(57)【要約】  本発明は、例えば、疼痛および眼表面疾患などのPAR関連疾患の予防および／または治療における使用のための化合物に関連する。特に、本発明は、膵炎関連疼痛、ＩＢＳ（過敏性腸症候群）、ＩＢＤ（炎症性腸疾患）、ドライアイ疾患および乾性結膜炎（conjunctivitis sicca）の予防および／または治療における使用のためのビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネートを提供する。この阻害剤は、ジフェニルグアニジノフェニルエチルホスホネートと比較して異なる阻害特性を有することが見出され、これらの状態に対してより顕著な効果をもたらした。【特許請求の範囲】
【請求項１】
疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器障害、および胃腸障害を含むリストから選択されるPAR（プロテアーゼ活性化受容体）関連疾患の予防および／または治療に使用するためのビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネート化合物。
【請求項２】
請求項１に規定されるとおりに使用するためのビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネート化合物であって、前記化合物は式Iであって、
【化１】
2019516715.tif 000012
式中、Aは直接結合、- (C=O) -、-(C=O) -O-、-(C=O) -NH-、または-SO2-を含むリストから選択されるものであり、および
Rは脂肪族基または芳香族基から選択される、化合物。
【請求項３】
請求項２で規定されるとおりに使用するためのビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネート化合物であって、 
式中、
Aは直接結合、- (C=O) -、-(C=O)-O-、-(C=O) -NH-、または-SO2-を含むリストから選択されるものであり、および
Rは、-C1-6アルキル、または3〜6員芳香族環から選択されるものであって、前記-C1-6アルキルは、3〜6員芳香族環で任意に置換される、化合物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項で規定されるとおりに使用するためのビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネート化合物であって、前記化合物は化合物２および化合物４から選択されるものである、化合物。
【化２】
2019516715.tif 000013
【化３】
2019516715.tif 000014
【請求項５】
疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器障害、および胃腸障害を含むリストから選択されるPAR関連疾患の予防および／または治療に使用するための医薬組成物であって、前記組成物は請求項１〜４のいずれか１項で規定されるビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネート化合物を含む、医薬組成物。
【請求項６】
前記PAR関連疾患が疼痛および眼表面疾患を含むリストから選択されるものである、請求項１〜４のいずれか１項で規定されるとおりに使用するための化合物、または請求項５で規定されるとおりに使用するための医薬組成物。
【請求項７】
前記PAR関連疾患が疼痛である、請求項１〜４のいずれか１項で規定されるとおりに使用するための化合物、または請求項５で規定されるとおりに使用するための医薬組成物。
【請求項８】
前記PAR関連疾患が、内臓痛、炎症性疼痛、および神経因性疼痛から選択される疼痛である、請求項１〜４のいずれか１項で規定されるとおりに使用するための化合物、または請求項５で規定されるとおりに使用するための医薬組成物。
【請求項９】
前記PAR関連疾患が、膵炎関連疼痛、術後疼痛、癌性疼痛、膀胱痛、IBS（過敏性腸症候群）の疼痛、およびIBD（炎症性腸疾患）の疼痛から選択される内臓痛である、請求項１〜４のいずれか１項で規定されるとおりに使用するための化合物、または請求項５で規定されるとおりに使用するための医薬組成物。
【請求項１０】
前記PAR関連疾患が、眼表面疾患である、請求項１〜４のいずれか１項で規定されるとおりに使用するための化合物、または請求項５で規定されるとおりに使用するための医薬組成物。
【請求項１１】
前記PAR関連疾患が、ドライアイ症候群、マイボーム腺機能不全、眼瞼炎（blepharitis）、酒さ（rosaceous）、アレルギー、緑内障薬物による瘢痕、化学的な火傷、熱傷、および粘液膜類天疱瘡およびシェーグレン症候群のような免疫学的状態を含むリストから選択される眼表面疾患である、請求項１〜４のいずれか１項で規定されるとおりに使用するための化合物、または請求項５で規定されるとおりに使用するための医薬組成物。
【請求項１２】
疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器障害、胃腸障害を含むリストから選択される少なくとも１つのPAR関連疾患の予防および／または治療のための、請求項１〜４のいずれか１項で規定されるとおりに使用するための化合物、または請求項５で規定されるとおりに使用するための医薬組成物の使用。
【請求項１３】
疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器障害、胃腸障害を含むリストから選択される少なくとも１つのPAR関連疾患の予防および／または治療の方法であって、前記方法は、請求項１〜４のいずれか１項で規定される化合物、または請求項５で規定される医薬組成物の治療有効量をそれを必要とする対象に投与することを含む、方法。
【請求項１４】
前記PAR関連疾患が疼痛および眼表面疾患を含むリストから選択されるものである、請求項１０に記載の使用、または請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記PAR関連疾患が、膵炎関連疼痛、術後疼痛、癌性疼痛、膀胱痛、IBS（過敏性腸症候群）の疼痛、IBD（炎症性腸疾患）の疼痛、ドライアイ症候群、マイボーム腺機能不全、眼瞼炎（blepharitis）、酒さ（rosaceous）、アレルギー、緑内障薬物による瘢痕、化学的な火傷、熱傷、および粘液膜類天疱瘡およびシェーグレン症候群のような免疫学的状態から選択される、請求項１０に記載の使用、または請求項１１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えば、疼痛および眼表面疾患などのPAR関連疾患の予防および／または治療における使用のための化合物に関連する。特に、本発明は、膵炎関連疼痛、ＩＢＳ（過敏性腸症候群）、ＩＢＤ（炎症性腸疾患）、ドライアイ疾患および乾性結膜炎（conjunctivitis sicca）の予防および／または治療における使用のためのビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネートを提供する。この阻害剤は、ジフェニルグアニジノフェニルエチルホスホネートと比較して異なる阻害特性を有することが見出され、これらの状態に対してより顕著な効果をもたらした。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、ビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニル - エチルホスホネート化合物がPAR（Protease Activated Receptor：プロテアーゼ活性化受容体）関連疾患、特に、PAR２関連疾患の治療に非常に有用であるという発見に基づく。PAR２は独自の活性化メカニズムを有し、多くの生物学的機能に関与する複数のタンパク質分解酵素の共通の標的である。PAR２は数種のタイプの疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器障害、および胃腸障害で記載される。報告されたPAR２活性化酵素は、肥満細胞トリプターゼ、KLK2、KLK4、KLK5、KLK6、KLK14、TMPRSS2、トリプシンＩＶ、 trypsin IV、マトリプターゼ／MT-SP1を含む。
【０００３】
したがって、PAR関連障害、または、より具体的にはPAR２関連障害の治療において、PAR活性化酵素のいくつかを同時に標的とするために、多標的化合物が必要とされることが予測される。実際、我々は、複数のインビボモデルにおいてPAR活性化を低下させるための正確な多標的生化学的および物理化学的特性を有する一連のセリンプロテアーゼ標的化合物を見出した。事実、以下の本明細書の実施例から明らかなように、本明細書に開示される化合物は、PAR関連障害、例えば、疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器疾患、胃腸障害の治療に非常に有用であることが判明した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
疼痛、特に内臓痛または過敏症に関して、例えばＩＢＳ（過敏性腸症候群）、ＩＢＤ（炎症性腸疾患）および膵炎の集団でよく知られた問題である。現在、内臓痛感覚を正常化することによって機能する治療戦略は利用できない。膨大な満たされていないニーズの存在は、FDAによって承認された相当数の薬物の欠如と、いくつかの有害な副作用、例えば、重度の慢性突発性便秘、虚血性大腸炎、腹部の不快感および痛み、吐き気、消化器系不快感および痛み、頭痛、めまい、下痢、および肝機能障害を引き起こす適応外薬の使用の結果である。ＩＢＳの分野では、痛み過敏症は最も重要な満たされていないニーズである。市場での過敏性腸症候群の治療薬は、承認された医薬品が4つ：ロトロネックス(Lotronex) 、アミティーザ（Amitiza）、 リンゼス（Linzess）もしくはコンステッラ（Constella）、およびイリボー（Iribo）しかありません。セリンプロテアーゼは胃腸疾患に関連することが一般に知られているが、我々が知る限りこれまで、薬物様小分子セリンプロテアーゼ阻害剤は、内臓痛に関連するインビボモデルにおいて治療に関連する効果を特に示さなかった。
