(57)【要約】本発明はナルメフェン（ｎａｌｍｅｆｅｎｅ）とナルトレキソン（ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ）及びその関連誘導体などから選べられたモルフィナン（ｍｏｒｐｈｉｎａｎｓ）、その薬物製剤、及びＮＡＳＨ、ＮＡＦＬＤおよび／またはＡＳＨの予防と治療のための用途に関する。
2019514872.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
必要とする人または動物に治療量の式（Ｉ）で表される化合物を投与する工程を含み、そのうち、
【化１】
2019514872.tif 000008
（Ｉ）
Ａがヒドロキシ基（ＯＨ）またはメトキシ基（ＯＣＨ３）であり、Ｒが水素原子（Ｈ）、メチル基（ＣＨ３）またはシクロプロピルメチル基（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌｍｅｔｈｙｌ）；Ｘが酸素原子（Ｏ）、Ｙがメチレン基（ＣＨ２）または酸素原子（Ｏ）、Ｚが水素（Ｈ）またはヒドロキシ基（ＯＨ）であり、該化合物がラセミ混合物またはエナンチオマ−、ジアステレオマ−または薬学的に許容可能な塩類の形式で投与される、ことを特徴とする、
ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨまたはＡＳＨを予防または治療する方法。
【請求項２】
式（Ｉ）で表される化合物が次の構造を有することを特徴とする、
請求項１に記載のＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨまたはＡＳＨを予防または治療する方法。
【化２】
2019514872.tif 000009
（化合物Ａ）
【請求項３】
式（Ｉ）で表される化合物が次の構造を有することを特徴とする、
請求項１に記載のＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨまたはＡＳＨを予防または治療する方法。
【化３】
2019514872.tif 000010
（化合物Ｂ）
【請求項４】
前記化合物が化合物Ａ（ナルメフェン）である、ことを特徴とする、
請求項１に記載のＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨまたはＡＳＨを予防または治療する方法。
【請求項５】
前記化合物が化合物Ｂ（ナルトレキソン）である、ことを特徴とする、
請求項１に記載のＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨまたはＡＳＨを予防または治療する方法。
【請求項６】
前記方法がＮＡＦＬＤを予防または治療するものである、ことを特徴とする、
請求項１に記載のＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨまたはＡＳＨを予防または治療する方法。
【請求項７】
前記方法がＮＡＳＨを予防または治療するものである、ことを特徴とする、
請求項１に記載のＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨまたはＡＳＨを予防または治療する方法。
【請求項８】
前記方法がＡＳＨを予防または治療するものである、ことを特徴とする、
請求項１に記載のＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨまたはＡＳＨを予防または治療する方法。
【請求項９】
前記医薬組成物が経口投与されることを特徴とする、
請求項１に記載のＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨまたはＡＳＨを予防または治療する方法。
【請求項１０】
前記医薬組成物が非経口投与されることを特徴とする、
請求項１に記載のＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨまたはＡＳＨを予防または治療する方法。
【請求項１１】
前記化合物が１日１ｍｇ〜１００ｍｇの用量で用途されることを特徴とする、
請求項１に記載のＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨまたはＡＳＨを予防または治療する方法。
【請求項１２】
式（Ｉ）で表される化合物の用途であって、そのうち、
【化４】
2019514872.tif 000011
（Ｉ）
Ａがヒドロキシ基（ＯＨ）またはメトキシ基（ＯＣＨ３）；Ｒが水素原子（Ｈ）、メチル基（ＣＨ３）またはシクロプロピルメチル基（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌｍｅｔｈｙｌ）；Ｘが酸素原子（Ｏ）、Ｙがメチレン基（ＣＨ２）または酸素原子（Ｏ）、Ｚが水素原子（Ｈ）またはヒドロキシ基（ＯＨ）であり、その化合物がＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨまたはＡＳＨの治療または予防のための薬物を調製するために用いるそのエナンチオマ−、ジアステレオマ−及びその薬学的に許容可能な塩類とすることができる、ことを特徴とする、式（Ｉ）で表される化合物の用途。
【請求項１３】
式（Ｉ）で表される化合物であって、そのうち、
【化５】
2019514872.tif 000012
（Ｉ）
Ａがヒドロキシ基（ＯＨ）またはメトキシ基（ＯＣＨ３）；Ｒが水素原子（Ｈ）、メチル基（ＣＨ３）またはシクロプロピルメチル基（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌｍｅｔｈｙｌ）；Ｘが酸素原子（Ｏ）、Ｙがメチレン基（ＣＨ２）または酸素原子（Ｏ）、Ｚが水素原子（Ｈ）またはヒドロキシ基（ＯＨ）であり、その化合物がＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨまたはＡＳＨの治療または予防のために用いるそのエナンチオマ−、ジアステレオマ−及びその薬学的に許容可能な塩類とすることができる、ことを特徴とする、式（Ｉ）で表される化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（参照出願）
２０１６年４月２２日米国仮特許出願第６２／３２６,４３５号及び２０１６年９月１６日米国仮特許出願第６２／３９５,４３６号の出願は、参考として本願に含まれる基礎出願である。
【背景技術】
【０００２】
本発明はモルフィナンの新しい用途方法に関する。本発明は、ナルトレキソン（ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ）または１７−シクロプロピルメチル−４,５α−エポキシ−６−オキソモルフィナン−３,１４−ジオ−ルと、ナルメフェン（ｎａｌｍｅｆｅｎｅ）または１７−シクロプロピルメチル−４,５α−エポキシ−６−メチレンモルフィナン−３,１４−ジオ−ル、及びその類似物、及びその薬物製剤、及びＮＡＳＨ（非アルコ−ル性脂肪性肝炎）、ＮＡＦＬＤ（非アルコ−ル性脂肪性肝疾患）、ＡＳＨ（アルコ−ル性脂肪性肝炎）を予防と治療するその用途に関する。
【０００３】
出願人はＰＣＴ公開第ＷＯ ０３／０９７６０８号において、ナルトレキソン（ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ）とナルメフェン（ｎａｌｍｅｆｅｎｅ）を含む、オピオイド様物質とオピオイド様物質化合物のいくつかの新しい医学的用途を説明した。また出願人はＰＣＴ公開第ＷＯ２００６０２９１６７号においても、１７−シクロプロピルメチル−４,５α−エポキシ−６−メチレンモルフィナン−３,１４−ジオ−ルの多くの新しい医学的用途を説明した。
【０００４】
中枢神経系神経退行性疾病研究の最新の進展から、オピオイド様物質がミクログリア中の炎症性サイトカイン、フリ−ラジカル及びアラキドン酸の代謝物などの炎症因子発現の調節、及び免疫関連の神経変性（Adv. Exp. Med. Biol. 1996, 402: 29-33; Mov. Disord. 1997; 12:
855-858)及び神経性疼痛(Hutchinson MR, et al. Eur J Neurosci.
