(57)【要約】本発明は、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ−４阻害剤、またはＶＩＳＴＡ阻害剤）などの他の免疫調節剤および／または先天免疫活性化剤（例えば、ＴＬＲ−４作動薬）と組み合わせて作動性抗ＣＤ４０抗体を利用する方法および関連する組成物を提供する。高親和性の抗ＣＤ４０抗体組み合わせが、癌および他の疾患の治療のための任意の種々の治療法において使用され得る。特に、抗ＣＤ４０抗体ＡＰＸ００５Ｍと免疫チェックポイント阻害剤または先天免疫活性化剤との組み合わせが開示される。【選択図】図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を有する患者を治療するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
【請求項２】
癌を有する患者において癌細胞の増殖を阻害するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
【請求項３】
癌を有する患者において腫瘍の成長を阻害するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
【請求項４】
癌を有する患者において癌細胞の抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を誘導するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
【請求項５】
癌を有する患者において癌細胞に対する抗体依存性細胞介在性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘導するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
【請求項６】
患者において樹状細胞を活性化するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
【請求項７】
患者において抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
【請求項８】
抗原提示細胞を活性化するための方法であって、樹状細胞を抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤に接触させることを含む、方法。
【請求項９】
癌を有する患者においてＴ細胞増殖を誘導するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
【請求項１０】
癌を有する患者においてＴ細胞のインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）産生を増大するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
【請求項１１】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗ＣＤ４０抗体がＡＰＸ００５Ｍである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記癌が、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫、ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される、請求項１〜５、９、および１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗原提示細胞が、Ｂ細胞、樹状細胞、またはマクロファージである、請求項７または請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
前記Ｔ細胞がＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項９または請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記Ｔ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項９または請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
癌を有する患者を治療するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
【請求項１８】
癌を有する患者において癌細胞の増殖を阻害するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
【請求項１９】
癌を有する患者において腫瘍の成長を阻害するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
【請求項２０】
癌を有する患者において癌細胞の抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を誘導するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
【請求項２１】
癌を有する患者において癌細胞に対する抗体依存性細胞介在性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘導するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
【請求項２２】
患者において樹状細胞を活性化するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
【請求項２３】
患者において抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
【請求項２４】
抗原提示細胞を活性化するための方法であって、樹状細胞を抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤およびＴＬＲ−４作動薬に接触させることを含む、方法。
【請求項２５】
癌を有する患者においてＴ細胞増殖を誘導するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
【請求項２６】
癌を有する患者においてＴ細胞のインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）産生を増大するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
【請求項２７】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される、請求項１７〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記抗ＣＤ４０抗体がＡＰＸ００５Ｍである、請求項１７〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記癌が、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫、ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される、請求項１７〜２１、２５、および２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗原提示細胞が、Ｂ細胞、樹状細胞、またはマクロファージである、請求項２３または請求項２４に記載の方法。
【請求項３１】
前記Ｔ細胞がＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項２５または請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
前記Ｔ細胞がＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項２５または請求項２６に記載の方法。
【請求項３３】
抗ＣＤ４０抗体およびＰＤ−１阻害剤を含む、組成物。
【請求項３４】
前記ＰＤ−１阻害剤が抗ＰＤ−１抗体である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記ＰＤ−１阻害剤が、ニボルマブまたはペンブロリズマブである、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３６】
抗ＣＤ４０抗体およびＰＤ−Ｌ１阻害剤を含む、組成物。
【請求項３７】
前記ＰＤ−Ｌ１阻害剤が抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
前記ＰＤ−Ｌ１阻害剤がアテゾリズマブである、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３９】
抗ＣＤ４０抗体およびＣＴＬＡ−４阻害剤を含む、組成物。
【請求項４０】
前記ＣＴＬＡ−４阻害剤が抗ＣＴＬＡ−４抗体である、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
前記ＣＴＬＡ−４阻害剤がイピリムマブである、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４２】
抗ＣＤ４０抗体およびＶＩＳＴＡ阻害剤を含む、組成物。
【請求項４３】
前記ＶＩＳＴＡ阻害剤が抗ＶＩＳＴＡ抗体である、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む、組成物。
【請求項４５】
前記ＴＬＲ−４作動薬が、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）である、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
前記ＴＬＲ−４作動薬がＬＰＳである、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４７】
ＴＬＲ−４抗体がＮＩ−０１０１である、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４８】
前記抗ＣＤ４０抗体が、配列番号１を含むＶＨＣＤＲ１と、配列番号２を含むＶＨＣＤＲ２と、配列番号３を含むＶＨＣＤＲ３と、配列番号４を含むＶＬＣＤＲ１と、配列番号５を含むＶＬＣＤＲ２と、配列番号６を含むＶＬＣＤＲ３と、を含む、請求項３３〜４７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４９】
前記抗ＣＤ４０抗体が、配列番号７を含む重鎖可変領域を含む、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
前記抗ＣＤ４０抗体が、配列番号８を含む軽鎖可変領域を含む、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】
前記抗ＣＤ４０抗体が、配列番号９を含む重鎖定常領域を含む、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５２】
前記抗ＣＤ４０抗体がＡＰＸ００５Ｍである、請求項３３〜４７のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年１１月２日に出願された米国仮特許出願第６２／４１６，５５４号の優先権を主張し、この出願は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表に関する陳述
本出願に関連した配列表は、ハードコピーの代わりにテキスト形式にて提出され、これは、参照により本明細書に組み込まれる。本配列表を含むテキストファイル名は、ＡＰＥＸ＿０１８＿０１ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ．である。このテキストファイルは、７ＫＢであり、２０１７年１１月２日に作成されたものであり、ＥＦＳ−Ｗｅｂにより電子的に提出される。
背景
【０００３】
本発明は一般的に、他の免疫調節剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤および先天免疫活性化剤）と組み合わせた作動性抗ＣＤ４０抗体ならびにその使用方法に関する。かかる組み合わせは、例えば、様々な腫瘍学的疾患を治療するための方法において有用である。
【背景技術】
【０００４】
Ｔ細胞の完全な活性化は、２つの別個であるが相乗的なシグナルを必要とする。Ｔ細胞抗原受容体によって送達される第１のシグナルは、ＡＰＣ上の抗原およびＭＨＣ複合体によって提供され、免疫応答の特異性に関与する。第２の、すなわち共刺激シグナルは、ＣＤ２８とＢ７−１（ＣＤ８０）／Ｂ７−２（ＣＤ８６）の相互作用およびＣＤ４０とＣＤ４０Ｌの相互作用によるものであり、これらの相互作用は、フルスケールＴ細胞応答を開始するために必要とされる。共刺激シグナル不在下では、Ｔ細胞は、抗原刺激の際に無応答性（アネルギー）またはプログラムされた細胞死（アポトーシス）に至る可能性がある。
【０００５】
ＣＤ４０は、正常免疫細胞によって発現されるばかりでなく、多くの悪性細胞によっても発現される。特に、ＣＤ４０は、Ｂ系列非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）細胞、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、ホジキン病（Ｕｃｋｕｎ  ＦＭ，Ｇａｊｌ−Ｐｅｃｚａｌｓｋａ  Ｋ，Ｍｙｅｒｓ  ＤＥ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １９９０；７６：２４４９−２４５６；Ｏ’Ｇｒａｄｙ  ＪＴ，Ｓｔｅｗａｒｔ  Ｓ，Ｌｏｗｒｅｙ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １９９４；１４４：２１−２６）、多発性骨髄腫（Ｐｅｌｌａｔ−Ｄｅｃｅｕｎｙｎｃｋ  Ｃ，Ｂａｔａｉｌｌｅ  Ｒ，Ｒｏｂｉｌｌａｒｄ  Ｎ，Ｈａｒｏｕｓｓｅａｕ  ＪＬ，Ｒａｐｐ  ＭＪ，Ｊｕｇｅ−Ｍｏｒｉｎｅａｕ  Ｎ，Ｗｉｊｄｅｎｅｓ  Ｊ，Ａｍｉｏｔ  Ｍ．Ｂｌｏｏｄ．１９９４；８４（８）：２５９７−６０３）において、ならびに膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、および悪性黒色腫（Ｙｏｕｎｇ  ＬＳ，Ｅｌｉｏｐｏｕｌｏｓ  ＡＧ，Ｇａｌｌａｇｈｅｒ  ＮＪ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １９９８；１９：５０２−６；Ｚｉｅｂｏｌｄ  ＪＬ，Ｈｉｘｏｎ  Ｊ，Ｂｏｙｄ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｃｈ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｈｅｒ  Ｅｘｐ（Ｗａｒｓｚ）２０００；４８：２２５−３３；Ｇｌａｄｕｅ  Ｒ，Ｃｏｌｅ  Ｓ，Ｄｏｎｏｖａｎ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００６；２４（１８Ｓ）：１０３ｓ）において過発現される。
【０００６】
ＣＤ４０シグナリングの活性化は、腫瘍を直接阻害し、腫瘍保有宿主における抗原提示細胞の機能を救出し、腫瘍関連抗原に対する活性免疫応答を引き起こす、または回復することが示されている。ＣＤ４０作動薬は、腫瘍保有マウスにおいてＴ細胞慣用性を克服し、腫瘍関連抗原に対する有効な細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘発し、かつ抗腫瘍ワクチンの効力を強化することが報告されている（Ｅｌｉｏｐｏｕｌｏｓ  ＡＧ，Ｄａｖｉｅｓ  Ｃ，Ｋｎｏｘ  ＰＧ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２０００；２０（１５）：５５０３−１５；Ｔｏｎｇ  ＡＷ，Ｐａｐａｙｏｔｉ  ＭＨ，Ｎｅｔｔｏ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００１；７（３）：６９１−７０３）。
しかし、当該技術分野では、改良された抗癌特性を提供するために樹状細胞を活性化し、かつ免疫監視機構を増強する、癌を治療するための治療用組成物および関連する方法が依然として必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｕｃｋｕｎ  ＦＭ，Ｇａｊｌ−Ｐｅｃｚａｌｓｋａ  Ｋ，Ｍｙｅｒｓ  ＤＥ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １９９０；７６：２４４９−２４５６
【非特許文献２】Ｏ’Ｇｒａｄｙ  ＪＴ，Ｓｔｅｗａｒｔ  Ｓ，Ｌｏｗｒｅｙ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １９９４；１４４：２１−２６
【非特許文献３】Ｙｏｕｎｇ  ＬＳ，Ｅｌｉｏｐｏｕｌｏｓ  ＡＧ，Ｇａｌｌａｇｈｅｒ  ＮＪ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １９９８；１９：５０２−６
【非特許文献４】Ｚｉｅｂｏｌｄ  ＪＬ，Ｈｉｘｏｎ  Ｊ，Ｂｏｙｄ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｃｈ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｈｅｒ  Ｅｘｐ（Ｗａｒｓｚ）２０００；４８：２２５−３３
【非特許文献５】Ｇｌａｄｕｅ  Ｒ，Ｃｏｌｅ  Ｓ，Ｄｏｎｏｖａｎ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００６；２４（１８Ｓ）：１０３ｓ
【非特許文献６】Ｅｌｉｏｐｏｕｌｏｓ  ＡＧ，Ｄａｖｉｅｓ  Ｃ，Ｋｎｏｘ  ＰＧ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２０００
【非特許文献７】２０（１５）：５５０３−１５；Ｔｏｎｇ  ＡＷ，Ｐａｐａｙｏｔｉ  ＭＨ，Ｎｅｔｔｏ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００１；７（３）：６９１−７０３
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ−４阻害剤、またはＶＩＳＴＡ阻害剤）などの他の免疫調節剤および／または先天免疫活性化剤（例えば、ＴＬＲ−４作動薬）と組み合わせて作動性抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＡＰＸ００５またはＡＰＸ００５Ｍ）を利用する方法および関連する組成物を提供する。
【０００９】
本開示の一態様は、癌を有する患者を治療するための方法であって、生理的に許容される担体および治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【００１０】
ある実施形態において、癌は、異常なＣＤ４０発現に関連する。一実施形態において、癌は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される。
【００１１】
本開示の別の態様は、癌を有する患者において癌細胞の増殖を阻害するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【００１２】
ある実施形態において、癌は、異常なＣＤ４０発現に関連する。一実施形態において、癌は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される。
【００１３】
本発明の一態様は、癌を有する患者において腫瘍の成長を阻害するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡから選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【００１４】
ある実施形態において、癌は、異常なＣＤ４０発現に関連する。一実施形態において、癌は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される。
【００１５】
本開示の別の態様は、癌を有する患者において癌細胞の抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を誘導するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【００１６】
ある実施形態において、癌は、異常なＣＤ４０発現に関連する。一実施形態において、癌は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される。
【００１７】
本開示の一態様は、癌を有する患者において癌細胞に対する抗体依存性細胞介在性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘導するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【００１８】
ある実施形態において、癌は、異常なＣＤ４０発現に関連する。一実施形態において、癌は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される。
【００１９】
本開示の別の態様は、患者において樹状細胞を活性化するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【００２０】
ある実施形態において、癌は、異常なＣＤ４０発現に関連する。一実施形態において、癌は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される。
【００２１】
本開示の一態様は、患者において抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、抗原提示細胞は、Ｂ細胞、樹状細胞、またはマクロファージである。
【００２２】
本開示の別の態様は、樹状細胞を抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤に接触させることを含む、抗原提示細胞を活性化させるための方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、抗原提示細胞は、Ｂ細胞、樹状細胞、またはマクロファージである。
【００２３】
本開示の一態様は、癌を有する患者においてＴ細胞増殖を誘導するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、抗原提示細胞は、Ｂ細胞、樹状細胞、またはマクロファージである。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。
【００２４】
ある実施形態において、癌は、異常なＣＤ４０発現に関連する。一実施形態において、癌は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される。
【００２５】
本開示の別の態様は、癌を有する患者においてＴ細胞のインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）産生を増大するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。
【００２６】
ある実施形態において、癌は、異常なＣＤ４０発現に関連する。一実施形態において、癌は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される。
【００２７】
本開示の一態様は、癌を有する患者を治療するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＬＰＳまたはＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【００２８】
ある実施形態において、癌は、異常なＣＤ４０発現に関連する。一実施形態において、癌は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される。
【００２９】
本開示の別の態様は、癌を有する患者において癌細胞の増殖を阻害するための方法であって、生理的に許容される担体ならび治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＬＰＳまたはＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【００３０】
ある実施形態において、癌は、異常なＣＤ４０発現に関連する。一実施形態において、癌は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される。
【００３１】
本発明の一態様は、癌を有する患者において腫瘍の成長を阻害するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＬＰＳまたはＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【００３２】
ある実施形態において、癌は、異常なＣＤ４０発現に関連する。一実施形態において、癌は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される。
【００３３】
本開示の別の態様は、癌を有する患者において癌細胞の抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を誘導するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＬＰＳまたはＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【００３４】
ある実施形態において、癌は、異常なＣＤ４０発現に関連する。一実施形態において、癌は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される。
【００３５】
本開示の一態様は、癌を有する患者において癌細胞に対する抗体依存性細胞介在性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘導するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＬＰＳまたはＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【００３６】
ある実施形態において、癌は、異常なＣＤ４０発現に関連する。一実施形態において、癌は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される。
【００３７】
本開示の別の態様は、患者において樹状細胞を活性化するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＬＰＳまたはＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【００３８】
ある実施形態において、癌は、異常なＣＤ４０発現に関連する。一実施形態において、癌は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される。
【００３９】
本開示の一態様は、患者において抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＬＰＳまたはＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、抗原提示細胞は、Ｂ細胞、樹状細胞、またはマクロファージである。
【００４０】
本開示の別の態様は、樹状細胞を抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬に接触させることを含む、抗原提示細胞を活性化させるための方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＬＰＳまたはＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、抗原提示細胞は、Ｂ細胞、樹状細胞、またはマクロファージである。
【００４１】
本開示の一態様は、癌を有する患者においてＴ細胞増殖を誘導するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＬＰＳまたはＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、抗原提示細胞は、Ｂ細胞、樹状細胞、またはマクロファージである。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。
【００４２】
ある実施形態において、癌は、異常なＣＤ４０発現に関連する。一実施形態において、癌は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される。
【００４３】
本開示の別の態様は、癌を有する患者においてＴ細胞のインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）産生を増大するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＬＰＳまたはＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。
【００４４】
本開示の一態様は、抗ＣＤ４０抗体およびＰＤ−１阻害剤を含む組成物を提供する。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号１を含むＶＨＣＤＲ１と、配列番号２を含むＶＨＣＤＲ２と、配列番号３を含むＶＨＣＤＲ３と、配列番号４を含むＶＬＣＤＲ１と、配列番号５を含むＶＬＣＤＲ２と、配列番号６を含むＶＬＣＤＲ３と、を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号８を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号９を含む重鎖定常領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５である。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体である。一実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、ニボルマブまたはペンブロリズマブである。
【００４５】
本開示の別の態様は、抗ＣＤ４０抗体およびＰＤ−Ｌ１阻害剤を含む組成物を提供する。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号１を含むＶＨＣＤＲ１と、配列番号２を含むＶＨＣＤＲ２と、配列番号３を含むＶＨＣＤＲ３と、配列番号４を含むＶＬＣＤＲ１と、配列番号５を含むＶＬＣＤＲ２と、配列番号６を含むＶＬＣＤＲ３と、を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号８を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号９を含む重鎖定常領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５である。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、Ｌ１抗体である。一実施形態において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、アテゾリズマブである。
【００４６】
本開示の一態様は、抗ＣＤ４０抗体およびＣＴＬＡ−４阻害剤を含む組成物を提供する。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号１を含むＶＨＣＤＲ１と、配列番号２を含むＶＨＣＤＲ２と、配列番号３を含むＶＨＣＤＲ３と、配列番号４を含むＶＬＣＤＲ１と、配列番号５を含むＶＬＣＤＲ２と、配列番号６を含むＶＬＣＤＲ３と、を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号８を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号９を含む重鎖定常領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５である。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、ＣＴＬＡ−４阻害剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体である。一実施形態において、ＣＴＬＡ−４阻害剤は、イピリムマブである。
