(57)【要約】本発明は、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を投与することにより、非虚血性拡張型心筋症を有する対象を治療する方法を提供する。本発明は、また、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を投与することにより、加齢による脆弱の症状を有する対象を治療する方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における非虚血性拡張型心筋症を治療する方法であって、
治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、
前記対象の血清試料中の疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中の疲弊Ｂ細胞の数と比較して少なくとも２５％減少し、それによって前記非虚血性拡張型心筋症を治療する、方法。
【請求項２】
対象における非虚血性拡張型心筋症を治療する方法であって、
治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、
前記対象の血清試料中のスイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のスイッチメモリーＢ細胞の数と比較して少なくとも１００％増加し、それによって前記非虚血性拡張型心筋症を治療する、方法。
【請求項３】
対象における非虚血性拡張型心筋症を治療する方法であって、
治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、
前記対象の血清試料中の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数と比較して少なくとも３０％減少し、それによって前記非虚血性拡張型心筋症を治療する、方法。
【請求項４】
対象における非虚血性拡張型心筋症を治療する方法であって、
治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、
前記対象の血清試料中の早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中の早期活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも３０％減少し、それによって前記非虚血性拡張型心筋症を治療する、方法。
【請求項５】
対象における非虚血性拡張型心筋症を治療する方法であって、
治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、
前記対象の血清試料中の慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中の慢性活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも７０％減少し、それによって前記非虚血性拡張型心筋症を治療する、方法。
【請求項６】
対象における非虚血性拡張型心筋症を治療する方法であって、
治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、
前記対象の血清試料中のＴｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のＴｅｍｒａ細胞の数と比較して少なくとも４０％減少し、それによって前記非虚血性拡張型心筋症を治療する、方法。
【請求項７】
対象における非虚血性拡張型心筋症を治療する方法であって、
治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、
前記対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度と比較して少なくとも８０％減少し、それによって前記非虚血性拡張型心筋症を治療する、方法。
【請求項８】
対象における加齢による脆弱の症状を治療する方法であって、
治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、
前記対象の血清試料中の疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中の疲弊Ｂ細胞の数と比較して少なくとも１０％減少し、それによって前記加齢による脆弱の症状を治療する、方法。
【請求項９】
対象における加齢による脆弱の症状を治療する方法であって、
治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、
前記対象の血清試料中のスイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のスイッチメモリーＢ細胞の数と比較して少なくとも７５％増加し、それによって前記加齢による脆弱の症状を治療する、方法。
【請求項１０】
対象における加齢による脆弱の症状を治療する方法であって、
治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、
前記対象の血清試料中の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数と比較して少なくとも６０％減少し、それによって前記加齢による脆弱の症状を治療する、方法。
【請求項１１】
対象における加齢による脆弱の症状を治療する方法であって、
治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、
前記対象の血清試料中の早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中の早期活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも３０％減少し、それによって前記加齢による脆弱の症状を治療する、方法。
【請求項１２】
対象における加齢による脆弱の症状を治療する方法であって、
治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、
前記対象の血清試料中の慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中の慢性活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも７５％減少し、それによって前記加齢による脆弱の症状を治療する、方法。
【請求項１３】
対象における加齢による脆弱の症状を治療する方法であって、
治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、
前記対象の血清試料中のＴｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のＴｅｍｒａ細胞の数と比較して少なくとも２０％減少し、それによって前記加齢による脆弱の症状を治療する、方法。
【請求項１４】
対象における加齢による脆弱の症状を治療する方法であって、
治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、
前記対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度と比較して少なくとも５０％減少し、それによって前記加齢による脆弱の症状を治療する、方法。
【請求項１５】
対象における加齢による脆弱の症状を治療する方法であって、
治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、
前記対象の血清試料中のＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比と比較して少なくとも１００％増加し、それによって前記加齢による脆弱の症状を治療する、方法。
【請求項１６】
前記対象がヒトである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記対象が加齢に伴う炎症を示している、請求項８〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記間葉系幹細胞が骨髄由来の間葉系幹細胞である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記間葉系幹細胞がＳＴＲＯ−１を発現していない、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記間葉系幹細胞がＣＤ４５を発現していない、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記間葉系幹細胞が線維芽細胞表面マーカーを発現していない、又は線維芽細胞形態を有していない、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記間葉系幹細胞が遺伝子操作されていない、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
同種間葉系幹細胞の前記単離された集団が単一用量で投与される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
同種間葉系幹細胞の前記単離された集団が２つ以上の用量で投与される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
同種間葉系幹細胞の前記単離された集団が少なくとも年１回投与される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
同種間葉系幹細胞の前記単離された集団が全身に投与される、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
同種間葉系幹細胞の前記単離された集団が点滴又は直接注射によって投与される、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
同種間葉系幹細胞の前記単離された集団が静脈内、動脈内、又は腹腔内に投与される、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
同種間葉系幹細胞の前記単離された集団が静脈内に投与される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
同種間葉系幹細胞の前記単離された集団が筋肉注射で、静脈内に、動脈内に、腹腔内に、皮下に、皮内に、経口で、経心内膜で、又は鼻腔内に投与される、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
同種間葉系幹細胞の前記単離された集団が筋肉注射で投与される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
同種間葉系幹細胞の前記単離された集団が約２０×１０６個の間葉系幹細胞の用量で投与される、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
同種間葉系幹細胞の前記単離された集団が約１００×１０６個の間葉系幹細胞の用量で投与される、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
同種間葉系幹細胞の前記単離された集団が約２００×１０６個の間葉系幹細胞の用量で投与される、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
同種間葉系幹細胞の前記単離された集団がヒトドナーから得られ、及び同種間葉系幹細胞の前記単離された集団を前記対象に投与する前に、前記対象へのヒトドナーのＭＨＣマッチングのステップは用いられない、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
対象における細胞性及び体液性免疫状態を評価する方法であって、
（１）対象が以前に非虚血性拡張型心筋症の治療を必要としており、前記対象に初期用量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を投与したという決定に基づいて、評価のために選択された対象から血清試料を得るステップと、
（２）（ｉ）アッセイされるバイオマーカーを検出するために、特異的に結合する１つ又は複数の抗体と前記血清試料を接触させ、（ｉｉ）１つ又は複数のアッセイ結果を提供するためにそれぞれの抗体への、アッセイされる各バイオマーカーの結合を示す１つ又は複数のアッセイ結果を生成するアッセイ機器へ、前記対象から得た前記血清試料を導入することによって、疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）、及び血清ＴＮＦ−αからなる群から選択される非虚血性拡張型心筋症マーカーを検出するために構成された１つ又は複数のアッセイを行うステップと、
（３）前記アッセイ機器によって生成された前記アッセイ結果を前記対象の免疫状態と関連付けるステップであって、前記アッセイ結果に基づいて免疫状態の１つ又は複数の将来の変化の可能性を前記対象に割り当てることを含むステップと、
（４）前記対象が割り当てられている個体の所定の部分集団に基づいて前記対象を治療するステップであって、同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団の１つ又は複数の追加用量の投与を含むステップと
を含む方法。
【請求項３７】
対象における細胞性及び体液性免疫状態を評価する方法であって、
（１）対象が以前に加齢による脆弱の症状の治療を必要としており、前記対象に初期用量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を投与したという決定に基づいて、評価のために選択された対象から血清試料を得るステップと、
（２）（ｉ）アッセイされるバイオマーカーを検出するために、特異的に結合する１つ又は複数の抗体と前記血清試料を接触させ、（ｉｉ）１つ又は複数のアッセイ結果を提供するためにそれぞれの抗体への、アッセイされる各バイオマーカーの結合を示す１つ又は複数のアッセイ結果を生成するアッセイ機器へ、前記対象から得た前記血清試料を導入することによって、疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）、ＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比、及び血清ＴＮＦ−αからなる群から選択される加齢による脆弱マーカーを検出するために構成された１つ又は複数のアッセイを行うステップと、
