(57)【要約】  本発明は、（Ｒ）−カルビドパ及びその医薬組成物、並びに（Ｒ）−カルビドパ及びステロイドの組み合わせられた調製品、並びにそれらの疼痛、炎症性疾患、免疫又は自己免疫性疾患及び腫瘍増殖等の医学的状態の治療又は予防における使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
疼痛、炎症、炎症性疾患、免疫又は自己免疫疾患及び腫瘍増殖から選択される疾患又は症状の治療に使用するための、（Ｒ）−カルビドパ又はその水和物若しくはその医薬として許容される塩。
【請求項２】
疼痛、炎症、炎症性疾患、免疫又は自己免疫疾患及び腫瘍増殖から選択される疾患又は症状の治療のための医薬の製造における、（Ｒ）−カルビドパ又はその水和物若しくはその医薬として許容される塩の使用。
【請求項３】
疼痛、炎症、炎症性疾患、免疫又は自己免疫疾患及び腫瘍増殖から選択される疾患又は症状を治療する方法であって、そのような疾患に罹患した患者に有効量の（Ｒ）−カルビドパ又はその水和物若しくはその医薬として許容される塩を投与する工程を含む、方法。
【請求項４】
疼痛、炎症、炎症性疾患、免疫又は自己免疫疾患及び腫瘍増殖から選択される疾患又は症状を治療するための医薬組成物であって：（Ｒ）−カルビドパ又はその水和物若しくはその医薬として許容される塩；及び医薬として許容される担体、賦形剤又は希釈剤；を含有する、医薬組成物。
【請求項５】
（Ｒ）−カルビドパのエナンチオマー純度が、６０％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、尚もより好ましくは９０％以上、又は尚もより好ましくは９９％以上である、請求項１に記載の（Ｒ）−カルビドパ、又は請求項２に記載の使用、又は請求項３に記載の方法、又は請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記疾患又は症状が疼痛である、請求項１又は５に記載の（Ｒ）−カルビドパ、又は請求項２又は５に記載の使用、又は請求項３又は５に記載の方法、又は請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記疾患又は症状が炎症性疼痛である、請求項６に記載の（Ｒ）−カルビドパ、又は使用、又は方法、又は医薬組成物。
【請求項８】
前記疾患又は症状が炎症である、請求項１又は５に記載の（Ｒ）−カルビドパ、又は請求項２又は５に記載の使用、又は請求項３又は５に記載の方法、又は請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記炎症又は炎症性疾患又は免疫又は自己免疫疾患が、紅斑性狼瘡（全身性エリテマトーデス）、関節炎 (関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎および乾癬性関節炎を含む)、滑膜炎、脈管炎、腸の炎症に関連する病状 (クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患および過敏性腸症候群を含む)、アテローム性動脈硬化症、多発性硬化症、アルツハイマー病、血管性認知症、肺の炎症性疾患 (喘息、慢性閉塞性肺疾患および急性呼吸窮迫症候群を含む)、線維性疾患 (特発性肺線維症、心線維症および全身性硬化症(強皮症)を含む)、皮膚の炎症性疾患 (接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎および乾癬を含む)、全身性炎症反応症候群、敗血症、肝の炎症性および／または自己免疫性の病状 (自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、アルコール性肝臓疾患、硬化性胆管炎および自己免疫性胆管炎を含む)、糖尿病 (IまたはII型)および／またはそれらの合併症、慢性心不全、うっ血性心不全、虚血性疾患 (脳卒中および虚血再灌流傷害)、ならびに心筋梗塞および／またはその合併症である、請求項１又は５に記載の（Ｒ）−カルビドパ、又は請求項２又は５に記載の使用、又は請求項３又は５に記載の方法、又は請求項４又は５に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記炎症性又は自己免疫性疾患が、関節リウマチ、慢性閉塞性肺疾患又はアトピー性皮膚炎である、請求項１又は５に記載の（Ｒ）−カルビドパ、又は請求項２又は５に記載の使用、又は請求項３又は５に記載の方法、又は請求項４又は５に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記炎症性又は自己免疫性疾患が、炎症性腸疾患、骨関節炎、慢性閉塞性肺疾患、線維症又は紅斑性狼瘡（全身性エリテマトーデス）である、請求項１又は５に記載の（Ｒ）−カルビドパ、又は請求項２又は５に記載の使用、又は請求項３又は５に記載の方法、又は請求項４又は５に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
（Ｒ）−カルビドパ又はその水和物若しくは医薬として許容される塩、及びステロイド又はその医薬として許容される塩を含有する、組み合わせられた調製品。
【請求項１３】
前記ステロイドがグルココルチコイドである、請求項１２に記載の組み合わせられた調製品。
【請求項１４】
前記ステロイドが、プレドニゾロン、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、デフラザコート、ベタメタゾン及びブデノシド又はそれらの医薬として許容される塩のいずれか１つから選択されるグルココルチコイドである、請求項１３に記載の組み合わせられた調製品。 
【請求項１５】
前記（Ｒ）−カルビドパのエナンチオマー純度が６０％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、尚もより好ましくは９０％以上、又は尚もより好ましくは９９％以上である、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の組み合わせられた調製品。
【請求項１６】
医薬として使用される、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の組み合わせられた調製品。
【請求項１７】
疼痛、炎症、炎症性疾患、免疫又は自己免疫疾患及び腫瘍増殖から選択される疾患又は症状の治療に使用するための、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の組み合わせられた調製品。
【請求項１８】
疼痛、炎症、炎症性疾患、免疫又は自己免疫疾患及び腫瘍増殖から選択される疾患又は症状の治療のための医薬を製造するための、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の組み合わせられた調製品の使用。
【請求項１９】
疼痛、炎症、炎症性疾患、免疫又は自己免疫疾患及び腫瘍増殖から選択される疾患又は症状を治療する方法であって、そのような疾患に罹患した患者に有効量の請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の組み合わせられた調製品を投与する工程を含む、方法。
【請求項２０】
疼痛、炎症、炎症性疾患、免疫又は自己免疫疾患及び腫瘍増殖から選択される疾患又は症状を治療するための医薬組成物であって：請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の組み合わせられた調製品を含有する、医薬組成物。
【請求項２１】
前記疾患又は症状が疼痛である、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の組み合わせられた調製品、又は請求項１８に記載の使用、又は請求項１９に記載の方法、又は請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記疾患又は症状が炎症性疼痛である、請求項２１に記載の組み合わせられた調製品、又は使用、又は方法、又は医薬組成物。
【請求項２３】
