(57)【要約】イカリインの誘導体が開示されている。本明細書中で定義されている式Ｉ〜Ｖを有する化合物が開示されている。これらの化合物をがん及び炎症の処置のために使用する方法も開示されている。【選択図】図１
2019507796.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2019507796.tif 000013
を有する化合物であって、
Ｄはそれぞれ、他方とは無関係に、Ｈ、ＯＨ、ＯＲ、及びハロゲンから選択され；
Ｒは、アルキルまたはモノグルコシドであり；
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、チオール、チオアルキル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アリール、アルキルヘテロアリール、及びヘテロアリールから選択され、これらのいずれも、アセチル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシル、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、もしくはニトロで任意に置換されるか；または
Ｒ１と、隣接するＤとは、一緒にアセチル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシ、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、ニトロ、スルホニル、またはスルホニルアミノで任意に置換された縮合複素環を形成し；
Ｒ２はそれぞれ、いずれの他のものとも無関係に、水素、ヒドロキシル、アミノ、チオール、ニトロ、シアノ、スルホニル、及びアルコキシル、チオアルキル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アリール、アルキルヘテロアリール、またはヘテロアリールから選択され、これらのいずれも、アセチル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシ、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、ニトロ、スルホニル、またはスルホニルアミノで任意に置換され；
ｎは、０、１、２、３、４または５であり；
Ｒ３は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アリール、アルキルヘテロアリール、及びヘテロアリールから選択され、これらのいずれも、アセチル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシ、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、ニトロ、スルホニル、またはスルホニルアミノで任意に置換される、
前記化合物、あるいはその薬学的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項２】
Ｄはそれぞれ、ヒドロキシル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｄはそれぞれ、メトキシル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｄは、ビオチンと結合した１から３０の原子のリンカーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ｎは１である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２は、メトキシ基である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３は、水素、アルキル、またはアルケニルである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
式ＩＩ：
【化２】
2019507796.tif 000014
を有する化合物であって、Ｒ４は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、メチレン、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アリール、アルキルヘテロアリール、及びヘテロアリールから選択され、これらのいずれも、カルボニル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシル、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、またはニトロで任意に置換される；
請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物、あるいはその薬学的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項９】
Ｒ４は、カルボニル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシル、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、またはニトロで任意に置換されるアルキル基である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ４は、＝ＣＨ２である、請求項８または９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ４は、ＣＨ（ＣＨ３）２である、請求項８または９に記載の化合物。
【請求項１２】
式ＩＩＩ：
【化３】
2019507796.tif 000015
を有する化合物であって、Ｒ４は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、メチレン、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アリール、アルキルヘテロアリール、及びヘテロアリールから選択され、これらのいずれも、カルボニル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシル、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、またはニトロで任意に置換される；
請求項１から７のいずれか１項に記載の化合物、あるいはその薬学的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項１３】
Ｒ４は、カルボニル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシル、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、またはニトロで任意に置換されるアルキル基である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ４は、＝ＣＨ２である、請求項１２または１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ４は、ＣＨ（ＣＨ３）２である、請求項１２または１３に記載の化合物。
【請求項１６】
式ＩＶ：
【化４】
2019507796.tif 000016
を有する化合物であって、Ｒ５は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アリール、アルキルヘテロアリール、及びヘテロアリールから選択され、これらのいずれも、カルボニル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシル、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、またはニトロで任意に置換され；
Ｒ２はそれぞれ、いずれの他のものとも無関係に、水素、ヒドロキシル、アルコキシル、スルホニル、アミノ、チオール、チオアルキル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アリール、アルキルヘテロアリール、及びヘテロアリールから選択され、これらのいずれも、アセチル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシ、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、ニトロ、スルホニル、またはスルホニルアミノで任意に置換され；
ｎは、０、１、２、３、４または５である；
請求項１から７のいずれか１項に記載の化合物、あるいはその薬学的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項１７】
式Ｖ：
【化５】
2019507796.tif 000017
を有する化合物であって、Ｒ６及びＲ７は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アリール、アルキルヘテロアリール、及びヘテロアリールから独立して選択され、これらのいずれも、カルボニル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシル、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、またはニトロで任意に置換され；
Ｒ２はそれぞれ、いずれの他のものとも無関係に、水素、ヒドロキシル、アルコキシル、スルホニル、アミノ、チオール、チオアルキル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アリール、アルキルヘテロアリール、及びヘテロアリールから選択され、これらのいずれも、アセチル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシ、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、ニトロ、スルホニル、またはスルホニルアミノで任意に置換され；
ｎは、０、１、２、３、４または５である；
請求項１から７のいずれか１項に記載の化合物、あるいはその薬学的に許容される塩またはプロドラッグ。
【請求項１８】
前記化合物は、表１にある、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれか１項に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項２０】
治療有効量の請求項１〜１８のいずれか１項に記載の化合物及び医薬担体ならびに任意の抗がん剤または抗炎症剤を含む、医薬組成物。
【請求項２１】
治療有効量の請求項１〜１８のいずれか１項に記載の化合物または組成物を対象に投与することを含む、骨髄異形成症候群を処置する方法。
【請求項２２】
腫瘍細胞を有効量の請求項１〜１８のいずれか１項に記載の化合物または組成物と接触させることを含む、腫瘍細胞を死滅させる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年３月１１日に出願された米国特許仮出願第６２／３０６，６９４号に対する優先権の利益を主張するものであり、その全体を参照により本明細書に組み込んだものとする。
【背景技術】
【０００２】
炎症はがんの特徴であり、がんの発症及び進行ならびに腫瘍細胞による免疫系の侵襲を助長する。炎症により誘導されたがんは、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）によるものである可能性があり、この細胞は腫瘍をもつホスト、特に、局所的な腫瘍微小環境に蓄積する。マウスでＧｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋及びヒトでＨＬＡ−ＤＲ−Ｌｉｎ−ＣＤ３３＋と特徴づけられるＭＤＳＣは、免疫抑制性及び腫瘍形成性微小環境の主要な免疫生成物として特定された（Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈ  ＤＩ，  Ｎａｇａｒａｊ  Ｓ．  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２００９；９（３）：１６２−７４）。健康な個体において、これらの細胞は未熟な骨髄細胞（ＩＭＣ）として存在し、成熟単球、ＤＣ及び好中球に急速に分化することができるため、正常な骨髄造血成の一部である。しかしながら、炎症及びがんを含む、特定の病理学的状況下において、これらのＩＭＣは、局所組織で活性化し、蓄積し、ここで、ＩＭＣは、ＶＥＧＦ、ＴＧＦβ、ＩＬ−６、またはＩＬ−１０などの可溶性の血管新生因子及び抑制因子、の放出により腫瘍促進細胞及び免疫抑制細胞の両方として働く。これはまた、腫瘍特異的なＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞応答を直接抑制し、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を誘導することがある。さらに、これは、骨髄前駆細胞の成熟を妨げることならびに造血幹細胞／前駆細胞の発生を調節することによって、がん及び白血病の発病に直接寄与する可能性がある。さらに、反応性酸素及び窒素化学種（それぞれＲＯＳ及びＲＮＳ）ならびに活性ＳＴＡＴ３は、ＭＤＳＣの働きに関わり、免疫抑制性サイトカイン及び腫瘍促進因子のアップレギュレーションと密接に関連する。したがって、ＭＤＳＣ及びその下流エフェクター機構の標的化は、腫瘍の免疫認識を回復させ、がんの進行を抑制するのに必須である。しかしながら、現在、それを含む効果的な治療法はない。
【０００３】
ヒトＭＤＳＣは、すべての細胞系マーカーがないのが独特であり、１つの重要なレセプター、未熟な骨髄細胞の周知の表面マーカーであるＣＤ３３によってのみ定義される。これは、シアル酸結合Ｉｇスーパーファミリーレクチン（ＳＩＧＬＥＣ）のサブセット原型メンバーとしても知られている６７ｋＤａの１型膜貫通シアロ糖タンパク質である。この特定のサブグループは、ＣＤ３３関連ＳＩＧＬＥＣ（ＣＤ３３−ｒ  Ｓｉｇｌｅｃ）として知られており、ＣＤ３３は機能的にＳＩＧＬＥＣ３として知られている。ヒトには、ＳＩＧＬＥＣ３、５及び１４を含む、ＣＤ３３に関連する９つのＳＩＧＬＥＣが存在し、これらは、５０〜９９％の相同性をもつ。この相同性にもかかわらず、それが、それぞれのＳＩＧＬＥＣは、シアル化リガンドに対して固有の特異性を有し、それぞれのタンパク質が異なる働きを仲介するという可能性をより高めている。すべてのＳＩＧＬＥＣがシアル酸と結合するアミノ末端可変Ｖセット免疫グロブリンドメインを有し、それらが結合する糖部分はわかっているが、その完全なリガンドはわかっていない。ＳＩＧＬＥＣ３を含むＣＤ３３−ｒ  ＳＩＧＬＥＣの別の特徴的な特性は、その細胞質領域における２つの保存免疫受容体抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）の存在である。ＳＩＧＬＥＣ３の抗ＳＩＧＬＥＣ３抗体との結合、またはそのリガンドを介した結合がこれらのチロシンモチーフのリン酸化につながり、これが、Ｓｒｃホモロジー−２（ＳＨ２）ドメイン含有チロシンホスファターゼ（ＳＨＰ−１及びＳＨＰ−２）をリクルートし、活性化する（Ｐａｕｌ  ＳＰ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｌｏｏｄ．  ２０００；９６（２）：４８３−９０）。古典的には、ＩＴＩＭドメインを有する受容体は、活性化または成熟シグナルを抑制するよう働き、このシグナルは、チロシン及びイノシトールホスファターゼのリクルートメントによるモチーフ（ＩＴＡＭ）の活性化と関連する受容体から生じる。
