(57)【要約】  式（Ｉ）化合物のメシル酸塩、その製造方法、当該塩を含む薬物組成物、及び、ＥＧＦＲの活性型又は薬剤耐性型突然変異体に起因する哺乳動物、特にヒトの疾病、とりわけ癌治療における当該塩の使用。式（Ｉ）化合物のメシル酸塩は、動物体内でのバイオアベイラビリティが高く、動物の移植瘤の成長をより良く阻害できるとともに、良好な安全性を示す。  【化１】2019507787.tif 000019【選択図】なし
2019507787.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）化合物のメシル酸塩。
【化１】
2019507787.tif 000018
【請求項２】
請求項１に記載する式（Ｉ）化合物のメシル酸塩の製造方法であって、
溶剤中で式（Ｉ）化合物をメシル酸に直接反応させて式（Ｉ）化合物のメシル酸塩を得ることを特徴とする製造方法。
【請求項３】
前記溶剤はアセトンと水の混合溶剤であることを特徴とする請求項２に記載の製造方法。
【請求項４】
請求項１に記載する式（Ｉ）化合物のメシル酸塩と、薬学的に許容可能な担体とを含むことを特徴とする薬物組成物。
【請求項５】
請求項１に記載する式（Ｉ）化合物のメシル酸塩の、癌治療の薬物の製造における使用。
【請求項６】
請求項４に記載する薬物組成物の、癌治療の薬物の製造における使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はピリジニルアミノピリミジン誘導体の塩に関し、具体的に、本発明は、Ｎ−｛２−｛［２−（ジメチルアミノ）エチル］（メチル）アミノ｝−６−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）−５−｛［４−（１−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）ピリミジン−２−イル］アミノ｝ピリジン−３−イル｝アクリルアミドのメシル酸塩、その製造方法、当該塩を含む薬物組成物、及び、ＥＧＦＲの活性型又は薬剤耐性型突然変異体に起因する哺乳動物、特にヒトの疾病、とりわけ癌治療における当該塩の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）は、細胞の成長及び増殖過程における極めて重要な駆動因子であることが確認されている。上皮成長因子受容体のファミリーは、ＥＧＦＲ（Ｅｒｂ−Ｂ１）、Ｅｒｂ−Ｂ２（ＨＥＲ−２／ｎｅｕ）、Ｅｒｂ−Ｂ３及びＥｒｂ−Ｂ４からなる。上皮成長因子受容体は、肺癌、結腸癌、乳癌といった大部分の癌の疾患進行に関連している。ＥＧＦＲの過剰発現と突然変異が予後不良の乳癌にとって主要な危険因子であることが、すでに明確に実証されている。
【０００３】
現在、研究の最前線とされているのは不可逆的な第三世代ＥＧＦＲ阻害薬である。中国特許出願第ＣＮ２０１４１０３６５９１１．４号は下記式（Ｉ）の構成の化合物を開示している。当該化合物は、ＥＧＦＲの活性型突然変異（例えば、エクソン１９の欠失による活性型突然変異や、Ｌ８５８Ｒの活性型突然変異）、及びＴ７９０Ｍの薬剤耐性型突然変異に対する活性阻害力が野生型ＥＧＦＲ（ＷＴ  ＥＧＦＲ）に対する活性阻害力よりも明らかに高く、良好な選択性を有している。且つ、毒性及び副作用が少なく、安全性に優れている。
【０００４】
【化１】
2019507787.tif 000003
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明が解決しようとする技術的課題は、式（Ｉ）化合物のメシル酸塩、その製造方法、当該塩を含む薬物組成物、及び、ＥＧＦＲの活性型又は薬剤耐性型突然変異体に起因する哺乳動物、特にヒトの疾病、とりわけ癌治療における当該塩の使用を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、式（Ｉ）化合物のメシル酸塩を提供する。
【０００７】
【化２】
2019507787.tif 000004
【０００８】
本発明は、式（Ｉ）化合物のメシル酸塩の製造方法を提供する。
【０００９】
本発明は、更に、溶剤中で式（Ｉ）化合物をメシル酸に直接反応させて式（Ｉ）化合物のメシル酸塩を得る、式（Ｉ）化合物のメシル酸塩の製造方法を提供する。
【００１０】
本発明は、式（Ｉ）化合物のメシル酸塩と、薬学的に許容可能な担体とを含む薬物組成物を提供する。
【００１１】
本発明は、更に、式（Ｉ）化合物のメシル酸塩と、薬学的に許容可能な担体、賦形剤又は希釈剤とを含む薬物組成物を提供する。
【００１２】
本発明は、抗腫瘍薬物として用いられる式（Ｉ）化合物のメシル酸塩を提供する。
【００１３】