前記疾患又は症状が炎症である、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の組み合わせられた調製品、又は請求項１８に記載の使用、又は請求項１９に記載の方法、又は請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記炎症又は炎症性疾患又は免疫又は自己免疫疾患が、紅斑性狼瘡（全身性エリテマトーデス）、関節炎 (関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎および乾癬性関節炎を含む)、滑膜炎、脈管炎、腸の炎症に関連する病状 (クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患および過敏性腸症候群を含む)、アテローム性動脈硬化症、多発性硬化症、アルツハイマー病、血管性認知症、肺の炎症性疾患 (喘息、慢性閉塞性肺疾患および急性呼吸窮迫症候群を含む)、線維性疾患 (特発性肺線維症、心線維症および全身性硬化症(強皮症)を含む)、皮膚の炎症性疾患 (接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎および乾癬を含む)、全身性炎症反応症候群、敗血症、肝の炎症性および／または自己免疫性の病状 (自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、アルコール性肝臓疾患、硬化性胆管炎および自己免疫性胆管炎を含む)、糖尿病 (IまたはII型)および／またはそれらの合併症、慢性心不全、うっ血性心不全、虚血性疾患 (脳卒中および虚血再灌流傷害)、ならびに心筋梗塞および／またはその合併症である、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の組み合わせられた調製品、又は請求項１８に記載の使用、又は請求項１９に記載の方法、又は請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記炎症性又は自己免疫性疾患が、関節リウマチ、慢性閉塞性肺疾患又はアトピー性皮膚炎である、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の組み合わせられた調製品、又は請求項１８に記載の使用、又は請求項１９に記載の方法、又は請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記炎症性又は自己免疫性疾患が、炎症性腸疾患、骨関節炎、慢性閉塞性肺疾患、線維症又は紅斑性狼瘡（全身性エリテマトーデス）である、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の組み合わせられた調製品、又は請求項１８に記載の使用、又は請求項１９に記載の方法、又は請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記治療がヒト対象に対する治療である、請求項３、５〜１１、１９及び２１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、（Ｒ）−カルビドパ及びこれを含有する医薬組成物の、疼痛、炎症性疾患、免疫又は自己免疫性疾患及び腫瘍増殖等の医学的状態の治療又は予防における使用に関する。また、本発明は、（Ｒ）−カルビドパ及びステロイドを含有する組み合わせられた調製品、並びに当該組み合わせられた調製品の、医療、特に疼痛、炎症性疾患、免疫又は自己免疫性疾患及び腫瘍増殖等の医学的状態の治療又は予防における使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
セミカルバジド-感受性アミンオキシダーゼ（ＳＳＡＯ）は、血管接着タンパク質-１（ＶＡＰ−１）又は銅含有アミンオキシダーゼ３（ＡＯＣ３）としても知られ、銅含有アミンオキシダーゼ酵素ファミリーに属する(EC.1.4.3.6)。この酵素ファミリーのメンバーは、セミカルバジドによる阻害に感受性で、以下の式：
R-CH2-NH2 + O2 → R-CHO + H2O2 + NH3
に従い、第一級アミンを分解してアルデヒド、過酸化水素及びアンモニアを生成する酸化的脱アミノ反応において、銅イオン及びタンパク質由来のトパキノン（ＴＰＱ）補因子を利用する。
【０００３】
ヒトＳＳＡＯの既知の基質には、内因性のメチルアミン及びアミノアセトン、そしてベンジルアミン等の生体異物的アミンがある[Lyles, Int. J. Biochem. Cell Biol. 1996, 28, 259-274; Klinman, Biochim. Biophys. Acta 2003, 1647(1-2), 131-137; Matyus et al., Curr. Med. Chem. 2004, 11(10), 1285-1298; O'Sullivan et al., Neurotoxicology 2004, 25(1-2), 303-315]。他の銅含有アミンオキシダーゼと類似して、ＤＮＡ配列解析及び構造決定は、組織結合ヒトＳＳＡＯは、Ｎ末端膜貫通ドメインによって細胞膜にアンカーされた９０〜１００ｋＤａの２つのサブユニットからなるホモ二量体糖タンパク質であることを示唆する[Morris et al., J. Biol. Chem. 1997, 272, 9388-9392; Smith et al., J. Exp. Med. 1998, 188, 17-27; Airenne et al., Protein Science 2005, 14, 1964-1974; Jakobsson et al., Acta Crystallogr. D Biol. Crystallogr. 2005, 61(Pt 11), 1550-1562]。
【０００４】
ＳＳＡＯ活性は、血管および非血管平滑筋組織、内皮細胞、ならびに脂肪組織を含む種々の組織で見出されている [Lewinsohn, Braz. J. Med. Biol. Res. 1984, 17, 223-256; Nakos & Gossrau, Folia Histochem. Cytobiol. 1994, 32, 3-10; Yu et al., Biochem. Pharmacol. 1994, 47, 1055-1059; Castillo et al., Neuroche分t. 1998, 33, 415-423; Lyles & Pino, J. Neural. Transm. Suppl. 1998, 52, 239-250; Jaakkola et al., Am. J. Pathol. 1999, 155, 1953-1965; Morin et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 2001, 297, 563-572; Salmi & Jalkanen, Trends Immunol. 2001, 22, 211-216]。さらに、ＳＳＡＯタンパク質は、血漿中に見出されており、この可溶型は、組織結合型と同じような性質を有するように思われる [Yu et al., Biochem. Pharmacol. 1994, 47, 1055-1059; Kurkijarvi et al., J. Immunol. 1998, 161, 1549-1557]。循環性のヒトおよび齧歯類のＳＳＡＯは、組織結合型が起源であること [Gokturk et al., Am. J. Pathol. 2003, 163(5), 1921-1928; Abella et al., Diabetologia 2004, 47(3), 429-438; Stolen et al., Circ. Res. 2004, 95(1), 50-57]、一方、その他の哺乳類において、血漿／血清ＳＳＡＯは、ＡＯＣ４と呼ばれる別の遺伝子でコード化されていること [Schwelberger, J. Neural. Transm. 2007, 114(6), 757-762]も最近示されている。
【０００５】
この豊富な酵素の正確な生理学的役割は、まだ十分に決定されていないが、ＳＳＡＯおよびその反応生成物が細胞情報伝達および細胞制御においていくつかの機能を有し得るようである。例えば、最近の発見は、ＳＳＡＯがＧＬＵＴ４-介在グルコース取り込み [Enrique-Tarancon et al., J. Biol. Chem. 1998, 273, 8025-8032; Morin et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 2001, 297, 563-572]および脂肪細胞分化[Fontana et al., Biochem. J. 2001, 356, 769-777; Mercier et al., Biochem. J. 2001, 358, 335-342]の両方において役割を果たすことが示唆される。さらに、ＳＳＡＯは、白血球に対する接着タンパク質として作用する炎症過程に含まれること[Salmi & Jalkanen, Trends Immunol. 2001, 22, 211-216; Salmi & Jalkanen, in "Adhesion Molecules: Functions and Inhibition" K. Ley (Ed.), 2007, pp. 237-251]および結合組織マトリックスの進展および維持にも役割を果たし得ること [Langford et al., Cardiovasc. Toxicol. 2002, 2(2), 141-150; Gokturk et al., Am. J. Pathol. 2003, 163(5), 1921-1928]が示されている。さらに、ＳＳＡＯと血管新生のリンクが最近発見されている [Noda et al., FASEB J. 2008, 22(8), 2928-2935]。そして、このリンクに基づき、ＳＳＡＯの阻害剤が抗血管新生効果を有することが期待されている。