【００４７】
本開示の別の態様は、抗ＣＤ４０抗体およびＶＩＳＴＡ阻害剤を含む組成物を提供する。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号１を含むＶＨＣＤＲ１と、配列番号２を含むＶＨＣＤＲ２と、配列番号３を含むＶＨＣＤＲ３と、配列番号４を含むＶＬＣＤＲ１と、配列番号５を含むＶＬＣＤＲ２と、配列番号６を含むＶＬＣＤＲ３と、を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号８を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号９を含む重鎖定常領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５である。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、ＶＩＳＴＡ阻害剤は、抗ＶＩＳＴＡ抗体である。
【００４８】
本開示の一態様は、抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を提供する。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号１を含むＶＨＣＤＲ１と、配列番号２を含むＶＨＣＤＲ２と、配列番号３を含むＶＨＣＤＲ３と、配列番号４を含むＶＬＣＤＲ１と、配列番号５を含むＶＬＣＤＲ２と、配列番号６を含むＶＬＣＤＲ３と、を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号８を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号９を含む重鎖定常領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５である。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、抗体である。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＬＰＳまたはＭＰＬＡである。別の実施形態において、ＴＬＲ−４抗体は、ＮＩ−０１０１である。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】ＡＰＸ００５Ｍ、ＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＰＤ−１抗体、ＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体、アイソタイプ対照抗体および抗ＰＤ−１抗体、またはアイソタイプ対照抗体および抗ＰＤ−Ｌ１抗体の存在下での、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を示す折れ線グラフである。
【図２Ａ】ＡＰＸ００５Ｍと抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体との組み合わせによるＣＤ８＋Ｔ細胞応答の増強を示す。図２Ａは、Ｔ細胞増殖を示す折れ線グラフである。図２Ｂは、分泌されたＩＦＮ−γを示す折れ線グラフである。
【図２Ｂ】ＡＰＸ００５Ｍと抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体との組み合わせによるＣＤ８＋Ｔ細胞応答の増強を示す。図２Ａは、Ｔ細胞増殖を示す折れ線グラフである。図２Ｂは、分泌されたＩＦＮ−γを示す折れ線グラフである。
【図３】Ｔ細胞からのＩＦＮ−γ産生を示す折れ線グラフである。
【図４】異なる抗ＣＤ４０抗体を用いたＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を示す折れ線グラフである。
【図５】１）ＣＤ４０作動性抗体またはアイソタイプ対照と共に培養したＤＣ、２）抗ＰＤ−Ｌ１抗体または対照抗体、と共に共培養した後のＣＤ８＋Ｔ細胞からのＩＦＮ−γ産生を示す棒グラフである。
【図６】１）ＣＤ４０作動性抗体またはアイソタイプ対照と共に培養したＤＣ、２）抗ＰＤ−１抗体、と共に共培養した後のＣＤ８＋Ｔ細胞からのＩＦＮ−γ産生を示す棒グラフである。
【図７】ＡＰＸ００５Ｍ、ＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＰＤ−１抗体、ＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体、アイソタイプ対照抗体および抗ＰＤ−１抗体、またはアイソタイプ対照抗体および抗ＰＤ−Ｌ１抗体の存在下での、ＣＤ４＋Ｔ細胞からのＩＦＮ−γ産生を示す棒グラフである。
【図８】示されるウイルスペプチド（ＣＭＶ）およびＡＰＸ００５Ｍおよび／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と共にインビトロで５日間培養されたＰＢＭＣからのＩＦＮ−γ産生を示す棒グラフである。
【図９】ＡＰＸ００５Ｍおよび／または抗ＰＤ−１抗体を用いた複合リンパ球反応のＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を示す棒グラフである。
【図１０】ＡＰＸ００５Ｍおよび／または抗ＣＴＬＡ４抗体を用いた複合リンパ球反応のＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を示す棒グラフである。
【図１１Ａ】ＡＰＸ００５Ｍおよび／またはＴＬＲ−４作動薬により誘導されたＤＣ活性化を示す。図１１Ａは、ＡＰＸ００５Ｍおよび／またはＬＰＳにより誘導されたＤＣによるＩＬ−１２産生を示す棒グラフである。図１１Ｂは、ＡＰＸ００５Ｍおよび／またはＬＰＳにより誘導されたＤＣによるＴＮＦα産生を示す棒グラフである。
【図１１Ｂ】ＡＰＸ００５Ｍおよび／またはＴＬＲ−４作動薬により誘導されたＤＣ活性化を示す。図１１Ａは、ＡＰＸ００５Ｍおよび／またはＬＰＳにより誘導されたＤＣによるＩＬ−１２産生を示す棒グラフである。図１１Ｂは、ＡＰＸ００５Ｍおよび／またはＬＰＳにより誘導されたＤＣによるＴＮＦα産生を示す棒グラフである。
【図１２Ａ】ＡＰＸ００５Ｍ（用量タイトレーション１０ｎＭ、３倍希釈、８データポイント）ならびにヒト抗ＶＩＳＴＡ抗体ｈ２９Ｇ７およびｈ１４Ｄ８（共に１００ｎＭで）の存在下または不在下においてＤＣと共に６日間培養されたＣＤ４＋Ｔ細胞からのＩＦＮ−γ産生を示す折れ線グラフである。ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体も示される。２つの例示的実験からの結果を示す。
【図１２Ｂ】ＡＰＸ００５Ｍ（用量タイトレーション１０ｎＭ、３倍希釈、８データポイント）ならびにヒト抗ＶＩＳＴＡ抗体ｈ２９Ｇ７およびｈ１４Ｄ８（共に１００ｎＭで）の存在下または不在下においてＤＣと共に６日間培養されたＣＤ４＋Ｔ細胞からのＩＦＮ−γ産生を示す折れ線グラフである。ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体も示される。２つの例示的実験からの結果を示す。
【図１３Ａ】示された濃度の抗ＶＩＳＴＡ抗体（ｈ２９Ｇ７およびｈ１４Ｄ８）単独または１０ｎｇ／ｍｌのＡＰＸ００５Ｍとの組み合わせかのいずれかでの存在下または不在下における、１００ｎｇ／ｍｌのスタフィロコッカスエンテロトキシン（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ）Ｂ（ＳＥＢ）で刺激されたＰＢＭＣからのＩＦＮ−γ産生を示す棒グラフである。データは、アイソタイプ対照のパーセントとして示される。
【図１３Ｂ】示された濃度の抗ＶＩＳＴＡ抗体（ｈ２９Ｇ７およびｈ１４Ｄ８）単独または１０ｎｇ／ｍｌのＡＰＸ００５Ｍとの組み合わせかのいずれかでの存在下または不在下における、１００ｎｇ／ｍｌのスタフィロコッカスエンテロトキシン（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ）Ｂ（ＳＥＢ）で刺激されたＰＢＭＣからのＩＦＮ−γ産生を示す棒グラフである。データは、アイソタイプ対照のパーセントとして示される。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
配列の簡単な説明
配列番号１は、ＡＰＸ００５およびＡＰＸ００５Ｍ抗ＣＤ４０抗体のＶＨＣＤＲ１のアミノ酸配列である。
配列番号２は、ＡＰＸ００５およびＡＰＸ００５Ｍ抗ＣＤ４０抗体のＶＨＣＤＲ２のアミノ酸配列である。
配列番号３は、ＡＰＸ００５およびＡＰＸ００５Ｍ抗ＣＤ４０抗体のＶＨＣＤＲ３のアミノ酸配列である。
配列番号４は、ＡＰＸ００５およびＡＰＸ００５Ｍ抗ＣＤ４０抗体のＶＬＣＤＲ１のアミノ酸配列である。
配列番号５は、ＡＰＸ００５およびＡＰＸ００５Ｍ抗ＣＤ４０抗体のＶＬＣＤＲ２のアミノ酸配列である。
配列番号６は、ＡＰＸ００５およびＡＰＸ００５Ｍ抗ＣＤ４０抗体のＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列である。
配列番号７は、ＡＰＸ００５およびＡＰＸ００５Ｍ抗ＣＤ４０抗体のＶＨ領域のアミノ酸配列である。
配列番号８は、ＡＰＸ００５およびＡＰＸ００５Ｍ抗ＣＤ４０抗体のＶＬ領域のアミノ酸配列である。
配列番号９は、ＡＰＸ００５Ｍ抗ＣＤ４０抗体のＳ２６７Ｅ置換を伴うＦｃ領域を含むヒトＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列である。
【００５１】
本開示は一般的に、作動性抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＡＰＸ００５またはＡＰＸ００５Ｍ）および免疫調節剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤または先天免疫活性化剤）ならびに関連する組成物を投与することを含む治療方法に関する。
【００５２】
本発明の実施は、具体的に相反する指示がない限り、当業者の範囲内のウイルス学、免疫学、微生物学、分子生物学および組換えＤＮＡ技術についての従来の方法を利用することとなり、これらの多くは、例示目的のために下記に記載される。かかる技術は文献において十分に説明されている。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｒ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（２００９）；Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９５；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１）；Ｍａｎｉａｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８２）；ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ  ＆  ＩＩ（Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ，ｅｄ．）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｎ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８５）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８４）；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）ならびに他の同様の参考文献を参照されたい。
【００５３】
本明細書および添付の特許請求の範囲において用いる場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上明確に別の指示がない限り、複数への参照を含む。
【００５４】
本明細書を通して、文脈上別の要求がない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語、またはその変化形、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、述べられている要素、整数、または要素群もしくは整数群の包含を含意するが、任意の他の要素もしくは整数、または要素群もしくは整数群の除外を含意しないものと理解される。
【００５５】
本明細書における各実施形態は、特に別の言明がない限り、あらゆる他の実施形態に準用されるものとする。
【００５６】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養および形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）については標準技術を用いることができる。酵素反応および精製技術は、製造業者の仕様書に従って、または当該技術分野において一般に遂行されているように、または本明細書に記載するように行うことができる。これらのおよび関連する技術および手順は、一般に、当該技術分野において周知の従来の方法に従って行うことができ、ならびに本明細書中の至る所で引用され、議論されている様々な一般的なおよびより専門的な参考文献に記載されているように行うことができる。特定の定義が提供されない限り、本明細書に記載される分子生物学、分析化学、合成有機化学、ならびに医化学および製薬化学に関連して用いられる命名法、ならびにそれらの実験手順および技術は、当該技術分野において周知の、かつ一般に用いられているものである。組換え技術、分子生物学的合成、微生物学的合成、化学合成、化学分析、薬学的調製、製剤化および送達、ならびに患者の治療には標準技術を用いることができる。
【００５７】
本発明の実施形態は、ＣＤ４０に結合する抗体、例えば、ＡＰＸ００５およびＡＰＸ００５Ｍに関する（例えば、ＷＯ２０１２／１４９３５６およびＷＯ２０１４／０７０９３４を参照されたい。これらの文献の開示は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。特に、ＡＰＸ００５およびＡＰＸ００５Ｍは、予想外にも高い親和性を伴ってＣＤ４０に特異的に結合し、ＣＤ４０シグナリング活性を増強し、免疫系を活性化し、抗体依存性Ｔ細胞性食作用（ＡＤＣＰ）を活性化し、かつ、ＣＤ４０の異常発現に関連する疾患の治療のために治療上有用性を有する。ＡＰＸ００５およびＡＰＸ００５Ｍは、ヒトＣＤ４０に特異的に結合するヒト化抗体であり、同じウサギ抗ＣＤ４０抗体から生成された。ＡＰＸ００５およびＡＰＸ００５Ｍは、それぞれ配列番号１〜６のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含む。ＡＰＸ００５およびＡＰＸ００５Ｍのヒト化ＶＨおよびＶＬアミノ酸配列は、配列番号７および８をそれぞれ含む。ＡＰＸ００５Ｍは、２６７位において改変されたＦｃ領域を含む（ＥＵ番号；例えば、Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｇ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，１９６９  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，６３，７８−８５を参照されたい；ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ＩＭＧＴＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＣｈａｒｔ／ＮｕｍｂｅｒｉｎｇのＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベースウェブサイトも参照されたい）。具体的には、ＡＰＸ００５Ｍは、Ｓ２６７Ｅ置換を含む（Ｌｉ  Ｆｕ，Ｒａｖｅｔｃｈ  ＪＶ．２０１１  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３３：１０３０；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１１，１８７：１７５４−１７６３；ｍＡｂｓ  ２０１０，２：１８１−１８９も参照されたい）。ＡＰＸ００５Ｍ重鎖定常領域アミノ酸配列は、配列番号９を含む。
【００５８】
当該技術分野において周知であるように、抗体は、免疫グロブリン分子の可変領域内に位置する少なくとも１つのエピトープ認識部位を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的に特異的に結合することが可能な免疫グロブリン分子である。本明細書において用いる場合、この用語は、インタクトなポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけでなく、それらの断片（例えば、ｄＡｂ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ｓｃＦｖ）、その合成バリアント、自然発生バリアント、必要とされる特異性の抗原結合断片を伴う抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、および必要とされる特異性の抗原結合部位または断片（エピトープ認識部位）を含む免疫グロブリン分子の任意の他の改変された形態も包含する。「ダイアボディ」、すなわち、遺伝子融合によって構築される多価または多重特異性断片（ＷＯ９４／１３８０４；Ｐ．Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０  ６４４４−６４４８，１９９３）も、本明細書において企図される抗体の特定の一形態である。ＣＨ３ドメインに結合したｓｃＦｖを含むミニボディも本明細書に含まれる（Ｓ．Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５６，３０５５−３０６１，１９９６）。例えば、Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，５４４−５４６（１９８９）；Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２，４２３−４２６，１９８８；Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，８５，５８７９−５８８３，１９８８）；ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５；ＷＯ９４／１３８０４；Ｐ．Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０  ６４４４−６４４８，１９９３；Ｙ．Ｒｅｉｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、１４、１２３９−１２４５，１９９６；Ｓ．Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５６，３０５５−３０６１，１９９６を参照されたい。
【００５９】
本明細書において用いる場合、用語「抗原結合断片」は、目的の抗原、例えば、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、およびＣＴＬＡ−４に結合する免疫グロブリン重鎖および／または軽鎖の少なくとも１つのＣＤＲを含む、ポリペプチド断片を指す。これに関連して、本明細書に記載される抗体の抗原結合断片は、抗体の１、２、３、４、５、または６つ全てのＣＤＲを含み得る。さらに、本明細書に記載される抗体の抗原結合断片は、抗体ＶＨおよびＶＬ配列を含み得る。本明細書に記載されるＣＤ４０特異的抗体の抗原結合断片は、ＣＤ４０に結合可能である。ある実施形態において、抗原結合断片または抗原結合断片を含む抗体は、ＣＤ４０に対するＣＤ４０Ｌの結合を防止または阻害する。ある実施形態において、抗原結合断片は、ヒトＣＤ４０に特異的に結合し、および／またはヒトＣＤ４０の生物活性を増強または調節する。かかる生物活性としては、細胞シグナリング、樹状細胞の活性化が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６０】
用語「抗原」は、抗体などの選択的結合剤によって結合され得る、およびさらには、その抗原のエピトープに結合が可能な抗体を産生するために動物において使用され得る、分子または分子の一部分を指す。抗原は、１つ以上のエピトープを有し得る。
【００６１】
用語「エピトープ」は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体への特異的結合が可能な、任意の決定基、好ましくは、ポリペプチド決定基を含む。エピトープは、抗体によって結合される抗原の一領域である。ある実施形態において、エピトープ決定基は、分子の化学的に活性な表面原子団、例えば、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニルを含み、また、ある実施形態では、特異的三次元構造特性および／または特異的電荷特性を有し得る。ある実施形態において、抗体がタンパク質および／または高分子の複合混合物中のその標的抗原を優先的に認識するとき、抗体は抗原に特異的に結合する、と言われる。平衡解離定数が、≦１０−７または１０−８Ｍであるとき、抗体が抗原に特異的に結合する、と言われる。幾つかの実施形態において、平衡解離定数は、≦１０−９Ｍまたは≦１０−１０Ｍであり得る。
【００６２】
ある実施形態において、本明細書に記載される抗体およびそれらの抗原結合断片は、重鎖および軽鎖フレームワーク領域（ＦＲ）セット間にそれぞれ挿入された重鎖および軽鎖ＣＤＲセットを含み、このＦＲセットは、ＣＤＲを支持し、かつＣＤＲの互いに対する空間的関係を規定する。本明細書において用いる場合、用語「ＣＤＲセット」は、重鎖または軽鎖Ｖ領域の３つの超可変領域を指す。重鎖または軽鎖のＮ末端から進んで、これらの領域を「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」、および「ＣＤＲ３」とそれぞれ表示する。したがって、抗原結合部位は、重鎖および軽鎖Ｖ領域の各々からのＣＤＲセットを含む、６つのＣＤＲを含む。単一のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３）を含むポリペプチドを、本明細書では「分子認識単位」と称する。多数の抗原−抗体複合体の結晶解析により、ＣＤＲのアミノ酸残基が、結合抗原との広範な接触を形成し、その最も広範な抗原接触が重鎖ＣＤＲ３とのものであることは立証されている。したがって、分子認識単位が主として抗原結合部位の特異性に関与する。
【００６３】
本明細書において用いる場合、用語「ＦＲセット」は、重鎖または軽鎖Ｖ領域のＣＤＲセットのＣＤＲの枠組みを形成する４つの隣接アミノ酸配列を指す。一部のＦＲ残基は、結合抗原と接触し得る；しかし、ＦＲ、特にＣＤＲに直接隣接したＦＲ残基は、主として、抗原結合部位へのＶ領域のフォールディングに関与する。ＦＲ内では、あるアミノ酸残基およびある構造特徴が非常に高度に保存される。これに関連して、全てのＶ領域配列は、約９０個アミノ酸残基の内部ジスルフィドループを含有する。Ｖ領域が結合部位へとフォールディングすると、ＣＤＲは、抗原結合面を形成する突出型ループモチーフとして提示される。その正確なＣＤＲアミノ酸配列に関係なく、ある「標準的な（ｃａｎｏｎｉｃａｌ）」構造にフォールディングされたＣＤＲループ形状に影響を及ぼすＦＲの保存された構造領域があることは、一般に認識されている。さらに、抗体重鎖と軽鎖との相互作用を安定化させる非共有結合性ドメイン間接触にあるＦＲ残基が関与することが知られている。
【００６４】
免疫グロブリン可変ドメインの構造および位置は、現在ではインターネット上で利用可能である（ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ）、Ｋａｂａｔ、Ｅ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ．１９８７、およびその更新版を参照することにより、決定され得る。
【００６５】
「モノクローナル抗体」は同種抗体集団を指し、ここで、このモノクローナル抗体は、エピトープの選択的結合に関与する（自然発生の、または自然発生でない）アミノ酸で構成されている。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一のエピトープに指向される。用語「モノクローナル抗体」は、インタクトなモノクローナル抗体および完全長モノクローナル抗体だけでなく、それらの断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ＳｃＦｖ）、そのバリアント、抗原結合部分を含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ならびに必要とされる特異性およびエピトープに結合する能力の抗原結合断片（エピトープ認識部位）を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾形態も包含する。抗体の源または抗体を作製する手法（例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、トランスジェニック動物などによる）に関して限定されることを意図しない。この用語は、全免疫グロブリン、ならびに、「抗体」の定義のもとに上記された断片も含む。
【００６６】
タンパク質分解酵素パパインは、ＩｇＧ分子を優先的に切断して幾つかの断片を生じさせ、そのうちの２つ（Ｆ（ａｂ）断片）はそれぞれインタクトな抗原結合部位を含む共有結合性ヘテロ二量体を含む。酵素ペプシンは、ＩｇＧ分子を切断して、両方の抗原結合部位を含むＦ（ａｂ’）２断片を含む幾つかの断片を生じさせることができる。本発明のある実施形態に従って使用するためのＦｖ断片は、ＩｇＭのおよび稀にＩｇＧまたはＩｇＡ免疫グロブリン分子の優先的タンパク質分解性切断によって産生することができる。しかし、より一般的には、Ｆｖ断片は、当該技術分野において既知の組換え技術を用いて得られる。Ｆｖ断片は、天然の抗体分子の抗原認識および結合能力の大部分を保持する抗原結合部位を含む非共有結合性ＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体を含む。Ｉｎｂａｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９７２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ６９：２６５９−２６６２；Ｈｏｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９７６）Ｂｉｏｃｈｅｍ  １５：２７０６−２７１０；およびＥｈｒｌｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０）Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９：４０９１−４０９６。
【００６７】
ある実施形態において、単鎖ＦｖまたはｓｃＦｖ抗体が企図される。例えば、カッパ体（Ｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：９４９−５７（１９９７）；ミニボディ（Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯＪ  １３：５３０５−９（１９９４）；ダイアボディ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９０：６４４４−８（１９９３）；またはＪａｎｕｓｉｎｓ（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ  １０：３６５５−５９（１９９１）およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｕｐｐｌ．７：５１−５２（１９９２）は、標準的な分子生物学的技術を用い、所望の特異性を有する抗体の選択に関しては本明細書の教示に従って、調製することができる。さらに他の実施形態では、本開示のリガンドを包含する二重特異性またはキメラ抗体を作製することができる。例えば、キメラ抗体は、異なる抗体に由来するＣＤＲおよびフレームワークを含むことができ、一方で、１つの結合ドメインを介してＣＤ４０に、および第二の結合ドメインを介して第二の分子（例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する二重特異性抗体を生成することができる。これらの抗体は、組換え分子生物学技術によって産生されてもよく、または物理的に共にコンジュゲートされてもよい。
【００６８】
単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）ポリペプチドは、ペプチドをコードするリンカーによって連結されたＶＨをコードする遺伝子とＶＬをコードする遺伝子を含む遺伝子融合体から発現される共有結合的に連結されたＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体である。Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５（１６）：５８７９−５８８３。自然に凝集しているが化学的に分離されている、軽および重ポリペプチド鎖を、抗体Ｖ領域から、抗原結合部位の構造と実質的に同様の三次元構造にフォールディングするｓＦｖ分子に変換するための化学構造の識別のために、多数の方法が記載されている。例えば、米国特許第５，０９１，５１３号および同第５，１３２，４０５号（Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．）、ならびに米国特許第４，９４６，７７８号（Ｌａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）を参照されたい。
【００６９】
ある実施形態において、本明細書に記載のＣＤ４０結合抗体は、ダイアボディの形態である。ダイアボディは、ポリペプチドの多量体であって、各ポリペプチドは、免疫グロブリン軽鎖の結合領域を含む第１のドメインと、免疫グロブリン重鎖の結合領域を含む第２のドメインとを含み、これらの２つのドメインは（例えば、ペプチドリンカーによって）連結されているが、互いに会合して抗原結合部位を形成することはできない多量体である：抗原結合部位は、この多量体内のあるポリペプチドの第１のドメインと同じ多量体内の別のポリペプチドの第２のドメインとの会合によって形成される（ＷＯ９４／１３８０４）。抗体のｄＡｂ断片は、ＶＨドメインからなる（Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，５４４−５４６（１９８９））。
【００７０】
二重特異性抗体を使用する場合、これらは、従来の二重特異性抗体であり、様々な方法で製造することができ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．およびＷｉｎｔｅｒ  Ｇ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４，４４６−４４９（１９９３））、例えば、化学的にもしくはハイブリッドハイブリドーマから調製されてもよく、または上記した二重特異性抗体断片のいずれかであり得る。Ｆｃ領域を伴うことなく、可変ドメインのみを使用して、ダイアボディおよびｓｃＦｖを構築して、抗イディオタイプ反応の影響を潜在的に軽減することができる。
【００７１】
二重特異性完全抗体と対照的に、二重特異性ダイアボディも、それらが容易に構築でき、かつＥ．ｃｏｌｉにおいて発現することができるので、特に有用であり得る。適切な結合特異性のダイアボディ（および抗体断片などの他の多数のポリペプチド）は、ファージディスプレイを用いて（ＷＯ９４／１３８０４）ライブラリーから容易に選択することができる。例えば、抗原Ｘに対して指向させた特異性を伴うダイアボディの１本のアームを定常に保つならば、他のアームを改変し、適切な特異性の抗体が選択されるライブラリーを作製することができる。二重特異性完全抗体は、ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓエンジニアリングにより作製できる（Ｊ．Ｂ．Ｂ．Ｒｉｄｇｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，９，６１６−６２１，１９９６）。
【００７２】