（３）前記アッセイ機器によって生成された前記アッセイ結果を前記対象の免疫状態と関連付けるステップであって、前記アッセイ結果に基づいて免疫状態の１つ又は複数の将来の変化の可能性を前記対象に割り当てることを含むステップと、
（４）前記対象が割り当てられている個体の所定の部分集団に基づいて前記対象を治療するステップであって、同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団の１つ又は複数の追加用量の投与を含むステップと
を含む方法。
【請求項３８】
前記免疫状態の１つ又は複数の将来の変化は、疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）の数の増加、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）の数の減少、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数の増加、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）の数の増加、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）の数の増加、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）の数の増加、ＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比の減少、及び血清ＴＮＦ−αの増加、のうちの１つ又は複数を含む、請求項３６又は３７に記載の方法。
【請求項３９】
対象における非虚血性拡張型心筋症の治療の有効性を決定するインビトロの方法であって、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団の前記対象への投与前後に前記対象から得られた血清中の、疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）、及びＴＮＦ−α濃度からなる群から選択される１つ又は複数のバイオマーカーのレベルを決定するステップと、前記単離されたヒト間葉系幹細胞の集団の投与前後に得られた前記血清中の前記１つ又は複数のバイオマーカーのレベルを比較するステップとを含み、治療が、
（１）疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の疲弊Ｂ細胞の数と比較して少なくとも２５％減少している、
（２）スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前のスイッチメモリーＢ細胞の数と比較して少なくとも１００％増加している、
（３）細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数と比較して少なくとも３０％減少している、
（４）早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の早期活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも３０％減少している、
（５）慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の慢性活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも７０％減少している、
（６）Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前のＴｅｍｒａ細胞の数と比較して少なくとも４０％減少している、及び／又は
（７）前記対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度と比較して少なくとも８０％減少している
場合に有効である、インビトロの方法。
【請求項４０】
対象における加齢による脆弱の症状の治療の有効性を決定するインビトロの方法であって、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団の前記対象への投与前後に前記対象から得られた血清中の、疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）、ＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比、及びＴＮＦ−α濃度からなる群から選択される１つ又は複数のバイオマーカーのレベルを決定するステップと、前記単離されたヒト間葉系幹細胞の集団の投与前後に得られた前記血清中の前記１つ又は複数のバイオマーカーのレベルを比較するステップとを含み、治療が、
（１）疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の疲弊Ｂ細胞の数と比較して少なくとも１０％減少している、
（２）スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前のスイッチメモリーＢ細胞の数と比較して少なくとも７５％増加している、
（３）細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数と比較して少なくとも６０％減少している、
（４）早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の早期活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも３０％減少している、
（５）慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の慢性活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも７５％減少している、
（６）Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前のＴｅｍｒａ細胞の数と比較して少なくとも２０％減少している、
（７）前記対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度と比較して少なくとも５０％減少している、及び／又は、
（８）前記対象の血清試料中のＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の前記集団を投与する前の前記対象の血清試料中のＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比と比較して少なくとも１００％増加している
場合に有効である、インビトロの方法。
【請求項４１】
非虚血性拡張型心筋症の治療に有効であるかどうか決定するための、血清中の疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）のレベル、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）のレベル、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞のレベル、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）のレベル、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）のレベル、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）のレベル、及びＴＮＦ−α濃度のインビトロでの使用。
【請求項４２】
加齢による脆弱の治療に有効であるかどうか決定するための、血清中の疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）のレベル、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）のレベル、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞のレベル、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）のレベル、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）のレベル、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）のレベル、ＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比、及びＴＮＦ−α濃度のインビトロでの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]本発明は、非虚血性拡張型心筋症を患う対象において、細胞性及び体液性免疫を達成するために治療有効量の同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する方法に関する。本発明また、加齢による脆弱の症状を患う対象において、細胞性及び体液性免疫を達成するために治療有効量の同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
[0002]加齢による脆弱及び加齢に伴う炎症（ｉｎｆｌａｍｍａｇｉｎｇ）
加齢による脆弱は、個体の全体的な健康状態及び健康に関する非常に懸念される問題を提起し、多系統生理的調節異常の症候群として特徴付けられる。加齢による脆弱は、脱力、低い身体活動、運動能力の低下、疲労、及び意図しない体重減少を特徴とする高齢者症候群である。Ｙａｏ，Ｘ．ら、Ｃｌｉｎｉｃｓ  ｉｎ  Ｇｅｒｉａｔｒｉｃ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２７（１）：７９〜８７（２０１１）を参照。さらに、加齢による脆弱と炎症との間の直接的相関を示す多くの研究がある。Ｈｕｂｂａｒｄ，Ｒ．Ｅ．ら、Ｂｉｏｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ、１１（５）：６３５〜６４１（２０１０）を参照。
【０００３】
[0003]免疫老化は、加齢に伴う炎症として知られた、低グレード、慢性全身炎症性状態によって特徴付けられる。Ｆｒａｎｃｅｓｈｉ，Ｃ．ら、Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、９０８：２４４〜２５４（２０００）を参照。加齢及び加齢による脆弱において見られる炎症性状態又は慢性炎症がこのように増大することは、免疫調節異常並びに先天性及び適応性免疫の両方の複雑なリモデリングをもたらす。免疫老化において、Ｔ細胞及びＢ細胞の守備範囲はゆがめられ、結果としてＣＤ４５ｒａ（ＴＥＭＲＡ）を再発現しているＣＤ８＋Ｔエフェクターメモリー細胞及びＣＤ１９＋後期／疲弊したメモリーＢ細胞が増加し、並びにＣＤ８＋ナイーブＴ細胞及びスイッチメモリーＢ細胞（ｓｗｉｔｃｈｅｄ  ｍｅｍｏｒｙ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ）（ＣＤ２７＋）が減少する。Ｂｌｏｍｂｅｒｇ，Ｂ．Ｂ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５７（１〜３）：３５４〜３６０（２０１３）；  Ｃｏｌｏｎｎａ−Ｒｏｍａｎｏ，Ｇ．ら、Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ａｇｅｉｎｇ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、１３０（１０）：６８１〜６９０（２００９）；及びＫｏｃｈ  Ｓ．ら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ＆  Ａｇｅｉｎｇ：５：６（２００８）を参照。Ｔ細胞及びＢ細胞の守備範囲におけるこのようなシフトは、難治性又は効率の悪い免疫状態をもたらす。全身性炎症（ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＮＦγ及びＣＲＰ）の加齢に伴う増加は、Ｂ細胞機能障害を誘導することはよく知られている。
【０００４】
[0004]加齢に伴う炎症は、免疫の変化と老齢期に共通の多数の疾患及び状態（加齢による脆弱のような）との関連性を示唆しているため、かなりの注目を集めている。サイトカイン及び急性期タンパク質のような血中炎症性メディエータは、加齢とともに増加することが観察されている低グレード炎症マーカーである。これらの炎症誘発性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６）は、外来性の抗原及びワクチンに対する防御抗体を作るＢ細胞の能力を損なう。この障害を受けたＢ細胞応答は、アイソタイプをＩｇＭから二次アイソタイプ（ＩｇＧ、ＩｇＡ、又はＩｇＥ）にスイッチする免疫グロブリンの能力である低減されたクラススイッチ組換え（ＣＳＲ）によって測定される。エフェクター機能がアイソタイプ毎に異なるので、免疫グロブリンアイソタイプスイッチングは適切な免疫応答にとって極めて重要である。ＣＳＲ及び体細胞超変異（ＳＨＭ）において中心となって働くのは、Ａｉｃｄａ遺伝子によってコードされる、活性化誘導シチジンデアミナーゼ（ＡＩＤ）という酵素である。ＣＳＲ及びＳＨＭにおけるＡＩＤの基本的機能は、免疫グロブリンのスイッチ領域及び可変領域でシトシンをウラシルに変換することによってＤＮＡを切断することである。Ｔｃｆｅ２ａ（Ｅ２Ａ）遺伝子によってコードされるＥ４７は、Ｅタンパク質としても知られた、クラスＩ塩基性へリックス−ループ−へリックス（ｂＨＬＨ）タンパク質に属する転写因子である。Ｅ４７が発現しないと、Ｂ細胞特異的転写因子のＥＢＦ１（早期Ｂ細胞因子）及びＰａｘ−５（ペアードボックスタンパク質）は発現しない。Ｅ４７及びＰａｘ−５の両者は、Ｂ細胞系統及び成熟Ｂ細胞機能の早期発生において重要な転写因子である。Ｈａｇｍａｎ  Ｊ．ら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、２７（１）：８〜１０（２００７）；  Ｈｏｒｃｈｅｒ  Ｍ．ら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１４（６）：７７９〜７９０（２００１）；Ｒｉｌｅｙ  Ｒ．Ｌ．ら、Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１７（５）：３３０〜３３６（２００５）を参照。Ｐａｘ−５遺伝子は、Ｂ細胞分化の全ステージで発現されるが最終的に分化したＢ細胞では発現されないＢ細胞系統特異的活性化因子タンパク質（ＢＳＡＰ）をコードする。Ｐａｘ−５は、Ｂ系統の不適当な遺伝子を抑制し、Ｂ細胞特異的遺伝子を活性化することによってＢ細胞のコミットメントを制御することから、Ｂ細胞ゲートキーパーであり、コミットメントしたプロＢ細胞から成熟Ｂ細胞ステージまでのＢリンパ系統においてのみ発現される。Ｂ細胞特異的転写因子であるＰａｘ−５は、早期Ｂ細胞発生及びＢ細胞系統のコミットメントにおいて非常に重要であるばかりでなく、ＣＳＲにも関わっている。