本発明は、更に、式（Ｉ）化合物のメシル酸塩の、ＥＧＦＲの活性型又は薬剤耐性型突然変異体に起因する哺乳動物、特にヒトの疾病、とりわけ癌治療の薬物の製造における使用を提供する。
【００１４】
本発明は、更に、式（Ｉ）化合物のメシル酸塩の、癌治療の薬物の製造における使用を提供する。
【００１５】
本発明は、更に、式（Ｉ）化合物のメシル酸塩の、ＥＧＦＲの活性型又は薬剤耐性型突然変異体に起因する哺乳動物、特にヒトの疾病、とりわけ癌治療における使用を提供する。
【００１６】
本発明は、更に、式（Ｉ）化合物のメシル酸塩を含む薬物組成物の、ＥＧＦＲの活性型又は薬剤耐性型突然変異体に起因する哺乳動物、特にヒトの疾病、とりわけ癌治療の薬物の製造における使用を提供する。
【００１７】
本発明は、更に、式（Ｉ）化合物のメシル酸塩を含む薬物組成物の、癌治療の薬物の製造における使用を提供する。
【００１８】
本発明は、更に、ＥＧＦＲの活性型又は薬剤耐性型突然変異体に起因する哺乳動物、特にヒトの疾病、とりわけ癌を治療する方法を提供する。前記方法は、式（Ｉ）化合物のメシル酸塩を、又は、治療有効量の式（Ｉ）化合物のメシル酸塩と、薬学的に許容可能な担体、賦形剤若しくは希釈剤とを含む薬物組成物を患者に投与することを含む。
【００１９】
本発明は、更に、癌を治療する方法を提供する。前記方法は、式（Ｉ）化合物のメシル酸塩を、又は、治療有効量の式（Ｉ）化合物のメシル酸塩と、薬学的に許容可能な担体、賦形剤若しくは希釈剤とを含む薬物組成物を患者に投与することを含む。
【００２０】
本発明で言及する癌としては、例えば、肺癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、胃癌、大腸癌、膵臓癌、神経膠腫、膠芽腫、メラノーマ、前立腺癌、白血病、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、肝細胞癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、甲状腺癌、胆管癌、子宮内膜癌、腎臓癌、未分化大細胞型リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、中皮腫が挙げられるがこれらに限られず、特に、上皮成長因子受容体の７９０番目のトレオニンがメチオニンに突然変異する（ＥＧＦＲ  Ｔ７９０Ｍ）タイプの腫瘍をより良好に適用されるものとして挙げられる。例えば、本発明における式（Ｉ）化合物のメシル酸塩は、非小細胞癌（ＥＧＦＲ  Ｔ７９０Ｍ）の治療薬物として使用可能である。
【００２１】
本発明で提供する式（Ｉ）化合物の製造方法は、中国特許出願第ＣＮ２０１４１０３６５９１１．４号における実施例１の方法を参照するものであり、なかでも中間体１ｃと中間体２ａの製造において中国特許出願第ＣＮ２０１４１０３６５９１１．４号の実施例をそのまま引用する。
【００２２】
【化３】
2019507787.tif 000005
【００２３】
中間体１ｃと中間体２ａが置換又はカップリング反応を経ることで化合物（ＩＩ）が得られ、化合物（ＩＩ）のニトロ基が還元されることで化合物（ＩＩＩ）が得られ、化合物（ＩＩＩ）と塩化アクリルがアシル化されることで化合物（Ｉ）が得られる。中間体１ｃと中間体２ａの置換又はカップリング反応は、遷移金属触媒による触媒作用下で行ってもよい。前記遷移金属触媒としては、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム／４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテンが挙げられるが、これに限られず、ニトロ基の還元方法で採用される当該分野において公知の一般的な還元剤が挙げられ、当該還元剤として、鉄粉、亜鉛粉、硫化ナトリウム、Ｈ２／白金（ＩＶ）ジオキシドが挙げられるが、これらに限られない。
【００２４】
本発明で提供する式（Ｉ）化合物のメシル酸塩の製造方法は、以下の通りである。
【００２５】
【化４】
2019507787.tif 000006
【００２６】
溶剤中で式（Ｉ）化合物をメシル酸に直接反応させて式（Ｉ）化合物のメシル酸塩を得る。前記溶剤として、アセトンと水の混合溶剤が挙げられるが、これに限られない。
【００２７】
本発明における式（Ｉ）化合物のメシル酸塩は、ヒトを含む哺乳動物に対し、経口投与、経直腸投与、非経腸・非経胃投与（静脈内投与、筋肉内投与又は皮下投与）、局所投与（粉剤、軟膏剤又は点滴剤）、又は腫瘍内投与することができる。
【００２８】
本発明における式（Ｉ）化合物のメシル酸塩の投与量は、約０．０５〜５０ｍｇ／体重ｋｇ／日とすればよく、例えば、０．１〜４５ｍｇ／体重ｋｇ／日、更に例えば、０．５〜３５ｍｇ／体重ｋｇ／日とすればよい。
【００２９】