ある実施形態において、本明細書で記載される抗体は、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）の形態で提供され得る。ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は、ヒンジ領域が除去されたＩｇＧ４抗体である（ＧｅｎＭａｂ  Ｕｔｒｅｃｈｔ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓを参照されたい；また、例えば、ＵＳ２００９／０２２６４２１も参照されたい）。この独占的な抗体技術は、現在の小さな抗体フォーマットより長い治療ウインドウが期待される、安定で、より小さい抗体を作成する。ＩｇＧ４抗体は、不活性であると考えられ、それ故に、免疫系と相互作用しない。完全ヒトＩｇＧ４抗体を、抗体のヒンジ領域を削除することにより改変して、対応するインタクトなＩｇＧ４（ＧｅｎＭａｂ、Ｕｔｒｅｃｈｔ）とは異なる安定特性を有する半分子断片を得ることができる。ＩｇＧ４分子を半分にすることで、コグネイト抗原（例えば、疾患標的）に結合することができるＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）上の一領域のみを残し、それ故に、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は、標的細胞上の一部位のみに一価結合する。ある癌細胞表面抗原について、この一価結合は、同じ抗原特異性を有する二価抗体を用いた場合にみられるような、癌細胞を刺激して成長させることがないこともあり、それ故に、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）技術は、従来の抗体を用いる治療に対して難治性であり得る幾つかの型の癌について治療選択を与えることができる。ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）の小さなサイズは、幾つかの型の癌を治療する際に、より大きな固形腫瘍にわたって分子をより良好に分布させることができ、かつ潜在的に効果を増大することができるために、非常に有利であり得る。
【００７３】
ある実施形態において、本開示の抗体は、ナノボディの形態をとり得る。ナノボディは、単一遺伝子によってコードされ、ほぼ全ての原核および真核宿主、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、米国特許第６，７６５，０８７号を参照されたい）、カビ（例えば、ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓまたはＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）、および酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｍｙｃｅｓ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、またはＰｉｃｈｉａ（例えば、米国特許第６，８３８，２５４号を参照されたい）において効果的に産生される。産生プロセスは、スケール調整可能であり、数キログラムの量のナノボディが産生されている。ナノボディは、長い貯蔵期間を有する、使用準備が整った溶液として配合され得る。ナノクローン法（例えば、ＷＯ０６／０７９３７２を参照されたい）は、Ｂ細胞の自動ハイスループット選択に基づく、所望の標的に対してナノボディを生成するための独自の方法である。
【００７４】
ある実施形態において、本明細書において利用される抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化されている。これは、一般に組換え技術を用いて調製された、非ヒト種からの免疫グロブリンに由来する抗原結合部位と、ヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づく分子の残りの免疫グロブリン構造とを有する、キメラ分子を指す。抗原結合部位は、定常ドメインに融合された完全な可変ドメインか、または可変ドメイン内の適切なフレームワーク領域にグラフトされたＣＤＲのみのいずれかを含み得る。エピトープ結合部位は、野生型であるか、または１つ以上のアミノ酸置換により改変され得る。これにより、ヒト個体における免疫原としての定常領域は除去されるが、外来可変領域に対する免疫応答の可能性は依然として残る（ＬｏＢｕｇｌｉｏ，Ａ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８６：４２２０−４２２４；Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ（１９８８）８６：１００２９−１００３３；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８８）３３２：３２３−３２７）。抗体をヒト化するための例示的な方法は、米国特許第７，４６２，６９７号に記載されている方法を含む。本発明のある実施形態による例示的なヒト化抗体は、配列番号７および８にて提供されるヒト化配列を含む。
【００７５】
別のアプローチは、ヒト形態に可能な限り似せて形成し直すために、ヒト由来定常領域を提供することだけでなく、可変領域の改変にも焦点を当てる。重鎖および軽鎖の両方の可変領域が、特定の種において比較的保存されており、かつＣＤＲのための足場を提供していると推定されている４つのフレームワーク領域に隣接する、問題となるエピトープに応じて様々であり、かつ結合能力を決定する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むことが知られている。非ヒト抗体が特定のエピトープに対して調製されるとき、改変されるべきヒト抗体内に存在するＦＲ上に非ヒト抗体に由来するＣＤＲをグラフトすることにより、可変領域は、「形成し直す」または「ヒト化する」ことができる。種々の抗体に対するこのアプローチの適用は、Ｓａｔｏ、Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５３：８５１−８５６．Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４−１５３６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ、Ｃ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ４：７７３−３７８３；Ｍａｅｄａ、Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ２：１２４−１３４；Ｇｏｒｍａｎ，Ｓ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８：４１８１−４１８５；Ｔｅｍｐｅｓｔ，Ｐ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：２６６−２７１；Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８：２８６９−２８７３；Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：４２８５−４２８９；およびＣｏ、Ｍ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８：１１４９−１１５４により報告されている。幾つかの実施形態において、ヒト化抗体は、全てのＣＤＲ配列を保存する（例えば、マウス抗体からの全ての６つのＣＤＲを含むヒト化マウス抗体）。他の実施形態において、ヒト化抗体は、元の抗体に対して変更された１つ以上（１、２、３、４、５、６）のＣＤＲを有し、これは、元の抗体からの１つ以上のＣＤＲに「由来する」１つ以上のＣＤＲとも称される。
【００７６】
ある実施形態において、本開示の抗体は、キメラ抗体であり得る。これに関連して、キメラ抗体は、作動可能に連結された抗体の抗原結合断片からなるか、そうでなければ、異なる抗体の異種Ｆｃ部分に融合される。ある実施形態において、異種Ｆｃドメインは、ヒト起源のものである。他の実施形態において、異種Ｆｃドメインは、ＩｇＡ（サブクラスＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む）、ならびにＩｇＭを含む、親抗体からの異なるＩｇクラスからのものであり得る。さらなる実施形態において、異種Ｆｃドメインは、１つ以上の異なるＩｇクラスからのＣＨ２およびＣＨ３ドメインから構成され得る。ヒト化抗体に関連して上記したように、キメラ抗体の抗原結合断片は、本明細書に記載される抗体の１つ以上のＣＤＲ（例えば、本明細書に記載される抗体の１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲ）を含んでもよく、または可変ドメイン全体（ＶＬ、ＶＨ、またはその両方）を含んでもよい。
【００７７】
ある実施形態において、ＣＤ４０結合抗体は、配列番号１〜６のＣＤＲを１つ以上含む。これに関連して、幾つかの場合において、所望の特異的結合を保持したままで、抗体のＶＨＣＤＲ３のみの移入が実施可能であることが示されている（Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ（１９９５）９２：２５２９−２５３３）。ＭｃＬａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ（１９９５）９２：５２１４−５２１８，Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９９４）１１６：２１６１−２１６２もまた参照されたい。
【００７８】
Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１９９２、１０：７７９−７８３）は、可変ドメイン領域の５’末端に指向されたまたは隣接するコンセンサスプライマーをヒトＶＨ遺伝子の第３フレームワーク領域に対するコンセンサスプライマーと併用して、ＣＤＲ３を欠くＶＨ可変ドメインのレパートリーを提供する、抗体可変ドメインのレパートリーを産生する方法を記載している。Ｍａｒｋｓらは、このレパートリーを特定の抗体のＣＤＲ３とどのように組み合わせることができるかを、さらに記載している。類似の技術を用いて、本明細書に記載の抗体のＣＤＲ３由来配列を、ＣＤＲ３を欠くＶＨまたはＶＬドメインのレパートリーとシャッフリングすることができ、シャッフリングされた完全ＶＨまたはＶＬドメインを同種のＶＬまたはＶＨドメインと合わせて、例えば、ＣＤ４０に結合する抗体または抗原結合断片を提供することができる。次いで、適切な抗体またはその抗原結合断片が選択されるように、ＷＯ９２／０１０４７のファージディスプレイ系などの適切な宿主系において、レパートリーを提示させることができる。レパートリーは、少なくとも約１０４の個々のメンバー、およびその数桁分上方の数、例えば、約１０６〜１０８または１０１０またはそれ以上のメンバーからなることができる。類似のシャッフリングまたはコンビナトリアル技術もＳｔｅｍｍｅｒ（Ｎａｔｕｒｅ、１９９４、３７０：３８９−３９１）により開示されており、Ｓｔｅｍｍｅｒは、β−ラクタマーゼ遺伝子に関する技術を記載しているが、そのアプローチを抗体の生成に用いることができると述べている。
【００７９】
抗体またはポリペプチドに対して「特異的に結合する」または「優先的に結合する」（本明細書においては互換的に使用される）エピトープは、当該技術分野において十分に理解されている用語であり、このような特異的または優先的結合を測定するための方法も当該技術分野において周知である。分子が特定の細胞または物質と、別の細胞または物質と反応または会合するよりも高頻度で、より迅速に、より長い持続時間、および／またはより大きい親和性で反応または会合する場合、分子は、「特異的結合」または「優先的結合」を示すと言われる。抗体が標的に、他の物質に結合するより大きい親和性で、結合力で、より迅速に、および／またはより長い持続時間、結合する場合、抗体は標的に「特異的に結合する」または「優先的に結合する」。例えば、ＣＤ４０エピトープに特異的にまたは優先的に結合する抗体は、それが他のＣＤ４０エピトープまたは非ＣＤ４０エピトープに結合するより大きな親和性で、結合力で、より迅速に、および／またはより長い持続時間、ある１つのＣＤ４０エピトープに結合する抗体である。例えば、第１の標的に特異的にまたは優先的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）が、第２の標的に特異的にまたは優先的に結合しても、しなくてもよいことが、この定義を読むことにより理解される。したがって、「特異的結合」または「優先的結合」は、排他的結合を（含む場合もあるが）必ずしも必要としない。一般に、必然的ではないが、結合への言及は優先的結合を意味する。
【００８０】
免疫学的結合は、例えば、例示を目的しており、限定をするものではないが、静電的、イオン的、親水性および／または疎水性の引力または反発力、立体障害力、水素結合、ファンデルワールス力ならびに他の相互作用の結果としての、免疫グロブリン分子とその免疫グロブリンが特異的である抗原との間で生じる類の非共有的相互作用を指す。免疫学的結合相互作用の強度または親和性は、その相互作用の解離定数（Ｋｄ）によって表すことができ、ここで、より小さいＫｄは、より大きい親和性を表す。選択されたポリペプチドの免疫学的結合特性を、当該技術分野において周知の方法を用いて定量化することができる。かかる方法の１つは、抗原結合部位／抗原複合体形成および解離の速度の測定を伴い、それらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、および両方向の速度に等しく影響を及ぼす幾何学的パラメータに依存する。したがって、「オン速度定数」（Ｋｏｎ）と「オフ速度定数」（Ｋｏｆｆ）の両方を、濃度ならびに実際の会合速度および解離速度の計算によって決定することができる。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比は、親和性に関係しない全てのパラメータの相殺を可能にし、したがって解離定数Ｋｄに等しい。一般的に、Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９：４３９−４７３を参照されたい。
【００８１】
ある実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ４０抗体は、約１００、１５０、１５５、１６０、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８または１９９ピコモルの親和性を有し、また幾つかの実施形態において、抗体は、ＣＤ４０についてさらにより高い親和性を有し得る。
【００８２】
存在するエピトープに関しての用語「免疫学的に活性の」または「依然として免疫学的に活性の」は、異なる条件下で、例えば、エピトープを還元および変性条件に付した後、エピトープに結合する抗体（例えば、抗ＣＤ４０抗体）の能力を指す。
【００８３】
本明細書において用いる場合、用語「と競合する」、「結合を阻害する」、および「結合を遮断する」（例えば、ＣＤ４０ＬのＣＤ４０への結合の阻害／遮断を指す、または抗ＣＤ４０抗体のＣＤ４０への結合の阻害／遮断を指す）は、互換的に用いられ、部分的および完全な阻害／遮断の両方を包含する。阻害および遮断は、抗ＣＤ４０抗体と接触していないリガンドと比較して、本明細書において開示される抗ＣＤ４０抗体と接触したときのＣＤ４０ＬのＣＤ４０への結合の、任意の測定可能な減少を含むことも意図され、例えば、ＣＤ４０に対するＣＤ４０Ｌを少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％だけ遮断する。
【００８４】
免疫グロブリンの定常領域は、可変領域より少ない配列多様性を示し、かつ重要な生化学的事象を惹起するための多数の天然タンパク質の結合に関与する。ヒトの場合、ＩｇＡ（サブクラスＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む）ならびにＩｇＭを含む、抗体の５つの異なるクラスがある。より細かい相違がＶ領域に存在することもあるが、これらの抗体クラス間を識別する特徴は、それらの定常領域である。
【００８５】
抗体のＦｃ領域は、多数のＦｃ受容体およびリガンドと相互作用し、それによって、エフェクター機能と呼ばれる一連の重要な機能的能力を付与する。ＩｇＧについて、Ｆｃ領域は、ＩｇドメインＣＨ２およびＣＨ３と、ＣＨ２につながるＮ末端ヒンジとを含む。ＩｇＧクラスについてのＦｃ受容体の重要なファミリーはＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）である。これらの受容体は、抗体と免疫系の細胞アームとの間のコミュニケーションを媒介する（Ｒａｇｈａｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  １２：１８１−２２０；Ｒａｖｅｔｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００１、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９：２７５−２９０）。ヒトの場合、このタンパク質ファミリーは、アイソフォームＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂおよびＦｃγＲＩｃを含む、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；アイソフォームＦｃγＲＩＩａ（アロタイプＨ１３１およびＲ１３１を含む）、ＦｃγＲＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ−１およびＦｃγＲＩＩｂ−２を含む）、およびＦｃγＲＩＩｃを含む、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）；ならびにアイソフォームＦｃγＲＩＩＩａ（アロタイプＶ１５８およびＦ１５８を含む）、およびＦｃγＲＩＩＩｂ（アロタイプＦｃγＲＩＩＩｂ−ＮＡ１およびＦｃγＲＩＩＩｂ−ＮＡ２）（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ８２：５７−６５）を含む、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、を含む。これらの受容体は、典型的に、Ｆｃへの結合を媒介する細胞外ドメインと、膜貫通領域と、細胞内の幾つかのシグナリング事象を媒介し得る細胞内ドメインとを有する。これらの受容体は、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球、肥満細胞、血小板、Ｂ細胞、大型顆粒リンパ球、ランゲルハンス細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびＴ細胞を含む様々な免疫細胞において発現される。Ｆｃ／ＦｃγＲ複合体の形成は、これらのエフェクター細胞を結合抗原部位に動員し、典型的には、細胞内のシグナリング事象および重要な後続の免疫応答、例えば、炎症媒介因子の放出、Ｂ細胞活性化、エンドサイトーシス、食作用および細胞傷害性攻撃を生じる。
【００８６】
細胞傷害性および食作用性エフェクター機能を媒介する能力は、抗体が標的細胞を破壊する潜在的機序である。ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、その後、その標的細胞の溶解を生じさせる細胞介在性反応は、抗体依存性細胞介在性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）と呼ばれる（Ｒａｇｈａｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  １２：１８１−２２０；Ｇｈｅｔｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８：７３９−７６６；Ｒａｖｅｔｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９：２７５−２９０）。ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、その後、その標的細胞の食作用を生じさせる細胞介在性反応は、抗体依存性細胞介在性食作用（ＡＤＣＰ）と呼ばれる。全てのＦｃγＲは、Ｆｃ上の同じ領域をＣｇ２（ＣＨ２）ドメインのＮ末端およびその前のヒンジで結合する。この相互作用は、構造的に十分特性付けされており（Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３０９：７３７−７４９）、ヒトＦｃγＲＩＩＩｂの細胞外ドメインに結合したヒトＦｃの幾つかの構造が解明されている（ｐｄｂアクセッションコード１Ｅ４Ｋ）（Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｎａｔｕｒｅ  ４０６：２６７−２７３．）（ｐｄｂアクセッションコード１ＩＩＳおよび１ＩＩＸ）（Ｒａｄａｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６：１６４６９−１６４７７．）。
【００８７】
異なるＩｇＧサブクラスは、ＦｃγＲに対して異なる親和性を有し、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、典型的に、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４より実質的に良好にその受容体に結合する（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ８２：５７−６５）。全てのＦｃγＲは、異なる親和性ではあるが、ＩｇＧ  Ｆｃ上の同じ領域を結合する：高親和性結合剤ＦｃγＲＩは、ＩｇＧ１に対して１０−８Ｍ−１のＫｄを有し、一方で、低親和性受容体ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩは、一般に、それぞれ１０−６および１０−５で結合する。ＦｃγＲＩＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩｂの細胞外ドメインは９６％同一であるが、ＦｃγＲＩＩＩｂは、細胞内シグナリングドメインを有さない。さらに、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ／ｃ、およびＦｃγＲＩＩＩａは、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を有する細胞内ドメインを有することを特徴とする、免疫複合体誘発活性化の陽性調節因子であるが、ＦｃγＲＩＩｂは、免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を有し、したがって阻害性である。故に、前者は活性化受容体と呼ばれ、ＦｃγＲＩＩｂは阻害性受容体と呼ばれる。これらの受容体はまた、異なる免疫細胞上での発現パターンおよびレベルが異なる。さらに別のレベルの複雑性は、ヒトプロテオームにおける多数のＦｃγＲ多形の存在である。臨床的有意性を有する特に関連のある多形は、Ｖ１５８／Ｆ１５８  ＦｃγＲＩＩＩａである。ヒトＩｇＧ１は、Ｆ１５８アロタイプより大きい親和性でＶ１５８アロタイプに結合する。親和性、ならびにおそらくＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰに対するその効果におけるこれらの差異は、抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎの登録商標）の効力の有意な決定因子であることが示されている。Ｖ１５８アロタイプを有する患者はリツキシマブ治療に対して好適に応答するが、より低い親和性Ｆ１５８アロタイプを有する患者の応答は乏しい（Ｃａｒｔｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｂｌｏｏｄ  ９９：７５４−７５８）。おおよそ１０〜２０％のヒトはＶ１５８／Ｖ１５８ホモ接合型であり、４５％はＶ１５８／Ｆ１５８ヘテロ接合型であり、および３５〜４５％のヒトは、Ｆ１５８／Ｆ１５８ホモ接合型である（Ｌｅｈｒｎｂｅｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｂｌｏｏｄ  ９４：４２２０−４２３２；Ｃａｒｔｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｂｌｏｏｄ  ９９：７５４−７５８）。したがって、８０〜９０％のヒトは不良応答者であり、すなわち、彼らはＦ１５８  ＦｃγＲＩＩＩａの少なくとも１つの対立遺伝子を有する。
【００８８】
Ｆｃ領域は、補体カスケードの活性化にも関与する。古典的な補体経路では、Ｃ１は、そのＣ１ｑサブユニットを用いて、抗原（複数可）と複合体を形成しているＩｇＧまたはＩｇＭのＦｃ断片に結合する。本発明のある実施形態において、Ｆｃ領域に対する改変は、補体系を活性化するための本明細書に記載のＣＤ４０特異的抗体の能力を変更する（増強するまたは低下するかのいずれか）改変を含む（例えば、米国特許第７，７４０，８４７号を参照されたい）。補体活性化を評価するために、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）アッセイを行ってもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０２：１６３（１９９６）を参照されたい）。
【００８９】
したがって、ある実施形態において、本発明は、機能特性が変更された、例えば、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ、もしくはＡＤＣＰ活性が低減されたか増強されたか、または特定のＦｃγＲについての結合親和性が増強されたか、または血清半減期が増大されたなどの、改変されたＦｃ領域を有する抗体を提供する。本明細書において企図される他の改変されたＦｃ領域は、例えば、発行済みの米国特許第７，３１７，０９１号；同第７，６５７，３８０号；同第７，６６２，９２５号；同第６，５３８，１２４号；同第６，５２８，６２４号；同第７，２９７，７７５号；同第７，３６４，７３１号；公開された米国特許出願第ＵＳ２００９／０９２５９９号；同第ＵＳ２００８／０１３１４３５号；同第ＵＳ２００８／０１３８３４４号；および公開された国際特許出願第ＷＯ２００６／１０５３３８号；同第ＷＯ２００４／０６３３５１号；同第ＷＯ２００６／０８８４９４号；同第ＷＯ２００７／０２４２４９号において記載される。
【００９０】
Ｆｃにおける１つ以上の置換は、ＦｃγＲＩＩＢに対する結合親和性を増大し、ＣＤ４０分子の架橋結合を増強し、抗ＣＤ４０抗体によるＣＤ４０活性化をより強力なものに導き得る。例えば、ＡＰＸ００５Ｍは、Ｓ２６７Ｅ置換を含む改変されたＦｃを含む抗ＣＤ４０抗体である（ＥＵ番号；Ｌｉ  Ｆｕ、Ｒａｖｅｔｃｈ  ＪＶ．２０１１  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３３：１０３０；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１１，１８７：１７５４−１７６３；ｍＡｂｓ  ２０１０、２：１８１−１８９も参照されたい）。ＡＰＸ００５Ｍ重鎖定常領域アミノ酸配列は、配列番号９を含む。
【００９１】
したがって、ある実施形態において、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメインは、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合される。ある実施形態において、融合は、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域の少なくとも一部分を含むＩｇ重鎖定常ドメインとのものである。融合体の少なくとも１つの中に存在する、軽鎖結合に必要な部位を含有する第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合体と、必要に応じて免疫グロブリン軽鎖とをコードするＤＮＡを別個の発現ベクターに挿入し、好適な宿主細胞にコトランスフェクトする。これにより、構築に用いられた３つのポリペプチドの不均等な比が、所望の二重特異性抗体の最適な収量をもたらす実施形態では、この３つのポリペプチド断片の相互の割合を調節する際に、より大きな自由度が得られる。しかし、等比での少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が高収量を生じるとき、またはその比が所望の鎖の組み合わせの収量に有意な影響を及ぼさないときは、２つまたは３つ全てのポリペプチド鎖についてのコーディング配列を単一の発現ベクターに挿入することが可能である。
【００９２】
本発明の抗体（ならびにその抗原結合断片およびバリアント）を、例えば精製または診断への適用に用いるために、エピトープタグまたは標識を含むように改変することもできる。抗体コンジュゲートを作製するための多くの連結基は、当該技術分野において知られており、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号、またはＥＰ特許第０４２５２３５Ｂ１号、およびＣｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）に開示されているものを含む。連結基としては、上で特定した特許に開示されているような、ジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定性基、感光性基、ペプチダーゼ不安定性基、またはエステラーゼ不安定性基が挙げられ、ジスルフィドおよびチオエーテル基が好ましい。
【００９３】
別の実施形態において、抗体は、本明細書においてコンジュゲートと称される別の治療用化合物にコンジュゲートまたは作動可能に連結させることができる。コンジュゲートは、細胞傷害性薬、化学療法薬、サイトカイン、抗血管新生剤、チロシンキナーゼ阻害剤、毒素、放射性同位元素、または他の治療活性剤であり得る。化学療法薬、サイトカイン、抗血管新生剤、チロシンキナーゼ阻害剤および他の治療薬は、上に記載されており、これらの上述の治療薬の全てが抗体コンジュゲートとして利用を見出すことができる。
【００９４】
代替的な一実施形態において、抗体は、細菌、真菌、植物または動物由来の小分子毒素および酵素的に活性な毒素を含むがこれらに限定されない毒素に、コンジュゲートまたは作動可能に連結される。小分子毒素としては、サポリン（ＫｕｒｏｄａＫ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ７０：１２８６−１２９４（２０１０）；Ｌｉｐ，ＷＬ．ｅｔ  ａｌ．，２００７  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ４：２４１−２５１；Ｑｕａｄｒｏｓ  ＥＶ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０  Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ；９（１１）；３０３３−４０；Ｐｏｌｉｔｏ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．２００９  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ，１４７，７１０−７１８）、カリケアマイシン、メイタンシン（米国特許第５，２０８，０２０号）、トリコテン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｎｅ）、およびＣＣ１０６５が挙げられるが、これらに限定されない。毒素としては、ＲＮａｓｅ、ゲロニン、エンジイン、リシン、アブリン、ジフテリア毒素、コレラ毒素、ゲロニン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素（ＰＥ４０）、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）毒素、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎ毒素、およびヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９５】
