(57)【要約】  本発明は、１種類以上のデフェンシンを投与することによる肝臓、胆管、および膵臓の障害の治療または予防のための方法に関する。本開示の範囲内には特定の代謝障害の治療も含まれる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
肝臓、胆管、膵臓または代謝の疾患または障害の治療または予防のための方法であって、それを必要とする被験体への哺乳動物α−デフェンシンおよび／またはβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログの効果的な量の投与を含む、方法。
【請求項２】
肝臓癌、胆管癌または膵臓癌の治療のための方法であって、それを必要とする被験体への単独でのあるいは放射線、化学、または免疫療法と組み合わせた哺乳動物α−デフェンシンおよび／またはβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログの効果的な量の投与を含む、方法。
【請求項３】
前記哺乳動物α−デフェンシンおよび／またはβ−デフェンシンが、１日に２回など、１日に３回など、１日に少なくとも２〜３回投与される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４】
前記哺乳動物α−デフェンシンおよび／またはβ−デフェンシンが、半減期延長ペプチドをさらに含まない、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記デフェンシンが、０．１ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇ〜１０ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇの一日投与量でそれを必要とする被験体に投与される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記デフェンシンが、１．２ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇの一日投与量でそれを必要とする被験体に投与される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記デフェンシンが、０．１ｍｇ  ＨＤ５／ｋｇ〜１０ｍｇ  ＨＤ５／ｋｇの一日投与量でそれを必要とする被験体に投与される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記デフェンシンが、１．２ｍｇ  ＨＤ５／ｋｇの一日投与量でそれを必要とする被験体に投与される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記α−およびβ−デフェンシンが、いずれかの割り当て例えば０．６ｍｇ  ＨＤ５／ｋｇおよび０．６ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇの一日投与量でそれを必要とする被験体に投与される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記カテリシジンが、０．１ｍｇ  ＬＬ−３７／ｋｇ〜１０ｍｇ  ＬＬ−３７／ｋｇの一日投与量でそれを必要とする被験体に投与される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記デフェンシンが、細胞貫通ペプチド（ＣＰＰ）、アルブミン結合性部分（ＡＢＭ）、検出可能な部分（Ｚ）、および半減期延長ペプチドからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる部分をさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記疾患または障害が、毒性肝疾患、アルコール性または非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肝炎、肝硬変、肝不全、肝線維症、肝硬化症、肝臓癌、肝性脳症および非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）から選択される肝臓障害である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記疾患または障害が、ＮＡＦＬＤおよびＮＡＳＨから選択される肝臓疾患である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法
【請求項１４】
前記疾患または障害が、胆管炎、原発性硬化症胆管炎、胆嚢炎および胆管癌から選択される胆管障害である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記疾患が、膵臓炎または膵臓癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記疾患が、高コレステロール血症；高グリセロール血症；高脂血症；高カイロミクロン血症；糖原貯蔵障害などのリポタンパク質代謝の障害；またはスフィンゴ脂質代謝および脂質保存障害、例えばガングリオシド蓄積症、およびスフィンゴ脂質症から選択される代謝疾患である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
動物の肝臓、胆管または膵臓における炎症の治療のための方法であって、それを必要とする被験体への哺乳動物α−またはβ−デフェンシンまたはカテリシジンまたはＧＬＰ−１アナログの効果的な量の投与を含む、方法。
【請求項１８】
少なくとも１種類の哺乳動物α−デフェンシンを投与することを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
少なくとも１種類の哺乳動物β−デフェンシンを投与することを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
少なくとも１種類の哺乳動物α−デフェンシンおよび少なくとも１種類の哺乳動物β−デフェンシンを投与することを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
哺乳動物カテリシジンなどの、少なくとも１種類のカテリシジンを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
少なくとも１種類のＧＬＰ−１アナログを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
それを必要とする被験体への単独でのあるいは抗生物質および／またはインスリン／インスリンアナログおよび／またはグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）／ＧＬＰ−１アナログおよび／またはグルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）／ＧＬＰ−２アナログおよび／またはジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）阻害剤および／またはメトホルミンおよび／またはナトリウム・グルコース共輸送体−２（ＳＧＬＴ−２）阻害剤および／またはグルカゴン受容体拮抗剤および／または一過性受容体電位カチオンチャネルサブファミリーＶメンバー１（ＴＲＰＶ１）拮抗剤と組み合わせた哺乳動物α−デフェンシンおよび／またはβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログの効果的な量の投与を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記哺乳動物デフェンシンが、ＨＤ５、ＨＤ６、ｈＢＤ−１、ｈＢＤ−２、ｈＢＤ−３およびｈＢＤ−４からなる群から選択される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記哺乳動物デフェンシンが、ＨＤ５であり、および／または前記哺乳動物デフェンシンが、ｈＢＤ−２である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記被験体が、３０以上などの、例えば３５以上、４０以上などの、２５以上のＢＭＩを有する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記被験体が、例えば０．８０−０．８４、少なくとも０．８５（女性）または少なくとも０．９０などの、例えば０．９−０．９９、１．００（男性）を超えるなどの、少なくとも０．８０のウェスト／ヒップ比を有する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記被験体が、例えば少なくとも７．０ｍｍｏｌ／Ｌの、少なくとも６．１ｍｍｏｌ／Ｌの空腹時血糖を有する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記被験体が、４２〜４６ｍｍｏｌ／ｍｏｌＨｂなどの、少なくとも４８ｍｍｏｌ／ｍｏｌＨｂなどの、少なくとも４２ｍｍｏｌ／ｍｏｌＨｂの糖化ヘモグロビン量を有する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記被験体が、以下の徴候：
・高血圧：≧１４０／９０ｍｍＨｇ；
・脂質異常：トリグリセリド（ＴＧ）≧１．６９５ｍｍｏｌ／Ｌおよび高比重リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）≦０．９ｍｍｏｌ／Ｌ（男性）、≦１．０ｍｍｏｌ／Ｌ（女性）；
・ＡＳＴ／ＡＬＴ＞１；
・空腹時血糖＞６．１ｍｍｏｌ／Ｌ；
・中心性肥満：ウェスト：ヒップ比＞０．９０（男性）；＞０．８５（女性）、または肥満度指数＞３０ｋｇ／ｍ２；および
・微量アルブミン尿：尿中アルブミン排泄比≧２０μｇ／分またはアルブミン：クレアチニン比≧３０ｍｇ／ｇ
の１つ以上を有する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記さらなる部分が、半減期延長ペプチドである、請求項１１に記載の方法。
【請求項３２】
前記半減期延長ペプチドが、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）、トランスフェリン、アルブミン（ＨＡＳ）、ＸＴＥＮ（登録商標）またはＰＥＧ、ホモ−アミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、プロリン−アラニン−セリンポリマー（ＰＡＳ）、またはエラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）、ヒアルロン酸、絨毛性ゴナドトロピン（ＣＧ）β鎖のカルボキシ端ペプチド（ＣＴＰ）などの負電荷高度アシル化ペプチド、ヒトＩｇＧ、およびｎが８〜２２であるＣＨ３（ＣＨ２）ｎＣＯ−に結合できる分子からなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項３３】
前記デフェンシンが、１日に１回それを必要とする被験体に投与される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記デフェンシンが、１日に２回それを必要とする被験体に投与される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記デフェンシンが、１日に３回それを必要とする被験体に投与される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記デフェンシンが、週に１回、２回または３回、例えば２日毎にそれを必要とする被験体に投与される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記デフェンシンが、食品または飲料補充剤として投与される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
それを必要とする被験体への前記デフェンシンの投与が、経口である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
それを必要とする被験体への前記デフェンシンの投与が、皮下である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＧＬＰ−１アナログの投与が、皮下である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
先行請求項のいずれかによる方法における使用のための哺乳動物α−デフェンシンおよび／またはβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログ。
【請求項４２】
先行請求項のいずれか一項による治療のための医薬品の調製のための哺乳動物α−デフェンシンおよび／またはβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１種類以上のデフェンシンを投与することによる肝臓、胆管、および膵臓障害の治療または予防のための方法に関する。本開示の範囲内には特定の代謝障害の治療も含まれる。
【背景技術】
【０００２】
腸内微生物叢
肥満および肥満関連疾患のような一般的な障害の罹患率の増加は、我々の西欧化した生活様式および食事と強く関連している。最も顕著な肥満関連病は、インスリン耐性、顕性２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）および特定の癌である（Ｆａｕｌｄｓ＆Ｄａｈｌｍａｎ−Ｗｒｉｇｈｔ，２０１２）。これらの疾患の病因論は複雑であるが、これらの多くは低度炎症の一般的な状態によって特徴付けられ、これは調節不全化した腸内微生物叢およびメタボロームから生じ得る（Ｅｖｅｒａｒｄ＆Ｃａｎｉ，２０１３、Ｂｅｌｋａｉｄ＆Ｈａｎｄ，２０１４）。現代のヒトの生活様式および動物の肉生産と関連する課題はかけ離れているようであるが、損なわれた腸健康が共通の特徴であることが予測される。調節不全化した腸健康は、肥満（Ｒｉｄａｕｒａら，２０１３）、Ｔ２Ｄ（Ｑｉｎら，２０１２）、関節リウマチ（Ｚｈａｎｇら，２０１５）および結腸直腸癌（Ｆｅｎｇら，２０１５）のような一連の多様な疾患と実際に関連している。最近、腸内微生物叢と、特にバクテロイデス属由来の特定のリポポリサッカライドの存在、および近隣領域と比べて高いフィンランドにおける１型糖尿病発生率との間の関連が報告されている（Ｌｅｖｉｔｅｎ２０１６）。
【０００３】
肥満および付随する低度炎症は、調節不全化した代謝ホメオスタシスの有力な推進力を形成する。Ｔｕｒｎｂａｕｇｈら（２００６）は、肥満関連微生物叢がエネルギー回収の増加した能力を有し、肥満マウスからの微生物叢の移植後２週間で、無菌マウスが痩せたマウスからの同様な移植に比べて脂肪量の有意な増加を示したことを発見した。Ｔｕｍｂａｕｇｈら（２００８）は、腸内微生物叢組成における変化が、高い脂肪／糖「西欧」食を一時的に与えられたマウスを当初の食餌に戻した後で完全に戻ったことを、さらにそして重要なことに発見した。これらの発見は、Ｖｒｉｅｚｅら（２０１２）によってヒトで確認され、痩せたヒトドナー由来の腸内微生物叢の移行が、メタボリック症候群を有する個体におけるインスリン感受性を増加したことを実証した。
【０００４】
体重および体重増加率を高めるための腸内微生物叢の操作は、低用量抗生物質およびラクトバチルス・イングルビエイなどのプロバイオティックスの使用を通して、農業用家畜で長年使用されている。体重増加のための腸内微生物叢操作は、ニワトリ（Ｋｈａｎら，２００７）、カモ（Ａｎｇｅｌａｋｉｓ＆Ｒａｏｕｌｔ，２０１０）、およびマウス（Ａｎｇｅｌａｋｉｓら，２０１２）で実証されている。ヒトでは、抗生物質を受ける乳児はこれらの対照よりも大きいことも実証されており（Ｔｒａｓａｎｄｅら，２０１２）、一方、経口抗生物質への早期暴露は小児における過体重と関連している（Ａｊｓｌｅｖら，２０１４）。妊婦では、脂肪症の生理学的な増加および妊娠３ヶ月における妊娠性糖尿病の発症可能性も、腸内微生物叢における重大な変化と関連していると考えられる（Ｋｏｒｅｎら，２０１２）。
【０００５】
腸内粘膜は外部環境に暴露される極めて広い最大の体表面（約２００ｍ２）である。そのため、腸表面は異物、我々の食事由来の代謝物（メタボローム）、および我々の腸に生息する推定１０１４個の細菌−腸内微生物叢−と緊密に接触している。このため、腸内障壁は不断の強い免疫監視の下にあり、免疫系、食事成分、および腸内微生物叢の間の動的相互干渉を必要としている。食事介入は免疫調節（Ｍｏｗａｔ＆Ａｇａｃｅ，２０１４）および腸内微生物叢組成（Ｗａｌｔｅｒ，２０１５）に多大な影響を有し、これらはともに独立的および相乗的に代謝ホメオスタシスに影響を及ぼす。これに関して、２件のごく最近の論文が、代謝ホメオスタシスに対する微生物叢調節された変化における食物添加物の（有害な）可能性を強調している。最近の論文（Ｃｈａｓｓａｉｎｇら，２０１５）は、食事がいかに耐糖能を損ない、そのため体重増加ならびに調節不全化した腸内微生物叢の誘発による大腸炎感受性を高めるか説明した。結果は無菌（ＧＦ）マウスでは再現できず、腸内微生物叢について重要な役割を示唆する。同様に、Ｓｕｅｚら（２０１４）は最近、ノンカロリー人工甘味料がどのように腸内微生物叢の変化を通して代謝機能不全を誘発するか示した。この筆者らは、ＧＦマウスへの糞便移行によって彼らの結果を検証し、その後に、ＧＦマウスは直ちにグルコース不耐性を発症した。これらの結果は、ＧＦマウスにおける先駆的な研究（Ｂａｃｋｈｅｄら，２００７）を反映し、代謝健全性の維持における腸内微生物叢の役割を明確にする。この研究は、共生微生物叢の不在下で、これにより不均衡な粘膜免疫ホメオスタシスを生じて、脂肪組織が高脂肪食に応答してサイズおよび機能を低下したことを示した。健全な表現型として通常は現れる体重増加の欠如に関わらず、異所的な脂質蓄積（脂肪肝および血中トリグリセリド量の増加）が重篤な代謝障害を生じた。ヒトでは、微生物叢の遺伝子豊富さが健全な表現型と関連し、一方、遺伝子不足（低い遺伝子数）は代謝障害のリスク増加と相互関連することが示されている（Ｌｅ  Ｃｈａｔｅｌｉｅｒら，２０１３）。
【０００６】
Ｗｅｒｔｅｎｂｒｕｃｈらは２０１５年に、抗微生物ペプチドＬＬ−３７／ＣＲＡＭＰ（カテリシジン）、ヒトβ−デフェンシン２および補体因子Ｃ５ａが、肝臓疾患を有する患者からの血清において、健常コントロールに比べて高められることを実証した。３種のマーカーすべての血清量は健常コントロールでは比較的狭いが、肝臓患者では値に幅広い変動がある。筆者らは、ｈＢＤ−２の高い量が胆管上皮の組織修復の増加を反映している可能性があると推測する。
【０００７】
Ｈａｒａｄａらは２００４年に、肝内胆管上皮細胞中、細胞株中および胆管中のｈＢＤ１およびｈＢＤ−２の量を試験した。ｈＢＤ−２発現が、活動性炎症の際に胆管で認められた。胆汁の量は、ＣＲＰの血清量と相関することが認められた。筆者らは、ｈＢＤ−２が局所感染または活動性炎症に応答して発現され、ｈＢＤ１は胆管抗微生物防御系の既存成分であり得ると結論付ける。
【０００８】
デフェンシン
デフェンシンは、健全なマイクロバイオームを維持し潜在的な病原体を取り除くように働く、有力な生来のホスト防御の一つを代表する（Ｗｅｈｋａｍｐら，２００２およびＳａｌｚｍａｎら，２００７）。デフェンシンはグラム陽性細菌、グラム陰性細菌、真菌、および古細菌に対する抗微生物活性、ならびに抗炎症性サイトカインを増加し炎症性サイトカインを減少させる抗炎症活性を有するペプチドである。
【０００９】
