(57)【要約】ソラフェニブ又はレゴラフェニブと、式：2019507764.tif 000026［式中、Ｙは、Ｃ１−Ｃ８直鎖又は分岐鎖アルキルであり、Ｘは、Ｈ、ハロ、Ｃ３−Ｃ４シクロアルキル又はＣ１−Ｃ４アルキルであり、Ｚは、Ｈ又はフルオロである］を有するトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ、又はその薬学的に許容可能な塩との併用療法は、肝がん又は肝転移の治療に驚くべき有用性を示す。
2019507764.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
肝がん又は肝転移の治療における、式：
【化１】
2019507764.tif 000024
［式中、Ｙは、Ｃ１−Ｃ８直鎖又は分岐鎖アルキルであり、Ｘは、Ｈ、ハロ、Ｃ３−Ｃ４シクロアルキル又はＣ１−Ｃ４アルキルであり、Ｚは、Ｈ又はフルオロである］を有するトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグと組み合わせた、ソラフェニブ及びレゴラフェニブから選ばれる標的治療薬、又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項２】
標的治療薬がソラフェニブである、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグが立体化学：
【化２】
2019507764.tif 000025
を有する、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
ＺがＨである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
ａ）ＸがＨであり、Ｙが２−プロピルペンチルであり、そしてＺがＨである；
ｂ）ＸがＨであり、Ｙが（Ｓ）−ペンタン−２−イルであり、そしてＺがＨである；
ｃ）ＸがＢｒであり、Ｙが（Ｓ）−ペンタン−２−イルであり、そしてＺがＨである；
ｄ）ＸがＨであり、Ｙが（Ｒ）−ｓｅｃ−ブチルであり、そしてＺがＨである；
ｅ）ＸがＨであり、Ｙが２−エチルブチルであり、そしてＺがＨである；
ｆ）Ｘがシクロプロピルであり、Ｙが（Ｓ）−ペンタン−２−イルであり、そしてＺがＨである；又は
ｇ）Ｘがｔ−ブチルであり、Ｙが（Ｓ）−ペンタン−２−イルであり、そしてＺがＨである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
ソラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグが、それぞれ同じ日に毎日（ＱＤ、ＢＩＤ又はＴＩＤとして）投与される、前記請求項のいずれかに記載の使用。
【請求項７】
ソラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグが、共通の経口投与単位で同時送達される、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
ソラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグが、別の経口投与単位で投与される、請求項６に記載の使用。
【請求項９】
ソラフェニブの投与単位（一つ又は複数）とトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの投与単位（一つ又は複数）が、任意の所与の日に少なくとも６時間空けて投与される、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
ソラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグが、１〜２８日間の単剤療法の治療サイクルで、任意に１〜２８日間の治療休止期間を散在させて、交互に投与される、請求項１〜５のいずれかに記載の使用。
【請求項１１】
治療がソラフェニブのサイクルで開始される、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
肝がんがＨＣＣ又は肝内胆管がんである、前記請求項のいずれかに記載の使用。
【請求項１３】
肝転移が大腸がんに由来する、請求項１〜１１のいずれかに記載の使用。
【請求項１４】
肝転移が、乳がん、食道がん、肺がん、メラノーマ、膵がん又は胃がんに由来する、請求項１〜１１のいずれかに記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、がんの併用療法に関し、さらに詳しくは、肝がん及び肝転移のためのソラフェニブ−トロキサシタビンホスホロアミデートプロドラッグ併用療法及びレゴラフェニブ−トロキサシタビンホスホロアミデートプロドラッグ併用療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
肝臓がん（又は肝がん）は肝臓に発生するがんである。原発性肝がんは、世界中で５番目に多く診断されるがんであり、がんによる死亡原因の第２位である。肝がんは、肝臓の表面上又は内部に増殖する悪性腫瘍である。それらは、肝臓自体から形成されるか、又は血管もしくは胆管を含む肝臓内部の構造から形成される。
【０００３】
肝がんの主因は、Ｂ型肝炎ウィルス又はＣ型肝炎ウィルスによるウィルス感染である。がんは通常、これらのウィルスによって引き起こされる肝硬変に続発して形成される。このため、肝がんの発生率が最も高いのは、これらのウィルスが風土特有である東アジア及びサハラ以南のアフリカを含む地域である。肝がんは、続発性肝がんとしても知られる肝転移と混同されるべきでない。これは身体の他の器官に発生して肝臓に転移したがんである。
【０００４】
全原発性肝がんのおよそ７５％を占める最も高頻度の肝がんは、肝細胞がん（ＨＣＣ）である。ＨＣＣは、悪性化した肝臓の細胞（肝細胞(hepatocyte)としても知られる）によって形成されたがんである。肝細胞によって形成される別のタイプのがんは肝芽腫で、これは未熟肝細胞によって特異的に形成される。これは、主に小児に発生する稀な悪性腫瘍で、全小児がんのおよそ１％を占め、１５歳未満の全原発性肝がんの７９％を占める。
【０００５】
肝がんは、胆管、血管及び免疫細胞といった肝臓内部の他の構造から形成されることもある。胆管のがん（胆管がん及び胆管細胞嚢胞腺がん）は原発性肝がんのおよそ６％を占める。ＨＣＣと胆管がんの両方からなるＨＣＣの異型もある。肝臓血管の腫瘍は、血管肉腫及び血管内皮腫を含む。胎児性肉腫及び線維肉腫は、間葉として知られる結合組織の一種から発生する。肝臓の筋肉から発生するがんは、平滑筋肉腫及び横紋筋肉腫である。その他の稀な肝がんは、がん肉腫、奇形腫、卵黄嚢腫瘍、カルチノイド腫瘍及びリンパ腫などである。リンパ腫は通常肝臓へのびまん性浸潤を有するが、稀な例では肝腫瘤を形成することもある。
【０００６】
肝硬変を起こしていない肝臓に対しては外科的切除が最適な治療であることが多い。肝硬変の肝臓を切除すると、肝不全などの合併症のリスクが高まる可能性がある。切除後の５年生存率はここ数十年の間に大幅に改良され、今や５０％を超えるほどである。初期腫瘍の広がり又は新規腫瘍の形成による切除後の再発率は７０％を超える。肝移植も、この形態の治療に耐えられ、腫瘍が特定の基準（例えばミラノ基準）に適合するＨＣＣの症例で使用できる。がんが末期で発見されることが多いため、手術及び移植に適格なのは、ＨＣＣを有する個人の３０〜４０％未満である。また、ＨＣＣは肝移植を待つ間に進行する可能性があり、最終的に肝移植が阻まれることになりかねない。
【０００７】
経皮的アブレーションは、治癒を提供できる唯一の非外科的治療である。多くの形態の経皮的アブレーションがあり、化学物質を肝臓に注入する（エタノール又は酢酸）、又は高周波アブレーション、マイクロ波、レーザーもしくは凍結療法を用いて極端な温度を生成する、のいずれかからなる。これらのうち、高周波アブレーションはＨＣＣで最も評判の良い治療法一つであるが、制限もある。それは、他の臓器及び血管に近接した腫瘍を、それぞれ発熱及び熱失神効果(heat sync effect)により、治療できないことなどである。
【０００８】
全身化学療法はＨＣＣでは日常的には使用されないが、局所化学療法は、肝動脈化学塞栓術（ＴＡＣＥ）として知られる処置で使用されることがある。この処置では、ドキソルビシン又はシスプラチンなどの細胞毒性薬とリピオドールを投与し、肝臓に分布する動脈をゼラチンスポンジ又は他の粒子で塞ぐ。大部分の全身薬はＨＣＣの治療に何の効果もないので、肝がんの発生に関与する分子経路についての研究から、細胞増殖及び一部の場合においては血液細胞増殖を防止する標的療法薬であるソラフェニブが生まれた。更なる研究により、ソラフェニブのフルオロ類似体であるレゴラフェニブが生まれた。レゴラフェニブは、経口受容体チロシンキナーゼ阻害薬である標的療法薬で、細胞分裂を促進する重要な経路を遮断する。
【０００９】
放射線療法は、肝臓が放射線に耐性がないので、ＨＣＣではあまり使用されない。肝臓の特定領域に良く標的化された放射線を提供する現代技術を持ってしても、周辺肝組織への副次的損傷が問題となり、より良い“肝臓保存的”レジメンの必要性が強調される。放射線療法プラス化学塞栓術、局所化学療法、全身化学療法又は標的療法薬の二元治療が、放射線療法単独に優る利益を示すことができる。
【００１０】
ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）として販売）は、進行した原発性肝がん患者のためのＦＤＡ承認薬である。これは、Ｒａｆ／Ｍｅｋ／Ｅｒｋ経路を含む複数の細胞内及び細胞表面キナーゼと相互作用する小分子である。これらのキナーゼを阻害することにより、細胞増殖及び血管新生に関与する遺伝情報転写が阻害されて、腫瘍への血液供給が低下する治療のために、固形腫瘍組織中の低酸素状態が増大しうるという興味深い観察が見られる。
【００１１】
しかしながら、ソラフェニブのような薬物が開発されても、肝がんに対する現行の治療選択肢は、その限定的な効果及び重大な毒性のために不十分である。
レゴラフェニブ（ＳＴＩＶＡＲＧＡ（登録商標）として販売）は、標準治療が奏功しなかった転移大腸がん患者のため、及び進行消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）患者で、外科的に取り除けず、この疾患のためのその他のＦＤＡ承認治療にもはや応答しない患者のためのＦＤＡ承認薬である。レゴラフェニブは、ソラフェニブ治療後に進行した肝がん患者のための第二選択薬としても、第II相臨床試験において無増悪期間（ＴＴＰ）及び全生存（ＯＳ）に関して良好な結果を示している。
【００１２】
