(57)【要約】本発明は、抗ＭＩＣ抗体及びその使用方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、
ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ｇｌｙ２４３、Ｈｉｓ２４８、及びＡｒｇ２７９からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する、前記抗体。
【請求項２】
前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ｇｌｕ２１５、Ｈｉｓ２４８、及びＡｒｇ２７９を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ｇｌｙ２４３及びＡｒｇ２７９を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ｈｉｓ２４８及びＡｒｇ２７９を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ｈｉｓ２４８を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項６】
前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ａｒｇ２７９を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項７】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、
配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、
配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、
配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、
配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、
配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項８】
前記抗体が、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、
配列番号８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、
配列番号９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、
配列番号１０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む、請求項７に記載の抗体。
【請求項９】
前記抗体が、次の重鎖可変領域ＦＲ：
配列番号１１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、
配列番号１２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、
配列番号１３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、
配列番号１４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む、請求項７または８に記載の抗体。
【請求項１０】
（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１１】
配列番号１５のＶＨ配列を含む、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１２】
配列番号１６のＶＬ配列を含む、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１３】
配列番号１５のＶＨ配列及び配列番号１６のＶＬ配列を含む、抗体。
【請求項１４】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、
配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、
配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、
配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、
配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、
配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項１５】
前記抗体が、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号２３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、
配列番号２４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、
配列番号２５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、
配列番号２６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む、請求項１４に記載の抗体。
【請求項１６】
前記抗体が、次の重鎖可変領域ＦＲ：
配列番号２７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、
配列番号２８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、
配列番号２９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、
配列番号３０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む、請求項１４または１５に記載の抗体。
【請求項１７】
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１８】
配列番号３１のＶＨ配列を含む、請求項１７に記載の抗体。
【請求項１９】
配列番号３２のＶＬ配列を含む、請求項１７に記載の抗体。
【請求項２０】
配列番号３１のＶＨ配列及び配列番号３２のＶＬ配列を含む、抗体。
【請求項２１】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、
配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、
配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、
配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、
配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、
配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項２２】
前記抗体が、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号３９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、
配列番号４０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、
配列番号４１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、
配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む、請求項２１に記載の抗体。
【請求項２３】
前記抗体が、次の重鎖可変領域ＦＲ：
配列番号４３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、
配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、
配列番号４５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、
配列番号４６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む、請求項２１または２２に記載の抗体。
【請求項２４】
（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項２５】
配列番号４７のＶＨ配列を含む、請求項２４に記載の抗体。
【請求項２６】
配列番号４８のＶＬ配列を含む、請求項２４に記載の抗体。
【請求項２７】
配列番号４７のＶＨ配列及び配列番号４８のＶＬ配列を含む、抗体。
【請求項２８】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、
配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、
配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、
配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、
配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、
配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項２９】
前記抗体が、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号５５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、
配列番号５６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、
配列番号５７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、
配列番号５８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む、請求項２８に記載の抗体。
【請求項３０】
前記抗体が、次の重鎖可変領域ＦＲ：
配列番号５９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、
配列番号６０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、
配列番号６１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、
配列番号６２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む、請求項２８または２９に記載の抗体。
【請求項３１】
（ａ）配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号６４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３２】
配列番号６３のＶＨ配列を含む、請求項３１に記載の抗体。
【請求項３３】
配列番号６４のＶＬ配列を含む、請求項３１に記載の抗体。
【請求項３４】
配列番号６３のＶＨ配列及び配列番号６４のＶＬ配列を含む、抗体。
【請求項３５】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、
配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、
配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、
配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、
配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、
配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項３６】
前記抗体が、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、
配列番号７２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、
配列番号７３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、
配列番号７４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む、請求項３５に記載の抗体。
【請求項３７】
前記抗体が、次の重鎖可変領域ＦＲ：
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、
配列番号７６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、
配列番号７７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、
配列番号７８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む、請求項３５または３６に記載の抗体。
【請求項３８】
（ａ）配列番号７９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３９】
配列番号７９のＶＨ配列を含む、請求項３８に記載の抗体。
【請求項４０】
配列番号８０のＶＬ配列を含む、請求項３８に記載の抗体。
【請求項４１】
配列番号７９のＶＨ配列及び配列番号８０のＶＬ配列を含む、抗体。
【請求項４２】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、
配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、
配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、
配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、
配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、
配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項４３】
前記抗体が、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号８７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、
配列番号８８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、
配列番号８９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む、請求項４２に記載の抗体。
【請求項４４】
前記抗体が、次の重鎖可変領域ＦＲ：
配列番号９１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、
配列番号９２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む、請求項４２または４３に記載の抗体。
【請求項４５】
（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項４６】
配列番号９５のＶＨ配列を含む、請求項４５に記載の抗体。
【請求項４７】
配列番号９６のＶＬ配列を含む、請求項４５に記載の抗体。
【請求項４８】
配列番号９５のＶＨ配列及び配列番号９６のＶＬ配列を含む、抗体。
【請求項４９】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、
配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、
配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、
配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、
配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、
配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項５０】
前記抗体が、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、
配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、
配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、
配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む、請求項４９に記載の抗体。
【請求項５１】
前記抗体が、次の重鎖可変領域ＦＲ：
配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、
配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、
配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、
配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む、請求項４９または５０に記載の抗体。
【請求項５２】
（ａ）配列番号１１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号１１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項５３】
配列番号１１１のＶＨ配列を含む、請求項５２に記載の抗体。
【請求項５４】
配列番号１１２のＶＬ配列を含む、請求項５２に記載の抗体。
【請求項５５】
配列番号１１１のＶＨ配列及び配列番号１１２のＶＬ配列を含む、抗体。
【請求項５６】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、
配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、
配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、
配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、
配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、
配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項５７】
前記抗体が、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、
配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、
配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、
配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む、請求項５６に記載の抗体。
【請求項５８】
前記抗体が、次の重鎖可変領域ＦＲ：
配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、
配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、
配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、
配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む、請求項５６または５７に記載の抗体。
【請求項５９】
（ａ）配列番号１２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項６０】
配列番号１２７のＶＨ配列を含む、請求項５９に記載の抗体。
【請求項６１】
配列番号１２８のＶＬ配列を含む、請求項５９に記載の抗体。
【請求項６２】
配列番号１２７のＶＨ配列及び配列番号１２８のＶＬ配列を含む、抗体。
【請求項６３】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、
配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、
配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、
配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、
配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、
配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項６４】
前記抗体が、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、
配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、
配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、
配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む、請求項６３に記載の抗体。
【請求項６５】
前記抗体が、次の重鎖可変領域ＦＲ：
配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、
配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、
配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、
配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む、請求項６３または６４に記載の抗体。
【請求項６６】
（ａ）配列番号１４３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号１４４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項６７】
配列番号１４３のＶＨ配列を含む、請求項６６に記載の抗体。
【請求項６８】
配列番号１４４のＶＬ配列を含む、請求項６６に記載の抗体。
【請求項６９】
配列番号１４３のＶＨ配列及び配列番号１４４のＶＬ配列を含む、抗体。
【請求項７０】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、
配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、
配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、
配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、
配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、
配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項７１】
前記抗体が、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、
配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、
配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、
配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む、請求項７０に記載の抗体。
【請求項７２】
前記抗体が、次の重鎖可変領域ＦＲ：
配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、
配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、
配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、
配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む、請求項７０または７１に記載の抗体。
【請求項７３】
（ａ）配列番号１５９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号１６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項７４】
配列番号１５９のＶＨ配列を含む、請求項７３に記載の抗体。
【請求項７５】
配列番号１６０のＶＬ配列を含む、請求項７３に記載の抗体。
【請求項７６】
配列番号１５９のＶＨ配列及び配列番号１６０のＶＬ配列を含む、抗体。
【請求項７７】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、
配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、
配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、
配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、
配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、
配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項７８】
前記抗体が、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号１６７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、
配列番号１６８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、
配列番号１６９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、
配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む、請求項７７に記載の抗体。
【請求項７９】
前記抗体が、次の重鎖可変領域ＦＲ：
配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、
配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、
配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、
配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む、請求項７７または７８に記載の抗体。
【請求項８０】
（ａ）配列番号１７５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号１７６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項８１】
配列番号１７５のＶＨ配列を含む、請求項８０に記載の抗体。
【請求項８２】
配列番号１７６のＶＬ配列を含む、請求項８０に記載の抗体。
【請求項８３】
配列番号１７５のＶＨ配列及び配列番号１７６のＶＬ配列を含む、抗体。
【請求項８４】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、
配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、
配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、
配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、
配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、
配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項８５】
前記抗体が、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、
配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、
配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、
配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む、請求項８４に記載の抗体。
【請求項８６】
前記抗体が、次の重鎖可変領域ＦＲ：
配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、
配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、
配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、
配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む、請求項８４または８５に記載の抗体。
【請求項８７】
（ａ）配列番号１９１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号１９２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項８８】
配列番号１９１のＶＨ配列を含む、請求項８７に記載の抗体。
【請求項８９】
配列番号１９２のＶＬ配列を含む、請求項８７に記載の抗体。
【請求項９０】
配列番号１９１のＶＨ配列及び配列番号１９２のＶＬ配列を含む、抗体。
【請求項９１】
前記抗体が、約１００ｎＭ以下のＫｄでヒトＭＩＣＡに結合する、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項９２】
前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００２、ヒトＭＩＣＡ＊００４、及びヒトＭＩＣＢ＊００５に結合することができる、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項９３】
前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８、ヒトＭＩＣＡ＊００２、ヒトＭＩＣＡ＊００４、ヒトＭＩＣＡ＊００８、及びヒトＭＩＣＢ＊００５の細胞外ドメインに結合することができる、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項９４】
前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８、ヒトＭＩＣＡ＊００２、ヒトＭＩＣＡ＊００４、及びヒトＭＩＣＢ＊００５のアルファ３ドメインに結合することができる、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項９５】
前記抗体が、モノクローナルである、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項９６】
前記抗体が、ヒト、ヒト化、またはキメラである、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項９７】
前記フレームワーク配列の少なくとも一部分が、ヒトコンセンサスフレームワーク配列である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項９８】
前記抗体が、全長抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項９９】
前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８に結合する抗体断片である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１００】
前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、一本鎖可変断片（ｓｃＦＶ）、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される、請求項９９に記載の抗体。
【請求項１０１】
前記抗体が、ＩｇＧクラス抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１０２】
前記ＩｇＧクラス抗体が、ＩｇＧ１サブクラス抗体である、請求項１０１に記載の抗体。
【請求項１０３】
先行請求項のいずれか１項に記載の抗体をコードする、単離核酸。
【請求項１０４】
請求項１０３に記載の核酸を含む、ベクター。
【請求項１０５】
請求項１０４に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項１０６】
前記宿主細胞が、原核性である、請求項１０５に記載の宿主細胞。
【請求項１０７】
前記宿主細胞が、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉである、請求項１０６に記載の宿主細胞。
【請求項１０８】
前記宿主細胞が、真核性である、請求項１０５に記載の宿主細胞。
【請求項１０９】
前記宿主細胞が、２９３細胞、ＣＨＯ細胞、酵母細胞、または植物細胞である、請求項１０８に記載の宿主細胞。
【請求項１１０】
請求項１０５〜１０９のいずれかに記載の宿主細胞を培養培地で培養することを含む、請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体の産生方法。
【請求項１１１】
前記方法が、前記宿主細胞または培養培地から前記抗体を回収することをさらに含む、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体と、細胞傷害性薬剤と、を含む、免疫抱合体。
【請求項１１３】
請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体を含む、組成物。
【請求項１１４】
薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤をさらに含む、請求項１１３に記載の組成物。
【請求項１１５】
前記組成物が、薬学的組成物である、請求項１１４に記載の組成物。
【請求項１１６】
前記組成物が、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストまたは追加の治療剤をさらに含む、請求項１１３〜１１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１７】
ＭＩＣのシェディングの低減に使用するための、請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１１８】
可溶性ＭＩＣのレベルの低減に使用するための、請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１１９】
ＭＩＣのシェディングの低減及び可溶性ＭＩＣのレベルの低減に使用するための、請求項１〜１０２のいずれかに記載の抗体。
【請求項１２０】
医薬品として使用するための、請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１２１】
がんの治療またはその進行の遅延を、それを必要とする対象において行うことに使用するための、請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１２２】
前記がんが、上皮癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉腫、メルケル細胞癌、及び他の血液系悪性腫瘍からなる群から選択される、請求項１２１に記載の抗体。
【請求項１２３】
免疫関連疾患の治療またはその進行の遅延を、それを必要とする対象において行うことに使用するための、請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１２４】
前記免疫関連疾患が、ＮＫＧ２Ｄリガンドと関連している、請求項１２３に記載の抗体。
【請求項１２５】
前記ＮＫＧ２Ｄリガンドが、ＭＩＣである、請求項１２４に記載の抗体。
【請求項１２６】
前記免疫関連疾患が、消散していない急性感染、慢性感染、及び腫瘍免疫からなる群から選択される、請求項１２３〜１２５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１２７】
免疫応答または機能の増加、増強、または刺激を、それを必要とする対象において行うことに使用するための、請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１２８】
ＭＩＣのシェディングを低減するための医薬品の製造における、請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項１２９】
可溶性ＭＩＣのレベルを低減するための医薬品の製造における、請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項１３０】
ＭＩＣのシェディング及び可溶性ＭＩＣのレベルを低減するための医薬品の製造における、請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項１３１】
がんの治療またはその進行の遅延を、それを必要とする対象において行うための医薬品の製造における、請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項１３２】
前記がんが、上皮癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉腫、メルケル細胞癌、及び他の血液系悪性腫瘍からなる群から選択される、請求項１３１に記載の使用。
【請求項１３３】
免疫関連疾患の治療またはその進行の遅延を、それを必要とする対象において行うための医薬品の製造における、請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項１３４】
前記免疫関連疾患が、ＮＫＧ２Ｄリガンドと関連している、請求項１３３に記載の使用。
【請求項１３５】
前記ＮＫＧ２Ｄリガンドが、ＭＩＣである、請求項１３４に記載の使用。
【請求項１３６】
前記免疫関連疾患が、消散していない急性感染、慢性感染、及び腫瘍免疫からなる群から選択される、請求項１３３〜１３５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３７】
免疫応答または機能の増加、増強、または刺激を、それを必要とする対象において行うための医薬品の製造における、請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項１３８】
個体においてＭＩＣのシェディングを低減する方法であって、前記個体に有効量の請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体を投与して、ＭＩＣのシェディングを低減することを含む、前記方法。
【請求項１３９】
個体において可溶性ＭＩＣのレベルを低減する方法であって、前記個体に有効量の請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体を投与して、可溶性ＭＩＣのレベルを低減することを含む、前記方法。
【請求項１４０】
個体においてＭＩＣのシェディングを低減し、可溶性ＭＩＣのレベルを低減する方法であって、前記個体に有効量の請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体を投与して、ＭＩＣのシェディング及び可溶性ＭＩＣのレベルを低減することを含む、前記方法。
【請求項１４１】
対象においてがんを治療またはその進行を遅延するための方法であって、前記対象に有効量の請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体を投与し、これによって前記対象において前記がんを治療またはその進行を遅延することを含む、前記方法。
【請求項１４２】
前記がんが、上皮癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉腫、メルケル細胞癌、及び他の血液系悪性腫瘍からなる群から選択される、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
対象において免疫関連疾患を治療またはその進行を遅延するための方法であって、前記対象に有効量の請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体を投与し、これによって前記対象において前記免疫関連疾患を治療またはその進行を遅延することを含む、前記方法。
【請求項１４４】
前記免疫関連疾患が、ＮＫＧ２Ｄリガンドと関連している、請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４５】
前記ＮＫＧ２Ｄリガンドが、ＭＩＣである、請求項１４４に記載の方法。
【請求項１４６】
前記免疫関連疾患が、消散していない急性感染、慢性感染、及び腫瘍免疫からなる群から選択される、請求項１４３〜１４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４７】
対象において免疫応答または機能を増加、増強、または刺激する方法であって、前記対象に有効量の請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体を投与し、これによって前記対象において免疫応答または機能を増加、増強、または刺激することを含む、前記方法。
【請求項１４８】
前記対象にＰＤ−１軸結合アンタゴニストを投与することをさらに含む、請求項１３８〜１４７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４９】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、前記抗体の前記投与の前または後に投与される、請求項１４８に記載の方法。
【請求項１５０】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、前記抗体と同時に投与される、請求項１４８に記載の方法。
【請求項１５１】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストからなる群から選択される、請求項１４８〜１５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５２】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、ＰＤ−１結合アンタゴニストである、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５３】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１の、そのリガンド結合パートナーへの結合を阻害する、請求項１５２に記載の方法。
【請求項１５４】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１への結合を阻害する、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１５５】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ２への結合を阻害する、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１５６】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１の、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２の両方への結合を阻害する、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１５７】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストが、抗ＰＤ−１抗体である、請求項１５２〜１５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５８】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＭＤＸ１１０６（ニボルマブ）、ＭＫ−３４７５（ペンブロリズマブ）、ＣＴ−０１１（ピジリズマブ）、ＭＥＤＩ−０６８０（ＡＭＰ−５１４）、ＰＤＲ００１、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ−１０８、及びＢＧＢ−Ａ３１７からなる群から選択される、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１５９】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストである、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１６０】
前記ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合を阻害する、請求項１５９に記載の方法。
【請求項１６１】
前記ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１のＢ７−１への結合を阻害する、請求項１５９に記載の方法。
【請求項１６２】
前記ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１の、ＰＤ−１及びＢ７−１の両方への結合を阻害する、請求項１５９に記載の方法。
【請求項１６３】
前記ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項１５９〜１６２に記載の方法。
【請求項１６４】
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブ）、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＤＸ−１１０５、ＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ）、及びＭＳＢ００１０７１８Ｃ（アベルマブ）からなる群から選択される、請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６５】
前記抗体が、ＭＰＤＬ３２８０Ａである、請求項１６４に記載の方法。
【請求項１６６】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストである、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１６７】
前記ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストが、抗ＰＤ−Ｌ２抗体である、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６８】
前記ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストが、イムノアドヘシンである、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６９】
１つ以上の追加の阻害性共刺激受容体を減少または阻害する薬剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項１３８〜１６８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７０】
前記１つ以上の追加の阻害性共刺激受容体が、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ４、及びＭＭからなる群から選択される、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７１】
前記対象に追加の治療剤を投与することをさらに含む、請求項１３８〜１７０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７２】
前記追加の治療剤が、化学療法剤である、請求項１７１に記載の方法。
【請求項１７３】
前記抗体が、非経口、肺内、鼻腔内、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与される、請求項１３８〜１７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７４】
前記対象が、ヒトである、請求項１３８〜１７３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７５】
請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体と、前記抗体を対象におけるがんの治療またはその進行の遅延に使用するための説明書を含む添付文書と、を含む、キット。
【請求項１７６】
請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体と、前記抗体を対象における免疫関連疾患の治療またはその進行の遅延に使用するための説明書を含む添付文書と、を含む、キット。
【請求項１７７】
請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体と、対象における免疫応答または機能を増加、増強、または刺激するための説明書を含む添付文書と、を含む、キット。
【請求項１７８】
前記対象が、ヒトである、請求項１７５〜１７７のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１７９】
抗体のエピトープをマッピングする方法であって、ポリペプチドの非グリコシル化アミノ酸を置換して置換グリコシル化アミノ酸を含むグリコシル化ポリペプチドを生成することと、前記抗体が前記グリコシル化ポリペプチドに結合するかを決定することと、前記抗体の、前記グリコシル化ポリペプチドへの結合が、前記抗体の、前記置換グリコシル化アミノ酸を含まない前記ポリペプチドへの結合と比較して低減する場合、前記非グリコシル化アミノ酸または前記非グリコシル化アミノ酸の５オングストローム以内の表面露出アミノ酸のうちの少なくとも１つを前記エピトープの一部として特定することと、を含む、前記方法。
【請求項１８０】
抗体のエピトープをマッピングする方法であって、ポリペプチドの非グリコシル化アミノ酸を置換して置換グリコシル化アミノ酸を含むグリコシル化ポリペプチドを生成することと、前記抗体が前記グリコシル化ポリペプチドに結合するかを決定することと、を含み、前記抗体の、前記グリコシル化ポリペプチドへの結合が、前記抗体の、前記置換グリコシル化アミノ酸を含まない前記ポリペプチドへの結合と比較して低減する場合、前記非グリコシル化アミノ酸または前記非グリコシル化アミノ酸の５オングストローム以内の表面露出アミノ酸のうちの少なくとも１つが、前記エピトープの一部として特定される、前記方法。
【請求項１８１】
抗体のエピトープをマッピングする方法であって、前記抗体の、置換グリコシル化アミノ酸を含むグリコシル化ポリペプチドへの結合が、前記抗体の、前記置換グリコシル化アミノ酸を含まないポリペプチドへの結合と比較して低減する場合、非グリコシル化アミノ酸または前記非グリコシル化アミノ酸の５オングストローム以内の表面露出アミノ酸のうちの少なくとも１つを前記エピトープの一部として特定することを含み、前記グリコシル化ポリペプチドが、前記ポリペプチドの非グリコシル化アミノ酸を置換することによって生成される、前記方法。
【請求項１８２】
ポリペプチドの非グリコシル化アミノ酸を置換することが、前記ポリペプチドにグリコシル化部位を導入することを含む、請求項１７９〜１８１のいずれかに記載の方法。
【請求項１８３】
前記エピトープが、立体構造エピトープである、請求項１７９〜１８２のいずれかに記載の方法。
【請求項１８４】
前記非グリコシル化アミノ酸が、前記置換グリコシル化アミノ酸を含まない前記ポリペプチドの表面上にある、請求項１７９〜１８３のいずれかに記載の方法。
【請求項１８５】
前記置換グリコシル化アミノ酸が、Ｎ結合グリカンを含む、請求項１７９〜１８４のいずれかに記載の方法。
【請求項１８６】
前記ポリペプチドが、Ｆｃドメインを含む、請求項１７９〜１８５のいずれかに記載の方法。
【請求項１８７】
抗体の前記グリコシル化ポリペプチドへの結合が、ＥＬＩＳＡによって検出される、請求項１７９〜１８６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８８】
前記抗体の前記グリコシル化ポリペプチドへの結合が、前記抗体の、前記置換グリコシル化アミノ酸を含まない前記ポリペプチドへの結合と比較して少なくとも５０％低減する、請求項１７９〜１８７のいずれかに記載の方法。
【請求項１８９】
抗体をビニングするための方法であって、第１の抗体のエピトープを請求項１７９〜１８８のいずれかに記載の方法によってマッピングすることと、第２の抗体のエピトープを請求項１７９〜１８８のいずれかに記載の方法によってマッピングすることと、前記第１の抗体及び前記第２の抗体が、同じエピトープを有する場合、同じビンにあることを決定することと、を含む、前記方法。
【請求項１９０】
抗体の接触アミノ酸を特定するための方法であって、ポリペプチドの非グリコシル化アミノ酸を置換して置換グリコシル化アミノ酸を含むグリコシル化ポリペプチドを生成することと、前記抗体が前記グリコシル化ポリペプチドに結合するかを決定することと、前記抗体の前記グリコシル化ポリペプチドへの結合が、前記抗体の、前記置換グリコシル化アミノ酸を含まない前記ポリペプチドへの結合と比較して低減する場合、前記非グリコシル化アミノ酸または前記非グリコシル化アミノ酸の５オングストローム以内の表面露出アミノ酸のうちの少なくとも１つを、前記抗体の前記接触アミノ酸のうちの１つとして特定することと、を含む、前記方法。
【請求項１９１】
抗体の前記接触アミノ酸を特定するための方法であって、ポリペプチドの非グリコシル化アミノ酸を置換して置換グリコシル化アミノ酸を含むグリコシル化ポリペプチドを生成することと、前記抗体が前記グリコシル化ポリペプチドに結合するかを決定することと、を含み、前記抗体の前記グリコシル化ポリペプチドへの結合が、前記抗体の、前記置換グリコシル化アミノ酸を含まない前記ポリペプチドへの結合と比較して低減する場合、前記非グリコシル化アミノ酸または前記非グリコシル化アミノ酸の５オングストローム以内の表面露出アミノ酸のうちの少なくとも１つが、前記抗体の前記接触アミノ酸のうちの１つとして特定される、前記方法。
【請求項１９２】
抗体の前記接触アミノ酸を特定するための方法であって、前記抗体の、置換グリコシル化アミノ酸を含むグリコシル化ポリペプチドへの結合が、前記抗体の、前記置換グリコシル化アミノ酸を含まないポリペプチドへの結合と比較して低減する場合、非グリコシル化アミノ酸または前記非グリコシル化アミノ酸の５オングストローム以内の表面露出アミノ酸のうちの少なくとも１つを前記抗体の前記接触アミノ酸のうちの１つとして特定することを含み、前記グリコシル化ポリペプチドが、前記ポリペプチドの非グリコシル化アミノ酸を置換することによって生成される、前記方法。
【請求項１９３】
前記エピトープが、請求項１７９〜１８８のいずれか１項に記載の方法によってマッピングされる、請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１９４】
前記接触アミノ酸残基が、請求項１９０〜１９２のいずれか１項に記載の方法によって特定される、請求項１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１９５】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ｇｌｙ２４３、Ｈｉｓ２４８、Ａｒｇ２７９、Ａｒｇ２１３、Ｓｅｒ２１４、Ａｌａ２１６、Ｓｅｒ２１７、Ａｓｎ２２０、Ａｒｇ２７１、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ｔｈｒ２８１、Ｓｅｒ２４７、Ａｓｐ２４９、Ｔｈｒ２５０、Ｔｒｐ２５３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、及びＧｌｎ２７８からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する、前記抗体。
【請求項１９６】
前記抗体が、第１のアミノ酸残基、第２のアミノ酸残基、及び第３のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、前記第１のアミノ酸残基が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ａｒｇ２１３、Ｓｅｒ２１４、Ａｌａ２１６、Ｓｅｒ２１７、Ａｓｎ２２０、及びＡｒｇ２７１からなる群から選択され、前記第２のアミノ酸残基が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＨｉｓ２４８、Ｓｅｒ２４７、Ａｓｐ２４９、Ｔｈｒ２５０、及びＴｒｐ２５３からなる群から選択され、前記第３のアミノ酸残基が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｒｇ２７９、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、及びＴｈｒ２８１からなる群から選択される、請求項１９５に記載の抗体。
【請求項１９７】
前記抗体が、第１のアミノ酸残基及び第２のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、前記第１のアミノ酸残基が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｙ２４３、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ａｒｇ２７９、及びＴｈｒ２８１からなる群から選択され、前記第２のアミノ酸残基が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｒｇ２７９、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、及びＴｈｒ２８１からなる群から選択される、請求項１９５に記載の抗体。
【請求項１９８】
前記抗体が、第１のアミノ酸残基及び第２のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、前記第１のアミノ酸残基が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＨｉｓ２４８、Ｓｅｒ２４７、Ａｓｐ２４９、Ｔｈｒ２５０、またはＴｒｐ２５３からなる群から選択され、前記第２のアミノ酸残基が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｒｇ２７９、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、及びＴｈｒ２８１からなる群から選択される、請求項１９５に記載の抗体。
【請求項１９９】
前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＨｉｓ２４８、Ｓｅｒ２４７、Ａｓｐ２４９、Ｔｈｒ２５０、及びＴｒｐ２５３からなる群から選択されるアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する、請求項１９５に記載の抗体。
【請求項２００】
前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｒｇ２７９、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、及びＴｈｒ２８１からなる群から選択されるアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する、請求項１９５に記載の抗体。
【請求項２０１】
前記エピトープが、線状エピトープである、請求項１７９〜１８２のいずれかに記載の方法。
【請求項２０２】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ｇｌｙ２４３を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する、前記抗体。
【請求項２０３】
前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ｇｌｙ２４３及びＡｒｇ２７９を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する、請求項２０２に記載の抗体。
【請求項２０４】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、
配列番号２１０、配列番号２１５、配列番号２１６、及び配列番号２１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、
配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、
配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、
配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、
配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項２０５】
前記抗体が、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号２４８、配列番号２５２、配列番号２５８、配列番号２６１、及び配列番号２６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、
配列番号２４９、配列番号２５３、配列番号２５６、配列番号２５９、配列番号２６２、及び配列番号２６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、
配列番号２５０、配列番号２５４、配列番号２５７、配列番号２６０、配列番号２６３、配列番号２６５、及び配列番号２６７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、
配列番号２５１または配列番号２５５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む、請求項２０４に記載の抗体。
【請求項２０６】
前記抗体が、次の重鎖可変領域ＦＲ：
配列番号２９５、配列番号２９９、及び配列番号３０３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、
配列番号２９６、配列番号３００、及び配列番号３０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、
配列番号２９７、配列番号３０１、配列番号３０５、配列番号３０６、配列番号３０７、配列番号３０８、配列番号３０９、配列番号３１０、配列番号３１１、配列番号３１２、配列番号３１３、及び配列番号３１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、
配列番号２９８または配列番号３０２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む、請求項２０４または２０５に記載の抗体。
【請求項２０７】
（ａ）配列番号３６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号３７０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む、請求項２０２に記載の抗体。
【請求項２０８】
配列番号３６９のＶＨ配列を含む、請求項２０７に記載の抗体。
【請求項２０９】
配列番号３７０のＶＬ配列を含む、請求項２０７に記載の抗体。
【請求項２１０】
配列番号３６９のＶＨ配列及び配列番号３７０のＶＬ配列を含む、抗体。
【請求項２１１】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
配列番号２１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、
配列番号２１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、
配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、
配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、
配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、
配列番号２２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項２１２】
前記抗体が、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号２６８または配列番号２７２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、
配列番号２６９、配列番号２７３、及び配列番号２７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、
配列番号２７０、配列番号２７４、及び配列番号２７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、
配列番号２５５または配列番号２７１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む、請求項２１１に記載の抗体。
【請求項２１３】
前記抗体が、次の重鎖可変領域ＦＲ：
配列番号３１５、配列番号３１９、及び配列番号３２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、
配列番号３１６または配列番号３２０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、
配列番号３１７、配列番号３２１、配列番号３２２、及び配列番号３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、
配列番号３０２または配列番号３１８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む、請求項２１１または２１２に記載の抗体。
【請求項２１４】
（ａ）配列番号４１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号４１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む、請求項２０２に記載の抗体。
【請求項２１５】
配列番号４１５のＶＨ配列を含む、請求項２１４に記載の抗体。
【請求項２１６】
配列番号４１６のＶＬ配列を含む、請求項２１４に記載の抗体。
【請求項２１７】
配列番号４１５のＶＨ配列及び配列番号４１６のＶＬ配列を含む、抗体。
【請求項２１８】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
配列番号２２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、
配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、
配列番号２２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、
配列番号２２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、
配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、
配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項２１９】
前記抗体が、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号２７７または配列番号２８０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、
配列番号２７８、配列番号２８１、及び配列番号２８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、
配列番号２７９、配列番号２８２、及び配列番号２８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、
配列番号２５１または配列番号２５５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む、請求項２１８に記載の抗体。
【請求項２２０】
前記抗体が、次の重鎖可変領域ＦＲ：
配列番号３２５、配列番号３２９、配列番号３３１、及び配列番号３３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、
配列番号３２０または配列番号３２６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、
配列番号３２７、配列番号３３０、配列番号３３２、及び配列番号３３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、
配列番号３０２または配列番号３２８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む、請求項２１８または２１９に記載の抗体。
【請求項２２１】
（ａ）配列番号４２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号４３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む、請求項２０２に記載の抗体。
【請求項２２２】
配列番号４２９のＶＨ配列を含む、請求項２２１に記載の前記抗体。
【請求項２２３】
配列番号４３０のＶＬ配列を含む、請求項２２１に記載の前記抗体。
【請求項２２４】
配列番号４２９のＶＨ配列及び配列番号４３０のＶＬ配列を含む、抗体。
【請求項２２５】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、
配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、
配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、
配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、
配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、
配列番号２４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項２２６】
前記抗体が、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、
配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、
配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、
配列番号２７１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む、請求項２２５に記載の抗体。
【請求項２２７】
前記抗体が、次の重鎖可変領域ＦＲ：
配列番号３３９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、
配列番号３４０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、
配列番号３４１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、
配列番号３４２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む、請求項２２５または２２６に記載の抗体。
【請求項２２８】
（ａ）配列番号４３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号４３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む、請求項２０２に記載の抗体。
【請求項２２９】
配列番号４３７のＶＨ配列を含む、請求項２２８に記載の抗体。
【請求項２３０】
配列番号４３８のＶＬ配列を含む、請求項２２８に記載の抗体。
【請求項２３１】
配列番号４３７のＶＨ配列及び配列番号４３８のＶＬ配列を含む、抗体。
【請求項２３２】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、
配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、
配列番号２４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、
配列番号２４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、
配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、
配列番号２４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項２３３】
前記抗体が、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：
配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、
配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、
配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、
配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む、請求項２３２に記載の抗体。
【請求項２３４】
前記抗体が、次の重鎖可変領域ＦＲ：
配列番号３４３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、
配列番号３４４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、
配列番号３４５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、
配列番号３４６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む、請求項２３２または２３３に記載の抗体。
【請求項２３５】
（ａ）配列番号４３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号４４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む、請求項２０２に記載の抗体。
【請求項２３６】
配列番号４３９のＶＨ配列を含む、請求項２３５に記載の抗体。
【請求項２３７】
配列番号４４０のＶＬ配列を含む、請求項２３５に記載の抗体。
【請求項２３８】
配列番号４３９のＶＨ配列及び配列番号４４０のＶＬ配列を含む、抗体。
【請求項２３９】
前記抗体が、約１００ｎＭ以下のＫｄでヒトＭＩＣＡに結合する、請求項２０２〜２３８のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２４０】
前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００２、ヒトＭＩＣＡ＊００４、及びヒトＭＩＣＢ＊００５に結合することができる、請求項２０２〜２３９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２４１】
前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８、ヒトＭＩＣＡ＊００２、ヒトＭＩＣＡ＊００４、ヒトＭＩＣＡ＊００８、及びヒトＭＩＣＢ＊００５の細胞外ドメインに結合することができる、請求項２０２〜２４０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２４２】
前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８、ヒトＭＩＣＡ＊００２、ヒトＭＩＣＡ＊００４、及びヒトＭＩＣＢ＊００５のアルファ３ドメインに結合することができる、請求項２０２〜２４１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２４３】
前記抗体が、モノクローナルである、請求項２０２〜２４２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２４４】
前記抗体が、ヒト、ヒト化、またはキメラである、請求項２０２〜２４３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２４５】
前記フレームワーク配列の少なくとも一部分が、ヒトコンセンサスフレームワーク配列である、請求項２０２〜２４４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２４６】
前記抗体が、全長抗体である、請求項２０２〜２４５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２４７】
前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８に結合する抗体断片である、請求項２０２〜２４５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２４８】
前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、一本鎖可変断片（ｓｃＦＶ）、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される、請求項２４７に記載の抗体。
【請求項２４９】
前記抗体が、ＩｇＧクラス抗体である、請求項２０２〜２４８のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２５０】
前記ＩｇＧクラス抗体が、ＩｇＧ１サブクラス抗体である、請求項２４９に記載の抗体。
【請求項２５１】
請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体をコードする、単離核酸。
【請求項２５２】
請求項２５１に記載の核酸を含む、ベクター。
【請求項２５３】
請求項２５２に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項２５４】
前記宿主細胞が、原核性である、請求項２５３に記載の宿主細胞。
【請求項２５５】
前記宿主細胞が、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉである、請求項２５４に記載の宿主細胞。
【請求項２５６】
前記宿主細胞が、真核性である、請求項２５３に記載の宿主細胞。
【請求項２５７】
前記宿主細胞が、２９３細胞、ＣＨＯ細胞、酵母細胞、または植物細胞である、請求項２５６に記載の宿主細胞。
【請求項２５８】
請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体を産生する方法であって、請求項２５３〜２５７のいずれかに記載の宿主細胞を培養培地で培養することを含む、前記方法。
【請求項２５９】
前記方法が、前記宿主細胞または培養培地から前記抗体を回収することをさらに含む、請求項２５８に記載の方法。
【請求項２６０】
請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体と、細胞傷害性薬剤と、を含む、免疫抱合体。
【請求項２６１】
請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体を含む、組成物。
【請求項２６２】
薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤をさらに含む、請求項２６１に記載の組成物。
【請求項２６３】
前記組成物が、薬学的組成物である、請求項２６２に記載の組成物。
【請求項２６４】
前記組成物が、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストまたは追加の治療剤をさらに含む、請求項２６１〜２６３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２６５】
ＭＩＣのシェディングの低減に使用するための、請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２６６】
可溶性ＭＩＣのレベルの低減に使用するための、請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２６７】
ＭＩＣのシェディングの低減及び可溶性ＭＩＣのレベルの低減に使用するための、請求項２０２〜２５０のいずれかに記載の抗体。
【請求項２６８】
医薬品として使用するための、請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２６９】
がんの治療またはその進行の遅延を、それを必要とする対象において行うことに使用するための、請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２７０】
前記がんが、上皮癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉腫、メルケル細胞癌、及び他の血液系悪性腫瘍からなる群から選択される、請求項２６９に記載の抗体。
【請求項２７１】
免疫関連疾患の治療またはその進行の遅延を、それを必要とする対象において行うことに使用するための、請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２７２】
前記免疫関連疾患が、ＮＫＧ２Ｄリガンドと関連している、請求項２７１に記載の抗体。
【請求項２７３】
前記ＮＫＧ２Ｄリガンドが、ＭＩＣである、請求項２７２に記載の抗体。
【請求項２７４】
前記免疫関連疾患が、消散していない急性感染、慢性感染、及び腫瘍免疫からなる群から選択される、請求項２７１〜２７３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２７５】
免疫応答または機能の増加、増強、または刺激を、それを必要とする対象において行うことに使用するための、請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２７６】
ＭＩＣのシェディングを低減するための医薬品の製造における、請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項２７７】
可溶性ＭＩＣのレベルを低減するための医薬品の製造における、請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項２７８】
ＭＩＣのシェディング及び可溶性ＭＩＣのレベルを低減するための医薬品の製造における、請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項２７９】
がんの治療またはその進行の遅延を、それを必要とする対象において行うための医薬品の製造における、請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項２８０】
前記がんが、上皮癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉腫、メルケル細胞癌、及び他の血液系悪性腫瘍からなる群から選択される、請求項２７９に記載の使用。
【請求項２８１】
免疫関連疾患の治療またはその進行の遅延を、それを必要とする対象において行うための医薬品の製造における、請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項２８２】
前記免疫関連疾患が、ＮＫＧ２Ｄリガンドと関連している、請求項２８１に記載の使用。
【請求項２８３】
前記ＮＫＧ２Ｄリガンドが、ＭＩＣである、請求項２８２に記載の使用。
【請求項２８４】
前記免疫関連疾患が、消散していない急性感染、慢性感染、及び腫瘍免疫からなる群から選択される、請求項２８１〜２８３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２８５】
