(57)【要約】  本発明は、ＫＤＭ１Ａ標的会合を決定するための方法およびそれに有用な化学プローブに関する。特に、本発明は、細胞および組織におけるＫＤＭ１Ａ標的会合を評価するために使用され得るタグまたは標識を有する非ペプチド性ＫＤＭ１Ａ化学プローブに関する。これらの化学プローブはまた、ＫＤＭ１Ａ相互作用因子を特定し、ＫＤＭ１Ａの発現レベルを分析するために使用され得る。2019512546.tif 000102
2019512546.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
Ｐ−Ｌ−Ｚ  （Ｉ）
の化合物またはその塩；
（式中、
Ｐはタグまたは標識であり；
Ｌは、二価のＣ６〜１００炭化水素基であり、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択されるヘテロ原子により任意選択で置き換えられ、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−および−ＮＲ１−ＳＯ２−からなる群から独立して選択される基により任意選択で置き換えられており、ＬはＰとＺとの間に少なくとも６原子の距離を与えるものであり；
Ｒ１は、水素またはＣ１〜４アルキルであり；および、
Ｚは、ＫＤＭ１Ａ阻害剤の基である）。
【請求項２】
Ｚが、２−シクリル−シクロプロピルアミノ部分を含む不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤の基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｚが、式Ｚ１：
【化１】
2019512546.tif 000088
（式中、
Ａは、アリールまたはヘテロアリールであり、前記アリールまたは前記ヘテロアリールは任意選択で置換され；
Ｂは、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、前記Ｂは任意選択で置換され；
ｍは、０または１であり；
Ｙは、結合、−（Ｃ１〜４アルキレン）−Ｏ−、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ＮＲ２−、−（Ｃ０〜４アルキレン）−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ２−、または−（Ｃ０〜４アルキレン）−ＮＲ２−Ｃ（＝Ｏ）−であり；
Ｒ２は、水素またはＣ１〜４アルキルであり；
Ｄは、水素、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ＣＯ−ＮＲ３Ｒ４、シクリルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、ここで、シクリル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分はそれぞれ任意選択で置換され；
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ、水素、Ｃ１〜４アルキルおよび−（Ｃ０〜４アルキレン）−シクリルから独立して選択され、ここで、−（Ｃ０〜４アルキレン）−シクリルのシクリル部分は任意選択で置換され、または、Ｒ３およびＲ４は互いに連結して、それらが結合しているＮ原子と共にヘテロ環式環を形成し、前記ヘテロ環式環はＮ、ＯおよびＳから選択される１個または複数の追加のヘテロ原子を含有してもよく、また任意選択で置換され；
シクロプロピル環上の基−（Ｂ−Ｙ）ｍ−Ａ−および−ＮＨ−Ｄは、トランス配置にある）の基である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｄが、シクリルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、ここで、シクリル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分はそれぞれ任意選択で置換されている、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｄが、下式：
【化２】
2019512546.tif 000089
の基である、請求項３に記載の化合物。
【請求項６】
Ｄが、任意選択で置換されたヘテロシクロアルキルである、請求項３に記載の化合物。
【請求項７】
Ｄが、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、ここで、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は任意選択で置換されている、請求項３に記載の化合物。
【請求項８】
Ｄが、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクロアルキルであり、ここで、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクロアルキルにおけるシクロアルキルは任意選択で置換されている、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｄが、−ＣＨ２−ヘテロシクロアルキル、好ましくは−ＣＨ２−（４−ピペリジニル）であり、−ＣＨ２−ヘテロシクロアルキルにおけるヘテロシクロアルキルおよび−ＣＨ２−（４−ピペリジニル）における４−ピペリジニルはそれぞれ任意選択で置換されている、請求項７に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｄが、下式：
【化３】
2019512546.tif 000090
の基である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ａが任意選択で置換されたフェニルである、請求項３〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
ｍが０である、請求項３〜１１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｚが、式Ｚ３ａまたはＺ３ｂ：
【化４】
2019512546.tif 000091
の基であり、
Ｚ３ａおよびＺ３ｂ中、フェニル環は任意選択で置換され、シクロプロピル環上の置換基はトランス配置にある、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｚが、式Ｚ５ａまたはＺ５ｂ：
【化５】
2019512546.tif 000092
の基である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｌが、式（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−（式中、ｎは６〜２０、好ましくは８〜１８の整数であり、ｐは１〜５の整数である）；または
（ｉｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘ−（ＣＨ２）ｑ−Ｇ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ（ＣＨ２）ｒ−（式中、Ｇは、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、もしくは−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、好ましくは、Ｇは、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−もしくは−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−であり、ここで、ｘおよびｙの一方は１〜１８の整数であり、ｘおよびｙの他方は０〜１７の整数であるが、但し、ｘ＋ｙは４〜１８であり、好ましくは、ｘ＋ｙは６〜１６であり、ｑおよびｒのそれぞれは１〜５から独立して選択される整数である）
の基を含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｌが式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３の基を含み、Ｘ１はＬの残りに連結し、Ｘ３はＺに連結し、
ここで、Ｘ１は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−、−ＮＲ１−ＳＯ２−または−Ｏ−であり；
Ｘ２は、Ｃ０〜５アルキレンであり；
Ｘ３は、アリーレンまたはヘテロアリーレンであり、前記アリーレンおよび前記ヘテロアリーレンはそれぞれ任意選択で置換されている、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｘ１が、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、好ましくは−ＮＨＣ（＝Ｏ）−である、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｘ３が、下式：
【化６】
2019512546.tif 000093
の基であり、ここで、各環は任意選択で置換されている、請求項１６または１７に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３が、下式：
【化７】
2019512546.tif 000094
の基であり、ここで、前記基はフェニル環を介してＺに、およびＮ原子を介してＬの残りに連結する、請求項１６に記載の化合物。
【請求項２０】
式（ＩＩ）：
【化８】
2019512546.tif 000095
の化合物またはその塩；
（式中、
Ｐは、タグまたは標識であり；
Ｄは、シクリルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、ここで、シクリル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分はそれぞれ任意選択で置換され；
Ｌ１は、二価のＣ６〜９０炭化水素基であり、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれＯ、ＳおよびＮから独立して選択されるヘテロ原子により任意選択で置き換えられ、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−および−ＮＲ１−ＳＯ２−からなる群から独立して選択される基により任意選択で置き換えられており、Ｌ１はＰとＸ１との間に少なくとも３原子の距離を与えるものであり；
Ｒ１は、水素またはＣ１〜４アルキルであり；
Ｘ１は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−、−ＮＲ１−ＳＯ２−または−Ｏ−であり；
Ｘ２は、Ｃ０〜５アルキレンであり；
Ｚ１およびＺ２の一方はＣＨまたはＮであり、Ｚ１およびＺ２の他方はＣＨであり；
ｓおよびｔは、それぞれ０、１および２から独立して選択され；
Ｒ５およびＲ６は、出現する毎に、Ｃ１〜４アルキル、ハロ、−ＮＨ２、−ＮＲａＲｃ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＯＲｃ、ハロＣ１〜４アルキル、シクリル、シクリルＣ１〜４アルキル−、Ｃ１〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキルから独立して選択され；
Ｒａは、水素、Ｃ１〜４アルキルおよびハロＣ１〜４アルキルから選択され；
Ｒｃは、Ｃ１〜４アルキル、ハロＣ１〜４アルキル、シクリル、シクリルＣ１〜４アルキル−、およびＣ１〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキルから独立して選択され；
シクロプロピル環上のフェニルおよび−ＮＨ−Ｄ基は、トランス配置にある）。
【請求項２１】
式（ＩＩａ）を有する請求項２０に記載の化合物、またはその塩；
【化９】
2019512546.tif 000096
。
【請求項２２】
Ｄが、シクロアルキル、ベンゾシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、ここで、シクロアルキル、ベンゾシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分はそれぞれ任意選択で置換されている、請求項２０または２１に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｄが、任意選択で置換されたシクロアルキルまたは任意選択で置換されたベンゾシクロアルキルである、請求項２０または２１に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｄが、任意選択で置換されたヘテロシクロアルキルである、請求項２０または２１に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｄが、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、ここで、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は任意選択で置換されている、請求項２０または２１に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｄが、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクロアルキルであり、ここで、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクロアルキルにおけるシクロアルキルは任意選択で置換されている、請求項２０または２１に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｄが、−ＣＨ２−ヘテロシクロアルキル、好ましくは−ＣＨ２−（４−ピペリジニル）であり、ここで、−ＣＨ２−ヘテロシクロアルキルにおけるヘテロシクロアルキルおよび−ＣＨ２−（４−ピペリジニル）における４−ピペリジニルはそれぞれ任意選択で置換されている、請求項２０または２１に記載の化合物。
【請求項２８】
式（ＩＩＩ）を有する請求項２０に記載の化合物、またはその塩：
【化１０】
2019512546.tif 000097
（式中、シクロプロピル環上の置換基は、トランス配置にある）。
【請求項２９】
式（ＩＩＩａ）を有する請求項２８に記載の化合物、またはその塩：
【化１１】
2019512546.tif 000098
。
【請求項３０】
Ｘ１が、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、好ましくは−ＮＨＣ（＝Ｏ）−である、請求項２０〜２９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｘ１−Ｘ２が、下式：
【化１２】
2019512546.tif 000099
の基であり、ここで前記基は、炭素原子を介して環に、およびＮ原子を介してＬ１に連結している、請求項２０〜２９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｚ１およびＺ２のそれぞれがＣＨである、請求項２０〜３１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３３】
ｓおよびｔのそれぞれが０である、請求項２０〜３２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３４】
Ｌ１が式Ｘ４−Ｘ５の基であり、Ｘ４はＰに連結し、Ｘ５はＸ１に連結し、
ここで、Ｘ４は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−または−ＮＲ１−ＳＯ２−であり；
Ｘ５は、式（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−（式中、ｎは６〜２０、好ましくは８〜１８の整数であり、ｐは１〜５の整数である）；または、
（ｉｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘ−（ＣＨ２）ｑ−Ｇ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ（ＣＨ２）ｒ−（式中、Ｇは−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、もしくは−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、好ましくは、Ｇは−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−もしくは−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−であり、ここで、ｘおよびｙの一方は１〜１８の整数であり、ｘおよびｙの他方は０〜１７の整数であるが、但し、ｘ＋ｙは４〜１８であり、好ましくは、ｘ＋ｙは６〜１６であり、ｑおよびｒのそれぞれは１〜５から独立して選択される整数である）
の基である、請求項２０〜３３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３５】
Ｐがタグである、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３６】
Ｐがビオチンまたはビオチン誘導体である、請求項３５に記載の化合物。
【請求項３７】
Ｐが標識である、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３８】
Ｐが蛍光標識である、請求項３７に記載の化合物。
【請求項３９】
化合物が、
【化１３】
2019512546.tif 000100
およびそれらの塩から選択される、請求項１または２０に記載の化合物。
【請求項４０】
化合物が、
【化１４】
2019512546.tif 000101
またはその塩である、請求項１または２０に記載の化合物。
【請求項４１】
試料中の遊離ＫＤＭ１Ａのレベルをｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定するための方法であって、
（ｉ）ＫＤＭ１Ａを化学プローブに接触させる、または曝露するステップであって、ここで、前記化学プローブは請求項１〜４０のいずれか１項に記載の化合物である；および、
（ｉｉ）前記試料において前記化学プローブを使用して遊離ＫＤＭ１Ａの前記レベルを決定するステップ；
を含む、前記方法。
【請求項４２】
前記試料中の全ＫＤＭ１Ａのレベルを決定することをさらに含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記試料中のＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合を決定するステップをさらに含む、請求項４１または４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記標的会合の決定が、試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルとの間の比率を計算することを含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記標的会合の決定が、試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルとの間の比率を計算することを含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記標的会合の決定が比率ＲＸ／ＲＲＥＦを計算することを含み、ここで、ＲＸは試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルの比率であり、ＲＲＥＦは参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルの比率である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
標的会合が、請求項４４〜４６のいずれか１項に従って計算された比率を１から差し引いたものとして決定され、ここで、１は完全標的会合に対応し、０は標的会合の非存在に対応する、請求項４３に記載の方法。
【請求項４８】
試料中のＫＤＭ１Ａの阻害剤の標的会合をｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定するための方法であって、
（ｉ）ＫＤＭ１Ａを化学プローブに接触させる、または曝露するステップであって、ここで、前記化学プローブは、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の化合物である；
（ｉｉ）前記試料において前記化学プローブを使用して遊離ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップ；
（ｉｉｉ）前記試料中の全ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップ；
（ｉｖ）参照試料において前記化学プローブを使用して遊離ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップ；
（ｖ）前記参照試料中の全ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップ；  
（ｖｉ）比率Ａ／Ｂを計算するステップであって、ここで、Ａは試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルの比率であり、Ｂは参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルの比率である；および、
（ｖｉｉ）ステップ（ｖｉ）において計算された比率を１から差し引いたものとして標的会合を決定するステップ；
含む、前記方法。
