(57)【要約】  本発明はｃ−ＭＥＴ阻害剤としてのピリドン系化合物に関し、具体的に式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を公開した。  【化１】2019535806.tif 000034
2019535806.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【化１】
2019535806.tif 000027
［Ｒ１はＨ、Ｆから選択され；
Ｒ２はＨ、ＣＨ３から選択され；
Ｒ２がＨではない場合に、Ｒ２と連結する炭素原子がＲ配置又はＳ配置であり；
Ａは１、２又は３個のＲ３によって任意に置換されたフェニル、ピリジル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル又はチアゾリルから選択され；
Ｒ３はＣＮ、ハロゲン、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２から選択され、或いは１、２又は３個のＲ０によって任意に置換されたＣ１−６アルキル、Ｃ１−６ヘテロアルキル又はＣ３−６シクロアルキルから選択され；
Ｒ０はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２から選択され、或いは１、２又は３個のＲ’によって任意に置換されたＣ１−３アルキル、Ｃ１−３ヘテロアルキルから選択され；
Ｒ’はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＨ３、ＣＨ３ＣＨ２、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆから選択され；
「Ｃ１−３ヘテロアルキル」、「Ｃ１−６ヘテロアルキル」における「ヘテロ」は、−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＲ’−、−ＮＨ−から選択され；
以上のいずれの場合でも、ヘテロ原子又はヘテロ原子団の数はそれぞれ独立して１、２又は３から選択される。］
【請求項２】
Ｒ０はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、ＣＨ３、ＣＨ３ＣＨ２、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、ＮＨ２ＣＨ２、（ＮＨ２）２ＣＨ、ＣＨ３Ｏ、ＣＨ３ＣＨ２Ｏ、ＣＨ３ＯＣＨ２、ＣＨ３ＮＨ、（ＣＨ３）２Ｎから選択される請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ１はＨから選択される請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒ１はＦから選択される請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
Ｒ２はＨから選択される請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
Ｒ２はＣＨ３から選択される請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
Ｒ２と連結する炭素原子はＲ配置である請求項６に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
Ｒ２と連結する炭素原子はＳ配置である請求項６に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項９】
Ｒ３はＣＮ、ハロゲン、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２から選択され、或いは１、２又は３個のＲ０によって任意に置換されたＣ１−３アルキル又はＣ１−３ヘテロアルキルから選択される請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
Ｒ３はＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＨ３、ＣＨ３ＣＨ２、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、ＣＨ３Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２から選択される請求項９に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
Ａは１、２又は３個のＲ３によって任意に置換された
【化２】
2019535806.tif 000028
から選択される請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
Ａは
【化３】
2019535806.tif 000029
から選択される請求項１１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
Ａは
【化４】
2019535806.tif 000030
から選択される請求項１２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
Ａは
【化５】
2019535806.tif 000031
から選択される請求項１０又は１３に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１５】
【化６】
2019535806.tif 000032
2019535806.tif 000033
から選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
有効治療量の請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１７】
腫瘍治療のための医薬の製造における請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、又は請求項１６に記載の医薬組成物の応用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一連のｃ−ＭＥＴ阻害剤としてのピリドン系化合物に関し、具体的に式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を公開した。
【背景技術】
【０００２】
癌原遺伝子Ｍｅｔでコードされたｃ−Ｍｅｔは、高度の結合性を有する受容体チロシンキナーゼであり、ＲＯＮサブファミリーに属し、散乱因子又は肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）に対する唯一の既知の受容体である。ｃ−Ｍｅｔタンパク質は、５０ｋＤのαサブユニットと１４５ｋＤのβサブユニットとがジスルフィド結合によって連結されたヘテロ二量体であり、細胞外ドメインと細胞内ドメインに分けられる。細胞外ドメインは、全α鎖及びβ鎖の一部を覆うＮ−末端リガンド結合ドメイン（ＳＥＭＡ領域）と、４つの保存されたジスルフィド結合を有するシスチンに富む領域と、免疫グロブリン様ドメインとの３つの機能的に異なるドメインを含む。細胞内ドメインもＴｙｒ１００３リン酸化部位を有する膜近傍ドメインと、Ｔｙｒ１２３４及びＴｙｒ１２３５リン酸化部位を有するチロシンキナーゼ触媒ドメインと、Ｔｙｒ１３４９及びＴｙｒ１３５６結合チロシンを有するＣ−末端多機能結合ドメインとの３つの調節領域から構成されている。
【０００３】
ＨＧＦがｃ−Ｍｅｔの細胞外ドメインと結合した後に、ｃ−Ｍｅｔのリン酸化を誘導し、そしてＣ末端多機能ドメインにおいてＧＡＢ１（成長因子受容体結合タンパク質−１）、ＧＡＢ２（成長因子受容体結合タンパク質−２）のような種々の間質因子を募集し、さらにＳＨＰ２、ＰＩ３Ｋなどの分子をここに結合させ、それによってＲＡＳ／ＭＡＰＫ、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路などを活性化し、それによって細胞の成長、移動、増殖及び生存を調節する。異常なｃ−Ｍｅｔ経路は腫瘍の形成及び転移を誘発する。膀胱癌、胃癌、肺癌及び乳癌のような種々のヒト悪性腫瘍において、異常に高レベルのｃ−Ｍｅｔの発現が見出される。さらに、ｃ−Ｍｅｔは種々のキナーゼ阻害剤に対する腫瘍の耐性と関連している。
【０００４】
ｃ−Ｍｅｔは、様々な膜受容体との間にクロストーク（ｃｒｏｓｓｔａｌｋ）があり、複雑なネットワークシステムを構成している。ｃ−Ｍｅｔは、接着受容体ＣＤ４４との相互作用がシグナルペプチドの応答作用を増幅し；脳タンパク質受容体とタンパク質の相互作用が非依存性リガンドＨＧＦのｃ−Ｍｅｔを活性化し、浸潤作用を増強し；アポトーシス促進性受容体ＦＡＳとの相互作用がアポトーシスを促進し；ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲのような種々の受容体チロシンキナーゼとの相互作用が互いの間の活性化を調節させ、血管形成過程に影響を及ぼす。ｃ−Ｍｅｔとこれらの膜受容体との間の相互作用は、腫瘍形成及び転移を促進し、薬物耐性の産生を誘導する。
【０００５】
転写因子ＨＩＦ−１αは、腫瘍細胞が低酸素環境ストレスを適応する主要な調節因子である。ＶＥＧＦＲ阻害剤は治療の初期段階で腫瘍低酸素を引き起こす。低酸素環境では、ＨＩＦ−１αはｃ−Ｍｅｔレベルをアップレギュレートし、ｃ−Ｍｅｔ濃度の上昇は腫瘍細胞の転移を促進し、腫瘍の局所的拡大又は転移を引き起こし、その結果、腫瘍が酸素欠乏環境から脱出することを引き起こし、より侵襲的で増殖可能なクローニングシステムを確立する。ＥＧＦＲ阻害剤に対する腫瘍の薬物耐性の発生原因は、リガンドＨＧＦレベルのアップレギュレーションに関連している可能性がある。ゲフィチニブ及びエルロチニブに耐性のある非小細胞肺癌患者の４％〜２０％では、ｃ−Ｍｅｔの増幅が検出された。ＨＧＦはＧＡＢ１を介してＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ及びＥＲＫ経路を調節し、直接にＥＧＦＲキナーゼ阻害剤に対して薬物耐性を生み出す。ＢＲＡＦ突然変異のメラノーマ細胞株において、研究者らはＨＧＦのアップレギュレーションがＢＲＡＦ阻害剤ｒａｍｕｒａｆｅｎｉｂの作用に対して抵抗性を生み出すことを見出した。従って、ｃ−Ｍｅｔと膜受容体との相互作用はキナーゼ標的療法に対する薬物耐性を誘導する。
【０００６】
現在、市場に出回っている抗腫瘍薬がたくさんであり、例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、免疫調節剤などがある。しかし、それらのほとんどは、高い毒性のために患者が耐えられない。腫瘍分子生物学の研究が深まるにつれて、腫瘍の発生及び成長の分子メカニズムがますます明らかになってきている。様々な悪性腫瘍に対する分子標的療法は、広く注目されており、高い注目を集めている。分子標的薬物は選択性が高く、広域スペクトル効果があり、そしてそれらの安全性が細胞毒性化学療法薬物よりも優れており、現在の腫瘍治療の分野における新しい方向である。
【０００７】
現在では、ｃ−Ｍｅｔ経路について２つの抗腫瘍薬物がある：１つは抗ＨＧＦ又はｃ−Ｍｅｔのモノクローナル抗体であり、そしてもう１つはｃ−Ｍｅｔに対する小分子阻害剤である。研究されているか又は臨床研究に入っているｃ−Ｍｅｔ小分子阻害剤には、ＰＦ−２３４１０６６、ＥＭＤ−１２１４０６３、ＸＬ−１８４又はＡＲＱ−１９７などがある。
【０００８】
そのうち、Ｔｅｐｏｔｉｎｉｂ（ＥＭＤ１２１４０６３）（ＷＯ２００９００６９５９、公開日：２００９年１月１５日）は、抗腫瘍活性が最も優れており、様々なｃ−ＭＥＴ高発現腫瘍細胞に対して強い阻害効果を有し（ｃ−ＭＥＴ酵素活性ＩＣ５０＝３．６７ｎＭ、ＭＨＣＣ９７Ｈ細胞ＩＣ５０＝６．２ｎＭ）、今は既に臨床第ＩＩ相研究段階に入った。
【０００９】
しかし、Ｔｅｐｏｔｉｎｉｂ（ＥＭＤ１２１４０６３）は、高い選択性があるが、依然として低い代謝安定性及び高いインビボでのクリアランス速度という欠点を有する。従って、臨床的には、この欠点を補うための代謝的に安定なｃ−Ｍｅｔ阻害剤が緊急に必要とされている。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、式（１）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１１】
【化１】
2019535806.tif 000003
【００１２】
Ｒ１はＨ、Ｆから選択され；
Ｒ２はＨ、ＣＨ３から選択され；
Ｒ２がＨではない場合に、Ｒ２と連結する炭素原子がＲ配置又はＳ配置であり；
Ａは１、２又は３個のＲ３によって任意に置換されたフェニル、ピリジル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル又はチアゾリルから選択され；
Ｒ３はＣＮ、ハロゲン、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２から選択され、或いは１、２又は３個のＲ０によって任意に置換されたＣ１−６アルキル、Ｃ１−６ヘテロアルキル又はＣ３−６シクロアルキルから選択され；
Ｒ０はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２から選択され、或いは１、２又は３個のＲ’によって任意に置換されたＣ１−３アルキル、Ｃ１−３ヘテロアルキルから選択され；