免疫応答または機能の増加、増強、または刺激を、それを必要とする対象において行うための医薬品の製造における、請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項２８６】
個体においてＭＩＣのシェディングを低減する方法であって、前記個体に有効量の請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体を投与して、ＭＩＣのシェディングを低減することを含む、前記方法。
【請求項２８７】
個体において可溶性ＭＩＣのレベルを低減する方法であって、前記個体に有効量の請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体を投与して、可溶性ＭＩＣのレベルを低減することを含む、前記方法。
【請求項２８８】
個体においてＭＩＣのシェディングを低減し、可溶性ＭＩＣのレベルを低減する方法であって、前記個体に有効量の請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体を投与して、ＭＩＣのシェディング及び可溶性ＭＩＣのレベルを低減することを含む、前記方法。
【請求項２８９】
対象においてがんを治療またはその進行を遅延するための方法であって、前記対象に有効量の請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体を投与し、これによって前記対象において前記がんを治療またはその進行を遅延することを含む、前記方法。
【請求項２９０】
前記がんが、上皮癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉腫、メルケル細胞癌、及び他の血液系悪性腫瘍からなる群から選択される、請求項２８９に記載の方法。
【請求項２９１】
対象において免疫関連疾患を治療またはその進行を遅延するための方法であって、前記対象に有効量の請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体を投与し、これによって前記対象において前記免疫関連疾患を治療またはその進行を遅延することを含む、前記方法。
【請求項２９２】
前記免疫関連疾患が、ＮＫＧ２Ｄリガンドと関連している、請求項２９１に記載の方法。
【請求項２９３】
前記ＮＫＧ２Ｄリガンドが、ＭＩＣである、請求項２９２に記載の方法。
【請求項２９４】
前記免疫関連疾患が、消散していない急性感染、慢性感染、及び腫瘍免疫からなる群から選択される、請求項２９１〜２９３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９５】
対象において免疫応答または機能を増加、増強、または刺激する方法であって、前記対象に有効量の請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体を投与し、これによって前記対象において免疫応答または機能を増加、増強、または刺激することを含む、前記方法。
【請求項２９６】
前記対象にＰＤ−１軸結合アンタゴニストを投与することをさらに含む、請求項２８６〜２９５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９７】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、前記抗体の前記投与の前または後に投与される、請求項２９６に記載の方法。
【請求項２９８】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、前記抗体と同時に投与される、請求項２９６に記載の方法。
【請求項２９９】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストからなる群から選択される、請求項２９６〜２９８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３００】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、ＰＤ−１結合アンタゴニストである、請求項２９９に記載の方法。
【請求項３０１】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１の、そのリガンド結合パートナーへの結合を阻害する、請求項３００に記載の方法。
【請求項３０２】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１への結合を阻害する、請求項３０１に記載の方法。
【請求項３０３】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ２への結合を阻害する、請求項３０１に記載の方法。
【請求項３０４】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１の、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２の両方への結合を阻害する、請求項３０１に記載の方法。
【請求項３０５】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストが、抗ＰＤ−１抗体である、請求項３００〜３０４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０６】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＭＤＸ１１０６（ニボルマブ）、ＭＫ−３４７５（ペンブロリズマブ）、ＣＴ−０１１（ピジリズマブ）、ＭＥＤＩ−０６８０（ＡＭＰ−５１４）、ＰＤＲ００１、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ−１０８、及びＢＧＢ−Ａ３１７からなる群から選択される、請求項３０１に記載の方法。
【請求項３０７】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストである、請求項２９９に記載の方法。
【請求項３０８】
前記ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合を阻害する、請求項３０７に記載の方法。
【請求項３０９】
前記ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１のＢ７−１への結合を阻害する、請求項３０７に記載の方法。
【請求項３１０】
前記ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１の、ＰＤ−１及びＢ７−１の両方への結合を阻害する、請求項３０７に記載の方法。
【請求項３１１】
前記ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項３０７〜３１０に記載の方法。
【請求項３１２】
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブ）、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＤＸ−１１０５、ＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ）、及びＭＳＢ００１０７１８Ｃ（アベルマブ）からなる群から選択される、請求項３１１に記載の方法。
【請求項３１３】
前記抗体が、ＭＰＤＬ３２８０Ａである、請求項３１２に記載の方法。
【請求項３１４】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストである、請求項２９９に記載の方法。
【請求項３１５】
前記ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストが、抗ＰＤ−Ｌ２抗体である、請求項３１４に記載の方法。
【請求項３１６】
前記ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストが、イムノアドヘシンである、請求項３１４に記載の方法。
【請求項３１７】
前記対象に１つ以上の追加の阻害性共刺激受容体を減少または阻害する薬剤を投与することをさらに含む、請求項２８６〜３１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１８】
前記１つ以上の追加の阻害性共刺激受容体が、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ４、及びＭＭからなる群から選択される、請求項３１７に記載の方法。
【請求項３１９】
前記対象に追加の治療剤を投与することをさらに含む、請求項２８６〜３１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２０】
前記追加の治療剤が、化学療法剤である、請求項３１９に記載の方法。
【請求項３２１】
前記抗体が、非経口、肺内、鼻腔内、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与される、請求項２８６〜３２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２２】
前記対象が、ヒトである、請求項２８６〜３２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２３】
請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体と、前記抗体を対象におけるがんの治療またはその進行の遅延に使用するための説明書を含む添付文書と、を含む、キット。
【請求項３２４】
請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体と、前記抗体を対象における免疫関連疾患の治療またはその進行の遅延に使用するための説明書を含む添付文書と、を含む、キット。
【請求項３２５】
請求項２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体と、対象における免疫応答または機能を増加、増強、または刺激するための説明書を含む添付文書と、を含む、キット。
【請求項３２６】
前記対象が、ヒトである、請求項３２３〜３２５のいずれか１項に記載のキット。
【請求項３２７】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｙ２４３、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ａｒｇ２７９、及びＴｈｒ２８１からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する、前記抗体。
【請求項３２８】
前記抗体が、第１のアミノ酸残基及び第２のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、前記第１の残基が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｙ２４３、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ａｒｇ２７９、及びＴｈｒ２８１からなる群から選択され、前記第２の残基が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｒｇ２７９、Ａｒｇ２７９、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、及びＴｈｒ２８１からなる群から選択される、請求項３２７に記載の抗体。
【請求項３２９】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ｈｉｓ２４８、Ｇｌｕ２７６、Ａｒｇ２７９、Ｔｙｒ２８３、Ｇｌｕ２８５、Ｈｉｓ２９０、及びＴｈｒ２９２からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する、前記抗体。
【請求項３３０】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ｌｅｕ２４６、Ｓｅｒ２４７、Ａｓｐ２４９、Ｔｈｒ２５０、Ａｒｇ２７９、Ｔｙｒ２８３、Ｈｉｓ２９０、Ｓｅｒ２９１、Ｔｈｒ２９２、及びＰｒｏ２９４からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する、前記抗体。
【請求項３３１】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｒｇ２４０、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｖａｌ２４４、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、Ａｒｇ２７９、Ｐｈｅ２８０、Ｔｈｒ２８１、Ｔｙｒ２８３、Ｇｌｕ２８５、Ｇｌｙ２８８、Ａｓｎ２８９、Ｈｉｓ２９０、Ｓｅｒ２９１、Ｔｈｒ２９２、Ｐｒｏ２９４、Ｖａｌ２９５、Ｐｒｏ２９６、及びＳｅｒ２９７からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する、前記抗体。
【請求項３３２】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｓｎ２３４、Ｉｌｅ２３５、Ｉｌｅ２３６、Ｌｅｕ２３７、Ｔｈｒ２３８、Ｔｒｐ２３９、及びＡｒｇ２４０からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する、前記抗体。
【請求項３３３】
ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＶａｌ２６８、Ａｌａ２６９、Ｔｈｒ２７０、Ａｒｇ２７１、Ｉｌｅ２７２、Ｃｙｓ２７３、Ａｒｇ２７４、Ｇｌｙ２７５、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、Ａｒｇ２７９、及びＰｈｅ２８０からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する、前記抗体。
【請求項３３４】
前記抗体が、二重特異性抗体である、請求項１〜１０２及び／または２０２〜２５０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３３５】
前記ＩｇＧクラス抗体が、ＩｇＧ２サブクラス抗体である、請求項１０１または２４９に記載の抗体。
【請求項３３６】
前記ＩｇＧクラス抗体が、ＩｇＧ４サブクラス抗体である、請求項１０１または２４９に記載の抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国仮出願第６２／４１４，６７０号の優先権利益を主張するものであり、この仮出願は、その全体において参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
連邦政府支援の研究開発に関する記述
該当せず。（Ｎ／Ａ）
【０００３】
共同研究契約の当事者
該当せず。（Ｎ／Ａ）
【０００４】
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出内容の全体が、参照により本明細書に組み込まれる：コンピュータ可読形態（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：１４６３９２０３４７４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、データ記録日：２０１７年１０月２６日、サイズ：２２６ＫＢ）。
【０００５】
本発明は、抗ＭＩＣ抗体、その使用方法、及びエピトープのマッピング方法に関する。
【背景技術】
【０００６】
ＭＩＣ（例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ）は、ほとんどのヒトＮＫ細胞、γδ  Ｔ細胞、及びＣＤ８＋Ｔ細胞で発現する受容体であるＮＫＧ２Ｄのリガンドである。ＮＫＧ２Ｄリガンドは通常健康な組織では見られないが、ＤＮＡ損傷を含む様々な形態の細胞ストレスがリガンド発現を上方制御し、黒色腫を含む多発性固形及び血液系悪性腫瘍におけるそれらの頻繁な検出をもたらす。ＭＩＣへの結合後、ＮＫＧ２ＤはＮＫ細胞によるパーフォリン依存的細胞溶解を活性化し、Ｔ細胞の共刺激をもたらし、ＮＫＧ２Ｄ発現細胞、例えば、腫瘍細胞の殺滅をもたらす。しかしながら、このメカニズムにかかわらず、多くのＭＩＣ陽性腫瘍が特定されている。研究は、これらの腫瘍細胞からのＭＩＣのシェディングによって腫瘍の免疫逃避が達成されていることを示した。可溶性ＭＩＣは、表面ＮＫＧ２Ｄ受容体の内在化及び下方制御ならびに細胞傷害性リンパ球の機能障害を誘発する。可溶性ＭＩＣは、Ｆａｓリガンド、ＩＬ−１０及びＴＧＦ−βによる抗腫瘍細胞傷害性に対抗し得る制御性ＮＫＧ２Ｄ＋ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３−Ｔ細胞の増殖も刺激し得る。がん患者からの血清は、典型的には上昇したレベルの可溶性形態（ｓＭＩＣＡ）を含有する。
【０００７】
治療剤としての開発に最適な臨床的属性を有する薬剤が依然として必要であることは明らかである。本明細書に記載される抗体は、この必要性を満たし、他の利益を提供する。
【０００８】
エピトープをマッピングすることは、抗体を特徴付ける重要な態様である。エピトープの知識は、設計、選択、及び／または類似した特性を有する他の抗体の特定を導くのに役立つ。エピトープの特定は、抗体の結合メカニズムについての洞察ももたらし得る。既存のマッピング方法は、Ｘ線結晶構造解析、アレイベースのオリゴペプチドスクリーニング、ＥＬＩＳＡまたは競合アッセイにおける抗原の合成ペプチドまたはタンパク質分解断片の使用、部位特異的変異誘発、ランダムペプチドまたは抗原断片配列のファージディスプレイライブラリ、結合または非結合断片のいずれかの質量分析を用いた抗体の存在または不在下での抗原のタンパク質分解、及びＩｎｔｅｇｒａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒによるショットガン変異誘発を含む。これらの方法の多くは、費用及び時間がかかり、有意義な結果が得られる前に多くのステップを必要とする。よって、依然としてエピトープマッピングの改良された方法が必要である。
【０００９】
特許出願、特許公報、及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号を含む、本明細書に引用される全ての参考文献は、各個別の参考文献が参照により組み込まれるように具体的かつ個別に示されているかのように、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、抗ＭＩＣ抗体及びその使用方法を提供する。本発明は、エピトープマッピングのための方法も提供する。本明細書に記載されるエピトープマッピング方法は、当該技術分野における既存の方法に対するいくつかの利点を提供する。例えば、本明細書に記載される方法は、適切に折り畳まれたポリペプチドを用いる抗体のエピトープマッピングを可能にするが、他の方法は、誤って折り畳まれているか、または折り畳みがほどけている可能性がある短いポリペプチド断片を用いてエピトープをマッピングする。さらに、グリカンの添加はポリペプチドを安定させることができる一方で、アラニンでの置換はしばしばポリペプチド構造を破壊し、凝集を引き起こし、ポリペプチドを使用不可能にする。また、本明細書に記載される方法は、抗原の大きな表面または表面全体のより迅速なスキャニングを可能にし、アラニンスキャニングよりも少ない数の構成体を使用する。
【００１１】
一態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ｇｌｙ２４３、Ｈｉｓ２４８、及びＡｒｇ２７９からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ｇｌｕ２１５、Ｈｉｓ２４８、及びＡｒｇ２７９を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。他の実施形態において、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ｇｌｙ２４３及びＡｒｇ２７９を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。他の実施形態において、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ｈｉｓ２４８及びＡｒｇ２７９を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。他の実施形態において、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ｈｉｓ２４８を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。他の実施形態において、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ａｒｇ２７９を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。
【００１２】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：配列番号７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、配列番号８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、配列番号９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む。他の実施形態において、抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：配列番号１１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【００１３】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ｇｌｙ２４３、Ｈｉｓ２４８、及びＡｒｇ２７９からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１５のＶＨ配列を含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号１６のＶＬ配列を含む。
【００１４】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、配列番号１５のＶＨ配列及び配列番号１６のＶＬ配列を含む、抗体である。
【００１５】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：配列番号２３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む。他の実施形態において、抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：配列番号２７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【００１６】
別の態様において、提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ｇｌｙ２４３、Ｈｉｓ２４８、及びＡｒｇ２７９からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号３１のＶＨ配列を含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号３２のＶＬ配列を含む。
【００１７】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、配列番号３１のＶＨ配列及び配列番号３２のＶＬ配列を含む、抗体である。
【００１８】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：配列番号３９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む。他の実施形態において、抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：配列番号４３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【００１９】
別の態様において、提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ｇｌｙ２４３、Ｈｉｓ２４８、及びＡｒｇ２７９からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号４７のＶＨ配列を含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号４８のＶＬ配列を含む。
【００２０】
別の態様において、提供されるものは、配列番号４７のＶＨ配列及び配列番号４８のＶＬ配列を含む、抗体である。
【００２１】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：配列番号５５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む。他の実施形態において、抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：配列番号５９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【００２２】
別の態様において、提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ｇｌｙ２４３、Ｈｉｓ２４８、及びＡｒｇ２７９からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、（ａ）配列番号６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号６４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号６３のＶＨ配列を含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号６４のＶＬ配列を含む。
【００２３】
別の態様において、提供されるものは、配列番号６３のＶＨ配列及び配列番号６４のＶＬ配列を含む、抗体である。
【００２４】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：配列番号７１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、配列番号７３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む。他の実施形態において、抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：配列番号７５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【００２５】
別の態様において、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ｇｌｙ２４３、Ｈｉｓ２４８、及びＡｒｇ２７９からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、（ａ）配列番号７９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号８０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号７９のＶＨ配列を含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号８０のＶＬ配列を含む。
【００２６】
別の態様において、提供されるものは、配列番号７９のＶＨ配列及び配列番号８０のＶＬ配列を含む、抗体である。
【００２７】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：配列番号８７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、配列番号９０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む。他の実施形態において、抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：配列番号９１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、配列番号９２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【００２８】
別の態様において、提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ｇｌｙ２４３、Ｈｉｓ２４８、及びＡｒｇ２７９からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９５のＶＨ配列を含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号９６のＶＬ配列を含む。
【００２９】
別の態様において、提供されるものは、配列番号９５のＶＨ配列及び配列番号９６のＶＬ配列を含む、抗体である。
【００３０】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む。他の実施形態において、抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【００３１】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ｇｌｙ２４３、Ｈｉｓ２４８、及びＡｒｇ２７９からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、（ａ）配列番号１１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号１１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１１のＶＨ配列を含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号１１２のＶＬ配列を含む。
【００３２】
別の態様において、提供されるものは、配列番号１１１のＶＨ配列及び配列番号１１２のＶＬ配列を含む、抗体である。
【００３３】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む。他の実施形態において、抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【００３４】
別の態様において、提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ｇｌｙ２４３、Ｈｉｓ２４８、及びＡｒｇ２７９からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、（ａ）配列番号１２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２７のＶＨ配列を含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号１２８のＶＬ配列を含む。
【００３５】
別の態様において、提供されるものは、配列番号１２７のＶＨ配列及び配列番号１２８のＶＬ配列を含む、抗体である。
【００３６】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む。他の実施形態において、抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【００３７】
別の態様において、提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ｇｌｙ２４３、Ｈｉｓ２４８、及びＡｒｇ２７９からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、（ａ）配列番号１４３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号１４４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１４３のＶＨ配列を含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号１４４のＶＬ配列を含む。
【００３８】
別の態様において、提供されるものは、配列番号１４３のＶＨ配列及び配列番号１４４のＶＬ配列を含む、抗体である。
【００３９】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む。他の実施形態において、抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【００４０】
別の態様において、提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ｇｌｙ２４３、Ｈｉｓ２４８、及びＡｒｇ２７９からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、（ａ）配列番号１５９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号１６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１５９のＶＨ配列を含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号１６０のＶＬ配列を含む。
【００４１】
別の態様において、提供されるものは、配列番号１５９のＶＨ配列及び配列番号１６０のＶＬ配列を含む、抗体である。
【００４２】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：配列番号１６７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、配列番号１６８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、配列番号１６９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む。他の実施形態において、抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【００４３】
別の態様において、提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ｇｌｙ２４３、Ｈｉｓ２４８、及びＡｒｇ２７９からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、（ａ）配列番号１７５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号１７６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１７５のＶＨ配列を含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号１７６のＶＬ配列を含む。
【００４４】
別の態様において、提供されるものは、配列番号１７５のＶＨ配列及び配列番号１７６のＶＬ配列を含む、抗体である。
【００４５】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む。他の実施形態において、抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【００４６】
別の態様において、提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ｇｌｙ２４３、Ｈｉｓ２４８、及びＡｒｇ２７９からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、（ａ）配列番号１９１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号１９２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１９１のＶＨ配列を含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号１９２のＶＬ配列を含む。
【００４７】
別の態様において、提供されるものは、配列番号１９１のＶＨ配列及び配列番号１９２のＶＬ配列を含む、抗体である。
【００４８】
一態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ｇｌｙ２４３を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ｇｌｙ２４３及びＡｒｇ２７９を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。
【００４９】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２１０、配列番号２１５、配列番号２１６、及び配列番号２１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：配列番号２４８、配列番号２５２、配列番号２５８、配列番号２６１、及び配列番号２６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、配列番号２４９、配列番号２５３、配列番号２５６、配列番号２５９、配列番号２６２、及び配列番号２６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、配列番号２５０、配列番号２５４、配列番号２５７、配列番号２６０、配列番号２６３、配列番号２６５、及び配列番号２６７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、配列番号２５１または配列番号２５５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む。他の実施形態において、抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：配列番号２９５、配列番号２９９、及び配列番号３０３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、配列番号２９６、配列番号３００、及び配列番号３０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、配列番号２９７、配列番号３０１、配列番号３０５、配列番号３０６、配列番号３０７、配列番号３０８、配列番号３０９、配列番号３１０、配列番号３１１、配列番号３１２、配列番号３１３、及び配列番号３１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、配列番号２９８または配列番号３０２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【００５０】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ｇｌｙ２４３を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、（ａ）配列番号３６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号３７０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号３６９のＶＨ配列を含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号３７０のＶＬ配列を含む。
【００５１】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、配列番号３６９のＶＨ配列及び配列番号３７０のＶＬ配列を含む、抗体である。
【００５２】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：配列番号２１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号２２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：配列番号２６８または配列番号２７２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、配列番号２６９、配列番号２７３、及び配列番号２７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、配列番号２７０、配列番号２７４、及び配列番号２７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、配列番号２５５または配列番号２７１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む。他の実施形態において、抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：配列番号３１５、配列番号３１９、及び配列番号３２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、配列番号３１６または配列番号３２０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、配列番号３１７、配列番号３２１、配列番号３２２、及び配列番号３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、配列番号３０２または配列番号３１８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【００５３】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ｇｌｙ２４３を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、（ａ）配列番号４１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号４１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号４１５のＶＨ配列を含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号４１６のＶＬ配列を含む。
【００５４】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、配列番号４１５のＶＨ配列及び配列番号４１６のＶＬ配列を含む、抗体である。
【００５５】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：配列番号２２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号２２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号２２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：配列番号２７７または配列番号２８０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、配列番号２７８、配列番号２８１、及び配列番号２８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、配列番号２７９、配列番号２８２、及び配列番号２８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、配列番号２５１または配列番号２５５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む。他の実施形態において、抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：配列番号３２５、配列番号３２９、配列番号３３１、及び配列番号３３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、配列番号３２０または配列番号３２６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、配列番号３２７、配列番号３３０、配列番号３３２、及び配列番号３３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、配列番号３０２または配列番号３２８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【００５６】
別の態様において、提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ｇｌｙ２４３を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、（ａ）配列番号４２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号４３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号４２９のＶＨ配列を含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号４３０のＶＬ配列を含む。
【００５７】
別の態様において、提供されるものは、配列番号４２９のＶＨ配列及び配列番号４３０のＶＬ配列を含む、抗体である。
【００５８】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号２４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、配列番号２７１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む。他の実施形態において、抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：配列番号３３９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、配列番号３４０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、配列番号３４１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、配列番号３４２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【００５９】
別の態様において、提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ｇｌｙ２４３を１つ以上含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、（ａ）配列番号４３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号４３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号４３７のＶＨ配列を含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号４３８のＶＬ配列を含む。
【００６０】
別の態様において、提供されるものは、配列番号４３７のＶＨ配列及び配列番号４３８のＶＬ配列を含む、抗体である。
【００６１】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、次の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号２４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号２４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号２４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、次の軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）：配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１と、配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２と、配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３と、配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４と、をさらに含む。他の実施形態において、抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：配列番号３４３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、配列番号３４４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、配列番号３４５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、配列番号３４６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【００６２】
別の態様において、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のアミノ酸残基Ｇｌｙ２４３を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、（ａ）配列番号４３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号４４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるとおりのＶＨ配列及び（ｂ）にあるとおりのＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号４３９のＶＨ配列を含む。他の実施形態において、抗体は、配列番号４４０のＶＬ配列を含む。
【００６３】
別の態様において、提供されるものは、配列番号４３９のＶＨ配列及び配列番号４４０のＶＬ配列を含む、抗体である。
【００６４】
前述の態様のいずれか１つの抗体の特定の実施形態において、抗体は、約１００ｎＭ以下のＫｄでヒトＭＩＣＡに結合する。
【００６５】
前述の態様のいずれか１つの抗体の特定の実施形態において、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００２、ヒトＭＩＣＡ＊００４、及びヒトＭＩＣＢ＊００５に結合することができる。
【００６６】
前述の態様のいずれか１つの抗体の特定の実施形態において、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８、ヒトＭＩＣＡ＊００２、ヒトＭＩＣＡ＊００４、ヒトＭＩＣＡ＊００８、及びヒトＭＩＣＢ＊００５の細胞外ドメインに結合することができる。
【００６７】
前述の態様のいずれか１つの抗体の特定の実施形態において、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８、ヒトＭＩＣＡ＊００２、ヒトＭＩＣＡ＊００４、及びヒトＭＩＣＢ＊００５のアルファ３ドメインに結合することができる。
【００６８】
前述の態様のいずれか１つの抗体の特定の実施形態において、抗体は、モノクローナルである。
【００６９】
前述の態様のいずれか１つの抗体の特定の実施形態において、抗体は、ヒト、ヒト化、またはキメラである。
【００７０】
前述の態様のいずれか１つの抗体の特定の実施形態において、フレームワーク配列の少なくとも一部分は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列である。
【００７１】
前述の態様のいずれか１つの抗体の特定の実施形態において、抗体は、全長抗体である。
【００７２】
前述の態様のいずれか１つの抗体の特定の実施形態において、抗体は、二重特異性抗体である。
【００７３】
前述の態様のいずれか１つの抗体の特定の実施形態において、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８に結合する抗体断片である。いくつかの実施形態において、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、一本鎖可変断片（ｓｃＦＶ）、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される。
【００７４】
前述の態様のいずれか１つの抗体の特定の実施形態において、抗体は、ＩｇＧクラス抗体である。いくつかの実施形態において、ＩｇＧクラス抗体は、ＩｇＧ１サブクラス抗体である。いくつかの実施形態において、ＩｇＧクラス抗体は、ＩｇＧ２サブクラス抗体である。いくつかの実施形態において、ＩｇＧクラス抗体は、ＩｇＧ４サブクラス抗体である。
【００７５】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、前述の態様の抗体をコードする、単離核酸である。
【００７６】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、前述の態様の核酸を含む、ベクターである。
【００７７】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、前述の態様のベクターを含む、宿主細胞である。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、原核性、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉである。他の実施形態において、宿主細胞は、真核性、例えば、２９３細胞、ＣＨＯ細胞、酵母細胞、または植物細胞である。
【００７８】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、いずれかの前述の態様の抗体を産生する方法であり、方法は、前述の態様のいずれかの宿主細胞を培養培地で培養することを含む。いくつかの実施形態において、方法は、抗体を宿主細胞または培養培地から回収することをさらに含む。
【００７９】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、前述の態様のいずれかの抗体と、細胞傷害性薬剤と、を含む、免疫抱合体である。
【００８０】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、前述の態様のいずれかの抗体を含む組成物である。いくつかの実施形態において、組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、組成物は、薬学的組成物である。他の実施形態において、組成物は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストまたは追加の治療剤をさらに含む。
【００８１】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ＭＩＣのシェディングの低減に使用、可溶性ＭＩＣのレベルの低減に使用、ならびにＭＩＣのシェディング及び可溶性ＭＩＣのレベルの両方の低減に使用するための、前述の態様の抗体である。
【００８２】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、医薬品として使用するための前述の態様の抗体である。
【００８３】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、がんの治療またはその進行の遅延を、それを必要とする対象において行うことに使用するための前述の態様の抗体である。この態様の実施形態において、がんは、上皮癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉腫、メルケル細胞癌、または他の血液系悪性腫瘍であり得る。
【００８４】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、免疫関連疾患の治療またはその進行の遅延を、それを必要とする対象において行うことに使用するための前述の態様の抗体である。この態様のいくつかの実施形態において、免疫関連疾患は、ＮＫＧ２Ｄリガンドと関連している。さらなる実施形態において、ＮＫＧ２Ｄリガンドは、ＭＩＣである。この態様の他の実施形態において、免疫関連疾患は、消散していない急性感染、慢性感染、及び腫瘍免疫からなる群から選択される。
【００８５】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、免疫応答または機能の増加、増強、または刺激を、それを必要とする対象において行うことに使用するための前述の態様の抗体である。
【００８６】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ＭＩＣのシェディングを低減するための医薬品の製造における、前述の態様のいずれかの抗体の使用である。別の態様において、本明細書に提供されるものは、可溶性ＭＩＣのレベルを低減するための医薬品の製造における、前述の態様の抗体の使用である。別の態様において、本明細書に提供されるものは、ＭＩＣのシェディング及び可溶性ＭＩＣのレベルを低減するための医薬品の製造における、前述の態様の抗体の使用である。
【００８７】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、がんの治療またはその進行の遅延を、それを必要とする対象において行うための医薬品の製造における、前述の態様の抗体の使用である。この態様の実施形態において、がんは、上皮癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉腫、メルケル細胞癌、または他の血液系悪性腫瘍であり得る。
【００８８】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、免疫関連疾患の治療またはその進行の遅延を、それを必要とする対象において行うための医薬品の製造における、前述の態様の抗体の使用である。この態様のいくつかの実施形態において、免疫関連疾患は、ＮＫＧ２Ｄリガンドと関連している。さらなる実施形態において、ＮＫＧ２Ｄリガンドは、ＭＩＣである。この態様の他の実施形態において、免疫関連疾患は、消散していない急性感染、慢性感染、及び腫瘍免疫からなる群から選択される。
【００８９】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、免疫応答または機能の増加、増強、または刺激を、それを必要とする対象において行うための医薬品の製造における、前述の態様の抗体の使用である。
【００９０】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、個体に有効量の前述の態様のいずれかの抗体を投与して、ＭＩＣのシェディングを低減することを含む、個体においてＭＩＣのシェディングを低減する方法である。別の態様において、本明細書に提供されるものは、個体に有効量の前述の態様のいずれかの抗体を投与して、可溶性ＭＩＣのレベルを低減することを含む、個体において可溶性ＭＩＣのレベルを低減する方法である。別の態様において、本明細書に提供されるものは、個体に有効量の前述の態様のいずれかの抗体を投与して、ＭＩＣのシェディング及び可溶性ＭＩＣのレベルを低減することを含む、個体においてＭＩＣのシェディング及び可溶性ＭＩＣのレベルを低減する方法である。
【００９１】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、対象においてがんを治療またはその進行を遅延するための方法であり、方法は、対象に有効量の前述の態様のいずれかの抗体を投与し、これによって対象においてがんを治療またはその進行を遅延することを含む。この態様の実施形態において、がんは、上皮癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉腫、メルケル細胞癌、及び他の血液系悪性腫瘍であり得る。
【００９２】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、対象において免疫関連疾患を治療またはその進行を遅延するための方法であり、方法は、対象に有効量の前述の態様のいずれかの抗体を投与し、これによって対象において免疫関連疾患を治療またはその進行を遅延することを含む。この態様のいくつかの実施形態において、免疫関連疾患は、ＮＫＧ２Ｄリガンドと関連している。さらなる実施形態において、ＮＫＧ２Ｄリガンドは、ＭＩＣである。この態様の他の実施形態において、免疫関連疾患は、消散していない急性感染、慢性感染、及び腫瘍免疫からなる群から選択される。
【００９３】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、対象において免疫応答または機能を増加、増強、または刺激する方法であり、対象に有効量の前述の態様のいずれかの抗体を投与し、これによって対象において免疫応答または機能を増加、増強、または刺激することを含む。
【００９４】
個体においてＭＩＣのシェディングを低減、がんを治療もしくはその進行を遅延、免疫関連疾患を治療もしくはその進行を遅延、または対象において免疫応答もしくは機能を増加、増強、もしくは刺激するための上記方法の特定の実施形態において、方法は、対象にＰＤ−１軸結合アンタゴニストを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、抗体の投与の前または後に投与される。他の実施形態において、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、抗体と同時に投与される。これらの実施形態のＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、またはＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストであり得る。
【００９５】
いくつかの実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１の、そのリガンド結合パートナーへの結合を阻害する。ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１のＰＤＬ１への結合を阻害、ＰＤ−１のＰＤＬ２への結合を阻害、またはＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２の両方への結合を阻害し得る。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体、例えば、ＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ）、ＭＫ−３４７５（ペンブロリズマブ）、ＣＴ−０１１（ピジリズマブ）、ＭＥＤＩ−０６８０（ＡＭＰ−５１４）、ＰＤＲ００１、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ−１０８、及びＢＧＢ−Ａ３１７である。
【００９６】
いくつかの実施形態において、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストである。ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合を阻害、ＰＤ−Ｌ１のＢ７−１への結合を阻害、またはＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１及びＢ７−１の両方への結合を阻害し得る。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、例えば、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブ）、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＤＸ−１１０５、ＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ）、及びＭＳＢ００１０７１８Ｃ（アベルマブ）である。好ましい実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＰＤＬ３２８０Ａである。
【００９７】
いくつかの実施形態において、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ２抗体である。他の実施形態において、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、イムノアドヘシンである。
【００９８】
個体においてＭＩＣのシェディングを低減、がんを治療もしくはその進行を遅延、免疫関連疾患を治療もしくはその進行を遅延、または対象において免疫応答もしくは機能を増加、増強、もしくは刺激するための上記方法の特定の実施形態において、方法は、対象に１つ以上の追加の阻害性共刺激受容体を減少または阻害する薬剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の追加の阻害性共刺激受容体は、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ４、及びＭＭからなる群から選択される。
【００９９】
個体においてＭＩＣのシェディングを低減、がんを治療もしくはその進行を遅延、免疫関連疾患を治療もしくはその進行を遅延、または対象において免疫応答もしくは機能を増加、増強、もしくは刺激するための上記方法の特定の実施形態において、方法は、対象に追加の治療剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、化学療法剤である。
【０１００】
個体においてＭＩＣのシェディングを低減、がんを治療もしくはその進行を遅延、免疫関連疾患を治療もしくはその進行を遅延、または対象において免疫応答もしくは機能を増加、増強、もしくは刺激するための上記方法の特定の実施形態において、前述の態様の抗体は、非経口、肺内、鼻腔内、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与される。
【０１０１】
個体においてＭＩＣのシェディングを低減、がんを治療もしくはその進行を遅延、免疫関連疾患を治療もしくはその進行を遅延、または対象において免疫応答もしくは機能を増加、増強、もしくは刺激するための上記方法の特定の実施形態において、対象は、ヒトである。
【０１０２】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、前述の態様のいずれかの抗体と、抗体を対象におけるがんの治療またはその進行の遅延に使用するための説明書を含む添付文書と、を含む、キットである。別の態様において、本明細書に提供されるものは、前述の態様のいずれかの抗体と、抗体を対象における免疫関連疾患の治療またはその進行の遅延に使用するための説明書を含む添付文書と、を含む、キットである。別の態様において、本明細書に提供されるものは、前述の態様のいずれかの抗体と、対象における免疫応答または機能を増加、増強、または刺激するための説明書を含む添付文書と、を含む、キットである。前述の態様のキットの説明書のいくつかの実施形態において、対象は、ヒトである。
【０１０３】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、抗体のエピトープをマッピングする方法であり、ポリペプチドの非グリコシル化アミノ酸を置換して置換グリコシル化アミノ酸を含むグリコシル化ポリペプチドを生成することと、抗体がグリコシル化ポリペプチドに結合するかを決定することと、抗体のグリコシル化ポリペプチドへの結合が、抗体の、置換グリコシル化アミノ酸を含まないポリペプチドへの結合と比較して低減する場合、非グリコシル化アミノ酸または非グリコシル化アミノ酸の５オングストローム以内の表面露出アミノ酸のうちの少なくとも１つをエピトープの一部として特定することと、を含む。
【０１０４】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、抗体のエピトープをマッピングする方法であり、ポリペプチドの非グリコシル化アミノ酸を置換して置換グリコシル化アミノ酸を含むグリコシル化ポリペプチドを生成することと、抗体がグリコシル化ポリペプチドに結合するかを決定することとを含み、抗体のグリコシル化ポリペプチドへの結合が、抗体の、置換グリコシル化アミノ酸を含まないポリペプチドへの結合と比較して低減する場合、非グリコシル化アミノ酸または非グリコシル化アミノ酸の５オングストローム以内の表面露出アミノ酸のうちの少なくとも１つは、エピトープの一部として特定される。
【０１０５】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、抗体のエピトープをマッピングする方法であり、抗体の、置換グリコシル化アミノ酸を含むグリコシル化ポリペプチドへの結合が、抗体の、置換グリコシル化アミノ酸を含まないポリペプチドへの結合と比較して低減する場合、非グリコシル化アミノ酸または非グリコシル化アミノ酸の５オングストローム以内の表面露出アミノ酸のうちの少なくとも１つをエピトープの一部として特定することを含み、グリコシル化ポリペプチドは、ポリペプチドの非グリコシル化アミノ酸を置換することによって生成される。
【０１０６】
エピトープをマッピングするための前述の方法のいくつかの実施形態において、ポリペプチドの非グリコシル化アミノ酸を置換することは、ポリペプチドにグリコシル化部位を導入することを含む。エピトープをマッピングするための前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態において、エピトープは、立体構造エピトープである。エピトープをマッピングするための前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態において、エピトープは、線状エピトープである。エピトープをマッピングするための前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態において、非グリコシル化アミノ酸は、置換グリコシル化アミノ酸を含まないポリペプチドの表面上にある。エピトープをマッピングするための前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態において、置換グリコシル化アミノ酸は、Ｎ結合グリカンを含む。エピトープをマッピングするための前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態において、ポリペプチドは、Ｆｃドメインを含む。エピトープをマッピングするための前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態において、抗体のグリコシル化ポリペプチドへの結合は、ＥＬＩＳＡによって検出される。エピトープをマッピングするための方法のいくつかの実施形態において、抗体のグリコシル化ポリペプチドへの結合は、抗体の、置換グリコシル化アミノ酸を含まないポリペプチドへの結合と比較して少なくとも５０％低減する。
【０１０７】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、抗体をビニングするための方法であり、第１の抗体のエピトープを本明細書に記載される前述の方法によってマッピングすることと、第２の抗体のエピトープを本明細書に記載される方法によってマッピングすることと、第１の抗体及び第２の抗体が、同じエピトープを有する場合、同じビンにあることを決定することと、を含む。
【０１０８】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、抗体の接触アミノ酸を特定するための方法であり、ポリペプチドの非グリコシル化アミノ酸を置換して置換グリコシル化アミノ酸を含むグリコシル化ポリペプチドを生成することと、抗体がグリコシル化ポリペプチドに結合するかを決定することと、抗体のグリコシル化ポリペプチドへの結合が、抗体の、置換グリコシル化アミノ酸を含まないポリペプチドへの結合と比較して低減する場合、非グリコシル化アミノ酸または非グリコシル化アミノ酸の５オングストローム以内の表面露出アミノ酸のうちの少なくとも１つを、抗体の接触アミノ酸のうちの１つとして特定することと、を含む。
【０１０９】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、抗体の接触アミノ酸を特定するための方法であり、ポリペプチドの非グリコシル化アミノ酸を置換して置換グリコシル化アミノ酸を含むグリコシル化ポリペプチドを生成することと、抗体がグリコシル化ポリペプチドに結合するかを決定することと、を含み、抗体のグリコシル化ポリペプチドへの結合が、抗体の、置換グリコシル化アミノ酸を含まないポリペプチドへの結合と比較して低減する場合、非グリコシル化アミノ酸または非グリコシル化アミノ酸の５オングストローム以内の表面露出アミノ酸のうちの少なくとも１つは、抗体の接触アミノ酸のうちの１つとして特定される。
【０１１０】
別の態様において、本明細書に記載されることは、抗体の接触アミノ酸を特定するための方法であり、抗体の、置換グリコシル化アミノ酸を含むグリコシル化ポリペプチドへの結合が、抗体の、置換グリコシル化アミノ酸を含まないポリペプチドへの結合と比較して低減する場合、非グリコシル化アミノ酸または非グリコシル化アミノ酸の５オングストローム以内の表面露出アミノ酸のうちの少なくとも１つを抗体の接触アミノ酸のうちの１つとして特定することを含み、グリコシル化ポリペプチドは、ポリペプチドの非グリコシル化アミノ酸を置換することによって生成される。
【０１１１】
別の態様において、本明細書に記載されるものは、エピトープが前述の態様のエピトープマッピング方法のいずれかによってマッピングされる、前述の態様のいずれかの抗体である。
【０１１２】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ｇｌｙ２４３、Ｈｉｓ２４８、Ａｒｇ２７９、Ａｒｇ２１３、Ｓｅｒ２１４、Ａｌａ２１６、Ｓｅｒ２１７、Ａｓｎ２２０、Ａｒｇ２７１、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ｔｈｒ２８１、Ｓｅｒ２４７、Ａｓｐ２４９、Ｔｈｒ２５０、Ｔｒｐ２５３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、及びＧｌｎ２７８からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、第１のアミノ酸残基、第２のアミノ酸残基、及び第３のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、第１のアミノ酸残基は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ａｒｇ２１３、Ｓｅｒ２１４、Ａｌａ２１６、Ｓｅｒ２１７、Ａｓｎ２２０、及びＡｒｇ２７１からなる群から選択され、第２のアミノ酸残基は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＨｉｓ２４８、Ｓｅｒ２４７、Ａｓｐ２４９、Ｔｈｒ２５０、及びＴｒｐ２５３からなる群から選択され、第３のアミノ酸残基は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｒｇ２７９、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、及びＴｈｒ２８１からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、抗体は、第１のアミノ酸残基及び第２のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、第１のアミノ酸残基は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｙ２４３、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ａｒｇ２７９、及びＴｈｒ２８１からなる群から選択され、第２のアミノ酸残基は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｒｇ２７９、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、及びＴｈｒ２８１からなる群から選択される。他の実施形態において、抗体は、第１のアミノ酸残基及び第２のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、第１のアミノ酸残基は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＨｉｓ２４８、Ｓｅｒ２４７、Ａｓｐ２４９、Ｔｈｒ２５０、またはＴｒｐ２５３からなる群から選択され、第２のアミノ酸残基は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｒｇ２７９、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、及びＴｈｒ２８１からなる群から選択される。さらに他の実施形態において、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＨｉｓ２４８、Ｓｅｒ２４７、Ａｓｐ２４９、Ｔｈｒ２５０、及びＴｒｐ２５３からなる群から選択されるアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。さらに他の実施形態において、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｒｇ２７９、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、及びＴｈｒ２８１からなる群から選択されるアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。
【０１１３】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｙ２４３、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ａｒｇ２７９、及びＴｈｒ２８１からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、抗体は、第１のアミノ酸残基及び第２のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、第１の残基は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｙ２４３、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ａｒｇ２７９、及びＴｈｒ２８１からなる群から選択され、第２の残基は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｒｇ２７９、Ａｒｇ２７９、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、及びＴｈｒ２８１からなる群から選択される。
【０１１５】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ｈｉｓ２４８、Ｇｌｕ２７６、Ａｒｇ２７９、Ｔｙｒ２８３、Ｇｌｕ２８５、Ｈｉｓ２９０、及びＴｈｒ２９２からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。
【０１１６】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ｌｅｕ２４６、Ｓｅｒ２４７、Ａｓｐ２４９、Ｔｈｒ２５０、Ａｒｇ２７９、Ｔｙｒ２８３、Ｈｉｓ２９０、Ｓｅｒ２９１、Ｔｈｒ２９２、及びＰｒｏ２９４からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。
【０１１７】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｒｇ２４０、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｖａｌ２４４、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、Ａｒｇ２７９、Ｐｈｅ２８０、Ｔｈｒ２８１、Ｔｙｒ２８３、Ｇｌｕ２８５、Ｇｌｙ２８８、Ａｓｎ２８９、Ｈｉｓ２９０、Ｓｅｒ２９１、Ｔｈｒ２９２、Ｐｒｏ２９４、Ｖａｌ２９５、Ｐｒｏ２９６、及びＳｅｒ２９７からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。
【０１１８】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｓｎ２３４、Ｉｌｅ２３５、Ｉｌｅ２３６、Ｌｅｕ２３７、Ｔｈｒ２３８、Ｔｒｐ２３９、及びＡｒｇ２４０からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。
【０１１９】
別の態様において、本明細書に提供されるものは、ヒトＭＩＣＡ＊００８に特異的に結合する抗体であり、抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＶａｌ２６８、Ａｌａ２６９、Ｔｈｒ２７０、Ａｒｇ２７１、Ｉｌｅ２７２、Ｃｙｓ２７３、Ａｒｇ２７４、Ｇｌｙ２７５、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、Ａｒｇ２７９、及びＰｈｅ２８０からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。
【０１２０】
本明細書に記載される様々な実施形態の特性のうちの１つ、いくつか、または全てが組み合わされて、本発明の他の実施形態を形成することができることを理解されたい。本発明のこれら及び他の態様は、当業者にとって明らかとなるであろう。本発明のこれら及び他の実施形態は、以下の詳細な説明によってさらに説明される。
【図面の簡単な説明】
【０１２１】
【図１Ａ】図１Ａ〜図１Ｌは抗ＭＩＣ抗体の可変領域のアミノ酸配列である。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列に印を付ける。アミノ酸位置は、本明細書に記載されるＫａｂａｔ付番システムに従って付番される。図１Ａ：３Ｃ９．１０、図１Ｂ：９Ｃ９．５．６、図１Ｃ：１Ｅ６．１．３、図１Ｄ：７Ａ３．１．９、図１Ｅ：６Ｅ１２．５、図１Ｆ：６Ｅ１．１．１２、図１Ｇ：７Ｄ４．６、図１Ｈ：２Ｅ５．２．３、図１−Ｉ：２０Ｇ１１、図１−Ｊ：３２Ｄ２、図１Ｋ：３Ｅ１１、図１Ｌ：６Ｆ８．７．
【図１Ｂ】図１Ａ〜図１Ｌは抗ＭＩＣ抗体の可変領域のアミノ酸配列である。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列に印を付ける。アミノ酸位置は、本明細書に記載されるＫａｂａｔ付番システムに従って付番される。図１Ａ：３Ｃ９．１０、図１Ｂ：９Ｃ９．５．６、図１Ｃ：１Ｅ６．１．３、図１Ｄ：７Ａ３．１．９、図１Ｅ：６Ｅ１２．５、図１Ｆ：６Ｅ１．１．１２、図１Ｇ：７Ｄ４．６、図１Ｈ：２Ｅ５．２．３、図１−Ｉ：２０Ｇ１１、図１−Ｊ：３２Ｄ２、図１Ｋ：３Ｅ１１、図１Ｌ：６Ｆ８．７．
【図１Ｃ】図１Ａ〜図１Ｌは抗ＭＩＣ抗体の可変領域のアミノ酸配列である。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列に印を付ける。アミノ酸位置は、本明細書に記載されるＫａｂａｔ付番システムに従って付番される。図１Ａ：３Ｃ９．１０、図１Ｂ：９Ｃ９．５．６、図１Ｃ：１Ｅ６．１．３、図１Ｄ：７Ａ３．１．９、図１Ｅ：６Ｅ１２．５、図１Ｆ：６Ｅ１．１．１２、図１Ｇ：７Ｄ４．６、図１Ｈ：２Ｅ５．２．３、図１−Ｉ：２０Ｇ１１、図１−Ｊ：３２Ｄ２、図１Ｋ：３Ｅ１１、図１Ｌ：６Ｆ８．７．
【図１Ｄ】図１Ａ〜図１Ｌは抗ＭＩＣ抗体の可変領域のアミノ酸配列である。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列に印を付ける。アミノ酸位置は、本明細書に記載されるＫａｂａｔ付番システムに従って付番される。図１Ａ：３Ｃ９．１０、図１Ｂ：９Ｃ９．５．６、図１Ｃ：１Ｅ６．１．３、図１Ｄ：７Ａ３．１．９、図１Ｅ：６Ｅ１２．５、図１Ｆ：６Ｅ１．１．１２、図１Ｇ：７Ｄ４．６、図１Ｈ：２Ｅ５．２．３、図１−Ｉ：２０Ｇ１１、図１−Ｊ：３２Ｄ２、図１Ｋ：３Ｅ１１、図１Ｌ：６Ｆ８．７．
【図１Ｅ】図１Ａ〜図１Ｌは抗ＭＩＣ抗体の可変領域のアミノ酸配列である。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列に印を付ける。アミノ酸位置は、本明細書に記載されるＫａｂａｔ付番システムに従って付番される。図１Ａ：３Ｃ９．１０、図１Ｂ：９Ｃ９．５．６、図１Ｃ：１Ｅ６．１．３、図１Ｄ：７Ａ３．１．９、図１Ｅ：６Ｅ１２．５、図１Ｆ：６Ｅ１．１．１２、図１Ｇ：７Ｄ４．６、図１Ｈ：２Ｅ５．２．３、図１−Ｉ：２０Ｇ１１、図１−Ｊ：３２Ｄ２、図１Ｋ：３Ｅ１１、図１Ｌ：６Ｆ８．７．
