(57)【要約】細胞及び細胞外コラーゲンを各層が含む複数の層を有する培養レザーであって、前記複数の層の各層は、ヌクレオチド接着分子によって隣接層と結合されており、前記培養レザーの水分含有率は４０％未満である。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
各層が細胞及び細胞外コラーゲンを含む複数の層を有し、前記複数の層の各層はヌクレオチド接着分子によって隣接層と結合されており、水分含有率が４０％未満である、培養レザー。
【請求項２】
前記細胞が線維芽細胞を含む、請求項１に記載の培養レザー。
【請求項３】
前記細胞が角化細胞を含む、請求項１に記載の培養レザー。
【請求項４】
前記細胞が誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を含む、請求項１に記載の培養レザー。
【請求項５】
前記細胞が多能性幹細胞由来の皮膚様細胞を含む、請求項１に記載の培養レザー。
【請求項６】
前記細胞のいずれかが、哺乳類、鳥類、魚類、及び爬虫類のうちのいずれか１種以上に由来する、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の培養レザー。
【請求項７】
前記細胞外コラーゲンが架橋されている、請求項１〜請求項６のいずれか一項に記載の培養レザー。
【請求項８】
前記ヌクレオチド接着分子が：
ａ）１２個以上の炭素原子の長鎖アルキル鎖を含む膜アンカー領域；並びに
ｂ）膜遠位端及び膜近位端を有し、前記膜アンカー領域と前記膜近位端で結合しており、少なくとも５０ヌクレオチドであり、かつ以下のi）及びii）を含むポリヌクレオチド、
ｉ）連続する約２０以上のヌクレオチドからなるヌクレオチド列を含むリンカー領域；
ｉｉ）１０以上のヌクレオチドを含み、前記リンカー領域に対して遠位に位置し、かつ前記リンカー領域とハイブリダイズ可能ではない、膜遠位接着領域；
を含む、請求項１〜請求項７のいずれか一項に記載の培養レザー。
【請求項９】
前記ヌクレオチド接着分子がＤＮＡ署名を含み、前記ＤＮＡ署名は、なめしプロセス後に増幅することができる、請求項８に記載の培養レザー。
【請求項１０】
前記水分含有率が１０％〜３０％である、請求項１〜請求項９のいずれか一項に記載の培養レザー。
【請求項１１】
引張強度が２５ｋｇｆ／ｃｍ２以上である、請求項１〜請求項１０のいずれか一項に記載の培養レザー。
【請求項１２】
前記培養レザーの厚さが１００ミリメートル未満である、請求項１〜請求項１１のいずれか一項に記載の培養レザー。
【請求項１３】
請求項１〜請求項１２のいずれか一項に記載の培養レザーを含む、消費材製品。
【請求項１４】
前記消費材製品が、札入れ、財布、腕時計バンド、ジャケット、靴、携帯電話ケース、ブリーフケース、カバン、手袋、ベルト、又はズボンである、請求項１３に記載の消費材製品。
【請求項１５】
ａ）それぞれヌクレオチド接着分子によって隣接層と結合され、かつそれぞれが細胞を含む複数の層を培養すること；及び
ｂ）前記複数の層を少なくとも１種類のなめし剤と接触させること、
を含み、得られた培養レザーの水分含有率が４０％未満である、培養レザーの作製方法。
【請求項１６】
前記細胞が線維芽細胞を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記細胞が角化細胞を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記細胞が誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
前記細胞のいずれかが、哺乳類、鳥類、魚類、及び爬虫類のうちのいずれか１種以上に由来する、請求項１５〜請求項１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
コラーゲンが前記なめし剤によって架橋されている、請求項１５〜請求項１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記なめし剤がクロムを含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記なめし剤が植物性タンニンを含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記ヌクレオチド接着分子が：
ａ）１２個以上の炭素原子の長鎖アルキル鎖を含む膜アンカー領域；並びに
ｂ）膜遠位端及び膜近位端を有し、前記膜アンカー領域と前記膜近位端で結合しており、少なくとも５０ヌクレオチドであり、かつ以下のi）及びii）を含むポリヌクレオチド、
ｉ）連続する約２０以上のヌクレオチドからなるヌクレオチド列を含むリンカー領域；
ｉｉ）１０ヌクレオチド以上を含み、前記リンカー領域に対して遠位に位置し、前記リンカー領域とハイブリダイズ可能ではない、膜遠位接着領域；
を含む、請求項１５〜請求項２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ヌクレオチド接着分子がＤＮＡ署名を含み、前記ＤＮＡ署名は前記なめしプロセス後に増幅することができる、請求項１５〜請求項２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
得られた培養レザーの水分含有率が１０％〜３０％である、請求項１５〜請求項２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
得られた培養レザーの引張強度が２５ｋｇｆ／ｃｍ２以上である、請求項１５〜請求項２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
消費材製品の製造に前記培養レザーを用いることをさらに含む、請求項１５〜請求項２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記消費材製品が、札入れ、財布、腕時計バンド、ジャケット、靴、携帯電話ケース、ブリーフケース、カバン、手袋、ベルト、又はズボンを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
培養レザー製品の作製に用いられた方法を識別する方法であって、前記方法は：
ａ．前記製品の培養レザーのサンプルから核酸を抽出すること；
ｂ．前記核酸を、特定の非天然核酸配列を含む既知のＤＮＡ署名に対して特異的なプライマーを用いる増幅手順の対象とすること、ここで非天然核酸配列は、前記作製のプロセスの間に前記培養レザー中に導入されたものである；
ｃ．前記ＤＮＡ署名が増幅されて存在するかどうかについて試験すること；及び
ｄ．前記増幅されたＤＮＡ署名の存在又は非存在に基づいて前記培養レザー製品の作製に用いられた手法を識別すること、
を含む、方法。
【請求項３０】
前記サンプルが、製造方法の確認を可能とするために特に提供された製品の一部から得られる、請求項２９に記載の酸配列方法。
【請求項３１】
前記増幅手順がポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）である、請求項２９又は請求項３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記特定の非天然核酸配列が、１０以上、２０以上、又は３０以上の核酸長である、請求項２９〜請求項３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記特定の非天然核酸がプライマー結合部位を有する、請求項２９〜請求項３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
レザー製品を培養レザー製品と同定する方法であって、前記方法は：
ａ．前記製品のレザーのサンプルから核酸を抽出すること；
ｂ．前記核酸を、特定の非天然核酸配列を含む既知のＤＮＡ署名に対して特異的なプライマーを用いた増幅手順の対象とすること、ここで前記特定の非天然核酸配列は、作製のプロセスの間に前記培養レザー中に導入されたものである；
ｃ．前記ＤＮＡ署名が増幅されて存在するかどうかについて試験すること；及び
ｄ．前記増幅されたＤＮＡ署名が存在又は非存在に基づいて、前記レザー製品を培養レザー製品と同定すること、
を含む、方法。
【請求項３５】
前記サンプルが、前記レザー製品を培養レザー製品として確認することを可能とするために特に提供された前記製品の一部から得られる、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記増幅手順がポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）である、請求項３４又は請求項３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記特定の非天然核酸配列が、１０以上、２０以上、又は３０以上の核酸長である、請求項３４〜請求項３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記特定の非天然核酸配列がプライマー結合部位を有する、請求項３４〜請求項３７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、その内容が参照により本明細書に援用される２０１６年５月６日に出願された米国仮特許出願第６２／３３２，８８１号の利益を主張するものである。
【背景技術】
【０００２】