2008; 28:20-299）において作用を発揮する可能性があることが示されている。中国特許出願（ＣＮ１０２０４８７３３）では、高脂肪の飲食に起因する脂肪肝の治療におけるナルメフェン（ｎａｌｍｅｆｅｎｅ）の注射による用途が提示されている。
【０００５】
本出願は、ナルメフェン（ｎａｌｍｅｆｅｎｅ）とナルトレキソン（ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ）がＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、ＡＳＨの予防と治療に効果があることが証明されたことを開示する。
【０００６】
本発明はＮＡＦＬＤ炎症性肝損傷及びそのＮＡＳＨへの進行を予防する方法を提供する。
【０００７】
増加している肥満とメタボリックシンドロ−ムはＮＡＳＨ罹患率の上昇を招いており、現在西洋における慢性肝臓病の主要な原因と考えられている（Clark, J.M., et al., Nonalcoholic fatty liver disease.
Gastroenterology, 2002; 122: 1649-1657）。２％〜５％の米国人はＮＡＳＨに影響される。さらに１０％〜２０％の米国人が肝臓に脂肪を有するが、炎症または肝損傷はなく、いわゆる「脂肪肝」に該当している。肝臓中の脂肪は異常であるものの、それ自体はほぼ傷害または永久的な損傷を引き起こすことはない。血液検査の結果または肝臓スキャンで肝臓の炎症及び脂肪の堆積が疑われる場合、このような状況を非アルコ−ル性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）と呼ぶ。このような状況下で肝生検を行うと、ＮＡＳＨと単純な脂肪肝を正確に診断し、識別することができる。ＮＡＳＨまたはＮＡＦＬＤはそれぞれＡＳＨ（アルコ−ル性肝炎）またはＡＬＤ（アルコ−ル性肝疾患）と相似しているが、ＮＡＳＨとＮＡＦＬＤは少量しか飲酒しない、または飲酒しない患者群に発生する（Ludwig, J., et al., Nonalcoholic steatohepatitis: Mayo Clinic
experiences with a hitherto unnamed disease. Mayo Clin Proc, 1980; 55: p.
434-438）。
【０００８】
ＮＡＳＨの潜在的原因はまだはっきりしないが、インスリン抵抗性、脂肪細胞が放出する毒性炎症性タンパク質（サイトカイン）、及び肝細胞中の酸化ストレス（肝細胞の劣化または死亡）などの要素はＮＡＳＨの罹患を促進する可能性がある（ｈｔｔｐ：／ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ．ｎｉｄｄｋ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｄｉｓｅａｓｅｓ／ｐｕｂｓ／ｎａｓｈ）。
【０００９】
脂肪肝の疾病発病と悪化を引き起こす確かなメカニズムも完全には分かっていない。いくつかの研究によれば、脂肪肝は動物の内毒素血症等に対する刺激反応を激化させ、より大きな組織損傷を引き起こすことが示されている。現在、脂肪肝は酸化ストレスや内毒素血症などの「第二の刺激」（ｓｅｃｏｎｄ  ｈｉｔ）により脂肪性肝炎になりやすい（ＮＡＦＬＤがＮＡＳＨになる）ことが広く認知されている（Wanless IR, Shiota K. The pathogenesis of nonalcoholic
steatohepatitis and other fatty liver diseases: a four-step model including the
role of lipid release and hepatic venular obstruction in the progression to
cirrhosis. Semin Liver Dis. 2004; 24:99-106; Duvnjak M, et al.  Pathogenesis
and management issues for non-alcoholic fatty liver disease. World J
Gastroenterol. 2007; 14;13:4539-4550）。ＮＡＦＬＤは「二段階の刺激」（ｔｗｏ  ｈｉｔ）メカニズムにより進行し、そのうちの第一の刺激（ｆｉｒｓｔ  ｈｉｔ）が肝細胞中の脂質蓄積（脂肪肝）である（Day CP, James OF. Steatohepatitis: a tale of two “hits”? Gastroenterology 1998; 114: 842-845; Sanches SC et al.