【図１Ｆ】図１Ａ〜図１Ｌは抗ＭＩＣ抗体の可変領域のアミノ酸配列である。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列に印を付ける。アミノ酸位置は、本明細書に記載されるＫａｂａｔ付番システムに従って付番される。図１Ａ：３Ｃ９．１０、図１Ｂ：９Ｃ９．５．６、図１Ｃ：１Ｅ６．１．３、図１Ｄ：７Ａ３．１．９、図１Ｅ：６Ｅ１２．５、図１Ｆ：６Ｅ１．１．１２、図１Ｇ：７Ｄ４．６、図１Ｈ：２Ｅ５．２．３、図１−Ｉ：２０Ｇ１１、図１−Ｊ：３２Ｄ２、図１Ｋ：３Ｅ１１、図１Ｌ：６Ｆ８．７．
【図１Ｇ】図１Ａ〜図１Ｌは抗ＭＩＣ抗体の可変領域のアミノ酸配列である。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列に印を付ける。アミノ酸位置は、本明細書に記載されるＫａｂａｔ付番システムに従って付番される。図１Ａ：３Ｃ９．１０、図１Ｂ：９Ｃ９．５．６、図１Ｃ：１Ｅ６．１．３、図１Ｄ：７Ａ３．１．９、図１Ｅ：６Ｅ１２．５、図１Ｆ：６Ｅ１．１．１２、図１Ｇ：７Ｄ４．６、図１Ｈ：２Ｅ５．２．３、図１−Ｉ：２０Ｇ１１、図１−Ｊ：３２Ｄ２、図１Ｋ：３Ｅ１１、図１Ｌ：６Ｆ８．７．
【図１Ｈ】図１Ａ〜図１Ｌは抗ＭＩＣ抗体の可変領域のアミノ酸配列である。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列に印を付ける。アミノ酸位置は、本明細書に記載されるＫａｂａｔ付番システムに従って付番される。図１Ａ：３Ｃ９．１０、図１Ｂ：９Ｃ９．５．６、図１Ｃ：１Ｅ６．１．３、図１Ｄ：７Ａ３．１．９、図１Ｅ：６Ｅ１２．５、図１Ｆ：６Ｅ１．１．１２、図１Ｇ：７Ｄ４．６、図１Ｈ：２Ｅ５．２．３、図１−Ｉ：２０Ｇ１１、図１−Ｊ：３２Ｄ２、図１Ｋ：３Ｅ１１、図１Ｌ：６Ｆ８．７．
【図１Ｉ】図１Ａ〜図１Ｌは抗ＭＩＣ抗体の可変領域のアミノ酸配列である。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列に印を付ける。アミノ酸位置は、本明細書に記載されるＫａｂａｔ付番システムに従って付番される。図１Ａ：３Ｃ９．１０、図１Ｂ：９Ｃ９．５．６、図１Ｃ：１Ｅ６．１．３、図１Ｄ：７Ａ３．１．９、図１Ｅ：６Ｅ１２．５、図１Ｆ：６Ｅ１．１．１２、図１Ｇ：７Ｄ４．６、図１Ｈ：２Ｅ５．２．３、図１−Ｉ：２０Ｇ１１、図１−Ｊ：３２Ｄ２、図１Ｋ：３Ｅ１１、図１Ｌ：６Ｆ８．７．
【図１Ｊ】図１Ａ〜図１Ｌは抗ＭＩＣ抗体の可変領域のアミノ酸配列である。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列に印を付ける。アミノ酸位置は、本明細書に記載されるＫａｂａｔ付番システムに従って付番される。図１Ａ：３Ｃ９．１０、図１Ｂ：９Ｃ９．５．６、図１Ｃ：１Ｅ６．１．３、図１Ｄ：７Ａ３．１．９、図１Ｅ：６Ｅ１２．５、図１Ｆ：６Ｅ１．１．１２、図１Ｇ：７Ｄ４．６、図１Ｈ：２Ｅ５．２．３、図１−Ｉ：２０Ｇ１１、図１−Ｊ：３２Ｄ２、図１Ｋ：３Ｅ１１、図１Ｌ：６Ｆ８．７．
【図１Ｋ】図１Ａ〜図１Ｌは抗ＭＩＣ抗体の可変領域のアミノ酸配列である。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列に印を付ける。アミノ酸位置は、本明細書に記載されるＫａｂａｔ付番システムに従って付番される。図１Ａ：３Ｃ９．１０、図１Ｂ：９Ｃ９．５．６、図１Ｃ：１Ｅ６．１．３、図１Ｄ：７Ａ３．１．９、図１Ｅ：６Ｅ１２．５、図１Ｆ：６Ｅ１．１．１２、図１Ｇ：７Ｄ４．６、図１Ｈ：２Ｅ５．２．３、図１−Ｉ：２０Ｇ１１、図１−Ｊ：３２Ｄ２、図１Ｋ：３Ｅ１１、図１Ｌ：６Ｆ８．７．
【図１Ｌ】図１Ａ〜図１Ｌは抗ＭＩＣ抗体の可変領域のアミノ酸配列である。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列に印を付ける。アミノ酸位置は、本明細書に記載されるＫａｂａｔ付番システムに従って付番される。図１Ａ：３Ｃ９．１０、図１Ｂ：９Ｃ９．５．６、図１Ｃ：１Ｅ６．１．３、図１Ｄ：７Ａ３．１．９、図１Ｅ：６Ｅ１２．５、図１Ｆ：６Ｅ１．１．１２、図１Ｇ：７Ｄ４．６、図１Ｈ：２Ｅ５．２．３、図１−Ｉ：２０Ｇ１１、図１−Ｊ：３２Ｄ２、図１Ｋ：３Ｅ１１、図１Ｌ：６Ｆ８．７．
【図２】ＭＩＣＡ／Ｂアルファ３ドメイン整列、同一性％、及び類似性％を示す。
【図３−１】図３Ａ〜図３Ｅは黒色の丸は抗体結合をブロッキングした操作グリコシル化部位アスパラギンを示し、灰色の丸は抗体結合を維持した操作グリコシル化部位を示す。図３Ａ：ビン１（３Ｃ９．１０）エピトープは、ＭＩＣＡの「底部」にマッピングする。図３Ｂ：ビン２（６Ｆ８、７Ｄ４、３２Ｄ２、及び３Ｅ１１）エピトープは、ＭＩＣＡの「底部及び前部」にマッピングする。図３Ｃ：ビン３（９Ｃ９．５．６、１Ｅ６．１．３、７Ａ３．１．９）エピトープは、ＭＩＣＡの「底部及び側部」にマッピングする。図３Ｄ：ビン４（６Ｅ１２．５）エピトープは、ＭＩＣＡの「側部」にマッピングする。図３Ｅ：ビン５（２０Ｇ１１）エピトープは、ＭＩＣＡの「前部」にマッピングする。
【図３−２】図３Ａ〜図３Ｅは黒色の丸は抗体結合をブロッキングした操作グリコシル化部位アスパラギンを示し、灰色の丸は抗体結合を維持した操作グリコシル化部位を示す。図３Ａ：ビン１（３Ｃ９．１０）エピトープは、ＭＩＣＡの「底部」にマッピングする。図３Ｂ：ビン２（６Ｆ８、７Ｄ４、３２Ｄ２、及び３Ｅ１１）エピトープは、ＭＩＣＡの「底部及び前部」にマッピングする。図３Ｃ：ビン３（９Ｃ９．５．６、１Ｅ６．１．３、７Ａ３．１．９）エピトープは、ＭＩＣＡの「底部及び側部」にマッピングする。図３Ｄ：ビン４（６Ｅ１２．５）エピトープは、ＭＩＣＡの「側部」にマッピングする。図３Ｅ：ビン５（２０Ｇ１１）エピトープは、ＭＩＣＡの「前部」にマッピングする。
【図３−３】図３Ａ〜図３Ｅは黒色の丸は抗体結合をブロッキングした操作グリコシル化部位アスパラギンを示し、灰色の丸は抗体結合を維持した操作グリコシル化部位を示す。図３Ａ：ビン１（３Ｃ９．１０）エピトープは、ＭＩＣＡの「底部」にマッピングする。図３Ｂ：ビン２（６Ｆ８、７Ｄ４、３２Ｄ２、及び３Ｅ１１）エピトープは、ＭＩＣＡの「底部及び前部」にマッピングする。図３Ｃ：ビン３（９Ｃ９．５．６、１Ｅ６．１．３、７Ａ３．１．９）エピトープは、ＭＩＣＡの「底部及び側部」にマッピングする。図３Ｄ：ビン４（６Ｅ１２．５）エピトープは、ＭＩＣＡの「側部」にマッピングする。図３Ｅ：ビン５（２０Ｇ１１）エピトープは、ＭＩＣＡの「前部」にマッピングする。
【図４】図４Ａ〜図４ＢはＧｌｙｃｏバリアントの示差走査蛍光測定（ＤＳＦ）からの融解曲線を示す。図４Ａは、全てのグリコシル化バリアントの蛍光応答（ＲＦＵ）を示す。図４Ｂは、全てのグリコシル化バリアントの融解曲線の一次導関数を示す。
【図５】ＭＩＣＡ及びｍＩｇＧ２ａのＤＳＦ融解温度（Ｔｍ）値を示す。
【図６】Ｇｌｙｃｏ変異体がグリコシル化されていること確認するゲルを示す。
【図７Ａ】マウスＭＩＬＬ１上に移植されたヒトＭＩＣＡ＊００８残基を示す。
【図７Ｂ】ＭＩＬＬ１キメラにおける非ＭＩＣＡ＊００８残基を示す。
【図８】ビン６及びビン７（それぞれ２Ｅ５．２．３及び６Ｅ１．１．１２）エピトープがＭＩＣＡの「背部及び上部」にマッピングすることを示す。黒色は、ＭＩＬＬ１−ＭＩＣＡキメラに結合するこれらの抗体に基づいて可能なエピトープを示す。エピトープに含まれない残基は、操作グリコシル化部位マッピング、ビン６及び７抗体が４つ全ての対立遺伝子に結合するので、ＭＩＣＡ００２、００４、００８、及びＭＩＣＢ００５の間の対立遺伝子の相違、ならびにＦｒａｃｚｋｉｅｗｉｃｚ，Ｒ．ａｎｄ  Ｂｒａｕｎ，Ｗ．（１９９８）”Ｅｘａｃｔ  ａｎｄ  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｃｃｅｓｓｉｂｌｅ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ａｒｅａｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｇｒａｄｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ”Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｃｈｅｍ．，１９，３１９−３３３に記載されるように、溶媒接触可能性計算プログラムＧＥＴＡＲＥＡを使用して内向きであるか、または接触可能表面積を有さないと予測されるＭＩＣＡ＊００１構造（ＰＤＢコード１Ｂ３Ｊ及び１ＨＹＲ）における残基からのデータに基づく。
【図９】アラニンスキャニングからの親和性の倍の減少を示す。３よりも大きい倍の減少は影付きである。
【図１０】Ａｌａスキャニングデータが含まれる２Ｅ５．２．３エピトープを示す。黒色の残基は２Ｅ５．２．３のエピトープであり、灰色の残基はそうではない。エピトープに含まれない残基は、アラニンスキャニング、操作グリコシル化部位マッピング、２Ｅ５．２．３が４つ全ての対立遺伝子に結合するので、ＭＩＣＡ００２、００４、００８、及びＭＩＣＢ００５の間の対立遺伝子の相違、ならびにＦｒａｃｚｋｉｅｗｉｃｚ，Ｒ．ａｎｄ  Ｂｒａｕｎ，Ｗ．（１９９８）”Ｅｘａｃｔ  ａｎｄ  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｃｃｅｓｓｉｂｌｅ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ａｒｅａｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｇｒａｄｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ”Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｃｈｅｍ．，１９，３１９−３３３に記載されるように、溶媒接触可能性計算プログラムＧＥＴＡＲＥＡを使用して内向きであるか、または接触可能表面積を有さないと予測されるＭＩＣＡ＊００１構造（ＰＤＢコード１Ｂ３Ｊ及び１ＨＹＲ）における残基からのデータに基づく。２Ｅ５．２．３はＭＩＣＡの「背部」及び「上部」に結合することが予測されるという我々の仮説を支持して、「前部」にある残基のＡｌａスキャニングは、２Ｅ５．２．３がこれらの残基のいずれにも結合しないことを示した。これは、２Ｅ５．２．３のエピトープがＭＩＣＡの「前部」にはなく、ＭＩＣＡの「背部」及び「上部」にあることを明らかにする。
【図１１Ａ】図１１Ａ〜図１１Ｂはグリコシル化操作及びＡｌａスキャニングによってマッピングされた抗体のエピトープを比較する。図１１Ａ：６Ｆ８、図１１Ｂ：７Ｄ４。
【図１１Ｂ】図１１Ａ〜図１１Ｂはグリコシル化操作及びＡｌａスキャニングによってマッピングされた抗体のエピトープを比較する。図１１Ａ：６Ｆ８、図１１Ｂ：７Ｄ４。
【図１２】本明細書に記載される抗ＭＩＣ抗体の配列特定因子の要約を提供する。
【図１３Ａ】図１３Ａ〜図１３Ｃは細胞に添加された、抗ＭＩＣ抗体１Ｄ５、１３Ａ９、及び６Ｅ１の組み合わせを滴定することによって、阻害によって引き起こされる可溶性ＭＩＣ（ｓＭＩＣ）シェディングの低減パーセントを示す。
【図１３Ｂ】図１３Ａ〜図１３Ｃは細胞に添加された、抗ＭＩＣ抗体１Ｄ５、１３Ａ９、及び６Ｅ１の組み合わせを滴定することによって、阻害によって引き起こされる可溶性ＭＩＣ（ｓＭＩＣ）シェディングの低減パーセントを示す。
【図１３Ｃ】図１３Ａ〜図１３Ｃは細胞に添加された、抗ＭＩＣ抗体１Ｄ５、１３Ａ９、及び６Ｅ１の組み合わせを滴定することによって、阻害によって引き起こされる可溶性ＭＩＣ（ｓＭＩＣ）シェディングの低減パーセントを示す。
【図１４Ａ】図１４Ａ〜図１４Ｆは１Ｄ５、１３Ａ９、１５Ｆ１１、６Ｅ１（別名、６Ｅ１．１．１２）、１８Ｇ３、及び１２Ｈ１０抗ＭＩＣ抗体の可変領域のアミノ酸配列である。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１（図１４Ａ）、ＨＶＲ−Ｈ２（図１４Ｂ）、及びＨＶＲ−Ｈ３（図１４Ｃ）、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１（図１４Ｄ）、ＨＶＲ−Ｌ２（図１４Ｅ）、及びＨＶＲ−Ｌ３（図１４Ｆ）配列に印を付ける。アミノ酸位置は、本明細書に記載されるＫａｂａｔ付番システムに従って付番される。
【図１４Ｂ】図１４Ａ〜図１４Ｆは１Ｄ５、１３Ａ９、１５Ｆ１１、６Ｅ１（別名、６Ｅ１．１．１２）、１８Ｇ３、及び１２Ｈ１０抗ＭＩＣ抗体の可変領域のアミノ酸配列である。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１（図１４Ａ）、ＨＶＲ−Ｈ２（図１４Ｂ）、及びＨＶＲ−Ｈ３（図１４Ｃ）、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１（図１４Ｄ）、ＨＶＲ−Ｌ２（図１４Ｅ）、及びＨＶＲ−Ｌ３（図１４Ｆ）配列に印を付ける。アミノ酸位置は、本明細書に記載されるＫａｂａｔ付番システムに従って付番される。
【図１４Ｃ】図１４Ａ〜図１４Ｆは１Ｄ５、１３Ａ９、１５Ｆ１１、６Ｅ１（別名、６Ｅ１．１．１２）、１８Ｇ３、及び１２Ｈ１０抗ＭＩＣ抗体の可変領域のアミノ酸配列である。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１（図１４Ａ）、ＨＶＲ−Ｈ２（図１４Ｂ）、及びＨＶＲ−Ｈ３（図１４Ｃ）、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１（図１４Ｄ）、ＨＶＲ−Ｌ２（図１４Ｅ）、及びＨＶＲ−Ｌ３（図１４Ｆ）配列に印を付ける。アミノ酸位置は、本明細書に記載されるＫａｂａｔ付番システムに従って付番される。
【図１４Ｄ】図１４Ａ〜図１４Ｆは１Ｄ５、１３Ａ９、１５Ｆ１１、６Ｅ１（別名、６Ｅ１．１．１２）、１８Ｇ３、及び１２Ｈ１０抗ＭＩＣ抗体の可変領域のアミノ酸配列である。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１（図１４Ａ）、ＨＶＲ−Ｈ２（図１４Ｂ）、及びＨＶＲ−Ｈ３（図１４Ｃ）、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１（図１４Ｄ）、ＨＶＲ−Ｌ２（図１４Ｅ）、及びＨＶＲ−Ｌ３（図１４Ｆ）配列に印を付ける。アミノ酸位置は、本明細書に記載されるＫａｂａｔ付番システムに従って付番される。
【図１４Ｅ】図１４Ａ〜図１４Ｆは１Ｄ５、１３Ａ９、１５Ｆ１１、６Ｅ１（別名、６Ｅ１．１．１２）、１８Ｇ３、及び１２Ｈ１０抗ＭＩＣ抗体の可変領域のアミノ酸配列である。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１（図１４Ａ）、ＨＶＲ−Ｈ２（図１４Ｂ）、及びＨＶＲ−Ｈ３（図１４Ｃ）、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１（図１４Ｄ）、ＨＶＲ−Ｌ２（図１４Ｅ）、及びＨＶＲ−Ｌ３（図１４Ｆ）配列に印を付ける。アミノ酸位置は、本明細書に記載されるＫａｂａｔ付番システムに従って付番される。
【図１４Ｆ】図１４Ａ〜図１４Ｆは１Ｄ５、１３Ａ９、１５Ｆ１１、６Ｅ１（別名、６Ｅ１．１．１２）、１８Ｇ３、及び１２Ｈ１０抗ＭＩＣ抗体の可変領域のアミノ酸配列である。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１（図１４Ａ）、ＨＶＲ−Ｈ２（図１４Ｂ）、及びＨＶＲ−Ｈ３（図１４Ｃ）、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１（図１４Ｄ）、ＨＶＲ−Ｌ２（図１４Ｅ）、及びＨＶＲ−Ｌ３（図１４Ｆ）配列に印を付ける。アミノ酸位置は、本明細書に記載されるＫａｂａｔ付番システムに従って付番される。
【図１５Ａ】図１５Ａ〜図１５Ｂはシェディング阻害アッセイで抗体干渉について試験する実験の結果を提供する。図１５Ａは、ＨＣＣ１５３４（ＭＩＣＡ＊００４）細胞の結果を提供する。図１５Ｂは、ＭＥＬ−ＪＵＳＯ細胞（ＭＩＣＡ＊００８）の結果を提供する。
【図１５Ｂ】図１５Ａ〜図１５Ｂはシェディング阻害アッセイで抗体干渉について試験する実験の結果を提供する。図１５Ａは、ＨＣＣ１５３４（ＭＩＣＡ＊００４）細胞の結果を提供する。図１５Ｂは、ＭＥＬ−ＪＵＳＯ細胞（ＭＩＣＡ＊００８）の結果を提供する。
【図１６Ａ】図１６Ａ〜図１６Ｃは条件培地に添加された、抗ＭＩＣ抗体１Ｄ５、１３Ａ９、及び６Ｅ１の組み合わせを滴定することによって、抗体干渉によって引き起こされるｓＭＩＣシグナルの低減パーセントを描写する。
【図１６Ｂ】図１６Ａ〜図１６Ｃは条件培地に添加された、抗ＭＩＣ抗体１Ｄ５、１３Ａ９、及び６Ｅ１の組み合わせを滴定することによって、抗体干渉によって引き起こされるｓＭＩＣシグナルの低減パーセントを描写する。
【図１６Ｃ】図１６Ａ〜図１６Ｃは条件培地に添加された、抗ＭＩＣ抗体１Ｄ５、１３Ａ９、及び６Ｅ１の組み合わせを滴定することによって、抗体干渉によって引き起こされるｓＭＩＣシグナルの低減パーセントを描写する。
【図１７】全ての抗体キャンペーンからＭＩＣＡ＊００８アルファ３ドメインへの最高の結合親和性を有した５２個の抗ＭＩＣＡ抗体を選択した。ｂｉａｃｏｒｅによって決定された結合親和性値は、０．５ｎＭ〜１０ｎＭの範囲で、１０ｎＭ以下であった。
【図１８Ａ】図１８Ａ及び図１８ＢはＭＩＣＡ＊００８のシェディング阻害パーセント（図１８Ａ）及びＭＩＣＡ＊００８アルファ３ドメインの結合親和性（ＫＤ）対１０ｎＭ以下の親和性を有する５２個の抗ＭＩＣＡ抗体についてのＭＩＣＡ＊００８のシェディング阻害パーセント（図１８Ｂ）を示すＷａｔｅｒｆａｌｌプロットである。抗ＭＩＣＡ抗体は、１〜８１％のＭＩＣＡ＊００８のシェディング阻害パーセントについての８０倍の範囲を示す。
【図１８Ｂ】図１８Ａ及び図１８ＢはＭＩＣＡ＊００８のシェディング阻害パーセント（図１８Ａ）及びＭＩＣＡ＊００８アルファ３ドメインの結合親和性（ＫＤ）対１０ｎＭ以下の親和性を有する５２個の抗ＭＩＣＡ抗体についてのＭＩＣＡ＊００８のシェディング阻害パーセント（図１８Ｂ）を示すＷａｔｅｒｆａｌｌプロットである。抗ＭＩＣＡ抗体は、１〜８１％のＭＩＣＡ＊００８のシェディング阻害パーセントについての８０倍の範囲を示す。
【図１９−１】Ｗａｓａｔｃｈを使用して決定された５２個の抗ＭＩＣＡ抗体のセットについての３つの固有のエピトープビンを示す。ＭＩＣＡ＊００８の親和性対Ｗａｓａｔｃｈ決定エピトープビン（図１９Ｂ）及びシェディング阻害パーセント対Ｗａｓａｔｃｈ決定エピトープビン（図１９Ｃ）も示す。
【図１９−２】Ｗａｓａｔｃｈを使用して決定された５２個の抗ＭＩＣＡ抗体のセットについての３つの固有のエピトープビンを示す。ＭＩＣＡ＊００８の親和性対Ｗａｓａｔｃｈ決定エピトープビン（図１９Ｂ）及びシェディング阻害パーセント対Ｗａｓａｔｃｈ決定エピトープビン（図１９Ｃ）も示す。
【図２０】糖鎖改変エピトープマッピング（ＧＥＭ）方法を描写する。単一Ｎ結合グリコシル化部位は、Ｎ−Ｘ−Ｓ／Ｔモチーフを達成するようにタンパク質抗原中の１つまたは２つの残基を変更することによって作製される。各々固有の新たに作製されたＮ結合グリコシル化部位を有する複数の抗原は次いで、Ｅｌｉｓａ、Ｂｉａｃｏｒｅ、またはＷａｓａｔｃｈを使用して抗体パネルへの結合活性について評価される。エピトープは次いで、グリコシル化が存在し、よって部位をマスキングする場合に結合することができない任意の部位として定義される。
【図２１Ａ】図２１ＡはＭＩＣＡ＊００８の「前部」にある７個の個別の固有に操作されたＮ結合グリコシル化部位の位置を描写する。各糖鎖改変ＭＩＣＡ＊００８バリアントについての総グリコシル化（フコシル化％及びアフコシル化％）の分析も示す（図２１Ｂ）。図２１Ｃは９６個の抗ＭＩＣＡ抗体への７個の糖鎖改変ＭＩＣＡ＊００８バリアントのＥｌｉｓａ結合特性に基づく糖鎖改変エピトープマッピング（ＧＥＭ）方法によって特定された固有のエピトープビンを描写する。図２１ＤはＭＩＣＡの「前部」及び「底部」にある糖鎖改変ＭＩＣＡバリアントのエピトープが、抗ＭＩＣＡ抗体によってブロッキングされる場合、ＭＩＣＡ＊００８シェディングをブロッキングするのに最も効果的であったことを示す１Ｄ５の結晶構造である。Ｇ２４３（Ｇｌｙｃｏ１４のＧ２４３Ｎ変異の位置）及びＲ２７９（Ｇｌｙｃｏ１６のＲ２７９Ｎ変異の位置）は、抗ＭＩＣＡ抗体によるＭＩＣＡ＊００８の最良のシェディング阻害を可能にするエピトープであった。
【図２１Ｂ】図２１ＡはＭＩＣＡ＊００８の「前部」にある７個の個別の固有に操作されたＮ結合グリコシル化部位の位置を描写する。各糖鎖改変ＭＩＣＡ＊００８バリアントについての総グリコシル化（フコシル化％及びアフコシル化％）の分析も示す（図２１Ｂ）。図２１Ｃは９６個の抗ＭＩＣＡ抗体への７個の糖鎖改変ＭＩＣＡ＊００８バリアントのＥｌｉｓａ結合特性に基づく糖鎖改変エピトープマッピング（ＧＥＭ）方法によって特定された固有のエピトープビンを描写する。図２１ＤはＭＩＣＡの「前部」及び「底部」にある糖鎖改変ＭＩＣＡバリアントのエピトープが、抗ＭＩＣＡ抗体によってブロッキングされる場合、ＭＩＣＡ＊００８シェディングをブロッキングするのに最も効果的であったことを示す１Ｄ５の結晶構造である。Ｇ２４３（Ｇｌｙｃｏ１４のＧ２４３Ｎ変異の位置）及びＲ２７９（Ｇｌｙｃｏ１６のＲ２７９Ｎ変異の位置）は、抗ＭＩＣＡ抗体によるＭＩＣＡ＊００８の最良のシェディング阻害を可能にするエピトープであった。
【図２１Ｃ】図２１ＡはＭＩＣＡ＊００８の「前部」にある７個の個別の固有に操作されたＮ結合グリコシル化部位の位置を描写する。各糖鎖改変ＭＩＣＡ＊００８バリアントについての総グリコシル化（フコシル化％及びアフコシル化％）の分析も示す（図２１Ｂ）。図２１Ｃは９６個の抗ＭＩＣＡ抗体への７個の糖鎖改変ＭＩＣＡ＊００８バリアントのＥｌｉｓａ結合特性に基づく糖鎖改変エピトープマッピング（ＧＥＭ）方法によって特定された固有のエピトープビンを描写する。図２１ＤはＭＩＣＡの「前部」及び「底部」にある糖鎖改変ＭＩＣＡバリアントのエピトープが、抗ＭＩＣＡ抗体によってブロッキングされる場合、ＭＩＣＡ＊００８シェディングをブロッキングするのに最も効果的であったことを示す１Ｄ５の結晶構造である。Ｇ２４３（Ｇｌｙｃｏ１４のＧ２４３Ｎ変異の位置）及びＲ２７９（Ｇｌｙｃｏ１６のＲ２７９Ｎ変異の位置）は、抗ＭＩＣＡ抗体によるＭＩＣＡ＊００８の最良のシェディング阻害を可能にするエピトープであった。
【図２１Ｄ】図２１ＡはＭＩＣＡ＊００８の「前部」にある７個の個別の固有に操作されたＮ結合グリコシル化部位の位置を描写する。各糖鎖改変ＭＩＣＡ＊００８バリアントについての総グリコシル化（フコシル化％及びアフコシル化％）の分析も示す（図２１Ｂ）。図２１Ｃは９６個の抗ＭＩＣＡ抗体への７個の糖鎖改変ＭＩＣＡ＊００８バリアントのＥｌｉｓａ結合特性に基づく糖鎖改変エピトープマッピング（ＧＥＭ）方法によって特定された固有のエピトープビンを描写する。図２１ＤはＭＩＣＡの「前部」及び「底部」にある糖鎖改変ＭＩＣＡバリアントのエピトープが、抗ＭＩＣＡ抗体によってブロッキングされる場合、ＭＩＣＡ＊００８シェディングをブロッキングするのに最も効果的であったことを示す１Ｄ５の結晶構造である。Ｇ２４３（Ｇｌｙｃｏ１４のＧ２４３Ｎ変異の位置）及びＲ２７９（Ｇｌｙｃｏ１６のＲ２７９Ｎ変異の位置）は、抗ＭＩＣＡ抗体によるＭＩＣＡ＊００８の最良のシェディング阻害を可能にするエピトープであった。
【図２２Ａ】図２２Ａ〜図２２Ｄは異なる角度から示されるＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１Ｄ５  Ｆａｂの結晶構造のレンダリングを描写し、Ｆａｂは表面として、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインはリボンダイヤグラムとして描写される。カルボキシ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」、及びアミノ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８αα３ドメインの「背面」は、アミノ末端（Ｎ末端）及びカルボキシ末端（Ｃ末端）とともに強調される。
【図２２Ｂ】図２２Ａ〜図２２Ｄは異なる角度から示されるＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１Ｄ５  Ｆａｂの結晶構造のレンダリングを描写し、Ｆａｂは表面として、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインはリボンダイヤグラムとして描写される。カルボキシ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」、及びアミノ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８αα３ドメインの「背面」は、アミノ末端（Ｎ末端）及びカルボキシ末端（Ｃ末端）とともに強調される。
【図２２Ｃ】図２２Ａ〜図２２Ｄは異なる角度から示されるＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１Ｄ５  Ｆａｂの結晶構造のレンダリングを描写し、Ｆａｂは表面として、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインはリボンダイヤグラムとして描写される。カルボキシ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」、及びアミノ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８αα３ドメインの「背面」は、アミノ末端（Ｎ末端）及びカルボキシ末端（Ｃ末端）とともに強調される。
【図２２Ｄ】図２２Ａ〜図２２Ｄは異なる角度から示されるＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１Ｄ５  Ｆａｂの結晶構造のレンダリングを描写し、Ｆａｂは表面として、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインはリボンダイヤグラムとして描写される。カルボキシ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」、及びアミノ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８αα３ドメインの「背面」は、アミノ末端（Ｎ末端）及びカルボキシ末端（Ｃ末端）とともに強調される。
【図２３】図２３Ａ及び図２３Ｂは異なる角度から示される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１Ｄ５  Ｆａｂ  ＣＤＲの結晶構造のレンダリングである。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインは表面として、１Ｄ５  ＦａｂのＣＤＲはリボンとして描写される。１Ｄ５パラトープ（ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内）の一部として定義される残基は、それらの側鎖がスティックとして示される。
【図２４−１】図２４Ａ及び図２４Ｂはそれぞれ表面として示される、１Ｄ５  ＦａｂとＭＩＣＡ＊００８α３ドメインとの間の界面のオープンブック表現である。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内にあるものとして定義される、１Ｄ５パラトープ中の残基は、図２４Ａにおいてそれらの残基番号とともに強調される。１Ｄ５  Ｆａｂの４．５Å以内にあるものとして定義される、１Ｄ５エピトープ中のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基は、図２４Ｂにおいてそれらの残基番号とともに強調される。図２４Ｃ及び図２４Ｄはそれぞれリボンダイヤグラムとして示される、１Ｄ５  ＦａｂとＭＩＣＡ＊００８α３ドメインとの間の界面のオープンブック表現である。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内にあるものとして定義される、１Ｄ５パラトープ中の残基は、図２４Ｃにおいてそれらの残基番号とともに強調され、それらの側鎖がスティックとして示される。１Ｄ５  Ｆａｂの４．５Å以内にあるものとして定義される、１Ｄ５エピトープ中のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基は、図２４Ｄにおいてそれらの残基番号とともに強調され、それらの側鎖がスティックとして示される。
【図２４−２】図２４Ａ及び図２４Ｂはそれぞれ表面として示される、１Ｄ５  ＦａｂとＭＩＣＡ＊００８α３ドメインとの間の界面のオープンブック表現である。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内にあるものとして定義される、１Ｄ５パラトープ中の残基は、図２４Ａにおいてそれらの残基番号とともに強調される。１Ｄ５  Ｆａｂの４．５Å以内にあるものとして定義される、１Ｄ５エピトープ中のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基は、図２４Ｂにおいてそれらの残基番号とともに強調される。図２４Ｃ及び図２４Ｄはそれぞれリボンダイヤグラムとして示される、１Ｄ５  ＦａｂとＭＩＣＡ＊００８α３ドメインとの間の界面のオープンブック表現である。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内にあるものとして定義される、１Ｄ５パラトープ中の残基は、図２４Ｃにおいてそれらの残基番号とともに強調され、それらの側鎖がスティックとして示される。１Ｄ５  Ｆａｂの４．５Å以内にあるものとして定義される、１Ｄ５エピトープ中のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基は、図２４Ｄにおいてそれらの残基番号とともに強調され、それらの側鎖がスティックとして示される。
【図２５Ａ】図２５Ａ及び図２５Ｂは１Ｄ５のＬＣ及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基間の水素結合を強調する。ＨＣは、ＬＣ相互作用を見やすくするために描写されない。図２５Ｃ及び図２５Ｄは１Ｄ５のＨＣ及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基間の水素結合を強調する。ＬＣは、ＨＣ相互作用を見やすくするために描写されない。
【図２５Ｂ】図２５Ａ及び図２５Ｂは１Ｄ５のＬＣ及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基間の水素結合を強調する。ＨＣは、ＬＣ相互作用を見やすくするために描写されない。図２５Ｃ及び図２５Ｄは１Ｄ５のＨＣ及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基間の水素結合を強調する。ＬＣは、ＨＣ相互作用を見やすくするために描写されない。
【図２５Ｃ】図２５Ａ及び図２５Ｂは１Ｄ５のＬＣ及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基間の水素結合を強調する。ＨＣは、ＬＣ相互作用を見やすくするために描写されない。図２５Ｃ及び図２５Ｄは１Ｄ５のＨＣ及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基間の水素結合を強調する。ＬＣは、ＨＣ相互作用を見やすくするために描写されない。
【図２５Ｄ】図２５Ａ及び図２５Ｂは１Ｄ５のＬＣ及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基間の水素結合を強調する。ＨＣは、ＬＣ相互作用を見やすくするために描写されない。図２５Ｃ及び図２５Ｄは１Ｄ５のＨＣ及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基間の水素結合を強調する。ＬＣは、ＨＣ相互作用を見やすくするために描写されない。
【図２６】図２６Ａ及び図２６ＢはそれぞれＰｙｍｏｌで計算されるように色付けされた静電表面電位を有する表面として示される、１Ｄ５  ＦａｂとＭＩＣＡ＊００８α３ドメインとの間の界面のオープンブック表現である。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内にあるものとして定義される、１Ｄ５パラトープ中の残基は、図２６Ａにおいてそれらの残基番号とともに強調される。１Ｄ５  Ｆａｂの４．５Å以内にあるものとして定義される、１Ｄ５エピトープ中のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基は、図２６Ｂにおいてそれらの残基番号とともに強調される。
【図２７−１】図２７Ａ及び図２７Ｂは２４０台ループが強調された、それぞれリボンダイヤグラムまたは表面表現として描写されるＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造を示す。図２７ＣはＬ３及びＨ３  ＣＤＲが強調され、セリン及びグリシンなどのこれらのＣＤＲの小さな残基が残基番号によって示される、リボンダイヤグラムとしての１Ｄ５  Ｆａｂ構造を示す。これらのセリンの側鎖はスティックとして示される。図２７Ｄ〜図２７ＥはＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの凸状２４０台ループとこれらのＣＤＲの配向及び一次配列によって作製された凹状表面との形状相補性を例証するために異なる角度から示される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１Ｄ５  Ｆａｂ  ＣＤＲ  Ｌ３及びＨ３の結晶構造のレンダリングである。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインは２４０台ループが強調された表面として、１Ｄ５  ＦａｂのＬ３及びＨ３  ＣＤＲはリボンダイヤグラムとして描写される。１Ｄ５パラトープ（ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内）の一部として定義されるＬ３及びＨ３内のセリン残基は、それらの側鎖がスティックとして示される。図２７Ｆ及び図２７Ｇは異なる角度から示される、それぞれＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１Ｄ５  Ｆａｂ  ＬＣ及びＨＣの結晶構造のレンダリングである。見やすくするために、Ｆａｂの１つの鎖のみが描写される。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの２４０台ループが強調される。１Ｄ５パラトープ（ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内）の一部として定義されるＬＣまたはＨＣのいずれかのＣＤＲ残基は、それらの側鎖がスティックとして示される。
【図２７−２】図２７Ａ及び図２７Ｂは２４０台ループが強調された、それぞれリボンダイヤグラムまたは表面表現として描写されるＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造を示す。図２７ＣはＬ３及びＨ３  ＣＤＲが強調され、セリン及びグリシンなどのこれらのＣＤＲの小さな残基が残基番号によって示される、リボンダイヤグラムとしての１Ｄ５  Ｆａｂ構造を示す。これらのセリンの側鎖はスティックとして示される。図２７Ｄ〜図２７ＥはＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの凸状２４０台ループとこれらのＣＤＲの配向及び一次配列によって作製された凹状表面との形状相補性を例証するために異なる角度から示される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１Ｄ５  Ｆａｂ  ＣＤＲ  Ｌ３及びＨ３の結晶構造のレンダリングである。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインは２４０台ループが強調された表面として、１Ｄ５  ＦａｂのＬ３及びＨ３  ＣＤＲはリボンダイヤグラムとして描写される。１Ｄ５パラトープ（ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内）の一部として定義されるＬ３及びＨ３内のセリン残基は、それらの側鎖がスティックとして示される。図２７Ｆ及び図２７Ｇは異なる角度から示される、それぞれＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１Ｄ５  Ｆａｂ  ＬＣ及びＨＣの結晶構造のレンダリングである。見やすくするために、Ｆａｂの１つの鎖のみが描写される。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの２４０台ループが強調される。１Ｄ５パラトープ（ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内）の一部として定義されるＬＣまたはＨＣのいずれかのＣＤＲ残基は、それらの側鎖がスティックとして示される。
【図２７−３】図２７Ａ及び図２７Ｂは２４０台ループが強調された、それぞれリボンダイヤグラムまたは表面表現として描写されるＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造を示す。図２７ＣはＬ３及びＨ３  ＣＤＲが強調され、セリン及びグリシンなどのこれらのＣＤＲの小さな残基が残基番号によって示される、リボンダイヤグラムとしての１Ｄ５  Ｆａｂ構造を示す。これらのセリンの側鎖はスティックとして示される。図２７Ｄ〜図２７ＥはＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの凸状２４０台ループとこれらのＣＤＲの配向及び一次配列によって作製された凹状表面との形状相補性を例証するために異なる角度から示される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１Ｄ５  Ｆａｂ  ＣＤＲ  Ｌ３及びＨ３の結晶構造のレンダリングである。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインは２４０台ループが強調された表面として、１Ｄ５  ＦａｂのＬ３及びＨ３  ＣＤＲはリボンダイヤグラムとして描写される。１Ｄ５パラトープ（ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内）の一部として定義されるＬ３及びＨ３内のセリン残基は、それらの側鎖がスティックとして示される。図２７Ｆ及び図２７Ｇは異なる角度から示される、それぞれＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１Ｄ５  Ｆａｂ  ＬＣ及びＨＣの結晶構造のレンダリングである。見やすくするために、Ｆａｂの１つの鎖のみが描写される。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの２４０台ループが強調される。１Ｄ５パラトープ（ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内）の一部として定義されるＬＣまたはＨＣのいずれかのＣＤＲ残基は、それらの側鎖がスティックとして示される。
【図２７−４】図２７Ａ及び図２７Ｂは２４０台ループが強調された、それぞれリボンダイヤグラムまたは表面表現として描写されるＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造を示す。図２７ＣはＬ３及びＨ３  ＣＤＲが強調され、セリン及びグリシンなどのこれらのＣＤＲの小さな残基が残基番号によって示される、リボンダイヤグラムとしての１Ｄ５  Ｆａｂ構造を示す。これらのセリンの側鎖はスティックとして示される。図２７Ｄ〜図２７ＥはＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの凸状２４０台ループとこれらのＣＤＲの配向及び一次配列によって作製された凹状表面との形状相補性を例証するために異なる角度から示される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１Ｄ５  Ｆａｂ  ＣＤＲ  Ｌ３及びＨ３の結晶構造のレンダリングである。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインは２４０台ループが強調された表面として、１Ｄ５  ＦａｂのＬ３及びＨ３  ＣＤＲはリボンダイヤグラムとして描写される。１Ｄ５パラトープ（ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内）の一部として定義されるＬ３及びＨ３内のセリン残基は、それらの側鎖がスティックとして示される。図２７Ｆ及び図２７Ｇは異なる角度から示される、それぞれＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１Ｄ５  Ｆａｂ  ＬＣ及びＨＣの結晶構造のレンダリングである。見やすくするために、Ｆａｂの１つの鎖のみが描写される。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの２４０台ループが強調される。１Ｄ５パラトープ（ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内）の一部として定義されるＬＣまたはＨＣのいずれかのＣＤＲ残基は、それらの側鎖がスティックとして示される。
【図２８Ａ】図２８Ａ〜図２８Ｄは異なる角度から示されるＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１３Ａ９  Ｆａｂの結晶構造のレンダリングであり、Ｆａｂは表面として、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインはリボンダイヤグラムとして描写される。カルボキシ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」、及びアミノ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「背面」は、アミノ末端（Ｎ末端）及びカルボキシ末端（Ｃ末端）とともに強調される。
【図２８Ｂ】図２８Ａ〜図２８Ｄは異なる角度から示されるＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１３Ａ９  Ｆａｂの結晶構造のレンダリングであり、Ｆａｂは表面として、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインはリボンダイヤグラムとして描写される。カルボキシ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」、及びアミノ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「背面」は、アミノ末端（Ｎ末端）及びカルボキシ末端（Ｃ末端）とともに強調される。
【図２８Ｃ】図２８Ａ〜図２８Ｄは異なる角度から示されるＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１３Ａ９  Ｆａｂの結晶構造のレンダリングであり、Ｆａｂは表面として、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインはリボンダイヤグラムとして描写される。カルボキシ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」、及びアミノ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「背面」は、アミノ末端（Ｎ末端）及びカルボキシ末端（Ｃ末端）とともに強調される。
【図２８Ｄ】図２８Ａ〜図２８Ｄは異なる角度から示されるＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１３Ａ９  Ｆａｂの結晶構造のレンダリングであり、Ｆａｂは表面として、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインはリボンダイヤグラムとして描写される。カルボキシ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」、及びアミノ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「背面」は、アミノ末端（Ｎ末端）及びカルボキシ末端（Ｃ末端）とともに強調される。
【図２９】図２９Ａ及び図２９Ｂは異なる角度から示される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１３Ａ９  Ｆａｂ  ＣＤＲの結晶構造のレンダリングである。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインは表面として、１３Ａ９  ＦａｂのＣＤＲはリボンダイヤグラムとして描写される。１３Ａ９パラトープ（ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内）の一部として定義される残基は、それらの側鎖がスティックとして示される。
【図３０−１】図３０Ａ〜図３０Ｂはそれぞれ表面として示される、１３Ａ９  ＦａｂとＭＩＣＡ＊００８α３ドメインとの間の界面のオープンブック表現である。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内にあるものとして定義される、１３Ａ９パラトープ中の残基は、図３０Ａにおいてそれらの残基番号とともに強調される。１３Ａ９  Ｆａｂの４．５Å以内にあるものとして定義される、１３Ａ９エピトープ中のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基は、図３０Ｂにおいてそれらの残基番号とともに強調される。図３０Ｃ〜図３０Ｄはそれぞれリボンダイヤグラムとして示される、１３Ａ９  ＦａｂとＭＩＣＡ＊００８α３ドメインとの間の界面のオープンブック表現である。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内にあるものとして定義される、１３Ａ９パラトープ中の残基は、図３０Ｃにおいてそれらの残基番号とともに強調され、それらの側鎖がスティックとして示される。１３Ａ９  Ｆａｂの４．５Å以内にあるものとして定義される、１３Ａ９エピトープ中のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基は、図３０Ｄにおいてそれらの残基番号とともに強調され、それらの側鎖がスティックとして示される。
【図３０−２】図３０Ａ〜図３０Ｂはそれぞれ表面として示される、１３Ａ９  ＦａｂとＭＩＣＡ＊００８α３ドメインとの間の界面のオープンブック表現である。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内にあるものとして定義される、１３Ａ９パラトープ中の残基は、図３０Ａにおいてそれらの残基番号とともに強調される。１３Ａ９  Ｆａｂの４．５Å以内にあるものとして定義される、１３Ａ９エピトープ中のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基は、図３０Ｂにおいてそれらの残基番号とともに強調される。図３０Ｃ〜図３０Ｄはそれぞれリボンダイヤグラムとして示される、１３Ａ９  ＦａｂとＭＩＣＡ＊００８α３ドメインとの間の界面のオープンブック表現である。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内にあるものとして定義される、１３Ａ９パラトープ中の残基は、図３０Ｃにおいてそれらの残基番号とともに強調され、それらの側鎖がスティックとして示される。１３Ａ９  Ｆａｂの４．５Å以内にあるものとして定義される、１３Ａ９エピトープ中のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基は、図３０Ｄにおいてそれらの残基番号とともに強調され、それらの側鎖がスティックとして示される。
【図３１Ａ】図３１Ａは１３Ａ９のＬＣ及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基間の水素結合を強調する。ＨＣは、ＬＣ相互作用を見やすくするために描写されない。図３１Ｂ〜図３１Ｄは１３Ａ９のＨＣ及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基間の水素結合を強調する。ＬＣは、ＨＣ相互作用を見やすくするために描写されない。
【図３１Ｂ】図３１Ａは１３Ａ９のＬＣ及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基間の水素結合を強調する。ＨＣは、ＬＣ相互作用を見やすくするために描写されない。図３１Ｂ〜図３１Ｄは１３Ａ９のＨＣ及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基間の水素結合を強調する。ＬＣは、ＨＣ相互作用を見やすくするために描写されない。
【図３１Ｃ】図３１Ａは１３Ａ９のＬＣ及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基間の水素結合を強調する。ＨＣは、ＬＣ相互作用を見やすくするために描写されない。図３１Ｂ〜図３１Ｄは１３Ａ９のＨＣ及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基間の水素結合を強調する。ＬＣは、ＨＣ相互作用を見やすくするために描写されない。
【図３１Ｄ】図３１Ａは１３Ａ９のＬＣ及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基間の水素結合を強調する。ＨＣは、ＬＣ相互作用を見やすくするために描写されない。図３１Ｂ〜図３１Ｄは１３Ａ９のＨＣ及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基間の水素結合を強調する。ＬＣは、ＨＣ相互作用を見やすくするために描写されない。
【図３２】図３２Ａ〜図３２ＢはそれぞれＰｙｍｏｌで計算されるように色付けされた静電表面電位を有する表面として示される、１３Ａ９  ＦａｂとＭＩＣＡ＊００８α３ドメインとの間の界面のオープンブック表現である。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内にあるものとして定義される、１３Ａ９パラトープ中の残基は、図３２Ａにおいてそれらの残基番号とともに強調される。１３Ａ９  Ｆａｂの４．５Å以内にあるものとして定義される、１３Ａ９エピトープ中のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基は、図３２Ｂにおいてそれらの残基番号とともに強調される。
【図３３−１】図３３Ａ及び図３３ＢはＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」に作製される隆起及び窪みを例証するために残基２４０−２４５、２７７−２７９、及び２８８−２９７が強調された、それぞれリボンダイヤグラムまたは表面表現として描写されるＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造を示す。図３３ＣはＦａｂ  ＣＤＲがリボンダイヤグラムとして、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインが表面として示された、１３Ａ９  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体構造のレンダリングであり、６つ全てのＣＤＲが強調され、パラトープ（ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内）中の残基の側鎖がスティックとして示される。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基２４０−２４５、２７７−２７９、及び２８８−２９７も、１３Ａ９  ＦａｂがこれらのＭＩＣＡ＊００８残基によって作製された隆起及び溝にわたって結合することを例証するためにＭＩＣＡ＊００８表面上で強調される。図３３Ｄ及び図３３ＥはＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基２４０−２４５、２７７−２７９、及び２８８−２９７の隆起と窪みとの形状相補性ならびに窪みを埋めるかまたは隆起に架かる１３Ａ９  Ｆａｂの側鎖を例証するために異なる角度から示される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１３Ａ９  ＣＤＲの結晶構造のレンダリングである。１３Ａ９パラトープ（ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内）中の残基の側鎖がスティックとして示される。
【図３３−２】図３３Ａ及び図３３ＢはＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」に作製される隆起及び窪みを例証するために残基２４０−２４５、２７７−２７９、及び２８８−２９７が強調された、それぞれリボンダイヤグラムまたは表面表現として描写されるＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造を示す。図３３ＣはＦａｂ  ＣＤＲがリボンダイヤグラムとして、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインが表面として示された、１３Ａ９  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体構造のレンダリングであり、６つ全てのＣＤＲが強調され、パラトープ（ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内）中の残基の側鎖がスティックとして示される。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基２４０−２４５、２７７−２７９、及び２８８−２９７も、１３Ａ９  ＦａｂがこれらのＭＩＣＡ＊００８残基によって作製された隆起及び溝にわたって結合することを例証するためにＭＩＣＡ＊００８表面上で強調される。図３３Ｄ及び図３３ＥはＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基２４０−２４５、２７７−２７９、及び２８８−２９７の隆起と窪みとの形状相補性ならびに窪みを埋めるかまたは隆起に架かる１３Ａ９  Ｆａｂの側鎖を例証するために異なる角度から示される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１３Ａ９  ＣＤＲの結晶構造のレンダリングである。１３Ａ９パラトープ（ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内）中の残基の側鎖がスティックとして示される。
【図３３−３】図３３Ａ及び図３３ＢはＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」に作製される隆起及び窪みを例証するために残基２４０−２４５、２７７−２７９、及び２８８−２９７が強調された、それぞれリボンダイヤグラムまたは表面表現として描写されるＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造を示す。図３３ＣはＦａｂ  ＣＤＲがリボンダイヤグラムとして、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインが表面として示された、１３Ａ９  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体構造のレンダリングであり、６つ全てのＣＤＲが強調され、パラトープ（ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内）中の残基の側鎖がスティックとして示される。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基２４０−２４５、２７７−２７９、及び２８８−２９７も、１３Ａ９  ＦａｂがこれらのＭＩＣＡ＊００８残基によって作製された隆起及び溝にわたって結合することを例証するためにＭＩＣＡ＊００８表面上で強調される。図３３Ｄ及び図３３ＥはＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基２４０−２４５、２７７−２７９、及び２８８−２９７の隆起と窪みとの形状相補性ならびに窪みを埋めるかまたは隆起に架かる１３Ａ９  Ｆａｂの側鎖を例証するために異なる角度から示される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１３Ａ９  ＣＤＲの結晶構造のレンダリングである。１３Ａ９パラトープ（ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内）中の残基の側鎖がスティックとして示される。
【図３４Ａ】図３４Ａ〜図３４Ｄは異なる角度から示されるＣ２７３Ｓ  ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した６Ｅ１（別名６Ｅ１．１．１２）Ｆａｂの結晶構造のレンダリングであり、Ｆａｂは表面として、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインはリボンダイヤグラムとして描写される。カルボキシ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」、及びアミノ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「背面」は、アミノ末端（Ｎ末端）及びカルボキシ末端（Ｃ末端）とともに強調される。
【図３４Ｂ】図３４Ａ〜図３４Ｄは異なる角度から示されるＣ２７３Ｓ  ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した６Ｅ１（別名６Ｅ１．１．１２）Ｆａｂの結晶構造のレンダリングであり、Ｆａｂは表面として、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインはリボンダイヤグラムとして描写される。カルボキシ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」、及びアミノ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「背面」は、アミノ末端（Ｎ末端）及びカルボキシ末端（Ｃ末端）とともに強調される。
【図３４Ｃ】図３４Ａ〜図３４Ｄは異なる角度から示されるＣ２７３Ｓ  ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した６Ｅ１（別名６Ｅ１．１．１２）Ｆａｂの結晶構造のレンダリングであり、Ｆａｂは表面として、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインはリボンダイヤグラムとして描写される。カルボキシ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」、及びアミノ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「背面」は、アミノ末端（Ｎ末端）及びカルボキシ末端（Ｃ末端）とともに強調される。
【図３４Ｄ】図３４Ａ〜図３４Ｄは異なる角度から示されるＣ２７３Ｓ  ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した６Ｅ１（別名６Ｅ１．１．１２）Ｆａｂの結晶構造のレンダリングであり、Ｆａｂは表面として、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインはリボンダイヤグラムとして描写される。カルボキシ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」、及びアミノ末端鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「背面」は、アミノ末端（Ｎ末端）及びカルボキシ末端（Ｃ末端）とともに強調される。
【図３５】図３５Ａ及び図３５Ｂは異なる角度から示される、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した６Ｅ１  Ｆａｂ  ＣＤＲの結晶構造のレンダリングである。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインは表面として、６Ｅ１  ＦａｂのＣＤＲはリボンダイヤグラムとして描写される。６Ｅ１パラトープ（ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内）の一部として定義される残基は、それらの側鎖がスティックとして示される。ＣＤＲ  Ｌ３はＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに全く接触しないことが留意される。
【図３６−１】図３６Ａ及び図３６Ｂはそれぞれ表面として示される、６Ｅ１  ＦａｂとＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインとの間の界面のオープンブック表現である。ＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインの４．５Å以内にあるものとして定義される、６Ｅ１パラトープ中の残基は、図３６Ａにおいてそれらの残基番号とともに強調される。６Ｅ１  Ｆａｂの４．５Å以内にあるものとして定義される、６Ｅ１エピトープ中のＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメイン残基は、図３６Ｂにおいてそれらの残基番号とともに強調される。図３６Ｃ及び図３６Ｄはそれぞれリボンダイヤグラムとして示される、６Ｅ１  ＦａｂとＭＩＣＡ＊００８α３ドメインとの間の界面のオープンブック表現である。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内にあるものとして定義される、６Ｅ１パラトープ中の残基は、図３６Ｃにおいてそれらの残基番号とともに強調され、それらの側鎖がスティックとして示される。６Ｅ１  Ｆａｂの４．５Å以内にあるものとして定義される、６Ｅ１エピトープ中のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基は、図３６Ｄにおいてそれらの残基番号とともに強調され、それらの側鎖がスティックとして示される。
【図３６−２】図３６Ａ及び図３６Ｂはそれぞれ表面として示される、６Ｅ１  ＦａｂとＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインとの間の界面のオープンブック表現である。ＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインの４．５Å以内にあるものとして定義される、６Ｅ１パラトープ中の残基は、図３６Ａにおいてそれらの残基番号とともに強調される。６Ｅ１  Ｆａｂの４．５Å以内にあるものとして定義される、６Ｅ１エピトープ中のＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメイン残基は、図３６Ｂにおいてそれらの残基番号とともに強調される。図３６Ｃ及び図３６Ｄはそれぞれリボンダイヤグラムとして示される、６Ｅ１  ＦａｂとＭＩＣＡ＊００８α３ドメインとの間の界面のオープンブック表現である。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内にあるものとして定義される、６Ｅ１パラトープ中の残基は、図３６Ｃにおいてそれらの残基番号とともに強調され、それらの側鎖がスティックとして示される。６Ｅ１  Ｆａｂの４．５Å以内にあるものとして定義される、６Ｅ１エピトープ中のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基は、図３６Ｄにおいてそれらの残基番号とともに強調され、それらの側鎖がスティックとして示される。
【図３７Ａ】図３７Ａは６Ｅ１のＬＣ及びＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインの残基間の水素結合及び塩橋を強調する。ＨＣは、ＬＣ相互作用を見やすくするために描写されない。図３７Ｂ及び図３７Ｃは６Ｅ１のＨＣ及びＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインの残基間の水素結合及び塩橋を強調する。ＬＣは、ＨＣ相互作用を見やすくするために描写されない。
【図３７Ｂ】図３７Ａは６Ｅ１のＬＣ及びＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインの残基間の水素結合及び塩橋を強調する。ＨＣは、ＬＣ相互作用を見やすくするために描写されない。図３７Ｂ及び図３７Ｃは６Ｅ１のＨＣ及びＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインの残基間の水素結合及び塩橋を強調する。ＬＣは、ＨＣ相互作用を見やすくするために描写されない。
【図３７Ｃ】図３７Ａは６Ｅ１のＬＣ及びＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインの残基間の水素結合及び塩橋を強調する。ＨＣは、ＬＣ相互作用を見やすくするために描写されない。図３７Ｂ及び図３７Ｃは６Ｅ１のＨＣ及びＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインの残基間の水素結合及び塩橋を強調する。ＬＣは、ＨＣ相互作用を見やすくするために描写されない。
【図３８】図３８Ａ及び図３８ＢはそれぞれＰｙｍｏｌで計算されるように色付けされた静電表面電位を有する表面として示される、６Ｅ１  ＦａｂとＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインとの間の界面のオープンブック表現である。ＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインの４．５Å以内にあるものとして定義される、６Ｅ１パラトープ中の残基は、図１７Ａにおいてそれらの残基番号とともに強調される。６Ｅ１  Ｆａｂの４．５Å以内にあるものとして定義される、６Ｅ１エピトープ中のＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメイン残基は、図１７Ｂにおいてそれらの残基番号とともに強調される。
【図３９−１】図３９Ａ及び図３９ＢはこのＣＤＲの長さの延長を例証するためにＣＤＲ  Ｌ１が強調された、２つの異なる配向でのリボンダイヤグラム表現として描写される６Ｅ１  Ｆａｂを示す。図３９Ｃ及び図３９Ｄは２５０台ループが強調された、それぞれリボンダイヤグラムまたは表面表現として描写される６Ｅ１  Ｆａｂ複合体構造からのＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインを示す。図３９Ｅ及び図３９Ｆはリボンダイヤグラムとして描写されるＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインに結合した表面として示される６Ｅ１  Ｆａｂの結晶構造のレンダリングである。この相互作用は、６Ｅ１の長いＣＤＲ  Ｌ１によって生成された溝におけるＭＩＣＡ＊００８の２５０台ループの結合を例証するために異なる角度から示される。２５０台ループにおける残基の側鎖はスティックとして示される。図３９Ｇは６Ｅ１  Ｆａｂペプチド結合溝におけるＬｅｕ２５７の疎水性結合ポケットを描写する。このポケットは６Ｅ１  ＦａｂのＣＤＲ  Ｌ１、Ｈ１、及びＨ３からなり、これらの残基の側鎖はスティックとして示される。図３９Ｈは６Ｅ１  Ｆａｂペプチド結合溝におけるＡｓｐ２５５の親水性結合ポケットを描写する。このポケットは６Ｅ１  ＦａｂのＣＤＲ  Ｌ１、Ｌ２、及びＨ３の残基からなり、これらの残基の側鎖はスティックとして示される。
【図３９−２】図３９Ａ及び図３９ＢはこのＣＤＲの長さの延長を例証するためにＣＤＲ  Ｌ１が強調された、２つの異なる配向でのリボンダイヤグラム表現として描写される６Ｅ１  Ｆａｂを示す。図３９Ｃ及び図３９Ｄは２５０台ループが強調された、それぞれリボンダイヤグラムまたは表面表現として描写される６Ｅ１  Ｆａｂ複合体構造からのＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインを示す。図３９Ｅ及び図３９Ｆはリボンダイヤグラムとして描写されるＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインに結合した表面として示される６Ｅ１  Ｆａｂの結晶構造のレンダリングである。この相互作用は、６Ｅ１の長いＣＤＲ  Ｌ１によって生成された溝におけるＭＩＣＡ＊００８の２５０台ループの結合を例証するために異なる角度から示される。２５０台ループにおける残基の側鎖はスティックとして示される。図３９Ｇは６Ｅ１  Ｆａｂペプチド結合溝におけるＬｅｕ２５７の疎水性結合ポケットを描写する。このポケットは６Ｅ１  ＦａｂのＣＤＲ  Ｌ１、Ｈ１、及びＨ３からなり、これらの残基の側鎖はスティックとして示される。図３９Ｈは６Ｅ１  Ｆａｂペプチド結合溝におけるＡｓｐ２５５の親水性結合ポケットを描写する。このポケットは６Ｅ１  ＦａｂのＣＤＲ  Ｌ１、Ｌ２、及びＨ３の残基からなり、これらの残基の側鎖はスティックとして示される。
【図３９−３】図３９Ａ及び図３９ＢはこのＣＤＲの長さの延長を例証するためにＣＤＲ  Ｌ１が強調された、２つの異なる配向でのリボンダイヤグラム表現として描写される６Ｅ１  Ｆａｂを示す。図３９Ｃ及び図３９Ｄは２５０台ループが強調された、それぞれリボンダイヤグラムまたは表面表現として描写される６Ｅ１  Ｆａｂ複合体構造からのＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインを示す。図３９Ｅ及び図３９Ｆはリボンダイヤグラムとして描写されるＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインに結合した表面として示される６Ｅ１  Ｆａｂの結晶構造のレンダリングである。この相互作用は、６Ｅ１の長いＣＤＲ  Ｌ１によって生成された溝におけるＭＩＣＡ＊００８の２５０台ループの結合を例証するために異なる角度から示される。２５０台ループにおける残基の側鎖はスティックとして示される。図３９Ｇは６Ｅ１  Ｆａｂペプチド結合溝におけるＬｅｕ２５７の疎水性結合ポケットを描写する。このポケットは６Ｅ１  ＦａｂのＣＤＲ  Ｌ１、Ｈ１、及びＨ３からなり、これらの残基の側鎖はスティックとして示される。図３９Ｈは６Ｅ１  Ｆａｂペプチド結合溝におけるＡｓｐ２５５の親水性結合ポケットを描写する。このポケットは６Ｅ１  ＦａｂのＣＤＲ  Ｌ１、Ｌ２、及びＨ３の残基からなり、これらの残基の側鎖はスティックとして示される。
【図３９−４】図３９Ａ及び図３９ＢはこのＣＤＲの長さの延長を例証するためにＣＤＲ  Ｌ１が強調された、２つの異なる配向でのリボンダイヤグラム表現として描写される６Ｅ１  Ｆａｂを示す。図３９Ｃ及び図３９Ｄは２５０台ループが強調された、それぞれリボンダイヤグラムまたは表面表現として描写される６Ｅ１  Ｆａｂ複合体構造からのＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインを示す。図３９Ｅ及び図３９Ｆはリボンダイヤグラムとして描写されるＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインに結合した表面として示される６Ｅ１  Ｆａｂの結晶構造のレンダリングである。この相互作用は、６Ｅ１の長いＣＤＲ  Ｌ１によって生成された溝におけるＭＩＣＡ＊００８の２５０台ループの結合を例証するために異なる角度から示される。２５０台ループにおける残基の側鎖はスティックとして示される。図３９Ｇは６Ｅ１  Ｆａｂペプチド結合溝におけるＬｅｕ２５７の疎水性結合ポケットを描写する。このポケットは６Ｅ１  ＦａｂのＣＤＲ  Ｌ１、Ｈ１、及びＨ３からなり、これらの残基の側鎖はスティックとして示される。図３９Ｈは６Ｅ１  Ｆａｂペプチド結合溝におけるＡｓｐ２５５の親水性結合ポケットを描写する。このポケットは６Ｅ１  ＦａｂのＣＤＲ  Ｌ１、Ｌ２、及びＨ３の残基からなり、これらの残基の側鎖はスティックとして示される。
【図３９−５】図３９Ａ及び図３９ＢはこのＣＤＲの長さの延長を例証するためにＣＤＲ  Ｌ１が強調された、２つの異なる配向でのリボンダイヤグラム表現として描写される６Ｅ１  Ｆａｂを示す。図３９Ｃ及び図３９Ｄは２５０台ループが強調された、それぞれリボンダイヤグラムまたは表面表現として描写される６Ｅ１  Ｆａｂ複合体構造からのＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインを示す。図３９Ｅ及び図３９Ｆはリボンダイヤグラムとして描写されるＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインに結合した表面として示される６Ｅ１  Ｆａｂの結晶構造のレンダリングである。この相互作用は、６Ｅ１の長いＣＤＲ  Ｌ１によって生成された溝におけるＭＩＣＡ＊００８の２５０台ループの結合を例証するために異なる角度から示される。２５０台ループにおける残基の側鎖はスティックとして示される。図３９Ｇは６Ｅ１  Ｆａｂペプチド結合溝におけるＬｅｕ２５７の疎水性結合ポケットを描写する。このポケットは６Ｅ１  ＦａｂのＣＤＲ  Ｌ１、Ｈ１、及びＨ３からなり、これらの残基の側鎖はスティックとして示される。図３９Ｈは６Ｅ１  Ｆａｂペプチド結合溝におけるＡｓｐ２５５の親水性結合ポケットを描写する。このポケットは６Ｅ１  ＦａｂのＣＤＲ  Ｌ１、Ｌ２、及びＨ３の残基からなり、これらの残基の側鎖はスティックとして示される。
【図３９−６】図３９Ａ及び図３９ＢはこのＣＤＲの長さの延長を例証するためにＣＤＲ  Ｌ１が強調された、２つの異なる配向でのリボンダイヤグラム表現として描写される６Ｅ１  Ｆａｂを示す。図３９Ｃ及び図３９Ｄは２５０台ループが強調された、それぞれリボンダイヤグラムまたは表面表現として描写される６Ｅ１  Ｆａｂ複合体構造からのＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインを示す。図３９Ｅ及び図３９Ｆはリボンダイヤグラムとして描写されるＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインに結合した表面として示される６Ｅ１  Ｆａｂの結晶構造のレンダリングである。この相互作用は、６Ｅ１の長いＣＤＲ  Ｌ１によって生成された溝におけるＭＩＣＡ＊００８の２５０台ループの結合を例証するために異なる角度から示される。２５０台ループにおける残基の側鎖はスティックとして示される。図３９Ｇは６Ｅ１  Ｆａｂペプチド結合溝におけるＬｅｕ２５７の疎水性結合ポケットを描写する。このポケットは６Ｅ１  ＦａｂのＣＤＲ  Ｌ１、Ｈ１、及びＨ３からなり、これらの残基の側鎖はスティックとして示される。図３９Ｈは６Ｅ１  Ｆａｂペプチド結合溝におけるＡｓｐ２５５の親水性結合ポケットを描写する。このポケットは６Ｅ１  ＦａｂのＣＤＲ  Ｌ１、Ｌ２、及びＨ３の残基からなり、これらの残基の側鎖はスティックとして示される。
【図４０Ａ】図４０ＡはＭＩＣＡに対して互いに重ね合わされた、１Ｄ５  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体、１３Ａ９  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体、及び６Ｅ１  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメイン複合体の結晶構造のレンダリングであり、１Ｄ５及び１３Ａ９がＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」に重複するエピトープを有し、６Ｅ１がα３ドメインの「背面」に結合することを示す。図４０Ｂは１Ｄ５  Ｆａｂエピトープ（１Ｄ５  Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基）、１３Ａ９  Ｆａｂエピトープ（１３Ａ９  Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基）、ならびに組み合わされた１Ｄ５及び１３Ａ９の両方のエピトープが、色で強調されたＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの表面にマッピングされた、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの表面表現である。図４０Ｃは１Ｄ５  Ｆａｂエピトープ（１Ｄ５  Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基）、１３Ａ９  Ｆａｂエピトープ（１３Ａ９  Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基）、ならびに組み合わされた１Ｄ５及び１３Ａ９の両方のエピトープが、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインのリボンダイヤグラムにマッピングされた、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインのリボンダイヤグラム表現である。定義されたエピトープ中の残基の側鎖はスティックとして示され、色付けされる。
【図４０Ｂ】図４０ＡはＭＩＣＡに対して互いに重ね合わされた、１Ｄ５  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体、１３Ａ９  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体、及び６Ｅ１  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメイン複合体の結晶構造のレンダリングであり、１Ｄ５及び１３Ａ９がＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」に重複するエピトープを有し、６Ｅ１がα３ドメインの「背面」に結合することを示す。図４０Ｂは１Ｄ５  Ｆａｂエピトープ（１Ｄ５  Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基）、１３Ａ９  Ｆａｂエピトープ（１３Ａ９  Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基）、ならびに組み合わされた１Ｄ５及び１３Ａ９の両方のエピトープが、色で強調されたＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの表面にマッピングされた、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの表面表現である。図４０Ｃは１Ｄ５  Ｆａｂエピトープ（１Ｄ５  Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基）、１３Ａ９  Ｆａｂエピトープ（１３Ａ９  Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基）、ならびに組み合わされた１Ｄ５及び１３Ａ９の両方のエピトープが、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインのリボンダイヤグラムにマッピングされた、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインのリボンダイヤグラム表現である。定義されたエピトープ中の残基の側鎖はスティックとして示され、色付けされる。
【図４０Ｃ】図４０ＡはＭＩＣＡに対して互いに重ね合わされた、１Ｄ５  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体、１３Ａ９  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体、及び６Ｅ１  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメイン複合体の結晶構造のレンダリングであり、１Ｄ５及び１３Ａ９がＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」に重複するエピトープを有し、６Ｅ１がα３ドメインの「背面」に結合することを示す。図４０Ｂは１Ｄ５  Ｆａｂエピトープ（１Ｄ５  Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基）、１３Ａ９  Ｆａｂエピトープ（１３Ａ９  Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基）、ならびに組み合わされた１Ｄ５及び１３Ａ９の両方のエピトープが、色で強調されたＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの表面にマッピングされた、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの表面表現である。図４０Ｃは１Ｄ５  Ｆａｂエピトープ（１Ｄ５  Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基）、１３Ａ９  Ｆａｂエピトープ（１３Ａ９  Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基）、ならびに組み合わされた１Ｄ５及び１３Ａ９の両方のエピトープが、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインのリボンダイヤグラムにマッピングされた、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインのリボンダイヤグラム表現である。定義されたエピトープ中の残基の側鎖はスティックとして示され、色付けされる。
【図４１Ａ】図４１ＡはＭＩＣＡ＊００１α３ドメイン（残基２０４−２９７）及びストーク領域（残基２９８−３１３、下線）の配列を描写する。Ｃ１Ｒ細胞（Ｗａｌｄｈａｕｅｒ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６８：６３６８）及びＴＲＡＭＰ  Ｃ２細胞（Ｗａｎｇ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）ＢＢＲＣ  ３８７：４７６）から報告されたＭＩＣＡ＊００１切断部位は、タンパク質配列内でそれぞれ下向き及び上向き矢印によって示される。これらの報告された切断部位の相同残基は、リボンダイヤグラムまたは表面表現のいずれかとしてレンダリングされた（１３Ａ９  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体構造から取られた）ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの結晶構造にマッピングされる。切断部位は色で強調され、側鎖はリボンダイヤグラムにおいてスティックとして示される。図４１Ｂは左にＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造の表面上にマッピングされた１Ｄ５、１３Ａ９、及び６Ｅ１  Ｆａｂエピトープ、右にＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造の表面上にマッピングされた報告切断部位を並べた比較を示す。１Ｄ５、１３Ａ９、及び６Ｅ１  Ｆａｂエピトープの境界も、切断部位を描写するＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造上に破線で縁取られる。Ｆａｂエピトープは、それぞれのＦａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基として定義された。切断部位は、Ｗａｌｄｈａｕｅｒ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６８：６３６８及びＷａｎｇ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）ＢＢＲＣ  ３８７：４７６によって報告されたものである。
【図４１Ｂ】図４１ＡはＭＩＣＡ＊００１α３ドメイン（残基２０４−２９７）及びストーク領域（残基２９８−３１３、下線）の配列を描写する。Ｃ１Ｒ細胞（Ｗａｌｄｈａｕｅｒ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６８：６３６８）及びＴＲＡＭＰ  Ｃ２細胞（Ｗａｎｇ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）ＢＢＲＣ  ３８７：４７６）から報告されたＭＩＣＡ＊００１切断部位は、タンパク質配列内でそれぞれ下向き及び上向き矢印によって示される。これらの報告された切断部位の相同残基は、リボンダイヤグラムまたは表面表現のいずれかとしてレンダリングされた（１３Ａ９  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体構造から取られた）ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの結晶構造にマッピングされる。切断部位は色で強調され、側鎖はリボンダイヤグラムにおいてスティックとして示される。図４１Ｂは左にＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造の表面上にマッピングされた１Ｄ５、１３Ａ９、及び６Ｅ１  Ｆａｂエピトープ、右にＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造の表面上にマッピングされた報告切断部位を並べた比較を示す。１Ｄ５、１３Ａ９、及び６Ｅ１  Ｆａｂエピトープの境界も、切断部位を描写するＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造上に破線で縁取られる。Ｆａｂエピトープは、それぞれのＦａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基として定義された。切断部位は、Ｗａｌｄｈａｕｅｒ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６８：６３６８及びＷａｎｇ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）ＢＢＲＣ  ３８７：４７６によって報告されたものである。
