(57)【要約】  試料を、例えば、かかる試料中の凝固性フィブリノゲンの存在の検出及び／又は定量化に使用するためにインサイツ調製を行うための方法、デバイス、及びシステムが提供される。
2019516092.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料のインサイツ調製を行うためのデバイスであって、前記調製が、ある数の工程を含み、かつ少なくとも２つの物質を伴い、前記デバイスが、
−物質受け部（４１）であって、頂部（１１）及び底部を有し、前記工程の各々に必要な所定量の材料を、前記頂部（１１）を通して中に受け取るのに十分な寸法を有する、物質受け部（４１）と、
−膜（３０）であって、前記物質受け部（４１）の前記底部を構成し、前記物質受け部の内側の方に向いている上面（３１ａ）と、前記物質受け部の外側の方に向いている下面（３１ｂ）と、を有し、前記工程のうちの少なくとも１つにおいて前記物質受け部中に配置される流体が、真空がその底部に適用されるときにのみ、そこから前記膜を通って前記物質受け部の前記外側に向かって移動することを可能にするような構造を有する、膜（３０）と、
−少なくとも１つの遮断部材（５１）であって、前記部材は、それが前記膜の前記下面に近接して配置され、それを被覆することで、前記物質受け部と前記物質受け部の前記外側との間の、前記膜を通した流体連通の可能性を防ぐ、１つの位置と、前記膜から離間されることで、真空が前記物質受け部の前記底部に適用されるときに前記流体連通を可能にする、別の位置と、に着くように構成されている、遮断部材（５１）と、を備える、デバイス。
【請求項２】
細長いキャビティ（４０）を更に備え、前記細長いキャビティ（４０）が、上方開口部（１１）及び下方開口部（２１）、前記物質受け部（４１）によって構成された第１のキャビティ部分、並びに前記膜（３０）と前記キャビティの前記下方開口部（２１）との間に延在する第２のキャビティ部分（４２）を有し、前記遮断部材（５１）が、前記デバイスの下方開口端部から前記第２のキャビティ部分の中へと挿入可能である、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３】
少なくとも、前記物質受け部、前記膜、及び前記遮断部材を囲繞している前記デバイスの部分が、アルカリ性物質、より具体的にはＮａＯＨに耐性である、請求項１又は２に記載のデバイス。
【請求項４】
前記膜が、少なくとも使用前に少なくとも前記物質に関して吸収特性を有しない材料で作製され、前記材料が、多孔質疎水性材料であり、かつ／又は少なくとも前記物質に対して不活性である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項５】
前記材料が、１０〜４０μｍの範囲、より具体的には２０〜３０μｍの範囲、更により具体的には約２５μｍのサイズの孔を有する、請求項４に記載のデバイス。
【請求項６】
前記デバイスは、前記膜の前記下面（３１ｂ）への真空の適用を許容すべく、前記遮断部材（５１）が前記膜（３０）から離間されているときに、真空マニホールド上に取り付けられるように構成されている、請求項１〜５のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項７】
前記遮断部材が、軸（Ｘ）に沿った延長部を有し、前記延長部が、少なくとも、この軸に沿った前記第２のキャビティ部分の延長部以上である、請求項２又は請求項２に直接的若しくは間接的に従属する請求項のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項８】
ウェル（４０）のアレイを構成する複数の前記物質受け部と、対応する複数の遮断部材と、を備え、前記遮断部材の各々が、前記対応する物質受け部に対する位置に着くように構成されている、請求項１〜７のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項９】
−上方プレート（１０）であって、上面（１５）と、下面（１２）と、それらの間に延在する複数の第１のウェル部分（４１）と、を有し、前記複数の第１のウェル部分（４１）が各々、前記上面に頂部開口端部を、そして前記下面に底部開口端部を有し、各第１のウェル部分が、前記物質受け部（４１）を構成する、上方プレート（１０）と、
−膜シート（３０）であって、前記上方プレート（１０）とその下面（１２）にて組み立てられるように構成され、その結果、前記各第１のウェル部分の下方開口端部に最も近く、かつそれと形状及び寸法において対応する前記膜の領域が、前記第１のウェル部分（３２）の底部を構成する、膜シート（３０）と、を備える、システム（３）の一部、を構成する、請求項８に記載のデバイス。
【請求項１０】
前記システムが、前記膜の前記領域（３２）及び前記第１のウェル部分の対応する下方開口端部の周囲に封止を形成するための封止アレンジメント（６０）を更に備え、任意選択的に、前記封止アレンジメント（６０）が、任意選択的にケイ素で作製され、前記第１のウェル部分の前記底部開口端部と形状及び寸法において対応する複数の上方封止開口部（６５ａ）を有する、上方封止シート（６０ａ）の形態であり、前記上方封止シートが、前記上方プレート（１０）と前記膜（３０）との間に、その開口部が前記第１のウェル部分（４１）と同軸上で整列した状態で取り付けられるように構成されている、請求項９に記載のデバイス。
【請求項１１】
前記システムが、上面（２２）と、下面（２５）と、それらの間に延在し、前記第１のウェル部分の断面形状及び寸法と対応する断面形状及び寸法を有する、複数の第２のウェル部分（４２）と、を有する、下方プレート（２０）を更に備え、各第２のウェル部分が、前記下方プレートの前記上面に頂部開口端部を、そして前記下方プレートの前記下面に底部開口端部を有し、前記上方プレート（１０）及び前記下方プレート（２０）は、前記膜（３０）がそれらの間に挟み込まれた状態で互いに固定されるように構成され、その結果、各対の対応する第１のウェル部分（４１）及び前記第２のウェル部分（４２）が、同軸上で整列して１つのウェルを形成し、前記膜の前記領域（３２）によって分離されている、請求項９又は１０に記載のデバイス。
【請求項１２】
前記システムが、前記膜の前記領域及び前記第２のウェル部分の前記頂部開口端部の周囲に封止を形成する封止アレンジメントを更に備え、任意選択的に、前記封止アレンジメントが、任意選択的にケイ素で作製され、前記第２のウェル部分の前記頂部開口端部と形状及び寸法において対応する複数の下方封止開口部（６５ｂ）を有する、下方封止シート（６０ｂ）の形態であり、前記封止シートが、前記下方プレート（２０）と前記膜（３０）との間に、その開口部が前記第２のウェル部分（４２）と同軸上で整列した状態で取り付けられるように構成されている、請求項１１に記載のデバイス。
【請求項１３】
前記第１のプレート及び前記第２のプレートのうちの一方が、前記上方プレート及び前記下方プレートを共にしっかりと保持するためのロック（７０）を備え、それにより、前記膜と前記上方封止シート及び前記下方封止シートとが、端部開口ウェルとの組立体（１００）を形成する、請求項１２に記載のデバイス。
【請求項１４】
前記システムが、前記膜の前記領域（３２）と形状及び寸法において対応する遮断フランジ（５３）を各々有する前記遮断部材（５１）を含む、遮断基部（５０）を更に備える、請求項９〜１３のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１５】
前記遮断部材が、前記遮断基部の上面から突出する複数のポストの形態であり、前記遮断面が、前記ポストの頂面によって構成されている、請求項１４に記載のデバイス。
【請求項１６】
前記システムは、前記遮断部材（５１）が前記膜（３０）に近接するときに、前記遮断基部（５０）を前記上方プレート（１０）及び前記下方プレート（２０）に対して固定された関係でしっかりと保持するためのロック（８０）を備える、請求項９〜１５のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１７】
前記組立体（１００）は、前記遮断部材（５１）が前記膜から離間されているときに、真空を適用するために前記第２のウェル部分の前記底部開口端部（２１）を露出させるべく、真空マニホールド上に取り付けられるように構成されている、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１８】
凝固性フィブリノゲンの存在の検出及び／又は定量化のための試料調製のインサイツプロセスであって、ある数の工程を含み、かつ少なくとも２つの物質を伴い、その一方がフィブリノゲンを含み、他方がフィブリノゲンとの反応時にフィブリンを形成することができるタンパク質分解酵素を含み、前記工程が、少なくとも、以下：
（ａ）請求項１〜１７のいずれか一項に記載のデバイスを提供することと、
（ｂ）前記少なくとも２つの物質を前記物質受け部中の前記膜上で混合することによって、凝塊を形成させることと、
（ｃ）前記凝塊を前記物質受け部中で液体によって洗浄することと、
（ｄ）前記遮断部材（５１）が前記膜（３０）から離間されているときに、前記物質受け部の前記底部で及び／又は前記キャビティの前記下方開口部（２１）に真空を適用することで、前記液体を前記物質受け部（４１）から前記膜を通して前記下方開口部を介して引き出すことによって前記液体を除去することと、
（ｅ）任意選択的に、工程（ｃ）及び（ｄ）を何回も繰り返すことと、
（ｆ）前記遮断部材（５１）を、前記膜に近接した位置に持っていくことと、
（ｇ）前記物質受け部中の前記凝塊を好適な水溶液によって可溶化することと、である、インサイツプロセス。
【請求項１９】
前記水溶液が、アルカリ性物質及び／又はカオトロピック剤を含む、請求項１８に記載のインサイツプロセス。
【請求項２０】
前記工程（ｄ）における真空の適用は、前記遮断部材（５１）が前記膜から離れているときに、真空を適用するために前記第２のウェル部分の前記底部開口端部（２１）を露出させるべく、前記デバイスを真空マニホールド上に取り付けることによって行われている、請求項１８又は１９に記載のインサイツプロセス。
【請求項２１】
試料のインサイツ調製を行うためのデバイスであって、前記調製が、ある数の工程を含み、かつ少なくとも２つの物質を伴い、前記デバイスが、
−少なくとも１つの細長いキャビティ（４０）であって、前記デバイスの長手方向軸（Ｘ）に沿って離間された上方開口部（１１）及び下方開口部（２１）を有し、物質受け部（４１）を有し、前記物質受け部の頂部開口端部と底部との間に延在し、前記工程の各々に必要な所定量の材料を、前記上方開口部を通して中に受け取るのに十分な寸法を有する、少なくとも１つの細長いキャビティ（４０）と、
−膜（３０）であって、前記物質受け部の前記底部を構成し、前記工程のうちの少なくとも１つにおいて前記物質受け部中に配置される流体が、真空が前記下方開口部を介してそれに適用されるときにのみ、そこから前記膜を通って前記キャビティの前記下方開口端部（２１）に向かって移動することを可能にするような構造を有する、膜（３０）と、を備え、
前記膜が、少なくとも前記物質に関して吸収特性を有しない疎水性材料で作製され、それにより、前記物質を混合し、任意選択的に前記混合物を前記物質受け部中でインキュベートすることによって、前記物質受け部中で前記膜上に形成された凝塊が、前記膜を、部分的にのみ、より具体的には前記膜領域の５０〜８０％の範囲で被覆することができるようにする、デバイス。
【請求項２２】
前記細長いキャビティ（４０）が、前記物質受け部（４１）によって構成される第１のキャビティ部分と、前記膜（３０）と前記キャビティの前記下方開口部（２１）との間に延在する第２のキャビティ部分（４２）と、を備える、請求項２１に記載のデバイス。
【請求項２３】
少なくとも、前記細長いキャビティ及び前記膜を囲繞している前記デバイスの部分が、アルカリ性物質、より具体的にはＮａＯＨに耐性である、請求項２１又は２２に記載のデバイス。
【請求項２４】
前記疎水性材料が、多孔質であり、かつ／又は少なくとも前記物質に対して不活性である、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項２５】
前記疎水性材料が、１０〜４０μｍの範囲、より具体的には２０〜３０μｍの範囲、更により具体的には約２５μｍのサイズの孔を有する、請求項２１〜２４のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項２６】
前記デバイスが、前記膜の前記下面（３１ｂ）への真空の適用を許容すべく、真空マニホールド上に取り付けられるように構成されている、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項２７】
ウェルのアレイを構成する複数の前記細長いキャビティを備える、請求項２１〜２６のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項２８】
−上方プレート（１０）であって、上面（１５）と、下面（１２）と、それらの間に延在する複数の第１のウェル部分（４１）と、を有し、前記複数の第１のウェル部分（４１）が各々、前記上面に頂部開口端部を、そして前記下面に底部開口端部を有し、各第１のウェル部分が、前記物質受け部（４１）を構成する、上方プレート（１０）と、
−シート形態の膜（３０）であって、前記上方プレート（１０）とその下面（１２）にて組み立てられるように構成され、その結果、前記各第１のウェル部分の前記底部開口端部に最も近く、かつそれと形状及び寸法において対応する前記膜の領域が、前記第１のウェル部分（３２）の底部を構成する、シート形態の膜（３０）と、を備える、システム（３）の一部、を構成する、請求項２７に記載のデバイス。
【請求項２９】
前記システムが、前記膜の前記領域（３２）及び前記第１のウェル部分の対応する底部開口端部の周囲に封止を形成するための封止アレンジメント（６０）を更に備え、任意選択的に、前記封止アレンジメント（６０）が、任意選択的にケイ素で作製され、前記第１のウェル部分の前記底部開口端部と形状及び寸法において対応する複数の上方封止開口部（６５ａ）を有する、上方封止シート（６０ａ）の形態であり、前記上方封止シートが、前記上方プレート（１０）と前記膜（３０）との間に、その開口部が前記第１のウェル部分と同軸上で整列した状態で取り付けられるように構成されている、請求項２８に記載のデバイス。
【請求項３０】
前記システムが、上面（２２）と、下面と、それらの間に延在し、前記第１のウェル部分の断面形状及び寸法と対応する断面形状及び寸法を有する、複数の第２のウェル部分（４２）と、を有する、下方プレート（２０）を更に備え、各第２のウェル部分が、前記下方プレートの前記上面に頂部開口端部を、そして前記下方プレートの前記下面に底部開口端部を有し、前記上方プレート（１０）及び前記下方プレート（２０）は、前記膜（３０）がそれらの間に挟み込まれた状態で互いに固定されるように構成され、その結果、各対の対応する第１のウェル部分（４１）及び第２のウェル部分（４２）が、同軸上で整列して１つのウェルを形成し、前記膜の前記領域（３２）によって分離されている、請求項２９に記載のデバイス。