【０００６】
ヒトでのいくつかの研究は、血漿中のＳＳＡＯ活性が、うっ血性心不全、糖尿病、アルツハイマー病および炎症のような病状で上昇することが示されている [Lewinsohn, Braz. J. Med. Biol. Res. 1984, 17, 223-256; Boomsma et al., Cardiovasc. Res. 1997, 33, 387-391; Ekblom, Pharmacol. Res. 1998, 37, 87-92; Kurkijarvi et al., J. Immunol. 1998, 161, 1549-1557; Boomsma et al., Diabetologia 1999, 42, 233-237; Meszaros et al., Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet. 1999, 24, 299-302; Yu et al., Biochim. Biophys. Acta 2003, 1647(1-2), 193-199; Matyus et al., Curr. Med. Chem. 2004, 11(10), 1285-1298; O'Sullivan et al., Neurotoxicology 2004, 25(1-2), 303-315; del Mar Hernandez et al., Neurosci. Lett. 2005, 384(1-2), 183-187]。酵素活性のこれらの変化の根底にあるメカニズムは明らかでない。内因性のアミンオキシダーゼによって産生する反応性のアルデヒドおよび過酸化水素が心血管疾患、糖尿病合併症およびアルツハイマー病の一因となることが示唆されている [Callingham et al., Prog. Brain Res. 1995, 106, 305-321; Ekblom, Pharmacol. Res. 1998, 37, 87-92; Yu et al., Biochim. Biophys. Acta 2003, 1647(1-2), 193-199; Jiang et al., Neuropathol Appl Neurobiol. 2008, 34(2), 194-204]。さらに、ＳＳＡＯの酵素活性は、ＳＳＡＯが血管内皮で強力に発現することが示されている炎症の部位での白血球溢出過程に関与する [Salmi et al., Immunity 2001, 14(3), 265-276; Salmi & Jalkanen, in "Adhesion Molecules: Functions and Inhibition" K. Ley (Ed.), 2007, pp. 237-251]。したがって、ＳＳＡＯの阻害は、糖尿病合併症の予防および炎症性疾患に治療的価値を有することが示唆されている [Ekblom, Pharmacol. Res. 1998, 37, 87-92; Salmi et al., Immunity 2001, 14(3), 265-276; Salter-Cid et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005, 315(2), 553-562]。
【０００７】
WO2007/146188は、ＳＳＡＯ活性のブロックが、白血球集合を阻害し、炎症性応答を低下させ、例えば癲癇等の発作の予防及び治療に有益と期待されることを示唆している。
【０００８】
O'Rourkeらは、神経学的疾患におけるＳＳＡＯ阻害剤の能力を試験し、発作のラットモデルにおいてＳＳＡＯ阻害の効果を実証した(J Neural Transm. 2007;114(6):845-9)。ＳＳＡＯ阻害剤は、ヒトの多発性硬化症と多くの特徴を共有する再発寛解型実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）マウスモデルに対して試験される。そのデータは、このモデルにおける、従ってヒト多発性硬化症における、低分子抗ＳＳＡＯ療法の潜在的臨床的利益を実証する。
【０００９】
ＳＳＡＯノックアウト動物は、表現型の上では明らかに正常であるが、種々の炎症刺激への応答で引き起こされる炎症応答に顕著な減少を示す [Stolen et al., Immunity 2005, 22(1), 105-115]。さらに、ヒト疾患の多様な動物モデル（例えば、カラゲニン誘発足炎症、オキサゾール誘発大腸炎、リポポリサッカライド誘発肺炎症、コラーゲン誘発関節炎、エンドトキシン誘発ブドウ膜炎）での野生型動物における、抗体および／または小分子の使用によるその機能のアンタゴニズムは、白血球浸潤の減少、疾病表現型の重篤度の減少ならびに炎症性サイトカインおよびケモカインのレベルの減少での保護であることを示している [Kirton et al., Eur. J. Immunol. 2005, 35(11), 3119-3130; Salter-Cid et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005, 315(2), 553-562; McDonald et al., Annual Reports in Medicinal Chemistry 2007, 42, 229-243; Salmi & Jalkanen, in "Adhesion Molecules: Functions and Inhibition" K. Ley (Ed.), 2007, pp. 237-251; Noda et al., FASEB J. 2008 22(4), 1094-1103; Noda et al., FASEB J. 2008, 22(8), 2928-2935]。この抗炎症保護は、特定の疾患または疾患モデルに限定されるよりはむしろ、独立の原因メカニズムとして広範な炎症モデルの全てにわたって与えられるようである。このことは、ＳＳＡＯが、炎症応答の制御の重要な節点であり得ることを示唆するであろうし、それゆえＳＳＡＯ阻害が、広範なヒト疾患での効果的な抗炎症薬となり得るように思われる。
【００１０】
線維症は、炎症の消散が炎症性刺激の慢性的性質によって部分的に無効にされる場合に慢性組織炎症から生じ得る。この結果は、組織創傷を有する過剰な細胞外マトリックス沈着（コラーゲンを含む）による組織の不適切な修復であり得る。これは、フィブロネクチン及び反応性酸素種及び増殖因子、例えばトランスフォーミング増殖因子-β-１（ＴＧＦβ-１）、インスリン様増殖因子-Ｉ（ＩＧＦ−１）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）及び結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）等の、コラーゲン、エラスチン、ヒアルロナン、糖タンパク質及びプロテオグリカンの生産増大をもたらす刺激による、筋線維芽細胞活性化の結果である。加えて、侵入するマクロファージの活性は、修復及び線維性プロセスの制御において重要な役割を果たす。
【００１１】
ＶＡＰ−１は、特に肝臓における線維性疾患の進行及び維持にも関与している。Weston and Adams (J Neural Transm. 2011, 118(7), 1055-64)は、肝線維症におけるＶＡＰ−１に関連する実験データを纏めている。Weston et al (EASL Poster 2010)は、ヒトの線維性肝臓における、特に活性化した筋線維芽細胞及びコラーゲン原線維と協調した、ＶＡＰ−１の高い発現増大を示した。この線維症との解剖学的協調は、ＶＡＰ−１のブロックが四塩化炭素誘導線維症の消散を促進したという知見と一致し、筋線維芽細胞の活性かにおけるＶＡＰ−１／ＳＳＡＯ酵素産物のＨ２Ｏ２の役割を示唆した。同著者は、線維化を促進する増殖因子ＴＧＦβが肝細胞中のＣＡＰ−１の発現を約５０倍増大したことも示した。そして、ＶＡＰ−１は、肺の炎症にも関与しており（例えばSingh et al., 2003, Virchows Arch 442:491-495）、これは、ＶＡＰ−１ブロッカーが肺の炎症を減少し、そのため、炎症促進及び線維化促進の両方の側面を治療することによって嚢胞性線維症の治療に有益であることを示唆する。