一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片を１つ以上のメイタンシノイド分子にコンジュゲートさせる。メイタンシノイドは、チューブリン重合を阻害することにより作用する有糸分裂阻害剤である。メイタンシンは最初、東アフリカの低木メイテナス・セラタ（Ｍａｙｔｅｎｕｓ  ｓｅｒｒａｔａ）から単離された（米国特許第３，８９６，１１１号）。その後、一定の微生物もメイタンシノールおよびＣ−３メイタンシノールエステルなどのメイタンシノイドを産生することが発見された（米国特許第４，１５１，０４２号）。合成メイタンシノールならびにその誘導体および類似体は、例えば、米国特許第４，１３７，２３０号；同第４，２４８，８７０号；同第４，２５６，７４６号；同第４，２６０，６０８号；同第４，２６５，８１４号；同第４，２９４，７５７号；同第４，３０７，０１６号；同第４，３０８，２６８号；同第４，３０８，２６９号；同第４，３０９，４２８号；同第４，３１３，９４６号；同第４，３１５，９２９号；同第４，３１７，８２１号；同第４，３２２，３４８号；同第４，３３１，５９８号；同第４，３６１，６５０号；同第４，３６４，８６６号；同第４，４２４，２１９号；同第４，４５０，２５４号；同第４，３６２，６６３号；および同第４，３７１，５３３号に開示されている。メイタンシノイドを含有する免疫コンジュゲートおよびそれらの治療用途は、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号；同第５，４１６，０６４号および欧州特許第ＥＰ０４２５２３５Ｂ１号に開示されている。Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８６１８−８６２３（１９９６）には、ヒト結腸直腸癌に対して指向されたモノクローナル抗体Ｃ２４２に連結されたＤＭ１と称するメイタンシノイドを含む免疫コンジュゲートが記載されている。このコンジュゲートは、培養結腸癌細胞に対して高い細胞傷害性であることが見出され、インビボ腫瘍成長アッセイにおいて抗腫瘍活性を示した。
【００９６】
抗体−メイタンシノイドコンジュゲートは、抗体またはメイタンシノイド分子いずれかの生物活性を有意に減少させることなく、抗体をメイタンシノイド分子に化学的に連結させることによって調製される。抗体分子あたり平均３〜４個のメイタンシノイド分子は、抗体の機能または溶解度に負の影響を及ぼすことなく標的細胞の細胞傷害性の増強において効力を示したが、１分子の毒素／抗体でさえ裸の（ｎａｋｅｄ）抗体の使用にわたって細胞傷害性を増強すると予想された。メイタンシノイドは当該技術分野において周知であり、かつ既知の技術によって合成することができ、または天然源から単離することができる。好適なメイタンシノイドは、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号ならびに先に言及した他の特許および非特許刊行物に開示されている。好ましいメイタンシノイドは、メイタンシノール、およびメイタンシノール分子の芳香族環または他の部分が修飾されているメイタンシノール類似体、例えば、様々なメイタンシノールエステルである。
【００９７】
対象となる別のコンジュゲートは、１つ以上のカリケアマイシン分子にコンジュゲートされた抗体を含む。抗生物質のカリケアマイシンファミリーは、ピコモル以下の濃度で二本鎖ＤＮＡ切断を生じさせることが可能である。使用され得るカリケアマイシンの構造類似体（Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｅａｒｃｈ  ５３：３３３６−３３４２；Ｌｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｅａｒｃｈ  ５８：２９２５−２９２８）（米国特許第５，７１４，５８６号；米国特許第５，７１２，３７４号；米国特許第５，２６４，５８６号；米国特許第５，７７３，００１号）。オーリスタチンＥ（ＡＥ）およびモノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）などのドラスタチン１０アナログは、開示の抗体またはそのバリアントのためのコンジュゲートとしての利用を見出すことができる（Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２１（７）：７７８−８４；Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００３  Ｂｌｏｏｄ  １０２（４）：１４５８−６５）。有用な酵素活性のある毒素としては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデッシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、アメリカヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ゴーヤー（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシンおよびトリコテセンが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、ＰＣＴ  ＷＯ９３／２１２３２を参照されたい。本開示はさらに、ＣＤ４０特異的抗体と、核酸分解活性を有する化合物、例えば、リボヌクレアーゼまたはＤＮＡエンドヌクレアーゼ、例えばデオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）との間でコンジュゲートまたは融合体が形成される実施形態を企図する。
【００９８】
代替的な一実施形態において、抗体を、放射性同位元素にコンジュゲートまたは作動可能に連結させて、放射性コンジュゲートを形成することができる。様々な放射性同位元素を放射性コンジュゲート抗体の産生に利用できる。例としては、９０Ｙ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、２１１Ａｔ、および２１２Ｂｉが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９９】
抗体は、治療用部分、例えば、細胞毒（例えば、細胞増殖抑制剤または細胞破壊剤）、治療薬または放射性元素（例えば、アルファ放射体、ガンマ放射体など）にコンジュゲートさせることができる。細胞毒または細胞傷害性薬剤は、細胞に有害である任意の薬剤を含む。例としては、パクリタキセル／パクリタキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシンならびにこれらのアナログまたはホモログが挙げられる。１つの好ましい例示的な細胞毒は、サポリン（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡから入手可能）である。治療薬としては、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−ルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ（ｔｈｉｏｅｐａ）クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロトホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシスジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ）、および抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１００】
さらに、抗体は、治療用部分、例えば、放射性金属イオンをコンジュゲートするのに有用な放射性材料または大環状キレーターにコンジュゲートさせることができる。ある実施形態において、大環状キレーターは、リンカー分子を介して抗体に連結することができる、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’‘，Ｎ’‘‘−四酢酸（ＤＯＴＡ）である。かかるリンカー分子は当該技術分野において一般に既知であり、Ｄｅｎａｒｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅ．４：２４８３−９０；Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１０：５５３；およびＺｉｍｍｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２６：９４３−５０に記載されている。
【０１０１】
さらなる別の実施形態において、抗体は、腫瘍前処置に利用するために「受容体」（例えば、ストレプトアビジン）にコンジュゲートさせることができ、ここで、この抗体−受容体コンジュゲートは、患者に投与され、次いで、清浄剤を利用して非結合コンジュゲートを循環から除去し、次いで、細胞傷害性薬剤（例えば、放射性ヌクレオチド）にコンジュゲートされている「リガンド」（例えば、アビジン）が投与される。代替的な一実施形態において、抗体は、抗体依存性酵素介在プロドラッグ療法（ＡＤＥＰＴ）を利用するために、酵素にコンジュゲートまたは作動可能に連結される。プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法薬、ＰＣＴ  ＷＯ８１／０１１４５を参照されたい）を活性抗癌薬に変換するプロドラッグ活性化酵素に抗体をコンジュゲートまたは作動可能に連結させることにより、ＡＤＥＰＴを用いることができる。例えば、ＰＣＴ  ＷＯ８８／０７３７８および米国特許第４，９７５，２７８号を参照されたい。ＡＤＥＰＴに有用な免疫コンジュゲートの酵素成分は、プロドラッグに対して、それをそのより活性な細胞傷害性形態に変換するように作用することが可能な任意の酵素を含む。これらおよび関連する実施形態の方法において有用である酵素としては、ホスファート含有プロドラッグの遊離薬物への変換に有用なアルカリホスファターゼ；サルフェート含有プロドラッグの遊離薬物への変換に有用なアリールサルファターゼ；非毒性５−フルオロシトシンの抗癌薬、５−フルオロウラシルへの変換に有用なシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグの遊離薬物への変換に有用なプロテアーゼ、例えば、セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチターゼ、およびカテプシン（例えば、カテプシンＢおよびＬ）；Ｄ−アミノ酸置換基を含有するプロドラッグの変換に有用なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグの遊離薬物への変換に有用な炭水化物切断酵素、例えば、β−ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼ；α−ラクタムで誘導体化された薬物の遊離薬物への変換に有用なベータ−ラクタマーゼ；ならびにアミン窒素がフェノキシアセチルまたはフェニルアセチル基でそれぞれ誘導体化された薬物の遊離薬物への変換に有用なペニシリンアミダーゼ、例えばペニシリンＶアミダーゼまたはペニシリンＧアミダーゼが挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、当該技術分野において「アブザイム」としても知られている酵素活性を有する抗体を使用して、プロドラッグを活性薬物に変換することができる（例えば、Ｍａｓｓｅｙ、１９８７、Ｎａｔｕｒｅ  ３２８：４５７−４５８を参照されたい）。腫瘍細胞集団へアブザイムを送達するために、抗体−アブザイムコンジュゲートを調製することができる。
【０１０２】
様々な二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、ジメチルアジプイミダートＨＣＬ）、活性エステル（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル）、アルデヒド（例えば、グルタレルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアナート（例えば、トルエン２，６−ジイソシアナート）、およびビス活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンを使用して、免疫コンジュゲートを作製することができる。特定のカップリング剤としては、ジスルフィド連結を提供するためのＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）（Ｃａｒｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１７３：７２３−７３７［１９７８］）およびＮ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタノアート（ＳＰＰ）が挙げられる。リンカーは、１つ以上の切断可能な成分の放出を促進する「切断可能リンカー」であってもよい。例えば、酸不安定性リンカーが使用され得る（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）；米国特許第５，２０８，０２０号）。
【０１０３】
抗体の他の改変も本明細書において企図される。例えば、抗体は、様々な非タンパク質様ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのコポリマーの１つに連結させることができる。抗体は、例えば、コアセルベーション技術もしくは界面重合によって調製したマイクロカプセル（例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ（メチルメタクリラート）マイクロカプセル）内に、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）内に、またはマクロエマルジョン内に捕捉されてもよい。かかる技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｌｏ，Ａ．，Ｅｄ．，（１９８０）に開示されている。
【０１０４】
本明細書において用いる場合、「担体」は、使用される投与量および濃度でそれに曝露される細胞または哺乳動物に非毒性である、薬学的に許容され得る担体、賦形剤、または安定剤を含む。多くの場合、生理的に許容され得る担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。生理的に許容される担体の例としては、緩衝剤、例えば、ホスフェート、シトレート、および他の有機酸；アスコルビン酸を含む抗酸化物質；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリシン；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノースもしくはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖アルコール、例えば、マンニトールもしくはソルビトール；塩形成性対イオン、例えば、ナトリウム；および／または非イオン性界面活性剤、例えば、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（商標））ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびポロキサマー（ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標））等が挙げられる。
【０１０５】
本明細書中の他の箇所で述べるように、本開示の抗ＣＤ４０抗体は、腫瘍細胞においてＣＤ４０シグナリングを誘導し、樹状細胞および免疫監視機構を活性化し、腫瘍細胞に対する抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を活性化し、腫瘍細胞に対する抗体依存性細胞性食作用（ＡＤＣＰ）を活性化し、ＣＤ４０のＣＤ４０Ｌへの結合を遮断し；ＣＤ４０作動性活性を有し；抗原提示細胞を活性化し；抗原提示細胞からのサイトカイン放出を刺激し；腫瘍細胞アポトーシスを誘導し；腫瘍細胞増殖を阻害し；ＡＤＣＣ、ＣＤＣおよびＡＤＣＰを含むがこれらに限定されないエフェクター機能の誘導により腫瘍細胞を殺傷し；抗腫瘍Ｔ細胞応答を刺激し；定着した腫瘍を低減させ；ならびにリツキシマブ耐性腫瘍を阻害する。本明細書に記載される抗体は、これらの特質または活性のいずれか１つ以上の組み合わせを有するか、またはそれを誘導することができる。抗ＣＤ４０抗体の機能特性は、当業者に既知の様々な方法、例えば、親和性／結合アッセイ（例えば、表面プラズモン共鳴、競合阻害アッセイ）；細胞傷害性アッセイ、細胞生存率アッセイ、細胞増殖、活性化または分化アッセイ、ＡＤＣＣおよびＣＤＣアッセイ、細胞シグナリング事象の結果として生ずる他の細胞活性（例えば、ＳＴＡＴ３リン酸化、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−アルファ、およびＭＩＰ１アルファを含むサイトカインの産生）、および癌細胞および／またはインビトロもしくはインビボモデルを用いる腫瘍成長阻害を用いて、評価することができる。他のアッセイは、正常なＣＤ４０ＬのＣＤ４０に対する結合もしくはＣＤ４０介在応答、例えば、細胞シグナリング、細胞活性化（例えば、免疫細胞活性化、増殖；抗原提示細胞活性化（例えば、樹状細胞、Ｂ細胞、マクロファージ）および免疫細胞活性化、増殖、免疫応答（細胞媒介および体液性応答を含む）等を遮断する、本明細書に記載の抗体の能力を試験することができる。本明細書に記載の抗体は、ＣＤ４０内在化、インビトロおよびインビボ効力等に対する効果についても試験することができる。かかるアッセイは、当業者に既知の十分に確立されたプロトコル（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌ．Ａｓｓｏｃ．Ｉｎｃ．＆  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｅ．ＣｏｌｉｇａｎＪｏｈｎ  Ｅ．ＣｏｌｉｇａｎＪｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａｄａ  Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄａｖｉｄ  Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅｔｈａｎ  Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗａｒｒｅｎ  ＳｔｒｏｂｅｒＡｄａ  Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄａｖｉｄ  Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅｔｈａｎ  Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗａｒｒｅｎ  ＳｔｒｏｂｅｒＡｄａ  Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄａｖｉｄ  Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅｔｈａｎ  Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗａｒｒｅｎ  Ｓｔｒｏｂｅｒ編，２００１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ）；または市販のキットを用いて、実施することができる。
【０１０６】
ある実施形態において、本発明はさらに、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードする単離された核酸、例えば、本明細書に記載のＣＤＲまたはＶＨもしくはＶＬドメインをコードする核酸を提供する。核酸は、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。これらおよび関連する実施形態は、本明細書に記載のＣＤ４０に結合する抗体をコードするポリヌクレオチドを含み得る。本明細書において用いる場合の用語「単離されたポリヌクレオチド」は、ゲノム、ｃＤＮＡもしくは合成起源のポリヌクレオチド、またはその組み合わせを意味し、その起源のため、この単離されたポリヌクレオチドは、（１）単離されたポリヌクレオチドが天然に見出されるポリヌクレオチドの全てまたは一部と関連していない、（２）天然では連結されていないポリヌクレオチドに連結されている、または（３）より大きな配列の一部として天然には存在しない。
【０１０７】
用語「作動可能に連結された」は、この用語が適用される成分が、適切な条件下でそれらの固有の機能を実施することが可能である関係にあることを意味する。例えば、タンパク質コーディング配列に「作動可能に連結された」転写制御配列は、制御配列の転写活性と適合する条件下でタンパク質コーディング配列の発現が達成されるように、タンパク質コーディング配列にライゲートされる。
【０１０８】
本明細書において用いる場合の用語「制御配列」は、それらがライゲートまたは作動可能に連結されるコーディング配列の発現、プロセシングまたは細胞内局在に影響を及ぼし得るポリヌクレオチド配列を指す。かかる制御配列の性質は、宿主生物に依存し得る。特定の実施形態において、原核生物についての転写制御配列は、プロモーター、リボソーム結合部位、および転写終結配列を含み得る。他の特定の実施形態において、真核生物についての転写制御配列は、転写因子についての１つまたは複数の認識部位を含むプロモーター、転写エンハンサー配列、転写終結配列、およびポリアデニル化配列を含み得る。ある実施形態において、「制御配列」は、リーダー配列および／または融合パートナー配列を含むことができる。
【０１０９】
本明細書において用いる場合、用語「ポリヌクレオチド」は、一本鎖または二本鎖核酸ポリマーを指す。ある実施形態において、ポリヌクレオチドを含むヌクレオチドは、リボヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチドであるか、またはいずれかのタイプのヌクレオチドの改変形態であり得る。かかる改変は、ブロモウリジンなどの塩基修飾、アラビノシドなどのリボソーム修飾、ならびに２’，３’−ジデオキシリボース、およびヌクレオチド間連結修飾、例えば、ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホロセレノアート、ホスホロジセレノアート、ホスホロアニロチオアート、ホスホラニラダート、およびホスホロアミダートを含む。用語「ポリヌクレオチド」は、具体的には、一本鎖および二本鎖形態のＤＮＡを含む。
【０１１０】
用語「自然発生ヌクレオチド」は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む。用語「改変されたヌクレオチド」は、改変または置換された糖基等を伴うヌクレオチドを含む。用語「オリゴヌクレオチド連結」は、オリゴヌクレオチド連結、例えば、ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホロセレノアート、ホスホロジセレノアート、ホスホロアニロチオアート、ホスホラニラダート、ホスホロアミダート等を含む。例えば、ＬａＰｌａｎｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１４：９０８１；Ｓｔｅｃ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１０６：６０７７；Ｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１６：３２０９；Ｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ、６：５３９；Ｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，ＯＬＩＧＯＮＵＣＬＥＯＴＩＤＥＳ  ＡＮＤ  ＡＮＡＬＯＧＵＥＳ：Ａ  ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ  ＡＰＰＲＯＡＣＨ，ｐｐ．８７−１０８（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｅｄ．），Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｅｎｇｌａｎｄ；米国特許第５，１５１，５１０号（Ｓｔｅｃ  ｅｔ  ａｌ．，）；ＵｈｌｍａｎｎおよびＰｅｙｍａｎ，１９９０，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，９０：５４３を参照されたい。これらの開示内容はあらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。オリゴヌクレオチドは、このオリゴヌクレオチドまたはそれらのハイブリダイゼーションの検出を可能にするために検出可能標識を含み得る。
【０１１１】
用語「ベクター」は、宿主細胞にコーディング情報を伝達するために使用される任意の分子（例えば、核酸、プラスミドまたはウイルス）を指すために用いられる。用語「発現ベクター」は、宿主細胞の形質転換に好適なベクターであって、挿入される異種核酸配列の発現を指示および／または制御する核酸配列を含むベクターを指す。発現は、転写、翻訳、およびイントロンが存在する場合にはＲＮＡスプライシングなどのプロセスを含むが、これらに限定されない。
【０１１２】
当業者には理解されるであろうが、ポリヌクレオチドは、ゲノム配列、ゲノム外およびプラスミドコード配列、ならびにタンパク質、ポリペプチド、ペプチド等を発現するか、または発現するように適合することができる、より小さな操作された遺伝子セグメントを含み得る。かかるセグメントは、自然に単離されてもよく、または当業者によって合成的に改変されてもよい。
【０１１３】
当業者にはまた認識されるであろうが、ポリヌクレオチドは、一本鎖（コーディングもしくはアンチセンス）または二本鎖であってもよく、またＤＮＡ（ゲノム、ｃＤＮＡもしくは合成）またはＲＮＡ分子であってもよい。ＲＮＡ分子は、イントロンを含有し、かつＤＮＡ分子に１対１の様式で対応するＨｎＲＮＡ分子、およびイントロンを含有しないｍＲＮＡ分子を含む。さらなるコーディングまたは非コーディング配列は、本開示によるポリヌクレオチド内に、必要ではないが、存在してもよく、またポリヌクレオチドは、他の分子および／または支持材料に、必要ではないが、連結されてもよい。ポリヌクレオチドは、天然配列を含んでもよく、またはかかる配列のバリアントもしくは誘導体をコードする配列を含んでもよい。
【０１１４】
したがって、これらおよび関連する実施形態によると、本開示は、本明細書に記載される抗体をコードするポリヌクレオチドも提供する。ある実施形態において、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチド配列の一部または全てを含むポリヌクレオチド、およびかかるポリヌクレオチドの相補体が提供される。
【０１１５】
他の関連する実施形態において、ポリヌクレオチドバリアントは、抗体（例えば、抗ＣＤ４０抗体）をコードするポリヌクレオチド配列に実質的な同一性を有し得る。例えば、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載する方法（例えば、下記のような標準パラメータを使用するＢＬＡＳＴ分析）を用いて、本明細書に記載の抗体をコードする参照ポリヌクレオチド配列と比較して、少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％またはそれ以上の配列同一性を含むポリヌクレオチドであり得る。コドン縮重、アミノ酸類似性、リーディングフレーム位置決定等を考慮することにより、これらの値を適切に調整して、２つのヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質の対応する同一性を決定可能であることは、当業者には分かるであろう。
【０１１６】
典型的に、ポリヌクレオチドバリアントは、好ましくは、バリアントポリヌクレオチドによってコードされる抗体の結合親和性が、本明細書に具体的に示されるポリヌクレオチド配列によってコードされる配列に比べて実質的に軽減しないように、１つ以上の置換、付加、欠失および／または挿入を含有する。
【０１１７】
ある他の関連する実施形態において、ポリヌクレオチド断片は、本明細書に記載の抗体をコードする配列と同一のまたはそれに相補的な配列の様々な長さの連続ストレッチを含み得るか、またはそれらから本質的になり得る。例えば、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードする配列の少なくとも約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、２００、３００、４００、５００もしくは１０００またはそれ以上の連続するヌクレオチドならびにそれらの間にある全ての中間長のヌクレオチドを含むか、それらから本質的になるポリヌクレオチドが提供される。この文脈での「中間長」が、２００〜５００；５００〜１，０００等の全ての整数を含む、引用された値の間の任意の長さ、例えば、５０、５１、５２、５３等；１００、１０１、１０２、１０３等；１５０、１５１、１５２、１５３等を意味することは、容易に理解されるであろう。本明細書に記載のポリヌクレオチド配列は、天然配列中では見出されないさらなるヌクレオチドにより、一端または両端で延長され得る。このさらなる配列は、本明細書に記載する抗体をコードするポリヌクレオチドのいずれかの末端にある、または本明細書に記載する抗体をコードするポリヌクレオチドの両端にある、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個のヌクレオチドからなり得る。
【０１１８】
別の実施形態において、本明細書において提供される抗体もしくはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド配列に中程度〜高度のストリンジェント条件下でハイブリダイズすることが可能であるポリヌクレオチド、またはその断片、またはその相補配列が提供される。ハイブリダイゼーション技術は、分子生物学の技術分野において周知である。例示を目的として、本明細書において提供されるポリヌクレオチドと他のポリヌクレオチドとのハイブリダイゼーションを試験するために好適な中程度のストリンジェント条件は、５ＸＳＳＣ、０．５％  ＳＤＳ、１．０ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶液中で予備洗浄すること；５０℃〜６０℃、５ＸＳＳＣで一晩ハイブリダイズさせること；次いで、０．１％  ＳＤＳを含有する２Ｘ、０．５Ｘ、および０．２ＸのＳＳＣの各々を用いて、６５℃で２０分間２回洗浄することを含む。例えばハイブリダイゼーション溶液の塩含有量および／またはハイブリダイゼーションを行う温度を変えることにより、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーを容易に操作することができることは、当業者には理解されるであろう。例えば、別の実施形態において、好適な高ストリンジェントハイブリダイゼーション条件は、ハイブリダイゼーションの温度を例えば６０℃〜６５℃または６５℃〜７０℃に上昇させることを除き、上に記載したものを含む。
【０１１９】
ある実施形態において、上に記載したポリヌクレオチド、例えば、ポリヌクレオチドバリアント、断片、およびハイブリダイジング配列は、ＣＤ４０またはその抗原結合断片に結合する抗体をコードする。他の実施形態において、かかるポリヌクレオチドは、ＣＤ４０に少なくとも約５０％、少なくとも約７０％、およびある実施形態においては、少なくとも約９０％結合する抗体またはその抗原結合断片もしくはＣＤＲ、ならびに本明細書に具体的に示される抗体配列をコードする。さらなる実施形態において、かかるポリヌクレオチドは、本明細書に示される抗体より大きい親和性でＣＤ４０に結合する、例えば、定量的に少なくとも約１０５％、１０６％、１０７％、１０８％、１０９％または１１０％結合する抗体またはその抗原結合断片もしくはＣＤＲ、ならびに本明細書に具体的に示される抗体配列をコードする。
【０１２０】
本明細書中の他の箇所に記載するように、代表的なポリペプチド（例えば、本明細書で提供されるようなバリアントＣＤ４０特異的抗体、例えば、本明細書で提供されるような抗原結合断片を有する抗体タンパク質）の三次元構造の決定は、定型的な方法論によって行うことができ、その結果、選択された天然または非天然アミノ酸を用いた１つ以上のアミノ酸の置換、付加、欠失または挿入を、そのように誘導された構造バリアントが本開示の種の空間充填特性を保持するかどうかを判定するために、実質的にモデル化することができる。例えば、親和性が維持されるまたはより良好な親和性が達成されるような抗体内の適切なアミノ酸置換（またはアミノ酸配列をコードする適切なポリヌクレオチド）を決定するための様々なコンピュータプログラムが当業者に既知である。