動物の皮から作られるレザーは、何千年も前から存在している。元々は、これらの皮は、食物用に狩った動物から利用されたものであり、レザーは、耐久性が高く機能的なファブリックの１つの容易に利用可能な入手源であった。しかし、今日、レザーは、主としてファッション及び贅沢さの訴求のために利用される贅沢品である。現在のレザーの入手は、持続可能性及び倫理上の理由の両方から、好ましくないものである。６５〜１５０ｋｇのＣＯ２／ｍ２というウシレザーのカーボンフットプリントは、他のファブリックよりも非常に多い。加えて、レザーの生産には、多くが倫理的に好ましくないと見る動物の飼育及び屠殺が必要である。本明細書では、レザーに伴うこれらの現行の欠点に対処する培養レザー製品及び培養レザー製品の作製方法が開示される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本明細書において、特定の実施形態では、培養「バイオレザー」、及びこれから作製された製品が開示される。一般的には、本開示の前記培養レザーはウシなどの適切な動物由来の皮膚細胞を培養し、細胞を使用に適したレザー製品が得られる１以上の処理工程に今日することによって作製される。本開示の方法及び製品は、培養レザーの生産に現在付随する多くの課題を解決するものであり、主としてレザーへの処理を可能とするのに充分な強度で結び付けられている細胞の充分に広いシートが作製される。これは、動物の屠殺又は従来のレザーの大きいカーボンフットプリントなしで達成される。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
特定の実施形態では、本明細書において、細胞及び細胞外コラーゲンを各層が含む複数の層を有する培養レザーが開示され、前記複数の層の各層は、ヌクレオチド接着分子（nucleotide adhesion molecule）によって隣接層と結合されており、前記培養レザーの水分含有率は４０％未満である。特定の実施形態では、前記細胞は線維芽細胞を含む。特定の実施形態では、前記細胞は角化細胞を含む。特定の実施形態では、前記細胞は誘導多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞又はｉＰＳＣ）を含む。特定の実施形態では、前記細胞の一部又はすべては、哺乳類、鳥類、魚類、爬虫類、又は両生類のうちのいずれか１以上に由来する。特定の実施形態では、前記細胞外コラーゲンは架橋されている。特定の実施形態では、前記ヌクレオチド接着分子は：炭素原子１２個以上の長鎖アルキル鎖を含む膜アンカー領域；並びに膜遠位端（membrane distal end）及び膜近位端（membrane proximal end）を有し、前記膜アンカー領域と前記膜近位端で結合しており、少なくとも５０ヌクレオチドであり、i）連続する約２０以上のヌクレオチドからなるヌクレオチド列を含むリンカー領域と、ii）１０以上のヌクレオチドを含み、前記リンカー領域に対して遠位に位置し、かつ前記リンカー領域が前記膜遠位接着領域とハイブリダイズ可能ではない、膜遠位接着領域とを含むポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、前記ヌクレオチド接着分子はＤＮＡ署名を含み、前記ＤＮＡ署名はなめしプロセス後に増幅することができる。特定の実施形態では、前記水分含有率は１０％〜３０％である。特定の実施形態では、引張強度は２５ｋｇｆ／ｃｍ２以上である。特定の実施形態では、前記培養レザーの厚さは１００ミリメートル未満である。特定の実施形態では、本明細書において、前記培養レザーを含む消費材製品が記載される。特定の実施形態では、前記消費材製品は札入れである。特定の実施形態では、前記消費材製品は財布である。特定の実施形態では、前記消費材製品は腕時計バンドである。特定の実施形態では、前記消費材製品は、ジャケットである。特定の実施形態では、前記消費材製品は靴である。特定の実施形態では、前記消費材製品は携帯電話ケースである。特定の実施形態では、前記消費材製品はブリーフケースである。特定の実施形態では、前記消費材製品はカバンである。特定の実施形態では、前記消費材製品は手袋である。特定の実施形態では、前記消費材製品はベルトである。特定の実施形態では、前記消費材製品はズボンである。
【０００５】
特定の実施形態では、複数の層のそれぞれがヌクレオチド接着分子によって隣接層と結合され、かつそれぞれが細胞を含む複数の層を培養すること；及び、前記複数の層を少なくとも１つのなめし剤と接触させることを含む、培養レザーの作製方法が本明細書で記載され、ここで、前記得られた培養レザーの水分含有率は４０％未満である。特定の実施形態では、前記細胞は線維芽細胞を含む。特定の実施形態では、前記細胞は角化細胞を含む。特定の実施形態では、前記細胞は誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を含む。特定の実施形態では、前記細胞のいずれかは、哺乳類、鳥類、魚類、爬虫類、又は両生類のうちのいずれか１以上に由来する。特定の実施形態では、前記コラーゲンはなめし剤によって架橋されている。特定の実施形態では、前記なめし剤はクロムを含む。特定の実施形態では、前記なめし剤は植物性タンニンを含む。特定の実施形態では、前記ヌクレオチド接着分子は：炭素原子１２個以上の長鎖アルキル鎖を含む膜アンカー領域；並びに、膜遠位端及び膜近位端を有し、前記膜アンカー領域と前記膜近位端で結合しており、少なくとも５０ヌクレオチドであり、i）連続する約２０以上のヌクレオチドからなるヌクレオチド列を含むリンカー領域と、ii）１０以上のヌクレオチドを含み、前記リンカー領域に対して遠位に位置し、かつ前記リンカー領域がハイブリダイズ可能ではない前記膜遠位接着領域と、を含むポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、前記ヌクレオチド接着分子はＤＮＡ署名を含み、前記ＤＮＡ署名は前記なめしプロセス後に増幅することができる。特定の実施形態では、前記得られた培養レザーの水分含有率は１０％〜３０％である。特定の実施形態では、前記得られた培養レザーの引張強度は２５ｋｇｆ／ｃｍ２以上である。特定の実施形態では、前記方法は、さらに消費材製品の製造に前記培養レザーを用いることを含む。特定の実施形態では、前記消費材製品は札入れである。特定の実施形態では、前記消費材製品は財布である。特定の実施形態では、前記消費材製品は腕時計バンドである。特定の実施形態では、前記消費材製品はジャケットである。特定の実施形態では、前記消費材製品は靴である。特定の実施形態では、前記消費材製品は携帯電話ケースである。特定の実施形態では、前記消費材製品はブリーフケースである。特定の実施形態では、前記消費材製品は、カバンである。特定の実施形態では、前記消費材製品は手袋である。特定の実施形態では、前記消費材製品はベルトである。特定の実施形態では、前記消費材製品はズボンである。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】図１は、培養レザーの製造に用いられる細胞を培養する方法の簡略化されたスキームを示す。このスキームでは、２つの細胞層が、別個の接着配列（灰色及び黒色の三角）を有して相補的塩基対形成によって結び付けられている２つの異なるヌクレオチド接着分子によって結び付けられている。これらの配列は、リンカー領域（黒色線）によって膜アンカー領域（灰色四角）と結合している。特定の実施形態では、３つ以上の層がこの方法で作製される。特定の実施形態では、前記層は細胞的に又は組成的に異なっている。
【図２】図２は、前記培養レザーから所望に応じて作製されるズボンのデザインを示す。
【図３】図３は、前記培養レザーから所望に応じて作製されるハンドバッグのデザインを示す。
【図４】図４は、前記培養レザーから所望に応じて作製されるブリーフケースのデザインを示す。
【図５】図５は、前記培養レザーから所望に応じて作製されるスーツケースのデザインを示す。
【図６】図６は、前記培養レザーから所望に応じて作製される女性用パンプスのデザインを示す。
【図７】図７は、前記培養レザーから所望に応じて作製される男性用ローファーのデザインを示す。
【図８】図８は、前記培養レザーから所望に応じて作製されるベルトのデザインを示す。
【図９】図９は、前記培養レザーから所望に応じて作製される札入れのデザインを示す。
【図１０】図１０は、前記培養レザーから所望に応じて作製される手袋のデザインを示す。
【図１１】図１１は、前記培養レザーから所望に応じて作製される腕時計バンドのデザインを示す。
【図１２】図１２は、前記培養レザーから所望に応じて作製されるサングラスケースのデザインを示す。
【図１３】図１３は、前記培養レザーから所望に応じて作製される自動車ハンドルカバーのデザインを示す。
【図１４】図１４は、前記培養レザーから所望に応じて作製される航空機用シートのデザインを示す。
【図１５】図１５は、前記培養レザーから所望に応じて作製されるフットボールのデザインを示す。
【図１６】図１６は、前記培養レザーから所望に応じて作製されるダイニングチェアのデザインを示す。
【図１７】図１７は、前記培養レザーから所望に応じて作製されるジャーナルのデザインを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
特定の定義
他に定めのない限り、本明細書で用いられるすべての技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。本明細書及び添付の請求項で用いられる場合、単数の形態「１つの（a）」、「１つの（an）」、及び「その（the）」は、文脈から明らかにそうでないことが示されていない限り、複数を含む。本明細書における「又は」の言及はいずれも、特に断りのない限り、「及び／又は」を包含することを意図している。
【０００８】
