(57)【要約】  鎮痛を誘導するための組成物には、複数の粒子が含まれ、該複数粒子の各粒子は、４０〜６０重量％のアミノアミド麻酔薬又はその医薬的に許容される塩、水和物、又は溶媒和物と、４８：５２〜５２：４８のモル比のＤ，Ｌラクチド：グリコリドを含んでなる６０〜４０重量％のＰＬＧＡポリマー、及び２５℃でのクロロホルム中０．１％（ｗ／ｖ）で約０．１６〜０．２４ｄＬ／ｇの固有粘度を有する。各粒子には、最大寸法が１００μｍ未満で、約１３，５００立法マイクロメートルの体積を有する非球形が含まれる。該アミノアミド麻酔薬は、結晶性であって、５０〜７０％の結晶形Ｉと３０〜５０％の結晶形ＩＩが含まれる。
2019514976.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の粒子を含んでなる組成物であって：
該複数粒子の各粒子は、
アミノアミド麻酔薬又はその医薬的に許容される塩、水和物若しくは溶媒和物を４０〜６０重量％、および
４８：５２〜５２：４８のモル比のＤ，Ｌラクチド：グリコリドを含み、且つ２５℃でのクロロホルム中０．１％（ｗ／ｖ）で約０．１６〜０．２４ｄＬ／ｇの固有粘度を含むＰＬＧＡポリマーを６０〜４０重量％、
含んでなり；
ここで各粒子は、最大寸法が１００μｍ未満で、約１３，５００立法マイクロメートルの体積を有する非球形を含み；そして
ここで該アミノアミド麻酔薬は、結晶性であって、５０〜７０％の結晶形Ｉと３０〜５０％の結晶形ＩＩとを含む、前記組成物。
【請求項２】
アミノアミド麻酔薬が、ジブカイン、リドカイン、メピバカイン、プリロカイン、ブピバカイン、レボブピバカイン、ロピバカイン、アルチカイン、エチドカイン、及びそれらの医薬的に許容される塩、水和物、及び溶媒和物からなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
アミノアミド麻酔薬が、ブピバカイン遊離塩基、又はその医薬的に許容される塩、水和物、及び溶媒和物を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
粒子が約３５００平方マイクロメートルの表面積を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
粘度調整剤、界面活性剤、緩衝剤、及び等張化剤を含んでなる水性媒体をさらに含んでなり、ここで該媒体は、約５０ｃｐｓ未満の粘度を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
粘度調整剤がヒアルロン酸又はその医薬的に許容される塩を含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
粘度調整剤が１．６〜２．２ｍ３／ｋｇの固有粘度を有するヒアルロン酸ナトリウムを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
粘度調整剤が媒体の約０．５〜約１．０重量％を含んでなるヒアルロン酸ナトリウムを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項９】
界面活性剤が媒体の約０．００１〜１．０重量％を含んでなるポリソルベート８０又はポリソルベート２０を含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項１０】
媒体が、ドクサートナトリウム又はデオキシコール酸ナトリウムより選択される界面活性剤、及び、場合によりエタノール、ベンジルアルコール、又はグリセリンを含んでなる共溶媒をさらに含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項１１】
複数の粒子を含有する組成物を必要部位へ投与する工程を含む、延長鎮痛を誘導する方法であって：
該複数粒子の各粒子は、
アミノアミド麻酔薬又はその医薬的に許容される塩、水和物、又は溶媒和物を４０〜６０重量％、および
４８：５２〜５２：４８のモル比のＤ，Ｌラクチド：グリコリドを含み、且つ２５℃でのクロロホルム中０．１％（ｗ／ｖ）で約０．１６〜０．２４ｄＬ／ｇの固有粘度を含むＰＬＧＡポリマーを６０〜４０重量％、
含んでなり、ここで各粒子は、最大寸法が１００μｍ未満の非球形を含み；そして
それによって該粒子は、その必要部位へ３日以上の鎮痛を提供する、前記方法。
【請求項１２】
投与する工程の前に、粘度調整剤、界面活性剤、緩衝剤、及び等張化剤を含有する媒体に該粒子を懸濁させる工程をさらに含み、ここで、該粒子は約５０ｃｐｓ未満の粘度を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
該粒子を媒体に懸濁させる工程の前に、粘度が約５０ｃｐｓ未満である媒体を製剤化する工程をさらに含んでなる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
投与する工程が、浸潤、注射、又は局所投与を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
該複数粒子の各粒子が、約１３，５００立法マイクロメートルの体積と約３５００平方マイクロメートルの表面積とを有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
アミノアミド麻酔薬が結晶性であって、５０〜７０％の結晶形Ｉと３０〜５０％の結晶形ＩＩとを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
アミノアミド麻酔薬が、ブピバカイン遊離塩基、又はその医薬的に許容される塩、水和物、及び溶媒和物を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
粘度調整剤が、１．６〜２．２ｍ３／ｋｇの固有粘度を有するヒアルロン酸ナトリウムを含み、媒体の約０．５〜約１．０重量％を含み、そして
界面活性剤が、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ドクサートナトリウム、又はデオキシコール酸ナトリウムを含み、そして、
媒体が、場合により、媒体の約０．００１〜１．０重量％を含んでなる、エタノール、ベンジルアルコール、又はグリセリンを含む共溶媒を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１９】
約０．１〜０．３重量％の粘度調整剤、約４．０重量％の等張化剤、約０．１重量％の界面活性剤、約０．６重量％の緩衝剤、約７．７〜８．３のｐＨ、及び約３０〜５０ｃｐｓの粘度を含んでなる媒体に懸濁した複数の粒子を含む、鎮痛を誘導するための投与用製剤であって；
ここで該複数粒子の各粒子は、
アミノアミド麻酔薬又はその医薬的に許容される塩、水和物、又は溶媒和物を４０〜６０重量％、および
４８：５２〜５２：４８のモル比のＤ，Ｌラクチド：グリコリドを含み、且つ２５℃でのクロロホルム中０．１％（ｗ／ｖ）で約０．１６〜０．２４ｄＬ／ｇの固有粘度を含むＰＬＧＡポリマーを６０〜４０重量％、
含んでなり；
ここで各粒子は、最大寸法が１００μｍ未満で、約１３，５００立法マイクロメートルの体積を有する非球形を含み；そして
ここで該アミノアミド麻酔薬は、結晶性であって、５０〜７０％の結晶形Ｉと３０〜５０％の結晶形ＩＩを含む、前記製剤。
【請求項２０】
アミノアミド麻酔薬が、ブピバカイン遊離塩基又はその医薬的に許容される塩、水和物、又は溶媒和物を含む、請求項１９に記載の製剤。
【請求項２１】
各粒子が約３５００平方マイクロメートルの表面積を含む、請求項１９に記載の製剤。
【請求項２２】
麻酔薬粒子を生成する方法であって：
４０〜６０重量％のアミノアミド麻酔薬と６０〜４０重量％のＰＬＧＡを含んでなる溶液を、約１３，５００立法マイクロメートルの容積を有する穴（cavities）を含んでなるポリマーモールドの上へ沈着させる工程；
該溶液を該モールドの穴の中へ配置する工程；及び
該溶液をモールド穴にある間に乾燥させて、結晶性のアミノアミド麻酔薬−ＰＬＧＡ麻酔薬粒子を生成する工程を含んでなり、ここで該結晶性アミノアミド麻酔薬は、５０〜７０％の間の結晶形Ｉと３０〜５０％の間の結晶形ＩＩを含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、そのいずれもその全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国仮特許出願番号：６２／３３２，０１５（２０１６年５月５日出願）、米国仮特許出願番号：６２／４４０，０８８（２０１６年１２月２９日出願）、米国仮特許出願番号：６２／４４３，３１８（２０１７年１月６日出願）、米国仮特許出願番号：６２／４６３，２０６（２０１７年２月２４日出願）、及び米国仮特許出願番号：６２／４７２，８８５（２０１７年３月１７日出願）に対する優先権とそれらの利益を請求する。
【０００２】
本発明の技術分野
本発明は、アミノアミド麻酔薬の薬物粒子、媒体に懸濁したアミノアミド麻酔薬の薬物粒子、その薬物粒子と媒体を作製する方法、及び該薬物粒子と有っても無くてもよい媒体の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
欧州連合と米国では、毎年１億例以上の外科手技が実施されていると推定される。有効な術後疼痛管理は、外科手技を受けているあらゆる患者にとって、喫緊の臨床課題である。縫合時に塩酸ブピバカインのようなアミノアミド麻酔薬を手術部位中に浸潤させると、一時的な鎮痛をもたらすことができる。しかしながら、鎮痛の期間は、ほぼ６時間しか続かない場合がある。これら局所麻酔薬の限られた作用時間の故に、患者は、経口鎮痛剤を服用又は忍容することが可能になる前に、初期の突発痛を体験する可能性が高い場合がある。この場合は、オピオイドのような強い非経口鎮痛剤を手術の直後期に使用することが必要になり得る。
【０００４】
患者の疼痛管理を依然として維持する一方で、オピオイドのような強い鎮痛剤への患者曝露を制限することが望まれている。既存の術後疼痛治療薬は、ブピバカインリポソーム懸濁注射液である、ＥＸＰＡＲＥＬ（Pacira Pharmaceuticals 社、カリフォルニア州サンディエゴ）であるが、ＥＸＰＡＲＥＬ（登録商標）は、１３．３ｍｇ／ｍｌのブピバカイン濃度（１回の治療につき２０ｍｌ容量中２６６ｍｇのブピバカインの最大用量）に制限されている。いくつかの治療選択肢が存在するものの、局所麻酔薬の使用により疼痛制御を延長させることによって、術後状況において、オピオイドのような強い鎮痛剤に対する依存を遅らせる、減少させる、及び／又は不要にすることへの未充足ニーズが依然としてある。
【発明の概要】
【０００５】
いくつかの態様において、本発明は、複数の粒子が含まれる組成物を提供し、該複数粒子の各粒子は、４０〜６０重量％のアミノアミド麻酔薬又はその医薬的に許容される塩、水和物、又は溶媒和物と６０〜４０重量％のポリマーを含んでなる。いくつかの態様において、該ポリマーには、ＰＬＧＡポリマー、例えば、４８：５２〜５２：４８のモル比のＤ，Ｌラクチド：グリコリドと、２５℃でのクロロホルム中０．１％（ｗ／ｖ）で約０．１６〜０．２４ｄＬ／ｇの固有粘度を含んでなるＰＬＧＡが含まれる。ある態様では、各粒子は、最大寸法が１００μｍ未満で、約１３，５００立法マイクロメートルの体積を有する非球形を含む。さらなる態様において、アミノアミド麻酔薬は、結晶性であって、５０〜７０％の結晶形Ｉと３０〜５０％の結晶形ＩＩとを含む。いくつかの態様において、アミノアミド麻酔薬は、ジブカイン、リドカイン、メピバカイン、プリロカイン、ブピバカイン、レボブピバカイン、ロピバカイン、アルチカイン、エチドカイン、及びそれらの医薬的に許容される塩、水和物、及び溶媒和物からなる群より選択される。いくつかのそのような態様において、アミノアミド麻酔薬は、ブピバカイン遊離塩基、又はその医薬的に許容される塩、水和物、及び溶媒和物を含む。さらなる態様では、各粒子が約３５００平方マイクロメートルの表面積を含む。
【０００６】
いくつかの態様による組成物は、粘度調整剤、界面活性剤、緩衝剤、及び等張化剤を含んでなる水性媒体をさらに含む。この媒体は、約５０ｃｐｓ未満の粘度を有し得る。いくつかの態様において、粘度調整剤は、ヒアルロン酸又はその医薬的に許容される塩を含む。いくつかの態様において、粘度調整剤は、１．６〜２．２ｍ３／ｋｇの固有粘度を有するヒアルロン酸ナトリウムを含む。いくつかの態様において、粘度調整剤は、媒体の約０．５〜約１．０重量％を含んでなるヒアルロン酸ナトリウムを含む。いくつかの態様において、界面活性剤は、媒体の約０．００１〜１．０重量％を含んでなるポリソルベート８０又はポリソルベート２０を含む。いくつかの態様において、媒体は、ドクサートナトリウム又はデオキシコール酸ナトリウムより選択される界面活性剤をさらに含み、エタノール、ベンジルアルコール、又はグリセリンを含んでなる共溶媒をさらに含んでもよい。
【０００７】
本発明のいくつかの態様による、延長鎮痛を誘導する方法には、複数の粒子を含んでなる組成物（該複数粒子の各粒子は、４０〜６０重量％のアミノアミド麻酔薬又はその医薬的に許容される塩、水和物、又は溶媒和物と、６０〜４０重量％のポリマーを含んでなる）を必要部位へ投与する工程が含まれる。いくつかの態様において、該ポリマーは、ＰＬＧＡポリマー、例えば、４８：５２〜５２：４８のモル比のＤ，Ｌラクチド：グリコリドと、２５℃でのクロロホルム中０．１％（ｗ／ｖ）で約０．１６〜０．２４ｄＬ／ｇの固有粘度を含んでなるＰＬＧＡポリマーである。いくつかの態様では、各粒子が、最大寸法が１００μｍ未満の非球形を含む。いくつかの態様において、該粒子は、その必要部位へ３日以上の鎮痛を提供する。いくつかの態様では、投与する工程が、浸潤、注射、又は局所投与を含む。いくつかの態様では、該複数粒子の各粒子が約１３、５００立法マイクロメートルの体積と約３５００平方マイクロメートルの表面積を有する。いくつかの態様において、アミノアミド麻酔薬は、結晶性であって、５０〜７０％の結晶形Ｉと３０〜５０％の結晶形ＩＩを含む。いくつかの態様において、アミノアミド麻酔薬は、ブピバカイン遊離塩基、又はその医薬的に許容される塩、水和物、及び溶媒和物を含む。
【０００８】
該方法には、さらなる態様において、投与する工程の前に、粘度調整剤、界面活性剤、緩衝剤、及び等張化剤を含んでなる媒体に該粒子を懸濁させる工程が含まれる。該媒体は、約５０ｃｐｓ未満の粘度を有し得る。いくつかの態様において、該方法には、該粒子を媒体に懸濁させる工程の前に、粘度が約５０ｃｐｓ未満である媒体を製剤化する工程が含まれる。いくつかの態様において、粘度調整剤は、１．６〜２．２ｍ３／ｋｇの固有粘度を有するヒアルロン酸ナトリウムを含んで、該媒体の約０．５〜約１．０重量％を含み、そしてここで界面活性剤は、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ドクサートナトリウム、又はデオキシコール酸ナトリウムを含み、そして該媒体は、媒体の約０．００１〜１．０重量％を含んでなる、エタノール、ベンジルアルコール、又はグリセリンを含んでなる共溶媒を含んでもよい。
【０００９】
なおさらなる態様において、本発明は、約０．１〜０．３重量％の粘度調整剤、約４．０重量％の等張化剤、約０．１重量％の界面活性剤、約０．６重量％の緩衝剤、約７．７〜８．３のｐＨ、及び約３０〜５０ｃｐｓの粘度を含んでなる媒体に懸濁した複数の粒子が含まれる、鎮痛を誘導するための投与用製剤を提供する。いくつかの態様では、該複数粒子の各粒子は、４０〜６０重量％のアミノアミド麻酔薬又はその医薬的に許容される塩、水和物、又は溶媒和物と、４８：５２〜５２：４８のモル比のＤ，Ｌラクチド：グリコリドを含み、且つ２５℃でのクロロホルム中０．１％（ｗ／ｖ）で約０．１６〜０．２４ｄＬ／ｇの固有粘度を含む、６０〜４０重量％のＰＬＧＡポリマーとを含む。いくつかの態様では、各粒子が、最大寸法が１００μｍ未満で、約１３，５００立法マイクロメートルの体積を有する非球形を含む。いくつかの態様では、各粒子が約３５００平方マイクロメートルの表面積を含む。いくつかの態様において、アミノアミド麻酔薬は、結晶性であって、５０〜７０％の結晶形Ｉと３０〜５０％の結晶形ＩＩを含む。このアミノアミド麻酔薬は、いくつかの態様において、ブピバカイン遊離塩基又はその医薬的に許容される塩、水和物、又は溶媒和物を含む。
【００１０】
本発明はまた、いくつかの態様において、麻酔薬粒子を生成する方法を提供する。該方法には、いくつかの態様において、４０〜６０重量％のアミノアミド麻酔薬と６０〜４０重量％のＰＬＧＡを含んでなる溶液を、約１３，５００立法マイクロメートルの容積を有する穴を含んでなるポリマーモールドの上へ沈着させる工程；該溶液を該モールドの穴の中へ配置する工程；及び該溶液をモールド穴にある間に乾燥させて、結晶性アミノアミド麻酔薬−ＰＬＧＡ麻酔薬粒子を生成する工程を含んでなり、ここで該結晶性アミノアミド麻酔薬は、５０〜７０％の間の結晶形Ｉと３０〜５０％の間の結晶形ＩＩを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図面１Ａ、図面１Ｂ、及び図面１Ｃは、六角柱である、本発明の粒子のレンダリングを図示する。図面１Ａは、六角柱である、本発明の粒子の三次元レンダリングを図示する。この六角柱の高さは、ほぼ２５μｍである。この六角柱面の幅は、介在頂点がある２つの頂点間の距離を表して、ほぼ２５μｍである。図面１Ｂと図面１Ｃは、この六角柱面の二次元図と横断面図をそれぞれ図示する。この六角面の各辺の長さは、図面１Ｂにあるように、ほぼ１４．４３μｍであると計算される。図面１Ｃは、六角柱の横断面図を図示する。
【図２】図面２は、動物試験における、対照、Ｅｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）（Pacira Pharmaceuticals 社、カリフォルニア州サンディエゴ）、ブピバカイン粒子、及びＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子について潜時（latency）を図示する。
【図３−１】図面３Ａ、図面３Ｂ、及び図面３Ｃは、ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子、ブピバカイン粒子、及びＥｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）についての後足退避反応潜時を図示する。図面３Ａは、媒体投与動物（Ｎ＝１２）とＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子投与動物（Ｎ＝１１）における、投与後２、４、５．５、及び７時間での左後足退避反応潜時の平均±ＳＥＭを図示する。すべての動物が媒体（１．２ｍＬ／ｋｇ）又はＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子（３３．３ｍｇ／ｍＬ，４０ｍｇ／ｋｇ）を神経周膜投与によって受けた（＋＋／＋＋＋：ｐ＜０．０１／０．００１，媒体群に対する対応のないｔ検定）。図面３Ｂは、媒体投与動物（Ｎ＝１２）とブピバカイン粒子投与動物（Ｎ＝１１）における、投与後２、４、５．５、及び７時間での左後足退避反応潜時の平均±ＳＥＭを図示する。すべての動物が媒体（１．２ｍＬ／ｋｇ）又はブピバカイン粒子（３３．３ｍｇ／ｍＬ，４０ｍｇ／ｋｇ）を神経周膜投与によって受けた（＋＋／＋＋＋：ｐ＜０．０１／０．００１，媒体群に対する対応のないｔ検定）。図面３Ｃは、媒体投与動物（Ｎ＝１２）とＥｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）投与動物（Ｎ＝１２）における、処置後２、４、５．５、及び７時間での左後足退避反応潜時の平均±ＳＥＭを図示する。すべての動物が媒体（１．２ｍＬ／ｋｇ）又はＥｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）（１３．３ｍｇ／ｍＬ，１８．６ｍｇ／ｋｇ）を神経周膜投与によって受けた（＊＊＊：ｐ＜０．００１，ＢＬに対するダネット事後検定）。図面３Ｃの各時間間隔では、図面３Ａと図面３Ｂにあるように、媒体対照が左のバーであって、Ｅｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）が右のバーである。
【図３−２】同上。
【図３−３】同上。
【図４】図面４は、薬物動態試験での本発明のブピバカイン粒子とＥｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）についてのブピバカイン血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）を図示する。
【図５】図面５は、薬物動態試験での本発明のＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子とＭａｒｃａｉｎｅ（塩酸ブピバカイン溶液（０〜７５％））についてのブピバカイン血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）を図示する。
【図６】図面６は、毒性試験での本発明のブピバカイン粒子についてのブピバカイン血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）を図示する。
【図７】図面７は、毒性試験での本発明のＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子についてのブピバカイン血漿濃度（ｎｇ／ｋｇ）を図示する。
【図８−１】図面８Ａ、図面８Ｂ、及び図面８Ｃは、ＰＫ試験での本発明のＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子とブピバカイン粒子についての平均ブピバカイン血漿濃度（ｎｇ／ｋｇ）を図示する。図面８Ａは、２ｍｇ／ｋｇ用量での平均ブピバカイン血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）を図示する。図面８Ｂは、４ｍｇ／ｋｇ用量での平均ブピバカイン血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）を図示する。図面８Ｃは、６ｍｇ／ｋｇ用量での平均ブピバカイン血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）を図示する。
【図８−２】同上。
【図８−３】同上。
【図９】図面９は、臨床試験でのＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子とブピバカイン粒子の送達のための開扇（fanning）技術に使用される、６０Ｘ３５ｍｍの矩形領域（長軸が垂直方向に配置）を図示する。
【図１０−１】図面１０Ａと図面１０Ｂは、本発明の粒子を投与したコホート１についての時間に対する血漿濃度を示す。
【図１０−２】同上。
【図１１−１】図面１１Ａと図面１１Ｂは、本発明の粒子を投与したコホート２についての時間に対する血漿濃度を示す。
【図１１−２】同上。
【図１２−１】図面１２Ａと図面１２Ｂは、本発明の粒子を３００ｍｇの用量で投与したコホート３についての時間に対する血漿濃度を示す。
【図１２−２】同上。
【図１３−１】図面１３Ａは、４５０ｍｇのＬＩＱ８６５Ａを投与した、コホート４とコホート５からの患者を示す。図面１３Ｂは、４５０ｍｇのＬＩＱ８６５Ｂを投与した、コホート４からの患者を示す。図面１３Ｃは、図面１３Ａと図面１３Ｂに示した被験者の対数線形データ収集を示す。
【図１３−２】同上。
【図１３−３】同上。
【図１４】図面１４は、本発明の粒子を６００ｍｇの用量で投与したコホート５についての時間に対する血漿濃度を示す。
【図１５】図面１５は、４５０ｍｇで投与したすべての被験者（コホート４とコホート５）と６００ｍｇを投与した被験者についてのデータが含まれる対数線形プロットを提示する。
【図１６】図面１６は、１５０ｍｇ、２２５ｍｇ、３００ｍｇ、及び４５０ｍｇの用量についての定性的な薬力学的サマリーを示す。
【図１７】図面１７は、コホート１〜コホート４における個別の被験者についての機械的触覚閾値と冷知覚閾値を示す。
【図１８】図面１８は、コホート１〜コホート５について、粒子製剤タイプＡでの患者の血漿濃度（Ｃｍａｘ）を製剤タイプＢのそれと比較した比較を示す。
【００１２】
略語
ＡＰＩ      有効医薬成分
ＡＵＣ      曲線下面積
ＡＶＥ      平均
ＢＬ        ベースライン
Ｂｕｐ      ブピバカイン
ＣＤＴ      冷知覚閾値
Ｃｍａｘ          最高血中濃度
ＣＭＣ      カルボキシメチルセルロース
ｃｐｓ      センチポアズ
ＤＭＰＣ    １，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン
ＤＯＰＣ    １，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン
ＤＰＰＧ    １，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルグリセロールナトリウム塩
ＤＳＰＥ    １，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン
ＥＤＴＡ    エチレンジアミン四酢酸
ｆｔ／ｍｉｎ    フィート／分
ｇ          グラム（複数）
