(57)【要約】  本発明は、一部は、Ｃｌｅｃ９Ａを結合する物質ならびに診断薬および治療薬としてのそれらの使用に関する。本発明は、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質を含む医薬組成物および種々の疾患の処置でのそれらの使用にさらに関する。【選択図】図１３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）Ｃｌｅｃ９Ａを認識しかつそれに結合する認識ドメインを含む第１のターゲティング部分と、
（ｂ）改変シグナル伝達物質であって、野生型シグナル伝達物質に比べて改善された安全性を付与する１個または複数の変異を有する改変シグナル伝達物質と
を含むキメラタンパク質であって、
前記ターゲティング部分および改変シグナル伝達物質が、１個または複数のリンカーで必要に応じ連結される、キメラタンパク質。
【請求項２】
１種または複数の追加のターゲティング部分をさらに含む、請求項１に記載のキメラタンパク質。
【請求項３】
前記１種または複数の追加のターゲティング部分が、腫瘍細胞上の抗原または受容体を認識しかつ結合する認識ドメインを含む、請求項２に記載のキメラタンパク質。
【請求項４】
前記１種または複数の追加のターゲティング部分が、免疫細胞上の抗原または受容体を認識しかつ結合する認識ドメインを含む、請求項２に記載のキメラタンパク質。
【請求項５】
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、およびＮＫ細胞から選択される、請求項４に記載のキメラタンパク質。
【請求項６】
前記認識ドメインが、完全長抗体、単一ドメイン抗体、組換え重鎖のみで構成される抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメ重鎖のみで構成される抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質、ｄａｒｐｉｎ、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、受容体に対する天然リガンド、または合成分子を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
【請求項７】
前記認識ドメインが、ＶＨＨを含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
【請求項８】
前記改変シグナル伝達物質が、野生型シグナル伝達物質に比べて受容体に対する低減された親和性または活性を付与する１個または複数の変異を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
【請求項９】
前記１個または複数の変異が、活性の減弱化を可能にする、請求項８に記載のキメラタンパク質。
【請求項１０】
アゴニストまたはアンタゴニスト活性が減弱化される、請求項９に記載のキメラタンパク質。
【請求項１１】
前記変異が、１つまたは複数のターゲティング部分への結合により回復可能である低減された親和性または活性を付与する、請求項８に記載のキメラタンパク質。
【請求項１２】
前記変異が、１つまたは複数のターゲティング部分への結合により実質的に回復可能でない低減されたまたは除去された親和性または活性を付与する、請求項８に記載のキメラタンパク質。
【請求項１３】
前記改変シグナル伝達物質が、インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子の１種または複数から選択され、これらのいずれかは必要に応じ変異される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
【請求項１４】
前記改変シグナル伝達物質が、ＩＦＮα２ａであり、位置Ｌ１５３、Ｒ１４９、およびＭ１４８で１個または複数の変異を必要に応じて有する（配列番号８６または配列番号８７）、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
【請求項１５】
前記認識ドメインが、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含み、
（ａ）ＣＤＲ１が配列番号２〜２１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲ２が配列番号２２〜４３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＣＤＲ３が配列番号４４〜５８、ＬＧＲ、およびＶＩＫのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、
請求項１〜１４のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
【請求項１６】
３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つのターゲティング部分を含むＣｌｅｃ９Ａ結合物質であって、
（ａ）ＣＤＲ１が配列番号２〜２１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲ２が配列番号２２〜４３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＣＤＲ３が配列番号４４〜５８、ＬＧＲ、およびＶＩＫのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、
Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質。
【請求項１７】
前記ターゲティング部分が、完全長抗体、単一ドメイン抗体、組換えの重鎖のみで構成される抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメ重鎖のみで構成される抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質、ｄａｒｐｉｎ、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、受容体に対する天然リガンド、または合成分子である、請求項１６に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質。
【請求項１８】
前記ターゲティング部分が、単一ドメイン抗体である、請求項１６または１７に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質。
【請求項１９】
前記ターゲティング部分が、ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ、またはラクダ化ＶＨＨを含む、請求項１８に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質。
【請求項２０】
前記ターゲティング部分が、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質。
【請求項２１】
前記ターゲティング部分が、下記：
配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、およびＬＧＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、およびＬＧＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、およびＬＧＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、およびＬＧＲのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、およびＶＩＫのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
の１つまたは複数を含む、請求項１６〜２０のいずれか１項に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質。
【請求項２２】
配列番号５９〜８５のいずれか１つと少なくとも９０％の類似性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１６〜２１のいずれか１項に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質。
【請求項２３】
配列番号５９〜８５の１つまたは複数のアミノ酸配列を含む、請求項１６〜２２のいずれか１項に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質。
【請求項２４】
１種または複数のシグナル伝達物質を含む、請求項１６〜２３のいずれか１項に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質。
【請求項２５】
前記シグナル伝達物質が、インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子の１種または複数から選択され、これらのいずれかは必要に応じ改変される、請求項２４に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質。
【請求項２６】
１つまたは複数の追加のターゲティング部分を含む、請求項１６〜２５のいずれか１項に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質。
【請求項２７】
前記１つまたは複数の追加のターゲティング部分が、腫瘍抗原を認識しかつ必要に応じ機能的に調節する、請求項２６に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質。
【請求項２８】
前記１つまたは複数の追加のターゲティング部分が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、およびＮＫ細胞から必要に応じ選択される、免疫細胞上の抗原を認識しかつ必要に応じ機能的に調節する、請求項２７に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質。
【請求項２９】
その活性を実質的に中和することなくＣｌｅｃ９Ａを認識しかつ結合する、請求項１６〜２８のいずれか１項に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質。
【請求項３０】
腫瘍細胞にまたは前記腫瘍環境に樹状細胞を直接的にまたは間接的にリクルートする、請求項１６〜２９のいずれか１項に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質。
【請求項３１】
樹状細胞による抗原提示を強化する、請求項１６〜３０のいずれか１項に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質。
【請求項３２】
樹状細胞による腫瘍抗原提示を強化する、請求項３１に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質。
【請求項３３】
請求項１６〜３２のいずれか１項に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質をコードする組換え核酸組成物。
【請求項３４】
請求項３３に記載の核酸を含む宿主細胞。
【請求項３５】
癌、感染症、免疫異常、自己免疫疾患、および／または神経変性疾患の１種または複数を有する患者における使用に好適である、請求項１６〜３４のいずれか１項に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質。
【請求項３６】
Ｃｌｅｃ９Ａを認識しそれに結合する認識ドメインを含むターゲティング部分、および
インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子の１種または複数から必要に応じ選択される、シグナル伝達物質
を含むキメラの有効量をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を処置するまたは予防するための方法。
【請求項３７】
前記癌が、基底細胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脳および中枢神経系癌；乳癌；腹膜の癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸および直腸癌；結合組織癌；消化器系の癌；子宮内膜癌；食道癌；眼癌；頭頸部の癌；胃癌（胃腸癌を含む）；神経膠芽腫；肝癌；ヘパトーマ；上皮内腫瘍；腎臓癌または腎性癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｏｒ  ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）；喉頭癌；白血病；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）；黒色腫；骨髄腫；神経芽腫；口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸癌；呼吸器系癌；唾液腺癌腫；肉腫；皮膚癌；扁平上皮細胞癌；胃癌；精巣癌；甲状腺癌；子宮または子宮内膜癌；泌尿器系の癌；外陰癌；ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；エイズ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；毛様細胞性白血病；慢性骨髄芽球性白血病；ならびに他の癌腫および肉腫；および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群に関連する異常血管増殖の１種または複数から選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
Ｃｌｅｃ９Ａを認識しかつそれに結合する認識ドメインを含む前記ターゲティング部分が、請求項１〜３７のいずれかに記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質である、請求項３６または３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記シグナル伝達物質が、改変される、請求項３６〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記改変シグナル伝達物質が、変異インターフェロンである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記変異インターフェロンが、変異ヒトＩＦＮα２である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記変異ＩＦＮα２が、配列番号８６または配列番号８７に関連して位置１４８、１４９、および１５３で１個または複数の変異を含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記変異が、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａ、またはその機能性等価物である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
それを必要とする患者に化学療法剤の有効量を投与することをさらに含む、請求項３６〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記化学療法剤が、ＤＮＡ挿入剤である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記ＤＮＡ挿入剤が、ドキソルビシン、シスプラチン、ダウノルビシン、およびエピルビシンから選択される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記ＤＮＡ挿入剤が、ドキソルビシンである、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記キメラまたは前記化学療法剤単独での治療応答に比べて相乗的効果をもたらす、請求項３６〜４７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
それを必要とする患者にチェックポイント阻害剤の有効量を投与することをさらに含む、請求項３６〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
前記チェックポイント阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、およびＣＴＬＡ−４の１種または複数を標的とする物質である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記チェックポイント阻害剤が、ニボルバム（ＯＮＯ−４５３８／ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、オプジーボ、ＢＲＩＳＴＯＬ  ＭＹＥＲＳ  ＳＱＵＩＢＢ）、ペムブロリズマブ（キイトルーダ、ＭＥＲＣＫ）、ピディリズマブ（ＣＴ−０１１、ＣＵＲＥ  ＴＥＣＨ）、ＭＫ−３４７５（ＭＥＲＣＫ）、ＢＭＳ９３６５５９（ＢＲＩＳＴＯＬ  ＭＹＥＲＳ  ＳＱＵＩＢＢ）、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ（ＲＯＣＨＥ）、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０、ＭＤＸ−１０１、ヤーボイ、ＢＭＳ）およびトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）の１種または複数である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記チェックポイント阻害剤が、ＰＤ−Ｌ１に対する抗体である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記キメラまたは前記チェックポイント阻害剤単独での治療応答に比べて相乗的効果をもたらす、請求項４９〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
それを必要とする患者に免疫抑制剤の有効量を投与することをさらに含む、請求項３６〜５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
前記免疫抑制剤が、ＴＮＦである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記キメラまたは前記免疫抑制剤単独での治療応答に比べて相乗的効果をもたらす、請求項５４または５５に記載の方法。
【請求項５７】
それを必要とする患者にキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞の有効量を投与することをさらに含む、請求項３６〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
前記ＣＡＲを発現するＴ細胞が、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、５Ｔ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４７、ＣＳ１、ＣＤ１３８、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、Ｌ１−ＣＡＭ、ＭＵＣ１６、ＲＯＲ−１、ＩＬ１３Ｒα２、ｇｐ１００、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ヒトパピローマタイプ１６  Ｅ６（ＨＰＶ−１６  Ｅ６）、ＣＤ１７１、葉酸受容体アルファ（ＦＲα）、ＧＤ２、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、および血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦ２）から選択される１種または複数の抗原を標的とする、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＣＡＲを発現するＴ細胞が、ＪＣＡＲ０１４（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０１５（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０１７（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０１８（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０２０（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０２３（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０２４（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＣＴＬ０１９（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＫＴＥ−Ｃ１９（Ｋｉｔｅ  Ｐｈａｒｍａ）、ＢＰＸ−４０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＰＸ−５０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＰＸ−６０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ｂｂ２１２１（Ｂｌｕｅｂｉｒｄ  Ｂｉｏ）、ＣＤ−１９  Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ  ｃｅｌｌｓ（眠れる森の美女細胞）（Ｚｉｏｐｈａｒｍ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、ＵＣＡＲＴ１９（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＵＣＡＲＴ１２３（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＵＣＡＲＴ３８（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＵＣＡＲＴＣＳ１（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＯＸＢ−３０２（Ｏｘｆｏｒｄ  ＢｉｏＭｅｄｉｃａ、ＭＢ−１０１（Ｍｕｓｔａｎｇ  Ｂｉｏ）およびＩｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓにより開発されたＣＡＲ  Ｔ細胞から選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記キメラまたは前記ＣＡＲ  Ｔ細胞単独での治療応答に比べて相乗的効果をもたらす、請求項５７〜５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６１】
非改変シグナル伝達物質を含むキメラタンパク質に比べて改善された安全性をもたらす、請求項３６〜６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
Ｃｌｅｃ９Ａを認識しかつそれに結合する認識ドメインを含むターゲティング部分、および
インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子の１種または複数から選択されるシグナル伝達物質
を含む有効量のキメラをそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患および／または神経変性疾患を処置するまたは予防するための方法。
【請求項６３】
自己免疫疾患および／または神経変性疾患が、多発性硬化症、糖尿病、ループス、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ギラン・バレー症候群、強皮症、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、自己免疫性てんかん、ラスムッセン脳炎、原発性硬化性胆管炎、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、アジソン病、橋本甲状腺炎、線維筋痛症、メニエール症候群（Ｍｅｎｉｅｒ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、移植拒絶反応（例えば、同種移植片拒絶の防止）、悪性貧血、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、紅斑性狼瘡、重症筋無力症、ライター症候群、グレーブス病から選択される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記自己免疫疾患および／または神経変性疾患が、多発性硬化症である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
Ｃｌｅｃ９Ａを認識しかつそれに結合する認識ドメインを含む前記ターゲティング部分が、請求項１〜６５のいずれかに記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質である、請求項６２〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６６】
前記シグナル伝達物質が、改変される、請求項６２〜６５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
前記キメラが、１つまたは複数の追加のターゲティング部分を含む、請求項６２〜６６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６８】
前記１つまたは複数の追加のターゲティング部分が、免疫刺激シグナルを認識しかつ必要に応じ中和する、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記１つまたは複数の追加のターゲティング部分が、免疫細胞上の抗原を認識しかつ必要に応じ中和する、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、およびＮＫ細胞から選択される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質が、Ｃｌｅｃ９Ａを認識しかつ結合しおよびその活性を実質的に調節する、請求項６５〜７０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７２】
前記Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質が、前記患者における免疫抑制をもたらす、請求項６５〜７１のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年２月５日に出願された米国特許仮出願第６２／２９１，７６９号；２０１６年５月１３日に出願された同第６２／３３５，８８０号；２０１６年１０月２４日に出願された同第６２／４１１，８０５号；２０１６年２月５日に出願された同第６２／２９１，７７２号；２０１６年２月５日に出願された同第６２／２９１，７７４号；２０１６年５月１３日に出願された同第６２／３３５，９６５号；２０１６年２月５日に出願された同第６２／２９１，７７６号；２０１６年５月１３日に出願された同第６２／３３５，９６８号；２０１６年５月１３日に出願された同第６２／３３５，９７９号；同第２０１６年５月１３日に出願された同第６２／３３６，０３０号；２０１６年６月２３日に出願された同第６２／３５３，６０７号；および２０１６年２月５日に出願された同第６２／２９１，７７９号の利益を主張する。これら全ての特許の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、一部は、Ｃｌｅｃ９Ａを結合する結合物質ならびに治療薬および診断薬としてのそれらの使用に関する。
【０００３】
電子申請したテキストファイルの説明
本明細書と共に電子申請された次記のテキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：配列リストのコンピュータ可読形式コピー（ファイル名：ＯＲＮ−０１２ＰＣ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿ｌｉｓｔｉｎｇ；記録日付：２０１７年２月１日；ファイルサイズ：２８１ＫＢ）。
【背景技術】
【０００４】
樹状細胞（ＤＣ）は、一次免疫応答を誘導する能力を備えた抗原提示細胞（ＡＰＣ）であり、種々の免疫の状況で重要な役割を果たす。活性化樹状細胞は、追加の免疫細胞、例えば、マクロファージ、好酸球、ナチュラルキラー細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞などをリクルートできる。樹状細胞はまた、抗原を捕捉し、樹状細胞の表面上に提示して、Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ））を活性化する。
【０００５】
癌治療における大きな進展にもかかわらず、癌は全世界的に、死亡の主要な原因の１つとして残されたままである。効果的な治療を設計する上での障害には、癌の免疫回避が含まれ、そこで癌細胞は破滅をもたらす免疫、ならびに放射線療法および化学療法などの多くの従来の癌治療の毒性を回避し、このことは患者の治療に耐える能力に影響を与え、および／または治療の効果に影響を与える。
【０００６】
癌が免疫検出および破壊を回避する１つの機序は、樹状細胞（ＤＣ）のリクルートおよび活性化を妨げることにより、樹状細胞の機能を無能にすることによる。したがって、腫瘍回避を効果的に逸脱させかつ、例えば、樹状細胞により媒介される抗腫瘍免疫を強化できる免疫療法薬に対する必要性が残されている。
【０００７】
多発性硬化症（ＭＳ）は、中枢神経系の自己免疫疾患であり、自己免疫および神経変性の両方の特徴を有する。最も多い型のＭＳは、再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）であり、神経学的症状の反復発症を臨床的な特徴とする。世界中で、２３０万人を越える人がＭＳに罹患しており、米国だけで４０万人がこの病気に罹っている。
【０００８】
ＭＳに対する現在の薬理学的処置は、疾患修飾治療（ＤＭＴ）を含み、身体の免疫系を緩和するまたは抑える。ＭＳ用の現在の薬理学的物質の多くは、不完全な効力、副作用および医療リスクにより制限される。これらの処置は、疾患の神経学的再発を中程度に減らし、いくつかの事例では、神経障害の進行を不完全に遅らせることが示されている。したがって、改善されたＭＳ処置に対する差し迫った必要性も残されている。
【発明の概要】
【０００９】
種々の態様では、本発明は、Ｃｌｅｃ９Ａに特異的に結合する少なくとも１つのターゲティング部分を有するＣｌｅｃ９Ａ結合物質に関する。種々の実施形態では、これらのＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、Ｃｌｅｃ９Ａに結合するが、Ｃｌｅｃ９Ａを機能的に調節しない（例えば、部分的にまたは完全に中和しない）。したがって、種々の実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、例えば、Ｃｌｅｃ９Ａ発現細胞を目的の部位に直接または間接的にリクルートし同時になおＣｌｅｃ９Ａ発現細胞をＣｌｅｃ９Ａを介してシグナル伝達させることにおいて使用される（すなわち、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質の結合は、目的の部位でのＣｌｅｃ９Ａシグナル伝達を低減せず排除しない）。ある実施形態では、ターゲティング部分は単一ドメイン抗体（ＶＨＨまたはナノボディ）である。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、シグナル伝達物質、例えば、限定されないが、活性を弱めるように改変され得るインターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子をさらに含む。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、目的とする他の標的（例えば、抗原、受容体）に結合する追加のターゲティング部分を含む。ある実施形態では、目的とする他の標的（例えば、抗原、受容体）は、腫瘍細胞上に存在する。別の実施形態では、目的とする他の標的（例えば、抗原、受容体）は、免疫細胞上に存在する。いくつかの実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、免疫細胞、（例えば、樹状細胞）を、作用の部位（例えば、非限定的例であるが、腫瘍微小環境など）に直接的にまたは間接的にリクルートし得る。いくつかの実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、樹状細胞による抗原（例えば、腫瘍抗原）の提示を促進する。
【００１０】
種々の実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、癌、感染症、免疫異常、ならびに他の疾患および障害などの種々の疾患または障害の処置に使用され、かつ本発明は、処置の様々な方法を包含する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１Ａ】図１のパネルＡは、マウスＣｌｅｃ９Ａに特異的な６種のＶＨＨの、Ｃｌｅｃ９Ａを遺伝子導入したＣＨＯ細胞への結合を示すヒストグラムである。
【図１Ｂ】図１のパネルＢは、マウスＣｌｅｃ９Ａに特異的な６種のＶＨＨの、Ｃｌｅｃ９Ａを遺伝子導入したＣＨＯ細胞への結合を示すヒストグラムである。
【図１Ｃ】図１のパネルＣは、マウスＣｌｅｃ９Ａに特異的な６種のＶＨＨの、Ｃｌｅｃ９Ａを遺伝子導入したＣＨＯ細胞への結合を示すヒストグラムである。
【図１Ｄ】図１のパネルＤは、マウスＣｌｅｃ９Ａに特異的な６種のＶＨＨの、Ｃｌｅｃ９Ａを遺伝子導入したＣＨＯ細胞への結合を示すヒストグラムである。
【図１Ｅ】図１のパネルＥは、マウスＣｌｅｃ９Ａに特異的な６種のＶＨＨの、Ｃｌｅｃ９Ａを遺伝子導入したＣＨＯ細胞への結合を示すヒストグラムである。
【図１Ｆ】図１のパネルＦは、マウスＣｌｅｃ９Ａに特異的な６種のＶＨＨの、Ｃｌｅｃ９Ａを遺伝子導入したＣＨＯ細胞への結合を示すヒストグラムである。
【図２Ａ】図２パネルＡは、改変ヒトインターフェロンとのマウスＣｌｅｃ９Ａに特異的なＶＨＨの融合体（Ｑ１２４Ｒ変異体、「Ｃｌｅｃ９Ａを標的とするＡｃＴａｆｅｒｏｎ」）の投与が、腫瘍サイズの減少をもたらしたことを示す（折れ線の最後の時点で上から下へ：ＰＢＳ、「非標的化ＡｃＴａｆｅｒｏｎ」（すなわち、無関係の標的−ｈｃＤ２０に対するターゲティング部分に融合された改変ヒトインターフェロン（Ｑ１２４Ｒ変異体）、「Ｃｌｅｃ９Ａを標的とするＡｃＴａｆｅｒｏｎ」−改変ヒトインターフェロン（Ｑ１２４Ｒ変異体）とのマウスＣｌｅｃ９Ａに特異的なＶＨＨの融合体、および「ＷＴ  ｍＩＦＮ」（すなわち、非改変マウスインターフェロン））。
【図２Ｂ】図２パネルＢは、改変ヒトインターフェロン（Ｑ１２４Ｒ変異体）とのマウスＣｌｅｃ９Ａに特異的なＶＨＨの融合体の投与が、それぞれ体重減少または血液毒性を生じなかったことを示す（パネルＢでは、折れ線の最後の時点で上から下へ：非標化ＡｃＴａｆｅｒｏｎ、ＰＢＳ、Ｃｌｅｃ９Ａを標的とするＡｃＴａｆｅｒｏｎ、およびＷＴ  ｍＩＦＮ、パネルＣの全てのグラフでは、ヒストグラムの左から右へ：未処置マウス、ＰＢＳ、ｍＩＦＮ  ＷＴ、非標的化ＡｃＴａｆｅｒｏｎ、およびＣｌｅｃ９Ａを標的とするＡｃＴａｆｅｒｏｎ）。
【図２Ｃ】図２パネルＣは、改変ヒトインターフェロン（Ｑ１２４Ｒ変異体）とのマウスＣｌｅｃ９Ａに特異的なＶＨＨの融合体の投与が、それぞれ体重減少または血液毒性を生じなかったことを示す（パネルＢでは、折れ線の最後の時点で上から下へ：非標化ＡｃＴａｆｅｒｏｎ、ＰＢＳ、Ｃｌｅｃ９Ａを標的とするＡｃＴａｆｅｒｏｎ、およびＷＴ  ｍＩＦＮ、パネルＣの全てのグラフでは、ヒストグラムの左から右へ：未処置マウス、ＰＢＳ、ｍＩＦＮ  ＷＴ、非標的化ＡｃＴａｆｅｒｏｎ、およびＣｌｅｃ９Ａを標的とするＡｃＴａｆｅｒｏｎ）。
【図３】図３は、ヒトＣｌｅｃ９Ａに特異的な２７種の異なるＶＨＨのヌクレオチド配列を示す。ギャップは、配列を整列するために導入された。図３の配列は、下記実施例２に示すようにして、シーケンス識別子に割り付けられる。
【図４】図４は、ヒトＣｌｅｃ９Ａに特異的な２７種の異なるＶＨＨのアミノ酸配列を示す。示される相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）は、Ｋａｂａｔに従って決定される。ギャップは、配列を整列するために導入された。上記２７種の異なるＶＨＨは、１１個の異なる群に属する（図５参照）。同じ群に属するＶＨＨは極めて類似しており、それらのアミノ酸配列は、それらが体細胞超変異から生じるまたは同じＢ細胞から生じるクローン的に関連したＢ細胞由来であるが、ライブラリー構築中にＲＴおよび／またはＰＣＲエラーにより多様化したことを示唆している。同じ群に属するＶＨＨは同じエピトープを認識するが、それらの他の特性（例えば、親和性、効力、安定性、発現量、など）は異なる可能性がある。図４の配列は、下記実施例２に示すようにして、シーケンス識別子に割り付けられる。
【図５】図５は、２７種のＶＨＨが１１個の異なる群に属することを示す。群５および７のメンバーは、マウスおよびヒトＣｌｅｃ９Ａの両方に結合する。
【図６Ａ】図６は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）と組み合わせた、改変ヒトインターフェロンアルファ２に融合されたマウスＣｌｅｃ９Ａに特異的なＶＨＨを含むキメラタンパク質（Ｑ１２４Ｒ変異体、「Ａｃｔａ−Ｃｌｅｃ９Ａ」）の抗腫瘍能力を示す。パネルＡは、キメラタンパク質とＴＮＦを用いた併用療法が強力な抗腫瘍活性を示し、３８日目まで（または投与後２３日目まで）腫瘍の再発がなかったことを示す。
【図６Ｂ】図６は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）と組み合わせた、改変ヒトインターフェロンアルファ２に融合されたマウスＣｌｅｃ９Ａに特異的なＶＨＨを含むキメラタンパク質（Ｑ１２４Ｒ変異体、「Ａｃｔａ−Ｃｌｅｃ９Ａ」）の抗腫瘍能力を示す。パネルＢは、併用療法が耐容性良好であり、野生型ＩＦＮまたはＴＮＦと組み合わされた野生型ＩＦＮに比べて、血小板減少症などの重大な血液毒性がなかったことを示す。
【図７】図７は、改変ヒトインターフェロンアルファ２（Ｑ１２４Ｒ変異体）に融合したマウスＣｌｅｃ９Ａに特異的なＶＨＨのキメラと抗ＰＤ−Ｌ１抗体との（「Ｃｌｅｃ９Ａ−ＡｃＴａｆｅｒｏｎ＋抗ＰＤ−Ｌ１」）組み合わせ効果を、ＰＢＳ（ネガティブコントロール）、改変ヒトインターフェロンアルファ２に融合したマウスＣｌｅｃ９Ａに特異的なＶＨＨのキメラ単独（Ｑ１２４Ｒ変異体、「Ｃｌｅｃ９Ａ−ＡｃＴａｆｅｒｏｎ」）、および抗ＰＤ−Ｌ１抗体単独（「抗ＰＤ−Ｌ１」）と比べて示す。
【図８】図８は、改変ヒトインターフェロンアルファ２（Ｑ１２４Ｒ）に融合し、および抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨにも融合したマウスＣｌｅｃ９Ａに特異的なＶＨＨのキメラと、ドキソルビシンとの（「Ｃｌｅｃ９Ａ−Ｑ１２４Ｒ−ＰＤ−Ｌ１＋ｄｏｘｏ」）組み合わせ効果を、改変ヒトインターフェロンアルファ２（「Ｑ１２４Ｒ」）に融合しかつ抗ＰＤ−Ｌ１ＶＨＨに融合したマウスＣｌｅｃ９Ａに特異的なＶＨＨのキメラ（「Ｃｌｅｃ９Ａ−Ｑ１２４Ｒ−ＰＤ−Ｌ１」）、ドキソルビシン（「ｄｏｘｏ」）、およびＰＢＳ（ネガティブコントロール）に比べて示す。
【図９】図９は、改変ヒトインターフェロンアルファ２に融合したマウスＣｌｅｃ９Ａに特異的なＶＨＨ（Ｑ１２４Ｒ変異体、「Ａｃｔａｋｉｎｅ」）の投与に応答した、マウスにおけるＴ細胞増殖の実質的誘導を示す。
【図１０Ａ】図１０、パネルＡは、実施例７に記載の種々の処置（種々の融合体を含む）に対する同じく実施例７で記載の平均臨床スコアを示す。
【図１０Ｂ】図１０、パネルＢは、実施例７に記載の種々の処置（種々の融合体を含む）に対する同じく実施例７で記載の平均体重を示す。
【図１１】図１１は、種々の処置に対する累積臨床スコアを示す。ヒストグラムは左から右へ次の順である：ＰＢＳ（ネガティブコントロール）、抗ＣＤ２０とＱ１２４Ｒ変異を有するヒトＩＦＮとの融合体（「Ｑ−ＣＤ２０」）、抗ＣＤ８とＱ１２４Ｒ変異を有するヒトＩＦＮとの融合体（Ｑ−ＣＤ８）、抗Ｃｌｅｃ９ＡとＱ１２４Ｒ変異を有するヒトＩＦＮとの融合体（Ｑ−Ｃｌｅｃ９Ａ）、抗Ｂｃｌｌ１０とＱ１２４Ｒ変異を有するヒトＩＦＮとの融合体（「Ｑ−Ｂｃｌｌ１０」）、および示したように２種の用量での野生型ＩＦＮ。Ｑ１２４Ｒは、マウスでの使用に好適するヒトＩＦＮ変異体である（すなわち、これは、マウスで機能するヒト変異体ＩＦＮである）。Ｎａｔ．Ｃｏｍｍ．２０１４；５：３０１６．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ  ４０１６を参照されたい。この文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【図１２Ａ】図１２は、上記図１１で示した処置での種々の副作用を示す（パネルＢ〜Ｆに対し、左から右へ同じヒストグラムの順序）。
【図１２Ｂ】図１２は、上記図１１で示した処置での種々の副作用を示す（パネルＢ〜Ｆに対し、左から右へ同じヒストグラムの順序）。
【図１２Ｃ】図１２は、上記図１１で示した処置での種々の副作用を示す（パネルＢ〜Ｆに対し、左から右へ同じヒストグラムの順序）。
【図１２Ｄ】図１２は、上記図１１で示した処置での種々の副作用を示す（パネルＢ〜Ｆに対し、左から右へ同じヒストグラムの順序）。
【図１２Ｅ】図１２は、上記図１１で示した処置での種々の副作用を示す（パネルＢ〜Ｆに対し、左から右へ同じヒストグラムの順序）。
【図１２Ｆ】図１２は、上記図１１で示した処置での種々の副作用を示す（パネルＢ〜Ｆに対し、左から右へ同じヒストグラムの順序）。
【図１３】図１３は、ヒト樹状細胞ｐＳＴＡＴ１シグナル伝達アッセイを示す。調査したキメラは、抗ヒトＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ  Ｒ１４９Ａおよび抗ヒトＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ  Ｒ３３Ａ／Ｅ１２０Ｒであった。物質の２種の用量：１００ｎｇ／ｍｌおよび５００ｎｇ／ｍｌを調査した。ＰＢＳはコントロールであり、データはｐＳＴＡＴ１＋樹状細胞のパーセンテージの倍率変化として表される（データは、３回のデータセットの平均である）。
【図１４】図１４は、抗ヒトＣｌｅｃ９ａ  ＶＨＨ／抗ヒトＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ−Ｒ１４９Ａ二重特異的キメラのヒト化マウスにおけるヒト腫瘍（ＲＬ）増殖に対する抗腫瘍効果を示す。Ｘ軸上の１８日目に対して、調査構築物は、上から下へ下記の通り：ＰＢＳ（コントロール）；抗ヒトＣｌｅｃ９ａ  ＶＨＨ／抗ヒトＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ−Ｒ１４９Ａ二重特異的キメラ；および抗ヒトＣｌｅｃ９ａ  ＶＨＨ／抗ヒトＰＤ−Ｌ１ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ−Ｒ１４９Ａ二重特異的キメラ＋ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、一部は、Ｃｌｅｃ９Ａを認識しそれに結合する物質（例えば、非限定的例であるが、ＶＨＨなどの抗体）の発見に基づいている。いくつかの実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、１つまたは複数のターゲティング部分および／または１種または複数のシグナル伝達物質とのキメラまたは融合タンパク質の一部である。いくつかの実施形態では、これらのＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、Ｃｌｅｃ９Ａに結合するが、Ｃｌｅｃ９Ａを機能的に調節しない。
【００１３】
いくつかの実施形態では、これらのＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、免疫細胞を結合し治療作用の必要な部位（例えば、腫瘍または腫瘍微小環境）へ直接的にまたは間接的にリクルートし得る。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、効果的な抗腫瘍免疫応答を誘発するため腫瘍抗原提示を強化する。
【００１４】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、腫瘍抗原提示を調節する。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、免疫応答を調節して自己免疫を回避するか低減させる。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、免疫抑制をもたらす。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、患者においてＴｒｅｇの、ＣＤ８＋  Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋  Ｔ細胞に対する比率を高める。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、患者中の自己反応性Ｔ細胞の低減に関する。
【００１５】
本発明は、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質を含む医薬組成物および、癌、自己免疫疾患、および／または神経変性疾患を含む、種々の疾患の処置におけるそれらの使用を提供する。
【００１６】
Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質
種々の実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、Ｃｌｅｃ９Ａに特異的に結合できるタンパク質ベースの物質である。種々の実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、Ｃｌｅｃ９Ａの機能的な調節（例えば、部分的または完全な中和）を行わずに特異的にＣｌｅｃ９Ａに結合できるタンパク質ベースの物質である。Ｃｌｅｃ９Ａは、死細胞由来の物質の取込とプロセッシングに特化された樹状細胞のサブセット（すなわち、ＢＤＣＡ３＋樹状細胞）の表面上で発現される５群Ｃ型レクチン様受容体（ＣＴＬＲ）である。Ｃｌｅｃ９Ａは、細胞膜が損傷を受けた場合に現れる、有核細胞および無核細胞内の保存された成分を認識する。Ｃｌｅｃ９Ａは、グリコシル化されたダイマーとして細胞表面で発現され、エンドサイトーシスを媒介できるが、食作用は媒介できない。Ｃｌｅｃ９Ａは、Ｓｙｋキナーゼをリクルートし炎症促進性サイトカイン産生を誘導できる細胞質免疫受容体チロシンベース活性化モチーフを有する（Ｈｕｙｓａｍｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００８），ＪＢＣ，２８３：１６６９３−７０１を参照）。
【００１７】
種々の実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、Ｃｌｅｃ９Ａ上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、Ｃｌｅｃ９Ａ上に存在する１個または複数の線形エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、線形エピトープは、Ｃｌｅｃ９Ａ上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、Ｃｌｅｃ９Ａ上に存在する１個または複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１個または複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。
【００１８】
種々の実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、ヒトＣｌｅｃ９Ａの完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。種々の実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、モノマー、ダイマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび会合型を含む任意の型のヒトＣｌｅｃ９Ａに結合し得る。ある実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、モノマー型のＣｌｅｃ９Ａに結合する。別の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ダイマー型のＣｌｅｃ９Ａに結合する。さらなる実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、グリコシル化型のＣｌｅｃ９Ａに結合し、これはモノマーであってもダイマーであってもよい。
【００１９】
ある実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、ヒトＣｌｅｃ９Ａ上に存在する１個または複数のエピトープを認識する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。ある実施形態では、ヒトＣｌｅｃ９Ａは、下記のアミノ酸配列を含む：
ＭＨＥＥＥＩＹＴＳＬＱＷＤＳＰＡＰＤＴＹＱＫＣＬＳＳＮＫＣＳＧＡＣＣＬＶＭＶＩＳＣＶＦＣＭＧＬＬＴＡＳＩＦＬＧＶＫＬＬＱＶＳＴＩＡＭＱＱＱＥＫＬＩＱＱＥＲＡＬＬＮＦＴＥＷＫＲＳＣＡＬＱＭＫＹＣＱＡＦＭＱＮＳＬＳＳＡＨＮＳＳＰＣＰＮＮＷＩＱＮＲＥＳＣＹＹＶＳＥＩＷＳＩＷＨＴＳＱＥＮＣＬＫＥＧＳＴＬＬＱＩＥＳＫＥＥＭＤＦＩＴＧＳＬＲＫＩＫＧＳＹＤＹＷＶＧＬＳＱＤＧＨＳＧＲＷＬＷＱＤＧＳＳＰＳＰＧＬＬＰＡＥＲＳＱＳＡＮＱＶＣＧＹＶＫＳＮＳＬＬＳＳＮＣＳＴＷＫＹＦＩＣＥＫＹＡＬＲＳＳＶ（配列番号１）。
【００２０】
種々の実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、特異的結合ができるターゲティング部分を含む。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、抗体またはその誘導体などの抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。ある実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、抗体であるターゲティング部分を含む。種々の実施形態では、抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む完全長マルチマータンパク質である。それぞれの重鎖は、１つの可変領域（例えば、ＶＨ）および少なくとも３つの定常領域（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）を含み、それぞれの軽鎖は、１つの可変領域（ＶＬ）および１つの定常領域（ＣＬ）を含む。可変領域は抗体の特異性を決定する。それぞれの可変領域は、４つの比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）が隣接する、相補性決定領域（ＣＤＲ）としても知られる、３つの高頻度可変領域を含む。３つのＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と呼ばれ、抗体の結合特異性に寄与する。いくつかの実施形態では、抗体はキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト化抗体である。
【００２１】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、特定の抗体誘導体または抗体フォーマットであるターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、次のターゲティング部分を含む：単一ドメイン抗体、組み換え型の重鎖のみで構成される抗体（重鎖抗体）（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖のみで構成される抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ；テトラネクチン；アフィボディ；アフィマー、トランスボディ；アンチカリン；アドネクチン；アフィリン；ミクロボディ；ペプチドアプタマー；ａｌｔｅｒａｓｅ；プラスチック抗体；フィロマー；ストラドボディ；マキシボディ；エビボディ；フィノマー；アルマジロリピートタンパク質（ａｒｍａｄｉｌｌｏ  ｒｅｐｅａｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）；クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペプボディ、ワクシボディ、ユニボディ；デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、または合成分子。これらは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４１７，１３０号、米国特許出願公開第２００４／１３２０９４号、米国特許第５，８３１，０１２号、米国特許出願公開第２００４／０２３３３４号、米国特許第７，２５０，２９７号、米国特許第６，８１８，４１８号、米国特許出願公開第２００４／２０９２４３号、米国特許第７，８３８，６２９号、米国特許第７，１８６，５２４号、米国特許第６，００４，７４６号、米国特許第５，４７５，０９６号、米国特許出願公開第２００４／１４６９３８号、米国特許出願公開第２００４／１５７２０９号、米国特許第６，９９４，９８２号、米国特許第６，７９４，１４４号、米国特許出願公開第２０１０／２３９６３３号、米国特許第７，８０３，９０７号、米国特許出願公開第２０１０／１１９４４６号、および／または米国特許第７，１６６，６９７号に記載されている。Ｓｔｏｒｚ  ＭＡｂｓ．２０１１  Ｍａｙ−Ｊｕｎ；３（３）：３１０−３１７、も参照されたい。
【００２２】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＶＨＨなどの、単一ドメイン抗体であるターゲティング部分を含む。ＶＨＨは、例えば、ラクダ類、サメなどのＶＨＨ抗体を産生する生物から誘導されるか、またはＶＨＨは設計されたＶＨＨであってもよい。ＶＨＨは、天然起源の重鎖抗体の特有の構造および機能特性を含む、抗体由来の治療用タンパク質である。ＶＨＨ技術は、軽鎖を欠くラクダ類由来の完全に機能的な抗体に基づいている。これらの重鎖抗体は、単一可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。ＶＨＨは、ＮＡＮＯＢＯＤＩＥＳの登録商標で市販されている。ある実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質はＶＨＨを含む。
【００２３】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、４つの「フレームワーク領域」またはＦＲおよび３つの「相補性決定領域」またはＣＤＲを有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨであるターゲティング部分を含む。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲの間に位置する可変ドメイン中の領域を指す。本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合できるアミノ酸配列を含むＶＨＨ中の可変領域を指す。
【００２４】
種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、少なくとも１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、少なくとも１つのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４配列を含む可変領域を有するＶＨＨを含む。
代表的実施形態では、ＣＤＲ１配列は、下記から選択される：
ＧＳＩＳＳＩＮＶＭＧ（配列番号２）；
ＧＳＦＳＳＩＮＶＭＧ（配列番号３）；
ＧＳＩＳＳＩＮＩＭＧ（配列番号４）；
ＧＳＩＳＳＩＮＩＭＧ（配列番号５）；
ＶＳＩＦＳＩＮＡＭＧ（配列番号６）；
ＧＳＩＦＳＬＮＡＭＧ（配列番号７）；
ＧＲＴＩＳＮＹＤＭＡ（配列番号８）；
ＧＲＴＦＴＴＳＬＭＱ（配列番号９）；
ＥＲＮＬＲＩＹＤＭＡ（配列番号１０）；
ＥＲＮＬＲＳＹＤＭＡ（配列番号１１）；
ＧＬＴＦＳＮＹＨＭＧ（配列番号１２）；
ＧＬＴＦＳＳＹＨＭＧ（配列番号１３）；
ＧＬＴＦＳＲＹＨＭＧ（配列番号１４）；
ＧＬＴＬＳＳＹＹＩＡ（配列番号１５）；
ＧＬＴＦＳＳＹＹＴＧ（配列番号１６）；
ＧＬＴＬＳＳＹＨＭＧ（配列番号１７）；
ＧＲＴＳＳＰＹＶＴＧ（配列番号１８）；
ＧＦＴＦＳＧＹＶＭＳ（配列番号１９）；
ＧＦＴＦＳＧＹＶＭＴ（配列番号２０）；または
ＧＦＴＦＳＧＹＬＭＳ（配列番号２１）。
【００２５】
代表的実施形態では、ＣＤＲ２配列は、下記から選択される：
ＲＩＴＮＬＧＬＰＮＹＡＤＷＬＫＤ（配列番号２２）；
ＲＩＴＮＬＧＬＰＮＹＡＤＳＶＴＧ（配列番号２３）；
ＲＩＴＮＩＧＬＰＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２４）；
ＲＩＴＮＬＧＬＰＮＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号２５）；
ＡＩＴＳＧＧＲＶＶＹＳＤＳＶＫＧ（配列番号２６）；
ＡＩＴＳＧＧＲＴＡＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２７）；
ＨＩＴＳＤＧＲＩＶＹＡＤＰＶＫＧ（配列番号２８）；
ＲＩＳＧＳＧＤＲＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２９）；
ＳＩＴＷＳＴＧＮＴＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３０）；
ＶＩＳＳＳＧＤＳＴＨＹＳＤＦＶＫＧ（配列番号３１）；
ＶＩＴＳＳＧＤＳＴＨＹＳＤＦＶＫＧ（配列番号３２）；
ＱＩＴＷＳＤＡＳＩＹＹＡＧＳＶＫＧ（配列番号３３）；
ＱＩＴＷＳＤＴＳＩＹＹＡＧＳＶＫＧ（配列番号３４）；
ＱＩＴＷＳＤＧＴＴＹＹＰＧＳＶＫＧ（配列番号３５）；
ＱＩＲＷＳＤＤＳＴＹＹＰＧＳＶＫＧ（配列番号３６）；
ＱＩＳＷＳＤＤＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３７）；
ＴＶＳＷＧＧＶＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３８）；
ＳＩＧＳＧＧＧＹＰＳＹＴＤＳＶＥＧ（配列番号３９）；
ＳＩＧＳＧＧＧＹＰＳＹＴＧＳＶＥＧ（配列番号４０）；
ＨＩＧＳＧＧＧＹＰＳＹＴＤＳＶＱＧ（配列番号４１）；
ＨＩＧＳＧＧＧＨＡＴＹＴＤＳＶＥＧ（配列番号４２）；または
ＴＩＧＳＧＧＧＩＴＳＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４３）。
【００２６】
代表的実施形態では、ＣＤＲ３配列は、下記から選択される：
ＶＡＬＳＡＥＹ（配列番号４４）；
ＶＡＬＫＡＥＹ（配列番号４５）；
ＶＧＬＫＡＥＹ（配列番号４６）；
ＫＴＫＳＡＶＬＦＧＧＭＤＹ（配列番号４７）；
ＹＩＲＧＥＤＹ（配列番号４８）；
ＫＨＹＡＳＮＹ（配列番号４９）；
ＱＤＦＧＳＰＳＦ（配列番号５０）；
ＱＤＦＲＳＰＤＦ（配列番号５１）；
ＱＩＦＧＳＰＮＦ（配列番号５２）；
ＬＡＩＨＧＤＹ（配列番号５３）；
ＮＱＩＲＱＷＰ（配列番号５４）；
ＮＳＩＲＱＷＰ（配列番号５５）；
ＮＡＩＲＱＷＰ（配列番号５６）；
ＲＫＶＧＧＰＤＹ（配列番号５７）；
ＮＴＦＧＮＶＹ（配列番号５８）；
ＬＧＲ；または
ＶＩＫ。
【００２７】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号２、配列番号２２、および配列番号４４を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号３、配列番号２３、および配列番号４５を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号４、配列番号２４、および配列番号４５を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号２、配列番号２５、および配列番号４６を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号５、配列番号２６、および配列番号４７を含む。
【００２８】
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号６、配列番号２７、および配列番号４８を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号７、配列番号２８、および配列番号４９を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号８、配列番号２９、および配列番号５０を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号８、配列番号２９、および配列番号５１を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号８、配列番号２９、および配列番号５２を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号９、配列番号３０、および配列番号５３を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号１０、配列番号３１、および配列番号５４を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号１０、配列番号３１、および配列番号５５を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号１１、配列番号３２、および配列番号５６を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号１２、配列番号３３、および配列番号５７を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号１３、配列番号３４、および配列番号５７を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号１４、配列番号３５、および配列番号５７を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号１５、配列番号３６、および配列番号５７を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号１６、配列番号３７、および配列番号５７を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号１７、配列番号３７、および配列番号５７を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号１８、配列番号３８、および配列番号５８を含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号１９、配列番号３９、およびＬＧＲを含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号１９、配列番号４０、およびＬＧＲを含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号１９、配列番号４１、およびＬＧＲを含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号２０、配列番号４２、およびＬＧＲを含む。
代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、配列番号２１、配列番号４３、およびＶＩＫを含む。
【００２９】
種々の代表的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、下記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：
Ｒ２ＣＨＣＬ８
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＨＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＳＳＩＮＶＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＲＩＴＮＬＧＬＰＮＹＡＤＷＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＹＬＶＡＬＳＡＥＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号５９）；
Ｒ１ＣＨＣＬ５０
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＨＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＦＳＳＩＮＶＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＲＩＴＮＬＧＬＰＮＹＡＤＳＶＴＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＹＬＶＡＬＫＡＥＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６０）；
Ｒ１ＣＨＣＬ２１
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＨＲＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＳＳＩＮＩＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＲＩＴＮＩＧＬＰＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＳＴＶＹＬＱＭＮＳＬＮＡＥＤＴＡＶＹＹＣＹＬＶＡＬＫＡＥＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６１）；
Ｒ２ＣＨＣＬ８７
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＳＳＩＮＶＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＲＩＴＮＬＧＬＰＮＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＫＤＥＮＴＶＹＬＥＭＮＴＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＹＬＶＧＬＫＡＥＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６２）；
Ｒ２ＣＨＣＬ２４
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＳＤＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＴＳＧＧＲＶＶＹＳＤＳＶＫＧＲＧＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＩＡＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＶＫＴＫＳＡＶＬＦＧＧＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６３）；
Ｒ２ＣＨＣＬ３８
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＶＳＩＦＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＡＩＴＳＧＧＲＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＤＳＬＫＰＥＤＴＤＶＹＹＣＫＡＹＩＲＧＥＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６４）；
Ｒ１ＣＨＣＬ１６
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＳＬＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＡＨＩＴＳＤＧＲＩＶＹＡＤＰＶＫＧＲＦＴＩＳＲＶＤＧＫＮＭＶＴＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＡＫＨＹＡＳＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６５）；
Ｒ２ＣＨＣＬ１０
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＩＳＮＹＤＭＡＷＳＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＲＩＳＧＳＧＤＲＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＱＩＱＤＦＧＳＰＳＦＳＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６６）；
Ｒ１ＣＨＣＬ３４
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＩＳＮＹＤＭＡＷＳＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＲＩＳＧＳＧＤＲＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＱＩＱＤＦＲＳＰＤＦＷＳＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６７）；
Ｒ１ＣＨＣＬ８２
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＥＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＩＳＮＹＤＭＡＷＳＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＲＩＳＧＳＧＤＲＴＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＮＣＱＴＱＩＦＧＳＰＮＦＳＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６８）；
Ｒ２ＣＨＣＬ３
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＴＴＳＬＭＱＷＨＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＳＩＴＷＳＴＧＮＴＨＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＴＣＲＶＬＡＩＨＧＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号６９）；
Ｒ２ＣＨＣＬ６９
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＳＣＡＡＳＥＲＮＬＲＩＹＤＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＥＲＥＹＶＡＶＩＳＳＳＧＤＳＴＨＹＳＤＦＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＳＬＱＭＤＳＬＫＰＥＤＴＡＦＹＹＣＮＶＮＱＩＲＱＷＰＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７０）；
Ｒ１ＣＨＣＬ５６
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＳＣＡＡＳＥＲＮＬＲＩＹＤＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＥＲＥＹＶＡＶＩＳＳＳＧＤＳＴＨＹＳＤＦＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＳＬＱＭＤＳＬＫＰＥＤＴＡＦＹＹＣＮＶＮＳＩＲＱＷＰＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７１）；
Ｒ２ＣＨＣＬ３２
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＤＳＬＲＬＳＣＴＡＳＥＲＮＬＲＳＹＤＭＡＷＷＲＱＡＰＧＫＥＲＥＹＶＡＶＩＴＳＳＧＤＳＴＨＹＳＤＦＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＳＬＱＭＤＳＬＫＰＥＤＴＡＳＹＹＣＮＶＮＡＩＲＱＷＰＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７２）；
Ｒ２ＣＨＣＬ４９
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＩＳＧＬＴＦＳＮＹＨＭＧＷＹＲＱＡＰＧＲＥＲＥＦＶＡＱＩＴＷＳＤＡＳＩＹＹＡＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＶＫＮＩＶＹＬＱＩＤＮＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＤＡＲＫＶＧＧＰＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７３）；
Ｒ２ＣＨＣＬ５３
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＴＬＳＣＡＩＳＧＬＴＦＳＳＹＨＭＧＷＹＲＱＡＰＧＲＥＲＥＦＶＡＱＩＴＷＳＤＴＳＩＹＹＡＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＶＫＮＩＶＹＬＱＩＤＮＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＤＡＲＫＶＧＧＰＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７４）；
Ｒ２ＣＨＣＬ２２
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＩＳＧＬＴＦＳＲＹＨＭＧＷＹＲＱＡＰＧＲＥＲＥＦＶＡＱＩＴＷＳＤＧＴＴＹＹＰＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＩＤＮＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＤＡＲＫＶＧＧＰＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７５）；
Ｒ２ＣＨＣＬ２５
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＬＴＬＳＳＹＹＩＡＷＹＲＱＡＰＧＲＥＲＥＦＶＡＱＩＲＷＳＤＤＳＴＹＹＰＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＲＭＤＮＬＫＰＥＤＴＡＲＹＹＣＤＡＲＫＶＧＧＰＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７６）；
Ｒ２ＣＨＣＬ１８
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＬＴＦＳＳＹＹＴＧＷＹＲＱＡＰＧＲＥＲＥＦＶＡＱＩＳＷＳＤＤＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＭＮＮＬＫＰＧＤＴＡＩＹＹＣＤＡＲＫＶＧＧＰＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７７）；
Ｒ１ＣＨＣＬ２３
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＬＴＬＳＳＹＨＭＧＷＹＲＱＡＰＧＲＥＲＥＦＶＡＱＩＳＷＳＤＤＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＶＹＬＱＭＮＮＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＤＡＲＫＶＧＧＰＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７８）；
Ｒ１ＣＨＣＬ２７