【請求項４９】
ＫＤＭ１Ａ標的会合の薬力学を評価するために使用される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記試料が、ＫＤＭ１Ａ阻害剤を投与された対象から得られる、請求項４１〜４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
ＫＤＭ１Ａの前記阻害剤が、ＫＤＭ１Ａの不可逆的阻害剤である、請求項４３〜４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
前記不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤が、（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン、（−）５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン、もしくは４−（（４−（（（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル）アミノ）メチル）ピペリジン−１−イル）メチル）安息香酸、またはそれらの塩である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
化学プローブが、遊離ＫＤＭ１Ａを捕捉または検出するために使用される、請求項４１〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
化学プローブ中のＰがタグであり、化学プローブは好適な捕捉または検出剤により捕捉または検出される、請求項５３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＫＤＭ１Ａ標的会合を決定するための方法およびそれに有用な化学プローブに関する。特に、本発明は、細胞および組織におけるＫＤＭ１Ａ標的会合を評価するために使用され得るタグまたは標識を有する非ペプチド性ＫＤＭ１Ａ化学プローブに関する。これらの化学プローブはまた、ＫＤＭ１Ａ相互作用因子を特定し、ＫＤＭ１Ａの発現レベルを分析するために使用され得る。
【背景技術】
【０００２】
ヒストンの共有結合修飾は、遺伝子転写の制御に密接に関係している。クロマチン修飾は、特殊なタンパク質により動的に「書込み」および「消去」され、またコードを遺伝子発現の変化に翻訳するタンパク質により「読出し」または解釈される、後成的コードを構成する。ヒストンのアセチル化、リン酸化およびメチル化は、ヒストンアセチル（ＨＡＴ）、ホスホ−およびメチルトランスフェラーゼ（ＰＲＭＴ、ＨＭＴ）により媒介され、デアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）、ホスファターゼおよびデメチラーゼ（ＫＤＭ）により反転され得る。
【０００３】
ＫＤＭは、異なる酵素作用機構により、Ｈ３Ｋ４ｍｅ１／２を脱メチル化するＦＡＤ依存性アミンオキシダーゼ（ＫＤＭ１）、ならびにモノ−、ジ−およびトリメチル化リシンの脱メチル化を触媒するＦｅ（ＩＩ）依存性酵素であるＪｍｊＣドメイン含有ＫＤＭの２つのファミリーに分類される。
【０００４】
ＫＤＭ１Ａ（リシン特異的デメチラーゼ−１、ＬＳＤ１またはＡＯＦ２としても知られる）は、ＦＡＤ依存性アミンオキシダーゼのファミリーに属し、メチル化リシンのＮ６−メチル基からＦＡＤ補因子への水素移動によりヒストンリシンを脱メチル化して不安定なイミン中間体を形成し、これがさらに加水分解されてホルムアルデヒドを放出する。この触媒機構は、第二級および第三級アミンの脱メチル化を許容するが、第四級アミンの脱メチル化は許容せず、これにより基質はモノおよびジメチル化リシンに制限される。脱メチル化反応中、ＦＡＤ補因子はＦＡＤＨ２に還元され、その後再びＦＡＤに酸化されるが、これはＨ２Ｏ２が放出されるプロセスである。ＫＤＭ１Ａは、ＭＡＯ−Ａ、ＭＡＯ−Ｂ、ＳＭＯＸおよびＩＬＩ１を含むモノアミンオキシダーゼのファミリーに構造的に関連する。
【０００５】
ＫＤＭ１Ａは、造血、胚発生、神経発達、およびウイルス生物学を含む様々な生物学的プロセスに関与する重要な酵素である。増加した、または不適切なＫＤＭ１Ａ発現は、白血病誘発および固形腫瘍において説明されている。ＫＤＭ１Ａは、がん、神経疾患および他の状態を処置するための新薬開発に向けた興味深い標的として認識されており、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、現在、ヒトの治療における使用のための前臨床または臨床開発段階にある。
【０００６】
細胞または組織におけるＫＤＭ１Ａ阻害剤によるＫＤＭ１Ａ標的結合の評価は、最も頻繁には、ｍｅ２Ｈ３Ｋ４蓄積の測定を通して、または遺伝子発現の変化の評価により、間接的に分析されている。しかしながら、ヒストンリシン修飾因子の阻害は、しばしば、ヒストンマークの全体的変化ではなく局所的変化をもたらし、ヒストン修飾は、２つ以上の細胞酵素により調整され得（例えば、Ｈ３Ｋ４は、ＳＥＴ／ＭＬＬタンパク質によりメチル化され得、メチル化は、ＫＤＭ１およびＫＤＭ５デメチラーゼにより反転され得る）、また、ヒストンマークの所与の変化が処理の直接的または間接的結果であるかどうかは常に明確なわけではない。
【０００７】
ＫＤＭ１Ａ阻害によるＨ３ヒストンからのＬＳＤ１脱離を評価するＮａｎｏＢＲＥＴアッセイもまた説明されている（ＪＰ  ＭｃＧｒａｔｈら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１６、ｅｐｕｂ  ２  Ｆｅｂ  ２０１６、ＰＭＩＤ：２６８３７７６１）。しかしながら、前記アッセイは、修飾ＫＤＭ１ＡおよびＨ３コンストラクトによる細胞のトランスフェクションを必要とし、動物またはヒト対象から得られた試料に容易に適用することができない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、臨床試料の分析に適した、細胞および組織におけるＫＤＭ１Ａへの阻害剤の会合の定量評価のための信頼性のある方法が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、本明細書および添付の特許請求の範囲に記載のような特異的ＫＤＭ１Ａ化学プローブを使用した遊離ＫＤＭ１Ａの決定に基づく、試料中のＫＤＭ１Ａ標的会合の直接的決定のための方法に関する。本明細書に記載のような方法は、臨床試料を含むあらゆる種類の試料中のＫＤＭ１Ａ阻害剤のＫＤＭ１Ａ標的会合を定量するために使用され得る。本発明はまた、本明細書および添付の特許請求の範囲に記載の前記ＫＤＭ１Ａ化学プローブ、ならびにそのさらなる使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１Ａは、化学プローブ実施例１．６を使用した実施例３に記載の細胞タンパク質抽出物のプルダウンのＫＤＭ１Ａウェスタンブロットを示す図である。図１Ｂは、実施例３に詳説される条件に従ってＯＲＹ−１００１で処理された細胞タンパク質抽出物のプルダウンのＫＤＭ１Ａウェスタンブロットを示す図である。
【図２】ＫＤＭ１ＡまたはＳＭＯＸ抗体を使用したウェスタンブロットを示す図であり、プルダウン産物は、化学プローブ実施例１．６により媒介された（実施例４に記載されている）。
【図３】図３Ａは、実施例５に記載のような全ＫＤＭ１Ａの決定のためのサンドイッチＥＬＩＳＡのスキームを示す図である。図３Ｂは、実施例５に記載のような遊離ＫＤＭ１ＡのＫＤＭ１Ａ化学プローブ捕捉ＥＬＩＳＡに基づく決定のスキームを示す図である。
【図４】実施例５に記載のような全および遊離ｒＫＤＭ１Ａ較正曲線を示すグラフである。
【図５】図５Ａは、実施例５による、健常ドナーからのヒトＰＢＭＣにおける全ＫＤＭ１Ａを示すグラフである。図５Ｂは、実施例５による、健常ドナーからのヒトＰＢＭＣにおける遊離ＫＤＭ１Ａを示すグラフである。
【図６Ａ】実施例６において説明されるようなＡｌｐｈａＬＩＳＡによる遊離ＫＤＭ１Ａの検出を示すグラフである。
【図６Ｂ】実施例６において説明されるようなＡｌｐｈａＬＩＳＡによる全ＫＤＭ１Ａの検出を示すグラフである。
【図６Ｃ】実施例６に記載のような５ｕＭ  ＯＲＹ−１００１の存在下でのＡｌｐｈａＬＩＳＡによる遊離ＫＤＭ１Ａの検出を示すグラフである。
【図７】実施例７に記載の発光化学プローブ免疫測定法を使用した、ＯＲＹ−１００１で処理された細胞（ＭＶ４；１１）におけるＫＤＭ１Ａ標的会合のＩＣ５０決定のグラフである。
【図８Ａ】実施例７において詳説される異なるＫＤＭ１Ａ阻害剤による処理後の、ＭＶ（４；１１）白血病細胞におけるＫＤＭ１Ａ標的会合を示すグラフである。
【図８Ｂ】実施例７において詳説される異なるＫＤＭ１Ａ阻害剤による処理後の、ＴＨＰ−１白血病細胞におけるＫＤＭ１Ａ標的会合を示すグラフである。
【図８Ｃ】実施例７において詳説される異なるＫＤＭ１Ａ阻害剤による処理後の、ＬＮＣａｐ前立腺がん細胞におけるＫＤＭ１Ａ標的会合を示すグラフである。
【図９Ａ】実施例８に記載の条件に従って異なる用量のＯＲＹ−１００１で処理された、ラットＰＢＭＣにおけるＫＤＭ１Ａ標的会合を示すグラフである。
【図９Ｂ】実施例８に記載の条件に従って異なる用量のＯＲＹ−１００１で処理された、ラット肺におけるＫＤＭ１Ａ標的会合を示すグラフである。
【図９Ｃ】実施例８に記載のように化合物Ｃで処理されたＳＡＭＰ８マウスの脳におけるＫＤＭ１Ａ標的会合を示すグラフである。
【図１０】実施例９に詳説される条件に従ってＯＲＹ−１００１で処理されたラットプールＰＢＭＣにおけるＫＤＭ１Ａ標的会合の動力学の決定のグラフである。
【図１１】実施例９に記載のように化合物Ｃで処理されたヒト健常ボランティアのＰＢＭＣにおけるＫＤＭ１Ａ標的会合の決定のグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
定義
明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、逆の意味が指定されない限り、次の用語は以下に示される意味を有する。
【００１２】
試料：本明細書に記載の本発明の方法が適用される任意の組織、細胞、タンパク質抽出物、組換えタンパク質である。試料、または試料が採取された対象は、ＫＤＭ１Ａ阻害剤で処理されていてもよい。
【００１３】
参照試料：試料に対する標準として役立つように選択される任意の組織、細胞、タンパク質抽出物、組換えタンパク質である。参照試料、または参照試料が採取された対象は、ビヒクルで処理されていてもよく、ＫＤＭ１Ａ阻害剤での処理前に採取されていてもよく、またはＫＤＭ１Ａ阻害剤の効果が完全に停止した際に採取されていてもよい。
【００１４】
対象：ヒトまたは動物の生命体である。
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ：生体環境外であり、すなわちｉｎ  ｖｉｖｏではない。
遊離ＫＤＭ１Ａ：試料中に存在する酵素活性ＫＤＭ１Ａ酵素、すなわちＫＤＭ１Ａ阻害剤が結合していないＫＤＭ１Ａである。遊離ＫＤＭ１Ａは、ＫＤＭ１Ａ化学プローブへの結合に利用可能である。
【００１５】
全ＫＤＭ１Ａ：遊離しているか、ＫＤＭ１Ａ阻害剤により阻害されているか、またはＫＤＭ１Ａ化学プローブが結合しているかを問わず、試料中に存在する全てのＫＤＭ１Ａ酵素である。
【００１６】
レベル：本明細書に記載の方法により決定される、試料または対象における遊離ＫＤＭ１Ａまたは全ＫＤＭ１Ａの信号の量である。信号の量はまた、データ処理により未加工信号読取値から得ることもできる。データ処理は、文献において説明される方法を使用した、バックグラウンド信号の除去、異常値の排除、未加工信号の平均化および／または正規化のための演算を含み得る。レベルはまた、既知の遊離ＫＤＭ１Ａまたは全ＫＤＭ１Ａ濃度／量を有する一連の希釈試料を使用して生成された較正曲線において、遊離ＫＤＭ１Ａまたは全ＫＤＭ１Ａの信号を補間することにより計算される、試料中の遊離ＫＤＭ１Ａまたは全ＫＤＭ１Ａの濃度／絶対量を示し得る。
【００１７】
ＫＤＭ１Ａ阻害剤：本明細書において、ＫＤＭ１Ａの酵素活性を阻害する非ペプチド性化合物である。ＫＤＭ１Ａ阻害剤という用語は、本明細書において、本発明によるＫＤＭ１Ａ化学プローブではない化合物に対してのみ使用される。
【００１８】
非ペプチド性化合物：ペプチド（アミド）結合により連結した少なくとも３つのアミノ酸モノマーの鎖を含有しない化合物である。１つ（単一）のアミド結合の存在は、本質的に、化合物をペプチド性と呼ぶには不十分である。
【００１９】
ＫＤＭ１Ａ化学プローブ（化学プローブとも呼ばれる）：ＫＤＭ１Ａに選択的に結合およびそれを阻害し、検出用の標識またはタグ、特に本明細書および添付の特許請求の範囲に記載のような式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩ、ＩＩＩａの化合物を組み込む化合物である。ＫＤＭ１Ａ化学プローブという用語は、本明細書において、本発明によるＫＤＭ１Ａ阻害剤ではない化合物に対してのみ使用される。
【００２０】
タグ：本明細書において、タグは、分子、例えばＫＤＭ１Ａ化学プローブ内に組み込むことができ、その分子またはその分子を含む複合体の捕捉、回収、単離、精製または検出手順において認識および使用され得る部分を説明するために使用される。
【００２１】
標識：本明細書において、標識は、分子、例えばＫＤＭ１Ａ化学プローブまたは検出剤内に組み込むことができ、例えば蛍光、生物発光、同位体、質量分析標識等、直接信号を生じる部分を説明するために使用される。標識はまた、好適な捕捉剤が利用可能である場合、例えばフルオレセイン部分が抗フルオレセイン抗体により認識および捕捉され得る場合、タグとしても使用され得る。
【００２２】
捕捉剤：タグを認識およびそれに結合し、化学プローブまたは化学プローブ複合体をその粗生物源から捕捉するために使用され得る薬剤である。本発明において、捕捉剤はまた、ＫＤＭ１ＡまたはＫＤＭ１Ａ含有複合体をその粗生物源から捕捉するために使用され得る薬剤であってもよい。
【００２３】
検出剤：タグを認識およびそれに結合し、ＫＤＭ１Ａ化学プローブもしくはＫＤＭ１Ａ化学プローブ結合複合体を検出するために使用され得る薬剤、または試料中のＫＤＭ１ＡもしくはＫＤＭ１Ａ含有複合体を検出するために使用され得る薬剤である。
【００２４】
不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤：ＫＤＭ１Ａまたはその補因子と反応し、それを化学的に（例えば共有結合形成により）変化させ、ＫＤＭ１Ａ酵素活性を不可逆的に不活性化するＫＤＭ１Ａ阻害剤である。不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤の例は、ＦＡＤ結合性ＫＤＭ１Ａ阻害剤を含む。
【００２５】
可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤：ＫＤＭ１Ａまたはその補因子と非共有結合的に結合し、ＫＤＭ１Ａ酵素活性を可逆的に不活性化するＫＤＭ１Ａ阻害剤である。
標的会合：ＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合は、ＫＤＭ１Ａ阻害剤によるＫＤＭ１Ａの占有度の目安である。
【００２６】
薬力学：本明細書において、投与されたＫＤＭ１Ａ阻害剤の用量およびＫＤＭ１Ａ標的会合の時間依存的な関係の研究である。
抗体は、本明細書において使用される場合、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体およびキメラ抗体、ならびにＦａｂ断片、ＳｃＦｖおよび同様のものを含むことを意図する。
【００２７】
ＫＤＭ１Ａ化学プローブ
一態様において、本発明は、本明細書に記載のような方法における使用のためのＫＤＭ１Ａ化学プローブとして使用され得る化合物に関する。
【００２８】
したがって、本発明は、式（Ｉ）
Ｐ−Ｌ−Ｚ  （Ｉ）
の化合物またはその塩を提供し、
式中、
Ｐは、タグまたは標識であり；
Ｌは、二価Ｃ６〜１００炭化水素基であり、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択されるヘテロ原子により任意選択で置き換えられ、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−および−ＮＲ１−ＳＯ２−からなる群から独立して選択される基により任意選択で置き換えられており、Ｌは、ＰとＺとの間に少なくとも６原子の距離を与え；
Ｒ１は、水素またはＣ１〜４アルキルであり；
Ｚは、ＫＤＭ１Ａ阻害剤の基である。
【００２９】
本明細書においてＺに関連して使用される場合、ＫＤＭ１Ａ阻害剤の基は、Ｈ原子が接続結合により置き換えられたＫＤＭ１Ａ阻害剤であることを意図する。
式（Ｉ）の化合物において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤または可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤であってもよい。好ましくは、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤であり、したがって、Ｚは、好ましくは不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤の基である。
【００３０】
式（Ｉ）の化合物に関連する使用のためのＫＤＭ１Ａ阻害剤は、以下の「ＫＤＭ１Ａ阻害剤」のセクションで開示される化合物のいずれかを含む。
好ましくは、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、選択的なＫＤＭ１Ａ阻害剤、例えば選択的な不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤である。本明細書において使用される場合、「選択的ＫＤＭ１Ａ阻害剤」は、他のＦＡＤ依存性モノアミンオキシダーゼ、特にＭＡＯ−ＡおよびＭＡＯ−Ｂよりも、ＫＤＭ１Ａに対して少なくとも１０倍の選択性を示す。より好ましくは、化合物は、他のＦＡＤ依存性モノアミンオキシダーゼ、特にＭＡＯ−ＡおよびＭＡＯ−Ｂよりも、ＫＤＭ１Ａに対して少なくとも３０倍、さらにより好ましくは、他のＦＡＤ依存性モノアミンオキシダーゼ、特にＭＡＯ−ＡおよびＭＡＯ−Ｂよりも、ＫＤＭ１Ａに対して少なくとも５０倍の選択性を示す。ＫＤＭ１Ａならびに他のＦＡＤ依存性モノアミンオキシダーゼ、特にＭＡＯ−ＡおよびＭＡＯ−Ｂを阻害する化合物の能力は、好ましくは、添付の実施例に記載のアッセイに従って決定される。
【００３１】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物におけるＫＤＭ１Ａ阻害剤は、選択的ＫＤＭ１Ａ阻害剤ではないトラニルシプロミンとしても知られるパルネート（ｐａｒｎａｔｅ）ではない。
【００３２】
式（Ｉ）の化合物において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、好ましくは、本明細書において定義されるような、２−シクリル−シクロプロピルアミノ部分を含む不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤、好ましくは２−（ヘテロ）アリールシクロプロピルアミノ化合物である。
【００３３】
ある特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物中、Ｚは、ＷＯ２０１０／０４３７２１、ＷＯ２０１０／０８４１６０、ＷＯ２０１１／０３５９４１、ＷＯ２０１１／０４２２１７、ＷＯ２０１１／１３１６９７、ＷＯ２０１２／０１３７２７、ＷＯ２０１２／０１３７２８、ＷＯ２０１２／０４５８８３、ＷＯ２０１３／０５７３２０、ＷＯ２０１３／０５７３２２、ＷＯ２０１２／１３５１１３、ＷＯ２０１３／０２２０４７、ＷＯ２０１４／０５８０７１、ＷＯ２０１０／１４３５８２、ＵＳ２０１０／０３２４１４７、ＷＯ２０１１／１３１５７６、ＷＯ２０１４／０８４２９８、ＷＯ２０１４／０８６７９０、ＷＯ２０１４／１６４８６７、ＷＯ２０１５／０２１１２８、ＷＯ２０１５／１２３４０８、ＷＯ２０１５／１２３４２４、ＷＯ２０１５／１２３４３７、ＷＯ２０１５／１２３４６５、ＷＯ２０１５／１５６４１７またはＷＯ２０１５／１８１３８０において開示されている不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤の基である。ある特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物中、Ｚは、ＷＯ２０１０／０４３７２１、ＷＯ２０１０／０８４１６０、ＷＯ２０１１／０３５９４１、ＷＯ２０１１／０４２２１７、ＷＯ２０１１／１３１６９７、ＷＯ２０１２／０１３７２７、ＷＯ２０１２／０１３７２８、ＷＯ２０１２／０４５８８３、ＷＯ２０１３／０５７３２０、ＷＯ２０１３／０５７３２２、ＷＯ２０１２／１３５１１３、ＷＯ２０１３／０２２０４７、ＷＯ２０１４／０５８０７１、ＷＯ２０１０／１４３５８２、ＵＳ２０１０／０３２４１４７、ＷＯ２０１１／１３１５７６、ＷＯ２０１４／０８４２９８、ＷＯ２０１４／０８６７９０、ＷＯ２０１４／１６４８６７、ＷＯ２０１５／０２１１２８、ＷＯ２０１５／１２３４０８、ＷＯ２０１５／１２３４２４、ＷＯ２０１５／１２３４３７、ＷＯ２０１５／１２３４６５、ＷＯ２０１５／１５６４１７、ＷＯ２０１５／１８１３８０、ＷＯ２０１６／１２３３８７、ＷＯ２０１６／１３０９５２、ＷＯ２０１６／１７２４９６、ＷＯ２０１６／１７７６５６、ＷＯ２０１７／０２７６７８またはＣＮ１０６０４５８６２において開示されている不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤の基である。
【００３４】