【０００５】
[0005]産生されたＴＮＦ−αの量は、（１）システムの炎症の量に依存し、（２）マイトジェン又は抗原で刺激される同一のＢ細胞の能力を損なうことがヒトにおいても示された。Ｆｒａｓｃａ，  Ｄ．ら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１８８（１）：２７９〜２８６（２０１２）を参照。したがって、加齢による脆弱を患う対象の免疫応答は、多数の原因のために損なわれている。
【０００６】
[0006]非虚血性拡張型心筋症（ＮＩＤＣＭ）
非虚血性拡張型心筋症（ＮＩＤＣＭ）は、現在の治療法がない、多くの場合最終的に心臓移植になる進行性の障害である。Ｆｅｌｋｅｒ，  Ｇ．Ｍ．ら、Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３４２：１０７７〜８４（２０００）、及びＫｉｒｋｌｉｎ，Ｊ．Ｋ．ら、Ｊ．Ｈｅａｒｔ  Ｌｕｎｇ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．、３５：４０７〜４１２（２０１６）を参照。ＮＩＤＣＭは、根底の病因として免疫調節異常の主要な要素を有する障害である。Ｅｆｔｈｉｍｉａｄｉｓ，Ｉ．ら、Ｈｉｐｐｏｋｒａｔｉａ、１５：３３５〜３４２（２０１１）、及びＭｅｎｇ，Ｘ．ら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ、１３：１６７〜７９（２０１６）を参照。心臓疾患のための細胞ベースの療法は、同種療法を開発する上で大きな課題と機会を伴う、評価を受けている有望な新しい治療戦略である。Ｐａｔｅｌ，Ａ．Ｎ．ら、Ｌａｎｃｅｔ、３８７：２４１２〜２１（２０１６）；Ａｓｓｍｕｓ，Ｂ．ら、Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３５５：１２２２〜３２（２００６）；Ｈａｒｅ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．、５４：２２７７〜８６（２００９）；Ｈｅｌｄｍａｎ，Ａ．Ｗ．ら、ＪＡＭＡ、３１１：６２〜７３（２０１４）；Ｐｅｒｉｎ，Ｅ．Ｃ．ら、ＪＡＭＡ、３０７：１７１７〜２６（２０１２）；Ｇｏｌｐａｎｉａｎ，Ｓ．ら、Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．、９６：１１２７〜６８（２０１６）；及びＨａｒｅ，Ｊ．Ｍ．ら、ＪＡＭＡ、３０８：２３６９〜７９（２０１２）を参照。
【０００７】
[0007]間葉系幹細胞
間葉系幹細胞は、損傷部位に移動することができる多能性細胞であり、主要な組織適合複合体クラスＩＩ（ＭＨＣ−ＩＩ）分子を検出可能なほどには発現せず、ＭＨＣ−Ｉ分子を低レベルで発現することによって免疫特権も有する。Ｌｅ  Ｂｌａｎｃ，Ｋ．ら、Ｌａｎｃｅｔ、３７１（９６２４）：１５７９〜１５８６（２００８）、及びＫｌｙｕｓｈｎｅｎｋｏｖａ  Ｅ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．、１２（１）：４７〜５７（２００５）を参照。したがって、同種間葉系幹細胞は、治療及び再生医療に非常に有望であり、複数の疾患過程に対する臨床試験において高い安全性及び有効性プロファイルを有することが繰り返し示されてきた。Ｈａｒｅ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ、５４（２４）：２２７７〜２２８６（２００９）；Ｈａｒｅ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｔｅｘ．Ｈｅａｒｔ  Ｉｎｓｔ．Ｊ．、３６（２）：１４５〜１４７（２００９）；及びＬａｌｕ，Ｍ．Ｍ．ら、ＰｌｏＳ  Ｏｎｅ、７（１０）：ｅ４７５５９（２０１２）を参照。同種間葉系幹細胞はまた、患者への移植後に悪性形質転換を受けないことが示されている。Ｔｏｇｅｌ  Ｆ．ら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｎａｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、２８９（１）：Ｆ３１〜Ｆ４２（２００５）を参照。間葉系幹細胞を用いた治療は、重症の移植片対宿主疾患を改善し、虚血性急性腎不全を予防し、糖尿病における膵島及び腎糸球体の修復に寄与し、劇症肝不全を回復に向かわせ、損傷した肺組織を再生し、敗血症を軽減し、及び心筋梗塞後にリモデリングを逆転し、及び心筋機能を改善することが示されている。Ｌｅ  Ｂｌａｎｃ  Ｋ．ら、Ｌａｎｃｅｔ、３７１（９６２４）：１５７９〜１５８６（２００８）；Ｈａｒｅ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ、５４（２４）：２２７７〜２２８６（２００９）；Ｔｏｇｅｌ  Ｆ．ら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｎａｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、２８９（１）：Ｆ３１〜Ｆ４２（２００５）；Ｌｅｅ  Ｒ．Ｈ．ら、ＰＮＡＳ、１０３（４６）：１７４３８〜１７４４２（２００６）；Ｐａｒｅｋｋａｄａｎ，Ｂ．ら、ＰｌｏＳ  Ｏｎｅ、２（９）：ｅ９４１（２００７）；Ｉｓｈｉｚａｗａ  Ｋ．ら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、５５６（１〜３）：２４９〜２５２（２００４）；Ｎｅｍｅｔｈ  Ｋ．ら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１５（１）：４２〜４９（２００９）；Ｉｓｏ  Ｙ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．、３５４（３）：７００〜７０６（２００７）；Ｓｃｈｕｌｅｒｉ  Ｋ．Ｈ．ら、Ｅｕｒ．Ｈｅａｒｔｈ  Ｊ．、３０（２２）：２７２２〜２７３２（２００９）；及びＨｅｌｄｍａｎ  Ａ．Ｗ．ら、ＪＡＭＡ、３１１（１）：６２〜７３（２０１４）を参照。さらに、間葉系幹細胞は、組織工学において使用するための複数の細胞タイプの潜在的な供給源でもある。Ｇｏｎｇ  Ｚ．ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．、６９８：２７９〜２９４（２０１１）；Ｐｒｉｃｅ，Ａ．Ｐ．ら、Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅ��ｉｎｇ  Ｐａｒｔ  Ａ、１６（８）：２５８１〜２５９１（２０１０）；及びＴｏｇｅｌ  Ｆ．ら、Ｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ、７（２）：９６〜１００（２０１１）を参照。
【０００８】
[0008]間葉系幹細胞は、免疫調節性の能力を有する。間葉系幹細胞は、免疫抑制毒性の兆候なしに、炎症並びにリンパ球及び骨髄由来免疫細胞のサイトカイン産生を制御し、及び低免疫原性である。Ｂｅｒｎａｒｄｏ  Ｍ．Ｅ．ら、Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ、１３（４）：３９２〜４０２（２０１３）を参照。
【０００９】
[0009]間葉系幹細胞は、中胚葉起源の細胞ばかりでなく、内胚葉及び外胚葉起源の細胞へ分化する能力も有する。Ｌｅ  Ｂｌａｎｃ  Ｋ．ら、Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．、３１（１０）：８９０〜８９６（２００３）を参照。例えば、インビトロでは、気道増殖培地で培養された間葉系幹細胞は分化して肺特異的上皮マーカー、例えば、サーファクタントタンパク質Ｃ、Ｃｌａｒａ細胞分泌タンパク質、及び甲状腺転写因子１を発現する。Ｊｉａｎｇ  Ｙ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、４１８（６８９３）：４１〜４９（２００２）及びＫｏｔｔｏｎ  Ｄ．Ｎ．ら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、１２８（２４）：５１８１〜５１８８（２００１）を参照。
【００１０】
[00010]インビボ研究は、ヒト間葉系幹細胞が、ヒツジ胎仔に移植されると、筋細胞及び心筋細胞を含む様々な細胞タイプへの部位特異的分化を受けることを示した。Ａｉｒｅｙ  Ｊ．Ａ．ら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１０９（１１）：１４０１〜１４０７（２００４）を参照。これらの間葉系幹細胞は、免疫抑制されていない免疫適格性宿主において、移植後、複数の組織において１３カ月間も持続し得る。齧歯動物、イヌ、ヤギ、及びヒヒを使用した他のインビボ研究は、同様に、ヒト間葉系幹細胞異種移植片がレシピエントにおいてリンパ球増殖又は全身性同種抗体産生を誘発しないことを実証している。Ｋｌｙｕｓｈｎｅｎｋｏｖａ  Ｅ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．、１２（１）：４７〜５７（２００５）；Ａｇｇａｒｗａｌ  Ｓ．ら、Ｂｌｏｏｄ、１０５（４）：１８１５〜２２（２００５）；Ａｕｇｅｌｌｏ  Ａ．ら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ、５６（４）：１１７５〜８６（２００７）；Ｂａｒｔｈｏｌｏｍｅｗ  Ａ．ら、Ｅｘｐ  Ｈｅｍａｔｏｌ．、３０（１）：４２〜４８（２００２）；Ｄｏｋｉｃ  Ｊ．ら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、４３（７）：１８６２〜７２（２０１３）；Ｇｅｒｄｏｎｉ  Ｅ．ら、Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、６１（３）：２１９〜２２７（２００７）；Ｌｅｅ  Ｓ．Ｈ．ら、Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１１：１６（２０１０）；Ｕｒｂａｎ  Ｖ．Ｓ．ら、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ、２６（１）：２４４〜２５３  （２００８）；Ｙａｎｇ  Ｈ．ら、ＰｌｏＳ  Ｏｎｅ、８（７）：ｅ６９１２９（２０１３）；Ｚａｐｐｉａ  Ｅ．ら、Ｂｌｏｏｄ、１０６（５）：１７５５〜１７６１（２００５）；Ｂｏｎｆｉｅｌｄ  Ｔ．Ｌ．ら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、２９９（６）：Ｌ７６０〜７０（２０１０）；Ｇｌｅｎｎ  Ｊ．Ｄ．ら、Ｗｏｒｌｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ．、６（５）：５２６〜３９（２０１４）；Ｇｕｏ  Ｋ．ら、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２：８（２０１４）；Ｐｕｉｓｓａｎｔ  Ｂ．ら、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ、１２９（１）：１１８〜１２９（２００５）；及びＳｕｎ  Ｌ．ら、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  ２７（６）：１４２１〜３２（２００９）を参照。全体的に見て、同種の安全性及び有効性のこれらの反復された研究結果は、間葉系幹細胞を組織再生の成功のための同種移植片として使用するための考えを固める。
【００１１】
[00011]しかし、安全な治療薬であるにもかかわらず、間葉系幹細胞は、抗体産生並びにＢ細胞の増殖及び成熟に対して抑制効果を発揮すると文献に報告されている。Ｕｃｃｅｌｌｉ，Ａ．ら、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２８（５）：２１９〜２２６（２００７）を参照。間葉系幹細胞は、また、抗原提示細胞の生成及び機能を阻害すると報告されている。Ｈｏｏｇｄｕｉｊｎ  Ｍ．Ｊ．ら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１０（１２）：１４９６〜１５００（２０１０）を参照。最終的に、間葉系幹細胞は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を抑制すると報告されている。Ｇｈａｎｎａｍ  Ｓ．ら、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．＆Ｔｈｅｒ．、１：２（２０１０）を参照。最終的に、いくつかの前臨床データは、自己間葉系幹細胞の投与と比較して、同種間葉系幹細胞の投与による免疫学的クリアランスの危険性が高いことを示す。例えば、Ｈｕａｎｇ，Ｘ．Ｐ．ら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１２２：２４１９〜２９（２０１０）を参照。
【発明の概要】
【００１２】
[00012]驚いたことに、間葉系幹細胞が免疫系の側面に抑制効果を及ぼすという報告にもかかわらず、本発明人は、対象における非虚血性拡張型心筋症を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を見いだした。本発明人はまた、対象における加齢による脆弱の症状を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を見いだした。本発明人は、血清中の疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）のレベル、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）のレベル、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞のレベル、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）のレベル、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）のレベル、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）のレベル、ＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比、及びＴＮＦ−α濃度を含むがこれに限定されるものではない非虚血性拡張型心筋症及び加齢による脆弱に対して特異的ないくつかのバイオマーカーを同定した。
