(57)【要約】  ＮＭＤＡ受容体の活性を調節する効力が増強された化合物が開示される。そのような化合物は、うつ病および関連する障害などの病態の治療に使用され得る。経口投与可能な製剤および静脈内製剤を含む他の薬学的に許容される送達形態の化合物も開示される。
2019516735.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2019516735.tif 000020
（Ｉ）
（式中、Ｒｂは、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノおよびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲンおよびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択され、および
Ｒ２は、水素、ハロゲンおよびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択される）
を有する化合物またはその立体異性体、Ｎ−オキシドおよび／もしくは薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒｂは、水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１は、水素である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２は、水素である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
式：
【化２】
2019516735.tif 000021
を有する化合物またはその立体異性体、Ｎ−オキシドおよび／もしくは薬学的に許容される塩。
【請求項６】
式：
【化３】
2019516735.tif 000022
を有する、請求項５に記載の化合物またはそのＮ−オキシドおよび／もしくは薬学的に許容される塩。
【請求項７】
式：
【化４】
2019516735.tif 000023
を有する、請求項５に記載の化合物またはそのＮ−オキシドもしくは薬学的に許容される塩。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項９】
経口投与に適している、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
静脈内、鼻腔内、皮下および／または舌下投与に適している、請求項８に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年５月１９日に出願された米国特許仮出願第６２／３３８，７６７号明細書の優先権および利益を主張するものであり、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
Ｎ−メチル−ｄ−アスパラギン酸（「ＮＭＤＡ」）受容体は、特に興奮性アミノ酸のグルタミン酸およびグリシンならびに合成化合物ＮＭＤＡに応答する後シナプスイオンチャネル型受容体である。ＮＭＤＡ受容体は、受容体関連チャネルを介した二価および一価イオンの両方の後シナプス神経細胞への流入を制御する（Ｆｏｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  １９８７，３２９：３９５−３９６；Ｍａｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．１９９０，１１：２５４−２６０）。ＮＭＤＡ受容体は、発生の過程でニューロン構造およびシナプス接続の指定に関与すると考えられており、経験依存的シナプス修飾に関与している可能性がある。さらに、ＮＭＤＡ受容体は、長期増強および中枢神経系障害にも関与すると考えられている。
【０００３】
ＮＭＤＡ受容体は、記憶獲得、記憶保持および学習などの多くの高次認知機能の根底にあるシナプス可塑性、ならびに特定の認知経路および疼痛の知覚において大きい役割を果たしている（Ｃｏｌｌｉｎｇｒｉｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ＮＭＤＡ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９４）。さらに、ＮＭＤＡ受容体の特定の特性から、それが意識自体の根底にある脳の情報処理に関与している可能性が示唆される。
【０００４】
ＮＭＤＡ受容体は、多岐にわたるＣＮＳ障害に関与していると思われることから、特に注目を集めている。例えば、脳卒中または外傷によって生じる脳虚血状態中、損傷を受けたかまたは酸欠状態になったニューロンから過剰量の興奮性アミノ酸のグルタミン酸が放出される。この過剰なグルタミン酸は、ＮＭＤＡ受容体と結合してそのリガンド依存性イオンチャネルを開き、次いでカルシウム流入により、細胞内カルシウムの濃度が上昇して生化学的カスケードを活性化し、タンパク質変性および細胞死をもたらす。この現象は、興奮毒性として知られ、低血糖および心停止から癲癇に及ぶ他の障害に関連する神経学的損傷に関与するとも考えられている。さらに、ハンチントン病、パーキンソン病ならびにジスキネジーおよびＬ−ドーパ誘導性ジスキネジーなどのパーキンソン病関連病態、ならびにアルツハイマー病の慢性神経変性にも同様に関与することを示す予備的報告がある。ＮＭＤＡ受容体の活性化が脳卒中後の痙攣に関与することが示されており、また癲癇の特定のモデルでは、発作の発生にＮＭＤＡ受容体の活性化が必要であることが示されている。また、動物用麻酔薬のＰＣＰ（フェンシクリジン）によりＮＭＤＡ受容体Ｃａ＋＋チャネルを遮断すると、統合失調症に類似した精神病的状態をヒトに引き起こすことから、ＮＭＤＡ受容体の神経精神医学的関与が認められている（Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋ．ａｎｄ  Ｊｏｎｅｓ，Ｓ．，１９９０で概説されている）。さらに、ＮＭＤＡ受容体は、特定の種類の空間学習にも関与すると考えられている。
【０００５】
ＮＭＤＡ受容体は、後シナプス膜に埋め込まれている複数のタンパク質からなると考えられている。これまでに発見されたサブユニットのうち、最初の２種類は、アロステリック結合部位の大部分を含むと考えられる大きい細胞外領域、Ｃａ＋＋透過性の小孔またはチャネルを形成するようにループを形成しかつ折り畳まれた複数の膜貫通領域およびカルボキシル末端領域を形成している。細胞外表面に存在するタンパク質のドメイン（アロステリック部位）に様々なリガンドが結合することにより、チャネルの開閉が調節される。このリガンドの結合は、タンパク質の構造全体のコンホメーション変化に影響を及ぼすと考えられており、これは、最終的にチャネルが開くか、部分的に開くか、部分的に閉じるか、または閉じることに反映される。
【０００６】
ＮＭＤＡ受容体化合物は、アロステリック部位を介してＮＭＤＡ受容体に二重の（アゴニスト／アンタゴニスト）作用を及ぼし得る。これらの化合物は、通常、「機能的部分アゴニスト」と呼ばれる。主要部位リガンドが存在する場合、部分アゴニストは、そのリガンドの一部に取って代わり、したがって受容体を通したＣａ＋＋流量を減少させる。主要部位リガンドが存在しないかまたはその濃度が低下した場合、部分アゴニストは、受容体チャネルを通したＣａ＋＋流量を増加させるように作用する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
当該技術分野では、ＮＭＤＡ受容体のグリシン結合部位と結合することができ、医薬品としての有益性が得られる、新規でより特異的／強力な化合物が依然として必要とされている。さらに、医療分野では、経口送達可能な形態のこのような化合物が依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本開示は、ＮＭＤＡモジュレーター、例えばＮＭＤＡの部分アゴニストであり得る化合物を提供する。より具体的には、本開示は、式：
【化１】
2019516735.tif 000003
（Ｉ）
（式中、Ｒｂは、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノおよびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択され、Ｒ１は、水素、ハロゲンおよびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択され、およびＲ２は、水素、ハロゲンおよびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択される）
を有する化合物またはその立体異性体、Ｎ−オキシドおよび／もしくは薬学的に許容される塩を提供する。
【０００９】
本明細書では、開示される化合物と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物も提供される。このような組成物は、患者への経口または静脈内投与に適したものであり得る。
【００１０】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の化合物は、ＮＭＤＡ受容体サブタイプに結合する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の化合物は、１つのサブタイプに結合し、かつ別のサブタイプに結合しない。
【００１１】
別の態様では、自閉症、不安、うつ病、双極性障害、注意欠陥障害、注意欠陥多動障害（ＡＤＨＤ）、統合失調症、精神病性障害、精神病症状、社会的引きこもり、強迫性障害、恐怖症、心的外傷後ストレス症候群、行動障害、衝動制御障害、物質乱用障害、睡眠障害、記憶障害、学習障害、尿失禁、多系統萎縮症、進行性核上性麻痺、フリードリヒ運動失調症、ダウン症候群、脆弱Ｘ症候群、結節性硬化症、オリーブ橋小脳萎縮症、脳性麻痺、薬物性視神経炎、虚血性網膜症、糖尿病性網膜症、緑内障、認知症、ＡＩＤＳ認知症、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、痙攣、ミオクローヌス、筋攣縮、トゥレット症候群、癲癇、脳虚血、脳卒中、脳腫瘍、外傷性脳損傷、心停止、脊髄症、脊髄損傷、末梢性ニューロパチー、線維筋痛症、急性神経因性疼痛および慢性神経因性疼痛からなる群から選択される病態を治療することを、それを必要とする患者において行う方法が提供される。そのような方法は、薬学的有効量の開示される化合物またはその薬学的に許容される塩、立体異性体、Ｎ−オキシドおよび／もしくは水和物を患者に投与することを含み得る。
【００１２】
いくつかの実施形態では、方法は、うつ病を治療することを含む。例えば、うつ病は、大うつ病性障害、気分変調性障害、精神病性うつ病、産後うつ病、季節性感情障害、双極性障害、気分障害または慢性の医学的状態を原因とするうつ病の１つ以上を含み得る。特定の実施形態では、方法は、統合失調症を治療し得る。そのような統合失調症は、妄想型統合失調症、解体型統合失調症、緊張型統合失調症、鑑別不能型統合失調症、残遺型統合失調症、統合失調症後抑うつまたは単純型統合失調症であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】肯定的感情学習（ＰＥＬ）モデルにおける化合物Ａの平均５０ｋＨｚ  ＵＳＶデータを示す。
【図２】化合物Ａの野生型ＮＭＤＡＲ２サブタイプに対する［３Ｈ］ＭＫ−８０１結合の増強を示す。
【図３】雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける単回静脈内（２ｍｇ／ｋｇ）および経口（１０ｍｇ／ｋｇ）投与後の化合物Ａの平均血漿濃度−時間プロファイルを示す。
【図４】雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける単回経口（１０ｍｇ／ｋｇ）投与後の化合物Ａの平均血漿、脳およびＣＳＦ濃度−時間プロファイルを示す。
【図５】ＰＥＬモデルにおける化合物Ｂの平均５０ｋＨｚ  ＵＳＶデータを示す。
【図６】化合物Ｂの野生型ＮＭＤＡＲ２サブタイプに対する［３Ｈ］ＭＫ−８０１結合の増強を示す。
【図７】雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける単回静脈内（２ｍｇ／ｋｇ）および経口（１０ｍｇ／ｋｇ）投与後の化合物Ｂの平均血漿濃度−時間プロファイルを示す。
【図８】雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける単回経口（１０ｍｇ／ｋｇ）投与後の化合物Ｂの平均血漿、脳およびＣＳＦ濃度−時間プロファイルを示す。
【図９】化合物ＡのインビトロＭＮ、ＡｍｅｓおよびｈＥＲＧアッセイの結果を示す。
【図１０】化合物ＢのインビトロＭＮ、ＡｍｅｓおよびｈＥＲＧアッセイの結果を示す。
【図１１】化合物ＡについてＰＥＬによって測定された逆爆風誘発性認知障害を示す。
【図１２】化合物ＢについてＰＥＬによって測定された逆爆風誘発性認知障害を示す。
【図１３】化合物Ａについてのラットにおける新規性誘発性食欲不振（ＮＩＨ）試験の結果を示す。
【図１４】化合物Ｂについてのラットにおける新規性誘発性食欲不振（ＮＩＨ）試験の結果を示す。
【図１５】化合物Ａの鎮痛効果を示す。
【図１６】化合物Ｂの鎮痛効果を示す。
【図１７】化合物ＡのＰｏｒｓｏｌｔ強制水泳試験の結果を示す。
【図１８】化合物ＢのＰｏｒｓｏｌｔ強制水泳試験の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本開示は、概して、ＮＭＤＡを調節することができる化合物、例えばＮＭＤＡアンタゴニストまたは部分アゴニストと、本開示の化合物を用いる組成物および／または方法とに関する。本開示の化合物は、他のタンパク質標的および／またはＮＭＤＡ受容体サブタイプを調節し得ることを理解されたい。
【００１５】
本明細書で使用される「アルキル」という用語は、飽和直鎖状または分岐鎖状炭化水素、例えば本明細書ではそれぞれＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ３アルキルと呼ばれる、炭素原子が１〜６個、１〜４個または１〜３個の直鎖状または分岐鎖状の基などを指す。例えば、「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」は、１〜６個の炭素原子を含む直鎖状または分枝鎖状の飽和炭化水素を指す。Ｃ１〜Ｃ６アルキル基の例には、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチルおよびネオペンチルが含まれるが、これらに限定されない。例示的なアルキル基としては、限定されないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、２−メチル−１−プロピル、２−メチル−２−プロピル、２−メチル−１−ブチル、３−メチル−１−ブチル、３−メチル−２−ブチル、２，２−ジメチル−１−プロピル、２−メチル−１−ペンチル、３−メチル−１−ペンチル、４−メチル−１−ペンチル、２−メチル−２−ペンチル、３−メチル−２−ペンチル、４−メチル−２−ペンチル、２，２−ジメチル−１−ブチル、３，３−ジメチル−１−ブチル、２−エチル−１−ブチル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチルおよびヘキシルが挙げられる。
【００１６】
本明細書で使用される「シアノ」という用語は、ラジカル−ＣＮを指す。
【００１７】
本明細書で使用される「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フルオロ（Ｆ）、クロロ（Ｃｌ）、ブロモ（Ｂｒ）および／またはヨード（Ｉ）を指す。
【００１８】
本明細書で使用される「ヒドロキシ」および「ヒドロキシル」という用語は、ラジカル−ＯＨを指す。
【００１９】
本明細書で使用される「化合物」という用語は、本明細書に関連して別段に理解されるか、または化合物の１つの特定の形態（すなわち化合物自体、その特定の立体異性体および／もしくは同位体標識された化合物、または薬学的に許容される塩、水和物、エステルもしくはＮ−オキシド）に明確に限定されない限り、化合物自体およびその薬学的に許容される塩、水和物、エステルおよびＮ−オキシドを指し、その様々な立体異性体およびその同位体標識された形態を含む。化合物は、化合物の立体異性体および／または同位体標識化合物の薬学的に許容される塩、または水和物、エステルもしくはＮ−オキシドを指し得ることを理解されたい。
【００２０】
本明細書で使用される「部分」という用語は、化合物または分子の一部を指す。
【００２１】
本開示の化合物は、１つ以上のキラル中心および／または二重結合を含み得、したがって幾何異性体およびエナンチオマーまたはジアステレオマーなどの立体異性体として存在し得る。本明細書で使用される場合、「立体異性体」という用語は、化合物のあらゆる幾何異性体、エナンチオマーおよび／またはジアステレオマーからなる。例えば、特定のキラル中心を有する化合物が示されている場合、その化合物のそのキラル中心および他のキラル中心においてそのようなキラリティーがないと示される化合物は、本開示の範囲内である（すなわち、例えば実線または破線のくさび形結合を有する三次元ではなく、「フラット」または「直線的」な結合を有する二次元で示された化合物）。立体特異的化合物は、立体中心炭素原子の周囲にある置換基の立体配置に応じて記号「Ｒ」または「Ｓ」と表記され得る。本開示は、これらの化合物の様々な立体異性体およびそれらの混合物の全てを包含する。エナンチオマーまたはジアステレオマーの混合物は、命名法では「（±）」と表記され得るが、当業者は、構造が暗示的にキラル中心を示し得ることを理解するであろう。別段の指示がない限り、化学構造、例えば一般的な化学構造の図形表示は、特定される化合物の全ての立体異性体を包含することが理解される。
【００２２】
本明細書で論じられるように、本開示の化合物は、複数のキラル中心を有し得る。各キラル中心は、独立して、Ｒ、ＳまたはＲとＳとの任意の混合物であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、キラル中心は、Ｒ：Ｓの比が約１００：０〜約５０：５０（「ラセミ体」）、約１００：０〜約７５：２５、約１００：０〜約８５：１５、約１００：０〜約９０：１０、約１００：０〜約９５：５、約１００：０〜約９８：２、約１００：０〜約９９：１、約０：１００〜５０：５０、約０：１００〜約２５：７５、約０：１００〜約１５：８５、約０：１００〜約１０：９０、約０：１００〜約５：９５、約０：１００〜約２：９８、約０：１００〜約１：９９、約７５：２５〜２５：７５または約５０：５０であり得る。１つ以上の異性体（すなわちＲおよび／またはＳ）をより大きい比で含む本開示の化合物の製剤は、開示される化合物または化合物の混合物のラセミ製剤と比べて増強された治療的特徴を有し得る。
【００２３】
本開示の化合物の個々のエナンチオマーおよびジアステレオマーは、不斉中心もしくは立体中心を含む市販の出発物質から合成することにより、またはラセミ混合物を調製した後、当業者に周知の分割法により調製することができる。このような分割法の例には、（１）エナンチオマーの混合物とキラル補助基とを結合させ、得られたジアステレオマーの混合物を再結晶もしくはクロマトグラフィーによって分離し、補助基から光学的に純粋な生成物を遊離させる方法、（２）光学活性分割剤を用いる塩の形成、（３）光学エナンチオマーの混合物をキラル液体クロマトグラフ用カラムで直接分離する方法、または（４）立体選択的化学試薬または酵素試薬を用いる速度論的分割がある。ラセミ混合物は、キラル相ガスクロマトグラフィーまたはキラル溶液中の化合物の結晶化などの周知の方法により、その構成成分のエナンチオマーに分割することもできる。新たな立体中心の形成または既存の立体中心の変換の過程で単一の反応物質が不均等な立体異性体の混合物を形成する化学反応または酵素反応である立体選択的合成が当該技術分野で周知である。立体選択的合成は、エナンチオ選択的変換およびジアステレオ選択的変換の両方を包含する。例えば、Ｃａｒｒｅｉｒａ  ａｎｄ  Ｋｖａｅｒｎｏ，Ｃｌａｓｓｉｃｓ  ｉｎ  Ｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ：Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，２００９を参照されたい。
【００２４】
本開示の化合物中には、炭素間二重結合周囲の置換基の配置またはシクロアルキルもしくは複素環周囲の置換基の配置により生じる幾何異性体も存在し得る。記号
【化２】
2019516735.tif 000004
は、本明細書に記載される単結合、二重結合または三重結合であり得る結合を表す。炭素間二重結合周囲の置換基について、「Ｚ」または「Ｅ」立体配置であることが示され、ここで、「Ｚ」および「Ｅ」という用語は、ＩＵＰＡＣ標準に従って使用される。特に明記されない限り、二重結合が記されている構造は、「Ｅ」異性体および「Ｚ」異性体の両方を包含する。
【００２５】
あるいは、炭素間二重結合周囲の置換基を「シス」または「トランス」と呼ぶことができ、ここで、「シス」は、二重結合の同じ側にある置換基を表し、「トランス」は、二重結合の反対側にある置換基を表す。炭素環周囲の置換基の配置も「シス」または「トランス」と表記され得る。「シス」という用語は、環の面の同じ側にある置換基を表し、「トランス」という用語は、環の面の反対側にある置換基を表す。化合物の混合物は、置換基が環の面の同じ側と反対側との両方に配置されている場合、「シス／トランス」と表記される。
【００２６】