【図４２】レーザに曝露されていない単独のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン抗原（ＭＩＣＡ、非曝露）、レーザに曝露された単独のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン抗原（ＭＩＣＡ、曝露）、曝露されていないＭＩＣＡ＊００８：１Ｄ５  Ｆａｂ複合体（複合体、非曝露）、及び曝露されたＭＩＣＡ＊００８：１Ｄ５  Ｆａｂ複合体（複合体、曝露）のいずれかからの還元、脱グリコシル化、及びアルキル化後の試料を、４〜２０％トリス−グリシンゲルに供したことを描写する。枠で囲った領域は、トリプシン及びキモトリプシン消化物ならびにその後の質量分析のために切り取られたＭＩＣＡ＊００８α３ドメインを含有するバンドを示す。
【図４３Ａ】ＭＩＣＡ＊００８：１Ｄ５  Ｆａｂ複合体、曝露試料からのＭＩＣＡ＊００８α３ドメインのトリプシン（図４３Ａ）及びキモトリプシン（図４３Ｂ）消化物から得られた配列カバレッジを示す。残基付番はα３ドメイン構成体の先頭で開始し、最初の２つの残基Ｇ１及びＳ２はクローニングアーチファクトであり、α３ドメインの始まりは、全長ＭＩＣＡ＊００８タンパク質の残基Ｔｈｒ２０４に対応するＴ３である。α３ドメインの終わりは、全長ＭＩＣＡ＊００８タンパク質の残基Ｓｅｒ２９７に対応するＳ９６である。これに残基Ｇ９７−Ｓ９９（クローニングアーチファクト）及びＨ１００−Ｈ１０７（Ｈｉｓ８精製タグ）が続く。Ｂｙｏｎｉｃソフトウェア（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｅｔｒｉｃｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を使用してＭｉｃＡ配列へのペプチド整列を行った。ピーク強度は図示されるカラースケールによって示される。
【図４３Ｂ】ＭＩＣＡ＊００８：１Ｄ５  Ｆａｂ複合体、曝露試料からのＭＩＣＡ＊００８α３ドメインのトリプシン（図４３Ａ）及びキモトリプシン（図４３Ｂ）消化物から得られた配列カバレッジを示す。残基付番はα３ドメイン構成体の先頭で開始し、最初の２つの残基Ｇ１及びＳ２はクローニングアーチファクトであり、α３ドメインの始まりは、全長ＭＩＣＡ＊００８タンパク質の残基Ｔｈｒ２０４に対応するＴ３である。α３ドメインの終わりは、全長ＭＩＣＡ＊００８タンパク質の残基Ｓｅｒ２９７に対応するＳ９６である。これに残基Ｇ９７−Ｓ９９（クローニングアーチファクト）及びＨ１００−Ｈ１０７（Ｈｉｓ８精製タグ）が続く。Ｂｙｏｎｉｃソフトウェア（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｅｔｒｉｃｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を使用してＭｉｃＡ配列へのペプチド整列を行った。ピーク強度は図示されるカラースケールによって示される。
【図４４】ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン単独に対してＭＩＣＡ＊００８α３ドメインが１Ｄ５  Ｆａｂとの複合体に結合している場合の酸化の変化パーセントがＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構成体残基番号に対してプロットされることを示す。残基付番はα３ドメイン構成体の先頭で開始し、最初の２つの残基Ｇ１及びＳ２はクローニングアーチファクトであり、α３ドメインの始まりは、全長ＭＩＣＡ＊００８タンパク質の残基Ｔｈｒ２０４に対応するＴ３である。α３ドメインの終わりは、全長ＭＩＣＡ＊００８タンパク質の残基Ｓｅｒ２９７に対応するＳ９６である。酸化の最大変化は、残基Ｗ３８（全長ＭＩＣＡ＊００８タンパク質のＴｒｐ２３９）ならびにＩｌｅ７１及びＰｈｅ７９（全長ＭＩＣＡ＊００８タンパク質のＩｌｅ２７２及びＰｈｅ２８０）について見られる。
【図４５】ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン単独試料と比較して結合１Ｄ５  Ｆａｂの存在下で酸化保護の顕著な変化を示したＭＩＣＡ＊００８α３ドメインペプチドが（１Ｄ５に結合したＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの複合体から）上記で決定されたＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの結晶構造にマッピングされることを描写する。これらは、Ｎ３３−Ｒ３９（全長ＭＩＣＡ＊００８タンパク質のＡｓｎ２３４−Ａｒｇ２４０）及びＶ６７−Ｆ７９（Ｖａｌ２６８−Ｐｈｅ２８０）を含む。
【図４６Ａ】図４６Ａは左にＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造の表面上にマッピングされた１Ｄ５、１３Ａ９、及び６Ｅ１  Ｆａｂエピトープ、右にＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造の表面上にマッピングされた糖鎖改変バリアントを並べた比較を示す。１Ｄ５、１３Ａ９、及び６Ｅ１  Ｆａｂエピトープの境界も、切断部位を描写するＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造上に破線で縁取られる。Ｆａｂエピトープは、それぞれのＦａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基として定義された。表は、様々な糖鎖改変バリアントへのＦａｂの相対結合を示し、＋は結合が影響を受けないことを示し、−は結合が完全に喪失したことを示し、＋／−は結合が野生型ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに対して部分的に喪失したことを示す。図４６Ｂは同じ配向から示される１Ｄ５  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン及び１３Ａ９  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体構造のレンダリングであり、Ｆａｂは表面として、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインはリボンダイヤグラムとして描写される。表は、様々な糖鎖改変バリアントへのＦａｂの相対結合を示し、＋は結合が影響を受けないことを示し、−は結合が完全に喪失したことを示し、＋／−は結合が野生型ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに対して部分的に喪失したことを示す。１Ｄ５及び１３Ａ９  Ｆａｂの結合に異なる程度で影響を及ぼす２つの変異、Ｇｌｙｃｏ１４（Ｇ２４３Ｎ）及びＧｌｙｃｏ１６（Ｒ２７９Ｎ）は、円として示され、矢印で強調される。図４６Ｃはリボンダイヤグラムとして示されるＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの結晶構造にマッピングされた、グリコシル化操作、ＦＰＯＰ、アラニンスキャニング、及びＸ線結晶構造解析によって決定された１Ｄ５エピトープを描写する。各方法によってエピトープの一部として特定された残基が色で強調され、残基番号が示される。ＭＩＣＡ＊００８のグリコシル化操作によって決定されたエピトープ残基は、Ａｓｎへの変異及びＮ結合グリカンの導入後に１Ｄ５結合の喪失を示し、０．５未満のＥＬＩＳＡ  ＯＤ４５０シグナルをもたらすものとして定義された。ＦＰＯＰによって決定されたエピトープ残基は、Ｆａｂの不在下の同じＭＩＣＡ＊００８ペプチドに対して、１Ｄ５  Ｆａｂ結合後にＭＩＣＡ＊００８のトリプシンまたはキモトリプシンペプチド内で酸化の減少を示すものとして定義された。ＭＩＣＡ＊００８のアラニンスキャニングによって決定されたエピトープ残基は、野生型ＭＩＣＡ＊００８に対して、アラニンに変異された場合に１Ｄ５結合親和性（ＳＰＲによって測定されるＫＤ）の３倍の減少を示すものとして定義された。Ｘ線結晶構造解析によって決定されたエピトープ残基は、１Ｄ５  Ｆａｂの４．５Å以内にあるものとして定義された。
【図４６Ｂ】図４６Ａは左にＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造の表面上にマッピングされた１Ｄ５、１３Ａ９、及び６Ｅ１  Ｆａｂエピトープ、右にＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造の表面上にマッピングされた糖鎖改変バリアントを並べた比較を示す。１Ｄ５、１３Ａ９、及び６Ｅ１  Ｆａｂエピトープの境界も、切断部位を描写するＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造上に破線で縁取られる。Ｆａｂエピトープは、それぞれのＦａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基として定義された。表は、様々な糖鎖改変バリアントへのＦａｂの相対結合を示し、＋は結合が影響を受けないことを示し、−は結合が完全に喪失したことを示し、＋／−は結合が野生型ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに対して部分的に喪失したことを示す。図４６Ｂは同じ配向から示される１Ｄ５  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン及び１３Ａ９  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体構造のレンダリングであり、Ｆａｂは表面として、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインはリボンダイヤグラムとして描写される。表は、様々な糖鎖改変バリアントへのＦａｂの相対結合を示し、＋は結合が影響を受けないことを示し、−は結合が完全に喪失したことを示し、＋／−は結合が野生型ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに対して部分的に喪失したことを示す。１Ｄ５及び１３Ａ９  Ｆａｂの結合に異なる程度で影響を及ぼす２つの変異、Ｇｌｙｃｏ１４（Ｇ２４３Ｎ）及びＧｌｙｃｏ１６（Ｒ２７９Ｎ）は、円として示され、矢印で強調される。図４６Ｃはリボンダイヤグラムとして示されるＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの結晶構造にマッピングされた、グリコシル化操作、ＦＰＯＰ、アラニンスキャニング、及びＸ線結晶構造解析によって決定された１Ｄ５エピトープを描写する。各方法によってエピトープの一部として特定された残基が色で強調され、残基番号が示される。ＭＩＣＡ＊００８のグリコシル化操作によって決定されたエピトープ残基は、Ａｓｎへの変異及びＮ結合グリカンの導入後に１Ｄ５結合の喪失を示し、０．５未満のＥＬＩＳＡ  ＯＤ４５０シグナルをもたらすものとして定義された。ＦＰＯＰによって決定されたエピトープ残基は、Ｆａｂの不在下の同じＭＩＣＡ＊００８ペプチドに対して、１Ｄ５  Ｆａｂ結合後にＭＩＣＡ＊００８のトリプシンまたはキモトリプシンペプチド内で酸化の減少を示すものとして定義された。ＭＩＣＡ＊００８のアラニンスキャニングによって決定されたエピトープ残基は、野生型ＭＩＣＡ＊００８に対して、アラニンに変異された場合に１Ｄ５結合親和性（ＳＰＲによって測定されるＫＤ）の３倍の減少を示すものとして定義された。Ｘ線結晶構造解析によって決定されたエピトープ残基は、１Ｄ５  Ｆａｂの４．５Å以内にあるものとして定義された。
【図４６Ｃ】図４６Ａは左にＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造の表面上にマッピングされた１Ｄ５、１３Ａ９、及び６Ｅ１  Ｆａｂエピトープ、右にＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造の表面上にマッピングされた糖鎖改変バリアントを並べた比較を示す。１Ｄ５、１３Ａ９、及び６Ｅ１  Ｆａｂエピトープの境界も、切断部位を描写するＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構造上に破線で縁取られる。Ｆａｂエピトープは、それぞれのＦａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基として定義された。表は、様々な糖鎖改変バリアントへのＦａｂの相対結合を示し、＋は結合が影響を受けないことを示し、−は結合が完全に喪失したことを示し、＋／−は結合が野生型ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに対して部分的に喪失したことを示す。図４６Ｂは同じ配向から示される１Ｄ５  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン及び１３Ａ９  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体構造のレンダリングであり、Ｆａｂは表面として、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインはリボンダイヤグラムとして描写される。表は、様々な糖鎖改変バリアントへのＦａｂの相対結合を示し、＋は結合が影響を受けないことを示し、−は結合が完全に喪失したことを示し、＋／−は結合が野生型ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに対して部分的に喪失したことを示す。１Ｄ５及び１３Ａ９  Ｆａｂの結合に異なる程度で影響を及ぼす２つの変異、Ｇｌｙｃｏ１４（Ｇ２４３Ｎ）及びＧｌｙｃｏ１６（Ｒ２７９Ｎ）は、円として示され、矢印で強調される。図４６Ｃはリボンダイヤグラムとして示されるＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの結晶構造にマッピングされた、グリコシル化操作、ＦＰＯＰ、アラニンスキャニング、及びＸ線結晶構造解析によって決定された１Ｄ５エピトープを描写する。各方法によってエピトープの一部として特定された残基が色で強調され、残基番号が示される。ＭＩＣＡ＊００８のグリコシル化操作によって決定されたエピトープ残基は、Ａｓｎへの変異及びＮ結合グリカンの導入後に１Ｄ５結合の喪失を示し、０．５未満のＥＬＩＳＡ  ＯＤ４５０シグナルをもたらすものとして定義された。ＦＰＯＰによって決定されたエピトープ残基は、Ｆａｂの不在下の同じＭＩＣＡ＊００８ペプチドに対して、１Ｄ５  Ｆａｂ結合後にＭＩＣＡ＊００８のトリプシンまたはキモトリプシンペプチド内で酸化の減少を示すものとして定義された。ＭＩＣＡ＊００８のアラニンスキャニングによって決定されたエピトープ残基は、野生型ＭＩＣＡ＊００８に対して、アラニンに変異された場合に１Ｄ５結合親和性（ＳＰＲによって測定されるＫＤ）の３倍の減少を示すものとして定義された。Ｘ線結晶構造解析によって決定されたエピトープ残基は、１Ｄ５  Ｆａｂの４．５Å以内にあるものとして定義された。
【図４７Ａ】ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの配列（図４７Ａ）及び構造（図４７Ｂ）にマッピングされるＤａｎａ  ＦａｒｂｅｒのＣＭ３３３２２  Ａｂ４、ＣＭ３３３２２  Ａｂ２８、及びＣＭ３３３２２  Ａｂ２９、Ｉｎｎａｔｅ  Ｐｈａｒｍａの１６Ａ８、ならびにＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ＷａｓｈｉｎｇｔｏｎのＨ９抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体のエピトープを描写する。これらの以前に記載された抗体のエピトープは、主にＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「背面」にマッピングする。対照的に、１Ｄ５及び１３Ａ９のエピトープは、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」にマッピングする。
【図４７Ｂ】ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの配列（図４７Ａ）及び構造（図４７Ｂ）にマッピングされるＤａｎａ  ＦａｒｂｅｒのＣＭ３３３２２  Ａｂ４、ＣＭ３３３２２  Ａｂ２８、及びＣＭ３３３２２  Ａｂ２９、Ｉｎｎａｔｅ  Ｐｈａｒｍａの１６Ａ８、ならびにＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ＷａｓｈｉｎｇｔｏｎのＨ９抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体のエピトープを描写する。これらの以前に記載された抗体のエピトープは、主にＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「背面」にマッピングする。対照的に、１Ｄ５及び１３Ａ９のエピトープは、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」にマッピングする。
【図４８】抗体１Ｄ５がＭＩＣ−ＮＫＧ２Ｄ相互作用に干渉しないことを示す、ＮＫＧ２Ｄ−Ｆｃ対抗ＭＩＣＡ／Ｂ濃度を描写する。
【図４９Ａ】図４９Ａは１．３Å分解能で決定されたＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１Ｄ５  Ｆａｂの結晶構造を描写する。１Ｄ５はＣ末端ベータ鎖を含有するα３ドメインの「前面」に結合する。図４９ＢはＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」の表面上の、Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ残基として定義される、１Ｄ５のエピトープを描写する。報告された切断部位が示され、１Ｄ５エピトープの境界も示される。
【図４９Ｂ】図４９Ａは１．３Å分解能で決定されたＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１Ｄ５  Ｆａｂの結晶構造を描写する。１Ｄ５はＣ末端ベータ鎖を含有するα３ドメインの「前面」に結合する。図４９ＢはＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」の表面上の、Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ残基として定義される、１Ｄ５のエピトープを描写する。報告された切断部位が示され、１Ｄ５エピトープの境界も示される。
【図５０Ａ】図５０ＡはＢＡＬＢ／ｃ  ＳＣＩＤマウスにおける腫瘍接種のタイムライン及び抗ＭＩＣ  １Ｄ５抗体の投薬レジメンを例示する。図５０Ｂは様々な処置群におけるカリパス測定による腫瘍体積を描写する。図５０Ｃ及び図５０Ｄはそれぞれ抗ＭＩＣ  １Ｄ５抗体での処置後の採取された腫瘍におけるＮＫ細胞の数及びグランザイムＢ陽性ＮＫ細胞の割合を描写する。
【図５０Ｂ】図５０ＡはＢＡＬＢ／ｃ  ＳＣＩＤマウスにおける腫瘍接種のタイムライン及び抗ＭＩＣ  １Ｄ５抗体の投薬レジメンを例示する。図５０Ｂは様々な処置群におけるカリパス測定による腫瘍体積を描写する。図５０Ｃ及び図５０Ｄはそれぞれ抗ＭＩＣ  １Ｄ５抗体での処置後の採取された腫瘍におけるＮＫ細胞の数及びグランザイムＢ陽性ＮＫ細胞の割合を描写する。
【図５０Ｃ】図５０ＡはＢＡＬＢ／ｃ  ＳＣＩＤマウスにおける腫瘍接種のタイムライン及び抗ＭＩＣ  １Ｄ５抗体の投薬レジメンを例示する。図５０Ｂは様々な処置群におけるカリパス測定による腫瘍体積を描写する。図５０Ｃ及び図５０Ｄはそれぞれ抗ＭＩＣ  １Ｄ５抗体での処置後の採取された腫瘍におけるＮＫ細胞の数及びグランザイムＢ陽性ＮＫ細胞の割合を描写する。
【図５０Ｄ】図５０ＡはＢＡＬＢ／ｃ  ＳＣＩＤマウスにおける腫瘍接種のタイムライン及び抗ＭＩＣ  １Ｄ５抗体の投薬レジメンを例示する。図５０Ｂは様々な処置群におけるカリパス測定による腫瘍体積を描写する。図５０Ｃ及び図５０Ｄはそれぞれ抗ＭＩＣ  １Ｄ５抗体での処置後の採取された腫瘍におけるＮＫ細胞の数及びグランザイムＢ陽性ＮＫ細胞の割合を描写する。
【図５１Ａ】図５１Ａは抗ＭＩＣ（１Ｄ５抗体）処置がｄｏｘ依存的様式でＭＩＣＡ（Ｂ１６−ＭＩＣＡ００２）を発現するように操作されたＢ１６細胞におけるＭＩＣＡ表面発現を安定化したことを示す。図５２ＢはＢ１６−ＭＩＣＡ００２における抗ＭＩＣ  １Ｄ５及び抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせ処置の抗腫瘍応答を描写する。
【図５１Ｂ】図５１Ａは抗ＭＩＣ（１Ｄ５抗体）処置がｄｏｘ依存的様式でＭＩＣＡ（Ｂ１６−ＭＩＣＡ００２）を発現するように操作されたＢ１６細胞におけるＭＩＣＡ表面発現を安定化したことを示す。図５２ＢはＢ１６−ＭＩＣＡ００２における抗ＭＩＣ  １Ｄ５及び抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせ処置の抗腫瘍応答を描写する。
【発明を実施するための形態】
【０１２２】
Ｉ．定義
本発明を詳細に説明する前に、本発明が特定の組成物または生物系に限定されず、これが言うまでもなく変化し得ることを理解されたい。本明細書で使用される専門用語が特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定するようには意図されていないこともまた理解されたい。
【０１２３】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、別途内容が明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「分子」への言及は、２つ以上のかかる分子の組み合わせなどを任意に含む。
【０１２４】
本明細書で使用される「約」という用語は、当業者に容易に知られているそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（かつ説明する）。
【０１２５】
本明細書に記載される本発明の態様及び実施形態が、態様及び実施形態「を含む」、「からなる」、及び「から本質的になる」を含むことが理解される。
【０１２６】
本明細書で使用される「ＭＩＣ」という用語は、別途示されない限り、霊長類（例えば、ヒト）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源に由来する任意の天然ＭＨＣクラスＩ関連鎖ＡまたはＢを指す。用語は、「全長」の非プロセシングＭＩＣ、及び細胞内でのプロセシングから得られるＭＩＣの任意の形態を包含する。用語は、ＭＩＣの天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアントまたは、ＭＩＣＡ対立遺伝子００２、００４、００８、及びＭＩＣＢ対立遺伝子００５を含む、対立遺伝子バリアントも包含する。用語によって包含されるＭＩＣＡの他の対立遺伝子は、ＭＩＣＡ＊００１、ＭＩＣＡ＊００５、ＭＩＣＡ＊００６、ＭＩＣＡ＊００７、ＭＩＣＡ＊００９、ＭＩＣＡ＊０１０、ＭＩＣＡ＊０１１、ＭＩＣＡ＊０１２、ＭＩＣＡ＊０１３、ＭＩＣＡ＊０１４、ＭＩＣＡ＊０１５、ＭＩＣＡ＊０１６、ＭＩＣＡ＊０１７、ＭＩＣＡ＊０１８、ＭＩＣＡ＊０１９、ＭＩＣＡ＊０２０、ＭＩＣＡ＊０２２、ＭＩＣＡ＊０２３、ＭＩＣＡ＊０２４、ＭＩＣＡ＊０２５、ＭＩＣＡ＊０２６、ＭＩＣＡ＊０２７、ＭＩＣＡ＊０２８、ＭＩＣＡ＊０２９、ＭＩＣＡ＊０３０、ＭＩＣＡ＊０３１、ＭＩＣＡ＊０３２、ＭＩＣＡ＊０３３、ＭＩＣＡ＊０３４、ＭＩＣＡ＊０３５、ＭＩＣＡ＊０３６、ＭＩＣＡ＊０３７、ＭＩＣＡ＊０３８、ＭＩＣＡ＊０３９、ＭＩＣＡ＊０４０、ＭＩＣＡ＊０４１、ＭＩＣＡ＊０４２、ＭＩＣＡ＊０４３、ＭＩＣＡ＊０４４、ＭＩＣＡ＊０４５、ＭＩＣＡ＊０４６、ＭＩＣＡ＊０４７、ＭＩＣＡ＊０４８、ＭＩＣＡ＊０４９、ＭＩＣＡ＊０５０、ＭＩＣＡ＊０５１、ＭＩＣＡ＊０５２、ＭＩＣＡ＊０５３、ＭＩＣＡ＊０５４、ＭＩＣＡ＊０５５、及びＭＩＣＡ＊０５６を含む。用語によって包含されるＭＩＣＢの他の対立遺伝子は、ＭＩＣＢ＊００１、ＭＩＣＢ＊００２、ＭＩＣＢ＊００３、ＭＩＣＢ＊００４、ＭＩＣＢ＊００６、ＭＩＣＢ＊００７、ＭＩＣＢ＊００８、ＭＩＣＢ＊００９Ｎ、ＭＩＣＢ＊０１０、ＭＩＣＢ＊０１１、ＭＩＣＢ＊０１２、ＭＩＣＢ＊０１３、ＭＩＣＢ＊０１４、ＭＩＣＢ＊０１５、ＭＩＣＢ＊０１６、ＭＩＣＢ＊０１８、ＭＩＣＢ＊０１９、ＭＩＣＢ＊０２０、ＭＩＣＢ＊０２１Ｎ、及びＭＩＣＢ＊０２２を含む。対立遺伝子のリストは、ｈｌａ．ａｌｌｅｌｅｓ／ｏｒｇ／ａｌｌｅｌｅｓ／ｃｌａｓｓｏ．ｈｔｍｌで入手可能である。例となるヒトＭＩＣＡ対立遺伝子００８（シグナル配列を含む）のアミノ酸配列は、配列番号１９３に示される。ＭＩＣＡ＊００８の適用における全てのアミノ酸付番は、シグナル配列を含むヒトＭＩＣＡ＊００８配列に対する。ＭＩＣのさらなる説明は、Ｓｔｅｐｈｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１  Ｊｕｌ；２２（７）：３７８−８５に提供されている。図２は、ＭＩＣＡ／Ｂアルファ３ドメイン整列、同一性パーセント、及び類似性パーセントを示す。
【０１２７】
「抗ＭＩＣ抗体」、「ＭＩＣに結合する抗体」、及び「ＭＩＣに特異的に結合する抗体」という用語は、抗体がＭＩＣを標的とする際に診断及び／または治療剤として有用であるように、十分な親和性でＭＩＣに結合することができる抗体を指す。一実施形態において、無関係の非ＭＩＣタンパク質への抗ＭＩＣ抗体の結合の程度は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）によって測定されるとき、ＭＩＣへの抗体への結合の約１０％未満である。特定の実施形態において、ＭＩＣに結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。特定の実施形態において、抗ＭＩＣ抗体は、異なる種由来のＭＩＣ間で保存されるＭＩＣのエピトープに結合する。
【０１２８】
本明細書の目的での「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下に定義されるように、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでもよく、あるいはアミノ酸配列変化を含有してもよい。いくつかの実施形態において、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。いくつかの実施形態において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列において同一である。
【０１２９】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との単一結合部位の間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。別途指示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）で表され得る。親和性は、本明細書に記載される方法を含む当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定され得る。結合親和性を測定するための具体的な例証的かつ例示的な実施形態が、以下に記載される。
【０１３０】
「親和性成熟」抗体とは、かかる改変を保有しない親抗体と比較して、１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）に１つ以上の改変を有する抗体を指し、かかる改変により抗体の抗原に対する親和性が改善される。
【０１３１】
本明細書の「抗体」という用語は、最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含むがこれらに限定されない、様々な抗体構造を包含する。
【０１３２】
「抗体断片」とは、無傷抗体が結合する抗原に結合する無傷抗体の一部を含む無傷抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、線状抗体、一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３３】
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて参照抗体のその抗原への結合を５０％以上ブロッキングする抗体を指し、逆に、参照抗体は、競合アッセイにおいて抗体のその抗原への結合を５０％以上ブロッキングする。例示的な競合アッセイが、本明細書に提供される。
【０１３４】
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の源または種に由来する一方で、重鎖及び／または軽鎖の残部が異なる源または種に由来する抗体を指す。
【０１３５】
抗体の「クラス」は、その重鎖が保有する定常ドメインまたは定常領域の種類を指す。抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分類され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【０１３６】
本明細書で使用される「細胞傷害性薬剤」という用語は、細胞機能を阻害もしくは抑制し、及び／または細胞死もしくは破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害性薬剤には、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；化学療法剤または薬物（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他の挿入剤）；増殖抑制剤；核酸分解酵素などの酵素及びそれらの断片；抗生物質；それらの断片及び／またはバリアントを含む、細菌、真菌、植物、または動物由来の小分子毒素または酵素活性毒素などの毒素；ならびに下に開示される様々な抗腫瘍または抗がん剤が含まれるが、これらに限定されない。
【０１３７】
「エフェクター機能」は、抗体アイソタイプにより異なる抗体のＦｃ領域に起因し得る生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
【０１３８】
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」とは、所望の治療または予防結果を達成するために必要な投薬量及び期間で有効な量を指す。
【０１３９】
本明細書の「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。用語は、天然配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端までに及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在してもしなくてもよい。本明細書において別段明記されない限り、Ｆｃ領域または定常領域内のアミノ酸残基の付番は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載される、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ付番システムに従う。
【０１４０】
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは一般に、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４の４つのＦＲドメインからなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）において次の配列中に出現する：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
【０１４１】
「完全長抗体」、「無傷抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書で、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、または本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように交換可能に使用される。
【０１４２】
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は、交換可能に使用され、その中に外因性核酸が導入された細胞を指し、かかる細胞の子孫を含む。宿主細胞は、初代形質転換細胞及び継代の数にかかわらずそれに由来する子孫を含む、「形質転換体」及び「形質転換細胞」を含む。子孫は、核酸含有量が親細胞と完全に同一ではない場合があるが、変異を含み得る。最初に形質転換された細胞についてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異子孫が、本明細書に含まれる。
【０１４３】
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞により産生された抗体、またはヒト抗体レパートリーもしくは他のヒト抗体コード配列を利用する非ヒト源に由来する抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。
【０１４４】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列の下位群からである。一般に、配列の下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３における下位群である。一実施形態において、ＶＬについては、下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）における下位群カッパＩである。一実施形態において、ＶＨについては、下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）における下位群ＩＩＩである。
【０１４５】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲからのアミノ酸残基及びヒトＦＲからのアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、及び典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意で、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含み得る。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
【０１４６】
本明細書で使用される「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、配列が超可変であり（「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」）、及び／または構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成し、及び／または抗原接触残基（「抗原接触体」）を含有する、抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般に、抗体は６つのＨＶＲを含み、３つがＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、３つがＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある。本明細書における例示的なＨＶＲは、
【０１４７】
（ａ）アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）で生じる超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））と、
【０１４８】
（ｂ）アミノ酸残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、８９〜９７（Ｌ３）、３１〜３５ｂ（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）で生じるＣＤＲ（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））と、
【０１４９】
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ〜３６（Ｌ１）、４６〜５５（Ｌ２）、８９〜９６（Ｌ３）、３０〜３５ｂ（Ｈ１）、４７〜５８（Ｈ２）、及び９３〜１０１（Ｈ３）で生じる抗原接触体（ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６））と、
【０１５０】
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６〜５６（Ｌ２）、４７〜５６（Ｌ２）、４８〜５６（Ｌ２）、４９〜５６（Ｌ２）、２６〜３５（Ｈ１）、２６〜３５ｂ（Ｈ１）、４９〜６５（Ｈ２）、９３〜１０２（Ｈ３）、及び９４〜１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、及び／または（ｃ）の組み合わせと、を含む。
【０１５１】
一実施形態において、ＨＶＲ残基は、図１Ａ〜図１Ｌまたは本明細書の他の場所において特定されるものを含む。
【０１５２】
本明細書で別途示されない限り、可変ドメイン中のＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書においてＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）に従って付番される。
【０１５３】
「免疫抱合体」は、細胞傷害性薬剤を含むがこれに限定されない、１つ以上の異種分子（複数可）に抱合された抗体である。
【０１５４】
「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物としては、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、ならびに齧歯類（例えば、マウス及びラット）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、個体または対象は、ヒトである。
【０１５５】
「単離された」抗体とは、その天然環境の構成成分から分離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動法（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動法）またはクロマトグラフ（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって決定される、９５％または９９％を超える純度に精製される。抗体の純度を評価するための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ  ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。
【０１５６】
「単離された」核酸とは、その天然環境の構成成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、通常核酸分子を含有する細胞内に含有される核酸分子を含むが、核酸分子は、染色体外に、またはその天然染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
【０１５７】
「抗ＭＩＣ抗体をコードする単離された核酸」とは、抗体重鎖及び軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクターまたは別個のベクター内のかかる核酸分子（複数可）を含み、かかる核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つ以上の位置に存在する。
【０１５８】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、集団を構成する個別の抗体は、例えば、自然発生変異を含有するか、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる、考えられるバリアント抗体を除き、同一であり、及び／または同じエピトープに結合し、かかるバリアントは、一般的に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対して指向された異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない、様々な技法により作製され得、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法及び他の例示的な方法が、本明細書に記載される。
【０１５９】
「ネイキッド抗体」は、異種部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射性標識に抱合されていない抗体を指す。ネイキッド抗体は、薬学的製剤中に存在し得る。
【０１６０】
「天然抗体」は、様々な構造を有する天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、その後に３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）が続く。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、その後に定常軽（ＣＬ）ドメインが続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの種類のうちの１つに割り当てられ得る。
【０１６１】
「添付文書」という用語は、かかる治療製品の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症、及び／または使用に関する警告についての情報を含有する、治療製品の商業用パッケージに通例含まれる指示書を指すために使用される。
【０１６２】
参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列を整列し、配列同一性最大パーセントを達成するために必要に応じてギャップを導入した後に、かついかなる保存的置換も配列同一性の部分として考慮せずに、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するための整列は、当該技術分野における技能の範囲内の様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成され得る。当業者であれば、比較されている配列の完全長にわたって最大の整列を達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列を整列させるための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって記述され、ソースコードは、ユーザ文書とともに米国著作権庁（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，２０５５９）に提出されており、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下に登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に入手可能であるか、またはソースコードからコンパイルされ得る。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ  Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムでの使用のためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムにより設定されており、変動しない。
【０１６３】
ＡＬＩＧＮ−２がアミノ酸配列比較に用いられる状況において、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれに対する、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれに対する、特定のアミノ酸配列同一性％を有するか、または含む所与のアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、以下のように計算される。
【０１６４】
１００×分数Ｘ／Ｙ
【０１６５】
式中、Ｘは、配列整列プログラムＡＬＩＧＮ−２によってそのプログラムのＡとＢとの整列において完全な一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性％は、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％とは等しくないことが理解される。別途具体的に示されない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落に記載されるようにＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られる。
【０１６６】
「薬学的製剤」という用語は、調製物中に含有される活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、かつ製剤が投与される対象にとって許容できないほど毒性である追加の成分を全く含有しない調製物を指す。
【０１６７】
「薬学的に許容される担体」とは、対象に無毒である、活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体としては、緩衝剤、賦形剤、希釈剤、安定剤、または防腐剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６８】
本明細書で使用される場合、「治療」（及び「治療する」または「治療すること」などのその文法上の変形）とは、治療されている個体の自然経過を変更することを目的とした臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理過程中に行われ得る。治療の望ましい効果には、疾患の発症または再発の予防、症状の軽減、疾患の任意の直接的または間接的病理学的帰結の縮小、転移の予防、疾患進行速度の減少、病状の改善または緩和、及び寛解または予後の改善が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本発明の抗体を使用して、疾患の発達を遅延させるか、または疾患の進行を減速させる。
【０１６９】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は一般に、類似の構造を有し、各ドメインが４つの保存フレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ｐａｇｅ  ９１（２００７）を参照されたい。）単一のＶＨドメインまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、ＶＨドメインまたはＶＬドメインを使用して抗原に結合する抗体から単離し、それぞれ相補的ＶＬドメインまたはＶＨドメインのライブラリをスクリーニングすることができる。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。
【０１７０】
「ベクター」という用語は、本明細書で使用される場合、それが結合している別の核酸を増幅させることができる核酸分子を指す。用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、及びそれが導入される宿主細胞のゲノム内に組み込まれたベクターを含む。特定のベクターは、それらが作動可能に結合している核酸の発現を誘導することができる。かかるベクターは、本明細書において「発現ベクター」と称される。
【０１７１】
「化学療法剤」は、がんの治療に有用な化学化合物を含む。化学療法剤の例としては、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍ．）、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍ．）、ジスルフィラム、没食子酸エピガロカテキン、サリノスポラミドＡ、カーフィルゾミブ、１７−ＡＡＧ（ゲルダナマイシン）、ラディシコール、乳酸デヒドロゲナーゼＡ（ＬＤＨ−Ａ）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、スニチブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ／Ｓｕｇｅｎ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、フィナスネート（ＶＡＴＡＬＡＮＩＢ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ）、５−ＦＵ（５−フルオロウラシル）、ロイコボリン、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６、Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ）、ロナファミブ（ＳＣＨ６６３３６）、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）、Ｂａｙｅｒ  Ｌａｂｓ）、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＡＧ１４７８、アルキル化剤、例えば、チオテパ及びＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロホスファミド；アルキルスルホネート、例えば、ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパ；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、及びトリメチロメラミンを含むエチレンイミン及びメチラメラミン；アセトゲニン（特に、ブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（トポテカン及びイリノテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、及びビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；副腎皮質ステロイド（プレドニゾン及びプレドニゾロンを含む）；酢酸シプロテロン；フィナステリド及びデュタステリドを含む５α−還元酵素；ボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、バルプロ酸、モセチノスタットドラスタチン；アルデスロイキン、タルクデュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロマファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビシン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソ尿素、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムヌスチン；エンジイン抗生物質などの抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンγ１Ｉ及びカリケアマイシンω１Ｉ（Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．１９９４  ３３：１８３−１８６）；ジネミシンＡを含む、ジネミシン；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチンクロモフォア及び関連色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）（ドキソルビシン）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、及びデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、ミトマイシンＣなどのミトマイシン、マイコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピュロマイシン、ケラマイシン、ロボルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カンファー、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤；フロリン酸などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシン及びアンサミトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ−２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、ＴＡＸＯＬ（パクリタキセル、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ−ｆｒｅｅ）、パクリタキセルのアルブミン改変ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌｌ．）、及びＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）（ドセタキセル、ドキセタキセル、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）；クロラムブシル；ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）（ゲムシタビン）；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン及びカルボプラチンなどの白金類似体；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標）（ビノレルビン）；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、及び誘導体が挙げられる。
【０１７２】
化学療法剤には、（ｉ）例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）、クエン酸タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェン（ｉｏｄｏｘｙｆｅｎｅ）、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）（トレミフェンクエン酸塩を含む）、抗エストロゲン剤及び選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）などの、腫瘍に対してホルモン作用を制御または阻害するように作用する抗ホルモン剤、（ｉｉ）副腎におけるエストロゲン産生を制御するアロマターゼ酵素を阻害する、アロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）（酢酸メゲストロール）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）（エキセメスタン、Ｐｆｉｚｅｒ）、フォルメスタニー（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）（ボロゾール）、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）（レトロゾール、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、及びＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）（アナストロゾール、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）など、（ｉｉｉ）抗アンドロゲン剤、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリン；ブセレリン、トリプトレリン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ジエチルスチルベストロール、プレマリン、フルオキシメステロン、全てのトランスレチノニン酸、フェンレチニド、ならびにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）など、（ｉｖ）タンパク質キナーゼ阻害剤、（ｖ）脂質キナーゼ阻害剤、（ｖｉ）アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｌｆ、及びＨ−Ｒａｓなど、（ｖｉｉ）リボザイム、例えば、ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標））及びＨＥＲ２発現阻害剤、（ｖｉｉｉ）遺伝子療法ワクチンなどのワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）、ｒＩＬ−２；トポイソメラーゼ１阻害剤、例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ、ならびに（ｉｘ）上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、及び誘導体も含まれる。
【０１７３】
化学療法剤には、抗体、例えば、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）、Ｉｍｃｌｏｎｅ）；パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）、ペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標）、２Ｃ４、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ、Ｃｏｒｉｘｉａ）、及び抗体薬物抱合体、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）も含まれる。本発明の化合物と組み合わせて薬剤としての治療可能性を有する追加のヒト化モノクローナル抗体には、アポリズマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、バピネオズマブ、ビバツズマブメルタンシン、カンツズマブメルタンシン、セデリズマブ、セルトリズマブペゴール、シドフシツズマブ、シドツズマブ、ダクリズマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、フェルビズマブ、フォントリズマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、ラベツズマブ、リンツズマブ、マツズマブ、メポリズマブ、モタビズマブ、モトビズマブ、ナタリズマブ、ニモツズマブ、ノロビズマブ、ヌマビズマブ、オクレリズマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パスコリズマブ、ペクフシツズマブ、ペクツズマブ、ペキセリズマブ、ラリビズマブ、ラニビズマブ、レスリビズマブ、レスリズマブ、レシビズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、シブロツズマブ、シプリズマブ、ソンツズマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、テフィバズマブ、トシリズマブ、トラリズマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツクシツズマブ、ウマビズマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、ビジリズマブ、及びインターロイキン−１２  ｐ４０タンパク質を認識するように遺伝子修飾された組換えヒト配列専用全長ＩｇＧ１  λ抗体である、抗インターロイキン−１２（ＡＢＴ−８７４／Ｊ６９５、Ｗｙｅｔｈ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）が挙げられる。
【０１７４】
化学療法剤には、ＥＧＦＲに結合するか、または他の様式でそれと直接相互作用し、そのシグナル伝達活性を阻止または低減する化合物を指す「ＥＧＦＲ阻害剤」も含まれ、これは代替的に「ＥＧＦＲアンタゴニスト」とも称される。かかる薬剤の例には、ＥＧＦＲに結合する抗体及び小分子が挙げられる。ＥＧＦＲに結合する抗体の例には、ＭＡｂ  ５７９（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ＨＢ  ８５０６）、ＭＡｂ  ４５５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ＨＢ８５０７）、ＭＡｂ  ２２５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ８５０８）、ＭＡｂ  ５２８（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ８５０９）（米国特許第４，９４３，５３３号、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい）、ならびにそれらのバリアント、例えば、キメラ化２２５（Ｃ２２５またはセツキシマブ、ＥＲＢＵＴＩＸ（登録商標））及び再成形ヒト２２５（Ｈ２２５）（ＷＯ９６／４０２１０、Ｉｍｃｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．を参照されたい）；ＩＭＣ−１１Ｆ８、完全ヒトＥＧＦＲ標的抗体（Ｉｍｃｌｏｎｅ）；ＩＩ型変異ＥＧＦＲに結合する抗体（米国特許第５，２１２，２９０号）；米国特許第５，８９１，９９６号に記載のＥＧＦＲに結合するヒト化抗体及びキメラ抗体；ならびにＥＧＦＲに結合するヒト抗体、例えば、ＡＢＸ−ＥＧＦまたはパニツムマブ（ＷＯ９８／５０４３３、Ａｂｇｅｎｉｘ／Ａｍｇｅｎを参照されたい）；ＥＭＤ５５９００（Ｓｔｒａｇｌｉｏｔｔｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ３２Ａ：６３６−６４０（１９９６））；ＥＧＦＲ結合においてＥＧＦ及びＴＧＦ−アルファの両方と競合するＥＧＦＲに対して指向されたヒト化ＥＧＦＲ抗体ＥＭＤ７２００（マツズマブ）（ＥＭＤ／Ｍｅｒｃｋ）；ヒトＥＧＦＲ抗体、ＨｕＭａｘ−ＥＧＦＲ（ＧｅｎＭａｂ）；Ｅ１．１、Ｅ２．４、Ｅ２．５、Ｅ６．２、Ｅ６．４、Ｅ２．１１、Ｅ６．３、及びＥ７．６．３として既知であり、かつＵＳ６，２３５，８８３に記載の完全ヒト抗体；ＭＤＸ−４４７（Ｍｅｄａｒｅｘ  Ｉｎｃ）；ならびにｍＡｂ８０６またはヒト化ｍＡｂ８０６（Ｊｏｈｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（２９）：３０３７５−３０３８４（２００４））が含まれる。抗ＥＧＦＲ抗体は、細胞傷害性薬剤に抱合され、それにより免疫抱合体を生成し得る（例えば、ＥＰ６５９，４３９Ａ２、Ｍｅｒｃｋ  Ｐａｔｅｎｔ  ＧｍｂＨを参照されたい）。ＥＧＦＲアンタゴニストには、米国特許第５，６１６，５８２号、同第５，４５７，１０５号、同第５，４７５，００１号、同第５，６５４，３０７号、同第５，６７９，６８３号、同第６，０８４，０９５号、同第６，２６５，４１０号、同第６，４５５，５３４号、同第６，５２１，６２０号、同第６，５９６，７２６号、同第６，７１３，４８４号、同第５，７７０，５９９号、同第６，１４０，３３２号、同第５，８６６，５７２号、同第６，３９９，６０２号、同第６，３４４，４５９号、同第６，６０２，８６３号、同第６，３９１，８７４号、同第６，３４４，４５５号、同第５，７６０，０４１号、同第６，００２，００８号、及び同第５，７４７，４９８号、ならびに以下のＰＣＴ公報：ＷＯ９８／１４４５１、ＷＯ９８／５００３８、ＷＯ９９／０９０１６、及びＷＯ９９／２４０３７に記載���れている化合物などの小分子が含まれる。特定の小分子ＥＧＦＲアンタゴニストには、ＯＳＩ−７７４（ＣＰ−３５８７７４、エルロチニブ、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ＰＤ１８３８０５（ＣＩ１０３３、２−プロペンアミド、Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−６−キナゾリニル］−、二塩酸塩、Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．）；ＺＤ１８３９、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標））４−（３’−クロロ−４’−フルオロアニリノ）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＺＭ１０５１８０（（６−アミノ−４−（３−メチルフェニル−アミノ）−キナゾリン、Ｚｅｎｅｃａ）；ＢＩＢＸ−１３８２（Ｎ８−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−Ｎ２−（１−メチル−ピペリジン−４−イル）−ピリミド［５，４−ｄ］ピリミジン−２，８−ジアミン、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；ＰＫＩ−１６６（（Ｒ）−４−［４−［（１−フェニルエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル］−フェノール）；（Ｒ）−６−（４−ヒドロキシフェニル）−４−［（１−フェニルエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン）；ＣＬ−３８７７８５（Ｎ−［４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−キナゾリニル］−２−ブチンアミド）；ＥＫＢ−５６９（Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−３−シアノ−７−エトキシ−６−キノリニル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド）（Ｗｙｅｔｈ）；ＡＧ１４７８（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＡＧ１５７１（ＳＵ  ５２７１、Ｐｆｉｚｅｒ）；及び二重ＥＧＦＲ／ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６またはＮ−［３−クロロ−４−［（３−フルオロフェニル）メトキシ］フェニル］−６［５［［［２メチルスルホニル）エチル］アミノ］メチル］−２−フラニル］−４−キナゾリンアミン）が含まれる。
【０１７５】
化学療法剤には、前段落に記載のＥＧＦＲ標的薬物を含む「チロシンキナーゼ阻害剤」；Ｔａｋｅｄａから入手可能なＴＡＫ１６５などの小分子ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害剤；ＣＰ−７２４，７１４、ＥｒｂＢ２受容体チロシンキナーゼ（Ｐｆｉｚｅｒ及びＯＳＩ）の経口選択的阻害剤；ＥＧＦＲに優先的に結合するがＨＥＲ２及びＥＧＦＲの両方の過剰発現細胞を阻害する、ＥＫＢ−５６９（Ｗｙｅｔｈから入手可能）などの二重ＨＥＲ阻害剤；ラパチニブ（ＧＳＫ５７２０１６、Ｇｌａｘｏ−ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから入手可能）、経口ＨＥＲ２及び  ＥＧＦＲ  チロシンキナーゼ阻害剤；ＰＫＩ−１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓから入手可能）；カネルチニブ（ＣＩ−１０３３、Ｐｈａｒｍａｃｉａ）などのｐａｎ−ＨＥＲ阻害剤；Ｒａｆ−１シグナル伝達を阻害するＩＳＩＳ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから入手可能なアンチセンス薬剤ＩＳＩＳ−５１３２などのＲａｆ−１阻害剤；イマチニブメシラート（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから入手可能）などの非ＨＥＲ標的ＴＫ阻害剤；スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒから入手可能）などの多標的チロシンキナーゼ阻害剤；バタラニブ（ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４、Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧから入手可能）などのＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤；ＭＡＰＫ細胞外制御キナーゼＩ阻害剤ＣＩ−１０４０（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）；ＰＤ  １５３０３５，４−（３−クロロアニリノ）キナゾリンなどのキナゾリン；ピリドピリミジン；ピリミドピリミジン；ＣＧＰ  ５９３２６、ＣＧＰ  ６０２６１、及びＣＧＰ  ６２７０６などのピロロピリミジン；ピラゾロピリミジン、４−（フェニルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；クルクミン（ジフェルロイルメタン、４，５−ビス（４−フルオロアニリノ）フタルイミド）；ニトロチオフェン部分を含有するトリホスチン；ＰＤ−０１８３８０５（Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒ）；アンチセンス分子（例えば、ＨＥＲコード核酸に結合するもの）；キノキサリン（米国特許第５，８０４，３９６号）；トリホスチン（米国特許第５，８０４，３９６号）；ＺＤ６４７４（Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ−７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）；ＣＩ−１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）などのｐａｎ−ＨＥＲ阻害剤；Ａｆｆｉｎｉｔａｃ（ＩＳＩＳ  ３５２１、Ｉｓｉｓ／Ｌｉｌｌｙ）；イマチニブメシラート（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標））；ＰＫＩ  １６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＧＷ２０１６（Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；ＣＩ−１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＥＫＢ−５６９（Ｗｙｅｔｈ）；セマキシニブ（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ−７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）；ＩＮＣ−１Ｃ１１（Ｉｍｃｌｏｎｅ）、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））；または下記の特許刊行物：米国特許第５，８０４，３９６号、ＷＯ１９９９／０９０１６（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄ）、ＷＯ１９９８／４３９６０（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄ）、ＷＯ１９９７／３８９８３（Ｗａ��ｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）、ＷＯ１９９９／０６３７８（Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）、ＷＯ１９９９／０６３９６（Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）、ＷＯ１９９６／３０３４７（Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ）、ＷＯ１９９６／３３９７８（Ｚｅｎｅｃａ）、ＷＯ１９９６／３３９７（Ｚｅｎｅｃａ）、及びＷＯ１９９６／３３９８０（Ｚｅｎｅｃａ）のいずれかに記載のものが含まれる。
【０１７６】
化学療法剤には、デキサメタゾン、インターフェロン、コルヒチン、メトプリン、シクロスポリン、アンホテリシン、メトロニダゾール、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アミホスチン、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、ＢＣＧ生、ベバクジマブ、ベキサロテン、クラドリビン、クロファラビン、ダルベポエチンアルファ、デニロイキン、デクスラゾキサン、エポエチンアルファ、エロチニブ、フィルグラスチム、酢酸ヒストレリン、イブリツモマブ、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、レナリドミド、レバミゾール、メスナ、メトキサレン、ナンドロロン、ネララビン、ノフェツモマブ、オプレルベキン、パリフェルミン、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペグアスパラガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペメトレキセド二ナトリウム、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、キナクリン、ラスブリカーゼ、サルグラモスチム、テモゾロミド、ＶＭ−２６、６−ＴＧ、トレミフェン、トレチノイン、ＡＴＲＡ、バルルビシン、ゾレドロネート、及びゾレドロン酸、ならびにそれらの薬学的に許容される塩も含まれる。
【０１７７】
化学療法剤には、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酢酸コルチゾン、ピバリン酸チキソコルトール、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンアルコール、モメタゾン、アムシノニド、ブデソニド、デソニド、フルオシノニド、フルオシノロンアセトニド、ベタメタゾン、ベタメタゾンリン酸ナトリウム、デキサメタゾン、デキサメタゾンリン酸ナトリウム、フルオコルトロン、１７−酪酸ヒドロコルチゾン、１７−吉草酸ヒドロコルチゾン、ジプロピオン酸アクロメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン、プレドニカルベート、１７−酪酸クロベタゾン、１７−プロピオン酸クロベタゾール、カプロン酸フルオコルトロン、ピバリン酸フルオコルトロン、及び酢酸フルプレニデン；フェニルアラニン−グルタミン−グリシン（ＦＥＧ）及びそのＤ−異性形態（ｆｅＧ）（ＩＭＵＬＡＮ  ＢｉｏＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＬＬＣ）などの免疫選択的抗炎症性ペプチド（ＩｍＳＡＩＤ）；抗リウマチ薬、例えば、アザチオプリン、シクロスポリン（シクロスポリンＡ）、Ｄ−ペニシラミン、金塩、ヒドロキシクロロキン、レフルノミドミノシクリン、スルファサラジン、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）遮断剤、例えば、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ）、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ）、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ）、セルトリズマブペゴール（Ｃｉｍｚｉａ）、ゴリムマブ（Ｓｉｍｐｏｎｉ）、インターロイキン１（ＩＬ−１）遮断剤、例えば、アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ）、Ｔ細胞共刺激遮断剤、例えば、アバタセプト（Ｏｒｅｎｃｉａ）、インターロイキン６（ＩＬ−６）遮断剤、例えば、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＥＲＡ（登録商標））；レブリキズマブなどのインターロイキン１３（ＩＬ−１３）遮断剤；ロンタリズマブなどのインターフェロンアルファ（ＩＦＮ）遮断剤；ｒｈｕＭＡｂベータ７などのベータ７インテグリン遮断剤；抗Ｍ１  ｐｒｉｍｅなどのＩｇＥ経路阻害剤；抗リンホトキシンアルファ（ＬＴａ）などの分泌ホモトリマーＬＴａ３及び膜結合ヘテロトリマーＬＴａ１／β２遮断剤；放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；チオプラチン、ＰＳ−３４１、フェニルブチラート、ＥＴ−１８−ＯＣＨ３、またはファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（Ｌ−７３９７４９，Ｌ−７４４８３２）などの種々の試験剤；ポリフェノール、例えば、ケルセチン、レスベラトロール、ピセアタンノール、没食子酸エピガロカテキン、テアフラビン、フラバノール、プロシアニジン、ベツリン酸、及びそれらの誘導体；クロロキンなどのオートファジー阻害剤；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ−ラパコン；ラパコール；コルチシン；ベツリン酸；アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、及び９−アミノカンプトテシン）；ポドフィルロトキシン；テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））；ビスホスホネート、例えば、クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）またはＯＳＴＡＣ（登���商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））；及び上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチンなどのワクチン；ペリホシン、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブまたはエトリコキシブ）、プロテオソーム阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ＣＣＩ−７７９；チピファルニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ、ＡＢＴ５１０；オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））などのＢｃｌ−２阻害剤；ピキサントロン；ロナファルニブ（ＳＣＨ  ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲＴＭ）などのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤；及び上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに上記の２つ以上の組み合わせ、例えば、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾロン併用療法の略語）；ならびにＦＯＬＦＯＸ（５−ＦＵ及びロイコボリンと組み合わされたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮＴＭ）の治療レジメンの略語）も含まれる。
【０１７８】
化学療法剤には、鎮痛、解熱、及び抗炎症作用を有する非ステロイド性抗炎症性薬物も含まれる。ＮＳＡＩＤには、酵素シクロオキシゲナーゼの非選択的阻害剤が含まれる。ＮＳＡＩＤの具体的な例としては、アスピリン、プロピオン酸誘導体、例えば、イブプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン、及びナプロキセン、酢酸誘導体、例えば、インドメタシン、スリンダク、エトドラク、ジクロフェナク、エノール酸誘導体、例えば、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、ドロキシカム、ロルノキシカム、及びイソキシカム、フェナム酸誘導体、例えば、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、トルフェナム酸、ならびにＣＯＸ−２阻害剤、例えば、セレコキシブ、エトリコキシブ、ルミラコキシブ、パレコキシブ、ロフェコキシブ、ロフェコキシブ、及びバルデコキシブが挙げられる。ＮＳＡＩＤの適応は、リウマチ性関節炎、変形性関節炎、炎症性関節症、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、ライター症候群、急性痛風、月経困難症、転移性骨痛、頭痛及び片頭痛、術後疼痛、炎症及び組織損傷に起因する軽度〜中程度の疼痛、発熱、腸閉塞症、ならびに腎疝痛などの状態の症状軽減であり得る。
【０１７９】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗原結合ポリペプチド（例えば、抗体）または複合体は、ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、オラパラニブ、ルカパリブ、ニラパリブ、セジラニブ、ＢＭＮ６７３、ベリパリブ）、トラベクテジン、ｎａｂ−パクリタキセル（アルブメン結合パクリタキセル、ＡＢＲＡＸＡＮＥ）、トレバナニブ、パゾパニブ、セジラニブ、パルボシクリブ、エベロリムス、フルオロピリミジン（例えば、ＦＯＬＦＯＸ、ＦＯＬＦＩＲＩ）、ＩＦＬ、レゴラフェニブ、レオリジン、アリムタ、ジカディア、スーテント、トーリセル（テムシロリムス）、インライタ（アキシチニブ、Ｐｆｉｚｅｒ）、アフィニトール（エベロリムス、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ネクサバール（ソラフェニブ、Ｏｎｙｘ／Ｂａｙｅｒ）、ヴォトリエント、パゾパニブ、アキシチニブ、ＩＭＡ−９０１、ＡＧＳ−００３、カボザンチニブ、ビンフルニン、Ｈｓｐ９０阻害剤（例えば、アパトルシン）、Ａｄ−ＧＭ−ＣＳＦ（ＣＴ−００７０）、テマゾロミド、ＩＬ−２、ＩＦＮａ、ビンブラスチン、サロミド、ダカルバジン、シクロホスファミド、レナリドミド、アザシチジン、レナリドマイド、ボルテゾミド（ＶＥＬＣＡＤＥ）、アムルビシン、カルフィルゾミブ、プララトレキサート、及び／またはエンザスタウリンと併せて投与され得る。
【０１８０】
「ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−１シグナル伝達軸上のシグナル伝達に起因するＴ細胞機能障害を除去するようにＰＤ−１軸結合パートナーとその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上との相互作用を阻害し、結果として、Ｔ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン産生、標的細胞殺滅）を復元または増強する分子を指す。本明細書で使用される場合、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストを含む。
【０１８１】