【請求項３１】
前記システムが、前記膜の前記領域及び前記第２のウェル部分の前記上方開口端部の周囲に封止を形成する封止アレンジメントを更に備え、任意選択的に、前記封止アレンジメントが、任意選択的にケイ素で作製され、前記第２のウェル部分の前記頂部開口端部と形状及び寸法において対応する複数の下方封止開口部（６５ｂ）を有する、下方封止シート（６０ｂ）の形態であり、前記封止シートが、前記下方プレート（２０）と前記膜（３０）との間に、その開口部が前記第２のウェル部分（４２）と同軸上で整列した状態で取り付けられるように構成されている、請求項３０に記載のデバイス。
【請求項３２】
前記第１のプレート及び前記第２のプレートのうちの一方が、前記上方プレート及び前記下方プレートを共にしっかりと保持するためのロック（７０）を備え、それにより、前記膜と前記上方封止シート及び前記下方封止シートとが、端部開口ウェルとの組立体（１００）を形成する、請求項３１に記載のデバイス。
【請求項３３】
前記組立体（１００）が、真空を適用するために前記第２のウェル部分の前記底部開口端部（２１）を露出させるべく、真空マニホールド上に取り付けられるように構成されている、請求項３２に記載のデバイス。
【請求項３４】
凝固性フィブリノゲンの存在の検出及び／又は定量化のための試料調製のインサイツプロセスであって、ある数の工程を含み、かつ少なくとも２つの物質を伴い、その一方がフィブリノゲンを含み、他方がフィブリノゲンとの反応時にフィブリンを形成することができるタンパク質分解酵素を含み、前記工程が、少なくとも、以下：
（ａ）請求項２１〜３３のいずれか一項に記載のデバイスを提供することと、
（ｂ）前記少なくとも２つの物質を前記物質受け部中の前記膜上で混合することによって、凝塊を形成させることであって、前記膜の前記疎水性質に起因して、前記凝塊が、前記膜を、部分的にのみ、より具体的には前記膜領域の５０〜８０％の範囲で被覆する、形成させることと、
（ｃ）前記凝塊を前記物質受け部中で液体によって洗浄することと、
（ｄ）前記キャビティの前記下方開口部で真空を適用することで、前記液体を前記物質受け部から引き出すことによって前記液体を除去することと、
（ｅ）任意選択的に、工程（ｃ）及び（ｄ）を何回も繰り返すことと、
（ｆ）前記物質受け部（４１）と前記下方開口端部（２１）との間の、前記膜を通した流体連通を防止することと、
（ｇ）前記物質受け部中の前記凝塊を好適な水溶液によって可溶化することと、である、インサイツプロセス。
【請求項３５】
前記物質の量は、前記形成された凝塊の寸法が、前記物質受け部の前記底部を構成する前記膜の寸法より小さく、その結果、前記凝塊が前記膜の表面を完全には被覆しなくなるような量である、請求項３４に記載のインサイツプロセス。
【請求項３６】
前記水溶液が、アルカリ性物質及び／又はカオトロピック剤を含む、請求項３４又は３５に記載のインサイツプロセス。
【請求項３７】
前記工程（ｄ）における真空の適用が、真空を適用するために前記第２のウェル部分の前記底部開口端部（２１）を露出させるべく、前記デバイスを真空マニホールド上に取り付けることによって行われている、請求項３４〜３６のいずれか一項に記載のインサイツプロセス。
【請求項３８】
ウェル（４０）のアレイを備えるシステム（１）を組み立てるためのキットであって、前記ウェル（４０）が各々、頂部ウェル開口端部（１１）と底部ウェル開口端部（２１）との間に延在する細長いキャビティの形態を有し、前記キットが、
−上方プレート（１０）であって、上面（１５）と、下面（１２）と、それらの間に延在する複数の第１のウェル部分と、を有し、各第１のウェル部分が、前記上面に頂部開口端部を、そして前記下面に底部開口端部を有する、上方プレート（１０）と、
−下方プレートであって、上面（２２）と、下面（２５）と、それらの間に延在し、前記第１のウェル部分（４１）の断面形状及び寸法と対応する断面形状及び寸法を有する、複数の第２のウェル部分（４２）を有し、各第２のウェル部分が、前記下方プレートの前記上面に頂部開口端部を、そして前記下方プレートの前記下面に底部開口端部を有する、下方プレートと、を備え、
前記上方プレート（１０）及び前記下方プレート（２０）は、前記プレートが互いに固定されるときに膜シート（３０）がそれらの間に挟み込まれた状態での使用に対して構成され、その結果、前記第１のウェル部分（４１）及び前記第２のウェル部分（４２）が、同軸上で整列して前記ウェル（４０）を形成し、前記膜（３０）によって分離されるようになり、前記各第１のウェル部分の頂部端部が前記第１のウェル開口端部（１１）を構成し、前記各第２のウェル部分の底部端部（２１）が前記第２のウェル開口端部を構成する、キット。
【請求項３９】
前記膜シート（３０）を更に備える、請求項３８に記載のキット。
【請求項４０】
上方封止シート（６０ａ）を更に備え、前記上方封止シート（６０ａ）が、任意選択的にケイ素で作製され、前記第１のウェル部分（４１）の断面形状及び寸法に対応する形状及び寸法を有する複数の上方封止開口部（６５ａ）を伴って形成され、前記システムが組み立てられるときに、前記上方封止開口部が、前記第１のウェル部分と同軸上で整列し、前記上方封止シートが、以下：
−前記上方プレートの前記下面に永続的に装着され、その一体的な部分を構成するか、
−その片面で、前記膜に永続的に装着され、前記膜の一体的な部分を構成するか、又は
−前記システムの組み立て時に、前記上方プレートと前記膜との間に取り付けられるように構成されるか、のうちの１つである、請求項３８又は３９に記載のキット。
【請求項４１】
下方封止シート（６０ｂ）を更に備え、前記下方封止シート（６０ｂ）が、任意選択的にケイ素で作製され、前記第２のウェル部分（４２）の断面形状及び寸法に対応する形状及び寸法を有する複数の下方封止開口部（６５ｂ）を伴って形成され、前記システムが組み立てられるときに、前記下方封止開口部が、前記第２のウェル部分と同軸上で整列し、前記下方封止シートが、以下：
−前記下方プレートの前記上面に永続的に装着され、その一体的な部分を構成するか、
−その前記上方封止シートが装着される面とは反対の面で、前記膜に永続的に装着され、前記膜の一体的な部分を構成するか、又は
−前記システムの組み立て時に、前記下方プレートと前記膜との間に取り付けられるように構成されるか、のうちの１つである、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項４２】
前記第１のプレート（１０）及び前記第２のプレート（２０）のうちの一方が、これらのプレートと、前記膜と、任意選択的に、前記膜とそれぞれの上方プレート及び下方プレートとの間に配置される前記上方封止シート及び前記下方封止シートとを共にロックするためのロック（７０）を備え、それにより端部開口組立体（１００）を形成する、請求項４１に記載のキット。
【請求項４３】
形状及び寸法において前記膜の前記領域のものに各々対応する複数の遮断フランジ（５３）を有する遮断基部（５０）を更に備え、前記遮断基部は、各遮断面が、ウェル底部開口端部の方向から見た場合に、前記膜の前記対応する領域に近接して配置され、それを完全に被覆することで、前記第１のウェル部分と前記第２のウェル開口端部との間の、前記膜を通した流体連通の可能性を防ぐ、１つの位置と、前記遮断面が、前記膜から離れる方向に前記ウェル底部開口端部から離間されて、前記流体連通を可能にする、別の位置と、に着くように構成されている、請求項３８〜４２のいずれか一項に記載のキット。
【請求項４４】
前記遮断基部が、その上面から突出する複数のポスト（５１）を伴って形成され、前記遮断面が、前記ポストの前記頂面によって構成されている、請求項４３に記載のキット。
【請求項４５】
前記遮断基部は、前記遮断基部が前記膜から離れているときに前記端部開口組立体（１００）をそれにロックするためのロック（８０）を備える、請求項４２に従属する場合の、請求項４３又は４４に記載のキット。
【請求項４６】
前記端部開口組立体（１００）が、真空を前記ウェル（４０）に適用するために前記底部ウェル開口端部を露出させるべく、真空マニホールド上に取り付けられるように構成されている、請求項４２〜４５のいずれか一項に記載のキット。
【請求項４７】
前記膜が、疎水性材料で作製され、かつ／又は前記膜が、吸収特性を有しない材料で作製されている、請求項３８〜４６のいずれか一項に記載のキット。
【請求項４８】
フィブリノゲン含有試料中の凝固性フィブリノゲンを定量化するための方法であって、請求項１８〜２０又は請求項３４〜３７のいずれか一項に記載の方法の工程（ａ）〜（ｇ）を含み、
（ｈ）工程（ｇ）の前記可溶化された凝塊の所定の部分をキュベットに移すことと、
（ｉ）前記部分のタンパク質吸収度を、分光光度計を使用して測定することと、
（ｊ）前記試料中に存在する前記凝固性フィブリノゲンを、既知量の凝固性フィブリノゲンを含有するフィブリノゲン標準と決定することと、を更に含む、方法。
【請求項４９】
前記タンパク質吸収度を測定する工程が、２８０ｎｍの波長及び３２０ｎｍの波長で光学濃度を測定し、３２０ｎｍで得られた光学濃度を２８０ｎｍで得られた光学濃度から減数することによって実行されている、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
試料のインサイツ調製を行うためのシステムであって、
−上面（１５）と、下面（１２）と、それらの間に延在する第１のウェル部分（４１）のアレイと、を有する上方プレート（１０）、
−上面（２２）と、下面（２５）と、それらの間に延在し、前記第１のウェル部分（４１）のアレイに対応する第２のウェル部分（４２）のアレイと、を有する下方プレート（２０）、
−前記上方プレート（１０）及び前記下方プレート（２０）中の前記第１のウェル部分（４１）のアレイ及び前記第２のウェル部分（４２）のアレイに各々対応する、それぞれの上方封止開口部（６５ａ）のアレイを有する上方封止シート（６０ａ）及びそれぞれの下方封止開口部（６５ｂ）のアレイを有する下方封止シート（６０ｂ）、
−膜シート（３０）であって、上面（３１ａ）及び下面（３１ｂ）を有し、その上面（３１ａ）に配置される流体が、真空が前記下面（３１ｂ）に適用されるときにのみ、前記膜（３０）を通ってその下面（３１ｂ）に向かって移動することを可能にするような構造を有する、膜シート（３０）、
−前記下方プレート（２０）中のロック（７０）であって、全ての前記アレイが、前記上方プレートの前記上面にある頂部開口端部（１１）、前記下方プレートの前記下面にある底部開口端部（２１）、前記頂部開口端部と前記膜の前記上面（３１ａ）との間に延在する前記第１のウェル部分（４１）、及び前記膜の前記下面と前記底部開口端部との間に延在する前記第２のウェル部分（４２）を各々有するウェル（４０）のアレイを伴う組立体（１００）を形成するように整列する状態で、前記膜の前記上面及び前記下面が、流体が前記第１のウェル部分から前記第２のウェル部分へと前記膜を通して移動するときに該流体に対して前記第１のウェル部分及び前記第２のウェル部分の周囲で封止される状態で、前記上方プレート（１０）及び前記下方プレート（２０）、前記膜（３０）、前記上方プレートと前記膜との間の前記上方封止シート（６５ａ）、並びに前記膜と前記下方プレートとの間の前記下方封止シート（６５ｂ）を共にしっかりと保持するように構成されている、ロック（７０）を備え、
前記システムが、
−遮断基部（５０）であって、その上面から突出し、前記底部開口端部から前記第２のウェル部分（４２）中に挿入されるときに前記第２のウェル部分（４２）中に受容されて、前記膜の上面に配置される流体が前記膜を通して前記第２のウェル部分に移動するのを防止するように構成された、ポスト（５１）のアレイを有し、
−前記遮断基部（５０）は、前記遮断ポスト（５１）が前記第２のウェル部分（４２）中に受容されるときに、前記遮断基部（５０）を前記組立体（１００）に対して固定された関係でしっかりと保持するための複数のロック（８０）を有する、遮断基部（５０）、を更に備える、システム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書に開示される主題は、試料のインサイツ調製であって、例えば、かかる試料中の凝固性フィブリノゲンの存在の検出及び／又は定量化に使用するための、インサイツ調製に言及する。
【背景技術】
【０００２】
凝固性フィブリノゲンは、フィブリノゲン系製品、例えば、フィブリノゲン濃縮物及びフィブリン封止剤などを製造するときに、検出し定量化する必要がある。
【０００３】
本明細書に開示される主題は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  ７．０（Ｇａｆｆｎｅｙ  Ｐ．Ｊ．ａｎｄ  Ｗｏｎｇ  Ｍ．Ｙ．Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ａ  ｐｒｏｐｏｓｅｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  ｆｏｒ  ｐｌａｓｍａ  Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ．Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈｅａｍｏｓｔａｓｉｓ，６８（４），ｐｐ．４２８〜４３２，１９９２も参照されたい）に従う、いわゆる重量アッセイプロセスによる凝固性フィブリノゲンの検出のための試料調製に言及し、本プロセスは、概して、以下の工程を含む：
ａ）トロンビン溶液及びＥＤＴＡを試験されるフィブリノゲン含有試料に添加して、それによりフィブリン凝塊を形成させること（ＥＤＴＡ（Ｃａ＋＋キレート剤）は、トロンビンによるＦＸＩＩＩのＦＸＩＩＩａ（血漿−トランスグルタミナーゼ）への活性化を阻害し、それによってフィブリンへの非凝固性タンパク質のγ−グルタミル−ε−リシンブリッジの形成を防止する）、
ｂ）形成された凝塊を乾燥させ（例えば、Ｗｈａｔｍａｎｎ紙上の液体の吸収により）、続いて、例えば、生理食塩水溶液で数回洗浄することで、「非凝固性」タンパク質を除去すること、並びに
ｃ）工程（ｂ）の後で残ったフィブリン凝塊を分解させ（例えば、硫黄、酸性、又は６Ｍの尿素と０．２ＭのＮａＯＨとの混合物によって）、それにより、任意の既知の方法、例えば、分光光度計測定による、試料中のフィブリノゲンの検出／定量化に更に使用するための試料を産出すること。
【０００４】