【０００５】
眼の障害に関して、特にドライアイ、アレルギー性角結膜炎、感染症、および化学的傷害等の眼表面疾患は一般的な病状である。セリンプロテアーゼは眼表面疾患に関連することが一般に知られているが、これまで小分子セリンプロテアーゼ阻害剤は、眼表面疾患に関連するインビボモデルにおいて強い効果を示さなかった。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
我々は、PAR関連障害、特に胃腸管および眼疾患における疼痛（過敏症）の治療のための理想的な阻害特性および物理化学的特性を有する化学的鋳型としてビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネートを同定した。一般に、ジフェニルグアニジノフェニルエチルホスホネートは、強力で選択的なuPA阻害剤であり、それらはインビボモデルにおいて非常に強力な抗転移効果を示した(Joossens et al., 2007)。この鋳型は、腫瘍画像化のための活性に基づくプローブを開発するためにも用いられた(Thomae et al., 2015)。
【０００７】
同じ研究において、これらのジフェニルグアニジノフェニルエチルホスホネートは、フェノール部分の代わりにパラセタモール部分を放出することにより起こり得る細胞毒性効果を回避するために、ビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネートを目指して修飾される。これまで、ジフェニルグアニジノフェニルエチルホスホネート骨格からビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネートに向かうシフトが異なる治療の適用につながり得るという示唆はなかった。
【０００８】
それにもかかわらず、我々は本明細書において最初にインビトロおよびインビボにおけるジフェニルグアニジノフェニルエチルホスホネートのビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネートへのシフトが異なる治療の適用につながる証拠を提供する。さらに、わずかに異なる阻害特性が、ジフェニルグアニジノフェニルエチルホスホネートとビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネートとの間の阻害特性の差を示す表１に説得力を持って示されている。
【０００９】
我々はセリンプロテアーゼのパネル： uPA、tPA、トロンビン、プラスミン、FXIIa、FXa、カテプシンG、HNE、KLK1、KLK2、KLK4、KLK8、PLKLK、トリプターゼ、マトリプターゼ、キモトリプシンおよびキマーゼに対してジフェニルグアニジノフェニルエチルホスホネートとビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネートとの違いを評価した。ジフェニルグアニジノフェニルエチルホスホネートはそのビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネート類似体と比較して、マトリプターゼ、トリプターゼおよびカテプシンGに対する阻害が有意に低いことを示す。生化学的特性のこの差異だけでなく、物理化学的特性の可能性のある差異も、PAR関連障害、例えば、痛み、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器障害および胃腸障害等の治療においてそれらをより有用にする。
【００１０】
本願明細書において提供される本化合物は、内臓痛および眼球表面疾患モデルラットの慢性および急性モデルで評価される。内臓痛のモデルにおいて、本化合物は、健康でないモデルの過敏症状態を正常状態に戻すことができた。この効果は、ナファモスタットによる治療よりも有意により顕著であった。ナファモスタットメシル酸塩は、広い薬効範囲のセリンプロテアーゼ阻害剤、カリクレイン阻害剤であり、血液凝固を阻害する。また、補体阻害剤である可能性があります。ラット眼表面疾患モデルでは、本化合物は、本発明日の時点でドライアイ治療の唯一の処方薬であるRestasis（登録商標）に対して、疾患状態（組織損傷に関連する）を有意に逆転させることができ、改善された結果を示した。
【００１１】
第一の態様において、本発明は、疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器障害、および胃腸障害を含むリストから選択されるPAR（protease-activated receptor：プロテアーゼ活性化受容体）関連疾患の予防および／または治療に使用するためのビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニル-エチルホスホネート化合物を提供する。
【００１２】
特に本発明に使用するための前記ビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニル-エチルホスホネート化合物は式Iの化合物である。
【化１】
2019516715.tif 000002
式中、Aは直接結合、- (C=O) -、-(C=O) -O-、-(C=O) -NH-、または-SO2-を含むリストから選択されるものであり、および
Rは脂肪族基または芳香族基から選択される。
【００１３】
本発明の特定の態様において、
Aは直接結合、- (C=O) -、-(C=O)-O-、-(C=O) -NH-、または-SO2-を含むリストから選択されるものであり、および
Rは、-C1-6アルキル、または3〜6員芳香族環から選択されるものであって、前記-C1-6アルキルは、3〜6員芳香族環で任意に置換される。
【００１４】
非常に特異的な態様において、本発明に使用される前記ビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネート化合物は化合物２および化合物４から選択される化合物である。
【化２】
2019516715.tif 000003
【化３】
2019516715.tif 000004
【００１５】
本発明は、疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器疾患、胃腸障害を含むリストから選択されるPAR関連疾患の予防および／または治療に使用するための医薬組成物をも提供する。前記組成物は請求項１〜４のいずれかに規定されるビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネート化合物を含む。
【００１６】
本発明の特定の態様において、本発明のPAR関連疾患は疼痛および眼表面疾患を含むリストから選択される。前記疼痛は、内臓痛、炎症性疼痛、および神経因性疼痛；特に、膵炎関連疼痛、術後疼痛、癌性疼痛、膀胱痛、IBS（過敏性腸症候群）に関連する疼痛、およびIBD（炎症性腸疾患）に関連する疼痛などの内臓痛を含むリストから特に選択される。前記眼表面疾患は、ドライアイ症候群、マイボーム腺機能不全、眼瞼炎（blepharitis）、酒さ（rosaceous）、アレルギー、緑内障薬物による瘢痕、化学的な火傷、熱傷、および粘液膜類天疱瘡およびシェーグレン症候群のような免疫学的状態および特にドライアイ疾患および乾性結膜炎、より特にはドライアイ疾患を含む。
【００１７】
さらなる態様において、 本発明は、疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器疾患、胃腸障害を含むリストから選択される少なくとも１つのPAR関連疾患の予防および／または治療のための本発明の化合物または組成物の使用を提供する。
【００１８】
最後の態様において、本発明は疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器疾患、胃腸障害を含むリストから選択される少なくとも１つのPAR関連疾患の予防および／または治療のための方法を提供する。前記方法は、それを必要とする対象に治療有効量の本発明の化合物または組成物を投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
ここで図面を具体的に参照するが、ここで示される詳細は、例として示されるものであり、本発明の異なる態様の説明のためだけのものであることが強調される。これらは本発明の原理および概念的側面の最も有用で容易な説明であると考えられるものを提供するために提示される。これに関し、本発明の基本的な理解に必要であるよりも詳細に本発明の構造的詳細を示す試みはなされていない。図面を用いた本説明は本発明のいくつかの形態がどのようにして実際に実施され得るかを当業者に明らかにする。
【００２０】
【図１Ａ】内臓痛のための大腸炎後ラットモデルにおける化合物４の効果。大腸炎（四角）および対照（黒丸）ラットにおけるVMRに対するビヒクル（黒色の記号）および化合物４の効果。データは平均±SEMとして示される。一般化推定方程式(GEE)＋LSD事後検定；n=8-11。*p<0.05; **p<0.01; ***p<0.001; 対照＋ビヒクルとは有意に異なる。 #p<0.05;##p<0.01; ###p<0.001; 大腸炎後＋ビヒクルとは有意に異なる。