「ＰＤ−１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−１とその結合パートナーのうちの１つ以上、例えば、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２との相互作用に起因するシグナル伝達を減少、遮断、阻害、抑止、または妨害する分子を指す。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１のその結合パートナーのうちの１つ以上への結合を阻害する分子である。具体的な態様において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１の、ＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２への結合を阻害する。例えば、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、ならびにＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２との相互作用に起因するシグナル伝達を減少、遮断、阻害、抑止、または妨害する他の分子を含む。一実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、機能障害性Ｔ細胞の機能障害性を低下させる（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−１を介してＴリンパ球媒介シグナル伝達で発現された細胞表面タンパク質によって、またはそれを介して媒介される、負の共刺激性シグナルを低減させる。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体である。具体的な態様において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ）である。別の具体的な態様において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＭＫ−３４７５（ペンブロリズマブ）である。別の具体的な態様において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＣＴ−０１１（ピジリズマブ）である。別の具体的な態様において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＡＭＰ−２２４である。
【０１８２】
「ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−Ｌ１とその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ−１、Ｂ７−１との相互作用に起因するシグナル伝達を減少、遮断、阻害、抑止、または妨害する分子を指す。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的な態様において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１及び／またはＢ７−１への結合を阻害する。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ−Ｌ１とその結合パートナーのうちの１つ以上、例えば、ＰＤ−１、Ｂ７−１との相互作用に起因するシグナル伝達を減少、遮断、阻害、抑止、または妨害する他の分子を含む。一実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、機能障害性Ｔ細胞の機能障害性を低下させる（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−Ｌ１を介してＴリンパ球媒介シグナル伝達で発現された細胞表面タンパク質によって、またはそれを介して媒介される、負の共刺激性シグナルを低減させる。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。具体的な態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。別の具体的な態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＤＸ−１１０５である。さらに別の具体的な態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＰＤＬ３２８０Ａである。さらに別の具体的な態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＥＤＩ４７３６である。
【０１８３】
「ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−Ｌ２とその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ−１との相互作用に起因するシグナル伝達を減少、遮断、阻害、抑止、または妨害する分子を指す。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２のその結合パートナーのうちの１つ以上への結合を阻害する分子である。具体的な態様において、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合を阻害する。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ２アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ−Ｌ２とその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ−１との相互作用に起因するシグナル伝達を減少、遮断、阻害、抑止、または妨害する他の分子を含む。一実施形態において、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、機能障害性Ｔ細胞の機能障害性を低下させる（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−Ｌ２を介してＴリンパ球媒介シグナル伝達で発現された細胞表面タンパク質によって、またはそれを介して媒介される、負の共刺激性シグナルを低減させる。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、イムノアドヘシンである。
【０１８４】
「ＮＫＧ２Ｄリガンド」という用語は、ＮＫＧ２Ｄ受容体に結合し、ＮＫＧ２Ｄ発現細胞の殺滅を引き起こすように受容体を活性化することができる任意の分子を指す。例示的なＮＫＧ２Ｄリガンドは、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、及び関連スプライスバリアント及び対立遺伝子を含む。
【０１８５】
「ＭＩＣのシェディングを低減すること」という用語またはその文法的変形は、ＭＩＣ発現細胞からの膜結合ＭＩＣの放出の低減を指す。特定の実施形態において、ＭＩＣのシェディングの低減は可溶性ＭＩＣのレベルを低減し、したがって免疫系を損傷し、がん及び他の免疫関連疾患を発症及び進行させるものを含む、可溶性ＭＩＣの効果の低減がある。特定の実施形態において、ＭＩＣのシェディングは、本明細書に記載される抗体の不在下でのＭＩＣのシェディングと比較して、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％低減する。
【０１８６】
「可溶性ＭＩＣのレベルを低減すること」という用語またはその文法的変形は、非膜結合ＭＩＣのレベルの低減を指す。特定の実施形態において、可溶性ＭＩＣの低減は、免疫系を損傷し、がん及び他の免疫関連疾患を発症及び進行させるものを含む、可溶性ＭＩＣの効果の低減があるということである。例えば、可溶性ＭＩＣの低減は、可溶性ＭＩＣによって誘導されるＮＫＧ２Ｄの下方制御を低減し得る。可溶性ＭＩＣのレベルの低減は、本明細書に記載される抗体によるＭＩＣのシェディング及び／または可溶性ＭＩＣの結合の低減を含む、複数のメカニズムに起因し得る。特定の実施形態において、可溶性ＭＩＣのレベルは、本明細書に記載される抗体の不在下での可溶性ＭＩＣのレベルと比較して、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％低減する。
【０１８７】
「腫瘍免疫」とは、腫瘍が免疫認識及びクリアランスを回避するプロセスを指す。したがって、治療的概念として、腫瘍免疫は、かかる回避が減弱し、腫瘍が免疫系によって認識及び攻撃されるときに「治療される」。腫瘍認識の例としては、腫瘍結合、腫瘍縮小、及び腫瘍クリアランスが挙げられる。
【０１８８】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性」またはＡＤＣＣは、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ＮＫ細胞、好中球、及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した分泌免疫グロブリンが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原保有標的細胞に特異的に結合し、その後細胞毒を用いて標的細胞を殺滅することができるようにする細胞傷害性の形態を指す。ＡＤＣＣを媒介する初代細胞であるＮＫ細胞がＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９：４５７−９２（１９９１）の４６４ページの表３に要約される。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号または同第６，７３７，０５６号（Ｐｒｅｓｔａ）に記載されるようなインビトロＡＤＣＣアッセイを行ってもよい。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞としては、ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞が挙げられる。あるいは、または加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるような動物モデルにおいて、インビボで評価されてもよい。
【０１８９】
本明細書で使用される「バイオマーカー」という用語は、試料中で検出され得る指標、例えば、予測指標、診断指標、及び／または予後指標を指す。バイオマーカーは、特定の分子的、病理学的、組織学的、及び／または臨床的特徴によって特徴付けられる疾患または障害（例えば、がん）の特定のサブタイプの指標としての機能を果たし得る。いくつかの実施形態において、バイオマーカーは遺伝子である。バイオマーカーには、ポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ及び／またはＲＮＡ）、ポリヌクレオチドコピー数の改変（例えば、ＤＮＡコピー数）、ポリペプチド、ポリペプチド及びポリヌクレオチド修飾（例えば、翻訳後修飾）、炭水化物、及び／または糖脂質系分子マーカーが含まれるが、これらに限定されない。「がん」及び「がん性」という用語は、典型的に未制御の細胞成長を特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指すか、または説明する。がんの例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病またはリンパ性悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。かかるがんのより具体的な例としては、扁平細胞癌（例えば、扁平上皮細胞癌）、肺癌、例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、及び肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、例えば、胃腸癌及び胃腸間質癌、膵臓癌、膠芽細胞腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿路癌、肝癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、表在拡大型黒色腫、悪性黒子型黒色腫、末端性黒子性黒色腫、結節型黒色腫、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非開裂細胞性ＮＨＬ、巨大病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、及びワルデンストレームマクログロブリン血症）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、ヘアリー細胞白血病、慢性骨髄芽球性白血病、及び移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、浮腫（脳腫瘍に関連するものなど）、メーグス症候群、脳癌、ならびに頭頸部癌、及び関連転移が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９０】
「補体依存性細胞傷害性」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下での標的細胞の溶解を指す。従来の補体経路の活性化は、補体系（Ｃ１ｑ）の第１の成分の（適切なサブクラスの）抗体への結合から始まり、これらの抗体は、それらの同族抗原に結合している。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）に記載されるようなＣＤＣアッセイが行われ得る。改変されたＦｃ領域アミノ酸配列を有するポリペプチドバリアント（バリアントＦｃ領域を有するポリペプチド）及び増加または減少したＣ１ｑ結合能力については、例えば、米国特許第６，１９４，５５１  Ｂ１号及びＷＯ１９９９／５１６４２に記載されている。例えば、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）も参照されたい。
【０１９１】
「診断」という用語は、本明細書では、分子的または病理学的状態、疾患、または病態（例えば、がん）の特定または分類を指すために使用される。例えば、「診断」は、特定の種類のがんの特定を指し得る。「診断」はまた、例えば、組織病理学的基準による、または分子的特徴による、がんの特定のサブタイプ（例えば、１つのバイオマーカーまたはバイオマーカーの組み合わせ（例えば、特定の遺伝子またはその遺伝子によってコードされたタンパク質）の発現を特徴とするサブタイプ）の分類を指し得る。
【０１９２】
本明細書で使用される場合、「疾患の進行を遅延させる」は、疾患（がんなど）の発症を延期し、妨害し、減速し、遅らせ、安定させ、及び／または先送りすることを意味する。この遅延は、治療されている病歴及び／または個体に応じて異なる期間であり得る。当業者に明らかであるように、十分な、または著しい遅延は、事実上、個体が疾患を発症しないという点で予防を包含し得る。例えば、転移の発症などの末期がんを遅延させることができる。
【０１９３】
「発現」とは、一般に、情報（例えば、遺伝子コード情報及び／またはエピジェネティック情報）が、細胞中に存在しかつそこで機能する構造に変換されるプロセスを指す。
【０１９４】
したがって、本明細書で使用されるとき、「発現」とは、ポリヌクレオチドへの転写、ポリペプチドへの翻訳、またはさらにはポリヌクレオチド及び／またはポリペプチド修飾（例えば、ポリペプチドの翻訳後修飾）を指し得る。転写されたポリヌクレオチド、翻訳されたポリペプチド、またはポリヌクレオチド及び／またはポリペプチド修飾（例えば、ポリペプチドの翻訳後修飾）の断片も、それらが選択的スプライシングによって生成された転写物もしくは分解された転写物に由来するか、または例えば、タンパク質分解による、ポリペプチドの翻訳後プロセシングに由来するかどうかにかかわらず、発現されたものと見なされるべきである。「発現遺伝子」は、ｍＲＮＡとしてポリヌクレオチドに転写され、その後、ポリペプチドに翻訳される遺伝子を含み、ＲＮＡに転写されるが、ポリペプチドに翻訳されない遺伝子（例えば、トランスファーＲＮＡ及びリボソームＲＮＡ）も含む。
【０１９５】
本明細書で使用されるとき、「成長阻害剤」とは、インビトロまたはインビボのいずれかで細胞の成長を阻害する化合物または組成物を指す。一実施形態において、成長阻害剤は、抗体が結合する抗原を発現する細胞の増殖を防止または低減する成長阻害抗体である。別の実施形態において、成長阻害剤は、Ｓ期の細胞の割合を著しく低減させるものであり得る。成長阻害剤の例には、細胞周期進行を（Ｓ期以外の場所で）妨害する薬剤、例えば、Ｇ１停止及びＭ期停止を誘導する薬剤が含まれる。従来のＭ期遮断剤としては、ビンカ（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン、ならびにトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えば、ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンが挙げられる。Ｇ１停止薬剤は、Ｓ期停止にも及び、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、及びａｒａ−ＣなどのＤＮＡアルキル化剤が挙げられる。さらなる情報は、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ  ａｎｄ  Ｉｓｒａｅｌ，ｅｄｓ．，Ｔｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｃｈａｐｔｅｒ  １，ｅｎｔｉｔｌｅｄ  “Ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，ａｎｄ  ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｄｒｕｇｓ”  ｂｙ  Ｍｕｒａｋａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）において、例えば、ｐ．１３に見出すことができる。タキサン（パクリタキセル及びドセタキセル）は、いずれもイチイの木に由来する抗がん薬である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ）は、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成類似体である。パクリタキセル及びドセタキセルは、チューブリン二量体に由来する微小管の組み立てを促進し、脱重合を防止することによって微小管を安定させ、細胞内の有糸分裂の阻害をもたらす。
【０１９６】
本明細書で使用されるとき、「と併せて」とは、１つの治療法の、別の治療法に加えた施行を指す。そのようなものとして、「と併せて」とは、１つの治療法の、個体への他の治療法の施行前、施行中、または施行後の施行を指す。
【０１９７】
本明細書で使用されるとき、「標識」という語は、検出可能な化合物または組成物を指す。標識は、典型的には、ポリヌクレオチドプローブまたは抗体などの試薬に直接または間接的に抱合または融合し、それが抱合または融合する試薬の検出を容易にする。標識は、それ自体が検出可能（例えば、放射性同位体標識または蛍光標識）であり得るか、または酵素標識の場合、検出可能な産生物をもたらす基質化合物または組成物の化学的改変を触媒し得る。
【０１９８】
「ポリヌクレオチド」という用語は、単数形または複数形で使用されるとき、一般に、修飾されていないＲＮＡもしくはＤＮＡまたは修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得る、任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドを指す。このため、例えば、本明細書で定義されるポリヌクレオチドは、非限定的に、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖領域を含むＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖及び二本鎖領域を含むＲＮＡを含み、ハイブリッド分子は、一本鎖もしくはより典型的には二本鎖であり得るか、または一本鎖及び二本鎖領域を含み得るＤＮＡ及びＲＮＡを含む。加えて、本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」という用語は、ＲＮＡもしくはＤＮＡまたはＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を指す。かかる領域内の鎖は、同じ分子由来であっても異なる分子由来であってもよい。領域は、分子のうちの１つ以上の全てを含み得るが、より典型的には分子のうちのいくつかの領域のみを伴う。三重らせん領域の分子のうちの１つは、オリゴヌクレオチドであることが多い。「ポリヌクレオチド」という用語は、具体的には、ｃＤＮＡを含む。用語は、１つ以上の修飾塩基を含有するＤＮＡ（ｃＤＮＡを含む）及びＲＮＡを含む。したがって、骨格が安定性または他の理由のために修飾されたＤＮＡまたはＲＮＡは、その用語が本明細書で意図される「ポリヌクレオチド」である。さらに、イノシンなどの珍しい塩基またはトリチウム化塩基などの修飾塩基を含むＤＮＡまたはＲＮＡが、本明細書で定義される「ポリヌクレオチド」という用語に含まれる。一般に、「ポリヌクレオチド」という用語は、修飾されていないポリヌクレオチドの全ての化学的、酵素的、及び／または代謝的に修飾された形態、ならびにウイルス及び細胞（単純細胞及び複雑細胞を含む）のＤＮＡ及びＲＮＡ特性の化学形態を包含する。
【０１９９】
「放射線療法」とは、細胞の正常に機能する能力を制限するように、または細胞を完全に破壊するように、細胞に十分な損傷を引き起こす指向性γ線またはβ線の使用を意味する。投薬量及び治療期間を決定するための当該技術分野で既知の方法が多く存在することが理解される。典型的な治療は、１回の投与として与えられ、典型的な投薬量は、１日あたり１０〜２００単位（グレイ）の範囲である。
【０２００】
本明細書で使用される「試料」という用語は、例えば、物理的、生化学的、化学的、及び／または生理学的特性に基づいて、特徴付け及び／または特定される細胞及び／または他の分子実体を含有する、目的とする対象及び／または個体から得られるか、またはそれらに由来する組成物を指す。例えば、「疾患試料」という語句及びその変化形は、特徴付けされる細胞及び／または分子実体を含有することが予想されるか、または知られている、目的の対象から得られる任意の試料を指す。試料としては、初代または培養細胞または細胞株、細胞上清、細胞溶解物、血小板、血清、血漿、硝子体液、リンパ液、滑液、卵胞液、精液、羊水、乳、全血、血液由来の細胞、尿、脳脊髄液、唾液、痰、涙、汗、粘液、腫瘍溶解物、及び組織培養培地、組織抽出物、例えば、均質化組織、腫瘍組織、細胞抽出物、ならびにそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０１】
ＩＩ．組成物及び使用方法
一態様において、本発明は、部分的に、ＭＩＣのシェディングを低減かつまたは可溶性ＭＩＣのレベルを低減する抗ＭＩＣ抗体の特定に基づく。特定の実施形態において、ＭＩＣに結合する抗体が提供される。本発明の抗体は、例えば、がん及び免疫関連疾患の診断または治療に有用である。
【０２０２】
Ａ．例示的な抗ＭＩＣ抗体
一態様において、本発明は、ＭＩＣに結合する単離された抗体を提供する。特定の実施形態において、抗ＭＩＣ抗体は、ＭＩＣのシェディング及び／または可溶性ＭＩＣのレベルを低減する。
一態様において、本発明は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＧｌｕ２１５、Ｇｌｙ２４３、Ｈｉｓ２４８、Ａｒｇ２７９、Ａｒｇ２１３、Ｓｅｒ２１４、Ａｌａ２１６、Ｓｅｒ２１７、Ａｓｎ２２０、Ａｒｇ２７１、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ｔｈｒ２８１、Ｓｅｒ２４７、Ａｓｐ２４９、Ｔｈｒ２５０、Ｔｒｐ２５３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、及び／またはＧｌｎ２７８を含むがこれらに限定されない、ヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する抗ＭＩＣ抗体を提供する。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、抗体は、第１のアミノ酸残基、第２のアミノ酸残基、及び第３のアミノ酸残基を含むがこれらに限定されない、ヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、第１のアミノ酸残基は、Ｇｌｕ２１５、Ａｒｇ２１３、Ｓｅｒ２１４、Ａｌａ２１６、Ｓｅｒ２１７、Ａｓｎ２２０、またはＡｒｇ２７１であり、第２のアミノ酸残基は、Ｈｉｓ２４８、Ｓｅｒ２４７、Ａｓｐ２４９、Ｔｈｒ２５０、またはＴｒｐ２５３であり、第３のアミノ酸残基は、Ａｒｇ２７９、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、またはＴｈｒ２８１である。
【０２０４】
他の実施形態において、抗体は、第１のアミノ酸残基及び第２のアミノ酸残基を含むがこれらに限定されない、ヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、第１のアミノ酸残基は、Ｇｌｙ２４３、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ａｒｇ２７９、またはＴｈｒ２８１であり、第２のアミノ酸残基は、Ａｒｇ２７９、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、またはＴｈｒ２８１である。
【０２０５】
さらに他の実施形態において、抗体は、第１のアミノ酸残基及び第２のアミノ酸残基を含むがこれらに限定されない、ヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、第１のアミノ酸残基は、Ｈｉｓ２４８、Ｓｅｒ２４７、Ａｓｐ２４９、Ｔｈｒ２５０、またはＴｒｐ２５３であり、第２のアミノ酸残基は、Ａｒｇ２７９、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、またはＴｈｒ２８１である。
【０２０６】
他の実施形態において、抗体は、アミノ酸残基Ｈｉｓ２４８、Ｓｅｒ２４７、Ａｓｐ２４９、Ｔｈｒ２５０、及び／またはＴｒｐ２５３を含むがこれらに限定されない、ヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。
【０２０７】
他の実施形態において、抗体は、アミノ酸残基Ａｒｇ２７９、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、及び／またはＴｈｒ２８１を含むがこれらに限定されない、ヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。
【０２０８】
他の実施形態において、抗体はＭＩＣの「背部及び上部」にあるエピトープに結合する。一実施形態において、抗体は、残基Ｖａｌ２０５、Ｐｒｏ２０６、Ｍｅｔ２０８、Ｔｈｒ２１２、Ｇｌｙ２１９、Ｔｈｒ２２２、Ｔｈｒ２２４、Ａｒｇ２２６、Ｓｅｒ２２８、Ｔｙｒ２３１、Ｐｒｏ２３２、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｔｈｒ２５０、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｓｐ２５５とＧｌｙ２６２、Ｔｙｒ２６４、Ｇｌｎ２６５、Ｔｒｐ２６７、Ａｒｇ２７１、Ｇｌｙ２７５、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｙ２８８、Ａｓｎ２８９、及び／またはＨｉｓ２９０との間の任意のアミノ酸に結合し得る。別の実施形態において、抗体は、Ｖａｌ２０５、Ｐｒｏ２０６、Ｍｅｔ２０８、Ｔｈｒ２１２、Ｇｌｙ２１９、Ｔｈｒ２２２、Ｔｈｒ２２４、Ａｒｇ２２６、Ｓｅｒ２２８、Ｔｙｒ２３１、Ｐｒｏ２３２、Ａｓｐ２４２、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＡｓｐ２５５とＧｌｙ２６２、Ｔｙｒ２６４、Ｇｌｎ２６５、Ｔｒｐ２６７、及び／またはＡｒｇ２７１との間の任意のアミノ酸に結合し得る。
【０２０９】
別の態様において、抗体は、アミノ酸残基Ｇｌｙ２４３、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ａｒｇ２７９、及び／またはＴｈｒ２８１を含むがこれらに限定されない、ヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。
【０２１０】
いくつかの実施形態において、抗体は、第１のアミノ酸残基及び第２のアミノ酸残基を含むがこれらに限定されない、ヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合し、第１のアミノ酸残基は、Ｇｌｙ２４３、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ａｒｇ２７９、またはＴｈｒ２８１であり、第２のアミノ酸残基は、Ａｒｇ２７９、Ａｒｇ２７９、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、またはＴｈｒ２８１である。
【０２１１】
いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸残基Ｇｌｙ２４３を含むがこれらに限定されない、ヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。
【０２１２】
いくつかの実施形態において、抗体は、アミノ酸残基Ｇｌｙ２４３及びＡｒｇ２７９を含むがこれらに限定されない、ヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。
【０２１３】
他の実施形態において、抗体は、アミノ酸残基Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ｈｉｓ２４８、Ｇｌｕ２７６、Ａｒｇ２７９、Ｔｙｒ２８３、Ｇｌｕ２８５、Ｈｉｓ２９０、及び／またはＴｈｒ２９２を含むがこれらに限定されない、ヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。
【０２１４】
他の実施形態において、抗体は、アミノ酸残基Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ｌｅｕ２４６、Ｓｅｒ２４７、Ａｓｐ２４９、Ｔｈｒ２５０、Ａｒｇ２７９、Ｔｙｒ２８３、Ｈｉｓ２９０、Ｓｅｒ２９１、Ｔｈｒ２９２、及び／またはＰｒｏ２９４を含むがこれらに限定されない、ヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。
【０２１５】
他の実施形態において、抗体は、アミノ酸残基Ａｒｇ２４０、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｖａｌ２４４、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、Ａｒｇ２７９、Ｐｈｅ２８０、Ｔｈｒ２８１、Ｔｙｒ２８３、Ｇｌｕ２８５、Ｇｌｙ２８８、Ａｓｎ２８９、Ｈｉｓ２９０、Ｓｅｒ２９１、Ｔｈｒ２９２、Ｐｒｏ２９４、Ｖａｌ２９５、Ｐｒｏ２９６、及び／またはＳｅｒ２９７を含むがこれらに限定されない、ヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。
【０２１６】
他の実施形態において、抗体は、アミノ酸残基Ａｓｎ２３４、Ｉｌｅ２３５、Ｉｌｅ２３６、Ｌｅｕ２３７、Ｔｈｒ２３８、Ｔｒｐ２３９、及び／またはＡｒｇ２４０を含むがこれらに限定されない、ヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。他の実施形態において、抗体は、アミノ酸残基Ｖａｌ２６８、Ａｌａ２６９、Ｔｈｒ２７０、Ａｒｇ２７１、Ｉｌｅ２７２、Ｃｙｓ２７３、Ａｒｇ２７４、Ｇｌｙ２７５、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、Ａｒｇ２７９、及び／またはＰｈｅ２８０を含むがこれらに限定されない、ヒトＭＩＣＡ＊００８上のエピトープに結合する。
【０２１７】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、または１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、または１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、または１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、または１８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号５、２１、３７、５３、６９、８５、１０１、１１７、１３３、１４９、１６５、または１８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、または１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、抗ＭＩＣ抗体を提供する。
【０２１８】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、または１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、または１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、または１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態において、抗体は、配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、または１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、または１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、または１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。さらなる実施形態において、抗体は、配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、または１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、または１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、または１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、を含む。さらなる実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、または１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、（ｂ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、または１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、（ｃ）配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、または１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、を含む。
【０２１９】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、または１８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号５、２１、３７、５３、６９、８５、１０１、１１７、１３３、１４９、１６５、または１８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、または１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、または１８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、（ｂ）配列番号５、２１、３７、５３、６９、８５、１０１、１１７、１３３、１４９、１６５、または１８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、（ｃ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、または１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。
【０２２０】
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、または１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、または１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、または１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、または１８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号５、２１、３７、５３、６９、８５、１０１、１１７、１３３、１４９、１６５、または１８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、または１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む。
【０２２１】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、または１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、（ｂ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、または１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、（ｃ）配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、または１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、（ｄ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、または１８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、（ｅ）配列番号５、２１、３７、５３、６９、８５、１０１、１１７、１３３、１４９、１６５、または１８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、（ｆ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、または１８２から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、抗体を提供する。
【０２２２】
別の態様において、抗ＭＩＣ抗体は、配列番号１５、３１、４７、６３、７９、９５、１１１、１２７、１４３、１５９、１７５、または１９１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＭＩＣ抗体は、ＭＩＣに結合する能力を保持する。特定の実施形態において、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１５、３１、４７、６３、７９、９５、１１１、１２７、１４３、１５９、１７５、または１９１において置換、挿入、及び／または欠失されている。特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＭＩＣ抗体は、配列番号１５、３１、４７、６３、７９、９５、１１１、１２７、１４３、１５９、１７５、または１９１におけるＶＨ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、または１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、または１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、または１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０２２３】
別の態様において、抗ＭＩＣ抗体が提供され、抗体は、配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、または１９２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。特定の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＭＩＣ抗体は、ＭＩＣに結合する能力を保持する。特定の実施形態において、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、または１９２において置換、挿入、及び／または欠失されている。特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＭＩＣ抗体は、配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、または１９２におけるＶＬ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、または１８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号５、２１、３７、５３、６９、８５、１０１、１１７、１３３、１４９、１６５、または１８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、または１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０２２４】
別の態様において、抗ＭＩＣ抗体が提供され、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるとおりのＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるとおりのＶＬを含む。一実施形態において、抗体は、それぞれ配列番号１５、３１、４７、６３、７９、９５、１１１、１２７、１４３、１５９、１７５、または１９１及び配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、または１９２におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。
【０２２５】
上記の実施形態のいずれにおいても、抗ＭＩＣ抗体は、ヒト化されている。一実施形態において、抗ＭＩＣ抗体は、上記の実施形態のいずれかにあるとおりのＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。別の実施形態において、抗ＭＩＣ抗体は、上記の実施形態のいずれかにあるとおりのＨＶＲを含み、図１Ａ〜図１Ｌに開示されるＦＲ配列を含むＶＨ及び／またはＶＬをさらに含む。いくつかの実施形態において、上述の抗ＭＩＣ抗体は、（ａ）配列番号７、２３、３９、５５、７１、８７、１０３、１１９、１３５、１５１、１６７、または１８３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、または１８４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）配列番号９、２５、４１、５７、７３、８９、１０５、１２１、１３７、１５３、１６９、または１８５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、または４つの軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）をさらに含む。他の実施形態において、上述の抗ＭＩＣ抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：ａ）配列番号１１、２７、４３、５９、７５、９１、１０７、１２３、１３９、１５５、１７１、または１８７のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、ｂ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、または１８８のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、ｃ）配列番号１３、２９、４５、６１、７７、９３、１０９、１２５、１４１、１５７、１７３、または１８９のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、ｄ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、または１９０のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【０２２６】
例示的な抗体（３Ｃ９．１０、７Ｄ４．６、６Ｆ８．７、３２Ｄ２、３Ｅ１１、９Ｃ９．５．６、１Ｅ６．１．３、７Ａ３．１．９、６Ｅ１２．５、２０Ｇ１１、６Ｅ１．１．１２、及び２Ｅ５．２．３）は、図１Ａ〜図１Ｌ、図１２、実施例、及び詳細な説明の配列セクションに記載されている。
【０２２７】
１Ｄ５、１３Ａ９、１５Ｆ１１、６Ｅ１、１８Ｇ３、１２Ｈ１０の例示的な抗体バリアントは、図１４Ａ〜図１４Ｆ、実施例、及び詳細な説明の配列セクションに記載されている。
【０２２８】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号２０９、２１８、２２４、２３６、または２４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２１０、２１５、２１６、２１７、２１９、２２５、２３７、または２４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２１１、２２０、２２６、２３８、または２４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号２１２、２２１、２２７、２３９、または２４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２１３、２２２、２２８、２４０、または２４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２１４、２２３、２２９、２４１、または２４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、抗ＭＩＣ抗体を提供する。
【０２２９】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号２０９、２１８、２２４、２３６、または２４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２１０、２１５、２１６、２１７、２１９、２２５、２３７、または２４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２１１、２２０、２２６、２３８、または２４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態において、抗体は、配列番号２１１、２２０、２２６、２３８、または２４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号２１１、２２０、２２６、２３８、または２４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号２１４、２２３、２２９、２４１、または２４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。さらなる実施形態において、抗体は、配列番号２１１、２２０、２２６、２３８、または２４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、配列番号２１４、２２３、２２９、２４１、または２４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、配列番号２１０、２１５、２１６、２１７、２１９、２２５、２３７、または２４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、を含む。さらなる実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号２０９、２１８、２２４、２３６、または２４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、（ｂ）配列番号２１０、２１５、２１６、２１７、２１９、２２５、２３７、または２４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、（ｃ）配列番号２１１、２２０、２２６、２３８、または２４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、を含む。
【０２３０】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２１２、２２１、２２７、２３９、または２４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２１３、２２２、２２８、２４０、または２４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２１４、２２３、２２９、２４１、または２４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号２１２、２２１、２２７、２３９、または２４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、（ｂ）配列番号２１３、２２２、２２８、２４０、または２４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、（ｃ）配列番号２１４、２２３、２２９、２４１、または２４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む。
【０２３１】
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２０９、２１８、２２４、２３６、または２４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２１０、２１５、２１６、２１７、２１９、２２５、２３７、または２４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２１１、２２０、２２６、２３８、または２４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号２１２、２２１、２２７、２３９、または２４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２１３、２２２、２２８、２４０、または２４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２１４、２２３、２２９、２４１、または２４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む。
【０２３２】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２０９、２１８、２２４、２３６、または２４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、（ｂ）配列番号２１０、２１５、２１６、２１７、２１９、２２５、２３７、または２４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、（ｃ）配列番号２１１、２２０、２２６、２３８、または２４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、（ｄ）配列番号２１２、２２１、２２７、２３９、または２４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、（ｅ）配列番号２１３、２２２、２２８、２４０、または２４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、（ｆ）配列番号２１４、２２３、２２９、２４１、または２４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、抗体を提供する。
【０２３３】
別の態様において、抗ＭＩＣ抗体は、配列番号３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、または４３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＭＩＣ抗体は、ＭＩＣに結合する能力を保持する。特定の実施形態において、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、または４３９において置換、挿入、及び／または欠失されている。特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＭＩＣ抗体は、配列番号３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、または４３９におけるＶＨ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号２０９、２１８、２２４、２３６、または２４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２１０、２１５、２１６、２１７、２１９、２２５、２３７、または２４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２１１、２２０、２２６、２３８、または２４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０２３４】
別の態様において、抗ＭＩＣ抗体が提供され、抗体は、配列番号３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、または４４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。特定の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＭＩＣ抗体は、ＭＩＣに結合する能力を保持する。特定の実施形態において、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、または４４０において置換、挿入、及び／または欠失されている。特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＭＩＣ抗体は、配列番号３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、または４４０におけるＶＬ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号２１２、２２１、２２７、２３９、または２４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２１３、２２２、２２８、２４０、または２４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２１４、２２３、２２９、２４１、または２４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０２３５】
別の態様において、抗ＭＩＣ抗体が提供され、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるとおりのＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるとおりのＶＬを含む。一実施形態において、抗体は、それぞれ配列番号３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、または４３９及び配列番号３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、または４４０におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。
【０２３６】
上記の実施形態のいずれにおいても、抗ＭＩＣ抗体は、ヒト化されている。一実施形態において、抗ＭＩＣ抗体は、上記の実施形態のいずれかにあるとおりのＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。別の実施形態において、抗ＭＩＣ抗体は、上記の実施形態のいずれかにあるとおりのＨＶＲを含み、図１４Ａ〜図１４Ｆに開示されるＦＲ配列を含むＶＨ及び／またはＶＬをさらに含む。いくつかの実施形態において、上述の抗ＭＩＣ抗体は、（ａ）配列番号２４８、２５２、２５８、２６１、２６６、２６８、２７２、２７７、２８０、２８８、または２９１のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２４９、２５３、２５６、２５９、２６２、２６４、２６９、２７３、２７５、２７８、２８１、２８３、２８９、または２９２のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）配列番号２５０、２５４、２５７、２６０、２６３、２６５、２６７、２７０、２７４、２７６、２７９、２８２、２８４、２９０、または２９３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）配列番号２５１、２５５、２７１、または２９４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、または４つの軽鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）をさらに含む。他の実施形態において、上述の抗ＭＩＣ抗体は、次の重鎖可変領域ＦＲ：ａ）配列番号２９５、２９９、３０３、３１５、３１９、３２３、３２５、３２９、３３１、３３３、３３９、または３４３のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１と、ｂ）配列番号２９６、３００、３０４、３１６、３２０、３２６、３４０、または３４４のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２と、ｃ）配列番号２９７、３０１、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１７、３２１、３２２、３２４、３２７、３３０、３３２、３３４、３４１、または３４５のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３と、ｄ）配列番号２９８、３０２、３１８、３２８、３４２、または３４６のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４と、をさらに含む。
【０２３７】
さらなる態様において、抗ＭＩＣ抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００２、ヒトＭＩＣＡ＊００４、及びヒトＭＩＣＢ＊００５に結合することができる。いくつかの実施形態において、抗ＭＩＣ抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８、ヒトＭＩＣＡ＊００２、ヒトＭＩＣＡ＊００４、及びヒトＭＩＣＢ＊００５の細胞外ドメインに結合することができる。いくつかの実施形態において、抗ＭＩＣ抗体は、ヒトＭＩＣＡ＊００８、ヒトＭＩＣＡ＊００２、ヒトＭＩＣＡ＊００４、及びヒトＭＩＣＢ＊００５のアルファ３ドメインに結合することができる。
【０２３８】
さらなる態様において、本発明は、本明細書に提供される抗ＭＩＣ抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、特定の実施形態において、本明細書に提供される抗ＭＩＣ抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
【０２３９】
本発明のさらなる態様において、上記の実施形態のいずれかによる抗ＭＩＣ抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態において、抗ＭＩＣ抗体は、抗体断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、一本鎖可変断片（ｓｃＦＶ）、及び（Ｆａｂ’）断片である。別の実施形態において、抗体は、完全長抗体、例えば、本明細書において定義される無傷ＩｇＧクラス抗体もしくはＩｇＧ１アイソタイプまたは他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【０２４０】
さらなる態様において、上記の実施形態のいずれかによる抗ＭＩＣ抗体は、以下のセクション１〜７に記載されるように、特徴のいずれかを、単独または組み合わせで組み込み得る。
【０２４１】
１．抗体親和性
特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
【０２４２】
一実施形態において、Ｋｄは、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一実施形態において、ＲＩＡは、目的の抗体及びその抗原のＦａｂバージョンを用いて行われる。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、非標識抗原の一連の滴定の存在下で、Ｆａｂを最低濃度の（１２５Ｉ）標識抗原と平衡させ、次いで、抗Ｆａｂ抗体をコーティングしたプレートで結合した抗体を捕捉することによって測定される（例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい）。アッセイのための条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍｌの捕捉用抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、続いて、室温（約２３℃）で２〜５時間、ＰＢＳ中２％（重量／体積）のウシ血清アルブミンによってブロッキングする。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭ［１２５Ｉ］−抗原を、目的とするＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）に記載の、抗ＶＥＧＦ抗体のＦａｂ−１２の評価と一致する）。次に、目的とするＦａｂを一晩インキュベートするが、このインキュベーションは、平衡が達成されることを確実にするために、より長い期間（例えば、約６５時間）継続し得る。その後、混合物を、室温でのインキュベーション（例えば、１時間）のため、捕捉プレートに移す。次いで、溶液を除去し、プレートをＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を付加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）上で１０分間、計数する。２０％以下の最大結合を付与する各Ｆａｂの濃度を競合結合アッセイにおける使用のために選択する。
【０２４３】
別の実施形態に従うと、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用するアッセイを、約１０の応答単位（ＲＵ）で、固定化された抗原ＣＭ５チップによって２５℃で実行する。一実施形態において、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）は、供給者の指示に従って、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化される。抗原をｐＨ４．８の１０ｍＭの酢酸ナトリウムによって５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）に希釈した後、５μｌ／分の流量で注射し、カップリングされたタンパク質の約１０応答単位（ＲＵ）を達成する。抗原の注射に続いて、１Ｍのエタノールアミンを注射して、未反応基をブロッキングする。動態測定のために、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を、２５℃の０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を有するＰＢＳ中に約２５μｌ／分の流量で注入する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、会合センサグラム及び解離センサグラムを同時に適合することによって、単純１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して計算する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として計算される。例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい。上記表面プラズモン共鳴アッセイによるオン速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、オン速度は、ストップトフローを備えた分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計で測定される、増加する抗原濃度の存在下、２５℃で、ｐＨ７．２のＰＢＳ中２０ｎＭの抗−抗原抗体（Ｆａｂ形態）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または減少を測定する蛍光消光技法を使用することによって決定することができる。
【０２４４】
２．抗体断片
特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに以下に記載される他の断片が含まれるが、これらに限定されない。特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照、またＷＯ  ９３／１６１８５、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号を参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加したインビボ半減期を有する、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
【０２４５】
ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１；Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。
【０２４６】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部、または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部を含む、抗体断片である。特定の実施形態において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照されたい）。
【０２４７】
抗体断片は、本明細書に記載されるように、無傷抗体のタンパク質消化、及び組換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはファージ）による産生を含むが、これらに限定されない、様々な技法によって作製され得る。
【０２４８】
３．キメラ抗体及びヒト化抗体
特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または非ヒト霊長類、例えばサルに由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスから変化した「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体には、その抗原結合断片が含まれる。
【０２４９】
特定の実施形態において、キメラ抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、非ヒト親抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減させるために、ヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはその一部）が非ヒト抗体に由来し、及びＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列に由来する１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体中のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を復元または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
【０２５０】
ヒト化抗体及びそれらの作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に概説されており、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号，同第７，５２７，７９１号，同第６，９８２，３２１号，及び同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフティングについて記載）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「表面再構成」について記載）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」について記載）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングへの「誘導選択」アプローチについて記載）にさらに記載されている。
【０２５１】
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域は、「ベスト−フィット」方法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖可変領域または重鎖可変領域の特定の下位群のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）、及びＦＲライブラリのスクリーニングから得られるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照されたい）を含むが、これらに限定されない。
【０２５２】
４．ヒト抗体
特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の種々の技法を使用して産生することができる。ヒト抗体は、概して、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載されている。
【０２５３】
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答して無傷ヒト抗体またはヒト可変領域を有する無傷抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製され得る。かかる動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、または染色体外に存在するかもしくは動物の染色体内にランダムに組み込まれている、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有する。かかるトランスジェニックマウスにおいて、内因性免疫グロブリン遺伝子座は一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照されたい。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４、ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載する米国特許第５，７７０，４２９号、Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許第７，０４１，８７０号、ならびにＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載する米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号も参照されたい。かかる動物により生成された無傷抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによりさらに修飾され得る。
【０２５４】
ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によっても作製され得る。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が説明されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい。）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成されるヒト抗体については、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）にも記載されている。さらなる方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生について記載）及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマについて記載）に記載の方法が挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）については、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５：９１（２００５）にも記載されている。
【０２５５】
ヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても生成され得る。次いで、かかる可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わせられ得る。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技法は、以下に記載される。
【０２５６】
５．ライブラリ由来抗体
本発明の抗体は、所望される活性（複数可）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、所望の結合特性を保有する抗体に関してかかるライブラリをスクリーニングするための様々な方法が当該技術分野で既知である。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説され、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）にさらに記載されている。
【０２５７】
特定のファージディスプレイ法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別個にクローニングされ、ファージライブラリ内でランダムに組換えられ、これはその後、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングされ得る。ファージは典型的には、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片のいずれかとして抗体断片をディスプレイする。免疫化源由来のライブラリは、ハイブリドーマの構築を必要とすることなく、高親和性抗体を免疫原に提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）に記載されるように、ナイーブレパートリーが（例えば、ヒトから）クローニングされて、免疫化することなく、広範な非自己抗原及び自己抗原に対する単一源の抗体を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されるように、幹細胞からの再編成されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して高度に可変的なＣＤＲ３領域をコードし、インビトロでの再編成を達成することによってナイーブライブラリを合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリを説明している特許公開には、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
【０２５８】
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体または抗体断片は、本明細書でヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
【０２５９】
６．多重特異性抗体
特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。特定の実施形態において、結合特異性の一方は、ＭＩＣへのものであり、他方は、任意の他の抗原へのものである。特定の実施形態において、二重特異性抗体は、ＭＩＣの２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体を使用して、ＭＩＣを発現する細胞に細胞傷害性薬剤を局所化することもできる。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製され得る。
【０２６０】
多重特異性抗体を作製するための技法としては、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３））、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯＪ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、及び「ノブインホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。多重特異性抗体はまた、静電的ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ  ｓｔｅｅｒｉｎｇ）効果を操作して抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製すること（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１号）、２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい）、「ダイアボディ」技術を使用して二重特異性抗体断片を作製すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい）、及び１本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）、ならびに例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載される三重特異性抗体を調製することによって、作製されてもよい。
【０２６１】
「オクトパス抗体」を含む３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体も、本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照されたい）。
【０２６２】
本明細書の抗体または断片には、ＭＩＣならびに別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用（Ｄｕａｌ  Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」も含まれる（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照されたい）。
【０２６３】
７．抗体バリアント
特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な修飾を導入することによるか、またはペプチド合成により調製され得る。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列内における、残基からの欠失、及び／または残基への挿入、及び／または残基の置換が含まれる。最終構築物に到達するために欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせを行うことができるが、最終構築物が所望の特性、例えば、抗原結合を保有することを条件とする。
【０２６４】
ａ）置換、挿入、及び欠失バリアント
特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体バリアントを提供する。置換変異原性のために対象となる部位は、ＨＶＲ及びＦＲを含む。保存的置換は、表１において「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１において「例示的な置換」の見出しの下に提供され、アミノ酸側鎖クラスを参照してさらに以下に記載される。アミノ酸置換が目的とする抗体に導入され、産生物が所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の低減、またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣの改善についてスクリーニングされ得る。
表１：アミノ酸置換。
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【０２６５】
アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従って群分けされ得る：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０２６６】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。
【０２６７】
１種類の置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、さらなる研究のために選択される結果として生じるバリアント（複数可）は、親抗体と比較して特定の生物学的特性の修飾（例えば、改善）を有し（例えば、親和性を増加し、免疫原性を低減し）、及び／または親抗体の実質的に保持された特定の生物学的特性を有する。例示的な置換型バリアントは、例えば、本明細書に記載の技法などのファージディスプレイに基づく親和性成熟技法を使用して好都合に生成され得る親和性成熟抗体である。簡潔には、１つ以上のＨＶＲ残基が変異され、バリアント抗体がファージ上にディスプレイされ、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０２６８】
改変（例えば、置換）は、ＨＶＲにおいて、例えば、抗体親和性を改善するために行われ得る。かかる改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を経るコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照されたい）、及び／または抗原と接触する残基で行われ得、結果として得られたバリアントＶＨまたはＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリの構築及びそこからの再選択による親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性変異誘発）のいずれかによって、成熟のために選択される可変遺伝子に多様性が導入される。次いで、二次ライブラリが作製される。次いで、ライブラリがスクリーニングされ、所望の親和性を有する任意の抗体バリアントを特定する。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４〜６つの残基）がランダム化されるＨＶＲ指向手法を伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発またはモデリングを使用して、特異的に特定され得る。特に、ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が標的化されることが多い。
【０２６９】
特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、かかる改変が抗体の抗原に結合する能力を実質的に低減しない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低減しない保存的改変（例えば、本明細書に提供されるような保存的置換）は、ＨＶＲ内で行われ得る。かかる改変は、例えば、ＨＶＲ内の抗原接触残基の外側であり得る。上で提供されるバリアントＶＨ及びＶＬ配列の特定の実施形態において、各ＨＶＲは、改変されていないか、または１つ、２つ、または３つ以下のアミノ酸置換を含有するかのいずれかである。
【０２７０】
変異誘発のための標的とされ得る抗体の残基または領域の特定のための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５に記載されるように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法において、残基または標的残基群（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕなどの荷電残基）が特定され、中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）により置き換えられて、抗体と抗原との相互作用に影響が及ぼされるかどうかを決定する。さらなる置換は、最初の置換に対する機能感受性を示すアミノ酸位置に導入され得る。あるいは、または加えて、抗体と抗原との間の接触点を特定するための抗原−抗体複合体の結晶構造。かかる接触残基及び隣接する残基が置換の候補として標的とされてもよく、または排除されてもよい。バリアントは、スクリーニングされて、それらが所望の特性を含有するかどうかが決定され得る。
