(57)【要約】  抗インフルエンザ特性を有するペプチドが本明細書で開示される。本ペプチドはデキストロ（Ｄ）またはデキストロ／レボ（Ｌ）−アミノ酸の混合物を含み、動物および鳥類に感染する型とともにヒトインフルエンザウイルスの複数の型に対する抗インフルエンザ特性を有し、インフルエンザウイルス感染の治療または予防のための医薬組成物として有用である。【選択図】図５
2019506840.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ａ６−Ａ７を含む分離されたペプチドであって、ここでＡ１はｔまたはｗであり、Ａ２はｋまたはｗであり、Ａ３はｓまたはｆであり、Ａ４はｒまたはｔであり、Ａ５はｆ、ｈ、ｉ、ｎ、またはｗであり、Ａ６はｉまたはｄであり、およびＡ７はｎまたはａであり、かつここでＡ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５、Ａ６、またはＡ７の１つは別のＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸で任意に置換される、分離されたペプチド。
【請求項２】
Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５、Ａ６、またはＡ７の１つが相当するＬ−アミノ酸で置換される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
配列ｗｗｆｔｆｉａを含む、請求項１に記載のペプチド。
【請求項４】
配列ｔｗｆｔｆｉｎを含む、請求項１に記載のペプチド。
【請求項５】
配列ｔｋｓｒｆｄｎを含む、請求項１に記載のペプチド。
【請求項６】
配列ｔｋｓｒｆｘｎを含み、ここでｘはｉ、１、またはｙである、請求項１に記載のペプチド。
【請求項７】
配列ｔｗｆｘｆｉｎを含み、ここでｘはｉ、１、ｍ、ｒ、ｓ、ｔ、ｖ、またはｗである、請求項１に記載のペプチド。
【請求項８】
配列ｔｗＸ／ｘｒｆｉｎを含み、ここでＸ／ｘはａ、ｃ、ｅ、ｆ、Ｇ、ｈ、ｉ、ｋ、ｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｖ、ｗ、またはｙである、請求項１に記載のペプチド。
【請求項９】
配列ｔｘｓｒｆｉｎを含み、ここでｘはｐ、ｒ、ｓ、またはｗである、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１０】
配列ｘｗｆｔｆｉｎを含み、ここでｘはｍまたはｗである、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１１】
ｔｋｓｒｆＸ／ｘｎ、ｔＸ／ｘｓｒｆｉｎ、ｔｗＸ／ｘｒｆｉｎ、ｔｗｆＸ／ｘｆｉｎ、Ｘ／ｘｗｆｔｆｉｎ、ｗｗｆｔｆｉＸ／ｘ、ｗｗｆｔＸ／ｘｉａおよびｔｋｓｒｆｄｎから選択される配列を含み、ここでＸ／ｘはＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１２】
Ｘ／ｘがａ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｈ、ｉ、ｋ、ｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｖ、ｗ、ｙまたはＧである、請求項１１に記載のペプチド。
【請求項１３】
前記配列のＮ末端にシステイン残基およびＣ末端にシステイン残基をさらに含む、いずれかの前記請求項に記載のペプチド。
【請求項１４】
前記２つのシステイン残基が環を形成する、請求項１３に記載のペプチド。
【請求項１５】
前記ＮまたはＣ末端に結合される溶解タグをさらに含む、いずれかの前記請求項に記載のペプチド。
【請求項１６】
溶解タグとして前記ＮまたはＣ末端に結合されるＲＲＫＫまたはｒｒｋｋをさらに含む、いずれかの前記請求項に記載のペプチド。
【請求項１７】
前記ペプチドが式ＲＲＫＫｃｔｗＸｒｆｉｎｃを有し、かつＲＲＫＫｃｔｗａｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｃｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｄｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｅｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗＧｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｈｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｉｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｋｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｌｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｍｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｎｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｐｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｑｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｒｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｓｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｔｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｖｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｗｒｆｉｎｃまたはＲＲＫＫｃｔｗｙｒｆｉｎｃから選択される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１８】
前記ペプチドが式ＲＲＫＫｃｔｗｆＸｆｉｎｃを有し、かつＲＲＫＫｃｔｗｆａｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｃｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｄｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｅｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｆｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆＧｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｕｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｉｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｋｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｌｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｍｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｎｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｐｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｑｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｓｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｖｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｗｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｙｆｉｎｃおよびＲＲＫＫＣＮＩＦＴＦＷＴＣから選択される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１９】
前記ペプチドが式ＲＲＫＫｃＸｗｆｔｆｉｎｃを有し、かつＲＲＫＫｃａｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｃｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｄｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｅｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｆｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃＧｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｈｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｉｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｋｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｌｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｍｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｎｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｐｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｑｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｒｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｓｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｖｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｎｃおよびＲＲＫＫｃｙｗｆｔｆｉｎｃから選択される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項２０】
前記ペプチドが式ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉＸｃを有し、かつＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｃｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｄｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｅｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｆｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉＧｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｈｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｉｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｋｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｌｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｍｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｐｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｑｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｒｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｓｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｔｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｖｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｗｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｙｃから選択される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項２１】
前記ペプチドが式ＲＲＫＫｃｗｗｆｔＸ／ｘｉａｃを有し、かつＲＲＫＫｃｗｗｆｔａｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｃｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｄｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｅｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔＧｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｈｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｉｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｋｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｌｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｍｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｎｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｐｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｑｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｒｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｓｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｔｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｖｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｗｉａｃおよびＲＲＫＫｃｗｗｆｔｙｉａｃから選択される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項２２】
Ｘ／ｘが任意のタンパク質原性アミノ酸から選択される、いずれかの前記請求項に記載のペプチド。
【請求項２３】
前記ペプチドが少なくとも１種類のインフルエンザウイルスＡ亜型および／または少なくとも１種類のインフルエンザＢ亜型に対する抗ウイルス活性を有する、いずれかの前記請求項に記載のペプチド。
【請求項２４】
前記インフルエンザウイルスＡ亜型がＨ１Ｎ１、Ｈ３Ｎ２、Ｈ９Ｎ２、Ｎ３Ｈ８またはＨ５Ｎ１から選択される、請求項２３に記載のペプチド。
【請求項２５】
１００μＭ未満のＩＣ５０を有する、いずれかの前記請求項に記載のペプチド。
【請求項２６】
医薬品としての使用のための、いずれかの前記請求項に記載のペプチド。
【請求項２７】
請求項１〜２６のいずれかに記載のペプチドを含む、医薬組成物。
【請求項２８】
インフルエンザウイルス感染の治療における使用のために適応される、請求項１〜２６のいずれかに記載のペプチドまたは請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
インフルエンザウイルス感染の治療のための医薬品の製造における、請求項１〜２６に記載のいずれかのペプチドまたは請求項２７に記載の医薬組成物の使用。
【請求項３０】
ホスト細胞におけるインフルエンザウイルス感染を治療するための方法であって、前記ホスト細胞に請求項１〜２６のいずれかに記載のペプチドまたは請求項２７に記載の医薬組成物の治療上効果的な量を投与することを含む、方法。
【請求項３１】
前記ペプチドまたは医薬組成物が予防的、経鼻的、経肺的、経口的または非経口的に投与される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
インフルエンザに対する抗ウイルス活性を有するペプチドを検出するための方法であって、請求項１〜２６のいずれかに記載のペプチドの誘導体を作製することおよび抗ウイルス活性についてスクリーニングすることを含む、方法。
【請求項３３】
請求項１〜２６のいずれかに記載のペプチドまたは請求項２７に記載の医薬組成物およびインフルエンザウイルス感染を治療するための前記ペプチドまたは前記医薬組成物の使用のための取扱説明書を含む、キット。
【請求項３４】
請求項１〜２６のいずれかに記載のペプチドをコードする核酸を含む、ベクター。
【請求項３５】
請求項１〜２６のいずれかに記載のペプチドをコードする核酸を含む、プラスミド。
【請求項３６】
請求項１〜２６のいずれかに記載のペプチドを発現する、ホスト細胞。
【請求項３７】
請求項１〜２６のいずれかに記載のペプチドと核酸、ペプチド、タンパク質、造影剤、抗体、毒素および小分子から選択される第二薬剤とを含む、組み合わせ。
【請求項３８】
請求項１〜２６のいずれかに記載のペプチドを含む、組換えライブラリー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インフルエンザウイルス、特にヒトインフルエンザウイルスに対して広範なスペクトルの抗ウイルス活性を有する治療用ペプチドに関する。
【背景技術】
【０００２】
インフルエンザウイルスは、マイナス鎖で一本鎖の分節ＲＮＡゲノムを有するウイルスを含むオルソミキソウイルス科に属する。この科のもとには、インフルエンザＡ、Ｂ、Ｃ、ソゴトウイルスおよびイサウイルスという５種の異なる属がある。最初の３種の属では、インフルエンザＡおよびＣはヒト、ブタ、鳥類および他の哺乳動物に感染し、一方、インフルエンザＢはほとんどヒトのみに感染する（Ｐｅｔｅｒ  Ｐａｌｅｓｅ，２００７）。インフルエンザウイルスは、世界中で年間５百万例を超える重大な症例を引き起こすと推定される。インフルエンザ感染の徴候は、無症候性〜致命的であり得る原発性ウイルス肺炎の範囲にわたる。臨床症状は一般的に、頭痛、寒気、乾性咳、高熱、重度の筋肉痛、倦怠および食欲不振を含む。小児における臨床症状は成人での症状と同様であるが、ただし、熱性痙攣を伴う高熱を示し得る（Ｐｅｔｅｒ  Ｆ  Ｗｒｉｇｈｔ，２００７）。
【０００３】
インフルエンザビリオンは高度な多形性であり、それらは卵型および長い糸状粒子を含む多くの形状で発生する。構造的に各インフルエンザビリオンは、赤血球凝集素（ＨＡ）（１３５Åトリマー）およびノイラミニダーゼ（ＮＡ）（６０〜１００Åトリマー）タンパク質からなり、それらは脂質エンベロープの外面に顕著に突出し４〜５：１の比で存在する。脂質エンベロープの内側はマトリックスタンパク質によって裏打ちされ、８つのセグメント（インフルエンザＣでは７つのセグメント）からなり核タンパク質によってラセン状に包まれるマイナス鎖ＲＮＡのコアを被包している。ＨＡおよびＮＡはウイルス感染において不可欠な役割を演じることが報告されている。ＨＡは感染した細胞の膜上のシアル酸受容体への結合および膜融合によるウイルス侵入に関与し、一方、ＮＡは細胞内ウイルス複製サイクル後に、子孫ビリオンの放出および拡散の際に必要とされる（Ｐｅｔｅｒ  Ｐａｌｓｅ，２００７）。
【０００４】
インフルエンザウイルスのＲＮＡゲノムは変異でき、「抗原ドリフト」を生じる。さらに、２つの異なる亜型は、これらが同一ホストに共感染するとき、結合して新たな亜型を形成でき、「抗原シフト」も生じる。変異のこれらの２つの型は、形状、感染能力および病原性を含む表面タンパク質型に僅かなまたは完全な変化をもたらし得、このことはインフルエンザウイルスを最終的には汎流行性または流行性株にする（Ｐｅｔｅｒ  Ｆ  Ｗｒｉｇｈｔ，２００７）。インフルエンザウイルスによって生じた４つを超える大きな汎流行が、前世紀の始め以来報告されており、それらは国際的な経済およびヒト生産性に大きな損失をもたらした（Ｋｉｌｂｏｕｒｎｅ，２００６）。最近、ブタ由来のインフルエンザウイルスＡ（Ｈ１Ｎ１）ウイルスが世界中に素早く広がり、人類にかなり厳しい死亡および罹患を引き起こした（Ｅｃｈｅｖａｒｒｉａ−Ｚｕｎｏら，２００９）。高病原性の動物流行性Ｈ５Ｎ１ウイルスは、それが非常に高い死亡率で断続的なヒト感染を伴いトリ集団間でのみ広がることができると報告されているが、次の汎流行であり得ることが示唆されている（Webster and Govorkova, 2006）。最近、新しい再集合体鳥Ｈ７Ｎ９ウイルスが、中国においてヒトでの重篤で致死的な呼吸器疾患と関連することが認められた（Ｇａｏら，２０１３）。
【０００５】
従来は、鳥ウイルスのヒトへの伝染は重大な脅威と考えられなかった。鳥ウイルスは実験的に感染させたヒトで効率的に複製しないことが報告されている（Ｂｅａｒｅ  ＡＳ，１９９１）。この報告と矛盾することなく、ヒトにおける高病原性鳥インフルエンザウイルスの重大な発生について、１９９７年まで極わずかな隔離されたトリ−ヒト伝染例以外に報告はなく、これらはヒトからヒトに効率的に伝染する能力を欠いていた。しかし、Ｈ５Ｎ１ウイルスのヒトからヒトへの伝染の最近の証拠は、汎流行性の恐れがある候補として、ヒト適応性鳥ウイルスの可能性の増加を示唆する（Ｕｎｇｃｈｕｓａｋら，２００５、Ｙａｎｇら，２００７）。
【０００６】
しかし、インフルエンザウイルスの感染を制御するために世界中で数十年にわたって広範な努力がなされているにも関わらず、抗インフルエンザウイルス薬剤の２クラスのみが効果的な治療のために現在利用可能である。一つのクラスはインフルエンザＡのＭ２イオンチャンネルタンパク質に拮抗剤として作用し（アマンタジンおよびその誘導体リマンタジン）（Ｋｏｌｏｃｏｕｒｉｓら，２００７）、もう一方は、オセルタミビルを含み、インフルエンザＡおよびＢでノイラミニダーゼ阻害剤として作用し（ザナミビル、オセルタミビルリン酸塩、およびペラミビル）（Ｋｉｍら，１９９７、ｖｏｎ  Ｉｔｚｓｔｅｉｎら，１９９３、Ｙｕｎら，２００８）ＮＡタンパク質に結合してウイルス子孫をホスト細胞から脱出させず、他の細胞に感染できなくする。残念なことに、これらの抗ウイルス剤は望ましくない副作用を有する。さらに、ウイルス株のほとんどがＭ２イオンチャンネルブロッカーに対しおよびそれより弱い程度でノイラミニダーゼ阻害剤に対し耐性を築いており、このことは薬剤の効能の低下および毒性の増加をもたらす（ＭｃＫｉｍｍ−Ｂｒｅｓｃｈｋｉｎ，２０００、Ｗｈｉｔｌｅｙら，２０１３）。またオセルタミビルは病気を悪化させ時に死さえもたらし得ることも報告されている（Ｈａｍａら，２０１１）。ウイルスＲＮＡ転写（Ｐｅｒｅｚら，２０１０）、ウイルス細胞付着（Ｊｏｎｅｓら，２００６）、ＨＡのタンパク質分解活性の防止（ＺｈｉｒｎｏｖおよびＫｌｅｎｋ，２０１１）、およびビリオン出芽の防止（Ｓｔｉｖｅｒ，２００３）を標的とする様々な方法が開発されているが、臨床使用のための抗ウイルス剤にうまく移行された化合物はこれまでない。従って、これに代わる作用方式を有する新規抗インフルエンザ治療剤を開発することが緊急に必要である。