【図１Ｂ】内臓痛のための大腸炎後ラットモデルにおける化合物４の効果。大腸炎（四角）および対照（黒丸）ラットにおけるVMRに対するビヒクル（黒色の記号）および化合物４の効果。データは平均±SEMとして示される。一般化推定方程式(GEE)＋LSD事後検定；n=8-11。*p<0.05; **p<0.01; ***p<0.001; 対照＋ビヒクルとは有意に異なる。 #p<0.05;##p<0.01; ###p<0.001; 大腸炎後＋ビヒクルとは有意に異なる。
【図１Ｃ】内臓痛のための大腸炎後ラットモデルにおける化合物４の効果。大腸炎（四角）および対照（黒丸）ラットにおけるVMRに対するビヒクル（黒色の記号）および化合物４の効果。データは平均±SEMとして示される。一般化推定方程式(GEE)＋LSD事後検定；n=8-11。*p<0.05; **p<0.01; ***p<0.001; 対照＋ビヒクルとは有意に異なる。 #p<0.05;##p<0.01; ###p<0.001; 大腸炎後＋ビヒクルとは有意に異なる。
【図１Ｄ】内臓痛のための大腸炎後ラットモデルにおける化合物４の効果。大腸炎（四角）および対照（黒丸）ラットにおけるVMRに対するビヒクル（黒色の記号）および化合物４の効果。データは平均±SEMとして示される。一般化推定方程式(GEE)＋LSD事後検定；n=8-11。*p<0.05; **p<0.01; ***p<0.001; 対照＋ビヒクルとは有意に異なる。 #p<0.05;##p<0.01; ###p<0.001; 大腸炎後＋ビヒクルとは有意に異なる。
【図２Ａ】内臓痛のための大腸炎後ラットモデルにおける化合物１の効果。大腸炎（四角）および対照（黒丸）ラットにおけるVMRに対するビヒクル（黒色の記号）および化合物１の効果。データは平均±SEMとして示される。一般化推定方程式＋LSD事後検定。 * p < 0.05；「対照＋ビヒクル」とは有意に異なる； # p <0.05；「大腸炎後＋ビヒクル」とは有意に異なる。
【図２Ｂ】内臓痛のための大腸炎後ラットモデルにおける化合物１の効果。大腸炎（四角）および対照（黒丸）ラットにおけるVMRに対するビヒクル（黒色の記号）および化合物１の効果。データは平均±SEMとして示される。一般化推定方程式＋LSD事後検定。 * p < 0.05；「対照＋ビヒクル」とは有意に異なる； # p <0.05；「大腸炎後＋ビヒクル」とは有意に異なる。
【図３】内臓痛のための大腸炎後ラットモデルにおけるナファモスタットメシル酸塩（ＮＭ）の効果。大腸炎後（四角）および対照（黒丸）ラットにおけるVMRに対するビヒクル（黒色の記号）およびＮＭの効果。データは平均±SEMとして示される。一般化推定方程式(GEE)＋LSD事後検定；n=7-8. *p<0.05;**p<0.01; ***p<0.001；対照＋ビヒクルとは有意に異なる。
【図４】対照、未処理、ビヒクルおよびレスタシス（登録商標）に対する化合物１、２および４の組織損傷スコア。
【図５】対照、未処理、ビヒクルおよびレスタシス（登録商標）に対する２つの異なる濃度における化合物４の２回の生体内実験の平均組織損傷スコア±SEM。
【図６】対照、未処理、ビヒクルおよびレスタシス（登録商標）に対する２つの異なる濃度における化合物４の２回の生体内実験の平均IL-1α濃度±SEM。
【図７】２つの生体内実験の平均TNF-α濃度±SEM。
【図８Ａ】対照、ビヒクルおよびレスタシス（登録商標）の7日以降の２つの異なる濃度での化合物４のIL-1α、TNF-αおよび組織損傷値を、未処置のドライアイ（１００％）と比較した。
【図８Ｂ】対照、ビヒクルおよびレスタシス（登録商標）の7日以降の２つの異なる濃度での化合物４のIL-1α、TNF-αおよび組織損傷値を、未処置のドライアイ（１００％）と比較した。
【図８Ｃ】対照、ビヒクルおよびレスタシス（登録商標）の7日以降の２つの異なる濃度での化合物４のIL-1α、TNF-αおよび組織損傷値を、未処置のドライアイ（１００％）と比較した。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明についてさらに記載する。以下の節では、本発明の異なる態様をより詳細に定義する。そのように定義される各態様は、これに反する明示がされない限り、他の態様と組み合わせてもよい。好ましいまたは有利であると示される任意の特徴は、好ましいまたは有利であると示される他の任意の１つまたは複数の特徴と組み合わせられ得る。
【００２２】
本明細書で前述したとおり、第一の態様において、本発明は、疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器障害、および胃腸障害を含むリストから選択されるPAR（protease-activated receptor：プロテアーゼ活性化受容体）関連疾患の予防および／または治療に使用するためのビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニル-エチルホスホネート化合物を提供する。
【００２３】
セリンプロテアーゼは、眼表面疾患および内臓痛または過敏症に関与することが知られているが、これまで、疼痛または眼表面疾患（例えば、ドライアイ）を治療するための最適な小分子セリンプロテアーゼ阻害剤は提示されていない。これはおそらく、これらの疾患がPAR関連障害であり、いくつかのトリプシン様セリンプロテアーゼ、例えば、カリクレイン、トリプシン、トロンビン、カテプシンG、マトリプターゼおよびuPAがプロテアーゼ活性化受容体（PAR）を活性化することが知られているという事実によると考えられる。
【００２４】
プロテアーゼ活性化受容体は、その細胞外ドメインの一部の切断によって活性化される、関連するGタンパク質共役受容体のサブファミリーの一つである。プロテアーゼ活性化受容体またはPARは、PAR１、PAR２、PAR３、およびPAR４の４つが知られている。本発明において、これらのPARの各々は、より一般的な用語PARを意図しているが、本発明は特にPAR２またはPAR４、より特にPAR２に関する。
【００２５】
従って、特定の態様において、本発明は疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器疾患、胃腸障害を含むリストから選択される、PAR１関連疾患、PAR２関連疾患、PAR３関連疾患、またはPAR４関連疾患の予防および／または治療における使用のためのビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニル-エチルホスホネート化合物に関連する。
【００２６】
すなわち、本発明は疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器疾患、胃腸障害を含むリストから選択される、PAR２関連疾患の予防および／または治療における使用のためのビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニル-エチルホスホネート化合物に関連する。
【００２７】
本発明は疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器疾患、胃腸障害；特に膵炎関連疼痛、術後疼痛、癌性疼痛、膀胱痛、IBS（過敏性腸症候群）疼痛、IBD（炎症性腸疾患）疼痛、ドライアイ症候群、マイボーム腺機能不全、眼瞼炎（blepharitis）、酒さ（rosaceous）、アレルギー、緑内障薬物による瘢痕、化学的な火傷、熱傷、および粘液膜類天疱瘡およびシェーグレン症候群のような免疫学的状態を含むリストから選択される、疾患の予防および／または治療における使用のためのビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニル-エチルホスホネート化合物にも関連することに留意されたい。
【００２８】
内臓痛または内臓過敏症で試験したほとんどのセリンプロテアーゼ阻害剤は、療法として開発するにはあまりにも特異的な特性を有するか、あまりにも特異的であり、PAR活性化を停止する完全な可能性はない。
【００２９】
最近、SERPINA3Kのような内因性セリンプロテアーゼ阻害剤が、ドライアイを治療するための可能な解決策として提示されたが (Lin et al., 2014; Hu et al., 2013)、 そのような化合物の物理化学的および化学的特性は、医薬品へのそれらの迅速な開発を妨げる。さらに、セリンプロテアーゼ阻害剤だけでなく、可能な治療戦略として提示することができる。
【００３０】
内臓過敏症のインビボモデルならびに眼表面疾患のインビボモデルにおいて有意に異なる影響を示すと思われるジフェニルグアニジノフェニルエチルホスホネートとビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネートのような非常に密接に関連する類似体を我々は発見した。ジフェニルグアニジノフェニルエチルホスホネートとビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネートはインビボ癌モデルにおいて強力な抗転移特性を有する選択的uPA阻害剤として記載されている(WO2007045496)。ジフェニルホスホネートは、不可逆性セリンプロテアーゼ阻害剤の設計および合成を開始するための標準鋳型である。アリールホスホネート鋳型周辺の合成プログラムのほとんどは、類似体を生成するための合成プロトコルが容易であるため、ジフェニルホスホネート弾頭で開始する。このタイプの化合物の選択性特性は、異なる化学的構成要素またはペプチドテールを組み込むことによって改変される。
【００３１】