ヒトデフェンシンは、小さなカチオン性ペプチドであり、それらの３つの分子内システインジスルフィド結合のトポロジーに基づいてα−およびβ−デフェンシンに分けることができる。ヒトα−デフェンシンはさらに、好中球顆粒（ＨＮＰ１〜４）から最初に分離されたもの、および小腸の陰窩においてパネート細胞によって発現される腸デフェンシン（ＨＤ５およびＨＤ６またはＤＥＦＡ５およびＤＥＦＡ６）に細分化できる。β−デフェンシンは（ＤＥＦＢｎ）は皮膚、眼、中耳、口、気管、肺、胃腸管、肝臓、泌尿生殖器系、腎臓、膣、膵臓および乳腺を含む様々な組織および器官における上皮細胞によって主に産生される。最も特徴付けされているヒトβ−デフェンシンファミリーのメンバーはｈＢＤ１〜４である。ヒトデフェンシンのいくつかは構成的に産生されるが、一方、他は炎症促進性サイトカインまたは外因性微生物産物によって誘発される。ヒトデフェンシンのいくつかは、妊娠期間に伴い増加した量で羊水中で既に発現され、子宮中で胎児を保護する。母乳および特に初乳である乳汁は、α−およびβ−デフェンシンの両方、ならびにカテリシジンを含むが、これらのいくつかのみが母乳中で著しい濃度で認められる（Ａｒｍｏｇｉｄａら，２００４）。
【００１０】
Ｌｉｕら（２００８）は、ともに白血球によって産生され血液中のα−デフェンシンの下位グループに属しているＨＮＰ−１およびＨＮＰ−２が、従来のインスリンシグナル化経路とは明確に異なる細胞内メカニズムによって分離された肝細胞中でグリコーゲン分解および糖新生を阻害できることを発見した。
【００１１】
ＣＮ１０４９７１３４３は、高脂肪食およびビタミン欠乏食で給餌されたマウスがメタボリック症候群を有することを開示している。長期のこのようなビタミンＤ欠乏食後のデフェンシンの発現は下方調節され、このためデフェンシンの発現欠如をもたらす。２５日間にわたるデフェンシンＨＤ５の４回の投与は、血漿グルコース量の低下を部分的に生じたが、インスリン耐性またはホメオスタシスモデル評価と関連するデータは示されない。ＣＮ１０４９７１３４３は、正常なビタミンＤ量を有する高脂肪食でのマウスへのデフェンシンＨＤ５の投与が肝臓、膵臓、または胆管の障害を治療できることを開示していない。
【００１２】
従来技術はカテリシジン、補体およびβ−デフェンシンと増加した胆管炎症または感染の相関関係を開示するが、デフェンシンが肝臓、膵臓または胆管の障害を治療するために使用できるという教示または示唆はない。
【発明の概要】
【００１３】
本開示は、経口投与される哺乳動物の腸α−およびβ−デフェンシンが、中心性（腹部または内臓の）重量増加および脂質蓄積を含む重量増加を予防または治療する能力を有することを実証する。データは、哺乳動物α−／β−デフェンシンの投与が、肝臓癌および肝性脳症を含む、肝臓、胆管、および膵臓の疾患または障害ならびに特定の代謝障害の治療をもたらすことを示す。
【００１４】
高脂肪食で給餌されたマウスへのα−またはβ−デフェンシンの投与は、肝臓および内臓脂肪、脂肪症マーカーおよび肝脂肪代謝のマーカーの発現に影響を及ぼし、これらが肝脂肪および脂肪症を低下することを示す。食餌摂取、食餌効率、脂肪摂取および排泄は影響されず、デフェンシンの投与が食欲を変化させなかったことを示す。
【００１５】
例１により、ヒトβ−デフェンシン２（ｈＢＤ−２）の投与量は、高脂肪食でのマウスにおける体重増加を低下するのに十分だった。ｈＢＤ−２の摂取は脂肪量増加を主に低下した。本発明者らは、低下されたのが主に腹部、すなわち肝臓および内臓脂肪量増加だったと最初に仮定した；例２は内臓脂肪量が高脂肪食でのｈＢＤ−２の摂取後に実際に有意に低下され、同時に肝臓量の低下の傾向が認められたことを示す。耐糖能およびグルコース負荷の際の糖刺激インスリン応答は、ともにｈＢＤ−２の投与で改善された。脂肪蓄積と相互関連することが知られているマーカーの発現は有意に低下した。重要なことに、食物摂取は食餌のタイプによって有意に影響されなかった。高脂肪食が給餌されたマウスへのα−デフェンシンＨＤ５の投与は、脂肪酸代謝の増加をもたらした。
【００１６】
例４に示されるように、肥満マウスへのｈＢＤ−２の投与は、同様な食物摂取において、ｈＢＤ−２を受けなかった肥満マウスと比べて投与後に体重増加を減少させる傾向を示した。ｈＢＤ−２の投与は全体重の脂肪割合を低下し、耐糖能およびインスリン耐性を速やかに改善した。同様な結果はＨＤ５の投与で観察された。
【００１７】
グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）アナログの投与は、高脂肪食で給餌されたマウスにおける体重低下効果を有し、肝臓における脂肪蓄積の低下および血漿コレステロール量の低下をもたらした。
【００１８】
総じて、本明細書に提示されるデータは、α−デフェンシン、β−デフェンシン、ＧＬＰ−１およびＧＬＰ−１アナログが肝臓、胆管、または膵臓の疾患または障害を治療するために使用できることを示す。
【００１９】
一つの態様では、本開示は肝臓、胆管、膵臓または代謝の疾患または障害の治療または予防のための方法に関し、当該方法はそれを必要とする被験体への哺乳動物α−デフェンシンおよび／またはβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログの効果的な量の投与を含む。
【００２０】
別の態様では、本開示は肝臓癌、胆管癌または膵臓癌の治療のための方法に関し、当該方法はそれを必要とする被験体への哺乳動物α−デフェンシンおよび／またはβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログの効果的な量の単独でのあるいは放射線、化学または免疫療法と組み合わせでの投与を含む。
【００２１】
さらに別の態様では、本開示は本明細書で説明される方法における使用のための哺乳動物α−デフェンシンおよび／またはβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログに関する。
【００２２】
さらに別の態様では、本開示は前述の請求項のいずれか一項による治療のための医薬品の調製のための哺乳動物α−デフェンシンおよび／またはβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログの使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】マウス代謝に対する哺乳動物α−および／またはβ−デフェンシンの効果を検討するための実験設定の概要を示す図である。−１週に、マウスを群およびケージに分け、ケージあたり３匹および群あたり４ケージにした。−１〜０週の間、マウスを磁気共鳴スキャンによって臨床的に検査して脂肪分布を評価した。０、１、および４週目に、糞便のマイクロバイオームを分析した。４週目に、微生物叢の分析に加えて、マウスをスキャンし、血中グルコースおよびインスリン量を測定した。６週目に、エネルギー消費を糞便の窒素および脂質含量を分析することによって評価した。７週目に、インスリン耐性試験（ＩＴＴ）を実施した。８週目に、経口耐糖能試験（ＯＧＴＴ）およびグルコース応答性インスリン分泌（ＧＳＩＳ）を実施した。９週目（終了時）に、いくつかの分析を実施し、特に、マウスの重量を測定しスキャンし、血漿成分ならびに結腸、盲腸および小腸の微生物叢組成を評価した。さらに、タンパク質／ＲＮＡ分析を筋組織（四頭筋）、ｉＷＡＴ、ｅＷＡＴ、ｉＢＡＴ、肝臓、結腸、空腸、回腸、および十二指腸で実施した。組織学的分析を筋組織（四頭筋）、ｉＷＡＴ、ｅＷＡＴ、ｉＢＡＴ、肝臓、結腸、空腸、回腸および十二指腸で実施した。
【図２】マウス代謝に対する哺乳動物α−および／またはβ−デフェンシンの効果を検討するための実験設定の概要を示す図である。−１週に、Ｃ５７／ＢＬ／６Ｊマウスが届いた。０週に、糞便を収集した。０〜１２週の馴らし期間中、マウスに高脂肪食を与えた。１２週目に、マウスを磁気共鳴スキャンによって臨床的に検査して脂肪分布を評価し、糞便を収集し、経口耐糖能試験（ＯＧＴＴ）およびグルコース応答性インスリン分泌（ＧＳＩＳ）を実施した。１３−０週目に、マウスをケージあたり４匹および群あたり３ケージで群およびケージに分けた。０、１２および１３−１０週目に、糞便のマイクロバイオームを分析した。１３−２、１３−４、１３−６、１３−８および１３−１０週目に、マウスをスキャンし、血糖およびインスリン量を測定した。１３−９週目に、インスリン耐性試験（ＩＴＴ）を実施した。１３−１０週目（終了時）に、いくつかの分析を実施し、特にマウスの重量を測定しスキャンし、血漿成分ならびに結腸、盲腸および小腸の微生物叢組成を評価した。さらに、ｉＷＡＴ、ｅＷＡＴおよび肝臓重量を測定した。
【図３】ヒトβ−デフェンシン１−４のＣｌｕｓｔａｌ  Ｗ（２．１）多重配列アラインメントを示す図である。
【図４】ヒトα−デフェンシン５および６のＣｌｕｓｔａｌ  Ｗ（２．１）多重配列アラインメントを示す図である。
【図５】ヒト好中球ペプチド１−３のＣｌｕｓｔａｌ  Ｗ（２．１）多重配列アラインメントを示す図である。
【図６】ヒト、アカゲザル、チンパンジー、オランウータン、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ブタおよびマウスのβ−デフェンシン２のＣｌｕｓｔａｌ  Ｗ（２．１）多重配列アラインメントを示す図である。Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗアラインメントにおいて、＊は単一の完全に保存された残基を有する位置を示す。：は以下の「強い」群、−Ｓ，Ｔ，Ａ；Ｎ，Ｅ，Ｑ，Ｋ；Ｎ，Ｈ，Ｑ，Ｋ；Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｑ；Ｑ，Ｈ，Ｒ，Ｋ；Ｍ，Ｉ，Ｌ，Ｖ；Ｍ，Ｉ，Ｌ，Ｆ；Ｈ，Ｙ；Ｆ，Ｙ，Ｗ、の一つが完全に保存されることを示す。．は以下の「より弱い」群、−Ｃ，Ｓ，Ａ；Ａ，Ｔ，Ｖ；Ｓ，Ａ，Ｇ；Ｓ，Ｔ，Ｎ，Ｋ；Ｓ，Ｔ，Ｐ，Ａ；Ｓ，Ｇ，Ｎ，Ｄ；Ｓ，Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｑ，Ｋ；Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｑ，Ｈ，Ｋ；Ｎ，Ｅ，Ｑ，Ｈ，Ｒ，Ｋ；Ｖ，Ｌ，Ｉ，Ｍ；Ｈ，Ｆ，Ｙ、の一つが完全に保存されることを示す。
【図７Ａ】低脂肪食（ＬＦＤ）、高脂肪食（ＨＦＤ）またはＨＦＤおよびデフェンシンｈＢＤ−２（ＨＦＤ＋Ｐ２）でのマウスの７週間処置にわたる体重変化を示す図である。
【図７Ｂ】低脂肪食（ＬＦＤ）、高脂肪食（ＨＦＤ）またはＨＦＤおよびデフェンシンｈＢＤ−２（ＨＦＤ＋Ｐ２）でのマウスの７週間処置にわたる体重発達を示す図である。
【図７Ｃ】低脂肪食（ＬＦＤ）、高脂肪食（ＨＦＤ）またはＨＦＤおよびデフェンシンｈＢＤ−２（ＨＦＤ＋Ｐ２）でのマウスの７週間処置にわたる累積食餌摂取を示す図である。
【図８Ａ】低脂肪食（ＬＦＤ）、高脂肪食（ＨＦＤ）またはＨＦＤおよびデフェンシンｈＢＤ−２（ＨＦＤ＋Ｐ２）でのマウスの７週間処理にわたる赤肉／脂肪量発達を示す図である。（ａ）１週目および７週目での赤肉量発達。
【図８Ｂ】低脂肪食（ＬＦＤ）、高脂肪食（ＨＦＤ）またはＨＦＤおよびデフェンシンｈＢＤ−２（ＨＦＤ＋Ｐ２）でのマウスの７週間処理にわたる赤肉／脂肪量発達を示す図である。（ｂ）１週目および７週目での脂肪量発達。
【図９Ａ】低脂肪食（ＬＦＤ）、高脂肪食（ＨＦＤ）またはＨＦＤとデフェンシンｈＢＤ−２（ＨＦＤ＋Ｐ２）で７週間処置したマウスにおけるグルコースホメオスタシスを示す図である。（ａ）インスリン耐性試験（ＩＴＴ）。
【図９Ｂ】低脂肪食（ＬＦＤ）、高脂肪食（ＨＦＤ）またはＨＦＤとデフェンシンｈＢＤ−２（ＨＦＤ＋Ｐ２）で７週間処置したマウスにおけるグルコースホメオスタシスを示す図である。（ｂ）経口耐糖能試験。
【図９Ｃ】低脂肪食（ＬＦＤ）、高脂肪食（ＨＦＤ）またはＨＦＤとデフェンシンｈＢＤ−２（ＨＦＤ＋Ｐ２）で７週間処置したマウスにおけるグルコースホメオスタシスを示す図である。（ｃ）グルコース応答性インスリン分泌（ＧＳＩＳ）。
【図９Ｄ】低脂肪食（ＬＦＤ）、高脂肪食（ＨＦＤ）またはＨＦＤとデフェンシンｈＢＤ−２（ＨＦＤ＋Ｐ２）で７週間処置したマウスにおけるグルコースホメオスタシスを示す図である。（ｄ）５時間空腹インスリン試験。
【図１０Ａ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンｈＢＤ−２での予防的処置（高脂肪＋ｈＢＤ−２）による、体重発達（Ａ）、食餌効率（Ｂ）およびエネルギー摂取（Ｃ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）体重発達。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）食餌効率（ケージにおける平均食物摂取で調整した増加体重のｇ）。テューキー補正による一元配置分散分析、補正注意！共ケージによるｎ＝４。（Ｃ）エネルギー摂取。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図１０Ｂ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンｈＢＤ−２での予防的処置（高脂肪＋ｈＢＤ−２）による、体重発達（Ａ）、食餌効率（Ｂ）およびエネルギー摂取（Ｃ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）体重発達。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）食餌効率（ケージにおける平均食物摂取で調整した増加体重のｇ）。テューキー補正による一元配置分散分析、補正注意！共ケージによるｎ＝４。（Ｃ）エネルギー摂取。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図１０Ｃ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンｈＢＤ−２での予防的処置（高脂肪＋ｈＢＤ−２）による、体重発達（Ａ）、食餌効率（Ｂ）およびエネルギー摂取（Ｃ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）体重発達。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）食餌効率（ケージにおける平均食物摂取で調整した増加体重のｇ）。テューキー補正による一元配置分散分析、補正注意！共ケージによるｎ＝４。（Ｃ）エネルギー摂取。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図１１Ａ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンｈＢＤ−２での予防的処置（ｈＢＤ−２）による全体重の割合としての脂肪（Ａ）、グラムで肝臓重量（Ｂ）およびグラムで精巣上体脂肪（ｅＷＡＴ）の重量（Ｃ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）異なる週における全体重の脂肪割合。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）終了時の精巣上体脂肪組織（内臓ＡＴ）の重量。テューキー補正による一元配置分散分析。（Ｃ）終了時重量。テューキー補正による一元配置分散分析。
【図１１Ｂ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンｈＢＤ−２での予防的処置（ｈＢＤ−２）による全体重の割合としての脂肪（Ａ）、グラムで肝臓重量（Ｂ）およびグラムで精巣上体脂肪（ｅＷＡＴ）の重量（Ｃ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）異なる週における全体重の脂肪割合。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）終了時の精巣上体脂肪組織（内臓ＡＴ）の重量。テューキー補正による一元配置分散分析。（Ｃ）終了時重量。テューキー補正による一元配置分散分析。
【図１１Ｃ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンｈＢＤ−２での予防的処置（ｈＢＤ−２）による全体重の割合としての脂肪（Ａ）、グラムで肝臓重量（Ｂ）およびグラムで精巣上体脂肪（ｅＷＡＴ）の重量（Ｃ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）異なる週における全体重の脂肪割合。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）終了時の精巣上体脂肪組織（内臓ＡＴ）の重量。テューキー補正による一元配置分散分析。（Ｃ）終了時重量。テューキー補正による一元配置分散分析。
【図１２Ａ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でおよびデフェンシンｈＢＤ−２での予防的処置（高脂肪＋ｈＢＤ−２）によって１０週間処置されたマウスにおけるグルコースホメオスタシスを示す図である。（Ａ）経口耐糖能試験。（Ｂ）グルコース応答性インスリン分泌（ＧＳＩＳ）。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）７週目の経口耐糖能試験。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）ｏＧＴＴの期間に得られた７週目のグルコース応答性インスリン分泌。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図１２Ｂ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でおよびデフェンシンｈＢＤ−２での予防的処置（高脂肪＋ｈＢＤ−２）によって１０週間処置されたマウスにおけるグルコースホメオスタシスを示す図である。（Ａ）経口耐糖能試験。（Ｂ）グルコース応答性インスリン分泌（ＧＳＩＳ）。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）７週目の経口耐糖能試験。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）ｏＧＴＴの期間に得られた７週目のグルコース応答性インスリン分泌。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図１３Ａ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でおよびデフェンシンｈＢＤ−２での予防的処置（高脂肪＋ｈＢＤ−２）によって１０週間処置されたマウスにおけるグルコースホメオスタシスを示す図である。（Ａ）インスリン耐性試験（ＩＴＴ）。（Ｂ）ＨＯＭＡ−ＩＲ。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）８週目のインスリン耐性試験。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）９週目のホメオスタシスモデル評価（ＨＯＭＡ）。テューキー補正による一元配置分散分析。
【図１３Ｂ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でおよびデフェンシンｈＢＤ−２での予防的処置（高脂肪＋ｈＢＤ−２）によって１０週間処置されたマウスにおけるグルコースホメオスタシスを示す図である。（Ａ）インスリン耐性試験（ＩＴＴ）。（Ｂ）ＨＯＭＡ−ＩＲ。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）８週目のインスリン耐性試験。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）９週目のホメオスタシスモデル評価（ＨＯＭＡ）。テューキー補正による一元配置分散分析。
【図１４Ａ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でおよびデフェンシンｈＢＤ−２での予防的処置（高脂肪＋ｈＢＤ−２）によって１０週間処置されたマウスの肝臓におけるペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ２（ＰＰＡＲγ２）発現（ａ）およびペルオキシソーム補酵素Ａオキシダーゼ１（Ａｃｏｘ１）発現（ｂ）を示す図である。