Nonalcoholic Steatohepatitis: A Search for Factual Animal Models.  Biomed
Res Int. 2015;2015:574832）という理論が最も一般的に受け入れられている。第二の刺激は酸化、内毒素血症または炎症のストレスと考えられている。何度も繰り返される炎症反応が肝損傷と繊維化の発生を引き起こす。脂肪肝疾病の具体的な治療は減量とインスリン感受性の回復を通じて脂肪肝を反転させることであるが、多くの状況下で、このような方法は通常不完全であり、さらには実践的でない。
【００１０】
現在、ＮＡＳＨまたはＡＳＨなどの脂肪肝疾病を治療するいかなる薬物はまだＦＤＡに認可されていない。 ＮＡＳＨ患者に対して行われる臨床試験療法評価には、抗酸化剤（例えば、：ビタミンＥ）、セレン、ベタイン及び新しい抗糖尿病薬物が含まれている。現在、医学界、製薬業界、規制当局は皆この特定の薬物治療の必要性を認識しており、且つ患者もこのような薬物の発売を待ち望んでいる。このため、このような薬物の開発方法は、ＮＡＳＨが第二用途の薬物（例えば、ピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）やメトホルミン（ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ））、又は一般で非特異的な肝保護類薬物（例えば、ペントキシフィリン（ｐｅｎｔｏｘｉｆｙｌｌｉｎｅ）、ウルソデオキシコ−ル酸（ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、または抗酸化剤）から、ＮＡＳＨにおいての肝損傷の一つ又は多数の経路を直すための特異的に試験された分子に明らかに変化している。現在開発段階が最も発売に近い２つの分子としてのオベチコ−ル酸（ｏｂｅｔｉｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）とエラフィブラノ−ル（ｅｌａｆｉｂｒａｎｏｒ）は、肝組織構造の改善において有望な結果が示されている。肝臓線維化を改善するオベチコ−ル酸と、血糖と脂質分布を改善するエラフィブラノ−ルの２種類の化合物の用途はＮＡＳＨを治癒させられるようである（Ratziu V., Novel Pharmacotherapy Options for NASH. Dig Dis Sci. 2016
Mar 22. (Epub ahead of print））。
【００１１】
上述のように、メチオニン・コリン欠乏（ＭＣＤ）給餌マウスモデルはＮＡＳＨ動物モデルとして広く受け入れられている（Rivera CA, et al. 2007; Sanches SC et al. Nonalcoholic  Steatohepatitis:
A Search for Factual Animal Models.  Biomed Res Int. 2015;2015:574832を参照）。このため、ＭＣＤ給餌マウスは化合物のＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの肝臓に対する保護作用の試験に広く用いられる。
【００１２】
ナルメフェン（Ｎａｌｍｅｆｅｎｅ）はＬＰＳによりの第二のヒット前のＭＣＤラットモデルにおいての炎症性肝損傷を予防する効果が実証された。
【００１３】
アルコ−ル性肝疾患（ＡＬＤ）は、世界の肝臓関連発病率と死亡率の主因である（Arsene
et al. Hepatol Int. 2016; 10:538-552）。ＡＬＤの臨床と病理学的範囲は、アルコ−ル性脂肪性肝疾患（アルコ−ル性脂肪変性）から肝硬変までを含む（Saberi et al. J Clin Translat Hepatol.2016; 4:113-122）。ＡＬＤはアルコ−ル性脂肪変性（小滴性、大滴性）、アルコ−ル性脂肪性肝炎（ＡＳＨ）、アルコ−ル性肝硬変に分けることができる。ＡＬＤの病理はＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨに類似している。ＡＬＤとＮＡＦＬＤは相似した病理状況を有し、かつ臨床環境において共存することが説明されている（Toshikuni et al World J Gastroenterol 2014;20:8393‐8406; Brunt and Tiniakos.World J Gastroenterol 2010;16:5286‐5296）。アルコ−ルの急性及び慢性摂取は、動物モデルとヒトモデルで門脈と体循環性の内毒素が強く上昇することを引き起こす（Parlesak et al.J Hepatol  2000; 32:742‐747）。内毒素はアルコ−ル性肝疾患の肝損傷の重要因子であり、抗生物質を用途してグラム陰性細菌を除去した後に明らかに改善されたアルコ−ル性肝損傷、及び長期にわたるアルコ−ル暴露後の肝臓のＬＰＳ誘発肝損傷への感作性増加によって証明できる。内毒素の上昇は主に２つのメカニズムにより引き起こされるようである。まず、アルコ−ルの消費は胃腸管上端での細菌叢が大量に増殖する変化を起こす（Hauge et al.Digestion 1997; 58:591‐595）。次に、アルコ−ルの摂取は腸管上皮バリアを破壊して、浸透を高めることにより、門脈循環に進入するＬＰＳを増加させる（Bjarnason et al. Lancet 1984; 1:179‐182）。現在、クッパ−細胞（Ｋｕｐｆｆｅｒ  ｃｅｌｌ）はエタノール性肝損傷においてＬＰＳの主な細胞内標的であると確認されている（Adachi et al. Hepatology 1994; 20:453‐460）。ＡＬＤの実験モデルにより、腸管バリアを通過した細菌産物が門脈循環に進入することが肝臓に炎症反応を引き起こして、脂肪性肝炎に至らしめることが示されている。ＡＳＨの管理における最も有効な措置はアルコ−ル飲酒者の飲酒を止めさせることである。ステロイドは重度のＡＳＨ治療においていくつかの短期的な利点があるが、副作用が多いため、長期的効果ははっきりしていない。このため、ＡＳＨの有効な治療と予防措置を見出す必要性が切迫している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】ＰＣＴ公開第ＷＯ ０３／０９７６０８号明細書
【特許文献２】中国特許出願第ＣＮ１０２０４８７３３号明細書
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Adv. Exp.Med. Biol. 1996, 402: 29-33
【非特許文献２】Mov.Disord. 1997; 12: 855-858
【非特許文献３】HutchinsonMR, et al. Eur J Neurosci. 2008; 28:20-299