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＳＳＰＹＶＴＧＷＹＲＱＴＰＧＫＥＲＥＰＶＡＴＶＳＷＧＧＶＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＡＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＮＶＮＴＦＧＮＶＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号７９）；
Ｒ２ＣＨＣＬ１３
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＹＶＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＳＩＧＳＧＧＧＹＰＳＹＴＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＬＭＤＮＬＫＰＤＤＴＡＶＹＹＣＥＭＬＧＲＲＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号８０）；
Ｒ２ＣＨＣＬ１４
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＹＶＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＳＩＧＳＧＧＧＹＰＳＹＴＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＮＬＫＰＤＤＴＡＶＹＹＣＥＭＬＧＲＲＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号８１）；
Ｒ２ＣＨＣＬ４２
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＹＶＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＳＩＧＳＧＧＧＹＰＳＹＴＧＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＬＭＮＮＬＫＰＤＤＴＡＶＹＹＣＥＭＬＧＲＲＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号８２）；
Ｒ２ＣＨＣＬ４１
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＹＶＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＨＩＧＳＧＧＧＹＰＳＹＴＤＳＶＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＮＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＥＭＬＧＲＲＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号８３）；
Ｒ２ＣＨＣＬ９４
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＹＶＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＨＩＧＳＧＧＧＨＡＴＹＴＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＮＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＥＦＬＧＲＲＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号８４）；または
Ｒ２ＣＨＣＬ２７
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＹＬＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＧＳＧＧＧＩＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＮＬＫＨＥＤＴＡＶＹＹＣＥＴＶＩＫＲＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号８５）。
【００３０】
種々の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質の任意の天然のまたは合成の類似体、変異体、バリアント、アレル、同族体およびオーソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図する。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、またはその他の非古典的アミノ酸をさらに含む。
【００３１】
種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、本明細書で開示の配列のいずれか１つに少なくとも６０％同一である配列を含むターゲティング部分を含む。例えば、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、本明細書で開示の配列のいずれかに少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示の配列のいずれか１つに約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）である配列を含むターゲティング部分を含み得る。
【００３２】
種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、本明細書で開示の配列のいずれか１つに関して１個または複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含むターゲティング部分を含む。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、本明細書で開示の配列のいずれか１つに関して１個、または２個、または３個、または４個、または５個、または６個、または７個、または８個、または９個、または１０個、または１５個、または２０個のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含むターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および切り詰めから独立に選択され得る。
【００３３】
いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、保存的および／または非保存的置換を含み得る。
【００３４】
「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒特性の類似性に基づいて行われ得る。２０種の天然アミノ酸は、次の６つの標準的アミノ酸群に分類できる：（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【００３５】
本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸群の同じ群内に記載の別のアミノ酸による交換として定義される。例えば、ＡｓｐのＧｌｕによる交換は、そのように改変されたポリペプチド中で１つの負電荷を保持する。さらに、グリシンおよびプロリンは、それらのαヘリックスを破壊する能力に基づいて相互に置換され得る。
【００３６】
本明細書で使用される場合、「非保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸群（１）〜（６）の異なる群に記載の別のアミノ酸による交換として定義される。
【００３７】
種々の実施形態では、置換は非古典的アミノ酸も含んでよい。代表的非古典的アミノ酸としては、限定されないが、セレノシステイン、ピロールリジン、Ｎ−ホルミルメチオニンβ−アラニン、ＧＡＢＡおよびδ−アミノレブリン酸、４−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、共通アミノ酸のＤ−異性体、２，４−ジアミノ酪酸、α−アミノイソ酪酸、４−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、γ−Ａｂｕ、ε−Ａｈｘ、６−アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、フルオロアミノ酸、βメチルアミノ酸などのデザイナーアミノ酸、Ｃ  α−メチルアミノ酸、Ｎ  α−メチルアミノ酸、およびアミノ酸類似体一般が挙げられる。
【００３８】
種々の実施形態では、アミノ酸変異は、ターゲティング部分のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３領域）中であってよい。別の実施形態では、アミノ酸変化は、ターゲティング部分のフレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、またはＦＲ４領域）中であってよい。
【００３９】
アミノ酸配列の改変は、任意の当該技術分野において周知の技術、例えば、部位特異的変異誘発またはＰＣＲベース変異誘発を用いて実現され得る。このような技術は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．，１９８９  ａｎｄ  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８９に記載されている。
【００４０】
種々の実施形態では、変異は、Ｃｌｅｃ９Ａに特異的に結合する本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質の能力を実質的に低下させない。種々の実施形態では、変異は、Ｃｌｅｃ９Ａに特異的に結合する本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質の能力を実質的に低下させず、かつＣｌｅｃ９Ａを機能的に調節する（例えば、部分的にまたは完全に中和する）こともない。
【００４１】
種々の実施形態では、ヒトＣｌｅｃ９Ａの完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／またはモノマーおよび／またはダイマー型および／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体（モノマー、ダイマー型を含む）に対する本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質の結合親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）により特徴付けられ得る。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ヒトＣｌｅｃ９Ａの完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体（モノマーおよび／またはダイマー型を含む）に約１ｕＭ、約９００ｎＭ、約８００ｎＭ、約７００ｎＭ、約６００ｎＭ、約５００ｎＭ、約４００ｎＭ、約３００ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約９０ｎＭ、約８０ｎＭ、約７０ｎＭ、約６０ｎＭ、約５０ｎＭ、約４０ｎＭ、約３０ｎＭ、約２０ｎＭ、約１０ｎＭ、または約５ｎＭ、または約１ｎＭ未満のＫＤで結合するターゲティング部分を含む。
【００４２】
種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、目的の抗原、すなわち、Ｃｌｅｃ９Ａを結合するが機能的に調節（例えば、部分的にまたは完全に中和）しないターゲティング部分を含む。例えば、種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質のターゲティング部分は、単に抗原を標的とするが、抗原が有する生物学的作用を実質的に機能的に調節（例えば、部分的にまたは完全に阻害するまたは中和する）しない。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質のターゲティング部分は、その生物活性にとって重要な抗原部位（例えば、抗原の活性部位）から物理的に離れたエピトープを結合する。
【００４３】
顕著な機能調節のないこのような結合は、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質がエフェクター抗原を介して必要な部位に活性免疫細胞を直接的にまたは間接的にリクルートするのに用いられる方法を含む、本発明の種々の実施形態で使用される。例えば、種々の実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、腫瘍を縮小させるまたは取り除く方法において、腫瘍細胞にＣｌｅｃ９Ａを介して直接的または間接的に樹状細胞をリクルートするために使用され得る（例えば、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、抗Ｃｌｅｃ９Ａ抗原認識ドメインを有するターゲティング部分および腫瘍抗原または受容体に対する認識ドメイン（例えば、抗原認識ドメイン）を有するターゲティング部分を含み得る）。このような実施形態では、樹状細胞を直接的または間接的にリクルートするがＣｌｅｃ９Ａ活性を機能的に調節または中和しないことが望ましい。これらの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａシグナル伝達は、腫瘍を縮小させるまたは取り除く作用の重要な部分である。
【００４４】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、樹状細胞による抗原提示を強化する。例えば、種々の実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、腫瘍細胞にＣｌｅｃ９Ａを介して樹状細胞を直接または間接的にリクルートし、そこで腫瘍抗原が次いで取り込まれ、かつ強力な体液性および細胞傷害性Ｔ細胞応答の誘導のために、樹状細胞上に提示される。
【００４５】
他の実施形態では（例えば、自己免疫または神経変性疾患の処置に関連して）、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、目的の抗原、すなわち、Ｃｌｅｃ９Ａを結合し中和するターゲティング部分を含む。例えば、種々の実施形態では、本発明の方法は、例えば免疫応答を低減させるために、Ｃｌｅｃ９Ａのシグナル伝達または発現を阻害または低減し得る。
【００４６】
本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質を含む治療薬
シグナル伝達物質とのキメラおよび融合体
種々の実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、１種または複数のシグナル伝達物質とのキメラまたは融合体の一部である。したがって、本発明は、例えば、Ｃｌｅｃ９Ａに対するターゲティング部分および１種または複数のシグナル伝達物質を含むキメラまたは融合タンパク質を提供する。
【００４７】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１個または複数のその受容体に対する低減された親和性または活性を有するように改変され、それによりキメラまたは融合タンパク質の活性（アゴニズムまたはアンタゴニズムを含む）の減弱化を可能とし、および／または非特異的シグナル伝達または望ましくない隔離を防止する。種々の実施形態では、シグナル伝達物質はその野生型の形態で拮抗的であり、そのアンタゴニスト活性を弱める１個または複数の変異を有する。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１個または複数の変異に起因して拮抗的であり、例えば、作動性シグナル伝達物質は拮抗的シグナル伝達物質に変換され、このような変換されたシグナル伝達物質は、場合により、そのアンタゴニスト活性を弱める１個または複数の変異も有する（例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号に記載のように）。
【００４８】
したがって、種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１個または複数の変異を有する改変された（例えば、変異した）型のシグナル伝達物質である。種々の実施形態では、改変（例えば、変異）は、改変シグナル伝達物質が、非改変型または非変異型、すなわち野生型形態のシグナル伝達物質に比べて（例えば、野生型形態対改変または変異形態で同じシグナル伝達物質を比較して）、低減された結合親和性、低減された内在性活性、および低減された特定の生物活性の１種または複数などの１種または複数の弱められた活性を有することを可能にする。いくつかの実施形態では、結合または親和性を弱めるまたは低減する変異は、結合または活性を実質的に低下または除去する変異を含む。いくつかの実施形態では、結合または親和性を弱めるまたは低減する変異は、結合または活性を実質的に低下または除去する変異とは異なる。結果として、種々の実施形態では、変異は、シグナル伝達物質が、非変異型、すなわち、野生型シグナル伝達物質に比べて（例えば、野生型形態対改変（例えば、変異）形態で同じシグナル伝達物質を比較して）向上した安全性、例えば、低減された全身性毒性、低減された副作用、および低減されたオフターゲット効果を有することを可能にする。
【００４９】
本明細書に記載のように、物質は、１個または複数の改変、例えば、変異により、向上した安全性を有し得る。種々の実施形態では、向上した安全性は、本キメラタンパク質ガより低い毒性（例えば、全身性毒性および／または組織／器官関連毒性）；および／または低減されたまたは実質的に除去された副作用；および／または高められた耐容性、低減されたまたは実質的に除去された有害事象；および／または低減されたまたは実質的に除去された；および／または拡大された治療濃度域をもたらすことを意味する。
【００５０】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１個または複数のその受容体に対する結合親和性または活性を低減する１個または複数の変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、受容体に対する結合親和性または活性を実質的に低減または除去する１個または複数の変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、野生型シグナル伝達物質により与えられる活性は、受容体に対するアゴニズム（例えば、治療の部位での細胞効果の活性化）である。例えば、野生型シグナル伝達物質は、その受容体を活性化し得る。このような実施形態では、変異は、受容体に対する低減されたまたは除去された活性化作用を有するように改変されたシグナル伝達物質をもたらす。例えば、変異は、標的細胞に低減された活性化シグナルを送るように改変されたシグナル伝達物質をもたらし得る、または活性化シグナルが除去され得る。いくつかの実施形態では、野生型シグナル伝達物質により与えられる作用は、受容体に対するアンタゴニズム（例えば、治療の部位での細胞効果の遮断または抑制）である。例えば、野生型シグナル伝達物質は、受容体をアンタゴナイズするまたは阻害し得る。これらの実施形態では、変異は、受容体に対するを低減されたまたは除去されたアンタゴナイズ活性を有するように改変されたシグナル伝達物質をもたらす。例えば、変異は、標的細胞に低減された阻害シグナルを送るように改変されたシグナル伝達物質をもたらし得る、または阻害シグナルが除去され得る。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１個または複数の変異に起因して拮抗的であり、例えば、作動性シグナル伝達物質は拮抗的シグナル伝達物質に変換され（例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号に記載のように）かつ、このような変換されたシグナル伝達物質は、場合により、１個または複数のその受容体に対するその結合親和性または活性を低減する、または１個または複数のその受容体に対し結合親和性または活性を実質的に低減または除去する１個または複数の変異も有する。
【００５１】
いくつかの実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、本明細書に記載の１つまたは複数のターゲティング部分（例えば、Ｃｌｅｃ９Ａに対するターゲティング部分または本明細書に記載のいずれか他のターゲティング部分）との結合により回復可能である。他の実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、１つまたは複数のターゲティング部分の活性により実質的に回復可能でない。
【００５２】
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、それらのシグナル伝達物質が受容体に対する結合親和性または活性を弱めるまたは除去する変異を有するという理由で、オフターゲット効果を低減させる。種々の実施形態では、副作用におけるこの低減は、例えば、野生型シグナル伝達物質と比べてが観察される。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、標的細胞に対し活性である。理由は、ターゲティング部分（単数または複数）が、実質的な活性化に必要とされる欠損した／不十分な結合（例えば、限定されないが、および／または結合力）を補償するためである。種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、治療作用部位への途中では実質的に不活性であり、特異的に標的とされる細胞型に対してその効果を実質的に有し、このことは望ましくない副作用を大きく低減する。
【００５３】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、１つの受容体（すなわち、治療受容体）に対する結合または親和性を弱めるまたは低減させる１個または複数の変異および第２の受容体に対する結合または活性を実質的に低減または除去する１個または複数の変異を含み得る。このような実施形態では、これらの変異は、同じまたは異なる位置にあってよい（すなわち、同じ変異または複数の変異）。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対し結合および／または活性を低減する変異（単数または複数）は、別の受容体に対し実質的に低減または除去する変異（単数または複数）とは異なる。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対し結合および／または活性を低減する変異（単数または複数）は、別の受容体に対し実質的に低減または除去する変異（単数または複数）と同じである。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、治療受容体に対し結合および／または活性を弱めしたがってより制御された狙い通りの治療効果（例えば、野生型シグナル伝達物質に比較して）を可能にする変異および、別の受容体に対する結合および／または活性を実質的に低減または除去ししたがって副作用を低減する（例えば、野生型シグナル伝達物質に比べて）変異の両方を有する改変シグナル伝達物質を有する。
【００５４】
いくつかの実施形態では、結合または活性の実質的な低減または除去は、ターゲティング部分（Ｃｌｅｃ９Ａに対するターゲティング部分または本明細書に記載の任意のその他のターゲティング部分）を用いて実質的に回復可能ではない。いくつかの実施形態では、結合または活性の実質的な低減または除去は、ターゲティング部分を用いて回復可能である。種々の実施形態では、第２の受容体に対する結合または活性の実質的な低減または除去は、他の受容体により媒介される有害作用も防止し得る。あるいは、または加えて、他の受容体に対する結合または活性の実質的な低減または除去は、治療作用の部位から離れて治療キメラタンパク質の低減されたまたは排除された隔離があるので、治療効果を改善させる。例えば、いくつかの実施形態では、これは、他の受容体での損失を補償する高用量の本キメラタンパク質の必要性をなくす。用量を低減するこのような能力は、副作用のより低い可能性をさらにもたらす。
【００５５】
種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質が、１個または複数のその受容体に対し、低減された、実質的に低減された、または除去された親和性、例えば、結合（例えば、ＫＤ）および／または活性化（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアゴニストである場合、例えば、ＫＡおよび／またはＥＣ５０として測定可能な）および／または阻害（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアンタゴニストである場合、例えば、ＫＩおよび／またはＩＣ５０として測定可能な）を有するようにさせる１個または複数の変異を含む。種々の実施形態では、免疫調節薬の受容体に対する低減された親和性は、活性の減弱化（アゴニズムまたはアンタゴニズムを含む）を可能にする。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、野生型シグナル伝達物質に比較して、約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１０％〜２０％、約２０％〜４０％、約５０％、約４０％〜６０％、約６０％〜８０％、約８０％〜１００％の受容体に対する親和性を有する。いくつかの実施形態では、結合親和性は、野生型シグナル伝達物質に比べて、少なくとも約２倍低い、約３倍低い、約４倍低い、約５倍低い、約６倍低い、約７倍低い、約８倍低い、約９倍低い、少なくとも約１０倍低い、少なくとも約１５倍低い、少なくとも約２０倍低い、少なくとも約２５倍低い、少なくとも約３０倍低い、少なくとも約３５倍低い、少なくとも約４０倍低い、少なくとも約４５倍低い、少なくとも約５０倍低い、少なくとも約１００倍低い、少なくとも約１５０倍低い、または約１０〜５０倍低い、約５０〜１００倍低い、約１００〜１５０倍低い、約１５０〜２００倍低い、または２００倍超低い。
【００５６】
キメラタンパク質が１つの受容体に対し結合を低減しかつ第２の受容体に対し結合を実質的に低減または除去する変異を有するいくつかの実施形態では、１つの受容体に対する改変シグナル伝達物質の結合親和性の減弱または低減は、他の受容体に対する親和性の実質的な低減または除去より小さい。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対する改変シグナル伝達物質の結合親和性の減弱または低減は、他の受容体に対する親和性の実質的低減または除去よりも、約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％だけ小さい。種々の実施形態では、実質的な低減または除去は、減弱または低減よりも大きい結合親和性および／または活性の低減を指す。
【００５７】
種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、例えば、野生型シグナル伝達物質に比べて、シグナル伝達物質の内在性活性を、約７５％、または約７０％、または約６０％、または約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２５％、または約２０％、または約１０％、または約５％、または約３％、または約１％に低減する１個または複数の変異を含む。
【００５８】
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質が、その（それらの）受容体（単一または複数）に対するターゲティング部分（単一または複数）の結合親和性より低い、その受容体に対する低下された親和性を有するようにさせる１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、この結合親和性の差異は、同じ細胞上のシグナル伝達物質／受容体とターゲティング部分／受容体との間に存在する。いくつかの実施形態では、この結合親和性の差異は、シグナル伝達物質、例えば、変異シグナル伝達物質が、局在化された狙い通りの効果を有し、かつ野生型シグナル伝達物質で観察される副作用の根底にあるオフターゲット効果を最小化するのを可能にする。いくつかの実施形態では、この結合親和性は、少なくとも約２倍、または少なくとも約５倍、または少なくとも約１０倍、または少なくとも約１５倍低い、または少なくとも約２５倍、または少なくとも約５０倍低い、または少なくとも約１００倍、または少なくとも約１５０倍低い。
【００５９】
受容体結合活性は、当該技術分野において既知の方法を使用して測定され得る。例えば、親和性および／または結合活性は、スキャッチャードプロット分析および結合データのコンピューターフィッティング（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ，１９４９）によりまたはＢｒｅｃｈｔら（１９９３）により記載のように、フロースルー条件下で反射型干渉分光法により評価され得る。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【００６０】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、免疫調節薬、例えば、インターロイキン、インターフェロン、および腫瘍壊死因子の１種または複数である。
【００６１】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、インターロイキンまたは改変インターロイキンであり、例えば、ＩＬ１；ＩＬ２；ＩＬ３；ＩＬ４；ＩＬ５；ＩＬ６；ＩＬ７；ＩＬ８；ＩＬ９；ＩＬ１０；ＩＬ１１；ＩＬ１２；ＩＬ１３；ＩＬ１４；ＩＬ１５；ＩＬ１６；ＩＬ１７；ＩＬ１８；ＩＬ１９；ＩＬ２０；ＩＬ２１；ＩＬ２２；ＩＬ２３；ＩＬ２４；ＩＬ２５；ＩＬ２６；ＩＬ２７；ＩＬ２８；ＩＬ２９；ＩＬ３０；ＩＬ３１；ＩＬ３２；ＩＬ３３；ＩＬ３５；ＩＬ３６またはそのフラグメント、バリアント、類似体、またはファミリーメンバーを含む。インターロイキンは、リンパ球、単球、およびマクロファージにより合成される多機能サイトカイン群である。既知の機能は、免疫細胞（例えば、ヘルパーＴ細胞、Ｂ細胞、好酸球、およびリンパ球）の増殖の刺激、好中球およびＴリンパ球の遊走作用、および／またはインターフェロンの阻害を含む。インターロイキン活性は、当該技術分野において既知のアッセイを使用して測定できる（Ｍａｔｔｈｅｗｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｃｌｅｍｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．１９８７，ｐｐ．２２１−２２５；ａｎｄ  Ｏｒｅｎｃｏｌｅ  ＆  Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ（１９８９）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  １，１４−２０）。
【００６２】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、インターフェロンまたはインターフェロンＩ、ＩＩ、およびＩＩＩ型などの改変型のインターフェロンである。インターフェロンの例としては、例えば、インターフェロンα−１、２、４、５、６、７、８、１０、１３、１４、１６、１７、および２１、インターフェロンβおよびインターフェロンγ、インターフェロンκ、インターフェロンε、インターフェロンτ、およびインターフェロンωが挙げられる。
【００６３】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）または腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の改変型またはＴＮＦファミリーのタンパク質であり、限定されないが、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＬＴβ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＦＡＳＬ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、およびＴＲＡＩＬを含む。
【００６４】
本明細書に記載の野生型シグナル伝達物質のアミノ酸配列は、当該技術分野において周知である。したがって、種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、本明細書に記載のシグナル伝達物質の既知の野生型アミノ酸配列との少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。
【００６５】
種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、本明細書に記載のシグナル伝達物質のいずれかのアミノ酸配列との少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。
【００６６】
種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１個または複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および切り詰めから独立に選択され得る。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異はアミノ酸置換であり、本明細書の他の場所で記載のように、保存的置換および／または非保存的置換を含み得る。
【００６７】
種々の実施形態では、本明細書の他の場所で記載のように、置換は非古典的アミノ酸も含んでよい。
【００６８】
本明細書に記載のように、改変シグナル伝達物質は、１個または複数の受容体に対し親和性および／または活性に影響を与える変異を有する。任意のシグナル伝達物質の受容体は、本明細書に記載のように当技術分野において既知である。
【００６９】
受容体に対し低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）をもたらす変異の例は、国際公開第２０１３／１０７７９号（例えば、インターフェロンに関して）、国際公開第２０１５／００７５４２号（例えば、インターロイキンに関して）、および国際公開第２０１５／００７９０３号（例えば、ＴＮＦに関して）で見出され、これらのそれぞれの全内容は参照により本明細書に組み込まれる。受容体に対し親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を低減する変異の例は、国際公開第２０１５／００７５２０号で見出され、この全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００７０】
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターフェロンαである。このような実施形態では、改変ＩＦＮα物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対し、低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮα物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対し、実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。変異型のインターフェロンαは、当業者に既知である。ある例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、下記のアミノ酸配列を有するアレル型のＩＦＮα２ａである：
ＩＦＮα２a：
ＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＳＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＲＫＩＳＬＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＧＮＱＦＱＫＡＥＴＩＰＶＬＨＥＭＩＱＱＩＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＴＬＬＤＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＧＶＧＶＴＥＴＰＬＭＫＥＤＳＩＬＡＶＲＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＫＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳＦＳＬＳＴＮＬＱＥＳＬＲＳＫＥ（配列番号８６）。
ある例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、下記のアミノ酸配列（これはアミノ酸位置２３でＩＦＮα２ａと異なる）を有するアレル型のＩＦＮα２ｂである：
ＩＦＮα２ｂ
ＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＳＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＲＲＩＳＬＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＧＮＱＦＱＫＡＥＴＩＰＶＬＨＥＭＩＱＱＩＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＴＬＬＤＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＧＶＧＶＴＥＴＰＬＭＫＥＤＳＩＬＡＶＲＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＫＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳＦＳＬＳＴＮＬＱＥＳＬＲＳＫＥ（配列番号８７）。
【００７１】
いくつかの実施形態では、上記ＩＦＮα２変異体（ＩＦＮα２ａまたはＩＦＮα２ｂ）は、位置１４４〜１５４、例えば、アミノ酸位置１４８、１４９および／または１５３にて、１個または複数のアミノ酸で変異される。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα２変異体は、Ｌ１５３Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＭ１４８Ａから選択される１個または複数の変異を含む。このような変異体は、例えば、国際公開第２０１３／１０７７９１号およびＰｉｅｈｌｅｒら、（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２７５：４０４２５−３３に記載され、これらの全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【００７２】
いくつかの実施形態では、ＩＦＮα２変異体は、ＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα２変異体は、国際公開第２０１０／０３０６７１号に記載のように、Ｆ６４Ａ、Ｎ６５Ａ、Ｔ６９Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、およびＹ８９Ａから選択される１個または複数の変異を含み、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【００７３】
いくつかの実施形態では、ＩＦＮα２変異体は、国際公開第２００８／１２４０８６号に記載のように、Ｋ１３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１個または複数の変異を含み、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【００７４】
いくつかの実施形態では、ＩＦＮα２変異体は、国際公開第２０１５／００７５２０号および国際公開第２０１０／０３０６７１号に記載のように、Ｒ１２０ＥおよびＲ１２０Ｅ／Ｋ１２１Ｅから選択される１個または複数の変異を含み、これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、前記ＩＦＮα２変異体は、野生型ＩＦＮα活性２をアンタゴナイズする。このような実施形態では、上記変異体ＩＦＮα２はＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有するが、ＩＦＮＡＲ２に対する活性は保持される。
【００７５】
いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、（１）Ｒ１２０ＥおよびＲ１２０Ｅ／Ｋ１２１Ｅから選択される１個または複数の変異（理論に束縛されることを望むものではないが、これらはアンタゴニスト効果を作り出す）、および（２）Ｋ１３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１個または複数の変異（理論に束縛されることを望むものではないが、これらは、例えば、ＩＦＮＡＲ２に対する減弱化効果を可能にする）を含む。ある実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、Ｒ１２０ＥおよびＬ１５３Ａを含む。
【００７６】
いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号に開示のように、Ｌ１５Ａ、Ａ１９Ｗ、Ｒ２２Ａ、Ｒ２３Ａ、Ｌ２６Ａ、Ｆ２７Ａ、Ｌ３０Ａ、Ｌ３０Ｖ、Ｋ３１Ａ、Ｄ３２Ａ、Ｒ３３Ｋ、Ｒ３３Ａ、Ｒ３３Ｑ、Ｈ３４Ａ、Ｄ３５Ａ、Ｑ４０Ａ、Ｄ１１４Ｒ、Ｌ１１７Ａ、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２５Ａ、Ｋ１３４Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｍ、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、Ｓ１５２Ａ、Ｌ１５３Ａ、およびＮ１５６Ａから選択される１個または複数の変異を含み、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＬ３０Ａを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＲ３３Ａを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＭ１４８Ａを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＬ１５３Ａを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、変異Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、および／またはＹ８９Ａを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、変異Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、Ｙ８９Ａ、および／またはＤ１１４Ａを含む。
【００７７】
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターフェロンβである。このような実施形態では、改変インターフェロンβ物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対し、低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβ物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対し、実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【００７８】
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターフェロンγである。このような実施形態では、改変インターフェロンγ物質は、インターフェロンガンマ受容体（ＩＦＮＧＲ）、すなわち、ＩＦＮＧＲ１および／またはＩＦＮＧＲ２鎖に対し、低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変インターフェロンγ物質は、インターフェロンガンマ受容体（ＩＦＮＧＲ）、すなわち、ＩＦＮＧＲ１および／またはＩＦＮＧＲ２鎖に対し、実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【００７９】
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＮＦαである。ＴＮＦは、細胞増殖、分化、アポトーシス、腫瘍形成、ウイルス複製、自己免疫、免疫細胞機能および輸送、炎症、ならびに敗血性ショックの調節を含む、多くの多様な機能を有する多面的サイトカインである。それは、標的細胞上の２つの別々の膜受容体：ＴＮＦＲ１（ｐ５５）およびＴＮＦＲ２（ｐ７５）に結合する。ＴＮＦＲ１は非常に広範な発現パターンを示すが、ＴＮＦＲ２はリンパ球、Ｔｒｅｇ、内皮細胞、特定のニューロン、ミクログリア、心筋細胞および間葉系幹細胞の特定の集団上で選択的に発現される。全く別々の生物学的経路が受容体活性化に応答して活性化されるが、若干の重なり合いも存在する。一般原則として、理論に束縛されることを望むものではないが、ＴＮＦＲ１シグナル伝達はアポトーシス（細胞死）の誘導に関連し、ＴＮＦＲ２シグナル伝達は細胞生存シグナルの活性化に関連する（例えば、ＮＦκＢ経路の活性化）。ＴＮＦの投与は、全身的毒性であり、これは主にＴＮＦＲ１の関与のためである。しかし、ＴＮＦＲ２の活性化もまた多様な作用に関連し、かつＴＮＦＲ１と同様に、ＴＮＦ系治療薬の開発においては、ＴＮＦターゲティングおよび活性に対する制御が重要であることに留意されたい。
【００８０】
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。ＴＮＦＲ１はほとんどの組織で発現され、かつ細胞死シグナル伝達に関与するが、対照的に、ＴＮＦＲ２は細胞生存シグナルに関与する。したがって癌の処置法に関する実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。これらの実施形態では、キメラタンパク質は、アポトーシスが望ましい細胞、例えば腫瘍細胞または腫瘍血管内皮細胞に標的され得る。例えば、神経変性障害の処置のためのニューロン新生における、細胞生存を促進する方法に関する実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。言い方を変えれば、本キメラタンパク質は、いくつかの実施形態では、死シグナルまたは生存シグナルのどちらかを優先できる改変ＴＮＦα物質を含む。
【００８１】
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦを有する。このようなキメラは、いくつかの実施形態では、野生型ＴＮＦおよび／またはＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性をもたらす変異（単一または複数）のみを有するキメラに比べて、より強力なアポトーシスの誘導因子である。このようなキメラは、いくつかの実施形態では、腫瘍細胞死または腫瘍血管内皮細胞死の誘導に使用される（例えば、癌の処置において）。また、いくつかの実施形態では、これらのキメラは、例えば、ＴＮＦＲ２を介してＴｒｅｇ細胞の活性化を回避または低減し、したがってｉｎ  ｖｉｖｏでＴＮＦＲ１介在性抗腫瘍活性をさらに支持する。
【００８２】
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦを有する。このようなキメラは、いくつかの実施形態では、いくつかの細胞型での細胞生存のより強力な活性化因子であり、これは種々の疾患における具体的治療目的であり得、限定されないが、ニューロン新生の刺激を含む。さらに、このようなＴＮＦＲ２選択キメラはまた、自己免疫疾患（例えば、クローン病、糖尿病、ＭＳ、大腸炎など、および本明細書に記載の多くの他の疾患）の処置において有用である。いくつかの実施形態では、キメラは自己反応性Ｔ細胞に標的される。いくつかの実施形態では、キメラは、Ｔｒｅｇ活性化および細胞傷害性Ｔ細胞の間接的抑制を促進する。
【００８３】
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、例えば、ＴＮＦＲ２の活性化および／またはＴＮＦＲ１の回避により自己反応性Ｔ細胞の死をもたらす（例えば、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦ）。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの自己反応性Ｔ細胞は、例えばＮＦκＢ経路活性／シグナル伝達の変化により変更されたそれらのアポトーシス／生存シグナルを有する。
【００８４】
いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２ベースキメラは、種々の自己免疫疾患、特に、心臓疾患、脱髄性および神経変性障害、および感染症を含む、疾患における追加の治療用途を有する。
【００８５】
ある実施形態では、野生型ＴＮＦαは、下記のアミノ酸配列を有する：
ＴＮＦα
ＶＲＳＳＳＲＴＰＳＤＫＰＶＡＨＶＶＡＮＰＱＡＥＧＱＬＱＷＬＮＲＲＡＮＡＬＬＡＮＧＶＥＬＲＤＮＱＬＶＶＰＳＥＧＬＹＬＩＹＳＱＶＬＦＫＧＱＧＣＰＳＴＨＶＬＬＴＨＴＩＳＲＩＡＶＳＹＱＴＫＶＮＬＬＳＡＩＫＳＰＣＱＲＥＴＰＥＧＡＥＡＫＰＷＹＥＰＩＹＬＧＧＶＦＱＬＥＫＧＤＲＬＳＡＥＩＮＲＰＤＹＬＤＦＡＥＳＧＱＶＹＦＧＩＩＡＬ（配列番号８８）。
【００８６】
このような実施形態では、改変ＴＮＦα物質は、１つまたは複数のアミノ酸位置２９、３１、３２、８４、８５、８６、８７、８８、８９、１４５、１４６および１４７に変異を有し、これは低減された受容体結合親和性を有する改変ＴＮＦαをもたらす。例えば、米国特許第７，９９３，６３６号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００８７】
いくつかの実施形態では、改変ＴＮＦα部分は、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、１つまたは複数のアミノ酸位置Ｒ３２、Ｎ３４、Ｑ６７、Ｈ７３、Ｌ７５、Ｔ７７、Ｓ８６、Ｙ８７、Ｖ９１、Ｉ９７、Ｔ１０５、Ｐ１０６、Ａ１０９、Ｐ１１３、Ｙ１１５、Ｅ１２７、Ｎ１３７、Ｄ１４３、およびＡ１４５に変異を有する（ジェンバンク受入番号ＢＡＧ７０３０６、バージョンＢＡＧ７０３０６．１  Ｇｌ：１９７６９２６８５、ヒトＴＮＦ配列に従ってナンバリング）。いくつかの実施形態では、改変ＴＮＦα部分は、Ｒ３２Ｇ、Ｎ３４Ｇ、Ｑ６７Ｇ、Ｈ７３Ｇ、Ｌ７５Ｇ、Ｌ７５Ａ、Ｌ７５Ｓ、Ｔ７７Ａ、Ｓ８６Ｇ、Ｙ８７Ｑ、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、Ｙ８７Ｆ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ａ、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、Ｉ９７Ｓ、Ｔ１０５Ｇ、Ｐ１０６Ｇ、Ａ１０９Ｙ、Ｐ１１３Ｇ、Ｙ１１５Ｇ、Ｙ１１５Ａ、Ｅ１２７Ｇ、Ｎ１３７Ｇ、Ｄ１４３Ｎ、Ａ１４５ＧおよびＡ１４５Ｔから選択される置換変異を有する。ある実施形態では、ＴＮＦα部分は、Ｙ８７Ｑ、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、およびＹ８７Ｆから選択される変異を有する。別の実施形態では、ＴＮＦα部分は、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、およびＩ９７Ｓから選択される変異を有する。さらなる実施形態では、ＴＮＦα部分は、Ｙ１１５ＡおよびＹ１１５Ｇから選択される変異を有する。
【００８８】
いくつかの実施形態では、改変ＴＮＦα物質は、国際公開第２００８／１２４０８６号に記載のように、Ｎ３９Ｙ、Ｓ１４７Ｙ、およびＹ８７Ｈから選択される１個または複数の変異を含み、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【００８９】
いくつかの実施形態では、改変ヒトＴＮＦα部分は、国際出願第ＰＣＴ／ＩＢ２０１６／００１６６８号に記載の受容体選択性をもたらし、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＴＮＦに対する変異は、ＴＮＦＲ１選択的である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、１つまたは複数の位置Ｒ３２、Ｓ８６、およびＥ１４６にある。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ｒ３２Ｗ、Ｓ８６Ｔ、およびＥ１４６Ｋの１個または複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ｒ３２Ｗ、Ｓ３２Ｗ／Ｓ８６Ｔ、Ｒ３２Ｗ／Ｅ１４６ＫおよびＥ１４６Ｋの１個または複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦに対する変異は、ＴＮＦＲ２選択的である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、１個または複数の位置Ａ１４５、Ｅ１４６、およびＳ１４７にある。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ａ１４５Ｔ、Ａ１４５Ｒ、Ｅ１４６Ｄ、およびＳ１４７Ｄの１個または複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ａ１４５Ｒ、Ａ１４５Ｔ／Ｓ１４７Ｄ、およびＡ１４５Ｔ／Ｅ１４６Ｄ／Ｓ１４７Ｄの１個または複数である。
【００９０】
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＮＦβである。ＴＮＦβは、ホモトリマーまたはＬＴβ（ＬＴα１β２）とヘテロトリマーを形成できる。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２および／またはヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＥＶＭ）および／またはＬＴβＲに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【００９１】
ある実施形態では、野生型ＴＮＦβは、下記のアミノ酸配列を有する：
ＴＮＦβ
ＬＰＧＶＧＬＴＰＳＡＡＱＴＡＲＱＨＰＫＭＨＬＡＨＳＮＬＫＰＡＡＨＬＩＧＤＰＳＫＱＮＳＬＬＷＲＡＮＴＤＲＡＦＬＱＤＧＦＳＬＳＮＮＳＬＬＶＰＴＳＧＩＹＦＶＹＳＱＶＶＦＳＧＫＡＹＳＰＫＡＴＳＳＰＬＹＬＡＨＥＶＱＬＦＳＳＱＹＰＦＨＶＰＬＬＳＳＱＫＭＶＹＰＧＬＱＥＰＷＬＨＳＭＹＨＧＡＡＦＱＬＴＱＧＤＱＬＳＴＨＴＤＧＩＰＨＬＶＬＳＰＳＴＶＦＦＧＡＦＡＬ（配列番号８９）。
【００９２】
このような実施形態では、改変ＴＮＦβ物質は、１つまたは複数のアミノ酸位置１０６〜１１３に変異を含み得、これはＴＮＦＲ２に対する低減された受容体結合親和性を有する改変ＴＮＦβをもたらす。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸位置１０６〜１１３に１個または複数の置換変異を有する。例示的実施形態では、置換変異は、Ｑ１０７Ｅ、Ｑ１０７Ｄ、Ｓ１０６Ｅ、Ｓ１０６Ｄ、Ｑ１０７Ｒ、Ｑ１０７Ｎ、Ｑ１０７Ｅ／Ｓ１０６Ｅ、Ｑ１０７Ｅ／Ｓ１０６Ｄ、Ｑ１０７Ｄ／Ｓ１０６Ｅ、およびＱ１０７Ｄ／Ｓ１０６Ｄから選択される。別の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、位置１０６〜１１３に、約１〜約３個のアミノ酸の挿入を有する。
【００９３】
いくつかの実施形態では、改変物質は、国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、単鎖トリマー型であってよいＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【００９４】
いくつかの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これはＴＮＦＲ１に対し、低減された親和性および／または活性、すなわちアンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照）を有する。これらの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これもまた、場合により、ＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これはＴＮＦＲ２に対し、低減された親和性および／または活性、すなわちアンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照）を有する。これらの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これもまた、場合により、ＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態の構築物は、例えば、細胞特異的な様式でＴＮＦ応答を抑制する方法で使用される。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）は、国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、単鎖トリマー型である。
【００９５】
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＲＡＩＬである。いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ−ＲＩ）および／またはＤＲ５（ＴＲＡＩＬ−ＲＩＩ）および／またはＤｃＲ１および／またはＤｃＲ２に対して、低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ−ＲＩ）および／またはＤＲ５（ＴＲＡＩＬ−ＲＩＩ）および／またはＤｃＲ１および／またはＤｃＲ２に対して、低減された親和性および／または活性を有する。
【００９６】
ある実施形態では、野生型ＴＲＡＩＬは、下記のアミノ酸配列を有する：
ＴＲＡＩＬ
ＭＡＭＭＥＶＱＧＧＰＳＬＧＱＴＣＶＬＩＶＩＦＴＶＬＬＱＳＬＣＶＡＶＴＹＶＹＦＴＮＥＬＫＱＭＱＤＫＹＳＫＳＧＩＡＣＦＬＫＥＤＤＳＹＷＤＰＮＤＥＥＳＭＮＳＰＣＷＱＶＫＷＱＬＲＱＬＶＲＫＭＩＬＲＴＳＥＥＴＩＳＴＶＱＥＫＱＱＮＩＳＰＬＶＲＥＲＧＰＱＲＶＡＡＨＩＴＧＴＲＧＲＳＮＴＬＳＳＰＮＳＫＮＥＫＡＬＧＲＫＩＮＳＷＥＳＳＲＳＧＨＳＦＬＳＮＬＨＬＲＮＧＥＬＶＩＨＥＫＧＦＹＹＩＹＳＱＴＹＦＲＦＱＥＥＩＫＥＮＴＫＮＤＫＱＭＶＱＹＩＹＫＹＴＳＹＰＤＰＩＬＬＭＫＳＡＲＮＳＣＷＳＫＤＡＥＹＧＬＹＳＩＹＱＧＧＩＦＥＬＫＥＮＤＲＩＦＶＳＶＴＮＥＨＬＩＤＭＤＨＥＡＳＦＦＧＡＦＬＶＧ（配列番号９０）。
【００９７】
このような実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、アミノ酸位置Ｔ１２７〜Ｒ１３２、Ｅ１４４〜Ｒ１４９、Ｅ１５５〜Ｈ１６１、Ｙ１８９〜Ｙ２０９、Ｔ２１４〜１２２０，Ｋ２２４〜Ａ２２６、Ｗ２３１、Ｅ２３６〜Ｌ２３９、Ｅ２４９〜Ｋ２５１、Ｔ２６１〜Ｈ２６４およびＨ２７０〜Ｅ２７１に変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿００３８０１、バージョン１０ＮＰ＿００３８０１．１、Ｇｌ：４５０７５９３、ヒト配列に基づいてナンバリング；上記参照）。
【００９８】
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターロイキンである。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１である。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１αまたはＩＬ１βである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１Ｒ１および／またはＩＬ１ＲＡｃＰに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１Ｒ１および／またはＩＬ１ＲＡｃＰに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１Ｒ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。例えば、いくつかの実施形態では、本改変ＩＬ１物質は、ＩＬ１Ｒ２に対する相互作用を回避し、したがって治療薬に対するデコイおよび／またはシンクとしてのその機能を実質的に低減する。
【００９９】
ある実施形態では、野生型ＩＬ１βは、下記のアミノ酸配列を有する：
ＩＬ１β（成熟型、野生型）
ＡＰＶＲＳＬＮＣＴＬＲＤＳＱＱＫＳＬＶＭＳＧＰＹＥＬＫＡＬＨＬＱＧＱＤＭＥＱＱＶＶＦＳＭＳＦＶＱＧＥＥＳＮＤＫＩＰＶＡＬＧＬＫＥＫＮＬＹＬＳＣＶＬＫＤＤＫＰＴＬＱＬＥＳＶＤＰＫＮＹＰＫＫＫＭＥＫＲＦＶＦＮＫＩＥＩＮＮＫＬＥＦＥＳＡＱＦＰＮＷＹＩＳＴＳＱＡＥＮＭＰＶＦＬＧＧＴＫＧＧＱＤＩＴＤＦＴＭＱＦＶＳＳ（配列番号９１）。
【０１００】
ＩＬ１は、炎症促進性のサイトカインであり、重要な免疫系制御因子である。それは、ＣＤ４  Ｔ細胞応答の強力な活性化因子であり、Ｔｈ１７細胞の比率ならびにＩＦＮγおよびＩＬ４産生細胞の増殖を増大させる。ＩＬ１はまたＣＤ８＋  Ｔ細胞の強力な制御因子であり、抗原特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞増殖、分化、周辺部への移動および記憶を強化する。ＩＬ１受容体は、ＩＬ１Ｒ１およびＩＬ１Ｒ２を含む。ＩＬ１Ｒ１への結合およびＩＬ１Ｒ１を介するシグナル伝達は、ＩＬ１がその生物学的（および病理学的）作用の多くを媒介する機序を構成する。ＩＬ１Ｒ２はデコイ受容体として機能し得、それによりＩＬ１Ｒ１を介する相互作用およびシグナル伝達のためのＩＬ１の利用可能性を減らす。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、改変ＩＬ１は、ＩＬ１Ｒ１に対する低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ１は、ＩＬ１Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、回復可能なＩＬ１／ＩＬ１Ｒ１シグナル伝達ならびにＩＬＲ２に対する治療用キメラの損失の防止およびその結果として必要とされるＩＬ１投与量の削減（例えば、野生型またはＩＬＲ１に対する減弱化変異のみを有するキメラに比べて）がある。このような構築物は、例えば、免疫系を刺激して抗癌応答を開始することを含む、例えば、癌を処置する方法で使用される。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、改変ＩＬ１は、ＩＬ１Ｒ１に対し、低減された親和性および／または活性（例えば、アンタゴニスト活性、例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照）を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ１は、ＩＬ１Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、回復可能でないＩＬ１／ＩＬ１Ｒ１シグナル伝達ならびにＩＬＲ２に対する治療用キメラの損失の防止およびその結果として必要とされるＩＬ１投与量の削減（例えば、野生型またはＩＬＲ１に対する減弱化変異のみを有するキメラに比べて）がある。このような構築物は、例えば、免疫系を抑制することを含む、例えば、自己免疫疾患を処置する方法で使用される。
【０１０３】
このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸５２〜５４の欠失を有し、これはＩ型ＩＬ１Ｒに対して低減された結合親和性および低減された生物活性を有する改変ヒトＩＬ１βを産生する。例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第１９９４／０００４９１号を参照されたい。いくつかの実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、Ａ１１７Ｇ／Ｐ１１８Ｇ、Ｒ１２０Ｘ、Ｌ１２２Ａ、Ｔ１２５Ｇ／Ｌ１２６Ｇ、Ｒ１２７Ｇ、Ｑ１３０Ｘ、Ｑ１３１Ｇ、Ｋ１３２Ａ、Ｓ１３７Ｇ／Ｑ１３８Ｙ、Ｌ１４５Ｇ、Ｈ１４６Ｘ、Ｌ１４５Ａ／Ｌ１４７Ａ、Ｑ１４８Ｘ、Ｑ１４８Ｇ／Ｑ１５０Ｇ、Ｑ１５０Ｇ／Ｄ１５１Ａ、Ｍ１５２Ｇ、Ｆ１６２Ａ、Ｆ１６２Ａ／Ｑ１６４Ｅ、Ｆ１６６Ａ、Ｑ１６４Ｅ／Ｅ１６７Ｋ、Ｎ１６９Ｇ／Ｄ１７０Ｇ、Ｉ１７２Ａ、Ｖ１７４Ａ、Ｋ２０８Ｅ、Ｋ２０９Ｘ、Ｋ２０９Ａ／Ｋ２１０Ａ、Ｋ２１９Ｘ、Ｅ２２１Ｘ、Ｅ２２１Ｓ／Ｎ２２４Ａ、Ｎ２２４Ｓ／Ｋ２２５Ｓ、Ｅ２４４Ｋ、Ｎ２４５Ｑから選択される１個または複数の置換変異（Ｘはアミノ酸の任意の変化、例えば、非保存的変化であり得る）を有し、これらは、例えば、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号および国際公開第２０１５／００７５３６号に記載のように、ＩＬ１Ｒに対し低減された結合を示す（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿０００５６７、バージョンＮＰ−０００５６７．１、Ｇｌ：１０８３５１４５、ヒトＩＬ１β配列に基づいてナンバリング）。いくつかの実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２０Ｇ、Ｑ１３０Ａ、Ｑ１３０Ｗ、Ｈ１４６Ａ、Ｈ１４６Ｇ、Ｈ１４６Ｅ、Ｈ１４６Ｎ、Ｈ１４６Ｒ、Ｑ１４８Ｅ、Ｑ１４８Ｇ、Ｑ１４８Ｌ、Ｋ２０９Ａ、Ｋ２０９Ｄ、Ｋ２１９Ｓ、Ｋ２１９Ｑ、Ｅ２２１ＳおよびＥ２２１Ｋから選択される１個または複数の変異を有し得る。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｑ１３１ＧおよびＱ１４８Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｑ１４８ＧおよびＫ２０８Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＱ１３１Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ａを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｎを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｒを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＫ２０８Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０Ｇ、Ｆ１６２Ａ、およびＱ１６４Ｅを含む。
【０１０４】
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ２である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ２Ｒαおよび／またはＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ２Ｒαに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態は、例えば、改変ＩＬ２がＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対するアゴニストである場合、癌の処置に適切であり得る。例えば、本構築物は、ＩＬ２受容体βおよびγを有するＣＤ８＋  Ｔ細胞（抗腫瘍効果を与えることができる）の減弱化された活性化を優先し、ＩＬ２受容体α、β、およびγを有するＴｒｅｇ（免疫抑制効果、腫瘍促進効果を与えることができる）を優先しない。さらに、いくつかの実施形態では、ＩＬ２ＲαよりもＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対する選択性は、肺水腫などのＩＬ２副作用を回避する。また、ＩＬ２ベースキメラは、例えば、改変ＩＬ２が、ＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対して拮抗的（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照）である場合、疾患（例えば、自己免疫疾患）の処置に有用である。例えば、本構築物は、ＩＬ２受容体βおよびγを有するＣＤ８＋  Ｔ細胞の抑制の減弱化（したがって、免疫応答を抑制する）を優先し、ＩＬ２受容体α、β、およびγを有するＴｒｅｇを優先しない。あるいは、いくつかの実施形態では、ＩＬ２を有するキメラは、Ｔｒｅｇの活性化、したがって免疫抑制を優先し、ＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化を優先しない。例えば、これらの構築物は、疾患または免疫抑制から恩恵を受けると思われる疾患、例えば、自己免疫疾患の処置で使用される。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞に向けられた本明細書に記載のターゲティング部分ならびにＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対する低減された親和性および／または活性および／またはＩＬ２Ｒαに対し実質的に低減されたまたは除去された親和性および／または活性を有する改変ＩＬ２物質を有する。いくつかの実施形態では、これらの構築物は、標的とされるＣＤ８＋  Ｔ細胞活性をもたらし、通常、Ｔｒｅｇ細胞に対して不活性である（または実質的に低減された活性を有する）。いくつかの実施形態では、このような構築物は、野生型ＩＬ２に比べて、高められた免疫刺激効果を有する（理論に束縛されることを望むものではないが、Ｔｒｅｇを刺激しないことにより）一方で、ＩＬ２に関連する全身毒性を除去または低減する。
【０１０６】
ある実施形態では、野生型ＩＬ２は、下記のアミノ酸配列を有する：
ＩＬ２（成熟型、野生型）
ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号９２）。
【０１０７】
このような実施形態では、改変ヒトＩＬ２物質は１個または複数の変異を、アミノ酸Ｌ７２（Ｌ７２Ｇ、Ｌ７２Ａ、Ｌ７２Ｓ、Ｌ７２Ｔ、Ｌ７２Ｑ、Ｌ７２Ｅ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ７２Ｄ、Ｌ７２Ｒ、またはＬ７２Ｋ）、Ｆ４２（Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｇ、Ｆ４２Ｓ、Ｆ４２Ｔ、Ｆ４２Ｑ、Ｆ４２Ｅ、Ｆ４２Ｎ、Ｆ４２Ｄ、Ｆ４２Ｒ、またはＦ４２Ｋ）およびＹ４５（Ｙ４５Ａ、Ｙ４５Ｇ、Ｙ４５Ｓ、Ｙ４５Ｔ、Ｙ４５Ｑ、Ｙ４５Ｅ、Ｙ４５Ｎ、Ｙ４５Ｄ、Ｙ４５ＲまたはＹ４５Ｋ）で有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ２物質は、野性型ＩＬ２と比べて、高親和性のＩＬ２受容体に対する低減された親和性を有し、中間の親和性のＩＬ２受容体に対する親和性を維持すると考えられている。例えば、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１１２号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１０８】
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ３である。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ３受容体に対する低減された親和性および／または活性を有し、ＩＬ３受容体は共通のベータ（ベータｃまたはＣＤ１３１）サブユニットと対になった特有のアルファ鎖を有するヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ３受容体に対して実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有し、ＩＬ３受容体は共通のベータ（ベータｃまたはＣＤ１３１）サブユニットと対になった特有のアルファ鎖を有するヘテロダイマーである。
【０１０９】
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ４である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１型および／または２型ＩＬ４受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１型および／または２型ＩＬ４受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。１型ＩＬ４受容体は、共通のγ鎖を有するＩＬ４Ｒαサブユニットから構成され、ＩＬ４を特異的に結合する。２型ＩＬ４受容体は、ＩＬ１３Ｒα１として知られる異なるサブユニットに結合されるＩＬ４Ｒαサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、２型ＩＬ４受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０１１０】
ある実施形態では、野生型ＩＬ４は、下記のアミノ酸配列を有する：
ＩＬ４（成熟型、野生型）
ＨＫＣＤＩＴＬＱＥＩＩＫＴＬＮＳＬＴＥＱＫＴＬＣＴＥＬＴＶＴＤＩＦＡＡＳＫＮＴＴＥＫＥＴＦＣＲＡＡＴＶＬＲＱＦＹＳＨＨＥＫＤＴＲＣＬＧＡＴＡＱＱＦＨＲＨＫＱＬＩＲＦＬＫＲＬＤＲＮＬＷＧＬＡＧＬＮＳＣＰＶＫＥＡＮＱＳＴＬＥＮＦＬＥＲＬＫＴＩＭＲＥＫＹＳＫＣＳＳ（配列番号９３）。
【０１１１】
このような実施形態では、改変ＩＬ４物質は１個または複数の変異を、アミノ酸Ｒ１２１（Ｒ１２１Ａ、Ｒ１２１Ｄ、Ｒ１２１Ｅ、Ｒ１２１Ｆ、Ｒ１２１Ｈ、Ｒ１２１Ｉ、Ｒ１２１Ｋ、Ｒ１２１Ｎ、Ｒ１２１Ｐ、Ｒ１２１Ｔ、Ｒ１２１Ｗ）、Ｅ１２２（Ｅ１２２Ｆ）、Ｙ１２４（Ｙ１２４Ａ、Ｙ１２４Ｑ、Ｙ１２４Ｒ、Ｙ１２４Ｓ、Ｙ１２４Ｔ）およびＳ１２５（Ｓ１２５Ａ）で有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ４物質は、Ｉ型受容体により媒介される活性を維持しているが、他の受容体により媒介される生物活性を顕著に低減すると考えられている。例えば、米国特許第６，４３３，１５７号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１２】
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ６である。ＩＬ６は、リガンド結合ＩＬ６Ｒ鎖（ＣＤ１２６）およびシグナル伝達成分ｇｐ１３０を含む細胞表面Ｉ型サイトカイン受容体複合体を介して信号を伝達する。ＩＬ６はまた、ＩＬ６Ｒの細胞外の部分である、可溶性型のＩＬ６Ｒ（ｓＩＬ６Ｒ）にも結合し得る。ｓＩＬ６Ｒ／ＩＬ６複合体は、神経突起の成長およびニューロンの生存に関与し得、したがって、再ミエリン化による神経再生において重要であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ６Ｒ／ｇｐ１３０および／またはｓＩＬ６Ｒに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ６Ｒ／ｇｐ１３０および／またはｓＩＬ６Ｒに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０１１３】
ある実施形態では、野生型ＩＬ６は、下記のアミノ酸配列を有する：
ＩＬ６（成熟型、野生型）
ＡＰＶＰＰＧＥＤＳＫＤＶＡＡＰＨＲＱＰＬＴＳＳＥＲＩＤＫＱＩＲＹＩＬＤＧＩＳＡＬＲＫＥＴＣＮＫＳＮＭＣＥＳＳＫＥＡＬＡＥＮＮＬＮＬＰＫＭＡＥＫＤＧＣＦＱＳＧＦＮＥＥＴＣＬＶＫＩＩＴＧＬＬＥＦＥＶＹＬＥＹＬＱＮＲＦＥＳＳＥＥＱＡＲＡＶＱＭＳＴＫＶＬＩＱＦＬＱＫＫＡＫＮＬＤＡＩＴＴＰＤＰＴＴＮＡＳＬＴＴＫＬＱＡＱＮＱＷＬＱＤＭＴＴＨＬＩＬＲＳＦＫＥＦＬＱＳＳＬＲＡＬＲＱＭ（配列番号９４）。
【０１１４】
このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸５８、１６０、１６３、１７１または１７７で１個または複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ６物質は、ＩＬ６Ｒαに対し低減された結合親和性および低減された生物活性を示すと考えられている。例えば、国際公開第９７／１０３３８号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１５】
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１０である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１０受容体１およびＩＬ１０受容体２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１０受容体１およびＩＬ１０受容体２に対する除去されたまたは実質的に低減された親和性および／または活性を有する。
【０１１６】