Ｄｅｍｐｆｌｅら（「Ａ  ９６−ｗｅｌｌ  ｍｉｃｒｏｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｔｏｔａｌ  Ｃｌｏｔｔａｂｌｅ  Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ」；Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ，１９９９，８１，２６４〜２６７）は、概して以下の工程を含む重量アッセイプロセスを開示している：
ａ）トロンビン溶液を濾過膜上に配置したフィブリノゲン含有試料に添加して、その膜上にフィブリン凝塊を形成させること、
ｂ）工程（ａ）において濾過膜に形成させた凝塊を洗浄し、フィブリン凝塊を保持している面とは反対の面で膜に真空を適用することによってそれを乾燥させ、それにより「非凝固性」タンパク質を、濾過膜を通して除去し、乾燥した凝固性フィブリンを残すこと、及び
ｃ）工程（ｂ）において残ったフィブリン凝塊を溶媒溶液に溶解させ、それにより、任意の既知の方法による、試料中のフィブリノゲンの検出／定量化における更なる使用のために試料を産出すること。
【０００５】
Ｄｅｍｐｆｌｅらでは、９６ウェル精密濾過アッセイが使用されており、これにおいては、各ウェルが、界面活性剤で前処理した孔径１．２μｍの親水性膜を備える。このプロセスでは、上記工程（ａ）及び（ｂ）がアレイ内で行われる一方、工程（ｂ）の後に、フィブリン凝塊が付着した膜がアッセイから除去され、９６個の膜の各々からのフィブリン凝塊の可溶化（上記工程（ｃ））は、別個の試験管中で、かかる試験あたり１個の付着性フィブリン凝塊付きの膜で行われる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本明細書に開示される主題の一態様に従い、試料のインサイツ調製を行うためのデバイスが提供され、この調製は、ある数の工程を含み、かつ少なくとも２つの物質を伴い、本デバイスは、
−物質受け部であって、頂部及び底部を有し、工程の各々に必要な所定量の材料を、頂部を通して中に受け取るのに十分な寸法を有する、物質受け部と、
−膜であって、物質受け部の底部を構成し、物質受け部の内側の方に向いている上面と、物質受け部の外側の方に向いている下面と、を有し、工程のうちの少なくとも１つにおいて物質受け部中に配置される流体が、真空がその外面に適用されるときにのみ、そこから膜を通って物質受け部の外側に向かって移動することを可能にするような構造を有する、膜と、
−少なくとも１つの遮断部材であって、その部材は、それが膜の下面に近接して配置され、それを被覆することで、物質受け部と物質受け部の外側との間の、膜を通した流体連通の可能性を防ぐ、１つの位置と、膜から離間されることで、流体連通を可能にする、別の位置と、に着くように構成されている、遮断部材と、を備える。
【０００７】
デバイスの上記構造、及び特にそれが遮断部材を含むという事実により、凝固性フィブリノゲンを検出するための試料調製の重量アッセイプロセスの全工程をその中で行うことができるようになる。具体的には、上記構造により、フィブリン凝塊の可溶化を、凝塊が形成され、洗浄され、乾燥される場所であるデバイスの同じキャビティにおいて行うことができる。
【０００８】
本デバイスは、細長いキャビティを備えることができ、その細長いキャビティは、上方及び下方開口部、上方開口部と膜との間に延在する上記物質受け部によって構成された第１のキャビティ部分、並びに上記膜とキャビティの下方開口部との間に延在する第２のキャビティ部分を有し、上記遮断部材は、デバイスの下方開口部から第２のキャビティ部分の中へと挿入可能である。
【０００９】
膜は、それに真空が適用されるときに、流体がその片面からもう片面へと移動するのを可能にするため、膜は多孔質材料で作製され得る。本デバイスをフィブリノゲンの存在の検出及び／又は定量化のための試料調製に使用する場合、１０〜４０μｍの範囲、より具体的には２０〜３０μｍの範囲、更により具体的には約２５μｍのサイズの孔を有する膜を用いることで、本デバイスの優れた性能が期待され得る。
【００１０】
膜が作製される材料は、更に、吸収特性を有さず、少なくとも上記質に対して不活性であり得る。更に、材料は、フィブリン凝塊を形成させるのに必要な物質が膜に広がって膜の表面の大部分を被覆することで、孔を閉塞させることを防止するために、疎水性であり得る。
【００１１】
遮断部材は、細長いキャビティの軸に沿った延長部を有し得、これは、少なくとも第２のキャビティ部分の対応する延長部以上である。この構造により、遮断部材が膜に近接して配置されるときに、物質受け部と第２の開口端部との間の、膜を通した流体連通の可能性が更に防止される。
【００１２】
上記デバイスは、ウェルのアレイを構成する複数の細長いキャビティ又は物質受け部と、存在する場合には、対応するキャビティ又は物質受け部に対する位置に着くように各々構成される、対応する複数の遮断部材とを備えることができる。
【００１３】
本明細書に開示される主題の更なる態様に従い、試料のインサイツ調製を行うためのデバイスが提供され、この調製は、ある数の工程を含み、かつ少なくとも２つの物質を伴い、本デバイスは、
−少なくとも１つの物質受け部であって、頂部及び底部を有し、上記工程の各々に必要な所定量の材料を、頂部を通して中に受け取るのに十分な寸法を有する、少なくとも１つの物質受け部と、
−膜であって、物質受け部の底部を構成し、物質受け部の内側の方に向いている上面と、物質受け部の外側の方に向いている下面と、を有し、工程のうちの少なくとも１つにおいて物質受け部中に配置される流体が、真空がその下面に適用されるときにのみ、そこから膜を通って物質受け部の外側へと移動することを可能にするような構造を有する、膜と、を備え、
この膜は、少なくとも上記物質に関して吸収特性を有しない疎水性材料で作製され、それにより、上記物質を混合し、任意選択的に混合物をキャビティ中でインキュベートすることによって、物質受け部中で膜上に形成された凝塊が、膜を部分的にのみ被覆することができるようにする。
【００１４】
具体的には、疎水性材料は、物質に対して、凝塊が物質受け部の底部で膜の領域の８０％を超過しない膜上の領域を占有するように、選択され得る。より具体的には、凝塊によって占有される領域は、物質受け部の底部における膜の領域の５０％〜８０％の範囲であり得る。
【００１５】
多孔質膜の使用は、例えば、米国特許出願公開第２００６／００１９４１０号及び欧州特許第０４１５９８３号から知られており、これらは、検出／定量化プロセスにおける更なる使用のために、多孔質膜の片面に流体混合物を配置し、混合物の一部をもう片面に移動させることを開示している。米国特許出願公開第２００６／００１９４１０号は、膜の後者の面に真空を適用すること、及び膜が疎水性特性を有することが可能であることを更に開示している。しかしながら、これらの公開特許で説明されているプロセスは、本明細書に開示される主題のような様式では膜の疎水性特性を使用していない。
【００１６】
上記態様のうちのいずれかのデバイスは、
−上方プレートであって、上面と、下面と、それらの間に延在する複数の第１のウェル部分と、を有し複数の第１のウェル部分が各々、上面に上方開口端部を、そして下面に下方開口端部を有し、各第１のウェル部分が、上記物質受け部を構成する、上方プレートと、
−膜シートであって、上方プレートとその下面にて組み立てられるように構成され、その結果、各第１のウェル部分の下方開口端部に最も近く、かつそれと形状及び寸法において対応する膜の領域が、第１のウェル部分の底部を構成する、膜シートと、を備える、システムの一部を構成することができる。
【００１７】
本システムは、上面と、下面と、それらの間に延在し、第１のウェル部分の断面形状及び寸法と対応する断面形状及び寸法を有する、複数の第２のウェル部分と、を有する、下方プレートを更に備えることができ、各第２のウェル部分が、下方プレートの上面に上方開口端部を、そして下方プレートの下面に下方開口端部を有し、上方プレート及び下方プレートは、膜がそれらの間に挟み込まれた状態で互いに固定されるように構成され、その結果、各対の対応する第１のウェル部分及び第２のウェル部分が、同軸上で整列して１つのウェルを形成し、膜の領域によって分離されている。
【００１８】
本システムは、膜の上記領域の周囲に封止を形成するための封止アレンジメントと、ウェルからプレートと膜との間の空間への流体の漏出を防止するための、第１のウェル部分の対応する下方開口端部及び／又は第２のウェル部分の対応する上方開口端部とを更に備えることができる。
【００１９】
本システムは、上記プレートを共にしっかりと保持するためのロックを備え、それにより、膜と上方封止シート及び下方封止シートとが、端部開口ウェルとの組立体を形成し得る。代替的に、本システムは、この目的でボルト及びナットを備えてもよい。
【００２０】
本システムは、膜の領域と形状及び寸法において対応する遮断面を各々有する該遮断部材を含む、遮断基部を更に備えることができる。この遮断部材は、遮断基部の上面から突出する複数のポストの形態であり得、上記遮断面は、ポストの頂面によって構成されている。これらの遮断ポストは、膜をそれに近接するときに被覆して、第１のウェル部分と第２のウェル部分との間の、膜を通した流体連通の可能性を防止し得る。
【００２１】
本システムは、遮断部材が膜に近接するときに、遮断基部を上方プレート及び下方プレートに対して固定された関係でしっかりと保持するためのロックを備えることができる。
【００２２】
組立体は、上記遮断部材が膜から離間されているときに、真空を適用するために第２のウェル部分の下方開口端部を露出させるべく、真空マニホールド上に取り付けられるように構成され得る。
【００２３】
本明細書に開示される主題の他の態様に従い、上述のデバイスのうちのいずれかを使用する、フィブリノゲンの存在の検出及び／又は定量化のための試料調製のインサイツプロセスが提供され、本プロセスは、ある数の工程を含み、かつ少なくとも２つの物質を伴い、その一方がフィブリノゲンを含み、他方がフィブリノゲンとの反応時にフィブリンを形成することができるタンパク質分解酵素、例えば、トロンビンを含む。これらの工程は、少なくとも、以下：
（ａ）上記少なくとも２つの物質を物質受け部中の膜上で混合することによって、凝塊を形成させ、任意選択的に混合物をインキュベートすることと、
（ｂ）凝塊を物質受け部中で液体によって洗浄することと、
（ｃ）キャビティの下方開口部で真空を適用することで、液体を物質受け部から膜を通して第２の開口端部を介して引き出すことによって液体を除去することと、
（ｄ）任意選択的に、工程（ｂ）及び（ｃ）を何回も繰り返すことと（その回数は任意選択的に１０回を超過しない）、
（ｅ）物質受け部と下方開口端部との間の、膜を通した流体連通を防止することと、
（ｆ）物質受け部中の凝塊を好適な水溶液によって可溶化することと、を含む。
【００２４】
いくつかの実施形態では、工程（ａ）〜（ｆ）は、インサイツ、又は同じ物質受け部、キャビティ部分、及び／若しくはウェル中で実行される。
【００２５】
水溶液は、アルカリ性物質、例えば、ＮａＯＨ、及び／又はカオトロピック剤、例えば、尿素又は塩酸グアニジンを含み得る。
【００２６】
本明細書に開示される主題の更に別の態様に従い、上述のシステムを組み立てるためのキットが提供される。具体的には、第１のウェル開口端部と第２のウェル開口端部との間に延在する細長いキャビティの形態を各々有するウェルのアレイを備えるシステムでは、キットは、
−上方プレートであって、上面と、下面と、それらの間に延在する複数の第１のウェル部分と、を有し、この複数の第１のウェル部分が各々、上面に上方開口端部を、そして下面に下方開口端部を有し、上方端部が第１のウェル開口端部を構成する、上方プレートと、
−膜シートであって、上方プレートとその下面にて組み立てられるように構成され、その結果、各第１のウェル部分の下方開口端部に最も近く、かつそれと形状及び寸法において対応する膜の領域が、第１のウェル部分の底部を構成する、膜シートと、
−下方プレートであって、上面と、下面と、それらの間に延在し、第１のウェル部分の断面形状及び寸法と対応する断面形状及び寸法を有する、複数の第２のウェル部分を有し、各第２のウェル部分が、下方プレートの上面に上方開口端部を、そして下方プレートの下面に下方開口端部を有する、下方プレートと、を備え、
上方プレート及び下方プレートは、膜がそれらの間に挟み込まれた状態で互いに固定されるように構成され、その結果、第１のウェル部分及び第２のウェル部分が、同軸上で整列して上記ウェルを形成し、膜の領域によって分離されるようになり、各第２のウェル部分の下方端部は、第２のウェル開口端部を構成する。
【００２７】
一態様では、試料のインサイツ調製を行うためのデバイスが提供され、本調製は、ある数の工程からなり、かつ少なくとも２つの物質を伴い、本デバイスは、
−物質受け部（４１）であって、頂部（１１）及び底部を有し、上記工程の各々に必要な所定量の材料を、頂部（１１）を通して中に受け取るのに十分な寸法を有する、物質受け部（４１）と、
−膜（３０）であって、物質受け部（４１）の底部を構成し、物質受け部の内側の方に向いている上面（３１ａ）と、物質受け部の外側の方に向いている下面（３１ｂ）と、を有し、工程のうちの少なくとも１つにおいて物質受け部中に配置される流体が、真空がその底部に適用されるときにのみ、そこから膜を通って物質受け部の外側に向かって移動することを可能にするような構造を有する、膜（３０）と、
−少なくとも１つの遮断部材（５１）であって、この部材は、それが膜の下面に近接して配置され、それを被覆することで、物質受け部と物質受け部の外側との間の、膜を通した流体連通の可能性を防ぐ、１つの位置と、膜から離間されることで、真空が物質受け部の底部に適用されるときに上記流体連通を可能にする、別の位置と、に着くように構成されている、遮断部材（５１）と、を備える。
【００２８】
本発明の一実施形態では、本デバイスは、細長いキャビティ（４０）を更に備え、この細長いキャビティが、上方開口部（１１）及び下方開口部（２１）、物質受け部（４１）によって構成された第１のキャビティ部分、並びに膜（３０）とキャビティの下方開口部（２１）との間に延在する第２のキャビティ部分（４２）を有し、上記遮断部材（５１）は、デバイスの下方開口端部から第２のキャビティ部分の中へと挿入可能である。
【００２９】
本発明の別の実施形態では、少なくとも、物質受け部、膜、及び遮断部材を囲繞しているデバイスの部分は、アルカリ性物質、より具体的にはＮａＯＨに耐性である。
【００３０】
本発明の別の更なる実施形態では、膜は、少なくとも使用前に少なくとも上記物質に関して吸収特性を有しない材料で作製される。
【００３１】
本発明の一実施形態では、上記材料は多孔質疎水性材料である。
【００３２】
本発明の別の更なる実施形態では、上記材料は、少なくとも上記物質に対して不活性である。
【００３３】
本発明の別の実施形態では、上記膜は、１０〜４０μｍの範囲、より具体的には２０〜３０μｍの範囲、更により具体的には約２５μｍのサイズの孔を有する。