【０００４】
抑制ではなくむしろ活性化シグナルを出すさらなるＣＤ３３−ｒ  ＳＩＧＬＥＣが発見された。これらの代替的な受容体は、ＩＴＩＭが欠如しており、かわりにＤＡＰ１２（１２ｋＤａのＤＮＡＸ活性化タンパク質）と相互作用する。この相互作用は、受容体の膜貫通ドメインに位置する正の電荷をもつアニオン性残基により生じ、これが、ＤＡＰ１２の負の電荷をもつアスパラギン酸残基と非共有結合する。このアダプター分子は、ＮＫ活性化受容体の大部分が共有するＩＴＡＭ担持タンパク質である。それを介したシグナル伝達は、Ｓｙｋタンパク質チロシンキナーゼ、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、及びＥＲＫ／ＭＡＰＫの活性化につながる。ＤＡＰ１２は、ヒトのＳＩＧＬＥＣ−１４及びマウスのＳＩＧＬＥＣ−Ｈを含む、活性化受容体と組み、単球への造血幹細胞の成熟及び分化ならびにＤＣ成熟及び生存の促進への関与により骨髄発生において役割を果たす。したがって、ＤＡＰ１２は、ＳＩＧＬＥＣ３-ＩＴＩＭシグナル伝達を妨げ、成熟細胞へのＭＤＳＣ分化を駆動することによって、ＭＤＳＣの機能をダウンレギュレートし、集団数を増加させることができる。
【０００５】
最近、ＳＩＧＬＥＣ３の内在性リガンドが特定された。ＳＩＧＬＥＣ３−ＩｇＧ  Ｆｃキメラ融合タンパク質を使用して、質量分析によりＳ１００Ａ９であるタンパク質が特定された。これは、Ｓ１００Ａ８及びＳ１００Ａ９（それぞれ、骨髄関連タンパク質（ＭＲＰ）−８及び１４またはカルグラニュリンＡ及びＢとも称される）が腫瘍のある個体におけるＭＤＳＣ活性化の強力な炎症性メディエーターであり得るため重大なことである。さらに、ＭＤＳ（骨髄異形成症候群、ＡＭＬ（急性骨髄性白血病）へと転換する前がん性障害）患者から単離されたＳＩＧＬＥＣ３発現ＭＤＳＣが、正常な造血を破壊する高い能力があることがわかった（Ｗｅｉ  Ｓ，  ｅｔ  ａｌ．  ＡＳＨ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ．  ２００９；１１４（２２）：５９７）。
【０００６】
Ｓ１００Ａ８及びＳ１００Ａ９（それぞれ、遺伝子Ｓ１００Ａ８及びＳ１００Ａ９によってコードされる）は、分化の特定の段階において骨髄細胞で発現するカルシウム結合タンパク質であり、内在性ダメージ関連分子パターン（ＤＡＭＰ）として認識されている。（カルプロテクチンと呼ばれる）ヘテロダイマーとして働く、Ｓ１００Ａ８／Ａ９は、効果的な内在性メディエーターとして作用して、炎症及びＭＤＳＣ活性化を促進する。さらに、それは、持続する炎症の部位で放出され、血清レベルの増加につながり、炎症の程度と相関する。機能的Ｓ１００Ａ８／Ａ９が欠如したマウスを使用して、両タンパク質がＴｏｌｌ様受容体−４（ＴＬＲ４）を活性化することがあり、したがって、ＴＬＲ４を介したシグナル伝達に関与して、炎症を促進することが確かめられた。ＭＤＳＣにおけるＳ１００Ａ８／Ａ９のアップレギュレーションがＤＣ及びマクロファージ分化の阻害に関与している可能性があり、がん発生及び腫瘍の浸潤の一因の可能性があるＭＤＳＣの蓄積を誘導する可能性がある。Ｓ１００Ａ８及びＳ１００Ａ９は、腫瘍をもつマウスにおけるＭＤＳＣ数のインビボにおける増加に関連している可能性があるだけでなく、骨髄細胞分化に対する阻害効果にも関連している可能性がある。この見解は、正常な骨髄細胞分化及びＭＤＳＣの大幅な減少を示すＳ１００Ａ９ノックアウトマウスによって裏付けられた。対照的に、ＭＤＳＣ蓄積は、マクロファージ及びＤＣ分化の阻害を伴うＳ１００Ａ９トランスジェニックマウス（Ｔｇ）で増大した（Ｃｈｅｎｇ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．  ２００８；２０５（１０）：２２３５−４９）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
他の炎症関連疾患におけるその役割と合わせて、がんにおけるＭＤＳＣに対する効果的な標的療法が現在ないことを考えれば、ＭＤＳＣのインヒビターが望ましい。本明細書中で開示されている化合物、組成物及び方法は、これら及びその他の必要性に対処する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本開示の化合物、組成物及び方法の目的によると、本明細書において具現化され、広く記載されているとおり、本開示の主題は、化合物、組成物ならびに組成物を生成及び使用する方法に関する。さらに特定の態様において、本開示の主題は、イカリイン及びイカリチンの誘導体である化合物、この化合物を使用する方法、及びこの化合物を含む組成物に関する。特定の態様において、本開示の主題は、本明細書中で定義される式Ｉ〜Ｖに示される化学構造を有する化合物に関する。さらなる態様において、本開示の主題は、対象における前がん性症候群を処置するための方法に関する。例えば、有効量の本明細書中で開示されている化合物または組成物が、前がん性症候群、例えば、骨髄異形成症候群を有し、その処置を必要とする対象に投与されることによる方法が本明細書中で開示されている。
【０００９】
さらなる利点については、続く説明及び図面に一部記載され、一部は説明から明らかになるであろうし、または下に示される態様の実施によって知ることができる。下に示される利点は、特に添付の特許請求の範囲において示される要素及び組み合わせによって実現及び達成される。前述の概括的な説明及び以下の詳細な説明はともに、例であり、説明のためのものにすぎず、限定的なものではないことが理解されるべきである。
【００１０】
本明細書に組み込まれ、その一部を構成する添付の図面は、下に示されるいくつかの態様を説明する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ＩＣＴＡは、ｒｈＳ１００Ａ９で処理した細胞におけるａ−カスパーゼ−１、ＮＬＲＰ３のレベル、及びａ−カスパーゼ−１／ＮＬＲＰ３の共局在を低下させる。ビヒクルまたは５μｇ／ｍＬのｒｈＳ１００Ａ９単独もしくはＩＣＴＡを伴う（２０μｇ／ｍＬ）処理の２４時間後のＵ９３７細胞におけるインフラマソーム形成を示す代表的な顕微鏡写真（１８９０×倍率）。ＤＡＰＩ（第１列）、ａ−カスパーゼ−１（第２列）、ＮＬＲＰ３（第３列）；合成画像は、インフラマソーム複合体の形成を示す（第４列）。
【図２】図２Ａにおいて、ＩＣＴＡは、ｒｈＳ１００Ａ９で処理した細胞におけるａ−カスパーゼ−１のレベルを低下させる。ａ−カスパーゼ−１に関する共焦点画像の定量分析。エラーバー：ＳＥ、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。  図２Ｂにおいて、ＩＣＴＡは、ｒｈＳ１００Ａ９で処理した細胞におけるＮＬＲＰ３のレベルを低下させる。ＮＬＲＰ３に関する共焦点画像の定量分析。エラーバー：ＳＥ、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。  図２Ｃにおいて、ＩＣＴＡは、ｒｈＳ１００Ａ９で処理した細胞におけるａ−カスパーゼ−１／ＮＬＲＰ３の共局在を低下させる。共局在に関する共焦点画像の定量分析。エラーバー：ＳＥ、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図３】図３Ａにおいて、ＩＣＴＡによるインビボにおけるインフラマソーム阻害は、Ｓ１００Ａ９Ｔｇマウスにおける造血を改善する。６ヶ月齢のＳ１００Ａ９Ｔｇトランスジェニックマウスを、合計８週間の経口強制飼養により５０ｍｇ／ｋｇのインフラマソームインヒビターＩＣＴＡで１日おきに処置した。ＷＴ（ｎ＝４）及びＳ１００Ａ９Ｔｇ（ｎ＝５）対ＩＣＴＡにより処置したＳ１００Ａ９Ｔｇマウス（ｎ＝５）におけるヘモグロビン数の変化が示される。エラーバー：ＳＥ、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１  図３Ｂにおいて、ＩＣＴＡによるインビボにおけるインフラマソーム阻害は、Ｓ１００Ａ９Ｔｇマウスにおける造血を改善する。６ヶ月齢のＳ１００Ａ９Ｔｇトランスジェニックマウスを、合計８週間の経口強制飼養により５０ｍｇ／ｋｇのインフラマソームインヒビターＩＣＴＡで１日おきに処置した。ＷＴ（ｎ＝４）及びＳ１００Ａ９Ｔｇ（ｎ＝５）対ＩＣＴＡにより処置したＳ１００Ａ９Ｔｇマウス（ｎ＝５）における白血球細胞（ＷＢＣ）数の変化が示される。エラーバー：ＳＥ、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１  図３Ｃにおいて、ＩＣＴＡによるインビボにおけるインフラマソーム阻害は、Ｓ１００Ａ９Ｔｇマウスにおける造血を改善する。６ヶ月齢のＳ１００Ａ９Ｔｇトランスジェニックマウスを、合計８週間の経口強制飼養により５０ｍｇ／ｋｇのインフラマソームインヒビターＩＣＴＡで１日おきに処置した。ＷＴ（ｎ＝４）及びＳ１００Ａ９Ｔｇ（ｎ＝５）対ＩＣＴＡにより処置したＳ１００Ａ９Ｔｇマウス（ｎ＝５）における赤血球数の変化が示される。エラーバー：ＳＥ、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１  図３Ｄにおいて、ＩＣＴＡによるインビボにおけるインフラマソーム阻害は、Ｓ１００Ａ９Ｔｇマウスにおける造血を改善する。６ヶ月齢のＳ１００Ａ９Ｔｇトランスジェニックマウスを、合計８週間の経口強制飼養により５０ｍｇ／ｋｇのインフラマソームインヒビターＩＣＴＡで１日おきに処置した。ＷＴ（ｎ＝４）及びＳ１００Ａ９Ｔｇ（ｎ＝５）対ＩＣＴＡにより処置したＳ１００Ａ９Ｔｇマウス（ｎ＝５）における血小板数の変化が示される。エラーバー：ＳＥ、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１
【図４】ＩＣＴＡ処置Ｓ１００Ａ９Ｔｇトランスジェニックマウスからの骨髄（ＢＭ）細胞ではＮＬＲＰ３活性化が低下する。未処置のＳ１００Ａ９Ｔｇマウスまたは合計８週間の経口強制飼養によりＩＣＴＡで処置したマウスから採取したＢＭ細胞におけるインフラマソーム形成を示す代表的な顕微鏡写真（２５２０×倍率、７．５μｍスケール）。ＤＡＰＩ（第１列）、ａ−カスパーゼ−１（第２列）、及びＮＬＲＰ３（第３列）；合成画像は、インフラマソーム形成を示す（第４列）。
【図５】核β−カテニンレベルは、ＩＣＴＡによるインビボでの処置後に低下する。ＷＴ（ｎ＝５）、Ｓ１００Ａ９Ｔｇ（ｎ＝５）及び合計８週間の経口強制飼養によるＩＣＴＡで処置したＳ１００Ａ９Ｔｇ（ｎ＝５）におけるβ−カテニン発現の代表的な顕微鏡写真（２５２０×倍率、７．５μｍスケール）。ＤＡＰＩ（第１列）、β−カテニン（第２列）；合成画像は、核β−カテニン局在化を示す（第３列）。
【図６】図６Ａにおいて、ＩＣＴＡで４８時間処理したＭＤＳ  ＢＭ−ＭＮＣ（ｎ＝４）においてＷｎｔ／β−カテニンターゲット遺伝子発現が低下する。Ｗｎｔ／β−カテニンターゲット遺伝子Ｃｄ４４を分析した。  図６Ｂにおいて、ＩＣＴＡで４８時間処理したＭＤＳ  ＢＭ−ＭＮＣ（ｎ＝４）においてＷｎｔ／β−カテニンターゲット遺伝子発現が低下する。Ｗｎｔ／β−カテニンターゲット遺伝子Ｃｃｎｄ１を分析した。  図６Ｃにおいて、ＩＣＴＡで４８時間処理したＭＤＳ  ＢＭ−ＭＮＣ（ｎ＝４）においてＷｎｔ／β−カテニンターゲット遺伝子発現が低下する。Ｗｎｔ／β−カテニンターゲット遺伝子Ｃｃｎｅを分析した。  図６Ｄにおいて、ＩＣＴＡで４８時間処理したＭＤＳ  ＢＭ−ＭＮＣ（ｎ＝４）においてＷｎｔ／β−カテニンターゲット遺伝子発現が低下する。Ｗｎｔ／β−カテニンターゲット遺伝子Ｃｄｋ４を分析した。  図６Ｅにおいて、ＩＣＴＡで４８時間処理したＭＤＳ  ＢＭ−ＭＮＣ（ｎ＝４）においてＷｎｔ／β−カテニンターゲット遺伝子発現が低下する。Ｗｎｔ／β−カテニンターゲット遺伝子Ｃｄｋ６を分析した。
【図７】図７Ａにおいて、ＩＣＴＡは、ＡＳＣ重合を減少させる。Ｓ３４Ｆ対照細胞におけるＡＳＣオリゴマー形成に基づくインフラマソーム形成の代表的な密度プロット。  図７Ｂにおいて、ＩＣＴＡは、ＡＳＣ重合を減少させる。１０μＭのＩＣＴＡで処理したＳ３４Ｆ細胞におけるＡＳＣオリゴマー形成に基づくインフラマソーム形成の代表的な密度プロット。
【図８】ＩＣＴＡは、Ｕ２ＡＦ１−Ｓ３４Ｆ変異細胞におけるコロニー形成能力を回復させる。ＷＴ細胞、Ｓ３４Ｆ細胞、及び漸増濃度のＩＣＴＡ（０．０１〜１０μＭ）で処理したＳ３４Ｆ細胞において評価したコロニー形成能力。コロニーの平均数は、条件毎の４回の反復を代表する。エラーバー：ＳＥ、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１。
【図９】ＩＣＴＡは、ＳＦ３Ｂ１−Ｋ７００Ｅ変異ＢＭ細胞におけるコロニー形成能力を回復させる。ＷＴ細胞、Ｋ７００Ｅ細胞または漸増濃度のＩＣＴＡ（０．１〜１０μＭ）で処理したＫ７００Ｅ細胞におけるコロニー形成能力を評価した。ＢＦＵ−Ｅコロニーの平均数は、条件毎に４匹のマウスから単離したＢＭ細胞、及び各マウスの４回の反復を代表する。エラーバー：ＳＥ、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本明細書に記載されている化合物、組成物及び方法は、本開示の主題の特定の態様の以下の詳細な説明ならびにそれに含まれる実施例及び図面を参照することによってさらに容易に理解することができる。
【００１３】
本化合物、組成物及び方法が開示及び記載される前に、以下に示される態様は、特定の合成方法または特定の試薬に限定されるものではなく、したがって、当然、変化してもよいと解釈されるべきである。本明細書中で使用される用語は特定の態様を説明するためのものにすぎず、限定されることは意図しないことも理解されるべきである。
【００１４】
また、本明細書全体をとおして、さまざまな刊行物が言及されている。これらの刊行物全体の開示は、開示されている要素が属する最新の技術をさらに完全に記載するために参照により本出願に組み込まれる。開示されている参考文献はまた、参考文献が依拠する文中で述べられているそれに含まれる資料に関して個々に具体的に参照により本明細書に組み込まれる。
【００１５】
一般定義
本明細書及びそれに添付される特許請求の範囲において、多くの用語が言及されることになり、これらの用語は、以下の意味を有すると定義されるものとする。
【００１６】
本明細書の説明及び特許請求の範囲全体をとおして、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及びその語のその他の形態、例えば、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」などは、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）が、以下に限定されるものではない」を意味し、例えば、その他の添加剤、構成要素、整数、またはステップを排除することを意図しない。
【００１７】
説明及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに別のことを規定していない限り複数の指示対象を含む。このように、例えば、「組成物（ａ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）」の言及は２以上のそのような組成物の混合物を含み、「薬剤（ａｎ  ａｇｅｎｔ）」の言及は２つ以上のそのような薬剤の混合物を含み、「構成要素（ｔｈｅ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）」の言及は２つ以上のそのような構成要素の混合物を含むなどである。
