシン）、Ｏｒｎ（オルニチン）、およびβ−Ａｌａの残基が含まれるがこれらに限定するものではない。適切なアミノ酸残基の例には、保護基で保護されたアミノ酸残基を含まれる。適切な保護基の例には、アシル基（ホルミルおよびアセチルなど）、アリールメトキシカルボニル基（ベンジルオキシカルボニルおよびｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル）、およびｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基（−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）などを含む、ペプチド合成に典型的に用いられるものが含まれる。適切なペプチド残基には、２から５個のアミノ酸残基を含むペプチド残基が含まれる。これらのアミノ酸またはペプチドの残基は、Ｄ型、Ｌ型、またはこれらの混合物である立体化学配置で存在することができる。さらに、アミノ酸またはペプチド残基は、不斉炭素原子を有していてもよい。不斉炭素原子を有する適切なアミノ酸残基の例には、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｎｖａ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ、およびＴｙｒの残基が含まれる。不斉炭素原子を有するペプチド残基には、不斉炭素原子を有する１個または複数の構成アミノ酸残基を有するペプチド残基が含まれる。適切なアミノ酸保護基の例には、アシル基（ホルミルおよびアセチルなど）、アリールメトキシカルボニル基（ベンジルオキシカルボニルおよびｐ−ニトロベンジルオキシカルボニルなど）、およびｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル基（−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３、Ｂｏｃ）などを含む、ペプチド合成で典型的に用いられるものが含まれる。「ｉｎ  ｖｉｖｏで���素に変換可能な」置換基のその他の例には、還元的になくすことが可能な水素化分解性基が含まれる。適切な、還元的になくすことが可能な水素化分解性基の例には、アリールスルホニル基（ｏ−トルエンスルホニルなど）；フェニルまたはベンジルオキシで置換されたメチル基（ベンジル、トリチル、およびベンジルオキシメチル）；アリールメトキシカルボニル基（ベンジルオキシカルボニルおよびｏ−メトキシ−ベンジルオキシカルボニルなど）；およびハロエトキシカルボニル基（β，β，β−トリクロロエトキシカルボニルおよびβ−ヨードエトキシカルボニルなど）が含まれるが、これらに限定するものではない。
【００５２】
本開示の化合物は、本明細書に記述される適応に使用されるとしてもまたはその他の適応に使用されるとしても、従来技術で公知の化合物よりも、効力があり、毒性が少なく、より長く作用し、より強力であり、より少ない副作用をもたらし、より容易に吸収され、および／またはより良好な薬物動態プロファイルを有し（例えば、より高い経口バイオアベイラビリティーおよび／またはより低いクリアランス）、および／またはより優れたその他の有用な薬理学的、物理的、もしくは化学的性質を有していてもよいという利点を、有していてもよい。
【００５３】
ＩＩ．生物活性
一部の実施形態では、本開示の化合物は、複数のＲＧＤ−結合インテグリンと拮抗するのに使用されてもよい。これらの実施形態の一部では、化合物は、１つより多くのインテグリンが異常な血管新生を促進させる疾患を処置または予防するのに使用されてもよい。例えば化合物は、血管新生と共依存するかまたは依存していない第２の疾患プロセスが、抗血管新生アンタゴニストにより同時に影響を受ける可能性があるＲＧＤインテグリンによって媒介されるとき、特に有用であり得る。腫瘍は、直径数ミリメートルを超えて増殖を持続させるため、新しい血管の形成に依存することが公知である。網膜における異常な血管新生は、滲出型加齢黄斑変性症、硝子体網膜症、未熟児網膜症、および糖尿病性網膜症などの多くの失明障害の特徴である。血管新生は、肺および肝線維症の進行に、ならびに関節リウマチにおける滑膜パンヌスの増殖に、関連付けられてきた。
【００５４】
インテグリンαｖβ３およびαｖβ５は、血管新生を促進させることを示唆しており（Avraamidesら、２００８年）、したがってそれらの拮抗作用は、その他のインテグリンに加えてこのプロセスの優れた遮断をもたらすことが予測され得る。インテグリンαｖβ３は、腫瘍細胞転移において、ならびに骨粗しょう症およびいくつかのがんに関連した高い骨吸収において、役割を果たすことも公知である。本開示のアンタゴニストは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで潜在型サイトカインＴＧＦβ複合体に結合することが報告されている少なくとも５つのインテグリン：αｖβ１、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、およびαｖβ８に対して様々な活性を保有する。参照により本明細書に組み込まれる（Asanoら、２００５年；Muら、２００２年；Mungerら、１９９９年；Wipffら、２００７年；およびMungerら、１９９８年）を参照されたい。ＴＧＦβは、血管新生サイトカインＶＥＧＦと頻繁に共発現し、その合成を誘導する（Ferrariら、２００６年）。血管調節活性を有することとは別に、ＴＧＦβは、肺、肝臓、腎臓、および皮膚などの多くの組織における線維症の強力な誘導因子である（Nishimura、２００９年）。事実上全てのＴＧＦβは、潜伏関連ペプチド（ＬＡＰ）を含有する複合体中の細胞から分泌される。インテグリンαｖβ３、αｖβ５、およびαｖβ６は、ＬＡＰ内に含有されるＲＧＤモチーフと相互作用し、複合体のコンフォメーション変化をもたらし、ＴＧＦβは、線維化促進経路を活性化する細胞受容体に結合することが可能になる。インテグリンαｖβ８も、ＲＧＤ依存的な手法でＴＧＦβを活性化させるが、その他のインテグリンとは異なるプロテアーゼ依存性メカニズムを利用する。
【００５５】
潜在型ＴＧＦβは、組織内に遍在的に存在し、空間的および時間的に制限される手法でインテグリンにより活性化される。したがって、肺または肝臓における上皮インテグリンαｖβ６の上方調節は、特発性肺線維症（Horanら、２００８年）または肝線維症（Popovら、２００８年）の患者で観察されたように、局在化したコラーゲンの堆積および瘢痕化を促進させる可能性がある。同様に、αｖβ５と、より少ない程度までのαｖβ３とは、間葉細胞上に存在し、間葉ＴＧＦβを活性化させることができる（Wipffら、２００７年；Scottonら、２００９年）。インテグリンαｖβ８は、上皮、神経、免疫、および間葉細胞型のサブセット上に発現する。皮膚において、創傷治癒プロセスを伴うＴＧＦβ活性化は、マトリクス堆積を媒介し瘢痕の形成を促進させる。本開示の化合物は、いくつかのＴＧＦβ活性化インテグリンを同時に阻害する能力に起因して、より制限された阻害プロファイルを有する以前に記載された化合物よりも、線維症の処置において大きい効力を発揮する可能性を有する。さらに、例えば良好なα５β１の効力を有するものを含めた本明細書に提供される化合物は、異常な血管新生および線維症の両方の病理によって特徴付けられた疾患を処置および／または予防するのに使用されてもよい。
【００５６】
ＴＧＦβは、ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の形成の重要な誘発因子である（Yoshimura、２０１１年）。一部の実施形態では、ＴＧＦβの活性化を阻害および／またはＴｒｅｇ活性を低減させるものを含む本開示の化合物は、単独でまたは既存の治療と組み合わせて投与されるとき、がんなどの疾患状態における免疫抑制を軽減するのに使用されてもよい。そのような化合物によるＴｒｅｇ活性の緩和には、がんおよび感染性疾患を予防または処置することが意図されるワクチンの活性を高める潜在性がある。ＴＧＦβは、ＩＬ−６の存在下、ナイーブＴ細胞からＴＨ１７細胞への変換を促進させる（Yoshimura、２０１１年）。これらの細胞は、様々な自己免疫疾患を促進させる。樹状細胞上での全てのαｖβ８発現に欠けるマウスは、多発性硬化症のモデルである実験的自己免疫性脳炎からほぼ完全に保護されることが報告されている（Meltonら、２０１０年）。したがって、ＴＧＦβの活性化を阻害および／またはＴｈ１７活性を低減させるものを含む本開示の化合物は、単独でまたは既存の治療と組み合わせて投与するときに、自己免疫疾患を予防または処置するのに使用することができる。
【００５７】
インテグリンαＩＩｂβ３（フィブリノーゲン受容体としても公知である）の拮抗作用は、血液凝固プロセスの一部として血小板凝集を遮断することが公知である。したがって、インテグリンα５β１およびその他のインテグリンによって媒介される状態または疾患状態を処置するときに、増大した出血を回避するために、αＩＩｂβ３を選択的に温存する化合物を利用することが有益と考えられる。
【００５８】
上記にて論じたように、インテグリンは、その他の細胞および細胞外マトリクス（ＥＣＭ）との細胞相互作用を媒介する内在性細胞質膜タンパク質のファミリーである。これらのタンパク質は、細胞シグナル伝達においても役割を演じ、それによって細胞の形状、運動性、および細胞周期が調節される。インテグリンは、受容体に典型的な「外側から内側の（outside-in）」シグナル伝達を行うだけでなく、「内側から外側の（inside-out）」モードでも動作する。したがって、ＥＣＭからの情報を細胞に伝達し、それと共に細胞の状態を外部に明らかにし、環境の変化に対する素早く柔軟な応答を可能にし、例えば血小板による血液凝固を可能にする。
【００５９】
多くのタイプのインテグリンがあり、多くの細胞は、それらの表面に複数のタイプを有する。インテグリンは、全ての動物に極めて重要なものであり、海綿から哺乳動物まで調査した全ての動物に見出されている。したがって、インテグリンを標的とする化合物には、コンパニオン動物、家畜動物、動物園の動物、および野生動物を含む種々の動物において数多くの用途が見出されている。インテグリンは、ヒトにおいて大規模に研究されてきた。インテグリンは、カドヘリン、免疫グロブリンスーパーファミリー細胞接着分子、セレクチン、およびシンデカンなどのその他のタンパク質と並行して働いて、細胞−細胞および細胞−マトリクスの相互作用および連絡を媒介する。インテグリンは、細胞表面、ならびにフィブロネクチン、ビトロネクチン、コラーゲン、およびラミニンなどのＥＣＭ構成成分に結合する。
【００６０】
各インテグリンは、アルファおよびベータ糖タンパク質サブユニットの非共有結合性ヘテロダイマー化によって形成され、その組合せは、細胞付着、移行、増殖、分化、および生存などの異なる生物活性を伝達する。現在、表２に示されるように、１８個のαサブユニットと８個のβサブユニットとを対にすることによって形成された、２４種のインテグリンが、哺乳動物において記述されている。
【表２】
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【００６１】
さらに、サブユニットのいくつかの改変体が、差次的スプライシングによって形成され；例えばベータ−１サブユニットの４つの改変体が存在する。これらαおよびβサブユニットの種々の組合せを通して、およそ２４種の独自のインテグリンが発生するが、その数が種々の研究に応じて様々である。
【００６２】
ＩＩＩ．治療方法
本開示は、医薬品、薬、および細胞生物学の分野に関する。より詳細には、本開示は、一部の実施形態において複数のインテグリン受容体アンタゴニストを含むインテグリン受容体アンタゴニストとして使用され得る、医薬剤（化合物）およびその医薬組成物に関する。したがってこれらの化合物は、そのようなインテグリンの１種または複数によって媒介される状態を、例えばこれらのインテグリンの１種または複数を阻害するかまたは拮抗することによって処置するための、医薬組成物においておよび方法において使用されてもよい。本開示のいくつかの態様では、本明細書に提供される化合物は、α５ｂ１、α８β１、αｖβ１、αｖβ３、αｖβ５、ａｖｂ６、およびａｖｂ８インテグリンの１種または複数が一定の役割を果たすものを含む、本明細書に提供される化合物を、様々な生物学的、予防的、または治療的な領域で使用してもよい。
【００６３】
別の態様では、この開示は、本明細書に開示される化合物の１種または複数およびそれらの医薬組成物を使用して、α５β１、α８β１、αｖβ１、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、およびαｖβ８インテグリンの１種または複数を阻害するかまたは拮抗する方法を提供する。一部の実施形態では、これらの方法は、本明細書で提供される治療有効量の化合物を投与することによって、腫瘍血管新生を含む血管新生、肺、腎臓、心臓、筋肉、および肝臓線維症などの線維症および線維疾患、網膜、角膜、および皮膚瘢痕化などの瘢痕化、糖尿病性網膜症および黄斑変性症を含む網膜症、未熟児網膜症（ＲＯＰ）および家族性滲出性硝子体網膜症（ＦＥＶＲ）を含む硝子体網膜症、骨粗しょう症、悪性体液性高カルシウム血症、パジェット病、腫瘍転移、充実性腫瘍増殖（新形成）、関節リウマチを含む関節炎、歯周病、乾癬、平滑筋細胞遊走および再狭窄、多発性硬化症などの自己免疫疾患、および感染性病原体など、それに関連する病態を阻害する。一部の実施形態では、化合物は、薬学的に許容される担体をさらに含む医薬組成物の一部として投与される。一部の実施形態では、化合物および／またはその医薬組成物は、経口、非経口、もしくは吸入スプレーによって、または従来の薬学的に許容される担体、アジュバント、およびビヒクルを含有する単位投薬量製剤で局所的に投与されてもよい。本明細書で使用される非経口という用語は、例えば、皮下、静脈内、筋肉内、胸骨内、輸液技法、または腹腔内を含む。一部の実施形態では、本開示の化合物は、そのような経路に適応された医薬組成物の形で、および意図される処置に有効な用量で、任意の適切な経路によって投与される。医学的状態の進行を予防しもしくは停止させまたは処置するのに必要とされる、化合物の治療有効用量は、薬の分野に精通している前臨床および臨床手法を使用して当業者により容易に確認される。
【００６４】
当業者に周知であり理解されている標準的な研究室用実験技法および手順に基づいて、ならびに公知の有用性を有する化合物との比較により、上述の化合物を、上記病態に罹っている患者の処置に使用することができる。当業者なら、本開示の最も適当な化合物の選択は、当業者の能力の範囲内にあり、標準アッセイおよび動物モデルで得られた結果の評価を含む様々な要因に依存することになることが理解されよう。
【００６５】
別の態様では、本明細書で提供される化合物は、１種または複数のα５ｂ１、α８β１、αｖβ１、αｖβ３、αｖβ５、ａｖｂ６、およびａｖｂ８インテグリンが役割を果たすものも含む、様々な生物学的、予防的、または治療的な分野で使用されてもよい。本開示はさらに、そのような処置を必要とする哺乳動物において、腫瘍血管新生を含む血管新生、肺線維症、腎臓、心臓、筋肉、および肝線維症などの線維症および線維疾患、強皮症、網膜、角膜、および皮膚瘢痕化などの瘢痕化、糖尿病性網膜症および黄斑変性症を含む網膜症、未熟児網膜症（ＲＯＰ）および家族性滲出性硝子体網膜症（ＦＥＶＲ）を含む硝子体網膜症、骨粗しょう症、悪性体液性高カルシウム血症、パジェット病、腫瘍転移、充実性腫瘍増殖（新形成）、関節リウマチを含む関節炎、歯周病、乾癬、平滑筋細胞遊走および再狭窄など、それに関連する病態を処置または阻害することを含む。さらに、そのような医薬剤は、抗ウイルス剤および抗菌剤として有用である。さらに、そのような医薬剤は、標的化されたインテグリンを阻害するかまたは拮抗することから得られるＴＧＦ−β活性化の阻害を介した免疫系モジュレーターとして有用である。そのような免疫モジュレーションは、免疫活性とＴ調節およびＴエフェクター細胞の機能とに影響を及ぼし、したがって、多発性硬化症などの自己免疫疾患を含む免疫関連病理の処置で、ならびに腫瘍および感染性病原体の処置において有用であり得る。
【００６６】
ＩＶ．医薬製剤および投与経路
本開示の別の目的は、本明細書に記述される化合物の１種または複数を含む医薬組成物を提供することである。そのような組成物は、例えばα５β１、α８β１、αｖβ１、αｖβ３、αｖβ６、およびαｖβ８インテグリンを含むインテグリンを阻害するかまたは拮抗させるのに有用である。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に開示される化合物の１種または複数、およびその医薬組成物を使用して、α５β１、α８β１、αｖβ１、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、およびαｖβ８インテグリンの１種または複数を阻害するかまたは拮抗するのに有効な、化合物を含む医薬組成物を提供する。これらの実施形態の一部では、そのような医薬組成物はさらに、１種または複数の無毒性の薬学的に許容される担体および／または希釈剤および／またはアジュバントを含む。
【００６７】
そのような処置を必要とする患者に投与する目的で、医薬製剤（医薬調製物、医薬組成物、医薬製品、医薬品、薬、薬物（medication）、または医薬とも呼ぶ）は、指示される投与経路に適切な１種または複数の賦形剤および／または薬物担体を用いて製剤化された治療有効量の本発明の化合物を含む。一部の実施形態では、本発明の化合物は、ヒトおよび／または獣医学患者の処置に受け入れられる手法で製剤化される。一部の実施形態では、製剤化は、本発明の化合物の１種または複数を、下記の賦形剤：ラクトース、スクロース、デンプン粉末、アルカン酸のセルロースエステル、セルロースアルキルエステル、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウムおよびカルシウム塩、ゼラチン、アカシア、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、および／またはポリビニルアルコールの１種または複数と混合するまたは組み合わせることを含む。一部の実施形態では、例えば経口投与のために、医薬製剤を錠剤化してもカプセル封入してもよい。一部の実施形態では、化合物は、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、トウモロコシ油、綿実油、落花生油、ゴマ油、ベンジルアルコール、塩化ナトリウム、および／または様々な緩衝液に溶解されてもスラリー化されてもよい。医薬製剤は、滅菌などの従来の医薬操作に供されてもよく、および／または保存剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、カプセル封入剤、例えば脂質、デンドリマー、ポリマー、アルブミンなどのタンパク質、または核酸、および緩衝液などの、薬物担体および／または賦形剤を含有していてもよい。
【００６８】
本開示に有用な医薬組成物は、滅菌などの従来の医薬操作に供されてもよく、および／または保存剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝液などの従来の医薬担体および賦形剤を含有していてもよい。
【００６９】
本開示の化合物は、様々な方法によって、例えば経口的にまたは注射（例えば、皮下、静脈内、腹腔内など）によって投与されてもよい。投与経路に応じて、活性化合物は、酸の作用、および化合物を不活性化し得るその他の自然条件から、化合物を保護する材料で被覆されてもよい。化合物は、疾患または創傷部位の連続潅流／輸液によって投与されてもよい。
【００７０】
非経口投与以外によって治療用化合物を投与するには、その不活性化を防止する材料で化合物を被覆し、または不活性化を防止する材料と共に化合物を同時投与することが必要と考えられる。例えば、治療用化合物は、適切な担体、例えばリポソーム、または希釈剤において患者に投与されてもよい。薬学的に許容される希釈剤は、食塩液および水性緩衝溶液を含む。リポソームは、水中油中水ＣＧＦエマルジョンおよび従来のリポソームを含む。
【００７１】
治療用化合物は、非経口的、腹腔内、脊髄内、または脳内に投与されてもよい。分散物は、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびこれらの混合物中に、ならびに油中で調製することができる。通常の貯蔵および使用条件下、これらの調製物は、微生物の増殖を防止するため保存剤を含有していてもよい。
【００７２】
注射可能な用途に適切であり得る医薬組成物は、滅菌注射溶液または分散物の即時調製のために、滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散物および滅菌粉末を含む。全ての場合において、組成物は無菌であるべきであり、容易な注射可能性（syringability）が存在する程度まで流体でなければならない。組成物は、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、細菌または真菌などの微生物の汚染作用に対して保存されなければならない。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、これらの適切な混合物、および植物油を含有する、溶媒または分散媒とすることができる。適正な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散物の場合には必要な粒度の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌および抗真菌剤によって、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、およびチメロサールなどによって、達成することができる。多くの場合、等張剤、例えば糖、塩化ナトリウム、またはマンニトールやソルビトールなどの多価アルコールを、組成物中に含むことが有用と考えられる。注射可能な組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを組成物中に含むことによってもたらすことができる。
【００７３】
滅菌注射液は、必要に応じて上記にて挙げられた成分の１種または組合せと共に適切な溶媒中に、必要な量で治療用化合物を組み込み、その後、濾過滅菌することによって、調製することができる。一般に分散物は、基本分散媒と、上記にて挙げられたものから必要なその他の成分とを含有する滅菌担体に、治療用化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射液の調製用の滅菌粉末の場合、調製方法は真空乾燥および凍結乾燥を含み、その結果、既に滅菌濾過されたその溶液から、活性成分（即ち、治療用化合物）に加えて任意の追加の所望の成分の粉末が得られる。
【００７４】
治療用化合物は、例えば、不活性希釈剤または同化食用担体と共に、経口投与することができる。治療用化合物およびその他の成分は、硬質または軟質シェルゼラチンカプセル剤に封入されてもよく、錠剤に圧縮されてもよく、または被験体の食餌に直接取り入れてもよい。経口治療投与の場合、治療用化合物は賦形剤に組み込まれてもよく、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、およびカシェ剤などの形で使用されてもよい。組成物および調製物中の治療用化合物のパーセンテージは、当然ながら変化してもよい。そのような治療上有用な組成物中の治療用化合物の量は、適切な投薬量が得られることになるようなものである。
