(57)【要約】本出願は、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭに融合された、標的抗原に特異的に結合する抗体部分を含む、抗体−ＴＣＲキメラ構築物を提供する。これらの構築物を作製および使用する方法もまた提供される。本出願は、一態様では、Ｔ細胞受容体モジュールに融合した抗体部分（例えば、Ｆａｂ様抗原結合結合モジュール）を含む構築物（例えば、単離された構築物）を提供する（前記構築物は、本明細書で「抗体−ＴＣＲキメラ分子」または「ａｂＴＣＲ」とも呼ぶ）。【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的抗原に特異的に結合する抗体−Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）キメラ分子（ａｂＴＣＲ）であって、
ａ）ＶＨおよびＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲサブユニットの第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴ細胞受容体ドメイン（ＴＣＲＤ）とを含む第１のポリペプチド鎖；ならびに
ｂ）ＶＬおよびＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲサブユニットの第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖
を含み、
前記第１の抗原結合ドメインの前記ＶＨおよびＣＨ１ドメインと前記第２の抗原結合ドメインの前記ＶＬおよびＣＬドメインとが、前記標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを形成し、
前記第１のＴＣＲＤと前記第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を形成する、
ａｂＴＣＲ。
【請求項２】
前記抗原結合モジュールが、前記ＣＨ１ドメイン中の残基と前記ＣＬドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を含む、請求項１に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項３】
前記第１のポリペプチド鎖が、前記第１の抗原結合ドメインと前記第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーをさらに含む、請求項１または２に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項４】
前記第２のポリペプチド鎖が、前記第２の抗原結合ドメインと前記第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーをさらに含む、請求項１から３のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項５】
前記第１のペプチドリンカーおよび／または前記第２のペプチドリンカーが個々に、約５〜約５０アミノ酸長である、請求項３または４に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項６】
前記標的抗原が細胞表面抗原である、請求項１から５のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項７】
前記細胞表面抗原が、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される、請求項６に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項８】
前記細胞表面抗原が、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である、請求項７に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項９】
前記標的抗原が、ペプチドと主要組織適合複合体（ＭＨＣ）タンパク質とを含む複合体である、請求項１から５のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項１０】
標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲであって、
ａ）ＶＨ抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲサブユニットの第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；および
ｂ）ＶＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲサブユニットの第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖
を含み、
前記第１の抗原結合ドメインの前記ＶＨドメインと前記第２の抗原結合ドメインの前記ＶＬドメインとが、前記標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを形成し、
前記第１のＴＣＲＤと前記第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を形成し、
前記標的抗原が、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む複合体である、
ａｂＴＣＲ。
【請求項１１】
前記第１のポリペプチド鎖が、前記第１の抗原結合ドメインと前記第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーをさらに含み、前記第２のポリペプチド鎖が、前記第２の抗原結合ドメインと前記第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーをさらに含む、請求項１０に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項１２】
前記第１および／または第２のペプチドリンカーが、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体サブユニット由来の定常ドメインまたはその断片を個々に含む、請求項１１に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項１３】
前記第１および／または第２のペプチドリンカーが、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４もしくはＣＬ抗体ドメイン、またはそれらの断片を個々に含む、請求項１２に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項１４】
前記第１および／または第２のペプチドリンカーが、Ｃα、Ｃβ、ＣγもしくはＣδＴＣＲドメイン、またはそれらの断片を個々に含む、請求項１２に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項１５】
前記第１のＴＣＲＤが、前記第１の膜貫通ドメインのＮ末端側に、ＴＣＲサブユニットの第１の接続ペプチドまたはその断片をさらに含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項１６】
前記第２のＴＣＲＤが、前記第２の膜貫通ドメインのＮ末端側に、ＴＣＲサブユニットの第２の接続ペプチドまたはその断片をさらに含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項１７】
前記ＴＣＲＭが、前記第１の接続ペプチド中の残基と前記第２の接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合を含む、請求項１５または１６に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項１８】
前記第１のＴＣＲＤが、前記第１の膜貫通ドメインのＣ末端側に、ＴＣＲ細胞内配列を含む第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項１９】
前記第２のＴＣＲＤが、前記第２の膜貫通ドメインのＣ末端側に、ＴＣＲ細胞内配列を含む第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む、請求項１から１８のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項２０】
前記第１のポリペプチド鎖が、前記第１の膜貫通ドメインのＣ末端側に、共刺激細胞内シグナル伝達配列を含む第１のアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項２１】
前記第２のポリペプチド鎖が、前記第２の膜貫通ドメインのＣ末端側に、共刺激細胞内シグナル伝達配列を含む第２のアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む、請求項１から２０のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項２２】
前記第１のポリペプチド鎖が、前記第１の抗原結合ドメインのＮ末端側に、第１のシグナル伝達ペプチドをさらに含む、請求項１から２１のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項２３】
前記第２のポリペプチド鎖が、前記第２の抗原結合ドメインのＮ末端側に、第２のシグナル伝達ペプチドをさらに含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項２４】
前記標的抗原複合体中の前記ペプチドが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する、請求項９から２３のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項２５】
前記分子が、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭの平衡解離定数（Ｋｄ）で前記標的抗原に結合する、請求項１から２４のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項２６】
前記ＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールが、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される、請求項１から２５のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項２７】
前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲα鎖であり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲβ鎖である、請求項１から２６のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項２８】
前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲβ鎖であり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲα鎖である、請求項１から２６のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項２９】
前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγ鎖であり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδ鎖である、請求項１から２６のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項３０】
前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδ鎖であり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγ鎖である、請求項１から２６のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【請求項３１】
請求項１から３０のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲの前記第１および第２のポリペプチド鎖をコードする核酸（複数可）。
【請求項３２】
請求項１から３０のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲと、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールとを含む複合体。
【請求項３３】
前記ａｂＴＣＲとＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζとを含む八量体である、請求項３２に記載の複合体。
【請求項３４】
請求項１から３０のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲまたは請求項３２もしくは３３に記載の複合体をその表面上に提示するエフェクター細胞。
【請求項３５】
請求項３１に記載の核酸（複数可）を含むエフェクター細胞。
【請求項３６】
前記第１のＴＣＲサブユニットおよび／または前記第２のＴＣＲサブユニットを発現しない、請求項３４または３５に記載のエフェクター細胞。
【請求項３７】
ａ）前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲαであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲβであり；または
ｂ）前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲβであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲαであり；
前記エフェクター細胞がγδＴ細胞である、請求項３６に記載のエフェクター細胞。
【請求項３８】
ａ）前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδであり；または
ｂ）前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγであり；
前記エフェクター細胞がαβＴ細胞である、請求項３６に記載のエフェクター細胞。
【請求項３９】
第１の内因性ＴＣＲサブユニットおよび／または第２の内因性ＴＣＲサブユニットの発現を遮断するまたは減少させるように改変されている、請求項３４から３６のいずれか一項に記載のエフェクター細胞。
【請求項４０】
ａ）前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲαであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲβであり；または
ｂ）前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲβであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲαであり；
前記エフェクター細胞が、ＴＣＲαおよび／またはＴＣＲβの発現を遮断するまたは減少させるように改変されたαβＴ細胞である、請求項３９に記載のエフェクター細胞。
【請求項４１】
ａ）前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδであり；または
ｂ）前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγであり；
前記エフェクター細胞が、ＴＣＲγおよび／またはＴＣＲδの発現を遮断するまたは減少させるように改変されたγδＴ細胞である、請求項３９に記載のエフェクター細胞。
【請求項４２】
ＣＤ３＋細胞である、請求項３４から４１のいずれか一項に記載のエフェクター細胞。
【請求項４３】
前記ＣＤ３＋細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される、請求項４２に記載のエフェクター細胞。
【請求項４４】
ａ）第１のプロモーターの制御下の前記ａｂＴＣＲの前記第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列を含む第１のベクターと、ｂ）第２のプロモーターの制御下の前記ａｂＴＣＲの前記第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列を含む第２のベクターとを含む、請求項３４から４３のいずれか一項に記載のエフェクター細胞。
【請求項４５】
ａ）第１のプロモーターの制御下の前記ａｂＴＣＲの前記第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列と；ｂ）第２のプロモーターの制御下の前記ａｂＴＣＲの前記第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列とを含むベクターを含む、請求項３４から４３のいずれか一項に記載のエフェクター細胞。
【請求項４６】
ａ）前記ａｂＴＣＲの前記第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列と；ｂ）前記ａｂＴＣＲの前記第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列とを含むベクターを含み、前記第１および第２の核酸配列が、単一のプロモーターの制御下にある、請求項３４から４３のいずれか一項に記載のエフェクター細胞。
【請求項４７】
前記ａｂＴＣＲの前記第１のポリペプチド鎖の発現が、前記ａｂＴＣＲの前記第２のポリペプチド鎖の発現とは、２倍よりも大きく異なる、請求項３４から４５のいずれか一項に記載のエフェクター細胞。
【請求項４８】
標的抗原を提示する標的細胞を死滅させる方法であって、前記標的細胞を、請求項３４から４７のいずれか一項に記載のエフェクター細胞と接触させるステップを含み、前記ａｂＴＣＲが、前記標的抗原に特異的に結合する、方法。
【請求項４９】
標的抗原を提示する標的細胞を死滅させる方法であって、前記標的細胞を、前記標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを含むエフェクターαβＴ細胞と接触させるステップを含み、前記ａｂＴＣＲが、
ａ）ＶＨ抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲサブユニットの第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；および
ｂ）ＶＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲサブユニットの第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖
を含み、
前記第１の抗原結合ドメインの前記ＶＨドメインと前記第２の抗原結合ドメインの前記ＶＬドメインとが、前記標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを形成し、
前記第１のＴＣＲＤと前記第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を形成し、
前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδである、または前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγである、
方法。
【請求項５０】
前記第１のポリペプチド鎖が、前記第１の抗原結合ドメインと前記第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーをさらに含み、前記第２のポリペプチド鎖が、前記第２の抗原結合ドメインと前記第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーをさらに含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記第１および／または第２のペプチドリンカーが、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体サブユニット由来の定常ドメインまたはその断片を個々に含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記第１および／または第２のペプチドリンカーが、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４もしくはＣＬ抗体ドメイン、またはそれらの断片を個々に含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記第１および／または第２のペプチドリンカーが、Ｃα、Ｃβ、ＣγもしくはＣδＴＣＲドメイン、またはそれらの断片を個々に含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
前記接触させるステップがｉｎ  ｖｉｖｏである、請求項４８から５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記接触させるステップがｉｎ  ｖｉｔｒｏである、請求項４８から５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
請求項１から３０のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ、請求項３１に記載の核酸（複数可）、または請求項３４から４７のいずれか一項に記載のエフェクター細胞と、薬学的に許容されるキャリアとを含む医薬組成物。
【請求項５７】
それを必要とする個体において標的抗原関連疾患を処置する方法であって、前記個体に、有効量の、請求項５１に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項５８】
それを必要とする個体において標的抗原関連疾患を処置する方法であって、前記個体に、有効量の、前記標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを含むエフェクターαβＴ細胞を含む組成物を投与するステップを含み、前記ａｂＴＣＲが、
ａ）ＶＨ抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲサブユニットの第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；および
ｂ）ＶＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲサブユニットの第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖
を含み、
前記第１の抗原結合ドメインの前記ＶＨドメインと前記第２の抗原結合ドメインの前記ＶＬドメインとが、前記標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを形成し、
前記第１のＴＣＲＤと前記第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を形成し、
前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδである、または前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγである、
方法。
【請求項５９】
前記第１のポリペプチド鎖が、前記第１の抗原結合ドメインと前記第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーをさらに含み、前記第２のポリペプチド鎖が、前記第２の抗原結合ドメインと前記第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーをさらに含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記第１および／または第２のペプチドリンカーが、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体サブユニット由来の定常ドメインまたはその断片を個々に含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記第１および／または第２のペプチドリンカーが、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４もしくはＣＬ抗体ドメイン、またはそれらの断片を個々に含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記第１および／または第２のペプチドリンカーが、Ｃα、Ｃβ、ＣγもしくはＣδＴＣＲドメイン、またはそれらの断片を個々に含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
前記標的抗原関連疾患ががんである、請求項５７から６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記がんが、副腎皮質癌、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞癌、結腸直腸がん、食道がん、グリア芽細胞腫、グリオーマ、肝細胞癌、頭頸部がん、腎臓がん、白血病、リンパ腫、肺がん、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓がん、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽細胞腫、卵巣がん、前立腺がん、肉腫、胃がん、子宮がんおよび甲状腺がんからなる群から選択される、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記標的抗原関連疾患がウイルス感染症である、請求項５７から６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記ウイルス感染症が、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１（ＨＴＬＶ−１）、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）からなる群から選択されるウイルスによって引き起こされる、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
請求項３４から４７のいずれか一項に記載のエフェクター細胞について不均一な細胞集団を富化する方法であって、
ａ）前記不均一な細胞集団を、前記標的抗原またはその中に含まれる１つもしくは複数のエピトープを含むリガンドと接触させて、前記リガンドに結合した前記エフェクター細胞の複合体を形成するステップ；および
ｂ）前記不均一な細胞集団から前記複合体を分離し、それによって、前記エフェクター細胞について富化された細胞集団を生成するステップ
を含む方法。
【請求項６８】
請求項１から３０のいずれか一項に記載の複数のａｂＴＣＲをコードする配列を含む核酸ライブラリー。
【請求項６９】
標的抗原に対して特異的なａｂＴＣＲをコードする配列について、請求項６８に記載の核酸ライブラリーをスクリーニングする方法であって、
ａ）前記ａｂＴＣＲが複数の細胞の表面上で発現されるように、前記核酸ライブラリーを前記複数の細胞中に導入するステップ；
ｂ）前記複数の細胞を、前記標的抗原またはその中に含まれる１つもしくは複数のエピトープを含むリガンドと共にインキュベートするステップ；
ｃ）前記リガンドに結合した細胞を収集するステップ；および
ｄ）ステップｃ）において収集した細胞から、前記ａｂＴＣＲをコードする配列を単離し、それによって、前記標的抗原に対して特異的なａｂＴＣＲを同定するステップ
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１５年１０月２３日に出願された米国仮出願第６２／２４５，９４４号、２０１６年３月７日に出願された米国仮出願第６２／３０４，９１８号、２０１６年６月３日に出願された米国仮出願第６２／３４５，６４９号、および２０１６年８月１日に出願された米国仮出願第６２／３６９，６９４号の優先権を主張し、これらすべてが、全体において参照によって組み込まれる。
【０００２】
本発明は、抗体／Ｔ細胞受容体キメラ構築物、ならびに疾患を処置および診断することを含むその使用に関する。
【０００３】
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出の内容は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる：コンピューター可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７５００４２０００３４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、データ記録：２０１６年１０月２０日、サイズ：１０４ＫＢ）。
【背景技術】
【０００４】
Ｔ細胞媒介性免疫は、ウイルス、細菌、寄生生物感染症または悪性細胞を排除するために、抗原（Ａｇ）特異的Ｔリンパ球を発達させる適応性のプロセスである。これには、自己抗原の異常な認識もまた関与し、自己免疫性炎症性疾患をもたらし得る。Ｔリンパ球のＡｇ特異性は、Ａｇ提示細胞（ＡＰＣ）上の主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子によって提示される独特の抗原性ペプチドの、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介した認識に基づく（Broereら、Principles  of  Immunopharmacology、２０１１年）。各Ｔリンパ球は、胸腺における成熟化の際の発生的選択の結果として、細胞表面上に独特のＴＣＲを発現する。ＴＣＲは、αβヘテロ二量体またはγδヘテロ二量体のいずれかとして２つの形態で存在する。Ｔ細胞は、細胞表面上に、αβ形態またはγδ形態のいずれかのＴＣＲを発現する。４つの鎖α／β／γ／δは全て、高度に多型の「免疫グロブリン可変領域」様のＮ末端ドメインおよび「免疫グロブリン定常領域」様の第２のドメインからなる特徴的な細胞外構造を有する。これらのドメインの各々は、特徴的なドメイン内ジスルフィド架橋を有する。定常領域は、細胞膜に対して近位であり、接続ペプチド、膜貫通領域および短い細胞質テイルが後に続く。ヘテロ二量体ＴＣＲの２つの鎖間の共有結合は、細胞外定常ドメインと膜貫通領域とを架橋する短い接続ペプチド配列内に位置する、対応する位置において対形成したＴＣＲ鎖のシステイン残基と共にジスルフィド結合を形成するシステイン残基によって形成される（The  T  cell  Receptor  Factsbook、２００１年）。
【０００５】
αβＴＣＲおよびγδＴＣＲは、非多型の膜結合型ＣＤ３タンパク質と会合して、ＴＣＲヘテロ二量体と３つの二量体シグナル伝達モジュールＣＤ３δ／ε、ＣＤ３γ／εおよびＣＤ３ζ／ζまたはζ／ηとからなる、機能的な八量体ＴＣＲ−ＣＤ３複合体を形成する。各サブユニットの膜貫通ドメイン中のイオン化可能な残基は、複合体を一緒に保持する相互作用の極性ネットワークを形成する。Ｔ細胞活性化のために、ＴＣＲのＮ末端可変領域は、標的細胞の表面上に提示されるペプチド／ＭＨＣ複合体を認識するが、ＣＤ３タンパク質は、シグナル伝達に関与する（Callら、Cell.  １１１巻（７号）：９６７〜７９頁、２００２年；The  T  cell  Receptor  Factsbook、２００１年）。
【０００６】
従来型のＴＣＲとも呼ばれるαβＴＣＲは、ほとんどのリンパ球上で発現され、グリコシル化された多型のα鎖およびβ鎖からなる。異なるαβＴＣＲは、その寸法および形状が比較的一定であるＭＨＣ  ＩＩ（ＡＰＣ細胞表面上で主に発現される）およびＭＨＣ  Ｉ（全ての有核細胞上で発現される）分子の表面中に包埋された異なるペプチド間を識別できる。γδＴＣＲは、αβＴＣＲに構造的に類似しているが、ＭＨＣ提示から独立した様式で、炭水化物保有、ヌクレオチド保有またはリン光体保有抗原を認識する（The  T  cell  Receptor  Factsbook、２００１年；Girardiら、J.  Invest.  Dermatol.  １２６巻（１号）：２５〜３１頁、２００６年；Hayesら、Immunity.  １６巻（６号）：８２７〜３８頁、２００２年）。
【０００７】
細胞表面タンパク質は、細胞性タンパク質のごく一部を構成するにすぎず、これらのタンパク質のほとんどは、腫瘍特異的ではない。対照的に、変異したまたは発癌性腫瘍関連タンパク質は、典型的には、細胞内に位置し、核、細胞質または分泌性である。ほとんどの細胞内タンパク質は、タンパク質異化およびＭＨＣ分子による提示の通常のプロセスの一部として、細胞表面上に曝露される。細胞内タンパク質は、プロテアソームまたはエンドソーム／リソソームによって通常分解され、得られた特異的ペプチド断片は、ＭＨＣクラスＩ／ＩＩ分子に結合する。これらのペプチド／ＭＨＣ複合体は、細胞表面でディスプレイされ、この場所で、ペプチド／ＭＨＣ  ＴＣＲ相互作用を介したＴ細胞認識のための標的を提供する（Scheinbergら、Oncotarget.  ４巻（５号）：６４７〜８頁、２０１３年；Cheeverら、Clin.  Cancer  Res.  １５巻（１７号）：５３２３〜３７頁、２００９年）。
【０００８】
過去二十年間に、多数の腫瘍抗原の同定と組み合わせた、免疫学および腫瘍生物学における基礎的な進歩は、細胞ベースの免疫療法の分野における顕著な進行をもたらしている。Ｔ細胞療法は、細胞ベースの免疫療法の分野において大きな空間を占め、自家のｅｘ  ｖｉｖｏで拡大増殖されたＴ細胞を患者に移入することによってがんを処置することを目的とし、いくらかの著しい抗腫瘍応答を生じている（Blattmanら、Science.  ３０５巻（５６８１号）：２００〜５頁、２００４年）。例えば、ｅｘ  ｖｉｖｏで拡大増殖された天然に存在する腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の投与は、肝臓、肺、軟部組織および脳を含む複数の部位における巨大な浸潤性腫瘍を含むメラノーマ患者において、５０〜７０％の範囲の客観的奏効率を媒介した（Rosenbergら、Nat.  Rev.  Cancer.  ８巻（４号）：２９９〜３０８頁、２００８年；Dudley  MEら、J.  Clin.  Oncol.  ２３巻（１０号）：２３４６〜５７頁、２００５年）。
【０００９】
ＴＩＬ療法の広範な適用に対する主要な制限は、抗腫瘍能を有するヒトＴ細胞を生成することにおける困難である。代替的アプローチとして、外因性の高親和性ＴＣＲが、Ｔ細胞操作を介して患者の正常な自家Ｔ細胞中に導入され得る。リンパ枯渇患者中へのこれらの細胞の養子移入は、メラノーマ、結腸直腸癌および滑膜肉腫などのがんにおいてがん退縮を媒介することが示されている（Kunert  Rら、Front.  Immunol.  ４巻：３６３頁、２０１３年）。滑膜肉腫に対する抗ＮＹ−ＥＳＯ−１  ＴＣＲを使用する最近の第Ｉ相臨床試験は、６６％の奏効率を報告し、完全奏功が、Ｔ細胞療法を受けている患者の１人において達成された（Robbins  PFら、Clin.  Cancer  Res.  ２１巻（５号）：１０１９〜２７頁、２０１５年）。
【００１０】
ＴＣＲ操作されたＴ細胞療法の利点の１つは、プロセシングされＭＨＣ提示を介して細胞表面に送達される潜在的細胞内腫瘍特異的タンパク質のアレイ全体を標的化できることである。さらに、ＴＣＲは、高度に感受性であり、ごくわずかな抗原性ペプチド／ＭＨＣ分子によって活性化され得、これは次に、サイトカイン分泌、Ｔ細胞増殖、および規定された標的細胞の細胞溶解を含む細胞溶解性Ｔ細胞応答を誘発し得る。したがって、抗体または小分子療法と比較すると、ＴＣＲ操作されたＴ細胞は、数少ないコピーの標的細胞内抗原を有する標的細胞を死滅させるそれらの能力にとって特に役に立つ（Kunert  Rら、Front.  Immunol.  ４巻：３６３頁、２０１３年）。
【００１１】
しかし、ハイブリドーマまたはディスプレイテクノロジーを介して主に発見された治療抗体とは異なり、標的特異的ＴＣＲの同定は、患者Ｔ細胞由来の標的ペプチド／ＭＨＣ特異的ＴＣＲクローンの確立、および最適な標的抗原結合親和性を有する正しいα−β鎖の組合せについてのスクリーニングを必要とする。非常にしばしば、ファージ／酵母ディスプレイが、ＴＣＲの標的結合親和性をさらに増強するために、患者Ｔ細胞由来のＴＣＲのクローニング後に用いられる。プロセス全体は、多くの領域における専門知識を必要とし、時間がかかる（Kobayashi  Eら、Oncoimmunology.  ３巻（１号）：ｅ２７２５８頁、２０１４年）。ＴＣＲ発見プロセスにおける困難は、ＴＣＲ操作されたＴ細胞療法の広範な適用を大きく妨害してきた。これは、特に、腫瘍細胞上で過剰発現されるが健康な細胞上でも発現される抗原に対するＴＣＲ、またはオフ−ターゲットペプチド／ＭＨＣ複合体を認識するＴＣＲによる、処置関連毒性によっても妨げられてきた（Rosenberg  SAら、Science.  ３４８巻（６２３０号）：６２〜８頁、２０１５年）。
【００１２】
標的化されたがん免疫療法にＴ細胞を関与させるための異なるアプローチが、近年開発されている。この新しいアプローチは、キメラ抗原受容体Ｔ細胞療法（ＣＡＲ−Ｔ）と呼ばれる。これは、モノクローナル抗体の精巧な標的化特異性を、細胞傷害性Ｔ細胞によりもたらされる強力な細胞傷害性および長期間持続と合体させる。ＣＡＲは、細胞表面抗原を認識する細胞外ドメイン、膜貫通領域、および細胞内シグナル伝達ドメインから構成される。細胞外ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）に融合されたモノクローナル抗体の重鎖および軽鎖由来の抗原結合結合可変領域からなる。細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）、例えば、ＣＤ３ζまたはＦｃＲγ由来のもの、および１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ２８、４−１ＢＢまたはＯＸ４０由来のものを含む（Barrett  DMら、Annu.  Rev.  Med.  ６５巻：３３３〜４７頁、２０１４年；Davila  MLら、Oncoimmunology.  １巻（９号）：１５７７〜１５８３頁、２０１２年）。Ｔ細胞表面上にグラフトされたＣＡＲによる標的抗原の結合は、ＴＣＲ−ペプチド／ＭＨＣ複合体相互作用とは独立して、Ｔ細胞エフェクター機能を誘発できる。したがって、ＣＡＲを備えたＴ細胞は、Ｔ細胞上のＴＣＲのＭＨＣ型とは一致しないが標的細胞表面抗原を発現するものを含む、広範な種々の細胞を攻撃するように再指向され得る。このアプローチは、ＭＨＣ拘束されたＴＣＲ認識の制約を克服し、抗原提示またはＭＨＣ分子発現における機能障害を介した腫瘍エスケープを回避する。臨床試験は、神経芽細胞腫（Louis  CUら、Blood.  １１８巻（２３号）：６０５０〜６０５６頁、２０１１年）、Ｂ−ＡＬＬ（Maude,  SLら、New  England  Journal  of  Medicine  ３７１巻：１６号：１５０７〜１５１７頁、２０１４年）、ＣＬＬ（Brentjens,  RJら  Blood  １１８巻：１８号：４８１７〜４８２８頁、２０１１年）およびＢ細胞リンパ腫（Kochenderfer,  JNら  Blood  １１６巻：２０号：４０９９〜４１０２頁、２０１０年）において、ＣＡＲ−Ｔ療法の臨床的に有意な抗腫瘍活性を示している。１つの研究では、ＣＤ１９−ＣＡＲ  Ｔ療法で処置されたＢ−ＡＬＬを有する３０人の患者において、９０％の完全寛解率が報告された（Maude,  SLら、上記）。
【００１３】
全てではないにしても大多数のこれまでに研究されたＣＡＲは、高い細胞表面発現を有する腫瘍抗原に指向されている。全ての公知の腫瘍特異的抗原の９５％に相当する低コピー数の細胞表面腫瘍抗原および細胞内腫瘍抗原を標的化するために、より強力で有効な操作された細胞療法を開発することが必要である（Cheeverら、Clin.  Cancer  Res.  １５巻（１７号）：５３２３〜３７頁、２００９年）。
Ｔ細胞受容体エフェクター機能を有する、抗体特異性を有するキメラ受容体分子を操作するためのいくつかの試みが行われてきた。例えば、Kuwana,  Yら、Biochem.  Biophys.  Res.  Commun.  １４９巻（３号）：９６０〜９６８頁、１９８７年；Gross,  Gら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA.  ８６巻：１００２４〜１００２８頁、１９８９年；Gross,  GおよびEshhar,  Z、FASEB  J.  ６巻（１５号）：３３７０〜３３７８頁、１９９２年；米国特許第７，７４１，４６５号を参照のこと。今日まで、これらのキメラ受容体の中には、臨床的使用に採用されたものは存在せず、ヒトＴ細胞において改善された発現および機能性を有する抗体−ＴＣＲキメラ受容体の新規設計が必要とされている。
本明細書で言及される全ての刊行物、特許、特許出願および公開された特許出願の開示は、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】米国特許第７，７４１，４６５号明細書
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Broereら、Principles  of  Immunopharmacology、２０１１年
【非特許文献２】The  T  cell  Receptor  Factsbook、２００１年
【非特許文献３】Callら、Cell.  １１１巻（７号）：９６７〜７９頁、２００２年
【非特許文献４】Girardiら、J.  Invest.  Dermatol.  １２６巻（１号）：２５〜３１頁、２００６年
【非特許文献５】Hayesら、Immunity.  １６巻（６号）：８２７〜３８頁、２００２年
【非特許文献６】Scheinbergら、Oncotarget.  ４巻（５号）：６４７〜８頁、２０１３年
【非特許文献７】Cheeverら、Clin.  Cancer  Res.  １５巻（１７号）：５３２３〜３７頁、２００９年
【非特許文献８】Blattmanら、Science.  ３０５巻（５６８１号）：２００〜５頁、２００４年
【非特許文献９】Rosenbergら、Nat.  Rev.  Cancer.  ８巻（４号）：２９９〜３０８頁、２００８年
【非特許文献１０】Dudley  MEら、J.  Clin.  Oncol.  ２３巻（１０号）：２３４６〜５７頁、２００５年
【非特許文献１１】Kunert  Rら、Front.  Immunol.  ４巻：３６３頁、２０１３年
【非特許文献１２】Robbins  PFら、Clin.  Cancer  Res.  ２１巻（５号）：１０１９〜２７頁、２０１５年
【非特許文献１３】Kunert  Rら、Front.  Immunol.  ４巻：３６３頁、２０１３年
【非特許文献１４】Kobayashi  Eら、Oncoimmunology.  ３巻（１号）：ｅ２７２５８頁、２０１４年
【非特許文献１５】Rosenberg  SAら、Science.  ３４８巻（６２３０号）：６２〜８頁、２０１５年
【非特許文献１６】Barrett  DMら、Annu.  Rev.  Med.  ６５巻：３３３〜４７頁、２０１４年
【非特許文献１７】Davila  MLら、Oncoimmunology.  １巻（９号）：１５７７〜１５８３頁、２０１２年
【非特許文献１８】Louis  CUら、Blood.  １１８巻（２３号）：６０５０〜６０５６頁、２０１１年）、Ｂ−ＡＬＬ（Maude,  SLら、New  England  Journal  of  Medicine  ３７１巻：１６号：１５０７〜１５１７頁、２０１４年
【非特許文献１９】Brentjens,  RJら  Blood  １１８巻：１８号：４８１７〜４８２８頁、２０１１年
【非特許文献２０】Kochenderfer,  JNら  Blood  １１６巻：２０号：４０９９〜４１０２頁、２０１０年
【非特許文献２１】Cheeverら、Clin.  Cancer  Res.  １５巻（１７号）：５３２３〜３７頁、２００９年
【非特許文献２２】Kuwana,  Yら、Biochem.  Biophys.  Res.  Commun.  １４９巻（３号）：９６０〜９６８頁、１９８７年
【非特許文献２３】Gross,  Gら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA.  ８６巻：１００２４〜１００２８頁、１９８９年
【非特許文献２４】Gross,  GおよびEshhar,  Z、FASEB  J.  ６巻（１５号）：３３７０〜３３７８頁、１９９２年
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本出願は、一態様では、Ｔ細胞受容体モジュールに融合した抗体部分（例えば、Ｆａｂ様抗原結合結合モジュール）を含む構築物（例えば、単離された構築物）を提供する（前記構築物は、本明細書で「抗体−ＴＣＲキメラ分子」または「ａｂＴＣＲ」とも呼ぶ）。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合結合モジュールと、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）とを含む。一部の実施形態では、標的抗原は、ペプチドとＭＨＣタンパク質（例えば、ＭＨＣクラスＩタンパク質またはＭＨＣクラスＩＩタンパク質）とを含む複合体である。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。
【００１７】
一部の実施形態では、標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）であって、ａ）ＶＨおよびＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合結合ドメインと第１のＴＣＲサブユニットの第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴ細胞受容体ドメイン（ＴＣＲＤ）とを含む第１のポリペプチド鎖；ならびにｂ）ＶＬおよびＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合結合ドメインと第２のＴＣＲサブユニットの第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み、第１の抗原結合結合ドメインのＶＨおよびＣＨ１ドメインと第２の抗原結合結合ドメインのＶＬおよびＣＬドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を形成する、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合結合モジュールは、第１のポリペプチド鎖中のＣＨ１ドメイン中の残基と第２のポリペプチド鎖中のＣＬドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１の抗原結合結合ドメインと第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーをさらに含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、第２の抗原結合結合ドメインと第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーをさらに含む。一部の実施形態では、第１のペプチドリンカーおよび／または第２のペプチドリンカーは個々に、約５〜約５０アミノ酸長である。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、ペプチドと主要組織適合複合体（ＭＨＣ）タンパク質とを含む複合体である。
【００１８】
一部の実施形態では、標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲであって、ａ）ＶＨ抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲサブユニットの第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）ＶＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲサブユニットの第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み、第１の抗原結合ドメインのＶＨドメインと第２の抗原結合ドメインのＶＬドメインとが、標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を形成し、標的抗原が、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む複合体である、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーをさらに含み、第２のポリペプチド鎖は、第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体サブユニット由来の定常ドメインまたはその断片を個々に含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４もしくはＣＬ抗体ドメイン、またはそれらの断片を個々に含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、Ｃα、Ｃβ、ＣγもしくはＣδ  ＴＣＲドメイン、またはそれらの断片を個々に含む。
【００１９】
一部の実施形態では、上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかによれば、第１のＴＣＲＤは、第１の膜貫通ドメインのＮ末端側に、ＴＣＲサブユニットの第１の接続ペプチドまたはその断片をさらに含む。第２のＴＣＲＤは、第２の膜貫通ドメインのＮ末端側に、ＴＣＲサブユニットの第２の接続ペプチドまたはその断片をさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、第１の接続ペプチド中の残基と第２の接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１の膜貫通ドメインのＣ末端側に、ＴＣＲ細胞内配列を含む第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、第２のＴＣＲＤは、第２の膜貫通ドメインのＣ末端側に、ＴＣＲ細胞内配列を含む第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭの平衡解離定数（Ｋｄ）で標的抗原に結合する。一部の実施形態では、ＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される。
【００２０】
一部の実施形態では、上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかによれば、第１のポリペプチド鎖は、第１の膜貫通ドメインのＣ末端側に、共刺激細胞内シグナル伝達配列を含む第１のアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、第２の膜貫通ドメインのＣ末端側に、共刺激細胞内シグナル伝達配列を含む第２のアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１の抗原結合ドメインのＮ末端側に、第１のシグナル伝達ペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチド鎖は、第２の抗原結合ドメインのＮ末端側に、第２のシグナル伝達ペプチドをさらに含む。
【００２１】
一部の実施形態では、標的抗原がペプチドと主要組織適合複合体（ＭＨＣ）タンパク質とを含む複合体である上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかによれば、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。
【００２２】
一部の実施形態では、上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかによれば、ａ）第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲα鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲβ鎖であり；ｂ）第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲβ鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲα鎖であり；ｃ）第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲγ鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲδ鎖であり；またはｄ）第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲδ鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲγ鎖である。
【００２３】
一部の実施形態では、上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかによれば、ａｂＴＣＲの第１および第２のポリペプチド鎖をコードする核酸が提供される。
【００２４】
一部の実施形態では、上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかによれば、ａｂＴＣＲとＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールとを含む複合体が提供される。一部の実施形態では、複合体は、ａｂＴＣＲとＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζとを含む八量体である。
【００２５】
一部の実施形態では、上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかによれば、ａｂＴＣＲをその表面上に提示するエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ａｂＴＣＲをコードする核酸を含む。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、第１のＴＣＲサブユニットおよび／または第２のＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、一部の実施形態では、ａ）第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲγであり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲδであり；またはｂ）第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲδであり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲγであり；エフェクター細胞はαβＴ細胞である。一部の実施形態では、ａ）第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲγであり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲδであり；またはｂ）第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲδであり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲγであり；エフェクター細胞はαβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、第１の内因性ＴＣＲサブユニットおよび／または第２の内因性ＴＣＲサブユニットの発現を遮断するまたは減少させるように改変されている。例えば、一部の実施形態では、ａ）第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲαであり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲβであり；またはｂ）第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲβであり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲαであり；エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはＴＣＲβの発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞である。一部の実施形態では、ａ）第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲγであり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲδであり；またはｂ）第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲδであり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲγであり；エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはＴＣＲδの発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。
【００２６】
一部の実施形態では、上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかによれば、ａｂＴＣＲをその表面上に提示するエフェクター細胞であって、Ｔ細胞であるエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【００２７】
一部の実施形態では、上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかによれば、ａｂＴＣＲをその表面上に提示するエフェクター細胞であって、ａ）第１のプロモーターの制御下のａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列を含む第１のベクターと、ｂ）第２のプロモーターの制御下のａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列を含む第２のベクターとを含む、エフェクター細胞が提供される。
【００２８】
一部の実施形態では、上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかによれば、ａｂＴＣＲをその表面上に提示するエフェクター細胞であって、ａ）第１のプロモーターの制御下のａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列と；ｂ）第２のプロモーターの制御下のａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列とを含むベクターを含む、エフェクター細胞が提供される。
【００２９】
一部の実施形態では、上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかによれば、ａｂＴＣＲをその表面上に提示するエフェクター細胞であって、ａ）ａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列と；ａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列とを含むベクターを含み、第１および第２の核酸配列が、単一のプロモーターの制御下にある、エフェクター細胞が提供される。
【００３０】
一部の実施形態では、上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかによれば、ａｂＴＣＲをその表面上に提示するエフェクター細胞であって、ａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖の発現が、ａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖の発現とは、２倍よりも大きく異なる、エフェクター細胞が提供される。
【００３１】
一部の実施形態では、標的抗原を提示する標的細胞を死滅させる方法であって、標的細胞を、上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかにしたがうａｂＴＣＲを発現するエフェクター細胞と接触させるステップを含み、ａｂＴＣＲが、標的抗原に特異的に結合する、方法が提供される。
【００３２】
一部の実施形態では、標的抗原を提示する標的細胞を死滅させる方法であって、標的細胞を、標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを含むエフェクターαβＴ細胞と接触させるステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）ＶＨ抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲサブユニットの第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）ＶＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲサブユニットの第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み、第１の抗原結合ドメインのＶＨドメインと第２の抗原結合ドメインのＶＬドメインとが、標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を形成し、第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγであり、第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδであり、または第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδであり、第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγである、方法が提供される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーをさらに含み、第２のポリペプチド鎖は、第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体サブユニット由来の定常ドメインまたはその断片を個々に含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４もしくはＣＬ抗体ドメイン、またはそれらの断片を個々に含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、Ｃα、Ｃβ、ＣγもしくはＣδＴＣＲドメイン、またはそれらの断片を個々に含む。
【００３３】
一部の実施形態では、上記標的細胞を死滅させる方法のいずれかによれば、接触させるステップはｉｎ  ｖｉｖｏである。一部の実施形態では、接触させるステップはｉｎ  ｖｉｔｒｏである。
【００３４】
一部の実施形態では、上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかにしたがうａｂＴＣＲと薬学的に許容されるキャリアとを含む医薬組成物が提供される。一部の実施形態では、上記実施形態のいずれかにしたがうａｂＴＣＲをコードする核酸と薬学的に許容されるキャリアとを含む医薬組成物が提供される。一部の実施形態では、上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかにしたがうａｂＴＣＲを発現するエフェクター細胞と薬学的に許容されるキャリアとを含む医薬組成物が提供される。
【００３５】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原関連疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかにしたがうａｂＴＣＲを発現するエフェクター細胞を含む医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。
【００３６】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原関連疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを含むエフェクターαβ  Ｔ細胞を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）ＶＨ抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲサブユニットの第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）ＶＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲサブユニットの第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み、第１の抗原結合ドメインのＶＨドメインと第２の抗原結合ドメインのＶＬドメインとが、標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を形成し、第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγであり、第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδであり、または第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδであり、第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγである、方法が提供される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーをさらに含み、第２のポリペプチド鎖は、第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体サブユニット由来の定常ドメインまたはその断片を個々に含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４もしくはＣＬ抗体ドメイン、またはそれらの断片を個々に含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、Ｃα、Ｃβ、ＣγもしくはＣδＴＣＲドメイン、またはそれらの断片を個々に含む。
【００３７】
一部の実施形態では、上記標的抗原関連疾患を処置する方法のいずれかによれば、標的抗原関連疾患はがんである。一部の実施形態では、がんは、副腎皮質癌、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞癌、結腸直腸がん、食道がん、グリア芽細胞腫、グリオーマ、肝細胞癌、頭頸部がん、腎臓がん、リンパ腫、白血病、肺がん、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓がん、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽細胞腫、卵巣がん、前立腺がん、肉腫、胃がん、子宮がんおよび甲状腺がんからなる群から選択される。一部の実施形態では、標的抗原関連疾患は、ウイルス感染症である。一部の実施形態では、ウイルス感染症は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１（ＨＴＬＶ−１）、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）からなる群から選択されるウイルスによって引き起こされる。
【００３８】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原関連疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかにしたがうａｂＴＣＲをコードする核酸を含む医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。
【００３９】
一部の実施形態では、上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかにしたがうａｂＴＣＲを発現するエフェクター細胞について不均一な細胞集団を富化する方法であって、ａ）不均一な細胞集団を、標的抗原またはその中に含まれる１つもしくは複数のエピトープを含むリガンドと接触させて、リガンドに結合したエフェクター細胞の複合体を形成するステップ；およびｂ）不均一な細胞集団から複合体を分離し、それによって、エフェクター細胞について富化された細胞集団を生成するステップを含む方法が提供される。
【００４０】
一部の実施形態では、上記ａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）のいずれかにしたがう複数のａｂＴＣＲをコードする配列を含む、核酸ライブラリーが提供される。
【００４１】
一部の実施形態では、標的抗原に対して特異的なａｂＴＣＲをコードする配列について、上記実施形態のいずれかにしたがう核酸ライブラリーをスクリーニングする方法であって、ａ）ａｂＴＣＲが複数の細胞の表面上で発現されるように、核酸ライブラリーを複数の細胞中に導入するステップ；ｂ）複数の細胞を、標的抗原またはその中に含まれる１つもしくは複数のエピトープを含むリガンドと共にインキュベートするステップ；ｃ）リガンドに結合した細胞を収集するステップ；およびｄ）ステップｃ）において収集した細胞から、ａｂＴＣＲをコードする配列を単離し、それによって、標的抗原に対して特異的なａｂＴＣＲを同定するステップを含む方法が提供される。
【００４２】
本明細書に記載される構築物のいずれかを作製する方法、本明細書に記載される方法に適切な製造物品およびキットもまた提供される。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１Ａ】図１Ａは、種々のａｂＴＣＲ構築物設計の概略図である（ａｂＴＣＲ−３、ａｂＴＣＲ−４、ａｂＴＣＲ−５およびａｂＴＣＲ−６）。
【００４４】
【図１Ｂ】図１Ｂは、ａｂＴＣＲ構築物設計の企図するバリエーションを示す図である。
【００４５】
【図２】図２は、ＴＣＲ−ＣＤ３複合体のアセンブリについての従来のモデルを示す図である。
【００４６】
【図３】図３は、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲ−３、−４、−５、−６または−６ＭＤ構築物を用いて個々に形質導入されたＪ．ＲＴ３−Ｔ３．５またはＪｕｒｋａｔ細胞由来の可溶化物の、抗ＦＬＡＧ（ＴＣＲα−およびＴＣＲγ−由来キメラサブユニット）または抗ＨＡ抗体（ＴＣＲβ−およびＴＣＲδ−由来キメラサブユニット）を用いて染色されたウエスタンブロット分析を示す図である。
【００４７】
【図４Ａ】図４Ａは、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲ−３、−４、−５、−６または−６ＭＤ構築物を用いて個々に形質導入されたＪ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞における表面ＣＤ３ε発現のフローサイトメトリー分析を示す図である；細胞は、抗ＣＤ３ε抗体を用いて染色された。
【００４８】
【図４Ｂ】図４Ｂは、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲ−３、−４、−５、−６または−６ＭＤ構築物を用いて個々に形質導入されたＪ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞における表面ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体結合のフローサイトメトリー分析を示す図である；細胞は、フィコエリトリン（ＰＥ）−標識ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体を用いて染色された。
【００４９】
【図４Ｃ】図４Ｃは、抗体によって認識される抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲ−３、−４、−５、−６または−６ＭＤ構築物を用いて個々に形質導入されたＪ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞における表面抗イディオタイプ抗体結合のフローサイトメトリー分析を示す図である；細胞は、ａｂＴＣＲ構築物の抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分に対する抗イディオタイプ抗体を用いて染色された。
【００５０】
【図５Ａ】図５Ａは、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲ−３、−４、−５、−６または−６ＭＤ構築物を用いて個々に形質導入されたＪｕｒｋａｔ細胞における表面抗ＴＣＲα／β抗体結合のフローサイトメトリー分析を示す図である；細胞は、抗ＴＣＲα／β抗体を用いて染色された。
【００５１】
【図５Ｂ】図５Ｂは、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲ−３、−４、−５、−６または−６ＭＤ構築物を用いて個々に形質導入されたＪｕｒｋａｔ細胞における表面ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体結合のフローサイトメトリー分析を示す図である；細胞は、ＰＥ標識されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体を用いて染色された。
【００５２】
【図５Ｃ】図５Ｃは、抗体によって認識される抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲ−３、−４、−５、−６または−６ＭＤ構築物を用いて個々に形質導入されたＪｕｒｋａｔ細胞における表面抗イディオタイプ抗体結合のフローサイトメトリー分析を示す図である；細胞は、ａｂＴＣＲ構築物の抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分に対する抗イディオタイプ抗体を用いて染色された。
【００５３】
【図６】図６は、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲ−６またはａｂＴＣＲ−６ＭＤ構築物を用いて個々に形質導入されたＪ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞におけるａｂＴＣＲキメラとのＣＤ３εの共発現のフローサイトメトリー分析を示す図である；細胞は、抗ＣＤ３ε抗体およびＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体を用いて共染色された。
【００５４】
【図７】図７Ａは、ａｂＴＣＲ形質導入末梢血リンパ球のフローサイトメトリー分析を示す図である；細胞は、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤ構築物を用いて形質導入され、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体およびＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体を用いて共染色された。点線四角は、図７ＢのＣＤ４／ＣＤ８プロットに示される細胞についての四量体＋集団ゲーティングを示す。図７Ｂは、偽形質導入または、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤ構築物を用いて形質導入され、抗ＣＤ４および抗ＣＤ８抗体を用いて共染色された末梢血リンパ球上のＣＤ４およびＣＤ８発現のフローサイトメトリー分析を示す図である；ＣＤ４およびＣＤ８発現は、未ゲーティング細胞（上の２パネル）または四量体＋ゲーティング細胞（下パネル）について示されている。
【００５５】
【図８】図８は、外因性ａｂＴＣＲ鎖のＣＤ３複合体との会合のウエスタンブロット分析を示す図である；ジギトニン可溶化物は、偽形質導入または、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤを用いて形質導入された初代Ｔ細胞から作製された；可溶化物または抗ＦＬＡＧ免疫沈降物は、抗ＦＬＡＧ、抗ＣＤ３δ、抗ＣＤ３ε、抗ＣＤ３γまたは抗ＣＤ３ζ抗体を用いてブロットされた。
【００５６】
【図９Ａ】図９Ａは、両方とも同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分可変ドメインを有するＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤを用いて形質導入された後の初代Ｔ細胞における形質導入効率を示す図である；細胞は、ＰＥ標識されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体を用いて染色された。
【００５７】
【図９Ｂ】図９Ｂは、両方とも同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分可変ドメインを有するＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤ構築物のいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞によって媒介される、がん細胞株ＨｅｐＧ２、ＳＫ−ＨＥＰ−１およびＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧの殺滅を示すグラフである。
【００５８】
【図１０】図１０は、標的細胞との共培養後のａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞の脱顆粒のフローサイトメトリー分析を示す図である；Ｔ細胞は、両方とも同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分可変ドメインを有するＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入された。標的細胞ＨｅｐＧ２、ＳＫ−ＨＥＰ−１およびＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧとの共培養後の形質導入された細胞の、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体、抗ＣＤ８抗体または抗ＣＤ１０７ａ抗体を用いた染色が示されている。
【００５９】
【図１１Ａ】図１１Ａは、ＨｅｐＧ２細胞との共培養後の偽形質導入されたＴ細胞または、両方とも同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分可変ドメインを有するＣＡＲもしくはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞によるサイトカインパネルの分泌レベルを示す図である。
【００６０】
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、ＳＫ−ＨＥＰ−１またはＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ細胞のいずれかと共培養された、偽形質導入されたＴ細胞または、両方とも同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分可変ドメインを有するＣＡＲもしくはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞によるサイトカインパネルの分泌レベルを示す図である。