ある特定の実施形態において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、好ましくは、以下でより詳細に説明されるような式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）、（Ｇ）、（Ｈ）、（Ｊ）、（Ｋ）、（Ｌ）、（Ｍ）または（Ｎ）の化合物である。より好ましくは、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、式（Ｃ）、（Ｆ）、（Ｈ）、（Ｊ）、（Ｋ）、（Ｌ）、（Ｍ）または（Ｎ）の化合物である。さらにより好ましくは、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、式（Ｃ）、（Ｆ）、（Ｈ）、（Ｊ）、（Ｋ）または（Ｌ）の化合物に関して以下で提供される例のリストからの化合物である。
【００３５】
好ましくは、本明細書に記載の本発明の化合物において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン（ＯＲＹ−１００１もしくはＲＧ６０１６としても知られる）またはその塩である。
【００３６】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物に関し、式中、Ｚは、式Ｚ１
【００３７】
【化１】
2019512546.tif 000003
【００３８】
の基であり、式中、
Ａは、アリールまたはヘテロアリールであり、前記アリールまたは前記ヘテロアリールは、任意選択で置換され；
Ｂは、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、Ｂは、任意選択で置換され；
ｍは、０または１であり；
Ｙは、結合、−（Ｃ１〜４アルキレン）−Ｏ−、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ＮＲ２−、−（Ｃ０〜４アルキレン）−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ２−、または−（Ｃ０〜４アルキレン）−ＮＲ２−Ｃ（＝Ｏ）−であり；
Ｒ２は、水素またはＣ１〜４アルキルであり；
Ｄは、水素、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ＣＯ−ＮＲ３Ｒ４、シクリルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、シクリル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、それぞれ任意選択で置換され；
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ、水素、Ｃ１〜４アルキルおよび−（Ｃ０〜４アルキレン）−シクリルから独立して選択され、−（Ｃ０〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、任意選択で置換され、または、Ｒ３およびＲ４は、互いに連結して、それらが結合しているＮ原子と共にヘテロ環式環を形成し、ヘテロ環式環は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数の追加のヘテロ原子を含有してもよく、また任意選択で置換され；
シクロプロピル環上の基−（Ｂ−Ｙ）ｍ−Ａ−および−ＮＨ−Ｄは、トランス配置にある。
【００３９】
本明細書において描かれる任意の化学的な図において、波線（中断された結合）は、基（この場合Ｚ１、または該当する場合には任意の他の基）の、化合物の残りの部分（すなわちＺ１の場合にはＬ）に対する結合点を指す。
【００４０】
Ｚ１中、Ｄは、水素、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ＣＯ−ＮＲ３Ｒ４、シクリルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、シクリル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、それぞれ任意選択で置換されている。
【００４１】
好ましくは、Ｄは、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ＣＯ−ＮＲ３Ｒ４、シクリルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、シクリル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、それぞれ任意選択で置換されている。
【００４２】
より好ましくは、Ｄは、シクリルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、シクリル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、それぞれ任意選択で置換されている。
【００４３】
さらにより好ましくは、Ｄは、シクロアルキル、ベンゾシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、シクロアルキル、ベンゾシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、それぞれ任意選択で置換されている。
【００４４】
いくつかの実施形態において、Ｄは、任意選択で置換されたシクロアルキルまたは任意選択で置換されたベンゾシクロアルキル、好ましくは任意選択で置換されたシクロアルキルである。さらにより好ましくは、Ｄは、式
【００４５】
【化２】
2019512546.tif 000004
【００４６】
の基である。
いくつかの実施形態において、Ｄは、任意選択で置換されたヘテロシクロアルキルであり、例えば、Ｄは、任意選択で置換されたピペリジニル、好ましくは任意選択で置換された４−ピペリジニルである。
【００４７】
いくつかの実施形態において、Ｄは、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、任意選択で置換されている。
【００４８】
いくつかの実施形態において、Ｄは、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクロアルキルであり、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクロアルキルにおけるシクロアルキルは、任意選択で置換されている。いくつかの実施形態において、Ｄは、シクロプロピルメチルである。
【００４９】
いくつかの実施形態において、Ｄは、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ヘテロシクロアルキルであり、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ヘテロシクロアルキルにおけるヘテロシクロアルキルは、任意選択で置換されている。いくつかの実施形態において、Ｄは、−ＣＨ２−ヘテロシクロアルキル、より好ましくは−ＣＨ２−（４−ピペリジニル）であり、−ＣＨ２−ヘテロシクロアルキルにおけるヘテロシクロアルキルおよび−ＣＨ２−（４−ピペリジニル）における４−ピペリジニルは、それぞれ任意選択で置換されている。いくつかの実施形態において、Ｄは、式
【００５０】
【化３】
2019512546.tif 000005
【００５１】
の基である。いくつかの実施形態において、Ｄは、式
【００５２】
【化４】
2019512546.tif 000006
【００５３】
の基である。
いくつかの実施形態において、Ｄは、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ヘテロアリール、好ましくは−ＣＨ２−ヘテロアリールであり、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ヘテロアリールにおけるヘテロアリールおよび−ＣＨ２−ヘテロアリールにおけるヘテロアリールは、任意選択で置換されている。好ましくは、Ｄにおけるヘテロアリールは、任意選択で置換された単環式５員または６員ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｄは、式
【００５４】
【化５】
2019512546.tif 000007
【００５５】
の基である。
Ｚ１中、Ｙは、結合、−（Ｃ１〜４アルキレン）−Ｏ−、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ＮＲ２−、−（Ｃ０〜４アルキレン）−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ２−、または−（Ｃ０〜４アルキレン）−ＮＲ２−Ｃ（＝Ｏ）−である。Ｙ基に関して両方の配向が可能であるが、好ましくは、Ｙ基は、それぞれＯ、ＮＲ２またはＣ（＝Ｏ）基を介してＡに連結し、アルキレン基を介してＢに連結する。
【００５６】
好ましくは、Ｙは、結合、−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ２−、または−ＮＲ２−Ｃ（＝Ｏ）−である。より好ましくは、Ｙは、結合である。
Ｚ１中、Ａは、アリールまたはヘテロアリールであり、前記アリールまたは前記ヘテロアリールは、任意選択で置換されている。Ａに関連して、アリールおよびヘテロアリールは、以下で定義されるアリールまたはヘテロアリール基に関する。さらに、Ａに関連して、アリールおよびヘテロアリールはまた、少なくとも１つの芳香環を含む環系を包含する。したがって、非芳香族炭素環またはヘテロ環式環に融合したフェニル等の芳香環またはピリジル等のヘテロ芳香環を含む環、例えば２，３−ジヒドロベンゾフランもまた含まれる。好ましくは、分子の残りの部分に対する環Ａの２つの結合点は、芳香環上にある。
【００５７】
好ましくは、Ａは、任意選択で置換されたフェニルである。いくつかの実施形態において、Ａは、非置換フェニルである。
Ｚ１中、Ｂは、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、Ｂは、任意選択で置換されている。好ましくは、Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｂは、任意選択で置換されている。より好ましくは、Ｂは、任意選択で置換されたアリール、好ましくは任意選択で置換されたフェニルである。いくつかの実施形態において、Ｂは、非置換フェニルである。
【００５８】
いくつかの実施形態において、ｍは１およびＹは結合であり、より好ましくは、ｍは１、Ｙは結合、およびＢは任意選択で置換されたアリール、好ましくは任意選択で置換されたフェニルである。いくつかの実施形態において、Ｂは、非置換フェニルである。
【００５９】
いくつかの実施形態において、ｍは０である。
本発明は、さらに、上で定義されたような式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、Ｚは、式Ｚ２
【００６０】
【化６】
2019512546.tif 000008
【００６１】
の基であり、式中、フェニル環は、任意選択で置換され、シクロプロピル環上の置換基は、トランス配置にある。いくつかの実施形態において、フェニル環は、非置換である。
本発明は、さらに、上で定義されたような式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、Ｚは、式Ｚ３ａまたはＺ３ｂ
【００６２】
【化７】
2019512546.tif 000009
【００６３】
の基であり、Ｚ３ａおよびＺ３ｂ中、フェニル環は、任意選択で置換され、シクロプロピル環上の置換基は、トランス配置にある。いくつかの実施形態において、フェニル環は、非置換である。
【００６４】
本発明は、さらに、上で定義されたような式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、Ｚは、式Ｚ４
【００６５】
【化８】
2019512546.tif 000010
【００６６】
の基であり、式中、フェニル環は、任意選択で置換されている。好ましくは、フェニル環は、非置換である。
本発明は、さらに、上で定義されたような式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、Ｚは、式Ｚ５ａまたはＺ５ｂ：
【００６７】
【化９】
2019512546.tif 000011
【００６８】
の基であり、Ｚ５ａおよびＺ５ｂ中、フェニル環は、任意選択で置換されている。好ましくは、フェニル環は、非置換である。
式（Ｉ）の化合物中、Ｐは、タグまたは標識である。式（Ｉ）の化合物において使用され得るタグまたは標識の例は、以下の対応するセクションにおいてより詳細に説明されるタグおよび標識を含む。
【００６９】
式（Ｉ）の化合物中、Ｌは、二価Ｃ６〜１００炭化水素基であり、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択されるヘテロ原子により任意選択で置き換えられ、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−および−ＮＲ１−ＳＯ２−からなる群から独立して選択される基により任意選択で置き換えられており、Ｌは、ＰとＺとの間に少なくとも６原子の距離を与える。
【００７０】
好ましくは、式（Ｉ）の化合物中、Ｌは、二価Ｃ３０〜Ｃ８０炭化水素基であり、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択されるヘテロ原子により任意選択で置き換えられ、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−および−ＮＲ１−ＳＯ２−からなる群から独立して選択される基により任意選択で置き換えられており、Ｌは、ＰとＺとの間に２５〜７０原子の距離を与える。
【００７１】
より好ましくは、Ｌは、二価Ｃ４０〜Ｃ７０炭化水素基であり、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択されるヘテロ原子により任意選択で置き換えられ、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−および−ＮＲ１−ＳＯ２−からなる群から独立して選択される基により任意選択で置き換えられており、Ｌは、ＰとＺとの間に３５〜６５原子の距離を与える。
【００７２】
いくつかの実施形態において、Ｌは、６〜７０原子、好ましくは６〜５０原子のヘテロアルキレン基を含む。
好ましくは、式（Ｉ）の化合物中、Ｌは、式（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−（式中、ｎは、６〜２０、好ましくは８〜１８の整数であり、ｐは、１〜５の整数である）；または
（ｉｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘ−（ＣＨ２）ｑ−Ｇ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ（ＣＨ２）ｒ−（式中、Ｇは、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、もしくは−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、好ましくは、Ｇは、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−もしくは−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−であり、ｘおよびｙの一方は、１〜１８の整数であり、ｘおよびｙの他方は、０〜１７の整数であるが、但し、ｘ＋ｙは、４〜１８であり、好ましくは、ｘ＋ｙは、６〜１６であり、ｑおよびｒのそれぞれは、１〜５から独立して選択される整数である）の基を含む。
【００７３】
より好ましくは、式（Ｉ）の化合物中、Ｌは、式（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−（式中、ｎは、６〜２０、好ましくは８〜１８の整数であり、ｐは、１〜５の整数である）；または
（ｉｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘ−（ＣＨ２）ｑ−Ｇ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ（ＣＨ２）ｒ−（式中、Ｇは、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−もしくは−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−であり、ｘおよびｙの一方は、１〜１８の整数であり、ｘおよびｙの他方は、０〜１７の整数であるが、但し、ｘ＋ｙは、４〜１８であり、好ましくは、ｘ＋ｙは、６〜１６であり、ｑおよびｒのそれぞれは、１〜５から独立して選択される整数である）の基を含む。
【００７４】
さらにより好ましくは、式（Ｉ）の化合物中、Ｌは、式−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−の基を含み、式中、ｎは、６〜２０、好ましくは８〜１８の整数であり、ｐは、１〜５の整数である。
【００７５】
好ましくは、Ｌは、式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３の基を含み、Ｘ１は、Ｌの残りに連結し、Ｘ３は、Ｚに連結し、
Ｘ１は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−、−ＮＲ１−ＳＯ２−または−Ｏ−であり；
Ｘ２は、Ｃ０〜５アルキレンであり；
Ｘ３は、アリーレンまたはヘテロアリーレンであり、前記アリーレンおよび前記ヘテロアリーレンは、それぞれ任意選択で置換されている。
【００７６】
好ましくは、Ｘ１は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＳＯ２−ＮＨ−または−ＮＨ−ＳＯ２−であり、より好ましくは、Ｘ１は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、さらにより好ましくは−ＮＨＣ（＝Ｏ）−である。
【００７７】
好ましくは、Ｘ３は、１，３位でＸ１−Ｘ２およびＺに接続する。より好ましくは、Ｘ３は、式：
【００７８】
【化１０】
2019512546.tif 000012
【００７９】
の基であり、式中、各環は、任意選択で置換されている。さらにより好ましくは、Ｘ３は、式：
【００８０】
【化１１】
2019512546.tif 000013
【００８１】
の基であり、これは任意選択で置換されている。いくつかの実施形態において、Ｘ３は、非置換である。
好ましくは、Ｘ２は、Ｃ１〜５アルキレン、より好ましくは−（ＣＨ２）１〜５−である。
【００８２】
いくつかの実施形態において、Ｌは、式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３の基を含み、式中、Ｘ１は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−であり、Ｘ２は、Ｃ１〜５アルキレンであり、Ｘ３は、式：
【００８３】
【化１２】
2019512546.tif 000014
【００８４】
の基である。
好ましくは、Ｌは、式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３の基を含み、Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３は、式：
【００８５】
【化１３】
2019512546.tif 000015
【００８６】
の基であり、基は、フェニル環を介してＺに、およびＮ原子を介してＬの残りに連結する。
本発明によるＫＤＭ１Ａ化学プローブとしての使用に特に好ましい化合物は、式（ＩＩ）の化合物を含む。
【００８７】
したがって、本発明は、式（ＩＩ）
【００８８】
【化１４】
2019512546.tif 000016
【００８９】
の化合物またはその塩を提供し、
式中、
Ｐは、タグまたは標識であり；
Ｄは、シクリルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、シクリル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、それぞれ任意選択で置換され；
Ｌ１は、二価Ｃ６〜９０炭化水素基であり、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択されるヘテロ原子により任意選択で置き換えられ、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−および−ＮＲ１−ＳＯ２−からなる群から独立して選択される基により任意選択で置き換えられており、Ｌ１は、ＰとＸ１との間に少なくとも３原子の距離を与え；
Ｒ１は、水素またはＣ１〜４アルキルであり；
Ｘ１は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−、−ＮＲ１−ＳＯ２−または−Ｏ−であり；
Ｘ２は、Ｃ０〜５アルキレンであり；
Ｚ１およびＺ２の一方は、ＣＨまたはＮであり、Ｚ１およびＺ２の他方は、ＣＨであり；
ｓおよびｔは、それぞれ０、１および２から独立して選択され；
Ｒ５およびＲ６は、出現する毎に、Ｃ１〜４アルキル、ハロ、−ＮＨ２、−ＮＲａＲｃ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＯＲｃ、ハロＣ１〜４アルキル、シクリル、シクリルＣ１〜４アルキル−およびＣ１〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキルから独立して選択され；
Ｒａは、水素、Ｃ１〜４アルキルおよびハロＣ１〜４アルキルから選択され；
Ｒｃは、Ｃ１〜４アルキル、ハロＣ１〜４アルキル、シクリル、シクリルＣ１〜４アルキル−、およびＣ１〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキルから独立して選択され；
シクロプロピル環上のフェニルおよび−ＮＨ−Ｄ基は、トランス配置にある。
【００９０】
別の態様において、本発明は、式（ＩＩａ）の化合物またはその塩を提供し、
【００９１】
【化１５】
2019512546.tif 000017