【００１８】
「任意の」または「任意に」は、その後に記載される事象または状況が起こっても、または起こらなくてもよく、その説明が事象または状況が生じる例及びそれが生じない例を含むことを意味する。
【００１９】
範囲は、本明細書において「約」ある特定の値から及び／または「約」別の特定の値までとして表すことができる。「約」とは、その値の５％以内、例えば、その値の４、３、２、または１％以内を意味する。そのような範囲が表される場合、別の態様は、ある特定の値から及び／または他方の特定の値まで含む。同様に、先行する「約」の使用によって値が近似値として表される場合、当然のことながら、特定の値は、別の態様を形成する。範囲のそれぞれの端点は、ともに他方の端点に関連して、及び他方の端点から独立して有効であることもさらに理解されるであろう。
【００２０】
「阻害する」という用語は、活性、応答、状態、疾患、またはその他の生物学的パラメーターの低下を指す。これは、以下に限定されないが、活性、応答、状態、または疾患の完全な消失を含んでもよい。これはまた、例えば、自然の状態のレベルまたは対照レベルと比較して活性、応答、状態、または疾患の１０％の低下を含む場合もある。このように、低下は、自然の状態のレベルまたは対照レベルと比較して、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００％であってもよく、またはその間の任意の量の低下であってもよい。
【００２１】
本明細書中で使用される場合、「対象」とは、個体を意味する。このように、「対象」は、飼育動物（例えば、ネコ、イヌなど）、家畜（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギなど）、実験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、テンジクネズミなど）及びトリを含んでもよい。「対象」はまた、哺乳動物、例えば、霊長類またはヒトを含んでもよい。
【００２２】
「低減する（ｒｅｄｕｃｅ）」またはその語の他の形態、例えば、「低減すること（ｒｅｄｕｃｉｎｇ）」もしくは「低減（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）」とは、事象または特徴（例えば、腫瘍増殖）を低下させることを意味する。当然のことながら、これは、一般にいくつかの標準的または予測される値に対するものであり、言い換えると、相対的なものであるが、必ずしも常に参照される標準的または相対的な値が必要な訳ではない。例えば、「腫瘍増殖を低減する」は、標準または対照に対して腫瘍の増殖率を低下させることを意味する。
【００２３】
「予防する」またはその語の他の形態、例えば、「予防すること」または「予防」は、特定の事象もしくは特徴を止めること、特定の事象もしくは特徴の発生もしくは進行を安定または遅延させること、あるいは特定の事象もしくは特徴が生じることになる機会を最小限にすることを意味する。「予防する」は、一般に、例えば、「低減する」よりも絶対的であるため、対照との比較を必要としない。本明細書中で使用される場合、あるものは低減されるが予防されないかもしれないが、低減されるあるものが予防される場合もあろう。同様に、あるものは予防されるが低減されないが、予防されるあるものが低減される場合もあろう。当然のことながら「低減する」または「予防する」が使用される場合、別に具体的に示していない限り、他方の語の使用も明白に開示される。
【００２４】
「処置する」またはその語の他の形態、例えば、「処置される」または「処置」は、特定の特徴もしくは事象（例えば、腫瘍増殖または残存）を低減する、予防する、阻害する、もしくは除去するために組成物を投与することまたは方法を実施することを意味する。「制御する」という用語は、「処置する」という用語と同義に使用される。
【００２５】
「抗がん性」という用語は、任意の濃度で細胞増殖及び／または腫瘍増殖を処置または制御する能力を指す。
【００２６】
化学的定義
本明細書中で使用される場合、「置換される」という用語は、有機化合物のすべての許容される置換基を含むことが意図される。広い態様において、許容される置換基としては、有機化合物の非環式及び環式、分岐及び直鎖、炭素環式及び複素環式、ならびに芳香族及び非芳香族置換基が挙げられる。実例となる置換基としては、例えば、以下に示されるものが挙げられる。適切な有機化合物に許容される置換基は、１つ以上であってもよく、同じであってもまたは異なってもよい。本開示の目的に対して、窒素などのヘテロ原子は、水素置換基及び／または本明細書に記載されているヘテロ原子の価数を満たす有機化合物の許容されるいかなる置換基を有してもよい。本開示は、有機化合物の許容される置換基によっていかなる方法でも限定されることは意図されない。また、「置換」または「〜で置換される」という用語は、そのような置換が、置換される原子及び置換基の許容される価数と一致し、その置換が安定した化合物、例えば、自然に転位、環化、脱離などによって変換を起こさない化合物をもたらす黙示の条件を含む。
【００２７】
「Ｚ１」、「Ｚ２」、「Ｚ３」、及び「Ｚ４」は、種々の特定の置換基を表すための一般記号として本明細書中で使用される。これらの記号はいかなる置換基であってもよく、本明細書中で開示されているものに限定されず、それらの記号がある場合に、ある置換基と定義されるとき、別の場合には、いくつかの他の置換基と定義される場合がある。
【００２８】
「脂肪族」という用語は、本明細書中で使用される場合、非芳香族炭化水素基を指し、分岐及び直鎖のアルキル、アルケニル、またはアルキニル基が挙げられる。
【００２９】
「アルキル」という用語は、本明細書中で使用される場合、１から２４の炭素原子、例えば、１から３、１から４、１から５、１から６、１から７、１から８、１から９、１から１０、または１から１５の炭素原子の分岐または直鎖の飽和炭化水素基、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、エイコシル、テトラコシルなどである。アルキル基はまた、置換されていても、または置換されていなくてもよい。アルキル基は、以下に記載されるようにアルキル、ハロゲン化アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、スルホニル、スルホン、スルホキシド、またはチオールを含むが、それらに限定されるものではない１つ以上の基で置換されてもよい。
【００３０】
本明細書全体をとおして、「アルキル」は、一般に非置換アルキル基及び置換アルキル基の両方を指すよう使用されるが、置換アルキル基は、本明細書においてはアルキル基にある特定の置換基（複数可）を特定することによって具体的にも言及される。例えば、「ハロゲン化アルキル」という用語は、具体的には１つ以上のハロゲン化物、例えば、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素で置換されたアルキル基を指す。「アルコキシアルキル」という用語は、以下に記載されるように、具体的には１つ以上のアルコキシ基で置換されたアルキル基を指す。「アルキルアミノ」という用語は、以下に記載されるように、具体的には１つ以上のアミノ基で置換されたアルキル基を指すなどである。ある場合に、「アルキル」が使用され、「アルキルアルコール」などの具体的な用語が別の場合に使用されるとき、「アルキル」という用語が「アルキルアルコール」などの具体的な用語を指さないということを示すことは意図しない。
【００３１】
この慣例は、本明細書に記載されている他の基にも使用される。すなわち、「シクロアルキル」などの用語は、非置換及び置換の両方のシクロアルキル部分を指すが、置換部分は、本明細書ではさらに具体的に特定される場合があり、例えば、特定の置換シクロアルキルは、例えば、「アルキルシクロアルキル」と言及される場合がある。同様に、置換アルコキシは、例えば、「ハロゲン化アルコキシ」と具体的に言及される場合があり、特定の置換アルケニルは、例えば、「アルケニルアルコール」と具体的に言及される場合があるなどである。また、「シクロアルキル」などの一般用語及び「アルキルシクロアルキル」などの具体的な用語を使用する実務は、一般用語が具体的な用語を含まないことを示すことは意図しない。
【００３２】
「アルコキシ」という用語は、本明細書中で使用される場合、１つの末端にあるエーテル結合を介して結合したアルキル基であり、すなわち、「アルコキシ」基は、−ＯＺ１と定義することができ、この場合、Ｚ１は上で定義されたとおりのアルキルである。
【００３３】
「アルケニル」という用語は、本明細書中で使用される場合、２から２４の炭素原子、例えば、２から５、２から１０、２から１５、または２から２０の炭素原子の炭化水素基であり、少なくとも１つの炭素・炭素二重結合を含む構造式を有する。（Ｚ１Ｚ２）Ｃ＝Ｃ（Ｚ３Ｚ４）などの非対称性構造は、Ｅ及びＺ両異性体を含むことが意図される。これは、本明細書において非対称性アルケンが存在する構造式において推定され得るか、または結合記号Ｃ＝Ｃによって明確に示され得る。アルケニル基は、以下に記載されるように、アルキル、ハロゲン化アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、スルホニル、スルホン、スルホキシド、またはチオールを含むが、それらに限定されない１つ以上の基で置換されてもよい。
【００３４】
「アルキニル」という用語は、本明細書中で使用される場合、２から２４の炭素原子の炭化水素基、例えば、２から５、２から１０、２から１５、または２から２０の炭素原子であり、少なくとも１つの炭素・炭素三重結合を含む構造式を有する。アルキニル基は、以下に記載されるように、アルキル、ハロゲン化アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、スルホニル、スルホン、スルホキシド、またはチオールを含むが、それらに限定されない１つ以上の基で置換されてもよい。
【００３５】
「アリール」という用語は、本明細書中で使用される場合、ベンゼン、ナフタレン、フェニル、ビフェニル、フェノキシベンゼンなどを含むが、それらに限定されない任意の炭素ベースの芳香族基を含む基である。「ヘテロアリール」という用語は、芳香族基の環内に組み込まれた少なくとも１つのヘテロ原子を有する芳香族基を含む基と定義される。ヘテロ原子の例としては、窒素、酸素、硫黄、及びリンが挙げられるが、これらに限定されない。「アリール」という用語に含まれる「非ヘテロアリール」という用語は、ヘテロ原子を含まない芳香族基を含む基を定義する。アリールまたはヘテロアリール基は、置換されていても、または置換されていなくてもよい。アリールまたはヘテロアリール基は、本明細書に記載されるとおり、アルキル、ハロゲン化アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、スルホニル、スルホン、スルホキシド、またはチオールを含むが、それらに限定されない１つ以上の基で置換されてもよい。「ビアリール」という用語は、アリール基の特定のタイプであり、アリールの定義内に含まれる。ビアリールは、ナフタレンのような縮合環構造を介して互いに結合しているか、またはビフェニルのような１つ以上の炭素・炭素結合を介して結合した２つのアリール基を指す。
【００３６】
「シクロアルキル」という用語は、本明細書中で使用される場合、少なくとも３つの炭素原子から構成される炭素ベースの非芳香族環である。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどが挙げられるが、これらに限定されない。「ヘテロシクロアルキル」という用語は、環の炭素原子のうちの少なくとも１つが窒素、酸素、硫黄、またはリンなどに限定されないヘテロ原子で置換された、上で定義されたとおりのシクロアルキル基である。シクロアルキル基及びヘテロシクロアルキル基は、置換されていても、または置換されていなくてもよい。シクロアルキル基及びヘテロシクロアルキル基は、本明細書に記載されるとおり、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、スルホニル、スルホン、スルホキシド、またはチオールを含むが、それらに限定されない１つ以上の基で置換されてもよい。
【００３７】
「シクロアルケニル」という用語は、本明細書中で使用される場合、少なくとも３つの炭素原子から構成され、少なくとも１つの二重結合、すなわち、Ｃ＝Ｃを含む炭素ベースの非芳香族環である。シクロアルケニル基の例としては、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロペンタジエニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。「ヘテロシクロアルケニル」という用語は、上で定義されたとおりのシクロアルケニル基の、あるタイプであり、「シクロアルケニル」という用語の意味に含まれ、この場合、環の炭素原子のうちの少なくとも１つが窒素、酸素、硫黄、またはリンなどに限定されないヘテロ原子で置換されている。シクロアルケニル基及びヘテロシクロアルケニル基は、置換されていても、または置換されていなくてもよい。シクロアルケニル基及びヘテロシクロアルケニル基は、本明細書に記載されているとおり、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルデヒド、アミノ、カルボン酸、エステル、エーテル、ハロゲン化物、ヒドロキシ、ケトン、ニトロ、シリル、スルホ−オキソ、スルホニル、スルホン、スルホキシド、またはチオールを含むが、それらに限定されない１つ以上の基で置換されてもよい。
【００３８】
「環式基」という用語は、アリール基、非アリール基のいずれか（すなわち、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル、及びヘテロシクロアルケニル基）、またはその両方を指すよう本明細書中で使用される。環式基は、置換されていても、または置換されていなくてもよい１つ以上の環系を有する。環式基は、１つ以上のアリール基、１つ以上の非アリール基、または１つ以上のアリール基と１つ以上の非アリール基を含んでもよい。
【００３９】
「カルボニル」という用語は、本明細書中で使用される場合、式−Ｃ（Ｏ）Ｚ１によって表され、式中、Ｚ１は、上記の水素、ヒドロキシル、アルコキシ、アルキル、ハロゲン化アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロシクロアルケニル基であってもよい。本明細書全体をとおして、「Ｃ（Ｏ）」または「ＣＯ」は、Ｃ＝Ｏに対する省略表現である。
【００４０】
「アルデヒド」という用語は、本明細書中で使用される場合、式−Ｃ（Ｏ）Ｈによって表される。
【００４１】
「アミン」または「アミノ」という用語は、本明細書中で使用される場合、式−ＮＺ１Ｚ２によって表され、式中、Ｚ１及びＺ２はそれぞれ、上記の水素、アルキル、ハロゲン化アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロシクロアルケニル基などの本明細書に記載されるとおりの置換基であってもよい。「アミド」は、−Ｃ（Ｏ）ＮＺ１Ｚ２である。
【００４２】
「カルボン酸」という用語は、本明細書中で使用される場合、式−Ｃ（Ｏ）ＯＨによって表される。「カルボキシラート」または「カルボキシル」基は、本明細書中で使用される場合、式−Ｃ（Ｏ）Ｏ−によって表される。
【００４３】
「エステル」という用語は、本明細書中で使用される場合、式−ＯＣ（Ｏ）Ｚ１または−Ｃ（Ｏ）ＯＺ１によって表され、式中、Ｚ１は、上記のアルキル、ハロゲン化アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロシクロアルケニル基であってもよい。