【００６１】
【図１２Ａ】図１２Ａ〜１２Ｈは、標的がん細胞の存在を有してまたは有さずにサイトカイン産生についての形質導入Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析を示す図である；Ｔ細胞は、両方とも同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分可変ドメインを有するＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入され、ＳＫ−ＨＥＰ−１、ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧまたはＨｅｐＧ２細胞のいずれかと共培養された；次に細胞は、ＰＥ標識されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体、抗ＣＤ４抗体ならびに抗ＴＮＦ−α抗体（１２Ａおよび１２Ｂ）、抗ＩＦＮγ抗体（１２Ｃおよび１２Ｄ）、抗ＩＬ−２抗体（１２Ｅおよび１２Ｆ）または抗ＩＬ−６抗体（１２Ｇおよび１２Ｈ）の１つを用いて共染色された。示される集団は、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体＋細胞でゲーティングされた。
【００６２】
【図１２Ｂ】図１２Ａ〜１２Ｈは、標的がん細胞の存在を有してまたは有さずにサイトカイン産生についての形質導入Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析を示す図である；Ｔ細胞は、両方とも同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分可変ドメインを有するＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入され、ＳＫ−ＨＥＰ−１、ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧまたはＨｅｐＧ２細胞のいずれかと共培養された；次に細胞は、ＰＥ標識されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体、抗ＣＤ４抗体ならびに抗ＴＮＦ−α抗体（１２Ａおよび１２Ｂ）、抗ＩＦＮγ抗体（１２Ｃおよび１２Ｄ）、抗ＩＬ−２抗体（１２Ｅおよび１２Ｆ）または抗ＩＬ−６抗体（１２Ｇおよび１２Ｈ）の１つを用いて共染色された。示される集団は、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体＋細胞でゲーティングされた。
【００６３】
【図１２Ｃ】図１２Ａ〜１２Ｈは、標的がん細胞の存在を有してまたは有さずにサイトカイン産生についての形質導入Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析を示す図である；Ｔ細胞は、両方とも同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分可変ドメインを有するＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入され、ＳＫ−ＨＥＰ−１、ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧまたはＨｅｐＧ２細胞のいずれかと共培養された；次に細胞は、ＰＥ標識されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体、抗ＣＤ４抗体ならびに抗ＴＮＦ−α抗体（１２Ａおよび１２Ｂ）、抗ＩＦＮγ抗体（１２Ｃおよび１２Ｄ）、抗ＩＬ−２抗体（１２Ｅおよび１２Ｆ）または抗ＩＬ−６抗体（１２Ｇおよび１２Ｈ）の１つを用いて共染色された。示される集団は、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体＋細胞でゲーティングされた。
【００６４】
【図１２Ｄ】図１２Ａ〜１２Ｈは、標的がん細胞の存在を有してまたは有さずにサイトカイン産生についての形質導入Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析を示す図である；Ｔ細胞は、両方とも同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分可変ドメインを有するＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入され、ＳＫ−ＨＥＰ−１、ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧまたはＨｅｐＧ２細胞のいずれかと共培養された；次に細胞は、ＰＥ標識されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体、抗ＣＤ４抗体ならびに抗ＴＮＦ−α抗体（１２Ａおよび１２Ｂ）、抗ＩＦＮγ抗体（１２Ｃおよび１２Ｄ）、抗ＩＬ−２抗体（１２Ｅおよび１２Ｆ）または抗ＩＬ−６抗体（１２Ｇおよび１２Ｈ）の１つを用いて共染色された。示される集団は、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体＋細胞でゲーティングされた。
【００６５】
【図１２Ｅ】図１２Ａ〜１２Ｈは、標的がん細胞の存在を有してまたは有さずにサイトカイン産生についての形質導入Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析を示す図である；Ｔ細胞は、両方とも同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分可変ドメインを有するＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入され、ＳＫ−ＨＥＰ−１、ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧまたはＨｅｐＧ２細胞のいずれかと共培養された；次に細胞は、ＰＥ標識されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体、抗ＣＤ４抗体ならびに抗ＴＮＦ−α抗体（１２Ａおよび１２Ｂ）、抗ＩＦＮγ抗体（１２Ｃおよび１２Ｄ）、抗ＩＬ−２抗体（１２Ｅおよび１２Ｆ）または抗ＩＬ−６抗体（１２Ｇおよび１２Ｈ）の１つを用いて共染色された。示される集団は、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体＋細胞でゲーティングされた。
【図１２Ｆ】図１２Ａ〜１２Ｈは、標的がん細胞の存在を有してまたは有さずにサイトカイン産生についての形質導入Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析を示す図である；Ｔ細胞は、両方とも同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分可変ドメインを有するＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入され、ＳＫ−ＨＥＰ−１、ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧまたはＨｅｐＧ２細胞のいずれかと共培養された；次に細胞は、ＰＥ標識されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体、抗ＣＤ４抗体ならびに抗ＴＮＦ−α抗体（１２Ａおよび１２Ｂ）、抗ＩＦＮγ抗体（１２Ｃおよび１２Ｄ）、抗ＩＬ−２抗体（１２Ｅおよび１２Ｆ）または抗ＩＬ−６抗体（１２Ｇおよび１２Ｈ）の１つを用いて共染色された。示される集団は、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体＋細胞でゲーティングされた。
【図１２Ｇ】図１２Ａ〜１２Ｈは、標的がん細胞の存在を有してまたは有さずにサイトカイン産生についての形質導入Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析を示す図である；Ｔ細胞は、両方とも同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分可変ドメインを有するＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入され、ＳＫ−ＨＥＰ−１、ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧまたはＨｅｐＧ２細胞のいずれかと共培養された；次に細胞は、ＰＥ標識されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体、抗ＣＤ４抗体ならびに抗ＴＮＦ−α抗体（１２Ａおよび１２Ｂ）、抗ＩＦＮγ抗体（１２Ｃおよび１２Ｄ）、抗ＩＬ−２抗体（１２Ｅおよび１２Ｆ）または抗ＩＬ−６抗体（１２Ｇおよび１２Ｈ）の１つを用いて共染色された。示される集団は、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体＋細胞でゲーティングされた。
【図１２Ｈ】図１２Ａ〜１２Ｈは、標的がん細胞の存在を有してまたは有さずにサイトカイン産生についての形質導入Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析を示す図である；Ｔ細胞は、両方とも同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分可変ドメインを有するＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入され、ＳＫ−ＨＥＰ−１、ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧまたはＨｅｐＧ２細胞のいずれかと共培養された；次に細胞は、ＰＥ標識されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体、抗ＣＤ４抗体ならびに抗ＴＮＦ−α抗体（１２Ａおよび１２Ｂ）、抗ＩＦＮγ抗体（１２Ｃおよび１２Ｄ）、抗ＩＬ−２抗体（１２Ｅおよび１２Ｆ）または抗ＩＬ−６抗体（１２Ｇおよび１２Ｈ）の１つを用いて共染色された。示される集団は、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体＋細胞でゲーティングされた。
【００６６】
【図１３】図１３は、抗ＡＦＰ１５８  ａｂＴＣＲを用いて形質導入され、ＡＦＰ発現について陽性または陰性であるがん細胞株とインキュベートされたＣＤ４＋Ｔ細胞におけるサイトカイン発現の標的特異的活性化を示す図である。
【００６７】
【図１４】図１４は、両方とも同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分可変ドメインを有するＣＡＲまたはａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞における、抗原陽性または陰性標的細胞への曝露の際のＴ細胞消耗マーカーＰＤ−１、ＬＡＧ−３およびＴＩＭ−３のフローサイトメトリー分析を示す図である。
【００６８】
【図１５】図１５は、両方とも同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分可変ドメインを有するＣＡＲまたはａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞における、抗原陽性または陰性標的細胞への曝露の際のＴ細胞分化マーカーＣＤ２８、ＣＣＲ７およびグランザイムＢのフローサイトメトリー分析を示す図である。
【００６９】
【図１６ＡＢ】図１６Ａ〜１６Ｃは、両方とも同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分可変ドメインを有する抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ａｂＴＣＲ−６ＭＤまたは抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ａｂＴＣＲ−７のいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞の特徴付けを示す図である。図１６Ａは、形質導入Ｔ細胞の細胞増殖を示す。図１６Ｂは、ＦＬＡＧタグ付き構築物を検出するために抗ＦＬＡＧ抗体を使用するＴ細胞におけるａｂＴＣＲ−６ＭＤおよびａｂＴＣＲ−７の発現についてのウエスタンブロット分析を示す。ＣＤ３ζについての染色は負荷対照として含まれた。図１６Ｃは、ａｂＴＣＲ−６ＭＤまたはａｂＴＣＲ−７のいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞によって媒介されたＳＫ−ＨＥＰ−１およびＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ細胞の殺滅を示す。
【図１６Ｃ】図１６Ａ〜１６Ｃは、両方とも同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分可変ドメインを有する抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ａｂＴＣＲ−６ＭＤまたは抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ａｂＴＣＲ−７のいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞の特徴付けを示す図である。図１６Ａは、形質導入Ｔ細胞の細胞増殖を示す。図１６Ｂは、ＦＬＡＧタグ付き構築物を検出するために抗ＦＬＡＧ抗体を使用するＴ細胞におけるａｂＴＣＲ−６ＭＤおよびａｂＴＣＲ−７の発現についてのウエスタンブロット分析を示す。ＣＤ３ζについての染色は負荷対照として含まれた。図１６Ｃは、ａｂＴＣＲ−６ＭＤまたはａｂＴＣＲ−７のいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞によって媒介されたＳＫ−ＨＥＰ−１およびＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ細胞の殺滅を示す。
【００７０】
【図１７】図１７は、偽形質導入Ｔ細胞または、両方とも同じ抗ＣＤ１９結合部分可変ドメインを有するＣＡＲもしくはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞によって媒介されるがん細胞株ＪｅＫｏ−１、ＩＭ９、ＴＨＰ−１およびＪｕｒｋａｔの殺滅を示すグラフである。
【００７１】
【図１８Ａ】図１８Ａおよび１８Ｂは、ＪｅＫｏ−１、ＩＭ９、ＴＨＰ−１またはＪｕｒｋａｔ細胞株と共培養された、偽形質導入Ｔ細胞または両方とも同じ抗ＣＤ１９結合部分可変ドメインを有するＣＡＲもしくはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞によるサイトカインパネルの分泌レベルを示す図である。
【図１８Ｂ】図１８Ａおよび１８Ｂは、ＪｅＫｏ−１、ＩＭ９、ＴＨＰ−１またはＪｕｒｋａｔ細胞株と共培養された、偽形質導入Ｔ細胞または両方とも同じ抗ＣＤ１９結合部分可変ドメインを有するＣＡＲもしくはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞によるサイトカインパネルの分泌レベルを示す図である。
【００７２】
【図１９】図１９は、抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲを用いて形質導入され、ＣＤ１９発現について陽性または陰性のがん細胞株とインキュベートされたＣＤ４＋Ｔ細胞におけるサイトカイン発現の標的−特異的活性化を示す図である。
【００７３】
【図２０】図２０は、両方とも同じ抗ＣＤ１９結合部分可変ドメインを有するＣＡＲまたはａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞での、抗原陽性または陰性標的細胞への曝露の際のＴ細胞分化マーカーＣＤ２８、ＣＣＲ７およびグランザイムＢのフローサイトメトリー分析を示す図である。
【００７４】
【図２１】図２１は、曝露開始後２日目から３日目に色素希釈によって評価された、両方のキメラ受容体が同じ抗ＣＤ１９結合部分可変ドメインを有するＣＡＲまたはａｂＴＣＲ形質導入ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞の抗原陽性標的細胞への曝露の際の増殖を示す図である。
【００７５】
【図２２】図２２は、両方のキメラ受容体が同じ抗ＣＤ１９結合部分可変ドメインを有するＣＡＲまたはａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞上のキメラ受容体の内部移行を示す図であり、表示の時点で、抗ＣＤ１９結合部分を標的化する抗イディオタイプ抗体を用いて表面キメラ受容体について染色した細胞のフローサイトメトリー分析によって評価された。
【００７６】
【図２３】図２３Ａおよび２３Ｂは、両方とも同じ抗ＣＤ１９結合部分可変ドメインを有するａｂＴＣＲ（抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ−６ＭＤ）またはｃＴＣＲ（抗ＣＤ１９−ｃＴＣＲ）のいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞の特徴付けを示すグラフである。図２３Ａは、ａｂＴＣＲおよびｃＴＣＲ  Ｔ細胞の細胞増殖を示す。図２３Ｂは、偽形質導入Ｔ細胞または、ａｂＴＣＲもしくはｃＴＣＲのいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞によって媒介されたＣＤ１９−陽性がん細胞株Ｎａｌｍ−６の殺滅を示す。
【００７７】
【図２４】図２４は、偽形質導入Ｔ細胞または、両方とも同じ抗ＮＹ−ＥＳＯ−１結合部分可変ドメインを有するＣＡＲ（＃３５  ＣＡＲ）もしくはａｂＴＣＲ−６ＭＤ（＃３５  ａｂＴＣＲ）のいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞によって媒介される、がん細胞株ＩＭ９、Ｃｏｌｏ２０５、ＭＤＡ−２３１、ＭＣＦ７、ＪｅＫｏ−１、Ｒａｊｉ、Ｈｅｐ１およびＪｕｒｋａｔの殺滅を示すグラフである。
【００７８】
【図２５】図２５Ａは、ヒトＰＢＭＣから精製されたＮＫＴ細胞のサブセットでのＣＤ３およびＣＤ５６の発現のフローサイトメトリー分析を示す図である。図２５Ｂは、ＲａｊｉまたはＲａｊｉ−ＣＤ１９ｋｏ細胞株と共培養された、偽形質導入Ｔ細胞または、抗ＣＤ１９結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤを用いて形質導入されたＴ細胞によるサイトカインＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよびＴＮＦαの分泌レベルを示すグラフである。対照は、偽形質導入またはａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞のみおよびＲａｊｉまたはＲａｊｉ−ＣＤ１９ｋｏ細胞のみを含む。
【００７９】
【図２６】図２６Ａは、ヒトＰＢＭＣから精製されたＴｒｅｇ細胞のサブセットでのＣＤ２５およびＣＤ４の発現のフローサイトメトリー分析を示す図である。図２６Ｂは、ＲａｊｉまたはＲａｊｉ−ＣＤ１９ｋｏ細胞株と共培養された、偽形質導入Ｔ細胞または、抗ＣＤ１９結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤを用いて形質導入されたＴ細胞によるサイトカインＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよびＴＮＦαの分泌レベルを示すグラフである。
【００８０】
【図２７】図２７は、偽形質導入Ｔ細胞または、それぞれ同じ抗ＡＦＰ結合部分を有する種々の免疫グロブリンＣＨ１ドメインを有するａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞によって媒介されるがん細胞株ＨｅｐＧ２、ＳＫ−Ｈｅｐ１およびＳＫ−Ｈｅｐ１−ＡＦＰ  ＭＧの殺滅を示すグラフである。
【００８１】
【図２８】図２８は、１または複数の共刺激ドメイン（ａｂＴＣＲ−６Ｍ−１、ａｂＴＣＲ−６Ｍ−２、ａｂＴＣＲ−６Ｍ−３、ａｂＴＣＲ−６Ｍ−４、ａｂＴＣＲ−６Ｍ−５、ａｂＴＣＲ−６Ｍ−６、ａｂＴＣＲ−６Ｍ−７、ａｂＴＣＲ−６Ｍ−８）を含有する種々のａｂＴＣＲ構築物設計を示す概略図である。
【００８２】
【図２９】図２９は、偽形質導入Ｔ細胞または、それぞれ同じ抗ＡＦＰ結合部分を有する１または複数のＣ末端共刺激ドメインを有する種々のａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞によって媒介されるがん細胞株ＨｅｐＧ２、ＳＫ−Ｈｅｐ１およびＳＫ−Ｈｅｐ１−ＡＦＰ  ＭＧの殺滅を示すグラフである。
【００８３】
【図３０】図３０は、ＳＫ−Ｈｅｐ１またはＳＫ−Ｈｅｐ１−ＡＦＰ  ＭＧ細胞株と共培養された、偽形質導入Ｔ細胞または、それぞれ同じ抗ＡＦＰ結合部分を有する１または複数のＣ末端共刺激ドメインを有する種々のａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞によるサイトカインＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよびＴＮＦαの分泌レベルを示すグラフである。
【００８４】
【図３１】図３１は、偽形質導入Ｔ細胞または、それぞれ同じ抗ＣＤ１９結合部分を有する１または複数のＣ末端共刺激ドメインを有する種々のａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞によって媒介されるがん細胞株Ｒａｊｉ、Ｒａｊｉ−ＣＤ１９ｋｏおよびＪｅＫｏ−１の殺滅を示すグラフである。
【００８５】
【図３２】図３２は、Ｒａｊｉ、Ｒａｊｉ−ＣＤ１９ｋｏまたはＪｅＫｏ−１細胞と共培養された、偽形質導入Ｔ細胞または、それぞれ同じ抗ＣＤ１９結合部分を有する１または複数のＣ末端共刺激ドメインを有する種々のａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞によるサイトカインＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよびＴＮＦαの分泌レベルを示すグラフである。
【００８６】
【図３３】図３３は、偽形質導入Ｔ細胞または、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤを用いて形質導入されたＴ細胞のいずれかの静脈注射を用いて処置されたＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧの皮下マウス異種移植モデルにおける経時的体重変化を示すグラフである。
【００８７】
【図３４】図３４Ａは、偽形質導入Ｔ細胞または、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤを用いて形質導入されたＴ細胞の静脈注射を用いて処置されたＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧの皮下マウスモデルにおける腫瘍増殖を示すグラフである。図３４Ｂは、平均腫瘍体積が３００ｍｍ３に達したときに、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤを用いて形質導入されたＴ細胞の単回腫瘍内注射を用いて処置されたまたはされていないＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧの皮下マウスモデルにおける腫瘍増殖を示すグラフである。
【００８８】
【図３５】図３５は、種々の抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ（クローン５、５−３、５−９および５−１４）を用いて形質導入されたＴ細胞で処置したレポーターＲａｊｉ静脈内異種移植マウスにおける腫瘍増殖を示す図である。偽形質導入Ｔ細胞およびＴ細胞無処置は、対照として含まれた。
【００８９】
【図３６】図３６は、偽形質導入Ｔ細胞または、両方ともクローン５−１３抗ＣＤ１９結合部分可変ドメインを有するＣＡＲもしくはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞を注射されたＲａｊｉ異種移植マウスにおけるＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１０の血清レベルを示すグラフである。
【００９０】
【図３７】図３７は、両方ともクローン５−１３抗ＣＤ１９結合部分可変ドメインを有する、ＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞を用いて処置されたレポーターＲａｊｉ異種移植マウスにおける腫瘍増殖の定量を示すグラフである。偽形質導入Ｔ細胞は、対照として含まれた。
【００９１】
【図３８】図３８は、両方ともクローン５−１３抗ＣＤ１９結合部分可変ドメインを有する、ＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞を用いて処置されたレポーターＲａｊｉ異種移植マウスにおける腫瘍由来生物発光についての画像化結果を示す図である。偽形質導入Ｔ細胞は、対照として含まれた。グレースケール変換ヒートマップは、マウス画像に重ねたダークスポットとして現れる腫瘍の位置での１秒あたりの総光子を示している。
【００９２】
【図３９】図３９は、初回腫瘍細胞移植およびクローン５−１３抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ−６ＭＤを用いて形質導入されたＴ細胞を用いた処置の７週間後に腫瘍細胞を用いて再チャレンジしたレポーターＲａｊｉ異種移植マウスにおける腫瘍増殖の定量を示すグラフである。偽形質導入Ｔ細胞は、対照として含まれた。
【００９３】
【図４０】図４０は、両方ともクローン５−１３抗ＣＤ１９結合部分可変ドメインを有する、ＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞を用いて処置されたレポーターＮＡＬＭ−６静脈内異種移植マウスにおける腫瘍増殖を示すグラフである。偽形質導入Ｔ細胞およびＴ細胞無処置は、対照として含まれた。
【００９４】
【図４１】図４１は、両方ともクローン５−１３抗ＣＤ１９結合部分可変ドメインを有する、ＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入された細胞を用いて注射されたＮＡＬＭ−６異種移植マウスにおけるＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの血清レベルを示すグラフである。偽形質導入Ｔ細胞およびＴ細胞無処置は、対照として含まれた。
【００９５】
【図４２】図４２は、両方ともクローン５−１３抗ＣＤ１９結合部分可変ドメインを有する、ＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入された細胞を用いて注射されたＮＡＬＭ−６異種移植マウス由来の血液中のキメラ受容体陽性Ｔ細胞の、処置後７および１３日目の量を示す図である。
【００９６】
【図４３】図４３は、両方ともクローン５−１３抗ＣＤ１９結合部分可変ドメインを有する、ＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入された細胞を用いて注射されたＮＡＬＭ−６異種移植マウス由来の血液中の腫瘍細胞についての、処置後１３日目のフローサイトメトリー分析を示す図である。
【００９７】
【図４４】図４４は、両方ともクローン５−１３抗ＣＤ１９結合部分可変ドメインを有する、ＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入された細胞を用いて注射されたＮＡＬＭ−６異種移植マウス由来の骨髄中の腫瘍細胞についての、処置後１３日目のフローサイトメトリー分析を示す図である。
【００９８】
【図４５】図４５は、両方ともクローン５−１３抗ＣＤ１９結合部分可変ドメインを有する、ＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入された細胞を用いて注射されたＮＡＬＭ−６異種移植マウス由来の血液中のＣＤ４＋またはＣＤ８＋のいずれかであるＣＤ３＋Ｔ細胞上のＰＤ−１発現についてのフローサイトメトリー分析を示す図である。
【００９９】
【図４６】図４６は、両方ともクローン５−１３抗ＣＤ１９結合部分可変ドメインを有する、ＣＡＲまたはａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを用いて形質導入された細胞を用いて注射されたＮＡＬＭ−６異種移植マウス由来の骨髄中のＣＤ４＋またはＣＤ８＋のいずれかであるＣＤ３＋Ｔ細胞上のＰＤ−１発現についてのフローサイトメトリー分析を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０１００】
本出願は、ａ）標的抗原に特異的に結合する抗体部分、例えば、ＦａｂまたはＦｖ断片；およびｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を含む、単離されたキメラ抗体／Ｔ細胞受容体構築物（本明細書で「ａｂＴＣＲ」と呼ぶ）を提供する。
【０１０１】
本発明者らは、本発明者らのＴＣＲ様ｍＡｂおよび従来のｍＡｂの結合特異性および親和性を、ＴＣＲによって得られる標的特異的な細胞傷害効力および制御された活性化と組み合わせる、一連の新規合成キメラ抗体／ＴＣＲ構築物を開発した。ａｂＴＣＲを発現するように形質導入された初代Ｔ細胞は、内因性ＣＤ３分子と会合した安定なＴＣＲ様シグナル伝達複合体の効率的な表面発現および形成を示した。Ｔ細胞中に操作した場合、ａｂＴＣＲは、ＭＨＣ依存的（ペプチド／ＭＨＣ抗原）およびＭＨＣ非依存的（細胞表面抗原）構成の両方で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方で、標的保有腫瘍細胞に対する強力な細胞傷害性を有するＴ細胞を与えた。標的特異的活性化は、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞および調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞を含む、ａｂＴＣＲを発現するように形質導入された複数の異なるＴ細胞サブセットについて観察された。さらに、細胞内共刺激配列を含むａｂＴＣＲは、いずれの共刺激配列も伴わない対応するａｂＴＣＲと同様に、一部の場合にはａｂＴＣＲよりも良好に機能することが見出された。
【０１０２】
ＣＡＲ  Ｔ細胞療法を用いて実証された顕著な治癒的潜在力にもかかわらず、臨床試験は、過剰なサイトカイン放出および制御されないＴ細胞増殖と関連する重症な有害事象を誘発し続けている。理論に束縛されないが、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞媒介性死滅を活性化するために内因性ＣＤ３複合体とのアセンブリを必要とするＴＣＲ活性化を制御する天然に存在する機構によって調節され得、したがって、構成的に活性化されることを回避し得ると考えられている。本発明者らは、ａｂＴＣＲ構築物を形質導入したＴ細胞が、がん細胞死滅における等価な効力を有したままで、同じ抗体可変領域を有する対応するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を形質導入したＴ細胞よりも低いレベルのサイトカイン（例えば、ＩＬ−２）およびＴ細胞消耗マーカー（例えば、ＰＤ−１、ＴＩＭ３およびＬＡＧ１）を発現することを見出している。したがって、この戦略は、その細胞傷害性シグナル伝達が内因性Ｔ細胞調節機構に応答し、ｉｎ  ｖｉｖｏでより長く機能的に持続する潜在力を有するＴ細胞が得られる、ＣＡＲを使用することを超える顕著な技術的利点を提供する。細胞表面抗原またはペプチド／ＭＨＣ複合体などの特異的抗原へのモノクローナル抗体の精巧に最適化された結合を、免疫細胞を活性化するために内因性シグナル伝達複合体を関与させるＴ細胞受容体の能力と組み合わせることによって、本発明は、ペプチド／ＭＨＣ複合体を介した、低コピー数の細胞表面抗原、ならびに細胞内抗原または分泌された抗原の高度に特異的で強力な標的化を可能にする。
【０１０３】
したがって、本出願は、標的抗原に特異的に結合する抗体部分と少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭとを含むａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）を提供する。ａｂＴＣＲは、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とを含むヘテロ二量体であり得る。抗体部分は、重鎖可変抗体ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変抗体ドメイン（ＶＬ）を含み得る。一部の実施形態では、抗体部分は、１つもしくは複数の抗体重鎖定常ドメイン、例えば、重鎖定常１抗体ドメイン（ＣＨ１）および／または軽鎖定常抗体ドメイン（ＣＬ）をさらに含む。ＴＣＲＭは、第１のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む第１のＴ細胞受容体ドメイン（ＴＣＲＤ）と、第２のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む。ａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結され得る。例示的なａｂＴＣＲ構築物設計については、図１Ａを参照のこと。
【０１０４】
別の態様では、ａｂＴＣＲをコードする１つまたは複数の核酸が提供される。
【０１０５】
さらに別の態様では、ａｂＴＣＲと少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールとを含む複合体（本明細書で「ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体」と呼ぶ）が提供される。複合体は、４つの二量体、ａｂＴＣＲ、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζを含む八量体であり得る。ａｂＴＣＲもしくはａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体を発現するまたはそれと関連する、Ｔ細胞などのエフェクター細胞もまた提供される。
【０１０６】
さらに別の態様では、ａｂＴＣＲを含む組成物が提供される。組成物は、ａｂＴＣＲ、またはａｂＴＣＲを発現するもしくはそれと関連するエフェクター細胞（例えば、ａｂＴＣＲを発現するＴ細胞）を含む医薬組成物であり得る。
【０１０７】
処置目的のためにａｂＴＣＲ（またはａｂＴＣＲを発現するもしくはそれと会合した細胞）を作製および使用する方法、ならびにかかる方法に有用なキットおよび製造物品もまた提供される。ａｂＴＣＲ（またはａｂＴＣＲを発現するもしくはそれと会合した細胞）を使用して疾患を処置する方法がさらに提供される。
【０１０８】
定義
本明細書で使用する場合、「処置」または「処置する」は、臨床結果を含む有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果には、以下のうち１または複数が含まれるがこれらに限定されない：疾患から生じる１もしくは複数の症状を軽減すること、疾患の程度を弱めること、疾患を安定化すること（例えば、疾患の悪化を防止もしくは遅延させること）、疾患の拡散（例えば、転移）を防止もしくは遅延させること、疾患の再発を防止もしくは遅延させること、疾患の進行を遅延もしくは減速させること、疾患状態を緩和すること、疾患の寛解（部分的もしくは全体的）を提供すること、疾患を処置するために必要とされる１もしくは複数の他の薬物療法の用量を減少させること、疾患の進行を遅延させること、生活の質を増加もしくは改善すること、体重増加を増加させること、および／または生存期間を延長させること。疾患の病理学的結果（例えば、がんにおける腫瘍体積など）の低減もまた、「処置」によって包含される。本発明の方法は、処置のこれらの態様のうちいずれか１または複数を企図する。
【０１０９】
用語「再発」、「再燃する」または「再燃した」とは、疾患の消失の臨床評価後のがんまたは疾患の復帰を指す。遠隔転移または局所的再発の診断は、再燃とみなされ得る。
【０１１０】
用語「難治性」または「抵抗性」とは、処置に応答していないがんまたは疾患を指す。
【０１１１】
「活性化」とは、Ｔ細胞に関連して本明細書で使用する場合、検出可能な細胞増殖を誘導するように十分に刺激されたＴ細胞の状態を指す。活性化は、誘導されたサイトカイン産生、および検出可能なエフェクター機能とも関連し得る。
【０１１２】
用語「抗体」または「抗体部分」は、全長抗体およびその抗原結合断片を含む。全長抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む。軽鎖および重鎖の可変領域は、抗原結合を担う。両方の鎖中の可変領域は、一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる３つの高度に可変性のループを含む（ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２およびＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２およびＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ）。本明細書に開示される抗体および抗原結合断片についてのＣＤＲ境界は、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＡｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉの慣習によって定義または同定され得る（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  １９９７年；Ｃｈｏｔｈｉａ  １９８５年；Ｃｈｏｔｈｉａ  １９８７年；Ｃｈｏｔｈｉａ  １９８９年；Ｋａｂａｔ  １９８７年；Ｋａｂａｔ  １９９１年）。重鎖または軽鎖の３つのＣＤＲは、ＣＤＲよりも高度に保存され、超可変ループを支持するための足場を形成する、フレームワーク領域（ＦＲ）として公知の隣接ストレッチ間に挟まれている。重鎖および軽鎖の定常領域は、抗原結合に関与しないが、種々のエフェクター機能を示す。抗体は、それらの重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいてクラスに割り当てられる。抗体の５つの主要なクラスまたはアイソタイプは、それぞれ、α、δ、ε、γおよびμ重鎖の存在を特徴とする、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭである。いくつかの主要な抗体クラスは、ＩｇＧ１（γ１重鎖）、ＩｇＧ２（γ２重鎖）、ＩｇＧ３（γ３重鎖）、ＩｇＧ４（γ４重鎖）、ＩｇＡ１（α１重鎖）またはＩｇＡ２（α２重鎖）などのサブクラスへと分割される。
【０１１３】
本明細書で使用する用語「抗原結合断片」とは、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異的ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖダイマー（二価ダイアボディ）、１もしくは複数のＣＤＲを含む抗体の一部分から形成された多特異的抗体、ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ）単一ドメイン抗体、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、または抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体断片を含む抗体断片を指す。抗原結合断片は、親抗体または親抗体断片（例えば、親ｓｃＦｖ）が結合する同じ抗原に結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合断片は、１または複数の異なるヒト抗体由来のフレームワーク領域にグラフトされた、特定のヒト抗体由来の１または複数のＣＤＲを含み得る。
【０１１４】
「Ｆａｂ様抗原結合モジュール」とは、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とを含む抗体部分を指し、第１および第２のポリペプチド鎖は、ＶＬ抗体ドメイン、ＣＬ抗体ドメイン、ＶＨ抗体ドメインおよびＣＨ１抗体ドメインを含む。ＶＬおよびＣＬ抗体ドメインは一方の鎖上にあり、ＶＨおよびＣＨ１抗体ドメインは他方の鎖上にあり得、またはＶＬおよびＣＨ１抗体ドメインは一方の鎖上にあり、ＶＨおよびＣＬ抗体ドメインは他方の鎖上にあり得る。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ジスルフィド結合によって連結される。
【０１１５】
本明細書で使用する場合、第１の抗体部分が、等モル濃度の第１の抗体部分の存在下で、第２の抗体部分の標的抗原結合を、少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％のいずれか）阻害する場合、第１の抗体部分は、標的抗原への結合について第２の抗体部分と「競合する」、または逆もまた同様である。それらの交差競合に基づいて抗体を「ビニングする」ためのハイスループットプロセスは、ＰＣＴ公開番号ＷＯ０３／４８７３１に記載されている。
【０１１６】
本明細書で使用する場合、用語「特異的に結合する」または「〜に対して特異的である」とは、生物学的分子を含む分子の不均一な集団の存在下での標的の存在を決定する、測定可能で再現性のある相互作用、例えば、標的と抗体または抗体部分との間の結合を指す。例えば、標的（エピトープであり得る）に特異的に結合する抗体部分は、他の標的へのその結合よりも、高い親和性、結合力で、容易に、および／または長い持続時間で、標的に結合する抗体部分である。一部の実施形態では、抗原に特異的に結合する抗体部分は、他の標的に対するその結合親和性の少なくとも約１０倍である結合親和性で、抗原（例えば、細胞表面抗原またはペプチド／ＭＨＣタンパク質複合体）の１つまたは複数の抗原決定基と反応する。
【０１１７】
用語「Ｔ細胞受容体」または「ＴＣＲ」とは、Ｔ細胞の表面上で対形成する、αβまたはγδ鎖から構成されるヘテロ二量体受容体を指す。各α、β、γおよびδ鎖は、２つのＩｇ様ドメインから構成される：相補性決定領域（ＣＤＲ）を介した抗原認識を付与する可変ドメイン（Ｖ）と、その後の接続ペプチドおよび膜貫通（ＴＭ）領域によって細胞膜にアンカーされる定常ドメイン（Ｃ）。ＴＭ領域は、ＣＤ３シグナル伝達装置のインバリアントサブユニットと会合する。Ｖドメインの各々は、３つのＣＤＲを有する。これらのＣＤＲは、主要組織適合複合体によってコードされるタンパク質に結合した抗原性ペプチド間の複合体（ｐＭＨＣ）と相互作用する（DavisおよびBjorkman（１９８８年）Nature、３３４巻、３９５〜４０２頁；Davisら（１９９８年）Annu  Rev  Immunol、１６巻、５２３〜５４４頁；Murphy（２０１２年）、ｘｉｘ、８６８頁）。
【０１１８】
用語「ＴＣＲ関連シグナル伝達モジュール」とは、ＴＣＲ−ＣＤ３複合体の一部である細胞質免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を有する分子を指す。ＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールは、ＣＤ３γε、ＣＤ３δεおよびζζを含む。
【０１１９】
用語「モジュール」とは、タンパク質またはタンパク質の一部分を指す場合、タンパク質またはタンパク質の一部分が、複数のポリペプチド鎖を含むことを意味する（例えば、二量体タンパク質または二量体タンパク質の一部分）。複数のポリペプチド鎖は、リンカー（例えば、ペプチドリンカー）または化学結合（例えば、ペプチド結合）などによって連結され得る。「モジュール」とは、タンパク質を構成する１つまたは複数のポリペプチドの構造的におよび／または機能的に関連する部分を含むことを意味する。例えば、二量体受容体の膜貫通モジュールは、膜を貫通する、受容体の各ポリペプチド鎖の部分を指し得る。モジュールはまた、単一のポリペプチド鎖の関連部分も指し得る。例えば、単量体受容体の膜貫通モジュールは、膜を貫通する、受容体の単一のポリペプチド鎖の部分を指し得る。
【０１２０】
用語「Ｔ細胞受容体モジュール」または「ＴＣＲＭ」とは、Ｔ細胞受容体に由来する配列を含むヘテロ二量体を指す。ＴＣＲＭは、Ｔ細胞受容体膜貫通ドメインを含み、Ｔ細胞受容体の接続ペプチドおよび／または細胞内ドメインの全てまたは一部分をさらに含み得る。
【０１２１】
「単離された」構築物（例えば、ａｂＴＣＲ）とは、本明細書で使用する場合、（１）天然に見出されるタンパク質と関連しない構築物、（２）同じ供給源由来の他のタンパク質を含まない構築物、（３）異なる種由来の細胞によって発現される構築物、または（４）天然に存在しない構築物を指す。
【０１２２】
本明細書で使用する用語「単離された核酸」は、「単離された核酸」が、その起源によって、（１）「単離された核酸」が天然に見出されるポリヌクレオチドの全てもしくは一部分と関連しない、（２）天然では関連しないポリヌクレオチドに作動可能に連結した、または（３）より大きい配列の一部として天然では生じない、ゲノム、ｃＤＮＡもしくは合成起源またはそれらのある組合せの核酸を意味することを意図する。
【０１２３】
本明細書で使用する場合、用語「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」は、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見出される非連続的な抗原結合部位（ａｎｔｉｇｅｎ  ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ  ｓｉｔｅ）を意味することを意図する。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２５２巻：６６０９〜６６１６頁（１９７７年）；Ｋａｂａｔら、Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐｔ．  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９９１年）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６巻：９０１〜９１７頁（１９８７年）；およびＭａｃＣａｌｌｕｍら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２６２巻：７３２〜７４５頁（１９９６年）によって記載されており、ここで、定義は、互いに対して比較した場合の、アミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体もしくはグラフト化抗体のＣＤＲまたはそのバリアントを指すためのいずれかの定義の適用は、本明細書で定義および使用される用語の範囲内であることが意図される。上で引用した参考文献の各々によって定義されるＣＤＲを包含するアミノ酸残基は、比較として以下の表１に示される。
【表１−１】
2019500848.tif 000002
【０１２４】
用語「キメラ抗体」とは、それらが本発明の生物学的活性を示す限り、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来するまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同であるが、鎖（複数可）の残部が、別の種に由来するまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体ならびにかかる抗体の断片中の対応する配列と同一または相同である抗体を指す（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８１巻：６８５１〜６８５５頁（１９８４年）を参照のこと）。
【０１２５】
抗体または抗体部分に関して、用語「半合成」とは、抗体または抗体部分が、１または複数の天然に存在する配列および１または複数の天然に存在しない（即ち、合成）配列を有することを意味する。
【０１２６】
抗体または抗体部分に関連する用語「完全合成」とは、抗体または抗体部分が、重鎖および軽鎖の両方の６つ全てのＣＤＲの天然に存在しない（即ち、合成）配列を除いて、固定された大部分のまたは全ての天然に存在するＶＨ／ＶＬフレームワークペアリングを有することを意味する。天然に存在しないＣＤＲには、保存的アミノ酸置換または導入されたシステイン残基によって改変されたＣＤＲ配列などの改変されたヒトＣＤＲ配列を含むものが含まれる。
【０１２７】
非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する最小配列を含むキメラ抗体である。大部分は、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域（ＨＶＲ）由来の残基が、所望の抗体特異性、親和性および能力を有する、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基によって置き換えられた、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中にもドナー抗体中にも見出されない残基を含み得る。これらの改変は、抗体性能をさらに洗練するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、超可変ループの全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものと対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、任意選択で、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのＦｃもまた含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１巻：５２２〜５２５頁（１９８６年）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２巻：３２３〜３２９頁（１９８８年）；およびＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２巻：５９３〜５９６頁（１９９２年）を参照のこと。
【０１２８】
「相同性」とは、２つのポリペプチド間または２つの核酸分子間の配列類似性または配列同一性を指す。２つの比較される配列の両方における位置が、同じ塩基またはアミノ酸単量体サブユニットによって占有される場合、例えば、２つのＤＮＡ分子の各々における位置がアデニンによって占有される場合には、分子はその位置において「相同」である。２つの配列間の「相同性のパーセント」または「パーセント配列同一性」は、任意の保存的置換を配列同一性の一部とみなして、比較される位置の数によって除算した、２つの配列によって共有される一致する位置または相同な位置の数に、１００を乗算した関数である。例えば、２つの配列中の１０個の位置のうち６個が一致するまたは相同である場合には、２つの配列は、６０％相同である。例として、ＤＮＡ配列ＡＴＴＧＣＣとＴＡＴＧＧＣとは、５０％の相同性を共有する。一般に、比較は、２つの配列が最大の相同性を与えるようにアラインされる場合になされる。パーセントアミノ酸配列同一性を決定することを目的としたアラインメントは、例えば、公に入手可能なコンピューターソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）またはＭＵＳＣＬＥソフトウェアを使用して、当業者の技術範囲内の種々の方法で達成され得る。当業者は、比較されている配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。しかし、本明細書の目的のために、％アミノ酸配列同一性値は、配列比較コンピュータープログラムＭＵＳＣＬＥを使用して生成される（Edgar,  R.C.、Nucleic  Acids  Research  ３２巻（５号）：１７９２〜１７９７頁、２００４年；Edgar,  R.C.、BMC  Bioinformatics  ５巻（１号）：１１３頁、２００４年）。
【０１２９】
ヒトＩｇＧの「ＣＨ１ドメイン」（「Ｈ１」ドメインの「Ｃ１」とも呼ぶ）は通常、約アミノ酸１１８から約アミノ酸２１５まで及ぶ（ＥＵ番号付け系）。
【０１３０】
特記しない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードする、全てのヌクレオチド配列を含む。タンパク質またはＲＮＡをコードする語句ヌクレオチド配列はまた、タンパク質をコードするヌクレオチド配列が、一部のバージョンにおいてイントロン（複数可）を含み得る程度まで、イントロンを含み得る。
【０１３１】
用語「作動可能に連結した」とは、後者の発現を生じる、調節配列と異種核酸配列との間の機能的連結を指す。例えば、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的に関連して配置される場合、第１の核酸配列は、第２の核酸配列と作動可能に連結している。例えば、プロモーターがコード配列の転写または発現に影響を与える場合、プロモーターは、コード配列に作動可能に連結している。一般に、作動可能に連結したＤＮＡ配列は、連続しており、２つのタンパク質コード領域をつなげることが必要な場合、同じリーディングフレーム中にある。
【０１３２】
用語「誘導性プロモーター」とは、１つまたは複数の特定のシグナルを添加または除去することによってその活性が調節され得るプロモーターを指す。例えば、誘導性プロモーターは、特定のセットの条件下で、例えば、プロモーターを活性化するおよび／またはプロモーターの抑制を軽減する誘導剤の存在下で、作動可能に連結した核酸の転写を活性化し得る。
【０１３３】
本明細書に開示されるａｂＴＣＲまたはａｂＴＣＲを含む組成物の「有効量」は、具体的に述べられた目的を成し遂げるのに十分な量である。「有効量」は、実験的に、および述べられた目的に関連する公知の方法によって、決定され得る。
【０１３４】
用語「治療有効量」とは、個体において疾患または障害を「処置する」のに有効な、本明細書に開示されるａｂＴＣＲまたはａｂＴＣＲを含む組成物の量を指す。がんの場合、治療有効量の、本明細書に開示されるａｂＴＣＲまたはａｂＴＣＲを含む組成物は、がん細胞の数を低減する；腫瘍のサイズまたは重量を低減する；末梢臓器中へのがん細胞浸潤を阻害する（即ち、ある程度まで減速させる、好ましくは停止させる）；腫瘍転移を阻害する（即ち、ある程度まで減速させる、好ましくは停止させる）；腫瘍成長をある程度まで阻害する；および／またはがんと関連する症状のうち１つもしくは複数をある程度まで軽減することができる。本明細書に開示されるａｂＴＣＲまたはａｂＴＣＲを含む組成物が、成長を防止および／または既存のがん細胞を死滅させることができる限りにおいて、これは、細胞分裂抑制性および／または細胞傷害性であり得る。一部の実施形態では、治療有効量は、成長阻害量である。一部の実施形態では、治療有効量は、患者の無増悪生存期間を改善する量である。ウイルス感染症などの感染性疾患の場合、治療有効量の、本明細書に開示されるａｂＴＣＲまたはａｂＴＣＲを含む組成物は、病原体が感染した細胞の数を低減する；病原体由来抗原の産生もしくは放出を低減する；非感染細胞への病原体の拡散を阻害する（即ち、ある程度まで減速させる、好ましくは停止させる）；および／または感染症と関連する症状のうち１つもしくは複数をある程度まで軽減することができる。一部の実施形態では、治療有効量は、患者の生存を延長させる量である。
【０１３５】
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される」または「薬理学的に適合する」とは、生物学的にも他の点でも望ましくないことのない材料を意味し、例えば、材料は、任意の顕著な望ましくない生物学的影響を引き起こすことも、それが含まれる組成物の他の成分のいずれかと有害な様式で相互作用することもなしに、患者に投与される医薬組成物中に組み入れることができる。薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤は、好ましくは、毒性学的試験および製造試験の必要な標準を満たし、ならびに／または米国食品医薬品局が作成したＩｎａｃｔｉｖｅ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｇｕｉｄｅ上に含まれる。
【０１３６】
本明細書に記載される発明の実施形態は、実施形態「からなる」および／または実施形態「から本質的になる」を含むことが理解される。
【０１３７】
本明細書の「約」値またはパラメーターに対する言及は、その値またはパラメーター自体に対する変動を含む（および記載する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記載は、「Ｘ」の記載を含む。
【０１３８】
本明細書で使用する場合、値またはパラメーター「ではない」に対する言及は、値またはパラメーター「以外」を一般に意味し記載する。例えば、方法が、Ｘ型のがんを処置するために使用されないとは、この方法が、Ｘ以外の型のがんを処置するために使用されることを意味する。
【０１３９】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「１つの、ある（ａ）」、「もしくは、または、あるいは（ｏｒ）」および「この、その、前記、該（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかに他を指定しない限り、複数の指示対象を含む。
【０１４０】
キメラ抗体／Ｔ細胞受容体構築物
一態様では、本発明は、標的抗原（例えば、細胞表面抗原またはペプチド／ＭＨＣ複合体）に特異的に結合し、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュール（例えば、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεまたはζζ）をリクルートすることが可能な、標的抗原特異的キメラ抗体／Ｔ細胞受容体（ａｂＴＣＲ）を提供する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合によって連結される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とを含むヘテロ二量体である。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、少なくとも１つのジスルフィド結合によって連結される。ａｂＴＣＲの特異性は、標的抗原に対する結合特異性を付与する抗体部分に由来する。一部の実施形態では、抗体部分は、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬおよびＣＬ抗体ドメインを含むＦａｂ様抗原結合モジュールである。一部の実施形態では、抗体部分は、ＶＨおよびＶＬ抗体ドメインを含むＦｖ様抗原結合モジュールである。ａｂＴＣＲがＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートする能力は、Ｔ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）に由来する。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲ（例えば、αβＴＣＲまたはγδＴＣＲ）の膜貫通モジュールを含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲの接続ペプチドまたはその断片の一方または両方をさらに含む。一部の実施形態では、膜貫通モジュールおよび接続ペプチドまたはその断片は、同じＴＣＲ型（αβまたはγδ）に由来する。一部の実施形態では、膜貫通モジュールはαβＴＣＲに由来し、接続ペプチドもしくはその断片はγδＴＣＲに由来し、または膜貫通モジュールはγδＴＣＲに由来し、接続ペプチドもしくはその断片はαβＴＣＲに由来する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、少なくとも１つの細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲの少なくとも１つの細胞内ドメインのうち１つまたは複数は、ＴＣＲの細胞内ドメイン由来の配列を含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲの少なくとも１つの細胞内ドメインのうち１つまたは複数は、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列を含む。共刺激シグナル伝達配列は、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む共刺激分子の細胞内ドメインの一部分であり得る。一部の実施形態では、抗体部分は、ａｂＴＣＲの細胞外ドメイン中に含まれる。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、細胞外ドメインの長さを最適化するために、抗体部分とＴＣＲＭとの間に１つまたは複数のペプチドリンカーをさらに含む。一部の実施形態では、標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュール（例えば、Ｆａｂ様またはＦｖ様抗原結合モジュール）に対する言及は、抗原結合モジュールが、ａ）他の分子に対するその結合親和性の少なくとも約１０（例えば、少なくとも���１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、２００、３００、４００、５００、７５０、１０００またはそれよりも大きい数のいずれかを含む）倍である親和性で、またはｂ）他の分子への結合に対するそのＫｄの約１／１０倍以下（例えば、約１／１０、１／２０、１／３０、１／４０、１／５０、１／７５、１／１００、１／２００、１／３００、１／４００、１／５００、１／７５０、１／１０００またはそれ未満のいずれか以下）のＫｄで、標的抗原に結合することを意味する。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）分析または放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＡ）などの、当該分野で公知の方法によって決定され得る。Ｋｄは、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ機器を利用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイ、または例えば、Ｓａｐｉｄｙｎｅ機器を利用する速度論的排除アッセイ（ＫｉｎＥｘＡ）などの、当該分野で公知の方法によって決定され得る。
【０１４１】
企図されたａｂＴＣＲ構築物には、例えば、細胞表面抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲおよび細胞表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的に結合するａｂＴＣＲが含まれる。
【０１４２】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）ＶＨ抗体ドメインおよびＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインを含む第１のポリペプチド鎖、ならびにｂ）ＶＬ抗体ドメインおよびＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含む、Ｆａｂ様抗原結合モジュールを含む。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインは、ＣＨ１抗体ドメインのアミノ末端側に、ＶＨ抗体ドメインを含み、および／または第２の抗原結合ドメインは、ＣＬ抗体ドメインのアミノ末端側に、ＶＬ抗体ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＬ抗体ドメインとＣＬ抗体ドメインとの間にペプチドリンカーが、および／またはＶＨ抗体ドメインとＣＨ１抗体ドメインとの間にペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、ＶＬ抗体ドメインおよびＶＨ抗体ドメインのＣＤＲは全て、同じ抗体部分に由来する。一部の実施形態では、ＶＬ抗体ドメインおよびＶＨ抗体ドメインは、１つよりも多い抗体部分に由来する抗体ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＶＬ抗体ドメインは、ＶＨ抗体ドメインに由来する抗体ＣＤＲを含み、および／またはＶＨ抗体ドメインは、ＶＬ抗体ドメインに由来する抗体ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＶＬ抗体ドメインは、１つの抗体に由来するフレームワーク領域と、別の抗体に由来する１つもしくは複数のＣＤＲとを含み、および／またはＶＨ抗体ドメインは、１つの抗体に由来するフレームワーク領域と、別の抗体に由来する１つもしくは複数のＣＤＲとを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合によって連結される。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第２の抗原結合ドメインとは、ジスルフィド結合によって連結される。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第２の抗原結合ドメインとは、ＣＨ１ドメイン中の残基とＣＬドメイン中の残基との間のジスルフィド結合によって連結される。一部の実施形態では、ＣＨ１ドメインは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＭまたはＩｇＥ重鎖、任意選択でヒトに由来する。一部の実施形態では、ＣＨ１ドメインは、配列番号３９および６０〜６９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、ＣＨ１ドメインは、それが由来する配列と比較して、１つまたは複数の改変（例えば、アミノ酸の置換、挿入および／または欠失）を含むバリアントである。一部の実施形態では、ＣＬドメインは、カッパまたはラムダ軽鎖、任意選択でヒトに由来する。一部の実施形態では、ＣＬドメインは、配列番号４１のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、ＣＬドメインは、それが由来する配列と比較して、１つまたは複数の改変（例えば、アミノ酸の置換、挿入および／または欠失）を含むバリアントである。一部の実施形態では、ＣＨ１および／またはＣＬドメインは、互いに対するそれらの結合親和性を実質的に変更しない１つまたは複数の改変を含む。一部の実施形態では、ＣＨ１および／またはＣＬドメインは、互いに対するそれらの結合親和性を増加させるおよび／または天然に存在しないジスルフィド結合を導入する１つまたは複数の改変を含む。一部の実施形態では、ＣＨ１およびＣＬドメインは、ノブイントゥホール改変を含む（例えば、Carter  P.  J  Immunol  Methods.  ２４８巻：７〜１５頁、２００１年を参照のこと）。一部の実施形態では、ＣＨ１およびＣＬドメインは、互いとのそれらの会合を増強するために、静電操縦によって改変される（例えば、ＷＯ２００６１０６９０５およびGunasekaran  Kら、J  Biol  Chem.  ２８５巻：１９６３７〜４６頁、２０１０年を参照のこと）。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。
【０１４３】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）ＶＬ抗体ドメインおよびＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインを含む第１のポリペプチド鎖、ならびにｂ）ＶＨ抗体ドメインおよびＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含む、Ｆａｂ様抗原結合モジュールを含む。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインは、ＣＨ１抗体ドメインのアミノ末端側に、ＶＬ抗体ドメインを含み、および／または第２の抗原結合ドメインは、ＣＬ抗体ドメインのアミノ末端側に、ＶＨ抗体ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨ抗体ドメインとＣＬ抗体ドメインとの間にペプチドリンカーが、および／またはＶＬ抗体ドメインとＣＨ１抗体ドメインとの間にペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、ＶＬ抗体ドメインおよびＶＨ抗体ドメインのＣＤＲは全て、同じ抗体部分に由来する。一部の実施形態では、ＶＬ抗体ドメインおよびＶＨ抗体ドメインは、１つよりも多い抗体部分に由来する抗体ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＶＬ抗体ドメインは、ＶＨ抗体ドメインに由来する抗体ＣＤＲを含み、および／またはＶＨ抗体ドメインは、ＶＬ抗体ドメインに由来する抗体ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＶＬ抗体ドメインは、１つの抗体に由来するフレームワーク領域と、別の抗体に由来する１つもしくは複数のＣＤＲとを含み、および／またはＶＨ抗体ドメインは、１つの抗体に由来するフレームワーク領域と、別の抗体に由来する１つもしくは複数のＣＤＲとを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合によって連結される。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第２の抗原結合ドメインとは、ジスルフィド結合によって連結される。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第２の抗原結合ドメインとは、ＣＨ１ドメイン中の残基とＣＬドメイン中の残基との間のジスルフィド結合によって連結される。一部の実施形態では、ＣＨ１ドメインは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＭまたはＩｇＥ重鎖、任意選択でヒトに由来する。一部の実施形態では、ＣＨ１ドメインは、配列番号３９および６０〜６９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、ＣＨ１ドメインは、それが由来する配列と比較して、１つまたは複数の改変（例えば、アミノ酸の置換、挿入および／または欠失）を含むバリアントである。一部の実施形態では、ＣＬドメインは、カッパまたはラムダ軽鎖、任意選択でヒトに由来する。一部の実施形態では、ＣＬドメインは、配列番号４１のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、ＣＬドメインは、それが由来する配列と比較して、１つまたは複数の改変（例えば、アミノ酸の置換、挿入および／または欠失）を含むバリアントである。一部の実施形態では、ＣＨ１および／またはＣＬドメインは、互いに対するそれらの結合親和性を実質的に変更しない１つまたは複数の改変を含む。一部の実施形態では、ＣＨ１および／またはＣＬドメインは、互いに対するそれらの結合親和性を増加させるおよび／または天然に存在しないジスルフィド結合を導入する１つまたは複数の改変を含む。一部の実施形態では、ＣＨ１およびＣＬドメインは、ノブイントゥホール改変を含む（例えば、Carter  P.  J  Immunol  Methods.  ２４８巻：７〜１５頁、２００１年を参照のこと）。一部の実施形態では、ＣＨ１およびＣＬドメインは、互いとのそれらの会合を増強するために、静電操縦によって改変される（例えば、ＷＯ２００６１０６９０５およびGunasekaran  Kら、J  Biol  Chem.  ２８５巻：１９６３７〜４６頁、２０１０年を参照のこと）。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。
【０１４４】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）ＶＨ抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインを含む第１のポリペプチド鎖、およびｂ）ＶＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含む、Ｆｖ様抗原結合モジュールを含む。一部の実施形態では、ＶＬ抗体ドメインのＣ末端に融合した第１のペプチドリンカーおよび／またはＶＨ抗体ドメインのＣ末端に融合した第２のペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、第１および第２のペプチドリンカーは、互いに結合することが可能である。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、免疫グロブリン重鎖および／または軽鎖定常領域に由来する。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、ＣＨ３抗体ドメインまたはそのバリアントを含む。一部の実施形態では、ペプチドリンカー中に含まれる免疫グロブリン重鎖定常ドメイン（例えば、ＣＨ１またはＣＨ３）は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＭまたはＩｇＥ重鎖、任意選択でヒトに由来する。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、ＴＣＲサブユニット定常領域に由来する。例えば、一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、ａ）ＴＣＲαおよびβサブユニット定常ドメイン；またはｂ）ＴＣＲγおよびδサブユニット定常ドメインに由来する。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、合成である。一部の実施形態では、ＶＬ抗体ドメインおよびＶＨ抗体ドメインのＣＤＲは全て、同じ抗体部分に由来する。一部の実施形態では、ＶＬ抗体ドメインおよびＶＨ抗体ドメインは、１つよりも多い抗体部分に由来する抗体ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＶＬ抗体ドメインは、ＶＨ抗体ドメインに由来する抗体ＣＤＲを含み、および／またはＶＨ抗体ドメインは、ＶＬ抗体ドメインに由来する抗体ＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＶＬ抗体ドメインは、１つの抗体に由来するフレームワーク領域と、別の抗体に由来する１つもしくは複数のＣＤＲとを含み、および／またはＶＨ抗体ドメインは、１つの抗体に由来するフレームワーク領域と、別の抗体に由来する１つもしくは複数のＣＤＲとを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合によって連結される。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第２の抗原結合ドメインとは、ジスルフィド結合によって連結される。一部の実施形態では、第１のペプチドリンカーと第２のペプチドリンカーとは、ジスルフィド結合によって連結される。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、それが由来する配列と比較して、１つまたは複数の改変（例えば、アミノ酸の置換、挿入および／または欠失）を含むバリアントである。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、互いに対するそれらの結合親和性を実質的に変更しない１つまたは複数の改変を含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチド���ンカーは、互いに対するそれらの結合親和性を増加させるおよび／または天然に存在しないジスルフィド結合を導入する１つまたは複数の改変を含む。一部の実施形態では、第１および第２のペプチドリンカーは、ノブイントゥホール改変を含む（例えば、Carter  P.  J  Immunol  Methods.  ２４８巻：７〜１５頁、２００１年を参照のこと）。一部の実施形態では、第１および第２のペプチドリンカーは、互いとのそれらの会合を増強するために、静電操縦によって改変される（例えば、ＷＯ２００６１０６９０５およびGunasekaran  Kら、J  Biol  Chem.  ２８５巻：１９６３７〜４６頁、２０１０年を参照のこと）。一部の実施形態では、Ｆｖ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。
【０１４５】
一部の実施形態では、抗体部分（例えば、Ｆａｂ様抗原結合モジュールまたはＦｖ様抗原結合モジュール）は、完全ヒト配列と１つまたは複数の合成領域とを含む、半合成である。一部の実施形態では、抗体部分は、完全ヒトＶＬと、完全ヒトＦＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４領域ならびに合成ＨＣ−ＣＤＲ３を含む半合成ＶＨとを含む、半合成である。一部の実施形態では、半合成ＶＨは、約５〜約２５（例えば、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５のいずれか）アミノ酸長の配列を有する完全合成ＨＣ−ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、半合成ＶＨまたは合成ＨＣ−ＣＤＲ３は、約５〜約２５（例えば、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５のいずれか）アミノ酸長の配列を有する完全合成ＨＣ−ＣＤＲ３領域を含む半合成ライブラリー（例えば、半合成ヒトライブラリー）から取得され、配列中の各アミノ酸は、標準的なヒトアミノ酸マイナスシステインからランダムに選択される。一部の実施形態では、合成ＨＣ−ＣＤＲ３は、約１０〜約１９（例えば、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８または１９のいずれか）アミノ酸長である。一部の実施形態では、抗体部分は、半合成ＶＬと半合成ＶＨとを含む、半合成である。一部の実施形態では、抗体部分は、固定されたヒトＶＨ／ＶＬフレームワークペアリングを有するが、重鎖および軽鎖の両方の６つ全てのＣＤＲについてランダム化された合成配列を有する抗体を含む、完全合成である。
【０１４６】
抗体部分（例えば、Ｆａｂ様抗原結合モジュールまたはＦｖ様抗原結合モジュール）は、一部の実施形態では、１つもしくは複数の抗体部分（例えば、モノクローナル抗体）に由来する特定のＣＤＲ配列、または１つもしくは複数のアミノ酸置換を含むかかる配列のある特定のバリアントを含む。一部の実施形態では、バリアント配列中のアミノ酸置換は、標的抗原に結合する抗体部分の能力を実質的に低減させない。標的抗原結合親和性を実質的に改善する、または一部の他の特性、例えば、標的抗原の関連バリアントとの特異性および／もしくは交差反応性に影響を与える変更もまた、企図される。
【０１４７】