トロキサシタビン（ベータ−Ｌ−ジオキソランシチジン）は、天然にないＬ−配置を有する細胞毒性デオキシシチジン類似体で、インビトロ及びインビボで固形悪性腫瘍及び造血器悪性腫瘍の両方に対して広い活性を示している。特に、印象深い活性が、肝細胞、前立腺、及び腎由来のヒトがん細胞株及び異種移植片に対して観察されている（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５，３００８−３０１１，１９９５）。トロキサシタビン処置は、通常はヌクレオシドの第一のリン酸化段階を担っているキナーゼのデオキシシチジンキナーゼ（ｄＣＫ）の耐性突然変異を引き起こし、トロキサシタビンモノホスフェートを全く又は非常に低レベルでしかもたらさないことが示されている。
【００１３】
トロキサシタビンは、２００８年に急性骨髄性白血病の適応において第III相臨床試験に入ったが、登録に至らなかった。中断された第II相のトロキサシタビン試験は、乳がん、大腸がん、膵がん、メラノーマ、ＮＳＣＬＣ、腎臓、前立腺及び卵巣腫瘍を含む。トロキサシタビンは一般的に静脈内注入として投与されたので、がんの部位とは無関係に多くの組織が薬物に暴露された。トロキサシタビンの臨床開発は断念されたと考えられている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５，３００８−３０１１，１９９５
【発明の概要】
【００１５】
本発明は、少なくとも一部は、ソラフェニブとトロキサシタビンの特定のホスホロアミデートプロドラッグとの一定の組合せが、肝がん細胞の阻害、及びその増殖の防止に特に有効であるという発見に基づく。この発見は、肝がん（例えばＨＣＣ）の領域内での、ソラフェニブとトロキサシタビンのこれらのホスホロアミデートプロドラッグに特異的な相乗効果、又は相加効果より大きい効果と言うことができる。我々は、この有益な相互作用は、肝転移の治療にも広げられると仮定している。
【００１６】
理論に拘束されることは望まないが、我々はさらに、ソラフェニブとトロキサシタビンの特定のホスホロアミデートプロドラッグとの組合せの予期せぬ強い抗発がん活性は、ソラフェニブによって生じる肝組織内の局所低酸素状態がトロキサシタビンプロドラッグからその細胞毒性トリホスフェートへの代謝活性化を増強することになるので、さらに増強されるのであろうとも仮定している。
【００１７】
本発明の更なる側面は、少なくとも一部は、レゴラフェニブとトロキサシタビンの特定のホスホロアミデートプロドラッグとの一定の組合せが、肝がん細胞の阻害、及びその増殖の防止に特に有効であるという発見に基づく。この発見は、肝がん（例えばＨＣＣ）の領域内での、レゴラフェニブとトロキサシタビンのこれらのホスホロアミデートプロドラッグに特異的な、相乗効果、又は相加効果より大きい効果と言うことができる。我々は、この有益な相互作用は、肝転移の治療にも広げられると仮定している。
【００１８】
理論に拘束されることは望まないが、我々はさらに、レゴラフェニブとトロキサシタビンの特定のホスホロアミデートプロドラッグとの組合せの予期せぬ強い抗発がん活性は、レゴラフェニブによって生み出される肝組織内の局所低酸素状態がトロキサシタビンプロドラッグからその細胞毒性トリホスフェートへの代謝活性化を増強ことになるので、さらに増強されるのであろうとも仮定している。
【００１９】
従って、本発明は、本明細書中に定義のソラフェニブ及びトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグをヒト又は哺乳動物個体に併用投与することによる、肝がん及び肝転移を治療するための方法及び組成物を提供する。
【００２０】
従って、本発明は、本明細書中に定義のレゴラフェニブ及びトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグをヒト又は哺乳動物個体に併用投与することによる、肝がん及び肝転移を治療するための方法及び組成物を提供する。
【００２１】
ソラフェニブ
本発明は、様々な側面及び態様において、ソラフェニブ（すなわち、ソラフェニブトシレートならびにソラフェニブのその他の薬学的に許容可能な形態、塩、及びエステル）の使用を含む。ソラフェニブは、ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）として市販されている。これはソラフェニブのトシレートである。ソラフェニブトシレートは、化学名４−（４−｛３−［４−クロロ−３（トリフルオロメチル）フェニル］ウレイド｝フェノキシ）  Ｎ−メチルピリジン−２−カルボキサミド  ４−メチルベンゼンスルホネートを有し、その構造式は、
【００２２】
【化１】
2019507764.tif 000003
【００２３】
である。ソラフェニブトシレートは、分子式Ｃ２１Ｈ１６ＣｌＦ３Ｎ４Ｏ３  ｘ  Ｃ７Ｈ８Ｏ３Ｓ及び分子量６３７．０ｇ／ｍｏｌを有する白色から帯黄色又は帯褐色固体である。ソラフェニブトシレートは、水性媒体に実質的に不溶性、エタノールにわずかに可溶性、そしてＰＥＧ４００に可溶性である。ソラフェニブは、米国特許第７，２３５，５７６号、７，２３５，５７６号、７，８９７，６２３号及び８，１２４，６３０号にも記載されている。
【００２４】
ソラフェニブの用量及び投与は、食物なしで１日２回４００ｍｇ（２錠）を経口投与することが承認されている。しかしながら、疑わしい有害薬物反応に対処するために治療中断及び／又は用量減が必要なこともある。そのような場合、用量は１日１回４００ｍｇ又は１日おきに４００ｍｇに低減できる（例えば、ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）経口錠剤に対するＦＤＡラベル、初期Ｕ．Ｓ．承認：２００５参照）。当業者であれば、ソラフェニブの用量及び投与は、医学的に承認されたガイドラインに従えるだけでなく、そのようなガイドラインに対する医学的に容認された逸脱又は変更にも従えることは理解されるであろう。ソラフェニブの用量及び投与に関する更なる説明及び詳細は以下の併用化学療法の項に示す。
【００２５】
本発明は、１個又は複数個の原子が、その／それらの原子の同位体、すなわち同じ原子番号を有するが原子質量がそれとは異なる、典型的には天然に存在する原子によって置換されている化合物も含む。本発明の化合物に組み込まれうる同位体の例は、水素の同位体、例えば２Ｈ及び３Ｈ（ジュウテリウムに対してはＤ及びトリチウムに対してはＴとそれぞれ表示される）、炭素の同位体、例えば１１Ｃ、１３Ｃ及び１４Ｃ、窒素の同位体、例えば１３Ｎ及び１５Ｎ、酸素の同位体、例えば１５Ｏ、１７Ｏ及び１８Ｏ、リンの同位体、例えば３１Ｐ及び３２Ｐ、フッ素の同位体、例えば１８Ｆ、塩素の同位体、例えば３６Ｃｌ及び臭素の同位体、例えば７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ及び８２Ｂｒなどであるが、これらに限定されない。同位体標識された化合物は、例えば、３Ｈ及び１４Ｃなどの放射性同位体が存在するもの、又は２Ｈ及び１３Ｃなどの非放射性同位体が存在するものを含む。
【００２６】
同位体含有化合物中に含まれる同位体の選択は、その化合物の特定の用途に依存する。例えば、薬物又は基質の組織分布アッセイのため、又は代謝研究においては、３Ｈ又は１４Ｃなどの放射性同位体が組み込まれた化合物が一般的に最も有用であろう。例えば陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）などの放射性イメージング用途の場合、１１Ｃ、１８Ｆ、１３Ｎ又は１５Ｏなどの陽電子放出同位体が有用であろう。ジュウテリウム、すなわち２Ｈのようなより重い同位体の組込みは、本発明の化合物に対するより大きい代謝安定性からもたらされる一定の治療的利益を提供できる。例えば、化合物のインビボ半減期の増大、必要用量の低減又は治療指数の改良が得られうる。
【００２７】
式Ｉ又は式Ｉの任意のサブグループの同位体標識化合物は、一般的に、当業者に公知の慣用技術により、又は適当な同位体標識試薬又は出発材料を対応する非同位体標識試薬又は出発材料の代わりに使用することによる本明細書中のスキーム及び／又は実施例に記載されている方法の類似の方法により、製造することができる。
【００２８】
一態様において、本発明は、ジュウテリウム化オメガジフェニルウレア又はその塩、さらに詳しくはドナフェニブ、４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−１’，１’，１’−トリジュウテロメチルピコリンアミド又はその塩、すなわち、構造式：
【００２９】
【化２】
2019507764.tif 000004
【００３０】
を有する化合物を含む。ドナフェニブ及びその合成については、例えばＷＯ２０１１／１１３３６７及びＷＯ２０１４／０１２４８０に拡大的に開示されている。
レゴラフェニブ
本発明は、様々な側面及び態様において、レゴラフェニブ（すなわち、レゴラフェニブ一水和物ならびにレゴラフェニブのその他の薬学的に許容可能な形態、塩、及びエステル）の使用を含む。レゴラフェニブは、ＳＴＩＶＡＲＧＡ（登録商標）として市販されている。これはレゴラフェニブの一水和物である。レゴラフェニブ一水和物は、化学名４−［４−（｛［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］カルバモイル｝アミノ）−３−フルオロフェノキシ］−Ｎ−メチルピリジン−２−カルボキサミド一水和物を有し、その構造式は、
【００３１】
【化３】
2019507764.tif 000005
【００３２】
である。レゴラフェニブ一水和物は、分子式Ｃ２１Ｈ１５ＣｌＦ４Ｎ４Ｏ３  ｘ  Ｈ２Ｏ及び分子量５００．８３ｇ／ｍｏｌを有する固体である。レゴラフェニル一水和物は、水性媒体に実質的に不溶性、アセトニトリル、メタノール、エタノール、及び酢酸エチルにわずかに可溶性、そしてアセトンに難溶性である。レゴラフェニブは、とりわけＷＯ２００４／１１３２７４、ＷＯ２００５／０００２８４及びＷＯ２００５００９９６１にも記載されている。
【００３３】
トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ
本発明の範囲内で使用されるトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグは、典型的には、式（Ｉ）：
【００３４】
【化４】
2019507764.tif 000006
【００３５】
［式中、
Ｒ１は、ＯＲ１１、又はＮＲ５Ｒ５’であり；
Ｒ２は、Ｈ又はＦであり；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６、Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ６又はＯ（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ６であり；
Ｒ５’は、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ２２アルキル又はＣ３−Ｃ７シクロアルキルであり；