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１１である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１１Ｒαおよび／またはＩＬ１１Ｒβおよび／またはｇｐ１３０に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１１Ｒαおよび／またはＩＬ１１Ｒβおよび／またはｇｐ１３０に対する除去されたまたは実質的に低減された親和性および／または活性を有する。
【０１１７】
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１２である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１２Ｒβ１および／またはＩＬ１２Ｒβ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１２Ｒβ１および／またはＩＬ１２Ｒβ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０１１８】
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１３である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ４受容体（ＩＬ４Ｒα）およびＩＬ１３Ｒα１に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ４受容体（ＩＬ４Ｒα）またはＩＬ１３Ｒα１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０１１９】
ある実施形態では、野生型ＩＬ１３は、下記のアミノ酸配列を有する：
ＩＬ１３（成熟型、野生型）
ＳＰＧＰＶＰＰＳＴＡＬＲＥＬＩＥＥＬＶＮＩＴＱＮＱＫＡＰＬＣＮＧＳＭＶＷＳＩＮＬＴＡＧＭＹＣＡＡＬＥＳＬＩＮＶＳＧＣＳＡＩＥＫＴＱＲＭＬＳＧＦＣＰＨＫＶＳＡＧＱＦＳＳＬＨＶＲＤＴＫＩＥＶＡＱＦＶＫＤＬＬＬＨＬＫＫＬＦＲＥＧＲＦＮ（配列番号９５）。
【０１２０】
このような実施形態では、改変ＩＬ１３物質は、アミノ酸１３、１６、１７、６６、６９、９９、１０２、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１２、１１３および１１４で１個または複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ１３物質は、低減された生物活性を示すと考えられている。例えば、国際公開第２００２／０１８４２２号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１２１】
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１８である。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１８Ｒαおよび／またはＩＬ１８Ｒβに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１８Ｒαおよび／またはＩＬ１８Ｒβに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達に必要なＴＩＲドメインを欠くＩＬ１８ＲαのアイソフォームであるＩＬ１８Ｒα２型に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０１２２】
ある実施形態では、野生型ＩＬ１８は、下記のアミノ酸配列を有する：
ＩＬ１８（野生型）
ＭＡＡＥＰＶＥＤＮＣＩＮＦＶＡＭＫＦＩＤＮＴＬＹＦＩＡＥＤＤＥＮＬＥＳＤＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＭＹＫＤＳＱＰＲＧＭＡＶＴＩＳＶＫＣＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＳＶＰＧＨＤＮＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤＬ（配列番号９６）。
【０１２３】
このような実施形態では、改変ＩＬ１８物質は、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号に記載のように、Ｙ３７〜Ｋ４４、Ｒ４９〜Ｑ５４、Ｄ５９〜Ｒ６３、Ｅ６７〜Ｃ７４、Ｒ８０、Ｍ８７〜Ａ９７、Ｎ１２７〜Ｋ１２９、Ｑ１３９〜Ｍ１４９、Ｋ１６５〜Ｋ１７１、Ｒ１８３およびＱ１９０〜Ｎ１９１から選択されるアミノ酸またはアミノ酸領域に１個または複数の変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＡＡＶ３８６９７、バージョンＡＡＶ３８６９７．１、Ｇｌ：５４６９６６５０、ヒトＩＬ１８配列に基づいてナンバリング）。
【０１２４】
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ３３である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＳＴ２受容体１およびＩＬ１ＲＡｃＰに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＳＴ２受容体およびＩＬ１ＲＡｃＰに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
【０１２５】
ある実施形態では、野生型ＩＬ３３は、下記のアミノ酸配列を有する：
ＭＫＰＫＭＫＹＳＴＮＫＩＳＴＡＫＷＫＮＴＡＳＫＡＬＣＦＫＬＧＫＳＱＱＫＡＫＥＶＣＰＭＹＦＭＫＬＲＳＧＬＭＩＫＫＥＡＣＹＦＲＲＥＴＴＫＲＰＳＬＫＴＧＲＫＨＫＲＨＬＶＬＡＡＣＱＱＱＳＴＶＥＣＦＡＦＧＩＳＧＶＱＫＹＴＲＡＬＨＤＳＳＩＴＧＩＳＰＩＴＥＹＬＡＳＬＳＴＹＮＤＱＳＩＴＦＡＬＥＤＥＳＹＥＩＹＶＥＤＬＫＫＤＥＫＫＤＫＶＬＬＳＹＹＥＳＱＨＰＳＮＥＳＧＤＧＶＤＧＫＭＬＭＶＴＬＳＰＴＫＤＦＷＬＨＡＮＮＫＥＨＳＶＥＬＨＫＣＥＫＰＬＰＤＱＡＦＦＶＬＨＮＭＨＳＮＣＶＳＦＥＣＫＴＤＰＧＶＦＩＧＶＫＤＮＨＬＡＬＩＫＶＤＳＳＥＮＬＣＴＥＮＩＬＦＫＬＳＥＴ（配列番号９７）。
【０１２６】
このような実施形態では、改変ＩＬ３３物質は、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号に記載のように、Ｉ１１３〜Ｙ１２２、Ｓ１２７〜Ｅ１３９、Ｅ１４４〜Ｄ１５７、Ｙ１６３〜Ｍ１８３、Ｅ２００、Ｑ２１５、Ｌ２２０〜Ｃ２２７およびＴ２６０〜Ｅ２６９から選択されるアミノ酸またはアミノ酸領域に１個または複数の変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿２５４２７４、バージョンＮＰ＿２５４２７４．１、Ｇｌ：１５５５９２０９、ヒト配列に基づいてナンバリング）。
【０１２７】
一実施形態では、本キメラタンパク質は、本明細書に記載のいずれかの改変または変異シグナル伝達物質と共に、（ｉ）Ｃｌｅｃ９Ａに対するターゲティング部分および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられたターゲティング部分を有する。ある実施形態では、本キメラタンパク質は、樹状細胞上のＣｌｅｃ９Ａに向けられたターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２に向けられた第２ターゲティング部分を有する。
【０１２８】
一実施形態では、本キメラタンパク質は、本明細書に記載のいずれかの改変または変異インターフェロンと共に、（ｉ）Ｃｌｅｃ９Ａに対するターゲティング部分および（ｉｉ）チェックポイント阻害剤マーカーに向けられたターゲティング部分を有する。ある実施形態では、本キメラタンパク質は、樹状細胞上のＣｌｅｃ９Ａに向けられたターゲティング部分およびＰＤ−１向けられた第２ターゲティング部分を有する。
【０１２９】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は毒素または毒性酵素である。いくつかの実施形態では、毒素または毒性酵素は、植物および細菌から誘導される。毒素または毒性酵素の例としては、ジフテリア毒素、シュードモナス毒素、炭疽病毒素、リシンおよびサポリンなどのリボソーム不活化タンパク質（ＲＩＰ）、モデシン、アブリン、ゲロニン、およびヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。追加の毒素は、Ｍａｔｈｅｗ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ  １００（８）：１３５９−６５、に開示のものを含み、この文献の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、細胞型特異的な様式で細胞死を誘導するのに利用され得る。このような実施形態では、毒素は改変され、例えば、変異導入されて、本明細書で他のシグナル伝達物質に関し記載されるように、弱められた効果のために毒素の親和性および／または活性を低減させ得る。
【０１３０】
シグナル伝達物質との多重特異的キメラおよび融合体
種々の実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、本明細書に記載の１種または複数のシグナル伝達物質および／または１つまたは複数の追加のターゲティング部分とのキメラまたは融合体の一部である。したがって、本発明は、例えば、１種または複数のシグナル伝達物質およびＣｌｅｃ９Ａに対するターゲティング部分および／または１つまたは複数の追加のターゲティング部分を含むキメラまたは融合タンパク質を提供する。したがって、種々の実施形態では、用語の「Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質」は、このような１種または複数のシグナル伝達物質および／または１つまたは複数の追加のターゲティング部分とのキメラまたは融合タンパク質を包含する。
【０１３１】
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、２個の異なる細胞（例えば、シナプスを作るために）または同じ細胞（例えば、より高濃度のシグナル伝達物質効果を得るために）を標的とするターゲティング部分を有する。
【０１３２】
種々の実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、多重特異的であり、すなわち、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、２つ以上の標的（例えば、抗原、または受容体、またはエピトープ）を認識し結合する認識ドメイン（例えば、抗原認識ドメイン）を有する２つ以上のターゲティング部分を含む。このような実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、同じ抗原上または異なる抗原上または異なる受容体上の２個以上のエピトープを認識し結合する認識ドメインを有する２つ以上のターゲティング部分を含み得る。種々の実施形態では、このような多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、向上した結合力および／または改善された選択性などの有利な性質を示す。ある実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、２つのターゲティング部分を含み、かつ二重特異性であり、すなわち、同じ抗原上または異なる抗原上または異なる受容体上の２個のエピトープを結合し認識する。したがって、種々の実施形態では、用語「Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質」は、２つ以上のターゲティング部分を含むこのような多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質を包含する。
【０１３３】
種々の実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、それぞれのターゲティング部分が本明細書に記載の抗体または抗体誘導体である２つ以上のターゲティング部分を含む。ある実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、Ｃｌｅｃ９Ａに対する抗原認識ドメインを含む少なくとも１種のＶＨＨおよび腫瘍抗原および／または免疫細胞マーカーに対する抗原認識ドメインを含む１種の抗体または抗体誘導体を含む。
【０１３４】
種々の実施形態では、本多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、異なる抗原または受容体を標的とする２つ以上のターゲティング部分を有し、１つのターゲティング部分は、その抗原または受容体に対し減弱化され得、例えば、ターゲティング部分はその抗原または受容体を低親和性または結合力で結合する（例えば、他のターゲティング部分がその抗原または受容体に対して有する親和性または結合力より低い親和性または結合力で、を含み、例えば結合親和性の間の差異は、約１０倍、または２５倍、または５０倍、または１００倍、または３００倍、または５００倍、または１０００倍、または５０００倍であってよく；例えばより低い親和性または結合力のターゲティング部分は中〜高ｎＭまたは低〜中μＭの範囲ＫＤでその抗原または受容体を結合し一方でより高い親和性または結合力のターゲティング部分は中〜高ｐＭまたは低〜中ｎＭの範囲のＫＤでその抗原または受容体を結合し得る）。例えば、いくつかの実施形態では、本多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、無差別の抗原または受容体に向けられた減弱化ターゲティング部分を含み、これは目的の細胞への標的化を改善し（例えば、他のターゲティング部分を介して）かつ治療用として標的にされないものを含む、複数細胞型間にまたがる効果を防止し得る（例えば、これらの実施形態で与えられるものより高い親和性で無差別な抗原または受容体を結合することによる）。
【０１３５】
本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、当該技術分野において既知の方法を使用して構築し得る。例えば、米国特許第９，０６７，９９１号、米国特許出願公開第２０１１０２６２３４８号および国際公開第２００４／０４１８６２号を参照されたい。これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、２つ以上のターゲティング部分を含む本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、例えば、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｌａｔｔｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２４，１５１７−１５２４および欧州特許第２９４７０３号に記載のように有機誘導体化試薬とアミノ酸残基を反応させることにより、化学架橋により構築し得る。別の例示的実施形態では、２つ以上のターゲティング部分を含む多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、遺伝的融合、すなわち、個別のターゲティング部分のポリペプチドを含む単一ポリペプチドを構築することにより、構築される。例えば、Ｃｌｅｃ９Ａに対する抗原認識ドメインを有する第１のＶＨＨおよび、例えば、腫瘍抗原またはチェックポイント阻害剤に対する抗原認識ドメインを有する第２の抗体または抗体誘導体をコードする、単一ポリペプチド構築物を形成し得る。二価または多価性のＶＨＨポリペプチド構築物を産生する方法は、国際公開第９６／３４１０３号に開示され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。さらなる例示的実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、リンカーを用いることにより構築し得る。例えば、Ｃｌｅｃ９Ａに対する抗原認識ドメインを有する第１のＶＨＨのカルボキシ末端を、例えば、腫瘍抗原またはチェックポイント阻害剤に対する抗原認識ドメインを有する第２の抗体または抗体誘導体のアミノ末端に連結し得る（または逆もまた同様）。使用し得るリンカーの例は、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質の成分は、リンカーの使用なしに、相互に直接連結される。
【０１３６】
種々の実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、Ｃｌｅｃ９Ａおよび１個または複数の免疫細胞上に見出される１個または複数の抗原を認識し、それらに結合し、免疫細胞は巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞）、Ｂリンパ球、プラズマ細胞、樹状細胞、またはこれらのサブセットを含み得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＣＬＥＣ９Ａ結合物質は、目的の抗原に特異的に結合し、１つまたは複数の免疫細胞を効果的に直接または間接的にリクルートする。
【０１３７】
種々の実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、Ｃｌｅｃ９Ａおよび腫瘍細胞上に見出される１個または複数の抗原を認識し、それらに結合する。これらの実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、腫瘍細胞にまたは腫瘍微小環境に免疫細胞を直接的にまたは間接的にリクルートし得る。いくつかの実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、作用部位（例えば、非限定的例であるが、腫瘍微小環境など）に、
免疫細胞、例えば、樹状細胞を直接的にまたは間接的にリクルートし得る。いくつかの実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、強力な体液性および細胞傷害性Ｔ細胞応答の誘導のために、樹状細胞による抗原の提示（例えば、腫瘍抗原の提示）を促進する。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、腫瘍の免疫攻撃に有利なように、免疫細胞のバランスを変化させることを含む、方法で使用できる、または用途が見つかる。例えば、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、臨床的に重要な部位での免疫細胞の比率を、腫瘍を死滅させるおよび／または抑制できる細胞（例えば、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ）、Ｂ細胞、および樹状細胞に有利なように、ならびに腫瘍を保護する細胞（例えば、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）；腫瘍関連好中球（ＴＡＮ）、Ｍ２マクロファージ、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、またはこれらのサブセット）に不利なように変化させることができる。いくつかの実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、エフェクターＴ細胞の制御性Ｔ細胞に対する比率を高めることができる。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、腫瘍細胞関連標的（例えば、抗原または受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、腫瘍細胞を直接または間接的にリクルートする。例えば、いくつかの実施形態では、腫瘍細胞のリクルートは、腫瘍細胞を死滅させることができるおよび／または抑制できる１個または複数のエフェクター細胞（例えば、本明細書に記載の免疫細胞）に対するものである。
【０１４０】
腫瘍細胞、または癌細胞は、身体の器官およびシステムの正常な機能動作を妨害する、細胞または組織の無制御な増殖および／または細胞生存の異常な増大および／またはアポトーシスの抑制の異常な増大を指す。例えば、腫瘍細胞は、良性および悪性の癌、ポリープ、過形成、ならびに休眠腫瘍または微小転移を含む。腫瘍細胞の例としては、基底細胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脳および中枢神経系癌；乳癌；腹膜の癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸および直腸癌；結合組織癌；消化器系の癌；子宮内膜癌；食道癌；眼癌；頭頸部の癌；胃癌（胃腸癌を含む）；神経膠芽腫；肝癌；ヘパトーマ；上皮内腫瘍；腎臓癌または腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｏｒ  ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）；喉頭癌；白血病；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）；黒色腫；骨髄腫；神経芽腫；口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸癌；呼吸器系癌；唾液腺癌腫；肉腫；皮膚癌；扁平上皮細胞癌；胃癌；精巣癌；甲状腺癌；子宮または子宮内膜癌；泌尿器系の癌；外陰癌；ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；エイズ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；毛様細胞性白血病；慢性骨髄芽球性白血病；ならびにその他の癌腫および肉腫；および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群と関連する異常血管増殖の細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４１】
腫瘍細胞または癌細胞としては、癌腫、例えば、種々のサブタイプ（例えば、腺癌、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、および移行性上皮癌を含む）、肉腫（例えば、骨および軟組織を含む）、白血病（例えば、急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性骨髄性、慢性リンパ球性、およびヘアリー細胞を含む）、リンパ腫および骨髄腫（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、軽鎖型、非分泌型ＭＧＵＳ、および形質細胞腫を含む）、および中枢神経系癌（例えば、脳腫瘍（例えば、神経膠腫（例えば、星状細胞腫、乏突起細胞腫および上衣腫）、髄膜腫、下垂体腺腫、および神経腫）、および脊髄腫瘍（例えば、髄膜腫および神経線維腫））も挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４２】
腫瘍抗原の例としては、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連性抗原（ＣＲＣ）−００１７−１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児抗原（ＣＥＡ）およびその免疫原性エピトープＣＡＰ−１およびＣＡＰ−２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）およびその免疫原性エピトープＰＳＡ−１、ＰＳＡ−２、およびＰＳＡ−３、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３−ゼータ鎖、ＭＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｃ４、ＭＡＧＥ−Ｃ５）、ＧＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＧＡＧＥ−９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、ＮＡＧ、ＧｎＴ−Ｖ、ＭＵＭ−１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α−フェトプロテイン、Ｅ−カドヘリン、α−カテニン、β−カテニンおよびγ−カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００  Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇ−イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質などのウイルス産物、Ｓｍａｄファミリーの腫瘍抗原、ｌｍｐ−１、ＮＡ、ＥＢＶ−コード化核内抗原（ＥＢＮＡ）−１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−１  ＣＴ−７、ｃ−ｅｒｂＢ−２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＡＧＳ１６、ＭＵＣ１、ＧＰＮＭＢ、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＭＳＡ、およびＢＣＭＡ（ＴＮＦＲＳＦ１７）が挙げられるが、これらに限定されない。種々の実施形態では、ＣＬＥＣ９Ａ結合物質は、１個または複数のこれらの腫瘍抗原を結合するターゲティング部分を含む。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、本多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、Ｃｌｅｃ９Ａならびに腫瘍細胞上の抗原を認識し、それに結合する。いくつかの実施形態では、多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、腫瘍細胞にまたは腫瘍微小環境へ樹状細胞を直接的にまたは間接的にリクルートする。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、Ｔ細胞関連標的（例えば、抗原または受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、直接または間接的にＴ細胞をリクルートする。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、エフェクターＴ細胞に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、エフェクターＴ細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的にリクルートする。エフェクターＴ細胞の例には、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＯ＋）；ＣＤ４＋ エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７＋）；ＣＤ８＋ エフェクターメモリーＴ細胞（例えば、ＣＤ６２Ｌｌｏｗ、ＣＤ４４＋、ＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７＋、ＩＬ１５Ｒ＋、ＣＣＲ７ｌｏｗ）；セントラルメモリーＴ細胞（例えば、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋；またはＣＣＲ７ｈｉ、ＣＤ４４＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７＋、ＩＬ１５Ｒ＋）；ＣＤ６２Ｌ＋ エフェクターＴ細胞；早期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７＋  ＣＤ６２Ｌ−）および後期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７−  ＣＤ６２Ｌ−）（それぞれ、ＴｅｍＥおよびＴｅｍＬ）を含むＣＤ８＋ エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）；ＣＤ１２７（＋）ＣＤ２５（ｌｏｗ／−）エフェクターＴ細胞；ＣＤ１２７（−）ＣＤ２５（−）エフェクターＴ細胞；ＣＤ８＋  幹細胞メモリーエフェクター細胞（ＴＳＣＭ）（例えば、ＣＤ４４（ｌｏｗ）ＣＤ６２Ｌ（ｈｉｇｈ）ＣＤ１２２（ｈｉｇｈ）ｓｃａ（＋））；ＴＨ１エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＸＣＲ３＋、ＣＸＣＲ６＋およびＣＣＲ５＋；またはαβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＩＬ１２Ｒ＋、ＩＦＮγＲ＋、ＣＸＣＲ３＋）、ＴＨ２エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＣＲ３＋、ＣＣＲ４＋およびＣＣＲ８＋；またはαβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＩＬ４Ｒ＋、ＩＬ３３Ｒ＋、ＣＣＲ４＋、ＩＬ１７ＲＢ＋、ＣＲＴＨ２＋）；ＴＨ９エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋）；ＴＨ１７エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＩＬ２３Ｒ＋、ＣＣＲ６＋、ＩＬ１Ｒ＋）；ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７＋ エフェクターＴ細胞、ＩＣＯＳ＋ エフェクターＴ細胞；ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７（−）エフェクターＴ細胞；およびＩＬ２、ＩＬ４および／またはＩＦＮ−γを分泌するエフェクターＴ細胞が挙げられる。
【０１４５】
目的とするＴ細胞抗原の例としては、例えば、下記が挙げられる（該当する場合には、細胞外ドメインも含む）：ＣＤ８、ＣＤ３、ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ２Ｒα、４−１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、ＩＬ２Ｒβ、ＡＬＣＡＭ、Ｂ７−１、ＩＬ４Ｒ、Ｂ７−Ｈ３、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＬ６Ｒ、ＣＣＲ３、ＩＬ７Ｒα、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲｌ／ＩＬＳＲＡ、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＩＬ１０Ｒα、ＣＣＲ７、ＩＬ１０Ｒβ、ＣＣＲＳ、ＩＬ１２Ｒβ１、ＣＣＲ９、ＩＬ１２Ｒβ２、ＣＤ２、ＩＬ１３Ｒα１、ＩＬ１３、ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬＴ２／ＣＤＳ５ｊ、ＩＬＴ３／ＣＤＳ５ｋ、ＩＬＴ４／ＣＤＳ５ｄ、ＩＬＴ５／ＣＤＳ５ａ、ｌｕｔｅｇｒｉｎ  α４／ＣＤ４９ｄ、ＣＤＳ、インテグリンαＥ／ＣＤ１０３、ＣＤ６、インテグリンαＭ／ＣＤ１１ｂ、ＣＤＳ、インテグリンαＸ／ＣＤ１１ｃ、インテグリンβ２／ＣＤｌＳ、ＫＩＲ／ＣＤ１５Ｓ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＣＤ２Ｓ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦＳ、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５Ｓｄ、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＬＡＧ−３、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４５、ＬＡＩＲ２、ＣＤＳ３、ロイコトリエンＢ４−Ｒ１、ＣＤＳ４／ＳＬＡＭＦ５、ＮＣＡＭ−Ｌ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９７、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＮＴ−４、ＣＤ６９、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、共通γ鎖／ＩＬ２Ｒγ、オステオポンチン、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＰＤ−１、ＣＲＴＡＭ、ＰＳＧＬ−１、ＣＴＬＡ−４、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、Ｌ−セレクチン、ＣＸＣＲ３、ＳＩＲＰβ１、ＣＸＣＲ４、ＳＬＡＭ、ＣＸＣＲ６、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１、ＤＮＡＭ−１、サイモポエチン、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＩＭ−１、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ−２、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＩＭ−３、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＴＩＭ−４、ＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＩＭ−６、ＴＮＦＲ１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、グラニュライシン、ＴＮＦＲＩＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＲＡＩＬＲｌ／ＴＮＦＲＳＦｌＯＡ、ＩＣＡＭ−１／ＣＤ５４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＴＲＡＩＬＲ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＩＦＮ−γＲ１、ＴＲＡＩＬＲ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＩＦＮ−γＲ２、ＴＳＬＰ、ＩＬ１Ｒ１およびＴＳＬＰＲ。種々の実施形態では、ＣＬＥＣ９Ａ結合物質は、１個または複数のこれらの例示Ｔ細胞抗原を結合するターゲティング部分を含む。
【０１４６】
非限定的例であるが、種々の実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｔ細胞上に発現されるチェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ−１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、Ｃｄ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３、およびＡ２ａＲの１個または複数に向けられたターゲティング部分を有する。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、Ｂ細胞と関連する標的（例えば、抗原または受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、Ｂ細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）へ直接または間接的にリクルートする。目的のＢ細胞抗原の例としては、例えば、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８、ＣＤ７９ａ／ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ９８、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤｗ１３０、ＣＤ１３８、ＣＤｗ１５０、およびＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）が挙げられる。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、１個または複数のこれらの例示Ｂ細胞抗原を結合するターゲティング部分を含む。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ナチュラルキラー細胞と関連する標的（例えば、抗原または受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ナチュラルキラー細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）へ直接または間接的にリクルートする。目的のナチュラルキラー細胞抗原の例としては、例えば、ＴＩＧＩＴ、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＣＤ９４、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ６９、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、Ｋｉｒ１ａｌｐｈａ、ＤＮＡＭ−１、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、Ｆｃ−イプシロンＲＩＩ、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、Ｆｃ−γＲｌ／ＣＤ６４、ＭＩＣＡ、Ｆｃ−γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＭＩＣＢ、Ｆｃ−γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＭＵＬＴ−１、Ｆｃ−γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、Ｎｅｃｔｉｎ−２／ＣＤ１１２、Ｆｃ−γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ａ、ＦｃＲＨ１／ＩＲＴＡ５、ＮＫＧ２Ｃ、ＦｃＲＨ２／ＩＲＴＡ４、ＮＫＧ２Ｄ、ＦｃＲＨ４／ＩＲＴＡ１、ＮＫｐ３０、ＦｃＲＨ５／ＩＲＴＡ２、ＮＫｐ４４、Ｆｃ−受容体様３／ＣＤ１６−２、ＮＫｐ４６／ＮＣＲ１、ＮＫｐ８０／ＫＬＲＦ１、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、Ｒａｅ−１、Ｒａｅ−１α、Ｒａｅ−１β、Ｒａｅ−１δ、Ｈ６０、Ｒａｅ−１ε、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、Ｒａｅ−１γ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭ−１、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＴＲＥＭ−２、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＴＲＥＭ−３、ＫＩＲ／ＣＤ１５８、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ−１、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＵＬＢＰ−１、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＵＬＢＰ−２、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５８ｄおよびＵＬＢＰ−３が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＬＥＣ９Ａ結合物質は、１個または複数のこれらの例示ＮＫ細胞抗原を結合するターゲティング部分を含む。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、マクロファージ／単球と関連する標的（例えば、抗原または受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、マクロファージ／単球を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）へ直接または間接的にリクルートする。目的のマクロファージ／単球抗原の例としては、例えば、ＳＩＲＰ１ａ、Ｂ７−１／ＣＤ８０、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、Ｂ７−Ｈ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、共通β鎖、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、インテグリンαＸ／ＣＤｌｌｃ、ＣＣＬ６／Ｃ１０、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１、Ｌａｔｅｘｉｎ、ＣＤ３６／ＳＲ−Ｂ３、ロイコトリエンＢ４Ｒ１、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ−Ｂ２、ＣＤ４３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ４５、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ６８、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ１６３、ＬＲＰ−１、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＭＡＲＣＯ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＭＤ−１、ＥＣＦ−Ｌ、ＭＤ−２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＧＬ２、エンドグリン／ＣＤ１０５、Ｏｓｔｅｏａｃｔｉｖｉｎ／ＧＰＮＭＢ、Ｆｃ−γＲＩ／ＣＤ６４、オステオポンチン、Ｆｃ−γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＰＤ−Ｌ２、Ｆｃ−γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、Ｓｉｇｌｅｃ−３／ＣＤ３３、Ｆｃ−γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、Ｆｃ−γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＳＬＡＭ、ＧＭ−ＣＳＦＲα、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＴＬＲ３、ＩＦＮ−γＲｌ、ＴＬＲ４、ＩＦＮ−ｇａｎｎｎａＲ２、ＴＲＥＭ−ｌ、ＩＬ−ｌＲＩＩ、ＴＲＥＭ−２、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＴＲＥＭ−３、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ−１、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ  ４、ＩＬ１０Ｒα、ＡＬＣＡＭ、ＩＬ１０Ｒβ、アミノペプチダーゼＮ／ＡＮＰＥＰ、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、共通β鎖、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＣｌｑＲ１／ＣＤ９３、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＣＣＲ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＣＣＲ２、ＣＤ２０６、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＣＣＲ５、インテグリンαＭ／ＣＤｌｌ  ｂ、ＣＣＲ８、インテグリンαＸ／ＣＤｌｌｃ、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１４、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３６／ＳＲ−Ｂ３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ２、ＣＤ４５、ロイコトリエンＢ４−Ｒ１、ＣＤ６８、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ−Ｂ２、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ１６３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、凝固因子ＩＩＩ／組織因子、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＸＣＲ４、ＬＲＰ−１、ＣＸＣＲ６、Ｍ−ＣＳＦ  Ｒ、ＤＥＰ−１／ＣＤ１４８、ＭＤ−１、ＤＮＡＭ−１、ＭＤ−２、Ｅ��ＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＭＲ、エンドグリン／ＣＤ１０５、ＮＣＡＭ−Ｌ１、Ｆｃ−γＲＩ／ＣＤ６４、ＰＳＧＬ−１、Ｆｃ−γＲＩＩＩＩＣＤ１６、ＲＰ１０５、Ｇ−ＣＳＦ  Ｒ、Ｌ−セレクチン、ＧＭ−ＣＳＦＲα、Ｓｉｇｌｅｃ−３／ＣＤ３３、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＳＬＡＭ、ＩＣＡＭ−１／ＣＤ５４、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＴＲＥＭ−ｌ、ＩＬ６Ｒ、ＴＲＥＭ−２、ＣＸＣＲｌ／ＩＬ８ＲＡ、ＴＲＥＭ−３およびＴＲＥＭＬｌ／ＴＬＴ−１が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＬＥＣ９Ａ結合物質は、１個または複数のこれらの例示マクロファージ／単球抗原を結合するターゲティング部分を含む。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、樹状細胞と関連する標的（例えば、抗原または受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、樹状細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）へ直接または間接的にリクルートする。目的の樹状細胞抗原の例としては、例えば、ＣＬＥＣ９Ａ、ＸＣＲ１、ＲＡＮＫ、ＣＤ３６／ＳＲＢ３、ＬＯＸ−１／ＳＲ−Ｅ１、ＣＤ６８、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ１６３、ＳＲ−Ａ１／ＭＳＲ、ＣＤ５Ｌ、ＳＲＥＣ−１、ＣＬ−Ｐｌ／ＣＯＬＥＣ１２、ＳＲＥＣ−ＩＩ、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲＢ２、ＲＰ１０５、ＴＬＲ４、ＴＬＲ１、ＴＬＲ５、ＴＬＲ２、ＴＬＲ６、ＴＬＲ３、ＴＬＲ９、４−ＩＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＩＬ１２／ＩＬ２３ｐ４０、４−Ａｍｉｎｏ−１、８−ナフタルイミド、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＣＣＬ２１／６Ｃｋｉｎｅ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、８−ｏｘｏ−ｄＧ、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、８Ｄ６Ａ、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、Ａ２Ｂ５、ｌｕｔｅｇｒｉｎ  α４／ＣＤ４９ｄ、Ａａｇ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＡＭＩＣＡ、Ｌａｎｇｅｒｉｎ、Ｂ７−２／ＣＤ８６、ロイコトリエンＢ４  Ｒｌ、Ｂ７−Ｈ３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣｌｑＲ１／ＣＤ９３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＣＲ６、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢＣＣＲ７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＭＡＧ／Ｓｉｇｌｅｃ−４−ａ、ＣＤ４３、ＭＣＡＭ、ＣＤ４５、ＭＤ−１、ＣＤ６８、ＭＤ−２、ＣＤ８３、ＭＤＬ−１／ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＭＭＲ、ＣＤ９７、ＮＣＡＭＬｌ、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、Ｏｓｔｅｏａｃｔｉｖｉｎ  ＧＰＮＭＢ、Ｃｈｅｒｎ２３、ＰＤ−Ｌ２、ＣＬＥＣ−１、ＲＰ１０５、ＣＬＥＣ−２、ＣＬＥＣ−８、シグレック−２／ＣＤ２２、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、シグレック−３／ＣＤ３３、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＤＥＣ２０５、シグレック−５、ＤＣ−ＳＩＧＮＲ／ＣＤ２９９、シグレック−６、ＤＣＡＲ、シグレック−７、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、シグレック−９、ＤＥＣ−２０５、シグレック−１０、Ｄｅｃｔｉｎ−１／ＣＬＥＣ７Ａ、シグレック−Ｆ、Ｄｅｃｔｉｎ−２／ＣＬＥＣ６Ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、ＤＥＰ−１／ＣＤ１４８、ＳＩＧＮＲ４、ＤＬＥＣ、ＳＬＡＭ、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１、Ｆｃ−γＲ１／ＣＤ６４、ＴＬＲ３、Ｆｃ−γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＴＲＥＭ−１、Ｆｃ−γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＴＲＥＭ−２、Ｆｃ−γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＴＲＥＭ−３、Ｆｃ−γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ−１、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、およびバニロイドＲ１が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＬＥＣ９Ａ結合物質は、１個または複数のこれらの例示ＤＣ抗原を結合するターゲティング部分を含む。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、限定されないが、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、またはこれらのサブセットから選択される免疫細胞と関連する標的（例えば、抗原または受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、またはこれらのサブセットを、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）へ直接または間接的にリクルートする。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、巨核球および／または血小板と関連する標的（例えば、抗原または受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。巨核球および／または血小板抗原の例としては、例えば、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ、ＧＰＩｂ、ｖＷＦ、ＰＦ４、およびＴＳＰが挙げられる。種々の実施形態では、ＣＬＥＣ９Ａ結合物質は、１個または複数のこれらの例示的な巨核球および／または血小板抗原を結合するターゲティング部分を含む。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、赤血球と関連する標的（例えば、抗原または受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。目的の赤血球抗原の例としては、例えば、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４１ａ（血小板糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ）、ＣＤ４１ｂ（ＧＰＩＩｂ）、ＣＤ７１（トランスフェリン受容体）、ＣＤ１０５、グリコホリンＡ、グリコホリンＣ、ｃ−ｋｉｔ、ＨＬＡ−ＤＲ、Ｈ２（ＭＨＣ−ＩＩ）、およびＲｈ抗原が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＬＥＣ９Ａ結合物質は、１個または複数のこれらの例示的な赤血球抗原を結合するターゲティング部分を含む。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、マスト細胞と関連する標的（例えば、抗原または受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。目的のマスト細胞抗原の例としては、例えば、ＳＣＦＲ／ＣＤ１１７、ＦｃεＲＩ、ＣＤ２、ＣＤ２５、ＣＤ３５、ＣＤ８８、ＣＤ２０３ｃ、Ｃ５Ｒ１、ＣＭＡｌ、ＦＣＥＲｌＡ、ＦＣＥＲ２、ＴＰＳＡＢｌが挙げられる。種々の実施形態では、ＣＬＥＣ９Ａ結合物質は、１個または複数のこれらの例示的なマスト細胞抗原を結合するターゲティング部分を含む。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、好塩基球と関連する標的（例えば、抗原または受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。目的の好塩基球抗原の例としては、例えば、ＦｃεＲＩ、ＣＤ２０３ｃ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１０７ｂ、およびＣＤ１６４が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＬＥＣ９Ａ結合物質は、１個または複数のこれらの好塩基球抗原を結合するターゲティング部分を含む。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、好中球と関連する標的（例えば、抗原または受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。目的の好中球抗原の例としては、例えば、７Ｄ５、ＣＤ１０／ＣＡＬＬＡ、ＣＤ１３、ＣＤ１６（ＦｃＲＩＩＩ）、ＣＤ１８タンパク質（ＬＦＡ−１、ＣＲ３、およびｐ１５０、９５）、ＣＤ４５、ＣＤ６７、およびＣＤ１７７が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＬＥＣ９Ａ結合物質は、１個または複数のこれらの好中球抗原を結合するターゲティング部分を含む。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、好酸球と関連する標的（例えば、抗原または受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。目的の好酸球抗原の例としては、例えば、ＣＤ３５、ＣＤ４４およびＣＤ６９が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＬＥＣ９Ａ結合物質は、１個または複数のこれらの好酸球抗原を結合するターゲティング部分を含む。
【０１５８】
種々の実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、当業者に既知の適切な抗原または細胞表面マーカーに特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、抗原または細胞表面マーカーは、組織特異的マーカーである。組織特異的マーカーの例としては、ＡＣＥ、ＣＤ１４、ＣＤ３４、ＣＤＨ５、ＥＮＧ、ＩＣＡＭ２、ＭＣＡＭ、ＮＯＳ３、ＰＥＣＡＭｌ、ＰＲＯＣＲ、ＳＥＬＥ、ＳＥＬＰ、ＴＥＫ、ＴＨＢＤ、ＶＣＡＭｌ、ＶＷＦなどの内皮細胞表面マーカー；ＡＣＴＡ２、ＭＹＨｌＯ、ＭＹＨｌ  １、ＭＹＨ９、ＭＹＯＣＤなどの平滑筋細胞表面マーカー；ＡＬＣＡＭ、ＣＤ３４、ＣＯＬｌＡｌ、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ３Ａ１、ＦＡＰ、ＰＨ−４などの線維芽細胞（間質）細胞表面マーカー；ＣＤｌＤ、Ｋ６ＩＲＳ２、ＫＲＴｌＯ、ＫＲＴ１３、ＫＲＴ１７、ＫＲＴ１８、ＫＲＴ１９、ＫＲＴ４、ＫＲＴ５、ＫＲＴ８、ＭＵＣｌ、ＴＡＣＳＴＤｌなどの上皮細胞表面マーカー；ＣＤ１３、ＴＦＮＡ、アルファ−ｖ  ベータ−３（αＶβ３）、Ｅ−セレクチンなどの新生血管マーカー；およびＡＤＩＰＯＱ、ＦＡＢＰ４、およびＲＥＴＮなどの脂肪細胞表面マーカーが挙げられるが、これらに限定されない。種々の実施形態では、ＣＬＥＣ９Ａ結合物質は、１個または複数のこれらの抗原を結合するターゲティング部分を含む。種々の実施形態では、キメラタンパク質のターゲティング部分は、これらの抗原を有する１個または複数の細胞を結合する。
【０１５９】
種々の実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、チェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２、ＣＤ２８／ＣＤ８０またはＣＤ８６、ＣＴＬＡ４／ＣＤ８０またはＣＤ８６、ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬまたはＢ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７／ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０／ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３／Ｇａｌ９、およびＡ２ａＲの１個または複数に向けられた１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、およびＰＤ−１の１種から選択されるチェックポイント阻害剤マーカーに対する抗体または抗体フォーマット、例えば、ＶＨＨを含み得る。
【０１６０】
非限定的例であるが、種々の実施形態では、本多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、（ｉ）Ｔ細胞上に発現したチェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ−１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、Ｃｄ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３、およびＡ２ａＲの１個または複数に向けられたターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかの改変（例えば、変異）シグナル伝達物質と共に、腫瘍細胞に向けられる。
【０１６１】
種々の実施形態では、本多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＰＤ−１に向けられた１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＰＤ−１ポリペプチドを選択的に結合する１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＰＤ−１ポリペプチドを選択的に結合する、抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質の１種または複数を含む。
【０１６２】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ−１抗体ペムブロリズマブ（別名ＭＫ−３４７５、キイトルーダ）、またはそのフラグメントを含む。ペムブロリズマブおよび他のヒト化抗ＰＤ−１抗体は、Ｈａｍｉｄ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３６９（２）：１３４−４４，ＵＳ  ８，３５４，５０９、および国際公開第２００９／１１４３３５号に開示され、これらの文献の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のためのペムブロリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＶＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＭＹＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＮＰＳＮＧＧＴＮＦ  ＮＥＫＦＫＮＲＶＴＬＴＴＤＳＳＴＴＴＡＹＭＥＬＫＳＬＱＦＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＲＦＤＭＧＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ  ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶ  ＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹ  ＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫ  ＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧ  ＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号：９８）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＫＧＶＳＴＳＧＹＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＬＡＳＹＬＥＳ  ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＳＲＤＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦ  ＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳ  ＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号９９）。
【０１６３】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ−１抗体、ニボルバム（別名ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ−１１０６、ＯＮＯ−４５３８、オプジーボ）、またはそのフラグメントを含む。ＰＤ−１に特異的に結合するニボルバム（クローン５Ｃ４）および他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第８，００８，４４９号および国際公開第２００６／１２１１６８号に開示され、これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ニボルバムまたはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧ  ＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬ  ＤＣＫＡＳＧＩＴＦＳ  
ＮＳＧＭＨＷＶＲＱＡ  ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶ  ＩＷＹＤＧＳＫＲＹＹ  
ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ  ＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦ  ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ  
ＴＡＶＹＹＣＡＴＮＤ  ＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴ  ＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳ  
ＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳ  ＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣ  ＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶ  
ＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴ  ＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬ  ＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳ  
ＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧ  ＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨ  ＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲ  
ＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰ  ＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ  ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰ  
ＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰ  ＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳ  ＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷ  
ＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡ  ＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮ  ＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴ  
ＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫ  ＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧ  ＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳ  
ＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱ  ＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥ  ＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣ  
ＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩ  ＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰ  ＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶ  
ＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹ  ＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷ  ＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶ
ＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴ  ＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１００）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴ  ＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴ  ＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳ  
ＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰ  ＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤ  ＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡ  
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ  ＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰ  ＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱ  
ＳＳＮＷＰＲＴＦＧＱ  ＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶ  ＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ  
ＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡ  ＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹ  ＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶ  
ＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱ  ＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤ  ＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴ  
ＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫ  ＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧ  ＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮ  
ＲＧＥＣ（配列番号１０１）。
【０１６４】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ−１抗体ピディリズマブ（別名ＣＴ−０１１、ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ−１）、またはそのフラグメントを含む。ピディリズマブおよびその他のヒト化抗ＰＤ−Ｉヒトモノクローナル抗体は、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号および国際公開第２００９／１０１６１１号に開示され、これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１５〜１８から選択される下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み：
米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１５（配列番号１０２）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＲＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲ  ＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１６（配列番号１０３）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹＲＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲ  ＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＮＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１７（配列番号１０４）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹＲＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲ  ＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＣＬＴＩＮＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１８（配列番号１０５）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹＲＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲ  ＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＣＬＴＩＮＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
および／または、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２０〜２４から選択される下記のアミノ酸配列を含む重鎖を含む：
米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２０（配列番号１０６）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＳＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＱＷＭＧＷＩＮＴＤＳＧＥＳＴＹ  ＡＥＥＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＴＳＬＴＡＥＤＴＧＭＹＦＣＡＫＶＧＹＤＡＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２１（配列番号１０７）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＱＷＭＧＷＩＮＴＤＳＧＥＳＴＹ  ＡＥＥＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＴＳＬＴＡＥＤＴＧＭＹＦＣＡＫＶＧＹＤＡＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２２（配列番号１０８）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＱＷＭＧＷＩＮＴＤＳＧＥＳＴＹ  ＡＥＥＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＮＴＡＹＬＱＩＴＳＬＴＡＥＤＴＧＭＹＦＣＶＲＶＧＹＤＡＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２３（配列番号１０９）：
ＱＩＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＱＷＭＧＷＩＮＴＤＳＧＥＳＴＹ  ＡＥＥＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＮＴＡＹＬＱＩＴＳＬＴＡＥＤＴＧＭＹＦＣＶＲＶＧＹＤＡＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２４（配列番号１１０）：
ＱＩＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＤＳＧＥＳＴＹ  ＡＥＥＦＫＧＲＦＡＦＳＬＤＴＳＶＮＴＡＹＬＱＩＴＳＬＮＡＥＤＴＧＭＹＦＣＶＲＶＧＹＤＡＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ。
【０１６５】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１８を含む軽鎖および米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２２を含む重鎖を含む。