ＴＣＲＭは、ａ）第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴ細胞受容体ドメイン（ＴＣＲＤ）を含む第１のポリペプチド鎖、およびｂ）第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤを含む第２のポリペプチド鎖、を含む。一部の実施形態では、第１の膜貫通ドメインは、第１のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインであり、および／または第２の膜貫通ドメインは、第２のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインである。一部の実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα鎖（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＣＣＩ７３８９５）であり、第２のＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲβ鎖（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＣＣＩ７３８９３）である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲβ鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲα鎖である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲγ鎖（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＧＥ９１７８８）であり、第２のＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲδ鎖（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＡＱ５７２７２）である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲδ鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲγ鎖である。一部の実施形態では、第１および／または第２の膜貫通ドメインは、配列番号７７〜８０のアミノ酸配列のうち１つ中に含まれる膜貫通ドメインを個々に含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、第１および／または第２の膜貫通ドメインは、配列番号１〜４のアミノ酸配列のいずれか１つを個々に含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、膜貫通ドメインのアミノ末端側に、第１の接続ペプチドをさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、膜貫通ドメインのアミノ末端側に、第２の接続ペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１の接続ペプチドは、第１のＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全てもしくは一部分を含み、および／または第２の接続ペプチドは、第２のＴＣＲサブユニットの接続ペプチドの全てもしくは一部分を含む。一部の実施形態では、第１の膜貫通ドメインと第１の接続ペプチドとは、異なるＴＣＲサブユニットに由来し、および／または第２の膜貫通ドメインと第２の接続ペプチドとは、異なるＴＣＲサブユニットに由来する。一部の実施形態では、第１および／または第２の接続ペプチドは、配列番号７７〜８０のアミノ酸配列のうち１つ中に含まれる接続ペプチドまたはその断片を個々に含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、第１および／または第２の接続ペプチドは、配列番号５〜１２のアミノ酸配列のいずれか１つを個々に含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１の膜貫通ドメインのカルボキシ末端側に、第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２の膜貫通ドメインのカルボキシ末端側に、第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインの全てもしくは一部分を含み、および／または第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインの全てもしくは一部分を含む。一部の実施形態で��、第１および／または第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号７７〜８０のアミノ酸配列のいずれか１つ中に含まれる細胞内ドメインの全てまたは一部分を個々に含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号１３〜１４のアミノ酸配列のいずれか１つを個々に含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲサブユニットの断片であり、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ鎖の断片である。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合によって連結される。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとは、ジスルフィド結合によって連結される。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとは、第１の接続ペプチド中の残基と第２の接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合によって連結される。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、八量体ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体を形成するため（即ち、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進するため）に、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζの各々をリクルートすることが可能である。
【０１４８】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をそれによって形成する、ＴＣＲＭの第１のポリペプチド鎖のアミノ末端側に、抗体部分（例えば、Ｆａｂ様抗原結合モジュールまたはＦｖ様抗原結合モジュール）の第１のポリペプチド鎖の融合物、およびａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をそれによって形成する、ＴＣＲＭの第２のポリペプチド鎖のアミノ末端側に、抗体部分の第２のポリペプチド鎖の融合物、を含む分子である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、抗体部分の第１のポリペプチド鎖とＴＣＲＭの第１のポリペプチド鎖との間の第１のペプチドリンカー、および／または抗体部分の第２のポリペプチド鎖とＴＣＲＭの第２のポリペプチド鎖との間の第２のペプチドリンカーをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、約５〜約７０の間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５または７０のいずれか）アミノ酸長である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖は、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／またはａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖は、第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖は、第１の膜貫通ドメインのカルボキシ末端側に、第１のアクセサリ細胞内ドメインをさらに含み、および／またはａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖は、第２の膜貫通ドメインのカルボキシ末端側に、第２のアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のアクセサリ細胞内ドメインは、ＴＣＲ共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、ＴＣＲ共刺激ドメインは、配列番号７０または７１のアミノ酸配列の全てまたは一部分を含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のアクセサリ細胞内ドメインは、エピトープタグを含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合によって連結される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ヘテロ二量体である。
【０１４９】
一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、罹患細胞において発現される疾患関連抗原である。一部の実施形態では、標的抗原は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む複合体である。ペプチド／ＭＨＣ複合体には、例えば、罹患細胞において発現される疾患関連抗原に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む表面提示された複合体が含まれる。一部の実施形態では、全長疾患関連抗原は、罹患細胞の表面上では通常発現されない（例えば、疾患関連抗原は、細胞内タンパク質または分泌されたタンパク質である）。一部の実施形態では、疾患はがんであり、疾患関連抗原は、がん細胞において発現される腫瘍関連抗原である。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、腫瘍性タンパク質である。一部の実施形態では、腫瘍性タンパク質は、癌原遺伝子における変異の結果であり、腫瘍性タンパク質は、変異を含むネオエピトープを含む。例えば、一部の実施形態では、標的抗原は、細胞表面腫瘍関連抗原（例えば、ネオエピトープを含む腫瘍性タンパク質）である。一部の実施形態では、標的抗原は、がん細胞の表面上では通常発現されない腫瘍関連抗原（例えば、ネオエピトープを含む腫瘍性タンパク質）（例えば、細胞内腫瘍関連抗原または分泌された腫瘍関連抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む複合体である。一部の実施形態では、疾患はウイルス感染症であり、疾患関連抗原は、感染細胞において発現されるウイルス関連抗原である。例えば、一部の実施形態では、標的抗原は、細胞表面ウイルス関連抗原である。一部の実施形態では、標的抗原は、ウイルス感染細胞の表面上では通常発現されないウイルス関連抗原（例えば、細胞内ウイルス関連抗原または分泌されたウイルス関連抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む複合体である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲ構築物は、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭの間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約０．１ｐＭ、１．０ｐＭ、１０ｐＭ、５０ｐＭ、１００ｐＭ、５００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭまたは５００ｎＭのいずれか）のＫｄで、標的抗原を結合する。
【０１５０】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、細胞表面抗原に特異的に結合する抗体部分（例えば、Ｆａｂ様抗原結合モジュールまたはＦｖ様抗原結合モジュール）を含み、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。完全抗原、例えば、細胞表面抗原への特異的結合は、「ＭＨＣ拘束されない結合」と呼ばれる場合がある。
【０１５１】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む複合体に特異的に結合する抗体部分（例えば、Ｆａｂ様抗原結合モジュールまたはＦｖ様抗原結合モジュール）を含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む複合体への特異的結合は、「ＭＨＣ拘束された結合」と呼ばれる場合がある。
【０１５２】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣクラスＩタンパク質とを含む複合体に特異的に結合する抗体部分（例えば、Ｆａｂ様抗原結合モジュールまたはＦｖ様抗原結合モジュール）を含み、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−ＦまたはＨＬＡ−Ｇである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＢまたはＨＬＡ−Ｃである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ｂである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ｃである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０１、ＨＬＡ−Ａ０２、ＨＬＡ−Ａ０３、ＨＬＡ−Ａ０９、ＨＬＡ−Ａ１０、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ１９、ＨＬＡ−Ａ２３、ＨＬＡ−Ａ２４、ＨＬＡ−Ａ２５、ＨＬＡ−Ａ２６、ＨＬＡ−Ａ２８、ＨＬＡ−Ａ２９、ＨＬＡ−Ａ３０、ＨＬＡ−Ａ３１、ＨＬＡ−Ａ３２、ＨＬＡ−Ａ３３、ＨＬＡ−Ａ３４、ＨＬＡ−Ａ３６、ＨＬＡ−Ａ４３、ＨＬＡ−Ａ６６、ＨＬＡ−Ａ６８、ＨＬＡ−Ａ６９、ＨＬＡ−Ａ７４またはＨＬＡ−Ａ８０である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１〜５５５のいずれか１つ、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０２、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０３、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０４、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０５、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０７、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０８、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０９、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１０、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１１、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１２、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１３、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１４、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１５、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１６、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１７、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１８、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１９、ＨＬＡ−Ａ＊０２：２０、ＨＬＡ−Ａ＊０２：２１、ＨＬＡ−Ａ＊０２：２２またはＨＬＡ−Ａ＊０２：２４である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０１５３】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣクラスＩＩタンパク質とを含む複合体に特異的に結合する抗体部分（例えば、Ｆａｂ様抗原結合モジュールまたはＦｖ様抗原結合モジュール）を含み、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＱまたはＨＬＡ−ＤＲである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＰである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＱである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＲである。
【０１５４】
例えば、一部の実施形態では、ａ）標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュール、およびｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭ、を含むａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）が提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ＶＨ抗体ドメイン、ＣＨ１抗体ドメイン、ＶＬ抗体ドメインおよびＣＬ抗体ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＨ１ドメインは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）重鎖、任意選択でヒトに由来する。一部の実施形態では、ＣＨ１ドメインは、それが由来する配列と比較して、１つまたは複数の改変（例えば、アミノ酸の置換、挿入および／または欠失）を含むバリアントである。一部の実施形態では、ＣＬドメインは、カッパまたはラムダ軽鎖、任意選択でヒトに由来する。一部の実施形態では、ＣＬドメインは、それが由来する配列と比較して、１つまたは複数の改変（例えば、アミノ酸の置換、挿入および／または欠失）を含むバリアントである。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲ、例えば、αβＴＣＲまたはγδＴＣＲの膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲ、例えば、αβＴＣＲまたはγδＴＣＲの接続ペプチドまたはその断片をさらに含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインおよび接続ペプチドは、αβＴＣＲまたはγδＴＣＲに由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインはαβＴＣＲに由来し、接続ペプチドはγδＴＣＲに由来する、または膜貫通ドメインはγδＴＣＲに由来し、接続ペプチドはαβＴＣＲに由来する。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも１つの部分をさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲの細胞内ドメイン由来の配列を含む少なくとも１つのＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲサブユニットの断片を含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、少なくとも１つのジスルフィド結合をさらに含む。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ジスルフィド結合を含み、および／またはＴＣＲＭは、ジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ＣＨ１ドメイン中の残基とＣＬドメインの残基との間のジスルフィド結合を含み、および／またはＴＣＲＭは、第１の接続ペプチド中の残基と第２の接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからな��群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールとＴＣＲＭとの間にはペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０１５５】
一部の実施形態では、ａ）標的抗原に特異的に結合するＦｖ様抗原結合モジュール、およびｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭ、を含むａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）であって、標的抗原がペプチド／ＭＨＣ複合体である、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、Ｆｖ様抗原結合モジュールは、ＶＨ抗体ドメインとＶＬ抗体ドメインとを含む。一部の実施形態では、ＶＬ抗体ドメインのＣ末端に融合した第１のペプチドリンカーおよび／またはＶＨ抗体ドメインのＣ末端に融合した第２のペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、第１および第２のペプチドリンカーは、互いに結合することが可能である。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、免疫グロブリン重鎖および／または軽鎖定常領域に由来する。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、ＴＣＲサブユニット定常領域に由来する。例えば、一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、ａ）ＴＣＲαおよびβサブユニット定常ドメイン；またはｂ）ＴＣＲγおよびδサブユニット定常ドメインに由来する。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、合成である。一部の実施形態では、Ｆｖ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲ、例えば、αβＴＣＲまたはγδＴＣＲの膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲ、例えば、αβＴＣＲまたはγδＴＣＲの接続ペプチドまたはその断片をさらに含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインおよび接続ペプチドは、αβＴＣＲまたはγδＴＣＲに由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインはαβＴＣＲに由来し、接続ペプチドはγδＴＣＲに由来する、または膜貫通ドメインはγδＴＣＲに由来し、接続ペプチドはαβＴＣＲに由来する。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも１つの部分をさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲの細胞内ドメイン由来の配列を含む少なくとも１つのＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲサブユニットの断片を含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、少なくとも１つのジスルフィド結合をさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、ジスルフィド結合を含み、および／またはＴＣＲＭは、ジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、第１の接続ペプチド中の残基と第２の接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、標的抗原ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０１５６】
一部の実施形態では、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）ＶＨおよびＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；ならびにｂ）ＶＬおよびＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖を含み、第１の抗原結合ドメインのＶＨおよびＣＨ１ドメインと第２の抗原結合ドメインのＶＬおよびＣＬドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲα鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲβ鎖である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲβ鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲα鎖である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲγ鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲδ鎖である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲδ鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲγ鎖である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲサブユニットの接続ペプチドもしくはその断片をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲサブユニットの接続ペプチドもしくはその断片をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインの一部分をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインの一部分をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲサブユニットの細胞内ドメイン由来の配列を含み、および／または第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲサブユニットの細胞内ドメイン由来の配列を含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲサブユニットの断片であり、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ鎖の断片である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリ��ルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーが、および／または第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合によって連結される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）第１の抗原結合ドメイン中のＣＨ１抗体ドメイン中の残基と第２の抗原結合ドメイン中のＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、ＣＨ１ドメインは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）重鎖、任意選択でヒトに由来する。一部の実施形態では、ＣＨ１ドメインは、それが由来する配列と比較して、１つまたは複数の改変（例えば、アミノ酸の置換、挿入および／または欠失）を含むバリアントである。一部の実施形態では、ＣＬドメインは、カッパまたはラムダ軽鎖、任意選択でヒトに由来する。一部の実施形態では、ＣＬドメインは、それが由来する配列と比較して、１つまたは複数の改変（例えば、アミノ酸の置換、挿入および／または欠失）を含むバリアントである。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０１５７】
一部の実施形態では、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）ＶＨ抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）ＶＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み、第１の抗原結合ドメインのＶＨドメインと第２の抗原結合ドメインのＶＬドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦｖ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成し、標的抗原がペプチド／ＭＨＣ複合体である、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、Ｆｖ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲ  α鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲβ鎖である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲβ鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲα鎖である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲγ鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲδ鎖である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲδ鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲγ鎖である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲサブユニットの接続ペプチドもしくはその断片をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲサブユニットの接続ペプチドもしくはその断片をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインの一部分をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインの一部分をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲサブユニットの細胞内ドメイン由来の配列を含み、および／または第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲサブユニットの細胞内ドメイン由来の配列を含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲサブユニットの断片であり、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ鎖の断片である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーが、および／または第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、免疫グロブリン重鎖および／または軽鎖定常領域に由来する。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、ＴＣＲサブユニット定常領域に由来する。例えば、一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、ａ）ＴＣＲαおよびβサブユニット定常ドメイン；またはｂ）ＴＣＲγおよびδサブユニット定常ドメインに由来する。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、合成である。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合によって連結される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）第１のペプチドリンカー中の残基と第２のペプチドリンカー中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、それが由来する配列と比較して、１つまたは複数の改変（例えば、アミノ酸の置換、挿入および／または欠失）を含むバリアントである。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、互いに対するそれらの結合親和性を実質的に変更しない１つまたは複数の改変を含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、互いに対するそれらの結合親和性を増加させるおよび／または天然に存在しないジスルフィド結合を導入する１つまたは複数の改変を含む。一部の実施形態では、標的抗原ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０１５８】
一部の実施形態では、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）ＶＨおよびＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインとＴＣＲα鎖の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；ならびにｂ）ＶＬおよびＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインとＴＣＲβ鎖の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み、第１の抗原結合ドメインのＶＨおよびＣＨ１ドメインと第２の抗原結合ドメインのＶＬおよびＣＬドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、ＴＣＲα鎖の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、ＴＣＲβ鎖の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、ＴＣＲα鎖の細胞外ドメインの一部分をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、ＴＣＲβ鎖の細胞外ドメインの一部分をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、ＴＣＲα鎖の細胞内ドメイン由来の配列を含み、および／または第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、ＴＣＲβ鎖の細胞内ドメイン由来の配列を含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーが、および／または第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合によって連結される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）第１の抗原結合ドメイン中のＣＨ１抗体ド��イン中の残基と第２の抗原結合ドメイン中のＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０１５９】
一部の実施形態では、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）ＶＨおよびＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインとＴＣＲβ鎖の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；ならびにｂ）ＶＬおよびＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインとＴＣＲα鎖の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み、第１の抗原結合ドメインのＶＨおよびＣＨ１ドメインと第２の抗原結合ドメインのＶＬおよびＣＬドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、ＴＣＲβ鎖の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、ＴＣＲα鎖の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、ＴＣＲβ鎖の細胞外ドメインの一部分をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、ＴＣＲα鎖の細胞外ドメインの一部分をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、ＴＣＲβ鎖の細胞内ドメイン由来の配列を含み、および／または第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、ＴＣＲα鎖の細胞内ドメイン由来の配列を含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーが、および／または第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合によって連結される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）第１の抗原結合ドメイン中のＣＨ１抗体ド��イン中の残基と第２の抗原結合ドメイン中のＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０１６０】
一部の実施形態では、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）ＶＨおよびＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインとＴＣＲγ鎖の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；ならびにｂ）ＶＬおよびＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインとＴＣＲδ鎖の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み、第１の抗原結合ドメインのＶＨおよびＣＨ１ドメインと第２の抗原結合ドメインのＶＬおよびＣＬドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、ＴＣＲγ鎖の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、ＴＣＲδ鎖の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、ＴＣＲγ鎖の細胞外ドメインの一部分をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、ＴＣＲδ鎖の細胞外ドメインの一部分をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、ＴＣＲγ鎖の細胞内ドメイン由来の配列を含み、および／または第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、ＴＣＲδ鎖の細胞内ドメイン由来の配列を含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーが、および／または第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合によって連結される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）第１の抗原結合ドメイン中のＣＨ１抗体ド��イン中の残基と第２の抗原結合ドメイン中のＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０１６１】
一部の実施形態では、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）ＶＨおよびＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインとＴＣＲδ鎖の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；ならびにｂ）ＶＬおよびＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインとＴＣＲγ鎖の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み、第１の抗原結合ドメインのＶＨおよびＣＨ１ドメインと第２の抗原結合ドメインのＶＬおよびＣＬドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、ＴＣＲδ鎖の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、ＴＣＲγ鎖の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、ＴＣＲδ鎖の細胞外ドメインの一部分をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、ＴＣＲγ鎖の細胞外ドメインの一部分をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、ＴＣＲδ鎖の細胞内ドメイン由来の配列を含み、および／または第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、ＴＣＲγ鎖の細胞内ドメイン由来の配列を含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーが、および／または第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合によって連結される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）第１の抗原結合ドメイン中のＣＨ１抗体ド��イン中の残基と第２の抗原結合ドメイン中のＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０１６２】
一部の実施形態では、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）ＶＨおよびＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；ならびにｂ）ＶＬおよびＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み、第１の抗原結合ドメインのＶＨおよびＣＨ１ドメインと第２の抗原結合ドメインのＶＬおよびＣＬドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲサブユニットの第１の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲサブユニットの第２の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含み、第１および／または第２の接続ペプチドは、配列番号５〜１２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、第１および／または第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号１３〜１４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）配列番号７０もしくは７１のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達配列；および／またはｂ）配列番号５０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）エピトープタグを含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含み、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーが、および／または第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合によって連結される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）第１の抗原結合ドメイン中のＣＨ１抗体ドメイン中の残基と第２の抗原結合ドメイン中のＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０１６３】
一部の実施形態では、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）ＶＨ抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）ＶＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み、第１の抗原結合ドメインのＶＨドメインと第２の抗原結合ドメインのＶＬドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦｖ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成し、標的抗原がペプチド／ＭＨＣ複合体である、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、Ｆｖ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲサブユニットの第１の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲサブユニットの第２の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含み、第１および／または第２の接続ペプチドは、配列番号５〜１２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、第１および／または第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号１３〜１４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）配列番号７０もしくは７１のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達配列；および／またはｂ）配列番号５０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）エピトープタグを含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含み、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーが、および／または第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、第１および第２のペプチドリンカーは、互いに結合することが可能である。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、免疫グロブリン重鎖および／または軽鎖定常領域に由来する。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、ＴＣＲサブユニット定常領域に由来する。例えば、一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、ａ）ＴＣＲαおよびβサブユニット定常ドメイン；またはｂ）ＴＣＲγおよびδサブユニット定常ドメインに由来する。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、合成である。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合によって連結される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）第１のペプチドリンカー中の残基と第２のペプチドリンカー中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、それが由来する配列と比較して、１つまたは複数の改変（例えば、アミノ酸の置換、挿入および／または欠失）を含むバリアントである。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、互いに対するそれらの結合親和性を実質的に変更しない１つまたは複数の改変を含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、互いに対するそれらの結合親和性を増加させるおよび／または天然に存在しないジスルフィド結合を導入する１つまたは複数の改変を含む。一部の実施形態では、標的抗原ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０１６４】
一部の実施形態では、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、ＶＨおよびＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと、配列番号５〜１２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）接続ペプチドを含む第１のＴＣＲＤと、配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）膜貫通ドメインとを含む第１のポリペプチド鎖；ならびにｂ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、ＶＬおよびＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと、配列番号５〜１２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）接続ペプチドを含む第２のＴＣＲＤと、配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）膜貫通ドメインとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み；第１の抗原結合ドメインのＶＨおよびＣＨ１ドメインと第２の抗原結合ドメインのＶＬおよびＣＬドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、第１および／または第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号１３〜１４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）配列番号７０もしくは７１のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達配列；および／またはｂ）配列番号５０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）エピトープタグを含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含み、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）第１の抗原結合ドメイン中のＣＨ１抗体ドメイン中の残基と第２の抗原結合ドメイン中のＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０１６５】
一部の実施形態では、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、ＶＨ抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと、配列番号５〜１２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）接続ペプチドを含む第１のＴＣＲＤと、配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）膜貫通ドメインとを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、ＶＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと、配列番号５〜１２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）接続ペプチドを含む第２のＴＣＲＤと、配列番号１〜４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）膜貫通ドメインとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み、第１の抗原結合ドメインのＶＨドメインと第２の抗原結合ドメインのＶＬドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦｖ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成し、標的抗原がペプチド／ＭＨＣ複合体である、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、Ｆｖ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲサブユニットの第１の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲサブユニットの第２の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含み、第１および／または第２の接続ペプチドは、配列番号５〜１２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、第１および／または第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、配列番号１３〜１４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）配列番号７０もしくは７１のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達配列；および／またはｂ）配列番号５０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）エピトープタグを含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含み、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーが、および／または第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、第１および第２のペプチドリンカーは、互いに結合することが可能である。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、免疫グロブリン重鎖および／または軽鎖定常領域に由来する。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、ＴＣＲサブユニット定常領域に由来する。例えば、一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、ａ）ＴＣＲαおよびβサブユニット定常ドメイン；またはｂ）ＴＣＲγおよびδサブユニット定常ドメインに由来する。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、合成である。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合によって連結される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）第１のペプチドリンカー中の残基と第２のペプチドリンカー中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、それが由来する配列と比較して、１つまたは複数の改変（例えば、アミノ酸の置換、挿入および／または欠失）を含むバリアントである。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、互いに対するそれらの結合親和性を実質的に変更しない１つまたは複数の改変を含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、互いに対するそれらの結合親和性を増加させるおよび／または天然に存在しないジスルフィド結合を導入する１つまたは複数の改変を含む。一部の実施形態では、標的抗原ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０１６６】
一部の実施形態では、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第１の抗原結合ドメインと配列番号１５のアミノ酸配列を含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第２の抗原結合ドメインと配列番号１６のアミノ酸配列を含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み；第１の抗原結合ドメインと第２の抗原結合ドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）配列番号７０もしくは７１のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達配列；および／またはｂ）配列番号５０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）エピトープタグを含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含み、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）Ｆａｂ様抗原結合モジュール中のＣＨ１抗体ドメイン中の残基とＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０１６７】
一部の実施形態では、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第１の抗原結合ドメインと配列番号１７のアミノ酸配列を含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第２の抗原結合ドメインと配列番号１８のアミノ酸配列を含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み；第１の抗原結合ドメインと第２の抗原結合ドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）配列番号７０もしくは７１のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達配列；および／またはｂ）配列番号５０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）エピトープタグを含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含み、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）Ｆａｂ様抗原結合モジュール中のＣＨ１抗体ドメイン中の残基とＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０１６８】
一部の実施形態では、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第１の抗原結合ドメインと配列番号１９のアミノ酸配列を含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第２の抗原結合ドメインと配列番号２０のアミノ酸配列を含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み；第１の抗原結合ドメインと第２の抗原結合ドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）配列番号７０もしくは７１のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達配列；および／またはｂ）配列番号５０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）エピトープタグを含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含み、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）Ｆａｂ様抗原結合モジュール中のＣＨ１抗体ドメイン中の残基とＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０１６９】
一部の実施形態では、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第１の抗原結合ドメインと配列番号２１のアミノ酸配列を含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第２の抗原結合ドメインと配列番号２２のアミノ酸配列を含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み；第１の抗原結合ドメインと第２の抗原結合ドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）配列番号７０もしくは７１のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達配列；および／またはｂ）配列番号５０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）エピトープタグを含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含み、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）Ｆａｂ様抗原結合モジュール中のＣＨ１抗体ドメイン中の残基とＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０１７０】
一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣ  Ｉタンパク質を含む複合体を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含む、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。
【０１７１】
一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣ  Ｉタンパク質を含む複合体を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含む、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。
【０１７２】
一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣ  Ｉタンパク質を含む複合体を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）配列番号２７のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含む、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。
【０１７３】
一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣ  Ｉタンパク質を含む複合体を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含む、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。
【０１７４】
一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣ  Ｉタンパク質を含む複合体を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含む、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。
【０１７５】
一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣ  Ｉタンパク質を含む複合体を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含む、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。
【０１７６】
一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣ  Ｉタンパク質を含む複合体を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含む、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。
【０１７７】
一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣ  Ｉタンパク質を含む複合体を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、配列番号３８のアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＶＨ抗体ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号４０のアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＶＬ抗体ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗原結合モジュールを含む、ａｂＴＣＲが提供される。
【０１７８】
したがって、一部の実施形態では、上記ａｂＴＣＲのいずれかにしたがう、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣ  Ｉタンパク質を含む複合体を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、Ｆａｂ様抗原結合モジュールのＶＨ抗体ドメインが、配列番号３８のアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）配列、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントで置き換えられ、Ｆａｂ様抗原結合モジュールのＶＬ抗体ドメインが、配列番号４０のアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）配列、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントで置き換えられる、ａｂＴＣＲが提供される。
【０１７９】
一部の実施形態では、ＣＤ１９を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含む、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。
【０１８０】
一部の実施形態では、ＣＤ１９を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含む、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。
【０１８１】
一部の実施形態では、ＣＤ１９を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）配列番号５５のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含む、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。
【０１８２】
一部の実施形態では、ＣＤ１９を特異的に認識するａｂＴＣＲであって、ａ）配列番号５６のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含む、ａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。
【０１８３】
一部の実施形態では、ＣＤ１９を特異的に認識する、本明細書に記載される実施形態のいずれかにしたがうａｂＴＣＲであって、配列番号４５のアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＶＨ抗体ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号４６のアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＶＬ抗体ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗原結合モジュールを含む、ａｂＴＣＲが提供される。
【０１８４】
一部の実施形態では、ＣＤ１９を特異的に認識する、本明細書に記載される実施形態のいずれかにしたがうａｂＴＣＲであって、配列番号４５のアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＶＨ抗体ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号５７のアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＶＬ抗体ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗原結合モジュールを含む、ａｂＴＣＲが提供される。
【０１８５】
一部の実施形態では、ＣＤ１９を特異的に認識する、本明細書に記載される実施形態のいずれかにしたがうａｂＴＣＲであって、配列番号５８のアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＶＨ抗体ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号５７のアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＶＬ抗体ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗原結合モジュールを含む、ａｂＴＣＲが提供される。
【０１８６】
一部の実施形態では、ＣＤ１９を特異的に認識する、本明細書に記載される実施形態のいずれかにしたがうａｂＴＣＲであって、配列番号５９のアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＶＨ抗体ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号５７のアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＶＬ抗体ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗原結合モジュールを含む、ａｂＴＣＲが提供される。
【０１８７】
一部の実施形態では、ＮＹ−ＥＳＯ−１  １５７−１６５ペプチドおよびＭＨＣ  Ｉタンパク質を含む複合体を特異的に認識する、本明細書に記載される実施形態のいずれかにしたがうａｂＴＣＲであって、配列番号７２のアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＶＨ抗体ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号７３のアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＶＬ抗体ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗原結合モジュールを含む、ａｂＴＣＲが提供される。
【０１８８】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかにしたがう、標的抗原への結合について第２の抗原結合モジュールと競合する第１の抗原結合モジュールを含むａｂＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、第１の抗原結合モジュールは、第２の抗原結合モジュールと同じまたは実質的に同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、標的抗原への第１の抗原結合モジュールの結合は、標的抗原への第２の抗原結合モジュールの結合を、少なくとも約７０％（例えば、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％のいずれか）阻害し、または逆もまた同様である。一部の実施形態では、第１の抗原結合モジュールおよび第２の抗原結合モジュールは、標的抗原への結合について交差競合する、即ち、第１および第２の抗原結合モジュールの各々は、標的抗原への結合について他方と競合する。
【０１８９】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかにしたがうａｂＴＣＲであって、第１の抗原結合ドメインがＶＬおよびＣＨ１抗体ドメインを含み、第２の抗原結合ドメインがＶＨおよびＣＬ抗体ドメインを含むように、ＶＬおよびＶＨドメインが相互交換される、ａｂＴＣＲが提供される。
【０１９０】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかにしたがうａｂＴＣＲと、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのシグナル伝達モジュールとを含む複合体が提供される。一部の実施形態では、複合体は、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζの各々を含む。したがって、一部の実施形態では、ａｂＴＣＲ、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζを含む複合体が提供される。
【０１９１】
異なる態様は、以下の種々のセクションにおいてさらに詳細に議論される。
【０１９２】
核酸
ａｂＴＣＲをコードする核酸分子もまた企図される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかによれば、ａｂＴＣＲをコードする核酸（または核酸のセット）が提供される。
【０１９３】
本発明は、本発明の核酸が挿入されたベクターもまた提供する。
【０１９４】
簡潔にまとめると、ａｂＴＣＲをコードする核酸によるａｂＴＣＲの発現は、その核酸が、例えば、プロモーター（例えば、リンパ球特異的プロモーター）および３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む５’および３’調節エレメントに作動可能に連結するように、適切な発現ベクター中に核酸を挿入することによって達成され得る。ベクターは、真核生物宿主細胞における複製および組込みに適切であり得る。典型的なクローニングベクターおよび発現ベクターは、転写ターミネーターおよび翻訳ターミネーター、開始配列、ならびに所望の核酸配列の発現の調節に有用なプロモーターを含む。
【０１９５】
本発明の核酸はまた、標準的な遺伝子送達プロトコールを使用して、核酸免疫および遺伝子治療のために使用され得る。遺伝子送達のための方法は、当該分野で公知である。例えば、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第５，３９９，３４６号、同第５，５８０，８５９号、同第５，５８９，４６６号を参照のこと。一部の実施形態では、本発明は、遺伝子治療ベクターを提供する。
【０１９６】
核酸は、いくつかの型のベクター中にクローニングされ得る。例えば、核酸は、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルスおよびコスミドが含まれるがこれらに限定されないベクター中にクローニングされ得る。特に目的とするベクターには、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクターおよび配列決定ベクターが含まれる。
【０１９７】
さらに、発現ベクターは、ウイルスベクターの形態で細胞に提供され得る。ウイルスベクターテクノロジーは、当該分野で周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２００１年、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）中、ならびに他のウイルス学および分子生物学のマニュアル中に記載されている。ベクターとして有用なウイルスには、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスおよびレンチウイルスが含まれるがこれらに限定されない。一般に、適切なベクターは、少なくとも１種の生物において機能的な複製起点、プロモーター配列、簡便な制限エンドヌクレアーゼ部位、および１または複数の選択可能なマーカーを含む（例えば、ＷＯ０１／９６５８４；ＷＯ０１／２９０５８；および米国特許第６，３２６，１９３号を参照のこと）。
【０１９８】
いくつかのウイルスベースの系が、哺乳動物細胞中への遺伝子移入のために開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達系のための簡便なプラットフォームを提供する。選択された遺伝子は、当該分野で公知の技術を使用して、ベクター中に挿入され得、レトロウイルス粒子中にパッケージングされ得る。次いで、組換えウイルスは、単離され得、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏのいずれかで、対象の細胞に送達され得る。いくつかのレトロウイルス系が、当該分野で公知である。一部の実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。いくつかのアデノウイルスベクターが、当該分野で公知である。一部の実施形態では、レンチウイルスベクターが使用される。レンチウイルスなどのレトロウイルスに由来するベクターは、導入遺伝子の長期の安定な組込みおよび娘細胞におけるその伝播を可能にするので、長期遺伝子移入を達成するのに適切なツールである。レンチウイルスベクターは、肝細胞などの非増殖性細胞を形質導入できるという点で、マウス白血病ウイルスなどのオンコ−レトロウイルス（ｏｎｃｏ−ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）に由来するベクターを越えるさらなる利点を有する。これらは、低い免疫原性のさらなる利点もまた有する。
【０１９９】
さらなるプロモーターエレメント、例えば、エンハンサーは、転写開始の頻度を調節する。典型的には、これらは、開始部位の３０〜１１０ｂｐ上流の領域中に位置するが、いくつかのプロモーターは、開始部位の下流にも機能的エレメントを含むことが最近示されている。プロモーターエレメント間のスペーシングは、エレメントが互いに対して反転されるまたは移動される場合にプロモーター機能が保存されるように、しばしば柔軟である。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターでは、プロモーターエレメント間のスペーシングは、活性が減退し始める前に、５０ｂｐ離れて増加され得る。
【０２００】