ＧＭＰＧ    １，２−ジテトラデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ｒａｃ−グリセロール）（ナトリウム塩）
ＨＣｌ      塩酸
ＨＤＰＥ    高密度ポリエチレン
ＨＥＰＥＳ  （４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）
ＨＰＴ      温痛閾値
ｋＧｙ      キログレイ
ＬＤＰＥ    低密度ポリエチレン
ＬＩＱ８６５Ａ（８６５Ａ）    ＰＬＧＡ／ブピバカイン薬物粒子
ＬＩＱ８６５Ｂ（８６５Ｂ）    ブピバカイン薬物粒子
ＭＤＴ      機械的触覚閾値
ｍＮ        ミリニュートン
ＭＴＤ      最大耐量
ＮＡ        不適用
ＮＭＴ      〜以下
ＮＴ        未試験
ＰＤ        薬力学
ＰＥＳ      ポリエーテルスルホン
ＰＥＴ      ポリエチレンテレフタレート
ＰＧＡ      ポリ（グリコール酸）
ＰＫ        薬物動態
ｐＫａ      酸解離定数
ＰＬＡ      ポリ（乳酸）
ＰＬＧＡ    ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）
ＰＮ        神経周膜
ｐｐｍ      百万分率
ＰＲＩＮＴ  非浸潤鋳型中での粒子複製
ｐｓｉ      ポンド／平方インチ
ＰＴＦＥ    ポリテトラフルオロエチレン
ＰＶＯＨ    ポリビニルアルコール
ＱＳ        適量（quantum satis）、適量（quantum sufficit）
ＲＨ        相対湿度
ｓ          秒（複数）
ＳＣ        皮下
ＳＥＭ      平均の標準誤差
ＳＮ        伏在神経
ＳＱ        皮下
ＳＴＤＥＶ  標準偏差
ｔ１／２          半減期
ＴＢＤ      未確定
Ｔｍａｘ          最高血中濃度到達時間
ＴＫ        毒性動態
Ｔｒｉｓ    トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
ＷＤＴ      温知覚閾値
ｗｔ（％）  重量パーセント
ｗ／ｗ      重量／重量
ＸＲＰＤ    Ｘ線粉末回折
【発明を実施するための形態】
【００１３】
目的部位への直接送達用の持続放出組成物の使用により鎮痛を提供するために組成物を開発した。一般的には、処方薬の低減が達成されるように、術間又は術後に送達を達成する。送達は、懸濁液剤、エアゾール剤、フォーム剤、ペースト剤、等による、注射、浸潤、沈着のいずれでもあり得る。該組成物は、アミノアミド麻酔薬、又はその医薬的に許容される塩、水和物、又は溶媒和物を含有して、生体適合性ポリマーを含有してもよい、複数の薬物粒子を含む。この生体適合性ポリマーは、分解性、生分解性、生体内分解性、吸収性、及び／又は溶解性であり得る。出願人は、当該ＰＬＧＡ／ブピバカイン薬物粒子に関連して生体適合性ポリマー全般を参照として、当業者には、該ポリマーが、分解性、生分解性、生体内分解性、吸収性、及び／又は溶解性であることが理解されよう。この複数の粒子は、粒子として、及び／又は媒体に懸濁した粒子として送達され得る。内腔を含有するシリンジ、カニューレ、トロカール、又は他のデバイスを使用して、注射又は浸潤により投与し得る。エアゾール化ポンプを推進剤の有り無しで使用して、エアゾール化粒子組成物を投与し得る。局所投与用に、該組成物は、所望の組織又は部位上への直接付着のために、限定されないが、粒子の塗り、塗布、軽塗り（dabbing）、エアゾール化が含まれる、任意数の方法を使用して適用し得る。
【００１４】
アミノアミド麻酔薬
アミノアミド麻酔薬には、ジブカイン、リドカイン、メピバカイン、プリロカイン、ブピバカイン、レボブピバカイン、ロピバカイン、アルチカイン、エチドカインと、それらの医薬的に許容される塩、水和物、及び／又は溶媒和物が含まれる。好ましくは、アミノアミドは、ブピバカイン、レボブピバカイン、及び／又はロピバカインである。より好ましくは、アミノアミドは、ブピバカイン及び／又はレボブピバカインである。最も好ましくは、アミノアミドは、ブピバカインである。好ましくは、ブピバカインは、ブピバカイン遊離塩基である。好ましくは、レボブピバカインは、レボブピバカイン遊離塩基である。
【００１５】
ブピバカインは、２種の立体異性体のラセミ混合物である。ロピバカインもレボブピバカインも、光学的に純粋な物質（単一エナンチオマー）として入手可能である。ブピバカイン、ロピバカイン、及びレボブピバカインのｐＫａは、類似している（約８．１）。しかしながら、クリアランス率は異なり、ロピバカイン、ブピバカイン、レボブピバカインの順により速く消失する（約０．７２Ｌ／分＞０．５８Ｌ／分＞０．３２Ｌ／分）［Adams AP, Grounds RM, Cashman Jeremy N. Recent Advances and Intensive Care, Inc. NetLibrary, 2002］。
【００１６】
医薬的に許容される塩、水和物、及び／又は溶媒和物は、このアミノアミド麻酔薬の遊離塩基とは異なる特性を有する場合がある。遊離塩基バージョンの使用は、医薬的に許容される塩、水和物、及び／又は溶媒和物に優る利点を提供する場合がある。例えば、ブピバカイン遊離塩基は、ｐＨ７．０とｐＨ９．０の間の水溶液系において、室温でブピバカインＨＣｌより溶けない［Shah JC and Maniar JJ. J. Contr. Rel., 23, 261-270 (1993)］。例えばブピバカイン遊離塩基のような、溶解性の低いアミノアミド麻酔薬の使用は、哺乳動物の体内のような水溶液系において、より遅い速度で溶解して、それ故に適用部位に存続し続けて延長された鎮痛効果をもたらすことによって、追加の鎮痛利益を提供する場合がある。
【００１７】
生体適合性ポリマー
当該粒子の組成物は、生体適合性ポリマーも含有し得る。生体適合性ポリマーは、生分解性、生体内分解性、吸収性、及び／又は溶解性であり得る。いくつかの態様において、本明細書に記載される薬物粒子を生成するために使用されるポリマー材料は、生分解性である。いくつかの態様において、ポリマー材料は、アミノアミド麻酔薬剤の経時的な持続放出を提供する、粒子の凝集を抑制する、医薬物質の安定性を高める、これらの組合せ、等をする、ポリ乳酸、グリコール酸、及びこれらの共重合体の任意の組合せであってよい。
【００１８】
薬物粒子における使用に適したポリマー材料又は組成物には、身体の機能又は生理との実質的な干渉を引き起こさないように、哺乳動物の身体と適合可能であって、生体適合性である材料が含まれる。そのようなポリマー材料は、生分解性、生体内分解性、又は生分解性と生体内分解性の両方であり得る。
【００１９】
特別な態様において、有用なポリマー材料の例には、限定無しに、有機エステル及び有機エーテルより誘導される、及び／又はそれらが含まれるような材料が含まれ、それらは、分解されるときに、生理学的に許容される分解産物をもたらす。また、無水物、アミド、オルトエステル、等より誘導される、及び／又はそれらが含まれるポリマー材料は、それ自体でも、他のモノマーとの組合せにおいても、本開示に有用である場合がある。ポリマー材料は、付加重合体でも縮合重合体でもよい。ポリマー材料は、架橋結合型でも非架橋結合型でもよい。ある態様では、該ポリマーに、炭素と水素以外に、酸素と窒素の少なくとも一方が含まれる場合がある。酸素は、オキシ（例、ヒドロキシ）又はエーテル）、カルボニル（例、カルボン酸エステルのような、非オキソカルボニル）、等として存在し得る。窒素は、アミド、シアノ、及びアミノとして存在し得る。
【００２０】
１つの態様では、ホモ重合体又は共重合体のいずれかのヒドロキシ脂肪族カルボン酸ポリマー（例、ポリエステル類）が当該粒子に有用である。ポリエステル類には、Ｄ−乳酸、Ｌ−乳酸、ラセミ乳酸、グリコール酸、ポリカプロラクトンのポリマー、これらの共重合体、及びこれらの組合せが含まれ得る。
【００２１】
本開示の態様に使用のためのポリマー又はポリマー材料のいくつかの特徴には、生体適合性、選択されるアミノアミド麻酔薬との適合性；本明細書に記載される粒子送達系の作製時における該ポリマーの使用の容易さ、及び所望される持続放出プロフィールが含まれ得る。
【００２２】
１つの態様において、該粒子を製造するために使用される生分解性ポリマーマトリックスは、合成脂肪族ポリエステル、例えば、乳酸及び／又はグリコール酸のポリマーであって、ポリ−（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリ−（Ｄ−ラクチド）、ポリ−（Ｌ−ラクチド）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、及び／又は共重合体のポリ−（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）が含まれる。
【００２３】
ＰＬＧＡは、グリコール酸と乳酸の環式二量体のランダム開環共重合を介して合成される。グリコール酸又は乳酸の連続モノマー単位をエステル結合によって一緒に連結する。ラクチド対グリコリドの比は、変化させることが可能であって、生成物の生分解特性を改変させる。その比を変化させることによって、ポリマー分解時間を設計することが可能である。限定されないが、分子量、固有粘度、及び結晶性が含まれる、生体適合性ポリマーの追加の特徴も調節し得る。重要にも、薬物の放出特性は、生分解速度、分子量、及び薬物送達系における結晶性の度合いによって影響を受ける。生分解性ポリマーを変化させてカスタマイズすることによって、薬物粒子の薬物送達プロフィールを変化させることができる。
【００２４】
ＰＬＡ、ＰＧＡ、及びＰＬＧＡは、周囲組織中の水分の存在時に、ポリマーマトリックス全体にあるそのエステル結合の非酵素的加水分解によって主に切断される。ＰＬＡ、ＰＧＡ、及びＰＬＧＡポリマーが生体適合性であるのは、それらが身体中で骨格加水分解を受けて、天然の代謝産物とみなされる、元のモノマー、乳酸、及び／又はグリコール酸を産生するからである。乳酸とグリコール酸は、無害であって、クレブス回路を介した二酸化炭素と水への変換によって安全に消失される。ＰＬＡ、ＰＧＡ、及びＰＬＧＡポリマーの生体適合性については、動物とヒトの組織において検証されてきた。この知見は、当該ポリマーが十分に忍容されることを示している。
【００２５】
本開示の態様において利用し得る、ＰＬＡポリマーの例には、限定されないが、Ｒ２０７Ｓ、Ｒ２０２Ｓ、Ｒ２０２Ｈ、Ｒ２０３Ｓ、Ｒ２０３Ｈ、Ｒ２０５Ｓ、Ｒ２０８、Ｒ２０６、及びＲ１０４として識別される、Evonik Industries より入手可能なＲＥＳＯＭＥＲ（登録商標）製品ラインが限定されないが含まれる。好適なＰＬＡポリマーの例には、ウベローデ（Ubbelhode）（サイズ０Ｃ）ガラス毛細管粘度計を用いて２５℃でのＣＨＣｌ３中０．１％（ｗ／ｖ）で測定されるときに、固有粘度がほぼ０．１５ｄＬ／ｇ〜ほぼ２．２ｄＬ／ｇに及ぶ、酸末端ポリマーとエステル末端ポリマーがともに含まれる。
【００２６】
本開示の態様において利用し得る、ＰＬＧＡポリマーの例には、限定されないが、ＲＧ５０２、ＲＧ５０２Ｈ、ＲＧ５０３、ＲＧ５０３Ｈ、ＲＧ５０４、ＲＧ５０４Ｈ、ＲＧ５０５、ＲＧ５０６、ＲＧ６５３Ｈ、ＲＧ７５２Ｈ、ＲＧ７５２Ｓ、ＲＧ７５３Ｈ、ＲＧ７５３Ｓ、ＲＧ７５５、ＲＧ７５５Ｓ、ＲＧ７５６、ＲＧ７５６Ｓ、ＲＧ７５７Ｓ、ＲＧ７５０Ｓ、ＲＧ８５８、及びＲＧ８５８Ｓとして識別される、Evonik Industries 由来のＲＥＳＯＭＥＲ（登録商標）製品ラインが限定されないが含まれる。このようなＰＬＧＡポリマーには、ウベローデ（サイズ０Ｃ）ガラス毛細管粘度計を用いて２５℃でのＣＨＣｌ３中０．１％（ｗ／ｖ）で測定されるときに、固有粘度がほぼ０．１４ｄＬ／ｇ〜ほぼ１．７ｄＬ／ｇに及ぶ、酸末端ポリマーとエステル末端ポリマーがともに含まれる。本開示の様々な態様において使用されるポリマーの例には、Ｄ，Ｌ−ラクチド対グリコリドのモル比がほぼ５０：５０〜ほぼ８５：１５（限定されないが、５０：５０．６５：３５、７５：２５、及び８５：１５並びにその間にある比、例えば、５５：４５、等が含まれる）に変動するものが含まれ得る。
【００２７】
様々なＤ，Ｌ−ラクチド−グリコリド比で様々な分子量のＰＬＧＡの合成は、可能である。１つの態様では、ほぼ４８：５２〜５２：４８（Ｄ，Ｌ−ラクチド：グリコリド）のモル比を有して、ウベローデ（サイズ０Ｃ）ガラス毛細管粘度計を用いて２５℃でのＣＨＣｌ３中０．１％（ｗ／ｖ）で測定されるときに、固有粘度がほぼ０．１６ｄｌ／ｇ〜ほぼ０．２４ｄｌ／ｇである、ＲＥＳＯＭＥＲ（登録商標）ＲＧ５０２ＨのようなＰＬＧＡを使用し得る。
【００２８】
アミノアミド麻酔薬剤の放出速度を制御する主要なポリマー特性のいくつかは、分子量分布、ポリマー末端基（即ち、酸又はエステル）、及び薬物粒子組成物中のポリマー及び／又は共重合体の比率である。本開示は、上記特性の１以上を操作することによって望ましい治療薬剤（例えば、限定されないが、アミノアミド麻酔薬）の放出特性を保有する、薬物粒子組成物の諸例を提供する。
【００２９】
薬物粒子の組成物を生成するために含まれる生分解性ポリマー材料は、酵素的又は加水分解的な不安定性にしばしば影響される。水溶性ポリマーを加水分解性又は生分解性の不安定な架橋と架橋結合させて、有用な非水溶性ポリマーを提供することができる。安定性の度合いは、モノマーの選択、ホモ重合体又は共重合体のいずれが利用されるか、ポリマーの混合物を利用するか、及びポリマーに末端酸基が含まれるかどうかに依って、広汎に変化する可能性がある。
【００３０】
ポリマーの生分解、ひいては活性薬剤の薬物粒子からの延長放出プロフィールを制御するのに同じく重要であるのは、薬物粒子に利用されるポリマー組成物の相対平均分子量である。例えばアミノアミド麻酔薬のような、少なくとも１つの活性薬剤の放出プロフィールを調節するために、異なる分子量の同じ又は異なるポリマー組成物を含めてよい。
【００３１】
粒子組成物
アミノアミド麻酔薬は、粒子中へ多様な濃度で製剤化し得る。アミノアミド麻酔薬は、粒子の５〜１００重量％の間を含み得る。本発明の代替態様において、アミノアミド麻酔薬は、粒子の２０重量％〜９９重量％の間を含む。さらなる代替態様において、アミノアミド麻酔薬は、粒子の３０重量％〜６０重量％の間を含む。ある態様において、粒子の麻酔薬成分の重量％は、粒子の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、９５、９９、及び１００重量％の間を含むように選択される。ある態様において、アミノアミド麻酔薬は、ブピバカインを含む。別の態様において、アミノアミド麻酔薬は、レボブピバカインを含む。特別な態様において、アミノアミド麻酔薬は、ロピバカインを含む。ある態様において、アミノアミド麻酔薬は、粒子の９０、９５、９９、及び１００重量％の間を含んでなるブピバカインを含む。ある態様において、アミノアミド麻酔薬は、粒子の４０、５０、及び６０重量％の間を含んでなるブピバカインを含む。ある態様において、アミノアミド麻酔薬は、粒子の４０重量％と６０重量％の間を含んでなるブピバカインを含む。ある態様において、アミノアミド麻酔薬は、粒子の５０重量％と６０重量％の間を含んでなるブピバカインを含む。ある態様において、アミノアミド麻酔薬は、粒子の９０、９５、９９、及び１００重量％の間を含んでなるレボブピバカインを含む。好ましくは、ブピバカイン及び／又はレボブピバカインは、遊離塩基である。
【００３２】
アミノアミド麻酔薬単独より多くの成分が粒子に含まれる、本発明の態様によれば、粒子組成物の残余（balance）は、生体適合性ポリマーを含む。生体適合性ポリマーは、粒子の残余を含み得るので、本発明によれば、粒子ストック溶液（本明細書に記載する）中の麻酔薬負荷重量％に依存して、粒子の９９〜１重量％の間に及び得る。いくつかの態様において、生体適合性ポリマーは、粒子の９９、９５、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、５、４、３、２、及び１重量％の間を含む可能性がある。好ましい態様において、生体適合性ポリマーは、ＰＬＡ及び／又はＰＬＧＡである。特別な態様において、ＰＬＧＡは、ほぼ４８：５２〜５２：４８（Ｄ，Ｌ−ラクチド：グリコリド）のモル比と、ウベローデ（サイズ０Ｃ）ガラス毛細管粘度計を用いて２５℃でのＣＨＣｌ３中０．１％（ｗ／ｖ）で測定されるときに、ほぼ０．１６ｄｌ／ｇ〜ほぼ０．２４ｄｌ／ｇの固有粘度を含む。１つの態様において、ＰＬＧＡは、Ｒｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ５０２Ｈ又はＲｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ５０２を含む。１つの態様において、ＰＬＧＡは、Ｒｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ５０２Ｈを含む。
【００３３】
１つの態様において、アミノアミド麻酔薬は、ブピバカイン遊離塩基を含み、そしてＰＬＧＡポリマーは、ほぼ４８：５２〜５２：４８（Ｄ，Ｌ−ラクチド：グリコリド）のモル比と、ウベローデ（サイズ０Ｃ）ガラス毛細管粘度計を用いて２５℃でのＣＨＣｌ３中０．１％（ｗ／ｖ）で測定されるときに、ほぼ０．１６ｄｌ／ｇ〜ほぼ０．２４ｄｌ／ｇの固有粘度を含む。１つの態様において、アミノアミド麻酔薬は、ブピバカイン遊離塩基を含み、そしてＰＬＧＡポリマーは、Ｒｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ５０２Ｈを含む。１つの態様において、アミノアミド麻酔薬は、ブピバカイン遊離塩基を約５０〜６０重量％で含み、そしてＰＬＧＡポリマーは、ほぼ４８：５２〜５２：４８（Ｄ，Ｌ−ラクチド：グリコリド）のモル比と、（ウベローデ（サイズ０Ｃ）ガラス毛細管粘度計を用いて２５℃でのＣＨＣｌ３中０．１％（ｗ／ｖ）で測定されるときに）ほぼ０．１６ｄｌ／ｇ〜ほぼ０．２４ｄｌ／ｇの固有粘度を含んで、粒子中に約４０〜５０重量％で存在する。特別な態様では、ブピバカイン遊離塩基を約６０重量％で含んでなり、そしてほぼ４８：５２〜５２：４８（Ｄ，Ｌ−ラクチド：グリコリド）のモル比と（ウベローデ（サイズ０Ｃ）ガラス毛細管粘度計を用いて２５℃でのＣＨＣｌ３中０．１％（ｗ／ｖ）で測定されるときに）ほぼ０．１６ｄｌ／ｇ〜ほぼ０．２４ｄｌ／ｇの固有粘度を含むＰＬＧＡポリマーを約４０重量％で含んでなる、アセトン中の粒子ストック溶液から粒子が製造される。粒子は、本明細書に含まれる方法及び材料に従って製造される。
【００３４】
いくつかの態様において、本発明の薬物粒子には、ブピバカインが約４０％〜６０重量％、４２％〜５８重量％、４４％〜５６重量％、４６％〜５４重量％、又は４８％〜５２重量％で含まれる。いくつかの態様において、本発明の薬物粒子には、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）が約４０％〜６０重量％、４２％〜５８重量％、４４％〜５６重量％、４６％〜５４重量％、又は４８％〜５２重量％で含まれる。
【００３５】
いくつかの態様において、活性薬剤は、粒子のポリマーマトリックスに混入した、非晶状態にある。代替態様において、活性薬剤は、粒子のポリマーマトリックスと混合した、結晶形態にある。いくつかの態様において、ポリマーマトリックス材料は、分解して、その分解が活性薬剤の放出を支援する。いくつかの態様において、粒子は、約１００パーセントが結晶形の活性薬剤である。
【００３６】
いくつかの態様において、活性薬剤（アミノアミド麻酔薬）は、１種より多い結晶形又は多形を含む。例えば、これまでの研究では、結晶性ブピバカイン遊離塩基の２形態が同定されてきた：熱力学的に安定な形態であると報告されている結晶形Ｉ（Form I）と、準安定的な結晶形ＩＩ（Form II）である。これら２つの形態は、モノトロピー的に（monotropically）関連していると考えられる。準安定的な結晶形ＩＩから熱力学的に安定した結晶形Ｉへの変換は、可逆的ではない。結晶性ブピバカイン遊離塩基は、薬物粒子において、結晶形Ｉ、結晶形ＩＩ、及び／又は結晶形Ｉと結晶形ＩＩで存在し得る。結晶性ブピバカイン遊離塩基は、粒子ストック溶液を生成するために溶媒に溶かす前は、結晶形Ｉのような１つの形態であってよい。結晶性ブピバカイン遊離塩基は、この粒子ストック溶液より薬物粒子が製造されたならば、同じ結晶形を含み得る。例えば、結晶性ブピバカイン遊離塩基は、粒子ストック溶液を生成するために溶媒に溶かす前は、結晶形Ｉであり得る。結晶性ブピバカイン遊離塩基は、粒子ストック溶液より薬物粒子が製造されて、活性薬剤（ブピバカイン遊離塩基）が再結晶するならば、異なる結晶形を含み得る。例えば、結晶性ブピバカイン遊離塩基は、粒子ストック溶液に溶かす前は、結晶形Ｉを含み得て、薬物粒子が製造されたならば、結晶形ＩＩを含み得る。活性薬剤は、粒子ストック溶液より薬物粒子が製造されて、活性薬剤が再結晶するならば、１種より多い結晶形を含み得る。例えば、結晶性ブピバカイン遊離塩基は、粒子ストック溶液に溶かす前は、結晶形Ｉを含み得て、薬物粒子が製造されたならば、結晶形Ｉと結晶形ＩＩを含む。
【００３７】
薬物粒子中の活性薬剤の結晶形及び／又は結晶形比は、経時的に変化し得る。薬物粒子中の活性薬剤の結晶形及び／又は結晶形比は、異なる保存条件下の異なる割合で経時的に変化し得る。例えば、ブピバカイン遊離塩基は、薬物粒子へ製造された後で、４０％未満の結晶形Ｉを含み得る。いくつかの態様において、薬物粒子は、約５０％〜約７０％の結晶形Ｉを含有する。いくつかの態様において、薬物粒子は、約５５％〜約７０％の結晶形Ｉを含有する。いくつかの態様において、薬物粒子は、約６４±５％の結晶形Ｉを含有する。保存の間に、ブピバカイン遊離塩基は、準安定的な結晶形ＩＩから熱力学的に安定な結晶形Ｉへ変換する場合がある。−２０℃、２〜８℃、又は２５℃／６０％の相対湿度といった異なる条件で保存されるならば、準安定的な結晶形ＩＩから熱力学的に安定な結晶形Ｉへのブピバカイン遊離塩基の変換は、より高い温度で加速される場合がある。いくつかの態様では、本明細書に開示されて組み込まれる方法及び材料に従って製造される、ＰＬＧＡがその薬物粒子組成物に含まれる薬物粒子は、一定の結晶形比を経時的に明示し得る。
【００３８】
媒体
粒子は、製造されたまま、即ち乾燥状態で送達しても、媒体中での懸濁に続いて送達してもよい。媒体に望まれる特性には、限定されないが、生体適合性、粒子を分散させる能力、使用中の懸濁安定性、内腔を含有するデバイス（例、シリンジ）全体に表出される（expressed）能力、ｐＨを生理学的範囲に維持する能力、及び浸透圧を維持する能力が含まれる。媒体に適した粘度範囲は、約２０〜２，０００ｃｐｓである。いくつかの態様において、粘度は、約３０〜１，０００ｃｐｓである。いくつかの態様において、粘度は、約３０〜５００ｃｐｓである。いくつかの態様において、粘度は、約２５０〜４５０ｃｐｓである。いくつかの態様において、粘度は、約３２５〜３７５ｃｐｓである。いくつかの態様において、粘度は、約２０ｃｐｓ〜２００ｃｐｓである。いくつかの態様において、粘度は、約２０ｃｐｓ〜１００ｃｐｓである。いくつかの態様において、粘度は、約２０ｃｐｓ〜５０ｃｐｓである。いくつかの態様において、粘度は、約３０ｃｐｓ〜５０ｃｐｓである。いくつかの態様において、粘度は、約４０ｃｐｓである。
【００３９】
材料を患者へ送達するのに使用される媒体は、ほとんどの場合、水性である。典型的な媒体は、生理食塩水、リン酸塩、トリス（Tris）、ホウ酸塩、コハク酸塩、ヒスチジン、クエン酸塩、又はマレイン酸塩緩衝剤といった緩衝剤中に、１種以上の生理学的に許容される成分を含有し得る。使用中の懸濁安定性を向上させるために、粘度調整剤を加えてよい。ｐＨを生理学的に許容される範囲に維持するために、様々な緩衝剤を加えてよい。浸透圧を生理学的に許容される範囲に維持するために、等張化剤を加えてよい。粒子と媒体の間の表面張力を低下させて媒体中への粒子の分散を容易にして向上させるために、界面活性剤又は湿潤剤を加えてよい。
【００４０】
粘度調整剤の例には、様々なポリマー材料が含まれて、限定されないが、ポロキサマー、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ヒアルロン酸ベースのポリマー、及びヒアルロン酸塩が含まれる。媒体の粘度を高めるために、粘度調整剤を加えてよい。その粘度は、所与の分子量の粘度調整剤をより多く又はより少なく取り込むことによって、変化させてよい。粘度は、分子量がより高いか又はより低い所与の粘度調整剤を所与の重量パーセントで取り込むことによって、変化させてよい。いくつかの態様では、１種より多い粘度調整剤を使用し得る。いくつかの態様において、粘度調整剤は、媒体の約０．１〜５．０重量％を含む。いくつかの態様において、粘度調整剤は、媒体の約０．２５〜約２．５重量％を含む。いくつかの態様において、粘度調整剤は、媒体の約０．５〜約１．２５重量％を含む。いくつかの態様において、粘度調整剤は、媒体の約０．１〜０．５重量％を含む。いくつかの態様において、粘度調整剤は、媒体の約０．１〜０．３重量％を含む。いくつかの態様において、粘度調整剤は、媒体の約０．２５重量％を含む。いくつかの態様において、粘度調整剤は、ヒアルロン酸ナトリウムを含む。いくつかの態様において、粘度調整剤は、約１．６〜２．２ｍ３／ｋｇの固有粘度を有するヒアルロン酸ナトリウムを含む。いくつかの態様において、粘度調整剤は、約１．６〜２．２ｍ３／ｋｇの固有粘度を有する、約０．５〜１．２５重量％のヒアルロン酸ナトリウムを含む。いくつかの態様において、粘度調整剤は、約１．６〜２．２ｍ３／ｋｇの固有粘度を有する、約０．１〜０．３重量％のヒアルロン酸ナトリウムを含む。