【００４４】
「エーテル」という用語は、本明細書中で使用される場合、式Ｚ１ＯＺ２によって表される、式中、Ｚ１及びＺ２は、独立して、上記のアルキル、ハロゲン化アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロシクロアルケニル基であってもよい。
【００４５】
「ケトン」という用語は、本明細書中で使用される場合、式Ｚ１Ｃ（Ｏ）Ｚ２によって表され、式中、Ｚ１及びＺ２は、独立して、上記のアルキル、ハロゲン化アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロシクロアルケニル基であってもよい。
【００４６】
「ハロゲン化物」または「ハロゲン」という用語は、本明細書中で使用される場合、フッ素、塩素、臭素、及びヨウ素を指す。
【００４７】
「ヒドロキシル」という用語は、本明細書中で使用される場合、式−ＯＨによって表される。
【００４８】
「ニトロ」という用語は、本明細書中で使用される場合、式−ＮＯ２によって表される。
【００４９】
「シリル」という用語は、本明細書中で使用される場合、式−ＳｉＺ１Ｚ２Ｚ３によって表され、式中、Ｚ１、Ｚ２、及びＺ３は、独立して、上記の水素、アルキル、ハロゲン化アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロシクロアルケニル基であってもよい。
【００５０】
「スルホニル」という用語は、式−Ｓ（Ｏ）２Ｚ１によって表されるスルホオキソ基を指すよう本明細書中で使用され、式中、Ｚ１は、上記の水素、アルキル、ハロゲン化アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロシクロアルケニル基であってもよい。
【００５１】
「スルホニルアミノ」または「スルホンアミド」という用語は、本明細書中で使用される場合、式−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−によって表される。
【００５２】
「チオール」という用語は、本明細書中で使用される場合、式−ＳＨによって表される。
【００５３】
「チオ」という用語は、本明細書中で使用される場合、式−Ｓ−によって表される。
【００５４】
「Ｒ１」、「Ｒ２」、「Ｒ３」、ｎが一部の整数である「Ｒｎ」などは、本明細書中で使用される場合、独立して、上で挙げた１つ以上の基を持ってもよい。例えば、Ｒ１が直鎖アルキル基である場合、アルキル基の水素原子のうちの１つは、任意にヒドロキシル基、アルコキシ基、アミン基、アルキル基、ハロゲン化物などで置換されてもよい。選択される基に応じて、第１の基が第２の基内に組み込まれている場合があり、あるいは、第１の基が第２の基に対するペンダント基である（すなわち、結合している）場合もある。例えば、「アミノ基を含むアルキル基」という語句によれば、アミノ基はアルキル基の主鎖内に組み込まれていてもよい。あるいは、アミノ基がアルキル基の主鎖に結合していてもよい。選択される基（複数可）の性質が、第１の基が第２の基にはめ込まれているのか、または結合しているのかどうかを決めることになる。
【００５５】
反対に指定されていない限り、くさびまたは破線としてではなく実線としてのみ示されている化学結合を有する式は、それぞれ可能な異性体、例えば、それぞれ、エナンチオマー、ジアステレオマー、及びメソ化合物、ならびにラセミまたはスケールミック混合物などの異性体の混合物を意図する。
【００５６】
次に本開示の材料、化合物、組成物、物品、及び方法の特定の態様に対して詳細に記載し、それらの例は添付の実施例及び図面に示される。
【００５７】
化合物
イカリイン（ＩＣＡ）は、イカリソウ属植物由来のフラボノイド配糖体である。西洋の薬局方でホーニーゴートウィードまたは中国薬局方において淫羊霍（いんようかく）としても知られているイカリソウ属植物は、多量のフラボノイド配糖体を含む。
【化１】
2019507796.tif 000003
イカリイン及びその脱グリコシル化誘導体イカリチン（３，５，７−トリヒドロキシ−２−（４−メトキシフェニル）−８−（３−メチル−２−ブテン−１−イル）−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン）は、これらの植物の草本の抽出物で観察される、増大した抗炎症性活性及び抗腫瘍性活性を含む、効果に関与すると考えられている。
【化２】
2019507796.tif 000004
【００５８】
ＩＣＡ及び誘導体（３，５，７−トリヒドロキシ−４‘−メトキシ−８−（３−ヒドロキシ−３−メチルブチル）−フラボン）（ＩＣＴ）は、ＭＤＳＣに関連する炎症反応を効果的に阻害することが最近明らかにされた（Ｚｈｏｕ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２０１１；１１（７）：８９０−８；Ｗｕ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２０１１；１２（１）：７４−９。ＩＣＡ及びＩＣＴならびにＭＤＳＣ及びがんに対するその効果及び使用の教示に関する本文献の全体を参照により本明細書に組み込んだものとする）。
【化３】
2019507796.tif 000005
これらの化合物は、発現を低下させることによってＳ１００Ａ８／Ａ９の相互作用を阻害し、それが、末梢性及び腫瘍内ＭＤＳＣの数の減少及びその活性の不活化につながり、その結果、腫瘍量を減少させる。
【００５９】
医薬担体を伴うＩＣＡ、イカリチン、及び／またはＩＣＴの誘導体、ならびに任意の抗がん剤及び／または抗炎症剤を含む医薬組成物が一態様として本明細書中で開示されている。
【００６０】
別の態様において、ＩＣＡ及び／またはＩＣＴの誘導体である化合物が本明細書中で開示されている。例えば、式Ｉ：
【化４】
2019507796.tif 000006
を有する化合物であって、
Ｄはそれぞれ、他方とは無関係に、Ｈ、ＯＨ、ＯＲ、及びハロゲンから選択され；
Ｒは、アルキルまたはモノグルコシドであり；
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、チオール、チオアルキル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アリール、アルキルヘテロアリール、及びヘテロアリールから選択され、これらのいずれも、アセチル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシル、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、もしくはニトロで任意に置換されるか；または
Ｒ１と、隣接するＤとは、一緒にアセチル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシ、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、ニトロ、スルホニル、またはスルホニルアミノで任意に置換された縮合複素環を形成し；
Ｒ２はそれぞれ、いずれの他のものとも無関係に、水素、ヒドロキシル、アミノ、チオール、ニトロ、シアノ、スルホニル、及びアルコキシル、チオアルキル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アリール、アルキルヘテロアリール、またはヘテロアリールから選択され、これらのいずれも、アセチル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシ、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、ニトロ、スルホニル、またはスルホニルアミノで任意に置換され；
ｎは、０、１、２、３、４または５であり；
Ｒ３は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アリール、アルキルヘテロアリール、及びヘテロアリールから選択され、これらのいずれも、アセチル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシ、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、ニトロ、スルホニル、またはスルホニルアミノで任意に置換される、
化合物あるいはその薬学的に許容される塩またはプロドラッグが本明細書中で開示されている。
【００６１】
特定の例において、Ｄはそれぞれ、他方とは無関係に、Ｈ、ＯＨ、ＯＲ、及びハロゲンから選択される。その他の特定の例において、一方のＤはＨである。その他の例において、両方のＤは、Ｈである。さらに他の例において、一方のＤは、ＯＨである。その他の例において、両方のＤは、ＯＨである。さらに別の例において、一方のＤは、ＯＲである。さらに他の例において、両方のＤは、ＯＲである。さらに別の例において、一方のＤは、ＯＨであり、他方はＯＣＨ３である。その他の例において、両方のＤは、ＯＣＨ３である。特定の例において、Ｒ１は、アセチル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシ、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、及びヒドロキシルで任意に置換されるアルキル、アルケニル、またはアルコキシルから選択される。アルキルまたはアルケニルは、Ｃ１からＣ２４、さらに具体的にはＣ１からＣ１２、さらに具体的にはＣ１からＣ８、例えば、Ｃ３からＣ６の長さが可能である。その他の例において、Ｒ１は水素であり、Ｒ３は、アセチル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシ、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、ニトロ、スルホニル、もしくはスルホニルアミノで任意に置換されるアルキルまたはアルケニルであり；あるいはその薬学的に許容される塩またはプロドラッグである。
【００６２】
特定の例において、Ｒ２は、アセチル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシ、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、スルホニル、もしくはスルホニルアミノで任意に置換される、アルキル、アルケニル、またはアルコキシルである。例えば、Ｒ２は、メトキシル、エトキシル、プロピルオキシル、メチル、エチル、またはプロピルであってもよい。その他の例において、Ｒ２は、ニトロである。
【００６３】
それぞれＤがＯＨであり、ｎが１であり、Ｒ２がメトキシルであり、Ｒ３が水素であり、Ｒ１がＣＨ２ＣＨ２Ｒ４である式Ｉの一部の特定の例において、化合物は式ＩＩ：
【化５】
2019507796.tif 000007
であって、Ｒ４は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、メチレン、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アリール、アルキルヘテロアリール、またはヘテロアリールから選択され、これらのいずれも、カルボニル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシル、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、またはニトロで任意に置換される；
式ＩＩあるいはその薬学的に許容される塩またはプロドラッグを有する。
【００６４】
式ＩＩの一部の例において、Ｒ４は、カルボニル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシル、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、またはニトロで任意に置換されるアルキル基である。一部の特定の例において、Ｒ４は、＝ＣＨ２である。一部の特定の例において、Ｒ４は、ＣＨ（ＣＨ３）２である。
【００６５】
ＤがそれぞれＯＣＨ３であり、ｎが１であり、Ｒ２がメトキシルであり、Ｒ３が水素であり、Ｒ１がＣＨ２ＣＨ２Ｒ４である一部のさらなる例において、化合物は式ＩＩＩ：
【化６】
2019507796.tif 000008
であって、Ｒ４は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、メチレン、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アリール、アルキルヘテロアリール、及びヘテロアリールから選択され、これらのいずれも、カルボニル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシル、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、またはニトロで任意に置換される；
式ＩＩＩあるいはその薬学的に許容される塩またはプロドラッグを有する。
【００６６】
式ＩＩＩの一部の例において、Ｒ４は、カルボニル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシル、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、またはニトロで任意に置換されるアルキル基である。一部の特定の例において、Ｒ４は、＝ＣＨ２である。一部の特定の例において、Ｒ４は、ＣＨ（ＣＨ３）２である。
【００６７】
別の例は、式ＩＶ：
【化７】
2019507796.tif 000009
の化合物であって、Ｒ５は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アリール、アルキルヘテロアリール、及びヘテロアリールから選択され、これらのいずれも、カルボニル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシル、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、またはニトロで任意に置換され；
Ｒ２はそれぞれ、いずれの他のものとも無関係に、水素、ヒドロキシル、アルコキシル、スルホニル、アミノ、チオール、チオアルキル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アリール、アルキルヘテロアリール、及びヘテロアリールから選択され、これらのいずれも、アセチル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシ、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、ニトロ、スルホニル、またはスルホニルアミノで任意に置換され；
ｎは、０、１、２、３、４または５である；
化合物、あるいはその薬学的に許容される塩またはプロドラッグである。
【００６８】
式Ｉの一部の別の実施形態において、は式Ｖ：
【化８】
2019507796.tif 000010
の化合物であって、Ｒ６及びＲ７は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アリール、アルキルヘテロアリール、及びヘテロアリールから独立して選択され、これらのいずれも、カルボニル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシル、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、またはニトロで任意に置換され；