【００１３】
[00013]本発明の一態様は、対象における非虚血性拡張型心筋症を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、対象の血清試料中の疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の対象の血清試料中の疲弊Ｂ細胞の数と比較して少なくとも２５％減少し、それによって非虚血性拡張型心筋症を治療する、方法に関する。
【００１４】
[00014]本発明の他の態様は、対象における非虚血性拡張型心筋症を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、対象の血清試料中のスイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の対象の血清試料中のスイッチメモリーＢ細胞の数と比較して少なくとも１００％増加し、それによって非虚血性拡張型心筋症を治療する、方法に関する。
【００１５】
[00015]本発明の他の態様は、対象における非虚血性拡張型心筋症を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、対象の血清試料中の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の対象の血清試料中の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数と比較して少なくとも３０％減少し、それによって非虚血性拡張型心筋症を治療する、方法に関する。
【００１６】
[00016]本発明の他の態様は、対象における非虚血性拡張型心筋症を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、対象の血清試料中の早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の対象の血清試料中の早期活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも３０％減少し、それによって非虚血性拡張型心筋症を治療する、方法に関する。
【００１７】
[00017]本発明の他の態様は、対象における非虚血性拡張型心筋症を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、対象の血清試料中の慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の対象の血清試料中の慢性活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも７０％減少し、それによって非虚血性拡張型心筋症を治療する、方法に関する。
【００１８】
[00018]本発明の他の態様は、対象における非虚血性拡張型心筋症を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、対象の血清試料中のＴｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の対象の血清試料中のＴｅｍｒａ細胞の数と比較して少なくとも４０％減少し、それによって非虚血性拡張型心筋症を治療する、方法に関する。
【００１９】
[00019]本発明の他の態様は、対象における非虚血性拡張型心筋症を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、前記対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の前記対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度と比較して少なくとも８０％減少し、それによって非虚血性拡張型心筋症を治療する、方法に関する。
【００２０】
[00020]本発明の他の態様は、対象における加齢による脆弱の症状を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、対象の血清試料中の疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の対象の血清試料中の疲弊Ｂ細胞の数と比較して少なくとも１０％減少し、それによって加齢による脆弱の症状を治療する、方法に関する。
【００２１】
[00021]本発明の他の態様は、対象における加齢による脆弱の症状を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、対象の血清試料中のスイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の対象の血清試料中のスイッチメモリーＢ細胞の数と比較して少なくとも７５％増加し、それによって加齢による脆弱の症状を治療する、方法に関する。
【００２２】
[00022]本発明の他の態様は、対象における加齢による脆弱の症状を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、対象の血清試料中の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の対象の血清試料中の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数と比較して少なくとも６０％減少し、それによって加齢による脆弱の症状を治療する、方法に関する。
【００２３】
[00023]本発明の他の態様は、対象における加齢による脆弱の症状を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、対象の血清試料中の早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の対象の血清試料中の早期活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも３０％減少し、それによって加齢による脆弱の症状を治療する、方法に関する。
【００２４】
[00024]本発明の他の態様は、対象における加齢による脆弱の症状を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、対象の血清試料中の慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の対象の血清試料中の慢性活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも７５％減少し、それによって加齢による脆弱の症状を治療する、方法に関する。
【００２５】
[00025]本発明の他の態様は、対象における加齢による脆弱の症状を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、対象の血清試料中のＴｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の対象の血清試料中のＴｅｍｒａ細胞の数と比較して少なくとも２０％減少し、それによって加齢による脆弱の症状を治療する、方法に関する。
【００２６】
[00026]本発明の他の態様は、対象における加齢による脆弱の症状を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度と比較して少なくとも５０％減少し、それによって加齢による脆弱の症状を治療する、方法に関する。
【００２７】
[00027]本発明の他の態様は、対象における加齢による脆弱の症状を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含み、対象の血清試料中のＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の対象の血清試料中のＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比と比較して少なくとも１００％増加し、それによって加齢による脆弱の症状を治療する、方法に関する。
【００２８】
[00028]本発明の一実施形態では、対象はヒトである。本発明の別の実施形態では、対象は加齢に伴う炎症を示しているヒトである。
【００２９】
[00029]本発明の一実施形態では、間葉系幹細胞は骨髄由来の間葉系幹細胞である。本発明の一実施形態では、間葉系幹細胞はＳＴＲＯ−１を発現していない。本発明の別の実施形態では、間葉系幹細胞はＣＤ４５を発現していない。本発明の別の実施形態では、間葉系幹細胞は線維芽細胞表面マーカーを発現していない、又は線維芽細胞形態を有していない。本発明の別の実施形態では、間葉系幹細胞は遺伝子操作されていない。
【００３０】
[00030]本発明の別の実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は単一用量で投与される。本発明の別の実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は複数の用量、例えば２つ以上の用量で投与される。本発明の別の実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は少なくとも年１回投与される。
【００３１】
[00031]一実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は全身に投与される。本発明の一実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は点滴又は直接注射によって投与される。本発明の一実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は、静脈内に、動脈内に、筋肉注射で、腹腔内に、皮下に、皮内に、経口で、経心内膜で、又は鼻腔内に投与される。さらなる実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は静脈内に投与される。さらなる実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は筋肉注射で投与される。
【００３２】
[00032]本発明の一実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は約２０×１０６個の間葉系幹細胞の用量で投与される。本発明の別の実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は約１００×１０６個の間葉系幹細胞の用量で投与される。本発明の別の実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は約２００×１０６個の間葉系幹細胞の用量で投与される。
【００３３】
[00033]本発明の一実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団がヒトドナーから得られ、及び同種間葉系幹細胞の単離された集団を対象に投与する前に、対象へのヒトドナーのＭＨＣマッチングのステップは用いられない。
【００３４】
[00034]本発明の他の態様は、対象における細胞性及び体液性免疫状態を評価する方法であって、
（１）対象が以前に非虚血性拡張型心筋症の治療を必要としており、対象に初期用量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を投与したという決定に基づいて、評価のために選択された対象から血清試料を得るステップと、
（２）（ｉ）アッセイされるバイオマーカー（複数可）を検出するために、特異的に結合する１つ又は複数の抗体と血清試料を接触させ、（ｉｉ）１つ又は複数のアッセイ結果を提供するためにそれぞれの抗体への、アッセイされる各バイオマーカーの結合を示す１つ又は複数のアッセイ結果を生成するアッセイ機器へ、対象から得た血清試料を導入することによって、疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）、及び血清ＴＮＦ−αからなる群から選択される非虚血性拡張型心筋症マーカーを検出するために構成された１つ又は複数のアッセイを行うステップと、
（３）アッセイ機器によって生成されたアッセイ結果（複数可）を対象の免疫状態と関連付けるステップであって、アッセイ結果（複数可）に基づいて免疫状態の１つ又は複数の将来の変化の可能性を対象に割り当てることを含むステップと、
（４）対象が割り当てられている個体の所定の部分集団に基づいて対象を治療するステップであって、同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団の１つ又は複数の追加用量の投与を含むステップと
を含む方法に関する。
【００３５】
[00035]本発明の他の態様は、対象における細胞性及び体液性免疫状態を評価する方法であって、
（１）対象が以前に加齢による脆弱の症状の治療を必要としており、対象に初期用量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を投与したという決定に基づいて、評価のために選択された対象から血清試料を得るステップと、
（２）（ｉ）アッセイされるバイオマーカー（複数可）を検出するために、特異的に結合する１つ又は複数の抗体と血清試料を接触させ、（ｉｉ）１つ又は複数のアッセイ結果を提供するためにそれぞれの抗体への、アッセイされる各バイオマーカーの結合を示す１つ又は複数のアッセイ結果を生成するアッセイ機器へ、対象から得た血清試料を導入することによって、疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）、ＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比、及び血清ＴＮＦ−αからなる群から選択される加齢による脆弱マーカーを検出するために構成された１つ又は複数のアッセイを行うステップと、