Ｒ１１は、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ１３は、Ｈ、フェニル、ピリジル、ベンジル、インドリル又はナフチルであり、前記フェニル、ピリジル、ベンジル、インドリル及びナフチルは、任意に１、２又は３個のＲ２２で置換されていてもよく；
Ｒ１５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキルＣ１−Ｃ３アルキル、フェニル、ベンジル又はインドリルであり；
Ｒ１５’は、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルであるか；又は
Ｒ１５及びＲ１５’は、それらが結合している炭素原子と一緒になってＣ３−Ｃ７シクロアルキレン基を形成し、ここで、各Ｃ１−Ｃ６アルキルは、任意にハロ、ＯＲ１８及びＳＲ１８から選ばれる基で置換されていてもよく、各Ｃ３−Ｃ７ｃシクロアルキル、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキレン、フェニル及びベンジルは、任意にＣ１−Ｃ３アルキル、ハロ及びＯＲ１８から独立に選ばれる１又は２個の基で置換されていてもよく；
Ｒ１６は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキルＣ１−Ｃ３アルキル、ベンジル、又はフェニルであり、そのいずれも、任意に、ハロ、ＯＲ１８及びＮ（Ｒ１８）２からそれぞれ独立に選ばれる１、２又は３個の基で置換されていてもよく；
各Ｒ１８は、独立に、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキル又はＣ３−Ｃ７シクロアルキルであり；  
各Ｒ２２は、ハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６ハロアルコキシ、フェニル、ヒドロキシＣ１−Ｃ６アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキルカルボニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ３アルコキシカルボニルＣ１−Ｃ６アルキル、カルボキシＣ１−Ｃ６アルキル、ヒドロキシ、アミノ  ＣＮ、及びＮＯ２から独立に選ばれるか、又は隣接する環炭素原子に結合した任意の２個のＲ２２基が一緒になって−Ｏ−（ＣＲ２３Ｒ２３’）１−６−Ｏ−を形成してもよく；
Ｒ２３及びＲ２３’は、独立に、Ｈ又はＣ１−Ｃ３アルキルである］によって表される；又はその薬学的に許容可能な塩及び／又は溶媒和物である。
【００３６】
式（Ｉ）の化合物は、任意に、薬学的に許容可能な塩及び／又は溶媒和物の形態で、又は遊離形として提供されうる。
本発明の典型的な態様において、Ｒ１は、ＮＲ５Ｒ５’、例えばＮＨ２又はＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ１−Ｃ６アルキルである。
【００３７】
Ｒ２は、典型的にはＨである。
好適な態様において、Ｒ１は、ＮＨ２であり、Ｒ２はＨである。
代替の態様において、Ｒ１は、ＮＨ２であり、Ｒ２はＦである。
【００３８】
典型的には、式（Ｉ）の化合物において、部分−ＮＨＣ（Ｒ１５）（Ｒ１５'）−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ１６の部分は、天然及び非天然アミノ酸残基を含むアミノ酸エステル残基を形成する。特に興味深いのは、Ｒ１５'が水素で、Ｒ１５が、メチル、イソプロピル、イソブチル又はベンジルであるアミノ酸残基である。典型的な構造において、Ｒ１５’はＨであり、Ｒ１５はＣ１−Ｃ３アルキル、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピルである。
【００３９】
Ｒ１５'が水素で、Ｒ１５が水素以外である化合物において、不斉炭素原子における配置は典型的にはＬ−アミノ酸の配置であるので、式（Ia）に示された立体化学を有する化合物が提供される。
【００４０】
【化５】
2019507764.tif 000007
【００４１】
式Iaの化合物の好適な構造において、Ｒ１５はメチルである。
式Iaの化合物の更なる構造において、Ｒ１５はベンジルである。
式Iaの化合物の代表的構造において、
Ｒ１はＮＨ２であり；
Ｒ２はＨであり；
Ｒ１３は、フェニル、ナフチル又はインドリルであり、そのいずれも、任意に、ハロ、例えばブロモ又はＣ３−Ｃ４シクロアルキル、例えばシクロプロピルで置換されていてもよく；
Ｒ１５はＣ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｒ１６はＣ１−Ｃ８アルキルである。
【００４２】
式Iaの化合物の更なる代表的構造において、
Ｒ１はＮＨ２であり；
Ｒ２はＨであり；
Ｒ１３はナフチルであり；
Ｒ１５はＣ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｒ１６はＣ１−Ｃ８アルキル又はベンジルである。
【００４３】
式Iaの化合物の更なる代表的構造において、
Ｒ１はＮＨ２であり；
Ｒ２はＨであり；
Ｒ１３はフェニルであり、任意に、その４位で、ハロ、例えばブロモ又はＣ３−Ｃ４シクロアルキル、例えばシクロプロピルで置換されていてもよく；
Ｒ１５はメチルであり；
Ｒ１６はＣ３−Ｃ８アルキルである。
【００４４】
式Iaの化合物の更なる代表的構造において、
Ｒ１はＮＨ２であり；
Ｒ２はＨであり；
Ｒ１３はフェニルであり；
Ｒ１５はメチルであり；
Ｒ１６はＣ３−Ｃ８アルキルである。
【００４５】
式Iaの化合物の更なる代表的構造において、
Ｒ１はＮＨ２であり；
Ｒ２はＦであり；
Ｒ１３は、フェニル、ナフチル又はインドリルであり、そのいずれも、任意に、ハロ、例えばブロモ又はＣ３−Ｃ４シクロアルキル、例えばシクロプロピルで置換されていてもよく；
Ｒ１５はＣ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｒ１６はＣ１−Ｃ８アルキルである。
【００４６】
式Iaの化合物の更なる代表的構造において、
Ｒ１はＮＨ２であり；
Ｒ２はＦであり；
Ｒ１３はナフチルであり；
Ｒ１５はＣ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｒ１６はＣ１−Ｃ８アルキル又はベンジルである。
【００４７】
式Iaの化合物の更なる代表的構造において、
Ｒ１はＮＨ２であり；
Ｒ２はＦであり；
Ｒ１３はフェニルであり、任意に、その４位で、ハロ、例えばブロモ又はＣ３−Ｃ４シクロアルキル、例えばシクロプロピルで置換されていてもよく；
Ｒ１５はメチルであり；
Ｒ１６はＣ３−Ｃ８アルキルである。
【００４８】
式Iaの化合物の更なる代表的構造において、
Ｒ１はＮＨ２であり；
Ｒ２はＦであり；
Ｒ１３はフェニルであり；
Ｒ１５はメチルであり；
Ｒ１６はＣ３−Ｃ８アルキルである。
【００４９】
更なる構造において、Ｒ１５及びＲ１５’は、それらが結合している炭素原子と一緒になってＣ３−Ｃ７シクロアルキル、例えばシクロプロピル又はシクロブチルを形成する。
Ｒ１６は、典型的には、Ｃ１−Ｃ１０アルキル又はＣ３−Ｃ７シクロアルキルである。
【００５０】
Ｒ１６の代表的値は、Ｃ１−Ｃ３アルキル、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピルである。Ｒ１６の好適な値はメチルであり、Ｒ１６のさらに好適な値はイソプロピルである。
【００５１】
一態様において、Ｒ１６はＣ３−Ｃ１０アルキルである。
本態様によるＲ１６の代表的値は、分岐Ｃ５−Ｃ８アルキルを含む。一態様において、Ｒ１６の分岐点はＣ１である。代替の態様において、Ｒ１６の分岐点はＣ２である。典型的には、これらの態様に従って、Ｒ１５’はＨであり、Ｒ１５が結合している炭素原子における立体化学はL-アミノ酸のそれであるので、一般式：
【００５２】
【化６】
2019507764.tif 000008
【００５３】
［式中、Ｒ１６１及びＲ１６２は、同じ又は異なるＣ１−Ｃ３アルキルであり、Ｒ１６３及びＲ１６４は、同じ又は異なるＣ１−Ｃ３アルキルである］の化合物が提供される。
典型的には、式（Ia’）の化合物において、Ｒ１６はペンタン−２−イル、すなわち、Ｒ１６１はプロピルであり、Ｒ１６２はメチルである。
【００５４】
式（Ia’）の化合物の更なる典型的構造において、Ｒ１６はブタン−２−イル、すなわち、Ｒ１６１はエチルであり、Ｒ１６２はメチルである。
典型的には、式（Ia”）の化合物において、Ｒ１６は２−プロピルペンチル又は２−エチルブチル、すなわち、Ｒ１６３及びＲ１６４は、どちらもそれぞれプロピル又はエチルである。
【００５５】
Ｒ１６の更なる代表的値は、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、例えばシクロヘキシルを含む。
Ｒ１６の更なる代表的値は、シクロペンチルである。
【００５６】
Ｒ１６の更なる代表的値は、ベンジルである。
Ｒ１３は、典型的には、フェニル、ナフチル又はインドリルであり、そのいずれも、任意に１又は２個のＲ２２で置換されていてもよい。
【００５７】
本発明の一態様において、Ｒ１３は、フェニル又はナフチルであり、そのいずれも、任意に置換されていてもよい。
本発明の一態様において、Ｒ１３はナフチルである。
【００５８】
本発明の好適な態様において、Ｒ１３はフェニルである。
Ｒ１３の代表例は、任意に１、２又は３個のＲ２２で置換されていてもよいフェニルを含むので、式（II）：
【００５９】
【化７】
2019507764.tif 000009
【００６０】
［式中、各Ｒ２２は、存在する場合、ハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル及びＣ１−Ｃ６アルコキシから独立に選ばれる］の化合物が提供される。典型的には、フェニル環は非置換であるか又は１個のＲ２２で置換されている。
【００６１】
式（II）の化合物の一つの構造において、フェニル環は非置換である。
式（II）の化合物の更なる構造において、フェニル環は１個のＲ２２で置換されている。典型的には、この構造において、置換基Ｒ２２は、フェニル環の４位に位置している。
【００６２】
本発明の化合物の一態様において、Ｒ１３は、４位で、ハロ、例えばブロモ又はＣ３−Ｃ４シクロアルキル、例えばシクロプロピルで置換されたフェニルである。
式（II）の化合物の一つの構造において、フェニル環は、Ｃ１−Ｃ３アルコキシカルボニルＣ１−Ｃ３アルキルで置換されている。この構造の代表例を部分式：
【００６３】
【化８】
2019507764.tif 000010
【００６４】
［式中、Ｒ３０は、Ｃ１−Ｃ３アルキル、例えばメチル又はイソプロピルである］に示す。
式（II）の化合物の更なる構造において、フェニル環は、隣接炭素原子上に位置する２個のＲ２２で置換され、２個のＲ２２が一緒になって−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−を形成すると、部分構造：
【００６５】