【図１４Ｂ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でおよびデフェンシンｈＢＤ−２での予防的処置（高脂肪＋ｈＢＤ−２）によって１０週間処置されたマウスの肝臓におけるペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ２（ＰＰＡＲγ２）発現（ａ）およびペルオキシソーム補酵素Ａオキシダーゼ１（Ａｃｏｘ１）発現（ｂ）を示す図である。
【図１５Ａ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンｈＢＤ−２での介入処置（高脂肪＋ｈＢＤ−２）による体重発達（Ａ）および体重変化（Ｂ）を示す図である。有意性：有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）体重発達。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）馴らし期間の最後の１３週目から実験食の次の１０週における体重変化。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図１５Ｂ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンｈＢＤ−２での介入処置（高脂肪＋ｈＢＤ−２）による体重発達（Ａ）および体重変化（Ｂ）を示す図である。有意性：有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）体重発達。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）馴らし期間の最後の１３週目から実験食の次の１０週における体重変化。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図１６Ａ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンｈＢＤ−２での介入処置（高脂肪＋ｈＢＤ−２）による全体重の割合としての脂肪（Ａ）およびグラムでの０−４週の脂肪％の変化（Ｂ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）異なる週における全体重の脂肪割合。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）馴らし期間の最後から実験食で４週における脂肪割合の変化。テューキー補正による一元配置分散分析。
【図１６Ｂ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンｈＢＤ−２での介入処置（高脂肪＋ｈＢＤ−２）による全体重の割合としての脂肪（Ａ）およびグラムでの０−４週の脂肪％の変化（Ｂ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）異なる週における全体重の脂肪割合。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）馴らし期間の最後から実験食で４週における脂肪割合の変化。テューキー補正による一元配置分散分析。
【図１７Ａ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンｈＢＤ−２での介入処置（ｈＢＤ−２）によるグラムでの肝臓重量（Ａ）およびグラムでの精巣上体脂肪（ｅＷＡＴ）の重量（Ｂ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）終了時の肝臓重量。テューキー補正による一元配置分散分析。（Ｂ）終了時の精巣上体脂肪組織（内臓脂肪）の重量。テューキー補正による一元配置分散分析。
【図１７Ｂ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンｈＢＤ−２での介入処置（ｈＢＤ−２）によるグラムでの肝臓重量（Ａ）およびグラムでの精巣上体脂肪（ｅＷＡＴ）の重量（Ｂ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）終了時の肝臓重量。テューキー補正による一元配置分散分析。（Ｂ）終了時の精巣上体脂肪組織（内臓脂肪）の重量。テューキー補正による一元配置分散分析。
【図１８Ａ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でおよびデフェンシンｈＢＤ−２での介入処置（高脂肪＋ｈＢＤ−２）によって１０週間処置されたマウスにおけるグルコースホメオスタシスを示す図である。（Ａ）ケージ１からの経口耐糖能試験。（Ｂ）マウスＤ１からの経口耐糖能試験。（Ｃ）インスリン耐性試験（ＩＴＴ）。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）高脂肪＋ｈＢＤ−２群の第一ケージを示す馴らし期間の最後（１３−０週）から２週おきに繰り返された経口耐糖能試験。（Ｂ）高脂肪＋ｈＢＤ−２群のマウスＤ１のみを示す馴らし期間の最後（１３−０週）から２週おきに繰り返された経口耐糖能試験。（Ｃ）９週目のインスリン耐性試験。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図１８Ｂ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でおよびデフェンシンｈＢＤ−２での介入処置（高脂肪＋ｈＢＤ−２）によって１０週間処置されたマウスにおけるグルコースホメオスタシスを示す図である。（Ａ）ケージ１からの経口耐糖能試験。（Ｂ）マウスＤ１からの経口耐糖能試験。（Ｃ）インスリン耐性試験（ＩＴＴ）。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）高脂肪＋ｈＢＤ−２群の第一ケージを示す馴らし期間の最後（１３−０週）から２週おきに繰り返された経口耐糖能試験。（Ｂ）高脂肪＋ｈＢＤ−２群のマウスＤ１のみを示す馴らし期間の最後（１３−０週）から２週おきに繰り返された経口耐糖能試験。（Ｃ）９週目のインスリン耐性試験。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図１８Ｃ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でおよびデフェンシンｈＢＤ−２での介入処置（高脂肪＋ｈＢＤ−２）によって１０週間処置されたマウスにおけるグルコースホメオスタシスを示す図である。（Ａ）ケージ１からの経口耐糖能試験。（Ｂ）マウスＤ１からの経口耐糖能試験。（Ｃ）インスリン耐性試験（ＩＴＴ）。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ｈＢＤ−２＝Ｃ。（Ａ）高脂肪＋ｈＢＤ−２群の第一ケージを示す馴らし期間の最後（１３−０週）から２週おきに繰り返された経口耐糖能試験。（Ｂ）高脂肪＋ｈＢＤ−２群のマウスＤ１のみを示す馴らし期間の最後（１３−０週）から２週おきに繰り返された経口耐糖能試験。（Ｃ）９週目のインスリン耐性試験。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図１９Ａ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンｈＢＤ−２での介入処置（ｈＢＤ−２）によるマウスの肝臓におけるペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ２）発現（Ａ）およびペルオキシソーム補酵素Ａオキシダーゼ１（Ａｃｏｘ１）発現（Ｂ）を示す図である。
【図１９Ｂ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンｈＢＤ−２での介入処置（ｈＢＤ−２）によるマウスの肝臓におけるペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ２）発現（Ａ）およびペルオキシソーム補酵素Ａオキシダーゼ１（Ａｃｏｘ１）発現（Ｂ）を示す図である。
【図２０Ａ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンＨＤ５での予防的処置（高脂肪＋ＨＤ５）による体重発達（Ａ）、食餌効率（Ｂ）およびエネルギー摂取（Ｃ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｃ。（Ａ）体重発達。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）食餌効率（ケージにおける平均食物摂取で調整した増加体重のｇ）。テューキー補正による一元配置分散分析、注意！共ケージによるｎ＝４。（Ｃ）エネルギー摂取。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図２０Ｂ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンＨＤ５での予防的処置（高脂肪＋ＨＤ５）による体重発達（Ａ）、食餌効率（Ｂ）およびエネルギー摂取（Ｃ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｃ。（Ａ）体重発達。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）食餌効率（ケージにおける平均食物摂取で調整した増加体重のｇ）。テューキー補正による一元配置分散分析、注意！共ケージによるｎ＝４。（Ｃ）エネルギー摂取。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図２０Ｃ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンＨＤ５での予防的処置（高脂肪＋ＨＤ５）による体重発達（Ａ）、食餌効率（Ｂ）およびエネルギー摂取（Ｃ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｃ。（Ａ）体重発達。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）食餌効率（ケージにおける平均食物摂取で調整した増加体重のｇ）。テューキー補正による一元配置分散分析、注意！共ケージによるｎ＝４。（Ｃ）エネルギー摂取。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図２１Ａ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンＨＤ５での予防的処置（ＨＤ５）による全体重の割合としての脂肪（Ａ）、グラムでの肝臓重量（Ｂ）、およびグラムでの精巣上体脂肪（ｅＷＡＴ）の重量（Ｃ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｃ。（Ａ）異なる週における全体重の脂肪割合。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）終了時の肝臓の重量。テューキー補正による一元配置分散分析。（Ｃ）終了時の精巣上体脂肪組織（内臓ＡＴ）の重量。テューキー補正による一元配置分散分析。
【図２１Ｂ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンＨＤ５での予防的処置（ＨＤ５）による全体重の割合としての脂肪（Ａ）、グラムでの肝臓重量（Ｂ）、およびグラムでの精巣上体脂肪（ｅＷＡＴ）の重量（Ｃ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｃ。（Ａ）異なる週における全体重の脂肪割合。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）終了時の肝臓の重量。テューキー補正による一元配置分散分析。（Ｃ）終了時の精巣上体脂肪組織（内臓ＡＴ）の重量。テューキー補正による一元配置分散分析。
【図２１Ｃ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンＨＤ５での予防的処置（ＨＤ５）による全体重の割合としての脂肪（Ａ）、グラムでの肝臓重量（Ｂ）、およびグラムでの精巣上体脂肪（ｅＷＡＴ）の重量（Ｃ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｃ。（Ａ）異なる週における全体重の脂肪割合。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）終了時の肝臓の重量。テューキー補正による一元配置分散分析。（Ｃ）終了時の精巣上体脂肪組織（内臓ＡＴ）の重量。テューキー補正による一元配置分散分析。
【図２２Ａ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でおよびデフェンシンＨＤ５での予防的処置（高脂肪＋ＨＤ５）によって１０週間処置されたマウスにおけるグルコースホメオスタシスを示す図である。（Ａ）経口耐糖能試験。（Ｂ）グルコース応答性インスリン分泌（ＧＳＩＳ）。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｃ。（Ａ）７週目の経口耐糖能試験。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）ｏＧＴＴの期間中に得られた７週目のグルコース応答性インスリン分泌。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図２２Ｂ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でおよびデフェンシンＨＤ５での予防的処置（高脂肪＋ＨＤ５）によって１０週間処置されたマウスにおけるグルコースホメオスタシスを示す図である。（Ａ）経口耐糖能試験。（Ｂ）グルコース応答性インスリン分泌（ＧＳＩＳ）。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｃ。（Ａ）７週目の経口耐糖能試験。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）ｏＧＴＴの期間中に得られた７週目のグルコース応答性インスリン分泌。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図２３Ａ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンＨＤ５での予防的処置（高脂肪＋ＨＤ５）によって１０週間処置されたマウスにおけるグルコースホメオスタシスを示す図である。（Ａ）インスリン耐性試験（ＩＴＴ）。（Ｂ）ＨＯＭＡ−ＩＲ。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｃ。（Ａ）８週目のインスリン耐性試験。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）９週目のホメオスタシスモデル評価（ＨＯＭＡ）。テューキー補正による一元配置分散分析。
【図２３Ｂ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンＨＤ５での予防的処置（高脂肪＋ＨＤ５）によって１０週間処置されたマウスにおけるグルコースホメオスタシスを示す図である。（Ａ）インスリン耐性試験（ＩＴＴ）。（Ｂ）ＨＯＭＡ−ＩＲ。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｃ。（Ａ）８週目のインスリン耐性試験。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）９週目のホメオスタシスモデル評価（ＨＯＭＡ）。テューキー補正による一元配置分散分析。
【図２４Ａ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でおよびデフェンシンＨＤ５での予防的処置（高脂肪＋ＨＤ５）によって１０週間処置されたマウスの肝臓におけるペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ２（ＰＰＡＲγ２）発現（Ａ）およびペルオキシソーム補酵素Ａオキシダーゼ１（Ａｃｏｘ１）発現（Ｂ）を示す図である。
【図２４Ｂ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でおよびデフェンシンＨＤ５での予防的処置（高脂肪＋ＨＤ５）によって１０週間処置されたマウスの肝臓におけるペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ２（ＰＰＡＲγ２）発現（Ａ）およびペルオキシソーム補酵素Ａオキシダーゼ１（Ａｃｏｘ１）発現（Ｂ）を示す図である。
【図２５Ａ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンＨＤ５での介入処置（高脂肪＋ＨＤ５）による体重発達（Ａ）および体重変化（Ｂ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｃ。（Ａ）体重発達。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）馴らし期間の最後の１３週目から実験食の次の１０週における体重変化。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図２５Ｂ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンＨＤ５での介入処置（高脂肪＋ＨＤ５）による体重発達（Ａ）および体重変化（Ｂ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｃ。（Ａ）体重発達。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）馴らし期間の最後の１３週目から実験食の次の１０週における体重変化。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図２６Ａ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンＨＤ５での介入処置（ＨＤ−５）による全体重の割合としての脂肪（Ａ）およびグラムでの０−４週の脂肪％の変化（Ｂ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｃ。（Ａ）異なる週における全体重の脂肪割合。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）馴らし期間の最後から実験食での４週までの脂肪割合の変化。テューキー補正による一元配置分散分析。
【図２６Ｂ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンＨＤ５での介入処置（ＨＤ−５）による全体重の割合としての脂肪（Ａ）およびグラムでの０−４週の脂肪％の変化（Ｂ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｃ。（Ａ）異なる週における全体重の脂肪割合。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。（Ｂ）馴らし期間の最後から実験食での４週までの脂肪割合の変化。テューキー補正による一元配置分散分析。
【図２７Ａ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンＨＤ５での介入処置（ＨＤ−５）によるグラムでの肝臓重量（Ａ）およびグラムでの精巣上体脂肪（ｅＷＡＴ）の重量（Ｂ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｃ。（Ａ）終了時の肝臓重量。テューキー補正による一元配置分散分析。（Ｂ）終了時の精巣上体脂肪組織（内臓ＡＴ）の重量。テューキー補正による一元配置分散分析。