【０００７】
ここ数年、製薬会社は研究開発のコスト増加、毒性、効能不足、臨床的安全性および承認された新規分子実体数の低下によって継続的な経済的圧力に直面している。ＫｏｌａおよびＬａｎｄｉｓは、これらの新規分子実体の約９０％が薬剤開発中に失敗したと報告した（ＫｏｌａおよびＬａｎｄｉｓ，２００４）。従って、医薬品研究開発の生産性を改善する代替方法を得ることが緊急に必要である。ペプチドベースの治療剤が最善の選択肢の一つであり得ると、本明細書において確信される。
【０００８】
ペプチド治療剤は従来の小分子をベースとした薬剤を超える利点を提供し得る。第一に、それらはしばしばタンパク質分子の活性な単位を表しそのため実質的な非特異的結合相互作用を回避するため、それらは優れた効能、特異性および選択性を提供し得る（Ｈｕｍｍｅｌ，Ｒｅｉｎｅｋｅ，およびＲｅｉｍｅｒ，２００６）。第二に、ペプチドの分解産物はアミノ酸であり、薬剤−薬剤相互作用の機会が著しく最小化され、かつ毒性と関連する問題が回避され得る（Ｌｏｆｆｅｔ，２００２）。タンパク質および抗体をベースとした治療剤よりもそれらのサイズは小さいため、ペプチドは容易に組織および器官中に侵入でき（Ｌａｄｎｅｒら，２００４）、かつ一般的に免疫原性が低い（ＭｃＧｒｅｇｏｒ，２００８）。さらに、それらの製造費用は他の生物学的薬剤よりも低い可能性がある。
【０００９】
ファージディスプレイライブラリー（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，米国）からの９アミノ酸のペプチド（Ｃ−Ｐ１）は、インビトロおよび卵内で抗インフルエンザ活性を有することが報告されている。例えば、Ｒａｊｉｋら“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｇａｉｎｓｔ  ａｖｉａｎ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖｉｒｕｓ  Ｈ９Ｎ２（鳥インフルエンザウイルスＨ９Ｎ２に対する新規抗ウイルスペプチドの特定および特徴付け），Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ，（２００９）６：７４，ｄｏｉ：１０．１１８６／１７４３−４２２Ｘ−６−７４”、Ｒａｊｉｋら“Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖｉｒｕｓ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｖｉｒａｌ  ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｈｏｓｔ  ｃｅｌｌｓ（新規ペプチドはヒト細胞へのウイルス付着を防止することによりインフルエンザウイルス複製を阻害する），Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２００９；５（６）：５４３−５４８”、マレーシア特許出願第ＰＩ２００８２０６１号、ＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２００９／１５１３１３Ａ１号、欧州特許第ＥＰ２３００４９２Ｂ１号、日本特許出願公開第ＪＰ２０１１５２２５６１Ａ号、および米国特許第８，８８３，４８０号を参照する。ペプチドＣ−Ｐ１は、報告によると、鳥インフルエンザＡウイルスＨ９Ｎ２を中度の有効性で阻害する。しかし、ヒトに感染するインフルエンザウイルスに対するＣ−Ｐ１の活性に関する報告はない。作用の正確なメカニズムは報告されていない。Ｃ−Ｐ１の活性は実際の使用には不十分であり得ることが本明細書で認められており、従って、インフルエンザウイルス感染を予防および／または治療できる薬剤に関する医学的な必要性が満たされないままである。
【発明の概要】
【００１０】
驚くべきことに、本明細書でＰ１−ＲＩ−ＣＤと呼ばれる配列ｔｋｓｒｆｄｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）を含むペプチドは、インフルエンザウイルスに対して効力があることが発見された。また驚くべきことに、Ｐ１−ＲＩ−ＣＤ中の１つ以上のアミノ酸が代替のＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸に置換されるＰ１−ＲＩ−ＣＤの配列変異を含むペプチドも、インフルエンザウイルスに対して高い効力があることが発見された。本明細書で説明されるペプチド（Ｆｌｕペプチド治療剤（ＦＰＴ）とも呼ばれる）は、ＣＰ−１よりも何倍も優れている抗ウイルス活性を示し、ヒトインフルエンザウイルスに対する広範なスペクトル活性を示す。
【００１１】
本発明の一つの例示的な実施形態では、抗ウイルス特性を有するペプチドが本明細書で説明される。別の実施形態では、抗インフルエンザ特性を有するペプチドが本明細書で説明される。別の例示的な実施形態では、デキストロ−アミノ酸またはデキストロ／レボ−アミノ酸の混合物を含むペプチドが本明細書で説明される。別の実施形態では、動物および鳥類に感染する型と共にヒトインフルエンザウイルスの複数の型に対する抗ウイルス特性を有し、かつインフルエンザウイルス感染の治療または予防のための医薬組成物で使用できるペプチドが、本明細書で説明される。
【００１２】
ＦＰＴに関するさらなる詳細がマレーシア出願第ＰＩ２０１５００２７５１号で開示されており、その開示のすべてが参考によって本明細書に組み込まれる。
【００１３】
別の実施形態では、分離されたペプチドＰ１−ＲＩ−ＣＤが本明細書で説明される。別の実施形態では、Ｐ１−ＲＩ−ＣＤのアナログおよび誘導体が本明細書で説明される。別の実施形態では、Ｐ１−ＲＩ−ＣＤあるいはＰ１−ＲＩ−ＣＤのアナログまたは誘導体を含むペプチドが本明細書で説明される。別の実施形態では、配列ＮＤＦＲＳＫＴを含まないペプチドが本明細書で説明される。別の実施形態では、配列ＣＮＤＦＲＳＫＴＣを含まないペプチドが本明細書で説明される。
【００１４】
本明細書で使用されるとき、用語「分離されたペプチド」は、生体外であり、および／またはバルク形態であるペプチドを一般的に意味する。分離されたペプチドは、他の化合物との混合物中、および／または溶液または懸濁液中であってよいと理解されるべきである。
【００１５】
本明細書で説明されるペプチドの配列は、一般的には各アミノ酸について標準的な一文字略号を用いて示される。大文字での略号はアミノ酸のレボ型に相当し、小文字での略号はアミノ酸のデキストロ型に相当する。例えば、一文字略号「Ａ」はＬ−アラニンを意味し、一文字略号「ａ」はＤ−アラニンを意味し、「Ｒ」はＬ−アルギニンを意味し、一方「ｒ」はＤ−アラニンを意味する、などである。
【００１６】
別の実施形態では、配列Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ａ６−Ａ７を含む分離されたペプチドであって、ここでＡ１はｔまたはｗであり、Ａ２はｋまたはｗであり、Ａ３はｓまたはｆであり、Ａ４はｒまたはｔであり、Ａ５はｈ、ｉ、ｎ、またはｗであり、Ａ６はｉまたはｄであり、およびＡ７はｎまたはａであり、かつここでＡ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５、Ａ６、またはＡ７のいずれか１つまたは２つは任意に別のＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸で置換される分離されたペプチドが本明細書で説明される。
【００１７】
別の実施形態では、配列Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ａ６−Ａ７を含む分離されたペプチドであって、ここでＡ１はｔまたはｗであり、Ａ２はｋまたはｗであり、Ａ３はｓまたはｆであり、Ａ４はｒまたはｔであり、Ａ５はｈ、ｉ、ｎ、またはｗであり、Ａ６はｉまたはｄであり、およびＡ７はｎまたはａであり、かつここでＡ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５、Ａ６、またはＡ７のいずれか１つは任意に別のＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸で置換される分離されたペプチドが本明細書で説明される。
【００１８】
別の実施形態では、配列Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−ｆ−Ａ６−Ａ７を含む分離されたペプチドであって、ここでＡ１はｔまたはｗであり、Ａ２はｋまたはｗであり、Ａ３はｓまたはｆであり、Ａ４はｒまたはｔであり、Ａ６はｉまたはｄであり、およびＡ７はｎまたはａであり、かつここでＡ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、ｆ、Ａ６、またはＡ７のいずれか１つまたは２つは任意に別のＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸で置換される分離されたペプチドが本明細書で説明される。
【００１９】
別の実施形態では、配列Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−ｆ−Ａ６−Ａ７を含む分離されたペプチドであって、ここでＡ１はｔまたはｗであり、Ａ２はｋまたはｗであり、Ａ３はｓまたはｆであり、Ａ４はｒまたはｔであり、Ａ６はｉまたはｄであり、およびＡ７はｎまたはａであり、かつここでＡ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、ｆ、Ａ６、またはＡ７のいずれか１つは任意に別のＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸で置換される分離されたペプチドが本明細書で説明される。
【００２０】
別の実施形態では、配列Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−ｆ−Ａ６−Ａ７を含む分離されたペプチドであって、ここでＡ１はｔまたはｗであり、Ａ２はｋまたはｗであり、Ａ３はｓまたはｆであり、Ａ４はｒまたはｔであり、Ａ６はｉまたはｄであり、およびＡ７はｎまたはａであり、かつここでＡ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ６、またはＡ７のいずれか１つまたは２つは任意に別のＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸で置換される分離されたペプチドが本明細書で説明される。
【００２１】
別の実施形態では、配列Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−ｆ−Ａ６−Ａ７を含む分離されたペプチドであって、ここでＡ１はｔまたはｗであり、Ａ２はｋまたはｗであり、Ａ３はｓまたはｆであり、Ａ４はｒまたはｔであり、Ａ６はｉまたはｄであり、およびＡ７はｎまたはａであり、かつここでＡ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ６、またはＡ７のいずれか１つは任意に別のＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸で置換される分離されたペプチドが本明細書で説明される。
【００２２】
別の実施形態では、ｔｋｓｒｆＸ／ｘｎ、ｔＸ／ｘｓｒｆｉｎ、ｔｗＸ／ｘｒｆｉｎ、ｔｗｆＸ／ｘｆｉｎ、Ｘ／ｘｗｆｔｆｉｎ、ｗｗｆｔｆｉＸ／ｘ、ｗｗｆｔＸ／ｘｉａ、およびｔｋｓｒｆｄｎから選択される配列を含む分離された抗インフルエンザペプチドが本明細書で説明される。
【００２３】
別の実施形態では、表１にシリアル番号２〜９で示される、または表２〜８のいずれかに示されるペプチドが本明細書で説明される。生物学的活性を保持する、これらの表中のペプチドの機能的変異体も本明細書で説明される発明の範囲内であると理解されるべきである。
【００２４】
別の実施形態では、ＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ１、Ｂ２、およびＢ４〜Ｂ２０、ＰＳＰ  ＩＶ  Ａ１、Ａ２、Ａ４、Ａ５、およびＡ７〜Ａ２０、ＰＳＰ  Ｖ  Ａ２〜Ａ５、Ａ７〜Ａ１１、Ａ１４〜Ａ１６、およびＡ１８〜Ａ２０、ＰＳＰ  ＶＩ  Ａ１〜Ａ８、Ａ１０〜Ａ１６、およびＡ１８〜Ａ２０、ならびにＰＳＰ  ＶＩＩ  Ａ１、Ａ７、Ａ８、Ａ１０、Ａ１２、Ａ１３、Ａ１５、およびＡ１９からなるペプチド群から選択される、インフルエンザウイルスに対する抗ウイルス特性を有するペプチドが本明細書で説明される。
【００２５】
別の実施形態では、上記の、例えばＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ１、Ｂ２、およびＢ４〜Ｂ２０、ＰＳＰ  ＩＶ  Ａ１、Ａ２、Ａ４、Ａ５、およびＡ７〜Ａ２０、ＰＳＰ  Ｖ  Ａ２〜Ａ５、Ａ７〜Ａ１１、Ａ１４〜Ａ１６、およびＡ１８〜Ａ２０、ＰＳＰ  ＶＩ  Ａ１〜Ａ８、Ａ１０〜Ａ１６、およびＡ１８〜Ａ２０、ならびにＰＳＰ  ＶＩＩ  Ａ１、Ａ７、Ａ８、Ａ１０、Ａ１２、Ａ１３、Ａ１５、およびＡ１９からなる群から選択される１種類以上のペプチドを含む医薬組成物が本明細書で説明される。
【００２６】
別の実施形態では、哺乳動物におけるインフルエンザウイルス感染を治療および／または予防するために本明細書で説明されるペプチドのいずれかを含む組成物が、本明細書で説明される。
【００２７】
別の実施形態では、本明細書で説明されるペプチドのいずれかを用いる、哺乳動物におけるインフルエンザウイルス感染を治療および／または予防するための方法、ならびに関連する使用が本明細書で説明される。
【００２８】
別の実施形態では、医薬品としての使用、または医薬品の製造における使用のための、インフルエンザに対する抗ウイルス特性を有する本明細書で説明されるペプチドの利用が、本明細書で説明される。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１Ａ】ＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５およびＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５のＨ１Ｎ１に対するインビトロでの効果を示す図である。Ｈ１Ｎ１  Ａ１／Ｍａｌａｙｓｉａ／３０２／１９５４の複製を阻害するＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５およびＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５の能力を、ＭＤＣＫ細胞のプラーク減少アッセイによって測定した。実験はＤＭＳＯ（対照）あるいは増加する濃度のＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５またはＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５の存在下で実施した。結果を三重測定の平均値として示す。
【図１Ｂ】ＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５およびＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５のＨ３Ｎ２に対するインビトロでの効果を示す図である。Ｈ３Ｎ２  Ａ／ＨＫ／８／１９６８の複製を阻害するＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５およびＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５の能力を、ＭＤＣＫ細胞のプラーク減少アッセイによって測定した。実験はＤＭＳＯ（対照）あるいは増加する濃度のＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５またはＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５の存在下で実施した。結果を三重測定の平均値として示す。
【図１Ｃ】ＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５およびＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５の２００９パンデミックウイルスに対するインビトロでの効果を示す図である。Ｈ１Ｎ１  Ａ／ＮＹ／１８／２００９の複製を阻害するＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５およびＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５の能力を、ＭＤＣＫ細胞のプラーク減少アッセイによって測定した。実験はＤＭＳＯ（対照）あるいは増加する濃度のＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５またはＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５の存在下で実施した。結果を三重測定の平均値として示す。
【図１Ｄ】ＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５およびＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５のＨ９Ｎ２に対するインビトロでの効果を示す図である。Ｈ９Ｎ２  Ａ／Ｉｒａｎ／１６／２０００の複製を阻害するＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５およびＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５の能力を、ＭＤＣＫ細胞のプラーク減少アッセイによって測定した。実験はＤＭＳＯ（対照）あるいは増加する濃度のＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５またはＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５の存在下で実施した。結果を三重測定の平均値として示す。
【図１Ｅ】ＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５およびＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５のＨ３Ｎ８に対するインビトロでの効果を示す図である。Ｈ３Ｎ８  Ａ／Ｍｉａｍｉ／２／６３の複製を阻害するＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５およびＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５の能力を、ＭＤＣＫ細胞のプラーク減少アッセイによって測定した。実験はＤＭＳＯ（対照）あるいは増加する濃度のＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５またはＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５の存在下で実施した。結果を三重測定の平均値として示す。
【図１Ｆ】ＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５およびＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５のＨ５Ｎ１に対するインビトロでの効果を示す図である。Ｈ５Ｎ１  Ａ／Ｋａｍｐｕｎｇ  ｐａｓｉｒ／５７４４／２００４の複製を阻害するＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５およびＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５の能力を、ＭＤＣＫ細胞のプラーク減少アッセイによって測定した。実験はＤＭＳＯ（対照）あるいは増加する濃度のＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５またはＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５の存在下で実施した。結果を三重測定の平均値として示す。
【図２】オセルタミビル酸およびＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５のＨ１Ｎ１  ＰＲ８に対するインビトロでの効果を示す図である。Ｈ１Ｎ１  Ａ／ＰＲ／８／１９３４の複製を阻害するオセルタミビル酸（比較例）およびＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５の能力の比較を、ＭＤＣＫ細胞のプラーク減少アッセイによって測定して比較した。実験はＤＭＳＯ（対照）あるいは増加する濃度のオセルタミビル酸またはＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５の存在下で実施した。結果を三重測定の平均値として示す。
【図３】ＰＳＰ  Ｖ  Ａ１９のＨ１Ｎ１  ＰＲ８に対するインビトロでの効果を示す図である。Ｈ１Ｎ１  Ａ／ＰＲ／８／１９３４の複製を阻害するＰＳＰ  Ｖ  Ａ１９の能力を、ＭＤＣＫ細胞のプラーク減少アッセイによって測定した。実験はＤＭＳＯ（対照）あるいは増加する濃度のＰＳＰ  Ｖ  Ａ１９の存在下で実施した。結果を三重測定の平均値として示す。
【図４】ＰＳＰ  ＶＩ  Ａ１のＨ１Ｎ１  ＰＲ８に対するインビトロでの効果を示す図である。Ｈ１Ｎ１  Ａ／ＰＲ／８／１９３４の複製を阻害するＰＳＰ  ＶＩ  Ａ１の能力を、ＭＤＣＫ細胞のプラーク減少アッセイによって測定した。実験はＤＭＳＯ（対照）あるいは増加する濃度のＰＳＰ  ＶＩ  Ａ１の存在下で実施した。結果を三重測定の平均値として示す。
【図５】ＰＳＰ  ＩＶ  Ａ１７のＨ１Ｎ１  ＰＲ８に対するインビボでの効果を示す図である。マウスモデルにおけるＦＰＴの抗ウイルス効能。インフルエンザ感染マウスを静脈内によって０ｍｇ／ｋｇ（対照）または３．５ｍｇ／ｋｇのＰＳＰ  ＩＶ  Ａ１７ペプチドで処置し（１日に４回、５日間）、マウスを１４日間にわたって罹患率および死亡率についてモニタリングした。観察期間の最後に、各群における生存したマウスの割合をプロットした。結果は少なくとも２回の異なる実験の代表的なものである