本明細書で用いられる場合、本明細書において「バイオレザー」とも称される「培養レザー」は、動物由来の個々の生細胞から、前記細胞を得るために動物を屠殺することなく作製されたレザーを意味する。特定の実施形態では、培養レザーは、標準的な組織／細胞培養法及び培地を用いて増殖されたものである。
【０００９】
本明細書で用いられる場合、「天然レザー」とは、動物の皮膚又は皮から従来の方法で作製されたレザーを意味する。
【００１０】
本明細書で用いられる場合、「基材」とは、細胞、細胞層、組織、又は培養レザーの支持物であり、細胞層、組織、又は前記培養レザーと一体化しておらず、一時的なものであり、例えば、作製の過程で、又は作製の後に除去される。ある実施形態では、基材は、組織／細胞培地に対して透過性である。基材は、細胞層、組織、又はレザー製品に一体化される予め作製された足場又は他の支持材料とは異なる。
【００１１】
培養レザー
特定の実施形態では、各層が細胞及び細胞外コラーゲンを含む複数の層を有する培養レザーが本明細書で開示され、前記複数の層の各層はヌクレオチド接着分子によって隣接層と結合されており、前記培養レザーの水分含有率は４０％未満である。他の特定の実施形態では、各層が細胞を含む複数の層を有する培養レザーが本明細書で開示され、前記複数の層の各層はヌクレオチド接着分子によって隣接層と結合されており、前記培養レザーの水分含有率は４０％未満である。他の特定の実施形態では、細胞及び細胞外コラーゲンの層を有する培養レザーが本明細書で開示され、前記培養レザーの水分含有率は４０％未満である。
【００１２】
特定の実施形態では、培養レザーは死んだ動物を入手源とするのではなく、培養された細胞から実験室又は生産設備で作製されるいずれのレザーをも意味する。特定の実施形態では、前記細胞は動物由来であり、続いて標準的な組織培養技術を用いて不死化又は増殖される。特定の実施形態では、前記細胞は屠殺されていない動物から得られる皮膚サンプル由来である。特定の実施形態では、培養レザーは純粋な合成レザー様製品又は人造レザー製品を含まない。合成形態のレザーは、ビニール、ポリ塩化ビニル、ポリウレタンなどから作製されたものを含む。
【００１３】
様々な実施形態では、培養レザーは多くの点で天然の組織及びレザーと異なる。特定の実施形態では、前記培養レザーは毛包を有しない。特定の実施形態では、前記培養レザーは体毛又は毛皮を有しない。特定の実施形態では、前記培養レザーは脂腺細胞を有しない。特定の実施形態では、前記培養レザーは脈管構造を有しない。特定の実施形態では、前記培養レザーは非天然の増幅可能なＤＮＡ分子をさらに含む。特定の実施形態では、前記培養レザーは２以上の異なるドナーから採取した細胞を含む。特定の実施形態では、前記培養レザーはキメラであり、２つの異なる種からの細胞を含む。特定の実施形態では、前記培養レザーは非皮膚由来の線維芽細胞を含む。
【００１４】
層及び構造
本明細書で述べる特定の実施形態では、前記培養レザーは複数の層を含む。特定の実施形態では、前記複数の層は１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、又はそれ以上の数の層を含む。特定の実施形態では、前記複数の層は、１０以上、２０以上、３０以上、４０以上、５０以上、６０以上、７０以上、８０以上、９０以上、１００以上、又はそれ以上、及びこれらの間の数も含む数の層を含む。特定の実施形態では、前記複数の層のいずれかの層が単一の細胞型を含む。特定の実施形態では、前記複数の層のいずれかの層が２つの異なる細胞型を含む。特定の実施形態では、前記複数の層のいずれかの層が３つの異なる細胞型を含む。特定の実施形態では、前記複数の層のいずれかの層が４つ以上の異なる細胞型を含む。特定の実施形態では、前記複数の層のいずれかの層が実質的に単一の細胞型から成る。特定の実施形態では、前記複数の層のいずれかの層が実質的に２つの異なる細胞型から成る。特定の実施形態では、前記複数の層のいずれかの層が実質的に３つの異なる細胞型から成る。特定の実施形態では、前記複数の層のいずれかの層が実質的に４つ以上の異なる細胞型から成る。特定の実施形態では、一層は単一細胞の厚さである。特定の実施形態では、一層は単一細胞の厚さよりも厚い。特定の実施形態では、一層は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上の数の細胞の厚さである。特定の実施形態では、一層は、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、又はそれ以上、及びこれらの間の数も含む数の細胞の厚さである。
【００１５】
特定の実施形態では、前記培養レザーは異なる細胞型の細胞、異なる種の細胞、又は同じ種の異なる品種の細胞を含むキメラである。特定の実施形態では、培養レザーの前記複数の層のいずれかが、異なる細胞型の細胞の混合物、異なる種の細胞の混合物、又は同じ種の異なる品種の細胞の混合物を含むキメラである。特定の実施形態では、１層以上の層が隣接する層と異なっている。特定の実施形態では、培養レザーは前記培養レザーに一体化される予め作製された足場又は他の支持材料を有しない。特定の実施形態では、少なくとも１つの層は隣接する層と異なる動物種由来の細胞を含む。特定の実施形態では、少なくとも１つの層は隣接する層と同じ種の異なる品種由来の細胞を含む。
【００１６】
特定の実施形態では、培養レザーは０．１ミリメートル以上の厚さである。特定の実施形態では、培養レザーは０．２ミリメートル以上の厚さである。特定の実施形態では、培養レザーは０．５ミリメートル以上の厚さである。特定の実施形態では、培養レザーは１ミリメートル以上の厚さである。特定の実施形態では、培養レザーは２ミリメートル以上の厚さである。特定の実施形態では、培養レザーは５ミリメートル以上の厚さである。特定の実施形態では、培養レザーは１０ミリメートル以上の厚さである。特定の実施形態では、培養レザーは１００ミリメートル未満の厚さである。特定の実施形態では、培養レザーは１０ミリメートル未満の厚さである。特定の実施形態では、培養レザーは５ミリメートル未満の厚さである。特定の実施形態では、培養レザーは２ミリメートル未満の厚さである。特定の実施形態では、培養レザーは１平方センチメートル以上の表面積を有する。特定の実施形態では、培養レザーは１０平方センチメートル以上の表面積を有する。特定の実施形態では、培養レザーは１００平方センチメートル以上の表面積を有する。特定の実施形態では、培養レザーは１０００平方センチメートル以上の表面積を有する。
【００１７】
細胞型
特定の実施形態では、本明細書で述べる前記培養レザーは適切ないずれかの細胞型から作製されている。特定の実施形態では、前記皮膚細胞は真皮の細胞である。特定の実施形態では、前記皮膚細胞は表皮細胞である。ある実施形態では、前記皮膚細胞は基底膜細胞である。特定の実施形態では、本明細書で述べる培養レザーは皮膚細胞から作製される。特定の実施形態では、前記皮膚細胞は角化細胞である。特定の実施形態では、前記皮膚細胞は線維芽細胞である。特定の実施形態では、前記皮膚細胞は色素細胞である。特定の実施形態では、前記皮膚細胞はメラニン細胞である。特定の実施形態では、前記皮膚細胞は角化細胞である。特定の実施形態では、本明細書で述べる前記培養レザーは多能性幹細胞を含む。特定の実施形態では、本明細書で述べる前記培養レザーは皮膚様細胞に分化された多能性幹細胞を含む。特定の実施形態では、多能性幹細胞の分化によって異種細胞集団が得られる。特定の実施形態では、多能性幹細胞の分化によって血管細胞が得られる。特定の実施形態では、前記多能性幹細胞の分化によって皮脂腺の細胞が得られる。特定の実施形態では、前記多能性幹細胞の分化によって毛包の細胞が得られる。特定の実施形態では、前記多能性幹細胞の分化によって神経系の細胞が得られる。特定の実施形態では、前記多能性幹細胞の分化によって脂肪細胞が得られる。特定の実施形態では、前記多能性幹細胞の分化によって線維芽細胞が得られる。特定の実施形態では、前記多能性幹細胞の分化によって本明細書で述べる１以上の細胞型の組み合わせが得られる。
【００１８】
特定の実施形態では、培養レザーは２以上の異なるドナー動物から得られる細胞を含む。特定の実施形態では、培養レザーは脂肪細胞又は脂肪組織を含まない。特定の実施形態では、培養レザーは筋肉細胞又は組織を含まない。特定の実施形態では、培養レザーは脂腺細胞を含まない。
【００１９】
特定の実施形態では、前記複数の層は線維芽細胞の１以上の層に隣接する角化細胞の１以上の層を含む。特定の実施形態では、前記複数の層のいずれかが線維芽細胞及び角化細胞の混合物を含む。特定の実施形態では、前記混合物は少なくとも約９５％、９０％、８５％、８０％、７５、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、又は５％、及びこれらの間のパーセントも含むパーセントの角化細胞を含む。特定の実施形態では、前記混合物は少なくとも約９５％、９０％、８５％、８０％、７５、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、又は５％、及びこれらの間のパーセントも含むパーセントの線維芽細胞を含む。
【００２０】
特定の実施形態では、前記複数の層は１以上の表皮様層を含む。さらなる実施形態では、表皮様層は約８０％、約８５％、約９０、約９５％、又は約９８％、及びこれらの間のパーセントも含むパーセントの角化細胞及び扁平上皮細胞を含む。特定の実施形態では、前記複数の層は１以上の真皮様層を含む。さらなる実施形態では、真皮様層は、線維芽細胞、マクロファージ、及び脂肪細胞の混合物を含む。特定の実施形態では、１以上の層は、前記細胞によって分泌されたか、又は作製プロセスで導入されたコラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、及び／又はラミニンなどの細胞外マトリックス成分を含む。
【００２１】