【図２７Ｂ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンＨＤ５での介入処置（ＨＤ−５）によるグラムでの肝臓重量（Ａ）およびグラムでの精巣上体脂肪（ｅＷＡＴ）の重量（Ｂ）を示す図である。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｃ。（Ａ）終了時の肝臓重量。テューキー補正による一元配置分散分析。（Ｂ）終了時の精巣上体脂肪組織（内臓ＡＴ）の重量。テューキー補正による一元配置分散分析。
【図２８Ａ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でおよびデフェンシンＨＤ５での介入処置（高脂肪＋ＨＤ５）によって１０週間処置されたマウスにおけるグルコースホメオスタシスを示す図である。（Ａ）ケージ２からの経口耐糖能試験。（Ｂ）インスリン耐性試験（ＩＴＴ）。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｃ。（Ａ）馴らし期間の最後（１３−０週）から２週おきに繰り返された経口耐糖能試験で、高脂肪＋ＨＤ−５群の第二ケージを示す。（Ｂ）９週目のインスリン耐性試験。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図２８Ｂ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でおよびデフェンシンＨＤ５での介入処置（高脂肪＋ＨＤ５）によって１０週間処置されたマウスにおけるグルコースホメオスタシスを示す図である。（Ａ）ケージ２からの経口耐糖能試験。（Ｂ）インスリン耐性試験（ＩＴＴ）。有意性：低脂肪対高脂肪＝Ａ、低脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｂ、高脂肪対高脂肪＋ＨＤ−５＝Ｃ。（Ａ）馴らし期間の最後（１３−０週）から２週おきに繰り返された経口耐糖能試験で、高脂肪＋ＨＤ−５群の第二ケージを示す。（Ｂ）９週目のインスリン耐性試験。テューキー補正による二元配置分散分析（層化した対応値）。
【図２９Ａ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンＨＤ５での介入処置（ＨＤ−５）によるマウスの肝臓におけるペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ２（ＰＰＡＲγ２）発現（ａ）およびペルオキシソーム補酵素Ａオキシダーゼ１（Ａｃｏｘ１）発現（ｂ）を示す図である。
【図２９Ｂ】１０週にわたる低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）または高脂肪食でのマウスの処置およびデフェンシンＨＤ５での介入処置（ＨＤ−５）によるマウスの肝臓におけるペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ２（ＰＰＡＲγ２）発現（ａ）およびペルオキシソーム補酵素Ａオキシダーゼ１（Ａｃｏｘ１）発現（ｂ）を示す図である。
【図３０Ａ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）、高脂肪食でおよびデフェンシンｈＢＤ−２での予防的処置（高脂肪＋ｈＢＤ−２）または高脂肪食およびデフェンシンＨＤ５での予防的処置（高脂肪＋ＨＤ５）によって１０週間処置されたマウスにおける食餌脂肪の摂取（Ａ）および糞便脂肪含量（Ｂ）を示す図である。
【図３０Ｂ】低脂肪食（低脂肪）、高脂肪食（高脂肪）、高脂肪食でおよびデフェンシンｈＢＤ−２での予防的処置（高脂肪＋ｈＢＤ−２）または高脂肪食およびデフェンシンＨＤ５での予防的処置（高脂肪＋ＨＤ５）によって１０週間処置されたマウスにおける食餌脂肪の摂取（Ａ）および糞便脂肪含量（Ｂ）を示す図である。
【図３１】マウス消化管炎症および微生物叢に対するＧＬＰ−１アナログ（リラグルチド）の効果を検討するための実験設定の概略を示す図である。−４０週に、Ｃ５７／ＢＩ／６Ｊ  ＤＩＯマウスが到着した。マウスに高脂肪食６０％脂肪、ＳＳＮＩＦＦ（Ｄｉｅｔ  Ｎｏ．Ｄ１２４９２）またはｐｕｒｉｎａ  ｃｈｏｗを３８週間与えて、５５ｇの平均体重を達成した。−２週からマウスを単独で飼育した。糞便サンプルを、１６Ｓ  ＲＮＡ分析用に−１日および２７日に収集した。回腸由来サンプルを２８日目に盲腸から２ｃｍで収集した。
【図３２Ａ】ＨＦＤでの３８週に続くＨＦＤ＋ＧＬＰ−１アナログによる４週処置の間のグラムでのおよび体重の％としての体重低下を示す図である。
【図３２Ｂ】ＨＦＤでの３８週に続くＨＦＤ＋ＧＬＰ−１アナログによる４週処置の間のグラムでのおよび体重の％としての体重低下を示す図である。
【図３３】ＨＦＤでの３８週およびＨＦＤ＋ＧＬＰ−１アナログでの４週に続く終了時におけるグラムでの肝臓重量を示す図である。
【図３４】ＨＦＤでの３８週およびＨＦＤ＋ＧＬＰ−１アナログでの４週に続く終了時における血漿コレステロール濃度を示す図である。
【図３５】雌ＮＭＲＩマウスへの４ｍｇ／ｋｇのｈＢＤ−２経口投与後の薬理動態データを示す図である。Ｙ軸はｈＢＤ−２をμｇ／ｇ組織で示す。結果を群平均±ＳＥＭで示す。
【図３６】それぞれ１ｍｇ／ｋｇの皮下（ＳＣ）および静脈内（ＩＶ）投与後のｈＢＤ−２に関する薬理動態データを示す図である。Ｙ軸はｈＢＤ−２をμｇ／ｍＬで示す。異なる曲線は、異なる実験および異なる方法（ＨＰＬＣおよびＥＬＩＳＡ）を表す。
【図３７】それぞれ１６．５ｍｇ／ｋｇの皮下および静脈内投与後の「ｈＢＤ−２−アルブミン融合Ｎ端」に関する薬物動態データを示す図である。Ｙ軸は融合タンパク質の濃度をμｇ／ｍＬで示す。結果は４匹のマウスの平均／サンプリング時間±ＳＤである。
【図３８】それぞれ１６．５ｍｇ／ｋｇの皮下および静脈内投与後の「ｈＢＤ−２−アルブミン融合Ｃ端」に関する薬物動態データを示す図である。Ｙ軸は融合タンパク質の濃度をμｇ／ｍＬで示す。結果は４匹のマウスの平均／サンプリング時間±ＳＤである。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明は請求項で定められる通りである。
【００２５】
定義
カテリシジン：本用語はカテリシジン関連抗微生物ペプチドを指し、それらはマクロファージおよび多形核白血球ＰＭＮのリソソーム、ならびにケラチノサイトで発見されたポリペプチドのファミリーである。カテリシジンは侵襲性細菌感染に対する哺乳動物の自然免疫防御において重要な役割を果たす。カテリシジンファミリーのペプチドは、抗微生物ペプチドとして分類され、ファミリーはデフェンシンも含む。抗微生物ポリペプチドのカテリシジンファミリーのメンバーは、高度に保存された領域（カテリン領域）および高度に可変なカテリシジンペプチド領域によって特徴付けられる。カテリシジンの例はヒトカテリシジンであり、それからＬＬ−３７（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）が派生される。
【００２６】
デフェンシン：本明細書で使用される用語「デフェンシン」は、抗微生物ペプチドのデフェンシン系に属すると従来技術の当業者によって認識されるポリペプチドを指す。デフェンシンはα−デフェンシン系にまたはβ−デフェンシン系に属する。デフェンシンの例は、すべてα−デフェンシン系に属する、ヒト腸α−デフェンシン５（ＨＤ５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）、ヒトα−デフェンシン６（ＨＤ６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９）、ヒト好中球ペプチド１（ＨＮＰ−１）、ヒト好中球ペプチド２（ＨＮＰ−２）、ヒト好中球ペプチド３（ＨＮＰ−３）、およびβ−デフェンシン系に属するヒトβ−デフェンシン１（ｈＢＤ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）、ヒトβ−デフェンシン２（ｈＢＤ−２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）、ヒトβ−デフェンシン３（ｈＢＤ３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）、ヒトβ−デフェンシン４（ｈＢＤ４、ＳＥＱ  ＩＤ：ＮＯ．７）、チンパンジーβ−デフェンシン２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０）、マカクβ−デフェンシン２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）、オランウータンβ−デフェンシン２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）、マウスβ−デフェンシン３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）、ウマβ−デフェンシン２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３）、ブタβ−デフェンシン１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）、ヤギβ−デフェンシン２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）、ウシβ−デフェンシン２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）、ニワトリβ−デフェンシン２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）も含む。
【００２７】
デフェンシンは前駆体として発現され、細胞外空間への分泌前にシグナルペプチドおよび場合によりプロペプチドの切断によってもプロセスされる。前述の特定配列は、予測される成熟生物活性デフェンシンを示す。プロセシングは細胞間で異なり得ること、かつ得られる分泌された成熟ペプチドは予測配列と１または２個のＣ−またはＮ−端アミノ酸により異なるが依然としてそれらの生物活性を保持し得ることは、従来技術の当業者によって理解されるであろう。
【００２８】
消化管：消化管は食物を消化器官に移動するために動物により使用される管であり、消化器官自体を含む。本明細書で使用されるヒト消化管は、口、食道、胃、十二指腸、空調、回腸、盲腸、結腸、直腸、および肛門管からなる消化器系を指す。
【００２９】
グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）：ＧＬＰ−１はプログルカゴン遺伝子の転写産生に由来する神経ペプチドおよびインクレチンである。末梢におけるＧＬＰ−１の主な起源は腸Ｌ細胞であり、それはＧＬＰ−１を腸ホルモンとして分泌する。ＧＬＰ−１の生物学的な活性型は、ＧＬＰ−１−（７−３７）およびＧＬＰ−１−（７−３６）ＮＨ２である。これらのペプチドはプログルカゴン分子の選択的切断から生じる。
【００３０】
回腸Ｌ細胞によるＧＬＰ−１分泌は、小腸の腔における栄養物の存在に依存する。このホルモンの分泌促進物質（分泌を生じるまたは刺激する物質）は、炭水化物、タンパク質および脂質のような主栄養物を含む。血液循環中に入ると、ＧＬＰ−１は、酵素ジペプチジルペプチダーゼ−４による急速な分解による、２分未満の半減期を有する。
【００３１】
ＧＬＰ−１は有力な抗高血糖ホルモンであり、グルコースの上昇に応答してホルモンインスリンを放出するよう膵臓のβ細胞を誘発し、一方、グルカゴン分泌を抑制する。このようなグルコース依存性作用は特に魅力的であり、なぜならインスリンの無調節な放出は、血漿グルコース濃度が正常な空腹時範囲にあるとき、または好機を逸したインスリン注射の際に、血糖の危険な低下−低血糖を生じ得るからである。このことはＧＬＰ−１の結果として起こらず、なぜなら血糖量が空腹時範囲にあるときに、ＧＬＰ−１はもはや、より多くのインスリンを放出するようβ細胞を刺激しないからである。さらに、ＧＬＰ−１は胃液分泌および胃運動性を阻害する。このことは炭水化物吸収を遅らせかつ延長し、ならびに満腹効果に寄与する。
【００３２】
リラグルチド（ＮＮ２２１１）は長期作用性グルカゴン様ペプチド−１受容体作用剤であり、インスリン分泌を刺激する内因性代謝ホルモンＧＬＰ−１と同じ受容体に結合する。
【００３３】
他のＧＬＰ−１アナログはエキセナチド、リキシセナチド、アルビグルチド、およびデュラグルチドを含む。
【００３４】
同一性：２つのアミノ酸配列間または２つのヌクレオチド配列間の関連性は、パラメータ「同一性」によって説明される。２つのアミノ酸配列間の同一性の程度は、ＥＭＢＯＳＳパッケージのニードルプログラム（Ｒｉｃｅら，２０００，ｈｔｔｐ：／／ｅｍｂｏｓｓ．ｏｒｇ）、好ましくはバージョン３．０．０以降で実行されるようにニードルマン−ウンシュアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３）を用いて決定される。使用される任意のパラメータは、１０のｇａｐ  ｏｐｅｎ  ｐｅｎａｌｔｙ、０．５のｇａｐ  ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  ｐｅｎａｌｔｙ、およびＥＢＬＯＳＵＭ６２（ＢＬＯＳＵＭ６２のＥＭＢＯＳＳバーション）置換マトリックスである。ニードル標識された「最長同一性」（−ｎｏｂｒｅｉｆオプションを用いて得られる）のアウトプットをパーセント同一性として使用し、
（同一残基×１００）／（アラインメント長−アラインメントにおけるギャップの全数）
として計算する。
【００３５】
治療：本明細書で使用される用語「治療」および「治療する」は、症状、疾患または障害に対抗する目的のための患者の管理および看護を指す。本用語は、徴候または合併症を軽減または緩和する；症状、疾患または障害の進行を遅らす；症状、疾患または障害を治すまたは消失させる；および／または症状、疾患または障害を予防する目的のための活性化合物の投与など、患者が患う所与の症状に対する治療の全範囲を含み、ここで「予防する」または「予防」は症状、疾患または障害の発症を妨げる、低下するまたは遅延させる目的のための患者の管理および看護を指すと理解されるべきであり、徴候または合併症の発症のリスクを防止または低下するための活性化合物の投与を含む。治療されるべき患者は、好ましくは哺乳動物、特にヒトである。治療されるべき患者は様々な年齢であってよい。
【００３６】
被験体、患者：被験体は本明細書で開示される哺乳動物の種の一つの個体である。患者は被験体であり、特定疾患が診断されている。
【００３７】
哺乳動物α−およびβ−デフェンシン
本開示は、肝臓、膵臓または胆管の障害および特定の代謝障害の治療におけるウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、マウス、サル、ウマ、またはヒトβ−デフェンシン、より好ましくはヒト科デフェンシン、より好ましくはヒトα−および／またはβ−デフェンシンおよび／またはヒトカテリシジンなどの、哺乳動物α−および／またはβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジンの使用に関する。別の実施形態では、本開示は、肝臓、膵臓、または胆管の障害および特定の代謝障害の治療における、リラグルチドなどの、ＧＬＰ−１アナログの使用に関する。
【００３８】
一つの実施形態では、哺乳動物α−および／またはβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジンは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７のアミノ酸配列のいずれかと、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％の同一性の程度を有する。別の実施形態では、デフェンシンはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１−１５または１７の１つと、８個未満などの、例えば５個未満、４個未満などの、例えば３個未満、２個未満などの、１０個未満のアミノ酸で異なる。
【００３９】
好ましい実施形態では、ヒトα−デフェンシンは、α−デフェンシン５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）および／またはα−デフェンシン６（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９）からなる。好ましい実施形態では、哺乳動物β−デフェンシンは、ヒトβ−デフェンシン１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）、ヒトβ−デフェンシン２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）、ヒトβ−デフェンシン３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）、ヒトβ−デフェンシン４（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）および／または切断ヒトβ−デフェンシン２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７）からなる。別の好ましい実施形態では、カテリシジンは、ヒトカテリシジンまたはカテリシジン由来のヒトＬＬ３７（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）からなる。好ましい実施形態では、ＧＬＰ−１アナログはリラグルチドである。
【００４０】
好ましい実施形態では、ヒトα−デフェンシンは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％の同一性の程度を有する。好ましい実施形態では、ヒト哺乳動物α−デフェンシンは、α−デフェンシン５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）からなる。好ましい実施形態では、ヒトβ−デフェンシンは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％の同一性の程度を有する。好ましい実施形態では、ヒトβ−デフェンシンは、ヒトβ−デフェンシン２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）からなる。好ましい実施形態では、ヒトカテリシジンは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％の同一性の程度を有する。好ましい実施形態では、ヒトカテリシジンは、ヒトＬＬ３７（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）からなる。
【００４１】
ヒト以外の種では、被験体は好ましくは、同一のまたは関連する種由来のデフェンシンまたはカテリシジンあるいはその同一の種由来のデフェンシンまたはカテリシジンのアミノ酸配列（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１−３、１０−１５から選択されるアミノ酸配列を有するデフェンシン）と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％を共有するデフェンシンまたはカテリシジンによって治療される。
【００４２】
さらに別の実施形態では、哺乳動物α−デフェンシンは、ヒトα−デフェンシンおよび／またはマウスα−デフェンシン、ならびにそれらの機能的に同等な変異体からなる。好ましくは、哺乳動物α−デフェンシンは、ヒトα−デフェンシン５、ヒトα−デフェンシン６およびそれらの機能的に同等な変異体からなる。より好ましくは、哺乳動物α−デフェンシンはヒトα−デフェンシン５、およびその機能的に同等な変異体またはオルソログからなる。
【００４３】