Ｒ’はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＨ３、ＣＨ３ＣＨ２、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆから選択され；
「Ｃ１−３ヘテロアルキル」、「Ｃ１−６ヘテロアルキル」における「ヘテロ」は、−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＲ’−、−ＮＨ−から選択され；
以上のいずれの場合でも、ヘテロ原子又はヘテロ原子団の数はそれぞれ独立して１、２又は３から選択される。
【００１３】
本発明のいくつかの様態において、前記Ｒ０はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、ＣＨ３、ＣＨ３ＣＨ２、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、ＮＨ２ＣＨ２、（ＮＨ２）２ＣＨ、ＣＨ３Ｏ、ＣＨ３ＣＨ２Ｏ、ＣＨ３ＯＣＨ２、ＣＨ３ＮＨ、（ＣＨ３）２Ｎから選択される。
【００１４】
本発明のいくつかの様態において、前記Ｒ１はＨから選択される。
本発明のいくつかの様態において、前記Ｒ１はＦから選択される。
本発明のいくつかの様態において、前記Ｒ２はＨから選択される。
【００１５】
本発明のいくつかの様態において、前記Ｒ２はＣＨ３から選択される。
本発明のいくつかの様態において、前記Ｒ２と連結する炭素原子はＲ配置である。
本発明のいくつかの様態において、前記Ｒ２と連結する炭素原子はＳ配置である。
【００１６】
本発明のいくつかの様態において、前記Ｒ３はＣＮ、ハロゲン、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２から選択され、或いは１、２又は３個のＲ０によって任意に置換されたＣ１−３アルキル又はＣ１−３ヘテロアルキルから選択される。
【００１７】
本発明のいくつかの様態において、前記Ｒ３はＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＨ３、ＣＨ３ＣＨ２、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、ＣＨ３Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２から選択される。
本発明のいくつかの様態において、前記Ａは１、２又は３個のＲ３によって任意に置換された
【００１８】
【化２】
2019535806.tif 000004
【００１９】
から選択される。
本発明のいくつかの様態において、前記Ａは
【００２０】
【化３】
2019535806.tif 000005
【００２１】
から選択される。
本発明のいくつかの様態において、前記Ａは
【００２２】
【化４】
2019535806.tif 000006
【００２３】
から選択される。
本発明のいくつかの様態において、前記Ａは
【００２４】
【化５】
2019535806.tif 000007
【００２５】
から選択される。
本発明のいくつかの様態において、前記化合物は、
【００２６】
【化６】
2019535806.tif 000008
【００２７】
から選択される。
本発明は、さらに有効治療量の前記化合物又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００２８】
本発明は、さらに腫瘍治療のための医薬の製造における前記化合物又はその薬学的に許容される塩、又は前記医薬組成物の応用を提供する。
技術効果
本発明は、代謝しやすい部位への正確な構造的修飾に焦点を合わせて、標的化合物の代謝安定性を大幅に向上させた。また、新規ピリドンコア構造を設計し合成して、標的化合物のｃ−ＭＥＴ酵素への結合力を顕著に増強し、従って腫瘍増殖を阻害するためのより優れた活性を得た。それとともに、インビボ薬力学的結果によれば、本発明の化合物を投与したマウスの腫瘍増殖速度が同じ用量でＴｅｐｏｔｉｎｉｂ  （ＥＭＤ１２１４０６３）のそれより有意に低く、さらに本発明の化合物がより優れた腫瘍抑制活性を有することを実証した。本発明の化合物は、半減期が増加し、標的に対する作用時間が延長し、代謝安定性が増強するので、より優れた阻害活性を有する。
定義と説明
特に説明しない限り、本文で使用される下記の用語及びフレーズは、下記の意味を指す。特定の用語およびフレーズは、特に定義されない場合に、不確かまたは不明瞭であると理解すべきではなく、その普通の意味で理解すべきである。また、本文に商品名が現れる場合は、それに対応する商品またはその有効成分を指すものである。
【００２９】
ここで用いられる用語「薬学的に許容される」は、化合物、材料、組成物及び／又は剤形に向けられることで、信頼できる医学判断の範囲内で、ヒトと動物の組織と接触して使うのに適用されて、過度の毒性、刺激性、アレルギー反応またはその他の問題または合併症がなくて、合理的な利益／リスク比率が釣り合うものである。
【００３０】
用語「薬学的に許容される塩」とは、本発明の化合物の塩であって、本発明で発見した特定置換基を有する化合物と、比較的非毒性の酸または塩基とから調製されたものである。本発明の化合物が比較的に酸性の官能基を含む場合は、純粋な溶液または適切な不活性溶媒に、十分な量の塩基をこの化合物の中性形態と接触させる方法によって、塩基付加塩を得ることができる。薬学的に許容される塩基付加塩は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アンモニアまたはマグネシウム塩または類似の塩を含む。本発明の化合物が比較的に塩基性の官能基を含む場合は、純粋な溶液または適切な不活性溶媒に、十分な量の酸をこの化合物の中性形態と接触させる方法によって、酸付加塩を得ることができる。薬学的に許容される酸付加塩の実例は、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、重炭酸イオン、リン酸、リン酸一水素イオン、リン酸二水素イオン、硫酸、硫酸水素イオン、ヨウ化水素酸、亜燐酸などのような無機酸を含む無機酸塩、及び酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、クエン酸、酒石酸およびメタンスルホン酸など類似の酸のような有機酸を含む有機酸塩を含み、さらにアミノ酸（例えばアルギニンなど）の塩、およびグルクロン酸などのような有機酸の塩を含む（Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６６：１−１９（１９７７）を参照）。本発明のある特定の化合物は、塩基性および酸性の官能基を含むことで、任意の一つの塩基または酸付加塩に変換することができる。
【００３１】
好ましくは、通常の方式で、塩を塩基または酸と接触させてから、母体化合物を分離し、これにより化合物の中性形態を再生する。化合物の母体形態と、その様々な塩の形態との違いは、いくつかの物理性質、例えば極性溶媒での溶解度が異なることにある。
【００３２】
本文で用いられる「薬学的に許容される塩」とは、本発明の化合物の誘導体を指し、酸付加塩または／および塩基付加塩を生成するように、上記母体化合物を修飾する。薬学的に許容される塩の実例は、アミンのような塩基の無機酸または有機酸塩、カルボン酸のような酸基のアルカリ金属または有機塩等を含むが、これらに限定されない。薬学的に許容される塩は、通常の非毒性の塩または母体化合物の第四級アンモニウム塩、例えば、非毒性の無機酸または有機酸から形成する塩を含む。通常の非毒性の塩は、無機酸および有機酸から誘導される塩を含むが、これらに限定されず、前記無機酸または有機酸は、２−アセトキシ安息香酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、酢酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、重炭酸イオン、炭酸、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトース、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸塩、ヒドロキシ、ヒドロキシナフタレン、イセチオン酸、乳酸、ラクトース、ドデシルスルホン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、硝酸、蓚酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、リン酸、ポリガラクトースアルデヒド、プロピオン酸、サリチル酸、ステアリン酸、スバセチン酸、コハク酸、スルファミン酸、ｐ−アミノベンゼンスルホン酸、硫酸、タンニン、酒石酸およびｐ−トルエンスルホン酸から選択される。
【００３３】
本発明の薬学的に許容される塩は、酸基または塩基を含む母体化合物から、通常の化学方法によって合成することができる。一般的な状況下で、このような塩の製造方法は、下記のようである。水または有機溶媒または両者の混合物の中で遊離酸または遊離塩基の形態のこれらの化合物を化学量論の適当な塩基または酸と反応させて製造する。一般的に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロピルアルコールまたはアセトニトリルなどの非水媒質が好ましい。
【００３４】
塩の形態のほかに、本発明が提供する化合物は、プロドラッグ形態も存在する。本文で説明する化合物のプロドラッグは、生理的条件の下で容易に化学的変化が発生して、本発明の化合物に変換される。このほかに、プロドラッグは、体内環境で化学的または生化学的方法によって本発明の化合物に変換される。
【００３５】
本発明の一部化合物は、非溶媒和形態または溶媒和形態で存在することができ、水和物形態が含まれる。一般的には、溶媒和形態は、非溶媒和の形態と同等であり、すべて本発明の本発明の範囲内に含まれる。
【００３６】
本発明の一部化合物は不斉炭素原子（光学中心）または二重結合を有してもよい。ラセミ体、ジアステレオマー、幾何異性体および個々の異性体は、すべて本発明の範囲内に含まれる。
【００３７】
別途の説明がない限り、くさび形結合と破線結合（
【００３８】
【化７】
2019535806.tif 000009
【００３９】
）で一つの立体中心の絶対配置を表し、
【００４０】
【化８】
2019535806.tif 000010
【００４１】
で一つの立体中心の相対配置を表す。本文で記述された化合物がオレフイン二重結合またはその他の幾何の不斉中心を含む場合、別途の説明がない限り、これらはＥ、Ｚ幾何異性体を含む。同様に、すべての互変異性形態は本発明の範囲内に含まれる
本発明の化合物は、特定の幾何的または立体的異性体形態が存在することができる。本発明は、仮想されるシス型およびトランス型異性体、（−）−と（＋）−ペア鏡像体、（Ｒ）−と（Ｓ）−鏡像体、ジアステレオマー、（Ｄ）−異性体、（Ｌ）−異性体、それらのラセミ混合物および他の混合物、例えば、エナンチオマーまたはジアステレオマーが豊富となった混合物の全てを含み、このような混合物は、全て本発明の範囲内に含まれる。アルキルなど置換基には、別途の不斉炭素原子が存在することができる。このような異性体およびこれらの混合物は全て本発明の範囲内に含まれる。
【００４２】
キラル合成またはキラル試薬またはその他の通常技術により光学活性の（Ｒ）−と（Ｓ）−異性体およびＤとＬ異性体を製造することができる。本発明のある化合物の１種の鏡像体を得ようとすれば、不斉合成またはキラル補助制の誘導作用により製造することができ、ここで得られたジアステレオマー混合物を分離し、補助基団が分割して所要の純粋なエナンチオマーを提供する。或いは、分子の中に塩基性官能基（例えば、アミノ基）または酸性官能基（例えば、カルボキシル）を含む場合、適当な光学活性の酸または塩基とジアステレオマーの塩を形成した後、当分野に公知された常法でジアステレオマーを分離した後、回収して純粋な鏡像体を得る。また、エナンチオマーとジアステレオマーの分離は、通常に、クロマトグラフィー法により完成されており、前記クロマトグラフィー法は、キラル固定相を用いて、任意に化学誘導法と結合する（例えば、アミンによりカルバメートを生成する）。
【００４３】
本発明の化合物は、当該化合物を構成する一つまたは複数の原子に非天然割合の原子同位体を含むことができる。例えば、トリチウム（３Ｈ）、ヨード−１２５（１２５Ｉ）またはＣ−１４（１４Ｃ）のような放射性同位体を使って化合物を表記することができる。本発明の化合物のすべての同位体で構成された変換は、放射性があるかどうかを問わず、すべて本発明の範囲内に含まれる。
【００４４】
用語「薬学的に許容される担体」とは、本発明の活性物質の有効量を送達することができ、活性物質の生物学的活性を妨害せず、宿主または患者に対して毒性の副作用がない任意の製剤または担体媒体を指す。代表的な担体は、水、油、野菜及びミネラル、クリーム基剤、ローション基剤、軟膏基剤等を含む。これらの基剤は懸濁剤、増粘剤、浸透促進剤等を含む。これらの製剤は、化粧品分野または局所薬物分野の当業者にとって周知のものである。担体に関する他の情報は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：    Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２１ｓｔ  Ｅｄ．，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  （２００５）を参考することができ、当該文献の内容を本願に参照により援用する。