【非特許文献４】Clark,J.M., et al., Nonalcoholic fatty liver disease. Gastroenterology, 2002; 122:1649-1657
【非特許文献５】Ludwig,J., et al., Nonalcoholic steatohepatitis: Mayo Clinic experiences with ahitherto unnamed disease. Mayo Clin Proc, 1980; 55: p. 434-438
【非特許文献６】WanlessIR, Shiota K. The pathogenesis of nonalcoholic steatohepatitis and other fattyliver diseases: a four-step model including the role of lipid release andhepatic venular obstruction in the progression to cirrhosis. Semin Liver Dis.2004; 24:99-106
【非特許文献７】DuvnjakM, et al.  Pathogenesis and management issues for non-alcoholic fattyliver disease. World J Gastroenterol. 2007; 14;13:4539-4550
【非特許文献８】Day CP,James OF. Steatohepatitis: a tale of two “hits”? Gastroenterology 1998; 114: 842-845;
【非特許文献９】SanchesSC et al. Nonalcoholic Steatohepatitis: A Search for Factual Animal Models.Biomed Res Int. 2015;2015:574832
【非特許文献１０】RatziuV., Novel Pharmacotherapy Options for NASH. Dig Dis Sci. 2016 Mar 22. (Epubahead of print)
【非特許文献１１】RiveraCA, et al. 2007; Sanches SC et al. Nonalcoholic Steatohepatitis: A Search forFactual Animal Models. Biomed Res Int. 2015;2015:574832
【非特許文献１２】Arseneet al.  Hepatol Int. 2016; 10:538-552
【非特許文献１３】Saberiet al. J Clin Translat Hepatol.2016; 4:113-122
【非特許文献１４】Toshikuniet al World J Gastroenterol 2014;20:8393‐8406
【非特許文献１５】Bruntand Tiniakos.World J Gastroenterol 2010;16:5286‐5296
【非特許文献１６】Parlesaket al.J Hepatol  2000; 32:742‐747
【非特許文献１７】Hauge etal.Digestion 1997; 58:591‐595
【非特許文献１８】Bjarnasonet al. Lancet 1984; 1:179‐182
【非特許文献１９】Adachiet al. Hepatology 1994; 20:453~460
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明は、モルフィナン（ｍｏｒｐｈｉｎａｎ）化合物及びその薬物製剤と、ＮＡＳＨ（非アルコ−ル性脂肪性肝炎）、ＮＡＦＬＤ（非アルコ−ル性脂肪性肝疾患）、ＡＳＨ（アルコ−ル性脂肪性肝炎）の予防と治療におけるその用途に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明は、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、ＡＳＨの治療、またはこれら疾病の治療のための薬物製造に用いる条件下での、式（Ｉ）で表されるモルフィナン（ｍｏｒｐｈｉｎａｎ）化合物の用途に関し、そのうち、
【化１】
2019514872.tif 000003
（Ｉ）
Ａがヒドロキシ基（ＯＨ）またはメトキシ基（ＯＣＨ３）；Ｒが水素原子（Ｈ）、メチル基（ＣＨ３）またはシクロプロピルメチル基（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌｍｅｔｈｙｌ）；Ｘが酸素原子（Ｏ）、Ｙが酸素原子（Ｏ）またはメチレン基（ＣＨ２）、Ｚが水素原子（Ｈ）またはヒドロキシ基（ＯＨ）とすることができる。式（Ｉ）で表される化合物は、そのエナンチオマ−、ジアステレオマ−及びその薬学的に許容可能な塩類とすることができる。
【００１８】
式（Ｉ）は以下の構造のうちのいずれかとすることができる：
【化２】
2019514872.tif 000004
（化合物Ａ）
特に好ましいのは、化合物Ａ（ナルメフェン）であって、そのうち、Ａがヒドロキシ基（ＯＨ）、Ｒがシクロプロピル基（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌ）、メチル基（ＣＨ３）、Ｘが酸素原子（Ｏ）、Ｙがメチレン基（ＣＨ２）、Ｚがヒドロキシ基（ＯＨ）である化合物（Ｉ）である。
【００１９】
式（Ｉ）は以下の構造のうちのいずれかとすることができる：
【化３】
2019514872.tif 000005
（化合物Ｂ）
特に好ましいのは、化合物Ｂ（ナルトレキソン）であって、そのうち、Ａがヒドロキシ基（ＯＨ）、Ｒがシクロプロピルメチル基（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌｍｅｔｈｙｌ）、Ｘが酸素原子（Ｏ）、Ｙが酸素原子（Ｏ）、Ｚがヒドロキシ基
(ＯＨ）である化合物（Ｉ）である。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】クッパ−細胞中のＴＮＦ−α放出の減少を示すグラフである。
【図２】クッパ−細胞中のＬＰＳにより誘導されるｐ３８ ＭＡＰキナ−ゼリン酸化の減少を示すグラフである。５分と２０分の時点でｐ３８ＭＡＰキナ−ゼリン酸化を測定し、化合物Ａの投与量は１００ｎｇ／ｍＬであり、ｎ＝３反復である。
【図３】ＮＡＳＨのＳＴＡＭモデルからの肝臓ヘマトキシリン・エオジン染色（ＨＥ−ｓｔａｉｎｅｄ）切片の代表顕微鏡写真である。ブアン液（Ｂｏｕｉｎ‘ｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）中に予め加えた肝組織のパラフィンブロックから切片を取り、Ｌｉｌｌｉｅ−Ｍａｙｅｒ’ｓヘマトキシリン・エオジン溶液で染色した。ＮＡＦＬＤ活動性指標（ＮＡＳ）はＫｌｅｉｎｅｒ（Ｋｌｅｉｎｅｒ等、２００５）の標準に基づいて計算した。