よりさらなる実施形態では、哺乳動物β−デフェンシンはヒトβ−デフェンシンおよび／またはマウスβ−デフェンシン、ならびにそれらの機能的に同等な変異体からなる。好ましくは、哺乳動物β−デフェンシンは、ヒトβ−デフェンシン１、ヒトβ−デフェンシン２、ヒトβ−デフェンシン３、ヒトβ−デフェンシン４、チンパンジーβ−デフェンシン２、マカクβ−デフェンシン２、マウスβ−デフェンシン３、オランウータンβ−デフェンシン２、ウマβ−デフェンシン２、ブタβ−デフェンシン１、ヤギβ−デフェンシン２、ウシβ−デフェンシン２、または切り詰められたヒトβ−デフェンシン２およびそれらの機能的に同等な変異体からなる。より好ましくは、哺乳動物β−デフェンシンは、ヒトβ−デフェンシン１、ヒトβ−デフェンシン２、ヒトβ−デフェンシン３、ヒトβ−デフェンシン４、切断されたヒトβ−デフェンシン２およびそれらの機能的に同等な変異体からなる。さらにより好ましくは、哺乳動物β−デフェンシンは、ヒトβ−デフェンシン２、およびその機能的に同等な変異体またはオルソログからなる。
【００４４】
よりさらなる実施形態では、哺乳動物カテリシジンはヒトカテリシジン、およびその機能的に同等な変異体からなる。好ましくは、哺乳動物カテリシジンはヒトＬＬ３７からなる。
【００４５】
一つの実施形態では、本方法はこのような治療を必要とする被験体への、少なくとも１種類の哺乳動物α−デフェンシンの効果的な量の投与を含む。他の実施形態では、提供される方法は、このような治療を必要とする被験体への、少なくとも１種類の哺乳動物β−デフェンシンの効果的な量の投与を含む。さらなる実施形態では、提供される方法は、このような治療を必要とする被験体への、少なくとも１種類の哺乳動物α−デフェンシンおよび少なくとも１種類の哺乳動物β−デフェンシンの効果的な量の投与を含む。好ましい実施形態は、哺乳動物α−デフェンシンＨＤ５および／または哺乳動物β−デフェンシンｈＢＤ−２の投与を提供する。
【００４６】
他の実施形態では、提供される方法は、このような治療を必要とする被験体への、少なくとも１種類の哺乳動物カテリシジンの効果的な量の投与を含む。いくつかの実施形態では、本方法はこのような治療を必要とする被験体への、ヒトＬＬ３７の効果的な量の投与を含む。
【００４７】
他の実施形態では、提供される方法は、このような治療を必要とする被験体への、少なくとも１種類のＧＬＰ−１アナログの効果的な量の投与を含む。特定の実施形態では、ＧＬＰ−１アナログはリラグルチドである。
【００４８】
さらなる実施形態では、提供される方法は、このような治療を必要とする被験体への、少なくとも１種類の哺乳動物α−デフェンシンおよび少なくとも１種類の哺乳動物カテリシジンの効果的な量の投与を含む。好ましい実施形態は、哺乳動物α−デフェンシンＨＤ５および／または哺乳動物カテリシジンの投与を提供する。さらなる実施形態では、提供される方法は、このような治療を必要とする被験体への、少なくとも１種類の哺乳動物β−デフェンシンおよび少なくとも１種類の哺乳動物カテリシジンの効果的な量の投与を含む。好ましい実施形態は、哺乳動物β−デフェンシンｈＢＤ−２および／または哺乳動物カテリシジンの投与を提供する。いくつかの実施形態では、本方法はリラグルチドなどのＧＬＰ−１アナログの投与をさらに含む。
【００４９】
哺乳動物（例えば、ヒト）α−またはβ−デフェンシンまたはカテリシジンの「機能的に同等な変異体」は、肝臓、胆管または膵臓の炎症に、親哺乳動物（例えば、ヒト）α−および／またはβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジンとほとんど同じ効果を示す改変された哺乳動物（例えば、ヒト）α−またはβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジンである。哺乳動物（例えばヒト）デフェンシンまたはカテリシジンの機能的に同等な変異体は、哺乳動物（例えばヒト）デフェンシンまたはカテリシジンのアミノ酸配列と比べて、１−５個のアミノ酸改変、好ましくは１−４個のアミノ酸改変、より好ましくは１−３個のアミノ酸改変、最も好ましくは１−２個のアミノ酸改変、特に１個のアミノ酸改変を含み得る。好ましくは、哺乳動物β−デフェンシンでは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５を有するヒトβ−デフェンシン２と比較される。好ましくは、哺乳動物α−デフェンシンでは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８を有するＨＤ５と比較される。好ましくは、哺乳動物カテリシジンは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６を有するヒトＬＬ３７と比較される。
【００５０】
本方法はまた、リラグルチドの機能的同等物などの、ＧＬＰ−１アナログの機能的同等物またはその改変型の投与を含み得る。
【００５１】
用語「改変」は、本明細書において、哺乳動物（例えばヒト）デフェンシン、哺乳動物カテリシジンまたはリラグルチドなどのＧＬＰ−１アナログの任意の化学的改変を意味する。改変は、アミノ酸の置換、欠失および／または挿入ならびにアミノ酸側鎖の交換であってよく、あるいはアミノ酸配列中の同様な特性を有する非天然アミノ酸の使用であってよい。特に、改変は、Ｃ端アミド化などの、アミド化であってよい。
【００５２】
好ましくは、アミノ酸改変は些細な性質のものであり、それはポリペプチドのフォールディングおよび／または活性にほとんど影響しない保存的アミノ酸置換または挿入；単一欠失；わずかなアミノ−またはカルボキシル−端伸長；あるいはポリ−ヒスチジンタグ、抗原エピトープまたは結合領域などの、正味荷電または別の機能を変化させることにより精製を容易にするわずかな伸長である。一つの実施形態では、ポリ−ヒスチジンタグ、抗原エピトープまたは結合領域などのわずかな伸長は、最大で約２０−２５個の残基の小リンカーペプチドによって哺乳動物（例えばヒト）α−またはβ−デフェンシンに結合され、このリンカーは制限酵素切断部位を含み得る。図３−６におけるＣｌｕｓｔａｌ  Ｗアラインメントを使用して、どのアミノ酸残基がタンパク質の生物学的活性に大きな影響を及ぼすことなく置換され得るか予測できる。配列は、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗ２．１（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏ，ｍｅ．ｊｐ／ｔｏｏｌｓ／ｃｌｕｓｔａｌｗ／）および以下の条件設定：Ｇａｐ  Ｏｐｅｎ  Ｐｅｎａｌｔｙ：１０、Ｇａｐ  Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  Ｐｅｎａｌｔｙ：０，０５、Ｗｅｉｇｈｔ  Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ：ＮＯ、タンパク質の親水性残基：ＧＰＳＮＤＱＥ、親水性ギャップ：あり、ウェイトマトリックス：ＢＬＯＳＵＭ（ＰＲＯＴＥＩＮ用）を用いて並べた。
【００５３】
以下のグループ（Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗ，「強い」保存グループ）内の置換は、保存的置換と考えられるべきである：
−Ｓ，Ｔ，Ａ；Ｎ，Ｅ，Ｑ，Ｋ；Ｎ，Ｈ，Ｑ，Ｋ；Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｑ；Ｑ，Ｈ，Ｒ，Ｋ；Ｍ，Ｉ，Ｌ，Ｖ；Ｍ，Ｉ，Ｌ，Ｆ；Ｈ，Ｙ；Ｆ，Ｙ，Ｗ。
【００５４】
以下のグループ（Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗ，「弱い」保存グループ）内の置換は、半保存的置換と考えられるべきである：
−Ｃ，Ｓ，Ａ；Ａ，Ｔ，Ｖ；Ｓ，Ａ，Ｇ；Ｓ，Ｔ，Ｎ，Ｋ；Ｓ，Ｔ，Ｐ，Ａ；Ｓ，Ｇ，Ｎ，Ｄ；Ｓ，Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｑ，Ｋ；Ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｑ，Ｈ，Ｋ；Ｎ，Ｅ，Ｑ，Ｈ，Ｒ，Ｋ；Ｖ，Ｌ，Ｉ，Ｍ；Ｈ，Ｆ，Ｙ。
【００５５】
保存的置換の例は、塩基性アミノ酸（アルギニン、リジンおよびヒスチジン）、酸性アミノ酸（グルタミン酸およびアスパラギン酸）、極性アミノ酸（グルタミンおよびアスパラギン）、疎水性アミノ酸（ロイシン、イソロイシンおよびバリン）、芳香族アミノ酸（フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシン）、および小アミノ酸（グリシン、アラニン、セリン、トレオニンおよびメチオニン）のグループ内でなされる置換である。一般的に比活性を変えないアミノ酸置換は、従来技術で知られており、例えば、ＮｅｕｒａｔｈおよびＨｉｌｌ（１９７９）によって報告されている。最も一般的に生じる交換は、Ａｌａ／Ｓｅｒ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ｔｙｒ／Ｐｈｅ、Ａｌａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｌｅｕ／Ｉｌｅ、Ｌｅｕ／Ｖａｌ、Ａｌａ／Ｇｌｕ、およびＡｓｐ／Ｇｌｙである。
【００５６】
２０種の標準アミノ酸に加え、非標準アミノ酸（４−ヒドロキシプロリン、６−Ｎ−メチルリジン、２−アミノイソブチル酸、イソバリン、およびα−メチルセリンなど）が野生型ポリペプチドのアミノ酸残基と置換され得る。非保存的アミノ酸、遺伝子コードによってコードされないアミノ酸、および非天然アミノ酸の限定数が、アミノ酸残基と置換され得る。「非天然アミノ酸」は、タンパク質合成後に改変されている、および／または標準アミノ酸のものとは異なるそれらの側鎖における化学的構造を有する。非天然アミノ酸は化学的に合成でき、好ましくは市販されており、かつピペコリン酸、チアゾリジンカルボン酸、デヒドロプロリン、３−および４−メチルプロリン、ならびに３，３−ジメチルプロリンを含む。
【００５７】
哺乳動物α−および／またはβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジン中のおよび／またはＧＬＰ−１アナログまたはそのペプチド骨格における必須アミノ酸は、部位特異的変異誘発またはアラニンスキャニング変異誘発などの、従来技術で知られている処理によって特定できる（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１−１０８５）。後者の技術では、単一アラニン変異が分子中のすべての残基で導入され、得られた変異分子を生物学的活性について試験して（すなわち、炎症性大腸疾患に対する活性および／またはＴＮＦ−α活性の抑制）分子の活性に重要であるアミノ酸残基を特定する。Ｈｉｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：４６９９−４７０８も参照する。必須アミノ酸の特定はまた、哺乳動物α−および／またはβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログのペプチド骨格と関連するポリペプチドとの同一性の分析から推測することもできる（図３〜６におけるＣｌｕｓｔａｌ  Ｗアラインメントを参照）。
【００５８】
単一または複数アミノ酸置換は、Ｒｅｉｄｈａａｒ−Ｏｌｓｏｎ  ａｎｄ  Ｓａｕｅｒ，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４１：５３−５７、Ｂｏｗｉｅ  ａｎｄ  Ｓａｕｅｒ，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：２１５２−２１５６、ＷＯ９５／１７４１３、またはＷＯ９５／２２６２５によって公表されるものなどの、変異形成、組換え、および／またはシャフリング、それに続く関連スクリーニング法の知られている方法を用いて作製および試験できる。使用できる他の方法は、エラープローンＰＣＲ、ファージディスプレイ（例えば、Ｌｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３０：１０８３２−１０８３７、米国特許第５，２２３，４０９号、ＷＯ９２／０６２０４）、および領域特異的変異形成（Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｇｅｎｅ４６：１４５、Ｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，ＤＮＡ７：１２７）を含む。
【００５９】
所定の置換結果が確信をもって予測できない場合、誘導体を本明細書における前述の方法に従って容易に測定して、生物学的活性の有無を決定し得る。
【００６０】
長期作用性化合物
α−またはβ−デフェンシンまたはカテリシジンの半減期は、α−またはβ−デフェンシンまたはカテリシジンを別の分子と融合または共役体化する、すなわちα−またはβ−デフェンシンまたはカテリシジンと同じ方式で投与されるα−またはβ−デフェンシンまたはカテリシジンのインビボでの血漿半減期と比べて著しく増加される、α−またはβ−デフェンシンまたはカテリシジンのインビボでの血漿半減期を付与する医薬品として許容可能な分子に連結された長期作用性の生物学的に活性なα−またはβ−デフェンシンまたはカテリシジンを構築することによって延長され得る。
【００６１】
長期作用性の生物学的に活性なα−またはβ−デフェンシンまたはカテリシジンは、哺乳動物新生児Ｆｃ受容体、トランスフェリンまたはＣＨ３（ＣＨ２）ｎＣＯ−、ここでｎは８〜２２またはポリマーである、に結合する分子から選択される医薬品として許容可能な分子に連結された哺乳動物α−デフェンシンまたはそのアナログあるいは哺乳動物β−デフェンシンまたはそのアナログあるいはヒトカテリシジンまたはそのアナログを含む。
【００６２】
α−またはβ−デフェンシンまたはカテリシジン作用剤も非哺乳動物起源のものであり得、小有機分子、ペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質から選択され得る。α−またはβ−デフェンシンまたはカテリシジン作用剤は、限定されないが、二官能性リンカーによる化学的結合、α−デフェンシンまたはβ−デフェンシンまたはカテリシジンなどのデフェンシンのＮ−末端またはＣ−末端を、アルブミンまたはアルブミンアナログなどの医薬品として許容可能な分子に結合させることによる遺伝子技術的な結合などの、従来技術の文献で報告されている様々な方法で、医薬品として許容可能な分子に連結され得る。特に、ヒトアルブミンなどのアルブミンまたはアルブミンアナログのＮ−末端は、α−デフェンシンまたはβ−デフェンシンまたはカテリシジンのＣ−末端、あるいはα−デフェンシンまたはβ−デフェンシンまたはカテリシジンのＮ−末端に結合でき、あるいはヒトアルブミンなどのアルブミンのＣ−末端は、α−デフェンシンまたはβ−デフェンシンまたはカテリシジンのＣ−末端、あるいはα−またはβ−デフェンシンまたはカテリシジンのＮ−末端に結合できる。リンカー配列は、アルブミンとα−またはβ−デフェンシンまたはカテリシジン鎖との間に挿入できる。
【００６３】
α−またはβ−デフェンシンまたはカテリシジン作用剤は、安定なリンカーまたはより不安定なリンカーを通して医薬品として許容可能な分子に連結され得る。いくつかのリンカーが従来技術で知られており、二官能性ＰＥＧ分子（例えば、Ｐａｉｇｅ  ｅｔ．ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｖｏｌ．１２，ｎｏ．１２，１９９５を参照）、加水分解可能なリンカー（Ｓｈｅｃｈｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．２００５，１６：９１３−  ９２０、およびＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．１３，Ｎｏｓ．１−２，Ｊｕｎｅ  ２００７、ならびにＷ０２００９０９５４７９）、例えばＷ０２０１００９２１３５を参照するＰＤＰＨおよびＥＭＣＨを含む。α−またはβ−デフェンシンまたはカテリシジン作用剤の、医薬品として許容可能な分子への化学的共役体化（２つ以上の分子の連結）が機能的なα−またはβ−デフェンシンまたはカテリシジン活性を強く低下させる特定の場合では、機能的なα−またはβ−デフェンシンまたはカテリシジン作用剤を放出できる、より不安定なリンカーを使用することが好ましい場合がある。
【００６４】
半減期延長は、γ−Ｌ−グルタミルスペーサーなどのスペーサーおよびリジンへのＣ−１８脂肪二酸鎖によるペプチド骨格のアシル化によっても実施され得る。脂肪二酸部位鎖およびスペーサーはアルブミンへの強いが可逆的な結合を仲介し、注入部位からの放出を遅らせ、腎クリアランスを低下させる。
【００６５】
同様に、リラグルチドなどのＧＬＰ−１アナログの半減期は、上記方法を含む従来技術で知られている方法によって延長され得る。
【００６６】
いくつかの実施形態では、α−デフェンシン、β−デフェンシン、カテリシジンまたはＧＬＰ−１アナログは、細胞貫通ペプチド（ＣＰＰ）、アルブミン結合性部分（ＡＢＭ）、検出可能な部分（Ｚ）、および半減期延長ペプチドからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる部分をさらに含む。
【００６７】
他の実施形態では、α−デフェンシン、β−デフェンシン、カテリシジンまたはＧＬＰ−１アナログは、細胞貫通ペプチド（ＣＰＰ）、アルブミン結合性部分（ＡＢＭ）、検出可能な部分（Ｚ）、および半減期延長ペプチドのいずれも含まない。
【００６８】
方法および使用
例５で実証されるように、ＧＬＰ−１アナログであるリラグルチドの投与は、高脂肪食を与えられたマウスにおいて体重低下効果を有することが認められた。ＧＬＰ−１アナログはまた、肝臓における脂肪蓄積および血漿コレステロール量を低下した。従って、本発明者らは、ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アナログの投与によって、肝臓、胆管、膵臓または代謝の疾患または障害、あるいは肝臓癌、胆管癌または膵臓癌の治療および本明細書で説明される他の使用を考える。
【００６９】
好ましくは、ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アナログは、皮下または筋肉内投与のいずれかによって非経口的に投与される。ＧＬＰ−１アナログは、エキセナチド、リラグルチド、リキシセナチド、アルビグルチド、およびデュラグルチドから選択され得る。
【００７０】
単独でのまたは併用でのヒトα−デフェンシン５およびヒトβ−デフェンシン２および／またはカテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログは、高脂肪／糖食餌（「西欧食」）を給餌されるマウスにおける体重増加、脂質蓄積および炎症を予防または治療できることが認められる。この高脂肪／糖食餌を給餌されるマウスは、いずれの処置もないときに急速に体重増加し精巣上体または内臓脂肪および／または肝臓における脂肪を蓄積する。肝臓中の脂肪の蓄積は非アルコール性脂肪性肝疾患になり、それは後期には脂肪肝、肝線維症、肝硬変、肝性脳症および最終的に肝臓癌をもたらし得る。例えば肝臓中の腹部脂肪の蓄積を低下することによって、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨおよび関連障害の発生を低下または防止することが可能である。
【００７１】
体重増加が防止または低下され得る場合、精巣上体または内臓脂肪および／または肝臓中の脂肪の蓄積も防止または低下され得、このため、肝臓癌および肝性脳症を含む肝疾患、胆管および膵臓の障害ならびに特定の代謝障害の治療または予防に関して医見込みのある薬品としての活性を示す。従って、一つの態様は、肝臓、胆管および膵臓の障害ならびに本明細書で定められる代謝障害の治療または予防のための方法を提供する。
【００７２】
肝臓障害の例は、アルコール性（ＩＤＣ１０：Ｋ７０）および非アルコール性肝疾患、毒性肝疾患（ＩＤＣ１０：Ｋ７１）例えば、脂肪肝、肝炎（ＩＤＣ１０：Ｋ７３およびＫ７５）、硬変（ＩＤＣ１０：Ｋ７４）、肝不全（ＩＤＣ１０：Ｋ７２）、線維症（ＩＤＣ１０：Ｋ７４）および肝臓の硬化ならびに最も重要な非アルコール性脂肪性肝炎ＮＡＳＨ−（ＩＤＣ１０：Ｋ７５．８）および非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）（ＩＤＣ１０：Ｋ７６．０）を含む。特定の実施形態では、肝疾患はＮＡＳＨまたはＮＡＦＬＤである。