【図６Ａ】ヒト肝細胞における抗ウイルスペプチドの細胞毒性効果を示す図である。抗ウイルスペプチド（ＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ３、ＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５、ＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ１６、ＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ１９、ＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ２０、およびＰＳＰ  ＩＶ  Ａ５）の細胞毒性効果。毒性効果は、細胞培養条件下で証明された分化した肝細胞表現型を有する細胞であるヒト肝細胞ＨｅｐａＲＧ（登録商標）において異なる２濃度で試験した。データを三重測定の平均値±標準偏差として示す。この実験は例５で説明されるように実施した。
【図６Ｂ】ヒト肝細胞における抗ウイルスペプチドの細胞毒性効果を示す図である。抗ウイルスペプチド（ＰＳＰ  ＩＶ  Ａ１７、ＰＳＰ  Ｖ  Ａ１９、ＰＳＰ  Ｖ  Ａ１１、ＰＳＰ  ＶＩ  Ａ１、およびＰＳＰ  ＶＩ  Ａ１６）の細胞毒性効果。毒性効果は、細胞培養条件下で証明された分化した肝細胞表現型を有する細胞であるヒト肝細胞ＨｅｐａＲＧ（登録商標）において異なる２濃度で試験した。データを三重測定の平均値±標準偏差として示す。この実験は例５で説明されるように実施した。
【図７Ａ】抗ウイルスペプチドＰＳＰ  Ｖ  Ａ１９のＭＤＣＫおよびＡ５４９細胞における細胞毒性効果を示す図である。抗ウイルスペプチドＰＳＰ  Ｖ  Ａ１９の細胞毒性効果。上記ペプチドの毒性効果を例７で説明されるように、ＭＤＣＫおよびＡ５４９細胞において多くの異なる濃度で試験した。データを三重測定の平均値±標準偏差として示す。
【図７Ｂ】抗ウイルスペプチドＰＳＰ  ＶＩ  Ａ１のＭＤＣＫおよびＡ５４９細胞における細胞毒性効果を示す図である。抗ウイルスペプチドＰＳＰ  ＶＩ  Ａ１の細胞毒性効果。上記ペプチドの毒性効果を例７で説明されるように、ＭＤＣＫおよびＡ５４９細胞において多くの異なる濃度で試験した。データを三重測定の平均値±標準偏差として示す。
【図８】異なる抗ウイルスペプチドの３０μＭ濃度での溶血活性を示す図である。トライトンＸ−１００または異なる抗ウイルスペプチド（ＰＳＰ  ＩＩＩ  Ｂ５、ＰＳＰ  ＩＶ  Ａ１７、ＰＳＰ  Ｖ  Ａ１９、およびＰＳＰ  ＶＩ  Ａ１）の溶血活性を、例８で説明されるように３０μＭ濃度で試験した。
【図９】ペプチド処置したＨ１Ｎ１  ＲＰ８ウイルスの電子顕微鏡による分析を示す図である。写真は０、１、または１００μＭのＰＳＰ  Ｖ  Ａ１９ペプチドのいずれかで処置したインフルエンザＡ  Ｈ１Ｎ１／ＰＲ／８ウイルスの電子顕微鏡写真を１６，０００Ｘの拡大で示す。実験は例６で説明されるように実施し、Ａ：ペプチド未処理、Ｂ：１μＭペプチド処理、Ｃ：１００μＭペプチド処理だった。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
本発明は次に、後述の例示的な実施形態によってさらに説明される。次の節では本発明の異なる例示的な態様がより詳細に定められる。このように定められる各態様は、明確に反する指示がない限り、いずれかの他の一態様または複数態様と組み合わされ得る。特に、好ましいまたは効果的であるとして示されるいずれかの特性は、好ましいまたは効果的であるとして示されるいずれかの他の一特性または複数特性と組み合わされ得る。しかし、本発明は好ましいまたは効果的であるとして示されるこのような一特性または複数特性に限定されず、かつ好ましいまたは効果的であるとして示されるいずれの一特性または複数特性も要求されないと理解されるべきである。
【００３１】
本発明の実施は、他に指示がない限り、従来技術の範囲内である化学、生化学、分子生物学、組換えＤＮＡ技術、細胞生物学、免疫学、およびバイオインフォマティックスの定法を使用する。このような技術は文献で十分説明される。
【００３２】
本開示全体を通して、標準的な一文字略号はＩＵＰＡＣ／ＩＵＢガイドラインに従ってアミノ酸を意味するために使用される。本明細書で示される配列では、任意の配列の最も左の端のアミノ酸はアミノ末端を示し（任意にＨ−で示される）、一方、最も右のアミノ酸はカルボキシ末端を示す（任意に−ＯＨで示される）。アキラルであるグリシン以外では、アミノ酸のレボ型は本明細書では大文字で示され、アミノ酸のデキストロ型は小文字で示される。
【００３３】
本発明は、抗インフルエンザ活性を有するペプチドに関する。さらに、本発明は、１種類を超えるインフルエンザウイルス亜型に対する抗インフルエンザ活性を有するペプチドに関する。さらに、本発明は、本明細書で説明されるペプチドを含む医薬組成物、およびインフルエンザウイルス感染を予防および／または治療するために本明細書で説明されるペプチドを用いる方法に関する。
【００３４】
本発明の例示的な実施形態は、次の項によって説明される。
配列ｔｋｓｒｆｄｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）の、またはこの配列を含む、分離されたペプチド。
Ｐ１−ＲＩ−ＣＤの誘導体の配列の、またはこの配列を含む、分離されたペプチド。
配列Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ａ６−Ａ７の、またはこの配列を含む、分離されたペプチドであって、ここでＡ１はｔまたはｗであり、Ａ２はｋまたはｗであり、Ａ３はｓまたはｆであり、Ａ４はｒまたはｔであり、Ａ５はｈ、ｉ、ｎ、またはｗであり、Ａ６はｉまたはｄであり、およびＡ７はｎまたはａであり、かつここでＡ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、ｆ、Ａ６、またはＡ７のいずれか１つまたはいずれか２つは任意に別のＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸で置換される。
配列Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ａ６−Ａ７の、またはこの配列を含む、分離されたペプチドであって、ここでＡ１はｔまたはｗであり、Ａ２はｋまたはｗであり、Ａ３はｓまたはｆであり、Ａ４はｒまたはｔであり、Ａ５はｉまたはｗであり、Ａ６はｉまたはｄであり、およびＡ７はｎまたはａであり、かつここでＡ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、ｆ、Ａ６、またはＡ７のいずれか１つまたはいずれか２つは任意に別のＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸で置換される。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここでＡ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５、Ａ６、またはＡ７のいずれか１つは任意に別のＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸で置換される。
配列Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−ｆ−Ａ６−Ａ７の、またはこの配列を含む、分離されたペプチドであって、ここでＡ１はｔまたはｗであり、Ａ２はｋまたはｗであり、Ａ３はｓまたはｆであり、Ａ４はｒまたはｔであり、Ａ６はｉまたはｄであり、およびＡ７はｎまたはａであり、かつここでＡ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、ｆ、Ａ６、またはＡ７のいずれか１つまたはいずれか２つは任意に別のＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸で置換される。
前項のペプチドであって、ここでＡ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、ｆ、Ａ６、またはＡ７のいずれか１つは任意に別のＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸で置換される。
配列Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−ｆ−Ａ６−Ａ７を含む分離されたペプチドであって、ここでＡ１はｔまたはｗであり、Ａ２はｋまたはｗであり、Ａ３はｓまたはｆであり、Ａ４はｒまたはｔであり、Ａ６はｉまたはｄであり、およびＡ７はｎまたはａであり、かつここでＡ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ６、またはＡ７のいずれか１つまたはいずれか２つは任意に別のＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸で置換される。
前項のペプチドであって、ここで、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ６、またはＡ７のいずれか１つは任意に別のＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸で置換される。
前項のいずれかのペプチドであって、ここでＡ１はｔである。
前項のいずれかのペプチドであって、ここでＡ１−Ａ２はｔｋまたはｔｗである。
前項のいずれかのペプチドであって、ここでＡ２−Ａ３はｋｓまたはｗｆである。
前項のいずれかのペプチドであって、ここでＡ１−Ａ２−Ａ３はｔｋｓまたはｔｗｆである。
前項のいずれかのペプチドであって、ここでＡ３−Ａ４はｓｒまたはｆｔである。
前項のいずれかのペプチドであって、ここでＡ２−Ａ３−Ａ４はｋｓｒまたはｗｆｔである。
前項のいずれかのペプチドであって、ここでＡ４はｒまたはｔである。
前項のいずれかのペプチドであって、ここでＡ５はｈ、ｉ、ｎ、またはｗである。
前項のいずれかのペプチドであって、ここでＡ５はｉまたはｗである。
前項のいずれかのペプチドであって、ここでＡ１−Ａ２はｗｗである。
前項のいずれかのペプチドであって、ここでＡ６−Ａ７はｉａである。
前項のいずれかのペプチドであって、ここでｆは置換されない。
前項のいずれかのペプチドであって、ここでＡ４はｒまたはｔであり、Ａ６はｉである。
前項のいずれかのペプチドであって、ここでＡ６−Ａ７はｉｎである。
前項のいずれかのペプチドであって、ここでＡ７はｎである。
ｔｋｓｒｆｘｎを含む前項のいずれかのペプチドであって、ここでｘはｉ、ｌ、またはｙである。
ｔｗｆｘｆｉｎを含む前項のいずれかのペプチドであって、ここでｘはｉ、ｌ、ｍ、ｒ、ｓ、ｔ、ｖ、またはｗである。
ｔｗＸ／ｘｒｆｉｎを含む前項のいずれかのペプチドであって、ここでＸ／ｘはａ、ｃ、ｅ、ｆ、Ｇ、ｈ、ｉ、ｋ、ｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｖ、ｗ、またはｙである。
ｔｘｓｒｆｉｎを含む前項のいずれかのペプチドであって、ここでｘはｐ、ｒ、ｓ、またはｗである。
ｘｗｆｔｆｉｎを含む前項のいずれかのペプチドであって、ここでｘはｍまたはｗである。
ｗｗｆｔｘｉａを含む前項のいずれかのペプチドであって、ここでｘはｈ、ｉ、ｎ、またはｗである。
ｗｗｆｔｘｉａを含む前項のいずれかのペプチドであって、ここでｘはｉまたはｗである。
ｔｋｓｒｆＸ／ｘｎ、ｔＸ／ｘｓｒｆｉｎ、ｔｗＸ／ｘｒｆｉｎ、ｔｗｆＸ／ｘｆｉｎ、Ｘ／ｘｗｆｔｆｉｎ、ｗｗｆｔｆｉＸ／ｘ、ｗｗｆｔＸ／ｘｉａ、およびｔｋｓｒｆｄｎから選択される配列またはＮＤＦＲＳＫＴを含まないその誘導体を含む前項のいずれかのペプチドであって、ここでＸ／ｘはグリシンあるいはいずれかのＤ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸である。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここで当該ペプチドはヒトに感染する１種類のインフルエンザウイルスＡ亜型に対する抗ウイルス活性を有する。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここで当該ペプチドはヒトに感染する１種類を超えるインフルエンザウイルスＡ亜型に対する抗ウイルス活性を有する。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここで当該ペプチドはヒトに感染する１種類のインフルエンザウイルスＢ亜型に対する抗ウイルス活性を有する。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここで当該ペプチドはヒトに感染する１種類を超えるインフルエンザウイルスＢ亜型に対する抗ウイルス活性を有する。
Ｎ末端およびＣ末端にシステイン残基をさらに含む、前項のいずれか１つのペプチド。
可溶性タグをさらに含む、前項のいずれか１つのペプチド。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここで溶解タグはＲＲＫＫまたはｒｒｋｋである。
ｃｔｋｓｒｆＸ／ｘｎｃ、ｒｒｋｋｃｔＸ／ｘｓｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗＸ／ｘｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆＸ／ｘｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃＸ／ｘｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉＸ／ｘｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔＸ／ｘｉａｃ、およびｃｔｋｓｒｆｄｎｃから選択される前項のいずれか１つのペプチド。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここでＸ／ｘはいずれかのタンパク質原性アミノ酸から選択される。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここでｘはａ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｈ、ｉ、ｋ、ｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｖ、ｗ、ｙまたはＧから選択される。
１００μＭ未満のＩＣ５０を有する、前項のいずれか１つのペプチド。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここで当該ペプチドは式ＲＲＫＫｃｔｗＸ／ｘｒｆｉｎｃを有し、かつＲＲＫＫｃｔｗａｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｃｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｄｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｅｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗＧｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｈｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｉｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｋｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｌｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｍｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｎｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｐｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｑｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｒｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｓｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｔｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｖｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｗｒｆｉｎｃまたはＲＲＫＫｃｔｗｙｒｆｉｎｃから選択される。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここで当該ペプチドは式ＲＲＫＫｃｔｗｆＸ／ｘｆｉｎｃを有し、かつＲＲＫＫｃｔｗｆａｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｃｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｄｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｅｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｆｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆＧｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｈｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｉｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｋｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｌｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｍｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｎｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｐｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｑｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｓｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｖｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｗｆｉｎｃ、およびＲＲＫＫｃｔｗｆｙｆｉｎｃから選択される。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここで当該ペプチドは式ＲＲＫＫｃＸ／ｘｗｆｔｆｉｎｃを有し、かつＲＲＫＫｃａｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｃｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｄｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｅｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｆｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃＧｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｈｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｉｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｋｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｌｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｍｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｎｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｐｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｑｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｒｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｓｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｖｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｎｃおよびＲＲＫＫｃｙｗｆｔｆｉｎｃから選択される。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここで当該ペプチドは式ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉＸ／ｘｃを有し、かつＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｃｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｄｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｅｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｆｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉＧｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｈｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｉｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｋｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｌｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｍｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｐｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｑｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｒｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｓｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｔｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｖｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｗｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｙｃから選択される。