【００９２】
式中、様々な置換基の意味は、上で定義された通りである。
本書全体を通して、シクロプロピル環上の記号ＲおよびＳは、この環上の絶対配置を指定することを意図する。
【００９３】
さらにより好ましくは、Ｄは、シクロアルキル、ベンゾシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、シクロアルキル、ベンゾシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、それぞれ任意選択で置換されている。
【００９４】
いくつかの実施形態において、式（ＩＩ）または（ＩＩａ）の化合物中、Ｄは、任意選択で置換されたシクロアルキルまたは任意選択で置換されたベンゾシクロアルキル、好ましくは任意選択で置換されたシクロアルキルである。さらにより好ましくは、Ｄは、式
【００９５】
【化１６】
2019512546.tif 000018
【００９６】
の基である。
いくつかの実施形態において、式（ＩＩ）または（ＩＩａ）の化合物中、Ｄは、任意選択で置換されたヘテロシクロアルキルであり、例えば、Ｄは、任意選択で置換されたピペリジニル、好ましくは任意選択で置換された４−ピペリジニルである。
【００９７】
いくつかの実施形態において、式（ＩＩ）または（ＩＩａ）の化合物中、Ｄは、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、任意選択で置換されている。
【００９８】
いくつかの実施形態において、式（ＩＩ）または（ＩＩａ）の化合物中、Ｄは、−（Ｃ１−４アルキレン）−シクロアルキルであり、−（Ｃ１−４アルキレン）−シクロアルキルにおけるシクロアルキルは、任意選択で置換されている。いくつかの実施形態において、Ｄは、シクロプロピルメチルである。
【００９９】
いくつかの実施形態において、式（ＩＩ）または（ＩＩａ）の化合物中、Ｄは、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ヘテロシクロアルキルであり、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ヘテロシクロアルキルにおけるヘテロシクロアルキルは、任意選択で置換されている。いくつかの実施形態において、Ｄは、−ＣＨ２−ヘテロシクロアルキル、より好ましくは−ＣＨ２−（４−ピペリジニル）であり、−ＣＨ２−ヘテロシクロアルキルにおけるヘテロシクロアルキルおよび−ＣＨ２−（４−ピペリジニル）における４−ピペリジニルは、それぞれ任意選択で置換されている。いくつかの実施形態において、Ｄは、式
【０１００】
【化１７】
2019512546.tif 000019
【０１０１】
の基である。いくつかの実施形態において、Ｄは、式
【０１０２】
【化１８】
2019512546.tif 000020
【０１０３】
の基である。
いくつかの実施形態において、式（ＩＩ）または（ＩＩａ）の化合物中、Ｄは、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ヘテロアリール、好ましくは−ＣＨ２−ヘテロアリールであり、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ヘテロアリールにおけるヘテロアリールおよび−ＣＨ２−ヘテロアリールにおけるヘテロアリールは、任意選択で置換されている。好ましくは、Ｄにおけるヘテロアリールは、任意選択で置換された単環式５員または６員ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｄは、式
【０１０４】
【化１９】
2019512546.tif 000021
【０１０５】
の基である。
さらなる態様において、本発明は、式（ＩＩＩ）の化合物、またはその塩を提供し、
【０１０６】
【化２０】
2019512546.tif 000022
【０１０７】
式中、シクロプロピル環上の置換基は、トランス配置にあり、様々な置換基の意味は、上で定義された通りである。
特に好ましい化合物は、式（ＩＩＩａ）の化合物、またはその塩であり、
【０１０８】
【化２１】
2019512546.tif 000023
【０１０９】
式中、様々な置換基の意味は、上で定義された通りである。
好ましくは、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）の化合物中、Ｘ１は、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＳＯ２−ＮＲ１−または−ＮＲ１−ＳＯ２−であり、より好ましくは、Ｘ１は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＳＯ２−ＮＨ−または−ＮＨ−ＳＯ２−であり、さらにより好ましくは、Ｘ１は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−であり、さらにより好ましくは、Ｘ１は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−である。
【０１１０】
好ましくは、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）の化合物中、Ｘ２は、Ｃ１〜５アルキレン、好ましくは−（ＣＨ２）１〜５−である。
好ましくは、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）の化合物中、Ｘ１−Ｘ２は、式
【０１１１】
【化２２】
2019512546.tif 000024
【０１１２】
の基であり、基は、炭素原子を介して環に、およびＮ原子を介してＬ１に連結している。
好ましくは、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）の化合物中、Ｚ１およびＺ２のそれぞれがＣＨである。
【０１１３】
好ましくは、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）の化合物中、Ｒ５およびＲ６は、それぞれ、ハロおよびＣ１〜４アルキルから独立して選択される。
いくつかの実施形態において、ｓおよびｔのそれぞれが０である。
【０１１４】
好ましくは、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）の化合物中、Ｌ１は、式Ｘ４−Ｘ５の基であり、Ｘ４は、Ｐに連結し、Ｘ５は、Ｘ１に連結し、
Ｘ４は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−または−ＮＲ１−ＳＯ２−であり；
Ｘ５は、式（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−（式中、ｎは、６〜２０、好ましくは８〜１８の整数であり、ｐは、１〜５の整数である）；または
（ｉｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘ−（ＣＨ２）ｑ−Ｇ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ（ＣＨ２）ｒ−（式中、Ｇは、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、もしくは−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、好ましくは、Ｇは、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−もしくは−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−であり、ｘおよびｙの一方は、１〜１８の整数であり、ｘおよびｙの他方は、０〜１７の整数であるが、但し、ｘ＋ｙは、４〜１８であり、好ましくは、ｘ＋ｙは、６〜１６であり、ｑおよびｒのそれぞれは、１〜５から独立して選択される整数である）の基である。
【０１１５】
より好ましくは、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）の化合物中、Ｌ１は、式Ｘ４−Ｘ５の基であり、Ｘ４は、Ｐに連結し、Ｘ５は、Ｘ１に連結し、
Ｘ４は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−または−ＮＲ１−ＳＯ２−であり；
Ｘ５は、式（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−（式中、ｎは、６〜２０、好ましくは８〜１８の整数であり、ｐは、１〜５の整数である）；または
（ｉｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘ−（ＣＨ２）ｑ−Ｇ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ（ＣＨ２）ｒ−（式中、Ｇは、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−もしくは−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−であり、ｘおよびｙの一方は、１〜１８の整数であり、ｘおよびｙの他方は、０〜１７の整数であるが、但し、ｘ＋ｙは、４〜１８であり、好ましくは、ｘ＋ｙは、６〜１６であり、ｑおよびｒのそれぞれは、１〜５から独立して選択される整数である）の基である。
【０１１６】
さらにより好ましくは、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）の化合物中、Ｌ１は、式Ｘ４−Ｘ５の基であり、Ｘ４は、Ｐに連結し、Ｘ５は、Ｘ１に連結し、
Ｘ４は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−または−ＮＲ１−ＳＯ２−であり；
Ｘ５は、式−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−（式中、ｎは、６〜２０、好ましくは８〜１８の整数であり、ｐは、１〜５の整数である）の基である。
【０１１７】
本発明の方法における化学プローブとしての使用に特に好適な化合物のクラスは、式（ＩＩ）、好ましくは式（ＩＩａ）の化合物、またはその塩であり、
式中、
Ｐは、タグまたは標識であり；
Ｄは、シクリルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、シクリル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、それぞれ任意選択で置換され、好ましくは、Ｄは、シクロアルキル、ベンゾシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、シクロアルキル、ベンゾシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、それぞれ任意選択で置換され、より好ましくは、Ｄは、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたヘテロシクロアルキル、−ＣＨ２−ヘテロシクロアルキルであり、−ＣＨ２−ヘテロシクロアルキルにおけるヘテロシクロアルキルは、任意選択で置換され、または、Ｄは、−ＣＨ２−ヘテロアリールであり、−ＣＨ２−ヘテロアリールにおけるヘテロアリールは、任意選択で置換され；
Ｌ１は、式Ｘ４−Ｘ５の基であり、Ｘ４は、Ｐに連結し、Ｘ５は、Ｘ１に連結し、
Ｘ４は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−または−ＮＲ１−ＳＯ２−であり；
Ｘ５は、式−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−（式中、ｎは、６〜２０、好ましくは８〜１８の整数であり、ｐは、１〜５の整数である）の基であり；
Ｘ１は、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＳＯ２−ＮＲ１−または−ＮＲ１−ＳＯ２−であり、好ましくは、Ｘ１は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＳＯ２−ＮＨ−または−ＮＨ−ＳＯ２−であり、より好ましくは、Ｘ１は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−であり、さらにより好ましくは、Ｘ１は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−であり；Ｘ２は、Ｃ１〜５アルキレン、好ましくは−（ＣＨ２）１〜５−であり；より好ましくは、Ｘ１−Ｘ２は、式
【０１１８】
【化２３】
2019512546.tif 000025
【０１１９】
の基であり、基は、炭素原子を介して環に、およびＮ原子を介してＬ１に連結し；
Ｚ１およびＺ２のそれぞれがＣＨであり；
ｓおよびｔのそれぞれが０である。
【０１２０】
本発明の方法における化学プローブとしての使用にさらにより好ましい化合物は、式（ＩＩＩ）、好ましくは式（ＩＩＩａ）の化合物、またはその塩であり、
【０１２１】
【化２４】
2019512546.tif 000026
【０１２２】
式中、
Ｐは、タグまたは標識であり；
Ｌ１は、式Ｘ４−Ｘ５の基であり、Ｘ４は、Ｐに連結し、Ｘ５は、Ｘ１に連結し、
Ｘ４は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−または−ＮＲ１−ＳＯ２−であり；
Ｘ５は、式−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−（式中、ｎは、６〜２０、好ましくは８〜１８の整数であり、ｐは、１〜５の整数である）の基であり；
Ｘ１は、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＳＯ２−ＮＲ１−または−ＮＲ１−ＳＯ２−であり、好ましくは、Ｘ１は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＳＯ２−ＮＨ−または−ＮＨ−ＳＯ２−であり、より好ましくは、Ｘ１は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−であり、さらにより好ましくは、Ｘ１は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−であり；Ｘ２は、Ｃ１〜５アルキレン、好ましくは−（ＣＨ２）１〜５−であり；より好ましくは、Ｘ１−Ｘ２は、式
【０１２３】
【化２５】
2019512546.tif 000027
【０１２４】
の基であり、基は、炭素原子を介して環に、およびＮ原子を介してＬ１に連結し；
Ｚ１およびＺ２のそれぞれがＣＨであり；
ｓおよびｔのそれぞれが０である。
【０１２５】
本書全体を通して、特定の化学式、例えばＸ１、Ｘ２、Ｘ３等を使用して描かれる二価化学基は、好ましくは、それらが記述されている方向に配向している。一例として、式（ＩＩＩａ）の化合物中、Ｘ１が−ＮＨＣ（＝Ｏ）−である場合、この基は、好ましくは、Ｎ原子がＬ１に結合し、Ｃ原子がＸ２基に結合するように配向している。
【０１２６】
上述の実施形態のいくつかにおいて、ある特定の環式基は、任意選択で置換されていると定義されている。これは、基が、非置換であってもよい、または１つもしくは複数の置換基を有してもよいことを意味する。環式基に対する任意選択の置換基の例は、限定されないが、以下の基：
Ｃ１〜４アルキル、シクリル、シクリルＣ１〜４アルキル−、−ＮＨ２、−ＮＲａＲｃ、−ＮＯ２、ハロ、ハロＣ１〜４アルキル、ハロＣ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル−、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲａＲｃ、−ＮＲａ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒｃ、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒｃ、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒｃ、−ＮＲａ−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒｃ、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲａＲｃ、−ＯＨ、−ＯＲｃ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒｃ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＲｃ、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒｃ、−ＮＲａ−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＲｃ、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲａＲｃを含み、式中、
各ＲａおよびＲｂは、水素、Ｃ１〜４アルキルおよびハロＣ１〜４アルキルから独立して選択され；
各Ｒｃは、Ｃ１〜４アルキル、ハロＣ１〜４アルキル、シクリル、シクリルＣ１〜４アルキル−、およびＣ１〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル−から独立して選択される。
【０１２７】
式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）および（ＩＩＩａ）の化合物中、Ｐは、タグまたは標識である。前記化合物において使用され得るタグまたは標識の例は、以下の対応するセクションにおいてより詳細に説明されるタグおよび標識を含む。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、Ｐは、タグである。いくつかの実施形態において、Ｐは、ビオチンまたはビオチン誘導体である。
いくつかの実施形態において、Ｐは、標識である。いくつかの実施形態において、Ｐは、蛍光標識である。いくつかの実施形態において、Ｐは、フルオレセインまたフルオレセイン誘導体である。
【０１２９】
好ましくは、Ｐは、ビオチンまたはビオチン誘導体である。
したがって、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）の化合物中、Ｘ４が、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−または−ＮＲ１−ＳＯ２−であり；Ｐが、ビオチンまたはビオチン誘導体であることが好ましい。
【０１３０】
したがって、Ｐ−Ｘ４−が以下に列挙される基から選択されることが特に好ましい。
【０１３１】
【化２６−１】
2019512546.tif 000028
【０１３２】
【化２６−２】
2019512546.tif 000029
【０１３３】
式中、Ｒ１は、水素またはＣ１〜４アルキルであり、好ましくは、Ｒ１は、Ｈである。
式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）の化合物中、Ｐ−Ｘ４−が以下に列挙される基から選択されることがさらにより好ましい。
【０１３４】
【化２７】
2019512546.tif 000030
【０１３５】
式中、Ｒ１は、水素またはＣ１〜４アルキルであり、好ましくは、Ｒ１は、Ｈである。
式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）の化合物中、Ｐ−Ｘ４−が
【０１３６】
【化２８】
2019512546.tif 000031
【０１３７】
であることがさらにより好ましく、式中、Ｒ１は、水素またはＣ１〜４アルキルであり、好ましくは、Ｒ１は、Ｈである（例えば実施例１．１〜１．６の場合のように）。
本発明は、一般的および／または好ましい特徴／実施形態の任意の組合せを含む、上述の特徴または実施形態のありとあらゆる組合せに具体的に関連することを理解されたい。特に、本発明は、本明細書において開示される化合物の好ましい特徴／実施形態（好ましさの全ての度合いを含む）の全ての組合せに具体的に関連する。
【０１３８】
化学プローブとしての使用に特に好ましい本発明の化合物は、以下に列挙される化合物、およびその塩である。
【０１３９】
【化２９】
2019512546.tif 000032
【０１４０】
好ましくは、上に列挙される化合物を含む式（Ｉ）（式中、Ｚは、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３ａ、Ｚ３ｂである）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物は、フェニル環が連結するシクロプロピル中のＣ原子上に（Ｓ）配置を有し、Ｎ原子が連結するシクロプロピル中のＣ原子において（Ｒ）配置を有する。
【０１４１】
本発明の方法における化学プローブとしての使用に最も好ましい化合物は、以下に列挙される化合物、およびその塩である。
【０１４２】
【化３０】
2019512546.tif 000033
【０１４３】
特に好ましい化合物は、式
【０１４４】
【化３１】
2019512546.tif 000034
【０１４５】
の化合物、およびその塩である。この化合物は、Ｎ−（３９−（４’−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（（（ｔｒａｎｓ）−４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−３７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ウンデカオキサ−３６−アザノナトリアコンチル）−５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミドと命名され、実施例１．６において説明されている。
【０１４６】