【００４１】
緩衝剤の例には、限定されないが、生理食塩水、リン酸塩、トリス、ホウ酸塩、コハク酸塩、ヒスチジン、クエン酸塩、酢酸塩、酒石酸塩、グルタミン酸塩、グリシン、重炭酸塩、硫酸塩、硝酸塩、ＨＥＰＥＳ、又はマレイン酸塩の緩衝剤が含まれる。緩衝剤は、生理学的に許容されるｐＨを維持するために、媒体に取り込まれる。緩衝剤はまた、特に粒子が媒体中に分散及び／又は懸濁される場合は、あらゆる他の材料の添加の後で、生理学的に許容されるｐＨを維持するべきである。トリスは、２５℃でほぼ８のｐＫａを有するので、トリス緩衝剤は、有効ｐＨ範囲を７．５と９．０の間に有する。トリスは、酸（トリスＨＣｌ）でも塩基（トリス塩基）でも利用可能である。いくつかの態様において、緩衝剤は、トリス塩基を含む。いくつかの態様において、緩衝剤は、トリスＨＣｌを含む。いくつかの態様において、緩衝剤は、トリス塩基とトリスＨＣｌを含む。いくつかの態様において、緩衝剤は、トリス塩基を含んで、ｐＨ調整は、ＨＣｌを使用してなされる。いくつかの態様において、緩衝剤は、トリス塩基を含んで、ｐＨ調整は、トリスＨＣｌを使用してなされる。いくつかの態様において、緩衝剤は、トリスＨＣｌを含んで、ｐＨ調整は、ＮａＯＨを使用してなされる。いくつかの態様において、緩衝剤は、トリスＨＣｌを含んで、ｐＨ調整は、トリス塩基を使用してなされる。本発明のある態様では、媒体を調製するためにほぼ０．４〜０．８重量％のトリスを使用し得る。本発明の代替態様では、媒体を調製するためにほぼ０．５〜０．７重量％のトリスを使用し得る。さらなる態様では、媒体を調製するためにほぼ０．６１重量％のトリスを使用し得る。いくつかの態様において、媒体のｐＨは、約ｐＨ６．０〜９．０の間にあり得る。いくつかの態様において、媒体のｐＨは、約ｐＨ７．０と８．５の間にあり得る。いくつかの態様において、媒体のｐＨは、約ｐＨ７．５と８．５の間にあり得る。いくつかの態様において、媒体のｐＨは、約７．７と８．３の間にあり得る。いくつかの態様において、媒体のｐＨは、約８．０であり得る。いくつかの態様において、緩衝剤は、トリス塩基とトリスＨＣｌを含んで、そのｐＨは、約７．７と８．３の間にある。
【００４２】
薬物粒子と媒体の間の表面張力を低下させて媒体中への粒子の分散を容易にする、及び／又は向上させるために、界面活性剤又は湿潤剤を加えてよい。界面活性剤は、陽イオン性、陰イオン性、双性イオン性、又は非イオン性であり得る。例示の陽イオン性界面活性剤には、ドクサート（スルホコハク酸ジオクチルナトリウム）が含まれる。例示の非イオン性界面活性剤及び湿潤剤には、ポリソルベート（ポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル類）、デオキシコール酸ナトリウム、及びポロキサマー（ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのブロック共重合体）が含まれる。ポリソルベートの例には、ポリソルベート２０とポリソルベート８０が含まれる。いくつかの態様において、界面活性剤又は湿潤剤は、媒体の約０．００１〜１．０重量％を含み得る。いくつかの態様において、界面活性剤又は湿潤剤は、媒体の約０．０１〜１．０重量％を含み得る。いくつかの態様において、界面活性剤又は湿潤剤は、媒体の約０．０５〜０．５重量％を含み得る。いくつかの態様において、界面活性剤又は湿潤剤は、媒体の約０．０５〜０．２５重量％を含み得る。いくつかの態様において、界面活性剤又は湿潤剤は、媒体の約０．０５〜０．１５重量％を含み得る。いくつかの態様において、界面活性剤又は湿潤剤は、媒体の約０．１重量％を含み得る。いくつかの態様において、界面活性剤又は湿潤剤は、ポリソルベート８０を含む。いくつかの態様において、界面活性剤又は湿潤剤は、約０．０５〜０．１５重量％のポリソルベート８０を含む。
【００４３】
媒体の浸透圧を変化させるために様々な物質を加えてよい。いくつかの態様において、その浸透圧は、約２００ｍＯｓ／ｋｇと４００ｍＯｓ／ｋｇの間にある。いくつかの態様において、浸透圧は、約２５０ｍＯｓ／ｋｇと３５０ｍＯｓ／ｋｇの間にある。媒体の浸透圧を調整するために、媒体へ等張化剤を加えてよい。選択される等張化剤に依存して、約０．２〜５．０重量％を使用し得る。等張化剤は、生体適合性であるべきである。等張化剤は、イオン性の物質でも非イオン性の物質でもよい。等張化剤の例には、限定されないが、糖類、糖アルコール類、及び塩類が含まれる。糖類の例には、限定されないが、乳糖、デキストロース、ショ糖、ブドウ糖、及びトレハロースが含まれる。糖アルコール類の例には、限定されないが、マンニトール、ソルビトール、及びグリセリンが含まれる。塩類の例には、限定されないが、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、及びリン酸カリウムが含まれる。いくつかの態様において、等張化剤は、塩である。いくつかの態様において、等張化剤は、塩化ナトリウムである。いくつかの態様において、等張化剤は、約０．４〜０．６重量％の塩化ナトリウムを含む。いくつかの態様において、等張化剤は、糖である。いくつかの態様において、等張化剤は、糖であって、乳糖、デキストロース、ショ糖、ブドウ糖、及びトレハロースからなる群より選択される。いくつかの態様において、等張化剤は、糖アルコールである。いくつかの態様において、等張化剤は、糖アルコールであって、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、及びグリセリンからなる群より選択される。いくつかの態様において、等張化剤は、糖アルコールであって、マンニトール又はソルビトールである。いくつかの態様において、等張化剤は、マンニトール、ソルビトール、デキストロース、ＰＶＰ、又は塩化ナトリウムである。いくつかの態様において、等張化剤は、マンニトールである。いくつかの態様において、等張化剤は、約４重量％のマンニトールを含む。
【００４４】
媒体と付属の包装品は、好ましくは、患者における使用に先立って滅菌される。様々な滅菌法が利用可能であって、限定されないが、乾熱滅菌、高圧蒸気滅菌、電子ビーム、γ線、酸化エチレン、蒸気化過酸化水素、及び超臨界二酸化炭素が含まれる。媒体は、濾過のような無菌操作を使用して製造し得て、無菌室において無菌容器中へ包装され得る。媒体は、バルクで滅菌して、無菌の単回投与容器へ無菌的に分配し得る。好適な単回投与容器には、限定されないが、バイアル、ブリスター、アンプル、ボトル、バッグ、及びシリンジが含まれる。媒体は、単回投与容器へ分配し得て、その後媒体と包装品は、最終的に滅菌される。使用される滅菌法は、媒体成分、並びに選択される包装品に依存するものである。
【００４５】
いくつかの態様において、媒体は、約０．７〜１．３重量％の粘度調整剤、約０．６重量％の等張化剤、約０．１重量％の界面活性剤、及び約０．６重量％の緩衝剤を含む。いくつかの態様において、媒体は、約０．７〜１．３重量％の粘度調整剤、約０．６重量％の等張化剤、約０．１重量％の界面活性剤、約０．６重量％の緩衝剤を含んで、ｐＨは、約７．７〜８．３である。いくつかの態様において、媒体は、約０．７〜１．３重量％の粘度調整剤、約０．６重量％の等張化剤、約０．１重量％の界面活性剤、約０．６重量％の緩衝剤を含み、ｐＨは、約７．７〜８．３であって、粘度は、約５０〜５００ｃｐｓである。いくつかの態様において、媒体は、約０．７〜１．３重量％の粘度調整剤、約０．６重量％の等張化剤、約０．１重量％の界面活性剤、約０．６重量％の緩衝剤を含み、ｐＨは、約７．７〜８．３であり、粘度は、約５０〜５００ｃｐｓであり、そして媒体は、高圧蒸気滅菌を使用して滅菌される。
【００４６】
いくつかの態様において、媒体は、約０．７〜１．３重量％のヒアルロン酸ナトリウム、約０．６重量％の塩化ナトリウム、約０．１重量％のポリソルベート８０、及び約０．６重量％のトリスを含む。いくつかの態様において、媒体は、約０．７〜１．３重量％のヒアルロン酸ナトリウム、約０．６重量％の塩化ナトリウム、約０．１重量％のポリソルベート８０、約０．６重量％のトリスを含んで、ｐＨは、約７．７〜８．３である。いくつかの態様において、媒体は、約０．７〜１．３重量％のヒアルロン酸ナトリウム、約０．６重量％の塩化ナトリウム、約０．１重量％のポリソルベート８０、約０．６重量％のトリスを含み、ｐＨは、約７．７〜８．３であって、粘度は、約５０〜５００ｃｐｓである。いくつかの態様において、媒体は、約０．７〜１．３重量％のヒアルロン酸ナトリウム、約０．６重量％の塩化ナトリウム、約０．１重量％のポリソルベート８０、約０．６重量％のトリスを含み、ｐＨは、約７．７〜８．３であり、粘度は、約５０〜５００ｃｐｓであり、そして媒体は、高圧蒸気滅菌を使用して滅菌される。
【００４７】
いくつかの態様において、媒体は、約０．１〜０．３重量％の粘度調整剤、約４．０重量％の等張化剤、約０．１重量％の界面活性剤、及び約０．６重量％の緩衝剤を含む。いくつかの態様において、媒体は、約０．１〜０．３重量％の粘度調整剤、約４．０重量％の等張化剤、約０．１重量％の界面活性剤、約０．６重量％の緩衝剤を含んで、ｐＨは、約７．７〜８．３である。いくつかの態様において、媒体は、約０．１〜０．３重量％の粘度調整剤、約４．０重量％の等張化剤、約０．１重量％の界面活性剤、約０．６重量％の緩衝剤を含み、ｐＨは、約７．７〜８．３であって、粘度は、約３０〜５０ｃｐｓである。いくつかの態様において、媒体は、約０．１〜０．３重量％の粘度調整剤、約４．０重量％の等張化剤、約０．１重量％の界面活性剤、約０．６重量％の緩衝剤を含み、ｐＨは、約７．７〜８．３であり、粘度は、約３０〜５０ｃｐｓであり、そして媒体は、除菌濾過を使用して滅菌される。
【００４８】
いくつかの態様において、媒体は、約０．１〜０．３重量％のヒアルロン酸ナトリウム、約４．０重量％のマンニトール、約０．１重量％のポリソルベート８０、及び約０．６重量％のトリスを含む。いくつかの態様において、媒体は、約０．１〜０．３重量％のヒアルロン酸ナトリウム、約４．０重量％のマンニトール、約０．１重量％のポリソルベート８０、約０．６重量％のトリスを含んで、ｐＨは、約７．７〜８．３である。いくつかの態様において、媒体は、約０．１〜０．３重量％のヒアルロン酸ナトリウム、約４．０重量％のマンニトール、約０．１重量％のポリソルベート８０、約０．６重量％のトリスを含み、ｐＨは、約７．７〜８．３であって、粘度は、約３０〜５０ｃｐｓである。いくつかの態様において、媒体は、約０．１〜０．３重量％のヒアルロン酸ナトリウム、約４．０重量％のマンニトール、約０．１重量％のポリソルベート８０、約０．６重量％のトリスを含み、ｐＨは、約７．７〜８．３であり、粘度は、約３０〜５０ｃｐｓであり、そして媒体は、除菌濾過を使用して滅菌される。
【００４９】
本発明の代替態様において、媒体は、追加の界面活性剤成分を含む。いくつかの態様では、本発明の媒体へ界面活性剤としてドクサートナトリウムを加える。いくつかの態様では、媒体へ界面活性剤としてデオキシコール酸ナトリウムを加える。いくつかの態様では、媒体へ界面活性剤系としてドクサートナトリウムとデオキシコール酸ナトリウムをともに加える。いくつかの態様において、界面活性剤系には、約０．０１５重量％未満のドクサートナトリウムと約０．１重量％未満のデオキシコール酸ナトリウムが含まれる。ドクサートナトリウムが含まれるいくつかの態様によれば、アルコール共溶媒も媒体に含めてよい。ドクサートナトリウムとともに使用される共溶媒は、エタノール、ベンジルアルコール、グリセリン、及び他の適正なアルコールより選択される。特別な態様において、共溶媒は、エタノールである。エタノールを共溶媒として利用するいくつかの態様では、それを媒体全体に対して約５％未満まで含めてよい。エタノールを共溶媒として利用するいくつかの態様では、それを媒体全体に対して約２％未満まで含めてよい。エタノールを共溶媒として利用するいくつかの態様では、それを媒体全体に対して約１％未満まで含めてよい．特別な態様において、共溶媒はエタノールであって、媒体全体に対して約０．１％〜０．５％の間含まれる。重要にも、媒体の張度は、等張の媒体溶液を維持するために調整されて、緩衝剤は、注射に適したｐＨを維持するために調整される。
【００５０】
ＰＲＩＮＴ技術
当該薬物粒子を生産するには、様々な方法を使用し得る。方法には、限定されないが、溶液流延、相分離、界面法、成形、圧縮成形、射出成形、押出、共押出、加熱押出、金型鋳造、加熱圧縮、及びこれらの組合せが含まれる。ある態様において、薬物粒子は、好ましくは高分子モールドを使用して、成形される。
【００５１】
特別な態様において、本開示の粒子は、ＰＲＩＮＴ（登録商標）技術（Liquidia Technologies 社、ノースカロライナ州モリスビル）粒子製造法を使用して製造される。特に、該粒子は、粒子を作製するように企図された材料をモールド穴において成形することによって、作製される。
【００５２】
モールドは、ポリマーベースのモールドであり得て、モールド穴は、所望される任意の形状及び寸法へ成形される。独特にも、粒子がモールド穴の中で成形される場合、該粒子は、形状、寸法、及び組成に関して、きわめて均質である。本組成物の粒子の物的構造（makeup）及び組成構造にある整合性の故に、本開示の組成物は、きわめて均質な放出速度及び投与範囲を提供する。本開示の粒子を製造するための方法及び材料については、そのそれぞれがそれらの全体において参照により本明細書に組み込まれる、以下の交付済み特許と同時係属中の特許出願にさらに記載されて開示されている：米国特許番号：８，５１８，３１６；８，４４４，９０７；８，４２０，１２４；８，２６８，４４６；８，２６３，１２９；８，１５８，７２８；８，１２８，３９３；７，９７６，７５９；米国特許出願公開公報番号：２０１３−０２４９１３８、２０１３−０２４１１０７、２０１３−０２２８９５０、２０１３−０２０２７２９、２０１３−００１１６１８、２０１３−０２５６３５４、２０１２−０１８９７２８、２０１０−０００３２９１、２００９−０１６５３２０、２００８−０１３１６９２；及び出願中の米国特許出願番号：１３／８５２，６８３（２０１３年３月２８日出願）と１３／９５０，４４７（２０１３年７月２５日出願）。加えて、そのそれぞれがそれらの全体において参照により本明細書に組み込まれる、以下の仮特許出願：６２／３３２，０１５（２０１６年５月５日出願）；６２／４４０，０８８（２０１６年１２月２９日出願）；６２／４４２，３１８（２０１７年１月６日出願）；６２／４６３，２０６（２０１７年２月２４日出願）；及び６２／４７２，８８５（２０１７年３月１７日出願）。
【００５３】
本発明の薬物粒子を作製するために製造されるモールドは、参照されて組み込まれる先の特許技術に記載されている、薄膜ロール・ツー・ロールモールド（roll-to-roll molds）である。この薄膜モールドには、参照されて組み込まれる先の特許技術にも概して記載されているような、ポリマーモールド層をそれへ貼り付けるタイ層（tie-layer）を有するＰＥＴ支持層が含まれる。いくつかの態様において、このタイ層には、無水マレイン酸が含まれる。
【００５４】
モールド穴は、様々な形状及び寸法へ成形することができる。例えば、この穴は、柱形、四角柱、三角柱、六角柱、錐形、四角錐、三角錐、立方体、円錐、円柱、円環、又は棒形として成形し得る。モールド内の穴は、同じ形状を有しても、異なる形状を有してもよい。モールド穴の内部で粒子が成形されて、その粒子の形状は、モールド穴の形状を模倣する。本開示のある側面において、粒子の形状は、柱形、四角柱、又は六角柱である。柱形は、直角柱、及び／又は正直角柱であり得る。特別な態様において、粒子は、正六角柱である。いくつかの態様において、粒子は、横断面において、図面１Ｃに示されるように、実質的に矩形の形状によって規定される。
【００５５】
モールド穴は、ナノメートル〜マイクロメートルの寸法とそれ以上の大きさであり得る。本開示のある態様では、モールド穴がナノメートルとマイクロメートルの範囲で寸法をとる。例えば、穴は、ほぼ５０ナノメートルとほぼ１００μｍの間の寸法をとり得る。いくつかの側面において、モールド穴の寸法は、ほぼ１０μｍとほぼ５０μｍの間であり得る。他の側面において、モールド穴の寸法は、ほぼ２０μｍとほぼ３０μｍの間であり得る。この寸法は、最大寸法であっても、最小寸法であってもよい。
【００５６】
いくつかの態様において、本発明の粒子は、特定の形状、及び／又は特定のアスペクト比で工学的に処理することができる。アスペクト比は、粒子の長軸の短軸に対する比を意味する。いくつかの態様では、表面積対体積比が小さい粒子形状が好ましい。小さな表面積対体積比の利益には、溶解速度の低下と製造収率の改善が含まれる。
【００５７】
製造したならば、該粒子は、保存用のアレイ上に留めても、保存用のモールド中に留めても、保存及び／又は利用のために直ちに採取してもよい。粒子は、滅菌法を使用して製造しても、製造後に滅菌してもよい。
【００５８】
１つの態様では、高さ２５μｍｘ幅２５μｍの寸法で正六角柱を製造し、ここで幅は、介在頂点がある２つの頂点間の距離を表す。図面１Ａ、図面１Ｂ、及び図面１Ｃは、そのような六角柱を図示する。この六角形面の各辺の長さ（図面１Ｂ中の小文字「ａ」）は、ほぼ１４．４３μｍであると計算される。その表面積は、ほぼ３，０００〜３，５００μｍ２であって、体積は、ほぼ１３，０００〜１４，０００μｍ３である。いくつかの態様において、表面積は、ほぼ３，２５０μｍ２である。いくつかの態様において、体積は、ほぼ１３，５００μｍ３である。表面積対体積比は、ほぼ０．２４であると計算される。六角柱の横断面図を図面１Ｃに示す。
【００５９】
いくつかの態様において、その表面積対体積比は、約０．１〜０．５である。いくつかの態様において、表面積対体積比は、約０．１５〜０．３５である。いくつかの態様において、表面積対体積比は、約０．２〜０．３である。
【００６０】
製造法
粒子を製造するための方法は、一般に、粒子ストック溶液の調製、粒子の製造、採取、篩分け、包装、及び滅菌を含む。
【００６１】
粒子ストック溶液は、アミノアミド麻酔薬、又は該組成物にポリマーも含まれる場合は、アミノアミド麻酔薬と単数又は複数のポリマーを好適な溶媒に溶かして均質溶液を創出することによって調製する。例えば、溶媒として、アセトン、塩化メチレン、アルコール類、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、クロロホルム、及び酢酸エチルを使用し得る。溶媒選択は、選択されるアミノアミド麻酔薬と（該当する場合は）単数又は複数のポリマーに依存するものである。使用に先立って、粒子ストック溶液は、濾過しても、無菌的に濾過してもよい。いくつかの態様において、粒子ストック溶液は、４０〜５０重量％のＰＬＧＡと５０〜６０重量％のブピバカイン遊離塩基のアセトン中固形分３５重量％の均質溶液を含む。ポリマー成分を有さない態様において、粒子ストック溶液は、１００重量％のブピバカイン遊離塩基の塩化メチレン中固形分４０重量％の均質溶液を含む。いくつかの態様において、粒子ストック溶液は、０．２μｍフィルターに通して濾過される。
【００６２】
粒子を製造するために、粒子ストック溶液は、モールドの中へ直接分配してよい。あるいは、粒子ストック溶液は、膜へ塗布し、乾燥させて、加熱及び／又は加圧を使用して、モールドの中へ移してよい。成形後、粒子は、モールドの中に維持しても、モールドから取り出して膜の上で維持しても、膜の上とモールドの中で維持してもよい。いくつかの態様において、粒子ストック溶液は、ＰＶＯＨ採取層で予めコートしたＰＥＴ膜へ塗布して、乾燥させる。乾燥後、ＰＥＴ膜上で乾燥した膜を、所望される粒子の形状及び寸法の穴を有するポリマーモールドへ付けて、ロール・ツー・ロールラミネーター中のニップ点に通すと、それがその乾燥された粒子ストック溶液膜をモールド穴の中へ移す。特別な態様において、この乾燥膜は、本発明の複数の２５μｍ粒子を製造するために、２５μｍの六角形モールドの中へ移される。
【００６３】
製造後、粒子は、依然としてモールドの中にある間に、焼き鈍し処理（annealing process）での採取に先立つ時間帯の間保存してよい。保存は、周囲条件下でも上昇温度でもよい。例えば、保存は、２５℃で２５％の相対湿度であり得る。保存は、４０℃で２５％の相対湿度であり得る。保存は、２０〜２５℃で５〜６０％の相対湿度といった、周囲条件であり得る。保存は、数時間、数日、数週、又は数ヶ月であり得る。保存は、少なくとも、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、又は２４時間であり得る。保存は、少なくとも、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０日間、又はそれ以上の日数であり得る。保存は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２ヶ月間、又はそれ以上であり得る。いくつかの態様では、保存が少なくとも約１０日間である。いくつかの態様では、保存が約１０〜１４日間である。いくつかの態様では、粒子を採取に先立って保存しない。いくつかの態様では、粒子を４０℃で２５％の相対湿度で少なくとも約１０日間保存する。いくつかの態様では、粒子を２５℃で２５％の相対湿度で少なくとも約１０日間保存する。いくつかの態様では、粒子を周囲条件（即ち、２０〜２５℃で５〜６０％の相対湿度）の下で少なくとも約１０日間保存する。
【００６４】
保存後に、又は介在保存がなければ製造後に、粒子を採取する。採取の間、粒子は、モールドから、膜から、及び／又はモールドと膜から取り出される。いくつかの態様において、採取には、機械的採取と溶解採取が含まれる群より選択される方法が含まれる。
【００６５】
溶解採取法では、液剤を使用して粒子を回収する。粒子は、溶解性の基質、シート、又はフィルムより採取される。この溶解性の基質、シート、又はフィルムは、製造プロセスにおいてすでに使用された場合があるか、又はこの溶解性の基質、シート、又はフィルムは、製造プロセス後に粒子へすでに適用された場合がある。溶解性基質には、限定されないが、プルラン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、アルギン酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、キサンタンゴム、トラガカントゴム、グアーゴム、アカシアゴム、アラビアゴム、ポリアクリル酸、メチルメタクリレート共重合体、カルボキシビニルポリマー、アミロース、高アミロースデンプン、ヒドロキシプロピル化高アミロースデンプン、デキストリン、ペクチン、キチン、キトサン、レバン、エルシナン、コラーゲン、ゼラチン、ゼイン、グルテン、大豆タンパク単離物、乳清タンパク単離物、カゼイン、これらの組合せ、等が含まれ得る。例えば、粒子がポリビニルアルコール膜上にあれば、水を使用してこのポリビニルアルコール膜を溶かし得て、この粒子は、濾過を使用して回収し得る。
【００６６】
機械的採取法において、粒子は、スクレイピング（scraping）、ブラッシング（brushing）、等のような機械力を使用して採取される。例えば、刃でのスクレイピングによって、粒子を膜から取り出してよい。
【００６７】
採取後、粒子は、バルク包装しても、単回投与容器中へ包装してもよい。バルク包装される場合、粒子は、フォイルオーバーラップと乾燥剤入りの Tyvek バッグ中に−２０℃で保存され得る。粒子はまた、単回投与容器の中へ分配して保存してよい。好適な容器には、タイプ１チューブクラスから作られるものが含まれる。好適な単回投与容器には、限定されないが、バイアル、ブリスター、アンプル、ボトル、バッグ、及びシリンジが含まれる。単回投与容器へ包装したならば、好ましくは、粒子と付属の包装品は、患者における使用に先立って滅菌される。粒子は、滅菌濾過と無菌室での製造及び包装のような無菌操作を使用して製造され得る。粒子は、バルクで滅菌して、無菌の単回投与容器中へ無菌的に分配し得る。粒子は、単回投与容器中へ分配し、媒体と合わせ、キットへ包装してよく、そして最終的に滅菌される。使用される滅菌法は、粒子成分、並びに選択される包装品に依存するものである。様々な滅菌法が利用可能であって、限定されないが、乾熱滅菌、高圧蒸気滅菌、電子ビーム、γ線、酸化エチレン、蒸気化過酸化水素、及び超臨界二酸化炭素が含まれる。
【００６８】
材料の使用
媒体に分散した薬物粒子及び／又は粒子は、患者において鎮痛を誘導するために使用され得る。当該組成物は、薬物粒子として、及び／又は媒体に懸濁した薬物粒子として送達され得る。送達は、例えば、必要部位への局所的、直接的な適用、注射、非経口的な送達、又は浸潤によってよい。注射又は浸潤により送達するために、シリンジ、カニューレ、トロカール、又は内腔を含有する他のデバイスを使用し得る。局所送達用に、当該薬物粒子は、限定されないが、塗り、塗布、軽塗りが含まれる、任意数の方法を使用して適用され得る。薬物粒子は、外科手技の前、その間、又はその後に使用され得る。例えば、薬物粒子は、術後鎮痛をもたらすために、手術部位への単回投与浸潤のために使用され得る。ある態様において、薬物粒子は、媒体中での再懸濁の有り無しで使用され得て、必要部位へ直接適用され得る。直接適用の例には、手術部位への直接適用、又は薬物粒子粉末を必要部位（例えば、抜歯又は他の歯科手技後の部位、生検、損傷又は処置部位のような）の中へ充填することを含めることができる。薬物粒子は、外科手術の間、どの時点でも投与してよい。好ましくは、薬物粒子は、外科手技の終了時又は終了近くで、あらゆる外科的切開の縫合時又はその近くで投与される。