【００７５】
一部の実施形態では、投薬量の投与および均一性が容易になる単位剤形（dosageunit form）において非経口組成物を製剤化することが有利である。本明細書で使用される単位剤形は、処置がなされる被験体への単一投薬量として適切な、物理的に別個の単位を指し；各単位は、必要とされる医薬担体に関連して所望の治療効果を発揮するように計算された、所定量の治療用化合物を含有する。本開示の単位剤形に関する仕様は、（ａ）治療用化合物の固有の特徴、および達成される特定の治療効果と、（ｂ）患者の選択された状態を処置するための、そのような治療用化合物を配合する当技術分野に固有の限度とによって、決定され、またこれらに直接依存する。
【００７６】
一部の実施形態では、治療用化合物は、皮膚、眼、または粘膜に局所的に投与されてもよい。あるいは、肺への局所送達が望まれる場合、治療用化合物は、乾燥粉末またはエアロゾル製剤において吸入により投与されてもよい。
【００７７】
活性化合物は、患者の状態に関連した状態を処置するのに十分な治療有効投薬量で投与される。例えば、化合物の効力は、ヒトまたは別の動物の疾患の処置における効力を予測し得る動物モデルシステム、例えば実施例および図面に示されるモデルシステムで、評価することができる。
【００７８】
治療剤の有効用量範囲は、様々な種々の動物に関する動物研究で決定された有効用量から外挿することができる。一般に、ｍｇ／ｋｇでのヒト等価用量（ＨＥＤ）は、下式（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Reagan-Shawら、２００８年参照）：
ＨＥＤ（ｍｇ／ｋｇ）＝動物用量（ｍｇ／ｋｇ）×（動物Ｋｍ／ヒトＫｍ）
に従い計算することができる。
【００７９】
変換におけるＫｍ係数の使用は、より正確なＨＥＤ値をもたらし、これらの値は、体重のみに基づくのではなく体表面積（ＢＳＡ）に基づく。ヒトおよび様々な動物に関するＫｍ値は、周知である。例えば、平均６０ｋｇのヒト（ＢＳＡは１．６ｍ２である）に関するＫｍは３７であり、それに対して２０ｋｇの小児（ＢＳＡ  ０．８ｍ２）は、２５のＫｍを有する可能性がある。いくつかの関連ある動物モデルに関するＫｍも周知であり：マウスのＫｍが３（重量０．０２ｋｇおよびＢＳＡ  ０．００７とする）；ハムスターのＫｍが５（重量０．０８ｋｇおよびＢＳＡ  ０．０２とする）；ラットのＫｍが６（重量０．１５ｋｇおよびＢＳＡ  ０．０２５とする）、およびサルのＫｍが１２（重量３ｋｇおよびＢＳＡ  ０．２４とする）が含まれる。
【００８０】
治療用組成物の正確な量は、医師の判断に依存し、個体ごとに固有のものである。それにも関わらず、計算されたＨＥＤ用量は、全体的な指針を提供する。用量に影響を及ぼすその他の要因には、患者の身体および臨床状態、投与経路、意図される処置目的および効力、特定の治療製剤の安定性および毒性が含まれる。
【００８１】
被験体に投与される、本開示の化合物または本開示の化合物を含む組成物の実際の投薬量は、処置がなされる動物のタイプ、年齢、性別、体重、状態の重症度、処置がなされる疾患のタイプ、先のまたは同時発生的な治療介入、被験体の特発性疾患、および投与経路などの身体的および生理的要因によって決定されてもよい。これらの要因は、当業者により決定されてもよい。投与に責任を持つ医師が、典型的には、組成物中の活性成分の濃度と、個々の被験体に適切な用量とを決定することになる。投薬量は、任意の合併症の場合には、個々の医師により調節されてもよい。
【００８２】
有効量は、典型的には、１日または数日間にわたり（上記論じた投与モードおよび要因の過程に応じて）、毎日１回または複数回の用量投与で、約０．００１ｍｇ／ｋｇから約１０００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇから約７５０ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇから約５００ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇから約２５０ｍｇ／ｋｇ、約１０．０ｍｇ／ｋｇから約１５０ｍｇ／ｋｇまで様々になる。その他の適切な用量範囲には、１日当たり１ｍｇから１００００ｍｇ、１日当たり１００ｍｇから１００００ｍｇ、１日当たり５００ｍｇから１００００ｍｇ、および１日当たり５００ｍｇから１０００ｍｇが含まれる。一部の特定の実施形態では、量は、１日当たり１０，０００ｍｇ未満であり、１日当たり７５０ｍｇから９０００ｍｇの範囲である。
【００８３】
有効量は、１ｍｇ／ｋｇ／日未満、５００ｍｇ／ｋｇ／日未満、２５０ｍｇ／ｋｇ／日未満、１００ｍｇ／ｋｇ／日未満、５０ｍｇ／ｋｇ／日未満、２５ｍｇ／ｋｇ／日未満、または１０ｍｇ／ｋｇ／日未満であってもよい。あるいは、１ｍｇ／ｋｇ／日から２００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲にあってもよい。例えば、糖尿病患者の処置に関しては、単位投薬量は、処置していない被験体に比べて少なくとも４０％、血糖を低減させる量であってもよい。別の実施形態では、単位投薬量は、非糖尿病被験体の血糖レベルの±１０％のレベルに、血糖を低減させる量である。
【００８４】
他の非限定的な実施例では、用量は、投与当たり、体重１ｋｇ当たり約１マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約５マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約１０マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約５０マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約１００マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約２００マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約３５０マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約５００マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約１ミリグラム、体重１ｋｇ当たり約５ミリグラム、体重１ｋｇ当たり約１０ミリグラム、体重１ｋｇ当たり約５０ミリグラム、体重１ｋｇ当たり約１００ミリグラム、体重１ｋｇ当たり約２００ミリグラム、体重１ｋｇ当たり約３５０ミリグラム、体重１ｋｇ当たり約５００ミリグラム／から、体重１ｋｇ当たり約１０００ｍｇ、またはそれよりも多い用量まで、およびそれらの範囲内で誘導可能な任意の範囲を含んでいてもよい。本明細書に列挙される数値から誘導可能な範囲の非限定的な例では、上述の数値に基づいて、体重１ｋｇ当たり約５ｍｇ／から体重１ｋｇ当たり約１００ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約５マイクログラム／から体重１ｋｇ当たり約５００ミリグラム／の範囲などを投与することができる。
【００８５】
ある特定の実施形態では、本開示の医薬組成物は、例えば、本開示の化合物を少なくとも約０．１％含んでいてもよい。他の実施形態では、本開示の化合物は、単位の重量の約１％から約７５％の間、または例えば約２５％から約６０％の間、およびそれらの範囲内で誘導可能な任意の範囲を構成していてもよい。
【００８６】
薬剤の単回または多回用量が企図される。多回用量を送達するための所望の時間間隔は、単なる慣例的な実験を用いて当業者が決定することができる。例として、被験体は、約１２時間の間隔で、２回用量を毎日投与されてもよい。一部の実施形態では、薬剤は、１日１回投与される。
【００８７】
薬剤は、慣例的なスケジュールで投与されてもよい。本明細書で使用される慣例的なスケジュールは、所定の指定された期間を指す。慣例的なスケジュールは、スケジュールが事前に決定されている限り、長さが同一のまたは異なる期間を包含していてもよい。例えば、慣例的なスケジュールは、１日２回、毎日、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、毎週基準、毎月基準、またはそれらの間の任意の設定された日数もしくは週数での投与を含んでいてもよい。あるいは、所定の慣例的なスケジュールで、最初の１週間にわたり毎日２回基準で投与し、その後、数カ月間にわたり毎日基準で投与するなどを含んでいてもよい。他の実施形態では、本開示は、薬剤を経口摂取すること、およびそのタイミングは食物摂取に依存するかまたは依存しないことを提供する。したがって例えば、薬剤は、被験体が食べたかまたは食べるのかに関係なく、毎朝および／または毎晩摂取することができる。
【００８８】
Ｖ．併用療法
単独療法として使用することに加え、本開示の化合物は、併用療法での使用を見出してもよい。有効な併用療法は、両方の薬剤を含む単一組成物または薬理学的製剤で、あるいは、同時に投与される２種の別個の組成物または製剤で、達成されてもよく、この場合、１種の組成物は本開示の化合物を含み、その他は第２の薬剤を含むものである。あるいは治療は、何分から何カ月に及ぶ間隔で、その他の薬剤処置に先行するかまたは後続する。
【００８９】
そのような併用療法の非限定的な例には、本開示の１種または複数の化合物と、別の薬剤、例えば抗炎症剤、化学療法剤、放射線治療、抗うつ剤、抗精神病剤、抗痙攣剤、抗躁うつ病剤（moodstabilizer）、抗感染剤、抗高血圧症剤、コレステロール低下剤または血中脂質の他のモジュレーター、減量を促進させる薬剤、抗血栓剤、心筋梗塞または卒中などの心血管事象を処置または予防するための薬剤、抗糖尿病剤、移植拒絶または移植片対宿主疾患を低減させる薬剤、関節炎治療剤、鎮痛剤、喘息治療剤または呼吸器疾患用の他の処置、あるいは皮膚障害を処置または予防するための薬剤との組合せが含まれる。本開示の化合物は、がんワクチンを含む（しかしこれに限定されない）、がんに対する患者の免疫応答を改善するように設計された薬剤と組み合わせてもよい。
【００９０】
ＶＩ．定義
化学基の文脈で使用されるとき：「水素」は−Ｈを意味し；「ヒドロキシ」は−ＯＨを意味し；「オキソ」は＝Ｏを意味し；「カルボニル」は−Ｃ（＝Ｏ）−を意味し；「カルボキシ」は−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨを意味し（−ＣＯＯＨまたは−ＣＯ２Ｈとも書かれる）；「ハロ」は独立して−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉを意味し；「アミノ」は−ＮＨ２を意味する。
【００９１】
化学式の文脈において、記号「−」は単結合を意味し、「＝」は二重結合を意味し、「≡」は三重結合を意味する。記号「----」は、任意選択の結合を表し、これは存在する場合には、単結合または二重結合のいずれかである。記号
【化１６】
2019500355.tif 000029
は単結合または二重結合を表す。したがって、例えば、式
【化１７】
2019500355.tif 000030
は
【化１８】
2019500355.tif 000031
を含む。また、１つより多くの二重結合の部分を形成するそのような環原子は存在しないことが理解される。さらに、共有結合の記号「−」は、１個または２個のステレオジェン原子を接続する場合、いかなる好ましい立体化学も示さないことに留意されたい。代わりに、この記号は、全ての立体異性体およびこれらの混合物を包含する。記号
【化１９】
2019500355.tif 000032
は、結合に垂直に交差して描かれる場合（例えば、メチルに関して
【化２０】
2019500355.tif 000033
）、基の付着点を示す。付着点は、典型的には、付着点を一義的に特定する際に読み手を支援するために、より大きい基に関して単にこのように特定されることに留意されたい。記号
【化２１】
2019500355.tif 000034
は、楔の厚いほうの端部に付着された基が「頁の外」にある単結合を意味する。記号
【化２２】
2019500355.tif 000035
は、楔の厚いほうの端部に付着された基が「頁の中」にある単結合を意味する。記号
【化２３】
2019500355.tif 000036
は、二重結合の周りの幾何形状（例えば、ＥまたはＺのいずれか）が定められていない単結合を意味する。したがって両方の選択肢およびこれらの組合せが意図される。本出願に示される構造の原子上の、任意の定められていない原子価は、その原子に結合された水素原子を暗黙的に表す。炭素原子上の太字のドットは、その炭素に付着された水素が、用紙平面の外に向いていることを示す。
【００９２】
化学基および化合物のクラスに関し、基またはクラスにおける炭素原子の数は、以下に示される通りである：「Ｃｎ」は、基／クラスにおける炭素原子の正確な数（ｎ）を定義する。「Ｃ≦ｎ」は、基／クラスに存在することができる炭素原子の最大数（ｎ）を定義し、それと共に、問題になっている基／クラスに関して可能な限り小さい最小数も定義され、例えば、基「アルケニル（Ｃ≦８）」またはクラス「アルケン（Ｃ≦８）」中の炭素原子の最小数は、２であることが理解される。１から１０個の炭素原子を有するアルコキシを示す、「アルコキシ（Ｃ≦１０）」と比較する。「Ｃｎ−ｎ’」は、基内の炭素原子の最小数（ｎ）および最大数（ｎ’）の両方を定義する。したがって、「アルキル（Ｃ２−１０）」は、２から１０個の炭素原子を有するようなアルキル基を示す。これらの炭素数指標は、意味のいかなる変化も示すことなく、それが修飾する化学基またはクラスに先行するかまたは後続してもよく、括弧で閉じても閉じなくてもよい。したがって、「Ｃ５オレフィン」、「Ｃ５−オレフィン」、「オレフィン（Ｃ５）」、および「オレフィンＣ５」という用語は、全て同義である。
【００９３】
「飽和した」という用語は、化合物または化学基を修飾するのに使用される場合、以下に記されることを除き、化合物または化学基が炭素−炭素二重結合を持たず、炭素−炭素三重結合を持たないことを意味する。用語が、原子を修飾するのに使用されるとき、原子は、任意の二重結合または三重結合の一部ではないことを意味する。飽和した基の、置換されたバージョンの場合、１つまたは複数の炭素酸素二重結合または炭素窒素二重結合が存在していてもよい。また、そのような結合が存在する場合、ケト−エノール互変異性またはイミン／エナミン互変異性の一部として生じ得る炭素−炭素二重結合は、排除されない。「飽和した」という用語は、物質の溶液を修飾するのに使用される場合、物質がその溶液にもはや溶解できないことを意味する。
【００９４】
「脂肪族」という用語は、「置換した」という修飾語なしで使用される場合、そのように修飾された化合物または化学基は非環式または環式であるが、非芳香族炭化水素化合物または基であることを意味する。脂肪族化合物／基において、炭素原子は、直鎖、分岐鎖、または非芳香族環（脂環式）内で一緒に接合することができる。脂肪族化合物／基は、飽和させることができ、即ち炭素間単結合によって接合させることができ（アルカン／アルキル）、あるいは１つもしくは複数の炭素間二重結合で（アルケン／アルケニル）または１つもしくは複数の炭素間三重結合で（アルキン／アルキニル）不飽和にすることができる。
【００９５】
「芳香族」という用語は、化合物または化学基を修飾するのに使用される場合、完全共役環状π系内に４ｎ＋２個の電子を持つ原子の平面不飽和環を指す。
【００９６】
「アルキル」という用語は、「置換された」という修飾語なして使用される場合、付着点として炭素原子を持ち、直鎖または分岐状非環式構造であり、炭素および水素以外の原子がない、１価の飽和脂肪族基を指す。基−ＣＨ３（Ｍｅ）、−ＣＨ２ＣＨ３（Ｅｔ）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３（ｎ−Ｐｒまたはプロピル）、−ＣＨ（ＣＨ３）２（ｉ−Ｐｒ、ｉＰｒ、またはイソプロピル）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３（ｎ−Ｂｕ）、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３（ｓｅｃ−ブチル）、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２（イソブチル）、−Ｃ（ＣＨ３）３（ｔｅｒｔ−ブチル、ｔ−ブチル、ｔ−Ｂｕ、またはｔＢｕ）、および−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３（ｎｅｏ−ペンチル）が、アルキル基の非限定的な例である。「アルカンジイル」という用語は、「置換された」という修飾語なしで使用される場合、１個または２個の飽和炭素原子を付着点として持ち、直鎖または分岐状非環式構造であり、炭素−炭素二重または三重結合がなく、炭素および水素以外の原子がない、２価の飽和脂肪族基を指す。基−ＣＨ２−（メチレン）、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２−、および−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−は、アルカンジイル基の非限定的な例である。「アルキリデン」という用語は、「置換された」という修飾語なしで使用される場合、２価の基＝ＣＲＲ’（式中、ＲおよびＲ’は独立して水素またはアルキルである）を指す。アルキリデン基の非限定的な例には：＝ＣＨ２、＝ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）、および＝Ｃ（ＣＨ３）２が含まれる。「アルカン」は、式Ｈ−Ｒ（式中、Ｒは、この用語が上記にて定義された通りのアルキルである）を有する化合物のクラスを指す。これらの用語のいずれかが、「置換された」という修飾語と共に使用される場合、１個または複数の水素原子が独立して、−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−ＮＨＣＨ３、−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）２、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、または−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２により置き換えられている。下記の基は、置換アルキル基の非限定的な例である：−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＮ、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、および−ＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ。「ハロアルキル」という用語は、置換アルキルのサブセットであり、水素原子の置換えは、炭素、水素、およびハロゲンを除くその他の原子が存在しないように、ハロ（即ち、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉ）に限定されたものである。基−ＣＨ２Ｃｌは、ハロアルキルの非限定的な例である。「フルオロアルキル」という用語は、置換アルキルのサブセットであり、水素原子の置換えは、炭素、水素、およびフッ素を除くその他の原子が存在しないように、フルオロに限定される。基−ＣＨ２Ｆ、−ＣＦ３、および−ＣＨ２ＣＦ３は、フルオロアルキル基の非限定的な例である。
【００９７】
「アルコキシ」という用語は、「置換された」という修飾語なしで使用する場合、基−ＯＲ（式中、Ｒはアルキルであり、その用語が上記にて定義された通りである）を指す。非限定的な例には：−ＯＣＨ３（メトキシ）、−ＯＣＨ２ＣＨ３（エトキシ）、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ（ＣＨ３）２（イソプロポキシ）、−ＯＣ（ＣＨ３）３（ｔｅｒｔ−ブトキシ）、−ＯＣＨ（ＣＨ２）２、−Ｏ−シクロペンチル、および−Ｏ−シクロヘキシルが含まれる。「フルオロアルコキシ」という用語は、「置換された」という修飾語なしで使用される場合、−ＯＲ（式中、Ｒはフルオロアルキルである）と定義された基を指す。「アルキルチオ」および「アシルチオ」という用語は、「置換された」という修飾語なしで使用される場合、基−ＳＲ（式中、Ｒはそれぞれアルキルおよびアシルである）を指す。「アルコール」という用語は、上記にて定義されたアルカンに該当し、水素原子の少なくとも１個がヒドロキシ基で置き換えられている。「エーテル」という用語は、上記にて定義されたアルカンに該当し、水素原子の少なくとも１個がアルコキシ基で置き換えられている。これらの用語のいずれかが、「置換された」という修飾語と共に使用される場合、１個または複数の水素原子は独立して、−ＯＨ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−ＮＨＣＨ３、−ＮＨＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）２、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、または−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２により置き換えられている。
【００９８】
「有効な」という用語は、本明細書および／または特許請求の範囲で使用されるように、所望の、期待された、または意図される結果を達成するのに適切であることを意味する。「有効量」、「治療有効量」、または「薬学的に有効な量」は、化合物で患者または被験体を処置する文脈で使用される場合、疾患を処置するために被験体または患者に投与されたときに疾患に関するそのような処置をなすのに十分な化合物の量を意味する。
【００９９】
本明細書で使用される「ＩＣ５０」という用語は、得られる最大応答の５０％である阻害用量を指す。この定量的尺度は、所与の生物学的、生化学的、または化学的プロセス（またはプロセスの構成成分、即ち酵素、細胞、細胞受容体、または微生物）を半分阻害するのに、特定の薬物またはその他の物質（阻害剤）がどの程度必要であるかを示す。
【０１００】
第１の化合物の「異性体」は、各分子が第１の化合物として同じ構成原子を含有するが、その原子の立体配置が３次元で異なる、別個の化合物である。
【０１０１】
本明細書で使用される「患者」または「被験体」という用語は、ヒト、サル、ウシ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、モルモット、またはそれらのトランスジェニック種などの、生きている哺乳類生物を指す。ある特定の実施形態では、患者または被験体が霊長類である。ヒト被験体の非限定的な例は、成人、若年、乳児、および胎児である。
【０１０２】
本明細書で一般に使用される「薬学的に許容される」は、適正な医療判断の範囲内で、妥当な利益／リスク比と釣り合った、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、またはその他の問題もしくは合併症なしに、ヒトおよび動物の組織、器官、および／または体液と接触させて使用するのに適した、化合物、材料、組成物、および／または剤形（dosage form）を指す。