当業者は非常に強力で選択的なセリンプロテアーゼ阻害剤の設計を目指しているしかしながら、本明細書に開示された阻害剤の明確な多標的阻害特性が内臓疼痛モデルおよび眼表面疾患モデルにおけるインビボ効果を得るのに有益であることを我々が本明細書において初めて明らかにした。ジフェニルグアニジノフェニルエチルホスホネートとビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネートのような非常に近い類似体の選択性特性における顕著な差異が同定された。ビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネートはマトリプターゼに対する選択性の低い特性を示しという事実は、カテプシンGおよびトリプターゼは、当業者をこれら化学物質群から遠ざけたであろう、しかしながら、我々は、内臓痛または内臓過敏症および眼表面疾患のようなPAR関連疾患の治療における有利な条件として、この特異な特性を特定しこれらの化合物をインビボ評価に向けて前進させた。
【００３２】
我々が知る限り、ビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネートについて、uPA、マトリプターゼ、トリプターゼおよびカテプシンGの組合わせられた強力な阻害はこれまで報告されていない。驚くべきことにビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネート化合物は、より選択的なジフェニルグアニジノフェニルエチルホスホネート阻害剤および慢性内臓痛モデルにおけるナファモスタットのような広域セリンプロテアーゼインヒビターと比較して、慢性内臓痛および眼表面疾患モデルにおいてより顕著な効果を示した。
【００３３】
本明細書において我々は最適な多標的セリン阻害特性および物理化学的特性が、PAR活性化の阻害に対してこの顕著な効果を有するのに必要であることを確かにする。しかしながら、血液凝固およびフィブリン溶解カスケードに関与するセリンプロテアーゼへの影響を管理することがさらなる薬剤開発状況に重要である。ほとんどの特異的セリンプロテアーゼ阻害剤は、プラスミン、tPA、FXIIaおよびトロンビンのような酵素または保護機能を有するプロテアーゼと非常に強い相互作用をも示す。インビボ結果に基づくと、我々は、適切な阻害バランスが過敏症に正の影響を及ぼすことを見出したようである。
【００３４】
特定の態様において、本発明は、疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器疾患、胃腸障害を含むリストから選択される、PAR（protease-activated receptor：プロテアーゼ活性化受容体）関連疾患の予防および／または治療における使用のためのビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニル-エチルホスホネート化合物を提供し、前記化合物は式Iの化合物である。
【化４】
2019516715.tif 000005
式中、Aは直接結合、- (C=O) -、-(C=O) -O-、-(C=O) -NH-、または-SO2-を含むリストから選択されるものであり、および
Rは脂肪族基または芳香族基から選択される。
【００３５】
別の特定の態様において、本発明は疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器疾患、胃腸障害を含むリストから選択される、PAR関連疾患の予防および／または治療における使用のためのビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニル-エチルホスホネート化合物を提供し、前記化合物は式Iの化合物であり、式中、
Aは直接結合、- (C=O) -、-(C=O)-O-、-(C=O) -NH-、または-SO2-を含むリストから選択されるものであり、および
Rは、-C1-6アルキル、または3〜6員芳香族環から選択されるものであって、前記-C1-6アルキルは、3〜6員芳香族環で任意に置換される。
【００３６】
別の特定の態様において、本発明は疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器疾患、胃腸障害を含むリストから選択される、PAR関連疾患の予防および／または治療における使用のためのビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニル-エチルホスホネート化合物を提供し、前記化合物は式Iの化合物であり、式中、
Aは-(C=O) -O-であり、および
Rは、-C1-6アルキル、または3〜6員芳香族環から選択されるものであって、前記-C1-6アルキルは、3〜6員芳香族環で任意に置換される。
【００３７】
さらに別の特定の態様において、本発明は疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器疾患、胃腸障害を含むリストから選択される、PAR関連疾患の予防および／または治療における使用のためのビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニル-エチルホスホネート化合物を提供し、前記化合物は式Iの化合物であり、式中、
Aは-(C=O) -O-であり、および
Rは、-C1-6アルキル、または3〜6員芳香族環から選択されるものである。
【００３８】
さらに別の特定の態様において、本発明は疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器疾患、胃腸障害を含むリストから選択される、PAR関連疾患の予防および／または治療における使用のためのビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニル-エチルホスホネート化合物を提供し、前記化合物は式Iの化合物であり、式中、
Aは-(C=O) -O-であり、および
Rは、-メチルから選択され、-フェニルで任意に置換されるものである。
【００３９】
本発明の化合物について記載する場合、文脈上他の指示がない限り、使用される用語は以下の定義に従って解釈されるべきである。
【００４０】
文脈上他の指示がない限り、本明細書では、アスタリスクは、描かれた一価または二価のラジカルが関連する構造に結合され、そのラジカルが部分を形成する点を示すために使用される。この点に関しAは好ましくは以下を含むリストから選択される： *-(C=O)-,*-(C=O)-O-, *-(C=O)-NH-, または*-SO2-；ここで、前記アスタリスクは、式Iで表される構造に対する前記基の結合点を示す。
【００４１】
用語「脂肪族基」は、飽和または不飽和であってよく、直鎖および分枝鎖ならびに環状化合物の両方を含む任意の非芳香族有機基を含むことを意味する。脂肪族基は、特にアルカン、アルケンおよびアルキンを包含する。脂肪族基は純粋にCおよびH原子からなってもよいが、N、OまたはSのようなヘテロ原子またはF、Cl、…などのハロゲン原子も含んでもよい。本発明の文脈において、脂肪族基は、例えば、-C1-6アルキルであってもよい。
【００４２】
それ自体または別の置換基の一部としての用語「アルキル」は、式CxH2x+1の完全に飽和した炭化水素を指し、式中xは1以上の数である。一般に、本発明のアルキル基は、1〜20個の炭素原子を含む。アルキル基は直鎖または分枝鎖であってよく、本明細書に示すように置換されていてもよい。炭素原子に続いて下付き文字が使用される場合、下付き文字は、指定された基が含有し得る炭素原子の数を指す。したがって、例えば、C1-4アルキルは、1〜4個の炭素原子のアルキルを意味する。アルキル基の例は、メチル、エチル、n-プロピル、i-プロピル、ブチルおよびその異性体（例えば、n-ブチル、i-ブチルおよびt-ブチル）、ペンチルおよびその異性体、ヘキシルおよびその異性体、ヘプチルおよびその異性体、オクチルおよびその異性体、ノニルおよびその異性体、デシルおよびその異性体である。C1-C6アルキルは、1〜6個の炭素原子を有するすべての直鎖状、分岐状または環状アルキル基を含み、したがって、メチル、エチル、n-プロピル、i-プロピル、ブチルおよびその異性体（例えば、n-ブチル、i-ブチルおよびt-ブチル）、ペンチルおよびその異性体、ヘキシルおよびその異性体、シクロペンチル、2-、3-または4-メチルシクロペンチル、シクロペンチルメチレンおよびシクロヘキシルを含む。
【００４３】
用語「任意に置換されたアルキル」は、任意の利用可能な結合点で１つ以上の置換基（例えば、１〜４個の置換基、例えば１、２、３または４個の置換基または１〜２個の置換基）で任意に置換されたアルキル基をいう。そのような置換の非限定的な例では  ハロ、ヒドロキシル、カルボニル、ニトロ、アミノ、オキシム、イミノ、アジド、ヒドラジノ、シアノ、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、アシル、アルキルアミノ、アルコキシ、チオール、アルキルチオ、カルボン酸、アシルアミノ、アルキルエステル、カルバメート、チオアミド、尿素、スルフォンアミド等を含む。
【００４４】
本明細書で使用される用語「アルケン」は、他に明示がない限り、少なくとも１つの炭素-炭素二重結合を含む直鎖、環状鎖、または分枝鎖炭化水素基を意味する。アルケニル基の例には、エテニル、E-およびZ-プロペニル、イソプロペニル、E-およびZ-ブテニル、E-およびZ-イソブテニル、E-およびZ-ペンテニル、E-およびZ-ヘキセニル、E,E-、E,Z-、Z,E-、Z,Z-ヘキサジエニル等を含む。任意に置換されたアルケニルとは、置換アルキルについて上記で定義されたものから選択される任意の１以上の置換基（例えば、１、２、３または４）を有するアルケニルをいう。
【００４５】