（３）アッセイ機器によって生成されたアッセイ結果（複数可）を対象の免疫状態と関連付けるステップであって、アッセイ結果（複数可）に基づいて免疫状態の１つ又は複数の将来の変化の可能性を対象に割り当てることを含むステップと、
（４）対象が割り当てられている個体の所定の部分集団に基づいて対象を治療するステップであって、同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団の１つ又は複数の追加用量の投与を含むステップと
を含む方法に関する。
【００３６】
[00036]本発明の一実施形態では、免疫状態の１つ又は複数の将来の変化は、疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）の数の増加、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）の数の減少、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数の増加、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）の数の増加、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）の数の増加、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）の数の増加、ＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比の減少、及び血清ＴＮＦ−αの増加、のうちの１つ又は複数を含む。
【００３７】
[00037]本発明の他の態様は、対象における非虚血性拡張型心筋症の治療の有効性を決定するインビトロの方法であって、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団の対象への投与前後に対象から得られた血清中の、疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）、Ｔｅｍｒａ細胞ｓ（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）、及びＴＮＦ−α濃度からなる群から選択される１つ又は複数のバイオマーカーのレベルを決定するステップと、単離されたヒト間葉系幹細胞の集団の投与前後に得られた血清中の１つ又は複数のバイオマーカーのレベルを比較するステップとを含み、治療が、
（１）疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の疲弊Ｂ細胞の数と比較して少なくとも２５％減少している、
（２）スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前のスイッチメモリーＢ細胞の数と比較して少なくとも１００％増加している、
（３）細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数と比較して少なくとも３０％減少している、
（４）早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の早期活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも３０％減少している、
（５）慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の慢性活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも７０％減少している、
（６）Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前のＴｅｍｒａ細胞の数と比較して少なくとも４０％減少している、及び／又は
（７）対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度と比較して少なくとも８０％減少している
場合に有効である、インビトロの方法に関する。
【００３８】
[00038]本発明の他の態様は、対象における加齢による脆弱の症状の治療の有効性を決定するインビトロの方法であって、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団の対象への投与前後に対象から得られた血清中の、疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）、Ｔｅｍｒａ細胞ｓ（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）、ＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比、及びＴＮＦ−α濃度からなる群から選択される１つ又は複数のバイオマーカーのレベルを決定するステップと、単離されたヒト間葉系幹細胞の集団の投与前後に得られた血清中の１つ又は複数のバイオマーカーのレベルを比較するステップとを含み、治療が、
（１）疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の疲弊Ｂ細胞の数と比較して少なくとも１０％減少している、
（２）スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前のスイッチメモリーＢ細胞の数と比較して少なくとも７５％増加している、
（３）細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数と比較して少なくとも６０％減少している、
（４）早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の早期活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも３０％減少している、
（５）慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の慢性活性化Ｔ細胞の数と比較して少なくとも７５％減少している、
（６）Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）の数は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前のＴｅｍｒａ細胞の数と比較して少なくとも２０％減少している、
（７）対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度と比較して少なくとも５０％減少している、及び／又は、
（８）対象の血清試料中のＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比は、単離された同種ヒト間葉系幹細胞の集団を投与する前の対象の血清試料中のＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比と比較して少なくとも１００％増加している
場合に有効である、インビトロの方法に関する。
【００３９】
[00039]本発明他の態様は、非虚血性拡張型心筋症の治療に有効であるかどうか決定するための、血清中の疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）のレベル、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）のレベル、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞のレベル、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）のレベル、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）のレベル、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）のレベル、及びＴＮＦ−α濃度のインビトロでの使用に関する。
【００４０】
[00040]本発明の他の態様は、加齢による脆弱の治療に有効であるかどうか決定するための、血清中の疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）のレベル、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）のレベル、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞のレベル、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）のレベル、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）のレベル、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）のレベル、ＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比、及びＴＮＦ−α濃度のインビトロでの使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】脆弱を有する高齢者を治療するための同種間葉系幹細胞の使用を研究するランダム化、二重盲検、プラセボ対照試験のコンソートダイアグラムの図である。
【図２】脆弱を有する高齢者を治療するための同種間葉系幹細胞の使用を研究するランダム化、二重盲検、プラセボ対照試験に登録された対象のベースライン患者特性を提供する図である。
【図３】同種ヒト間葉系幹細胞を投与された高齢の対象においてＴＮＦ−αが減少することを示す図である。
【図４】同種ヒト間葉系幹細胞を投与された高齢の対象においてＣＤ６９を発現している早期活性化Ｔ細胞が減少することを示す図である。
【図５】同種ヒト間葉系幹細胞を投与された高齢の対象においてＣＤ２５を発現している慢性／後期活性化Ｔ細胞の数が減少することを示す図である。
【図６】同種ヒト間葉系幹細胞を投与された高齢の対象におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の測定を示す図である。
【図７】同種ヒト間葉系幹細胞を投与された高齢の対象におけるＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞の比の増加を示す図である。
【図８】ヒト間葉系幹細胞の点滴を２回受けた加齢による脆弱を有する患者における免疫老化スコア増加を示す図である。
【図９】ベースラインの血清ＴＮＦ−αとベースラインの細胞内（ＩＣ）ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞との間の相関を示す図である。
【図１０】若い対照のベースライン、低ＴＮＦ：ＩＣ  ＴＮＦのベースライン、及び高ＴＮＦ：ＩＣＴＮＦのベースラインにおいてＩＣ  ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の％を提供する図である。
【図１１】若い対照のベースライン、低ＴＮＦ：スイッチメモリーＢ細胞のベースライン、及び高ＴＮＦ：スイッチメモリーＢ細胞のベースラインにおけるスイッチメモリーＢ細胞の％を提供する図である。
【図１２】若い対照のベースライン、低ＴＮＦ：疲弊Ｂ細胞のベースライン、及び高ＴＮＦ：疲弊Ｂ細胞のベースラインにおける疲弊Ｂ細胞の％を提供する図である。
【図１３】若い対照のベースライン、低ＴＮＦ：Ｔｅｍｒａ細胞のベースライン、及び高ＴＮＦ：Ｔｅｍｒａ細胞のベースラインにおけるＴｅｍｒａ細胞の％を提供する図である。
【図１４】若い対照のベースライン、低ＴＮＦ：ＣＤ４：ＣＤ８のベースライン、及び高ＴＮＦ：ＣＤ４：ＣＤ８のベースラインにおけるＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞比を提供する図である。
【図１５】プラセボ対照、低ＴＮＦ−α、及び高ＴＮＦ−αにおける血清ＴＮＦ−αの絶対変化ｐｇ／ｍｌを提供する図である。
【図１６】ベースラインの血清ＴＮＦ−αと血清ＴＮＦ−αの変化との間の相関を示す図である。
【図１７】プラセボ対照、低ＴＮＦ−α、及び高ＴＮＦ−αにおけるＩＣ  ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の絶対変化を示す図である。
【図１８】血清ＴＮＦ−αとＩＣ  ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の変化との間の相関を示す図である。
【図１９】プラセボ対照、低ＴＮＦ−α、及び高ＴＮＦ−αにおけるスイッチメモリーＢ細胞の％の絶対変化を示す図である。
【図２０】プラセボ対照、低ＴＮＦ−α、及び高ＴＮＦ−αにおける疲弊Ｂ細胞の％の絶対変化を示す図である。
【図２１】プラセボ対照、低ＴＮＦ−α、及び高ＴＮＦ−αにおけるＴｅｍｒａＴ細胞の％の絶対変化を示す図である。
【図２２】血清ＴＮＦ−αの変化とＴｅｍｒａＴ細胞の変化との間の相関を示す図である。
【図２３】プラセボ対照、低ＴＮＦ−α、及び高ＴＮＦ−αにおけるＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞比の絶対変化を示す図である。
【図２４】ＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞比の変化とＴｅｍｒａＴ細胞の変化との間の相関を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
[00065]ある特定の実施形態では、本発明は、対象における非虚血性拡張型心筋症を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を対象にする。実施例は、同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団をインビボで投与すると、対象におけるスイッチメモリーＢ細胞の割合が増加し、疲弊Ｂ細胞が減少することを実証する。実施例はまた、単離された同種ヒト間葉系幹細胞をインビボで投与すると、対象におけるＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比が改善することを実証する。また、実施例に示すように、血清中の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞のレベル、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）のレベル、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）のレベル、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）のレベル、及びＴＮＦ−α濃度は、同種ヒト間葉系幹細胞の点滴を受けた対象では低減する。これらの予期されない結果から、本発明人らは、単離された同種ヒト間葉系幹細胞が、慢性炎症において一般的に上昇したいくつかの免疫学的マーカーを有利に変化させることを明らかにした。共存症の感染性疾患の危険性が高い対象においては、免疫能力の回復は、臨床的に関連性がある。