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここで当該ペプチドはｃｔｋｓｒｆａｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｃｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｄｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｅｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｆｎｃ、ｃｔｋｓｒｆＧｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｈｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｉｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｋｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｌｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｍｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｎｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｐｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｑｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｒｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｓｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｔｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｖｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｗｎｃおよびｃｔｋｓｒｆｙｎｃから選択される。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここで当該ペプチドはｒｒｋｋｃｔａｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｃｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｄｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｅｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｆｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔＧｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｈｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｉｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｋｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｌｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｍｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｎｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｐｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｑｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｒｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｓｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｔｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｖｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｗｓｒｆｉｎｃおよびｒｒｋｋｃｔｙｓｒｆｉｎｃから選択される。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここで当該ペプチドはＲＲＫＫｃｗｗｆｔａｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｃｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｄｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｅｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔＧｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｈｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｉｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｋｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｌｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｍｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｎｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｐｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｑｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｒｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｓｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｖｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｗｉａｃ、およびＲＲＫＫｃｗｗｆｔｙｉａｃから選択される。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここで当該ペプチドはＲＲＫＫｃｔｗｆｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｆｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｎｃおよびＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉａｃから選択される。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここでインフルエンザ亜型はＨ２Ｎ２、Ｈ７Ｎ３、Ｈ７Ｎ７、Ｈ７Ｎ９、Ｈ６Ｎ１、Ｈ１０Ｎ８、Ｈ１Ｎ１、Ｈ３Ｎ２、Ｈ９Ｎ２、Ｈ３Ｎ８またはＨ５Ｎ１から選択される。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここでインフルエンザ亜型はＨ１Ｎ１、Ｈ３Ｎ２、Ｈ９Ｎ２、Ｈ３Ｎ８またはＨ５Ｎ１から選択される。
前項のいずれか１つのペプチドであって、ここでインフルエンザ亜型または株はヤマガタ系統および／またはビクトリア系統から選択される。
医薬品としての使用のための前項のいずれか１つのペプチド。
前項のいずれか１つのペプチドを含む医薬組成物。
インフルエンザウイルス感染の治療における使用のために適応される、前項のいずれか１つのペプチドまたはその医薬組成物。
インフルエンザウイルス感染の治療のための医薬品の製造における、前項のいずれか１つのペプチドまたはその医薬組成物の使用。
ホスト動物におけるインフルエンザウイルス感染を治療するための方法であって、ここで当該方法は前項のいずれか１つのペプチドまたはその医薬組成物の治療上効果的な量をホスト動物に投与することを含む。
前項のいずれか１つの方法であって、ここで当該ペプチドまたは医薬組成物は鼻腔、肺、気管支内、経口または非経口経路によって投与される。
前項のいずれか１つの方法であって、ここで当該ペプチドまたは医薬組成物は予防的に投与される。
前項のいずれか１つの方法であって、ここで当該インフルエンザウイルスはインフルエンザＡ亜型またはインフルエンザＢ亜型である。
前項のいずれか１つの方法であって、ここで当該インフルエンザウイルスはインフルエンザウイルスＡであり、亜型はＨ１Ｎ１、Ｈ３Ｎ２、Ｈ９Ｎ２、Ｈ３Ｎ８またはＨ５Ｎ１から選択される。
前項のいずれか１つのペプチドの誘導体を作製することおよび抗ウイルス活性についてスクリーニングすることを含む、インフルエンザに対する抗ウイルス活性を有するペプチドを検出するための方法。
前項のいずれか１つのペプチドまたはその医薬組成物、およびインフルエンザウイルス感染を治療するためのペプチドまたは医薬組成物の使用のための取扱説明書を含むキット。
前項のいずれか１つのペプチドをコードする核酸を含むベクター。
前項のいずれか１つのペプチドをコードする核酸を含むプラスミド。
前項のいずれか１つのペプチドを発現するホスト細胞。
前項のいずれか１つのペプチドと、核酸、ペプチド、タンパク質、造影剤、抗体、毒素および小分子から選択される第二薬剤とを含む組み合わせ。
前項のいずれか１つのペプチドを含む組換えライブラリー。
【００３５】
配列ｔｋｓｒｆｄｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）を含む新規抗インフルエンザペプチドが本明細書で説明される。また、Ｐ１−ＲＩ−ＣＤをベースとし、環化のためにＮ末端および／またはＣ末端にＤ−システインおよび／またはＬ−システインを含む新規抗インフルエンザペプチドも本明細書で説明される。
【００３６】
本明細書で説明されるペプチド（Ｐ１−ＲＩ−ＣＤ）などのペプチドは、Ｃ−Ｐ１よりも強い抗インフルエンザ活性を示す。Ｐ１−ＲＩ−ＣＤはＣ−Ｐ１のレトロインベルソアナログであり、ここで各アミノ酸は非天然Ｄ−アミノ酸であり、配列はＣ−Ｐ１の逆である。さらに、本明細書で説明されるペプチドは、ヒトに感染する種々のインフルエンザウイルスＡ亜型に対する広範なスペクトルの抗ウイルス活性を示す。
【００３７】
理論に拘束されることなく、インフルエンザウイルスに対するＦＰＴの作用メカニズムは、ＦＰＴがおそらく他のウイルス標的とともに、インフルエンザウイルスの完全なマトリックスタンパク質（Ｍ１）を結合し変化させることによりそれらの作用を及ぼすことに由来すると本明細書において考えられる。そのため、本明細書で説明されるペプチドは、限定されないが、ＨＩＶなど、レンチウイルスなどのレトロウイルス科、パラミクソウイルスなどのパラミクソウイルス科、フラビウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ダニ媒介脳炎、黄熱病、およびデング熱ウイルスなどのフラビウイルス科、ならびにエボラおよびマールバーグウイルスなどのフィロウイルス科のウイルスを含む、いずれかのマトリックスを結合し阻害することが予測される。
【００３８】
理論に拘束されることなく、本明細書で開示されるペプチドは、下層のマトリックスタンパク質へ接近するためにインフルエンザウイルスの脂質エンベロープを破壊する膜透過モチーフを含みそれはそれらの抗ウイルス活性において重大な役割を演じ得ると、本明細書において考えられる。従って、本発明のペプチドはいずれかの脂質エンベロープ含有ウイルス、限定されないが、風疹ウイルスを含むトガウイルス科、ＨＩＶなどのレンチウイルスを含むレトロウイルス科、ハンターウイルスおよびアレナウイルスなどのブンヤウイルス科、ヘルペスウイルスおよびサイトメガロウイルスなどのヘルペスウイルス科、Ｂ型肝炎ウイルスなどのヘパドナウイルス科（Ｈｅｐｎａｖｉｒｉｄａｅ）、パラミクソウイルスなどのパラミクソウイルス科、フラビウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ダニ媒介性脳炎、黄熱病およびデング熱ウイルスなどのフラビウイルス科、エボラおよびマールバーグウイルスなどのフィロウイルス科、ならびにＳＡＲＳウイルスおよびトロウイルスを含むコロナウイルスなどのコロナウイルス科のウイルスを結合し阻害することが予想される。
【００３９】
ポジショナルスキャニング法を適用することによって誘導体を設計するためのベースとしてＰ１−ＲＩ−ＣＤを使用し、Ｐ１−ＲＩ−ＣＤの配列内の元のアミノ酸を自然由来のアミノ酸の１つなどの代替アミノ酸、または代替のＤ−アミノ酸によって同時に１つ以上を置換し、それらの活性をインビトロで確認した。ＰＳＰライブラリーからの高活性ペプチドを、同法を用いるその後の改変のために選択した。例示的なライブラリーであるＰＳＰＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、およびＶＩＩを表１に示す。
【００４０】
ポジショナルスキャニングは、ナノモルＩＣ５０値を有するさらなる抗ウイルスペプチドを生じた（表１０）。これらのペプチドの活性はＣ−Ｐ１ペプチドと比べて向上されている。例えば、ＰＳＰ  ＶＩ  Ａファミリーにおけるペプチドは、試験した鳥インフルエンザウイルスに対して極めて高い能力（Ｃ−Ｐ１よりも３００００倍超優れている）を有する。特に、Ｃ−Ｐ１は鳥インフルエンザウイルスに対してのみ活性を示したが、本発明のペプチドはヒトに感染するウイルスを含む幅広い種類のインフルエンザウイルスに対して活性である。
【００４１】
Ｐ１−ＲＩ−ＣＤの誘導体は、１つ以上のアミノ酸が欠失されるまたは表１に示されるような種々のアミノ酸で置換されるペプチドを含む。誘導体はまた、少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％配列同一性を有するペプチドも含む。誘導体は好ましくは７個のアミノ酸を含む、これらから基本的になる、またはこれらからなる。別の実施形態では、誘導体は７個のアミノ酸のコアペプチドを含み、かつ様々な特性、溶解性を改善する、または本明細書で説明されるように環化を可能にする追加のアミノ酸をさらに含む。コアペプチドは活性ペプチドであり、抗ウイルス活性を付与するペプチドである。誘導体は機能的であり、すなわち、それらは生物学的に活性であり、インフルエンザウイルスに対して、好ましくはヒトに感染する１種類を超えるインフルエンザウイルスＡ亜型に対して抗ウイルス活性を示す。
【００４２】
本明細書で使用される用語「ペプチド」は、アミノ酸残基を含むポリマーを指す。例示的な実施形態では、ペプチドは２〜約１００個の残基または２〜約５０個の残基を含む。他の実施形態では、ペプチドは約７〜２０個の残基、例えば７〜１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８または１９個の残基を含む。特定の実施形態では、ペプチドに含まれるアミノ酸残基はすべて「Ｄ型」アミノ酸残基であるが、様々な実施形態では、「Ｌ」アミノ酸がペプチドに組み込まれ得ると認識される。そのため、いくつかの実施形態では、本発明のペプチドはＤ型およびＬ型アミノ酸の混合物である。例えば、ペプチドは７個のＤ−アミノ酸のコアを含み、ここで１つ以上のアミノ酸はＬ型であり得る。
【００４３】
ペプチドはまた、１つ以上のアミノ酸残基が、相当する天然由来アミノ酸の人工的な化学的アナログ、またはＤ−アミノ酸アナログであるアミノ酸ポリマー、ならびに天然由来のアミノ酸ポリマーを含む。さらに、本用語はペプチド結合または他の「修飾された結合」（例えば、ペプチド結合がα−エステル、β−エステル、チオアミド、ホスホンアミド、カルバマート、ヒドロキシレートなどによって置換される）によって結合されるアミノ酸にも適用される。
【００４４】
特定の実施形態では、本発明のペプチドは７個の残基を有する活性コアペプチドを含む。その上、ペプチドは、ペプチドに環状ペプチドを形成させ得る１つ以上の残基および／または本明細書で説明されるペプチドの溶解性を増加する１つ以上の残基を含むが限定されない、さらなる残基を含んでよい。
【００４５】
本明細書で説明されるペプチドは、天然由来、または非天然由来であってよい。それらは、ａ）化学的合成によって産生、ｂ）組換えＤＮＡ技術によって産生、ｃ）大型分子の生化学的または酵素的な断片化によって産生、ｄ）ａ〜ｄの前述の方法のいずれかの組み合わせによって産生、ｅ）ペプチドを産生するためのいずれか他の手段によって産生できる。別の実施形態では、ペプチドは天然由来ではない。別の実施形態では、ペプチドは天然由来でない修飾を含む。このような修飾の例は本明細書で説明される。
【表１】
2019506840.tif 000003
【００４６】
別の実施形態では、ｔｋｓｒｆＸ／ｘｎ、ｔＸ／ｘｓｒｆｉｎ、ｔｗＸ／ｘｒｆｉｎ、ｔｗｆＸ／ｘｆｉｎ、Ｘ／ｘｗｆｔｆｉｎ、ｗｗｆｔｆｉＸ／ｘ、ｗｗｆｔＸ／ｘｉａ、およびｔｋｓｒｆｄｎ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）から選択される配列を含む、これから基本的になる、またはこれからなる抗インフルエンザペプチドが説明される。別の実施形態では、ｔｋｓｒｆＸ／ｘｎ、ｔＸ／ｘｓｒｆｉｎ、ｔｗＸ／ｘｒｆｉｎ、ｔｗｆＸ／ｘｆｉｎ、Ｘ／ｘｗｆｔｆｉｎ、ｗｗｆｔｆｉＸ／ｘ、およびｗｗｆｔＸ／ｘｉａから選択される配列を含む、これから基本的になる、またはこれからなる抗インフルエンザペプチドが説明される。
【００４７】
別の実施形態では、ｃｔｋｓｒｆＸ／ｘｎｃ、ｃｔＸ／ｘｓｒｆｉｎｃ、ｃｔｗＸ／ｘｒｆｉｎｃ、ｃｔｗｆＸ／ｘｆｉｎｃ、ｃＸ／ｘｗｆｔｆｉｎｃ、ｃｗｗｆｔｆｉＸ／ｘｃ、ｃｗｗｆｔＸ／ｘｉａｃ、およびｃｔｋｓｒｆｄｎｃから選択される配列を含む、これから基本的になる、またはこれからなる抗インフルエンザペプチドが説明される。別の実施形態では、ｃｔｋｓｒｆＸ／ｘｎｃ、ｃｔＸ／ｘｓｒｆｉｎｃ、ｃｔｗＸ／ｘｒｆｉｎｃ、ｃｔｗｆＸ／ｘｆｉｎｃ、ｃＸ／ｘｗｆｔｆｉｎｃ、ｃｗｗｆｔｆｉＸ／ｘｃ、およびｃｗｗｆｔＸ／ｘｉａｃから選択される配列を含む、これから基本的になる、またはこれからなる抗インフルエンザペプチドが説明される。
【００４８】
別の実施形態では、ＲＲＫＫｃｔｋｓｒｆＸ／ｘｎｃ、ＲＲＫＫｃｔＸ／ｘｓｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗＸ／ｘｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆＸ／ｘｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃＸ／ｘｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉＸ／ｘｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔＸ／ｘｉａｃ、およびＲＲＫＫｃｔｋｓｒｆｄｎｃから選択される配列を含む、これから基本的になる、またはこれからなる抗インフルエンザペプチドが説明される。別の実施形態では、ＲＲＫＫｃｔｋｓｒｆＸ／ｘｎｃ、ＲＲＫＫｃｔＸ／ｘｓｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗＸ／ｘｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆＸ／ｘｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃＸ／ｘｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉＸ／ｘｃ、およびＲＲＫＫｃｗｗｆｔＸ／ｘｉａｃから選択される配列を含む、これから基本的になる、またはこれからなる抗インフルエンザペプチドが説明される。
【００４９】
別の実施形態では、ｒｒｋｋｃｔｋｓｒｆＸ／ｘｎｃ、ｒｒｋｋｃｔＸ／ｘｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｗＸ／ｘｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｗｆＸ／ｘｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃＸ／ｘｗｆｔｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｗｗｆｔｆｉＸ／ｘｃ、ｒｒｋｋｃｗｗｆｔＸ／ｘｉａｃ、およびｒｒｋｋｃｔｋｓｒｆｄｎｃから選択される配列を含む、これから基本的になる、またはこれからなる抗インフルエンザペプチドが説明される。別の実施形態では、ｒｒｋｋｃｔｋｓｒｆＸ／ｘｎｃ、ｒｒｋｋｃｔＸ／ｘｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｗＸ／ｘｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｗｆＸ／ｘｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃＸ／ｘｗｆｔｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｗｗｆｔｆｉＸ／ｘｃ、およびｒｒｋｋｃｗｗｆｔＸ／ｘｉａｃから選択される配列を含む、これから基本的になる、またはこれからなる抗インフルエンザペプチドが説明される。
【００５０】
上記実施形態のいずれかにおいて、Ｄ−システインはＬ−システインであってよいと理解されるべきである。
【００５１】
本明細書で説明される配列中で、アミノ酸指定「Ｘ／ｘ」は置換がなされる位置を示し、それは任意のＬ−アミノ酸またはＤ−アミノ酸、あるいは任意のアミノ酸アナログを含み得る。文字「Ｘ／ｘ」は任意のタンパク質原性アミノ酸を意味し、２０種の天然由来アミノ酸のいずれか１つである。アキラルであるＧを除き、ＸはＬ型のアミノ酸、ｘはＤ型のアミノ酸を意味する。別の実施形態では、Ｘ／ｘはＤ型のアミノ酸であるｘであり、あるいはＬ型のアミノ酸であるＸである。別の実施形態では、ｘはＤ型であるアミノ酸ａ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｈ、ｉ、ｋ、ｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｖ、ｗ、またはｙから選択される。別の実施形態では、ＸはＬ型であるアミノ酸Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹから選択される。別の実施形態では、Ｘはグリシンである。
【００５２】