【図４Ａ】ＮＡＳＨのＳＴＡＭモデル中のシリウスレッド陽性（Ｓｉｒｉｕｓ  ｒｅｄ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ）区域（％）を示すグラフである。
【図４Ｂ】ＮＡＳＨのＳＴＡＭモデル中のシリウスレッド陽性（Ｓｉｒｉｕｓ  ｒｅｄ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ）区域（％）を示すグラフである。  ａ）シリウスレッド顕微鏡写真である。コラ−ゲンの堆積を観察できるように、ブアン液で固定した左側肝切片をシリウスレッド（ｐｉｃｒｏ−Ｓｉｒｉｕｓ  ｒｅｄ）溶液（Ｗａｌｄｅｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で染色した。ｂ）線維化区域に対する定量分析を示すグラフであり、ここでは倍率２００倍のデジタルカメラ（ＤＦＣ２９５；  Ｌｅｉｃａ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、シリウスレッド染色切片の明視野像を取得し、かつ５つの視野／部分中の陽性面積をＩｍａｇｅＪソフトウェアで測定した（アメリカ国立衛生研究所）。各治療群の個体値と平均値±ＳＤがすべて示されている。
【図５】脂肪肝ラットの肝損傷における予防効果が用量依存的であることを示すグラフである。図６に示すように、ｎ＝５／群で２０ｍｇの実験を繰り返し、図５と同じ結果が得られた。
【図６】化合物Ａを２０ｍｇ／Ｋｇで投与した脂肪肝ラット肝損傷における用量依存的予防効果を示すグラフである（Ｎ＝化合物Ａ）。
【図７】本実験の化合物Ａ／ＬＰＳ処理ラットの肝損傷の組織病理学検査による評価を示す顕微鏡写真である。対照群と比較すると、治療ラットの肝脂肪蓄積は化合物Ａにより組織病理学的に予防できることが示された。図７には、化合物Ａが脂肪肝とＬＰＳ処理（ＬＰＳ−ｔｒｅａｔｅｄ）された脂肪肝損傷からの肝損傷を改善することが示されている。図７において、a）左上［対照群（ＭＣＤ処理ラット）］：大滴性脂肪変性があり、少し小滴性脂肪変性もあることを示す；b）左下［ＭＣＤと化合物Ａで処理されたラット］：軽微な門脈慢性炎症（軽度の非特異性慢性肝炎）；c）右上：ＭＣＤ＋ＬＰＳ処理ラット：黒点（矢印）は死に掛かっている肝細胞であり、やや暗いエリア（矩形）は壊死を示す。出血と門脈周囲（ゾ−ン１）壊死が見られる。明らかな鬱血または構造欠損はない；d）右下［ＭＣＤ＋ＬＰＳ＋化合物Ａ治療ラット］：軽微な門脈周囲慢性炎症。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明に基づく治療または製造された薬物は、ＮＡＳＨ（非アルコ−ル性脂肪性肝炎）、ＮＡＦＬＤ（非アルコ−ル性脂肪性肝疾患）及び／または（ＡＳＨ）アルコ−ル性脂肪性肝炎）の予防または治療のための薬物を含む。
【００２２】
本発明の別の実施態様に基づき、本発明はＮＡＳＨ、ＮＡＦＬＤ及び／またはＡＳＨを予防または治療する方法を提供し、該方法が、必要とするレシピエントに治療有効量の１種類または多種類の指定された化合物を含む医薬組成物を投与する工程を含む。これから説明するその他の実施例に関して、本発明の前述及び他の態様をより詳細に以下で説明する。本発明は異なる形式で実施することができると理解されるべきであり、かつ本明細書に記載された実施例に限定されると解釈されるべきではない。これらの実施例を提供することにより本発明の開示はより徹底的かつ完全となり、本発明の範囲を本発明の属する技術分野の技術者に充分に伝達する。
【００２３】
本発明の説明において用いられる用語は特定の実施例を説明する目的のためのみに用いられており、本発明を限定することは意図されていない。
本発明及び添付の特許請求の範囲で用途される単数形式の「一」、「一つ」、「該」は、文脈中で別途明確に記載されていない限り、複数形式を含む。
【００２４】
別途定義されている場合を除き、本文で使用されるすべての技術及び科学用語は本発明の属する技術分野において通常の知識を有する技術者が通常理解するものと同じ意味を有する。
【００２５】
本文で引用されているすべての出版物、特許出願、特許及びその他参考文献は、該参考文献が示された文及び／または段落に関連する教示について、引用により全体が本文に組み込まれる。
【００２６】
本文で使用される用語「オピオイド」とは、アヘンまたはモルヒネ様の性質を示す化合物を指し、アゴニスト及びアンタゴニスト活性を含み、そのうち、これらの化合物は脳及びその他の組織中の立体特異的及び飽和結合部位と相互作用することができる。薬理学的特性にはこれまでに、眠気、呼吸抑制、情緒変化と意識を失わない意識混濁が含まれている。本文で使用される用語「オピオイド様」とは、構造上及び／または薬理学的に既知のオピオイド化合物と相似した化合物を指す。
【００２７】
本文で使用される「治療（ｔｒｅａｔ  ｏｒ  ｔｒｅａｔｉｎｇ）」とは、疾病に罹患した患者に有益なあらゆる種類の治療を指し、患者の状態の改善（例えば、１つまたは複数の症状において）、疾病の進行の遅延、疾病の発病の予防または遅延等を含む。
【００２８】
本文で使用される「薬学的に許容可能な」成分（例えば塩類、担体，賦形剤または希釈剤）とは、レシピエントに投与し、本文に記載された治療を実現するために適しており、疾病の重篤度と治療の必要性の観点から過度に有害な副作用を発生しない、化合物または組成物を指す。
【００２９】
本文で使用される用語「予防」とは、関連症状を示す前にレシピエントに薬物を投与し、疾病が現れるリスクを低下させる、または現れた後その重篤度を低下させることを指す。
【００３０】
本文で使用される「治療有効量」とは、対象の疾病の予防、遅延またはその重篤度を低下させるために必要な量を指し、かつ正常な生理機能の増強に必要な量を含む。
【００３１】
本発明の活性化合物は水溶性とすることができ、かつ既知の水溶性オピオイドとオピオイド様誘導体を含むこともできる。
【００３２】
本発明の化合物は不斉炭素原子を具備できるため、エナンチオマ−またはジアステレオマ−として存在することができる。従って、本発明の化合物は、本発明の化合物のエナンチオマ−とジアステレオマ−及び薬学的に許容可能な塩類を含む。
【００３３】
本発明の活性化合物は単独で投与または他の治療剤と組み合わせて投与することができる。例えば、本発明の活性化合物は現在既知であるまたは今後特定される化合物と併用し、ＮＡＳＨ、ＮＡＦＬＤ及び／またはＡＳＨの予防及び／または治療に用いることができる。
【００３４】