【０２７１】
アミノ酸配列挿入には、長さが１残基から１００以上の残基を含有するポリペプチドの範囲であるアミノ末端及び／またはカルボキシル末端の融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入型バリアントには、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）またはポリペプチドへの抗体のＮ末端またはＣ末端の融合が挙げられ、これは抗体の血清半減期を増加させる。
【０２７２】
ｂ）グリコシル化バリアント
特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作製または除去されるようにアミノ酸配列を改変することによって好都合に達成され得る。
【０２７３】
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物が改変され得る。哺乳動物細胞によって産生された天然抗体は、典型的には、Ｎ結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に一般に結合される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖には、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「ステム」のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれ得る。いくつかの実施形態において、特定の特性が改善された抗体バリアントを作製するために、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾が行われ得る。
【０２７４】
一実施形態において、Ｆｃ領域に（直接的にまたは間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体バリアントが提供される。例えば、かかる抗体中のフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であり得る。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって測定される、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計に対する、Ａｓｎ２９７での糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ付番）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体内のわずかな配列変動に起因して、２９７位の約±３アミノ酸上流または下流、すなわち２９４〜３００位の間に位置してもよい。かかるフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、ＵＳ２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体バリアントに関する出版物の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することが可能な細胞株の例には、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）；米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８  Ａ１号，Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；及びＷＯ２００４／０５６３１２  Ａ１，Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，特に実施例１１）、及びアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）；及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）が挙げられる。
【０２７５】
例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃにより二分される、二分されたオリゴ糖を有する抗体バリアントがさらに提供される。かかる抗体バリアントは、低減されたフコシル化及び／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体バリアントの例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔ  ｅｔ  ａｌ．）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）、及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されている。Ｆｃ領域に結合しているオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体バリアントも提供される。かかる抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体バリアントは、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【０２７６】
ｃ）Ｆｃ領域バリアント
特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸修飾が、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによりＦｃ領域バリアントが生成され得る。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含み得る。
【０２７７】
特定の実施形態において、本発明は、全てではないがいくつかのエフェクター機能を保有し、それにより、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、さらに特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣなど）が不要であるか、または有害である用途に対して望ましい候補となる、抗体バリアントを企図する。インビトロ及び／またはインビボ細胞傷害性アッセイを行って、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／欠乏を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行って、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（したがってＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞がＦｃ（ＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、Ｆｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ、及びＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４ページの表３に要約される。目的とする分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照されたい）;及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：１４９９−１５０２（１９８５）；５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いてもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい）。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、または加えて、目的とする分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるものなどの動物モデルで評価されてもよい。Ｃ１ｑ結合アッセイを実行して、抗体がＣ１ｑに結合することができないためにＣＤＣ活性を欠くことを確認することもできる。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイが行われ得る（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０１：１０４５−１０５２（２００３）；及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ  １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアラ��ス／半減期決定もまた、当該技術分野において既知である方法を使用して実行することができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照されたい）。
【０２７８】
低下したエフェクター機能を有する抗体としては、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上の置換を有するものが挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ変異体としては、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７位のうちの２つ以上での置換を有するＦｃ変異体が挙げられる（米国特許第７，３３２，５８１号）。
【０２７９】
ＦｃＲへの結合が改善または低減された特定の抗体バリアントが記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；ＷＯ２００４／０５６３１２；及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたい。）
【０２８０】
特定の実施形態において、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／または３３４位（残基のＥＵ付番）での置換を有するＦｃ領域を含む。
【０２８１】
いくつかの実施形態において、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号，ＷＯ９９／５１６４２，及びＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、Ｆｃ領域でもたらされた改変の結果、改変された（すなわち、改善または低減いずれかの）Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）をもたらす。
【０２８２】
母体ＩｇＧの胎児への移入に関与する、半減期が増加し、かつ新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））については、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されている。それらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する、１つ以上の置換を内部に有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃバリアントは、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上での置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものを含む（米国特許第７，３７１，８２６号）。
【０２８３】
Ｆｃ領域バリアントの他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；及びＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。
【０２８４】
ｄ）システイン操作抗体バリアント
特定の実施形態において、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作された抗体、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂ」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態において、置換された残基は、抗体の接触可能な部位で生じる。それらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基がそれによって抗体の接触可能な部位に位置付けられ、それを使用して、抗体を他の部分、例えば、薬物部分またはリンカー−薬物部分に抱合して、本明細書にさらに記載される免疫抱合体を作製することができる。特定の実施形態において、以下の残基のうちの任意の１つ以上を、システイン：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ付番）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ付番）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ付番）で置換することができる。システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成され得る。
【０２８５】
ｅ）抗体誘導体
特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、容易に入手可能な追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾され得る。抗体の誘導体化に好適な部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにこれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造時に有利であり得る。ポリマーは、いずれの分子量のものであってもよく、分岐状であっても非分岐状であってもよい。抗体に結合したポリマーの数は異なり得、２つ以上のポリマーが結合している場合、それらは同じ分子であることも異なる分子であることもできる。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／または種類は、改善される抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が定義された条件下である療法に使用されるかなどを含むが、これらに限定されない、考慮事項に基づいて決定され得る。
【０２８６】
別の実施形態において、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る、抗体及び非タンパク質性部分の抱合体が提供される。一実施形態において、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０２：１１６００−１１６０５（２００５））。放射線は、いずれの波長のものであってもよく、通常の細胞を傷つけないが、抗体−非タンパク質性部分に近接する細胞が殺滅される温度まで非タンパク質性部分を加熱する波長を含むが、これらに限定されない。
【０２８７】
Ｂ．組換え方法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される、組換え方法及び組成物を使用して産生され得る。一実施形態において、本明細書に記載される抗ＭＩＣ抗体をコードする単離された核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのかかる実施形態において、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態において、宿主細胞は、真核性、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態において、抗ＭＩＣ抗体を作製する方法が提供され、方法は、上記で提供されるような、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することとを含む。
【０２８８】
抗ＭＩＣ抗体の組換え産生のために、例えば、上述のような、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／または発現のために、１つ以上のベクター中に挿入される。かかる核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定され得る。
【０２８９】
抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、本明細書に記載される原核生物細胞または真核生物細胞が含まれる。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合に、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉなどの細菌中で産生され得る。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現について記載する、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照されたい。）発現後、抗体は、可溶性画分中で細菌細胞ペーストから単離され得、さらに精製され得る。
【０２９０】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物は、抗体をコードするベクターにとって好適なクローニングまたは発現宿主であり、そのグリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌及び酵母株を含む。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
【０２９１】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために昆虫細胞と組み合わせて使用され得る、多数のバキュロウイルス株が特定されている。
【０２９２】
植物細胞培養物もまた、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載）を参照されたい。
【０２９３】
脊椎動物細胞もまた、宿主として使用することができる。例えば、懸濁液中で成長するように適合された哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例としては、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載される２９３または２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されるＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載されるＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、及びＦＳ４細胞が挙げられる。他の有用な哺乳動物宿主細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０））を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に好適な特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。
【０２９４】
Ｃ．アッセイ
本明細書に提供される抗ＭＩＣ抗体は、それらの物理的／化学的特性及び／または生物学的活性について、当該技術分野で既知の様々なアッセイによって、特定され得るか、スクリーニングされ得るか、または特徴付けられ得る。
【０２９５】
１．結合アッセイ及び他のアッセイ
一態様において、本発明の抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットなどの既知の方法によって、その抗原結合活性について試験される。
【０２９６】
別の態様において、競合アッセイを使用して、ＭＩＣへの結合について本明細書に記載される抗ＭＩＣ抗体のいずれかと競合する抗体を特定してもよい。特定の実施形態において、かかる競合する抗体は、本明細書に記載される抗ＭＩＣ抗体のいずれかによって結合される同じエピトープ（例えば、線状または立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供されている。
【０２９７】
例示的な競合アッセイにおいて、固定化されたＭＩＣは、ＭＩＣに結合する第１の標識抗体（例えば、本明細書に記載される抗ＭＩＣ抗体のいずれか）と、ＭＩＣへの結合について第１の抗体と競合するその能力について試験されている第２の非標識抗体とを含む溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在し得る。対照として、固定化されたＭＩＣを、第１の標識抗体を含むが第２の非標識抗体を含まない溶液中でインキュベートする。第１の抗体のＭＩＣへの結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰な非結合抗体を除去し、固定化されたＭＩＣと関連する標識の量を測定する。固定化されたＭＩＣと関連する標識の量が、対照試料と比較して試験試料中で実質的に低減される場合、それは、第２の抗体がＭＩＣへの結合について第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
【０２９８】
２．活性アッセイ
一態様において、生物学的活性を有するその抗ＭＩＣ抗体を特定するためのアッセイが提供される。生物学的活性は、例えば、ＭＩＣのシェディングを低減すること及び／または可溶性ＭＩＣのレベルを低減することを含み得る。かかる生物学的活性をインビボ及び／またはインビトロで有する抗体も提供される。
【０２９９】
特定の実施形態において、本発明の抗体は、かかる生物学的活性について試験される。いくつかの実施形態において、ＭＩＣのシェディングの低減は、抗体の存在または不在下でＭＩＣ発現細胞上の表面ＭＩＣのレベルをアッセイ及び比較することによって試験される。細胞表面ＭＩＣのレベルは、表面ポリペプチドを検出するために当業者に既知の定性的（例えば、免疫組織化学）または定量的（例えば、フローサイトメトリー）方法のいずれかを使用して検出することができる。例示的なアッセイは、ＷＯ２０１５／０８５２１０の実施例１４に記載されている。他の実施形態において、可溶性ＭＩＣのレベルの低減は、例えば、ＥＬＩＳＡを使用して抗体の存在または不在下でＭＩＣ発現細胞の培養培地に見られるＭＩＣのレベルをアッセイ及び比較することによって試験される。例示的なアッセイは、本明細書の実施例及びＷＯ２０１３／１１７６４７の実施例８に記載されている。
【０３００】
特定の実施形態において、ＭＩＣのシェディングは、本明細書に記載される抗体の不在下でのＭＩＣのシェディングと比較して、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％低減する。
【０３０１】
特定の実施形態において、可溶性ＭＩＣのレベルの低減は、本明細書に記載される抗体の不在下での可溶性ＭＩＣのレベルの低減と比較して、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％低減する。
【０３０２】
本明細書に記載される抗体についての目的の他の生物学的活性は、対象においてがんもしくは免疫関連疾患を治療もしくはその進行を遅延、及び／または免疫応答もしくは機能を増加、増強、もしくは刺激するための抗体の有効性を増強するであろう任意のものを含む。かかる生物学的活性は、ＮＫ及びＴ細胞の細胞溶解機能の増強、ＮＫＧ２Ｄ下方制御の阻害、インビボでＭＩＣの血清レベルを低減する能力、ならびに腫瘍成長の阻害を含み得る。これらの活性についてのアッセイは、当該技術分野において周知である。例示的なアッセイは、ＷＯ２０１５／０８５２１０に記載されている。特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体は、生物学的活性を、本明細書に記載される抗体の不在下での生物学的活性のレベルと比較して、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％増強する。
【０３０３】
Ｄ．免疫抱合体
本発明はまた、化学療法剤もしくは薬物、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、もしくは動物由来の酵素活性毒素、またはそれらの断片）、または放射性同位体などの１つ以上の細胞傷害性薬剤と抱合された本明細書における抗ＭＩＣ抗体を含む免疫抱合体を提供する。
【０３０４】
一実施形態において、免疫抱合体は、抗体が１つ以上の薬物に抱合された抗体−薬物抱合体（ＡＤＣ）であり、薬物としては、マイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、及び欧州特許第ＥＰ  ０  ４２５  ２３５  Ｂ１号を参照されたい）；モノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦなどのオーリスタチン（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）（米国特許第５，６３５，４８３号及び同第５，７８０，５８８号、ならびに同第７，４９８，２９８号を参照されたい）；ドラスタチン：カリケアマイシンまたはその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、及び同第５，８７７，２９６号；Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：３３３６−３３４２（１９９３）；ならびにＬｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：２９２５−２９２８（１９９８）を参照されたい）；ダウノマイシンまたはドキソルビシンなどのアントラサイクリン（Ｋｒａｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７−５２３（２００６）；Ｊｅｆｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １６：３５８−３６２（２００６）；Ｔｏｒｇｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７−７２１（２００５）；Ｎａｇｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７：８２９−８３４（２０００）；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２：１５２９−１５３２（２００２）；Ｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６−４３４３（２００２）；及び米国特許第６，６３０，５７９号を参照されたい）；メトトレキサート；ビンデシン；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセルなどのタキサン；トリコテセン；ならびにＣＣ１０６５を含むが、これらに限定されない。
【０３０５】
別の実施形態において、免疫抱合体は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンシンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンを含むがこれらに限定されない酵素活性毒素またはその断片に抱合された、本明細書に記載される抗体を含む。
【０３０６】
別の実施形態において、免疫抱合体は、放射性原子に抱合されて放射性抱合体を形成する、本明細書に記載される抗体を含む。放射性抱合体の産生には、様々な放射性同位体が利用可能である。例は、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体を含む。放射性抱合体が検出のために使用される場合、それは、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えば、ｔｃ９９ｍもしくはＩ１２３、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（別名、磁気共鳴画像法、ｍｒｉ）のためのスピン標識、例えば、この場合もやはりヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン、もしくは鉄を含み得る。
【０３０７】
抗体及び細胞傷害性薬剤の抱合体は、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ）、活性エステル（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン２，６−ジイソシアネート）、及びビス−活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）などの様々な二官能性タンパク質結合剤を使用して作製され得る。例えば、リシン免疫毒素を、Ｖｉｔｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製することができる。炭素−１４で標識された１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体への抱合のための例示的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。リンカーは、細胞内において細胞傷害性薬物の放出を促進する「切断可能リンカー」であってもよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１（１９９２）、米国特許第５，２０８，０２０号）を使用してもよい。
【０３０８】
本明細書の免疫抱合体またはＡＤＣは、（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａから）市販されている、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ならびにＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）安息香酸塩）を含むが、これらに限定されない架橋剤試薬で調製されるかかる抱合体を明示的に企図するが、これらに限定されない。
【０３０９】
Ｅ．診断及び検出のための方法及び組成物
特定の実施形態において、本明細書に提供される抗ＭＩＣ抗体のいずれも、生体試料中のＭＩＣの存在の検出に有用である。「検出すること」という用語は、本明細書で使用されるとき、定量または定性検出を包含する。特定の実施形態において、生体試料は、生検、摘出標本、または微細針吸引からの腫瘍の試料などの、細胞または組織を含む。いくつかの実施形態において、生体試料は、腹水、尿、血液、血漿、または血清である。
【０３１０】
一実施形態において、診断または検出方法において使用するための抗ＭＩＣ抗体が提供される。さらなる態様において、生体試料中のＭＩＣの存在を検出する方法が提供される。特定の実施形態において、方法は、抗ＭＩＣ抗体のＭＩＣへの結合を許容する条件下で生体試料を本明細書に記載の抗ＭＩＣ抗体と接触させることと、複合体が抗ＭＩＣ抗体とＭＩＣとの間に形成されたかを検出することと、を含む。かかる方法は、インビトロまたはインビボ方法であり得る。一実施形態において、例えば、ＭＩＣが患者の選択のためのバイオマーカーである場合、抗ＭＩＣ抗体を使用して、抗ＭＩＣ抗体での療法に適格な対象を選択する。本発明の抗体を使用して診断され得る例示的な障害には、上皮癌（例えば、黒色腫）などの、がんが含まれる。
【０３１１】
特定の実施形態において、標識された抗ＭＩＣ抗体が提供される。標識としては、直接検出される標識または部分（蛍光標識、発色団標識、電子密度の高い標識、化学発光標識、及び放射性標識など）、及び間接的に、例えば、酵素反応または分子相互作用により検出される酵素またはリガンドなどの部分が挙げられるが、これらに限定されない。例となる標識には、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、希土類キレートまたはフルオレセイン及びその誘導体などのフルオロフォア、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖質オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸塩デヒドロゲナーゼ、過酸化水素を用いて色素前駆体を酸化させる酵素、例えば、ＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、またはマイクロペルオキシダーゼとカップリングされた、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼなどの複素環式オキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定した遊離ラジカルなどが含まれるが、これらに限定されない。
【０３１２】
Ｆ．薬学的製剤及び組成物
本明細書に記載される抗ＭＩＣ抗体の薬学的製剤及び組成物は、所望の程度の純度を有するかかる抗体と、１つ以上の任意の薬学的に許容される担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））とを混合することによって、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製される。薬学的に許容される担体は一般に、レシピエントに対し、用いられる投薬量及び濃度で無毒であり、緩衝剤、例えば、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジン；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む、単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖類、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／または非イオン性界面活性剤、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含むが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質などの介在性薬物分散剤をさらに含む。ｒＨｕＰＨ２０を含む、特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
【０３１３】
例示的な凍結乾燥抗体製剤については、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体製剤には、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８号に記載されるものが含まれ、後者の製剤は、ヒスチジン−酢酸バッファを含む。
【０３１４】
本明細書における製剤はまた、治療される特定の適応症に必要な２つ以上の活性成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含有してもよい。例えば、追加の医薬品（その例は本明細書に提供される）をさらに提供することが望ましい場合がある。かかる活性成分は、意図される目的に有効な量で組み合わせて好適に存在する。
【０３１５】
活性成分は、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）中またはマクロエマルジョン中において、それぞれ、例えば、コアセルベーション技法によって、または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルに取り込まれ得る。かかる技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
【０３１６】
徐放性調製物が調製され得る。徐放性調製物の好適な例としては、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、これらのマトリックスは、成形物品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。
【０３１７】
インビボ投与に使用される製剤は一般に、滅菌される。滅菌は、例えば、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成され得る。
【０３１８】
Ｇ．治療方法及び組成物
本明細書に提供される抗ＭＩＣ抗体のいずれも、治療方法において使用することができる。
【０３１９】
一態様において、医薬品として使用するための抗ＭＩＣ抗体が提供される。さらなる態様において、がんもしくは免疫関連疾患（例えば、ＮＫＧ２Ｄリガンドと関連している免疫関連疾患、消散していない急性感染、慢性感染、腫瘍免疫）の治療もしくはその進行の遅延、または免疫応答もしくは機能の増加、増強、もしくは刺激に使用するための抗ＭＩＣ抗体が提供される。特定の実施形態において、治療方法に使用するための抗ＭＩＣ抗体が提供される。特定の実施形態において、本発明は、個体に有効量の抗ＭＩＣ抗体を投与することを含む、がんもしくは免疫関連疾患（例えば、ＮＫＧ２Ｄリガンドと関連している免疫関連疾患、消散していない急性感染、慢性感染、腫瘍免疫）を有するか、または免疫応答もしくは機能を増加、増強、もしくは刺激する必要がある個体を治療する方法に使用するための抗ＭＩＣ抗体を提供する。１つのかかる実施形態において、方法は、例えば、以下に記載されるように、個体に有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。さらなる実施形態において、本発明は、ＭＩＣのシェディングの低減及び／または可溶性ＭＩＣのレベルの低減に使用するための抗ＭＩＣ抗体を提供する。特定の実施形態において、本発明は、個体に有効量の抗ＭＩＣ抗体を投与して、ＭＩＣのシェディングを低減及び／または可溶性ＭＩＣのレベルを低減することを含む、個体においてＭＩＣのシェディングを低減及び／または可溶性ＭＩＣのレベルを低減する方法に使用するための抗ＭＩＣ抗体を提供する。上記の実施形態のいずれかによる「個体」は、好ましくはヒトである。
【０３２０】
さらなる態様において、本発明は、医薬品の製造または調製における抗ＭＩＣ抗体の使用を提供する。一実施形態において、医薬品は、がんもしくは免疫関連疾患（例えば、ＮＫＧ２Ｄリガンドと関連している免疫関連疾患、消散していない急性感染、慢性感染、腫瘍免疫）を治療もしくはその進行を遅延、または免疫応答もしくは機能を増加、増強、もしくは刺激するためのものである。さらなる実施形態において、医薬品は、がんもしくは免疫関連疾患（例えば、ＮＫＧ２Ｄリガンドと関連している免疫関連疾患、消散していない急性感染、慢性感染、腫瘍免疫）を有するか、または免疫応答もしくは機能を増加、増強、もしくは刺激する必要がある個体に、有効量の医薬品を投与することを含む、がんもしくは免疫関連疾患（例えば、ＮＫＧ２Ｄリガンドと関連している免疫関連疾患、消散していない急性感染、慢性感染、腫瘍免疫）を治療もしくはその進行を遅延、または免疫応答もしくは機能を増加、増強、もしくは刺激する方法において使用される。１つのかかる実施形態において、方法は、例えば、以下に記載されるように、個体に有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。さらなる実施形態において、医薬品は、ＭＩＣのシェディングを低減及び／または可溶性ＭＩＣのレベルを低減するためのものである。さらなる実施形態において、医薬品は、個体に有効量の医薬品を投与して、ＭＩＣのシェディングを低減及び／または可溶性ＭＩＣのレベルを低減することを含む、個体においてＭＩＣのシェディングを低減及び／または可溶性ＭＩＣのレベルを低減する方法において使用される。上記の実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【０３２１】
さらなる態様において、本発明は、がんもしくは免疫関連疾患（例えば、ＮＫＧ２Ｄリガンドと関連している免疫関連疾患、消散していない急性感染、慢性感染、腫瘍免疫）を治療もしくはその進行を遅延、または免疫応答もしくは機能を増加、増強、もしくは刺激するための方法を提供する。一実施形態において、方法は、がんもしくは免疫関連疾患（例えば、ＮＫＧ２Ｄリガンドと関連している免疫関連疾患、消散していない急性感染、慢性感染、腫瘍免疫）を有するか、または免疫応答もしくは機能を増加、増強、もしくは刺激する必要がある個体に、有効量の抗ＭＩＣ抗体を投与することを含む。１つのかかる実施形態において、方法は、以下に記載されるように、個体に有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。上記の実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【０３２２】
さらなる態様において、本発明は、個体においてＭＩＣのシェディングを低減及び／または可溶性ＭＩＣのレベルを低減するための方法を提供する。一実施形態において、方法は、個体に有効量のＭＩＣのシェディングを低減及び／または可溶性ＭＩＣのレベルを低減する抗ＭＩＣ抗体を投与することを含む。一実施形態において、「個体」は、ヒトである。
【０３２３】
上述の治療方法の実施形態において、がんは、任意の上皮癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉腫、メルケル細胞癌、または他の血液系悪性腫瘍である。
【０３２４】
さらなる態様において、本発明は、例えば、上記の治療方法のいずれかにおける使用のための、本明細書に提供される抗ＭＩＣ抗体のいずれかを含む薬学的製剤を提供する。一実施形態において、薬学的製剤は、本明細書に提供される抗ＭＩＣ抗体のうちのいずれかと薬学的に許容される担体とを含む。別の実施形態において、薬学的製剤は、本明細書に提供される抗ＭＩＣ抗体のうちのいずれかと、例えば、以下の併用療法セクションに記載される、少なくとも１つの追加の治療剤とを含む。
【０３２５】
本発明の抗体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、ならびに局所治療で所望の場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与され得る。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与を含む。投薬は、部分的には、投与が短時間であるか、または慢性的であるかに応じて、例えば、任意の好適な経路によるもの、例えば、静脈内注射または皮下注射などの注射によるものであり得る。単回または様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むがこれらに限定されない、様々な投薬スケジュールが本明細書で企図される。
【０３２６】
本発明の抗体は、良好な医療行為と一貫した様式で、製剤化され、投薬され、及び投与される。この文脈において検討する因子には、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個別の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療従事者に既知である他の因子が含まれる。抗体は、そうである必要はないが、任意に、問題の障害を予防または治療するために現在使用されている１つ以上の薬剤とともに製剤化される。かかる他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体の量、障害または治療の種類、及び上記で考察される他の要因に左右される。これらは、一般に、本明細書に記載のものと同じ投薬量及び投与経路で、または本明細書に記載の投薬量の約１〜９９％、または適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量及び任意の経路で使用される。
【０３２７】
疾患の予防または治療について、本発明の抗体の適切な投薬量は（単独で、または１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、治療される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体が予防目的または治療目的で投与されるか、以前の療法、患者の病歴及び抗体への応答、ならびに主治医の裁量に左右される。抗体は、一度に、または一連の治療にわたって患者に適切に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば、１回以上の別個の投与によるか、または連続注入によるかにかかわらず、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体が、患者への投与のための初期候補投薬量であり得る。１つの典型的な一日投薬量は、上記で言及した因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。数日以上にわたる反復投与について、状態に応じて、治療は、疾患の症状の所望される抑制が発生するまで、一般に持続される。抗体の１つの例示的な投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ（またはこれらの任意の組み合わせ）のうちの１つ以上の用量が、患者に投与され得る。かかる用量は、断続的に、例えば、毎週または３週間毎に（例えば、患者が約２〜約２０回、または例えば、約６回の用量の抗体を受けるように）投与されてもよい。最初のより高い負荷用量に続いて、１つ以上のより低い用量が投与され得る。しかしながら、他の投薬量レジメンが有用であり得る。この療法の進行は、従来の技法及び解析によって容易に監視される。
【０３２８】
上記の製剤または治療方法のうちのいずれも、抗ＭＩＣ抗体の代わりに、またはそれに加えて、本発明の免疫抱合体を使用して行われ得ることが理解される。
【０３２９】
併用療法
本発明の抗体は、療法において単独で、または他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明の抗体は、少なくとも１つの追加の治療剤と同時投与され得る。上記のかかる併用療法は、（同じまたは別個の製剤中に２つ以上の治療剤が含まれる）組み合わされた投与及び別個の投与を包含し、別個の投与の場合、本発明の抗体の投与は、追加の治療剤（複数可）の投与前、投与と同時に、及び／または投与後に行うことができる。一実施形態において、抗ＭＩＣ抗体の投与及び追加の治療剤の投与は、互いの約１カ月以内、または約１、２、もしくは３週間以内、または約１、２、３、４、５、もしくは６日以内に行われる。本発明の抗体は、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
【０３３０】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、化学療法または化学療法剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、放射線療法または放射線療法剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、標的療法または標的療法剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、免疫療法または免疫療法剤、例えば、モノクローナル抗体と併せて投与され得る。
【０３３１】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストと併せて投与され得る。ＰＤ−１軸結合アンタゴニストには、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストが含まれるが、これらに限定されない。「ＰＤ−１」の代替名には、ＣＤ２７９及びＳＬＥＢ２が含まれる。「ＰＤ−Ｌ１」の代替名には、Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−４、ＣＤ２７４、及びＢ７−Ｈが含まれる。「ＰＤ−Ｌ２」の代替名には、Ｂ７−ＤＣ、Ｂｔｄｃ、及びＣＤ２７３が含まれる。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、及びＰＤ−Ｌ２は、ヒトＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、及びＰＤ−Ｌ２である。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１のそのリガンド結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的な態様において、ＰＤ−１リガンド結合パートナーは、ＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２である。別の実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的な態様において、ＰＤ−Ｌ１結合パートナーは、ＰＤ−１及び／またはＢ７−１である。別の実施形態において、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２のその結合パートナー、例えば、抗ＰＤ−Ｌ２抗体またはイムノアドへシンへの結合を阻害する分子である。具体的な態様において、ＰＤ−Ｌ２結合パートナーは、ＰＤ−１である。アンタゴニストは、抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、またはオリゴペプチドであり得る。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体）である。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ、ＯＰＤＩＶＯ）、Ｍｅｒｃｋ  ３４７５（ＭＫ−３４７５、ペムブロリズマブ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、ＣＴ−０１１（ピジリズマブ）、ＭＥＤＩ−０６８０（ＡＭＰ−５１４）、ＰＤＲ００１、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ−１０８、及びＢＧＢ−Ａ３１７からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合したＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２の細胞外またはＰＤ−１結合部分を含むイムノアドヘシン）である。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＡＭＰ−２２４である。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブ）、ＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ）、ＭＤＸ−１１０５、及びＭＳＢ００１０７１８Ｃ（アベルマブ）からなる群から選択される。ＭＤＸ−１１０５、別名、ＢＭＳ−９３６５５９は、ＷＯ２００７／００５８７４に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０（それぞれ配列番号２０及び２１に示される重鎖及び軽鎖可変領域）は、ＷＯ２０１０／０７７６３４Ａ１に記載される抗ＰＤ−Ｌ１である。Ｍ���Ｘ−１１０６、別名、ＭＤＸ−１１０６−０４、ＯＮＯ−４５３８、ＢＭＳ−９３６５５８、またはニボルマブは、ＷＯ２００６／１２１１６８に記載される抗ＰＤ−１抗体である。Ｍｅｒｃｋ  ３４７５、別名、ＭＫ−３４７５、ＳＣＨ−９００４７５、またはペンブロリズマブは、ＷＯ２００９／１１４３３５に記載される抗ＰＤ−１抗体である。ＣＴ−０１１、別名、ｈＢＡＴ、ｈＢＡＴ−１、またはピジリズマブは、ＷＯ２００９／１０１６１１に記載される抗ＰＤ−１抗体である。ＡＭＰ−２２４、別名、Ｂ７−ＤＣＩｇは、ＷＯ２０１０／０２７８２７及びＷＯ２０１１／０６６３４２に記載されるＰＤ−Ｌ２−Ｆｃ融合可溶性受容体である。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ＭＤＸ−１１０６である。「ＭＤＸ−１１０６」の代替名には、ＭＤＸ−１  １０６−０４、ＯＮＯ−４５３８、ＢＭＳ−９３６５５８、またはニボルマブが含まれる。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ（ＣＡＳ登録番号：９４６４１４−９４−４）である。
【０３３２】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、活性化共刺激分子に対して指向されるアゴニストと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、活性化共刺激分子は、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＣＤ２８、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、またはＣＤ１２７を含み得る。いくつかの実施形態において、活性化共刺激分子に対して指向されるアゴニストは、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、またはＣＤ１２７に結合するアゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、阻害性共刺激分子に対して指向されるアンタゴニストと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、阻害性共刺激分子には、ＣＴＬＡ−４（別名、ＣＤ１５２）、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＩＤＯ、ＴＩＧＩＴ、ＭＩＣＡ／Ｂ、またはアルギナーゼが含まれ得る。いくつかの実施形態において、阻害性共刺激分子に対して指向されるアンタゴニストは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３（例えば、ＬＡＧ−３−ＩｇＧ融合タンパク質（ＩＭＰ３２１））、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＩＤＯ、ＴＩＧＩＴ、ＭＩＣＡ／Ｂ、またはアルギナーゼに結合するアンタゴニスト抗体である。
【０３３３】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＴＬＡ−４（別名、ＣＤ１５２）に対して指向されるアンタゴニスト、例えば、ブロッキング抗体と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、イピリムマブ（別名、ＭＤＸ−０１０、ＭＤＸ−１０１、またはＹｅｒｖｏｙ（登録商標））と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、トレメリムマブ（別名、チシリムマブまたはＣＰ−６７５，２０６）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、Ｂ７−Ｈ３（別名、ＣＤ２７６）に対して指向されるアンタゴニスト、例えば、ブロッキング抗体と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＭＧＡ２７１と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＴＧＦベータに対して指向されるアンタゴニスト、例えば、メテリムマブ（別名、ＣＡＴ−１９２）、フレソリムマブ（別名、ＧＣ１００８）、またはＬＹ２１５７２９９と併せて投与され得る。
【０３３４】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞またはＣＴＬ）の養子移入を含む治療と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＵＣＡＲＴ１９と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＷＴ１２８ｚと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＫＴＥ−Ｃ１９（Ｋｉｔｅ）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＴＬ０１９（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、優性陰性ＴＧＦベータ受容体、例えば、優性陰性ＴＧＦベータＩＩ型受容体を含むＴ細胞の養子移入を含む治療と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＨＥＲＣＲＥＥＭプロトコル（例えば、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  ＮＣＴ００８８９９５４を参照されたい）を含む治療と併せて投与され得る。
【０３３５】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＤ１９に対して指向されるアンタゴニストと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＭＯＲ００２０８と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＤ３８に対して指向されるアンタゴニストと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ダラツムマブと併せて投与され得る。
【０３３６】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＤ１３７（別名、ＴＮＦＲＳＦ９、４−１ＢＢ、またはＩＬＡ）に対して指向されるアゴニスト、例えば、活性化抗体と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ウレルマブ（別名、ＢＭＳ−６６３５１３）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＤ４０に対して指向されるアゴニスト、例えば、活性化抗体と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＰ−８７０８９３またはＲＯ７００９７８９と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＯＸ４０（別名、ＣＤ１３４）に対して指向されるアゴニスト、例えば、活性化抗体と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＤ２７に対して指向されるアゴニスト、例えば、活性化抗体と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＤＸ−１１２７（別名、バルリルマブ）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）に対して指向されるアンタゴニストと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、ＩＤＯアンタゴニストとともに、１−メチル−Ｄ−トリプトファン（別名、１−Ｄ−ＭＴ）がある。いくつかの実施形態において、ＩＤＯアンタゴニストは、ＷＯ２０１０／００５９５８（その内容は本明細書に記録によって明確に組み込まれる）に示されるＩＤＯアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ＩＤＯアンタゴニストは、（例えば、ＷＯ２０１０／００５９５８の実施例２３に記載される）４−（｛２−［（アミノスフホニル）アミノ］エチル｝アミノ）−Ｎ−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−Ｎ’−ヒドロキシ−１，２，５−オキサジアゾール−３−カルボキシイミドアミドである。いくつかの実施形態において、ＩＤＯアンタゴニストは
2019535250.tif 000003
である。
【０３３７】
いくつかの実施形態において、ＩＤＯアンタゴニストは、ＩＮＣＢ２４３６０である。いくつかの実施形態において、ＩＤＯアンタゴニストは、インドキシモド（１−メチル−トリプトファンのＤ異性体）である。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗体−薬物抱合体と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、抗体−薬物抱合体は、メルタンシンまたはモノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体−ＭＭＡＥ抱合体（別名、ＤＮＩＢ０６００Ａ、ＲＧ７５９９、またはリファスツズマブベドチン）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、トラスツズマブエムタンシン（別名、Ｔ−ＤＭ１、アド−トラスツズマブエムタンシン、またはＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗ＭＵＣ１６抗体−ＭＭＡＥ抱合体、ＤＭＵＣ５７５４Ａと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗ＭＵＣ１６抗体−ＭＭＡＥ抱合体、ＤＭＵＣ４０６４Ａと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、エンドセリンＢ受容体（ＥＤＮＢＲ）を標的とする抗体−薬物抱合体、例えば、ＭＭＡＥと抱合されたＥＤＮＢＲに対して指向される抗体と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ（Ｌｙ６Ｅ）を標的とする抗体−薬物抱合体、例えば、ＭＭＡＥと抱合されたＬｙ６Ｅに対して指向される抗体（別名、ＤＬＹＥ５９５３Ａ）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ポラツズマブベドチンと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＤ３０を標的とする抗体−薬物抱合体と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＡＤＣＥＴＲＩＳ（別名、ブレンツキシマブベドチン）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ポラツズマブベドチンと併せて投与され得る。
【０３３８】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、血管新生阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＶＥＧＦに対して指向される抗体、例えば、ＶＥＧＦ−Ａと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ベバシズマブ（別名、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、アンジオポエチン２（別名、Ａｎｇ２）に対して指向される抗体と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＭＥＤＩ３６１７と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＶＥＧＦＲ２に対して指向される抗体と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ラムシルマブと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、アフリベルセプトと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ｚｉｖ−アフリベルセプト（別名、ＶＥＧＦトラップまたはＺａｌｔｒａｐ（登録商標））と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＶＥＧＦ及びＡｎｇ２に対して指向される二重特異性抗体と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＲＧ７２２１（別名、バヌシズマブ）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、血管新生阻害剤と併せて、及びＰＤ−１軸結合アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ−１抗体などのＰＤ−１結合アンタゴニスト、抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体などのＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ベバシズマブ及びＰＤ−１軸結合アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ−１抗体などのＰＤ−１結合アンタゴニスト、抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体などのＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ベバシズマブ及びＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ、ＯＰＤＩＶＯ）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ベバシズマブ及びＭｅｒｃｋ  ３４７５（ＭＫ−３４７５、ペンブロリズマブ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ベバシズマブ及びＣＴ−０１１（ピジリズマブ）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ベバシズマブ及びＭＥＤＩ−０６８０（ＡＭＰ−５１４）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ベバシズマブ及びＰＤＲ００１と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ベバシズマブ及びＲＥ���Ｎ２８１０と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ベバシズマブ及びＢＧＢ−１０８と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ベバシズマブ及びＢＧＢ−Ａ３１７と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ベバシズマブ及びＹＷ２４３．５５．Ｓ７０と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ベバシズマブ及びＭＰＤＬ３２８０Ａと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ベバシズマブ及びＭＥＤＩ４７３６と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ベバシズマブ及びＭＤＸ−１１０５と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ベバシズマブ及びＭＳＢ００１０７１８Ｃ（アベルマブ）と併せて投与され得る。
【０３３９】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗新生物剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＳＦ−１Ｒ（別名、Ｍ−ＣＳＦＲまたはＣＤ１１５）を標的とする薬剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体（別名、ＩＭＣ−ＣＳ４またはＬＹ３０２２８５５）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体、ＲＧ７１５５（別名、ＲＯ５５０９５５４またはエマクツズマブ）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、インターフェロン、例えば、インターフェロンアルファまたはインターフェロンガンマと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ロフェロン−Ａ（別名、組換えインターフェロンアルファ−２ａ）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＧＭ−ＣＳＦ（別名、組換えヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ｒｈｕ  ＧＭ−ＣＳＦ、サルグラモスチム、またはＬｅｕｋｉｎｅ（登録商標））と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＩＬ−２（別名、アルデスロイキンまたはＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＩＬ−１２と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＩＬ２７と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＩＬ−１５と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＡＬＴ−８０３と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＤ２０を標的とする抗体と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、ＣＤ２０を標的とする抗体は、オビヌツズマブ（別名、ＧＡ１０１またはＧａｚｙｖａ（登録商標））またはリツキシマブである。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＧＩＴＲを標的とする抗体と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、ＧＩＴＲを標的とする抗体は、ＴＲＸ５１８である。いくつかの実施形態において、ＧＩＴＲを標的とする抗体は、ＭＫ０４１６６（Ｍｅｒｃｋ）である。
【０３４０】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）の阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、イブルチニブと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ１（ＩＤＨ１）及び／またはイソクエン酸デヒドロゲナーゼ２（ＩＤＨ２）の阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＡＧ−１２０（Ａｇｉｏｓ）と併せて投与され得る。
【０３４１】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、オビヌツズマブ及びＰＤ−１軸結合アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ−１抗体などのＰＤ−１結合アンタゴニスト、抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体などのＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト）と併せて投与され得る。
【０３４２】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、がんワクチンと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、がんワクチンは、ペプチドがんワクチンであり、これは、いくつかの実施形態では、個人化されたペプチドワクチンである。いくつかの実施形態において、ペプチドがんワクチンは、多価長ペプチド、多ペプチド、ペプチドカクテル、ハイブリッドペプチド、またはペプチドパルス樹状細胞ワクチンである（例えば、Ｙａｍａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ，１０４：１４−２１，２０１３を参照されたい）。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、アジュバントと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＴＬＲアゴニスト、例えば、Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ（別名、Ｈｉｌｔｏｎｏｌ（登録商標））、ＬＰＳ、ＭＰＬ、またはＣｐＧ  ＯＤＮを含む治療と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）アルファと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＩＬ−１と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＨＭＧＢ１と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＩＬ−１０アンタゴニストと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＩＬ−４アンタゴニストと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＩＬ−１３アンタゴニストと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＩＬ−１７アンタゴニストと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＨＶＥＭアンタゴニストと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＩＣＯＳアゴニストと併せて、例えば、ＩＣＯＳ−Ｌ、またはＩＣＯＳに対して指向されるアゴニスト抗体の投与により投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＸ３ＣＬ１を標的とする治療と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＸＣＬ９を標的とする治療と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＸＣＬ１０を標的とする治療と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＣＬ５を標的とする治療と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＬＦＡ−１またはＩＣＡＭ１アゴニストと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、セレクチンアゴニストと併せて投与され得る。
【０３４３】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、Ｂ−Ｒａｆの阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ベムラフェニブ（別名、Ｚｅｌｂｏｒａｆ（登録商標））と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ダブラフェニブ（別名、Ｔａｆｉｎｌａｒ（登録商標））と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、エンコラフェニブ（ＬＧＸ８１８）と併せて投与され得る。
【０３４４】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＥＧＦＲ阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、エルロチニブ（別名、Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＥＧＦＲ−Ｔ７９０Ｍの阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ゲフィチニブと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、アファチニブと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、セツキシマブ（別名、Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、パニツムマブ（別名、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標））と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ロシレチニブと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＡＺＤ９２９１と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＭＥＫ１（別名、ＭＡＰ２Ｋ１）及び／またはＭＥＫ２（別名、ＭＡＰ２Ｋ２）などのＭＥＫの阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、コビメチニブ（別名、ＧＤＣ−０９７３またはＸＬ−５１８）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、トラメチニブ（別名、Ｍｅｋｉｎｉｓｔ（登録商標））と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ビニメチニブと併せて投与され得る。
【０３４５】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、Ｂ−Ｒａｆの阻害剤（例えば、ベムラフェニブまたはダブラフェニブ）及びＭＥＫの阻害剤（例えば、ＭＥＫ１及び／またはＭＥＫ２（例えば、コビメチニブまたはトラメチニブ）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＥＲＫ（例えば、ＥＲＫ１／２）の阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＧＤＣ−０９９４と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、Ｂ−Ｒａｆの阻害剤、ＭＥＫの阻害剤、及びＥＲＫ１／２の阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＥＧＦＲの阻害剤、ＭＥＫの阻害剤、及びＥＲＫ１／２の阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、１つ以上のＭＡＰキナーゼ経路阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＫ１２７と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、Ｋ−Ｒａｓの阻害剤と併せて投与され得る。
【０３４６】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ｃ−Ｍｅｔの阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、オナルツズマブ（別名、ＭｅｔＭＡｂ）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）の阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＡＦ８０２（別名、ＣＨ５４２４８０２またはアレクチニブ）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、クリゾチニブと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、セリチニブと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）の阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ブパルリシブ（ＢＫＭ−１２０）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ピクチリシブ（別名、ＧＤＣ−０９４１）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ブパルリシブ（別名、ＢＫＭ−１２０）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ペリフォシン（別名、ＫＲＸ−０４０１）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）のデルタ選択的阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、イデラリシブ（別名、ＧＳ−１１０１またはＣＡＬ−１０１）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、タセリシブ（別名、ＧＤＣ−００３２）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＢＹＬ−７１９と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、Ａｋｔの阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＭＫ２２０６と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＧＳＫ６９０６９３と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、イパタセルチブ（別名、ＧＤＣ−００６８）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ｍＴＯＲの阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、シロリムス（別名、ラパマイシン）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、テムシロリムス（別名、ＣＣＩ−７７９またはＴｏｒｉｓｅｌ（登録商標））と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、エベロリムス（別名、ＲＡＤ００１）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、リダフォロリムス（別名、ＡＰ−２３５７３、ＭＫ−８６６９、またはデフォロリムス）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＯＳＩ−０２７と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＡＺＤ８０５５と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＩＮＫ１２８と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、二重ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＸＬ７６５と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＧＤＣ−０９８０と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＢＥＺ２３５（別名、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＢＧＴ２２６と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＧＳＫ２１２６４５８と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＰＦ−０４６９１５０２と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＰＦ−０５２１２３８４（別名、ＰＫＩ−５８７）と併せて投与され得る。