本明細書で述べる培養レザーに用いられる細胞は、動物組織の生検由来であり、動物は傷害されたり屠殺されたりすることはない。特定の実施形態では、培養レザーは、哺乳類（例：ウシ）、鳥類（例：ダチョウ）、魚類（例：サメ）、爬虫類（例：ヘビ）、両生類、又はこれらの組み合わせに由来する細胞を含む。
【００２２】
コラーゲン
特定の実施形態では、培養レザーはコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは培養状態に維持された細胞によって分泌されたコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは架橋されたコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは細胞外コラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは架橋された細胞外コラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは約２５重量％〜約７５重量％のコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは約２５重量％以上のコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは約３０重量％以上のコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは約３５重量％以上のコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは約４０重量％以上のコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは約４５重量％以上のコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは約５０重量％以上のコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは約５５重量％以上のコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは約６０重量％以上のコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは約６５重量％以上のコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは約７０重量％以上のコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは約６５重量％未満のコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは約６０重量％未満のコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは約５０重量％未満のコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは約４５重量％未満のコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは約４０重量％未満のコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは約３５重量％未満のコラーゲンを含む。特定の実施形態では、培養レザーは約３０重量％未満のコラーゲンを含む。特定の実施形態では、コラーゲンはなめし剤によって架橋されている。特定の実施形態では、前記なめし剤は植物性タンニンである。特定の実施形態では、前記植物性タンニンは、クリ、オーク、レドウル（redoul）、タンオーク、ヘムロック、ケブラチョ、マングローブ、ワットル（アカシア；カテコール参照）、及びテルミナリア・ケブラ（Terminalia chebula）などのテルミナリア属由来のミロバラン由来である。特定の実施形態では、前記タンニンは化学タンニンである。特定の実施形態では、前記化学タンニンはクロム化合物である。特定の実施形態では、前記なめし剤はアルミニウム化合物、ミョウバン、ジルコニウム、チタン、鉄塩、又はこれらの組み合わせである。特定の実施形態では、前記なめし剤は環境にやさしいものである。例えば、ある実施形態では、前記なめし剤はクロム、鉛、又はヒ素などのヒトの健康及び環境に有害である金属を含まない。さらなる例として、ある実施形態では、前記なめし剤はアントラセン又はホルムアルデヒドなどのヒトの健康及び環境に有害である有機化学物質を含まない。
【００２３】
特定の実施形態では、培養レザーは外来性コラーゲンを含む。特定の実施形態では、外来性コラーゲンは１μｇ／ｍｌの最終濃度で添加される。特定の実施形態では、外来性コラーゲンは５μｇ／ｍｌの最終濃度で添加される。特定の実施形態では、外来性コラーゲンは１０μｇ／ｍｌの最終濃度で添加される。特定の実施形態では、外来性コラーゲンは２０μｇ／ｍｌの最終濃度で添加される。特定の実施形態では、外来性コラーゲンは３０μｇ／ｍｌの最終濃度で添加される。特定の実施形態では、外来性コラーゲンは４０μｇ／ｍｌの最終濃度で添加される。特定の実施形態では、外来性コラーゲンは５０μｇ／ｍｌの最終濃度で添加される。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはウシコラーゲンである。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはブタコラーゲンである。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはトリコラーゲンである。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはＩ型である。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはＩ型である。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはＩＩＩ型である。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはＩＶ型である。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはＶ型である。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはＶＩ型である。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはＶＩＩ型である。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはＶＩＩＩ型である。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはＩＸ型である。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはＸ型である。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはＸＩ型である。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはＸＩＩ型である。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはＸＩＩＩ型である。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはＸＩＶ型である。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはＸＶ型である。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはＸＶＩ型である。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはＸＶＩＩ型である。特定の実施形態では、外来性コラーゲンはＸＶＩＩＩ型である。特定の実施形態では、外来性コラーゲンは１以上の型のコラーゲンの組み合わせである。
【００２４】
特定の実施形態では、培養レザーはコラーゲン以外の外来性細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質を含む。特定の実施形態では、外来性ＥＣＭタンパク質はフィブロネクチンである。特定の実施形態では、外来性ＥＣＭタンパク質はラミニンである。特定の実施形態では、外来性ＥＣＭタンパク質はエラスチンである。特定の実施形態では、外来性ＥＣＭタンパク質は１以上の細胞外マトリックスタンパク質の組み合わせである。
【００２５】
内因性コラーゲン源
特定の実施形態では、コラーゲンは培養レザーの細胞によって内因的に産生される。特定の実施形態では、内因性コラーゲン合成は機械的コンディショニングを介して刺激される。特定の実施形態では、内因性コラーゲン合成はシグナル伝達経路の活性化を介して刺激される。特定の実施形態では、内因性コラーゲン合成は組換えＤＮＡ技術を用いて増加された遺伝子発現を介して増加される。
【００２６】
細胞の機械的コンディショニングにより、細胞中でのコラーゲン発現、さらにはコラーゲンのリモデリング及び成熟が高められる。ある実施形態では、機械的伸長によりコラーゲン合成が促進される。特定の実施形態では、周期的歪みによりコラーゲン合成が促進される。特定の実施形態では、圧縮によりコラーゲン合成が促進される。特定の実施形態では、前記機械的な力は外部からであり非細胞源から発生させる。他の実施形態では、前記機械的な力は内部からであり、細胞−細胞相互作用又は細胞−環境相互作用から生じる。加えて、細胞の電気的刺激によってもコラーゲン発現が増加される。特定の実施形態では、電気的刺激はパルス化される。特定の実施形態では、電気的刺激は細胞だけに指向され、細胞外マトリックスには指向されない。