本明細書で使用される用語「アルキン」は、他に明示がない限り、少なくとも１つの炭素-炭素三重結合を含む直鎖、または分枝鎖炭化水素基を意味する。アルキニル基の例にはエチニル、E-およびZ-プロピニル、イソプロピニル、E-およびZ-ブチニル、E-およびZ-イソブチニル、E-およびZ-ペンチニル、E、Z-ヘキシニル等を含む。
任意に置換されたアルキニルは、置換アルキルについて上記で定義されたものから選択される任意の１以上の置換基（例えば、１、２、３または４）を有するアルキニルをいう。
【００４６】
定義されたアルキル基が２価である場合、すなわち２つの他の基に結合するための２つの単結合を有する場合、それらは「アルキレン」基と呼ばれる。アルキレン基の非限定的例はメチレン、エチレン、メチルメチレン、トリメチレン、プロピレン、テトラメチレン、エチルエチレン、1,2-ジメチルエチレン、ペンタメチレンおよびヘキサメチレンを含む。同様に、上記定義したアルケニル基および上記定義したアルキニル基はそれぞれ２つの他の基に結合するための単結合を有する二価の基であり、それらはそれぞれ「アルケニレン」および「アルキニレン」と呼ばれる。
【００４７】
一般に、本発明のアルキレン基は、好ましくは、それらのアルキル対応物と同じ数の炭素原子を含む。アルキレンまたはシクロアルキレンビラジカルが存在する場合、それが部分的に形成する分子構造への結合性は、共通の炭素原子または異なる炭素原子、好ましくは共通の炭素原子を介してよい。これを模式化するため、本発明のアスタリスク命名法を適用し、C3アルキレン基は、例えば*-CH2CH2CH2-*、*-CH(-CH2CH3)-*または*-CH2CH(-CH3)-*であってよい。同様に、シクロアルキレン基は、
【化５】
2019516715.tif 000006
であってよい。
【００４８】
用語「芳香族基」は、単環（すなわちフェニル）または互いに縮合した複数の芳香族環（例えば、ナフタレンまたはアントラセン）または、共有的に結合した、典型的には６〜１０原子を含むものであって、少なくとも１つの環は芳香族である、多価不飽和の芳香族ヒドロカルビル基をいう「アリール」を含むことを意味する。芳香族環は、それに縮合した１〜３個のさらなる環（シクロアルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロアリールのいずれか）を任意に含んでもよい。また、アリールは本明細書に列挙される炭素環系の部分的に水素化された誘導体を含むことが意図される。アリールの非限定な例では、フェニル、ビフェニリル、ビフェニレニル、5-または6-テトラリニル、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-または8-アズレニル、1-または2-ナフチル、1-、 2- 、または3-インデニル、1-、2-または9-アントリル、1-、2-、3-、4-または5-アセナフチレニル、3-、4-または5-アセナフテニル、1-、2-、3-、4-または10-フェナントリル、1-または2-ペンタレニル、1,2-、3-または4-フルオレニル、4-または5-インダニル、5-、6-、7-または8-テトラヒドロナフチル、1,2,3,4-テトラヒドロナフチル、1,4-ジヒドロナフチル、ジベンゾ[a、d]シクロヘプテニル、および1-、2-、3-、4-または5-ピレニルを含む。
【００４９】
アリール環は、任意で1つ以上の置換基で置換されてもよい。「任意で置換されたアリール」は、任意の利用可能な結合点における任意の１つ以上の置換基（例えば１〜５個の置換基、例えば１、２、３または４個）を有するアリールをいう。そのような置換の非限定的例は、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、ニトロ、アミノ、ヒドラジン、アミノカルボニル、アジド、シアノ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキルアルキル、アルキルアミノ、アルコキシ、-SO2-NH2、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ヘテロアリールアルキル、アルキルスルホンアミド、ヘテロシクリル、アルキルカルボニルアミノアルキル、アリールオキシ、アルキルカルボニル、アシル、アリールカルボニル、アミノカルボニル、アルキルスルホキシド、-SO2Ra（Raはアルキルまたはシクロアルキル）、アルキルチオ、カルボキシル等から選択される。
【００５０】
アリール基の炭素原子がヘテロ原子で置換されている場合、得られる環はヘテロアリール環と本明細書においていう。
【００５１】
それ自体または別の置換基の一部としての用語「カルボキシ」または「カルボキシル」または「ヒドロキシカルボニル」は、-CO2H基をいう。したがって、カルボキシアルキルは、-CO2Hである少なくとも１つの置換基を有する上記で定義したアルキル基である。
【００５２】
それ自体または別の置換基の一部としての用語「アルコキシカルボニル」は、アルキル基に結合した、すなわち-C(=O)OReを形成するカルボキシ基をいい、ここで、Reはアルキルについて上記で定義した通りのものである。
【００５３】
基としてのまたは基の一部としての用語「ハロ」または「ハロゲン」はフルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードのような属である。
【００５４】
用語「置換された」は、本発明において使用される場合はいつでも、「置換された」を用いて表現された原子上の１以上の水素が、指示された基からの選択で置き換えられ、指示された原子の通常の原子価を超えないことを条件とし、この置換により、化学的に安定な化合物、すなわち、反応混合物からの有用な純度での単離および治療剤への製剤化に耐えるのに十分に丈夫な化合物が得られる。
【００５５】
基が任意で置換されてもよい場合、そのような基は１つ以上、好ましくは１つ、２つまたは３つが置換されてもよい。
本明細書で使用される用語「アルキル、アリール、またはシクロアルキル、互いに任意で置換される」または「アルキル、アリール、またはシクロアルキル、任意で置換される」は、任意で置換されるアルキル、任意で置換されるアリール、および任意で置換されるシクロアルキルをいう。
【００５６】
より一般的には、上記から、本発明の化合物は、これに限定されるものではないが、幾何異性体、立体配座異性体、E/Z異性体、立体化学異性体（すなわち、鏡像異性体およびジアステレオ異性体）および本発明の化合物に存在する環の異なる位置に同じ置換基が存在するように対応する異性体を含む、異なる異性体および／または互変異性体の形態で存在してもよいことは当業者に明らかであろう。そのような可能性のある異性体、互変異性体、ラセミ体およびそれらの混合物の全ては、本発明の範囲内に含まれる。
【００５７】
本発明において使用されるときはいつでも、用語「本発明の化合物」または類似の用語は、一般式Iの化合物およびその任意のサブグループを含むことを意味する。  この用語はまた、それらの誘導体、N-オキシド、塩、溶媒和物、水和物、立体異性体、ラセミ混合物、互変異性体、光学異性体、類似体、プロまたはプレドラッグ、エステルおよび代謝産物ならびにそれらの四級化窒素類似体もいう。前記化合物のN-オキシド形態は、１個または数個の窒素原子が酸化されていわゆるN-オキシドとなる化合物を含むことを意味する。
【００５８】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される、単数形「a」、「an」および「the」は、文脈上他に明示されない限り、複数の指示対象を含む。例として、「化合物」は、１つの化合物または２つ以上の化合物を意味する。上述の用語および本明細書で使用される他の用語は、当業者によく理解されている。
【００５９】
非常に特定の態様において、本発明は、以下を含むリストから選択される、疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器疾患、胃腸障害を含むリストから選択される、PAR関連疾患の予防および／または治療における使用のための化合物を提供する：
【化６】
2019516715.tif 000007
【化７】
2019516715.tif 000008
【００６０】
本発明は疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器疾患、胃腸障害を含むリストから選択される、PAR関連疾患の予防および／または治療における使用のための医薬組成物もまた提供し、前記組成物は、本願の請求項１〜４のいずれかで規定されるビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネート化合物を含む。
【００６１】
当業者に明らかであるが、本発明に係る化合物は本発明に係るPAR関連疾患の治療に使用するのに適切な活性成分をさらに含んでもよい。
【００６２】
本発明の特定の態様において、本発明のPAR関連疾患は、疼痛および眼表面疾患を含むリストから選択される。前記疼痛は特に以下を含むリストから選択される：内臓痛、炎症性疼痛、および神経因性疼痛；特に、膵炎関連疼痛、術後疼痛、癌性疼痛、膀胱痛、IBS（過敏性腸症候群）の疼痛、およびIBD（炎症性腸疾患）の疼痛などの内臓痛。前記眼表面疾患は、ドライアイ症候群、マイボーム腺機能不全、眼瞼炎（blepharitis）、酒さ（rosaceous）、アレルギー、緑内障薬物による瘢痕、化学的な火傷、熱傷、および粘液膜類天疱瘡およびシェーグレン症候群のような免疫学的状態および特にドライアイ疾患。
【００６３】
本発明の化合物は、以下の実施例でさらに詳述するように、WO2014140299で提供される反応スキームに従って調製することができるが、当業者であれば、これらは本発明の単なる例示であり、本発明の化合物は、有機化学分野の当業者によって一般的に使用されているいくつかの標準合成工程のいずれかによって調製できることを理解するであろう。