Ｒ２はそれぞれ、いずれの他のものとも無関係に、水素、ヒドロキシル、アルコキシル、スルホニル、アミノ、チオール、チオアルキル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アリール、アルキルヘテロアリール、及びヘテロアリールから選択され、これらのいずれも、アセチル、アルキル、アミノ、アミド、アルコキシ、アルキルヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボニル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、シアノ、ニトロ、スルホニル、またはスルホニルアミノで任意に置換され；
ｎは、０、１、２、３、４または５である；
化合物、あるいはその薬学的に許容される塩またはプロドラッグである。
【００６９】
一部の例において、式Ｉ〜Ｖの化合物の任意のヒドロキシルの水素は、ビオチンと結合した１から３０の原子の長さのリンカーで置換されてもよい。
【００７０】
本明細書中で開示されている化合物の特定の例は、表１に示されている。
【表１】
2019507796.tif 000011
【００７１】
また、本開示の化合物の薬学的に許容される塩及びプロドラッグも本明細書中で開示されている。薬学的に許容される塩は、化合物に存在する特定の置換基に応じて酸または塩基により調製される本開示の化合物の塩を含む。本明細書中で開示されている化合物が十分に塩基性または酸性であり、安定した無毒の酸または塩基塩を形成する条件下において、塩としての化合物の投与が適切な場合がある。薬学的に許容される塩基付加塩の例としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、またはマグネシウム塩が挙げられる。生理学的に許容される酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、リン酸、炭酸、硫酸、及び酢酸、プロピオン酸、安息香酸、コハク酸、フマル酸、マンデル酸、シュウ酸、クエン酸、酒石酸、マロン酸、アスコルビン酸、アルファ−ケトグルタル酸、アルファ−グリコリン酸、マレイン酸、トシル酸、メタンスルホン酸のような有機酸などのものが挙げられる。このように、塩酸塩、硝酸塩、リン酸塩、炭酸塩、炭酸水素塩、硫酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マンデル酸塩、シュウ酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、マロン酸塩、アスコルビン酸塩、アルファ−ケトグルタル酸塩、アルファ−グリコリン酸塩、マレイン酸塩、トシル酸塩、及びメシル酸塩が本明細書中で開示されている。化合物の薬学的に許容される塩は、当該技術分野において周知の標準的な手順を使用して、例えば、アミンなどの塩基性化合物を生理学的に許容されるアニオンをもたらす、適した酸と十分に反応させることによって得ることができる。カルボン酸のアルカリ金属（例えば、ナトリウム、カリウムもしくはリチウム）またはアルカリ土類金属（例えば、カルシウム）塩も生成することができる。
【００７２】
式Ｉ〜Ｖの化合物は、イカリチンから開始して調製することができる。例えば、イカリチンのイソプレニル部分は、アミンまたはアミドに還元的アミノ化され得るアルデヒドに、またはアミドに変換され得るエステルに酸化されてもよい。さらに、イソプレニル部分は、置換反応のための適した脱離基に変換され得るカルボニルに酸化されてもよい。
【００７３】
使用の方法
本明細書中で開示されている化合物は、ＭＤＳＣの活性化を調節し、ＭＤＳＣによって作り出された腫瘍微小環境を変えるために使用することができる。これらの化合物、及びそれらを含む組成物は、ＭＤＳＣの機能の根本となるものであるＳ１００Ａ９／ＳＩＧＬＥＣ３シグナル伝達のダウンレギュレーションにより作用することが可能である。本明細書中で開示されているＩＣＡ／ＩＣＴ及びそれらの誘導体が標的とするシグナル伝達事象としては、ＰＤＥ５の直接的または間接的な阻害及びＰＰ２Ａの活性化を挙げることができ、これは、ＭＤＳＣによって産生されるＮＯを含む、炎症性メディエーターを抑制する。本明細書中で開示されているＩＣＡ／ＩＣＴ及びそれらの誘導体はまた、ＳＩＧＬＥＣ３・ＩＴＩＭシグナル伝達を阻害し、成熟させることによってＭＤＳＣの数を減少させるようＤＡＰ１２を活性化するために使用することができる。本明細書中で開示されているＩＣＡ／ＩＣＴ及びその誘導体による処置は、ＮＯ産生を仲介するＴＮＦαを減少させることができる。本明細書中で開示されているＩＣＡ／ＩＣＴ及びその誘導体はまた、ＭＤＳＣ増殖に対する十分に確立された転写因子であるＳＴＡＴ３のレベルならびに腫瘍の確立に利益を与える抑制性サイトカイン（例えば、ＴＧＦβ）、血管新生因子（ＶＥＧＦ）及び生存因子の産生をダウンレギュレートすることができる。これらの経路を誘発する受容体／リガンド相互作用は不明であるが、ＴＬＲ４が炎症及びがんにつながるＭＤＳＣ発生における主要なトリガーとして有力視されてきた。ＴＬＲ４は、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）ならびに内在性危険シグナル（ＤＡＭＰ）を含む、外来性だけでなく、内在性危険シグナルも認識することができる特殊化した受容体である。Ｓ１００Ａ８／Ａ９は、ＴＬＲ４を活性化する細胞が放出する強力なＤＡＭＰである。ＴＬＲ４／ＭｙＤ８８／ＩＲＡＫ経路は、ＮＦ−κＢ、ＭＡＰＫ及びＳＴＡＴ３を含む数々の下流エフェクター経路の活性化に重要である可能性がある。これらのマーカーのいずれかの欠乏が、腫瘍増殖の低減に関連している可能性がある。これらのＤＡＭＰ／受容体相互作用の最も重要な腫瘍促進特性の１つは、ＭＤＳＣを腫瘍部位にリクルートする能力であることが示された。したがって、無菌環境のがんという状況において、ＤＡＭＰは、腫瘍進行及び局所的な免疫抑制を促進する炎症反応を引き起こすことに関与する可能性がある。
【００７４】
このように、対象におけるがんを処置または予防する方法であって、有効量の本明細書中で開示されている化合物または組成物を対象に投与することを含む、方法が本明細書中で開示されている。対象における前がん性症候群を処置する方法であって、有効量の本明細書中で開示されている化合物または組成物を対象に投与することを含む、方法が本明細書においてさらに提供される。前がん性症候群の例としては、骨髄異形成症候群、本態性血小板血症、骨髄線維症、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、真性多血症、腺腫性ポリープ、家族性大腸ポリポーシス、非遺伝性非ポリポーシス結腸癌、粘膜下線維症、扁平苔癬、表皮水疱症、円板状エリテマトーデス、子宮頚部異形成、子宮頚部上皮内腫瘍、扁平上皮内病変、上皮過形成、乳管癌、及びパジェット病が挙げられるが、これらに限定されない。有効量の本明細書中で開示されている化合物または組成物を対象に投与することを含む、腫瘍を標準的看護療法に対して感作させる方法も提供される。
【００７５】
腫瘍細胞を死滅させる方法も本明細書において提供される。本方法は、腫瘍細胞を有効量の本明細書中で開示されている化合物または組成物と接触させることを含む。本方法は、第２の化合物もしくは組成物（例えば、抗がん剤）を投与することまたは有効量の電離放射線を対象に施すことをさらに含んでもよい。
【００７６】
腫瘍微小環境を改変する方法も本明細書において提供される。本方法は、腫瘍を有効量の本明細書中で開示されている化合物または組成物と接触させることを含む。微小環境の改変は、対照と比較した場合のＭＤＳＣの減少によって特徴づけることができる。本方法は、第２の化合物もしくは組成物（例えば、抗がん剤）を投与することまたは有効量の電離放射線を対象に施すことをさらに含んでもよい。
【００７７】
腫瘍を有効量の本明細書中で開示されている化合物または組成物と接触させること及び腫瘍に有効量の電離放射線を照射することを含む、腫瘍の放射線療法の方法も本明細書において提供される。対象における炎症を処置する方法が本明細書においてさらに提供され、本方法は、有効量の本明細書に記載されるとおりの化合物または組成物を対象に投与することを含む。任意に、本方法は、第２の化合物または組成物（例えば、抗炎症剤）を投与することをさらに含んでもよい。
【００７８】
本開示の主題はまた、腫瘍学的障害または状態を有する対象を処置するための方法に関する。一実施形態において、有効量の本明細書中で開示されている１つ以上の化合物または組成物は、腫瘍学的な障害を有し、その処置を必要とする対象に投与される。本開示の方法は、任意に腫瘍学的な障害の処置を必要とするか、または必要とする可能性のある対象を特定することを含んでもよい。対象は、腫瘍学的な障害を有するヒトまたは霊長類（サル、チンパンジー、類人猿など）、イヌ、ネコ、雌ウシ、ブタ、ウマ、マウスもしくはその他の動物などのその他の哺乳動物であってもよい。化合物を投与する手段及び対象に投与するための化合物を製剤化する手段は当該技術分野において知られており、その例は本明細書に記載されている。腫瘍学的な障害としては、前がん性症候群（ＭＤＳなど）、肛門、胆管、膀胱、骨、骨髄、腸（結腸及び直腸を含む）、乳房、眼、胆嚢、腎臓、口、喉頭、食道、胃、精巣、頸部、頭、首、卵巣、肺、中皮腫、神経内分泌、陰茎、皮膚、脊髄、甲状腺、膣、外陰部、子宮、肝臓、筋肉、膵臓、前立腺、血液細胞（リンパ球及びその他の免疫細胞を含む）、及び脳のがん及び／または腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。処置が意図される特定のがんとしては、Ｂ細胞癌、例えば、白血病（急性リンパ芽球性、急性骨髄性、慢性リンパ球性、慢性骨髄性、及びその他）、リンパ腫（ホジキン及び非ホジキン）、ならびに多発性骨髄腫が挙げられる。
【００７９】
本明細書中で開示されている方法により処置することができるがんのその他の例は、副腎皮質癌、副腎皮質癌、小脳星細胞腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、乳癌、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、中枢神経系リンパ腫、子宮頸癌、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、胆のう癌、胃の（胃）癌、胃腸管系カルチノイド腫瘍、胚細胞性腫瘍、グリオーマ、ヘアリー細胞白血病、頭頸部癌、肝細胞（肝）癌、下咽頭癌、視床下部及び視経路グリオーマ、眼球内黒色腫、網膜芽細胞腫、膵島細胞癌（膵内分泌部）、喉頭癌、口唇癌、口腔癌、肝癌、髄芽腫、メルケル細胞癌、不顕性菌状息肉腫を伴う扁平上皮頸部癌、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病、鼻腔及び副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽腫、非小細胞肺癌、口腔癌、中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、副鼻腔及び鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、褐色細胞腫、松果体芽腫及びテント上未分化神経外胚葉性腫瘍、下垂体腫瘍、形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫、胸膜肺芽細胞腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞（腎）癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、ユーイング肉腫、軟部組織肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、テント上未分化神経外胚葉性腫瘍、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺癌、腎盂及び尿管の移行細胞癌、絨毛性腫瘍、尿道癌、子宮癌、腟癌、外陰癌、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、ならびにウィルムス腫瘍である。
【００８０】
本開示の主題はまた、それを必要とする患者において感染症を処置するため及び／または敗血症を予防するための方法に関する。敗血症は、血液、尿路、肺、皮膚、またはその他の組織における最も一般的には細菌だが、それだけでなく、真菌、ウイルス、及び寄生生物の深刻な感染症に対する免疫系の応答によって引き起こされる。
【００８１】
本開示の主題はまた、炎症性及び／または自己免疫性障害または状態を有する対象を処置するための方法に関する。ＭＤＳＣは、自然免疫応答及び適応免疫応答の両方を乱すことによって免疫を抑制する。例えば、ＭＤＳＣは、Ｔ細胞活性化に必須のアミノ酸であるアルギニンの取り込み及び周辺のアルギニンを激減させるアルギナーゼの高い細胞内レベルによりＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を抑制することによってＴ細胞活性化に間接的に影響を及ぼす。さらに、ＭＤＳＣが産生するＲＯＳ及びペルオキシナイトライトは、ＴＣＲのニトロ化を触媒し、それによりＴ細胞・ペプチド・ＭＨＣ相互作用を妨げることによってＣＤ８＋Ｔ細胞を抑制する。ＭＤＳＣはまた、腫瘍免疫を腫瘍促進２型表現型の方へ偏らせることによって腫瘍免疫を乱す。ＭＤＳＣは、これを、２型サイトカインＩＬ−１０を産生することによって及び１型サイトカインＩＬ−１２のマクロファージ産生をダウンレギュレートすることによって行う。この影響は、ＩＬ−１０のＭＤＳＣ産生を増加させるマクロファージによって増幅される。ＭＤＳＣ蓄積及び活性化はまた、慢性炎症により特定される。例えば、炎症性サイトカインＩＬ−１β及びＩＬ−６ならびに生理活性脂質ＰＧＥ２は、ＭＤＳＣを誘導することが知られている。
【００８２】
開示されている化合物によって処置することができる炎症性及び自己免疫性障害または状態としては、全身性エリテマトーデス、橋本病、関節リウマチ、痛風性関節炎、移植片対宿主病、シェーグレン症候群、悪性貧血、アジソン病、強皮症、グッドパスチャー症候群、炎症性腸疾患、例えば、クローン病、大腸炎、非定型大腸炎、化学的大腸炎；コラーゲン性大腸炎、遠位大腸炎、空置大腸炎：劇症大腸炎、不確定大腸炎、感染性大腸炎、虚血性大腸炎、リンパ球性大腸炎、顕微鏡的大腸炎、胃腸炎、ヒルシュスプルング病、炎症性消化性疾患、モルブス・クローン、非慢性または慢性消化性疾患、非慢性または慢性炎症性消化性疾患；限局性腸炎及び潰瘍性大腸炎、自己免疫性溶血性貧血、不妊症、重症筋無力症、多発性硬化症、バセドウ病、血小板減少性紫斑病、インスリン依存性糖尿病、アレルギー；喘息、アトピー性疾患；動脈硬化症；心筋炎；心筋症；糸球体腎炎；再生不良性貧血；臓器移植後拒絶及び肺、前立腺、肝臓、卵巣、結腸、頸部、リンパ及び乳房組織の多数の悪性腫瘍、乾癬、尋常性ざ瘡、喘息、自己免疫疾患、セリアック病、慢性前立腺炎、糸球体腎炎、炎症性腸疾患、骨盤内炎症性疾患、再灌流傷害サルコイドーシス、血管炎、間質性膀胱炎、１型過敏症、全身性硬化症、皮膚筋炎、多発性筋炎、ならびに封入体筋炎が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８３】
一実施形態において、有効量の本明細書中で開示されている１つ以上の化合物または組成物は、炎症性または自己免疫性障害を有し、その処置を必要とする対象に投与される。本開示の方法は、任意に炎症性または自己免疫性障害の処置を必要とする、または必要とする可能性がある対象を特定することを含んでもよい。対象は、炎症性障害を有するヒトまたは霊長類（サル、チンパンジー、類人猿など）、イヌ、ネコ、雌ウシ、ブタ、ウマ、マウスもしくはその他の動物などのその他の哺乳動物であってもよい。化合物を投与する手段及び対象に投与するための化合物を製剤化する手段は当該技術分野において知られており、その例は本明細書に記載されている。