【０１０３】
「薬学的に許容される塩」は、上記にて定義された、薬学的に許容されるおよび所望の薬理学的活性を保有する、本開示の化合物の塩を意味する。そのような塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、およびリン酸などの無機酸で；または１，２−エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、３−フェニルプロピオン酸、４，４’−メチレンビス（３−ヒドロキシ−２−エン−１−カルボン酸）、４−メチルビシクロ［２．２．２］オクト−２−エン−１−カルボン酸、酢酸、脂肪族モノ−およびジカルボン酸、脂肪族硫酸、芳香族硫酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、炭酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクロペンタンプロピオン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヘプタン酸、ヘキサン酸、ヒドロキシナフトエ酸、乳酸、ラウリル硫酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムコン酸、ｏ−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、シュウ酸、ｐ−クロロベンゼンスルホン酸、フェニル置換アルカン酸、プロピオン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ピルビン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、酒石酸、第３級ブチル酢酸、およびトリメチル酢酸などの有機酸で形成された、酸付加塩が含まれる。薬学的に許容される塩は、存在する酸性プロトンが無機または有機塩基と反応することが可能であるときに形成され得る塩基付加塩も含む。許容される無機塩基には、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アルミニウム、および水酸化カルシウムが含まれる。許容される有機塩基には、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、およびＮ−メチルグルカミンなどが含まれる。本開示の任意の塩の一部を形成する特定の陰イオンまたは陽イオンは、塩が全体として薬理学的に許容される限り、重要ではない。薬学的に許容される塩と、その調製方法および使用方法の追加の例は、Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, and Use (P. H. Stahl& C. G. Wermuth編、Verlag Helvetica Chimica Acta、２００２年）に提示されている。
【０１０４】
本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」という用語は、化学的作用物質(chemicalagent)の運搬または移送に関わる、液体もしくは固体充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、またはカプセル封入材料などの、薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクルを意味する。
【０１０５】
「予防」または「予防すること」は：（１）疾患のリスクがありおよび／または疾患への素因を有する可能性があるがまだ疾患の病理または徴候のいずれかまたは全てを経験しておらずまたは示してもいない、被験体または患者における疾患の発症の阻害、および／または（２）疾患のリスクがありおよび／または疾患への素因を有する可能性があるがまだ疾患の病理または徴候のいずれかまたは全てを経験しておらずまたは示してもいない、被験体または患者における疾患の病理または徴候の発症の遅延を含む。
【０１０６】
「プロドラッグ」は、本開示による阻害剤に、代謝的にｉｎ  ｖｉｖｏで変換可能な化合物を意味する。プロドラッグ自体は、所与の標的タンパク質に関して活性を有していてもいなくてもよい。例えば、ヒドロキシ基を含む化合物は、ヒドロキシ化合物に、ｉｎ  ｖｉｖｏで加水分解によって変換されるエステルとして投与されてもよい。ヒドロキシ化合物に、ｉｎ  ｖｉｖｏで変換され得る適切なエステルには、酢酸エステル、クエン酸エステル、乳酸エステル、リン酸エステル、酒石酸エステル、マロン酸エステル、シュウ酸エステル、サリチル酸エステル、プロピオン酸エステル、コハク酸エステル、フマル酸エステル、マレイン酸エステル、メチレン−ビス−β−ヒドロキシナフトエ酸エステル、ゲンチジン酸エステル、イセチオン酸エステル、ジ−ｐ−トルオイル酒石酸エステル、メタンスルホン酸エステル、エタンスルホン酸エステル、ベンゼンスルホン酸エステル、ｐ−トルエンスルホン酸エステル、シクロヘキシルスルファミン酸エステル、キナ酸エステル、およびアミノ酸のエステルなどが含まれる。同様に、アミン基を含む化合物は、アミン化合物に、ｉｎ  ｖｉｖｏで加水分解により変換されるアミドとして投与されてもよい。
【０１０７】
「立体異性体」または「光学異性体」は、同じ原子が同じその他の原子に結合されるがそれらの原子の立体配置が３次元で異なっている、所与の化合物の異性体である。「鏡像異性体」は、左手および右手のように互いの鏡像である所与の化合物の立体異性体である。「ジアステレオマー」は、鏡像異性体ではない所与の化合物の立体異性体である。キラル分子は、立体中心またはステレオジェン中心とも呼ばれるキラル中心を含有し、これは、必ずしも原子である必要はないが、任意の２個の基の相互交換が立体異性体をもたらすように基を保持する分子中の、任意の点である。有機化合物において、キラル中心は、典型的には炭素、リン、または硫黄原子であるが、その他の原子が有機および無機化合物の立体中心であることも可能である。分子は、複数の立体中心を有することができ、多くの立体異性体が得られる。その立体異性が４面体ステレオジェン中心（例えば、４面体炭素）に起因する化合物では、仮説上可能性のある立体異性体の総数が２ｎを超えない（式中、ｎは、４面体立体中心の数である）。対称性を持つ分子は頻繁に、立体異性体の最大限可能な数よりも少ない。鏡像異性体の５０：５０混合物は、ラセミ混合物と呼ばれる。あるいは、鏡像異性体の混合物は、一方の鏡像異性体が５０％よりも多い量で存在するように、鏡像異性的に濃縮されている。典型的には、鏡像異性体および／またはジアステレオマーは、当技術分野で公知の技法を使用して分解または分離することができる。立体化学がまだ定義されていないキラリティーの任意の立体中心または軸に関し、キラリティーの立体中心または軸は、ラセミおよび非ラセミ混合物を含む、そのＲ体、Ｓ体で、またはＲ体およびＳ体の混合物として存在できることが企図される。本明細書で使用される「他の立体異性体を実質的に含まない」という語句は、組成物が、≦１５％、より好ましくは≦１０％、さらにより好ましくは≦５％、または最も好ましくは≦１％の別の立体異性体を含有することを意味する。
【０１０８】
「ｉｎ  ｖｉｖｏで水素に変換可能な置換基」は、加水分解および水素化分解を含むがこれらに限定されない酵素学的または化学的手段によって、水素原子に変換可能な任意の基を意味する。例には、加水分解性基、例えばアシル基、オキシカルボニル基を有する基、アミノ酸残基、ペプチド残基、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、トリメチルシリル、テトラヒドロピラニル、およびジフェニルホスフィニルなどが含まれる。アシル基の例には、ホルミル、アセチル、およびトリフルオロアセチルなどが含まれる。オキシカルボニル基を有する基の例には、エトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）、ベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ビニルオキシカルボニル、およびβ−（ｐ−トルエンスルホニル）エトキシカルボニルなどが含まれる。適切なアミノ酸残基には、Ｇｌｙ（グリシン）、Ａｌａ（アラニン）、Ａｒｇ（アルギニン）、Ａｓｎ（アスパラギン）、Ａｓｐ（アスパラギン酸）、Ｃｙｓ（システイン）、Ｇｌｕ（グルタミン酸）、Ｈｉｓ（ヒスチジン）、Ｉｌｅ（イソロイシン）、Ｌｅｕ（ロイシン）、Ｌｙｓ（リシン）、Ｍｅｔ（メチオニン）、Ｐｈｅ（フェニルアラニン）、Ｐｒｏ（プロリン）、Ｓｅｒ（セリン）、Ｔｈｒ（トレオニン）、Ｔｒｐ（トリプトファン）、Ｔｙｒ（チロシン）、Ｖａｌ（バリン）、Ｎｖａ（ノルバリン）、Ｈｓｅ（ホモセリン）、４−Ｈｙｐ（４−ヒドロキシプロリン）、５−Ｈｙｌ（５−ヒドロキシリシン）、Ｏｒｎ（オルニチン）、およびβ−Ａｌａの残基が含まれるが、これらに限定するものではない。適切なアミノ酸残基の例には、保護基で保護されたアミノ酸残基も含まれる。適切な保護基の例には、アシル基（ホルミルおよびアセチルなど）、アリールメトキシカルボニル基（ベンジルオキシカルボニルおよびｐ−ニトロベンジルオキシカルボニルなど）、およびｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基（−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）などを含む、ペプチド合成で典型的に用いられるものが含まれる。適切なペプチド残基には、２から５個のアミノ酸残基を含むペプチド残基が含まれる。これらのアミノ酸またはペプチドの残基は、Ｄ型、Ｌ型、またはこれらの混合物の立体化学配置で存在することができる。さらに、アミノ酸またはペプチド残基は、不斉炭素原子を有していてもよい。不斉炭素原子を有する適切なアミノ酸残基の例には、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｎｖａ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ、およびＴｙｒの残基が含まれる。不斉炭素原子を有するペプチド残基には、不斉炭素原子を有する１個または複数の構成アミノ酸残基を有する、ペプチド残基が含まれる。適切なアミノ酸保護基の例には、アシル基（ホルミルおよびアセチルなど）、アリールメトキシカルボニル基（ベンジルオキシカルボニルおよびｐ−ニトロベンジルオキシカルボニルなど）、およびｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基（−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）などを含む、ペプチド合成で典型的に用いられるものが含まれる。「ｉｎ  ｖｉｖｏで水素に変換可能な」置換基のその他の例には、還元的に除去可能な水素化分解性基が含まれる。適切な、還元的に除去可能な水素化分解性基の例���は、アリールスルホニル基（ｏ−トルエンスルホニルなど）；フェニルまたはベンジルオキシで置換されたメチル基（ベンジル、トリチル、およびベンジルオキシメチルなど）；アリールメトキシカルボニル基（ベンジルオキシカルボニルおよびｏ−メトキシ−ベンジルオキシカルボニルなど）；およびハロエトキシカルボニル基（β，β，β−トリクロロエトキシカルボニルおよびβ−ヨードエトキシカルボニルなど）が含まれるが、これらに限定するものではない。
【０１０９】
「処置」または「処置すること」は、（１）疾患の病理または徴候を経験するまたは示す、被験体または患者における疾患を阻害すること（例えば、病理および／または徴候のさらなる発症を停止させる）、（２）疾患の病理または徴候を経験するまたは示す、被験体または患者における疾患を改善する（ameliorate）こと（例えば、病理および／または徴候を逆転させる）、および／または（３）疾患の病理または徴候を経験するまたは示す、被験体または患者における疾患の、任意の測定可能な低減を行うことを含む。
【０１１０】
本明細書で使用されるその他の略語は、下記の通りである：１Ｈ  ＮＭＲはプロトン核磁気共鳴であり、ＡｃＯＨは酢酸であり、Ａｒはアルゴンであり、ＡＣＮまたはＣＨ３ＣＮはアセトニトリルであり、ＣＨＮ分析は炭素／水素／窒素元素分析であり、ＣＨＮＣｌ分析は炭素／水素／窒素／塩素元素分析であり、ＣＨＮＳ分析は炭素／水素／窒素／硫黄元素分析であり、ＤＩ水は脱イオン水であり、ＤＩＣはジイソプロピルカルボジイミドであり、ＤＭＡはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドであり、ＤＭＡＰは４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ピリジンであり、ＤＭＦはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであり、ＥＤＣｌは１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩であり、ＥｔＯＡｃは酢酸エチルであり、ＥｔＯＨはエタノールであり、ＦＡＢ  ＭＳは高速原子衝撃質量分光法であり、ｇはグラムであり、ＨＯＢＴは１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物であり、ＨＰＬＣは高速液体クロマトグラフィーであり、ＩＢＣＦはイソブチルクロロホルメートであり、ＫＳＣＮはチオシアン酸カリウムであり、Ｌはリットルであり、ＬｉＯＨは水酸化リチウムであり、ＭＥＭはメトキシエトキシメチルであり、ＭＥＭＣｌは塩化メトキシエトキシメチルであり、ＭｅＯＨはメタノールであり、ｍｇはミリグラムであり、ＭｇＳＯ４は硫酸マグネシウムであり、ｍｌはミリリットルであり、ｍＬはミリリットルであり、ＭＳは質量分光法であり、ＭＴＢＥはメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルであり、Ｎ２は窒素であり、ＮａＨＣＯ３は重炭酸ナトリウムであり、ＮａＯＨは水酸化ナトリウムであり、Ｎａ２ＳＯ４は硫酸ナトリウムであり、ＮＭＭはＮ−メチルモルホリンであり、ＮＭＰはＮ−メチルピロリジノンであり、ＮＭＲは核磁気共鳴であり、Ｐ２Ｏ５は五酸化リンであり、ＰＴＳＡはパラ−トルエンスルホン酸であり、ＲＰＨＰＬＣは逆相高速液体クロマトグラフィーであり、ＲＴは室温であり、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸であり、ＴＨＦはテトラヒドロフランであり、ＴＭＳはトリメチルシリルであり、Δは、反応混合物を加熱することを示す。
【０１１１】
上記定義は、本明細書に参照により組み込まれる参考文献のいずれかにおける定義との何等かの矛盾に対して優先するものである。しかし、ある特定の用語が定義されるという事実は、定義されていない任意の用語が不明確であることを示すとみなすべきではない。むしろ使用される全ての用語は、当業者が本開示の範囲および実施を理解することができるような用語で本開示について記述すると考えられる。
【実施例】
【０１１２】
下記の実施例は、本開示の好ましい実施形態を実証するために含まれる。後に続く実施例で開示される技術は、本開示の実践においてうまく機能するように本発明者らが発見した技術を表し、故に、その実践に好適なモードを構成するとみなされ得ることが、当業者にはわかるはずである。しかしながら、当業者ならば、本開示を考慮して、本開示の趣旨および範囲から逸脱することなく、開示される具体的な実施形態では多くの変更を行うことができ、類似または同様の結果を依然として得ることができることがわかるはずである。
【０１１３】
Ａ．器具使用および一般的な方法。
分析用ＨＰＬＣ分析はＡｇｉｌｅｎｔ  １１００システムで実施し、ＬＣ−ＭＳ分析はＡｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズＬＣ／ＭＳＤシステムで行った。逆相分取ＨＰＬＣ精製は、０．０５％ＴＦＡを含有するアセトニトリル／水勾配を使用するＢｉｏｔａｇｅ  ＫＰ−Ｃ１８−ＨＳ  １２０ｇ  ＳＮＡＰカラム上、可変デュアル波長ＵＶ検出器を使用するＢｉｏｔａｇｅ  ＳＰ４  ＨＰＦＣシステムで実施した。全ての最終化合物を分析用ＨＰＬＣによって分析し、ピークを、２１０、２５４および２８０ｎＭにおいて純度についてモニターした。１Ｈおよび１９Ｆ  ＮＭＲスペクトルは、ＤＭＳＯ−ｄ６中、広帯域ＮＭＲプローブを備えたＢｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ−ＩＩＩ／４００ＭＨｚ分光計で記録した。重水素化溶媒のシグナルを内部基準として使用した。化学シフトはｐｐｍ（δ）で表現し、カップリング定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）で報告する。１９Ｆ  ＮＭＲは、最終精製の間の分取ＨＰＬＣ溶媒中におけるＴＦＡに起因する最終生成物（約７４ｐｐｍ）のＴＦＡ塩についてシグナルを検出する。反応は、別段の記載がない限り、乾燥窒素雰囲気下で実施した。
Ｂ．化合物の調製
（実施例Ａ）
３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ安息香酸の調製
【化２４】
2019500355.tif 000037
【０１１４】
３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ安息香酸は、文献の手順に従って合成した（参照により本明細書に組み込まれる、Organic Process Research & Development、８巻：５７１〜５７５頁、２００４年を参照）。
（実施例Ｂ）
２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）酢酸の調製
【化２５】
2019500355.tif 000038
【０１１５】
２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）酢酸は、下記の手順に従って調製した。
３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ安息香酸のグリシンエチルエステルとのカップリング：
【化２６】
2019500355.tif 000039
【０１１６】
ＤＭＦ（５０．０ｍＬ）およびＤＣＭ（５０．０ｍＬ）の１：１混合物中の３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ安息香酸（９．０１３ｇ、３５．８７ｍｍｏｌ）の懸濁物に、グリシンエチルエステル塩酸塩（５．０２ｇ、３５．９５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を、窒素雰囲気下、室温で撹拌した。ニートのＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（６．７５ｍＬ、４３．６０ｍｍｏｌ）を上記の反応混合物に添加し、混合物を室温で終夜撹拌して、無色懸濁物を得た。粗反応混合物を、上記のエステルの加水分解のためにそのまま使用した。
【化２７】
2019500355.tif 000040
【０１１７】
上記の粗反応混合物を１０℃に冷却し（氷浴）、２．５Ｎ  ＮａＯＨ溶液（９０．０ｍＬ）を撹拌しながらゆっくりと添加し、溶液温度を２０℃未満に保って、淡黄色溶液／懸濁物を得た。反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。反応混合物を、撹拌しながら５Ｎ  ＨＣｌでｐＨ５に酸性化して、無色沈殿物を得、混合物を室温でさらに１５分間撹拌し、濾過して、無色固体を得た。固体を水（１×２５ｍＬ）で、次いでアセトニトリル（１×２５ｍＬ）で洗浄した。固体を真空中で乾燥させて、無色粉末（９．６８６ｇ、収率８８％）を得た。
【０１１８】
1H NMR(400 MHz, D2O): δ 3.37 (dd, J = 12.7および3.1 Hz, 2H), 3.50 (dd, J = 12.7および2.8 Hz,2H), 4.17 (s, 2H), 4.37 (m, 1H), 6.97 (t, J = 2.01 Hz, 1H), 7.17-7.26 (m, 2H).試料の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、生成物の示唆される構造と一致していた。
（実施例Ｃ）
５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノニコチン酸の調製
【化２８】
2019500355.tif 000041
【０１１９】
５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノニコチン酸は、下記の手順に従って調製した。
【化２９】
2019500355.tif 000042
【０１２０】
ＣＨ３ＣＮ（２．０Ｌ）中の化合物１（４０ｇ、０．３ｍｏｌ）およびベンゾイルイソチオシアネート（９５ｇ、０．５８ｍｏｌ）の混合物を、室温で１２時間撹拌した。ＴＬＣは、出発材料が残っていないことを示した。沈殿物を濾過し、ＣＨ３ＣＮで洗浄し、乾燥させて、化合物２（８０ｇ、９０％）を薄黄色固体として得た。
【化３０】
2019500355.tif 000043
【０１２１】
無水ＣＨ３ＯＨ（５００ｍｌ）中の化合物２（８０ｇ、０．２７ｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮａＯＭｅ（２８．５ｇ、０．５３ｍｏｌ）を室温でゆっくりと添加した。透明溶液が２０分で得られ、反応混合物を１時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物をｔ−ＢｕＯＭｅとすり混ぜると、薄黄色粉末が残った。粉末をＨ２Ｏで希釈し、ｐＨ＝２〜３に酸性化した。形成された黄色固体を濾過し、乾燥させて、化合物３（３３．７ｇ、６５％）を得た。
【化３１】
2019500355.tif 000044
【０１２２】
ＤＭＦ（２００ｍＬ）中の化合物３（３３．７ｇ、０．１７ｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＣＨ３Ｉ（２４．３ｇ、０．１７ｍｏｌ）を室温でゆっくりと添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。ＴＬＣは、出発材料が残っていないことを示した。溶媒を除去し、化合物４（３４．３ｇ、９５％）を黄色油状物として得た。
【化３２】
2019500355.tif 000045
【０１２３】
ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の化合物４（１５．５ｇ、０．０７４ｍｏｌ）およびヒドロキシジアミノプロパン（２０ｇ、０．２２ｍｏｌ）の混合物を、加熱還流し、５時間撹拌した。形成された固体を濾過し、乾燥させた。実施例Ｃ（５．２ｇ、３０％）を、白色固体として得た。
【０１２４】
ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＝２３７）は、所望の生成物について一致している。1H NMR: DMSO-d6 400MHz δ 13.053(s, 1H), 9.881 (s, 2H), 8.783 (s, 1H), 8.630 (s, 1H), 7.897 (s, 1H), 5.492 (s,1H), 4.112 (s, 1H), 3.410 (s, 2H), 3.228-3.190 (m, 2H).