本発明における式（Ｉ）化合物のメシル酸塩は、経口投与に用いられる固体剤形として製造することができ、当該固体剤形としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤及び顆粒剤等が挙げられるが、これらに限られない。これらの固体剤形において、本発明にかかる式（Ｉ）化合物のメシル酸塩は活性成分として、例えばクエン酸ナトリウム又はリン酸二カルシウムといった少なくとも１種の一般的な不活性賦形剤（又は担体）と混合され、或いは次の成分：（１）充填剤又は増量剤（例えば、デンプン、乳糖、蔗糖、ブドウ糖、マンニトール、ケイ酸等）；（２）結合剤（例えば、ヒドロキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、蔗糖、アラビアゴム等）；（３）保湿剤（例えばグリセロール等）；（４）崩壊剤（例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプン又はタピオカデンプン、アルギン酸、いくつかの複合ケイ酸塩、炭酸ナトリウム等）；（５）溶解遅延剤（例えば、パラフィン等）；（６）吸収促進剤（例えば、第四級アンモニウム化合物等）；（７）湿潤剤（例えば、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセロール等）；（８）吸着剤（例えば、カオリン等）；（９）潤滑剤（例えば、滑石、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ドデシル硫酸ナトリウム等）；又はこれらの混合物と混合される。カプセル剤、錠剤、丸剤には、緩衝剤が含まれてもよい。
【００３０】
前記固体剤形（例えば、錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤、顆粒剤）は、コーティング及びシェル材料（例えば、腸溶コーティングと当該分野において公知のその他材料）でコーティング又はマイクロカプセル化してもよい。これらは不透明剤であってもよく、そして、これら組成物中の活性成分の放出は、遅延した方式で消化器内のある部分において放出されてもよい。使用可能な包埋成分の実例は、重合体物質、ワックス類物質である。必要に応じて、活性成分は前記賦形剤のうちの１種又は複数種とともにマイクロカプセルを形成してもよい。
【００３１】
本発明における式（Ｉ）化合物のメシル酸塩は、経口投与に用いられる液体剤形として製造することができ、当該液体剤形としては、薬学的に許容可能な乳濁液、溶液、懸濁液、シロップ、チンキ等が挙げられるが、これらに限られない。液体剤形は、活性成分である式（Ｉ）化合物のメシル酸塩のほか、当該分野において一般的に用いられる不活性希釈剤（例えば、水及びその他の溶剤、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エタノール、イソプロパノール、炭酸エチル、酢酸エチル、プロパンジオール、１，３−ブタンジオール、ジメチルホルムアミド及び油脂類、特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ひまし油、ゴマ油等）、又はこれら物質の混合物等を含んでもよい。これら不活性希釈剤のほか、本発明の液体剤形は、一般的な助剤（例えば、湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤、甘味剤、矯味剤及び香料等）を含んでもよい。
【００３２】
前記懸濁化剤としては、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、マイクロクリスタリンセルロース、アルミニウムメトキシド及び寒天等、又はこれら物質の混合物が挙げられる。
【００３３】
本発明における式（Ｉ）化合物のメシル酸塩は、非経口注射に用いられる剤形として製造することができ、当該剤形としては、生理的に許容可能な無菌の含水若しくは無水溶液、分散液、懸濁液又は乳濁液、及び、新たに溶解して得られる無菌の注射可能な溶液又は分散液に用いられる無菌粉末が挙げられるが、これらに限られない。適切な担体、希釈剤、溶剤又は賦形剤としては、水、エタノール、ポリオール及びこれらの適切な混合物が挙げられる。
【００３４】
本発明の化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、局所投与に用いられる剤形として製造することができ、当該剤形としては、例えば、軟膏剤、散剤、座薬、点滴剤、噴射剤、吸入剤等が挙げられる。活性成分としての本発明における式（Ｉ）化合物のメシル酸塩は、無菌条件下において、生理的に許容可能な担体及び任意の防腐剤、緩衝剤、或いは必要に応じて推進剤とともに混合される。
【００３５】