【０１６６】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ＡＭＰ−５１４（別名ＭＥＤＩ−０６８０）を含む。
【０１６７】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ｐｄ−ｌ２−Ｆｃ融合タンパク質ＡＭＰ−２２４を含み、これは国際公開第２０１０／０２７８２７号および同第２０１１／０６６３４２号に開示され、これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、ターゲティング部分は、下記の国際公開第２０１０／０２７８２７号の配列番号４（配列番号１１１）を含むターゲティングドメイン：
ＬＦＴＶＴＶＰＫＥＬＹＩＩＥＨＧＳＮＶＴＬＥＣＮＦＤＴＧＳＨＶＮＬＧＡＩＴＡＳＬＱＫＶＥＮＤＴＳＰＨＲＥＲＡＴＬＬＥＥＱ  ＬＰＬＧＫＡＳＦＨＩＰＱＶＱＶＲＤＥＧＱＹＱＣＩＩＩＹＧＶＡＷＤＹＫＹＬＴＬＫＶＫＡＳＹＲＫＩＮＴＨＩＬＫＶＰＥＴＤＥＶ  ＥＬＴＣＱＡＴＧＹＰＬＡＥＶＳＷＰＮＶＳＶＰＡＮＴＳＨＳＲＴＰＥＧＬＹＱＶＴＳＶＬＲＬＫＰＰＰＧＲＮＦＳＣＶＦＷＮＴＨＶ  ＲＥＬＴＬＡＳＩＤＬＱＳＱＭＥＰＲＴＨＰＴＷＬＬＨＩＦＩＰＦＣＩＩＡＦＩＦＩＡＴＶＩＡＬＲＫＱＬＣＱＫＬＹＳＳＫＤＴＴＫ  ＲＰＶＴＴＴＫＲＥＶＮＳＡＩ
および／または下記の国際公開第２０１０／０２７８２７号の配列番号８３（配列番号１１２）を含むＢ７−ＤＣ融合タンパク質を含み得る：
ＭＩＦＬＬＬＭＬＳＬＥＬＱＬＨＱＩＡＡＬＦＴＶＴＶＰＫＥＬＹＩＩＥＨＧＳＮＶＴＬＥＣＮＦＤＴＧＳＨＶＮＬＧＡＩＴＡＳＬＱ  ＫＶＥＮＤＴＳＰＨＲＥＲＡＴＬＬＥＥＱＬＰＬＧＫＡＳＦＨＩＰＱＶＱＶＲＤＥＧＱＹＱＣＩＩＩＹＧＶＡＷＤＹＫＹＬＴＬＫＶＫ  ＡＳＹＲＫＩＮＴＨＩＬＫＶＰＥＴＤＥＶＥＬＴＣＱＡＴＧＹＰＬＡＥＶＳＷＰＮＶＳＶＰＡＮＴＳＨＳＲＴＰＥＧＬＹＱＶＴＳＶＬ  ＲＬＫＰＰＰＧＲＮＦＳＣＶＦＷＮＴＨＶＲＥＬＴＬＡＳＩＤＬＱＳＱＭＥＰＲＴＨＰＴＷＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬ  ＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥ  ＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳ  ＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫ  ＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ。
【０１６８】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ペプチドＡＵＮＰ１２または米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号または米国特許第８，９０７，０５３号に開示のいずれかの他のペプチドを含む。例えば、ターゲティング部分は、ＡＵＮＰ１２（すなわち、米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号の化合物８または配列番号４９）を含み得、これは、下記配列番号１１３の配列を有する：
ＳＮＴＳＥＳＦＫ（ＳＮＴＳＥＳＦ）ＦＲＶＴＱＬＡＰＫＡＱＩＫＥ−ＮＨ２
【化１】
2019506867.tif 000003
【０１６９】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、抗ＰＤ−１抗体１Ｅ３またはそのフラグメントを含み、この特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１Ｅ３またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＶ  ＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭ  ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ  
ＤＹＹＭＮＷＶＫＱＳ  ＨＧＫＳＬＥＷＩＧＮ  ＩＮＰＹＮＧＧＴＴＹ  
ＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬ  ＴＶＤＫＳＳＲＴＡＹ  ＭＥＩＮＳＬＴＳＥＤ  
ＳＡＶＹＹＣＡＲＧＲ  ＩＹＤＧＳＬＤＹＷＧ  ＱＧＴＡＬＴＶＳＳ（配列番号１１４）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＤＩＱＭＴＱＦＰＳＳ  ＬＣＡＳＱＧＧＫＶＴ  ＶＴＣＫＡＳＱＤＩＮ  
ＮＹＭＡＷＹＱＨＫＰ  ＧＫＧＰＲＬＬＩＨＹ  ＴＳＴＬＬＳＧＩＰＳ  
ＲＦＳＧＳＧＳＧＲＤ  ＹＳＦＳＩＳＮＬＥＰ  ＥＤＩＡＴＹＹＣＬＱ  
ＹＤＮＬＷＴＦＧＧＧ  ＴＫＬＥＩＫ（配列番号１１５）。
【０１７０】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、抗ＰＤ−１抗体１Ｅ８またはそのフラグメントを含み、この特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１Ｅ８またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥ  ＬＡＫＰＧＡＳＶＲＬ  ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ  
ＮＹＷＭＨＷＶＫＱＲ  ＰＧＱＧＬＥＷＩＧＨ  ＩＮＰＳＳＧＦＴＴＹ  
ＮＱＮＦＫＤＫＡＴＬ  ＴＡＤＫＳＳＮＴＡＹ  ＭＱＬＳＳＬＴＹＥＤ  
ＳＡＶＹＦＣＡＲＥＤ  ＹＤＶＤＹＷＧＱＧＴ  ＴＬＴＶＳＳ（配列番号１１６）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＤＩＶＭＴＱＳＱＫＦ  ＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳ  ＶＴＣＫＡＳＱＳＶＤ  
ＴＮＶＡＷＹＱＱＫＰ  ＧＱＳＰＫＡＬＩＦＳ  ＡＳＹＲＹＳＧＶＰＤ  
ＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤ  ＦＴＬＴＩＮＳＶＱＳ  ＥＤＬＡＥＹＦＣＱＱ  
ＹＮＳＹＰＹＴＦＧＳ  ＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１１７）。
【０１７１】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、抗ＰＤ−１抗体１Ｈ３またはそのフラグメントを含み、この特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１Ｈ３またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧ  ＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬ  ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ  
ＤＹＧＭＨＷＶＲＱＡ  ＰＥＫＧＬＥＷＶＡＹ  ＩＳＳＧＳＹＴＩＹＹ  
ＴＤＴＶＫＧＲＦＴＩ  ＳＲＤＮＡＫＮＴＬＦ  ＬＱＭＴＳＬＲＳＥＤ  
ＴＡＭＹＹＣＡＲＲＧ  ＹＧＳＦＹＥＹＹＦＤ  ＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶ  
ＳＳ（配列番号１１８）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＬ  ＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴ  ＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳ  
ＹＭＹＷＹＱＱＫＰＲ  ＳＳＰＫＰＷＩＹＬＴ  ＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲ  
ＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹ  ＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥ  ＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷ  
ＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧ  ＴＫＬＥＩＫ（配列番号１１９）。
【０１７２】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、例えば、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のように、ＰＤ−１抗体に向けられたＶＨＨを含み、これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ＰＤ−１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４７〜３５１を含む：
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４７（配列番号１２０）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＫＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡ  ＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＥＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＡＤＲ  ＡＥＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４８（配列番号１２１）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶ  ＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＧＤＫ  ＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４９（配列番号１２２）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＳＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡ  ＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＬＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＧＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＡＤＲ  ＡＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３５０（配列番号１２３）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＧＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＳＩＮＡＭＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＬ  ＩＳＷＳＧＧＳＴＹＹＥＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＡＤＲ  ＶＤＳＮＷＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３５１（配列番号１２４）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＡＦＳＳＧＴＭＧＷＦＲＲＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡ  ＳＩＰＷＳＧＧＲＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＱＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＶＫ  ＥＲＳＴＧＷＤＦＡＳＷＧＱＣＴＱＶＴＶＳＳ。
【０１７３】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のように、いずれか１種の抗ＰＤ−１抗体またはそのフラグメントを含み、これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の下記の配列番号２５〜２９から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖：
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２５（配列番号１２５）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＬＫＱＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＳＳＷＩＨＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＳＴＧＦＴＥＹ  ＮＱＫＦＫＤＲＡＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＷＲＤＳＳＧＹＨＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳ  Ｓ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２６（配列番号１２６）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＱＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＳＳＷＩＨＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＳＴＧＦＴＥＹ  ＮＱＫＦＫＤＲＡＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹ３／ｄ１０ＣＡＲＷＲＤＳＳＧＹＨＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳ  Ｓ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２７（配列番号１２７）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＨＥＶＫＱＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＳＳＷＩＨＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＳＴＧＦＴＥＹ  ＮＱＫＦＫＤＲＡＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＷＲＤＳＳＧＹＨＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ  Ｓ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２８（配列番号１２８）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＨＥＶＫＱＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＳＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＳＴＧＦＴＥＹ  ＮＱＫＦＫＤＲＡＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＷＲＤＳＳＧＹＨＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ  Ｓ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２９（配列番号１２９）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＨＥＶＫＱＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＳＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＳＴＧＦＴＥＹ  ＮＱＫＦＫＤＲＡＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＷＲＤＳＳＧＹＨＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ  Ｓ；
および／または、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の下記の配列番号３０〜３３から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３０（配列番号１３０）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＴＬＳＰＧＱＲＬＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＫＦＧＳＮＬＥＳ  ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＥＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＳＷＥＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３１（配列番号１３１）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＱＲＬＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＫＦＧＳＮＬＥＳ  ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＳＷＥＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３２（配列番号１３２）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＱＲＬＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＫＦＧＳＮＬＥＳ  ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＳＷＥＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３３（配列番号１３３）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＱＲＬＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＫＦＧＳＮＬＥＳ  ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＳＷＥＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。
【０１７４】
種々の実施形態では、本多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＴＳＲ−０４２（Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、およびＢＧＢ−Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ  Ｌｔｄ．）から選択されるＰＤ−１に対する１種または複数の抗体、またはその抗体フラグメントを含む。
【０１７５】
ある実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、下記配列番号１３４などの、ＰＤ−１に向けられたターゲティング部分を含む：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＫＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＥＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＡＤＲＡＥＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ。
【０１７６】
種々の実施形態では、本多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＰＤ−Ｌ１に向けられた１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを選択的に結合する１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを選択的に結合する、抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質の１種または複数を含む。
【０１７７】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＭＥＤＩ４７３６（別名デュルバルマブ）、またはそのフラグメントを含む。ＭＥＤＩ４７３６は、ＰＤ−Ｌ１に対し選択的であり、ＰＤ−１およびＣＤ８０受容体に対するＰＤ−Ｌ１の結合を阻止する。本明細書で提供される方法での使用のためのＭＥＤＩ４７３６およびその抗原結合フラグメントは、重鎖および軽鎖または重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。ＭＥＤＩ４７３６の配列は、国際公開第２０１６／０６２７２号に開示され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のためのＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧ  ＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬ  ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ  
ＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡ  ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮ  ＩＫＱＤＧＳＥＫＹＹ  
ＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩ  ＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹ  ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ  
ＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧ  ＧＷＦＧＥＬＡＦＤＹ  ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ  
ＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦ  ＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳ  ＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶ  
ＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶ  ＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧ  ＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳ  
ＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶ  ＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱ  ＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰ  
ＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥ  ＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣ  ＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧ  
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫ  ＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴ  ＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶ  
ＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮ  ＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮ  ＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹ  
ＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬ  ＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧ  ＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫ  
ＡＬＰＡＳＩＥＫＴＩ  ＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰ  ＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥ  
ＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴ  ＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤ  ＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱ  
ＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰ  ＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬ  ＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲ  
ＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳ  ＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹ  ＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ  
Ｋ（配列番号１３５）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴ  ＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴ  ＬＳＣＲＡＳＱＲＶＳ  
ＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫ  ＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ  ＤＡＳＳＲＡＴＧＩＰ  
ＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴ  ＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥ  ＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱ  
ＱＹＧＳＬＰＷＴＦＧ  ＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴ  ＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰ  
ＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴ  ＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦ  ＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫ  
ＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳ  ＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫ  ＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬ  
ＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨ  ＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱ  ＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦ  
ＮＲＧＥＣ（配列番号１３６）。
【０１７８】
例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のためのＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメントは、下記の国際公開第２０１６／０６２７２号の配列番号４（配列番号１３７）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＫＹＹ  ＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＷＦＧＥＬＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ  Ｓ；
および／または下記の国際公開第２０１６／０６２７２号の配列番号３（配列番号１３８）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＲＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＳＲＡＴＧＩＰ  ＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ。
【０１７９】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体アテゾリズマブ（別名ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６）、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のためのアテゾリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１３９）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１４０）。
【０１８０】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体アベルマブ（別名ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のためのアベルマブまたはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧ  ＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬ  ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ  
ＳＹＩＭＭＷＶＲＱＡ  ＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳ  ＩＹＰＳＧＧＩＴＦＹ  
ＡＤＴＶＫＧＲＦＴＩ  ＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹ  ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ  
ＴＡＶＹＹＣＡＲＩＫ  ＬＧＴＶＴＴＶＤＹＷ  ＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ  
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧ  ＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  
ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶ  ＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  
ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴ  ＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳ  
ＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰ  ＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰ  ＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ  
ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰ  ＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰ  ＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳ  
ＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷ  ＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡ  ＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮ  
ＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴ  ＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫ  ＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡ  
ＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳ  ＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱ  ＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥ  
ＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣ  ＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩ  ＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰ  
ＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶ  ＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹ  ＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ  
ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶ  ＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴ  ＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号１４１）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶ  ＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩ  ＳＣＴＧＴＳＳＤＶＧ  
ＧＹＮＹＶＳＷＹＱＱ  ＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩ  ＹＤＶＳＮＲＰＳＧＶ  
ＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧ  ＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬ  ＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣ  
ＳＳＹＴＳＳＳＴＲＶ  ＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ  ＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴ  
ＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱ  ＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩ  ＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶ  
ＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫ  ＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫ  ＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳ  
ＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫ  ＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴ  ＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶ  
ＡＰＴＥＣＳ（配列番号１４２）。
【０１８１】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＢＭＳ−９３６５５９（別名１２Ａ４、ＭＤＸ−１１０５）、またはそのフラグメントを含み、これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のためのＢＭＳ−９３６５５９またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＴＳＧＤＴＦＳＴＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＫＡＨＹ  ＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＫＦＨＦＶＳＧＳＰＦＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴ  ＶＳＳ（配列番号１４３）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１４４）。
【０１８２】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体３Ｇ１０、またはそのフラグメントを含み、これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための３Ｇ１０またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＧＦＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＴＡＹＮＧＮＴＮＹ  ＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＦＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１４５）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＶＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１４６）。
【０１８３】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体１０Ａ５、またはそのフラグメントを含み、これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１０Ａ５またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＤＶＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＷＬＨＡＤＴＧＩＴＫＦ  ＳＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＲＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＲＩＱＬＷＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４７）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＥＫＡＰＫＳＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１４８）。
【０１８４】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体５Ｆ８、またはそのフラグメントを含み、これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための５Ｆ８またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧＧＩＦＳＴＹＡＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＨ  ＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＧＩＡＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４９）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰ  ＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１５０）。
【０１８５】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体１０Ｈ１０、またはそのフラグメントを含み、これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１０Ｈ１０またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＴＦＤＤＹＶＶＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＮＳＧＮＩＧＹ  ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＶＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５１）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＥＫＡＰＫＳＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１５２）。
【０１８６】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体１Ｂ１２、またはそのフラグメントを含み、これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１Ｂ１２またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＴＳＧＤＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＲＡＨＹ
ＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＫＦＨＦＶＳＧＳＰＦＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴ  ＶＳＳ（配列番号１５３）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１５４）。
【０１８７】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体７Ｈ１、またはそのフラグメントを含み、これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための７Ｈ１またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＴＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＫＡＨＹ  ＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＴＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＫＹＤＹＶＳＧＳＰＦＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴ  ＶＳＳ（配列番号１５５）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１５６）。
【０１８８】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体１１Ｅ６、またはそのフラグメントを含み、これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１１Ｅ６またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＳＡＮＹ  ＡＱＫＦＱＤＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＡＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＳＳＧＷＳＲＹＹＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳ  Ｓ（配列番号１５７）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰ  ＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１５８）。
【０１８９】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体１２Ｂ７、またはそのフラグメントを含み、これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１２Ｂ７またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＥＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＮＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＬＦＧＩＡＨＹ  ＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＮＴＡＹＭＤＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＫＹＳＹＶＳＧＳＰＦＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴ  ＶＳＳ（配列番号１５９）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号１６０）。
【０１９０】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体１３Ｇ４、またはそのフラグメントを含み、これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１３Ｇ４またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＩＴＦＤＤＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＷＮＲＧＲＩＥＹ  ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＧＲＦＲＹＦＤＷＦＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ  Ｓ（配列番号１６１）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＡＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＡＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＦＮＳＹＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫ（配列番号１６２）。
【０１９１】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体１Ｅ１２、またはそのフラグメントを含み、この特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１Ｅ１２またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＫＬＱＥＳＧＰＳ  ＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬ  ＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴ  
ＳＤＹＷＮＷＩＲＫＦ  ＰＧＮＫＬＥＹＶＧＹ  ＩＳＹＴＧＳＴＹＹＮ  
ＰＳＬＫＳＲＩＳＩＴ  ＲＤＴＳＫＮＱＹＹＬ  ＱＬＮＳＶＴＳＥＤＴ  
ＡＴＹＹＣＡＲＹＧＧ  ＷＬＳＰＦＤＹＷＧＱ  ＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１６３）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＤＩＶＭＴＱＳＨＫＬ  ＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳ  ＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧ  
ＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰ  ＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷ  ＡＳＴＲＨＴＧＶＰＤ  
ＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤ  ＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳ  ＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱ  
ＤＳＳＹＰＬＴＦＧＡ  ＧＴＫＶＥＬＫ（配列番号１６４）。
【０１９２】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体１Ｆ４、またはそのフラグメントを含み、この特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１Ｆ４またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＱＬＱＥＳＧＰＧ  ＬＶＡＰＳＱＳＬＳＩ  ＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴ  
ＴＹＳＩＮＷＩＲＱＰ  ＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶ  ＭＷＡＧＧＧＴＮＳＮ  
ＳＶＬＫＳＲＬＩＩＳ  ＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬ  ＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴ  
ＡＲＹＹＣＡＲＹＹＧ  ＮＳＰＹＹＡＩＤＹＷ  ＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
（配列番号１６５）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＤＩＶＴＴＱＳＨＫＬ  ＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳ  ＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧ  
ＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰ  ＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷ  ＡＳＴＲＨＴＧＶＰＤ  
ＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤ  ＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳ  ＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱ  
ＤＳＳＹＰＬＴＦＧＡ  ＧＴＫＶＥＬＫ（配列番号１６６）。
【０１９３】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体２Ｇ１１、またはそのフラグメントを含み、この特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための２Ｇ１１またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＫＬＱＥＳＧＰＳ  ＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬ  ＴＣＳＶＴＧＹＳＩＩ  
ＳＤＹＷＮＷＩＲＫＦ  ＰＧＮＫＬＥＹＬＧＹ  ＩＳＹＴＧＳＴＹＹＮ  
ＰＳＬＫＳＲＩＳＩＴ  ＲＤＴＳＫＮＱＹＹＬ  ＱＬＮＳＶＴＴＥＤＴ  
ＡＴＹＹＣＡＲＲＧＧ  ＷＬＬＰＦＤＹＷＧＱ  ＧＴＴＬＴＶＳＳ
（配列番号１６７）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳ  ＬＡＶＳＶＧＥＫＶＳ  ＭＧＣＫＳＳＱＳＬＬ  
ＹＳＳＮＱＫＮＳＬＡ  ＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰ  ＫＬＬＩＤＷＡＳＴＲ  
ＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧ  ＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴ  ＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡ  
ＶＹＹＣＱＱＹＹＧＹ  ＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬ  ＥＬＫ（配列番号１６８）。
【０１９４】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体３Ｂ６、またはそのフラグメントを含み、この特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための３Ｂ６またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＫＬＱＥＳＧＰＳ  ＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬ  ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ  
ＳＹＤＩＮＷＶＫＱＲ  ＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷ  ＩＦＰＲＤＮＮＴＫＹ  
ＮＥＮＦＫＧＫＡＴＬ  ＴＶＤＴＳＳＴＴＡＹ  ＭＥＬＨＳＬＴＳＥＤ  
ＳＡＶＹＦＣＴＫＥＮ  ＷＶＧＤＦＤＹＷＧＱ  ＧＴＴＬＴＬＳＳ（配列番号１６９）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＩ  ＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴ  ＭＴＣＳＡＳＳＳＩＲ  
ＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧ  ＴＳＰＫＲＷＩＳＤＴ  ＳＫＬＴＳＧＶＰＡＲ  
ＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹ  ＡＬＴＩＳＳＭＥＡＥ  ＤＡＡＴＹＹＣＨＱＲ  
ＳＳＹＰＷＴＦＧＧＧ  ＴＫＬＥＩＫ（配列番号１７０）。
【０１９５】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号および国際公開第２０１２／１４５４９３号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体３Ｄ１０、またはそのフラグメントを含み、これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための３Ｄ１０またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＤ  ＬＶＴＰＧＡＳＶＲＩ  ＳＣＱＡＳＧＹＴＦＰ  
ＤＹＹＭＮＷＶＫＱＳ  ＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤ  ＩＤＰＮＹＧＧＴＴＹ  
ＮＱＫＦＫＧＫＡＩＬ  ＴＶＤＲＳＳＳＴＡＹ  ＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤ  
ＳＡＶＹＹＣＡＲＧＡ  ＬＴＤＷＧＱＧＴＳＬ  ＴＶＳＳ（配列番号１７１）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＱＩＶＬＳＱＳＰＡＩ  ＬＳＡＳＰＧＥＫＶＴ  ＭＴＣＲＡＳＳＳＶＳ  
ＹＩＹＷＦＱＱＫＰＧ  ＳＳＰＫＰＷＩＹＡＴ  ＦＮＬＡＳＧＶＰＡＲ  
ＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹ  ＳＬＴＩＳＲＶＥＴＥ  ＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷ  
ＳＮＮＰＬＴＦＧＡＧ  ＴＫＬＥＬＫ（配列番号１７２）。
【０１９６】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のいずれか１種の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の下記の配列番号３４〜３８から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖：
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３４（配列番号１７３）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＫＱＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＶＮＰＦＮＤＧＴＫＹ  ＮＥＭＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＱＡＷＧＹＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３５（配列番号１７４）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＫＱＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＶＮＰＦＮＤＧＴＫＹ  ＮＥＭＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＡＷＧＹＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３６（配列番号１７５）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＶＮＰＦＮＤＧＴＫＹ  ＮＥＭＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＡＷＧＹＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３７（配列番号１７６）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＶＮＰＦＮＤＧＴＫＹ  ＮＥＭＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＡＷＧＹＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３８（配列番号１７７）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＶＮＰＦＮＤＧＴＫＹ  ＮＥＭＦＫＧＲＡＴＩＴＳＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＡＷＧＹＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
および／または、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の下記の配列番号３９〜４２から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３９（配列番号１７８）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＴＥＳＶＥＹＹＧＴＳＬＶＱＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＶＤＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＥＥＤＡＡＭＹＦＣＱＱＳＲＲＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４０（配列番号１７９）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＴＥＳＶＥＹＹＧＴＳＬＶＱＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＶＤＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＭＹＦＣＱＱＳＲＲＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４１（配列番号１８０）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＴＥＳＶＥＹＹＧＴＳＬＶＱＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＶＤＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＭＹＦＣＱＱＳＲＲＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４２（配列番号１８１）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＴＥＳＶＥＹＹＧＴＳＬＶＱＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＶＤＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＦＣＱＱＳＲＲＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。
【０１９７】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体２．７Ａ４、またはそのフラグメントを含み、これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための２．７Ａ４またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２（配列番号１８２）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＴＹＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＳＳＧＤＹＩＹＹ  ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＦＬＱＭＮＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＶＴＳＭＶＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７（配列番号１８３）：
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＡＡＲＩＴＣＳＧＤＡＬＰＱＫＹＶＦＷＹＱＱＫＳＧＱＡＰＶＬＶＩＹＥＤＳＫＲＰＳＧＩＰＥＲ  ＦＳＧＳＳＳＧＴＭＡＴＬＴＩＳＧＡＱＶＥＤＥＡＤＹＹＣＹＳＴＤＲＳＧＮＨＲＶＦＧＧＧＴＲＬＴＶＬ。
【０１９８】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体２．９Ｄ１０、またはそのフラグメントを含み、これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための２．９Ｄ１０またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号１２（配列番号１８４）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＧＥＱＹＹ  ＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＷＮＹＧＹＹＤＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号１７（配列番号１８５）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＦＧＴＳＳＲＡＴＧＩＰ  ＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＩＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫ。
【０１９９】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体２．１４Ｈ９、またはそのフラグメントを含み、これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための２．１４Ｈ９またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２２（配列番号１８６）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＫＹＹ  ＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＷＦＧＥＬＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ  Ｓ；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２７（配列番号１８７）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＲＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＳＲＡＴＧＩＰ  ＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＬＰＷＴＦＧＱＧＴＥＶＥＩＫ。
【０２００】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体２．２０Ａ８、またはそのフラグメントを含み、これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための２．２０Ａ８またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号３２（配列番号１８８）：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＲＧＳＧＧＳＴＹＹ  ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＬＨＹＤＳＳＧＹＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ  Ｓ；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号３７（配列番号１８９）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＩＳＲＬＱＳＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＮＳＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ。
【０２０１】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体３．１５Ｇ８、またはそのフラグメントを含み、これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための３．１５Ｇ８またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号４２（配列番号１９０）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＧＥＫＹＹ  ＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＱＬＹＳＤＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号４７（配列番号１９１）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＳＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＧＬＱＳＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＬＡＴＹＹＣＱＱＳＨＳＬＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ。
【０２０２】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体３．１８Ｇ１、またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための３．１８Ｇ１またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号５２（配列番号１９２）：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＤＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＴＩＳＧＳＧＧＦＴＦＳ  ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＶＥＤＳＡＶＹＳＣＡＫＶＬＶＧＦＮＮＧＣＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ  Ｓ；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号５７（配列番号１９３）：
ＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＶＹＤＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲ  ＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＮＤＨＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ。
【０２０３】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体２．７Ａ４ＯＰＴ、またはそのフラグメントを含み、これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための２．７Ａ４ＯＰＴまたはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号６２（配列番号１９４）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＴＹＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＳＳＧＤＹＩＹＹ  ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＶＴＳＭＶＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号６７（配列番号１９５）：
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＤＡＬＰＱＫＹＶＦＷＹＱＱＫＳＧＱＡＰＶＬＶＩＹＥＤＳＫＲＰＳＧＩＰＥＲ  ＦＳＧＳＳＳＧＴＭＡＴＬＴＩＳＧＡＱＶＥＤＥＡＤＹＹＣＹＳＴＤＲＳＧＮＨＲＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ。
【０２０４】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体２．１４Ｈ９ＯＰＴ、またはそのフラグメントを含み、これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための２．１４Ｈ９ＯＰＴまたはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７２（配列番号１９６）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＫＹＹ  ＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＷＦＧＥＬＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ  Ｓ；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７７（配列番号１９７）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＲＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＳＲＡＴＧＩＰ  ＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ。
【０２０５】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１６／０６１１４２号に開示されるいずれか１種の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１６／０６１１４２号の下記の配列番号１８、３０、３８、４６、５０、５４、６２、７０、および７８から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖：