本開示はまた、１つ以上の原子が天然に通常みられる原子質量または質量数と異なる原子質量または質量数を有する原子に置き換わっていること以外、本明細書に記載の化合物と同一である、同位体で標識された化合物を包含する。本発明の化合物に組み込むことができる同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素および塩素の同位体、例えばそれぞれ２Ｈ（「Ｄ」）、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆおよび３６Ｃｌなどが挙げられる。例えば、本明細書に記載の化合物は、１つ以上のＨ原子が重水素に置き換えられる。
【００２７】
同位体で標識された特定の化合物（例えば、３Ｈおよび１４Ｃで標識されたもの）は、化合物および／または基質の組織分布アッセイに有用であり得る。トリチウム化（すなわち３Ｈ）および炭素−１４（すなわち１４Ｃ）同位体は、その調製が容易で検出感度が高いために特に好ましい。さらに、重水素（すなわち２Ｈ）などのさらに重い同位体で置換することにより、代謝安定性の増大による特定の治療的利点（例えば、インビボ半減期の増大または必要投与量の減少）を得ることができ、したがって状況によってはこのような置換が好ましいものになり得る。同位体で標識された化合物は、一般に、本明細書、例えば実施例の項に開示される方法と同様の方法に従い、非同位体標識試薬を同位体標識試薬に置き換えることによって調製され得る。
【００２８】
本明細書で使用される「薬学的に許容される」または「薬理学的に許容される」という表現は、必要に応じて動物またはヒトに投与したときに有害反応、アレルギー反応または他の不都合な反応を引き起こさない化合物、分子的実体、組成物、物質および／または剤形を指す。ヒトに投与する場合、製剤がＦＤＡ生物製剤局の基準で求められる無菌性、発熱原性、一般的安全性および純度に関する基準を満たさなければならない。
【００２９】
本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」または「薬学的に許容される賦形剤」という表現は、医薬品投与に適合するあらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、等張剤および吸収遅延剤などを指す。薬学的に許容される担体は、リン酸緩衝化生理食塩水、水、エマルジョン（例えば、油／水または水／油エマルジョン）および様々なタイプの湿潤剤を含み得る。組成物は、安定化剤および保存剤も含み得る。
【００３０】
本明細書で使用される「医薬組成物」という表現は、１つ以上の薬学的に許容される担体と共に製剤化される、本明細書に開示される少なくとも１つの化合物を含む組成物を指す。医薬組成物は、補助的な、追加の、または増強された治療機能をもたらす他の活性化合物も含有し得る。
【００３１】
本明細書で使用される「個体」、「患者」および「対象」という用語は、互換的に使用され、哺乳動物、好ましくはマウス、ラット、他のげっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマまたは霊長類、より好ましくはヒトを含む任意の動物を包含する。本開示に記載の化合物は、ヒトなどの哺乳動物に投与することができるが、獣医学的治療を必要とする動物、例えば家庭動物（例えば、イヌ、ネコなど）、農業動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマなど）および実験動物（例えば、ラット、マウス、モルモットなど）などの他の哺乳動物にも投与することができる。本開示に記載の方法で治療する哺乳動物は、好ましくは、例えば疼痛またはうつ病の治療が望まれる哺乳動物である。
【００３２】
本明細書で使用される「治療」という用語は、１つ以上のその症状を含む、病態、疾患、障害などの改善をもたらす任意の効果、例えば緩和、軽減、調節、寛解または消失を包含する。治療は、障害を治癒、改善または少なくとも部分的に回復させるものであり得る。
【００３３】
「障害」という用語は、別段の指示がない限り、「疾患」、「病態」または「病気」という用語を指し、それらと互換的に使用される。
本明細書で使用される「調節」という用語は、アンタゴニズム（例えば、阻害）、アゴニズム、部分的アンタゴニズムおよび／または部分的アゴニズムを指し、これらを包含する。
【００３４】
本明細書で使用される「薬学的有効量」および「治療有効量」という表現は、研究者、獣医、医師または他の臨床医が求める組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を引き起こす、化合物（例えば、開示される化合物）の量を指す。本開示に記載の化合物を、疾患を治療するために治療有効量で投与することができる。化合物の治療有効量は、うつ病などの疾患または障害の症状の軽減をもたらす量など、所望の治療および／または予防効果を得るのに必要な量であり得る。
【００３５】
本明細書で使用される「薬学的に許容される塩」という表現は、本開示の化合物中に存在し得、かつ／または本開示の化合物中で使用され得る酸性または塩基性基の塩を指す。本開示の化合物の薬学的に許容される塩（例えば、酸または塩基）は、患者への投与時、本発明の化合物またはその活性代謝物もしくは残渣を提供することができる。
【００３６】
本発明の組成物中に含まれる本来塩基性の化合物は、様々な無機酸および有機酸と多様な塩を形成することができる。このような塩基性化合物の薬学的に許容される酸付加塩の調製に使用し得る酸には、非毒性酸付加塩、すなわち、限定されないが、リンゴ酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、過リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロナート（ｇｌｕｃａｒｏｎａｔｅ）、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩（すなわち１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトアート））を含む、薬理学的に許容される陰イオンを含む塩を形成する酸がある。本発明の組成物中に含まれる本来酸性の化合物は、様々な薬理学的に許容される陽イオンと塩基性塩を形成することができる。このような塩の例としては、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩、特にカルシウム塩、マグネシウム塩、ナトリウム塩、リチウム塩、亜鉛塩、カリウム塩および鉄塩が挙げられる。本発明の組成物中に含まれる塩基性または酸性部分を含む化合物は、様々なアミノ酸と薬学的に許容される塩も形成し得る。本開示の化合物は、酸性基および塩基性基の両方、例えば１つのアミノ基と１つのカルボン酸基とを含有し得る。そのような場合、化合物は、酸付加塩、両性イオンまたは塩基塩として存在し得る。
【００３７】
本明細書に開示される化合物は、水、エタノールなどの薬学的に許容される溶媒との溶媒和形態および非溶媒和形態として存在し得、本開示は、溶媒和形態と非溶媒和形態との両方を包含することが意図される。いくつかの実施形態では、化合物は、非晶質である。特定の実施形態では、化合物は、単一の多形である。様々な実施形態では、化合物は、多形の混合物である。特定の実施形態では、化合物は、結晶形態である。
【００３８】
本明細書で使用される「プロドラッグ」という用語は、インビボで変換されて開示の化合物またはその化合物の薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物を生じる化合物を指す。この変換は、様々な場所（腸管腔内または腸管、血液もしくは肝臓内の通過時など）において様々な機序（エステラーゼ、アミダーゼ、ホスファターゼ、酸化的および／または還元的代謝など）によって起こり得る。プロドラッグは、当該技術分野で周知である（例えば、Ｒａｕｔｉｏ，Ｋｕｍｐｕｌａｉｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ２００８，７，２５５を参照されたい）。例えば、本明細書に記載の化合物またはその化合物の薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物がカルボン酸官能基を含む場合、プロドラッグは、カルボン酸基の水素原子が、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ１２）アルカノイルオキシメチル、炭素原子を４〜９個有する１−（アルカノイルオキシ）エチル、炭素原子を５〜１０個有する１−メチル−１−（アルカノイルオキシ）−エチル、炭素原子を３〜６個有するアルコキシカルボニルオキシメチル、炭素原子を４〜７個有する１−（アルコキシカルボニルオキシ）エチル、炭素原子を５〜８個有する１−メチル−１−（アルコキシカルボニルオキシ）エチル、炭素原子を３〜９個有するＮ−（アルコキシカルボニル）アミノメチル、炭素原子を４〜１０個有する１−（Ｎ（アルコキシカルボニル）アミノ）エチル、３−フタリジル、４−クロトノラクトニル、γ−ブチロラクトン−４−イル、ジ−Ｎ，Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ２）アルキルアミノ（Ｃ２〜Ｃ３）アルキル（β−ジメチルアミノエチルなど）、カルバモイル−（Ｃ１〜Ｃ２）アルキル、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１〜Ｃ２）アルキルカルバモイル−（Ｃ１〜Ｃ２）アルキル、ピペリジノ−（Ｃ２〜Ｃ３）アルキル、ピロリジノ−（Ｃ２〜Ｃ３）アルキルまたはモルホリノ（Ｃ２〜Ｃ３）アルキルなどの基に置換されることによって形成されるエステルであり得る。
【００３９】
同様に、本明細書に記載の化合物がアルコール官能基を含む場合、プロドラッグは、アルコール基の水素原子の、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシメチル、１−（（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ）エチル、１−メチル−１−（（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ）エチル（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニルオキシメチル、Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニルアミノメチル、スクシノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、α−アミノ（Ｃ１〜Ｃ４）アルカノイル、アリールアシル、およびα−アミノアシルまたはα−アミノアシル−α−アミノアシル（ここで、α−アミノアシル基のそれぞれは、独立して、天然のＬ−アミノ酸、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、Ｐ（Ｏ）（Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２またはグリコシル（ヘミアセタール型炭水化物のヒドロキシル基の除去によって生じるラジカル）から選択される）などの基による置き換えによって形成され得る。
【００４０】
本明細書に記載の化合物にアミン官能基を組み込む場合、プロドラッグは、例えば、アミドまたはカルバミン酸エステル、Ｎ−アシルオキシアルキル誘導体、（オキソジオキソレニル）メチル誘導体、Ｎ−マンニッヒ塩基、イミンまたはエナミンの生成によって形成され得る。さらに、第二級アミンが代謝的に切断されて生物活性第一級アミンを生じ得るか、または第三級アミンが代謝的に切断されて生物活性第一級または第二級アミンを生じ得る。例えば、Ｓｉｍｐｌｉｃｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２００８，１３，５１９およびその参考文献を参照されたい。
【００４１】
別段定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的用語および科学的用語は、本開示が関係する当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
本明細書全体を通して、組成物およびキットが特定の構成要素を有する、包含する、もしくは含むと記載される場合、またはプロセスおよび方法が特定の工程を有する、包含する、または含むと記載される場合、列挙された構成要素から本質的になるかまたはそれらからなる本開示の組成物およびキットが存在すること、および列挙されたプロセス工程から本質的になるかまたはそれらからなる本開示によるプロセスおよび方法が存在することがさらに企図される。
【００４２】
本出願では、要素または構成要素が、列挙された要素または構成要素のリストに含まれかつ／またはそれから選択されると言われる場合、その要素または構成要素は、列挙された要素または構成要素のいずれか１つであり得るか、またはその要素または構成要素は、列挙された要素または構成要素の２つ以上からなる群から選択され得ることを理解されたい。
【００４３】
さらに、本明細書において、明示的または暗示的にかかわらず、本開示の趣旨および範囲から逸脱することなく、本明細書に記載の組成物または方法の要素および／または特徴を様々な方法で組み合わせ得ることを理解されたい。例えば、特定の化合物に言及される場合、その化合物は、文脈から別段の理解がない限り、本開示の組成物の様々な実施形態および／または本開示の方法において使用され得る。換言すれば、本出願において、実施形態は、明瞭かつ簡潔な適用が記述されかつ描かれることを可能にするように説明されかつ示されてきたが、本教示および本開示から逸脱することなく、実施形態を様々に組み合わせ得るかまたは分離し得ることが意図され、それが理解されるであろう。例えば、本明細書に記載され示された全ての特徴は、本明細書に記載されかつ示された本開示の全ての態様に適用可能であり得ることが理解されるであろう。
【００４４】
文脈が不適切でない限り、「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」という冠詞は、本開示では、冠詞の文法的目的語の１つ以上（すなわち少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「要素」は、１つの要素または２つ以上の要素を意味する。
【００４５】
本開示における「および／または」という用語は、他に示されない限り、「および」または「または」のいずれかを意味するために使用される。
【００４６】
「少なくとも１つ」という表現は、文脈および用法から別段に理解されない限り、表現の後に列挙される対象のそれぞれおよび列挙される対象の２つ以上の様々な組み合わせを個々に含むことを理解されたい。３つ以上の列挙された対象に関連する「および／または」という表現は、文脈から別段の理解がない限り、同じ意味を有するものと理解されたい。
【００４７】
「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含んでいる」、「有する（ｈａｖｅ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有している」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」または「含有している」という用語の使用は、それらの文法的均等物を含み、特に別段の記述または文脈からの理解がない限り、一般的にオープンエンドかつ非限定的であり、例えば、記載のない追加的な要素または工程を排除しないことを理解されたい。
【００４８】
「約」という用語の使用が定量値の前にある場合、別段の特定の記述のない限り、本開示は、特定の定量値自体も含む。本明細書中で使用される「約」という用語は、別段の指示または推論がない限り、公称値から±１０％の変動を指す。
【００４９】
組成物中の成分または物質の量に関してパーセンテージが提供される場合、パーセンテージは、別段の記述または文脈からの理解がない限り、重量に基づくパーセンテージであることを理解されたい。
【００５０】
分子量が提供され、それが例えばポリマーの絶対値でない場合、別段の記載または文脈からの理解がない限り、その分子量は、平均分子量であると理解されたい。
【００５１】
本開示が実施可能なままである限り、工程の順序または特定の動作を実行するための順序は重要でないことを理解されたい。さらに、２つ以上の工程または動作を同時に実行することができる。
【００５２】
本明細書中の様々な箇所において、置換基は、群または範囲で開示される。本明細書は、そのような群および範囲のメンバーのそれぞれおよび全ての個々のサブコンビネーションを含むことが特に意図される。例えば、「Ｃ１−６アルキル」という用語は、具体的には、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ１〜Ｃ６、Ｃ１〜Ｃ５、Ｃ１〜Ｃ４、Ｃ１〜Ｃ３、Ｃ１〜Ｃ２、Ｃ２〜Ｃ６、Ｃ２〜Ｃ５、Ｃ２〜Ｃ４、Ｃ２〜Ｃ３、Ｃ３〜Ｃ６、Ｃ３〜Ｃ５、Ｃ３〜Ｃ４、Ｃ４〜Ｃ６、Ｃ４〜Ｃ５およびＣ５〜Ｃ６を個々に開示することが意図される。他の例として、０〜４０の範囲の整数は、具体的には、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９および４０を個々に開示することが意図され、０〜２０の範囲の整数は、具体的には、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９および２０を個々に開示することが意図される。さらなる例として、「１〜５個の置換基で任意に置換された」という表現は、具体的には、０、１、２、３、４、５、０〜５、０〜４、０〜３、０〜２、０〜１、１〜５、１〜４、１〜３、１〜２、２〜５、２〜４、２〜３、３〜５、３〜４および４〜５個の置換基を含み得る化学基を個々に開示することが意図されることが含まれる。
【００５３】
本明細書の任意のおよび全ての例または例示的な文言、例えば「〜などの」または「〜を含む」の使用は、単に本開示をよりよく説明することを意図したものであり、特許請求の範囲に記載されていない限り、本開示の範囲を限定するものではない。本明細書中のいかなる文言も、本開示の実施に必須であると主張されていない要素を示すものとして解釈されるべきではない。
【００５４】
さらに、変数が定義を伴わない場合、その変数は、文脈から異なって理解されない限り、開示の別の箇所に見出されるように定義される。さらに、各変数および／または置換基、例えばＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ２、Ｒｂ、ｗなどの定義は、それが任意の構造または化合物において２回以上出現する場合、同じ構造または化合物における他の箇所での定義から独立したものであり得る。
【００５５】
本明細書の式および／または化合物における変数および／または置換基の定義は、複数の化学基を包含する。本開示は、例えば、ｉ）変数および／または置換基の定義が、本明細書に記載の化学基から選択される単一の化学基であり、かつｉｉ）定義が、本明細書に記載のものから選択される２つ以上の化学基の集合体であり、ｉｉｉ）化合物が、変数および／または置換基が（ｉ）または（ｉｉ）によって定義される変数および／または置換基の組み合わせによって定義される、実施形態を含む。
【００５６】
本開示の様々な態様は、本明細書において、明確性のために見出しおよび／またはセクションの下に記載されるが、１つの特定のセクションに記載される本開示の全ての態様、実施形態または特徴は、その特定のセクションに限定されるのではなく、むしろ本開示の任意の態様、実施形態または特徴に適用され得ることが理解される。
【００５７】
化合物
開示される化合物は、式：
【化３】
2019516735.tif 000005
（Ｉ）
（式中、Ｒｂは、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノおよびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択され、Ｒ１は、水素、ハロゲンおよびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択され、およびＲ２は、水素、ハロゲンおよびＣ１〜Ｃアルキルからなる群から選択される）
を有する化合物またはその立体異性体、Ｎ−オキシドおよび／もしくは薬学的に許容される塩を含む。
【００５８】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、水素である。特定の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、例えばメチル（ＣＨ３）である。
【００５９】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、水素である。特定の実施形態では、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、例えばメチル（ＣＨ３）である。
【００６０】
いくつかの実施形態（本明細書に記載の実施形態のいずれかを含む）では、Ｒｂは、水素である。いくつかの実施形態では、Ｒｂは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、例えばメチル（ＣＨ３）である。
【００６１】
様々な実施形態において、開示される化合物は、式：
【化４】
2019516735.tif 000006
またはその立体異性体、Ｎ−オキシドおよび／もしくは薬学的に許容される塩を有する。
【００６２】
いくつかの実施形態では、化合物は、実施例に記載の化合物から選択される。
【００６３】
特定の実施形態において、開示される化合物は、式：
【化５】
2019516735.tif 000007
またはそのＮ−オキシドおよび／もしくは薬学的に許容される塩を有する。
【００６４】
特定の実施形態において、開示される化合物は、式：