別の実施形態では、ペプチドは１００μＭ未満、または５０μＭ未満、または１０μＭ未満、または５μＭ未満、または１μＭ未満、または０．１μＭ未満のＩＣ５０を有する。別の実施形態では、ペプチドは少なくとも１種類のインフルエンザウイルスおよび／または少なくとも１種類のインフルエンザウイルス亜型、好ましくは少なくとも２種類のインフルエンザウイルスおよび／または少なくとも２種類のインフルエンザウイルス亜型の、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％のまたはそれを超える阻害を示す。好ましくは、阻害は少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれを超える、あるいは少なくとも７５％、８０％、９０％、９５％またはそれを超える。
【００５３】
別の実施形態では、ペプチドはＭＤＣＫ細胞のプラーク減少アッセイにおいて、例えば、０．０１〜１００μＭのペプチドを用いて測定されるとき、好ましくは２、３、４種類またはそれより多いインフルエンザウイルスＡ亜型に対する抗ウイルス活性を有する。別の実施形態では、ペプチドは少なくとも２種類のインフルエンザウイルスＡ亜型の少なくとも７５％、８０％、９０％または９５％阻害を示す。
【００５４】
別の実施形態では、本発明のペプチドは１つ以上の溶解タグを含む。一つの例示的な実施形態では、溶解タグは荷電アミノ酸からなる短いペプチドであり、それは、疎水性ペプチドのＮ末端またはＣ末端に共有結合されたとき、結合されたペプチドの溶解性を増加させる。例えば、溶解タグは、親水性の性質を有するＤ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、ヒドロキシ−プロリンおよびピロ−グルタミン酸から選択される１種類以上のアミノ酸を含み得る。これらはレボ型またはデキストロ型のいずれかであってよい。任意の組み合わせまたは反復で、Ｎ末端またはＣ末端のどちらかで、これらのアミノ酸のいずれか、特にＥ／Ｄ／Ｒ／Ｋを加えることによって、ペプチドの溶解性を増加できる。溶解性はまた、ジペプチドＥＥ、トリペプチドＳＧＳの付加、および／または高グリコシル化およびペグ化、あるいは溶解性を増加するために従来技術で知られている他の方法によって増加できる。
【００５５】
例えば、溶解タグはペプチドのＮ末端および／またはＣ末端に結合された溶解タグＲＲＫＫ（レボ型ＲＲＫＫまたはデキストロ型ｒｒｋｋのいずれか）を含む、またはこれからなり得る。
【００５６】
本発明のペプチドは線状または環状型であり得る。別の実施形態では、本発明のペプチドは環状型である。ペプチドは、例えば、システイン残基間の（あるいは、より一般的にはポリペプチドに存在する（例えば、末端領域で）少なくとも２個のシステイン残基の２個の間の）ジスルフィド結合の形成によって環化できる。各システイン残基は独立してＤ−システインまたはＬ−システインであることが理解されるべきである。例えば、少なくとも２個のシステイン残基を加えることができ、その１つまたは両方は、任意に、ペプチドのＣ末端またはＮ末端である。このため、抗ウイルスペプチドならびにそれらの誘導体は、それらの末端システイン残基によるジスルフィド結合によって環化され得る。本明細書で示されるように、ペプチドの線状型（すなわち、いずれの環化も伴わない）は抗ウイルス特性を示す。ペプチドが３つ以上のシステイン残基を含む場合、これらの残基の１つ以上を修飾して、その残基がジスリフィド結合の形成に加わることを防ぎ得ることも理解されるべきである。好都合なことに、これはシステインのチオール基をアセトアミドメチルで保護することによって達成されてシステインアナログであるアセトアミドメチル−システイン（Ｃｙｓ（Ａｃｍ））を形成し得る。本発明のペプチドの状況では、これはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８、３８、５９、７９、９８、および１１７の内部システイン残基によってなされ得る。修飾は合成の際に実施でき（すなわち、修飾された残基が合成に使用される）、あるいは合成後に実施し得る。
【００５７】
線状前駆体から環状ポリペプチドを調製するための方法が報告されており、本ペプチドで実施できる。例えば、方法は化学的交差結合、化学的分子内結合法および酵素的分子内結合法を含み、それらは線状合成ペプチドを水性条件下で効率的に環化させ得る。
【００５８】
別の実施形態では、環状型で溶解タグを含むペプチド、例えばＲＲＫＫ（レボ型またはデオキシ型のいずれか）が本明細書で説明される。
【００５９】
別の実施形態では、ペプチドはｃｔｋｓｒｆＸ／ｘｎｃ、ｒｒｋｋｃｔＸ／ｘｓｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗＸ／ｘｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆＸ／ｘｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃＸ／ｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉＸ／ｘｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔＸ／ｘｉａｃ、またはｃｔｋｓｒｆｄｎｃから選択される。
【００６０】
別の実施形態では、本発明のペプチドは一般式ｔｗＸ／ｘｒｆｉｎ（式Ｖ）を有し、ここでＸ／ｘはａ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｖ、ｗ、またはｙである。ペプチドは環化のためにＮ末端またはＣ末端にシステイン残基、および／または溶解タグを含み得る。別の実施形態では、ペプチドはＲＲＫＫｃｔｗａｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｃｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｄｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｅｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗＧｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｈｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｉｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｋｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｌｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｍｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｎｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｐｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｑｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｒｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｓｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｔｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｖｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｗｒｆｉｎｃまたはＲＲＫＫｃｔｗｙｒｆｉｎｃから選択される。異なるインフルエンザウイルスに対するこれらのペプチドの活性を表２に示す。また、上記で示されるペプチドも本発明の範囲内であり、ここで溶解タグはＤ型（ｒｒｋｋ）である。また、いずれの環化も有さないこれらのペプチドの機能的誘導体も本発明の範囲内である。
【表２】
2019506840.tif 000004
2019506840.tif 000005
【００６１】
別の実施形態では、本発明のペプチドは一般式ｔｗｆＸ／ｘｆｉｎ（式ＶＩ）を有し、ここでＸ／ｘはａ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、Ｇ、ｈ、ｉ、ｋ、ｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｖ、ｗ、またはｙである。ペプチドは環化のためにＮ末端またはＣ末端にシステイン残基、および／または溶解タグを含み得る。別の実施形態では、ペプチドはＲＲＫＫｃｔｗｆａｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｃｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｄｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｅｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｆｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆＧｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｈｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｉｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｋｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｌｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｍｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｎｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｐｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｑｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｒｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｓｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｖｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｗｆｉｎｃ、およびＲＲＫＫｃｔｗｆｙｆｉｎｃから選択される。異なるインフルエンザウイルスに対するこれらのペプチドの活性を表３に示す。また、上記で示されるペプチドも本発明の範囲内であり、ここで溶解タグはＤ型（ｒｒｋｋ）である。また、いずれの環化も有さないこれらのペプチドの機能的誘導体も本発明の範囲内である。
【表３】
2019506840.tif 000006
2019506840.tif 000007
【００６２】
別の実施形態では、本発明のペプチドは一般式Ｘ／ｘｗｆｔｆｉｎ（式ＶＩＩ）を有し、ここでＸ／ｘはａ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、Ｇ、ｈ、ｉ、ｋ、ｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｖ、ｗ、またはｙである。ペプチドは環化のためにＮ末端またはＣ末端にシステイン残基、および／または溶解タグを含み得る。別の実施形態では、ペプチドはＲＲＫＫｃａｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｃｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｄｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｅｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｆｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃＧｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｈｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｉｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｋｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｌｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｍｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｎｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｐｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｑｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｒｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｓｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｔｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｖｗｆｔｆｉｎｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｎｃおよびＲＲＫＫｃｙｗｆｔｆｉｎｃから選択される。異なるインフルエンザウイルスに対するこれらのペプチドの活性を表４に示す。また、上記で示されるペプチドも本発明の範囲内であり、ここで溶解タグはＤ型（ｒｒｋｋ）である。また、いずれの環化も有さないこれらのペプチドの機能的誘導体も本発明の範囲内である。
【表４】
2019506840.tif 000008
2019506840.tif 000009
【００６３】
別の実施形態では、本発明のペプチドは一般式ｗｗｆｔｆｉＸ／ｘ（式ＶＩＩＩ）を有し、ここでＸ／ｘはａ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、Ｇ、ｈ、ｉ、ｋ、ｌ、ｍ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｖ、ｗ、またはｙである。ペプチドは環化のためにＮ末端またはＣ末端にシステイン残基、および／または溶解タグを含み得る。別の実施形態では、ペプチドはＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｃｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｄｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｅｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｆｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉＧｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｈｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｉｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｋｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｌｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｍｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｐｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｑｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｒｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｓｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｔｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｖｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｗｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｆｉｙｃから選択される。異なるインフルエンザウイルスに対するこれらのペプチドの活性を表５に示す。また、上記で示されるペプチドも本発明の範囲内であり、ここで溶解タグはＤ型（ｒｒｋｋ）である。また、いずれの環化も有さないこれらのペプチドの機能的誘導体も本発明の範囲内である。
【表５】
2019506840.tif 000010
2019506840.tif 000011
【００６４】
別の実施形態では、本発明のペプチドは一般式ｔｋｓｒｆＸ／ｘｎ（式Ｉ）を有し、ここでＸ／ｘはａ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、Ｇ、ｈ、ｉ、ｋ、ｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｖ、ｗ、またはｙである。ペプチドは環化のためにＮ末端またはＣ末端にシステイン残基、および／または溶解タグを含み得る。別の実施形態では、ペプチドはｃｔｋｓｒｆａｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｃｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｄｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｅｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｆｎｃ、ｃｔｋｓｒｆＧｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｈｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｉｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｋｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｌｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｍｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｎｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｐｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｑｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｒｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｓｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｔｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｖｎｃ、ｃｔｋｓｒｆｗｎｃおよびｃｔｋｓｒｆｙｎｃから選択される。異なるインフルエンザウイルスに対するこれらのペプチドの活性を表６に示す。また、上記で示されるペプチドも本発明の範囲内であり、ここで溶解タグはＬ型（ＲＲＫＫ）またはＤ型（ｒｒｋｋ）である。また、いずれの環化も有さないこれらのペプチドの機能的誘導体も本発明の範囲内である。
【表６】
2019506840.tif 000012
2019506840.tif 000013
【００６５】
別の実施形態では、本発明のペプチドは一般式ｔＸ／ｘｓｒｆｉｎ（式ＩＩ）を有し、ここでＸ／ｘ  はａ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、Ｇ、ｈ、ｉ、ｋ、ｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｖ、ｗ、またはｙである。ペプチドは環化のためにＮ末端またはＣ末端にシステイン残基、および／または溶解タグを含み得る。別の実施形態では、ペプチドはｒｒｋｋｃｔａｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｃｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｄｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｅｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｆｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔＧｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｈｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｉｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｋｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｌｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｍｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｎｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｐｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｑｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｒｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｓｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｔｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｖｓｒｆｉｎｃ、ｒｒｋｋｃｔｗｓｒｆｉｎｃおよびｒｒｋｋｃｔｙｓｒｆｉｎｃから選択される。異なるインフルエンザウイルスに対するこれらのペプチドの活性を表７に示す。また、上記で示されるペプチドも本発明の範囲内であり、ここで溶解タグはＬ型（ＲＲＫＫ）である。また、いずれの環化も有さないこれらのペプチドの機能的誘導体も本発明の範囲内である。
【表７】
2019506840.tif 000014
2019506840.tif 000015
【００６６】