上述のように、ナルメフェン（ｎａｌｍｅｆｅｎｅ）とナルトレキソン（ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ）は充分に既知であり、市販にて取得することができる。本発明で使用されるその他の化合物は、一般的な化学的方法またはＰＣＴ公開第ＷＯ
０３／０９７６０８号で説明される技術に類似した方法を使用し、ナルメフェン（ｎａｌｍｅｆｅｎｅ）を修飾して得ることができる。
【００３５】
本文で使用される用語「活性薬剤」とは、該化合物の薬学的に許容可能な塩類を含む。薬学的に許容可能な塩類とは、母体化合物の望ましい生物活性を留めており、かつ望ましくない毒性効果を発生しない塩類である。これらの塩の例としては、（a）無機酸と形成された酸付加塩類、例えば塩酸（ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ  ａｃｉｄ）、臭化水素酸（ｈｙｄｒｏｂｒｏｍｉｃ  ａｃｉｄ）、硫酸（ｓｕｌｆｕｒｉｃ  ａｃｉｄ）、リン酸（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ  ａｃｉｄ）、硝酸（ｎｉｔｒｉｃ  ａｃｉｄ）等；有機酸と形成された塩類、例えば酢酸（ａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）、シュウ酸（ｏｘａｌｉｃ  ａｃｉｄ）、酒石酸（ｔａｒｔａｒｉｃ  ａｃｉｄ）、コハク酸（ｓｕｃｃｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）、マレイン酸（ｍａｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）、フマル酸（ｆｕｍａｒｉｃ  ａｃｉｄ）、グルコン酸（ｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、クエン酸（ｃｉｔｒｉｃ  ａｃｉｄ）、リンゴ酸（ｍａｌｉｃ  ａｃｉｄ）、アスコルビン酸（ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）、安息香酸（ｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ）、タンニン酸（ｔａｎｎｉｃ  ａｃｉｄ）、パルミチン酸（ｐａｌｍｉｔｉｃ  ａｃｉｄ）、アルギン酸（ａｌｇｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ポリグルタミン酸（ｐｏｌｙｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）、ナフタレンスルホン酸（ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、メタンスルホン酸（ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ｐ−トルエンスルホン酸（ｐ−ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ナフタレンジスルホン酸（ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅｄｉｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ポリガラクツロン酸（ｐｏｌｙｇａｌａｃｔｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）等；及び（b）元素陰イオンから形成された塩類、例えば塩素、臭素、ヨウ素がある。別の具体的な実施態様において、薬学的に許容可能な塩類はリンゴ酸を用いて形成される。具体的な実施態様において、薬学的に許容可能な塩類は塩酸（ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ  ａｃｉｄ）を用いて形成される。
【００３６】
本発明の組成物調製に用いる活性薬剤は、薬学的に許容可能な活性薬剤の遊離塩基の形式としてもよい。化合物の遊離塩基はその塩類よりも溶解度が低いため、遊離塩基組成物を使用してより長く活性薬剤を標的区域に放出させることができる。溶液にまだ進入していない標的区域中に存在する活性薬剤は生理反応を誘導できず、徐々に溶液に溶解されて体内に吸収され得る薬物の貯蔵庫として作用する。
【００３７】
薬物製剤
本発明のオピオイドとオピオイド様化合物は薬学的に活性な薬剤として有用であり、かつバルク形式で使用できる。しかしながら、これら化合物は投与に用いる医薬製剤として調製することがより適している。多くの適した医薬製剤中のいずれかを本発明の化合物の賦形剤として使用することができる。
【００３８】
上述の式の一部化合物は不斉炭素原子を具備できるため、エナンチオマ−として存在できることが理解されるべきである。別途の説明がない限り、本発明はラセミ体を含むそれらエナンチオマ−を含む。単独のエナンチオマ−はキラル性（ｃｈｉｒａｌ）出発物質から合成でき、またはラセミ体は例えばキラルクロマトグラフィ−（ｃｈｉｒａｌ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、ジアステレオマ−塩の分別晶析（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）等、化学分野において周知の方法で分離することができる。
【００３９】
本発明の化合物は各種症状の治療のための投与用に調製することができる。本発明に基づく薬物製剤の製造において、本発明の化合物及びその生理学的に許容可能な塩類、またはそのいずれかの酸誘導体（以下「活性化合物」という）は許容可能な担体と混合される。担体は製剤中のいかなるその他成分と相性からも当然許容可能でなければならず、患者に有害であってはならない。担体は固体または液体、或いは両者とすることができ、単位用量製剤として化合物と調製することが好ましい。例えば０.５重量％〜９５重量％の活性化合物を含有する錠剤とすることができる。具体的な一実施態様において、医薬組成物は８０重量％未満の活性化合物を含む。その他の具体的な実施態様において、医薬組成物は５０重量％未満の活性化合物を含む。基本的に成分の混合を含む任意の既知の薬学技術で調製することにより、１種類または多種類の各活性化合物を本発明の製剤中に組み込むことができ、選択的に１種類または多種類の補助成分を含んでもよい。
【００４０】
本発明の製剤は、経口、直腸、局所、口腔（例えば舌下）、非経口（例えば皮下、筋肉、皮内または静脈内）、経皮投与に適したものを含み、特定の状況下で最も適した経路は治療する疾患の性質と重篤度及び使用される特定の活性化合物の性質によって決定される。
【００４１】