適切なプロモーターの一例は、最初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、それに作用的に連結した任意のポリヌクレオチド配列の高いレベルの発現を駆動することが可能な強い構成的プロモーター配列である。適切なプロモーターの別の例は、伸長成長因子（Ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ）−１α（ＥＦ−１α）である。しかし、サルウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の長い末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バーウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ならびに、これらに限定されないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーターおよびクレアチンキナーゼプロモーターなどのヒト遺伝子プロモーターが含まれるがこれらに限定されない、他の構成的プロモーター配列もまた使用され得る。さらに、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定されるべきではない。誘導性プロモーターもまた、本発明の一部として企図される。誘導性プロモーターの使用は、かかる発現が所望される場合には作用的に連結したポリヌクレオチド配列の発現のスイッチをオンにし、または発現が所望されない場合には発現のスイッチをオフにすることが可能な分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例には、メタロチオネイン（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｉｎｅ）プロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーターおよびテトラサイクリンプロモーターが含まれるがこれらに限定されない。
【０２０１】
さらに、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定されるべきではない。誘導性プロモーターもまた、本発明の一部として企図される。誘導性プロモーターの使用は、かかる発現が所望される場合には作用的に連結したポリヌクレオチド配列の発現のスイッチをオンにし、または発現が所望されない場合には発現のスイッチをオフにすることが可能な分子スイッチを提供する。真核生物細胞における使用のための例示的な誘導性プロモーター系には、ホルモン調節されるエレメント（例えば、Mader,  S.およびWhite,  J.  H.（１９９３年）Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  ９０巻：５６０３〜５６０７頁を参照のこと）、合成リガンド調節されるエレメント（例えば、Spencer,  D.  M.ら（１９９３年）Science  ２６２巻：１０１９〜１０２４頁を参照のこと）および電離放射線調節されるエレメント（例えば、Manome,  Y.ら（１９９３年）Biochemistry  ３２巻：１０６０７〜１０６１３頁；Datta,  R.ら（１９９２年）Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  ８９巻：１０１４〜１０１５３頁を参照のこと）が含まれるがこれらに限定されない。ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ哺乳動物系における使用のためのさらなる例示的な誘導性プロモーター系は、Gingrichら（１９９８年）Annual  Rev.  Neurosci  ２１巻：３７７〜４０５頁に概説されている。
【０２０２】
本発明における使用のための例示的な誘導性プロモーター系は、Ｔｅｔ系である。かかる系は、Gossenら（１９９３年）によって記載されたＴｅｔ系に基づく。例示的な実施形態では、目的のポリヌクレオチドは、１つまたは複数のＴｅｔオペレーター（ＴｅｔＯ）部位を含むプロモーターの制御下にある。不活性状態では、Ｔｅｔリプレッサー（ＴｅｔＲ）がＴｅｔＯ部位に結合し、プロモーターからの転写を抑制する。活性状態では、例えば、テトラサイクリン（Ｔｃ）、アンヒドロテトラサイクリン、ドキシサイクリン（Ｄｏｘ）、またはそれらの活性アナログなどの誘導剤の存在下では、誘導剤は、ＴｅｔＯからのＴｅｔＲの放出を引き起こし、それによって、転写が起こるのを可能にする。ドキシサイクリンは、１−ジメチルアミノ−２，４ａ，５，７，１２−ペンタヒドロキシ−１１−メチル−４，６−ジオキソ−１，４ａ，１１，１１ａ，１２，１２ａ−ヘキサヒドロテトラセン−３−カルボキサミドの化学名を有する、テトラサイクリンファミリーの抗生物質のメンバーである。
【０２０３】
一実施形態では、ＴｅｔＲは、哺乳動物細胞、例えば、マウスまたはヒト細胞における発現のために、コドン最適化される。ほとんどのアミノ酸は、遺伝コードの縮重に起因して１つよりも多いコドンによってコードされ、核酸によってコードされるアミノ酸配列におけるいずれの変更も伴わずに、所与の核酸のヌクレオチド配列におけるかなりのバリエーションを可能にする。しかし、多くの生物が、「コドンバイアス」（即ち、所与のアミノ酸についての特定のコドン（複数可）の使用へのバイアス）としても公知の、コドン使用法における差異を示す。コドンバイアスは、ｍＲＮＡ翻訳の効率を次に増加させる、特定のコドンのためのｔＲＮＡの優勢な種の存在と相関する場合が多い。したがって、特定の生物（例えば、原核生物）に由来するコード配列は、コドン最適化を介して、異なる生物（例えば、真核生物）における改善された発現のために調整され得る。
【０２０４】
Ｔｅｔ系の他の特定のバリエーションには、以下の「Ｔｅｔ−Ｏｆｆ」および「Ｔｅｔ−Ｏｎ」系が含まれる。Ｔｅｔ−Ｏｆｆ系では、転写は、ＴｃまたはＤｏｘの存在下では不活性である。その系では、単純ヘルペスウイルス由来のＶＰ１６の強いトランス活性化性ドメインに融合したＴｅｔＲから構成される、テトラサイクリン制御性トランス活性化因子タンパク質（ｔＴＡ）が、テトラサイクリン応答性プロモーターエレメント（ＴＲＥ）の転写制御下にある標的核酸の発現を調節する。ＴＲＥは、プロモーター（一般に、ヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）最初期プロモーターに由来するミニマルプロモーター配列）に融合したＴｅｔＯ配列コンカテマーから構成される。ＴｃまたはＤｏｘの非存在下では、ｔＴＡはＴＲＥに結合し、標的遺伝子の転写を活性化する。ＴｃまたはＤｏｘの存在下では、ｔＴＡは、ＴＲＥに結合できず、標的遺伝子からの発現は不活性なままである。
【０２０５】
逆に、Ｔｅｔ−Ｏｎ系では、転写は、ＴｃまたはＤｏｘの存在下で活性である。Ｔｅｔ−Ｏｎ系は、逆テトラサイクリン制御性トランス活性化因子、ｒｔＴＡに基づく。ｔＴＡと同様、ｒｔＴＡは、ＴｅｔＲリプレッサーおよびＶＰ１６トランス活性化ドメインから構成される融合タンパク質である。しかし、ＴｅｔＲ  ＤＮＡ結合部分における４アミノ酸の変化が、Ｄｏｘの存在下で標的導入遺伝子のＴＲＥ中のｔｅｔＯ配列のみを認識できるように、ｒｔＴＡの結合特徴を変更させる。したがって、Ｔｅｔ−Ｏｎ系では、ＴＲＥ調節される標的遺伝子の転写は、Ｄｏｘの存在下でのみｒｔＴＡによって刺激される。
【０２０６】
別の誘導性プロモーター系は、Ｅ．ｃｏｌｉ由来のｌａｃリプレッサー系である（Brownら、Cell  ４９巻：６０３〜６１２頁（１９８７年）を参照のこと）。ｌａｃリプレッサー系は、ｌａｃオペレーター（ｌａｃＯ）を含むプロモーターに作動可能に連結した目的のポリヌクレオチドの転写を調節することによって機能する。ｌａｃリプレッサー（ｌａｃＲ）は、ＬａｃＯに結合し、そうして、目的のポリヌクレオチドの転写を防止する。目的のポリヌクレオチドの発現は、適切な誘導剤、例えば、イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）によって誘導される。
【０２０７】
ポリペプチドまたはその一部分の発現を評価するために、細胞中に導入される発現ベクターは、ウイルスベクターを介してトランスフェクトまたは感染されることが求められる細胞の集団からの発現細胞の同定および選択を促進するために、選択可能なマーカー遺伝子もしくはレポーター遺伝子のいずれかまたはそれら両方もまた含み得る。他の態様では、選択可能なマーカーは、ＤＮＡの別々の小片上に保有され得、共トランスフェクション手順において使用され得る。選択可能なマーカーおよびレポーター遺伝子の両方には、宿主細胞における発現を可能にする適切な調節配列が隣接し得る。有用な選択可能なマーカーには、例えば、抗生物質耐性遺伝子、例えばｎｅｏなどが含まれる。
【０２０８】
レポーター遺伝子は、潜在的にトランスフェクトされた細胞を同定するため、および調節配列の機能性を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物または組織中に存在することもそれらによって発現されることもなく、ある容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性によってその発現が明らかにされるポリペプチドをコードする、遺伝子である。レポーター遺伝子の発現は、ＤＮＡがレシピエント細胞中に導入された後の適切な時点でアッセイされる。適切なレポーター遺伝子には、ルシフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼまたは緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子が含まれ得る（例えば、Ｕｉ−Ｔｅｌら、２０００年  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４７９巻：７９〜８２頁）。適切な発現系は、周知であり、公知の技術を使用して調製され得るまたは商業的に取得され得る。一般に、レポーター遺伝子の最も高いレベルの発現を示す最小の５’隣接領域を有する構築物が、プロモーターとして同定される。かかるプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結され得、プロモーター駆動性の転写をモジュレートする能力について薬剤を評価するために使用され得る。
【０２０９】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかにしたがうａｂＴＣＲをコードする核酸が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲをコードする核酸は、ａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列およびａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列を含む。一部の実施形態では、第１の核酸配列は、第１のベクター上に位置し、第２の核酸配列は、第２のベクター上に位置する。一部の実施形態では、第１および第２の核酸配列は、同じベクター上に位置する。ベクターは、例えば、哺乳動物発現ベクターおよびウイルスベクター（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスおよびレンチウイルスに由来するもの）からなる群から選択され得る。一部の実施形態では、第１の核酸配列は、第１のプロモーターの制御下にあり、第２の核酸配列は、第２のプロモーターの制御下にある。一部の実施形態では、第１および第２のプロモーターは、同じ配列を有する。一部の実施形態では、第１および第２のプロモーターは、異なる配列を有する。一部の実施形態では、第１および第２の核酸配列は、マルチシストロン性（例えば、バイシストロン性）ベクター中の単一のプロモーターの制御下で、単一の転写物として発現される。例えば、Kim,  JHら、PLoS  One  ６巻（４号）：ｅ１８５５６頁、２０１１年を参照のこと。一部の実施形態では、第１、第２および／または単一のプロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、第１の核酸配列は、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）における第２の核酸配列の発現レベルとほぼ同じである、宿主細胞における発現レベルを有する。一部の実施形態では、第１の核酸配列は、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）における第２の核酸配列の発現レベルの少なくとも約２（例えば、少なくとも約２、３、４、５またはそれよりも多くのいずれか）倍である、宿主細胞における発現レベルを有する。一部の実施形態では、第１の核酸配列は、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）における第２の核酸配列の発現レベルの約１／２倍以下（例えば、約１／２、１／３、１／４、１／５またはそれ未満のいずれか以下）である、宿主細胞における発現レベルを有する。発現は、ｍＲＮＡレベルまたはタンパク質レベルで決定され得る。ｍＲＮＡ発現のレベルは、ノーザンブロッティング、定量的ＲＴ−ＰＣＲ、マイクロアレイ分析などを含む、種々の周知の方法を使用して、核酸から転写されたｍＲＮＡの量を測定することによって決定され得る。タンパク質発現のレベルは、免疫細胞化学的染色、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット分析、発光アッセイ、質量分析、高速液体クロマトグラフィー、高圧液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析などを含む公知の方法によって測定され得る。
【０２１０】
したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかにしたがうａｂＴＣＲをコードする核酸であって、ａ）ａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列、およびｂ）ａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列を含み、第１の核酸配列が、第１のベクター（例えば、レンチウイルスベクター）上に位置し、第１のプロモーターに作動可能に連結し、第２の核酸配列が、第２のベクター（例えば、レンチウイルスベクター）上に位置し、第２のプロモーターに作動可能に連結する、核酸が提供される。一部の実施形態では、第１および第２のプロモーターは、同じ配列を有する。一部の実施形態では、第１および第２のプロモーターは、異なる配列を有する。一部の実施形態では、第１および／または第２のプロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、第１の核酸配列は、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）における第２の核酸配列の発現レベルとほぼ同じである、宿主細胞における発現レベルを有する。一部の実施形態では、第１の核酸配列は、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）における第２の核酸配列の発現レベルの少なくとも約２（例えば、少なくとも約２、３、４、５またはそれよりも多くのいずれか）倍である、宿主細胞における発現レベルを有する。一部の実施形態では、第１の核酸配列は、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）における第２の核酸配列の発現レベルの約１／２倍以下（例えば、約１／２、１／３、１／４、１／５またはそれ未満のいずれか以下）である、宿主細胞における発現レベルを有する。一部の実施形態では、第１および／または第２のベクターは、ウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）である。
【０２１１】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかにしたがうａｂＴＣＲをコードする核酸を含むベクター（例えば、レンチウイルスベクター）であって、ａ）ａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列に作動可能に連結した第１のプロモーター；およびｂ）ａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列に作動可能に連結した第２のプロモーターを含む、ベクターが提供される。一部の実施形態では、第１および第２のプロモーターは、同じ配列を有する。一部の実施形態では、第１および第２のプロモーターは、異なる配列を有する。一部の実施形態では、第１および／または第２のプロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、第１の核酸配列は、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）における第２の核酸配列の発現レベルとほぼ同じである、宿主細胞における発現レベルを有する。一部の実施形態では、第１の核酸配列は、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）における第２の核酸配列の発現レベルの少なくとも約２（例えば、少なくとも約２、３、４、５またはそれよりも多くのいずれか）倍である、宿主細胞における発現レベルを有する。一部の実施形態では、第１の核酸配列は、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）における第２の核酸配列の発現レベルの約１／２倍以下（例えば、約１／２、１／３、１／４、１／５またはそれ未満のいずれか以下）である、宿主細胞における発現レベルを有する。一部の実施形態では、ベクターは、ウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）である。
【０２１２】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかにしたがうａｂＴＣＲをコードする核酸を含むベクター（例えば、レンチウイルスベクター）であって、ａ）ａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列；およびｂ）ａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列を含み；第１および第２の核酸配列が、単一のプロモーターの制御下にある、ベクターが提供される。一部の実施形態では、プロモーターは、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に連結し、第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に連結し、第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、ベクターは、ウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）である。
【０２１３】
遺伝子を細胞中に導入し発現させる方法は、当該分野で公知である。発現ベクターに関して、ベクターは、当該分野の任意の方法によって、宿主細胞、例えば、哺乳動物、細菌、酵母または昆虫の細胞中に容易に導入され得る。例えば、発現ベクターは、物理的、化学的または生物学的手段によって、宿主細胞中に移入され得る。
【０２１４】
ポリヌクレオチドを宿主細胞中に導入するための物理的方法には、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、微粒子銃、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどが含まれる。ベクターおよび／または外因性核酸を含む細胞を産生するための方法は、当該分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２００１年、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を参照のこと。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドの宿主細胞中への導入は、リン酸カルシウムトランスフェクションによって実施される。
【０２１５】
目的のポリヌクレオチドを宿主細胞中に導入するための生物学的方法には、ＤＮＡベクターおよびＲＮＡベクターの使用が含まれる。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、哺乳動物、例えば、ヒト細胞中に遺伝子を挿入するための最も広く使用される方法になっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルス１、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルスなどに由来し得る。例えば、米国特許第５，３５０，６７４号および同第５，５８５，３６２号を参照のこと。
【０２１６】
ポリヌクレオチドを宿主細胞中に導入するための化学的手段には、コロイド分散系、例えば、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、ならびに水中油エマルジョン、ミセル、混合ミセルおよびリポソームを含む脂質ベースの系が含まれる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで送達ビヒクルとして使用するための例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。
【０２１７】
非ウイルス送達系が利用される場合、例示的な送達ビヒクルは、リポソームである。脂質製剤の使用が、核酸の宿主細胞中への導入（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ）のために企図される。別の態様では、核酸は、脂質と会合し得る。脂質と会合した核酸は、リポソームの水性内部中に封入され得、リポソームの脂質二重層内に散在され得、リポソームおよびオリゴヌクレオチドの両方と結合する連結分子を介してリポソームに結合され得、リポソーム中に捕捉され得、リポソームと複合体形成され得、脂質を含む溶液中に分散され得、脂質と混合され得、脂質と組み合わされ得、脂質中に懸濁物として含まれ得、ミセルと共に含まれもしくはミセルと複合体形成され得、または脂質と他の方法で会合し得る。脂質、脂質／ＤＮＡまたは脂質／発現ベクター会合組成物は、溶液中の任意の特定の構造に限定されない。例えば、これら組成物は、二重層構造中に、ミセルとして、または「崩壊した」構造で、存在し得る。これらはまた、溶液中に単に散在して、サイズまたは形状が均一ではない凝集体をおそらくは形成し得る。脂質は、天然に存在する脂質または合成脂質であり得る脂肪性物質である。例えば、脂質には、細胞質中に天然に存在する脂肪滴、ならびに長鎖脂肪族炭化水素ならびにその誘導体、例えば、脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコールおよびアルデヒドを含む化合物のクラスが含まれる。
【０２１８】
外因性核酸を宿主細胞中に導入するためまたは細胞を本発明の阻害剤に他の方法で曝露させるために使用される方法に関わらず、宿主細胞中の組換えＤＮＡ配列の存在を確認するために、種々のアッセイが実施され得る。かかるアッセイには、例えば、サザンおよびノーザンブロッティング、ＲＴ−ＰＣＲおよびＰＣＲなどの、当業者に周知の「分子生物学的」アッセイ；例えば、免疫学的手段（ＥＬＩＳＡおよびウエスタンブロット）によるまたは本発明の範囲内に入る薬剤を同定するための本明細書に記載されるアッセイによる、特定のペプチドの存在または非存在を検出するなどの「生化学的」アッセイが含まれる。
【０２１９】
ａｂＴＣＲエフェクター細胞
一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかにしたがうａｂＴＣＲをその表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）が提供される。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ａｂＴＣＲをコードする核酸を含み、ａｂＴＣＲは核酸から発現され、エフェクター細胞表面に局在化される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、外因的に発現され、エフェクター細胞と組み合わされる。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ａｂＴＣＲのＴＣＲＤが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、一部の実施形態では、エフェクター細胞はαβＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲδおよびγ鎖に由来する配列を含み、またはＴ細胞はγδＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲαおよびβ鎖に由来する配列を含む。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ａｂＴＣＲのＴＣＲＤが由来する内因性ＴＣＲサブユニットの一方または両方の発現を遮断するまたは減少させるように改変されている。例えば、一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲαおよびβ鎖に由来する配列を含み、あるいはエフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲγおよびδ鎖に由来する配列を含む。遺伝子発現を破壊するための細胞の改変には、例えば、ＲＮＡ干渉（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、遺伝子編集（例えば、ＣＲＩＳＰＲベースまたはＴＡＬＥＮベースの遺伝子ノックアウト）などを含む当該分野で公知の任意のかかる技術が含まれる。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかにしたがうａｂＴＣＲをコードする核酸を含むエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａｂＴＣＲが核酸から発現され、エフェクター細胞表面に局在化される、エフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲをコードする核酸は、ａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列およびａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列を含む。一部の実施形態では、第１の核酸配列は、第１のベクター上に位置し、第２の核酸配列は、第２のベクター上に位置する。一部の実施形態では、第１および第２の核酸配列は、同じベクター上に位置する。ベクターは、例えば、哺乳動物発現ベクターおよびウイルスベクター（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスおよびレンチウイルスに由来するもの）からなる群から選択され得る。一部の実施形態では、ベクターのうち１つまたは複数は、エフェクター細胞の宿主ゲノム中に組み込まれる。一部の実施形態では、第１の核酸配列は、第１のプロモーターの制御下にあり、第２の核��配列は、第２のプロモーターの制御下にある。一部の実施形態では、第１および第２のプロモーターは、同じ配列を有する。一部の実施形態では、第１および第２のプロモーターは、異なる配列を有する。一部の実施形態では、第１および第２の核酸は、単一のプロモーターの制御下にある。一部の実施形態では、第１、第２および／または単一のプロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現とほぼ同じである。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の少なくとも約２（例えば、少なくとも約２、３、４、５またはそれよりも多くのいずれか）倍である。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の約１／２倍以下（例えば、約１／２、１／３、１／４、１／５またはそれ未満のいずれか以下）である。発現は、ｍＲＮＡレベルまたはタンパク質レベルで決定され得る。ｍＲＮＡ発現のレベルは、ノーザンブロッティング、定量的ＲＴ−ＰＣＲ、マイクロアレイ分析などを含む、種々の周知の方法を使用して、核酸から転写されたｍＲＮＡの量を測定することによって決定され得る。タンパク質発現のレベルは、免疫細胞化学的染色、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット分析、発光アッセイ、質量分析、高速液体クロマトグラフィー、高圧液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析などを含む公知の方法によって測定され得る。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２２０】
したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかにしたがうａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）ａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする核酸配列に作動可能に連結した第１のプロモーターを含む第１の核酸、およびｂ）ａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする核酸配列に作動可能に連結した第２のプロモーターを含む第２の核酸、を含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸から発現され、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸から発現されて、ａｂＴＣＲを形成し、ａｂＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、第１および第２のプロモーターは、同じ配列を有する。一部の実施形態では、第１および第２のプロモーターは、異なる配列を有する。一部の実施形態では、第１および／または第２のプロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現とほぼ同じである。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の少なくとも約２（例えば、少なくとも約２、３、４、５またはそれよりも多くのいずれか）倍である。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の約１／２倍以下（例えば、約１／２、１／３、１／４、１／５またはそれ未満のいずれか以下）である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ａｂＴＣＲのＴＣＲＤが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、一部の実施形態では、エフェクター細胞はαβＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲδおよびγ鎖に由来する配列を含み、またはエフェクター細胞はγδＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲαおよびβ鎖に由来する配列を含む。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ａｂＴＣＲのＴＣＲＤが由来する内因性ＴＣＲサブユニットの一方または両方の発現を遮断するまたは減少させるように改変されている。例えば、一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲαおよびβ鎖に由来する配列を含み、あるいはエフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲγおよびδ鎖に由来する配列を含む。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。一部の実施形態では、ベクターは、エフェクター細胞の宿主ゲノム中に組み込まれるウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）である。
【０２２１】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかにしたがうａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）ａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列に作動可能に連結した第１のプロモーターを含む第１のベクター、およびｂ）ａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列に作動可能に連結した第２のプロモーターを含む第２のベクター、を含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現され、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現されて、ａｂＴＣＲを形成し、ａｂＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、第１および第２のプロモーターは、同じ配列を有する。一部の実施形態では、第１および第２のプロモーターは、異なる配列を有する。一部の実施形態では、第１および／または第２のプロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現とほぼ同じである。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の少なくとも約２（例えば、少なくとも約２、３、４、５またはそれよりも多くのいずれか）倍である。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の約１／２倍以下（例えば、約１／２、１／３、１／４、１／５またはそれ未満のいずれか以下）である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ａｂＴＣＲのＴＣＲＤが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、一部の実施形態では、エフェクター細胞はαβＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲδおよびγ鎖に由来する配列を含み、またはエフェクター細胞はγδＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲαおよびβ鎖に由来する配列を含む。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ａｂＴＣＲのＴＣＲＤが由来する内因性ＴＣＲサブユニットの一方または両方の発現を遮断するまたは減少させるように改変されている。例えば、一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲαおよびβ鎖に由来する配列を含み、あるいはエフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲγおよびδ鎖に由来する配列を含む。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。一部の実施形態では、第１および第２のベクターは、エフェクター細胞の宿主ゲノム中に組み込まれるウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）である。
【０２２２】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかにしたがうａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）ａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列に作動可能に連結した第１のプロモーター、およびｂ）ａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列に作動可能に連結した第２のプロモーターを含むベクターを含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現され、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現されて、ａｂＴＣＲを形成し、ａｂＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、第１および第２のプロモーターは、同じ配列を有する。一部の実施形態では、第１および第２のプロモーターは、異なる配列を有する。一部の実施形態では、第１および／または第２のプロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現とほぼ同じである。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の少なくとも約２（例えば、少なくとも約２、３、４、５またはそれよりも多くのいずれか）倍である。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の約１／２倍以下（例えば、約１／２、１／３、１／４、１／５またはそれ未満のいずれか以下）である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ａｂＴＣＲのＴＣＲＤが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、一部の実施形態では、エフェクター細胞はαβＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲδおよびγ鎖に由来する配列を含み、またはエフェクター細胞はγδＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲαおよびβ鎖に由来する配列を含む。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ａｂＴＣＲのＴＣＲＤが由来する内因性ＴＣＲサブユニットの一方または両方の発現を遮断するまたは減少させるように改変されている。例えば、一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲαおよびβ鎖に由来する配列を含み、あるいはエフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲγおよびδ鎖に由来する配列を含む。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。一部の実施形態では、第１および第２のベクターは、エフェクター細胞の宿主ゲノム中に組み込まれるウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）である。
【０２２３】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかにしたがうａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）ａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列に作動可能に連結した第１のプロモーター、およびｂ）ａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列に作動可能に連結した第２のプロモーターを含む、宿主ゲノム組み込みされたレンチウイルスベクターを含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現され、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現されて、ａｂＴＣＲを形成し、ａｂＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、第１および第２のプロモーターは、同じ配列を有する。一部の実施形態では、第１および第２のプロモーターは、異なる配列を有する。一部の実施形態では、第１および／または第２のプロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現とほぼ同じである。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の少なくとも約２（例えば、少なくとも約２、３、４、５またはそれよりも多くのいずれか）倍である。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖の発現は、第２のポリペプチド鎖の発現の約１／２倍以下（例えば、約１／２、１／３、１／４、１／５またはそれ未満のいずれか以下）である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ａｂＴＣＲのＴＣＲＤが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、一部の実施形態では、エフェクター細胞はαβＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲδおよびγ鎖に由来する配列を含み、またはエフェクター細胞はγδＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲαおよびβ鎖に由来する配列を含む。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ａｂＴＣＲのＴＣＲＤが由来する内因性ＴＣＲサブユニットの一方または両方の発現を遮断するまたは減少させるように改変されている。例えば、一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲαおよびβ鎖に由来する配列を含み、あるいはエフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲγおよびδ鎖に由来する配列を含む。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、内因性ＴＣＲ鎖の一方または両方の発現を遮断するまたは減少させるように改変されている。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２２４】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかにしたがうａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）ａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列、およびｂ）ａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列を含むベクターを含み、第１および第２の核酸配列が、単一のプロモーターの制御下にあり、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現され、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現されて、ａｂＴＣＲを形成し、ａｂＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、プロモーターは、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に連結し、第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に連結し、第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ａｂＴＣＲのＴＣＲＤが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、一部の実施形態では、エフェクター細胞はαβＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲδおよびγ鎖に由来する配列を含み、またはエフェクター細胞はγδＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲαおよびβ鎖に由来する配列を含む。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ａｂＴＣＲのＴＣＲＤが由来する内因性ＴＣＲサブユニットの一方または両方の発現を遮断するまたは減少させるように改変されている。例えば、一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲαおよびβ鎖に由来する配列を含み、あるいはエフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲγおよびδ鎖に由来する配列を含む。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。一部の実施形態では、ベクターは、エフェクター細胞の宿主ゲノム中に組み込まれるウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）である。
【０２２５】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかにしたがうａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）ａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列、およびｂ）ａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列を含む、宿主ゲノム組み込みされたレンチウイルスベクターを含み、第１および第２の核酸配列が、単一のプロモーターの制御下にあり、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現され、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現されて、ａｂＴＣＲを形成し、ａｂＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ａｂＴＣＲのＴＣＲＤが由来するＴＣＲサブユニットを発現しない。例えば、一部の実施形態では、エフェクター細胞はαβＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲδおよびγ鎖に由来する配列を含み、またはエフェクター細胞はγδＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲαおよびβ鎖に由来する配列を含む。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ａｂＴＣＲのＴＣＲＤが由来する内因性ＴＣＲサブユニットの一方または両方の発現を遮断するまたは減少させるように改変されている。例えば、一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲαおよびβ鎖に由来する配列を含み、あるいはエフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞であり、導入されたａｂＴＣＲのＴＣＲＤは、ＴＣＲγおよびδ鎖に由来する配列を含む。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２２６】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第１の抗原結合ドメインと配列番号１５のアミノ酸配列を含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列；およびｂ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第２の抗原結合ドメインと配列番号１６のアミノ酸配列を含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列、を含み；第１の抗原結合ドメインと第２の抗原結合ドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）配列番号７０もしくは７１のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達配列；および／またはｂ）配列番号５０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）エピトープタグを含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含み、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、γδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２２７】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第１の抗原結合ドメインと配列番号１７のアミノ酸配列を含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列；およびｂ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第２の抗原結合ドメインと配列番号１８のアミノ酸配列を含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列、を含み；第１の抗原結合ドメインと第２の抗原結合ドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）配列番号７０もしくは７１のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達配列；および／またはｂ）配列番号５０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）エピトープタグを含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含み、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、γδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２２８】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第１の抗原結合ドメインと配列番号１９のアミノ酸配列を含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列；およびｂ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第２の抗原結合ドメインと配列番号２０のアミノ酸配列を含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列、を含み；第１の抗原結合ドメインと第２の抗原結合ドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）配列番号７０もしくは７１のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達配列；および／またはｂ）配列番号５０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）エピトープタグを含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含み、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２２９】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第１の抗原結合ドメインと配列番号２１のアミノ酸配列を含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列；およびｂ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第２の抗原結合ドメインと配列番号２２のアミノ酸配列を含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列、を含み；第１の抗原結合ドメインと第２の抗原結合ドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）配列番号７０もしくは７１のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達配列；および／またはｂ）配列番号５０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）エピトープタグを含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含み、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２３０】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列、およびｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列、を含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現され、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現されて、ａｂＴＣＲを形成し、ａｂＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、γδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２３１】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列、およびｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列、を含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現され、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現されて、ａｂＴＣＲを形成し、ａｂＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、γδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２３２】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）配列番号２７のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列、およびｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列、を含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現され、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現されて、ａｂＴＣＲを形成し、ａｂＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、γδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２３３】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列、およびｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列、を含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現され、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現されて、ａｂＴＣＲを形成し、ａｂＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２３４】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列、およびｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列、を含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現され、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現されて、ａｂＴＣＲを形成し、ａｂＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２３５】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列、およびｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列、を含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現され、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現されて、ａｂＴＣＲを形成し、ａｂＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２３６】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列、およびｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列、を含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現され、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現されて、ａｂＴＣＲを形成し、ａｂＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２３７】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列、およびｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列、を含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現され、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現されて、ａｂＴＣＲを形成し、ａｂＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２３８】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列、およびｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列、を含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現され、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現されて、ａｂＴＣＲを形成し、ａｂＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２３９】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）配列番号５５のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列、およびｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列、を含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現され、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現されて、ａｂＴＣＲを形成し、ａｂＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２４０】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲをその表面上に発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、ａ）配列番号５６のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列、およびｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含むａｂＴＣＲの第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列、を含み、第１のポリペプチド鎖が第１の核酸配列から発現され、第２のポリペプチド鎖が第２の核酸配列から発現されて、ａｂＴＣＲを形成し、ａｂＴＣＲが、エフェクター細胞の表面に局在する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、第１の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第１の核酸配列の３’末端を第２の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、第２の核酸配列の５’末端に作動可能に連結したプロモーターが存在し、第２の核酸配列の３’末端を第１の核酸配列の５’末端に連結する、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在し、第１の核酸配列および第２の核酸配列は、プロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０２４１】
本明細書に記載される一部のかかる実施形態のいずれかでは、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、類似の条件下で比較した場合、対応するＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ａｂＴＣＲの抗体部分を含むＣＡＲ、例えば、ａｂＴＣＲの抗体可変ドメインを構成するｓｃＦｖを含むＣＡＲをその表面上に提示するエフェクター細胞）と比較して、より低い割合のキメラ受容体内在化を有する。例えば、一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、類似の条件下でのキメラ受容体エフェクター細胞の標的抗原依存的刺激後に、対応するＣＡＲエフェクター細胞と比較して、より低い割合のキメラ受容体内在化を有する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、ａｂＴＣＲの標的抗原による刺激の約９０分後に、約５０％未満（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０または５％未満のいずれか）のａｂＴＣＲ内在化を有する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞である。
【０２４２】
本明細書に記載される一部のかかる実施形態のいずれかでは、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、類似の条件下で比較した場合、対応するＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ａｂＴＣＲの抗体部分を含むＣＡＲをその表面上に提示するエフェクター細胞）と比較して、より低い割合および／または発生率の疲弊を有する。エフェクター細胞の疲弊は、例えば、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３およびＬＡＧ−３を含むがこれに限定されない疲弊マーカーの発現レベルを測定することによって、当該分野で公知の任意の手段によって決定され得る。例えば、一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、類似の条件下でのキメラ受容体エフェクター細胞の標的抗原依存的刺激後に、対応するＣＡＲエフェクター細胞と比較して、より低い発現レベルの１つまたは複数の疲弊マーカー（例えば、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３またはＬＡＧ−３）を有する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、類似の条件下でのキメラ受容体エフェクター細胞の標的抗原依存的刺激後に、対応するＣＡＲエフェクター細胞と比較して、１つまたは複数の疲弊マーカー（例えば、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３またはＬＡＧ−３）について陽性であることの、より低い発生率を有する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、ａｂＴＣＲの標的抗原による刺激後に、１つまたは複数の疲弊マーカー（例えば、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３またはＬＡＧ−３）について陽性であることの、約５０％未満（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、５、４、３、２、１％未満のいずれか）の発生率を有する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞である。発生率は、例えば、キメラ受容体エフェクター細胞の集団中の、疲弊マーカーについて陽性のキメラ受容体エフェクター細胞の百分率を定量することによって、当該分野で公知の任意の手段によって計算され得、疲弊マーカーについて陽性の細胞の百分率が発生率である。
【０２４３】
本明細書に記載される一部のかかる実施形態のいずれかでは、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、類似の条件下で比較した場合、対応するＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ａｂＴＣＲの抗体部分を含むＣＡＲをその表面上に提示するエフェクター細胞）と比較して、より低い割合および／または発生率の最終分化を有する。最終分化は、例えば、ＣＤ２８、ＣＣＲ７およびグランザイムＢを含むがこれに限定されない分化マーカーの発現レベルを測定することによって、当該分野で公知の任意の手段によって決定され得る。例えば、一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、類似の条件下の対応するＣＡＲエフェクター細胞と比較して、より低い発現レベルの１つまたは複数の最終分化マーカー（例えば、グランザイムＢ）および／あるいはより高い発現の１つまたは複数の非最終分化マーカー（例えば、ＣＤ２８またはＣＣＲ７）を有する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、類似の条件下の対応するＣＡＲエフェクター細胞と比較して、１つまたは複数の最終分化マーカー（例えば、グランザイムＢ）について陽性であることの、より低い発生率、および／あるいは１つまたは複数の非最終分化マーカー（例えば、ＣＤ２８またはＣＣＲ７）について陽性であることの、より高い発生率を有する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、ａｂＴＣＲの標的抗原による刺激後に、１つまたは複数の最終分化マーカー（例えば、グランザイムＢ）について陽性であることの、約５０％未満（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、５、４、３、２、１％未満のいずれか）の発生率、および／あるいは１つまたは複数の非最終分化マーカー（例えば、ＣＤ２８またはＣＣＲ７）について陽性であることの、約１０％よりも高い（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０または９５％のいずれかよりも高い）発生率を有する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞である。発生率は、例えば、キメラ受容体エフェクター細胞の集団中の、最終分化マーカーについて陽性のキメラ受容体エフェクター細胞の百分率を定量することによって、当該分野で公知の任意の手段によって計算され得、最終分化マーカーについて陽性の細胞の百分率が発生率である。
【０２４４】
本明細書に記載される一部のかかる実施形態のいずれかでは、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、類似の条件下で比較した場合、対応するＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ａｂＴＣＲの抗体部分を含むＣＡＲをその表面上に提示するエフェクター細胞）と比較してより高い割合の増殖を有する。増殖は、例えば、色素希釈を測定することによって、当該分野で公知の任意の手段によって決定され得る。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞である。
【０２４５】
ａｂＴＣＲの調製
一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかによれば、抗体部分は、モノクローナル抗体由来の配列を含むＦａｂ様抗原結合モジュールである。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、モノクローナル抗体由来のＶＨ、ＣＨ１、ＶＬおよびＣＬドメインを含む。モノクローナル抗体は、例えば、KohlerおよびMilstein、Nature、２５６巻：４９５頁（１９７５年）ならびにSergeevaら、Blood、１１７巻（１６号）：４２６２〜４２７２頁によって記載されるものなどのハイブリドーマ法を使用して調製され得る。
【０２４６】
ハイブリドーマ法では、ハムスター、マウスまたは他の適切な宿主動物が、典型的には、免疫剤に特異的に結合する抗体を産生するまたは産生することが可能なリンパ球を惹起するために、免疫剤で免疫される。あるいは、リンパ球は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫され得る。免疫剤には、目的のタンパク質のポリペプチドもしくは融合タンパク質、または少なくとも２つの分子を含む複合体、例えば、ペプチドおよびＭＨＣタンパク質を含む複合体が含まれ得る。一般に、ヒト起源の細胞が所望される場合、末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）が使用され、または非ヒト哺乳動物供給源が所望される場合、脾臓細胞もしくはリンパ節細胞が使用される。次いで、リンパ球は、ハイブリドーマ細胞を形成するために、ポリエチレングリコールなどの適切な融合剤を使用して、不死化細胞株と融合される。例えば、Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８６年）、５９〜１０３頁を参照のこと。不死化細胞株は通常、形質転換された哺乳動物細胞、特に、げっ歯類、ウシおよびヒト起源の骨髄腫細胞である。通常、ラットまたはマウス骨髄腫細胞株が使用される。ハイブリドーマ細胞は、未融合の不死化細胞の成長または生存を阻害する１または複数の物質を好ましくは含む、適切な培養培地中で培養され得る。例えば、親細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマ用の培養培地は、典型的には、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を防止する、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含む（「ＨＡＴ培地」）。
【０２４７】
一部の実施形態では、不死化細胞株は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベル発現を支持し、ＨＡＴ培地などの培地に対して感受性である。一部の実施形態では、不死化細胞株は、例えば、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣａｌｉｆｏｒｎｉａおよびＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａから取得され得る、マウス骨髄腫株である。ヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫（ｈｅｔｅｒｏｍｙｅｌｏｍａ）細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている。Ｋｏｚｂｏｒ、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３３巻：３００１頁（１９８４年）；Ｂｒｏｄｅｕｒら  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．：  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８７年）５１〜６３頁。
【０２４８】
次いで、ハイブリドーマ細胞が培養される培養培地は、ポリペプチドに対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイされ得る。ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって決定され得る。かかる技術およびアッセイは、当該分野で公知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、ＭｕｎｓｏｎおよびＰｏｌｌａｒｄ、Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１０７巻：２２０頁（１９８０年）のスキャッチャード分析によって決定され得る。
【０２４９】
所望のハイブリドーマ細胞が同定された後、それらのクローンは、限界希釈手順によってサブクローニングされ得、標準的な方法によって成長され得る。Ｇｏｄｉｎｇ、上記。この目的のために適切な培養培地には、例えば、ダルベッコ改変イーグル培地およびＲＰＭＩ−１６４０培地が含まれる。あるいは、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物において腹水としてｉｎ  ｖｉｖｏで成長され得る。
【０２５０】
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製手順、例えば、プロテインＡ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析またはアフィニティクロマトグラフィーなどによって、培養培地または腹水から単離または精製され得る。
【０２５１】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかによれば、抗体部分は、抗体部分ライブラリー（例えば、ｓｃＦｖまたはＦａｂ断片を提示するファージライブラリー）から選択されたクローン由来の配列を含むＦａｂ様抗原結合モジュールである。クローンは、所望の活性（単数または複数）を有する抗体断片についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって同定され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特徴を有する抗体についてかかるライブラリーをスクリーニングするための種々の方法が、当該分野で公知である。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８巻：１〜３７頁（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．、２００１年）において概説され、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８巻：５５２〜５５４頁；Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３５２巻：６２４〜６２８頁（１９９１年）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２巻：５８１〜５９７頁（１９９２年）；ＭａｒｋｓおよびＢｒａｄｂｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８巻：１６１〜１７５頁（Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．、２００３年）；Ｓｉｄｈｕら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８巻（２号）：２９９〜３１０頁（２００４年）；Ｌｅｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０巻（５号）：１０７３〜１０９３頁（２００４年）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１巻（３４号）：１２４６７〜１２４７２頁（２００４年）；ならびにＬｅｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４巻（１〜２号）：１１９〜１３２頁（２００４年）においてさらに記載されている。
【０２５２】
ある特定のファージディスプレイ法では、Ｗｉｎｔｅｒら、Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２巻：４３３〜４５５頁（１９９４年）に記載されるように、ＶＨ遺伝子およびＶＬ遺伝子のレパートリーが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングされ、ファージライブラリー中にランダムに組み換えられ、これは次いで、抗原結合ファージについてスクリーニングされ得る。ファージは、典型的には、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片のいずれかとして、抗体断片をディスプレイする。免疫された供給源由来のライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、ＥＭＢＯ  Ｊ、１２巻：７２５〜７３４頁（１９９３年）によって記載されるように、いずれの免疫もなしに、広範な非自己抗原およびまた自己抗原に対する抗体の単一の供給源を提供するために、ナイーブレパートリーが、（例えば、ヒトから）クローニングされ得る。最後に、ナイーブライブラリーは、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２２７巻：３８１〜３８８頁（１９９２年）に記載されるように、高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで再構成を達成するために、再構成されていないＶ遺伝子セグメントを幹細胞からクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用することによって、合成によっても作製され得る。ヒト抗体ファージライブラリーを記載している特許公報には、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号および同第２００９／０００２３６０号が含まれる。
【０２５３】
Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、標的抗原（例えば、ペプチド／ＭＨＣクラスＩ／ＩＩ複合体または細胞表面抗原）に対して特異的な抗体についてライブラリーをスクリーニングするためのファージディスプレイを使用して調製され得る。ライブラリーは、少なくとも１×１０９（例えば、少なくとも約１×１０９、２．５×１０９、５×１０９、７．５×１０９、１×１０１０、２．５×１０１０、５×１０１０、７．５×１０１０または１×１０１１のいずれか）の独特のヒト抗体断片の多様性を有するヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーであり得る。一部の実施形態では、ライブラリーは、全てのヒト重鎖および軽鎖サブファミリーを包含する、健康なドナー由来のヒトＰＭＢＣおよび脾臓から抽出されたＤＮＡから構築されるナイーブヒトライブラリーである。一部の実施形態では、ライブラリーは、種々の疾患を有する患者、例えば、自己免疫性疾患を有する患者、がん患者、および感染性疾患を有する患者から単離されたＰＢＭＣから抽出されたＤＮＡから構築されるナイーブヒトライブラリーである。一部の実施形態では、ライブラリーは、重鎖ＣＤＲ３が完全にランダム化され、（システインを除く）全てのアミノ酸が任意の所与の位置において等しく存在する可能性がある、半合成ヒトライブラリーである（例えば、Hoet,  R.M.ら、Nat.  Biotechnol.  ２３巻（３号）：３４４〜３４８頁、２００５年を参照のこと）。一部の実施形態では、半合成ヒトライブラリーの重鎖ＣＤＲ３は、約５〜約２４（例えば、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４のいずれか）アミノ酸の長さを有する。一部の実施形態では、ライブラリーは、完全合成ファージディスプレイライブラリーである。一部の実施形態では、ライブラリーは、非ヒトファージディスプレイライブラリーである。
【０２５４】
高い親和性で標的抗原に結合するファージクローンは、固体支持体（例えば、溶液パニングにはビーズ、または細胞パニングには哺乳動物細胞など）に結合した標的抗原へのファージの反復結合と、その後の、非結合ファージの除去および特異的に結合したファージの溶出とによって選択され得る。溶液パニングの一例では、標的抗原は、固体支持体への固定化のためにビオチン化され得る。ビオチン化標的抗原は、ファージライブラリーおよび固体支持体、例えば、ストレプトアビジンとコンジュゲートしたＤｙｎａｂｅａｄｓ  Ｍ−２８０と混合され、次いで、標的抗原−ファージ−ビーズ複合体が単離される。次いで、結合したファージクローンが溶出され、発現および精製のために、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＸＬ１−Ｂｌｕｅなどの適切な宿主細胞を感染させるために使用される。細胞パニングの一例では、ＡＦＰペプチドを負荷したＴ２細胞（ＴＡＰ欠損、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋リンパ芽球細胞株）が、ファージライブラリーと混合され、その後、細胞が収集され、結合したクローンが溶出され、発現および精製のために適切な宿主細胞を感染させるために使用される。パニングは、標的抗原に特異的に結合するファージクローンについて富化するために、溶液パニング、細胞パニングまたは両方の組合せのいずれかを用いて複数（例えば、約２、３、４、５、６またはそれよりも多くのいずれか）ラウンド実施され得る。富化されたファージクローンは、例えばＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳを含む当該分野で公知の任意の方法によって、標的抗原への特異的結合について試験され得る。
【０２５５】
ヒトおよびヒト化抗体部分
ａｂＴＣＲ抗体部分は、ヒトまたはヒト化であり得る。非ヒト（例えば、マウス）抗体部分のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を典型的には含む、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはそれらの断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、または抗体の他の抗原結合サブ配列）である。ヒト化抗体部分には、レシピエントのＣＤＲ由来の残基が、所望の特異性、親和性および能力を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基によって置き換えられた、ヒト免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはそれらの断片（レシピエント抗体）が含まれる。一部の場合には、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。ヒト化抗体部分は、レシピエント抗体部分中にも、インポートされたＣＤＲまたはフレームワーク配列中にも見出されない残基もまた含み得る。一般に、ヒト化抗体部分は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み得、ここで、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。例えば、Jonesら、Nature、３２１巻：５２２〜５２５頁（１９８６年）；Riechmannら、Nature、３３２巻：３２３〜３２９頁（１９８８年）；Presta、Curr.  Op.  Struct.  Biol.、２巻：５９３〜５９６頁（１９９２年）を参照のこと。
【０２５６】
一般に、ヒト化抗体部分は、非ヒトである供給源由来のものの中に導入された１つまたは複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、「インポート」残基と呼ばれる場合が多く、これらは典型的には、「インポート」可変ドメインから取られる。一部の実施形態によれば、ヒト化は、ヒト抗体部分の対応する配列をげっ歯類のＣＤＲまたはＣＤＲ配列で置換することによって、Winterおよび共同研究者ら（Jonesら、Nature、３２１巻：５２２〜５２５頁（１９８６年）；Riechmannら、Nature、３３２巻：３２３〜３２７頁（１９８８年）；Verhoeyenら、Science、２３９巻：１５３４〜１５３６頁（１９８８年））の方法に従って本質的に実施され得る。したがって、かかる「ヒト化」抗体部分は、実質的にインタクト未満のヒト可変ドメインが、非ヒト種由来の対応する配列によって置換されている、抗体部分である（米国特許第４，８１６，５６７号）。実際には、ヒト化抗体部分は、典型的には、一部のＣＤＲ残基およびおそらくは一部のＦＲ残基が、げっ歯類抗体中の類似の部位由来の残基によって置換された、ヒト抗体部分である。
【０２５７】
ヒト化の代替法として、ヒト抗体部分が生成され得る。例えば、免疫の際に、内因性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の完全レパートリーを産生することが可能なトランスジェニック動物（例えば、マウス）を産生することが現在可能である。例えば、キメラおよび生殖系列変異体マウスにおける抗体重鎖連結領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失が、内因性抗体産生の完全な阻害を生じることが記載されている。かかる生殖系列変異体マウス中へのヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移入は、抗原チャレンジの際にヒト抗体の産生を生じる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、９０巻：２５５１頁（１９９３年）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２巻：２５５〜２５８頁（１９９３年）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、７巻：３３頁（１９９３年）；米国特許第５，５４５，８０６号、第５，５６９，８２５号、第５，５９１，６６９号；第５，５４５，８０７号；およびＷＯ９７／１７８５２を参照のこと。あるいは、ヒト抗体は、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活性化されたトランスジェニック動物、例えば、マウス中にヒト免疫グロブリン遺伝子座を導入することによって作製され得る。チャレンジの際に、遺伝子再構成、アセンブリおよび抗体レパートリーを含むあらゆる点において、ヒトにおいて見られたものと密接に類似したヒト抗体産生が観察される。このアプローチは、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；および同第５，６６１，０１６号、ならびにＭａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０巻：７７９〜７８３頁（１９９２年）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ、３６８巻：８５６〜８５９頁（１９９４年）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、３６８巻：８１２〜８１３頁（１９９４年）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４巻：８４５〜８５１頁（１９９６年）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４巻：８２６頁（１９９６年）；ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３巻：６５〜９３頁（１９９５年）中に記載されている。
【０２５８】
ヒト抗体はまた、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化されたＢ細胞（米国特許第５，５６７，６１０号および同第５，２２９，２７５号を参照のこと）によって、またはファージディスプレイライブラリーを含む当該分野で公知の種々の技術を使用することによって、生成され得る。ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２２７巻：３８１頁（１９９１年）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２２２巻：５８１頁（１９９１年）。ＣｏｌｅらおよびＢｏｅｒｎｅｒらの技術は、ヒトモノクローナル抗体の調製のためにも利用可能である。Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ、７７頁（１９８５年）およびＢｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７巻（１号）：８６〜９５頁（１９９１年）。
【０２５９】
バリアント
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望まれ得る。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な改変を導入することによって、またはペプチド合成によって調製され得る。かかる改変には、例えば、抗体のアミノ酸配列からの欠失、および／またはかかるアミノ酸配列中への挿入、および／またはかかるアミノ酸配列内の残基の置換が含まれる。最終構築物が所望の特徴、例えば、抗原結合を有することを条件として、欠失、挿入および置換の任意の組合せが、最終構築物に到達するために作製され得る。
【０２６０】
一部の実施形態では、１または複数のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換変異誘発のための目的の部位には、ＨＶＲおよびＦＲが含まれる。アミノ酸置換は、目的の抗体中に導入され得、産物は、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、または減少した免疫原性について、スクリーニングされ得る。
【０２６１】
保存的置換は以下の表１に示される。
【表１−２】
2019500848.tif 000003
【０２６２】
アミノ酸は、共通する側鎖特性に従って異なるクラスへとグループ分けされ得る：
ａ．疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
ｂ．中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
ｃ．酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
ｄ．塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
ｅ．鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
ｆ．芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０２６３】
非保存的置換は、これらのクラスのうち１つのメンバーを別のクラスに交換することを伴う。
【０２６４】
例示的な置換バリアントは、例えば、ファージディスプレイベースの親和性成熟技術を使用して簡便に生成され得る親和性成熟抗体である。簡潔に述べると、１または複数のＣＤＲ残基が変異され、バリアント抗体部分がファージ上にディスプレイされ、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。変更（例えば、置換）は、例えば、抗体部分の親和性を改善するために、ＨＶＲ中に作製され得る。かかる変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」、即ち、体細胞成熟プロセスの間に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２０７巻：１７９〜１９６頁（２００８年）を参照のこと）および／または特異性決定残基（ＳＤＲ）中に作製され得、得られたバリアントＶＨまたはＶＬは、結合親和性について試験される。二次ライブラリーから構築および再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８巻：１〜３７頁（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ（２００１年））に記載されている。
【０２６５】
親和性成熟の一部の実施形態では、多様性が、種々の方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリングまたはオリゴヌクレオチド指向性変異誘発（ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ））のいずれかによる成熟のために選択された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリーが作り出される。次いで、ライブラリーは、所望の親和性を有する任意の抗体部分のバリアントを同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入するための別の方法には、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４〜６残基）がランダム化されるＨＶＲ指向性アプローチが関与する。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発またはモデル化を使用して、特異的に同定され得る。特に、ＣＤＲ−Ｈ３およびＣＤＲ−Ｌ３が標的化される場合が多い。
【０２６６】
一部の実施形態では、置換、挿入または欠失が、かかる変更が抗原に結合する抗体部分の能力を実質的に低減させない限り、１または複数のＨＶＲ内に存在し得る。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的変更（例えば、本明細書で提供される保存的置換）が、ＨＶＲ中に作製され得る。かかる変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」またはＳＤＲの外側にあり得る。上で提供されたバリアントＶＨ配列およびＶＬ配列の一部の実施形態では、各ＨＶＲのいずれかが変更されていない、または１、２もしくは３つ以下のアミノ酸置換を含む。
【０２６７】
変異誘発のために標的化され得る抗体の残基または領域の同定のために有用な方法は、ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ（１９８９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４巻：１０８１〜１０８５頁によって記載されるように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基（例えば、荷電残基、例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓおよびｇｌｕ）の１つの残基または群が同定され、抗体部分と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定するために、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられる。さらなる置換が、初期の置換に対する機能的感受性を明らかに示すアミノ酸位置において導入され得る。あるいは、またはさらに、抗原−抗体部分の複合体の結晶構造が、抗体部分と抗原との間の接触点を同定するために決定され得る。かかる接触残基および隣接残基は、置換のための候補として標的化または排除され得る。バリアントは、それらが所望の特性を含むかどうかを決定するためにスクリーニングされ得る。
【０２６８】
アミノ酸配列挿入には、１残基から１００またはそれより多くの残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端および／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体部分が含まれる。抗体部分の他の挿入バリアントには、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのため）または抗体部分の血清半減期を増加させるポリペプチドへの、抗体部分のＮまたはＣ末端への融合が含まれる。
【０２６９】
誘導体
一部の実施形態では、本明細書に記載のａｂＴＣＲのいずれかにしたがうａｂＴＣＲは、当該分野で公知であり容易に入手可能なさらなる非タンパク質性部分を含むように、さらに改変され得る。ａｂＴＣＲの誘導体化に適切な部分には、水溶性ポリマーが含まれるがこれらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、およびデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコール（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）ホモポリマー、ポリプロピレンオキシド（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｏｘｉｄｅ）／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が含まれるがこれらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性に起因して、製造における利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量のものであり得、分岐鎖または非分岐鎖であり得る。ａｂＴＣＲに結合したポリマーの数は変動し得、１よりも多いポリマーが結合される場合、それらは同じまたは異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／または型は、改善すべきａｂＴＣＲの特定の特性または機能、ａｂＴＣＲ誘導体が規定された条件下で治療に使用されるかどうかなどが含まれるがこれらに限定されない考慮事項に基づいて決定され得る。
【０２７０】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲと放射線への曝露によって選択的に加熱され得る非タンパク質性部分とのコンジュゲートが提供される。一部の実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １０２巻：１１６００〜１１６０５頁（２００５年））。放射線は、任意の波長のものであり得、これには、通常の細胞を害さないが、ａｂＴＣＲ−非タンパク質性部分に対して近位の細胞が殺滅される温度まで非タンパク質性部分を加熱する波長が含まれるがこれに限定されない。
【０２７１】
ａｂＴＣＲエフェクター細胞の調製
本発明は、一態様では、ａｂＴＣＲを発現するエフェクター細胞（例えば、リンパ球、例えば、Ｔ細胞）を提供する。ａｂＴＣＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）（ａｂＴＣＲエフェクター細胞、例えば、ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞）を調製する例示的な方法は、本明細書で提供される。
【０２７２】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞）は、標的抗原（例えば、疾患関連抗原）に特異的に結合するａｂＴＣＲ（例えば、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれか）をコードする１つまたは複数の核酸（例えば、レンチウイルスベクターを含む）をエフェクター細胞中に導入することによって生成され得る。エフェクター細胞中への１つまたは複数の核酸の導入は、核酸について本明細書に記載されるものなどの、当該分野で公知の技術を使用して達成され得る。一部の実施形態では、本発明のａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞）は、ｉｎ  ｖｉｖｏで複製することができ、標的抗原の発現と関連する疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）の持続性の制御をもたらし得る長期持続を生じる。
【０２７３】
一部の実施形態では、本発明は、リンパ球注入を使用する、例えば、がんもしくはウイルス感染症を含む、標的抗原の発現と関連する疾患および／もしくは障害（本明細書で「標的抗原陽性」または「ＴＡ陽性」疾患または障害とも呼ぶ）を有するまたは疾患および／もしくは障害を発症するリスクがある患者の処置のために、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかにしたがう、標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する遺伝子改変されたＴ細胞を投与することに関する。一部の実施形態では、自家リンパ球注入が、処置において使用される。自家ＰＢＭＣは、処置を必要とする患者から収集され、Ｔ細胞は、本明細書に記載されており、当該分野で公知の方法を使用して活性化および拡大増殖され、次いで、患者に注入して戻される。
【０２７４】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかにしたがう、標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現するＴ細胞（本明細書で「ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞」とも呼ぶ）が提供される。本発明のａｂＴＣＲ  Ｔ細胞は、ロバストなｉｎ  ｖｉｖｏ  Ｔ細胞拡大増殖を受け得、血液および骨髄において延長された量の時間にわたって高いレベルで持続する標的抗原特異的メモリー細胞を確立できる。一部の実施形態では、患者に注入される本発明のａｂＴＣＲ  Ｔ細胞は、標的抗原関連疾患を有する患者においてｉｎ  ｖｉｖｏで、標的抗原提示細胞、例えば、標的抗原提示がんまたはウイルス感染細胞を排除できる。一部の実施形態では、患者に注入される本発明のａｂＴＣＲ  Ｔ細胞は、少なくとも１つの従来の処置に対して難治性である標的抗原関連疾患を有する患者においてｉｎ  ｖｉｖｏで、標的抗原提示細胞、例えば、標的抗原提示がんまたはウイルス感染細胞を排除できる。
【０２７５】
Ｔ細胞の拡大増殖および遺伝子改変の前に、Ｔ細胞の供給源が被験体から取得される。Ｔ細胞は、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織および腫瘍を含むいくつかの供給源から取得され得る。本発明の一部の実施形態では、当該分野で利用可能ないくつものＴ細胞株が使用され得る。本発明の一部の実施形態では、Ｔ細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離などの当業者に公知のいくつもの技術を使用して被験体から収集された血液の単位から取得され得る。一部の実施形態では、個体の循環血由来の細胞は、アフェレーシスによって取得される。アフェレーシス産物は、典型的には、Ｔ細胞を含むリンパ球、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球および血小板を含む。一部の実施形態では、アフェレーシスによって収集された細胞は、血漿画分を除去するため、および引き続く処理ステップに適切な緩衝液または培地中に細胞を配置するために、洗浄され得る。一部の実施形態では、細胞は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。一部の実施形態では、洗浄溶液は、カルシウムを欠き、マグネシウムを欠き得る、または全てではないものの、多くの二価カチオンを欠き得る。当業者が容易に理解するように、洗浄ステップは、当業者に公知の方法によって、例えば、製造業者の指示に従って半自動化「フロースルー」遠心分離機（例えば、Ｃｏｂｅ  ２９９１細胞プロセッサー、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅまたはＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｅｌｌ  Ｓａｖｅｒ  ５）を使用することによって達成され得る。洗浄後、細胞は、種々の生体適合性緩衝液、例えば、無Ｃａ２＋、無Ｍｇ２＋ＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ、または緩衝剤ありもしくはなしの他の食塩水溶液中に再懸濁され得る。あるいは、アフェレーシス試料の望ましくない成分が除去され得、細胞が培養培地中に直接再懸濁され得る。
【０２７６】
一部の実施形態では、Ｔ細胞は、赤血球を溶解させ、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配を介した遠心分離によって、または向流遠心分離溶出（ｃｏｕｎｔｅｒｆｌｏｗ  ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  ｅｌｕｔｒｉａｔｉｏｎ）によって単球を枯渇させることによって、末梢血リンパ球から単離される。Ｔ細胞の特定の下位集団、例えば、ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋およびＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞は、陽性または陰性選択技術によってさらに単離され得る。例えば、一部の実施形態では、Ｔ細胞は、所望のＴ細胞の陽性選択に十分な期間にわたる、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（即ち、３×２８）結合体化ビーズ、例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔとのインキュベーションによって単離される。一部の実施形態では、期間は、約３０分間である。一部の実施形態では、期間は、３０分間から３６時間またはそれ超まで（これらの値のの間の全ての範囲を含む）である。一部の実施形態では、期間は、少なくとも１、２、３、４、５または６時間である。一部の実施形態では、期間は、１０〜２４時間である。一部の実施形態では、インキュベーション期間は、２４時間である。白血病を有する患者からのＴ細胞の単離のために、より長いインキュベーション時間、例えば２４時間の使用が、細胞収量を増加させ得る。より長いインキュベーション時間は、他の細胞型と比較して少ないＴ細胞が存在する任意の状況において、例えば、腫瘍組織からまたは免疫無防備状態の個体から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離することにおいて、Ｔ細胞を単離するために使用され得る。さらに、より長いインキュベーション時間の使用は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕捉の効率を増加させ得る。したがって、この時間を単純に短縮もしくは延長させることによって、Ｔ細胞は、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合するようになり、および／またはビーズ対Ｔ細胞の比率を増加もしくは減少させることによって、Ｔ細胞の下位集団は、培養開始の時点で、もしくはプロセスの間の他の時点で、有利にまたは不利に優先的に選択され得る。さらに、ビーズまたは他の表面上の抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８抗体の比率を増加または減少させることによって、Ｔ細胞の下位集団は、培養開始の時点で、または他の所望の時点で、有利にまたは不利に優先的に選択され得る。当業者は、複数ラウンドの選択もまた本発明との関連において使用され得ることを認識している。一部の実施形態では、活性化および拡大増殖プロセスにおいて、選択手順を実施し、「選択されていない」細胞を使用することが望まれ得る。「選択されていない」細胞はまた、さらなるラウンドの選択に供され得る。
【０２７７】
陰性選択によるＴ細胞集団の富化は、陰性選択された細胞に独自の表面マーカーに対する抗体の組合せを用いて達成され得る。１つの方法は、陰性選択される細胞上に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する、負の磁気免疫付着（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｒｅｎｃｅ）もしくはフローサイトメトリーを介した細胞分取および／または選択である。例えば、陰性選択によってＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲおよびＣＤ８に対する抗体を含む。一部の実施形態では、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋およびＦｏｘＰ３＋を典型的には発現する調節性Ｔ細胞を富化または陽性選択することが望まれ得る。あるいは、一部の実施形態では、Ｔ調節細胞は、抗ＣＤ２５結合体化ビーズまたは他の類似の選択方法によって枯渇される。
【０２７８】
陽性または陰性選択による細胞の所望の集団の単離のために、細胞の濃度および表面（例えば、ビーズなどの粒子）を変えることができる。一部の実施形態では、細胞とビーズとの最大の接触を確実にするために、ビーズおよび細胞が一緒に混合される体積を顕著に減少させる（即ち、細胞の濃度を増加させる）ことが望まれ得る。例えば、一部の実施形態では、約２０億細胞／ｍｌの濃度が使用される。一部の実施形態では、約１０億細胞／ｍｌの濃度が使用される。一部の実施形態では、約１００百万細胞／ｍｌ超が使用される。一部の実施形態では、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０百万細胞／ｍｌのいずれかの細胞の濃度が使用される。一部の実施形態では、約７５、８０、８５、９０、９５または１００百万細胞／ｍｌのいずれかの細胞の濃度が使用される。一部の実施形態では、約１２５または約１５０百万細胞／ｍｌの濃度が使用される。高い濃度を使用すると、増加した細胞収量、細胞活性化および細胞拡大増殖が生じ得る。さらに、高い細胞濃度の使用は、目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞、例えばＣＤ２８陰性Ｔ細胞の、または多くの腫瘍細胞が存在する試料（即ち、白血病血液、腫瘍組織など）からの、より効率的な捕捉を可能にする。細胞のかかる集団は、治療的価値を有し得、取得が望まれる。例えば、高濃度の細胞を使用すると、通常はより弱いＣＤ２８発現を有するＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択が可能になる。
【０２７９】
本発明の一部の実施形態では、Ｔ細胞は、処置後に患者から直接取得される。これに関して、ある特定のがん処置、特に、免疫系を損傷する薬物による処置の後、患者が処置から通常は回復している期間中の処置の直後に、取得されたＴ細胞の品質は、ｅｘ  ｖｉｖｏで拡大増殖するそれらの能力について、最適であり得るまたは改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載された方法を使用するｅｘ  ｖｉｖｏ操作の後、これらの細胞は、増強された生着およびｉｎ  ｖｉｖｏ拡大増殖のための好ましい状態にあり得る。したがって、本発明との関連において、この回復期の間に、Ｔ細胞、樹状細胞、または造血系統の他の細胞を含む血液細胞を収集することが企図される。さらに、一部の実施形態では、動員（例えば、ＧＭ−ＣＳＦによる動員）および条件付けレジメンが、被験体において、特定の細胞型の再増殖、再循環、再生および／または拡大増殖が、特に、治療後の規定された時間ウインドウの間に好まれる状態を作り出すために使用され得る。例示的な細胞型には、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、および免疫系の他の細胞が含まれる。
【０２８０】
望ましいａｂＴＣＲを発現させるためのＴ細胞の遺伝子改変の前であれ後であれ、Ｔ細胞は、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号；第６，５３４，０５５号；第６，９０５，６８０号；第６，６９２，９６４号；第５，８５８，３５８号；第６，８８７，４６６号；第６，９０５，６８１号；第７，１４４，５７５号；第７，０６７，３１８号；第７，１７２，８６９号；第７，２３２，５６６号；第７，１７５，８４３号；第５，８８３，２２３号；第６，９０５，８７４号；第６，７９７，５１４号；第６，８６７，０４１号；および米国特許出願公開第２００６０１２１００５号に記載される方法を一般に使用して、活性化および拡大増殖され得る。
【０２８１】
一般に、本発明のＴ細胞は、それに結合したＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤およびＴ細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドを有する表面との接触によって拡大増殖される。特に、Ｔ細胞集団は、例えば、表面上に固定された抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合断片、または抗ＣＤ２抗体との接触によって、あるいはカルシウムイオノフォアと併せたタンパク質キナーゼＣ活性化因子（例えば、ブリオスタチン）との接触によって、刺激され得る。Ｔ細胞の表面上のアクセサリ分子の共刺激のために、アクセサリ分子を結合するリガンドが使用される。例えば、Ｔ細胞の集団は、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適切な条件下で、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体と接触させられ得る。ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれかの増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体。抗ＣＤ２８抗体の例には、９．３、Ｂ−Ｔ３、ＸＲ−ＣＤ２８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ、Ｂｅｓａｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）が含まれ、当該分野で一般に公知である他の方法と同様に使用され得る（ｃａｎ  ｂｅ  ｕｓｅｄ  ａｓ  ｃａｎ  ｏｔｈｅｒ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｃｏｍｍｏｎｌｙ  ｋｎｏｗｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｒｔ）（Ｂｅｒｇら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．３０巻（８号）：３９７５〜３９７７頁、１９９８年；Ｈａａｎｅｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０巻（９号）：１３１９〜１３２８頁、１９９９年；Ｇａｒｌａｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２２７巻（１〜２号）：５３〜６３頁、１９９９年）。
【０２８２】
本明細書に記載される任意のかかる実施形態の一部では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の調製は、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の最小限の疲弊を生じるまたは疲弊を実質的に生じない。例えば、一部の実施形態では、調製は、約５０％未満（例えば、約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０または５％未満のいずれか）の、疲弊していくａｂＴＣＲエフェクター細胞を生じる。エフェクター細胞の疲弊は、本明細書に記載される任意の手段を含む、当該分野で公知の任意の手段によって決定され得る。
【０２８３】
本明細書に記載される任意のかかる実施形態の一部では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の調製は、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の最小限の最終分化を生じるまたは最終分化を実質的に生じない。例えば、一部の実施形態では、調製は、約５０％未満（例えば、約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０または５％未満のいずれか）の、最終分化していくａｂＴＣＲエフェクター細胞を生じる。エフェクター細胞の分化は、本明細書に記載される任意の手段を含む、当該分野で公知の任意の手段によって決定され得る。
【０２８４】
本明細書に記載される任意のかかる実施形態の一部では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の調製は、ａｂＴＣＲエフェクター細胞上のａｂＴＣＲの最小限の内在化を生じるまたは内在化を実質的に生じない。例えば、一部の実施形態では、調製は、約５０％未満（例えば、約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０または５％未満のいずれか）の、内在化されていくａｂＴＣＲエフェクター細胞上のａｂＴＣＲを生じる。ａｂＴＣＲエフェクター細胞上のａｂＴＣＲの内在化は、本明細書に記載される任意の手段を含む、当該分野で公知の任意の手段によって決定され得る。
【０２８５】
遺伝子改変
一部の実施形態では、本発明のａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞）は、本明細書に記載されるａｂＴＣＲをコードするウイルスベクターで、エフェクター細胞（例えば、本明細書に記載される方法によって調製されるＴ細胞）を形質導入することによって生成される。ウイルスベクター送達系には、エフェクター細胞への送達後にエピソームまたは組み込まれたゲノムのいずれかを有する、ＤＮＡおよびＲＮＡウイルスが含まれる。遺伝子療法手順の概説については、Anderson、Science  ２５６巻：８０８〜８１３頁（１９９２年）；NabelおよびFeigner、TIBTECH  １１巻：２１１〜２１７頁（１９９３年）；MitaniおよびCaskey、TIBTECH  １１巻：１６２〜１６６頁（１９９３年）；Dillon、TIBTECH  １１巻：１６７〜１７５頁（１９９３年）；Miller、Nature  ３５７巻：４５５〜４６０頁（１９９２年）；Van  Brunt、Biotechnology  ６巻（１０号）：１１４９〜１１５４頁（１９８８年）；Vigne、Restorative  Neurology  and  Neuroscience  ８巻：３５〜３６頁（１９９５年）；KremerおよびPerricaudet、British  Medical  Bulletin  ５１巻（ｌ号）：３１〜４４頁（１９９５年）；ならびにYuら、Gene  Therapy  １巻：１３〜２６頁（１９９４年）を参照のこと。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターであり、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、ａｂＴＣＲエフェクター細胞ゲノム中に組み込まれたレンチウイルスベクターを含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、そのゲノム中に組み込まれたレンチウイルスベクターを含むａｂＴＣＲ  Ｔ細胞である。
【０２８６】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、内因性ＴＣＲ鎖の一方または両方の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているＴ細胞である。例えば、一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞であり、あるいはａｂＴＣＲエフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。遺伝子発現を破壊するための細胞の改変には、例えば、ＲＮＡ干渉（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、遺伝子編集（例えば、ＣＲＩＳＰＲベースまたはＴＡＬＥＮベースの遺伝子ノックアウト）などを含む当該分野で公知の任意のかかる技術が含まれる。
【０２８７】
一部の実施形態では、Ｔ細胞の内因性ＴＣＲ鎖の一方または両方の低減された発現を有するａｂＴＣＲ  Ｔ細胞は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を使用して生成される。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系の遺伝子編集の概説については、例えば、Jian  WおよびMarraffini  LA、Annu.  Rev.  Microbiol.  ６９巻、２０１５年；Hsu  PDら、Cell、１５７巻（６号）：１２６２〜１２７８頁、２０１４年；ならびにO'Connell  MRら、Nature  ５１６巻：２６３〜２６６頁、２０１４年を参照のこと。一部の実施形態では、Ｔ細胞の内因性ＴＣＲ鎖の一方または両方の低減された発現を有するａｂＴＣＲ  Ｔ細胞は、ＴＡＬＥＮベースのゲノム編集を使用して生成される。
【０２８８】
富化
一部の実施形態では、本明細書に記載されるａｂＴＣＲエフェクター細胞のいずれかにしたがうａｂＴＣＲエフェクター細胞について不均一な細胞集団を富化する方法が提供される。
【０２８９】
標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞）の特定の下位集団は、陽性選択技術によって富化され得る。例えば、一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞）は、所望のａｂＴＣＲエフェクター細胞の陽性選択に十分な期間にわたる、標的抗原コンジュゲートビーズとのインキュベーションによって富化される。一部の実施形態では、期間は約３０分間である。一部の実施形態では、期間は、３０分間から３６時間またはそれより長くまでの範囲である（これらの値の間の全ての範囲を含む）。一部の実施形態では、期間は、少なくとも１、２、３、４、５または６時間である。一部の実施形態では、期間は、１０〜２４時間である。一部の実施形態では、インキュベーション期間は、２４時間である。不均一な細胞集団中に低レベルで存在するａｂＴＣＲエフェクター細胞の単離のために、より長いインキュベーション時間、例えば、２４時間の使用は、細胞収量を増加させ得る。より長いインキュベーション時間は、他の細胞型と比較して少ないａｂＴＣＲエフェクター細胞が存在する任意の状況において、ａｂＴＣＲエフェクター細胞を単離するために使用され得る。当業者は、複数ラウンドの選択もまた、本発明との関連において使用され得ることを認識している。
【０２９０】
陽性選択によるａｂＴＣＲエフェクター細胞の所望の集団の単離のために、細胞の濃度および表面（例えば、ビーズなどの粒子）を変えることができる。一部の実施形態では、細胞とビーズとの最大の接触を確実にするために、ビーズと細胞とが一緒に混合される体積を顕著に減少させる（即ち、細胞の濃度を増加させる）ことが望まれ得る。例えば、一部の実施形態では、約２０億細胞／ｍｌの濃度が使用される。一部の実施形態では、約１０億細胞／ｍｌの濃度が使用される。一部の実施形態では、約１００百万細胞／ｍｌよりも高くが使用される。一部の実施形態では、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０百万細胞／ｍｌのいずれかの細胞の濃度が使用される。一部の実施形態では、約７５、８０、８５、９０、９５または１００百万細胞／ｍｌのいずれかの細胞の濃度が使用される。一部の実施形態では、約１２５または約１５０百万細胞／ｍｌの濃度が使用される。高い濃度を使用することは、増加した細胞収量、細胞活性化および細胞拡大増殖を生じ得る。さらに、高い細胞濃度の使用は、ａｂＴＣＲを弱く発現し得るａｂＴＣＲエフェクター細胞のより効率的な捕捉を可能にする。
【０２９１】
本明細書に記載される任意のかかる実施形態の一部では、富化は、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の最小限の疲弊を生じるまたは疲弊を実質的に生じない。例えば、一部の実施形態では、富化は、約５０％未満（例えば、約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０または５％未満のいずれか）の、疲弊していくａｂＴＣＲエフェクター細胞を生じる。エフェクター細胞の疲弊は、本明細書に記載される任意の手段を含む、当該分野で公知の任意の手段によって決定され得る。
【０２９２】
本明細書に記載される任意のかかる実施形態の一部では、富化は、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の最小限の最終分化を生じるまたは最終分化を実質的に生じない。例えば、一部の実施形態では、富化は、約５０％未満（例えば、約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０または５％未満のいずれか）の、最終分化していくａｂＴＣＲエフェクター細胞を生じる。エフェクター細胞の分化は、本明細書に記載される任意の手段を含む、当該分野で公知の任意の手段によって決定され得る。
【０２９３】
本明細書に記載される任意のかかる実施形態の一部では、富化は、ａｂＴＣＲエフェクター細胞上のａｂＴＣＲの最小限の内在化を生じるまたは内在化を実質的に生じない。例えば、一部の実施形態では、富化は、約５０％未満（例えば、約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０または５％未満のいずれか）の、内在化されていくａｂＴＣＲエフェクター細胞上のａｂＴＣＲを生じる。ａｂＴＣＲエフェクター細胞上のａｂＴＣＲの内在化は、本明細書に記載される任意の手段を含む、当該分野で公知の任意の手段によって決定され得る。
【０２９４】
本明細書に記載される任意のかかる実施形態の一部では、富化は、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の増加した増殖を生じる。例えば、一部の実施形態では、富化は、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、１０００％またはそれよりも多くのいずれか）の、富化後のａｂＴＣＲエフェクター細胞の数における増加を生じる。
【０２９５】
したがって、一部の実施形態では、標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞について不均一な細胞集団を富化する方法であって、ａ）不均一な細胞集団を、標的抗原またはその中に含まれる１つもしくは複数のエピトープを含むリガンドと接触させて、リガンドに結合したａｂＴＣＲエフェクター細胞を含む複合体を形成するステップ；およびｂ）不均一な細胞集団から複合体を分離し、それによって、ａｂＴＣＲエフェクター細胞について富化された細胞集団を生成するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、リガンドは、固体支持体に固定化される。一部の実施形態では、固体支持体は、粒状物（例えば、ビーズ）である。一部の実施形態では、固体支持体は、表面（例えば、ウェルの底）である。一部の実施形態では、リガンドは、タグで標識される。一部の実施形態では、タグは、蛍光分子、親和性タグまたは磁性タグである。一部の実施形態では、方法は、リガンドからａｂＴＣＲエフェクター細胞を溶出させるステップ、および溶出物を回収するステップをさらに含む。
【０２９６】
ライブラリースクリーニング
標的抗原に対して特異的な候補ａｂＴＣＲ構築物を単離するために、ａｂＴＣＲライブラリー、例えば、複数のａｂＴＣＲをコードする核酸のライブラリーを発現する細胞が、標的抗原またはその中に含まれる１つもしくは複数のエピトープを含むリガンドに曝露され、その後、リガンドに特異的に結合するライブラリーの親和性メンバーが単離され得る。一部の実施形態では、リガンドは、固体支持体上に固定化される。一部の実施形態では、支持体は、ビーズ、マイクロタイタープレート、イムノチューブ、またはかかる目的に有用な、当該分野で公知の任意の材料の表面であり得る。一部の実施形態では、タグ化されたリガンド標的（例えば、ビオチン化リガンド）に対する相互作用は、溶液中で起こる。一部の実施形態では、手順には、非特異的で非反応性のライブラリーメンバーを除去するための、１回または複数の洗浄するステップ（パニング）が含まれる。一部の実施形態では、溶液中の複合体を精製するために、それらは、固定化によってまたは遠心分離によって捕捉される。一部の実施形態では、親和性メンバーは、可溶性ビオチン化リガンド上で捕捉され、その後、ストレプトアビジンビーズ上に親和性複合体（親和性メンバーおよびリガンド）が固定化される。一部の実施形態では、固体支持体は、ビーズである。一部の実施形態では、ビーズには、例えば、磁性ビーズ（例えば、Ｂａｎｇｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎｃ．、Ｄｙｎａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＢｉｏｔｅｃｈまたはＱｕａｎｔｕｍ  Ｍａｇｎｅｔｉｃから）、非磁性ビーズ（例えば、ＰｉｅｒｃｅおよびＵｐｓｔａｔｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、単分散ビーズ（例えば、Ｄｙｎａｌ  ＢｉｏｔｅｃｈおよびＭｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｇｍｂｈ）および多分散ビーズ（例えば、Ｃｈｅｍａｇｅｎ）が含まれる。磁性ビーズの使用は、文献（Uhlen,  Mら（１９９４年）、Advances  in  Biomagnetic  Separation、BioTechniques  press、Westborough、MA）中に徹底的に記載されている。一部の実施形態では、親和性メンバーは、陽性選択によって精製される。一部の実施形態では、親和性メンバーは、望ましくないライブラリーメンバーを除去するために、陰性選択によって精製される。一部の実施形態では、親和性メンバーは、陽性選択ステップおよび陰性選択ステップの両方によって精製される。
【０２９７】
一般に、ライブラリー構築物を調製するために使用される技術は、公知の遺伝子操作技術に基づく。これに関して、ライブラリー中の、発現されるａｂＴＣＲをコードする核酸配列は、使用される発現系の型に適切な発現ベクター中に取り込まれる。ＣＤ３＋細胞などの細胞におけるディスプレイでの使用に適切な発現ベクターは、当該分野で周知であり、記載されている。例えば、一部の実施形態では、発現ベクターは、ウイルスベクター、例えば、レンチウイルスベクターである。
【０２９８】
一部の実施形態では、本明細書に記載される実施形態のいずれか１つにしたがう複数のａｂＴＣＲをコードする配列を含む、核酸ライブラリーが提供される。一部の実施形態では、核酸ライブラリーは、複数のａｂＴＣＲをコードするウイルスベクターを含む。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。
【０２９９】
一部の実施形態では、標的抗原に対して特異的なａｂＴＣＲをコードする配列について、本明細書に記載される実施形態のいずれかにしたがう核酸ライブラリーをスクリーニングする方法であって、ａ）ａｂＴＣＲが複数の細胞の表面上で発現されるように、核酸ライブラリーを複数の細胞中に導入するステップ；ｂ）複数の細胞を、標的抗原またはその中に含まれる１つもしくは複数のエピトープを含むリガンドと共にインキュベートするステップ；ｃ）リガンドに結合した細胞を収集するステップ；およびｄ）ステップｃ）において収集した細胞から、ａｂＴＣＲをコードする配列を単離し、それによって、標的抗原に対して特異的なａｂＴＣＲを同定するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、１回または複数の洗浄ステップをさらに含む。一部の実施形態では、１回または複数の洗浄ステップは、ステップｂ）とステップｃ）との間に実施される。一部の実施形態では、複数の細胞は、複数のＣＤ３＋細胞である。一部の実施形態では、リガンドは、固体支持体上に固定化される。一部の実施形態では、固体支持体は、ビーズである。一部の実施形態では、リガンドに結合した細胞を収集するステップは、固体支持体に結合したリガンドから細胞を溶出させること、および溶出物を収集することを含む。一部の実施形態では、リガンドは、タグで標識される。一部の実施形態では、タグは、蛍光分子、親和性タグまたは磁性タグである。一部の実施形態では、リガンドに結合した細胞を収集するステップは、細胞と標識されたリガンドとを含む複合体を単離することを含む。一部の実施形態では、細胞は、複合体から解離される。
【０３００】
ＭＨＣタンパク質
ＭＨＣクラスＩタンパク質は、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子の２つの主要なクラスのうちの一方であり（他方はＭＨＣクラスＩＩである）、身体のほぼ全ての有核細胞上で見出される。それらの機能は、細胞内由来のタンパク質の断片をＴ細胞にディスプレイすることである；健康な細胞は無視されるが、外来タンパク質または変異したタンパク質を含む細胞は、免疫系によって攻撃される。ＭＨＣクラスＩタンパク質は、細胞質ゾルタンパク質に由来するペプチドを提示するので、ＭＨＣクラスＩ提示の経路は、細胞質ゾル経路または内因性経路と呼ばれる場合が多い。クラスＩ  ＭＨＣ分子は、プロテアソームによる細胞質ゾルタンパク質の分解から主に生成されるペプチドを結合する。次いで、ＭＨＣ  Ｉ：ペプチド複合体は、細胞の原形質膜中に挿入される。ペプチドは、クラスＩ  ＭＨＣ分子の細胞外部分に結合される。したがって、クラスＩ  ＭＨＣの機能は、細胞内タンパク質を細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）にディスプレイすることである。しかし、クラスＩ  ＭＨＣは、交差提示として公知のプロセスにおいて、外因性タンパク質から生成されたペプチドもまた提示できる。
【０３０１】
ＭＨＣクラスＩタンパク質は、２つのポリペプチド鎖αおよびβ２−ミクログロブリン（β２Ｍ）からなる。２つの鎖は、β２Ｍとα３ドメインとの相互作用を介して非共有結合される。α鎖だけが多型であり、ＨＬＡ遺伝子によってコードされるが、β２Ｍサブユニットは多型ではなく、β−２ミクログロブリン遺伝子によってコードされる。α３ドメインは、原形質膜貫通性であり、Ｔ細胞のＣＤ８共受容体と相互作用する。α３−ＣＤ８相互作用は、ＭＨＣ  Ｉ分子を適所に維持するが、細胞傷害性Ｔ細胞の表面上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、そのα１−α２ヘテロ二量体リガンドに結合し、カップリングされたペプチドを抗原性についてチェックする。α１およびα２ドメインは、ペプチドが結合する溝を形成するようにフォールディングする。ＭＨＣクラスＩタンパク質は、８〜１０アミノ酸長のペプチドを結合する。
【０３０２】
ＭＨＣクラスＩＩ分子は、樹状細胞、単核食細胞、一部の内皮細胞、胸腺上皮細胞およびＢ細胞などの抗原提示細胞上でのみ通常見出される分子のファミリーである。クラスＩＩペプチドによって提示される抗原は、細胞外タンパク質（クラスＩのように細胞質ゾルタンパク質であるわけではない）に由来する；したがって、ＭＨＣクラスＩＩ依存的経路の抗原提示は、エンドサイトーシス経路または外因性経路と呼ばれる。ＭＨＣクラスＩＩ分子の負荷は、食作用によって生じる；細胞外タンパク質は、エンドサイトーシスされ、リソソーム中で消化され、得られたエピトープ性ペプチド断片は、細胞表面へのそれらの移動の前にＭＨＣクラスＩＩ分子上に負荷される。
【０３０３】
ＭＨＣクラスＩ分子と同様、クラスＩＩ分子もまたヘテロ二量体であるが、この場合、２つの同種のペプチド、αおよびβ鎖からなる。α１、α２などのサブ指定とは、ＨＬＡ遺伝子内の別々のドメインを指す；各ドメインは通常、遺伝子内の異なるエクソンによってコードされ、一部の遺伝子は、リーダー配列、膜貫通配列などをコードするさらなるドメインを有する。ＭＨＣクラスＩＩ分子の抗原結合溝は、両方の末端において開放であるが、クラスＩ分子上の対応する溝は各末端において閉鎖されているので、ＭＨＣクラスＩＩ分子によって提示される抗原は、より長く、一般的には１５アミノ酸残基長と２４アミノ酸残基長との間である。
【０３０４】
ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）遺伝子は、ＭＨＣ遺伝子のヒトバージョンである。ヒトにおける３つの主要なＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＢおよびＨＬＡ−Ｃであり、３つのマイナーなＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−ＦおよびＨＬＡ−Ｇである。ヒトにおける抗原提示に関与する３つの主要なＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＤＡ−ＤＱおよびＨＬＡ−ＤＲであり、他のＭＨＣクラスＩＩタンパク質、ＨＬＡ−ＤＭおよびＨＬＡ−ＤＯは、抗原の内部プロセシングおよび負荷に関与する。ＨＬＡ−Ａは、ヒトにおいて、最も速く進化するコード配列を有する遺伝子の中にランクされる。２０１３年１２月の時点で、１７４０個の活性タンパク質および１１７個のヌルタンパク質をコードする、２４３２個の公知のＨＬＡ−Ａ対立遺伝子が存在した。ＨＬＡ−Ａ遺伝子は、第６染色体の短腕上に位置し、ＨＬＡ−Ａの構成要素であるより大きいα鎖をコードする。ＨＬＡ−Ａα鎖のバリエーションは、ＨＬＡ機能のカギである。このバリエーションは、集団中の遺伝的多様性を促進する。各ＨＬＡは、ある特定の構造のペプチドに対して異なる親和性を有するので、より多くの種類のＨＬＡは、細胞表面上に「提示」されるより多くの種類の抗原を意味し、集団のサブセットが任意の所与の外来侵入者に対して抵抗性である可能性を増強する。これは、単一の病原体がヒト集団全体を全滅させる能力を有する可能性を減少させる。各個体は、最大で２つの型のＨＬＡ−Ａを発現でき、一方の型は、それらの両親の各々由来である。一部の個体は、両親から同じＨＬＡ−Ａを受け継ぎ、それら個体のＨＬＡ多様性を減少させる；しかし、個体の大部分は、２つの異なるコピーのＨＬＡ−Ａを受け取る。この同じパターンは、全てのＨＬＡ群にも当てはまる。言い換えると、１人のヒトは、２４３２個の公知のＨＬＡ−Ａ対立遺伝子のうち１つまたは２つのいずれかだけを発現できる。
【０３０５】
全ての対立遺伝子は、４桁の分類、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１２を少なくとも与えられる。Ａは、対立遺伝子が属するＨＬＡ遺伝子を示す。血清型による分類がカテゴリー化を単純化するように、多くのＨＬＡ−Ａ対立遺伝子が存在する。桁の次の対は、この割り当てを示す。例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０２、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０４およびＨＬＡ−Ａ＊０２：３２４は全て、Ａ２血清型のメンバーである（＊０２接頭辞によって指定される）。この群は、ＨＬＡ適合性を担う主要な因子である。これの後ろの全ての数は、血清型決定によっては決定できず、遺伝子配列決定を介して指定される。２番目のセットの桁は、どのＨＬＡタンパク質が産生されるかを示す。これらは、発見の順に割り当てられ、２０１３年１２月の時点で、４５６個の異なるＨＬＡ−Ａ０２タンパク質が公知である（名称ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１〜ＨＬＡ−Ａ＊０２：４５６が割り当てられている）。最も短い可能なＨＬＡ名は、これらの詳細の両方を含む。それを越えた各延長は、タンパク質を変化させてもさせなくてもよいヌクレオチド変化を示す。
【０３０６】
一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣクラスＩタンパク質とを含む複合体に特異的に結合し、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−ＦまたはＨＬＡ−Ｇである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＢまたはＨＬＡ−Ｃである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ｂである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ｃである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０１、ＨＬＡ−Ａ０２、ＨＬＡ−Ａ０３、ＨＬＡ−Ａ０９、ＨＬＡ−Ａ１０、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ１９、ＨＬＡ−Ａ２３、ＨＬＡ−Ａ２４、ＨＬＡ−Ａ２５、ＨＬＡ−Ａ２６、ＨＬＡ−Ａ２８、ＨＬＡ−Ａ２９、ＨＬＡ−Ａ３０、ＨＬＡ−Ａ３１、ＨＬＡ−Ａ３２、ＨＬＡ−Ａ３３、ＨＬＡ−Ａ３４、ＨＬＡ−Ａ３６、ＨＬＡ−Ａ４３、ＨＬＡ−Ａ６６、ＨＬＡ−Ａ６８、ＨＬＡ−Ａ６９、ＨＬＡ−Ａ７４またはＨＬＡ−Ａ８０である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１〜５５５のいずれか１つ、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０２、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０３、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０４、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０５、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０７、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０８、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０９、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１０、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１１、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１２、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１３、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１４、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１５、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１６、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１７、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１８、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１９、ＨＬＡ−Ａ＊０２：２０、ＨＬＡ−Ａ＊０２：２１、ＨＬＡ−Ａ＊０２：２２またはＨＬＡ−Ａ＊０２：２４である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１は、全ての白人の３９〜４６％で発現され、したがって、本発明における使用のためのＭＨＣクラスＩタンパク質の適切な選択を示す。
【０３０７】
一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣクラスＩＩタンパク質とを含む複合体に特異的に結合し、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＱまたはＨＬＡ−ＤＲである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＰである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＱである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質は、ＨＬＡ−ＤＲである。
【０３０８】
Ｆａｂ様抗原結合モジュールを生成する際の使用に適切なペプチドは、例えば、当業者に公知のコンピューター予測モデルを使用して、ＨＬＡ（例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）結合モチーフ、ならびにプロテアソームおよび免疫プロテアソームの切断部位の存在に基づいて、決定され得る。ＭＨＣ結合部位を予測するために、かかるモデルには、ＰｒｏＰｒｅｄ１（SinghおよびRaghava、ProPred:  prediction  of  HLA-DR  binding  sites.  BIOINFORMATICS  １７巻（１２号）：１２３６〜１２３７頁、２００１年により詳細に記載されている）およびＳＹＦＰＥＩＴＨＩ（Schulerら  SYFPEITHI,  Database  for  Searching  and  T-Cell  Epitope  Prediction.、Immunoinformatics  Methods  in  Molecular  Biology、４０９巻（１号）：７５〜９３頁、２００７年を参照のこと）が含まれるがこれらに限定されない。
【０３０９】
適切なペプチドが同定されると、ペプチド合成が、当業者に周知のプロトコールに従って行われ得る。それらの比較的小さいサイズに起因して、本発明のペプチドは、従来のペプチド合成技術に従って、溶液中でまたは固体支持体上で直接合成され得る。種々の自動合成器が市販されており、公知のプロトコールに従って使用され得る。溶液相中でのペプチドの合成は、合成ペプチドの大規模産生のための十分確立された手順になっており、したがって、本発明のペプチドを調製するための適切な代替法である（例えば、John  Morrow  StewartおよびMartinら  Application  of  Almez-mediated  Amidation  Reactions  to  Solution  Phase  Peptide  Synthesis、Tetrahedron  Letters  ３９巻、１５１７〜１５２０頁、１９９８年によるSolid  Phase  Peptide  Synthesisを参照のこと）。
【０３１０】
医薬組成物
本明細書に記載される実施形態のいずれかにしたがうａｂＴＣＲ、本明細書に記載される実施形態のいずれかにしたがうａｂＴＣＲをコードする核酸、または本明細書に記載される実施形態のいずれかにしたがうａｂＴＣＲエフェクター細胞を含む組成物（例えば、医薬組成物、本明細書で製剤とも呼ぶ）もまた本明細書で提供される。一部の実施形態では、組成物は、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれかにしたがうａｂＴＣＲをその表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含むａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物（例えば、医薬組成物）である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物は、医薬組成物である。
【０３１１】
組成物は、同じ細胞型の、および同じａｂＴＣＲを発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞を含む均一な細胞集団、または異なる細胞型の、および／もしくは異なるａｂＴＣＲを発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞を含む複数のａｂＴＣＲエフェクター細胞集団を含む不均一な細胞集団を含み得る。組成物は、ａｂＴＣＲエフェクター細胞ではない細胞をさらに含み得る。
【０３１２】
したがって、一部の実施形態では、同じ細胞型の、および同じａｂＴＣＲを発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞（例えば、ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞）の均一な細胞集団を含むａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物は、医薬組成物である。
【０３１３】
一部の実施形態では、異なる細胞型の、および／または異なるａｂＴＣＲを発現するａｂＴＣＲエフェクター細胞を含む複数のａｂＴＣＲエフェクター細胞集団を含む不均一な細胞集団を含むａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される細胞型のものである。一部の実施形態では、組成物中のａｂＴＣＲエフェクター細胞は全て、同じ細胞型のものである（例えば、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は全て、細胞傷害性Ｔ細胞である）。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なる細胞型のものである（例えば、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の１つの集団は、細胞傷害性Ｔ細胞からなり、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の他の集団は、ナチュラルキラーＴ細胞からなる）。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、同じａｂＴＣＲを発現する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なるａｂＴＣＲを発現する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、他とは異なるａｂＴＣＲを発現する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、同じ標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なる標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する（例えば、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の１つの集団は、ｐＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の他の集団は、細胞表面受容体に特異的に結合する）。ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が異なる標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、同じ疾患または障害と関連する標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する（例えば、標的抗原の各々は、乳がんなどのがんと関連する）。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物は、医薬組成物である。
【０３１４】
したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載される実施形態のいずれかにしたがう複数のａｂＴＣＲエフェクター細胞集団を含むａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物であって、組成物中のａｂＴＣＲエフェクター細胞が全て、同じ細胞型のものであり（例えば、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は全て、細胞傷害性Ｔ細胞である）、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団が、他とは異なるａｂＴＣＲを発現する、ａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、同じ標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なる標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する（例えば、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の１つの集団は、ｐＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の他の集団は、細胞表面受容体に特異的に結合する）。ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が異なる標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、同じ疾患または障害と関連する標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する（例えば、標的抗原の各々は、乳がんなどのがんと関連する）。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物は、医薬組成物である。
【０３１５】
一部の実施形態では、本明細書に記載される実施形態のいずれかにしたがう複数のａｂＴＣＲエフェクター細胞集団を含む組成物であって、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、他とは異なる細胞型のものである、組成物が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の集団は全て、異なる細胞型のものである。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される細胞型のものである。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、同じａｂＴＣＲを発現する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なるａｂＴＣＲを発現する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、他とは異なるａｂＴＣＲを発現する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、同じ標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なる標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する（例えば、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の１つの集団は、ｐＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の他の集団は、細胞表面受容体に特異的に結合する）。ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が異なる標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、同じ疾患または障害と関連する標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する（例えば、標的抗原の各々は、乳がんなどのがんと関連する）。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物は、医薬組成物である。
【０３１６】
組成物の調製の間の種々の時点において、細胞を凍結保存することが必要または有益であり得る。用語「凍結された／凍結する」および「凍結保存された／凍結保存する」は、相互交換可能に使用され得る。凍結することには、フリーズドライすることが含まれる。
【０３１７】
当業者に理解されるように、細胞の凍結は、破壊的であり得る（Mazur,  P.、１９７７年、Cryobiology  １４巻：２５１〜２７２頁を参照のこと）が、かかる損傷を防止するために利用可能な多数の手順が存在する。例えば、損傷は、（ａ）凍結保護剤の使用、（ｂ）凍結速度の制御、および／または（ｃ）分解反応を最小化するのに十分に低い温度における貯蔵、によって回避され得る。例示的な凍結保護剤には、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（LovelockおよびBishop、１９５９年、Nature  １８３巻：１３９４〜１３９５頁；Ashwood-Smith、１９６１年、Nature  １９０巻：１２０４〜１２０５頁）、グリセロール、ポリビニルピロリドン（polyvinylpyrrolidine）（Rinfret、１９６０年、Ann.  N.Y.  Acad.  Sci.  ８５巻：５７６頁）、ポリエチレングリコール（SloviterおよびRavdin、１９６２年、Nature  １９６巻：５４８頁）、アルブミン、デキストラン、スクロース、エチレングリコール、ｉ−エリスリトール、Ｄ−リビトール、Ｄ−マンニトール（Roweら、１９６２年、Fed.  Proc.  ２１巻：１５７頁）、Ｄ−ソルビトール、ｉ−イノシトール、Ｄ−ラクトース、塩化コリン（Benderら、１９６０年、J.  Appl.  Physiol.  １５巻：５２０頁）、アミノ酸（Phan  The  TranおよびBender、１９６０年、Exp.  Cell  Res.２０巻：６５１頁）、メタノール、アセトアミド、グリセロールモノアセテート（Lovelock、１９５４年、Biochem.  J.  ５６巻：２６５頁）および無機塩（Phan  The  TranおよびBender、１９６０年、Proc.  Soc.  Exp.  Biol.  Med.  １０４巻：３８８頁；Phan  The  TranおよびBender、１９６１年、Radiobiology,  Proceedings  of  the  Third  Australian  Conference  on  Radiobiology、llbery編、Butterworth、London、５９頁）が含まれる。特定の実施形態では、ＤＭＳＯが使用され得る。（例えば、２０〜２５％の濃度になるような）血漿の添加は、ＤＭＳＯの保護効果を強化し得る。１％のＤＭＳＯ濃度は、４℃を上回る温度では毒性であり得るので、ＤＭＳＯの添加後、細胞は、凍結まで０℃で維持され得る。