【００１２】
ＳＳＡＯ（ＶＡＰ−１）は、胃癌で上方制御され、ヒト黒色腫、肝細胞癌及び頭部頸部腫瘍の腫瘍血管系で同定されている(Yoong KF, McNab G, Hubscher SG, Adams DH. (1998), J Immunol 160, 3978-88.; Irjala H, Salmi M, Alanen K, Gre´nman R, Jalkanen S (2001), Immunol. 166, 6937-6943; Forster-Horvath C, Dome B, Paku S, et al. (2004), Melanoma Res. 14, 135-40.)。ある報告(Marttila-Ichihara F, Castermans K, Auvinen K, Oude Egbrink MG, Jalkanen S, Griffioen AW, Salmi M. (2010), JImmunol. 184, 3164-3173.)は、酵素的に不活性なＶＡＰ−１を担持するマウスの黒色腫の増殖がより遅く、腫瘍血管の数や直径が減少したことを示している。これらの腫瘍の増殖の減少は、骨髄サプレッサー細胞の浸入の減少（６０〜７０％）にも反映された。好ましいことに、ＶＡＰ−１欠損は正常組織における血管又はリンパ管形成に対して効果を有しなかった。
【００１３】
上記の理由のため、ＳＳＡＯの阻害は、炎症促進性酵素産物（アルデヒド、過酸化水素及びアンモニア）のレベルを減少し、また免疫細胞の接着能力も低下させ、またそれに対応してそれらの活性化及び最終的な血管外遊出も低下させることが期待される。そのような活性が治療的に有益と期待される疾患は、病理の開始、維持又は消散において免疫細胞が重要な役割を果たす全ての疾患、例えば炎症性疾患及び免疫／自己免疫疾患を含む。そのような疾患の例は、多発性硬化症、関節炎及び血管炎を含む。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
発明者らは、驚くべきことに、（Ｒ）−カルビドパが有用なＳＳＡＯ／ＶＡＰ−１阻害活性を有すること、及び（Ｒ）−カルビドパが、炎症性疾患、免疫又は自己免疫疾患及び腫瘍増殖等のＶＡＰ−１活性の阻害が有益な医学的状態の治療又は予防において有用性を有することを見出した。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
更に、本発明は、驚くべきことに、（Ｒ）−カルビドパが、炎症性疼痛を含む疼痛の治療に効果的であることを見出した。 
【００１６】
更に、発明者らは、（Ｒ）−カルビドパが、ＤＯＰＡデカルボキシラーゼ酵素よりもＳＳＡＯ／ＶＡＰ−１に対し驚異的な選択性を有することを見出した。（Ｓ）−カルビドパを含有する薬物Ｌｏｄｏｓｙｎ（登録商標）はＤＯＰＡデカルボキシラーゼとして周知であるため、これは特に驚くべきことである。この有利な選択性は、特に、ＳＳＡＯ／ＶＡＰ−１の阻害が有益であるがＤＯＰＡデカルボキシラーゼの阻害が有益ではない疾患又は症状に罹患した患者の治療において、有益であると期待される。
【００１７】
更に、発明者らは、（Ｒ）−カルビドパ及びステロイドの組み合わせられた調製品を利用可能にした。この組み合わせられた調製品は、炎症性疾患、免疫又は自己免疫疾患及び腫瘍増殖等のＶＡＰ−１活性の阻害が有益な医学的状態の治療又は予防において有用であると期待される。
【００１８】
更に、発明者らは、（Ｒ）−カルビドパ及びステロイドの組み合わせられた調製品が、炎症性疼痛を含む疼痛の治療に驚異的に効果的であることを見出した。
【００１９】
本発明の態様は、添付の図面を参照して下記に記載される。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、投与後１時間及び３時間でのラットにおけるＣＦＡ誘導痛覚過敏に対する（Ｒ）−カルビドパの効果を示す。（左から右‐ビヒクル；３ｍｇ／ｋｇ  （Ｒ）−カルビドパ；１０ｍｇ／ｋｇ  （Ｒ）−カルビドパ；３０ｍｇ／ｋｇ  （Ｒ）−カルビドパ；１０ｍｇ／ｋｇインドメタシン）
【００２１】
【図２】図２は、投与後３時間でのラットにおけるＣＦＡ誘導痛覚過敏における足浮腫に対する（Ｒ）−カルビドパ及びインドメタシンの効果を示す。（左から右‐ビヒクル／ビヒクル；３ｍｇ／ｋｇ  （Ｒ）−カルビドパ／ビヒクル；１０ｍｇ／ｋｇ  （Ｒ）−カルビドパ／ビヒクル；３０ｍｇ／ｋｇ  （Ｒ）−カルビドパ／ビヒクル；１０ｍｇ／ｋｇインドメタシン）
【００２２】
【図３】図３は、投与後１時間及び３時間でのラットにおけるＣＦＡ誘導痛覚過敏に対するプレドニゾロンの効果を示す。（左から右‐ビヒクル／ビヒクル；０．３ｍｇ／ｋｇプレドニゾロン／ビヒクル；１ｍｇ／ｋｇプレドニゾロン／ビヒクル；３ｍｇ／ｋｇプレドニゾロン／ビヒクル；１０ｍｇ／ｋｇプレドニゾロン／ビヒクル；１０ｍｇ／ｋｇインドメタシン）
【００２３】
【図４】図４は、投与後１時間及び３時間でのラットにおけるＣＦＡ誘導痛覚過敏に対する（Ｒ）−カルビドパ及びプレドニゾロンの効果を示す。（左から右‐ビヒクル／ビヒクル；３ｍｇ／ｋｇ  （Ｒ）−カルビドパ／ビヒクル；１０ｍｇ／ｋｇカルビドパ／ビヒクル；０．３ｍｇ／ｋｇプレドニゾロン／ビヒクル；３ｍｇ／ｋｇ（Ｒ）−カルビドパ／０．３ｍｇ／ｋｇプレドニゾロン，  １０ｍｇ／ｋｇ（Ｒ）−カルビドパ／０．３ｍｇ／ｋｇプレドニゾロン）
【発明を実施するための形態】
【００２４】
発明の詳細な説明
定義
本発明において、「治療」は、所望の薬理的及び／又は生理的効果を得ることを意味する。例えば疼痛の治療の場合、その効果は、疼痛又はその兆候の完全な又は部分的防止の観点において予防的であり得、及び／又は疼痛及び／又は当該疾患に起因する弊害の部分的又は完全な治癒の観点において治療的であり得る。「治療」は、本発明において、哺乳類、特にヒトの疼痛の任意の治療を包含し：（ａ）疾患の素因を有するがまだ発症していると診断されていない対象においてその疾患が発症するのを防ぐこと；（ｂ）その疾患を阻害する、即ちその発達を停止すること；及び（ｃ）その疾患を軽減する、即ちその疾患の縮小を引き起こすこと；を含む。
【００２５】
（Ｒ）−カルビドパ及び／又はステロイドの「有効量」は、疾患又は症状の治療のために哺乳類又は他の対象に投与された場合にその疾患又は症状の治療に効果的な量を意味する。「有効量」は、ステロイド（存在する場合）、疾患及びその重症度、及び治療すべき対象の年齢、体重等に依存して変化する。治療的効果は、客観的（即ち試験又はマーカーによって測定可能）であっても主観的（即ち対象が効果の指標を与え又は効果を感じる）であってもよい。 
【００２６】
「医薬として許容される」は、一般に安全で、非毒性で、生物学的又は他の意味で望ましくないものではない医薬組成物を調製するのに有用であることを意味し、獣医学的使用及び人の医薬的使用に有用であることを含む。適切な医薬として許容される塩は、例えば無機酸又は有機酸に由来する酸付加塩、例えば塩化水素酸塩、臭化水素酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、リン酸塩、硫酸塩、過塩素酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、プロピオン酸塩、クエン酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、乳酸塩、オキサロ酸塩、酒石酸塩及び安息香酸塩等を含む。塩に関するレビューとして、Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)を参照されたい。医薬として許容される塩は塩基を用いて形成されてもよい。そのような塩は、有機又は無機塩に由来する塩、例えばアルカリ金属塩、例えばマグネシウム又はカルシウム塩、及び他の有機アミン塩、例えばモルホリン、ピペリジン、ジメチルアミン又はジエチルアミン塩を含む。
【００２７】
「疼痛」は、本発明において炎症性疼痛を含む。一つの態様において、疼痛は炎症性疼痛である。
【００２８】
カルビドパ
【化１】