経口投与に適した製剤は、例えばそれぞれ予定量の活性化合物を含有するカプセル、カシェ−、舐剤、錠剤、糖衣錠またはシロップ；粉末または顆粒；水性または非水性液体中の溶液または懸濁液；または水中油型或いは油中水型エマルションなどの離散した単位で表すことができる。このような製剤は、活性化合物と適した担体（上述の１種類または多種類の補助成分を含有できる）を結合する工程を含む、任意の適した薬学的方法で調製することができる。
【００４２】
通常、本発明の製剤は、活性化合物と液体または微細粉末固体の担体或いは両者を均一かつ緊密に混合して調製され、その後必要に応じて、得られた混合物を成形する。例えば、活性化合物を含有する粉末または顆粒と、選択的に１種類または多種類の補助成分を圧縮または成型し、錠剤を調製することができる。圧縮錠剤は、適した機器中で、例えば結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤及び／または表面活性／分散剤と選択的に混合された粉末または顆粒などの自由流動形式で化合物を圧縮して製造することができる。成型錠剤は、適した機器中で、成型用不活性液体結合剤で湿潤された粉末化合物により製造することができる。
【００４３】
口腔（舌下）用途に適した製剤は、通常、スクロ−スとアラビアガムまたはトラガカントガムなどの風味付けされた基質中に活性化合物を含有する舐剤、及びゼラチンとグリセリンまたはスクロ−スとアラビアガムなどの不活性基質中に該化合物を含有するトロ−チ剤を含む。
【００４４】
本発明の非経口投与に適した製剤は、活性化合物の無菌水性製剤を含み、該製剤は意図されたレシピエントの血液と等張の状態であることが好ましい。これらの製剤は、皮下、静脈内、筋肉または皮内注射で使用することができる。これらの製剤は、化合物と水またはグリシン緩衝液を混合し、血液と等張の無菌液を得ることで調製される。
【００４５】
直腸投与に適した製剤は、好ましくは、単位用量の坐剤で表される。これらは活性化合物と１種類または多種類の従来の固体担体（例えばココアバタ−）を混合した後得られた混合物を成形して調製できる。
【００４６】
皮膚での局所用途に適した製剤は、好ましくは、軟膏、クリ−ム、ロ−ション、ペ−スト、ゲル、スプレ−、エアロゾルまたはオイルの形式が採用される。
【００４７】
経皮投与に適した製剤は、レシピエントの表皮と長時間緊密な接触を保持するために適した離散パッチとして提供することができる。経皮投与に適した製剤は、イオントフォレシスで送達することもでき（例えばPharmaceutical Research 3(6):318 (1986)を参照）、かつ通常は任意に緩衝された活性化合物の水溶液の形式が採用される。適した製剤は、クエン酸塩またはビス−トリス緩衝液（ｐＨ６）またはエタノ−ル／水を含み、かつ０.０１〜０.２Ｍの活性成分を含有する。
【００４８】
本発明は徐放性製剤に調製してもよい。徐放性組成物は、活性成分と選択的に拡散バリア層をコ−ティングすることにより樹脂の放出性能が改変されたイオン交換樹脂と結合した組成物を含むが、これに限らない。
【００４９】
使用可能な担体及び／または希釈剤は、ワセリン、ラノリン、グリセリン、植物油、または脂肪乳剤、ポリエチレングリコ−ル、アルコ−ル、経皮促進剤、天然または硬化した油、またはロウ、及びそれらの２種類以上の組み合わせを含む。
【００５０】
用途方法
本文に記載された式の化合物のほか、本発明はさらに有用な治療方法を提供する。例えば、本発明はＮＡＳＨ、ＮＡＦＬＤ及び／またはＡＳＨを治療する方法を提供する。
【００５１】
本発明に基づく例示的な鳥類は、鶏、鴨、七面鳥、ガチョウ、ウズラ、雉、走鳥類（例えばダチョウ）、飼育された鳥類（例えばオウムやカナリア）を含み、かつ卵内鳥類を含む。鶏と七面鳥が好ましい。
【００５２】
本発明に基づくレシピエントは任意的な哺乳動物が適している。ヒトのレシピエントが好ましい。本発明に基づくレシピエントは性別及びあらゆる発育段階（即ち、新生児、乳幼児、青少年、青年、成人）のヒトとすることができる。
【００５３】
上述のように、本発明は、経口、直腸、局所、口腔、非経口、筋肉、皮内、静脈内、経皮投与を含むが、これらに限らない、あらゆる適した投与経路に用いる薬学的に許容可能な担体に、本文に記載された式の化合物またはその薬学的に許容可能な塩類を含む、薬物製剤を提供する。
【００５４】
本発明に基づき、本発明の方法は、有効量の本発明の組成物（上述のとおり）をレシピエントに投与する工程を含む。組成物の有効量（その用途は本発明の範囲内にある）は、レシピエントによって異なり、かつレシピエントの年齢と状況及び投薬経路等の要因によって決める。そのような用量は当業者が既知の一般的な薬理学手順で確定できる。例えば、本発明の化合物は組成物の重量％で下限約０.０１、０.０２、０.０３、０.０４、０.０５、０.０６、０.０７、０.０８、０.０９、０.１０、０.２０、０.４０、０.５０、０.６０、０.７０、０.８０、０.９０、１.０、２.０、３.０、４.０、５.０、６.０、７.０、８.０、９.０または１０％から、上限約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００重量％の量でレシピエントに投与することができる。一部の実施態様において、化合物は組成物の重量の約０.０５〜約９５％を占める。その他の実施態様において、化合物は組成物の重量の約０.０５％〜約６０％を占める。その他の実施態様において、化合物は組成物の重量の約０.０５％〜約１０%を占める。
【００５５】
あらゆる特定の化合物の治療有効量は、化合物と患者によって異なり、かつ患者の状態及び投与経路によって決定される。一般に、約０.１〜約５０ ｍｇ／ｋｇの用量が治療効果を有し、経口投与及び／またはエアロゾルにはより高用量が使用される可能性がある。化合物の毒性問題によって、静脈注射投与の用量は、例えば約１０ｍｇ／ｋｇまでなど、比較的低いレベルの濃度に制限される可能性があり、すべての重量は、塩類を使用する状況においての活性塩基（ａｃｔｉｖｅ  ｂａｓｅ）の重量に基づいて計算される。
通常、約０.５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの用量が静脈内または筋肉投与に用いられる。経口投与には約１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量を用いることができる。
【００５６】