【化９】
2019507764.tif 000011
【００６６】
が形成される。
Ｒ１３の更なる代表的値は、任意に置換されていてもよいピリジルを含む。典型的には、ピリジル部分は、非置換であるか又はハロ、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ヒドロキシ、アミノからそれぞれ独立に選ばれる１又は２個の置換基で置換されている。
【００６７】
式（Ｉ）の化合物の典型的な態様において、
Ｒ１は、ＮＨ２又はＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ１３は、フェニル、ナフチル又はインドリルで、そのいずれも任意にハロ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｃ１−Ｃ３アルコキシ、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル又はＣ１−Ｃ３ハロアルキルで置換されていてもよく；
Ｒ１５’はＨであり、Ｒ１５は、Ｃ１−Ｃ３アルキル又はベンジルであり；
Ｒ１６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル又はＣ３−Ｃ７シクロアルキルである。
【００６８】
式（Ｉ）又は（Ia）の化合物の典型的な態様において、
Ｒ１は、ＮＨ２又はＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ１３は、フェニル又はナフチルで、そのいずれも任意にハロ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｃ１−Ｃ３アルコキシ、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル又はＣ１−Ｃ３ハロアルキルで置換されていてもよく；
Ｒ１５’はＨであり、Ｒ１５は、Ｃ１−Ｃ３アルキル又はベンジルであり；
Ｒ１６は、Ｃ２−Ｃ１０アルキル又はＣ３−Ｃ７シクロアルキルである。
【００６９】
式（Ｉ）の化合物の更なる典型的な態様において、
Ｒ１はＮＨ２であり；
Ｒ２はＨであり；
Ｒ１３はフェニルであり；
Ｒ１５’はＨであり、Ｒ１５は、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｒ１６は、Ｃ１−Ｃ３アルキル又はシクロヘキシルである。
【００７０】
式（Ｉ）又は（Ia）の化合物の更なる典型的な態様において、
Ｒ１はＮＨ２であり；
Ｒ２はＨであり；
Ｒ１３はフェニルであり；
Ｒ１５’はＨであり、Ｒ１５は、Ｃ１−Ｃ３アルキル又はベンジルであり；
Ｒ１６は、Ｃ３−Ｃ８アルキル、シクロペンチル又はシクロヘキシルである。
【００７１】
好適な態様において、本発明は、ヒト又は哺乳動物における肝がん又は肝転移の治療法を提供し、該方法は、肝がん又は肝転移の治療において、ソラフェニブと、式：
【００７２】
【化１０】
2019507764.tif 000012
【００７３】
［式中、Ｙは、Ｃ１−Ｃ８直鎖又は分岐鎖アルキルであり、Ｘは、Ｈ、ハロ、Ｃ３−Ｃ４シクロアルキル又はＣ１−Ｃ４アルキルであり、Ｚは、Ｈ又はフルオロである］を有するトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ、又はその薬学的に許容可能な塩を組み合わせて投与することを含む（本明細書においてさらに定義されている通り）。
【００７４】
更なる態様において、本発明は、ヒト又は哺乳動物における肝がん又は肝転移の治療法を提供し、該方法は、肝がん又は肝転移の治療において、レゴラフェニブと、式：
【００７５】
【化１１】
2019507764.tif 000013
【００７６】
［式中、Ｙは、Ｃ１−Ｃ８直鎖又は分岐鎖アルキルであり、Ｘは、Ｈ、ハロ、Ｃ３−Ｃ４シクロアルキル又はＣ１−Ｃ４アルキルであり、Ｚは、Ｈ又はフルオロである］を有するトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ、又はその薬学的に許容可能な塩を組み合わせて投与することを含む（本明細書においてさらに定義されている通り）。
【００７７】
一定の態様において、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグは、立体化学：
【００７８】
【化１２】
2019507764.tif 000014
【００７９】
［式中、Ｘ、Ｙ及びＺは上記定義の通り］を有する。
好適な態様において、ＺはＨである。
一定の態様において、
ａ）ＸはＨであり、Ｙは２−プロピルペンチルである；
ｂ）ＸはＨであり、Ｙは（Ｓ）−ペンタン−２−イルである；
ｃ）ＸはＢｒであり、Ｙは（Ｓ）−ペンタン−２−イルである；
ｄ）ＸはＨであり、Ｙは（Ｒ）−ｓｅｃ−ブチルである；
ｅ）ＸはＨであり、Ｙは２−エチルブチルである；
ｆ）Ｘはシクロプロピルであり、Ｙは（Ｓ）−ペンタン−２−イルである；又は
ｇ）Ｘはｔ−ブチルであり、Ｙは（Ｓ）−ペンタン−２−イルである；
いずれの場合も特にＺがＨの場合である。
【００８０】
代替の態様において、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグは、立体化学：
【００８１】
【化１３】
2019507764.tif 000015
【００８２】
［式中、Ｘ、Ｙ及びＺは上記定義の通り］を有する。
好適な態様において、ＺはＨである。
一定の態様において、
ａ）ＸはＨであり、Ｙは２−プロピルペンチルである；
ｂ）ＸはＨであり、Ｙは（Ｓ）−ペンタン−２−イルである；
ｃ）ＸはＢｒであり、Ｙは（Ｓ）−ペンタン−２−イルである；
ｄ）ＸはＨであり、Ｙは（Ｒ）−ｓｅｃ−ブチルである；
ｅ）ＸはＨであり、Ｙは２−エチルブチルである；
ｆ）Ｘはシクロプロピルであり、Ｙは（Ｓ）−ペンタン−２−イルである；又は
ｇ）Ｘはｔ−ブチルであり、Ｙは（Ｓ）−ペンタン−２−イルである；
いずれの場合も特にＺがＨの場合である。
【００８３】
一定の態様において、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグは、下記化合物：
【００８４】
【化１４】
2019507764.tif 000016
【００８５】
から選ばれる。
典型的な態様において、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグは、下記化合物：
【００８６】
【化１５】
2019507764.tif 000017
【００８７】
から選ばれる。
トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの合成法は、ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０６９３７０に拡大的に記載及び例示されており、その内容は引用によってその全文を援用する。
【００８８】
肝がん
本発明は、様々な側面及び態様において、ヒトなどの霊長類でありうる対象の肝がんの治療に適用可能である。対象は哺乳動物、例えばマウス以外の哺乳動物でありうる。対象は成年のヒト（すなわち１８歳以上）、又は若年のヒト（すなわち１８歳未満）でありうる。
【００８９】
様々な態様において、肝がん（例えばＨＣＣ）はソラフェニブに耐性を示さない。あるいは、肝がん（例えばＨＣＣ）は、ソラフェニブに対して一次又は二次耐性を有しうる。対象は、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの不在下でソラフェニブに応答できる。対象は、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの不在下でソラフェニブに応答できない。一部の態様において、対象は、少なくとも２、４、６、８、１０ヶ月、又はそれ以上継続的にソラフェニブによる前治療を受けている。他の態様において、対象は、ソラフェニブに対する一つ又は複数の重大な有害副作用を経験しており、そのために用量の低減が必要な患者である。
【００９０】
様々な態様において、肝がん（例えばＨＣＣ）はレゴラフェニブに耐性を示さない。あるいは、肝がん（例えばＨＣＣ）は、レゴラフェニブに対して一次又は二次耐性を有しうる。対象は、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの不在下でレゴラフェニブに応答できる。対象は、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの不在下でレゴラフェニブに応答できない。一部の態様において、対象は、少なくとも２、４、６、８、１０ヶ月、又はそれ以上継続的にレゴラフェニブによる前治療を受けている。他の態様において、対象は、レゴラフェニブに対する一つ又は複数の重大な有害副作用を経験しており、そのために用量の低減が必要な患者である。
【００９１】
様々な態様において、肝がん（例えばＨＣＣ）は、中間期、進行期、又は末期である。肝がん（例えばＨＣＣ）は、転移性又は非転移性でありうる。肝がん（例えばＨＣＣ）は、切除可能又は切除不能でありうる。肝がん（例えばＨＣＣ）は、単発性腫瘍、多発性腫瘍、又は浸潤性増殖パターン（門脈又は肝静脈への）を有する境界の不明瞭な腫瘍を含みうる。肝がん（例えばＨＣＣ）は、線維層板状(fibrolamellar)、偽腺性（腺様）、多形性（巨細胞）、又は明細胞パターンを含みうる。肝がん（例えばＨＣＣ）は、高分化型を含み得、腫瘍細胞は肝細胞に類似し、小柱(trabeculae)、コード、及びネストを形成し、及び／又は細胞質に胆汁色素を含有する。肝がん（例えばＨＣＣ）は、低分化型を含み得、悪性上皮細胞は、非付着性(discohesive)、多形性、未分化、及び／又は巨大である。一部の態様において、肝がん（例えばＨＣＣ）は、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝硬変、又は２型糖尿病と関連している。
【００９２】
一部の態様において、対象は、米国東海岸がん臨床試験グループ(Eastern Cooperative Oncology Group，ＥＣＯＧ）の全身状態(performance status)＜２を有するヒトである。
【００９３】
一部の態様において、対象は、下記のように定義される容認可能な肝機能を有するヒトである。（ｉ）総ビリルビン＜正常上限（ＵＬＮ）の１．５倍；肝細胞がんのみの患者の場合、総ビリルビン＜３ｍｇ／ｄＬ（すなわち、ビリルビンのチャイルド・ピュー・スコア(Child-Pugh Score)が２を超えない）；(ii)アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）＜５×ＵＬＮ；又は（iii）容認可能な腎機能、すなわち血清クレアチニン＜ＵＬＮの１．５倍、又はクレアチニン値が機関正常値の１．５倍より高い患者の場合、算出クレアチニン・クリアランスが＞６０ｍＬ／分／１．７３ｍ２。
【００９４】