【００４５】
医薬または薬理学活性剤について、用語「有効量」または「治療有効量」とは、非毒性であって所望の効果を達成するのに医薬または薬剤の十分な用量を指す。本発明における経口剤型について、組成物における活性物質の「有効量」とは、前記組成物における他の活性物質と併用する時に所望の効果を達成するのに必要な用量を指す。有効量の確認は、人によって変わり、受容体の年齢および一般状態によって決まり、また具体的な活性物質によって決まる。個別のケースでは、適切な有効量は、当業者が通常の試験に基づいて確認することができる。
【００４６】
用語「活性成分」、「治療剤」、「活性物質」または「活性剤」はケミカルエンティティ（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｅｎｔｉｔｙ）を指し、当該ケミカルエンティティは標的障害、疾患または病症を効果的に治療することができる。
【００４７】
「任意」または「任意に」は、後述の事件や状況が発生する可能性があるが、必ず発生することではなく、当該記述は、その記述の事件や状況が発生する場合、およびその記述の事件や状況が発生しない場合を含む。
【００４８】
用語「置換された」とは、特定の原子上の任意の１つまたは複数の水素原子が置換基により置換されたことを指し、前記水素原子は、重水素および水素の変体を含み、特定の原子の原子価状態が正常であり、置換された後の化合物が安定であればよい。置換基がケトン基（即ち、＝Ｏ）である場合、２つの水素原子が置換されたことを意味する。ケトン置換は、アリールで発生しない。用語「任意に置換された」とは、置換されてもよく、置換されなくてもよいことを意味する。別途の説明がない限り、置換基の種類及び数は、化学的に実現可能であれば任意であってよい。
【００４９】
任意の変量（例えば、Ｒ）は、化合物の組成又は構造で１回以上現れる場合、いずれの状況においても独立に定義される。従って、例えば、１つの基が０−２個のＲに置換された場合、上記基は、任意に多くとも２個のＲに置換されてよく、かついずれの状況においてもＲは独立に選択される。さらに、置換基および／またはその変体の組み合せは、その組み合せで安定した化合物が生成される場合のみ、許容される。
【００５０】
１つの置換基の結合が交差して１つの環における２つの原子に接続することができる場合、この置換基は、この環における任意の原子と結合することができる。挙げられた置換基においてどの原子を通して化合物（化学構造式に含まれるが具体的に言及していない化合物）に接続するかを明記していない場合、この置換基は、任意の原子を通して結合することができる。置換基および／またはその変体の組み合せは、その組み合せで安定した化合物が生成される場合のみ、許容される。例えば、構造単位
【００５１】
【化９】
2019535806.tif 000011
【００５２】
は、シクロヘキシルまたはシクロヘキサジエンにおいて任意の１つの位置で置換されることを示す。
別途の説明がない限り、用語「ヘテロ」は、ヘテロ原子またはヘテロ原子団（すなわち、ヘテロ原子を含む原子団）を表し、炭素（Ｃ）と水素（Ｈ）を除いた原子及びこのようなヘテロ原子を含む原子団を含み、例えば、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）、ケイ素（Ｓｉ）、ゲルマニウム（Ｇｅ）、アルミニウム（Ａｌ）、ホウ素（Ｂ）、−Ｏ−、−Ｓ−、＝Ｏ、＝Ｓ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｓ（＝Ｏ）、−Ｓ（＝Ｏ）２−、及び任意に置換された−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）−、−Ｎ（Ｈ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｈ）−または−Ｓ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）−を含む。
【００５３】
別途の説明がない限り、用語「ヘテロ炭化水素基」またはその下位概念（例えば、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、ヘテロアリールなど）は、その自体または別の一つの用語と合わせて、安定した直鎖状、分岐鎖状または環状の炭化水素原子団またはその組み合わせを表し、一定の数の炭素原子及び少なくとも一つのヘテロ原子によって形成される。いくつかの実施例において、用語「ヘテロアルキル」は、その自体または別の一つの用語と合わせて、安定した直鎖状、分岐鎖状の炭化水素原子団またはその組成物を表し、一定の数の炭素原子及び少なくとも一つのヘテロ原子によって形成される。一つの典型的な実施例において、ヘテロ原子はＢ、Ｏ、Ｎ及びＳから選択され、ここで窒素原子と硫黄原子は任意に酸化され、窒素ヘテロ原子は任意に第四級化される。ヘテロ原子またはヘテロ原子団は、ヘテロ炭化水素基の任意の内部位置（前記炭化水素基が分子の残り部分に附着した位置を含む）に位置することができる。用語「アルコキシ」、「アルキルアミノ」および「アルキルチオ」（またはチオアルコキシ）は、慣用表現に属し、それぞれ一つの酸素原子、アミノまたは硫黄原子を介して分子の残り部分に連結されるアルキルを指す。実例は、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２、−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）２−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ３および-ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３を含むが、これらに限定されない。多くとも二つのヘテロ原子が連続することができる。例えば、−ＣＨ２−ＮＨ−ＯＣＨ３が挙げられる。別途の説明がない限り、用語「アルキル」は、直鎖状または分岐鎖状の飽和炭化水素基を表し、単置換（例えば、−ＣＨ２Ｆ）または多置換(−ＣＦ3)されたものであることができ、一価（例えば、メチル基）、二価（例えば、メチレン基）または多価（例えば、メチリデン基）のものであることができる。アルキルの例としては、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（例えば、ｎ−プロピルおよびイソプロピル）、ブチル（例えば、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル）、ペンチル（例えば、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル）などを含む。別途の説明がない限り、シクロアルキルは、如何なる安定する環状または多環状の炭化水素基を含み、すべての炭素原子が飽和であり、単置換または多置換されたものであることができ、一価、二価または多価のものであることができる。これらのシクロアルキルの実例としては、シクロプロピル、ノルボルネニル、［２．２．２］ビシクロオクタン、［４．４．０］ビシクロデカンなどを含む。別途の説明がない限り、用語「ハロゲン化」又は「ハロゲン」は、そのもの又は他の置換基の一部として、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素原子を表す。また、用語「ハロゲン化アルキル」は、単置換ハロゲン化アルキル又は多置換ハロゲン化アルキルを含む。例えば、用語「ハロゲン化（Ｃ１−Ｃ４）アルキル」は、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、４−クロロブチル及び３−ブロモプ��ピルなどを含むが、これらに限定されない。別途の説明がない限り、ハロゲン化アルキルの実例としては、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、ペンタフルオロエチル及びペンタクロロエチルを含むが、これらに限定されない。
【００５４】
本発明の化合物は、当業者が熟知するさまざまな合成方法で製造することができ、下記のような具体的な実施形態、これとその他の化学合成方法との組み合わせによる実施形態、及び当業者が熟知する同等形態を含み、好ましい実施形態は本発明の実施例を含むが、これらに限定されない。
【００５５】
本発明で使用された溶媒は、市販によって入手できる。本発明は、下記の略号を使用する。ａｑは水を表し；ＨＡＴＵはＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートを表し；ＥＤＣはＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩を表し；ｍ−ＣＰＢＡは３−クロロペルオキシ安息香酸を表し；ｅｑは当量、等量を表し；ＣＤＩはカルボニルジイミダゾールを表し；ＤＣＭはジクロロメタンを表し；ＰＥは石油エーテルを表し；ＤＩＡＤはアゾジカルボン酸ジイソプロピルを表し；ＤＭＦはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを表し；ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドを表し；ＥｔＯＡｃは酢酸エチルを表し；ＥｔＯＨはエタノールを表し；ＭｅＯＨはメタノールを表し；ＣＢｚはベンジルオキシカルボニルを表し、アミンの保護基の一種であり；ＢＯＣはｔｅｒｔ−ブチルカルボニルを表し、アミンの保護基の一種であり；ＨＯＡｃは酢酸を表し；ＮａＣＮＢＨ３はシアノ水素化ホウ素ナトリウムを表し；ｒ．ｔ．は室温を表し；Ｏ／Ｎは一晩中を表し；ＴＨＦはテトラヒドロフランを表し；Ｂｏｃ２Ｏはジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートを表し；ＴＦＡはトリフルオロ酢酸を表し；ＤＩＰＥＡはジイソプロピルエチルアミンを表し；ＳＯＣｌ２は塩化チオニルを表し；ＣＳ２は二硫化炭素を表し；ＴｓＯＨはｐ−トルエンスルホン酸を表し；ＮＦＳＩはＮ−フルオロ−Ｎ−（フェニルスルホニル）ベンゼンスルホンイミドを表し；ＮＣＳは１−クロロピロリジン−２，５−ジオンを表し；ｎ−Ｂｕ４ＮＦはフッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムを表し；ｉＰｒＯＨは２−プロパノールを表し；ｍｐは融点を表し；ＬＤＡはリチウムジイソプロピルアミドを表す。
【００５６】
化合物は、手作りまたはＣｈｅｍＤｒａｗ＜登録商標＞ソフトウェアにより命名され、市販される化合物は、販売業者のカタログ名を使用する。
【発明を実施するための形態】
【００５７】
以下は、実施例に基づいて本発明を詳しく説明するが、本発明に対して何らかの不利な制限を意味することがない。本文は本発明を詳しく説明して、その具体的な実施形態をも公開したが、当業者にとって、本発明の精神および範囲を逸脱しない限り、本発明の具体的な実施形態に対して各種の変更および改良を行ってもよいのは、勿論である。
【００５８】
実施例１（１−１及び１−２）
【００５９】
【化１０】
2019535806.tif 000012
【００６０】
工程Ａ：
中間体７Ｃ（合成方法は実施例７を参照）（２０．４ｇ、５０．８８ｍｍｏｌ）と二酸化マンガン（４４．２３ｇ、５０８．７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３００ｍＬ）溶液で室温で１６時間撹拌した。反応が完了した後、反応液を濾過し、濃縮して中間体１Ａ（１８．４ｇ）を得て、次の工程に直接に使用した。LCMS (ESI) m/z: 398 (M+1).
工程Ｂ：
０℃で、中間体１Ａ（２３．０ｇ、５７．８７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液に臭化メチルマグネシウム（３Ｍ，３８．５８ｍＬ）を添加した。反応液を室温で１時間撹拌した。反応が完了した後、反応液を飽和塩化アンモニウム溶液（３００ｍＬ）でクエンチさせ、酢酸エチル（２００ｍＬ×２）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。中間体１Ｂ（２２．７６ｇ、９５．１１％  収率）を得た。LCMS (ESI) m/z: 414 (M+1). HNMR (400MHz, CHLOROFORM-d) δ = 8.46 (s, 2H), 8.38 - 8.33 (m, 1H), 8.26 (td, J=1.9, 6.9 Hz, 1H), 7.53 - 7.44 (m, 2H), 5.02 (q, J=6.4 Hz, 1H), 4.31 - 4.12 (m, 2H), 3.95 (d, J=6.4 Hz, 2H), 2.78 (br t, J=12.1 Hz, 2H), 2.13 (br s, 1H), 2.08 - 1.96 (m, 1H), 1.86 (br d, J=12.9 Hz, 2H), 1.58 (d, J=6.5 Hz, 3H), 1.49 (s, 9H), 1.39 - 1.29 (m, 2H).