【００２７】
組換えＤＮＡ技術を用いて、コラーゲン又は変異コラーゲンの細胞内遺伝子発現を増加する。特定の実施形態では、培養レザーの細胞はコラーゲンをコードする遺伝物質の送達を通して、コラーゲン又は変異コラーゲンを発現するように誘導される。特定の実施形態では、遺伝物質はエレクトロポレーション又は化学的トランスフェクションを介して、細胞中にトランスフェクトされる。特定の実施形態では、遺伝物質はＤＮＡである。特定の実施形態では、遺伝子物質はＲＮＡである。特定の実施形態では、細胞は１以上の細胞外マトリックスタンパク質の産生のシグナル伝達経路の活性化因子の追加を介してコラーゲンを産生するように誘導される。
【００２８】
外来性コラーゲン源
内因性コラーゲン発現を増加させることが可能である一方で、他の実施形態では、外来性コラーゲンが培養レザーの細胞に添加される。特定の実施形態では、コラーゲン又は変異コラーゲンは市販で入手される。特定の実施形態では、コラーゲン又は変異コラーゲンは組換えＤＮＡ技術又は化学合成を含む従来のタンパク質合成法によって入手される。組換えＤＮＡ技術では、細胞系又は無細胞系を用いて前記コラーゲン又は変異コラーゲンが作製される。
【００２９】
タンパク質合成のための細胞系の特定の実施形態では、タンパク質を産生する細胞は翻訳後修飾、分子フォールディング、及び多ドメイン真核生物タンパク質合成を例とする様々な因子に応じて選択される。特定の実施形態では、コラーゲン又は変異コラーゲンをコードするＤＮＡはタンパク質産生のための鋳型であり、エレクトロポレーション及びウィルス送達などの様々な方法を用いて宿主細胞中に導入される。前記ＤＮＡは宿主細胞ゲノム中に安定に組み込まれる。場合によっては安定な組み込みは必要とされない。多くの異なる宿主細胞が利用可能であり、細菌、酵母、昆虫、及び哺乳類の細胞から得られるものが挙げられる。細胞系では、細菌宿主や、酵母細胞、昆虫細胞、及び哺乳類細胞などの真核生物宿主が用いられる。
【００３０】
タンパク質合成のための無細胞系の特定の実施形態では、ポリペプチド及びタンパク質が、リボソーム、アミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼ、翻訳開始因子及び伸長因子、ヌクレアーゼなどを例とする生物マシーナリーを用いて、生細胞を用いることなく作製される。ある実施形態では、無細胞タンパク質発現のための生物マシーナリーは、細菌、昆虫細胞、酵母、又は哺乳類細胞から回収される。生物マシーナリー（例：リボソーム、アミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼ、翻訳開始因子及び伸長因子、ヌクレアーゼなど）、ＤＮＡ鋳型、アミノ酸、及び他の必要な補助剤を含む反応溶液が、一緒にインキュベートされてタンパク質の生体外翻訳が促進される。無細胞タンパク質合成によって翻訳環境への直接のアクセス及び前記翻訳環境の制御が可能となり、このことは、場合によってはタンパク質の作製及び非天然アミノ酸、アミノ酸類似体、修飾アミノ酸などの組み込みの最適化にとって有利である。
【００３１】
ヌクレオチド接着分子
特定の実施形態では、培養レザーはさらにヌクレオチド接着分子を含む。所定の培養レザーの隣接層は、図１に示されるように、各連続する層の細胞膜に固定されるヌクレオチドを用いて培養中に結合される。異なる隣接層は異なる相補ヌクレオチド接着分子を有し、培養中の細胞層の迅速で堅固な集合が得られる。細胞の集合は、ギャップジャンクション、タイトジャンクション、及びデスモソームなどの結合を通した細胞同士の接触に依存する。特定の実施形態では、細胞の近接度が増加されると細胞同士の結合がさらに広がることによって細胞同士の接触が高まる。
【００３２】
特定の実施形態では、各隣接層はヌクレオチド接着分子を含む。特定の実施形態では、ヌクレオチド接着分子は膜アンカー領域及び細胞外領域を含む。特定の実施形態では、前記細胞外領域はリンカー領域及び膜遠位接着領域を含む。ヌクレオチド接着分子は、その全体が参照により援用される米国特許出願公開第２０１４／０２９４７８２（Ａ１）号に記載され、例示されている。
【００３３】
特定の実施形態では、前記膜アンカー領域は細胞膜中に入り込むことができる１以上の疎水性分子を含む。ある実施形態では、前記膜アンカー領域は疎水性である。ある実施形態では、前記膜アンカー領域は親油性である。ある実施形態では、前記膜アンカー領域全体が疎水性である。ある実施形態では、前記膜アンカー領域全体が親油性である。ある実施形態では、一部分のみが親油性又は疎水性である。ある実施形態では、前記膜アンカー領域は両親媒性である。多くの実施形態では、前記膜アンカー領域は鎖が溶液中に含有されるよりも膜中に挿入される方がエネルギー的に有利であるような領域である。特定の実施形態では、前記膜アンカー領域はアルキル鎖を含む。ある実施形態では、前記膜アンカー領域はアルキル鎖、及びアルケニル鎖、アルキル鎖、アリール鎖、又はアラルキル鎖を含む。特定の実施形態では、前記アルケニル鎖、アルキル鎖、アリール鎖、又はアラルキル鎖は１２〜２２個の炭素原子を含む。ある実施形態では、前記アルキル鎖は約１２〜２２個の炭素原子を含み、前記アルケニル鎖、アルキル鎖、アリール鎖、又はアラルキル鎖は、約１２〜２２個の炭素原子を含む。ある実施形態では、前記鎖は同じ数の炭素原子を共有する。他の実施形態では、一方の鎖が他方の鎖よりも約１〜約１０個少ない炭素原子を有する。ある実施形態では、一方の鎖が他方の鎖よりも約１個少ない炭素原子、約２個少ない炭素原子、約３個少ない炭素原子、約４個少ない炭素原子、約５個少ない炭素原子、約６個少ない炭素原子、約７個少ない炭素原子、約８個少ない炭素原子、約９個少ない炭素原子、又は約１０個少ない炭素原子を有する。様々な実施形態において、前記膜アンカー領域は１以上のアルケニル鎖、アリール鎖、又はアラルキル鎖を含み、各鎖は１２〜２２個の炭素原子を含む。特定の実施形態では、膜アンカー領域は少なくとも１２炭素のアルキル鎖を含む。特定の実施形態では、膜アンカー領域は少なくとも１４炭素のアルキル鎖を含む。特定の実施形態では、膜アンカー領域は少なくとも１６炭素のアルキル鎖を含む。特定の実施形態では、膜アンカー領域は少なくとも１８炭素のアルキル鎖を含む。特定の実施形態では、アルキル鎖は飽和である。特定の実施形態では、アルキル鎖は不飽和である。
【００３４】
特定の実施形態では、細胞外領域はポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、細胞外領域は一本鎖ＤＮＡポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、ＤＮＡポリヌクレオチドはリンカー領域及び膜遠位接着領域を含む。
【００３５】
特定の実施形態では、細胞外領域はリンカー領域を含む。特定の実施形態では、リンカー領域は約２０〜約３０００の連続するヌクレオチドを含む。多くの実施形態では、リンカー領域はポリヌクレオチドの膜遠位端から約１０ヌクレオチド以上離れている。多くの実施形態では、リンカー領域はポリヌクレオチドの膜遠位端から約１０〜約２０００ヌクレオチド以上離れている。ある実施形態では、リンカー領域は膜遠位端から約５〜約１０ヌクレオチド、約１０〜約２０ヌクレオチド、約２０〜約４０ヌクレオチド、約４０〜約６０ヌクレオチド、約６０〜約８０ヌクレオチド、約８０〜約１００ヌクレオチド、約１００〜約１２０ヌクレオチド、約１２０〜約１４０ヌクレオチド、約１４０〜約１６０ヌクレオチド、約１６０〜約１８０ヌクレオチド、約１８０〜約２００ヌクレオチド、約２００〜約２２５ヌクレオチド、約２２５〜約２５０ヌクレオチド、約２５０〜約２７５ヌクレオチド、約２７５〜約３００ヌクレオチド、約３００〜約３５０ヌクレオチド、約３５０〜約４００ヌクレオチド、約４５０〜約５００ヌクレオチド、約５００〜約６００ヌクレオチド、約６００〜約７００ヌクレオチド、約７００〜約８００ヌクレオチド、約８００〜約９００ヌクレオチド、約１０００〜約１２００ヌクレオチド、約１２００〜約１４００ヌクレオチド、約１４００〜約１６００ヌクレオチド、約１６００〜約１８００ヌクレオチド、約１８００〜約２０００ヌクレオチド離れている。多くの実施形態では、リンカー領域は約５〜約３０００の連続する同一のヌクレオチドを含む。ある実施形態では、リンカー領域は２種類の塩基のみを含む約１０〜約２０００の連続するヌクレオチドを含む。ある実施形態では、リンカー領域はポリヌクレオチド中のリンカー領域に対して遠位にある約１０以上のどの連続するヌクレオチドともハイブリダイズしない。ある実施形態では、リンカー領域はポリヌクレオチド中のリンカー領域に対して遠位にある約１０〜約５００のどの連続するヌクレオチドともハイブリダイズしない。
【００３６】