【００７３】
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は世界で最も一般的な肝臓疾患であり、肥満の蔓延的な発生との密接な関連のため罹患率が増加している。脂肪症は、細胞中の脂肪の異常な保持であり、しばしば肝臓で生じるが、腎臓、心臓および筋肉などの他の器官で生じ得る。肝臓における脂肪症は脂肪性肝疾患（ＦＬＤ）を高め得るが、さらにアルコール消費の関与に応じて、それはアルコール性または非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）として分類することができる。
【００７４】
単純性脂肪症は肝臓関連の疾病率また死亡率のリスク増加と関連しないが、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）は進行型肝線維症および肝硬変に進行し、肝臓癌リスクの増加とも関連する。ＮＡＳＨを有する被験体は、Ｃ型肝炎のため肝硬変を発症する被験体におけるリスクに匹敵する、肝細胞癌などの癌を発症するリスクの増加（５-１０％）を有する。約百万人の米国市民がＮＡＳＨを有すると見積もられるが、ＮＡＳＨは必ずしも徴候を生じないため数を定めることは困難である。ＮＡＳＨはしかし、肝バイオプシーを受けた米国の人々の７-９％で診断されており、２５歳以下の米国市民における肝移植の主な適応である。
【００７５】
ＮＡＳＨはしばしば、３０を超えるＢＭＩ（肥満度指数）を有する、糖尿病を有する、および／またはインスリン耐性を有する人々に認められる。現在、ＮＡＳＨは日常的な試験室検査の際に最も高頻度で発見される。追加の検査がＮＡＳＨの存在を確証して他のタイプの肝疾患を除外するのに役立つ。画像検査（超音波、ＣＴスキャン、または磁気共鳴画像など）は、肝臓における脂肪蓄積を示し得るが、ＮＡＳＨを同様な所見を有する肝疾患の他の原因と区別できない。肝バイオプシーがＮＡＳＨを確証するために必要とされる。肝臓移植以外にＮＡＳＨを治療するための具体的な療法は現在存在しないが、生活様式の管理はその重症度を低下するのに役立ち得る。
【００７６】
ＡＳＴおよびＡＬＴなどの肝臓酵素の高値は、ＮＡＦＬＤおよびＮＡＳＨを有する患者を特定するための診断方法の一部として使用できる。ＡＬＴ値はＮＡＦＬＤ患者において通常ＡＳＴ値よりも高いが、１を超えるＡＳＴ／ＡＬＴ比は疾患の進行した線維症型を示唆する。この比は進行した線維症の最も簡単な予測モデルであり、容易に利用可能な肝機能検査を用いて計算できる。その簡単さにも関わらず、この比は優れた陰性予測値を有し、進行した線維症の存在を除外するために使用できる。
【００７７】
胆管および膵臓障害の例は、胆管炎（ＩＤＣ：Ｋ８３．０）および特に原発性硬化性胆管炎、胆嚢炎（ＩＤＣ１０：Ｋ８１．０）、胆管癌（ＩＤＣ１０：Ｃ２２．１）および膵臓炎（ＩＤＣ１０：Ｋ８５．０）を含む。
【００７８】
代謝障害の例は、リポタンパク質代謝の障害（ＩＤＣ１０：Ｅ７８）、高コレステロール血症（ＩＤＣ１０：Ｅ７８．０）、高グリセロール血症（ＩＤＣ１０：Ｅ７８．１）、高脂血症（ＩＤＣ１０：Ｅ７８．２およびＥ７８．４）、高カイロミクロン血症（ＩＤＣ１０：Ｅ７８．３）、糖原貯蔵障害（ＩＤＣ１０：Ｅ７４）、スフィンゴ脂質代謝および脂質保存障害（ＩＤＣ１０：Ｅ７５）、脂質保存障害（ＩＤＣ１０：Ｅ７５．６）、ガングリオシド蓄積症（ＩＤＣ１０：Ｅ７５）およびスフィンゴ脂質症（ＩＤＣ１０：Ｅ７５．２）を含む。
【００７９】
これらの疾患に共通することは、これらが遺伝子変異の結果であり、あるいは肥満、脂質異常、グルコース不耐性およびインスリン耐性ならびに腹部／内臓または肝臓脂肪の蓄積を伴うメタボリック症候群を誘発する西欧生活様式によって生じるまたは悪化されることである。
【００８０】
好ましい実施形態で開示される方法は、少なくとも１つの哺乳動物α−デフェンシンおよび／または少なくとも１つの哺乳動物β−デフェンシンおよび／またはカテリシジンおよび／またはリラグルチドなどのＧＬＰ−１アナログの投与を介して、前述のような肝臓、胆管、膵臓または代謝障害を治療できる。
【００８１】
開示される方法によって提供される治療を必要とする被験体は、前述のような肝臓、胆管、膵臓または代謝の障害によって冒されている。
【００８２】
開示される方法によって提供される治療を必要とする被験体は以下の徴候：
・高血圧：≧１４０／９０ｍｍＨｇ；
・脂質異常：トリグリセリド（ＴＧ）≧１．６９５ｍｍｏｌ／Ｌおよび高比重リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）≦０．９ｍｍｏｌ／Ｌ（男性）、≦１．０ｍｍｏｌ／Ｌ（女性）；
・空腹時血糖＞６．１ｍｍｏｌ／Ｌ；
・ＡＳＴ／ＡＬＴ＞１；
・中心性肥満：ウェスト：ヒップ比＞０．９０（男性）、＞０．８５（女性）、または肥満度指数＞３０ｋｇ／ｍ２；および
・微量アルブミン尿：尿中アルブミン排泄比≧２０μｇ／分またはアルブミン：クレアチニン比≧３０ｍｇ／ｇ
の１つ以上を示し得る。
【００８３】
一つの実施形態では、開示される方法による、少なくとも１種類の哺乳動物α−デフェンシンおよび／または少なくとも１種類の哺乳動物β−デフェンシンの投与は、一般的に経口である。
【００８４】
哺乳動物α−およびβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログは、任意の標準的な経路による投与用に製剤化された組成物中で治療的に使用できる。一つの実施形態では、哺乳動物α−および／またはβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログは、経口によって投与される。他の実施形態では、投与は静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内または肺などの非経口である。
【００８５】
いくつかの実施形態では、好ましい実施形態の組成物は、凍結乾燥品としてのおよび再水和化後に安定性をもたらす適切な賦形剤を使用して、凍結乾燥品として製剤化され得る。
【００８６】
ヒトα−デフェンシンおよび／またはヒトβ−デフェンシンおよび／またはヒトカテリシジンおよび／またはリラグルチドなどの、哺乳動物α−デフェンシンおよび／または哺乳動物β−デフェンシンおよび／またはカテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログを含む医薬組成物は、標準的な方法、例えば、混合する、顆粒化する、コーティングする、溶解するまたは凍結乾燥する工程によって製造できる。好ましい実施形態では、哺乳動物α−および／または哺乳動物β−デフェンシンを含む医薬組成物は、無菌のおよび等張の溶液として製剤化される。
【００８７】
提供される医薬組成物は、一つの実施形態では、少なくとも１種類の哺乳動物α−デフェンシンを含む。哺乳動物α−デフェンシンの例はＨＤ５およびＨＤ６である。好ましい実施形態では、組成物は哺乳動物α−デフェンシンＨＤ５を含む。医薬組成物は、別の実施形態では、少なくとも１種類の哺乳動物β−デフェンシンを含む。哺乳動物β−デフェンシンの例はｈＢＤ１、ｈＢＤ−２、切り詰められたｈＢＤ−２、ｈＢＤ３およびｈＢＤ４である。好ましい実施形態では、組成物は哺乳動物β−デフェンシンｈＢＤ−２を含む。医薬組成物は、さらなる実施形態では、少なくとも１種類の哺乳動物α−デフェンシンおよび少なくとも１種類の哺乳動物β−デフェンシンを含む。哺乳動物α−デフェンシンの例はＨＤ５およびＨＤ６である。哺乳動物β−デフェンシンの例はｈＢＤ−２である。好ましい実施形態では、組成物は哺乳動物α−デフェンシンＨＤ５および哺乳動物β−デフェンシンｈＢＤ−２を含む。他の実施形態では、組成物または食餌組成物は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１-３および１０-１５から選択されるアミノ酸配列ならびに本明細書で定められる配列変異体を有するデフェンシンから選択される１種類以上の非ヒトデフェンシンを含む。別の実施形態では、医薬組成物は少なくも１種類のカテリシジン、例えばヒトカテリシジン、例えばＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６のヒトＬＬ３７を含む。別の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１種類のＧＬＰ−１アナログ、例えばリラグルチドを含む。
【００８８】
好ましい実施形態の医薬組成物は、ヒトα−デフェンシンおよびヒトβ−デフェンシンなどの哺乳動物α−デフェンシンおよび／または哺乳動物β−デフェンシン、および／またはヒトカテリシジンなどのカテリシジンおよび／またはリラグルチドなどのＧＬＰ−１アナログ、ならびに医薬品として許容可能な担体および／または希釈剤を含む。
【００８９】
医薬品として許容可能な担体および／または希釈剤は、従来技術の当業者に良く知られている。液体溶液として製剤化される組成物では、許容可能な担体および／または希釈剤は生理食塩水および無菌水を含み、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および他の一般的な添加剤を任意に含み得る。
【００９０】
開示される化合物は、経口投与用の幅広い様々な製剤で製剤化され得る。固体剤形調製物は、粉末、錠剤、ドロップ、カプセル、カシェ、舐剤、および分散可能な顆粒を含み得る。経口投与に適した他の剤形は、エマルション、シロップ、エリキシル、水性溶液、水性懸濁液、歯磨き粉、歯磨きゲル、チューインガムを含む液体剤形調製物、あるいは溶液、懸濁液、およびエマルションなどの、液体剤形調製物へと使用直前に変換されることが意図される固体剤形調製物を含み得る。
【００９１】
製剤は、（哺乳動物α−デフェンシンおよび／または哺乳動物β−デフェンシンおよび／またはカテリシジン、ならびに他の任意の有効成分に加えて）担体、増量剤、崩壊剤、流動調整剤、糖および甘味料、香料、保存剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、溶解剤、浸透圧を調節するための塩、緩衝剤、希釈剤、分散化および界面活性剤、結合剤、滑剤、および／または他の従来技術で知られている医薬品用賦形剤を含んでよい。
【００９２】
本技術の当業者はさらに、哺乳動物α−デフェンシンおよび哺乳動物β−デフェンシンおよび／またはカテリシジンを適切な方式で、ならびにＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（レミントンの薬学），Ｇｅｎｎａｒｏ（１９９０）に記載されるものなどの、容認された実施法に従って、製剤化し得る。
【００９３】
ヒトα−デフェンシンおよびヒトβ−デフェンシンなどの哺乳動物α−デフェンシンおよび哺乳動物β−デフェンシンは、単独で、または１種類、２種類、またはそれより多い他の医薬化合物または薬剤物質、例えばインスリンまたはインスリンアナログ、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）またはＧＬＰ−１アナログ、またはジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ（ＤＤＰ−ＩＶ）阻害剤との併用療法で、および／または１種類以上の医薬品として許容可能な賦形剤とともに使用できる。
【００９４】
ヒトα−デフェンシン、ヒトβ−デフェンシンおよび／またはヒトカテリシジンなどの、哺乳動物α−デフェンシンおよび／または哺乳動物β−デフェンシンおよび／またはカテリシジンは、単独で、あるいは１種、２種、またはそれより多い他の医薬化合物または薬剤物質、例えば抗生物質、インスリンまたはインスリンアナログ、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）またはＧＬＰ−１アナログ、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）またはＧＬＰ−２アナログ、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）阻害剤、メトホルミン、ナトリウム・グルコース共輸送体−２（ＳＧＬＴ−２）阻害剤、グルカゴン受容体拮抗剤および／または一過性受容体電位カチオンチャネルサブファミリーＶメンバー１（ＴＲＰＶ１）拮抗剤との併用療法で、および／または１種類以上の医薬品として許容可能な賦形剤とともに使用できる。
【００９５】
ヒトα−デフェンシン、ヒトβ−デフェンシンおよびヒトカテリシジンなどの、哺乳動物α−デフェンシンおよび／または哺乳動物β−デフェンシンおよび／またはカテリシジンはまた、化学療法、免疫療法、放射線療法またはこれらの組み合わせのいずれかとの併用療法で使用され得る。
【００９６】
同様に、ＧＬＰ−１アナログは、単独で、あるいは１種、２種、またはそれより多い他の医薬化合物または薬剤物質、例えば抗生物質、インスリンまたはインスリンアナログ、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）またはＧＬＰ−１アナログ、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ２）またはＧＬＰ−２アナログ、ジペプチジルペプチダーゼ-ＩＶ（ＤＤＰ−ＩＶ）阻害剤、メトホルミン、ナトリウム・グルコース共輸送体−２（ＳＧＬＴ−２）阻害剤、グルカゴン受容体拮抗剤および／または一過性受容体電位カチオンチャネルサブファミリーＶメンバー１（ＴＲＰＶ１）拮抗剤との併用療法で、および／または１種類以上の医薬品として許容可能な賦形剤とともに使用できる。
【００９７】
リラグルチドなどのＧＬＰ−１アナログはまた、化学療法、免疫療法、放射線療法またはこれらの組み合わせのいずれかとの併用療法で使用され得る。
【００９８】
インビトロ合成
哺乳動物α−デフェンシン、哺乳動物β−デフェンシ、カテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログは、従来技術で知られている標準的な方法を用いて、インビトロ合成によって調製され得る。様々な市販の合成装置が利用可能であり、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．，Ｂｅｃｋｍａｎによる自動合成装置などである。合成装置を用いることによって、天然由来アミノ酸は、非天然アミノ酸、特にＤ−アイソマー（またはＤ−型）例えばＤ−アラニンおよびＤ−イソロイシン、ジアステレオアイソマー、異なる長さまたは官能性を有する側鎖などで置換され得る。特定の配列および調製方法は、利便性、経済性、要求される純度などによって決定される。
【００９９】
化学結合は、アミドまたは置換アミン形成、例えば還元的アミノ化、のためのアミノ基、チオエーテルまたはジスルフィド形成のためのチオール基、アミド形成のためのカルボキシル基などの、結合に都合がよい官能性を含む様々なペプチドまたはタンパク質に加えられ得る。
【０１００】
必要に応じて、様々な基が合成の際または発現の際にペプチドに導入され得、これは他の分子へのまたは表面への結合を可能にする。このため、システインがチオエーテルを得るため、ヒスチジンが金属イオン錯体への結合のため、カルボキシル基がアミドまたはエステルを形成するため、アミノ基がアミドを形成するためなどに使用できる。
【０１０１】
哺乳動物α−デフェンシンおよび哺乳動物β−デフェンシン、カテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログ、あるいはこれらの機能的同等物はまた、組換え合成の標準的な技術によって分離および精製され得る。組換え合成は、適切な発現ベクターおよび真核生物発現系を用いて実施され得る。溶液が発現ホストおよび培地から調製され、存在するデフェンシンがＨＰＬＣ、排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、アフィニティークロマトグラフィー、または他の精製技術を用いて精製され得る。大腸菌におけるヒトβ−デフェンシン２の組換え発現に関する方法がＷＯ２０１０／００７１６６（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）に開示されている。
【０１０２】
投与量
ヒトα−デフェンシン、ヒトβ−デフェンシン、カテリシジンおよび／またはリラグルチドなどのＧＬＰ−１アナログなどの、哺乳動物α−デフェンシン、哺乳動物β−デフェンシン、カテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログは、好ましくは患者に許容可能な毒性を有して肝臓疾患、胆管または膵臓の障害あるいは代謝障害を治療するのに効果的である量で、医薬組成物中で好ましくは使用される。ヒトα−デフェンシン、ヒトβ−デフェンシン、ヒトカテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログなどの、哺乳動物α−デフェンシン、哺乳動物β−デフェンシン、哺乳動物カテリシジンおよび／またはＧＬＰ−１アナログはまた、好ましくは治療を必要とする患者または動物に許容可能な毒性を有して肝臓、胆管または膵臓の炎症を治療するのに効果的である量で、医薬組成物中で好ましくは使用される。
【０１０３】
このような治療では、適切な投与量は当然、例えば、使用される化合物の化学的性質および薬理動態データ、個別ホスト、投与方式ならびに治療される症状の性質および重症度に応じて変化する。
【０１０４】
一般的に、哺乳動物、例えばヒトでは、ヒトα−デフェンシンの指示一日投与量は好ましくは、約０．１ｍｇ  ＨＤ５／ｋｇ〜約１０ｍｇ  ＨＤ５／ｋｇ体重、より好ましくは約０．５ｍｇ  ＨＤ５／ｋｇ〜約１０ｍｇ  ＨＤ５／ｋｇ体重、１ｍｇ  ＨＤ５／ｋｇ〜約１０ｍｇ  ＨＤ５／ｋｇ体重など、より好ましくは約１．２ｍｇ  ＨＤ５／ｋｇ〜約１０ｍｇ  ＨＤ５／ｋｇ体重、好ましくは約１．２ｍｇ  ＨＤ５／ｋｇ〜約５ｍｇ  ＨＤ５／ｋｇ体重、さらにより好ましくは１．２ｍｇ  ＨＤ５／ｋｇ体重であり、例えば、最大で１日に１、２または３回分割された用量で投与される。同様な投与量を、他のα−デフェンシンについて使用できる。いくつかの実施形態では、α−デフェンシンは、１日に３回など、１日に少なくとも２回投与される。
【０１０５】
一つの実施形態では、ヒトβ−デフェンシンの指示一日投与量は好ましくは、約０．１ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇ体重〜約１０ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇ体重、より好ましくは約０．５ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇ体重〜約１０ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇ体重、１ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇ体重〜約１０ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇ体重など、より好ましくは約１．２ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇ体重〜約１０ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇ体重、好ましくは約１．２ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇ体重〜約５ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇ体重、さらにより好ましくは１．２ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇ体重であり、例えば、最大で１日に１、２または３回分割された用量で投与される。同様の投与量が、他のβ−デフェンシンについて使用できる。いくつかの実施形態では、β−デフェンシンは１日に３回など、１日に少なくとも２回投与される。好ましい実施形態では、投与は経口である。