具体的な実施態様において、本発明の化合物は毎日動物体重１ｋｇ当たり約０.１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で使用することができ、１日１回〜１日４回または徐放形式で投与できる。人体では、１日の合計用量が約１ｍｇ〜約１,４００ｍｇの範囲内、例えば１日１ｍｇ〜５０ｍｇとすることができ、その他の具体的な実施態様において、１日の合計用量は約１０ｍｇ〜約１００ｍｇである。その他の実施態様において、経口投与に適した単位用量の剤形は、約１ｍｇ〜約１,４００ｍｇの化合物を含むことができ、選択的に固体または液体の薬物担体または希釈剤と混合される。本発明の化合物は、関連文書と文献を参照して、及び／または一般的な実験で、当業者により確定された、レシピエントに対する使用に適した任意の量で投与することができる。（例えば、The Science And Practice of Pharmacy 第9版、1995を参照）。但し、通常、本発明の化合物は、好ましくは１日１回〜４回に分けた用量、または徐放性の形式で、毎日動物体重１ｋｇ当たり約０.１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で使用されたときに満足できる結果が得られる。
【００５７】
前述の内容は本発明についての説明であり、本発明を制限するものと解釈されるべきではない。本発明は後述の特許請求の範囲により限定され、特許請求の範囲の均等物はすべて本発明の範囲に含まれる。
【実施例１】
【００５８】
本発明の化合物の合成
化合物Ａ（ナルメフェン）と化合物Ｂ（ナルトレキソン）は市販のものとすることができる。
【実施例２】
【００５９】
化合物Ａがクッパ−細胞においてＬＰＳによるＴＮＦ−αの誘発とＭＡＰＫリン酸化を減少する。
肝臓炎症反応の主な根源はクッパ−細胞である。ＴＮＦ−αが肝損傷で重要な役割を果たし、その血漿濃度と肝損傷の重篤度には相関性があることはすでに知られている。ｐ３８リン酸化はクッパ−細胞による炎症促進性媒介因子の産生を引き起こす主な経路の１つにおける重要なステップである。
【００６０】
２.１実験の設計
正常なラットからクッパ−細胞を酵素消化により分離し、遠心溶出で精製した後、一晩培養した。その後培地への化合物Ａの添加ありとなしで、それらを大腸菌ＬＰＳで刺激し、２、４、６時間後に上清液中のＴＮＦ−α含量を測定した。
【００６１】
２.２結果
化合物Ａはクッパ−細胞中のＬＰＳにより誘発されるＴＮＦ−αを抑制した。［２時間後、細胞中のＴＮＦ−αの過度な累積が実験結果に干渉した］。（図１）。化合物Ａがさらにクッパ−細胞中のＬＰＳに誘導されるｐ３８
ＭＡＰキナ−ゼリン酸化を減少した（図２）。
【実施例３】
【００６２】
非アルコ−ル性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）のＳＴＡＭモデルでの生体内薬効研究
実験手順 オスＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて生後２日目に２００μｇのストレプトゾトシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ）溶液の単回皮下注射によりＮＡＳＨが誘導され、生後４週間後から高脂肪食（ＨＦＤ、５７ｋｃａｌ％の脂肪、Ｃａｔ＃ＨＦＤ３２、ＣＬＥＡ  Ｊａｐａｎ、Ｊａｐａｎ）が与えられた。動物は６匹ずつグル−プ分けされ、それぞれ１０ｍＬ／ｋｇの賦形剤（１％Ｔｗｅｅｎ  ８０）または１０ｍｇ／ｋｇのテルミサルタン（Ｔｅｌｍｉｓａｒｔａｎ）が経口で１日２回、生後６週目から９週目まで投与された。同様に、化合物Ａ／ナルメフェン（ＮＭＮ）と化合物Ｂ／ナルトレキソン（ＮＴＸ）が５ｍｇ／ｋｇの皮下注射で１日２回投与された。被験動物は９週目に犠牲にされた。テルミサルタン群の平均体重は治療期間中徐々に減少した。治療期間が９週目に到達する前に、ＮＭＮ群の６匹の被験マウス中１匹が死亡した。対照群と比較して、テルミサルタン群のマウスが犠牲にされた当日の平均体重は減少していた。処理群のいずれも対照群との間に平均体重の有意な差異はなかった（デ−タは示さない）。
【００６３】
対照群（ｖｅｈｉｃｌｅ）、テルミサルタン（Ｔｅｌｍｉｓａｒｔａｎ）、ＮＴＸ、ＮＭＮの肝臓のヘマトキシリン（ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ）・エオジン染色（ｅｏｓｉｎ（ＨＥ）−ｓｔａｉｎｅｄ）区域の代表的な顕微鏡写真を図３に示す。対照群の肝切片では小滴性と大滴性の脂肪蓄積、肝細胞膨張、炎症細胞浸潤の現象が見られた。対照群と比較して、テルミサルタン、ＮＴＸ群のＮＡＳ（ＮＡＦＬＤ活動性指標）は有意に減少した。
【００６４】
【表１ａ】
2019514872.tif 000006
【００６５】
【表１ｂ】
2019514872.tif 000007
【００６６】
対照群の肝切片は肝小葉の中心区域でコラ−ゲンの蓄積増加を示した（表１ａ；図３）。対照群と比較して、テルミサルタンとＮＴＸ群の線維化面積（シリウスレッド陽性区域（Ｓｉｒｉｕｓ  ｒｅｄ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ａｒｅａ））は明らかに減少した。対照群と比較して、ＮＭＮ治療群の線維化面積は減少の傾向があった。
【実施例４】
【００６７】
メチオニン・コリン欠乏（ＭＣＤ）飼料のラットモデル（Szabo G.等、2005を参照）
【００６８】
４.１実験の設計
０、５、１０、２０または３０ｍｇ／ｋｇ（ラット４匹／群）の用量で化合物Ａを１日１回２０匹のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに４週間強制経口投与した。給餌期間は毎週すべての動物にメチオニン・コリン欠乏（ＭＣＤ）飼料（Ｄｙｅｔｓ，Ｉｎｃ）を５回与え、食餌性脂肪肝を生じさせた。４週間の終了時、ラットは２ｍｇ／ｋｇの大腸菌内毒素（ＬＰＳ）が腹膜内に投与（ＩＰ）され、６時間後ラットを安楽死させて肝組織と血清を採取した。肝臓と血液はラット死亡時に採取された。同時に組織学試料も採取された。
【００６９】
４.２結果
図５に示すように、化合物Ａは脂肪肝ラット（ｎ＝３／組、ｍｐｋ＝ｍｇ／ｋｇ）にＬＰＳを投与した後、肝損傷の用量依存的な予防を示した。化合物Ａの治療がない状況下で、血清ＡＬＴレベルは３３９Ｕ／Ｌであった。ＬＰＳはＡＬＴの病的な亢進を引き起こした。５および１０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａでの治療は、上昇したＡＬＴレベルを５０％近く低下させたが、該試験用量の研究は数量が小さかった（ｎ＝３）ため、統計学的有意差を達成できなかった。しかしながら、２０および３０ｍｇ／ｋｇの状況下で、ＡＬＴはさらに減少しており、少ない数量の試験でも、有意であった（ｐ＜０.０５）。３０ｍｇ／ｋｇの投与の結果、ＡＬＴは９４.９±５.５Ｕ／Ｌであった。これらの結果は、化合物Ａが非アルコ−ル性脂肪性肝疾患のラットにおいて、内毒素血症後の肝損傷に用量依存的な予防効果を有することを証明している。
【図１】
2019514872.tif 000013
【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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