特定の用語に関して別段に定義されない限り、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）および（ＩＩＩａ）の本発明の化合物の定義において、該当する場合には以下の定義が適用される。
【０１４７】
本明細書において使用される場合、「シクリル」という用語は、融合性（ｆｕｓｅｎｅｓｓ）、芳香族性およびヘテロ−カルボ性に関わらず、任意の種類の環を指す。シクリルの例は、本明細書において定義されるような、アリール、ヘテロシクリル（ヘテロアリールおよびヘテロシクロアルキルを含む）、ベンゾシクロアルキルならびにシクロアルキル基を含む。
【０１４８】
本明細書において使用される場合、「アリール」という用語は、１つの環、または互いに融合した２つもしくは３つの環を含有する炭素環芳香族系を指し、環原子は全て炭素である。「アリール」という用語は、これらに限定されないが、フェニル、ナフチル、またはアントラセニル等の基を含む。「単環式アリール」という用語は、フェニルを指す。アリール基は、好ましくはフェニルである。
【０１４９】
本明細書において使用される場合、「シクロアルキル」という用語は、別段に指定されない限り、飽和単環式、二環式または三環式基を指し、環系の環原子は全て炭素であり、各環式部分は、３〜１２個の炭素原子環員を含有する。シクロアルキル基の例は、これらに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、またはアダマンチルを含む。シクロアルキルの好ましい基は、単環式Ｃ３〜７シクロアルキルである。
【０１５０】
本明細書において使用される場合、「ヘテロアリール」という用語は、５〜６員不飽和単環式環、または融合二環式もしくは三環式環系を指し、環は芳香環であり、少なくとも１つの環は、Ｏ、Ｓ、およびＮからなる群から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含有する。好ましいヘテロアリール基は、５〜６員単環式または９〜１０員二環式ヘテロアリール基である。ヘテロアリール基の例は、これらに限定されないが、ピリジニル、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、ピリミジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、またはフロピリジニルを含む。
【０１５１】
本明細書において使用される場合、「ヘテロシクリル」または「ヘテロ環」という用語は、それぞれ、環員として少なくとも１個のヘテロ原子を含有する飽和、部分不飽和、または完全不飽和単環式、二環式、または三環式ヘテロ環式基を指し、それぞれの前記へテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄からなる群から独立して選択されてもよく、窒素または硫黄原子は、酸化されていてもよい（例えば、−Ｎ＝Ｏ、−Ｓ（＝Ｏ）−、または−Ｓ（＝Ｏ）２−）。さらに、ヘテロシクリルの炭素原子の１個、２個、または３個が、任意選択で酸化されていてもよい（例えば、オキソ基または＝Ｏを形成してもよい）。ヘテロシクリルの１つの基は、環員として１〜４個のヘテロ原子を有する。ヘテロシクリルの別の基は、環員として１〜２個のヘテロ原子を有する。ヘテロシクリルの１つの基は、各環内に３〜８個の環員を有する。ヘテロシクリルのさらに別の基は、各環内に３〜７個の環員を有する。またヘテロシクリルの別の基は、各環内に５〜６個の環員を有する。「ヘテロシクリル」は、カルボシクリルまたはベンゾ環系に融合したヘテロシクリル基を包含することを意図する。ヘテロシクリル基の例は、これらに限定されないが、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオキサニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、２−ピロリニル、３−ピロリニル、インドリニル、２Ｈ−ピラニル、４Ｈ−ピラニル、ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリジニルイミダゾリニル、またはイミダゾリジニルを含む。ヘテロシクリルであるヘテロアリールの例は、これらに限定されないが、ピリジニル、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、ピリミジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、またはフロピリジニルを含む。
【０１５２】
本明細書において使用される場合、「ヘテロシクロアルキル」という用語は、完全には不飽和ではない、例えばヘテロシクロアルキルの環系の１つまたは複数が芳香族ではないヘテロシクリル基を指す。好ましくは、ヘテロシクリル基は、完全に飽和しており、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含有し、より好ましくは少なくとも１個のＮ原子を含有する。いくつかの実施形態において、ヘテロシクロアルキルは、完全に飽和した３〜７員単環式または７〜１５員多環式環（好ましくは、融合、架橋および／またはスピロ環であってもよい２つまたは３つの環を環系内に含有する）であり、ヘテロシクロアルキルは、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含有する。ヘテロシクロアルキルの例は、アゼチジニル、ピペラジニル、モルホリニル、ピペリジニル、またはピロリジニルを含む。
【０１５３】
本明細書において使用される場合、「ベンゾシクロアルキル」という用語は、シクロアルキルがフェニル環に融合した（すなわちフェニル環と２個の隣接する環炭素原子を共有する）、本明細書において上で定義されたようなシクロアルキルを指す。ベンゾシクロアルキルの限定されない例は、インジル（すなわち２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデニルもしくはベンゾシクロペンチル）、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル（すなわちテトラリニルもしくはベンゾシクロヘキシル）、またはベンゾシクロヘプチルである。ベンゾシクロアルキルは、そのシクロアルキル部分を介して（およびそのフェニル環部分を介さずに）分子の残りに結合することが好ましい。
【０１５４】
本発明の化合物は、１個または複数の塩基性窒素を含有し、したがって、有機または無機酸と塩を形成し得る。これらの塩の例は、中でも、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、過塩素酸、硫酸またはリン酸等の無機酸との塩；ならびにメタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、フマル酸、シュウ酸、酢酸、マレイン酸、アスコルビン酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、マロン酸、グリコール酸、コハク酸およびプロピオン酸等の有機酸との塩を含む。本発明の化合物、例えば式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩまたはＩＩＩａの化合物の塩は、本発明の化合物の最終単離および精製の間に得ることができ、または、従来の様式で化合物を十分な量の所望の酸で処理して塩を生成することにより調製することができる。本発明の化合物の塩は、イオン交換樹脂を使用したイオン交換により、他の塩に変換され得る。
【０１５５】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩまたはＩＩＩａの化合物、およびそれらの塩は、いくつかの物理的特性において異なり得るが、本発明の目的においては等価である。式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩまたはＩＩＩａの化合物の全ての塩が、本発明の範囲内に含まれる。塩は、好ましくは、薬学的に許容される塩である。本明細書において使用される場合、「薬学的に許容される塩」は、親化合物の生物学的有効性および／または特性を保持する塩（すなわち、該当する場合には遊離酸または遊離塩基）、ならびに生物学的にまたは別様に有害ではない塩を意味することを意図する。薬学的に許容される塩は、無機または有機塩基と形成された塩、ならびに無機および有機酸と形成された塩を含む。薬学的に許容される塩は、当該技術分野において周知である。例示的な薬学的に許容される塩は、本発明の化合物と鉱酸もしくは有機酸との反応により調製されたそれらの塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、リン酸塩、一リン酸水素塩、二リン酸水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソブチル酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオル酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４ジオエート、ヘキシン−１，６−ジオエート、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、ガンマ−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、マンデル酸塩、ピルビン酸塩、ステアリン酸塩、アスコルビン酸塩、またはサリチル酸塩を含む。本発明の化合物が酸性部分を有する場合、その好適な薬学的に許容される塩は、アルカリ金属塩、例えばナトリウムまたはカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばカルシウムまたはマグネシウム塩；および好適な有機リガンド、例えばアンモニア、アルキルアミン、ヒドロキシアルキルアミン、リシン、アルギニン、Ｎ−メチルグルカミン、プロカイン等と形成された塩を含み得る。本発明の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法により、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から調製され得る。例えば、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を、化学量論的量の適切な塩基または酸と好適な溶媒中で反応させることにより調製され得る。
【０１５６】
本発明の化合物は、それらがその中で反応する、またはそこから沈殿もしくは結晶化する溶媒と複合体を形成してもよい。これらの複合体は、溶媒和物として知られる。本明細書において使用される場合、溶媒和物という用語は、溶質（式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩもしくはＩＩＩａの化合物、またはそれらの塩）および溶媒により形成された様々な化学量の複合体を指す。溶媒の例は、薬学的に許容される溶媒、例えば水、エタノール等を含む。水との複合体は、水和物として知られる。水和物を含む本発明の化合物（またはその塩）の溶媒和物は、本発明の範囲内に含まれる。
【０１５７】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩまたはＩＩＩａの化合物は、異なる物理的形態、すなわち非晶質および結晶形態で存在し得る。さらに、本発明の化合物は、２つ以上の形態で結晶化する能力を有し得、これは多形性として知られる特性である。多形は、当技術分野において周知の様々な物理的特性、例えばＸ線回折パターン、融点または溶解度により区別され得る。その全ての多形体（「多形」）を含む式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩまたはＩＩＩａの化合物の全ての物理的形態が、本発明の範囲内に含まれる。
【０１５８】
本発明の化合物の一部は、いくつかの光学異性体として存在し得る。光学異性体は、光学的分割の従来の技術により分割され、光学的に純粋な異性体が提供され得る。この分割は、任意のキラル合成中間体、または式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩもしくはＩＩＩａの生成物に対して行うことができる。光学的に純粋な異性体はまた、エナンチオ特異的合成を使用して個々に得ることができる。本発明は、合成により、または物理的に混合することにより得られたか否かを問わず、全ての個々の異性体およびその混合物（例えばラセミ混合物）を包含する。
【０１５９】
以下で説明される本発明の方法における使用のためのＫＤＭ１Ａ化学プローブは、ＫＤＭ１Ａに対する高い親和性、および他のＦＡＤ依存性モノアミンオキシダーゼ、例えばＭＡＯ−Ａ、ＭＡＯ−Ｂ、ＳＭＯＸ、またはＩＬ４Ｉ１と比べて選択性を有さなければならない。重要なことに、ＫＤＭ１Ａ化学プローブは、シクロプロピルアミン含有ＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的外となり得るＭＡＯ−ＡおよびＭＡＯ−Ｂと比べて高い選択性を示すべきである。
【０１６０】
好ましくは、ＫＤＭ１Ａ化学プローブは、１ｍｃＭ未満、より好ましくは５００ｎＭ未満のＫＤＭ１Ａに対するＩＣ５０を有する。
好ましくは、ＫＤＭ１Ａ化学プローブは、他のＦＡＤ依存性モノアミンオキシダーゼよりも、ＫＤＭ１Ａに対して少なくとも１０倍、より好ましくは、他のＦＡＤ依存性モノアミンオキシダーゼよりも、ＫＤＭ１Ａに対して少なくとも３０倍、さらにより好ましくは、他のＦＡＤ依存性モノアミンオキシダーゼよりも、ＫＤＭ１Ａに対して少なくとも５０倍の選択性を示すべきである。少なくともＸ倍の選択性とは、例えば、ＫＤＭ１ＡのＩＣ５０値が、例えば生化学的アッセイを使用して決定したとき、少なくとも、ＭＡＯ−Ａ、ＭＡＯ−Ｂおよび他のＦＡＤ依存性モノアミンオキシダーゼのＩＣ５０値のＸ分の１よりも低いことを意味する。
【０１６１】
文献において、ＫＤＭ１Ａ、ＭＡＯ−Ａ、ＭＡＯ−Ｂ、ＳＭＯＸおよびＩＬ４Ｉ１阻害の評価を可能にする異なる方法が説明されている。これらの方法は、ＵＶ／ＶＩＳ分光法、質量分析、基質脱メチル化の副生成物であるＨ２Ｏ２またはホルムアルデヒドを検出するための酵素アッセイ、Ｈ３Ｋ４ｍｅ２／１脱メチル化を測定するためのａｌｐｈａＬＩＳＡアッセイによるＦＡＤ補因子への結合の評価を含む。例えば、化学プローブのＫＤＭ１Ａ阻害活性は、実施例２において開示される方法を使用して決定され得る。化学プローブの他のＦＡＤ依存性酵素より高いＫＤＭ１Ａに対する特異性は、例えば、実施例４に記載の方法を使用して試験され得る。実施例２に記載のデータは、実施例１．１、１．２、１．３、１．４、１．５および１．６の化学プローブが強力なＫＤＭ１Ａ阻害活性を示し、ＩＣ５０値が全ての場合において約２００ｎＭ以下であることを示している。実施例１．６の化学プローブ（すなわち、Ｎ−（３９−（４’−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（（（ｔｒａｎｓ）−４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−３７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ウンデカオキサ−３６−アザノナトリアコンチル）−５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミドおよびその塩）は、実施例４に記載のデータにより示されるように、他のＦＡＤ依存性酵素よりもＫＤＭ１Ａに対して非常に選択性であることが判明した。
【０１６２】
本発明者らは、添付の実施例における結果により示されるように、強力および選択的なＫＤＭ１Ａ阻害活性を示す、本明細書および添付の実施例において開示されるような化学プローブを特定した。これによって、これらの化学プローブは、本発明による方法における、特にＯＲＹ−１００１等の非常に強力なＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合を決定するための方法における化学プローブとしての使用に好適となる。実施例１．１の化学プローブ（すなわち、Ｎ−（３９−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（（ｔｒａｎｓ）−４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−３７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ウンデカオキサ−３６−アザノナトリアコンチル）−５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミドおよびその塩）および特に実施例１．６の化学プローブ（すなわち、Ｎ−（３９−（４’−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（（（ｔｒａｎｓ）−４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−３７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ウンデカオキサ−３６−アザノナトリアコンチル）−５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミドおよびその塩）が、特に好ましい。
【０１６３】
タグおよび標識
タグ：上で定義されたように、本明細書において、タグは、分子、例えばＫＤＭ１Ａ化学プローブ内に組み込むことができ、その分子またはその分子を含む複合体の捕捉、回収、単離、精製または検出手順において認識および使用され得る部分を説明するために使用される。
【０１６４】
好ましくは、タグは、タグが組み込まれる分子の結合親和性および選択性を含む機能性に対する干渉が最小限である低分子量化合物である。
好適なタグの例は、
−  アビジン、ストレプトアビジンまたはストレプトアクチンにより認識され得るビオチン誘導体；および
−  抗ジゴキシゲニン抗体により認識され得るジゴキシゲニン誘導体
である。
その例は、
【０１６５】
【化３２】
2019512546.tif 000035
【０１６６】
を含む。
−  Ｈａｌｏ  Ｔａｇ（登録商標）技術により認識され得るハロアルカンタグもまた、好適なタグである。
【０１６７】
タグはまた、ペプチド的な性質であってもよく、化学プローブ／対応する捕捉剤に組み込むことができるペプチドタグの例は、これらに限定されないが、
−  ＡｖｉＴａｇ、ＳＢＰ、Ｓｔｒｅｐ−ｔａｇ／アビジン、ストレプトアビジン、ストレプタシン（ｓｔｒｅｐｔａｃｉｎ）
−  カルモジュリンタグ／カルモジュリン
−  ポリグルタメートタグ／アニオン交換樹脂、例えばモノ−Ｑ（ＥＥＥＥＥＥ）
−  Ｅタグ／抗Ｅ−タグ抗体
−  ＦＬＡＧタグ／抗ＦＬＡＧ抗体
−  ＨＡタグ／抗ＨＡ抗体
−  ポリヒスチジンタグ、例えば５〜１０ヒスチジン、例えばニッケルまたはコバルトキレートが結合したＨｉｓタグ（ＨＨＨＨＨＨ）
−  Ｍｙｃタグ／抗Ｍｙｃ抗体
−  ＴＣタグ／ＦｌＡｓＨおよびＲｅＡｓＨ二ヒ素化合物（ＣＣＰＧＣＣ）
−  Ｖ５タグ／Ｖ５タグ抗体
−  ＶＳＶタグ／ＶＳＶタグ抗体
−  Ｍｙｃタグ／抗Ｍｙｃタグ抗体
−  （ポリ）ヒスチジンタグ／キレート剤で機能化されたニッケルおよびコバルトセファロースまたはアガロース、例えばニッケルの場合イミノ二酢酸（Ｎｉ−ＩＤＡ）およびニトリロ三酢酸（Ｎｉ−ＮＴＡ）、およびカルボキシルメチルアスパルテート（Ｃｏ−ＣＭＡ）を含む。
【０１６８】
タグはまた、
−  ＰＮＡ（タンパク質核酸）、（修飾）ＤＮＡ、（修飾）ＲＮＡタグ／相補的天然または合成ＰＮＡ、（修飾）ＤＮＡ、（修飾）ＲＮＡオリゴヌクレオチドを含む、合成オリゴヌクレオチドであってもよい。オリゴヌクレオチドタグは、相補（塩基対）配列を有する他のオリゴヌクレオチドにより認識され得る。
【０１６９】
標識：上で定義されたように、本明細書において、標識は、分子、例えばＫＤＭ１Ａ化学プローブまたは検出剤中に組み込むことができ、例えば蛍光、生物発光、同位体、質量分析標識等、直接信号を生じる部分を説明するために使用される。優先的には、標識は低分子量であり（ＭＷ＜１０００）、標識が組み込まれる分子の結合親和性および選択性を含む機能性に対する干渉が最小限となるべきである。
【０１７０】
蛍光標識の例は、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ、ＢＯＤＩＰＹ（登録商標）、フルオレセイン、Ｏｒｅｇｏｎ  ｇｒｅｅｎ（登録商標）、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｇｒｅｅｎ（商標）、長波長ローダミン、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ（登録商標）、クマリン、ピレン、ピリジオキサゾール、ナフタレン、Ｄａｐｏｘｙｌ（登録商標）またはビマン、例えば以下に列挙される群を含む、
【０１７１】
【化３３−１】
2019512546.tif 000036
【０１７２】
【化３３−２】
2019512546.tif 000037
【０１７３】
【化３３−３】
2019512546.tif 000038
【０１７４】
【化３３−４】
2019512546.tif 000039
【０１７５】
標識はまた、好適な捕捉または検出剤が利用可能である場合、例えばフルオレセイン部分が抗フルオレセイン抗体により認識および捕捉され得る場合、タグとしても使用され得る。
【０１７６】
捕捉剤：上で定義されたように、この用語は、タグを認識およびそれに結合し、化学プローブまたは化学プローブ複合体をその粗生物源から捕捉するために使用され得る薬剤を指すように使用される。本発明において、捕捉剤はまた、ＫＤＭ１ＡまたはＫＤＭ１Ａ含有複合体をその粗生物源から捕捉することができる。捕捉試薬は、表面に結合し得る。捕捉プロセスは、直接的または間接的であってもよく、すなわち、化学プローブ内に含まれる認識、例えばタグは、表面に結合した一次捕捉剤により捕捉され、第１の捕捉剤を認識して表面に結合する第２の捕捉剤により認識されてもよい。好適な捕捉剤は、ＫＤＭ１Ａ化学プローブ内のタグ、およびＫＤＭ１Ａ化学プローブ結合複合体に対する高い選択性および親和性、またはＫＤＭ１ＡもしくはＫＤＭ１Ａ含有複合体に対する高い選択性および親和性を有する抗体またはタンパク質を含む。