一部の態様において、対象は、下記のように定義される容認可能な血液学的状態を有するヒトである。（ｉ）絶対好中球数（ＡＮＣ）＞１５００細胞／ｍｍ３；（ii）血小板数＞１００，０００ｐｉｔｓ／ｍｍ３（輸血なし）；肝細胞がんのみの患者の場合＞７５，０００ｐｉｔｓ／ｍｍ３；又は（iii）ヘモグロビン＞９ｇ／ｄＬ。
【００９５】
一部の態様において、対象は、プロトロンビン時間（ＰＴ）又は国際標準化比（ＩＮＲ）＜１．２５×ＵＬＮ；ＩＮＲ＜１．７又はプロトロンビン時間（ＰＴ）又は＜ＵＬＮより４秒上（すなわち、凝固パラメーターに関してチャイルド・ピュー・スコアが１を超えない）；又は血清アルブミン＞２．８ｇ／ｄＬ（すなわち、アルブミンに関するチャイルド・ピュー・スコアが２を超えない）を有するヒトである。
【００９６】
一部の態様において、対象は、プロトロンビンのチャイルド・ピュー・クラスＡ（スコア５−６）疾患を有するヒトである。チャイルド・ピュー・クラスの決定に関し、肝性脳症のスコアは１でなければならず；腹水のスコアは２を超えず、臨床的に無関係でなくてはならない。
【００９７】
一部の態様において、対象は、ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）クラスIII又はIVの心疾患、過去６ヶ月以内に心筋梗塞、不安定及び／又は症候性不整脈、又はＥＣＧ上で虚血の証拠を持たないヒトである。
【００９８】
一部の態様において、対象は、全身療法を必要とする活動性の制御されていない細菌、ウィルス、又は真菌感染を持たない。
一部の態様において、対象は、妊婦又は授乳婦でないヒトである。
【００９９】
一部の態様において、対象は、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）による既知の感染を持たないヒトである。
一部の態様において、対象は、療法に支障を来しかねない重症の非悪性疾患（例えば、水腎症、肝不全、又はその他の状態）を持たないヒトである。
【０１００】
一部の態様において、対象は、最近の出血歴がないヒト及び凝固障害又は構造異常による出血傾向がある患者である。
一部の態様において、対象は、クマリン型抗凝固薬の治療用量による治療を必要としないヒトである。
【０１０１】
一部の態様において、対象は、チャイルド・ピューのＢ又はＣに分類される肝硬変を持たないヒトである。
一部の態様において、対象は、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）＞１０、５０、１００、２００、３００、４００、又は５００ｎｇ／ｍＬを有するヒトである。
【０１０２】
一部の態様において、対象は、上昇した（＞１０％）ＡＦＰ−Ｌ３レベルを持つヒトである。
一部の態様において、対象は、デス−ガンマ−カルボキシ(Des-Gamma-Carboxy)（異常）プロトロンビン（ＤＣＰ）＞５、７．５、１０、２５、５０、７５、又は１００ｎｇ／ｍＬを有するヒトである。
【０１０３】
一部の態様において、対象は、異常レベルの上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）（ｅｒｂＢ−１）、ｃ−ｅｒｂ−２（Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ）、ｃ−ｅｒｂ−３（ＨＥＲ−３）、ｃ−  ｅｒｂ−４（ＨＥＲ−４）、又はそれらの組合せを有するヒトである。［００１００］一部の態様において、対象は、異常レベルのアルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；デス−ガンマ−カルボキシ（異常）プロトロンビン（ＤＣＰ）；血清ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）；アルファ−ｌ−フコシダーゼ（ＡＦＵ）；ヒトカルボニルレダクターゼ２；ゴルジホスホプロテイン２（ＧＯＬＰＨ２）；形質転換増殖因子−ベータ（ＴＧＦ−ベータ）；腫瘍特異的増殖因子（ＴＳＧＦ）；肝細胞増殖因子／分散因子（ＨＧＦ／ＳＦ）；塩基性線維芽細胞増殖因子；アルファ−フェトプロテインｍＲＮＡ（ＡＦＰ  ｍＲＮＡ）；ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼｍＲＮＡ（ＧＧＴ  ｍＲＮＡ）；インスリン様成長因子ＩＩ（ＩＧＦ−ＩＩ）ｍＲＮＡ；アルブミンｍＲＮＡ；ＤＫ  １；ゴルジタンパク質７３（ＧＰ７３）；ビタミンＫ欠乏又はアンタゴニストＩＩによって誘導されたタンパク質（ＰＩＶＫＡ−ＩＩ）；ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１９２、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２７ａ、及びｍｉＲ−８０１、又はそれらの組合せを有するヒトである。
【０１０４】
様々な態様において、側面及び態様のいずれも、下記の任意の一つ又は複数の特徴と組み合わせることができる。例えば：
一部の態様において、肝がんは原発性肝がんである。
【０１０５】
一部の態様において、肝がんは肝細胞がん（ＨＣＣ）である。
一部の態様において、肝がんは肝内胆管がんである。
一部の態様において、肝転移は大腸がん由来であるが、乳がん、食道がん、肺がん、メラノーマ、膵がん、及び胃がん由来でもある。
【０１０６】
併用化学療法
本明細書において、“併用投与”という用語は、ソラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ又はレゴラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグを、ヒト又は哺乳動物に、錠剤又は経口懸濁液などの共通の投与単位に入れて同時投与する状況だけに限定されないが、そのような共通の投与単位は、投与の利便性、患者のコンプライアンス及び用量の正確さに関して利益を有しうる。
【０１０７】
より典型的には、個別投与単位のソラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ又はレゴラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグは、処方医のより自由な用量較正を可能にする。ソラフェニブの場合、現在市販されている製品は、Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標）フィルムコート錠２００ｍｇを含む。レゴラフェニブの場合、現在市販されている製品は、Ｓｔｉｖａｒｇａ（登録商標）フィルムコート錠４０ｍｇを含む。
【０１０８】
ソラフェニブの投与量及び／又は投与スケジュールは、臨床的に承認された、又は実験的な、ガイドラインに従うことができる。様々な態様において、ソラフェニブの用量は、約８００、６００、４００、又は２００ｍｇ／日である。２００ｍｇ／日の用量は、１日おきに４００ｍｇ用量として投与することができる。若年者及び高齢者などの低体重の個人は、一般的に部分錠剤で投与される。
【０１０９】
レゴラフェニブの投与量及び／又は投与スケジュールは、臨床的に承認された、又は実験的な、ガイドラインに従うことができる。様々な態様において、レゴラフェニブの用量は、約６４０、４８０、３２０、又は１６０ｍｇ／日である。１６０ｍｇ／日の用量は、１日おきに３２０ｍｇ用量として投与することができる。若年者及び高齢者などの低体重の個人は、一般的に部分錠剤で投与される。
【０１１０】
トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグは、一般的に経口投与される。最も典型的には、１個又は数個の錠剤又はカプセルとして経口投与され、それぞれ１０ｍｇ〜６００ｍｇの医薬品有効成分を含有している。代表的な錠剤又はカプセルは、２５ｍｇ〜５００ｍｇ、又は５０ｍｇ〜４５０ｍｇ、又は１００ｍｇ〜４００ｍｇ、例えば１５０ｍｇ〜４００ｍｇ、２００ｍｇ〜５００ｍｇ、又は２５０ｍｇ〜５００ｍｇを含有しうる。
【０１１１】
様々な態様において、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグは、対象に単一週（７日間）にわたって１、２、３、４、５、６、又は７回の日用量で投与される。トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグは、対象に１４日間にわたって１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４回の日用量で投与することもできる。トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグは、対象に２１日間にわたって１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又は２１回の日用量で投与することもできる。トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグは、対象に２８日間にわたって１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、又は２８回の日用量で投与することもできる。
【０１１２】
様々な態様において、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグは、２週間服薬（合計１４日間）；１週間服薬＋１週間休薬（合計１４日間）；連続３週間服薬（合計２１日間）；２週間服薬＋１週間休薬（合計２１日間）；１週間服薬＋２週間休薬（合計２１日間）；連続４週間服薬（合計２８日間）：連続３週間服薬＋１週間休薬（合計２８日間）；２週間服薬＋２週間休薬（合計２８日間）；１週間服薬＋連続３週間休薬（合計２８日間）で投与される。
【０１１３】
様々な態様において、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグは、７、１４、２１又は２８日サイクルの１日目に投与される；２１又は２８日サイクルの１及び１５日目に投与される；２１又は２８日サイクルの１、８、及び１５日目に投与される；又は２１又は２８日サイクルの１、２、８、及び１５日目に投与される。トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグは、１、２、３、４、５、６、７、又は８週間ごとに１回投与することもできる。
【０１１４】
ソラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグは、共通の投与単位又は個別の投与単位として実質的に同時に投与されうるか、又は併用投与は、ソラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグを別個のサイクルで時差式(staggered)又は交互(alternating)に行うのでもよい。例えば、毎日のソラフェニブの連続週間サイクルに、毎日のトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの１、２、３、５又は７日間サイクルを散在させることができる。