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カルビドパは（Ｒ）及び（Ｓ）エナンチオマーの形態で存在する。カルビドパは、典型的には（Ｒ）及び（Ｓ）エナンチオマーの混合物として入手される。本発明において、「（Ｒ）−カルビドパ」は、（Ｒ）カルビドパを含有する任意の組成物又は混合物を含み、例えば実質的に純粋な（Ｒ）−カルビドパ又は（Ｒ）及び（Ｓ）−カルビドパの混合物、例えばラセミ混合物を含む。 
【００２９】
本発明の実施において、（Ｒ）−カルビドパが優勢な混合物、例えばエナンチオマー純度が６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、又は９９％以上の（Ｒ）−カルビドパを利用するのが望ましくともよい。（Ｒ）−カルビドパに富む組成物の使用は、上記酵素阻害選択性の利益を享受するために望ましくあり得る。
【００３０】
ステロイド
本発明において「ステロイド」は、本発明の組み合わせられた調製品に使用するのに適した任意のステロイドを意味する。また、「ステロイド」は、本発明の組成物及び本発明の方法の実施に採用される２つ以上のステロイドの組み合わせを包含することも意図される。
【００３１】
適切なステロイドは、グルココルチコイドを含む。グルココルチコイドステロイドの例は、プレドニゾロン、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、デフラザコート、ベタメタゾン及びブデノシド又はそれらの医薬として許容される塩を含む。特に好ましいステロイドは、プレドニゾロン又はその医薬として許容される塩；及びプレドニゾン又はその医薬として許容される塩を含む。
【００３２】
疼痛の治療のための（Ｒ）−カルビドパ
発明者らは、（Ｒ）−カルビドパが、炎症性疼痛を含む疼痛の治療に驚異的に有効であることを見出した。本明細書中で、疼痛の確立されたモデルにおいて有効性を実証したインビボのデータが示されている。例えば図１を参照されたい。 
【００３３】
更に、発明者らは、（Ｒ）−カルビドパが、炎症の治療に驚異的に有効であることを見出した。本明細書中で、炎症の確立されたモデルにおいて有効性を実証したインビボのデータが示されている。例えば図２を参照されたい。
【００３４】
本発明の治療は、以下：疼痛又は炎症の優れた減少；疼痛又は炎症のより迅速な緩和；コンプライアンスの増大；中毒の可能性の減少；治療に関連する副作用の減少；用量依存的な治療に関連する副作用を呈する他の治療剤への暴露を減少する能力；又は他の任意の知覚できる治療的利益；のいずれか又は全てを提供し得る。
【００３５】
（Ｒ）−カルビドパ及びステロイドの組み合わせられた調製品
発明者らは、ステロイドと組み合わせた（Ｒ）−カルビドパが疼痛の治療に驚異的に有効であることを見出した。この驚異的な有効性は、（Ｒ）−カルビドパとステロイドが、それらが個別に投与された場合の治療的効果よりも大きい治療的効果を一緒になって生じることを意味する。一つの態様において、ステロイドと組み合わせた（Ｒ）−カルビドパは、疼痛の治療において相乗的な有益な効果を提供する。 
【００３６】
従って、一つの態様において、本発明は、（Ｒ）−カルビドパ又はその水和物又は医薬として許容される塩、及びステロイド又はその医薬として許容される塩を含有する、組み合わせられた調製品を利用することを可能とする。一つの態様において、前記ステロイドはグルココルチコイドである。一つの態様において、前記ステロイドは、プレドニゾロン、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、デフラザコート、ベタメタゾン及びブデノシド又はそれらの医薬として許容される塩のいずれか１つから選択されるグルココルチコイドである。他の態様において、前記ステロイドは、上記ステロイド又はその塩の２つ以上の組合せである。特定の態様において、前記ステロイドは、プレドニゾロン又はその医薬として許容される塩である。特定の態様において、前記ステロイドは、プレドニゾン又はその医薬として許容される塩である。
【００３７】
本発明の組合せは、以下：
疼痛又は炎症の優れた減少；疼痛又は炎症のより迅速な緩和；コンプライアンスの増大；中毒の可能性の減少；治療に関連する副作用の減少；用量依存的な治療に関連する副作用を呈する他の治療剤への暴露を減少する能力；又は他の任意の知覚できる治療的利益；
のいずれか又は全てを提供し得る。
【００３８】
一つの態様において、前記組み合わせられた調製品は、（Ｒ）−カルビドパ又はその水和物又は医薬として許容される塩、及びプレドニゾロン又はその医薬として許容される塩を含有する。
【００３９】
一つの態様において、前記組み合わせられた調製品は、（Ｒ）−カルビドパ又はその水和物又は医薬として許容される塩、及びプレドニゾン又はその医薬として許容される塩を含有する。
【００４０】
一つの態様において、前記組み合わせられた調製品は、（Ｒ）−カルビドパ又はその水和物又は医薬として許容される塩、及びメチルプレドニゾロン又はその医薬として許容される塩を含有する。
【００４１】
一つの態様において、前記組み合わせられた調製品は、（Ｒ）−カルビドパ又はその水和物又は医薬として許容される塩、及びトリアムシノロン又はその医薬として許容される塩を含有する。
【００４２】
一つの態様において、前記組み合わせられた調製品は、（Ｒ）−カルビドパ又はその水和物又は医薬として許容される塩、及びデキサメタゾン又はその医薬として許容される塩を含有する。
【００４３】
一つの態様において、前記組み合わせられた調製品は、（Ｒ）−カルビドパ又はその水和物又は医薬として許容される塩、及びヒドロコルチゾン又はその医薬として許容される塩を含有する。
【００４４】
一つの態様において、前記組み合わせられた調製品は、（Ｒ）−カルビドパ又はその水和物又は医薬として許容される塩、及びデフラザコート又はその医薬として許容される塩を含有する。
【００４５】
一つの態様において、前記組み合わせられた調製品は、（Ｒ）−カルビドパ又はその水和物又は医薬として許容される塩、及びベタメタゾン又はその医薬として許容される塩を含有する。
【００４６】
一つの態様において、前記組み合わせられた調製品は、（Ｒ）−カルビドパ又はその水和物又は医薬として許容される塩、及びブデノシド又はその医薬として許容される塩を含有する。
【００４７】
組成物
有効成分（組み合わせられた調製品の場合は複数の有効成分）を含有する医薬組成物は、水性又は非水性溶液又は懸濁物、分散可能な粉末又は顆粒、経皮又は経粘膜パッチ、クリーム、軟膏又は乳剤等の任意の適切な形態であり得る。
【００４８】
前記組成物は、滅菌注射水性又は非水性（例えば油性）溶液又は懸濁物の形態であり得る。当該滅菌注射調製品は、非毒性の非経口で許容される希釈剤又は溶媒中の滅菌注射溶液又は懸濁物、例えば１，３−ブタンジオール溶液でもあり得る。採用され得る許容されるビヒクル及び溶媒は、水、リン酸緩衝溶液、リンゲル液及び等張塩化ナトリウム溶液である。加えて、滅菌固定油は、溶媒又は懸濁媒体として従来から採用されている。この目的のため、合成モノ又はジグリセリドを含む任意の無菌性の固定油が採用され得る。加えて、オレイン酸等の脂肪酸は、注射用調製品における使用が見出されている。公知の技術に従い、適切な分散又は湿潤剤又は懸濁剤を使用して、懸濁剤が製剤化され得る。
【００４９】
水性懸濁物は、有効成分（組み合わせられた調製品の場合複数の有効成分）を、水性懸濁物の製造に適した賦形剤との混合物として含有する。そのような賦形剤は、懸濁剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム及びアカシアゴム等の懸濁剤；分散又は湿潤剤、例えば天然に存在するリン脂質、例えばレシチン、又はアルキレンオキシドと脂肪酸の重合産物、例えばポリオキシエチレンステアレート、又はエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの重合化合物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、又はエチレンオキシドと脂肪酸由来の部分的エステル及びヘキシトール、例えば脂肪酸由来の部分エステル及びヘキシトール無水物と有するポリオキシエチレンとの重合産物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであり得る。また、前記水性懸濁物は、１つ以上の保存料、例えばエチル又はn-プロピルp-ヒドロキシベンゾエート、１つ以上の着色剤、１つ以上の香料、及び１つ以上の甘味料、例えばスクロース又はサッカリンを含有してもよい。
【００５０】