【００４３】
[00066]他の実施形態では、本発明は、対象における加齢による脆弱の症状を治療する方法であって、治療有効量の同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を対象にする。実施例は、同種ヒト間葉系幹細胞の単離された集団をインビボで投与すると、対象におけるスイッチメモリーＢ細胞の割合が増加し、疲弊Ｂ細胞が減少することを実証する。実施例はまた、単離された同種ヒト間葉系幹細胞をインビボで投与すると、対象におけるＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比が改善することを実証する。また、実施例に示すように、血清中の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞のレベル、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）のレベル、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）のレベル、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）のレベル、及びＴＮＦ−α濃度は、同種ヒト間葉系幹細胞の点滴を受けた対象では低減する。これらの予期されない結果から、本発明人らは、単離された同種ヒト間葉系幹細胞が、加齢による脆弱においてよく見られる特性である加齢に伴う炎症を効果的に減少させることを明らかにした。
【００４４】
[00067]定義
実施形態は、提示された理論的態様なしで実施されてもよい。さらに、理論的態様は、実施形態が提示されたいかなる理論によっても拘束されないことを理解して提示されている。
【００４５】
[00068]断りがない限り、本明細書で使用されるすべての用語（技術用語及び科学用語を含む）は、当業者によって一般的に理解されているものと同じ意味を有する。一般に用いられる辞書で定義されるような用語は、関連技術の文脈における意味と一致した意味を有するものと解釈されるべきであり、本明細書において明示的に定義されない限り、理想化された又は過度に形式的な意味に解釈されない。
【００４６】
[00069]本明細書で用いられる用語は、単に特定の実施形態を説明するためのものであり、限定の意図はない。本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、内容が別の方法で明確に示されない限り、複数形を含むことを意図する。さらに、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｗｉｔｈ）」、又はそれらの異形の用語が詳細な説明及び／又は特許請求の範囲のいずれかにおいて使用される限りにおいて、そのような用語は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語と同様の方法で包括的であることが意図される。
【００４７】
[00070]本明細書における値の範囲の列挙は、本明細書で別段の指示がない限り、その範囲内にあるそれぞれの独立した値をそれぞれ示す簡略化された方法として機能することを意図しており、それぞれの独立した値は、本明細書にそれぞれが記載されるかのように、本明細書内に含まれる。本明細書で提示された任意及びすべての例又は例示的な言葉（例えば「〜のような」）は、特に主張されていない限り、本発明をより明確にするのであって、本発明の範囲を限定するものではない。本明細書の言葉は、本発明の実践に必須の請求されない要素を示すものと解釈してはならない。
【００４８】
[00071]「約（ａｂｏｕｔ）」又は「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」という用語は、当業者によって決定される特定の値の許容誤差範囲内を意味し、これは、値がどのように測定又は決定されるか、すなわち測定システムの限界に部分的に依存するであろう。例えば、「約」は、当技術分野の慣行により、１又は１を超える標準偏差内を意味することができる。あるいは、「約」は、被参照値の±１０％の範囲を意味することができる。
【００４９】
[00072]用量、期間及び対象
「治療有効量」は、Ｂ細胞又はＴ細胞依存性免疫応答を促進する量を意味する。そのような応答は、有意なレベルのＩｇＧ及びオプソニン活性を引き出す能力によって特徴付けられる。対象に投与される用量及び用量の数（例えば単一又は複数の用量）は、投与経路、患者の状態及び特性（性別、年齢、体重、健康状態、サイズ）、症状の程度、同時治療、治療の頻度及び所望の効果などを含む様々な因子に応じて変わる。
【００５０】
[00073]本発明の一実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は単一用量で投与される。別の実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は複数の用量、例えば２つ以上の用量で投与される。他の実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は少なくとも年１回投与される。
【００５１】
[00074]本発明の別の実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団の投与は、例えば、同種間葉系幹細胞の単離された集団の最初の投与後の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、若しくは１８カ月に反復され、又は、同種間葉系幹細胞の単離された集団の最初の投与後２〜４、２〜６、２〜８、２〜１０、３〜４、３〜６、３〜８、３〜１０、４〜６、４〜８、４〜１０、６〜８、６〜１０、６〜１２、又は１２〜１８カ月の間に反復される。
【００５２】
[00075]本発明の一実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は、約１×１０６、２×１０６、５×１０６、１０×１０６、２０×１０６、３０×１０６、４０×１０６、５０×１０６、６０×１０６、７０×１０６、８０×１０６、９０×１０６、１００×１０６、１１０×１０６、１２０×１０６、１３０×１０６、１４０×１０６、１５０×１０６、１６０×１０６、１７０×１０６、１８０×１０６、１９０×１０６、２００×１０６、３００×１０６、４００×１０６、５００×１０６、又は１０×１０７個の間葉系幹細胞の用量で投与される。さらなる実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は、約２０×１０６個の間葉系幹細胞の用量で投与される。さらなる実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は、約１００×１０６個の間葉系幹細胞の用量で投与される。さらにさらなる実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は、約２００×１０６個の間葉系幹細胞の用量で投与される。さらなる実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は、約１〜４００×１０６、１０〜４００×１０６、１００〜４００×１０６、２０〜２００×１０６、２０〜４００×１０６、０．１〜５×１０６、０．１〜１０×１０６、０．１〜１００×１０６、１〜５０×１０６、１〜１００×１０６、０．０１〜１０×１０６又は０．０１〜１００×１０６個の間葉系幹細胞の用量で投与される。
【００５３】
[00076]一部の実施形態では、治療有効量の同種間葉系幹細胞の単離された集団は、対象においてＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞の比を増加させるのに十分であり、例えば同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の比と比較して少なくとも２、３、４、５、又は６倍ＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞の比を増加させ、すなわち、ＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞の比は少なくとも１００％、２００％、３００％、４００％、又は５００％増加する。
【００５４】
[00077]一部の実施形態では、治療有効量の同種間葉系幹細胞の単離された集団は、対象においてスイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）の数を増加させるのに十分であり、例えば同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の数と比較して少なくとも２、３、４、又は５倍スイッチメモリーＢ細胞の数を増加させ、すなわち、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）の数は少なくとも１００％、２００％、３００％、又は４００％増加する。他の実施形態では、スイッチメモリーＢ細胞の数は、同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前のスイッチメモリーＢ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％増加する。
【００５５】
[00078]一部の実施形態では、治療有効量の同種間葉系幹細胞の単離された集団は、対象において細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数を減少させるのに十分であり、例えば同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前のそのようなＢ細胞の数と比較して少なくとも２、３、４、５、又は６倍、数を減少させる。他の実施形態では、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数は、同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、又は６０％減少する。
【００５６】
[00079]一部の実施形態では、治療有効量の同種間葉系幹細胞の単離された集団は、対象において疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）の数を減少させるのに十分であり、例えば同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の数と比較して少なくとも２又は３倍、疲弊Ｂ細胞の数を減少させる。他の実施形態では、疲弊Ｂ細胞の数は、同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の疲弊Ｂ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、又は５０％減少する。
【００５７】
[00080]一部の実施形態では、治療有効量の同種間葉系幹細胞の単離された集団は、対象において早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）の数を減少させるのに十分であり、例えば同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の数と比較して少なくとも２又は３倍、早期活性化Ｔ細胞の数を減少させる。他の実施形態では、早期活性化Ｔ細胞の数は、同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の早期活性化Ｔ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、又は５０％減少する。
【００５８】
[00081]一部の実施形態では、治療有効量の同種間葉系幹細胞の単離された集団は、対象において慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）の数を減少させるのに十分であり、例えば同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の数と比較して少なくとも２又は３倍、慢性活性化Ｔ細胞の数を減少させる。他の実施形態では、慢性活性化Ｔ細胞の数は、同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の慢性活性化Ｔ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％減少する。
【００５９】
[00082]一部の実施形態では、治療有効量の同種間葉系幹細胞の単離された集団は、対象においてＴｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）の数を減少させるのに十分であり、例えば同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の数と比較して少なくとも２又は３倍、Ｔｅｍｒａ細胞の数を減少させる。他の実施形態では、Ｔｅｍｒａ細胞の数は、同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前のそのようなＴｅｍｒａ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、又は５０％減少する。
【００６０】
[00083]一部の実施形態では、治療有効量の同種間葉系幹細胞の単離された集団は、対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度を減少させるのに十分であり、例えば同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前のＴＮＦ−α濃度と比較して少なくとも２又は３倍、ＴＮＦ−α濃度を減少させる。他の実施形態では、ＴＮＦ−αの濃度は、同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前のＴＮＦ−αの濃度と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％減少する。