特定の実施形態では、リンカー領域は約５〜約３０００の連続する同一のヌクレオチドを含む。ある実施形態では、連続する範囲は約５〜約１０ヌクレオチド、約１０〜約２０ヌクレオチド、約２０〜約４０ヌクレオチド、約４０〜約６０ヌクレオチド、約６０〜約８０ヌクレオチド、約８０〜約１００ヌクレオチド、約１００〜約１２０ヌクレオチド、約１２０〜約１４０ヌクレオチド、約１４０〜約１６０ヌクレオチド、約１６０〜約１８０ヌクレオチド、約１８０〜約２００ヌクレオチド、約２００〜約２２５ヌクレオチド、約２２５〜約２５０ヌクレオチド、約２５０〜約２７５ヌクレオチド、約２７５〜約３００ヌクレオチド、約３００〜約３５０ヌクレオチド、約３５０〜約４００ヌクレオチド、約４５０〜約５００ヌクレオチド、約５００〜約６００ヌクレオチド、約６００〜約７００ヌクレオチド、約７００〜約８００ヌクレオチド、約８００〜約９００ヌクレオチド、約１０００〜約１２００ヌクレオチド、約１２００〜約１４００ヌクレオチド、約１４００〜約１６００ヌクレオチド、約１６００〜約１８００ヌクレオチド、約１８００〜約２０００ヌクレオチド、約２０００〜約２２５０ヌクレオチド、約２２５０〜約２５００ヌクレオチド、約２５００〜約２７５０ヌクレオチド、約２７５０〜約３０００ヌクレオチドまたはそれ以上を含む。特定の実施形態では、連続する範囲はチミンヌクレオチドを含む。他の実施形態では、連続する範囲はアデニンヌクレオチドを含む。さらに他の実施形態では、連続する範囲はシトシンヌクレオチドを含む。さらに他の実施形態では、連続する範囲はグアニンヌクレオチドを含む。なお他の実施形態では、連続する範囲はウラシルヌクレオチドを含む。
【００３７】
特定の実施形態では、細胞外領域は膜遠位接着領域を含む。特定の実施形態では、細胞外領域はリンカー領域に対して遠位にあるポリヌクレオチド領域を含み、膜遠位端の前に膜遠位接着領域を含む。特定の実施形態では、膜遠位接着領域はポリヌクレオチド、フルオロフォア、又は医薬組成物とハイブリダイズする。特定の実施形態では、膜遠位接着領域は別の膜固定ポリヌクレオチド中に存在するポリヌクレオチドとハイブリダイズする。特定の実施形態では、ハイブリダイゼーションは２つの膜固定ポリヌクレオチドの膜遠位接着領域同士でなされる。特定の実施形態では、ハイブリダイゼーションは厳密なハイブリダイゼーションである。特定の実施形態では、膜遠位接着領域の配列はポリヌクレオチドの他のいずれの領域ともハイブリダイズしない。特定の実施形態では、膜遠位接着領域は約５〜約３０００のヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、膜遠位接着領域は、約５〜約１０のヌクレオチド、約１０〜約２０のヌクレオチド、約２０〜約４０のヌクレオチド、約４０〜約６０のヌクレオチド、約６０〜約８０のヌクレオチド、約８０〜約１００のヌクレオチド、約１００〜約１２０のヌクレオチド、約１２０〜約１４０のヌクレオチド、約１４０〜約１６０のヌクレオチド、約１６０〜約１８０のヌクレオチド、約１８０〜約２００のヌクレオチド、約２００〜約２２５のヌクレオチド、約２２５〜約２５０のヌクレオチド、約２５０〜約２７５のヌクレオチド、約２７５〜約３００のヌクレオチド、約３００〜約３５０のヌクレオチド、約３５０〜約４００のヌクレオチド、約４５０〜約５００のヌクレオチド、約５００〜約６００のヌクレオチド、約６００〜約７００のヌクレオチド、約７００〜約８００のヌクレオチド、約８００〜約９００のヌクレオチド、約１０００〜約１２００のヌクレオチド、約１２００〜約１４００のヌクレオチド、約１４００〜約１６００のヌクレオチド、約１６００〜約１８００のヌクレオチド、約１８００〜約２０００のヌクレオチド、約２０００〜約２２５０のヌクレオチド、約２２５０〜約２５００のヌクレオチド、約２５００〜約２７５０のヌクレオチド、約２７５０〜約３０００のヌクレオチドまたはそれ以上を含む。特定の実施形態では、膜遠位接着領域は（ＣＡＧＴ）及び／又は（ＡＣＴＧ）ｎを含み、ここでｎは１以上の整数である。ある実施形態では、ｎは１である。他の実施形態では、ｎは１〜２０である。特定の実施形態では、ｎは１〜１０、又はそれ以上であり、好ましくは１〜５である。
【００３８】
特定の実施形態では、培養レザーはさらに第一及び第二のヌクレオチド接着分子を含む。特定の実施形態では、第二のヌクレオチド接着分子は膜遠位接着領域が異なっており、第一のヌクレオチド接着分子の膜遠位接着領域に対して相補的であるポリヌクレオチド配列を含むこと以外は第一のヌクレオチド接着分子と同一である。
【００３９】
特定の実施形態では、ヌクレオチド接着分子はポリメラーゼ連鎖反応法によって増幅可能であるＤＮＡ署名を含む。特定の実施形態では、ＤＮＡ署名は１０以上のヌクレオチドの非天然連続配列を有する。特定の実施形態では、ＤＮＡ署名は２０以上のヌクレオチドの非天然連続配列を有する。特定の実施形態では、ＤＮＡ署名は３０以上のヌクレオチドの非天然連続配列を有する。特定の実施形態では、ＤＮＡ署名を含む前記ポリヌクレオチドはプライマー結合部位を有する。特定の実施形態では、ＤＮＡ署名を用いて本明細書で述べる手法によって作製された培養レザーから消費材製品が作製されたことが確認される。
【００４０】
例えば、本明細書において、培養レザー製品の作製に用いられた手法を識別する方法が記載され、前記方法は：製品の培養レザーのサンプルから核酸を抽出すること；前記核酸を、特定の非天然核酸配列を含む既知のＤＮＡ署名に対する特異的なプライマーを用いた増幅手順の対象とすること、ここで前記特定の非天然核酸配列は作製プロセスで培養レザー中に導入されたものであり；前記ＤＮＡ署名が増幅されて存在するかどうかについて試験すること；及び前記増幅されたＤＮＡ署名の存在又は非存在に基づいて前記培養レザー製品の作製に用いられた手法を識別すること、を含む。ある実施形態では、サンプルは製造手法の確認を可能とするために特に提供された前記製品の一部から得られる。ある実施形態では、増幅手順はポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）である。ある実施形態では、特定の非天然核酸配列は少なくとも１０、２０、又は３０の核酸長である。さらなる実施形態では、特定の非天然核酸配列はプライマー結合部位を有する。
【００４１】
さらなる例として、本明細書において、レザー製品を培養レザー製品として識別する方法が記載され、前記方法は：製品のレザーのサンプルから核酸を抽出すること；前記核酸を、特定の非天然核酸配列を含む既知のＤＮＡ署名に対して特異的なプライマーを用いた増幅手順の対象とすること、ここで前記特定の非天然核酸配列は作製プロセスで培養レザー中に導入されたものであり；前記ＤＮＡ署名が増幅されて存在するかどうかについて試験すること；及び前記増幅されたＤＮＡ署名の存在又は非存在に基づいて前記レザー製品を培養レザー製品として識別すること、を含む。ある実施形態では、サンプルはレザー製品を培養レザー製品として確認することを可能とするために特に提供された製品の一部から得られる。ある実施形態では、増幅手順はポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）である。ある実施形態では、特定の非天然核酸配列は少なくとも１０、２０、又は３０の核酸長である。さらなる実施形態では、特定の非天然核酸配列はプライマー結合部位を有する。
【００４２】
構造支持体
細胞外マトリックスタンパク質は、組織において構造的完全性を提供する役割を有する。細胞及びいずれかの追加のタンパク質を含む細胞溶液が足場に播種される。組織を培養で作製する場合、ある実施形態では、構造支持体を提供するか、又は細胞の整列を補助するために足場が用いられる。
【００４３】
ある実施形態では、足場は生分解性ポリマー（例：ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ−ｄｉ−乳酸−コ−グリコール酸（poly-di-lactic-co-glycolic acid）など）から作製される。ある実施形態では、足場を生体活性とするために追加部分によって機能が付与される（例：ペプチド、脂質、核酸、又は医薬化合物）。ある実施形態では、足場は脱細胞された組織から得られる。ある実施形態では、脱細胞された組織は哺乳類の組織である。ある実施形態では、脱細胞された組織は植物由来である。材料の選択は、足場及び前記培養で作製された組織の剛性に影響を与える。加えて、足場の構造も足場の剛性に寄与する。例えば、足場中の細孔サイズを変化させることで足場の剛性が改変される。
【００４４】
培養レザーの物理的特性
本開示の培養レザーは、天然レザーの外観及び感触を模倣することを意図している。特定の実施形態では、培養レザーは天然レザーに類似の水分含有率を有する。特定の実施形態では、培養レザーの水分含有率は４０％未満である。特定の実施形態では、培養レザーの水分含有率は３０％未満である。特定の実施形態では、培養レザーの水分含有率は２０％未満である。特定の実施形態では、培養レザーの水分含有率は５％超である。特定の実施形態では、培養レザーの水分含有率は１０％超である。特定の実施形態では、培養レザーの水分含有率は１５％超である。特定の実施形態では、培養レザーの水分含有率は２０％超である。特定の実施形態では、培養レザーの水分含有率は５％〜４０％である。特定の実施形態では、培養レザーの水分含有率は１０％〜３５％である。特定の実施形態では、培養レザーの水分含有率は１０％〜３０％である。
【００４５】
本開示の培養レザーは、死んだ動物の皮膚を入手源とするレザーの外観及び感触を模倣することを意図している。特定の実施形態では、培養レザーは死んだ動物の皮膚から作製されたレザーの引張強度を有する。特定の実施形態では、培養レザーは、５０ｋｇｆ／ｃｍ２以上の引張強度を有する。特定の実施形態では、培養レザーは７５ｋｇｆ／ｃｍ２以上の引張強度を有する。特定の実施形態では、培養レザーは１００ｋｇｆ／ｃｍ２以上の引張強度を有する。特定の実施形態では、培養レザーは１２５ｋｇｆ／ｃｍ２以上の引張強度を有する。特定の実施形態では、培養レザーは１５０ｋｇｆ／ｃｍ２以上の引張強度を有する。特定の実施形態では、培養レザーは１７５ｋｇｆ／ｃｍ２以上の引張強度を有する。特定の実施形態では、培養レザーは２００ｋｇｆ／ｃｍ２以上の引張強度を有する。特定の実施形態では、引張強度試験は米国試験材料協会（ＡＳＴＭ）規格に従って行われる。
【００４６】
合成レザー対天然レザー