別の実施形態では、本発明のペプチドは一般式ｗｗｆｔＸ／ｘｉａ（式ＩＸ）を有し、ここでＸ／ｘはａ、ｃ、ｄ、ｅ、Ｇ、ｈ、ｉ、ｋ、ｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｖ、ｗ、またはｙである。ペプチドは環化のためにＮ末端またはＣ末端にシステイン残基、および／または溶解タグを含み得る。別の実施形態では、ペプチドはＲＲＫＫｃｗｗｆｔａｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｃｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｄｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｅｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔＧｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｈｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｉｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｋｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｌｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｍｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｎｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｐｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｑｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｒｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｓｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｖｉａｃ、ＲＲＫＫｃｗｗｆｔｗｉａｃ、およびＲＲＫＫｃｗｗｆｔｙｉａｃから選択される。異なるインフルエンザウイルスに対するこれらのペプチドの活性を表８に示す。また、上記で示されるペプチドも本発明の範囲内であり、ここで溶解タグはＤ型（ｒｒｋｋ）である。また、いずれの環化も有さないこれらのペプチドの機能的誘導体も本発明の範囲内である。
【表８】
2019506840.tif 000016
2019506840.tif 000017
【００６７】
別の実施形態では、本明細書で説明されるペプチドは、ヒトに感染する少なくとも１種類、好ましくは１種類を超えるインフルエンザウイルスに対する抗ウイルス活性を有する。別の実施形態では、本明細書で説明されるペプチドは、好ましくはヒトに感染する、インフルエンザウイルスの１種類を超える亜型に対する抗ウイルス活性を有する。一つの例では、インフルエンザウイルスはインフルエンザＡまたはインフルエンザＢウイルスである。インフルエンザＡおよび／またはＢウイルス亜型は、表９に示される亜型の１種類以上から選択される。
【表９】
2019506840.tif 000018
【００６８】
本発明はインフルエンザＡウイルスに限定されず、インフルエンザウイルスはＡ型、Ｂ型、またはＣ型ウイルスのいずれかであり得ることが理解されるべきである。ウイルスはヒトまたは動物由来、例えばトリ由来であり得る。好ましいウイルスはＡ型インフルエンザウイルス、特にヒト由来のウイルスまたはヒト感染性ウイルスである。
【００６９】
このため、Ｃ−Ｐ１とは対照的に、本発明のペプチドは広範なスペクトルの抗ウイルス活性を示し、それらは１種類を超えて、好ましくは２、３、４、５種類またはそれを超えるインフルエンザウイルスＡ亜型に対して有効である。
【００７０】
さらに、本明細書で説明されるペプチドは、Ｃ−Ｐ１よりもインフルエンザウイルスに対して活性である。本発明の最も活性なペプチドは、鳥インフルエンザウイルスに対してＣ−Ｐ１よりも３００００倍超の高い効果を有する。
【表１０】
2019506840.tif 000019
【００７１】
特徴付けされたペプチドおよびその生物学的に活性な変異体は、多くの方法で修飾することができる。例えば、追加アミノ酸残基、他の置換基、および保護基を含む物質を、アミノ末端、カルボキシ末端、または両方に加えることができる。例えば、前述のように、ペプチドを、ジスルフィド結合形成に関与できるシステイン残基または他のイオウ含有残基あるいは物質を含むように修飾できる。
【００７２】
本発明のペプチドはまた、溶解性、安定性、反応性を増加する、または他の特性を改善するために、１つ以上の修飾アミノ酸を任意の位置および／またはＮ末端および／またはＣ末端で含み得る。これらの修飾は、限定されないが、アミノ末端へのアセチル、カルボベンジル、ダンシル、ｔ−ブチルオキシカルボニル基、９−フルオレニルメトキシカルボニル基または親水性基、および／またはカルボキシ末端へのｔ−ブチルオキシカルボニル、またはアミド基、またはパラ−ニトロベンジルエステル基、または親水性基などの化学基の付加を含む。これらはまたＮ−メチル化などの修飾されたアミド結合を含み得る。
【００７３】
別の実施形態では、本明細書で説明されるペプチドのいずれかは、１つ以上の置換基を含む。例えば、ペプチドは置換基をアミノ末端、カルボキシ末端で、および／または反応性アミノ酸残基側鎖上に含んでよい。置換基は、アシル基あるいは置換または非置換アミン基であり得る（例えば、Ｎ末端での置換基はアシル基であってよく、かつＣ末端は置換または非置換アミン基（例えば、同一または異なり得る１、２、または３個の置換基を有するアミノ基）によってアミド化され得る）。アミン基は、低級アルキル（例えば、１〜４個の炭素を有するアルキル）、アルケニル、アルキニル、またはハロアルキル基であってよい。アシル基は、低級アシル基（例えば、最大４個の炭素原子を有するアシル基）、特にアセチル基であってよい。置換基は非タンパク質ポリマー、例えば、ポリエーテル、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリアルキレングリコール（例えば、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリブチレングリコール（ＰＢＧ）、またはＰＰＧ−ＰＥＧブロック／ランダムポリマー）であってよい。
【００７４】
非タンパク質ポリマーは、サイズおよび形状が異なってよい。例えば、前述の非タンパク質ポリマーのいずれか（例えば、ＰＥＧ）は、線状、分枝、または櫛形であってよい。サイズに関して、分子量は変化し得る。例えば、ＰＥＧは約３００Ｄａ、約１０００Ｄａ、約２０００Ｄａ、約３０００Ｄａ、約４０００Ｄａ、約５０００Ｄａ、約６０００Ｄａ、約７０００Ｄａ、約８０００Ｄａ、約９０００Ｄａ、約１００００Ｄａ、約１１０００Ｄａ、約１２０００Ｄａ、約１３０００Ｄａ、約１４０００Ｄａ、約１５０００Ｄａ、約２００００Ｄａ、約３００００Ｄａ、約４００００Ｄａ、または約５００００Ｄａなどの分子量を有してよい。例えば、ＰＥＧは３００〜２０００Ｄａ、３００〜３０００Ｄａ、１０００〜２０００Ｄａおよび１０００〜３０００Ｄａの範囲の分子量であってよい。非タンパク質ポリマー（例えば、ＰＥＧ）は、官能基化学のいくつかによってペプチドに結合され得る（例えば、カルボキシル化−ｍＰＥＧ、ｐ−ニトロフェニル−ＰＥＧ、アルデヒド−ＰＥＧ、アミノ−ＰＥＧ、チオール−ＰＥＧ、マレイミド−ＰＥＧ、アミノキシ−ＰＥＧ、ヒドラジン−ＰＥＧ、トシル−ＰＥＧ、ヨードアセトアミド−ＰＥＧ、スクシンイミジルスクシナート−ＰＥＧ、スクシンイミジルグルタレート−ＰＥＧ、スクシンイミジルカルボキシペンチル−ＰＥＧ、ｐ−ニトロフェニルカルボナート−ＰＥＧ、またはエタンチオール−ＰＥＧ）。非タンパク質ポリマー（例えば、ＰＥＧ）は、限定されないが、アミノ末端アミノ酸、カルボキシ末端アミノ酸、遊離アミン、および遊離スルフヒドリル基を含む化学基のいくつかによってペプチドに結合され得る。
【００７５】
非タンパク質ポリマー（例えば、ＰＥＧ）は、官能化され得る（例えば、単官能性活性化線状ＰＥＧ、ホモ二官能性活性化線状ＰＥＧ、ヘテロ二官能性線状ＰＥＧ、多アーム活性化ＰＥＧ（例えば、２アーム、４アーム、８アームなど）、分枝活性化ＰＥＧ、および櫛形活性化ＰＥＧ）。
【００７６】
本発明の抗ウイルスペプチドはまた、検出、分離、精製などの目的のためにそれらの末端アミノ酸に反応性タグを含み得る。これらのタグは、ビオチン、ヒスチジン、ＧＳＴなどを含み得る（しかし限定されない）。適切なタグは従来技術で知られている。
【００７７】
本発明のペプチドはまた、脂質（リン脂質）またはポリエチレングリコールと結合されて、溶解性、タンパク質分解安定性あるいは他の特性および／または活性を増強／変化させ得る。
【００７８】
本明細書で使用されるとき、本発明の抗ウイルスペプチドは、ペプチドのコア構造を模倣できる化合物である模倣誘導体またはペプチド模倣誘導体を含み得る。同様に、抗ウイルスペプチドは等価体または生物学的等価体などの１つ以上のアミノ酸置換を含み得ることが理解されるべきである。
【００７９】
別の実施形態では、本明細書の抗ウイルスペプチドは多量体型であり得る。多量体は二量体、三量体または四量体、好ましくは二量体であってよい。多量体を形成する単量体抗ウイルスペプチドは、同一または異なるペプチドから構成され得る。好ましい実施形態では、多量体を形成するペプチドは共有結合される。
【００８０】
別の実施形態では、本発明の抗ウイルスペプチドは、異なる物理的形態で提供され得る。物理的形態は、従来技術で良く知られている結晶、無定形などであり得る。
【００８１】
本特許出願で提供される様々な例は、置換されたアミノ酸を有するＦＰＴが、表２〜８で説明される様々な配列で示される抗ウイルス活性を保持することを実証する。このような誘導体は本発明の範囲内である。別の実施形態では、本発明の抗ウイルスペプチドのアミノ酸は、保存的置換によって置換され得る。保存的置換は、一次配列を変えるが機能を変化させ得ない代替アミノ酸による置換を指す。保存的アミノ酸置換の例は、バリン、イソロイシン、およびロイシン；リジンおよびアルギニン；アスパラギンおよびグルタミン；セリンおよびトレオニン；グリシンおよびアラニン；フェニルアラニンおよびチロシン；ならびにアスパラギン酸およびグルタミン酸を含む。示されたグループ内のアミノ酸は同一群からの別のアミノ酸によって保存的に置換され得る。
【００８２】
別の実施形態では、本発明の抗ウイルスペプチドのアミノ酸は、非天然または不自然アミノ酸およびそれらの誘導体によって置換され得、限定されないが、β−アミノ酸（β３およびβ２）、ホモ−アミノ酸、プロリンおよびピルビン酸誘導体、３−置換アラニン誘導体、グリシン誘導体、環−置換フェニルアラニンおよびチロシン誘導体、Ｎ−メチルアミノ酸ならびに従来技術で良く知られている他のものを含む。
【００８３】
本発明のペプチドまたはその誘導体は、後述の例で説明される方法を用いてそれらの抗ウイルス活性について試験され得る。
【００８４】
開示されるペプチドおよびそれらの誘導体は、液相または固相合成あるいは従来技術で良く知られている任意の他の方法などの、ペプチド合成で使用されるいずれかの一般的な方法によって合成できる。
【００８５】
本発明のペプチドは、ヒト、動物亜型および鳥（高病原性Ｈ５Ｎ１など）を含むインフルエンザＡウイルスに対する広範なスペクトルの抗ウイルス活性を示す。これらのウイルスの感染から生じる病気は、従って本発明のペプチドによって治療でき、本発明のペプチドはこのような治療のために医薬品として許容可能な組成物に製剤化できる。
【００８６】
このため、本発明の別の態様により、前述の本発明の１種類以上のペプチドは、医薬組成物に製剤化され得る。この組成物は、本発明の少なくとも１種類のペプチドを１種類以上の医薬品として許容可能な担体とともに含み得、所望されるとき、希釈剤、担体などの賦形剤、および安定化剤、保存剤、溶解剤、緩衝剤などの添加剤を含む。医薬品として許容可能な担体は、本発明のペプチドがそれとともに投与され得、かつ本発明で説明される活性抗ウイルスペプチドの有効性を阻害または低下しない１種類以上の非毒性成分を含む化合物である。
【００８７】
医薬品として許容可能な担体または賦形剤は微粒子であってよく、そのため組成物は、例えば、錠剤または粉末剤形である。担体は液体であってよく、組成物は、例えば経口シロップまたは注射可能な液体である。さらに、担体は気体状であってよく、例えば、吸入投与で有用なエアゾール組成物を提供する。
【００８８】
このような医薬担体は、水およびオイルなどの液体であってよく、ピーナッツオイル、ダイズオイル、ミネラルオイル、ゴマオイルなどの、石油、動物、植物または合成由来のオイルを含む。担体は食塩水、アカシアガム、ゼラチン、デンプンペースト、タルク、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素などであってよい。さらに、補助剤、安定化剤、増粘剤、潤滑剤、および色素を使用できる。別の実施形態では、動物に投与されるとき、本発明のペプチドまたは組成物および医薬品として許容可能な担体は、無菌である。本発明のペプチドが静脈内投与されるとき、水が好ましい担体である。食塩水溶液ならびに水性デキストロースおよびグリセロール溶液もまた液体担体として、特に注射用溶液のために使用できる。適切な医薬担体はまた、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、マルト、コメ、コムギ、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセリル、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどの賦形剤を含む。本組成物は、所望される場合、少量の湿潤剤または乳化剤、あるいはｐＨ緩衝化剤を含んでもよい。
【００８９】
別の実施形態では、担体および賦形剤の具体的な非限定例は、限定されないが、水、食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、あるいはこれらの組み合わせを含む。製剤化賦形剤は、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ヒドロキシルセルロース、アカシア、ポリエチレングリコール、マンニトール、塩化ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムを含み得る。
【００９０】
経口投与用の固体組成物として、組成物は粉末、顆粒、圧縮錠剤、ピル、カプセル、チューインガム、ウェハーなどの剤形に製剤化できる。このような固体組成物は、１種類以上の不活性増量剤を一般的に含む。さらに、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、微細結晶セルロース、またはゼラチンなどの結合剤；デンプン、ラクトースまたはデキストリンなどの賦形剤；アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、コーンスターチなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの滑剤；スクロースまたはサッカリンなどの甘味剤；ペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジ香料などの香味剤；ならびに着色剤の１種類以上が存在してよい。
【００９１】
局所投与剤形では、様々なクリーム、軟膏、ゲル、ローションなどのいずれかが使用され得る。
【００９２】
経口投与が意図されるとき、組成物は好ましくは固体または液体剤形であり、半固体、半液体、懸濁液およびゲル剤形が、固体または液体のいずれかとして本明細書で考慮される剤形に含まれる。
【００９３】
組成物は液体の剤形であってよく、例えば、エリキシル、シロップ、溶液、エマルションまたは懸濁液が挙げられる。液体は経口投与のために、または注射による送達のために有用であり得る。経口投与が意図されるとき、組成物は甘味剤、保存剤、色素／着色剤および香味増強剤の１種類以上を含み得る。注射による投与のための組成物では、界面活性剤、保存剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、緩衝剤、安定剤および等張剤の１種類以上も含まれてよい。安定化剤、保存剤および溶解剤の添加または無添加に関わらず、少なくとも１種類の緩衝化成分を含む水が好ましい。組成物がカプセル剤形であるとき（例えば、ゼラチンカプセル）、前述のタイプの材料に加えて、ポリエチレングリコール、シクロデキストリンまたは脂肪オイルなどの液体担体を含んでよい。
【００９４】
ほとんどの医薬品剤形では、非有効成分が調製物の重量または容量で大きな部分を構成する。医薬品製剤では、期間中に本発明のペプチドの送達をもたらすように投与量が製剤化されるように、様々な計量放出、遅延放出または持続放出製剤のいずれか、および添加剤が使用され得ることも考慮される。
【００９５】
経口、非経口、デポー、口腔内などを含むが限定されない、投与または送達方法の任意の適切な経路が本明細書で説明されるペプチドで使用され得ることが理解されるべきである。
【００９６】
特定の実施形態では、ペプチドは非共有結合担体とともに製剤化される。非共有結合担体は従来技術の当業者に良く知られている。
【００９７】
特定の実施形態では、ペプチドは脂質などの担体と複合体化される、あるいはリポソーム、生体分解性または非生体分解性マイクロ粒子、マイクロカプセル、マイクロスフェアおよびナノ粒子中に製剤化される。リポソーム、マイクロ粒子、マイクロカプセル、マイクロスフェアおよびナノ粒子を製造する方法、ならびに化合物をこれらに複合体化または被包する方法は、従来技術の当業者に良く知られている。
【００９８】
特定の実施形態では、本明細書で説明される抗ウイルスペプチドは、ナノエマルション中に製剤化される。ナノエマルションは、限定されないが、水中油（Ｏ／Ｗ）エマルション、および油中水エマルション（Ｗ／Ｏ）を含む。ナノエマルションは約２０〜約１０００ｎｍの平均液滴直径を有するエマルションとして定められる。通常、平均液滴サイズは約２０または５０〜約５００ｎｍである。
【００９９】
例示的な水中油（Ｏ／Ｗ）および／または油中水（Ｗ／Ｏ）ナノエマルションは、限定されないが、
１）界面活性剤ミセル−主に疎水性ペプチドに適する、小分子界面活性剤またはデタージェント（例えば、ＳＤＳ／ＰＢＳ／２−プロパノール）からなるミセル、
２）ポリマーミセル−主に疎水性ペプチドに適する、ポリマー、コポリマー、またはブロックコポリマー界面活性剤（例えば、プルロニックＬ６４／ＰＢＳ／２−プロパノール）からなるミセル、
３）混合ミセル−主に疎水性ペプチドに適する、その中に１種類を超える界面活性剤が存在する、またはその中で液相（一般的にアルコールまたは脂肪酸化合物）の１つがミセル（例えば、オクタン酸／ＰＢＳ／ＥｔＯＨ）の形成に関与するミセル、
４）一体的ペプチドミセル−両親媒性ペプチドに適する、その中でペプチドが補助界面活性剤として働き、ミセル（例えば、両親媒性ペプチド／ＰＢＳ／ミネラルオイル）の一体的な部分を形成している混合ミセル、
５）ピッカリング（固相）エマルション−両親媒性ペプチドに適する、その中でペプチドが固体ナノ粒子（例えば、ポリスチレンナノ粒子／ＰＢＳ／無油相）の外側と結合されるエマルション、
を含む。
【０１００】
別の実施形態では、本発明は医薬品としての使用のための本発明のペプチドまたは組成物に関する。
【０１０１】
別の実施形態では、本発明はインフルエンザウイルス感染の治療における使用のための本発明のペプチドまたは組成物に関する。別の実施形態では、本使用は１種類を超えるインフルエンザウイルスの感染の治療においてである。別の実施形態では、インフルエンザウイルスはインフルエンザウイルスＡであり、本使用は１種類を超えるインフルエンザウイルスＡ亜型の感染の治療においてである。
【０１０２】
別の実施形態では、本発明はインフルエンザウイルス感染治療のための医薬品の製造における本発明の分離された抗ウイルスペプチドまたは組成物の使用に関する。別の実施形態では、本使用は１種類を超えるインフルエンザウイルスの感染の治療においてである。別の実施形態では、インフルエンザウイルスはインフルエンザウイルスＡであり、本使用は１種類を超えるインフルエンザウイルスＡ亜型の感染の治療においてである。
【０１０３】
別の実施形態では、本発明はインフルエンザウイルス感染を治療するための方法に関し、本発明の抗ウイルスペプチドまたは組成物の治療上効果的な量を投与することを含む。別の実施形態では、本方法は１種類を超えるインフルエンザウイルスの感染を治療するためである。別の実施形態では、インフルエンザウイルスはインフルエンザウイルスＡであり、本方法は１種類を超えるインフルエンザウイルスＡ亜型の感染の治療のためである。
【０１０４】
また、インフルエンザウイルスによるウイルス感染の予防における前述の使用または方法も本発明の範囲内である。
【０１０５】
本発明のペプチドおよび組成物の投与は、限定されないが、経口、局所、非経口、舌下、直腸、膣、眼、肺（吸入）および鼻腔内を含む。非経口投与は、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内の注射または注入技術を含む。好ましくは、組成物は非経口、肺または経口によって投与される。本発明の医薬組成物は、本発明のペプチドが動物、好ましくはヒトへの組成物の投与で生体利用が可能であるように製剤化できる。組成物は１回以上の投与量単位の剤形にでき、例えば、錠剤は単回投与単位であってよく、エアゾール剤形で本発明のペプチドを含む容器は複数の投与量単位を保持できる。
【０１０６】
非経口投与は、限定されないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、脳内、脳室内、髄腔内、膣内または経皮を含む。投与の好ましい方式は、担当医師の判断にゆだねられ、疾患の部位に部分的に依存する。
【０１０７】
本発明の液体組成物は、それらが溶液、懸濁液または他の剤形のいずれであれ以下の：注射用水、食塩溶液、好ましくは生理食塩水、リンゲル液、等張塩化ナトリウム、合成モノまたはジグリセリドなどの不揮発性オイル、ポリエチレングリコール、グリセリン、または他の溶媒などの無菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗細菌剤；および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの浸透圧調節剤の１種類以上を含んでもよい。非経口組成物は、ガラス、プラスチックまたは他の材質からなるアンプル、使い捨てシリンジまたは複数回用量バイアル中に封入できる。生理食塩水は好ましい補助剤である。
【０１０８】
本ペプチドまたは組成物は、治療上効果的な量で投与される。用語「治療上効果的な量」または「医薬品として効果的な量」は、所望の結果をもたらすのに必要である１種類以上の化合物の量および／または投与量、および／または投与量計画を指し、例えば、ウイルスの増殖を低下または阻止するのに十分な量、またはウイルス疾患症状の重篤度を低下するまたは進行を遅延するのに十分な量（例えば、治療上効果的な量）、ウイルス感染によって生じる疾患のリスクを低下するまたは発症を遅延する、および／または最終的な重篤度を低下するのに十分な量（例えば、予防上効果的な量）である。
【０１０９】
化合物の正しい投与量は、特定の製剤、適用方式、ならびに治療される特定の部位、ホストおよび疾患に従って変動する。年齢、体重、性別、食事療法、投与期間、排出速度、ホストの状態、薬剤併用、反応感受性および疾患の重篤度などの他の要因も考慮される。投与は最大耐容投与量内で連続的または間欠的に実施できる。