【００６９】
その用量は、所与の組成の薬物粒子をより多く又はより少なく使用することによって、又は薬物粒子中のアミノアミド含量を増加するか又は減少させることによって調整し得る。例えば、２００ｍｇのブピバカインを送達するには、１００重量％のブピバカインを含有する粒子を含有する２０ｍｇ／ｍＬ懸濁液の１０ｍＬ、又は約５０重量％のブピバカインを含有する粒子を含有する２０ｍｇ／ｍＬ懸濁液の２０ｍＬを使用し得る。
【００７０】
本発明のある態様によると、当該薬物粒子は、モールド穴において製造されて、それ故にモールド穴の制御された形状及び寸法を受けるので、該粒子は、作用の必要部位へのエアゾール化送達に特に適している。例えば、該粒子は、例えば、低い粒子−粒子相互作用力、好ましい空気力学上の形状及び寸法、等のような、適用可能な空気力学的特性を提供する形状及び寸法で製造される。粒子は、エアゾール化送達デバイス（静止中の粒子を空気懸濁液中へ混入させて、ノズルを介して該粒子を送達部位へ送り込むためのデバイスのような）の中へロードされる。粒子は、代替態様において、きっかけの事象に呼応して制御された送達容量のエアゾール及び／又は粒子を提供するように設計された、用量目盛付きエアゾール化デバイスの中へロードすることができる。従って、該粒子は、エアゾール化されて、送達部位の表面上に均等分布されるやり方で沈着される。そのような態様によれば、エアゾール化送達を使用する方法には、エアゾール化デバイスからの薬物粒子をその必要部位の上又は中に沈着させる工程が含まれる。別の態様において、薬物粒子は、粒子を含有するその必要部位へフォームを提供する発泡沈着物（a foaming deposition）に含めることができる。
【００７１】
キット
粒子及び／又は媒体は、使用の簡便さのためにキットへ包装し得る。包装は、いくつかの目的（それぞれのキット成分を閉じ込めて、それを他の成分から離しておくこと、キット成分を保護すること、キット成分をエンドユーザーに提示すること、エンドユーザーに情報を提供すること、個々のキット成分及び／又はシステムを識別すること、及びエンドユーザーへの簡便な提示のため）に役立つ。
【００７２】
例えば、キットは、別々のバイアルに包装された薬物粒子と媒体を含有し得る。キットは、１個の粒子バイアルと１個の媒体バイアルを含有し得る。キットは、１個より多い粒子バイアルと１個の媒体バイアルを含有し得る。キットは、１個より多い粒子バイアルと１個より多い媒体バイアルを含有し得る。この粒子バイアル（複数）と媒体バイアル（複数）は、滅菌に先立って包装して、最終的には既知の滅菌法を使用して滅菌し得る。粒子は、無菌法を使用して製造して包装し得る。媒体は、無菌法を使用して製造して包装し得る。次いで、この粒子と媒体を一緒にキット化して、最終的に滅菌し得る。
【００７３】
キットは、補助アイテムを含有し得る。例えば、キットは、薬物粒子を媒体に懸濁させるのに役立つ補助アイテムを含有し得る。薬物粒子を懸濁させるのに役立ついくつかの補助アイテムには、限定されないが、バイアル、撹拌子、シェーカー、ミキサー、ソニケーター、アダプター、コネクター、及びボルテクサー（vortexers）が含まれる。キットは、薬物粒子、又は媒体に懸濁した薬物粒子を目的部位へ適用するのに役立つ補助アイテムを含有し得る。その例には、限定されないが、シリンジ、注射針、カニューレ、トロカール、内腔含有デバイス、ブラシ、スワブ、ダウバー（daubers）、ローラー、及びスポンジが含まれる。エアゾール化による送達が望まれる場合、キットは、静止中の粒子を空気懸濁液中へ混入させるデバイスを含有し得る。そのようなデバイスには、限定されないが、ポンプ、ノズル付きデバイス、用量目盛付きデバイス、及び乾燥粉末デバイスが含まれる。薬物粒子は、フォーム又はペーストに封じ込めて適用される場合もある。そのようなキットは、薬物粒子と組み合わせるためのフォーム及び／又は発泡デバイスを含有し得る。
【００７４】
キット成分は、キット化に先立って、無菌法を使用して個別に滅菌される、及び／又は製造され得て、キットが組み立てられたならば、最終的に滅菌され得る。一部のキット成分は、キット化に先立って、個別に滅菌される、及び／又は無菌法を使用して製造され得る。一部のキット成分は、キット化に先立って無菌でなくてもよい。すでに滅菌された、及び／又は無菌法を使用して製造されたキット成分を非無菌キット成分と組み合わせてよく、その組み合わされた成分は、その後最終的に滅菌される。
【００７５】
キット成分は、その単回投与容器において一回滅菌しても、その最終梱包容器において滅菌してもよい。最終包装品には、パウチ、オーバーラップ、シュリンク・ラップ、乾燥剤、トレイ、カートン、及びボックスのような成分が含まれ得る。含まれる追加材料には、ゲルパック、温度監視デバイス、耐衝突性の包装品、ラベル、説明書、及び搬送容器が含まれ得る。
【００７６】
個々のキットを組み立てたならば、保存及び／又は販売のために、それらを他のキットと組み合わせて、箱又は枠箱のような他の梱包容器へ入れてよい。
粒子の媒体中での懸濁
薬物粒子は、エンドユーザーによる適用のために媒体に懸濁され得る。薬物粒子は、エンドユーザーによる使用の前又はその直前に媒体に懸濁させても、それと組み合わせてもよい。薬物粒子は、任意数の方法を使用して、媒体と組み合わせ得る。媒体の容器中で薬物粒子を媒体へ加えても、薬物粒子の容器中で媒体を薬物粒子へ加えてもよい。あるいは、追加の容器を使用して、薬物粒子と媒体を組み合わせてよい。薬物粒子は、混合する、渦状に撹拌する、音波処理する、振り混ぜる、反転させる、撹拌する、旋回させる、軌道旋回させる、又は超音波処理することが可能である。代替態様において、薬物粒子は、分配、適用、及び／又は使用の直前か又はそれと連動して、２室型シリンジ又はセルフミキシングシリンジを介して媒体と組み合わせてよい。
【００７７】
いくつかの態様において、薬物粒子は、以下の混合手順に従って、注射に備えるために、媒体の中へ、又はそれと共に混合される：
薬物粒子の室温バイアル（複数）をボルテックスして、あり得る凝集塊を破壊する。例えば、薬物粒子容器は、ほぼ２分間ボルテックスすることができる。
【００７８】
所望される薬物粒子濃度を入手するための媒体容量をこの薬物粒子容器中へ移す。例えば、注射針を使用して、媒体をシリンジ中へ吸引することができる。
あるいは、薬物粒子と媒体を保持する容器を、その懸濁液が均質に見える（即ち、塊が観察されない）まで、ボルテックスして音波処理する。例えば、薬物粒子と媒体を保持する容器を１５秒間ボルテックスしてから、１５秒間の音波処理を続けてよい。このボルテックスと音波処理のパターンは、数サイクル、例えば、９回まで繰り返し得る。
【００７９】
この容器を最後に１回ボルテックスした後で、その懸濁容量を送達デバイス（即ち、シリンジ）の中へ吸引する。懸濁液を保持する容器を逆さにして、所望される容量を汲み上げる。例えば、注射針を使用して、この懸濁液をシリンジ中へ汲み上げる。
【００８０】
この懸濁液をさらに混合するために、アダプターと第二の送達デバイス（即ち、シリンジ）を付ける。この懸濁液を送達デバイスから送達デバイスへ何回も移すことによって、それを混合する。懸濁液が均質であることを目視により確認する。例えば、ボルテックスされた／音波処理された懸濁液を含有するシリンジへシリンジからシリンジへの２方向アダプターを取り付ける。アダプターの反対側に別のシリンジを取り付ける。この懸濁液をアダプター経由で反対のシリンジ中へ各方向に全部で１０回突き通す（各プランジには、ほぼ２秒を要する）ことによって、それを混合する。
【００８１】
送達デバイスをアダプターから外して、分配デバイスを取り付ける。空気を一掃して、この懸濁液を目的領域へ投与する。懸濁液の投与がほぼ１分のうちに行わなければ、上記の混合工程の１回以上を繰り返す。懸濁液の投与がほぼ３０分のうちに行わなければ、それを捨てる。例えば、懸濁液を含有するシリンジをアダプターから外す。注射針を付けて、懸濁液を目的領域へ投与する。
【００８２】
本発明の代替態様では、上記の手順を使用して、アミノアミド麻酔薬を含有する薬物粒子を、約０．７〜１．３重量％の粘度調整剤、約０．６重量％の等張化剤、約０．１重量％の界面活性剤、約０．６重量％の緩衝剤、約７．７〜８．３のｐＨ、及び約５０〜５００ｃｐｓの粘度を含有する媒体に懸濁させる。代替態様では、アミノアミド麻酔薬を含有する薬物粒子を、約０．７〜１．３重量％のヒアルロン酸ナトリウム、約０．６重量％の塩化ナトリウム、約０．１重量％のポリソルベート８０、約０．６重量％のトリス、約７．７〜８．３のｐＨ、及び約５０〜５００ｃｐｓの粘度を含有する媒体に懸濁させる。いくつかの態様では、上記の手順を使用して、ブピバカイン遊離塩基を含有する薬物粒子を、約０．７〜１．３重量％の粘度調整剤、約０．６重量％の等張化剤、約０．１重量％の界面活性剤、約０．６重量％の緩衝剤、約７．７〜８．３のｐＨ、及び約５０〜５００ｃｐｓの粘度を含有する媒体に懸濁させる。いくつかの態様では、ブピバカイン遊離塩基を含有する薬物粒子を、約０．７〜１．３重量％のヒアルロン酸ナトリウム、約０．６重量％の塩化ナトリウム、約０．１重量％のポリソルベート８０、約０．６重量％のトリス、約７．７〜８．３のｐＨ、及び約５０〜５００ｃｐｓの粘度を含有する媒体に懸濁させる。
【００８３】
いくつかの態様では、上記の手順を使用して、アミノアミド麻酔薬と生体適合性ポリマーを含有する薬物粒子を、約０．７〜１．３重量％の粘度調整剤、約０．６重量％の等張化剤、約０．１重量％の界面活性剤、約０．６重量％の緩衝剤、約７．７〜８．３のｐＨ、及び約５０〜５００ｃｐｓの粘度を含有する媒体に懸濁させる。いくつかの態様では、上記の手順を使用して、ブピバカイン遊離塩基と生体適合性ポリマーを含有する薬物粒子を、約０．７〜１．３重量％の粘度調整剤、約０．６重量％の等張化剤、約０．１重量％の界面活性剤、約０．６重量％の緩衝剤、約７．７〜８．３のｐＨ、及び約５０〜５００ｃｐｓの粘度を含有する媒体に懸濁させる。いくつかの態様では、上記の手順を使用して、ブピバカイン遊離塩基とＰＬＧＡを含有する薬物粒子を、約０．７〜１．３重量％の粘度調整剤、約０．６重量％の等張化剤、約０．１重量％の界面活性剤、約０．６重量％の緩衝剤、約７．７〜８．３のｐＨ、及び約５０〜５００ｃｐｓの粘度を含有する媒体に懸濁させる。
【００８４】
いくつかの態様では、アミノアミド麻酔薬と生体適合性ポリマーを含有する薬物粒子を、約０．７〜１．３重量％のヒアルロン酸ナトリウム、約０．６重量％の塩化ナトリウム、約０．１重量％のポリソルベート８０、約０．６重量％のトリス、約７．７〜８．３のｐＨ、及び約５０〜５００ｃｐｓの粘度を含有する媒体に懸濁させる。いくつかの態様では、ブピバカイン遊離塩基と生体適合性ポリマーを含有する薬物粒子を、約０．７〜１．３重量％のヒアルロン酸ナトリウム、約０．６重量％の塩化ナトリウム、約０．１重量％のポリソルベート８０、約０．６重量％のトリス、約７．７〜８．３のｐＨ、及び約５０〜５００ｃｐｓの粘度を含有する媒体に懸濁させる。いくつかの態様では、ブピバカイン遊離塩基とＰＬＧＡを含有する薬物粒子を、約０．７〜１．３重量％のヒアルロン酸ナトリウム、約０．６重量％の塩化ナトリウム、約０．１重量％のポリソルベート８０、約０．６重量％のトリス、約７．７〜８．３のｐＨ、及び約５０〜５００ｃｐｓの粘度を含有する媒体に懸濁させる。
【００８５】
下記の媒体によるいくつかの態様において、薬物粒子は、以下の工程に従って媒体と混合される：
薬物粒子の室温バイアル（複数）を堅い表面に対して軽く叩いて、あり得る凝集塊を破壊する。
【００８６】
所望される薬物粒子濃度を入手するための媒体容量をこの薬物粒子容器中へ移す。例えば、注射針を使用して、媒体をシリンジ中へ吸引し得る。
薬物粒子と媒体を保持する容器を、均質な懸濁液が観察されるまで、穏やかに旋回させる。例えば、均質な懸濁液が観察されるまで、この容器を３０秒間隔で旋回させる。
【００８７】
懸濁液の所望される容量を送達デバイス中に吸引して、目的領域へ投与する。懸濁液が送達デバイス中に１分以内に吸引されなければ、上記の旋回を繰り返す。懸濁液の投与がほぼ３０分のうちに行わなければ、捨てて、新たな混合物を調製する。
【００８８】
ある好ましい態様によれば、上記の混合工程を本明細書に記載されて開示されるＰＬＧＡ／ブピバカイン薬物粒子とともに以下の媒体組成物に利用する：
上記の手順を使用して、アミノアミド麻酔薬と生体適合性ポリマーを含有する本発明の薬物粒子を、約０．１〜０．３重量％の粘度調整剤、約４．０重量％の等張化剤、約０．１重量％の界面活性剤、約０．６重量％の緩衝剤、約７．７〜８．３のｐＨ、及び約３０〜５０ｃｐｓの粘度を含有する媒体に懸濁させる。いくつかの態様では、上記の手順を使用して、ブピバカイン遊離塩基と生体適合性ポリマーを含有する薬物粒子を、約０．１〜０．３重量％の粘度調整剤、約４．０重量％の等張化剤、約０．１重量％の界面活性剤、約０．６重量％の緩衝剤、約７．７〜８．３のｐＨ、及び約３０〜５０ｃｐｓの粘度を含有する媒体に懸濁させる。いくつかの態様では、上記の手順を使用して、ブピバカイン遊離塩基とＰＬＧＡを含有する薬物粒子を、約０．１〜０．３重量％の粘度調整剤、約４．０重量％の等張化剤、約０．１重量％の界面活性剤、約０．６重量％の緩衝剤、約７．７〜８．３のｐＨ、及び約３０〜５０ｃｐｓの粘度を含有する媒体に懸濁させる。
【００８９】
アミノアミド麻酔薬と生体適合性ポリマーを含有する本発明の薬物粒子を、約０．１〜０．３重量％のヒアルロン酸ナトリウム、約４．０重量％のマンニトール、約０．１重量％のポリソルベート８０、約０．６重量％のトリス、約７．７〜８．３のｐＨ、及び約３０〜５０ｃｐｓの粘度を含有する媒体に懸濁させる。いくつかの態様では、ブピバカイン遊離塩基と生体適合性ポリマーを含有する薬物粒子を、約０．１〜０．３重量％のヒアルロン酸ナトリウム、約４．０重量％のマンニトール、約０．１重量％のポリソルベート８０、約０．６重量％のトリス、約７．７〜８．３のｐＨ、及び約３０〜５０ｃｐｓの粘度を含有する媒体に懸濁させる。いくつかの態様では、ブピバカイン遊離塩基とＰＬＧＡを含有する薬物粒子を、約０．１〜０．３重量％のヒアルロン酸ナトリウム、約４．０重量％のマンニトール、約０．１重量％のポリソルベート８０、約０．６重量％のトリス、約７．７〜８．３のｐＨ、及び約３０〜５０ｃｐｓの粘度を含有する媒体に懸濁させる。
【００９０】
本発明の代替態様において、媒体は、追加の界面活性剤成分を含む。いくつかの態様では、本発明の媒体へ界面活性剤としてドクサートナトリウムを加える。いくつかの態様では、媒体へ界面活性剤としてデオキシコール酸ナトリウムを加える。いくつかの態様では、媒体へ界面活性剤系としてドクサートナトリウムとデオキシコール酸ナトリウムをともに加える。いくつかの態様において、界面活性剤系には、約０．０１５重量％未満のドクサートナトリウムと約０．１重量％未満のデオキシコール酸ナトリウムが含まれる。ドクサートナトリウムが含まれるいくつかの態様によれば、アルコール共溶媒も媒体に含めてよい。ドクサートナトリウムとともに使用される共溶媒は、エタノール、ベンジルアルコール、グリセリン、及び他の適正なアルコールより選択される。特別な態様において、共溶媒は、エタノールである。共溶媒としてエタノールを利用するいくつかの態様では、それを媒体全体に対して約５％未満まで含めてよい。共溶媒としてエタノールを利用するいくつかの態様では、それを媒体全体に対して約２％未満まで含めてよい。共溶媒としてエタノールを利用するいくつかの態様では、それを媒体全体に対して約１％未満まで含めてよい．特別な態様において、共溶媒はエタノールであって、媒体全体に対して約０．１％〜０．５％の間含まれる。重要にも、媒体の張度は、等張の媒体溶液を維持するために調整されて、緩衝剤は、注射に適したｐＨを維持するために調整される。
【００９１】
本発明の媒体における賦形剤とそれらの機能を以下の表に含める。特に、賦形剤は、本発明の媒体に含めて、薬物粒子へ湿潤性をもたらして、薬物粒子の媒体中での懸濁性を高める、及び／又は分散性をもたらして、媒体に懸濁した薬物粒子の微細分散を高めることができる。
【００９２】
【表１−１】
2019514976.tif 000003
【００９３】
【表１−２】
2019514976.tif 000004
【００９４】
本発明の媒体に含まれ得る他の賦形剤を以下の表に含める。
【００９５】
【表２】
2019514976.tif 000005
【００９６】
結晶化した医薬品
本発明のいくつかの態様において、活性薬剤は、溶媒中へ溶かして、ポリマーマトリックス材料も他の賦形剤も存在しないことを除けば本明細書に記載されるモールドの中へ導入する。そのような態様において、ＰＲＩＮＴ法から生成される粒子は、ほとんど１００パーセント純粋な結晶化した医薬物質を含む。これらの結晶薬物粒子は、そのままで安定していて、有利な保存、取扱い、送達、及び性能の特徴を提供する。例えば、本発明の結晶粒子は、ポリマー又は他のマトリックス（脂質、等）材料を患者へ導入することの回避を提供する。いくつかの態様において、マトリックス材料の回避は、薬物の性能を高める、組織刺激、炎症、反応、又は傷害を抑制する、薬物粒子相互作用を抑制する、媒体の単位容量当たりの投与量を高めること、及びこれらの組合せを可能にする。
【００９７】
いくつかの態様では、本発明の組成物に複数の粒子が含まれ、該複数粒子の各粒子は、最大長さ寸法が所定の最大長さ寸法より１マイクロメートルと異ならない非球形によって規定され；そしてここで各粒子は、アミノアミド麻酔薬、又はその医薬的に許容される塩、水和物、及び／又は溶媒和物を含み、そしてＰＬＡ及び／又はＰＬＧＡポリマーを含んでもよい。
【００９８】
本発明の別の態様において、粒子の組成物には、複数の粒子が含まれ、該複数粒子の各粒子は、横断面図において実質的に矩形によって規定される、非球形によって規定され、ここで各粒子はは、アミド麻酔薬、又はその医薬的に許容される塩、水和物、及び／又は溶媒和物を含み、そしてＰＬＡ及び／又はＰＬＧＡポリマーを含んでもよく、そして該組成物には、粘度調整剤、界面活性剤、緩衝剤と、任意選択的に等張化剤を含んでなる媒体が含まれる。
【００９９】
本発明のある側面によると、注射前に粒子がその中に懸濁される媒体は、ヒアルロン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、トリス塩基、トリスＨＣｌの水性媒体を含み、そしてポリソルベート８０を含んでもよく、ここでヒアルロン酸ナトリウムは、１．６〜２．２ｍ３／ｋｇの固有粘度を有して、媒体１ｍＬにつき７．０〜１０．０ｍｇを含む。
【０１００】
他の態様によれば、制御結晶化、溶液からの結晶化、鋳型結晶化、又は固相結晶化、並びに連続結晶化とバッチ結晶化が含まれる方法によって、薬物粒子を結晶性のまま製造し得る。他の態様では、より大きな結晶性の医薬バルク材料を、微細化、摩砕、粉砕、スプレー乾燥、又は湿式研磨によって、成形粒子に類似しているか又はそれに代わる、本発明に適用可能な結晶性粒子へ縮小させることができる。
【０１０１】
本発明の適用のための外科手技
本発明の薬物粒子は、多様な外科手技に利用されて、３〜５日の術後期間にわたる延長放出鎮痛をもたらすことができる。本発明の粒子に適用可能な外科手技は、腹腔鏡手術、低侵襲手術であっても、開腹手術であってもよい。薬物粒子は、軟部組織手術、整形外科手術、脊髄手術において、又は医療専門家によって決定されるような他のやり方で使用され得る。
【０１０２】
低侵襲手術には、限定されないが、関節鏡下手術、腹腔鏡手術、縦隔鏡検査術、胸腔鏡検査術、胆嚢摘出術、虫垂切除術、胃腸吻合術、半結腸切除術、Ｓ状結腸切除術が含まれ、心臓専門医による弁置換術、特定の椎間板切除術、又は神経外科医と整形外科医による他の類似の経皮的手術、及び他の経皮的手術も含まれる。軟部組織手術の例には、限定されないが、腹部、肛門直腸、乳房の再建手術、女性及び男性の尿生殖器、結直腸、腹横筋膜面（ＴＡＰ）ブロックベースの手術、結直腸手術、及び／又は美容整形手術が含まれる。腹部手術の例には、限定されないが、ヘルニア手術、肥満外科手術、胃バイパス手術、胃切除術、回腸造瘻術、開腹及び腹腔鏡の結直腸手術、回腸人工肛門閉鎖術、及び／又は腹壁再建術が含まれる。乳腺手術の例には、限定されないが、乳腺切除術が含まれる。再建手術の例には、限定されないが、形成外科再建手術が含まれる。女性の尿生殖器手術の例には、限定されないが、子宮摘出術、会陰切開術、産科的裂傷修復、低子宮頸部帝王切開術、及び帝王切開術が含まれる。男性の尿生殖器手術の例には、限定されないが、前立腺切除術が含まれる。結直腸手術の例には、限定されないが、痔核切除術、直腸切除術、半結腸切除術、Ｓ状結腸切除術、腸（小腸又は大腸）切除術、及び結腸切除術が含まれる。形成外科手術の例には、限定されないが、豊胸手術、乳房縮小術、及び／又は腹部脂肪除去手術が含まれる。
【０１０３】
整形外科手術の例には、限定されないが、腱膜瘤切除術、膝関節形成術、全人工膝関節置換術、股関節形成術、全人工股関節置換術、肩関節形成術、全人工肩関節置換術、足と踝の手術、骨折の癒合及び／又は修復が含まれる。
【０１０４】
脊髄手術は、頸部、胸部、腰部、及び／又は仙骨の領域で起こり得る。脊髄手術の例には、限定されないが、癒合、椎間板切除術、椎間板切開術、仙骨固定術、腰骨固定術、及び／又は頸椎後方固定術が含まれる。
【実施例】
【０１０５】
実施例１
粒子の製造
実施例１Ａ：ブピバカイン／ＰＬＧＡ粒子の製造
ブピバカイン遊離塩基とＰＬＧＡ粒子を含有する粒子を製造した。初めに、粒子ストック溶液を調製した。４０重量％のＰＬＧＡ（Evonik Industries，Ｒｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ５０２Ｈ）と６０重量％のブピバカイン遊離塩基（Cayman Chemical Company）のアセトン中固形分３５重量％の均質溶液を調製した。この溶液を無菌の０．２μｍ  ＰＴＦＥフィルターに通して濾過した。生じる粒子ストック溶液を、ポリビニルアルコール採取層でプレコートした４ｍｉｌ  ＰＥＴフィルム上へ室温で流延した。
【０１０６】
粒子を生成するために、この流延フィルムを２５μｍの六角形モールド（Liquidia Technologies 社、ノースカロライナ州モリスビル）に対してラミネート加工した。このモールド／フィルムを２８０°Ｆにて５フィート／分でラミネーターに通過させた。
【０１０７】
このモールド中で粒子を焼き鈍す工程は、アミノアミド麻酔薬の結晶化をもたらして、４０℃の温度と１０〜２５％のＲＨで約９〜１３日間にわたって生じる。代替態様では、薬物粒子を周囲条件でほぼ２０日間モールド中に保存した後で採取して、第二分量の粒子を４０℃／２５％相対湿度でほぼ２０日間モールド中に保存した後で採取した。保存及び／又は焼き鈍し（annealing）の後で、採取層を付着した薬物粒子とともに、モールドから外した。この採取層から、ドクターブレードを周囲条件下に使用して、粒子を剥離させた。この回収された薬物粒子を２５０μｍと１０６μｍの篩に通過させて粒子を徹底的に混合して、大サイズの不純物を除去した。この薬物粒子を、窒素下に、２５℃で真空乾燥させた。乾燥後、この粒子をバイアル中へ等分して、γ放射線を使用して滅菌した。この滅菌済み粒子を使用まで−２０℃で保存した。
【０１０８】
実施例１Ｂ：ブピバカイン粒子の製造
ブピバカイン遊離塩基を含有する粒子を製造した。粒子は、以下の変更を加えて、上記の実施例１Ａと同様に製造した。１００重量％のブピバカイン遊離塩基（Cayman Chemical Company）の塩化メチレン中固形分４０重量％の均質溶液を使用した。これらの粒子について、ラミネーターは、３００°Ｆであった。いくつかの態様では、粒子を焼き鈍し条件下に保存して、モールド中に周囲条件でほぼ２０日間保存した後で、採取した。他の態様では、粒子を焼き鈍し条件下でモールド中に保存して、周囲温度と相対湿度（１９〜２５℃、及び２０〜４０％  ＲＨ）で約９〜１３日間のモールド中での結晶化を可能にした。
【０１０９】
実施例１Ｃ：レボブピバカイン粒子の製造
レボブピバカイン遊離塩基を含有する粒子を製造した。粒子は、以下の変更を加えて、上記の実施例１Ｂと同様に製造した。１００重量％のレボブピバカイン遊離塩基（BOC Sciences）の塩化メチレン中固形分４０重量％の均質溶液を調製して使用した。これらの粒子について、ラミネーターは、３２０°Ｆであった。粒子は、焼き鈍し工程や保存を介在させることなく、直ちに採取した。
【０１１０】
実施例２
媒体の製造
３０ｍｇのポリソルベート８０（ＮＯＦ，ＨＸ２）を測定して、清潔な秤量済みビーカーの中へ入れた。少量の注射用水（ＷＦＩ）を加えて、このポリソルベート８０と水を目視で溶けるまで撹拌した。２９１ｍｇのトリス塩基（JT Baker，４１０９−０１）と５６７ｍｇのトリスＨＣｌ（JT Baker，４１０６−０１）を秤量して、清潔な秤量済みビーカーの中へ移した。先の溶けたポリソルベート８０溶液をこの粉末へ加えて、残りの水を加えた（全量２８．９６２ｇの水を加えた）。この溶液を撹拌した。撹拌しながら、不溶性の塊の形成を回避するために、１５０ｍｇのヒアルロン酸ナトリウム（Stanford Chemical，ＨＡ−ＥＰ−１．８）をゆっくり加えた。ヒアルロン酸ナトリウムの添加の後で、この溶液を室温で均質になるまで撹拌した。この溶液を滅菌用ガラス瓶へ移した。この溶液を１２１℃で２０分間滅菌した。この溶液を室温へ冷やした。
【０１１１】
実施例３
粒子の安定性