【０１０６】
一つの実施形態では、ヒトカテリシジンの指示一日投与量は好ましくは、約０．１ｍｇカテリシジン／ｋｇ体重〜約１０ｍｇカテリシジン／ｋｇ体重であり、例えば、最大で１日に１、２または３回分割された用量で投与される。いくつかの実施形態では、カテリシジンは１日に３回など、１日に少なくとも２回投与される。好ましい実施形態では、投与は経口である。
【０１０７】
一つの実施形態では、リラグルチドなどのＧＬＰ−１アナログの指示一日投与量は、好ましくは１日に約０．６ｍｇ  ＧＬＰ−１アナログ〜約３ｍｇ  ＧＬＰ−１アナログである。例えば、リラグルチドの投与計画は、一日０．６ｍｇを１週間、続いて１日１．２ｍｇを１週間、続いて１日１．８ｍｇを１週間、続いて１日２．４ｍｇを１週間、続いて１日３ｍｇを２週など、３週など、４週など、またはそれを越える、１週間以上であってよい。好ましい実施形態では、ＧＬＰ−１アナログは静脈内、筋肉内または皮下によって投与される。
【０１０８】
ヒトβ−デフェンシンまたはヒトカテリシジンと併用するヒトα−デフェンシンの指示一日投与量は好ましくは、約０．１ｍｇデフェンシンまたはカテリシジン／ｋｇ体重〜約１０ｍｇデフェンシン／ｋｇ体重、より好ましくは約０．５ｍｇデフェンシンまたはカテリシジン／ｋｇ体重〜約１０ｍｇデフェンシン／ｋｇ体重、約１ｍｇデフェンシンまたはカテリシジン／ｋｇ体重〜約１０ｍｇデフェンシンまたはカテリシジン／ｋｇ体重など、より好ましくは約１．２ｍｇデフェンシンまたはカテリシジン／ｋｇ体重〜約１０ｍｇデフェンシン／ｋｇ体重、好ましくは約１．２ｍｇデフェンシンまたはカテリシジン／ｋｇ体重〜約５ｍｇデフェンシン／ｋｇ体重、さらにより好ましくは１．２ｍｇデフェンシンまたはカテリシジン／ｋｇ体重であり、例えば、最大で１日に１、２または３回分割された用量で投与される。２種の異なるデフェンシンが１回投与量で投与されるとき、投与量は重量ベースまたはモルベースで決定される２種のデフェンシンを等量またはほぼ等量で含み得る。比はまた、β−デフェンシンに対するα−デフェンシンの比が重量またはモルベースで決定されたときに５：１〜１：５など、例えば２：１〜１：２など、１０：１〜１：１０で変化するように異なり得る。
【０１０９】
一日投与量は、０．６ｍｇ  ＨＤ５／ｋｇ体重および０．６ｍｇ  ｈＢＤ−２ｋｇ／体重に相当してよい。
【０１１０】
特定の実施形態では、好ましい実施形態の医薬組成物は、ヒトα−デフェンシンおよび／またはヒトβ−デフェンシンおよび／またはヒトカテリシジンなどの、哺乳動物α−デフェンシンおよび／または哺乳動物β−デフェンシンおよび／または哺乳動物カテリシジンを、単位投与量剤形あたり約０．５ｍｇ未満〜約１５００ｍｇ以上など、好ましくは約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、または０．９ｍｇ〜約１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、または１０００ｍｇ、およびより好ましくは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、または２５ｍｇ〜約３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００ｍｇ、単位投与剤形あたり約０．１ｍｇ未満〜約１５００ｍｇ以上の量で、含んでよい。特定の実施形態では、しかし、上記のこれらよりも低いまたは高い投与量が好ましいことがあり得る。適切な濃度および投与量は、従来技術の当業者によって容易に決定され得る。特定の実施形態では、好ましい実施形態の医薬組成物は、ヒトα−デフェンシンなどの、哺乳動物α−デフェンシンを含む。他の実施形態では、好ましい実施形態の医薬組成物は、ヒトβ−デフェンシンなどの、哺乳動物β−デフェンシンを含む。さらなる実施形態では、好ましい実施形態の医薬組成物は、ヒトα−デフェンシンおよびヒトβ−デフェンシンなどの、哺乳動物α−デフェンシンおよび哺乳動物β−デフェンシンを含み、ここでα−およびβ−デフェンシンはモル濃度ベースでまたはｍｇ／ｍＬベースで等量で存在する。
【０１１１】
一つの実施形態では、哺乳動物α−および／またはβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジンは、少なくとも１日２回など、例えば少なくとも１日３回、少なくとも１日１回投与される。一つの実施形態では、ＧＬＰ−１アナログは、少なくとも１日２回など、例えば少なくとも１日３回、少なくとも１日１回投与される。一つの実施形態では、ＧＬＰ−１アナログは皮下、静脈内または筋肉内によって投与される。
【０１１２】
別の実施形態では、哺乳動物α−および／またはβ−デフェンシンおよび／またはカテリシジンは、食品または飲料補充剤として投与される。
【０１１３】
本開示はさらに、本発明の範囲を制限するものとして解釈されるべきではない以下の例によって説明される。
【０１１４】
例
例１。デフェンシンによる体重増加の防止および筋肉／脂肪比の改善ならびに肝臓における脂肪蓄積の防止。
材料および方法
マウス：マウスは３匹ずつ飼育し、群あたり４ケージだった。食餌摂取は消灯（午後６時）直前に毎日記録した。個別マウスは群およびケージの両方の順序を変える方式で実験手順に供された。マウスはＳＰＦ標準条件で、１２時間の明／暗サイクル下で室温にて維持された。
【０１１５】
食餌：投与について、平均体重をマウスあたり２５グラムであると見積もった。マウスは、１日にマウス１匹あたり約３ｇの食餌を食する。
【０１１６】
治療計画：マウスは高脂肪食（ＨＦＤ）または低脂肪（ＬＦ）対照食のいずれかを与えられた。ＨＦＤは４つのサブ群；１．ｈＢＤ−２、１．ＨＤ５、１．ｈＢＤ−２／ＨＤ５および１．デフェンシン無添加の標準ＨＦＤを含む。デフェンシン濃度は、１．２ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇマウス／日である。ＨＤ５はｈＢＤ−２と等モル濃度で与えられる。併用群は５０％ｈＢＤ−２＋５０％ＨＤ５を与えられ、そのためデフェンシンの全量は残りの試験群と同等である。
【０１１７】
試験：インスリン耐性試験（ＩＴＴ）、グルコース応答性インスリン分泌（ＧＳＩＳ）試験、経口耐糖能試験（ＯＧＴＴ）および５時間空腹時インスリン試験を、１日に群あたり５０％のマウスによって２日かけて実施し、そのため交絡要因としての日日変動を回避した。
【０１１８】
微生物分析を実施して腸の微生物叢を調査する。１６Ｓの長軸上の特徴付けを６０匹のマウスからの４対サンプル、合計２４０サンプルで実施する。各マウスを食餌変更前、食餌変更１週後、食事変更４週後および終了時にサンプリングし、従ってデフェンシン処置の結果としての糞便微生物叢の完全な特徴付けを確実にする。さらに、小腸の内容物を終了時に分析し（１６Ｓまたはディープシークエンシングによる）、従って栄養摂取の主要部位における可能な変化に関する価値ある洞察をもたらす。最後に、盲腸内容物の全メタボロームプロファイルを実施して、微生物変化を全身代謝に変換することを可能にする。十二指腸、空腸、回腸および結腸の詳細な組織学的および免疫組織化学的分析も実施する。
【０１１９】
例２。デフェンシンによる体重増加の防止および筋肉／脂肪比の改善ならびに肝臓における脂肪蓄積の防止。
材料および方法
マウス：マウスは３匹ずつ飼育し、群あたり４ケージだった。食餌摂取は消灯（午後６時）直前に毎日記録した。個別マウスは群およびケージの両方の順序を変える方式で実験手順に供された。マウスはＳＰＦ標準条件で、１２時間の明／暗サイクル下で室温にて維持された。
【０１２０】
食餌：投与について、平均体重をマウスあたり２５グラムであると見積もった。マウスは、１日にマウス１匹あたり約３ｇの食餌を食する。
【０１２１】
治療計画：マウスは高脂肪食（ＨＦＤ）または低脂肪（ＬＦ）対照食のいずれかを与えられた。ＨＦＤは３つのサブ群：１．ｈＢＤ−２、１．ＨＤ５および１．デフェンシン無添加の標準ＨＦＤを含む。デフェンシン濃度は、１．２ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇマウス／日だった。ＨＤ５はｈＢＤ−２と等モル濃度で与えた。試験：インスリン耐性試験（ＩＴＴ）、グルコース応答性インスリン分泌（ＧＳＩＳ）試験、経口耐糖能試験（ＯＧＴＴ）および５時間空腹時インスリン試験を、１日に群あたり５０％のマウスによって２日かけて実施し、そのため交絡要因としての日日変動を回避した。
【０１２２】
結果（例１および２）
ＨＦＤ群では、最後に、α−、β−ならびにα−およびβ−デフェンシンによって処置されたマウスは、処置されなかったマウスよりも少ない体重増加、高い筋肉／脂肪比ならびに肝臓における少ない脂肪蓄積を示す。
【０１２３】
体重変化。食物摂取は３つの実験食群すべてで同様だったが、高脂肪食（ＨＦＤ）群はいずれも低脂肪食（ＬＦＤ）対照群より１０週の試験期間にわたって有意に高い重量を得た（＊ｐ＜０．０００１  二元配置分散分析、テューキー事後検定）。ＨＦＤ＋ｈＢＤ−２群はしかし、ＨＦＤ対照群よりも有意に少ない体重を得た（＊ｐ＝０．００２８）（図７および１０Ａ）。
【０１２４】
赤身／脂肪量発達。赤肉／脂肪量は、試験開始時に３つの実験群間で同等に分布した。試験の最後で、両ＨＦＤ群は同量の赤肉を獲得し、これはＬＦＤ群よりも有意に高く（＊ｐ＜０．０００１  一元配置分散分析、テューキー事後検定）、おそらく体重増加のためだった。試験の最後で、ＨＦＤ＋ｈＢＤ−２群はＬＦＤ群と比べて脂肪量増加の傾向を示した。しかしこれは統計学的に有意ではなかった（＊ｐ＝０．２５）。ＨＦＤ群はＬＦＤ群と比べて脂肪量がほぼ４倍、ＨＦＤ＋ｈＢＤ−２群と比べて脂肪量が２倍増加していた（それぞれ＊ｐ＜０．０００１および＊ｐ＝０．００５）（図８Ａ）。
【０１２５】
インスリン耐性試験。ＬＦＤ群およびＨＦＤ＋ｈＢＤ−２群はともに、ＨＦＤ群よりもインスリンに対して有意により感受性であった（ｐ＜０．０５）（図９Ａおよび１３Ａ）。
【０１２６】
耐糖能試験。ＨＦＤ群は、１５分のピークから１２０分の半クリアランスへのグルコースクリアランスの延長を伴う耐糖能だった。ＬＦＤ群は、１５分のピークからグルコースの急速なクリアランスを有した。ＨＦＤ＋ｈＢＤ−２群は、グルコースクリアランスのわずかな延長を有したが、ＨＦＤ群よりも有意に低いグルコース量に到達した（ｐ＜０．０５）（図９Ｂおよび１２Ａ）。
【０１２７】
グルコース応答性インスリン分泌。ＨＦＤ群は、グルコース投与後に有意に高く持続するインスリン濃度を伴う、損なわれたグルコースホメオスタシスを有した（ｐ＜０．０５）。ＬＦＤ群は、グルコース刺激後にほとんどインスリンが増加しなかった。ＨＦＤ＋ｈＢＤ−２群は、ＬＦＤ群より高いが有意差のないインスリン濃度を有した（図１２Ｂおよび９Ｂ）。
【０１２８】
５時間空腹時インスリン。ＨＦＤ群は、ＬＦＤよりも有意に高い空腹時インスリン量（＊ｐ＝０．０００４）およびＨＦＤ＋ｈＢＤ−２群よりも有意に高い空腹時インスリンである境界（＊ｐ＝０．０５７）を伴う深刻な糖尿病だった。ＬＦＤとＨＦＤ＋ｈＢＤ−２群との間に有意差はなかった（＊ｐ＝０．１７）（図９Ｄ）。
【０１２９】
＊テューキー事後検定、さもなければ、ダネット事後検定。
【０１３０】
β細胞機能およびインスリン耐性の評価のためのホメオスタシスモデル評価（ＨＯＭＡ−ＩＲ）。ＨＦＤプラスｈＢＤ−２群についてＨＯＭＡ−ＩＲはＨＦＤ群よりも低く、維持されたβ細胞機能および限定されたインスリン耐性を示唆する（図１３Ｂ）。
【０１３１】
肝臓代謝。肝臓におけるペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ２（ＰＰＡＲγ２）発現は脂肪肝を誘発し、ＨＦＤ給餌対照群において上方調節されることが認められた（＊ｐ＜０．００１）。ＨＦＤ＋ｈＢＤ−２は、ＰＰＡＲγ２の有意な発現低下をもたらし（＊ｐ＝０．０３）、これは低下した脂肪蓄積と相関し、これによって脂肪肝に対しておそらく予防すると予測される（図１４Ａ）。ＨＰＤ＋ｈＢＤ−２群とＨＦＤ群との間に肝臓重量における有意差はなく、両群はＬＦＤマウスと比べて有意に増加した肝臓重量を有した（図１１Ｂ）。しかし、ＨＦＤ＋ｈＢＤ−２群におけるｅＷＡＴは、ＨＦＤ群よりも有意に低かった（図１１Ｃ）。
【０１３２】
高脂肪食給餌マウスにおける体重増加、肥満および肝臓における脂肪蓄積に対する予防としてのｈＢＤ−２の結論：
ＨＦＤ−ｈＢＤ−２−給餌マウスの５０％は、６０％ＨＦＤが給餌されたにも関わらず、ＬＦＤ対照マウスと類似する体脂肪割合を有した。数匹のマウスは最も低いＬＦＤ対照マウスよりもさらに低い脂肪％を有した。
【０１３３】
驚くべきことに、最も予防されたｈＢＤ−２−給餌マウスは、ＬＦＤ対照マウスと同等またはそれより低いの内臓脂肪量を有し、このことは６０％ＨＦＤでは非常に並はずれている。
【０１３４】
改善されたインスリン感受性。ｈＢＤ−２給餌マウスはＬＦＤ対照マウスと有意差がなかった。インスリン耐性試験およびＨＯＭＡ−ＩＲの両方が、改善したインスリンシグナル伝達を示した。
【０１３５】
耐糖能はＨＦＤ対照マウスと比べて著しく改善された。重要なことに、グルコース負荷の際の耐糖能およびグルコース応答性インスリン応答は共に改善された。ｈＢＤ−２−給餌マウスはこのため、ＨＦＤ対照マウスよりもグルコース多量投与をよりよく扱うために少ない量のインスリンを必要とした。
【０１３６】
精巣上体脂肪は、ＨＦＤ対照マウスと比べてＨＦＤ＋ｈＢＤ−２マウスで低下した。ＨＦＤ＋ｈＢＤ−２は、ＰＰＡＲγ２の有意に低い発現をもたらし、低下した脂肪蓄積を示唆する。
【０１３７】
体重増加の防止および筋肉／脂肪比の改善、ならびに肝臓における脂肪蓄積の防止のためのＨＤ５：
体重変化。すべてのＨＦＤ給餌群は試験期間中に同一食物摂取を有し、１３週の馴らし期間に同等な重量増加を有した（図２０Ａ）。
【０１３８】
耐糖能試験。ＨＦＤ＋ＨＤ５処置マウスおよびＨＦＤマウスにおける耐糖能は、ＬＦＤマウスよりも高かった（図２２Ａ）。
【０１３９】
インスリン耐性試験。ＬＦＤ群はＨＦＤ給餌群よりも有意によりインスリン感受性であった（図２３Ａ）。
【０１４０】
グルコース応答性インスリン分泌。ＨＦＤ群は、グルコース投与後に有意に高く持続するインスリン濃度を伴う、損なわれたグルコースホメオスタシスを有した（ｐ＜０．０５）。ＬＦＤ群は、グルコース刺激後にほとんどインスリンが増加しなかった（図２２Ｂ）。
【０１４１】
β細胞機能およびインスリン耐性の評価のためのホメオスタシスモデル評価（ＨＯＭＡ−ＩＲ）。ＨＦＤ＋ＨＤ−５群についてＨＯＭＡ−ＩＲは、ＨＦＤ群よりも有意には低くなかった（図２３Ｂ）。
【０１４２】
肝臓代謝。肝臓におけるペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ２（ＰＰＡＲγ２）発現は、ＬＦＤ対照と比べてＨＦＤ食餌群において増加し（＊ｐ＜０．００１）、ＨＦＤに対するＨＤ−５の予防効果を有さなかった（図２４Ａ）。肝臓におけるペルオキシソームアシル補酵素Ａオキシダーゼ１（Ａｃｏｘ１）の発現は、ＬＦＤ対照群と比べてＨＦＤ＋ＨＤ−５において有意に増加し（＊ｐ＝０．０００９）、ＨＦＤ対照とＨＦＤ＋ＨＤ−５群の間の境界有意差が認められ（＊ｐ＝０．０７、一元配置分散分析）、ＨＤ−５による高量の脂肪酸酸化を示す（図２４Ｂ）。
【０１４３】
高脂肪食給餌マウスにおける体重増加、肥満および肝臓での脂肪蓄積の発達に対する予防としてのＨＤ５の結論：
ＨＤ５給餌マウスは、ＨＦＤ−給餌対照マウスよりも低い内臓脂肪境界を有した。
耐糖能における改善はなく、ｈＢＤ−２とＨＤ５の間の作用方式における不一致を示唆する。
【０１４４】
肝臓代謝。ｈＢＤ−２はＰＰＡＲγ２の発現を有意に低下し、そのため脂肪肝に対して予防するが、ＨＤ５はＡｃｏｘ１の発現およびこれによる脂肪酸代謝を有意に増加した。肝臓酵素発現におけるこれらの変化は異なり、両方が肝臓における脂肪蓄積に対しておそらく予防的であるので、おそらく相乗的である。
【０１４５】
例３。デフェンシンによる肝臓脂肪性肝炎における脂肪蓄積の治療。
材料よび方法
マウス：マウスは３匹ずつ飼育し、群あたり４ケージである。食餌摂取は週に３回記録する。個別マウスを群およびケージの両方の順序を変える方式で実験手順に供する。マウスはＳＰＦ標準条件化下にて室温で飼育する。
【０１４６】
食餌：投与について、平均体重をマウスあたり２５グラムであると見積もる。マウスは、１日にマウス１匹あたり約３ｇの食餌を食する。
【０１４７】
治療計画：マウスは高脂肪食（ＨＦＤ）を１２週間給餌される。マウスはこれらの１２週にわたってそれらの体重を約５０ｇへと２倍化する。マウスを４つのサブ群；１．ｈＢＤ−２、１．ＨＤ５、１．ｈＢＤ−２／ＨＤ５および１．デフェンシン無添加の標準ＨＦＤに分ける。デフェンシン濃度は、１．２ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇマウス／日である。ＨＤ５はｈＢＤ−２と等モル濃度で与えられる。併用群は５０％ｈＢＤ−２＋５０％ＨＤ５を与えられ、そのため、デフェンシンの全量は残りの試験群と同等である。
【０１４８】
試験：インスリン耐性試験（ＩＴＴ）、グルコース応答性インスリン分泌（ＧＳＩＳ）試験および経口耐糖能試験（ＯＧＴＴ）を、１日に群あたり５０％のマウスによって２日かけて実施し、そのため交絡要因としての日日変動を回避する。微生物分析を実施して腸の微生物叢を調査する。１６Ｓの長軸上の特徴付けを６０匹のマウスからの４対サンプル、合計２４０サンプルで実施する。各マウスについてデフェンシン処置前、デフェンシン処置１週後、デフェンシン処置４週後および終了時にサンプリングし、従ってデフェンシン処置の結果としての糞便微生物叢の完全な特徴付けを確実にする。さらに、小腸の内容物を終了時に分析し（１６Ｓまたはディープシークエンシングによる）、そのため栄養摂取の主要部位における変化の可能性に関する価値ある洞察をもたらす。最後に、盲腸内容物の全メタボロームプロファイルを実施して、微生物変化を全身代謝に変換することを可能にする。十二指腸、空腸、回腸および結腸の詳細な組織学的および免疫組織化学的分析も実施する。
【０１４９】
結果
デフェンシン処置群では、最後に、α−、β−、ならびにα−およびβ−デフェンシンによって処置されたマウスは、未処置ＨＦＤマウスと比べて肝臓における脂肪蓄積の正常化、体重低下、改善した筋肉／脂肪比ならびにインスリン耐性試験（ＩＴＴ）、グルコース応答性インスリン分泌（ＧＳＩＳ）試験および経口耐糖能試験（ＯＧＴＴ）などの正常化した代謝パラメータを示す。
【０１５０】
例４。デフェンシンによる体重増加、肥満および肝臓脂肪性肝炎における脂肪蓄積の治療。
材料および方法
マウス：マウスは３匹ずつ飼育し、群あたり４ケージだった。食餌摂取は週に３回記録した。個別マウスは群およびケージの両方の順序を変える方式で実験手順に供された。マウスはＳＰＦ標準条件化下において室温にて飼育した。
【０１５１】
食餌：投与について、平均体重をマウスあたり２５グラムであると見積もった。マウスは、１日にマウス１匹あたり約３ｇの食餌を食する。
【０１５２】
治療計画：マウスは高脂肪食（ＨＦＤ）を１２週間給餌された。マウスはこれらの１２週にわたってそれらの体重を約５０ｇへと２倍化した。マウスを３つのサブ群；１．ｈＢＤ−２、１．ＨＤ５および１．デフェンシン無添加の標準ＨＦＤに分けた。デフェンシン濃度は、１．２ｍｇ  ｈＢＤ−２／ｋｇマウス／日だった。ＨＤ５をｈＢＤ−２と等モル濃度で与えた。
【０１５３】
試験：インスリン耐性試験（ＩＴＴ）、グルコース応答性インスリン分泌（ＧＳＩＳ）試験および経口耐糖能試験（ＯＧＴＴ）を、１日に群あたり５０％のマウスによって２日かけて実施し、そのため交絡要因としての日日変動を回避した。
【０１５４】
結果