【０１１０】
一般的に、この量は組成物の重量で少なくとも約０．０１％の本発明のペプチドである。経口投与が意図されるとき、この量は組成物の重量で約０．１〜約８０％の範囲で変動し得る。好ましい経口組成物は、重量で約４〜約５０％の本発明のペプチドを含み得る。
【０１１１】
本発明の好ましい組成物は、非経口投与量単位が重量で約０．０１〜約２％の本発明のペプチドを含むように調製される。
【０１１２】
静脈内投与では、本組成物は一般的には約０．１〜約２５０ｍｇ／日、好ましくは約０．１〜約５０ｍｇ／日を含んでよい。
【０１１３】
本ペプチドは治療的または予防的に投与され得る。適切な治療は、１日に１〜４回で与えられ、好ましくは１〜７日、またはそれを超えて継続される。本明細書で使用される用語「治療」、「治療している」、または「治療する」は、疾患の徴候または病状あるいは症状に所望の効果を生じる活動、特に本明細書で説明されるペプチドを使用して達成できるものを指し、限定されないが、治療される疾患または症状の１つ以上の測定可能なマーカーにおける最小限の変化または改善さえ含み得る。治療はまた、本用語が適用される疾患または症状のいずれか、あるいはこのような疾患または症状の徴候の１つ以上の、発症を遅延する、進行を妨害または逆転する、重篤度を低下する、あるいは緩和または予防することも指す。「治療」、「治療している」、または「治療する」は、疾患または症状、あるいはその関連する徴候の完全な根絶または治癒を必ずしも示さない。別の実施形態では、治療は治療される疾患の少なくとも１つの徴候の改善を含む。改善は部分的または完全であり得る。この治療を受ける被験体は、それを必要とするいずれかの被験体である。臨床的改善の例示的なマーカーは、従来技術の当業者に明らかであろう。
【０１１４】
本発明のペプチドまたは組成物は、任意の都合の良い経路によって投与でき、例えば、注入またはボーラス注入によって、上皮または皮膚粘膜の裏層を通した吸収によって投与できる。
【０１１５】
肺投与も用いることができ、例えば、吸入器または噴霧器、およびエアゾール化剤を有する製剤の使用によって、あるいはフルオロカーボンまたは合成肺界面活性剤での灌流を介してである。特定の実施形態では、本発明のペプチドまたは組成物は、従来の結合剤およびトリグリセリドなどの担体と共に、坐薬として製剤化できる。
【０１１６】
前述の説明のように、投与経路に応じて、本発明の抗ウイルスペプチドは、錠剤、カプセル、カプレット、懸濁液、粉末、凍結乾燥調製物、坐薬、点眼剤、皮膚パッチ、口腔溶解性製剤、スプレー、エアゾールなどを含むが限定されない、従来技術で知られているいずれかの手段によって製剤化され得、かつ緩衝剤、結合剤、賦形剤、安定化剤、抗酸化剤および従来技術で知られている他の薬剤とともに混合され製剤化され得る。
【０１１７】
投与はまた、別の活性化合物、例えば、別の抗ウイルス化合物と併用され得る。１種類を超える本発明のペプチドも投与され得る。
【０１１８】
本明細書で説明されるペプチドはまた、医薬品として許容可能な塩としても提供され得る。「医薬品として許容可能な塩」は、無機塩基（例えば、ナトリウムおよびカリウムなどのアルカリ金属、カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属、またはアルミニウム、ならびにアンモニア）、有機塩基（例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、およびトリエタノールアミン）、無機酸（例えば、塩酸、ヒドロホウ酸、硝酸、硫酸、およびリン酸）、または有機酸（例えば、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸）との塩を含む。本明細書で引用される例は非限定的である。
【０１１９】
本発明はまた、本発明のペプチドまたは組成物および使用のための取扱説明書ならびに任意に補助剤を含むキットに関する。
【０１２０】
本発明はまた、インフルエンザに対する抗ウイルス活性を有するペプチドを検出するためのスクリーニング方法に関し、本発明で説明される分離された抗ウイルスペプチドの誘導体を作製すること、当該ウイルスにペプチドを暴露することおよび抗ウイルス活性についてスクリーニングすることを含む。
【０１２１】
本発明はまた、本発明の抗ウイルスペプチドをコードする、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子を含む分離された核酸分子に関する。別の実施形態では、分離された核酸は天然由来ではない。
【０１２２】
本発明はまた、本発明の抗ウイルスペプチドをコードする核酸を含むベクターに関する。ベクターは発現ベクターであり得、特に真核細胞における発現用である。このようなベクターは、例えば、ウイルスベクター、プラスミドベクター、コスミドベクター、または人工染色体（例えば、酵母人工染色体）ベクターであってよい。
【０１２３】
本明細書で説明されるベクターは、従来技術で知られている様々な方法のいずれか一つによって細胞または組織中に導入できる。このような方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（分子クローニング：実験室マニュアル），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，４ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｊｕｎｅ１５，２０１２）に記載されている。
【０１２４】
本発明はまた、本発明の抗インフルエンザペプチドを含むホスト細胞に関する。
【０１２５】
ホスト細胞は、任意の原核細胞または真核細胞であってよいが、真核細胞が好ましい。例示的な真核細胞は哺乳動物細胞（チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）またはＣＯＳ細胞）を含む。他の適切なホスト細胞は従来技術で知られている。
【０１２６】
このため、本発明では、細胞はインビトロまたは生体外でトランスフェクションでき、発現されたペプチドは従来技術で知られている方法によってこれらから分離できる。細胞はまた、被験体に投与でき、またはこれに代えて細胞は直接的にインビボで改変できる。
【０１２７】
本発明はまた、本発明の抗インフルエンザペプチドと、例えば核酸、ペプチド、タンパク質、造影剤、抗体、毒素および小分子から選択される、選ばれた第二薬剤とを含む組み合わせに関する。
【０１２８】
本発明はまた、本発明のペプチドを含む組換えライブラリー、例えばファージライブラリに関する。
【０１２９】
前述の開示は、本発明の範囲内に包含される主題の全般的な説明を提供し、本発明を作製して用いる方法ならびにこの最善の方式を含むが、次の例は従来技術の当業者が本発明を実行してこれらのすべての記載された説明をもたらすことがさらに可能なように提供される。しかし、従来技術の当業者は、これらの例の詳細が本発明での限定として読み取られるべきではなく、発明の範囲は本開示に添付される請求およびこの均等物から理解されるべきであることを認識するであろう。本発明の様々なさらなる態様および実施形態が本開示の観点において従来技術の当業者に明らかであろう。これらの例の詳細は限定的なものとして扱われるべきではない。
【０１３０】
本明細書で引用される各文書は、その全体が参考によって本明細書に組み込まれる。
【０１３１】
本明細書で使用される「および／または」は、２つの特定の特性または成分のそれぞれが他を伴う、または伴わない特定の開示として捉えられるべきである。例えば、「Ａおよび／またはＢ」は、まさにそれぞれが個別として本明細書で提示されるかのように、（ｉ）Ａ、（ｉｉ）Ｂ、および（ｉｉｉ）ＡとＢのそれぞれの特定的な開示として捉えられるべきである。
【０１３２】
文脈に他の指示がない限り、前述で示される特性の説明および定義は、本発明のいずれかの特定の態様または実施形態に限定されず、説明されるすべての態様および実施形態に同等に適用される。
【０１３３】
例
次の非限定例は、本発明をさらに説明するために示される。
【０１３４】
例１．材料および方法
細胞培養およびウイルス：Ａ／ＰＲ／８／１９３４（Ｈ１Ｎ１）、Ａ１／Ｍａｌ／３０２／１９５４（Ｈ１Ｎ１）、Ａ／ニワトリ／Ｉｒａｎ／１６／２０００（Ｈ９Ｎ２）およびＡ／ウマ／２／Ｍａｉａｍｉ／６３（Ｈ３Ｎ８）を、８日齢の特定病原体フリー孵化鶏卵において３５℃または３７℃で４８時間増殖させる。Ａ／ＮＹ／１８／２００９（２００９パンデミックＨ１Ｎ１）、Ａ／ＨＫ／８／１９６８（Ｈ３Ｎ２）およびＡ／Ｋａｍｐｕｎｇ  Ｐａｓｉｒ／５７４４／２００４（Ｈ５Ｎ１）をＭＤＣＫ細胞中で増殖させる。増殖および精製方法はＹｕｓｏｆｆら（Ｙｕｓｏｆｆら，１９９６）を適応および変更する。簡単に説明すると、ウイルスを孵化鶏卵中またはＭＤＣＫ細胞中のいずれかで増殖させる。孵化鶏卵に基づく増殖の場合、ウイルスを８または９日齢の特定病原体フリー孵化鶏卵に注入する。３７℃で４８時間インキュベーション後、尿膜腔液を収集し遠心分離（４℃で１２，０９６ｇ×ｇを３０分間）によって澄明化する。ウイルスを３０〜６０％スクロース勾配超遠心分離（４℃で２８５，０００×ｇを３．５時間）により澄明化上清から精製し、後述の試験で使用する。細胞培養に基づく増殖の場合、ウイルスを一昼夜増殖したＭＤＣＫ細胞に１．０ｍ．ｏ．ｉで感染させ、５０〜７０％ＣＰＥが生じるまで３７℃、５％ＣＯ２でインキュベーションする。上清を前述のように収集して処理する。
【０１３５】
ペプチド合成：ペプチドを、固相法を用いるＭｉｍｏｔｏｐｅｓ（オーストラリア）またはＰｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ｉｎｃ（米国）によって合成する。例示的なペプチドの配列を表１〜８に示す。最初に、ペプチドをライブラリーとして少量で合成し、顕著な抗ウイルス活性を有するライブラリーからの特定ペプチドを大スケールで合成して、ウイルスの様々な亜型に対するＩＣ５０値を測定する。ペプチドをＨＰＬＣによって精製し（純度９５％超）、配列をマススペクトロメーター分析によって確認する。配列「ＲＲＫＫ」（または「ｒｒｋｋ」）をすべてのペプチドのＮ末端に任意に加えて溶解性を増加させる。すべてのペプチドは配列に応じて、デキストロ−アミノ酸またはレボ−アミノ酸を用いて合成される。
【０１３６】
プラーク減少アッセイ：プラーク減少アッセイを実施して、選択されたペプチドの抗ウイルス活性を測定する。様々な濃度でペプチドおよびインフルエンザウイルス（約８０〜１２０ＰＦＵ）を前混合し、４℃または氷上で９０分間インキュベーションする。６ウェルプレートに播種したＭＤＣＫ細胞の密集単層（細胞６００，０００個／ウェル）を、１×ＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）を用いて２回洗浄し、ペプチド−ウイルス混合物を加えて５％ＣＯ２中にて３７℃または３３℃で１時間吸収させる。未結合ウイルスをＰＢＳによる洗浄で除去し、各ウェルに２μｇ／ｍＬトシルスルホニルフェニルアラニルクロロメチルケトン（ＴＰＣＫ）処理トリプシン（シグマ、セントルイス、ミズーリ州）添加した１×ＤＭＥＭ中の２ｍＬの０．６％低融点アガロースを重層する。プレートを５％ＣＯ２中にて、３７℃または３５℃で４１〜６８時間または透明プラークが出現するまでインキュベーションする。プラークを０．１％クリスタルバイオレット染料（メルク、ドイツ）を用いて染色し計数する。
【０１３７】
アラニンスキャニング：精製したウイルスをブラッドフォードアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、米国）によって定量する。１５μｇ／ウェルの精製ウイルスを、９６ウェルＥＬＩＳＡマイクロプレート（エッペンドルフ、米国）に４℃で一昼夜コーティングする。コーティングしたウェルを１×ＰＢＳＴ（Ｔｗｅｅｎ−２０を加えたリン酸緩衝化生理食塩水）で２回洗浄し、１×ＰＢＳ中の５ｍｇ／ｍＬのＢＳＡによって室温で１時間ブロッキングする。コーティングしたウェルを１％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）／１×ＰＢＳＴ中の１５０μＭビオチン共役体化ペプチドと室温で２時間インキュベーションする。１×ＰＢＳＴを用いる３回の洗浄後、ビオチン共役体化ペプチドを抗ビオチン第一ウサギ抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、１：２５０、マサチューセッツ州）およびＨＲＰ共役体化抗ウサギ第二抗体（Ａｂｃａｍ、１：５０００、マサチューセッツ州）を用いて検出する。吸光度を４１５ｎｍでバイオラドｉＭａｒｋマイクロプレートリーダーによって読み取る。
【０１３８】
赤血球凝集アッセイ：ニワトリ赤血球（ｃＲＢＣ）の赤血球凝集を、Ｊｏｎｅｓら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，８０（２４）：１１９６０−１１９６７（２００６）で説明されるようにＶ底９６ウェルマイクロタイタープレートで実施する。
【０１３９】
ブラッドフォードアッセイ：タンパク質定量を、製造業者の取扱説明書に従ってクーマシー（ブラッドフォード）タンパク質アッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、米国）によって実施する。
【０１４０】
検査施設：Ｈ５Ｎ１ウイルスを用いるすべての作業は、マレーシアのマレーシアプトラ大学で当局によりそのような使用に関して承認された、バイオセイフティーレベル３＋認定封じ込め実験室で実施する。研究者は適切な防護装置および着衣を装着するように要求される。
【０１４１】
ＩＣ５０算出：すべての実験は三重測定で実施され、データは少なくとも３回の独立した測定の結果を示す。ＩＣ５０値はＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）ソフトウェアによって分析される用量−反応曲線に基づいて計算する。
【０１４２】
細胞毒性アッセイ：ＭＤＣＫ細胞またはＡ５４９細胞（細胞約５０００個／ウェル）を９６ウェルプレートで一昼夜増殖させる。培地を連続希釈したペプチドによって交換し、再度２４／４８時間インキュベーションする。培養培地を除去し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ［３−（４，５−ジメチルチオゾール−２−イル）−３，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド］（Ｐｒｏｍｅｇａ、ウィスコンシン州、米国）を２０μＬ加えて３７℃で２時間インキュベーションする。光学密度をマイクロプレートリーダー（ｉＭＡＲＫ、バイオラド、米国）で４９０ｎｍにて測定する。
【０１４３】
溶血アッセイ：新たに得たヒト赤血球を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）緩衝液を用いて、５００×ｇ、１０分間の遠心分離によって３回洗浄する。ペプチドをＶ底マイクロタイタープレート中で洗浄ＲＢＣとともに１時間インキュベーションする。１％トライトンＸ−１００を陽性コントロールとして使用する。インキュベーション後に、プレートを５００×ｇで５分間遠心分離して、上清を新たな透明底９６ウェルプレートに移し、吸光度をｉＭａｒｋマイクロプレートリーダー（バイオラド、米国）によって５４５ｎｍで測定する。
【０１４４】
例２
ＦＰＴのインビトロでの抗ウイルス活性：この例では、インフルエンザウイルスの様々な亜型に対するＣ−Ｐ１ペプチドの誘導体の抗ウイルス活性を試験する。Ｃ−Ｐ１のレトロインベルソ型、すなわちＰ１−ＲＩ−ＣＤをペプチドプロテアーゼ耐性にするために合成する。Ｐ１−ＲＩ−ＣＤにアラニンスキャニングを実施して、ペプチドの抗ウイルス活性に必須でない１つ以上のアミノ酸を特定する。Ｐ１−ＲＩ−ＣＤから、前述のアラニンスキャニングによって抗ウイルス活性における非必須アミノ酸の１つとして早期に特定される単一位置で置換されたアミノ酸を有する、一連のペプチドを合成する。Ｐ１−ＲＩ−ＣＤの上記位置で特定された非必須アミノ酸を、１つずつ、残りの１９種のタンパク質原性アミノ酸で置換し、それらの活性をプラーク減少アッセイによって評価する。表１〜８は評価されたペプチドの配列を示す。ＰＳＰ  ＩＩ  Ａライブラリーから開始し、アルギニンおよびリジンアミノ酸を含むテトラペプチド溶解タグをデキストロ型またはレボ型でいずれかのアミノ末端に加える。プラーク減少アッセイを材料および方法のセクションで前述されたように実施する。簡単に説明すると、ウイルスをＰＢＳ単独（モック）または様々な濃度のＦＰＴと共に４℃で１時間処理し、ＭＤＣＫ細胞の密集単層に吸収のために１時間加える。吸収後、単層をアガロースで覆い、プラークが出現するまでさらにインキュベーションする。２４〜７２時間後（種々のウイルス亜型のプラーク形成能力に依存する）にプラークの数を数え、Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いてＩＣ５０値を計算する。図１Ａ〜１Ｆおよび図２〜４に示すように、ＦＰＴはインフルエンザウイルスの様々な亜型の増殖を用量依存的に阻害した。
【０１４５】
例３
ＦＰＴのインビボでの抗ウイルス活性：この例では、ＦＰＴの１つ、すなわちＰＳＰ  ＩＶ  Ａ−１７の抗ウイルス活性を、６週齢ＢＡＬＢ／ｃ雌マウス中のマウスに適応したインフルエンザＡ  Ｈ１Ｎ１ウイルスに対して評価する。
【０１４６】
最初に、マウスをケタミンキシラジン溶液によって麻酔にかけ、異なるＰＦＵの上記ウイルスを投与し、臨床症状を数日間観察して最適な負荷用量を選択する。最適な負荷用量が選択されたら、マウスに最適用量のウイルス（Ｈ１Ｎ１  Ａ／ＰＲ／８−ＭＣ／１９３４）を鼻腔内で負荷し、続いて３．５ｍｇ／ｋｇ／日のＰＳＰ  ＩＶ  Ａ１７ペプチドを７日間、静脈内投与する。最初の用量は感染の１時間前に投与し、その後の用量を２４時間毎に投与する。予後診断および疾患進行を、体重、逆立った毛、弓なりな姿勢、体の震え、麻痺およびほとんどない動きに基づいて測定する。マウスを感染の日から連続２１日間毎日モニタリングする。マウスの死亡を、２０％を超える体重喪失および重度の逆立った毛によって決定する。図５で認められるように、ＰＳＰ  ＩＶ  Ａ１７はインフルエンザ処理されたマウスの罹患を完全に阻害した。
【０１４７】
例４
赤血球凝集活性に対する抗ウイルスペプチドの効果：この例では、抗ウイルスペプチドを、インフルエンザウイルスの赤血球凝集を阻害するその能力について試験して、ペプチドがウイルスのＨＡタンパク質に結合することによってウイルス複製を阻害するかどうか推測する。実験を例１で説明されるように実施する。簡単に説明すると、１０μＭのペプチドを４ＨＡＵ／５０μＬのＲＰ／８ウイルスと混合し、ＨＡ活性をニワトリ赤血球細胞で測定する。赤血球凝集活性の阻害はペプチド処理で認められなかった。
【０１４８】
例５
ヒト肝細胞に対するＦＰＴの細胞毒性効果：細胞培養条件下で証明された分化した肝細胞表現型を有する細胞であるヒト肝細胞ＨｅｐａＲＧ（登録商標）に対する抗ウイルスペプチドの細胞毒性効果を、ＡｖａｎｔｉＣｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｔｄ、英国によって分析する。簡単に説明すると、試験材料の細胞毒性を、２４時間負荷の間のサイトゾル内容物、特にサイトゾルデヒドロゲナーゼの放出として測定する。培地中への細胞内容物放出を、高感度蛍光ベースアッセイによって測定する。アッセイの性能を陰性コントロール（試験材料溶媒）および既知の細胞毒性剤での陽性コントロールの使用によってモニタリングした。負荷期間の最後で、アッセイ読み取りを標準的な方法論によって得、結果を、完全に溶解されたデタージェント処理コントロール（１００％溶解）により得られた測定と試験測定を比較することによって、細胞溶解割合（溶解％）として計算する。
【０１４９】
例６
電子顕微鏡分析：ＰＳＰ  ＩＶ  Ａ１２ペプチド処理または未処理のウイルスＨ１Ｎ１（Ａ／ＰＲ／８／１９３４）をカーボンコーティンググリッド（Ｆｏｒｍｖａｒ  ｃａｒｂｏｎ  ｆｉｌｍｓ  ｏｎ  Ｃｏｐｐｅｒ；Ａｇａｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，英国）に結合させ、３％酢酸ウラニルでネガティブ染色し、透過型電子顕微鏡（ＬＥＯ  ９１２  Ａｄｖａｎｃｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｆｉｌｔｅｒ）を用いて分析する。
【０１５０】
例７
ＭＤＣＫ細胞またはＡ５４９細胞に対する抗ウイルスペプチドの細胞毒性効果：例１で説明されたように評価される抗ウイルスペプチドの細胞毒性効果を、図７Ａおよび７Ｂに示す。簡単に説明すると、ＭＤＣＫ細胞／Ａ５４９細胞を、０μＭ（モック）または増加する濃度（すなわち、０．１μＭ、０．３μＭ、１μＭ、３μＭ、１０μＭ、３０μＭおよび１００μＭ）のＰＳＰ  Ｖ  Ａ１９およびＰＳＰ  ＶＩ  Ａ１細胞のいずれかで処理し、細胞死を、製造業者の説明に従いＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ細胞増殖アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、米国）による細胞毒性アッセイによって、感染後４８時間まで測定する。結果をモック処理細胞に対し基準化する。結果で示されるように、ＰＳＰ  Ｖ  Ａ１９およびＰＳＰ  ＶＩ  Ａ１は、ＭＤＣＫ細胞／Ａ５４９細胞に対して３０μＭを超えるＣＥ５０（細胞毒性効果５０）値を有し、有意な毒性を示さなかった。
【０１５１】
例８
ＦＰＴの溶血活性：例１で説明されるように評価した抗ウイルスペプチドの溶血効果を図８に示す。簡単に説明すると、異なる濃度のペプチドをヒト赤血球とともにインキュベーションし、溶血を、バイオラドｉＭａｒｋマイクロプレートリーダーを用いて５４５ｎｍで、上清中の放出されたヘモグロビンの吸光度によってインキュベーションの１時間後に測定する。
【０１５２】
参考
Ｂｅａｒｅ  ＡＳ，Ｗ．Ｒ．（１９９１）．Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｖｉａｎ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ（ヒトにおける鳥インフルエンザウイルスの複製）．Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １１９，  ３７−４２．
Ｅｃｈｅｖａｒｒｉａ−Ｚｕｎｏ，Ｓ．，Ｍｅｊｉａ−Ａｒａｎｇｕｒｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｍａｒ−Ｏｂｅｓｏ，Ａ．Ｊ．，Ｇｒａｊａｌｅｓ−Ｍｕｎｉｚ，Ｃ．，Ｒｏｂｌｅｓ−Ｐｅｒｅｚ，Ｅ．，Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｌｅｏｎ，Ｍ．，Ｏｒｔｅｇａ−Ａｌｖａｒｅｚ，Ｍ．Ｃ．，Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｂｏｎｉｌｌａ，Ｃ．，Ｒａｓｃｏｎ−Ｐａｃｈｅｃｏ，Ｒ．Ａ．，ａｎｄ  Ｂｏｒｊａ−Ａｂｕｒｔｏ，Ｖ．Ｈ．（２００９）．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅａｔｈ  ｆｒｏｍ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ａ  Ｈ１Ｎ１  ｖｉｒｕｓ  ｉｎ  Ｍｅｘｉｃｏ：  ａ  ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ（メキシコにおけるインフルエンザＡ  Ｈ１Ｎ１ウイルスからの感染および死：回顧的分析）．Ｌａｎｃｅｔ  ３７４（９７０７），２０７２−９．