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号１８（配列番号１９８）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＶＲＱＡＴＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＤＰＮＳＧＳＴＫＹ  ＮＥＫＦＫＮＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＲＫＧＬＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号３０（配列番号１９９）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＶＲＱＡＴＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＤＰＮＳＧＳＴＫＹ  ＮＥＫＦＫＮＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＲＫＧＬＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号３８（配列番号２００）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＲＩＳＣＫＧＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＤＰＮＳＧＳＴＫＹ  ＮＥＫＦＫＮＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＲＫＧＬＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号４６（配列番号２０１）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＩＤＰＮＳＧＳＴＫＹ  ＮＥＫＦＫＮＲＬＴＩＳＫＤＴＳＫＮＱＶＶＬＴＭＴＮＭＤＰＶＤＴＡＴＹＹＣＡＲＤＹＲＫＧＬＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号５０（配列番号２０２）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＲＩＳＣＫＧＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＮＳＧＳＴＫＹ  ＮＥＫＦＫＮＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＲＫＧＬＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号５４（配列番号２０３）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＩＤＰＮＳＧＳＴＫＹ  ＮＥＫＦＫＮＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＲＫＧＬＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号６２（配列番号２０４）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＲＩＳＣＫＧＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＶＲＱＡＲＧＱＲＬＥＷＩＧＲＩＤＰＮＳＧＳＴＫＹ  ＮＥＫＦＫＮＲＬＴＩＳＫＤＴＳＫＮＱＶＶＬＴＭＴＮＭＤＰＶＤＴＡＴＹＹＣＡＲＤＹＲＫＧＬＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号７０（配列番号２０５）：
ＱＩＴＬＫＥＳＧＰＴＬＶＫＰＴＱＴＬＴＬＴＣＴＦＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＲＩＤＰＮＳＧＳＴＫＹ  ＮＥＫＦＫＮＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＲＫＧＬＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号７８（配列番号２０６）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＶＲＱＡＲＧＱＲＬＥＷＩＧＲＩＤＰＮＳＧＳＴＫＹ  ＮＥＫＦＫＮＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＲＫＧＬＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
および／または、国際公開第２０１６／０６１１４２号の下記の配列番号２２、２６、３４、４２、５８、６６、７４、８２、および８６から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号２２（配列番号２０７）：
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＩＰＡ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＳＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号２６（配列番号２０８）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号３４（配列番号２０９）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＤ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号４２（配列番号２１０）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ．
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号５８（配列番号２１１）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＩＰＰ  ＲＦＳＧＳＧＹＧＴＤＦＴＬＴＩＮＮＩＥＳＥＤＡＡＹＹＦＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号６６（配列番号２１２）：
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号７４（配列番号２１３）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号８２（配列番号２１４）：
ＡＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号８６（配列番号２１５）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ。
【０２０６】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１６／０２２６３０号に開示されるいずれか１種の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１６／０２２６３０号の下記の配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、および４６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖：
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２（配列番号２１６）：
ＥＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＩＦＲＳＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡＳＩＳＳＧＧＳＴＹＹＰ  ＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＩＬＹＬＱＭＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＤＣＡＲＧＹＤＳＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＥ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号６（配列番号２１７）：
ＥＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＲＳＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡＳＩＳＳＧＧＴＴＹＹＰ  ＤＳＶＫＧＲＦＩＩＳＲＤＮＡＲＮＩＬＹＬＱＭＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＫＧＹＤＳＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＩＶＳＡ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１０（配列番号２１８）：
ＱＶＱＬＫＱＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＴＹＧＶＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＲＧＶＴＴＤＹＮ  ＡＡＦＭＳＲＬＴＩＴＫＤＮＳＫＳＱＶＦＦＫＭＮＳＬＱＡＮＤＴＡＩＹＹＣＡＲＬＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１４（配列番号２１９）：
ＱＶＱＬＫＱＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＳＹＧＶＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＳＧＧＶＴＤＹＮ  ＡＡＦＩＳＲＬＳＩＳＫＤＮＳＫＳＱＶＦＦＫＭＮＳＬＱＡＮＤＴＡＩＹＹＣＡＲＬＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１８（配列番号２２０）：
ＥＶＫＬＦＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＶＡＳＧＦＤＦＳＴＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＱＩＮＰＤＳＴＴＩＮＹ  ＡＰＳＬＫＤＲＦＩＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＦＬＱＭＳＫＶＲＳＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＰＧＤＹＧＹＤＦＤＣＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２２（配列番号２２１）：
ＥＶＱＬＱＥＳＧＰＳＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＳＶＴＧＤＳＩＴＳＧＹＷＮＷＩＲＫＦＰＧＮＫＬＥＹＭＧＹＩＳＹＳＧＳＴＹＹＮ  ＰＳＬＫＳＲＩＳＩＴＲＤＴＳＫＮＱＹＹＬＱＬＮＳＶＴＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＲＳＬＬＷＦＳＴＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２６（配列番号２２２）：
ＱＶＱＬＫＱＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＳＹＧＶＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＳＧＧＩＴＤＹＮ  ＡＡＦＫＳＲＬＳＩＳＫＤＮＳＫＳＱＶＦＦＫＭＮＳＬＱＡＮＤＴＡＩＹＦＣＡＲＬＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３０（配列番号２２３）：
ＥＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＲＳＹＧＭＳＷＡＲＱＩＰＥＫＲＬＥＷＶＡＳＩＳＳＧＧＴＴＹＹＬ  ＧＳＶＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＩＬＹＬＱＭＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＹＤＡＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＳＶＳＥ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３４（配列番号２２４）：
ＥＶＱＬＱＥＳＧＰＳＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＳＶＴＧＤＳＩＴＳＧＹＷＴＷＩＲＫＦＰＧＮＫＬＥＹＭＧＹＩＳＹＴＧＳＴＹＹＮ  ＰＳＬＫＳＲＩＳＩＳＲＤＴＳＫＳＱＹＹＬＱＬＮＳＶＴＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＲＱＲＤＷＬＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３８（配列番号２２５）：
ＥＥＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＳＦＳＳＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡＳＩＳＳＧＧＳＩＹＹＰ  ＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＩＬＹＬＱＭＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＹＤＡＧＦＡＦＷＧＱＧＴＬＶＴＡＳＡ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４２（配列番号２２６）：
ＱＩＴＬＫＥＳＧＰＴＬＶＫＰＴＱＴＬＴＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＴＹＧＶＨＷＩＲＱＰＰＧＫＡＬＥＷＬＧＶＩＷＲＧＶＴＴＤＹＮ  ＡＡＦＭＳＲＬＴＩＴＫＤＮＳＫＮＱＶＶＬＴＭＮＮＭＤＰＶＤＴＡＴＹＹＣＡＲＬＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４６（配列番号２２７）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＩＦＲＳＹＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＳＩＳＳＧＧＳＴＹＹＰ  ＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＤＣＡＲＧＹＤＳＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
および／または、国際公開第２０１６／０２２６３０号の下記の配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、および４８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４（配列番号２２８）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＴＳＳＳＳＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＫＹＡＳＮＬＥＳ  ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＴＡＴＹＹＣＱＨＳＷＥＩＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号８（配列番号２２９）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＰＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＴＳＳＳＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＫＹＡＳＮＬＥＳ  ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＴＡＴＹＹＣＱＨＳＷＥＩＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１２（配列番号２３０）：
ＳＩＶＭＴＱＴＰＫＦＬＬＶＳＡＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＳＶＳＮＤＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＹＡＡＮＲＹＴＧＶＰＤ  ＲＦＴＧＳＧＹＧＴＤＦＴＦＴＩＳＩＶＱＡＥＤＬＡＶＹＦＣＱＱＤＹＴＳＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１６（配列番号２３１）：
ＳＩＶＭＴＱＴＰＫＦＬＬＶＳＡＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＳＶＳＮＤＶＧＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＹＡＳＮＲＹＳＧＶＰＤ  ＲＦＴＧＳＧＹＧＴＤＦＴＦＴＩＳＴＶＱＡＥＤＬＡＶＹＦＣＱＱＤＹＴＳＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２０（配列番号２３２）：
ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＹＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＳＱＩＩＶＨＳＮＡＮＴＹＬＥＷＦＬＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦ  ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２４（配列番号２３３）：
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＬＴＣＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹＷＮＱＱＫＰＧＳＳＰＫＶＷＩＹＮＴＳＮＬＡＳＧＶＰ  ＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＳＹＦＣＨＱＷＲＳＹＰＰＴＬＧＡＧＴＫＬＥＬＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２８（配列番号２３４）：
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＮＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＲ  ＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＧＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３２（配列番号２３５）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＴＳＳＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＫＹＡＳＮＬＥＳ  ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＴＡＴＹＹＣＱＮＳＷＥＩＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３６（配列番号２３６）：
ＤＩＶＭＴＱＴＰＳＳＬＡＶＳＬＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＳＮＱＫＮＳＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＮＲ  ＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＳＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４０（配列番号２３７）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＴＳＳＹＳＹＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＫＹＡＳＮＬＥＳ  ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＴＡＴＹＹＣＱＨＳＷＥＩＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４４（配列番号２３８）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＳＶＳＮＤＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＡＡＮＲＹＴＧＶＰＤ  ＲＦＳＧＳＧＹＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＤＹＴＳＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４８（配列番号２３９）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＰＧＱＲＡＴＩＴＣＲＡＳＱＳＶＳＴＳＳＳＳＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＫＹＡＳＮＬＥＳ  ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＰＶＥＡＮＤＴＡＮＹＹＣＱＨＳＷＥＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。
【０２０７】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１５／１１２９００号に開示されるいずれか１種の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１５／１１２９００号の下記の配列番号３８、５０、８２、および８６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖：
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号３８（配列番号２４０）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＲＩＳＣＫＧＳＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨＷＶＲＱＡＴＧＱＧＬＥＷＭＧＮＩＹＰＧＴＧＧＳＮＦ  ＤＥＫＦＫＮＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＷＴＴＧＴＧＡＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５０（配列番号２４１）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＲＩＳＣＫＧＳＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＮＩＹＰＧＴＧＧＳＮＦ  ＤＥＫＦＫＮＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＷＴＴＧＴＧＡＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号８２（配列番号２４２）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＮＩＹＰＧＴＧＧＳＮＦ  ＤＥＫＦＫＮＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＷＴＴＧＴＧＡＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号８６（配列番号２４３）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＲＩＳＣＫＧＳＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＮＩＹＰＧＴＧＧＳＮＦ  ＤＥＫＦＫＮＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＷＴＴＧＴＧＡＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
および／または、国際公開第２０１５／１１２９００号の下記の配列番号４２、４６、５４、５８、６２、６６、７０、７４、および７８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号４２（配列番号２４４）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＧＮＱＫＮＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＷＡＳＴＲ  ＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号４６（配列番号２４５）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＧＮＱＫＮＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＷＡＳＴＲ  ＥＳＧＩＰＰＲＦＳＧＳＧＹＧＴＤＦＴＬＴＩＮＮＩＥＳＥＤＡＡＹＹＦＣＱＮＤＹＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５４（配列番号２４６）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＧＮＱＫＮＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲ  ＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５８（配列番号２４７）：
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＧＮＱＫＮＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＷＡＳＴＲ  ＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号６２（配列番号２４８）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＧＮＱＫＮＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲ  ＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号６６（配列番号２４９）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＧＮＱＫＮＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＷＡＳＴＲ  ＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号７０（配列番号２５０）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＧＮＱＫＮＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＷＡＳＴＲ  ＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号７４（配列番号２５１）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＧＮＱＫＮＦＬＴＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲ  ＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号７８（配列番号２５２）：
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＧＮＱＫＮＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲ  ＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ。
【０２０８】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１０／０７７６３４号および米国特許第８，２１７，１４９号に開示されるいずれか１種の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための抗ＰＤ−Ｌ１またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
国際公開第２０１０／０７７６３４号の配列番号２０（配列番号２５３）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹ  ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
国際公開第２０１０／０７７６３４号の配列番号２１（配列番号２５４）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ。
【０２０９】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１２００３９９０６号に開示されるように、ＣＮＣＭ受託番号ＣＮＣＭ  Ｉ−４１２２、ＣＮＣＭ  Ｉ−４０８０およびＣＮＣＭ  Ｉ−４０８１で入手可能なハイブリドーマから得られるいずれか１種の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１０】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、例えば、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のように、ＰＤ−Ｌ１抗体に向けられたＶＨＨを含み、これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ＰＤ−Ｌ１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の下記の配列番号３９４〜３９９を含む：
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９４（配列番号２５５）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＷＡＳＳ  ＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＦＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＳＣＡＡＳＱ  ＡＰＩＴＩＡＴＭＭＫＰＦＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９５（配列番号２５６）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＤＹＹＡＫＣＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＷＶＳＣ  ＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＦＣＡＡＲＨ  ＧＧＰＬＴＶＥＹＦＦＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９６（配列番号２５７）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＡＲＥＧＶＳＣ  ＩＳＧＧＤＮＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＧ  ＷＫＹＣＳＧＹＤＰＥＹＩＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９７（配列番号２５８）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＴＦＳＱＹＤＶＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡ  ＦＳＳＳＧＧＲＴＩＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＲＤＮＴＫＮＴＶＹＬＱＭＴＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＫＩＤＷ  ＹＬＮＳＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９８（配列番号２５９）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＶＤＡＳＮＳＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＷＶＡＲ  ＩＴＧＧＧＬＩＡＹＴＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＳＴＶＹＬＱＭＮＳＬＥＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＴＩＮＳ  ＲＤＧＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９９（配列番号２６０）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＴＩＳＣＡＡＳＧＩＴＦＳＤＳＩＶＳＷＹＲＲＡＲＧＫＱＲＥＷＶＡＧ  ＩＳＮＧＧＴＴＫＹＡＥＳＶＬＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＮＶＹＬＱＭＮＧＬＮＰＥＤＴＡＶＹＬＣＫＶＲＱＹ  ＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ。
【０２１１】
ある実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、下記の配列番号２６１などの、ＰＤＬ−１に向けられたターゲティング部分を含む：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＤＹＹＡＫＣＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＷＶＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＦＣＡＡＲＨＧＧＰＬＴＶＥＹＦＦＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
【０２１２】
種々の実施形態では、本多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＰＤ−Ｌ２に向けられた１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＰＤ−Ｌ２ポリペプチドを選択的に結合する１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＰＤ−Ｌ２ポリペプチドを選択的に結合する、抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質の１種または複数を含む。
【０２１３】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、例えば、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のように、ＰＤ−Ｌ２抗体に向けられたＶＨＨを含み、これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ＰＤ−１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の下記の配列番号４４９〜４５５を含む：
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４４９（配列番号２６２）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＥＳＴＶＬＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＳ
ＩＳＳＧＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＡＤＶＹ  ＰＱＤＹＧＬＧＹＶＥＧＫＶＹＹＧＨＤＹＷＧＴＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５０（配列番号２６３）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＴＦＳＮＹＶＳＮＹＡＭＧＷＧＲＱＡＰＧＴＱ  ＲＥＬＶＡＳＩＳＮＧＤＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹ  ＣＦＥＨＱＶＡＧＬＴＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５１（配列番号２６４）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＸＡＬＫＩＸＶＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶ  ＡＡＩＴＳＧＧＲＴＮＹＳＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＧＤＮＡＸＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＲＥ  ＷＮＳＧＹＰＰＶＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５２（配列番号２６５）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＳＧＴＭＧＷＦＲＲＡＰＧＫＥＲＥＦＶ  ＡＳＩＰＷＳＧＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＡＱＮＴＶＦＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＦ  ＫＥＲＳＴＧＷＤＦＡＳＷＧＱＧＩＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５３（配列番号２６６）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＴＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＤＹＹＧＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳ  ＦＩＳＧＳＤＧＳＴＹＹＡＥＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＫＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤ  ＰＷＧＰＰＳＩＡＴＭＴＳＹＥＹＫＨＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５４（配列番号２６７）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＴＹＴＭＩＷＬＲＲＡＰＧＫＧＦＥＷＶ  ＳＴＩＤＫＤＧＮＴＮＹＶＤＳＶＫＧＲＦＡＶＳＲＤＮＴＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＴＫ  ＨＧＳＳＡＲＧＱＧＴＲＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５５（配列番号２６８）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＥＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥ  ＷＶＳＴＩＮＳＧＧＧＩＴＹＲＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹ  ＣＥＮＧＧＳＳＹＲＲＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ。
【０２１４】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のいずれか１種の抗ＰＤ−Ｌ２抗体を含み、これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の下記の配列番号４３〜４７から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖：
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４３（配列番号２６９）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＴＭＨＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＲＳＧＹＴＥＹ  ＮＱＫＦＫＤＲＴＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＰＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４４（配列番号２７０）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＴＭＨＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＲＳＧＹＴＥＹ  ＮＱＫＦＫＤＲＴＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４５（配列番号２７１）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＲＳＧＹＴＥＹ  ＮＱＫＦＫＤＲＴＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４６（配列番号２７２）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＲＳＧＹＴＥＹ  ＮＱＫＦＫＤＲＴＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４７（配列番号２７３）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＲＳＧＹＴＥＹ  ＮＱＫＦＫＤＲＴＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
および／または、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の下記の配列番号４８〜５１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４８（配列番号２７４）：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＳＬＴＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲ  ＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４９（配列番号２７５）：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＳＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲ  ＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号５０（配列番号２７６）：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲ  ＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号５１（配列番号２７７）：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲ  ＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。
【０２１５】
種々の実施形態では、本発明のターゲティング部分は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、および／またはＰＤ−Ｌ２を標的とする配列、または本明細書で開示の配列のいずれかに少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示の配列のいずれかと約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）である、本明細書に記載のいずれかの他の標的を含み得る。
【０２１６】
種々の実施形態では、本発明のターゲティング部分は、本明細書で開示のＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、および／またはＰＤ−Ｌ２を標的とする重鎖、軽鎖、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびフレームワーク領域配列の任意の組み合わせを含み得る。
【０２１７】
ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２を選択的に結合するまたは標的とする追加の抗体、抗体誘導体またはフォーマット、ポリペプチドまたは融合タンパク質は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号、米国特許出願公開第２０１３／００３４５５９号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号、米国特許第８，６０９，０８９号、米国特許出願公開第２０１０／０２８３３０号、米国特許出願公開第２０１２／０１１４６４９号、国際公開第２０１０／０２７８２７号、国際公開第２０１１／０６６３４２号、米国特許第８，９０７，０６５号、国際公開第２０１６／０６２７２２号、国際公開第２００９／１０１６１１号、国際公開第２０１０／０２７８２７号、国際公開第２０１１／０６６３４２号、国際公開第２００７／００５８７４号、国際公開第２００１／０１４５５６号、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号、国際公開第２０１０／０３６９５９号、国際公開第２０１０／０７７６３４号、米国特許第８，２１７，１４９号、米国特許出願公開第２０１２／００３９９０６号、国際公開第２０１２／１４５４９３号、米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号、国際公開第２００９／０８９１４９号、国際公開第２００７／００５８７号、国際公開第２０１６／０６１１４２号、国際公開第２０１６／０２２６３号、国際公開第２０１０／０７７６３４号、および国際公開第２０１５／１１２９００で開示され、これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１８】
種々の実施形態では、本発明の多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、例えば樹状細胞上のＸＣＲ１に向けられた１つまたは複数のターゲティング部分を有する。例えば、ターゲティング部分は、いくつかの実施形態ではＸＣＬ１の全部もしくは一部またはＸＣＲ１を機能的に調節しない（例えば中和しない）抗ＸＣＲ１物質を含む。
【０２１９】
種々の実施形態では、多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、非細胞構造の一部である標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、抗原または受容体は、無傷の細胞または細胞構造の不可欠な構成要素ではない。いくつかの実施形態では、抗原または受容体は、細胞外の抗原または受容体である。いくつかの実施形態では、標的は、非タンパク質性の非細胞マーカーであり、これらは、限定されないが、例えば、壊死腫瘍細胞から放出されたＤＮＡ、などのＤＮＡまたはＲＮＡを含む、核酸またはコレステロールなどの細胞外沈着物を含む。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、ストローマもしくは細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の非細胞成分またはそれと関連するマーカーの一部である。本明細書で使用される場合、ストローマは、組織または器官の連結および支持フレームワークを指す。ストローマは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）および細胞外分子と共に線維芽細胞／筋線維芽細胞／膠細胞、上皮、脂肪、免疫、血管、平滑筋、および免疫細胞などの細胞の寄せ集めを含み得る。種々の実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、細胞外マトリックスおよび細胞外分子などのストローマの非細胞成分の一部である。本明細書で使用される場合、ＥＣＭは、全ての組織および器官内に存在する非細胞成分を指す。ＥＣＭは、限定されないが、タンパク質、糖タンパク質、プロテオグリカン、および多糖類を含む生化学的に別々の成分の多数の集まりからなる。ＥＣＭのこれらの成分は通常、隣接する細胞により産生され、エキソサイトーシスによりＥＣＭ中に分泌される。分泌されると、ＥＣＭ成分は多くの場合、集合して、巨大分子の複合体ネットワークを形成する。種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、ＥＣＭの任意の成分上に位置する標的（例えば、抗原または受容体または非タンパク質分子）を認識するターゲティング部分を含む。ＥＣＭの成分の例としては、限定されないが、プロテオグリカン、非プロテオグリカン多糖類、繊維および他のＥＣＭタンパク質またはＥＣＭ非タンパク質、例えば、多糖類および／または脂質、またはＥＣＭ関連分子（例えば、タンパク質または非タンパク質、例えば、多糖類、核酸および／または脂質）が挙げられる。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＣＭプロテオグリカン上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。プロテオグリカンはグリコシル化タンパク質である。塩基性のプロテオグリカン単位は、１個または複数の共有結合グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）鎖を有するコアタンパク質を含む。プロテオグリカンは、正電荷のナトリウムイオン（Ｎａ＋）を引き付ける正味負電荷を有し、これは浸透を介して水を引き付け、ＥＣＭおよび常在性細胞を水和した状態に保持する。プロテオグリカンはまた、ＥＣＭ内の成長因子を捕捉し貯蔵し得る。本発明のキメラタンパク質により標的とされ得るプロテオグリカンの例としては、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、およびケラタン硫酸が挙げられるが、これらに限定されない。ある実施形態では、ターゲティング部分は、ヒアルロン酸などの非プロテオグリカン多糖類上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＣＭ繊維上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。ＥＣＭ繊維は、コラーゲン繊維およびエラスチン繊維を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、コラーゲンまたはコラーゲン繊維上の１個または複数のエピトープを認識する。コラーゲンは、ＥＣＭ中で最も豊富なタンパク質である。コラーゲンはＥＣＭ中に線維性タンパク質として存在し、常在性細胞に対し構造支持を与える。１つまたは複数の実施形態では、ターゲティング部分は、限定されないが、線維性コラーゲン（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、Ｖ、ＸＩ型）、ＦＡＣＩＴコラーゲン（ＩＸ、ＸＩＩ、ＸＩＶ型）、短鎖コラーゲン（ＶＩＩＩ、Ｘ型）、基底膜コラーゲン（ＩＶ型）、および／またはＶＩ、ＶＩＩ、またはＸＩＩＩ型コラーゲンを含む、ＥＣＭ内に存在する様々な種類のコラーゲンを認識し、これに結合する。エラスチン繊維は組織に弾性を与え、それらが必要に応じ伸縮し、その後それらの元の状態に戻ることを可能にする。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、エラスチンまたはエラスチン繊維上の１個または複数のエピトープを認識する。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、限定されないが、テネイシン、フィブロネクチン、フィブリン、ラミニン、またはナイドジェン／エンタクチンを含む、１種または複数のＥＣＭタンパク質を認識する。
【０２２４】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、テネイシンを認識し、これに結合する。テネイシン（ＴＮ）ファミリーの糖タンパク質は、少なくとも４種のメンバー、テネイシン−Ｃ、テネイシン−Ｒ、テネイシン−Ｘ、およびテネイシン−Ｗを含む。テネイシンタンパク質の一次構造は、同じ連続する配列で順序づけられるいくつかの共通のモチーフ：アミノ末端７個の反復、上皮増殖因子（ＥＧＦ）様反復、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン反復、およびカルボキシル末端フィブリノーゲン様球状ドメインを含む。それぞれのタンパク質メンバーは、ＥＧＦ様およびフィブロネクチンＩＩＩ型反復の数および性質における典型的な変動と関連付けられる。アイソフォームバリアントもまた、特にテネイシン−Ｃに関して存在する。２７種を超えるテネイシン−Ｃのスプライスバリアントおよび／またはアイソフォームが知られている。特定の実施形態では、ターゲティング部分は、テネイシン−ＣＡ１を認識し、これに結合する。同様に、テネイシン−Ｒはまた、種々のスプライスバリアントおよびアイソフォームを有する。テネイシン−Ｒは通常、ダイマーまたはトリマーとして存在する。テネイシン−Ｘは、テネイシンファミリーの最大メンバーであり、トリマーとして存在することが知られている。テネイシン−Ｗは、トリマーとして存在する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、テネイシンタンパク質上の１個または複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマーおよび／またはダイマーおよび／またはトリマーおよび／またはヘキサマー型のテネイシンタンパク質を認識する。
【０２２５】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、フィブロネクチンを認識し、これに結合する。フィブロネクチンは、細胞をＥＣＭ中のコラーゲン繊維と連結する糖タンパク質であり、細胞がＥＣＭ中を移動することを可能にする。インテグリンへの結合時に、フィブロネクチンは折り畳みをほどいて機能的ダイマーを形成する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマーおよび／またはダイマー型のフィブロネクチンを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブロネクチン上の１個または複数のエピトープを認識する。例示的実施形態では、ターゲティング部分は、フィブロネクチン細胞外ドメインＡ（ＥＤＡ）またはフィブロネクチン細胞外ドメインＢ（ＥＤＢ）を認識する。ＥＤＡレベルの上昇は、乾癬、関節リウマチ、糖尿病、および癌を含む種々の疾患および障害に関連する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＤＡアイソフォームを含むフィブロネクチンを認識し、キメラタンパク質を癌細胞を含む疾患細胞に向けるのに使用し得る。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＤＢアイソフォームを含むフィブロネクチンを認識する。種々の実施形態では、このようなターゲティング部分は、キメラタンパク質を腫瘍新生血管を含む腫瘍細胞に向けるのに使用し得る。
【０２２６】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、フィブリンを認識し、これに結合する。フィブリンは、ＥＣＭのマトリックスネットワーク中に見出されることが多い、もう１つのタンパク質物質である。フィブリンは、フィブリンを重合させるフィブリノーゲンに対するプロテアーゼトロンビンの作用により形成される。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブリン上の１個または複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマーならびに重合型のフィブリンを認識する。
【０２２７】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ラミニンを認識し、これに結合する。ラミニンは、基底膜の主要成分であり、これは細胞および器官のためのタンパク質ネットワーク基盤である。ラミニンは、α鎖、β鎖、およびγ鎖を含むヘテロトリマータンパク質である。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ラミニン上の１個または複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマー、ダイマーならびにトリマー型のラミニンを認識する。
【０２２８】
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ナイドジェンまたはエンタクチンを認識し、これらに結合する。ナイドジェン／エンタクチンは、高度に保存された硫酸化糖タンパク質ファミリーである。それらは基底膜の主要構造的成分をなし、基底膜中でラミニンとコラーゲンＩＶネットワークを連結するように機能する。このファミリーのメンバーは、ナイドジェン−１およびナイドジェン−２を含む。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、ナイドジェン−１および／またはナイドジェン−２上のエピトープを認識する。
【０２２９】
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかの標的（例えば、ＥＣＭタンパク質）上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、タンパク質上に存在する１個または複数の線形エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、線形エピトープは、タンパク質上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を意味する。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、タンパク質上に存在する１個または複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識できる特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１個または複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。
【０２３０】
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかの標的（例えば、ＥＣＭタンパク質）の完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然または合成の類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、モノマー、ダイマー、トリマー、テトラマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび会合型を含む、本明細書に記載の任意の型のタンパク質に結合し得る。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、グリコシル化および／またはリン酸化型などの、本明細書に記載の任意の翻訳後修飾型のタンパク質に結合し得る。
【０２３１】
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、ＤＮＡなどの細胞外分子を認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＤＮＡを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、ＤＮＡは、壊死細胞またはアポトーシス腫瘍細胞または他の疾患細胞から細胞外間隙中に脱落する。
【０２３２】
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、アテローム斑と関連する１種または複数の非細胞構造を認識する抗原認識ドメインを含む。２つのタイプのアテローム斑が知られている。線維−脂質（線維−脂肪）斑（ｆｉｂｒｏ−ｌｉｐｉｄ（ｆｉｂｒｏ−ｆａｔｔｙ）ｐｌａｑｕｅ）は、動脈の内膜の下の脂質を取り込んだ（ｌｉｐｉｄ−ｌａｄｅｎ）細胞の蓄積を特徴とする。内皮の下には、アテローム性のプラークコアを覆う繊維状キャップが存在する。コアは、増大した組織コレステロールおよびコレステロールエステル含量、フィブリン、プロテオグリカン、コラーゲン、エラスチン、ならびに壊死細胞片を有する脂質を取り込んだ細胞（マクロファージおよび平滑筋細胞）を含む。進行型プラークでは、プラークの中心コアは通常、細胞外のコレステロール沈着物（死細胞から放出される）を含み、これは空の針状間隙を有するコレステロール結晶の領域を形成する。プラークの周辺部には、より若い泡沫状細胞および毛細血管がある。繊維状プラークはまた、動脈壁内の内膜下にも局在し、壁の肥厚化および増殖、および時には、筋層の若干の萎縮を伴う内腔の飛び飛びに局在化した狭小化をもたらす。繊維状プラークは、コラーゲン繊維（エオシン好性）、カルシウムの沈殿物（ヘマトキシリン好性）および脂質を取り込んだ細胞を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブリン、プロテオグリカン、コラーゲン、エラスチン、壊死細胞片、およびカルシウムまたは他の鉱物沈着物または沈殿物などのこれらのプラークの１種または複数の非細胞成分を認識し、これに結合する。いくつかの実施形態では、壊死細胞片は、核酸、例えば、死細胞から放出されるＤＮＡまたはＲＮＡである。
【０２３３】
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、神経変性疾患と関連する脳プラーク中で見つかる１種または複数の非細胞構造を認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、アルツハイマー病の患者の脳中で見つかるアミロイド斑中に局在する１種または複数の非細胞構造を認識し、これに結合する。例えば、ターゲティング部分は、ペプチドアミロイドベータを認識し、これに結合する。ペプチドアミロイドベータは、アミロイド斑の主要な成分である。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ハンチントン病の患者で見つかる脳プラーク中にある１種または複数の非細胞構造を認識し、これに結合する。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、レヴィー小体認知症および封入体筋炎などの他の神経変性疾患または筋骨格疾病と関連するプラークで見つかる１種または複数の非細胞構造を認識し、これに結合する。
【０２３４】
リンカーおよび官能基
種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、１つまたは複数の官能基、残基、または部分を含み得る。種々の実施形態では、１つまたは複数の官能基、残基、または部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質またはターゲティング部分に結合されるか、または遺伝的に融合される。いくつかの実施形態では、このような官能基、残基または部分は、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質に１つまたは複数の望ましい特性または官能基を付与する。このような官能基およびそれらをＣｌｅｃ９Ａ結合物質に導入する技術の例は、当技術分野において既知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９８０）を参照されたい。
【０２３５】
種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、別の物質と複合化および／または融合されて、半減期を延長するか、または別の方法で薬力学的および薬物動態学的特性を改善し得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＰＥＧ、ＸＴＥＮ（例えば、ｒＰＥＧとして）、ポリシアル酸（ＰＯＬＹＸＥＮ）、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミンまたはＨＡＳ）、エラスチン様タンパク質（ＥＬＰ）、ＰＡＳ、ＨＡＰ、ＧＬＫ、ＣＴＰ、トランスフェリンなどの１種または複数と融合または複合化され得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、抗体またはＦｃフラグメントなどの抗体フラグメントと融合または複合化され得る。例えば、キメラタンパク質は、ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）ＧのＦｃドメインのＮ−末端またはＣ末端に融合され得る。種々の実施形態では、それぞれ個々のキメラタンパク質は、ＢｉｏＤｒｕｇｓ（２０１５）２９：２１５−２３９に記載の１種または複数の物質に融合され、この文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、好適な薬学的に許容可能なポリマー、例えばポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）またはその誘導体（例えば、メトキシポリ（エチレングリコール）またはｍＰＥＧ）を含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ部分の結合は、半減期を伸ばし、および／またはＣｌｅｃ９Ａ結合タンパク質の免疫原性を低減する。通常、抗体および抗体フラグメント（限定されないが、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む）に対し当該技術分野で用いられるペグ化などの、任意の好適な形態のペグ化が用いられる；例えば、Ｃｈａｐｍａｎ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，５４，５３１−５４５（２００２）；ＶｅｒｏｎｅｓｅおよびＨａｒｒｉｓによる、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５４，４５３−４５６（２００３），ＨａｒｒｉｓおよびＣｈｅｓｓによる、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．，２，（２００３）ならびに国際公開第０４／０６０９６５号を参照されたい。これらの文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。タンパク質のペグ化のための種々の試薬も、例えば、Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＵＳＡから市販されている。いくつかの実施形態では、特に、システイン残基を介した部位特異的なペグ化が使用される（例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，１６，１０，７６１−７７０（２００３）を参照されたい）。例えば、このために、ＰＥＧは本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質中の天然のシステイン残基に結合され得る。いくつかの実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＰＥＧの結合のための１個または複数のシステイン残基を適切に導入するように修飾されるか、またはＰＥＧの結合のための１個または複数のシステイン残基を含むアミノ酸配列が、当該技術分野において既知の技術を使用してＣｌｅｃ９Ａ結合物質のアミノ末端および／またはカルボキシ末端に融合され得る。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、Ｎ結合型またはＯ結合型グリコシル化を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ結合型またはＯ結合型グリコシル化は、翻訳時修飾および／または翻訳後修飾の一部として導入される。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、１個または複数の検出可能なラベルまたはその他のシグナル生成基または部分を含む。好適なラベルおよびそれらの結合、使用および検出のための技術は、当技術分野において既知であり、限定されないが、蛍光標識（例えば、フルオレセイン、イソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルアルデヒド、ならびにフルオレサミンおよび蛍光金属、例えば、Ｅｕまたはランタニド系列の他の金属）、リン光標識、化学発光ラベルまたは生物発光ラベル（例えば、ルミノール、イソルミノール、セロマティックアクリジニウム・エステル、イミダゾール、アクリジニウム塩、オキサレートエステル、ジオキセタンまたはＧＦＰおよびその類似体）、放射性同位体、金属、金属キレートもしくは金属カチオンまたはインビボ、インビトロまたはインサイツ診断および画像処理での使用に特に適している他の金属もしくは金属カチオン、ならびに発色団および酵素（例えば、リンゴ酸脱水素酵素、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ−Ｖ−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコール脱水素酵素、アルファグリセロリン酸脱水素酵素、トリオースリン酸イソメラーゼ、ビオチンアビジンペルオキシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−ＶＩ−リン酸脱水素酵素、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼ）を含む。他の好適なラベルとしては、ＮＭＲまたはＥＳＲ分光法を用いて検出できる部分が挙げられる。このように標識される本発明のＶＨＨおよびポリペプチドは、特定の標識の選択により、例えば、インビトロ、インビボまたはインサイツアッセイ（ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡおよびＥＩＡおよび他の「サンドイッチ法」などのそれ自体公知のイムノアッセイを含む）ならびにインビボ診断および画像処理の目的に使用し得る。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質に結合または遺伝的に融合されるタグを含む。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、単一タグまたは複数タグを含み得る。タグは例えば、Ｃｌｅｃ９Ａまたは腫瘍抗原などの目的のいずれか他の抗原へのＣｌｅｃ９Ａ結合物質の結合を阻害または妨害しない、ペプチド、糖、またはＤＮＡ分子である。種々の実施形態では、タグは、少なくとも約：３〜５個のアミノ酸長、５〜８個のアミノ酸長、８〜１２個のアミノ酸長、１２〜１５個のアミノ酸長、または１５〜２０個のアミノ酸長である。タグの例は、例えば、米国特許出願公開第２０１３／００５８９６２号に記載されている。いくつかの実施形態では、タグは、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）タグなどの親和性タグである。ある実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質はＨｉｓタグを含む。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、例えば、１種の金属または金属カチオンをキレートするためのキレート化基を含む。好適なキレート化基は、例えば、限定されないが、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含む。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、ビオチン−（ストレプト）アビジン結合対などの、特異的結合対の片方の部分である官能基を含む。このような官能基を使って、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質を、結合対のもう一方の半分に結合される別のタンパク質、ポリペプチドまたは化学化合物に、すなわち、結合対の形成を介して、連結し得る。例えば、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質をビオチンに複合化し、アビジンまたはストレプトアビジンに複合化された別のタンパク質、ポリペプチド、化合物または担体に連結し得る。例えば、検出可能なシグナル生成物質がアビジンまたはストレプトアビジンに複合化される診断システムにおいて、このような結合Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質を、例えば、レポーターとして用い得る。このような結合対を、例えば、医薬品目的に好適する担体を含む、担体へＣｌｅｃ９Ａ結合物質を結合するのにも使用し得る。１つの非限定的例は、Ｃａｏ  ａｎｄ  Ｓｕｒｅｓｈ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，８，４，２５７（２０００）に記載されたリポソーム製剤である。このような結合対を、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質に治療活性薬剤を連結するのにも使用し得る。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、必要に応じ、１個または複数のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、それぞれの結合領域および／またはターゲティング部分を連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、それぞれのシグナル伝達物質およびターゲティング部分を連結する（または２つ以上のターゲティング部分の場合、シグナル伝達物質をターゲティング部分の１つに連結する）リンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に記載される種々の官能基、残基、または部分をＣｌｅｃ９Ａ結合物質に連結するのに利用し得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、結合領域および結合タンパク質の安定性、配向、結合、中和、および／または排出特性に影響を与えない、またはそれらを低下させない単一アミノ酸または複数のアミノ酸である。種々の実施形態では、リンカーは、ペプチド、タンパク質、糖、または核酸から選択される。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、ターゲティング部分とシグナル伝達物質とを連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、シグナル伝達物質内にリンカーを含む（例えば、単鎖ＴＮＦの場合には、それは２つのリンカーを含みトリマーを生じることができる）。
【０２４４】