【０３１８】
細胞の凍結保存では、緩徐な制御された冷却速度が重要であり得、異なる凍結保護剤（Rapatzら、１９６８年、Cryobiology  ５巻（１号）：１８〜２５頁）および異なる細胞型は、異なる最適な冷却速度を有する（幹細胞の生存およびそれらの移植能に対する冷却速度の効果については、例えば、RoweおよびRinfret、１９６２年、Blood  ２０巻：６３６頁；Rowe、１９６６年、Cryobiology  ３巻（１号）：１２〜１８頁；Lewisら、１９６７年、Transfusion  ７巻（１号）：１７〜３２頁；ならびにMazur、１９７０年、Science  １６８巻：９３９〜９４９頁を参照のこと）。水が氷になる融解相の熱は、最小であるべきである。冷却手順は、例えば、プログラム可能な凍結デバイスまたはメタノール浴手順の使用によって実施され得る。プログラム可能な凍結装置は、最適な冷却速度の決定を可能にし、標準的な再現性のある冷却を促進する。
【０３１９】
特定の実施形態では、ＤＭＳＯ処理された細胞は、氷上で事前冷却され、次に機械的冷蔵庫（例えば、ＨａｒｒｉｓまたはＲｅｖｃｏ）中−８０℃に配置される冷却メタノールを含むトレイに移され得る。メタノール浴および試料の熱電対測定は、１℃〜３℃／分の冷却速度が好まれ得ることを示す。少なくとも２時間後、検体は、−８０℃の温度に達していることができ、液体窒素（−１９６℃）中に直接配置され得る。
【０３２０】
徹底的な凍結後、細胞は、長期凍結貯蔵容器に迅速に移され得る。好ましい実施形態では、試料は、液体窒素（−１９６℃）または蒸気（−１℃）中に凍結貯蔵され得る。かかる貯蔵は、高度に効率的な液体窒素冷蔵庫の有用性によって促進される。
【０３２１】
細胞の操作、凍結保存および長期貯蔵のためのさらなる考慮事項および手順は、以下の例示的な参考文献中に見出すことができる：米国特許第４，１９９，０２２号；同第３，７５３，３５７号；および同第４，５５９，２９８号；Gorin、１９８６年、Clinics  In  Haematology  １５巻（１号）：１９〜４８頁；Bone-Marrow  Conservation,  Culture  and  Transplantation、Proceedings  of  a  Panel、Moscow、１９６８年７月２２〜２６日、International  Atomic  Energy  Agency、Vienna、１０７〜１８６頁；LiveseyおよびLinner、１９８７年、Nature  ３２７巻：２５５頁；Linnerら、１９８６年、J.  Histochem.  Cytochem.  ３４巻（９号）：１１２３〜１１３５頁；Simione、１９９２年、J.  Parenter.  Sci.  Technol.  ４６巻（６号）：２２６〜３２頁。
【０３２２】
凍結保存後、凍結された細胞は、当業者に公知の方法に従って使用のために解凍され得る。凍結された細胞は、好ましくは、迅速に解凍され、解凍後即座に冷却される。特定の実施形態では、凍結された細胞を含むバイアルは、温水浴中にその首まで浸漬され得る；穏やかな回転が、解凍される際の細胞懸濁物の混合を確実にし、温水から内部氷塊への熱伝達を増加させる。氷が完全に融解したら直ぐに、バイアルは氷上に即座に配置され得る。
【０３２３】
特定の実施形態では、解凍の間に細胞凝集を防止するための方法が使用され得る。例示的な方法には以下が含まれる：凍結の前および／または後のＤＮａｓｅの添加（Spitzerら、１９８０年、Cancer  ４５巻：３０７５〜３０８５頁）、低分子量デキストランおよびシトレート、ヒドロキシエチルデンプン（Stiffら、１９８３年、Cryobiology  ２０巻：１７〜２４頁）など。［０１６２］当業者に理解されるように、ヒトに対して毒性である凍結保護剤が使用される場合、それは、治療的使用の前に除去するべきである。ＤＭＳＯは、重大な毒性を有さない。
【０３２４】
例示的なキャリアおよび細胞の投与様式は、米国特許出願公開第２０１０／０１８３５６４号の１４〜１５頁に記載されている。さらなる医薬キャリアは、Remington:  The  Science  and  Practice  of  Pharmacy、第２１版、David  B.  Troy編、Lippicott  Williams  &  Wilkins（２００５年）に記載されている。
【０３２５】
特定の実施形態では、細胞は、培養培地から回収され、洗浄され、治療有効量でキャリア中に濃縮され得る。例示的なキャリアには、食塩水、緩衝食塩水、生理食塩水、水、ハンクス溶液、リンゲル溶液、Ｎｏｎｎｏｓｏｌ−Ｒ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｓ）、Ｐｌａｓｍａ−Ｌｙｔｅ  Ａ（Ｒ）（Ｂａｘｔｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｍｏｒｔｏｎ  Ｇｒｏｖｅ、ＩＬ）、グリセロール、エタノール、およびそれらの組合せが含まれる。
【０３２６】
特定の実施形態では、キャリアには、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）もしくは他のヒト血清成分または胎仔ウシ血清が補充され得る。特定の実施形態では、注入のためのキャリアには、５％ＨＡＳまたはデキストロースを含む緩衝食塩水が含まれる。さらなる等張剤には、三価またはそれよりも高い糖アルコールを含む多価糖アルコール、例えば、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールまたはマンニトールが含まれる。
【０３２７】
キャリアには、緩衝剤、例えば、クエン酸緩衝液、コハク酸緩衝液、酒石酸緩衝液、フマル酸緩衝液、グルコン酸緩衝液、シュウ酸緩衝液、乳酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液および／またはトリメチルアミン塩が含まれ得る。
【０３２８】
安定剤とは、機能が増量剤から、容器の壁への細胞の粘着を防止するのに役立つ添加剤までの範囲であり得る賦形剤の広いカテゴリーを指す。典型的な安定剤には、多価糖アルコール；アミノ酸、例えば、アルギニン、リシン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ−ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸およびスレオニン；有機糖または糖アルコール、例えば、ラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオイノシトール（myoinisitol）、ガラクチトール、グリセロールおよびシクリトール、例えば、イノシトール；ＰＥＧ；アミノ酸ポリマー；硫黄含有還元剤、例えば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、アルファ−モノチオグリセロールおよびチオ硫酸ナトリウム；低分子量ポリペプチド（即ち、＜１０残基）；タンパク質、例えば、ＨＳＡ、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；単糖、例えば、キシロース、マンノース、フルクトースおよびグルコース；二糖、例えば、ラクトース、マルトースおよびスクロース；三糖、例えば、ラフィノース、ならびに多糖、例えば、デキストランが含まれ得る。
【０３２９】
必要または有益な場合、組成物は、注射の部位における疼痛を和らげるために、リドカインなどの局所麻酔薬を含み得る。
【０３３０】
例示的な防腐剤には、フェノール、ベンジルアルコール、メタ−クレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、ベンザルコニウムハライド、塩化ヘキサメトニウム、アルキルパラベン、例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノールおよび３−ペンタノールが含まれる。
【０３３１】
組成物内の細胞の治療有効量は、１０２細胞よりも高い、１０３細胞よりも高い、１０４細胞よりも高い、１０５細胞よりも高い、１０６細胞よりも高い、１０７細胞よりも高い、１０８細胞よりも高い、１０９細胞よりも高い、１０１０細胞よりも高い、または１０１１細胞よりも高いとすることができる。
【０３３２】
本明細書に開示される組成物および製剤では、細胞は一般に、１リットルもしくはそれ未満、５００ｍｌもしくはそれ未満、２５０ｍｌもしくはそれ未満または１００ｍｌもしくはそれ未満の体積中にある。したがって、投与される細胞の密度は、典型的には、１０４細胞／ｍｌ、１０７細胞／ｍｌまたは１０８細胞／ｍｌよりも高い。
【０３３３】
本明細書に記載されるａｂＴＣＲをコードする核酸のいずれかを含むａｂＴＣＲ核酸組成物（例えば、医薬組成物、本明細書で製剤とも呼ぶ）もまた本明細書で提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲ核酸組成物は、医薬組成物である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲ核酸組成物は、等張化剤、賦形剤、希釈剤、増粘剤、安定剤、緩衝液および／もしくは防腐剤；ならびに／または水性ビヒクル、例えば、精製水、糖水溶液、緩衝液溶液、生理食塩水、ポリマー水溶液もしくは無ＲＮａｓｅ水のいずれかをさらに含む。添加されるかかる添加剤および水性ビヒクルの量は、ａｂＴＣＲ核酸組成物の使用の形態に従って適切に選択され得る。
【０３３４】
本明細書に開示される組成物および製剤は、例えば、注射、注入、灌流または洗浄による投与のために調製され得る。組成物および製剤は、骨髄、静脈内、真皮内、動脈内、結節内、リンパ内、腹腔内、病巣内、前立腺内、腟内、直腸内、外用、髄腔内、腫瘍内、筋肉内、小胞内および／または皮下注射のためにさらに製剤化され得る。
【０３３５】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は、滅菌でなければならない。これは、例えば、滅菌濾過膜を介した濾過によって容易に達成される。
【０３３６】
ａｂＴＣＲを使用する処置の方法
本発明のａｂＴＣＲおよび／または組成物は、例えば、がんおよび感染性疾患（例えば、ウイルス感染症）を含む、標的抗原（ＴＡ）発現と関連する疾患および／または障害（本明細書で「標的抗原陽性」または「ＴＡ陽性」疾患または障害とも呼ぶ）を処置するために、個体（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）に投与され得る。したがって、本出願は、一部の実施形態では、個体において標的抗原陽性疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）を処置するための方法であって、個体に、有効量の、抗体部分を含むａｂＴＣＲ、例えば、本明細書に記載されるａｂＴＣＲのいずれか１つを含む組成物（例えば、医薬組成物）を投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、組成物は、ａｂＴＣＲと関連する細胞（例えば、エフェクター細胞）をさらに含む。一部の実施形態では、がんは、例えば、副腎皮質癌、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞癌、結腸直腸がん、食道がん、グリア芽細胞腫、グリオーマ、肝細胞癌、頭頸部がん、腎臓がん、肺がん、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓がん、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽細胞腫、卵巣がん、前立腺がん、肉腫、胃がん、子宮がんおよび甲状腺がんからなる群から選択される。一部の実施形態では、ウイルス感染症は、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１（ＨＴＬＶ−１）、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）からなる群から選択されるウイルスによって引き起こされる。
【０３３７】
例えば、一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原関連疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａ）標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュール、およびｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを含むａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）をそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ＶＨ抗体ドメイン、ＣＨ１抗体ドメイン、ＶＬ抗体ドメインおよびＣＬ抗体ドメインを含む。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲ、例えば、αβＴＣＲまたはγδＴＣＲの膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲの接続ペプチドまたはその断片をさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも１つの部分をさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、少なくとも１つの細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの細胞内ドメインは、ＴＣＲの細胞内ドメイン由来の配列、共刺激細胞内シグナル伝達配列、エピトープタグ、またはそれらの組合せのいずれかを含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、少なくとも１つのジスルフィド結合をさらに含む。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ジスルフィド結合を含み、および／またはＴＣＲＭは、ジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ＣＨ１ドメイン中の残基とＣＬドメインの残基との間のジスルフィド結合を含み、および／またはＴＣＲＭは、第１の接続ペプチド中の残基と第２の接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールとＴＣＲＭとの間にはペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、方法は、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の最小限の疲弊を生じるまたは疲弊を実質的に生じない。一部の実施形態で���、方法は、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の最小限の最終分化を生じるまたは最終分化を実質的に生じない。一部の実施形態では、方法は、ａｂＴＣＲエフェクター細胞上のａｂＴＣＲの最小限の内在化を生じるまたは内在化を実質的に生じない。一部の実施形態では、方法は、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の増加した増殖を生じる。
【０３３８】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原関連疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａ）標的抗原に特異的に結合するＦｖ様抗原結合モジュール、およびｂ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを含むａｂＴＣＲ（例えば、単離されたａｂＴＣＲ）をそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、標的抗原がペプチド／ＭＨＣ複合体である、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｆｖ様抗原結合モジュールは、ＶＨ抗体ドメインとＶＬ抗体ドメインとを含む。一部の実施形態では、ＶＬ抗体ドメインのＣ末端に融合した第１のペプチドリンカーおよび／またはＶＨ抗体ドメインのＣ末端に融合した第２のペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、第１および第２のペプチドリンカーは、互いに結合することが可能である。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、免疫グロブリン重鎖および／または軽鎖定常領域に由来する。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、ＴＣＲサブユニット定常領域に由来する。例えば、一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、ａ）ＴＣＲαおよびβサブユニット定常ドメイン；またはｂ）ＴＣＲγおよびδサブユニット定常ドメインに由来する。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、合成である。一部の実施形態では、Ｆｖ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲ、例えば、αβＴＣＲまたはγδＴＣＲの膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲ、例えば、αβＴＣＲまたはγδＴＣＲの接続ペプチドまたはその断片をさらに含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインおよび接続ペプチドは、αβＴＣＲまたはγδＴＣＲに由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインはαβＴＣＲに由来し、接続ペプチドはγδＴＣＲに由来する、または膜貫通ドメインはγδＴＣＲに由来し、接続ペプチドはαβＴＣＲに由来する。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも１つの部分をさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲの細胞内ドメイン由来の配列を含む少なくとも１つのＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＴＣＲサブユニットの断片を含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、少なくとも１つのジスルフィド結合をさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のペプチドリンカーは、ジスルフィド結合を含み、および／またはＴＣＲＭは、ジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、第１の接続ペプチド中の残基と第２の接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、標的抗原ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、方法は、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の最小限の疲弊を生じるまたは疲弊を実質的に生じない。一部の実施形態では、方法は、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の最小限の最終分化を生じるまたは最終分化を実質的に生じない。一部の実施形態では、方法は、ａｂＴＣＲエフェクター細胞上のａｂＴＣＲの最小限の内在化を生じるまたは内在化を実質的に生じない。一部の実施形態では、方法は、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の増加した増殖を生じる。
【０３３９】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原関連疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）を処置する方法であって、個体に、有効量の、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）ＶＨおよびＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；ならびにｂ）ＶＬおよびＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み、第１の抗原結合ドメインのＶＨおよびＣＨ１ドメインと第２の抗原結合ドメインのＶＬおよびＣＬドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲα鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲβ鎖である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲβ鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲα鎖である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲγ鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲδ鎖である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲδ鎖であり、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲγ鎖である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲサブユニットの接続ペプチドもしくはその断片をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲサブユニットの接続ペプチドもしくはその断片をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインの一部分をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインの一部分をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、第１のＴＣＲサブユニットの細胞内ドメイン由来の配列を含み、および／または第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、第２のＴＣＲサブユニットの細胞内ドメイン由来の配列を含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲＤとの間に第１��ペプチドリンカーが、および／または第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合によって連結される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）第１の抗原結合ドメイン中のＣＨ１抗体ドメイン中の残基と第２の抗原結合ドメイン中のＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。
【０３４０】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原関連疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）を処置する方法であって、個体に、有効量の、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）ＶＨおよびＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインとＴＣＲα鎖の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；ならびにｂ）ＶＬおよびＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインとＴＣＲβ鎖の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み、第１の抗原結合ドメインのＶＨおよびＣＨ１ドメインと第２の抗原結合ドメインのＶＬおよびＣＬドメインとが、細胞表面抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、ＴＣＲα鎖の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、ＴＣＲβ鎖の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、ＴＣＲα鎖の細胞外ドメインの一部分をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、ＴＣＲβ鎖の細胞外ドメインの一部分をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、ＴＣＲα鎖の細胞内ドメイン由来の配列を含み、および／または第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、ＴＣＲβ鎖の細胞内ドメイン由来の配列を含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーが、および／または第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合��よって連結される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）第１の抗原結合ドメイン中のＣＨ１抗体ドメイン中の残基と第２の抗原結合ドメイン中のＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、γδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３４１】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原関連疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）を処置する方法であって、個体に、有効量の、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）ＶＨおよびＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインとＴＣＲβ鎖の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；ならびにｂ）ＶＬおよびＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインとＴＣＲα鎖の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み、第１の抗原結合ドメインのＶＨおよびＣＨ１ドメインと第２の抗原結合ドメインのＶＬおよびＣＬドメインとが、細胞表面抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、ＴＣＲβ鎖の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、ＴＣＲα鎖の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、ＴＣＲβ鎖の細胞外ドメインの一部分をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、ＴＣＲα鎖の細胞外ドメインの一部分をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、ＴＣＲβ鎖の細胞内ドメイン由来の配列を含み、および／または第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、ＴＣＲα鎖の細胞内ドメイン由来の配列を含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーが、および／または第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合��よって連結される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）第１の抗原結合ドメイン中のＣＨ１抗体ドメイン中の残基と第２の抗原結合ドメイン中のＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、γδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３４２】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原関連疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）を処置する方法であって、個体に、有効量の、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）ＶＨおよびＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインとＴＣＲγ鎖の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；ならびにｂ）ＶＬおよびＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインとＴＣＲδ鎖の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み、第１の抗原結合ドメインのＶＨおよびＣＨ１ドメインと第２の抗原結合ドメインのＶＬおよびＣＬドメインとが、細胞表面抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、ＴＣＲγ鎖の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、ＴＣＲδ鎖の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、ＴＣＲγ鎖の細胞外ドメインの一部分をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、ＴＣＲδ鎖の細胞外ドメインの一部分をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、ＴＣＲγ鎖の細胞内ドメイン由来の配列を含み、および／または第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、ＴＣＲδ鎖の細胞内ドメイン由来の配列を含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーが、および／または第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合��よって連結される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）第１の抗原結合ドメイン中のＣＨ１抗体ドメイン中の残基と第２の抗原結合ドメイン中のＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３４３】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原関連疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）を処置する方法であって、個体に、有効量の、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）ＶＨおよびＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインとＴＣＲδ鎖の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；ならびにｂ）ＶＬおよびＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインとＴＣＲγ鎖の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み、第１の抗原結合ドメインのＶＨおよびＣＨ１ドメインと第２の抗原結合ドメインのＶＬおよびＣＬドメインとが、細胞表面抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、ＴＣＲδ鎖の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、ＴＣＲγ鎖の接続ペプチドもしくはその断片をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、ＴＣＲδ鎖の細胞外ドメインの一部分をさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、ＴＣＲγ鎖の細胞外ドメインの一部分をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲＤは、第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含み、および／または第２のＴＣＲＤは、第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、第１のＴＣＲ細胞内ドメインは、ＴＣＲδ鎖の細胞内ドメイン由来の配列を含み、および／または第２のＴＣＲ細胞内ドメインは、ＴＣＲγ鎖の細胞内ドメイン由来の配列を含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーが、および／または第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーが存在する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、例えば、共有結合（例えば、ペプチド結合または他の化学結合）または非共有結合��よって連結される。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）第１の抗原結合ドメイン中のＣＨ１抗体ドメイン中の残基と第２の抗原結合ドメイン中のＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３４４】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原関連疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）を処置する方法であって、個体に、有効量の、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第１の抗原結合ドメインと配列番号１５のアミノ酸配列を含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第２の抗原結合ドメインと配列番号１６のアミノ酸配列を含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み；第１の抗原結合ドメインと第２の抗原結合ドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）配列番号７０もしくは７１のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達配列；および／またはｂ）配列番号５０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）エピトープタグを含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含み、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）Ｆａｂ様抗原結合モジュール中のＣＨ１抗体ドメイン中の残基とＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、γδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３４５】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原関連疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）を処置する方法であって、個体に、有効量の、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第１の抗原結合ドメインと配列番号１７のアミノ酸配列を含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第２の抗原結合ドメインと配列番号１８のアミノ酸配列を含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み；第１の抗原結合ドメインと第２の抗原結合ドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）配列番号７０もしくは７１のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達配列；および／またはｂ）配列番号５０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）エピトープタグを含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含み、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）Ｆａｂ様抗原結合モジュール中のＣＨ１抗体ドメイン中の残基とＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、γδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３４６】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原関連疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）を処置する方法であって、個体に、有効量の、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第１の抗原結合ドメインと配列番号１９のアミノ酸配列を含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第２の抗原結合ドメインと配列番号２０のアミノ酸配列を含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み；第１の抗原結合ドメインと第２の抗原結合ドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）配列番号７０もしくは７１のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達配列；および／またはｂ）配列番号５０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）エピトープタグを含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含み、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）Ｆａｂ様抗原結合モジュール中のＣＨ１抗体ドメイン中の残基とＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３４７】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原関連疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）を処置する方法であって、個体に、有効量の、標的抗原を特異的に認識するａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第１の抗原結合ドメインと配列番号２１のアミノ酸配列を含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）アミノ末端からカルボキシ末端の順に、第２の抗原結合ドメインと配列番号２２のアミノ酸配列を含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖、を含み；第１の抗原結合ドメインと第２の抗原結合ドメインとが、標的抗原に特異的に結合するＦａｂ様抗原結合モジュールを形成し、第１のＴＣＲＤと第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴＣＲＭを形成する、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｆａｂ様抗原結合モジュールは、ヒト、ヒト化、キメラ、半合成または完全合成である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ａ）配列番号７０もしくは７１のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）少なくとも１つのＴ細胞共刺激シグナル伝達配列；および／またはｂ）配列番号５０〜５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）エピトープタグを含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、第１の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドおよび／または第２の抗原結合ドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含み、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能である。一部の実施形態では、ＴＣＲＭは、ａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成を促進する。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とは、ａ）第１のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基と第２のＴＣＲＤの接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合；および／またはｂ）Ｆａｂ様抗原結合モジュール中のＣＨ１抗体ドメイン中の残基とＣＬ抗体ドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を介して連結される。一部の実施形態では、標的抗原は細胞表面抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、疾患関連抗原、例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原である。一部の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である。一部の実施形態では、標的抗原は、表面提示されたペプチド／ＭＨＣ複合体である。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、疾患関連抗原（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルスがコードする抗原）に由来するペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む。一部の実施形態では、ペプチド／ＭＨＣ複合体は、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含み、ペプチドは、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、ＭＨＣタンパク質は、ＭＨＣクラスＩタンパク質である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３４８】
一部の実施形態では、それを必要とする個体においてＡＦＰ関連疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とが、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される、方法が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、γδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３４９】
一部の実施形態では、それを必要とする個体においてＡＦＰ関連疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とが、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される、方法が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、γδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３５０】
一部の実施形態では、それを必要とする個体においてＡＦＰ関連疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）配列番号２７のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とが、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される、方法が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、γδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲαおよび／またはβ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているαβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３５１】
一部の実施形態では、それを必要とする個体においてＡＦＰ関連疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とが、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される、方法が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３５２】
一部の実施形態では、それを必要とする個体においてＡＦＰ関連疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とが、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される、方法が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３５３】
一部の実施形態では、それを必要とする個体においてＡＦＰ関連疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とが、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される、方法が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３５４】
一部の実施形態では、それを必要とする個体においてＡＦＰ関連疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とが、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される、方法が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３５５】
一部の実施形態では、それを必要とする個体においてＣＤ１９関連疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とが、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される、方法が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３５６】
一部の実施形態では、それを必要とする個体においてＣＤ１９関連疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とが、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される、方法が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３５７】
一部の実施形態では、それを必要とする個体においてＣＤ１９関連疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）配列番号５５のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とが、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される、方法が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３５８】
一部の実施形態では、それを必要とする個体においてＣＤ１９関連疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲが、ａ）配列番号５６のアミノ酸配列を含む第１のａｂＴＣＲドメインを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む第２のａｂＴＣＲドメインを含む第２のポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖とが、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して連結される、方法が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０またはＣＤ４０由来）および／またはエピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧまたはｍｙｃ）を含む少なくとも１つのアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、配列番号５０〜５２のアミノ酸配列のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、第１のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第１のシグナルペプチドをさらに含み、および／または第２のポリペプチド鎖は、第２のａｂＴＣＲドメインのアミノ末端側に、第２のシグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、第１および／または第２のシグナルペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、αβＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、ＴＣＲγおよび／またはδ鎖の発現を遮断するまたは減少させるように改変されているγδＴ細胞である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３５９】
それを必要とする個体において標的抗原関連疾患を処置する方法であって、個体に、異なるａｂＴＣＲを発現する複数のエフェクター細胞を含む組成物を投与するステップを含む、方法もまた企図される。したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載される個体において標的抗原関連疾患を処置するための方法のいずれかによれば、組成物は、本明細書に記載される不均一なａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物である。
【０３６０】
例えば、一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原関連疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）を処置する方法であって、個体に、有効量の、本明細書に記載される実施形態のいずれかにしたがう複数のａｂＴＣＲエフェクター細胞集団を含む不均一なａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物を投与するステップを含み、組成物中のａｂＴＣＲエフェクター細胞が全て、同じ細胞型のものであり（例えば、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は全て、細胞傷害性Ｔ細胞である）、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団が、他とは異なるａｂＴＣＲを発現し、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する、方法が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団は、異なる標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する。ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が異なる標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する一部の実施形態では、異なる標的抗原の各々は、標的抗原関連疾患と関連する。
【０３６１】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原関連疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）を処置する方法であって、個体に、有効量の、本明細書に記載される実施形態のいずれかにしたがう複数のａｂＴＣＲエフェクター細胞集団を含む不均一なａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、他とは異なる細胞型のものであり、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する、方法が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の集団は全て、異なる細胞型のものである。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される細胞型のものである。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、同じａｂＴＣＲを発現する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なるａｂＴＣＲを発現する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、他とは異なるａｂＴＣＲを発現する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団は、異なる標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する。ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が異なる標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する一部の実施形態では、異なる標的抗原の各々は、標的抗原関連疾患と関連する。
【０３６２】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において複数の標的抗原と関連する疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、本明細書に記載される実施形態のいずれかにしたがう複数のａｂＴＣＲエフェクター細胞集団を含む不均一なａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物を投与するステップを含み、組成物中のａｂＴＣＲエフェクター細胞が全て、同じ細胞型のものであり（例えば、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は全て、細胞傷害性Ｔ細胞である）、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団が、他とは異なるａｂＴＣＲを発現し、複数の標的抗原の各標的抗原について、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する、方法が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
【０３６３】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において複数の標的抗原と関連する疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、本明細書に記載される実施形態のいずれかにしたがう複数のａｂＴＣＲエフェクター細胞集団を含む不均一なａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物を投与するステップを含み、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、他とは異なる細胞型のものであり、複数の標的抗原の各標的抗原について、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の少なくとも１つの集団が、標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを発現する、方法が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の集団は全て、異なる細胞型のものである。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される細胞型のものである。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞の各集団は、他とは異なるａｂＴＣＲを発現する。
【０３６４】
一部の実施形態では、個体は、哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、ラット、マウス、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコなど）である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。一部の実施形態では、個体は、臨床患者、臨床試験の志願者、実験動物などである。一部の実施形態では、個体は、約６０歳未満（例えば、約５０歳未満、約４０歳未満、約３０歳未満、約２５歳未満、約２０歳未満、約１５歳未満、または約１０歳未満のいずれかを含む）である。一部の実施形態では、個体は、約６０歳超（例えば、約７０歳超、約８０歳超、約９０歳超、または約１００歳超のいずれかを含む）である。一部の実施形態では、個体は、本明細書に記載される疾患または障害（例えば、がんまたはウイルス感染症）のうちの１つまたは複数と診断されているまたはそれに環境的もしくは遺伝的にかかりやすい。一部の実施形態では、個体は、本明細書に記載される１つまたは複数の疾患または障害に関連づけられる１つまたは複数の危険因子を有する。
【０３６５】
一部の実施形態では、本発明のａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物は、標的抗原発現が関与する疾患または障害を処置するために、第２、第３または第４の薬剤（例えば、抗新生物剤、成長阻害剤、細胞傷害剤または化学療法剤を含む）と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物は、サイトカイン（例えば、ＩＬ−２）と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲは、ＭＨＣタンパク質の発現を増加させる薬剤および／またはＭＨＣタンパク質によるペプチドの表面提示を増強する薬剤と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、薬剤には、例えば、ＩＦＮ受容体アゴニスト、Ｈｓｐ９０阻害剤、ｐ５３発現のエンハンサー、および化学療法剤が含まれる。一部の実施形態では、薬剤は、例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮβおよびＩＦＮαを含むＩＦＮ受容体アゴニストである。一部の実施形態では、薬剤は、例えば、タネスピマイシン（１７−ＡＡＧ）、アルベスピマイシン（１７−ＤＭＡＧ）、レタスピマイシン（ＩＰＩ−５０４）、ＩＰＩ−４９３、ＣＮＦ２０２４／ＢＩＩＢ０２１、ＭＰＣ−３１００、Ｄｅｂｉｏ  ０９３２（ＣＵＤＣ−３０５）、ＰＵ−Ｈ７１、Ｇａｎｅｔｅｓｐｉｂ（ＳＴＡ−９０９０）、ＮＶＰ−ＡＵＹ９２２（ＶＥＲ−５２２６９）、ＨＳＰ９９０、ＫＷ−２４７８、ＡＴ１３３８７、ＳＮＸ−５４２２、ＤＳ−２２４８およびＸＬ８８８を含むＨｓｐ９０阻害剤である。一部の実施形態では、薬剤は、例えば、５−フルオロウラシルおよびヌトリン−３を含む、ｐ５３発現のエンハンサーである。一部の実施形態では、薬剤は、例えば、トポテカン、エトポシド、シスプラチン、パクリタキセルおよびビンブラスチンを含む化学療法剤である。
【０３６６】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原陽性疾患を処置する方法であって、個体に、サイトカイン（例えば、ＩＬ−２）と組み合わせて、本明細書に記載される実施形態のいずれかにしたがうａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物とサイトカインとは、同時に投与される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物とサイトカインとは、逐次投与される。
【０３６７】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原陽性疾患を処置する方法であって、標的抗原を発現する細胞が、それらの表面上に、標的抗原とＭＨＣクラスＩタンパク質とを含む複合体を通常は提示しないまたは比較的低いレベルで提示し、個体に、ＭＨＣクラスＩタンパク質の発現を増加させる薬剤および／またはＭＨＣクラスＩタンパク質による標的抗原の表面提示を増強する薬剤と組み合わせて、本明細書に記載される実施形態のいずれかにしたがうａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、薬剤には、例えば、ＩＦＮ受容体アゴニスト、Ｈｓｐ９０阻害剤、ｐ５３発現のエンハンサー、および化学療法剤が含まれる。一部の実施形態では、薬剤は、例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮβおよびＩＦＮαを含むＩＦＮ受容体アゴニストである。一部の実施形態では、薬剤は、例えば、タネスピマイシン（１７−ＡＡＧ）、アルベスピマイシン（１７−ＤＭＡＧ）、レタスピマイシン（ＩＰＩ−５０４）、ＩＰＩ−４９３、ＣＮＦ２０２４／ＢＩＩＢ０２１、ＭＰＣ−３１００、Ｄｅｂｉｏ  ０９３２（ＣＵＤＣ−３０５）、ＰＵ−Ｈ７１、Ｇａｎｅｔｅｓｐｉｂ（ＳＴＡ−９０９０）、ＮＶＰ−ＡＵＹ９２２（ＶＥＲ−５２２６９）、ＨＳＰ９９０、ＫＷ−２４７８、ＡＴ１３３８７、ＳＮＸ−５４２２、ＤＳ−２２４８およびＸＬ８８８を含むＨｓｐ９０阻害剤である。一部の実施形態では、薬剤は、例えば、５−フルオロウラシルおよびヌトリン−３を含む、ｐ５３発現のエンハンサーである。一部の実施形態では、薬剤は、例えば、トポテカン、エトポシド、シスプラチン、パクリタキセルおよびビンブラスチンを含む化学療法剤である。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物と薬剤とは、同時に投与される。一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物と薬剤とは、逐次投与される。
【０３６８】
一部の実施形態では、それを必要とする個体において標的抗原関連疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）を処置する方法であって、個体に、有効量の、本明細書に記載される実施形態のいずれかにしたがうａｂＴＣＲをコードする核酸を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。遺伝子送達のための方法は、当該分野で公知である。例えば、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第５，３９９，３４６号、同第５，５８０，８５９号、同第５，５８９，４６６号を参照のこと。
【０３６９】
がんの処置は、例えば、腫瘍の退縮、腫瘍の重量またはサイズの減少、進行までの時間、生存の持続時間、無増悪生存期間、奏効率、応答の持続時間、生活の質、タンパク質の発現および／または活性によって評価することができる。例えば放射線画像法による応答の測定を含む、療法の有効性を決定するための手法を用いることができる。
【０３７０】
一部の実施形態では、処置の有効性は、腫瘍成長阻害の百分率（％ＴＧＩ）として測定され、これは、方程式１００−（Ｔ／Ｃ×１００）（式中、Ｔは、処置される腫瘍の相対的な腫瘍体積の平均であり、Ｃは、無処置の腫瘍の相対的な腫瘍体積の平均である）を使用して算出される。一部の実施形態では、％ＴＧＩは、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、または９５％超である。
【０３７１】
ウイルス感染症の処置は、例えば、ウイルス負荷、生存の持続時間、生活の質、タンパク質発現および／または活性によって評価され得る。
【０３７２】
疾患
ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、一部の実施形態では、標的抗原と関連するがんを処置するために有用であり得る。本明細書に記載される方法のいずれかを使用して処置され得るがんには、血管新生されていない腫瘍、またはまだ実質的に血管新生されていない腫瘍、ならびに血管新生された腫瘍が含まれる。がんは、非固形腫瘍（例えば、血液学的腫瘍、例えば、白血病およびリンパ腫）を含み得、または固形腫瘍を含み得る。本発明のａｂＴＣＲエフェクター細胞で処置されるがんの型には、癌腫、芽細胞腫および肉腫、ならびにある特定の白血病またはリンパ様悪性腫瘍、良性および悪性の腫瘍、ならびに悪性腫瘍、例えば、肉腫、癌腫およびメラノーマが含まれるがこれらに限定されない。成体腫瘍／がんおよび小児腫瘍／がんもまた含まれる。
【０３７３】
血液学的がんは、血液または骨髄のがんである。血液学的（または血行性）がんの例には、急性白血病（例えば、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病ならびに骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性および赤白血病）、慢性白血病（例えば、慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病および慢性リンパ球性白血病）、真性赤血球増加症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（低悪性度および高悪性度形態）、多発性骨髄腫、形質細胞腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、重鎖病、骨髄異形成症候群、ヘアリー細胞白血病および脊髄形成異常症を含む白血病が含まれる。
【０３７４】
固形腫瘍は、嚢胞も液体領域も通常は含まない、組織の異常な塊である。固形腫瘍は、良性であっても、または悪性であってもよい。異なる型の固形腫瘍は、それらを形成する細胞の型によって命名される（例えば、肉腫、癌腫およびリンパ腫）。固形腫瘍、例えば、肉腫および癌腫の例には、副腎皮質癌、胆管細胞癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫および他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、胃がん、リンパ様悪性腫瘍、膵臓がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、肝細胞癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺がん（例えば、甲状腺髄様癌および甲状腺乳頭癌）、褐色細胞腫、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん（例えば、子宮頸癌および前侵襲性子宮頸部形成異常）、結腸直腸がん、肛門、肛門管または肛門直腸のがん、膣がん、外陰部のがん（例えば、扁平上皮細胞癌、上皮内癌、腺癌および線維肉腫）、陰茎がん、口咽頭がん、食道がん、頭部がん（例えば、扁平上皮細胞癌）、頸部がん（例えば、扁平上皮細胞癌）、精巣がん（例えば、セミノーマ、奇形腫、胎児性癌、奇形癌、絨毛癌、肉腫、ライディッヒ細胞腫瘍、線維腫、線維腺腫、腺腫様腫瘍および脂肪腫）、膀胱癌、腎臓がん、メラノーマ、子宮のがん（例えば、子宮内膜癌）、尿路上皮がん（例えば、扁平上皮細胞癌、移行上皮癌、腺癌、尿管がんおよび膀胱がん）、およびＣＮＳ腫瘍（例えば、グリオーマ（例えば、脳幹グリオーマおよび混合グリオーマ）、グリア芽細胞腫（多形性グリア芽細胞腫としても公知）、星状細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、胚細胞腫、髄芽細胞腫、シュワン細胞腫、頭蓋咽頭腫（craniopharyogioma）、上衣（細胞）腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏枝グリオーマ、髄膜腫（menangioma）、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫および脳転移）が含まれる。
【０３７５】
がんの処置は、例えば、腫瘍の退縮、腫瘍の重量またはサイズの収縮、進行までの時間、生存の持続期間、無増悪生存期間、全体的奏効率、応答の持続期間、生活の質、タンパク質の発現および／または活性によって評価することができる。例えば放射線画像法による応答の測定を含む、療法の有効性を決定するため手法を用いることができる。
【０３７６】
ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、他の実施形態では、病原体関連（例えば、ウイルスがコードする）抗原を標的化することによって感染性疾患を処置するために有用であり得る。予防または処置される感染症は、例えば、ウイルス、細菌、原生生物または寄生生物によって引き起こされ得る。標的抗原は、病原体によって引き起こされる疾患の原因となる、または病原体が感染した宿主において免疫学的応答を誘導することが可能な、病原性タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドであり得る。ａｂＴＣＲエフェクター細胞によって標的化され得る病原性抗原には、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ａｎａｐｌａｓｍａ属、Ａｎａｐｌａｓｍａ  ｐｈａｇｏｃｙｔｏｐｈｉｌｕｍ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｅ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ、Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ、Ａｓｃａｒｉｓ  ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属、アストロウイルス科、Ｂａｂｅｓｉａ属、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ  ｈｅｎｓｅｌａｅ、ＢＫウイルス、Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｉｓ  ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ属、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｓｐｐ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ属、Ｂｒｕｇｉａ  ｍａｌａｙｉ、ブニヤウイルス科、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａおよび他のＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ種、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍａｌｌｅｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ、カリシウイルス科、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ属、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ、ＣＪＤプリオン、Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｐ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｓｐｐ、コロナウイルス、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｏｘｉｅｌｌａ  ｂｕｒｎｅｔｉｉ、クリミアコンゴ出血熱ウイルス、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ属、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、デングウイルス（ＤＥＮ−１、ＤＥＮ−２、ＤＥＮ−３およびＤＥＮ−４）、Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｆｒａｇｉｌｉｓ、エボラウイルス（ＥＢＯＶ）、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｃｈａｆｆｅｅｎｓｉｓ、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｅｗｉｎｇｉｉ、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ属、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属、エンテロウイルス属、エンテロウイルス、主にコクサッキーＡウイルスおよびエンテロウイルス７１（ＥＶ７１��、Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ  ｓｐｐ、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｏ１５７：Ｈ７、Ｏ１１１およびＯ１０４：Ｈ４、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｈｅｐａｔｉｃａおよびＦａｓｃｉｏｌａ  ｇｉｇａｎｔｉｃａ、ＦＦＩプリオン、Ｆｉｌａｒｉｏｉｄｅａ上科、フラビウイルス、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｃａｎｄｉｄｕｍ、Ｇｉａｒｄｉａ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ、Ｇｎａｔｈｏｓｔｏｍａ  ｓｐｐ、ＧＳＳプリオン、グアナリトウイルス、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、ヘニパウイルス（ヘンドラウイルス、ニパーウイルス）、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス１および２（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、Ｈｏｒｔａｅａ  ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ、ヒトボカウイルス（ＨＢｏＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）およびヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ−７）、ヒトメタニューモウイルス（ｈＭＰＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１（ＨＴＬＶ−１）、日本脳炎ウイルス、ＪＣウイルス、フニンウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、Ｋｉｎｇｅｌｌａ  ｋｉｎｇａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ、クーループリオン、ラッサウイルス、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ属、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ属、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、マチュポウイルス、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｓｐｐ、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、Ｍｅｔａｇｏｎｉｍｕｓ  ｙｏｋａｇａｗａｉ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａ  ｐｈｙｌｕｍ、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、ムンプスウイルス、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅおよびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ  ｆｏｗｌｅｒｉ、Ｎｅｃａｔｏｒ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ  ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｓｐｐ、Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ  ｖｏｌｖｕｌｕｓ、Ｏｒｉｅｎｔｉａ  ｔｓｕｔｓｕｇａｍｕｓｈｉ、オルトミクソウイルス科（インフルエンザ）、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ  ｓｐｐ、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ  ｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ、パルボウイルスＢ１９、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ属、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ属、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、���吸器多核体ウイルス（ＲＳＶ）、ライノウイルス属、ライノウイルス、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ａｋａｒｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ属、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｔｙｐｈｉ、リフトバレー熱ウイルス、ロタウイルス、風疹ウイルス、サビアウイルス、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属、Ｓａｒｃｏｐｔｅｓ  ｓｃａｂｉｅｉ、ＳＡＲＳコロナウイルス、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ属、Ｓｈｉｇｅｌｌａ属、シンノンブルウイルス、ハンタウイルス、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ  ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ、Ｔａｅｎｉａ属、Ｔａｅｎｉａ  ｓｏｌｉｕｍ、ダニ媒介性脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ）、Ｔｏｘｏｃａｒａ  ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ  ｃａｔｉ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｓｐｉｒａｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｓｐｐ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｔｒｉｃｈｉｕｒａ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ、Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、大痘瘡または小痘瘡、ｖＣＪＤプリオン、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、ウエストナイルウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ  ｂａｎｃｒｏｆｔｉ、黄熱病ウイルス、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ、ならびにＹｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに由来する抗原が含まれるがこれらに限定されない。