本発明は、更に、薬物組成物を提供し、当該薬物組成物は本発明における式（Ｉ）化合物のメシル酸塩と、薬学的に許容可能な担体、賦形剤又は希釈剤とを含む。薬物組成物を製造する際、通常は、本発明における式（Ｉ）化合物のメシル酸塩と、薬学的に許容可能な担体、賦形剤又は希釈剤とを混合する。
【００３６】
一般的な製造方法に基づいて、前記本発明の組成物を一般的な薬物製剤として製造することができる。例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、乳濁液剤、懸濁剤、分散液、溶液剤、シロップ、エリキシル剤、軟膏剤、点滴剤、座薬、吸入剤、噴射剤等である。
【００３７】
本発明に係る式（Ｉ）化合物のメシル酸塩は、単独で投与してもよいし、或いは他の薬学的に許容可能な治療剤と組み合わせて投与してもよく、特に、他の抗腫瘍薬物と組み合わせて投与してもよい。前記治療剤としては、ＤＮＡの化学構造に作用する抗腫瘍薬（例えば、シスプラチン）、ヌクレオチドの合成に影響する抗腫瘍薬物（例えば、メトトレキサート（ＭＴＸ）、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）等）、核酸の転写に影響する抗腫瘍薬物（例えば、ドキソルビシン、エピルビシン、アクラシノマイシン、ミトラマイシン等）、チューブリンの合成に作用する抗腫瘍薬物（例えば、パクリタキセル、ビノレルビン等）、アロマターゼ阻害薬（例えば、アミノグルテチミド、レンタロン、レトロゾール、アナストロゾール等）、細胞シグナル経路阻害剤（例えば、上皮成長因子受容体阻害剤であるイマチニブ（Ｉｍａｔｉｎｉｂ）、ゲフィチニブ（Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）、エルロチニブ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）等）が挙げられるが、これらに限られない。組み合わされる各成分は、同時に投与してもよいし、或いは順に投与してもよく、単一製剤の形式で投与してもよいし、或いは製剤形式とせずに投与してもよい。上記の組み合わせには、本発明における化合物と１種類のその他の活性剤の組み合わせが含まれるだけでなく、本発明における化合物と２種類又は更に多くの種類のその他の活性剤の組み合わせも含まれる。
【００３８】
本発明における式（Ｉ）化合物のメシル酸塩を胃内投与する場合の絶対的バイオアベイラビリティの測定方法は次の通りである。
【００３９】
静脈投与：健康なＳＤラットをランダムに群分けする。測定する化合物を所定の投与量Ｄで静脈投与し、投与前と、投与から５ｍｉｎ後、１５ｍｉｎ後、０．５ｈ後、１．０ｈ後、２．０ｈ後、４．０ｈ後、８．０ｈ後、１２ｈ後及び２４ｈ後に眼球後静脈叢から採血する。これを分離して血漿を作製し、液体クロマトグラフィー／タンデム質量分析法により血漿中の薬物濃度を測定することで、薬物濃度−時間曲線を取得する。
【００４０】
胃内投与：健康なＳＤラットをランダムに群分けする。測定物質を所定の投与量Ｄで胃内投与し、投与前と、投与から０．５ｈ後、１．０ｈ後、２．０ｈ後、４．０ｈ後、６．０ｈ後、８．０ｈ後、１０ｈ後、１２ｈ後及び２４ｈ後にラットの眼球後静脈叢から静脈血を採取する。これを分離して血漿を作製し、液体クロマトグラフィー／タンデム質量分析法により血漿中の薬物濃度を測定することで、薬物濃度−時間曲線を取得する。
【００４１】
投与量を補正した後、薬物濃度−時間曲線よりも下の面積（ＡＵＣ０−ｔ）を計算することで、絶対的バイオアベイラビリティＦを得る。計算式は、Ｆ＝（ＡＵＣ胃内投与×Ｄ静脈）／（ＡＵＣ静脈×Ｄ胃内投与）×１００％である。
【００４２】
本発明における式（Ｉ）化合物のメシル酸塩による動物の移植瘤に対する成長阻害効果は、一般的な方法で測定すればよく、好ましい評価方法としては、ヒト肺癌Ｈ１９７５ヌードマウス皮下移植瘤に対する成長阻害作用である。実験方法：ヒト肺癌Ｈ１９７５細胞株（５×１０６株／匹）をヌードマウスの右側背部の皮下に接種する。腫瘍が平均（１００〜１５０）ｍｍ３まで成長してから、腫瘍の大きさとマウスの体重に基づきランダムに群分けする。測定する化合物を所定の投与量で胃内投与するとともに、溶剤対照群については同量の溶剤を胃内投与する。毎日１回投与し、連続して２１日投与する。実験の全過程において、マウスの体重と腫瘍の大きさを毎週２回測定し、毒性反応出現の有無を観察する。
【００４３】
腫瘍体積の計算式は、腫瘍体積（ｍｍ３）＝０．５×（腫瘍長径×腫瘍短径２）である。
【発明の効果】
【００４４】
本発明の有益な効果は、次の通りである。
【００４５】
本発明で提供する式（Ｉ）化合物のメシル酸塩は、動物の体内において優れたバイオアベイラビリティを有する。