【００８４】
神経変性疾患または障害を有する対象を処置するための方法も開示されている。本明細書中で使用される場合、「神経変性疾患」は、「タンパク質凝集障害」、「タンパク質高次構造障害」または「タンパク質症」とも呼ばれる、タンパク質凝集と関連する神経変性疾患を含む。タンパク質凝集と関連する神経変性疾患は、有害な細胞内タンパク質凝集体（例えば、サイトゾルまたは核の含有物）もしくは細胞外タンパク質凝集体（例えば、プラーク）の形成を特徴とする疾患または障害を含む。「有害なタンパク質凝集」は、２つ以上のヘテロまたはホモマーのタンパク質またはペプチドの望ましくない有害な蓄積、オリゴマー形成、線維形成または凝集である。有害なタンパク質凝集は、小体、含有物またはプラークとして沈着する場合があり、その特徴は、疾患を示す場合が多く、疾患固有のタンパク質を含む。例えば、スーパーオキシドジスムターゼ−１凝集体はＡＬＳに関連し、ｐｏｌｙ−Ｑ凝集体はハンチントン病に関連し、α−シヌクレイン含有レビー小体はパーキンソン病に関連する。
【００８５】
神経学的疾患はまた、免疫系の含有する能力を上回る疾患を引き起こす因子のレベルの増加、または疾患を引き起こす要素と間接的もしくは直接的に関連する因子のために、疾患進行と同時に免疫機能が悪化するか、または抑制される状況に関連する免疫不全に関連づけられる。ＭＤＳＣは、エフェクターＴ細胞活性を抑制し、それにより免疫不全と関連づけられる神経変性疾患を促進することによってＴ細胞欠乏を引き起こすことがある。
【００８６】
タンパク質凝集障害またはプロテオパチーの代表的な例としては、タンパク質高次構造障害、アルファ−シヌクレイン病、ポリグルタミン病、セルピン病、タウオパチーまたはその他の関連障害が挙げられる。神経学的疾患のその他の例としては、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病（ＨＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、びまん性レビー小体型認知症（ＤＬＢＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、筋強直性ジストロフィー、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、フリードライヒ運動失調症、脆弱Ｘ症候群、脆弱ＸＥ精神遅滞、マシャド・ジョセフ病（ＭＪＤまたはＳＣＡ３）、球脊髄性筋萎縮症（ケネディ病としても知られている）、脊髄小脳失調症１型（ＳＣＡ１）遺伝子、脊髄小脳失調症２型（ＳＣＡ２）、脊髄小脳失調症６型（ＳＣＡ６）、脊髄小脳失調症７型（ＳＣＡ７）、脊髄小脳失調症１７型（ＳＣＡ１７）、慢性肝疾患、ニューロセルピン封入体を伴う家族性脳疾患（ＦＥＮＩＢ）、ピック病、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン認知症複合、白内障、セルピン病、溶血性貧血、嚢胞性線維症、ウィルソン病、神経線維腫症２型、脱髄性末梢神経障害、網膜色素変性、マルファン症候群、肺気腫、特発性肺線維症、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、前頭側頭葉型認知症／１７番染色体に連鎖したパーキンソニズム、ハラーヴォーデン・スパッツ病、ニーマン・ピック病Ｃ型、亜急性硬化性全脳炎、（アルツハイマー病、虚血、心的外傷、血管の問題もしくは卒中、ＨＩＶ疾患、パーキンソン病、ハンチントン病、ピック病、クロイツフェルト・ヤコブ病、出生時低酸素症、その他の一般的な医学的状態または物質乱用に関連する）認知症を含む認知障害；せん妄、健忘障害または加齢性認知低下；急性ストレス反応、広場恐怖症、全般性不安障害、強迫性障害、パニック発作、パニック障害、心的外傷後ストレス障害、分離不安障害、社会恐怖症、限局性恐怖症、物質誘発不安障害及び一般的な医学的状態による不安を含む不安障害；統合失調症（妄想型、破瓜型、緊張型もしくは識別不法型）、統合失調症様障害、統合失調感情障害、妄想性障害、短期精神障害、共有精神病性障害、一般的な医学的状態による精神障害及び物質誘発精神障害を含む統合失調症または精神病；物質関連障害及び嗜癖行動（物質誘発せん妄、持続性認知症、持続性健忘障害、精神障害もしくは不安障害；アルコール、アンフェタミン、大麻、コカイン、幻覚剤、吸入薬、ニコチン、オピオイド、フェンシクリジン、鎮静剤、催眠薬もしくは抗不安薬を含む物質の耐性、依存もしくは離脱を含む）；アキネジア及び無動固縮症候群（パーキンソン病、薬物誘発パーキンソニズム、脳炎後パーキンソニズム、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、パーキンソニズム・ＡＬＳ認知症複合及び大脳基底核石灰化を含む）、薬剤誘発パーキンソニズム（例えば、神経遮断誘発パーキンソニズム、悪性症候群、神経遮断誘発急性ジストニア、神経遮断誘発急性アカシジア、神経遮断誘発遅発性ジスキネジア及び薬剤誘発姿勢時振戦）、ジル・ドゥ・ラ・トゥレット症候群、てんかん、及び振戦を含むジスキネジア（例えば、静止時振戦、姿勢時振戦及び企図振戦）、舞踏病（例えば、シデナム舞踏病、ハンチントン病、良性遺伝性舞踏病、有棘赤血球舞踏病、症候性舞踏病、薬物誘発舞踏病及びヘミバリズム）、ミオクローヌス（全身性ミオクローヌス及び局所性ミオクローヌスを含む）、チック（単純チック、複雑チック及び症候性チックを含む）、及びジストニア（全身性ジストニア、例えば、突発性ジストニア、薬物誘発ジストニア、症候性ジストニア及び発作性ジストニア、及び局所性ジストニア、例えば、眼瞼痙攣、口下顎ジストニア、痙攣性発声障害、痙性斜頚、軸性ジストニア、ジストニア性書痙及び半側ジストニアを含む）］を含む運動障害；肥満、神経性大食症及び心因性摂食障害；骨及び関節痛（骨関節炎）、反復運動痛、歯痛、がん性疼痛、筋膜痛（筋肉損傷、線維筋痛）、周術期疼痛（一般的な手術、婦人科）、慢性疼痛、神経障害性疼痛、外傷後疼痛、三叉神経痛、偏頭痛及び偏頭痛を含む疼痛；過剰な食物摂取に関連する肥満または摂食障害及びそれに関連する合併症；注意欠陥多動障害；素行障害；うつ病性障害、双極性障害、一般的な医学的状態による気分障害、及び物質誘発気分障害を含む気分障害；筋痙縮及び振戦を含む筋肉痙攣または虚弱に関連する障害；尿失禁；筋萎縮性側索硬化症；眼の損傷、眼の網膜症または黄斑変性、難聴もしくは耳鳴症を含む神経損傷；ナルコレプシーを含む嘔吐、脳浮腫及び睡眠障害、ならびに運動神経細胞のアポトーシスが挙げられるが、これらに限定されない。神経障害性疼痛の説明のための例としては、糖尿病性多発ニューロパチー、絞扼性ニューロパチー、幻肢痛、卒中後の視床痛、ヘルペス後神経痛、抜歯後の非定型顔面神経痛など、脊髄損傷、三叉神経痛及びモルヒネなどの麻薬性鎮痛薬に対して耐性のあるがん性疼痛が挙げられる。神経障害性疼痛は、中枢または末梢神経損傷のいずれかによって引き起こされる疼痛を含む。さらに、これは、単ニューロパチーまたは多発ニューロパチーのいずれかによって引き起こされる疼痛を含む。
【００８７】
対象における慢性疾患の貧血を処置する方法（癌関連貧血を含む）であって、有効量の本明細書中で開示されている化合物または組成物を対象に投与することを含む、方法が本明細書においてさらに提供される。
【００８８】
組成物、製剤及び投与の方法
本開示の化合物、及びそれらを含む組成物のインビボにおける適用は、現在または将来的に当業者に既知の任意の適した方法及び技術によって達成することができる。例えば、本開示の化合物は、生理学的または薬学的に許容される形態に製剤化することができ、例えば、経口、経鼻、直腸、局所、及び非経口経路の投与を含む、当該技術分野において知られている任意の適切な経路によって投与することができる。本明細書中で使用される場合、非経口という用語は、注射などによる皮下、皮内、静脈内、筋肉内、腹腔内、及び胸骨内投与を含む。本開示の化合物または組成物の投与は、当業者が容易に決定できる、１回の投与、または継続的もしくは別個の間隔であってもよい。
【００８９】
本明細書中で開示されている化合物、及びそれらを含む組成物はまた、リポソーム技術、徐放性カプセル、埋め込み型ポンプ、及び生分解性容器を利用して投与されてもよい。これらの送達方法は、有利にも、長期間にわたって一定の投与量を提供することができる。本化合物はまた、その塩誘導体形態または結晶形態で投与されてもよい。
【００９０】
本明細書中において開示されている化合物は、薬学的に許容される組成物を調製するための既知の方法に従って製剤化することができる。製剤は、当業者に周知で、容易に利用可能な多くの情報源に詳細に記載されている。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｂｙ  Ｅ．Ｗ．  Ｍａｒｔｉｎ  （１９９５）は、本開示の方法に関連して使用することができる製剤について記載している。一般に、本明細書中において開示されている化合物は、有効量の化合物が化合物の効果的な投与を容易にするのに適した担体と混合されるよう製剤化することができる。使用される組成物も、さまざまな形態が可能である。これらのものとしては、例えば、固体、半固体、ならびに液体剤形、例えば、錠剤、丸剤、粉薬、液体溶液または懸濁液、座剤、注射可能及び注入可能な溶液、及びスプレー剤が挙げられる。好ましい形態は、意図される投与様式及び治療用途によって決まる。本組成物はまた、当業者に既知の従来の薬学的に許容される担体及び希釈剤を含むのが好ましい。化合物とともに使用するための担体または希釈剤の例としては、エタノール、ジメチルスルホキシド、グリセロール、アルミナ、デンプン、生理的食塩水、ならびに同等の担体及び希釈剤が挙げられる。所望の治療的処置のための投与量の投与を提供するために、本明細書中で開示されている組成物は、担体または希釈剤を含む全組成物の重量に基づいて、合計で約０．１％から１００％重量の間の１つ以上の対象の化合物を含むことができる。
【００９１】
投与に適した製剤としては、例えば、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、及び製剤を対象とする受け手の血液と等張にする溶質を含んでもよい水性滅菌注射溶液；及び懸濁化剤及び増粘剤を含んでもよい水性及び非水性滅菌懸濁液が挙げられる。製剤は、単位用量または複数用量容器、例えば、密閉されたアンプル及びバイアルとして提示されてもよく、使用に先立って滅菌液体担体、例えば、注射用水の条件のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存されてもよい。即席の注射溶液及び懸濁液は、滅菌粉末、細粒、錠剤などから調製することができる。当然のことながら、特に上記の成分に加えて、本明細書中で開示されている組成物は、問題となっている製剤の種類を考慮して当該技術分野における従来の他の薬剤を含んでもよい。
【００９２】
本明細書中で開示されている化合物、及びそれらを含む組成物は、細胞との直接接触によるか、または搬送手段を介して細胞に送達することができる。化合物及び組成物を細胞に送達するための搬送手段は、当該技術分野において知られており、例えば、リポソーム部分に組成物をカプセル化することが挙げられる。本明細書中で開示されている化合物及び組成物を細胞へ送達するための別の手段は、標的細胞に送達するために標的とされるタンパク質または核酸に化合物を付着させることを含む。米国特許第６，９６０，６４８号ならびに米国出願公開第２００３００３２５９４号及び同第２００２０１２０１００号は、別の組成物と結合でき、組成物が生体膜を越えて移動することを可能にするアミノ酸配列を開示している。米国出願公開第２００２００３５２４３号はまた、細胞内送達のために細胞膜を超えて生物学的部分を輸送するための組成物について記載している。化合物はまた、ポリマー中に組み込まれてもよく、その例としては、頭蓋内腫瘍のためのポリ（Ｄ−Ｌラクチド−ｃｏ−グリコリド）ポリマー；２０：８０モル比のポリ［ビス（ｐ−カルボキシフェノキシ）プロパン：セバシン酸］（ＧＬＩＡＤＥＬに使用される）；コンドロイチン；キチン；及びキトサンが挙げられる。
【００９３】
腫瘍学的障害の処置のために、本明細書中で開示されている化合物は、処置を必要とする患者に他の抗腫瘍性物質もしくは抗がん性物質及び／または放射線及び／もしくは光力学療法及び／または腫瘍を除去するための外科的処置と組み合わせて投与することができる。こうした他の物質または処置は、本明細書中で開示されている化合物と同時にまたは、それとは異なる時点で与えられてもよい。例えば、本明細書中で開示されている化合物は、有糸分裂阻害剤、例えば、タキソールもしくはビンブラスチン、アルキル化剤、例えば、シクロホスファミドもしくはイホスファミド、代謝拮抗剤、例えば、５−フルオロウラシルもしくはヒドロキシ尿素、ＤＮＡインターカレーター、例えば、アドリアマイシンもしくはブレオマイシン、トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、エトポシドもしくはカンプトテシン、抗血管新生剤、例えば、アンジオスタチン、抗エストロゲン薬、例えば、タモキシフェン、及び／またはその他の抗がん薬物もしくは抗体、それぞれ、例えば、ＧＬＥＥＶＥＣ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）及びＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，  Ｉｎｃ．）、あるいは免疫治療薬、例えば、イピリムマブ及びボルテゾミブと組み合わせて使用することができる。その他の態様において、本開示の化合物は、ＡＣＹ−１２１５、Ｔｕｂａｃｉｎ、Ｔｕｂａｓｔａｔｉｎ  Ａ、ＳＴ−３−０６、またはＳＴ−２−９２のような他のＨＤＡＣインヒビターと同時投与される。
【００９４】
特定の例において、本明細書中で開示されている化合物及び組成物は、任意に不活性希釈剤などの薬学的に許容される担体と組み合わせて、１つ以上の解剖学的部位、例えば、望ましくない細胞増殖の部位（腫瘍部位または良性皮膚増殖など、例えば、腫瘍または皮膚増殖に注入されるか、または局所適用される）に局所投与されてもよい。本明細書中で開示されている化合物及び組成物は、任意に不活性希釈剤などの薬学的に許容される担体または、経口送達用に同化可能な可食の担体と組み合わせて、全身投与、例えば、静脈内または経口投与されてもよい。これは、硬または軟シェルゼラチンカプセルに封入されてもよく、錠剤に圧縮されてもよく、または患者の食事の食物と直接混合されてもよい。治療的経口投与に関して、活性化合物は、１つ以上の賦形剤と混合され、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウェーハ、エアロゾルスプレー剤などの形態で使用されてもよい。
【００９５】