【０１７７】
ＫＤＭ１Ａ化学プローブ内に組み込まれた特定のタグに対する好適な捕捉剤の例は、上に列挙されている。
ＫＤＭ１ＡまたはＫＤＭ１Ａ含有複合体を捕捉するための好適な捕捉剤は、優先的には、ＫＤＭ１ＡまたはＫＤＭ１Ａ含有複合体に対する高特異性／高親和性抗体または抗体断片を含む。抗体は、市販のものであってもよく、または任意の既知の方法により生成もしくは合成されてもよい。
【０１７８】
ＫＤＭ１Ａ化学プローブに特に好適なタグは、ビオチンであり、対応する捕捉剤は、ストレプトアビジンである。
表面：上述のように、捕捉剤は、表面に結合し得る。これは、マイクロもしくはナノビーズ、マイクロタイタープレート、ナノストリング、ナノワイヤ、生物膜、ポリマーまたは任意の他の好適なマトリックスを含む、任意の好適な表面または固体担体であってもよい。
【０１７９】
検出剤：上で定義されたように、本明細書において、検出剤は、タグを認識およびそれに結合し、ＫＤＭ１Ａ化学プローブに組み込まれたタグを検出するために使用され得、またＫＤＭ１Ａ化学プローブ結合複合体を検出するために使用され得る薬剤である。代替として、検出剤は、試料中のＫＤＭ１ＡまたはＫＤＭ１Ａ含有複合体を検出するために使用され得る薬剤であってもよい。
【０１８０】
検出は、直接的または間接的であってもよく、増幅されてもまたは増幅されなくてもよく、単一分子または混合分子により媒介されてもよいが、可視化または測定され得る信号を生成する部分を常に含む。
【０１８１】
検出剤は、ＫＤＭ１Ａ化学プローブおよび化学プローブ結合複合体；またはＫＤＭ１ＡもしくはＫＤＭ１Ａ含有複合体の直接的検出に使用されてもよく、また信号生成部分を直接含んでもよい。
【０１８２】
代替として、一次検出剤は、ＫＤＭ１Ａ化学プローブおよび化学プローブ結合複合体；またはＫＤＭ１ＡもしくはＫＤＭ１Ａ含有複合体に結合してもよく、一次検出剤は、信号生成部分を含む二次検出剤により検出されてもよい。
【０１８３】
前記検出剤は、蛍光、発光、比色、同位体または質量分析標識を含み得る。
代替として、前記検出剤は、近接ライゲーションアッセイ技術を使用して信号を生成するために使用され得る合成オリゴヌクレオチドを含み得る。
【０１８４】
代替として、前記検出剤は、着色、蛍光または発光化合物中で基質を転換する酵素、例えばホースラディッシュペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼを含んでもよい。そのような酵素の例は、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、グルコースオキシダーゼおよびβ−ガラクトシダーゼ酵素を含む。比色検出は、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、グルコースオキシダーゼまたはβ−ガラクトシダーゼ酵素とのコンジュゲーションに続く、適切な発色性レポーター（それぞれ、３，３’−ジアミノベンジジン、塩化ニトロブルーテトラゾリウムおよび５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェートの組合せ、塩化ニトロブルーテトラゾリウムまたは５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド）とのインキュベーションに基づく。化学発光検出系は、ＨＲＰ酵素により触媒される、ルミノールから発光部分である３−アミノフタレートへの変換に基づく。ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）の基質の例は、以下を含む。
【０１８５】
【化３４】
2019512546.tif 000040
【０１８６】
前記酵素は、ＫＤＭ１Ａ化学プローブもしくはＫＤＭ１Ａ化学プローブ結合複合体に組み込まれたタグを認識する薬剤に直接結合してもよく、または、前記一次薬剤を認識する二次薬剤に結合してもよい。同様に、前記酵素は、ＫＤＭ１ＡまたはＫＤＭ１Ａ含有複合体を認識する薬剤に直接結合してもよく、または、前記一次薬剤を認識する二次薬剤に結合してもよい。
【０１８７】
代替として、前記一次検出剤はまた、可視化または測定され得る信号を生成する標識または部分を組み込んだ二次検出剤により検出されるタグを組み込んでもよい。
前記（一次）検出剤は、ＫＤＭ１Ａ化学プローブ内のタグに対する、およびＫＤＭ１Ａ化学プローブ結合複合体に対する、またはＫＤＭ１ＡもしくはＫＤＭ１Ａ含有複合体に対する高い選択性および親和性を有する。好ましくは、前記（一次）検出剤は、高い特異性および高い親和性でＫＤＭ１Ａ化学プローブまたはＫＤＭ１ＡもしくはＫＤＭ１Ａ含有複合体内に組み込まれたタグを認識する抗体または結合タンパク質または他のマクロ（分子）（例えばアプタマー、アフィマー（ａｆｆｉｍｅｒ）等）等の結合分子を含む。本明細書において、抗体は、優先的にはモノクローナル抗体、または一本鎖コンストラクト、例えば組換えＳｃＦｖ、Ｆａｂまたはそれらの融合タンパク質である。ＫＤＭ１ＡまたはＫＤＭ１Ａ含有複合体を検出するために使用される抗体またはタンパク質抗体は、容易に到達可能なエピトープに対するものであるべきである。エピトープの到達可能性は、コンピュータ内でモデル化され、実施例において説明されるように免疫沈降法（ＩＰ）を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験され得る。好適なＫＤＭ１Ａ抗体は、実施例において開示されており、代替の抗体もまた、前記好適な抗体を特定するための実施例において開示される戦略に従って特定され得る。また、代替の抗体は、到達可能なエピトープに対して、ＫＤＭ１Ａ複合体の一部であるＫＤＭ１Ａ相互作用因子から形成することができる。ＲＣＯＲ１、ＨＤＡＣ１およびＨＤＡＣ２は、ＫＤＭ１Ａと密接に相互作用するそのような因子の例である。
【０１８８】
好ましくは、第１の検出または捕捉剤によるＫＤＭ１Ａ結合化学プローブまたはＫＤＭ１Ａ結合化学プローブ含有複合体の検出または捕捉は、第２の検出剤によるＫＤＭ１ＡまたはＫＤＭ１Ａ含有複合体の検出に干渉せず、また、第１の検出または捕捉剤によるＫＤＭ１ＡまたはＫＤＭ１Ａ含有複合体の検出または捕捉は、第２の検出剤によるＫＤＭ１ＡまたはＫＤＭ１Ａ含有複合体の検出に干渉しない。
【０１８９】
検出系：本明細書において、信号を生成するために、複数の検出剤がトランスで、および極めて近接して作用することが必要である場合、検出系が言及されるが、例えば、Ｆｏｒｓｔｅｒ／Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｅｎｅｒｇｙ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ（ＦＲＥＴ）、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ、ＤＥＬＦＩＡ、および近接ライゲーションアッセイ技術（タンパク質ＰＣＲ）等がある。ＦＲＥＴ、ＡｌｐｈａＬＩＳＡおよびＤＥＬＦＩＡにおいて、第１の検出剤は、エネルギーを吸収して、アクセプターへのエネルギー伝達（ＦＲＥＴ）または酸素一重項移動（ＡｌｐｈａＬＩＳＡ、ＤＥＬＦＩＡ）を生成するドナーとして機能し、特定のより低い波長で信号を放出するようにそれを励起する。本明細書に記載の本発明の一実施形態において、遊離ＫＤＭ１Ａを検出するために、第１の検出剤は、ＫＤＭ１Ａ化学プローブ含有複合体を認識してそれに結合するように設計され、第２の検出剤は、ＫＤＭ１Ａ酵素またはＫＤＭ１Ａ含有複合体に結合するように設計される。別の実施形態において、遊離ＫＤＭ１Ａの検出に加えて、ＫＤＭ１ＡまたはＫＤＭ１Ａ含有複合体上の異なる部位に結合する２つの異なる検出剤が、全ＫＤＭ１Ａを検出するために使用される。さらに、代替として、ＫＤＭ１ＡまたはＫＤＭ１Ａ含有複合体に結合する２種のＫＤＭ１Ａ検出剤、およびＫＤＭ１Ａ化学プローブに結合する第３の検出剤が使用され得る。１つのＫＤＭ１Ａ検出剤は、ドナーとして機能し、他のＫＤＭ１Ａ検出剤およびＫＤＭ１Ａ化学プローブ検出剤は、異なる波長で放出するアクセプターとして機能し、遊離および全ＫＤＭ１Ａの同時検出を可能にする。近接ライゲーションアッセイ技術において、異なる検出剤が、接続核酸とアニールし、ライゲーションされ、リアルタイム定量ＰＣＲを使用して検出され得る増幅可能な断片を形成する核酸を有する。この場合も、検出剤は、ＫＤＭ１Ａ化学プローブ含有複合体およびＫＤＭ１Ａタンパク質を検出することができ、均一または不均一アッセイにおいて、独立してまたは多重反応において遊離および全ＫＤＭ１Ａを検出するために使用され得る。
【０１９０】
上述のタグ、標識、捕捉および検出剤、酵素、基質ならびに他のツールおよび技術は、単に本発明を実行するための手法を例示するためのものであり、決して本発明の方法を制限することを意図しない。
【０１９１】
標的会合アッセイ
本発明の化学プローブは、本明細書においてより詳細に説明されるようなＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合を決定するための方法において使用され得る。本発明による方法は、典型的にはＫＤＭ１Ａにより標的化されるヒストンマークのレベルまたは遺伝子発現における前記ＫＤＭ１Ａ阻害剤によりもたらされる変化の分析によるＫＤＭ１Ａ会合の間接的決定に基づく、これまで一般的に使用されてきた方法とは対照的に、ＫＤＭ１Ａ阻害剤による標的占有の直接的評価を可能にする。
【０１９２】
本発明の方法は、とりわけ、遊離ＫＤＭ１Ａ酵素の化学プローブ「タグ付け」を用いた遊離ＫＤＭ１Ａレベルの測定による標的会合の直接的定量に基づく。本明細書において以前に定義されたように、遊離ＫＤＭ１Ａは、ＫＤＭ１Ａ阻害剤が結合していない、試料中に存在する酵素活性ＫＤＭ１Ａを意味する。「タグ付け」は、本明細書において広い意味で使用され、以前に定義されたようなタグおよび標識の両方の使用を包含する。
【０１９３】
ＫＤＭ１Ａ阻害剤で処理される細胞、組織、器官または対象において、酵素活性ＫＤＭ１Ａ酵素プールの一部は、ＫＤＭ１Ａ阻害剤により結合（占有）され、この部分は、化合物の（ＫＤＭ１Ａ阻害）効力および使用される濃度／用量に従って変化し得る。したがって、遊離ＫＤＭ１Ａレベルは、どれほどのＫＤＭ１Ａ酵素に、ＫＤＭ１Ａ阻害剤が結合しているかを決定するために使用することができ、すなわち、そのような阻害剤による標的会合が、本明細書に記載の方法により決定され得る。したがって、本発明による遊離ＫＤＭ１Ａレベルを決定するための化学プローブベースの方法は、例えば臨床試験または臨床業務において、標的会合を評価するため、およびＫＤＭ１Ａ阻害剤の薬力学を評価するために有用である。
【０１９４】
したがって、一態様において、本発明は、試料または対象中の遊離ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するための方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）ＫＤＭ１Ａを化学プローブに接触させる、または曝露するステップであって、前記化学プローブは、上記および添付の特許請求項の範囲において定義されるような化合物であるステップと；
（ｉｉ）前記試料または対象において前記化学プローブを使用して遊離ＫＤＭ１Ａの前記レベルを決定するステップと
を含む。
【０１９５】
遊離ＫＤＭ１Ａレベルを決定するための方法は、以下および添付の実施例に記載される。
別の態様において、本発明は、試料中の遊離ＫＤＭ１Ａのレベルをｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定するための方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）ＫＤＭ１Ａを化学プローブに接触させる、または曝露するステップであって、前記化学プローブは、上記または添付の特許請求項の範囲において定義されるような化合物であるステップと；
（ｉｉ）前記試料において前記化学プローブを使用して遊離ＫＤＭ１Ａの前記レベルを決定するステップと
を含む。
【０１９６】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏとは、遊離ＫＤＭ１Ａレベルを決定するため、および標的会合を決定するための本発明の方法に関連して使用される場合、以前に定義されたように、生体（これは例えばヒトであってもよい）外であること、すなわち方法が前記生体に対して直接行われないことを意味する。したがって、これは、例えば、ＫＤＭ１Ａ阻害剤によるｉｎ  ｖｉｖｏ処理を受けた生体（例えばヒト）から採取された試料を使用して実行される方法を含み、その試料は、実施例のセクションにおいて「ｅｘ  ｖｉｖｏ」試料と呼ばれる。
【０１９７】
実施例において例示されるように、本発明の化学プローブを使用して遊離ＫＤＭ１Ａレベルを決定するための方法は、様々な状況で、およびヒト試料を含む様々な試料の種類において実行され得る。
【０１９８】
添付の実施例において例示されるように、遊離ＫＤＭ１Ａレベルは、実施例５に示されるように遊離ＫＤＭ１Ａを捕捉するためのビオチンタグ（Ｐ基として）を含有する式（Ｉ）の化学プローブを用いたＫＤＭ１Ａ化学プローブベースＥＬＩＳＡアッセイを使用して、ならびに発光または比色等の異なる検出技術（実施例５．２および５．３を参照されたい）を使用して決定され得る。遊離ＫＤＭ１Ａを決定するためのこの方法はまた、例えば実施例６および図６Ａに示されるように、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ技術を使用した均一アッセイ形式で遊離ＫＤＭ１Ａレベルを決定するためにも成功裏に行うことができる。
【０１９９】
実施例５．２において説明される化学プローブベースの方法は、さらに、実施例５．２および図５Ｂにおいて説明されるように、健常ボランティアからのヒト血液から単離されたＰＢＭＣ中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルを決定するために使用された。これは、本発明の化学プローブおよび化学プローブベースの方法が、以下でもより詳細に説明されるように、ヒト試料において遊離ＫＤＭ１Ａレベルを決定するために、したがってヒトにおけるＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合を決定するために成功裏に使用され得ることを示す。
【０２００】
実施例７において例示されるように、遊離ＫＤＭ１Ａレベルは、本発明の化学プローブベースの方法を使用して、ＫＤＭ１Ａ阻害剤で処理された細胞において決定され得る。特に、実施例７において、遊離ＫＤＭ１Ａレベルは、実施例７．３ならびに図７および８Ａにおいてより詳細に説明されるようにいくつかのＫＤＭ１Ａ阻害剤（またはビヒクル）で処理されたＭＶ（４；１１）ヒト白血病細胞、およびＴＨＰ−１ヒト白血病細胞（実施例７．３および図８Ｂを参照されたい）を含む他の細胞株、およびＬＮＣａｐヒト前立腺がん細胞等の固形腫瘍細胞（実施例７．３および図８Ｃを参照されたい）において決定された。そこで決定された遊離ＫＤＭ１Ａレベルは、次いで、以下でより詳細に説明される方法に従って、標的会合を決定するために使用され得る。実施例７において得られた結果は、試験されたＫＤＭ１Ａ阻害剤のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＫＤＭ１Ａ阻害活性に従う用量応答性細胞標的会合を示し、本発明による化学プローブおよび化学プローブベースの方法が、遊離ＫＤＭ１ＡレベルおよびＫＤＭ１Ａ阻害剤によるＫＤＭ１Ａ標的会合の信頼性のある決定を提供するために使用され得ることをさらに示した。
【０２０１】
特に、実施例８および９は、単回または反復用量のＫＤＭ１Ａ阻害剤をｉｎ  ｖｉｖｏで投与された動物から採取された試料において、遊離ＫＤＭ１Ａレベルが本発明の化学プローブベースの方法を使用して決定され得ることをさらに示している。例えば、実施例８において説明されるように、増加用量のＯＲＹ−１００１またはビヒクルで処理されたラットからのＰＢＭＣおよび肺試料において遊離ＫＤＭ１Ａレベルが決定され、これらのレベルを使用して標的会合が決定された（以下で説明される通り）が、対応する結果を図９Ａおよび９Ｂに示す。単回または複数回用量のＯＲＹ−１００１で処理された動物における遊離ＫＤＭ１Ａレベルの測定を示す追加的な例が、実施例９において開示されている。遊離ＫＤＭ１Ａレベルは、別のＫＤＭ１Ａ阻害剤、化合物Ｃ（実施例８においてさらに説明される通り）、またはビヒクルで処理された、実験的アルツハイマー病モデルのマウスからの脳試料においてさらに決定され、脳における化合物Ｃの標的会合を決定するために使用された（図９Ｃ中の結果を参照されたい）が、本発明の方法を使用した遊離ＫＤＭ１Ａレベル決定および標的会合測定により、この化合物が脳に進入し、脳内でＫＤＭ１Ａを阻害することが確認された。
【０２０２】
実施例９において例示されるように、本発明の化学プローブおよび方法は、臨床試験の状況でＫＤＭ１Ａ阻害剤を投与されたヒト対象からのＰＢＭＣ試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルを決定するために使用され得る。特に、実施例９において説明されるように、化合物Ｃ（実施例において説明される通り）で指定されるＫＤＭ１Ａ阻害剤の安全性、耐容性および薬物動態を決定するための第Ｉ相臨床試験において、単回用量のＫＤＭ１Ａ阻害剤の投与前、および投与後の異なる時点で、各ボランティアから試料を採取し、前記試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルを決定し、以下で説明されるように標的会合を決定するために使用した。
【０２０３】
遊離ＫＤＭ１Ａを「タグ付け」するためにＫＤＭ１Ａ化学プローブを使用する本発明による遊離ＫＤＭ１Ａレベルを決定するための方法は、例において説明される特定の実施形態に限定されない。特にＥＬＩＳＡは研究所および臨床分析機関において広く行われている技術であるため、方法は、ＥＬＩＳＡ（またはＡｌｐｈａＬＩＳＡ）プラットフォームを使用して行われたが、遊離ＫＤＭ１Ａタンパク質レベルを決定するための化学プローブベースの方法は、例えば上記の検出剤および検出系のセクションにおいて概説されるように、他の技術を使用して行われてもよいことが、当業者に容易に認識される。
【０２０４】
例えば、ビオチンが式（Ｉ）の化合物に関連して上で定義されたような別のタグまたは標識Ｐと置き換えられた、式（Ｉ）（または式ＩＩもしくはＩＩＩ）の他の異なるタグ付け／標識化ＫＤＭ１Ａ化学プローブが使用されてもよい。上記のタグおよび標識という表題のセクションにおいて、ビオチンの代わりに本発明の化学プローブにおいて使用され得るタグおよび標識の他の例、ならびに、化学プローブおよびＫＤＭ１Ａ化学プローブ結合複合体における前記タグ／標識を捕捉／検出するための、例えば遊離ＫＤＭ１Ａレベルを決定するための対応する好適な方法が言及されている。同様に、異なるＫＤＭ１Ａ阻害剤基Ｚを含有する他の化学プローブが使用され得る。いずれも式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物に対応する実施例１．１、１．２、１．３および１．６において説明される化学プローブは、ＯＲＹ−１００１として知られるＫＤＭ１Ａ阻害剤をベースとしており、一方、いずれも式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物に対応する実施例１．４および１．５の化学プローブは、２つの他のＫＤＭ１Ａ阻害剤Ｚ基をベースとしている。他のＫＤＭ１Ａ阻害剤、すなわち他のＺ基を含有するＫＤＭ１Ａ阻害剤をベースとする代替の好適な化学プローブが調製および使用されてもよく、好ましくは、Ｚは、不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤の基である。ＫＤＭ１Ａ化学プローブを調製するために使用され得るＫＤＭ１Ａ阻害剤の例は、上記のＫＤＭ１Ａ化学プローブのセクションにおいて開示されている。ＫＤＭ１Ａ阻害剤の追加的な例は、以下のＫＤＭ１Ａ阻害剤のセクションにおいて議論されており、それらもまた、ＫＤＭ１Ａ化学プローブを生成するために使用され得る。得られるＫＤＭ１Ａ化学プローブは、上記のＫＤＭ１Ａ化学プローブのセクションにおいて議論されたように、本発明の方法における使用のための他の標的と比べて、適切なＫＤＭ１Ａ阻害効力および選択性を示すべきである。
【０２０５】
いくつかの実施形態において、上記の方法は、前記試料中の全ＫＤＭ１Ａのレベルを決定することをさらに含む。例えば、全ＫＤＭ１Ａレベルは、異なる試料において得られた結果を比較する際に試料中に存在するＫＤＭ１Ａ酵素の量の差を補正するための試料正規化に使用され得る。
【０２０６】
例えば、全ＫＤＭ１Ａレベルは、実施例において例示されるように決定され得る。例えば、実施例５および６において説明されるように、全ＫＤＭ１Ａレベルは、サンドイッチＥＬＩＳＡ（実施例５およびサンドイッチＥＬＩＳＡの概略図を示す図３Ａを参照されたい）を使用して、または、実施例５．１および以下の抗体のセクションにおいてより詳細に説明される基準を使用して選択された２種の異なる抗ＫＤＭ１Ａ抗体を使用した対応するＡｌｐｈａＬＩＳＡ形式（実施例６を参照されたい）において決定され得る。他の代替の抗ＫＤＭ１Ａ抗体が使用されてもよく、これは前記抗体セクションにおいて説明されるように選択され得る。ＥＬＩＳＡ技術プラットフォームは研究所および臨床分析機関において広く使用されているため、例えば実施例において説明されるもの等のＥＬＩＳＡベースの方法が有利であるが、当業者に明らかなように、試料中に存在するＫＤＭ１Ａタンパク質の総量を決定するための代替の方法、例えば上で検出剤および検出系のセクションにおいて概説された方法が使用されてもよい。
【０２０７】