工程Ｃ：
０℃で、中間体１Ｂ（２２．７６ｇ、５５．０４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３００ｍＬ）溶液にジイソプロピルエチルアミン（２１．３４  ｇ、１６５．１２ｍｍｏｌ）及び塩化メタンスルホニル（９．１２ｇ、７９．６２ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を室温で１時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーは反応が完了したことを示した。反応液を飽和塩化アンモニウム溶液（２００ｍＬ）で二回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた中間体１Ｃ（３０ｇ，粗品）を次の工程に直接に使用した。
【００６１】
工程Ｄ：
室温で、中間体１Ｃ（１９ｇ、３８．６５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００ｍＬ）溶液に炭酸カリウム（１０．６８ｇ、７７．３０ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（６４１．５８ｍｇ、３．８６ｍｍｏｌ）及び５−ブロモ−３−フルオロ−１Ｈ−ピリジン−２−オン（１１．１３ｇ、５７．９７ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を９０℃で３時間撹拌した。反応が完了した後、反応液に酢酸エチル（３００ｍＬ）を添加し、かつ飽和食塩水（５００ｍＬ）で３回洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。中間体１Ｄ（５．８ｇ、２５．５４％収率）を得た。HNMR (400MHz, CHLOROFORM-d) δ = 8.47 (s, 2H), 8.41 - 8.32 (m, 2H), 7.55 - 7.47 (m, 1H), 7.39 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.15 (dd, J=2.4, 8.4 Hz, 1H), 7.11 - 7.07 (m, 1H), 6.52 (q, J=7.0 Hz, 1H), 4.31 - 4.12 (m, 2H), 4.01 - 3.93 (m, 2H), 2.87 - 2.72 (m, 2H), 2.09 - 1.98 (m, 1H), 1.89 - 1.80 (m, 5H), 1.49 (s, 9H), 1.39 - 1.30 (m, 2H).
工程Ｅ：
室温、窒素保護下で、中間体１Ｄ（２．０ｇ、３．４ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，３，２    −  ジオキサボロラン（１．０４ｇ、４．０９ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（６６８．２１ｍｇ、６．８１ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４９８．２０ｍｇ、６８０．８７μｍｏｌ）をジオキサン（３０ｍＬ）に溶解させた。反応液を９０℃で２時間撹拌した。反応が完了した後、中間体１Ｅのジオキサン溶液３０  ｍＬを得て、当該反応液を次の工程に直接に使用した。
【００６２】
工程Ｆ（１Ｆ−１、１Ｆ−２）：
室温、窒素保護下で、中間体１Ｅのジオキサン溶液３０  ｍＬ（１．９２ｇ、３．０３ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（６４２．３０ｍｇ、６．０６ｍｍｏｌ）、２−ブロモ−５−シアノピリジン（６６５．４２ｍｇ、３．６４ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４４３．４３ｍｇ、６０６．０μｍｏｌ）をジオキサン（４０ｍＬ）と水（６ｍＬ）に溶解させた。反応液を９０℃で３時間撹拌した。反応が完了した後、反応液を濾過し、ろ液に水（１００ｍＬ）を添加し、かつ酢酸エチル（６０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。粗品を分取プレートにより精製し、産品をＳＦＣ（カラムモデル：  ＡＳ（２５０ｍｍ×３０ｍｍ，１０ｕｍ）；移動相：［Ｂ：０．１％ＮＨ３Ｈ２Ｏ  ＥＴＯＨ］；Ｂ％：  ５５％〜５５％，１０ｍｉｎ；２００ｍｉｎｍｉｎ）により分離し、中間体１Ｆ−１（ｔ＝２．８１９，  ４９０ｍｇ、２６．０４％収率）と中間体１Ｆ−２（ｔ＝３．９３３，  ４８０ｍｇ、２５．９５％収率）を得た。
【００６３】
LCMS (ESI) m/z: 611 (M+1). 
HNMR （中間体1F-1）(400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.73 (dd, J=0.9, 5.0 Hz, 1H), 8.55 (s, 2H), 8.39 (s, 1H), 8.34 - 8.26 (m, 2H), 8.17 - 8.08 (m, 2H), 7.58 - 7.49 (m, 3H), 6.50 (q, J=7.2 Hz, 1H), 4.15 (br d, J=13.3 Hz, 2H), 4.06 (d, J=6.3 Hz, 2H), 2.84 (br s, 2H), 2.14 - 2.01 (m, 1H), 1.97 (d, J=7.3 Hz, 3H), 1.87 (br d, J=11.9 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.35 - 1.28 (m, 2H).  
HNMR （中間体1F-2）(400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.73 (dd, J=0.8, 5.0 Hz, 1H), 8.55 (s, 2H), 8.39 (s, 1H), 8.34 - 8.26 (m, 2H), 8.16 - 8.09 (m, 2H), 7.61 - 7.49 (m, 3H), 6.50 (q, J=7.2 Hz, 1H), 4.15 (br d, J=13.2 Hz, 2H), 4.06 (d, J=6.3 Hz, 2H), 2.84 (br s, 2H), 2.12 - 2.01 (m, 1H), 1.99 - 1.95 (m, 3H), 1.87 (br d, J=10.9 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.35 - 1.29 (m, 2H).
工程Ｇ（１Ｇ−１、１Ｇ−２）：
０℃で、中間体１Ｆ−１（４９０ｍｇ、７８６．０１μｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液にトリフルオロ酢酸（３ｍＬ）を添加した。反応液を室温で１時間撹拌した。反応が完了した後、反応液を濃縮し回転乾燥して、中間体１Ｇ−１（５０２ｍｇ、粗品）を得て、次の工程に直接に使用した。中間体１Ｇ−１の調製方法のように中間体１Ｇ−２（４９１ｍｇ、粗品）を得た。
【００６４】
工程Ｈ：
０℃で、中間体１Ｇ−１（５０２．００ｍｇ、８０３．７４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液にホルムアルデヒド水溶液（３２６．２７ｍｇ、４．０２ｍｍｏｌ，３７％純度）及びトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（５１１．０３ｍｇ，  ２．４１ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を室温で２時間撹拌した。反応が完了した後、反応液を水（５０ｍＬ）でクエンチさえ、ＤＣＭ（３０ｍＬ×２）で抽出した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた粗品を分取ＨＰＬＣにより精製した。実施例１−１（１５０ｍｇ、３５．４１％収率）を得た。
【００６５】
実施例１−１の調製方法のように中間体１Ｇ−２により実施例１−２（１００．６ｍｇ、２３．９１％収率）を得た。
実施例１−１：
LCMS (ESI) m/z: 525 (M+1).  
HNMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.73 (d, J=4.9 Hz, 1H), 8.56 (s, 2H), 8.49 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.34 - 8.26 (m, 2H), 8.18 - 8.09 (m, 2H), 7.61 - 7.49 (m, 3H), 6.50 (q, J=7.2 Hz, 1H), 4.13 (d, J=5.8 Hz, 2H), 3.53 (br d, J=12.4 Hz, 2H), 3.03 (br t, J=12.4 Hz, 2H), 2.87 (s, 3H), 2.27 - 2.08 (m, 3H), 1.97 (d, J=7.2 Hz, 3H), 1.81 - 1.63 (m, 2H).
実施例１−２：
LCMS (ESI) m/z: 525 (M+1).  
HNMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.72 (dd, J=0.8, 5.0 Hz, 1H), 8.61 - 8.46 (m, 3H), 8.38 (s, 1H), 8.33 - 8.25 (m, 2H), 8.16 - 8.08 (m, 2H), 7.58 - 7.47 (m, 3H), 6.49 (q, J=7.1 Hz, 1H), 4.12 (d, J=5.9 Hz, 2H), 3.50 (br d, J=12.2 Hz, 2H), 3.05 - 2.93 (m, 2H), 2.83 (s, 3H), 2.22 - 2.06 (m, 3H), 1.96 (d, J=7.2 Hz, 3H), 1.80 - 1.62 (m, 2H).
実施例２（２−１及び２−２）
【００６６】
【化１１】
2019535806.tif 000013
【００６７】
工程Ａ：  
室温、窒素保護下で、中間体１Ｄ（１．０ｇ×２，１．７０ｍｍｏｌ）、３−メチル−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）イソチアゾール（１．１５ｇ、５．１０ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム（１Ｍ，３．４ｍＬ）及び１，１−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルホスフィン）フェロセンパラジウムジクロリド（１１０．８０ｍｇ、１７０．００μｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解させた。反応液を７０℃で１６時間撹拌した。反応液を濾過して水（５０ｍＬ）を添加した。混合溶液を酢酸エチル（３０ｍＬ＊３）で抽出した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた粗品を分取ＨＰＬＣにより精製した。産品をＳＦＣ（カラムモデル：ＡＳ（２５０ｍｍ×３０ｍｍ，１０ｕｍ）；移動相：［０．１％ＮＨ３Ｈ２Ｏ  ＥＴＯＨ］；Ｂ％：  ３５％〜３５％，７．２ｍｉｎ；２００ｍｉｎｍｉｎ）を分離して、中間体２Ａ−１（ｔ＝２．５２９，５６０ｍｇ、２４．２８％収率）及び中間体２Ａ−２（ｔ＝３．４９４，５００ｍｇ、２７．１９％収率）を得た。
【００６８】
LCMS (ESI) m/z: 605 (M+1)。
HNMR （中間体2A-1）(400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.61 - 8.50 (m, 2H), 8.41 - 8.26 (m, 2H), 7.76 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.70 (dd, J=2.1, 10.0 Hz, 1H), 7.57 - 7.50 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.45 (q, J=7.1 Hz, 1H), 4.16 (br d, J=13.3 Hz, 2H), 4.07 (d, J=6.1 Hz, 2H), 2.85 (br s, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.08 (br s, 1H), 1.96 - 1.84 (m, 5H), 1.48 (s, 9H), 1.37 - 1.29 (m, 2H).
HNMR （中間体2A-2） (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.59 - 8.53 (m, 2H), 8.41 - 8.27 (m, 2H), 7.76 (s, 1H), 7.73 - 7.66 (m, 1H), 7.58 - 7.49 (m, 2H), 7.28 (d, J=2.8 Hz, 1H), 6.45 (q, J=6.9 Hz, 1H), 4.16 (br d, J=13.6 Hz, 2H), 4.06 (dd, J=3.9, 6.1 Hz, 2H), 2.94 - 2.78 (m, 2H), 2.44 (d, J=2.1 Hz, 3H), 2.07 (td, J=3.7, 9.6 Hz, 1H), 1.96 - 1.84 (m, 5H), 1.48 (s, 9H), 1.36 - 1.27 (m, 2H).
工程Ｂ：中間体１Ｇ−１の調製方法のように中間体２Ｂ−１及び中間体２Ｂ−２を得た。  
【００６９】
工程Ｃ：実施例１の調製方法のように実施例２−１及び２−２を得た。
実施例２−１：
LCMS (ESI) m/z: 520 (M+1). 
HNMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.73 (s, 2H), 8.35 (s, 1H), 8.29 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.86 - 7.81 (m, 1H), 7.72 (dd, J=2.3, 10.0 Hz, 1H), 7.64 - 7.58 (m, 2H), 7.36 (s, 1H), 6.45 (q, J=7.1 Hz, 1H), 4.21 (d, J=5.9 Hz, 2H), 3.63 (br d, J=12.4 Hz, 2H), 3.15 (br t, J=11.9 Hz, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.33 - 2.06 (m, 3H), 1.99 (d, J=7.2 Hz, 3H), 1.86 - 1.73 (m, 2H).
実施例２−２：
LCMS (ESI) m/z: 520 (M+1).  
HNMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.75 (s, 2H), 8.37 (s, 1H), 8.28 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.88 - 7.81 (m, 1H), 7.70 (dd, J=2.3, 10.0 Hz, 1H), 7.65 - 7.56 (m, 2H), 7.34 (s, 1H), 6.42 (q, J=7.1 Hz, 1H), 4.20 (d, J=5.9 Hz, 2H), 3.62 (br d, J=12.4 Hz, 2H), 3.12 (br t, J=11.9 Hz, 2H), 2.91 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.33 - 2.08 (m, 3H), 1.96 (d, J=7.2 Hz, 3H), 1.87 - 1.70 (m, 2H).