【０１２１】
本明細書に記載されるポリヌクレオチド、またはコーディング配列自体の長さに関わらず、その断片を、他のＤＮＡ配列、例えば、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、さらなる制限酵素部位、マルチクローニングサイト、他のコーディングセグメント等と組み合わせることができ、その結果、それらの全長はかなり様々であり得る。したがって、ほぼあらゆる長さの核酸断片が使用され得ることが企図され、その全長は、好ましくは、意図される組換えＤＮＡプロトコルにおける調製および使用の容易さによって制限される。例えば、約１０，０００、約５０００、約３０００、約２，０００、約１，０００、約５００、約２００、約１００、約５０塩基長等（全ての中間長を含む）の全長を有する例示的なポリヌクレオチドセグメントが有用であると企図される。
【０１２２】
ポリヌクレオチド配列を比較するとき、下記するように、一致が最大となるようアラインした場合に、２つの配列中のヌクレオチドの配列が同じである場合、「同一」であると言われる。２つの配列間の比較は、典型的に、比較ウインドウにわたってこれらの配列を比較して、配列類似性の局在領域を同定し、比較することによって行われる。本明細書において用いる場合の「比較ウインドウ」は、少なくとも約２０、通常は３０〜約７５、４０〜約５０の連続する位置のセグメントを指し、ここで、ある配列は、２つの配列を最適にアラインした後に、同数の連続した位置の参照配列と比較され得る。
【０１２３】
比較のための配列の最適なアラインメントは、デフォルトパラメータを用いて、バイオインフォマティクスソフトウェア（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ））のＬａｓｅｒｇｅｎｅ  ｓｕｉｔｅのＭｅｇａｌｉｇｎプログラムを用いることにより行うことができる。このプログラムは、以下の参考文献に記載されている幾つかのアラインメントスキームを具現化したものである：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（１９７８）Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ−Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｄｉｓｔａｎｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．Ｉｎ  Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（ｅｄ．）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ  Ｖｏｌ．５，Ｓｕｐｐｌ．３，ｐｐ．３４５−３５８；Ｈｅｉｎ  Ｊ．，Ｕｎｉｆｉｅｄ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓ，ｐｐ．６２６−６４５（１９９０）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．１８３，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．およびＳｈａｒｐ，Ｐ．Ｍ．，ＣＡＢＩＯＳ  ５：１５１−１５３（１９８９）；Ｍｙｅｒｓ，Ｅ．Ｗ．およびＭｕｌｌｅｒ  Ｗ．，ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１−１７（１９８８）；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｅ．Ｄ．，Ｃｏｍｂ．Ｔｈｅｏｒ  １１：１０５（１９７１）；Ｓａｎｔｏｕ，Ｎ．Ｎｅｓ，Ｍ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．４：４０６−４２５（１９８７）；Ｓｎｅａｔｈ，Ｐ．Ｈ．Ａ．およびＳｏｋａｌ，Ｒ．Ｒ．，Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ−ｔｈｅ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ，Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ（１９７３）；Ｗｉｌｂｕｒ，Ｗ．Ｊ．およびＬｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．，Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：７２６−７３０（１９８３）。
【０１２４】
あるいは、比較のための配列の最適なアラインメントは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｄ．ＡＰＬ．Ｍａｔｈ  ２：４８２（１９８１）の局所同一性アルゴリズムにより、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の同一性アライメントアルゴリズムにより、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索方法により、これらのアルゴリズムをコンピューターで実施することにより（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ、ｔｈｅ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ），５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、または検査により、行うことができる。
【０１２５】
配列同一性および配列類似性パーセントの決定に好適なアルゴリズムの好ましい一例は、ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ  ２．０アルゴリズムであり、これらは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２（１９７７）、およびＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）に記載されており、それぞれ、ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０を、例えば、本明細書に記載するパラメータと共に使用して、２つ以上のポリヌクレオチド間の配列同一性パーセントを決定することができる。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを通して公的に入手することができる。例示的な一例では、ヌクレオチド配列について、パラメータＭ（１対のマッチ残基についてのリワードスコア；常に＞０）およびＮ（ミスマッチ残基についてのペナルティスコア；常に＜０）を用いて、累積スコアを計算することができる。各方向のワードヒットの拡張は、累積アラインメントスコアが、その最大達成値からＸ量だけ低下した場合；１つ以上の負のスコアの残基アラインメントの蓄積のため、累積スコアがゼロ以下になった場合；またはいずれかの配列の末端に達した場合；に停止される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ、およびＸは、アラインメントの感度および速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）は、デフォルトとして１１のワード長（Ｗ）および１０の期待値（Ｅ）、ならびにＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５（１９８９）を参照されたい）アライメント、５０の（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、および両鎖の比較を用いる。
【０１２６】
ある実施形態において、「配列同一性のパーセント」は、少なくとも２０の位置の比較ウインドウにわたって最適にアラインされた２つの配列を比較することにより決定され、ここで、比較ウインドウ内のポリヌクレオチド配列の部分は、２つの配列の最適なアラインメントのために（付加および欠失を含まない）参照配列と比較して、２０パーセント以下、通常は５〜１５パーセント、または１０〜１２パーセントの付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含み得る。パーセンテージは、マッチした位置の数を得るために同一の核酸塩基が両方の配列内に出現する位置の数を決定すること、そのマッチした位置の数を参照配列内の位置の総数（すなわち、ウインドウサイズ）で割ること、そしてそれらの結果に１００をかけて配列同一性のパーセンテージを得ること、によって計算される。
【０１２７】
遺伝子コードの縮重の結果として、本明細書に記載の抗体をコードする多くのヌクレオチド配列が存在することは、当業者には理解されるであろう。これらのポリヌクレオチドの一部は、ＣＤ４０に結合する抗体をコードする天然のまたは元のポリヌクレオチド配列のヌクレオチド配列に対して最小限の配列同一性しか持たない。それにも関わらず、コドン使用における差異に起因して異なるポリヌクレオチドが、本開示によって明確に企図される。ある実施形態において、哺乳動物発現用にコドン最適化された配列が具体的に企図される。
【０１２８】
したがって、本発明の別の実施形態において、部位特異的変異誘発などの変異誘発アプローチを、本明細書に記載する抗体のバリアントおよび／または誘導体の調製に利用することができる。このアプローチにより、ポリペプチド配列における特定の改変を、それらをコードする基礎ポリヌクレオチドの変異誘発によって行うことができる。これらの技術は、例えば、上述の考察の１つ以上を組み入れて、１つ以上のヌクレオチド配列変化をポリヌクレオチドに導入することによる、配列バリアントを調製および試験するために複雑でないアプローチを提供する。
【０１２９】
部位特異的変異誘発により、所望の変異のＤＮＡ配列をコードする特異的オリゴヌクレオチド配列、および十分な数の隣接ヌクレオチドの使用により変異体を産生し、交差した欠失接合部の両側に安定した二重鎖を形成するために十分なサイズおよび配列複雑性のプライマー配列をもたらすことが可能となる。選択されたポリヌクレオチド配列における変異を用いて、そのポリヌクレオチド自体の特性を改善、変更、低下、修飾もしくは別様に変化させることができ、および／またはコードされたポリペプチドの特性、活性、組成、安定性もしくは一次配列を変更することができる。
【０１３０】
ある実施形態において、本発明者らは、コードされるポリペプチドの１つ以上の特性、例えば、抗体もしくはその抗原結合断片の結合親和性、または特定のＦｃ領域の機能、または特定のＦｃγＲに対するＦｃ領域の親和性を変更するための、本明細書に開示する抗体またはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド配列の変異誘発を企図する。部位特異的変異誘発の技術は当該技術分野において周知であり、ポリペプチドとポリヌクレオチド両方のバリアントを作成するために広く用いられている。例えば、部位特異的変異誘発は、多くの場合、ＤＮＡ分子の特異的部分を変更するために用いられる。かかる実施形態では、配列の接合部の両側の約５〜約１０残基が変更される、典型的に約１４〜約２５ヌクレオチドほどを含む長さのプライマーが用いられる。
【０１３１】
当業者には理解されるであろうが、部位特異的変異誘発技術は、多くの場合、一本鎖および二本鎖形態の両方に存在するファージベクターを利用する。部位指向性変異誘発において有用な典型的なベクターは、Ｍ１３ファージなどのベクターを含む。これらのファージは、商業的に容易に入手することができ、それらの使用は、当業者に一般に周知である。二本鎖プラスミドはまた、対象とする遺伝子をプラスミドからファージへと移入する段階を排除する部位指向性変異誘発において従来利用されている。
【０１３２】
一般的に、本明細書による部位指向性変異誘発は、先ず、一本鎖ベクターを得ること、または所望のペプチドをコードするＤＮＡ配列をその配列内に含む二本鎖ベクターの２本の鎖を融解して分離させることによって行う。一般的に、所望の変異配列を保有するオリゴヌクレオチドプライマーは、合成的に調製される。次いで、このプライマーを一本鎖ベクターとアニールし、Ｅ．ｃｏｌｉポリメラーゼＩクレノウ断片などのＤＮＡポリメラーゼ酵素に供して、変異を保有する鎖の合成を完了する。このようにして、１つの鎖が元の非変異配列をコードし、第２の鎖が所望の変異を保有するヘテロ二重鎖が形成される。次いで、このヘテロ二重鎖ベクターを使用して、Ｅ．Ｃｏｌｉ細胞などの適切な細胞を形質転換させ、変異配列配置を保有する組換えベクターを含むクローンを選択する。
【０１３３】
部位指向性変異誘発を用いる、選択されたペプチドをコードするＤＮＡセグメントの配列バリアントの調製は、潜在的に有用な種を産生する手段を提供し、これは、ペプチドの配列バリアントおよびそれらをコードするＤＮＡ配列を得ることができる他の方法を限定することを意図しない。例えば、所望のペプチド配列をコードする組換えベクターを、ヒドロキシルアミンなどの変異誘発剤で処理して、配列バリアントを得ることができる。これらの方法およびプロトコルに関する具体的な詳細は、Ｍａｌｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４；Ｓｅｇａｌ，１９７６；ＰｒｏｋｏｐおよびＢａｊｐａｉ，１９９１；Ｋｕｂｙ，１９９４；およびＭａｎｉａｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２の教示の中で見出され、これらの各文献は、その目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３４】
本明細書において用いる場合、用語「オリゴヌクレオチド指向性変異誘発手順」は、特異的核酸分子の濃度のその初期濃度に対する増加、または増幅などの検出可能シグナルの濃度の増加をもたらす、テンプレート依存性プロセスおよびベクター媒介増殖を指す。本明細書において用いる場合、用語「オリゴヌクレオチド指向性変異誘発手順」は、プライマー分子のテンプレート依存性伸長を含むプロセスを指すことを意図する。テンプレート依存性プロセスという用語は、核酸の新規に合成された鎖の配列が相補的塩基対合についての周知の規則（例えば、Ｗａｔｓｏｎ、１９８７を参照されたい）によって規定される、ＲＮＡまたはＤＮＡ分子の核酸合成を指す。典型的に、ベクター媒介方法論は、核酸断片のＤＮＡまたはＲＮＡへの導入、ベクターのクローン増幅、および増幅された核酸断片の回収を含む。かかる方法論の例は、米国特許第４，２３７，２２４号により提供され、これはその全体が参照により本明細書に具体的に組み込まれる。
【０１３５】
ポリペプチドバリアントの産生のためのもう１つのアプローチでは、米国特許第５，８３７，４５８号において記載されるような再帰的配列組換えを利用することができる。このアプローチでは、組換えおよびスクリーニングまたは選択の反復サイクルを行って、例えば、増大した結合親和性を有する個々のポリヌクレオチドバリアントを「展開」させる。ある実施形態は、本明細書に記載の少なくとも１つのポリヌクレオチドを含むプラスミド、ベクター、転写または発現カセットの形態の構築物も提供する。
【０１３６】
多くの実施形態において、対象モノクローナル抗体をコードする核酸を宿主細胞に直接導入し、コードされた抗体の発現を誘導するのに十分な条件下でその細胞をインキュベートする。当業者に周知の標準的な技術を本明細書で提供されるポリペプチドおよび核酸配列と共に用いて、本開示の抗体を調製する。ポリペプチド配列を使用して、それによって開示される特定の抗体をコードする適切な核酸配列を決定することができる。当業者に周知の標準的な方法に従って、様々な発現系に対する特定のコドン「選好性」を反映するように、核酸配列を最適化することができる。
【０１３７】
ある関連する実施形態に従って、本明細書に記載の１つ以上の構築物を含む組み換え宿主細胞；任意の抗体、そのＣＤＲ、ＶＨもしくはＶＬドメイン、または抗原結合断片をコードする核酸；およびコード核酸からの発現を含む、コードされた産物の産生方法が提供される。発現は、核酸を含有する組換え宿主細胞を適切な条件下で培養することによって、都合よく達成することができる。発現による産生の後、抗体またはその抗原結合断片を、任意の好適な技術を用いて単離および／または精製することができ、その後、必要に応じて使用することができる。
【０１３８】
本明細書で提供される抗体または抗原結合断片、ならびにコードする核酸分子およびベクターは、例えば、それらの天然の環境から実質的に純粋なもしくは均質な形態で単離および／もしくは精製されてもよく、または核酸の場合には、所望の機能を有するポリペプチドをコードする配列以外の元の核酸もしくは遺伝子を伴わずに、もしくは実質的に伴わずに、単離および／もしくは精製されてもよい。核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡを含んでもよく、完全にまたは部分的に合成のものであってもよい。本明細書で示される場合のヌクレオチド配列への言及は、特定された配列を伴うＤＮＡ分子を包含し、かつ文脈上他のものが必要とされない限り、ＴをＵで代用する特定された配列を伴うＲＮＡ分子を包含する。
【０１３９】
様々な異なる宿主細胞におけるポリペプチドのクローニングおよび発現のための系は周知である。好適な宿主細胞としては、細菌、哺乳動物細胞、酵母、およびバキュロウイルス系が挙げられる。異種ペプチドの発現のために当該技術分野において利用可能な哺乳動物細胞系としては、チャイニーズハムスター卵巣細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞、ＮＳＯマウス黒色腫細胞、および多数の他のものが挙げられる。一般的な好ましい細菌宿主は、Ｅ．ｃｏｌｉである。
【０１４０】
Ｅ．ｃｏｌｉなどの原核細胞における抗体および抗原結合断片の発現は、当該技術分野において十分に確立されている。総説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：５４５−５５１（１９９１）を参照されたい。真核細胞における培養での発現も、抗体またはそれらの抗原結合断片の産生の選択肢として当業者に利用可能であり、最近の総説については、例えば、Ｒｅｆ，Ｍ．Ｅ．（１９９３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．４：５７３−５７６；ＴｒｉｌｌＪ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ６：５５３−５６０を参照されたい。
【０１４１】
プロモーター配列、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子、および他の配列を適宜含む適切な調節配列を含有する好適なベクターを選択または構築することができる。ベクターは、適宜、プラスミド、ウイルス性、例えばファージ、またはファージミドであってよい。さらなる詳細については、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ：２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい。核酸の操作、例えば、核酸構築物の調製、変異誘発、シークエンシング、ＤＮＡの細胞への導入および遺伝子発現についての、ならびにタンパク質の分析についての、多くの既知の技術およびプロトコルは、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９２またはその後の最新版に詳細が記載されている。
【０１４２】
用語「宿主細胞」は、本明細書に記載の抗体のうちの１つ以上をコードする核酸配列が導入される細胞、またはそれを導入することが可能な細胞、および任意の本明細書に記載の抗体をコードする遺伝子などの対象となる選択された遺伝子をさらに発現するか、または発現することが可能である細胞を指すために用いられる。この用語は、選択された遺伝子が存在する限り、その後代が形態の点でまたは構成する遺伝子の点でその元の親と同一であるかに関わらず、親細胞の後代を含む。したがって、かかる核酸を宿主細胞へ導入することを含む方法も企図される。導入には任意の利用可能な技術を用いることができる。真核細胞については、好適な技術は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン、エレクトロポレーション、リポソーム媒介トランスフェクション、およびレトロウイルスまたは他のウイルス、例えば、ワクシニアウイルスもしくは昆虫細胞についてはバキュロウイルスを使用する形質導入を含む。細菌細胞については、好適な技術は、塩化カルシウム形質転換、エレクトロポレーション、およびバクテリオファージを使用するトランスフェクションを含む。導入の後、例えば、遺伝子の発現のための条件下で宿主細胞を培養することにより、核酸からの発現を生じさせるか、または発現を可能にすることができる。一実施形態において、核酸は、宿主細胞のゲノム（例えば、染色体）に組み込まれる。標準的な技術に従って、ゲノムでの組換えを促進する配列を含めることによって、組み込みを促進することができる。
【０１４３】
ある実施形態において、本発明は、ＣＤ４０特異的抗体などの特定のポリペプチドを発現させるための発現系における上記の構築物の使用を含む方法も提供する。用語「形質導入」は、通常はファージによる、ある細菌から別の細菌への遺伝子の移入を指すために用いられる。「形質導入」は、レトロウイルスによる真核細胞配列の獲得および移入も指す。用語「トランスフェクション」は、細胞による外来または外因性ＤＮＡの取り込みを指すために使用され、細胞は、外因性ＤＮＡが細胞膜の内部に導入されたときに、「トランスフェクト」される。多数のトランスフェクション技術が当該技術分野において周知であり、本明細書で開示されている。例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９７３，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ５２：４５６；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ，Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，ＢＡＳＩＣ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ；およびＣｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｇｅｎｅ  １３：１９７を参照されたい。かかる技術を用いて、１つ以上の外因性ＤＮＡ部分を好適な宿主細胞に導入することができる。
【０１４４】
本明細書において用いる場合の用語「形質転換」は、細胞の遺伝子特徴における変化を指し、細胞は、新たなＤＮＡを含有するように改変されたときに、形質転換される。例えば、細胞は、その天然の状態から遺伝子的に改変されるときに、形質転換される。トランスフェクションまたは形質導入の後、形質転換するＤＮＡを、細胞の染色体への物理的組み込みによりその細胞のＤＮＡと組み換えることができ、または複製することなくエピソーム成分として一過的に維持することができ、またはプラスミドとして独立して複製することができる。細胞は、その細胞の分裂に伴ってＤＮＡが複製されるときに、安定に形質転換されると考えられる。生体物質、例えば、核酸分子、ポリペプチド、宿主細胞等とに関連して使用される場合の用語「自然発生」または「天然の」は、天然に見出される材料であって、かつヒトによって操作されていない材料を指す。同様に、本明細書において用いる場合の「非自然発生」または「非天然の」は、天然で見出されない材料であるか、またはヒトによって構造を改変されたかまたは合成された材料を指す。
【０１４５】
用語「ポリペプチド」「タンパク質」および「ペプチド」および「糖タンパク質」は、互換的に使用され、任意の特定の長さに限定されないアミノ酸のポリマーを意味する。この用語は、ミリスチル化、硫酸化、グリコシル化、リン酸化、およびシグナル配列の付加または欠失などの改変を排除しない。用語「ポリペプチド」または「タンパク質」は、アミノ酸の１つ以上の鎖を意味し、ここで、各鎖は、ペプチド結合によって共有結合的に連結されたアミノ酸を含み、およびこのポリペプチドまたはタンパク質は、天然タンパク質の配列、すなわち、自然発生の、および具体的には非組み換え細胞によって産生されたタンパク質、または遺伝子改変もしくは組換え細胞によって生産されたタンパク質の配列を有する、ペプチド結合によって互いに非共有結合的および／または共有結合的に連結された複数の鎖を含むことができ、ならびに天然タンパク質のアミノ酸配列を有する分子、またはこの天然配列の１つ以上のアミノ酸からの欠失、このアミノ酸の付加および／もしくは置換を有する分子を含むことができる。用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、具体的には、本開示のＣＤ４０に結合する抗体、または抗ＣＤ４０抗体の１つ以上のアミノ酸からの欠失、このアミノ酸への付加および／もしくは置換を有する配列を包含する。したがって、「ポリペプチド」または「タンパク質」は、１つのアミノ酸鎖（「単量体」と呼ばれる）または複数のアミノ酸鎖（「多量体」と呼ばれる）を含み得る。
【０１４６】
本明細書において言及される用語「単離されたタンパク質」は、対象のタンパク質が、（１）天然に典型的に共に見出される少なくとも一部の他のタンパク質を含まないこと、（２）同じ源からの、例えば、同じ種からの、他のタンパク質を本質的に含まないこと、（３）異なる種からの細胞によって発現されること、（４）天然でそれが関連しているポリヌクレオチド、脂質、炭水化物または他の材料の少なくとも約５０パーセントから分離されていること、（５）「単離されたタンパク質」が天然で関連しているタンパク質の部分と（共有結合性もしくは非共有結合性相互作用によって）関連付けられていないこと、（６）天然で関連していないポリペプチドと（共有結合性もしくは非共有結合性相互作用によって）作動可能に関連付けられていること、または（７）天然に存在しないこと、を意味する。かかる単離されたタンパク質は、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡもしくは他のＲＮＡによってコードされるか、合成起源のものであるか、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。ある実施形態において、単離されたタンパク質は、その用途（治療、診断、予防、研究、または他のもの）を妨害し得るその天然環境において見出されるタンパク質またはポリペプチドまたは他の混入物を実質的に含まない。
【０１４７】
用語「ポリペプチド断片」は、自然発生または組換え的に産生されたポリペプチドのアミノ末端欠失、カルボキシル末端欠失、および／または内部欠失もしくは置換を有する、単量体または多量体であり得るポリペプチドを指す。ある実施形態において、ポリペプチド断片は、少なくとも５〜約５００アミノ酸長のアミノ酸を含むことができる。ある実施形態において、断片は、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、または４５０アミノ酸長であることが理解されるであろう。特に有用なポリペプチド断片は、抗体の抗原結合ドメインまたは断片を含む、機能性ドメインを含む。抗ＣＤ４０抗体の場合、有用な断片は、ＣＤＲ領域、特に、重鎖または軽鎖のＣＤＲ３領域；重鎖または軽鎖の可変領域；２つのＣＤＲを含む抗体鎖の一部分またはその可変領域のみ；等を含むが、これらに限定されない。
【０１４８】
ポリペプチドは、翻訳と同時にまたは翻訳後にタンパク質の移入を指示するシグナル（またはリーダー）配列をそのタンパク質のＮ末端に含み得る。シグナルペプチドを含む本明細書で提供される任意のポリペプチドアミノ酸配列もまた、かかるシグナルまたはリーダーペプチドを伴わない本明細書に記載される任意の用途のために企図される。当業者には分かるであろうが、シグナルペプチドは、通常、プロセッシング中に切断され、活性抗体タンパク質中には含まれない。ポリペプチド（例えば、ポリ−Ｈｉｓ）の合成、精製もしくは同定を容易にするために、または固体支持体へのポリペプチドの結合を強化するために、ポリペプチドをリンカーまたは他の配列にインフレーム融合またはコンジュゲートさせることもできる。
【０１４９】
複数のポリペプチド成分を、各ポリペプチドがその二次および／または三次構造に確実に折り畳まれるように十分な距離で隔離するために、必要に応じて、ペプチドリンカー／スペーサー配列を利用してもよい。当該技術分野において周知の標準的な技術を用いて、かかるペプチドリンカー配列を融合ポリペプチドに組み込むことができる。
【０１５０】
あるペプチドスペーサー配列を、例えば、（１）柔軟な伸長された立体配座構造をとることができるそれらの能力；（２）それらが第１および第２のポリペプチド上の機能的エピトープと相互作用し得る二次構造をとることができないこと；および／または（３）ポリペプチドの機能的エピトープと反応し得る疎水性または荷電残基の欠如、に基づいて、選択することができる。
【０１５１】
例示的な一実施形態において、ペプチドスペーサー配列は、例えば、Ｇｌｙ、ＡｓｎおよびＳｅｒ残基を含む。他のほぼ中性のアミノ酸、例えば、ＴｈｒおよびＡｌａも、スペーサー配列に含めることができる。
【０１５２】
スペーサーとして有用に利用することができる他のアミノ酸配列としては、Ｍａｒａｔｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  ４０：３９  ４６（１９８５）；Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：８２５８  ８２６２（１９８６）；米国特許第４，９３５，２３３号および米国特許第４，７５１，１８０号において開示されているものが挙げられる。
【０１５３】
幾つかの実施形態において、第１および第２のポリペプチドが、機能的ドメインを離隔するためにおよび立体障害を防止するために用いることができる非必須Ｎ末端アミノ酸領域を有するとき、スペーサー配列は必要とされない。任意のスペーサーを用いることなく、または例えば１〜３回反復される５量体Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒからなる柔軟なポリリンカーを使用することにより、２つのコーディング配列を直接融合することができる。かかるスペーサーは、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）を構築する際にＶＨとＶＬとの間に挿入されることにより使用されている（Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：５９７９−５８８３）。
【０１５４】
ある実施形態において、ペプチドスペーサーは、単鎖抗体の可変領域を形成する２つのベータシート間の妥当な相互作用を可能にするように設計される。
【０１５５】
ある例示的な実施形態において、ペプチドスペーサーは、１〜５個のアミノ酸、５〜１０個のアミノ酸、５〜２５個のアミノ酸、５〜５０個のアミノ酸、１０〜２５個のアミノ酸、１０〜５０個のアミノ酸、１０〜１００個のアミノ酸、または任意のその範囲内のアミノ酸である。
【０１５６】
他の例示的な実施形態において、ペプチドスペーサーは、約１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０個またはそれ以上のアミノ酸長を含む。
【０１５７】
本明細書に記載される抗体のアミノ酸配列改変（複数可）も企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改良することが望ましいことがある。例えば、抗体のアミノ酸配列バリアントを、その抗体をコードするポリヌクレオチドもしくはその鎖に適切なヌクレオチド変化を導入することにより、またはペプチド合成により調製することができる。かかる改変は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失および／またはその残基への挿入および／または置換が挙げられる。最終的な構築物が所望の特性（例えば、ＣＤ４０への高親和性結合）を有する限り、最終的な抗体に到達するために、欠失、挿入および置換のいずれかの組み合わせを行ってもよい。アミノ酸変化は、グリコシル化部位の数または位置を変化させるなどの、抗体の翻訳後プロセスを変更してもよい。本発明のポリペプチドについて上で説明した任意の変異および改変が、本発明の抗体に含まれ得る。
【０１５８】