【０１１５】
あるいは、一つの薬剤、例えばソラフェニブ成分の負荷用量を、例えば肝臓内の局所低酸素状態を構築するために開始した後、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグとの同時投与を開始することもできる。
【０１１６】
ソラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ間の標的モル比又はｍｇ比を参照することにより、時差式併用投与をモニターするのが好都合であろう。様々な態様において、比率(例えば、ソラフェニブ：トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグのモル比）は、約２０：１〜１：２０、例えば５：１、２：１、１：１、１：２、１：５又は１：１０である。
【０１１７】
ソラフェニブ：トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグのモル比は、様々な期間にわたって測定できる。例えば、モル比は、対象に、１日、１週間、１４日間、２１日間、又は２８日間に投与されるソラフェニブ：トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの量でありうる。
【０１１８】
一定の態様に従って、本発明の方法は、ソラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグを、それぞれ同じ日に毎日（ＱＤ、ＢＩＤ又はＴＩＤとして）投与することを想定している。
【０１１９】
そのような態様において、ソラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグは、共通の経口投与単位、例えばカプセル、ソフトゲルカプセル又は錠剤で同時送達できる。
【０１２０】
他の態様において、本発明の方法は、ソラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグを、別の経口投与単位として投与することを想定している。
直前の段落の代表的態様において、ソラフェニブの投与単位（一つ又は複数）とトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの投与単位（一つ又は複数）は、患者の快適性のために、任意の所与の日に少なくとも６時間空けて、好ましくは少なくとも８時間及び典型的にはおよそ１２時間空けて投与される。
【０１２１】
本発明の方法の一定の態様は、ソラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグを、１〜２８日間の単剤療法サイクルで、任意に１〜２８日間の治療休止期間を散在させて、交互に投与することを想定している。
【０１２２】
本明細書において、ソラフェニブ又はトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの“単剤療法”とは、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグのサイクル中にソラフェニブを投与せず、逆もまた同じであることを意味する。単剤療法は、その他の治療薬（その他の抗がん剤又は緩和剤を含む、すべては責任医師の定める通り）の同時投与を排除しない。
【０１２３】
レゴラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグは、共通の投与単位としては個別の投与単位として実質的に同時に投与されうるか、又は併用投与は、レゴラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグを別個のサイクルで時差式(staggered)又は交互(alternating)に行うのでもよい。例えば、毎日のレゴラフェニブの連続週間サイクルに、毎日のトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの１、２、３、５又は７日間サイクルを散在させることができる。
【０１２４】
あるいは、一つの薬剤、例えばレゴラフェニブ成分の負荷用量を、例えば肝臓内の局所低酸素状態を構築するために開始した後、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグとの同時投与を開始することもできる。
【０１２５】
レゴラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ間の標的モル比又はｍｇ比を参照することにより、時差式併用投与をモニターするのが好都合であろう。様々な態様において、比率(例えば、レゴラフェニブ：トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグのモル比）は、約２０：１〜１：２０、例えば５：１、２：１、１：１、１：２、１：５又は１：１０である。
【０１２６】
レゴラフェニブ：トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグのモル比は、様々な期間にわたって測定できる。例えば、モル比は、対象に、１日、１週間、１４日間、２１日間、又は２８日間に投与されるレゴラフェニブ：トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの量でありうる。
【０１２７】
一定の態様に従って、本発明の方法は、レゴラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグを、それぞれ同じ日に毎日（ＱＤ、ＢＩＤ又はＴＩＤとして）投与することを想定している。
【０１２８】
そのような態様において、レゴラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグは、共通の経口投与単位、例えばカプセル、ソフトゲルカプセル又は錠剤で同時送達できる。
【０１２９】
他の態様において、本発明の方法は、レゴラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグを、別の経口投与単位として投与することを想定している。
直前の段落の代表的態様において、レゴラフェニブの投与単位（一つ又は複数）とトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの投与単位（一つ又は複数）は、患者の快適性のために、任意の所与の日に少なくとも６時間空けて、好ましくは少なくとも８時間及び典型的にはおよそ１２時間空けて投与される。
【０１３０】
本発明の方法の一定の態様は、レゴラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグを、１〜２８日間の単剤療法サイクルで、任意に１〜２８日間の治療休止期間を散在させて、交互に投与することを想定している。
【０１３１】
本明細書において、レゴラフェニブ又はトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの“単剤療法”とは、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグのサイクル中にレゴラフェニブを投与せず、逆もまた同じであることを意味する。単剤療法は、その他の治療薬（その他の抗がん剤又は緩和剤を含む、すべては責任医師の定める通り）の同時投与を排除しない。
【０１３２】
本明細書において、例えば比率、用量、時間などの範囲の記載に関し、“約”という用語は、関連誤差の範囲内にある、本質的に同じ（例えば、正規又はガウス分布に従う現象に関しては当該技術分野で許容される信頼区間、例えば９５％の範囲内）、又はさもなければ定量される物事の効果を実質的に変化させない変動を包含する。
【０１３３】
ソラフェニブ−トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ療法又はレゴラフェニブ−トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ療法のコースは医師によって処方できる。トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ（従って併用療法）は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２サイクル投与できる。
【０１３４】
ソラフェニブ−トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ療法又はレゴラフェニブ−トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ療法のコースは、臨床的エンドポイントを満たすまで継続できる。一部の態様において、療法は、疾患の進行又は容認できない毒性が発生するまで継続される。一部の態様において、療法は、肝がん（例えばＨＣＣ）の不在と定義される病理学的完全奏功（ｐＣＲ）率を達成するまで継続される。一部の態様において、療法は、肝がんの部分又は完全寛解まで継続される。ＨＣＣを有する複数の対象へのトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグとレゴラフェニブの投与は、全生存（ＯＳ）、無進行生存（ＰＦＳ）、無病生存（ＤＦＳ）、奏功率（ＲＲ）、生活の質（ＱｏＬ）、又はそれらの組合せを向上させる。
【０１３５】
様々な態様において、治療は、肝がん腫瘍のサイズ及び／又は数を低減する。治療は、肝がん腫瘍のサイズ及び／又は数の増大を防止できる。治療は、肝がん腫瘍の転移を防止できる。
【０１３６】
本発明の方法において、投与は、何らかの特定の送達システムに限定されず、非経口（皮下、静脈内、髄内、関節内、筋肉内、又は腹腔内注射を含む）、直腸、局所、経皮、又は好ましくは経口（例えば、カプセル、懸濁液、又は錠剤で）を含みうるが、これらに限定されない。
【０１３７】
個人（個体）への投与は、単回投与又は反復投与で、及び任意の様々な生理学的に許容可能な塩形で、及び／又は医薬組成物の一部としての許容可能な製薬学的担体及び／又は添加剤と共に行われうる。
【０１３８】
生理学的に許容可能な塩形及び標準的な製薬技術、投与量、及び賦形剤は、当業者には周知である（例えば、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ（登録商標））２００５，第５９版，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ，２００４；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｇｅｎｎａｄｏら編，第２１版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５参照）。