実施例３
【００７０】
【化１２】
2019535806.tif 000014
【００７１】
工程Ａ：
中間体１Ｄの調製方法のように中間体３Ｄを得た。
工程Ｂ：
中間体１Ｆの調製方法のように中間体３Ｅを得た。産品をＳＦＣ（カラムモデル：ＡＳ（２５０ｍｍ×３０ｍｍ，１０ｕｍ）；移動相：［０．１％ＮＨ３Ｈ２Ｏ  ＥＴＯＨ］；Ｂ％：４０％〜４０％，５ｍｉｎ；８０ｍｉｎｍｉｎ）により分離して中間体３Ｅ−１（ｔ＝２．８０５，３３ｍｇ、３３．０％収率）及び中間体３Ｅ−２（ｔ＝３．２５５，３３ｍｇ、３３．０％収率）を得た。LCMS (ESI) m/z: 588 (M+1).
工程Ｃ：
中間体１Ｇの調製方法のように中間体３Ｆ−１（５８０ｍｇ、粗品）、３Ｆ−２（５２０ｍｇ、粗品）を得た。
【００７２】
工程Ｄ：
実施例１の調製方法のように実施例３−１及び３−２を得た。
実施例３−１：
LCMS (ESI) m/z: 502 (M+1).  
HNMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.62 - 8.49 (m, 3H), 8.36 (s, 1H), 8.31 (br d, J=6.8 Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.77 (br d, J=9.4 Hz, 1H), 7.57 - 7.49 (m, 2H), 7.26 (s, 1H), 6.71 (d, J=9.4 Hz, 1H), 6.42 (q, J=6.6 Hz, 1H), 4.13 (br d, J=5.1 Hz, 2H), 3.50 (br d, J=11.9 Hz, 2H), 2.97 (br t, J=12.2 Hz, 2H), 2.83 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 2.24 - 2.06 (m, 3H), 1.91 (br d, J=7.1 Hz, 3H), 1.80 - 1.61 (m, 2H).
実施例３−２：
LCMS (ESI) m/z: 502 (M+1).  
HNMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.56 (s, 2H), 8.49 (br s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.30 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 7.91 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.77 (dd, J=2.4, 9.4 Hz, 1H), 7.56 - 7.49 (m, 2H), 7.26 (s, 1H), 6.70 (d, J=9.4 Hz, 1H), 6.41 (q, J=7.1 Hz, 1H), 4.13 (d, J=5.7 Hz, 2H), 3.54 (br d, J=12.3 Hz, 2H), 3.05 (br t, J=11.9 Hz, 2H), 2.87 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 2.21 - 2.08 (m, 3H), 1.91 (d, J=7.1 Hz, 3H), 1.79 - 1.67 (m, 2H).
実施例４
【００７３】
【化１３】
2019535806.tif 000015
【００７４】
工程Ａ：  
中間体１Ｄの調製方法のように中間体４Ａを得た。
工程Ｂ：  
中間体１Ｅの調製方法のように中間体４Ｂを得た。
【００７５】
工程Ｃ：  
中間体１Ｆの調製方法のように中間体４Ｃを得た。
工程Ｄ：  
中間体１Ｇの調製方法のように中間体４Ｄを得た。
【００７６】
工程Ｅ：  
実施例１の調製方法のように実施例４を得た。LCMS (ESI) m/z: 510 (M+1)。  HNMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.59 - 8.47 (m, 3H), 8.37 (s, 1H), 8.32 - 8.24 (m, 1H), 8.17 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.95 (dd, J=2.0, 7.3 Hz, 1H), 7.85 - 7.73 (m, 2H), 7.51 - 7.46 (m, 2H), 7.41 (dd, J=8.6, 10.5 Hz, 1H), 6.70 (d, J=9.5 Hz, 1H), 5.37 (s, 2H), 4.12 (d, J=5.8 Hz, 2H), 3.52 (br d, J=12.8 Hz, 2H), 3.08 - 2.96 (m, 2H), 2.85 (s, 3H), 2.26 - 2.09 (m, 3H), 1.79 - 1.63 (m, 2H).
実施例５
【００７７】
【化１４】
2019535806.tif 000016
【００７８】
工程Ａ：  
中間体１Ｄの調製方法のように中間体５Ａを得た。
工程Ｂ：  
中間体１Ｆの調製方法のように中間体５Ｂを得た。
【００７９】
工程Ｃ：  
中間体１Ｇの調製方法のように中間体５Ｃを得た。
工程Ｄ：
実施例１の調製方法のように実施例５を得た。LCMS (ESI) m/z: 506 (M+1)。HNMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.58 - 8.49 (m, 3H), 8.37 - 8.26 (m, 2H), 8.16 (dd, J=1.3, 2.1 Hz, 1H), 7.74 (dd, J=2.2, 10.2 Hz, 1H), 7.50 (d, J=5.3 Hz, 2H), 7.34 (s, 1H), 5.40 (s, 2H), 4.12 (d, J=5.8 Hz, 2H), 3.51 (br d, J=12.4 Hz, 2H), 3.06 - 2.94 (m, 2H), 2.84 (s, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.23 - 2.07 (m, 3H), 1.80 - 1.62 (m, 2H).
実施例６
【００８０】
【化１５】
2019535806.tif 000017
【００８１】
工程Ａ：  
中間体１Ｅの調製方法のように中間体６Ａを得た。
工程Ｂ：  
中間体１Ｆの調製方法のように中間体６Ｂを得た。
【００８２】
工程Ｃ：  
中間体１Ｇの調製方法のように中間体６Ｃを得た。
工程Ｄ：
実施例１の調製方法のように実施例６を得た。LCMS (ESI) m/z: 493 (M+1)。HNMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.75 (d, J=5.0 Hz, 1H), 8.69 (d, J=2.4 Hz, 1H), 8.58 - 8.43 (m, 3H), 8.34 (s, 1H), 8.30 - 8.22 (m, 2H), 8.13 (s, 1H), 7.55 (dd, J=1.1, 5.0 Hz, 1H), 7.51 - 7.44 (m, 2H), 6.71 (d, J=9.5 Hz, 1H), 5.39 (s, 2H), 4.10 (d, J=5.9 Hz, 2H), 3.54 (br d, J=12.0 Hz, 2H), 3.04 (br t, J=12.0 Hz, 2H), 2.87 (s, 3H), 2.23 - 2.07 (m, 3H), 1.79 - 1.65 (m, 2H).
実施例７
【００８３】
【化１６】
2019535806.tif 000018
【００８４】
工程Ａ：  
０℃、窒素ガス保護下、かつ撹拌下で、ｔｅｒｔ−ブチル−４−（ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−カルボキシレート（６８．００ｇ、３１５．８５ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（８１．６４ｇ、６３１．７１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（８００ｍＬ）溶液に塩化メタンスルホニル（４５．１５ｇ、３９４．１５ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下が完了した後に、２５℃で２時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより反応の完了を検出した。反応液を飽和塩化アンモニウム溶液（５００ｍＬ×２）及び飽和食塩水（３００ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、中間体７Ａ（赤色油状液体，９５．００ｇ、１００％収率）を得て、精製することなく、次の工程に使用した。
【００８５】
工程Ｂ：
２５℃、窒素ガス保護下で、中間体７Ａ（９４．４０ｇ、３２１．７７ｍｍｏｌ）及び２−クロロピリミジン−５−オール（３５．００ｇ、２６８．１４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．００Ｌ）液に、炭酸カリウム（７４．１２ｇ、５３６．２８ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を８０℃で１６時間反応させ、薄層クロマトグラフィーにより反応の完了を検出した。反応液を室温に冷却し、濃縮し、残留物に水（５００ｍＬ）を添加し、酢酸エチル（３００ｍＬ＊３）で抽出し、有機相を飽和食塩水（４００ｍＬ×２）で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、中間体７Ｂ（淡黄色固体，８４．００ｇ、９５．０５％収率）を得た。LCMS (ESI) m/z: 327.7 (M+1).  1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.08 - 1.25 (m, 2 H) 1.40 (s, 9 H) 1.69 - 1.78 (m, 2 H) 1.88 - 2.03 (m, 1 H) 2.58 - 2.88 (m, 2 H) 3.89 - 4.05 (m, 4 H) 8.50 - 8.57 (m, 2 H)
工程Ｃ：
窒素ガス保護下で、中間体７Ｂ（８４．００ｇ、２５４．８５ｍｍｏｌ）、［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］ボロン酸（４２．６０ｇ、２８０．３４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（１７．８９ｇ、２５．４９ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（７０．４５ｇ、５０９．７１ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１．００升）と水（２００．００ｍＬ）の混合溶液の中に、８０℃で撹拌し１６時間反応させた。反応液を室温に冷却して、濾過し、ジクロロメタン（５００ｍＬ×３）で抽出し、有機層を合わせ、飽和食塩水（５００ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残留物をメタノールで再結晶させて、中間体７Ｃ（白色固体，７７．６０ｇ、７６．２２％収率）を得た。LCMS (ESI) m/z: 400.1 (M+1).  1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.14 - 1.31 (m, 2 H) 1.45 (s, 9 H) 1.75 - 1.87 (m, 2 H) 1.95 - 2.10 (m, 1 H) 2.66 - 2.93 (m, 2 H) 3.94 - 4.22 (m, 4 H) 4.63 (d, J=5.62 Hz, 2 H) 5.34 (t, J=5.81 Hz, 1 H) 7.41 - 7.54 (m, 2 H) 8.21 (d, J=7.46 Hz, 1 H) 8.35 (s, 1 H) 8.68 (s, 2 H)
工程Ｄ：
０℃、窒素ガス保護下、かつ撹拌下で、中間体７Ｃ（１０．００ｇ、２５．０３ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（６．４７ｇ、５０．０６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１００．００ｍＬ）溶液に塩化メタンスルホニル（３．４４ｇ、３０．０４ｍｍｏｌ）を添加した。滴下が完了した後に、２５℃で２時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより反応の完了を検出した。反応液を飽和塩化アンモニウム溶液（５００ｍＬ＊２）及び飽和食塩水（３００ｍＬ＊２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、中間体７Ｄ（灰色固体，１４．００ｇ、１００％  収率）を得て、精製することなく、次の工程に直接に使用した。LCMS (ESI) m/z: 478.1 (M+1).