代表的なポリペプチド（例えば、ＣＤ４０特異的抗体）の三次元構造の決定は、定型的な方法論によって行うことができ、その結果、選択された天然または非天然アミノ酸を用いた１つ以上のアミノ酸の置換、付加、欠失または挿入を、そのように誘導された構造バリアントが本開示の種の空間充填特性を保持するかどうかを判定するために、実質的にモデル化することができる。例えば、Ｄｏｎａｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４  Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．３：２３７８；Ｂｒａｄｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０９：１８６８−１８７１（２００５）；Ｓｃｈｕｅｌｅｒ−Ｆｕｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１０：６３８（２００５）；Ｄｉｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ｅｔ  ａｌ．ＵＳＡ  １０３：１２４４（２００６）；Ｄｏｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４５０：１７６（２００７）；Ｑｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４５０：２５９（２００７）ｅｔ  ａｌ．，Ｒａｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２７：１０１４−１０１８（２０１０）を参照されたい。これらおよび関連する実施形態のために用いられ得る、例えば、本明細書で提供されるようなＣＤ４０特異的抗体その抗原結合ドメインの合理的設計のために用いられ得るコンピュータアルゴリズムの幾つかのさらなる非限定的な例としては、３Ｄグラフィックおよび内蔵スクリプトを使用して大きな生体分子系を表示、動画化および分析するための分子可視化プログラムであるＶＭＤが挙げられる（ｔｈｅ  Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ  Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｉｌｌｉｎｏｉｓ  ａｔ  Ｕｒｂａｎａ−Ｃｈａｍｐａｇｎｅのウェブサイト、ｋｓ．ｕｉｕｃ．ｅｄｕ／Ｒｅｓｅａｒｃｈ／ｖｍｄ／を参照されたい）。多くの他のコンピュータプログラムが当該技術分野において既知であり、かつ当業者に利用可能であり、それらにより、エネルギー最小化立体配座の空間充填モデル（ファンデルワールス半径）から原子寸法の決定が可能となる；ＧＲＩＤは、異なる化学基についての高親和性の領域を決定し、それにより結合を強化しようと努めるものであり、Ｍｏｎｔｅ  Ｃａｒｌｏサーチは、数学的アライメントを計算するものであり、ならびにＣＨＡＲＭＭ（Ｂｒｏｏｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｊ．Ｃｏｍｐｕｔ．Ｃｈｅｍ．４：１８７−２１７）およびＡＭＢＥＲ（Ｗｅｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９８１）Ｊ．Ｃｏｍｐｕｔ．Ｃｈｅｍ．１０６：７６５）は、力の場の計算を評定し、分析するものである（Ｅｉｓｅｎｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６１：Ｃ３７６−３８６；Ｌｙｂｒａｎｄ（１９９１）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｅｌｇ．４６：４９−５４；Ｆｒｏｉｍｏｗｉｔｚ（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ８：６４０−６４４；Ｂｕｒｂａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ７：９９−１１１；Ｐｅｄｅｒｓｅｎ（１９８５）Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．６１：１８５−１９０；およびＫｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｄｙｎ．９：４７５−４８８も参照されたい）。様々な適切���計算用コンピュータプログラムは、Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ（Ｍｕｎｉｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）などからも市販されている。
【０１５９】
本発明の別の実施形態において、ＣＤ４０抗体およびそれらのヒト化バージョンは、ウサギモノクローナル抗体に由来し、特に、ＲａｂＭＡｂ（登録商標）技術を用いて生成される。これらの抗体は、最小限の配列改変しか必要とせず、それにより、変異系統誘導（ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｌｉｎｅａｇｅ  ｇｕｉｄｅｄ）（ＭＬＧ）ヒト化技術（例えば、米国特許第７，４６２，６９７号を参照されたい）を用いるヒト化後の機能特性の保持が助長されるので、有利である。したがって、本開示の抗ＣＤ４０抗体を作製するための例示的な方法は、例えば、米国特許第５，６７５，０６３号および同第７，４２９，４８７号に記載されている、ＲａｂＭａｂ（登録商標）ウサギモノクローナル抗体技術を含む。これに関連して、ある実施形態において、本開示の抗ＣＤ４０抗体は、ウサギにおいて産生される。特定の実施形態において、ウサギ脾細胞との融合が可能なウサギ由来不死Ｂリンパ球を使用して、抗体を産生するハイブリッド細胞を産生する。不死Ｂリンパ球は、内因性免疫グロブリン重鎖を検出可能な程度には発現せず、ある実施形態では、変更された免疫グロブリン重鎖をコードする遺伝子を含有し得る。
【０１６０】
ＣＤ４０
白血病およびリンパ腫の大部分は、Ｂ系列細胞の悪性形質転換から生ずる。ＣＤ２０などの細胞表面Ｂ系列拘束性抗原の発現により、それは、抗体療法の魅力的な標的となる。抗体療法は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）および慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を有する患者への対処方法を劇的に変えた。リツキシマブが認可されて以来、抗体単独または化学療法と併用により、奏効率、長期成績および生活の質を著しく向上させてきた（Ｃｈｉｎｎ  Ｐ，Ｂｒａｓｌａｗｓｋｙ  Ｇ，Ｗｈｉｔｅ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２００３；５２：２５７−２８０．；Ｒａｓｔｅｔｔｅｒ  Ｗ，Ｍｏｌｉｎａ  Ａ，Ｗｈｉｔｅ  ＣＡ．Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ：Ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｌｙｍｐｈｏｍａｓ  ａｎｄ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｍｅｄ  ２００４；５５：４７７−５０３）。しかし、相当な数の患者がリツキシマブに対する初期耐性または獲得耐性のいずれかを呈示し、これは、ＣＤ２０を標的とする現行アプローチには臨床成果において限界があることを示しており、抗ＣＤ４０ｍＡｂ、ＡＰＸ００５などの異なる作用機序を有するＢ細胞リンパ腫および白血病のための新規免疫療法を開発することにより改善する必要がある（Ｓｔｏｌｚ  Ｃ，Ｓｃｈｕｌｅｒ  Ｍ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｉｔｓ  ｃｉｒｃｕｍｖｅｎｔｉｏｎ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．２００９；５０（６）：８７３−８８５；Ｂｅｌｌｏ  Ｃ，Ｓｏｔｏｍａｙｏｒ  ＥＭ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａｓ：Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ａｎｄ  ｂｅｙｏｎｄ．Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｅｄｕｃ  Ｐｒｏｇｒａｍ  ２００７；２３３−２４２；Ｄｕｐｉｒｅ  Ｓ，Ｃｏｉｆｆｉｅｒ  Ｂ．Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｎｅｗ  ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌａｒｇｅ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ２０１０；Ｊｕｎ  １８（オンライン））。
【０１６１】
免疫応答の調節におけるＣＤ４０の役割
Ｔ細胞の完全な活性化は、２つの別個であるが相乗的なシグナルを必要とする。Ｔ細胞抗原受容体によって送達される第１のシグナルは、ＡＰＣ上の抗原およびＭＨＣ複合体によって提供され、免疫応答の特異性に関与する。第２の、すなわち共刺激シグナルは、ＣＤ２８とＢ７−１（ＣＤ８０）／Ｂ７−２（ＣＤ８６）の相互作用およびＣＤ４０とＣＤ４０Ｌの相互作用によるものであり、これらの相互作用は、フルスケールＴ細胞応答を開始するために必要とされる。共刺激シグナル不在下では、Ｔ細胞は、抗原刺激の際に無応答性（アネルギー）またはプログラムされた細胞死（アポトーシス）に至る可能性がある。
【０１６２】
ＴＮＦ受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーのメンバーであるＣＤ４０は、主として、Ｂ細胞ならびに他の抗原提示細胞（ＡＰＣ）、例えば、樹状細胞およびマクロファージ上で発現される。ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）は、主として、活性化されたＴ細胞によって発現される。
【０１６３】
ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌの相互作用は、Ｔ細胞活性化のための共刺激シグナルとして働く。休止Ｂ細胞上でのＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌエンゲージメントは、増殖、免疫グロブリンクラススイッチ、抗体分泌を誘導し、また、胚中心の発達およびメモリーＢ細胞の生存に一定の役割を果たし、これらの全てが体液性免疫応答に不可欠である（Ｋｅｈｒｙ  ＭＲ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９６；１５６：２３４５−２３４８）。樹状細胞上のＣＤ４０へのＣＤ４０Ｌの結合は、Ｂ７ファミリー（ＣＤ８０、ＣＤ８６）などの共刺激分子の発現およびインターロイキン１２などの炎症誘発性サイトカインの産生の増加により顕在化されるようなＤＣ成熟を誘導する。これらが強力なＴ細胞応答をもたらす（Ｓｔｏｕｔ，Ｒ．Ｄ．，Ｊ．Ｓｕｔｔｌｅｓ．１９９６．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １７：４８７−４９２；Ｂｒｅｎｄａｎ  Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ，Ｒａｎｊｅｎｙ  Ｔｈｏｍａｓ．Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００３；２３：８３−１０７；Ｃｅｌｌａ，Ｍ．，Ｄ．Ｓｃｈｅｉｄｅｇｇｅｒ，Ｋ．Ｐａｌｍｅｒ−Ｌｅｈｍａｎｎ，Ｐ．Ｌａｎｅ，Ａ．Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ，Ｇ．Ａｌｂｅｒ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９６；１８４：７４７−４５２）。
【０１６４】
ＣＤ４０シグナル伝達は、活性化タンパク質、ｃ−Ｊｕｎ、ＡＴＦ２（活性化転写因子−２）およびＲｅｌ転写因子（Ｄａｄｇｏｓｔａｒ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００２  Ｆｅｂ  ５；９９（３）：１４９７−５０２）の活性化により遺伝子発現を調節する、ＮＦ−カッパＢ（核内因子−カッパＢ）、ＭＡＰＫ（マイトジェン活性化プロテインキナーゼ）およびＳＴＡＴ３（シグナル伝達および転写活性化因子−３）（Ｐｙｐｅ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  ＢｉｏｌＣｈｅｍ．２０００  Ｊｕｎ  １６；２７５（２４）：１８５８６−９３）を含む、多数の経路を活性化する。ＴＮＦＲ受容体関連因子アダプタータンパク質（例えば、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ５、およびＴＲＡＦ６）は、この受容体と相互作用し、シグナル伝達の媒介因子として働く。特定の細胞型に依存して、ＣＤ４０エンゲージメントは、特定の遺伝子発現パターンを生じる。ＣＤ４０シグナリングに応じて活性化される遺伝子は、非常に多数のサイトカインおよびケモカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−アルファ、およびマクロファージ炎症性タンパク質−１アルファ（ＭＩＰ１アルファ））を含む。ある細胞型では、ＣＤ４０の活性化は、細胞傷害性ラジカルの産生（Ｄａｄｇｏｓｔａｒ  ｅｔ  ａｌ．，上記）、ＣＯＸ２（シクロオキシゲナーゼ−２）、およびＮＯ（酸化窒素）の産生をもたらし得る。
【０１６５】
腫瘍におけるＣＤ４０の役割
ＣＤ４０は、正常免疫細胞によって発現されるばかりでなく、多くの悪性細胞によっても発現される。特に、ＣＤ４０は、Ｂ系列ＮＨＬ、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、ホジキン病（Ｕｃｋｕｎ  ＦＭ，Ｇａｊｌ−Ｐｅｃｚａｌｓｋａ  Ｋ，Ｍｙｅｒｓ  ＤＥ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １９９０；７６：２４４９−２４５６；Ｏ’Ｇｒａｄｙ  ＪＴ，Ｓｔｅｗａｒｔ  Ｓ，Ｌｏｗｒｅｙ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １９９４；１４４：２１−２６）、多発性骨髄腫（Ｐｅｌｌａｔ−Ｄｅｃｅｕｎｙｎｃｋ  Ｃ，Ｂａｔａｉｌｌｅ  Ｒ，Ｒｏｂｉｌｌａｒｄ  Ｎ，Ｈａｒｏｕｓｓｅａｕ  ＪＬ，Ｒａｐｐ  ＭＪ，Ｊｕｇｅ−Ｍｏｒｉｎｅａｕ  Ｎ，Ｗｉｊｄｅｎｅｓ  Ｊ，Ａｍｉｏｔ  Ｍ．Ｂｌｏｏｄ．１９９４；８４（８）：２５９７−６０３）において、ならびに膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、および悪性黒色腫（Ｙｏｕｎｇ  ＬＳ，Ｅｌｉｏｐｏｕｌｏｓ  ＡＧ，Ｇａｌｌａｇｈｅｒ  ＮＪ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １９９８；１９：５０２−６；Ｚｉｅｂｏｌｄ  ＪＬ，Ｈｉｘｏｎ  Ｊ，Ｂｏｙｄ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｃｈ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｈｅｒ  Ｅｘｐ（Ｗａｒｓｚ）２０００；４８：２２５−３３；Ｇｌａｄｕｅ  Ｒ，Ｃｏｌｅ  Ｓ，Ｄｏｎｏｖａｎ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００６；２４（１８Ｓ）：１０３ｓ）において過発現される。
【０１６６】
腫瘍細胞表面上でのＣＤ４０のライゲーションは、多くの場合、直接細胞傷害効果を媒介するものであり、アポトーシスおよび壊死により腫瘍退縮を生じさせる結果となる（Ｇｒｅｗａｌ  ＩＳ，Ｆｌａｖｅｌｌ  ＲＡ．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９８；１６：１１１−３５；ｖａｎ  Ｋｏｏｔｅｎ  Ｃ，ＢａｎｃｈｅｒｅａｕＪ．Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ  ２０００；６７（１）：２−１７）。腫瘍細胞におけるＣＤ４０の正確な機能は不明である（Ｔｏｎｇ  ＡＷ、Ｓｔｏｎｅ  ＭＪ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２００３  １０（１）：１−１３）が、インビトロでのＣＤ４０のエンゲージメントは、固形腫瘍細胞および高悪性度Ｂ細胞リンパ腫細胞の成長を阻害する（Ｍａｇｉ  ＫｈａｌｉｌおよびＲｏｂｅｒｔ  Ｈ．Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ．Ｕｐｄａｔｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  ２００７；２（２）：６１−６５；Ｙｏｕｎｇ  ＬＳ，Ｅｌｉｏｐｏｕｌｏｓ  ＡＧ，Ｇａｌｌａｇｈｅｒ  ＮＪ，Ｄａｗｓｏｎ  ＣＷ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １９９８；１９（１１）：５０２−６；Ｆｕｎａｋｏｓｈｉ  Ｓ，Ｌｏｎｇｏ  ＤＬ，Ｂｅｃｋｗｉｔｈ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １９９４；８３（１０）：２７８７−９４；Ｈｅｓｓ  Ｓ、Ｅｎｇｅｌｍａｎｎ  Ｈ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９９６；１８３（１）：１５９−６７；Ｅｌｉｏｐｏｕｌｏｓ  ＡＧ，Ｄａｗｓｏｎ  ＣＷ，Ｍｏｓｉａｌｏｓ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９９６；１３（１０）：２２４３−５４；ｖｏｎ  Ｌｅｏｐｒｅｃｈｔｉｎｇ  Ａ，ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｂｒｕｇｇｅｎ  Ｐ，Ｐａｈｌ  ＨＬ，Ａｒｕｆｆｏ  Ａ，Ｓｉｍｏｎ  ＪＣ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９９９；５９（６）：１２８７−９４）。これらの効果は、非新生物Ｂ細胞および樹状細胞上でのＣＤ４０のエンゲージメント後に誘導される増殖とは対照的である。
【０１６７】
直接的な腫瘍阻害に加えて、ＣＤ４０シグナリングの活性化は、腫瘍保有宿主における抗原提示細胞の機能を救出し、腫瘍関連抗原に対する活性免疫応答を引き起こす、または回復させる。ＣＤ４０作動薬は、腫瘍保有マウスにおいてＴ細胞慣用性を克服し、腫瘍関連抗原に対する有効な細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘発し、かつ抗腫瘍ワクチンの効力を強化することが報告されている（Ｅｌｉｏｐｏｕｌｏｓ  ＡＧ，Ｄａｖｉｅｓ  Ｃ，Ｋｎｏｘ  ＰＧ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２０００；２０（１５）：５５０３−１５；Ｔｏｎｇ  ＡＷ，Ｐａｐａｙｏｔｉ  ＭＨ，Ｎｅｔｔｏ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００１；７（３）：６９１−７０３）。
【０１６８】
分子標的としてのＣＤ４０
ＣＤ４０は、広範な悪性細胞上で過発現される。腫瘍阻害および免疫系の刺激におけるＣＤ４０の役割により、ＣＤ４０は抗体に基づく免疫療法の魅力的な標的となる（ｖａｎ  Ｍｉｅｒｌｏ  ＧＪ，ｄｅｎ  Ｂｏｅｒ  ＡＴ，Ｍｅｄｅｍａ  ＪＰ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２００２；９９（８）：５５６１−５５６６；Ｆｒｅｎｃｈ  ＲＲ，Ｃｈａｎ  ＨＴ，Ｔｕｔｔ  ＡＬ，Ｇｌｅｎｎｉｅ  ＭＪ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ．１９９９；５（５）：５４８−５５３）。抗ＣＤ４０抗体は、複数の機序：（ｉ）ＡＤＣＣなどの抗体エフェクター機能、（ｉｉ）腫瘍細胞に対する直接的な細胞傷害効果、および（ｉｉｉ）抗腫瘍免疫応答の活性化、を介して癌細胞に対して作用し得る。
【０１６９】
したがって、本開示は、ＡＰＸ００５Ｍなどの抗ＣＤ４０抗体を、第２の剤を組み合わせて利用する方法を提供し、ここで、第２の剤は免疫調整剤である。特に好ましい実施形態において、第２の剤は抗体である。
【０１７０】
抗ＣＤ４０治療用抗体
幾つかの抗ＣＤ４０抗体は、抗腫瘍治療薬としての可能性を有することが報告されている。ＣＰ−８７０，８９３は、Ｐｆｉｚｅｒにより開発された完全ヒトＩｇＧ２  ＣＤ４０作動薬抗体である。それは、３．４８ｘ  １０−１０ＭのＫＤ  を伴ってＣＤ４０に結合するが、ＣＤ４０Ｌの結合を遮断しない（例えば、米国特許第７，３３８，６６０号を参照されたい）。ＣＰ−８７０８９３はＡＤＣＣ効果を示さず、それは、おそらくそのＩｇＧ２アイソタイプに起因する。したがって、この抗体は、ＣＤ４０作動薬（すなわち、ＣＤ４０Ｌ結合に影響しない）として作用し、アポトーシス促進性シグナリングを誘導し、ＤＣおよび免疫監視機構を活性化させる。しかし、この抗体は、ＡＤＣＣを媒介しない。
【０１７１】
ＨＣＤ１２２は、Ｎｏｖａｒｔｉｓにより開発された完全ヒトＩｇＧ１  ＣＤ４０作動薬抗体である。これは、５．１ｘ１０−１０のＫＤでＣＤ４０に結合し、ＣＤ４０ＬへのＣＤ４０の結合を遮断し、Ｂ細胞ならびに一定の初代ＣＬＬおよびＭＭ細胞に対するＣＤ４０リガンド誘導シグナリングおよび生物学的効果を阻害する（Ｔａｉ  ＹＴ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅ．２００５  Ｊｕｌ  １；６５（１３）：５８９８−９０６；Ｌｕｑｍａｎ  Ｍ，Ｋｌａｂｕｎｄｅ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．：Ｂｌｏｏｄ  １１２：７１１−７２０，２００８）。インビボでのその抗腫瘍効果についての主要な作用機序は、ＡＤＣＣである（Ｌｏｎｇ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．２００５  ＩＭＦ  Ｏｒａｌ  Ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．３；Ｂｌｏｏｄ  ２００４，１０４（１１，Ｐａｒｔ  １）：Ａｂｓｔ  ３２８１）。そのアンタゴニスト特性に起因して、この抗体は、ＣＤ４０介在抗腫瘍免疫応答を直接誘導できないこともある。
【０１７２】
ＳＧＮ−４０は、ヒト膀胱癌腫細胞系を免疫原として用いて生成された、マウス抗体クローンＳ２Ｃ６からＳｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓによって開発されたヒト化ＩｇＧ１抗体である。これは、１．０ｘ１０−９のＫＤでＣＤ４０に結合し、ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌとの間の相互作用を増進させることにより作用し、そのようにして、部分的な作動性効果を示す（Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  ＪＡ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅ，６０：３２２５−３１，２０００）。ＳＧＮ−４０は、高悪性度非ホジキンリンパ腫およびＭＭ細胞起源のＢリンパ腫系列のパネルに増殖阻害性およびアポトーシスシグナルを送達する（Ｔａｉ  ＹＴ，Ｃａｔｌｅｙ  ＬＰ，Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ  ＣＳ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００４；６４（８）：２８４６−２８５２）。インビトロおよびインビボ研究は、ＡＤＣＣを介するアポトーシスシグナリングおよび抗体エフェクター機能の両方がＳＧＮ−４０の抗腫瘍活性に寄与することを示唆している（Ｌａｗ  ＣＬ，Ｇｏｒｄｏｎ  ＫＡ，Ｃｏｌｌｉｅｒ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ：Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００５；６５：８３３１−８３３８）。最近の研究は、ＳＧＮ−４０の抗腫瘍活性が、エフェクター細胞とＦｃの相互作用に有意に依存すること、およびマクロファージが、その治療活性に寄与する主要エフェクターであることを示唆している（Ｏｆｌａｚｏｇｌｕ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．２００９  Ｊａｎ  １３；１００（１）：１１３−７．Ｅｐｕｂ  ２００８  Ｄｅｃ  ９）。ＳＧＮ−４０は、部分的な作動薬であり、Ｔ細胞上で発現されるＣＤ４０Ｌを必要とするので、ＳＧＮ−４０が抗腫瘍免疫応答を十分に押し上げる能力には限界があり得る。
【０１７３】
組み合わせた抗ＣＤ４０抗体
本明細書において用いられ得る抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５（Ａｐｅｘｉｇｅｎ）、ＡＰＸ００５Ｍ（Ａｐｅｘｉｇｅｎ）、ＣＰ−８７０，８９３（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＳＧＮ−４０（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）；およびＡＤＣ−１０１３（Ａｌｌｉｇａｔｏｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を含むが、これらに限定されない。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５である。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号１を含むＶＨＣＤＲ１と、配列番号２を含むＶＨＣＤＲ２と、配列番号３を含むＶＨＣＤＲ３と、配列番号４を含むＶＬＣＤＲ１と、配列番号５を含むＶＬＣＤＲ２と、配列番号６を含むＶＬＣＤＲ３と、を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号８を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号９を含む重鎖定常領域を含む。
【０１７４】
本明細書において、以下でより詳細に説明される第２の治療薬と組み合わせた、ＣＤ４０に結合する抗体を使用する治療方法が提供される。一実施形態において、本発明の組み合わせは、本開示の文脈において、例えば、存在するタンパク質の量における変化（例えば、統計的に有意な増大もしくは減少）、または変異タンパク質の存在、またはその両方に起因する、異常なＣＤ４０発現または活性を特徴とする疾患および障害を含むことが意味される、ＣＤ４０の不適切な発現を伴う疾患を有する患者に投与される。過剰さは、分子レベルでの過剰発現、作用部位における長期もしくは蓄積された出現、または正常に検出可能なものに対して増大した（例えば、統計的に有意な様式で）ＣＤ４０の活性を含むがこれらに限定されない、任意の原因に起因し得る。かかるＣＤ４０の過剰さは、正常な発現に対して測定することができ、またはＣＤ４０シグナリング事象の活性およびその測定は、本明細書に記載される抗体の開発および／または臨床試験において重要な役割を果たし得る。
【０１７５】
本発明の組み合わせは、種々の癌の治療のために有用である。ある実施形態において、本明細書において記載される抗体は、抗腫瘍免疫応答を活性化させることによる、抗腫瘍活性を呈する。ある実施形態において、本抗体は、ＣＤ４０の異常発現に関連した種々の癌の治療のために有用である。本発明の一実施形態は、癌患者に治療上有効量の本明細書に記載のＣＤ４０特異的抗体組み合わせ物を投与することによる、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓癌、結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫、ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病を含むがこれらに限定されない癌を治療するための方法を提供する。投与後、統計的に有意な様式で（すなわち、当業者に知られているような適切な対照に対して）癌の進行および／または転移を阻害、予防または遅延させる量が、効果的であるとみなされる。
【０１７６】
別の実施形態は、癌患者に治療上有効量（例えば、投与後、統計的に有意な様式で、すなわち、当業者に知られているような適切な対照に対して、癌の転移を阻害、予防または遅延させる量）の本明細書に記載のＣＤ４０特異的抗体組み合わせ物を投与することによる、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓癌、結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫、ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病を含むがこれらに限定されない癌の転移を予防するための方法を提供する。
【０１７７】
別の実施形態は、癌患者に治療上有効量の本明細書に記載のＣＤ４０特異的抗体組み合わせ物を投与することによる、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓癌、結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫、ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病を含むがこれらに限定されない癌を予防するための方法を提供する。
【０１７８】
別の実施形態は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓癌、結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫、ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病の１つ以上を罹患している患者に治療上有効量の本明細書に記載のＣＤ４０特異的抗体組み合わせ物を投与することによる、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓癌、結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫、ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病を治療するための方法、これらの徴候を改善するための方法、これらの進行を阻害するための方法、またはこれらを予防するための方法を提供する。
【０１７９】
別の実施形態は、自己免疫疾患の１つ以上に罹患している患者に治療上有効量の本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体組み合わせを投与することによる、自己免疫疾患を治療するための方法、これらの徴候を改善するための方法、これらの進行を阻害するための方法、またはこれらを予防するための方法を提供する。これに関連して、自己免疫疾患は、関節炎（関節リウマチ、反応性関節炎を含む）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、乾癬および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、脳脊髄炎、ブドウ膜炎、重症筋無力症、多発性硬化症、インスリン依存型糖尿病、アジソン病、セリアック病、慢性疲労症候群、自己免疫性肝炎、自己免疫性脱毛症、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、線維筋痛症、尋常性天疱瘡、シェーグレン症候群、川崎病、甲状腺機能亢進症／ブレーブス病、甲状腺機能低下症／橋本病、子宮内膜症、強皮症、悪性貧血、グッドパスチャー症候群、ギラン・バレー症候群、ウェーグナー病、糸球体腎炎、再生不良性貧血（多数回輸血を受けた再生不良性貧血患者を含む）、発作性夜間ヘモグロビン尿症、骨髄異形成症候群、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、エバンス症候群、第ＶＩＩＩ因子阻害物質症候群、全身性血管炎、皮膚筋炎、多発性筋炎およびリウマチ熱、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性水疱性類天疱瘡、パーキンソン病、サルコイドーシス、白斑、原発性胆汁性肝硬変、ならびに自己免疫性心筋炎を含むが、これらに限定されない。