非水性（即ち油性）懸濁物は、植物油、例えば落花生油、オリーブ油、胡麻油又はココナッツ油等、又は鉱物油、例えば液体パラフィン等の中に活性成分を懸濁することによって製剤化され得る。当該油性懸濁物は、増量剤、例えば蜜蝋、硬パラフィン又はセチルアルコール等を含有し得る。これらの組成物は、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸等を添加することにより保存され得る。 
【００５１】
水を加えて水性懸濁物を調製するのに適した分散粉末及び顆粒は、分散又は湿潤剤、懸濁剤及び１つ以上の保存料との混合物の状態で有効成分を提供する。適切な分散又は湿潤剤及び懸濁剤は公知である。
【００５２】
前記有効成分は、薬物の腸内投与用の座薬の形態で投与され得る。これらの組成物は、薬物を、常温では固体であるが腸内温度で液体であるため腸内で融解して薬物を放出する、適切な非刺激性賦形剤と混合することにより調製され得る。そのような材料は、カカオバター及びポリエチレングリコールである。
【００５３】
局所送達において、経皮及び経粘膜パッチ、クリーム、軟膏、ゼリー、溶液又は懸濁物が採用され得る。舌下送達において、即時崩壊錠剤製剤や上記の様々な製剤が使用され得る。経口投与において、薬物は、錠剤、カプセル又は液体として投与され得る。
【００５４】
製剤は、錠剤及び除法カプセル等の単位剤形、及びリポソームとして容易に提示され、また製薬分野で公知の任意の方法によって調製され得る。医薬製剤は通常有効成分又はその医薬として許容される塩を、公知の医薬として許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合することによって調製され得る。賦形剤の例は、水、ゼラチン、アラビアゴム、ラクトース、微結晶セルロース、デンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、リン酸水素カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、滑石、コロイド二酸化ケイ素等である。そのような製剤は、他の医薬として活性な剤や公知の添加物、例えば安定化剤、湿潤剤、乳化剤、香料、緩衝剤等を含有し得る。通常、有効成分の量は、調製品の重量の０．１〜９５％、好ましくは非経口使用において調製品の重量の０．２〜２０％、より好ましくは経口投与において、調製品の重量の１〜５０％である。製剤は、更に、顆粒化、圧縮、微小カプセル化、スプレー被覆等の公知の方法によって調製され得る。製剤は、錠剤、カプセル、顆粒、粉末、シロップ、懸濁物、座薬又は注射剤の投与形態における公知の方法によって調製され得る。液体製剤は、有効成分を水又は他の適切なビヒクル中に溶解又は懸濁して調製され得る。より長期間治療的に有効な血漿濃度を維持するため、本発明の化合物は、徐放性剤中に包含され得る。
【００５５】
特定の化合物の投与レベル及び投与頻度は、採用される具体的な化合物、その化合物の代謝安定性及び活性期間、患者の年齢、体重、一般的健康状態、性別、食生活、投与の様式及び時間、排出の速度、薬物の組合せ、治療する症状の重症度、及び治療を行う患者を含む様々な要因に従い変化し得る。例えば毎日用量は、体重１ｋｇあたり約0.001mg〜約100mg、単発、又は一回約0.01mg〜約25mgで複数回であり得る。そのような用量は、経口又は非経口的に与えられる。複数回用量は一定期間に渡って投与され、例えば１週間以上、１ヶ月以上、数ヶ月、１年、又は数年以上であり、又はその症状が現れている限り投与される。投与の頻度は１ヶ月に１回、１週間に１回、又は１日１回であり得る。
【００５６】
組み合わせられた調製品
本発明の組み合わせられた調製品の成分は、同時、個別又は連続使用用であり得る。
【００５７】
「組み合わせられた調製品」は、本発明において、（ａ）（Ｒ）−カルビドパ及び（ｂ）ステロイドの組合せ成分が独立して投与されるという意味で、又は異なる量の組合せ成分（ａ）及び（ｂ）の異なる固定された組み合わせが用いられるという意味で使用される。各成分は同時又は順次投与され得る。各成分が順次投与される場合、好ましくは、投与の間隔は、それら成分の組合せ使用において治療される障害又は疾患に対する効果が組合せ成分（ａ）及び（ｂ）を一方だけ使用して得られる効果よりも大きくなるように選択される。
【００５８】
組み合わせられた調製品の成分は、１つの組み合わせられた単位剤形として、又は成分（ａ）の第一の単位剤形及び個別の成分（ｂ）の第二の単位剤形として存在し得る。組み合わせられた調製品において投与される組合せ成分（ａ）及び（ｂ）の合計量の比率は、例えば、治療すべき患者群の需要、又は特定の疾患、患者の年齢、性別又は体重等により得る単一の患者の需要に対処するため、変化し得る。
【００５９】
好ましくは、１つ以上の有益な効果、例えば（Ｒ）−カルビドパ阻害剤の効果の増強、又は組合せ成分（ａ）及び（ｂ）の効果の相互の増強、例えば相加効果以上、追加の有利な効果、副作用の減少、毒性の減少又は組合せ成分（ａ）及び（ｂ）の一方又は両方の非効果的な用量と比較して組み合わせられた治療的効果及び非常に好ましくは組合せ成分（ａ）及び（ｂ）の相乗効果が存在する。
【００６０】
（Ｒ）−カルビドパ及びステロイドは対象に連続投与され、即ち（Ｒ）−カルビドパはステロイドの前、同時又は後に投与され得る。
【００６１】
（Ｒ）−カルビドパ及びステロイドは、一方を投与した９６時間、７２時間、４８時間、２４時間、又は１２時間以内に対象に投与され得る。
【００６２】
あるいは、（Ｒ）−カルビドパ及びステロイドは、対象に同時に、例えばＶＡＰ−１阻害剤及びステロイドを含有する組成物として、又は（Ｒ）−カルビドパ及びステロイドの別個の剤形の同時投与によって、共投与され得る。
【００６３】
幾つかの態様において、複数の剤形の（Ｒ）−カルビドパ及び／又は複数の剤形のステロイドが、対象に投与され得る。
【００６４】
幾つかの態様において、１つの（Ｒ）−カルビドパの剤形が、２つ以上の剤形のステロイドの各投与の前、同時又は後に投与される。
【００６５】
例えば、１つの（Ｒ）−カルビドパの剤形は、２つ以上の剤形のステロイドの各投与の９６時間、７２時間、４８時間、２４時間、又は１２時間以内に対象に投与され得る。
【００６６】
本発明の組合せ治療に使用される成分の適切な用量の選択は、患者の全体的健康及び当該組合せ治療に対する応答等を観察して、当業者によって決定及び最適化され得る。例えば最適化は、患者が所望の治療効果を呈しない、又は反対に患者が多くの又は問題の有る重症度の望ましくない又は不都合な副作用を経験している場合に必要である。
【００６７】
組合せ治療に用いる化合物の用量は、組み合わせる成分の治療有効量を提供するように選択されるべきである。組合せ治療の「有効量」は、疼痛に関連する病理的パラメーターの１つ以上の減少をもたらす量である。例えば、幾つかの態様において、組合せ治療の有効量は、当該組合せ治療の無い疼痛に関連するパラメーターの予想される減少と比較してパラメーターの約10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%又は90%以上の減少を達成するのに有効である量である。例えば、パラメーターは、Western Ontario and McMaster Universities Arthritis Index (WOMAC)の下での評価によるスコアであり得、例えば歩行時、階段使用時、就寝中、座位又は仰臥、及び立位時の疼痛、又は日常活動、運動機能又は剛性スコア等である。あるいは、パラメーターは、Visual Analogue Scale (VAS), Pain Intensity (PI) Scale, Wong-Baker FACES Pain Rating Scale, 0-10 Numeric Pain Rating Scale, Verbal Pain Intensity Scale又はDescriptor Differential Scaleによる評価からのスコアであり得る。
【００６８】
本発明において、組合せ治療は、（Ｒ）−カルビドパ及びステロイドの治療効果が（Ｒ）−カルビドパ及びステロイドを単一で用いる場合と比較して増大するように、又は得られる組合せにおける個別の成分の用量を減少して個別の成分の望ましくない又は有害な副作用のリスクを防止又は更に減少するように採用され得る。
【００６９】
単一治療としてのステロイド、特にプレドニゾン又はプレドニゾロン等のグルココルチコイドの典型的な用量範囲は、人間において、0.3-1mg/kg/day (適切には0.7又は0.75mg/kg/day)、又は0.3mg/kg/day〜10mg/kg/weekである。
【００７０】
単一治療としての（Ｒ）−カルビドパの典型的な用量範囲は、人間において20-200mg/day、典型的には30mg/day又は75mg/dayである。