【００４６】
本発明における式（Ｉ）化合物のメシル酸塩は、動物の移植瘤の成長をより良く阻害できるとともに、良好な安全性を示す。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】図１は、実施例２で作製して得た式（Ｉ）化合物のメシル酸塩と、比較例２の物質（即ち、中国特許出願第ＣＮ２０１４１０３６５９１１．４号の実施例１６）を２５ｍｇ／ｋｇ投与した場合のヒト肺癌Ｈ１９７５ヌードマウス皮下移植瘤の腫瘍体積の変化曲線である。
【図２】図２は、実施例２で作製して得た式（Ｉ）化合物のメシル酸塩と、比較例２の物質（即ち、中国特許出願第ＣＮ２０１４１０３６５９１１．４号の実施例１６）を２５ｍｇ／ｋｇ投与した場合のヒト肺癌Ｈ１９７５ヌードマウスの体重の変化曲線である。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
以下に、具体的な実施例とともに、本発明を更に詳細に述べる。これらの実施例は本発明を例示して説明するためのものにすぎず、本発明の範囲を制限するものではない。以下の実施例において具体的条件を明記していない実験方法は、一般的な条件或いはメーカー推奨の条件に基づいて行われたものである。別途説明がない限り、部数及びパーセンテージはそれぞれ重量部及び重量パーセントを指す。
【００４９】
Ｉ．作製にかかる実施例
実施例１：Ｎ−｛２−｛［２−（ジメチルアミノ）エチル］（メチル）アミノ｝−６−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）−５−｛［４−（１−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）ピリミジン−２−イル］アミノ｝ピリジン−３−イル｝アクリルアミド
中間体１ｃ：Ｎ２−メチル−Ｎ２−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−６−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）−３−ニトロピリジン−２，５−ジアミンの製造方法については、中国特許出願第ＣＮ２０１４１０３６５９１１．４号の実施例を引用する。
【００５０】
【化５】
2019507787.tif 000007
【００５１】
中間体２ａ：３−（２−クロロピリミジン−４−イル）−１−メチル−１Ｈ−インドールの製造方法については、中国特許出願第ＣＮ２０１４１０３６５９１１．４号の実施例を引用する。
【００５２】
【化６】
2019507787.tif 000008
【００５３】
化合物（ＩＩ）：Ｎ２−メチル−Ｎ２−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−６−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）−Ｎ５−［４−（１−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）ピリミジン−２−イル］−３−ニトロピリジン−２，５−ジアミンの合成
【００５４】
【化７】
2019507787.tif 000009
【００５５】
丸底フラスコに、３−（２−クロロピリミジン−４−イル）−１−メチル−１Ｈ−インドール（７３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、Ｎ２−メチル−Ｎ２−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−６−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）−３−ニトロピリジン−２，５−ジアミン（１００ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（１４ｍｇ、０．０１５  ｍｍｏｌ）、４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（１４ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム（１２７ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）及び８ｍｌのジオキサンを投入し、アルゴンガス保護下において９５℃で５ｈ反応させた。濾過して、濾液を減圧により蒸発乾燥させて、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝２０：１）により１４０ｍｇの生成物を得た。収率は８６％であった。ＭＳ  ｍ／ｚ：５４５［Ｍ＋１］。
【００５６】