【化６】
2019516735.tif 000008
またはそのＮ−オキシドおよび／もしくは薬学的に許容される塩を有する。
【００６５】
開示される化合物は、効率的なＮＭＤＡ受容体の陽イオンチャネル開口をもたらし得、例えば、ＮＭＤＡ受容体のグルタミン酸部位と結合または会合して、陽イオンチャネルを開口することを補助し得る。本開示の化合物を用いて、アゴニストとしての作用を介してＮＭＤＡ受容体を調節する（オンまたはオフにする）ことができる。
【００６６】
本明細書に記載の化合物は、いくつかの実施形態では、特定のＮＭＤＡ受容体サブタイプに結合する。例えば、開示される化合物は、１つのＮＭＤＡサブタイプに結合し得、かつ別のＮＭＤＡサブタイプに結合し得ない。特定の実施形態では、開示される化合物は、１つまたは２つ以上のＮＭＤＡサブタイプに結合し得、かつ／または例えば特定の他のＮＭＤＡサブタイプに対して実質的により少ない（または実質的にない）結合活性を有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、開示される化合物（例えば、化合物Ａ）は、ＮＲ２Ａに結合し、かつＮＲ２Ｄに実質的に結合しない。いくつかの実施形態では、開示される化合物（例えば、化合物Ｂ）は、ＮＲ２ＢおよびＮＲ２Ｄに結合し、かつＮＲ２ＡおよびＮＲ２Ｃとの結合が実質的により低い。
【００６７】
本明細書に記載の化合物は、グリシン部位ＮＭＤＡ受容体部分アゴニストであり得る。これに関連して使用される部分アゴニストは、低濃度では類似体がアゴニストとして作用し、高濃度では類似体がアンタゴニストとして作用することを意味することが理解されるであろう。グリシン結合は、グルタミン酸によってもグルタミン酸の競合阻害剤によっても阻害されることはなく、またＮＭＤＡ受容体上のグルタミン酸と同じ部位で結合しない。ＮＭＤＡ受容体には第２の別のグリシン結合部位が存在する。したがって、ＮＭＤＡ受容体のリガンド依存性イオンチャネルは、少なくともこの２つの異なるアロステリック部位の制御下にある。開示される化合物は、ＮＭＤＡ受容体のグリシン結合部位と結合または会合することができる部位であり得る。いくつかの実施形態では、開示される化合物は、既存のＮＭＤＡ受容体グリシン部位部分アゴニストの活性の１０倍以上の効力を有する。
【００６８】
本開示の化合物は、高い治療指数を示し得る。本明細書で使用される治療指数は、集団の５０％に毒性を引き起こす用量（すなわちＴＤ５０）と、集団の５０％に最小有効用量（すなわちＥＤ５０）との比を指す。したがって、治療指数＝（ＴＤ５０）：（ＥＤ５０）である。いくつかの実施形態では、開示される化合物は、治療指数が少なくとも約１０：１、少なくとも約５０：１、少なくとも約１００：１、少なくとも約２００：１、少なくとも約５００：１または少なくとも約１０００：１である。
【００６９】
組成物
他の態様では、本開示の化合物と、任意に薬学的に許容される賦形剤とを含む製剤および組成物が提供される。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の本開示の化合物のラセミ混合物を含む。
【００７０】
製剤は、使用のための任意の様々な形態で調製され得る。限定するものではなく、例を挙げると、化合物は、製剤技術分野で知られている、それを必要とする患者に活性な薬剤を投与するための経口投与、皮下注射または他の方法に適した製剤に調製され得る。例えば、本開示の医薬組成物は、眼への送達に適し得る。関連する方法は、開示される化合物または開示される化合物を含む医薬組成物の薬学的有効量を、それを必要とする患者、例えば患者の眼に投与することを含み得、ここで、投与は、局所的、結膜下、網膜下、硝子体内、眼球後部、眼球周囲、前房内および／または全身的であり得る。
【００７１】
製剤中の本明細書に記載される開示化合物の量は、個体の病的状態、年齢、性別および体重などの要因によって異なり得る。投与レジメンは、最適な治療応答を提供するように調節され得る。例えば、単回ボーラスを投与し得、または複数の分割用量を、時間をかけて投与し得、または治療状況の緊急度に応じて用量を増減させ得る。投与を容易にし、かつ用量を均一にするため、非経口組成物を投与単位形態で製剤化することが特に有利である。本明細書で使用される投与単位形態は、治療する哺乳動物対象に対する単位用量として適した物理的に分離した単位を指し、各単位には、所望の治療効果が得られるよう計算された所定量の活性化合物が必要な医薬担体と共に含まれている。
【００７２】
投与単位形態の仕様は、（ａ）選択する化合物の固有の特徴および達成するべき特定の治療効果、ならびに（ｂ）個体の感度を治療するためのこのような活性化合物の合成技術分野に本来存在する制限によって決まり、これに直接依存する。
【００７３】
治療用組成物は、通常、製造および保管条件下で無菌および安定でなければならない。組成物を、薬物濃度を高めるのに適した溶液、微細乳濁液、リポソームまたは他の秩序構造として製剤化することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）およびその適した混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどの使用により、分散液の場合に必要とされる粒子径を維持することにより、かつ界面活性剤の使用により維持することができる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコールまたは塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸塩およびゼラチンを含ませることにより、その持続的吸収をもたらすことができる。
【００７４】
化合物を徐放性製剤、例えば徐放ポリマーを含む組成物において投与することができる。化合物は、埋込物およびマイクロカプセル送達システムを含む徐放製剤など、化合物を即時放出から保護する担体を用いて調製することができる。生分解性生体適合性ポリマー、例えばエチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸およびポリ乳酸、ポリグリコール酸コポリマー（ＰＬＧ）などを使用することができる。このような製剤を調製するための多数の方法が当業者に一般的に知られている。
【００７５】
必要量の化合物を、必要に応じて上に挙げた成分の１つまたはその組合せと共に適切な溶媒に組み込んだ後、濾過滅菌することにより、無菌注射用液剤を調製することができる。一般に、基礎となる分散媒と、上に挙げたもののうちの必要とされる他の成分とを含有する無菌賦形剤に活性化合物を組み込むことにより、分散液剤を調製する。無菌注射用液剤を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製方法には、有効成分と任意の追加の所望成分の粉末とが予め滅菌濾過したその溶液から得られる、真空乾燥および凍結乾燥がある。
【００７６】
代替的な態様によれば、化合物を、その化合物の溶解性を増強する１つ以上の追加の化合物と共に製剤化し得る。
【００７７】
方法
治療有効量または治療有効用量の本明細書に記載の化合物を投与することにより、病態の治療を、それを必要とする患者において行う方法が提供される。いくつかの実施形態では、病態は、精神病態であり得る。例えば、精神疾患を治療し得る。別の態様では、神経系病態を治療し得る。例えば、中枢神経系、末梢神経系および／または眼球に発症する病態を治療し得る。いくつかの実施形態では、神経変性疾患を治療し得る。
【００７８】
いくつかの実施形態では、本方法は、自閉症、不安、うつ病、双極性障害、注意欠陥障害、注意欠陥多動障害（ＡＤＨＤ）、統合失調症、精神病性障害、精神病症状、社会的引きこもり、強迫性障害（ＯＣＤ）、恐怖症、心的外傷後ストレス症候群、行動障害、衝動制御障害、物質乱用障害（例えば、離脱症状、アヘン中毒、ニコチン中毒およびエタノール中毒）、睡眠障害、記憶障害（例えば、欠如、喪失または新たに記憶する能力の低下）、学習障害、尿失禁、多系統萎縮症、進行性核上性麻痺、フリードリヒ運動失調症、ダウン症候群、脆弱Ｘ症候群、結節性硬化症、オリーブ橋小脳萎縮症、脳性麻痺、薬物性視神経炎、虚血性網膜症、糖尿病性網膜症、緑内障、認知症、ＡＩＤＳ認知症、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、痙攣、ミオクローヌス、筋痙攣、点頭痙攣、トゥレット症候群、癲癇、脳虚血、脳卒中、脳腫瘍、外傷性脳損傷、心停止、脊髄症、脊髄損傷、末梢性ニューロパチー、急性神経因性疼痛および慢性神経因性疼痛に罹患している患者を治療するための化合物を投与することを含む。
【００７９】
いくつかの実施形態では、加齢による記憶障害、統合失調症、特殊学習障害、発作、脳卒中後の痙攣、脳虚血、低血糖、心停止、癲癇、レヴィー小体型認知症、片頭痛、ＡＩＤＳ認知症、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、初期アルツハイマー病およびアルツハイマー病を治療する方法が提供される。
【００８０】
特定の実施形態では、統合失調症を治療する方法が提供される。例えば、本明細書に記載の方法および組成物を用いて、妄想型統合失調症、解体型統合失調症（すなわち、破瓜型統合失調症）、緊張型統合失調症、鑑別不能型統合失調症、残遺型統合失調症、統合失調症後抑うつおよび単純型統合失調症を治療し得る。また、本明細書に記載の組成物を用いて、精神病性障害、例えば統合失調感情障害、妄想性障害、短期精神病性障害破、妄想または幻覚を伴う共有精神病性障害および精神病性障害などを治療し得る。
【００８１】
妄想型統合失調症の特徴は、妄想または幻覚がみられるが、思考障害、解体した行動または感情鈍麻がみられないことであり得る。妄想は、被害妄想および／または誇大妄想であり得るが、これらに加えて嫉妬、信心深さまたは身体化などの他のテーマがみられる場合もある。解体型統合失調症の特徴は、思考障害と感情鈍麻とが共にみられることであり得る。緊張型統合失調症は、患者がほとんど不動であったり、興奮した無目的な動きを示したりすることであり得る。症状には、緊張病性昏迷および蝋屈症が含まれ得る。鑑別不能型統合失調症の特徴は、精神病症状がみられるが、妄想型、解体型または緊張型のいずれの基準も満たさないことであり得る。残遺型統合失調症の特徴は、陽性症状が軽度にみられるにとどまることであり得る。統合失調症後抑うつの特徴は、統合失調症の影響でうつ病エピソードが生じ、依然として低レベルの統合失調症の症状が一部みられることであり得る。単純型統合失調症は、精神病エピソードの病歴がなく、顕著な陰性症状が穏やかに進行することを特徴とし得る。
【００８２】
いくつかの実施形態では、限定されないが、双極性障害、境界性パーソナリティ障害、薬物中毒および薬物誘発性精神病を含む他の精神障害にみられ得る精神病症状を治療する方法が提供される。特定の実施形態では、例えば妄想性障害にみられ得る妄想（例えば、「奇異ではない」妄想）を治療する方法が提供される。
【００８３】
様々な実施形態では、限定されないが、社会不安障害、回避性パーソナリティ障害および統合失調型パーソナリティ障害を含む病態にみられる社会的引きこもりを治療する方法が提供される。
【００８４】
いくつかの実施形態では、本開示は、シナプス機能不全に関連する神経発達障害の治療を、それを必要とする患者において行うための方法を提供し、ここで、方法は、一般に、治療有効量の開示化合物または開示化合物を含む医薬組成物を患者に投与することを含む。特定の実施形態では、シナプス機能不全に関連する神経発達障害は、脳萎縮性高アンモニア血症、ＭＥＣＰ２重複症候群（例えば、ＭＥＣＰ２障害）、ＣＤＫＬ５症候群、脆弱Ｘ症候群（例えば、ＦＭＲ１障害）、結節硬化症（例えば、ＴＳＣ１障害および／またはＴＳＣ２障害）、神経線維腫症（例えば、ＮＦ１障害）、アンジェルマン症候群（例えば、ＵＢＥ３Ａ障害）、ＰＴＥＮ過誤腫腫瘍症候群、Ｐｈｅｌａｎ−ＭｃＤｅｒｍｉｄ症候群（例えば、ＳＨＡＮＫ３障害）、または乳児痙攣としても知られるレット症候群であり得る。特定の実施形態において、神経発達障害は、ニューロリジン（例えば、ＮＬＧＮ３障害および／またはＮＬＧＮ２障害）および／またはニューレキシン（例えば、ＮＲＸＮ１障害）の突然変異によって引き起こされ得る。
【００８５】
いくつかの実施形態では、神経因性疼痛を治療する方法が提供される。神経因性疼痛は、急性または慢性であり得る。いくつかの場合、神経因性疼痛は、ヘルペス、ＨＩＶ、外傷性神経損傷、脳卒中、虚血後、慢性背部痛、ヘルペス後神経痛、線維筋痛症、反射性交感神経性ジストロフィー、複合性局所疼痛症候群、脊髄損傷、坐骨神経痛、幻肢痛、糖尿病性末梢神経障害（ＤＰＮ）などの糖尿病性ニューロパチー、および癌化学療法による神経因性疼痛などの病態に関連し得る。また、疼痛緩和を増強する方法および患者に鎮痛をもたらす方法も提供される。
【００８６】
様々な実施形態では、本開示の方法は、患者に有効量の開示される化合物を投与することを含む、自閉症および／または自閉症スペクトラム障害の治療を、それを必要とする患者において行う方法を含む。いくつかの実施形態では、自閉症の症状の軽減を、それを必要とする患者において行う方法が提供され、ここで、方法は、患者に有効量の開示される化合物を投与することを含む。例えば、化合物を投与することにより、自閉症の症状、例えば視線を合わせない、人付き合いができない、注意欠陥、情緒が乏しい、多動性、音に異常に過敏である、不適切な会話、睡眠障害および固執などの１つ以上の症状の発生頻度が低下し得る。そのような発生頻度の低下は、未治療の個体での発生頻度と比較して測定されたものであり得る。
【００８７】
本明細書では、細胞と、有効量の本明細書に記載の化合物とを接触させることを含む、細胞内での自閉症標的遺伝子発現を調節する方法も提供される。自閉症遺伝子発現は、例えば、ＡＢＡＴ、ＡＰＯＥ、ＣＨＲＮＡ４、ＧＡＢＲＡ５、ＧＦＡＰ、ＧＲＩＮ２Ａ、ＰＤＹＮおよびＰＥＮＫから選択され得る。特定の実施形態では、患者に有効量の化合物を投与することを含む、シナプス可塑性に関連する障害に罹患している患者のシナプス可塑性を調節する方法が提供される。
【００８８】
いくつかの実施形態では、化合物を投与することを含む、アルツハイマー病の治療を、それを必要とする患者において行う方法、または例えば初期アルツハイマー病に伴って起こる記憶喪失の治療が提供される。本明細書では、アルツハイマー病アミロイドタンパク質と、有効量の開示の化合物とを接触させることを含む、インビトロまたはインビボ（例えば、細胞内）でアルツハイマー病アミロイドタンパク質（例えば、βアミロイドペプチド、例えばアイソフォームＡβ１−４２）を調節する方法も提供される。例えば、いくつかの実施形態では、化合物により、このようなアミロイドタンパク質が海馬スライス内で長期増強を阻害する能力およびアポトーシスによる神経細胞死を阻止し得る。いくつかの実施形態では、開示の化合物は、それを必要とするアルツハイマー病患者に神経保護特性、例えば後期アルツハイマー病による神経細胞死に対する治療効果をもたらし得る。
【００８９】
特定の実施形態では、開示される方法は、脳卒中、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳまたはルーゲーリック病）、多発性硬化症、外傷性脳損傷、アルツハイマー病、認知症および／またはパーキンソン病などの別の病状によって誘発される精神病または仮性球情動（「ＰＢＡ」）を治療することを含む。そのような方法は、本開示の他の方法と同様に、開示された化合物の薬学的有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む。
【００９０】
様々な実施形態では、本明細書に記載の化合物を投与することを含む、うつ病を治療する方法が提供される。いくつかの実施形態では、治療は、行動または運動協調性に影響を及ぼさず、また発作活動を誘発または促進せずにうつ病またはうつ病の症状を緩和し得る。この態様による治療の対象となることが予想される例示的なうつ病の病態としては、限定されないが、大うつ病性障害、気分変調性障害、精神病性うつ病、産後うつ病、月経前症候群、月経前不快気分障害、季節性感情障害（ＳＡＤ）、双極性障害（または躁うつ性障害）、気分障害、慢性の医学的状態、例えば癌または慢性疼痛、化学療法、慢性ストレスなどを原因とするうつ病および心的外傷後ストレス障害が挙げられる。さらに、いずれかの形態のうつ病に罹患している患者では、多くの場合に不安が認められる。不安を原因とする様々な症状としては、特に恐怖、パニック、心臓の動悸、息切れ、疲労、嘔気および頭痛が挙げられる。本明細書に記載の化合物を投与することにより、不安またはそのいずれかの症状を治療し得る。
【００９１】
本明細書では、治療抵抗性患者、例えば少なくとも１つもしくは少なくとも２つの化合物もしくは治療剤による適切な治療が奏効せず、かつ／またはこれまで奏効しなかった精神もしくは中枢神経系の病態に罹患している患者の病態を治療する方法も提供される。例えば、本明細書では、ａ）患者が治療抵抗性であることを任意に確認することと、ｂ）前記患者に有効量の化合物を投与することとを含む、治療抵抗性患者のうつ病を治療する方法が提供される。
【００９２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物を患者の急性治療に使用し得る。例えば、化合物を患者に投与して、本明細書に記載の病態の特定のエピソード（例えば、重症エピソード）を治療する。
【００９３】
本明細書には、１つ以上の他の活性薬剤と組み合わせた開示される化合物を含む併用療法も含まれる。例えば、開示される化合物を１つ以上の抗うつ薬、例えば三環系抗うつ薬、ＭＡＯ−Ｉ、ＳＳＲＩ、二重取込み阻害剤、三重取込み阻害剤などおよび／または抗不安薬と組み合わせ得る。化合物と併用し得る例示的な薬物としては、アナフラニール、アダピン、アベンチル、エラビル、ノルプラミン、パメロール、パートフラン、セネクアン、スルモンチール、トフラニール、ビバクティル、パルネート、ナーディル、マープラン、レクサプロ、ルボックス、パキシル、プロザック、ゾロフト、ウエルバトリン、エフェクサー、レメロン、サインバルタ、デシレル（トラゾドン）およびルジオミールが挙げられる。他の例では、化合物を抗精神病薬と組み合わせ得る。抗精神病薬の非限定的な例としては、ブチロフェノン、フェノチアジン、チオキサンテン、クロザピン、オランザピン、リスペリドン、クエチアピン、ジプラシドン、アミスルプリド、アセナピン、パリペリドン、イロペリドン、ゾテピン、セルチンドール、ルラシドンおよびアリピプラゾールが挙げられる。化合物と１つ以上の上記治療剤との組合せは、任意の適切な病態の治療に使用され得、抗うつ薬または抗精神病薬としての使用に限定されないことを理解するべきである。
【実施例】
【００９４】
以下の実施例は、単に例示目的で提供され、本開示の範囲を限定することを意図するものではない。
【００９５】
以下の略語を本明細書で使用することができ、それらは、以下に示す定義を有する：Ａｃは、アセチル（−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３）であり、ＡＩＤＳは、後天性免疫不全症候群であり、ＢｏｃおよびＢＯＣは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルであり、Ｂｏｃ２Ｏは、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートであり、Ｂｎは、ベンジルであり、ＢＯＭ−Ｃｌは、塩化ベンジルオキシメチルであり、ＣＡＮは、硝酸セリウムアンモニウムであり、Ｃｂｚは、カルボキシベンジルであり、ＤＣＭは、ジクロロメタンであり、ＤＩＡＤは、ジイソプロピルアゾジカルボキシレートであり、ＤＩＰＥＡは、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンであり、ＤＭＡＰは、４−ジメチルアミノピリジンであり、ＤＭＦは、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであり、ＤＭＳＯは、ジメチルスルホキシドであり、ＥＤＣおよびＥＤＣＩは、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩であり、ＥＳＩは、エレクトロスプレーイオン化であり、ＥｔＯＡｃは、酢酸エチルであり、Ｇｌｙは、グリシンであり、ｈは、時間であり、ＨＡＴＵは、２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートであり、ＨＩＶは、ヒト免疫不全ウイルスであり、ＨＯＢｔは、ヒドロキシベンゾトリアゾールであり、ＨＰＬＣは、高速液体クロマトグラフィーであり、ＬＣＭＳは、液体クロマトグラフィー／質量分析法であり、ＬＤＡは、リチウムジイソプロピルアミドであり、ＬｉＨＭＤＳは、リチウムヘキサメチルジシラザンであり、ＭＴＢＥは、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルであり、ＮＭＤＡＲは、Ｎ−メチル−ｄ−アスパルテート受容体であり、ＮＭＰは、Ｎ−メチル−２−ピロリドンであり、ＮＭＲは、核磁気共鳴であり、Ｐｄ／Ｃは、炭素上パラジウムであり、ＰＭＢは、パラメトキシベンジルであり、ＲＴは、室温（例えば、約２０℃〜約２５℃）であり、ＴＢＳおよびＴＢＤＭＳは、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルであり、ＴＥＡは、トリエチルアミンであり、ＴＬＣは、薄層クロマトグラフィーであり、ＴＦＡは、トリフルオロ酢酸であり、ＴＨＦは、テトラヒドロフランであり、ＴＭＳは、トリメチルシリルであり、ＴＭＳＣＮは、トリメチルシリルシアニドであり、ＴＰＰは、トリフェニルホスフィンである。
【００９６】
実施例１  −  化合物Ａおよび化合物Ａマレイン酸塩の合成
【化７】
2019516735.tif 000009