（実施例Ｄ）
２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］酢酸の調製
【化３３】
2019500355.tif 000046
【０１２５】
２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］酢酸は、下記の手順に従って調製した。
【化３４】
2019500355.tif 000047
【０１２６】
ＤＭＦ（１０．０ｍＬ）およびＤＣＭ（１０．０ｍＬ）の１：１混合物中の５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ニコチン酸（１．２０ｇ、５．０８ｍｍｏｌ）の懸濁物に、グリシンエチルエステル塩酸塩（０．７９８ｇ、５．７１７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を、窒素雰囲気下、室温で１０分間撹拌した。ニートのＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（１．１０ｍＬ、７．１０４ｍｍｏｌ）を上記の反応混合物に添加し、混合物を室温で終夜撹拌して、無色からクリーム色の懸濁物を得た。溶媒を真空中で蒸発させて、淡黄色粘性残留物を得た。残留物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ３２２（Ｍ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３４４（Ｍ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ６４３（２Ｍ＋Ｈ）を示す；Ｃ１４Ｈ１９Ｎ５Ｏ４の計算値：３２１．３３。粗生成物を、上記のエステルの鹸化のために次のステップにおいてそのまま使用した。
【化３５】
2019500355.tif 000048
【０１２７】
上記の粗生成物を、ＤＭＦ／ＤＣＭ（１：１）の混合物（１０ｍＬ）に溶解し、溶液を１０℃に冷却し（氷浴）、２．５Ｎ  ＮａＯＨ溶液（１０．０ｍＬ）を撹拌しながらゆっくりと添加し、溶液温度を２０℃未満に保って、淡黄色溶液を得た。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、撹拌しながら５Ｎ  ＨＣｌでｐＨ５に酸性化して、黄色〜橙色の溶液を得た。混合物をＤＣＭ（２５ｍＬ）で希釈し、有機および水性層を分離した。水性層を真空中で蒸発させて、黄色ガム状固体を得た。粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜４０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、所望の生成物を無色から黄色のガム状固体として得た。固体をアセトニトリルとすり混ぜて、無色から淡黄色の結晶性固体を得て、これを、メタノールから再結晶させて、クリーム色固体（８６９．３ｍｇ、収率５９％）を得た。固体のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ２９４（Ｍ＋Ｈ）およびｍ／ｚ３１６（Ｍ＋Ｎａ）を示す；Ｃ１２Ｈ１５Ｎ５Ｏ４の計算値：２９３．２８。1H NMR (400 MHz, D2O): δ 3.19 (dd, J = 12.47および3.67 Hz, 2H), 3.37(dd, J = 12.47および2.93 Hz, 2H), 3.96 (s, 2H), 4.11 (m,1H), 8.12 (t, J = 2.20 Hz, 1H), 8.64 (d, J = 2.45 Hz, 1H), 8.90 (d, J = 1.96Hz, 1H).化合物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、実施例Ｄとしての生成物の示唆される構造と一致していた。
【０１２８】
ベータアミノ酸およびそれらの対応するベータアミノエステル中間体
実施例１〜１７の合成において出発材料および試薬として使用されるベータアミノ酸およびそれらの対応するベータアミノエステル中間体は、上記のスキームＩＩＩで描写されている通りに合成することができる。簡潔に述べると、そのようなベータアミノ酸およびエステルは、適切なベンズアルデヒドから、描写されている条件下で合成することができる。あるいは、適切なベンズアルデヒドを、モノ−エチルまたはメチルマロネートと反応させて、ラセミベータアミノエチルエステルを直接産出することができる。そのような代替方法を利用する実施例を以下で記述する。別段の例示がない限り、全ての関連するベンズアルデヒドは、商業的に容易に入手できるか、または、適切な臭化フェニル、ｎ−ＢｕＬｉおよびＤＭＦから、当業者に公知の方法によって容易に合成することができる。スキームＩＩＩで注記されている通り、対応するラセミベータアミノエステルは、超臨界流体キラルクロマトグラフ分離を介して、または、アマノリパーゼＰＳ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）による（Ｓ）ベータアミノエステルの、容易に単離される（Ｓ）ベータアミノ酸への選択的酵素的開裂を介してのいずれかで、所望の（Ｓ）鏡像異性体に変換することができ、次いで、これを（Ｓ）エステルに変換し、本明細書で開示される実施例１〜１７の合成のためにそのまま使用することができる。
【０１２９】
下記は、後に続く実施例１〜１７の合成で利用される全てのベータアミノエステル中間体の形成における種々のステップにおいて使用される多様な一般的手順を例示する代表的な方法であり、そのような方法の一般的有用性を例証することになっている。
（実施例Ｅ）
エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパノエート塩酸塩の調製
【化３６】
2019500355.tif 000049
【０１３０】
ＥｔＯＨ（３０ｍＬ）中の、ＮＨ４ＯＡｃ（１．３３ｇ、０．１２ｍｏｌ）、ＨＯＯＣＣＨ２ＣＯＯＥｔ（４．５ｇ、０．０３４ｍｏｌ）およびベンズアルデヒド１（３．６ｇ、０．０１７ｍｏｌ）を、７０℃で６時間撹拌した。混合物を濃縮し、ＮａＨＣＯ３水溶液の添加によってｐＨ＝７．５に調整した。混合物をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮乾固して、油状物を得た。粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィーを介して精製して、ラセミ化合物２（１．５ｇ、２９．４％）を得た。（Ｓ）鏡像異性体、実施例Ｅを、実施例Ｆ（以下）について記述されている酵素的分割手順を使用して単離した。
（実施例Ｆ）
エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパノエート塩酸塩の調製
【化３７】
2019500355.tif 000050
ステップ１
ラセミエチル３−アミノ−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパノエートの調製
【化３８】
2019500355.tif 000051
【０１３１】
（ｒａｃ）−エチル３−アミノ−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパノエートは、３−クロロ−５−トリフルオロメチルベンズアルデヒドの代わりに３−ブロモ−５−トリフルオロメチルベンズアルデヒドを用い、実施例Ｅの調製について記述されている方法に従って調製した。
ステップ２
（３Ｓ）−３−アミノ−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパン酸の調製
【化３９】
2019500355.tif 000052
【０１３２】
ラセミ混合物の酵素的分割：５０ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４溶液（３０．０ｍＬ）中の（ｒａｃ）−エチル３−アミノ−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパノエート（５７０．０ｍｇ、１．６７６ｍｍｏｌ）の懸濁物を、室温で撹拌し、１．０Ｎ  ＮａＯＨ溶液および５０ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４溶液の添加によって水性層のｐＨをｐＨ８．３２に調整した。アマノリパーゼＰＳ（６２５．０ｍｇ）を上記の懸濁物に添加し、反応混合物を室温で２日間撹拌した。混合物をＭＴＢＥ（２５ｍＬ）で希釈し、反応混合物を室温で１時間撹拌して、（Ｒ）−エステルを抽出した。（Ｒ）−エステルを含有するＭＴＢＥ層を、ＬＣ−ＭＳによって分析した後、廃棄した。真空中での水性層の蒸発により、（Ｓ）−酸ならびにアマノリパーゼおよびリン酸緩衝塩を含有する、クリーム色固体を得た。上記の粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜６０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、所望の生成物を無色ガラス状固体（２３１．０ｍｇ）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ３１２（７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３１４（８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３３４（７９ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ３３６（８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ１０Ｈ９ＢｒＦ３ＮＯ２の計算値：３１２．０８。（Ｓ）−酸の単離されたＴＦＡ塩を、（Ｓ）−エステルの調製のためにそのまま使用した。
ステップ３
エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパノエート塩酸塩（実施例Ｆ）の調製
【化４０】
2019500355.tif 000053
【０１３３】
無水エタノール（３ｍＬ）中の上記のステップ２からの（３Ｓ）−３−アミノ−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］プロパン酸ＴＦＡ塩（２３１．０ｍｇ、０．５４２ｍｍｏｌ）の溶液に、乾燥ＨＣｌガスで飽和した無水エチルアルコール（１０ｍＬ）を添加し、反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。真空中での溶媒の蒸発により、無色結晶性固体（実施例Ｆ）（１９８．５ｍｇ、９７％）を得た。固体のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ３４０（７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３４２（８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３６２（７９ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ３６４（８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ１２Ｈ１３ＢｒＦ３ＮＯ２の計算値：３４０．１４。
（実施例Ｇ）
エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］プロパノエート塩酸塩の調製
【化４１】
2019500355.tif 000054
ステップ１
ラセミエチル３−アミノ−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］プロパノエートの調製
【化４２】
2019500355.tif 000055
【０１３４】
無水エタノール（３０ｍＬ）中の３−クロロ−５−（トリフルオロメトキシ）ベンズアルデヒド（１．０５ｇ、４．６７６ｍｍｏｌ）モノ−エチルマロネート（１．５４ｇ、１１．６９ｍｍｏｌ）および酢酸アンモニウム（１．９８５ｇ、２５．７５ｍｍｏｌ）の混合物の溶液を、８０℃で終夜加熱して、無色溶液を得た。反応混合物を室温に冷却し、溶媒を真空中で蒸発させて、黄色粘性液体を得た。残留物を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）と酢酸エチル（５０ｍＬ）との間で分配し、有機層を除去し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で蒸発させて、黄褐色粘性液体（１．５６ｇ）を得た。粗生成物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ３１２（３５ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３１４（３７ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３３４（３５ＣｌＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ３３６（３７ＣｌＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ１２Ｈ１３ＣｌＦ３ＮＯ３の計算値：３１１．６８。ＬＣ−ＭＳは、副産物：（Ｅ）−エチル３−（３−クロロ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル）アクリレートの質量：ｍ／ｚ２９５（３５ＣｌＭ＋Ｈ）およびｍ／ｚ２９７（３７ＣｌＭ＋Ｈ）も示す；Ｃ１２Ｈ１０ＣｌＦ３Ｏ３の計算値：２９４．６５。無水エタノール（２ｍＬ）中の粗残留物の溶液に、ジエチルエーテル中ＨＣｌの２．０Ｍ溶液（１０．０ｍＬ）を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌して、黄色溶液を得た。溶媒の蒸発後の残留物を、水（２５ｍＬ）とジクロロメタン（５０ｍＬ）との間で分配した。有機および水性層を分離した。水性層を真空中で蒸発させて、無色ガム状残留物を得た。残留物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜７０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相分取ＨＰＬＣによって精製した。純粋画分混合物を真空中で蒸発させて、所望の生成物を無色結晶性固体（３４７．２ｍｇ、収率２４％）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ３１２（３５ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３１４（３７ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３３４（３５ＣｌＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ３３６（３７ＣｌＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ１２Ｈ１３ＣｌＦ３ＮＯ３の計算値：３１１．６８。
ステップ２
ラセミエチル３−アミノ−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］プロパノエート塩酸塩の調製
【化４３】
2019500355.tif 000056
【０１３５】
無水エタノール（２ｍＬ）中の上記からの（ｒａｃ）−エチル３−アミノ−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］プロパノエートＴＦＡ塩（３４７．２ｍｇ、０．８１６ｍｍｏｌ）の溶液に、乾燥ＨＣｌガスで飽和した無水エチルアルコール（５ｍＬ）を添加し、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。真空中での溶媒の蒸発により、無色ガム状固体を得た。固体をヘキサン（２×１０ｍＬ）でスラリー化し、溶媒層をデカントで除き、残留物を真空中で乾燥させて、無色結晶性固体（２７０．７ｍｇ、収率９５％）を得た。固体のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ３１２（３５ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３１４（３７ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３３４（３５ＣｌＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ３３６（３７ＣｌＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ１２Ｈ１３ＣｌＦ３ＮＯ３の計算値：３１１．６８。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.08 (t, J =7.1 Hz, 3H, CH3-CH2-), 3.06 (dd,J = 16.1および8.8 Hz, 1H, CHH-C=O-), 3.20 (dd, J = 16.4および10.3 Hz, 1H, -CHH-C=O-), 4.01 (q, J = 7.1および2.0Hz, 2H, CH3-CH2-), 4.72 (m, 1H, -NH2-CH-CH2-C=O-),7.62 (s, 1H, H-2), 7.64 (s, 1H, H-6), 7.80 (s, 1H, H-4), 8.87 (brs, 3H, -NH2.HCl).固体の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、生成物の示唆される構造と一致していた。
ステップ３
（３Ｓ）−３−アミノ−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］プロパン酸の調製
【化４４】
2019500355.tif 000057
【０１３６】
ラセミ混合物の酵素的分割：５０ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４溶液（２５．０ｍＬ）中の（ｒａｃ）−エチル３−アミノ−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］プロパノエート塩酸塩（１８５．３０ｍｇ、０．５３２ｍｍｏｌ）の懸濁物を、室温で撹拌し、１．０Ｎ  ＮａＯＨ溶液および５０ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４溶液の添加によって水性層のｐＨをｐＨ８．３２に調整した。アマノリパーゼＰＳ（２０１．０ｍｇ）を上記の懸濁物に添加し、反応混合物を室温で２日間撹拌した。混合物をＭＴＢＥ（２５ｍＬ）で希釈し、反応混合物を室温で１時間撹拌して、（Ｒ）−エステルを抽出した。（Ｒ）−エステルを含有するＭＴＢＥ層を、ＬＣ−ＭＳによって分析した後、廃棄した。真空中での水性層の蒸発により、（Ｓ）−酸ならびにアマノリパーゼおよびリン酸緩衝塩を含有する、クリーム色固体を得た。上記の粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜７０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、所望の生成物を無色ガラス状固体（８３．１ｍｇ）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ２８４（３５ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ２８６（３７ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３０６（３５ＣｌＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ３０８（３７ＣｌＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ１０Ｈ９ＣｌＦ３ＮＯ３の計算値：２８３．６３。（Ｓ）−酸の単離されたＴＦＡ塩を、（Ｓ）−エステルの調製のためにそのまま使用した。
ステップ４
エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］プロパノエート塩酸塩（実施例Ｇ）の調製
【化４５】
2019500355.tif 000058
【０１３７】
無水エタノール（２．０ｍＬ）中の上記のステップ３からの（Ｓ）−３−アミノ−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］プロパン酸ＴＦＡ塩（８３．０ｍｇ、０．２０９ｍｍｏｌ）の溶液に、乾燥ＨＣｌガスで飽和した無水エチルアルコール（５ｍＬ）を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌して、無色溶液を得た。１時間後、反応混合物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物：エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］プロパノエートの質量：ｍ／ｚ３１２（３５ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３１４（３７ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３３４（３５ＣｌＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ３３６（３７ＣｌＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ１２Ｈ１３ＣｌＦ３ＮＯ３の計算値：３１１．６８。溶媒を真空中で蒸発させて、エステルの所望のＨＣｌ塩（実施例Ｇ）を無色結晶性固体（６８．７０ｍｇ、収率９４％）として得た。
（実施例Ｈ）
エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］プロパノエート塩酸塩の調製
【化４６】
2019500355.tif 000059
ステップ１
ラセミエチル３−アミノ−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］プロパノエートの調製
【化４７】
2019500355.tif 000060
【０１３８】
無水エタノール（２５ｍＬ）中の３−ブロモ−５−（トリフルオロメトキシ）ベンズアルデヒド（１．０５ｇ、３．９０ｍｍｏｌ）モノ−エチルマロネート（１．３１ｇ、９．９１ｍｍｏｌ）および酢酸アンモニウム（１．６８ｇ、２１．７９ｍｍｏｌ）の混合物の溶液を、８０℃で５時間加熱して、無色溶液を得た。反応混合物を室温に冷却し、溶媒を真空中で蒸発させて、無色粘性液体を得た。残留物を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）と酢酸エチル（５０ｍＬ）との間で分配し、有機層を除去し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で蒸発させて、淡黄色粘性液体（１．４０ｇ）を得た。粗生成物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ３５６（７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３５８（８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３７８（７９ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ３８０（８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ１２Ｈ１３ＢｒＦ３ＮＯ３の計算値：３５６．１４。ＬＣ−ＭＳは、副産物：（Ｅ）−エチル３−（３−ブロモ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル）アクリレートの質量：ｍ／ｚ３３９（７９ＢｒＭ＋Ｈ）およびｍ／ｚ３４１（８１ＢｒＭ＋Ｈ）も示す；Ｃ１２Ｈ１０ＢｒＦ３Ｏ３の計算値：３３９．１１。無水エタノール（２ｍＬ）中の粗残留物の溶液に、ジエチルエーテル中ＨＣｌの２．０Ｍ溶液（１５．０ｍＬ）を添加し、反応混合物を室温で３０分間撹拌して、淡黄色溶液を得た。溶媒の蒸発後の残留物を、水（２５ｍＬ）とジクロロメタン（２５ｍＬ）との間で分配した。有機および水性層を分離した。水性層を真空中で蒸発させて、無色ガム状残留物を得た。残留物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜７０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相分取ＨＰＬＣによって精製した。純粋画分混合物を真空中で蒸発させて、所望の生成物を無色結晶性固体（４４２．５ｍｇ、収率３１％）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ３５６（７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３５８（８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３７８（７９ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ３８０（８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ１２Ｈ１３ＢｒＦ３ＮＯ３の計算値：３５６．１４。
ステップ２
ラセミエチル３−アミノ−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］プロパノエート塩酸塩の調製
【化４８】
2019500355.tif 000061
【０１３９】
無水エタノール（２ｍＬ）中の上記からの（ｒａｃ）−エチル３−アミノ−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］プロパノエートＴＦＡ塩（４４２．８ｍｇ、０．９４２ｍｍｏｌ）の溶液に、ジエチルエーテル中２．０Ｍ  ＨＣｌ溶液（１０ｍＬ）を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。真空中での溶媒の蒸発により、無色ガム状固体を得た。固体をヘキサン（２×１０ｍＬ）でスラリー化し、溶媒層をデカントで除き、残留物を真空中で乾燥させて、無色結晶性固体（３５８．０ｍｇ、収率９６％）を得た。固体のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ３５６（７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３５８（８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３７８（７９ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ３８０（８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ１２Ｈ１３ＢｒＦ３ＮＯ３の計算値：３５６．１４。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.08 (t, J =7.1 Hz, 3H, CH3-CH2-), 3.095 (二重AB q, J = 16.4および8.7 Hz, およびJ = 16.4および10.3 Hz, (各々1H), 2H, -CHH-C=O-および-CHH-C=O-; ジアステレオ性), 4.01 (dq, J = 7.1および2.0 Hz, 2H, CH3-CH2-),4.72 ( dd, J = 8.3および6.1 Hz, 1H, -NH2-CH-CH2-C=O-),7.65 (appt, J = 1.7 Hz, 1H), 7.73 (appt, J = 1.7 Hz, 1H), 7.90 (appt, J = 1.5Hz, 1H), 8.74 (brs, 3H, -NH2.HCl).固体の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、生成物の示唆される構造と一致していた。
ステップ３
（３Ｓ）−３−アミノ−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］プロパン酸の調製
【化４９】
2019500355.tif 000062
ラセミ混合物の酵素的分割：
【０１４０】
５０ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４溶液（３０．０ｍＬ）中の上記のステップ２からの（ｒａｃ）−エチル３−アミノ−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］プロパノエート塩酸塩（３４５．４０ｍｇ、０．８８０ｍｍｏｌ）の懸濁物を、室温で撹拌し、１．０Ｎ  ＮａＯＨ溶液および５０ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４溶液の添加によって水性層のｐＨをｐＨ８．３２に調整した。アマノリパーゼＰＳ（３１７．０ｍｇ）を上記の懸濁物に添加し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。混合物をＭＴＢＥ（２５ｍＬ）で希釈し、反応混合物を室温で１時間撹拌して、（Ｒ）−エステルを抽出した。（Ｒ）−エステルを含有するＭＴＢＥ層を、ＬＣ−ＭＳによって分析した後、廃棄した。真空中での水性層の蒸発により、（Ｓ）−酸ならびにアマノリパーゼおよびリン酸緩衝塩を含有する、クリーム色固体を得た。上記の粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜７０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、所望の生成物を無色ガラス状固体（２０１．３ｍｇ）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ３２８（７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３３０（８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３５０（７９ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ３５２（８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ１０Ｈ９ＢｒＦ３ＮＯ３の計算値：３２８．０８。（Ｓ）−酸の単離されたＴＦＡ塩を、（Ｓ）−エステルの調製のためにそのまま使用した。
ステップ４
エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］プロパノエート塩酸塩（実施例Ｈ）の調製
【化５０】
2019500355.tif 000063
【０１４１】
無水エタノール（２．０ｍＬ）中の上記のステップ３からの（Ｓ）−３−アミノ−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］プロパン酸ＴＦＡ塩（２０１．３０ｍｇ、０．４５５ｍｍｏｌ）の溶液に、乾燥ＨＣｌガスで飽和した無水エチルアルコール（５ｍＬ）を添加し、反応混合物を室温で１．５時間撹拌して、無色溶液を得た。１．５時間後、反応混合物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物：（Ｓ）−エチル３−アミノ−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］プロパノエートの質量：ｍ／ｚ３５６（７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３５８（８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ３７８（７９ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ３８０（８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ１２Ｈ１３ＢｒＦ３ＮＯ３の計算値：３５６．１４。溶媒を真空中で蒸発させて、エステルの所望のＨＣｌ塩（実施例Ｈ）を無色結晶性固体（１７１．０ｍｇ、収率９５％）として得た。
（実施例Ｉ）
エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−［３，５−ジクロロ−フェニル］プロパノエート塩酸塩の調製
【化５１】
2019500355.tif 000064
ステップ１
（Ｓ）−３−アミノ−３−［３，５−ジクロロ−フェニル］プロパン酸の調製
【化５２】
2019500355.tif 000065
【０１４２】
ラセミ混合物の酵素的分割：５０ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４溶液（３０．０ｍＬ）中の（ｒａｃ）−エチル３−アミノ−３−［３，５−ジクロロフェニル］プロパノエート塩酸塩（３，５−ジクロロフェニルベンズアルデヒドから出発し、本明細書で記述されている手順に従って合成したもの）（３１６．０ｍｇ、１．０５８ｍｍｏｌ）の懸濁物を、室温で撹拌し、１．０Ｎ  ＮａＯＨ溶液および５０ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４溶液の添加によって水性層のｐＨをｐＨ８．３２に調整した。アマノリパーゼＰＳ（２９５．０ｍｇ）を上記の懸濁物に添加し、反応混合物を室温で２日間撹拌した。混合物をＭＴＢＥ（２５ｍＬ）で希釈し、反応混合物を室温で１時間撹拌して、（Ｒ）−エステルを抽出した。（Ｒ）−エステルを含有するＭＴＢＥ層を、ＬＣ−ＭＳによって分析した後、廃棄した。真空中での水性層の蒸発により、（Ｓ）−酸ならびにアマノリパーゼおよびリン酸緩衝塩を含有する、クリーム色固体を得た。上記の粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜５０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、所望の生成物を無色ガラス状固体（１０３．０ｍｇ）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ２３４（３５ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ２３６（３７ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ２５６（３５ＣｌＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ２５８（３７ＣｌＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ９Ｈ９Ｃｌ２ＮＯ２の計算値：２３４．０８。（Ｓ）−酸の単離されたＴＦＡ塩を、（Ｓ）−エステルの調製のためにそのまま使用した。
ステップ２
エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−［３，５−ジクロロ−フェニル］プロパノエート塩酸塩（実施例Ｉ）の調製
【化５３】
2019500355.tif 000066
【０１４３】
無水エタノール（２．０ｍＬ）中の上記のステップ１からの（Ｓ）−３−アミノ−３−［３，５−ジクロロフェニル］プロパン酸（１０３．０ｍｇ、０．４４０ｍｍｏｌ）の懸濁物に、乾燥ＨＣｌガスで飽和した無水エチルアルコール（５ｍＬ）を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌して、無色溶液を得た。１．５時間後、反応混合物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物：（Ｓ）−エチル３−アミノ−３−［３，５−ジクロロフェニル］プロパノエートの質量：ｍ／ｚ２６２（３５ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ２６４（３７ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ２８４（３５ＣｌＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ２８６（３７ＣｌＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ１１Ｈ１３Ｃｌ２ＮＯ２の計算値：２６２．１３。溶媒を真空中で蒸発させて、エステルの所望のＨＣｌ塩（実施例Ｉ）を無色結晶性固体（１３１．２０ｍｇ、収率９９％）として得た。