実施例１Ａからの粒子（４００℃で１９日間保存して、２５ｋＧｙのγ線照射を使用して滅菌した）と実施例１Ｂからの粒子（周囲条件で１９日間保存して、２５ｋＧｙのγ線照射を使用して滅菌した）をバイアル中へ等分した。実施例１Ａについては、４００±８ｍｇを１０ｍＬの１型管形ガラスバイアル中へ等分して、これを窒素で充填し、栓をして、クリンプ止めした。実施例１Ｂについては、２００±６ｍｇを１０ｍＬの１型管形ガラスバイアル中へ等分して、これを窒素で充填し、栓をして、クリンプ止めした。これらの粒子を窒素下でバイアル中に密封した後で、その滅菌用にγ線照射する。
【０１１２】
バイアルを３種の保存条件：−２０℃、２〜８℃、及び２５℃／６０％の相対湿度下に置いた。この粒子について、粒径とブピバカイン含量をＴ＝０、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、及び９ヶ月で分析した。
【０１１３】
Malvern Mastersizer 3000 を使用するレーザー回折法による粒径
０．０５〜０．２Ｍの炭酸ナトリウム−重炭酸ナトリウム緩衝剤（ｐＨ９．４〜９．６）を調製した。この重炭酸塩緩衝剤へポリソルベート８０溶液を０．１％（ｖ／ｖ）まで加えて、水性分散液を生成した。ほぼ４０〜６０ｍｇの粒子を２ｍＬバイアルへ移した。全量ピペットを使用して、このバイアル中の粒子へほぼ２ｍＬの分散液を加えた。この粒子／分散液の懸濁液をほぼ１０秒間ボルテックスした。全量ピペットを使用して、この粒子／分散液の懸濁液を分析用に Malvern Mastersizer 3000 のＨｙｄｒｏ−ＭＶ中へ滴下した。
【０１１４】
機器パラメータとして、撹拌速度は、２，０００ｒｐｍであった。測定モードは、フラウンホーファー（Fraunhofer）近似であった。バックグラウンド収集時間は、１０秒であった。試料データ収集のために、測定時間は２０秒で、少なくとも５回の反復測定をした。試料データ収集のために、試料を１０％で１分間音波処理して、音波処理を止めた後でデータ収集した。不明瞭化ターゲット（obscuration target）は５〜７％であって、データ解析は、汎用（General Purpose）モデルであった。
【０１１５】
Ｔ＝０データは、以下の変更を施して上記のように収集した。この水性分散液では、０．０２％（ｖ／ｖ）ポリソルベート重炭酸塩緩衝剤（ｐＨ９．４〜９．６）を使用した。試料は、データ収集を通して５％で音波処理した。データ解析は、ナローモード（Narrow Mode）モデルで実施した。Ｔ＝１ヶ月、２ヶ月、及び数ヶ月後の結果は、分析法における変更の故に、初回のＴ＝０ヶ月の結果よりやや異なる場合がある。
【０１１６】
収集したデータは、Ｄ１０、Ｄ５０、及びＤ９０であった。実施例１Ａの薬物粒子についての結果を下記の表に示す。実施例１Ａの薬物粒子は、−２０℃と２〜８℃で少なくとも９ヶ月物理的に安定している。
【０１１７】
【表３】
2019514976.tif 000006
【０１１８】
実施例１Ｂの薬物粒子についての結果を下記の表に示す。実施例１Ｂの薬物粒子は、−２０℃と２〜８℃で少なくとも９ヶ月物理的に安定している。
【０１１９】
【表４】
2019514976.tif 000007
【０１２０】
ＨＰＬＣによるブピバカイン含量
下記の表に詳述されるクロマトグラフィー変数を用いるＨＰＬＣを使用して、ブピバカイン含量を定量した。
【０１２１】
【表５】
2019514976.tif 000008
【０１２２】
収集データは、ブピバカインの重量％であった。実施例１Ａと実施例１Ｂの薬物粒子についての結果を下記の表に提示する。実施例１Ａの薬物粒子は、−２０℃、２〜８℃、及び２５℃／６０％の相対湿度で保存されるとき、少なくとも９ヶ月間、化学的に安定している。実施例１Ｂの薬物粒子は、−２０℃、２〜８℃、及び２５℃で保存されるとき、少なくとも９ヶ月間、化学的に安定している。
【０１２３】
【表６】
2019514976.tif 000009
【０１２４】
ＸＲＰＤによる結晶形
同じ２ロットの薬物粒子について、ＸＲＰＤを使用して、ブピバカイン遊離塩基の結晶形Ｉ及び／又は結晶形ＩＩの含量を分析した。この薬物粒子について、−２０℃、２〜８℃、及び２５℃／６０％の相対湿度で３ヶ月の保存後に解析した。この結果を下記の表に示す。
【０１２５】
【表７】
2019514976.tif 000010
【０１２６】
実施例４
追加ロットの薬物粒子を製造して、ＸＲＰＤを使用して、ブピバカイン遊離塩基の結晶形Ｉ及び／又は結晶形ＩＩの含量を分析した。この薬物粒子は、−２０℃、２〜８℃、及び２５℃／６０％の相対湿度で保存して、様々な経過時間で解析した。
【０１２７】
１つの試験では、本明細書に開示される本発明の方法に従って、ロット５６７０１１２０７１６のＰＬＧＡ／ブピバカイン薬物粒子を製造して、本明細書に開示される本発明の方法に従って、ロット５６６９１１００７１６のブピバカイン薬物粒子を製造した。この試験では、ＸＲＰＤを使用して、結晶形Ｉの含量をロット５６７０１１２０７１６については１、３、及び６ヶ月で、そしてロット５６６９１１００７１６については１ヶ月と３ヶ月で定量した。この結果を下記の表に示す。
【０１２８】
【表８】
2019514976.tif 000011
【０１２９】
別の試験では、本明細書に開示される本発明の方法に従って、ロット２０９１−００１−４０のＰＬＧＡ／ブピバカイン薬物粒子を製造して、本明細書に開示される本発明の方法に従って、ロット２０９１−００１−３６のブピバカイン薬物粒子を製造した。本試験では、ＸＲＰＤを使用して、結晶形Ｉの含量をロット２０９１−００１−４０については０、１、２、３、６、及び９ヶ月で、そしてロット２０９１−００１−３６については０、１、２、３、及び６ヶ月で定量した。この結果を下記の表に示す。
【０１３０】
【表９】
2019514976.tif 000012
【０１３１】
実施例５
温度感受性（ハーグリーブス試験）エンドポイントにおいて効力を判定する、ラットでの生体内（in vivo）試験
ブピバカイン遊離塩基微粒子の組成物について、神経周囲（坐骨神経）浸潤後のラットでの疼痛の熱的モデル（ハーグリーブス試験）において評価した。組成物をスプラーグ・ドーリー（Sprague Dawley）ラットへＮ＝１１〜１２匹／群で投与した。
【０１３２】
４種の試験物には、以下が含まれた：
（１）実施例１Ａに従って製造したＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子（９２６−１４４−３）（この粒子は、４０℃／２５％相対湿度で２０日間保存してから採取した）、
（２）実施例１Ｂに従って製造したブピバカイン粒子（９２６−１４４−１）、
（３）媒体（９６９−３７−１）、及び
（４）Ｅｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）（１３．３ｍｇ／ｍＬ，Pacira Pharmaceuticals 社、カリフォルニア州サンディエゴ）、比較対照品。
【０１３３】
水性媒体（９６９−３７−１）を製造した。この水性媒体は、０．５重量％のヒアルロン酸ナトリウム（ＨＡ，１，０００ｋＤａ，Stanford，カタログ番号：ＨＡ−ＥＰ−１．８）、０．１重量％のポリソルベート８０（ＮＯＦ，カタログ番号：ＨＸ２）、及び２００ｍＭトリス（トリス塩基とトリスＨＣｌとして、JT Baker，カタログ番号：それぞれ、４１０９−０１と４１０６−０１）（ｐＨ８）を含有した。この媒体は、０．１４７ｇ  ＨＡ、０．０２８ｇ  ＰＳ８０、０．２９１ｇ  トリス塩基、０．５６３ｇ  トリスＨＣｌ、及び２８．９８３ｇ  ＷＦＩを５０ｍＬの無菌コニカルチューブにおいて合わせることによって製造した。このチューブを、すべての成分が溶けた状態になるまで、室温で上下に（end to end）回転させた。注射に先立って、その粒子を媒体に懸濁させた。バイアル中の粒子へ媒体を加えて、均質な懸濁液が存在するまで、少なくとも２分間ボルテックスした。２分間のボルテックス処理後に均質な懸濁液が存在しなければ、目視での均質性が達成されるまで、バイアルをボルテックスした。この懸濁液のブピバカイン濃度は、ほぼ３３．３ｍｇ／ｍＬであった。
【０１３４】
９２６−１４４−３と９２６−１４４−１（懸濁状態）の両方を１．２ｍＬ／ｋｇで投与し、４０ｍｇ／ｋｇのブピバカインを送達した。媒体のみの対照は、１．２ｍＬ／ｋｇで投与した。Ｅｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）（Pacira Pharmaceuticals 社、カリフォルニア州サンディエゴ）は、１．４ｍＬ／ｋｇで投与し、１８．６ｍｇ／ｋｇのブピバカインを送達した。
【０１３５】
ラットの坐骨神経を麻酔下に曝露して、試験物を坐骨神経上へ直に注射した。筋肉を縫合して閉じて、組織接着剤を使用して、皮膚を閉鎖した。
輻射熱をあてた後の後肢退避について、ラットにおいて、投与に先立って、そして神経周膜投与後２、４、５．５、及び７時間で評価した。足底熱刺激測定装置を使用して、ベースラインと投与後の熱感受性を測定した。
【０１３６】
図面３Ａ、図面３Ｂ、及び図面３Ｃに示すように、ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子の神経周膜投与は、投与後２、４、及び５．５時間で、媒体のみの対照動物に比較して、後肢退避反応潜時を有意に増加させた。リポソームブピバカインであるＥｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）の神経周膜投与が、投与後２時間の間、後肢退避反応潜時を有意に増加させた一方で、ブピバカイン粒子の神経周膜投与は、投与後２時間と４時間で後肢退避反応潜時を有意に増加させた。図面２は、このデータを散布図として図示する。図面３Ａ、図面３Ｂ、及び図面３Ｃは、このデータを棒グラフとして図示する。図面３Ａに示すように、神経周膜投与によるＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子（３３．３ｍｇ／ｍＬ，４０ｍｇ／ｋｇ）は、媒体対照に比較して２、４、及び５．５時間で有意差があった（＋＋／＋＋＋：ｐ＜０．０１／０．００１、対応のないｔ検定）。図面３Ｂに示すように、神経周膜投与によるブピバカイン粒子（３３．３ｍｇ／ｍＬ，４０ｍｇ／ｋｇ）は、媒体対照に比較して２時間と４時間で有意差があった（＋＋／＋＋＋：ｐ＜０．０１／０．００１、対応のないｔ検定）。図面３Ｃに示すように、神経周膜投与によるＥｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）（１３．３ｍｇ／ｍＬ，１８．６ｍｇ／ｋｇ）は、媒体対照に比較して２時間でのみ有意差があった（＊＊＊：ｐ＜０．００１、ベースライン（ＢＬ）に対するダンネット事後検定）。
【０１３７】
ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子は、投与後少なくとも５．５時間の間、後肢退避反応潜時を有意に増加させた。ブピバカイン粒子は、投与後少なくとも４時間の間、後肢退避反応潜時を有意に増加させた。リポソームブピバカインであるＥｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）は、後肢退避反応潜時を有意に増加させた。粒子形態で送達されるブピバカインは、リポソーム形態で送達されるブピバカインに比較して、後肢退避反応潜時を有意に増加させた。
【０１３８】
実施例６  ラットでの非ＧＬＰ薬物動態評価
本発明の粒子として投与される場合のブピバカインの薬物動態パラメータに対するｐＨと媒体粘度の影響について評価するために試験を行った。
【０１３９】
この試験における使用のために２種の緩衝剤と２種の媒体を調製した。
緩衝剤１（９６９−０８−１）：この水性緩衝剤は、９０ｍＭ塩化ナトリウム、２７ｍＭ酢酸ナトリウム、２３ｍＭグルコン酸ナトリウム、５ｍＭ塩化カリウム、１ｍＭ塩化マグネシウム、及び０．１重量％ポリソルベート８０を含有した。この緩衝剤を０．２μｍ  ＰＥＳフィルターに通して濾過した。ｐＨは、ほぼ７．３７であった。
【０１４０】
緩衝剤２（９６９−０８−２）：この水性緩衝剤は、４７６ｍＭ重炭酸ナトリウム、７ｍＭ  ＥＤＴＡ、及び０．１重量％  ＰＳ８０を含有した。この緩衝剤を０．２μｍ  ＰＥＳフィルターに通して濾過した。ｐＨは、ほぼ８であった。
【０１４１】
媒体１（９６９−０７−１）：この水性媒体は、１重量％のヒアルロン酸（１，０００ｋＤａ，Creative PEGworks，カタログ番号：ＨＡ−１０５）、１４５ｍＭ塩化ナトリウム、及び１．６ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性リン酸ナトリウム無水物と一塩基性リン酸ナトリウム一水和物として取り込まれる）を含有した。ｐＨは、ほぼ７．４１であった。
【０１４２】
媒体２（９６９−０７−２）：この水性媒体は、１重量％のヒアルロン酸（２，５００ｋＤａ，Creative PEGworks，カタログ番号：ＨＡ−１０７）、１４５ｍＭ塩化ナトリウム、１．９ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性リン酸ナトリウム無水物と一塩基性リン酸ナトリウム一水和物として取り込まれる）を含有した。ｐＨは、ほぼ７．４１であった。
【０１４３】
本試験では、２種の粒子組成物：ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子とブピバカイン粒子について試験した。
実施例１Ａに従って、以下の変更を施して、ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子（９２６−１３２−１）を製造した。５０重量％のＰＬＧＡ（Evonik Industries，Ｒｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ５０２Ｈ）と５０重量％のブピバカイン遊離塩基（Cayman Chemical Company）の酢酸エチル中固形分２２重量％の均質溶液を調製した。このモールド／フィルムを３００°Ｆにて５フィート／分でラミネーターに通過させた。粒子を４０℃／２５％相対湿度でモールド中にほぼ１３日間保存した後で、採取した。
【０１４４】
実施例１Ｂに従って、以下の変更を施して、ブピバカイン粒子（９２６−１３５−１）を製造した。１００重量％のブピバカイン遊離塩基（Cayman Chemical Company）のクロロホルム中固形分４０重量％の均質溶液を使用した。粒子を周囲条件でモールド中にほぼ４日間保存した後で、採取した。
【０１４５】
注射に先立って、その粒子を媒体に懸濁させた。バイアル中の粒子へ媒体を加えて、均質な懸濁液が存在するまで、少なくとも２分間ボルテックスした。２分間のボルテックス処理後に均質な懸濁液が存在しなければ、目視での均質性が達成されるまで、バイアルをボルテックスした。この懸濁液のブピバカイン濃度は、ほぼ３３．３ｍｇ／ｍＬであった。
【０１４６】
下記の表は、緩衝剤と媒体の組合せについて詳述する。
【０１４７】
【表１０】
2019514976.tif 000013
【０１４８】
スプラーグ・ドーリー・ラット（３匹／群）へ単回ＳＣ用量の９２６−１３２−１又は９２６−１３５−１（緩衝剤／媒体懸濁液中）を４０ｍｇ／ｋｇの全ブピバカイン用量のために１．２ｍＬ／ｋｇ（３３．３ｍｇ／ｍＬのブピバカイン）で投与した。
【０１４９】
ｐＨは、投与の前と後で、Oakton ｐＨ計を使用して測定した。下記の表は、そのデータを要約する。
【０１５０】
【表１１】
2019514976.tif 000014
【０１５１】
ＰＫ分析用の血液試料を各動物より投与前と投与後１５分、３０分、１、２、４、８、２４、４８、及び７２時間で回収した。ブピバカインの血漿濃度をＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって測定して、マイクロソフトエクセル用ＰＫ関数を使用してＰＫパラメータを計算した。
【０１５２】
各動物群についてのＰＫ結果を下記の表に要約する。
【０１５３】
【表１２】
2019514976.tif 000015
【０１５４】
変動係数を下記の表に示す。
【０１５５】
【表１３】
2019514976.tif 000016
【０１５６】
第１群から第４群のＰＫパラメータは、Ｔｍａｘにわずかな変動があったものの、同様であった。Ｃｍａｘ値は、３４８〜３６６ｎｇ／ｍＬに及んで、ＡＵＣｌａｓｔは、１０４３４〜１２６１２ｎｇ・時間／ｍＬに及んだ。平均Ｔｍａｘは、第２群の５．３３時間からブピバカイン粒子の８時間に及んだが、Ｔｍａｘは、第３群と第４群でともに１２時間であった。消失速度定数は、０．０４５〜０．０６４に及び、平均ｔ１／２は、１０．８〜１６．２時間に及んだ。従って、ｐＨ又はＨＡ媒体の違いは、ブピバカイン（９２６−１３５−１）のＰＫにほとんど影響しなかった。
【０１５７】
第５群から第８群のＰＫパラメータは、ＡＵＣｌａｓｔ，消失速度定数、及びｔ１／２については同様であったが、ＣｍａｘとＴｍａｘについてはいくらかの差があった。Ｔｍａｘへの時間が最も短い製剤（第６群と第８群）は、より高いＣｍａｘ値も示した。第２群と第４群の平均Ｔｍａｘは、第５群と第７群のそれぞれ５．３時間と６．７時間に比べて、それぞれ２．８時間と１．８時間であった。平均ＡＵＣｌａｓｔ値は、９４１２ｎｇ・時間／ｍＬ〜１０６９７ｎｇ・時間／ｍＬに及んだ。消失速度定数は、０．０３７〜０．０４６に及んで、平均ｔ１／２は、１５．４〜１９．０時間に及んだ。９２６−１３２−１の放出特性は、媒体のｐＨによって変化するように見えたが、媒体に使用されるＨＡの種類によって変化するように見えなかった。
【０１５８】
実施例７
薬物動態分析試験
種々の試験を行って、本発明の組成物の単回ＳＣ注射に続くブピバカインのＰＫについて評価した。
【０１５９】
７．１：ブピバカイン粒子
実施例１Ｂに従って、以下の変更を施して、ブピバカイン粒子（９７６−２７−２）を製造した。粒子を周囲条件でモールド中にほぼ１２日間保存した後で、採取した。
【０１６０】
媒体（１０１９−４９）も製造した。初めに、１．０重量％のヒアルロン酸（１，０００ｋＤａ，Stanford，カタログ番号：ＨＡ−ＥＰ−１．８）、５０ｍＭトリス（トリス塩基とトリスＨＣｌとして）、１００ｍＭ塩化ナトリウム、０．１重量％ポリソルベート８０を含有するストック組成物を作製した。このストック組成物の粘度は、ほぼ２０００〜３５００ｃｐｓであった。次に、５０ｍＭトリス（トリス塩基とトリスＨＣｌとして）、１００ｍＭ塩化ナトリウム、０．１重量％ポリソルベート８０を含有する希釈用組成物を作製した。希釈用組成物のｐＨは、ほぼ８へ調整した。希釈用組成物は、除菌濾過した。７５重量％のストック組成物と２５重量％の希釈用組成物を合わせることによって、ストック組成物を希釈用組成物で希釈した。この媒体の最終組成は、０．７５重量％のヒアルロン酸（１，０００ｋＤａ，Stanford，カタログ番号：ＨＡ−ＥＰ−１．８）、５０ｍＭトリス（トリス塩基とトリスＨＣｌとして）、１００ｍＭ塩化ナトリウム、０．１重量％のポリソルベート８０であった。ｐＨはほぼ８であって、粘度はほぼ８３８ｃｐｓであった。
【０１６１】
注射に先立って、粒子を媒体に懸濁させた。媒体を加えて、下記の表中の投与濃度を達成した。懸濁液を生成するために、粒子を含有するバイアルへ媒体を加えた。このバイアルをほぼ３０秒間ボルテックスした。ボルテックス処理の後で、このバイアルをほぼ３０秒間音波処理した。このバイアルを３サイクルの間ボルテックス／音波処理すると、均一な懸濁液が生成した。所望される容量をシリンジ中へ吸引した後で、この懸濁液をメス−メスルアーロックコネクタ（female-female luer lock connector）を介したシリンジ−シリンジ混合によってさらに混合した。
【０１６２】
本試験では、スプラーグ・ドーリー・ラット（Ｎ＝６／性／群、但し、８０ｍｇ／ｋｇでは、Ｎ＝６匹の雄）に懸濁状態の９７６−２７−２を４０、８０、１２０、及び１６０ｍｇ／ｋｇ（それぞれ、２６．７、５３．３、８０．０、及び１０６．７ｍｇ／ｍＬのブピバカイン）で、又はＥｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）（Pacira Pharmaceuticals 社、カリフォルニア州サンディエゴ）を４０ｍｇ／ｋｇ（１３．３ｍｇ／ｍＬ）で投与した。
【０１６３】
【表１４】
2019514976.tif 000017
【０１６４】
ＰＫ分析用の血液試料を投与後０．２５、０．７５、１．５、２、４、６、８、２４、３０、４８、７２、及び９６時間で回収した。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを０．５００〜５００ｎｇ／ｍＬの範囲で使用して、ブピバカインの血漿濃度を測定した。WinNonlin（ノンコンパートメント解析）を使用して、ＰＫ分析を行った。ＰＫパラメータを下記の表に要約する。
【０１６５】
【表１５】
2019514976.tif 000018
【０１６６】
９７６−２７−２投与に続くブピバカインへの曝露は、ＣｍａｘとＵＣｌａｓｔに基づけば、雌のＣｍａｘを除くと、用量の増加に伴って一貫して増加することはなかった。
雌におけるＣｍａｘの増加は、４０ｍｇ／ｋｇから１６０ｍｇ／ｋｇに比例した用量ほどでなくて、用量が４倍増加しても、曝露は２、３倍の増加であった。しかしながら、各用量群で高いＣｍａｘ値（雌：１２０ｍｇ／ｋｇに対して＞３６００ｎｇ／ｍＬ、そして雌：１６０ｍｇ／ｋｇに対して＞４５００ｎｇ／ｍＬ）を有した１匹の雌がいて、それが上記２群にける雌のより高い平均Ｃｍａｘ値に貢献したのである。雄において、Ｃｍａｘは、全４種の用量にわたって同様であった。
【０１６７】
雌の用量範囲にわたるＡＵＣｌａｓｔの増加は、用量に比例するほどではなくて、４０ｍｇ／ｋｇから１２０ｍｇ／ｋｇではＡＵＣｌａｓｔの増加が無くて、１２０ｍｇ／ｋｇから１６０ｍｇ／ｋｇでの１．３倍増加では２．３倍の増加を特徴とした。同様に、雄でも、用量範囲にわたるＡＵＣｌａｓｔの増加は、用量に比例するほどではなかった。４０ｍｇ／ｋｇから８０ｍｇ／ｋｇへの用量の２倍増加に関連した曝露の増加は１．４倍であっったが、８０ｍｇ／ｋｇから１２０ｍｇ／ｋｇでは、曝露の増加のないことが注目された。１２０ｍｇ／ｋｇから１６０ｍｇ／ｋｇへのＡＵＣｌａｓｔ曝露の増加は、用量比例性であった（用量の１．３倍増加が曝露の１．４倍増加をもたらした）。一貫した性関連の差（即ち、何らかのパラメータでの２倍以上の差）は、確認されなかった。
【０１６８】
９７６−２７−２についての平均ブピバカインＴｍａｘは、１．５〜４時間に及んで、ｔ１／２は、４０ｍｇ／ｋｇから１２０ｍｇ／ｋｇで、雌では４．２時間から２２．６時間、そして雄では７．６時間から２８．８時間に及んだ。１６０ｍｇ／ｋｇでは、ｔ１／２のさらなる増加を観測しなかった（雌と雄で、ぞれぞれ１９．５時間と２０．２時間）。９７６−２７−２の４０ｍｇ／ｋｇ用量では、ブピバカインの血漿濃度が概して（少なくとも各雌雄につき２〜３匹）３０時間まで認められた。（３０時間での雌雄合算の平均濃度は、５５ｎｇ／ｍＬであった）。８０〜１６０ｍｇ／ｋｇの用量では、血漿濃度が７２時間から９６時間まで観測された（７２〜９６時間での雌雄合算の平均値は、２０〜９０ｎｇ／ｍＬに及んだ）。血漿ブピバカイン濃度を図面４に示す。
【０１６９】
結論として、雄における用量増加に伴うＣｍａｘの増加の不足と雌における概して用量比例性ほどでない増加、ピーク血漿レベルに至る時間の延長、及び用量増加に伴うｔ１／２の増加は、９７６−２７−２粒子の皮下投与に続く初期バースト放出を伴わずにブピバカインが全身循環へ放出されることを実証する。
【０１７０】
７．２．ブピバカイン／ＰＬＧＡ粒子
実施例１Ａに従って、以下の変更を施して、粒子（９１４−９５−２）を製造した。４０重量％のＰＬＧＡ（Evonik Industries，Ｒｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ５０２Ｈ）と６０重量％のブピバカイン遊離塩基（Cayman Chemical Company）のアセトン中固形分２８重量％の均質溶液を調製した。このモールド／フィルムを２９０°Ｆにて１０フィート／分でラミネーターに通過させた。粒子を周囲条件でモールド中にほぼ１９日間保存した後で、採取した。
【０１７１】
本試験に使用する媒体は、上記に記載した、１０１９−４９であった。
注射に先立って、粒子を媒体に懸濁させた。媒体を加えて、下記の表中の投与濃度を達成した。懸濁液を生成するために、粒子を含有するバイアルへ媒体を加えた。このバイアルをほぼ３０秒間ボルテックスした。ボルテックス処理の後で、このバイアルをほぼ３０秒間音波処理した。このバイアルを３サイクルの間ボルテックス／音波処理すると、均一な懸濁液が生成した。所望される容量をシリンジ中へ吸引した後で、この懸濁液をメス−メスルアーロックコネクタを介したシリンジ−シリンジ混合によってさらに混合した。
【０１７２】
本試験では、スプラーグ・ドーリー・ラット（Ｎ＝６／性／群、但し、可溶性ブピバカイン群では、Ｎ＝６匹の雄）に、懸濁状態の９１４−９５−２を４０、８０、及び１６９．２ｍｇ／ｋｇのブピバカイン濃度（２６．７、５３．３、及び８０．０ｍｇ／ｍＬのブピバカイン）で、又は塩酸ブピバカイン溶液（Marcain, ０．７５％）を１０ｍｇ／ｋｇ（７．５ｍｇ／ｍＬ）で投与した。
【０１７３】
【表１６】
2019514976.tif 000019
【０１７４】