（３Ｒ、７ａＳ）−３−（トリクロロメチル）テトラヒドロ−１Ｈ，３Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］オキサゾール−１−オン（１）の合成：
クロロホルム（５０Ｌ）中のＬ−プロリン（２．０ｋｇ、０．０１７ｍｏｌ）の懸濁液に室温で抱水クロラール（５．７ｋｇ、０．０３４ｍｏｌ）を添加した。反応混合物をリバースディーンスターク装置下で６０℃に加熱し、得られた水を収集した。１６時間後、揮発性物質を減圧下で蒸発させた。粗固体を冷エタノールで洗浄し、濾過し、乾燥させて化合物１（２．２ｋｇ、５７％）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ５．８２（ｓ，１Ｈ），４．１１−４．０８（ｍ，１Ｈ），３．３３−３．２７（ｍ，２Ｈ），３．１９−３．１４（ｍ，１Ｈ），２．１５−２．１０（ｍ，１Ｈ），１．９６−１．９１（ｍ，１Ｈ），１．８０−１．７４（ｍ，１Ｈ），１．６５−１．５８（ｍ，１Ｈ）．
【００９７】
（３Ｒ、７ａＲ）−７ａ−（（ベンジルオキシ）メチル）−３−（トリクロロメチル）テトラヒドロ−１Ｈ，３Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］オキサゾール−１−オン（２）の合成：
ジイソプロピルアミン（２２１．２ｍＬ、１．５３３ｍｏｌ）のＴＨＦ（８７０ｍＬ）溶液に窒素雰囲気下において−７８℃でｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中１．６Ｍ）（９５８．５ｍＬ、１．５３３ｍｏｌ）を滴下した。添加終了後、反応混合物の温度を−２０℃に上げ、１時間撹拌した。再び−７８℃に冷却し、ＴＨＦ（１Ｌ）中の化合物１（２５０ｇ、１．０２２ｍｏｌ）を加え、３０分間撹拌した。次いで、ベンジルクロロメチルエーテル（２０８ｍＬ、１．３２９ｍｏｌ）を滴下し、１時間撹拌を続けた。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、氷冷水（１００ｍＬ）で反応混合物の反応を停止させ、Ｅｔ２Ｏ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗化合物を得、これを１０％ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物２（２２０ｇ、粗製）を褐色の粘度の高いシロップとして得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．４２−７．２６（ｍ，５Ｈ），５．６０（ｓ，１Ｈ），４．５９−４．５３（ｄ，２Ｈ），３．６７−３．６１（ｍ，２Ｈ），３．３７−３．３３（ｍ，１Ｈ），３．３１−３．１０（ｍ，１Ｈ），２．１２−１．９９（ｍ，２Ｈ），１．８７−１．７５（ｍ，２Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３６３．９［Ｍ＋＋１］．
【００９８】
メチル（Ｒ）−２−（（ベンジルオキシ）メチル）ピロリジン−２−カルボキシレート塩酸塩（３）の合成：
化合物２（４００ｇ、１．０９６ｍｏｌ）のメタノール（１Ｌ）溶液に室温でＭｅＯＨ（１．６４Ｌ、３．２９ｍｏｌ）中の２Ｎ  ＨＣｌを添加し、８０℃で１６時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、揮発性物質を減圧下で蒸発させた。得られた粗生成物をヘキサン（３×７５０ｍＬ）で洗浄し、減圧下で乾燥させて、化合物３（３５８ｇ、粗製）を、赤味を帯びた粘度の高いシロップとして得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１０．４０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．４０−７．２１（ｍ，５Ｈ），４．６４−４．５０（ｄ，２Ｈ），４．４９−４．３（ｄ，２Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．３３−３．２２（ｍ，２Ｈ），２．２２−２．１５（ｓ，１Ｈ），２．０２−１．９（ｍ，２Ｈ），１．９５−１．８３（ｍ，１Ｈ）．
【００９９】
１−（ｔｅｒｔ−ブチル）２−メチル（Ｒ）−２−（（ベンジルオキシ）メチル）ピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（４）の合成：
ＤＣＭ（２．１９Ｌ）中の化合物３（３１３ｇ、粗製１．０９６ｍｏｌ）の撹拌懸濁液に窒素雰囲気下において０℃でＥｔ３Ｎ（４５８．４ｍＬ、３．２８８ｍｏｌ）を滴下し、１０分間撹拌した。次いで、Ｂｏｃ無水物（３５８．４ｇ、１．６４４ｍｏｌ）を０℃で滴下した。反応混合物を室温にし、１６時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応物を水（２×１Ｌ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を１０％クエン酸（ｐＨ〜７）およびブライン溶液（１Ｌ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗化合物を得、これを２０％ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物４（２１５ｇ、５６％）を無色の粘度の高いシロップとして得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．３７−７．２６（ｍ，５Ｈ），４．５６−４．４８（ｍ，２Ｈ），４．０３−３．８７（ｄｄ，１Ｈ），３．６９−３．６７（ｄ，１Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），３．５３−３．４７（ｍ，１Ｈ），３．３３−３．３０（ｍ，１Ｈ），２．２７−２．２０（ｍ，１Ｈ），２．０３−１．８９（ｍ，２Ｈ），１．８８−１．７９（ｍ，１Ｈ），１．４６−１．２４（２ｓ，９Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２５０．１［（Ｍ＋＋１）−Ｂｏｃ］．
【０１００】
（Ｒ）−２−（（ベンジルオキシ）メチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸（５）の合成：
化合物４（２１５ｇ、０．６１６ｍｏｌ）のＭｅＯＨ：ＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（３Ｌ、５：５：３）溶液にＮａＯＨ（７３．９ｇ、１．８４８ｍｏｌ）を添加し、室温で１０分間撹拌した。反応混合物を８０℃に加熱し、１６時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物を室温にし、揮発性物質を蒸発させた。粗物質を水（１Ｌ）で希釈し、Ｅｔ２Ｏ（２×５００ｍＬ）で抽出した。分離した水層を、２Ｎ  ＨＣｌ溶液（ｐＨ〜３）を用いて酸性化し、ＤＣＭ（２×７５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、化合物５（１７０ｇ、８２．４％）をオフホワイトの固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．６６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．３６−７．２６（ｍ，５Ｈ），４．５４−４．４７（ｍ，２Ｈ），４．０５−３．９０（ｄｄ，１Ｈ），３．８８−３．６３（ｄ，１Ｈ），３．６３−３．４４（ｍ，１Ｈ），３．３４−３．２７（ｍ，１Ｈ），２．２７−２．０１（ｍ，１Ｈ），２．０２−１．８（ｍ，２Ｈ），１．７９−１．７６（ｍ，１Ｈ），１．１７−１．１４（２ｓ，９Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２３５．１［（Ｍ＋＋１）−Ｂｏｃ］．
【０１０１】
（Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−２−カルボン酸（６）の合成：
ＣＨ３ＯＨ（１Ｌ）中の化合物５（１７０ｇ、０．５０７ｍｏｌ）の撹拌溶液に５０％湿１０％Ｐｄ−Ｃ（６８ｇ）を室温で添加し、Ｈ２雰囲気下で１６時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物をセライトパッドで濾過し、パッドをＣＨ３ＯＨ（１Ｌ）で洗浄した。得られた濾液を減圧下で濃縮して、化合物６（１１０ｇ、８８％）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．６６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．９６−３．８３（ｄｄ，１Ｈ），３．６３−３．６０（ｍ，１Ｈ），３．４９−３．４６（ｍ，１Ｈ），３．３４−３．２５（ｍ，２Ｈ），２．３０−２．１５（ｍ，１Ｈ），１．９５−１．７２（ｍ，３Ｈ），１．３８−１．３３（２ｓ，９Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２４４［Ｍ＋−１］；キラルＨＰＬＣ：９５．８８％．
【０１０２】
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１，３−ビス（ベンジルオキシ）−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボキシレート（７）の合成：
Ｎ２雰囲気下で０℃に冷却したＤＣＭ（２０ｍＬ）中の化合物６（１１０ｇ、０．４４８ｍｏｌ）の撹拌溶液にジイソプロピルエチルアミン（２０６ｍＬ、１．１２ｍｏｌ）、中間体Ｄ１（１５０ｇ、０．４４８ｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２０４ｇ、０．５３７ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温にし、４時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物をＤＣＭ（１Ｌ）で希釈し、水（２×５００ｍＬ）、１０％クエン酸溶液（５００ｍＬ）およびブライン溶液（５００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗化合物を得、これを３０％ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物７（１４３ｇ、６０％）を無色の粘度の高いシロップとして得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ８．２０−８．１２（ｄ，１Ｈ），７．２９−７．１８（ｍ，１０Ｈ），５．８３−５．５９（ｍ，１Ｈ），５．０８（ｓ，２Ｈ），４．５０−４．４４（ｍ，２Ｈ），４．３０−４．２６（ｍ，１Ｈ），４．０８−４．００（ｍ，２Ｈ），３．４２−３．４０（ｍ，２Ｈ），３．３９−３．２９（ｍ，１Ｈ），２．１９−２．０８（ｍ，１Ｈ），１．９６−１．８７（ｍ，１Ｈ），１．６８−１．６３（ｍ，２Ｈ），１．２３−１．１５（２ｓ，９Ｈ），１．１４−１．１３（ｄ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）：５２５．２［Ｍ＋−１］；ＨＰＬＣ：７６．２％；ＣｈｉｒａｌＨＰＬＣ：６９．４７％．
【０１０３】
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−１，３−ビス（ベンジルオキシ）−１−オキソブタン−２−イル）−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−５−カルボキシレート（８）の合成：
トリフェニルホスフィン（１６１．４ｇ、０．６１２ｍｏｌ）のＴＨＦ（４３０ｍＬ）溶液に窒素雰囲気下において室温でＤＩＡＤ（１２３．８ｇ、０．６１２ｍｏｌ）を滴下し、１５分間撹拌した。これに化合物７（２１５ｇ、０．４０８ｍｏｌ）のＴＨＦ（８６０ｍＬ）溶液を滴下し、室温で４時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、揮発性物質を減圧下で蒸発させた。得られた粗物質を２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離させるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物８（１８０ｇ、ＤＩＡＤ副生成物との混合物）を黄色のシロップとして得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．３１−７．１８（ｍ，１０Ｈ），５．１８−５．１０（ｍ，２Ｈ），４．６１−４．５４（ｍ，２Ｈ），４．２７−４．１８（ｍ，２Ｈ），３．７８−３．７７（ｄ，１Ｈ），３．４５−３．４３（ｄ，１Ｈ），３．３５−３．３１（ｄ，１Ｈ），３．２７−３．２３（ｍ，１Ｈ），２．０３−１．９８（ｍ，２Ｈ），１．７８−１．７６（ｍ，２Ｈ），１．３９−１．３１（２ｓ，９Ｈ），１．２３−１．２２（ｄ，３Ｈ）（ＤＩＡＤ副生成物のピークは捕捉されなかった）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５０９．４［Ｍ＋＋１］．
【０１０４】
（２Ｓ，３Ｒ）−２−（（Ｒ）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−イル）−３−ヒドロキシブタン酸（９）の合成：
化合物８（８５ｇ、０．１６７ｍｏｌ）のメタノール（８５０ｍＬ）溶液をＮ２雰囲気下で脱気した。次いで、５０％湿１０％Ｐｄ−Ｃ（４０ｇ）を室温で添加し、Ｈ２雰囲気下で２４時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物をセライトパッドで濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。得られた粗固体をＥｔ２Ｏ（１Ｌ）で希釈し、室温で１時間激しく撹拌した。得られた固体物質を濾別し、乾燥して化合物９（７５ｇ、６８％）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．８６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），５．２４（ｂｒ  ｓ  １Ｈ），４．０６−４．００（ｍ，２Ｈ），３．８８−３．８２（ｍ，１Ｈ），３．５１−３．５０（ｍ，１Ｈ），３．４３−３．３４（ｍ，１Ｈ），３．３１−３．２３（ｍ，１Ｈ），２．１５−２．０９（ｍ，２Ｈ），１．８２−１．７８（ｍ，２Ｈ），１．３９−１．３１（２ｓ，９Ｈ），１．１０−１．０８（ｄ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）：３２９．１［Ｍ＋＋１］；ＨＰＬＣ：９３．９７％．
【０１０５】
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−５−カルボキシレート（Ａ４）の合成：
０℃のＣＨ２Ｃｌ２（２Ｌ）中の化合物９（１５０ｇ、０．４５７ｍｏｌ）の撹拌溶液にジイソプロピルエチルアミン（１７６．８５ｇ、１．３７ｍｏｌ）、ＮＨ４Ｃｌ（４８．８ｇ、０．９１４ｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２０８．３ｇ  ０．５４８ｍｏｌ）を窒素雰囲気下で添加した。反応混合物を室温にし、１２時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物を水（２×７５０ｍＬ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を２Ｎ  ＨＣｌ溶液および飽和塩化ナトリウム溶液（７５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗化合物をカラムクロマトグラフィーにより精製し、純化合物を３％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶離した。得られた物質をＤＣＭ（２Ｌ）で希釈し、飽和クエン酸（５×５００ｍＬ）で洗浄し、飽和重炭酸塩洗浄、続いてブライン洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。物質をエーテル（２×５００ｍＬ）で研和して化合物Ａ４（８０ｇ、５３％）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ４．３６−４．２１（ｍ，２Ｈ），４．０３−３．９８（ｍ，１Ｈ），３．７６−３．６７（ｍ，１Ｈ），３．５６−．３．３７（ｍ，２Ｈ），２．３２−２．２３（ｍ，２Ｈ），１．９７−１．９３（ｍ，２Ｈ），１．４９−１．４７（２ｓ，９Ｈ），１．３３−１．３２（ｄ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３２８．３［Ｍ＋＋１］；ＨＰＬＣ：９９．３０％；キラルＨＰＬＣ：９８．９７％；ＳＯＲ（ｃ＝１、ＣＨ３ＯＨ）：−１１．０８．
【０１０６】
（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−（（Ｒ）−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−イル）ブタンアミド（１０）の合成：
化合物Ａ４（１０ｇ、０．０３０ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の撹拌溶液に窒素雰囲気下において０℃でＴＦＡ（２４ｍＬ、０．３０５８ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温にし、４時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、揮発性物質を減圧下で蒸発させた。得られた粘度の高いシロップ物質をエーテル（２×１００ｍＬ）およびヘキサン（１×１００ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥させて、化合物１０（３．５ｇ、ＴＦＡ塩）を粘度の高いシロップとして得、これを次の工程に用いた。粗製ＲＭは、精製することなくそのまま先に進めた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２２８．１［Ｍ＋＋１］．
【０１０７】
（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−（（Ｒ）−５−イソブチル−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−イル）ブタンアミド（化合物Ａ）の合成：
メタノール（５０ｍＬ）中の化合物１０（１０ｇ、ＴＦＡ塩０．０２８ｍｏｌ）の撹拌溶液にイソブチルアルデヒド（１０ｍＬ、０．１１５ｍｍｏｌ）、続いてＡｃＯＨ（１２ｍＬ）を窒素雰囲気下において室温で添加し、１０分間撹拌した。次いで、ＮａＣＮＢＨ３（７．２ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）を少しずつ添加し、１６時間撹拌を続けた。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）で希釈し、減圧下で濃縮した。５ｇのバッチで同様の反応を行った。両方のロットを合わせ、得られた粗物質を４％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−（（Ｒ）−５−イソブチル−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−イル）ブタンアミドの混合物を得た。得られた混合物をさらにカラムクロマトグラフィーに供し、（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−（（Ｒ）−５−イソブチル−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−イル）ブタンアミド（８ｇ）を粘度の高いシロップとして得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ４．１６−４．１２（ｍ，１Ｈ），４．０９（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），２．９７−２．９３（ｍ，１Ｈ），２．７５（ｑ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），２．４７−２．４５（ｍ，２Ｈ），２．２２−２．１８（ｍ，１Ｈ），２．１６−２．１０（ｍ，１Ｈ），１．９２−１．８３（ｍ，２Ｈ），１．７６−１．７３（ｍ，１Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），０．９２−０．８９（ｍ，６Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２８４．１［Ｍ＋＋１］；ＨＰＬＣ：９７．６５％；キラルＨＰＬＣ：９８．２５％；ＳＯＲ（ｃ＝１、ＣＨ３ＯＨ）：１．６．
【０１０８】
（４Ｒ）−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−５−イソブチル−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−５−イウム（Ｚ）−３−カルボキシアクリレート（化合物Ａマレイン酸塩）の合成：