【００６１】
[00084]本発明の他の態様は、対象が同種間葉系幹細胞の単離された集団の投与から利益を受けるかどうかを判断するために対象の細胞性及び体液性免疫状態を評価する方法、及びバイオマーカーデータに基づいて対象の所定の部分集団を治療する方法を含む。例えば、疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）、及び血清ＴＮＦ−αからなる群から選択される非虚血性拡張型心筋症マーカーを検出するために１つ又は複数のアッセイを行うことができた。同様に、疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）、ＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比、及び血清ＴＮＦ−αからなる群から選択される加齢による脆弱マーカーを検出するために１つ又は複数のアッセイを行うことができた。
【００６２】
[00085]一部の実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は、対象においてＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞の比を増加させるのに十分であり、例えば同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の比と比較して少なくとも２、３、４、５、又は６倍ＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞の比を増加させ、すなわち、ＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞の比は少なくとも１００％、２００％、３００％、４００％、又は５００％増加する場合、治療は有効であると実証される。
【００６３】
[00086]一部の実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は、対象においてスイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）の数を増加させるのに十分であり、例えば同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の数と比較して少なくとも２、３、４、又は５倍スイッチメモリーＢ細胞の数を増加させ、すなわち、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）の数は少なくとも１００％、２００％、３００％、又は４００％増加する場合、治療は有効であると実証される。他の実施形態では、スイッチメモリーＢ細胞の数は、同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前のスイッチメモリーＢ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％増加する。
【００６４】
[00087]一部の実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は、対象において細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数を減少させるのに十分であり、例えば同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数と比較して少なくとも２、３、４、５、又は６倍、数を減少させる場合、治療は有効であると実証される。他の実施形態では、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数は、同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、又は６０％減少する。
【００６５】
[00088]一部の実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は、対象において疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）の数を減少させるのに十分であり、例えば同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の数と比較して少なくとも２又は３倍、疲弊Ｂ細胞の数を減少させる場合、治療は有効であると実証される。他の実施形態では、疲弊Ｂ細胞の数は、同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の疲弊Ｂ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、又は５０％減少する。
【００６６】
[00089]一部の実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は、対象において早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）の数を減少させるのに十分であり、例えば同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の数と比較して少なくとも２又は３倍、早期活性化Ｔ細胞の数を減少させる場合、治療は有効であると実証される。他の実施形態では、早期活性化Ｔ細胞の数は、同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の早期活性化Ｔ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、又は５０％減少する。
【００６７】
[00090]一部の実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は、対象において慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）の数を減少させるのに十分であり、例えば同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の数と比較して少なくとも２又は３倍、慢性活性化Ｔ細胞の数を減少させる場合、治療は有効であると実証される。他の実施形態では、慢性活性化Ｔ細胞の数は、同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の慢性活性化Ｔ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％減少する。
【００６８】
[00091]一部の実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は、対象においてＴｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）の数を減少させるのに十分であり、例えば同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前の数と比較して少なくとも２又は３倍、Ｔｅｍｒａ細胞の数を減少させる場合、治療は有効であると実証される。他の実施形態では、Ｔｅｍｒａ細胞の数は、同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前のそのようなＴｅｍｒａ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、又は５０％減少する。
【００６９】
[00092]一部の実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は、対象の血清試料中のＴＮＦ−α濃度を減少させるのに十分であり、例えば同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前のＴＮＦ−α濃度と比較して少なくとも２又は３倍、ＴＮＦ−α濃度を減少させる場合、治療は有効であると実証される。他の実施形態では、ＴＮＦ−αの濃度は、同種間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前のＴＮＦ−αの濃度と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％減少する。
【００７０】
[00093]組成物の「投与」は、経口投与、注射、点滴、非経口、静脈内、粘膜、舌下腺、筋肉内、皮内、鼻内、腹腔内、動脈内、皮下吸収又は他の既知の技術と組み合わせた任意の方法によって達成されてもよい。本発明の一実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は全身に投与される。本発明の別の実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は点滴又は直接注射によって投与される。本発明の一実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は、筋肉注射で、静脈内に、動脈内に、腹腔内に、皮下に、皮内に、経口で、経心内膜で、又は鼻腔内に投与される。さらなる実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は筋肉注射で投与される。さらなる実施形態では、同種間葉系幹細胞の単離された集団は静脈内に投与される。
【００７１】
[00094]本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、ヒト、並びに野生動物、家庭内動物、及び農場動物のような非ヒト脊椎動物を含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、用語は６５歳以上の高齢者、又は６０〜９５歳の高齢者のようなヒトを表す。一部の実施形態では、ヒト対象は加齢による脆弱の症状を示す。一部の実施形態では、ヒト対象は加齢に伴う炎症を示す。
【００７２】
[00095]「同種」という用語は、「レシピエント宿主」となる動物と同一の動物種であるが、１つ又は複数の遺伝子座において遺伝的に異なる細胞を表す。これは通常、ある動物から同種の別の同一でない動物に移植された細胞に適用される。
【００７３】
[00096]本明細書で使用される場合、「それを必要とする」という語句は、対象が特定の方法又は治療を必要としていると同定されたことを意味する。一部の実施形態では、同定は任意の診断の手段によることができる。本明細書に記載の任意の方法及び治療では、対象はそれを必要としている可能性がある。一部の実施形態では、対象は環境内にいるか、又は特定の疾患、障害、又は状態がよく見られる環境に移動しているであろう。
【００７４】
[00097]細胞は、本明細書である種のマーカーに対してポジティブ又はネガティブであると称される。例えば、細胞はＣＤ４５に対してネガティブであることがあり、これはＣＤ４５−とも称され得る。上付文字表記「−」は、上付き文字にリンクされたマーカーに対してネガティブである細胞を表す。一方、「＋」を有するマーカーは、そのマーカーに対してポジティブである細胞を表す。例えば、「ＣＤ８＋」と称される細胞は、ＣＤ８に対してポジティブである。「＋」もまた、マーカーをポジティブとして称するために使用され得る。「−」もまた、マーカーをネガティブとして称するために使用され得る。
【００７５】
[00098]本明細書で使用される場合、「幹細胞」という用語は、ある種の条件下で長期間、又は成人幹細胞の場合には生物の寿命を通してそれ自体増殖する能力を有する、胚、胎児、又は成人由来の細胞を表す。幹細胞はまた体の組織や器官を構成する特殊な細胞を生み出すことができる。
【００７６】
[00099]間葉系幹細胞は、サイトカインのような生物活性因子からの様々な影響によって、間葉系組織又は結合組織（すなわち、特化された要素を支持する体の組織；特に脂肪、骨性、軟骨性、弾力性、及び線維性結合組織）の任意の種類の特定のタイプに分化することができる、とりわけ骨髄、血液、真皮、及び骨膜に見られる形成性の多能性芽細胞である。
【００７７】
[000100]間葉系幹細胞を単離及び／又は精製するある種の方法は本明細書に記載されており、当技術分野で既知である。一部の実施形態では、間葉系幹細胞は成人ヒトの骨髄から単離される。一部の実施形態では、細胞は密度勾配を通過して望ましくない細胞タイプが除外される。細胞を蒔き、適した培地で培養することができる。一部の実施形態では、細胞を少なくとも１日又は約３〜約７日培養し、非付着性細胞を除去する。次いで付着性細胞を蒔き、増殖させる。
【００７８】
[000101]幹細胞を単離及び培養する他の方法も既知である。胎盤は間葉系幹細胞の容易に入手可能な優れた供給源である。さらに、間葉系幹細胞は脂肪組織から誘導することができ、骨髄間質細胞は他の組織に存在すると推察される。成人幹細胞が由来し得る臓器には劇的な定性的及び定量的な違いがあるが、細胞間の初期の違いは比較的表面的であり、細胞が示す類似の範囲の柔軟性によってバランスがとられている可能性がある。
【００７９】
[000102]すべての間葉系細胞系統の前駆体としての機能を果たす、均質なヒト間葉系幹細胞組成物が提供される。間葉系幹細胞は、固有のモノクローナル抗体で識別される特定の細胞表面マーカーによって識別される。均質な間葉系幹細胞組成物は、造血細胞又は分化した間葉系細胞のいずれかに関連したマーカーを含まない接着性の骨髄細胞又は骨膜細胞のポジティブ選択により得られる。これらの単離された間葉系細胞集団は、間葉系幹細胞のみに関連するエピトープ特性を示し、分化することなく培養下で再生する能力を有し、インビトロで誘導されるか又は炎症部位にインビボで置かれると特定の間葉系系統に分化する能力を有する。
【００８０】
[000103]本明細書で開示された組成物、方法、及びキットのためのヒト間葉系幹細胞を得るために、多能性間葉系幹細胞は、骨髄又は他の間葉系幹細胞供給源中の他の細胞から分離される。骨髄細胞を腸骨稜、大腿骨、脛骨、脊椎、肋骨、又は他の髄腔から得てもよい。ヒト間葉系幹細胞の他のスペースは、胚卵黄嚢、胎盤、臍帯、胎児及び青年の皮膚、及び血液を含む。
【００８１】
[000104]一部の実施形態では、ヒト間葉系幹細胞はマーカーの非存在によって同定される。例えば、本発明で有用なヒト間葉系幹細胞は、ＳＴＲＯ−１に対してネガティブ及び／又はＣＤ４５に対してネガティブのヒト間葉系幹細胞を含む。同様に、本発明で有用なヒト間葉系幹細胞は、線維芽細胞表面マーカーを発現しない、又は線維芽細胞形態を有するヒト間葉系幹細胞を含む。