ＰＫ分析用の血液試料（Ｎ＝３／性／群／時点）を投与後０．２５、０．７５、１．５、２、４、６、８、２４、３０、４８、７２、及び９６時間で回収した。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを０．５００〜５００ｎｇ／ｍＬの範囲で使用して、ブピバカインの血漿濃度を測定した。WinNonlin（ノンコンパートメント解析）を使用して、ＰＫ分析を行った。ＰＫパラメータを下記の表に要約する。
【０１７５】
【表１７】
2019514976.tif 000020
【０１７６】
評価した薬物動態変数のいずれにおいても、一貫した性関連の差（即ち、何らかのパラメータでの２倍以上の差）は、無かった。９１４−９５−２の投与後、血漿ブピバカインＡＵＣは、用量増加に伴って増加した。しかしながら、平均Ｃｍａｘ値は、用量群全体で同様であった：Ｃｍａｘは、雄と雌の結果を平均して、４０、８０、及び１６９．２ｍｇ／ｋｇでそれぞれ７７７、７４４、及び８４４ｎｇ／ｍＬであった。４０ｍｇ／ｋｇから１６９．２ｍｇ／ｋｇの用量範囲にわたって、曝露の増加は、ＣｍａｘとＡＵＣについては用量に比例するほどではなかったが、４０ｍｇ／ｋｇから８０ｍｇ／ｋｇのＡＵＣでは、ほぼ用量比例性の増加があった。
【０１７７】
９１４−９５−２の動態プロフィールは、塩酸ブピバカイン溶液のそれと、それぞれ概ね４時間（１６９．２ｍｇ／ｋｇでは１．５時間）と１８分のＴｍａｘによって裏付けられるように、顕著に異なっていた。ブピバカインの血漿レベルは、塩酸ブピバカイン溶液では８時間まで検出し得た（８時間での平均＝５．６１ｎｇ／ｍＬ）が、４０ｍｇ／ｋｇの９１４−９５−２では７２時間まで検出し得て（７２時間での雌雄合算の平均＝０．８０５ｎｇ／ｍＬ）、８０ｍｇ／ｋｇと１６９．２ｍｇ／ｋｇの９１４−９５−２では９６時間まで検出し得た（９６時間での雌雄合算の平均は、それぞれ５．９４ｎｇ／ｍＬと５６．１ｎｇ／ｍＬ）。生じる平均ｔ１／２は、ブピバカイン溶液では１時間であったが、９１４−９５−２での平均ｔ１／２は、用量依存的に増加して、６．６時間〜３１．６時間に及んだ。９１４−９５−２のブピバカイン用量は、ブピバカイン溶液で投与された用量よりほぼ５〜２３倍高かったが、９１４−９５−２のＣｍａｘ値は、ブピバカイン溶液のＣｍａｘの０．７〜０．９倍にすぎなかった。しかしながら、９１４−２７−２のＡＵＣｌａｓｔ値は、ブピバカイン溶液でのそれよりほぼ５〜１２倍高かった。血漿ブピバカイン濃度−時間の曲線を図面５に示す。
【０１７８】
結論として、用量増加に伴うＣｍａｘの増加の不足、ピーク血漿レベルに至る時間の延長、及び用量増加に伴うｔ１／２の増加は、９７６−２７−２粒子の皮下投与に続く初期バースト放出を伴わずにブピバカインが全身循環へ放出されることを実証する。
【０１７９】
実施例８
皮下毒性試験：毒性動態分析と組織学的試験
種々の試験を行って、本発明の組成物の単回皮下投与に続くブピバカインへの全身曝露について判定した。
【０１８０】
雄と雌のスプラーグ・ドーリー・ラットのコホート由来の血液試料を分析して、本発明の組成物の単回皮下投与に続くブピバカインへの全身曝露について評価した。投与に続き、１１の時点：０．５、１．２５、２．５、４、６、８、２４、３０、４８、７２、及び９６時間で血液試料を採取した。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを使用してブピバカインの血漿濃度を測定して、WinNonlin（バージョン６．３）を使用してＰＫ分析を行った。
【０１８１】
８．１．ブピバカイン粒子
実施例１Ｂに従って、以下の変更を施して、ブピバカイン粒子（１０３１−１３）を製造した。このモールド／フィルムを３００°Ｆにて１０フィート／分でラミネーターに通過させた。粒子を周囲条件でモールド中にほぼ１４日間保存した後で、採取した。
【０１８２】
媒体（１０７２−７）を製造した。初めに、１．０重量％のヒアルロン酸（１，０００ｋＤａ，Stanford，カタログ番号：ＨＡ−ＥＰ−１．８）、５０ｍＭトリス（トリス塩基とトリスＨＣｌとして）、１００ｍＭ塩化ナトリウム、０．１重量％ポリソルベート８０を含有するストック組成物を作製した。このストック組成物を高圧蒸気滅菌した。このストック組成物の粘度は、ほぼ２０００〜３５００ｃｐｓであった。次に、５０ｍＭトリス（トリス塩基とトリスＨＣｌとして）、１００ｍＭ塩化ナトリウム、０．１重量％ポリソルベート８０を含有する希釈用組成物を作製した。希釈用組成物のｐＨは、ほぼ８へ調整した。希釈用組成物は、除菌濾過した。ストック組成物を希釈用組成物で希釈した。この媒体は、０．６１重量％のヒアルロン酸（１，０００ｋＤａ，Stanford，カタログ番号：ＨＡ−ＥＰ−１．８）、５０ｍＭトリス（トリス塩基とトリスＨＣｌとして）、１００ｍＭ塩化ナトリウム、０．１重量％のポリソルベート８０の最終組成を有した。ｐＨは、ほぼ８．０２であった。粘度は、ほぼ３８２ｃｐｓであった。
【０１８３】
注射に先立って、粒子を媒体に懸濁させた。媒体を加えて、下記の表中の投与濃度を達成した。懸濁液を生成するために、粒子を含有するバイアルへ媒体を加えた。このバイアルをほぼ３０秒間ボルテックスした。ボルテックス処理の後で、このバイアルをほぼ３０秒間音波処理した。このバイアルを少なくとも５サイクルの間ボルテックス／音波処理すると、均一な懸濁液が生成した。所望される容量をシリンジ中へ吸引した後で、この懸濁液をメス−メスルアーロックコネクタを介したシリンジ−シリンジ混合によってさらに混合した。下記の表は、この懸濁液のブピバカイン濃度とブピバカイン用量について詳述する。
【０１８４】
【表１８】
2019514976.tif 000021
【０１８５】
１０３１−１３を４０、８０、及び１６０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで投与した。ＰＫパラメータについて分析して、下記の表に要約する。１６０ｍｇ／ｋｇ用量では、雄と雌の両方で、終末速度定数を十分に評価し得なかったことに注目されたい。
【０１８６】
【表１９】
2019514976.tif 000022
【０１８７】
Ｔｍａｘは、投与後４時間又は６時間であって、皮下投与された１０３１−１３がすべての薬物を即座に放出する（「投薬ダンプ（dose dump）」）わけではないことを示した。Ｔｍａｘは、用量レベルが高くなるほど遅れる傾向があって、皮下用量の増加が吸収相を延長させる傾向があることを示した。
【０１８８】
ＣｍａｘとＡＵＣｌａｓｔによって測定されるような、ブピバカインの全身曝露は、４０〜１６０ｍｇ／ｋｇの用量範囲では、用量の増加に伴って増加した。しかしながら、これらの増加は、用量に比例するほどではなかった。全体として、１６０ｍｇ／ｋｇの最高用量レベルでのＣｍａｘ値とＡＵＣｌａｓｔ値は、線形関係より予測される値より、それぞれほぼ６６％と３４％低かった。雄と雌の間では、曝露が概して同様であった。
【０１８９】
終末半減期については、すべての試験群で十分に評価されたわけではないが、評価された場合、それは、性別に無関係であって、用量増加に伴って増加するように見えた。平均ｔ１／２は、用量の２倍増加に伴って、ほぼ３倍増加した；ｔ１／２は、４０ｍｇ／ｋｇと８０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで、それぞれ約１０．７時間と３１．５時間であった（雌雄合算）。血漿ブピバカイン濃度−時間曲線を図面６に示す。
【０１９０】
ラットのブピバカインへの全身曝露の速度と程度は、４０〜１６０ｍｇ／ｋｇの用量範囲にわたる１０３１−１３の単回皮下投与に続く、非線形の（用量依存的な）動態を特徴とするように見えた。１０３１−１３の用量を４０ｍｇ／ｋｇより高く増加させると、線形関係より予測されるより低い全身曝露を生じる可能性があって、このことは、ブピバカインの吸収が溶解律速的であることに一致している。かくして、Ｃｍａｘは、ＡＵＣと同等の割合で増加しないので、１０３１−１３が潜在的に改善された忍容性プロフィールを伴って持続的な曝露を提供することが可能であることを示唆する。
【０１９１】
皮下投与される単回用量の毒性について、ラットにおいて組織学的にも評価した。
試験物の局所毒性とＴＫについて評価するために設計した試験において、スプラーグ・ドーリー・ラット（Ｎ＝１５／性／群、主要試験；Ｎ＝３／性／対照群、及び６／性／試験物群、ＴＫコホート用）に１０３１−１３の単回皮下用量を４０、８０、及び１６０ｍｇ／ｋｇで、又は媒体対照を投与した。主要試験群では、１０匹／性／群を３日目に安楽死させて、５匹／性／群を１５日目に安楽死させた。
【０１９２】
臨床所見（皮膚所見を除く）、体重又は体重変化、食餌消費、血液学、凝固、血清化学、尿分析、臓器重量、又は肉眼剖検に対する、試験物関連の有害効果は無かった。
３日目に、４０ｍｇ／ｋｇ以上で投与されたすべての雄と雌の皮下組織において、変化が存在した。組織層筋肉のすぐ下にある皮下組織の線維性結合組織成分において、境界明瞭な単一の蒼白領域が存在したのである。この蒼白領域には、試験物と一致した様々な大きさの粒子の大集団が含まれた。この蒼白領域の端で、粒子は大きさが減衰して、それらの境界は一緒に崩れて、周囲組織における炎症反応と調和する好酸球増多層を形成した。この炎症反応には、好中球性炎症細胞の浸潤、鬱血／血管拡張、及び壊死が含まれた。この炎症反応は、用量群全体で、発生率と重症度が同様であった。
【０１９３】
媒体対照と１０３１−１３の両方の注射部位で観察された変化には、単核炎症細胞浸潤（マクロファージ、より少ないリンパ球、及び未熟な線維芽細胞を伴う偶発的な形質細胞から構成される）と浮腫が含まれた。これらの変化は、媒体対照より１０３１−１３群（すべての用量レベル）において重症度が大きかった。１０３１−１３群内では、これらの変化は、雌において重症度が用量関連性の増加を示したが、雄では用量群全体で同様であった。顕著で重篤なレベルでの炎症細胞浸潤には、周囲の筋肉を伴うことが多かった。
【０１９４】
１５日目には、蒼白領域、壊死、及び好中球浸潤が１６０ｍｇ／ｋｇでは雄と雌の一方又は両方に、そして８０ｍｇ／ｋｇでは１匹の雄に（蒼白領域のみ）存続した。いずれの変化も、３日目の対応する用量群に比較して、発生率が減少した。蒼白領域と壊死は、重症度も減少した。８０ｍｇ／ｋｇ以上では、雄と雌の両方で脂肪浸潤が存在して、４０ｍｇ／ｋｇでは、１匹の雌がその発生率と重症度において用量関連性の増加を示した。いずれの変化も、組織層筋肉のすぐ下にある皮下組織の線維性結合組織成分に定位された。
【０１９５】
すべての用量レベル（対照が含まれる）で単核炎症細胞浸潤が存在したが、対応する３日目の用量群に比較して、重症度が減少していた。その浸潤の重症度は、すべての用量レベル（特に、８０ｍｇ／ｋｇと１６０ｍｇ／ｋｇ）の１０３１−１３注射部位で対照部位（最小の重症度）におけるより大きくて、用量依存的な関連性を示した。対照部位での浸潤は、マクロファージが稀なリンパ球から主に構成されて、しばしば血管周囲に向かっていた。１０３１−１３部位での浸潤は、リンパ球、可変数のマクロファージ、及び稀な巨細胞の混合物から構成された。１０３１−１３注射部位でのマクロファージには、空胞状の細胞質があった。すべての用量群の雌雄の一方又は両方で、最小〜軽度の線維形成が発生したが、雄では１６０ｍｇ／ｋｇで発生率と重症度が増加した。主に１６０ｍｇ／ｋｇの１０３１−１３用量レベルでは、雌雄において心血管形成を観察した。
【０１９６】
８．２．ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子
実施例１Ａに従って、以下の変更を施して、粒子（１０３１−１２）を製造した。４０重量％のＰＬＧＡ（Evonik Industries，Ｒｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ５０２Ｈ）と６０重量％のブピバカイン遊離塩基（Cayman Chemical Company）のアセトン中固形分２８重量％の均質溶液を調製した。このモールド／フィルムを２９０°Ｆにて１０フィート／分でラミネーターに通過させた。粒子をほぼ４０℃／２５％相対湿度でモールド中にほぼ１１日間保存した後で、採取した。
【０１９７】
加えて、プラセボ粒子（９１４−９５−４）も製造した。初めに、粒子ストック溶液を調製した。１００重量％のＰＬＧＡ（Evonik Industries，Ｒｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ５０２Ｈ）のアセトン中固形分２８重量％の均質溶液を調製した。この粒子ストック溶液を、無菌の０．２μｍ  ＰＴＦＥフィルターに通して濾過した。生じる粒子ストック溶液を、ポリビニルアルコール採取層でプレコートした４ｍｉｌ  ＰＥＴフィルム上へ室温で流延した。この乾燥させた流延フィルムを２５μｍの六角形モールド（Liquidia Technologies 社、ノースカロライナ州モリスビル）に対してラミネート加工した。このモールド／フィルムを２９０°Ｆにて１０フィート／分でラミネーターに通過させた。粒子を採取して滅菌した。
【０１９８】
本試験に使用する媒体は、上記に記載した、１０７２−７であった。
注射に先立って、粒子を媒体に懸濁させた。媒体を加えて、下記の表中の投与濃度を達成した。懸濁液を生成するために、粒子を含有するバイアルへ媒体を加えた。このバイアルをほぼ３０秒間ボルテックスした。ボルテックス処理の後で、このバイアルをほぼ３０秒間音波処理した。このバイアルを少なくとも３サイクルの間ボルテックス／音波処理すると、均一な懸濁液が生成した。所望される容量をシリンジ中へ吸引した後で、この懸濁液をメス−メスルアーロックコネクタを介したシリンジ−シリンジ混合によってさらに混合した。下記の表は、この懸濁液のブピバカイン濃度とブピバカイン用量について詳述する。
【０１９９】
【表２０】
2019514976.tif 000023
【０２００】
１０３１−１２を２０ｍｇ／ｋｇ又は８０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで投与した。ＰＫパラメータについて下記の表に要約する。２０ｍｇ／ｋｇ用量の雄で、終末速度定数を十分に評価し得なかったことに注目されたい。
【０２０１】
【表２１】
2019514976.tif 000024
【０２０２】
Ｔｍａｘは、投与後、８０ｍｇ／ｋｇ用量の雄（１．２５時間のＴｍａｘを有した）以外は、６時間であった。血漿レベルは、投与後２．５〜８時間で相対的に似通っていて、吸収が概して遅い（「投薬ダンプ（dose dump）」が無い）ことを示した。
【０２０３】
ラットのブピバカインに対する全身曝露（ＣｍａｘとＡＵＣｌａｓｔによって測定されるような）は、２０〜８０ｍｇ／ｋｇの用量範囲にわたって用量の増加に伴って増加したが、これらの増加は、用量に比例するほどではなかった。全体として、最高用量レベル（８０ｍｇ／ｋｇ）でのＣｍａｘ値とＡＵＣｌａｓｔ値は、線形関係より予測される値より、それぞれほぼ５７％と２５％低かった。雄と雌の間では、曝露が概して同様であった。
【０２０４】
終末半減期については、すべての試験群で十分に評価し得たわけではないが、評価された場合、それは、性別に無関係であって、用量増加に伴って増加するように見えた。平均ｔ１／２は、用量の４倍増加に伴って、ほぼ４倍増加した；ｔ１／２は、２０ｍｇ／ｋｇと８０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで、それぞれ約６．６時間と２７時間であった（雌雄合算）。血漿ブピバカイン濃度−時間曲線を図面７に示す。
【０２０５】
ラットのブピバカインへの全身曝露の速度と程度は、２０〜８０ｍｇ／ｋｇの用量範囲にわたる単回皮下投与に続く、非線形の（用量依存的な）動態を特徴とするように見えた。ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子の用量を２０ｍｇ／ｋｇより高く増加させると、線形関係より予測されるより低い全身曝露を生じる可能性があって、このことは、ブピバカインの吸収が溶解律速的であることに一致している。かくして、Ｃｍａｘは、ＡＵＣと同等の割合で増加しないので、ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子が潜在的に改善された忍容性プロフィールを伴って持続的な曝露を提供することが可能であることを示唆する。
【０２０６】
皮下投与される単回用量の毒性について、ラットにおいて組織学的にも評価した。
試験物の局所毒性と毒物動態（ＴＫ）について評価するために設計したＧＬＰ試験において、スプラーグ・ドーリー・ラット（Ｎ＝２０／性／群、主要試験；Ｎ＝３／性／対照群、及び６／性／試験物群、ＴＫコホート用）に媒体（１０７２−７）、プラセボ粒子（９１４−９５−４）、２０又は８０ｍｇ／ｋｇの１０３１−１２の単回皮下用量を投与した。主要試験群では、５匹／性／群を７、１４、３０、及び６０日目に安楽死させた。１日目の皮下投与に続く０．５、１．２５、２．５、４、６、８、２４、３０、４８、及び７２時間で、ＴＫ試験群より血液試料を採取した。
【０２０７】
組織学的検査のために、５匹の動物／性／群を７、１４、３０、及び６０日目に安楽死させた。死亡率、瀕死度（moribundity）、臨床所見、体重、及び食餌消費によって毒性について評価した。剖検時に、臨床病理、臓器重量、巨視的観察、及び注射部位と漏出性（draining）鼠蹊リンパ節の微視的病理について評価した。
【０２０８】
本試験では、死亡率、瀕死度、臨床所見（注射部位を除く）、体重、及び食餌消費に対する、試験物関連の効果は無かった。臨床所見には、一過性の浮腫と注射部位に局在化した隆起部が含まれた。剖検時には、臨床病理、臓器重量、及び巨視的観察に対する、試験物関連の効果は無かった。
【０２０９】
組織学的所見には、皮下組織に限定された、可逆性又は反転性の炎症反応と治癒反応が含まれた。すべての注射部位の微視的変化は、皮下組織の表面線維層内の小領域に局在化していた。ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子群とＰＬＧＡプラセボ群の両方で、７日目と１４日目に粒子沈着が存在した。これらの粒子沈着は、８０ｍｇ／ｋｇ用量レベルでより持続的であって、この沈着は、３０日目又は６０日目には、注射部位のどこでももはや観察されなかった。ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子群並びにＰＬＧＡプラセボ群に対する炎症反応は、１４日目、３０日目、及び６０日目にわたって進行的に減少した。この減少は、粒子の消失と一致した。この炎症反応は、治癒反応（即ち、新血管形成、線維形成、及び脂肪浸潤）の消散がほとんど完全になる６０日目までに完全に消散していた。漏出性の鼠蹊リンパ節には、７、１４、３０、又は６０日目に変化を観察しなかった。
【０２１０】
実施例９
ユカタン系ミニチュア豚に皮下投与されたブピバカインの薬物動態評価
ブピバカイン粒子又はＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子として皮下投与される場合のユカタン系ミニチュア豚におけるブピバカインのＰＫプロフィールを特徴付けるために試験を実施した。追加的に、そのＰＫプロフィールをＥｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）（Pacira Pharmaceuticals 社、カリフォルニア州サンディエゴ）と塩酸ブピバカイン溶液（Ｍａｒｃａｉｎｅ，０．７５％）のプロフィールと比較した。
【０２１１】
実施例１Ｂに従って、以下の変更を施して、粒子（９１４−９８−１）を製造した。このモールド／フィルムを２９０°Ｆにて１０フィート／分でラミネーターに通過させた。粒子をモールド中にほぼ１０日間保存した後で、採取した。
【０２１２】
実施例１Ａに従って、以下の変更を施して、粒子（９１４−９８−２）を製造した。４０重量％のＰＬＧＡ（Evonik Industries，Ｒｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ５０２Ｈ）と６０重量％のブピバカイン遊離塩基（Cayman Chemical Company）のアセトン中固形分２８重量％の均質溶液を調製した。このモールド／フィルムを２９０°Ｆにて１０フィート／分でラミネーターに通過させた。粒子をモールド中にほぼ１０日間保存した後で、採取した。
【０２１３】
媒体（１０６９−７）も製造した。初めに、０．８２重量％のヒアルロン酸（１，０００ｋＤａ，Stanford，カタログ番号：ＨＡ−ＥＰ−１．８）、５０ｍＭトリス（トリス塩基とトリスＨＣｌとして）、１００ｍＭ塩化ナトリウム、０．１重量％ポリソルベート８０を含有するストック組成物を作製した。このストック組成物を高圧蒸気滅菌した。このストック組成物の粘度は、ほぼ６００〜７５０ｃｐｓであった。次に、５０ｍＭトリス（トリス塩基とトリスＨＣｌとして）、１００ｍＭ塩化ナトリウム、０．１重量％ポリソルベート８０を含有する希釈用組成物を作製した。希釈用組成物のｐＨは、ほぼ８へ調整した。希釈用組成物は、除菌濾過した。８５重量％のストック組成物と１５重量％の希釈用組成物を合わせることによって、ストック組成物を希釈用組成物で希釈した。この媒体（１０６９−７）の組成は、０．７重量％のヒアルロン酸（１，０００ｋＤａ，Stanford，カタログ番号：ＨＡ−ＥＰ−１．８）、５０ｍＭトリス、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１重量％のポリソルベート８０であった。この媒体を高圧蒸気滅菌した。媒体のｐＨはほぼ８であって、粘度はほぼ３６０ｃｐｓであった。
【０２１４】
注射に先立って、媒体を粒子へ加えて、投与用の懸濁液を生成した。媒体を加えて、下記の表中の投与濃度を達成した。懸濁液を生成するために、粒子を含有するバイアルへ媒体を加えた。このバイアルをほぼ１５秒間ボルテックスした。ボルテックス処理の後で、このバイアルをほぼ１５秒間音波処理した。このバイアルを３〜６サイクルの間ボルテックス／音波処理すると、均一な懸濁液が生成した。
【０２１５】
本試験では、ユカタン系ミニチュア豚（Ｎ＝３匹の雄／群）に、下記の表に記載のように、Ｅｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）、Ｍａｒｃａｉｎｅ、９１４−９８−２、又は９１４−９８−１の単回ＳＣ注射を投与した。
【０２１６】
【表２２】
2019514976.tif 000025
【０２１７】
ＰＫ分析用の血液試料を投与後５分と３０分、そして１、２、４、６、８、１２、２４、４８、７２、９６、及び１２０時間で回収した。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを０．５００〜５００ｎｇ／ｍＬの測定範囲で使用してブピバカインの血漿濃度を測定して、WinNonlin を使用して、ＰＫ分析を実施した。
【０２１８】
血漿ブピバカイン曝露は、９１４−９８−２と９１４−９８−１の両方で用量増加に伴って増加し、ＣｍａｘとＡＵＣｌａｓｔの増加は、用量にほぼ比例した。９１４−９８−２の用量の１：２：３倍の増加がＣｍａｘの１：１．７：２．９倍の増加とＡＵＣｌａｓｔの１：１．６：３．０倍の増加をもたらしたのである。同様に、９１４−９８−１の用量の１：２：３倍の増加は、ブピバカインＣｍａｘの１：１．４：１．８倍の増加とＡＵＣｌａｓｔの１：１．８：３．０倍の増加によって特徴付けられた。平均ｔ１／２は、用量に依存せず、９１４−９８−２と９１４−９８−１の両方で９．４〜１４．８時間に及んだ。同様に、平均Ｔｍａｘは、９１４−９８−２と９１４−９８−１の両方で用量に依存しなかった。９１４−９８−１の平均Ｔｍａｘ値は、４．０時間〜５．３時間に及んだ。９１４−９８−２では平均Ｔｍａｘがより大きな変動性を示し、０．８時間〜４．８時間に及んだが、９１４−９８−１より短い時間である傾向があった。４ｍｇ／ｋｇ用量での９１４−９８−２について注目された変動性は、一匹の動物が１２時間のＴｍａｘを明示したことによるものであって、これを除けば、１．３時間の平均Ｔｍａｘをもたらした。
【０２１９】
９１４−９８−２と９１４−９８−１で、ブピバカインの動態プロフィールは、Ｔｍａｘの差を例外とすれば、概ね似通っていた。９１４−９８−２と９１４−９８−１の動態プロフィールは、ブピバカイン溶液とリポソームのブピバカインに比較した場合に、異なっていた。
【０２２０】
２ｍｇ／ｋｇの用量で、ブピバカイン溶液は、９１４−９８−２に比較して１０倍短いＴｍａｘとほぼ３倍高いＣｍａｘを明示した。９１４−９８−１に比較した場合、ブピバカイン溶液は、ほぼ６６倍短いＴｍａｘとほぼ２倍高いＣｍａｘを明示した。
【０２２１】
４ｍｇ／ｋｇの用量で、Ｅｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）は、２ｍｇ／ｋｇで投与されたブピバカイン溶液に匹敵するＴｍａｘを明示した。Ｅｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）は、９１４−９８−１と９１４−９８−２のＴｍａｘよりほぼ５０〜６０倍短いＴｍａｘを明示した。加えて、平均ｔ１／２は、ほぼ２〜２．５倍長かった。
【０２２２】
６ｍｇ／ｋｇの用量で、９１４−９８−２と９１４−９８−１のＣｍａｘは、ほぼ等しかった。
データを下記の表に要約する。結果を平均±標準偏差として表す。試験した各群につき、Ｎ＝３。
【０２２３】
【表２３】
2019514976.tif 000026
【０２２４】