（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−（（Ｒ）−５−イソブチル−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−イル）ブタンアミド（４００ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）の溶液にマレイン酸（１４８ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）を室温で添加し、１６時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、水を減圧下で除去した。得られた粗物質をペンタンおよびヘキサンで研和し、真空下で乾燥して、（４Ｒ）−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−５−イソブチル−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−５−イウム（Ｚ）−３−カルボキシアクリレート（５３０ｍｇ、９４％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ６．２９（ｓ，２Ｈ），４．２１−４．１２（ｍ，２Ｈ），３．９１−３．８５（ｍ，１Ｈ），３．８３−３．７９（ｍ，１Ｈ），３．６１−３．５１（ｍ，１Ｈ），３．２９−３．１９（ｍ，１Ｈ），３．０４（ｄｄ，Ｊ＝９．０，１２．５Ｈｚ，１Ｈ），２．９０（ｄｄ，Ｊ＝５．８，１２．２Ｈｚ，１Ｈ），２．５２−２．４３（ｍ，１Ｈ），２．４０−２．３１（ｍ，１Ｈ），２．２５−１．９７（ｍ，３Ｈ），１．２８（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，３Ｈ），１．０４（ｄｄ，Ｊ＝６．４，９．９Ｈｚ，６Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２８４．３［Ｍ＋＋１−マレイン酸］；ＨＰＬＣ：９６．８３％；融点：１１３．４℃〜１１７．５℃．
【０１０９】
Ｉｎｔ−Ｄの調製：
（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−トレオニン（Ａ１）の合成：
ＳＭ−２（５０ｇ、０．４２０ｍｏｌ）の１，４−ジオキサン：水（５００ｍＬ、１：１）溶液にＮａＨＣＯ３（１３３ｇ、１．２５５ｍｏｌ）を室温で少しずつ加え、１５分間撹拌した。次いで、Ｂｏｃ無水物（１４４ｍＬ、０．６２９ｍｏｌ）を反応混合物に滴下し、撹拌を室温で１６時間継続した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物を減圧下で濃縮し、得られた残渣を水（２００ｍＬ）で希釈し、１ＮのＨＣｌ（ｐＨ約２）を用いることによって酸性にした。水層をＥｔＯＡｃ（２×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１×２００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、Ａ１（８０ｇ、８７％）を無色のシロップとして得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．３０（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），４．５０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．０５−４．０２（ｍ，１Ｈ），３．８８−３．８６（ｍ，１Ｈ），１．３９（ｓ，９Ｈ），１．０８（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ）；
ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）：２１８．１［Ｍ＋−１］
【０１１０】
Ｏ−ベンジル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−トレオニン（Ｂ１）の合成：
ＤＭＦ（８００ｍＬ）中の化合物Ａ１（８０ｇ、０．３６５ｍｏｌ）の撹拌溶液にＮ２雰囲気下において−２０℃で６０％ＮａＨ（２２ｇ、０．９１３ｍｏｌ）を少しずつ添加し、２時間撹拌した。これに臭化ベンジル（５２ｍＬ、０．４３８ｍｏｌ）を滴下し、反応混合物を０℃で４時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、氷冷水で反応混合物の反応を停止させ、ジエチルエーテル（２×５００ｍＬ）で抽出した。水層を、１Ｎ  ＨＣｌ（ｐＨ〜２）を用いて酸性化した。水層をＥｔＯＡｃ（２×１Ｌ）で抽出した。分離した有機層をブライン溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、化合物Ｂ１（８４ｇ、粗製）を粘度の高いシロップとして得た。
１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．６４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．３４−７．２５（ｍ，５Ｈ），６．４６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），４．５３（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），４．３９（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．００−３．９８（ｍ，２Ｈ），１．３９（ｓ，９Ｈ），１．１５（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ）．
【０１１１】
ベンジルＯ−ベンジル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−トレオニン酸（Ｃ１）の合成：
ＤＭＦ（７８０ｍＬ）中の化合物Ｂ１（７８ｇ、０．２５２ｍｏｌ）の撹拌溶液にＫ２ＣＯ３（８７ｇ、０．６３１ｍｏｌ）をＮ２雰囲気下において室温で添加し、３０分間撹拌した。これに臭化ベンジル（４５ｍＬ、０．３７８ｍｏｌ）を室温で滴下し、１６時間撹拌した。水（２Ｌ）で反応混合物の反応を停止させ、ジエチルエーテル（２×１Ｌ）で抽出した。分離した有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質を１０％ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、化合物Ｃ１（６８ｇ、６８％）を黄色のシロップとして得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．３７−７．１８（ｍ，１０Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０８（ｓ，２Ｈ），４．４９（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３２（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２５−４．２２（ｍ，１Ｈ），４．０１−３．９８（ｍ，１Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ），１．１５（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ）；質量（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３９９．４［Ｍ＋］．
【０１１２】
ベンジルＯ−ベンジル−Ｌ−トレオニン塩酸塩（Ｄ１）の合成：
化合物Ｃ１（６８ｇ、０．１７０ｍｏｌ）のジエチルエーテル（５００ｍＬ）溶液に１，４−ジオキサン中の４Ｎ  ＨＣｌ（１３０ｍＬ、０．５１１ｍｏｌ）を添加し、室温で１６時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物を減圧下で濃縮した。粗物質をジエチルエーテル（１Ｌ）に溶解し、室温で１時間激しく撹拌した。得られた固体を濾別し、減圧下で乾燥させて化合物Ｄ１（５０ｇ、８７％）を白色固体（ＨＣｌ塩）として得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ８．５９（ｓ，２Ｈ），７．５０−７．２５（ｍ，１０Ｈ），５．２３（ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ），５．１６（ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ），４．５４（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３６（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１２−４．０９（ｍ，１Ｈ），４．０９−３．９９（ｍ，１Ｈ），１．２９（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）；質量（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３３６．４［Ｍ＋＋１］．
【０１１３】
実施例２  −  化合物Ｂおよび化合物Ｂマレイン酸塩の合成
【化８】
2019516735.tif 000010
（３Ｓ，７ａＲ）−３−（トリクロロメチル）テトラヒドロ−１Ｈ，３Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］オキサゾール−１−オン（１）の合成：
クロロホルム（６０Ｌ）中のＤ−プロリン（３ｋｇ、２６．０５７ｍｏｌ）の懸濁液に室温で抱水クロラール（８．６２ｋｇ、５２．１１５ｍｏｌ）を添加した。反応混合物をリバースディーンスターク装置下で８０℃に加熱し、得られた水を収集した。２４時間撹拌した後、反応混合物を室温に冷却し、ブライン溶液（２５Ｌ）を添加した。反応混合物を３０分間撹拌し、３０分間静置した。分離した有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、揮発物を減圧下で蒸発させた。得られた粗製固体を冷エタノール（５Ｌ）でスラリー化し、濾過し、乾燥して、化合物１（４．７ｋｇ、７４％）をオフホワイトの固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ５．８２（ｓ，１Ｈ），４．１１−４．０９（ｍ，１Ｈ），３．３３−３．２８（ｍ，１Ｈ），３．１９−３．１４（ｍ，１Ｈ），２．１７−２．１０（ｍ，１Ｈ），１．９７−１．９１（ｍ，１Ｈ），１．８０−１．７４（ｍ，１Ｈ），１．６５−１．５８（ｍ，１Ｈ）．
【０１１４】
（３Ｓ，７ａＳ）−７ａ−（（ベンジルオキシ）メチル）−３−（トリクロロメチル）テトラヒドロ−１Ｈ，３Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］オキサゾール−１−オン（２）の合成：
ジイソプロピルアミン（４４２ｍＬ、３．０６７ｍｏｌ）のＴＨＦ（１Ｌ）溶液に窒素雰囲気下において−７８℃でｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中１．６Ｍ）（１．９１Ｌ、３．０６７ｍｏｌ）を滴下した。添加終了後、反応混合物の温度を−２０℃に上げ、４５分間撹拌した。再び−７８℃に冷却し、ＴＨＦ（２Ｌ）中の化合物１（５００ｇ、２．０４４ｍｏｌ）を滴下し、４５分間撹拌した。次いで、ベンジルクロロメチルエーテル（４２５ｍＬ、３．０６７ｍｏｌ）を滴下し、２時間撹拌を続けた。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、氷冷水（２Ｌ）で反応混合物の反応を停止させ、Ｅｔ２Ｏ（２×１Ｌ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３Ｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗化合物を得、これを１０％ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物２（４２５ｇ、５７％）を黄色の液体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．３５−７．２６（ｍ，５Ｈ），５．６０（ｓ，１Ｈ），４．５９−４．５３（ｄ，２Ｈ），３．６７−３．６２（ｍ，２Ｈ），３．７１−３．３１（ｍ，１Ｈ），３．１６−３．１１（ｍ，１Ｈ），２．１２−１．９９（ｍ，２Ｈ），１．８６−１．７２（ｍ，２Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３６３．８［Ｍ＋−１］．
【０１１５】
メチル（Ｓ）−２−（（ベンジルオキシ）メチル）ピロリジン−２−カルボキシレート塩酸塩（３）の合成：
化合物２（１ｋｇ、２．７４２ｍｏｌ）のメタノール（２Ｌ）溶液にメタノール中の２Ｎ  ＨＣｌ（４．１Ｌ、８．２２７ｍｏｌ）を室温で添加し、３０分間撹拌した。反応混合物を６０℃で１６時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、揮発性物質を減圧下で蒸発させた。得られた粗シロップをＤＭ水（３Ｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×１Ｌ）で洗浄した。水層ｐＨ（８〜９）をＮａＨＣＯ３溶液で調整した。水層を５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２×２Ｌ）で抽出した。合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して化合物３（６００ｇ、８８％）を褐色のシロップとして得た。別の１ｋｇバッチを繰り返し、６００ｇの化合物３を得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１０．５４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），９．４４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．４０−７．３０（ｍ，５Ｈ），４．６８−４．６２（ｄ，１Ｈ），４．５１−４．４６（ｄ，１Ｈ），４．００−３．９０（ｍ，２Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．３３−３．１６（ｍ，２Ｈ），２．２０−２．１４（ｓ，１Ｈ），２．０１−１．８５（ｍ，３Ｈ）．
【０１１６】
１−（ｔｅｒｔ−ブチル）２−メチル（Ｓ）−２−（（ベンジルオキシ）メチル）ピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（４）の合成：
ＤＣＭ（６Ｌ）中の化合物３（１．２ｋｇ、４．８１９ｍｏｌ）の撹拌懸濁液に窒素雰囲気下において０℃でＥｔ３Ｎ（１．３５Ｌ、９．６３８ｍｏｌ）を滴下し、２０分間撹拌した。次いで、０℃でＢｏｃ無水物（１．６５Ｌ、７．２２８ｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温にし、８時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応物をＤＭ水（３Ｌ）で希釈し、ＤＣＭ（２Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を１０％クエン酸（２Ｌ）溶液およびブライン溶液（２Ｌ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、化合物４（２ｋｇ、粗製）を褐色のシロップとして得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．３７−７．２８（ｍ，５Ｈ），４．５７−４．５０（ｍ，２Ｈ），４．０３−３．８８（ｄｄ，１Ｈ），３．７１−３．６９（ｄ，１Ｈ），３．６３（ｓ，３Ｈ），３．５２−３．４７（ｍ，１Ｈ），３．３６−３．３１（ｍ，１Ｈ），２．３２−２．２３（ｍ，１Ｈ），２．０５−１．８８（ｍ，２Ｈ），１．８２−１．７７（ｍ，１Ｈ），１．３８−１．２６（ｓ，９Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３５０．２［（Ｍ＋＋１）］．
【０１１７】
（Ｓ）−２−（（ベンジルオキシ）メチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸（５）の合成：
化合物４（１ｋｇ、２．８６５ｍｏｌ）のＭｅＯＨ：ＴＨＦ（３Ｌ、１：１）溶液にＨ２Ｏ（１．５Ｌ）中のＮａＯＨ（３４３．８４ｇ、８．５９５ｍｏｌ）を室温で添加し、７０℃で６時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物を室温にし、揮発性物質を減圧下で蒸発させた。粗物質を水（５Ｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×２Ｌ）で抽出した。分離した水層を、６Ｎ  ＨＣｌ溶液（ｐＨ〜２）を用いて酸性化し、ＤＣＭ（３×２Ｌ）で抽出した。合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して化合物５（５５０ｇ、５８％）を褐色のシロップとして得た。別の１ｋｇバッチを繰り返し、５５０ｇの化合物５を得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．６８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．３６−７．２８（ｍ，５Ｈ），４．５６−４．４９（ｍ，２Ｈ），４．０７−３．９０（ｄｄ，１Ｈ），３．６６−３．６４（ｄ，１Ｈ），３．５０−３．４４（ｍ，１Ｈ），２．２９−２．２０（ｍ，１Ｈ），２．０３−１．７５（ｍ，３Ｈ），１．３９−１．２８（２ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２３６．０［Ｍ＋＋１−Ｂｏｃ］；ＨＰＬＣ：７６．７９％；キラルＨＰＬＣ：９６．２６％
【０１１８】
（Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−２−カルボン酸（６）の合成：
メタノール（１０Ｌ）中の化合物５（１．１ｋｇ、３２．８３５ｍｏｌ）の撹拌溶液に５０％湿１０％Ｐｄ−Ｃ（５００ｇ）を室温で添加し、Ｈ２雰囲気下で８時間撹拌した（３ｋｇ）。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物をセライトパッドで濾過し、パッドをメタノール（５０ｍＬ）で洗浄した。得られた濾液を減圧下で濃縮して粗生成物を得、これをＥｔ２Ｏで研和してオフホワイトの固体として化合物６（６５０ｇ、８１％）を得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．９２−３．８０（ｄｄ，１Ｈ），３．６４−３．６１（ｍ，１Ｈ），３．４９−３．３４（ｍ，１Ｈ），３．３２−３．２６（ｍ，１Ｈ），２．２９−２．１６（ｍ，１Ｈ），１．９５−１．７１（ｍ，３Ｈ），１．３８−１．３３（ｓ，９Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２４３．８［Ｍ＋−１］．
【０１１９】
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１，３−ビス（ベンジルオキシ）−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボキシレート（７）の合成：
化合物６（４５０ｇ、０．８３６ｍｏｌ）のＤＣＭ（４．５Ｌ）溶液に窒素雰囲気下において０〜５℃でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８４６ｍＬ、４．５９１ｍｏｌ）を添加した。１０分間撹拌した後、中間体Ｄ１（６１５ｇ、１．８３６ｍｏｌ）を添加した。１０分間撹拌した後、ＨＡＴＵ（７０１ｇ、２．２０４ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温にし、６時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物をＤＣＭ（１Ｌ）で希釈し、水（２×２Ｌ）、１０％クエン酸溶液（２Ｌ）およびブライン溶液（２Ｌ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗化合物を得、これを４０％ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物７を得、これをＥｔ２Ｏ（１．５Ｌ）中に溶解し、１時間撹拌した。得られた沈殿物を濾過し、真空下で乾燥して化合物７（６３０ｇ、６５％）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．９１−７．８９（ｄ，０．５Ｈ），７．５３−７．５１（ｄ，０．５Ｈ），７．３２−７．１９（ｍ，１０Ｈ），５．６４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），５．１６−５．０４（ｍ，２Ｈ），４．６２−４．４９（ｍ，２Ｈ），４．３１−４．２８（ｍ，１Ｈ），４．０９−４．０２（ｍ，１．５Ｈ），３．８７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．５７−３．５６（ｍ，０．５Ｈ），３．４３−３．３７（ｍ，１Ｈ），３．２９−３．２５（ｍ，１Ｈ），２．３２−２．１４（ｍ，１Ｈ），１．９８−１．９０（ｍ，１Ｈ），１．７５−１．６９（ｍ，２Ｈ），１．３３−１．２６（２ｓ，９Ｈ），１．１４−１．１２（ｄ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）：５２７．６［Ｍ＋＋１］；ＨＰＬＣ：９６．６０％．