【０３４７】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、エストロゲン受容体を選択的に分解する薬剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＧＤＣ−０９２７と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＨＥＲ３の阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、デュリゴツズマブと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＬＳＤ１の阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＭＤＭ２の阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＢＣＬ２の阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ベネトクラクスと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＨＫ１の阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＧＤＣ−０５７５と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、活性化ヘッジホッグシグナル伝達経路の阻害剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＥＲＩＶＥＤＧＥと併せて投与され得る。
【０３４８】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、放射線療法と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ゲムシタビンと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ｎａｂ−パクリタキセル（ＡＢＲＡＸＡＮＥ）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、トラスツズマブと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＴＶＥＣと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＩＬ２７と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、シクロホスファミドと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、Ｔ細胞を腫瘍に動員する薬剤と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、リリルマブ（ＩＰＨ２１０２／ＢＭＳ−９８６０１５）と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、イデラリシブと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＤ３及びＣＤ２０を標的とする抗体と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＲＥＧＮ１９７９と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＣＤ３及びＣＤ１９を標的とする抗体と併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ブリナツモマブと併せて投与され得る。
【０３４９】
いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、腫瘍溶解性ウイルスと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、カルボプラチン及びｎａｂ−パクリタキセルと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、カルボプラチン及びパクリタキセルと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、シスプラチン及びペメトレキセドと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、シスプラチン及びゲムシタビンと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＦＯＬＦＯＸと併せて投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ＦＯＬＦＩＲＩと併せて投与され得る。
【０３５０】
上記のかかる併用療法は、（同じまたは別個の製剤中に２つ以上の治療剤が含まれる）組み合わされた投与及び別個の投与を包含し、別個の投与の場合、本明細書に提供される抗体の投与は、追加の治療剤及び／またはアジュバントの投与前、投与と同時に、及び／または投与後に行うことができる。本明細書に提供される抗体は、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
【０３５１】
Ｈ．製造物品
本発明の別の態様において、上記の障害の治療、予防、及び／または診断に有用な材料を含有する製造物品が提供される。製造物品は、容器と、容器上のまたは容器に関連するラベルまたは添付文書とを含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、それ自体で、または別の組成物との組み合わせで、状態の治療、予防、及び／または診断に有効である組成物を保持し、滅菌接触ポートを有し得る（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針によって穿孔可能な栓を有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本発明の抗体である。ラベルまたは添付文書は、組成物が、本明細書に記載の選択される状態を治療するために使用されることを示す。さらに、製造製品は、（ａ）本発明の抗体を含む組成物を内部に収容した第１の容器と、（ｂ）さらなる細胞傷害性薬剤、またはさもなければ治療剤を含む組成物を内部に収容した第２の容器とを含み得る。本発明のこの実施形態における製造物品は、組成物が特定の状態を治療するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含み得る。あるいは、または加えて、製造物品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝剤を含む第２の（または第３の）容器をさらに含み得る。それは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的観点及びユーザ観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
【０３５２】
上記の物品のいずれも、抗ＭＩＣ抗体の代わりに、またはそれに加えて、本発明の免疫抱合体を含み得ることが理解される。
【０３５３】
ＩＩＩ．エピトープマッピング方法
一態様において、本発明は、抗原上でのグリコシル化の導入が抗体結合をブロッキングし、抗原エピトープについての情報を提供し得るという出願人の発見に基づく。理論に縛られることを望むことなく、出願人は、ポリペプチドの特定のアミノ酸のグリコシル化は抗体結合を破壊することができ、したがって置換グリコシル化アミノ酸を含まないポリペプチドへの抗体の結合と比較したグリコシル化ポリペプチドへの抗体の結合の低減は、予め非グリコシル化したアミノ酸またはそれと構造的に近接した表面露出アミノ酸、例えば、１、２、３、４、または５オングストローム以内で抗体に接触可能なアミノ酸のうちの少なくとも１つが抗体のエピトープまたは接触アミノ酸の一部であることを示すと考える。いくつかの態様において、本明細書に記載される方法は、抗体のエピトープをマッピングすることに関する。他の態様において、本明細書に記載される方法は、抗体の接触アミノ酸を特定することに関する。
【０３５４】
いくつかの実施形態において、方法は、（ａ）ポリペプチドの非グリコシル化アミノ酸を置換して置換グリコシル化アミノ酸を含むグリコシル化ポリペプチドを生成することと、（ｂ）抗体がグリコシル化ポリペプチドに結合するかを決定することと、（ｃ）抗体のグリコシル化ポリペプチドへの結合が、抗体の、置換グリコシル化アミノ酸を含まないポリペプチドへの結合と比較して低減する場合、非グリコシル化アミノ酸または非グリコシル化アミノ酸の５オングストローム以内の表面露出アミノ酸のうちの少なくとも１つを、抗体のエピトープの一部または接触アミノ酸のうちの１つとして特定することと、を含む。
【０３５５】
いくつかの実施形態において、方法は、（ａ）ポリペプチドの非グリコシル化アミノ酸を置換して置換グリコシル化アミノ酸を含むグリコシル化ポリペプチドを生成することと、（ｂ）抗体がグリコシル化ポリペプチドに結合するかを決定することと、を含み、抗体のグリコシル化ポリペプチドへの結合が、抗体の、置換グリコシル化アミノ酸を含まないポリペプチドへの結合と比較して低減する場合、非グリコシル化アミノ酸または非グリコシル化アミノ酸の５オングストローム以内の表面露出アミノ酸のうちの少なくとも１つは、抗体のエピトープの一部または接触アミノ酸のうちの１つとして特定される。
【０３５６】
いくつかの実施形態において、方法は、抗体の、置換グリコシル化アミノ酸を含むグリコシル化ポリペプチドへの結合が、抗体の、置換グリコシル化アミノ酸を含まないポリペプチドへの結合と比較して低減する場合、非グリコシル化アミノ酸または非グリコシル化アミノ酸の５オングストローム以内の表面露出アミノ酸のうちの少なくとも１つを抗体のエピトープの一部または接触アミノ酸のうちの１つとして特定することを含み、グリコシル化ポリペプチドは、ポリペプチドの非グリコシル化アミノ酸を置換することにより生成される。
【０３５７】
本明細書に記載される方法を用いて、グリコシル化機構を有する組換え発現宿主において発現させることができる任意のポリペプチドのエピトープをマッピングまたは接触アミノ酸を特定することができる。ポリペプチドは、全長タンパク質、タンパク質の断片、及び／または発現及び折り畳みを促進するために別のドメイン融合したタンパク質、例えば、Ｆｃ領域であり得る。マッピングまたは特定されるエピトープまたは接触アミノ酸は、線状または立体構造であり得る。
【０３５８】
いくつかの実施形態において、ポリペプチドの非グリコシル化アミノ酸の置換は、ポリペプチドにグリコシル化部位を導入または作製することによって達成される。グリコシル化部位は、Ｎ結合グリコシル化、Ｏ結合グリコシル化、Ｃマンノシル化、及びグリピエーションを含むがこれらに限定されない、任意の形態のグリコシル化のためのものであり得る。真核生物において、Ｎ結合グリコシル化のためのグリコシル化部位は、コンセンサス配列（Ｎ−Ｘ−Ｓ／Ｔ（標準シークオン）、Ｎ−Ｘ−Ｃ、Ｎ−Ｇ、Ｎ−Ｘ−Ｖ（非標準シークオン）（Ｍｏｒｅｍｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １３，４４８−４６２（２０１２））、Ｘ＝Ｐを除く任意の残基）によって定義される。他の種類のグリコシル化について、グリコシル化部位を予測するのに生物情報科学ソフトウェアが使用され得る（例えば、Ｃａｒａｇｅａ  ｅｔ  ａｌ．ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ８，４３８（２００７））。部位特異的変異誘発を介してグリコシル化部位を操作するための方法は、当該技術分野で周知である。Ｎ結合グリコシル化部位の導入及びＳＤＳ−ＰＡＧＥによって測定されるＭＷの増加によるグリコシル化の確認は、Ｅｇｇｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８８，６９９−７０４（２０１４）に記載されている。方法は、Ｃｈａｎｄｒａｍｏｕｌｉ  ｅｔ  ａｌ．“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ＨＣＭＶ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｏｓｔｆｕｓｉｏｎ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｂｏｕｎｄ  ｔｏ  ａ  ｂｒｏａｄｌｙ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ”Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，ｉｎ  ｐｒｅｓｓにも記載されている。いくつかの実施形態において、グリコシル化に必要な変異の数を最小化するために、グリコシル化部位は部分グリコシル化モチーフの部位で導入される。Ｎ結合グリコシル化について、ポリペプチドの一次配列における部分グリコシル化モチーフは、アスパラギン残基の後にプロリンがない場合、またはセリン及びトレオニン残基の前にプロリンがない場合に存在する。
【０３５９】
本明細書に記載される方法における置換グリコシル化アミノ酸は、アミノ酸に結合することができ、抗体結合を破壊する任意の種類のグリカンを含み得る。例えば、Ｎ結合グリカン、Ｏ結合グリカン、Ｃ結合マンノース、または糖脂質。
【０３６０】
いくつかの実施形態において、非グリコシル化アミノ酸は、置換グリコシル化アミノ酸を含まないポリペプチドの表面上にある。結晶構造または相同性モデルなどの、ポリペプチドの構造を予測または可視化する任意の手段を使用して、表面露出位置を特定し、適切に折り畳まれた材料を確認することができる。相同性モデルは、ＳｗｉｓｓＭｏｄｅｌ、ＭＯＥ（ＣＣＧ）、Ｂｉｏｌｕｍｉｎａｔｅ（Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ）などのモデリングソフトウェアによって作製することができる。
【０３６１】
グリコシル化ポリペプチドへの抗体の結合は、ＥＬＩＳＡ及び本開示のアッセイセクションに記載される他の方法を含む、抗体とポリペプチドとの間の結合を検出するための当該技術分野において既知の任意の手段によって検出され得る。グリコシル化ポリペプチドへの抗体の結合は、置換グリコシル化アミノ酸を含まないポリペプチドへの抗体の結合と比較して、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％低減し得る。
【０３６２】
いくつかの実施形態において、抗体のエピトープマッピング及び接触アミノ酸を特定する方法は、非グリコシル化アミノ酸の置換グリコシル化アミノ酸での置換がポリペプチドの全体的な統合性または構造を変更しないことを確認するステップも含む。例示的なステップは、操作されたグリコシル化領域の外側に結合する対照抗体へのグリコシル化ポリペプチドの結合について試験することを含む。他の例示的なステップは、生物物理学的技法、例えば、示差走査蛍光測定（ＤＳＦ）（Ｎｉｅｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ  ２，２２１２−２２２１（２００７））、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）Ｍａｋｈａｔａｄｚｅ，Ｇ．Ｉ．（１９９８）Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ７：Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｂｙ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ，７．９．１−７．９．１４．Ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｂｙ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．．ｄｏｉ：１０．１００２／０４７１１４０８６４．ｐｓ０７０９ｓ１２／ｐｄｆ、円偏光二色性（ＣＤ）（Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ  １，２８７６−２８９０（２００６））を行って、ポリペプチドが非グリコシル化アミノ酸の置換グリコシル化アミノ酸での置換後に依然として適切に折り畳まれることを確認することを含む。他の実施形態において、抗体のエピトープマッピング及び接触アミノ酸を特定する方法は、例えば、質量分析アッセイ、ゲル−シフトアッセイ、またはウエスタンによって、非グリコシル化アミノ酸のグリコシル化アミノ酸での置換が成功したことを確認するステップも含む。いくつかの実施形態において、エピトープのマッピングまたは接触アミノ酸の特定の後に、エピトープを微細マッピングするためにアラニンスキャニングが使用される。
【０３６３】
抗体をビニングするための方法も提供される。方法は、上記の方法のいずれかによって第１の抗体のエピトープをマッピングまたは接触アミノ酸を特定することと、上記の方法のいずれかによって第２の抗体のエピトープをマッピングまたは接触アミノ酸を特定することと、第１の抗体及び第２の抗体が、同じエピトープまたは接触アミノ酸を有する場合、同じビンにあることを決定することと、を含む。
【０３６４】
エピトープが上記方法によってマッピングされるか、接触アミノ酸が上記方法によって特定される、本明細書に記載される抗体も提供される。
【０３６５】
本明細書は、当業者が本発明を実践することを可能にするのに十分なものであるとみなされる。本明細書に示され、かつ記載される修正に加えて、本発明の様々な修正が前述の記載から当業者に明らかになり、添付の特許請求の範囲内に含まれる。本明細書で引用される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、あらゆる目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０３６６】
本発明は、以下の実施例を参照することによってより完全に理解されるだろう。しかしながら、それらは、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書に記載される実施例及び実施形態が例証のみを目的とするものであり、それを考慮した様々な修正または変更が当業者に示唆され、本出願の趣旨及び範囲ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれるべきであることが理解される。
【０３６７】
実施例１：抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の生成
この実施例は、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を生成するために使用された戦略について記載する。
【０３６８】
レガシー免疫化プロトコル
ヒトＭＩＣＡに選択的に結合する抗体のパネルを、免疫原としてＦｃ（インハウス）に融合したＭＩＣＡを使用して生成した。１０匹のＢＡＬＢ／ｃマウスは各々、ＰＢＳ中２成分Ｒｉｂｉで再懸濁させたＭＩＣＡ−Ｆｃタンパク質を足蹠に注射された。全てのその後のブーストは、ＰＢＳ中Ｒｉｂｉで再懸濁させたＭＩＣＡ−Ｆｃタンパク質を含有した。９回のブーストを３〜４日毎に足蹠に注射した。
【０３６９】
ＧＨ免疫化プロトコル
ヒトＭＩＣＡに選択的に結合する抗体のパネルを、免疫原としてマウスＩｇＧ２ａ（インハウス）に融合したＭＩＣＡアルファ３ドメイン（対立遺伝子００２、００４、００８、及びＭＩＣＢ  ００５）を使用して生成した。５匹のＢＡＬＢ／ｃマウスは各々、ＰＢＳ中完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）で再懸濁させた５０ｕｇのＭＩＣＡタンパク質（対立遺伝子の混合物）をまず尾の根元に注射された。全てのその後のブーストは、ＰＢＳ中不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）で再懸濁させたＭＩＣＡ対立遺伝子の混合物を含有した。５回のブーストを２週間毎に異なる部位に注射した（飛節１６ｕｇ／マウス、ＩＰ８ｕｇ／マウス、皮下８ｕｇ／マウス、及び／または尾の根元８ｕｇ／マウス）。
【０３７０】
ＧＧ免疫化プロトコル
ヒトＭＩＣＡに選択的に結合する抗体のパネルを、免疫原としてマウスＩｇＧ２ａ（インハウス）に融合したＭＩＣＡアルファ３ドメイン（対立遺伝子００２、００４、００８、及びＭＩＣＢ  ００５）を使用して生成した。５匹のＢＡＬＢ／ｃマウスは各々、それぞれマウスあたりＰＢＳ中カクテルアジュバント（ポリＩ：Ｃ＋モノホスホリル脂質Ａ（ＭＢＬ）＋Ｒ８４８＋ＣｐＧからなるカクテル）で再懸濁させたｍｕＩｇＧ２ａタンパク質（対立遺伝子の混合物）に融合した６及び３ｕｇのＭＩＣＡ００２アルファ３ドメインをまず飛節及びＩＰに注射された。全てのその後のブーストは、ＰＢＳ中カクテルアジュバントで再懸濁させたｍｕＩｇＧ２ａ（対立遺伝子００４、００８、及びＭＩＣＢ００５）に融合した異なるＭＩＣＡα３ドメインの連続免疫化を含有した。１５回のブーストを３〜４日毎に異なる部位に注射した（飛節６ｕｇ／マウス、ＩＰ３ｕｇ／マウス、皮下３ｕｇ／マウス、及び／または尾の根元３ｕｇ／マウス）。
【０３７１】
ＨＺ免疫化プロトコル
ヒトＭＩＣＡに結合する抗体のパネルを、Ｆｌａｇタグ（インハウス）を有するＭＩＣＡ／Ｂ  ＥＣＤドメイン（対立遺伝子００２、００４、００８、及びＭＩＣＢ  ００５）を使用して生成した。５匹のＢＡＬＢ／ｃマウスは各々、ＰＢＳ中カクテルアジュバント（ポリＩ：Ｃ＋モノホスホリル脂質Ａ（ＭＢＬ）＋Ｒ８４８＋ＣｐＧ）で再懸濁させた５０ｕｇのＭＩＣＡ／Ｂタンパク質（対立遺伝子の混合物）をまず尾の根元に注射された。全てのその後のブーストは、ＰＢＳ中カクテルアジュバントで再懸濁させたＭＩＣＡ対立遺伝子の混合物を含有した。マウスは、１週間に１回、異なる部位に注射された（飛節１６ｕｇ／マウス、ＩＰ８ｕｇ／マウス、皮下８ｕｇ／マウス、及び／または尾の根元８ｕｇ／マウス）。
【０３７２】
ハイブリドーマ融合及び開発
上述の免疫化の全てについて、最終ブーストの３日後、ＥＬＩＳＡによって正の血清力価を示した動物を犠死させ、脾臓細胞の単一細胞懸濁液をマウス黒色腫細胞株Ｐ３Ｘ６３Ａｇ．Ｕ．１（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）と、電気融合（Ｃｙｔｏ  Ｐｕｌｓｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｇｌｅｎ  Ｂｕｒｎｉｅ，ＭＤ）を用いて融合した。融合ハイブリドーマ細胞を、非融合脾臓、膝窩節、または黒色腫細胞から、ＣｌｏｎａＣｅｌｌ（登録商標）ハイブリドーマ選択キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ，Ｃａｎａｄａ）からの培地Ｄにおいてヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）選択を用いて選択した。ハイブリドーマ細胞をＣｌｏｎａＣｅｌｌ（登録商標）ハイブリドーマ選択キットからの培地Ｅにおいて培養し、細胞培養上清をさらなる特徴付け及びスクリーニングに使用した。
【０３７３】
実施例２：結合アッセイ
この実施例は、ＥＬＩＳＡによって測定される、ヒトＭＩＣＡ／Ｂ対立遺伝子に結合するハイブリドーマクローンの特定について記載する。ＥＬＩＳＡに結合する抗体を、Ｂｉａｃｏｒｅを使用してさらに試験した。
【０３７４】
ＥＬＩＳＡ
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して、上述のようなハイブリドーマクローンが、ヒトＭＩＣＡ／Ｂ対立遺伝子に結合したモノクローナル抗体を産生していたかを決定した。Ｎｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｐプレートを、５０ｍＭの炭酸ナトリウムバッファ、ｐＨ９．６中の２ｕｇ／ｍｌのヒトＭＩＣＡ対立遺伝子００２、００４、００８、またはＭＩＣＢ  ００５アルファ３ドメイン（インハウス）で一晩４℃でコーティングした。マウス由来ハイブリドーマからの上清を、０．５％ＢＳＡ及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０を含有する１倍ＰＢＳバッファで１時間ブロッキング後にプレートに添加した。インキュベーション後、プレートを洗浄バッファ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０を含有する１倍ＰＢＳ）で複数回洗浄し、二次抗体（ＨＲＰと抱合したヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ、Ｓｉｇｍａ）を添加した。プレートを次いで、ＢｉｏＦＸ  ＴＭＢ  Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ  １  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅを添加する前に、再度洗浄バッファで複数回洗浄した。数分のインキュベーション後、反応を、ＴＭＢ  ＭｉｃｒｏｗｅｌｌのためのＢｉｏＦＸ停止試薬で停止した。プレートをＳｐｅｃｔｒａ  ＭＡＸ  ３４０プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）で、６３０ｎｍで読んだ。
【０３７５】
ＭＩＣＡ＊００８アルファ３構成体の配列を以下に提供する：
＞ＭＩＣＡ００８．ｍｕＩｇＧ２ａ（ａ３ドメイン太字）．注記：これは糖鎖バリアントにのみ使用された。
2019535250.tif 000004
【０３７６】
ＥＬＩＳＡ及びＢｉａｃｏｒｅに使用されるＨｉｓタグ付きＭＩＣＡタンパク質。
ＭＩＣＡ＊００８アルファ３構成体の配列を以下に提供する：
＞ＭＩＣＡ００８．Ｈｉｓ（ａ３ドメイン太字）
2019535250.tif 000005
ＭＩＣＡ＊００２アルファ３構成体の配列を以下に提供する：
＞ＭＩＣＡ００２．Ｈｉｓ（ａ３ドメイン太字）
2019535250.tif 000006
ＭＩＣＡ＊００４アルファ３構成体の配列を以下に提供する：
＞ＭＩＣＡ００４．Ｈｉｓ（ａ３ドメイン太字）
2019535250.tif 000007
ＭＩＣＢ＊００５アルファ３構成体の配列を以下に提供する：
＞ＭＩＣＢ００５．Ｈｉｓ（ａ３ドメイン太字）
2019535250.tif 000008
表２．抗ＭＩＣＡ抗体及びＭＩＣＡ対立遺伝子のアルファ３ドメインへの結合についてのＥＬＩＳＡデータ
2019535250.tif 000009
注記：ＥＬＩＳＡ値＞０．５は正符号で示される。ＥＬＩＳＡ値＜０．５は負符号で示される。
【０３７７】
Ｂｉａｃｏｒｅ
抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の結合動態を、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００機器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて測定した。抗マウスＦｃまたは抗ヒトＦｃ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、製造業者が提供するプロトコルを用いて、アミンに基づくカップリングを介してＣＭ５センサチップに固定した。抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を抗Ｆｃによって捕捉し、ＭＩＣＡ／Ｂ対立遺伝子は考慮しなかった。ヒトＭＩＣＡ  ００２、００４、００８、及びＭＩＣＢ  ００５アルファ３ドメイン（Ｈｉｓタグ付き、インハウス）への抗体結合を測定した。ＭＩＣＡ／Ｂの結合のセンサグラムは、２〜３分の注入時間、３０ｍｌ／分の流量、２５℃の温度、ならびに１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、及び０．００５％Ｔｗｅｅｎ２０のランニングバッファを用いて記録した。注入後、抗体からのアルファ３ドメインの解離をランニングバッファ中で１０分間監視した。表面を結合サイクル間に１０ｍＭグリシンＨＣｌ  ｐＨ１．７の６０ｕｌ注入で再生した。ランニングバッファのみを含有していたブランクを差し引いた後、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体へのＭＩＣＡ結合について観察されたセンサグラムを、製造業者によって供給されたソフトウェアで１：１ラングミュア結合モデルを使用して分析して、動態及び結合定数を計算した。１：１結合モデルを使用してデータを分析した。捕捉された抗ＭＩＣＡ抗体へのＭＩＣＡ対立遺伝子結合のセンサグラムを使用して、解離定数（Ｋｄ）を計算した。これらのデータからの動力学定数を表３に提供する。各クローンの最終ビン割り当ても示す（最終ビン割り当てに関するさらなる詳細について実施例６を参照されたい）。図３Ａ−図３Ｅは、各ビンのエピトープがＭＩＣＡ上に位置する場所を示す構造モデルを描写する。
表３：そのリガンドへの抗ＭＩＣＡ抗体結合の動力学定数
2019535250.tif 000010
注記：ＩＣ：モノクローナル抗体の良好な捕捉にかかわらず実験条件下で弱い結合が観察されたので不確定
【０３７８】
実施例３：Ｏｃｔｅｔ競合によるエピトープマッピング
方法
抗体エピトープビンを、Ｏｃｔｅｔ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）を使用して決定した。ＭＩＣＡアルファ３ドメイン（対立遺伝子００４、Ｈｉｓタグ）タンパク質を、ＥＺ−ＬＩＮＫ  ＮＨＳ−ＰＥＧ４  Ｂｉｏｔｉｎ（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用してビオチン化した。ストレプトアビジンバイオセンサチップ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）を使用して、ビオチン化ＭＩＣＡタンパク質を捕捉した（１０ｕｇ／ｍｌの溶液中１８０秒）。一次抗体（１０ｕｇ／ｍｌ）を３００秒間にわたって捕捉タンパク質と会合させる前に、ベースラインを６０秒間安定させた。５ｕｇ／ｍｌの二次抗体のパネルを次いで、抗原及び一次抗体複合体とさらに３００秒間にわたって会合させた。
【０３７９】
結果
シグナルを各結合事象について記録し、比較して、抗体ビンを決定した。第２の抗体の添加後の追加結合は、重複するエピトープビンを示さなかった。第２の抗体の添加後の追加結合は、別個のエピトープビンを示した。結果は３つのビンを示す。
表４．Ｏｃｔｅｔとの抗体競合によるエピトープマッピングは３つのビンを示す。
2019535250.tif 000011
注記：Ｎ．Ｄ．＝未決定。
【０３８０】
実施例４：グリコシル化部位操作によるエピトープマッピング
この実施例は、抗体結合をブロッキングし、抗原エピトープについての情報をもたらすための抗原上の単一操作Ｎ結合グリコシル化部位の使用を例証する。具体的には、この実施例は、ＭＩＣＡ＊００８の非グリコシル化アミノ酸を、Ｎ結合グリコシル化部位を導入するグリコシル化アスパラギンまたはトレオニン残基で置換し、グリコシル化アスパラギンを有するＭＩＣＡ＊００８  Ｆｃ融合体への抗体結合について試験することによるエピトープのマッピングを示す。単一または複数のＮ結合グリコシル化部位を導入して、異なる抗原領域をマスキングすることによって、ＭＩＣＡ＊００８を操作した。これらの構成体を使用して、様々な抗ＭＩＣＡ抗体のＭＩＣＡ＊００８抗原結合部位をプローブした。
【０３８１】
ヒト、マウス、ハエ、植物、及び酵母におけるアスパラギンの比較構造研究は、Ｎグリコシル化で示されるＮ−Ｘ−Ｓ／Ｔ、式中、Ｘ≠Ｐのモチーフにおける高い割合のアスパラギンがターン／ループ内に局在化し、タンパク質表面で溶媒曝露されていることを示した。グリコシル化部位操作バリアントは、これを考慮して設計され、ループ中またはターン近くの表面曝露残基に操作された（Ｌａｍ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｂａｓｅｄ  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎ−ｌｉｎｋｅｄ  Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  Ｓｉｔｅｓ  ｉｎ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｉｌｙ  Ｄｉｓｔａｎｔ  Ｅｕｋａｒｙｏｔｅｓ”Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（２０１３）１１（２）：９６−１０４）。
【０３８２】
方法
グリコシル化操作
ＭＩＣＡ＊００８中の単一の残基をＡｓｎまたはＴｈｒに変更して、Ｎ−Ｘ−Ｓ／Ｔ、式中、Ｘ≠Ｐの配列モチーフを有する新たなグリコシル化部位を導入した。個別の変異を有する７つの構成体及び、５つの操作されたＮ結合グリコシル化部位を含有した超グリコシル化構成体を作製した。ＭＩＣＡ＊００１の結晶構造（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ構造１Ｂ３Ｊ及び１ＨＹＲ）において表面曝露された残基のみを変異させた。これらのＭＩＣＡ＊００８操作グリコシル化部位バリアントをマウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃ融合体として発現させ、２９３Ｓ哺乳動物細胞において発現させ、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  Ｓｕｒｅによって精製した。
【０３８３】
下記のバリアントを作製した（シグナル配列を含むヒトＭＩＣＡ＊００８配列に対して付番する）：
Ｇｌｙｃｏ４：Ｅ２１５Ｎ．Ｇ２４３Ｎ．Ｈ２４８Ｎ．Ｒ２７９Ｎ
Ｇｌｙｃｏ１１：Ｒ２０２Ｎ
Ｇｌｙｃｏ１２：Ｅ２１５Ｎ
Ｇｌｙｃｏ１３：Ｉ２３６Ｔ
Ｇｌｙｃｏ１４：Ｇ２４３Ｎ
Ｇｌｙｃｏ１５：Ｈ２４８Ｎ
Ｇｌｙｃｏ１６：Ｒ２７９Ｎ
Ｇｌｙｃｏ１７：Ｎ２９８のＣ末端挿入．Ｇ２９９．Ｓ３００
【０３８４】
ＭＩＣＡ＊００８．α３．マウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃ融合タンパク質上のグリコシル化操作部位の配列を以下に提供する。太字で下線が引かれた変異を含み、マウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃ融合体の配列を含まないＭＩＣＡ＊００８．α３ドメインのみを示す。
＞ＭＩＣＡ．００８．ａ３．Ｔ２０４−Ｓ２９７．ｍＩｇＧ２ａ．野生型
ＴＶＰＰＭＶＮＶＴＲＳＥＡＳＥＧＮＩＴＶＴＣＲＡＳＳＦＹＰＲＮＩＩＬＴＷＲＱＤＧＶＳＬＳＨＤＴＱＱＷＧＤＶＬＰＤＧＮＧＴＹＱＴＷＶＡＴＲＩＣＲＧＥＥＱＲＦＴＣＹＭＥＨＳＧＮＨＳＴＨＰＶＰＳ（配列番号１９９）
＞ＭＩＣＡ．００８．ａ３．Ｔ２０４−Ｓ２９７．Ｅ２１５Ｎ．Ｇ２４３Ｎ．Ｈ２４８Ｎ．Ｒ２７９Ｎ．Ｎ２９８のＣ末端挿入．Ｇ２９９．Ｓ３００．ｍＩｇＧ２ａ．Ｇｌｙｃｏ４（超グリコシル化）
2019535250.tif 000012
＞ＭＩＣＡ．００８．ａ３．Ｒ２０２−Ｓ２９７．Ｒ２０２Ｎ  ｍＩｇＧ２ａ．Ｇｌｙｃｏ１１
2019535250.tif 000013
＞ＭＩＣＡ．００８．ａ３．Ｔ２０４−Ｓ２９７．Ｅ２１５Ｎ．ｍＩｇＧ２ａ．Ｇｌｙｃｏ１２
2019535250.tif 000014
＞ＭＩＣＡ．００８．ａ３．Ｔ２０４−Ｓ２９７．Ｉ２３６Ｔ．ｍＩｇＧ２ａ．Ｇｌｙｃｏ１３
2019535250.tif 000015
＞ＭＩＣＡ．００８．ａ３．Ｔ２０４−Ｓ２９７．Ｇ２４３Ｎ．ｍＩｇＧ２ａ．Ｇｌｙｃｏ１４
2019535250.tif 000016
＞ＭＩＣＡ．００８．ａ３．Ｔ２０４−Ｓ２９７．Ｈ２４８Ｎ．ｍＩｇＧ２ａ．Ｇｌｙｃｏ１５
2019535250.tif 000017
＞ＭＩＣＡ．００８．ａ３．Ｔ２０４−Ｓ２９７．Ｒ２７９Ｎ．ｍＩｇＧ２ａ．Ｇｌｙｃｏ１６
2019535250.tif 000018
＞ＭＩＣＡ．００８．ａ３．Ｔ２０４−Ｓ２９７．Ｎ２９８のＣ末端挿入．Ｇ２９９．Ｓ３００．ｍＩｇＧ２ａ．Ｇｌｙｃｏ１７
2019535250.tif 000019
【０３８５】
全ての４つのＭＩＣＡ／Ｂ対立遺伝子アルファ３ドメインに結合するハイブリドーマ由来クローンを、ＥＬＩＳＡによって、マウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃ融合体に融合したＭＩＣＡ＊００８アルファ３グリコシル化バリアントへの結合について試験した。Ｎｕｎｃ  ｍａｘｉｓｏｒｐプレートを２ｕｇ／ｍｌの前述のようなグリコシル化バリアントでコーティングした。クローニングし、組換え発現させたハイブリドーマモノクローナル抗体を、０．５％ＢＳＡ及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０を含有する１倍ＰＢＳバッファでのブロッキング後にプレートに添加した。インキュベーション後、プレートを洗浄バッファ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０を含有する１倍ＰＢＳ）で複数回洗浄し、二次抗体（ＨＲＰと抱合したヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ）を添加した。プレートを次いで、ＢｉｏＦＸ  ＴＭＢ  Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ  １  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅまたはテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質（ＫＰＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）のいずれかを添加する前に、再度洗浄バッファで複数回洗浄した。数分のインキュベーション後、反応を、それぞれＢｉｏＦＸ停止溶液またはＨＣｌの１Ｎ溶液で停止した。プレートをＳｐｅｃｔｒａ  ＭＡＸ  ３４０プレートリーダーで、それぞれ６３０または４５０ｎｍで読んだ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）。
【０３８６】
示差走査蛍光測定（ＤＳＦ）
示差走査蛍光測定（ＤＳＦ）は、タンパク質の熱安定性を測定するのに使用される方法である。この方法では、ＳＹＰＲＯ  Ｏｒａｎｇｅ蛍光染料がタンパク質と組み合わされ、ゆっくりと加熱される。タンパク質の折り畳みがほどけるとき、露出した疎水性表面は染料と結合し、蛍光シグナルをもたらす。蛍光シグナルは加熱プロセス中に各温度で測定され、最高シグナルはタンパク質融解物と相関付けられる。
【０３８７】
示差走査蛍光測定によるタンパク質安定性測定
Ｂｉｏｒａｄ  ＣＦＸ９６  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏｒａｄ，ＵＳＡ）をＳｙｐｒｏ  Ｏｒａｎｇｅ染料ストック（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，ＵＳＡ）の１：５００の最終希釈液で使用して、タンパク質安定性を決定した。ＰＢＳ中の２５μＬ試料（０．５ｍｇ／ｍｌ）の蛍光を２０〜１００℃（ステップ毎に０．２℃増分、１０秒保持）で記録した。ｍｕＩｇＧ２ａ融解物は、ＭＩＣＡ．ｍＩｇＧ２ａ  Ｇｌｙｃｏバリアントで見られる第２の推移またはピークに対応した（図４Ａ、図５）。ＭＩＣＡ融解物は、第１の推移またはピークに割り当てた（図４Ａ、図５）。
【０３８８】
ゲルシフトアッセイ
６ｕｇの各ＭＩＣＡ．ｍＩｇＧ２ａ  Ｇｌｙｃｏバリアントを、ＭＥＳ−ＳＤＳランニングバッファ（５０ｍＭのＭＥＳ、５０ｍＭのＴＲＩＳ  Ｂａｓｅ  ｐＨ  ７．３、０．１％ＳＤＳ、１ｍＭのＥＤＴＡ）を使用して４〜１２％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ  Ｇｅｌ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に供した。タンパク質バンドをＧｅｌＣｏｄｅ  Ｂｌｕｅ  Ｓａｆｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔａｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で染色した。Ｇｌｙｃｏ操作バリアントは、野生型（ＷＴ）ＭＩＣＡ＊００８．ｍＩｇＧ２ａと比較して上向きであるか、または異なるシフトを示し、それらが異なるグリコシル化状態を有することを示す。
【０３８９】
質量分析
５μｇの各タンパク質試料を、５０ｍＭの重炭酸アンモニウムｐＨ８で希釈し、１０ｍＭのジチオトレイトールで１時間３７℃で還元し、１０ｍＭのヨードアセトアミドで２０分間室温でアルキル化した。各試料を、一晩、トリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ）及びキモトリプシン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で、１：５０の酵素：基質比、３７℃で別々に消化した。ペプチド消化物を２％トリフルオロ酢酸でクエンチし、Ｃ１８ステージチップ清浄に供した。試料をオートサンプラーによって、７５μｍ×１００ｍｍカラム（ＢＥＨ、１．７μｍ、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ）に１μＬ／分の流量でＮａｎｏＡｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ）を用いて注入した。９８％溶媒Ａ（水＋０．１％ギ酸）から８０％溶媒Ｂ（アセトニトリル＋０．１％ギ酸）までの勾配を４０分にわたって適用した。試料をハイブリッドＬＴＱ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）へのナノスプレーイオン化によってオンラインで分析した。データをデータ依存モードで収集し、親イオンをＦＴＭＳにおいて分析し、ＬＴＱにおけるフラグメンテーション及び分析のために上位８つの最も豊富なイオンを選択した。タンデム質量分析データを、ＰｅｐＦｉｎｄｅｒソフトウェア（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して分析した。システインに対する固定カルバミドメチル化及びメチオニンに対する可変酸化を、２０ｐｐｍの前駆体質量許容差及び０．８Ｄａのフラグメントイオン許容差を有するタンパク質配列に対するデータベース検索に含めた。ソフトウェア内のＣＨＯ  Ｎ結合グリカンライブラリも、グリコシル化部位マッピング及び無標識定量化のためのデータベース検索に含めた。
【０３９０】
結果
グリコシル化バリアントへの結合の低減が観察された場合、潜在的なエピトープは、グリコシル化残基及び構造的にグリコシル化残基の５オングストローム以内である残基を含むと推定された。
【０３９１】
グリコシル化について見られる変動する幅及び長さ、ならびにさらにサイズ不確実性をもたらす高い柔軟性のために、１つのＮ結合グリコシル化がカバーすることができるサイズを予測するのは難しい。例えば、血漿リン脂質輸送タンパク質における６つのＮ−グリコシル化部位の各々での炭水化物のサイズは、質量分析によって測定されるように３．１４〜４．２ｋＤａの範囲であった（Ａｌｂｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ｓｉｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｎ−ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ，ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｌａｓｍａ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ“，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ（２００１）１８１４（７）：９０８−１１．）。しかしながら、２つのグリコシル化操作バリアントを比較する２つの抗体でのデータ及びＡｌａスキャニングデータは、構造的に操作グリコシル化部位におけるＡｓｎの５オングストローム以内の相互作用が有効なエピトープであり得ることを示唆する。これは、小さなデータセットに基づき、かつＭＩＣＡ＊００１構造を用いる構造予測である（ＰＤＢ  コード１ＨＹＲ）。
【０３９２】
以下に列挙されるものは、Ｐｙｍｏｌを使用して１ＨＹＲ構造に基づき各糖鎖改変バリアントの５Å以内であると予測されるアミノ酸残基である。両方のＰＤＢ構造１ＨＹＲ及び１Ｂ３Ｊに基づいていずれの接触可能な表面領域も有さないと予測された残基は含まれなかった。構造モデルにおけるＡｓｎへの目的のアミノ酸位置の変異は、この分析の結果を変更しなかった。
・Ｇｌｙｃｏ４バリアント（Ｅ２１５Ｎ．Ｇ２４３Ｎ．Ｈ２４８Ｎ．Ｒ２７９Ｎ）：Ａｒｇ２１３、Ｓｅｒ２１４、Ａｌａ２１６、Ｓｅｒ２１７、Ａｓｎ２２０、Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ｓｅｒ２４７、Ａｓｐ２４９、Ｔｈｒ２５０、Ｔｒｐ２５３、Ａｒｇ２７１、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、Ａｒｇ２７９、またはＴｈｒ２８１。
・Ｇｌｙｃｏ１２バリアント（Ｇｌｕ２１５）：Ａｒｇ２１３、Ｓｅｒ２１４、Ａｌａ２１６、Ｓｅｒ２１７、Ａｓｎ２２０、またはＡｒｇ２７１。
・Ｇｌｙｃｏ１４バリアント（Ｇｌｙ２４３）：Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ａｒｇ２７９、またはＴｈｒ２８１。
・Ｇｌｙｃｏ１５バリアント（Ｈｉｓ２４８）：Ｓｅｒ２４７、Ａｓｐ２４９、Ｔｈｒ２５０、またはＴｒｐ２５３。
・Ｇｌｙｃｏ１６バリアント（Ａｒｇ２７９）：Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｎ２７８、またはＴｈｒ２８１。
【０３９３】
この情報を使用して、潜在的なエピトープを特定した。例えば、Ｇｌｙｃｏ１２バリアントへの結合の低減が観察された場合、エピトープは、Ｇｌｕ２１５、Ａｒｇ２１３、Ｓｅｒ２１４、Ａｌａ２１６、Ｓｅｒ２１７、Ａｓｎ２２０、またはＡｒｇ２７１のうちの少なくとも１つを含むと推定される。
【０３９４】
グリコシル化変異体の適切な折り畳みを、示差走査蛍光測定（ＤＳＦ）によって確認した。図４Ａ及び図４Ｂは、全てのグリコシル化バリアントの融解曲線及びそれらの導関数を示す。Ｇｌｙｃｏ１２及びＧｌｙｃｏ１６は、ＤＳＦの開始時に多量の折り畳まれていない材料を有する。Ｇｌｙｃｏ４（超グリコシル化）ＭＩＣＡピークは右にシフトし、これがより安定であり、ｍＩｇＧ２ａ融解物のピークがＭＩＣＡ融解物をマスキングすることを示す。加えてこれは、他のＧｌｙｃｏバリアントと比較して、ＤＳＦの開始時に最低量の折り畳まれていない材料を有する。図５は、ＭＩＣＡ及びｍＩｇＧ２ａのＤＳＦ融解温度（Ｔｍ）値を示す。我々はＥＬＩＳＡによって正の結合を見ることができるので、Ｇｌｙｃｏ１２及びＧｌｙｃｏ１６はおそらく折り畳まれた種及び折り畳まれていない種の組み合わせを有し、材料のいくらかは折り畳まれていることを示す。Ｇｌｙｃｏ４（超グリコシル化）は、おそらくＷＴよりも安定である。ＭＩＣＡ＊００８  Ｇｌｙｃｏバリアントのグリコシル化は、図６においてゲルシフトによって確認される。Ｇｌｙｃｏバリアントの全ては、野生型（ＷＴ）ＭＩＣＡ＊００８．ｍＩｇＧ２ａよりも高いか、またはこれとは異なるシフトを有する。トリプシンペプチド質量分析を行って、ＭＩＣＡ＊００８アルファ３ドメインのグリコシル化バリアント上のグリコシル化を分析した。我々は、Ｇｌｙｃｏバリアント１１、１４、１５、または１６についてトリプシンペプチドのカバレッジを有さなかった（図３Ｄ）。しかしながら、我々は、Ｇｌｙｃｏ１２、１３、及び１７についてトリプシンペプチドを検出し、それらは全て、それらのＷＴ  ＭＩＣＡ＊００８トリプシンペプチド対応物と比較して増加したＮ結合グリコシル化を示した（図３Ｄ）。Ｇｌｙｃｏ１２についてのグリコシル化部位の付加によって、我々は、３８％グリコシル化及び１つの天然グリコシル化部位を有したＷＴペプチドと比較して、トリプシンペプチド上で＞９９％の総グリコシル化を観察した。Ｇｌｙｃｏ１３は、他の部位を有さなかったペプチドにおいてＮ結合グリコシル化部位を導入し、総グリコシル化が０から９９％となった。Ｇｌｙｃｏ１７についてのグリコシル化部位の付加によって、我々は、６８％グリコシル化及び１つの天然グリコシル化部位を有したＷＴペプチドと比較して、トリプシンペプチド上で８６％の総グリコシル化を観察した。
【０３９５】
これらの実験に基づき、抗体を８つのビンに分け、エピトープを含む残基を決定した。各ビンのエピトープがＭＩＣＡ上に位置する場所を示す構造モデルである、実施例５の後に位置する、表５及び図３Ａ〜図３Ｅを参照されたい。ビン１（３Ｃ９．１０）エピトープは、ＭＩＣＡの「底部」にマッピングする。ビン２（６Ｆ８、７Ｄ４、３２Ｄ２、３Ｅ１１、１Ｄ５、１５Ｆ１１）エピトープは、ＭＩＣＡの「底部及び前部」にマッピングする。ビン３（９Ｃ９．５．６、１Ｅ６．１．３、７Ａ３．１．９）エピトープは、ＭＩＣＡの「底部及び側部」にマッピングする。ビン４（６Ｅ１２．５）エピトープは、ＭＩＣＡの「側部」にマッピングする。ビン５（２０Ｇ１１）エピトープは、ＭＩＣＡの「前部」にマッピングする。ビン８（１２Ｈ１０及び１８Ｇ３）エピトープは、ＭＩＣＡの「底部及び前部」にマッピングする。
【０３９６】
実施例５：ＭＩＬＬ１−ＭＩＣＡ＊００８キメラを使用する６Ｅ１．１．１２及び２Ｅ５．２．３についてのエピトープのさらなる試験
方法
ＭＩＣＡ＊００８アルファ３ドメインを、ＮＣＢＩブラストを用いて非冗長性タンパク質データベースに対してブラストし、上位ヒットはマウスＭＩＬＬ１タンパク質であった。「背部」にあるエピトープＮＧＴＹＱＴを囲むＭＩＣＡ＊００８からの残基、及びベータ２マイクログロブリン結合部位がＭＩＬＬ１上で見られる界面における残基を、マウスＭＩＬＬ１配列上に移植した。これはＭＩＣＡの「背部」での結合についての情報を与えるための代替戦略として行った。
【０３９７】
ＭＩＬＬ１−ＭＩＣＡ＊００８キメラ．マウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃ融合タンパク質の配列を以下に提供する：
＞ＭＩＬＬ１−ＭＩＣＡキメラ．マウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃ融合
ＧＳＴＶＰＰＭＶＴＶＴＳＲＮＹＰＶＧＲＶＴＬＴＣＲＡＳＳＰＹＰＲＮＩＴＬＶＷＬＱＤＧＫＰＶＱＱＫＴＦＲＳＧＤＶＬＰＤＧＮＧＴＹＱＴＷＶＳＩＲＶＬＰＧＱＥＰＱＦＳＣＮＬＲＨＧＮＨＳＩＭＱＴＡＶＧＮＳＲＡＱＶＴＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ（配列番号２０８）
【０３９８】
図７Ａは、ＭＩＬＬ上に移植されたＭＩＣＡ＊００８残基を示す。図７Ｂは、ＭＩＬＬキメラの非ＭＩＣＡ＊００８残基を示す。
【０３９９】
結果
２つの抗体、６Ｅ１．１．１２及び２Ｅ５．２．３は、ＭＩＬＬ１−ＭＩＣＡ＊００８キメラタンパク質及びＭＩＣＡ＊００８の全てのグリコシル化部位操作バリアントに結合し、それらが抗原の「背面」上のエピトープに結合することを示す（ビン６）。以下の表５を参照されたい。図８は、ＭＩＬＬ１−ＭＩＣＡキメラに結合するこれらの抗体に基づいて可能なエピトープを黒色で示す。より濃い灰色の領域は、エピトープではない部位を示す。かかる部位は、グリコシル化部位マッピングに基づいて特定された。６Ｅ１．１．１２及び２Ｅ５．２．３は全ての４つの対立遺伝子に結合するので、それらはまたＭＩＣＡ００２、００４、００８、及びＭＩＣＢ００５の間の対立遺伝子の相違に基づいて特定された。モデルは、これらの抗体のエピトープが抗原の「背部及び上部」にあることを示す。黒色の残基は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＶａｌ２０５、Ｐｒｏ２０６、Ｍｅｔ２０８、Ｔｈｒ２１２、Ｇｌｙ２１９、Ｔｈｒ２２２、Ｔｈｒ２２４、Ａｒｇ２２６、Ｓｅｒ２２８、Ｔｙｒ２３１、Ｐｒｏ２３２、Ｇｌｎ２４１、Ａｓｐ２４２、Ｔｈｒ２５０、Ａｓｐ２５５とＧｌｙ２６２との間のアミノ酸、Ｔｙｒ２６４、Ｇｌｎ２６５、Ｔｒｐ２６７、Ａｒｇ２７１、Ｇｌｙ２７５、Ｇｌｕ２７７、Ｇｌｙ２８８、Ａｓｎ２８９、及びＨｉｓ２９０である。１３Ａ９抗体は、これがＭＩＬＬ１−ＭＩＣＡ＊００８キメラタンパク質及び、超グリコシル化バリアントＧｌｙｃｏ４を除く、ＭＩＣＡ＊００８の全てのグリコシル化部位操作バリアントに結合するという点で固有である（ビン７）。Ｅｌｉｓａ値はＧｌｙｃｏ１４について０．９であり、＞０．６５Ｅｌｉｓａカットオフがこれを正の結合として分類したが、この領域で結合が大幅に減少したことを示した。加えて、Ｇｌｙｃｏ１６のＥｌｉｓａ値は２．２であり、これは全て３．８または３．９のＥｌｉｓａ値を有した他のＧｌｙｃｏバリアントと比較していくらかの結合が減少したことも示す。したがって、１３Ａ９抗体は、ＭＩＣＡ＊００８の「前部」及び「背部」の両方でいくらかの結合を共有するようである。
表５．グリコシル化バリアント４及び１１−１７ならびにＭＩＬＬ１−ＭＩＣＡキメラへのＥＬＩＳＡ結合。
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2019535250.tif 000021
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【０４００】
表５において、ＥＬＩＳＡ値＞０．６５を正の結合として示す。最終ビン割り当ても示す。太字の残基はグリコシル化部位を示し、グリコシル化部位後に記載される太字ではない残基は５オングストローム以内である。エピトープは、グリコシル化残基の少なくとも１つまたはグリコシル化残基の５オングストローム以内の残基の１つを含むと推定される。
【０４０１】
実施例６：最終エピトープビン割り当て
Ｏｃｔｅｔ競合及びグリコシル化部位操作に基づく最終ビン割り当ては７つのビンを示す。
表６．最終ビン割り当て。
2019535250.tif 000023
注記：Ｎ．Ｄ．＝未決定。ＥＬＩＳＡ値＞０．５を示す。
【０４０２】
実施例７：アラニンスキャニング
この実施例は、ＭＩＣＡ＊００８対立遺伝子のアラニンスキャニングを使用して、６Ｆ８．７（最終ビン２）、７Ｄ４．６（最終ビン２）、２Ｅ５．２．３（最終ビン７）、及び１Ｄ５（最終ビン２）のエピトープをマッピングする。
【０４０３】
方法
ＭＩＣＡアラニンバリアントに結合する抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の結合動態を、Ｔ２００機器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて測定した。抗マウスＦｃ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、製造業者が提供するプロトコルを用いて、アミンに基づくカップリングを介してＣＭ５センサチップに固定した。ＭＩＣＡ＊００８．ｍＩｇＧ２ａアラニンバリアントは、Ｆａｂを考慮しないので、抗マウスＦｃ及び抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体によって捕捉した。ヒトＭＩＣＡ＊００８アルファ３ドメイン（ｍＩｇＧ２ａタグ付き、インハウス）へのＦａｂ結合を測定した。抗ＭＩＣＡ／Ｂ  Ｆａｂの結合のセンサグラムは、２分の注入時間、３０μＬ／分の流量、２５℃の温度、ならびに１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、及び０．００５％Ｔｗｅｅｎ２０のランニングバッファを用いて記録した。注入後、Ｆａｂのアルファ３ドメインからの解離をランニングバッファ中で５分間監視した。表面を結合サイクル間に１０ｍＭグリシンＨＣｌ  ｐＨ１．７の７０μＬ注入で再生した。ランニングバッファのみを含有していたブランクを差し引いた後、ＭＩＣＡへの抗ＭＩＣＡ／Ｂ  Ｆａｂ結合について観察されたセンサグラムを、製造業者によって供給されたソフトウェアで１：１ラングミュア結合モデルを使用して分析して、動態及び結合定数を計算した。捕捉されたＭＩＣＡ＊００８アラニンバリアントへの抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体結合のセンサグラムを使用して、解離定数（Ｋｄ）を計算した。Ｋｄ値を次いで野生型ＭＩＣＡ＊００８に対して正規化し、データを親和性の倍の減少として報告し、図９に提供する。
結果
図９は、アラニンスキャニングからの親和性の倍の減少を示す。３倍よりも大きい倍の減少は影付きである。前部における残基を有する２Ｅ５．２．３（最終ビン７）のＡｌａスキャニングは、抗体がＭＩＣの「前部」ではなく「背部」に結合することを示すＭＩＬＬ１−ＭＩＣキメラデータを確認する。図１０は、Ａｌａスキャニングデータが含まれる２Ｅ５．２．３エピトープを示す。黒色の残基は、ヒトＭＩＣＡ＊００８のＶａｌ２０５、Ｐｒｏ２０６、Ｍｅｔ２０８、Ｔｈｒ２１２、Ｇｌｙ２１９、Ｔｈｒ２２２、Ｔｈｒ２２４、Ａｒｇ２２６、Ｓｅｒ２２８、Ｔｙｒ２３１、Ｐｒｏ２３２、Ａｓｐ２４２、Ａｓｐ２５５とＧｌｙ２６２との間のアミノ酸、Ｔｙｒ２６４、Ｇｌｎ２６５、Ｔｒｐ２６７、及びＡｒｇ２７１である。図１１Ａは、グリコシル化操作及びＡｌａスキャニングによってマッピングされた６Ｆ８のエピトープを比較する。図１１Ｂは、グリコシル化操作及びＡｌａスキャニングによってマッピングされた７Ｄ４のエピトープを比較する。
【０４０４】
考察
グリコシル化操作によってマッピングされたエピトープは、抗体６Ｆ８、７Ｄ４、及び１Ｄ５のＡｌａスキャニングＢｉａｃｏｒｅ実験からの結果と非常によく一致した。６Ｆ８、７Ｄ４、及び１Ｄ５について、我々は、糖鎖改変残基（Ｇｌｙｃｏ１４からの）Ｇ２４３Ｎ及び（Ｇｌｙｃｏ１６からの）Ｒ２７９ＮをＭＩＣＡエピトープとして特定した。Ａｌａスキャニングから、我々は、Ｇ２４３の５Å以内の２つの残基及びＲ２７９の５Å以内の２つの残基を、６Ｆ８、７Ｄ４両方のエピトープとして特定した。１Ｄ５について、我々は、Ｇ２４３の５Å以内の４つの残基及びＲ２７９の５Å以内の１つの残基をエピトープとして特定した。我々は、Ｒ２７９を６Ｆ８、７Ｄ４、及び１Ｄ５のエピトープとして特定した。しかしながら、Ｇ２４３Ａは２Ｅ５．２．３対照及び他の抗体のＢｉａｃｏｒｅ実験において低いＲｍａｘを有し、タンパク質が誤って折り畳まれ、よってＡｌａスキャニングが情報を提供しないことを示した。それでも我々はＲ２４０及びＶ２４４、Ｇ２４３の５Å以内の残基を、６Ｆ８、７Ｄ４、及び１Ｄ５のエピトープとして特定することができた。アラニンバリアントに加えて、Ｇ２４３Ａ、Ｄ２４２Ａ、Ｌ２４６Ａ、Ｔ２８１Ａ、及びＨ２９３Ａは、不十分に折り畳まれたＭＩＣＡ＊００８タンパク質のために評価することができなかった。
【０４０５】
ＥＬＩＳＡを使用する糖鎖改変は、結合に重要である抗原表面上の領域を特定するための迅速な方法である。グリコシル化でカバーすることができる領域には制限があり得るが、それは抗原エピトープ情報を得るための迅速で容易な方法である。抗原をＡｌａスキャニングすることは、エピトープについての非常に詳細な情報をもたらすことができるが、それは多くの構成体を必要とし、そのいくつかは不十分に折り畳まれる場合があり、Ｂｉａｃｏｒｅを使用してさらに時間がかかる。巨大タンパク質または多ドメインタンパク質のエピトープをマッピングする場合、これは特に面倒である。この場合、抗原のグリコシル化操作は、全てのＡｌａバリアントまたは別個の抗原ドメインを発現する必要なく、抗原の結合ドメインまたは領域を特定するのに特に有用である。抗体への結合に重要である結合ドメインまたは領域が特定されると、次いで表面露出残基のより小さなサブセットに対してＡｌａスキャニングを行うことができる。
【０４０６】
実施例８：ＭＩＣＡシェディング阻害及び干渉アッセイ
抗ＭＩＣ抗体を、ＭＩＣＡ＊００４及びＭＩＣＡ＊００８シェディング細胞株からのＭＩＣシェディング阻害について試験した。
【０４０７】
方法
ＭＩＣＡ＊００４及びＭＩＣＢ＊００５対立遺伝子を分析するために、肺癌細胞株ＨＣＣ１５３４（ＵＴＳＷ）を使用した。ＭＩＣＡ＊００８について、黒色腫細胞株ＭＥＬ−ＪＵＳＯ（ＤＳＭＺ）を使用した。真正の細胞シェディング阻害を試験するために、ＭＩＣの細胞分泌に対する抗体の効果を反映する試料及びＭＩＣ  ＥＬＩＳＡアッセイへの抗体干渉を反映する試料を分析した。簡潔に、細胞をＴ１５０フラスコ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）において少なくとも２４時間（解凍後）、１０％ＦＢＳ及び２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）が補足されたＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。細胞は、細胞密度が７０〜８０％コンフルエントに到達したとき採取し、２５０，０００細胞／ｍｌの濃度で培養培地に再懸濁させた。４０マイクロリットルの細胞懸濁液（合計１０，０００細胞）を３８４ウェルポリスチレン組織培養プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）の各ウェルに添加した。干渉アッセイのための上清（ｓｕｐ）としての役割を果たすように、追加のプレートに同数の細胞を播種した。
【０４０８】
組み合わせ阻害のための抗体調製物
抗体（ｍＩｇＧ２ａ、ＣＨＯ由来）を、最高濃度について培養培地中４０ｕｇ／ｍＬ（４倍濃度）に対して正規化し、次いで４倍、７点希釈スキームで連続希釈した。希釈４倍抗体を１：１比（最終２０ｕｇ／ｍＬ［２倍］各Ａｂ濃度）のチェッカー盤様式（水平／垂直）で組み合わせた。
【０４０９】
濃度−効果分析のための抗体調製物
抗体（ｈＩｇＧ１）を、最高濃度について培養培地中２０ｕｇ／ｍＬ（２倍濃度）に対して正規化し、次いで４倍、８点希釈スキームで連続希釈した。
【０４１０】
シェディング阻害アッセイの構築
４０ｕＬの２倍抗体試料を、ウェルあたり１０，０００細胞を含有する細胞培養プレートに添加し、１０ｕｇ／ｍＬ（１倍）の最終最高濃度で８０ｕＬの体積をもたらした。任意の残ったウェルは、対照としての役割を果たすように添加された４０ｕＬの培地（最終体積８０ｕＬ）を有した。試料を３７Ｃ／５％ＣＯ２でインキュベートした。インキュベーションの２４時間後、細胞培養上清を３８４ウェルのディープウェルポリプロピレンブロック（Ｇｒｅｉｎｅｒ）に採取し、その後の分析のために−８０Ｃで凍結した（または同じ日に分析した）。干渉上清について、培養培地は、プールするためにリザーバーに採取し、また凍結した。
【０４１１】
ＭＩＣ  ＥＬＩＳＡアッセイ
ＥＬＩＳＡプレートを、ＭＩＣＡ＊００４及びＭＩＣＡ＊００８について抗ＭＩＣＡ  ＡＭＯ１（ＭＢＬ）またはＭＩＣＢ＊００５について抗ＭＩＣＢ  ２３６５１１（Ｒ＆Ｄ）でコーティングした。一晩インキュベーション後、試料を３回洗浄し、カゼインブロッキングバッファ（Ｓｉｇｍａ）を使用してブロッキングした。阻害試料分析のために、ｓｕｐ試料をアッセイの日に解凍し（または採取直後に使用し）、次いで試料バッファ（０．５％ＢＳＡ、１０ｐｐｍプロクリン、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．２５％ＣＨＡＰＳ、５ｍＭのＥＤＴＡ、０．３５ＭのＮａＣｌ、１０ｐｐｍプロクリンを含むＰＢＳ  ７．４）中で希釈し、ＥＬＩＳＡプレートに添加した。干渉試料分析のために、プールされた条件培地は、試験抗体が添加され、穏やかに撹拌しながら室温で少なくとも１時間インキュベートした。抗体添加培地を次いでＥＬＩＳＡプレートに添加した。連続希釈された組換えＭＩＣタンパク質も、（ｓｕｐとは無関係の）プレートに添加して、試料定量化のための標準曲線を構築した。
【０４１２】
プレートを次いで密封し、穏やかに撹拌しながら室温で２時間インキュベートした。使用される一次抗体は次のとおりであった：ＭＩＣＡについてＢｉｏ−８Ｃ５．６（インハウスＧｅｎｅｎｔｅｃｈ）：図１３Ａ〜図１３Ｃ、Ｂｉｏ−６Ｄ４（ＭＢＬ）：図１５Ａ〜図１５Ｂ、及び表７、ＭＩＣＡについてＢｉｏ−８Ｃ５．６（インハウスＧｅｎｅｎｔｅｃｈ）：図１６Ａ〜図１６Ｃ、及び表８〜表１０、ならびにＭＩＣＢアッセイについてＢｉｏ−７Ｅ３（インハウスＧｅｎｅｎｔｅｃｈ）（図１３Ａ〜図１３Ｃ、図１５Ａ〜図１５Ｃ、図１６Ａ〜図１６Ｃ、表８〜表１０。これらの抗体を、Ａｓｓａｙ  Ｄｉｌｕｅｎｔ（ＰＢＳ  ｐＨ７．４、０．５％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、１０ｐｐｍプロクリン）中で希釈し、５０ｕｇ／ｍＬの非特異的マウスＩｇＧ（Ｅｑｕｉｔｅｃｈ−Ｂｉｏ）と１時間室温でインキュベートした。試料インキュベーション後、プレートを６回洗浄し、２５ｕＬの一次抗体を添加した。プレートを次いで穏やかに撹拌しながら室温で１時間インキュベートした。インキュベーション後、ストレプトアビジンＰｏｌｙ−ＨＲＰ８０（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ）をユニバーサルカゼイン希釈剤（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ）中で９０ｎｇ／ｍＬまで希釈した。プレートを６回洗浄し、２５ｕＬの希釈ストレプトアビジンＰｏｌｙ−ＨＲＰ８０を各ウェルに添加し、穏やかに撹拌しながら室温で１時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを６回洗浄し、２５ｕＬのＴＭＢ（Ｍｏｓｓ）を各ウェルに添加し、穏やかに撹拌しながら１５分間インキュベートした。２５ｕＬの１Ｍリン酸を次いで各ウェルに添加し、ＥＬＩＳＡプレートを４５０／６２０ｎｍ波長で読んだ。
【０４１３】
データ分析方法
ＯＤを、標準材料の５パラメータ曲線あてはめ（１／Ｙ重み付け）を使用して処理して、対応する対立遺伝子標準を使用する各試料中の可溶性ＭＩＣＡ／Ｂ（ｓＭＩＣ）の量を定量化した。二重反復試料を一緒に平均し、全ての未処置試料をその特定のプレートについて平均した。各処置試料の阻害パーセントは、１−（処置試料中のｓＭＩＣ）／（未処置試料中のｓＭＩＣ平均）として定義された。
【０４１４】
干渉試料を同じ方法で処理した。抗体がＭＩＣＡ／ＭＩＣＢ定量化に干渉した場合、抗体添加条件培地中のＭＩＣＡ／ＭＩＣＢ濃度は未処置条件培地（対照）から顕著に逸脱する。ＭＩＣＡ／ＭＩＣＢ量が対照よりも高い場合、それは正の干渉として定義された。ＭＩＣＡ／ＭＩＣＢ量が対照よりも低い場合、それは負の干渉として定義された。
【０４１５】
結果
結果を表７に提供する。ＭＩＣＡ  ００８対立遺伝子について、最終ビン９及び２、続いてビン５及び７中の抗体は最高最大阻害％値を有し、最低ＥＣ５０値はビン２及び９において見られる。最終ビン１及び３中の抗体は、しかしながら、ＭＩＣＡ００８対立遺伝子の不十分なシェディング阻害を示す。このシェディングをブロッキングできないことは、抗体の低親和性によるものであり得る。ＭＩＣＡ＊００４対立遺伝子について、最終ビン２、９、５、７、続いてビン８及び６中の抗体は最高最大阻害％値を示し、最低ＥＣ５０値はビン２及び９において見られる。ＭＩＣＢ  ００５対立遺伝子について、より小さいセットのデータが入手可能であるが、ビン８、続いてビン７は最高最大阻害％値を有し、最低ＥＣ５０値はビン９、２、５、及び８において見られる。
【０４１６】
ＨＣＣ１５３４細胞におけるＭＩＣＡ＊００４シェディング阻害を図１３Ａに示す。単独の１Ｄ５または１３Ａ９によるシェディングの最大阻害は約６０％であり、６Ｅ１によるシェディングの最大阻害は約５０％であった。１Ｄ５と１３Ａ９とを組み合わせることは、相加または相乗効果を示さなかった。１Ｄ５及び６Ｅ１の組み合わせは、しかしながら、試料中のｓＭＩＣの量をバックグラウンドと比較して約１０％さらに低下し、微小の相加／相乗効果を示した。同様に、１３Ａ９及び６Ｅ１の組み合わせも、シェディング阻害を増強した。
【０４１７】
ＭＥＬ−ＪＵＳＯ細胞におけるＭＩＣＡ＊００８シェディング阻害を図１３Ｂに示す。単独の１Ｄ５によるシェディングの最大阻害は約７０〜７５％であり、単独の１３Ａ９によるシェディングの最大阻害は約４０％であり、６Ｅ１による最大阻害は約３５〜５０％であった。１Ｄ５及び１３Ａ９が組み合わされた場合、シェディング阻害において相加または相乗効果はなかった。１Ｄ５の活性は一般に、１３Ａ９の存在下で維持された。１Ｄ５及び６Ｅ１の組み合わせは、しかしながら、試料中のｓＭＩＣの量を約５〜１０％さらに低下し、微小の相加／相乗効果を示した。同様に、１３Ａ９及び６Ｅ１の組み合わせは、シェディング阻害の５〜１０％増加を示した。
【０４１８】
ＨＣＣ１５３４細胞におけるＭＩＣＢ＊００５シェディング阻害を図１３Ｃに示す。単独の１Ｄ５によるシェディングの最大阻害は約５０％であり、１３Ａ９による最大阻害は７５％に到達し、６Ｅ１によるシェディングの最大阻害は約４５〜５０％であった。１Ｄ５及び１３Ａ９を１０ｕｇ／ｍｌで組み合わせることは５３％のシェディング阻害を示すのみであったので、１３Ａ９の強いシェディング阻害は１Ｄ５の添加によって減少した。加えて、シェディング阻害において相加または相乗効果はなかった。１Ｄ５及び６Ｅ１の組み合わせは、しかしながら、シェディング阻害を約２０〜３０％顕著に増強し、相加／相乗効果を示した。６Ｅ１と１３Ａ９との組み合わせは、相加または相乗効果を示さなかった。
表７：ＥＣ５０及び最大阻害パーセント値。
2019535250.tif 000024
注記：灰色で強調されたデータは、ＨＥＫ２９３細胞の代わりにＣＨＯから精製された抗ＭＩＣＡ抗体を使用して、別の日に実施された。
【０４１９】
アッセイ干渉を、抗体を異なる濃度で希釈し、次いでそれらを組み合わせ、ＨＣＣ１５３４またはＭＥＬ−ＪＵＳＯ細胞培養上清と＞１時間インキュベートし、続いてシェディングされたＭＩＣＡ／ＭＩＣＢの定量化を行うことによって試験した。抗体がＭＩＣＡ／ＭＩＣＢ定量化に干渉した場合、ＭＩＣＡ／ＭＩＣＢ濃度は抗体なし対照から顕著に逸脱する。ＭＩＣＡ／ＭＩＣＢ量が対照よりも高い場合、これは正の干渉である（正の回復％／負の阻害％をもたらし、場合によっては活性をマスキングする）。ＭＩＣＡ／ＭＩＣＢ量が対照よりも低い場合、これは負の干渉である（正の阻害％／偽陽性をもたらす）。正及び負の両方の干渉が、変動する程度で観察された（表８及び図１５Ａ〜図１５Ｂ）。潜在的にはＨＥＫ２９３宿主細胞からの共精製ＭＩＣＡの存在のために、特定の抗体について高濃度でいくらかの正の干渉があった（表８、図１５Ａ〜図１５Ｂ、及び図１６Ａ〜図１６Ｃ）。よって、列挙された抗体からのシェディング阻害活性は、アッセイ干渉アーチファクトによるものではないようであった。
【０４２０】
ＣＨＯから精製された抗ＭＩＣＡ抗体が使用された場合、共精製ＭＩＣＡは存在しなかった。ｍＩｇＧ２ａ  ＣＨＯ由来材料が使用されたので、観察された唯一の顕著な干渉は負であり、場合によっては生物学的メカニズムにおいて真に発生していたものよりも強力な活性をもたらした。ＨＣＣ１５３４細胞におけるＭＩＣＡ＊００４アッセイ干渉を図１６Ａに示す。全ての抗体について、干渉は阻害よりも低く、したがって、抗体はシェディングを積極的に阻害し、結果は単にアッセイ干渉からのアーチファクトではなかった。１Ｄ５及び１３Ａ９の組み合わせについて、いくらかの干渉（バックグラウンドの約２５〜３５％超）がほとんどの試料にわたって観察され、より低い抗体濃度でわずかな低減があった。この干渉は、単一抗体で観察された。１Ｄ５及び６Ｅ１の組み合わせについて、高濃度の６Ｅ１でいくらか（適量の１Ｄ５で最高）の干渉（バックグラウンドの約２０〜３５％超）があり、この干渉は６Ｅ１で薄められた。この干渉は、単一抗体では顕著なレベルで観察されなかった。１３Ａ９及び６Ｅ１の組み合わせについて、いくらかの抗体干渉（バックグラウンドの約１０〜１５％超）が高濃度の１３Ａ９及び６Ｅ１で観察され、６Ｅ１と組み合わされた１３Ａ９よりも顕著な影響を有するようであった６Ｅ１干渉で、薄まるようであった。
【０４２１】
ＭＥＬ−ＪＵＳＯ細胞におけるＭＩＣＡ＊００８アッセイ干渉を図１６Ｂに示す。有意な抗体干渉は任意の抗体によっていずれの対立遺伝子に対しても観察されず、したがって、任意の効果は主に生物学的であった。
【０４２２】
ＨＣＣ１５３４細胞におけるＭＩＣＢ＊００５アッセイ干渉を図１６Ｃに示す。１Ｄ５及び１３Ａ９からいくらかの微小の干渉（２０〜３０％阻害）があった。干渉は、組み合わされた抗体のより高い濃度で、より少なかった。したがって、１３Ａ９の活性のほとんどは生物学的であり、１Ｄ５の活性の多くは干渉である。単独の１Ｄ５または６Ｅ１から最小限の干渉があったが、組み合わされた場合、約３０〜４０％阻害があり、したがって、観察された活性のいくらかは部分的に干渉によるものである。６Ｅ１及び１３Ａ９の組み合わせでは、組み合わせ干渉は明確な滴定傾向に従わなかった。観察されたほとんどの干渉は約２５〜３０％であったので、活性の多くは真の阻害であると決定された。
表８：ＭＩＣＡ／Ｂ干渉。
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注記：灰色で強調されたデータは、ＨＥＫ２９３細胞の代わりにＣＨＯから精製された抗ＭＩＣＡ抗体を使用して、別の日に実施された。
【０４２３】
低干渉アッセイ様式（ＭＩＣＡについてＡＭＯ１／８Ｃ５及びＭＩＣＢについて２３６５１１／７Ｅ３）を使用するｓＭＩＣシェディング阻害活性に対する抗ＭＩＣ抗体の比較の要約を表９に提供する。
表９：ＭＩＣ対立遺伝子にわたる抗ＭＩＣ抗体のシェディング阻害
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【０４２４】
低干渉アッセイ様式（ＭＩＣＡについてＡＭＯ１／８Ｃ５及びＭＩＣＢについて２３６５１１／７Ｅ３）を使用する条件培地に対する抗ＭＩＣ抗体の干渉の比較の要約を表１０に提供する。
表１０：ＭＩＣ対立遺伝子にわたる抗ＭＩＣ抗体の干渉
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【０４２５】
表９及び表１０に示されるように、抗ＭＩＣ抗体１Ｄ５、１３Ａ９、及び１５Ｆ１１は全て、全ての対立遺伝子上のＰＡＮＣ−１、ＨＣＣ１５３４、及びＭＥＬ−ＪＵＳＯに対する干渉レベルを上回るシェディング阻害活性を示した。抗ＭＩＣ抗体６Ｅ１は、ＨＣＣ１５３４及びＭＥＬ−ＪＵＳＯに対する干渉を上回るシェディング阻害活性を示すが、ＰＡＮＣ−１に対する非干渉活性を示さない。１Ｄ５及び１５Ｆ１１はＭＩＣＡ＊００４及びＭＩＣＢ＊００８対立遺伝子に対する優れたシェディング阻害を示し、１３Ａ９は対立遺伝子ＭＩＣＡ＊００２及びＭＩＣＢ＊００５に対する優れたシェディング阻害を示した。
【０４２６】
実施例９：抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体の親和性及びシェディング阻害特性
この実施例は、ＭＩＣエピトープと抗ＭＩＣＡ／Ｂクローンの親和性及びシェディング阻害特性との間の関係を分析する。ＨＺキャンペーンからのアルファ３ドメインに結合する抗ＭＩＣＡ／Ｂクローン及び早期キャンペーンからの選択されたクローンを、結合、抗体ビン、及びシェディングの阻害について試験した。ビンをこのクローンのセットに基づいて割り当てた。
【０４２７】
Ｗａｓａｔｃｈビニング方法
９６×９６アレイベースＳＰＲイメージングシステム（Ｃａｒｔｅｒｒａ  ＵＳＡ）を使用して、モノクローナル抗体のパネルをエピトープビニングする。精製されたモノクローナルハイブリドーマ抗体を、１０ｍＭの酢酸ナトリウムバッファｐＨ４．５中で１０ｕｇ／ｍｌで希釈した。アミンカップリングを使用し、抗体を、Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  Ｆｌｏｗ  Ｍｉｃｒｏｓｐｏｔｔｅｒ（Ｃａｒｔｅｒｒａ，ＵＳＡ）を使用するＳＰＲセンサプリズムＣＭＤ  ２００Ｍチップ（ＸａｎＴｅｃ  Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃｓ，Ｇｅｒｍａｎｙ）上に直接固定化して、抗体のアレイを作製した。ビニング分析について、ＩＢＩＳ  ＭＸ９６  ＳＰＲｉ（Ｃａｒｔｅｒｒａ  ＵＳＡ）を使用して、固定化抗体への結合を評価した。実験を、２５℃で、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、及び０．００５％Ｔｗｅｅｎ  ２０（ＨＢＳ−ＴＥ）のランニングバッファ中で行った。抗原をまず４分間１００ｎＭで注入し、続いてＨＢＳ−ＴＥのランニングバッファ中１０ｕｇ／ｍｌで精製抗体の第２の４分注入を行った。表面をサイクル間に１０ｍＭのグリシンｐＨ２．０で再生した。結合データを、Ｗａｓａｔｃｈビニングソフトウェアツールを使用して処理した。
【０４２８】
結果
合計９６個の抗ＭＩＣＡ／Ｂクローンは、ＥＬＩＳＡスクリーン（データ示さず）によって、ＭＩＣＡ対立遺伝子＊００２、＊００４、及び００８、ならびにＭＩＣＢ００５のＥＣＤ及びアルファ３ドメインを結合することが見出された。＞０．５のＥＬＩＳＡ値を「結合」とみなした。これらのクローンを次いで、ＢｉａｃｏｒｅによってＭＩＣＡ及びＭＩＣＢのアルファ３ドメイン版への結合について試験し、ＭＩＣＡ＊００８アルファ３ドメインへの親和性値＜／＝１０ｎＭでの結合を示した５２個のクローンを選択した（図１７）。次に、これらの５２個の抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体をＭＩＣＡ＊００８のシェディング阻害％について試験した（図１８Ａ）。これらの抗体はＭＩＣＡ＊００８に十分に結合するが（＜／＝１０ｎＭ）、それらはＭＩＣＡ＊００８のシェディングを１％〜８１％阻害する。この大きな範囲をさらに詳細に分析し、６個の抗体は、ＭＩＣＡ＊００８の１〜２０％シェディング阻害、７個の抗体は２１〜４０％、２６個の抗体は４１〜６０％、１３個の抗体は６１〜８１％を示した。２６個の抗ＭＩＣＡ抗体はＭＩＣＡ＊００８シェディングを＞／＝５０％阻害し、３個の抗体はシェディングを＞／＝７５％阻害した。
【０４２９】
抗ＭＩＣＡ抗体のより良好なシェディング阻害特性の原因となる決定因子を理解するために、シェディング阻害と親和性との間の相関を分析した。ＭＩＣＡ＊００８の親和性（ＫＤ）及びＭＩＣＡ＊００８のシェディング阻害％を５２個の抗ＭＩＣＡ抗体についてプロットした（図１８Ｂ）。このデータは、ＭＩＣＡ＊００８親和性とシェディング阻害％との間の相関を示さなかった。次に、親和性とＭＩＣＡ＊００８上の特定のエピトープとの間の相関を試験した。Ｗａｓａｔｃｈを使用してビニング実験を行い、５２個の抗ＭＩＣＡ抗体のセットについての３つの固有のエピトープビンを決定した（図１９Ａ）。ビン１及びビン３は固有であったが、ビン２はビン１及びビン３とのいくらかの重複を有した。ビン１は、１Ｄ５と同様に結合した抗体を含有し、ビン３は、６Ｅ１．１．１２と同様の結合を有した抗体を含有した。ＭＩＣＡ＊００８  Ｗａｓａｔｃｈエピトープビンをプロットし、ＭＩＣＡ抗体の結合親和性と比較した（図１９Ｂ）。ビン１は０．５〜８．４ｎＭの親和性範囲を有する３３個の抗ＭＩＣＡ抗体を有し、ビン２は２．１ｎＭ〜１０ｎＭの親和性範囲を有する４個の抗ＭＩＣＡ抗体を有し、ビン３は０．４７〜６．８ｎＭの親和性範囲を有する１５個の抗ＭＩＣＡ抗体を有した。Ｗａｓａｔｃｈは３つの別個のＭＩＣＡ＊００８エピトープビンを決定したが、これらのビン（特にビン１及び３）内での親和性範囲は類似し、親和性とエピトープビンとの間の相関を欠くことを示した。
【０４３０】
最後に、５２個の抗ＭＩＣＡ抗体について特定のＭＩＣＡ＊００８エピトープへのシェディング阻害の相関を分析した。ＷａｓａｔｃｈによるＭＩＣＡ＊００８エピトープビン及びシェディング阻害パーセント（％）をプロットした（図１９Ｃ）。ビン１は、５１％の中央値及び１６〜８１％の範囲のシェディング阻害％を有する３３個の抗ＭＩＣＡ抗体を有した。ビン２は、３９％の中央値及び２６〜４２％の範囲のシェディング阻害％を有する４個の抗ＭＩＣＡ抗体を有した。ビン３は、４７％の中央値及び１〜６４％の範囲のシェディング阻害％を有する１５個の抗ＭＩＣＡ抗体を有した。ビン１及びビン３のシェディング阻害％の中央値は類似し、ともに約６５％の範囲差を有した。しかしながら、ＭＩＣＡ＊００８エピトープとシェディングを阻害する能力との間の相関が存在することが見出された。ビン１は最高シェディング阻害値を有する１０個の抗体を含有し、ビン３は最低シェディング阻害能力を有する３個の抗体を有した（図１９Ｃ）。ビン１におけるシェディング阻害パーセント値の大きな範囲のために、最良シェディング阻害に相関した特定のエピトープを特定するには、より高分解能のエピトープマッピング方法が必要であった。これは、所望のＭＩＣＡエピトープについて選択するための抗体のスクリーニングを可能にした。
【０４３１】
より高分解能及び抗スループットのエピトープマッピング方法の必要性に対処するために、糖鎖改変エピトープマッピングまたはＧＥＭ方法が開発された（図２０）。この方法は、単一Ｎ結合グリコシル化部位（Ｎ−Ｘ−Ｓ／Ｔ、式中、Ｘ≠Ｐ）を作製するようにタンパク質抗原配列を操作した。これはＮ−Ｘ−Ｘ部位をＮ−Ｘ−Ｓ／Ｔに変更することによって、またはＸ−Ｘ−Ｓ／Ｔ部位をＮ−Ｘ−Ｓ／Ｔに変更することによって達成された。加えて、いくつかのアミノ酸をＮまたはＣ末端に付加して、新たなＮ結合グリコシル化部位を作製することができた。糖鎖改変抗原バリアントのパネルが作製され、精製されると、それらを抗体の結合についてＥＬＩＳＡまたはＢｉａｃｏｒｅ／Ｗａｓａｔｃｈのいずれかを使用してスクリーニングした。正及び負の結合を次いで構築し、エピトープがグリコシル化によってマスキングされているために結合が観察されなかった部位（複数可）としてエピトープを定義した。
【０４３２】
ＭＩＣＡ＊００８について、ＭＩＣＡ＊００８アルファ３ドメインの「前部」の単一Ｎ結合グリコシル化部位を、７個の別々のＭＩＣＡ＊００８バリアントに導入した（図２１Ａ）。かかるバリアントは、ＭＩＣＡ＊００１の結晶構造（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ構造１Ｂ３Ｊ及び１ＨＹＲ）に基づいて設計され、変異された７個の残基は、全て結晶構造において表面が露出された。ＭＩＣＡ＊００８糖鎖改変バリアントの質量分析を行って、グリコシル化を分析した（図２１Ｂ）。我々は、Ｇｌｙｃｏバリアント１１、１４、１５、または１６についてトリプシンペプチドのカバレッジを有さなかった。しかしながら、我々は、Ｇｌｙｃｏ１２、１３、及び１７についてトリプシンペプチドを検出し、それらは全て、それらのＷＴ  ＭＩＣＡ＊００８トリプシンペプチド対応物と比較して増加したＮ結合グリコシル化を示した（図２１Ｂ）。Ｇｌｙｃｏ１２についてのグリコシル化部位の付加によって、我々は、３８％グリコシル化及び１つの天然グリコシル化部位を有したＷＴペプチドと比較して、トリプシンペプチド上で＞９９％の総グリコシル化を観察した。Ｇｌｙｃｏ１３は、他の部位を有さなかったペプチドにおいてＮ結合グリコシル化部位を導入し、総グリコシル化が０から９９％となった。Ｇｌｙｃｏ１７についてのグリコシル化部位の付加によって、我々は、６８％グリコシル化及び１つの天然グリコシル化部位を有したＷＴペプチドと比較して、トリプシンペプチド上で８６％の総グリコシル化を観察した。
【０４３３】
これらの７個のＭＩＣＡグリコシル化バリアントの結合を、ＥＬＩＳＡによって全ての４個のＭＩＣＡ／Ｂ対立遺伝子を結合した全ての９６個の抗ＭＩＣＡ／Ｂクローンで試験した。１１個の固有のエピトープビンを、７個の糖鎖改変バリアントへの結合特性に基づいて特定した（図２１Ｃ）。最も多数の抗体は、糖鎖改変ＭＩＣＡバリアントのいずれも結合しないビン６、糖鎖改変バリアント１４及び１６に結合するビン２、ならびに糖鎖改変バリアント１６に結合するビン５において観察された。シェディングを＞７０％阻害する抗ＭＩＣＡ抗体のさらなる試験は、シェディングをブロッキングする上位抗体が３つのビンのみに該当したことを示した（図２１Ｃ）。これらのビンは、糖鎖改変バリアントＧｌｙｃｏ１４、Ｇｌｙｃｏ１６、またはＧｌｙｃｏ１４及びＧｌｙｃｏ１６の両方を有するエピトープを含んだ。したがって、ＭＩＣＡの「前部」及び「底部」上のエピトープをブロッキングする抗体は、ＭＩＣＡ＊００８シェディングをブロッキングするのに最も効果的であった（図２１Ｄ）。
【０４３４】
実施例１０：抗ＭＩＣ抗体の結晶構造解析
この実施例は、抗ＭＩＣ  １Ｄ５、１３Ａ９、及び６Ｅ１．１．１２抗体の結晶構造を特徴付ける。
【０４３５】
Ｆａｂの発現及び精製
全てのＦａｂを、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて、マウス可変ドメインならびにヒトカッパＣＬ及びヒトＩｇＧ１  ＣＨ１定常ドメインを含有するキメラとして発現させた。細胞をペレット化し、２５ｍＭのトリス、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＥＤＴＡに再懸濁し、マイクロフルイダイザーに２回通すことによって溶解した。ＤＮＡを、０．４％ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を添加し、撹拌しながら１時間〜一晩まで４℃でインキュベートすることによって沈殿させた。溶解物を、１５，０００×ｇでの１時間の遠心分離、続いて０．２２μｍフィルターを通す濾過によって浄化した。
【０４３６】
１Ｄ５  Ｆａｂを、ＧａｍｍａＢｉｎｄ  Ｐｌｕｓ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用する親和性クロマトグラフィーによって精製した。親和性捕捉後、カラムを平衡バッファ（２５ｍＭのトリス、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＥＤＴＡ）、平衡化バッファ及び０．１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００＋０．１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１１４、再び平衡化バッファ、続いて低塩バッファ（２５ｍＭのスクシネート、ｐＨ６．０）で洗浄した。Ｆａｂを１５０ｍＭの酢酸、ｐＨ２．７で溶出し、１／１０体積の１Ｍのトリス、ｐＨ９．０で直ちに中和した。１Ｄ５  Ｆａｂを、バッファＡ（２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ５．０）で予め平衡化されたＳＰ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｈｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用するカチオン交換クロマトグラフィーによってさらに精製し、１０のカラム体積（ＣＶ）にわたる０〜４０％勾配のバッファＢ（２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ５．０、１ＭのＮａＣｌ）で溶出した。カチオン交換クロマトグラフィー後、１Ｄ５  Ｆａｂを、複合体形成前に２５ｍＭのトリス、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌに透析した。