化合物（ＩＩＩ）：Ｎ２−メチル−Ｎ２−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−６−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）−Ｎ５−［４−（１−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）ピリミジン−２−イル］ピリジン−２，３，５−トリアミンの合成
【００５７】
【化８】
2019507787.tif 000010
【００５８】
丸底フラスコに、Ｎ２−メチル−Ｎ２−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−６−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）−Ｎ５−［４−（１−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）ピリミジン−２−イル］−３−ニトロピリジン−２，５−ジアミン（１５０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）、白金ジオキシド（６０ｍｇ）及び１０ｍｌのメタノールを投入し、水素ガスを導入して室温下で１ｈ反応させた。濾過して、プレプレートで分離することで（ジクロロメタン：メタノール＝１０：１）、８０ｍｇの標的化合物を得た。収率は５６％であった。ＭＳ  ｍ／ｚ：５１５［Ｍ＋１］。
【００５９】
化合物（Ｉ）：Ｎ−｛２−｛［２−（ジメチルアミノ）エチル］（メチル）アミノ｝−６−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）−５−｛［４−（１−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）ピリミジン−２−イル］アミノ｝ピリジン−３−イル｝アクリルアミドの合成
【００６０】
【化９】
2019507787.tif 000011
【００６１】
丸底フラスコに、Ｎ２−メチル−Ｎ２−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−６−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）−Ｎ５−［４−（１−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）ピリミジン−２−イル］ピリジン−２，３，５−トリアミン（８０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）と５ｍｌのジクロロメタンを投入して、氷水浴で冷却し、塩化アクリル０．５Ｎのジクロロメタン溶液（０．５ｍｌ、０．２５ｍｍｏｌ）を加えた。氷水浴で１．５時間反応させてから、反応液を５０ｍｌの酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して、濾液を減圧により濃縮し、プレプレートで分離純化することで（ジクロロメタン：メタノール＝１０：１）、２０ｍｇの標的生成物を得た。収率は２３％であった。ＭＳ  ｍ／ｚ：５６９［Ｍ＋１］。
【００６２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．４１（ｓ，１Ｈ），１０．２７（ｓ，１Ｈ），８．６８（ｓ，１Ｈ），８．４４（ｓ，１Ｈ），８．２８（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２９−７．１４（ｍ，３Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），６．２８（ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ，  １Ｈ），５．７６（ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，１Ｈ），５．００（ｑ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．６１（ｓ，２Ｈ），３．２８（ｓ，２Ｈ），２．８０（ｓ，  ３Ｈ），２．７３（ｓ，６Ｈ）。
【００６３】
化合物（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（Ｉ）の製造方法については、中国特許出願第ＣＮ２０１４１０３６５９１１．４号の実施例１を参照した。
【００６４】