【０１２０】
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−１，３−ビス（ベンジルオキシ）−１−オキソブタン−２−イル）−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−５−カルボキシレート（８）の合成：
トリフェニルホスフィン（２９５ｇ、１．１２５ｍｏｌ）のＴＨＦ（８４６ｍＬ）溶液に窒素雰囲気下において室温でＤＩＡＤ（２２７ｇ、１．１２５ｍｏｌ）を滴下し、３０分間撹拌した。反応混合物を１５℃に冷却し、化合物７（４２３ｇ、０．８０４ｍｏｌ）のＴＨＦ（１．２Ｌ）溶液を滴下し、室温で４時間撹拌した。得られた粗物質をヘキサンで洗浄し、続いて５０％Ｅｔ２Ｏ／ヘキサンで３０分間撹拌した。形成された沈殿物を濾別し、濾液を減圧下で濃縮した。得られた粗生成物を４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物８（４２５ｇ、粗製）を褐色のシロップとして得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．３８−７．２１（ｍ，１０Ｈ），５．１７−５．１０（ｍ，２Ｈ），４．５６−４．５０（ｍ，２Ｈ），４．３１−４．２８（ｄ，１Ｈ），４．０６−３．９９（ｍ，２Ｈ），３．８９−３．８８（ｄ，０．５Ｈ），３．４８−３．４７（ｄ，０．５Ｈ），３．３６−３．３４（ｍ，１Ｈ），３．２５−３．１９（ｍ，１Ｈ），２．１０−２．０２（ｍ，２Ｈ），１．７９−１．７７（ｍ，２Ｈ），１．４０−１．２５（ｓ，９Ｈ），１．１５−１．１２（ｄ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５０９．４［Ｍ＋＋１］；ＨＰＬＣ：９２．３１％；キラルＨＰＬＣ：８６．４７％．
【０１２１】
（２Ｓ，３Ｒ）−２−（（Ｓ）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−イル）−３−ヒドロキシブタン酸（９）の合成：
化合物８（２８３ｇ、０．５５７ｍｏｌ）のメタノール（１．２Ｌ）溶液をＮ２雰囲気下で脱気した。次いで、５０％湿１０％Ｐｄ−Ｃ（１４０ｇ）を室温で添加し、Ｈ２雰囲気下で２４時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物をセライトパッドで濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。得られた粗固体をＥｔ２Ｏ（５００ｍＬ）で希釈し、０℃で１時間激しく撹拌した。得られた固体物質を濾別し、乾燥して化合物９（１４０ｇ、７６％）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．８６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），５．２４（ｂｒ  ｓ  １Ｈ），４．０６−４．００（ｍ，２Ｈ），３．８８−３．８２（ｍ，１Ｈ），３．５１−３．５０（ｍ，１Ｈ），３．４３−３．３４（ｍ，１Ｈ），３．３１−３．２３（ｍ，１Ｈ），２．１５−２．０９（ｍ，２Ｈ），１．８２−１．７８（ｍ，２Ｈ），１．３９−１．３１（２ｓ，９Ｈ），１．１０−１．０８（ｄ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）：３２７．１［Ｍ＋−１］；ＨＰＬＣ：９５．４４％；キラルＨＰＬＣ：１００．００％．
【０１２２】
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−５−カルボキシレート（Ｂ４）の合成：
ＣＨ２Ｃｌ２（４．２Ｌ）中の化合物９（４２０ｇ、１．２８ｍｏｌ）の撹拌溶液に窒素雰囲気下において０℃でＨＡＴＵ（５８４ｇ、１．５３６ｍｏｌ）、ＮＨ４Ｃｌ（１３７ｇ、２．５６ｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（７０８ｍＬ、３．８４１ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温にし、８時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物を水（２Ｌ）とＣＨ２Ｃｌ２（２Ｌ）との間で分配し、１５分間撹拌した。有機層を分離し、２Ｎ  ＨＣｌ溶液（２×１Ｌ）および飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２Ｌ）およびブライン溶液（２Ｌ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。得られた粗生成物を５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物Ｂ４（３２０ｇ、混合物）をオフホワイトの固体として得た。混合化合物Ｂ４（８７ｇ）をＤＣＭに溶解し、室温で１時間激しく撹拌しながらＥｔ２Ｏで再沈殿させた。生成物を濾過し、真空下で乾燥して化合物Ｂ４（８２ｇ）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ４．５３−４．１０（ｍ，２Ｈ），４．０８−３．９６（ｍ，１Ｈ），３．８０−３．７２（ｍ，１Ｈ），３．６０−３．３９（ｍ，２Ｈ），２．５３−２．３１（ｍ，２Ｈ），２．０２−１．９３（ｍ，２Ｈ），１．５１−１．４５（ｓ，９Ｈ），１．３１−１．２９（ｄ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３２６．１［Ｍ＋−１］；ＨＰＬＣ：９９．６６％；キラルＨＰＬＣ：９９．７６％；ＳＯＲ（ｃ＝１、ＭｅＯＨ）：−４９．６１．
【０１２３】
（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−（（Ｓ）−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−イル）ブタンアミド（１０）の合成：
化合物Ｂ４（１０ｇ、０．０３１ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）中の撹拌溶液に窒素雰囲気下において０℃でＴＦＡ（２３ｍＬ、０．３０５ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温にし、３時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、揮発性物質を減圧下で蒸発させた。得られた粘度の高いシロップ物質をエーテル（２×５０ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥させて、化合物１０（１０ｇ、ＴＦＡ塩、粗製）を粘度の高いシロップとして得、これを次の工程に用いた。１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ４．３８−４．１０（ｍ，２Ｈ），４．１１−３．９４（ｍ，２Ｈ），３．５６−３．４４（ｍ，２Ｈ），２．５２−２．３８（ｍ，２Ｈ），２．２４−２．１６（ｍ，２Ｈ），１．３９−１．２７（ｄ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２２８．２［Ｍ＋＋１］．
【０１２４】
（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−（（Ｓ）−５−イソブチル−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−イル）ブタンアミド（化合物Ｂ）の合成：
メタノール（５０ｍＬ）中の粗化合物１０（１０ｇ、ＴＦＡ塩０．０２９ｍｏｌ）の撹拌溶液にイソブチルアルデヒド（６．５ｍＬ、０．０７３ｍｏｌ）、続いてＡｃＯＨ（２．５ｍＬ）を窒素雰囲気下において室温で添加し、１０分間撹拌した。次いで、ＮａＣＮＢＨ３（５．４ｇ、０．０８７ｍｏｌ）を少しずつ添加し、１６時間撹拌を続けた。出発物質の消費（ＴＬＣによる）は完了しなかった。再度、イソブチルアルデヒド（３．２ｍＬ、０．０３６ｍｏｌ）およびＡｃＯＨ（１ｍＬ）を添加し、２時間撹拌を続けた。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）で希釈し、減圧下で濃縮した。得られた粗物質を４％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−（（Ｓ）−５−イソブチル−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−イル）ブタンアミド（６ｇ）を粘度の高いシロップとして得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ４．１０−４．０７（ｍ，２Ｈ），３．６３（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），３．４９（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），２．９７−２．９３（ｍ，１Ｈ），２．７４（ｑ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），２．４１−２．３４（ｍ，２Ｈ），２．２６−２．２０（ｍ，１Ｈ），２．１７−２．１１（ｍ，１Ｈ），１．９４−１．８１（ｍ，２Ｈ），１．７３−１．６９（ｍ，１Ｈ），１．２１（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），０．９１−０．８９（ｍ，６Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２８４．１［Ｍ＋＋１］；ＨＰＬＣ：９９．５３％；キラルＨＰＬＣ：１００．００％；ＳＯＲ（ｃ＝０．５、ＭｅＯＨ）：−６０．２５．
【０１２５】
（４Ｓ）−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−５−イソブチル−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−５−イウム（Ｚ）−３−カルボキシアクリレート（化合物Ｂマレイン酸塩）の合成：
（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−（（Ｓ）−５−イソブチル−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−イル）ブタンアミド（１８０ｍｇ、０．６３６ｍｍｏｌ）の溶液にマレイン酸（５９ｍｇ、０．５０８ｍｍｏｌ）を室温で添加し、１６時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、水を減圧下で除去した。得られた粗物質をペンタンおよびヘキサンで研和し、真空下で乾燥して、（４Ｓ）−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−５−イソブチル−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−５−イウム（Ｚ）−３−カルボキシアクリレート（２１０ｍｇ、８６％）を淡黄色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ６．２８（ｓ，２Ｈ），４．２１−４．１１（ｍ，２Ｈ），３．９０（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７１（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），３．４７−３．３６（ｍ，１Ｈ），３．２０−３．０９（ｍ，１Ｈ），２．９２−２．８２（ｍ，１Ｈ），２．８１−２．７１（ｍ，１Ｈ），２．４８−２．３８（ｍ，１Ｈ），２．３６−２．２６（ｍ，１Ｈ），２．２０−１．８８（ｍ，３Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２８４．２［Ｍ＋＋１−マレイン酸］；ＨＰＬＣ：９７．９８％；融点：１１４．８℃〜１１８．３℃．
【０１２６】
実施例３  −  化合物Ｃの合成
【化９】
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（３Ｒ，７ａＳ）−３−（トリクロロメチル）テトラヒドロ−１Ｈ，３Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］オキサゾール−１−オン（１）の合成：
クロロホルム（５０Ｌ）中のＬ−プロリン（２．０ｋｇ、０．０１７ｍｏｌ）の懸濁液に室温で抱水クロラール（５．７ｋｇ、０．０３４ｍｏｌ）を添加した。反応混合物をリバースディーンスターク装置下で６０℃に加熱し、得られた水を収集した。１６時間後、揮発性物質を減圧下で濃縮した。粗固体を冷エタノールで洗浄し、濾過し、乾燥させて化合物１（２．２ｋｇ、５７％）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ５．８２（ｓ，１Ｈ），４．１１−４．０８（ｍ，１Ｈ），３．３３−３．２７（ｍ，２Ｈ），３．１９−３．１４（ｍ，１Ｈ），２．１５−２．１０（ｍ，１Ｈ），１．９６−１．９１（ｍ，１Ｈ），１．８０−１．７４（ｍ，１Ｈ），１．６５−１．５８（ｍ，１Ｈ）．
【０１２７】
（３Ｒ，７ａＲ）−７ａ−（（ベンジルオキシ）メチル）−３−（トリクロロメチル）テトラヒドロ−１Ｈ，３Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］オキサゾール−１−オン（２）の合成：
ジイソプロピルアミン（２２１．２ｍＬ、１．５３３ｍｏｌ）のＴＨＦ（８７０ｍＬ）溶液に窒素雰囲気下において−７８℃でｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中１．６Ｍ）（９５８．５ｍＬ、１．５３３ｍｏｌ）を滴下した。添加終了後、反応混合物の温度を−２０℃に上げ、１時間撹拌した。再び−７８℃に冷却し、ＴＨＦ（１Ｌ）中の化合物１（２５０ｇ、１．０２２ｍｏｌ）を加え、３０分間撹拌した。次いで、ベンジルクロロメチルエーテル（２０８ｍＬ、１．３２９ｍｏｌ）を滴下し、１時間撹拌を続けた。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、氷冷水（１００ｍＬ）で反応混合物の反応を停止させ、Ｅｔ２Ｏ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、これを１０％ＥｔＯＡＣ／ｎ−ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物２（２２０ｇ、粗製）を褐色の粘度の高いシロップとして得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．４２−７．２６（ｍ，５Ｈ），５．６０（ｓ，１Ｈ），４．５９−４．５３（ｄ，２Ｈ），３．６７−３．６１（ｍ，２Ｈ），３．３７−３．３３（ｍ，１Ｈ），３．３１−３．１０（ｍ，１Ｈ），２．１２−１．９９（ｍ，２Ｈ），１．８７−１．７５（ｍ，２Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３６３．９［Ｍ＋＋１］．
【０１２８】
メチル（Ｒ）−２−（（ベンジルオキシ）メチル）ピロリジン−２−カルボキシレート塩酸塩（３）の合成：
化合物２（４００ｇ、１．０９６ｍｏｌ）のメタノール（１Ｌ）溶液に室温でＭｅＯＨ（１．６４Ｌ、３．２９ｍｏｌ）中の２Ｎ  ＨＣｌを添加し、８０℃で１６時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、揮発性物質を減圧下で蒸発させた。得られた粗生成物をヘキサン（３×７５０ｍＬ）で洗浄し、減圧下で乾燥させて、化合物３（３５８ｇ、粗製）を、赤味を帯びた粘度の高いシロップとして得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１０．４０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．４０−７．２１（ｍ，５Ｈ），４．６４−４．５０（ｄ，２Ｈ），４．４９−４．３（ｄ，２Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．３３−３．２２（ｍ，２Ｈ），２．２２−２．１５（ｓ，１Ｈ），２．０２−１．９（ｍ，２Ｈ），１．９５−１．８３（ｍ，１Ｈ）．
【０１２９】
１−（ｔｅｒｔ−ブチル）２−メチル（Ｒ）−２−（（ベンジルオキシ）メチル）ピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（４）の合成：
ＤＣＭ（２．１９Ｌ）中の化合物３（３１３ｇ、粗製１．０９６ｍｏｌ）の撹拌懸濁液に窒素雰囲気下において０℃でＥｔ３Ｎ（４５８．４ｍＬ、３．２８８ｍｏｌ）を滴下し、１０分間撹拌した。次いで、Ｂｏｃ無水物（３５８．４ｇ、１．６４４ｍｏｌ）を０℃で滴下した。反応混合物を室温にし、１６時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応物を水（２×１Ｌ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を１０％クエン酸（ｐＨ〜７）およびブライン溶液（１Ｌ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗化合物を得、これを２０％ＥｔＯＡＣ／ｎ−ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物４（２１５ｇ、５６％）を無色の粘度の高いシロップとして得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．３７−７．２６（ｍ，５Ｈ），４．５６−４．４８（ｍ，２Ｈ），４．０３−３．８７（ｄｄ，１Ｈ），３．６９−３．６７（ｄ，１Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），３．５３−３．４７（ｍ，１Ｈ），３．３３−３．３０（ｍ，１Ｈ），２．２７−２．２０（ｍ，１Ｈ），２．０３−１．８９（ｍ，２Ｈ），１．８８−１．７９（ｍ，１Ｈ），１．４６−１．２４（２ｓ，９Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２５０．１［（Ｍ＋＋１）−Ｂｏｃ］．
【０１３０】
（Ｒ）−２−（（ベンジルオキシ）メチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸（５）の合成：
化合物４（２１５ｇ、０．６１６ｍｏｌ）のＭｅＯＨ：ＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（３Ｌ、５：５：３）溶液にＮａＯＨ（７３．９ｇ、１．８４８ｍｏｌ）を添加し、室温で１０分間撹拌した。反応混合物を８０℃に加熱し、１６時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物を室温にし、揮発性物質を蒸発させた。粗物質を水（１Ｌ）で希釈し、Ｅｔ２Ｏ（２×５００ｍＬ）で抽出した。分離した水層を、２Ｎ  ＨＣｌ溶液（ｐＨ〜３）を用いて酸性化し、ＤＣＭ（２×７５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、化合物５（１７０ｇ、８２．４％）をオフホワイトの固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．６６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．３６−７．２６（ｍ，５Ｈ），４．５４−４．４７（ｍ，２Ｈ），４．０５−３．９０（ｄｄ，１Ｈ），３．８８−３．６３（ｄ，１Ｈ），３．６３−３．４４（ｍ，１Ｈ），３．３４−３．２７（ｍ，１Ｈ），２．２７−２．０１（ｍ，１Ｈ），２．０２−１．８（ｍ，２Ｈ），１．７９−１．７６（ｍ，１Ｈ），１．１７−１．１４（２ｓ，９Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２３５．１［（Ｍ＋＋１）−Ｂｏｃ］．
【０１３１】
（Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−２−カルボン酸（６）の合成：
ＣＨ３ＯＨ（１Ｌ）中の化合物５（１７０ｇ、０．５０７ｍｏｌ）の撹拌溶液に５０％湿１０％Ｐｄ−Ｃ（６８ｇ）を室温で添加し、Ｈ２雰囲気下で１６時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物をセライトパッドで濾過し、パッドをＣＨ３ＯＨ（１Ｌ）で洗浄した。得られた濾液を減圧下で濃縮して、化合物６（１１０ｇ、８８％）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．６６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．９６−３．８３（ｄｄ，１Ｈ），３．６３−３．６０（ｍ，１Ｈ），３．４９−３．４６（ｍ，１Ｈ），３．３４−３．２５（ｍ，２Ｈ），２．３０−２．１５（ｍ，１Ｈ），１．９５−１．７２（ｍ，３Ｈ），１．３８−１．３３（２ｓ，９Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２４４［Ｍ＋−１］；キラルＨＰＬＣ：９５．８８％．
【０１３２】
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ）−１，３−ビス（ベンジルオキシ）−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボキシレート（７）の合成：