本発明は、種々のリンカー配列の使用を意図する。種々の実施形態では、リンカーは、天然のマルチドメインタンパク質から誘導され得るか、または、例えば、Ｃｈｉｃｈｉｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３），Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．２２（２）：１５３−１６７；Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３），Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７−１３６９に記載されている経験的リンカーであり、これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、リンカーは、リンカー設計データベースおよびその全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３），Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７−１３６９  ａｎｄ  Ｃｒａｓｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００），Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１３（５）：３０９−３１２に記載のものなどのコンピュータープログラムを用いて設計され得る。種々の実施形態では、リンカーは機能性であり得る。例えば、限定されないが、リンカーは、折り畳みおよび／または安定性を改善するように、発現を改善するように、薬物動態学を改善するように、および／または本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質の生物活性を改善するように機能し得る。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーは約１００アミノ酸長未満である。例えば、リンカーは、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長未満であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーは約１００アミノ酸長超である。例えば、リンカーは、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長超であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーはフレキシブルである。別の実施形態では、リンカー は剛性である。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、ターゲティング部分とシグナル伝達物質のそれらの受容体への効果的結合を可能にする。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、１つのターゲティング部分とシグナル伝達物質の同じ細胞上の受容体への効果的な結合、ならびに他のターゲティング部分の別の細胞への効果的な結合を可能にする。細胞対の例は、本明細書の他の場所で提供される。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、少なくとも、同じ細胞上の１つのターゲティング部分およびシグナル伝達物質の受容体への結合部位の間の最短距離に等しい。いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、同じ細胞上の１つのターゲティング部分およびシグナル伝達物質の受容体への結合部位の間の最短距離の、少なくとも２倍、または３倍、または４倍、または５倍、または１０倍、または２０倍、または２５倍、または５０倍、または１００倍、または、それを超える。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、あるリンカーは２つのターゲティング部分を相互に連結し、このリンカーは短い長さを有し、また、あるリンカーはターゲティング部分とシグナル伝達物質を連結し、このリンカーは２つのターゲティング部分を連結するリンカーより長い。例えば、２つのターゲティング部分を連結するリンカーと、ターゲティング部分とシグナル伝達物質とを連結するリンカーとの間のアミノ酸長さの差異は、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーはフレキシブルである。別の実施形態では、リンカーは剛性である。
【０２４９】
種々の実施形態では、リンカーは、グリシンおよびセリン残基から実質的に構成される（例えば、約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または約９７％のグリシンとセリン）。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎであり、式中、ｎは、約１〜約８、例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８である。ある実施形態では、リンカー配列は、ＧＧＳＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２７８）である。追加のリンカーの例としては、限定されないが、次記の配列を有するリンカーが挙げられる：ＬＥ、ＧＧＧＧＳ（配列番号２７９）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜４）（配列番号２８０）、（Ｇｌｙ）８（配列番号２８１）、（Ｇｌｙ）６（配列番号２８２）、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（ｎ＝１〜３）（配列番号２８３）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（ｎ＝２〜５）（配列番号２８４）、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号２８５）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）４ＡＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）４Ａ（配列番号２８６）、ＰＡＰＡＰ（配列番号２８７）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号２８８）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号２８９）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号２９０）、および（ＸＰ）ｎ、Ｘは、任意のアミノ酸、例えば、Ａｌａ、Ｌｙｓ、またはＧｌｕを示す。種々の実施形態では、リンカーはＧＧＳである。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、リンカーは抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、ならびにＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）のヒンジ部である。種々の実施形態では、リンカーは抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、ならびにＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）のヒンジ部である。ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥクラス抗体で見つかるヒンジ部は、フレキシブルスペーサーとして機能し、Ｆａｂ部が空間中で自由に動くことを可能にする。定常領域と対照的に、ヒンジドメインは、構造上多様で、免疫グロブリンクラスおよびサブクラス中の配列および長さの両方で変動する。例えば、ヒンジ部の長さおよび可撓性は、ＩｇＧサブクラス内で変動する。ＩｇＧ１のヒンジ部は、アミノ酸２１６〜２３１を包含し、それは自由にフレキシブルであるため、Ｆａｂフラグメントがそれらの対称軸の周りで回転でき、２つの重鎖間ジスルフィド架橋の内の最初の位置を中心とする球内で移動できる。ＩｇＧ２は、ＩｇＧ１より短いヒンジを有し、１２個のアミノ酸残基と４個のジスルフィド架橋を有する。ＩｇＧ２のヒンジ部は、グリシン残基を欠き、比較的短く、また、追加の重鎖間ジスルフィド架橋により安定化される剛性のポリプロリン二重らせんを含む。これらの特性は、ＩｇＧ２分子の可撓性を制限する。ＩｇＧ３は、その特有の伸びたヒンジ部（ＩｇＧ１ヒンジの約４倍の長さ）により他のサブクラスとは異なり、６２個のアミノ酸（２１個のプロリンと１１個のシステインを含む）を含み、柔軟でないポリプロリン二重らせんを形成する。ＩｇＧ３では、ＦａｂフラグメントはＦｃフラグメントから比較的遠くに離れており、分子により大きな可撓性を与える。ＩｇＧ３の伸びたヒンジはまた、その他のサブクラスに比べて、これが高分子量である原因である。ＩｇＧ４のヒンジ部はＩｇＧ１より短く、その可撓性はＩｇＧ１とＩｇＧ２との中間である。ヒンジ部の可撓性は、次の順に低下すると報告されている：ＩｇＧ３＞ＩｇＧ１＞ＩｇＧ４＞ＩｇＧ２。
【０２５１】
結晶学的調査によれば、免疫グロブリンヒンジ部は、機能的に次の３つの領域にさらに細分できる：上部ヒンジ部、コアヒンジ部、および下部ヒンジ部。Ｓｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３０：８７を参照されたい。上部ヒンジ部は、ＣＨ１残基カルボキシル末端〜運動を制限するヒンジ中の最初のアミノ酸、通常は２つの重鎖間の鎖間ジスルフィド結合を形成する最初のシステイン残基のアミノ酸を含む。上部ヒンジ部の長さは、抗体のセグメントの可撓性と相関する。コアヒンジ部は重鎖間ジスルフィド架橋を含み、下部ヒンジ部はＣＨ２ドメインのアミノ末端に繋がり、かつＣＨ２中の残基を含む（同上文献）。野性型ヒトＩｇＧ１のコアヒンジ部は配列Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓを含み、これは、ジスルフィド結合形成により二量体化されると、環状オクタペプチドを生成し、これが旋回軸として機能することにより、可撓性を付与すると考えられている。種々の実施形態では、本リンカーは、任意の抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、ならびにＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）の１個、または２個、または３個の上部ヒンジ部、コアヒンジ部および下部ヒンジ部を含む。ヒンジ部はまた、１つまたは複数のグリコシル化部位も含み得、これは、多くの構造上異なるタイプの炭水化物付着部位を含む。例えば、ＩｇＡ１は、ヒンジ部の１７アミノ酸セグメント内に５つのグリコシル化部位を含み、腸内プロテアーゼに対するヒンジ部ポリペプチドの耐性を付与し、これは、分泌性免疫グロブリンにとって、有利な性質であると考えられる。種々の実施形態では、本発明のリンカーは、１つまたは複数のグリコシル化部位を含む。種々の実施形態では、リンカーは、ヒトＩｇＧ４抗体のヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３ドメインである。
【０２５２】
必要に応じ、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は抗体Ｆｃ領域に連結されてよく、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインの片方または両方、および場合によりヒンジ部を含む。例えば、単一ヌクレオチド配列としてＦｃ領域に連結された本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質をコードするベクターを用いて、このようなポリペプチドを調製できる。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、リンカーはＰＥＧなどの合成リンカーである。
種々の実施形態では、リンカーは機能性であり得る。例えば、限定されないが、リンカーは、折り畳みおよび／または安定性を改善するように、発現を改善するように、薬物動態学を改善するように、および／または本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質の生物活性を改善するように機能し得る。別の例では、リンカーは、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質を特定の細胞型または部位に向けるように機能し得る。
【０２５４】
Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質の改変と産生
種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＶＨＨであるターゲティング部分を含む。種々の実施形態では、ＶＨＨは、特定の生物源または特定の調製法に限定されない。例えば、ＶＨＨは通常、次記により得ることができる：（１）天然の重鎖抗体のＶＨＨドメインを単離することにより；（２）天然のＶＨＨドメインをコードするヌクレオチド配列の発現により；（３）天然のＶＨＨドメインの「ヒト化」によりまたはこのようなヒト化ＶＨＨドメインをコードする核酸の発現により；（４）ヒト由来などの哺乳動物種由来などの任意の動物種由来の天然のＶＨドメインの「ラクダ化」により、またはこのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現により；（５）当該技術分野で記載される「ドメイン抗体」または「Ｄａｂ」の「ラクダ化」により、またはこのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現により；（６）当該技術分野において既知のタンパク質、ポリペプチドまたは他のアミノ酸配列を調製するための合成技術または半合成技術を用いることにより；（７）当該技術分野において既知の核酸合成技術を用いてＶＨＨをコードする核酸を調製すること、それに続く、こうして得られた核酸の発現により；および／または（８）前述の１つまたは複数の任意の組み合わせにより。
【０２５５】
ある実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ヒトＣｌｅｃ９Ａに向けられた天然の重鎖抗体のＶＨＨドメインに対応するＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、このようなＶＨＨ配列は通常、ラクダ科の動物種をＣｌｅｃ９Ａ分子で適切に免疫する（すなわち、Ｃｌｅｃ９Ａに対する免疫応答および／またはＣｌｅｃ９Ａに対する重鎖抗体を生じるように）ことにより、ラクダ科の動物から好適な生物試料（例えば、血液試料、またはＢ細胞の任意の試料）を得ることにより、および任意の好適な既知の技術を用いて、試料から出発して、Ｃｌｅｃ９Ａに対するＶＨＨ配列を生成することにより、生成または得ることができる。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａに対する天然のＶＨＨドメインは、、例えば、当技術分野で既知の１種または複数のスクリーニング技術を使って、Ｃｌｅｃ９Ａまたはその少なくとも１つの部分、フラグメント、抗原決定基またはエピトープを用いてこのようなライブラリーをスクリーニングすることにより、ラクダ科の動物ＶＨＨ配列の未処理ライブラリーから得ることができる。このようなライブラリーおよび技術は、例えば、国際公開第９９／３７６８１号、国際公開第０１／９０１９０号、国際公開第０３／０２５０２０号、および国際公開第０３／０３５６９４号に記載され、これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、例えば、その全内容はが参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第００／４３５０７号に記載の、ランダム変異誘発および／またはＣＤＲシャッフリングなどの技術により未処理ＶＨＨライブラリーから得られるＶＨＨライブラリーなどの、未処理ＶＨＨライブラリー由来の改善された合成または半合成ライブラリーを使用し得る。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａに対するＶＨＨ配列を得るための別の技術は、重鎖抗体を発現できる遺伝子導入哺乳動物を適切に免疫すること（すなわち、Ｃｌｅｃ９Ａに対する免疫応答および／またはＣｌｅｃ９Ａに対する重鎖抗体を生じるように）、遺伝子導入哺乳動物から好適な生物試料（例えば、血液試料、またはＢ細胞の任意の試料）を得ること、およびその後、任意の好適な既知の技術を用いて、試料から出発してＣｌｅｃ９Ａに対するＶＨＨ配列を生成することを含む。例えば、この目的のために、国際公開第０２／０８５９４５号および国際公開第０４／０４９７９４号（これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載の重鎖抗体発現マウスおよびさらなる方法および技術を使用できる。
【０２５６】
ある実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、「ヒト化され」ている、すなわち、天然のＶＨＨ配列（および特に、フレームワーク配列中の）のアミノ酸配列の１個または複数のアミノ酸残基を、ヒト由来の従来の４鎖抗体由来のＶＨドメイン中の対応する位置（単一または複数）にある１個または複数のアミノ酸残基で置換することによる、ＶＨＨを含む。これは、当該技術分野において既知の技術を使用して実施できる。いくつかの実施形態では、可能なヒト化置換またはヒト化置換の組み合わせは、当該技術分野において既知の方法により、例えば、ＶＨＨの配列と天然のヒトＶＨドメインの配列との間の比較により決定し得る。いくつかの実施形態では、ヒト化置換は、得られるヒト化ＶＨＨが有利な機能特性をなお保持するように選択される。通常、ヒト化の結果として、本発明のＶＨＨは、より「ヒト様」になり得るが、対応する天然のＶＨＨドメインと比較して、低減された免疫原性などの好ましい特性を依然として保持している。種々の実施形態では、本発明のヒト化ＶＨＨは、当該技術分野において既知の任意の好適な方法で得ることができ、したがって出発材料として天然のＶＨＨドメインを含むポリペプチドを用いて得たポリペプチドに厳密に限定されない。
【０２５７】
ある実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、「ラクダ化され」ている、すなわち、従来の４鎖抗体由来の天然のＶＨドメインのアミノ酸配列の１個または複数のアミノ酸残基を、ラクダ科の動物の重鎖抗体のＶＨＨドメイン中の対応する位置（単一または複数）にある１個または複数のアミノ酸残基で置換することによる、ＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、このような「ラクダ化」置換は、ＶＨ−ＶＬインターフェースを形成するおよび／または、そこに存在するアミノ酸位置で、および／またはいわゆるラクダ科の顕著な特徴の残基の位置で挿入される（例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第９４／０４６７８号を参照）。いくつかの実施形態では、ラクダ化ＶＨＨを生成するまたは設計するための出発材料または出発点として用いられるＶＨ配列は、哺乳動物由来のＶＨ配列、例えば、ＶＨ３配列などの、ヒトのＶＨ配列である。種々の実施形態では、ラクダ化ＶＨＨは、当該技術分野において既知の任意の好適な方法で得ることができ（すなわち、上記（１）〜（８）で示されるような）、したがって、出発材料として天然のＶＨドメインを含むポリペプチドを用いて得たポリペプチドに厳密に限定されない。
【０２５８】
種々の実施形態では、「ヒト化」および「ラクダ化」の両方は、天然のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列をそれぞれ用意すること、および次に、当該技術分野において既知の方法で、ヌクレオチド配列中の１個または複数のコドンを新規ヌクレオチド配列がそれぞれ「ヒト化」または「ラクダ化」ＶＨＨをコードするように変更することにより実施できる。この核酸は、その後、本発明の目的のＶＨＨを得るように、当該技術分野において既知の方法で発現されてよい。あるいは、天然のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインそれぞれのアミノ酸配列に基づいて、目的の本発明のヒト化またはラクダ化ＶＨＨのそれぞれのアミノ酸配列を設計し、その後、当該技術分野において既知のペプチド合成技術を用いて、新規に合成できる。また、天然のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインそれぞれのアミノ酸配列またはヌクレオチド配列に基づいて、目的のヒト化またはラクダ化ＶＨＨのそれぞれをコードするヌクレオチド配列を設計し、次に当該技術分野において既知の核酸合成技術を用いて新規に合成でき、その後、こうして得られた核酸を、本発明の目的のＶＨＨが得られるように、当該技術分野において既知の方法で発現させることができる。天然のＶＨ配列またはＶＨＨ配列から出発して、本発明のＶＨＨおよび／またはそれをコードする核酸を得るための他の好適な方法および技術は、当技術分野において既知であり、例えば、１個または複数の天然のＶＨ配列（１個または複数のＦＲ配列および／またはＣＤＲ配列など）の１個または複数の部分、１個または複数の天然のＶＨＨ配列（１個または複数のＦＲ配列またはＣＤＲ配列など）の１個または複数の部分、および／または１個または複数の合成または半合成配列を、本発明のＶＨＨまたはそれをコードするヌクレオチド配列もしくは核酸をもたらすように、好適な方法で組み合わせることを含み得る。
【０２５９】
本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質を産生するための方法は、本明細書に記載される。例えば、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質をコードするＤＮＡ配列は、当該技術分野において既知の方法を使用して化学的に合成できる。合成ＤＮＡ配列は、例えば、発現制御配列を含む他の適切なヌクレオチド配列に連結されて、目的のＣｌｅｃ９Ａ結合物質をコードする遺伝子発現構築物を産生できる。したがって、種々の実施形態では、本発明は、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質をコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。
【０２６０】
本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質をコードする核酸は、発現ベクター中に組み込まれ（連結され）てよく、このベクターは、遺伝子導入、形質転換、または形質導入技術により宿主細胞中に導入されてよい。例えば、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質をコードする核酸は、レトロウイルス形質導入により宿主細胞中に導入されてよい。宿主細胞の例は、大腸菌細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞、ヒーラ細胞、仔ハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、サル腎培養細胞（ＣＯＳ）、またはヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２）、および骨髄腫細胞である。形質転換宿主細胞は、宿主細胞が本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質をコードする遺伝子を発現するのを可能にする条件下で増殖されてよい。したがって、種々の実施形態では、本発明は、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質をコードする核酸を含む発現ベクターを提供する。種々の実施形態では、本発明は、このような発現ベクターを含む宿主細胞をさらに提供する。
【０２６１】
特定の発現および精製条件は、用いた発現系に応じて変化するであろう。例えば、遺伝子が大腸菌中で発現される場合、遺伝子は最初に、操作された遺伝子を細菌プロモーター、例えば、ＴｒｐまたはＴａｃ、および原核生物シグナル配列の下流に配置することにより発現ベクター中に挿入される。別の例では、操作された遺伝子が真核生物宿主細胞、例えば、ＣＨＯ細胞中で発現される場合、遺伝子は最初に、例えば、好適な真核生物プロモーター、分泌シグナル、転写促進因子、および種々のイントロンを含む発現ベクター中に挿入される。遺伝子構築物は、遺伝子導入、形質転換、または形質導入技術を用いて宿主細胞中に導入できる。
【０２６２】
本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、タンパク質の発現を許容する条件下で、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質をコードする発現ベクターで形質導入された宿主細胞を増殖させることにより産生できる。発現後、タンパク質を収集し、例えば、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）などの親和性タグまたはクロマトグラフィーによる当該技術分野において周知の技術を用いて精製できる。ある実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質はＨｉｓタグを含む。ある実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質はＨｉｓタグおよびＨｉｓタグの切断を可能にするタンパク分解部位を含む。
【０２６３】
したがって、種々の実施形態では、本発明は、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質をコードする核酸を提供する。種々の実施形態では、本発明は、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質をコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。
【０２６４】
種々の実施形態では、本明細書に記載されるＣｌｅｃ９Ａ結合物質を改変するおよび産生する方法は、２つ以上のターゲティング部分および／またはシグナル伝達物質を含む任意の多重特異的結合物質またはキメラの改変および産生に容易に適応できる。例えば、方法は、チェックポイント阻害剤抗原に対するターゲティング部分を含む多重特異的Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質の産生に適応され得る。
【０２６５】
薬学的に許容可能な塩および賦形剤
本明細書で記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質（および／またはいずれか他の治療薬）は、充分に塩基性の官能基を有してよく、これは無機もしくは有機酸、またはカルボキシル基と反応でき、これは無機または有機塩基と反応でき、薬学的に許容可能な塩を形成する。薬学的に許容可能な酸付加塩は、当該技術分野でよく知られているように、薬学的に許容可能な酸から形成される。このような塩は、例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２−１９（１９７７およびＴｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ．Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ  ａｎｄ  Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｖｅｒｌａｇ，Ｚｕｒｉｃｈ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）２００２、に挙げられた薬学的に許容可能な塩を含み、これらの文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２６６】
薬学的に許容可能な塩としては、限定されないが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、ホスフェート、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、樟脳スルホン酸塩、パモ酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ−アセトキシ安息香酸塩、ナフタレン−２−安息香酸塩、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、α−ヒドロキシ酪酸塩、ブチン−１，４−ジカルボキシレート、ヘキシン−１，４−ジカルボキシレート、カプリン酸塩、カプリル酸塩、ケイ皮酸塩、グリコール酸塩、ヘプタン酸塩、ヒプル酸塩、リンゴ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ニコチン酸塩、フタル酸塩、テラフタル酸塩、プロピオール酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、セバシン酸塩、スベリン酸塩、ｐ−ブロモベンゼンスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、エチルスルホン酸塩、２−ヒドロキシエチルスルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、ナフタレン−１，５−スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、および酒石酸塩が挙げられる。
【０２６７】
「薬学的に許容可能な塩」という用語はまた、カルボン酸官能基などの酸性官能基、および塩基を有する本発明の組成物の塩を指す。適切な塩基は、限定されないが、ナトリウム、カリウム、およびリチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウムおよび亜鉛などのその他の金属の水酸化物；アンモニア、および非置換またはヒドロキシ置換のモノ−、ジ−、またはトリ−アルキルアミン、ジシクロヘキシルアミンなどの有機アミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ−メチル、Ｎ−エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ−、ビス−、またはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、またはトリス−（ヒドロキシメチル）メチルアミンなどのモノ−、ビス−、またはトリス−（２−ＯＨ−低級アルキルアミン）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミンまたはトリ−（２−ヒドロキシエチル）アミンなどのＮ，Ｎ−ジ−低級アルキル−Ｎ−（ヒドロキシル−低級アルキル）−アミン；Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン；およびアルギニン、リシンなどのアミノ酸などを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で記載の組成物は、薬学的に許容可能な塩の形態である。
【０２６８】
医薬組成物および製剤
種々の実施形態では、本発明は、本明細書で記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質（および／またはいずれか他の治療薬）および薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む医薬組成物に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質を含む医薬組成物に関する。別の実施形態では、本発明は、本明細書に記載のいずれか他の治療薬を含む医薬組成物に関する。さらなる実施形態では、本発明は、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質と本明細書に記載のいずれか他の治療薬との組み合わせを含む医薬組成物に関する。本明細書で記載のいずれの医薬組成物も、薬学的に許容可能な担体またはビークルを含む組成物の成分として、対象に投与できる。このような組成物は必要に応じ、適切な投与用の形態を与えるように、適切な量の薬学的に許容可能な賦形剤を含んでよい。
【０２６９】
種々の実施形態では、医薬賦形剤は、ピーナッツオイル、大豆油、ミネラルオイル、ゴマ油などの石油、動物、植物、または人工起源のものを含む、水および油などの液体であってよい。医薬賦形剤は、例えば、食塩水、アカシアゴム、ゼラチン、デンプンペースト、滑石、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素などであってよい。さらに、助材、安定化剤、増粘化剤、潤滑剤、および着色料を使用できる。一実施形態では、薬学的に許容可能な賦形剤は、対象に投与される場合、無菌である。本明細書で記載のいずれかの薬剤が静脈内に投与される場合、水は有用な賦形剤である。生理食塩水および水性デキストロースならびにグリセリン溶液はまた、液体賦形剤として、特に注射可能溶液に用いることができる。適切な医薬賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセリンモノステアレート、滑石、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセリン、プロピレン、グリコール、水、エタノールなども挙げられる。本明細書で記載のいずれの薬剤も、必要に応じ、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含んでよい。適切な医薬賦形剤の他の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １４４７−１６７６（Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｄｓ．，１９ｔｈ  ｅｄ．１９９５）に記載され、この文献は参照により本明細書に組み込まれる。
【０２７０】
本発明は、種々の製剤中に記載医薬組成物（および／または追加の治療薬）を含む。本明細書で記載のいずれの本発明の医薬組成物（および／または追加の治療薬）も、液剤、懸濁剤、乳濁液、点滴剤、錠剤、丸薬、ペレット、カプセル剤、液体含有カプセル剤、ゼラチンカプセル剤、散剤、徐放製剤、坐剤、乳剤、エアロゾル、噴霧剤、懸濁剤、凍結乾燥散剤、凍結懸濁剤、乾燥散剤、または使用に適する他の任意の形態をとってよい。一実施形態では、組成物はカプセルの形態である。別の実施形態では、組成物は錠剤の形態である。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、軟質ゲルカプセルの形態で処方される。さらなる実施形態では、医薬組成物は、ゼラチンカプセルの形態で処方される。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、液剤として処方される。
【０２７１】
必要に応じて、本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）は、可溶化剤も含んでよい。また、薬剤は当技術分野において既知の適切なビークルまたはデリバリー装置を使って送達できる。本明細書で概要を述べた併用療法剤は、単一の送達ビークルまたはデリバリー装置で共送達することができる。
【０２７２】
本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）を含む製剤は単位剤形として好都合に提供でき、薬学の分野でよく知られたいずれかの方法により調製され得る。このような方法は通常、治療薬を担体と会合させるステップを含み、担体は１種または複数の補助成分を構成する。通常、製剤は、治療薬を液体担体、微粉化固相担体、または両方と均一にかつ完全に会合させること、およびその後、必要に応じ、生成物を所望の製剤の剤形に成形すること（例えば、湿式または乾式造粒、散剤ブレンド、など、続いて、当該技術分野で既知の従来の方法を使って錠剤化）により調製される。
【０２７３】
種々の実施形態では、本明細書で記載のいずれの医薬組成物（および／または追加の薬剤）も、本明細書で記載の投与方法に適合された組成物として、ルーチン手順に従って処方される。
【０２７４】
投与経路は、例えば、経口、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、舌下、鼻腔内、脳内、膣内、経皮、直腸内、吸入、または局所を含む。投与は局所的でも全身性でもよい。いくつかの実施形態では、投与は、経口により行われる。別の実施形態では、投与は非経口の注射による。投与方法は、開業医の自由裁量に任すことができ、病状の部位にある程度依存する。大抵の場合、投与は血流中への本明細書で記載のいずれかの薬剤の放出を生じる。
【０２７５】
一実施形態では、本明細書で記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、経口投与に適合された組成物として、常法に従って処方される。経口送達用の組成物は、例えば、錠剤、トローチ剤、水性または油性懸濁剤、粒剤、散剤、乳剤、カプセル剤、シロップ剤、またはエリキシル剤の形態であってよい。経口投与される組成物は、薬学的に美味な製剤を提供するために、１種または複数種の薬剤、例えば、ラクトース、アスパルテームまたはサッカリンなどの甘味料；ペパーミント、冬緑油、またはチェリー油などの調味料；着色料；および保存剤を含んでよい。さらに、タブレットまたは丸薬形態では、組成物をコートして消化管での崩壊および吸収を遅らせ、長期間にわたる持続作用を提供できる。本明細書に記載のいずれかのＣｌｅｃ９Ａ結合物質を運ぶ浸透圧的に活性な物質を取り囲む選択的透過性膜も、経口投与組成物として好適である。これらの後者のプラットフォームでは、カプセルの周りの環境からの液体が運搬化合物により吸収され、この化合物は膨潤して開口部を介し薬剤または薬剤組成物を追い出す。これらの送達プラットフォームは、即時放出製剤の急上昇プロファイルとは対照的に、実質的に０次の送達プロファイルを提供できる。グリセロールモノステアレートまたはグリセロールステアレートなどの時間遅延物質も使用できる。経口組成物は、標準的な賦形剤、例えば、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、セルロース、および炭酸マグネシウムを含んでよい。一実施形態では、賦形剤は医薬品グレードである。懸濁剤は、活性化合物に加えて、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロオキシド、ベントナイト、寒天、トラガントなど、およびこれらの混合物などの沈殿防止剤を含んでよい。
【０２７６】
非経口投与（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下および関節内注射および注入）に好適な剤形は、例えば、液剤、懸濁剤、分散剤、乳剤、などを含む。それらは、無菌の固相組成物（例えば、凍結乾燥組成物）の形態で製造されてもよく、これは使用直前に無菌の注射可能媒体中に溶解または懸濁し得る。それらは、例えば、当該技術分野において既知の懸濁剤または分散剤を含み得る。非経口的投与に好適な製剤成分としては、注射用の水、食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、またはその他の合成溶媒などの無菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸もしくは亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤；ＥＤＴＡなどのキレート化剤；アセテート、シトレート、またはホスフェートなどの緩衝剤；および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの浸透圧調節剤が挙げられる。
【０２７７】
静脈内投与の場合、好適なキャリアとしては、生理食塩水、静菌性水、クレモフォアＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。担体は、製造および貯蔵条件下で安定でなければならず、微生物に対し保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール）、および好適なこれらの混合物を含む、溶媒または分散媒であってよい。
【０２７８】
本明細書にて提供される組成物は、単独でまたは他の好適な成分と組み合わせて、吸入により投与されるエーロゾル製剤（すなわち、「噴霧化」製剤）に作製されてよい。エーロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの許容され得る加圧化噴射剤中に置かれてよい。
【０２７９】
本明細書で記載のいずれの本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）も、当業者に既知の制御放出によりまたは徐放手段または送達装置により投与可能である。例としては、米国特許第３，８４５，７７０号；同第３，９１６，８９９号；同第３，５３６，８０９号；同第３，５９８，１２３号；同第４，００８，７１９号、同第５，６７４，５３３号、同第５，０５９，５９５号、同第５，５９１，７６７号、同第５，１２０，５４８号、同第５，０７３，５４３号、同第５，６３９，４７６号、同第５，３５４，５５６号、および同第５，７３３，５５６号に記載のものが挙げられるが、これらに限定されない。これらの特許のそれぞれは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。このような剤形は、例えば、ヒドロプロピルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、その他のポリマーマトリクス、ゲル、浸透膜、浸透系、多層被膜、微粒子、リポソーム、マイクロスフェア、またはこれらの組み合わせを用いて１つまたは複数の有効成分の制御放出または徐放を提供して様々な割合での所望の放出プロファイルを提供するために有用である。本明細書に記載されるものを含む、当業者に既知の適切な制御放出または徐放製剤は、本明細書で記載の薬剤の有効成分との使用のために容易に選択できる。本発明はこのように、限定されないが、制御放出または徐放に適合された錠剤、カプセル、ジェルカプセルおよびカプレットなどの経口投与に好適な単位剤形を提供する。
【０２８０】
有効成分の制御放出または徐放は、限定されないが、ｐＨ変化、温度変化、適切な波長の光による刺激、酵素の濃度もしくは利用可能性、水の濃度または利用可能性、または他の生理学的条件または化合物を含む、種々の条件により刺激されてよい。
【０２８１】
別の実施形態では、徐放系が、処置される標的領域の近傍に配置されてよく、したがって全身用量の一部のみを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）を参照）。Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３、中の概説で考察される他の放出制御系を使用し得る。
【０２８２】
医薬製剤は好ましくは無菌である。無菌化は、例えば、無菌濾過膜を介する濾過により達成される。組成物が凍結乾燥される場合、凍結乾燥および再構成の前またはその後でフィルター滅菌を行うことができる。
【０２８３】
投与および投与量
本発明により投与されるＣｌｅｃ９Ａ結合物質および／または本明細書に記載のいずれかの治療薬の実際の用量は、特定の剤形および投与方法に応じて変わるであろうということは理解されよう。当業者なら、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質の作用を変え得る多くの要因（例えば、体重、性別、食事、投与時期、投与経路、排出速度、対象の状態、薬剤の組み合わせ、遺伝的素因および反応感度）を考慮に入れることができる。投与は、最大耐量の範囲内で連続的にまたは１種または複数の別々の用量で実施できる。与えられた一連の条件に対する最適投与速度は、従来の用量投与試験を使って、当業者により確認できる。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質および／または本明細書に記載のいずれかの治療薬の好適な投与量は、対象の体重の約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｇ／ｋｇ、対象の体重の約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇ、対象の体重の約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、対象の体重の約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であり、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０６ｍｇ／ｋｇ、約０．０７ｍｇ／ｋｇ、約０．０８ｍｇ／ｋｇ、約０．０９ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．１ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．７ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、１．９ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｇ／ｋｇ体重、約１０ｇ／ｋｇ体重（これらの間の全ての値および範囲を含む）である。
【０２８５】
Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質および／または本明細書に記載のいずれかの治療薬の個々の用量は、例えば、単位剤形当たり約０．０１ｍｇ〜約１００ｇ、約０．０１ｍｇ〜約７５ｇ、約０．０１ｍｇ〜約５０ｇ、約０．０１ｍｇ〜約２５ｇ、約０．０１ｍｇ〜約１０ｇ、約０．０１ｍｇ〜約７．５ｇ、約０．０１ｍｇ〜約５ｇ、約０．０１ｍｇ〜約２．５ｇ、約０．０１ｍｇ〜約１ｇ、約０．０１ｍｇ〜約１００ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約１００ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約９０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約８０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約７０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約６０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約５０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約４０ｍｇの有効成分、約０．１ｍｇ〜約３０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約５ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約３ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約１ｍｇ、または単位剤形当たり約５ｍｇ〜約８０ｍｇを含む単位剤形として投与できる。例えば、単位剤形は、約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約５００ｍｇ、約１ｇ、約２．５ｇ、約５ｇ、約１０ｇ、約２５ｇ、約５０ｇ、約７５ｇ、約１００ｇ（これらの間の全ての値および範囲を含む）であってよい。
【０２８６】
一実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質および／または本明細書に記載のいずれかの治療薬は、毎日約０．０１ｍｇ〜約１００ｇ、毎日約０．０１ｍｇ〜約７５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ〜約５０ｇ、毎日約０．０１ｍｇ〜約２５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ〜約１０ｇ、毎日約０．０１ｍｇ〜約７．５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ〜約５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ〜約２．５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ〜約１ｇ、毎日約０．０１ｍｇ〜約１００ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約１００ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約９５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約９０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約８５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約８０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約７５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約７０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約６５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約６０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約５５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約５０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約４５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約４０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約３５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約３０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約２５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約１５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約３ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ〜約１ｍｇ、または毎日約５ｍｇ〜約８０ｍｇの量で投与される。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約５００ｍｇ、約１ｇ、約２．５ｇ、約５ｇ、約７．５ｇ、約１０ｇ、約２５ｇ、約５０ｇ、約７５ｇ、約１００ｇ（これらの間の全ての値および範囲を含む）の１日量で投与される。
【０２８７】
本発明の特定の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質および／または本明細書に記載のいずれかの治療薬を含む医薬組成物は、例えば、１日２回以上（例えば、毎日約２回、約３回、約４回、約５回、約６回、約７回、約８回、約９回、または約１０回）、１日約１回、約１日おき、約３日おき、週約１回、２週毎に約１回、毎月約１回、２ヶ月毎に約１回、３ヶ月毎に約１回、６ヶ月毎に約１回、または毎年約１回投与されてよい。
【０２８８】
併用療法および追加の治療薬
種々の実施形態では、本発明の医薬組成物は、追加の治療薬（単一または複数）と併せて共投与される。共投与は、同時または順次であってよい。
【０２８９】
一実施形態では、追加の治療薬および本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、対象に同時に投与される。本明細書で使用される場合、用語「同時に」は、追加の治療薬およびＣｌｅｃ９Ａ結合物質が約６０分以下、例えば約３０分以下、約２０分以下、約１０分以下、約５分以下、または約１分以下の時間間隔で投与されることを意味する。追加の治療薬およびＣｌｅｃ９Ａ結合物質の投与は、単一製剤（例えば、追加の治療薬およびＣｌｅｃ９Ａ結合物質を含む製剤）のまたは別々の製剤（例えば、追加の治療薬を含む第１の製剤およびＣｌｅｃ９Ａ結合物質を含む第２の製剤）の同時の投与により行われてよい。
【０２９０】
共投与は、それらの投与のタイミングが、追加の治療薬およびＣｌｅｃ９Ａ結合物質の薬理学的活性が時がたてば重なりあい、それにより組み合わされた治療効果が発揮されるような場合には、治療薬が同時に投与される必要はない。例えば、追加の治療薬およびＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、順次に投与できる。本明細書で使用される場合、用語「順次に」は、追加の治療薬およびＣｌｅｃ９Ａ結合物質が約６０分を超える時間間隔で投与されることを意味する。例えば、追加の治療薬とＣｌｅｃ９Ａ結合物質との逐次投与の間の時間は、約６０分を超えて、約２時間を超えて、約５時間を超えて、約１０時間を超えて、約１日を超えて、約２日を超えて、約３日を超えて、約１週間を超えて、約２週間を超えて、または約１ヶ月を越えて離れていてよい。最適投与時間は、投与される追加の治療薬およびＣｌｅｃ９Ａ結合物質の代謝、排泄速度、および／または薬力学的活性に依存するであろう。追加の治療薬またはＣｌｅｃ９Ａ結合物質のいずれかを、最初に投与してよい。
【０２９１】
共投与はまた、治療薬が同じ投与経路により対象に投与される必要はない。むしろ、それぞれの治療薬は、任意の適切な経路、例えば、非経口または経口（ｎｏｎ−ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｌｙ）で投与できる。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、別の治療薬と共投与されると、相乗的に作用する。このような実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質および追加の治療薬は、治療薬が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。
【０２９３】
いくつかの実施形態では、本発明は、追加の治療薬としての化学療法剤に関する。例えば、限定されないが、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質と化学療法剤のこのような組み合わせは、本明細書の別の場所で記載のように、癌の処置で使用される。化学療法剤の例としては、アルキル化剤、例えば、チオテパ、ＣＹＴＯＸＡＮ（シクロホスファミド）；スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドーパ，カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパ；エチレンイミン、メチラメラミン例えば、アルトレタミン、トリエチルエネメラミン、トリエチレンネフォスフォラミド、トリエチレンチオフォスフォラミドおよび、トリメチロールメラミン；アセトゲニン（例えば、ブラタシン、ブラタチノン）；カントテシン（合成類似剤トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン（ｃａｌｌｙ  ｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ−１０６５（アドゼレシン、カルゼルシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（例えば、クリプトフィシン１、クリプトフィシン８など）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似薬ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコディクチン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、酸化メクロルエタミン塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（カリチアマイシン、特にカリチアマイシンガンマＩＩとカリチアマイシンオメガＩＩ（Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照）；ダイネマイシン、ダイネマイシンＡを含む；ビスフォスフォネート、例えば、クロドロネート；エスペラマイシン；ならびに、ネオカルジノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン）（モルフォリノドキソルビシン、シアノモルフォリノドキソルビシン、２−ピロリノドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン（例えば、マイトマイシンＣ）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、チュベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮���薬、例えば、メトトレキセートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸の類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎物質、例えば、アミノグルテチミド（ｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充液、例えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；エリプチニウムアセテート；エポチロン；エトグルシド；ガリウムニトレート；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシノイド、例えば、メイタンシンおよびアンサマイトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（例えば、Ｔ２毒、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、およびアングイディン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（アラ−Ｃ）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、タキソールパクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、アブラキサンクレモフォアフリー、アルブミン処理ナノ粒子形成パクリタキセル（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，１１１．）、タキソテールドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル；ジェムザール（ゲムシタビン）；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；白金類似体、例えば、シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ナベルビン（ビノレルビン）；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（キャンプトサー，ＣＰＴ−１１）（イリノテカンと５−ＦＵおよびロイコボリンの治療法を含む）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ヂルルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えば、レチノイン酸；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン、オキサリプラチン治療法（ＦＯＬＦＯＸ）を含む；ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ）；ＰＫＣ−α、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、ＥＧＦＲの阻害剤（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ））および細胞増殖を抑制するＶＥＧＦ−Ａならびに上述のいずれかの薬剤の薬学的に許容可能な塩、酸または誘導体、が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、処置の方法は、放射線の使用をさらに含んでよい。さらに、処置の方法は、光線力学的治療の使用をさらに含んでよい。
【０２９４】
したがって、いくつかの実施形態では、本発明は、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質および化学療法剤を用いる併用療法に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、化学療法剤での処置を受けている患者に対するＣｌｅｃ９Ａ結合物質の投与に関する。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、ＤＮＡ挿入剤、例えば、限定されないが、ドキソルビシン、シスプラチン、ダウノルビシン、およびエピルビシンである。ある実施形態では、ＤＮＡ挿入剤は、ドキソルビシンである。
【０２９５】
例示的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ドキソルビシンと共投与されると、相乗的に作用する。例示的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、腫瘍または癌の処置での使用において、ドキソルビシンと共投与されると相乗的に作用する。例えば、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質とドキソルビシンとの共投与は、相乗的に作用して、腫瘍または癌を低減または除去し得、または腫瘍または癌の増殖および／または進行および／または転移を遅らせ得る。例示的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質とドキソルビシンの組み合わせは、単剤療法において単独で使用される物質に比べて、改善された安全性プロファイルを示し得る。例示的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質およびドキソルビシンは、その物質が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、変異ＩＦＮαなどの変異インターフェロンを含む。例示的実施形態では、変異ＩＦＮαは、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａなど、配列番号８６または配列番号８７に関連して位置１４８、１４９、および１５３で１個または複数の変異を含む。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、本発明は、１種または複数の免疫調節薬、例えば、限定されないが、免疫チェックポイントを調節する物質との併用療法に関する。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、およびＰＤ−Ｌ２の１個または複数を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ−１阻害剤である。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、およびＰＤ−Ｌ２の１個または複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、ニボルバム（ＯＮＯ−４５３８／ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、オプジーボ、ＢＲＩＳＴＯＬ  ＭＹＥＲＳ  ＳＱＵＩＢＢ）、ペムブロリズマブ（キイトルーダ、ＭＥＲＣＫ）、ピディリズマブ（ＣＴ−０１１，ＣＵＲＥ  ＴＥＣＨ）、ＭＫ−３４７５（ＭＥＲＣＫ）、ＢＭＳ９３６５５９（ＢＲＩＳＴＯＬ  ＭＹＥＲＳ  ＳＱＵＩＢＢ）、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ（ＲＯＣＨＥ）などの抗体である。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ１３７またはＣＤ１３７Ｌの１つまたは複数を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ１３７またはＣＤ１３７Ｌの１つまたは複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３および抗４−１ＢＢ抗体としても知られる）などの抗体である。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、固形腫瘍および／またはＢ細胞非ホジキンリンパ腫および／または頭頸部癌および／または多発性骨髄腫の処置のために、ウレルマブ（と必要に応じ、ニボルバム、リリルマブ、およびウレルマブの１種または複数）と組み合わされる。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＣＴＬＡ−４、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ−２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａの１種または複数を標的とする物質である。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＴＬＡ−４、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ−２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａの１種または複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０、ＭＤＸ−１０１、ヤーボイ、ＢＭＳ）および／またはトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）などの抗体である。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、黒色腫、前立腺癌、および肺癌の１種または複数の処置のために、イピリムマブ（と必要に応じ、バビツキシマブ）と組み合わされる。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ２０を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ２０に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、オファツムマブ（ＧＥＮＭＡＢ）、オビヌツズマブ（ＧＡＺＹＶＡ）、、ＡＭＥ−１３３ｖ（ＡＰＰＬＩＥＤ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＥＶＯＬＵＴＩＯＮ）、オクレリズマブ（ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ）、ＴＲＵ−０１５（ＴＲＵＢＩＯＮ／ＥＭＥＲＧＥＮＴ）、ベルツズマブ（ＩＭＭＵ−１０６）などの抗体である。
【０２９７】
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質およびチェックポイント阻害剤を用いる併用療法に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、チェックポイント阻害剤での処置を受けている患者に対するＣｌｅｃ９Ａ結合物質の投与に関する。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、およびＣＴＬＡ−４（本明細書に記載の抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−Ｌ２、および抗ＣＴＬＡ−４物質のいずれかを含む）の１種または複数を標的とする物質である。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ニボルバム（ＯＮＯ−４５３８／ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、オプジーボ、ＢＲＩＳＴＯＬ  ＭＹＥＲＳ  ＳＱＵＩＢＢ）、ペムブロリズマブ（キイトルーダ、ＭＥＲＣＫ）、ピディリズマブ（ＣＴ−０１１，ＣＵＲＥ  ＴＥＣＨ）、ＭＫ−３４７５（ＭＥＲＣＫ）、ＢＭＳ９３６５５９（ＢＲＩＳＴＯＬ  ＭＹＥＲＳ  ＳＱＵＩＢＢ）、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ（ＲＯＣＨＥ）、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０、ＭＤＸ−１０１、ヤーボイ、ＢＭＳ）およびトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）の１種または複数である。ある実施形態では、チェックポイント阻害剤はＰＤ−Ｌ１に対する抗体である。
【０２９８】
例示的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と共投与されると、相乗的に作用する。例示的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、腫瘍または癌の処置での使用において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と共投与されると相乗的に作用する。例えば、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質と抗ＰＤ−Ｌ１抗体との共投与は、相乗的に作用して、腫瘍または癌を低減または除去し得、または腫瘍または癌の増殖および／または進行および／または転移を遅らせ得る。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質と抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせは、単剤療法において単独で使用される物質に比べて、改善された安全性プロファイルを示し得る。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質および抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、その物質が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、変異ＩＦＮαなどの変異インターフェロンを含む。例示的実施形態では、変異ＩＦＮαは、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａなど、配列番号８６または配列番号８７に関連して位置１４８、１４９、および１５３で１個または複数の変異を含む。
【０２９９】
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質および免疫抑制剤を用いる併用療法に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫抑制剤での処置を受けている患者に対するＣｌｅｃ９Ａ結合物質の投与に関する。ある実施形態では、免疫抑制剤は、ＴＮＦである。
【０３００】
例示的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＴＮＦと共投与されると、相乗的に作用する。例示的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、腫瘍または癌の処置での使用において、ＴＮＦと共投与されると相乗的に作用する。例えば、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質とＴＮＦとの共投与は、相乗的に作用して、腫瘍または癌を低減または除去し得、または腫瘍または癌の増殖および／または進行および／または転移を遅らせ得る。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質とＴＮＦの組み合わせは、単剤療法において単独で使用される物質に比べて、改善された安全性プロファイルを示し得る。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質およびＴＮＦは、その物質が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、変異ＩＦＮαなどの変異インターフェロンを含む。例示的実施形態では、変異ＩＦＮαは、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａなど、配列番号８６または配列番号８７に関連して位置１４８、１４９、および１５３で１個または複数の変異を含む。
【０３０１】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると、相乗的に作用する。例示的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、腫瘍または癌の処置において、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると相乗的に作用する。例示的実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、血液系腫瘍の処置において、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると相乗的に作用する。ある実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、固形腫瘍の処置において、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると相乗的に作用する。例えば、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質とＣＡＲ  Ｔ細胞との使用は、相乗的に作用して、腫瘍または癌を低減または除去し得、または腫瘍または癌の増殖および／または進行および／または転移を遅らせ得る。種々の実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＣＡＲ  Ｔ細胞分裂を誘導する。種々の実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＣＡＲ  Ｔ細胞増殖を誘導する。種々の実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＣＡＲ  Ｔ細胞増のアナジーを防止する。
【０３０２】
種々の実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法は、抗原（例えば、腫瘍抗原）、例えば、限定されないが、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、５Ｔ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４７、ＣＳ１、ＣＤ１３８、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、Ｌ１−ＣＡＭ、ＭＵＣ１６、ＲＯＲ−１、ＩＬ１３Ｒα２、ｇｐ１００、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ヒトパピローマタイプ１６  Ｅ６（ＨＰＶ−１６  Ｅ６）、ＣＤ１７１、葉酸受容体アルファ（ＦＲα）、ＧＤ２、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、および血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦ２）、ならびに当該技術分野において周知の他の腫瘍抗原を標的とするＣＡＲ  Ｔ細胞を含む。追加の腫瘍抗原の例としては、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連性抗原（ＣＲＣ）−００１７−１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児抗原（ＣＥＡ）およびその免疫原性エピトープＣＡＰ−１およびＣＡＰ−２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）およびその免疫原性エピトープＰＳＡ−１、ＰＳＡ−２、およびＰＳＡ−３、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３−ゼータ鎖、ＭＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｃ４、ＭＡＧＥ−Ｃ５）、ＧＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＧＡＧＥ−９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、ＮＡＧ、ＧｎＴ−Ｖ、ＭＵＭ−１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α−フェトプロテイン、Ｅ−カドヘリン、α−カテニン、β−カテニンおよびγ−カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００  Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇ−イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質などのウイルス産物、Ｓｍａｄファミリーの腫瘍抗原、ｌｍｐ−１、ＮＡ、ＥＢＶ−コード化核内抗原（ＥＢＮＡ）−１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−１  ＣＴ−７、ｃ−ｅｒｂＢ−２、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＡＧＳ１６、ＭＵＣ１、ＧＰＮＭＢ、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＰＤ−Ｌ１、およびＰＤ−Ｌ２が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３０３】