【００８２】
[000105]免疫応答を高める方法
上記のように、本発明は、対象の細胞性又は体液性免疫応答を高める方法であって、治療有効量のヒト間葉系幹細胞の単離された集団を対象に投与することを含む方法を対象にする。本発明の一部の実施形態では、間葉系幹細胞は遺伝子操作されていない。本発明の一部の実施形態では、間葉系幹細胞はヒトドナーから得られ、対象へのヒトドナーのＭＨＣマッチングのステップは、ヒト間葉系幹細胞の単離された集団を投与する前に用いられない。
【００８３】
[000106]本発明で使用するための組成物は、任意の適した方法を使用して製剤化されてもよい。標準の薬学的に許容される担体及び／又は賦形剤を有する細胞の製剤は、医薬分野で日常的な方法を使用して行われてもよい。製剤の正確な特質は、投与される細胞及び投与の所望の経路を含むいくつかの因子に依存する。製剤の適したタイプは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１９版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ、ＵＳＡに十分に記載されている。
【００８４】
[000107]組成物は、生理学的に許容される担体又は希釈剤と共に調製されてもよい。一般的に、そのような組成物は細胞の液体懸濁液として調製される。細胞は、薬学的に許容され活性成分と適合性のある賦形剤と混合されてもよい。適した賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロールなど、及びそれらの組合せである。
【００８５】
[000108]さらに、必要ならば、本発明の医薬組成物は、湿潤剤若しくは乳化剤、ｐＨ緩衝剤、及び／又は効果を高めるアジュバントのような少量の補助物質を含んでよい。本発明の一実施形態では、アジュバントはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含む。
【００８６】
[000109]１つの適した担体又は希釈剤はプラズマライト（ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ）Ａ（商標）である。これは静脈内投与のための無菌の非発熱性等張溶液である。各１００ｍＬは、５２６ｍｇの塩化ナトリウム、ＵＳＰ（ＮａＣｌ）、５０２ｍｇのグルコン酸ナトリウム（Ｃ６Ｈ１１ＮａＯ７）、３６８ｍｇの酢酸ナトリウム三水和物、ＵＳＰ（Ｃ２Ｈ３ＮａＯ２３Ｈ２Ｏ）、３７ｍｇの塩化カリウム、ＵＳＰ（ＫＣｌ）、及び３０ｍｇの塩化マグネシウム、ＵＳＰ（ＭｇＣｌ２６Ｈ２Ｏ）を含む。抗菌剤は含まない。ｐＨは水酸化ナトリウムで調整する。ｐＨは７．４（６．５〜８．０）である。
【００８７】
[000110]本発明の一実施形態では、間葉系幹細胞は遺伝子操作されていない。本発明の別の実施形態では、間葉系幹細胞は凍結保存されている。例えば、間葉系幹細胞を２％ＨＳＡ及び５％ＤＭＳＯを添加したヘスパン（Ｈｅｓｐａｎ）（登録商標）（０．９％塩化ナトリウム中６％ヘタスターチ）からなる凍結保護剤に懸濁し、次いで気相窒素フリーザーに配置するために凍結保存容器にアリコートすることができる。別の実施形態では、間葉系幹細胞は１％ＨＳＡを添加したプラズマライトＡ（商標）で提供されてもよい。
【実施例】
【００８８】
実施例１  慢性非虚血性拡張型心筋症の治療
[000111]手短に言うと、３７例の患者を同種又は自己のヒト間葉系幹細胞のいずれかを受けるように、１：１の比でランダム化した。Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉａｍｉ  Ｈｏｓｐｉｔａｌで、２０１１年１２月から２０１５年７月の間に患者を募集した。患者（５５．８±１１．２歳、３２％女性）は、ＮＯＧＡカテーテルによる１０個の左心室部位に、経心内膜幹細胞注射（ＴＥＳＩ）によってヒト間葉系幹細胞（１億）を受けた。治療した患者を、ベースライン、３０日、３、６、及び１２カ月に、免疫バイオマーカーについて評価した。
【００８９】
[000112]患者集団
患者の適格性は、４０％未満のＥＦ、及び男性対象で５．９ｃｍを超え、女性対象で５．６ｃｍを超える左室拡張末期直径又は１２５ｍＬ／ｍ２を超える左室拡張末期容積指標のいずれかのＮＩＤＣＭの診断の確認後に決定された。３７例の患者を自己ヒト間葉系幹細胞（ｈＭＳＣ）又は同種ｈＭＳＣのいずれかに、１：１の比でランダム化した。３４例の患者が試験の注射を受け、１６例及び１８例の患者がそれぞれ自己ｈＭＳＣ及び同種ｈＭＳＣであった。３例の患者は、試験の注射を受けなかった。１例の患者は、治療前に同意を取り下げた。他の患者を募集したが、この患者は、自動埋込み可能なカルジオバータ−除細動器配置のために治療を受けず（ｎ＝１）、１例の患者は治療前に死亡した（ｎ＝１）。注射した参加者の平均年齢は５５．８±１１．２歳であり、２９％が女性、及び３５％がヒスパニック系であった。ＴＥＳＩ前のＮＩＤＣＭ診断の平均年数は、同種患者で６．１±６．２年及び自己の患者で６．９±７．３年（グループ間、ｐ＝０．５）であった。５０パーセントの患者は、ＮＹＨＡクラスＩＩ症状を有しており、全体的なＥＦの平均ベースラインは２６．５±９．６４％、平均６ＭＷＴは４２２±８６．８Ｍ、及びベースラインＭＬＨＦＱスコア中央値は３６（ＩＱＲ１８．０、６４．０）であった。
【００９０】
[000113]試験手順及びタイムライン
ベースライン評価は、化学及び血液学検査室、心エコー検査、並びに胸部、腹部及び骨盤コンピューター断層撮影スキャンを含んでいた。
【００９１】
[000114]細胞療法のためのヒト間葉系幹細胞（ｈＭＳＣ）
すべての同種及び自己ヒト間葉系幹細胞は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉａｍｉ  ＩＳＣＩで製造された。例えば、Ｇｏｌｐａｎｉａｎ，Ｓ．ら、Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．、９６：１１２７〜６８（２０１６）、及びＭｕｓｈｔａｑ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｃａｒｄｉｏ．Ｔｒａｎｓ．Ｒｅｓ．、７：７６９〜８０（２０１４）を参照。同種ヒト間葉系幹細胞は、平均年齢２５．４±３．３歳のコーカサス人男性ドナーに由来し、ＴＥＳＩの時８０〜９０％が生存していた。自己ｈＭＳＣは、平均年齢５８．０±９．９歳の１１名の男性、及び平均年齢５５．０±１２．４歳の６名の女性に由来した。
【００９２】
[000115]経心内膜幹細胞注射
注射部位は、ＴＥＳＩ手順の安全性を優先し、及び利用可能な心筋領域全体に部位を分布させるために選択された。部位の選択についての検討には、心室尖部の回避、及び針を伸長する前のカテーテル安定性の最適化が含まれていた。
【００９３】
[000116]免疫モニタリング
算出したパネル反応性抗体（ｃＰＲＡ）をベースライン及び６カ月に、Ｌｕｍｉｎｅｘ  ２００を使用して測定した。血清ＴＮＦ−αをヒトＴＮＦ−αＥＬＩＳＡ高感度キット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して測定した。リンパ球を活性化のＴ細胞マーカーについて染色した。後期／疲弊したＴ細胞、Ｂ細胞サブセット（スイッチメモリー及び後期／疲弊Ｂ細胞）及びＢ細胞によるＴＮＦ−α。すべての試料はＬＳＲ−Ｆｏｒｔｅｓｓａ−ＨＴＳ分析器（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ）を使用して取得し、ＦｌｏｗＪｏ  Ｖ１０ソフトウェアで分析した。すなわち、すべてのリンパ球集団をフローサイトメトリーによって評価し、ゲートしたもの（ＣＤ１９＋でゲートしたＢ細胞パラメータ、及びＣＤ３＋でゲートしたＴ細胞パラメータ）からのパーセントで表した。
【００９４】
[000117]ｃＰＲＡの結果は、同種の６７％及び自己レシピエントの９２％が低ｃＰＲＡ（０〜２０％のｃＰＲＡ）に対して反応を示さなかったことを示した。同種の２７％及び自己の８％が中程度のｃＰＲＡ（２１〜７９％のｃＰＲＡ）を有し、及び同種ＭＳＣを投与された１例の対象（７％）が高いｃＰＲＡ応答を示した（＋８０％のｃＰＲＡ）。
【００９５】
[000118]ＴＮＦ−αの上昇したベースラインレベルは、両グループにおいてベースラインから６カ月に減少した（同種：−１０．６±１．６ｐｇ／ｍｌ、ｐ＜０．０００１、自己：−６．８±１．４ｐｇ／ｍｌ、ｐ＜０．０００１、表１；グループ間、ｐ＝０．０５）。ＴｅｍｒａＴ細胞（疲弊したＴ細胞表現型）は、両グループにおいて減少し、同種においてより大きく減少した（同種：−１５．９±５．４％、ｐ＜０．０００１、自己：−９．３±３．３％、ｐ＜０．０００１、表１；グループ間、ｐ＝０．０１１１；表１）。ベースラインの抑制されたスイッチメモリーＢ細胞（抗体応答の予測バイオマーカー）の％は、両グループとも６カ月で有意に増加し、同種においてより大きく改善した（同種：＋１０．２±４．９％、ｐ＜０．０００１に対して、自己：＋４．３±３．９％、ｐ＝０．００１４、グループ間、ｐ＜０．０００１；表１）。最終的に、Ｂ２３細胞における細胞内ＴＮＦ−α発現も、両グループにおいて、ベースラインに対して６カ月で減少した（同種：−１１．２±３．３％、ｐ＜０．０００１、自己：−８．５±３．０％、ｐ＜０．０００１；グループ間、ｐ＝０．１７４；表１）。一方、後期／疲弊Ｂ細胞は両グループにおいて有意に減少した（同種：−５．４±１．０３％、ｐ＜０．０００１、自己：−５．９±２．５％、ｐ＝０．００３；グループ間の違い、ｐ＝０．５７；表１）。早期Ｔ細胞活性化は（同種：−５．５７±１．０３％、ｐ＜０．０００１、自己：−２．９２±１．５％、ｐ＝０．０２；グループ間、ｐ＝０．０８；表１）、両グループにおいて同程度減少した。一方、後期／慢性Ｔ−細胞活性化は、いずれのグループにおいても有意に減少しなかった（同種：−２．３±１．３％、ｐ＝０．４、及び自己：−３．４±２．７％、ｐ＝０．７）。
【００９６】
【表１】
2019534307.tif 000002
【００９７】
実施例２  加齢による脆弱の症状の治療−試験１
[000119]Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ａｇｉｎｇ（ＣＳＨＡ）による脆弱の試験選択／除外基準を満たした６０歳以上の３０例の対象をランダム化した。１０例の対象は１億個のＭＳＣを受け、１０例の対象は２億個のＭＳＣを受け、及び１０例の対象はプラセボを受けた。安全性及び有効性について対象を１年間追跡した。評価は少なくとも以下の、炎症性バイオマーカーの試験及び免疫学的効果のレビューを含んでいた。図１はコンソートダイアグラムである。図２はベースライン患者特性を提供する。図３〜７は同種ヒトＭＳＣが免疫バイオマーカーに及ぼす影響を示す。
【００９８】
[000120]図３はヒトＭＳＣを投与された対象においてＴＮＦ−αが減少することを示す。早期及び後期／慢性Ｔ細胞活性化の両者は、同種ＭＳＣの治療後に減少している。図４はヒトＭＳＣを投与された対象においてＣＤ６９を発現している早期活性化Ｔ細胞が減少することを示す。図５はヒトＭＳＣを投与された対象においてＣＤ２５を発現している慢性／後期活性化Ｔ細胞の数が減少することを示す。図７はヒトＭＳＣを投与された対象におけるＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞の比の増加を示す。
【００９９】
実施例３  加齢による脆弱の症状の治療−試験２
[000121]１５例の高齢の対象を非盲検試験に含め、２つの別々の点滴でヒト間葉系幹細胞を投与した。注入されたヒト間葉系幹細胞に対する応答を判定するために、様々な免疫バイオマーカーの変化について対象を評価した。これらの免疫バイオマーカーは、血清中の疲弊Ｂ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７−、ＩｇＤ−）のレベル、スイッチメモリーＢ細胞（ＣＤ１９＋、ＣＤ２７ｈｉｇｈ、ＩｇＤ−）のレベル、細胞内ＴＮＦ−αを発現しているＢ細胞のレベル、早期活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ６９＋）のレベル、慢性活性化Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ２５＋）のレベル、Ｔｅｍｒａ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）のレベル、ＣＤ４＋：ＣＤ８＋Ｔ細胞比、及びＴＮＦ−α濃度を含んでいた。最初の注射後６カ月、並びに２回目の注射後１、３、及び６カ月に対象を評価した。上記の各免疫バイオマーカーの測定値が表２〜９に提供される。測定された免疫バイオマーカーにおいて増加又は減少が観察されたかどうかを示す、異なる時点で各患者において評価された各免疫バイオマーカーに割り当てられたスコアも表２〜９に提供される。最終的に、表１０は、異なる時点及び患者間の平均を含む各患者についての合計スコアである。表１０の最後の列及び図８に観察することができたように、免疫老化スコアは、ヒト間葉系幹細胞の最初の注射後に加齢による脆弱を有する対象において改善され、ヒト間葉系幹細胞の２回目の注射後に改善された状態を維持し続ける。
【０１００】
【表２】
2019534307.tif 000003
【０１０１】
【表３】
2019534307.tif 000004
【０１０２】
【表４】
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【０１０３】
【表５】
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【０１０４】
【表６】
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【０１０５】
【表７】
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【０１０６】
【表８】
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【０１０７】
【表９】
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【０１０８】
【表１０】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【国際調査報告】
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