（実施例Ｊ）
ラセミエチル３−アミノ−３−［３，５−ブロモフェニル］プロパノエート塩酸塩の調製
【化５４】
2019500355.tif 000067
ステップ１
ラセミ３−アミノ−３−［３，５−ブロモ−フェニル］プロパン酸の調製
【化５５】
2019500355.tif 000068
【０１４４】
イソプロパノール（３５０ｍＬ）中の、３，５−ジブロモ−ベンズアルデヒド（５０ｇ、１８９．３９ｍｍｏｌ）、マロン酸（３９．３９ｇ、３７８．７８ｍｍｏｌ）および酢酸アンモニウム（２９．１９ｇ、３７８．７８ｍｍｏｌ）の懸濁物を、窒素下、１４時間加熱還流して、濃厚な無色固体を得た。固体を熱いうちに濾過し、熱イソプロパノール（２×１００ｍＬ）で洗浄し、真空中で乾燥させて、所望のラセミ生成物を無色固体（３２．２ｇ）として得た。
ステップ２
ラセミエチル３−アミノ−３−［３，５−ブロモフェニル］プロパノエート塩酸塩の調製
【化５６】
2019500355.tif 000069
【０１４５】
無水エタノール（５００ｍＬ、無水ＨＣｌガスで飽和したもの）を、上記のステップ１からの３−アミノ−３−（３，５−ジブロモ−フェニル）−プロピオン酸（３２ｇ、９９．０７ｍｍｏｌ）に添加し、反応混合物を１．５時間加熱還流して、淡黄色溶液を得た。溶媒を真空中で除去して、無色固体を得た。固体をヘキサン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。溶媒層をデカントで除いた後、残留物を真空中で乾燥させて、ラセミアミノエステル塩酸塩（実施例Ｊ）を白色固体（３８ｇ）として得た。
（実施例Ｋ）
エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−［３−ブロモ−５−（ジ−フルオロメチル）フェニル］プロパノエート塩酸塩の調製
【化５７】
2019500355.tif 000070
【０１４６】
トルエン（２０ｍＬ）中の、３，５−ジブロモベンズアルデヒド１（１０ｇ、３７．８ｍｍｏｌ、１．０当量）、エタン−１，２−ジオール（７．０ｇ、１１４ｍｍｏｌ、３．０当量）およびＴｓＯＨ（０．３２ｇ、１．８９ｍｍｏｌ）を、１１０℃で４時間撹拌した。混合物を２３℃に冷却し、濃縮し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮乾固して、化合物２（９．２ｇ、８３．６％）を油状物として得た。
ステップ２
【化５８】
2019500355.tif 000071
【０１４７】
ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の化合物２（９．２ｇ、２９．８ｍｍｏｌ、１．０当量）を、−７８℃で撹拌した。ｎ−ＢｕＬｉ（１２ｍＬ、１．０当量）を、上記の混合物に−７８℃で滴下添加した。混合物を−７８℃で１時間撹拌した。ＤＭＦ（４．５６ｇ、１．５当量）を、上記の混合物に−７８℃で滴下添加した。混合物を−７８℃で３時間撹拌し、次いで、２５℃に加温した。水を混合物に添加し、次いで、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮乾固して、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、化合物３（６．６ｇ、８６．８％）を白色固体として得た。
ステップ３
【化５９】
2019500355.tif 000072
【０１４８】
化合物３（６．６ｇ、０．０２６ｍｏｌ）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に添加し、次いで、ＤＡＳＴ（８．３ｇ、０．０５２ｍｏｌ）を溶液に添加し、反応物をＮ２下で８時間撹拌した。溶液をＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、混合物をＤＣＭで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。粗材料をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、化合物４（４．２ｇ、５８．３％）を得た。
ステップ４
【化６０】
2019500355.tif 000073
【０１４９】
化合物４（４．２ｇ、０．０２６ｍｏｌ）を、ＴＨＦ（４０ｍＬ）および３Ｎ  ＨＣｌ（２０ｍＬ）の溶液に添加し、反応物を６時間撹拌した。混合物を濃縮し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、化合物５（３．６ｇ、７６．９％）を得た。
ステップ５
【化６１】
2019500355.tif 000074
【０１５０】
ＥｔＯＨ（３０ｍＬ）中の、ＮＨ４ＯＡｃ（０．５４ｇ、０．０７７ｍｏｌ）、ＨＯＯＣＣＨ２ＣＯＯＥｔ（２．９ｇ、０．０２２ｍｏｌ）および化合物５（３．６ｇ、０．０１１ｍｏｌ）を、７０℃で６時間撹拌した。混合物を濃縮し、ＮａＨＣＯ３水溶液の添加によってｐＨ＝７．５に調整した。混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮乾固して、油状物を得た。粗製物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、化合物６（０．６ｇ、１７．１％）を得た。（Ｓ）鏡像異性体、実施例Ｋを、上述した酵素的分割手順を使用して単離した。
（実施例Ｌ）
エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−［３−クロロ−５−（ジ−フルオロメチル）フェニル］プロパノエート塩酸塩の調製
【化６２】
2019500355.tif 000075
【０１５１】
実施例Ｌは、ステップ１において３，５−ジ−ブロモベンズアルデヒドの代わりに３−ブロモ−５−クロロベンズアルデヒドを用いたことを除き、実施例Ｋのための手順で記述されている通りに合成した。
（実施例１）
（３Ｓ）−３−（３，５−ジブロモフェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパン酸の調製
【化６３】
2019500355.tif 000076
ステップ１
エチル（３Ｓ）３−［３，５−ジブロモ（dibrom）−フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド］プロパノエートの調製
【化６４】
2019500355.tif 000077
【０１５２】
２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）酢酸（実施例Ｂ）（５１３．８０ｍｇ、１．６６７ｍｍｏｌ）、エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−（３，５−ジブロモフェニル）プロパノエート塩酸塩（酵素的リパーゼ開裂方法を介して形成された実施例Ｊの（Ｓ）エステル）（６４５．８０ｍｇ、１．６６７ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（５２．０ｍｇ、０．３４０ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（６ｍＬ）およびジクロロメタン（６ｍＬ）の混合物に溶解し、反応混合物を、窒素雰囲気下、１０分間撹拌して、クリーム色懸濁物を得た。ニートのＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（３６０．０μＬ、２．３２５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、窒素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させて、生成物：エチル（３Ｓ）−３−［３，５−ジブロモフェニル］−３−［［２−［［３−ヒドロキシ−５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ベンゾイル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエートの無色粘性残留物を得た。粗残留物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ６４０（７９Ｂｒ，７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６４２（７９Ｂｒ，８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６４４（８１Ｂｒ，８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６６２（７９Ｂｒ，７９ＢｒＭ＋Ｎａ）、ｍ／ｚ６６４（７９Ｂｒ，８１ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ６６６（８１Ｂｒ，８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２４Ｈ２７Ｂｒ２Ｎ５Ｏ６の計算値：６４１．３１。粗残留物を、ステップ２における鹸化反応のためにそのまま使用した。
ステップ２
（３Ｓ）−３−（３，５−ジブロモフェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパン酸の調製
【化６５】
2019500355.tif 000078
【０１５３】
アセトニトリル／水の１：１混合物（１０ｍＬ）の混合物中の上記のステップ１からの粗製のエチル（３Ｓ）−３−［３，５−ジブロモフェニル］−３−［［２−［［３−ヒドロキシ−５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ベンゾイル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエート（１．６６７ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム一水和物（３５０．０ｍｇ、８．３４１ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物をＴＦＡ（１０．０ｍＬのＣＨ３ＣＮ中１．０ｍＬ）で中和し、混合物を真空中で蒸発させて、無色ガム状残留物を得た。上記の粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜７０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥後、所望の生成物を無色凍結乾燥固体（実施例１）（６８４．２ｍｇ、収率６７％）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ６１２（７９Ｂｒ，７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６１４（７９Ｂｒ，８１ＢｒＭ＋Ｈ）およびｍ／ｚ６１６（８１Ｂｒ，８１ＢｒＭ＋Ｈ）を示す；Ｃ２２Ｈ２３Ｂｒ２Ｎ５Ｏ６の計算値：６１３．２６。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.74 (d, J = 7.10 Hz, 2H), 3.16 (d, J = 12.23 Hz, 2H), 3.33 (d, J =11.25 Hz, 2H), 3.86 (d, J = 5.87 Hz, 2H), 4.08 (brs, 1H), 5.14 (q, J = 7.34 Hz,1H), 6.74 (appt, J = 2.0 Hz, 1H), 7.11 (appt, 1H), 7.14 (appt, J =1.7 Hz,1H),7.56 (d, J =1.71 Hz, 2H), 7.71 (t, J = 1.7 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.53 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 8.64 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 9.61 (s,1H), 10.01 (brs, 1H),12.40(brs, 1H).試料の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、実施例１に関して提案されている構造と一致していた。
（実施例２）
（３Ｓ）−３−（３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパン酸の調製
【化６６】
2019500355.tif 000079
ステップ１
エチル（３Ｓ）３−（３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパノエートの調製
【化６７】
2019500355.tif 000080
【０１５４】
２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）酢酸（実施例Ｂ）（８３．０ｍｇ、０．２６９ｍｍｏｌ）、エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−（３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）プロパノエート塩酸塩（実施例Ｆ）（１０２．０ｍｇ、０．２７１ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（４ｍＬ）およびジクロロメタン（４ｍＬ）に溶解して、クリーム色懸濁物を得た。固体１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（８．７ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）を上記の反応混合物に添加し、反応混合物を窒素雰囲気下で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（６０．０μＬ、０．３８７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、窒素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させて、生成物：エチル（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［［２−［［３−ヒドロキシ−５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ベンゾイル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエートの無色ガム状残留物を得た。粗残留物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ６３０（７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６３２（８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６５２（７９ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ６５４（８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２５Ｈ２７ＢｒＦ３Ｎ５Ｏ６の計算値：６３０．４１。粗残留物を、ステップ２における鹸化反応のためにそのまま使用した。
ステップ２
（３Ｓ）−３−（３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパン酸の調製
【化６８】
2019500355.tif 000081
【０１５５】
アセトニトリル／水の１：１混合物（４ｍＬ）の混合物中の、上記のステップ１からの粗製のエチル（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［［２−［［３−ヒドロキシ−５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ベンゾイル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエート（０．３４４ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム一水和物（７７．０ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。混合物をＴＦＡ（１０．０ｍＬのＣＨ３ＣＮ中１．０ｍＬ）で中和し、混合物を真空中で蒸発させて、無色ガム状残留物を得た。上記の粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜６０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥後、所望の生成物を無色凍結乾燥固体（実施例２）（１２４．０ｍｇ、収率６０％）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ６０２（７９ＢｒＭ＋Ｈ）およびｍ／ｚ６０４（８１ＢｒＭ＋Ｈ）を示す；Ｃ２３Ｈ２３ＢｒＦ３Ｎ５Ｏ６の計算値：６０２．３６。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.78 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 3.16 (d, J = 12.2 Hz, 2H), 3.33 (d, J =12.2 Hz, 2H), 3.87 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 4.08 (appt, J = 3.07 Hz, 1H), 5.23 (q,J = 7.3 Hz, 1H), 6.74 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 7.11 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.14 (t, J= 1.8 Hz, 1H), 7.72 (s,1H), 7.85 (s,1H), 7.87 (s, 1H), 8.10 (brs, 2H), 8.61 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 8.64 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 9.60 (s,1H), 10.02 (brs, 1H),12.41(brs, 1H, -COOH).生成物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、実施例２に関して提案されている構造と一致していた。19F NMR (376 MHz, DMSO-d6):δ -61.09 (s), および-73.82 (s).
（実施例３）
（３Ｓ）−３−［３−クロロ−５−（ジフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド］プロパン酸の調製
【化６９】
2019500355.tif 000082
ステップ１
（３Ｓ）−エチル３−［３−クロロ−５−（ジフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド］プロパノエートの調製
【化７０】
2019500355.tif 000083
【０１５６】
２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）酢酸（実施例Ｂ）（２７．０ｍｇ；０．０８８ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−エチル３−アミノ−３−（３−クロロ−５−（１−（ジフルオロメチル）フェニル）プロパノエート塩酸塩（実施例Ｌ）（２７．５１ｍｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（１ｍＬ）およびジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解して、無色懸濁物を得た。固体１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（３．０ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）を上記の反応混合物に添加し、反応混合物を窒素雰囲気下で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（２０．０μＬ、０．１２９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、窒素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させて、生成物：（３Ｓ）−エチル３−（３−クロロ−５−（ジフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパノエートの淡黄色粘性残留物を得た。粗残留物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５６８（３５ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５７０（３７ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５９０（３５ＣｌＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ５９２（３７ＣｌＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２５Ｈ２８ＣｌＦ２Ｎ５Ｏ６の計算値：５６７．９７。粗残留物を、ステップ２における鹸化反応のためにそのまま使用した。
ステップ２
（３Ｓ）−３−［３−クロロ−５−（ジフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド］プロパン酸の調製
【化７１】
2019500355.tif 000084
【０１５７】
アセトニトリル／水の１：１混合物（４ｍＬ）の混合物中の、上記のステップ１からの粗製の（３Ｓ）−エチル３−（３−クロロ−５−（ジフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパノエート（０．０８８ｍｍｏｌ）の懸濁物に、水酸化リチウム一水和物（２０．０ｍｇ、０．４７７ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。混合物をＴＦＡ（１０．０ｍＬのＣＨ３ＣＮ中１ｍＬ）で中和し、混合物を真空中で蒸発させて、黄色ガム状残留物を得た。上記の粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜６０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥後、所望の生成物を無色凍結乾燥固体（実施例３）（４１．２ｍｇ、収率８７％）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５４０（３５ＣｌＭ＋Ｈ）およびｍ／ｚ５４２（３７ＣｌＭ＋Ｈ）を示す；Ｃ２３Ｈ２４ＣｌＦ２Ｎ５Ｏ６の計算値：５３９．９２。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.76 (d, J = 7.34 Hz, 2H, -CH2-COOH), 3.16 (d, J = 12.23Hz, 2H), 3.33 (d, J = 10.76 Hz, 2H), 3.87 (dd/m, 3H), 4.08 (t, J = 3.18 Hz,1H), 5.21 (q, J = 7.34 Hz, 1H, -NH-CH-CH2-COOH), 6.74 (t, J = 2.08Hz, 1H), 7.03 (s, 1H), 7.11 (t, J =1.71 Hz, 1H), 7.13 (appt, 1H), 7.53 (brs,1H), 7.59 (s, 1H), 8.14 (brs, 2H), 8.63 (t, J = 5.87 Hz, 1H), 9.67 (brs,1H),10.02 (brs, 1H), 12.44 (brs, 1H, -COOH).生成物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、実施例３に関して提案されている構造と一致していた。19F NMR (376 MHz, DMSO-d6):δ-74.12 (s), および-110.28 (d, J =56.0 Hz).
（実施例４）
（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−（ジフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド］プロパン酸の調製
【化７２】
2019500355.tif 000085
（３Ｓ）−エチル３−［３−ブロモ−５−（ジフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド］プロパノエートの調製
【化７３】
2019500355.tif 000086
【０１５８】
２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）酢酸（実施例Ｂ）（２５．０ｍｇ；０．０８１ｍｍｏｌ）、エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−（３−ブロモ−５−（１−（ジフルオロメチル）フェニル）プロパノエート塩酸塩（実施例Ｋ）（２９．０８ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（１ｍＬ）およびジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解して、無色懸濁物を得た。固体１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（３．０ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）を上記の反応混合物に添加し、反応混合物を窒素雰囲気下で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（２０．０μＬ、０．１２９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、窒素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させて、生成物：（３Ｓ）−エチル３−（３−ブロモ−５−（ジフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパノエートの黄橙色粘性残留物を得た。粗残留物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ６１２（７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６１４（８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６３４（７９ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ６３６（８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２５Ｈ２８ＢｒＦ２Ｎ５Ｏ６の計算値：６１２．４２。粗残留物を、ステップ２における鹸化反応のためにそのまま使用する。
ステップ２
（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−（ジフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド］プロパン酸の調製
【化７４】
2019500355.tif 000087
【０１５９】
アセトニトリル／水の１：１混合物（４ｍＬ）の混合物中の、上記のステップ１からの粗製のエチル（３Ｓ）−３−（３−ブロモ−５−（ジフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパノエート（０．０８０ｍｍｏｌ）の懸濁物に、水酸化リチウム一水和物（１８．０ｍｇ、０．４２９ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。混合物をＴＦＡ（５．０ｍＬのＣＨ３ＣＮ中５００μＬ）で中和し、混合物を真空中で蒸発させて、黄色ガム状残留物を得た。上記の粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜６０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥後、所望の生成物を無色凍結乾燥固体（実施例４）（３３．４ｍｇ、収率７１％）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５８４（７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５８６（８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６０６（７９ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ６０８（８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２３Ｈ２４ＢｒＦ２Ｎ５Ｏ６の計算値：５８４．３７。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.76 (d, J = 7.34 Hz, 2H, -CH2-COOH), 3.16 (d, J = 12.47Hz, 2H), 3.33 (d, J = 10.76 Hz, 2H), 3.87 (dd/m, 3H), 4.08 (t, J = 2.90 Hz,1H), 5.21 (q, J = 7.34 Hz, 1H, -NH-CH-CH2-COOH), 6.74 (t, J = 2.08Hz, 1H), 7.02 (appt, 1H), 7.14 (appt, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.72 (s,1H), 8.13 (brs, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.62 (t, J = 5.99 Hz, 1H), 9.65 (brs,1H),10.02 (brs, 1H), 12.40 (brs, 1H, -COOH).生成物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、実施例４に関して提案されている構造と一致していた。19F NMR (376 MHz, DMSO-d6):δ -73.81 (s), および-110.23 (d, J= 56.0 Hz).
（実施例５）
（３Ｓ）−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド］プロパン酸の調製
【化７５】
2019500355.tif 000088
ステップ１
（３Ｓ）−エチル３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメチル（tifluoromethyl））フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド］プロパノエートの調製
【化７６】
2019500355.tif 000089
【０１６０】
２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）酢酸（実施例Ｂ）（４３．０ｍｇ；０．１３９ｍｍｏｌ）、エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−（３−クロロ−５−（１−（トリフルオロメチル）フェニル）プロパノエート塩酸塩（実施例Ｅ）（４６．３３ｍｇ、０．１３９ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（１ｍＬ）およびジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解して、無色懸濁物を得た。固体１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（４．４０ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ）を上記の反応混合物に添加し、反応混合物を窒素雰囲気下で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（３２．０μＬ、０．２０７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、窒素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させて、生成物：（３Ｓ）−エチル３−（３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパノエートの無色ガム状残留物を得た。粗残留物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５８６（３５ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５８８（３７ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６０８（３５ＣｌＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ６１０（３７ＣｌＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２５Ｈ２７ＣｌＦ３Ｎ５Ｏ６の計算値：５８５．９６。粗残留物を、ステップ２における鹸化反応のためにそのまま使用した。
ステップ２
（３Ｓ）−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド］プロパン酸の調製
【化７７】
2019500355.tif 000090
【０１６１】
アセトニトリル／水の１：１混合物（４ｍＬ）の混合物中の、上記のステップ１からの粗製のエチル（３Ｓ）−３−（３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパノエート（０．１３９ｍｍｏｌ）の懸濁物に、水酸化リチウム一水和物（３０．０ｍｇ、０．７１５ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。混合物をＴＦＡ（１０．０ｍＬのＣＨ３ＣＮ中１ｍＬ）で中和し、混合物を真空中で蒸発させて、クリーム色ガム状残留物を得た。上記の粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜６０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥後、所望の生成物を無色凍結乾燥固体（実施例５）（６３．２ｍｇ、収率８１％））として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５５８（３５ＣｌＭ＋Ｈ）およびｍ／ｚ５６０（３７ＣｌＭ＋Ｈ）を示す；Ｃ２３Ｈ２３ＣｌＦ３Ｎ５Ｏ６の計算値：５５７．９１。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.79 (d, J = 7.09 Hz, 2H, -CH2-COOH), 3.16 (d, J = 11.98Hz, 2H), 3.33 (d, J = 11.00 Hz, 2H), 3.87 (d, J = 5.87 Hz, 2H), 4.08 (t, J =3.18 Hz, 1H), 5.24 (q, J = 7.09 Hz, 1H, -NH-CH-CH2-COOH), 6.75 (s,1H), 7.11 (s, 1H), 7.13 (t, J = 2.00 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 8.12(brs, 1H), 8.61 (d, J = 8.07 Hz, 1H), 8.65 (t, J = 5.75 Hz, 1H), 9.66 (brs,1H),10.02 (brs, 1H), 12.43 (brs, 1H, -COOH).生成物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、実施例５に関して提案されている構造と一致していた。19F NMR (376 MHz, DMSO-d6):δ -61.11 (s), および-73.94 (s).