【０１８０】
別の実施形態は、炎症性疾患の１つ以上に罹患している患者に治療上有効量の本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体組み合わせを投与することによる、炎症性疾患を治療するための方法、これらの徴候を改善するための方法、これらの進行を阻害するための方法、またはこれらを予防するための方法を提供する。炎症性疾患は、クローン病、大腸炎、皮膚炎、乾癬、憩室炎、肝炎、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、エリテマトーデス、腎炎、パーキンソン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症（ＭＳ）、アルツハイマー病、関節炎、関節リウマチ、喘息、ならびに様々な心血管疾患、例えば、アテローム性動脈硬化症および血管炎を含むが、これらに限定されない。ある実施形態において、炎症性疾患は、関節リウマチ、糖尿病、痛風、クリオピリン関連周期性症候群、および慢性閉塞性肺疾患からなる群より選択される。
【０１８１】
抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤
ＣＤ４０は、重要な刺激性免疫チェックポイント分子であるが、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１もしくはＣＤ２７９）、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１もしくはＣＤ２７４もしくはＢ７ホモログ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４もしくはＣＤ１５２）、およびＴ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡもしくはＰＤ−１ＨもしくはＤｉｅｓ１もしくは血小板受容体Ｇｉ２４もしくはＳＩＳＰ１もしくはＣ１０ｏｒｆ５４もしくはＢ７−Ｈ５）などの分子は、阻害性免疫チェックポイント分子である。すなわち、これらの分子は、免疫応答を阻害または下方制御する。
【０１８２】
本発明の一態様は、免疫チェックポイント阻害剤を用いて、ＣＤ４０を作動させ、かつ阻害性免疫チェックポイント分子を拮抗させる方法に関する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗体である。ある実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ＰＤ−１阻害剤の例は、ニボルマブおよびペンブロリズマブを含むが、これらに限定されない。ＰＤ−Ｌ１阻害剤の例は、アテゾリズマブを含むが、これらに限定されない。ＣＴＬＡ−４阻害剤の例は、イピルムマブを含むが、これらに限定されない。抗ＶＩＳＴＡ抗体の例は、ｈ２９Ｇ７およびｈ１４Ｄ８を含むが、これらに限定されない。
【０１８３】
抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤の組み合わせは、癌の治療において特に有用である。ある実施形態において、癌は、異常なＣＤ４０発現に関連する。一実施形態において、癌は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される。
【０１８４】
したがって、本開示の一態様は、癌を有する患者を治療するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【０１８５】
本開示の別の態様は、癌を有する患者において癌細胞の増殖を阻害するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【０１８６】
本発明の一態様は、癌を有する患者において腫瘍の成長を阻害するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【０１８７】
本開示の別の態様は、癌を有する患者において癌細胞の抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を誘導するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【０１８８】
本開示の一態様は、癌を有する患者において癌細胞に対する抗体依存性細胞介在性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘導するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【０１８９】
本開示の別の態様は、患者において樹状細胞を活性化するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【０１９０】
本開示の一態様は、患者において抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、抗原提示細胞は、Ｂ細胞、樹状細胞、またはマクロファージである。
【０１９１】
さらに、細胞を抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤に接触させることを含む、ＡＰＣおよび／またはＴ細胞をインビトロおよびエクソビボで活性化させる方法も提供される。
【０１９２】
本開示の別の態様は、樹状細胞を抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤に接触させることを含む、抗原提示細胞を活性化させるための方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、抗原提示細胞は、Ｂ細胞、樹状細胞、またはマクロファージである。
【０１９３】
本開示の一態様は、癌を有する患者においてＴ細胞増殖を誘導するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、抗原提示細胞は、Ｂ細胞、樹状細胞、またはマクロファージである。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞である。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋  Ｔ細胞である。
【０１９４】
本開示の別の態様は、癌を有する患者においてＴ細胞のインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）産生を増大するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、抗原提示細胞は、Ｂ細胞、樹状細胞、またはマクロファージである。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞である。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋  Ｔ細胞である。
【０１９５】
抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤組成物
本発明は、抗ＣＤ４０抗体および免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物を提供する。一実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、および抗ＶＩＳＴＡ抗体から選択される。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【０１９６】
本開示の一態様は、抗ＣＤ４０抗体およびＰＤ−１阻害剤を含む組成物を提供する。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号１を含むＶＨＣＤＲ１と、配列番号２を含むＶＨＣＤＲ２と、配列番号３を含むＶＨＣＤＲ３と、配列番号４を含むＶＬＣＤＲ１と、配列番号５を含むＶＬＣＤＲ２と、配列番号６を含むＶＬＣＤＲ３と、を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号８を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号９を含む重鎖定常領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５である。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体である。一実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、ニボルマブまたはペンブロリズマブである。
【０１９７】
本開示の別の態様は、抗ＣＤ４０抗体およびＰＤ−Ｌ１阻害剤を含む組成物を提供する。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号１を含むＶＨＣＤＲ１と、配列番号２を含むＶＨＣＤＲ２と、配列番号３を含むＶＨＣＤＲ３と、配列番号４を含むＶＬＣＤＲ１と、配列番号５を含むＶＬＣＤＲ２と、配列番号６を含むＶＬＣＤＲ３と、を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号８を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号９を含む重鎖定常領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５である。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、Ｌ１抗体である。一実施形態において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、アテゾリズマブである。
【０１９８】
本開示の一態様は、抗ＣＤ４０抗体およびＣＴＬＡ−４阻害剤を含む組成物を提供する。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号１を含むＶＨＣＤＲ１と、配列番号２を含むＶＨＣＤＲ２と、配列番号３を含むＶＨＣＤＲ３と、配列番号４を含むＶＬＣＤＲ１と、配列番号５を含むＶＬＣＤＲ２と、配列番号６を含むＶＬＣＤＲ３と、を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号８を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号９を含む重鎖定常領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５である。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、ＣＴＬＡ−４阻害剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体である。一実施形態において、ＣＴＬＡ−４阻害剤は、イピリムマブである。
【０１９９】
本開示の別の態様は、抗ＣＤ４０抗体およびＶＩＳＴＡ阻害剤を含む組成物を提供する。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号１を含むＶＨＣＤＲ１と、配列番号２を含むＶＨＣＤＲ２と、配列番号３を含むＶＨＣＤＲ３と、配列番号４を含むＶＬＣＤＲ１と、配列番号５を含むＶＬＣＤＲ２と、配列番号６を含むＶＬＣＤＲ３と、を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号８を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号９を含む重鎖定常領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５である。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、ＶＩＳＴＡ阻害剤は、抗ＶＩＳＴＡ抗体である。一実施形態において、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ｈ２９Ｇ７またはｈ１４Ｄ８である。
【０２００】
抗ＣＤ４０抗体および先天免疫活性化剤
本開示の別の態様は、ＣＤ４０および先天免疫活性化剤、例えば、ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ−４またはＣＤ２８４）を作動させる方法を提供する。一実施形態において、先天免疫活性化剤作動薬は、抗体である。ある実施形態において、先天免疫活性化剤は、ＴＬＲ−４である。ＴＬＲ−４作動薬の一例は、リポ多糖（ＬＰＳ）である。モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）は、ＬＰＳよりも毒性の低いＴＬＲ−４作動薬である。したがって、ＴＬＲ−４作動薬は、例えば、ＭＰＬＡおよび合成ＭＰＬＡ（複数可）を含む。ある実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＭＰＬＡである。あるインビトロ法において、ＬＰＳは、ＴＬＲ−４作動薬として使用される。例示的な抗ＴＬＲ−４抗体は、ＮＩ−０１０１である。
【０２０１】
本方法は特に癌の治療に有用である。ある実施形態において、癌は、異常なＣＤ４０発現に関連する。一実施形態において、癌は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病からなる群より選択される。
【０２０２】
本開示の一態様は、癌を有する患者を治療するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、抗ＴＬＲ−４抗体である。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【０２０３】
本開示の別の態様は、癌を有する患者において癌細胞の増殖を阻害するための方法であって、生理的に許容される担体ならび治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、抗ＴＬＲ−４抗体である。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【０２０４】
本発明の一態様は、癌を有する患者において腫瘍の成長を阻害するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、抗ＴＬＲ−４抗体である。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【０２０５】
本開示の別の態様は、癌を有する患者において癌細胞の抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を誘導するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、抗ＴＬＲ−４抗体である。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【０２０６】
本開示の一態様は、癌を有する患者において癌細胞に対する抗体依存性細胞介在性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘導するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、抗ＴＬＲ−４抗体である。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【０２０７】
本開示の別の態様は、患者において樹状細胞を活性化するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、抗ＴＬＲ−４抗体である。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【０２０８】
本開示の一態様は、患者において抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、抗ＴＬＲ−４抗体である。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、抗原提示細胞は、Ｂ細胞、樹状細胞、またはマクロファージである。
【０２０９】
本開示の別の態様は、樹状細胞を抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬に接触させることを含む、抗原提示細胞を活性化させるための方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、抗ＴＬＲ−４抗体である。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、抗原提示細胞は、Ｂ細胞、樹状細胞、またはマクロファージである。
【０２１０】
本開示の一態様は、癌を有する患者においてＴ細胞増殖を誘導するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、抗ＴＬＲ−４抗体である。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、抗原提示細胞は、Ｂ細胞、樹状細胞、またはマクロファージである。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞である。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋  Ｔ細胞である。
【０２１１】
本開示の別の態様は、癌を有する患者においてＴ細胞のインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）産生を増大するための方法であって、生理的に許容される担体ならびに治療上有効量の抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む組成物を患者へ投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、抗ＴＬＲ−４抗体である。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞である。一実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋  Ｔ細胞である。
【０２１２】
抗ＣＤ４０抗体および先天免疫活性化剤作動薬組成物
本発明は、抗ＣＤ４０抗体および先天免疫活性化剤作動薬を含む組成物を提供する。ある実施形態において、先天免疫活性化剤は、ＴＬＲ−４である。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、抗ＴＬＲ−４抗体である。別の実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、リポ多糖（ＬＰＳ）である。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＭＰＬＡである。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。
【０２１３】
したがって、一実施形態において、組成物は、抗ＣＤ４０抗体およびＴＬＲ−４作動薬を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号１を含むＶＨＣＤＲ１と、配列番号２を含むＶＨＣＤＲ２と、配列番号３を含むＶＨＣＤＲ３と、配列番号４を含むＶＬＣＤＲ１と、配列番号５を含むＶＬＣＤＲ２と、配列番号６を含むＶＬＣＤＲ３と、を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号７を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号８を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号９を含む重鎖定常領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５である。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＡＰＸ００５Ｍである。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、抗体である。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＭＰＬＡである。一実施形態において、ＴＬＲ−４作動薬は、ＬＰＳである。別の実施形態において、ＴＬＲ−４抗体は、ＮＩ−０１０１である。
【０２１４】
投与
本開示は、ＣＤ４０特異的抗体を組み合わせて含む組成物、ならびに種々の治療設定におけるかかる組成物の投与を提供する。ある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、免疫チェックポイント阻害剤の投与前に投与される。他の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、免疫チェックポイント阻害剤の投与後に投与される。さらなる別の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、免疫チェックポイント阻害剤と同時に投与される。
【０２１５】
純粋な形態または適切な薬学的組成物中での本明細書に記載の抗体の投与は、同様の効用をもたらす剤の容認された任意の投与モードを介して実施することができる。薬学的組成物は、抗体もしくは抗体含有組成物を適切な生理的に許容される担体、希釈剤もしくは賦形剤と組み合わせることにより調製することができ、また、固体、半固体、液体もしくは気体形態の調製物、例えば、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、軟膏、溶液、坐剤、注射、吸入剤、ゲル、微粒子、およびエアロゾルへと製剤化することができる。さらに、他の薬学的に活性な成分（本明細書の他の箇所に記載されるような他の抗癌剤を含む）および／または好適な賦形剤、例えば、塩、緩衝液、および安定化剤が、組成物中に存在してもよいが、必須ではない。投与は、経口、非経口、経鼻、静脈内、経皮、皮下、または局所を含む、種々の異なる経路により成し遂げることができる。好ましい投与モードは、治療または予防すべき状態の性質に依存する。投与後に、癌の進行および／または転移を軽減、阻害、予防、または遅延させる量が、有効であるとみなされる。
【０２１６】
ある実施形態において、投与される量は、生存腫瘍の量の統計学的に有意な減少、例えば、腫瘍質量の少なくとも５０％減少、またはスキャン寸法の変化（例えば、統計学的有意性を伴う減少）によって示されるような腫瘍退縮をもたらすのに十分な量である。他の実施形態において、投与される量は、熟練の医師には既知の特定の疾患適応症の症状において臨床的に妥当な低減をもたらすのに十分な量である。
【０２１７】
正確な投与量および治療の継続期間は、治療される疾患の関数であり、既知の試験プロトコルを用いて経験的に決定することができ、または当該技術分野において既知のモデル系において組成物を試験し、そこから外挿することにより決定することができる。制御下での臨床試験も実施することができる。投与量はまた、緩和すべき状態の重篤度に応じて変化し得る。薬学的組成物は一般に、望ましくない副作用を最小限にする一方で、治療上有用な効果を発揮するように、製剤化および投与される。組成物は１回で投与されてもよく、または多数のより小さい用量に分割して、時間間隔をあけて投与されてもよい。任意の特定の対象については、特定の投与レジメンを、個々の必要性に応じて経時的に調整することができる。
【０２１８】
抗体含有組成物は、単独で投与されてもよく、または、放射線療法、化学療法、移植、免疫療法、ホルモン療法、光力学的療法等などの他の既知の癌療法と組み合わせて投与されてもよい。また、組成物を、抗生物質と組み合わせて投与してもよい。
【０２１９】
したがって、これらのおよび関連する薬学的組成物の典型的な投与経路は、経口、局所、経皮、吸入、非経口、舌下、頬側、直腸内、膣内、および鼻腔内経路を含むが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合の非経口という用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内注射または注入技術を含む。本発明のある実施形態に従う薬学的組成物は、患者に組成物を投与するとその中に含有された活性成分が生物学的に利用可能になるように、製剤化される。対象または患者に投与され得る組成物は、１つ以上の投与量単位の形態をとってもよく、例えば、錠剤は、単一投与量単位であってもよく、また、エアロゾル形態の抗体の容器は、複数の投与量単位を保持してもよい。かかる剤形の実際の調製方法は当業者に既知であるか、または明らかであろう；例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０００）を参照されたい。投与される組成物は、いずれの事象においても、本明細書の教示に従って対象となる疾患または状態を治療するために、治療上有効量の本開示の抗体を含有する。
【０２２０】
薬学的組成物は、固体または液体の形態であり得る。一実施形態において、担体（複数可）は、粒子状であり、その場合、組成物は、例えば、錠剤または粉末形態である。担体（複数可）は、組成物が、例えば、経口油、注射液、または例えば吸入投与の際に有用であるエアロゾルであると、液体であり得る。経口投与が意図されるとき、薬学的組成物は、好ましくは、固体または液体形態のいずれかであり、半固体、半液体、懸濁液およびゲル形態は、本明細書において固体または液体のいずれかとして考えられる形態の中に含まれる。
【０２２１】
経口投与用の固体組成物として、薬学的組成物は、粉末、顆粒、圧縮錠剤、ピル、カプセル、チューインガム、ウエハース等へと製剤化することができる。かかる固体組成物は、典型的に１つ以上の不活性希釈剤または可食担体を含有し得る。加えて、以下：結合剤、例えばカルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、微結晶性セルロース、トラガカントガム、またはゼラチン；賦形剤、例えば、デンプン、ラクトース、またはデキストリン、崩壊剤、例えば、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、コーンスターチ等；滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｘ；流動化促進剤、例えばコロイド状二酸化ケイ素；甘味剤、例えば、スクロースまたはサッカリン；着香剤、例えばペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジフレーバリング；ならびに着色剤、の１つ以上が存在してもよい。薬学的組成物がカプセル、例えば、ゼラチンカプセルの形態であるとき、それは、上記の種類の材料に加えて、ポリエチレングリコールまたは油などの液体担体を含有し得る。
【０２２２】
薬学的組成物は、液体、例えば、エリキシル、シロップ、溶液、エマルジョンまたは懸濁液の形態であり得る。２つの例として、液体は、経口投与用または注射による送達用であり得る。経口投与が意図されるとき、好ましい組成物は、本化合物に加えて、甘味剤、保存剤、色素／着色剤および香味増強剤のうちの１つ以上を含有する。注射による投与が意図される組成物の場合には、界面活性剤、保存剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、緩衝剤、安定剤、および等張剤のうちの１つ以上が含まれ得る。
【０２２３】
液体薬学的組成物は、溶液、懸濁液、または他の同様の形態であるかに関わらず、以下のアジュバント：無菌希釈剤、例えば、注射用水、食塩溶液、好ましくは、生理食塩水、リンガー溶液、等張性塩化ナトリウム、溶媒または懸濁媒体として機能し得る固定油、例えば、合成モノもしくはジグリセリド、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；アセテート、シトレートまたはホスフェートなどの緩衝剤、張性調整剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース、のうちの１つ以上を含んでもよい。非経口調製物を、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器、または多回投与用バイアルに封入することができる。生理食塩水が好ましいアジュバントである。注射用薬学的組成物は、好ましくは無菌である。
【０２２４】
非経口投与または経口投与のいずれかが意図された液体薬学的組成物は、好適な投与量が得られるように、抗体の量を含有する必要がある。典型的に、この量は、組成物中、少なくとも０．０１％の抗体である。経口投与が意図されるとき、この量は、組成物の重量の０．１〜約７０％で変化させることができる。ある経口薬学的組成物は、約４％〜約７５％の抗体を含有する。ある実施形態において、本発明に従う薬学的組成物および調製物は、非経口投与量単位が希釈前に０．０１〜１０重量％の抗体を含有するように、調製される。
【０２２５】
薬学的組成物は、局所投与を意図されてもよく、この場合、担体は、好適には、溶液、エマルジョン、軟膏またはゲル基剤を含み得る。基剤は、例えば、以下：ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、蜜蝋、鉱油、希釈剤、例えば水およびアルコール、ならびに乳化剤および安定剤、のうちの１つ以上を含み得る。局所投与用の薬学的組成物中に増粘剤が存在してもよい。経皮投与が意図される場合、組成物は、経皮パッチまたはイオン注入デバイスを含み得る。薬学的組成物は、例えば、直腸内で融解して薬物を放出することとなる坐剤の形態での、直腸内投与を意図されてもよい。直腸内投与用の組成物は、好適な無刺激性の賦形剤として油性基剤を含有し得る。かかる基剤としては、ラノリン、カカオ脂およびポリエチレングリコールが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２６】
薬学的組成物は、固体または液体投与量単位の物理的形態を修飾する様々な材料を含み得る。例えば、組成物は、活性成分の周囲にコーティングシェルを形成する材料を含み得る。コーティングシェルを形成する材料は、典型的に不活性であり、例えば、糖、シェラック、および他の腸溶コーティング剤から選択され得る。あるいは、活性成分をゼラチンカプセルに収容することができる。固体または液体形態の薬学的組成物は、本発明の抗体に結合し、それにより化合物の送達を補助する剤を含んでもよい。この能力において作用し得る好適な剤は、他のモノクローナルもしくはポリクローナル抗体、１つ以上のタンパク質またはリポソームを含む。薬学的組成物は、エアロゾルとして投与することができる投薬量単位から本質的になり得る。エアロゾルという用語は、コロイド的性質のものから、加圧パッケージからなる系までの範囲にわたる、様々な系を示すために用いられる。送達は、液化もしくは圧縮ガスによるか、または活性成分を投与する適切なポンプシステムにより、行われ得る。活性成分（複数可）を送達するために、単相、二相または三相系でエアロゾルを送達することができる。エアロゾルの送達は、共にキットを形成することができる、必須の容器、活性剤、弁、副容器等を含む。当業者は、過度の実験を伴うことなく、好ましいエアロゾルを決定することができる。
【０２２７】
薬学的組成物は、薬学的技術分野において周知の方法論によって調製されてもよい。例えば、注射により投与されることが意図される薬学的組成物は、本明細書に記載のＣＤ４０特異的抗体を含む組成物と、場合により、塩、緩衝剤および／または安定剤のうちの１つ以上とを含む組成物を滅菌蒸留水と合わせて溶液を形成することにより、調製することができる。均質な溶液または懸濁液の形成を促進するために界面活性剤が添加されてもよい。界面活性剤は、抗体組成物と非共有結合的に相互作用して、水性送達系における抗体の溶解または均質懸濁を促進する化合物である。
【０２２８】
組成物は、治療上有効な量で投与されてもよく、この有効量は、使用される特定の化合物（例えば、ＣＤ４０特異的抗体）の活性；化合物の代謝安定性および作用の長さ；患者の年齢、体重、全身の健康状態、性別および食事；投与モードおよび回数；排泄速度；薬物の組み合わせ；特定の障害または状態の重症度；ならびに対象が受ける治療、を含む種々の因子に依存して変化し得る。一般に、治療上有効な１日用量は、（７０ｋｇ哺乳動物については）約０．００１ｍｇ／ｋｇ（すなわち、０．０７ｍｇ）〜約１００ｍｇ／ｋｇ（すなわち、７．０  ｇ）であり；好ましくは、治療上有効な用量は、（７０ｋｇ哺乳動物については）約０．０１ｍｇ／ｋｇ（すなわち、０．７ｍｇ）〜約５０ｍｇ／ｋｇ（すなわち、３．５ｇ）であり；より好ましくは、治療上有効な用量は、（７０ｋｇ哺乳動物については）約１ｍｇ／ｋｇ（すなわち、７０ｍｇ）〜約２５ｍｇ／ｋｇ（すなわち、１．７５ｇ）である。