Ｇａｏ，Ｒ．，Ｃａｏ，Ｂ．，Ｈｕ，Ｙ．，Ｆｅｎｇ，Ｚ．，Ｗａｎｇ，Ｄ．，Ｈｕ，Ｗ．，Ｃｈｅｎ，Ｊ．，Ｊｉｅ，Ｚ．，Ｑｉｕ，Ｈ．，Ｘｕ，Ｋ．，Ｘｕ，Ｘ．，Ｌｕ，Ｈ．，Ｚｈｕ，Ｗ．，Ｇａｏ，Ｚ．，Ｘｉａｎｇ，Ｎ．，Ｓｈｅｎ，Ｙ．，Ｈｅ，Ｚ．，Ｇｕ，Ｙ．，Ｚｈａｎｇ，Ｚ．，Ｙａｎｇ，Ｙ．，Ｚｈａｏ，Ｘ．，Ｚｈｏｕ，Ｌ．，Ｌｉ，Ｘ．，Ｚｏｕ，Ｓ．，Ｚｈａｎｇ，Ｙ．，Ｙａｎｇ，Ｌ．，Ｇｕｏ，Ｊ．，Ｄｏｎｇ，Ｊ．，Ｌｉ，Ｑ．，Ｄｏｎｇ，Ｌ．，Ｚｈｕ，Ｙ．，Ｂａｉ，Ｔ．，Ｗａｎｇ，Ｓ．，Ｈａｏ，Ｐ．，Ｙａｎｇ，Ｗ．，Ｈａｎ，Ｊ．，Ｙｕ，Ｈ．，Ｌｉ，Ｄ．，Ｇａｏ，Ｇ．Ｆ．，Ｗｕ，Ｇ．，Ｗａｎｇ，Ｙ．，Ｙｕａｎ，Ｚ．，ａｎｄ  Ｓｈｕ，Ｙ．（２０１３）．Ｈｕｍａｎ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ａｖｉａｎ−Ｏｒｉｇｉｎ  Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ａ  （Ｈ７Ｎ９）  Ｖｉｒｕｓ（新規鳥由来インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）によるヒト感染）．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．
Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｒｅｙ，Ｅ．，Ｖａｒｅｌａ，Ｎ．，Ｓｈｅｉｂａｎｉｅ，Ａ．Ｆ．，Ｃｈｏｒｎｙ，Ａ．，Ｇａｎｅａ，Ｄ．，ａｎｄ  Ｄｅｌｇａｄｏ，Ｍ．（２００６）．Ｃｏｒｔｉｓｔａｔｉｎ，ａｎ  ａｎｔｉｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ（炎症性大腸疾患における治療作用を有する抗炎症性ペプチドであるコルチスタチン）．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １０３（１１），４２２８−３３．
Ｇｏｒｄｏｎ，Ｙ．Ｊ．，Ｒｏｍａｎｏｗｓｋｉ，Ｅ．Ｇ．，ａｎｄ  ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ，Ａ．Ｍ．（２００５）．Ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｓ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ  ｄｒｕｇｓ（抗微生物ペプチドのレビューおよび抗感染剤としてのそれらの治療的可能性）．Ｃｕｒｒ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ３０（７），５０５−１５．
Ｈａｍａ，Ｒ．，Ｊｏｎｅｓ，Ｍ．，Ｏｋｕｓｈｉｍａ，Ｈ．，Ｋｉｔａｏ，Ｍ．，Ｎｏｄａ，Ｎ．，Ｈａｙａｓｈｉ，Ｋ．，ａｎｄ  Ｓａｋａｇｕｃｈｉ，Ｋ．（２０１１）．Ｏｓｅｌｔａｍｉｖｉｒ  ａｎｄ  ｅａｒｌｙ  ｄｅｔｅｒｉｏｒａｔｉｏｎ  ｌｅａｄｉｎｇ  ｔｏ  ｄｅａｔｈ：  ａ  ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｓｔｕｄｙ  ｆｏｒ  ２００９Ａ／Ｈ１Ｎ１  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ（オセルタミビルおよび死をもたらす初期悪化：２００９Ａ／Ｈ１Ｎ１インフルエンザに関する死亡割合試験）．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｒｉｓｋ  Ｓａｆ  Ｍｅｄ  ２３（４），２０１−１５．
Ｈｕｍｍｅｌ，Ｇ．，Ｒｅｉｎｅｋｅ，Ｕ．，ａｎｄ  Ｒｅｉｍｅｒ，Ｕ．（２００６）．Ｔｒａｎｓｌａｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｉｎｔｏ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（小分子へのペプチドの移行）．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｓｙｓｔ  ２（１０），４９９−５０８．
Ｊａｎｉｎ，Ｙ．Ｌ．（２００３）．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｗｉｔｈ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｕｓｅ  ｏｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ（抗癌の利用または可能性を有するペプチド）．Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ  ２５（１），１−４０．
Ｊｏｎｅｓ，Ｊ．Ｃ．，Ｔｕｒｐｉｎ，Ｅ．Ａ．，Ｂｕｌｔｍａｎｎ，Ｈ．，Ｂｒａｎｄｔ，Ｃ．Ｒ．，ａｎｄ  Ｓｃｈｕｌｔｚ−Ｃｈｅｒｒｙ，Ｓ．（２００６）．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｔｈａｔ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｖｉｒａｌ  ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｔｏ  ｃｅｌｌｓ（細胞へのウイルス付着を標的にする新規抗ウイルスペプチドによるインフルエンザウイルス感染の阻害）．Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ８０（２４），１１９６０−７．
Ｋｉｌｂｏｕｒｎｅ，Ｅ．Ｄ．（２００６）．Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｐａｎｄｅｍｉｃｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ２０ｔｈ  ｃｅｎｔｕｒｙ（２０世紀のインフルエンザパンデミック）．Ｅｍｅｒｇ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  １２（１），９−１４．
Ｋｉｍ，Ｃ．Ｕ．，Ｌｅｗ，Ｗ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｍ．Ａ．，Ｌｉｕ，Ｈ．，Ｚｈａｎｇ，Ｌ．，Ｓｗａｍｉｎａｔｈａｎ，Ｓ．，Ｂｉｓｃｈｏｆｂｅｒｇｅｒ，Ｎ．，Ｃｈｅｎ，Ｍ．Ｓ．，Ｍｅｎｄｅｌ，Ｄ．Ｂ．，Ｔａｉ，Ｃ．Ｙ．，Ｌａｖｅｒ，Ｗ．Ｇ．，ａｎｄ  Ｓｔｅｖｅｎｓ，Ｒ．Ｃ．（１９９７）．Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｐｏｓｓｅｓｓｉｎｇ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｎｚｙｍｅ  ａｃｔｉｖｅ  ｓｉｔｅ：  ｄｅｓｉｇｎ，ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ａｎｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃａｒｂｏｃｙｃｌｉｃ    ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｗｉｔｈ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ａｃｔｉｖｉｔｙ（酵素活性部位における新規疎水性相互作用を有するインフルエンザノイラミニダーゼ阻害剤：強力な抗インフルエンザ活性を有する炭素環シアル酸アナログの設計、合成、および構造分析）．Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １１９（４），６８１−９０．
Ｋｏｌａ，Ｉ．，ａｎｄ  Ｌａｎｄｉｓ，Ｊ．（２００４）．Ｃａｎ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｉｎｄｕｓｔｒｙ  ｒｅｄｕｃｅ  ａｔｔｒｉｔｉｏｎ  ｒａｔｅｓ？（製薬工業は損耗率を低下することができるか？）  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  ３（８），７１１−５．
Ｋｏｌｏｃｏｕｒｉｓ，Ｎ．，Ｚｏｉｄｉｓ，Ｇ．，Ｆｏｓｃｏｌｏｓ，Ｇ．Ｂ．，Ｆｙｔａｓ，Ｇ．，Ｐｒａｔｈａｌｉｎｇｈａｍ，Ｓ．Ｒ．，Ｋｅｌｌｙ，Ｊ．Ｍ．，Ｎａｅｓｅｎｓ，Ｌ．，ａｎｄ  Ｄｅ  Ｃｌｅｒｃｑ，Ｅ．（２００７）．Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｄａｍａｎｔａｎｅ  ｓｐｉｒｏ  ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ（生物活性アダマンタンスピロ複素環の設計および合成）．Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ  １７（１５），４３５８−６２．
Ｌａｄｎｅｒ，Ｒ．Ｃ．，Ｓａｔｏ，Ａ．Ｋ．，Ｇｏｒｚｅｌａｎｙ，Ｊ．，ａｎｄ  ｄｅ  Ｓｏｕｚａ，Ｍ．（２００４）．Ｐｈａｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｓ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓ  ｔｏ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（抗体に代わる治療剤としてのファージディスプレイ由来ペプチド）．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ  ９（１２），５２５−９．
Ｌｏｆｆｅｔ，Ａ．（２００２）．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｓ  ｄｒｕｇｓ：  ｉｓ  ｔｈｅｒｅ  ａ  ｍａｒｋｅｔ？（薬剤としてのペプチド：市場はあるか？）  Ｊ  Ｐｅｐｔ  Ｓｃｉ  ８（１），１−７．
ＭｃＧｒｅｇｏｒ，Ｄ．Ｐ．（２００８）．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｉｎｇ  ａｎｄ  ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  ｎｏｖｅｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（新規ペプチド治療剤の発見および改良）．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ８（５），６１６−９．
ＭｃＫｉｍｍ−Ｂｒｅｓｃｈｋｉｎ，Ｊ．Ｌ．（２０００）．Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｏｆ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ｔｏ  ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ−−ａ  ｒｅｖｉｅｗ（ノイラミニダーゼ阻害剤に対するインフルエンザウイルスの耐性−レビュー）．Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ  ４７（１），１−１７．
Ｐｅｒｅｚ，Ｊ．Ｔ．，Ｖａｒｂｌｅ，Ａ．，Ｓａｃｈｉｄａｎａｎｄａｍ，Ｒ．，Ｚｌａｔｅｖ，Ｉ．，Ｍａｎｏｈａｒａｎ，Ｍ．，Ｇａｒｃｉａ−Ｓａｓｔｒｅ，Ａ．，ａｎｄ  ｔｅｎＯｅｖｅｒ，Ｂ．Ｒ．（２０１０）．Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ａ  ｖｉｒｕｓ−ｇｅｎｅｒａｔｅｄ  ｓｍａｌｌ  ＲＮＡｓ  ｒｅｇｕｌａｔｅ  ｔｈｅ  ｓｗｉｔｃｈ  ｆｒｏｍ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｔｏ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ（インフルエンザＡウイルス産生小ＲＮＡは転写から複製への切り替えを制御する）．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １０７（２５），１１５２５−３０．
Ｐｅｔｅｒ  Ｆ  Ｗｒｉｇｈｔ，Ｇ．Ｎ．，Ｙｏｓｈｉｈｉｒｏ  Ｋａｗａｏｋａ  （２００７）．Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｕｓｅｓ（オルソミキソウイルス）．Ｉｎ  “Ｆｉｅｌｄｓ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ”（Ｐ．Ｍ．Ｈ．Ｄａｖｉｄ  Ｍ  Ｋｎｉｐｅ，Ｅｄ．），Ｖｏｌ．２，ｐｐ．１６９２．２  ｖｏｌｓ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ．
Ｐｅｔｅｒ  Ｐａｌｅｓｅ，Ｍ．Ｌ．Ｓ．（２００７）．Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ：  Ｔｈｅ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ（オルソミキソウイルス科：ウイルスおよびそれらの複製）．Ｉｎ  “Ｆｉｅｌｄｓ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ”  （Ｐ．Ｍ．Ｈ．Ｄａｖｉｄ  Ｍ  Ｋｎｉｐｅ，Ｅｄ．），Ｖｏｌ．２，ｐｐ．１６４７．２  ｖｏｌｓ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ．
Ｓｔｉｖｅｒ，Ｇ．（２００３）．Ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｗｉｔｈ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｄｒｕｇｓ（抗ウイルス剤によるインフルエンザの治療）．ＣＭＡＪ  １６８（１），４９−５６．
Ｕｎｇｃｈｕｓａｋ，Ｋ．，Ａｕｅｗａｒａｋｕｌ，Ｐ．，Ｄｏｗｅｌｌ，Ｓ．Ｆ．，Ｋｉｔｐｈａｔｉ，Ｒ．，Ａｕｗａｎｉｔ，Ｗ．，Ｐｕｔｈａｖａｔｈａｎａ，Ｐ．，Ｕｉｐｒａｓｅｒｔｋｕｌ，Ｍ．，Ｂｏｏｎｎａｋ，Ｋ．，Ｐｉｔｔａｙａｗｏｎｇａｎｏｎ，Ｃ．，Ｃｏｘ，Ｎ．Ｊ．，Ｚａｋｉ，Ｓ．Ｒ．，Ｔｈａｗａｔｓｕｐｈａ，Ｐ．，Ｃｈｉｔｔａｇａｎｐｉｔｃｈ，Ｍ．，Ｋｈｏｎｔｏｎｇ，Ｒ．，Ｓｉｍｍｅｒｍａｎ，Ｊ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｃｈｕｎｓｕｔｔｈｉｗａｔ，Ｓ．（２００５）．Ｐｒｏｂａｂｌｅ  ｐｅｒｓｏｎ−ｔｏ−ｐｅｒｓｏｎ  ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｖｉａｎ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ａ  （Ｈ５Ｎ１）（鳥インフルエンザＡ（Ｈ５Ｎ１）のあり得るヒトからヒトへの伝染）．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５２（４），３３３−４０．
Ｖｌｉｅｇｈｅ，Ｐ．，Ｌｉｓｏｗｓｋｉ，Ｖ．，Ｍａｒｔｉｎｅｚ，Ｊ．，ａｎｄ  Ｋｈｒｅｓｔｃｈａｔｉｓｋｙ，Ｍ．（２０１０）．Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ：  ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｍａｒｋｅｔ（合成治療用ペプチド：科学および市場）．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ  １５（１−２），４０−５６．
ｖｏｎ  Ｉｔｚｓｔｅｉｎ，Ｍ．，Ｗｕ，Ｗ．Ｙ．，Ｋｏｋ，Ｇ．Ｂ．，Ｐｅｇｇ，Ｍ．Ｓ．，Ｄｙａｓｏｎ，Ｊ．Ｃ．，Ｊｉｎ，Ｂ．，Ｖａｎ  Ｐｈａｎ，Ｔ．，Ｓｍｙｔｈｅ，Ｍ．Ｌ．，Ｗｈｉｔｅ，Ｈ．Ｆ．，Ｏｌｉｖｅｒ，Ｓ．Ｗ．，ａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）．Ｒａｔｉｏｎａｌ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔ  ｓｉａｌｉｄａｓｅ−ｂａｓｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖｉｒｕｓ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ（インフルエンザウイルス複製のシアリダーゼをベースとした強力な阻害剤の合理的設計）．Ｎａｔｕｒｅ  ３６３（６４２８），４１８−２３．
Ｗｅｂｓｔｅｒ，Ｒ．Ｇ．，ａｎｄ  Ｇｏｖｏｒｋｏｖａ，Ｅ．Ａ．（２００６）．Ｈ５Ｎ１  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ−−ｃｏｎｔｉｎｕｉｎｇ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｐｒｅａｄ（Ｈ５Ｎ１インフルエンザ−継続する進化および拡散）．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５５（２１），２１７４−７．
Ｗｈｉｔｌｅｙ，Ｒ．Ｊ．，Ｂｏｕｃｈｅｒ，Ｃ．Ａ．，Ｌｉｎａ，Ｂ．，Ｎｇｕｙｅｎ−Ｖａｎ−Ｔａｍ，Ｊ．Ｓ．，Ｏｓｔｅｒｈａｕｓ，Ａ．，Ｓｃｈｕｔｔｅｎ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｍｏｎｔｏ，Ａ．Ｓ．（２０１３）．Ｇｌｏｂａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  Ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ（ノイラミニダーゼ阻害剤に対する耐性の世界的評価）：  ２００８−２０１１．Ｔｈｅ  Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｔｕｄｙ  （ＩＲＩＳ）．Ｃｌｉｎ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ．
Ｙａｎｇ，Ｙ．，Ｈａｌｌｏｒａｎ，Ｍ．Ｅ．，Ｓｕｇｉｍｏｔｏ，Ｊ．Ｄ．，ａｎｄ  Ｌｏｎｇｉｎｉ，Ｉ．Ｍ．，Ｊｒ．（２００７）．Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｈｕｍａｎ−ｔｏ−ｈｕｍａｎ  ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｖｉａｎ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ａ  （Ｈ５Ｎ１）（鳥インフルエンザＡ（Ｈ５Ｎ１）のヒトからヒトへの伝染の検出）．Ｅｍｅｒｇ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  １３（９），１３４８−５３．
Ｙｕｎ，Ｎ．Ｅ．，Ｌｉｎｄｅ，Ｎ．Ｓ．，Ｚａｃｋｓ，Ｍ．Ａ．，Ｂａｒｒ，Ｉ．Ｇ．，Ｈｕｒｔ，Ａ．Ｃ．，Ｓｍｉｔｈ，Ｊ．Ｎ．，Ｄｚｉｕｂａ，Ｎ．，Ｈｏｌｂｒｏｏｋ，Ｍ．Ｒ．，Ｚｈａｎｇ，Ｌ．，Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ，Ｊ．Ｍ．，Ａｒｎｏｌｄ，Ｃ．Ｓ．，ａｎｄ  Ｐａｅｓｓｌｅｒ，Ｓ．（２００８）．Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ  ｐｅｒａｍｉｖｉｒ  ｍｉｔｉｇａｔｅｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｆｅｒｒｅｔｓ  ａｎｄ  ｍｉｃｅ  ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｈｉｇｈｌｙ  ｖｉｒｕｌｅｎｔ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖｉｒｕｓ，Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／０４  （Ｈ５Ｎ１）（注射可能なペラミビルは高病原性インフルエンザウイルスＡ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／０４に感染したフェレットおよびマウスにおける疾患を緩和し生存を促進する）．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ３７４（１），１９８−２０９．
Ｙｕｓｏｆｆ，Ｋ．，Ｔａｎ，Ｗ．Ｓ．，Ｌａｕ，Ｃ．Ｈ．，Ｎｇ，Ｂ．Ｋ．，ａｎｄ  Ｉｂｒａｈｉｍ，Ａ．Ｌ．（１９９６）．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ−ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ  ｇｅｎｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｖｉｒｕｓ  ｏｒａｌ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｓｔｒａｉｎ  Ｖ４（ＵＰＭ）（ニューキャッスル病ウイルス経口ワクチン株Ｖ４（ＵＰＭ）の赤血球凝集素−ノイラミニダーゼ遺伝子の配列）．Ａｖｉａｎ  Ｐａｔｈｏｌ  ２５（４），８３７−４４．
Ｚｈｉｒｎｏｖ，Ｏ．Ｐ．，ａｎｄ  Ｋｌｅｎｋ，Ｈ．Ｄ．（２０１１）．［Ａｐｒｏｔｉｎｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐａｎｄｅｍｉｃ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖｉｒｕｓ  Ａ（Ｈ１Ｎ１）  ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ（パンデミックインフルエンザウイルスＡ（Ｈ１Ｎ１）再生産のアプロチニン誘発性阻害）］．Ｖｏｐｒ  Ｖｉｒｕｓｏｌ  ５６（３），２４−８．
【図１Ａ】
2019506840.tif 000020
【図１Ｂ】
2019506840.tif 000021
【図１Ｃ】
2019506840.tif 000022
【図１Ｄ】
2019506840.tif 000023
【図１Ｅ】
2019506840.tif 000024
【図１Ｆ】
2019506840.tif 000025
【図２】
2019506840.tif 000026
【図３】
2019506840.tif 000027
【図４】
2019506840.tif 000028
【図５】
2019506840.tif 000029
【図６Ａ】
2019506840.tif 000030
【図６Ｂ】
2019506840.tif 000031
【図７Ａ】
2019506840.tif 000032
【図７Ｂ】
2019506840.tif 000033
【図８】
2019506840.tif 000034
【図９】
2019506840.tif 000035
【配列表】
2019506840000001.app
【国際調査報告】
2019506840.tif 000036
2019506840.tif 000037
2019506840.tif 000038