【００３４】
本発明の別の実施形態では、本デバイスは、膜の下面（３１ｂ）への真空の適用を許容するべく、遮断部材（５１）が膜（３０）から離間されているときに、真空マニホールド上に取り付けられるように構成されている。
【００３５】
本発明の別の実施形態では、上記遮断部材は、軸（Ｘ）に沿った延長部を有し、この延長部は、少なくとも、この軸に沿った第２のキャビティ部分の延長部以上である。
【００３６】
本発明の別の実施形態では、本デバイスは、ウェル（４０）のアレイを構成する複数の物質受け部と、対応する複数の遮断部材と、を備え、この遮断部材の各々が、対応する物質受け部に対する位置に着くように構成されている。
【００３７】
本発明の別の実施形態では、本デバイスは、
−上方プレート（１０）であって、上面（１５）と、下面（１２）と、それらの間に延在する複数の第１のウェル部分（４１）と、を有し、複数の第１のウェル部分（４１）が各々、上面に頂部開口端部を、そして下面に底部開口端部を有し、各第１のウェル部分が、上記物質受け部（４１）を構成する、上方プレート（１０）と、
−膜シート（３０）であって、上方プレート（１０）とその下面（１２）にて組み立てられるように構成され、その結果、各第１のウェル部分の下方開口端部に最も近く、かつそれと形状及び寸法において対応する膜の領域が、第１のウェル部分（３２）の底部を構成する、膜シート（３０）と、を備える、システム（３）の一部、を構成する。
【００３８】
本発明の別の実施形態では、本システムは、上記膜の領域（３２）及び第１のウェル部分の対応する下方開口端部の周囲に封止を形成するための封止アレンジメント（６０）を更に備える。
【００３９】
本発明の別の実施形態では、上記封止アレンジメント（６０）は、任意選択的にケイ素で作製され、第１のウェル部分の底部開口端部と形状及び寸法において対応する複数の上方封止開口部（６５ａ）を有する、上方封止シート（６０ａ）の形態であり、この上方封止シートは、上方プレート（１０）と膜（３０）との間に、その開口部が第１のウェル部分（４１）と同軸上で整列した状態で取り付けられるように構成されている。
【００４０】
本発明の別の実施形態では、本システムは、上面（２２）と、下面（２５）と、それらの間に延在し、第１のウェル部分の断面形状及び寸法と対応する断面形状及び寸法を有する、複数の第２のウェル部分（４２）と、を有する下方プレート（２０）を更に備え、各第２のウェル部分が、下方プレートの上面に頂部開口端部を、そして下方プレートの下面に底部開口端部を有し、上方プレート（１０）及び下方プレート（２０）は、膜（３０）がそれらの間に挟み込まれた状態で互いに固定されるように構成され、その結果、各対の対応する第１のウェル部分（４１）及び第２のウェル部分（４２）が、同軸上で整列して１つのウェルを形成し、上記膜の領域（３２）によって分離されている。
【００４１】
本発明の別の実施形態では、本システムは、上記膜の領域及び第２のウェル部分の頂部開口端部の周囲に封止を形成する封止アレンジメントを更に備える。
【００４２】
本発明の別の実施形態では、上記封止アレンジメントは、任意選択的にケイ素で作製され、第２のウェル部分の頂部開口端部と形状及び寸法において対応する複数の下方封止開口部（６５ｂ）を有する、下方封止シート（６０ｂ）の形態であり、この封止シートは、下方プレート（２０）と膜（３０）との間に、その開口部が第２のウェル部分（４２）と同軸上で整列した状態で取り付けられるように構成されている。
【００４３】
本発明の別の実施形態では、第１のプレート及び第２のプレートのうちの一方は、上方プレート及び下方プレートを共にしっかりと保持するためのロック（７０）を備え、それにより、膜と上方封止シート及び下方封止シートとが、端部開口ウェルとの組立体（１００）を形成する。
【００４４】
本発明の別の実施形態では、本システムは、上記膜の領域（３２）と形状及び寸法において対応する遮断フランジ（５３）を各々有する遮断部材（５１）を含む、遮断基部（５０）を更に備える。
【００４５】
本発明の別の実施形態では、該遮断部材は、遮断基部の上面から突出する複数のポストの形態であり、該遮断面は、ポストの頂面によって構成される。
【００４６】
本発明の別の実施形態では、本システムは、遮断部材（５１）が膜（３０）に近接するときに、遮断基部（５０）を上方プレート（１０）及び下方プレート（２０）に対して固定された関係でしっかりと保持するためのロック（８０）を備える。
【００４７】
本発明の別の実施形態では、上記組立体（１００）は、上記遮断部材（５１）が膜から離間されているときに、真空を適用するために第２のウェル部分の底部開口端部（２１）を露出させるべく、真空マニホールド上に取り付けられるように構成されている。
【００４８】
本発明の別の態様は、凝固性フィブリノゲンの存在の検出及び／又は定量化のための試料調製のインサイツプロセスに関し、本プロセスは、ある数の工程を含み、かつ少なくとも２つの物質を伴い、その一方がフィブリノゲンを含み、他方がフィブリノゲンとの反応時にフィブリンを形成することができるタンパク質分解酵素を含み、この工程は、少なくとも、以下：
（ａ）本発明に従うデバイスを提供することと、
（ｂ）上記少なくとも２つの物質を物質受け部中の膜上で混合することによって、凝塊を形成させることと、
（ｃ）凝塊を物質受け部中で液体によって洗浄することと、
（ｄ）遮断部材（５１）が膜（３０）から離間されているときに、物質受け部の底部で及び／又はキャビティの下方開口部（２１）に真空を適用することで、液体を物質受け部（４１）から膜を通して下方開口部を介して引き出すことによって液体を除去することと、
（ｅ）任意選択的に、工程（ｃ）及び（ｄ）を何回も繰り返すことと、
（ｆ）遮断部材（５１）を、膜に近接した位置に持っていくことと、
（ｇ）物質受け部中の凝塊を好適な水溶液によって可溶化することと、である。
【００４９】
いくつかの実施形態では、工程（ｂ）〜（ｇ）は、インサイツ又は同じ物質受け部中で実行される。
【００５０】
本発明の一実施形態では、水溶液は、アルカリ性物質及び／又はカオトロピック剤を含む。
【００５１】
本発明の別の実施形態では、本プロセスは、工程（ｂ）で得られる混合物をインキュベートすることを更に含む。
【００５２】
本発明の別の更なる実施形態では、上記工程（ｄ）における真空の適用は、上記遮断部材（５１）が膜から離れているときに、真空を適用するために第２のウェル部分の底部開口端部（２１）を露出させるべく、デバイスを真空マニホールド上に取り付けることによって行われる。
【００５３】
本発明の別の実施形態では、上記工程（ｅ）における回数は１０回を超過しない。
【００５４】
更に別の本発明の目的は、試料のインサイツ調製を行うためのデバイスを提供することであり、この調製は、ある数の工程を含み、かつ少なくとも２つの物質を伴い、本デバイスは、
−少なくとも１つの細長いキャビティ（４０）であって、このキャビティが、デバイスの長手方向軸（Ｘ）に沿って離間された上方開口部（１１）及び下方開口部（２１）を有し、物質受け部（４１）を有し、物質受け部の頂部開口端部と底部との間に延在し、上記工程の各々に必要な所定量の材料を、上方開口部を通して中に受け取るのに十分な寸法を有する、少なくとも１つの細長いキャビティと、
−膜（３０）であって、物質受け部の底部を構成し、工程のうちの少なくとも１つにおいて物質受け部中に配置される流体が、真空が下方開口部を介してそれに適用されるときにのみ、そこから膜を通ってキャビティの下方開口端部（２１）に向かって移動することを可能にするような構造を有する、膜（３０）と、を備え、
膜が、少なくとも上記物質に関して吸収特性を有しない疎水性材料で作製され、それにより、上記物質を混合し、任意選択的に混合物を物質受け部中でインキュベートすることによって、物質受け部中で膜上に形成された凝塊が、膜を、部分的にのみ、より具体的には膜領域の５０〜８０％の範囲で被覆することができるようにする。
【００５５】
本発明の一実施形態では、上記細長いキャビティ（４０）は、上記物質受け部（４１）によって構成される第１のキャビティ部分と、上記膜（３０）とキャビティの下方開口部（２１）との間に延在する第２のキャビティ部分（４２）と、を備える。
【００５６】
本発明の別の実施形態では、少なくとも、細長いキャビティ及び膜を囲繞しているデバイスの部分は、アルカリ性物質、より具体的にはＮａＯＨに耐性である。
【００５７】
本発明の別の実施形態では、上記材料は多孔質である。
【００５８】
本発明の別の実施形態では、上記材料は、少なくとも上記物質に対して不活性である。
【００５９】
本発明の別の実施形態では、上記膜は、１０〜４０μｍの範囲、より具体的には２０〜３０μｍの範囲、更により具体的には約２５μｍのサイズの孔を有する。
【００６０】
本発明の別の実施形態では、本デバイスは、膜の下面（３１ｂ）への真空の適用を許容すべく、真空マニホールド上に取り付けられるように構成されている。
【００６１】
本発明の別の実施形態では、本デバイスは、ウェルのアレイを構成する複数の細長いキャビティを備える。
【００６２】
本発明の別の実施形態では、本デバイスは、
−上方プレート（１０）であって、上面（１５）と、下面（１２）と、それらの間に延在する複数の第１のウェル部分（４１）と、を有し、複数の第１のウェル部分（４１）が各々、上面に頂部開口端部を、そして下面に底部開口端部を有し、各第１のウェル部分が、上記物質受け部（４１）を構成する、上方プレート（１０）と、並びに
−シート形態の膜（３０）であって、上方プレート（１０）とその下面（１２）にて組み立てられるように構成され、その結果、各第１のウェル部分の底部開口端部に最も近く、かつそれと形状及び寸法において対応する膜の領域が、第１のウェル部分（３２）の底部を構成する、膜シート（３０）と、を備える、システム（３）の一部、を構成する。
【００６３】
本発明の一実施形態では、本システムは、上記膜の領域（３２）及び第１のウェル部分の対応する底部開口端部の周囲に封止を形成するための封止アレンジメント（６０）を更に備える。
【００６４】
本発明の一実施形態では、上記封止アレンジメント（６０）は、任意選択的にケイ素で作製され、第１のウェル部分の底部開口端部と形状及び寸法において対応する複数の上方封止開口部（６５ａ）を有する、上方封止シート（６０ａ）の形態であり、この上方封止シートは、上方プレート（１０）と膜（３０）との間に、その開口部が第１のウェル部分と同軸上で整列した状態で取り付けられるように構成されている。
【００６５】
本発明の一実施形態では、本システムは、上面（２２）と、下面と、それらの間に延在し、第１のウェル部分の断面形状及び寸法と対応する断面形状及び寸法を有する、複数の第２のウェル部分（４２）と、を有する加法プレート（２０）を更に備え、各第２のウェル部分が、下方プレートの上面に頂部開口端部を、そして下方プレートの下面に底部開口端部を有し、上方プレート（１０）及び下方プレート（２０）は、膜（３０）がそれらの間に挟み込まれた状態で互いに固定されるように構成され、その結果、各対の対応する第１のウェル部分（４１）及び第２のウェル部分（４２）が、同軸上で整列して１つのウェルを形成し、上記膜の領域（３２）によって分離されている。
【００６６】
本発明の一実施形態では、本システムは、上記膜の領域（３２）及び第２のウェル部分の上方開口端部の周囲に封止を形成する封止アレンジメントを更に備える。
【００６７】
本発明の別の実施形態では、上記封止アレンジメントは、任意選択的にケイ素で作製され、第２のウェル部分の頂部開口端部と形状及び寸法において対応する複数の下方封止開口部（６５ｂ）を有する、下方封止シート（６０ｂ）の形態であり、この封止シートは、下方プレート（２０）と膜（３０）との間に、その開口部が第２のウェル部分（４２）と同軸上で整列した状態で取り付けられるように構成されている。
【００６８】
本発明の別の実施形態では、第１のプレート及び第２のプレートのうちの一方は、上方プレート及び下方プレートを共にしっかりと保持するためのロック（７０）を備え、それにより、膜と上方封止シート及び下方封止シートとが、端部開口ウェルとの組立体（１００）を形成する。
【００６９】
本発明の別の実施形態では、上記組立体（１００）は、真空を適用するために第２のウェル部分の底部開口端部（２１）を露出させるべく、真空マニホールド上に取り付けられるように構成されている。
【００７０】
本発明の別の目的は、凝固性フィブリノゲンの存在の検出及び／又は定量化のための試料調製のインサイツプロセスを提供することであり、本プロセスは、ある数の工程を含み、かつ少なくとも２つの物質を伴い、その一方がフィブリノゲンを含み、他方がフィブリノゲンとの反応時にフィブリンを形成することができるタンパク質分解酵素を含み、上記工程は、少なくとも、以下：
（ａ）本発明に従うデバイスを提供することと、
（ｂ）少なくとも２つの物質を物質受け部中の膜上で混合することによって、凝塊を形成させることであって、膜の疎水性質に起因して、凝塊が、膜を、部分的にのみ、より具体的には膜領域の５０〜８０％の範囲で被覆する、形成させることと、
（ｃ）凝塊を物質受け部中で液体によって洗浄することと、
（ｄ）キャビティの下方開口部で真空を適用することで、液体を物質受け部から引き出すことによって液体を除去することと、
（ｅ）任意選択的に、工程（ｃ）及び（ｄ）を何回も繰り返すことと、
（ｆ）物質受け部（４１）と下方開口端部（２１）との間の、膜を通した流体連通を防止することと、
（ｇ）物質受け部中の凝塊を好適な水溶液によって可溶化することと、である。
【００７１】
いくつかの実施形態では、工程（ｂ）〜（ｇ）は、インサイツ、又は同じ物質受け部、キャビティ部分、及び／若しくはウェル中で実行される。
【００７２】
本発明の一実施形態では、上記物質の量は、形成された凝塊の寸法が、物質受け部の底部を構成する膜の寸法より小さく、その結果、凝塊が膜の表面を完全には被覆しなくなるような量である。
【００７３】
本発明の別の実施形態では、水溶液は、アルカリ性物質及び／又はカオトロピック剤を含む。
【００７４】
本発明の別の実施形態では、本プロセスは、工程（ｂ）で得られる混合物をインキュベートすることを更に含む。
【００７５】
本発明の別の実施形態では、上記工程（ｄ）における真空の適用は、真空を適用するために第２のウェル部分の底部開口端部（２１）を露出させるべく、デバイスを真空マニホールド上に取り付けることによって行われる。
【００７６】
本発明の別の実施形態では、上記工程（ｅ）における回数は１０回を超過しない。
【００７７】
本発明の別の態様では、ウェル（４０）のアレイを備えるシステム（１）を組み立てるためのキットであって、このウェル（４０）が各々、頂部ウェル開口端部（１１）と底部ウェル開口端部（２１）との間に延在する細長いキャビティの形態を有する、キットに関し、本キットは、
−上方プレート（１０）であって、上面（１５）と、下面（１２）と、それらの間に延在する複数の第１のウェル部分と、を有し、各第１のウェル部分が、上面に頂部開口端部を、そして下面に底部開口端部を有する、上方プレート（１０）と、