合成レザーはいくつかの点で天然レザーと区別することができる。まず、天然レザーの細胞組成は天然レザーの細胞組成と異なる。多能性幹細胞から得られる細胞の遺伝子プロファイルは、相当する成体細胞の遺伝子プロファイルと異なる。遺伝子プロファイルの相違から遺伝子発現プロファイルの相違が得られ、最終的に、タンパク質合成、タンパク質構造、及びタンパク質機能における相違に繋がる。
【００４７】
加えて、天然皮膚中の細胞型の比は培養で作製された皮膚組織中の細胞型の比と異なる。その結果、分化された細胞は、皮脂腺、脈管構造、又は毛包などの天然皮膚中に見られる下部構造を自然に形成することはない。培養で作製された組織の形成は、細胞の整列、細胞の相互作用、前記細胞による細胞外マトリックスの発現及び分泌、並びに前記細胞外マトリックスタンパク質の成熟を含む多くの因子に依存する。これらの因子は、前記培養で作製された組織、さらには前記培養レザーの特性に影響を与える。
【００４８】
培養レザーの作製方法
培養レザーの作製方法が本明細書において開示される。ドナー動物からサンプリングされた線維芽細胞、角化細胞、メラニン細胞、又はこれらの組み合わせなどの皮膚細胞が培養レザーの作製に用いられる。特定の実施形態では、サンプリングは動物を屠殺するものではない。特定の実施形態では、サンプリングは動物に疼痛を与えるものではない。特定の実施形態では、細胞は、線維芽細胞、角化細胞、及び／又はメラニン細胞に分化される多能性幹細胞である。特定の実施形態では、細胞は、線維芽細胞、角化細胞、又はメラニン細胞に分化される誘導多能性幹細胞である。特定の実施形態では、誘導多能性幹細胞は、化学処理、遺伝子処理、又はウィルス処理によって作成される。
【００４９】
培養レザーは付加製造プロセスによって作製される。仕上げられた培養レザーは、いくつかの細胞層によって放出されたコラーゲンを含む。層は、連続して積層される。第一の層は、組織培養物適合性の（tissue culture compatible）ガラス、プラスチック、又はメッシュをなどの基材上に積層される。特定の実施形態では、第一の層との接着を促進するためにコラーゲン又はリジンなどの物質でコーティングされる。特定の実施形態では、基材は第一の層の追加後に生分解可能及び／又は溶解可能である。第一の層は、基材に加えられる前又は後のいずれかに、ヌクレオチド接着分子によって機能が付与される。続く層は、その前に積層された層との接着を促進するヌクレオチド接着分子で各層が機能化されて積層される。特定の実施形態では、接着はヌクレオチド接着分子の相補的塩基対形成によって促進される。特定の実施形態では、細胞は続く層の追加前に完全な接着が可能とされる。特定の実施形態では、細胞は続く層の追加前に、１０分間以上、２０分間以上、３０分間以上、４０分間以上、５０分間以上、６０分間以上、９０分間以上、１２０分間以上、１８０分間以上、又は２４０分間以上、及びこれらの間の時間も含む時間にわたって接着される。
【００５０】
各層の細胞を堆積させる多くの方法が好適である。特定の実施形態では、各層の細胞は、液体の細胞含有懸濁液の適用によって堆積される。特定の実施形態では、各層の細胞は、バイオプリンティングによって堆積される。さらなる実施形態では、前記バイオプリンティング技術は、液体又は半液体である細胞含有溶液のインクジェット又はスプレーを含む。なおさらなる実施形態では、前記バイオプリンティング技術は、半固体又は固体である細胞含有組成物の適用又は押出しを含む。特定の実施形態では、各層の細胞は、基材の表面上で細胞をパターン化することによって堆積される。さらなる実施形態では、前記パターン化は、基材の表面上に核酸のパターンを配置すること、及び前記パターン化された核酸を、ハイブリダイゼーション条件下、細胞の第一の懸濁液と接触させることを含み、第一の懸濁液の細胞はパターン化された核酸に対して相補的である細胞表面結合核酸を含み、及び細胞表面結合核酸はパターン化された核酸とハイブリダイズして基材の表面上の細胞がパターン化される。基材の表面上の細胞をパターン化する方法は、その全体が参照により援用される米国特許出願公開第２０１６／００１００５４（Ａ１）号に記載され、例示されている。
【００５１】
細胞層は、前記基材に接着された後、標準的な組織培養技術及び培地を用いて培養される。細胞は、約５％、及び摂氏２４〜４０度の温度で培養される。好ましくは、摂氏３０〜３８度である。細胞は、ＲＰＭＩ、ＤＭＥＭ、又は専用の細胞培地などの冨栄養培地中で培養される。特定の実施形態では、前記細胞は細胞の増殖及び接着を補助することができる無血清培地中で培養される。特定の実施形態では、細胞は少なくとも２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、又は１２０時間、及びこれらの間の時間を含む時間にわたって培養され、その後処理のために取り出される。特定の実施形態では、細胞は、少なくとも１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、又は１４日間にわたって培養され、その後、さらなる処理のために前記基材から取り出される。
【００５２】
細胞は、層の完全性の維持が可能となるいずれかの方法で基材から取り出される。特定の実施形態では、細胞は酵素消化によって取り出される。特定の実施形態では、細胞はスクレーピング又は振とうなどの物理的手段によって取り出される。細胞層の取り出し後、細胞はさらなる処理工程によって処理され、レザー様ファブリックが得られる。一般的に、レザー処理工程は本技術分野において公知である。特定の実施形態では、さらなる処理工程は、乾燥、保存処理、水漬け、石灰漬け、裏打ち、分割、再石灰漬け、脱灰、酵解、脱脂、フリジング（frizing）、漂白、浸酸、脱酸、なめし、染色、又はこれらのいずれかの組み合わせを含む。特定の実施形態では、前記レザーは、水絞り、分割、シェービング、再クロム処理、中和、再なめし、染色、加脂（fatliquoring）、充填、加脂（stuffing）、ストリッピング（stripping）、ホワイトニング、固着、セッティング、乾燥、味入れ、空打ち、ステーキング、バフィング、又はこれらのいずれかの組み合わせなどの１又は複数のクラスティング（crusting）工程に掛けられる。特定の実施形態では、前記培養レザーは、加脂（oiling）、ブラッシング、手塗り、含浸、バッフィング、スプレー塗装、ローラー塗装、ポリッシング、プレート仕上げ、エンボス加工、アイロン掛け、グレージング、タンブリング（tumbling）、又はこれらのいずれかの組み合わせを含む１又は複数の仕上げ工程に掛けられる。
【００５３】
培養レザーから製造される物品
本開示の前記培養レザーにおいて意図される目的は消費材製品の製造である。特定の実施形態では、前記消費材製品は天然レザーを用いて作製されるいずれかの製品である。
【００５４】
ある実施形態では、消費材製品はファッション物品及び／又はアパレルの物品を含む。様々なさらなる実施形態では、前記消費材製品としては、限定されない例として、ズボン（例えば、図２参照）、ショーツ、ハンドバッグ（例えば、図３参照）、小型カバン、ブリーフケース（例えば、図４参照）、バックパック、ラップトップコンピュータ用バッグ、カバン（例えば、図５参照）、カバン用タグ、トートバッグ、携帯電話用ケース、ラップトップコンピュータ用ケース、ラップトップコンピュータ用カバー、タブレット用ケース、靴（例：ハイヒール（例えば、図６参照）、サンダル、スリッパ、ローファー（例えば、図７参照）、編み上げ靴、ブーツ、ブーティ、靴紐など）、ジャケット（例：レインコート、オートバイ用ジャケットなど）、スカート、シャツ（例：Ｔシャツ、タンクトップ、ジャージなど）、下着、ベスト、チャップス、ベルト（例えば、図８参照）、札入れ（例えば、図９参照）、オートバイ用グローブを含む手袋（例えば、図１０参照）、帽子、装身具（例：ブレスレット、バングル、イヤリング、ネックレス、腕時計バンド（例えば、図１１参照）など）、防弾チョッキ、ヘルメット、装飾物（例：タッセルなど）、サングラス、及びサングラス用ケース（例えば、図１２参照）が挙げられる。
【００５５】
ある実施形態では、消費材製品はペット用アクセサリーを含む。様々なさらなる実施形態では、前記消費材製品としては、限定されない例として、物（犬）用首輪、動物（犬）用紐、動物（犬）用アパレル品などが挙げられる。
【００５６】
ある実施形態では、消費材製品は車両コンポーネント及び装飾品を含む。様々なさらなる実施形態では、消費材製品としては、限定されない例として、ハンドルカバー（例えば、図１３参照）、自動車用ダッシュボード、自動車用アームレスト、自動車用キャプテンチェア、自動車用シート及びベンチ、自動車用内装品、航空機用シート（例えば、図１４参照）、航空機用内装品、ボート用シート、オートバイ用シートなどが挙げられる。
【００５７】
ある実施形態では、消費材製品はスポーツ及び運動競技用品を含む。様々なさらなる実施形態では、消費材製品としては、限定されない例として、フットボール（例えば、図１５参照）、野球ボール、ソフトボール、サッカーボール、バレーボール、クリケットボール、ラグビーボール、ハンドボール、クリート、登山靴、サイクリング用シューズ、自転車用シート、野球用グローブ、ゴルフ用手袋、ボクシング用グローブ、スキー／スノーボード用手袋、ヨガマット、ピラティス用品、パンチングバッグ、ジム用ベンチ、乗馬スポーツ用品、馬具類及び用品、あん馬、平均台、テント、ティピー、ウィグワム、ユルト（住居）、カヤック、タカ狩り用足輪、アーチェリー用腕甲、牛追いむち、馬蹄用ブーツ、ボクシング用スピードバッグ、剣のグリップ、ナイフのグリップ、剣の鞘、矢筒、ナイフの鞘、銃ホルスター、銃スリーブなどが挙げられる。
【００５８】
ある実施形態では、消費材製品としては、限定されない例として、レザーでアクセントをつけたツール、木工工具用ベルト、木工釘用バッグなどが挙げられる。
【００５９】