工程Ｅ：
２５℃、窒素ガス保護下で、中間体７Ｄ（１２．００ｇ、２５．１３ｍｍｏｌ）及び５−ブロモ−３−フルオロ−１−ヒドロ−ピリジン−２−オン（５．７９ｇ、３０．１６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００．００ｍＬ）溶液に、炭酸カリウム（６．９５ｇ、５０．２６ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を９０℃で３時間反応させ、薄層クロマトグラフィーにより反応の完了を検出した。反応液を室温に冷却し、濃縮し、残留物に水（１００ｍＬ）を添加し、酢酸エチル（１００ｍＬ×３）で抽出し、有機相を飽和食塩水（２００ｍＬ×２）で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、中間体７Ｅ（黄色固体，９．６０ｇ、６６．６２％収率）を得た。LCMS (ESI) m/z: 574.9 (M+1).  1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.09 - 1.27 (m, 2 H) 1.41 (s, 9 H) 1.77 (br d, J=11.13 Hz, 2 H) 1.90 - 2.10 (m, 1 H) 2.62 - 2.91 (m, 2 H) 3.87 - 4.14 (m, 4 H) 5.16 - 5.30 (m, 2 H) 7.39 - 7.52 (m, 2 H) 7.76 (dd, J=9.66, 2.45 Hz, 1 H) 8.14 - 8.19 (m, 1 H) 8.24 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 8.28 (s, 1 H) 8.65 (s, 2 H)
工程Ｆ：
窒素ガス保護下で、中間体７Ｅ（２００．００ｍｇ、３４８．７７μｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，３，２−ジオキサボロラン（９２．９９ｍｇ、３６６．２１μｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２５．５２ｍｇ、３４．８８μｍｏｌ）及び酢酸カリウム（１０２．６８ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１０．００ｍＬ）との混合溶液中に、７０℃で２時間反応させ、中間体７Ｆのジオキサン溶液を得た。反応液を処理することなく次の工程に直接に使用した。
【００８６】
工程Ｇ：
窒素ガス保護下で、中間体７Ｆのジオキサン溶液（２１０．００ｍｇ、３３８．４３μｍｏｌ）、２−ブロモピリジン−４−カルボニトリル（１８５．８１ｍｇ，  １．０２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２・ＣＨ２Ｃｌ２（５５．２８ｍｇ、６７．６９μｍｏｌ）及び炭酸カリウム（９３．５５ｍｇ、６７６．８６μｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１０．００ｍＬ）と水（２．００ｍＬ）との混合溶液に、８０℃で３時間撹拌反応させた。反応液を室温に冷却し、濾過し、濃縮した。残留物を水（５０ｍＬ）で溶解し、酢酸エチル（３０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（３０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残留物を分取薄層クロマトグラフィーにより精製して中間体７Ｇ（黄色固体，５０．００ｍｇ、２４．７６％収率）を得た。LCMS (ESI) m/z: 619.2 (M+23). 
工程Ｈ：
０℃、窒素ガス保護下で、中間体７Ｇ（５０．００ｍｇ、８３．８０μｍｏｌ）のジクロロメタン（１０．００ｍＬ）溶液にトリフルオロ酢酸（４．６２ｇ、４０．５２ｍｍｏｌ，３．００ｍＬ）を滴下した。反応物を２５℃で１時間撹拌した。反応物を濃縮乾燥して、中間体７Ｈ（ブラウン黒油状液体，６０．００ｍｇ、１００％収率，トリフルオロ酢酸塩）を得て、精製することなく、次の工程に直接に使用した。LCMS (ESI) m/z: 497.2 (M+1).
工程Ｉ：
０℃、窒素ガス保護下で、中間体７Ｈ（５０．００ｍｇ、１００．７０μｍｏｌ）のジクロロメタン（５．００ｍＬ）溶液にホルムアルデヒド（４０．８７ｍｇ、５０３．５０μｍｏｌ，３７．５０μＬ，３７％水溶液）及びトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（６４．０３ｍｇ、３０２．１０μｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で１６時間反応させ、濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例７（２１．７０ｍｇ、３８．４８％収率，ギ酸塩）を得た。LCMS (ESI) m/z: 511.1 (M+1). 1HNMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.27 - 1.43 (m, 2 H) 1.77 (br d, J=9.78 Hz, 3 H) 1.99 (br t, J=11.43 Hz, 2 H) 2.22 (s, 3 H) 2.85 (br d, J=11.37 Hz, 2 H) 4.05 (d, J=5.99 Hz, 2 H) 5.39 (s, 2 H) 7.50 (d, J=5.01 Hz, 2 H) 7.75 (dd, J=5.01, 1.22 Hz, 1 H) 8.18 - 8.26 (m, 2 H) 8.28 (s, 1 H) 8.33 (s, 1 H) 8.40 (s, 1 H) 8.64 (s, 2 H) 8.78 (d, J=1.34 Hz, 1 H) 8.82 (d, J=5.01 Hz, 1 H)
実施例８（８−１及び８−２）
【００８７】
【化１７】
2019535806.tif 000019
【００８８】
工程Ａ：  
窒素ガス保護下で、中間体１Ｄ（１．５０ｇ、２．５５ｍｍｏｌ）、トリブチル（１−エトキシエチレン）スズ（１．１４ｇ、３．１６ｍｍｏｌ，１．０７ｍＬ）及びＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（３５８．４３ｍｇ、５１０．６６μｍｏｌ）をトルエン（１０．００ｍＬ）の溶液に、１００℃で３時間撹拌反応させた。反応液を室温に冷却し、塩酸（１０．２１ｍＬ，１Ｎ水溶液）を添加し、２５℃で１時間撹拌した。濾過し、濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製して中間体８Ａ（黄色油状液体，１．１３ｇ、８０．４８％収率）を得た。LCMS (ESI) m/z: 573.1 (M+23).  1HNMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.50 (s, 9 H) 1.89 (d, J=7.03 Hz, 6 H) 1.98 - 2.10 (m, 2 H) 2.31 (s, 3 H) 2.72 - 2.86 (m, 2 H) 3.98 (d, J=6.27 Hz, 2 H) 4.12 - 4.31 (m, 2 H) 6.54 (q, J=7.28 Hz, 1 H) 7.42 (br d, J=7.65 Hz, 1 H) 7.61 (dd, J=9.66, 2.26 Hz, 1 H) 7.65 - 7.74 (m, 1 H) 7.84 (d, J=1.38 Hz, 1 H) 8.38 (d, J=7.78 Hz, 1 H) 8.42 (s, 1 H) 8.47 (s, 2 H)
工程Ｂ：
窒素ガス保護下で、中間体８Ａ（１．１３ｇ、２．０５ｍｍｏｌ）を１，１−ジメトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−エタン（５．００ｍＬ）の溶液に、１２０℃で３時間撹拌反応させた。反応液を室温に冷却し、反応物を濃縮乾燥し、中間体８Ｂ（棕黒色油状液体，１．２７ｇ、１００％収率）を得て、精製することなく次の工程に直接に使用した。LCMS (ESI) m/z: 620.1 (M+1).
工程Ｃ：  
窒素ガス保護下で、中間体８Ｂ（１．２７ｇ、２．０５ｍｍｏｌ）のエタノール（２０．００ｍＬ）溶液にヒドロキシルアミン（２１３．６１ｍｇ、３．０８ｍｍｏｌ，塩酸塩）を添加した。混合物を８０℃で１６時間反応させ、濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製し、ラセメートを分取ＳＦＣ（カラムモデル：ＡＳ（２５０ｍｍ×３０ｍｍ，１０ｕｍ）；移動相：［０．１％  ＮＨ３−Ｈ２Ｏ  ＥＴＯＨ］；Ｂ％：０％〜５５％，５．２ｍｉｎ；１５０ｍｉｎｍｉｎ）により分割して、中間体８Ｃ−１（白色固体，３８０．００ｍｇ、３１．４４％収率，１００％  ｅｅ値，Ｒｔ＝２．４３１ｍｉｎ）及び中間体８Ｃ−２（白色固体，３５０．００ｍｇ、２８．９５％収率，１００％  ｅｅ値，Ｒｔ＝３．２９９ｍｉｎ）を得た。LCMS (ESI) m/z: 590.4 (M+1).  1HNMR（中間体8C-1） (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.31 - 1.38 (m, 2 H) 1.50 (s, 9 H) 1.82 - 1.94 (m, 5 H) 1.97 - 2.12 (m, 1 H) 2.29 (s, 3 H) 2.79 (br t, J=12.23 Hz, 2 H) 3.98 (d, J=6.36 Hz, 2 H) 4.21 (br s, 2 H) 6.06 (s, 1 H) 6.59 (d, J=6.97 Hz, 1 H) 7.33 (dd, J=9.41, 2.20 Hz, 1 H) 7.40 - 7.46 (m, 1 H) 7.48 - 7.55 (m, 1 H) 7.56 - 7.62 (m, 1 H) 8.36 (d, J=7.70 Hz, 1 H) 8.43 (s, 1 H) 8.47 (s, 2 H ).  
1HNMR（中間体8C-2） (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.30 - 1.37 (m, 2 H) 1.49 (s, 9 H) 1.81 - 1.94 (m, 5 H) 1.96 - 2.10 (m, 1 H) 2.29 (s, 3 H) 2.79 (br t, J=12.10 Hz, 2 H) 3.98 (d, J=6.24 Hz, 2 H) 4.20 (br s, 2 H) 6.06 (s, 1 H) 6.59 (q, J=7.05 Hz, 1 H) 7.33 (dd, J=9.29, 2.20 Hz, 1 H) 7.41 - 7.46 (m, 1 H) 7.48 - 7.54 (m, 1 H) 7.59 (d, J=1.59 Hz, 1 H) 8.36 (d, J=7.82 Hz, 1 H) 8.42 (s, 1 H) 8.47 (s, 2 H)
工程Ｄ：  
中間体１Ｇの調製方法のように中間体８Ｄ−１、８Ｄ−２を得た。  
【００８９】
工程Ｅ：
実施例１の調製方法のように実施例８−１、８−２を得た。
実施例８−１
LCMS (ESI) m/z: 504.1 (M+1).  
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.54 - 1.72 (m, 2 H) 1.85 - 2.13 (m, 6 H) 2.24 (s, 3 H) 2.69 - 2.80 (m, 3 H) 2.86 - 3.16 (m, 2 H) 3.19 - 3.52 (m, 2 H) 4.09 (d, J=6.27 Hz, 2 H) 6.29 (q, J=7.07 Hz, 1 H) 6.78 (s, 1 H) 7.47 - 7.60 (m, 2 H) 7.92 (dd, J=10.42, 2.13 Hz, 1 H) 8.08 (s, 1 H) 8.21 - 8.35 (m, 2 H) 8.62 - 8.75 (m, 2 H) 10.37 - 10.80 (m, 1 H)
実施例８−２
LCMS (ESI) m/z: 504.1 (M+1).  
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.57 - 1.74 (m, 2 H) 1.81 - 2.12 (m, 6 H) 2.23 (s, 3 H) 2.62 - 2.79 (m, 3 H) 2.86 - 3.05 (m, 2 H) 3.41 (br d, J=11.92 Hz, 2 H) 4.09 (d, J=6.27 Hz, 2 H) 6.29 (q, J=6.99 Hz, 1 H) 6.79 (s, 1 H) 7.53 (d, J=5.02 Hz, 2 H) 7.92 (dd, J=10.48, 2.07 Hz, 1 H) 8.08 (s, 1 H) 8.20 - 8.34 (m, 2 H) 8.61 - 8.73 (m, 2 H) 10.75 (br s, 1 H)
実施例9
【００９０】
【化１８】
2019535806.tif 000020
【００９１】
工程Ａ：
窒素ガス保護下で、中間体３Ｄ（１．００ｇ、１．７６ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，３，２−ジオキサボロラン（４６９．２８ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１２８．７８ｍｇ、１７６．００μｍｏｌ）及び酢酸カリウム（５１８．１８ｍｇ、５．２８ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１５．００  ｍＬ）の混合溶液に、８０℃で２時間撹拌反応させた。中間体９Ａのジオキサン溶液を得て、反応液を処理することなく次の工程に直接に使用した。
【００９２】
工程Ｂ：
窒素ガス保護下で、中間体９Ａジオキサン溶液（１．０９ｇ、１．７７ｍｍｏｌ）、２−ブロモピリジン−４−カルボニトリル（４８５．８９ｍｇ、２．６６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２・ＣＨ２Ｃｌ２（２８９．０９ｍｇ、３５４．００μｍｏｌ）及び炭酸カリウム（４８９．２６ｍｇ、３．５４ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２０．００ｍＬ）と水（４．００ｍＬ）との混合溶液に、８０℃で３時間撹拌反応させた。反応液を室温に冷却し、濾過し、濃縮した。残留物を分取薄層クロマトグラフィーにより精製して、分取ＳＦＣ（カラムモデル：ＡＳ（２５０ｍｍ×３０ｍｍ，１０ｕｍ）；移動相：［０．１％  ＮＨ３−Ｈ２Ｏ  ＥＴＯＨ］；Ｂ％：５５％〜５５％，８．２ｍｉｎ；１００ｍｉｎｍｉｎ）により分割し、中間体９Ｂ−１（黄色油状液体，２００．００ｍｇ、１００％  ｅｅ値，１９．０６％収率，Ｒｔ＝２．９７３ｍｉｎ）及び中間体９Ｂ−２（黄色油状液体，２００．００ｍｇ、１００％  ｅｅ値，１９．０６％収率，Ｒｔ＝３．６０５ｍｉｎ）を得た。LCMS (ESI) m/z: 593.1 (M+1). 