【０１３９】
さらに、一つの動物で達成された有効用量は、当該技術分野で公知の換算係数を用いてヒトを含む別の動物で使用するために外挿できる。例えば、Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ５０（４）：２１９−２４４（１９６６）及び等価表面積投与量係数(equivalent surface area dosage factors)に関する下記表参照。
【０１４０】
【表１】
2019507764.tif 000018
【０１４１】
本発明の併用療法は、任意の特定のコース又はレジメンに特に限定されず、別個に又は他の治療法（例えば化学療法又は放射線療法）と組み合わせて使用することもできる。
本発明による併用療法は、ソラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ又はレゴラフェニブとトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ以外の追加の療法（例えば、医薬、放射線など）を含むことができる。同様に、本発明は補助療法として使用することもできる（例えば手術と組み合わせる場合）。様々な態様において、対象は、外科的切除、経皮エタノール又は酢酸注入、肝動脈化学塞栓術、高周波アブレーション、レーザーアブレーション、冷凍アブレーション、集光式外照射定位放射線療法(focused external beam radiation stereotactic radiotherapy)、選択的内部放射線療法、動脈内ヨウ素−１３１−リピオドール投与、及び／又は高強度集束超音波によっても治療される。
【０１４２】
トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグとソラフェニブの組合せは、補助療法、新補助（ネオアジュバント）療法、併用(concomitant)療法、同時(concurrent)療法、又は緩和療法として使用できる。トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグとソラフェニブの組合せは、 第一選択療法、第二選択療法、又はクロスオーバー療法として使用できる。
【０１４３】
トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグとレゴラフェニブの組合せは、補助療法、新補助（ネオアジュバント）療法、併用療法、同時療法、又は緩和療法として使用できる。トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグとレゴラフェニブの組合せは、 第一選択療法、第二選択療法、又はクロスオーバー療法として使用できる。
【０１４４】
一部の態様において、ソラフェニブの治療有効用量は、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグとの併用を通じて削減される。例えば、ソラフェニブの週間又は月間用量は、最大推奨用量又は最大耐量と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれ以上削減できる。他の態様において、ソラフェニブは、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ投与がない場合に有効であるために必要とされる用量より少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又はそれ以上少ない有効用量で投与される。一部の態様において、ソラフェニブのＩＣ５０は、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ不在下でのＩＣ５０と比べて少なくとも４、５、１０、２０、３０、４０、５０、又は１００倍減少する。
【０１４５】
一部の態様において、レゴラフェニブの治療有効用量は、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグとの併用を通じて削減される。例えば、レゴラフェニブの週間又は月間用量は、最大推奨用量又は最大耐量と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれ以上削減できる。他の態様において、レゴラフェニブは、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ投与がない場合に有効であるために必要とされる用量より少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又はそれ以上少ない有効用量で投与される。一部の態様において、レゴラフェニブのＩＣ５０は、トロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ不在下でのＩＣ５０と比べて少なくとも４、５、１０、２０、３０、４０、５０、又は１００倍減少する。
【０１４６】
併用療法の更なる説明及び態様を以下の実施例の項に示す。
本発明の例示的態様を添付の図面を参照しながら以下の実施例に記載する。
【図面の簡単な説明】
【０１４７】
【図１Ａ】図１Ａは、ソラフェニブと、（２Ｓ）−２−プロピルペンチル  ２−（（（（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−１，３−ジオキソラン−２−イル）メトキシ）−（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエートと表示されるトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの単一のリン立体異性体との組合せの薬物濃度／活性アレイを示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、図１Ａのデータから誘導された３Ｄ相乗作用のプロットを示す。
【図２Ａ】図２Ａは、ソラフェニブと、（２Ｓ）−（Ｒ）−ｓｅｃ−ブチル  ２−（（（（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−アミノ−５−フルオロ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−１，３−ジオキソラン−２−イル）メトキシ）−（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエートと表示されるトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの単一のリン立体異性体との組合せの薬物濃度／活性アレイを示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、図２Ａのデータから誘導されたｉ３Ｄ相乗作用のプロットを示す。
【図３Ａ】図３Ａは、ソラフェニブと、（２Ｓ）−２−プロピルペンチル  ２−（（（（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−１，３−ジオキソラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエートと表示されるトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの単一のリン立体異性体との組合せの薬物濃度／活性アレイを示す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、図３Ａのデータから誘導されたｉ３Ｄ相乗作用のプロットを示す。
【図４Ａ】図４Ａは、ソラフェニブと、（２Ｓ）−（Ｓ）−ペンタン−２−イル  ２−（（（（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−１，３−ジオキソラン−２−イル）メトキシ）（４−ブロモフェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエートと表示されるトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの単一のリン立体異性体との組合せの薬物濃度／活性アレイを示す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、図４Ａのデータから誘導されたｉ３Ｄ相乗作用のプロットを示す。
【図５Ａ】図５Ａは、ソラフェニブと、（２Ｓ）−（Ｒ）−ｓｅｃ−ブチル  ２−（（（（（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−１，３−ジオキソラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）−３−メチルブタノエートと表示されるトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグの単一のリン立体異性体との組合せの薬物濃度／活性アレイを示す。
【図５Ｂ】図５Ｂは、図５Ａのデータから誘導されたｉ３Ｄ相乗作用のプロットを示す。
【発明を実施するための形態】
【０１４８】
当業者であれば、本発明の精神又は範囲を変更することなく実施されうる多数の修正及び変更に気付くであろう。そのような修正及び変更も本発明の範囲内に包含される。実施例は本発明を制限するものでは決してない。
【０１４９】
細胞培養におけるコンビナトリアル評価のための一般的手順
継代培養：
ヒト肝細胞がん分析のため、ＤＳＭＺ（ＡＣＣ９３）から入手した細胞株Ｈｅｐ３Ｂを使用した。Ｈｅｐ３Ｂ細胞を、培養培地として９０％ＭＥＭ（Ｅａｒｌｅ塩入り）＋１０％  ｈ．ｉ．ＦＢＳ＋２ｍＭ  Ｌ−グルタミン＋５０ｕ／ｍｌペニシリン／０，０５ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン中、単層で上皮様細胞として培養した。コンフルエント培養物を３〜５日ごとにトリプシン／ＥＤＴＡを用いて１：４〜１：１０に分割し、０．５〜１×１０６細胞／８０ｃｍ２で再播種した。
【０１５０】
材料：
フェノールレッドを含まない完全細胞培地を使用した：
フェノールレッドを含まないＤＭＥＭ
１０％ＦＣＳ
５０ｕ／ｍｌペニシリン／０，０５ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン
トリプシン−ＥＤＴＡ  ＰＡＡ  カタログ番号 Ｌ１１−００４、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃより入手
付着細胞用細胞アッセイプレート、９６−ウェル、カタログ番号１２８００９２９６、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃより入手
シールテープ、Ｎｕｎｃカタログ番号７３２  ６１０、ＶＷＲより入手