【０４３７】
１３Ａ９  Ｆａｂを、上述のようなＧａｍｍａＢｉｎｄ  Ｐｌｕｓ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、続いてＨｉＬｏａｄ  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００ｐｇカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用するサイズ排除クロマトグラフィーによって精製した。サイズ排除クロマトグラフィー後、１３Ａ９  Ｆａｂを、複合体形成前に、２５ｍＭのトリス、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌに透析した。
【０４３８】
６Ｅ１．１．１２  Ｆａｂも、ＧａｍｍａＢｉｎｄ  Ｐｌｕｓ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用する親和性クロマトグラフィー、続いて２０ＣＶにわたる０〜２０％勾配のバッファＢ（２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ５．０、１ＭのＮａＣｌ）を溶出に使用したことを除き、上述のようなカチオン交換クロマトグラフィーによって精製した。ＳＰ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｈｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅカラムからの溶出後、２つのピークが観察された。質量分析は、主要ピークがそれらの各理論的質量に一致する軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）を有するＦａｂを含有したことを示した。微小ピークはＬＣの予想される質量を含有したが、ＨＣは理論的質量よりも１７Ｄａ小さく、タンパク質の画分のアミノ末端上でのピログルタメートの形成を示した。ピログルタメートを含有するピークは総タンパク質の微小画分であり、したがってアミノ末端でグルタミンを含有するピークは結晶化に使用された。カチオン交換クロマトグラフィー後、６Ｅ１．１．１２  Ｆａｂを、複合体形成前に２５ｍＭのトリス、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌに透析した。
【０４３９】
ヒトＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの発現及び精製
野生型ヒトＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン及びＣ２７３Ｓ変異体の両方を生成した。Ｃ２７３Ｓ変異体は、α３ドメインから非対合システインを除去し、小画分の野生型タンパク質で観察されたジスルフィド結合形成を介した共有結合二量体化をブロッキングするように設計された。
【０４４０】
アミノ末端トロンビン切断性Ｈｉｓ６タグを含有するヒトＭＩＣＡ＊００８α３ドメインを、バキュロウイルス発現系を使用してＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉ（Ｔ．ｎｉ）細胞においてＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｐｌｉｃａｔｕ  ＥｎｄｏＨと共発現させた。ヒトＭＩＣＡ＊００８の残基Ｔ２０４−Ｓ２９７及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｐｌｉｃａｔｕ  ＥｎｄｏＨの残基Ｆ２−Ｐ３１３をコードするＤＮＡを、ｐＡｃｇｐ６７（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）をわずかに修飾した版に別々にクローニングした。導入ベクターを、ＢｅｓｔＢａｃ直線化ウイルスＤＮＡ（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＬＬＣ）と、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（Ｓｆ９）細胞に、Ｃｅｌｌｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてコトランスフェクトして、組換えバキュロウイルスを産生した。ウイルスを増幅させて、タンパク質発現に使用されるストックを調製した。Ｔ．ｎｉ  Ｐｒｏ細胞を、２ＬのＥＳＦ９２１無血清無タンパク質培地（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）に２×１０６細胞／ｍＬで接種し、２０ｍＬのウイルスに１：１ＭＩＣＡ：ＥｎｄｏＨの比で感染させた。キフネンシンを１０ｍＬのＥＳＦ９２１培地に溶解し、滅菌濾過し、１ｍｇ／Ｌの最終濃度までの感染で添加し、複合体Ｎ結合グリカン形成を防止した。細胞を、１３０ＲＰＭでの２インチスローによる振盪機における５Ｌ  Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｏｐｔｉｍｕｍ  Ｇｒｏｗｔｈ（商標）フラスコ中２７℃で増殖させた。感染の４８時間後、培養物を、トリス及び塩で５０ｍＭのトリス、ｐＨ８．０、５ｍＭのＣａＣｌ２、１ｍＭのＮｉＣｌ２の最終濃度まで調節し、３０分間混合させて、培地における過剰遊離アミノ酸を沈殿させた。細胞及び沈殿アミノ酸を、３００ＲＣＦで１５分間の遠心分離によって培養上清から除去した。分泌ＭＩＣＡ＊００８タンパク質を含有する上清を、０．２μｍフィルターに通して濾過し、精製前にｐＨ７．０に調節した。
【０４４１】
全てのＭＩＣＡ＊００８精製ステップは４℃で行った。ｐＨが調節された上清を、バッファＡ（５０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ８．０、３００ｍＭのＮａＣｌ）中で平衡化されたＮｉ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｅｘｃｅｌ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）カラムに装填した。カラムを、２．５％バッファＢ（５０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ８．０、３００ｍＭのＮａＣｌ、４００ｍＭのイミダゾール）、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１１４バッファ（５０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ８．０、３００ｍＭのＮａＣｌ、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１１４）、続いて２．５％バッファＢで洗浄した。タンパク質を、１００％バッファＢの段階的勾配で溶出し、次いで５０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌに透析した。
【０４４２】
Ｈｉｓ６タグを、ＭＩＣＡ＊００８タンパク質１ｍｇあたり１５単位のトロンビン（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）での１６時間室温で回転させながらの切断によって除去し、切断反応を質量分析によって監視した。ＭＩＣＡ＊００８の１ｍｇあたりさらに５単位のトロンビンを添加し、反応を室温で回転させながらさらに２４時間進行させた。タンパク質を０．２２μｍフィルターに通して濾過して、さらなる精製前に沈殿を除去した。
【０４４３】
タグ付けされていないＭＩＣＡ＊００８α３ドメインを、フロースルーの収集を伴うＮｉ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｅｘｃｅｌ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）カラムを使用する逆親和性精製によっていずれの残ったタグ付きタンパク質からも分離した。カラムを５０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ８．０、３００ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのイミダゾールで洗浄し、洗浄物も収集した。フロースルー及び洗浄物の両方を、ＨｉＬｏａｄ  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ７５ｐｇカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でさらに精製して、トロンビン及び高分子量凝集物を除去した。
【０４４４】
Ｍｏｎｏ  Ｓ  ＧＬカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で、３０ＣＶにわたる０〜１００％バッファＢ（２０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０、１ＭのＮａＣｌ）勾配を用いて最終研磨ステップを行って、微量の残ったＨｉｓ６タグ付きＭＩＣＡ＊００８を除去した。タグ付けされていないＭＩＣＡ＊００８α３ドメインを含有する画分をプールし、複合体形成前に２５ｍＭのトリス、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌに透析した。
【０４４５】
Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体の精製
Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８複合体を、２倍モル過剰の、４℃で一晩様々なＦａｂとインキュベートされたＭＩＣＡ＊００８α３ドメインから形成した。１Ｄ５または１３Ａ９  Ｆａｂを含有する複合体を野生型ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインで形成した一方で、６Ｅ１．１．１２複合体をＣ２７３Ｓ変異体ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインで形成した。複合体を、２５ｍＭトリス、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ中でＨｉＬｏａｄ  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ７５ｐｇカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用するサイズ排除クロマトグラフィーによって、過剰ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインから精製した。複合体を含有する画分をプールし、結晶化スクリーニング試験のために２０ｍｇ／ｍＬまで濃縮した。
【０４４６】
Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体の結晶化及びＸ線データ収集
１Ｄ５  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８複合体の結晶は、３０日にわたって４℃でタンパク質（２５ｍＭのトリス、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ中２０ｍｇ／ｍＬ）及びウェル溶液（０．１Ｍの酢酸ナトリウム、ｐＨ４．６、２５％ＰＥＧ４０００）の１：１混合物からの蒸気拡散懸滴において成長した。結晶は、ウェル溶液を使用して極低温保護し、急速冷凍し、液体窒素中で保存した。回折データを、極低温冷却条件（１００Ｋ）下、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｈｏｔｏｎ  Ｓｏｕｒｃｅ（ＡＰＳ）ビームラインＳＥＲ−ＣＡＴ  ２２−ＩＤ（Ａｒｇｏｎｎｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＩＬ）、１．００Åの波長で収集した（表１１）。
【０４４７】
１３Ａ９  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８複合体の結晶は、一晩１９℃でタンパク質（２５ｍＭのトリス、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ中２０ｍｇ／ｍＬ）及びウェル溶液（０．０１ＭのＺｎＳＯ４、０．１ＭのＭＥＳ、ｐＨ６．５、２５％ＰＥＧ  ５５０  ＭＭＥ）の２：１混合物からの蒸気拡散懸滴において成長した。これらの結晶を、Ｓｅｅｄ  Ｂｅａｄキット（Ｈａｍｐｔｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）で粉砕し、ウェル溶液中で１：５００に希釈し、タンパク質（２５ｍＭのトリス、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ中２０ｍｇ／ｍＬ）及びより低濃度のＰＥＧ  ５５０  ＭＭＥを含有するウェル溶液（０．０１ＭのＺｎＳＯ４、０．１ＭのＭＥＳ、ｐＨ６．５、１６〜１８％ＰＥＧ  ５５０  ＭＭＥ）の１：１混合物へのストリークシーディングに使用した。播種された結晶は、３日にわたって１９℃で蒸気拡散懸滴において成長した。結晶は、２５％グリセロール、０．０１ＭのＺｎＳＯ４、０．１ＭのＭＥＳ、ｐＨ６．５、１５％ＰＥＧ  ５５０  ＭＭＥ中で極低温保護し、急速冷凍し、液体窒素中で保存した。回折データを、極低温冷却条件（１００Ｋ）下、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｌｉｇｈｔ  Ｓｏｕｒｃｅ（ＡＬＳ）ビームライン５．０．２（Ｌａｗｒｅｎｃｅ  Ｂｅｒｋｅｌｅｙ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＣＡ）、１．００Åの波長で収集した（表１１）。
【０４４８】
６Ｅ１．１．１２  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓ複合体の結晶は、５日にわたって１９℃でタンパク質（２５ｍＭのトリス、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ中２０ｍｇ／ｍＬ）及びウェル溶液（０．１Ｍのクエン酸三ナトリウム、１５％イソプロパノール、１５％ＰＥＧ４０００）の１：１混合物からの蒸気拡散懸滴において成長した。結晶は、２５％グリセロールを添加したウェル溶液を使用して極低温保護し、急速冷凍し、液体窒素中で保存した。回折データを、極低温冷却条件（１００Ｋ）下、Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｓｙｎｃｈｒｏｔｒｏｎ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｌｉｇｈｔｓｏｕｒｃｅ（ＳＳＲＬ）ビームライン１２−２（ＳＬＡＣ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃｃｅｌｅｒａｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＣＡ）、０．９７９４６Åの波長で収集した（表１１）。
表１１．Ｘ線データ収集及び精密化統計
2019535250.tif 000028
2019535250.tif 000029
注記：＊括弧内の値は、最高分解能シェルのものである。
【０４４９】
６Ｅ１．１．１２  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメイン複合体の分解能は２．２１Åであり、完全性＞５０％であったが、ＣＣ１／２＞０．５である２．０５Åのデータを精密化に使用した。平均Ｂ因子はＣＣＰ４においてＢ平均を使用して計算し、ウィルソンＢ因子はＰＨＥＮＩＸにおいてＸｔｒｉａｇｅを使用して計算した。ラマチャンドラン統計及び回転異性体外れ値は、ＰＨＥＮＩＸにおいてＰＤＢツールを使用して計算した。
【０４５０】
Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体のＸ線構造決定
ＨＫＬ２０００を使用して、データを統合し、スケーリングした。１Ｄ５  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８結晶は、１つのＦａｂ−ＭＩＣＡ複合体が非対称単位（ＡＳＵ）中にあるＰ２１空間群に属した。１３Ａ９  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８結晶は、１つのＦａｂ−ＭＩＣＡ複合体がＡＳＵ中にあるＰ２１２１２１空間群に属した。６Ｅ１．１．１２  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓ結晶も、１つのＦａｂ−ＭＩＣＡ複合体がＡＳＵ中にある空間群Ｐ２１２１２１であることが見出された（表１１）。
【０４５１】
全ての構造を、ＰＨＥＮＩＸにおいてＰＨＡＳＥＲ−ＭＲを用いる分子置換によって決定した。各複合体について、５つの連続分子置換検索を、後述のような個別の検索モデルとしてＦａｂ定常ドメイン（ＣＬ及びＣＨ１）、Ｆａｂ可変ドメイン（ＶＬ及びＶＨ）、及びＭＩＣＡα３ドメインの各々で行った。
【０４５２】
この試験に使用されるＦａｂの全ては、ヒトカッパＣＬ及びヒトＩｇＧ１  ＣＨ１定常ドメインを含有する。ハーセプチン（タンパク質データバンク（ＰＤＢ）受託１ＮＺ８）のＦａｂ断片からの個別のＣＬ（鎖Ａの残基１０８−２１２）及びＣＨ１（鎖Ｂの残基１２１−２２０）ドメインを検索モデルとして使用した。
【０４５３】
１Ｄ５  Ｆａｂ  ＶＬドメインはマウスＩＧＫＶ４−９１＊０１生殖細胞系列遺伝子に由来し、ＰＢＤ受託４Ｍ１Ｇからの鎖Ｌの残基１−１０８を検索モデルとして使用した。１Ｄ５  Ｆａｂ  ＶＨドメインはマウスＩＧＨＶ１Ｓ１３５＊０１生殖細胞系列遺伝子に由来し、ＰＤＢ受託１Ｆ３Ｄからの鎖Ｈの残基１−１１３を検索モデルとして使用した。
【０４５４】
１３Ａ９  Ｆａｂ  ＶＬドメインはマウスＩＧＫＶ１２−４１＊０１生殖細胞系列遺伝子に由来し、ＰＤＢ受託１Ａ２ＹからのＡ鎖の残基１−１０７を検索モデルとして使用した。１３Ａ９  Ｆａｂ  ＶＨドメインはマウスＩＧＨＶ１−５４＊０２生殖細胞系列遺伝子に由来し、ＰＤＢ受託４Ｊ８ＲからのＢ鎖の残基２−１１３を検索モデルとして使用した。
【０４５５】
６Ｅ１．１．１２  ＶＬドメインはマウスＩＧＫＶ１−１１７＊０１生殖細胞系列遺伝子に由来し、ＰＤＢ受託１Ｆ３Ｄからの鎖Ｊの残基１−１０７を検索モデルとして使用した。６Ｅ１．１．１２  Ｆａｂ  ＶＨドメインはマウスＩＧＨＶ１−８４＊０１生殖細胞系列遺伝子に由来し、ＰＤＢ受託１ＣＴ８からの鎖Ｂの残基１−１１３を検索モデルとして使用した。
【０４５６】
１Ｄ５  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８複合体構造について、ＭＩＣＡ＊００１  ＰＤＢ受託１ＨＹＲからの鎖Ｃの残基１８１−２７４を検索モデルとして使用した。その後の１３Ａ９  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８及び６Ｅ１．１．１２  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８複合体の構造について、１Ｄ５  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８複合体からのＭＩＣＡ＊００８の残基２０４−２９７を、α３ドメインのための検索モデルとして使用した。
【０４５７】
分子置換溶液を得た後、ＣＯＯＴを使用してモデルを構築し、ＲＥＦＭＡＣ及びＰＨＥＮＩＸにおいて精密化した。平均Ｂ因子はＣＣＰ４においてＢ平均を使用して計算し、ウィルソンＢ因子はＰＨＥＮＩＸにおいてＸｔｒｉａｇｅを使用して計算した。ラマチャンドラン統計及び回転異性体外れ値は、ＰＨＥＮＩＸにおいてＰＤＢツールを使用して計算した。接触は、ＣＣＰ４において接触／ＮＣＯＮＴ及びＰＩＳＡで分析した。全ての数値は、ＰＹＭＯＬで生成した。
【０４５８】
１Ｄ５  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８複合体構造の分解能は１．３０Åであり、モデルは２０．５％のＲｆｒｅｅ値に精密化した。最終モデルは、１Ｄ５  ＬＣの残基１−２１４、１Ｄ５  ＨＣの残基２−２１６、及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基２０４−２９７を含有し、ＭＩＣＡ＊００８の残基２１５−２２０は構造が破壊されている。ラマチャンドラン統計は、残基の９８．９％が好まれる領域にあり、１．１％が許容される領域にあり、外れ値がないことを示す（表１１）。
【０４５９】
１３Ａ９  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８複合体構造の分解能は１．９０Åであり、モデルは２４．７％のＲｆｒｅｅ値に精密化した。最終モデルは、１３Ａ９  ＬＣの残基１〜２１４、１３Ａ９  ＨＣの残基１〜２１７、及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基２０４−２９７を含有する。ラマチャンドラン統計は、残基の９７．７％が好まれる領域にあり、２．３％が許容される領域にあり、外れ値がないことを示す（表９）。
【０４６０】
６Ｅ１．１．１２  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓ複合体構造の分解能は２．２１Åであり、完全性は依然として５０％超（５９．４％）であったが、ＣＣ１／２が依然として０．５より大きかった２．０５Å分解能のデータを精密化に使用した。モデルを２７．５％のＲｆｒｅｅ値に精密化した。最終モデルは、６Ｅ１．１．１２  ＬＣの残基１〜２１２、６Ｅ１．１．１２  ＨＣの残基２〜２１４、及びＭＩＣＡ＊００８α３  Ｃ２７３Ｓドメインの残基２０４−２９７を含有する。ラマチャンドラン統計は、残基の９７．５％が好まれる領域にあり、２．５％が許容される領域にあり、外れ値がないことを示す（表１１）。
【０４６１】
１Ｄ５  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体の構造分析
ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインを有する複合体内の１Ｄ５  Ｆａｂの構造は、１Ｄ５が、カルボキシ末端ベータ鎖を含有する免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメインのベータシートとして定義される、α３ドメインの「前面」に結合することを明らかにする（図２２Ａ〜図２２Ｄ）。約１５２６Å２の表面積は、１Ｄ５  ＦａｂとＭＩＣＡ＊００８α３ドメインとの界面で埋没し、そのうちの９３４Å２はＨＣとの接触からのものであり、５２６Å２はＬＣからのものである。全ての６つのＣＤＲからの残基はＭＩＣＡ＊００８と相互作用し、最多数の接触はＣＤＲ  Ｈ１からのものであり、続いてはＣＤＲ  Ｌ３及びＨ３からのものである（図２３Ａ−図２３Ｂ）。１Ｄ５のエピトープは、複合体の構造において１Ｄ５  Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基として定義される（表１２及び図２４Ａ〜図２４Ｄ）。同様に、１Ｄ５のパラトープは、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内の１Ｄ５  Ｆａｂの残基として定義される（表１２及び図２４Ａ〜図２４Ｄ）。
表１２．１Ｄ５のＭＩＣＡ＊００８のエピトープ残基及びそれらの対応するパラトープ残基
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注記：１Ｄ５エピトープは、１Ｄ５  Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基として定義された。１Ｄ５パラトープは、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内の１Ｄ５残基として定義された。距離は、ＣＣＰ４において接触／ＮＣＯＮＴで計算された。
【０４６２】
１Ｄ５は、極性及び非極性の両方の相互作用の組み合わせを用いてＭＩＣＡ＊００８α３ドメインと相互作用する。観察される極性相互作用は、水素結合（図２５Ａ〜図２５Ｄ）及び静電相互作用（図２６Ａ〜図２６Ｂ）の両方を含む。ＭＩＣＡ＊００８のＳｅｒ２４７の側鎖は、Ａｓｐ２４９の側鎖と分子内水素結合を作製する（図２５Ａ）。これはＡｓｐ２４９をＣＤＲ  Ｌ１のＨｉｓ３１との静電相互作用を起こすように位置付ける（図２６Ａ〜図２６Ｂ）。１Ｄ５  ＬＣも、ともにＭＩＣＡ＊００８におけるＡｒｇ２７９の側鎖のグアニジニウム基からの２つのアミンと水素結合を形成するＣＤＲ  Ｌ３のＧｌｙ９１及びＳｅｒ９２の主鎖カルボニルとのの２つの水素結合に寄与する（図２５Ｂ）。いくつかの水素結合及び極性相互作用も、１Ｄ５のＨＣからのものである。２つの水素結合はＣＤＲ  Ｈ１における残基からのものであり、Ｈ１のＳｅｒ３１の主鎖カルボニルがＭＩＣＡ＊００８におけるＡｒｇ２４０の側鎖と水素結合を形成し（図２５Ｃ）、Ｈ１のＴｙｒ３５の側鎖ヒドロキシルがＭＩＣＡ＊００８のＡｓｐ２４２の主鎖カルボニルと水素結合を形成する（図２５Ｄ）。ＣＤＲ  Ｈ２のＴｙｒ５０も、ＭＩＣＡ＊００８のＡｓｐ２４２の側鎖カルボキシルと水素結合を作製する（図２５Ｄ）。加えて、ＣＤＲ  Ｈ２のＡｓｎ５４の側鎖カルボニルは、ＭＩＣＡ＊００８のＴ２９２の主鎖カルボニルと極性相互作用を形成し（図２５Ｃ）、ＣＤＲ  Ｈ３のＧｌｙ９６の主鎖カルボニルは、ＭＩＣＡ＊００８のＳｅｒ２４５の主鎖アミドと水素結合を作製する（図２５Ｄ）。観察される非極性相互作用は、ファンデルワールス相互作用及び形状相補性を含む。ＭＩＣＡ＊００８の２４０台ループは、Ｉｇドメインの「前面」から突出し、α３ドメイン上の凸面を作製する（図２７Ａ〜図２７Ｂ）。１Ｄ５  Ｆａｂは、ＬＣとＨＣとの界面での形状相補性を用いて、この表面を収容する。ＣＤＲ  Ｌ３及びＨ３の両方は、２４０台ループの結合に関与し、両方は、セリンなどの小さな側鎖を有するか、またはグリシンなどの側鎖を有さない一連の残基を含有する。これらのＣＤＲはＬＣ／ＨＣ界面から離れて広がり、セリン側鎖がＭＩＣＡ＊００８界面から離れて示され、ＭＩＣＡ＊００８の凸面が結合する窪みを作製する（図２７Ｃ〜図２７Ｅ）。ＣＤＲ  Ｌ３及びＨ３アミノ酸組成物の性質ならびにそれらの立体構造は、２４０台ループの凸状性質を補完する凹面をもたらす。ＣＤＲ  Ｌ３及びＨ３の側鎖及び全体的なループ立体構造は、ＭＩＣＡ＊００８界面から離れて曲がるが、ＣＤＲ  Ｌ１、Ｌ２、Ｈ１、及びＨ２ならびにそれらの側鎖は、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン表面の凹状領域を充填する界面を指す傾向がある（図２７Ｆ〜図２７Ｇ）。
【０４６３】
１３Ａ９  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体の構造分析
ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインを有する複合体内の１３Ａ９  Ｆａｂの構造は、１３Ａ９が、カルボキシ末端ベータ鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、α３ドメインの「前面」に結合することを明らかにする（図２８Ａ〜図２８Ｄ）。約１７５０Å２の表面積は、１３Ａ９  ＦａｂとＭＩＣＡ＊００８α３ドメインとの界面で埋没し、そのうちの１０８６Å２はＨＣとの接触からのものであり、６６４Å２はＬＣからのものである。全ての６つのＣＤＲからの残基はＭＩＣＡ＊００８と相互作用し、最多数の接触はＣＤＲ  Ｈ２からのものであり、続いてはＣＤＲ  Ｌ３及びＨ３からのものである（図２９Ａ〜図２９Ｂ）。１３Ａ９のエピトープは、複合体の構造において１３Ａ９  Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの残基として定義される（表１３及び図３０Ａ〜図３０Ｄ）。同様に、１３Ａ９のパラトープは、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内の１３Ａ９  Ｆａｂの残基として定義される（表１３及び図３０Ａ〜図３０Ｄ）。１３Ａ９は、極性及び非極性の両方の相互作用の組み合わせを用いてＭＩＣＡ＊００８α３ドメインと相互作用する。観察される極性相互作用は、水素結合（図３１Ａ〜図３１Ｄ）及び静電相互作用（図３２Ａ〜図３２Ｂ）の両方を含む。ＬＣ及びＨＣの両方からの残基は、ＭＩＣＡ＊００８と水素結合を形成する。３つの水素結合は、１３Ａ９のＣＤＲ  Ｌ１からのものである。Ｈｉｓ３０の側鎖はＳｅｒ２９７の主鎖アミドと水素結合を作製し、Ｓｅｒ３１の主鎖カルボニル基はＧｌｎ２７８の側鎖と水素結合を作製し、Ｔｙｒ３２の側鎖はＶａｌ２９５の主鎖カルボニルと水素結合を形成する（図３１Ａ）。ＬＣからの追加の水素結合は、ＣＤＲ  Ｌ２のＴｙｒ５０からのものであり、側鎖がＧｌｎ２７８の主鎖カルボニルと水素結合を作製する（図３１Ａ）。合計９つの水素結合は、１３Ａ９のＨＣからのものである。ＣＤＲ  Ｈ１のＡｓｎ３１の主鎖カルボニルは、Ａｒｇ２４０の側鎖と水素結合を形成する（図３１Ｂ）。ＣＤＲ  Ｈ２は、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインと５つの水素結合を形成する（図３１Ｃ）。Ａｓｎ５２の側鎖は、Ｔｙｒ２８３の側鎖と水素結合を作製する。Ｓｅｒ５４の側鎖は、Ｇｌｕ２８５の側鎖と水素結合を作製する。Ａｌａ５６の主鎖カルボニルは、Ｈｉｓ２９０の側鎖と水素結合を作製する。最後に、Ｔｈｒ５７は２つの水素結合を形成し、その主鎖アミドがＧ２８８の主鎖カルボニルと結合を形成し、Ｔｈｒ５７の主鎖カルボニルがＨｉｓ２９０の主鎖アミドと水素結合を形成する。１３Ａ９のＣＤＲ  Ｈ３は、ＭＩＣＡ＊００８と３つの水素結合を作製するが、これらの結合を作製するのに単一の残基のみを使用する（図３１Ｄ）。Ａｓｎ９８の側鎖は、Ｇｌｎ２７８及びＰｈｅ２８０の主鎖カルボニルと、ならびにＴｈｒ２８１の側鎖と水素結合を作製する。１３Ａ９及びＭＩＣＡ＊００８の非極性相互作用は、ファンデルワールス相互作用及び形状相補性を含む。２４０台ループ（残基２４０〜２４５）の開始、２７０台ループ（残基２７７〜２７９）の終止、及びＭＩＣＡ＊００８α３ドメインのカルボキシ末端ベータ鎖（残基２８８−２９７）は、Ｉｇドメインの「前面」から突出し、それらの間���窪みを有する２つの隆起を作製する（図３３Ａ〜ＦＩＧ．３３Ｂ）。１３Ａ９は、そのＣＤＲの６つ全てを用いて結合し、隆起及び窪みに及ぶ（図３３Ｃ）。ＣＤＲ  Ｌ１のＴｙｒ３２、ＣＤＲ  Ｌ３のＴｙｒ９６、ＣＤＲ  Ｈ１のＬｅｕ３３、ＣＤＲ  Ｈ２のＡｌａ５６、ならびにＣＤＲ  Ｈ３のＰｈｅ９５及びＡｓｎ９８は結合し、それらの側鎖がＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの「前面」の認識のための相補的凸面を作製する窪みを指す（図３３Ｄ〜図３３Ｅ）。ＣＤＲ  Ｌ１のＨｉｓ３０及びＳｅｒ３１、ＣＤＲ  Ｌ２のＴｙｒ５０、ＣＤＲ  Ｌ３のＴｒｐ９２及びＴｈｒ９４、ＣＤＲ  Ｈ１のＡｓｎ３１及びＴｙｒ３２、ＣＤＲ  Ｈ２のＡｓｎ５２、Ｓｅｒ５４、及びＡｓｎ５８、ならびにＣＤＲ  Ｈ３のＬｅｕ９６などの残基の側鎖は、隆起に折り重なり、ＭＩＣＡ＊００８と顕著なファンデルワールス相互作用を起こす（図３３Ｄ〜図３３Ｅ）。
表１３．１３Ａ９のＭＩＣＡ＊００８のエピトープ残基及び対応するパラトープ残基
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注記：１３Ａ９エピトープは、１３Ａ９  Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン残基として定義された。１３Ａ９パラトープは、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの４．５Å以内の１３Ａ９残基として定義された。距離は、ＣＣＰ４において接触／ＮＣＯＮＴで計算された。
【０４６４】
６Ｅ１．１．１２  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメイン複合体の構造分析
ＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓ  α３ドメインを有する複合体内の６Ｅ１．１．１２  Ｆａｂの構造は、６Ｅ１．１．１２が、アミノ末端ベータ鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、α３ドメインの「背面」に結合することを明らかにする（図３４Ａ〜図３４Ｄ）。約１４１６Å２の表面積は、６Ｅ１．１．１２  ＦａｂとＭＩＣＡ＊００８α３ドメインとの界面で埋没し、そのうちの１０４６Å２はＨＣとの接触からのものであり、３７０Å２はＬＣからのものである。６つのＣＤＲのうちの５つからの残基はＭＩＣＡ＊００８と相互作用し、最多数の接触はＣＤＲ  Ｈ３からのものであり、続いてはＣＤＲ  Ｌ１及びＨ２からのものであり、ＣＤＲ  Ｌ３からの接触はない（図３５Ａ〜図３５Ｂ）。６Ｅ１．１．１２のエピトープは、複合体の構造において６Ｅ１．１．１２  Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインの残基として定義される（表１４及び図３６Ａ〜図３６Ｄ）。同様に、６Ｅ１．１．１２のパラトープは、ＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインの４．５Å以内の６Ｅ１．１．１２  Ｆａｂの残基として定義される（表１４及び図３６Ａ〜図３６Ｄ）。
表１４．６Ｅ１．１．１２のＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓのエピトープ残基及び対応するパラトープ残基
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注記：６Ｅ１．１．１２エピトープは、６Ｅ１．１．１２  Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインとして定義された。６Ｅ１．１．１２パラトープは、ＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメインの４．５Å以内の６Ｅ１．１．１２残基として定義された。距離は、ＣＣＰ４において接触／ＮＣＯＮＴで計算された。
【０４６５】
６Ｅ１．１．１２は、極性及び非極性の両方の相互作用の組み合わせを用いてＭＩＣＡ＊００８α３ドメインと相互作用する。観察される極性相互作用は、水素結合、塩橋、パイ−カチオン相互作用、及び静電相互作用を含む（図３７Ａ〜図３７Ｃ、図３８Ａ〜図３８Ｂ）。ＬＣ及びＨＣの両方からの残基は、ＭＩＣＡ＊００８と水素結合を形成する。ＣＤＲ  Ｌ１における２つの残基は、ＭＩＣＡ＊００８と水素結合を作製する。Ａｓｎ２８の側鎖は、ＭＩＣＡ＊００８のＶａｌ２５６の主鎖カルボニルと水素結合を形成し、Ｔｙｒ３２の側鎖は、ＭＩＣＡ＊００８のＡｓｐ２５５の側鎖と水素結合を作製する（図３７Ａ）。ＣＤＲ  Ｌ２の正荷電Ｌｙｓ５０は、ＭＩＣＡ＊００８の負荷電Ａｓｐ２５５と塩橋を形成する（図３７Ａ）。ＣＤＲ  Ｈ１の負荷電Ａｓｐ３１は、ＭＩＣＡ＊００８の正荷電Ａｒｇ２２６と塩橋を形成する（図３７Ｂ）。ＣＤＲ  Ｈ１のＴｙｒ３３の側鎖は、ＭＩＣＡ＊００８のＧｌｎ２６５の側鎖と、及び  Ｐｒｏ２５８の主鎖カルボニルと水素結合を形成する（図３７Ｂ）。Ｔｈｒ５４の側鎖は、Ａｓｐ２５９の主鎖カルボニルと水素結合を作製する（図３７Ｂ）。ＣＤＲ  Ｈ３のＴｙｒ９７は、３つの水素結合を作製する。Ｔｙｒ９７の主鎖カルボニルは、ＭＩＣＡ＊００８のＴｒｐ２６７と水素結合を形成し、Ｔｙｒ９７の側鎖は、ＭＩＣＡ＊００８のＡｓｐ２５５及びＧｌｎ２６５の主鎖カルボニルと２つの水素結合を形成する（図３７Ｃ）。ＣＤＲ  Ｈ３のＳｅｒ１００Ａの側鎖も、Ａｓｐ２５５の主鎖アミドと水素結合を形成する。最終的に、Ｔｙｒ９８は、ＭＩＣＡ＊００８のＡｒｇ２２６とパイ−カチオン相互作用を形成する（図３７Ｃ）。観察される非極性相互作用は、ファンデルワールス相互作用及び形状相補性を含む。６Ｅ１．１．１２のＣＤＲ  Ｌ１は、残基２７（残基２７Ａ〜２７Ｅ）後に５アミノ酸挿入を有し、ほとんどの抗体において典型的に見られるものよりもかなり長いＬ１ループを作製する。これは、ＣＤＲ  Ｌ１とＣＤＲ  Ｈ３との間に溝を作製する、６Ｅ１．１．１２の全ての他のＣＤＲよりもさらに突出するＣＤＲ  Ｌ１をもたらす（図３９Ａ〜図３９Ｂ）。より長いＣＤＲ  Ｌ１は、ペプチド抗原に結合する抗体において見られることが多く、ペプチドはＣＤＲ  Ｌ１及びＨ３によって作製される裂片において結合する。ＭＩＣＡ＊００８の２５０台ループ（残基２５４〜２６０）は、α３ドメインの「背面」にわたる隆起を作製する（図３９Ｃ〜図３９Ｄ）。２５０台ループは、ペプチド抗原を模倣する６Ｅ１．１．１２のＣＤＲ  Ｌ１とＣＤＲ  Ｈ３との間の溝において結合する（図３９Ｅ〜図３９Ｆ）。特にＡｓｐ２５５及びＬｅｕ２５７の側鎖は、裂片を指し、ＣＤＲ  Ｌ１及びＨ３の両方からの残基と相互作用する。Ｌｅｕ２５７は、ＬＣからの残基Ｈｉｓ２７Ｄ、Ａｓｎ２８、Ｔｙｒ３２、及びＨＣからのＴｙｒ３３、Ｈｉｓ９５、Ｔｙｒ９７、Ｔｒｐ１００Ｄによって形成された疎水性ポケットにおいて結合する（図３９Ｇ）。このポケットは、芳香族残基で重度に裏打ちされている。Ａｓｐ２５５はＬＣの残基Ａｓｎ２８、Ａｓｎ３０、Ｔｙｒ３２、Ｌｙｓ５０、及びＨＣのＴｙｒ９７、Ｓｅｒ１００Ａ、Ｇｌｙ１００Ｂによって形成されたポケットに結合し（図３９Ｈ）、Ｔｙｒ３２との水素結合、及びＬＣのＬｙｓ５０との塩橋を形成する（図３７Ａ）。
【０４６６】
１Ｄ５  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン、１３Ａ９  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン、及び６Ｅ１．１．１２  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８  Ｃ２７３Ｓα３ドメイン複合体構造の比較
１Ｄ５及び１３Ａ９の両方は、カルボキシ末端ベータ鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８の「前面」に結合する一方で、６Ｅ１．１．１２は、アミノ末端ベータ鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義される、ＭＩＣＡ＊００８の「背面」に結合する（図４０Ａ）。１Ｄ５及び１３Ａ９の（それらの各Ｆａｂの４．５Å以内の残基として定義される）エピトープの比較は、それらが部分的に重複するエピトープを有することを明らかにした（図４０Ｂ〜図４０Ｃ）。文献（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ（２００８）；６８：６３６８及びＢＢＲＣ（２００９）；３８７：４７６）において報告されたＭＩＣＡ切断部位の分析は、α３ドメイン中の全ての切断部位がドメインの「前面」にマッピングしたことを明らかにした（図４１Ａ）。報告された切断部位での結晶構造解析によって定義されたエピトープの比較は、１Ｄ５及び１３Ａ９エピトープがα３ドメインの「前面」上に排他的に見られるこれらの切断部位と重複したことを示した（図４１Ｂ）。ＭＩＣＡα３ドメインへの１Ｄ５または１３Ａ９の結合は、立体障害を作製し、ＭＩＣＡの切断に必要なプロテアーゼの接触をブロッキングし得る。対照的に、６Ｅ１．１．１２は、ＭＩＣＡの「背面」上で任意の報告された切断部位から離れて結合した（図４１Ｂ）。エピトープを定義することは、１Ｄ５及び１３Ａ９がＭＩＣＡ＊００８切断及びシェディングの強力な遮断剤である一方で、６Ｅ１．１．１２が切断及びシェディングの比較的弱い遮断剤である理由を説明するのに役立つ。
【０４６７】
タンパク質の高速光化学酸化（ＦＰＯＰ）によるＭｉｃＡ酸化フットプリント法
ＭＩＣＡ＊００８上の１Ｄ５  Ｆａｂのエピトープを、タンパク質の高速光化学酸化（ＦＰＯＰ）を用いる酸化フットプリント法によってマッピングした。１Ｄ５  Ｆａｂを発現させ、結晶構造解析について上述のように精製した。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン（残基Ｔｈｒ２０４−Ｓｅｒ２９７）を、ＣＨＯ  ＤＰ１２細胞においてＣ末端Ｈｉｓ８タグとともに発現させた。ＣＨＯ  ＤＰ１２細胞株は、大規模産生のために選択されたＣＨＯ−Ｋ１細胞株（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−６１）の誘導体である。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン発現プラスミドを、以前に記載されたＰＥＩを用いて一時的にトランスフェクトした（Ｗｏｎｇ，Ａ．Ｗ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  １０６：７５１−７６３）。トランスフェクションの１４日後に上清を採取し、分泌したＭＩＣＡ＊００８α３ドメインを結晶構造解析について上述のようにＮｉ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｅｘｃｅｌ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）カラム、続いてＨｉＬｏａｄ  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ７５  ｐｇカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。
【０４６８】
１．５：１モル比の１Ｄ５  Ｆａｂ対ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン抗原を、２．３５ｍｇ／ｍＬの総タンパク質濃度を有するＰＢＳ中で調製した。溶液を３７℃で３０分間インキュベートした。サイズ排除クロマトグラフィーを行って、完全な複合体の形成を確保した。未結合ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン抗原について、２．３５ｍｇ／ｍＬ溶液を１ｍＬのＰＢＳ中で調製した。捕捉剤アルギニンを３０ｍＭの最終濃度でタンパク質溶液に添加した。未結合ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインまたはＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン：１Ｄ５  Ｆａｂ複合体を３０ｍＭの過酸化物と流動混合し、以前に記載されたタンパク質の高速光化学酸化（ＦＰＯＰ）方法を用いて標識を行った（Ｚｈａｎｇ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ  ２６：５２６−５２９、Ｚｈａｎｇ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ  ２８：８５０−８５８、Ｌｉ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ａｎａｌ  Ｃｈｅｍ  ８９：２２５０−２２５８）。簡潔には、露光前の高速混合のために、１５μＬ／分のＭＩＣＡ溶液を３０ｍＭのＨ２０２と７．５μＬ／分の割合でマイクロティーミキサー（Ｃｏｂｅｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  Ｌａｂ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）によって混合した。集束された２４８ｎｍのＫｒＦエキシマレーザ（ＧＡＭ  Ｌａｓｅｒ  Ｉｎｃ．，Ｏｒｌａｎｄｏ，ＦＬ）を内径１５０μｍの溶融シリカ管（Ｐｏｌｙｍｉｃｒｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｐｈｏｅｎｉｘ，ＡＺ）の３．０ｍｍの露光窓を通して７Ｈｚの速度で７０ｍＪ／パルスでパルスすることによって酸化反応を開始した。酸化試料を、メチオニン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）及びカタラーゼ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）をそれぞれ４０ｍＭ及び１μＭの最終濃度で含むクエンチ溶液を含有するチューブ中に収集した。タンパク質分解及び質量分析の前に試料を−８０℃で凍結及び保存した。バックグラウンド酸化を考慮するために、非曝露試料を得、各タンパク質状態について３つの酸化複製物と比較した。ＦＰＯＰ実験のための試料収集の順序及び継続時間を表１５に示す。
表１５．三重反復試料標識の時間表
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【０４６９】
解凍後、試料を還元し、ＰＮＧアーゼＦで脱グリコシル化し、ヨードアセトアミドでアルキル化し、次いでＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離した（図４２）。ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの分子量に対応する１５ｋＤａ領域のバンドを、非曝露及び曝露両方の、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン単独及びＭＩＣＡ＊００８：１Ｄ５  Ｆａｂ複合体試料から切り取った。試料を１：５００酵素：基質比のトリプシン及びキモトリプシンで消化した。消化物をＣ１８ステージチップ浄化し、乾燥させ、１００ｕＬの２％アセトニトリルを含有する０．１％ギ酸で再構成した。１ｕＬをオートサンプラーによって、７５μｍ×１００ｍｍカラム（ＢＥＨ、１．７ミクロン、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ）に１μＬ／分の流量でＮａｎｏＡｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ）を用いて注入した。９８％溶媒Ａ（水＋０．１％ギ酸）から８０％溶媒Ｂ（アセトニトリル＋０．０８％ギ酸）までの勾配を６０分間適用した。試料をハイブリッドＥｌｉｔｅ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）へのナノスプレーイオン化によってオンラインで分析した。得られたスペクトルを、使用されたＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン構成体のタンパク質配列の理論的なトリプシン及びキモトリプシン消化物に対して調査した。各トリプシンペプチドの修飾されていない酸化種を断片化スペクトルから特定した。システイン、トリプトファン、チロシン、メチオニン、フェニルアラニン、ヒスチジン、アルギニン、ロイシン、及びイソロイシンの酸化を、所与のペプチドの一致する修飾イオン対総発生の曲線下の面積を測定することによって定量化した。複合体及び未結合ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの両方の酸化事象を次いでＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの配列上にマッピングした。保護の領域を、２つの値の間に顕著な変化を有するものとして観察した。三重反復試料を最終酸化パーセントについて平均し、エラーバーは３つの測定の標準偏差を表す。
【０４７０】
残基Ａｓｎ２３４−Ａｒｇ２４０を含有するＭＩＣＡ＊００８α３ドメイントリプシンペプチド内のＴｒｐ２３９について、ならびにＭＩＣＡ＊００８α３ドメインキモトリプシンペプチドＶａｌ２６８−Ｐｈｅ２８０内の残基Ｉｌｅ２７２及びＰｈｅ２８０について、酸化保護における顕著な変化が観察された（図４３Ａ〜Ｂ、図４４、図４５）。
【０４７１】
グリコシル化操作、アラニンスキャニング、ＦＰＯＰ、及びＸ線結晶構造解析からのエピトープマッピング結果の比較
グリコシル化操作、アラニンスキャニング、ＦＰＯＰ、及びＸ線結晶構造解析によって決定された１Ｄ５エピトープの比較は、これらの方法の間で一貫した結果を明らかにする。
【０４７２】
１Ｄ５抗体は、グリコシル化バリアントＧｌｙｃｏ１４（Ｇ２４３Ｎ）またはＧｌｙｃｏ１６（Ｒ２７９Ｎ）のいずれかを含有するＭＩＣＡ＊００８α３ドメインへの結合の完全な喪失を示すが、Ｇｌｙｃｏ１１（Ｒ２０２Ｎ）、Ｇｌｙｃｏ１２（Ｅ２１５Ｎ）、Ｇｌｙｃｏ１３（Ｉ２３６Ｔ）、Ｇｌｙｃｏ１５（Ｈ２４８Ｎ）、及びＧｌｙｃｏ１７（残基Ｎ２９８、Ｇ２９９、Ｓ３００のＣ末端付加）には影響されない。グリコシル化部位バリアントの位置でＸ線結晶構造解析によって決定された１Ｄ５のエピトープの比較は、Ｇｌｙｃｏ１４（Ｇ２４３Ｎ）及びＧｌｙｃｏ１６（Ｒ２７９Ｎ）が１Ｄ５エピトープの一部である一方で、Ｇｌｙｃｏ１１（Ｒ２０２Ｎ）、Ｇｌｙｃｏ１２（Ｅ２１５Ｎ）、Ｇｌｙｃｏ１３（Ｉ２３６Ｔ）、Ｇｌｙｃｏ１５（Ｈ２４８Ｎ）、及びＧｌｙｃｏ１７（残基Ｎ２９８、Ｇ２９９、Ｓ３００のカルボキシ末端付加）が１Ｄ５エピトープの範囲外であることを示す（図４６Ａ）。
【０４７３】
１３Ａ９抗体は、グリコシル化バリアントＧｌｙｃｏ１４（Ｇ２４３Ｎ）またはＧｌｙｃｏ１６（Ｒ２７９Ｎ）のいずれかを含有するＭＩＣＡ＊００８α３ドメインへの結合の部分的な喪失を示すが、Ｇｌｙｃｏ１１（Ｒ２０２Ｎ）、Ｇｌｙｃｏ１２（Ｅ２１５Ｎ）、Ｇｌｙｃｏ１３（Ｉ２３６Ｔ）、Ｇｌｙｃｏ１５（Ｈ２４８Ｎ）、及びＧｌｙｃｏ１７（残基Ｎ２９８、Ｇ２９９、Ｓ３００のＣ末端付加）には影響されない。グリコシル化部位バリアントの位置でＸ線結晶構造解析によって決定された１３Ａ９のエピトープの比較は、Ｇｌｙｃｏ１４（Ｇ２４３Ｎ）及びＧｌｙｃｏ１６（Ｒ２７９Ｎ）が１３Ａ９エピトープの一部である一方で、Ｇｌｙｃｏ１１（Ｒ２０２Ｎ）、Ｇｌｙｃｏ１２（Ｅ２１５Ｎ）、Ｇｌｙｃｏ１３（Ｉ２３６Ｔ）、Ｇｌｙｃｏ１５（Ｈ２４８Ｎ）、及びＧｌｙｃｏ１７（残基Ｎ２９８、Ｇ２９９、Ｓ３００のカルボキシ末端付加）が１３Ａ９エピトープの範囲外であることを示す（図４６Ａ）。カルボキシ末端に付加された残基Ｎ２９８、Ｇ２９９、及びＳ３００は結晶構造中に存在せず、したがってＧｌｙｃｏ１７は、図４６Ａにおいて、付加グリコシル化部位直前のカルボキシ末端残基Ｓ２９７を強調することによって示される。Ｎ２９８でのグリコシル化は、１３Ａ９の結合に影響を及ぼさない。
【０４７４】
６Ｅ１．１．１２抗体は、試験されたグリコシル化バリアント（Ｇｌｙｃｏ１１（Ｒ２０２Ｎ）、Ｇｌｙｃｏ１２（Ｅ２１５Ｎ）、Ｇｌｙｃｏ１３（Ｉ２３６Ｔ）、Ｇｌｙｃｏ１４（Ｇ２４３Ｎ）、Ｇｌｙｃｏ１５（Ｈ２４８Ｎ）、Ｇｌｙｃｏ１６（Ｒ２７９Ｎ）、またはＧｌｙｃｏ１７（残基Ｎ２９８、Ｇ２９９、Ｓ３００のカルボキシ末端付加））のいずれかへの結合の喪失を示さなかった。グリコシル化部位バリアントの位置でＸ線結晶構造解析によって決定された６Ｅ１．１．１２のエピトープの比較は、全てのグリコシル化バリアント（Ｇｌｙｃｏ１１（Ｒ２０２Ｎ）、Ｇｌｙｃｏ１２（Ｅ２１５Ｎ）、Ｇｌｙｃｏ１３（Ｉ２３６Ｔ）、Ｇｌｙｃｏ１４（Ｇ２４３Ｎ）、Ｇｌｙｃｏ１５（Ｈ２４８Ｎ）、Ｇｌｙｃｏ１６（Ｒ２７９Ｎ）、及びＧｌｙｃｏ１７（残基Ｎ２９８、Ｇ２９９、Ｓ３００のカルボキシ末端付加）が６Ｅ１．１．１２エピトープの範囲外であることを示す（図４６Ａ）。
【０４７５】
グリコシル化工学によって決定されたエピトープの全てが、Ｘ線結晶構造解析によって決定されたエピトープと一貫している。また、グリコシル化工学は、１Ｄ５及び１３Ａ９のものなどのエピトープにおける微妙な相違を区別することができる。上記に示されるように、Ｘ線結晶構造分析は、１Ｄ５及び１３Ａ９が部分的に重複するエピトープを含有することを示す（図４０Ａ〜図４０Ｃ）。両方の抗体の結合は、Ｇｌｙｃｏ１４（Ｇ２４３Ｎ）及びＧｌｙｃｏ１６（Ｒ２７９Ｎ）バリアントによって、異なる程度にであるが、影響を受けた。１Ｄ５結合はＧｌｙｃｏ１４（Ｇ２４３Ｎ）またはＧｌｙｃｏ１６（Ｒ２７９Ｎ）バリアントのいずれかによって完全に無効化されたが、１３Ａ９はこれらの２つのバリアントのいずれかへの結合における部分的な喪失のみを示した。Ｘ線結晶構造の比較は、Ｇｌｙｃｏ１４（Ｇ２４３Ｎ）及びＧｌｙｃｏ１６（Ｒ２７９Ｎ）バリアントが１Ｄ５  Ｆａｂとの結合界面の中心にある一方で、それらが１３Ａ９  Ｆａｂとの結合界面の周辺にあることを明らかにする（図４６Ｂ）。ＭＩＣＡ＊００８の２４３及び２７９位にあるグリコシル化は、１Ｄ５エピトープ／パラトープ相互作用の中心にかさ高い糖を導入し、結合を破壊するが、同じ糖は、１３Ａ９エピトープ／パラトープの側部にＦａｂから離して曲げることによって潜在的に収容することができ、結合の部分的な喪失のみを引き起こす。
【０４７６】
ＦＰＯＰによって決定された１Ｄ５のエピトープの、結晶構造によって決定されたエピトープに対する比較は、重複する結果を明らかにする（図４６Ｃ）。ＦＰＯＰエピトープは、ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインへの１Ｄ５  Ｆａｂの結合によってトリプシンペプチドＡｓｎ２３４−Ａｒｇ２４０における残基Ｔｒｐ２３９及びキモトリプシンペプチドＶａｌ２６８−Ｐｈｅ２８０におけるＰｈｅ２８０に与えられた酸化保護によって定義された。これらの２つのＦＰＯＰペプチドには、共結晶構造からの１Ｄ５エピトープの一部として定義される残基Ａｒｇ２７９及びＡｒｇ２４０が含まれる（表１０及び図２４Ａ〜図２４Ｄ）。
【０４７７】
アラニンスキャニングによって決定された１Ｄ５のエピトープの、結晶構造によって決定されたエピトープに対する比較も、高度に重複する結果を明らかにする（図４６Ｃ）。アラニンスキャニングによって１Ｄ５エピトープの一部として特定された残基Ａｒｇ２４０、Ｇｌｎ２４１、Ｖａｌ２４４、Ｓｅｒ２４５、Ａｓｐ２４９、Ｔｈｒ２５０、Ａｒｇ２７９、Ｔｙｒ２８３、Ｈｉｓ２９０、及びＴｈｒ２９２を、結晶構造におけるエピトープの一部としても特定した。残基Ａｓｐ２４２、Ｇｌｙ２４３、及びＬｅｕ２４６は結晶構造によって決定された１Ｄ５エピトープの一部であるが、それらはアラニンスキャニングにおいて試験することができなかった。これらの残基は、アラニンに変異される場合、（「背面」上の）ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインの反対面に結合することが知られる抗体によるこれらの変異体への結合の欠如によって推論されるように、誤って折り畳まれたタンパク質をもたらした。結晶構造によってエピトープの一部として特定された３つの残基、Ｓｅｒ２４７、Ｓｅｒ２９１、及びＰｒｏ２９４のみが、アラニンスキャニングによって決定されたエピトープの一部ではなかった。これらの残基の全ては、結晶構造においてエピトープの周辺にある（図２４Ａ〜図２４Ｄ）。４つの追加の残基、Ｈｉｓ２４８、Ｇｌｕ２７６、Ｇｌｕ２８５、及びＳｅｒ２８７が、結晶構造によって決定されたエピトープにおいて見られなかったアラニンスキャニングによる１Ｄ５エピトープの一部として特定された。これらの残基は全て、共結晶構造において決定されるエピトープの周辺に沿って見られる（図４６Ｃ）。
【０４７８】
結晶構造解析は２つのタンパク質間の結合界面についての非常に高い分解能の配列情報を提供するのでエピトープ決定の黄金律であるが、これは非常に労働集約的かつ低スループットである。アラニンスキャニングは、個別の残基のレベルで結合分解能も提供しながら、多くの個別のアラニン点変異体を発現、精製、及び特徴付けしなければならないので、結晶構造解析よりも労働集約度がわずかに低いのみである。ＦＰＯＰは、依然としてより高スループットであるが、結合残基が線状ペプチド内で特定され、ペプチド断片が一次アミノ酸配列におけるプロテアーゼ切断部位の存在または非存在によって決定されるという事実によって配列分解能が損なわれる。加えて、全てのアミノ酸が等しく酸化を受けやすいわけではなく、側鎖が主鎖ペプチド骨格よりもより受けやすい。したがって、エピトープ中の全ての接触残基が、結晶構造でそうであるとおりにＦＰＯＰによって特定されるわけではない。
【０４７９】
抗体のペアワイズ併用の相互ブロッキング試験は、エピトープマッピングの最高スループット方法であるが、低分解能配列情報に悩まされる。グリコシル化工学は、相互ブロッキングまたはＦＰＯＰなどの方法の高スループットとアラニンスキャニング及び結晶構造解析の高分解能配列情報とを組み合わせる。グリコシル化工学は、抗体の大パネルのエピトープを個別の残基レベルの分解能でマッピングする高速高スループット方法を提供する。
【０４８０】
１Ｄ５及び１３Ａ９エピトープと前述のエピトープとの比較
シェディングをブロッキングする前述の抗ＭＩＣＡ／Ｂエピトープの全ては、アミノ末端ベータ鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義されるＭＩＣＡ／Ｂの「背面」をマッピングする。これらには、Ｄａｎａ  ＦａｒｂｅｒのＣＭ３３３２２  Ａｂ４、ＣＭ３３３２２  Ａｂ２８、及びＣＭ３３３２２  Ａｂ２９、Ｉｎｎａｔｅ  Ｐｈａｒｍａの１６Ａ８、ならびにＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ＷａｓｈｉｎｇｔｏｎのＨ９抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体が含まれる（図４７Ａ〜図４７Ｂ）。これは、カルボキシ末端ベータ鎖を含有するＩｇドメインのベータシートとして定義されるＭＩＣＡ／Ｂの「前面」にマッピングする１Ｄ５及び１３Ａ９エピトープとは対照的である（図４７Ａ〜図４７Ｂ）。
【０４８１】
実施例１１：Ｂｉａｃｏｒｅ抗ＭＩＣＡ／Ｂヒト化バリアント動態
１Ｄ５、１３Ａ９、及び１５Ｆ１１抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体のヒト化バリアントの結合動態を、Ｂｉａｃｏｒｅ  ８Ｋ機器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて測定した。タンパク質Ａセンサチップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を製造業者が提供するプロトコルに従って使用し、ヒト化抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体を捕捉した。ＭＩＣＡ／Ｂ対立遺伝子は除外した。ヒトＭＩＣＡ  ００２、００４、００８、及びＭＩＣＢ  ００５アルファ３ドメイン（Ｈｉｓタグ付き、インハウス）への抗体結合を測定した。ＭＩＣＡ／Ｂの結合のセンサグラムは、注入時間２分、流速３０ｍｌ／分、２５℃の温度で、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、及び０．００５％Ｔｗｅｅｎ２０のランニングバッファを用いて記録した。注入後、抗体からのアルファ３ドメインの解離をランニングバッファ中で１０分間監視した。結合サイクル間に、１０ｍＭグリシン−ＨＣｌ  ｐＨ１．５を６０ｕｌ注入して表面を再生させた。ランニングバッファのみを含有していたブランクを差し引いた後、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体へのＭＩＣＡ結合について観察されたセンサグラムを、製造業者によって供給されたソフトウェアで１：１ラングミュア結合モデルを使用して分析して、動態及び結合定数を計算した。１：１結合モデルを使用してデータを分析した。捕捉された抗ＭＩＣＡ抗体へのＭＩＣＡ対立遺伝子結合のセンサグラムを使用して、解離定数（Ｋｄ）を計算した。これらのデータからの動力学定数を表１６に提供する。
表１６：そのリガンドへの抗ＭＩＣＡ抗体結合の動力学定数
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【０４８２】
実施例１２：インビボ腫瘍モデルにおけるＭＩＣ−ＮＫＧ２Ｄ経路の抗アルファ３ＭＩＣＡ／Ｂ抗体調節
この実施例は、インビトロ及びインビボアッセイにおける抗ＭＩＣ（１Ｄ５抗体）調節の効果を記載する。
【０４８３】
序論
ＭＩＣＡ（ＭＨＣクラスＩ鎖関連遺伝子Ａ）発現は細胞ストレスに応じて誘導され、腫瘍細胞において、ＭＩＣＡはＤＮＡ損傷によって誘導される。ＭＩＣＡは、ＣＤ８＋  Ｔ及びＮＫ細胞上の活性化受容体ＮＫＧ２Ｄに結合する。ＮＫＧ２Ｄ係合は、次いでＮＫ細胞における細胞溶解活性を誘導し、ＣＤ８＋Ｔ細胞を共刺激する。腫瘍細胞は細胞表面ＭＩＣＡを切断し、低減した表面ＭＩＣ発現はＮＫＧ２Ｄ媒介性腫瘍細胞殺滅を弱める。ＭＩＣＡのシェディングは、腫瘍細胞へのＮＫＧ２Ｄ媒介性結合に干渉し得る。抗ＭＩＣ抗体の作用機序について提案された仮説は、抗ＭＩＣ抗体がシェディングを防止し、細胞傷害性細胞による表面発現及び認識を増加するということである。
【０４８４】
結果
実施例８に記載されるように、様々な細胞株：ＭＥＬ−ＪＵＳＯ、ＨＣＣ１５３４、及びＰＡＮＣ−１を使用して細胞シェディングアッセイを行った。細胞を３７℃で抗ＭＩＣ  １Ｄ５抗体を含有する培地において２４時間インキュベートした。その後、細胞上清を採取し、（必要に応じて）希釈し、適切なＥＬＩＳＡフォーマット（ＭＩＣＡまたはＭＩＣＢ）において分析し、対応するＭＩＣ  ＥＣＤ材料を使用して定量化した。式：１−（［ｓＭＩＣ］ａｂ−処置細胞ｓｕｂ）／（［ｓＭＩＣ］未処置細胞）を使用してシェディング阻害パーセントを計算し、式中、ｓＭＩＣは可溶性ＭＩＣＡまたは可溶性ＭＩＣＢを表した。これらのデータからＥＣ５０も決定した。表１７は、各細胞シェディングアッセイについての抗体親和性、ＩＣ５０、及び最大阻害パーセントを示す。
表１７：抗体１Ｄ５の切断阻害活性
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【０４８５】
次に、ＮＫＧ２Ｄ−Ｆｃ、抗Ｆｃ抗体、及び抗ＭＩＣ抗体を使用してＭＩＣ−ＮＫＧ２Ｄ相互作用を評価した。図４８に示されるように、ブロッキング抗体８Ｃ５はＮＫＧ２Ｄ結合を用量依存的様式で破壊する一方で、１Ｄ５抗体はＭＩＣ−ＮＫＧ２Ｄ相互作用に干渉しなかった。
【０４８６】
ＭＩＣＡ＊００８α３ドメインに結合した１Ｄ５  Ｆａｂの結晶構造は、１Ｄ５がＣ末端ベータ鎖を含有するα３ドメインの「前面」に結合することを示した（図４９Ａ）。加えて、１Ｄ５のエピトープは、Ｆａｂの４．５Å以内のＭＩＣＡ残基として定義され、報告された切断部位は、ＭＩＣＡ＊００８アルファα３ドメインの「前面」の表面上で特定された（図４９Ｂ）。まとめると、これらの所見は、１Ｄ５エピトープ及びＭＩＣＡ切断部位の１Ｄ５  Ｆａｂ−ＭＩＣＡ＊００８α３ドメイン複合体における重複を示す。
【０４８７】
ＢＡＬＢ／ｃ  ＳＣＩＤマウスにおけるＨＣＣ１５３４細胞から増殖させた異種移植腫瘍モデルにおける１Ｄ５処置の抗腫瘍効果を次いで分析した。図５０Ａに示されるように、各マウス（ｎ＝１０マウス／処置群）における腫瘍接種に１千万個のＨＣＣ１５３４細胞を使用した。抗ＭＩＣ  １Ｄ５  ＩｇＧ２ａ、抗ＭＩＣ  １Ｄ５  ＩｇＧ１、または抗ｇｐ１２０（対照）を次いでＴＩＷで４週間にわたって各群に投与した。その後、ＰＫ試料を７日毎に２１日間回収した。カリパス測定による腫瘍体積は、１Ｄ５  ＩｇＧ１ではなく、抗ＭＩＣ  １Ｄ５  ＩｇＧ２ａ処置で予防有効性を示し、抗体エフェクター機能が必要であることを示した。（図５０Ｂ）。腫瘍を接種後７日目にも採取し、処理し、ＦＡＣＳ分析のために抗体で染色し、ＨＣＣ１５３４腫瘍成長阻害がＮＫ細胞数の増加（図５０Ｃ）及びグランザイムＢ発現（図５０Ｄ）と関連付けられることを示した。
【０４８８】
次に、ドキシサイクリン（ｄｏｘ）誘導後にＭＩＣＡ（Ｂ１６−ＭＩＣＡ００２）を発現するように操作された１×１０４個のＢ１６細胞を、ウェルあたり１ｕｇ／ｍＬのｄｏｘ及び５ｕｇ／ｍＬの抗体とともに２４時間にわたって播種した。細胞を次いで採取し、ＭＩＣＡ表面発現について染色した。１Ｄ５処置は、Ｂ１６−ＭＩＣＡ００２におけるＭＩＣＡ表面発現をｄｏｘ依存的様式で安定化することが見出された（図５１Ａ）。Ｂ１６−ＭＩＣＡ００２細胞から増殖させた異種移植腫瘍モデルにおける１Ｄ５処置の抗腫瘍効果を次いで分析した。図５１Ｂに示されるように、カリパス測定による腫瘍体積は、単剤として投与された場合に抗ＭＩＣ  １Ｄ５  ＩｇＧ２ａ処置及び抗ＰＤ−Ｌ１での控えめな予防有効性を示した。しかしながら、抗ＰＤＬ１及び抗ＭＩＣ  １Ｄ５  ＩｇＧ２ａの両方が投与された群においてロバストな相加効果が観察された。腫瘍成長は、抗ＭＩＣ  １Ｄ５  ＩｇＧ１での処置による影響を受けず、ＡＤＣＣが重要な機序であり得ることを示した。
【０４８９】
結論
抗ＭＩＣ抗体、１Ｄ５は、インビトロで切断阻害を示し、複数の対立遺伝子に対する広範囲の活性を例証し、ＭＩＣ−ＮＫＧ２Ｄ相互作用に干渉しなかった。加えて、１Ｄ５−ＭＩＣＡ＊００８複合体の結晶構造は、１Ｄ５エピトープとＭＩＣＡ切断部位との重複を明らかにした。
【０４９０】
抗腫瘍有効性は、マウス異種移植モデル、ＨＣＣ１５３４における１Ｄ５の予防的抗体投薬で観察され、ＮＫ細胞の数の増加及びＮＫ細胞におけるグランザイムＢ発現の増加と関連付けられた。
【０４９１】
最後に、Ｂ１６．Ｆ１０  ＭＩＣＡ００２誘導性過剰発現モデルにおいて、１Ｄ５は、単剤効果及び抗ＰＤＬ１と組み合わされた場合のロバストな相加効果の両方を有した。
【０４９２】
実施例１３：異なるマッピング方法を使用するエピトープの比較
この実施例は、表１８に示される様々なエピトープマッピング方法を使用して抗ＭＩＣ抗体１Ｄ５、１３Ａ９、及び６Ｅ１．１．１２について決定されたエピトープをまとめる。
表１８：エピトープ比較。
2019535250.tif 000038
2019535250.tif 000039
注記：Ｎ．Ｄ．＝未決定。
【０４９３】
実施例１４：抗ＭＩＣＡ／Ｂヒト化バリアントを使用するＭＩＣＡシェディング阻害及び干渉
この実施例は、ＨＥＫ２９３及びＣＨＯ細胞株におけるＭＩＣシェディング阻害及び干渉についてのヒト化抗ＭＩＣ抗体の試験を記載する。
【０４９４】
結果
バリアント試料について、残留可溶性ＭＩＣ（ｓＭＩＣＢよりも多量のｓＭＩＣＡ）を含有するｈＩｇＧ２ａ  ＨＥＫ２９３由来材料を使用した。この干渉は、試料におけるｓＭＩＣの過回復を引き起こし、見かけシェディング阻害の低下をもたらした（表１９）。ｓＭＩＣは抗体で共希釈され、したがって、より少ない抗体がより少ない干渉を示した。抗体の変動する濃度のために、試料中のｓＭＩＣの量は各抗体で変動した。干渉を複雑にして、精製方法にかかわらず観察された抗体干渉のためにｓＭＩＣの人工的な回復不足があり得る（ＣＨＯ対ＨＥＫ２９３）。結果として、報告されたデータは、阻害及び干渉の両方について、０．６２５ｕｇ／ｍＬのＭＩＣＡ試料及びＭＩＣＢについて２．５ｕｇ／ｍＬからのものであり、これらのそれぞれの濃度で、多くの試料は正のｓＭＩＣ関連干渉の大部分を薄めたが、抗体効果は依然として観察された。観察された抗体効果は最大限の潜在的な阻害を反映しない場合があり得ることに留意すべきである。
【０４９５】
以前のデータは、ＨＣＣ１５３４（ＭＩＣＡ＊００４及びＭＩＣＢ＊００５）上で抗体からのいくらかの負のシグナル干渉があり、ＭＥＬ−ＪＵＳＯ（ＭＩＣＡ＊００８）上ではかなり小さかったことを示した。これらの２つの種類の相反するシグナル干渉のために、ＨＣＣ１５３４  ＭＩＣＡ＊００４上のいくらかの正のシグナル（ＭＩＣ）及び負のシグナル（Ａｂ）干渉、ＭＥＬ−ＪＵＳＯ  ＭＩＣＡ＊００８上の主に正のシグナル（ＭＩＣ）干渉、ならびにＨＣＣ１５３４  ＭＩＣＢ＊００５上の主に負のシグナル（Ａｂ）干渉が予想された。対照抗体について、ｍＩｇＧ２ａ  ＣＨＯ由来材料を使用し、よって、観察された唯一の顕著な干渉は負であり、場合によっては生物学的活性の真のレベルよりも有力な結果をもたらした。アッセイばらつきのために、ｓＭＩＣの絶対量は、阻害及び干渉アッセイ間で変動し得た。
【０４９６】
次の抗体：１Ｄ５ｖ２、１Ｄ５ｖ１５、１Ｄ５ｖ２８、１３Ａ９ｖ１、及び１５Ｆ１１ｖ１において不十分な試料があった。したがって、以前の抗体調製物を使用した。オートメーションエラーのために、前述の試料の精度を保証することができなかった。１Ｄ５ｖ１４は再希釈することができたが、新たな試料調製物は濃度が意図されたものよりもわずかに低かった。１Ｄ５ｖ１４の元のかつ場合によっては不正確な試料希釈液も分析した（表１９）。
【０４９７】
いくつかの干渉試料、特にＨＣＣ１５３４  Ａ００４：１３Ａ９  ｖ１、ＭＥＬ−ＪＵＳＯ  Ａ００８：１Ｄ５ｖ１０、及び１３Ａ９ｖ１、ならびにＨＣＣ１５３４  Ｂ００５：１Ｄ５ｖ３、１Ｄ５ｖ２２、及び１５Ｆ１１ｖ３が、ワッシャーピンの詰まりによりアッセイプレート上のウェルが冷えたために欠損していた。よって、これらの条件の各々について結果を決定することができなかったので、「ＮＤ」値を割り当てた（表１９）。
【０４９８】
表２０に示されるように、完全カットオフを、適切なプレート上の非処置試料の全ての標準偏差を３倍することによって決定される阻害パーセント（％）として定義した。平均を、３つのアッセイプレートを使用して決定した。
【０４９９】
ＨＣＣ１５３４細胞におけるＭＩＣＡ＊００４シェディング阻害
全ての１Ｄ５バリアントは（易感染性であり得る１Ｄ５ｖ２８を除き）、いくらかの分散、及び小さな干渉のみとともに、非バリアント抗体（約５０〜６０％）とほぼ同等の阻害活性を示した（表１９）。一般に、１３Ａ９バリアントは、最小限の阻害を示した。１５Ｆ１１バリアントは、活性をマスキングしたであろう顕著な正のｓＭＩＣ干渉を示した潜在的に易感染性の試料１５Ｆ１１ｖ１、ならびに１５Ｆ１１ｖ４及び１５Ｆ１１ｖ６を除き、非バリアント抗体（約５０％）とほぼ同様の活性を示した。
【０５００】
ＭＥＬ−ＪＵＳＯ細胞におけるＭＩＣＡ＊００８シェディング阻害
ＭＥＬ−ＪＵＳＯは、典型的には、ＣＨＯ試料での非常にわずかな抗体干渉を示した。よって、ほとんどの干渉はこれらの試料中のｓＭＩＣに起因すると予想され、実際にｓＭＩＣ増加効果は他の細胞株よりも大きい。
【０５０１】
全ての１Ｄ５バリアントは、易感染性であり得る１Ｄ５ｖ２８を除き、いくらかの分散とともに、かつ（ＨＥＫ２９３材料対他の細胞株及び対立遺伝子からのかなり大きなｓＭＩＣ干渉があるが）抗体阻害干渉がほとんどなく、非バリアント抗体（約６０〜７０％）とほぼ同等の阻害活性を示した（表１９）。一般に、１３Ａ９バリアントは、阻害をほとんど〜全く示さなかった。１５Ｆ１１バリアントは、活性をマスキングしたであろう顕著な正のｓＭＩＣ干渉を示した潜在的に易感染性の試料１５Ｆ１１ｖ１、ならびに１５Ｆ１１ｖ４及び１５Ｆ１１ｖ６を除き、非バリアント抗体（約６０％）とほぼ同様の活性を示した。
【０５０２】
ＨＣＣ１５３４細胞におけるＭＩＣＢ＊００５シェディング阻害
干渉プレートの予想よりも大きいばらつきのために、完全カットオフは、阻害カットオフよりも高かった。全ての１Ｄ５バリアントは（易感染性であり得る１Ｄ５ｖ２８を除き）、そのアッセイの予想よりも大きいばらつきに起因する可能性が高い、いくらかの分散、及び変動する負のシグナル（Ａｂ）干渉の程度とともに、非バリアント抗体（約６０％）よりも約１０％低い、いくらかの阻害活性（約４０〜５０％）を示した（表１９）。一般に、１３Ａ９バリアントは、おそらく易感染性であった１３Ａ９ｖ１を除き、非バリアント１３Ａ９とほぼ同等の顕著な阻害を示した。１５Ｆ１１バリアントは、活性をマスキングしたであろう顕著な正のｓＭＩＣ干渉を示した潜在的に易感染性の試料１５Ｆ１１ｖ１、ならびに１５Ｆ１１ｖ４及び１５Ｆ１１ｖ６を除き、非バリアント抗体及び１Ｄ５（約４０％）とほぼ同様の活性を示した。
表１９：干渉による阻害及び低減パーセント
2019535250.tif 000040
2019535250.tif 000041
2019535250.tif 000042
注記：ＮＤ＝未決定。＾＝再ラン中の試料のうち、前回ランから装填されたロボット正規化試料であり、正しい抗体希釈、誤った抗体希釈、または抗体が添加されていないものを指し得る。＾＾＝低い体積のために意図された濃度よりもわずかに低く希釈した。灰色で示されるものは、１Ｄ５ｖ１４について収集された第２のデータ点である。
表２０：阻害及び干渉カットオフ値。
2019535250.tif 000043
注記：完全カットオフは、非処置試料を下回る３つの標準偏差以内の阻害として定義された。
【０５０３】
前述の発明は、明確な理解のために例証及び例によっていくらか詳細に記載されているが、説明及び例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書で引用される全ての特許及び科学文献の開示は、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。
配列
超可変領域配列
2019535250.tif 000044
2019535250.tif 000045
フレームワーク配列
軽鎖フレームワーク配列
2019535250.tif 000046
重鎖フレームワーク配列
2019535250.tif 000047
可変ドメイン配列
2019535250.tif 000048
2019535250.tif 000049
【０５０４】
１Ｄ５、１３Ａ９、及び１５Ｆ１１のヒト化バリアント、ならびにマウスキメラ１Ｄ５、１３Ａ９、１５Ｆ１１、１８Ｇ３、及び１２Ｈ１０の超可変領域配列、重鎖及び軽鎖フレームワーク配列、ならびに可変ドメイン配列を下記の表に示す（配列番号２０９〜配列番号４４０）。
超可変領域配列
2019535250.tif 000050
2019535250.tif 000051
フレームワーク配列
軽鎖フレームワーク配列
2019535250.tif 000052
2019535250.tif 000053
重鎖フレームワーク配列
2019535250.tif 000054
2019535250.tif 000055
可変ドメイン配列
2019535250.tif 000056
2019535250.tif 000057
2019535250.tif 000058
2019535250.tif 000059
2019535250.tif 000060
2019535250.tif 000061
配列番号１９３〜配列番号２０８
配列番号１９３
ＭＩＣＡ＊００８（シグナル配列を含む）
2019535250.tif 000062
実施例における構成体の配列
配列番号１９４
＞ＭＩＣＡ００８．ｍｕＩｇＧ２ａ（ａ３ドメイン太字）
2019535250.tif 000063
配列番号１９５
＞ＭＩＣＡ００８．Ｈｉｓ（ａ３ドメイン太字）
2019535250.tif 000064
配列番号１９６
＞ＭＩＣＡ００２．Ｈｉｓ（ａ３ドメイン太字）
2019535250.tif 000065
配列番号１９７
＞ＭＩＣＡ００４．Ｈｉｓ（ａ３ドメイン太字）
2019535250.tif 000066
配列番号１９８
＞ＭＩＣＢ００５．Ｈｉｓ（ａ３ドメイン太字）
2019535250.tif 000067
配列番号１９９
＞ＭＩＣＡ．００８．ａ３．Ｔ２０４−Ｓ２９７．ｍＩｇＧ２ａ．野生型
2019535250.tif 000068
配列番号２００
＞ＭＩＣＡ．００８．ａ３．Ｔ２０４−Ｓ２９７．Ｅ２１５Ｎ．Ｇ２４３Ｎ．Ｈ２４８Ｎ．Ｒ２７９Ｎ．Ｎ２９８のＣ末端挿入．Ｇ２９９．Ｓ３００．ｍＩｇＧ２ａ．Ｇｌｙｃｏ４（超グリコシル化）
2019535250.tif 000069
配列番号２０１
＞ＭＩＣＡ．００８．ａ３．Ｒ２０２−Ｓ２９７．Ｒ２０２Ｎ  ｍＩｇＧ２ａ．Ｇｌｙｃｏ１１
2019535250.tif 000070
配列番号２０２
＞ＭＩＣＡ．００８．ａ３．Ｔ２０４−Ｓ２９７．Ｅ２１５Ｎ．ｍＩｇＧ２ａ．Ｇｌｙｃｏ１２
2019535250.tif 000071
配列番号２０３
＞ＭＩＣＡ．００８．ａ３．Ｔ２０４−Ｓ２９７．Ｉ２３６Ｔ．ｍＩｇＧ２ａ．Ｇｌｙｃｏ１３
2019535250.tif 000072
配列番号２０４
＞ＭＩＣＡ．００８．ａ３．Ｔ２０４−Ｓ２９７．Ｇ２４３Ｎ．ｍＩｇＧ２ａ．Ｇｌｙｃｏ１４
2019535250.tif 000073
配列番号２０５
＞ＭＩＣＡ．００８．ａ３．Ｔ２０４−Ｓ２９７．Ｈ２４８Ｎ．ｍＩｇＧ２ａ．Ｇｌｙｃｏ１５
2019535250.tif 000074
配列番号２０６
＞ＭＩＣＡ．００８．ａ３．Ｔ２０４−Ｓ２９７．Ｒ２７９Ｎ．ｍＩｇＧ２ａ．Ｇｌｙｃｏ１６
2019535250.tif 000075
配列番号２０７
＞ＭＩＣＡ．００８．ａ３．Ｔ２０４−Ｓ２９７．Ｎ２９８のＣ末端挿入．Ｇ２９９．Ｓ３００．ｍＩｇＧ２ａ．Ｇｌｙｃｏ１７
2019535250.tif 000076
配列番号２０８
＞ＭＩＬＬ１−ＭＩＣＡキメラ．マウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃ融合
2019535250.tif 000077
【図１Ａ】
2019535250.tif 000078
【図１Ｂ】
2019535250.tif 000079
【図１Ｃ】
2019535250.tif 000080
【図１Ｄ】
2019535250.tif 000081
【図１Ｅ】
2019535250.tif 000082
【図１Ｆ】
2019535250.tif 000083
【図１Ｇ】
2019535250.tif 000084
【図１Ｈ】
2019535250.tif 000085
【図１Ｉ】
2019535250.tif 000086
【図１Ｊ】
2019535250.tif 000087
【図１Ｋ】
2019535250.tif 000088
【図１Ｌ】
2019535250.tif 000089
【図２】
2019535250.tif 000090
【図３−１】
2019535250.tif 000091
【図３−２】
2019535250.tif 000092
【図３−３】
2019535250.tif 000093
【図４】
2019535250.tif 000094
【図５】
2019535250.tif 000095
【図６】
2019535250.tif 000096
【図７Ａ】
2019535250.tif 000097
【図７Ｂ】
2019535250.tif 000098
【図８】
2019535250.tif 000099
【図９】
2019535250.tif 000100
【図１０】
2019535250.tif 000101
【図１１Ａ】
2019535250.tif 000102
【図１１Ｂ】
2019535250.tif 000103
【図１２】
2019535250.tif 000104
【図１３Ａ】
2019535250.tif 000105
【図１３Ｂ】
2019535250.tif 000106
【図１３Ｃ】
2019535250.tif 000107
【図１４Ａ】
2019535250.tif 000108
【図１４Ｂ】
2019535250.tif 000109
【図１４Ｃ】
2019535250.tif 000110
【図１４Ｄ】
2019535250.tif 000111
【図１４Ｅ】
2019535250.tif 000112
【図１４Ｆ】
2019535250.tif 000113
【図１５Ａ】
2019535250.tif 000114
【図１５Ｂ】
2019535250.tif 000115
【図１６Ａ】
2019535250.tif 000116
【図１６Ｂ】
2019535250.tif 000117
【図１６Ｃ】
2019535250.tif 000118
【図１７】
2019535250.tif 000119
【図１８Ａ】
2019535250.tif 000120
【図１８Ｂ】
2019535250.tif 000121
【図１９−１】
2019535250.tif 000122
【図１９−２】
2019535250.tif 000123
【図２０】
2019535250.tif 000124
【図２１Ａ】
2019535250.tif 000125
【図２１Ｂ】
2019535250.tif 000126
【図２１Ｃ】
2019535250.tif 000127
【図２１Ｄ】
2019535250.tif 000128
【図２２Ａ】
2019535250.tif 000129
【図２２Ｂ】
2019535250.tif 000130
【図２２Ｃ】
2019535250.tif 000131
【図２２Ｄ】
2019535250.tif 000132
【図２３】
2019535250.tif 000133
【図２４−１】
2019535250.tif 000134
【図２４−２】
2019535250.tif 000135
【図２５Ａ】
2019535250.tif 000136
【図２５Ｂ】
2019535250.tif 000137
【図２５Ｃ】
2019535250.tif 000138
【図２５Ｄ】
2019535250.tif 000139
【図２６】
2019535250.tif 000140
【図２７−１】
2019535250.tif 000141
【図２７−２】
2019535250.tif 000142
【図２７−３】
2019535250.tif 000143
【図２７−４】
2019535250.tif 000144
【図２８Ａ】
2019535250.tif 000145
【図２８Ｂ】
2019535250.tif 000146
【図２８Ｃ】
2019535250.tif 000147
【図２８Ｄ】
2019535250.tif 000148
【図２９】
2019535250.tif 000149
【図３０−１】
2019535250.tif 000150
【図３０−２】
2019535250.tif 000151
【図３１Ａ】
2019535250.tif 000152
【図３１Ｂ】
2019535250.tif 000153
【図３１Ｃ】
2019535250.tif 000154
【図３１Ｄ】
2019535250.tif 000155
【図３２】
2019535250.tif 000156
【図３３−１】
2019535250.tif 000157
【図３３−２】
2019535250.tif 000158
【図３３−３】
2019535250.tif 000159
【図３４Ａ】
2019535250.tif 000160
【図３４Ｂ】
2019535250.tif 000161
【図３４Ｃ】
2019535250.tif 000162
【図３４Ｄ】
2019535250.tif 000163
【図３５】
2019535250.tif 000164
【図３６−１】
2019535250.tif 000165
【図３６−２】
2019535250.tif 000166
【図３７Ａ】
2019535250.tif 000167
【図３７Ｂ】
2019535250.tif 000168
【図３７Ｃ】
2019535250.tif 000169
【図３８】
2019535250.tif 000170
【図３９−１】
2019535250.tif 000171
【図３９−２】
2019535250.tif 000172
【図３９−３】
2019535250.tif 000173
【図３９−４】
2019535250.tif 000174
【図３９−５】
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【図３９−６】
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【図４０Ａ】
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【図４０Ｂ】
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【図４０Ｃ】
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【図４１Ａ】
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【図４１Ｂ】
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【図４２】
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【図４３Ａ】
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【図４３Ｂ】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６Ａ】
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【図４６Ｂ】
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【図４６Ｃ】
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【図４７Ａ】
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【図４７Ｂ】
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【図４８】
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【図４９Ａ】
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【図４９Ｂ】
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【図５０Ａ】
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【図５０Ｂ】
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【図５０Ｃ】
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【図５０Ｄ】
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【図５１Ａ】
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【図５１Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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