Ｎ２雰囲気下で０℃に冷却したＤＣＭ（２０ｍＬ）反応混合物中の化合物６（１１０ｇ、０．４４８ｍｏｌ）の撹拌溶液にジイソプロピルエチルアミン（２０６ｍＬ、１．１２ｍｏｌ）を添加し、中間体Ｄ１（１５０ｇ、０．４４８ｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２０４ｇ、０．５３７ｍｏｌ）を窒素雰囲気下で添加した。反応混合物を室温にし、４時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物をＤＣＭ（１Ｌ）で希釈し、水（２×５００ｍＬ）、１０％クエン酸溶液（５００ｍＬ）およびブライン溶液（５００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗化合物を得、これを３０％ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物７（１４３ｇ、６０％）を無色の粘度の高いシロップとして得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ８．２０−８．１２（ｄ，１Ｈ），７．２９−７．１８（ｍ，１０Ｈ），５．８３−５．５９（ｍ，１Ｈ），５．０８（ｓ，２Ｈ），４．５０−４．４４（ｍ，２Ｈ），４．３０−４．２６（ｍ，１Ｈ），４．０８−４．００（ｍ，２Ｈ），３．４２−３．４０（ｍ，２Ｈ），３．３９−３．２９（ｍ，１Ｈ），２．１９−２．０８（ｍ，１Ｈ），１．９６−１．８７（ｍ，１Ｈ），１．６８−１．６３（ｍ，２Ｈ），１．２３−１．１５（２ｓ，９Ｈ），１．１４−１．１３（ｄ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）：５２５．２［Ｍ＋−１］；ＨＰＬＣ：７６．２％；キラルＨＰＬＣ：６９．４７％．
【０１３３】
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−１，３−ビス（ベンジルオキシ）−１−オキソブタン−２−イル）−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−５−カルボキシレート（８）の合成：
トリフェニルホスフィン（１６１．４ｇ、０．６１２ｍｏｌ）のＴＨＦ（４３０ｍＬ）溶液に窒素雰囲気下において室温でＤＩＡＤ（１２３．８ｇ、０．６１２ｍｏｌ）を滴下し、１５分間撹拌した。これに化合物７（２１５ｇ、０．４０８ｍｏｌ）のＴＨＦ（８６０ｍＬ）溶液を滴下し、室温で４時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、揮発性物質を減圧下で蒸発させた。得られた粗物質を２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離させるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物８（１８０ｇ、ＤＩＡＤ副生成物との混合物）を黄色のシロップとして得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．３１−７．１８（ｍ，１０Ｈ），５．１８−５．１０（ｍ，２Ｈ），４．６１−４．５４（ｍ，２Ｈ），４．２７−４．１８（ｍ，２Ｈ），３．７８−３．７７（ｄ，１Ｈ），３．４５−３．４３（ｄ，１Ｈ），３．３５−３．３１（ｄ，１Ｈ），３．２７−３．２３（ｍ，１Ｈ），２．０３−１．９８（ｍ，２Ｈ），１．７８−１．７６（ｍ，２Ｈ），１．３９−１．３１（２ｓ，９Ｈ），１．２３−１．２２（ｄ，３Ｈ）（ＤＩＡＤ副生成物のピークは捕捉されなかった）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５０９．４［Ｍ＋＋１］．
【０１３４】
（２Ｓ，３Ｒ）−２−（（Ｒ）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−イル）−３−ヒドロキシブタン酸（９）の合成：
化合物８（８５ｇ、０．１６７ｍｏｌ）のメタノール（８５０ｍＬ）溶液をＮ２雰囲気下で脱気した。次いで、５０％湿１０％Ｐｄ−Ｃ（４０ｇ）を室温で添加し、Ｈ２雰囲気下で２４時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物をセライトパッドで濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。得られた粗固体をＥｔ２Ｏ（１Ｌ）で希釈し、室温で１時間激しく撹拌した。得られた固体物質を濾別し、乾燥して化合物９（７５ｇ、６８％）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．８６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），５．２４（ｂｒ  ｓ  １Ｈ），４．０６−４．００（ｍ，２Ｈ），３．８８−３．８２（ｍ，１Ｈ），３．５１−３．５０（ｍ，１Ｈ），３．４３−３．３４（ｍ，１Ｈ），３．３１−３．２３（ｍ，１Ｈ），２．１５−２．０９（ｍ，２Ｈ），１．８２−１．７８（ｍ，２Ｈ），１．３９−１．３１（２ｓ，９Ｈ），１．１０−１．０８（ｄ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）：３２９．１［Ｍ＋＋１］；ＨＰＬＣ：９３．９７％．
【０１３５】
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−５−カルボキシレート（Ａ４）の合成：
反応混合物を０℃に冷却した状態のＣＨ２Ｃｌ２（２Ｌ）中の化合物９（１５０ｇ、０．４５７ｍｏｌ）の撹拌溶液にジイソプロピルエチルアミン（１７６．８５ｇ、１．３７ｍｏｌ）、ＮＨ４Ｃｌ（４８．８ｇ、０．９１４ｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２０８．３ｇ  ０．５４８ｍｏｌ）を窒素雰囲気下で添加した。反応混合物を室温にし、１２時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物を水（２×７５０ｍＬ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を２Ｎ  ＨＣｌ溶液および飽和塩化ナトリウム溶液（７５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗化合物をカラムクロマトグラフィーにより精製し、純化合物を３％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶離した。得られた物質をＤＣＭ（２Ｌ）で希釈し、飽和クエン酸（５×５００ｍＬ）で洗浄し、飽和重炭酸塩洗浄、続いてブライン洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。物質をエーテル（２×５００ｍＬ）で研和して化合物Ａ４（８０ｇ、５３％）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ４．３６−４．２１（ｍ，２Ｈ），４．０３−３．９８（ｍ，１Ｈ），３．７６−３．６７（ｍ，１Ｈ），３．５６−．３．３７（ｍ，２Ｈ），２．３２−２．２３（ｍ，２Ｈ），１．９７−１．９３（ｍ，２Ｈ），１．４９−１．４７（２ｓ，９Ｈ），１．３３−１．３２（ｄ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３２８．３［Ｍ＋＋１］；ＨＰＬＣ：９９．３０％；キラルＨＰＬＣ：９８．９７％；ＳＯＲ（ｃ＝１、ＣＨ３ＯＨ）：−１１．０８．
【０１３６】
（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−（（Ｒ）−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−イル）ブタンアミド（１０）の合成：
化合物Ａ４（２ｇ、６．１６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中の撹拌溶液に窒素雰囲気下において０℃でＴＦＡ（１．０ｍＬ、１２．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温にし、２時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、揮発性物質を減圧下で蒸発させた。得られた粘度の高いシロップ物質をエーテル（２×５０ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥させて、粗化合物１０（２．５ｇ、ＴＦＡ塩）を粘度の高いシロップとして得、これを次の工程に用いた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ４．２４−４．１７（ｍ，２Ｈ），３．９９−３．８９（ｍ，２Ｈ），３．５２−３．３９（ｍ，２Ｈ），２．４６−２．３２（ｍ，２Ｈ），２．２６−２．１０（ｍ，２Ｈ），１．２８（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２２８．１［Ｍ＋＋１］．
【０１３７】
（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−（（Ｒ）−５−（（Ｓ）−２−ヒドロキシプロピル）−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−イル）ブタンアミド（化合物Ｃ）：
メタノール（１０ｍＬ）中の化合物１０（ＴＦＡ塩、２ｇ、５．８６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＮａＯＭｅ（６３０ｍｇ、１１．７ｍｍｏｌ）、続いて（Ｓ）−２−メチルオキシラン（５１０ｍｇ、８．７９ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下において室温で添加した。反応混合物を室温で２４時間撹拌した。出発物質が消費された後（ＴＬＣによる）、反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）で希釈し、減圧下で濃縮した。得られた粗物質を５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−（（Ｒ）−５−（（Ｓ）−２−ヒドロキシプロピル）−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−イル）ブタンアミド（１８５ｍｇ、１２％）を粘度の高いシロップとして得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ４．１８−４．０７（ｍ，２Ｈ），３．９０−３．８１（ｍ，１Ｈ），３．６３（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），３．５８（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），３．１１（ｄｔ，Ｊ＝４．２，８．２Ｈｚ，１Ｈ），２．８３−２．６７（ｍ，２Ｈ），２．６２−２．５４（ｍ，１Ｈ），２．２６−２．１２（ｍ，２Ｈ），１．９８−１．８３（ｍ，２Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，３Ｈ），１．１４（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２８５．９［Ｍ＋＋１］；ＨＰＬＣ：９７．２０％．
【０１３８】
実施例４
この例は、肯定的感情学習（ＰＥＬ）試験を示す。実験は、Ｂｕｒｇｄｏｒｆ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｂｒｅｅｄｉｎｇ  ｆｏｒ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｒａｔｅｓ  ｏｆ  ５０−ｋＨｚ  ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ  ｖｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｓ  ｏｎ  ｅｍｏｔｉｏｎａｌ  ｂｅｈａｖｉｏｒ  ｉｎ  ｒａｔｓ，”Ｄｅｖｅｌ．Ｐｓｙｃｈｏｂｉｏｌ．，５１：３４−４６（２００９）に記載されているように行った。ラットの５０ｋＨｚの超音波啼鳴（ヘドニックＵＳＶ）は、肯定的感情状態の研究のための有効なモデルであり、取っ組み合い遊び（ｒｏｕｇｈ−ａｎｄ−ｔｕｍｂｌｅ  ｐｌａｙ）によって最もよく誘発される。５０ｋＨｚの超音波啼鳴は、ラットにおける報酬および食欲に関する社会的行動と正の相関を有し、肯定的感情状態を反映することが以前に示されている。
【０１３９】
ＰＥＬアッセイは、社会的刺激、異種特異的取っ組み合い遊び刺激に対する陽性（ヘドニック）５０ｋＨｚ超音波啼鳴（ＵＳＶ）の獲得を測定する。実験者の右手で異種特異的な取っ組み合い遊び刺激を施した。動物は、異種特異的な遊びの１５秒のブロックと無刺激の１５秒のブロックとの交互のブロックからなる３分の異種特異的な取っ組み合い遊びを受けた。Ｂｕｒｇｄｏｒｆ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｅｍｏｔｉｏｎａｌ  ｌｅａｒｎｉｎｇ  ｉｓ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｅｄｉａｌ  ｐｒｅｆｒｏｎｔａｌ  ｃｏｒｔｅｘ  ｂｙ  ＧｌｕＮ２Ｂ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ＮＭＤＡ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，”Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１９２：５１５−５２３（２０１１）によって以前に記載されているように、Ａｖａｓｏｆｔ  ＳＡＳｌａｂ  Ｐｒｏ（Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて超音波による高周波数超音波啼鳴（ＵＳＶ）を記録し、分析した。各無刺激期間中に発生した周波数変調された５０ｋＨｚのＵＳＶを定量してＰＥＬを測定した。動物は、刺激を与えるため、試験前に馴化しなかった。くすぐり無条件刺激（ＵＣＳ）試験に先行する条件付き刺激（ＣＳ）試験中に肯定的感情学習を測定した。動物は、それぞれ６回のＣＳおよび６回のＵＣＳ試験からなる１５回の第２回試験を受けた（合計３分間）。３分間のセッションの最後に、自発的に受けるくすぐりに対する動物の走行速度も測定した。
【０１４０】
図１は、ラットＰＥＬ試験の結果を示す。結果は、化合物ＡがＰＥＬ試験の１時間前に投与された場合、ラットＵＳＶによって測定された肯定的感情学習を増加させ、それにより抗うつ効果を示すことを実証する。
【０１４１】
実施例５
化合物Ａのミクロソームおよび血漿安定性を調査した。以下の表は、６０分後に残存する化合物Ａのパーセントを示す。
【表１】
2019516735.tif 000012
脳内の未結合薬物濃度も調査し、血漿タンパク質結合アッセイを実施した。以下の表（％結合）は、化合物Ａの結果を示す。
【表２】
2019516735.tif 000013
ＰＯ投与後に化合物Ａのバイオアベイラビリティを調査した。ＣＳＦ、脳および血漿試料を、化合物Ａ（１０ｍｇ／ｋｇ）を投与した後に分析した。以下の表は、バイオアベイラビリティならびにＣＳＦ／血漿および脳／血漿比を示す。
【表３】
2019516735.tif 000014
【０１４２】
実施例６
アッセイは、Ｍｏｓｋａｌ  ｅｔ  ａｌ．，“ＧＬＹＸ−１３：ａ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｔｈａｔ  ａｃｔｓ  ａｓ  ａｎ  Ｎ−ｍｅｔｈｙｌ−Ｄ−ａｓｐａｒｔａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ，”Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４９，１０７７−８７，２００５によって記載されているように行った。濃度を漸増させた化合物Ａの存在下において、［３Ｈ］ＭＫ−８０１（５ｎＭ；２２．５Ｃｉ／ｍｍｏｌ）と十分に洗浄したラット皮質膜（２００μｇ）との結合の増強を非平衡条件下で（２５℃で１５分間）測定した。
図２は、Ａに対する野生型ＮＭＤＡＲ２サブタイプの［３Ｈ］ＭＫ−８０１結合の増強を示す。図２に示すように、化合物Ａは、ＮＲ２Ａを高度に選好し、ＮＲ２Ｄに結合しない。
【０１４３】
実施例７
Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを静脈内投与した。第２群のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに１０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを経口投与した。血漿試料を２４時間にわたって採取し、化合物Ａについて分析した。
図３は、２４時間にわたる雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける単回静脈内（２ｍｇ／ｋｇ）および経口（１０ｍｇ／ｋｇ）投与後の化合物Ａの平均血漿濃度−時間プロファイルを提示する。
別の実験では、Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに１０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを経口投与した。血漿、脳およびＣＳＦ試料を２４時間にわたって様々な時点で分析した。
図４は、２４時間にわたる雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける単回経口（１０ｍｇ／ｋｇ）投与後の化合物Ａの平均血漿、脳およびＣＳＦ濃度−時間プロファイルを示す。
【０１４４】
実施例８
この例は、実施例３で上述したように、ＰＥＬ実験に関する。ラット超音波啼鳴（ＵＳＶ）試験である。
くすぐり無条件刺激（ＵＣＳ）試験に先行する条件付き刺激（ＣＳ）試験中に肯定的感情学習を測定した。動物は、それぞれ６回のＣＳおよび６回のＵＣＳ試験からなる１５回の第２回試験を受けた（合計３分間）。
図５は、ラットＵＳＶ試験の結果を示す。この結果は、化合物ＢがラットＵＳＶ試験において肯定的感情学習を増加させ、それにより抗うつ効果を示すことを実証する。
【０１４５】
実施例９
化合物Ｂのミクロソームおよび血漿安定性を調査した。以下の表は、６０分後に残存する化合物Ｂのパーセントを示す。
【表４】
2019516735.tif 000015
脳内の未結合薬物濃度も調査し、血漿タンパク質結合アッセイを実施した。以下の表（％結合）は、化合物Ｂの結果を示す。
【表５】
2019516735.tif 000016
化合物Ｂのバイオアベイラビリティを調査した。ＣＳＦ、脳および血漿試料を、化合物Ｂを投与した後に分析した。以下の表は、バイオアベイラビリティならびにＣＳＦ／血漿および脳／血漿比を示す。
【表６】
2019516735.tif 000017
化合物Ａおよび化合物Ｂは、両方とも経口バイオアベイラビリティがより低いが、より高い割合でＣＳＦおよび脳に到達することができる。
【０１４６】
実施例１０
アッセイは、Ｍｏｓｋａｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）による上記の実施例５に記載されるように行った。濃度を漸増させた化合物Ｂの存在下において、［３Ｈ］ＭＫ−８０１（５ｎＭ；２２．５Ｃｉ／ｍｍｏｌ）と十分に洗浄したラット皮質膜（２００μｇ）との結合の増強を非平衡条件下で（２５℃で１５分間）測定した。図６は、化合物Ｂの野生型ＮＭＤＡＲ２サブタイプに対する［３Ｈ］ＭＫ−８０１結合の増強を示す。化合物Ｂは、ＮＲ２ＢおよびＮＲ２Ｄを高度に選好し、ＮＲ２ＡおよびＮＲ２Ｃにおける効力がより低い。
【０１４７】
実施例１１
Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに２ｍｇ／ｋｇの化合物Ｂを静脈内投与した。第２群のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに１０ｍｇ／ｋｇの化合物Ｂを経口投与した。血漿試料を２４時間にわたって採取し、化合物Ｂについて分析した。
図７は、２４時間にわたる雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける単回静脈内（２ｍｇ／ｋｇ）および経口（１０ｍｇ／ｋｇ）投与後の化合物Ｂの平均血漿濃度−時間プロファイルを示す。
別の実験では、Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに１０ｍｇ／ｋｇの化合物Ｂを経口投与した。血漿、脳およびＣＳＦ試料を２４時間にわたって様々な時点で分析した。
図８は、２４時間にわたる雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける単回経口（１０ｍｇ／ｋｇ）投与後の化合物Ｂの平均血漿、脳およびＣＳＦ濃度−時間プロファイルを示す。
【０１４８】
実施例１２
インビトロＭＮ（小核）アッセイを化合物Ａについて実施した。化合物Ｂについてもアッセイを行った。細胞毒性は、対照増殖の％として示される。６０％未満の細胞毒性値が標識され、化合物は、それぞれの濃度で毒性であると考えられる。化合物ＡのインビトロＭＮアッセイの結果を図９に示す。化合物ＢのインビトロＭＮアッセイの結果を図１０に示す。