信号と試料中の遊離または全ＫＤＭ１Ａの量との間に直線関係がある（すなわち、希釈曲線が、検出が直線範囲内にあることを示す）限り、レベルは、必要に応じて、信号を得るために使用される技術に対応して異なる単位（例えば、相対発光単位またはＲＬＵ、吸光度単位またはＡＵ、蛍光単位またはＦＵ等）で表現されてもよい。レベルはまた、較正曲線が既知の量の全または遊離ＫＤＭ１Ａタンパク質を含有する試料から確立された場合、濃度（量）として表現されてもよく、濃度（量）は、補間により決定され得る。
【０２０８】
測定機器から得られた未加工信号は、データ処理に供されてもよい。一般的に適用されるデータ処理は、バックグラウンド信号の除去、Ｇｒｕｂｂｓ検定等の確立された基準を使用した外れ値の排除、Ｃｈａｕｖｅｎｅｔ基準、直線回帰における外れ値のＭＭＳ検定、Ｐｅｉｒｃｅ基準およびビジネスルール等である。信号の平均または中央値、および測定誤差が計算され得る。
【０２０９】
いくつかの実施形態において、上記方法は、前記試料中のＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合を決定することをさらに含む。
いくつかの実施形態において、前記標的会合の決定は、試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルとの間の比率を計算することを含む。
【０２１０】
いくつかの実施形態において、前記標的会合の決定は、試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルとの間の比率を計算することを含む。
いくつかの実施形態において、前記標的会合の決定は、比率Ａ／Ｂを計算することを含み、Ａは、試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルの比率であり、Ｂは、参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルの比率である。
【０２１１】
ＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合（ＴＥ）は、様々な様式で決定され得る。
第１の方法において、試料ＸにおけるＴＥ（ＴＥｘ）は、ＴＥＸ＝１−ＬＥＶＥＬＦｒｅｅ，Ｘ／ＬＥＶＥＬＴｏｔａｌ，Ｘとして計算することができ、式中、ＬＥＶＥＬＦｒｅｅ，Ｘは、試料Ｘ中の遊離ＫＤＭ１Ａのレベルであり、ＬＥＶＥＬＴｏｔａｌ，Ｘは、試料Ｘ中の全ＫＤＭ１Ａのレベルである。この計算方法は、遊離および全ＫＤＭ１Ａの検出効率が等しいという条件で使用され得る。
【０２１２】
したがって、本発明は、試料中のＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合を決定するための方法を提供し、前記標的会合は、試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルとの間の比率を１から差し引いたものとして決定され、１は、完全標的会合に対応し、０は、標的会合の非存在に対応する。
【０２１３】
第２の方法において、試料ＸにおけるＴＥ（ＴＥｘ）はまた、ＴＥＸ＝１−ＬＥＶＥＬＦｒｅｅ，Ｘ／ＬＥＶＥＬＦｒｅｅ，ＲＥＦとして計算することができ、式中、ＬＥＶＥＬＦｒｅｅ，Ｘは、試料Ｘ中の遊離ＫＤＭ１Ａのレベルであり、ＬＥＶＥＬＦｒｅｅ，ＲＥＦは、参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａのレベルである。この方法は、試料Ｘおよび参照試料中に存在する全ＫＤＭ１Ａの量が同じであるという条件、ならびに試料Ｘおよび参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａの検出効率が同じであるという条件で使用され得る。
【０２１４】
したがって、本発明は、試料中のＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合を決定するための方法を提供し、前記標的会合は、試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルとの間の比率を１から差し引いたものとして決定され、１は、完全標的会合に対応し、０は、標的会合の非存在に対応する。
【０２１５】
第３の方法において、試料ＸにおけるＴＥはまた、ＴＥＸ＝１−（ＲＸ／ＲＲＥＦ）として計算することができ、式中、
ＲＸ＝ＬＥＶＥＬＦｒｅｅ，Ｘ／ＬＥＶＥＬＴｏｔａｌ，Ｘであり、ＲＲＥＦ＝ＬＥＶＥＬＦｒｅｅ，ＲＥＦ／ＬＥＶＥＬＴｏｔａｌ，ＲＥＦであり、
ＬＥＶＥＬＦｒｅｅ，Ｘは、試料Ｘ中の遊離ＫＤＭ１Ａのレベルであり、ＬＥＶＥＬＴｏｔａｌ，Ｘは、試料Ｘ中の全ＫＤＭ１Ａのレベルであり、ＬＥＶＥＬＦｒｅｅ，ＲＥＦは、参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａのレベルであり、ＬＥＶＥＬＴｏｔａｌ，ＲＥＦは、参照試料中の全ＫＤＭ１Ａのレベルである。
【０２１６】
これは、ＴＥＸ＝１−（ＲＦｒｅｅ／ＲＴｏｔａｌ）を使用したＴＥの計算と同等であり、式中、
ＲＦｒｅｅ＝ＬＥＶＥＬＦｒｅｅ，Ｘ／ＬＥＶＥＬＦｒｅｅ，ＲＥＦであり、ＲＴｏｔａｌ＝ＬＥＶＥＬＴｏｔａｌ，Ｘ／ＬＥＶＥＬＴｏｔａｌ，ＲＥＦである。
【０２１７】
この計算法の利点は、遊離および全ＫＤＭ１Ａの検出効率が等しい必要がなく、またアッセイ毎に同じ量の全ＫＤＭ１Ａが使用される必要がないことであり、これにより手順が迅速化される。式は、試料Ｘおよび参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａの検出効率が同じであると仮定され得る場合、ならびに全ＫＤＭ１Ａの検出効率が試料Ｘおよび参照試料において同じであると仮定され得る場合に適用され得る。これは、通常、両方の試料が同じ性質である場合、例えば特定の組織または細胞型の抽出物である場合に該当する。
【０２１８】
したがって、本発明は、試料中のＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合を決定するための方法を提供し、前記標的会合は、比率ＲＸ／ＲＲＥＦを１から差し引いたものとして決定され、ＲＸは、試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルの比率であり、ＲＲＥＦは、参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルの比率であり、１は、完全標的会合に対応し、０は、標的会合の非存在に対応する。
【０２１９】
いずれの場合も、上記方法に従って計算される標的会合は、何分の１かで、または％で表現され得、例えば、
ＴＥＸ（％）＝１００−（（ＲＸ（％）／ＲＲＥＦ（％））×１００）であり、式中、ＲＸ（％）＝（ＬＥＶＥＬＦｒｅｅ，Ｘ／ＬＥＶＥＬＴｏｔａｌ，Ｘ）×１００であり、ＲＲＥＦ（％）＝（ＬＥＶＥＬＦｒｅｅ，ＲＥＦ／ＬＥＶＥＬＴｏｔａｌ，ＲＥＦ）×１００である。
【０２２０】
したがって、本発明は、試料中のＫＤＭ１Ａの阻害剤の標的会合をｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定するための方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）ＫＤＭ１Ａを本発明の化学プローブに接触させる、または曝露するステップと；
（ｉｉ）前記試料において前記化学プローブを使用して遊離ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップと；
（ｉｉｉ）参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップと；
（ｉｖ）試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルとの間の比率を計算するステップと；
（ｖ）ステップ（ｉｖ）において計算された比率を１から差し引いたものとして標的会合を決定するステップと
を含む。
【０２２１】
いくつかの実施形態において、方法は、試料を前記化学プローブに接触させる、または曝露するステップを含む。
別の態様において、本発明は、試料中のＫＤＭ１Ａの阻害剤の標的会合をｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定するための方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）ＫＤＭ１Ａを本発明の化学プローブに接触させる、または曝露するステップと；
（ｉｉ）前記試料において前記化学プローブを使用して遊離ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップと；
（ｉｉｉ）前記試料中の全ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップと；
（ｉｖ）試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルとの間の比率を計算するステップと；
（ｖ）ステップ（ｉｖ）において計算された比率を１から差し引いたものとして標的会合を決定するステップと
を含む。
【０２２２】
いくつかの実施形態において、方法は、試料を前記化学プローブに接触させる、または曝露するステップを含む。
別の態様において、本発明は、試料中のＫＤＭ１Ａの阻害剤の標的会合をｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定するための方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）ＫＤＭ１Ａを本発明の化学プローブに接触させる、または曝露するステップと；
（ｉｉ）前記試料において前記化学プローブを使用して遊離ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップと；
（ｉｉｉ）前記試料中の全ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップと；
（ｉｖ）参照試料において前記化学プローブを使用して遊離ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップと；
（ｖ）前記参照試料中の全ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップと；
（ｖｉ）比率Ａ／Ｂを計算するステップであって、Ａは、試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルの比率であり、Ｂは、参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルの比率であるステップと；
（ｖｉｉ）ステップ（ｖｉ）において計算された比率を１から差し引いたものとして標的会合を決定するステップと
を含む。
【０２２３】
いくつかの実施形態において、方法は、試料を前記化学プローブに接触させる、または曝露するステップを含む。
いくつかの実施形態において、試料は、ＫＤＭ１Ａ阻害剤にｉｎ  ｖｉｔｒｏで曝露または接触されている。
【０２２４】
いくつかの実施形態において、試料は、ＫＤＭ１Ａ阻害剤が投与された対象から得られる。
上記方法のステップ（ｉ）において、ＫＤＭ１Ａは、本発明の化学プローブに接触される、または曝露される。本明細書に記載のような式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）の任意の化合物が、上記方法における化学プローブとして使用され得る。添付の実施例において、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）（式中、Ｐは、ビオチンである）の化学プローブが使用されているが、式（Ｉ）（または式ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩもしくはＩＩＩａ）の他の異なるタグ付け／標識化ＫＤＭ１Ａ化学プローブ（ビオチンは、式（Ｉ）の化合物に関連して上で定義されたような別のタグまたは標識Ｐで置き換えられている）が使用されてもよい。上記のタグおよび標識という表題のセクションにおいて、ビオチンの代わりに本発明の化学プローブにおいて使用され得るタグおよび標識の例が言及されている。同様に、実施例において説明されているような化学プローブにおいて示されるもの以外の異なるＫＤＭ１Ａ阻害剤基Ｚを含有する他の化学プローブが使用されてもよい。好ましくは、Ｚは、不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤の基であるべきである。ＫＤＭ１Ａ化学プローブを調製するために使用され得るＫＤＭ１Ａ阻害剤の例は、上記のＫＤＭ１Ａ化学プローブのセクションにおいて開示されている。ＫＤＭ１Ａ阻害剤の追加的な例は、以下のＫＤＭ１Ａ阻害剤のセクションにおいて議論されており、それらもまた、ＫＤＭ１Ａ化学プローブを生成するために使用され得る。得られるＫＤＭ１Ａ化学プローブは、上で議論されたように、本発明の方法における使用のための他の標的に比べて、適切なＫＤＭ１Ａ阻害効力および選択性を示すべきである。
【０２２５】
ＫＤＭ１Ａを化学プローブに接触させる、または曝露する前記ステップは、試料（ＫＤＭ１Ａを含有する）を化学プローブにｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触または曝露することにより、例えば化学プローブの存在下で試料を溶解することにより行われてもよい。
【０２２６】
上記方法のステップ（ｉ）において使用されるような前記試料は、ＫＤＭ１Ａ阻害剤にｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触または曝露された試料であってもよく、例えば、ヒト細胞培養物等の細胞培養物が、前記ＫＤＭ１Ａ阻害剤にｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触もしくは曝露されるか、または、対象から得られた組織、器官もしくは血液試料が、前記ＫＤＭ１Ａ阻害剤にｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触もしくは曝露される。試料はまた、ＫＤＭ１Ａ阻害剤が投与された対象（例えばヒトまたは動物）から得られる試料であってもよい。試料は、例えば、末梢試料（例えば、血液から単離されたＰＢＭＣ）、生検試料、抽出組織、抽出腫瘍等であってもよい。
【０２２７】
上記方法のステップ（ｉｉ）において、前記試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルは、本発明の前記化学プローブを使用して決定される。実施例において例示されるように、遊離ＫＤＭ１Ａレベルは、遊離ＫＤＭ１Ａを捕捉するためにビオチンタグ（Ｐ基として）を含有する式（Ｉ）（またはＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩもしくはＩＩＩａ）の化学プローブを使用したＫＤＭ１Ａ化学プローブベースＥＬＩＳＡアッセイを使用して、および発光または比色等の異なる検出技術を使用して決定され得る。しかしながら、ＫＤＭ１Ａ化学プローブを使用して本発明に従い遊離ＫＤＭ１Ａレベルを決定するために使用される方法は、実施例において説明される特定の実施形態に限定されず、当業者に明らかなように、遊離ＫＤＭ１Ａレベルを決定するための他の方法が使用されてもよい。例えば、化学プローブならびに／または他の好適な捕捉剤（例えば上記の捕捉剤のセクションにおいて説明される通り）ならびに／または他の検出方法（例えば上記の検出剤および検出系のセクションにおいて説明される通り）において、他のＰタグまたは標識を使用することができる。
【０２２８】
上記方法のいくつかは、試料中の全ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップを含む。実施例において例示されるように、全ＫＤＭ１Ａレベルは、２種の異なる抗ＫＤＭ１Ａ抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ（または対応するＡｌｐｈａＬＩＳＡアッセイ）を使用して決定され得る。ＥＬＩＳＡ技術プラットフォームは研究所および臨床分析機関において広く使用されているため、例えば実施例において説明されるもの等のＥＬＩＳＡベースの方法が有利であるが、当業者に明らかなように、試料中に存在するＫＤＭ１Ａタンパク質の総量を決定するための代替の方法、例えば上で検出剤および検出系のセクションにおいて概説された方法が使用されてもよい。
【０２２９】
上記方法のいくつかは、参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａまたは全ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップを含む。上で定義されたように、参照試料は、試験されている試料に対する標準として役立つように選択される任意の組織、細胞、タンパク質抽出物、組換えタンパク質であってもよい。参照試料、または参照試料が採取された対象は、ビヒクルで処理されていてもよく、ＫＤＭ１Ａ阻害剤での処理前の同じ対象から採取されていてもよく、またはＫＤＭ１Ａ阻害剤の効果が完全に停止した際に同じ対象から採取されていてもよい。前記参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルおよび全ＫＤＭ１Ａレベルは、それぞれ、試験されている試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルおよび全ＫＤＭ１Ａレベルを決定するための方法と同じ方法を使用して決定され得る。
【０２３０】
このようにして決定された、試料および／または参照試料中の遊離および／または全ＫＤＭ１Ａレベルは、次いで、上で定義されたような比率を計算するために使用され得、これは次いで上述のような標的会合を決定するために使用される。上記方法に従って計算された標的会合は、次いで、何分の１かで、または％で表現され得る。
【０２３１】
例えば、実施例７において例示されるように、ＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合は、以下のように決定され得る：ＫＤＭ１Ａ阻害剤（例えばＯＲＹ−１００１）またはビヒクル（参照試料として使用される）で処理された細胞（例えばＭＶ（４；１１））の試料が、本発明の化学プローブ（例えば実施例１．６）の存在下で溶解され、実施例７．１において説明されるようにタンパク質抽出物が得られ、それにより、上記ステップ（ｉ）に列挙されるようにＫＤＭ１Ａ（前記細胞試料中に存在する）が前記化学プローブに接触または曝露され；実施例７．３において説明されるように、遊離ＫＤＭ１Ａのレベルが、実施例５．２において説明される化学プローブベースＥＬＩＳＡアッセイを使用して、ＫＤＭ１Ａに結合した化学プローブを含有する前記タンパク質抽出物において測定され得、したがって、上記ステップ（ｉｉ）に列挙されるように前記試料において前記化学プローブを使用して遊離ＫＤＭ１Ａのレベルが決定され；実施例７．３において説明されるように、全ＫＤＭ１Ａのレベルが、実施例５.２において説明されるサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを使用して、同じタンパク質抽出物において測定され得、したがって、上記ステップ（ｉｉｉ）に列挙されるように前記試料中の全ＫＤＭ１Ａのレベルが決定され；参照試料として上述のビヒクルで処理された細胞の試料を使用して同じ手順に従い、前記参照試料中の遊離および全ＫＤＭ１Ａレベルが測定され得、したがって、上記ステップ（ｉｖ）に列挙されるように前記参照試料において前記化学プローブを使用して遊離ＫＤＭ１Ａのレベルが決定され、またステップ（ｖ）に列挙されるように前記参照試料中の全ＫＤＭ１Ａのレベルが決定され；ＯＲＹ−１００１で処理された細胞の試料および（ビヒクルのみで処理された）参照試料中の遊離および全ＫＤＭ１Ａレベルの得られた値は、次いで、実施例７．２および７．３において説明されるように、上記ステップ（ｖｉ）においてＡに対応する試料（実施例７．２において試料Ｘとして示される）中の遊離ＫＤＭ１Ａ／全ＫＤＭ１Ａレベルの比率、および上記ステップ（ｖｉ）においてＢに対応する参照試料（実施例７．２において試料ＲＥＦとして示される）中の遊離ＫＤＭ１Ａ／全ＫＤＭ１Ａレベルの比率を計算するために、また最後に上記ステップ（ｖｉ）において列挙されるように比率Ａ／Ｂを計算するために使用され得、次いで、実施例７．２において概説されるように標的会合が計算され得、試料における標的会合（実施例７．２においてＴＥｘとして示される）は１−Ａ／Ｂに対応し、したがって、上記ステップ（ｖｉｉ）に列挙されるように、ステップ（ｖｉ）において計算された比率を１から差し引いたものとして標的会合が決定される。標的会合は、上でより詳細に説明されたように、何分の１かで、または％で表現され得る。
【０２３２】
実施例において例示されるように、ＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合は、ヒト試料を含むある範囲の試料の種類において上記方法に従って決定され得る。例えば、ＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合は、実施例７において示されるように、ＫＤＭ１Ａ阻害剤で処理された細胞株において、特にＭＶ（４；１１）白血病細胞（実施例７．３ならびに図７および８Ａを参照されたい）、ならびにＴＨＰ−１白血病細胞（実施例７．３および図８Ｂを参照されたい）およびＬＮＣａｐ前立腺がん細胞（実施例７．３および図８Ｃを参照されたい）を含む他の細胞株において決定され得る。
【０２３３】