試験化合物：
化合物はＤＭＳＯ（Ｃａｒｌｏ  Ｅｒｂａ  Ｒｅａｃｔｉｆｓ−ＳＤＳ、カタログ番号０３５０２Ｔ１６）中に１０ｍＭまでのストック溶液として調製
細胞増殖の分析：
Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ（細胞計数キット）−８  ＣＫ０４、Ｄｏｊｉｎｄｏより入手
機器：
Ｅｃｈｏ  ５５０  Ａｃｏｕｓｔｉｃ  Ｌｉｑｕｉｄ  ｈａｎｄｌｅｒ（音響液体ハンドラー）、Ｌａｂｃｙｔｅ社製
Ｔｅｃａｎサンライズ、分光光度計
ソフトウェア（シェアウェア）：
ＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ  ＩＩ  https://www.uab.edu/medicine/peds/macsynergyよりダウンロード（Ｐｒｉｃｈａｒｄ，Ｍ．Ｎ．及びＣ．Ｓｈｉｐｍａｎ，Ｊｒ．１９９０．（Ｒｅｖｉｅｗ）  Ａ  ｔｈｒｅｅ−ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｔｏ  ａｎａｌｙｚｅ  ｄｒｕｇ−ｄｒｕｇ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ（薬物−薬物相互作用を分析するための３次元モデル）． Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．１４：１８１−２０６）
試験手順：
１日目、細胞播種：
細胞培養フラスコを５ｍｌのＰＢＳで２回洗浄し、ＰＢＳを廃棄した。１．５ｍｌのトリプシンを加え、フラスコをインキュベーターに３〜４分間入れた。フラスコを振盪し、１０ｍｌのＤＭＥＭ、１０％ＦＣＳ、５０μ／ｍｌペニシリン／０，０５ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンをフェノールレッドなしで加えた。細胞をＳｃｅｐｔｅｒ細胞カウンターでカウントし、Ｈｅｐ３Ｂ細胞をフェノールレッドなしの完全細胞培地中で２０×１０３細胞／ｍｌに希釈した。１００μｌ細胞懸濁液／ウェルを９６ウェル細胞アッセイプレートに播種した。各組合せにつき、プレートを２重に複製した。
【０１５１】
２日目、試験化合物添加：
試験化合物を１：３の希釈系列で５μＭから０．０００７６μＭまで又は１０μＭから０．００１５μＭまでのいずれかの９種類の濃度で試験した。ソラフェニブは１：２の希釈系列で２０μＭから０．３１μＭまでの７種類の濃度で試験した。４個の希釈プレートをＥｃｈｏ機器を用いて調製した。
【０１５２】
化合物の希釈は、所望最終濃度の２倍であった。希釈プレート中の各ウェル中の容量は化合物入り培地１２５μｌである。
様々な濃度の化合物入り希釈プレートから１００μｌを１００μｌ入り細胞アッセイプレートの対応ウェルに移した（合計容量２００μｌ／ウェル）。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で６日間インキュベートした。
【０１５３】
７日目、プレートの読み：
１０μｌのＣＣＫ  Ｋｉｔ−８をマルチチャンネルピペットを用いて各ウェルに加えた（先端を各ウェルの水面下に浸漬）。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で４時間インキュベートした。
【０１５４】
シールテープをプレート上面に付け、プレート内容物を穏やかに混合した。
プレートを分光光度計で、参照フィルター６５０ｎｍを用い、波長４５０ｎｍで読んだ。ビヒクル処置細胞対照の場合、平均吸光度は＞１〜＜３であった。
【０１５５】
各組合せの２個のプレートからの生データをＭａｃ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  ＩＩシェアウェアに入力することにより、併用効果が算出され、３Ｄの用量−反応面グラフにプロットされた。理論的な相加相互作用は、各薬物個別の用量反応曲線から計算する。計算された相加面を、実験的に決定された用量反応面から差し引くと、非相加活性の領域が明らかになる。最終結果は、ＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ  ＩＩのマニュアルに示されたガイドラインに従って相乗作用又は拮抗作用の容量（μＭ２％）として示される。
【０１５６】
相乗作用容量：
１．９５％信頼度で２５μＭ２％未満の相乗作用又は拮抗作用の値（対数容量＜２）は有意でないと見なされるべきであり、おそらく重要でない。
【０１５７】
２．２５μＭ２％〜５０μＭ２％の間の値（対数容量＞２〜＜５）は微小ではあるが有意量の相乗作用と見なされるべきである。
３．５０μＭ２％〜１００μＭ２％の間の値（対数容量＞５〜＜９）は中程度の相乗作用又は拮抗作用を示す。この相互作用はインビボでは重要でありうる。
【０１５８】
４．１００μＭ２％を超える値（対数容量＞９）は強い相乗作用を示し、おそらくインビボで重要である。
ソラフェニブとトロキサシタビンホスホロアミデートプロドラッグの組合せのインビボ評価のための一般的手順
ソラフェニブと組み合わせたトロキサシタビンホスホロアミデートプロドラッグ処置の効果は、肝細胞がん（ＨＣＣ）の皮下異種移植片モデルでインビボ評価できる。このモデルは、免疫不全マウスの左脇腹へのＨＣＣ細胞（例えば、Ｈｅｐ３Ｂ、Ｈｕｈ−７又はＨｅｐＧ２）の接種に基づいている。腫瘍容積を週３回くらい評価し、化合物による処置は、典型的には１００〜２００ｍｍ３の腫瘍サイズで開始する。典型的な研究は４群（ｎ＝１０匹のマウス／群）からなる。
１）ビヒクル（対照）、
２）トロキサシタビンホスホロアミデートプロドラッグ、
３）ソラフェニブ単独及び
４）ソラフェニブと組み合わせたトロキサシタビンホスホロアミデートプロドラッグ
トロキサシタビンホスホロアミデートプロドラッグを経口胃管投与により２５〜１００ｍｇ／ｋｇの用量で１日１又は２回、５〜２１日間与える。あるいは、齧歯類血液中で迅速な代謝を有するプロドラッグの場合、相乗作用はトロキサシタビン親化合物を２．５〜２５ｍｇ／ｋｇの用量で１日１又は２回、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与することによってモデル化することもできる。ソラフェニブは、経口胃管投与により１日１回、１０〜５０ｍｇ／ｋｇの用量で合計２１日間与える。腫瘍増殖は、処置期間中及び処置中止後（該当する場合）に評価する。腫瘍増殖の阻害及び腫瘍増殖の遅延を計算し、対照群と比べて処置の有意な効果を評価するために統計分析を実施する。
【実施例】
【０１５９】
実施例１
ソラフェニブと、式：
【０１６０】
【化１６】
2019507764.tif 000019
【０１６１】
を有するトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ（リン原子における単一の立体異性体である）を上記のコンビナトリアル細胞培養アッセイで分析した。図１Ａは、二つの化合物の各濃度配列で測定された細胞毒活性を示す。図１Ｂは、ＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ  ＩＩによって計算された３Ｄ相乗作用プロットを示し、９５％の信頼度で対数容量７６という結論は、強力な抗増殖相乗作用に対応している。
【０１６２】
実施例２
ソラフェニブと、式：
【０１６３】
【化１７】
2019507764.tif 000020
【０１６４】
を有するトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ（リン原子における単一の立体異性体である）を上記のコンビナトリアル細胞培養アッセイで分析した。図２Ａは、二つの化合物の各濃度配列で測定された細胞毒活性を示す。図２Ｂは、ＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ  ＩＩによって計算されたアイソボログラムを示し、９５％の信頼度で対数容量１１という結論は、強力な抗増殖相乗作用に対応している。
【０１６５】
実施例３
ソラフェニブと、式：
【０１６６】
【化１８】
2019507764.tif 000021
【０１６７】
を有するトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ（リン原子における単一の立体異性体である）を上記のコンビナトリアル細胞培養アッセイで分析した。図３Ａは、二つの化合物の各濃度配列で測定された細胞毒活性を示す。図３Ｂは、ＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ  ＩＩによって計算された３Ｄ相乗作用プロットを示し、９５％の信頼度で対数容量３２という結論は、強力な抗増殖相乗作用に対応している。
【０１６８】
実施例４
ソラフェニブと、式：
【０１６９】
【化１９】
2019507764.tif 000022
【０１７０】
を有するトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ（リン原子における単一の立体異性体である）を上記のコンビナトリアル細胞培養アッセイで分析した。図４Ａは、二つの化合物の各濃度配列で測定された細胞毒活性を示す。図４Ｂは、ＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ  ＩＩによって計算されたアイソボログラムを示し、９５％の信頼度で対数容量４０という結論は、強力な抗増殖相乗作用に対応している。
【０１７１】
実施例５
ソラフェニブと、式：
【０１７２】
【化２０】
2019507764.tif 000023
【０１７３】
を有するトロキサシタビンのホスホロアミデートプロドラッグ（リン原子における単一の立体異性体である）を上記のコンビナトリアル細胞培養アッセイで分析した。図５Ａは、二つの化合物の各濃度配列で測定された細胞毒活性を示す。図５Ｂは、ＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ  ＩＩによって計算されたアイソボログラムを示し、９５％の信頼度で対数容量４６という結論は、強力な抗増殖相乗作用に対応している。
【図１Ａ】
2019507764.tif 000027
【図１Ｂ】
2019507764.tif 000028
【図２Ａ】
2019507764.tif 000029
【図２Ｂ】
2019507764.tif 000030
【図３Ａ】
2019507764.tif 000031
【図３Ｂ】
2019507764.tif 000032
【図４Ａ】
2019507764.tif 000033
【図４Ｂ】
2019507764.tif 000034
【図５Ａ】
2019507764.tif 000035
【図５Ｂ】
2019507764.tif 000036
【国際調査報告】
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