すべての試験物についての「ブピバカインの血漿濃度」対「時間」を図面８Ａ、図面８Ｂ、及び図面８Ｃに図解する。図面８Ａは、２ｍｇ／ｋｇ用量についての平均ブピバカイン血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）を図示する。図面８Ｂは、４ｍｇ／ｋｇ用量についての平均ブピバカイン血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）を図示する。図面８Ｃは、６ｍｇ／ｋｇ用量についての平均ブピバカイン血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）を図示する。
【０２２５】
このように、９１４−９８−２製剤と９１４−９８−１製剤の薬物動態は、豚において同等であって、唯一の違いは、ピーク到達時間への影響であった。９１４−９８−２と９１４−９８−１が６ｍｇ／ｋｇで可溶性塩酸ブピバカインのそれより低いピーク濃度をもたらすことは、注目に値する。
【０２２６】
実施例１０
ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子を使用する、豚の切開実施例
媒体中に懸濁したＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子として、又はＥｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）として投与される場合のユカタン系ミニチュア豚におけるブピバカインの薬物動態（ＰＫ）プロフィールを決定するために試験を行った。
【０２２７】
実施例１Ａに従って、以下の変更を施して、ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子（１１１０−１６１）を製造した。４０重量％のＰＬＧＡ（Evonik Industries，Ｒｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ５０２Ｈ）と６０重量％のブピバカイン遊離塩基（Cambrex）のアセトン中固形分２８重量％の均質溶液を調製した。このモールド／フィルムを２９０°Ｆにて１０フィート／分でラミネーターに通過させた。粒子をモールド中にほぼ７日間保存した後で、採取した。
【０２２８】
媒体（１０７２−２２）を製造した。初めに、１．０重量％のヒアルロン酸（１，０００ｋＤａ，Stanford，カタログ番号：ＨＡ−ＥＰ−１．８）、５０ｍＭトリス（トリス塩基とトリスＨＣｌとして）、１００ｍＭ塩化ナトリウム、０．１重量％ポリソルベート８０を含有するストック組成物を作製した。このストック組成物を高圧蒸気滅菌した。このストック組成物の粘度は、ほぼ２０００〜３５００ｃｐｓであった。次に、５０ｍＭトリス（トリス塩基とトリスＨＣｌとして）、１００ｍＭ塩化ナトリウム、０．１重量％ポリソルベート８０を含有する希釈用組成物を作製した。希釈用組成物のｐＨは、ほぼ８へ調整した。希釈用組成物は、除菌濾過した。このストック組成物を希釈用組成物で希釈した。この媒体は、０．６１重量％のヒアルロン酸（１，０００ｋＤａ，Stanford，カタログ番号：ＨＡ−ＥＰ−１．８）、５０ｍＭトリス（トリス塩基とトリスＨＣｌとして）、１００ｍＭ塩化ナトリウム、０．１重量％のポリソルベート８０の最終組成を有した。ｐＨは、ほぼ８．２であった。粘度は、ほぼ３２２ｃｐｓであった。
【０２２９】
注射に先立って、本明細書に記載の方法に従って、粒子を媒体に懸濁させた。媒体を加えて、下記の表に示される投与濃度を達成した。下記の表は、この懸濁液のブピバカイン濃度とブピバカイン用量について詳述する。
【０２３０】
【表２４】
2019514976.tif 000027
【０２３１】
少なくとも７日間の順化期に続いて、２４匹のユカタン系ミニチュア豚（１２匹の雄と１２匹の雌）を４つの処理群の１つへ割り当てた。試験１日目に、手術に先立って、絶食動物に単回用量のＴｅｌａｚｏｌ及びＸｙｌａｚｉｎｅ（２．２ｍｇ／ｋｇ，ＩＭ）とケトプロフェン（２．０ｍｇ／ｋｇ，ＩＭ）を与えた。この動物をイソフルラン（１００％酸素中０．５〜５％）の吸入による直接投与で麻酔導入して維持した。
【０２３２】
麻酔状態になったならば、電動バリカンを使用して各動物の左側頸部と左背部を刈毛して、クロルヘキシジンとアルコールの交互ワイプを使用して切開に備えた。次いで、この手術領域に覆布した。
【０２３３】
各動物には、全層の切開創傷がその背に沿って、正中線に垂直に創出された。創傷創出に続き、媒体中のＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子又はＥｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）の単回用量を創傷組織を介して皮下的に（ＳＱ）注射した。創傷の各端から等距離にある切開部の各側に全容量のほぼ半分を投与した。注射に先立ってシリンジプランジャーを引き戻して、注射針が血管を貫通しないことを確実にした。
【０２３４】
下記の表のパラメータについて、試験の間モニターした。
【０２３５】
【表２５】
2019514976.tif 000028
【０２３６】
血液試料を投与前と用量投与に続く５、１５、及び３０分と、１、２、４、８、２４、４８、７２、９６、１２０、及び１４４時間で回収した。薬物動態（ＰＫ）モデリング（Phoenix WinNonlin 6.4, Certara, ニュージャージー州プリンストン）を実施した。投与量に依存する、ＡＵＣに基づく血漿濃度−時間曲線より、全身曝露について評価した。ＣＭＡＸ、ＴＭＡＸ、ＴＬＡＳＴ、ｔ１／２、ＡＵＣＬＡＳＴ、及びＡＵＣ０−ａの薬物動態変数を推定した。ＣＭＡＸ、ＴＭＡＸ、及びＴＬＡＳＴは、濃度−時間の結果より直接導いた。加えて、用量線形性、クリアランス、及び分布について決定した。下記の表は、これらのＰＫパラメータについて詳述する。
【０２３７】
【表２６】
2019514976.tif 000029
【０２３８】
ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子とＥｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）の全３種の用量レベルで、ブピバカイン全身曝露における性差が明白であった。雌豚では、雄豚より大きなブピバカイン全身曝露が明示されたのである。雄雌のそれぞれで、Ｅｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）の６ｍｇ／ｋｇでのＳＱ投与は、最低のブピバカイン平均Ｃｍａｘをもたらした。６ｍｇ／ｋｇで、Ｅｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）（登録商標）とＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子は、同様の全身ブピバカインＡＵＣをもたらして、それぞれが同様のｔ１／２を保有した。ブピバカインＴｍａｘは、Ｅｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）で約５分であって、ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子調製物では、１〜２時間に及んだ。雄豚では、ブピバカインの平均ＡＵＣｌａｓｔとＡＵＣ０−αに用量関連性の増加があったが、ブピバカインの平均Ｃｍａｘは、ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子の１８ｍｇ／ｋｇ用量と３６ｍｇ／ｋｇ用量の間で同様であった。雌豚では、平均ＡＵＣｌａｓｔとＡＵＣ０−αによって裏付けられるような全身ブピバカイン曝露の用量比例性の増加があった。雄豚と雌豚の両方で、ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子用量の増加に伴う、平均ブピバカインｔ１／２の用量関連性の増加があった。
【０２３９】
ユカタン系ミニチュア豚における全層切開創傷付近でのＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子の単回皮下投与に続く、ブピバカインの制御された遅延放出は、全身循環への初期ブピバカインボーラス放出の不足、１８ｍｇ／ｋｇ以上の用量でのＣｍａｘ増加の不足、ピーク血漿レベルに到達する時間の延長、及び用量増加に伴うｔ１／２の増加によって実証された。
【０２４０】
ユカタン系ミニチュア豚における全層切開部付近でのＥｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）の６ｍｇ／ｋｇでの単回皮下注射は、ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子製剤に比較して、より低いＣｍａｘだが早いＴｍａｘをもたらした。
【０２４１】
実施例１１
ブピバカイン粒子を使用する、豚の切開実施例
媒体中に懸濁したブピバカイン粒子として、又はＭａｒｃａｉｎｅ（登録商標）として投与される場合のユカタン系ミニチュア豚におけるブピバカインの薬物動態（ＰＫ）プロフィールを決定するために試験を行った。
【０２４２】
実施例１Ｂに従って、以下の変更を施して、ブピバカイン粒子（１１１０−１６２）を製造した。このモールド／フィルムを３００°Ｆにて１０フィート／分でラミネーターに通過させた。粒子をモールド中にほぼ７日間保存した後で、採取した。
【０２４３】
本試験では、上記に記載したような媒体（１０７２−２２）も使用した。
注射に先立って、本明細書に記載の方法に従って、粒子を媒体に懸濁させた。媒体を加えて、下記の表に示される投与濃度を達成した。下記の表は、この懸濁液のブピバカイン濃度とブピバカイン用量について詳述する。
【０２４４】
【表２７】
2019514976.tif 000030
【０２４５】
少なくとも７日間の順化期に続いて、２４匹のユカタン系ミニチュア豚（１２匹の雄と１２匹の雌）を４つの処理群の１つへ割り当てた。試験１日目に、手術に先立って、絶食動物に単回用量のＴｅｌａｚｏｌ及びＸｙｌａｚｉｎｅ（２．２ｍｇ／ｋｇ，ＩＭ）とケトプロフェン（２．０ｍｇ／ｋｇ，ＩＭ）を与えた。この動物をイソフルラン（１００％酸素中０．５〜５％）の吸入による直接投与で麻酔導入して維持した。
【０２４６】
各動物には、カットダウン法によって、左側頸部の頸静脈の中に一時的留置カテーテルを入れた。次いで、このカテーテルを頸部背側に露出させて、適正な縫合糸で所定の位置に縫合した。切開部位全体にガーゼをかけて、適正な包帯材料で所定の位置に保持した。この一時的カテーテルは、血液回収手技に使用した。
【０２４７】
各動物には、全層の切開創傷がその背に沿って、正中線付近で創出された。創傷創出に続き、媒体中のブピバカイン粒子又はＭａｒｃａｉｎｅの単回用量を創傷組織を介して皮下的に（ＳＱ）注射した。
【０２４８】
下記の表のパラメータについて、試験の間モニターした。
【０２４９】
【表２８】
2019514976.tif 000031
【０２５０】
血液試料を投与前と用量投与に続く５、１５、及び３０分と、１、２、４、８、２４、４８、７２、９６、１２０、及び１４４時間で回収した。薬物動態（ＰＫ）モデリング（Phoenix WinNonlin 6.4, Certara, ニュージャージー州プリンストン）を実施した。投与量に依存する、ＡＵＣに基づく血漿濃度−時間曲線より、全身曝露について評価した。ＣＭＡＸ、ＴＭＡＸ、ＴＬＡＳＴ、ｔ１／２、ＡＵＣＬＡＳＴ、及びＡＵＣ０−ａの薬物動態変数を推定した。ＣＭＡＸ、ＴＭＡＸ、及びＴＬＡＳＴは、濃度−時間の結果より直接導いた。加えて、用量線形性、クリアランス、及び分布について決定した。下記の表は、これらのＰＫパラメータについて詳述する。
【０２５１】
【表２９】
2019514976.tif 000032
【０２５２】
試験デザインに従って、すべての動物がそのそれぞれの処理薬剤の適正量を成功裡に投与されて、投与の間に有害反応は観測されなかった。２日目に、主に、低用量ブピバカイン粒子群、高用量ブピバカイン粒子群、及びＭａｒｃａｉｎｅ群の動物において認められた、嘔吐及び／又は下痢の多数の症例があった。しかしながら、この試験の間に、動物の死亡は観察されなかった。記録された動物の体重は、いずれも若い実験用豚の正常範囲内であるとみなされた。
【０２５３】
２ｍｇ／ｋｇで投与されるＭａｒｃａｉｎｅ（登録商標）又は６、１８、又は３６ｍｇ／ｋｇで投与されるブピバカイン粒子の単回ＳＱ投与の後で、ブピバカインの全身曝露と薬物動態を決定した。ブピバカイン粒子の全３種の用量レベルで、ブピバカイン全身曝露における性差が明白であった。約１０時間の血漿ブピバカイン終末半減期は、すべての製剤と用量にわたって同様であった。
【０２５４】
Ｍａｒｃａｉｎｅ（登録商標）は、迅速なＴｍａｘ、すべてのブピバカイン粒子用量より大きいＣｍａｘとより低いＡＵＣによって特徴付けられた。ブピバカインの平均Ｃｍａｘにおける、ブピバカイン粒子の用量関連性の増加の証拠が雄豚ではほとんどなかった。しかしながら、ＡＵＣｌａｓｔとＡＵＣ０−αによって測定されるような、全身ブピバカイン曝露における、ブピバカイン粒子の用量関連性の増加が雄豚と雌豚の両方で有った。ブピバカイン粒子のすべての用量レベルでの単回ＳＱ投与は、Ｍａｒｃａｉｎｅ（登録商標）より大きな全身ブピバカイン曝露をもたらした。
【０２５５】
結論として、ユカタン系ミニチュア豚における全層切開部付近での６、１８、及び３６ｍｇ／ｋｇで投与されるブピバカイン粒子の単回皮下（ＳＱ）注射は、雄豚より高い全身曝露を有する雌豚での曝露において、用量比例性の増加をもたらした。ユカタン系ミニチュア豚における全層切開部付近でのＭａｒｃａｉｎｅ（登録商標）の２ｍｇ／ｋｇでの単回皮下（ＳＱ）注射は、低い全身曝露を伴う迅速な吸収をもたらした。Ｍａｒｃａｉｎｅ（登録商標）の血漿濃度は、ブピバカイン粒子製剤によって生じるもの以上であったが、Ｍａｒｃａｉｎｅとして送達されるブピバカインの全身曝露は、ブピバカイン粒子製剤ほどのものではなかった。
【０２５６】
実施例１２
ラットにおける最大耐量（ＭＴＤ）試験
単回ＳＣ注射に続く雄と雌のスプラーグ・ドーリー・ラットにおける、ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子とブピバカイン粒子の最大耐量（ＭＴＤ）を決定するために、諸試験を行った。
【０２５７】
１２．１．ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子
実施例１Ａに従って、以下の変更を施して、粒子（９７６−２７−１）を製造した。４０重量％のＰＬＧＡ（Evonik Industries，Ｒｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ５０２Ｈ）と６０重量％のブピバカイン遊離塩基（Cayman Chemical Company）のアセトン中固形分２８重量％の均質溶液を調製した。粒子をほぼ４０℃／２５％相対湿度でモールド中にほぼ１２日間保存した後で、採取した。
【０２５８】
本試験における使用のために、媒体（１０１９−２２−１）を製造した。初めに、１．０重量％のヒアルロン酸（１，０００ｋＤａ，Stanford，カタログ番号：ＨＡ−ＥＰ−１．８）、５０ｍＭトリス（トリス塩基とトリスＨＣｌとして）、１００ｍＭ塩化ナトリウム、０．１重量％ポリソルベート８０を含有するストック組成物を作製した。このストック組成物を高圧蒸気滅菌した。このストック組成物の粘度は、ほぼ２０００〜３５００ｃｐｓであった。次に、５０ｍＭトリス（トリス塩基とトリスＨＣｌとして）、１００ｍＭ塩化ナトリウム、０．１重量％ポリソルベート８０を含有する希釈用組成物を作製した。希釈用組成物のｐＨは、ほぼ８へ調整した。７５重量％のストック組成物と２５重量％の希釈用組成物を合わせることによって、ストック組成物を希釈用組成物で希釈した。この媒体の最終組成は、０．７５重量％のヒアルロン酸（１，０００ｋＤａ，Stanford，カタログ番号：ＨＡ−ＥＰ−１．８）、５０ｍＭトリス（トリス塩基とトリスＨＣｌとして）、１００ｍＭ塩化ナトリウム、０．１重量％のポリソルベート８０であった。この媒体のｐＨは、ほぼ８であった。この媒体の粘度は、ほぼ８１４ｃｐｓであった。
【０２５９】
注射に先立って、粒子を媒体に懸濁させた。媒体を加えて、下記の表中の投与濃度を達成した。懸濁液を生成するために、粒子を含有するバイアルへ媒体を加えた。このバイアルをほぼ３０秒間ボルテックスした。ボルテックス処理の後で、このバイアルをほぼ３０秒間音波処理した。このバイアルを３サイクルの間ボルテックス／音波処理すると、均一な懸濁液が生成した。所望される容量をシリンジ中へ吸引した後で、この懸濁液をメス−メスルアーロックコネクタを介したシリンジ−シリンジ混合によってさらに混合した。
【０２６０】
【表３０】
2019514976.tif 000033
【０２６１】
雄ラットでは、２００ｍｇ／ｋｇ以上の用量で、早期の死亡／安楽死が観察された。この早死動物には、注射部位での所見以外の肉眼観察所見が無かった。体重に対しては、明らかな試験物関連の所見が無かった。２００ｍｇ／ｋｇ以上の用量の雄では、文献に報告されたブピバカイン誘発性の発作活動に一致した臨床徴候に、痙攣、首振り、歯のがちがち、及び／又は筋肉攣縮が含まれた。１匹の雄が４０ｍｇ／ｋｇで、投与後３５分に始まって３時間続く、一時的な首振りと歯のがちがちを明示した。ＭＴＤは、雄において８０ｍｇ／ｋｇであって、雌においては少なくとも８０ｍｇ／ｋｇであるとみなされた。
【０２６２】
１２．２．ブピバカイン粒子
実施例１Ｂに従って、以下の変更を施して、ブピバカイン粒子（９１４−９５−１）を製造した。粒子を周囲条件でモールド中にほぼ１１日間保存した後で、採取した。
【０２６３】
注射に先立って、媒体を粒子へ加えて、投与用の懸濁液を生成した。媒体を加えて、下記の表中の投与濃度を達成した。懸濁液を生成するために、粒子を含有するバイアルへ媒体を加えた。このバイアルをほぼ３０秒間ボルテックスした。ボルテックス処理の後で、このバイアルをほぼ３０秒間音波処理した。このバイアルを３サイクルの間ボルテックス／音波処理すると、均一な懸濁液が生成した。所望される容量をシリンジ中へ吸引した後で、この懸濁液をメス−メスルアーロックコネクタを介したシリンジ−シリンジ混合によってさらに混合した。
【０２６４】
【表３１】
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【０２６５】
用量投与後２４〜７２時間で動物を安楽死させた。
すべての雄が予定の安楽死まで生存したのに対し、雌は、３００ｍｇ／ｋｇ以上の用量で、人道的な理由により（即ち、延長した発作活動の故に）安楽死させた。文献に報告されたブピバカイン誘発性の発作活動に一致した臨床徴候には、痙攣、首振り、歯のがちがち、及び筋肉攣縮が含まれて、７５０ｍｇ／ｋｇの用量では、それらが雄に見られた。４０ｍｇ／ｋｇで投与した３匹の雌の１匹に、３０秒続く一時的で軽い痙攣があった。その雌は、４０ｍｇ／ｋｇでの試験物投与後２５６分で、短時間の全身筋攣縮も明示した。４０、８０、又は１６０ｍｇ／ｋｇで投与した他のすべての雌は、この観察期間を通して、正常限度内にあった。肉眼剖検を実施した雌（３００ｍｇ／ｋｇ用量群と５００ｍｇ／ｋｇ用量群）については、注射部位の観察所見が報告されて、嚢胞様の構造（試験物に一致した白色の液体を含有する）と関連した浮腫が含まれた。雌のＭＴＤは１６０ｍｇ／ｋｇであって、雄のＭＴＤは５００ｍｇ／ｋｇであった。
【０２６６】
実施例１３
ラットにおける、単回投与パイロット局所耐性及び生体適合性試験
スプラーグ・ドーリー・ラットにおいて、ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子とブピバカイン粒子の両方で局所耐性について評価した。
【０２６７】
先の試験において利用したのと同じ材料（９７６−２７−１、９１４−９５−１、９１４−９５−４、及び１０１９−２２−１）をこの局所耐性及び生体適合性試験でも使用した。
【０２６８】
１３．１．ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子
ＭＴＤ試験において詳述した手順に従って、媒体：１０１９−２２−１を使用して、９７６−２７−１と９１４−９５−４をともに懸濁させた。
【０２６９】
動物の左側でプラセボ粒子の９１４−９５−１を、そしてその右側で９７６−２７−１を８０ｍｇ／ｋｇで投与したスプラーグ・ドーリー・ラット（Ｎ＝９匹の雄、各時点につき３匹）において局所耐性を評価した。１５、３０、又は６０日の観察期間に続いて、動物を安楽死させた。注射部位で微視的評価を行った。
【０２７０】
各投与部位について、炎症反応と治癒反応に基づいてスコアを決定することによって、生体反応性評価を計算した。炎症反応について、スコアには、細胞の種類と重症度（即ち、好中球、リンパ球、形質細胞、マクロファージ、及び巨細胞）、壊死の重症度、及び他の関連した組織病理学的知見が含まれた。炎症反応は、２倍の重み付けをした。治癒反応では、新血管形成、線維形成、脂肪浸潤、及び他の関連した微視的変化の度合いをスコア化した。この炎症スコアと治癒スコアを合算して、各動物についての総得点を導いた。この生体反応性評価は、９７６−２７−１のスコアとプラセボのスコアの間の平均スコアにおける差であった。２．９以下のスコアは「反応なし」、３．０〜８．９のスコアは「軽度の反応」、９．０〜１５．０のスコアは「中等度の反応」、そして１５．０より高いスコアは「重度の反応」とみなした。
【０２７１】
１５日目に、９７６−２７−１に対する組織反応とプラセボ（９１４−９５−４）に対するそれは似通っていて、マクロファージと巨細胞が含まれて、リンパ球の末梢蓄積を伴った。９７６−２７−１の部位では、プラセボ粒子の部位と比較して、巨細胞と壊死領域がより普通にあった、及び／又はより重症であった。すべての変化が皮下組織に限られていた。６という生体反応性スコアは、１５日目の反応に基づけば、９７６−２７−１が軽度に刺激性であることを示した。
【０２７２】
３０日目までに、９７６−２７−１の注射部位には、プラセボの部位より多数のマクロファージがあって、そのマクロファージのいくつかは、１０〜４０μｍの大きさに及ぶ非染色性の細胞質内空胞を含有した。注射部位には、ＰＬＧＡ粒子に一致する粒子が観察されなかった。プラセボ対照の注射部位では、９７６−２７−１の注射部位よりも、線維形成、新血管形成、脂肪浸潤がより普通にあって、より重症であった。対照部位と試験部位は、ともに最少〜中等度のリンパ球、稀な形質細胞、そして稀な巨細胞を有した。すべての変化が皮下組織内で生じた。９７６−２７−１の全体スコアとプラセボ（９１４−９５−４）の全体スコアは同等であって、３０日目までに、９７６−２７−１について０の生体反応性評価をもたらした。
【０２７３】
６０日目の微視的検査は、プラセボと９７６−２７−１の両方で炎症がすでに消散していたこと、そしてプラセボと試験物で治癒がほとんど完了していることを示した。６０日間で、ＰＬＧＡの存在を示すものは無かった。
【０２７４】
１３．２．ブピバカイン粒子
ＭＴＤ試験において詳述した手順に従って、媒体：１０１９−２２−１を使用して、９１４−９５−１を懸濁させた。
【０２７５】
動物の左側で媒体対照を、そしてその右側で９１４−９５−１の試験物を８０ｍｇ／ｋｇで投与したスプラーグ・ドーリー・ラット（Ｎ＝９匹の雄、各時点につき３匹）において局所耐性を評価した。３、７、又は１４日目の試験日に動物を安楽死させた。
【０２７６】
すべての動物が予定の安楽死まで生存した。日常観察、臨床観察（投与部位の評価を除く）、体重、及び食餌消費に対して試験物関連の効果は無かった。
日常観察と巨視的及び微視的評価に関して注目された試験物関連の効果は、局在化していて、回復の徴候を明示して、有害ではないとみなされた。この臨床観察には、１日目（用量投与の日）での媒体又は９１４−９５−１の投与に続く、中等度の浮腫と隆起部が含まれた。浮腫と隆起部は、媒体では５日目までに、そして９１４−９５−１では７日目（浮腫）又は１３日目（隆起部）までに消散した。注射に続く３日目と７日目での微視的変化は、試験物の存在、好中球の浸潤、鬱血した拡張血管、浮腫の増加、壊死、炎症細胞浸潤、及び新血管形成／線維形成が含まれる、皮下組織中の変化に関連していた。その発生率及び／又は重症度は、３日目に比較して７日目で減少した。対照投与動物においても炎症細胞浸潤と浮腫が認められたが、その発生率と重症度は、試験物でより大きかった。注射後１４日目までには、ほとんどの変化が完全に戻っていた。すべての変化が皮下組織の表面線維層内の小領域に局在化していた。軽度の新血管形成及び線維形成とやや増加した炎症細胞浸潤の病巣（focus）には、後日の完全復帰を明示する可能性がある。
【０２７７】
実施例１４
ユカタン系ミニチュア豚における最大耐量と組織病理学的評価
ユカタン系ミニチュア豚において、媒体に懸濁したブピバカイン粒子とＬＧＡ／ブピバカイン粒子の全身最大耐量と局所耐性を決定するために試験を行った。
【０２７８】
ＰＬＧＡ／ブピバカイン薬物粒子について本明細書に開示した方法に従って、ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子（９１４−１２２）を製造した。ブピバカイン薬物粒子について本明細書に開示した方法に従って、ブピバカイン粒子（９１４−１２３−１）を製造した。
【０２７９】