錠剤、トローチ剤、丸剤、カプセル剤などはまた、以下のものを含んでもよい：結合剤、例えば、トラガカントゴム、アラビアゴム、トウモロコシデンプンもしくはゼラチン；賦形剤、例えば、リン酸水素カルシウム；崩壊剤、例えば、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸など；滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム；及び甘味剤、例えば、スクロース、フルクトース、ラクトースもしくはアスパルテームまたは香味料、例えば、ペパーミント、トウリョクジュの油、もしくはサクランボ香料が添加されてもよい。単位剤形がカプセルの場合、これは、上記の種類の材料に加えて、液体担体、例えば、植物油またはポリエチレングリコールを含んでもよい。種々の他の材料は、コーティングとして、または別の方法で固体単位剤形の物理的形態を改変するために存在してもよい。例えば、錠剤、丸剤、またはカプセル剤は、ゼラチン、ワックス、セラック、または糖などによりコーティングされてもよい。シロップ剤またはエリキシル剤は、活性化合物、甘味剤としてスクロースまたはフルクトース、保存料としてメチル及びプロピルパラベン、色素ならびにサクランボまたはオレンジ香味料などの香料を含んでもよい。当然、あらゆる単位剤形を調製する際に使用するいかなる材料も、薬学的に許容され、利用される量で実質的に無毒でなければならない。さらに、本活性化合物は、持続放出調製物及びデバイスに組み込まれてもよい。
【００９６】
その薬学的に許容される塩またはプロドラッグを含む、本明細書中で開示されている化合物及び組成物は、注入または注射によって静脈内、筋肉内、または腹腔内投与されてもよい。活性剤の溶液またはその塩は、任意に毒性のない界面活性剤と混合された水中で調製することができる。分散液はまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、トリアセチン、及びそれらの混合物中ならびに油中で調製することができる。これらの調製物は、保管及び使用の一般の条件下における微生物の増殖を防ぐための保存料を含んでもよい。
【００９７】
注射または注入に適した医薬剤形は、活性成分を含む、滅菌水溶液もしくは分散液または滅菌された粉末を含んでもよく、これは、任意に、リポソーム中にカプセル化された、滅菌された注射可能または注入可能な溶液または分散液の即席の調製物に適合させられる。最終的な剤形は、滅菌された流体であり、製造及び保管の条件下において安定でなければならない。液体担体またはビヒクルは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、植物油、毒性のないグリセリルエステル、及び適したそれらの混合物を含む、溶媒または液体分散媒であってもよい。適切な流動性は、例えば、リポソームの形成によって、分散液の場合に必要とされる粒度の維持によって、または界面活性剤の使用によって維持することができる。任意に、微生物の作用の防止は、種々のその他の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによってもたらされてもよい。多くの場合、等張化剤、例えば、砂糖、緩衝剤または塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。注射可能な組成物の長期の吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを含めることによってもたらされてもよい。
【００９８】
滅菌された注射可能な溶液は、適切な溶媒中の本明細書中で開示されている化合物及び／または薬剤を必要とされる量で上に挙げた種々のその他の成分とともに組み込むことによって調製され、必要な場合、ろ過滅菌が続く。滅菌された注射可能な溶液の調製のための滅菌された粉末の場合、調製の好ましい方法は、真空乾燥及びフリーズドライ技術であり、これにより、予め滅菌ろ過した溶液に存在した活性成分及び任意の付加的な所望の成分の粉末を得る。
【００９９】
局所投与に対して、本明細書中で開示されている化合物及び薬剤は、液体または固体として適用されてもよい。しかしながら、固体または液体であってもよい皮膚科学的に許容される担体と組み合わせた組成物として皮膚に局所投与するのが一般に望ましいであろう。本明細書中で開示されている化合物及び薬剤及び組成物は、悪性もしくは良性増殖の大きさを低減する（及び完全な除去を含んでもよい）ため、または感染部位を処置するために対象の皮膚に局所適用されてもよい。本明細書中で開示されている化合物及び薬剤は、増殖または感染部位に直接適用されてもよい。好ましくは、化合物及び薬剤は、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、液剤、チンキ剤、または同種のものなどの製剤として増殖または感染部位に適用される。
【０１００】
有用な固体担体としては、タルク、粘土、微結晶性セルロース、シリカ、アルミナなどの微粉化された固体が挙げられる。有用な液体担体としては、水、アルコールもしくはグリコールまたは水・アルコール／グリコールブレンドが挙げられ、その中に任意に毒性のない界面活性剤の助けにより化合物が有効なレベルで溶解または分散させられてもよい。所与の使用に対する特性を最適化するために、芳香剤などの補助薬及び付加的な抗菌剤が添加されてもよい。得られた液体組成物は、吸収パッドから適用されてもよく、包帯及びその他の被覆材に染み込ませるために使用されてもよく、または例えば、ポンプ型もしくはエアロゾルスプレーを使用して患部にスプレーされてもよい。
【０１０１】
ユーザーの皮膚に直接適用するための塗ることが可能なペースト剤、ゲル剤、軟膏剤、石けんなどを形成するために、合成ポリマー、脂肪酸、脂肪酸塩及びエステル、脂肪族アルコール、変性セルロースまたは変性鉱物材料などの増粘剤も液体担体とともに利用することができる。
【０１０２】
本明細書中で開示されている化合物及び薬剤及び医薬組成物の有用な投与量は、そのインビトロ活性、及び動物モデルにおけるインビボ活性を比較することによって決定することができる。マウス、及び他の動物における有効な投与量からヒトの有効な投与量を推定するための方法は当該技術分野において知られている。
【０１０３】
薬学的に許容される担体とともに本明細書中で開示される化合物を含む医薬組成物も開示されている。ある量の化合物を含む、経口、局所または非経口投与に適合した医薬組成物は、好ましい態様を構成する。患者、特に、ヒトに投与される用量は、致死毒性がなく、好ましくは、許容されるレベルを超えた副作用または病的状態を引き起こさずに、適度な期間にわたって患者において治療反応を達成するのに十分でなければならない。投与量が、対象の状態（健康）、対象の体重、併用処置の種類、あれば、処置の頻度、治療可能比、ならびに病的状態の重症度及びステージを含む、さまざまな要因に左右されることになることを当業者は認識するであろう。
【０１０４】
１つ以上の容器に本明細書中で開示されている化合物を含む組成物を含む、キットも開示されている。本開示のキットは、任意に薬学的に許容される担体及び／または希釈剤を含んでもよい。一実施形態において、キットは、本明細書に記載されるとおり、１つ以上のその他の構成成分、付属物、または補助薬を含む。別の実施形態において、キットは、本明細書に記載されている薬剤などの１つ以上の抗がん剤を含む。一実施形態において、キットは、キットの化合物または組成物を投与する方法を説明する説明書または包装材を含む。キットの容器は、任意の適した材料、例えば、ガラス、プラスチック、金属などのものであってもよく、任意の適した大きさ、形状または構成のものであってよい。一実施形態において、本明細書中で開示されている化合物及び／または薬剤は、キット中に固体、例えば、錠剤、丸薬、もしくは粉末形態として提供される。別の実施形態において、本明細書中で開示されている化合物及び／または薬剤は、キット中に液体または溶液として提供される。一実施形態において、キットは、本明細書中で開示されている化合物及び／または薬剤を液体もしくは溶液の形態で包含しているアンプルまたはシリンジを含む。
【実施例】
【０１０５】
以下の実施例は、本開示の主題による方法及び結果を説明するために記載する。これらの実施例は、本明細書中で開示されている主題のすべての態様を含むことは意図されず、むしろ代表的な方法及び結果を説明することが意図される。これらの実施例は、当業者に明白な本発明の等価物及び変形物を除外することは意図されない。
【０１０６】
数（例えば、量、温度など）に関して正確に記載するよう努力したが、いくらかの誤差及び偏差が占めるはずである。別のことが示されない限り、部は重量部であり、温度は℃単位であるか、または周囲温度であり、圧力は大気圧またはその付近である。記載されているプロセスから得られる生成物純度及び収率を最適化するために使用することができる反応条件、例えば、構成成分濃度、温度、圧力ならびにその他の反応範囲及び条件の多数の変動及び組み合わせが存在する。そのようなプロセス条件を最適化するためには、妥当な通常の実験のみが必要とされるであろう。
【０１０７】
データは、平均±標準誤差として表される。統計分析は、スチューデントｔ検定を使用してＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌで行い、非連続変数に関してはカイ二乗及び連続変数に関してはロジスティック回帰を使用した相関関係は、ＩＰＳＳソフトウェアｖ２２を使用して実施した（ＳＰＳＳ  Ｉｎｃ．、シカゴ、イリノイ州）。＊ｐ値＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、及び＊＊＊ｐ＜０．０１は、統計学的に有意であると見なされる。
【０１０８】
実施例１．インビボにおけるインフラマソーム阻害は、Ｓ１００Ａ９Ｔｇマウスにおける造血を改善する。
インビボにおけるインフラマソーム阻害が、ヒト骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）と類似のＳ１００Ａ９Ｔｇマウスにおける造血を改善するかどうかを試験するために、老齢のＳ１００Ａ９Ｔｇマウスを、ＮＬＲＰ３インフラマソーム活性化を阻害するイカリイン誘導体ＩＣＴＡで１日おきに８週間処置した。図１及び２Ａ〜２Ｃは、ｒｈＳ１００Ａ９で処理したＵ９３７細胞におけるＩＣＴＡ処理によるａ−カスパーゼ−１、ＮＬＲＰ３及び共局在の低下を示している。
【０１０９】
ＩＣＴＡ処置したトランスジェニックマウスは、ヘモグロビン、白血球数（白血球細胞）、赤血球及び血小板数（図３Ａ〜３Ｄ）の増加を含む末梢血数の著しい改善を示し、このことは、効果的な造血が回復したことを示す。さらに、ＮＬＲＰ３活性化は、ＩＣＴＡ処置トランスジェニック動物からのＢＭ細胞で低下した（図４）。したがって、ピロトーシスが、Ｓ１００Ａ９ＴｇマウスにおいてＨＳＰＣ細胞死及びＭＤＳに至らせる主なメカニズムである。
【０１１０】
実施例２．ＩＣＴＡはβ−カテニンのレベル及びターゲット遺伝子発現を低下させる。
ＷＴ  ＢＭ細胞に対してＳ１００Ａ９Ｔｇ由来のＢＭ細胞で核β−カテニンの著しい増加が観察され、ＩＣＴＡによるインビボでの処置後に核β−カテニンのレベルが低下した（図５）。同様に、ＩＣＴＡによるＭＤＳ骨髄単核細胞（ＢＭ−ＭＮＣ）の処理は、核β−カテニンならびにターゲット遺伝子発現を抑制した（図６Ａ〜６Ｅ）。したがって、β−カテニンのＳ１００Ａ９に誘導される活性化は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の特徴である。
【０１１１】
実施例３．ＩＣＴＡは、ＡＳＣ重合を減少させ、コロニー形成能力Ｕ２ＡＦ１−Ｓ３４Ｆ変異細胞を回復させる。
ＡＳＣ重合の減少によって立証されるとおり、Ｕ２ＡＦ１−Ｓ３４Ｆ変異細胞（細胞は、Ｕ２ＡＦスプライシング因子に変異を含む）のＮＬＲＰ３インフラマソームインヒビターＩＣＴＡによる処理は、インフラマソーム活性化を抑制し、コロニー形成能力をＷＴ細胞のコロニー形成能力へ回復させた（図７Ａ、７Ｂ、及び８）。したがって、ＮＬＲＰ３インフラマソームに誘導されるピロトーシスによって、ＭＤＳスプライシング変異をもつ細胞の生存が減少に至る一方で、β−カテニン活性化がクローンの増殖を助けることもある。
【０１１２】
実施例４．ＩＣＴＡは、ＳＦ３Ｂ１−Ｋ７００Ｅ変異ＢＭ細胞におけるコロニー形成能力を回復させる。
スプライシング因子ＳＦ３Ｂ１に変異を含むＳＦ３Ｂ１−Ｋ７００Ｅコンディショナルノックインマウス（ｎ＝３）から骨髄（ＢＭ）細胞を採取した。これらのノックインマウスは、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）表現型を示す（Ｏｂｅｎｇ  Ｅ．  Ａ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｌｏｏｄ．  ２０１４  １２４（６）：８２８−３０）。ＳＦ３Ｂ１−Ｋ７００Ｅ変異ＢＭ細胞におけるＩＣＴＡを使用したＮＬＲＰ３インフラマソームの薬理学的阻害は、コロニー形成能力を回復させた。このことは、変異細胞の減少におけるインフラマソーム活性化の重要性を示している（図９）。
【０１１３】
方法
ＭＤＳ患者試料。Ｈ．  Ｌｅｅ  Ｍｏｆｆｉｔｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ  ＆  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＭａｌｉｇｎａｎｔ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｃｌｉｎｉｃ、及びＥａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）Ｅ２９０５試験（ＮＣＴ００８４３８８２）からＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｏｕｔｈ  Ｆｌｏｒｉｄａ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄが認めたプロトコルに同意したＭＤＳ患者を採用した。世界保健機関（ＷＨＯ）の基準に従ってＭＤＳの病理学的サブタイプ及び国際予後判定システム（ＩＰＳＳ）に従って割り当てられた予後リスクを報告した。患者を低リスク（低い、中程度−１）及び高リスク（中程度−２、高い）ＭＤＳと分けた。ヘパリン処理した骨髄吸引液からＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓグラジエント遠心分離（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して骨髄単核細胞（ＢＭ−ＭＮＣ）を単離した。
【０１１４】
マウス。Ｓ１００Ａ９Ｔｇマウスを動物試験に使用した（Ｃｈｅｎ  Ｘ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２０１３  １２３（１１）：４５９５−６１１）。ＷＴ  ＦＶＢ／ＮＪマウスをＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（バーハーバー、メーン）から購入した。ヘパリン処理したＢＭ細胞を雄及び雌マウスの脛骨及び大腿骨から単離した。
【０１１５】
試薬及び細胞。１０％ＦＢＳを加えたＲＰＭＩ１６４０中でＵ９３７細胞を増殖させた。１０％ＦＢＳ及び２ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＧＭ−ＣＳＦを加えたＲＰＭＩ１６４０中でＴＦ−１  Ｕ２ＡＦ１変異細胞及びｍｏｃｋ  ＷＴ細胞を培養した。５％ＣＯ２下、３７℃に細胞を維持した。正常なヘパリン処理したＢＭ吸引液を、Ｌｏｎｚａ  ＷａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅまたはＡｌｌＣｅｌｌｓ，  ＬＬＣから購入した。正常な骨髄単核細胞及びＭＤＳ骨髄単核細胞（ＢＭ−ＭＮＣ）をヘパリン処理した骨髄吸引液からＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓグラジエント遠心分離（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して単離した。組換えヒトＳ１００Ａ９及びＣＤ３３／Ｓｉｇｌｅｃ３キメラ融合タンパク質を以前に記載されたとおりに生成した（Ｃｈｅｎ  Ｘ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２０１３  １２３（１１）：４５９５−６１１）。ＦＡＭ−ＦＬＩＣＡ（商標）カスパーゼ−１及びカスパーゼ−３／７活性キット（ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して活性カスパーゼ−１及びカスパーゼ−３／７を検出した。ＮＬＲＰ１抗体をＳａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから、ＮＬＲＰ３抗体をＡｂｃａｍから、及びβ−カテニン抗体をＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。カスパーゼ−１抗体をＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｉｎｃ．（それぞれ＃３８６６及び＃１４７１５）から購入した。