【００６４】
さらなる態様において、本発明は、前述のとおり規定される化合物の使用または疼痛、過敏症、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器疾患、胃腸障害を含むリストから選択される、少なくとも１つのPAR関連疾患の予防および／または治療における前記化合物を含む組成物の使用を提供する。
【００６５】
治療方法
本発明は、疼痛、眼表面疾患、組織損傷、皮膚疾患、呼吸器疾患、胃腸障害を含む群から選択される、少なくとも１つのPAR関連疾患の予防および／または治療のための方法をさらに提供し、前記方法は、それを必要とする対象に治療有効量の本発明に係る化合物または組成物を投与することを含む。すなわち、本発明は、膵炎関連疼痛、術後疼痛、癌性疼痛、膀胱痛、IBS（過敏性腸症候群）の疼痛、およびIBD（炎症性腸疾患）の疼痛、ドライアイ症候群、マイボーム腺機能不全、眼瞼炎（blepharitis）、酒さ（rosaceous）、アレルギー、緑内障薬物による瘢痕、化学的な火傷、熱傷、および粘液膜類天疱瘡およびシェーグレン症候群のような免疫学的状態を含む群から選択される、少なくとも１つのPAR関連疾患の予防および／または治療のための方法を提供し、前記方法は、それを必要とする対象に治療有効量の本発明に係る化合物または組成物を投与することを含む。
【００６６】
本発明では、以下に記載する阻害アッセイにおいて、500nMμM未満、好ましくは100nM未満、最も好ましくは10nM未満のIC50値で阻害する式Iの化合物またはその任意のサブグループが特に好ましい。少なくともマトリプターゼおよびトリプターゼは阻害特性に関与し、この特性は、これらに限定されれるものではないが、組織カリクレイン（例えば、KLK2、KLK4、KLK14）、カテプシンG、uPAおよびトリプシンによって拡張され得る。
【００６７】
前記阻害は、インビトロおよび／またはインビボで達成され得、インビボで達成される場合、好ましくは、上記で定義されるように、多標的様式で達成される。
【００６８】
医薬用途のために、本発明の化合物は、遊離の酸または塩基として、および／または薬学的に許容される酸付加および/または塩基付加塩（例えば、毒性のない有機または無機の酸または塩基で得られる）の形態で、水和物、溶媒和物および／または錯体の形態で、および/またはエステルのようなプロドラッグもしくはプレドラッグの形態で使用されてもよい。本明細書において他に明示されない場合、用語「溶媒和物」は、本発明の化合物によって、適切な無機溶媒（例えば、水和物）または有機溶媒、例えば、これに限定されるものではないが、アルコール、ケトン、エステル等と形成され得る任意の組み合わせを含む。そのような塩、水和物、溶媒和物等およびそれらの調製は、当業者には明らかであろう。例えば、US-A-6,372,778、US-A-6,369,086、US-A-6,369,087およびUS-A-6,372,733に記載されている塩、水和物、溶媒和物などが参照される。
【００６９】
本発明に係る化合物の薬学的に許容される塩、すなわち水溶性、油溶性、または分散性製品の形態では、例えば無機または有機の酸または塩基から形成される従来の非毒性塩または第４級アンモニウム塩を含む。一般に、医薬用途のために、本発明の化合物は、少なくとも1つの本発明の化合物および少なくとも1つの薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤および／またはアジュバント、および任意で１つ以上のさらなる薬学的に活性な化合物を含む医薬調製物または医薬組成物として製剤化されてもよい。
【００７０】
非限定的例によって、そのような製剤は、経口投与用、非経口投与用（静脈内、筋肉内または皮下注射または静脈内注入など）、局所投与用（眼球を含む）、吸入による投与用、皮膚パッチ用、インプラント用、坐薬用などに適切な形態であってよい。このような適切な投与形態（投与様式に依存して、固体、半固体または液体であってもよい）、ならびにその調製に使用するための方法および担体、希釈剤および賦形剤は、当業者には明らかであろう；文献はUS-A-6,372,778、US-A-6,369,086、US-A-6,369,087 およびUS-A-6,372,733ならびにレミントン薬科学の最新版などの標準的な手引書がまた参照される。
【００７１】
化合物は、そのような製剤のためにそれ自体適切な担体、賦形剤、および希釈剤と共に製剤化することができる。製剤は、他の薬学的に活性な物質（本発明の化合物との相乗効果をもたらしてももたらさなくてもよい）および医薬製剤に一般的に使用される他の物質、例えば、潤滑剤、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、分散剤、崩壊剤（desintegrants）、増量剤、充填剤、保存剤、甘味剤、香味剤、流動調節剤、離型剤などのような他の添加剤を任意に含むことができる。組成物は、その中に含まれる活性化合物の迅速、持続的または遅延放出を提供するように製剤化されてもよい。
【００７２】
さらに、アルコールなどの共溶媒は、化合物の溶解性および／または安定性を改善し得る。水溶性組成物の調製において、本発明の化合物の塩の添加は、それらの水溶性の増加のために、より適切であり得る。
【００７３】
調製物は、自体公知の方法で調製してよく、通常は、少なくとも1つの本発明に係る化合物を１つ以上の薬学的に許容される担体と混合することを含み、また、所望の場合、必要に応じて無菌条件下で他の薬学的に活性のある化合物と組み合わせて、混合することを含む。文献はUS-A-6,372,778、US-A-6,369,086、US-A-6,369,087 およびUS-A-6,372,733および上述されたさらなる先行文献ならびにレミントン薬科学の最新版などの標準的な手引書がまた参照される。
【００７４】
本発明の医薬製剤は、好ましくは単位投与形態であり、例えば、箱、ブリスター、バイアル、瓶、サシェ、アンプル、または他の適切な単回用量または複数回用量のホルダーまたは容器（適切に標識されていてもよい）で、適切に包装されていてもよく、任意で、製品情報および／または使用説明書を含む１つ以上の手引書を有する。一般に、このような単位用量は、本発明の少なくとも１つの化合物、例えば、単位用量あたり約10、25、50、100、200、300または400mg、1〜1000mg、通常5〜500mg含有する。
【００７５】
主に使用される特定の調製物および治療または予防される状態に依存して、経口、経直腸、経眼、経皮、経皮下、経静脈内、経筋肉内または経鼻腔内経路を含む種々の経路によって化合物を投与することができるが、通常は経口および静脈内投与投与が好ましい。少なくとも１つの本発明の化合物は、一般に、「有効量」で投与され、式I、IIまたはIIIの化合物またはそれらの任意のサブグループの任意の量を意味し、適切な投与により、それが投与される個体において所望の治療効果または予防効果をもたらすのに十分である。患者の年齢、性別および全身状態、ならびに治療されるべき疾患／症状の性質および重症度などの要因に応じて、投与される量、投与経路およびさらなる治療投与計画は、治療する臨床医によって決定されてもよい。文献はUS-A-6,372,778、US-A-6,369,086、US-A-6,369,087 およびUS-A-6,372,733および上述されたさらなる先行文献ならびにレミントン薬科学の最新版などの標準的な手引書がまた参照される。
【００７６】
本発明の方法によれば、前記医薬組成物は、治療過程の間の異なる時間に別々に、または分割した形態または単一の組み合わせ形態で同時に投与することができる。したがって、本発明は、同時または交互の治療のこのような投与計画のすべてを包含するものとして理解されるべきであり、用語「投与する」は、それに応じて解釈されるべきである。
【００７７】
本発明の組成物は、獣医学分野において価値があり、本明細書の目的のため、動物における疾患の予防および／または治療だけでなく、ウシ、ブタ、ヒツジ、ニワトリ、魚などの経済的に重要な動物についても含み、動物の成長および／または重量および／または動物から得られる肉または他の製品の量および／または品質を向上させることも含む。したがって、さらなる態様において、本発明は少なくとも1つの本発明の化合物および少なくとも1つの適切な担体（すなわち、獣医学的使用に適した担体）を含む獣医学的使用のための組成物に関連する。本発明は、このような組成物の調製における本発明の化合物の使用にも関連する。
【００７８】
本発明は、いかなる場合であっても本発明の範囲を限定するものではない以下の合成および生物学的実施例を用いて説明される。
【実施例１】
【００７９】
実施例１：化合物合成および物理化学的性質
【００８０】
本発明の化合物、特に、WO2007045496の化合物9bに対応する本発明の化合物４、WO2007045496の化合物35bに対応する本発明の化合物２は、WO2007045496に記載の合成経路によって調製されてもよい。また、その物理化学的特性に関する詳細な情報はWO2007045496にも見つけることができる。
【実施例２】
【００８１】
実施例２：インビトロアッセイ
【００８２】
生化学的特性の概要
化合物２および４（ビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネート）は化合物１および３（ジフェニルグアニジノフェニルエチルホスホネート）よりも強力なマトリプターゼ、トリプターゼおよびカテプシンG阻害剤であることを表１は示す。これらの酵素は全て、PAR２受容体を活性化することが知られている。
【化８】
2019516715.tif 000009
【００８３】
表１  インビトロ特性の比較