例示的ＣＡＲ  Ｔ細胞療法としては、ＪＣＡＲ０１４（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０１５（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０１７（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０１８（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０２０（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０２３（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０２４（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＣＴＬ０１９（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＫＴＥ−Ｃ１９（Ｋｉｔｅ  Ｐｈａｒｍａ）、ＢＰＸ−４０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＰＸ−５０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＰＸ−６０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ｂｂ２１２１（Ｂｌｕｅｂｉｒｄ  Ｂｉｏ）、ＣＤ−１９  Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ（眠れる森の美女）細胞（Ｚｉｏｐｈａｒｍ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、ＵＣＡＲＴ１９（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＵＣＡＲＴ１２３（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＵＣＡＲＴ３８（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＵＣＡＲＴＣＳ１（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＯＸＢ−３０２（Ｏｘｆｏｒｄ  ＢｉｏＭｅｄｉｃａ、ＭＢ−１０１（Ｍｕｓｔａｎｇ  Ｂｉｏ）およびＩｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓにより開発されたＣＡＲ  Ｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、限定されないが、３−インターフェロン、酢酸グラチラマー、Ｔ−インターフェロン、ＩＦＮβ２（米国特許出願公開第２００２／００２５３０４号）、スピロゲルマニウム（例えば、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル−２−アザ−８，８−ジメチル−８−ゲルマスピロ［４：５］デカン、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル−２−アザ−８，８−ジエチル−８−ゲルマスピロ［４：５］デカン、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル−２−アザ−８，８−ジプロピル−８−ゲルマスピロ［４：５］デカン、およびＮ−（３−ジメチルアミノプロピル−２−アザ−８，８−ジブチル−８−ゲルマスピロ［４：５］デカン）、ビタミンＤ類似体（例えば、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３、（例えば、米国特許第５，７１６，９４６号を参照））、プロスタグランジン（例えば、ラタノプロスト、ブリモニジン、ＰＧＥ１、ＰＧＥ２およびＰＧＥ３、例えば、米国特許出願公開第２００２／０００４５２５号を参照）、テトラサイクリンと誘導体（例えば、ミノサイクリンおよびドキシサイクリン、例えば、米国特許出願公開第２００２／００２２６０８号を参照）、ＶＬＡ−４結合抗体（例えば、米国特許出願公開第２００９／０２０２５２７号を参照）、副腎皮質刺激ホルモン、副腎皮質ステロイド、プレドニゾン、メチルプレドニソン、２−クロロデオキシアデノシン、ミトキサントロン、スルファサラジン、メトトレキセート、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、フマレート、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）、および  チザニジン塩酸塩を含むＭＳ治療薬の１種または複数と組み合わせて多発性硬化症（ＭＳ）を処置する方法で使用される。
【０３０５】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＭＳの１つまたは複数の症状または副作用を処置する１種または複数の治療薬と組み合わせて使用される。このような薬剤としては、アマンタジン、バクロフェン、パパベリン、メクリジン、ヒドロキシジン、スルファメトキサゾール、シプロフロキサシン、ドクセート、ペモリン、ダントロレン、デスモプレシン、デキサメタゾン、トルテロジン、フェニトイン（ｐｈｅｎｙｌｏｉｎ）、オキシブチニン、ビサコジル、ベンラファキシン、アミトリプチリン、メテナミン、クロナゼパム、イソニアジド、バルデナフィル、ニトロフラントイン、車前子親水性粘漿薬、アルプロスタジル、ガバペンチン、ノルトリプチリン、パロキセチン、プロパンテリンブロミド、モダフィニル、フルオキセチン、フェナゾピリジン、メチルプレドニゾロン、カルバマゼピン、イミプラミン、ジアゼパム、シルデナフィル、ブプロピオン、およびセルトラリンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３０６】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、１種または複数の本明細書に記載の疾患修飾治療薬（ＤＭＴ）（例えば、表Ａの物質）と組み合わせて多発性硬化症を処置する方法で使用される。いくつかの実施形態では、本発明は、１種または複数の開示結合物質を含まない１個または複数の本明細書に記載のＤＭＴ（例えば、下表に挙げた物質）の使用と比べて、改善された治療効果を提供する。ある実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質と１種または複数のＤＭＴの組み合わせは、相乗的治療効果をもたらす。
【表１】
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【０３０７】
ＭＳ疾患進行は、疾患進行の最初期段階で、最も激しく、最も多くの損害を与える得る。したがって、例えば、コストと副作用緩和を考慮した多くの償還方針および医療業務とは逆に、例えば、いわゆる二次治療として、最も強力なＤＭＴを用いて処置を開始することが患者の長期疾患状態にとって最も有益である可能性がある。いくつかの実施形態では、患者は二次治療と組み合わせたＣｌｅｃ９Ａ結合物質の投与計画により処置される。このような組み合わせを用いて、１種または複数の二次治療の副作用プロファイルを低減する。いくつかの実施形態では、この組み合わせを用いて、１種または複数の二次治療の投与頻度用量を低減する。例えば、組み合わせの場合、上記表に列挙された物質の用量を、約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２５％低減し得、および／または投与頻度を通常の半分、または通常の１／３に、または例えば、毎日から隔日もしくは毎週に、隔日から毎週もしくは２週毎に、毎週から２週毎もしくは毎月に、等々減らし得る。したがって、いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、より都合のよい治療計画を可能にすることにより、患者のアドヒアランスを高める。さらに、いくつかのＤＭＴは示唆される生涯投与量限度を有し、例えばミトキサントロンについては生涯累積投与量は１４０ｍｇ／ｍ２、または２、３年の治療に厳密に制限されるべきである。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質の補充は、このＤＭＴのより低い用量またはより少ない頻度の投与を可能にすることにより、患者がミトキサントロンを利用する機会を維持する。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、患者は、１種または複数のＤＭＴでの処置を受けていない未処置の患者であり、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質が二次治療の副作用を和らげるために使用される。したがって、未処置患者は、疾患の発生時に、二次治療の長期間の効果から利益を得られる。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、二次治療の使用の前のエントリー治療として使用される。例えば、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質が、最初の約３ヶ月の処置期間投与されて疾患を安定化させ、その後患者は二次薬剤の維持療法に移行され得る。
【０３０９】
未処置患者は、１種または複数のＤＭＴを受け、かつおそらく失敗した患者に比べて、治療に応答する可能性が大きいと一般に考えられる。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９ａ結合物質は、１種または複数のＤＭＴを受け、かつおそらく失敗した患者に使用される。例えば、いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、１種または複数のＤＭＴを受け、かつおそらく失敗した患者の治療効果を高め、これらの患者が未処置患者のように応答することを可能にし得る。
【０３１０】
いくつかの実施形態では、患者は１種または複数のＤＭＴを受けたことがあるか受けているが、十分に応答していない。例えば、患者は１種または複数のＤＭＴに対し、不応性であるか、または不十分に応答し得る。いくつかの実施形態では、患者は、（ＡＵＢＡＧＩＯ（ＧＥＮＺＹＭＥ））；テリフルノミド（ＡＵＢＡＧＩＯ（ＧＥＮＺＹＭＥ））；インターフェロンβ１ａ（ＡＶＯＮＥＸ（ＢＩＯＧＥＮ  ＩＤＥＣ）；インターフェロンβ１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（ＢＡＹＥＲ  ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ，ＩＮＣ．）；酢酸グラチラマー（ＣＯＰＡＸＯＮＥ（ＴＥＶＡ  ＮＥＵＲＯＳＣＩＥＮＣＥ）；インターフェロンβ１ｂ（ＥＸＴＡＶＩＡ（ＮＯＶＡＲＴＩＳ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ  ＣＯＲＰ．）；フィンゴリモド（ＧＩＬＥＮＹＡ（ＮＯＶＡＲＴＩＳ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ  ＣＯＲＰ．）；アレムツズマブ（ＬＥＭＴＲＡＤＡ（ＧＥＮＺＹＭＥ）；ミトキサントロン（ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（ＥＭＤ  ＳＥＲＯＮＯ）；ペグ化インターフェロンβ１ａ（ＰＬＥＧＲＩＤＹ（ＢＩＯＧＥＮ  ＩＤＥＣ）；インターフェロンβ１ａ（ＲＥＢＩＦ（ＥＭＤ  ＳＥＲＯＮＯ，ＩＮＣ．）；フマル酸ジメチル（ＢＧ−１２）（ＴＥＣＦＩＤＥＲＡ（ＢＩＯＧＥＮ  ＩＤＥＣ）；およびナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（ＢＩＯＧＥＮ  ＩＤＥＣ）の内の１種または複数に対し、不応性であるか、または不十分に応答する。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、患者における１種または複数のＤＭＴの治療効果をもたらし、したがってＤＭＴに対する非応答性を低減または除去する。例えば、これは、より高い用量または頻度での１種または複数のＤＭＴを用いる治療から患者を免れさせ得る。
【０３１１】
より攻撃的な疾患の患者では、１つの手法は、誘導治療モデルであり、この場合、強力な効力があるが強い安全性の懸念のある治療を最初に投与し、続いて、維持療法を行う。このようなモデルの例は、アレムツズマブによる最初の処置に続く、ＩＦＮβ、ＧＡ、またはＢＧ−１２による処置を含む。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質を用いて、療法を維持療法に切り替える必要性をなくす。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質を、二次治療を含む、１種または複数のＤＭＴに対する維持療法として用いる。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質を、例えば、一次治療などの、誘導療法での最初の治療として用い、維持療法として別のＤＭＴが続く。
【０３１２】
いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、約３ヶ月の初期処置期間の間投与されて疾患を安定させ、その後患者を一次治療薬による維持療法に移行し得る。
【０３１３】
種々の実施形態では、１種または複数の開示結合物質を用いて、限定されないが、本明細書で開示のいずれかの物質を含む、ＤＭＴの１種または複数の副作用を低減する。例えば、１個または複数の開示結合物質は、１種または複数のＤＭＴの用量節約を可能にしかつ、したがって、より少ない副作用をもたらす投与計画において使用され得る。例えば、いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、ＡＵＢＡＧＩＯまたは関連物質の１種または複数の副作用を低減させ得る。この副作用は、毛髪菲薄化、下痢、インフルエンザ、悪心、肝臓検査異常および手または足の異常な痺れまたは刺痛（知覚異常）、白血球のレベル（感染症のリスクを増大させる可能性がある）；血圧の増大；および重篤な肝障害を含み得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、注射後のインフルエンザ様症状、うつ、軽度の貧血、肝障害、アレルギー反応、および心臓障害を含むＡＶＯＮＥＸまたは関連物質の１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、注射後のインフルエンザ様症状、注射部位反応、アレルギー反応、うつ、肝障害、および低白血球数を含むＢＥＴＡＳＥＲＯＮまたは関連物質の１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、注射部位反応、血管拡張（血管の拡張）；胸部痛；不安症、胸部痛、動悸、息切れ、および顔面紅潮を含む注射直後の反応を含むＣＯＰＡＸＯＮＥまたは関連物質の１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、注射後のインフルエンザ様症状、注射部位反応、アレルギー反応、うつ、肝障害、および低白血球数を含むＥＸＴＡＶＩＡまたは関連物質の１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、頭痛、インフルエンザ、下痢、背部痛、肝臓酵素上昇、咳、最初の投与後の遅い心拍数、感染症、および眼の膨潤を含むＧＩＬＥＮＹＡまたは関連物質の１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、発疹、頭痛、発熱、鼻詰まり、悪心、尿路感染症、疲労、不眠、上気道感染症、じん麻疹、そう痒、甲状腺障害、真菌感染、関節、四肢および背中の痛み、下痢、嘔吐、顔面紅潮、および輸注反応（悪心、じん麻疹、そう痒、不眠、悪寒、顔面紅潮、疲労、息切れ、味覚の変化、消化障害、眩暈、疼痛を含む）を含むＬＥＭＴＲＡＤＡまたは関連物質の１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、投与の２４時間後の緑色尿；感染症、骨髄抑制（疲労、紫斑、低血液細胞数）、悪心、毛髪菲薄化、膀胱感染症、口のびらん、および深刻な肝障害および心臓障害を含むノバントロンまたは関連物質の１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、注射後のインフルエンザ様症状、注射部位反応、うつ、軽度の貧血、肝障害、アレルギー反応、および心臓障害を含むＰＬＥＧＲＩＤＹまたは関連物質の１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、注射後のインフルエンザ様症状、注射部位反応、うつ、アレルギー反応、および低赤血球数または低白血球数を含むＲＥＢＩＦまたは関連物質の１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、顔面紅潮（熱またはそう痒の感覚、皮膚の紅潮）、消化管障害（悪心、下痢、腹痛）、発疹、尿中タンパク、肝酵素の上昇；および血中のリンパ球（白血球）数の減少を含むＴＥＣＦＩＤＥＲＡまたは関連物質の１種または複数の副作用を低減し得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示結合物質は、頭痛、疲労、尿路感染症、うつ、気道感染症、関節痛、胃もたれ、腹部不快感、下痢、腟炎、腕または脚部痛、発疹、輸注の２時間以内のアレルギー性反応または過敏症反応（眩暈、発熱、発疹、そう痒、悪心、顔面紅潮、低血圧、呼吸困難、胸部痛）を含むＴＹＳＡＢＲＩまたは関連物質の１種または複数の副作用を低減し得る。
【０３１４】
いくつかの実施形態では、本発明は、国際公開第２０１３／１０７７９号、国際公開第２０１５／００７５３６号、国際公開第２０１５／００７５２０号、国際公開第２０１５／００７５４２号、および国際公開第２０１５／００７９０３号に記載の１種または複数のキメラ物質との併用療法に関する。これらの特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０３１５】
限定されないが、感染症適用を含む、いくつかの実施形態では、本発明は、追加の治療薬としての抗感染薬に関する。いくつかの実施形態では、抗感染薬は抗ウイルス薬であり、限定されないが、アバカビル、アシクロビル、アデホビル、アンプレナビル、アタザナビル、シドフォヴィル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エファビレンツ、エルビテグラビル、エムトリシタビン、エンフビルチド、エトラビリン、ファムシクロビル、およびホスカルネットを含む。いくつかの実施形態では、治療薬は抗菌剤であり、限定されないが、セファロスポリン系抗生物質（セファレキシン、セフロキシム、セファドロキシル、セファゾリン、セファロチン、セファクロール、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、およびセフトビプロール）；フルオロキノロン系抗生物質（シプロ、レヴァキン、フロキシン、テクイン、アベロックスおよびノルフロックス）；テトラサイクリン系抗生物質（テトラサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、およびドキシサイクリン）；ペニシリン系抗生物質（アモキシシリン、アンピシリン、ペニシリンＶ、ジクロキサシリン、カルベニシリン、バンコマイシン、およびメチシリン）；モノバクタム系抗生物質（アズトレオナム）；およびカルバペネム系抗生物質（エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、およびメロペネム）を含む。いくつかの実施形態では、抗感染薬は、抗マラリア薬（例えば、クロロキン、キニーネ、メフロキン、プリマキン、ドキシサイクリン、アーテメータ／ルメファントリン、アトバクオン／プログアニルおよびスルファドキシン／ピリメタミン）、メトロニダゾール、チニダゾール、イベルメクチン、パモ酸ピランテル、およびアルベンダゾールを含む。
【０３１６】
限定されないが、自己免疫疾患適用を含むいくつかの実施形態では、追加の治療薬は、免疫抑制剤である。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、ステロイド性抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤＳ）などの抗炎症剤である。ステロイド，特に副腎皮質ホルモン剤およびそれらの合成類似体は当該技術分野においてよく知られている。本発明で有用な副腎皮質ステロイドの例としては、ヒドロキシルトリアムシノロン、α−メチルデキサメタゾン、β−メチルβ−メタゾン、ベクロメタゾンジプロピオネート、β−メタゾンベンゾエート、β−メタゾンジプロピオネート、β−メタゾンバレレート、クロベタゾールバレレート、デソニド、デソキシメタゾン、デキサメタゾン、ジフロラソンジアセテート、ジフルコルトロンバレレート、フルアドレノロン、フルクロロロンアセトニド、フルメタゾンピバレート、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルコルチンブチルエステル、フルオコルトロン、フルプレドニデン（フルプレドニリデン）アセテート、フルランドレノロン、ハルシノニド、ヒドロコルチゾンアセテート、ヒドロコルチゾンブチレート、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロンアセトニド、コルチゾン、コルトドキソン、フルセトニド、フルドロコルチゾン、ジフルオロゾンジアセテート、フルラドレノロンアセトニド、メドリゾン、アムシナフェル、アムシナフィド、ベタメタゾンおよびその残りのエステル、クロロプレドニソン、クロコルテロン、クレシノロン、ジクロリゾン、ジフルプレドネート、フルクロロニド、フルニソリド、フルオロメタロン、フルペロロン、フルプレドニソロン、ヒドロコルチゾン、メプレドニゾン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ベクロメタゾンジプロピオネートが挙げられるが、これらに限定されない。本発明で使用してよい（ＮＳＡＩＤＳ）としては、限定されないが、サリチル酸、アセチルサリチル酸、サリチル酸メチル、グリコールサリチレート、サリチルアミド、ベンジル−２，５−ジアセトキシ安息香酸、イブプロフェン、スリンダク（ｆｕｌｉｎｄａｃ）、ナプロキセン、ケトプロフェン、エトフェナメート、フェニルブタゾン、およびインドメタシンが挙げられる。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、アルキル化剤、代謝拮抗物質（例えば、アザチオプリン、メトトレキセート）、細胞傷害性抗生物質、抗体（バシリキシマブ、ダクリズマブ、およびムロモナブ）、抗イムノフィリン剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、シロリムス）、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、ミコフェノレート、および小分子生物学的製剤（例えば、フィンゴリモド、ミリオシン）などの細胞分裂阻害薬であってよい。追加の抗炎症剤は、例えば、米国特許第４，５３７，７７６号に記載され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０３１７】
いくつかの実施形態では、本明細書で記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、修飾されている誘導体、すなわち、共有結合が組成物の活性を妨げないような組成物への任意のタイプの分子の共有結合により修飾されている誘導体を含む。例えば、限定するものではないが、誘導体は、特に、グリコシル化、脂質化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質切断、細胞リガンドまたはその他のタンパク質への結合、などにより修飾されている組成物を含む。多くの化学修飾のいずれかを、限定されないが、特異的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などを含む、既知の技術により行うことができる。
【０３１８】
さらに他の実施形態では、本明細書に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、例示的実施形態で、毒素、化学療法剤、放射性同位元素、およびアポトーシスまたは細胞死を引き起こす物質を含む細胞傷害薬をさらに含む。このような物質は、本明細書に記載の組成物に複合化され得る。
【０３１９】
本明細書で記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質はしたがって翻訳後修飾されて、化学リンカーなどのエフェクター部分、例えば蛍光染料、酵素、基質、生物発光物質、放射性物質、および化学発光部分などの検出可能な部分、または、例えばストレプトアビジン、アビジン、ビオチン、細胞毒、細胞傷害性薬、および放射性物質などの機能的部分を付加し得る。
【０３２０】
細胞傷害薬の例としては、メトトレキセート、アミノプテリン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン；アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ、クロラムブシル（ｔｈｉｏｅｐａ  ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、マイトマイシンＣ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、１−メチルニトロソウレア、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、メクロレタミン、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、シス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチンおよびカルボプラチン（パラプラチン））；アントラサイクリン（ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およびドキソルビシン（アドリアマイシン）、デトルビシン、カルミノマイシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロンおよびビサントレンを含む）；抗生物質（ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、カリチアマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ）を含む）；および有糸分裂阻害薬（ａｎｔｉｍｙｔｏｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）（例えば、ビンカアルカロイドビンカアルカロイド、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。他の細胞傷害薬としては、パクリタキセル（タキソール）、リシン、緑膿菌外毒素、ゲムシタビン、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、エトポシド、テノポシド、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン，１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、副腎皮質ステロイド、ミトタン（ｍｙｔｏｔａｎｅ）（Ｏ，Ｐ’−（ＤＤＤ））、インターフェロン、およびこれらの細胞傷害薬の混合物が挙げられる。
【０３２１】
さらなる細胞傷害薬としては、化学療法剤、例えば、カルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、カリチアマイシン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ、シクロホスファミド、ビンクリスチン、ブレオマイシン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニスト、プラチン、タキソール、イリノテカン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｙｔａｂｉｎｅ）、ロイコボリン、ステロイド類、シクロホスファミド、メルファラン、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビン）、ムスチン、チロシンキナーゼ阻害剤、放射線療法、性ホルモン拮抗薬、選択的アンドロゲン受容体調節薬、選択的エストロゲン受容体調節薬、ＰＤＧＦアンタゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ-１アンタゴニスト、インターロイキン（例えば、ＩＬ-１２またはＩＬ-２）、ＩＬ-１２Ｒアンタゴニスト、毒素複合化モノクローナル抗体、腫瘍抗原特異的モノクローナル抗体、アービタックス、アバスチン、ペルツズマブ、抗ＣＤ２０抗体、リツキサン、オクレリズマブ、オファツムマブ、ＤＸＬ６２５、ハーセプチン（登録商標）、またはこれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。リシン、ジフテリア毒素およびシュードモナス毒素などの植物および細菌由来の毒性酵素は、治療薬（例えば、抗体）と複合化されて、細胞型特異的殺作用剤を生成し得る（Ｙｏｕｌｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：５４８３（１９８０）；Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４５３９（１９８０）；Ｋｒｏｌｉｃｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：５４１９（１９８０））。
【０３２２】
他の細胞傷害薬としては、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇによる米国特許第６．６５３，１０４号に記載される細胞傷害性リボヌクレアーゼが挙げられる。本発明の実施形態はまた、放射性免疫複合体に関し、複合体形成剤を使用してまたは使用せずに、アルファまたはベータ粒子を放出する放射性核種がＣｌｅｃ９Ａ結合物質に安定に結合される。このような放射性核種は、リン−３２、スカンジウム−４７、銅−６７、ガリウム−６７、イットリウム−８８、イットリウム−９０、ヨウ素−１２５、ヨウ素−１３１、サマリウム−１５３、ルテチウム−１７７、レニウム−１８６またはレニウム−１８８などのベータエミッター、およびアスタチン−２１１、鉛−２１２、ビスマス−２１２、ビスマス−２１３またはアクチニウム−２２５などのアルファエミッターを含む。
【０３２３】
検出可能な部分の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、アルカリフォスファターゼ、ベータガラクトシダーゼおよびルシフェラーゼが挙げられるが、これらに限定されない。蛍光材料のさらなる例としては、ローダミン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ウンベリフェロン、ジクロロトリアジニルアミン、フィコエリトリンおよびダンシルクロリドが挙げられるが、これらに限定されない。化学発光部分のさらなる例としては、ルミノールが挙げられるが、これに限定されない。生物発光材料のさらなる例としては、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられるが、これらに限定されない。放射性材料のさらなる例としては、ヨウ素−１２５、炭素−１４、硫黄−３５、トリチウムおよびリン−３２が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３２４】
処置方法
本明細書に記載の方法および組成物は、限定されないが、癌、感染症、免疫異常、および炎症性疾患または状態を含む、種々の疾患および障害を処置する用途がある。
【０３２５】
さらに、本発明の物質は、限定されないが、癌、感染症、免疫異常、炎症性疾患または状態、および自己免疫疾患を含む、種々の疾患および障害の処置、または処置用の薬物の製造に使用し得る。
【０３２６】
いくつかの実施形態では、本発明は、癌の処置、または癌の患者に関する。本明細書で使用される場合、癌は、身体の器官およびシステムの正常な機能動作を妨害し得る何らかの制御されない細胞増殖を指し、原発性および転移性の腫瘍の両方を含む。原発性腫瘍またはそれらの元の位置から移動し重要な器官に播種する癌は、罹患した器官の機能劣化により対象の死を最終的にもたらす可能性がある。転移は、原発腫瘍部位とは異なる、癌細胞または一群の癌細胞であり、原発腫瘍から身体の他の部位への癌細胞の転移から生ずる。転移は、最終的に対象の死に繋がる場合がある。例えば、癌は、良性および悪性の癌、ポリープ、過形成、ならびに休眠腫瘍または微小転移を含み得る。
【０３２７】
処置され得る癌の例としては、基底細胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脳および中枢神経系癌；乳癌；腹膜の癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸および直腸癌；結合組織癌；消化器系の癌；子宮内膜癌；食道癌；眼癌；頭頸部の癌；胃癌（胃腸癌を含む）；神経膠芽腫；肝癌；ヘパトーマ；上皮内腫瘍；腎臓癌または腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｏｒ  ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）；喉頭癌；白血病；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）；黒色腫；骨髄腫；神経芽腫；口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸癌；呼吸器系癌；唾液腺癌腫；肉腫；皮膚癌；扁平上皮細胞癌；胃癌；精巣癌；甲状腺癌；子宮または子宮内膜癌；泌尿器系の癌；外陰癌；ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；エイズ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；毛様細胞性白血病；慢性骨髄芽球性白血病；ならびに他の癌腫および肉腫；および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群に関連する異常血管増殖が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３２８】
種々の実施形態では、本発明は、癌の処置のための改変シグナル伝達物質をさらに含むキメラの一部であるＣｌｅｃ９Ａ結合物質を提供する。いくつかの実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、腫瘍を大きく低減および／または除去する。いくつかの実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、化学療法剤、チェックポイント阻害剤、および免疫抑制剤などの他の抗癌剤と併せて対象に投与されると、腫瘍を大きく低減および／または除去する。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質と他の抗癌剤の組み合わせは、腫瘍サイズを相乗的に低減するおよび／または腫瘍細胞を除去する。
【０３２９】
種々の実施形態では、本発明は、１つまたは複数のターゲティング部分および１種または複数の改変シグナル伝達物質を含むキメラの一部であるＣｌｅｃ９Ａ結合物質を用いる癌併用療法に関する。したがって、本発明は、例えば、Ｃｌｅｃ９Ａに対するターゲティング部分および１種または複数のシグナル伝達物質を含むキメラタンパク質または融合タンパク質ならびに抗癌剤と組み合わせたその使用を提供する。
【０３３０】
例えば、種々の実施形態では、本発明は、限定されないが、本明細書に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質と、ヒトインターフェロンアルファ２を含むＩＦＮアルファなどの変異ヒトインターフェロンを含む改変シグナル伝達物質とのキメラを含む癌の併用療法剤に関する。
【０３３１】
他の実施形態では、本発明のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、複数のターゲティング部分を含みしたがって二重特異性または三重特異性フォーマットで存在するキメラの一部である。例えば、種々の実施形態では、本発明は、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質と、本明細書に記載のチェックポイント阻害剤結合物質（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ２、または抗ＣＴＬＡ）、および限定されないが、ヒトインターフェロンアルファ２を含むＩＦＮアルファなどの変異ヒトインターフェロンを含む改変シグナル伝達物質と、を含む癌のための併用療法剤に関する。
【０３３２】
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１個または複数のその受容体に対する低減された親和性または活性を有するように改変され、それはキメラタンパク質の活性（アゴニズムまたはアンタゴニズムを含む）の減弱化を可能にし、および／または非特異的シグナル伝達または望ましくない隔離を防止する。いくつかの実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、本明細書に記載の１つまたは複数のターゲティング部分の結合により回復可能である。
【０３３３】
いくつかの実施形態では、本発明は、微生物感染症および／または慢性感染症の処置、またはそれらの感染症を罹患している患者に関する。感染症の例としては、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、結核、骨髄炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、エプスタイン・バールウイルスまたはパルボウイルス感染症、Ｔ細胞白血病ウイルス感染症、細菌過剰症候群、真菌または寄生虫感染症が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３３４】
種々の実施形態では、本発明の組成物は、炎症、急性炎症、慢性炎症、呼吸器疾患、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、敗血性ショック、関節リウマチ、炎症性腸疾患、炎症性骨盤疾患、痛み、眼の炎症性疾患、セリアック病、リー症候群、グリセロールキナーゼ欠損症、家族性好酸球増加症（ＦＥ）、常染色体劣性遺伝性脊髄小脳変性症、炎症性喉頭疾患；結核、慢性胆嚢炎、気管支拡張症、珪肺症および他の塵肺症などの１種または複数の炎症性疾患または状態を処置するまたは予防するために使用される。
【０３３５】
種々の実施形態では、本発明は、自己免疫疾患および／または神経変性疾患を処置する用途を有する。
【０３３６】
種々の実施形態では、本発明の組成物は、１種または複数の望ましくないＣＴＬ活性を特徴とする状態、および／または高レベルの細胞死を特徴とする状態を処置するまたは予防するために使用される。例えば、種々の実施形態では、本発明の組成物は、１種または複数の無制御または過敏性の免疫応答に関連する状態を処置するまたは予防するために使用される。
【０３３７】
種々の実施形態では、本発明の組成物は、ＭＳ、糖尿病、ループス、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ギラン・バレー症候群、強皮症、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、自己免疫性てんかん、ラスムッセン脳炎、原発性硬化性胆管炎、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、アジソン病、橋本甲状腺炎、線維筋痛症、メニエール症候群（Ｍｅｎｉｅｒ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、移植拒絶反応（例えば、移植片拒絶の防止）、悪性貧血、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、紅斑性狼瘡、重症筋無力症、ライター症候群、グレーブス病、および他の自己免疫疾患などの、１種または複数の自己免疫疾患および／または神経変性疾患または状態を処置するまたは予防するために使用される。
【０３３８】
種々の実施形態では、本発明は、自己免疫疾患および／または神経変性疾患を処置するまたは予防するために用いられる。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患および／または神経変性疾患は、ＭＳ（限定されないが、本明細書に記載のサブタイプを含む）、アルツハイマー病（限定されないが、早期発症型アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、および家族性アルツハイマー病（ＦＡＤ）を含む）、パーキンソン病およびパーキンソニズム（限定されないが、特発性パーキンソン病、脳血管性パーキンソニズム、薬剤誘発性パーキンソニズム、レヴィー小体型痴呆、遺伝性パーキンソン病、若年性パーキンソン病を含む）、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、限定されないが、突発性ＡＬＳ、家族性ＡＬＳ、西太平洋ＡＬＳ、若年性ＡＬＳ、平山病（Ｈｉｒａｙａｍａ  ｄｉｓｅａｓｅ））から選択される。
【０３３９】
種々の実施形態では、本発明は、ＭＳの処置または予防するために用いられる。種々の実施形態では、本明細書に記載のＣｌｅｃ９ａ結合物質は、複数のＭＳ症状を除去または低減するために用いられる。本明細書に記載の組成物および方法で予防または処置できる多発性硬化症に関連する症状の例は、視神経炎、複視、眼振、眼球運動測定異常、核間性眼筋麻痺、運動眼閃および音眼閃、求心性瞳孔障害、不全麻痺、単不全麻痺、不全対麻痺、不全片麻痺、四肢不全麻痺、麻痺、対麻痺、半身麻痺、四肢麻痺、四肢不全麻痺（ｑｕａｄｒｉｐｌｅｇｉａ）、痙縮、構音障害、筋萎縮症、痙攣、筋痙攣、筋緊張低下、クローヌス、間代性筋痙攣、ミオキミア、不隠脚症候群、下垂足、反射機能不全、錯感覚、麻酔、神経痛、神経障害性および神経性疼痛、レルミット徴候、固有受容機能不全、三叉神経痛、運動失調、企図振戦、測定異常、前庭性運動失調、めまい、発語運動失調、ジストニア、拮抗運動反復障害、頻尿、膀胱痙性、弛緩性膀胱、排尿筋・括約筋筋失症、勃起不全、無オルガスム症、不感症、便秘、便意切迫、便失禁、うつ、認知障害、認知症、気分変動、情緒不安定、多幸感、双極症候群、不安症、失語症、言語障害、疲労、ウートホフ徴候、胃食道逆流症、および就眠障害を含む。本明細書に記載の１種または複数の物質により、対象におけるこれらの症状の１種または複数の緩和または改善を実現できる。
【０３４０】
種々の実施形態では、本明細書に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、最初のエピソードからなる症候群（ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）（ＣＩＳ）を処置または予防するために用いられる。最初のエピソードからなる症候群（ＣＩＳ）は、視神経炎、脳幹症状、および部分的な脊髄炎などの、ＭＳと合致する単一症状の発作である。第２の臨床的発作を経験するＣＩＳの患者は通常、臨床的に確実な多発性硬化症（ＣＤＭＳ）であると見なされる。ＣＩＳおよびＭＲＩ病変を有する患者の８０％超がＭＳを発病し、約２０％は自己限定プロセスを有する。ＭＳに適合する単一の臨床的発作を経験する患者は、臨床的に確実な多発性硬化症の発作の前に、多発性硬化症に合致する少なくとも１つの病変を有し得る。種々の実施形態では、本明細書中に記載するＣｌｅｃ９ａ結合物質は、ＣＩＳが、例えばＲＲＭＳを含むＭＳに進行しないよう、ＣＩＳの処置に使用される。
【０３４１】
種々の実施形態では、本明細書に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、ｒａｄｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＲＩＳ）を処置または予防するために用いられる。ＲＩＳでは、偶然の画像診察所見が、臨床的徴候または症状の非存在下の炎症性脱髄を示唆する。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＲＩＳが、例えば、ＲＲＭＳを含むＭＳに進行しないよう、ＲＩＳの処置に使用される。
【０３４２】
種々の実施形態では、本明細書に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、良性多発性硬化症；再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）；二次性進行型多発性硬化症（ＳＰＭＳ）；進行性再発型多発性硬化症（ＰＲＭＳ）；および一次性進行型多発性硬化症（ＰＰＭＳ）の１種または複数を処置するために用いられる。
【０３４３】
良性多発性硬化症は、レトロスペクティブな診断であり、１〜２回の増悪と完全な回復、継続しない能力障害および最初の発症後１０〜１５年の間の無疾患進行を特徴とする。しかし、良性多発性硬化症は、他の型の多発性硬化症に進行する可能性がある。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９ａ結合物質は、良性多発性硬化症がＭＳに進行しないように良性多発性硬化症の処置に使用される。
【０３４４】
ＲＲＭＳに罹患している患者は、散発性増悪または再発、ならびに寛解期間を経験する。病変および軸索喪失の証拠は、ＲＲＭＳの患者のＭＲＩで見える場合も見えない場合もある。種々の実施形態では、本明細書に記載のＣｌｅｃ９ａ結合物質は、ＲＲＭＳを処置するために使用される。いくつかの実施形態では、ＲＲＭＳは、ＲＲＭＳの患者；ＳＰＭＳの患者で再発が重畳している患者；およびＣＩＳの患者で、その後のＭＲＩスキャンでＭｃＤｏｎａｌｄ基準に従い病変の多発を示す患者を含む。本明細書で「再発」、「確定再発」、または「臨床的確定再発（ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ  ｄｅｆｉｎｅｄ  ｒｅｌａｐｓｅ）」として使用してもよい臨床的再発は、１種または複数の新しい神経学的異常の出現または１種または複数の以前に観察された神経学的異常の再出現である。臨床状態のこの変化は、少なくとも４８時間持続しなければならず、少なくとも３０日間の比較的安定なまたは改善されている神経学的状態が直前になければならない。いくつかの実施形態では、対象の症状に、以前の評価に比べて総合障害度評価尺度（ＥＤＳＳ）スコアでの少なくとも１．００または７つのＦＳの２以上のスコアでの１グレードまたはＦＳの１つのスコアの２グレードの増加に一致する、観察される客観的な神経学的変化が付随する場合、あるイベントは再発としてカウントされる。
【０３４５】
ＳＰＭＳは、ＲＲＭＳから進化し得る。ＳＰＭＳに罹患している患者は、再発を有し、寛解中の回復の減少した程度、ＲＲＭＳ患者より頻度が低い寛解およびより顕著な神経障害を有する。脳梁、正中中枢および脊髄の萎縮のマーカーである脳室拡大が、ＳＰＭＳの患者のＭＲＩで認められる。種々の実施形態では、本明細書に記載のＣｌｅｃ９ａ結合物質は、ＲＲＭＳがＳＰＭＳに進行しないようＲＲＭＳを処置するために使用される。
【０３４６】
ＰＰＭＳは、明確な発作または寛解なしに増大する神経障害の着実な進行を特徴とする。脳病変、びまん性脊髄損傷および軸索喪失の証拠が、ＰＰＭＳの患者のＭＲＩで明白である。ＰＰＭＳは急性増悪の期間を有し、一方で、寛解することなく増大する神経障害の過程に沿って進行する。病変は、ＰＲＭＳを罹患している患者のＭＲＩで明らかである。種々の実施形態では、本明細書に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＲＲＭＳおよび／またはＳＰＭＳがＰＰＭＳに進行しないようにそれらを処置するために使用される。
【０３４７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、再発型のＭＳの処置の方法で使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣｌｅｃ９Ａ結合物質は、身体障害の蓄積を遅らせおよび／または臨床的増悪の頻度を低減させるために再発型のＭＳの処置の方法で使用され、かつ、任意に、最初の臨床的発症を経験しかつＭＳに合致するＭＲＩの特徴を有する患者に対して使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣｌｅｃ９ａ結合物質は、神経障害および／または臨床的増悪の頻度を低減するために、悪化する再発寛解型ＭＳ、進行再発型ＭＳまたは二次性進行型ＭＳの処置の方法で使用される。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、再発の頻度および／または重症度を低減する。
【０３４８】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、１回、または２回、または３回、または４回、または５回、または６回、または７回、または８回、または９回、または１０回以上の疾患修飾治療（ＤＭＴ）に対し不適切な応答のあった患者における再発型のＭＳの処置の方法で使用される。
【０３４９】
種々の実施形態では、対象の症状は、ＥＤＳＳ、または再発の頻度の減少、または持続性進行までの時間の増加、または高頻度の連続的ＭＲＩ調査における磁気共鳴画像（ＭＲＩ）挙動の改善によりなど、定量的に評価され、患者の処置前後の状態測定値を比較し得る。成功した処置では、患者の状態は改善されるであろう（例えば、ＥＤＳＳ測定スコアまたは再発の頻度が減少する、または持続性進行までの時間が増加する、またはＭＲＩスキャンが病状の低下を示す）。
【０３５０】
いくつかの実施形態では、患者は、例えば、Ｃｌｅｃ９ａ結合物質を受ける前、その間またはその後で、例えば、応答性の指標について評価され得る。種々の臨床的または他の処置の有効性の指標、例えば、ＥＤＳＳスコア；ＭＲＩスキャン；再発数、比率、または重症度；多発性硬化症機能評価（ＭＳＦＣ）；多発性硬化症の生活の質質問票（ＭＳＱＬＩ）；連続聞き取り加算検査（ＰＡＳＡＴ）；符号数字モダリティー検査（ＳＤＭＴ）；２５フィートの歩行試験；９ホールペグ試験；低コントラスト視力；修正疲労重症度スケール；総合障害度評価スコア（ＥＤＳＳ）；多発性硬化症機能評価（ＭＳＦＣ）；ベックうつ病質問票；および７／２４空間認知検査を使用できる。種々の実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、これらの尺度の１つまたは複数で改善をもたらす。さらに、患者は、投与計画中の様々な時間でモニターされ得る。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９ａ結合物質は、空間的、時間的ＭｃＤｏｎａｌｄ播種により評価される、疾患の改善をもたらす。例えば、空間的播種に関しては、病変イメージング、例えば、実例として、Ｂａｒｋｈｏｆ−ＴｉｎｔｏｒｅのＭＲＩ基準、を使用してよく、ガドリニウム強調病変または９  Ｔ２高信号病変；少なくとも１つのテント下病変；少なくとも１つの傍骨性病変；少なくとも約３個の脳室周囲病変；および脊髄病変を含む。時間的播種に関しても、ＭＲＩを使用でき；例えば、最初の臨床的イベント後３ヶ月以上で実施された脳のＭＲＩスキャンが新しいガドリニウム強調病変を示す場合、これは新規ＣＮＳ炎症性のイベントを示す可能性があり、理由は、ＭＳのガドリニウム強調期間は通常、６週間未満であるためである。ガドリニウム強調病変はないが新しいＴ２病変が存在する場合（最初のイベントの時のＭＲＩを仮定して）、新しいＴ２病変またはガドリニウム強調病変を実証する３ヶ月後の反復ＭＲイメージングが必要となり得る。
【０３５１】
いくつかの実施形態では、疾患効果は、Ｌａｖｅｒｙ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｖｏｌ  ２０１４（２０１４），Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ２６２３５０に記載されるいずれかの尺度を用いて評価され、この文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０３５２】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、（ａ）ＥＤＳＳでの１．０ポイントの劣化として定義される身体障害の悪化の防止、（ｂ）再発までの時間の増加、（ｃ）ガドリニウム強調病変の数および／または体積の低減または安定化、（ｄ）低下した年間再発率、（ｅ）増加した再発持続時間およびＮＲＳスコアによる重症度、（ｆ）ＭＲＩで測定される疾患活動性の低下（新規のまたは拡大する病変の年率）、（ｇ）１年間、または２年間でのより低い再発平均数、（ｈ）３ヶ月でのＥＤＳＳで測定される持続性の疾患進行、（ｉ）ＣＤＭＳへの移行の防止、（ｊ）新規のまたは増進するＴ２病変がない、またはわずか、（ｋ）高信号Ｔ２病変体積の最小限の変化、（ｌ）ＭｃＤｏｎａｌｄ定義のＭＳまでの延長された時間、（ｍ）１２週でのＥＤＳＳの持続性悪化により測定される身体障害の進行の防止、（ｎ）９６週での再発までの時間の短縮、および（ｏ）脳萎縮（例えば、ベースラインからの％変化）の低減または安定化、の１つまたは複数をもたらす。
【０３５３】
一実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質が投与され、処置の投与前の再発率に比べて（例えば、１２ヶ月、または１２ヶ月未満、例えば、約１０ヶ月、または約８ヶ月、または約４ヶ月、または約２ヶ月、またはそれ未満の月数の間の投与後の発生率と比較して）、または以前の再発後の３〜２４ヶ月（例えば、６〜８ヶ月、例えば、１２ヶ月）に測定した場合、処置の開始前と比べて、低下された再発率（例えば、少なくとも、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０またはそれを超える再発率の低下）を効果的に生ずる。
【０３５４】
一実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質が投与され、前処理状態からのＥＤＳＳスコアの増加の防止を効果的にもたらす。Ｋｕｒｔｚｋｅ総合障害度評価尺度（ＥＤＳＳ）は、多発性硬化症での身体障害を定量化する方法である。ＥＤＳＳは、ＭＳの人をより低い区分にまとめた以前の障害度評価尺度と置き換わった。ＥＤＳＳは、身体障害を８つの機能障害度（ＦＳ）で定量化し、神経学者が機能別障害度スコア（ＦＳＳ）をこれらのそれぞれに割り付けるのを可能にする。機能障害度は：錐体路機能、小脳機能、脳幹機能、感覚機能、膀胱直腸機能、視覚機能および脳機能である。
【０３５５】
一実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質が投与され、Ｃｌｅｃ９ａ結合物質の投与後のＥＤＳＳスコアに比較して（例えば、１２ヶ月または１２ヶ月未満に対し、例えば、１０、８、４またはそれ未満の月数に対し、または処置開始以前に対し）低減されたＥＤＳＳスコア（例えば、少なくとも３ヶ月、６ヶ月、１年、またはそれより長くにわたり、例えば、１、１．５、２、２．５、３ポイント以上の低減）を効果的にもたらす。
【０３５６】
一実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質が投与され、１２ヶ月または１２ヶ月未満の、例えば、１０、８、４ヶ月またはそれ未満の月数の間のＣｌｅｃ９Ａ結合物質の投与後の、または処置開始以前の新しい病変の数に比べて、低減された新しい病変全体の数または任意の１つの型の新しい病変の数（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％の低減）を効果的にもたらすさ。
【０３５７】
一実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質が投与され、１２ヶ月または１２ヶ月未満の、例えば、１０、８、４ヶ月またはそれ未満の月数の間のＣｌｅｃ９ａ結合物質の投与後の、または処置開始以前の病変の数に比べて、低減された病変全体の数または任意の１つの型の病変の数の低減（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％の低減）を効果的にもたらす。
【０３５８】
一実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質が投与され、１２ヶ月または１２ヶ月未満、例えば、１０、８、４ヶ月またはそれ未満の月数の間のＣｌｅｃ９ａ結合物質の投与後の、または処置開始以前の新しい病変の出現比率に比べて、低減された新しい病変全体の数またはいずれか１つの型の新しい病変の数の出現比率（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％の比率の低減）を効果的にもたらす。
【０３５９】
一実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質が投与され、１２ヶ月または１２ヶ月未満、例えば、１０、８、４ヶ月またはそれ未満の月数の間のＣｌｅｃ９ａ結合物質の投与後の、または処置開始以前の病変面積の増加に比べて、低減された病変面積全体またはいずれか１つの型の病変面積（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％の低減）を効果的にもたらす。
【０３６０】
一実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質が投与され、１２ヶ月または１２ヶ月未満、例えば、１０、８、４ヶ月またはそれ未満の月数の間のＣｌｅｃ９ａ結合物質の投与後の、または処置開始以前の視神経炎の発生率または症状に比べて、低減された視神経炎の発生率または症状（例えば、視力の改善）を効果的にもたらす。
【０３６１】
種々の実施形態では、本発明の方法は、ヒト対象の処置で有用である。いくつかの実施形態では、ヒトは小児科のヒトである。他の実施形態では、ヒトは成人のヒトである。他の実施形態では、ヒトは老人のヒトである。他の実施形態では、ヒトは患者と呼ばれることもある。いくつかの実施形態では、ヒトは女性である。いくつかの実施形態では、ヒトは男性である。
【０３６２】
特定の実施形態では、ヒトは、約１〜約１８ヶ月、約１８〜約３６ヶ月、約１〜約５才、約５〜約１０才、約１０〜約１５才、約１５〜約２０才、約２０〜約２５才、約２５〜約３０才、約３０〜約３５才、約３５〜約４０才、約４０〜約４５才、約４５〜約５０才、約５０〜約５５才、約５５〜約６０才、約６０〜約６５才、約６５〜約７０才、約７０〜約７５才、約７５〜約８０才、約８０〜約８５才、約８５〜約９０才、約９０〜約９５才または約９５〜約１００才の範囲の年齢である。種々の実施形態では、ヒトは３０才を超える年齢である。
【０３６３】
免疫調節
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、免疫調節ができる、または免疫調節の方法で使用される。例えば、種々の実施形態では、本発明の処置の方法は、本明細書に記載の免疫調節を含み得る。いくつかの実施形態では、免疫調節は、樹状細胞（ＤＣ）との関連で、改変ＩＦＮシグナル伝達を含む、ＩＦＮシグナル伝達を含む。
【０３６４】
種々の実施形態では、多重特異的Ｃｌｅｃ９ａ結合物質が提供される。いくつかの実施形態では、このような多重特異的Ｃｌｅｃ９ａ結合物質は、Ｃｌｅｃ９Ａおよび１個または複数の免疫細胞上で見出される１個または複数の抗原を認識しそれらに結合する。免疫細胞は、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞）、Ｂリンパ球、プラズマ細胞、樹状細胞、またはこれらのサブセットを含み得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、目的の抗原に特異的に結合し、１つまたは複数の免疫細胞を効果的に、直接または間接的にリクルートする。
【０３６５】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９ａ結合物質は、目的の抗原に特異的に結合し、１個または複数の免疫細胞を効果的に、直接または間接的にリクルートして、免疫抑制効果を生じさせる。例えば、Ｃｌｅｃ９ａ結合物質は免疫抑制性免疫細胞を直接的または間接的にリクルートする。いくつかの実施形態では、免疫抑制性免疫細胞は、制御性Ｔ細胞（または、本明細書で使用される場合、免疫系を調節し、自己免疫疾患を抑制し、自己抗原に対する寛容を維持し、抗腫瘍免疫応答を妨害するＴ細胞の亜集団を指す「Ｔｒｅｇ」）である。他の免疫抑制性免疫細胞としては、骨髄系サプレッサー細胞（または、本明細書で使用される場合、それらの骨髄起源、未成熟状態、およびＴ細胞応答を強力に抑制する能力により規定される、不均一細胞集団を指す「ＭＳＣ」）；腫瘍関連好中球（または、本明細書で使用される場合、免疫応答を抑制できる好中球サブセットを指す「ＴＡＮ」）；腫瘍関連マクロファージ（または、本明細書で使用される場合、免疫応答を低減させ得るマクロファージのサブセットを指す「ＴＡＭ」）、Ｍ２マクロファージ、および／または腫瘍誘導マスト細胞（本明細書で使用される場合、骨髄由来の長寿命不均一細胞集団のサブセットを指す）が挙げられる。また、免疫抑制性免疫細胞は、Ｔｈ２細胞およびＴｈ１７細胞を含む。さらに、免疫抑制性免疫細胞は、免疫細胞、例えば、１種または複数のチェックポイント阻害性受容体（例えば、無制御免疫応答を防止または抑制する免疫細胞上で発現される、ＣＴＬＡ−４、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＴＩＭ−３を含む、受容体）を発現する、ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞を含む。Ｓｔａｇｇ，Ｊ．ｅｔ．ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｉｎ  ｔｒｉｐｌｅ−ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅｒ  Ａｄｖ  Ｍｅｄ  Ｏｎｃｏｌ．（２０１３）５（３）：１６９−１８１）を参照されたい。
【０３６６】
いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９ａ結合物質は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）増殖を刺激する。Ｔｒｅｇ細胞は、Ｆｏｘｐ３（Ｆｏｒｋｈｅａｄ  ｂｏｘ  ｐ３）転写因子の発現を特徴とする。大部分のＴｒｅｇ細胞はＣＤ４＋およびＣＤ２５＋であり、ヘルパーＴ細胞のサブセットと見なすことができるが、小さい集団はＣＤ８＋の場合がある。したがって、本発明の方法により調節される免疫応答は、Ｔｒｅｇ細胞の、場合により抗原に応答した、増殖誘導を含み得る。したがって、方法は、対象に抗原を含む組成物を投与することを含み得、この場合、抗原はＣｌｅｃ９Ａに対する親和性を有する結合物質と組み合わせられる。抗原はＴｒｅｇ細胞の増殖を促進するアジュバントと共に投与されてよい。
【０３６７】
この方法が特異的抗原に応答してＴｒｅｇの増殖と分化を伴う限り、それは免疫応答を刺激する方法であると見なすことができる。しかし、Ｔｒｅｇが抗原に対する免疫系の他の細胞の応答を他の方法で、例えば、それらの活性を阻害または抑制することで調節できることを考慮すれば、全体としての免疫系に対する効果は、その抗原に対する応答を調節する（例えば、抑制または阻害する）ことであり得る。したがって、本発明のこの態様の方法は等しく、抗原に対する免疫応答を調節（例えば、阻害または抑制）する方法と呼ぶことができる。
【０３６８】
いくつかの実施形態では、方法は、その抗原に対する既存の免疫または進行中の免疫応答を有する対象においてであっても、特定の抗原に対する望ましくない免疫応答を治療的にまたは予防的に阻害または抑制する。これは、例えば、自己免疫疾患の処置で特に有用であり得る。
【０３６９】
ある種の条件下では、Ｃｌｅｃ９Ａを発現する抗原提示細胞に抗原を標的することにより、特定の抗原に対して対象を寛容化することも可能である。したがって、本発明は、対象において抗原に対する寛容を誘導するための方法を提供し、方法は、抗原を含む組成物を対象に投与することを含み、この場合、抗原はＣｌｅｃ９Ａに対する親和性を有する結合物質と組み合わせられ、その抗原はアジュバントの非存在下で投与される。この状況において、寛容は通常、免疫細胞の枯渇を伴い、その枯渇がなければ、この免疫細胞はその抗原に応答できる、またはこのような免疫細胞中での抗原に対する応答性の持続性低減を誘導できるはずである。
【０３７０】
それに対し対象が望ましくない免疫応答を示す、または生じる危険性のある抗原に対して、Ｔｒｅｇ応答を高めることは特に望ましいであろう。例えば、それは、自己免疫疾患においてそれに対し免疫応答が起こる自己抗原であり得る。潜在的に重要な病因して特定の抗原が特定されている自己免疫疾患の例としては、多発性硬化症（ミエリン塩基性タンパク質）、インスリン依存性糖尿病（グルタミン酸デカルボキシラーゼ）、インスリン耐性糖尿病（インスリン受容体）、セリアック病（グリアジン）、水疱性類天疱瘡（コラーゲンＸＶＩＩ型）、自己免疫性貧血（Ｒｈタンパク質）、自己免疫性血小板減少症（ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ）、重症筋無力症（ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ  ｇｒａｖｉｓ）（アセチルコリン受容体）、グレーブス病（甲状腺刺激ホルモン受容体）、グッドパスチャー病などの糸球体腎炎（アルファ３（ＩＶ）ＮＣ１コラーゲン）、および悪性貧血（内因子）が挙げられる。あるいは、標的抗原は、宿主組織にまた損害をもたらす応答を刺激する外来性抗原であってよい。例えば、急性リウマチ熱は、心筋細胞抗原と交差反応する連鎖球菌抗原に対する抗体応答により引き起こされる。したがって、これらの抗原、またはその特定のフラグメントまたはエピトープは、本発明での使用のために好適な抗原であり得る。
【０３７１】
いくつかの実施形態では、本発明の物質、またはこれらの物質を用いる方法は、例えば、そのリガンドへのＣｌｅｃ９Ａ結合を低減するまたは抑制することにより、Ｃｌｅｃ９Ａシグナル伝達を破壊する（例えば、Ｃｌｅｃ９Ａの中和を介して）。いくつかの自己免疫疾患は、異常な高レベルの細胞死を特徴とし、これらの細胞と関連する自己抗原に対する免疫応答がこれらの状態の発症に寄与すると考えられる。Ｃｌｅｃ９Ａアンタゴニストをしたがって使用して、死細胞または瀕死細胞（例えば、免疫原性細胞死に曝されている細胞）中で曝露されるリガンドへのＣｌｅｃ９Ａの結合を防ぎ、それにより、これらの抗原に対する免疫応答の刺激を抑制または防止し得る。
【０３７２】
種々の実施形態では、本発明の物質、またはこれらの物質を用いる方法は、自己反応性Ｔ細胞を低減または抑制する。いくつかの実施形態では、多重特異的Ｃｌｅｃ９ａ結合物質は、キメラの場合には任意にインターフェロンシグナル伝達を介して、この免疫抑制をもたらす。いくつかの実施形態では、多重特異的Ｃｌｅｃ９ａ結合物質は、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２シグナル伝達および／または発現を刺激し、これは自己反応性Ｔ細胞を抑制し得る。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、キメラの場合には任意にインターフェロンシグナル伝達を介して、この免疫抑制をもたらす。いくつかの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａ結合物質は、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２シグナル伝達および／または発現を刺激し、これは自己反応性Ｔ細胞を抑制し得る。
【０３７３】
種々の実施形態では、本発明の方法は、制御性Ｔ細胞対エフェクターＴ細胞の比率を、例えば、自己免疫疾患を処置するために、免疫抑制に有利なように調整することを含む。例えば、本発明の方法は、いくつかの実施形態では、１種または複数の細胞傷害性Ｔ細胞；エフェクターメモリーＴ細胞；セントラルメモリーＴ細胞；ＣＤ８＋ 幹細胞メモリーエフェクター細胞；ＴＨ１エフェクターＴ細胞；ＴＨ２エフェクターＴ細胞ｐＴＨ９エフェクターＴ細胞；ＴＨ１７エフェクターＴ細胞を低減および／または抑制する。例えば、本発明の方法は、いくつかの実施形態では、１種または複数のＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５−制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ制御性Ｔ細胞、ＴＩＭ−３＋ＰＤ−１＋制御性Ｔ細胞、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）＋制御性Ｔ細胞、ＣＴＬＡ−４／ＣＤ１５２＋制御性Ｔ細胞、ニューロピリン−１（Ｎｒｐ−１）＋制御性Ｔ細胞、ＣＣＲ４＋ＣＣＲ８＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ６２Ｌ（Ｌ−セレクチン）＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＢｌｏｗ制御性Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ制御性Ｔ細胞、ＬＲＲＣ３２／ＧＡＲＰ＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ３９＋制御性Ｔ細胞、ＧＩＴＲ＋制御性Ｔ細胞、ＬＡＰ＋制御性Ｔ細胞、１Ｂ１１＋制御性Ｔ細胞、ＢＴＬＡ＋制御性Ｔ細胞、１型制御性Ｔ細胞（Ｔｒ１細胞）、Ｔヘルパー３型（Ｔｈ３）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞表現型の制御性細胞（ＮＫＴｒｅｇ）、ＣＤ８＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ８＋ＣＤ２８−制御性Ｔ細胞および／またはＩＬ−１０、ＩＬ−３５、ＴＧＦ−β、ＴＮＦ−α、ガレクチン−１、ＩＦＮ−γおよび／またはＭＣＰ１分泌制御性Ｔ細胞を増加させる、および／または刺激する。
【０３７４】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、免疫刺激シグナルより免疫抑制シグナルを優先する。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、免疫活性化シグナルまたは共刺激シグナルを逆転または抑制することを可能にする。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、免疫抑制シグナルを提供することを可能にする。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の物質および方法は、免疫刺激シグナルの効果を低減し、免疫刺激シグナルは、限定されないが、４−１ＢＢ、ＯＸ−４０、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳリガンド；ＯＸ−４０リガンド、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８）、ＧＩＴＲリガンド、ＣＤ７０、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ４０リガンド、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳリガンド、ＣＤ１３７リガンドおよびＴＬ１Ａの１種または複数である。さらに、いくつかの実施形態では、本発明の物質および方法は、免疫抑制シグナルの効果を高め、これらのシグナルは、限定されないが、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０（ＢＹ５５とも呼ばれる）、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＨＫ１およびＣＨＫ２キナーゼ、Ａ２ａＲ、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５）、および種々のＢ−７ファミリーリガンド（限定されないが、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−ＤＣ、Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ５、Ｂ７−Ｈ６およびＢ７−Ｈ７を含む）の１種または複数である。
【０３７５】
キット
本発明はまた、本明細書に記載のいずれかのＣｌｅｃ９Ａ結合物質の投与（例えば追加の治療薬を含み、または含まず）のためのキットを提供する。キットは、本明細書に記載の少なくとも１種の本発明の医薬組成物を含む、材料または成分の集合体である。したがって、いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の少なくとも１種の医薬組成物を含む。
【０３７６】
キットを構成する成分の明確な性質は、その意図される目的に依存する。一実施形態では、キットは、ヒト対象用を処置する目的のために構成される。
【０３７７】
使用説明書をキット中に含めてもよい。使用説明書は通常、癌を処置するなどの、望まれる治療結果を達成するためにキットの成分を使用する際に採用すべき技術を説明する、明確な表現を含む。必要に応じ、キットは、他の有用な成分、例えば、希釈剤、緩衝剤、薬学的に許容可能な担体、シリンジ、カテーテル、塗布具、ピペット操作または測定用ツール、包帯材料または当業者なら容易に気付くような他の有用な備品一式も含む。
【０３７８】
キットに組込まれる材料および成分は、それらの操作性および有用性を維持する任意の便利で適切な方法で保管され開業医に提供され得る。例えば、成分は、室温、冷蔵温度、または凍結温度で提供できる。成分は通常、適切な梱包材料に収容される。種々の実施形態では、梱包材料は、よく知られた方法、好ましくは無菌の、混入物のない環境を与える方法で構築される。梱包材料は、内容物および／またはキットの目的および／またはその成分を表示する外部ラベルを有してよい。
【０３７９】
定義
本明細書で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、または「ｔｈｅ」は、１つ（１種）または１つ（１種）を超えるを意味し得る。
さらに、参照数値表示に関連して使われる用語の「約」は、参照数値表示±参照数値表示の最大１０％を意味する。例えば、用語の「約５０」は、４５〜５５の範囲を含む。
【０３８０】
「有効量」という用語は、医学的使用に関連して使用される場合、目的の疾患の測定できる処置、予防、または発病速度の低下を与えるのに効果的である量である。
【０３８１】
本明細書で使用される場合、物質または刺激の存在下で、このような調節の非存在に比べて、活性および／または効果の出力値がかなりの量、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、またはそれを超えて、少なくとも最大約１００％（約１００％を含む）低減されるとき、何かが「減少し」ている。当業者により理解されるように、いくつかの実施形態では、活性は低下し、かついくつかの下流の出力値は低下するが、他のものは増加し得る。
【０３８２】
逆に、物質または刺激の存在下で、このような物質または刺激の非存在に比べて、活性および／または効果の出力値がかなりの量、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、またはそれを超えて、最大少なくとも約１００％（約１００％を含む）またはそれを超えて、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍増加する場合、活性は「高く」なる。