体重変化。標準高脂肪食（ＨＦＤ）給餌群は、全試験期間を通して同等な食物摂取を有し、最初の１３週で同等な脂肪および赤肉量で同様な体重発達を有し、そのため食餌介入前に同一開始時点を有した。体重増加は、低脂肪食給餌（ＬＦＤ）群より有意に高かった（＊ｐ＜０．０５  二元配置分散分析）（図１５Ａ）。食餌介入後、ＨＦＤ群は体重が増加し続けたが、ＨＦＤ＋ｈＢＤ−２群は食餌介入後の最初の４週間で体重増加が少ない傾向だったが、有意ではなかった（＊ｐ＝０．０７  二元配置分散分析）。試験期間の４週目〜最後で、ＨＦＤ＋ｈＢＤ−２群は標準ＨＦＤ群と同様の体重を得た（＊ｐ＝０．８２  二元配置分散分析）（図１５Ｂ）。
【０１５５】
脂肪割合。全体重の脂肪割合は、試験期間の開始時は３実験群間で同様だった。食餌介入の時点で、ＨＦＤ給餌の２群の脂肪割合は同じであり、ともにＬＦＤ食餌群よりも有意に高く、これは食餌介入後１０週の全期間を通して一定だった（＊ｐ＜０．０５  二元配置分散分析）（図１６Ａ）。食餌介入後４週で、ＨＦＤ＋ｈＢＤ−２群の約７５％は、介入前よりも低い脂肪割合を有し、すべてのマウスの脂肪割合が増加していた標準ＨＦＤ群とは極めて対比的だった（図１６Ｂ）。脂肪割合の変化は、この時点で標準ＨＦＤ群よりもＨＦＤ＋ｈＢＤ−２群で有意に低かった（＊ｐ＝０．００３  二元配置分散分析）。終了時の肝臓重量は、ＬＦＤ群に比べてＨＦＤ給餌群で有意に高かった（＊ｐ＜０．０５  一元配置分散分析）（図１７Ａ）。終了時の内臓脂肪（ｅＷＡＴ）の量もまた、ＬＦＤと比べてＨＦＤ群で高かった（＊ｐ＜０．０５  一元配置分散分析）。ＨＦＤ給餌群間で内臓脂肪（ｅＷＡＴ）に有意差はなかった（図１７Ｂ）。
【０１５６】
耐糖能試験。耐糖能は、ＨＦＤ＋ｈＢＤ−２群において食餌介入時点から急速に改善し、血糖での小さなピークならびに２週後で既にグルコースのより迅速なクリアランスを示した（図１８Ａ）。試験における最大の耐糖能マウスは、標準ＨＦＤからＨＦＤ＋ｈＢＤ−２に切り替えられた後の最初の２週に劇的に好転することが認められた。（図１８Ｂ）。
【０１５７】
インスリン耐性試験。ＬＦＤ群は両ＨＦＤ群よりもインスリンに対して有意により感受性であった（＊ｐ＜０．０５  二元配置分散分析）。ＨＦＤ＋ｈＢＤ−２群は同時に、ＨＦＤ対照群に比べてよりインスリン感受性であり、食餌介入以後のインスリン耐性における改善を暗示する（＊ｐ＜０．０５  二元配置分散分析）（図１８Ｃ）。
【０１５８】
肝臓代謝。肝臓におけるペルオキシソームアシル−補酵素Ａオキシダーゼ１（Ａｃｏｘ１）の発現は、ＬＦＤ対照群と比べてＨＦＤ＋ｈＢＤ−２群において有意に増加し（＊ｐ＝０．００２７）、ｈＢＤ−２の食餌介入による高レベルの脂肪酸酸化を示した（図１９）。肝臓重量およびｅＷＡＴ重量は、対照ＨＦＤ群とＨＦＤ＋ｈＢＤ−２群の間に有意差はなかった（図１７）。
【０１５９】
高脂肪食給餌マウスにおける体重増加、肥満および肝臓における脂肪蓄積の治療としてのｈＢＤ−２の結論：
−全体として、ｈＢＤ−２給餌マウスはＨＦＤ対照マウスよりも介入の最初の４週でより少ない体重を得た（図１５Ａ）。
−８匹中７匹の肥満および耐糖能マウスが、介入のわずか２週後にそれらの耐糖能を有意に改善した（図１８Ａ）。１匹のマウスが、５０ｇの体重のうち約２０ｇの脂肪量を有しベースラインで最も耐糖能の高いマウスだった。この重度の不健全な表現型にも関わらず、このマウスは介入の２週でグルコース不耐性に関して完全に救済された（図１８Ｂ）。
−全身レベルでは、ｈＢＤ−２給餌マウスはＨＦＤ対照マウスよりも低いインスリン耐性だった（図１８Ｃ）。重度の全身性インスリン耐性は逆転させることが非常に困難であり、かつヒト疾患（例えば、特に糖尿病、ＣＶＤ、特定の癌）の治療における主たる制限であるため、このことは重要な意味がある。
−ｈＢＤ−２給餌マウスは、肝臓における増加した脂肪酸酸化を有した（図１９）。
【０１６０】
高脂肪食給餌マウスにおける体重増加、肥満および肝臓における脂肪蓄積の治療としてのＨＤ−５：
体重変化。すべてのＨＦＤ給餌群は試験期間中に同一の食物摂取を有し、１３週の馴らし期間に同等の重量増加を有した（図２５Ａ）。食餌介入後、ＨＦＤ＋ＨＤ−５給餌群は、ＨＦＤ対照よりも有意に少ない体重を得た（＊ｐ＜０．０５  二元配置分散分析）（図２５Ｂ）。さらに、ＨＦＤ＋ＨＤ−５群において脂肪割合の低下傾向が認められ（図２６Ａ）、ＨＦＤ対照と比べてＨＦＤ＋ＨＤ−５で有意に低い脂肪割合が食餌変更後４週で測定された（＊ｐ＝０．００９  二元配置分散分析）（図２６Ｂ）。終了時の肝臓の重量は、ＨＦＤ対照と比べてＨＦＤ＋ＨＤ−５給餌群で低下する傾向だった。具体的には、標準ＨＦＤ給餌マウスの約５０％が、最も高いＨＦＤ＋ＨＤ−５給餌マウスよりも高い成績だった（図２７Ａ）。内臓脂肪の重量は、ＬＦＤ給餌群よりもＨＦＤ給餌群で高かった（＊ｐ＜０．０５  一元配置分散分析）（図２７Ｂ）。
【０１６１】
耐糖能試験。代表的なケージであるケージ２においてＨＦＤ＋ＨＤ５処置されたマウスについての耐糖能は、介入開始（１３−０週）から１３．８週にわたって改善した。（図２８Ａ）
【０１６２】
インスリン耐性試験。ＬＦＤ群は、ＨＦＤ給餌群よりも有意によりインスリン感受性であった（＊ｐ＜０．０５  二元配置分散分析）。ＨＦＤ＋ＨＤ−５群はＨＦＤ対照よりもよりインスリン感受性であり、食餌介入以後のインスリン耐性における改善を暗示する（＊ｐ＜０．０５  二元配置分散分析）（図２８Ｂ）。
【０１６３】
肝臓代謝。肝臓におけるペルオキシソームアシル−補酵素Ａオキシダーゼ１（Ａｃｏｘ１）の発現は、３群すべてでほぼ同じだった（図２９Ｂ）が、ＰＰＡＲγ２の発現は、ＬＦＤ群と比べて両ＨＦＤ群で有意に高かった（図２９Ａ）。
【０１６４】
高脂肪食給餌マウスにおける体重増加、肥満および肝臓における脂肪蓄積の治療としてのＨＤ５の結論：
ＨＤ５−給餌マウスは、ＨＦＤ−給餌対照マウスと比べて有意に低い体重変化を有した（図２５Ｂ）。
−肥満ＨＦＤ−ＨＤ５−給餌マウスの脂肪量低下の全般的な傾向があった（図２６ＡおよびＢ）。
−肝臓重量は、ＨＦＤ−給餌対照マウスと比べてＨＤ５−給餌マウスで低下する傾向だった（図２７Ａ）。内臓および皮下貯留は有意差がなかったため（図２７Ｂ）、この結果は、ＨＤ５マウスにおける中度に低下した脂肪％が肝臓の脂質分解／脂質酸化に限定されることを示唆する。
−耐糖能は、ＨＤ５給餌マウスにおいて経時的に改善した（図２８Ａ）。
−ＨＤ５給餌マウスは、ＨＦＤ−給餌対照マウスよりもインスリン耐性が低かった（図２８ｂ）。
【０１６５】
重要なことに、食餌脂肪の摂取は、ＨＦＤマウス、ＨＦＤ＋ｈＢＤ−２マウスおよびＨＦＤ＋ＨＤ−５マウス間で有意差がなく（図３０Ａ）、このことは糞便脂肪含量も３群すべてでほぼ同様だったという観察と一致する。（図３０Ｂ）。
【０１６６】
例５。グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）アナログ（リラグルチド）による高脂肪食給餌マウスにおける体重増加、肥満および肝臓での脂肪蓄積の治療。
材料および方法
マウス：４週齢Ｃ５７ＢＩ／６Ｊ  ＤＩＯ雄マウスに高脂肪食（ＨＦＤ６０％脂肪、ＳＳＮＩＦＦ（ＤｉｅｔＮｏ．Ｄ１２４９２）またはｐｕｒｉｎａ  ｃｈｏｗを３６週間給餌した。ＨＦＤ給餌群は、介入開始までに約５５グラムの平均体重に達していた。マウスを−２週までケージあたり１０匹で集団飼育した。−２週からマウスを、試験期間全体を通して単独で飼育した。食餌摂取は午後３時の消灯直前に毎日記録した。個別マウスは群およびケージの両方の順序を変える方式で実験手順に供された。マウスをＳＰＦ標準条件にて１２時間の明／暗サイクル下で室温で維持した。
【０１６７】
治療計画：マウスは高脂肪食（ＨＦＤ）または低脂肪（ＬＦ）対照食のいずれかを与えられた。ＨＦＤは、２つのサブ群；１．ＧＬＰ−１アナログおよび１．ＧＬＰ−１無添加の標準ＨＦＤを含んだ。ＧＬＰ−１アナログであるリラグルチドをＰＢＳに溶解し、０．１％ＢＳＡを加えた。ＧＬＰ−１アナログを０．２ｍｇ／ｋｇで１日２回皮下投与した。
【０１６８】
結果
ＧＬＰ−１アナログは、ＧＬＰ−１アナログによって処置されたマウスが未処置ＨＦＤ対照群マウスと比べて２５〜３０％の体重または平均１５グラムを失った（図３２）ため、体重低下効果を有することが認められた。
【０１６９】
ＧＬＰ−１アナログはまた、ＧＬＰ−１アナログ処置群のマウスにおける終了時のグラムでの肝臓重量は、ｃｈｏｗが給餌されたマウスの群の肝臓重量と統計学的に有意差がなかった（ｐ＜０．００１）ため、肝臓における脂肪蓄積も低下すると考えられた（図３３）。
【０１７０】
これらの効果と一致して、血漿コレステロール量は、マウスのＨＦＤ対照群と比べて、ＧＬＰ−１アナログ処理群のマウスにおいて統計学的に有意に低下した（ｐ＜０．０１）（図３４）。
【０１７１】
例６。ＮＭＲＩマウスへのｈＢＤ−２の４ｍｇ／ｋｇ単回経口強制投与に続き経口による生物学的利用能を測定しおよび薬理動態プロファイルを確立するための薬理動態試験。
材料および方法
治療計画：２１匹の雌ＮＭＲＩマウスに、投与日に得られた個別体重に従って経口強制投与チューブおよび１ｍＬシリンジを用いて５ｍl／ｋｇを経口強制投与によって投与した。尿を、ランダムな時点に腹部の鼠径領域を優しくマッサージすることによって強制的にサンプリングした。最初の血液サンプルを、顎下サンプリング法を用いて採取した。２回目の血液サンプルを、イソフルラン麻酔したマウスから収集した。腸サンプルを、安楽死後に採取した。各マウスの腹部を開いて、腸の３部分をサンプリングした。
【０１７２】
結果
ｈＢＤ−２は、ｈＢＤ−２が血清または尿サンプルのいずれでもＨＰＬＣによって検出されず全ての値が＜１０ｐｇ／ｍＬの検出量未満であったので、健全な腸から吸収されると思われなかった。このことは、ｈＢＤ−２がマウスにおける４ｍｇ／ｋｇの経口投与後に全身で利用可能ではないことを示す（図３５）。
【０１７３】
例７。ＮＭＲＩ雌マウスへの１ｍｇ／ｋｇ  ｈＢＤ−２（分子量６６４３７Ｄａ）のモル当量の皮下または静脈内投与に続くヒト血清アルブミンのＣ端（融合後分子量７１，３３６Ｄａ）またはＮ端（融合後分子量７１，６６６Ｄａ）に融合されたｈＢＤ−２の薬理動態プロファイル。
材料および方法
処置方法：マウスに、個別体重に従ってストック濃度１．６５ｍｇ／ｍＬを１０ｍＬ／ｋｇ投与した（３０ｇマウスあたり３００μＬ）。最初の血液サンプルを、下顎サンプリング法を用いて、２回目を、イソフルラン麻酔および安楽死後に採取した。
【０１７４】
結果
ｈＢＤ−２は１時間の半減期、および２種の融合タンパク質は１２時間の半減期を示した。ＡＵＣは劇的に変化した。腎クリアランスもまた、ｈＢＤ−２での１０ｍＬ／分から２種の融合分子での０．５−２．２ｍＬ／分に変化した（図３６、３７および３８）。
【０１７５】
例は、ｈＢＤ−２の半減期が、アルブミンへのＣ端またはＮ端共役体化によって著しく延長され得ることを示す。
【０１７６】
例８。マウスでの急性デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）１０日間誘発大腸炎モデルにおける「ｈＢＤ−２−アルブミン融合Ｎ端」の抗炎症効果。
材料および方法
処置方法：「ｈＢＤ−２−アルブミンＮ端」を、１０ｍＬ／ｋｇ体重の投与容量で無菌２５Ｇ針を用いて尾静脈による静脈内でまたは皮下に投与した。マウスは、計画した１０日の間に１日１回投与を受けた。有効な対照デキサメサゾン（ＤＥＸ）を、１０ｍＬ／ｋｇ体重ＯＤの投与容量で１ｍｇ／ｋｇの用量で皮下で与えた。
【０１７７】
結果
「ｈＢＤ−２−アルブミンＮ端」による処置は、静脈内経路によって１．６５ｍｇ／ｋｇの用量で毎日投与されたとき、疾患活動性指標（ＤＡＩ）の有意な阻害をもたらした（ｐ＜０．０５）。さらに、「ｈＢＤ−２−アルブミンＮ端」が皮下に１．６５ｍｇ／ｋｇの用量で、および１２５ｍｇ／ｋｇの用量で毎日投与されたとき、１０日目にＤＡＩスコアの有意な阻害も認められた（ｐ＜０．０５）。
【０１７８】
デキストラン硫酸ナトリウムの投与は、組織学的検査後に証明された結腸組織の重大な炎症および傷害をもたらした。「ｈＢＤ−２−アルブミンＮ端」による処置は、この組織学的損傷の統計学的に有意な低下をもたらさなかったが、同様に、有効な対照ＤＥＸは組織学的傷害を低下しなかった。
【０１７９】
結果はさらに２日および３日目の体重の一時的な低下に関わらず、「ｈＢＤ−２−アルブミンＮ端」で処置されたマウスにおける７日目の体重の有意な増加を示し、「ｈＢＤ−２−アルブミンＮ端」が、劇的な体重低下と通常関連するネズミＤＳＳモデルにおいて著しい体重維持効果を有すること示す。これに対して、ＤＥＸ処置マウスは５日目以降、体重の非常に有意な低下を示した（ｐ＜０．０１）。
【０１８０】
例は、ｈＢＤ−２−アルブミン融合Ｎ端が炎症症状の動物モデルにおいて生物学的に活性であることを実証する（図３９）。
【０１８１】
例９。マウスでの急性デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）１０日間誘発大腸炎モデルにおける「ｈＢＤ−２−アルブミン融合Ｃ端」の抗炎症効果。
材料および方法
処置方法：ｈＢＤ−２−アルブミンＣ端」を、１０ｍＬ／ｋｇ体重の投与容量で無菌２５Ｇ針を用いて尾静脈により静脈内にまたは皮下に投与した。マウスは、計画した１０日の間に１日１回投与を受けた。有効な対照プレドニゾロン（Ｐｒｅｄ）を、１０ｍＬ／ｋｇ体重ＯＤの投与容量で１ｍｇ／ｋｇの用量で強制投与によって経口で与えた。
【０１８２】
結果
「ｈＢＤ−２−アルブミンＣ端」による処置は、静脈内経路によって１．６ｍｇ／ｋｇの用量で毎日投与されたとき、ＤＡＩの有意な阻害をもたらした（ｐ＜０．０５）。さらに、「ｈＢＤ−２−アルブミンＣ端」は、静脈内経路によって１．６ｍｇ／ｋｇの用量で選択した０、２、４、６、８および１０日目に投与されたとき、ＤＡＩの有意な阻害をもたらした（ｐ＜０．０５）。Ｐｒｅｄによる毎日の処置は、９日目にＤＡＩの有意な阻害をもたらした。（ｐ＜０．０５）。
【０１８３】
デキストラン硫酸ナトリウムの投与は、組織学的検査後に証明された結腸組織の重大な炎症および傷害をもたらした。１．６ｍｇ／ｋｇの用量での「ｈＢＤ−２−アルブミンＣ端」による処置は、この組織学的損傷の統計学的に有意な低下をもたらした（ｐ＜０．０５）。同様に、１．６ｍｇ／ｋｇでの「ｈＢＤ−２−アルブミンＣ端」による毎日の処置および１６．５ｍｇ／ｋｇの用量での０、２、４、６、８、および１０日目の処置は、結腸に組織学的損傷の有意な低下をもたらした（ｐ＜０．０１）。有効対照Ｐｒｅｄによる処置は、結腸の近位部分における組織学的な傷害を有意に低下しなかったが、遠位結腸における傷害を低下した（ｐ＜０．０１）。
【０１８４】
結果はさらに、「ｈＢＤ−２−アルブミンＣ端」によって処置された動物における体重の有意な増加を示し（ｐ＜０．０５）、「ｈＢＤ−２−アルブミンＣ端」の体重維持効果を示した。
【０１８５】
例は、ｈＢＤ−２−アルブミン融合Ｃ端が炎症症状の動物モデルにおいて生物学的に活性であるあることを実証する。
【０１８６】
例１０．配列
【表１】
2019514908.tif 000002
【０１８７】
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Ｔｒａｓａｎｄｅ  Ｌ，Ｂｌｕｓｔｅｉｎ  Ｊ，Ｌｉｕ  Ｍ，Ｃｏｒｗｉｎ  Ｅ，Ｃｏｘ  ＬＭ  ａｎｄ  Ｂｌａｓｅｒ  ＭＪ，２０１２．Ｉｎｆａｎｔ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ  ｅｘｐｏｓｕｒｅｓ  ａｎｄ  ｅａｒｌｙ−ｌｉｆｅ  ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ（小児の抗生物質暴露および若齢期体重）．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｂｅｓ  （Ｌｏｎｄ）  ３７（１）：１６−２３．
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Ｚｈａｎｇ  Ｘ，ｅｔ  ａｌ，２０１５．Ｔｈｅ  ｏｒａｌ  ａｎｄ  ｇｕｔ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅｓ  ａｒｅ  ｐｅｒｔｕｒｂｅｄ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｐａｒｔｌｙ  ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ  ａｆｔｅｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（口腔および消化管マイクロバイオームは関節リウマチで撹乱され、治療後に部分的に正常化される）．Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２１（８）：８９５−９０５．
【０１８８】
そして特許および特許出願を次に示す。
ＷＯ２０１０／００７１６６
ＷＯ９２／０６２０４
ＷＯ９５／１７４１３
ＷＯ９５／２２６２５
ＵＳ５，２２３，４０９
ＣＮ１０４９７１３４３
【図１】
2019514908.tif 000003
【図２】
2019514908.tif 000004
【図３】
2019514908.tif 000005
【図４】
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【図５】
2019514908.tif 000007
【図６】
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【図７Ａ】
2019514908.tif 000009
【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
2019514908.tif 000011
【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２１Ｃ】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３Ａ】
2019514908.tif 000049
【図２３Ｂ】
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【図２４Ａ】
2019514908.tif 000051
【図２４Ｂ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２６Ａ】
2019514908.tif 000055
【図２６Ｂ】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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【図２８Ａ】
2019514908.tif 000059
【図２８Ｂ】
2019514908.tif 000060
【図２９Ａ】
2019514908.tif 000061
【図２９Ｂ】
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【図３０Ａ】
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【図３０Ｂ】
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【図３１】
2019514908.tif 000065
【図３２Ａ】
2019514908.tif 000066
【図３２Ｂ】
2019514908.tif 000067
【図３３】
2019514908.tif 000068
【図３４】
2019514908.tif 000069
【図３５】
2019514908.tif 000070
【図３６】
2019514908.tif 000071
【図３７】
2019514908.tif 000072
【図３８】
2019514908.tif 000073
【手続補正書】
【提出日】平成30年12月27日(2018.12.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2019514908000001.app
【国際調査報告】
2019514908.tif 000074
2019514908.tif 000075
2019514908.tif 000076
2019514908.tif 000077
2019514908.tif 000078