【表１】
2019516715.tif 000010
【実施例３】
【００８４】
実施例３：インビボアッセイー内臓痛
【００８５】
材料と方法
【００８６】
動物
すべての実験においてオスSprague-Dawleyラット（200-225 g；Charles River、イタリア）を使用した。ラットを一定の室温（22±2℃）および湿度（60％）で飼育した。動物は水と食物に無制限にアクセスでき、１２時間：１２時間の昼夜のサイクルで維持された。それらは、実験の開始前に少なくとも１週間順応させた。すべての実験は、アントワープ大学の動物実験用倫理委員会によって承認された(EC nr. 2014-41)。
【００８７】
実験計画
本設定では、TNBS注腸を用いて、0日目に大腸炎を大腸炎後群に誘導した。対照群は、0.9％NaClを用いた直腸内投与を受けた。大腸炎の存在は、3日目の大腸内視鏡検査によって確認された。10日以降、大腸粘膜の治癒を経過観察するために4日ごとに大腸内視鏡検査を実施した。結腸粘膜が完全に治癒したとき、3日後にさらなる実験を行った。内臓運動応答（VMR）実験の開始30分前に、活性化合物またはビヒクルを腹腔内（i.p.）注射した。VMR測定後、動物を犠牲にした。
【００８８】
TNBS大腸炎の誘導
TNBS注腸(4 mg TNBS、50％エタノール)を用いて、0日目にTNBS大腸炎を誘導した。一晩絶食させた後、ペントバルビタール麻酔（45mg/kg、腹腔内）下で、柔軟なカテーテル（18G、長さ4.5cm）を使用して0.25mlのTNBS-注腸を直腸内投与した。対照動物には、0.25mlの0.9％NaClを直腸内に投与した。動物を1分間テールアップ体位に保持し、次にトレンデレンブルグ体位で回復させた。
【００８９】
内臓運動応答
内臓運動応答（VMR）は、結腸直腸バルーン拡張に応答して腹筋の収縮を伴う侵害反射として定義することができる(Nessら 1988)。VMRは、内臓の感度を定量化するために、我々の研究室で頻繁に使用される検証された客観的な方法である（Vermeulenら 2013、Deiterenら 2014、Deiterenら 2015）。電気筋運動記録の（EMG）電極を外腹筋に埋め込み、3日後に意識のあるラットでVMR実験を行った。 潤滑したバルーン（長さ5cm）を動物の結腸直腸に導入し、バロスタット(Distender Series II Barostat、G&J Electronics、カナダ)に接続した。EMG電極をデータ収集システムに取り付け、バストスタットを介して相動性膨満（phasicdistension）プロトコル（10-20-30-40-60 mmHg、20秒、4分間隔）を送った。 EMG信号を登録し（Neurolog, Digitimer Ltd、英国）、増幅し（Neurolog、Digitimer Ltd、英国）、デジタル化し（CED1401、Cambridge Electronic Design、英国）、EMG記録をSpike2 V.5.16（Cambridge Electronic Design、英国）を用いて分析した。膨張（20秒）前のEMG信号について補正した膨張（20秒）中のEMG信号の曲線下面積（AUC）を用いて、VMRを定量した。
【００９０】
統計分析
すべてのデータは平均±SEMとして提供されている。統計分析は、SPSS 22.0を用いて行った。VMR実験の結果は、最小有意差（LSD）事後検定で一般化推定方程式（GEE）検定を用いて分析された。p値<0.05を統計的に有意であるとみなした。GraphPad Prism 6.0を用いてグラフを作成した。
【００９１】
結果
化合物１と化合物４のインビボ比較の概要
この実験において、内臓痛に関して検証された大腸炎後ラットモデルを使用した（Deiterenら 2014）。膨張圧力（x軸; mmHg）ごとの曲線下面積（AUC;y軸;μV.20s-1）として下のグラフに示される結腸直腸膨張に対する内蔵運動応答（VMR）を用いて内臓感受性を評価した。セリンプロテアーゼは、内臓痛の病理発生に重要な役割を果たすと考えられる。我々は、セリンプロテアーゼであるトリプターゼ、カテプシンG、およびマトリプターゼに対する生化学的阻害特性の明確な違いを有するが、ほぼ同等の化学構造を有する２つの新たに開発されたセリンプロテアーゼ阻害剤（化合物１および化合物４）の効果を研究した。また、我々は広域スペクトルのトリプシン様セリンプロテアーゼ阻害剤としてナファモスタットメシル酸塩（日本で販売されているセリンプロテアーゼ阻害剤）を使用した。
【００９２】
ビヒクルで処置した大腸炎後ラットは、より高いVMRを示し、内臓痛の存在を示した（図１Ａ）。化合物４を単回投与すると、内臓痛が用量依存的に減少した。0.01mg/kgの用量で化合物４は有意な効果を示さなかったが、0.1mg/kgでは既にVMRを有意に低下させ、1mg/kg 化合物４の投与後に内臓痛は完全に消失した（図１Ａ−Ｃ）。対照動物では、化合物４は1mg/kgの用量で内臓感受性に有意な影響を及ぼさなかった（図１Ｄ）。 化合物１に関して、用量依存的効果があるように思われる：1mg/kgの用量では、VMRの明らかな減少は見られなかったが、2.5mg/kgの用量では、内臓痛は完全に消失した（図２Ａ−Ｂ）。しかしながら、この化合物は化合物４と比較していくつかの欠点を示す：第１に、5mg/kgの用量でこれらの動物に鎮静作用が観察され、第２に、化合物４と比較して同じ効果を観察するためにはより高い用量が必要とされるため、より低い阻害活性が存在するようである。最後に、ナファモスタットメシル酸塩を我々のモデルにおいて10mg/kgの用量で試験したが、内臓痛に対する有意な効果は検出されなかった。
【００９３】
これらの実験から、化合物４が内臓痛の適応のために最も効果的で有益であると結論付けることができる。化合物１は、少なくとも2.5mg/kgの用量で有意な活性のみであり、5mg/kg用量で副作用を示したが、化合物４は0.1mg/kgで有効であり、これは十分な安全限度をもたらす。治療活性の相違は、マトリプターゼ、トリプターゼおよびカテプシンGに対するIC50値間の効力における同様の差によって説明することができる。この相関関係に基づいて、我々は化合物２もおそらく同じ治療効果を示すと述べることができる。
【００９４】
興味深いことに、広域スペクトルのセリンプロテアーゼ阻害剤ナファモスタットは、10mg/kg用量で何ら治療効果を示さなかった。これは、ビス（アセトアミドフェニル）グアニジノフェニルエチルホスホネートが、予想外の生化学的および物理化学的特性を有し、これが正しいセリンプロテアーゼ標的の阻害に基づくことを示している。
【実施例４】
【００９５】
実施例４：インビボアッセイードライアイ疾患
【００９６】
材料と方法
【００９７】
動物
メスWistarラット(200-300g、Janvier、ルーベ、フランス) は標準的な病原体のない条件で飼育された。飼育条件：室温20-25℃、湿度50-60％、および12時間明／12時間暗の昼夜サイクル。食べ物と水は自由に入手できた。すべてのインビボ実験は、アントワープ大学の動物実験用倫理委員会によって承認され(2013-67)、眼部および視覚研究における動物の使用に関するARRIVEガイドラインに従った。
【００９８】
麻酔
眼窩外涙腺を除去するために、動物に25mg/kgケタミン(Anesketin(登録商標)、Eurovet、ブラーデル、オランダ)および2.5 mg/kgキシラジン（Rompun（登録商標）、Bayer、レバークーゼン、ドイツ）の腹腔内注射で麻酔をかけた。通常の操作（涙回収、フルオレセイン染色）は、5％イソフルラン（Halocarbon（登録商標）、ニュージャージー、米国）で誘導した後、1.5％の維持投与量で行った。
【００９９】
ドライアイの誘導
DES（ドライアイ症候群）は、皮下の咬筋の上かつ眼神経の下に位置する眼窩外涙腺を除去することによって誘発された。腺を除去するために、右耳の下に小さな切開を施した。左眼の涙腺は完全に保たれ、各動物はそれ自身の個々のコントロールを残し、余分な対照群の必要性を排除した。ドライアイの進行を24日間モニターし、涙液量測定およびフルオレセイン染色を週に1回行った。週に2回涙液を採取した。
【０１００】
水性涙液生産の測定
フェノールレッド糸（ゾーンクイック（登録商標）、株式会社メニコン、名古屋、日本）を結膜円蓋の外眼角に15秒間置いた。涙液の吸収により黄色から赤色への色シフトをもたらし、涙液の距離はミリメートル単位で測定した。涙液量を週1回測定した。
【０１０１】
フルオレセイン染色による眼表面損傷の評価
リン酸緩衝生理食塩水（PBS、LifeTechnologiesEuropeによるGibco（登録商標）、ヘント、ベルギー）中のフルオレセインナトリウム（１％、Sigma-Aldrich、シールゼ、ドイツ）を眼の表面に局所投与した。偽陽性を避けるために、PBSで1分後に眼をすすぎ、余分なフルオレセインをろ紙を眼の外眼角（lateral cantus）に置くことによって除去した。眼をコバルトブルー光下の暗室で顕微鏡レンズ（Photo adapter 1.0 MC 80 DX - Axiovert 25CA、Carl Zeiss AB、ゲッティンゲン、ドイツ）で撮影した。オックスフォードフルオレセイン評価尺度を用いて、0〜5のスコアを眼の染色強度に応じて各眼に与えた。半定量的スコアリングは、3人の独立した観察者によって盲目的に行われた。 眼表面損傷の評価は毎週行われた。
【０１０２】
涙液採取
可撓性チューブでシリンジに接続した10μlキャピラリー（Blaubrand（登録商標）Intramark、ヴェルトハイム、ドイツ）で1週間に1回、涙液を採取した。採取直後に、キャピラリーおよび涙液を免疫学的分析のために-80℃で保存した。
【０１０３】
涙液分析