【０３７７】
一部の実施形態では、ａｂＴＣＲエフェクター細胞は、発癌性感染性疾患、例えば、発癌性ウイルスによる感染症を処置するために使用される。発癌性ウイルスには、ＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＢＶ、ＫＳＨＶ、ＨＰＶ、ＭＣＶ、ＨＴＬＶ−１、ＨＩＶ−１およびＨＣＶが含まれるがこれらに限定されない。ａｂＴＣＲの標的抗原は、Ｔａｘ、Ｅ７、Ｅ６／Ｅ７、Ｅ６、ＨＢｘ、ＥＢＮＡタンパク質（例えば、ＥＢＮＡ３Ａ、ＥＢＮＡ３ＣおよびＥＢＮＡ２）、ｖ−サイクリン、ＬＡＮＡ１、ＬＡＮＡ２、ＬＭＰ−１、ｋ−ｂＺＩＰ、ＲＴＡ、ＫＳＨＶ  Ｋ８、およびそれらの断片が含まれるがこれらに限定されないウイルス腫瘍性タンパク質であり得る。Ahuja,  Richaら、Curr.  Sci.、２０１４年を参照のこと。
【０３７８】
製造物品およびキット
本発明の一部の実施形態では、標的抗原陽性疾患、例えば、がん（例えば、副腎皮質癌、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞癌、結腸直腸がん、食道がん、グリア芽細胞腫、グリオーマ、肝細胞癌、頭頸部がん、腎臓がん、肺がん、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓がん、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽細胞腫、卵巣がん、前立腺がん、肉腫、胃がん、子宮がんまたは甲状腺がん）またはウイルス感染症（例えば、ＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＢＶ、ＫＳＨＶ、ＨＰＶ、ＭＣＶ、ＨＴＬＶ−１、ＨＩＶ−１またはＨＣＶによる感染症）の処置に有用な材料を含む製造物品が提供される。製造物品は、容器、および、容器上のまたは容器に付随する標識または添付文書を含み得る。適切な容器としては、例えば、ビン、バイアル、シリンジなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの種々の材料から形成されたものであってよい。一般に、容器は、本明細書に記載の疾患または障害の処置に有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針で穴をあけることができる止め栓を有するバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明のａｂＴＣＲをその表面上に提示するエフェクター細胞である。標識または添付文書は、組成物が特定の状態を処置するために使用されるものであることを示す。標識または添付文書は、ａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物の患者への投与に関する指示をさらに含む。本明細書に記載のコンビナトリアル治療を含む製造物品およびキットも企図される。
【０３７９】
添付文書とは、市販の治療用製品の市販パッケージに慣例的に含まれる、そのような治療用製品の使用にかかわる適応症、使用法、投与量、投与、禁忌および／または警告についての情報を含有する指示を指す。一部の実施形態では、添付文書は、組成物が、標的抗原陽性がん（例えば、副腎皮質癌、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞癌、結腸直腸がん、食道がん、グリア芽細胞腫、グリオーマ、肝細胞癌、頭頸部がん、腎臓がん、肺がん、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓がん、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽細胞腫、卵巣がん、前立腺がん、肉腫、胃がん、子宮がんまたは甲状腺がん）を処置するために使用されるものであることを示す。他の実施形態では、添付文書は、組成物が、標的抗原陽性ウイルス感染症（例えば、ＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＢＶ、ＫＳＨＶ、ＨＰＶ、ＭＣＶ、ＨＴＬＶ−１、ＨＩＶ−１またはＨＣＶによる感染症）を処置するために使用されるものであることを示す。
【０３８０】
さらに、製造物品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液およびブドウ糖溶液などの、薬学的に許容される緩衝液を含む第２の容器をさらに含み得る。製造物品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的観点および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
【０３８１】
任意選択で製造物品と組み合わせた、本明細書に記載される標的抗原陽性疾患または障害の処置のためなどの種々の目的に有用なキットもまた提供される。本発明のキットは、ａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物（または単位剤形および／または製造物品）を含む１つまたは複数の容器を含み、一部の実施形態では、本明細書に記載される方法のいずれかにしたがう使用のための別の薬剤（例えば、本明細書に記載される薬剤）および／または指示をさらに含む。キットは、処置に適切な個体の選択の説明をさらに含み得る。本発明のキット中で提供される指示は、典型的には、標識または添付文書（例えば、キット中に含まれる紙シート）上の書面による指示であるが、機械可読指示（例えば、磁気または光学記憶ディスク上に保持される指示）もまた許容される。
【０３８２】
例えば、一部の実施形態では、キットは、ａｂＴＣＲをその表面上に提示するエフェクター細胞を含む組成物を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）ａｂＴＣＲをその表面上に提示するエフェクター細胞を含む組成物、およびｂ）有効量の少なくとも１つの他の薬剤を含み、他の薬剤は、ＭＨＣタンパク質の発現を増加させるおよび／またはＭＨＣタンパク質によるペプチドの表面提示を増強する（例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮβ、ＩＦＮα、またはＨｓｐ９０阻害剤）。一部の実施形態では、キットは、ａ）ａｂＴＣＲをその表面上に提示するエフェクター細胞を含む組成物、およびｂ）標的抗原陽性疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）の処置のために個体にａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物を投与することについての指示を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）ａｂＴＣＲをその表面上に提示するエフェクター細胞を含む組成物、ｂ）有効量の少なくとも１つの他の薬剤であって、ＭＨＣタンパク質の発現を増加させるおよび／またはＭＨＣタンパク質によるペプチドの表面提示を増強する（例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮβ、ＩＦＮα、またはＨｓｐ９０阻害剤）、他の薬剤、ならびにｃ）標的抗原陽性疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）の処置のために個体にａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物および他の薬剤（複数可）を投与することについての指示を含む。ａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物および他の薬剤（複数可）は、別々の容器中に存在していてもよく、単一の容器中に存在していてもよい。例えば、キットは、１つの別個の組成物を含んでもよく、２つまたはそれよりも多い組成物であって、１つの組成物がａｂＴＣＲエフェクター細胞を含み、別の組成物が他の薬剤を含む、組成物を含んでもよい。
【０３８３】
一部の実施形態では、キットは、ａ）ａｂＴＣＲを含む組成物、およびｂ）ａｂＴＣＲをエフェクター細胞（例えば、個体に由来する、エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞）と組み合わせて、ａｂＴＣＲをそれらの表面上に提示するエフェクター細胞を含む組成物を形成し、標的抗原陽性疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）の処置のために個体にａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物を投与することについての指示を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）ａｂＴＣＲを含む組成物、およびｂ）エフェクター細胞（例えば、細胞傷害性細胞）を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）ａｂＴＣＲを含む組成物、ｂ）エフェクター細胞（例えば、細胞傷害性細胞）、およびｃ）ａｂＴＣＲをエフェクター細胞と組み合わせて、ａｂＴＣＲをその表面上に提示するエフェクター細胞を含む組成物を形成し、標的抗原陽性疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）の処置のために個体にａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物を投与することについての指示を含む。
【０３８４】
一部の実施形態では、キットは、ａｂＴＣＲをコードする核酸（または核酸のセット）を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）ａｂＴＣＲをコードする核酸（または核酸のセット）、およびｂ）核酸（または核酸のセット）を発現するための宿主細胞（例えば、エフェクター細胞）を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）ａｂＴＣＲをコードする核酸（または核酸のセット）、ならびにｂ）ｉ）宿主細胞（例えば、エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞）においてａｂＴＣＲを発現させること、ｉｉ）ａｂＴＣＲを発現する宿主細胞を含む組成物を調製すること、およびｉｉｉ）ａｂＴＣＲを発現する宿主細胞を含む組成物を、標的抗原陽性疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）の処置のために個体に投与することに関する指示を含む。一部の実施形態では、宿主細胞は、個体に由来する。一部の実施形態では、キットは、ａ）ａｂＴＣＲをコードする核酸（または核酸のセット）、ｂ）核酸（または核酸のセット）を発現するための宿主細胞（例えば、エフェクター細胞）、ならびにｃ）ｉ）宿主細胞においてａｂＴＣＲを発現させること、ｉｉ）ａｂＴＣＲを発現する宿主細胞を含む組成物を調製すること、およびｉｉｉ）ａｂＴＣＲを発現する宿主細胞を含む組成物を、標的抗原陽性疾患（例えば、がんまたはウイルス感染症）の処置のために個体に投与することに関する指示を含む。
【０３８５】
本発明のキットは、適切なパッケージ中に入れられる。適切なパッケージとしては、これらに限定されないが、バイアル、ビン、ジャー、フレキシブル包装（例えば、密封Ｍｙｌａｒまたはプラスチックバッグ）などが挙げられる。キットは、任意選択で、緩衝液などの追加的な成分および説明情報も提供し得る。したがって、本出願は、バイアル（例えば、密封バイアル）、ビン、ジャー、フレキシブル包装などを含む製造物品も提供する。
【０３８６】
ａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物の使用に関する指示は、一般に、投与量、投薬スケジュール、および意図した処置のための投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、多用量パッケージ）またはサブ単位用量であり得る。例えば、延長された期間、例えば、１週間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間またはそれよりも長くのいずれかにわたって個体の有効な処置を提供するために十分な投与量の、本明細書に開示されるａｂＴＣＲエフェクター細胞組成物を含むキットが提供され得る。キットは、薬局、例えば、病院薬局および調剤薬局における貯蔵および使用に十分な量で包装された、ａｂＴＣＲおよび医薬組成物の複数の単位用量、ならびに使用についての指示もまた含み得る。
【０３８７】
本発明の範囲および主旨の中でいくつかの実施形態が可能であることが当業者には理解されよう。ここで以下の非限定的な例に言及することにより、本発明をより詳細に記載する。以下の例は、本発明をさらに例示するものであるが、当然、いかなる形でもその範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
例示的な実施形態
【０３８８】
（実施形態１）
標的抗原に特異的に結合する抗体−Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）キメラ分子（ａｂＴＣＲ）であって、
ａ）ＶＨおよびＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲサブユニットの第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴ細胞受容体ドメイン（ＴＣＲＤ）とを含む第１のポリペプチド鎖；ならびに
ｂ）ＶＬおよびＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲサブユニットの第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖
を含み、
前記第１の抗原結合ドメインの前記ＶＨおよびＣＨ１ドメインと前記第２の抗原結合ドメインの前記ＶＬおよびＣＬドメインとが、前記標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを形成し、
前記第１のＴＣＲＤと前記第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を形成する、
ａｂＴＣＲ。
【０３８９】
（実施形態２）
前記抗原結合モジュールが、前記ＣＨ１ドメイン中の残基と前記ＣＬドメイン中の残基との間のジスルフィド結合を含む、実施形態１に記載のａｂＴＣＲ。
【０３９０】
（実施形態３）
前記第１のポリペプチド鎖が、前記第１の抗原結合ドメインと前記第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーをさらに含む、実施形態１または２に記載のａｂＴＣＲ。
【０３９１】
（実施形態４）
前記第２のポリペプチド鎖が、前記第２の抗原結合ドメインと前記第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーをさらに含む、実施形態１から３のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【０３９２】
（実施形態５）
前記第１のペプチドリンカーおよび／または前記第２のペプチドリンカーが個々に、約５〜約５０アミノ酸長である、実施形態３または４に記載のａｂＴＣＲ。
【０３９３】
（実施形態６）
前記標的抗原が細胞表面抗原である、実施形態１から５のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【０３９４】
（実施形態７）
前記細胞表面抗原が、タンパク質、炭水化物および脂質からなる群から選択される、実施形態６に記載のａｂＴＣＲ。
【０３９５】
（実施形態８）
前記細胞表面抗原が、ＣＤ１９、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５ＤまたはＦＣＲＬ５である、実施形態７に記載のａｂＴＣＲ。
【０３９６】
（実施形態９）
前記標的抗原が、ペプチドと主要組織適合複合体（ＭＨＣ）タンパク質とを含む複合体である、実施形態１から５のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【０３９７】
（実施形態１０）
標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲであって、
ａ）ＶＨ抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲサブユニットの第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；および
ｂ）ＶＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲサブユニットの第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖
を含み、
前記第１の抗原結合ドメインの前記ＶＨドメインと前記第２の抗原結合ドメインの前記ＶＬドメインとが、前記標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを形成し、
前記第１のＴＣＲＤと前記第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を形成し、
前記標的抗原が、ペプチドとＭＨＣタンパク質とを含む複合体である、
ａｂＴＣＲ。
【０３９８】
（実施形態１１）
前記第１のポリペプチド鎖が、前記第１の抗原結合ドメインと前記第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーをさらに含み、前記第２のポリペプチド鎖が、前記第２の抗原結合ドメインと前記第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーをさらに含む、実施形態１０に記載のａｂＴＣＲ。
【０３９９】
（実施形態１２）
前記第１および／または第２のペプチドリンカーが、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体サブユニット由来の定常ドメインまたはその断片を個々に含む、実施形態１１に記載のａｂＴＣＲ。
【０４００】
（実施形態１３）
前記第１および／または第２のペプチドリンカーが、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４もしくはＣＬ抗体ドメイン、またはそれらの断片を個々に含む、実施形態１２に記載のａｂＴＣＲ。
【０４０１】
（実施形態１４）
前記第１および／または第２のペプチドリンカーが、Ｃα、Ｃβ、ＣγもしくはＣδＴＣＲドメイン、またはそれらの断片を個々に含む、実施形態１２に記載のａｂＴＣＲ。
【０４０２】
（実施形態１５）
前記第１のＴＣＲＤが、前記第１の膜貫通ドメインのＮ末端側に、ＴＣＲサブユニットの第１の接続ペプチドまたはその断片をさらに含む、実施形態１から１４のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【０４０３】
（実施形態１６）
前記第２のＴＣＲＤが、前記第２の膜貫通ドメインのＮ末端側に、ＴＣＲサブユニットの第２の接続ペプチドまたはその断片をさらに含む、実施形態１から１５のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【０４０４】
（実施形態１７）
前記ＴＣＲＭが、前記第１の接続ペプチド中の残基と前記第２の接続ペプチド中の残基との間のジスルフィド結合を含む、実施形態１５または１６に記載のａｂＴＣＲ。
【０４０５】
（実施形態１８）
前記第１のＴＣＲＤが、前記第１の膜貫通ドメインのＣ末端側に、ＴＣＲ細胞内配列を含む第１のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む、実施形態１から１７のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【０４０６】
（実施形態１９）
前記第２のＴＣＲＤが、前記第２の膜貫通ドメインのＣ末端側に、ＴＣＲ細胞内配列を含む第２のＴＣＲ細胞内ドメインをさらに含む、実施形態１から１８のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【０４０７】
（実施形態２０）
前記第１のポリペプチド鎖が、前記第１の膜貫通ドメインのＣ末端側に、共刺激細胞内シグナル伝達配列を含む第１のアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む、実施形態１から１９のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【０４０８】
（実施形態２１）
前記第２のポリペプチド鎖が、前記第２の膜貫通ドメインのＣ末端側に、共刺激細胞内シグナル伝達配列を含む第２のアクセサリ細胞内ドメインをさらに含む、実施形態１から２０のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【０４０９】
（実施形態２２）
前記第１のポリペプチド鎖が、前記第１の抗原結合ドメインのＮ末端側に、第１のシグナル伝達ペプチドをさらに含む、実施形態１から２１のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【０４１０】
（実施形態２３）
前記第２のポリペプチド鎖が、前記第２の抗原結合ドメインのＮ末端側に、第２のシグナル伝達ペプチドをさらに含む、実施形態１から２２のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【０４１１】
（実施形態２４）
前記標的抗原複合体中の前記ペプチドが、ＷＴ−１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６−Ｅ７、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ−ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ−１およびＰＳＡからなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態９から２３のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【０４１２】
（実施形態２５）
前記分子が、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭの平衡解離定数（Ｋｄ）で前記標的抗原に結合する、実施形態１から２４のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【０４１３】
（実施形態２６）
前記ＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールが、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される、実施形態１から２５のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【０４１４】
（実施形態２７）
前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲα鎖であり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲβ鎖である、実施形態１から２６のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【０４１５】
（実施形態２８）
前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲβ鎖であり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲα鎖である、実施形態１から２６のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【０４１６】
（実施形態２９）
前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγ鎖であり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδ鎖である、実施形態１から２６のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【０４１７】
（実施形態３０）
前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδ鎖であり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγ鎖である、実施形態１から２６のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ。
【０４１８】
（実施形態３１）
実施形態１から３０のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲの前記第１および第２のポリペプチド鎖をコードする核酸（複数可）。
【０４１９】
（実施形態３２）
実施形態１から３０のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲと、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζからなる群から選択される少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールとを含む複合体。
【０４２０】
（実施形態３３）
前記ａｂＴＣＲとＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびζζとを含む八量体である、実施形態３２に記載の複合体。
【０４２１】
（実施形態３４）
実施形態１から３０のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲまたは実施形態３２もしくは３３に記載の複合体をその表面上に提示するエフェクター細胞。
【０４２２】
（実施形態３５）
実施形態３１に記載の核酸（複数可）を含むエフェクター細胞。
【０４２３】
（実施形態３６）
前記第１のＴＣＲサブユニットおよび／または前記第２のＴＣＲサブユニットを発現しない、実施形態３４または３５に記載のエフェクター細胞。
【０４２４】
（実施形態３７）
ａ）前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲαであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲβであり；または
ｂ）前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲβであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲαであり；
前記エフェクター細胞がγδＴ細胞である、実施形態３６に記載のエフェクター細胞。
【０４２５】
（実施形態３８）
ａ）前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδであり；または
ｂ）前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγであり；
前記エフェクター細胞がαβＴ細胞である、実施形態３６に記載のエフェクター細胞。
【０４２６】
（実施形態３９）
第１の内因性ＴＣＲサブユニットおよび／または第２の内因性ＴＣＲサブユニットの発現を遮断するまたは減少させるように改変されている、実施形態３４から３６のいずれか一項に記載のエフェクター細胞。
【０４２７】
（実施形態４０）
ａ）前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲαであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲβであり；または
ｂ）前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲβであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲαであり；
前記エフェクター細胞が、ＴＣＲαおよび／またはＴＣＲβの発現を遮断するまたは減少させるように改変されたαβＴ細胞である、実施形態３９に記載のエフェクター細胞。
【０４２８】
（実施形態４１）
ａ）前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδであり；または
ｂ）前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγであり；
前記エフェクター細胞が、ＴＣＲγおよび／またはＴＣＲδの発現を遮断するまたは減少させるように改変されたγδＴ細胞である、実施形態３９に記載のエフェクター細胞。
【０４２９】
（実施形態４２）
ＣＤ３＋細胞である、実施形態３４から４１のいずれか一項に記載のエフェクター細胞。
【０４３０】
（実施形態４３）
前記ＣＤ３＋細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される、実施形態４２に記載のエフェクター細胞。
【０４３１】
（実施形態４４）
ａ）第１のプロモーターの制御下の前記ａｂＴＣＲの前記第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列を含む第１のベクターと、ｂ）第２のプロモーターの制御下の前記ａｂＴＣＲの前記第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列を含む第２のベクターとを含む、実施形態３４から４３のいずれか一項に記載のエフェクター細胞。
【０４３２】
（実施形態４５）
ａ）第１のプロモーターの制御下の前記ａｂＴＣＲの前記第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列と；ｂ）第２のプロモーターの制御下の前記ａｂＴＣＲの前記第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列とを含むベクターを含む、実施形態３４から４３のいずれか一項に記載のエフェクター細胞。
【０４３３】
（実施形態４６）
ａ）前記ａｂＴＣＲの前記第１のポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列と；ｂ）前記ａｂＴＣＲの前記第２のポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列とを含むベクターを含み、前記第１および第２の核酸配列が、単一のプロモーターの制御下にある、実施形態３４から４３のいずれか一項に記載のエフェクター細胞。
【０４３４】
（実施形態４７）
前記ａｂＴＣＲの前記第１のポリペプチド鎖の発現が、前記ａｂＴＣＲの前記第２のポリペプチド鎖の発現とは、２倍よりも大きく異なる、実施形態３４から４５のいずれか一項に記載のエフェクター細胞。
【０４３５】
（実施形態４８）
標的抗原を提示する標的細胞を死滅させる方法であって、前記標的細胞を、実施形態３４から４７のいずれか一項に記載のエフェクター細胞と接触させるステップを含み、前記ａｂＴＣＲが、前記標的抗原に特異的に結合する、方法。
【０４３６】
（実施形態４９）
標的抗原を提示する標的細胞を死滅させる方法であって、前記標的細胞を、前記標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを含むエフェクターαβＴ細胞と接触させるステップを含み、前記ａｂＴＣＲが、
ａ）ＶＨ抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲサブユニットの第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；および
ｂ）ＶＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲサブユニットの第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖
を含み、
前記第１の抗原結合ドメインの前記ＶＨドメインと前記第２の抗原結合ドメインの前記ＶＬドメインとが、前記標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを形成し、
前記第１のＴＣＲＤと前記第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を形成し、
前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδである、または前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγである、
方法。
【０４３７】
（実施形態５０）
前記第１のポリペプチド鎖が、前記第１の抗原結合ドメインと前記第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーをさらに含み、前記第２のポリペプチド鎖が、前記第２の抗原結合ドメインと前記第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーをさらに含む、実施形態４９に記載の方法。
【０４３８】
（実施形態５１）
前記第１および／または第２のペプチドリンカーが、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体サブユニット由来の定常ドメインまたはその断片を個々に含む、実施形態５０に記載の方法。
【０４３９】
（実施形態５２）
前記第１および／または第２のペプチドリンカーが、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４もしくはＣＬ抗体ドメイン、またはそれらの断片を個々に含む、実施形態５１に記載の方法。
【０４４０】
（実施形態５３）
前記第１および／または第２のペプチドリンカーが、Ｃα、Ｃβ、ＣγもしくはＣδＴＣＲドメイン、またはそれらの断片を個々に含む、実施形態５１に記載の方法。
【０４４１】
（実施形態５４）
前記接触させるステップがｉｎ  ｖｉｖｏである、実施形態４８から５３のいずれか一項に記載の方法。
【０４４２】
（実施形態５５）
前記接触させるステップがｉｎ  ｖｉｔｒｏである、実施形態４８から５３のいずれか一項に記載の方法。
【０４４３】
（実施形態５６）
実施形態１から３０のいずれか一項に記載のａｂＴＣＲ、実施形態３１に記載の核酸（複数可）、または実施形態３４から４７のいずれか一項に記載のエフェクター細胞と、薬学的に許容されるキャリアとを含む医薬組成物。
【０４４４】
（実施形態５７）
それを必要とする個体において標的抗原関連疾患を処置する方法であって、前記個体に、有効量の、実施形態５１に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。
【０４４５】
（実施形態５８）
それを必要とする個体において標的抗原関連疾患を処置する方法であって、前記個体に、有効量の、前記標的抗原に特異的に結合するａｂＴＣＲを含むエフェクターαβＴ細胞を含む組成物を投与するステップを含み、前記ａｂＴＣＲが、
ａ）ＶＨ抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと第１のＴＣＲサブユニットの第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；および
ｂ）ＶＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと第２のＴＣＲサブユニットの第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖
を含み、
前記第１の抗原結合ドメインの前記ＶＨドメインと前記第２の抗原結合ドメインの前記ＶＬドメインとが、前記標的抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールを形成し、
前記第１のＴＣＲＤと前記第２のＴＣＲＤとが、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達モジュールをリクルートすることが可能なＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を形成し、
前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδである、または前記第１のＴＣＲサブユニットがＴＣＲδであり、前記第２のＴＣＲサブユニットがＴＣＲγである、
方法。
【０４４６】
（実施形態５９）
前記第１のポリペプチド鎖が、前記第１の抗原結合ドメインと前記第１のＴＣＲＤとの間に第１のペプチドリンカーをさらに含み、前記第２のポリペプチド鎖が、前記第２の抗原結合ドメインと前記第２のＴＣＲＤとの間に第２のペプチドリンカーをさらに含む、実施形態５８に記載の方法。
【０４４７】
（実施形態６０）
前記第１および／または第２のペプチドリンカーが、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体サブユニット由来の定常ドメインまたはその断片を個々に含む、実施形態５９に記載の方法。
【０４４８】
（実施形態６１）
前記第１および／または第２のペプチドリンカーが、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４もしくはＣＬ抗体ドメイン、またはそれらの断片を個々に含む、実施形態６０に記載の方法。
【０４４９】
（実施形態６２）
前記第１および／または第２のペプチドリンカーが、Ｃα、Ｃβ、ＣγもしくはＣδＴＣＲドメイン、またはそれらの断片を個々に含む、実施形態６０に記載の方法。
【０４５０】
（実施形態６３）
前記標的抗原関連疾患ががんである、実施形態５７から６２のいずれか一項に記載の方法。
【０４５１】
（実施形態６４）
前記がんが、副腎皮質癌、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞癌、結腸直腸がん、食道がん、グリア芽細胞腫、グリオーマ、肝細胞癌、頭頸部がん、腎臓がん、白血病、リンパ腫、肺がん、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓がん、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽細胞腫、卵巣がん、前立腺がん、肉腫、胃がん、子宮がんおよび甲状腺がんからなる群から選択される、実施形態６３に記載の方法。
【０４５２】
（実施形態６５）
前記標的抗原関連疾患がウイルス感染症である、実施形態５７から６２のいずれか一項に記載の方法。
【０４５３】
（実施形態６６）
前記ウイルス感染症が、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１（ＨＴＬＶ−１）、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）からなる群から選択されるウイルスによって引き起こされる、実施形態６５に記載の方法。
【０４５４】
（実施形態６７）
実施形態３４〜４７のいずれか１つに記載のエフェクター細胞について不均一な細胞集団を富化する方法であって、
ａ）不均一な細胞集団を、固体支持体に固定化された標的抗原と接触させて、固体支持体上の標的抗原に結合したエフェクター細胞の複合体を形成するステップ；および
ｂ）不均一な細胞集団から複合体を分離し、それによって、エフェクター細胞について富化された細胞集団を生成するステップ
を含む方法。
【０４５５】
（実施形態６８）
実施形態１から３０のいずれか一項に記載の複数のａｂＴＣＲをコードする配列を含む核酸ライブラリー。
【０４５６】
（実施形態６９）
標的抗原に対して特異的なａｂＴＣＲをコードする配列について、実施形態６８に記載の核酸ライブラリーをスクリーニングする方法であって、
ａ）ａｂＴＣＲが複数のＣＤ３＋細胞の表面上で発現されるように、核酸ライブラリーを複数のＣＤ３＋細胞中に導入するステップ；
ｂ）複数のＣＤ３＋細胞を、標識された標的抗原と共にインキュベートするステップ；
ｃ）標識された標的抗原と結合したＣＤ３＋細胞を収集するステップ；および
ｄ）ステップｃ）において収集した細胞から、ａｂＴＣＲをコードする配列を単離し、それによって、標的抗原に対して特異的なａｂＴＣＲを同定するステップ
を含む方法。
【実施例】
【０４５７】
材料および方法
細胞試料、細胞株および抗体
細胞株ＨｅｐＧ２（ＡＴＣＣ  ＨＢ−８０６５；ＨＬＡ−Ａ２＋、ＡＦＰ＋）、ＳＫ−ＨＥＰ−１（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−５２；ＨＬＡ−Ａ２＋、ＡＦＰ−）、Ｒａｊｉ（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−８６；ＣＤ１９＋）、ＣＡ４６（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６４８；ＣＤ１９＋）、Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２８９９、ＣＤ１９−）、Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−１５３）、Ｊｅｋｏ−１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−３００６；ＣＤ１９＋）、ＴＨＰ−１（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−２０２、ＣＤ１９−）、Ｄａｕｄｉ（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２１３；ＣＤ１９＋）、ＨｅＬａ（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２）、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−２６）およびＭＣＦ−７（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−２２）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから取得した。Ｊｕｒｋａｔは、Ｔ細胞白血病由来のヒトＴリンパ球細胞株である。Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５は、Ｔ細胞受容体β鎖を欠いているＪｕｒｋａｔ細胞由来変異株である。Ｒａｊｉは、ＣＤ１９を発現するＢｕｒｋｉｔｔリンパ腫細胞株である。Ｒａｊｉ−ＣＤ１９ノックアウト（Ｒａｊｉ−ＣＤ１９ＫＯ）株は、ＣＲＩＳＰＲ技術によって生成された。３つの異なるガイド配列は、Ｒａｊｉ細胞中のＣＤ１９を標的化するように設計された。ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９ベクターはＯｒｉｇｅｎｅから購入し、各ガイドは、ｐＣａｓ−Ｇｕｉｄｅベクターに別々にクローニングした。電気穿孔法の３日後、各ガイドによるノックアウト効率をフローサイトメトリーによって評価し、最良のＣＤ１９ノックアウトプールを限界希釈によってクローン選択のために選択した。選択されたクローンを配列決定によって完全なＣＤ１９ノックアウトとして確認した。別の対照細胞株、ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧは、ＡＦＰペプチドＡＦＰ１５８（配列番号５３）を発現するミニ遺伝子カセットを用いてＳＫ−ＨＥＰ−１細胞株を形質導入することによって生成し、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体の高レベルの細胞表面発現を生じた。すべての細胞株を１０％ＦＢＳおよび２ｍＭグルタミンを補充したＲＰＭＩ１６４０またはＤＭＥＭにおいて３７℃／５％ＣＯ２で培養した。
【０４５８】
ＦＩＴＣまたはＡＰＣにコンジュゲートしたヒトＨＬＡ−Ａ０２（クローンＢＢ７．２）に対するモノクローナルＡｂ、およびＦＩＴＣまたはＡＰＣにコンジュゲートしたそのアイソタイプ対照マウスＩｇＧ  ２ｂ、ヒトまたはマウスＣＤ３に対する抗体、ヒトＴ細胞受容体の種々のサブユニット、３ｘＦｌａｇタグ、ＨＡタグ、ＰＥまたはＦＩＴＣとコンジュゲートしたヤギＦ（ａｂ）２抗ヒトＩｇＧおよび蛍光コンジュゲートヤギＦ（ａｂ’）２抗マウスＩｇ’ｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を購入した。ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１−特異的抗体に対する抗イディオタイプ抗体を開発し、Ｅｕｒｅｋａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓにおいて組織内で産生した。フローサイトメトリーデータをＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩを使用して収集し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアパッケージを使用して分析した。
【０４５９】
すべてのペプチドは、Ｅｌｉｍ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａによって合成され、購入した。ペプチドは、純度＞９０％であった。ペプチドを１０ｍｇ／ｍＬでＤＭＳＯに溶解するまたは生理食塩水に希釈し、−８０℃で凍結した。ビオチン化単鎖ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１および対照ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体モノマーをペプチドを組換えＨＬＡ−Ａ＊０２：０１およびベータ−２ミクログロブリン（β２Ｍ）と再フォールディングさせることによって生成した。モノマーをＢｉｒＡ酵素によってＨＬＡ−Ａ＊０２：０１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）のＣ末端に連結されたＢＳＰペプチドを介してビオチン化した。蛍光標識ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体を形成するために蛍光標識ストレプトアビジンをビオチン化ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体モノマーと混合した。
【０４６０】
ヒトＣＤ１９特異的またはＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１−特異的ＣＡＲまたはａｂＴＣＲを含有するレンチウイルスは、例えばキメラ構築物をコードするベクターを用いた２９３Ｔ細胞のトランスフェクションによって産生した。初代ヒトＴ細胞を、１００Ｕ／ｍｌのインターロイキン−２（ＩＬ−２）の存在下でＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で１日刺激した後の形質導入に使用した。濃縮レンチウイルスをＲｅｔｒｏｎｅｃｔｉｎ（Ｔａｋａｒａ）でコーティングした６ウェルプレート中のＴ細胞にアプライし、９６時間置いた。抗ＡＦＰおよび抗ＣＤ１９キメラ構築物の形質導入効率を、それぞれビオチン化ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体（「ＡＦＰ１５８四量体」）およびＰＥコンジュゲートストレプトアビジンまたは抗ｍｙｃ抗体を使用して、フローサイトメトリーにより評価した。反復フローサイトメトリー分析を、その後５日目および３〜４日ごとに行った。
【０４６１】
細胞株をａｂＴＣＲ構築物の２つのサブユニットをコードする１つまたは２つのベクターのいずれかを用いて形質導入した。形質導入５日後、細胞可溶化物を抗ＨＡ（抗ＨＡタグ抗体−ＣｈＩＰ  Ｇｒａｄｅ、Ａｂｃａｍ）または抗Ｆｌａｇ抗体（ウサギで産生された抗Ｆｌａｇ抗体、Ｓｉｇｍａ）を使用するウエスタンブロットのために生成した。
【０４６２】
腫瘍細胞傷害性をＣｙｔｏｘ  ９６  Ｎｏｎ−ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  ＬＤＨ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によってアッセイした。ＣＤ３＋Ｔ細胞をＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３６、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１２３、グリコホリンＡ発現細胞を陰性に枯渇させるＥａｓｙＳｅｐ  Ｈｕｍａｎ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してＰＢＭＣ富化全血から調製した。ヒトＴ細胞は、例えば、ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を製造者のプロトコールに従って用いて活性化し、拡大増殖させた。活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）を１０％ＦＢＳに加えて１００Ｕ／ｍｌ  ＩＬ−２を含むＲＰＭＩ１６４０培地中で培養および維持し、７〜１４日目に使用した。活性化Ｔ細胞（エフェクター細胞）および標的細胞を種々のエフェクターおよび標的の比（例えば、２．５：１または５：１）で１６時間共培養し、細胞傷害性についてアッセイした。
【０４６３】
（実施例１）
抗体−Ｔ細胞受容体（ａｂＴＣＲ）キメラ設計
４つの異なる抗体−Ｔ細胞受容体キメラ構築物（ａｂＴＣＲ）設計（ａｂＴＣＲ−３、ａｂＴＣＲ−４、ａｂＴＣＲ−５およびａｂＴＣＲ−６）を、企図されるバリエーションも含んで、図１Ａおよび１Ｂに示す。これらの設計では、抗体Ｆａｂ断片の重鎖（ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１）および軽鎖（ＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ）ドメインは、可変および定常ドメインを欠いており、Ｔ細胞表面上に発現され得るキメラ抗体−ＴＣＲヘテロ二量体を形成するようにそれらの接続ペプチド（定常ドメイン後の領域）のすべてまたは一部を含むＴ細胞受容体α／β鎖またはγ／δ鎖断片のアミノ末端に融合される。ａｂＴＣＲ設計それぞれのＩｇＶＨおよびＩｇＶＬドメインは、抗原結合特異性を決定し、ＩｇＣＨ１およびＩｇＣＬと合わせてＦａｂ断片に似た構造を形成する。天然ＴＣＲでは、Ｖα／ＶβまたはＶδ／ＶγドメインはＴＣＲの抗原結合ドメインを形成する。これらの設計は、Ｖα−Ｃα／Ｖβ−ＣβまたはＶδ−Ｃδ／Ｖγ−Ｃγ領域をＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１またはＩｇＶＬ−ＩｇＣＬで置き換え、それによりＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびＣＤ３ζζなどの天然ＴＣＲ複合体中のアクセサリ分子と会合する構築物の能力を維持しながら、構築物への抗体の結合特異性を付与している。これらの設計は、抗体の可変ドメインがＴＣＲ定常領域に連結され、Ｖα／Ｖβ領域だけをＩｇＶＨ／ＩｇＶＬで置き換えている、GrossおよびEshhar（Endowing  T  cells  with  antibody  specificity  using  chimeric  T  cell  receptors、FASEB  J.  １９９２年（１５巻）：３３７０頁）によって記載されたｃＴＣＲ設計とは異なっている。
【０４６４】
他のａｂＴＣＲ設計では、ペプチドおよびＭＨＣタンパク質（ＭＨＣ限定抗体部分）を含む複合体に対して特異的である抗体Ｆｖ断片の重鎖（ＩｇＶＨ）および軽鎖（ＩｇＶＬ）ドメインは、可変ドメインを欠いており、それらの接続ペプチド（定常ドメイン後の領域）のすべてまたは一部を含むＴ細胞受容体α／β鎖またはγ／δ鎖断片のアミノ末端に融合される。これらのａｂＴＣＲ設計の一部では、Ｔ細胞受容体α／β鎖またはγ／δ鎖断片は、ＴＣＲ定常ドメインのすべてまたは一部を含む。かかる設計の１つ、ａｂＴＣＲ−７ではＩｇＶＨは、定常ドメインを含むＴＣＲδ断片に融合されており、ＩｇＶＬは定常ドメインを含むＴＣＲγ断片に融合されている。これらの設計は、抗体可変ドメインが非ＭＨＣ限定結合のためのものである、GrossおよびEshhar（上記）によって記載されたｃＴＣＲ設計とは異なっている。
【０４６５】
ａｂＴＣＲ−３（ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１−ＴＣＲα／ＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ−ＴＣＲβ）設計では、抗体重鎖の可変ドメインおよび第１の定常ドメイン（ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１）は、ＴＣＲα鎖のアミノ末端部分をＶα−Ｃα領域後の細胞外ドメイン中の接続ペプチドと境界を接するまたはその中の位置まで置き換えている。対応する抗体軽鎖の可変ドメインおよび定常ドメイン（ＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ）は、ＴＣＲβ鎖のアミノ末端部分をＶβ−Ｃβ領域後の細胞外ドメイン中の接続ペプチドと境界を接するまたはその中の位置まで置き換えている。ａｂＴＣＲ−４（ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１−ＴＣＲβ／ＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ−ＴＣＲα）設計では、抗体重鎖の可変ドメインおよび第１の定常ドメイン（ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１）は、ＴＣＲβ鎖のアミノ末端部分をＶβ−Ｃβ領域後の細胞外ドメイン中の接続ペプチドと境界を接するまたはその中の位置まで置き換えている。対応する抗体軽鎖の可変ドメインおよび定常ドメイン（ＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ）は、ＴＣＲα鎖のアミノ末端部分をＶα−Ｃα領域後の細胞外ドメイン中の接続ペプチドと境界を接するまたはその中の位置まで置き換えている。キメラαおよびβ鎖は、１つはＩｇＣＬとＩｇＣＨ１ドメインとの間、１つはＴＣＲαおよびβ鎖中の接続ペプチド間の、２つのジスルフィド結合を通じて二量体化される。３ｘ−ＦｌａｇタグはＴＣＲα鎖細胞質性領域のＣ末端に任意選択で融合されており、ＨＡタグはＴＣＲβ鎖細胞質性領域のＣ末端に任意選択で融合されている。
【０４６６】
１つのａｂＴＣＲ−３実施形態では、一方の鎖は、配列番号２３の配列（抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１−ａｂＴＣＲ−３）を含み、ここで抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体（配列番号３８）のＩｇＶＨドメインは配列番号１５、接続ペプチドの一部をＶα−Ｃα領域後のＴＣＲα鎖の細胞外ドメインに含むＴＣＲα鎖の一部に融合されたＩｇＣＨ１ドメイン（配列番号３９）に融合されており、他方の鎖は、配列番号２４の配列を含み、ここで抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体（配列番号４０）のＩｇＶＬドメインは配列番号１６、Ｖβ−Ｃβ領域後のＴＣＲβ鎖の細胞外ドメインに接続ペプチドの一部を含むＴＣＲβ鎖のカルボキシ部分に融合されたＩｇＣＬドメイン（配列番号４１）に融合されている。１つのａｂＴＣＲ−４実施形態では、一方の鎖は、配列番号２５（抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１−ａｂＴＣＲ−４）の配列を含み、ここで抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体（配列番号４０）のＩｇＶＬドメインは配列番号１５、Ｖα−Ｃα領域後のＴＣＲα鎖の細胞外ドメイン中に接続ペプチドの一部を含むＴＣＲα鎖の一部に融合されたＩｇＣＬドメイン（配列番号４１）に融合されており、他方の鎖は、配列番号２６の配列を含み、ここで抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体（配列番号３８）のＩｇＶＨドメインは配列番号１６、Ｖβ−Ｃβ領域後のＴＣＲβ鎖の細胞外ドメインに接続ペプチドの一部を含むＴＣＲβ鎖のカルボキシ部分に融合されたＩｇＣＨ１ドメイン（配列番号３９）に融合されている。
【０４６７】
ａｂＴＣＲ−５（ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１−ＴＣＲγ／ＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ−ＴＣＲδ）設計では、抗体重鎖の可変ドメインおよび第１の定常ドメイン（ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１）は、ＴＣＲγ鎖のアミノ末端部分をＶγ−Ｃγ領域後のＴＣＲγ鎖の細胞外ドメイン中の接続ペプチドと境界を接するまたはその中の位置まで置き換えている。対応する抗体軽鎖の可変ドメインおよび定常ドメイン（ＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ）は、ＴＣＲδ鎖のアミノ末端部分をＶδ−Ｃδ領域後のＴＣＲδ鎖の細胞外ドメイン中の接続ペプチドと境界を接するまたはその中の位置まで置き換えている。ａｂＴＣＲ−６（ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１−ＴＣＲδ／ＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ−ＴＣＲγ）設計では、抗体重鎖の可変ドメインおよび第１の定常ドメイン（ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１）は、ＴＣＲδ鎖のアミノ末端部分をＶδ−Ｃδ領域後のＴＣＲδ鎖の細胞外ドメイン中の接続ペプチドと境界を接するまたはその中の位置まで置き換えている。対応する抗体軽鎖の可変ドメインおよび定常ドメイン（ＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ）は、ＴＣＲγ鎖のアミノ末端部分をＶγ−Ｃγ領域後のＴＣＲγ鎖の細胞外ドメイン中の接続ペプチドと境界を接するまたはその中の位置まで置き換えている。キメラγおよびδ鎖は、１つはＩｇＣＬとＩｇＣＨ１ドメインとの間、１つはＴＣＲγおよびδ鎖中の接続ペプチド間の、２つのジスルフィド結合を通じて二量体化される。３ｘｆｌａｇタグはＴＣＲγ鎖細胞質性領域のＣ末端に任意選択で融合されており、ＨＡタグはＴＣＲδ鎖細胞質性領域のＣ末端に任意選択で融合されている。
【０４６８】
１つのａｂＴＣＲ−５実施形態では、一方の鎖は配列番号３０の配列（抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１−ａｂＴＣＲ−５）を含み、ここで抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体（配列番号３８）のＩｇＶＨドメインは配列番号２０、Ｖγ−Ｃγ領域後のＴＣＲγ鎖の細胞外ドメイン中に接続ペプチドの一部を含むＴＣＲγ鎖の一部に融合されたＩｇＣＨ１ドメイン（配列番号３９）に融合されており、他方の鎖は、配列番号２９の配列を含み、ここで抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体（配列番号４０）のＩｇＶＬドメインはＩｇＣＬドメイン（配列番号４１）および次いで配列番号１９、Ｖδ−Ｃδ領域後のＴＣＲδ鎖の細胞外ドメイン中の接続ペプチドの一部を含むＴＣＲδ鎖のカルボキシ部分に融合されている。１つのａｂＴＣＲ−６実施形態では、一方の鎖は配列番号３４の配列（抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１−ａｂＴＣＲ−６）を含み、ここで抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体（配列番号４０）のＩｇＶＬドメインは配列番号２０、Ｖγ−Ｃγ領域後のＴＣＲγ鎖の細胞外ドメイン中に接続ペプチドの一部を含むＴＣＲγ鎖の一部に融合されたＩｇＣＬドメイン（配列番号４１）に融合されており、他方の鎖は、配列番号３３の配列を含み、ここで抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体（配列番号３８）のＩｇＶＨドメインは配列番号１９、Ｖδ−Ｃδ領域後のＴＣＲδ鎖の細胞外ドメイン中の接続ペプチドの一部を含むＴＣＲδ鎖のカルボキシ末端部分に融合されたＩｇＣＨ１ドメイン（配列番号３９）に融合されている。
【０４６９】
図１Ｂに例示のとおり、４つのａｂＴＣＲ設計それぞれのバリエーションもまた企図される。かかるバリエーションは（ｉ）ＩｇＣとＴＣＲとの融合によって形成される接合部に残基を付加することによる伸長または（ｉｉ）ＴＣＲ接続ペプチドのＮ−末端で残基を欠失させることによる短縮、などの細胞外ドメインの長さの変更を含む場合がある。ａｂＴＣＲ−６のかかるバリエーションの実施形態は、ａｂＴＣＲ−６ＭＤであり、ここで一方の鎖は配列番号３６の配列（抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１−ａｂＴＣＲ−６ＭＤ）を含み、ここで抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体（配列番号４０）のＩｇＶＬドメインは、配列番号２２、ＴＣＲγ鎖中のＶγ−Ｃγ領域の後に接続ペプチドのより長い（ａｂＴＣＲ−６と比較して）部分を含むＴＣＲγ鎖のカルボキシ末端部分に融合されたＩｇＣＬドメイン（配列番号４１）に融合されており、他方の鎖は、配列番号３５の配列を含み、ここで抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体（配列番号３８）のＩｇＶＨドメインは配列番号２１、ＴＣＲδ鎖のＶδ−Ｃδ領域後の接続ペプチドのより長い（ａｂＴＣＲ−６と比較して）部分を含むＴＣＲδ鎖のカルボキシ末端部分に融合されたＩｇＣＨ１ドメイン（配列番号３９）に融合されている。ａｂＴＣＲ−５のかかるバリエーションの実施形態はａｂＴＣＲ−５ＭＤであり、ここで一方の鎖は配列番号３１の配列（抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１−ａｂＴＣＲ−５ＭＤ）を含み、ここで抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体（配列番号４０）のＩｇＶＬドメインは配列番号２１、ＴＣＲδ鎖のＶδ−Ｃδ領域後の接続ペプチドのより長い（ａｂＴＣＲ−５と比較して）部分を含むＴＣＲδ鎖のカルボキシ末端部分に融合されたＩｇＣＬドメイン（配列番号４１）に融合されており、他方の鎖は、配列番号３２の配列を含み、ここで抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体（配列番号３８）のＩｇＶＨドメインは配列番号２２、ＴＣＲγ鎖のＶγ−Ｃγ領域後の接続ペプチドのより長い（ａｂＴＣＲ−５と比較して）部分を含むＴＣＲγ鎖のカルボキシ末端部分に融合されたＩｇＣＨ１ドメイン（配列番号３９）に融合されている。ａｂＴＣＲ−４のかかるバリエーションの実施形態はａｂＴＣＲ−４ＭＤであり、ここで一方の鎖は配列番号２７の配列（抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１−ａｂＴＣＲ−４ＭＤ）を含み、ここで抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体（配列番号４０）のＩｇＶＬドメインは配列番号１７、Ｖα−Ｃα領域後の接続ペプチドのより長い（ａｂＴＣＲ−４と比較して）部分を含むＴＣＲα鎖のカルボキシ末端部分に融合されたＩｇＣＬドメイン（配列番号４１）に融合されており、他方の鎖は、配列番号２８の配列を含み、ここで抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体（配列番号３８）のＩｇＶＨドメインは配列番号１８、Ｖβ−Ｃβ領域後の接続ペプチドのより長い（ａｂＴＣＲ−４と比較して）部分を含むＴＣＲβ鎖のカルボキシ末端部分に融合されたＩｇＣＨ１ドメイン（配列番号３９）に融合されている。
【０４７０】
さらなるバリエーションは、さらなるエフェクタードメイン（例えば、ＣＤ２８の細胞内ドメイン）のＴＣＲα／β／δ／γ鎖のいずれかのＣ末端への融合を含む場合がある。別のバリエーションは、ＩｇＶとＩｇＣドメインとの間のリンカー領域の変更を含む場合がある。
【０４７１】
（実施例２）
Ｔ細胞株におけるａｂＴＣＲの発現
成熟Ｔ細胞ではＴＣＲ−ＣＤ３複合体は、図２に示すとおり、無処置複合体を形成するように膜内および膜外接触を通じて会合すると考えられている４つの二量体モジュール：ＴＣＲαβ（またはＴＣＲγδ）、ＣＤ３δε、ＣＤ３γεおよびＣＤ３ζζからなる（Wucherpfennig  KWら、Structural  biology  of  the  T-cell  receptor:  insights  into  receptor  assembly,  ligand  recognition,  and  initiation  of  signaling.  Cold  Spring  Harb  Perspect  Biol.  ２０１０年４月;２巻（４号）：ａ００５１４０から）。複合体アセンブリは小胞体（ＥＲ）で生じる。完全なＴＣＲ−ＣＤ３複合体だけが、ゴルジ装置に移入され、グリコシル化工程を通り、Ｔ細胞の細胞膜に輸送される。不完全なＴＣＲは、ゴルジから、それらが分解されるリソソームに方向付けられる。
【０４７２】
Ｔ細胞におけるａｂＴＣＲ発現を検査し、ＣＤ３分子をリクルートし、Ｔ細胞表面でのａｂＴＣＲ−ＣＤ３複合体の発現を可能にすることにａｂＴＣＲが内因性ＴＣＲと同様に機能し得るかどうかを検討するために、ａｂＴＣＲ構築物を変異Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞株、Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５に導入した。Ｊｕｒｋａｔ、αβＴＣＲ陽性白血病Ｔ細胞株とは異なり、Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５はＴＣＲβサブユニット発現を欠いているＪｕｒｋａｔ変異株である。ＴＣＲ−ＣＤ３複合体のアセンブリはＴＣＲβサブユニット無しでは損なわれることから、Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞ではＴＣＲおよびＣＤ３は、いずれも細胞膜に輸送され得ない。
【０４７３】
ウエスタンブロットによるａｂＴＣＲ発現の検出
５セットのａｂＴＣＲ構築物（ａｂＴＣＲ−３、−４、−５、−６、−６ＭＤ）を、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体のＩｇＶＨおよびＩｇＶＬ領域を用いて生成した。Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５およびＪｕｒｋａｔ細胞は、ａｂＴＣＲ−３（配列番号２３および２４）、ａｂＴＣＲ−４（配列番号２５および２６）、ａｂＴＣＲ−５（配列番号２９および３０）、ａｂＴＣＲ−６（配列番号３３および３４）またはａｂＴＣＲ−６ＭＤ（配列番号３５および３６）構築物を用いて形質導入し、ａｂＴＣＲの個々のサブユニットの発現を抗Ｆｌａｇまたは抗ＨＡ抗体を使用するウエスタンブロットにおいて検出した（図３）。各構築物について２つのサブユニットを２つの別々のレンチウイルスベクターにサブクローニングした。完全なａｂＴＣＲヘテロ二量体を発現するために、Ｔ細胞を両方のベクターを用いて形質導入した。ＴＣＲβおよびＴＣＲδキメラをＨＡを用いてタグ付けした一方で、ＴＣＲαおよびＴＣＲγキメラはａｂＴＣＲサブユニットのＣ末端に結合された３ｘＦｌａｇを用いてタグ付けした。ＨＡまたは３ｘＦｌａｇタグを有するＴＣＲ鎖は、図３で各ａｂＴＣＲ設計についての表示の下に括弧で示されている。
【０４７４】
Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５およびＪｕｒｋａｔの両方でのＨＡタグ付きキメラの内（図３、抗ＨＡパネル）、ａｂＴＣＲ−３中のＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ−ＴＣＲβサブユニットは、最も高い発現を示し、ａｂＴＣＲ−６およびａｂＴＣＲ−６ＭＤ中のＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１−ＴＣＲδサブユニット、ならびにａｂＴＣＲ−４中のＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１−ＴＣＲβサブユニットが続いた。３ｘＦｌａｇタグ付きキメラの内（図３、抗ｆｌａｇパネル）、最も高い発現は、ａｂＴＣＲ−６およびａｂＴＣＲ−６ＭＤ中のＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ−ＴＣＲγについて観察され、ａｂ−ＴＣＲ−４中のＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ−ＴＣＲαが続いた。ａｂＴＣＲ−５（ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１−ＴＣＲγ／ＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ−ＴＣＲδ）について両鎖は、検査した５セットの構築物の内で最も低い発現量を示した。ａｂＴＣＲ−６ＭＤについてのＴＣＲδ鎖は、ａｂＴＣＲ６と同様のレベルで発現された一方で、ａｂＴＣＲ−６ＭＤについてのＴＣＲγ鎖はａｂＴＣＲ６について観察されたよりも低いレベルで発現された。形質導入された細胞の百分率および形質導入細胞内の発現レベルの両方がウエスタンブロットにおいて検出されるシグナルに寄与する。したがって次にフローサイトメトリーを細胞表面でのａｂＴＣＲ発現レベルを決定するために実施した。
【０４７５】
フローサイトメトリーによるａｂＴＣＲ細胞表面発現およびＴＣＲ−ＣＤ３複合体形成の検出
上に記載の５対のキメラａｂＴＣＲ鎖（ａｂＴＣＲ−３、−４、−５、−６、−６ＭＤ）をＪ．ＲＴ３−Ｔ３．５（図４Ａ〜４Ｃ）およびＪｕｒｋａｔ（図５Ａ〜５Ｃ）細胞に個々に形質導入した。ａｂＴＣＲ構築物を用いて形質導入された細胞を、次の：（ｉ）Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞でのＣＤ３ε発現のレスキューを評価するための抗ＣＤ３ε抗体（図４Ａ）、（ｉｉ）Ｊｕｒｋａｔ細胞でのＴＣＲαβの内因性発現へのａｂＴＣＲ構築物の影響を評価するための抗ＴＣＲαβ抗体（図５Ａ）、（ｉｉｉ）形質導入ａｂＴＣＲ構築物による抗原結合を評価するためのＰＥ標識されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体（図４Ｂおよび５Ｂ）、ならびに（ｉｖ）キメラ構築物の表面発現を評価するためにａｂＴＣＲキメラ（図４Ｃおよび５Ｃ）において使用された抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体に対する抗イディオタイプ抗体、によって評価した。
【０４７６】
Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞について、偽形質導入はＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体および抗イディオタイプ抗体への結合を付与せず、細胞表面にＣＤ３ε発現を生じなかった（図４Ａ〜４Ｃ）。抗イディオタイプ抗体は、ａｂＴＣＲ−３およびａｂＴＣＲ−４を用いて形質導入されたＪ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞においてａｂＴＣＲ陰性ピークから伸びる肩を検出した。対照的に、ａｂＴＣＲ−５、−６および−６ＭＤを用いて形質導入された細胞は、抗イディオタイプ抗体を用いて染色した場合に高蛍光強度で別々のピークを示した（図４Ｃ）。ａｂＴＣＲ構築物は、標的抗原ＡＦＰ１５８四量体に結合し得ることに機能性である（図４Ｂ）。ａｂＴＣＲ−６ＭＤにおける、より高いＡＦＰ１５８四量体陽性ピークによって明らかであるとおり、ａｂＴＣＲ−６と比較してさらに多くの細胞集団がａｂＴＣＲ−６ＭＤ構築物を発現した。しかしａｂＴＣＲ−６ＭＤ形質導入細胞は、ＡＦＰ１５８四量体陽性ピークが類似する平均蛍光強度（ＭＦＩ）を有することから、細胞あたりのコピー数でａｂＴＣＲ−６形質導入細胞と類似する発現が見られる。さらに、ａｂＴＣＲ構築物の発現は、Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞でのＣＤ３εの細胞表面発現をレスキューした（図４Ａ）。これは、ＴＣＲの定常ドメインがＣＤ３鎖との相互作用をもたらしたことから予測外である（KuhnsおよびDavis、TCR  Signaling  Emerges  from  the  Sum  of  Many  Parts、Front  Immunol.  ２０１２年；３巻：１５９頁、WangおよびReinherz、The  structural  basis  of  αβ  T-lineage  immune  recognition:  TCR  docking  topologies,  mechanotransduction,  and  co-receptor  function、Immunol  Rev.  ２０１２年、２５０巻：１０２頁によって概説されている）。キメラがＴＣＲ定常ドメインをＩｇＣを用いて置き換えていることから、本発明者らは、ＴＣＲ定常ドメインがＴＣＲ複合体を含むＣＤ３アセンブリのために必要ないことを実証した。ａｂＴＣＲ−６およびａｂＴＣＲ−６ＭＤ形質導入細胞を抗ＣＤ３εおよびＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体で共染色し、フローサイトメトリーによって分析した場合に、本発明者らは、ＣＤ３ε＋Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞もまたＡＦＰ１５８四量体陽性であることを確認した（図６）。これは、外因性ａｂＴＣＲキメラが、それらの同族抗原に結合でき、Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞上のＣＤ３複合体の細胞表面発現をレスキューする機能的受容体を形成することを示している。
【０４７７】
同じセットの実験を、ａｂＴＣＲ−３、−４、−５、−６および−６ＭＤ構築物を抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体と共に使用してＪｕｒｋａｔ細胞（αβＴＣＲ陽性Ｔ細胞株）においてもまた行った（図５Ａ〜５Ｃ）。結果は、ＡＦＰ１５８四量体染色（図５Ｂ）および抗イディオタイプ抗体結合（図５Ｃ）に関してＪ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞において観察されたものと一致している。形質転換細胞を、内因性ＴＣＲα／β鎖の発現へのａｂＴＣＲ構築物の影響を決定するために抗ＴＣＲα／β抗体でもまた染色した。偽形質導入Ｊｕｒｋａｔ細胞が高レベルのＴＣＲα／βを発現した一方で、ＴＣＲα／β陰性集団がそれぞれのａｂＴＣＲ形質転換細胞においてＴＣＲα／βピークの左側の肩として検出された（図５Ａ）。これらのデータは、ａｂＴＣＲキメラの発現がＣＤ３鎖について競合しており、内因性ＴＣＲα／βの表面発現の低減を生じていることを示唆している。
【０４７８】
ウエスタンブロットおよびフローサイトメトリー実験からの観察を合わせて、本発明者らはａｂＴＣＲ−３および−４形質導入細胞において、一部の内因性ＴＣＲαサブユニットがａｂＴＣＲキメラの外因性β鎖と対形成し、細胞表面に輸送され得るＴＣＲ−ＣＤ３複合体を形成することを仮定する。あるいは、ａｂＴＣＲ−３および−４は、抗イディオタイプ抗体へのエピトープの曝露を限定する異なるコンホメーションを有する可能性がある。ａｂＴＣＲ−３−形質導入Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５およびＪｕｒｋａｔ細胞では、ＩｇＶＬ−ＩｇＣＬ−ＴＣＲβ鎖の高レベル発現（ウエスタンブロットあたり、図３）は、細胞表面にＣＤ３εを発現するＪ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞の高い百分率（図４Ａ）および、ａｂＴＣＲ−３を用いて形質導入されたＪｕｒｋａｔ細胞のサブセットでの内因性ＴＣＲα／β発現の低減を生じた。ａｂＴＣＲ−４形質導入細胞では、ＩｇＶＨ−ＩｇＣＨ１−ＴＣＲβ鎖もまた、Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞でのＣＤ３ε発現およびＪｕｒｋａｔ細胞での内因性ＴＣＲα／β発現の低減を生じたが、キメラａｂＴＣＲβ鎖発現がａｂＴＣＲ−３と比較してａｂＴＣＲ−４では低いことから程度は低かった（ウエスタンブロットあたり、図３）。
【０４７９】
ａｂＴＣＲ−３および−４形質導入細胞について、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞での外因性ＴＣＲβキメラの内因性ＴＣＲα鎖との対形成は、外因性ＴＣＲαキメラ鎖との正しい対形成のために利用可能なＴＣＲβキメラ鎖のプールを低減すると予測される。キメラがＴＣＲδおよびＴＣＲγ鎖を用いて生成されるａｂＴＣＲ−５、−６または−６ＭＤ構築物を発現する場合にＴＣＲαβ＋Ｔ細胞においてこれは問題でない。ａｂＴＣＲ陽性ピークでの高ＭＦＩは、ａｂＴＣＲ−５、−６または−６ＭＤ構築物を発現するＪ．ＲＴ３−Ｔ３．５およびＪｕｒｋａｔ細胞の両方での正しく対形成したキメラの数の多さと一致する。反対に、キメラがＴＣＲαおよびＴＣＲβ鎖を用いて生成されるＴＣＲδγ＋Ｔ細胞での発現のためのａｂＴＣＲ−３および−４構築物の使用は、外因性キメラ鎖と内因性ＴＣＲδおよびＴＣＲγ鎖との対形成を回避するために好ましい。