【０２２９】
本明細書に記載の抗体組成物は、１つ以上の他の治療薬と同時に投与されてもよく、その投与前に投与されてもよく、またはその投与後に投与されてもよい。かかる組み合わせ療法は、本発明の化合物および１つ以上のさらなる活性剤を含有する単一の薬学的投与用製剤の投与と、本発明の抗体および各活性剤をその独自の別個の薬学的投与用製剤中に含む組成物の投与と、を含み得る。例えば、本明細書に記載の抗体および他の活性剤を、錠剤もしくはカプセルなどの単一の経口投与用組成物中で共に患者に投与することができ、または各剤を別々の経口投与用製剤中にて投与することができる。同様に、本明細書に記載の抗体および他の活性剤を、生理食塩水もしくは他の生理的に許容される溶液中などの単一の非経口投与用組成物中で共に患者に投与することができ、または各剤を別々の非経口投与用製剤中にて投与することができる。別々の投与用製剤を使用する場合、抗体および１つ以上のさらなる活性剤を含む組成物は、本質的に同じ時点で、すなわち、同時に投与されることができ、または別々に時間をずらして、すなわち、逐次的および任意の順序で、投与されることができる；組み合わせ療法は、これらの全てのレジメンを含むことが理解される。
【０２３０】
したがって、ある実施形態において、１つ以上の他の治療薬と組み合わせた、本開示の抗体組成物の投与も企図される。かかる治療薬は、本明細書に記載の特定の疾患状態、例えば、関節リウマチ、炎症または癌についての標準的治療として当該技術分野において受け入れられ得る。企図される例示的な治療薬としては、サイトカイン、成長因子、ステロイド、ＮＳＡＩＤ、ＤＭＡＲＤ、抗炎症剤、化学療法薬、放射線療法剤、または他の活性剤および補助剤が挙げられる。
【０２３１】
ある実施形態において、抗体は、任意の数の化学療法薬と共に投与されてもよい。化学療法薬の例は、アルキル化剤、例えば、チオテパおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））；アルキルスルホナート、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパおよびウレドパ；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチロロメラミンを含む、エチレンイミンおよびメチラメラミン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン；抗生物質、例えば、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、ピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗薬、例えば、メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸アナログ、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリンアナログ、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えば、アンシタビン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジン、５−ＦＵ；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎薬、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充薬、例えば、フォリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビスアントレン；エダトレキサート；デホファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォルミチン；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ．ＲＴＭ．；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；���カルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標），Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標），Ｒｈｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ、例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤  ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルオミチン（ｄｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌｏｍｉｔｈｉｎｅ）（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸誘導体、例えば、Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（商標）（ベキサロテン）、Ｐａｎｒｅｔｉｎ（商標）（アリトレチノイン）；ＯＮＴＡＫ（商標）（デノロイキンジフティトックス）；エスペラマイシン；カペシタビン；ならびに上記いずれかのものの薬学的に許容される塩、酸または誘導体を含む。この定義には、腫瘍上のホルモン作用を調節もしくは阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害性４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストンおよびトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）などを含む抗エストロゲン；および抗アンドロゲン、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリドおよびゴセレリン；ならびに上記いずれかのものの薬学的に許容される塩、酸または誘導体、も含まれる。
【０２３２】
様々な他の治療薬が、本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体組み合わせ組成物と共に使用されてもよい。一実施形態において、抗体は、抗炎症剤と共に投与される。抗炎症剤または薬としては、ステロイドおよび糖質コルチコイド（ベタメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンを含む）、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、メトトレキサート、スルファサラジン、レフルノミド、抗ＴＮＦ薬、シクロホスファミドおよびミコフェノラートを含む非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３３】
例示的なＮＳＡＩＤは、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、Ｃｏｘ−２阻害剤、例えば、ＶＩＯＸＸ（登録商標）（ロフェコキシブ）およびＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）（セレコキシブ）、およびシアリラートからなる群より選択される。例示的な鎮痛薬は、アセトアミノフェン、オキシコドン、トラマドールまたは（ｏｆ）プロポキシフェン（ｐｒｏｐｏｒｘｙｐｈｅｎｅ）塩酸塩からなる群より選択される。例示的な糖質コルチコイドは、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロンまたはプレドニゾンからなる群より選択される。例示的な生物学的応答改変剤は、細胞マーカー（例えば、ＣＤ４、ＣＤ５等）に指向された分子、サイトカイン阻害剤、例えば、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））およびインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）））、ケモカイン阻害剤および接着分子阻害剤を含む。生物学的応答改変剤は、モノクローナル抗体、および組換え型の分子も含む。例示的なＤＭＡＲＤは、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキサート、ペニシラミン、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、金（経口（オーラノフィン）および筋肉内）ならびにミノサイクリンを含む。
【０２３４】
ある実施形態において、本明細書に記載される抗体は、サイトカインと共に投与される。本明細書において用いる場合の「サイトカイン」とは、別の細胞に対して細胞間媒介因子として作用するある細胞集団によって放出されるタンパク質についての総称を意味する。かかるサイトカインの例は、リンフォカイン、モノカイン、および伝統的なポリペプチドホルモンである。サイトカインには、成長ホルモン、例えば、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タンパクホルモン、例えば、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝成長因子；線維芽細胞成長因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子−アルファおよび−ベータ；ミュラー管抑制因子；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子、例えば、ＮＧＦ−ベータ；血小板成長因子；形質転換成長因子（ＴＧＦ）、例えば、ＴＧＦ−アルファおよびＴＧＦ−ベータ；インスリン様成長因子−Ｉおよび−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン、例えば、インターフェロン−アルファ、ベータ、および−ガンマ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２；ＩＬ−１５、腫瘍壊死因子、例えば、ＴＮＦ−アルファまたはＴＮＦ−ベータ；ならびにＬＩＦおよびｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子、が含まれる。本明細書において用いる場合、サイトカインという用語は、天然源または組換え細胞培養からのタンパク質、および天然配列サイトカインの生物活性のある等価物を含む。
【０２３５】
抗体を含む組成物は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓結腸癌、胃腸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、上咽頭癌、悪性黒色腫ならびにリツキシマブ耐性ＮＨＬおよび白血病を含むが、これらに限定されない、本明細書に記載される疾患に罹患している個人に投与されてもよい。自己免疫疾患は、関節炎（関節リウマチ、反応性関節炎を含む）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、乾癬および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、脳脊髄炎、ブドウ膜炎、重症筋無力症、多発性硬化症、インスリン依存型糖尿病、アジソン病、セリアック病、慢性疲労症候群、自己免疫性肝炎、自己免疫性脱毛症、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、線維筋痛症、尋常性天疱瘡、シェーグレン症候群、川崎病、甲状腺機能亢進症／ブレーブス病、甲状腺機能低下症／橋本病、子宮内膜症、強皮症、悪性貧血、グッドパスチャー症候群、ギラン・バレー症候群、ウェーグナー病、糸球体腎炎、再生不良性貧血（多数回輸血を受けた再生不良性貧血患者を含む）、発作性夜間ヘモグロビン尿症、骨髄異形成症候群、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、エバンス症候群、第ＶＩＩＩ因子阻害物質症候群、全身性血管炎、皮膚筋炎、多発性筋炎およびリウマチ熱、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性水疱性類天疱瘡、パーキンソン病、サルコイドーシス、白斑、原発性胆汁性肝硬変、ならびに自己免疫性心筋炎を含むが、これらに限定されない。
【０２３６】
炎症性疾患は、クローン病、大腸炎、皮膚炎、乾癬、憩室炎、肝炎、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、エリテマトーデス、腎炎、パーキンソン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症（ＭＳ）、アルツハイマー病、関節炎、関節リウマチ、喘息、ならびに様々な心血管疾患、例えば、アテローム性動脈硬化症および血管炎を含むが、これらに限定されない。ある実施形態において、炎症性疾患は、関節リウマチ、糖尿病、痛風、クリオピリン関連周期性症候群、および慢性閉塞性肺疾患からなる群より選択される。これに関連して、一実施形態は、炎症もしくは炎症性疾患を治療する、炎症もしくは炎症性疾患の重症度を低減させる、または炎症もしくは炎症性疾患を予防する方法であって、それを必要とする患者に抗ＣＤ４０抗体を含む治療上有効量の本明細書に開示された組成物を投与することによる方法を提供する。
【０２３７】
ヒト疾患の治療のためのインビボ使用のために、本明細書に記載される抗体は一般的に、投与前に薬学的組成物中に組み込まれる。薬学的組成物は、本明細書の他の箇所で記載される生理的に許容される担体または賦形剤と組み合わせて、本明細書で記載される１つ以上の抗体を含む。薬学的組成物を調製するために、有効量の１つ以上の化合物を、当業者に既知である任意の薬学的担体（複数可）または賦形剤と混合して、特定の投与モードに好適なものとする。薬学的担体は、液体、半液体、または個体であり得る。非経口、皮内、皮下または局所用途のために用いられる溶液または懸濁液は、例えば、無菌希釈剤（例えば、水）、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒；抗菌剤（例えば、ベンジルアルコールおよびメチルパラベン）；酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸および重亜硫酸ナトリウム）ならびにキレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））；緩衝液（例えば、アセテート、シトレート、およびホスフェート）を含み得る。静脈内投与される場合、好適な担体は、生理食塩水またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、ならびに増粘剤および可溶化剤、例えば、グルコース、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールおよびこれらの混合物を含有する溶液を含む。
【０２３８】
本明細書に記載の抗体を含む組成物は、身体からの急速な排出に対して抗体を保護する担体、例えば、徐放性製剤またはコーティングを用いて、調製することができる。かかる担体は、例えば、限定はされないが、インプラントおよびマイクロカプセル化送達系、および生体分解性、生体適合性ポリマー、例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、ＰＥＧ、ポリオルトエステル、ポリ乳酸、および当業者に既知の他のものなどの、放出制御製剤を含む。
【実施例】
【０２３９】
実施例１
ＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせ治療によるＣＤ８＋Ｔ細胞応答の増強
別の癌免疫療法剤（（Ｉ−Ｏ剤）と組み合わせて使用された場合の作動性抗ＣＤ４０抗体の効果を調べるために、作動性抗ＣＤ４０抗体と、抗ＰＤ−１抗体もしくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体のいずれかである免疫チェックポイント阻害剤とによる共刺激を試験した。
【０２４０】
ヒト末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）からの単球由来樹状細胞（ＤＣ）を、系列希釈の作動性抗ＣＤ４０抗体と共に、２４時間培養した。以下の抗ＣＤ４０抗体：ＡＰＸ００５Ｍ（Ａｐｅｘｉｇｅｎ）；ＣＰ−８７０，８９３（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＳＧＮ−４０（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）；およびＡＤＣ−１０１３（Ａｌｌｉｇａｔｏｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、を使用した。開始濃度は１０ｎＭであり、３倍希釈を用いて、全部で８つのデータポイントを生成した。
【０２４１】
同種ＣＤ８＋Ｔ細胞を、ＰＢＭＣから単離し、ｅＦｌｕｏｒ  ６７０で標識し、１）単独で、または２）抗ＰＤ−Ｌ１抗体（マウス抗ヒトＰＤ−Ｌ１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、３）マウスアイソタイプ対照抗体、もしくは４）抗ＰＤ−１抗体（ヒトＩｇＧ１バックボーンに対するニボルマブ、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）と共に、のいずれかで、ＤＣ培養へ添加した。チェックポイント阻害剤抗体を、１０ｎＭで添加した。
【０２４２】
初めに、ＡＰＸ００５Ｍと、抗ＰＤ−１もしくは抗ＰＤ−Ｌ１のいずれかとの組み合わせを試験した。細胞増殖をＦＡＣＳにより測定した（図１および図２Ａ）。６日間の培養後、上清を回収し、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＡ分析用に凍結した（図２Ｂおよび図３）。これらの結果により、細胞増殖およびＩＮＦ−γ産生を含むＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、抗ＰＤ−１もしくは抗ＰＤ−Ｌ１のいずれかとＡＰＸ００５Ｍとを組み合わせることにより増強されることが実証された。
【０２４３】
次に、ＡＰＸ００５Ｍ；ＣＰ−８７０，８９３；ＳＧＮ−４０；およびＡＤＣ−１０１３を含む作動性抗ＣＤ４０抗体のパネルと共に、ＤＣを培養した。ヒトＰＢＭＣからの単球由来ＤＣを、抗ＣＤ４０抗体と共に２４時間培養し、次いで、ＣＤ８＋Ｔ細胞と共に培養した。６日間の共培養の後、Ｔ細胞の増殖をＦＡＣＳにより測定した（図４）。
【０２４４】
抗ＣＤ４０抗体の同じパネルを用いて、抗ＰＤ−１もしくは抗ＰＤ−Ｌ１のいずれかとの組み合わせを用いて、上記のようにＩＦＮ−γ産生を試験した。抗ＰＤ−Ｌ１抗体との組み合わせの結果を図５に示し、抗ＰＤ−１抗体との組み合わせの結果を図６に示す。これらの結果により、抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくは抗ＰＤ−１抗体のいずれかと組み合わせたＡＰＸ００５Ｍは、試験した他の抗ＣＤ４０抗体を含む組み合わせと比較して、ＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ−γ産生において有意な増大を誘導することが実証された。
【０２４５】
実施例２
ＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせ治療によるＣＤ４＋Ｔ細胞応答の増強
別の癌免疫療法剤（Ｉ−Ｏ剤）と組み合わせて使用された場合の、ＣＤ４＋Ｔ細胞上にある作動性抗ＣＤ４０抗体の効果を調べるために、作動性抗ＣＤ４０抗体と、抗ＰＤ−１抗体もしくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体のいずれかである免疫チェックポイント阻害剤とによる共刺激を試験した。
【０２４６】
ヒト末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）からの単球由来樹状細胞（ＤＣ）を、系列希釈の作動性抗ＣＤ４０抗体と共に、２４時間培養した。ＡＰＸ００５Ｍ（Ａｐｅｘｉｇｅｎ）が、使用した抗ＣＤ４０抗体であった。ＡＰＸ００５Ｍの開始濃度は１０ｎＭであり、３倍希釈を用いて、全部で８つのデータポイントを生成した。
【０２４７】
同種ＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＰＢＭＣから単離し、１）単独で、または２）抗ＰＤ−Ｌ１抗体（マウス抗ヒトＰＤ−Ｌ１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、３）マウスアイソタイプ対照抗体、もしくは４）抗ＰＤ−１抗体（ヒトＩｇＧ１バックボーンに対するニボルマブ、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）と共に、のいずれかで、ＤＣ培養へ添加した。チェックポイント阻害剤抗体を、１０ｎＭで添加した。
【０２４８】
６日間の培養後、上清を回収し、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＡ分析用に凍結した（図７）。これらの結果により、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答は、抗ＰＤ−１もしくは抗ＰＤ−Ｌ１のいずれかとＡＰＸ００５Ｍとを組み合わせることにより増強されることが実証された。
【０２４９】
実施例３
ＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ウイルス抗原に対するＴ細胞応答を相乗的に増強する。
ＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせがウイルス抗原に対するＴ細胞応答を改変するかを決定するために、単離したヒトＰＢＭＣを、９６ウェルフラットボトムプレート中、１ウェルあたり５０万個（１ｍＬあたり２５０万個）の細胞にて播種し、１ｕｇ／ｍＬ（０．６ｎＭ）のサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ｐｐ６５ペプチド（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、１３０−０３９−４３８）および抗体の存在下で５日間培養した。ＡＰＸ００５Ｍを１ｎｇ／ｍＬ（６．７ｐＭ）で用い、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、３２９７１０）を０．１μｇ／ｍＬまたは１μｇ／ｍＬ（０．６７または６．７ｎＭ）で用いた。ＰＢＭＣを、ＡＰＸ００５Ｍ単独、抗ＰＤ−Ｌ１単独、ＡＰＸ００５Ｍおよび０．６７ｎＭの抗ＰＤ−Ｌ１、またはＡＰＸ００５Ｍおよび６．７ｎＭの抗ＰＤ−Ｌ１と共に、培養した。２つの対照群を抗体なしで培養し、一方は、ウイルス性ペプチドプールを伴い、他方は、これを伴わなかった。全ての条件をトリプレットで繰り返した。５日後、上清を回収し、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＤＹ２８５）により、ＩＦＮ−γについて評価した（図８）。
【０２５０】
これらの結果により、ＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ウイルス抗原に対する応答においてＩＮＦ−γ産生を相乗的に増強することが実証された。
【０２５１】
実施例４
ＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＰＤ−１抗体によるＴ細胞応答の刺激
ＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＰＤ−１抗体の組み合わせが、各剤を別々に用いたときとは異なるＴ細胞増殖に対する効果を有するかを決定するために、複合リンパ球反応（ＭＬＲ）を実施した。
【０２５２】
ヒトＰＢＭＣからの５０，０００個の単球由来ＤＣを、抗体（ＡＰＸ００５Ｍ、抗ＰＤ−１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、３２９９１２）、またはＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＰＤ−１のいずれか）で刺激し、Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｅ  Ｖｉｏｌｅｔで標識した２００，０００個のＨＬＡミスマッチ応答性ＣＤ４＋Ｔ細胞と共培養した。９６ウェルフラットボトムプレート中で、ＭＬＲを５日間培養した。ＡＰＸ００５Ｍを１０ｎｇ／ｍＬ（６．７ｎＭ）で用い、抗ＰＤ−１抗体を１００ｎｇ／ｍＬ（６７ｎＭ）で用いた。全ての条件をトリプレットで繰り返した。５日目に、Ｖｉｏｌｅｔ色素希釈物を、ＭＡＣＳＱｕａｎｔアナライザーを用いて評価した（図９）。
【０２５３】
これらの結果により、ＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＰＤ−１抗体の組み合わせは、各抗体を別々に用いたときと比較して、増大したＴ細胞増殖を誘導することが実証された。
【０２５４】
実施例５
ＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＣＴＬＡ−４抗体によるＴ細胞応答の刺激
ＡＰＸ００５Ｍおよび異なる免疫チェックポイント阻害剤の組み合わせが、前記実施例において記載したＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＰＤ−１と同じ効果をＴ細胞増殖に対して有するかを決定するために、ＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＣＴＬＡ−４抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、３４９９０４）を用いて、複合リンパ球反応（ＭＬＲ）を実施した。
【０２５５】
簡潔に言うと、抗体（ＡＰＸ００５Ｍ、抗ＣＴＬＡ−４、またはＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＣＴＬＡ−４のいずれか）で刺激した、ヒトＰＢＭＣからの５０，０００個の単球由来ＤＣを、Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｅ  Ｖｉｏｌｅｔで標識した２００，０００個のＨＬＡミスマッチ応答性ＣＤ４＋Ｔ細胞と共培養した。９６ウェルフラットボトムプレート中で、ＭＬＲを５日間培養した。ＡＰＸ００５Ｍを１０ｎｇ／ｍＬ（６．７ｎＭ）で用い、抗ＣＴＬＡ−４抗体を１００ｎｇ／ｍＬ（６７ｎＭ）で用いた。全ての条件をトリプレットで繰り返した。５日目に、Ｖｉｏｌｅｔ色素希釈物を、ＭＡＣＳＱｕａｎｔアナライザーを用いて評価した（図１０）。
【０２５６】
以前の研究により、ＡＰＸ００５Ｍが単一の剤として抗原特異的Ｔ細胞応答を増強可能であることが示されている。この研究により、ＡＰＸ００５Ｍを、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１および抗ＰＤ−Ｌ１を含む免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて、Ｔ細胞の抗原特異的活性化をさらに増強することが、実証された。
【０２５７】
実施例６
ＡＰＸ００５ＭおよびＴＬＲ−４作動薬は、ＤＣ活性化を相乗的に刺激する。
以前の研究により、ＡＰＸ００５Ｍが単一の剤としてＤＣを刺激可能であることが示されている。ＡＰＸ００５Ｍを先天免疫活性化剤と組み合わせることができるかを決定するために、ＴＬＲ−４作動薬、リポ多糖（ＬＰＳ）を利用した。
【０２５８】
ヒトＰＢＭＣからの単球由来ＤＣを、ＡＰＸ００５Ｍ、ＬＰＳ、またはＡＰＸ００５Ｍ、およびＬＰＳと共に培養した。ＡＰＸ００５Ｍを１ｎＭで用い、ＬＰＳを１ｎｇ／ｍｌで用いた。ＥＬＩＳＡによりＩＬ−１２およびＴＮＦ−αの産生を検出することにより、ＤＣ活性化を測定した。図１１Ａおよび１１Ｂに示されるように、ＡＰＸ００５ＭおよびＬＰＳの組み合わせは、ＤＣ活性化を相乗的に刺激した。
【０２５９】
実施例７
ＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＶＩＳＴＡ抗体によるＴ細胞応答の刺激
ＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＶＩＳＴＡ抗体の組み合わせが、Ｔ細胞応答に対して効果を有するかを決定するために、複合リンパ球反応（ＭＬＲ）を実施して、ＡＰＸ００５Ｍ誘導Ｔ細胞応答における抗ＶＩＳＴＡ  ｍＡｂの効果を評価した。２つの実験用抗ＶＩＳＴＡ抗体、ｈ２９Ｇ７およびｈ１４Ｄ８（Ａｐｅｘｉｇｅｎ）を、これらの試験で用いた。
【０２６０】
簡潔に言うと、ヒトＣＤ１４単球を、健常ボランティアから得られたＰＢＭＣから単離し、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４の存在下で１週間培養し、骨髄性樹状細胞（ＤＣ）を生成させた。同種ヒトＣＤ４Ｔ細胞を単離し、次いで、ＡＰＸ００５Ｍ（用量タイトレーション１０ｎＭ、３倍希釈、８データポイント）ならびにヒト抗ＶＩＳＴＡ抗体ｈ２９Ｇ７およびｈ１４Ｄ８（共に１００ｎＭで）の存在下または不在下において、ＤＣおよびＴ細胞を６日間培養した。ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体も用いた。培養上清を回収し、次いで、ＥＬＩＳＡにより、ＩＦＮ−γについて評価した。２つの例示的な実験からの結果を図１２Ａおよび１２Ｂに示す。図に示されるように、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、複合リンパ球反応において、ＡＰＸ００５Ｍ−誘導Ｔ細胞応答を増強した。
【０２６１】
次に、ＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＶＩＳＴＡ抗体の組み合わせが、スタフィロコッカスエンテロトキシン（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ）Ｂ（ＳＥＢ）に対するＴ細胞応答に対して効果を有するかが決定された。ＰＢＭＣを健常ドナーから単離し、９６ウェルフラットボトムプレート中、１ウェル当たり２００，０００細胞で播種した。単独または１０ｎｇ／ｍＬのＡＰＸ００５Ｍと組み合わせたかのいずれかでの、指示された濃度の抗ＶＩＳＴＡ抗体（ｈ２９Ｇ７もしくはｈ１４Ｄ８）の存在下もしくは不在下で、細胞を１００ｎｇ／ｍＬのＳＥＢで刺激した。４日間の培養後、細胞上清を回収し、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）により、ＩＦＮ−ガンマについて分析した。２つの例示的な実験の結果を図１３Ａおよび１３Ｂに示す。データは、アイソタイプ対照．のパーセントとして示される。これらの結果により、ＡＰＸ００５Ｍおよび抗ＶＩＳＴＡ抗体の組み合わせは、ＳＥＢに対するＴ細胞応答を増強することが実証された。
【０２６２】
上記した様々な実施形態を組み合わせて、さらなる実施形態を提供することができる。本明細書において言及されたおよび／または出願データシートに記載された米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願、および非特許刊行物の全ては、参照によりそれらの全てが本明細書に組み込まれる。必要に応じて、様々な特許、出願および刊行物の内容を利用して、本実施形態の態様を修飾して、よりさらなる実施形態を提供することができる。
【０２６３】
上述の詳細な説明を照らして、これらのおよび他の変更を本実施形態に加えることができる。一般的に、以下の特許請求の範囲において使用される用語は、本明細書および特許請求の範囲において開示された特定の実施形態に特許請求の範囲を限定するものとして解釈してはならず、かかる特許請求の範囲が権利を有する等価物の全範囲と共に、全ての可能な実施形態を含むものとして解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は、本開示により限定されない。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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