製造業者のプロトコル（ラットIL-1αおよびTNF-αCBAフレックスセット、BD Biosciences、エーレムボーデゲム、ベルギー）に従ってサイトメトリックビーズアレイ（CBA）を用いて、涙液中のTNF-αおよびIL-1α濃度をフローサイトメトリー（FACS calibur、BD Biosciences）で測定した。
【０１０４】
実験計画
涙液は1週間に2回得られた。 涙液量および組織損傷を週1回評価した。 動物をRestasis（登録商標）（2x/day）、UAMC50、UAMC1162、UAMC1169/ビヒクル（2x/day）で3週間連続して処置した。化合物１、２、および４以下のとおり製剤化した。溶液のpHは４である。
【表２】
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【０１０５】
結果
眼表面疾患（図４参照）、特にドライアイに関するこのインビボモデルにおける化合物１、２および４の製剤を比較した場合、我々は化合物４が眼組織損傷に対して他の治療と比較して優れた効果を有することを観察した。興味深いことに、化合物２は、組織損傷パラメータに基づく眼のドライアイの進行に同様の効果を有する。しかしながら、化合物１は効果がなく、ドライアイ群と比較して組織損傷で同様の進行を示した。
【０１０６】
したがって、化合物４は、組織損傷に対する影響に基づいて最も有望な化合物であり、組織損傷に関連する抗炎症活性についてさらに検討を行った。これらの実験において、２つの濃度の化合物４について試験を行った。健常対照群、未処理ドライアイ群、Restasis（登録商標）処理群およびビヒクル処理動物が含まれる。先入観のある結果を避けるために、治療は完全に盲検化された。両実験において、臨床的に関連するパラメータのセットを毎週評価した。これらのパラメータには、眼組織損傷、涙液量および涙液中の２つの前炎症性サイトカインのレベルが含まれる。この動物モデルにおけるドライアイの誘導方法に起因して、涙液量に有意な効果は観察されなかった。
【０１０７】
２つの異なる用量での化合物４の眼組織損傷の評価
図５から明らかなように、化合物４で処理した動物は、この追跡実験においてより低い組織損傷スコアを再度示した。化合物４の両方の濃度は、未処理の（ドライアイ）動物、ビヒクル処理動物およびRestasis（登録商標）処理動物と比較して、ドライアイのこの動物モデルにおける眼組織損傷の進行に有利な平均効果を有するようである。しかしながら、化合物４のより低い用量では、２１日目に効果を提供しなかった。我々は、用量関連効果としてこれを観察する。
【０１０８】
２つの異なる用量の化合物４における涙液中の前炎症性サイトカインの評価
次に、我々は、処理動物の涙液中の前炎症性サイトカイン特性を評価した（図６および図７参照）。再度、化合物４はRestasis（登録商標）よりも全体的に強力な抗炎症効果およびより早い作用効果を示した。化合物４（5mM）は全般的に最良の治療法である。化合物４（5mM）は、眼の損傷の進行の減少と組み合わせて、有意な抗炎症効果を有する。
【０１０９】
対照、未処理、ビヒクルおよびRestasis（登録商標）に対する化合物４  5mMのドライアイ進行に対する平均全体的効果：ドライアイ誘発7日後
これらのインビボ実験では、ドライアイを0日目に誘導し、治療を1日目に開始する。ドライアイの重症度は、時間に関連して増加する。図８Ａ〜Ｃに見られるとおり、ドライアイの重症度が著しく進行した7日後に、治療効率の明瞭な区別が明らかになる。我々は、化合物４、対照、ビヒクルおよびRestasis（登録商標）の結果を、7日後から未処理のドライアイと比較して調べたところ、化合物４の効果がさらにより顕著になる。すべての治療は、未処理のドライアイ（100％）と比較される。
【０１１０】
参考文献
Deiteren, A. et al. "Histamine H4 and H1receptors contribute to postinflammatory visceralhypersensitivity." Gut 63(12): 1873-1882.
Deiteren, A., et al. (2015)."P2X3 Receptors Mediate Visceral Hypersensitivity during AcuteChemically-Induced Colitis and in the Post-Inflammatory Phase via DifferentMechanisms of Sensitization." PLoS One 10(4):e0123810.
Hu, J. et al.Serine protease inhibitor A3K protects rabbit corneal endothelium from barrierfunction disruption induced by TNF-alpha. Investigative ophthalmology &visual science 54, 5400-5407, doi:10.1167/iovs.12-10145 (2013).
Joossen, C. et al. Optimization andvalidation of an existing, surgical and robust dry eye rat model for theevaluation of therapeutic compounds. Experimental eye research 146, 172-178,doi:10.1016/j.exer.2016.03.006 (2016).
Joossens, J. et al. Small, potent,and selective diaryl phosphonate inhibitors forurokinase-type plasminogen activator with in vivo antimetastatic properties.Journal of medicinal chemistry 50, 6638-6646, doi:10.1021/jm700962j (2007).
Lin, Z. et al.Serine protease inhibitor A3K suppressed the formation of ocular surfacesquamous metaplasia in a mouse model of experimental dry eye. Investigativeophthalmology & visual science 55, 5813-5820, doi:10.1167/iovs.13-13546(2014).
Ness, T. J.,et al. (1988). "Colorectal distension as a noxious visceral stimulus:physiologic and pharmacologic characterization of pseudaffectivereflexes in the rat." Brain Res 450(1-2): 153-169.
Thomae, D. et al. FirstIn-111-labeled activity-based probe for SPECT imaging of uPAactivity: in vivo study in human cancer xenografts. J Labelled Compd Rad 58, S104-S104 (2015).
Vermeulen, W.,et al. (2013). "Role of TRPV1 and TRPA1 in visceral hypersensitivity tocolorectal distension during experimental colitis in rats." Eur J Pharmacol 698(1-3): 404-412.
【０１１１】
図面の用語
Post-colitis：大腸炎後
cmpd-4：化合物４
Control：対照
vehicle：ビヒクル
Distensionpressure：膨張圧力
Compd1：化合物１
Pressure：圧力
Dry eye：ドライアイ
Compound 1：化合物１
Compound 2：化合物２
Compound 4：化合物４
Fluoresceinscore：フルオレセインスコア
Time[days] ：時間[日]
Time[weeks]： 時間[週]
Concentration：濃度
% Inflammatorymarkers vs untreated：炎症性マーカー対未処理％
Tissue damage：組織損傷
% tissuedamage vs untreated：組織損傷対未処理％
【図１Ａ】
2019516715.tif 000015
【図１Ｂ】
2019516715.tif 000016
【図１Ｃ】
2019516715.tif 000017
【図１Ｄ】
2019516715.tif 000018
【図２Ａ】
2019516715.tif 000019
【図２Ｂ】
2019516715.tif 000020
【図３】
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【図４】
2019516715.tif 000022
【図５】
2019516715.tif 000023
【図６】
2019516715.tif 000024
【図７】
2019516715.tif 000025
【図８Ａ】
2019516715.tif 000026
【図８Ｂ】
2019516715.tif 000027
【図８Ｃ】
2019516715.tif 000028
【国際調査報告】
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