工程Ｃ：
中間体１Ｇの調製方法のように中間体９Ｃ−１、９Ｃ−２を得た。  
【００９３】
工程Ｄ：
実施例１の調製方法のように実施例９−１、９−２を得た。
実施例９−１
LCMS (ESI) m/z: 507.1 (M+1).  1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.29 - 1.45 (m, 2 H) 1.80 (br d, J=10.54 Hz, 3 H) 1.88 (d, J=7.28 Hz, 3 H) 2.14 (br t, J=11.17 Hz, 2 H) 2.30 (s, 3 H) 2.94 (br d, J=11.29 Hz, 2 H) 4.05 (d, J=6.02 Hz, 2 H) 6.32 (d, J=7.15 Hz, 1 H) 6.62 (d, J=9.66 Hz, 1 H) 7.46 - 7.55 (m, 2 H) 7.69 (dd, J=5.02, 1.25 Hz, 1 H) 8.19 - 8.26 (m, 3 H) 8.27 (s, 1 H) 8.43 (t, J=1.07 Hz, 1 H) 8.49 (d, J=2.38 Hz, 1 H) 8.64 (s, 2 H) 8.77 (dd, J=5.02, 0.88 Hz, 1 H)
実施例９−２
LCMS (ESI) m/z: 507.1 (M+1).  1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.27 - 1.46 (m, 2 H) 1.81 (br d, J=10.54 Hz, 3 H) 1.89 (d, J=7.28 Hz, 3 H) 2.17 (br t, J=11.17 Hz, 2 H) 2.31 (s, 3 H) 2.96 (br d, J=11.29 Hz, 2 H) 4.09 (d, J=6.02 Hz, 2 H) 6.35 (d, J=7.15 Hz, 1 H) 6.65 (d, J=9.66 Hz, 1 H) 7.42 - 7.57 (m, 2 H) 7.66 (dd, J=5.02, 1.25 Hz, 1 H) 8.21 - 8.27 (m, 3 H) 8.29 (s, 1 H) 8.45 (t, J=1.07 Hz, 1 H) 8.51 (d, J=2.38 Hz, 1 H) 8.67 (s, 2 H) 8.79 (dd, J=5.02, 0.88 Hz, 1 H)
実施例10
【００９４】
【化１９】
2019535806.tif 000021
【００９５】
工程Ａ：
窒素ガス保護下で、中間体４Ａ（２００．００ｍｇ、３４６．５３μｍｏｌ）、１−メチル−４−（、４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピラゾール（１０８．１５ｍｇ、５１９．８０μｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２５．３６ｍｇ、３４．６５μｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（１１０．１９ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１０．００ｍＬ）の溶液に、８０℃で２時間撹拌反応させた。反応液を室温に冷却し、濾過し、濃縮した。残留物を水（６０ｍＬ）に溶解し、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出し、有機層を合わせ、飽和食塩水（８０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残留物を分取薄層クロマトグラフィーにより精製し、中間体１０Ｂ（黄色油状液体，２００．００ｍｇ、９５．４５％収率）を得た。LCMS (ESI) m/z: 557.3 (M+1).
工程Ｂ：
中間体１Ｇの調製方法のように中間体１０Ｃを得た。  
【００９６】
工程Ｃ：
実施例１の調製方法のように実施例１０を得た。LCMS (ESI) m/z: 471.2 (M+1).  1HNMR (400 MHz, METHANOL-d4): 1.63 - 1.80 (m, 2 H) 2.09 - 2.25 (m, 3 H) 2.88 (s, 3 H) 3.05 (t, J=12.17 Hz, 2 H) 3.55 (d, J=12.67 Hz, 2 H) 3.91 (s, 3 H) 4.12 (d, J=5.90 Hz, 2 H) 5.34 (s, 2 H) 6.67 (d, J=9.41 Hz, 1 H) 7.42 - 7.51 (m, 2 H) 7.75 (s, 1 H) 7.81 (dd, J=9.35, 2.57 Hz, 1 H) 7.88 (s, 1 H) 8.05 (d, J=2.38 Hz, 1 H) 8.25 - 8.29 (m, 1 H) 8.33 (s, 1 H) 8.47 (s, 1 H) 8.55 (s, 2 H).
実施例11
【００９７】
【化２０】
2019535806.tif 000022
【００９８】
工程Ａ：
０℃、窒素ガス保護下で、３−メチルイソチアゾール−５−アミン（５．００ｇ、３３．１９ｍｍｏｌ，塩酸塩）の水（１４．００ｍＬ）と硫酸（１０．００ｍＬ，９８％純度）との混合溶液に、亜硝酸ナトリウム（２．５２ｇ、３６．５１ｍｍｏｌ）の水（５０ｍＬ）溶液を滴ずつ添加し、反応液を０℃で１時間撹拌し、ヨウ化カリウム（６．０６ｇ、３６．５１ｍｍｏｌ）の水（３５ｍＬ）溶液を添加し、８０℃で１時間反応させた。反応液を室温に冷却し、水（１００ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（５０ｍＬ×２）で抽出し、有機層を合わせ、飽和食塩水（２５ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製して中間体１１Ａ（黄色固体，４．００ｇ、５３．５５％収率）を得た。LCMS (ESI) m/z: 225.9 (M+1). 1HNMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 2.39 - 2.48 (m, 3 H) 7.04 - 7.13 (m, 1 H)
工程Ｂ：  
−２５℃、窒素ガス保護下で、中間体１１Ａ（１．００ｇ、４．４４ｍｍｏｌ）及び２−イソプロポキシ−４，４，５，５、−１，３，２−ジオキサボロラン（８５０ｍｇ、４．５７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５．００ｍＬ）溶液に、イソプロピルマグネシウムクロリド−塩化リチウム複合体（３．６６ｍＬ，１．３Ｍテトラヒドロフラン溶液）を滴ずつ添加し、反応液を−２５℃で０．５時間撹拌した。反応が完了した後、酢酸（０．２４ｍＬ）のテトラヒドロフラン（０．６７ｍＬ）溶液を添加して反応をクエンチさせ、反応液に石油エーテル（４８ｍＬ）及びｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（２４ｍＬ）を添加し、濾過し、ろ液にｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（３２ｍＬ）を添加し、濾過し、濃縮した。中間体１１Ｂ（黄色油状液体，５１２ｍｇ、５１．２２％収率）を得て、さらに精製することなく次の工程に直接に使用した。1HNMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.28 (s, 12 H) 2.46 - 2.48 (m, 3 H) 7.31 (s, 1 H)。
【００９９】
工程Ｃ：
窒素ガス保護下で、中間体１１Ｂ（２８３．６９ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）、中間体４Ａ（５００．００ｍｇ、９００．１５μｍｏｌ）、１，１−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルホスフィン）フェロセンパラジウムクロリド（５８．６７ｍｇ，  ９０．０２μｍｏｌ）及びリン酸カリウム三水和物（４７９．４４ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５．００ｍＬ）と水（１．００ｍＬ）との混合溶液に、６５℃で１２時間撹拌反応させた。反応液を室温に冷却し、濾過し、濃縮した。残留物を水（５０ｍＬ）で溶解し、酢酸エチル（１００ｍＬ×２）で抽出し、有機層を合わせ、飽和食塩水（５０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残留物を分取薄層クロマトグラフィーにより精製し、中間体１１Ｃ（黄色固体，２６６．００ｍｇ、５１．５１％収率）を得た。LCMS (ESI) m/z: 574.2 (M+1).  1HNMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.27 - 1.34 (m, 6 H) 1.60 - 1.64 (m, 10 H) 1.60 - 1.65 (m, 10 H) 1.83 - 1.91 (m, 2 H) 1.95 (s, 1 H) 2.46 - 2.52 (m, 3 H) 3.95 - 4.01 (m, 2 H) 5.28 - 5.31 (m, 2 H) 6.71 - 6.77 (m, 1 H) 6.94 - 6.97 (m, 1 H) 7.39 - 7.56 (m, 3 H) 7.63 - 7.68 (m, 1 H) 8.37 (s, 2 H) 8.47 (s, 2 H)
工程Ｄ：
中間体１Ｆの調製方法のように中間体１１Ｄを得た。LCMS (ESI) m/z: 474.2 (M+1). 
工程Ｅ：
実施例１の調製方法のように実施例１１を得た。LCMS (ESI) m/z: 488.2 (M+1).  1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.37 (br d, J=10.54 Hz, 2 H) 1.79 (br d, J=10.04 Hz, 3 H) 2.11 (br s, 2 H) 2.26 - 2.31 (m, 3 H) 2.40 - 2.44 (m, 3 H) 2.89 - 2.97 (m, 2 H) 4.01 - 4.09 (m, 2 H) 5.25 (s, 2 H) 6.57 (d, J=9.41 Hz, 1 H) 7.45 (d, J=11.80 Hz, 3 H) 7.79 (dd, J=9.41, 2.64 Hz, 1 H) 8.20 - 8.26 (m, 2 H) 8.29 (s, 1 H) 8.53 - 8.56 (m, 1 H) 8.62 - 8.66 (m, 2 H).