【００７１】
一つの態様において、（Ｒ）−カルビドパ及びステロイドは、それぞれ、各成分が単一治療として用いられる場合の典型的な用量範囲内の用量でそれぞれ処方される。これらの成分は、個別の剤形又は組合せ剤形として処方され得る。そのような組合せは、単一治療としての各化合物の効果と比較して増大した効果を提供する。
【００７２】
他の態様において、（Ｒ）−カルビドパ及びステロイドは、それぞれ、各成分が単一治療として用いられる場合の典型的な用量よりも少ないが組み合わせて治療効果を有する用量でそれぞれ処方される。これらの成分は、個別の剤形又は組合せ剤形として処方され得る。組み合わせられた成分の用量は、（Ｒ）−カルビドパ及びステロイドが単独で用いられたのと同等の治療効果を提供するように選択され得るが、より少ない用量の（Ｒ）−カルビドパ及びステロイドは、各化合物が単独で処方された場合と比べて副作用のリスクが減少する。
【００７３】
他の態様において、（Ｒ）−カルビドパの処方される用量は、単一治療で処方される典型的な用量内で、ステロイドは、単一治療で処方される典型的な用量を下回る用量で処方される。
【００７４】
更なる態様において、（Ｒ）−カルビドパ処方される用量は単一治療で処方される典型的な用量を下回り、ステロイドは、単一治療で処方される典型的な用量内で処方される。
【００７５】
単一治療で処方される典型的な用量を下回る好ましい用量は、典型的な処方される用量の５０％以下又は２５％以下である。
【００７６】
別個の剤形で投与されるとき、（Ｒ）−カルビドパ及びステロイドは、実質的に同時に投与されてもよく（例えば約６０分、５０分、約４０分、約３０分、約２０分、約１０分、約５分又は約１分以内）、又は約１時間、約２時間、約４時間、約６時間、約１０時間、約１２時間、約２４時間、約３６時間、約７２時間又は約９６時間以上の間隔で投与されてもよい。
【００７７】
当業者は、連続投与の適切なタイムコースを、（Ｒ）−カルビドパ及びステロイドの具体的組合せに従い決定及び最適化できる。タイムコースは好ましくは１つ以上の有益な効果、例えば（Ｒ）−カルビドパ又はステロイドの効果の増強、又は組合せ成分の効果の相互の増強、例えば相加効果以上、追加の有利な効果、副作用の減少、毒性の減少又は組合せ成分の一方又は両方の非効果的な用量と比較して組み合わせられた治療的効果及び非常に好ましくは組合せ成分相乗効果、が存在するように選択される。
【００７８】
最低なタイムコースは、投与後に化合物がピーク血漿濃度に達する時間、及び各化合物の半減期等の要因に依存し得るのが好ましい。好ましくは、当該時間差は、最初に投与された成分の半減期よりも短い。
【００７９】
当業者は、投与の適切なタイミングを決定することも出来る。幾つかの態様において、（Ｒ）−カルビドパは朝に投与され、ステロイドはその日の１回以降に投与され得る。他の態様において、（Ｒ）−カルビドパ及びステロイドは、実質的に同時に投与され得る。
【００８０】
対象は、（Ｒ）−カルビドパ阻害剤及びステロイドの剤形を、数週間、数ヶ月又は数年に渡り受け取り得る。例えば、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、3ヶ月、4ヶ月、5ヶ月、6ヶ月、7ヶ月、8ヶ月、9ヶ月、10ヶ月、11ヶ月、1年、2年、3年、4年、5年以上である。
【００８１】
一般に、本発明の組合せの成分は、公知の手段で、任意の適切な剤形で、任意の適切な経路で投与され得る。適切な投与の経路は、経口、直腸、経鼻、局所（口腔及び舌下を含む）、舌下、経皮、鞘内、経粘膜又は非経口（皮下、筋肉内、静脈内及び皮内を含む）投与を含み得る。幾つかの態様において、（Ｒ）−カルビドパ阻害剤及びステロイドは経口投与される。
【００８２】
適切な医薬組成物及び剤形は、医薬製剤の分野で公知の、又はRemington: The Science and Practice of Pharmacy (Easton, Pa.: Mack Publishing Co., 1995)等関連する資料及び文献に記載される方法を用いて調製され得る。
【００８３】
剤形の投与及び均一性を容易にするため、本発明の組み合わせられた調製品を単位剤形として製剤化するのが特に有利である。「単位剤形」は、本発明において、治療する個人における単一の投与に適した物理的に個別の単位を意味する。即ち、組成物は、要求される医薬担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定の「単位用量」の有効成分をそれぞれ含有する個別の用量単位として製剤化される。本発明の単位剤形の特定は、送達される有効成分の特有の特性に依存する。用量は更に、当該成分の通常の用量及び投与様式を参照して決定され得る。場合によっては、組合せの２つ以上の個別の用量単位が１つの治療有効量の有効成分を提供し、例えば、一緒に摂取される２つの錠剤又はカプセルが治療有効量の用量を提供し、各錠剤又はカプセルの単位剤形は、治療有効量の約５０％である。
【００８４】
非経口投与のための本発明の調製品は、滅菌水性及び非水性溶液、懸濁物及び乳剤を含む。注射可能水性溶液は、水溶性形態で有効成分を含有する。非水性溶媒又はビヒクルの例は、脂肪性油脂、例えばオリーブ油及びトウモロコシ油、合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチル又はトリグリセリド、低分子量アルコール、例えばプロピレングリコール、合成親水性ポリマー、例えばポリエチレングリコール、リポソーム等を含む。また、好ましい製剤は、可溶化剤、保存料、湿潤剤、乳化剤、分散剤及び安定化剤等の助剤を含有してもよく、また水性懸濁物は、粘性を増大させる物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール及びデキストランを含有し得る。注射製剤は、滅菌剤の添加、細菌保持フィルターによる濾過、放射線照射又は加熱により滅菌されたと見なされ得る。それらは、滅菌注射媒体を用いて製造されてもよい。有効成分も、注射で投与される直前に適切なビヒクルで再水和され得る乾燥、例えば凍結乾燥形態であってもよい。
【００８５】
上記製剤に加え、有効成分は、有効成分の調整放出、好ましくは長期間の持続放出のためのデポー調製品として製剤化され得る。これらの徐放剤形は、一般に、移植（例えば皮下又は筋肉内投与又は筋肉内注射）により投与される。
【００８６】
本発明の組み合わせられた調製品は、当該組合せ上の成分の投与のための指示と共に包装され得る。この指示は、適切な記録媒体又は基質上に記録され得る。例えば、指示は基質、例えば紙やプラスチック上に印刷され得る。この指示は添付文書として、その容器又は成分の標識中に提示され得る（即ち包装又は内部包装に添えられる）。他の態様において、当該指示は、ＣＤ−ＲＯＭやディスケット等の適切なコンピューター読み取り可能な保存媒体上に提示された電子保存データファイルとして提示される。組み合わせられた調製品の幾つか又は全ての成分は、無菌性を維持するために適切な包装中に包装され得る。
【実施例】
【００８７】
生物学的データ
実施例１
ヒトＶＡＰ−１（ＳＳＡＯ）阻害のインビトロでの判定
このアッセイは、室温で、精製組換え発現ヒトＶＡＰ−１（ＳＳＡＯ）を用いて実施された。酵素は、基本的にはOhman et al. (Protein Expression and Purification 46 (2006) 321-331)に記載のようにして調製された。酵素活性は、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）会合反応における過酸化水素の生産を利用してベンジルアミンを基質としてアッセイされる。要するに、試験化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に濃度１０ｍＭで溶解する。用量応答測定を、ＤＭＳＯによる１：１０の７点希釈系列カーブ又はＤＭＳＯによる１：３の１１点希釈系列カーブを作成してアッセイされる。最高濃度は、化合物の強度によって調整され、反応緩衝液中の連続希釈の最終ＤＭＳＯ濃度は２％以下であった。
【００８８】
ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）会合反応において、１０−アセチル−３，７−ジヒロドキシフェノキサジンの過酸化水素酸化がレゾルフィンを生成し、これは高度な蛍光を有する化合物である(Zhout and Panchuk-Voloshina. Analytical Biochemistry 253 (1997) 169-174; AmplexR Red Hydrogen Peroxide/peroxidise Assay kit, Invitrogen A22188)。酵素及び化合物を含有するｐＨ７．４の５０ｍＭリン酸ナトリウム溶液を約１５分間平底マイクロタイタープレート中でプレインキュベートし、その後、ＨＲＰ、ベンジルアミン及びＡｍｐｌｅｘ試薬の混合物を添加して反応を開始する。ベンジルアミン濃度は、標準的な方法で決定されたＭｉｃｈａｅｌｉｓ定数に対応する濃度で固定される。そして蛍光強度は１〜２時間複数のタイムポイントで励起５４４nm及び放出５９０nmで読み取られた。ヒトＳＳＡＯアッセイにおいて、アッセイウェル中の試薬の最終濃度は：SSAO酵素１mg/ml、ベンジルアミン１００μM、Amplex試薬２０μM、HRP0.1U/mL及び様々な濃度の試験化合物である。阻害は、阻害剤無しの対照（希釈ＤＭＳＯのみ）と比較したシグナルの減少％として測定された。ＳＳＡＯ酵素無しの試料からのバックグラウンドシグナルが、全てのデータポイントから差し引かれる。データは、４つのパラメーター論理モデルと適合され、ＩＣ５０値が、例えばGraphPad Prism 4又はXLfit 4プログラムを用いて計算される。
【００８９】
このアッセイを用いて、（Ｓ）−カルビドパ及び（Ｒ）−カルビドパによるヒトＶＡＰ−１の阻害のＩＣ５０は、それぞれ142nM及び148nMであった。
【００９０】
実施例２
ヒト芳香族Ｌ−アミノ酸デカルボキシラーゼ（ＤＯＰＡデカルボキシラーゼ）阻害のインビトロ判定
ヒトＤＯＰＡデカルボキシラーゼの酵素反応は、製造者の指示に従い実施された。このアッセイは、組換えヒトＤＯＰＡデカルボキシラーゼがＬ−Ｄｏｐａをドーパミンに変換する能力を測定した。ドーパミン産物は、トリニトロベンゼンスルホン酸による誘導体化後に３４０nmの吸光度によって測定された。要するに、この反応は、１００ｍＭ  ＮａＣｌを含有するｐＨ７．２の５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ中で３０分間実施され、９５℃で２分間酵素を不活性化して停止された。阻害アッセイは、ＤＯＰＡデカルボキシラーゼのデカルボキシラーゼ活性を、固定された量の各化合物の存在下又は非存在下、0.8μg酵素、500μM L-Dopa、及び100μMピリドキサールリン酸を用いて測定することにより実施された。試験化合物はＤＯＰＡデカルボキシラーゼと共に６０分間プレインキュベートされ、その後Ｌ−ＤＯＰＡ基質を添加してアッセイを開始した。用量応答曲線を作成して、５０％のデカルボキシラーゼ活性の阻害に要する濃度（ＩＣ５０）を決定した。化合物は７つの濃度で２回評価された。ＩＣ５０値は、非線形回帰解析によって導かれた。
【００９１】
このアッセイを用いて、（Ｓ）−カルビドパによるヒト芳香族Ｌ−アミノ酸デカルボキシラーゼの阻害のＩＣ５０は１９０nmであり、一方（Ｒ）−カルビドパは、試験された最高濃度（３μＭ）でもヒト芳香族Ｌ−アミノ酸デカルボキシラーゼを阻害しなかった。
【００９２】
実施例３
ラットのＣＦＡ（完全フロインドアジュバント）誘導過敏に対する単独又はプレドニゾロンと組み合わせた（Ｒ）−カルビドパの効果
（Ｒ）−カルビドパの抗痛覚過敏作用の評価は、ＣＦＡ誘導過敏後に担持する体重の測定を通じて判定された。無処理のラットは２本の後ろ足に等しく体重を分散する。しかしながら、注射された（左）足が痛む場合、其方の足にかかる体重が減るように体重が再分散される（注射された足が担持する体重が減少する）。各後ろ足が担持する体重は、ラットインキャパシタンステスター(Linton Instruments, UK)を用いて測定された。ラットの左右の後ろ足が別のセンサーに乗るようにインキャパシタンステスター中に置き、両後ろ足が発する平均の力を４秒間記録した。ＣＦＡの注射は浮腫も誘導し、これは足の体積によって評価され得る；これはプレチスモメーターによって測定される。ラットの後ろ足は溶液の入った筒の中に置かれ、置き換えられた液体の体積が足の体積を判定する。
【００９３】
無処理の雄Sprague Dawleyラットを水及び餌を不断供給して順化させた。インキャパシタンステスターへの馴化が実施された。ベースライン体重担持及び足体積記録が、障害の誘導の前に行われた。左後ろ足にＣＦＡ（100μlの1mg/ml溶液）を足底内に注射して炎症性過敏を誘導した。処理前の体重担持及び足体積測定が、ＣＦＡ注射２３時間後の過敏症を評価するために行われた。そして動物をランク付けし、ラテン方格法におけるＣＦＡ窓に従い無作為化した。 
【００９４】
部分Ａにおいて、動物は、ＣＦＡ注射２４時間後、ビヒクル(5% DMSO、0.5%ヒドロキシプロピルメチルセルロース(HPMC)を含有する水)、（Ｒ）−カルビドパ３、１０及び３０mg/kg又はインドメタシン10mg/kg (10mL/kg用量体積)のいずれかで処理された。体重担持は処理後１及び３時間、浮腫は処理後３時間で測定された。
【００９５】
部分Ｂにおいて、動物は、ＣＦＡ注射２４時間後、ビヒクル(１%メチルセルロース(MC)を含有する水)、（プレドニゾロン０．３、１、３及び１０mg/kg又はインドメタシン10mg/kg (10mL/kg用量体積)のいずれかで処理された。体重担持は処理後１及び３時間で測定された。
【００９６】
部分Ｃにおいて、動物は、ＣＦＡ注射２４時間後、２回、１回はビヒクル(5% DMSO 0.5% HPMC)又は（Ｒ）−カルビドパ３及び10mg/kg p.o. (10mL/kg用量体積）で、そしてビヒクル(1%MC)又はプレドニゾロン0.3mg/kg p.o. (5mL/kg用量体積)で処理された。体重担持は処理後１及び３時間、浮腫は処理後３時間で測定された。
【００９７】
データは各タイムポイントで処理群をビヒクル対照群と比較して解析された。
【００９８】
体重担持（ｇ）の読み取りは右後ろ足及び左後ろ足の両方で行われ、差が計算された。データは痛みに対する過敏の反転％として表現される。足体積（ｍＬ）の読み取りは左後ろ足において行われた。データは浮腫の反転％として表現された。計算：（投与後読み取り−投与前読み取り）／（無処理読み取り−投与前読み取り）×１００、無処理体重担持差−投与前体重担持差は、反転されるＣＦＡ窓として定義される。統計解析は反復測定ＡＮＯＶＡ、続いてInVivoStat (invivostat.co.uk)を用いる計画的比較検定（Planned comparison test）によって実施される。
【００９９】
結果
ＣＦＡの足底内注射は過敏症を誘導し、これは投与２４時間後の傷害及び非傷害後ろ足の間の体重担持のシフトによって判定される。またＣＦＡは両試験において注射した足に顕著な浮腫を誘導した。過去の研究と一致して、インドメタシン(10mg/kg)は過敏症の顕著な反転を生じ、これは体重担持を用いて測定される。またインドメタシンは足の浮腫に対し顕著な減少を示した。 
【０１００】
部分Ａ：（Ｒ）−カルビドパ(3-30mg/kg)単独は過敏症応答を用量依存的に阻害し（図１）、足体積の顕著な減少を示した（図２）。
【０１０１】
部分Ｂ：プレドニゾロン(0.3-10mg/kg)単独は、過敏症応答を用量依存的に阻害した（図３）。
【０１０２】
部分Ｃ：（Ｒ）−カルビドパ(3及び30mg/kg)及びプレドニゾロン(0.3mg/kg)の最小／中度有効量は、潜在的な相乗効果を評価するために組合せで投与されるように選択された。
【０１０３】
プレドニゾロン(0.3mg/kg)と(R)-カルビドパの共投与は、3mg/kgのプレドニゾロン単独と同じ鎮痛効果を有し、これは、ステロイドの投与量は、（Ｒ）−カルビドパと共投与すると１０倍以上減少出来ることを示唆する（図４）。
【０１０４】
これらの結果は、プレドニゾロン及び（Ｒ）−カルビドパの間の相乗効果の証拠を示している（図４）。
【０１０５】
相乗効果は、以下参考文献１及び２に教示された方法に従って計算できる。
１． Webb JL, Effect of more than one inhibitor. Enzyme and metabolic inhibitors. 1. New York: Academic Press; 1963, p. 66-79 (488-512)
２． Greco WR, Bravo G, and Parsons JC (1995) The search for synergy: a critical review from a response surface perspective. Pharmacol Rev 47: 331-385.
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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