実施例２：Ｎ−｛２−｛［２−（ジメチルアミノ）エチル］（メチル）アミノ｝−６−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）−５−｛［４−（１−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）ピリミジン−２−イル］アミノ｝ピリジン−３−イル｝アクリルアミドのメシル酸塩の合成
【００６５】
【化１０】
2019507787.tif 000012
【００６６】
三つ口フラスコに、Ｎ−｛２−｛［２−（ジメチルアミノ）エチル］（メチル）アミノ｝−６−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）−５−｛［４−（１−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）ピリミジン−２−イル］アミノ｝ピリジン−３−イル｝アクリルアミドを１ｇ（１．７６ｍｍｏｌ）、３５ｍｌのアセトン、７ｍｌの水、１６９ｍｇのメシル酸を投入し、全て溶解するまで５０℃で加熱した。減圧により蒸発乾燥させ、アセトニトリルを加えてから再び減圧により蒸発乾燥させた。残留物にアセトンを加えて超音波濾過し、濾過後のケーキを乾燥させて６８５ｍｇの標的生成物を得た。収率は５９％であった。
【００６７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．８０（ｓ，１Ｈ），９．２３（ｓ，１Ｈ），８．５３（ｓ，１Ｈ），８．４２（ｓ，１Ｈ），８．３０（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），８．２３（ｓ，１Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），６．７０（ｄｄ，Ｊ＝１７．０，１０．２Ｈｚ，１Ｈ），６．３４（ｄｄ，Ｊ＝１７．０，１．７Ｈｚ，１Ｈ），５．８３（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，１．６Ｈｚ，１Ｈ），５．０２（ｑ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．６５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．３３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．８６（ｓ，６Ｈ），２．８１（ｓ，３Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ）。
【００６８】
ＩＩ．活性測定にかかる実施例
測定にかかる実施例１：ＳＤラット（Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット）による薬物吸収実験
静脈投与：上海西普爾−必凱実験動物有限公司（Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｓｉｐｐｒ−ＢＫ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｉｍａｌ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．）から提供された健康なＳＤラット（オス・メス各１６匹、体重２００〜２８０ｇ）をランダムに４群に分けた。下表に列記した投与量で上記の実施例１、実施例２、比較例１及び比較例２の物質を静脈投与し、投与前と、投与から５ｍｉｎ後、１５ｍｉｎ後、０．５ｈ後、１．０ｈ後、２．０ｈ後、４．０ｈ後、８．０ｈ後、１２ｈ後及び２４ｈ後にラットの眼球後静脈叢から静脈血０．２ｍｌを採取した。これを分離して血漿を作製し、液体クロマトグラフィー／タンデム質量分析法により血漿中の薬物濃度を測定することで、薬物濃度−時間曲線を取得した。
【００６９】
表１に主な薬物動態パラメータを示す。
【００７０】
【表１】
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【００７１】
表１のうち、比較例１の物質構成は下記の通りであり、中国特許出願第ＣＮ２０１４１０３６５９１１．４号における実施例２の方法で作製して得た。
【００７２】
【化１１】
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【００７３】
比較例２の物質構成は下記の通りであり、中国特許出願第ＣＮ２０１４１０３６５９１１．４号における実施例１６の方法で作製して得た。
【００７４】
【化１２】
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【００７５】
Ｔ１／２：半減期、Ｃｍａｘ：血漿中薬物の最高濃度、ＡＵＣ０−ｔ：薬物濃度−時間曲線よりも下の面積