実施例12
【０１００】
【化２１】
2019535806.tif 000023
【０１０１】
工程Ａ：
フェニルイソシアネート（８３０．７４ｍｇ、６．９７ｍｍｏｌ）のニトロエタン（２６１．７７ｍｇ、３．４９ｍｍｏｌ，２４９．３０μＬ）溶液にトリエチルアミン（３２．０８ｍｇ、３１７．００μｍｏｌ，４３．９４μＬ）を添加し、５０℃で３０分間撹拌した後に、トリブチル（エチニル）スタンナン（１．００ｇ、３．１７ｍｍｏｌ）のトルエン（８．００ｍＬ）溶液を添加し、反応液を５０℃で５時間反応させた。薄層クロマトグラフィーにより反応の完了を検出した。反応液に水（１００ｍＬ）を添加し、酢酸エチル（１００ｍＬ）で抽出した。有機相を飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、ロータリーエバポレーターで濃縮乾燥し、残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製し、中間体１２Ａ（黄色油状液体，７００．００ｍｇ、４２．１３％収率）を得た。LCMS (ESI) m/z: 373.14 (M+1).  1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 0.82 - 0.85 (m, 9 H) 0.97 - 1.11 (m, 6 H) 1.20 - 1.34 (m, 12 H) 1.49 - 1.52 (m, 3 H) 7.18 - 7.20 (m, 1 H)
工程Ｂ：
２０℃で、中間体４Ａ（２００．００ｍｇ、３６０．０６μｍｏｌ）のジオキサン（４．００ｍＬ）溶液に中間体１２Ａ（２００．００ｍｇ、３４８．７７μｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（２５．２７ｍｇ、３６．０１μｍｏｌ）を添加し、その後、窒素ガス保護下で１００℃に加熱し、１２時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより反応の完了を検出した。反応液に水（５０ｍＬ）を添加し、酢酸エチル（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機相を飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、ロータリーエバポレーターで濃縮乾燥し、残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製し、中間体１２Ｂ（黄色固体，１１０．００ｍｇ、４２．１８％収率）を得た。LCMS (ESI) m/z: 557.26 (M+1).  1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.21 - 1.31 (m, 4 H) 1.40 (s, 9 H) 1.72 - 1.81 (m, 2 H) 1.89 - 1.98 (m, 1 H) 2.22 (s, 3 H) 2.70 (br s, 2 H) 3.88 (d, J=6.36 Hz, 2 H) 5.21 (s, 2 H) 6.02 (s, 1 H) 6.63 (d, J=9.54 Hz, 1 H) 7.33 - 7.37 (m, 1 H) 7.50 (dd, J=9.54, 2.57 Hz, 1 H) 7.57 - 7.64 (m, 1 H) 7.83 (d, J=2.32 Hz, 1 H) 8.23 - 8.31 (m, 2 H) 8.38 (s, 2 H)
工程Ｃ：
中間体１Ｇの調製方法のように中間体１２Ｃを得た。LCMS (ESI) m/z: 457.21 (M+1).
工程Ｄ：
実施例１の調製方法のように実施例１２を得た。LCMS (ESI) m/z: 471.23 (M+1).  1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.14 - 1.21 (m, 2 H) 1.49 (br s, 2 H) 1.79 - 1.95 (m, 3 H) 1.99 (s, 2 H) 2.24 (s, 3 H) 2.38 - 2.38 (m, 1 H) 2.46 (s, 3 H) 3.12 (br d, J=10.92 Hz, 2 H) 5.29 (s, 2 H) 6.65 (s, 1 H) 7.47 (br s, 1 H) 7.82 - 7.90 (m, 1 H) 8.29 (br s, 2 H) 8.63 (s, 2 H)
実験例１：  ｃ−ＭＥＴ酵素結合活性実験
試薬及び消耗品：
ｃＭＥＴ  （ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＰＶ３１４３）
Ｔｒａｃｅｒ  ２３６  （Ｌｏｔ  Ｎｕｍｂｅｒ：  １０８１５９７８）
Ｅｕ−Ａｎｔｉ−Ｈｉｓ  ＡＢ  （ＭＡｂ  Ａｎｔｉ  ６ＨＩＳ−Ｋ）
ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  会社Ｅｎｖｉｓｏｎ検出６６５ｎｍと６１５ｎｍ  
３８４ウェルプレート＿アッセイプレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＃６００７２９９）
実験原理：
本実験はＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎＴＭ  Ｅｕ  キナーゼ結合アッセイ（ＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎＴＭ  Ｅｕ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ａｓｓａｙ）を利用し、図１に示されるように、Ｅｕを添加し、抗体を標記することで、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒコンジュゲート又はキナーゼ「トレーサー」結合を検出した。トレーサーと、抗体及びキナーゼとの結合は、高度のＦＲＥＴを引き起こし、これに対し、トレーサーの代わりに、キナーゼ阻害化合物を使用すると、ＦＲＥＴの喪失をもたらす。
実験方法：  
１）抗体Ｅｕ−Ａｎｔｉ−Ｈｉｓ  ＡＢ、酵素ｃＭＥＴ、トレーサーＴｒａｃｅｒ２３６を希釈した。
【０１０２】
２）化合物の調製：１０ｍＭ試験化合物及び参照化合物を１００％ＤＭＳＯで０．６６７  ｍＭに希釈し、全自動マイクロプレート前処理システムＥＣＨＯを使用して３倍希釈し、８つの濃度勾配とし、二重反復ウェルを設置し、１ウェルあたり７５ｎＬとした。
【０１０３】
３）化合物のプレートに７．５ｕＬ抗体（１／３７５ｎＭ）とキナーゼ（１０ｎＭ）との混合物を添加し、さらに７．５ｕＬ  Ｔｒａｃｅｒ（６０ｎＭ）を添加した。反応最終濃度：ｃＭＥＴ：５ｎＭ，  Ｔｒａｃｅｒ  ２３６：  ３０ｎＭ，  Ｅｕ−Ａｎｔｉ−Ｈｉｓ  ＡＢ  （ＭＡｂ  Ａｎｔｉ  ６ＨＩＳ−Ｋ）：  １／７５０ｎＭ。
【０１０４】
４）４℃で６０分間インキュベートした後に、マルチラベルマイクロプレートリーダーＥｎｖｉｓｉｏｎを使用して読取りを行った。（６６５ｎｍ／６１５ｎｍ信号値をＰｒｉｓｍ  ５でデータ分析を行った；Ｅｘ励起光：Ｌａｓｅｒ  ｍｉｒｒｏｒ４４６  Ｅｍ放射光：６１５  及び  ６６５ｎＭ  ）。
実験結果：表１を参照する。
結論：本発明化合物はｃ−ＭＥＴ酵素に対して強い阻害活性を有する。
【０１０５】
【表１】
2019535806.tif 000024
【０１０６】
実験例２：  細胞増殖抑制効果テスト
試薬及び消耗品：
１．細胞培養：ＤＭＥＭ培地、ウシ胎児血清、ＤＰＢＳ
２．細胞株：ＭＨＣＣ９７−Ｈ
３．検出試薬：生細胞検出キットＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ
４．その他の主な消耗品及び試薬：化合物希釈プレート、中間プレート、アッセイプレート、ＤＭＳＯ
実験原理：
ＡＴＰの含有量は細胞数及び細胞の状態を直接に反映しており、ＡＴＰを定量的に測定することによって生細胞数を検出することができる。生細胞検出キットにはルシフェラーゼとその基質が含まれており、ルシフェラーゼはＡＴＰの関与により基質を触媒し、安定した光シグナルを発し、シグナルの強度を検出することによって細胞内のＡＴＰ量を測定する。そのうち、光信号は細胞内のＡＴＰの量に比例し、ＡＴＰは生細胞の数と正の相関があり、それによって細胞増殖を検出することができる。アッセイプレートは、ＰＥ社のＥｎｖｉｓｉｏｎによって分析した。
実験方法：
１．細胞プレートの調製
ＭＨＣＣ９７−Ｈ細胞を１ウェルあたり５００個の細胞を含むように、３８４ウェルプレートに別々に播種した。細胞プレートを二酸化炭素インキュベーターに入れて一晩中インキュベートした。
【０１０７】
２．化合物の準備
Ｅｃｈｏを用いて４倍希釈し、９つの化合物濃度とし、二重反復ウェル実験を設置した。
【０１０８】
３．化合物による細胞の処理
化合物を１０μＭの開始濃度で細胞プレートに移した。細胞プレートを二酸化炭素インキュベーター中で３日間インキュベートした。
【０１０９】
４．検出
Ｐｒｏｍｅｇａ  ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬を細胞プレートに添加し、室温で１０分間インキュベートして発光シグナルを安定化させた。読取りは、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチラベルアナライザーを用いてを行った。
実験結果：表２を参照する。
結論：本発明化合物はＭＨＣＣ９７Ｈ細胞に対して優れた阻害活性を示した。
【０１１０】
【表２】
2019535806.tif 000025
【０１１１】
実験例３：ＭＨＣＣ９７Ｈ肝臓癌細胞の皮下異種移植腫瘍モデルの薬力学的実験
細胞培養：
ＭＨＣＣ９７Ｈ細胞体外単層培養、培養条件はＲＰＭＩ１６４０培地に１０％熱不活化ウシ胎児血清、１％ペニシリン−ストレプトマイシン二重抗体を添加し、３７℃  ５％ＣＯ２で培養した。トリプシン−ＥＤＴＡを用いて継代を週に２回、日常的に消化した。細胞が対数増殖期にあるとき、細胞を収穫し、計数し、そして接種した。
動物：
ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス、雄。６〜８週齢、体重１８〜２２ｇ。
腫瘍接種：
５×１０＾６個のＭＨＣＣ９７Ｈを含む細胞懸濁液０．２ｍｌを各マウスの右背中の皮下に接種した。腫瘍の平均体積が約１７２ｍｍ３に達したときにグループ毎に投与を開始した。実験では、グループ分け及び投与スケジュールを以下の表に示す。
【０１１２】
実験指標：実験指標とは、腫瘍増殖が抑制されているか、遅延されているか、又は治癒されているかを調べることである。ノギスを用いて週に２回腫瘍直径を測定した。腫瘍体積の計算式は、Ｖ＝０．５ａ×ｂ２であり、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長径及び短径を表す。化合物の腫瘍抑制効果（ＴＧＩ）は、Ｔ−Ｃ（日数）及びＴ／Ｃ（％）によって評価された。
実験結果：表３を参照する。
結論：本発明化合物は、ＭＨＣＣ９７Ｈ肝臓癌細胞の皮下異種移植腫瘍モデルの薬力学的実験においてＴｅｐｏｔｉｎｉｂより良い腫瘍抑制効果を示した。
【０１１３】
【表３】
2019535806.tif 000026
【０１１４】
本発明化合物は、ｔｅｐｏｔｉｎｉｂよりも優れた代謝安定性を有する。例えば、実施例１−２では、ヒト、ラット及びマウスの三つの種における肝臓粒子代謝のｔ１／２は、それぞれ６２．１分、３６．５分及び４９．１分であった。同じ条件下で、ｔｅｐｏｔｉｎｉｂはヒト、ラット及びマウスの三つの種における肝臓粒子代謝のｔ１／２は、それぞれ４８．３分、１０．５分及び１２．４分であった。本発明化合物は、半減期が増加し、標的に対する作用時間が延長し、代謝安定性が増強するので、より優れた阻害活性を有する。半減期の延長は、血中濃度を長期間維持することができる。従って、化合物が腫瘍治療に適用され、そして患者の投与量又は投与回数が同じ薬物と比較して減少し、そして患者コンプライアンスが顕著に改善されることが予測され得る。
【０１１５】
ｃ−ＭＥＴとＨＧＦとが結合した後に、ＭＡＰＫ、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、Ｃｄｃ４２／Ｒａｃ１などの経路を活性化するため、癌細胞の生存及び増殖をもたらし、それによって腫瘍増殖を促進する。したがって、ｃ−ＭＥＴ阻害剤としてのピリドン系の化合物は、肝臓癌、非小細胞肺癌、及び胃癌などの標的治療薬において大きな応用の見込みがある。特に肝臓癌の治療において、このような化合物はｃ−ＭＥＴの高発現を伴う肝臓癌に対して正確な治療効果を有する。従って、ピリドン系のｃ−ＭＥＴ阻害剤としての本発明化合物は、インビボ及びインビトロでのその顕著な阻害活性及び良好な代謝安定性の観点から、類似の製品よりも有効な新規薬物になると期待される。
【国際調査報告】
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