【０１１６】
ピロトーシスフローサイトメトリーパネル。ヒトサンプルに関して、処理及び未処理ＢＭ−ＭＮＣを、１０％の自己ＢＭ血漿を加えたＩＭＤＭ中で一晩インキュベートした。その後、細胞を回収し、１×ＰＢＳ中で２回洗浄し、製造業者の手順に従ってＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ  Ｖｉｏｌｅｔ蛍光反応色素（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で着色した。２％ＢＳＡを含む１×ＰＢＳ中に細胞を再懸濁させ、非特異的な結合をブロックするために室温で１５分間インキュベートした。洗浄後、１：３０の比で２時間３７℃において３０ｘＦＡＭ−ＦＬＩＣＡ（登録商標）カスパーゼ−１及びカスパーゼ−３／７溶液で細胞を着色した。細胞を洗浄し、細胞表面受容体に対してＣＤ３８：ＰＥ−ＣＦ５９４、ＣＤ３３：ＢＶ７１１、ＣＤ３４：ＡＰＣ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、及びＣＤ７１：ＰＥ−Ｃｙａｎｉｎｅ７（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して着色した。すべての抗体を１：２０希釈し、細胞を３０分間、４℃で着色した。細胞を洗浄し、１×結合バッファー中に再懸濁させ、１：２０の希釈で１５分間、室温においてＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖ：Ｃｙ５．５（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で着色した。１×結合バッファーを４００μＬの最終体積になるまで添加した。サンプル収集は、ＢＤ  ＬＳＲ  ＩＩフローサイトメーター及びＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して行った。Ｒａｉｎｂｏｗ  Ｍｉｄ−Ｒａｎｇｅ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して各実験に先立ってフローサイトメーターの較正を行った。蛍光補正設定を確立するために、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ  Ｖｉｏｌｅｔ染色（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）のためにＡｒＣ  Ａｍｉｎｅ  Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｃｏｍｐｅｎｓａｔｉｏｎ  Ｂｅａｄを使用し、表面受容体複合物のためにＢＤ  ＣｏｍｐＢｅａｄ  Ｐｌｕｓ  Ａｎｔｉ−Ｍｏｕｓｅ  Ｉｇ  κ／Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ（ＢＳＡ）Ｃｏｍｐｅｎｓａｔｉｏｎ  Ｐｌｕｓ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用した。ＦｌｏｗＪｏ９．７．５ソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ，  ＬＬＣ、アシュランド、オハイオ州）を使用してデータを分析した。
【０１１７】
Ｕ９３７細胞におけるＳ１００Ａ９フローサイトメトリー実験。Ｕ９３７単核球細胞を示した濃度のｒｈＳ１００Ａ９で２４時間、または示した時点に５μｇ／ｍＬのｒｈＳ１００Ａ９で処理した。その後、１：３０の比で２時間、３７℃において３０ｘＦＡＭ−ＦＬＩＣＡ（登録商標）カスパーゼ−１溶液で細胞を着色した。細胞を洗浄し、１×結合バッファー中に再懸濁させ、１：３０の希釈で１５分間、室温においてＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖ：ＰＥで着色した。３５０μＬの最終体積になるまで１×結合バッファーを添加した。サンプル収集は、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して行った。ＦｌｏｗＪｏ９．７．５ソフトウェアを使用してデータを分析した。
【０１１８】
細胞内Ｓ１００Ａ９フローサイトメトリー。１０％の自己ＢＭ血漿を加えたＩＭＤＭ中でＢＭ−ＭＮＣを一晩インキュベートした。翌日、細胞を回収し、１×ＰＢＳ中で２回洗浄した。３７℃において１０分間、ＢＤ  Ｃｙｔｏｆｉｘ  Ｆｉｘａｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒで細胞を固定し、染色まで−８０℃で保存した。染色のとき、細胞を水浴中で３７℃に温め、遠心沈殿し、染色バッファーで１回洗浄した。１ｍＬの予め温めたＢＤ  Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ  ＩＩＩ中にペレットを再懸濁させ、氷上で３０分間インキュベートした。染色バッファーで２回細胞を洗浄した。洗浄後に、細胞をＳ１００Ａ９：ＦＩＴＣ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）により、ならびに細胞表面受容体をＣＤ３８：ＰＥ−ＣＦ５９４、ＣＤ３３：ＢＶ７１１、ＣＤ３４：ＡＰＣ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、及びＣＤ７１：ＰＥ−Ｃｙａｎｉｎｅ７（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して着色した。すべての抗体を１：２０希釈して、３０分間４℃において細胞を着色した。細胞を洗浄し、４００μＬの染色バッファー中に再懸濁させた。サンプル収集は、ＢＤ  ＬＳＲ  ＩＩフローサイトメーター及びＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して行った。
【０１１９】
免疫蛍光共焦点顕微鏡法。１：３０の比で２時間３７℃において３０ｘＦＡＭ−ＦＬＩＣＡ（商標）カスパーゼ−１溶液でマウスＢＭ細胞を着色した。細胞を洗浄し、４５０ｒｐｍでの５分間の遠心分離を使用してサイトスピンを形成した。ＢＤ  Ｃｙｔｏｆｉｘ  Ｆｉｘａｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して３７℃で１０分間、スライドを固定した後、ＰＢＳを使用して洗浄した。ＰＢＳ中の０．１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００／２％  ＢＳＡにより室温において１５分間、細胞を透過処理した。ＰＢＳで洗浄後、ＰＢＳ中の２％ＢＳＡを使用して３０分間、室温において細胞をブロッキングし、再び洗浄した。細胞を適切な一次抗体（ＮＬＲＰ３に関しては１：４００、β−カテニンに関しては１：２０）とともに４℃で一晩インキュベートした。その次の日、細胞をＰＢＳで洗浄し、適切な二次抗体（１：５００）とともに１時間、室温でインキュベートした。洗浄後、細胞を、ＤＡＰＩを含むＰｒｏＬｏｎｇ  Ｇｏｌｄ  Ａｎｔｉｆａｄｅ  Ｒｅａｇｅｎｔで覆ってから、カバーガラス（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）をつけた。ａ−カスパーゼ−１のＮＬＲＰ３インフラマソーム複合体との共局在化を、Ｌｅｉｃａ  ＴＣＳ  ＳＰ５  ＡＯＢＳレーザー走査共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して評価した。インフラマソーム画像の解析をＤｅｆｉｎｉｅｎｓ  Ｄｅｖｅｌｏｐｅｒ２．０（Ｄｅｆｉｎｉｅｎｓ  ＡＧ）を用いて実施した。明度及びサイズ閾値に基づいて細胞を区分するために、そのソフトウェアを使用した後に、ウォーターシェッドセグメンテーションアルゴリズムが続く。強度値及びピアソンの相関係数を、区分した細胞から抽出した。β−カテニン画像解析に関しては、共焦点画像をＤｅｆｉｎｉｅｎｓ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｓｔｕｄｉｏ  ｖ３．０，  ６４  Ｄｕａｌに．ｔｉｆ形式でインポートした。ＲＧＢ閾値を使用してバックグラウンドから細胞を分離した。ＤＡＰＩチャネルに閾値を設定することによって核を特定した。典型的な細胞は、平均して６０マイクロメートルであった。赤チャネルの０〜２５５のスケールにおいて閾値を赤チャネルの低い、中程度及び高いに設定することによって核及び細胞質における赤色強度（β−カテニン）を確立した。
【０１２０】
フローサイトメトリーによりインフラマソーム形成を検出するためのＡＳＣ染色。記載されるとおりに染色を行った（Ｓｅｓｔｅｒ  Ｄ．  Ｐ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１５  １９４（１）：４５５−６２）。簡単にいえば、１ｍＬの予め温めたＢＤ  Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ  ＩＩＩ中に細胞ペレットを再懸濁させ、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を染色バッファーで２回洗浄した。洗浄後に、１：１５００希釈のウサギ抗ＡＳＣ一次抗体で細胞を着色し、９０分間インキュベートした。細胞を洗浄し、１：１５００の希釈で二次抗体により着色し、４５分間インキュベートした。細胞を洗浄し、ＢＤ  ＬＳＲ  ＩＩフローサイトメーター及びＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを使用してサンプル収集を行った。
【０１２１】
ＡＳＣスペック検出。４００μｇのタンパク質を、正常なドナー及びＭＤＳ患者からのＢＭ血漿から分取し、１：１５００希釈でウサギ抗ＡＳＣ一次抗体により着色し、９０分間インキュベートした。１：１５００の希釈で二次抗体を添加し、４５分間インキュベートした。サンプル収集は、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーターを使用して行った。ＦＳＣ、ＳＳＣ及び二次蛍光色素に対する閾値をゼロに設定して、スペックの検出を可能にする。
【０１２２】
リアルタイム定量ＰＣＲ。ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用してＲＮＡをＢＭ−ＭＮＣから単離した。ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キット（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を使用してｃＤＮＡを生成した。プライマーに関する配列は、表１で見つけられる。ＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡを転写正規化のために使用した。ｉＱ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ及びＣＦＸ９６リアルタイムＰＣＲ検出システム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を使用してｃＤＮＡを増幅した。ＰＣＲ条件は以下のとおりとした：９５℃で１０分間、続いて増幅の４０サイクル（９５℃で１５秒及び６０℃で１分）。相対的な遺伝子発現は、−２ΔΔＣｔ法を使用して算出した。
【表２】
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【０１２３】
コロニー形成アッセイ。４反復の３５０，０００ＢＭ−ＭＮＣ／ｍＬを１０％自己ＢＭ血漿に再懸濁させ、１％ｖ／ｖペニシリン・ストレプトマイシン及び３単位／ｍＬのエリスロポエチンを加えたＭｅｔｈｏＣｕｌｔメチルセルロース培地（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に播いた。ＣＤ３３−ＩｇＧ及びＭＣＣ９５０を培地に直接添加してから播いた。ＢＦＵ−Ｅ、ＣＦＵ−ＧＭ、及びＣＦＵ−ＧＥＭＭのコロニーを、播いた１４日後に倒立光学顕微鏡を使用して評価した。Ｕ２ＡＦ１アッセイに関しては、４反復の３０，０００細胞／ｍＬを、１％ｖ／ｖペニシリン・ストレプトマイシン及び漸増濃度のＩＣＴＡを加えた培地に播いた。播いた７日後にコロニーをカウントした。ＳＦ３Ｂ１−Ｋ７００Ｅアッセイに関しては、条件毎にＢＭ細胞を４ドナーから単離し、４反復の３５０，０００ＢＭ細胞／ｍＬを漸増濃度のＩＣＴＡを含むマウス細胞用のＭｅｔｈｏＣｕｌｔメチルセルロース培地に播いた。播いた１４日後にコロニーを評価した。
【０１２４】
ＩＣＴＡマウス処置試験。Ｈ．  Ｌｅｅ  Ｍｏｆｆｉｔｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ  ＆  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＤｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｃｏｒｅ  ＦａｃｉｌｉｔｙによりＩＣＴＡが合成された。６か月齢のトランスジェニックマウス（ｎ＝５）に経口強制飼養により合計８週間５０ｍｇ／ｋｇ  ＩＣＴＡを１日おきに投与した。
【０１２５】
明白で本発明に固有のその他の利点は、当業者には明らかであろう。当然のことながら、特定の特徴及びサブコンビネーションが有用であり、他の特徴及びサブコンビネーションを参照せずに利用されてもよい。これは、特許請求の範囲によって予期され、その範囲内にある。本発明の範囲から逸脱することなく、多くの可能な実施形態を本発明から作製することができるため、本明細書に記載されているか、または添付の図面に示されているすべての要素は例として解釈されるべきであり、限定の意味ではないことが理解されるべきである。
【０１２６】
別に定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術及び科学用語は、本開示の発明が属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中で引用される刊行物及びそれらが引用される資料は、具体的に参照により組み込まれる。
【０１２７】
当業者は、およそ通常の実験を使用して本明細書に記載される本発明の特定の実施形態の多くの等価物を認識するであろう、または確かめることができる。そのような等価物は、添付の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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