（実施例６）
（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−クロロ−フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド］プロパン酸の調製
【化７８】
2019500355.tif 000091
ステップ１
（３Ｓ）−エチル３−［３−ブロモ−５−クロロ−フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド］プロパノエートの調製
【化７９】
2019500355.tif 000092
【０１６２】
２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）酢酸（実施例Ｂ）（８２．０ｍｇ；０．２６６ｍｍｏｌ）、エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−（３−ブロモ−５−クロロ−フェニル）プロパノエート塩酸塩（３−ブロモ−５−クロロベンズアルデヒドから出発し、上述した方法のように合成したもの）（９１．４０ｍｇ、０．２６６ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）およびジクロロメタン（１．５ｍＬ）に溶解して、クリーム色〜橙色の懸濁物を得た。固体１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（９．０ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ）を上記の反応混合物に添加し、反応混合物を窒素雰囲気下で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（６０．０μＬ、０．３８７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、窒素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させて、生成物：（３Ｓ）−エチル３−（３−ブロモ−５−クロロ−フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパノエートのくすんだ黄色〜橙色のガム状残留物を得た。粗残留物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５９６（３５Ｃｌ，７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５９８（３５Ｃｌ，８１Ｂｒ，３７Ｃｌ，７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６００（３７Ｃｌ，８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６１８（３５Ｃｌ，７９ＢｒＭ＋Ｎａ）、ｍ／ｚ６２０（３５Ｃｌ，８１Ｂｒ，３７Ｃｌ，７９ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ６２２（３７Ｃｌ，８１ＢｒＭ＋Ｎａ）；Ｃ２４Ｈ２７ＢｒＣｌＮ５Ｏ６の計算値：５９６．８６を示す。粗残留物を、ステップ２における鹸化反応のためにそのまま使用した。
ステップ２
（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−クロロ−フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド］プロパン酸の調製
【化８０】
2019500355.tif 000093
【０１６３】
アセトニトリル／水の１：１混合物（４ｍＬ）の混合物中の、上記のステップ１からの粗製のエチル（３Ｓ）−３−（３−ブロモ−５−クロロ−フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパノエート（０．２６６ｍｍｏｌ）の懸濁物に、水酸化リチウム一水和物（５６．０ｍｇ、０．１．３３４ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を室温で４時間撹拌して、橙色〜黄色の溶液を得た。混合物をＴＦＡ（１０．０ｍＬのＣＨ３ＣＮ中１ｍＬ）で中和し、混合物を真空中で蒸発させて、無色ガム状残留物を得た。上記の粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜６０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥後、所望の生成物を無色凍結乾燥固体（実施例６）（８８．７ｍｇ、収率５９％）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５６８（３５Ｃｌ，７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５７０（３５Ｃｌ，８１Ｂｒ，３７Ｃｌ，７９ＢｒＭ＋Ｈ）およびｍ／ｚ５７２（３７Ｃｌ，８１ＢｒＭ＋Ｈ）を示す；Ｃ２２Ｈ２３ＢｒＣｌＮ５Ｏ６の計算値：５６８．８０。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.74 (d, J = 7.34 Hz, 2H, -CH2-COOH), 3.16 (d, J = 12.23Hz, 2H), 3.34 (d, J = 11.74 Hz, 2H), 3.87 (d, J = 5.87 Hz, 2H), 4.08 (appt,1H), 5.15 (q, J = 7.42 Hz, 1H, -NH-CH-CH2-COOH), 6.75 (t, J = 1.96Hz, 1H), 7.11 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.60 (s, 1H),8.13 (brs, 1H), 8.84 (d, J = 8.07 Hz, 1H), 8.64 (t, J = 5.87 Hz, 1H), 9.65(brs,1H), 10.03 (brs, 1H), 12.45 (brs, 1H, -COOH).生成物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、実施例６に関して提案されている構造と一致していた。
（実施例７）
（３Ｓ）−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパン酸の調製
【化８１】
2019500355.tif 000094
ステップ１
エチル（３Ｓ）−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエートの調製
【化８２】
2019500355.tif 000095
【０１６４】
２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］酢酸（実施例Ｄ）（５６．０ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）、エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）プロパノエート塩酸塩（実施例Ｅ）（３８．０５ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（３．５ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（３ｍＬ）およびジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下、室温で１０分間撹拌して、クリーム色懸濁物を得た。Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（２５μＬ、０．１６１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、窒素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させて、中間生成物：エチル（３Ｓ）−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエートの無色ガム状固体を得た。粗残留物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５７１（３５ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５７３（３７ＣｌＭ＋Ｈ）；ｍ／ｚ５９３（３５ＣｌＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ５９５（３７ＣｌＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２４Ｈ２６ＣｌＦ３Ｎ６Ｏ５の計算値：５７０．９５。粗残留物を、ステップ２における鹸化反応のためにそのまま使用した。
ステップ２
（３Ｓ）−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパン酸の調製
【化８３】
2019500355.tif 000096
【０１６５】
アセトニトリル／水の１：１混合物（４ｍＬ）の混合物中の、上記のステップ１からのエチル（３Ｓ）−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエート（０．１１５ｍｍｏｌ）の懸濁物に、水酸化リチウム一水和物（２５．０ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物をＴＦＡ（５ｍＬのＣＨ３ＣＮ中２５０μＬ）で中和し、混合物を真空中で蒸発させて、無色残留物を得た。粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜７０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥後、所望の生成物を無色凍結乾燥固体（実施例７）（４６．４ｍｇ、収率７４％）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５５８（３５ＣｌＭ＋Ｈ）およびｍ／ｚ５６０（３７ＣｌＭ＋Ｈ）を示す；Ｃ２２Ｈ２２ＣｌＦ３Ｎ６Ｏ５の計算値：５４２．９０。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.79 (d, J = 7.34 Hz, 2H, -CH2-COOH), 3.17 (d, J = 11.98Hz, 2H), 3.36 (d, J = 11.98 Hz, 2H), 3.94 (d, J = 5.87 Hz, 2H), 4.11 (brt, 1H),5.25 (q, J = 7.09 Hz, 1H, -NH-CH-CH2-COOH), 7.70 (s, 1H), 7.75 (s,2H), 8.02 (s, 1H), 8.43 (brs, 2H), 8.59 (brs, 1H), 8.66 (d, J = 8.07 Hz, 1H),8.90 (brs, 1H), 9.04 (t, J = 5.75 Hz, 1H), 9.92 (s,1H), 12.41 (brs, 1H, -COOH).生成物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、実施例７に関して提案されている構造と一致していた。19F NMR (376 MHz, DMSO-d6):δ -61.12 (s), および-74.31 (s).
（実施例８）
（３Ｓ）−３−（３−ブロモ−５−クロロ−フェニル）−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパン酸の調製
【化８４】
2019500355.tif 000097
ステップ１
エチル（３Ｓ）−３−（３−ブロモ（bromoo）−５−クロロ−フェニル）−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエートの調製
【化８５】
2019500355.tif 000098
【０１６６】
２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］酢酸（実施例Ｄ）（８０．０ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）、エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−［３−ブロモ−５−クロロフェニル）プロパノエート塩酸塩（３−ブロモ−５−クロロベンズアルデヒドから出発し、上述した方法のように合成したもの）（５６．１５ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（６．０ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（３ｍＬ）およびジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下、室温で１０分間撹拌して、クリーム色懸濁物を得た。Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（３５．０μＬ、０．２２６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、窒素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させて、中間生成物：エチル（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−クロロ−フェニル］−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエートの無色固体を得た。粗残留物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５８１（３５Ｃｌ，７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５８３（３５Ｃｌ，８１Ｂｒ，３７Ｃｌ，７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５８５（３７Ｃｌ，８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６０３（３５Ｃｌ，７９ＢｒＭ＋Ｎａ）、ｍ／ｚ６０５（３５Ｃｌ，８１Ｂｒ，３７Ｃｌ，７９ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ６０７（３７Ｃｌ，８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２３Ｈ２６ｌＢｒＣｌＮ６Ｏ５の計算値：５８１．８５。粗残留物を、ステップ２における鹸化反応のためにそのまま使用した。
ステップ２
（３Ｓ）−３−（３−ブロモ−５−クロロ−フェニル）−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパン酸の調製
【化８６】
2019500355.tif 000099
【０１６７】
アセトニトリル／水の１：１混合物（６ｍＬ）の混合物中の、上記のステップ１からのエチル（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−クロロ−フェニル］−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエート（０．１６４ｍｍｏｌ）の懸濁物に、水酸化リチウム一水和物（３５．０ｍｇ、０．８３４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をＴＦＡ（５ｍＬのＣＨ３ＣＮ中２５０μＬ）で中和し、混合物を真空中で蒸発させて、無色結晶性固体を得た。粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜５０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥後、所望の生成物を無色凍結乾燥固体（実施例８）（５５．０ｍｇ、収率６１％）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５５３（３５Ｃｌ，７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５５５（３５Ｃｌ，８１Ｂｒ，３７Ｃｌ，７９ＢｒＭ＋Ｈ）およびｍ／ｚ５５７（３７Ｃｌ，８１ＢｒＭ＋Ｈ）を示す；Ｃ２１Ｈ２２ＢｒＣｌＮ６Ｏ５の計算値：５５３．７９。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.75 (d, J = 7.34 Hz, 2H, -CH2-COOH), 3.17 (d, J = 12.23Hz, 2H), 3.36 (d, J = 11.00 Hz, 2H), 3.94 (d, J = 5.62 Hz, 2H), 4.11 (t,J =3.20 Hz, 1H), 5.16 (q, J = 7.42 Hz, 1H, -NH-CH-CH2-COOH), 7.44 (t, J= 1.47 Hz, 1H), 7.53 (appt, 1H), 7.60 (t, J = 1.83 Hz,1H), 8.03 (t, J = 2.08Hz, 1H), 8.42 (brs, 2H), 8.59 (d, J =7.82 Hz, 1H), 8.90 (brs, 1H), 9.03 (t, J =5.87 Hz, 1H), 9.90 (s,1H), 12.42 (brs, 1H, -COOH).生成物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、実施例８に関して提案されている構造と一致していた。
（実施例９）
（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパン酸の調製
【化８７】
2019500355.tif 000100
ステップ１
エチル（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエートの調製
【化８８】
2019500355.tif 000101
【０１６８】
２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］酢酸（実施例Ｄ）（６４．０ｍｇ、０．１３１ｍｍｏｌ）、エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−（３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）プロパノエート塩酸塩（実施例Ｆ）（４９．３１ｍｇ、０．１３１ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（５．０ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（３ｍＬ）およびジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下、室温で１０分間撹拌して、クリーム色懸濁物を得た。Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（３０．０μＬ、０．１９４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、窒素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させて、中間生成物：エチル（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエートの無色ガム状固体を得た。粗残留物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ６１５（７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６１７（８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６３７（７９ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ６３９（８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２４Ｈ２６ＢｒＦ３Ｎ６Ｏ５の計算値：６１５．４０。粗残留物を、ステップ２における鹸化反応のためにそのまま使用した。
ステップ２
（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパン酸の調製
【化８９】
2019500355.tif 000102
【０１６９】
アセトニトリル／水の１：１混合物（６ｍＬ）の混合物中の、上記のステップ１からのエチル（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエート（０．１３１ｍｍｏｌ）の懸濁物に、水酸化リチウム一水和物（３０．０ｍｇ、０．７１５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物をＴＦＡ（５ｍＬのＣＨ３ＣＮ中２５０μＬ）で中和し、混合物を真空中で蒸発させて、無色結晶性固体を得た。粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜６０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥後、所望の生成物を無色凍結乾燥固体（実施例９）（６９．６ｍｇ、収率９０％）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５８７（７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５８９（８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６０９（７９ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ６１１（８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２２Ｈ２２ＢｒＦ３Ｎ６Ｏ５の計算値：５８７．３５。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.79 (d, J = 7.34 Hz, 2H, -CH2-COOH), 3.17 (d, J = 12.47Hz, 2H), 3.36 (d, J = 11.74 Hz, 2H), 3.94 (d, J = 5.87 Hz, 2H), 4.11 (brt, 1H),5.24 (q, J = 7.25 Hz, 1H, -NH-CH-CH2-COOH), 7.73 (s, 1H), 7.85 (s,1H), 8.02 (t, J =2.08 Hz, 1H), 8.43 (brs, 2H), 8.59 (d, J = 1.96 Hz, 1H), 8.66(d, J = 8.07 Hz, 1H), 8.90 (s, 1H), 9.05 (t, J = 5.75 Hz, 1H), 9.92 (s,1H),12.43 (brs, 1H, -COOH).生成物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、実施例９に関して提案されている構造と一致していた。19F NMR (376 MHz, DMSO-d6):δ -61.10 (s), および-74.47 (s).
（実施例１０）
（３Ｓ）−３−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド］プロパン酸の調製
【化９０】
2019500355.tif 000103
ステップ１
エチル（３Ｓ）−３−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド］プロパノエートの調製
【化９１】
2019500355.tif 000104
【０１７０】
２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）酢酸（実施例Ｂ）（６５．５０ｍｇ；０．２１２ｍｍｏｌ）、エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−（３，５−ビス（１−（トリフルオロメチル）フェニル）プロパノエート塩酸塩（３，５−ビストリフルオロメチルベンズアルデヒドから出発し、上述した方法のように合成したもの）（７７．７０ｍｇ、０．２１２ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（２ｍＬ）およびジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解して、無色懸濁物を得た。固体１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（７．０ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）を上記の反応混合物に添加し、反応混合物を窒素雰囲気下で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（４５．０μＬ、０．２９１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、窒素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させて、生成物：エチル（３Ｓ）−３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパノエートの無色ガム状残留物を得た。粗残留物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ６２０（Ｍ＋Ｈ）およびｍ／ｚ６４２（Ｍ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２６Ｈ２７Ｆ６Ｎ５Ｏ６の計算値：６１９．５１。粗残留物を、ステップ２における鹸化反応のためにそのまま使用した。
ステップ２
（３Ｓ）−３−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド］プロパン酸の調製
【化９２】
2019500355.tif 000105
【０１７１】
アセトニトリル／水の１：１混合物（６ｍＬ）の混合物中の、上記のステップ１からの粗製のエチル（３Ｓ）−３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパノエート（０．２１２ｍｍｏｌ）の懸濁物に、水酸化リチウム一水和物（４５．０ｍｇ、１．０７２ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物をＴＦＡ（５．０ｍＬのＣＨ３ＣＮ中２５０μＬ）で中和し、混合物を真空中で蒸発させて、無色ガム状残留物を得た。上記の粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜６０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥後、所望の生成物を無色凍結乾燥固体（実施例１０）（６９．２ｍｇ、収率５５％）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５９２（Ｍ＋Ｈ）およびｍ／ｚ６１４（Ｍ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２４Ｈ２３Ｆ６Ｎ５Ｏ６の計算値：５９１．４６。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.83 (d, J = 7.34 Hz, 2H, -CH2-COOH), 3.15 (d, J = 12.23Hz, 2H), 3.33 (brd, J = 10.67 Hz, 2H), 3.87 (d, J = 5.62 Hz, 2H), 4.08 (d,J =3.18 Hz, 1H), 5.33 (q, J = 7.09 Hz, 1H, -NH-CH-CH2-COOH), 6.74 (t, J= 2.08 Hz, 1H), 7.10 (appt, 1H), 7.13 (appt, 1H), 7.85-8.22 (m, 4H), 8.48-8.93(m, 2H), 9.64 (s,1H), 10.02 (brs, 1H), 12.45 (brs, 1H, -COOH).生成物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、実施例１０に関して提案されている構造と一致していた。19F NMR (376 MHz, DMSO-d6):δ -61.14 (s), および-73.73 (s).
（実施例１１）
（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−メチル−フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパン酸の調製
【化９３】
2019500355.tif 000106
ステップ１
メチル（３Ｓ）３−［３−ブロモ−５−メチル−フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド］プロパノエートの調製
【化９４】
2019500355.tif 000107
【０１７２】
２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）酢酸（実施例Ｂ）（９４．７０ｍｇ、０．３０７ｍｍｏｌ）、メチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−（３−ブロモ−５−メチル−フェニル）プロパノエート塩酸塩（３−ブロモ−５−メチルベンズアルデヒドから出発し、上述した方法のように合成したもの）（９４．８０ｍｇ、０．３０７ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（２ｍＬ）およびジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解して、クリーム色懸濁物を得た。固体１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（１０．２０ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）を上記の反応混合物に添加し、反応混合物を窒素雰囲気下で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（７０μＬ、０．４５２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、窒素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させて、生成物：メチル（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−メチル−フェニル］−３−［［２−［［３−ヒドロキシ−５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ベンゾイル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエートの無色ガム状残留物を得た。粗残留物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５６２（７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５６４（８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５８４（７９ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ５８６（８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２４Ｈ２８ＢｒＮ５Ｏ６の計算値：５６２．４１。粗残留物を、ステップ２における鹸化反応のためにそのまま使用した。
ステップ２
（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−メチル−フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパン酸の調製
【化９５】
2019500355.tif 000108
【０１７３】
アセトニトリル／水の１：１混合物（６ｍＬ）の混合物中の、上記のステップ１からの粗製のメチル（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−メチル−フェニル］−３−［［２−［［３−ヒドロキシ−５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ベンゾイル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエート（０．３０７ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム一水和物（６５ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物をＴＦＡ（５．０ｍＬのＣＨ３ＣＮ中５００μＬ）で中和し、混合物を真空中で蒸発させて、無色ガム状残留物を得た。上記の粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜５０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥後、所望の生成物を無色凍結乾燥固体（実施例１１）（１０５．３ｍｇ、収率６２％）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５４８（７９ＢｒＭ＋Ｈ）およびｍ／ｚ５５０（８１ＢｒＭ＋Ｈ）を示す；Ｃ２３Ｈ２６ＢｒＮ５Ｏ６の計算値：５４８．３９。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.28 (s, 3H, CH3-), 2.70 (d, J = 7.34 Hz, 2H, -CH2-COOH),3.16 (d, J = 12.23 Hz, 2H), 3.34 (d, J = 11.98 Hz, 2H), 3.86 (d, J = 5.87 Hz,2H), 4.09 (t,J = 2.90 Hz, 1H), 5.13 (q, J = 7.50 Hz, 1H, -NH-CH-CH2-COOH),6.74 (t, J = 1.96 Hz, 1H), 7.11 (s, 1H), 7.14 (appt, 1H), 7.28 (appt, 1H), 7.31(appt, 1H), 8.13 (brs, 1H), 8.48 (d, J = 8.31 Hz, 1H), 8.61 (t, J = 5.87 Hz,1H), 9.64 (s,1H), 10.02 (brs, 1H), 12.37 (brs, 1H, -COOH).生成物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、実施例１１に関して提案されている構造と一致していた。
（実施例１２）
（３Ｓ）−３−［３−クロロ−５−メチル−フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパン酸の調製
【化９６】
2019500355.tif 000109
ステップ１
エチル（３Ｓ）３−（３−クロロ−５−メチル−フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパノエートの調製
【化９７】
2019500355.tif 000110
【０１７４】
２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）酢酸（実施例Ｂ）（８１．８０ｍｇ、０．２６５ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−エチル３−アミノ−３−（３−クロロ−５−メチル−フェニル）プロパノエート塩酸塩（３−クロロ−５−メチルベンズアルデヒドから出発し、上述した方法のように合成したもの）（７３．８１ｍｇ、０．２６５ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（２ｍＬ）およびジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解して、クリーム色懸濁物を得た。固体１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（８．４ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）を上記の反応混合物に添加し、反応混合物を窒素雰囲気下で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（６０μＬ、０．３９０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、窒素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させて、生成物：エチル（３Ｓ）−３−［３−クロロ−５−メチル−フェニル］−３−［［２−［［３−ヒドロキシ−５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ベンゾイル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエートの無色ガム状残留物を得た。粗残留物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５３２（３５ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５３４（３７ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５５４（３５ＣｌＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ５５６（３７ＣｌＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２５Ｈ３０ＣｌＮ５Ｏ６の計算値：５３１．９９。粗残留物を、ステップ２における鹸化反応のためにそのまま使用した。
ステップ２
（３Ｓ）−３−［３−クロロ−５−メチル−フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパン酸の調製
【化９８】
2019500355.tif 000111
【０１７５】
アセトニトリル／水の１：１混合物（６ｍＬ）の混合物中の、上記のステップ１からの粗製のエチル（３Ｓ）−３−［３−クロロ−５−メチル−フェニル］−３−［［２−［［３−ヒドロキシ−５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ベンゾイル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエート（０．２６５ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム一水和物（５６ｍｇ、１．３３４ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物をＴＦＡ（５．０ｍＬのＣＨ３ＣＮ中５００μＬ）で中和し、混合物を真空中で蒸発させて、無色粘性残留物を得た。上記の粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜５０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥後、所望の生成物を無色凍結乾燥固体（実施例１２）（８９．４ｍｇ、収率６７％）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５０４（３５ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５０６（３７ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５２６（３５ＣｌＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ５２８（３７ＣｌＭ＋Ｈ）を示す；Ｃ２３Ｈ２６ＣｌＮ５Ｏ６の計算値：５０３．９４。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.29 (s, 3H, CH3-), 2.70 (d, J = 7.34 Hz, 2H, -CH2-COOH),3.16 (d, J = 11.98 Hz, 2H), 3.34 (d, J = 11.00 Hz, 2H), 3.86 (d, J = 5.87 Hz,2H), 4.09 (appt/m, 1H), 5.14 (q, J = 7.25 Hz, 1H, -NH-CH-CH2-COOH),6.74 (t, J = 1.96 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 1.47 Hz, 2H), 7.14 (appt, 2H), 7.18 (s,1H), 8.14 (br s, 2H), 8.48 (d, J = 8.31 Hz, 1H), 8.61 (t, J = 5.99 Hz, 1H),9.67 (s,1H), 10.03 (brs, 1H), 12.32 (brs, 1H, -COOH).生成物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、実施例１２に関して提案されている構造と一致していた。
（実施例１３）
（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパン酸の調製
【化９９】
2019500355.tif 000112
ステップ１
エチル（３Ｓ）３−［３−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド］プロパノエートの調製
【化１００】
2019500355.tif 000113
【０１７６】
２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）酢酸（実施例Ｂ）（７９．５０ｍｇ、０．２５８ｍｍｏｌ）、エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−（３−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）プロパノエート塩酸塩（３−ブロモ−５−フルオロベンズアルデヒドから出発し、上述した方法のように合成したもの）（８４．２２ｍｇ、０．２５８ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（２ｍＬ）およびジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解して、クリーム色懸濁物を得た。固体１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（８．０ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を上記の反応混合物に添加して、反応混合物を窒素雰囲気下で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（６０μＬ、０．３８７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、窒素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させて、生成物：エチル（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−フルオロ−フェニル］−３−［［２−［［３−ヒドロキシ−５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ベンゾイル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエートの無色ガム状残留物を得た。粗残留物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５８０（７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５８２（８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６０２（７９ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ６０４（８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２４Ｈ２７ＢｒＦＮ５Ｏ６の計算値：５８０．４０。粗残留物を、ステップ２における鹸化反応のためにそのまま使用した。
ステップ２
（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパン酸の調製
【化１０１】
2019500355.tif 000114
【０１７７】
アセトニトリル／水の１：１混合物（６ｍＬ）の混合物中の、上記のステップ１からの粗製のエチル（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−フルオロ−フェニル］−３−［［２−［［３−ヒドロキシ−５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ベンゾイル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエート（０．２５８ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム一水和物（５５ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。混合物をＴＦＡ（５．０ｍＬのＣＨ３ＣＮ中２５０μＬ）で中和し、混合物を真空中で蒸発させて、無色ガム状残留物を得た。上記の粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜５０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥後、所望の生成物を無色凍結乾燥固体（実施例１３）（１１０．３ｍｇ、収率７７％）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５５２（７９ＢｒＭ＋Ｈ）およびｍ／ｚ５５４（８１ＢｒＭ＋Ｈ）を示す；Ｃ２２Ｈ２３ＢｒＦＮ５Ｏ６の計算値：５５２．３５。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.74 (d, J = 7.58 Hz, 2H, -CH2-COOH), 3.16 (d, J = 12.23Hz, 2H), 3.34 (d, J = 10.80 Hz, 2H), 3.87 (d, J = 5.87 Hz, 2H), 4.08 (t, J =3.18 Hz, 1H), 5.17 (q, J = 7.34 Hz, 1H, -NH-CH-CH2-COOH), 6.75 (t, J= 1.96 Hz, 1H), 7.11 (t,J = 1.47 Hz, 1H), 7.14 (appt, 1H), 7.21 (t, J = 1.71Hz, 1H), 7.24 (appt, 1H), 7.41 (m, 2H), 8.13 (brs, 1H), 8.53 (d, J = 8.07 Hz,1H), 8.64 (t, J = 5.75 Hz, 1H), 9.66 (brs,1H), 10.03 (brs, 1H), 12.40 (brs, 1H,-COOH).生成物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、実施例１３に関して提案されている構造と一致していた。19F NMR (376 MHz, DMSO-d6):δ -74.07(s), および-110.57 (t, J =8.85 Hz).