Ａｍｅｓアッセイは、化合物Ａおよび化合物Ｂのそれぞれについて行った。Ａｍｅｓアッセイの結果では、ハイフン（−）は、否定的な結果を示す。ｐ＜０．０５の場合、弱い陽性は、「＋」として示される。ｐ＜０．０１の場合、強い陽性は、「＋＋」と示される。ｐ＜０．００１の場合、非常に強い陽性は、「＋＋＋」と示される。化合物ＡのＡｍｅｓアッセイの結果を図９に示す。化合物ＢのＡｍｅｓアッセイの結果を図１０に示す。
潜在的なｈＥＲＧチャネル相互作用を同定するために、化合物Ａを用いてｈＥＲＧアッセイを行った。また、化合物Ｂを用いてｈＥＲＧアッセイを行った。ｈＥＲＧについて、５０％より高い阻害または刺激を示す結果は、試験化合物に有意な影響を表すと考えられる。化合物ＡのｈＥＲＧアッセイの結果を図９に示し、化合物ＢのｈＥＲＧアッセイの結果を図１０に示す。
【０１４９】
実施例１３
Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｔｒａｕｍａｔｉｃ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ  ｉｎ  ｂｌａｓｔ−ｅｘｐｏｓｅｄ  ｍｉｌｉｔａｒｙ  ｖｅｔｅｒａｎｓ  ａｎｄ  ａ  ｂｌａｓｔ  ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ，”Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌ．４，Ｉｓｓｕｅ  １３４，ｐｐ．１３４ｒａ６０，２０１２のプロトコルに従い、ラットにおける使用のために改変して、単一の爆風誘発性外傷性脳傷害／認知障害を誘発した。２〜３ヶ月齢の雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットを用いた。ラットをアスペンウッドチップの敷材と共にＬｕｃｉｔｅケージに収容し、１２：１２の明暗サイクル（午前５時に点灯）で維持し、試験を通してＰｕｒｉｎａ研究用飼料（ＵＳＡ）および水道水を自由摂取させた。最初に３．５〜４％イソフルランを用いてラットを麻酔し、次いで耳を１．５×１．５ｍｍ発泡プラグ（Ｐｕｒａ−Ｆｉｔ（登録商標）、Ｍｏｌｄｅｘ−Ｍｅｔｒｉｃ  Ｉｎｃ．、Ｃｕｌｖｅｒ  Ｃｉｔｙ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）で保護し、ラットを頭部アクセス齧歯類用胸部拘束具（Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ、ＵＳＡ）に入れて、頭部を自由に動かせるようにしながら身体を保護した。アルミニウムショックチューブ（１８３×６１ｃｍ；Ｌ−３  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＳＡ）をラットの頭部から１０ｃｍに配置した。ラットは、０．０１４インチのポリエステルフィルムを穿刺することによって発生したヘリウムの１回の約４２ＰＳＩの爆風を受けた。擬似対照は、爆風半径の外側に配置された。爆風の１時間後に化合物Ａ（１０ｍｇ／ｋｇ  ＰＯ）、化合物Ｂ（１０ｍｇ／ｋｇ  ＰＯ）、または０．９％滅菌生理食塩水中０．５％Ｎａ−ＣＭＣビヒクル（１ｍｌ／ｋｇ  ＰＯ）を動物に投与した。
【０１５０】
ＰＥＬ（肯定的感情学習）は、爆風の４８時間後に実施された。異種特異的な取っ組み合い遊びは、以前にＢｕｒｇｄｏｒｆ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅ  ｌｏｎｇ−ｌａｓｔｉｎｇ  ａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｒａｐａｓｔｉｎｅｌ（ＧＬＹＸ−１３）ａｒｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａ  ｍｅｔａｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ｐｒｏｃｅｓｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｅｄｉａｌ  ｐｒｅｆｒｏｎｔａｌ  ｃｏｒｔｅｘ  ａｎｄ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ，”Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ３０８：２０２−２１１，２０１５に記載されるように実施した。実験者の右手で異種特異的な取っ組み合い遊び刺激を施した。動物は、異種特異的な遊びの１５秒のブロックと無刺激の１５秒のブロックとの交互のブロックからなる３分の異種特異的な取っ組み合い遊びを受けた。Ｂｕｒｇｄｏｒｆ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｅｍｏｔｉｏｎａｌ  ｌｅａｒｎｉｎｇ  ｉｓ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｅｄｉａｌ  ｐｒｅｆｒｏｎｔａｌ  ｃｏｒｔｅｘ  ｂｙ  ＧｌｕＮ２Ｂ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ＮＭＤＡ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，”Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１９２：５１５−５２３，２０１１によって以前に記載されているように、Ａｖａｓｏｆｔ  ＳＡＳｌａｂ  Ｐｒｏ（Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて超音波による高周波数超音波啼鳴（ＵＳＶ）を記録し、分析した。各無刺激期間中に発生した周波数変調された５０ｋＨｚのＵＳＶを定量してＰＥＬを測定した。動物は、刺激を与えるため、試験前に馴化しなかった。
化合物ＡおよびＢについてのＰＥＬ研究の結果は、図１１および１２に報告されている。
【０１５１】
実施例１４
この実施例は、ストレス誘発性不安モデル、新規性誘発性食欲不振における治療の抗不安効果の評価に関する。このアッセイは、速効型抗うつ薬ケタミンおよびＧＬＹＸ−１３にも感受性である（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，“ｍＴＯＲ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｓｙｎａｐｓｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｕｎｄｅｒｌｉｅｓ  ｔｈｅ  ｒａｐｉｄ  ａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＮＭＤＡ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ，”Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２９：９５９−９６４，２０１０；およびＢｕｒｇｄｏｒｆ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。Ｂｏｄｎｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｄｉａｚｅｐａｍ  ｖｅｒｓｕｓ  ｓｅｖｅｒａｌ  ｔｙｐｉｃａｌ  ａｎｄ  ａｔｙｐｉｃａｌ  ａｎｔｉ−ｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ  ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  ａｎ  ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ａｎｘｉｅｔｙ，”Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，９７：２７７−２７９，１９８９も参照されたい。
【０１５２】
試験は、（Ｂｕｒｇｄｏｒｆ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）に記載されているように行った。以前にケタミンの急性抗不安様作用を検出することが示されている（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）新規性誘発性食欲不振（ＮＩＨ）試験の１バージョンが用いられた。動物は、試験前に一晩食物を与えられず、研究用飼料は、オープンフィールド（４０×４０×２０ｃｍ）の中央チャンバ内に暗い赤色の照明下において１０分間置かれた。各動物の試験間で糞便および尿を装置から除去した。ＮＩＨ試験後、動物のホームケージでの摂食までの待ち時間は、摂食に対する効果が新規な環境に特異的であることを確認するための対照として決定された。動物は、ビデオテープに録画され、最初の食料摂取までの待ち時間（秒）は、オフラインで手動採点された。
【０１５３】
平均からの標準偏差２以上であった用量群あたりの単一点は、外れ値とみなされ、データ分析から除外された。ＥＤ５０は、ｌｏｇ（用量）線形（ＮＩＨ値）プロットから半最大効果（ビヒクルおよび最大有効用量の平均）を示す用量（または用量の対数線形補間）として定義した。最大有効用量は、ビヒクルと統計学的に異なるが、その用量より高い用量と統計学的に均等（フィッシャーのＰＬＳＤによる；αを０．０５に設定）である最低容量であると定義された。
【０１５４】
結果を図１３および図１４に示す。図１３に示すように、化合物Ａは、ラットの新規性誘発性食欲不振（ＮＩＨ）試験において抗不安効果を生じる。単回１０分間の試験セッションの１時間前に化合物Ａ（１０〜１０００μｇ／ｋｇ  ＰＯ；青丸）または滅菌生理食塩水＋０．５％Ｎａ−ＣＭＣビヒクル（１ｍｌ／ｋｇ  ＰＯ；黒丸）で処置した２〜３ヵ月齢の雄ＳＤラットでの、新規性誘発性食欲不振（ＮＩＨ）試験における摂食までの待ち時間平均±ＳＥＭである。動物は、試験前に一晩食物を与えられず、研究用飼料は、試験中にオープンフィールドの中央チャンバ内に置かれた。
【０１５５】
図１４に示すように、化合物Ｂは、ラットの新規性誘発性食欲不振（ＮＩＨ）試験において抗不安効果を生じる。単回１０分間の試験セッションの１時間前に化合物Ｂ（０．０００１〜１μｇ／ｋｇ  ＰＯ；青丸）または滅菌生理食塩水＋０．５％Ｎａ−ＣＭＣビヒクル（１ｍｌ／ｋｇ  ＰＯ；黒丸）で処置した２〜３ヵ月齢の雄ＳＤラットでの、新規性誘発性食欲不振（ＮＩＨ）試験における摂食までの待ち時間平均±ＳＥＭである。動物は、試験前に一晩食物を与えられず、研究用飼料は、試験中にオープンフィールドの中央チャンバ内に置かれた。
【０１５６】
実施例１５
器質的鎮痛のＢｅｎｎｅｔｔモデルを用いて、足引込み閾値によって測定された化合物の鎮痛効果を評価する。Ｂｅｎｎｅｔｔ  ＧＪ，Ｘｉｅ  ＹＫ，“Ａ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｍｏｎｏｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ  ｉｎ  ｒａｔ  ｔｈａｔ  ｐｒｏｄｕｃｅｓ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｏｆ  ｐａｉｎ  ｓｅｎｓａｔｉｏｎ  ｌｉｋｅ  ｔｈｏｓｅ  ｓｅｅｎ  ｉｎ  ｍａｎ，”Ｐａｉｎ３３：８７−１０７，１９８８。動物が手術から回復したが、ｖｏｎ  ｆｒｅｙフィラメントの適用後に依然として低い足引込み閾値を示す場合、鎮痛応答の試験をしている動物で神経部分損傷手術を実施する。ビヒクル動物は、手術を受け、次いで試験化合物ではなくビヒクルを投与される。試験化合物またはビヒクル投与の１時間後、２４時間後および１週間後に動物を試験した。
【０１５７】
２〜３ヶ月齢の雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットを用いた。Ｈａｒｌａｎは、全研究のサプライヤであった。ラットをアスペンウッドチップの敷材と共にＬｕｃｉｔｅケージに収容し、１２：１２の明暗サイクル（午前５時に点灯）で維持し、試験を通してＰｕｒｉｎａ研究用飼料（ＵＳＡ）および水道水を自由摂取させた。
【０１５８】
吸入イソフルラン（２．５％）を用いてラットを麻酔した。神経部分損傷手術は、以前に記載されているように（Ｂｅｎｎｅｔｔ  ａｎｄ  Ｘｉｅ，１９８８）実施した。切開部（約１．５ｃｍの長さ）を、大腿と平行およびその後方に、右後脚の皮膚上にメスの刃で背中側に作製した。小さい先尖止血鉗子を用いて大腿二頭筋と大腿筋とを分離した。湾曲した鈍頭鉗子を用いて一般的な坐骨神経を分離し、露出させた。器質的鎮痛試験のために坐骨神経全体を結紮した。止血鉗子／鉗子およびｃｈｒｏｍｉｃ  ｇｕｔ（５−０）を使用して神経をゆるくこま結びで結紮し、３つの結紮を１ｍｍ間隔で神経上に配置した。結紮糸は、縫合糸が神経の上または下に滑らない程度まで締め付けられた。このプロトコルは、神経の部分的機能喪失をもたらした。熱鎮痛試験のために坐骨神経の一般的な腓骨および脛骨の枝を結紮し切断し、腓腹枝を温存した。Ｄｅｃｏｓｔｅｒｄ  Ｉ，Ｗｏｏｌｆ  ＣＪ，“Ｓｐａｒｅｄ  ｎｅｒｖｅ  ｉｎｊｕｒｙ：  ａｎ  ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ  ｐａｉｎ，”Ｐａｉｎ  ８７：１４９−１５８，２０００を参照されたい。試験は、手術後１〜２週間で行われた。
【０１５９】
試験中、ラットを、懸架されたワイヤメッシュグリッド（１ｃｍ×１ｃｍ、直径０．３ｃｍのワイヤを用いた）の表面に１５〜２０分間順化した。各Ｖｏｎ  Ｆｒｅｙフィラメントを、最も小さいものから、障害した（同側の）後足の足底面にわずかに曲がるまで垂直に押し付け、次いで６秒間保持した。フィラメントの回収直後に明白な後足引込みまたは尻込み挙動が観察されなかった場合、次のより大きいフィラメントが同様に使用された。応答があった場合、より低いフィラメントが使用された。これは、６応答が収集されるまで繰り返された。
【０１６０】
試験は、化合物Ａおよび化合物Ｂ（０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ  ＰＯ）、ガバペンチン（１５０ｍｇ／ｋｇ  ＰＯ）または０．９％滅菌生理食塩水中０．５％Ｎａ−ＣＭＣ投与の１時間後に行った。動物は、投薬の２４時間後および１週間後に再試験した。化合物Ａの結果を図１５に示し、化合物Ｂの結果を図１６に示す。両方の化合物について、１０ｍｇ／ｋｇ  ＰＯの単回投与は、投与後１時間、２４時間および１週間、Ｂｅｎｎｅｔｔモデルにおける器質的鎮痛効果を生じたが、ガバペンチンは、投与後１時間のみ鎮痛効果を生じた。
【０１６１】
実施例１６
抗うつ薬様作用を測定するために非臨床インビボ薬理試験（Ｐｏｒｓｏｌｔアッセイ）を行った。化合物Ａおよび化合物Ｂと比較するために陰性対照（０．９％滅菌食塩水中０．５％カルボキシメチルセルロースナトリウム）および陽性対照（化合物Ｄ）を用いた。本研究は、５分間の水泳試験中のラットの応答（浮遊時間の減少）によって評価されるＰｏｒｓｏｌｔ強制水泳試験における各化合物の効果の用量反応曲線の構築を可能にした。
【０１６２】
２〜３ヶ月齢の雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットを使用した（Ｈａｒｌａｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）。ラットをアスペンウッドチップの敷材と共にＬｕｃｉｔｅケージに収容し、１２：１２の明暗サイクル（午前５時に点灯）で維持し、試験を通してＰｕｒｉｎａ研究用飼料（ＵＳＡ）および水道水を自由摂取させた。
【０１６３】
ラットでの使用に適合させたＰｏｒｓｏｌｔ強制水泳試験は、Ｂｕｒｇｄｏｒｆ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｔｈｅ  ｌｏｎｇ−ｌａｓｔｉｎｇ  ａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｒａｐａｓｔｉｎｅｌ（ＧＬＹＸ−１３）ａｒｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａ  ｍｅｔａｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ｐｒｏｃｅｓｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｅｄｉａｌ  ｐｒｅｆｒｏｎｔａｌ  ｃｏｒｔｅｘ  ａｎｄ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ３０８：２０２−２１１，２０１５）に記載されるように実施した。動物を、初日に１５分間（馴化）、その後の試験日には５分間、水道水（２３±１℃）で３０ｃｍまで満たした高さ４６ｃｍ×直径２０ｃｍの透明ガラス管に入れた。動物を化合物（化合物Ａおよび化合物Ｂ）、陽性対照（化合物Ｄ、１０μｇ／ｋｇ）またはビヒクル（０．９％滅菌生理食塩水中０．５％カルボキシメチルセルロースナトリウム（Ｎａ−ＣＭＣ））の投与から１時間後に試験した。１動物おきの後に水を変えた。動物をビデオ撮影し、動物の頭を水の上に保つのに必要な労力の最小量として定義される浮遊時間が、高い評価者間信頼度（ピアソンのｒ＞０．９）を有する盲検の実験者によってオフラインで採点された。
【０１６４】
ＥＣ５０は、ｌｏｇ（用量）線形プロットから半最大効果（ビヒクルおよび最大有効用量の平均）を示す用量（または用量の対数線形補間）として定義した。最大有効用量は、ビヒクルと統計学的に異なるが、その用量より高い用量と統計学的に均等（フィッシャーのＰＬＳＤによる）である最低容量であると定義された。
【０１６５】
化合物Ａの結果を図１７に示す。成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに化合物Ａ（１０〜１０００μｇ／ｋｇ  ＰＯ；青丸または線で接続されたデータ点）、陽性対照化合物Ｄ（１０μｇ／ｋｇ  ＰＯ；緑丸または１０μｇ／ｋｇ  ＰＯのデータ点）または０．９％生理食塩水中Ｎａ−ＣＭＣ（１ｍｌ／ｋｇ  ＰＯ；黒丸または１ｍｌ／ｋｇ  ＰＯのデータ点）を試験の１時間前に投与した。ラットＰｏｒｓｏｌｔ試験における平均±ＳＥＭ浮遊時間を示す。動物は、５分間の試験の１日前に１５分間の馴化セッションを受けた。一群あたりＮ＝６〜１８である。示されるように、化合物Ａは、投与後１時間のビヒクル群と比較して、Ｐｏｒｓｏｌｔ試験における浮遊時間の減少によって測定される抗うつ薬様効果を生じる。
【０１６６】
化合物Ｂの結果を図１８に示す。成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに化合物Ｂ（０．１〜１０μｇ／ｋｇ  ＰＯ；青丸または線で接続されたデータ点）、陽性対照化合物Ｄ（１０μｇ／ｋｇ  ＰＯ；緑丸または１０μｇ／ｋｇ  ＰＯのデータ点）または０．９％生理食塩水中Ｎａ−ＣＭＣ（１ｍｌ／ｋｇ  ＰＯ；黒丸または１ｍｌ／ｋｇ  ＰＯのデータ点）を試験の１時間前に投与した。ラットＰｏｒｓｏｌｔ試験における平均±ＳＥＭ浮遊時間を示す。動物は、５分間の試験の１日前に１５分間の馴化セッションを受けた。一群あたりＮ＝６〜１８である。示されるように、化合物Ｂは、投与後１時間のビヒクル群と比較して、Ｐｏｒｓｏｌｔ試験における浮遊時間の減少によって測定される抗うつ薬様効果を生じる。
【０１６７】
実施例１７
以下の表は、化合物Ａ、化合物Ｂ、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−５−カルボキシレート（化合物Ｗ）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−アミノ−３−ヒドロキシ−１−オキソブタン−２−イル）−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−５−カルボキシレート（化合物Ｘ）、（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−（（Ｒ）−５−イソブチリル−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−イル）ブタンアミド（化合物Ｙ）、または（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−（（Ｓ）−５−イソブチリル−１−オキソ−２，５−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−イル）ブタンアミド（化合物Ｚ）の存在下での野生型ＮＭＤＡＲ２サブタイプの相対インビボ結合データを示す。
【０１６８】
【表７】
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【０１６９】
【表８】
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【０１７０】
均等物
当業者は、ルーチンの実験のみを用いて、本明細書に記載される本発明の特定の実施形態に対する多数の均等物を認識または確認することができる。このような均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されるものとする。
【０１７１】
参照による組み込み
本明細書に引用される特許、公開特許出願、ウェブサイトおよび他の参考文献の全内容は、その全体が参照により明示的に本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【国際調査報告】
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