−下方プレートであって、上面（２２）と、下面（２５）と、それらの間に延在し、第１のウェル部分（４１）の断面形状及び寸法と対応する断面形状及び寸法を有する、複数の第２のウェル部分（４２）を有し、各第２のウェル部分が、下方プレートの上面に頂部開口端部を、そして下方プレートの下面に底部開口端部を有する、下方プレート（２０）と、を備え、
上方プレート（１０）及び下方プレート（２０）は、プレートが互いに固定されているときに膜シート（３０）がそれらの間に挟み込まれた状態での使用に対して構成され、その結果、第１のウェル部分（４１）及び第２のウェル部分（４２）が、同軸上で整列して上記ウェル（４０）を形成し、膜（３０）によって分離されるようになり、各第１のウェル部分の頂部端部が第１のウェル開口端部（１１）を構成し、各第２のウェル部分の底部端部（２１）が第２のウェル開口端部を構成する。
【００７８】
本発明の一実施形態では、本キットは、上記膜シート（３０）を更に備える。
【００７９】
本発明の別の実施形態では、本キットは、上方封止シート（６０ａ）を更に備え、この上方封止シート（６０ａ）が、任意選択的にケイ素で作製され、第１のウェル部分（４１）の断面形状及び寸法に対応する形状及び寸法を有する複数の上方封止開口部（６５ａ）を伴って形成され、本システムが組み立てられるときに、上方封止開口部は、第１のウェル部分と同軸上で整列し、上方封止シートは、以下：
−上方プレートの下面に永続的に装着され、その一体的な部分を構成するか、
−その片面で、膜に永続的に装着され、膜の一体的な部分を構成するか、又は
−本システムの組み立て時に、上方プレートと膜との間に取り付けられるように構成されるか、のうちの１つである。
【００８０】
本発明の別の実施形態では、本キットは、下方封止シート（６０ｂ）を更に備え、この下方封止シート（６０ｂ）は、任意選択的にケイ素で作製され、第２のウェル部分（４２）の断面形状及び寸法に対応する形状及び寸法を有する複数の下方封止開口部（６５ｂ）を伴って形成され、本システムが組み立てられるときに、下方封止開口部は、第２のウェル部分と同軸上で整列し、下方封止シートは、以下：
−下方プレートの上面に永続的に装着され、その一体的な部分を構成するか、
−その上方封止シートが装着される面とは反対の面で、膜に永続的に装着され、膜の一体的な部分を構成するか、又は
−本システムの組み立て時に、下方プレートと膜との間に取り付けられるように構成されるか、のうちの１つである。
【００８１】
本発明の別の実施形態では、第１のプレート（１０）及び第２のプレート（２０）のうちの一方は、これらのプレートと、膜と、任意選択的に、膜とそれぞれ上方プレート及び下方プレートとの間に配置される上方封止シート及び下方封止シートとを共にロックするためのロック（７０）を備え、それにより端部開口組立体（１００）を形成する。
【００８２】
本発明の別の実施形態では、本キットは、形状及び寸法において上記膜の領域のものに各々対応する複数の遮断フランジ（５３）を有する遮断基部（５０）を更に備え、この遮断基部は、各遮断面が、ウェル底部開口端部の方向から見た場合に、膜の対応する領域に近接して配置され、それを完全に被覆することで、第１のウェル部分と第２のウェル開口端部との間の、膜を通した流体連通の可能性を防ぐ、１つの位置と、遮断面が、膜から離れる方向にウェル底部開口端部から離間されて、上記流体連通を可能にする、別の位置と、に着くように構成されている。
【００８３】
本発明の別の実施形態では、上記遮断基部は、その上面から突出する複数のポスト（５１）を伴って形成され、上記遮断面は、ポストの頂面によって構成されている。
【００８４】
本発明の別の実施形態では、上記遮断基部は、遮断基部が膜から離れているときに上記端部開口組立体（１００）をそれにロックするためのロック（８０）を備える。
【００８５】
本発明の別の実施形態では、上記端部開口組立体（１００）が、真空をウェル（４０）に適用するために底部ウェル開口端部を露出させるべく、真空マニホールド上に取り付けられるように構成されている。
【００８６】
本発明の別の実施形態では、上記膜は、疎水性材料で作製されている。
【００８７】
本発明の別の実施形態では、上記膜は、吸収特性を有しない材料で作製されている。
【００８８】
本発明の更に別の態様は、フィブリノゲン含有試料中の凝固性フィブリノゲンを定量化するための方法を提供することであり、本方法は、上述の工程（ａ）〜（ｇ）を含み、
（ｈ）工程（ｇ）の可溶化された凝塊の所定の部分を
キュベットに移すことと、
（ｉ）部分のタンパク質吸収度を、分光光度計を使用して測定することと、
（ｊ）試料中に存在する凝固性フィブリノゲンを、既知量の凝固性フィブリノゲンを含有するフィブリノゲン標準と決定することと、を更に含む。
【００８９】
本発明の一実施形態では、タンパク質吸収度を測定する工程は、２８０ｎｍの波長及び３２０ｎｍの波長で光学濃度を測定し、３２０ｎｍで得られた光学濃度を２８０ｎｍで得られた光学濃度から減数することによって実行されている。
【００９０】
本発明の別の実施形態では、フィブリノゲン標準は、フィブリノゲン含有試料として工程（ａ）〜（ｉ）に供される。更に、本発明の別の態様では、試料のインサイツ調製を行うためのシステムに関し、本システムは、
−上面（１５）と、下面（１２）と、それらの間に延在する第１のウェル部分（４１）のアレイと、を有する、上方プレート（１０）、
−上面（２２）と、下面（２５）と、それらの間に延在し、第１のウェル部分（４１）のアレイに対応する第２のウェル部分（４２）のアレイと、を有する、下方プレート（２０）、
−上方プレート（１０）及び下方プレート（２０）中の第１のウェル部分（４１）のアレイ及び第２のウェル部分（４２）のアレイに各々対応する、それぞれの上方封止開口部（６５ａ）のアレイを有する上方封止シート（６０ａ）及びそれぞれの下方封止開口部（６５ｂ）のアレイを有する下方封止シート（６０ｂ）、
−膜シート（３０）であって、上面（３１ａ）及び下面（３１ｂ）を有し、その上面（３１ａ）に配置される流体が、真空が下面（３１ｂ）に適用されるときにのみ、膜（３０）を通ってその下面（３１ｂ）に向かって移動することを可能にするような構造を有する、膜シート（３０）、
−下方プレート（２０）中のロック（７０）であって、全てのアレイが、上方プレートの上面にある頂部開口端部（１１）、下方プレートの下面にある底部開口端部（２１）、頂部開口端部と膜の上面（３１ａ）との間に延在する第１のウェル部分（４１）、及び膜の下面と底部開口端部との間に延在する第２のウェル部分（４２）を各々有するウェル（４０）のアレイを伴う組立体（１００）を形成するように整列する状態で、膜の上面及び下面が、流体が第１のウェル部分から第２のウェル部分へと膜を通して移動するときにその流体に対して第１のウェル部分及び第２のウェル部分の周囲で封止される状態で、上方プレート（１０）及び下方プレート（２０）、膜（３０）、上方プレートと膜との間の上方封止シート（６５ａ）、並びに膜と下方プレートとの間の下方封止シート（６５ｂ）を共にしっかりと保持するように構成されている、ロック（７０）を備え、
本システムは、
−遮断基部（５０）であって、その上面から突出し、底部開口端部から第２のウェル部分（４２）中に挿入されるときに第２のウェル部分（４２）中に受容されて、膜の上面に配置される流体が膜を通して第２のウェル部分に移動するのを防止するように構成された、ポスト（５１）のアレイを有し、
−遮断基部（５０）は、遮断ポスト（５１）が第２のウェル部分（４２）中に受容されるときに、遮断基部（５０）を組立体（１００）に対して固定された関係でしっかりと保持するための複数のロック（８０）を有する、遮断基部（５０）、を更に備える。
【図面の簡単な説明】
【００９１】
本明細書に開示される主題をよりよく理解し、実際にその主題をどのように実施することができるのかを例示するために、ここで添付の図面を参照しながら単なる非限定的な例によって実施形態について説明する。
【図１】本明細書に開示される主題のうちの一実施形態に従うシステムの概略斜視図である。
【図２Ａ】遮断基部がそれぞれ第１の位置及び第２の位置にある、平面ＩＩ−ＩＩに沿った図１のシステムの概略断面図である。
【図２Ｂ】遮断基部がそれぞれ第１の位置及び第２の位置にある、平面ＩＩ−ＩＩに沿った図１のシステムの概略断面図である。
【図３】本明細書に開示される主題のうちの別の実施形態に従うシステムの分解図である。
【図４Ａ】本明細書に開示される主題のうちの更なる実施形態に従うシステムの分解図である。
【図４Ｂ】組み立ての異なる段階にある、遮断プレートを有しない、図４Ａに示されるシステムの斜視図である。
【図４Ｃ】組み立ての異なる段階にある、遮断プレートを有しない、図４Ａに示されるシステムの斜視図である。
【図４Ｄ】組み立ての異なる段階にある、遮断プレートを有しない、図４Ａに示されるシステムの斜視図である。
【図４Ｅ】遮断プレートを図４Ｄに示される組立体に固定する異なる段階にある、図４Ａに示されるシステムの斜視図である。
【図４Ｆ】遮断プレートを図４Ｄに示される組立体に固定する異なる段階にある、図４Ａに示されるシステムの斜視図である。
【図４Ｇ】遮断プレートを図４Ｄに示される組立体に固定する異なる段階にある、図４Ａに示されるシステムの斜視図である。
【発明を実施するための形態】
【００９２】
図１、２Ａ、及び２Ｂは、フィブリノゲンとの反応時にフィブリンを形成することができるタンパク質分解酵素、例えば、トロンビンを含有する溶液を使用して、フィブリノゲンの存在を検出及び／又は定量化するために、例えば、本明細書の背景技術の部分に記載される工程（ａ）〜（ｃ）を含む手順によって、複数のフィブリノゲン含有試料（以降「試験試料」）をインサイツ調製するための、本明細書に開示される主題のうちの一実施形態に従うシステム１の概略斜視図及び断面図である。
【００９３】
システム１は、上方開口部１１を有する第１のキャビティ部分４１のアレイを有する上方プレート１０と、下方開口部２１を有する対応する第２のキャビティ部分４２のアレイを有する下方プレート２０と、それらの間の多孔質膜３０と備え、これらは、上方プレートの第１のキャビティ部分が、下方プレートの第２のキャビティ部分と、長手方向軸Ｘに対して同軸上で整列し、膜３０がそれらを分離し、それにより各々単一の試験試料の調製に対して構成された細長いキャビティ４０のアレイを形成するように組み立てられる。システム１は、複数のポスト５１が上向きに突出した遮断プレート５０を更に備え、この複数のポスト５１は各々、対応する下方開口部２１中に各々受容されるように構成されている。
【００９４】
図１及び図２Ａに見られるように、各細長いキャビティ４０は、それぞれ、プレート１０及び２０の上方開口部１１及び下方開口部２１によって構成される頂部開口端部及び底部開口端部を有するウェルを構成し、このウェルは、膜３０によって、第１のキャビティ部分４１によって構成され、物質受け部として機能する第１のウェル部分と、第２のキャビティ部分４２によって構成され、通路（これを介して、ポスト５１が、キャビティの第２の開口端部２１から第２のウェル部分中に挿入されるときに、図２Ｂに示されるように、底部開口部から膜へのアクセスを遮断することができる）として働くように構成される、第２のウェル部分とに分割される。
【００９５】
膜３０は、真空が底部開口端部／下方開口部２１を介してそれに適用されるときに膜を通過する、タンパク質、例えば、物質受け部４１中でその上に配置された流体に対する吸収特性を有しない多孔質材料で作製される、シートの形態である。膜材料は、上述の物質に対して不活性な疎水性材料である。膜は、１０〜４０μｍの範囲、より具体的には２０〜３０μｍの範囲、更により具体的には約２５μｍのサイズの孔を有する。
【００９６】
各物質受け部４１は、頂部開口端部／上方開口部１１を通して本プロセスの各工程に必要な所定量の物質を中に受け取るのに十分な寸法を有する。
【００９７】
各ポスト５１は、少なくとも第２のキャビティ部分４２の軸方向延長部以上の軸方向延長部を有し、少なくとも膜３０に近い場所ではウェルの第２の部分の形状及び寸法に対応する形状及び寸法を有するフランジ５３を有する。
【００９８】
遮断基部５０は、ポスト５１のフランジ５３が膜３０から離れた方向に底部開口端部２１から離間して、第１のウェル部分４１と第２のウェル部分４２との間の、膜３０を通した流体連通を可能にする、第１の位置と、各フランジ５３が、ウェル底部開口端部２１の方向から見た場合に、各ウェル内で膜３０の下面３１ｂの対応する領域３２に近接して又は接触して配置され、それを完全に被覆することで、上記流体連通の可能性を防ぐ、第２の位置とからポスト５１を移動させるように構成される。
【００９９】
第１のウェル部分４１の壁を含む上方プレート１０、第２のウェル部分４２の壁を含む下方プレート２０、及びポスト５１を含む遮断基部５０は、アルカリ性物質、例えば、ＮａＯＨに耐性である材料で作製される。かかる材料の一例は、ステンレス鋼、より具体的にはＳＴ−３０３である。列挙される要素の各々は、１つ超の材料で作製され得る。例えば、遮断ポスト５１は、遮断プレート５２が作製される材料の疎水特性及び摩擦係数よりも高い疎水特性及び低い摩擦係数を有する材料で作製することができるか、又はそれらを有するコーティングを有することができる。具体的には、遮断プレート５２はＳＴ−３０３などのステンレス鋼から作製することができ、遮断ポスト５１はテフロンから作製することができる。
【０１００】
遮断プレート５２及びポスト５１は、全て、記載される例のように一元体として製造することができる。代替的に、これらの要素を別々に製造し、組み立てて、遮断基部５０を形成することができる。プレートは、下方プレート２０から永続的に離間して、静止するか、又はシステムの残りの部分に対して水平にのみ移動するように構築することができ、ポスト５１を、それらの上記２つの位置の間で軸方向に移動させるための機構を有し得る（図示せず）。
【０１０１】
システム１は、底部開口端部２１が露出して、それを通してウェルに真空を適用すべく、真空マニホールド（図示せず）に取り付けられるように構成される。
【０１０２】
システム１は、封止アレンジメント（図２Ａ及び２Ｂに図示せず）を更に含むことができ、これは、膜３０と上方プレート１０又は下方プレート２０のうちの少なくとも一方との間のウェルの領域を封止するためのものである。
【０１０３】
本システムの上記構造により、マルチウェルアレイが構成され、ここでは、各ウェルが、単一の試験管として機能し、この試験管は、管の外側のその第１の位置と管の内側の第２の位置との間で移動可能な専用の遮断ポスト５１を伴う。
【０１０４】
上記システムは、以下のように、フィブリノゲンとの反応時にフィブリンを形成することができるタンパク質分解酵素、例えば、トロンビンを含有する溶液を使用して、フィブリノゲン含有試料から試験試料を調製するインサイツプロセスに使用され得る：