（実施例１４）
（３Ｓ）−３−（３，５−ジブロモフェニル）−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパン酸の調製
【化１０２】
2019500355.tif 000115
ステップ１
エチル（３Ｓ）−３−（３，５−ジブロモフェニル）−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエートの調製
【化１０３】
2019500355.tif 000116
【０１７８】
２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］酢酸（実施例Ｄ）（７８．０ｍｇ、０．２６６ｍｍｏｌ）、エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−（３，５−ジブロモフェニル）プロパノエート塩酸塩（酵素的リパーゼ開裂方法を介して形成された実施例Ｊの（Ｓ）エステル）（１０３．０６ｍｇ、０．２６６ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（８．１５ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（２ｍＬ）およびジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下、室温で１０分間撹拌して、クリーム色懸濁物を得た。Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（６０．０μＬ、０．３８７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、窒素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させて、中間生成物：エチル（３Ｓ）−３−［３，５−ジブロモフェニル］−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエートの無色結晶性固体を得た。粗残留物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ６２５（７９Ｂｒ，７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６２７（７９Ｂｒ，８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６２９（８１Ｂｒ，８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６４７（７９Ｂｒ，７９ＢｒＭ＋Ｎａ）、ｍ／ｚ６４９（７９Ｂｒ，８１ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ６５１（８１Ｂｒ，８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２３Ｈ２６Ｂｒ２Ｎ６Ｏ５の計算値：６２６．３０。粗残留物を、ステップ２における鹸化反応のためにそのまま使用した。
ステップ２
（３Ｓ）−３−（３，５−ジブロモフェニル）−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパン酸の調製
【化１０４】
2019500355.tif 000117
【０１７９】
アセトニトリル／水の１：１混合物（６ｍＬ）の混合物中の、上記のステップ１からのエチル（３Ｓ）−３−［３，５−ジブロモフェニル］−３−［［２−［［５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ピリジン−３−カルボニル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエート（０．２６６ｍｍｏｌ）の懸濁物に、水酸化リチウム一水和物（５６．０ｍｇ、０．１．３３４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物をＴＦＡ（５ｍＬのＣＨ３ＣＮ中２５０μＬ）で中和し、混合物を真空中で蒸発させて、無色結晶性／ガム状固体を得た。粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜５０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥後、所望の生成物を無色凍結乾燥固体（実施例１４）（８２．５ｍｇ、収率５２％）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５９７（７９Ｂｒ，７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５９９（７９Ｂｒ，８１ＢｒＭ＋Ｈ）およびｍ／ｚ６０１（８１Ｂｒ，８１ＢｒＭ＋Ｈ）を示す；Ｃ２１Ｈ２２Ｂｒ２Ｎ６Ｏ５の計算値：５９８．２４。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.74 (d, J = 7.34 Hz, 2H, -CH2-COOH), 3.17 (d, J = 12.23Hz, 2H), 3.36 (d, J = 11.0 Hz, 2H), 3.93 (d, J = 5.62 Hz, 2H), 4.11 (t, J =3.06Hz, 1H), 5.15 (q, J = 7.42 Hz, 1H, -NH-CH-CH2-COOH), 7.57 (d, J =1.71 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 8.03 (t, J = 2.20 Hz, 1H), 8.42 (brs, 1H), 8.59 (m,2H), 8.90 (d, J = 1.71 Hz, 1H), 9.03 (t, J = 5.75 Hz, 1H), 9.88 (s,1H), 12.42(brs, 1H, -COOH).生成物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、実施例１４に関して提案されている構造と一致していた。
（実施例１５）
（３Ｓ）−３−［３，５−ジクロロ−フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパン酸の調製
【化１０５】
2019500355.tif 000118
ステップ１
エチル（３Ｓ）３−（３，５−ジクロロフェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパノエートの調製
【化１０６】
2019500355.tif 000119
【０１８０】
２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）酢酸（実施例Ｂ）（８７．０ｍｇ、０．２８２ｍｍｏｌ）、エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−（３，５−ジクロロフェニル）プロパノエート塩酸塩（実施例Ｉ）（８４．２６ｍｇ、０．２８２ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（２ｍＬ）およびジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解して、クリーム色懸濁物を得た。固体１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（９．０ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ）を上記の反応混合物に添加し、反応混合物を窒素雰囲気下で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（６５μＬ、０．４２０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、窒素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させて、生成物：エチル（３Ｓ）−３−［３，５−ジクロロフェニル］−３−［［２−［［３−ヒドロキシ−５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ベンゾイル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエートの無色ガム状残留物を得た。粗残留物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５５２（３５ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５５４（３７ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５７４（３５ＣｌＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ５７６（３７ＣｌＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２４Ｈ２７Ｃｌ２Ｎ５Ｏ６の計算値：５５２．４１。粗残留物を、ステップ２における鹸化反応のためにそのまま使用した。
ステップ２
（３Ｓ）−３−［３，５−ジクロロ−フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパン酸の調製
【化１０７】
2019500355.tif 000120
【０１８１】
アセトニトリル／水の１：１混合物（６ｍＬ）の混合物中の、上記のステップ１からの粗製のエチル（３Ｓ）−３−［３，５−クロロフェニル］−３−［［２−［［３−ヒドロキシ−５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ベンゾイル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエート（０．２８２ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム一水和物（６０ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。混合物をＴＦＡ（５．０ｍＬのＣＨ３ＣＮ中１００μＬ）で中和し、混合物を真空中で蒸発させて、無色粘性残留物を得た。上記の粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜５０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥後、所望の生成物を無色凍結乾燥固体（実施例１５）（１０１．２ｍｇ、収率６８％）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５２４（３５ＣｌＭ＋Ｈ）およびｍ／ｚ５２６（３７ＣｌＭ＋Ｈ）を示す；Ｃ２２Ｈ２３Ｃｌ２Ｎ５Ｏ６の計算値：５２４．３５。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.75 (d, J = 7.34 Hz, 2H, -CH2-COOH), 3.16 (brd, J =11.98 Hz, 2H), 3.33 (brd, J = 12.23 Hz, 2H), 3.87 (d, J = 5.87 Hz, 2H), 4.08(brs, 1H), 5.15 (q, J = 7.17 Hz, 1H, -NH-CH-CH2-COOH), 6.75 (t, J=2.08 Hz, 1H), 7.11 (appt, 1H), 7.14 (appt, 1H), 7.40 (d, J =1.96 Hz, 1H), 7.49(appt, 1H), 8.12 (s, 2H), 8.54 (d, J = 8.07 Hz, 1H), 8.64 (t, J = 5.87 Hz, 1H),9.64 (s,1H), 10.02 (brs, 1H), 12.40 (brs, 1H, -COOH).生成物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、実施例１５に関して提案されている構造と一致していた。
（実施例１６）
（３Ｓ）−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパン酸の調製
【化１０８】
2019500355.tif 000121
ステップ１
エチル（３Ｓ）３−（３−クロロ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパノエートの調製
【化１０９】
2019500355.tif 000122
【０１８２】
２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）酢酸（実施例Ｂ）（６１．０ｍｇ、０．１９８ｍｍｏｌ）、エチル（３Ｓ）−３−アミノ−３−（３−クロロ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル）プロパノエート塩酸塩（実施例Ｇ）（６８．８９ｍｇ、０．１９８ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（２ｍＬ）およびジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解して、クリーム色懸濁物を得た。固体１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（６．１ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ）を上記の反応混合物に添加し、反応混合物を窒素雰囲気下で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（４６μＬ、０．２９７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、窒素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させて、生成物：エチル（３Ｓ）−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］−３−［［２−［［３−ヒドロキシ−５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ベンゾイル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエートのクリーム色ガム状残留物を得た。粗残留物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ６０２（３５ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６０４（３７ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６２４（３５ＣｌＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ６２６（３７ＣｌＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２５Ｈ２７ＣｌＦ３Ｎ５Ｏ７の計算値：６０１．９６。粗残留物を、ステップ２における鹸化反応のためにそのまま使用した。
ステップ２
（３Ｓ）−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパン酸の調製
【化１１０】
2019500355.tif 000123
【０１８３】
アセトニトリル／水の１：１混合物（６ｍＬ）の混合物中の、上記のステップ１からの粗製のエチル（３Ｓ）−３−［３−クロロ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］−３−［［２−［［３−ヒドロキシ−５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ベンゾイル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエート（０．１９８ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム一水和物（４２ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物をＴＦＡ（５．０ｍＬのＣＨ３ＣＮ中１００μＬ）で中和し、混合物を真空中で蒸発させて、無色粘性残留物を得た。上記の粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜７０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥後、所望の生成物を無色凍結乾燥固体（実施例１６）（６９．５０ｍｇ、収率６１％）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ５７４（３５ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５７６（３７ＣｌＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ５９６（３５ＣｌＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ５９８（３７ＣｌＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２３Ｈ２３ＣｌＦ３Ｎ５Ｏ７の計算値：５７３．９１。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.76 (d, J = 7.34 Hz, 2H, -CH2-COOH), 3.17 (d, J = 12.47Hz, 2H), 3.34 (d, J = 12.72 Hz, 2H), 3.88 (d, J = 5.87 Hz, 2H), 4.09 (t, J =3.20 Hz, 1H), 5.21 (q, J = 7.17 Hz, 1H, -NH-CH-CH2-COOH), 6.76 (t, J= 2.08 Hz, 1H), 7.12 (t, J = 1.59 Hz, 1H), 7.14 (t, J = 1.00 Hz, 1H), 7.35 (s,1H), 7.45 (d, J = 0.73 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 1.47 Hz, 1H), 8.13 (brs, 1H), 8.58(d, J = 7.82 Hz, 1H), 8.65 (t, J = 5.87 Hz, 1H), 9.64 (s,1H), 10.03 (brs, 1H),12.44 (brs, 1H, -COOH).生成物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、実施例１６に関して提案されている構造と一致していた。19F NMR (376 MHz, DMSO-d6):δ -56.83 (s), および-73.70 (s).
（実施例１７）
（３Ｓ）−３−（３−ブロモ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパン酸の調製
【化１１１】
2019500355.tif 000124
ステップ１
エチル（３Ｓ）３−（３−ブロモ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパノエートの調製
【化１１２】
2019500355.tif 000125
【０１８４】
２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）酢酸（実施例Ｂ）（６５．０ｍｇ、０．２１１ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−エチル３−アミノ−３−（３−ブロモ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル）プロパノエート塩酸塩（実施例Ｈ）（８２．７５ｍｇ、０．２１１ｍｍｏｌ）の混合物を、ＤＭＦ（２ｍＬ）およびジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解して、無色懸濁物を得た。固体１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（７．０ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）を上記の反応混合物に添加し、反応混合物を窒素雰囲気下で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（５０μＬ、０．３２３ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、窒素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させて、生成物：エチル（３Ｓ）−３−［３−ブロモ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］−３−［［２−［［３−ヒドロキシ−５−［（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ］ベンゾイル］アミノ］アセチル］アミノ］プロパノエートのクリーム色ガム状残留物を得た。粗残留物のＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ６４６（７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６４８（８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６６８（７９ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ６７０（８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２５Ｈ２７ＢｒＦ３Ｎ５Ｏ７の計算値：６４６．４１。粗残留物を、ステップ２における鹸化反応のためにそのまま使用した。
ステップ２
（３Ｓ）−３−（３−ブロモ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル）−３−（２−（３−ヒドロキシ−５−（（５−ヒドロキシ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イル）アミノ）ベンズアミド）アセトアミド）プロパン酸の調製
【化１１３】
2019500355.tif 000126
【０１８５】
アセトニトリル／水の１：１混合物（６ｍＬ）の混合物中の、上記のステップ１からの粗生成物（０．２１１ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム一水和物（４８ｍｇ、１．１４４ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物をＴＦＡ（５．０ｍＬのＣＨ３ＣＮ中０．１ｍＬ）で中和し、混合物を真空中で蒸発させて、無色粘性残留物を得た。上記の粗生成物を、０．０５％ＴＦＡを含有する水中１０〜７０％ＣＨ３ＣＮ勾配を用いる逆相ＨＰＬＣによって精製して、凍結乾燥後、所望の生成物を無色凍結乾燥固体（実施例１７）（８３．２ｍｇ、収率６４％）として得た。生成物のＬＣ／ＭＳ分析は、所望の生成物の質量：ｍ／ｚ６１８（７９ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６２０（８１ＢｒＭ＋Ｈ）、ｍ／ｚ６４０（７９ＢｒＭ＋Ｎａ）およびｍ／ｚ６４２（８１ＢｒＭ＋Ｎａ）を示す；Ｃ２３Ｈ２３ＢｒＦ３Ｎ５Ｏ７の計算値：６１８．３６。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.75 (d, J = 7.09 Hz, 2H, -CH2-COOH), 3.16 (d, J = 12.23Hz, 2H), 3.33 (d, J = 11.25 Hz, 2H), 3.87 (d, J = 5.87 Hz, 2H), 4.08 (t, J =3.20 Hz, 1H), 5.19 (q, J = 7.42 Hz, 1H, -NH-CH-CH2-COOH), 6.75 (t, J= 1.96 Hz, 1H), 7.11 (appt, 1H), 7.14 (t, J = 1.70 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.55(s, 1H), 7.61 (s, 1H), 8.12 (brs, 1H), 8.58 (d, J = 7.82 Hz, 1H), 8.64 (t, J =5.87 Hz, 1H), 9.63 (brs,1H), 10.02 (brs, 1H), 12.42 (brs, 1H, -COOH).生成物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、実施例１７に関して提案されている構造と一致していた。19F NMR (376 MHz, DMSO-d6):δ -56.81 (s), および-73.81 (s).