ある実施形態では、消費材製品は家具を含む（例：革張りベッド、ヘッドボード、チェア（例えば、図１６参照）、クッション、枕、ドレーパリーなど）。ある実施形態では、消費材製品は床材を含む。ある実施形態では、消費材製品は家庭用品を含む（例：飲物用コースター、バレットトレイ、額縁、びん、細口びん、革張り動物ぬいぐるみ、敷物など）。ある実施形態では、前記消費材製品としては、限定されない例として、本、ブックカバー、製本用品、ジャーナル（例えば、図１７参照）、ジャーナルカバー、及びレザー製スケッチブックが挙げられる。
【００６０】
ある実施形態では、消費材製品は楽器を含む（例：ドラム、バンジョー、ギター用ストラップなど）。
【００６１】
ある実施形態では、消費材製品は羊皮紙及び／又はベラムを含む。
【実施例】
【００６２】
以下の例示的な例は、本明細書で述べる主題の実施形態を代表するものであり、限定することを意図するものではまったくない。
【００６３】
例１−ウシ由来多能性幹細胞から合成レザーを作製する方法
本明細書で述べる例は、例示的なものであり、請求項を限定することを意図するものではまったくない。この例では、培養レザーの作製方法について述べる。組織は、分化したウシ誘導多能性幹細胞（ｉＰＳ）細胞、ヌクレオチド接着分子、及び外来性コラーゲン源から培養で作製される。前記培養で作製された組織を、培養レザーとするためにさらに処理する。
【００６４】
ウシ誘導多能性幹細胞の成長
ウシｉＰＳ細胞を成長させるために、血液サンプルをウシ動物からまず採取する。前記細胞を、Ｆｉｃｏｌｌ密度遠心分離によって血漿から単離する。血液細胞のｉＰＳ細胞への脱分化を誘導するために、血液細胞を、当業者によって一般的に用いられる方法を用いて、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、ｃＭｙｃ、及びＫｌｆ４を発現するように誘導する。良好に誘導された細胞は分裂してコロニーを形成し、これらの細胞がｉＰＳ細胞である。コロニーを選択し、基底膜タンパク質でコーティングされた組織培養プレート上の接着培養物として増殖させることによってｉＰＳ細胞をさらに作製する。ｉＰＳ細胞を試験して、これらが増殖し、３つすべての胚葉へ分化する能力について確認する。ウシｉＰＳ細胞を、ＳＳＥＡ−１、ＳＳＥＡ−３、ＳＳＥＡ−４、Ｔｒａ−１−６０、Ｏｃｔ４、及びＮａｎｏｇなどのｉＰＳ細胞バイオマーカーの遺伝子発現及びタンパク質発現について特性決定する。
【００６５】
ｉＰＳ細胞の角化細胞様細胞への分化
続いて、ｉＰＳ細胞を角化細胞様細胞へ分化させる。組織培養プレートを、３ｍｇ／ｍＬのＩ型コラーゲン、及びＭａｔｒｉｇｅｌ若しくはＧｅｌｔｒｅｘ  ｈＥＳＣ最適化増殖因子低減基底膜マトリックス又は類似の同等である基底膜混合物などの基底膜混合物によってコーティングする。コーティング用の混合物は、ダルベッコ変法イーグル培地／栄養混合物Ｆ−１２（ＤＭＥＭ／Ｆ１２）中において、まず、ＤＭＥＭ／Ｆ１２中のＧｅｌｔｒｅｘの１：１００希釈物を作製し、次にＩ型コラーゲンを添加して最終コラーゲン濃度を３ｍｇ／ｍＬとすることによって作製する。コーティングされたプレートを３７℃で１時間インキュベートする。
【００６６】
細胞の第一の層を作製するために、ｉＰＳ細胞のコンフルエントなプレートを、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ディスパーゼ、又はアキュターゼなどの１以上の解離剤を用いて解離させる。まず、ｉＰＳ細胞のディッシュから培地を吸引し、１ｍＬの１００ｎＭ  ＥＤＴＡで置き換える。細胞を、ＥＤＴＡと共に３７℃で３〜７分間、又は細胞が丸くなるが剥離はまだしていない状態までインキュベートする。ＥＤＴＡを吸引し、細胞をｉＰＳ細胞培地中に再懸濁し、基底膜混合物で予めコーティングしておいた組織培養ディッシュ上に、１：５の比率で再播種する。ｉＰＳ細胞を、ＤＭＥＭ／Ｆ１２、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地、０．１ｍＭ  非必須アミノ酸、１ｍＭ  グルタミン、５５μＭ  ２−メルカプトエタノール、Ｎ２サプリメント、Ｂ２７サプリメント、５０μｇ／ｍＬ  アスコルビン酸、０．０５％  ウシ血清アルブミン、５０Ｕ／ｍＬ  ペニシリン−ストレプトマイシン、１００ｎｇ／ｍＬ  塩基性ＦＧＦ、及び１０μＭ  Ｙ２７６３２から成るＮ２Ｂ２７培地中で培養する。細胞を３７℃の組織培養物インキュベーター中で一晩インキュベートする。
【００６７】
翌日、ｉＰＳ細胞がコロニーを形成していた場合、分化プロトコルを開始することができる。ｉＰＳ細胞の角化細胞様細胞への前記分化プロセスは、培地組成によって制御する。分化用の基本培地は、Ｇｉｂｃｏから販売されている角化細胞無血清培地（ＤＫＳＦＭ）によって設定し、これに５０Ｕ／ｍＬのペニシリン−ストレプトマイシンを添加する。分化の第１日に、前記培地を１μＭのレチノイン酸及び２５ｎｇ／ｍＬのＢＭＰ４を含有するＤＫＳＦＭに置き換える。細胞を４８時間インキュベートする。第３日に、培地を１μＭのレチノイン酸及び２５ｎｇ／ｍＬのＢＭＰ４を含有する新しいＤＫＳＦＭに置き換える。第５日に、培地をレチノイン酸もＢＭＰ４も含まない新しいＤＫＳＦＭに置き換える。細胞をＤＫＳＦＭ中で、隔日で培地を交換しながら１０日間インキュベートする。第１４日に、培地を、５０Ｕ／ｍＬのペニシリン−ストレプトマイシンを含有する表皮角化細胞培地に置き換える。第２４日には、より多く増殖したｉＰＳ細胞コロニーから離れて遊走する細胞が、角化細胞様フェノタイプを示し、外胚葉を角化細胞の運命に関与させるのに必要とされる主要制御因子であるｐ６３、及びＫｒｔ１４の発現を開始する。
【００６８】
角化細胞様細胞の高濃度化は、コラーゲンコーティングプレート上へ素早く接着させることによって得られる。組織培養プレートを、０．２５％の酢酸中７μｇ／ｍｌのＩＶ型コラーゲン及び３０μｇ／ｍｌのＩ型コラーゲンでコーティングする。プレートを室温で１時間インキュベートする。次に、コラーゲンを吸引し、プレートを滅菌状態でＰＢＳで１×、蒸留Ｈ２Ｏで１×リンスする。分化した細胞を、細胞をアキュターゼと共に５分間インキュベートし、細胞を追加の角化細胞培地と共に取り出し、細胞を角化細胞培地中に再懸濁することによって継代培養する。細胞を、コラーゲンコーティングプレートに１５〜３０分間播種する。浮遊している細胞はすべて吸引し、残りの細胞を、隔日で培地を交換しながら３７℃で増殖させる。プレートがコンフルエンスに到達した時点で、細胞を１：４の比率で新しいコラーゲンコーティングプレートで継代培養する。２又は３継代後、培養物は角化細胞様フェノタイプを示す９０％のＫｒｔ１４陽性細胞から成る。
【００６９】
皮膚様組織の培養での作製
培養で作製される皮膚組織を、分化した角化細胞様細胞、コラーゲン混合物、及びヌクレオチド接着分子を含む混合物を用いて作製する。角化細胞様細胞を、アキュターゼを用いてプレートから解離させる（アキュターゼと共に５分間インキュベートし、細胞を追加の角化細胞培地と共に取り出し、細胞を角化細胞培地中に再懸濁することによる）。次に、細胞の総数をカウントする。第一の溶液を、細胞（角化細胞培地１ミリリットルあたり１０００万個の細胞）、Ｉ型コラーゲン（１０μｇ／ｍｌ）、及び第一のヌクレオチド接着分子を用いて作製する。第一のヌクレオチド接着分子は、角化細胞培地中で作製する。第二の溶液を、細胞（角化細胞培地１ミリリットルあたり１０００万個の細胞）、Ｉ型コラーゲン（１０μｇ／ｍｌ）、及び第二のヌクレオチド接着分子を用いて作製する。第二のヌクレオチド接着分子の配列は、第一のヌクレオチド接着分子の配列に対して相補的であり、したがって、第一及びの細胞層間での相補的塩基対形成が可能となる。
【００７０】
第一の溶液を基底膜をコーティングした基材に適用し、１５分間インキュベートしてコラーゲンにゲルを形成させる。続いて、第二の溶液を第一の層上に適用する。これらの溶液を順に交互に適用する。適用は手作業であるが、ある実施形態では、層は３Ｄプリンティング技術を用いて適用される。層が少なくとも５ｍｍの厚さに到達した後、組織を脱着し、処理してレザー製品を形成する。
【００７１】
培養レザーの処理
培養で作製された組織を、培養組織のタンパク質を安定な材料に変換する方法をによって処理して培養レザーとする。このプロセスはなめしと称され、タンパク質を架橋することを含み、クロムの適用によって実現される。培養組織を、ディスパーゼを用いて基材から脱着し（３７℃で１０分間のインキュベーション）、クロムタンニンの溶液に移し、室温で１５分間インキュベートする。次に、培養レザーを、酸化マグネシウム中に４５℃、ｐＨ３．５〜４．０で一晩浸漬する。クロムなめしプロセスは、酸性であることから、前記培養レザーを、炭酸水素ナトリウム、及びギ酸ナトリウム又は酢酸ナトリウムで中和する。次に、培養レザーを、シンタン、樹脂、及び天然タンニンなどの合成なめし剤で再なめしする。培養レザーを必要とされる色合いに染色し、天然及び合成油が培養レザーに吸収されるように加脂する。次に、培養レザーを、真空乾燥、吊り乾燥、及び張り乾燥を含む様々な方法を用いて乾燥する。
【００７２】
本発明の好ましい実施形態を、本明細書で示し、記載してきたが、当業者であれば、そのような実施形態は、単なる例として提供されることは明らかであろう。本発明から逸脱することなく、数多くの変形例、改変、及び置換が今や当業者であれば思い付くであろう。本明細書で述べる本発明の実施形態に対する様々な別の選択肢が、本発明の実践において用いられてもよいことは理解されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【国際調査報告】
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