（ａ）各ウェルの物質受け部４１に所定量のトロンビン含有溶液及び所定量のフィブリノゲン含有試料を配置して、膜３０上でそれらの混合物を得て、任意選択的にシステムをインキュベーター（図示せず）中に置いて、フィブリン凝塊の形態での混合物の形成を促進すること（各ウェルと関連する遮断ポスト５１が第１の位置（図２Ａ）、即ち、管の外側にある）、
（ｂ）システム１を真空マニホールド（図示せず）上に取り付けること（ここで、底部開口端部２１は真空マニホールドと対面する）、
（ｃ）凝塊を物質受け部４１中で生理食塩水などの所定量の液体で洗浄すること、
（ｄ）真空マニホールドを操作して、真空を底部開口端部２１で膜３０に適用し、それにより「非凝固性」タンパク質を物質受け部４１から膜３０を通して底部開口端部２１を介して引き出すことで、液体を「非凝固性」タンパク質と共に除去すること、
（ｅ）任意選択的に、工程（ｃ）及び（ｄ）を何回も繰り返すこと、
（ｆ）システム１を真空マニホールドから除去すること、
（ｇ）遮断基部５０を移動させて、ポスト５１をそれらの第２の位置（図２Ｂ）、即ち、管の内側に持っていくこと、並びに
（ｈ）所定量の可溶化溶液、例えば、アルカリ性物質及び／又はカオトロピック剤を含むアルカリ性溶液を各ウェルの物質受け部４１中に配置して、凝塊の可溶化を促進し、それにより試験試料を産出すること。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、工程（ａ）〜（ｈ）は、インサイツ、又は同じ物質受け部、キャビティ部分、及び／若しくはウェル中で実行される。
【０１０６】
上述のプロセスでは、各ウェルに使用される物質の量は、上記工程（ａ）で産出されたフィブリン凝塊が、それと物質受け部４１の底部を構成する膜３０とが接触する領域が膜表面の領域より小さいために、凝塊が後者の領域の一部しか占有しない、即ち、膜の表面を完全には被覆しない（これは膜の疎水性質によって可能となる）寸法を有するような量である。
【０１０７】
図３は、本明細書に開示される主題の別の実施形態に従うシステム２を示し、このシステム２は、その上方プレート１０、下方プレート２０、膜３０、及び遮断基部５０の構造に関する限り、システム１と類似しているが、封止アレンジメント６０を更に含む。図３では、上方プレート１０の下面は１２と指定され、下方プレート２０の上面は２２と指定され、封止アレンジメントは、６０ａ及び６０ｂとそれぞれ指定される上方封止部材及び下方封止部材の形態である。
【０１０８】
これらの封止部材６０ａ、６０ｂの各々は、それぞれの上方プレートの下面１２又は下方プレートの上面２２に対応する形状及び寸法のシートの形態を有し、相応に、上方プレートの下面１２と膜３０との間でその表面と対面している面に、又は下方プレートの上面２２と膜３０との間でその表面と対面している面に取り付けられる。
【０１０９】
上方封止部材６０ａは、第１のウェル部分４１の断面形状及び寸法に対応する形状及び寸法を有する複数の上方封止開口部６５ａを有する。このため、上方封止部材６０ａが、上方プレート１０と膜３０との間で、その開口部６５ａが第１のウェル部分４１と同軸上で整列した状態で挟み込まれるときに、第１のウェル部分の周囲に封止が形成されて、例えば、第１のウェル部分から膜に向かって通る流体が領域３１以外の膜の領域に達することを防止する。
【０１１０】
下方封止部材６０ｂは、第２のウェル部分４２の断面形状及び寸法に対応する形状及び寸法を有する複数の下方封止開口部６５ｂを有する。このため、下方封止部材６０ｂが、下方プレート２０と膜３０との間で、その開口部６５ｂが第２のウェル部分４２と同軸上で整列した状態で挟み込まれるときに、第２のウェル部分の周囲に封止が形成されて、例えば、膜の領域３２を通って第２のウェル部分４２に向かって流れる流体が、領域３２以外の膜の領域に達することを防止する。
【０１１１】
上方封止部材と下方封止部材との両方は、その清掃／洗浄ができるように、ケイ素などの材料で作製され得る。
【０１１２】
一般に、上方封止部材６０ａ及び下方封止部材６０ｂは、それぞれの上方プレート１０及び下方プレート２０に永続的に又は着脱可能に装着され得、それらは全て、それぞれの位置決め用雄部及び雌部を有することがき、その係合により、封止部材と上方プレート及び下方プレートとの必要な相互配置が確実となる。具体的には、図３に示される実施形態では、上方封止部材６０ａ及び下方封止部材６０ｂは、複数のピン６８ａ及び６８ｂを有し、これらのピンは、それらの対向する縁部に沿って配置され、それに応じて、上方プレート１２及び下方プレート２２にある対応するボア１８（図示せず）及び２８の中に堅く受容されるように構成される。
【０１１３】
システム２は、上方プレート１０と下方プレート２０とを、上方封止部材６０ａ及び下方封止部材６０ｂ並びに膜３０がそれらの間にくることで端部開口組立体（この場合は第１の位置にある遮断プレート５０を含まない）を形成する状態で、共に固定するように構成される、第１の固定アレンジメントと、第２の位置にあるときの遮断プレート５０を、上方プレート及び下方プレートの角部に対応するその領域間に配置されるその対向する位置で端部開口組立体に固定するように構成される、第２の固定アレンジメントと、を含み得る。
【０１１４】
より具体的には、上方プレート及び下方プレートは、固定に関与するある数の角部を有することができ、その場合、第１のアレンジメントは、プレートが共に固定されるときに、これらの角部にて上方プレート及び下方プレートに等しい力を加えるように構成され得る。
【０１１５】
図４Ａは、本明細書に開示される主題の更なる実施形態に従うシステム３を示し、これは、その上方プレート１０、下方プレート２０、膜３０、遮断基部５０、及び封止アレンジメント６０の構造に関する限り、システム２に類似しているが、この場合は図４Ｂ〜４Ｄでより詳細に示される４つの同一のロック機構７０の形態である第１の固定アレンジメントと、この場合は図４Ｅ〜４Ｇでより詳細に示される２つのロック機構８０の形態である第２の固定アレンジメントとを更に含む。
【０１１６】
図４Ｂ〜４Ｄを参照して、第１の固定アレンジメントの各ロック機構７０は、少なくともその角部のうちの１つで下方プレート２０に装着されるロック７１’と、上方プレート１０の対応する角部に形成されるロック係合部分７１”とを備える。ロック７１’は、
−上方端部７５、下方端部７６、及びそれらの間の細長いボルト本体７７を有するアイボルトの形態である整列部材７３であって、下方端部７６が、図４Ｂに示されるように、アイボルトが実線で示される第１の水平位置（プレートに対して）と点線で示される第２の垂直位置（プレートに対して）との間の矢印Ｂの方向に曲がる可能性がある、下方プレート２０にヒンジ式に装着される、整列部材７３と、
−締付部材７４であって、図４Ｃに示されるように、整列部材と整列する第１の位置と整列部材に対して横方向に配向される第２の位置との間の矢印Ｃの方向に曲がる可能性がある、アイボルト７３の上方端部７５に取り付けられる、偏心カムレバーの形態である、締付部材７４と、を備える。
【０１１７】
上方プレート１０のロック係合部分７１”は、中にボルト本体を受容するように構成される陥凹の形態である。
【０１１８】
実際には、間に膜３０並びに封止部材６０ａ及び６０ｂを有する上方プレート１０並びに下方プレート２０は、互いに固定される前にまず整列され、その後、アイボルト７３がその水平位置からその垂直位置に曲がり、その結果、ボルト本体７７がロック係合部分７１”中に受容され、整列した位置にある偏心カムレバー７４が、図４Ｃに示されるように、上方プレートの上に配置され、最後に、偏心カムレバー７４が図４Ｄに示されるその横方向の位置へと曲がることにより、上方プレート１０に圧力を加える。４つ全てのロック機構７０においてこれが起きると、上方プレート及び下方プレートは互いにしっかりと締め付けられて、組立体１００を形成する（図４Ａ、４Ｄ）。
【０１１９】
図４Ｅ〜４Ｇを参照して、第２の固定アレンジメントのロック機構８０は、ロック機構７０と同じ構造を有し、同じ様式で動作するが、主な違いはそれらの位置である。具体的には、ロック機構８０のロック８１’は、図４Ｅに示されるように、その反対側の縁部の中央、及びロック係合部分７１”間の上方プレート１０の対応する位置に形成されるロック係合部分８１”で、遮断プレート５０に装着される。いくつかの実施形態では、「ロック係合部分」は、上方プレートにある突起部である。
【０１２０】
実際には、組立体１００及び遮断部材５０は、互いに固定される前にまず整列され、その後、アイボルト８３がその水平位置からその垂直位置に曲がり、その結果、ボルト本体８７がロック係合部分８１”中に受容され、整列した位置にある偏心カムレバー８４が、図４Ｆに示されるように、上方プレートの上に配置され、最後に、偏心カムレバー８４が図４Ｇに示されるその横方向の位置へと曲がることにより、上方プレート１０に圧力を加える。両方のロック機構８０においてこれが起きると、組立体１００及び遮断プレートは互いにしっかりと締め付けられて、システム３を形成する（図４Ｇ）。
【０１２１】
上記説明から明白であるように、ロック機構７１の細長いボルト本体７７の長さは、上方プレート１０、膜、及びそれらの間にある封止部材の総合した厚さに対応するべきであり、ロック機構８１の細長いボルト本体８７の長さは、組立体１００の総合した厚さに対応するべきある。
【０１２２】
上述のシステム１〜３のうちのいずれも、それらの製造場所で組み立てられることができ、あるいはキットとして製造されることができ、この場合、システムの構成要素の全て又は少なくとも一部は、使用者の場所で組み立てられることになる。
【０１２３】
本明細書に記載される主題に従うデバイス及びインサイツプロセスを使用して得られた、フィブリノゲン含有溶液中の凝固性フィブリノゲン濃度を定量化した結果を比較するために、実験を行い、以下に記載され、これには、既知の調製方法によって調製された（実験１）又は既知の値を有する（実験２）フィブリノゲン含有溶液を使用して得られたものを用いた。
【０１２４】
実験１
この実験の目的は、本明細書に開示される主題に従うデバイス及びインサイツプロセスがフィブリノゲン含有試料（試料１及び２、以下参照）中のフィブリノゲン含有量を測定する能力を調査することであった。この目的のため、試験した試料中の得られた凝固性フィブリノゲン濃度を、既知の確認されている重量法を使用して得られた結果と比較した。
【０１２５】
アッセイにおいて試料１及び２中の凝固性フィブリノゲン濃度を計算するために、本デバイス中でフィブリノゲン標準試料（凝固性フィブリノゲン濃度６４ｍｇ／ｍｌ）と対照させて試験した。
【０１２６】
試験した試料（フィブリノゲン含有溶液）
試料１は２９．８ｍｇ／ｍｌの凝固性フィブリノゲンを含有した。
試料２は７０．１ｍｇ／ｍｌの凝固性フィブリノゲンを含有した。
【０１２７】
既知の評価方法（既知の確認されている重量法）
２つの試料中の凝固性フィブリノゲン濃度を評価するための既知の方法は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  ７．０に従う確認されている重量手法であった（Ｇａｆｆｎｅｙ  Ｐ．Ｊ．ａｎｄ  Ｗｏｎｇ  Ｍ．Ｙ．Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ａ  ｐｒｏｐｏｓｅｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  ｆｏｒ  ｐｌａｓｍａ  Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ．Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈｅａｍｏｓｔａｓｉｓ，６８（４），ｐｐ．４２８〜４３２，１９９２も参照されたい）。
【０１２８】
試験した技法及び方法
以下は、実験に使用した、本明細書に開示される主題に従うデバイスの説明である。
【０１２９】
本デバイスは、ステンレス鋼鋼（ｓｔ−３０３）で作製された矩形上方プレート及び矩形下方プレートを有し、各プレートは、３５個の開口ウェルを有した。各プレートは、高さ１．５ｃｍ、長さ１２．６ｃｍ、幅８．５ｃｍである。各ウェルは、深さ１．５ｃｍ、直径０．９ｃｍ、面積０．６４ｃｍ２であった。本デバイスは、２つのケイ素封止部材を備え、各封止部材は、厚さ０．２ｃｍであり、２つのプレートに長さ及び幅において対応し、プレート中のウェルに形状及びサイズにおいて対応する穴を有した。ポリプロピレンで作製された、孔径２５μｍの疎水性膜シートを使用した（Ｍｅｒｃｋ、カタログ番号ＰＰ２５１４２５０）。本デバイスは、４つのカムレバーロックを更に備え、これらは、ステンレス鋼（ｓｔ−３０３）で作製され、上方プレート及び下方プレート、膜シート、及び２つの封止部材を共に保持して、インサイツプロセス中に使用される端部開口ウェルを有する組立体を形成するために、下方プレートの各角部に位置する。
【０１３０】
上記要素を、下方プレート、第１のケイ素封止部材、膜、第２のケイ素封止部材、上方プレートの順序で下から上に組み立てた後、これらの要素をカムレバーロックによって互いに固定した（以降「組立体Ｉ」）。
【０１３１】
本デバイスは、３５個の遮断ポストを有する、ステンレス鋼（ｓｔ−３０３）で作製された矩形遮断基部を更に備え、基部は、長さ１３ｃｍ及び幅９ｃｍであり、各ポストは、高さ２．９ｃｍであり、ウェル開口部に形状において対応する直径約０．８ｃｍの上面を有した。遮断基部は、ステンレス鋼（ｓｔ−３０３）で作製され、基部の短い側部の中央に位置する、２つのカムレバーロックを有した。ロックは、組立体Ｉを遮断基部と共に保持し、それによりポストが膜に近接して位置付けられるように構成された。遮断ポストにより膜を通した流体漏出の可能性が妨げられるような様式で、組立体Ｉを遮断基部に取り付けた。
【０１３２】
真空マニホールド（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号ＭＡＶＭ０９６０Ｒ）を使用して、デバイスに真空を適用した。真空マニホールドは、高さ５．５ｃｍ、長さ１４．５ｃｍ、幅１０ｃｍである。
【０１３３】
以下の工程に従って試験を実行した：
１−５０μｌの溶液Ａと６０μｌの溶液Ｂとを膜シート上で混合することにより、組立体Ｉのウェルの中に凝塊を形成させた（以下の表１中の溶液Ａ及び溶液Ｂの組成を参照）。
【０１３４】
【表１】
2019516092.tif 000003
＊試料を、フィブリノゲン標準試料に基づいて許容可能なＯ．Ｄ．内となるように生理食塩水で希釈した。フィブリノゲン標準を、試料２、４５０μｌの生理食塩水及び５０μｌのフィブリノゲン標準として希釈した。
２−凝塊を形成させるために、混合物を室温（約２０〜２５°Ｃ）で２０分間インキュベートした。凝塊は、膜表面の約０．３５〜０．４９ｃｍ２（ウェル領域の約５５〜７７％）を被覆した。