【０１８６】
Ｃ．生物学的アッセイ結果
本開示の化合物および比較化合物の活性を、下記のアッセイおよび実験的研究において試験した。結果を、表２、３および４ならびに図１に提示する。
【０１８７】
１．α５β１機能についての固相受容体アッセイ（ＳＰＲＡ）
ＴＢＳ＋緩衝液（２５ｍＭトリスｐＨ７．４、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２）中で２μｇ／ｍＬに希釈した精製ヒトフィブロネクチン（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、１９１８−ＦＮ）を、９６ウェルハーフウェル透明マイクロタイタープレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ６７５０６１）のウェル（５０μＬ／ウェル）に添加し、４℃で終夜インキュベートした。ウェルを１５０μＬのＴＢＳ＋で３回洗浄し、１５０μＬのブロッキング緩衝液（ＴＢＳ＋に１％ウシ血清アルブミンを加えたもの、Ｓｉｇｍａ  Ａ７９０６）を添加した。プレートを３７℃で１時間インキュベートし、次いで、ＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄した。組換えヒトインテグリンα５β１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、３２３０−Ａ５）を、ＴＢＳ＋／０．１％ウシ血清アルブミン中で０．１μｇ／ｍＬに希釈した。化合物をインテグリン溶液中に１：１００希釈し、次いで、洗浄したフィブロネクチンコーティングプレートの空のウェルに５０μＬを標準テンプレートに従って添加し、各試料について三連で繰り返した。室温で２時間インキュベーション後、プレートを１５０μＬのＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄した。各ウェルに、５０μＬのビオチン化抗α５抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＢＡＦ１８６４）をＴＢＳ＋／０．１％ＢＳＡ中０．５μｇ／ｍＬで添加し、プレートにカバーをし、室温で１時間インキュベートした。プレートを１５０μＬのＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄した後、ＴＢＳ＋ブロッキング緩衝液中で希釈した５０μＬのストレプトアビジンコンジュゲート西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＤＹ９９８）をウェルに添加し、プレートを室温で２０分間インキュベートした。プレートをＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄し、続いて、５０μＬの室温のＴＭＢ基質（Ｓｉｇｍａ、Ｔ４４４）を各ウェルに添加し、プレートを室温で２０分間インキュベートした。プレートを、Ｔｅｃａｎ  Ｓａｆｉｒｅ  ＩＩプレートリーダーを使用する６５０ｎｍ波長での比色検出によって読み取った。濃度−応答曲線を非線形回帰（適合度（ｂｅｓｔ  ｆｉｔ））分析によって構築し、ＩＣ５０値を各化合物について計算した。
【０１８８】
２．αｖβ１機能についての固相受容体アッセイ（ＳＰＲＡ）
ＴＢＳ＋緩衝液（２５ｍＭトリスｐＨ７．４、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２）中で５μｇ／ｍＬに希釈した精製ヒトフィブロネクチン（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、１９１８−ＦＮ）を、９６ウェルハーフウェル透明マイクロタイタープレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ６７５０６１）のウェル（５０μＬ／ウェル）に添加し、４℃で終夜インキュベートした。ウェルを１５０μＬのＴＢＳ＋で３回洗浄し、１５０μＬのブロッキング緩衝液（ＴＢＳ＋に１％ウシ血清アルブミンを加えたもの、Ｓｉｇｍａ  Ａ７９０６）を添加した。プレートを３７℃で１時間インキュベートし、次いで、ＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄した。組換えヒトインテグリンαｖβ１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ．６５７９−ＡＶ）を、ＴＢＳ＋／０．１％ウシ血清アルブミン中で２．０μｇ／ｍＬに希釈した。化合物をインテグリン溶液中に１：１００希釈し、洗浄したフィブロネクチンコーティングプレートの空のウェルに５０μＬを標準テンプレートに従って添加し、各試料について三連で繰り返した。室温で２時間インキュベーション後、プレートを１５０μＬのＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄した。各ウェルに、５０μＬのビオチン化抗αｖ抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＢＡＦ１２１９）をＴＢＳ＋／０．１％ＢＳＡ中１μｇ／ｍＬで添加し、プレートにカバーをし、室温で１時間インキュベートした。プレートを１５０μＬのＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄した後、ＴＢＳ＋ブロッキング緩衝液中で希釈した５０μＬのストレプトアビジンコンジュゲート西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＤＹ９９８）をウェルに添加し、プレートを室温で２０分間インキュベートした。プレートをＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄し、続いて、５０μＬのＴＭＢ基質（Ｓｉｇｍａ、Ｔ４４４４）を各ウェルに添加し、プレートを室温で２０分間インキュベートした。プレートを、Ｔｅｃａｎ  Ｓａｆｉｒｅ  ＩＩプレートリーダーを使用する６５０ｎｍ波長での比色検出によって読み取った。濃度−応答曲線を非線形回帰（適合度）分析によって構築し、ＩＣ５０値を各化合物について計算した。
【０１８９】
３．αｖβ３機能についての固相受容体アッセイ（ＳＰＲＡ）
ＴＢＳ＋緩衝液（２５ｍＭトリスｐＨ７．４、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２）中で１μｇ／ｍＬに希釈した組換えヒトビトロネクチン（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、２３０８−ＶＮ）を、９６ウェルハーフウェル透明マイクロタイタープレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ６７５０６１）のウェル（５０μＬ／ウェル）に添加し、４℃で終夜インキュベートした。ウェルを１５０μＬのＴＢＳ＋で３回洗浄し、１５０μＬのブロッキング緩衝液（ＴＢＳ＋に１％ウシ血清アルブミンを加えたもの、Ｓｉｇｍａ  Ａ７９０６）を添加した。プレートを３７℃で１時間インキュベートし、次いで、ＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄した。組換えヒトインテグリンαｖβ３（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、３０５０−ＡＶ）を、ＴＢＳ＋／０．１％ウシ血清アルブミン中で１μｇ／ｍＬに希釈した。化合物をインテグリン溶液中に１：１００希釈し、次いで、洗浄したビトロネクチンコーティングプレートの空のウェルに５０μＬを標準テンプレートに従って添加し、各試料について三連で繰り返した。室温で２時間インキュベーション後、プレートを１５０μＬのＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄した。各ウェルに、５０μＬのビオチン化抗αｖ抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＢＡＦ１２１９）をＴＢＳ＋／０．１％ＢＳＡ中０．５μｇ／ｍＬで添加し、プレートにカバーをし、室温で１時間インキュベートした。プレートを１５０μＬのＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄した後、ＴＢＳ＋ブロッキング緩衝液中で希釈した５０μＬのストレプトアビジンコンジュゲート西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＤＹ９９８）をウェルに添加し、プレートを室温で２０分間インキュベートした。プレートをＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄し、続いて、５０μＬのＴＭＢ基質（Ｓｉｇｍａ、Ｔ４４４４）を各ウェルに添加し、プレートを室温で２０分間インキュベートした。プレートを、Ｔｅｃａｎ  Ｓａｆｉｒｅ  ＩＩプレートリーダーを使用する６５０ｎｍ波長での比色検出によって読み取った。濃度−応答曲線を非線形回帰（適合度）分析によって構築し、ＩＣ５０値を各化合物について計算した。
【０１９０】
４．αｖβ５機能についての固相受容体アッセイ（ＳＰＲＡ）
ＴＢＳ＋緩衝液（２５ｍＭトリスｐＨ７．４、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２）中の０．２５μｇ／ｍＬの組換えヒトビトロネクチン（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、２３０８−ＶＮ）を９６ウェルハーフウェル透明マイクロタイタープレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ６７５０６１）のウェル（５０μＬ／ウェル）に添加し、４℃で終夜インキュベートした。ウェルを１５０μＬのＴＢＳ＋で３回洗浄し、１５０μＬのブロッキング緩衝液（ＴＢＳ＋に１％ウシ血清アルブミンを加えたもの、Ｓｉｇｍａ  Ａ７９０６）を添加した。プレートを３７℃で１時間インキュベートし、次いで、ＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄した。組換えヒトインテグリンαｖβ５（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、２５２８−ＡＶ）を、ＴＢＳ＋／０．１％ウシ血清アルブミン中で０．１μｇ／ｍＬに希釈した。化合物をインテグリン溶液中に１：１００希釈し、次いで、洗浄したビトロネクチンコーティングプレートの空のウェルに５０μＬを標準テンプレートに従って添加し、各試料について三連で繰り返した。室温で２時間インキュベーション後、プレートを１５０μＬのＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄した。各ウェルに、５０μｌのビオチン化抗αｖ抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＢＡＦ１２１９）をＴＢＳ＋／０．１％ＢＳＡ中０．５μｇ／ｍＬで添加し、プレートにカバーをし、室温で１時間インキュベートした。プレートを１５０μＬのＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄した後、ＴＢＳ＋ブロッキング緩衝液中で希釈した５０μＬのストレプトアビジンコンジュゲート西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓｍ  ＤＹ９９８）をウェルに添加し、プレートを室温で２０分間インキュベートした。プレートをＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄し、続いて、５０μＬのＴＭＢ基質（Ｓｉｇｍａ  Ｔ４４４４）を各ウェルに添加し、プレートを室温で２０分間インキュベートした。プレートを、Ｔｅｃａｎ  Ｓａｆｉｒｅ  ＩＩプレートリーダーを使用する６５０ｎｍ波長での比色検出によって読み取った。濃度−応答曲線を非線形回帰（適合度）分析によって構築し、ＩＣ５０値を各化合物について計算した。
【０１９１】
５．αｖβ６機能についての固相受容体アッセイ（ＳＰＲＡ）
ＴＢＳ＋緩衝液（２５ｍＭトリスｐＨ７．４、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２）中で０．２５μｇ／ｍＬに希釈した組換えヒトＬＡＰ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、２４６−ＬＰ）を、９６ウェルハーフウェル透明マイクロタイタープレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ６７５０６１）のウェル（５０μＬ／ウェル）に添加し、４℃で終夜インキュベートした。ウェルを１５０μＬのＴＢＳ＋で３回洗浄し、１５０μＬのブロッキング緩衝液（ＴＢＳ＋に１％ウシ血清アルブミンを加えたもの、Ｓｉｇｍａ  Ａ７９０６）を添加した。プレートを３７℃で１時間インキュベートし、次いで、ＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄した。組換えヒトインテグリンαｖβ６（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、３８１７−ＡＶ）を、ＴＢＳ＋／０．１％ウシ血清アルブミン中で０．１μｇ／ｍＬに希釈した。化合物をインテグリン溶液中に１：１００希釈し、次いで、洗浄したＬＡＰコーティングプレートの空のウェルに５０μＬを標準テンプレートに従って添加し、各試料について三連で繰り返した。室温で２時間インキュベーション後、プレートを１５０μＬのＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄した。各ウェルに、５０μＬのビオチン化抗αｖ抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＢＡＦ１２１９）をＴＢＳ＋／０．１％ＢＳＡ中０．５μｇ／ｍＬで添加し、プレートにカバーをし、室温で１時間インキュベートした。プレートを１５０μＬのＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄した後、ＴＢＳ＋ブロッキング緩衝液中で希釈した５０μＬのストレプトアビジンコンジュゲート西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＤＹ９９８）をウェルに添加し、プレートを室温で２０分間インキュベートした。プレートをＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄し、続いて、５０μＬのＴＭＢ基質（Ｓｉｇｍａ  Ｔ４４４４）を各ウェルに添加し、プレートを室温で２０分間インキュベートした。プレートを、Ｔｅｃａｎ  Ｓａｆｉｒｅ  ＩＩプレートリーダーを使用する６５０ｎｍ波長での比色検出によって読み取った。濃度−応答曲線を非線形回帰（適合度）分析によって構築し、ＩＣ５０値を各化合物について計算した。
【０１９２】
６．αｖβ８機能についての固相受容体アッセイ（ＳＰＲＡ）
ＴＢＳ＋緩衝液（２５ｍＭトリスｐＨ７．４、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２）中で０．５μｇ／ｍＬに希釈した組換えヒトＬＡＰタンパク質（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ、２４６−ＬＰ）を、９６ウェルハーフウェル透明マイクロタイタープレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ６７５０６１）のウェル（５０μｌ／ウェル）に添加し、４℃で終夜インキュベートした。ウェルを１５０μＬのＴＢＳ＋で３回洗浄し、１５０μＬのブロッキング緩衝液（ＴＢＳ＋に１％ウシ血清アルブミンを加えたもの、Ｓｉｇｍａ  Ａ７９０６）を添加した。プレートを３７℃で１時間インキュベートし、次いで、ＴＢＳ＋で３回洗浄した。組換えヒトインテグリンαｖβ８（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、４１３５−ＡＶ）を、ＴＢＳ＋／０．１％ウシ血清アルブミン中で０．１μｇ／ｍＬに希釈した。化合物をインテグリン溶液中に１：１００希釈し、洗浄したＬＡＰコーティングプレートの空のウェルに５０μＬを標準テンプレートに従って添加し、各試料について三連で繰り返した。室温で２時間インキュベーション後、プレートを１５０μＬのＴＢＳ＋で３回洗浄した。各ウェルに、５０μＬのビオチン化抗αｖ抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＢＡＦ１２１９）をＴＢＳ＋／０．１％ＢＳＡ中１μｇ／ｍＬで添加し、プレートにカバーをし、室温で１時間インキュベートした。プレートを１５０μＬのＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄した後、ＴＢＳ＋ブロッキング緩衝液中で希釈した５０μＬのストレプトアビジンコンジュゲート西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＤＹ９９８）をウェルに添加し、プレートを室温で２０分間インキュベートした。プレートをＴＢＳ＋で３回洗浄し、続いて、５０μＬのＴＭＢ基質（Ｓｉｇｍａ  Ｔ４４４４）を各ウェルに添加し、プレートを室温で２０分間インキュベートした。プレートを、Ｔｅｃａｎ  Ｓａｆｉｒｅ  ＩＩプレートリーダーを使用する６５０ｎｍ波長での比色検出によって読み取った。濃度−応答曲線を非線形回帰（適合度）分析によって構築し、ＩＣ５０値を各化合物について計算した。
【０１９３】
７．α８β１機能についての固相受容体アッセイ（ＳＰＲＡ）
ＴＢＳ＋緩衝液（２５ｍＭトリスｐＨ７．４、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２）中で１μｇ／ｍＬに希釈した組換えマウスネフロネクチン（ｎｅｐｈｒｏｎｅｃｔｉｎ）タンパク質（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ、４２９８−ＮＰ）を、９６ウェルハーフウェル透明マイクロタイタープレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ６７５０６１）のウェル（５０μＬ／ウェル）に添加し、４℃で終夜インキュベートした。ウェルを１５０μＬのＴＢＳ＋で３回洗浄し、１５０μＬのブロッキング緩衝液（ＴＢＳ＋に１％ウシ血清アルブミンを加えたもの、Ｓｉｇｍａ  Ａ７９０６）を添加した。プレートを３７℃で１時間インキュベートし、次いで、ＴＢＳ＋で３回洗浄した。組換えヒトインテグリンα８β１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、発売前）を、ＴＢＳ＋／０．１％ウシ血清アルブミン中で０．２５μｇ／ｍＬに希釈した。化合物をインテグリン溶液中に１：１００希釈し、洗浄したネフロネクチンコーティングプレートの空のウェルに５０μＬを標準テンプレートに従って添加し、各試料について三連で繰り返した。室温で２時間インキュベーション後、プレートを１５０μＬのＴＢＳ＋で３回洗浄した。各ウェルに、５０μＬのビオチン化抗β１抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＢＡＦ１７７８）をＴＢＳ＋／０．１％ＢＳＡ中０．５μｇ／ｍＬで添加し、プレートにカバーをし、室温で１時間インキュベートした。プレートを１５０μＬのＴＢＳ＋緩衝液で３回洗浄した後、ＴＢＳ＋ブロッキング緩衝液中で希釈した５０μＬのストレプトアビジンコンジュゲート西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＤＹ９９８）をウェルに添加し、プレートを室温で２０分間インキュベートした。プレートをＴＢＳ＋で３回洗浄し、続いて、５０μＬのＴＭＢ基質（Ｓｉｇｍａ  Ｔ４４４４）を各ウェルに添加し、プレートを室温で２０分間インキュベートした。プレートを、Ｔｅｃａｎ  Ｓａｆｉｒｅ  ＩＩプレートリーダーを使用する６５０ｎｍ波長での比色検出によって読み取った。濃度−応答曲線を非線形回帰（適合度）分析によって構築し、ＩＣ５０値を各化合物について計算した。
【０１９４】
Ｄ．薬物動態分析
１．材料
最低限十分な量のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を、各試験化合物に添加して、可溶化を達成した。次いで、静脈内（ＩＶ）送達のために、化合物を、グリセロールホルマール：生理食塩水（２０：８０または４０：６０ｖ／ｖのいずれか）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）中溶液として製剤化した。経口（ＰＯ）投与のために、化合物を０．５％メチルセルロースとともに製剤化した。５〜６つの化合物溶液を組み合わせて、ＩＶおよびＰＯカセットのためにそれぞれ０．６％未満または１．２％未満の最終ＤＭＳＯ濃度を持つ、ＩＶおよびＰＯカセット投与用の単一混合溶液とした。ＬＣ−２０ＡＤポンプ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ、Ｋｙｏｔｏ、Ｊａｐａｎ）、ＨＴＣ  ＰＡＬオートサンプラー（Ｌｅａｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｒｂｏｒｏ、Ｎ．Ｃ．）およびＥＳＩモードのＳｃｉｅｘ  ＡＰＩ−４０００質量分析計（ＡＢ  Ｓｃｉｅｘ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ．）からなるＬＣ／ＭＳ／ＭＳ（液体クロマトグラフィー／質量分析法）システムを使用して、検体を試験試料中で検出した。アムールＣ１８逆相カラム（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓａｌｅｓ  ａｎｄ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｐｏｍｐｔｏｎ  Ｐｌａｉｎｓ、Ｎ．Ｊ．）をクロマトグラフ分離に使用した。
【０１９５】
２．実験プロトコール
セントルイス大学で行われた薬物動態（ＰＫ）研究では、２００〜２２０ｇの初期体重を持つ雄スプラーグドーリー系ラットを使用した。ＩＶ  ＰＫ研究は、下記の化合物を用いて実施した：実施例１〜３および５〜１７ならびに比較化合物Ｃ１２〜Ｃ１８、Ｃ２９およびＣ３０。動物に、食物および水への自由なアクセスを許した。ラットを個々に収容し、頸静脈カテーテルに接続した。各カセット製剤を、２匹のラットに静脈内投与した（体重１ｋｇ当たり１ｍＬ）。各カセット製剤は、２０：８０または４０／６０いずれかのグリセロールホルマール／生理食塩水（ｖ／ｖ）中に５〜６つの化合物を１ｍｇ／ｋｇで含有していた。用量後０．０１７、０．０８３、０．５、１、２、４、６および２４時間で、血液を、リチウムヘパリン管中にカテーテルを介して手動で収集した。実験の終わりに、動物をＣＯ２で安楽死させた。
【０１９６】
経口ＰＫ研究は、下記の化合物を用いて行った：実施例１〜３および５〜１７ならびに比較化合物Ｃ１２、Ｃ１４〜１６およびＣ２９〜３０。カセット当たり５〜６つの化合物を含有するＰＯカセット製剤を、２匹のラットに経口胃管栄養法を介して投与した（体重１ｋｇ当たり１０ｍＬ）。経口用量は、０．５％メチルセルロース中２ｍｇ／ｋｇ／化合物で投与した。採血時点は、リチウムヘパリン管中へ、用量後０．２５、０．５、１、２、４、６および２４時間であった。実験の終わりに、動物をＣＯ２で安楽死させた。
【０１９７】
内部標準を、全ての試料に２００ｎｇ／ｍＬ（最終）で、１５０μＬのアセトニトリルとともに添加した。血漿試料（５０μＬの総体積）を適宜対照ナイーブラット血漿で希釈して、試料測定値を標準曲線の線形ダイナミックレンジにした。試料に蓋をし、マルチプレートボルテクサー上で５分間混合し、３２００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清を９６ウェル試料プレートに移し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析のために蓋をした。化合物を最適化し、それらのそれぞれのＭＲＭ遷移についてモニターした。移動相は、０．３５ｍＬ／分の流量でのアムールＣ１８逆相カラム（２．１×３０ｍｍ、５ミクロン）を用いる、０．１％ギ酸（水溶液）および１００％アセトニトリル（有機）からなるものであった。出発相は、０．９分間１０％アセトニトリルであり、次いで、０．４分間かけて９０％アセトニトリルに増大し、追加で０．２分間維持された後、０．４分間かけて１０％アセトニトリルに戻った。１０％アセトニトリルを追加で１．６分間保持した。Ａｎａｌｙｓｔ  １．５．１（ＡＢ  Ｓｃｉｅｘ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ．）を使用して、ピーク面積を積分した。
【０１９８】
比較化合物Ｃ１９〜Ｃ２８について、同様のラットＰＫ研究をＰＲＥＳＣＯＳ，ＬＬＣ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）によって行った。１９５〜２２０ｇの初期体重を持つ雌スプラーグドーリー系ラットを使用した。４０／６０  グリセロールホルマール／生理食塩水中１ｍｇ／ｋｇ／化合物を含むカセット製剤を、３匹のラットに静脈内投与した。各動物について投薬体積は体重１ｋｇ当たり５ｍＬであった。用量後０．０１７、０．２５、０．５、１、２、４および８時間で、血液試料を、Ｋ２ＥＤＴＡ管中に頸静脈カテーテルを介して収集した。実験の終わりに、動物をＣＯ２で安楽死させた。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによる試料加工および化合物測定は、ＨＴ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）によって実施した。
【表３Ａ】
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【表３Ｂ】
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【表４Ａ】
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【表４Ｂ】
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【表５Ａ】
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【表５Ｂ】
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【０１９９】
本明細書で記述されている実施例および選択比較化合物のＡＵＣを、ラットにおける単回２ｍｇ／ｋｇ経口（ＰＯ）用量後に決定して、本開示の実施例の血漿曝露増大を実証した。
【０２００】
本明細書で開示され特許請求されている化合物、組成物および方法の全ては、本開示を考慮して、必要以上の実験をすることなく作製し実行することができる。本開示の化合物、組成物および方法を好ましい実施形態の観点から記述してきたが、本開示の概念、趣旨および範囲を逸脱することなく、組成物および方法に、ならびに本明細書で記述されている方法のステップにおいてまたは一連のステップにおいて、変形形態が適用され得ることが、当業者には明らかとなると予想される。より具体的には、化学的にかつ生理学的に両方で関連するある特定の薬剤により、本明細書で記述されている薬剤を代用してよく、その上、同じまたは同様の結果が達成されることが明らかとなると予想される。当業者に明らかな全てのそのような同様の代用物および修正形態は、添付の特許請求の範囲によって定義される通り、本開示の趣旨、範囲および概念に含まれると考えられる。
【０２０１】
参考文献
下記の参考文献は、本明細書で説明されているものを補足する例示的な手順のまたは他の詳細を提供する限りでは、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。
米国特許第６，０１３，６５１号
米国特許第６，０２８，２２３号
Adachi et al., Clin. Cancer Res., 6(1):96-101, 2000.
Asano et al., J. Immunol., 175(11):7708-7718, 2005.
Avraamides et al., Nat. Rev. Cancer, 8(8):604-617,2008.
Bax et al., J. Biol. Chem., 278(36):34605-34616, 2003.
Becker et al., Tetrahedron, 39:4189-4192, 1983.
Bhaskar et al., J. Transl. Med., 5:61, 2007.
Blase et al., Int. J. Cancer, 60(6):860-866, 1995.
Bouzeghrane, et al., J. Mol. Cell. Cardiology,36:343-353, 2004.
Clark, et al., Organic Process Research & Development, 8:51-61,2004.
Clark, et al., Organic Process Research & Development,8:571-575, 2004.
Collo, J. Cell Sci., 112(Pt 4):569-578, 1999.
Danen et al., Histopathology, 24(3):249-256, 1994.
Edward, Curr. Opin. Oncol., 7(2):185-191, 1995.
Engleman et al., J. Clin. Invest., 99(9):2284-2292,1997.
Faulconbridge et al., Tetrahedron Lett., 41:2679-2681, 2000.
Ferrari et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103(46):17260-17265,2006.
Gaoand Brigstock, Gut, 55:856-862, 2006.
Girschet al., J. Med. Chem., 50:1658-1667, 2007.
Girschet al., J. Med. Chem., 51:6752-6760, 2008.
Greene & Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rdEd., John Wiley, 1999.
Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, and Use, Stahl and Wermuth(Eds.), Verlag Helvetica Chimica Acta, 2002.
Henderson, et al., Nat. Med., 19:1617-1624, 2013.
Herlt,et al., Austr. J. Chem., 34(6):1319-1324, 1981.
Horan et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 177(1):56-65, 2008.
Jorgensen, et al., J. Am. Chem. Soc., 124(42):12557-12565,2002.
Kim et al., Am. J. Pathol., 156(4):1345-1362, 2000.
Landis et al., Organic Process Research & Development, 6:539-546,2002.
Levine, et al., Am. J. Pathol., 156:1927-1935,2000.
Li et al., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 50(12):5988-5996, 2009.
Livant et al., J. Clin. Invest., 105(11):1537-1545, 2000.
Lobert et al., Dev. Cell, 19(1):148-159, 2010.
Lu, et al., J.Cell Sci., 115:4641-4648, 2002.
March’s Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 2007.
Melton et al., J. Clin. Invest., 120(12):4436-4444,2010.
Millard et al., Theranostics, 1:154-88, 2011.
Mu et al., Cell Biol., 157(3):493-507, 2002.
Munger et al., Cell., 96(3):319-328, 1999.
Munger et al., Mol. Biol. Cell, 9:2627-2638, 1998.
Nishimura, Am. J. Pathol., 175(4):1362-1370, 2009.
Perdih, Curr. Med. Chem., 17(22):2371-2392, 2010.
Popov et al., J. Hepatol., 48(3):453-464, 2008.
Reagan-Shaw et al., FASEB J., 22(3):659-661, 2008
Scotton et al., J. Clin. Invest., 119(9):2550-2563,2009.
Suehiro et al., J. Biochem., 128(4):705-710, 2000.
Sun, et al., Am.J. Therapeutics, 2014.
Wipff et al., J. Cell Biol., 179(6):1311-1323, 2007.
Yang et al., Development, 119(4):1093-1105, 1993.
Yoshimura, Curr. Top. Microbiol. Immunol., 350:127-147, 2011.
Zahn et al., Arch. Ophthalmol., 127(10):1329-1335,2009.
Zahn et al., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 51(2):1028-1035, 2010
【図１】
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【国際調査報告】
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2019500355.tif 000141
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