注射に先立って、ＰＬＧＡ／ブピバカイン薬物粒子とブピバカイン薬物粒子のそれぞれを、本明細書に開示されるような５０ｃｐｓより高い粘度を有する媒体に懸濁させた。媒体を加えて、下記の表に示される投与濃度を達成した。下記の表は、この懸濁液のブピバカイン濃度とブピバカイン用量について詳述する。
【０２８０】
【表３２】
2019514976.tif 000035
【０２８１】
少なくとも７日間の順化期に続いて、１２匹のユカタン系ミニチュア豚（６匹の雄と６匹の雌）を各コホートにつき３つの群（１、２、３）がある２つのコホート（Ａ又はＢ）の１つへ割り当てた（１匹／性／群）。試験１日目に、手術に先立って、絶食動物に単回投与のＴｅｌａｚｏｌ及びＸｙｌａｚｉｎｅ（２．２ｍｇ／ｋｇ，ＩＭ）とケトプロフェン（２．０ｍｇ／ｋｇ，ＩＭ）を与えた。この動物をイソフルラン（１００％酸素中０．５〜５％）の吸入による直接投与で麻酔導入して維持した。麻酔状態になったならば、電動バリカンを使用して各動物の背部を刈毛して、クロルヘキシジンとアルコールの交互ワイプとそれに続く最終のヨウ素スプレーを使用して切開に備えた。滅菌済みの手術用メス刃を使用して、単一の縦方向（背部から腹部）の全層切開創傷（約８〜１０ｃｍ）を創出した。媒体に懸濁した薬物粒子を皮下層の中へ直に投与した後で、切開部を縫合して閉じた。各動物には、単一の切開創傷が創出されて、単回皮下（ＳＱ）用量投与を受けた。投与量は、先のコホートの臨床観察に基づいて、第１群から第２群へ、そして第２群から第３群へと連続的に上昇した。試験３日目に、各コホートの各群につき１匹の動物より切開部位を組織病理学的評価のために回収した。試験１４日目に、残りの動物（１匹の動物／群／コホート）の切開部位を組織病理学的評価のために回収した。
【０２８２】
下記の表のパラメータについて、試験の間モニターした。
【０２８３】
【表３３】
2019514976.tif 000036
【０２８４】
３日目に、各用量群より１匹の動物を安楽死させて、切開部位を（一括して）回収した。１４日目に残りの動物を安楽死させて、切開部位を回収した。この切開部位は、１０％中性緩衝化ホルマリン（ＮＢＦ）に保存した。各切開部位を外縁上でプラスチックカードに縫合して、該組織の一様な固定を確実にした。
【０２８５】
保存した切開部位を組織病理学的評価に提出した。保存した組織は、パラフィンに包埋され、切片化されて、ヘマトキシリンとエオジンで染色されて、認定病理学者によって微視的に検査された。
【０２８６】
術後３日目の微視的検査は、この手技と矛盾しない形態学的知見（急性炎症、出血、及び筋線維変性）を示した。加えて、１２ｍｇ／ｋｇ以上のＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子では、微粒子が最小〜軽度の細胞浸潤に付随していた。１４日目までに、検査した標本では、切開線上での再上皮形成とその切開線の縁を架橋する線維形成の存在によって判定されるように、すべての皮膚切開部が治癒されていた。追加的に、ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子では、肉芽腫炎症が皮下組織中に観察された。本試験の条件下では、ユカタン系ミニチュア豚のこの切開創傷治癒皮膚モデルにおいて、いずれの試験試料も３６ｍｇ／ｋｇまでの用量レベルで適用部位にて十分忍容された。
【０２８７】
結論として、媒体に懸濁したいずれの粒子組成物も、ユカタン系ミニチュア豚において全層切開部付近で皮下投与される場合、試験したすべての用量レベルで十分忍容されることが証明された。病気の臨床徴候も処理薬に対する有害反応も、本試験の間に認められなかった。巨視的にも微視的にも、切開部位は、３日目に治癒しつつあって、１４日目までに治癒していて、いずれの粒子タイプも局所的に十分忍容されることを実証した。ＭＴＤは、＞３６ｍｇ／ｋｇであると決定された。９１４−１２２粒子について、３６ｍｇ／ｋｇが最大可能量（ＭＦＤ）であったのは、投与製剤の濃度及び容量の限界によるものである。
【０２８８】
実施例１５
治験薬の記載
本節では、臨床試験における使用のための２種の治験薬（ＩＭＰ）について記載する。いずれのＩＭＰも、媒体で復元されて懸濁注射液をもたらす無菌乾燥粉末である。一方のＩＭＰは、ブピバカイン医薬物質に由来する粉末であって、他方は、ブピバカイン医薬物質／賦形剤の混合物に由来する粉末である。
【０２８９】
１５．１  ブピバカイン薬物粒子：
懸濁注射液用のブピバカイン粒子（２１４ｍｇ）を今後ブピバカイン粒子及び／又はブピバカイン粒子医薬品と言及する。これらの微粒子は、追加の賦形剤の無いブピバカインからなる。
【０２９０】
ブピバカイン粒子は、単回使用のための無菌乾燥粉末として供給されて、これは、使用前に無菌媒体で希釈されてから即座に混合されて均質懸濁液となる。この医薬品バイアル（複数）と媒体バイアル（複数）は、別々に供給される。この懸濁液を混合するのに必要とされる、２本の無菌プラスチックシリンジと１個の無菌プラスチックコネクタは、フェーズ１ユニットによって提供される。医薬物質であるブピバカインの最終濃度は、企図される用量に依存して、最大６０ｍｇ／ｍＬまで製剤化することができて、そのバイアルが提供される。皮下注射によって１０ｍＬを投与すると、６００ｍｇの最大総ブピバカイン用量が与えられる。過多許容量が含まれる臨床提示について、下記に記載する。
【０２９１】
ブピバカイン粒子医薬品の組成
【０２９２】
【表３４】
2019514976.tif 000037
【０２９３】
ブピバカイン粒子：ブピバカイン粒子を使用する試験は、Ｄ５０値が２５μｍの範囲にある、サイズと形状の一定した粒子が生成されることを実証した。さらに、これらの粒子は、窒素環境において、粒子の形状又はサイズ分布、薬物レベルに影響を及ぼすことも医薬不純物のレベルを有意に増加させることも無く、２５ｋＧｙと４５ｋＧｙでのγ線照射に耐えるものである。従って、粒子には最終滅菌の手段がある。γ線照射されたブピバカイン粒子の安定性の特性については、試作品／開発品のバッチについて−２０℃で評価されてきた。
【０２９４】
さらに、非臨床試験においてラットへ皮下投与されたブピバカイン粒子は、Ｅｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）（Pacira Pharmaceuticals 社、カリフォルニア州サンディエゴ）に対して有利に比較される薬物動態プロフィールを示す。その結果は、ブピバカイン粒子について、Ｅｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）プロフィールに比較して、より低いＣｍａｘとより遅れたＴｍａｘと、７２時間にわたるより高い曲線下面積（ＡＵＣ）を示した。下記の図面では、Ｅｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）を矩形によって表して、ブピバカイン粒子を菱形によって表す。
【０２９５】
１５．２  ＰＬＧＡ／ブピバカイン薬物粒子：
ＰＬＧＡ／ブピバカイン薬物粒子（２４４ｍｇ）を今後ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子及び／又はＰＬＧＡ／ブピバカイン医薬品と言及する。これらの微粒子は、約５５％〜６０％のブピバカインと４０％〜４５％のポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）からなる。ＰＬＧＡは、５０／５０比の乳酸／グリコール酸を含有する。
【０２９６】
ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子は、単回使用のための無菌乾燥粉末として供給されて、これは、使用前に無菌媒体で希釈されてから即座に混合されて均質懸濁液となる。この医薬品バイアル（複数）と媒体バイアル（複数）は、別々に供給される。この懸濁液を混合するのに必要とされる、２本の無菌プラスチックシリンジと１個の無菌プラスチックコネクタは、フェーズ１ユニットによって提供される。医薬物質であるブピバカインの最終濃度は、企図される用量に依存して、最大６０ｍｇ／ｍＬまで製剤化することができて、そのバイアルが提供される。皮下注射によって１０ｍＬを投与すると、６００ｍｇの最大総ブピバカイン用量が与えられる。過多許容量が含まれる臨床提示について、下記に記載する。
【０２９７】
ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子医薬品の組成
【０２９８】
【表３５】
2019514976.tif 000038
【０２９９】
ＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子：試作品粒子に関する実験は、ＰＬＧＡの存在がブピバカインの薬物動態プロフィールに対してさしたる影響を及ぼさないことを実証した。この形状（configuration）についてのこの事例では、上記条件の下で、ＰＬＧＡは、ブピバカインの粒子からの放出速度に対して有意な役割を担わない。しかしながら，再懸濁実験では、懸濁状態の粒子の分散を促進するのにＰＬＧＡが役に立つことが示されている。
【０３００】
５５％のブピバカインと４５％のＰＬＧＡを含有する微粒子の皮下投与後の薬物動態プロフィールをＥｘｐａｒｅｌ（ブピバカインリポソーム懸濁注射液）（Pacira Pharmaceuticals 社、カリフォルニア州サンディエゴ）のそれと比較すると、Ｃｍａｘの低下と、同等のＡＵＣを伴う、より長いＴｍａｘ到達時間が実証された。
【０３０１】
治験薬の媒体
この媒体の組成を下記の表に示す。ブピバカイン粒子とＰＬＧＡ／ブピバカイン粒子の懸濁及び注射に使用される媒体は、粘度調整剤（ヒアルロン酸ナトリウム）を含有する、無菌、澄明、等張でｐＨ８の水溶液である。
【０３０２】
この媒体の開発、製造、管理、及び安定性の完全な詳細について、下記に記載する。
媒体の組成
【０３０３】
【表３６】
2019514976.tif 000039
【０３０４】
用量均一性と適合性
この媒体と当該医薬品の適合性と、この懸濁液の混合手順との適合性について評価した。
【０３０５】
諸試験により、目標用量が達成されること、そして臨床混合プロトコールに従って懸濁される場合にシリンジ中での用量均一性が維持されることが実証された。１５０ｍｇと６００ｍｇの両方の目標ブピバカイン用量の５種の用量調製品からのデータは、以下の表に示すように目標用量が達成されることを実証した。
【０３０６】
【表３７】
2019514976.tif 000040
【０３０７】
以下の表は、この医薬品懸濁液が投与に使用されるシリンジ内で均質であることを実証する。
【０３０８】
【表３８】
2019514976.tif 000041
【０３０９】
諸試験は、臨床混合プロトコールに従うことによって一体化される場合の粒子と媒体の間の適合性を示した。加えて、再懸濁の後で、この懸濁液をシリンジ中に周囲温度で１時間の間保持する場合でも、追加の関連物質は観測されなかった。
【０３１０】
実施例１６
臨床の実施例
健常成人男性における無作為化比較対照二重盲検の単回漸増用量での安全性及び薬物動態／薬力学試験
健常成人・白人男性被験者の内側腓腹（medial calf）の一定領域中へ本発明の粒子を浸潤させた場合の安全性と忍容性について媒体と比較して評価して特徴付けるために、臨床試験を実施した。
【０３１１】
熱感受性試験に対する過剰レスポンダーと過少レスポンダーを本試験から除外した。接触熱極（５０Ｘ２５ｍｍ２）を使用する４７℃で５秒間からなる閾上短期緊張性熱刺激（ＳＴＨＳ）を非利き側の大腿部に適用した（熱極の末端縁は、正中線の長軸上、膝頭の上縁から約１５ｃｍ上にある。即ち、膝を９０°曲げて測定した）。０〜１０の数的疼痛尺度（数的評価スコア（ＮＲＳ））を使用して、被験者の知覚疼痛強度を評価した。ＳＴＨＳ刺激の間にＮＲＳ疼痛スコアが２／１０以下と報告した被験者を過少レスポンダーと定義した。ＳＴＨＳ刺激の間にＮＲＳ疼痛スコアが８／１０以上と報告した被験者を過剰レスポンダーと定義した。
【０３１２】
本試験では、薬物動態（ＰＫ）反応と薬力学（ＰＤ）反応をともに評価した。
薬物動態では、本発明の粒子の単回投与後のブピバカインの血漿ＰＫを特徴付けた。それぞれの投与コホートについて、個々の血漿濃度／時間曲線とコホート平均ＰＫパラメータを決定した。Ｔ＝０、投与後０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、５、６、８、１２、及び２４時間で血液試料を入手した。０．５、１、及び１．５時間のＰＫ評価では、時間枠は、±５分であった。２時間から６時間（を含む）までのＰＫ評価の時間枠は、±１０分であった。８時間から２４時間（を含む）までのＰＫ評価の時間枠は、±１５分であった。血漿についてブピバカイン含量を分析した。加えて、同じ時間間隔で、局所と全身の安全性評価を実施した。
【０３１３】
内側腓腹の一定領域内で実施される熱刺激検査と機械刺激検査の両方を使用して、薬力学的反応について評価した。感覚検知閾値と疼痛閾値のベースラインからの変化を本発明の粒子と陽性比較薬（active comparator）について評価した。
【０３１４】
温知覚閾値（ＷＤＴ）、冷知覚閾値（ＣＤＴ）、及び温痛閾値（ＨＰＴ）という熱閾値について評価した。この熱閾値は、コンピュータ制御熱極（作用面：２．５Ｘ５．０ｃｍ２；ＭＳＡ，Somedic AB，スウェーデン）を３２℃のベースライン温度から傾斜率を±１．０℃／秒として、そして５０．０℃と５．０℃をカットオフ温度として使用して測定した。被験者は、温度感覚（ＷＤＴとＣＤＴ）の変化を体感するとき、又はその熱刺激を痛みとして知覚する（ＨＰＴ）ときに即座にボタンを押した。ボタンの起動後、熱極温度は、ベースライン温度へ復帰した。評価を３回行って、ＷＤＴとＣＤＴについて平均値を記録した。ＨＰＴについては、メジアン値を記録した。
【０３１５】
目盛付きポリアミドモノフィラメント（Stoelting-Europe，ダブリン、アイルランド；指定値：２．３６〜６．６５［曲げ力：０．２〜４４７ｍＮ］）を使用して、機械的触覚閾値（ＭＤＴ）を測定した。ＭＤＴは、機械的触覚減退の程度に関する情報を提供した。被験者は、検査域の皮膚へ垂直に適用される最小モノフィラメントがいつ触感として知覚されるかを示した。ＭＤＴは、昇順又は降順のモノフィラメントを使用して、そして修正ディクソン（Dixon）アルゴリズムを使用して５回決定した。この評価のメジアンを解析に使用した。
【０３１６】
「重りピン」刺激装置（ＰｉｎＰｒｉｃｋ，MRC Systems，ハイデルベルグ、ドイツ；８〜５１２ｍＮ；先端面積：０．０４９ｍｍ２）を使用して、機械的疼痛閾値（ＭＰＴ）について評価した。被験者は、垂直に適用される５回のピン刺し刺激のうち少なくとも３回がいつ痛みとして知覚されるかを示した。このピン刺し刺激は、均等に、そして無作為形式で適用された。ＭＰＴは、昇順又は降順のピン刺し刺激装置を使用して、そして修正ディクソン（Dixon）アルゴリズムを使用して５回決定した。この評価のメジアンを解析に使用した。
【０３１７】
図面９に示すように、各被験者に対して、半永久的な皮膚マーカーを使用して、６０Ｘ３５ｍｍの矩形領域（長軸が垂直方向に配置）（１１０）の輪郭を描いた。この矩形の上部前方角は、膝の内側半月縁のほぼほぼ１１ｃｍ下にあって、腓骨の前縁からほぼ６ｃｍ離れていた。本発明の粒子の投与のために、半永久的なマーカーを使用して、反対の対角部分（上部外側と下部内側）（１２０）に白丸印を付けた。感覚検査は、より大きな６０Ｘ３５ｍｍの矩形内を中心とする５０Ｘ２５ｍｍの矩形の内側に集中した。
【０３１８】
注射に先立って、内側腓腹上で刻印した矩形領域について、ＰＤ検査評価に干渉し得る感染又は他の異常の証拠を視察した。注射には、２インチの２１ゲージ針を使用して、刻印した反対の対角部分に注射した。図面９に示すように、開扇技術を使用して、５ｍＬを送達した。それぞれの刻印した反対の対角部分（１２０）より、３つの皮下通路（１３０）を（扇状のパターンを創出する）ほぼ３０°、４５°、及び６０°で使用して、試験物を送達した。各通路には、ほぼ等しい容量（約１．６ｍＬ〜約１．７ｍＬ）を送達した。全部でほぼ１０ｍＬの容量が送達された。試験物は、媒体のみに対して、媒体に懸濁した本発明の粒子を含んだ。
【０３１９】
被験者は、６つのコホートへ分けた。各コホートは、２つの亜群を含有した。各亜群で、Ｎ＝３である。下記の表は、各コホートと亜群について記載する。
【０３２０】
【表３９】
2019514976.tif 000042
【０３２１】
簡潔には、各コホートを３名の被験者の２つの亜群へ分けた。例えば、コホート１〜コホート５では、１つの亜群が、一方のレグにおいて、実施例１Ｂに記載のように作製されて、５０ｃｐｓより高い粘度を有する、本明細書に記載される媒体に懸濁された本発明の粒子を受けて、他方のレグにおいて、媒体のみを受ける。他の亜群では、一方のレグにおいて、実施例１Ａに記載のように作製された本発明の粒子を受けて、他方のレグにおいて、媒体のみを受ける。
【０３２２】
臨床転帰：
コホート１：
概して言えば、該粒子からの放出は、約１時間の時点での発現の証拠をもたらして、検査全体で定性的な反応が出現した。図面１０Ａと図面１０Ｂには、経時的な血漿濃度をプロットで被験者ごとに示す。図面１０Ａは、ＬＩＱ８６５Ａを投与された被験者の血漿濃度を示す。図面１０Ｂは、ＬＩＱ８６５Ｂを投与された被験者の血漿濃度を示す。
【０３２３】
コホート２：
概して言えば、該粒子からの放出は、すべての被験者において作用の発現（感受性の低下）が１時間で、又は１時間以内に起きて、より高い投与のコホート２においてコホート１に比較してより強い効果を生じることを実証するＰＤ評価をもたらした。効果の持続期間は、ほとんどの感受性検査で、３日間までであるか又は３日間を超えるように見えて、コホート２では、コホート１に比べて、より長い持続期間が観測された。図面１１Ａと図面１１Ｂには、経時的な血漿濃度をプロットで被験者ごとに示す。図面１１Ａは、ＬＩＱ８６５Ａを投与された被験者の血漿濃度を示す。図面１１Ｂは、ＬＩＱ８６５Ｂを投与された被験者の血漿濃度を示す。
【０３２４】
コホート３：
概して言えば、該粒子からの放出は、すべての被験者において作用の発現（感受性の低下）が１時間で、又は１時間以内に起きて、より高い投与のコホート３においてコホート１とコホート２に比較してより強い効果を生じることを実証するＰＤ評価をもたらした。効果の持続期間は、ほとんどの感受性検査で、３日間までであるか又は３日間を超えるように見えて、コホート３では、コホート１とコホート２に比べて、より長い持続期間が観測された。図面１２Ａと図面１２Ｂには、経時的な血漿濃度をプロットで示す。図面１２Ａは、ＬＩＱ８６５Ａを投与された被験者の血漿濃度を示す。図面１２Ｂは、ＬＩＱ８６５Ｂを投与された被験者の血漿濃度を示す。
【０３２５】
コホート４：
概して言えば、該粒子からの放出は、すべての被験者において作用の発現（感受性の低下）が１時間で、又は１時間以内に起きて、より高い投与のコホート４においてコホート１、コホート２、及びコホート３に比較してより強い効果を生じることを実証するＰＤ評価をもたらした。効果の持続期間は、ほとんどの感受性検査で、３日間までであるか又は３日間を超えるように見えて、コホート４では、コホート１、コホート２、及びコホート３に比べて、より長い持続期間が観測された。図面１３Ａと図面１３Ｂには、経時的な血漿濃度をプロットで示す。図面１３Ａは、コホート４とコホート５の両方においてＬＩＱ８６５Ａを投与された被験者の血漿濃度を示す（コホート５については、下記の記載を参照のこと）。図面１３Ｂは、ＬＩＱ８６５Ｂを投与された被験者の血漿濃度を示す。図面１３Ｃは、この２種の薬物粒子設計についてのデータを要約する。図面１３Ａに示すように、この統合グラフには、コホート５由来の追加の４５０ｍｇ被験者が含まれている。
【０３２６】
コホート５
コホート５では、１名の被験者に６００ｍｇを投与して、３名の追加の被験者に４５０ｍｇを投与した。概して言えば、該粒子からの放出は、コホート４において観測されたものに類似した作用の発現（感受性の低下）を実証して、３〜５日間の適度の鈍化を提供するＰＤ評価をもたらした。図面１４は、１名の６００ｍｇ被験者についての１２０時間にわたるデータが含まれる対数線形プロットを提示する。
【０３２７】
図面１５は、４５０ｍｇを投与されたすべての被験者（コホート４とコホート５における）と６００ｍｇを投与された被験者についてのデータが含まれる対数線形プロットを提示する。
【０３２８】
薬力学上の要約
薬力学データを図面１６と図面１７に提示する。図面１６は、１５０ｍｇ、２２５ｍｇ、３００ｍｇ、及び４５０ｍｇ用量についての機械的触覚閾値（ＭＤＴ）と冷知覚閾値（ＣＤＴ）が含まれる定量的サマリーを提示する。この図面において、星印は、この薬力学的分析に、コホート５の追加の４５０ｍｇ被験者が含まれないことを示す。図面１７は、コホート１〜コホート４における個々の被験者についてのＭＤＴデータとＣＤＴデータを詳解する。図面１６と同様に、図面１７の薬力学的分析は、コホート５の３名の追加の４５０ｍｇ被験者を示さない。
【０３２９】
製剤８６５Ａと製剤８６５Ｂのデータ：
粒子製剤８６５Ａは、ＰＬＧＡマトリックス材料とアミノアミド麻酔薬ＡＰＩを含めて製造された粒子を含む。粒子製剤８６５Ｂは、ポリマーマトリックス材料も他の賦形剤も含めずにアミノアミド麻酔薬ＡＰＩだけで製造された粒子を含む。
【０３３０】
いくつかの態様では、製剤ＡがＰＬＧＡの分解に伴うｐＨシフトを引き起こして、それによってブピバカインのイオン化を促進して、最終的にその活性薬剤の溶解性増大をもたらす場合がある。
【０３３１】
図面１８は、ＰＬＧＡポリマーマトリックスが含まれる本発明の粒子がポリマーマトリックス材料を含まない粒子製剤より高い血中濃度（Ｃｍａｘ）（ｎｇ／ｍＬ）をもたらしたことを示す。いくつかの態様では、ＰＬＧＡを含む粒子中のブピバカインの１５０ｍｇ用量が、１８５ｎｇ／ｍＬの算術平均濃度を有する、ポリマーマトリックス材料を含まない粒子からのブピバカインの同じ用量に比べて、３２７ｎｇ／ｍＬの算術平均濃度をもたらした。いくつかの態様では、ＰＬＧＡを含む粒子中のブピバカインの２２５ｍｇ用量が、１６９ｎｇ／ｍＬの算術平均濃度を有する、ポリマーマトリックス材料を含まない粒子からのブピバカインの同じ用量に比べて、２０２ｎｇ／ｍＬの算術平均濃度をもたらした。いくつかの態様では、ＰＬＧＡを含む粒子中のブピバカインの３００ｍｇ用量が、２４７ｎｇ／ｍＬの算術平均濃度を有する、ポリマーマトリックス材料を含まない粒子からのブピバカインの同じ用量に比べて、２７２ｎｇ／ｍＬの算術平均濃度をもたらした。いくつかの態様では、ＰＬＧＡを含む粒子中のブピバカインの４５０ｍｇ用量が、４１３ｎｇ／ｍＬの算術平均濃度を有する、ポリマーマトリックス材料を含まない粒子からのブピバカインの同じ用量に比べて、５０６ｎｇ／ｍＬの算術平均濃度をもたらした。図面１８に示すように、いくつかの態様では、４５０ｍｇ用量範囲の追加の被験者が、同じ用量での先の被験者に対する確認結果を示して、ＰＬＧＡを含むブピバカイン粒子の６００ｍｇ用量の単一被験者が２４時間で５３３ｎｇ／ｍＬのＣｍａｘを生じた。
【０３３２】
神経ブロック
いくつかの態様において、本発明の粒子は、５日間まで続く、神経ブロック適用に有用である。伏在神経（ＳＮ）の表在性皮膚感覚枝のいくつかが注射部位深部の膝通路に対して遠位にあるとすれば、数名の被験者が、検査域内の鈍化した感覚反応に加えて、遠位内側の皮膚感覚神経において脚枝ブロックを発症したことは、驚くべきことではなかろう。コホート２（２２５ｍｇ）では１／６、コホート３（３００ｍｇ）では２／６、コホート４（４５０ｍｇ）では５／６、コホート５（４５０ｍｇ）では３／３、そしてコホート５（６００ｍｇ）では１／１にＳＮブロックが見られた。これらの伝導ブロックは、３〜５日間継続する神経ブロックのプロフィールを裏付けるものである。
【図１】
2019514976.tif 000043
【図２】
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【図３−１】
2019514976.tif 000045
【図３−２】
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【図３−３】
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【図４】
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【図５】
2019514976.tif 000049
【図６】
2019514976.tif 000050
【図７】
2019514976.tif 000051
【図８−１】
2019514976.tif 000052
【図８−２】
2019514976.tif 000053
【図８−３】
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【図９】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１１−１】
2019514976.tif 000058
【図１１−２】
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【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１３−３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【国際調査報告】
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