３−凝塊形成の後、組立体Ｉを真空マニホールドに取り付け、凝塊を６回洗浄して、非凝固性タンパク質を除去した。各回、９００μｌの生理食塩水を各ウェルに添加し、続いて、約９００ｍｂａｒの圧力差（ΔＰ）でデバイスに真空を適用し、洗浄溶液の膜の通過が生じた。
４−組立体Ｉを真空マニホールドから取り外し、遮断基部に取り付け、２つのカムレバーロックによって固定して、ポストを膜に近接して配置し、膜を通した流体漏出の可能性を妨げた。
５−１ｍｌの凝塊可溶化溶液［リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中、７Ｍの尿素、０．２ＭのＮａＯＨ］を各ウェルに添加した。
６−室温での１時間のインキュベート期間後。この実験では、工程１〜６はインサイツで（同じウェルにおいて）実行する。
７−インキュベーション後、１００μｌを各ウェルから採集し、エッペンドルフチューブに移し、９００μｌのＨ２Ｏを用いて１：１０に希釈した。
８−試料を凝固性フィブリノゲン濃度の定量化のためにキュベットに移した。光学濃度（Ｏ．Ｄ．）の測定を、２８０ｎｍ及び３２０ｎｍで分光光度計によって実行した。凝固性フィブリノゲン計算用の最終Ｏ．Ｄ．を測定するために、３２０ｎｍでのＯ．Ｄ．測定値を２８０ｎｍでのＯ．Ｄ．測定値から減算し、正確な凝固性フィブリノゲン濃度を、減算したＯ．Ｄ．及び上記工程に供した既知のフィブリノゲン標準試料Ｏ．Ｄ．に基づいて計算した。試料の希釈を計算において考慮に入れた。
【０１３５】
実施例試験の結果を以下で表２に示す。
【０１３６】
【表２】
2019516092.tif 000004
【０１３７】
本明細書に開示される主題に従うデバイス及びインサイツプロセスを使用して試料１及び２について得られた平均結果は、時間のかかる代替的な確認されている方法（試料調製のための全ての工程が同じウェルで実行されない方法）によって得られた結果と本質的に同じであったことが分かる。
【０１３８】
これらの結果により、フィブリノゲン含有溶液中の凝固性フィブリノゲン濃度を定量化するための使用に対する本明細書に開示される主題のインサイツプロセスの精度の高さ並びにインサイツプロセス及びデバイスの安定性が示される。
【０１３９】
異なる複製間のＲＳＤ（３．５〜４％）により、本試験の良好な精度が示される。
【０１４０】
実験２
試料中の凝固性フィブリノゲン濃度を測定するための、本明細書に開示される主題に従うインサイツプロセスの精度は、１０．９ｍｇ／ｍｌの既知の保証値を有するフィブリノゲン濃縮物についての国際標準（International Standard for a Fibrinogen Concentrate）（ＮＩＢＳＣから購入、コード０２／２４２）（以降「試料３」）の凝固性フィブリノゲン濃度を試験することによって裏付けられた。
【０１４１】
試験した技法及び方法
上記実験１に記載したものと同一のデバイス及びインサイツプロセスを使用して試験を行った。凝塊調製を試料１と同様に実行した（表１を参照されたい）。
【０１４２】
上述のデバイス及びインサイツプロセスを使用して得られた凝固性フィブリノゲン濃度を以下で表３に示す。
【０１４３】
【表３】
2019516092.tif 000005
【０１４４】
これらの結果により、本明細書に開示される主題に従う方法が、正確かつ精密であること、また本デバイスを使用して、凝固性フィブリノゲン濃度を正確に測定できることが確認される。
【０１４５】
〔実施の態様〕
（１）  試料のインサイツ調製を行うためのデバイスであって、前記調製が、ある数の工程を含み、かつ少なくとも２つの物質を伴い、前記デバイスが、
−物質受け部（４１）であって、頂部（１１）及び底部を有し、前記工程の各々に必要な所定量の材料を、前記頂部（１１）を通して中に受け取るのに十分な寸法を有する、物質受け部（４１）と、
−膜（３０）であって、前記物質受け部（４１）の前記底部を構成し、前記物質受け部の内側の方に向いている上面（３１ａ）と、前記物質受け部の外側の方に向いている下面（３１ｂ）と、を有し、前記工程のうちの少なくとも１つにおいて前記物質受け部中に配置される流体が、真空がその底部に適用されるときにのみ、そこから前記膜を通って前記物質受け部の前記外側に向かって移動することを可能にするような構造を有する、膜（３０）と、
−少なくとも１つの遮断部材（５１）であって、前記部材は、それが前記膜の前記下面に近接して配置され、それを被覆することで、前記物質受け部と前記物質受け部の前記外側との間の、前記膜を通した流体連通の可能性を防ぐ、１つの位置と、前記膜から離間されることで、真空が前記物質受け部の前記底部に適用されるときに前記流体連通を可能にする、別の位置と、に着くように構成されている、遮断部材（５１）と、を備える、デバイス。
（２）  細長いキャビティ（４０）を更に備え、前記細長いキャビティ（４０）が、上方開口部（１１）及び下方開口部（２１）、前記物質受け部（４１）によって構成された第１のキャビティ部分、並びに前記膜（３０）と前記キャビティの前記下方開口部（２１）との間に延在する第２のキャビティ部分（４２）を有し、前記遮断部材（５１）が、前記デバイスの下方開口端部から前記第２のキャビティ部分の中へと挿入可能である、実施態様１に記載のデバイス。
（３）  少なくとも、前記物質受け部、前記膜、及び前記遮断部材を囲繞している前記デバイスの部分が、アルカリ性物質、より具体的にはＮａＯＨに耐性である、実施態様１又は２に記載のデバイス。
（４）  前記膜が、少なくとも使用前に少なくとも前記物質に関して吸収特性を有しない材料で作製され、前記材料が、多孔質疎水性材料であり、かつ／又は少なくとも前記物質に対して不活性である、実施態様１〜３のいずれかに記載のデバイス。
（５）  前記材料が、１０〜４０μｍの範囲、より具体的には２０〜３０μｍの範囲、更により具体的には約２５μｍのサイズの孔を有する、実施態様４に記載のデバイス。
【０１４６】
（６）  前記デバイスは、前記膜の前記下面（３１ｂ）への真空の適用を許容すべく、前記遮断部材（５１）が前記膜（３０）から離間されているときに、真空マニホールド上に取り付けられるように構成されている、実施態様１〜５のいずれかに記載のデバイス。
（７）  前記遮断部材が、軸（Ｘ）に沿った延長部を有し、前記延長部が、少なくとも、この軸に沿った前記第２のキャビティ部分の延長部以上である、実施態様２又は実施態様２に直接的若しくは間接的に従属する実施態様のいずれかに記載のデバイス。
（８）  ウェル（４０）のアレイを構成する複数の前記物質受け部と、対応する複数の遮断部材と、を備え、前記遮断部材の各々が、前記対応する物質受け部に対する位置に着くように構成されている、実施態様１〜７のいずれかに記載のデバイス。
（９）  −上方プレート（１０）であって、上面（１５）と、下面（１２）と、それらの間に延在する複数の第１のウェル部分（４１）と、を有し、前記複数の第１のウェル部分（４１）が各々、前記上面に頂部開口端部を、そして前記下面に底部開口端部を有し、各第１のウェル部分が、前記物質受け部（４１）を構成する、上方プレート（１０）と、
−膜シート（３０）であって、前記上方プレート（１０）とその下面（１２）にて組み立てられるように構成され、その結果、前記各第１のウェル部分の下方開口端部に最も近く、かつそれと形状及び寸法において対応する前記膜の領域が、前記第１のウェル部分（３２）の底部を構成する、膜シート（３０）と、を備える、システム（３）の一部、を構成する、実施態様８に記載のデバイス。
（１０）  前記システムが、前記膜の前記領域（３２）及び前記第１のウェル部分の対応する下方開口端部の周囲に封止を形成するための封止アレンジメント（６０）を更に備え、任意選択的に、前記封止アレンジメント（６０）が、任意選択的にケイ素で作製され、前記第１のウェル部分の前記底部開口端部と形状及び寸法において対応する複数の上方封止開口部（６５ａ）を有する、上方封止シート（６０ａ）の形態であり、前記上方封止シートが、前記上方プレート（１０）と前記膜（３０）との間に、その開口部が前記第１のウェル部分（４１）と同軸上で整列した状態で取り付けられるように構成されている、実施態様９に記載のデバイス。
【０１４７】
（１１）  前記システムが、上面（２２）と、下面（２５）と、それらの間に延在し、前記第１のウェル部分の断面形状及び寸法と対応する断面形状及び寸法を有する、複数の第２のウェル部分（４２）と、を有する、下方プレート（２０）を更に備え、各第２のウェル部分が、前記下方プレートの前記上面に頂部開口端部を、そして前記下方プレートの前記下面に底部開口端部を有し、前記上方プレート（１０）及び前記下方プレート（２０）は、前記膜（３０）がそれらの間に挟み込まれた状態で互いに固定されるように構成され、その結果、各対の対応する第１のウェル部分（４１）及び前記第２のウェル部分（４２）が、同軸上で整列して１つのウェルを形成し、前記膜の前記領域（３２）によって分離されている、実施態様９又は１０に記載のデバイス。
（１２）  前記システムが、前記膜の前記領域及び前記第２のウェル部分の前記頂部開口端部の周囲に封止を形成する封止アレンジメントを更に備え、任意選択的に、前記封止アレンジメントが、任意選択的にケイ素で作製され、前記第２のウェル部分の前記頂部開口端部と形状及び寸法において対応する複数の下方封止開口部（６５ｂ）を有する、下方封止シート（６０ｂ）の形態であり、前記封止シートが、前記下方プレート（２０）と前記膜（３０）との間に、その開口部が前記第２のウェル部分（４２）と同軸上で整列した状態で取り付けられるように構成されている、実施態様１１に記載のデバイス。
（１３）  前記第１のプレート及び前記第２のプレートのうちの一方が、前記上方プレート及び前記下方プレートを共にしっかりと保持するためのロック（７０）を備え、それにより、前記膜と前記上方封止シート及び前記下方封止シートとが、端部開口ウェルとの組立体（１００）を形成する、実施態様１２に記載のデバイス。
（１４）  前記システムが、前記膜の前記領域（３２）と形状及び寸法において対応する遮断フランジ（５３）を各々有する前記遮断部材（５１）を含む、遮断基部（５０）を更に備える、実施態様９〜１３のいずれかに記載のデバイス。
（１５）  前記遮断部材が、前記遮断基部の上面から突出する複数のポストの形態であり、前記遮断面が、前記ポストの頂面によって構成されている、実施態様１４に記載のデバイス。
【０１４８】
（１６）  前記システムは、前記遮断部材（５１）が前記膜（３０）に近接するときに、前記遮断基部（５０）を前記上方プレート（１０）及び前記下方プレート（２０）に対して固定された関係でしっかりと保持するためのロック（８０）を備える、実施態様９〜１５のいずれかに記載のデバイス。
（１７）  前記組立体（１００）は、前記遮断部材（５１）が前記膜から離間されているときに、真空を適用するために前記第２のウェル部分の前記底部開口端部（２１）を露出させるべく、真空マニホールド上に取り付けられるように構成されている、実施態様１３〜１６のいずれかに記載のデバイス。
（１８）  凝固性フィブリノゲンの存在の検出及び／又は定量化のための試料調製のインサイツプロセスであって、ある数の工程を含み、かつ少なくとも２つの物質を伴い、その一方がフィブリノゲンを含み、他方がフィブリノゲンとの反応時にフィブリンを形成することができるタンパク質分解酵素を含み、前記工程が、少なくとも、以下：
（ａ）実施態様１〜１７のいずれかに記載のデバイスを提供することと、
（ｂ）前記少なくとも２つの物質を前記物質受け部中の前記膜上で混合することによって、凝塊を形成させることと、
（ｃ）前記凝塊を前記物質受け部中で液体によって洗浄することと、
（ｄ）前記遮断部材（５１）が前記膜（３０）から離間されているときに、前記物質受け部の前記底部で及び／又は前記キャビティの前記下方開口部（２１）に真空を適用することで、前記液体を前記物質受け部（４１）から前記膜を通して前記下方開口部を介して引き出すことによって前記液体を除去することと、
（ｅ）任意選択的に、工程（ｃ）及び（ｄ）を何回も繰り返すことと、
（ｆ）前記遮断部材（５１）を、前記膜に近接した位置に持っていくことと、
（ｇ）前記物質受け部中の前記凝塊を好適な水溶液によって可溶化することと、である、インサイツプロセス。
（１９）  前記水溶液が、アルカリ性物質及び／又はカオトロピック剤を含む、実施態様１８に記載のインサイツプロセス。
（２０）  前記工程（ｄ）における真空の適用は、前記遮断部材（５１）が前記膜から離れているときに、真空を適用するために前記第２のウェル部分の前記底部開口端部（２１）を露出させるべく、前記デバイスを真空マニホールド上に取り付けることによって行われている、実施態様１８又は１９に記載のインサイツプロセス。
【０１４９】
（２１）  試料のインサイツ調製を行うためのデバイスであって、前記調製が、ある数の工程を含み、かつ少なくとも２つの物質を伴い、前記デバイスが、
−少なくとも１つの細長いキャビティ（４０）であって、前記デバイスの長手方向軸（Ｘ）に沿って離間された上方開口部（１１）及び下方開口部（２１）を有し、物質受け部（４１）を有し、前記物質受け部の頂部開口端部と底部との間に延在し、前記工程の各々に必要な所定量の材料を、前記上方開口部を通して中に受け取るのに十分な寸法を有する、少なくとも１つの細長いキャビティ（４０）と、
−膜（３０）であって、前記物質受け部の前記底部を構成し、前記工程のうちの少なくとも１つにおいて前記物質受け部中に配置される流体が、真空が前記下方開口部を介してそれに適用されるときにのみ、そこから前記膜を通って前記キャビティの前記下方開口端部（２１）に向かって移動することを可能にするような構造を有する、膜（３０）と、を備え、
前記膜が、少なくとも前記物質に関して吸収特性を有しない疎水性材料で作製され、それにより、前記物質を混合し、任意選択的に前記混合物を前記物質受け部中でインキュベートすることによって、前記物質受け部中で前記膜上に形成された凝塊が、前記膜を、部分的にのみ、より具体的には前記膜領域の５０〜８０％の範囲で被覆することができるようにする、デバイス。
（２２）  前記細長いキャビティ（４０）が、前記物質受け部（４１）によって構成される第１のキャビティ部分と、前記膜（３０）と前記キャビティの前記下方開口部（２１）との間に延在する第２のキャビティ部分（４２）と、を備える、実施態様２１に記載のデバイス。
（２３）  少なくとも、前記細長いキャビティ及び前記膜を囲繞している前記デバイスの部分が、アルカリ性物質、より具体的にはＮａＯＨに耐性である、実施態様２１又は２２に記載のデバイス。
（２４）  前記疎水性材料が、多孔質であり、かつ／又は少なくとも前記物質に対して不活性である、実施態様２１〜２３のいずれかに記載のデバイス。
（２５）  前記疎水性材料が、１０〜４０μｍの範囲、より具体的には２０〜３０μｍの範囲、更により具体的には約２５μｍのサイズの孔を有する、実施態様２１〜２４のいずれかに記載のデバイス。