【０４８０】
（実施例３）
初代Ｔ細胞でのａｂＴＣＲの発現
ａｂＴＣＲ構築物をＴ細胞株に良好に形質導入でき、ＣＤ３複合体と共に機能性抗原結合受容体として細胞表面に発現できたことを実証し、次いで本発明者らは初代Ｔ細胞でのａｂＴＣＲの発現を検査した。
【０４８１】
ＣＤ４＋およびＣＤ８＋初代Ｔ細胞において発現されたａｂＴＣＲ
末梢血リンパ球を健常ドナーから単離し、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分（配列番号３５および３６）をコードするａｂＴＣＲ−６ＭＤ構築物を用いて形質導入した。ａｂＴＣＲγおよびδサブユニットを初代ヒトＴ細胞を形質導入するために同じレンチウイルスベクターにサブクローニングした。形質導入の５日後、ａｂＴＣＲ−Ｔ細胞および偽形質導入細胞をＡＦＰ１５８四量体ならびにＣＤ４およびＣＤ８抗体を用いて共染色し、フローサイトメトリーによって分析した。図７Ａは、ＣＤ８対抗原（ＡＦＰ１５８四量体）の結合の散布図を示しており、一方図７Ｂは、ＣＤ８対ＣＤ４の散布図を示している。偽形質導入Ｔ細胞ではＣＤ４：ＣＤ８の比は、約２：１である（図７Ｂ上パネル）。同じＣＤ４：ＣＤ８の比がａｂＴＣＲ−６ＭＤ構築物を用いて形質導入された細胞において観察された（図７Ｂ中央パネル）。本発明者らは、ＣＤ４：ＣＤ８の比がａｂＴＣＲ−６ＭＤ形質導入細胞中のＡＦＰ１５８四量体＋集団においてもまた約２：１であることを見出した（図７Ｂ下パネルおよび図７Ａでのゲーティングを参照のこと）。これは、ａｂＴＣＲキメラがＣＤ４＋およびＣＤ８＋初代Ｔ細胞の両方で発現され得ることを示している。
【０４８２】
外因性ａｂＴＣＲ鎖はＣＤ３複合体と物理的に会合する
Ｔ細胞株におけるａｂＴＣＲ発現がＪ．ＲＴ３−Ｔ３．５細胞でのＣＤ３εの表面発現をレスキューできたと仮定して、本発明者らは初代Ｔ細胞において発現されたａｂＴＣＲ構築物がＣＤ３複合体中の個々の鎖と物理的に会合するかどうかを共免疫沈降（ｃｏ−ｉｐ）によって検査した。初代Ｔ細胞を抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８を使用して刺激し、次いで偽形質導入または、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分（配列番号３５および３６）をコードするａｂＴＣＲ−６ＭＤ構築物を用いて形質導入した。形質導入の１２日後、ａｂＴＣＲ−Ｔ細胞をＡＦＰ１５８四量体＋細胞を富化させるためにＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧとさらに１２日間共培養した。次いで細胞をジギトニン（０．１％）溶解緩衝液を用いて溶解し、抗Ｆｌａｇ抗体を３ｘＦｌａｇタグを介してＴＣＲγ鎖をｉ．ｐ．するために使用した。図８に示すとおりＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γおよびＣＤ３ζ鎖をａｂＴＣＲγキメラを用いて同時免疫沈降し、形質導入ａｂＴＣＲキメラが内因性ＣＤ３複合体と物理的に会合したことを実証した。抗Ｆｌａｇ免疫沈降で偽形質導入試料において観察されたＣＤ３εより大きなＭＷを有するバンドは、非特異的バンドである。
【０４８３】
同様の共免疫沈降実験をＪＲＴ３−Ｔ３．５およびＪｕｒｋａｔ細胞株において行う。ＪＲＴ３−Ｔ３．５およびＪｕｒｋａｔ細胞株を抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分（配列番号３５および３６）をコードするａｂＴＣＲ−６ＭＤ構築物を用いて形質導入する。形質導入５日後、ＣＥＬＬｅｃｔｉｏｎ  ｂｉｏｔｉｎ  ｂｉｎｄｅｒ  ｋｉｔをＪＲＴ３−Ｔ３．５およびＪｕｒｋａｔ細胞株からＡＦＰ１５８四量体＋集団を精製するために使用する。ａｂＴＣＲ−６ＭＤを用いて形質導入され、ＡＦＰ１５８四量体を用いて精製されたＪｕｒｋａｔおよびＪＲＴ３−Ｔ３．５細胞をそれぞれＪｕｒｋａｔ−ａｂＴＣＲ−ｐｕｒｅおよびＪＲＴ３−Ｔ３．５−ａｂＴＣＲ−ｐｕｒｅと命名する。ＪＲＴ３−Ｔ３．５、ＪＲＴ３−Ｔ３．５−ａｂＴＣＲ−ｐｕｒｅ、ＪｕｒｋａｔおよびＪｕｒｋａｔ−ａｂＴＣＲ−ｐｕｒｅ細胞を拡大増殖させ、０．１％ジギトニン溶解緩衝液中で溶解する。共免疫沈降を抗Ｆｌａｇ抗体（Ｓｉｇｍａ）およびＤｙｎａｂｅａｄｓ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して標準的プロトコールに従って実施する。
【０４８４】
（実施例４）
同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１可変ドメインを含有するａｂＴＣＲ−６ＭＤおよびＣＡＲ構築物を用いて形質導入されたＴ細胞の生物学的活性の特徴付け
ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞は抗原陽性がん細胞を特異的に殺滅し得る
初代Ｔ細胞を偽形質導入または、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ｓｃＦｖ（配列番号３７）を含有するＣＡＲもしくは同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１可変ドメイン（配列番号３５および３６）を含有するａｂＴＣＲ−６ＭＤをコードするレンチウイルスベクターを用いて形質導入した。形質導入効率をＰＥ標識されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体を用いる染色によって決定した（図９Ａ）。同様の形質導入率（ＣＡＲＴについて３２％およびａｂＴＣＲについて３４％）を有するＴ細胞集団をがん細胞株を殺滅するそれらの能力を検査するために使用した。２．５：１のエフェクターおよび標的の比で３つの細胞株を使用した：ＨｅｐＧ２（ＡＦＰ＋／ＨＬＡ−Ａ２＋）、ＳＫ−ＨＥＰ−１（ＡＦＰ−／ＨＬＡ−Ａ２＋）およびＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ（ＡＦＰミニ遺伝子を用いて形質導入されたＳＫ−ＨＥＰ−１）。特異的溶解を１６時間インキュベーション後に、Ｃｙｔｏｘ  ９６  Ｎｏｎ−ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定した。図９Ｂに示すとおり、ＣＡＲおよび、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤの両方を用いて形質導入されたＴ細胞は、抗原陽性細胞株ＨｅｐＧ２およびＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧの殺滅を方向付けたが、抗原陰性細胞株ＳＫ−ＨＥＰ−１の殺滅はもたらさなかった。ａｂＴＣＲ形質導入細胞において観察された特異的溶解のレベルは、ＣＡＲ−Ｔ細胞についてのもとの同等である。
【０４８５】
ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞は抗原刺激で脱顆粒する
ａｂＴＣＲ対ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞での生物学的活性をさらに特徴付けるために、本発明者らは、脱顆粒活性の測定としてＣＤ１０７ａ表面発現を検出するためのフローサイトメトリーアッセイを使用した。抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲおよびＣＡＲ形質導入Ｔ細胞は、上のとおり生成され、ＨｅｐＧ２、ＳＫ−ＨＥＰ−１およびＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ細胞と４時間、抗ＣＤ１０７ａ抗体とｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｏｃｋｔａｉｌ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の１：２００希釈物の存在下で同時インキュベートした。標的細胞との同時インキュベーション後、形質導入Ｔ細胞をＡＦＰ１５８／ＨＬＡ四量体および抗ＣＤ８を用いて染色した。四量体陽性、ＣＤ８陽性Ｔ細胞での脱顆粒を図１０右パネルに示す。ＣＤ１０７ａ発現によって測定された最も高いレベルの脱顆粒は、ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ（実線、灰色）に続くＨｅｐＧ２（点線、灰色）との同時インキュベーションで観察された一方で、脱顆粒はａｂＴＣＲおよびＣＡＲの両方の形質導入Ｔ細胞を用いた親抗原陰性ＳＫ−ＨＥＰ−１（実線、白色）では観察されなかった。同じ標的細胞が使用される場合に脱顆粒のレベルは、ａｂＴＣＲおよびＣＡＲ形質導入細胞の間で同様であった。これは、上記のＴ細胞媒介細胞溶解データと一致する。合わせて考えて本発明者らは、ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞が脱顆粒において抗原陽性がん細胞に対してＣＡＲ形質導入細胞と同等に応答性であり（図１０）、細胞殺滅を媒介する（図９）ことを実証した。
【０４８６】
腫瘍細胞殺滅におけるａｂＴＣＲおよびＣＡＲ  Ｔ細胞よるサイトカイン産生および分泌
ａｂＴＣＲまたはＣＡＲのいずれかを用いて形質導入され、同様の形質導入率を有するＴ細胞を生成し、上記のとおり標的細胞と同時インキュベートした。図９Ｂに示すｉｎ  ｖｉｔｒｏ殺滅アッセイ後のＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの培地への放出をＭａｇｐｉｘ  ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｌｕｍｉｎｅｘ）をＢｉｏ−ｐｌｅｘ  Ｐｒｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ８−ｐｌｅｘ  Ａｓｓａｙ（ＢｉｏＲａｄ）と共に使用して測定した。アッセイの検出限界に達するようにＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ標的反応由来の上清は２５倍希釈したが、他のすべての試料は希釈しなかった。サイトカイン濃度を、培地、標的単独およびエフェクター単独由来のサイトカイン放出を減算した後に公知の標準曲線を用いて決定した。
【０４８７】
本発明者らは、ＨｅｐＧ２の表面上のＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体の数を高分解能顕微鏡を使用して細胞あたり約１００であると推定した（データ示さず）。かかる低コピー数のペプチド／ＨＬＡ複合体では、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体を使用するフローサイトメトリーは顕著なＭＦＩシフトを検出し得なかった。対照的に、ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ細胞でのＡＦＰミニ遺伝子の発現はフローサイトメトリーによるＭＦＩでの１ログシフトを生じ、ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ細胞上でのＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体のレベルがＨｅｐＧ２におけるものよりも顕著に高かったことを示している。ＨｅｐＧ２を標的細胞として使用する場合、８つのヒトサイトカイン（ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α）のパネルをａｂＴＣＲまたはＣＡＲ形質導入Ｔ細胞を用いた１６時間の同時インキュベーション後に測定し、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αが培地において検出可能であった（図１１Ａ）。サイトカイン放出は、ＣＡＲ形質導入試料と比較した場合にａｂＴＣＲを形質導入試料において一貫して低かった。同じアッセイをＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧを用いて行った場合、本発明者らが検査した８つのサイトカインの内７つの分泌は、ａｂＴＣＲ−またはＣＡＲ形質導入初代Ｔ細胞との同時インキュベーションで検出された（図１１Ｂ）。検査した各サイトカインにおいて、培地中で検出されたサイトカインのレベルは、ＣＡＲ−Ｔ試料と比較してａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞を含有する試料において同様または低く、一部は２分の１未満であった（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α）。ＳＫ−ＨＥＰ−１細胞のみもまた、Ｔ細胞の非存在下で検出可能なレベル（バックグラウンドを約３０００ｐｇ／ｍｌ超える）のＩＬ−６およびＩＬ−８を示した。
【０４８８】
培地中に検出されるサイトカインの供給源としての形質導入Ｔ細胞の寄与を決定するために、同様の形質導入効率（３４％）を有するａｂＴＣＲおよびＣＡＲ形質導入Ｔ細胞を２．５：１の比で標的細胞と、サイトカイン分泌を妨げるためのｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｏｃｋｔａｉｌ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃａｔ＃００４９８００３）を用いて共培養した。処置４時間後、Ｔ細胞をＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体および抗ＣＤ４抗体を抗ＴＮＦ−α、抗ＩＦＮ−γ、抗ＩＬ−２または抗ＩＬ−６抗体と共に用いて染色した。フローサイトメトリーを使用し、ＡＦＰ１５８四量体＋細胞（図１２Ａ〜１２Ｈ）でゲーティングして、本発明者らは、抗原陽性標的細胞と共培養された場合に、ａｂＴＣＲおよびＣＡＲ形質導入Ｔ細胞の両方において細胞内ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２は発現されたが、ＩＬ−６はされなかったことを実証した。検討した各サイトカインについて、細胞内サイトカインのレベルは、標的細胞上での抗原発現のレベルに相関してＨｅｐＧ２よりもＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧにおいて一貫して高かった。各標的細胞集団に関して検査した各サイトカインについてａｂＴＣＲに対するＣＡＲ形質導入細胞の間で細胞内サイトカインに顕著な差異はなかった。これは、サイトカイン放出アッセイにおいて見られた差異がサイトカインフィードバックによるものである可能性があることを示唆している。形質導入Ｔ細胞での細胞内ＩＬ−６の非存在は、図１１Ｂで培地中に検出されたＩＬ−６の供給源がＳＫ−ＨＥＰ−１細胞由来であり、Ｔ細胞ではないことを示唆している。
【０４８９】
ＣＤ４＋Ｔ細胞でのａｂＴＣＲの活性化が特異的生物学的応答をもたらし得るかどうかを決定するために、本発明者らはＡＦＰを発現しているがん細胞株を用いた刺激後のＣＤ４＋、抗ＡＦＰ１５８  ａｂＴＣＲ発現Ｔ細胞での細胞内サイトカイン発現を調査した。上に記載のとおりＣＤ３＋Ｔ細胞を抗ＡＦＰ１５８  ａｂＴＣＲを用いて形質導入し、がん細胞株ＳＫ−ＨＥＰ１−ＭＧ（ＡＦＰ＋）、ＳＫ−ＨＥＰ１（ＡＦＰ−）またはＨＥＰＧ２（ＡＦＰ＋）と共にタンパク質輸送阻害剤の存在下で４時間、インキュベートした。陰性対照として、ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞をいずれのがん細胞株も非存在でインキュベートした。インキュベーション後、Ｔ細胞を抗ＩＦＮγ、抗ＩＬ２または抗ＴＮＦα抗体を用いて染色し、ＡＦＰ−四量体−ＰＥおよび抗ＣＤ４を用いて共染色した。ａｂＴＣＲ発現についてゲーティングした細胞をフローサイトメトリーによって粒度およびサイトカイン発現について分析した（図１３、Ｙ軸は側方散乱、Ｘ軸はサイトカイン染色）。ＩＦＮγ、ＩＬ２およびＴＮＦαの発現は、ＡＦＰ＋がん細胞株ＳＫ−ＨＥＰ１−ＭＧおよびＨＥＰＧ２を用いた抗ＡＦＰ１５８  ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞のインキュベーション後に誘導されたが、ＡＦＰ−細胞株ＳＫ−ＨＥＰ１を用いて、またはいずれのがん細胞株も非存在でインキュベートした場合はされず、ＣＤ４＋Ｔ細胞でのａｂＴＣＲの抗原特異的活性化を示している。
【０４９０】
標的細胞との共培養後のａｂＴＣＲおよびＣＡＲ  Ｔ細胞におけるＴ細胞消耗マーカーの発現
抗原刺激の際にａｂＴＣＲおよびＣＡＲ形質導入細胞上に発現される消耗マーカーのレベルを検討するために、ＣＤ３＋Ｔ細胞をＥａｓｙＳｅｐ  Ｈｕｍａｎ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してＰＢＭＣ富化全血から調製し、上記のとおりＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓを用いて活性化させた。活性化および拡大増殖させた細胞集団は、フローサイトメトリーによって＞９９％ＣＤ３＋であった。次いでこれらの細胞を抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ｓｃＦｖ（配列番号３７）を含有するＣＡＲまたは同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１可変ドメイン（配列番号３５および３６）を含有するａｂＴＣＲ−６ＭＤをコードするレンチウイルスベクターを用いて７〜９日間形質導入した。形質導入細胞をエフェクターおよび標的の比２．５：１で標的細胞と１６時間共培養し、ＡＦＰ１５８四量体および抗ＣＤ８抗体を消耗マーカーＰＤ−１、ＴＩＭ−３またはＬＡＧ−３に対する抗体と共に用いて共染色した。形質導入Ｔ細胞上の消耗マーカーのレベルを四量体＋（即ち、形質導入された）Ｔ細胞でのゲーティングによってフローサイトメトリーによって分析した。独立したフローサイトメトリー実験では、本発明者らはＣＤ８−であった四量体＋Ｔ細胞がＣＤ４＋であった（データ示さず）ことを決定した。
【０４９１】
ＰＤ−１の上方制御がＣＤ８−四量体＋Ｔ細胞において観察された一方でＬＡＧ−１およびＴＩＭ−３の上方制御が、ＡＦＰ（ＨｅｐＧ２およびＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ）を発現する標的細胞への曝露後にＣＤ８＋四量体＋Ｔ細胞において観察された（図１４）。すべての場合において、ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞において観察された消耗マーカーレベルの上方制御は、ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞において観察されたものと同等またはより高かった。これは、ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞が低レベルのＴ細胞消耗を生じる場合があり、ｉｎ  ｖｉｖｏでのより長いＴ細胞持続性をもたらしていることを示唆している。検査条件下で各消耗マーカーについて陽性の細胞のパーセントを決定し、表２に示す。
【表２】
2019500848.tif 000004
【０４９２】
ａｂＴＣＲおよびＣＡＲ  Ｔ細胞でのＴ細胞分化マーカーの発現
抗ＡＦＰ１５８  ａｂＴＣＲがｉｎ  ｖｉｔｒｏ拡大増殖の際にＴ細胞の分化を遅延させ得るかどうかを決定するために、本発明者らは、３つのＴ細胞分化マーカー、メモリーＴ細胞マーカーＣＣＲ７およびＣＤ２８、ならびに最終分化マーカー、グランザイムＢの細胞表面発現を測定した。抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ｓｃＦｖ（配列番号３７）を含有するＣＡＲまたは同じ抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１可変ドメイン（配列番号３５および３６）を含有するａｂＴＣＲ−６ＭＤをコードするレンチウイルスベクターを用いてＴ細胞を形質導入し、これらのマーカーに対する抗体を用いて染色し、フローサイトメトリーによってウイルス形質導入後１０〜１２日目に分析した（図１５）。結果は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の両方についてａｂＴＣＲ  Ｔ細胞がＣＡＲ  Ｔ細胞よりも多くのＣＣＲ７およびＣＤ２８を発現したが、グランザイムＢは少なかったことを示し、抗ＡＦＰ１５８  ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＴ細胞拡大増殖後に抗ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ  Ｔ細胞よりも分化していないことを示唆している。
【０４９３】
抗ＡＦＰ  ａｂＴＣＲ−６ＭＤとａｂＴＣＲ−７構築物との比較
抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ａｂＴＣＲ−６ＭＤを発現するように形質導入された初代Ｔ細胞の細胞増殖を同じ抗体可変ドメインを有する抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ａｂＴＣＲ−７を用いて形質導入されたＴ細胞のものと比較した。６．７×１０５Ｔ細胞を０日目に１００Ｕ／ｍｌ  ＩＬ−２の存在下でαＣＤ３／αＣＤ２８ビーズ（１：１の割合）によって活性化させた。活性化Ｔ細胞を抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ａｂＴＣＲ−６ＭＤ（配列番号３５のアミノ酸配列を有するＴＣＲδキメラサブユニットおよび配列番号３６のアミノ酸配列を有するＴＣＲγキメラサブユニット）をコードするレンチウイルスベクターまたは、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ａｂＴＣＲ−７（配列番号８１のアミノ酸配列を有するＴＣＲδキメラサブユニットおよび配列番号８２のアミノ酸配列を有するＴＣＲγキメラサブユニット）をコードするレンチウイルスベクターのいずれかでＭＯＩ４で１日目に形質導入した。次いで形質導入Ｔ細胞を培養し、ＩＬ−２の存在下で９〜１０日間拡大増殖させた。細胞数を１日目、５日目、７日目および９日目に計数した。図１６Ａに示すとおりａｂＴＣＲ−６−ＭＤ形質導入Ｔ細胞は、９日目までにおよそ２倍の生細胞を有して、ａｂＴＣＲ−７形質導入Ｔ細胞よりも早く増殖した。形質導入Ｔ細胞でのａｂＴＣＲ−６ＭＤおよびａｂＴＣＲ−７構築物の発現を９日目にＦＬＡＧタグ付き構築物についてのウエスタンブロット分析によって評価した。簡潔に述べると、５００万形質導入Ｔ細胞を１００μｌ溶解緩衝液に溶解し、可溶化物１３μｌをＮｕＰａｇｅ  ｓｙｓｔｅｍを使用して４〜１２％ポリアクリルアミドゲル上で分離した。マウス抗ＦＬＡＧ抗体（１μｇ／ｍｌ）をａｂＴＣＲガンマ鎖を検出するために使用し、マウス抗ＣＤ３ゼータ（１μｇ／ｍｌ）を内因性ＣＤ３を検出するために使用した。図１６Ｂに示すとおりａｂＴＣＲ−７構築物は、ａｂＴＣＲ−６ＭＤ構築物よりも高いレベルで発現された。対応する抗ＣＤ３ζバンドで標準化した可溶化物についての抗ＦＬＡＧバンドの強度をＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して定量し、ａｂＴＣＲ−６ＭＤと比較したａｂＴＣＲ−７の発現の２０％の相対的増加を示した。
【０４９４】
抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ａｂＴＣＲ−６ＭＤ  Ｔ細胞の標的細胞殺滅活性を抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ａｂＴＣＲ−７  Ｔ細胞のものと比較した。初代Ｔ細胞を偽形質導入または、上に記載のとおり抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ａｂＴＣＲ−６ＭＤもしくは抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ａｂＴＣＲ−７構築物のいずれかをコードするレンチウイルスベクターを用いて形質導入した。ａｂＴＣＲ−６ＭＤまたはａｂＴＣＲ−７を用いて形質導入されたＴ細胞をＳＫ−ＨＥＰ−１（ＡＦＰ−／ＨＬＡ−Ａ２＋）およびＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ（ＡＦＰミニ遺伝子を用いて形質導入されたＳＫ−ＨＥＰ−１）細胞を殺滅するそれらの能力についてエフェクターおよび標的の比５：１で検査した。特異的殺滅のレベルを１６時間で上に記載のとおり測定した。図１６Ｃに示すとおり、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤ構築物は、同じ抗体可変ドメインを有するａｂＴＣＲ−７と比較して、ＡＦＰ陽性ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ細胞と同様の特異的溶解を方向付けた。
【０４９５】
（実施例５）
ａｂＴＣＲ−６ＭＤおよび、同じ抗ヒトＣＤ１９可変ドメインを有するＣＡＲ構築物を用いて形質導入されたＴ細胞の生物学的活性の特徴付け
実施例４では、使用された抗体部分は抗原としてペプチド／ＭＨＣ複合体に結合するＴＣＲ模倣物であった。ａｂＴＣＲ設計が伝統的抗体標的（細胞表面抗原）とも作用することを実証するために、同様の実験設定をヒトＣＤ１９に対する抗体に基づいた構築物を使用して実行した。
【０４９６】
ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞はＣＤ１９陽性がん細胞を殺滅し得る
初代Ｔ細胞を偽形質導入または、抗ＣＤ１９結合ドメインを含有するＣＡＲ（配列番号４４、ＩｇＶＨドメインを有するｓｃＦｖ、配列番号４５、およびＩｇＶＬドメイン、配列番号４６を含む、例示的抗ＣＤ１９抗体由来）または同じ抗ＣＤ１９可変ドメインを含有するａｂＴＣＲ−６ＭＤ（配列番号４２および４３）をコードするレンチウイルスベクターを用いて形質導入した。ＣＡＲまたはａｂＴＣＲ（両方とも形質導入率２５％）を用いて形質導入されたＴ細胞をＢ細胞株ＪｅＫｏ−１（ＣＤ１９＋）、ＩＭ９（ＣＤ１９＋）、Ｊｕｒｋａｔ（ＣＤ１９−）およびＴＨＰ−１（ＣＤ１９−）を、エフェクターおよび標的の比５：１で殺滅するそれらの能力を検査するために使用した。特異的殺滅のレベルを図９Ｂについての記載と同じ方法を使用して１６時間で測定した。図１７に示すとおり、抗ＣＤ１９結合部分を有するＣＡＲおよびａｂＴＣＲ−６ＭＤの両方はＣＤ１９陽性ＪｅＫｏ−１およびＩＭ９細胞の殺滅を同様のレベルで方向付けたが、ＣＤ１９陰性であるＪｕｒｋａｔおよびＴＨＰ−１は殺滅しなかった。
【０４９７】
腫瘍細胞殺滅でのａｂＴＣＲおよびＣＡＲ  Ｔ細胞によるサイトカイン分泌
上記がん殺滅実験において使用されたものと同じ形質導入されたＴ細胞集団を標的細胞としてのＪｅＫｏ−１、ＩＭ９、ＴＨＰ−１およびＪｕｒｋａｔとそれらとを共インキュベートすることによるサイトカイン放出アッセイにおいて使用した。８つのヒトサイトカインのパネル（ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α）を１６時間後に測定した。検査したすべてのサイトカインは、ＣＤ１９＋標的細胞との共インキュベーションの際にＣＡＲ形質導入Ｔ細胞の培地中で検出されたが、ＣＤ１９−細胞ではされなかった（図１８Ａおよび１８Ｂ）。ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞を用いた共インキュベーション試料では、ＩＬ−１０を除く検査したすべてのサイトカインの放出は、ＣＤ１９＋細胞を含むａｂＴＣＲ試料において低かった。抗ＣＤ１９抗体構築物でのこれらの発見は、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体構築物のものと同様であり：同様のがん細胞殺滅がＣＡＲ−ＴおよびａｂＴＣＲ形質導入細胞において観察された一方で、サイトカイン放出のレベルはａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞が使用された場合に低かった。これは、高レベルのサイトカイン放出が望ましくない生理学的作用を生じる設定においてａｂＴＣＲを使用することに有利である可能性がある。
【０４９８】
ＣＤ４＋Ｔ細胞でのａｂＴＣＲの活性化が特異的生物学的応答をもたらし得るかどうかを決定するために、本発明者らはＣＤ１９を発現しているがん細胞株を用いた刺激後のＣＤ４＋、抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ発現Ｔ細胞での細胞内サイトカイン発現を調査した。ＣＤ３＋Ｔ細胞をクローン５−１３  ａｂＴＣＲ−６ＭＤ（配列番号５６および５４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９クローン５−１３結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤ）を用いて形質導入し、がん細胞株Ｒａｊｉ（ＣＤ１９＋）、Ｒａｊｉ−ＣＤ１９ＫＯ（ＣＤ１９−）またはＪｅｋｏ−１（ＣＤ１９＋）と共にタンパク質輸送阻害剤の存在下で４時間、インキュベートした。陰性対照として、ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞をいずれのがん細胞株も非存在でインキュベートした。インキュベーション後、Ｔ細胞を抗ＩＦＮγ、抗ＩＬ２または抗ＴＮＦα抗体を用いて染色し、抗ヒトＦａｂ（ＣＤ１９）および抗ＣＤ４を用いて共染色した。ａｂＴＣＲ発現についてゲーティングした細胞をフローサイトメトリーによって粒度およびサイトカイン発現について分析した（図１９、Ｙ軸は側方散乱、Ｘ軸はサイトカイン染色）。ＩＦＮγ、ＩＬ２およびＴＮＦαの発現は、ＣＤ１９＋がん細胞株ＲａｊｉおよびＪｅｋｏ−１を用いた抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞のインキュベーション後では誘導されたが、ＣＤ１９−細胞株Ｒａｊｉ−ＣＤ１９ＫＯを用いて、またはいずれのがん細胞株も非存在でインキュベートした場合はされず、ＣＤ４＋Ｔ細胞でのａｂＴＣＲの抗原特異的活性化を示している。
【０４９９】
標的細胞との共培養後のａｂＴＣＲおよびＣＡＲ  Ｔ細胞でのＴ細胞消耗マーカーの発現
抗原刺激の際に抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲおよびＣＡＲ形質導入細胞で発現される消耗マーカーのレベルを抗ＡＦＰ１５８キメラ受容体について上に記載のとおり決定した。細胞をクローン５−１３  ａｂＴＣＲ−６ＭＤまたは同じ抗ＣＤ１９可変ドメインを含有するＣＡＲを用いて形質導入した。標的細胞株は、Ｒａｊｉ（ＣＤ１９＋）、Ｒａｊｉ−ＣＤ１９ＫＯ（ＣＤ１９−）およびＪｅｋｏ−１（ＣＤ１９＋）を含んだ。検査条件下で各消耗マーカーについて陽性の細胞のパーセントを決定し、表３に示す。
【表３】
2019500848.tif 000005
【０５００】
ａｂＴＣＲおよびＣＡＲ  Ｔ細胞でのＴ細胞分化マーカーの発現
抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲがｉｎ  ｖｉｔｒｏ拡大増殖の際にＴ細胞の分化を遅延させ得るかどうかを決定するために、本発明者らは、３つのＴ細胞分化マーカー、メモリーＴ細胞マーカーＣＣＲ７およびＣＤ２８、ならびに最終分化マーカー、グランザイムＢの細胞表面発現を測定した。Ｔ細胞をクローン  ５−１３ａｂＴＣＲ−６ＭＤまたは同じ抗ＣＤ１９可変ドメインを有するＣＡＲを用いて形質導入し、これらのマーカーに対する抗体を用いて染色し、フローサイトメトリーによってウイルス形質導入後１０〜１２日目に分析した（図２０）。結果は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の両方についてａｂＴＣＲ  Ｔ細胞がＣＡＲ  Ｔ細胞よりも多くのＣＣＲ７およびＣＤ２８を発現したが、グランザイムＢは少なかったことを示し、クローン５−１３  ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＴ細胞拡大増殖後に対応する  ＣＡＲ  Ｔ細胞よりも分化していないことを示唆しており、抗ＡＦＰ１５８キメラ受容体について観察されたものと一致していた。
【０５０１】
ａｂＴＣＲおよびＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖
ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞があまり分化しておらず、ＣＡＲ  Ｔ細胞よりも高い増殖能力を有するかどうかをさらに決定するために、本発明者らは抗原陽性がん細胞とのエンゲージメント後のａｂＴＣＲおよびＣＡＲ  Ｔ細胞のＣＦＳＥ蛍光、細胞分割の指標における変化をモニターした。Ｔ細胞をクローン５−１３  ａｂＴＣＲ−６ＭＤまたは同じ抗ＣＤ１９可変ドメインを有するＣＡＲを用いたウイルス形質導入１０日後にＣＦＳＥ色素を用いて標識し、ベースライン蛍光をフローサイトメトリーによって記録した。標識Ｔ細胞をＲａｊｉ細胞（ＣＤ１９＋がん細胞株）とサイトカイン不含有培地中でインキュベートした。ＣＦＳＥ蛍光を２日目および３日目にＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞についてフローサイトメトリーによって測定した（図２１）。２日目と３日目の間のＣＦＳＥ蛍光強度の減少は、細胞増殖の量を示し、ＣＡＲ  Ｔ細胞よりもａｂＴＣＲ  Ｔ細胞において顕著に高く、クローン５−１３  ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞が対応するＣＡＲ  Ｔ細胞よりも多くの細胞分割を受けていることを示している。
【０５０２】
ａｂＴＣＲおよびＣＡＲ  Ｔ細胞のキメラ受容体内部移行
Ｔ細胞表面ａｂＴＣＲとＣＡＲとの内部移行率を比較するために、Ｔ細胞をクローン５−１３  ａｂＴＣＲ−６ＭＤまたは、同じ抗ＣＤ１９可変ドメインを含有するＣＡＲを用いて形質導入し、ＣｙｐＨｅｒ５Ｅ、酸性ｐＨ６．５で蛍光を発するＰＨ感受性色素を用いて標識した抗ＣＤ１９結合部分を認識する抗イディオタイプ抗体を用いて氷上、３０分間染色した。次いで細胞を３７℃で表示の時間インキュベートし、固定し、粒度およびキメラ受容体発現についてフローサイトメトリーによって分析した（図２２、Ｙ軸は側方散乱、Ｘ軸はＣｙｐＨｅｒ５Ｅ染色）。結果は、ほとんどすべてのＣＡＲが染色後９０分までに内部移行されたことを示している。対照的にａｂＴＣＲは、ずっと低い率で内部移行され、大部分のａｂＴＣＲは９０分間でさえ細胞表面上に残っていた。
【０５０３】
抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲとｃＴＣＲ構築物との比較
抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ−６ＭＤを発現するように形質導入された初代Ｔ細胞の細胞増殖を同じ抗体可変ドメインおよび膜貫通ドメインを有するがＴＣＲδおよびＴＣＲγポリペプチド由来の定常領域を含む抗ＣＤ１９キメラ構築物（ｃＴＣＲ）を用いて形質導入されたＴ細胞のものと比較した。６．７×１０５個のＴ細胞を０日目に１００Ｕ／ｍｌ  ＩＬ−２の存在下でαＣＤ３／αＣＤ２８ビーズ（１：１の割合）によって活性化させた。活性化Ｔ細胞を抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ−６ＭＤ（配列番号５６のアミノ酸配列を有するＴＣＲδキメラサブユニットおよび配列番号５４のアミノ酸配列を有するＴＣＲγキメラサブユニット）をコードするレンチウイルスベクターまたは、抗ＣＤ１９  ｃＴＣＲ（配列番号７５のアミノ酸配列を有するＴＣＲδキメラサブユニットおよび配列番号７６のアミノ酸配列を有するＴＣＲγキメラサブユニット）をコードするレンチウイルスベクターのいずれかでＭＯＩ４で１日目に形質導入した。次いで形質導入Ｔ細胞を培養し、ＩＬ−２の存在下で９〜１０日間拡大増殖させた。細胞数を１日目、５日目、７日目および９日目に計数した。図２３Ａに示すとおりａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞は、９日目に１．７倍超の生細胞数を有して、ｃＴＣＲ形質導入Ｔ細胞よりも早く増殖した。
【０５０４】
抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞の標的細胞殺滅活性を抗ＣＤ１９  ｃＴＣＲ  Ｔ細胞のものと比較した。初代Ｔ細胞を偽形質導入または、抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ−６ＭＤもしくは抗ＣＤ１９  ｃＴＣＲのいずれかをコードするレンチウイルスベクターを用いて形質導入した。ａｂＴＣＲまたはｃＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞をエフェクターおよび標的の比５：１でＣＤ１９陽性標的細胞株Ｎａｌｍ−６を殺滅させるそれらの能力について検査した。特異的殺滅のレベルを上に記載のとおり１６時間で測定した。図２３Ｂに示すとおり、抗ＣＤ１９結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤ構築物は、同じ抗ＣＤ１９可変ドメインを有するｃＴＣＲよりもＣＤ１９陽性Ｎａｌｍ−６細胞のより多い特異的溶解を方向付けた。
【０５０５】
（実施例６）
ａｂＴＣＲ−６ＭＤおよび、同じ抗ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１可変ドメインを有するＣＡＲ構築物を用いて形質導入されたＴ細胞の生物学的活性の特徴付け
抗ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞はＮＹ−ＥＳＯ−１陽性がん細胞を殺滅し得る
初代Ｔ細胞を偽形質導入または、ＣＡＲもしくは、配列番号７３のアミノ酸配列を有するＩｇＶＬドメインおよび配列番号７２のアミノ酸配列を有するＩｇＶＨドメインを含む抗ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を含有するａｂＴＣＲ−６ＭＤのいずれかを発現するように形質導入した。ＣＡＲは、Ｎ−末端からＣ末端までを有するｓｃＦｖ、ＩｇＶＬドメイン、リンカー（配列番号７４）およびＩｇＶＨドメインを含んだ。ＣＡＲまたはａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞は、フローサイトメトリーによってアッセイされたとおりそれらのそれぞれのキメラ受容体を同様のレベルで発現し、エフェクターおよび標的の比５：１で細胞株ＩＭ９（ＨＬＡ−Ａ２＋、ＮＹ−ＥＳＯ−１＋）、Ｃｏｌｏ２０５（ＨＬＡ−Ａ２＋、ＮＹ−ＥＳＯ−１−）、ＭＤＡ−２３１（ＨＬＡ−Ａ２＋、ＮＹ−ＥＳＯ−１−）、ＭＣＦ７（ＨＬＡ−Ａ２＋、ＮＹ−ＥＳＯ−１−）、ＪｅＫｏ−１（ＨＬＡ−Ａ２＋、ＮＹ−ＥＳＯ−１＋）、Ｒａｊｉ（ＨＬＡ−Ａ２＋、ＮＹ−ＥＳＯ−１−）、Ｈｅｐ１（ＨＬＡ−Ａ２＋、ＮＹ−ＥＳＯ−１−）およびＪｕｒｋａｔ（ＨＬＡ−Ａ２＋、ＮＹ−ＥＳＯ−１−）を殺滅するそれらの能力を検査するために使用した。特異的殺滅のレベルを上の記載と同じ方法を使用して１６時間で測定した。図２４に示すとおり、ＣＡＲおよび、抗ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤの両方がＮＹ−ＥＳＯ−１陽性ＪｅＫｏ−１およびＩＭ９細胞の殺滅を同様のレベルで方向付けたが、ＮＹ−ＥＳＯ−１陰性である他の細胞は殺滅させなかった。
【０５０６】
腫瘍細胞殺滅におけるａｂＴＣＲおよびＣＡＲ  Ｔ細胞によるサイトカイン分泌
上記がん殺滅実験において使用したものと同じ形質導入Ｔ細胞集団を、それらをＩＭ９、Ｃｏｌｏ２０５、ＭＤＡ−２３１、ＭＣＦ７、ＪｅＫｏ−１、Ｈｅｐ１およびＪｕｒｋａｔ細胞と共インキュベーションすることによってサイトカイン放出アッセイにおいて使用した。４つのヒトサイトカイン（ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α）のパネルを１６時間後に測定した。検査したすべてのサイトカインは、ＮＹ−ＥＳＯ−１＋標的細胞との共インキュベーションの際にＣＡＲおよびａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞の培地で検出されたが、大部分のＮＹ−ＥＳＯ−１−細胞ではされなかった（データ示さず）。重要なことにａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞共インキュベーションによって検査したＮＹ−ＥＳＯ−１＋標的細胞の大部分から放出されたサイトカインのレベルは、ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞共インキュベーションによるものより顕著に低かった（データ示さず）。
【０５０７】
（実施例７）
ａｂＴＣＲ−６ＭＤ構築物を用いて形質導入されたナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞および制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の生物学的活性の特徴付け
抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ形質導入ＮＫＴ細胞
ビオチン抗体カクテルおよび抗ビオチンマイクロビーズを用いる非ＣＤ３＋／ＣＤ５６＋細胞（非ＮＫＴ細胞）の間接磁気標識化によってＮＫＴ細胞をヒトＰＢＭＣから単離し、ＣＤ３＋／ＣＤ５６＋ＮＫＴ細胞について富化するために非ＮＫＴ細胞を枯渇させた。富化ＮＫＴ細胞集団についてＣＤ３およびＣＤ５６の表面発現をフローサイトメトリーによって評価し、図２５Ａに示す。ＮＫＴ細胞を抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズによって活性化し、抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲをコードするレンチウイルスを用いて形質導入し、１０％ＦＢＳおよびＩＬ−２（１００Ｕ／ｍｌ）を含有するＲＰＭＩ−１６４０中で拡大増殖させた。形質導入効率は、抗ＣＤ１９結合部分に特異的な抗イディオタイプ抗体を用いるフローサイトメトリーによって測定して８０％超であった。ＮＫＴ細胞をＣＤ１９発現ＲａｊｉまたはＲａｊｉ  ＣＤ１９−ノックアウト（ＣＤ１９ｋｏ）がん細胞株とエフェクターおよび標的の比５：１で１６時間共インキュベートし、培地中のサイトカイン放出（ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγ、ＴＮＦα）の測定が続いた（図２５Ｂ）。抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ形質導入ＮＫＴ細胞は、ＣＤ１９−陽性Ｒａｊｉ細胞とインキュベートされた場合に、検査したそれぞれのサイトカインを放出するが、ＣＤ１９陰性Ｒａｊｉ  ＣＤ１９ｋｏ細胞とインキュベートされた場合には放出しないように活性化されたが、偽形質導入ＮＫＴ細胞はされず、ＣＤ１９抗原を含む形質導入されたａｂＴＣＲのがん細胞への結合を通じてＮＫＴ細胞が特異的に活性化され得ることを示している。
【０５０８】
抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ形質導入Ｔｒｅｇ細胞
Ｔｒｅｇ細胞をＣＤ４＋／ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞の直接磁気標識化によってヒトＰＢＭＣから単離した。単離されたＴｒｅｇ細胞集団についてＣＤ４およびＣＤ２５の表面発現をフローサイトメトリーによって評価し、図２６Ａに示す。Ｔｒｅｇ細胞を抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズによって活性化し、抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲをコードするレンチウイルスを用いて形質導入し、１０％ＦＢＳおよびＩＬ−２（１００Ｕ／ｍｌ）を含有するＲＰＭＩ−１６４０中で拡大増殖させた。形質導入効率は、抗ＣＤ１９結合部分に特異的な抗イディオタイプ抗体を用いるフローサイトメトリーによって測定して８０％であった。Ｔｒｅｇ細胞をＣＤ１９発現ＲａｊｉまたはＲａｊｉ  ＣＤ１９−ノックアウト（ＣＤ１９ｋｏ）がん細胞株とエフェクターおよび標的の比５：１で１６時間共インキュベートし、培地中のＩＬ−１０サイトカイン放出の測定が続いた（図２６Ｂ）。抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ形質導入Ｔｒｅｇ細胞は、ＣＤ１９陽性Ｒａｊｉ細胞とインキュベートされた場合にＩＬ−１０を放出するが、ＣＤ１９陰性Ｒａｊｉ  ＣＤ１９ｋｏ細胞とインキュベートされた場合には放出しないように活性化されたが、偽形質導入Ｔｒｅｇ細胞はされず、ＣＤ１９抗原を含む形質導入ａｂＴＣＲのがん細胞への結合を通じてＴｒｅｇ細胞が特異的に活性化され得ることを示している。
【０５０９】
（実施例８）
異なる抗体重鎖定常ドメインを有するａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞の生物学的活性の特徴付け
先の実施例ではａｂＴＣＲ構築物において使用された抗体部分は、配列番号３９のアミノ酸配列を有するＩｇＧ１  ＣＨ１ドメインを含有した。ａｂＴＣＲ設計が他の免疫グロブリン重鎖由来のＣＨ１ドメインとも作用することを実証するために、標的細胞殺滅アッセイをＩｇＧ１（配列番号３９）、ＩｇＧ２（配列番号６０、６１もしくは６２）、ＩｇＧ３（配列番号６３）またはＩｇＧ４（配列番号６４）のいずれか由来のＣＨ１ドメインを有する抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体に基づく構築物を使用して上に記載のとおり実行した。ａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞を表面発現の指標としてＡＦＰ１５８四量体結合についてアッセイし（表４）、ＨｅｐＧ２（ＡＦＰ＋／ＨＬＡ−Ａ２＋）、ＳＫ−ＨＥＰ−１（ＡＦＰ−／ＨＬＡ−Ａ２＋）およびＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ（ＡＦＰミニ遺伝子を用いて形質導入されたＳＫ−ＨＥＰ−１）細胞を殺滅するそれらの能力について検査した。特異的溶解を１６時間インキュベーション後にＣｙｔｏｘ  ９６  Ｎｏｎ−ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定した。図２７に示すとおり、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分を有するａｂＴＣＲのいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞は、抗原陽性細胞株ＨｅｐＧ２およびＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧの殺滅を方向付けたが、抗原陰性細胞株ＳＫ−ＨＥＰ−１の殺滅はもたらさなかった。重要なことに、非ＩｇＧ１  ＣＨ１ドメイン含有ａｂＴＣＲの表面発現はＩｇＧ１  ＣＨ１含有ａｂＴＣＲと比較して低かったが（表４を参照のこと）、それらは同様のレベルの標的細胞殺滅を生じ、それらの機能特性が増強されていることを示唆している。
【表４】
2019500848.tif 000006
【０５１０】
（実施例９）
共刺激ドメイン含有ａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞の生物学的活性の特徴付け
Ｃ末端共刺激ドメインを含むａｂＴＣＲ設計の実現可能性を実証するために、種々の抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ａｂＴＣＲ構築物をＣＤ２８および／または４−１ＢＢ由来の共刺激断片を使用して設計した（図２８）。ａｂＴＣＲは、配列番号３６のアミノ酸配列を含有するＴＣＲγキメラサブユニットおよび配列番号３５のアミノ酸配列を含有するＴＣＲδキメラサブユニットからなった。ＣＤ２８共刺激ドメインを有するａｂＴＣＲサブユニットは、それらのＣ末端に融合した配列番号７０のアミノ酸配列を有し、４−１ＢＢ共刺激ドメインを有するサブユニットはそれらのＣ末端に融合した配列番号７１のアミノ酸配列を有した。ａｂＴＣＲ構築物をＪ．ＲＴ３−Ｒ３．５細胞に形質導入し、ａｂＴＣＲ発現およびＣＤ３表面発現レスキューをフローサイトメトリーを使用して上に記載のとおりアッセイした。結果を表５に要約する。ａｂＴＣＲの発現およびＣＤ３発現をレスキューするそれらの能力は、共刺激ドメインを含むまたは含まない種々のａｂＴＣＲ構築物の間で同様であった。別の実験では初代Ｔ細胞を、ａｂＴＣＲ構築物を用いて形質導入し、フローサイトメトリーによってＣＤ８発現およびＡＦＰ１５８四量体結合についてアッセイした（表６）。ａｂＴＣＲを用いて形質導入された初代Ｔ細胞をＡＦＰ１５８四量体結合およびＣＤ４またはＣＤ８発現のいずれかについてゲーティングし、フローサイトメトリーによってＣＣＲ７、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ２８およびグランザイムＢの発現についてアッセイした（表７）。これらの結果は、ウイルス形質導入および形質導入されたＴ細胞の分化が共刺激ドメインを含むまたは含まない種々のａｂＴＣＲ構築物間で同様であることを示している。標的細胞殺滅アッセイをａｂＴＣＲ構築物を使用して上に記載のとおり実行した。ａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞をＨｅｐＧ２（ＡＦＰ＋／ＨＬＡ−Ａ２＋）、ＳＫ−ＨＥＰ−１（ＡＦＰ−／ＨＬＡ−Ａ２＋）およびＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ（ＡＦＰミニ遺伝子を用いて形質導入されたＳＫ−ＨＥＰ−１）細胞を殺滅するそれらの能力についてアッセイした。図２９に示すとおり、ａｂＴＣＲのいずれかを用いて形質導入されたＴ細胞は、抗原陽性細胞株ＨｅｐＧ２およびＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧの殺滅を方向付けたが、抗原陰性細胞株ＳＫ−ＨＥＰ−１の殺滅はもたらさなかった。
【０５１１】
共刺激ドメインを含有するａｂＴＣＲ構築物をさらに特徴付けるために、種々のａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞を４つの異なる集団（ＣＤ８＋／ａｂＴＣＲ＋；ＣＤ８＋／ａｂＴＣＲ−；ＣＤ４＋／ａｂＴＣＲ＋；ＣＤ４＋／ａｂＴＣＲ−）にゲーティングし、ＨｅｐＧ２、ＳＫ−ＨＥＰ−１およびＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ細胞とのインキュベーション後にＴ細胞消耗マーカーＰＤ−１、ＴＩＭ−３およびＬＡＧ−３の発現についてフローサイトメトリーによってアッセイした。Ｃ末端共刺激ドメインを含有する種々のａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞は、いずれの共刺激ドメインも欠いているａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞と比較して、標的陽性細胞ＨｅｐＧ２およびＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧによる活性化後にＴ細胞消耗の顕著な増加を示さなかった（データ示さず）。種々のａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞を、それらをＳＫ−ＨＥＰ−１およびＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ細胞と共インキュベートすることによって上に記載のサイトカイン放出アッセイにおいて使用した。４つのヒトサイトカイン（ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α）のパネルを１６時間後に測定した。検査したすべてのサイトカインは、ａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞のＡＦＰ＋ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ細胞との共インキュベーションの際に培地中に検出したが、ＡＦＰ−ＳＫ−ＨＥＰ−１細胞ではしなかった（図３０）。Ｃ末端共刺激ドメインを含有する種々のａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞は、いずれの共刺激ドメインも欠いているａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞と比較して標的陽性ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ細胞による活性化後にサイトカイン放出の顕著な増加を示さず、一部の場合ではサイトカイン放出の低減を示した。
【０５１２】
標的細胞殺滅、Ｔ細胞消耗およびサイトカイン放出実験を、上に記載し、図２８に示すとおりのＣＤ２８および／または４−１ＢＢ由来の共刺激断片を使用して設計された抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ構築物を使用して繰り返した。ａｂＴＣＲは、配列番号５４のアミノ酸配列を含有するＴＣＲγキメラサブユニットおよび配列番号５６のアミノ酸配列を含有するＴＣＲδキメラサブユニットからなった。抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ａｂＴＣＲ構築物と同様に、共刺激ドメインを含有する抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞は、いずれの共刺激ドメインも含まない抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ構築物を用いて形質導入されたＴ細胞と同様に挙動した（図３１および３２）。
【表５】
2019500848.tif 000007
【表６】
2019500848.tif 000008
【表７】
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【０５１３】
（実施例１０）
ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性研究
ヒト肝細胞癌異種移植モデルでの抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１抗体についてのｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍性活性
抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分（配列番号３５および３６）を含有するａｂＴＣＲ−６ＭＤ構築物を用いて形質導入されたＴ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍性活性をＳＣＩＤ−ｂｅｉｇｅマウスにおいてＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧの皮下（ｓ．ｃ．）モデルを使用して検査した。ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ細胞をＳＣＩＤ−ｂｅｉｇｅマウスの右側腹部にマウス１匹あたり５×１０６細胞ｓ．ｃ．移植した。平均腫瘍体積が１００ｍｍ３に達したら、動物を腫瘍体積に基づいて：（ｉ）偽形質導入Ｔ細胞および（ｉｉ）ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞、を受ける２つの群にランダム化した（１群あたりマウス８匹）。動物をランダム化の直後にマウス１匹あたり１０７の偽またはａｂＴＣＲ形質導入を２週間ごとに１回、３回用量で静脈注射（ｉ．ｖ．）によって処置した。マウスを全身健康状態、有害応答の可能性およびある場合は腫瘍体積の変化について注意深くモニターした。偽およびａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞の両方が現在の用量およびスケジュールを十分に許容した。投薬に関連する体重変化は、研究全体を通じて観察されなかった（図３３）。ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ腫瘍は偽またはａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞のｉ．ｖ．投与後に継続して増殖したが、ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞で処置した腫瘍の増殖速度は偽Ｔ処置腫瘍と比較して減速した。図３４Ａに示すとおり、腫瘍増殖曲線の分離は、投薬開始後２０日目に始まった。３１日目に、ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細処置腫瘍において２３％増殖阻害が観察された（ｔ検定、ｐ＝０．０１８）。
【０５１４】
ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞の抗腫瘍性活性をより大きなＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ  ｓ．ｃ．腫瘍でさらに評価した。ＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ腫瘍を有するマウスでの研究では、平均腫瘍体積が３００ｍｍ３に達したら動物を２つの群にランダム化した（ｎ＝１群あたりマウス４匹）。動物は、無処置またはマウス１匹あたり１０７ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞の単回腫瘍内注射（ｉ．ｔ．）のいずれかを受けた。図３４Ｂに示すとおり、ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞のｉ．ｔ．送達は、経時的な腫瘍体積における変化によって測定される大きなＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ腫瘍の増殖速度を減速させた。無処置とａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞で処置した大きなＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧ腫瘍との間での曲線下面積の比較は、２つの群間で統計的有意差を示した（両側ｔ検定、ｐ＝０．０４）。合わせて、ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞のｉ．ｖ．およびｉ．ｔ．投与の両方がＳＫ−ＨＥＰ−１−ＡＦＰ−ＭＧの確立されたｓ．ｃ．異種移植の増殖を顕著に阻害した。
【０５１５】
リンパ腫異種移植モデルでの抗ＣＤ１９抗体についてのｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍性活性
ＣＡＲおよび、例示的抗ｈＣＤ１９抗体結合部分を含むａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍性活性をＮＯＤ  ＳＣＩＤガンマ（ＮＳＧ）マウスにおけるＣＤ１９陽性ヒトリンパ腫異種移植モデルにおいて検査する。Ｒａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞をＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｓｕｎｎｙｖｉｌｌｅ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ９４０８５）から購入し、ＲＰＭＩ培地＋１０％ＦＢＳおよび１％Ｌ−グルタミンにおいて３７℃、５％ＣＯ２を用いた加湿雰囲気中で培養する。Ｒａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞は、ＣＤ１９陽性バーキットリンパ腫細胞株、Ｒａｊｉ由来であり、ホタルルシフェラーゼ（ｌｕｃ）および緑色蛍光タンパク質の両方をコードする二重レポーター遺伝子を用いる安定トランスフェクション後に、生物発光画像法を使用してｉｎ  ｖｉｖｏで追跡可能な細胞を生じる。ＮＳＧマウスをＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ  ＵＳＡ  ０４６０９）から購入し、実験の前に少なくとも７日間順化させる。Ｒａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞をＰＢＳに再懸濁し、ＮＳＧマウスに尾静脈を通じて１×１０６細胞／１００μｌ／マウスで静脈内（ｉ．ｖ．）移植する。腫瘍移植５日後、動物をＸｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍを使用して腫瘍負荷の評価のために画像化する。マウスを光子発光に基づいて６．７×１０５光子の平均光子発光で次の４つの群にランダム化する（ｎ＝１群あたりマウス６匹）：（ｉ）無処置、（ｉｉ）偽形質導入ヒトＴ細胞、（ｉｉｉ）抗ＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ処置、および（ｉｖ）抗ｈＣＤ１９  ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞処置。ランダム化の直後に動物を偽または抗ＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞を用いてマウス１匹あたり１０７細胞の用量で、２週間ごとに１回、３回用量で、ｉ．ｖ．で処置する。
【０５１６】
動物は、投薬後は注意深くモニターする。Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ  ｓｙｓｔｅｍを使用する生物発光画像法を１週間に１回、８週間まで撮る。
【０５１７】
動物研究を抗ＣＤ１９結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤを用いて形質導入されたＴ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍能力を評価するために上に記載のとおり実行した。
【０５１８】
６〜８週齢メスＮＳＧマウスをこの研究において使用した。Ｒａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞株をＲＰＭＩ培地＋１０％ＦＢＳおよび１％Ｌ−グルタミン、３７℃、５％ＣＯ２を用いた加湿雰囲気中で培養した。Ｒａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞をＰＢＳ中に再懸濁し、１×１０６細胞／１００μｌ／マウスでＮＳＧマウス４０匹にｉ．ｖ．移植した。
【０５１９】
腫瘍移植４日後、腫瘍増殖を確認するためにＩｖｉｓ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍを使用してマウスを画像化した。次いでマウスを光子発光に基づいて、次の処置のために６つの群にランダム化した（ｎ＝マウス６匹／群）：１）ビヒクル（ＰＢＳ）；２）偽（８×１０６個の偽形質導入Ｔ細胞）；３）クローン５  ａｂＴＣＲ（配列番号４２および５４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９クローン５結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤを用いて形質導入された８×１０６個のＴ細胞）；４）クローン５−３  ａｂＴＣＲ（配列番号４２および４３のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９クローン５−３結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤを用いて形質導入された８×１０６個のＴ細胞）；５）クローン５−９  ａｂＴＣＲ（配列番号５５および５４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９クローン５−９結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤを用いて形質導入された８×１０６個のＴ細胞）；ならびに６）クローン５−１３  ａｂＴＣＲ（配列番号５６および５４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９クローン５−１３結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤを用いて形質導入された８×１０６個のＴ細胞）。
【０５２０】
動物は、腫瘍移植後は注意深くモニターし、８００万受容体陽性Ｔ細胞を投薬した。動物を秤量し、Ｘｅｎｏｇｅｎ画像法を研究期間について１週間に２回行った。次の状態を示す動物を安楽死させ「条件死」と記録した：ａ）急性有害応答：努力呼吸、振戦、受動的行動（食欲の喪失および嗜眠）；ｂ）初期体重の２５％超の体重喪失；ならびにｃ）マウス移動に影響する四肢麻痺。
【０５２１】
この実験の結果を、腫瘍由来の総フラックス発光をａｂＴＣＲ細胞または対照の投薬後日数に対してプロットする図３５に示す。４つすべてのＣＤ１９−ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞はｉｎ  ｖｉｖｏでＣＤ１９陽性Ｒａｊｉ腫瘍を標的化し、溶解して、腫瘍増殖を阻害するａｂＴＣＲプラットフォームでの抗ＣＤ１９抗体の有効性を実証している。
【０５２２】
別の実験では、腫瘍を移植されなかったＮＳＧマウスを抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ−６ＭＤまたは、同じ結合配列を有する抗ＣＤ１９  ＣＡＲを用いて形質導入されたＴ細胞８×１０６を用いて処置し、これらの形質導入Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏでの効果を比較した。抗ＣＤ１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞を用いて処置したマウスは２４時間以内に死んだ、一方で抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞を用いて処置したマウスは５週間後に生存していた。この結果は、ａｂＴＣＲ構築物を発現しているＴ細胞が、ＣＡＲを発現しているものよりも安全であることを示している。
【０５２３】
抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲと抗ＣＤ１９  ＣＡＲの比較
Ｒａｊｉ  Ｂ細胞リンパ腫Ｒａｊｉ−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞をＮＳＧマウスに上に記載のとおり移植した。次いでマウスにクローン５−１３  ａｂＴＣＲ−６ＭＤ（配列番号５６および５４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９クローン５−１３結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤ）を用いて形質導入された５×１０６個のａｂＴＣＲ＋Ｔ細胞、クローン５−１３  ＣＡＲ（抗ＣＤ１９クローン５−１３結合部分を有するＣＡＲ）を用いて形質導入された５×１０６個のＣＡＲ＋Ｔ細胞、または５×１０６個の偽Ｔ細胞を、注射試料あたりマウス８匹の群に注射した。血清をＴ細胞移植２４時間後に収集し、血清中のヒトサイトカインの濃度をＬｕｍｉｎｅｘ  Ｍａｇｐｉｘ  ｍａｃｈｉｎｅを使用して上に記載のとおり測定した。サイトカイン測定結果を図３６に示す。腫瘍負荷を既に記載のとおりルシフェラーゼ活性によって測定し、結果を図３７（定量）および２７（画像法）に示す。
【０５２４】
クローン５−１３  ＣＡＲとクローン５−１３  ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞との間の直接比較では、マウスに注射されたａｂＴＣＲ  Ｔ細胞はＣＡＲ  Ｔ細胞と比較して早期の時点で急速な腫瘍退縮を生じた一方で、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注射されたマウスは約５日後まで腫瘍退縮を示さなかった。本実験全体を通じてクローン５−１３  ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞は、クローン５−１３  ＣＡＲ  Ｔ細胞よりも高いｉｎ  ｖｉｖｏ腫瘍阻害有効性を示した。２４時間でのサイトカイン測定結果は、クローン５−１３  ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞を用いて処置されたマウスもまたサイトカイン分泌レベルがＣＡＲ  Ｔ細胞処置マウスよりも低減していたことを示している。これらの結果は、ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞がＣＡＲ  Ｔ細胞よりも低いサイトカイン分泌効果にも関わらず、高い腫瘍阻害効力を有することから、抗腫瘍有効性がサイトカインの過産生を必要としないことの証拠を提供している。
【０５２５】
腫瘍移植７週間後、クローン５−１３  ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞を用いて処置したマウスで検出可能な腫瘍を有するものはなかった。この時点で偽Ｔ細胞処置群由来のマウス３匹およびクローン５−１３  ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞処置群由来のマウス３匹を、５×１０５個のＲａｊｉリンパ腫細胞を用いるｉ．ｖ．移植によって再チャレンジした。腫瘍負荷をルシフェラーゼ活性によって既に記載のとおり測定し、結果を図３９に示す。偽Ｔ細胞処置群由来のマウスにおいて腫瘍が急速に増殖する一方で、クローン５−１３  ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞を用いる先行処置は、Ｒａｊｉリンパ腫細胞移植を用いる再チャレンジ後の腫瘍の増殖を妨げ、ａｂＴＣＲ形質導入Ｔ細胞が抗原に応答するそれらの能力を継続し、維持していることを示している。
【０５２６】
別の実験では５×１０６個のクローン５−３  ａｂＴＣＲ−６ＭＤ（配列番号４２および４３のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９クローン５−３結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤ）Ｔ細胞または、５×１０６個のクローン５−３  ＣＡＲ（抗ＣＤ１９クローン５−３結合部分を有するＣＡＲ、配列番号４４）Ｔ細胞のいずれかの注射の２４時間後にＮＳＧマウスから血清を、収集した。マウス血清中のサイトカインの濃度を上に記載のとおり測定した。高レベルのＴ細胞由来ヒトサイトカインおよびマウス由来ＩＬ−６をクローン５−３  ＣＡＲ  Ｔ細胞を用いて処置したマウスにおいて見出した。対照的に、クローン５−３  ａｂＴＣＲを用いて処置されたマウスは、血清サイトカインレベルの劇的な低下を示し（データ示さず）、ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞についてサイトカイン過産生への効果の低減のさらなる証明を提供している。
【０５２７】
白血病異種移植モデルにおける抗ＣＤ１９抗体についてのｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍性活性
例示的抗ｈＣＤ１９抗体結合部分を含有するＣＡＲまたはａｂＴＣＲを用いて形質導入されたＴ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍性活性をＮＳＧマウスでのＣＤ１９陽性ヒト白血病異種移植モデルにおいて検査した。ＮＡＬＭ−６−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞は、Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ  Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  ＣｅｎｔｅｒのＥｒｉｃ  Ｓｍｉｔｈの研究室からの贈与であり、ＲＰＭＩ培地＋１０％ＦＢＳ中、３７℃、５％ＣＯ２を用いた加湿雰囲気中で培養した。ＮＡＬＭ−６−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞は、ＣＤ１９陽性急性リンパ性白血病細胞株、ＮＡＬＭ−６由来であり、ホタルルシフェラーゼ（ｌｕｃ）および緑色蛍光タンパク質の両方をコードする二重レポーター遺伝子を用いる安定トランスフェクション後に、生物発光画像法を使用してｉｎ  ｖｉｖｏで追跡可能な細胞を生じる。ＮＳＧマウスをＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ  ＵＳＡ  ０４６０９）から購入し、実験の前に少なくとも３日間順化させる。ＮＡＬＭ−６−ｌｕｃ−ＧＦＰ細胞をＰＢＳに再懸濁し、６〜８週齢メスＮＳＧマウス３０匹に尾静脈を通じて５×１０５細胞／１００μｌ／マウスで静脈内（ｉ．ｖ．）移植する。腫瘍移植４日後、動物をＸｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍを使用して腫瘍負荷の評価のために画像化した。マウスを光子発光に基づいて次の４群にランダム化した：（ｉ）ビヒクル、ＰＢＳのみ（ｎ＝マウス６匹）；（ｉｉ）１０×１０６個の偽形質導入ヒトＴ細胞（ｎ＝マウス６匹）；（ｉｉｉ）５×１０６個のクローン５−１３  ＣＡＲ  Ｔ細胞（抗ＣＤ１９クローン５−１３結合部分を有するＣＡＲを用いて形質導入されたＴ細胞）（ｎ＝マウス８匹）；ならびに（ｉｖ）５×１０６個のクローン５−１３  ａｂＴＣＲ−６ＭＤ  Ｔ細胞（配列番号５６および５４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９クローン５−１３結合部分を有するａｂＴＣＲ−６ＭＤを用いて形質導入されたＴ細胞）（ｎ＝マウス８匹）。
【０５２８】
動物は、腫瘍移植後は注意深くモニターし、受容体陽性Ｔ細胞を投薬した。動物を秤量し、Ｘｅｎｏｇｅｎ画像法を研究期間について１週間に２回行った。次の状態を示す動物を安楽死させ「条件死」と記録した：ａ）急性有害応答：努力呼吸、振戦、受動的行動（食欲の喪失および嗜眠）；ｂ）初期体重の２５％超の体重喪失；ならびにｃ）マウス移動に影響する四肢麻痺。
【０５２９】
この実験の結果を、各処置群についての腫瘍由来の平均総フラックス発光を処置後日数に対してプロットした図４０に示す。クローン５−１３  ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞およびクローン５−１３  ＣＡＲ  Ｔ細胞の両方がｉｎ  ｖｉｖｏでＣＤ１９陽性ＮＡＬＭ−６腫瘍を標的化および溶解し、複数のがんモデルにおいて腫瘍増殖を阻害するａｂＴＣＲプラットフォームでの抗ＣＤ１９抗体の有効性を実証している。
【０５３０】
処置２４時間後に血液を１群あたり３匹のマウスからサイトカイン測定のために収集し、結果を図４１に示す。リンパ腫異種移植モデルと同様に、白血病異種移植モデルでの抗ＣＤ１９  ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞を用いた処置は、抗ＣＤ１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞を用いた処置よりも低いレベルのサイトカイン分泌を生じた。
【０５３１】
処置後７日目および１３日目に血液を各群の代表的なマウスから収集し、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．からの「１２３ｃｏｕｎｔ  ｅＢｅａｄｓ」キットを使用して、血液１μｌあたりのＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＡＲ／ａｂＴＣＲ発現Ｔ細胞および腫瘍細胞の数およびＴ細胞上のＰＤ−１発現のレベルを決定するためにフローサイトメトリーによって分析した。処置１３日後に１群あたりマウス２匹を安楽死させ、骨髄抽出物をＣＤ３＋／ＣＡＲ／ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞、腫瘍細胞の存在およびＴ細胞上のＰＤ−１発現レベルについてフローサイトメトリーによって分析した。
【０５３２】
ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞を投与されたマウスは、投与後７および１３日目の両方でＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたマウスについて観察されたものよりも高いレベルのキメラ受容体発現Ｔ細胞をそれらの血液中に有し（図４２）、ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞がこのモデルにおいてそれらの対応するＣＡＲ  Ｔ細胞よりも高いレベルの生存率および／または増殖を有することを示している。図４３および４４に示すとおり、ＣＡＲ  Ｔ細胞またはａｂＴＣＲ  Ｔ細胞のいずれかで処置したマウスが、ビヒクルおよび偽処置対照動物と比較して処置後１３日目に末梢血および骨髄の両方において腫瘍細胞の低減を示した（ＦＩＴＣ染色によって示された）一方で、末梢血および骨髄の両方における腫瘍細胞の低減はａｂＴＣＲ  Ｔ細胞を用いて処置された動物に対してより大きかった。図４５および４６に示すとおり、末梢血および骨髄の両方由来のＴ細胞の表面上のＰＤ−１、Ｔ細胞消耗マーカーの発現レベルは、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の両方について、ａｂＴＣＲ  Ｔ細胞を用いて処置したマウスにおいての方が、ＣＡＲ  Ｔ細胞を用いて処置したものよりも低く、偽処置マウスにおいて観察されたレベルに匹敵した。これらの結果は、ａｂＴＣＲ発現Ｔ細胞がＣＡＲ発現Ｔ細胞よりも消耗しにくい可能性があることを示唆している。
【表８−１】
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【表８−２】
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【表８−３】
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【表８−４】
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【表８−５】
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【表８−６】
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【表８−７】
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【表８−８】
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【表８−９】
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【表８−１０】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１２Ｅ】
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【図１２Ｆ】
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【図１２Ｇ】
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【図１２Ｈ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６ＡＢ】
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【図１６Ｃ】
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【図１７】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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