【０３８３】
本明細書において参照される場合、全ての組成物に関するパーセンテージは、特に指定がない限り、総組成物の重量による。本明細書で使用する場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」という単語とその変形物は、非限定であると意図され、それにより、リスト中の項目の記載は、この技術の組成物および方法に有用である可能性を同様に有する他の類似項目の除外を意図するものではない。同様に、用語の「ｃａｎ」および「ｍａｙ」およびその変形物は、非限定であると意図され、それにより、ある実施形態が特定の要素または特徴を含むことが「できる（ｃａｎ）」または含んでも「よい（ｍａｙ）」という記載は、これらの要素または特徴を含まないこの技術のその他の実施形態を排除するものではない。
【０３８４】
ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ、ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ、またはｈａｖｉｎｇなどの用語の同義語としてのオープンエンド用語の「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を本明細書で使用して本発明を記載および請求するが、本発明、またはその実施形態は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」などの代替用語を使って、代わって記載できる。
【０３８５】
本明細書で使用される場合、用語の「好ましい」および「好ましくは」は、特定の状況下で、特定の利点をもたらす本技術の実施形態を指す。しかしながら、同じまたは他の環境下で、他の実施形態も好ましい場合がある。さらに、１つまたは複数の好ましい実施形態の記載は、他の実施形態が有用でないことを示すものではなく、また、本技術の範囲から他の実施形態を排除することを意図するものではない。
【０３８６】
治療効果の達成に必要な本明細書で記載の組成物の量は、特定目的のための従来の手順に従って経験的に決定されてよい。一般に、治療目的のために治療薬を投与する場合、治療薬は薬理学的有効量で投与される。「薬理学的有効量」、「薬理学的有効用量」、「治療有効量」、または「有効量」は、特に障害または疾患を処置するために、望ましい生理的効果を生み出すのに十分な量または望ましい結果を達成できる量を意味する。本明細書で使用される場合、有効量は、例えば、障害または疾患の症状の進展を遅らせる、障害または疾患の症状の経過を変える（例えば、疾患の症状の進展を遅らせる）、障害または疾患の１つまたは複数の症状または発症を減らすまたはなくす、および障害または疾患の症状を逆転させるのに十分な量を含んでよい。治療効果はまた、改善が実現されるかどうかにかかわらず、根底にある疾患または障害の進行を止めるまたは遅らせることも含む。
【０３８７】
有効量、毒性、および治療効果は、例えば、細胞培養または実験動物によりＬＤ５０（集団の約５０％に対する致死用量）およびＥＤ５０（集団の約５０％での治療的有効量）を測定するための標準的薬学的手順により決定できる。投与量は、用いられる剤形および利用される投与経路に応じて変化し得る。毒性と治療効果との間の用量比率は、治療指数であり、比率ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。いくつかの実施形態では、大きな治療指数を示す組成物および方法が好ましい。治療有効量は最初に、例えば、細胞培養アッセイを含む、インビトロアッセイから推測できる。また、用量は、細胞培養または適切な動物モデルで決定したＩＣ５０などの循環血漿中濃度を達成するように動物モデルで処方できる。記載の組成物の血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーにより測定できる。いずれかの特定の投与量の効果は、適切なバイオアッセイによりモニターできる。投与量は医師により決定されてよく、必要に応じて、観察された処置の効果に適合するように調節できる。
【０３８８】
特定の実施形態では、効果は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約９０％の定量可能な変化をもたらすであろう。いくつかの実施形態では、効果は、約１０％、約２０％、約３０％、約５０％、約７０％、またはさらに約９０％以上の定量可能な変化をもたらすであろう。治療効果はまた、改善が実現されるかどうかにかかわらず、根底にある疾患または障害の進行を止めるまたは遅らせることも含む。
【０３８９】
本明細書で使用される場合、「処置方法」は、本明細書に記載の疾患または障害の処置のための組成物および／または本明細書に記載の疾患または障害の処置のための薬剤の製造での使用および／または複数使用のための組成物に等しく適用可能である。
【０３９０】
実施例
用語の「ＡｃＴａｆｅｒｏｎ」は、インターフェロンベースキメラに言及するために本明細書で使われることがある。
下記の実施例では、特に断りのない限り、ＩＦＮ対する変異は、ヒトＩＦＮα２（配列番号８６）に対するものである。
【０３９１】
Ｑ１２４Ｒ変異体は、マウスモデル中でインビボアッセイできる、減弱化ヒトＩＦＮアルファ２変異体を代表するものである。特に、Ｑ１２４Ｒは、マウスでの使用に好適なヒトＩＦＮ変異である（すなわち、これは、マウスで機能するヒト変異体ＩＦＮである）。Ｎａｔ．Ｃｏｍｍ．２０１４；５：３０１６．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ  ４０１６を参照されたい。この文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
Ｒ３３Ａ／Ｅ１２０Ｒ変異体は、非機能性である（およびコントロールとして使用される）ヒトＩＦＮアルファ２変異体を代表するものである。
これらの例で用いられる抗ヒトＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨは、配列番号２５６である。
抗Ｂｃｌｌ１０  ＶＨＨは、コントロールとしてこれらの実施例で使用される（無関係の抗原を標的とする、すなわち、「非標的化」）。
【０３９２】
実施例１．マウスＣｌｅｃ９Ａ特異的ＶＨＨの構築と評価
抗原特異的ＶＨＨの単離
ＶＨＨライブラリーを３回の連続パニングラウンドに供し、マウスＣｌｅｃ９Ａを発現する安定に遺伝子導入されたＣＨＯ−Ｋ１細胞で実施した。抗原特異的ファージの濃縮を、パニング後に遺伝子導入された細胞から溶出されたファージミド粒子の数（出力）をパニングに使用したファージミド粒子の数（入力）と比較することにより、各パニングラウンド後に評価した。ファージ出力は、第１ラウンドの出力と比較して、第２および第３ラウンドで、それぞれ約５０倍および３０倍増加した。入力ファージは、常に約１０１１個であり、第１ラウンドからの出力は約１０９個のファージ粒子であり、第１ラウンドで標的特異的ファージが既に濃縮されたことを示唆している。合計で２８５個のコロニー（第１および第２ラウンドからそれぞれ９５個と１９０個）を無作為に選択し、それらの粗製周辺質抽出物（可溶性ＶＨＨを含む）を、親ＣＨＯ−Ｋ１細胞と比較して、遺伝子導入したＣＨＯ−Ｋ１に対する特異的結合について細胞ＥＬＩＳＡにより分析した。これらのコロニーのいずれも細胞ＥＬＩＳＡで陽性を示さず、ＥＬＩＳＡがこの場合には十分に感受性でないか、または抗原がＥＬＩＳＡでの細胞固定に影響されるかのいずれかを示唆する。我々はしたがって、抗原特異的ＶＨＨの特定のためＦＡＣＳに切り替えた。ここで我々は、第１および第２パニングラウンドからの１９０個（各ラウンドから９５個）の無作為選択コロニーを配列決定し、その後、ＣＤＲ３配列に基づいてＶＨＨを分類した。これらの実験により、７種の異なるＣＤＲ３群に属する２８種の異なるＶＨＨが特定された。下表１は、２８種の異なる抗マウスＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨ遺伝子を表す２８個のクローンの説明である。抗マウスＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨ配列を含む組換えファージミドｐＨＥＮ４を収容する大腸菌ＴＧ１を生成し、−８０℃で保存した。ベクターｐＨＥＮ４は、アンピシリン耐性をコードする。
【表２】
2019506867.tif 000009
【０３９３】
ＶＨＨを含む粗製ペリプラズム抽出物を用いて、各群の代表物（単一または複数）を、マウスＣｌｅｃ９Ａで遺伝子導入されたＣＨＯ−Ｋ１細胞を用いて、マウスＣｌｅｃ９Ａに対する特異性についてＦＡＣＳにより分析した。親の非遺伝子導入ＣＨＯ−Ｋ１細胞は、ネガティブコントロールとしての役割を果たした。マウスＣｌｅｃ９Ａに対するそれらの特異性について試験した代表的ＶＨＨは以下の通り：Ｒ１ＭＣＬ３、Ｒ１ＭＣＬ７、Ｒ１ＭＣＬ９、Ｒ１ＭＣＬ１２、Ｒ１ＭＣＬ１３、Ｒ１ＭＣＬ３３、Ｒ１ＭＣＬ７１、Ｒ１ＭＣＬ９５、Ｒ２ＭＣＬ１５、Ｒ２ＭＣＬ１８、Ｒ２ＭＣＬ２０、Ｒ２ＭＣＬ２８、Ｒ２ＭＣＬ３６、Ｒ２ＭＣＬ４１、Ｒ２ＭＣＬ４３、Ｒ２ＭＣＬ４７、Ｒ２ＭＣＬ５７、Ｒ２ＭＣＬ７４、Ｒ２ＭＣＬ８６、Ｒ２ＭＣＬ９３。試験した全ての代表物は、マウスＣｌｅｃ９Ａで遺伝子導入されたＣＨＯ−Ｋ１細胞に対し陽性であり、全２８ＶＨＨがマウスＣｌｅｃ９Ａに特異的に結合したことを示す。次に、マウスＣｌｅｃ９ＡまたはヒトＣｌｅｃ９Ａで遺伝子導入されたＣＨＯ−Ｋ１細胞を用いて、各群の代表物のマウスおよびヒトＣｌｅｃ９Ａに対する特異性についてＦＡＣＳにより分析した。ここでまた、親の非遺伝子導入ＣＨＯ−Ｋ１細胞が、ネガティブコントロールとしての役割を果たした。異種間反応性について試験した代表的ＶＨＨは以下の通り：Ｒ１ＭＣＬ３、Ｒ１ＭＣＬ７、Ｒ１ＭＣＬ９、Ｒ１ＭＣＬ１２、Ｒ１ＭＣＬ３３、Ｒ２ＭＣＬ１８、Ｒ２ＭＣＬ４３。これらのＶＨＨのいずれも、ヒトＣｌｅｃ９Ａに対する何らの特異的結合を示さず、これらのＶＨＨがマウスＣｌｅｃ９Ａに対する固有のエピトープを認識することを示唆する。
【０３９４】
ＶＨＨの発現および精製
ＶＨＨ遺伝子をｐＨＥＮ４からｐＨＥＮ６ｃベクターに再クローニングした。具体的には、ＶＨＨ遺伝子を、テンプレートとしてＶＨＨ遺伝子を含む組換えｐＨＥＮ４ならびにプライマーＡ６Ｅおよび３８を用いるＰＣＲにより増幅した。プライマーＡ６Ｅおよび３８は、それぞれ、フレームワーク１およびフレームワーク４プライマーであった。プライマー配列は以下の通り：
・プライマーＡ６Ｅ（５’  ＧＡＴ  ＧＴＧ  ＣＡＧ  ＣＴＧ  ＣＡＧ  ＧＡＧ  ＴＣＴ  ＧＧＲ＊  ＧＧＡ  ＧＧ  ３’）（配列番号２９１）。
・プライマー３８（５’  ＧＧＡ  ＣＴＡ  ＧＴＧ  ＣＧＧ  ＣＣＧ  ＣＴＧ  ＧＡＧ  ＡＣＧ  ＧＴＧ  ＡＣＣ  ＴＧＧ  ＧＴ  ３’）（配列番号２９２）。
・ユニバーサル逆方向プライマー（５’  ＴＣＡ  ＣＡＣ  ＡＧＧ  ＡＡＡ  ＣＡＧ  ＣＴＡ  ＴＧＡ  Ｃ  ３’）（配列番号２９３）。
・ユニバーサル順方向プライマー（５’  ＣＧＣ  ＣＡＧ  ＧＧＴ  ＴＴＴ  ＣＣＣ  ＡＧＴ  ＣＡＣ  ＧＡＣ  ３’）（配列番号２９４）。
＊Ｒは、ＡまたはＧを表す。
【０３９５】
増幅プロトコルは、約３０サイクルのＰＣＲを含み、それぞれのサイクルは、９４℃で３０秒、５５℃で３０秒および７２℃で４５秒、その後、ＰＣＲの最後に７２℃で１０分間の伸長反応を含んだ。約４００ｂｐのフラグメントが増幅された。本明細書に記載のプロトコルを用いて産生された全ての得られたＶＨＨは、次記の配列で始まる：ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧ（配列番号２９５）。
【０３９６】
ＰＣＲ産物を精製し（例えば、ＱｉａｇｅｎのＱｉａｑｕｉｃｋ  ＰＣＲ精製キットにより）、ＰｓｔＩで一晩消化した。精製ＰＣＲ産物をＢｓｔＥＩＩで（またはＦｅｒｍｅｎｔａｓのＥｃｏ９１Ｉで）一晩消化した。消化に用いた温度は様々であった。例えば、ＢｓｔＥＩＩによる消化は、酵素の供給業者に応じて、５０℃または６０℃で実施した。
【０３９７】
ライゲーションのために、ＰＣＲ産物を精製した。ｐＨＥＮ６ｃベクターをＰｓｔＩで３時間消化し、上述のように精製した後、ＢｓｔＥＩＩで２〜３時間消化した。あるいは、消化をＦｅｒｍｅｎｔａｓのＥｃｏ９１Ｉを用いて実施した。消化ベクターを１％アガロースゲルで泳動し、ベクターバンドをゲルから切り出し、精製した（例えば、ＱｉａｇｅｎのＱｉａｑｕｉｃｋゲル抽出キットにより）。ＰＣＲフラグメントをその後ベクターに連結した。
【０３９８】
エレクトロコンピテントＷＫ６細胞を連結反応で形質転換し、ＬＢ／寒天／アンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）／グルコース（１％）プレートを用いて形質転換体を選択した。陽性クローンを、ユニバーサル逆方向およびユニバーサル順方向プライマーを用いるＰＣＲによりスクリーニングした。挿入断片が存在した場合には、約５５０ｂｐのフラグメントが増幅された。クローンの同一性を確認するために、それぞれのＶＨＨ当たり少なくとも２種のクローンを、ユニバーサル逆方向プライマーを用いて配列決定した。抗原結合能を、ＥＬＩＳＡまたは任意の他の適切なアッセイにより再試験した。
【０３９９】
上記プロトコルに続き、ｐＨＥＮ６ｃベクター中にクローン化したＶＨＨ遺伝子を生成した。これは、Ｎ−末端にＰｅｌＢシグナル配列およびＣ−末端にＨｉｓ６テイルを含んだ。ＰｅｌＢリーダー配列はＶＨＨを大腸菌のペリプラズム空間に向け、ＨｉｓタグはＶＨＨの精製と検出に使用された（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、などで）。
【０４００】
ＶＨＨの発現および精製を実施した。具体的には、１日目に、１０〜２０ｍｌのＬＢ＋アンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）＋グルコース（１％）に、新たに形質転換したＷＫ６コロニーを接種した。この前培養液を３７℃で一晩、２００〜２５０ｒｐｍで振盪しながらインキュベートした。２日目に、ＶＨＨ発現用にＴＢ培地を用いた。ＴＢ培地は、リッター当たり：２．３ｇのＫＨ２ＰＯ４、１６．４ｇのＫ２ＨＰＯ４・３Ｈ２Ｏ、１２ｇのトリプトン（Ｄｕｃｈｅｆａ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ）、２４ｇの酵母（Ｄｕｃｈｅｆａ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ）、および４ｍｌの１００％グリセロール（Ｄｕｃｈｅｆａ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ）を含んだ。
【０４０１】
１リットルのバッフル付振とうフラスコを、３３０ｍｌのＴＢで満たし、オートクレーブ処理した。ＫＨ２ＰＯ４およびＫ２ＨＰＯ４・３Ｈ２Ｏは、オートクレーブ処理しなかった。その代わりに、ＫＨ２ＰＯ４およびＫ２ＨＰＯ４・３Ｈ２Ｏを調製し、フィルター滅菌した後、既にオートクレーブ処理された残りの培地に加えた。約１ｍｌの前培養液を、１００μｇのアンピシリン、３３０ｍｌの、２ｍＭのＭｇＣｌ２および０．１％のグルコースを補充したＴＢに加えた後、３７℃で振盪（２００〜２５０ｒｐｍ）しながら、０．６〜０．９のＯＤ６００に達するまで増殖させた。ＩＰＴＧ（１ｍＭの最終濃度）を加えて、ＶＨＨ発現を誘導した。この培養液を２８℃で振盪しながら一晩（約１６〜１８時間）インキュベートした。一晩誘導後のＯＤ６００は通常、２５〜３０であった。クローン当たり少なくとも１リットルの培養液（３つのボトル）を、平均収量１〜１５ｍｇ／ｌで調製した。
【０４０２】
大腸菌のペリプラズムからのＶＨＨの抽出を３日目に実施した。使用した溶液は、次を含んだ：ＴＥＳ：０．２Ｍ  トリス  ｐＨ８．０、０．５ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５Ｍショ糖、およびＴＥＳ／４：水中４倍希釈ＴＥＳ。
【０４０３】
一晩の誘導培養液を８０００ｒｐｍで８分間遠心分離した。１リットルの培養液からの細胞ペレットを、上下のピペッティングにより１２ｍｌのＴＥＳ中に再懸濁し、氷上で１時間震盪した。用いた各１２ｍｌのＴＥＳ当たり、約１８ｍｌのＴＥＳ／４を加え、氷上で追加の１時間振盪しながらインキュベートし、続いて４℃にて８０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。ペリプラズム空間から抽出されたタンパク質を含む上清を、新しいファルコンチューブに移した。
【０４０４】
ＶＨＨをその後、次の溶液を使用するＩＭＡＣにより精製した：ＨＩＳ−ｓｅｌｅｃｔ（Ｓｉｇｍａ）、ＰＢＳ、および５０ｍＭの酢酸ナトリウムｐＨ４．６。
【０４０５】
ＨＩＳ−ｓｅｌｅｃｔをＰＢＳで平衡化した。具体的には、１リットルの培養液からのペリプラズム抽出物当たり、１ｍｌのレジン（約２ｍｌのＨｉｓ−ｓｅｌｅｃｔ溶液）を５０ｍｌのファルコンチューブに加えた。ＰＢＳも加えて、最終体積の５０ｍｌにし、混合した。遠心分離を２０００ｒｐｍで２分間行い、上清を廃棄した。上述のように、レジンをＰＢＳで２回洗浄した。ペリプラズム抽出物をレジンに加え、緩やかに振盪しながら室温で３０分〜１時間インキュベートした。試料を、底部にフィルターを備えたＰＤ−１０カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号１７−０４３５−０１）に加え、５０〜１００ｍｌのＰＢＳ（使用した１ｍｌのレジン当たり、５０〜１００ｍｌのＰＢＳ）で洗浄した。溶出を３回実施し、各回に使用した１ｍｌのレジン当たり、１ｍｌのＰＢＳ／０．５Ｍのイミダゾールを用いた（溶出を効率化するために、ビーズを再懸濁し、カラムの低部を閉止して、４℃で一晩放置した）。透析を、ＰＢＳに対し４℃で一晩実施（カットオフ３５００ダルトン）して、イミダゾールを除去した。効率的な透析のために、透析緩衝液（ＰＢＳ）を２、３回交換した。あるいは、イミダゾールを用いる溶出の代わりに、結合ＶＨＨを１０ｍｌの５０ｍＭ  酢酸ナトリウムｐＨ４．６で溶出し得る。５０ｍＭの酢酸ナトリウムｐＨ４．６をＶＨＨの溶出に使用した場合、溶出されたＶＨＨをすぐに１ＭのトリスｐＨ８．０で中和し、透析の必要はなかった。
【０４０６】
タンパク質の量を、溶出した試料のＯＤ２８０測定により推定した。各クローンの消光率を、ＥｘＰＡＳｙプロテオミクスサーバーでの一次構造分析に基づいて、ｐｒｏｔＰａｒａｍツールにより測定した。ＶＨＨのさらなる精製は、異なる方法で達成できるであろう。例えば、試料を、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ７５  １６／６０へのロード用の適切な体積が得られるまで（最大４ｍｌ）４℃にて２０００ｒｐｍでの遠心分離（Ｖｉｖａｓｐｉｎ  ５０００ＭＷカットオフ、Ｖｉｖａｓｃｉｅｎｃｅ）により濃縮し得る。濃縮試料を、ＰＢＳで平衡化したＳｕｐｅｒｄｅｘ  ７５  １６／６０カラムにロードした。ピーク画分をプールし、定量化のためにＯＤ２８０測定を実施した。一般に、１ｍｌ／分で稼働した場合、ＶＨＨは８５〜９５分後に溶出した。濃縮ＶＨＨ試料の分割量を、約１ｍｇ／ｍｌの濃度にて−２０℃で貯蔵した。
【０４０７】
ＶＨＨの機能分析
ＶＨＨをＣｌｅｃ９Ａに対する結合について試験した。図１は、Ｃｌｅｃ９Ａを安定に発現するＣＨＯ細胞への種々のＶＨＨの結合を示す。全ての実験で、ＶＨＨを以下の通り標識した：
【表３】
2019506867.tif 000010
【０４０８】
腫瘍処置におけるＶＨＨの活性を特徴付ける実験を実施した。図２の実験では、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、５０μｌのＰＢＳ中の６ｘ１０５個のＢ１６Ｂｌ６−ｍＣＤ２０細胞を皮下注射した。７日後、病変周囲（＝腫瘍端部の皮下）の処置を開始した。ＷＴ  ｍＩＦＮを８ｘ１０６の用量で注射し、同時に、５５００ＩＵのキメラタンパク質を注射した。処置を、腫瘍細胞接種後８、９、１０、１１、１２、１４、１６および１７日目に与えた。コントロールマウスに１００μｌのＰＢＳを注射した。デジタルノギスを用いて腫瘍増殖をモニターした。プロットは、腫瘍サイズの平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）（図２パネルＡ）および体重変化（図２パネルＢ）である。最後の処置（１８日目）後１日目に、ＥＤＴＡ血液を、Ｈｅｍａｖｅｔ  ９５０ＦＳ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｄｒｅｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いる血液学的パラメーターの分析（図２パネルＣ）のために尾静脈から集めた。
【０４０９】
図２パネルＡに示すように、Ｃｌｅｃ９Ａに対するＶＨＨの投与は、腫瘍サイズを効果的に縮小した。図２、パネルＢおよびＣは、それぞれ、ＶＨＨによる処置が体重減少または血液毒性を生じなかったことを示す。重要なことに、パネルＢおよびＣは、野生型インターフェロンに対しキメラの改善された安全性パラメーター（体重、血球数パラメーター）を示す。
【０４１０】
実施例２．ヒトＣｌｅｃ９Ａ特異的ＶＨＨの構築と評価
抗原特異的ＶＨＨの単離
ＶＨＨライブラリーを２回の連続パニングラウンドに供し、ヒトＣｌｅｃ９Ａを発現する安定に遺伝子導入されたＣＨＯ−Ｋ１細胞で実施した。抗原特異的ファージの濃縮を、パニング後に遺伝子導入された細胞から溶出されたファージミド粒子の数（出力）を、パニングに使用したファージミド粒子の数（入力）と比較することにより、各パニングラウンド後に評価した。ファージ出力は、第１ラウンドの出力と比較して、第２ラウンドで約１０２倍増加した。入力ファージは、約１０１１個であり、第１ラウンドからの出力は約２ｘ１０８個のファージ粒子であった。ラウンドからの９５個のコロニーを無作為に選択し、それらの粗製周辺質抽出物（可溶性ＶＨＨを含む）を、親ＣＨＯ−Ｋ１細胞と比較して、遺伝子導入したＣＨＯ−Ｋ１に対する特異的結合について細胞ＥＬＩＳＡにより分析した。これらのコロニーのいずれも細胞ＥＬＩＳＡで陽性を示さず、ＥＬＩＳＡがこの場合には十分に感受性でなかったか、または抗原がＥＬＩＳＡでの細胞固定に影響されたかのいずれかを示唆する。ＦＡＣＳ分析をしたがって、抗原特異的ＶＨＨの特定のために使用した。ここで、第１および第２パニングラウンドから１９０個の無作為に選択したコロニー（各ラウンドから９５個）を配列決定し、その後、ＶＨＨをＣＤＲ３配列に基づいて群に分類した。これらの実験により、１１種の異なる群に属する２７種の異なるＶＨＨが特定された（図５）。２７種の抗ヒトＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨのヌクレオチドおよびアミノ酸配列を、それぞれ配列番号３および配列番号４に示す。下表２は、２７種の異なる抗ヒトＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨ遺伝子を表す２７個のクローンの説明である。抗ヒトＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨ配列を含む組換えファージミドｐＨＥＮ４を収容する大腸菌ＴＧ１を生成し、−８０℃で保存した。ベクターｐＨＥＮ４は、アンピシリン耐性をコードする。
【表４】
2019506867.tif 000011
【０４１１】
ＶＨＨを含む粗製ペリプラズム抽出物を用いて、各群の代表物（単一または複数）を、マウスＣｌｅｃ９ＡまたはヒトＣｌｅｃ９Ａで遺伝子導入されたＣＨＯ−Ｋ１細胞を用いて、ヒトおよびマウスＣｌｅｃ９Ａに対する特異性についてＦＡＣＳにより分析した。親の非遺伝子導入ＣＨＯ−Ｋ１細胞は、ネガティブコントロールとしての役割を果たした。試験した代表的ＶＨＨは以下の通り：Ｒ１ＣＨＣＬ１６、Ｒ１ＣＨＣＬ２７、Ｒ１ＣＨＣＬ３４、Ｒ１ＣＨＣＬ５０、Ｒ２ＣＨＣＬ３、Ｒ２ＣＨＣＬ１０、Ｒ２ＣＨＣＬ１３、Ｒ２ＣＨＣＬ２４、Ｒ２ＣＨＣＬ２５、Ｒ２ＣＨＣＬ２７、Ｒ２ＣＨＣＬ３２、Ｒ２ＣＨＣＬ３８、Ｒ２ＣＨＣＬ４９、Ｒ２ＣＨＣＬ６９およびＲ２ＣＨＣＬ８７。試験した全ての代表物は、ヒトＣｌｅｃ９Ａで遺伝子導入されたＣＨＯ−Ｋ１細胞に対し陽性であり、全２７ＶＨＨがヒトＣｌｅｃ９Ａに特異的に結合したことを示す。さらに、群５由来のＶＨＨ  Ｒ２ＣＨＣＬ１０はまた、ＦＡＣＳで、マウスＣｌｅｃ９Ａとも強く反応した。群５由来のＶＨＨ  Ｒ１ＣＨＣＬ３４もまた、マウスＣｌｅｃ９Ａと反応したが、極めて弱い反応であった。群５由来のＶＨＨ  Ｒ１ＣＨＣＬ８２は、ＦＡＣＳで試験されなかった。さらに、群７由来のＶＨＨ  Ｒ２ＣＨＣＬ３２は、ＦＡＣＳで、マウスＣｌｅｃ９Ａと弱く反応した。他の群７の２つのメンバー（ＶＨＨ  Ｒ１ＣＨＣＬ５６およびＲ２ＣＨＣＬ６９）は、ＦＡＣＳで試験されなかった。
【０４１２】
ＶＨＨの発現および精製
ＶＨＨ遺伝子をｐＨＥＮ４からｐＨＥＮ６ｃベクターに再クローニングした。具体的には、ＶＨＨ遺伝子を、テンプレートとしてＶＨＨ遺伝子を含む組換えｐＨＥＮ４ならびにプライマーＡ６Ｅおよび３８を用いるＰＣＲにより増幅した。プライマーＡ６Ｅおよび３８は、それぞれ、フレームワーク１およびフレームワーク４プライマーであった。プライマー配列は以下の通り：
・プライマーＡ６Ｅ（５’  ＧＡＴ  ＧＴＧ  ＣＡＧ  ＣＴＧ  ＣＡＧ  ＧＡＧ  ＴＣＴ  ＧＧＲ＊  ＧＧＡ  ＧＧ  ３’）（配列番号２９１）。
・プライマー３８（５’  ＧＧＡ  ＣＴＡ  ＧＴＧ  ＣＧＧ  ＣＣＧ  ＣＴＧ  ＧＡＧ  ＡＣＧ  ＧＴＧ  ＡＣＣ  ＴＧＧ  ＧＴ  ３’）（配列番号２９２）。
・ユニバーサル逆方向プライマー（５’  ＴＣＡ  ＣＡＣ  ＡＧＧ  ＡＡＡ  ＣＡＧ  ＣＴＡ  ＴＧＡ  Ｃ  ３’）（配列番号２９３）。
・ユニバーサル順方向プライマー（５’  ＣＧＣ  ＣＡＧ  ＧＧＴ  ＴＴＴ  ＣＣＣ  ＡＧＴ  ＣＡＣ  ＧＡＣ  ３’）（配列番号２９４）。
＊Ｒは、ＡまたはＧを表す。
【０４１３】
増幅プロトコルは、約３０サイクルのＰＣＲを含み、それぞれのサイクルは、９４℃で３０秒、５５℃で３０秒および７２℃で４５秒、その後、ＰＣＲの最後に７２℃で１０分間の伸長反応を含んだ。約４００ｂｐのフラグメントが増幅された。
【０４１４】
ＰＣＲ産物を精製し（例えば、ＱｉａｇｅｎのＱｉａｑｕｉｃｋ  ＰＣＲ精製キットにより）、ＰｓｔＩで一晩消化した。精製ＰＣＲ産物をＢｓｔＥＩＩで（またはＦｅｒｍｅｎｔａｓのＥｃｏ９１Ｉで）一晩消化した。消化に用いた温度は様々であった。例えば、ＢｓｔＥＩＩによる消化は、酵素の供給業者に応じて、５０℃または６０℃で実施した。
【０４１５】
ライゲーションのために、ＰＣＲ産物を精製した。ｐＨＥＮ６ｃベクターをＰｓｔＩで３時間消化し、上述のように精製した後、ＢｓｔＥＩＩで２〜３時間消化した。あるいは、消化をＦｅｒｍｅｎｔａｓのＥｃｏ９１Ｉを用いて実施した。消化ベクターを１％アガロースゲルで泳動し、ベクターバンドをゲルから切り出し、精製した（例えば、ＱｉａｇｅｎのＱｉａｑｕｉｃｋゲル抽出キットにより）。ＰＣＲフラグメントをその後ベクターに連結した。
【０４１６】
エレクトロコンピテントＷＫ６細胞を連結反応で形質転換し、ＬＢ／寒天／アンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）／グルコース（１％）プレートを用いて形質転換体を選択した。陽性クローンを、ユニバーサル逆方向およびユニバーサル順方向プライマーを用いるＰＣＲによりスクリーニングした。挿入断片が存在した場合には、約５５０ｂｐのフラグメントが増幅された。クローンの同一性を確認するために、それぞれのＶＨＨ当たり少なくとも２種のクローンを、ユニバーサル逆方向プライマーを用いて配列決定した。抗原結合能を、ＥＬＩＳＡまたは任意の他の適切なアッセイにより再試験した。
【０４１７】
上記プロトコルに続き、ｐＨＥＮ６ｃベクター中にクローン化したＶＨＨ遺伝子を生成した。これは、Ｎ−末端にＰｅｌＢシグナル配列およびＣ−末端にＨｉｓ６テイルを含んだ。ＰｅｌＢリーダー配列はＶＨＨを大腸菌のペリプラズム空間に向け、ＨｉｓタグはＶＨＨの精製と検出に使用された（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、などで）。
【０４１８】
ＶＨＨの発現および精製を実施した。具体的には、１日目に、１０〜２０ｍｌのＬＢ＋アンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）＋グルコース（１％）に、新たに形質転換したＷＫ６コロニーを接種した。この前培養液を３７℃で一晩、２００〜２５０ｒｐｍで振盪しながらインキュベートした。２日目に、ＶＨＨ発現用にＴＢ培地を用いた。ＴＢ培地は、リッター当たり：２．３ｇのＫＨ２ＰＯ４、１６．４ｇのＫ２ＨＰＯ４・３Ｈ２Ｏ、１２ｇのトリプトン（Ｄｕｃｈｅｆａ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ）、２４ｇの酵母（Ｄｕｃｈｅｆａ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ）、および４ｍｌの１００％グリセロール（Ｄｕｃｈｅｆａ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ）を含んだ。
【０４１９】
１リットルのバッフル付振とうフラスコを、３３０ｍｌのＴＢで満たし、オートクレーブ処理した。ＫＨ２ＰＯ４およびＫ２ＨＰＯ４・３Ｈ２Ｏは、オートクレーブ処理しなかった。その代わりに、ＫＨ２ＰＯ４およびＫ２ＨＰＯ４・３Ｈ２Ｏを調製し、フィルター滅菌した後、既にオートクレーブ処理された残りの培地に加えた。約１ｍｌの前培養液を、１００μｇのアンピシリン、３３０ｍｌの、２ｍＭのＭｇＣｌ２および０．１％のグルコースを補充したＴＢに加えた後、３７℃で振盪（２００〜２５０ｒｐｍ）しながら、０．６〜０．９のＯＤ６００に達するまで増殖させた。ＩＰＴＧ（１ｍＭの最終濃度）を加えて、ＶＨＨ発現を誘導した。この培養液を２８℃で振盪しながら一晩（約１６〜１８時間）インキュベートした。一晩誘導後のＯＤ６００は通常、２５〜３０であった。クローン当たり少なくとも１リットルの培養液（３つのボトル）を、平均収量１〜１５ｍｇ／ｌで調製した。
【０４２０】
大腸菌のペリプラズムからのＶＨＨの抽出を３日目に実施した。使用した溶液は、次を含んだ：ＴＥＳ：０．２Ｍ  トリス  ｐＨ８．０、０．５ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５Ｍショ糖、およびＴＥＳ／４：水中４倍希釈ＴＥＳ。
【０４２１】
一晩の誘導培養液を８０００ｒｐｍで８分間遠心分離した。１リットルの培養液からの細胞ペレットを、上下のピペッティングにより１２ｍｌのＴＥＳ中に再懸濁し、氷上で１時間震盪した。用いた各１２ｍｌのＴＥＳ当たり、約１８ｍｌのＴＥＳ／４を加え、氷上で追加の１時間振盪しながらインキュベートし、続いて４℃にて８０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。ペリプラズム空間から抽出されたタンパク質を含む上清を、新しいファルコンチューブに移した。
【０４２２】
ＶＨＨをその後、次の溶液を使用するＩＭＡＣにより精製した：ＨＩＳ−ｓｅｌｅｃｔ（Ｓｉｇｍａ）、ＰＢＳ、および５０ｍＭの酢酸ナトリウムｐＨ４．６。
【０４２３】
ＨＩＳ−ｓｅｌｅｃｔをＰＢＳで平衡化した。具体的には、１リットルの培養液からのペリプラズム抽出物当たり、１ｍｌのレジン（約２ｍｌのＨｉｓ−ｓｅｌｅｃｔ溶液）を５０ｍｌのファルコンチューブに加えた。ＰＢＳも加えて、最終体積の５０ｍｌにし、混合した。遠心分離を２０００ｒｐｍで２分間行い、上清を廃棄した。上述のように、レジンをＰＢＳで２回洗浄した。ペリプラズム抽出物をレジンに加え、緩やかに振盪しながら室温で３０分〜１時間インキュベートした。試料を、底部にフィルターを備えたＰＤ−１０カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号１７−０４３５−０１）に加え、５０〜１００ｍｌのＰＢＳ（使用した１ｍｌのレジン当たり、５０〜１００ｍｌのＰＢＳ）で洗浄した。溶出を３回実施し、各回に使用した１ｍｌのレジン当たり、１ｍｌのＰＢＳ／０．５Ｍのイミダゾールを用いた（溶出を効率化するために、ビーズを再懸濁し、カラムの低部を閉止して、４℃で一晩放置した）。透析を、ＰＢＳに対し４℃で一晩実施（カットオフ３５００ダルトン）して、イミダゾールを除去した。効率的な透析のために、透析緩衝液（ＰＢＳ）を２、３回交換した。あるいは、イミダゾールを用いる溶出の代わりに、結合ＶＨＨを１０ｍｌの５０ｍＭ  酢酸ナトリウムｐＨ４．６で溶出し得る。５０ｍＭの酢酸ナトリウムｐＨ４．６をＶＨＨの溶出に使用した場合、溶出されたＶＨＨをすぐに１ＭのトリスｐＨ８．０で中和し、透析の必要はなかった。
【０４２４】
タンパク質の量を、溶出した試料のＯＤ２８０測定により推定した。各クローンの消光率を、ＥｘＰＡＳｙプロテオミクスサーバーでの一次構造分析に基づいて、ｐｒｏｔＰａｒａｍツールにより測定した。ＶＨＨのさらなる精製は、異なる方法で達成できるであろう。例えば、試料を、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ７５  １６／６０へのロード用の適切な体積が得られるまで（最大４ｍｌ）４℃にて２０００ｒｐｍでの遠心分離（Ｖｉｖａｓｐｉｎ  ５０００ＭＷカットオフ、Ｖｉｖａｓｃｉｅｎｃｅ）により濃縮し得る。濃縮試料を、ＰＢＳで平衡化したＳｕｐｅｒｄｅｘ  ７５  １６／６０カラムにロードした。ピーク画分をプールし、定量化のためにＯＤ２８０測定を実施した。一般に、１ｍｌ／分で稼働した場合、ＶＨＨは８５〜９５分後に溶出した。濃縮ＶＨＨ試料の分割量を、約１ｍｇ／ｍｌの濃度にて−２０℃で貯蔵した。
【０４２５】
図３および図４の配列は、下表に示すように、配列識別子に割り付けられる。さらに、精製後に、抗ヒトＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨの結合特性を、Ｃｌｅｃ９Ａで遺伝子導入されたＨＥＫ−２９３Ｔ細胞への結合により評価し、下表に示す。簡単に説明すると、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に、標準的リン酸カルシウム法を用いてヒトＣｌｅｃ９Ａ発現プラスミドを遺伝子導入した。遺伝子導入の２日後に、細胞をＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳおよび０．５ｍＭのＥＤＴＡを補充したＰＢＳ）中に再懸濁し、系列希釈ＶＨＨ（１０００ｎｇ／ｍｌ；１／３）と４℃で２時間インキュベートした。非結合ＶＨＨをＦＡＣＳ緩衝液で洗い流した。試料をＦＩＴＣ結合抗Ｈｉｓ  Ａｂで４℃にてさらに４５分間染色し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＣｅｌｌＱｕｅｓｔ  Ｐｒｏ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ４．０．２ソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。
【表５】
2019506867.tif 000012
【０４２６】
実施例３．Ｃｌｅｃ９Ａキメラおよび腫瘍壊死因子を用いる併用療法
マウスＣｌｅｃ９Ａ特異的ＶＨＨおよび腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）を用いる併用療法の抗腫瘍効果を試験した。マウスにＢ１６（マウス黒色腫細胞株）を皮下に接種して、腫瘍を誘導した。マウスの病変周囲（＝腫瘍端部の皮下）をその後、ＴＮＦ含有または非含有で、改変ヒトインターフェロンアルファ２と融合されたマウスＣｌｅｃ９Ａ特異的キメラＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨ（Ｑ１２４Ｒ変異体、「ＡｃＴａ  Ｃｌｅｃ９Ａ」）を用いて処置した。コントロールマウスをＰＢＳまたはキメラＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨ単独またはＴＮＦ単独のいずれかで処置した。腫瘍増殖を、デジタルノギスを用いてモニターした。ＥＤＴＡ血液もまた、Ｈｅｍａｖｅｔ  ９５０ＦＳ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｄｒｅｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いる血液学的パラメーターの分析のために尾静脈から集めた。
【０４２７】
図６パネルＡに示すように、キメラＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨおよびＴＮＦを用いる併用治療は、いずれかの物質単独での処置に比べて、強力な抗腫瘍効果を誘発し３８日目まで腫瘍再発が認められなかった。図６パネルＢは、併用療法が耐容性良好であり、野生型ＩＦＮ単独または野生型ＩＦＮとＴＮＦでの処置に比べて、血液毒性を誘導しなかったことを示す。これらのデータは全体で、キメラＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨおよびＴＮＦを用いる併用療法の相乗的効果を示唆する。
【０４２８】
Ｑ１２４Ｒ変異体は、マウスモデル中でインビボアッセイできる、減弱化ヒトＩＦＮアルファ２変異体を代表するものである。特に、Ｑ１２４Ｒは、マウスでの使用に好適なヒトＩＦＮ変異である（すなわち、これは、マウスで機能するヒト変異体ＩＦＮである）。Ｎａｔ．Ｃｏｍｍ．２０１４；５：３０１６．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ  ４０１６を参照されたい。この文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０４２９】
実施例４．Ｃｌｅｃ９Ａキメラおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体を用いる併用療法
図７は、改変ヒトＩＦＮアルファ２（Ｑ１２４Ｒ変異体）に融合されたマウスＣｌｅｃ９Ａ特異的ＶＨＨのキメラと、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせ（「Ｃｌｅｃ９Ａ−ＡｃＴａｆｅｒｏｎ＋抗ＰＤ−Ｌ１」）の効果を、ＰＢＳ（ネガティブコントロール）、改変ヒトＩＦＮに融合されたマウスＣｌｅｃ９Ａ特異的ＶＨＨのキメラ（Ｑ１２４Ｒ変異体、「Ｃｌｅｃ９Ａ−ＡｃＴａｆｅｒｏｎ」）単独、および抗ＰＤ−Ｌ１抗体（「抗ＰＤ−Ｌ１」）単独と比べて示す。
【０４３０】
図７のインビボ実験により示されるように、改変ヒトＩＦＮに融合されたＣｌｅｃ９Ａのキメラと、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせは、腫瘍進行に対し相乗効果をもたらす。特に、併用治療は、均衡状態をもたらしたのみでなく、腫瘍収縮ももたらした。これは、例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体単独との比較において、この抗体で単独処置されたマウスが実験の終わりに腫瘍増殖を示していたので、特に注目に値する。
【０４３１】
Ｑ１２４Ｒ変異体は、マウスモデルでインビボアッセイできる、減弱化ヒトＩＦＮアルファ２変異体を代表するものである。特に、Ｑ１２４Ｒは、マウスでの使用に好適なヒトＩＦＮ変異である（すなわち、これは、マウスで機能するヒト変異体ＩＦＮである）。Ｎａｔ．Ｃｏｍｍ．２０１４；５：３０１６．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ  ４０１６を参照されたい。この文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０４３２】
実施例５．Ｃｌｅｃ９Ａキメラおよび化学療法剤を用いる併用療法
図８は、改変ヒトＩＦＮ（Ｑ１２４Ｒ）に融合され、および抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨに融合されたマウスＣｌｅｃ９Ａ特異的ＶＨＨのキメラと、ドキソルビシンとの組み合わせ（「Ｃｌｅｃ９Ａ−Ｑ１２４Ｒ−ＰＤ−Ｌ１＋ｄｏｘｏ」）の効果を、改変ヒトＩＦＮ（「Ｑ１２４Ｒ」）に融合され、および抗ＰＤ−Ｌ１ＶＨＨ（“Ｃｌｅｃ９Ａ−Ｑ１２４Ｒ−ＰＤ−Ｌ１）に融合されたマウスＣｌｅｃ９Ａ特異的ＶＨＨのキメラ、ドキソルビシン（「ｄｏｘｏ」）、およびＰＢＳ（ネガティブコントロール）に比べて、示す。
【０４３３】
図８のインビボ実験により示されるように、改変ヒトインターフェロン（Ｑ１２４Ｒ）に融合されかつ抗ＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨに融合されたマウスＣｌｅｃ９Ａ特異的ＶＨＨのキメラと、ドキソルビシンの組み合わせは、腫瘍進行に対し相乗効果をもたらす。重要なことに、併用療法群中の６匹のマウスのうち５匹が完全な腫瘍縮小を示した。
【０４３４】
Ｑ１２４Ｒ変異体は、マウスモデルでインビボアッセイできる、減弱化ヒトＩＦＮアルファ２変異体を代表するものである。特に、Ｑ１２４Ｒは、マウスでの使用に好適なヒトＩＦＮ変異である（すなわち、これは、マウスで機能するヒト変異体ＩＦＮである）。Ｎａｔ．Ｃｏｍｍ．２０１４；５：３０１６．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ  ４０１６を参照されたい。この文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０４３５】
実施例６．マウスＣｌｅｃ９ＡキメラによるＴ細胞増殖の刺激
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞に対する免疫抑制作用を課す、極めて過酷な固形腫瘍の腫瘍微小環境により損なわれることが多い。例えば、種々の免疫抑制サイトカイン、調節モジュレーター、および共抑制受容体が、ＣＡＲ  Ｔ細胞のアナジーを誘導できる腫瘍微小環境中に存在する。ＣＡＲ  Ｔ細胞療法の有効性を高める１つの機序は、腫瘍微小環境内で分裂および増殖するようにＴ細胞を誘導する必要がある。
【０４３６】
改変ヒトＩＦＮ（Ｑ１２４Ｒ）に融合されたマウスＣｌｅｃ９Ａ特異的ＶＨＨがインビボでＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖を誘導し得るがどうかを評価する実験を実施した。具体的には、腫瘍細胞上に存在するメラノサイト分化抗原ｇｐ１００を認識するカルボキシフルオレスセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）標識Ｔ細胞受容体遺伝子導入ＣＤ８＋  Ｔ細胞（ｐｍｅｌ−１）を、Ｂ１６メラノーマ腫瘍担持マウスに養子導入した。マウスをその後、ＰＢＳ（コントロール）または改変ヒトＩＦＮ（Ｑ１２４Ｒ）に融合されたマウスＣｌｅｃ９Ａ特異的ＶＨＨで処置した。Ｔ細胞増殖を、ＦＡＣＳ分析を使って腫瘍流入領域リンパ節中に存在するＣＦＳＥ標識Ｔ細胞の量を求めることにより評価した。
【０４３７】
図９に示すように、ＶＨＨでマウスを処置することは、ＰＢＳでの処置に比べて、Ｔ細胞の分裂および増殖を大きく誘導した。理論に束縛されることを意図するものではないが、Ｔ細胞の分裂および増殖は樹状細胞活性化を経由して媒介されたと考えられる。これらの結果は全体で、ＩＦＮに融合されたＣｌｅｃ９Ａ特異的ＶＨＨの使用がＣＡＲ  Ｔ細胞療法を相乗的に高めることを示す。
【０４３８】
実施例７．ヒトＣｌｅｃ９Ａに特異的なＶＨＨは、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデルで効果的である。
本実施例は、ヒト多発性硬化症（ＭＳ）を模倣するＥＡＥマウスモデルにおける、マウスＣｌｅｃ９Ａ特異的ＶＨＨの治療効果を示す。手短に言えば、Ｃｌｅｃ９Ａ−ＩＦＮＱ１２４Ｒの融合体で処置された５匹のマウスのうち４匹は、ＭＳ症状を全く発症しなかった。単回処置マウスは、病気になったが、すぐに回復した。疾患発症を抑制した、高用量の野生型ＩＦＮで処置された５匹のマウスのうち３匹は、死亡した。低用量の野生型ＩＦＮで処置されたマウスは体重減を示した。これは、実際に体重が増加した、Ｃｌｅｃ９Ａ−ＩＦＮＱ１２４ＲＡｃＴａｆｅｒｏｎ（すなわち、融合タンパク質）処置動物とは著しい対照をなす。
【０４３９】
図１０〜１２について、種々のＡｃＴａｆｅｒｏｎを使用した。この状況下では、これらは減弱化インターフェロンを指し、すなわち、５０００ＩＵでＢｃＩＩ１０、ｍＣＤ２０、ＣＤ８、またはＣｌｅｃ９Ａに対するＶＨＨを含んだ種々のターゲティングドメインに連結されたｈＩＦＮ  Ｑ１２４Ｒ（「Ｑ」）を指す。比較のために、野生型インターフェロンを用いた（上述のように、５０００ＩＵまたは１，０００，０００ＩＵのいずれかでの「ＷＴ  ｍＩＦＮ」）。ＰＢＳ緩衝液は、モックコントロール（すなわち、ネガティブコントロール）である。
この調査に対する処置スケジュールは以下の通り：
・ｄ０＝ｓｃ注射ＭＯＧ＋ＣＦＡ／ｍｔｂ、＋ｉｐ  ＰＴ
・ｄ２＝ｉｐ  ＰＴ
・ｄ７＝毎日の処置ｉｐの開始、および
臨床スコアリングは次の通りであった：
０〜１  マウスが頸部で掴まれた場合、様々な程度の水平より低い尾
１．５  尾挙上不全（全く垂直）であるが尾にまだわずかな張力がある
２      完全に尾挙上不全
２．５  ＋閉じた後肢（足指はもはや広がらない）
３      ＋よたよた歩き（しかしまだ両後肢を使用）
３．５  歩行時にもはや片方の後肢を使用しない
４      両後肢を使用しない
４．５  ＋裏返して置かれてももはやひっくり返ることができない
５      瀕死
６      死亡
【０４４０】
図１０パネルＡには、０日目に、雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（８週齢）を、ミエリン特異的ペプチド（マウスオリゴデンドロサイト糖タンパク質アミノ酸３５−５５  ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫ（配列番号２９６）、１ｍｇ／ｍｌ）およびフロイント完全アジュバント（５ｍｇ／ｍｌ）の２ｘ１００μｌのエマルジョンでｓ．ｃ免疫し、続いて、５０ｎｇの百日咳毒素のｉ．ｐ．注射を行った。２日目に、第２の百日咳毒素用量をｉ．ｐ．接種した。７日目に開始して、マウスを、ＢｃＩＩ１０（すなわち、無関係の標的、したがって非標的化コントロール）、ｍＣＤ８、ｍＣＤ２０またはｍＣｌｅｃ９Ａ（ｎ＝４であるｍＣＤ８を標的とするＡｃＴａｆｅｒｏｎを除いて、ｎ＝５）のいずれかに結合するＶＨＨに連結された５０００ＩＵのＡｃＴａｆｅｒｏｎで毎日処置（ｉ．ｐ．）した。ポジティブコントロールとして、非標的化野生型ｍＩＦＮ（ＢｃＩＩ１０ＶＨＨに連結）を５，０００ＩＵまたは１，０００，０００ＩＵのいずれかで注射した。コントロールマウスは、ＰＢＳ処置を受けた。マウスを、進行性不全麻痺および運動麻痺に関し毎日スコア付けた。０〜２のスコアを減少した尾張力の異なる度合いに対し与え、スコア２を完全に麻痺した尾に対し；スコア３は後肢脱力および対麻痺開始に対し；スコア４は完全対麻痺に対し；スコア５は四肢麻痺に対し（この段階でマウスを安楽死させる必要がある）およびスコア６はマウスが死んだ場合に与えた。注目すべきは、マウスが１未満のスコアで突然に死亡した場合、それらの死亡は処置の毒性に帰された。これらのマウスは、平均臨床スコアの計算に含まれなかった（これは、高用量の野生型ＩＦＮで処置したマウスの場合のみであった）。図１０パネルＢは、体重の変化を示す。体重も毎日測定した。平均体重は、死亡マウスのものも含めて計算した。
【０４４１】
図１１は、処置後１０日目〜２８日目の平均（±Ｓ．Ｅ．Ｍ）累積臨床スコアを示す。運動麻痺の最初の徴候は、１３日目から認められる（ｎ＝５、ｍＣＤ８標的化ＡｃＴａｆｅｒｏｎについてはｎ＝４）。図１２は、種々のＡｃＴａｆｅｒｏｎによる毎日の処置の毒性副作用の評価を示す。示されるのは、実験の過程での死亡率（パネルＡ）および２５日目の白血球数である。具体的には、ＥＤＴＡ処理血液を最後の処置の３時間後にマウスの尾静脈から収集し、リンパ球（パネルＢ）、単球（パネルＣ）、好中球（パネルＤ）、血小板（パネルＥ）、および赤血球（パネルＦ）を、ＨＥＭＡＶＥＴ９５０ＦＳ血液学的分析計（Ｄｒｅｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて計数した。プロットは、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ（ｎ＝５、ｍＣＤ８標的化ＡｃＴａｆｅｒｏｎについてはｎ＝４、野生型ｍＩＦＮ  １，０００，０００ＩＵについてはｎ＝２）である。
【０４４２】
実施例８．抗ヒトＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨキメラにより誘導される樹状細胞シグナル伝達
樹状細胞ｐＳＴＡＴシグナル伝達アッセイを行った。調査したキメラは、抗ヒトＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ  Ｒ１４９Ａおよび抗ヒトＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ  Ｒ３３Ａ／Ｅ１２０Ｒであった。物質の２種の用量：１００ｎｇ／ｍｌおよび５００ｎｇ／ｍｌを調査した。
この実施例で使用した抗ヒトＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨはＲ２ＣＨＣＬ２４（配列番号６３）であった。
【０４４３】
簡単に説明すると、ヒトＰＢＭＣを健康なドナー由来の血液から単離した。約１２０ｍｌの血液をヘパリンコートチューブ（１２個のチューブ）を用いて各ドナーから収集した。血液を室温で保持し、すぐに処理した。簡単に説明すると、血液をＤＰＢＳで１：１に希釈し、２５ｍｌを１５ｍｌのリンパ球Ｈ上に静かに層状に配置した。遠心分離後、単核細胞環を集め、細胞をＤＰＢＳ（ＰＢＳダルベッコリン酸緩衝食塩水、Ｗｉｓｅｎｔ、カタログ番号３１１−４２５−ＬＬ）で３回洗浄し、計数した。樹状細胞を、製造業者の説明書に従い、ＰＢＳ中の系統特異的モノクローナル抗体および磁気粒子（ＳＴＥＭＣＥＬＬ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号１９２５１）の懸濁液の組み合わせを含む「ＤＣ濃縮キット」を用いてＰＢＭＣ集団から濃縮した。
【０４４４】
樹状細胞（ＤＣ）を供試品およびコントロール（ＰＢＳ）の存在下または非存在下で１５分間刺激し、単離ＤＣ細胞集団（Ｌｉｎ−（ＣＤ１４／ＣＤ１６／ＣＤ２０／ＣＤ５６／ＣＤ３）／ＨＬＡ−ＤＲ＋）中のリン酸化ＳＴＡＴ１（ｐＳＴＡＴ１、特にｐＹ７０１−ＳＴＡＴ１）の量を、フローサイトメトリーにより測定した。刺激後、細胞を固定（ＢＤ  Ｃｙｔｏｆｉｘ  ｆｉｘａｔｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒ，ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号５５４６５５）した後、Ｐｅｒｍ緩衝液ＩＩ（ＢＤ  ＰｈｏｓＦｌｏｗ  Ｐｅｒｍ  Ｂｕｆｆｅｒ，ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号５５８０５２）で透過処理した。細胞をその後、ホスホＳＴＡＴ１およびＤＣ表面マーカー（Ｌｉｎ−／ＨＬＡ−ＤＲ＋）について染色した（下表参照）。細胞内および表面の染色の両方を同時に実施した。フローサイトメトリーおよびデータ取得を、ＤＰＢＳによる細胞洗浄後に実施した。
【表６】
2019506867.tif 000013
【０４４５】
図１３は、ｐＳＴＡＴ＋樹状細胞のパーセンテージの倍率変化として表したデータを示す。
この調査は、その活性が細胞ターゲティング時に回復可能であるＩＦＮシグナル伝達物質（ＩＦＮ  Ｒ１４９Ａ）を含むヒトＣＬＥＣ９Ａ抗原ターゲティング構築物が、ヒト樹状細胞中でＩＦＮシグナル伝達（ｐＳＴＡＴ１誘導により測定される）を促進することを明確に示す。対照的に、その活性が回復可能でないＩＦＮシグナル伝達物質（ＩＦＮ  Ｒ３３Ａ／Ｅ１２０Ｒ）を組み込むＣＬＥＣ９Ａターゲティング構築物では、ＩＦＮシグナル伝達活性化は観察されない。したがって、ＣＬＥＣ９Ａマウスを標的とする同等のＩＦＮ融合体構築物について観察されるように、ＣＬＥＣ９Ａ抗原に向けたターゲティング部分を用いるＩＦＮのヒト樹状細胞への標的化は、顕著なＩＦＮシグナル伝達のトリガーをもたらす。
【０４４６】
実施例９．ヒト抗腫瘍効果のモデル化
この実施例で使用した抗ヒトＣｌｅｃ９Ａ  ＶＨＨはＲ２ＣＨＣＬ２４（配列番号６３）であった。
【０４４７】
ヒト臍帯血の選択
幹細胞は、実験中用いた腫瘍細胞によるＨＬＡ−Ａ２の発現と、ＨＬＡ型が適合した。このために、ＨＬＡ−Ａ２陽性臍帯血のみを選択して、ＣＤ３４幹細胞精製を進めた。細胞をＨＬＡ−Ａ２−ＦＩＴＣ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）またはＨＬＡ−ＡＢＣ−ＰＥ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で染色した。後者はポジティブコントロールである。試料をＡｔｔｕｎｅ  Ｎｘｔ  Ａｃｏｕｓｔｉｃ  Ｆｏｃｕｓｉｎｇ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で取得した。
【０４４８】
ヒト臍帯血からのＣＤ３４＋幹細胞の精製
ヒト臍帯血由来の生存単核細胞を、Ｆｙｃｏｌｌ（Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ，Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）勾配分離を用いて単離した後、直接ＣＤ３４＋前駆細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いてＣＤ３４＋単離を行った。ヒトＣＤ３−ＰＥ（ＢＤ  Ｐｈａｍｒｉｎｇｅｎ）／ヒトＣＤ３４−ＡＰＣ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を用いるフローサイトメトリー染色を使って、単離幹細胞の純度を評価した。試料をＡｔｔｕｎｅ  Ｎｘｔ  Ａｃｏｕｓｔｉｃ  Ｆｏｃｕｓｉｎｇ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で取得した。注入した細胞の純度は９５〜９８％に達した。
【０４４９】
ヒト化マウスの生成
新生児ＮＳＧマウス（１〜２日齢）を、１００ＣＧｙで亜致死量照射し、その後、１０５個のＣＤ３４＋ヒト幹細胞を肝内に送達した。細胞移入の６週後、末梢血を、ヒトおよびマウスＣＤ４５（両方共ＢＤ）細胞の両方の存在について分析して、生着の効果を解析した。試料を、ＬＳＲフローサイトメーター（ＢＤ）で取得し、ＦＡＣＳ  Ｄｉｖａソフトウェア（ＢＤ）で解析した。
【０４５０】
キメラの抗腫瘍能力を、担腫瘍ヒト化マウスモデルで評価した。新生児ＮＳＧマウス（１〜２日齢）を、１００ＣＧｙで亜致死量照射し、その後、１０５個のＣＤ３４＋ヒト幹細胞（ＨＬＡ−Ａ２陽性臍帯血由来）を肝内に送達した。幹細胞移入の１３週後、マウスに２．５ｘ１０６個のヒトＲＬ濾胞性リンパ腫細胞をｓ．ｃ．接種した。マウスを、腫瘍接種後６日目に開始して毎日、３０μｌのＦｌｔ３Ｌタンパク質でｉ．ｐ．処置した。毎日の病変周囲キメラ送達（３０μｇ）を、触知できる腫瘍に到達した、腫瘍接種後の１０日目に開始した。抗ヒトＣｌｅｃ９ａＶＨＨ／抗ヒトＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ−Ｒ１４９Ａ二重特異的キメラによる処置は、腫瘍増殖の安定化をもたし、これは、ＰＢＳの注入と対照的に、Ｆｌｔ３Ｌ注入と組み合わされるとさらに顕著であった。グラフは、腫瘍増殖を平均値±ＳＥＭとして示す。
【０４５１】
したがって、抗ヒトＣｌｅｃ９ａ  ＶＨＨ／抗ヒトＰＤ−Ｌ１  ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ−Ｒ１４９Ａ二重特異的キメラは、ヒト化マウス（再構成ヒト免疫系を有するマウス）におけるヒト腫瘍（ＲＬ）増殖に対する明確な抗腫瘍効果を示した。図１４を参照されたい。
【０４５２】
等価物
本発明をその特定の実施形態と関連付けて説明してきたが、その実施形態はさらに修正が可能であり、本出願は、一般的に、本発明の原理に従った本発明の任意の変形、使用、または改変を包含することが意図され、本発明が属する技術内の既知のまたは日常的な実施の範囲に入る、および上に示されるおよび以下の添付の請求項の範囲に入る本質的な特徴に該当し得る本開示からの乖離を含むものと理解されよう。
【０４５３】
当業者は、本明細書で具体的に記載された特定の実施形態に対する多数の等価物を、ルーチン実験のみを用いて認識し、確認できるであろう。このような等価物は、次の請求項の範囲内に包含されることが意図されている。
【０４５４】
参照による組み込み
本明細書で引用されている全ての特許および刊行物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０４５５】
本明細書で考察された出版物は、単に本出願の出願日に先行してそれらが開示されているという理由で提供されている。本明細書のいずれも、本発明が、先行発明の理由でこのような出版物に先行する権利がないことを容認すると解釈されるべきではない。
【０４５６】
本明細書で使用されている全ての見出しは、単に構成上の理由によるものであり、どんな形にせよ、本開示を限定することを意図するものではない。任意の個別のセクションの内容は、等しく全てのセクションに適用することができる。
【０４５７】
参考文献
以下の参考文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
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Ｓｈｏｒｔｍａｎ  Ｋ  ａｎｄ  Ｈｅａｔｈ  ＷＲ（２０１０）Ｔｈｅ  ＣＤ８＋  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｓｕｂｓｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２３４：１８−３１
Ｄｅｎ  Ｈａａｎ  ＪＭ，Ｌｅｈａｒ  ＳＭ  ａｎｄ  Ｂｅｖａｎ  ＭＪ（２０００）ＣＤ８（＋）ｂｕｔ  ｎｏｔ  ＣＤ８（−）ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｃｒｏｓｓ−ｐｒｉｍｅ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９２：１６８５−１６９６
Ｈｅａｔｈ  ＷＲ，Ｂｅｌｚ  ＧＴ，Ｂｅｈｒｅｎｓ  ＧＭ，Ｓｍｉｔｈ  ＣＭ，Ｆｏｒｅｈａｎ  ＳＰ，Ｐａｒｉｓｈ  ＩＡ，Ｄａｖｅｙ  ＧＭ，Ｗｉｌｓｏｎ  ＮＳ，Ｃａｒｂｏｎｅ  ＦＲ  ａｎｄ  Ｖｉｌｌａｄａｎｇｏｓ  ＪＡ（２００４）Ｃｒｏｓｓ−ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ，ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｓｕｂｓｅｔｓ，ａｎｄ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｔｏ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １９９：９−２６
Ｄａｌｌａｌ  ＲＭ  ａｎｄ  Ｌｏｔｚｅ  ＭＴ（２０００）Ｔｈｅ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｖａｃｃｉｎｅｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １２：５８３−５８８
Ｓｔｅｉｎｍａｎ  ＲＭ  ａｎｄ  Ｄｈｏｄａｐｋａｒ  Ｍ（２００１）Ａｃｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｗｉｔｈ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ：ｔｈｅ  ｎｅａｒ  ｆｕｔｕｒｅ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  ９４：４５９−４７３
Ｈｓｕ  ＦＪ，Ｂｅｎｉｋｅ  Ｃ，Ｆａｇｎｏｎｉ  Ｆ，Ｌｉｌｅｓ  ＴＭ，Ｃｚｅｒｗｉｎｓｋｉ  Ｄ，Ｔａｉｄｉ  Ｂ，Ｅｎｇｌｅｍａｎ  ＥＧ  ａｎｄ  Ｌｅｖｙ  Ｒ（１９９６）Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｕｓｉｎｇ  ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｐｕｌｓｅｄ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２：５２−５８
Ｒａｄｆｏｒｄ  ＫＪ  ａｎｄ  Ｃａｍｉｎｓｃｈｉ  Ｉ（２０１３）Ｎｅｗ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｖａｃｃｉｎｅｓ．Ｈｕｍａｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ＆  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ９：２５９−２６４
Ｂｏｚｚａｃｃｏ  Ｌ，Ｔｒｕｍｐｆｈｅｌｌｅｒ  Ｃ，Ｓｉｅｇａｌ  ＦＰ，Ｍｅｈａｎｄｒｕ  Ｓ，Ｍａｒｋｏｗｉｔｚ  Ｍ，Ｃａｒｒｉｎｇｔｏｎ  Ｍ，Ｎｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ  ＭＣ，Ｐｉｐｅｒｎｏ  ＡＧ  ａｎｄ  Ｓｔｅｉｎｍａｎ  ＲＭ（２００７）ＤＥＣ−２０５  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｏｎ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＩＶ  ｇａｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｏ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ａ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ＭＨＣ  Ｉ  ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １０４：１２８９−１２９４
Ｂｉｒｋｈｏｌｚ  Ｋ，Ｓｃｈｗｅｎｋｅｒｔ  Ｍ，Ｋｅｌｌｎｅｒ  Ｃ，Ｇｒｏｓｓ  Ｓ，Ｆｅｙ  Ｇ，Ｓｃｈｕｌｅｒ−Ｔｈｕｒｎｅｒ  Ｂ，Ｓｃｈｕｌｅｒ  Ｇ，Ｓｃｈａｆｔ  Ｎ  ａｎｄ  Ｄｏｒｒｉｅ  Ｊ（２０１０）Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ＤＥＣ−２０５  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｉｎ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｂｌｏｏｄ  １１６：２２７７−２２８５
Ｆｌｙｎｎ  ＢＪ，Ｋａｓｔｅｎｍｕｌｌｅｒ  Ｋ，Ｗｉｌｌｅ−Ｒｅｅｃｅ  Ｕ，Ｔｏｍａｒａｓ  ＧＤ，Ａｌａｍ  Ｍ，Ｌｉｎｄｓａｙ  ＲＷ，Ｓａｌａｚａｒ  ＡＭ，Ｐｅｒｄｉｇｕｅｒｏ  Ｂ，Ｇｏｍｅｚ  ＣＥ，Ｗａｇｎｅｒ  Ｒ，Ｅｓｔｅｂａｎ  Ｍ，Ｐａｒｋ  ＣＧ，Ｔｒｕｍｐｆｈｅｌｌｅｒ  Ｃ，Ｋｅｌｅｒ  Ｔ，Ｐａｎｔａｌｅｏ  Ｇ，Ｓｔｅｉｎｍａｎ  ＲＭ  ａｎｄ  Ｓｅｄｅｒ  Ｒ（２０１１）Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＨＩＶ  Ｇａｇ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｏ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｌｌｏｗｅｄ  ｂｙ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ｖａｃｃｉｎｉａ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｒｏｂｕｓｔ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｉｎ  ｎｏｎｈｕｍａｎ  ｐｒｉｍａｔｅｓ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １０８：７１３１−７１３６
Ｉｄｏｙａｇａ  Ｊ，Ｌｕｂｋｉｎ  Ａ，Ｆｉｏｒｅｓｅ  Ｃ，Ｌａｈｏｕｄ  ＭＨ，Ｃａｍｉｎｓｃｈｉ  Ｉ，Ｈｕａｎｇ  Ｙ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  Ａ，Ｃｌａｕｓｅｎ  ＢＥ，Ｐａｒｋ  ＣＧ，Ｔｒｕｍｐｆｈｅｌｌｅｒ  Ｃ  ａｎｄ  Ｓｔｅｉｎｍａｎ  ＲＭ（２０１１）Ｃｏｍｐａｒａｂｌｅ  Ｔ  ｈｅｌｐｅｒ  １（Ｔｈ１）ａｎｄ  ＣＤ８  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｂｙ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＨＩＶ  ｇａｇ  ｐ２４  ｔｏ  ＣＤ８  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｌａｎｇｅｒｉｎ，ＤＥＣ２０５，ａｎｄ  Ｃｌｅｃ９Ａ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １０８：２３８４−２３８９
Ｓａｎｃｈｏ  Ｄ，Ｊｏｆｆｒｅ  ＯＰ，Ｋｅｌｌｅｒ  ＡＭ，Ｒｏｇｅｒｓ  ＮＣ，Ｍａｒｔｉｎｅｚ  Ｄ，Ｈｅｒｎａｎｚ−Ｆａｌｃｏｎ  Ｐ，Ｒｏｓｅｗｅｌｌ  Ｉ  ａｎｄ  Ｒｅｉｓ  ｅ  Ｓｏｕｓａ  Ｃ（２００９）Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｈａｔ  ｃｏｕｐｌｅｓ  ｓｅｎｓｉｎｇ  ｏｆ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｔｏ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｎａｔｕｒｅ  ４５８：８９９−９０３
Ｃａｍｉｎｓｃｈｉ  Ｉ，Ｐｒｏｉｅｔｔｏ  ＡＩ，Ａｈｍｅｔ  Ｆ，Ｋｉｔｓｏｕｌｉｓ  Ｓ，Ｓｈｉｎ  Ｔｅｈ  Ｊ，Ｌｏ  ＪＣ，Ｒｉｚｚｉｔｅｌｌｉ  Ａ，Ｗｕ  Ｌ，Ｖｒｅｍｅｃ  Ｄ，ｖａｎ  Ｄｏｍｍｅｌｅｎ  ＳＬ，Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ＩＫ，Ｍａｒａｓｋｏｖｓｋｙ  Ｅ，Ｂｒａｌｅｙ  Ｈ，Ｄａｖｅｙ  ＧＭ，Ｍｏｔｔｒａｍ  Ｐ，ｖａｎ  ｄｅ  Ｖｅｌｄｅ  Ｎ，Ｊｅｎｓｅｎ  Ｋ，Ｌｅｗ  ＡＭ，Ｗｒｉｇｈｔ  ＭＤ，Ｈｅａｔｈ  ＷＲ，Ｓｈｏｒｔｍａｎ  Ｋ  ａｎｄ  Ｌａｈｏｕｄ  ＭＨ（２００８）Ｔｈｅ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｓｕｂｔｙｐｅ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  Ｃ−ｔｙｐｅ  ｌｅｃｔｉｎ  Ｃｌｅｃ９Ａ  ｉｓ  ａ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ．Ｂｌｏｏｄ  １１２：３２６４−３２７３
Ｓａｎｃｈｏ  Ｄ，Ｍｏｕｒａｏ−Ｓａ  Ｄ，Ｊｏｆｆｒｅ  ＯＰ，Ｓｃｈｕｌｚ  Ｏ，Ｒｏｇｅｒｓ  ＮＣ，Ｐｅｎｎｉｎｇｔｏｎ  ＤＪ，Ｃａｒｌｙｌｅ  ＪＲ  ａｎｄ  Ｒｅｉｓ  ｅ  Ｓｏｕｓａ  Ｃ（２００８）Ｔｕｍｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｖｉａ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｏ  ａ  ｎｏｖｅｌ，ＤＣ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  Ｃ−ｔｙｐｅ  ｌｅｃｔｉｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  １１８：２０９８−２１１０
Ｌａｈｏｕｄ  ＭＨ，Ａｈｍｅｔ  Ｆ，Ｋｉｔｓｏｕｌｉｓ  Ｓ，Ｗａｎ  ＳＳ，Ｖｒｅｍｅｃ  Ｄ，Ｌｅｅ  ＣＮ，Ｐｈｉｐｓｏｎ  Ｂ，Ｓｈｉ  Ｗ，Ｓｍｙｔｈ  ＧＫ，Ｌｅｗ  ＡＭ，Ｋａｔｏ  Ｙ，Ｍｕｅｌｌｅｒ  ＳＮ，Ｄａｖｅｙ  ＧＭ，Ｈｅａｔｈ  ＷＲ，Ｓｈｏｒｔｍａｎ  Ｋ  ａｎｄ  Ｃａｍｉｎｓｃｈｉ  Ｉ（２０１１）Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｔｏ  ｍｏｕｓｅ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｖｉａ  Ｃｌｅｃ９Ａ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｐｏｔｅｎｔ  ＣＤ４  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｂｉａｓｅｄ  ｔｏｗａｒｄ  ａ  ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｈｅｌｐｅｒ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １８７：８４２−８５０
Ｓｃｈｒｅｉｂｅｌｔ  Ｇ，Ｋｌｉｎｋｅｎｂｅｒｇ  ＬＪ，Ｃｒｕｚ  ＬＪ，Ｔａｃｋｅｎ  ＰＪ，Ｔｅｌ  Ｊ，Ｋｒｅｕｔｚ  Ｍ，Ａｄｅｍａ  ＧＪ，Ｂｒｏｗｎ  ＧＤ，Ｆｉｇｄｏｒ  ＣＧ  ａｎｄ  ｄｅ  Ｖｒｉｅｓ  ＩＪ（２０１２）Ｔｈｅ  Ｃ−ｔｙｐｅ  ｌｅｃｔｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＬＥＣ９Ａ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｕｐｔａｋｅ  ａｎｄ（ｃｒｏｓｓ−）ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ｂｌｏｏｄ  ＢＤＣＡ３＋  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ  １１９：２２８４−２２９２
Ｗｅｓｏｌｏｗｓｋｉ  Ｊ，Ａｌｚｏｇａｒａｙ  Ｖ，Ｒｅｙｅｌｔ  Ｊ，Ｕｎｇｅｒ  Ｍ，Ｊｕａｒｅｚ  Ｋ，Ｕｒｒｕｔｉａ  Ｍ，Ｃａｕｅｒｈｆｆ  Ａ，Ｄａｎｑｕａｈ  Ｗ，Ｒｉｓｓｉｅｋ  Ｂ，Ｓｃｈｅｕｐｌｅｉｎ  Ｆ，Ｓｃｈｗａｒｚ  Ｎ，Ａｄｒｉｏｕｃｈ  Ｓ，Ｂｏｙｅｒ  Ｏ，Ｓｅｍａｎ  Ｍ，Ｌｉｃｅａ  Ａ，Ｓｅｒｒｅｚｅ  ＤＶ，Ｇｏｌｄｂａｕｍ  ＦＡ，Ｈａａｇ  Ｆ  ａｎｄ  Ｋｏｃｈ−Ｎｏｌｔｅ  Ｆ（２００９）Ｓｉｎｇｌｅ  ｄｏｍａｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔｏｏｌｓ  ｉｎ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １９８：１５７−１７４
Ｈａｒｍｓｅｎ  ＭＭ  ａｎｄ  Ｄｅ  Ｈａａｒｄ  ＨＪ（２００７）Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｃａｍｅｌｉｄ  ｓｉｎｇｌｅ−ｄｏｍａｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ７７：１３−２２
Ｄｏｌｋ  Ｅ，ｖａｎ  Ｖｌｉｅｔ  Ｃ，Ｐｅｒｅｚ  ＪＭ，Ｖｒｉｅｎｄ  Ｇ，Ｄａｒｂｏｎ  Ｈ，Ｆｅｒｒａｔ  Ｇ，Ｃａｍｂｉｌｌａｕ  Ｃ，Ｆｒｅｎｋｅｎ  ＬＧ  ａｎｄ  Ｖｅｒｒｉｐｓ  Ｔ（２００５）Ｉｎｄｕｃｅｄ  ｒｅｆｏｌｄｉｎｇ  ｏｆ  ａ  ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  ｄｅｎａｔｕｒｅｄ  ｌｌａｍａ  ｈｅａｖｙ−ｃｈａｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｂｙ  ｉｔｓ  ａｎｔｉｇｅｎ．Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ５９：５５５−５６４
Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｓ（２０１３）Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ：ｎａｔｕｒａｌ  ｓｉｎｇｌｅ−ｄｏｍａｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ８２：７７５−７９７
Ｌｅｓｔｅｒｈｕｉｓ  ＷＪ，Ａａｒｎｔｚｅｎ  ＥＨ，Ｄｅ  Ｖｒｉｅｓ  ＩＪ，Ｓｃｈｕｕｒｈｕｉｓ  ＤＨ，Ｆｉｇｄｏｒ  ＣＧ，Ａｄｅｍａ  ＧＪ  ａｎｄ  Ｐｕｎｔ  ＣＪ（２００８）Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ：ｆｒｏｍ  ｐｒｏｍｉｓｅ  ｔｏ  ｐｒｏｏｆ？  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ／Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ６６：１１８−１３４
Ｖｕｌｉｎｋ  Ａ，Ｒａｄｆｏｒｄ  ＫＪ，Ｍｅｌｉｅｆ  Ｃ  ａｎｄ  Ｈａｒｔ  ＤＮ（２００８）Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ９９：３６３−４０７
Ｌｕｆｔ  Ｔ，Ｐａｎｇ  ＫＣ，Ｔｈｏｍａｓ  Ｅ，Ｈｅｒｔｚｏｇ  Ｐ，Ｈａｒｔ  ＤＮ，Ｔｒａｐａｎｉ  Ｊ  ａｎｄ  Ｃｅｂｏｎ  Ｊ（１９９８）Ｔｙｐｅ  Ｉ  ＩＦＮｓ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｔｈｅ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６１：１９４７−１９５３
Ｐａｑｕｅｔｔｅ  ＲＬ，Ｈｓｕ  ＮＣ，Ｋｉｅｒｔｓｃｈｅｒ  ＳＭ，Ｐａｒｋ  ＡＮ，Ｔｒａｎ  Ｌ，Ｒｏｔｈ  ＭＤ  ａｎｄ  Ｇｌａｓｐｙ  ＪＡ（１９９８）Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ａｌｐｈａ  ａｎｄ  ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ  ｉｎｔｏ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ６４：３５８−３６７
Ｒａｄｖａｎｙｉ  ＬＧ，Ｂａｎｅｒｊｅｅ  Ａ，Ｗｅｉｒ  Ｍ  ａｎｄ  Ｍｅｓｓｎｅｒ  Ｈ（１９９９）Ｌｏｗ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ａｌｐｈａ  ｉｎｄｕｃｅ  ＣＤ８６（Ｂ７．２）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｓ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５０：４９９−５０９
【図１Ａ】
2019506867.tif 000014
【図１Ｂ】
2019506867.tif 000015
【図１Ｃ】
2019506867.tif 000016
【図１Ｄ】
2019506867.tif 000017
【図１Ｅ】
2019506867.tif 000018
【図１Ｆ】
2019506867.tif 000019
【図２Ａ】
2019506867.tif 000020
【図２Ｂ】
2019506867.tif 000021
【図２Ｃ】
2019506867.tif 000022
【図３−１】
2019506867.tif 000023
【図３−２】
2019506867.tif 000024
【図３−３】
2019506867.tif 000025
【図４−１】
2019506867.tif 000026
【図４−２】
2019506867.tif 000027
【図５】
2019506867.tif 000028
【図６Ａ】
2019506867.tif 000029
【図６Ｂ】
2019506867.tif 000030
【図７】
2019506867.tif 000031
【図８】
2019506867.tif 000032
【図９】
2019506867.tif 000033
【図１０Ａ】
2019506867.tif 000034
【図１０Ｂ】
2019506867.tif 000035
【図１１】
2019506867.tif 000036
【図１２Ａ】
2019506867.tif 000037
【図１２Ｂ】
2019506867.tif 000038
【図１２Ｃ】
2019506867.tif 000039
【図１２Ｄ】
2019506867.tif 000040
【図１２Ｅ】
2019506867.tif 000041
【図１２Ｆ】
2019506867.tif 000042
【図１３】
2019506867.tif 000043
【図１４】
2019506867.tif 000044
【配列表】
2019506867000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年10月10日(2018.10.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
2019506867.tif 000045
2019506867.tif 000046
2019506867.tif 000047
2019506867.tif 000048
2019506867.tif 000049