胃内投与：上海西普爾−必凱実験動物有限公司から提供された健康なＳＤラット（オス・メス各１６匹、体重２００〜２８０ｇ）をランダムに４群に分けた。下表に列記した投与量で上記の実施例１、実施例２、比較例１及び比較例２の物質を胃内投与し、投与前と、投与から０．５ｈ後、１．０ｈ後、２．０ｈ後、４．０ｈ後、６．０ｈ後、８．０ｈ後、１０ｈ後、１２ｈ後及び２４ｈ後にラットの眼球後静脈叢から静脈血０．２ｍｌを採取した。これを分離して血漿を作製し、液体クロマトグラフィー／タンデム質量分析法により血漿中の薬物濃度を測定することで、薬物濃度−時間曲線を取得した。
【００７６】
表２に主な薬物動態パラメータを示す。
【００７７】
【表２】
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【００７８】
表２における比較例１、比較例２の構成及び製造方法は、表１と同様である。
【００７９】
投与量を補正した後、ＡＵＣ０−ｔを計算することで絶対的バイオアベイラビリティＦを得た。計算式はＦ＝（ＡＵＣ胃内投与×Ｄ静脈）／（ＡＵＣ静脈×Ｄ胃内投与）×１００％であり、得られた絶対的バイオアベイラビリティＦを表２に示す。
【００８０】
結論：実施例２における式（Ｉ）化合物のメシル酸塩を胃内投与した場合の絶対的バイオアベイラビリティは最高で２８．２８％に達し、実施例１における式（Ｉ）化合物、比較例１及び比較例２における胃内投与の場合の絶対的バイオアベイラビリティよりも明らかに優れていた。
【００８１】
測定にかかる実施例２：ヒト肺癌Ｈ１９７５ヌードマウス皮下移植瘤に対する成長阻害作用
本発明における実施例２で作製して得た式（Ｉ）化合物のメシル酸塩と、比較例２の物質（比較例２の構成は下記の通りであり、製造方法については中国特許出願第ＣＮ２０１４１０３６５９１１．４号の実施例１６を参照した）によるヒト肺癌Ｈ１９７５ヌードマウス皮下移植瘤に対する阻害作用を観察した。
【００８２】
【化１３】
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【００８３】
細胞培養：Ｈ１９７５を１０％のＦＢＳを加えたＲＰＭＩ−１６４０培地に置いて、５％のＣＯ２を含有する３７℃の恒温培養器にて培養した。接種のために、対数期の細胞を採取してカウントした。
【００８４】
実験動物：ＢＡＬＢ／ｃ  ｎｕｄｅヌードマウス、１５匹、雄、６週零、１８〜２０ｇ、各群５匹、上海動物実験センターより購入。
【００８５】
実験群として、０．５％カルボキシメチルセルロースナトリウム溶剤対照群、実施例２（２５ｍｇ／ｋｇ）群、及び比較例２（２５ｍｇ／ｋｇ）群の３つを設定した。
【００８６】
実験方法：ヒト肺癌Ｈ１９７５細胞株（５×１０６株／匹）を実験用マウスの右側背部の皮下に接種し、腫瘍の成長状況を定期的に観察した。移植瘤の直径をノギスで測定し、腫瘍が平均（１００〜１５０）ｍｍ３まで成長してから、腫瘍の大きさとマウスの体重に基づきランダムに群分けした。実施例２と比較例２の物質を２５ｍｇ／ｋｇずつ胃内投与するとともに、溶剤対照群については同量の溶剤を胃内投与した。毎日１回投与し、連続して２１日投与した。実験の全過程において、マウスの体重と腫瘍の大きさを毎週２回測定し、毒性反応出現の有無を観察した。
【００８７】
腫瘍体積の計算式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝０．５×（腫瘍長径×腫瘍短径２）。
【００８８】
３つの実験群の腫瘍成長曲線を図１に、体重曲線を図２に示す。
【００８９】
結論：本発明の実施例２における式（Ｉ）化合物のメシル酸塩は、ヒト肺癌Ｈ１９７５ヌードマウス皮下移植瘤の成長に対し良好な阻害作用を発揮した。阻害効果は比較例２よりも明らかに優れており、且つ、良好な安全性を示した。
【００９０】
本文中で言及した全ての文献は、いずれも引用によって本願に組み込まれている。なお、本願における上記の開示内容を精読することで、当業者は本発明の精神及び範囲を逸脱することなく本発明について各種の補足、変更又は修正を行うことができ、これらの変形はいずれも本願の請求項に記載された範囲に含まれる。
【図１】
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【図２】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年11月2日(2018.11.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６３
【補正方法】削除
【補正の内容】
【国際調査報告】
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