【０１５０】
（２６）  前記デバイスが、前記膜の前記下面（３１ｂ）への真空の適用を許容すべく、真空マニホールド上に取り付けられるように構成されている、実施態様２１〜２５のいずれかに記載のデバイス。
（２７）  ウェルのアレイを構成する複数の前記細長いキャビティを備える、実施態様２１〜２６のいずれかに記載のデバイス。
（２８）  −上方プレート（１０）であって、上面（１５）と、下面（１２）と、それらの間に延在する複数の第１のウェル部分（４１）と、を有し、前記複数の第１のウェル部分（４１）が各々、前記上面に頂部開口端部を、そして前記下面に底部開口端部を有し、各第１のウェル部分が、前記物質受け部（４１）を構成する、上方プレート（１０）と、
−シート形態の膜（３０）であって、前記上方プレート（１０）とその下面（１２）にて組み立てられるように構成され、その結果、前記各第１のウェル部分の前記底部開口端部に最も近く、かつそれと形状及び寸法において対応する前記膜の領域が、前記第１のウェル部分（３２）の底部を構成する、シート形態の膜（３０）と、を備える、システム（３）の一部、を構成する、実施態様２７に記載のデバイス。
（２９）  前記システムが、前記膜の前記領域（３２）及び前記第１のウェル部分の対応する底部開口端部の周囲に封止を形成するための封止アレンジメント（６０）を更に備え、任意選択的に、前記封止アレンジメント（６０）が、任意選択的にケイ素で作製され、前記第１のウェル部分の前記底部開口端部と形状及び寸法において対応する複数の上方封止開口部（６５ａ）を有する、上方封止シート（６０ａ）の形態であり、前記上方封止シートが、前記上方プレート（１０）と前記膜（３０）との間に、その開口部が前記第１のウェル部分と同軸上で整列した状態で取り付けられるように構成されている、実施態様２８に記載のデバイス。
（３０）  前記システムが、上面（２２）と、下面と、それらの間に延在し、前記第１のウェル部分の断面形状及び寸法と対応する断面形状及び寸法を有する、複数の第２のウェル部分（４２）と、を有する、下方プレート（２０）を更に備え、各第２のウェル部分が、前記下方プレートの前記上面に頂部開口端部を、そして前記下方プレートの前記下面に底部開口端部を有し、前記上方プレート（１０）及び前記下方プレート（２０）は、前記膜（３０）がそれらの間に挟み込まれた状態で互いに固定されるように構成され、その結果、各対の対応する第１のウェル部分（４１）及び第２のウェル部分（４２）が、同軸上で整列して１つのウェルを形成し、前記膜の前記領域（３２）によって分離されている、実施態様２９に記載のデバイス。
【０１５１】
（３１）  前記システムが、前記膜の前記領域及び前記第２のウェル部分の前記上方開口端部の周囲に封止を形成する封止アレンジメントを更に備え、任意選択的に、前記封止アレンジメントが、任意選択的にケイ素で作製され、前記第２のウェル部分の前記頂部開口端部と形状及び寸法において対応する複数の下方封止開口部（６５ｂ）を有する、下方封止シート（６０ｂ）の形態であり、前記封止シートが、前記下方プレート（２０）と前記膜（３０）との間に、その開口部が前記第２のウェル部分（４２）と同軸上で整列した状態で取り付けられるように構成されている、実施態様３０に記載のデバイス。
（３２）  前記第１のプレート及び前記第２のプレートのうちの一方が、前記上方プレート及び前記下方プレートを共にしっかりと保持するためのロック（７０）を備え、それにより、前記膜と前記上方封止シート及び前記下方封止シートとが、端部開口ウェルとの組立体（１００）を形成する、実施態様３１に記載のデバイス。
（３３）  前記組立体（１００）が、真空を適用するために前記第２のウェル部分の前記底部開口端部（２１）を露出させるべく、真空マニホールド上に取り付けられるように構成されている、実施態様３２に記載のデバイス。
（３４）  凝固性フィブリノゲンの存在の検出及び／又は定量化のための試料調製のインサイツプロセスであって、ある数の工程を含み、かつ少なくとも２つの物質を伴い、その一方がフィブリノゲンを含み、他方がフィブリノゲンとの反応時にフィブリンを形成することができるタンパク質分解酵素を含み、前記工程が、少なくとも、以下：
（ａ）実施態様２１〜３３のいずれかに記載のデバイスを提供することと、
（ｂ）前記少なくとも２つの物質を前記物質受け部中の前記膜上で混合することによって、凝塊を形成させることであって、前記膜の前記疎水性質に起因して、前記凝塊が、前記膜を、部分的にのみ、より具体的には前記膜領域の５０〜８０％の範囲で被覆する、形成させることと、
（ｃ）前記凝塊を前記物質受け部中で液体によって洗浄することと、
（ｄ）前記キャビティの前記下方開口部で真空を適用することで、前記液体を前記物質受け部から引き出すことによって前記液体を除去することと、
（ｅ）任意選択的に、工程（ｃ）及び（ｄ）を何回も繰り返すことと、
（ｆ）前記物質受け部（４１）と前記下方開口端部（２１）との間の、前記膜を通した流体連通を防止することと、
（ｇ）前記物質受け部中の前記凝塊を好適な水溶液によって可溶化することと、である、インサイツプロセス。
（３５）  前記物質の量は、前記形成された凝塊の寸法が、前記物質受け部の前記底部を構成する前記膜の寸法より小さく、その結果、前記凝塊が前記膜の表面を完全には被覆しなくなるような量である、実施態様３４に記載のインサイツプロセス。
【０１５２】
（３６）  前記水溶液が、アルカリ性物質及び／又はカオトロピック剤を含む、実施態様３４又は３５に記載のインサイツプロセス。
（３７）  前記工程（ｄ）における真空の適用が、真空を適用するために前記第２のウェル部分の前記底部開口端部（２１）を露出させるべく、前記デバイスを真空マニホールド上に取り付けることによって行われている、実施態様３４〜３６のいずれかに記載のインサイツプロセス。
（３８）  ウェル（４０）のアレイを備えるシステム（１）を組み立てるためのキットであって、前記ウェル（４０）が各々、頂部ウェル開口端部（１１）と底部ウェル開口端部（２１）との間に延在する細長いキャビティの形態を有し、前記キットが、
−上方プレート（１０）であって、上面（１５）と、下面（１２）と、それらの間に延在する複数の第１のウェル部分と、を有し、各第１のウェル部分が、前記上面に頂部開口端部を、そして前記下面に底部開口端部を有する、上方プレート（１０）と、
−下方プレートであって、上面（２２）と、下面（２５）と、それらの間に延在し、前記第１のウェル部分（４１）の断面形状及び寸法と対応する断面形状及び寸法を有する、複数の第２のウェル部分（４２）を有し、各第２のウェル部分が、前記下方プレートの前記上面に頂部開口端部を、そして前記下方プレートの前記下面に底部開口端部を有する、下方プレートと、を備え、
前記上方プレート（１０）及び前記下方プレート（２０）は、前記プレートが互いに固定されるときに膜シート（３０）がそれらの間に挟み込まれた状態での使用に対して構成され、その結果、前記第１のウェル部分（４１）及び前記第２のウェル部分（４２）が、同軸上で整列して前記ウェル（４０）を形成し、前記膜（３０）によって分離されるようになり、前記各第１のウェル部分の頂部端部が前記第１のウェル開口端部（１１）を構成し、前記各第２のウェル部分の底部端部（２１）が前記第２のウェル開口端部を構成する、キット。
（３９）  前記膜シート（３０）を更に備える、実施態様３８に記載のキット。
（４０）  上方封止シート（６０ａ）を更に備え、前記上方封止シート（６０ａ）が、任意選択的にケイ素で作製され、前記第１のウェル部分（４１）の断面形状及び寸法に対応する形状及び寸法を有する複数の上方封止開口部（６５ａ）を伴って形成され、前記システムが組み立てられるときに、前記上方封止開口部が、前記第１のウェル部分と同軸上で整列し、前記上方封止シートが、以下：
−前記上方プレートの前記下面に永続的に装着され、その一体的な部分を構成するか、
−その片面で、前記膜に永続的に装着され、前記膜の一体的な部分を構成するか、又は
−前記システムの組み立て時に、前記上方プレートと前記膜との間に取り付けられるように構成されるか、のうちの１つである、実施態様３８又は３９に記載のキット。
【０１５３】
（４１）  下方封止シート（６０ｂ）を更に備え、前記下方封止シート（６０ｂ）が、任意選択的にケイ素で作製され、前記第２のウェル部分（４２）の断面形状及び寸法に対応する形状及び寸法を有する複数の下方封止開口部（６５ｂ）を伴って形成され、前記システムが組み立てられるときに、前記下方封止開口部が、前記第２のウェル部分と同軸上で整列し、前記下方封止シートが、以下：
−前記下方プレートの前記上面に永続的に装着され、その一体的な部分を構成するか、
−その前記上方封止シートが装着される面とは反対の面で、前記膜に永続的に装着され、前記膜の一体的な部分を構成するか、又は
−前記システムの組み立て時に、前記下方プレートと前記膜との間に取り付けられるように構成されるか、のうちの１つである、実施態様３８〜４０のいずれかに記載のキット。
（４２）  前記第１のプレート（１０）及び前記第２のプレート（２０）のうちの一方が、これらのプレートと、前記膜と、任意選択的に、前記膜とそれぞれの上方プレート及び下方プレートとの間に配置される前記上方封止シート及び前記下方封止シートとを共にロックするためのロック（７０）を備え、それにより端部開口組立体（１００）を形成する、実施態様４１に記載のキット。
（４３）  形状及び寸法において前記膜の前記領域のものに各々対応する複数の遮断フランジ（５３）を有する遮断基部（５０）を更に備え、前記遮断基部は、各遮断面が、ウェル底部開口端部の方向から見た場合に、前記膜の前記対応する領域に近接して配置され、それを完全に被覆することで、前記第１のウェル部分と前記第２のウェル開口端部との間の、前記膜を通した流体連通の可能性を防ぐ、１つの位置と、前記遮断面が、前記膜から離れる方向に前記ウェル底部開口端部から離間されて、前記流体連通を可能にする、別の位置と、に着くように構成されている、実施態様３８〜４２のいずれかに記載のキット。
（４４）  前記遮断基部が、その上面から突出する複数のポスト（５１）を伴って形成され、前記遮断面が、前記ポストの前記頂面によって構成されている、実施態様４３に記載のキット。
（４５）  前記遮断基部は、前記遮断基部が前記膜から離れているときに前記端部開口組立体（１００）をそれにロックするためのロック（８０）を備える、実施態様４２に従属する場合の、実施態様４３又は４４に記載のキット。
【０１５４】
（４６）  前記端部開口組立体（１００）が、真空を前記ウェル（４０）に適用するために前記底部ウェル開口端部を露出させるべく、真空マニホールド上に取り付けられるように構成されている、実施態様４２〜４５のいずれかに記載のキット。
（４７）  前記膜が、疎水性材料で作製され、かつ／又は前記膜が、吸収特性を有しない材料で作製されている、実施態様３８〜４６のいずれかに記載のキット。
（４８）  フィブリノゲン含有試料中の凝固性フィブリノゲンを定量化するための方法であって、実施態様１８〜２０又は実施態様３４〜３７のいずれかに記載の方法の工程（ａ）〜（ｇ）を含み、
（ｈ）工程（ｇ）の前記可溶化された凝塊の所定の部分をキュベットに移すことと、
（ｉ）前記部分のタンパク質吸収度を、分光光度計を使用して測定することと、
（ｊ）前記試料中に存在する前記凝固性フィブリノゲンを、既知量の凝固性フィブリノゲンを含有するフィブリノゲン標準と決定することと、を更に含む、方法。
（４９）  前記タンパク質吸収度を測定する工程が、２８０ｎｍの波長及び３２０ｎｍの波長で光学濃度を測定し、３２０ｎｍで得られた光学濃度を２８０ｎｍで得られた光学濃度から減数することによって実行されている、実施態様４８に記載の方法。
（５０）  試料のインサイツ調製を行うためのシステムであって、
−上面（１５）と、下面（１２）と、それらの間に延在する第１のウェル部分（４１）のアレイと、を有する上方プレート（１０）、
−上面（２２）と、下面（２５）と、それらの間に延在し、前記第１のウェル部分（４１）のアレイに対応する第２のウェル部分（４２）のアレイと、を有する下方プレート（２０）、
−前記上方プレート（１０）及び前記下方プレート（２０）中の前記第１のウェル部分（４１）のアレイ及び前記第２のウェル部分（４２）のアレイに各々対応する、それぞれの上方封止開口部（６５ａ）のアレイを有する上方封止シート（６０ａ）及びそれぞれの下方封止開口部（６５ｂ）のアレイを有する下方封止シート（６０ｂ）、
−膜シート（３０）であって、上面（３１ａ）及び下面（３１ｂ）を有し、その上面（３１ａ）に配置される流体が、真空が前記下面（３１ｂ）に適用されるときにのみ、前記膜（３０）を通ってその下面（３１ｂ）に向かって移動することを可能にするような構造を有する、膜シート（３０）、
−前記下方プレート（２０）中のロック（７０）であって、全ての前記アレイが、前記上方プレートの前記上面にある頂部開口端部（１１）、前記下方プレートの前記下面にある底部開口端部（２１）、前記頂部開口端部と前記膜の前記上面（３１ａ）との間に延在する前記第１のウェル部分（４１）、及び前記膜の前記下面と前記底部開口端部との間に延在する前記第２のウェル部分（４２）を各々有するウェル（４０）のアレイを伴う組立体（１００）を形成するように整列する状態で、前記膜の前記上面及び前記下面が、流体が前記第１のウェル部分から前記第２のウェル部分へと前記膜を通して移動するときに該流体に対して前記第１のウェル部分及び前記第２のウェル部分の周囲で封止される状態で、前記上方プレート（１０）及び前記下方プレート（２０）、前記膜（３０）、前記上方プレートと前記膜との間の前記上方封止シート（６５ａ）、並びに前記膜と前記下方プレートとの間の前記下方封止シート（６５ｂ）を共にしっかりと保持するように構成されている、ロック（７０）を備え、
前記システムが、
−遮断基部（５０）であって、その上面から突出し、前記底部開口端部から前記第２のウェル部分（４２）中に挿入されるときに前記第２のウェル部分（４２）中に受容されて、前記膜の上面に配置される流体が前記膜を通して前記第２のウェル部分に移動するのを防止するように構成された、ポスト（５１）のアレイを有し、
−前記遮断基部（５０）は、前記遮断ポスト（５１）が前記第２のウェル部分（４２）中に受容されるときに、前記遮断基部（５０）を前記組立体（１００）に対して固定された関係でしっかりと保持するための複数のロック（８０）を有する、遮断基部（５０）、を更に備える、システム。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図４Ｆ】
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【図４Ｇ】
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【国際調査報告】
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