実施例において例示されるように、本発明の方法はまた、単回または反復用量のＫＤＭ１Ａ阻害剤をｉｎ  ｖｉｖｏで投与された動物から採取された試料における標的会合を決定するために使用され得る。実施例８において例示されるように、ＫＤＭ１Ａ阻害剤（例えばＯＲＹ−１００１）の標的会合は、実施例８．３ならびに図９Ａおよび９Ｂにおいてより詳細に説明されるように、増加容量のＫＤＭ１Ａ阻害剤またはビヒクルで処理された対象（例えばラット）からの末梢試料（例えばＰＢＭＣ）および組織（例えば肺）試料において決定され得る。実施例８は、さらに、脳試料等のさらなる組織試料において標的会合が決定され得ることを示しており、特に、標的会合は、実施例８．３および図９Ｃにおいて説明されるように、化合物Ｃ（実施例８においてさらに説明されるように脳内の血液脳関門を通過する化合物）として指定されたＫＤＭ１Ａ阻害剤で処理されたＳＡＭＰ８マウス（実験的アルツハイマー病モデル）からの脳試料において決定された。
【０２３４】
添付の実施例において例示されるように、本発明の方法はまた、ヒト試料におけるＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合を決定するために使用され得る。特に、実施例９は、ＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合が、臨床試験に参加しているヒトからの末梢試料（ＰＢＭＣ）において決定され得ることを示している。実施例９においてより詳細に説明されるように、化合物Ｃで指定されたＫＤＭ１Ａ阻害剤による第Ｉ相臨床試験（その主目的は、化合物Ｃの安全性、耐容性および薬物動態を決定することである）の一環として、健常ボランティアのコホートが、単回用量の化合物Ｃまたはプラセボを投与された。異なる時点で各ボランティアから試料が採取され、前記試料中の遊離および全ＫＤＭ１Ａレベルが決定され、実施例７．２において説明される方法に従って化合物Ｃの標的会合を計算するために使用された。
【０２３５】
本明細書に記載のＫＤＭ１Ａ化学プローブおよび方法は、実施例においてより詳細に説明されるように、ＯＲＹ−１００１および他のＫＤＭ１Ａ阻害剤による標的会合を評価するために適用されており、他のＫＤＭ１Ａ阻害剤、例えば以下の「ＫＤＭ１Ａ阻害剤」のセクションにおいて開示される化合物による標的会合を評価するために容易に使用され得る。残留する未結合ＫＤＭ１Ａ阻害剤ではなくＫＤＭ１Ａ化学プローブが遊離ＫＤＭ１Ａ酵素を占有することを確実にするために、優先的には、化学プローブのＩＣ５０は、ＫＤＭ１Ａ阻害剤のＩＣ５０の最大１０倍であるべきであり、化学プローブは過剰に添加されるべきである。
【０２３６】
いくつかの実施形態において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤である。いくつかの実施形態において、不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、ＦＡＤ補因子への共有結合によりＫＤＭ１Ａを阻害する。いくつかの実施形態において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン、または（−）５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミンである。いくつかの他の実施形態において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、４−（（４−（（（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル）アミノ）メチル）ピペリジン−１−イル）メチル）安息香酸、またはその塩である。
【０２３７】
ＫＤＭ１Ａの酵素活性をブロックする可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤によるＫＤＭ１Ａ標的会合もまた評価され得る。この場合、分析手順の間に化学プローブが可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤に置き換わるのを回避するために、適切な結合反応速度を有するより強力でないＫＤＭ１Ａ化学プローブが好ましくなり得る。代替として、またはこの手法と組み合わせて、分析手順の間の化学プローブ結合反応は、選択された時点で過剰のＯＲＹ−１００１等の強力な不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤を添加することにより停止されてもよい。
【０２３８】
いくつかの実施形態において、上記方法では、遊離ＫＤＭ１Ａを捕捉または検出するために化学プローブが使用される。
いくつかの実施形態において、本発明の化学プローブ中、Ｐはタグであり、化学プローブは、タグに対する好適な捕捉または検出剤により捕捉または検出される。捕捉および／または検出剤の性質は、使用されるタグに依存する。タグおよび対応する捕捉または検出剤の例は、「タグおよび標識」のセクションでより詳細に説明されている。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、遊離ＫＤＭ１Ａのレベルの決定は、ＫＤＭ１Ａのエピトープに特異的な抗体の使用を含む。
いくつかの実施形態において、全ＫＤＭ１Ａのレベルの決定は、全ＫＤＭ１Ａを捕捉または検出するための、ＫＤＭ１Ａのエピトープに特異的な第１の抗体の使用を含む。いくつかの実施形態において、全ＫＤＭ１Ａのレベルの決定は、全ＫＤＭ１Ａを捕捉または検出するための、ＫＤＭ１Ａのエピトープに特異的な第２の抗体の使用を含み、前記第２の抗体の前記エピトープは、第１の抗体の前記エピトープとは異なる。
【０２４０】
いくつかの実施形態において、上記方法は、化学プローブ中のタグを捕捉または検出するため、および遊離ＫＤＭ１Ａの前記レベルを決定するためのタンパク質の使用を含む。使用され得るタンパク質は、「タグおよび標識」のセクションにおいて詳細に説明されている。一実施形態において、そのようなタンパク質は、ストレプトアビジンである。
【０２４１】
上記方法において使用するための検出および捕捉剤を選択する際、ＫＤＭ１Ａ上の標的エピトープに対する抗体のいずれかの結合、またはＫＤＭ１Ａ結合化学プローブ中のタグに対するタンパク質の結合が、ＫＤＭ１Ａ上の標的エピトープに結合する残りの抗体の能力、またはＫＤＭ１Ａ結合化学プローブに結合するタンパク質の能力に干渉しないことが望ましい。
【０２４２】
抗体
本発明の上記方法において使用される抗体の選択基準は、本発明の方法と共に使用するために選択される検出技術に依存する。考慮されるべき要因は、特異性、親和性、近接性および立体障害性を含み、これは、抗体またはプローブの結合の相互干渉の可能性、およびそれを含有するタンパク質複合体内の天然酵素を認識する抗体の可能性を含む。
【０２４３】
上記方法と組み合わせた使用に好適な抗体の対は、ＫＤＭ１ＡのＮ末端領域に位置するエピトープに対する抗体、およびＫＤＭ１ＡのＣ末端領域に位置するエピトープに対する抗体を含む。一実施形態において、抗体の対は、以下で定義されるようなｍＡｂ−８２５およびｍＡｂ−８４４である。
【０２４４】
抗体の一方は以下で定義されるようなエピトープＥＰ１に対するものであり、他方の抗体は以下で定義されるようなエピトープＥＰ２に結合する。
ｍＡｂ−８２５：
ヒトＫＤＭ１Ａ配列（ＵＮＩＰＲＯＴ  ＩＤ  Ｏ６０３４１−１）のプロリン６０（Ｐ６０）に近接するＮ末端領域に位置し、ペプチド＃ＬＳＤ１  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｐｅｐｔｉｄｅ−２１８４特異性（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）によりブロックされる、本明細書においてＥＰ１と指定されるエピトープを標的化するウサギＮ末端ｍＡｂ−ＫＤＭ１Ａ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃２１８４）。
【０２４５】
ｍＡｂ−８４４：
マウスＣ末端ｍＡｂ−ＫＤＭ１Ａ（Ａｂｃａｍ  ＃ａｂ５３２６９）。この抗体は、Ｃ末端領域に位置し、ヒトＫＤＭ１ＡのＡＡ８３２〜８４７に対応するＡＭＹＴＬＰＲＱＡＴＰＧＶＰＡＱを含む、本明細書においてＥＰ２と指定されるエピトープを標的化する。
【０２４６】
抗体は両方とも、少なくともヒト、ラットおよびマウスＫＤＭ１Ａタンパク質を認識する。
エピトープＥＰ１およびＥＰ２を認識するＫＤＭ１Ａに対するさらなる抗体は、当技術分野において知られている方法によって容易に開発され得る。特に、これらのエピトープに結合する抗体は、本明細書に記載の抗体と競合する、または上述のペプチドによりブロックされる能力によって特定され得る。上記エピトープＥＰ１およびＥＰ２に含まれる配列は、ヒト、ラットおよびマウスを含む異なる種におけるＫＤＭ１Ａタンパク質中の高度保存領域に対応する。
【０２４７】
いくつかの実施形態において、本発明の方法では、前記抗体の一方はエピトープＥＰ１を標的化し、ＥＰ１は、ヒトＫＤＭ１Ａ配列（ＵＮＩＰＲＯＴ  ＩＤ  Ｏ６０３４１−１）のプロリン６０（Ｐ６０）に近接するＮ末端領域に位置し、ペプチド＃ＬＳＤ１  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｐｅｐｔｉｄｅ−２１８４特異性（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）によりブロックされる。いくつかの実施形態において、前記抗体の他方はエピトープＥＰ２を標的化し、ＥＰ２は、Ｃ末端領域に位置し、ヒトＫＤＭ１ＡのＡＡ８３２〜８４７に対応するＡＭＹＴＬＰＲＱＡＴＰＧＶＰＡＱを含む。
【０２４８】
本明細書において開示される試験法および標的会合アッセイにおいて使用されるＫＤＭ１Ａは、好ましくは、とりわけ配列番号１および対応するＵＮＩＰＲＯＴ番号で提供されるようなヒトＫＤＭ１Ａである。また、ＫＤＭ１Ａアイソフォームまたは差異的スプライス形態、および本明細書に記載され配列番号１に示されるヒトＫＤＭ１Ａ配列の天然または人工変異体、特に他の種（例えば、添付の実施例において示されるように、ラット、マウス）における機能的相同体およびその相同分子種も、本発明の試験法および標的会合アッセイにおいて使用され得る。接触または曝露されるＫＤＭ１Ａは、発現タンパク質であり、これは、例えば生物学的試料において天然に発現されてもよく、または組換えにより発現されてもよい。
【０２４９】
いくつかの実施形態において、本発明の方法では、抗体は、ｍＡｂ−８４４およびｍＡｂ−８２５であり、ＫＤＭ１Ａ化学プローブ中のタグＰは、ビオチンであり、化学プローブを捕捉するために使用されるタンパク質は、ストレプトアビジンである。
【０２５０】
いくつかの実施形態において、本発明の方法では、全ＫＤＭ１Ａのレベルは、サンドイッチＥＬＩＳＡにより決定され、遊離ＫＤＭ１Ａのレベルは、ＫＤＭ１Ａ化学プローブ捕捉ＥＬＩＳＡにより決定される。この方法の概略図を図３に示す。代替として、全ＫＤＭ１Ａのレベルは、ＡｌｐｈａＬＩＳＡにより決定されてもよく、遊離ＫＤＭ１Ａのレベルは、ＫＤＭ１Ａ化学プローブ捕捉ＡｌｐｈａＬＩＳＡにより決定されてもよい。いくつかの実施形態において、実行される遊離および全ＫＤＭ１Ａのレベルの決定は、同じ試料において多重化されてもよい。
【０２５１】
いくつかの実施形態において、ＥＬＩＳＡは、化学発光検出を使用する。
本発明は、一般的および／または好ましい特徴／実施形態の任意の組合せを含む、上述の特徴または実施形態のありとあらゆる組合せに具体的に関連することを理解されたい。特に、本発明は、上で開示される方法の好ましい特徴／実施形態（好ましさの全ての度合いを含む）の全ての組合せに具体的に関連する。
【０２５２】
本発明の化学プローブの他の用途
本明細書に記載のＫＤＭ１Ａ化学プローブはまた、例えば固定透過処理された細胞または組織に対する化学組織化学（ｃｈｅｍｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ＣＨＣ）、化学蛍光またはフローサイトメトリーを使用した、遊離ＫＤＭ１Ａの空間分布の分析にも使用され得る。概念は免疫組織化学（ＩＨＣ）と同様であり、化学プローブを細胞または組織試料に接触させ、組み込まれたタグまたは標識により化学プローブの空間分布を可視化することを含む。
【０２５３】
したがって、本発明は、試料中の遊離ＫＤＭ１Ａの空間分布をｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定するための方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）ＫＤＭ１Ａを本発明の化学プローブに接触させる、または曝露するステップと；
（ｉｉ）化学プローブの検出により、前記試料中の前記遊離ＫＤＭ１Ａの空間分布を可視化するステップと
を含む。
【０２５４】
化学プローブを使用したＫＤＭ１Ａの検出は、タンパク質の場所に関する情報を提供するだけでなく、タンパク質が活性であるかどうかに関する情報も提供する。
ＫＤＭ１Ａ結合化学プローブの検出による試料中の遊離ＫＤＭ１Ａの空間分布の分析は、標識（上述の通り）が化学プローブに組み込まれる場合直接的となり得、または、タグ（上述の通り）が組み込まれる場合間接的となり得るが、タグは一方で、標識を組み込んだ薬剤、または前述のように検出剤もしくは検出系を使用して検出され得る信号を生成する任意の他の実体により検出され得る。
【０２５５】
試料が得られる細胞、組織または生物は、処理されていなくてもよく、またはＫＤＭ１Ａ阻害剤に曝露されていてもよいが、この場合、本明細書に記載のＫＤＭ１Ａ化学プローブベースの方法は、遊離ＫＤＭ１Ａの空間分布、ひいては標的会合の空間分布を評価するために使用され得る。ＫＤＭ１Ａ化学プローブを使用した遊離ＫＤＭ１Ａの空間分布は、細胞型特異的マーカーによる蛍光支援細胞分類（ＦＡＣＳ）を使用して分類された細胞において評価され得る。細胞型特異的マーカーは、例えばＴＨＰ−１  ＡＭＬ細胞におけるＣＤ１１ｂの誘引等、ＫＤＭ１Ａの阻害により誘引されることが知られている細胞表面マーカーを含み得、個々の細胞レベルで標的阻害の程度および分化の誘引の相間に関する情報を提供し得る。
【０２５６】
細胞成分の分離を達成するために分画に供された試料を使用して、遊離ＫＤＭ１Ａの細胞内局在性が分析され得る。
空間分布はまた、試料の構造的完全性を保存する試料においても評価され得、例えば、ＫＤＭ１Ａ  ＣＨＣ法は組織切片に対して実行されてもよく、さらにこれは、従来のＩＨＣと組み合わされてもよく、これによって、細胞または組織試料中の遊離および全ＫＤＭ１Ａタンパク質の空間分布の評価が可能となる。ＫＤＭ１Ａ  ＣＨＣ法はまた、例えばＫＤＭ１Ａ標的会合の後に上方制御されると予測されるタンパク質を検出するために、他のタンパク質に対するＩＨＣと組み合わされてもよく、標的会合およびその下流効果の同時検出が可能となる。
【０２５７】
さらに、本明細書に記載の化学プローブは、ＫＤＭ１Ａ含有複合体の単離に好適である。
したがって、本発明は、ＫＤＭ１Ａの相互作用因子をｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定するための方法に関し、前記方法は、
（ｉ）試料を本発明による化学プローブ（例えば添付の特許請求の範囲の化学プローブ）に接触させる、または曝露するステップと；
（ｉｉ）化学プローブ結合ＫＤＭ１Ａ含有複合体を単離するステップと；
（ｉｉｉ）ＫＤＭ１Ａの前記相互作用因子を特定するステップであって、前記相互作用因子は、核酸および／またはポリペプチドであるステップと
を含む。
【０２５８】
ＫＤＭ１Ａ含有複合体中のタンパク質パートナーを同定するために、細胞は、タンパク質複合体を破壊しない「穏やかな」条件で溶解され、また捕捉剤が結合し、ＫＤＭ１Ａ含有複合体を「化学的に沈殿」させるために使用され得るタグを含有するＫＤＭ１Ａ化学プローブに接触される。このようにして得られた「化学的沈殿物」は、ウェスタンブロット分析による相互作用タンパク質の同定、抗体アレイを使用したマイクロアレイ分析、または質量分析を含む、当技術分野において知られているタンパク質分析法に供される。捕捉剤へのタンパク質の非特異的結合により生成される偽陽性を最小限にするために、過剰のＫＤＭ１Ａ阻害剤に曝露された陰性対照試料が含まれてもよく、このようにして化学プローブがＫＤＭ１Ａ複合体に結合する可能性がブロックされる。
【０２５９】
同様にして、本明細書に記載のＫＤＭ１Ａ化学プローブは、ゲノム内のＫＤＭ１Ａ標的領域を単離するために使用されてもよい。ＫＤＭ１Ａは、転写リプレッサーによりゲノム内の特定部位（部位は、異なる細胞型および異なる条件下で変動する）に動員される。ヌクレオソームを含むＤＮＡ−タンパク質複合体は、架橋およびクロマチンの消化により標的細胞の核から単離され得る。ＫＤＭ１Ａに会合したＤＮＡは、本明細書に記載のようなＫＤＭ１Ａ化学プローブによる化学的沈殿によって単離され得、ゲノム内の選択されたＫＤＭ１Ａ標的領域が、定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を使用して特定され得、または、ＫＤＭ１Ａ標的領域が、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）とカップルしたクロマチン化学プローブ沈殿により、またはタイリングＤＮＡマイクロアレイを使用してゲノム規模で分析され得る。本明細書に記載のクロマチン化学プローブ沈殿技術に対するＫＤＭ１Ａ化学プローブの利点は、厳密な洗浄手順および高い特異性を可能にする、それらの結合の不可逆的性質である。
【０２６０】
ＫＤＭ１Ａ化学プローブの調製
本発明の化学プローブは、標準化学を含む様々な方法により作製され得る。例示的な一般的合成法を以下に示し、次いで、本発明の特定の化合物の調製を、実施形態のセクションにおいてより詳細に説明する。
【０２６１】
当業者に明らかなように、所与の化合物を調製するために使用される厳密な方法は、その化学構造に依存して変動し得る。さらに、以下に記載のプロセスのいくつかにおいて、従来の保護基により反応性または不安定な基を保護することが必要または望ましくなり得る。これらの保護基の性質、およびその導入または除去のための手順の両方が、当技術分野において周知である（例えば、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｔ．Ｗ．およびＷｕｔｓ  Ｐ．Ｇ．Ｍ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、第３版、１９９９年を参照されたい）。例えば、アミノ官能基の保護基として、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基が使用され得る。保護基が存在する場合はいつでも、その後の脱保護ステップが必要となり、これは、上述の参考文献において説明されているように、有機合成における標準条件下で行うことができる。別段に指定されない限り、後述の方法において、異なる置換基の意味は、式Ｉの化合物に関連して上述された意味である。
【０２６２】
【化３５】
2019512546.tif 000041
【０２６３】
例えば、式Ｉの化合物は、ＰをＬ−Ｚに、または代替としてＺをＰ−Ｌにカップリングさせることにより調製され得、両方の部分が便利にも官能化されている。カップリング反応の例は、これらに限定されないが、標準条件における任意選択で塩基の存在下での活性化酸またはアシルハライドからのエステル、アミドの形成；標準条件における任意選択で塩基の存在下でのアミンとスルホニルハライドとの反応によるスルホンアミドの形成；標準条件における第１級もしくは第２級アミンのアルキル化剤での置換による、または還元アミノ化、すなわちシアノ水素化ホウ素ナトリウムもしくはナトリウムトリアセトキシボロヒドリド等の還元剤の存在下でのアルデヒドもしくはケトンでの処理によるアミンの形成；標準条件におけるイソシアネート、チオイソシアネートおよびクロロホルメートからのカルバメート、尿素またはチオ尿素の形成；標準条件におけるアルキル化剤との反応によるアルコールおよびチオールのアルキル化によるエーテルおよびチオエーテルの形成を含む。
【０２６４】
Ｐの結合に使用され得る試薬の例は、中でも、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４０５カルボン酸、スクシンイミジルエステル；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４０５カルボン酸、スクシンイミジルエステル；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８  カルボン酸、スクシンイミジルエステル；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８  カルボン酸、２，３，５，６−テトラフルオロフェニルエステル；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８  ５−ＳＤＰエステル；３−アミノ−３−デオキシジゴキシゲニンヘミスクシンアミド、スクシンイミジルエステル；Ｎ−（２−アミノエチル）ビオチンアミド、臭化水素酸塩；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４０５カダベリン、三ナトリウム塩；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８カダベリン、ナトリウム塩；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５５５カダベリン、二ナトリウム塩；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５６８カダベリン、二アンモニウム塩；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５９４カダベリン、５−（アミノアセトアミド）フルオレセイン（フルオレセイニルグリシンアミド）；５−（（２−アミノエチル）アミノ）ナフタレン−１−スルホン酸、ナトリウム塩；７−アミノ−４−メチルクマリン；４’−（アミノメチル）フルオレセイン、塩酸塩；５−（アミノメチル）フルオレセイン、塩酸塩；５−（および−６）−（（Ｎ−（５−アミノペンチル）アミノ）カルボニル）テトラメチルローダミン；Ｎ−（５−アミノペンチル）−４−アミノ−３，６−ジスルホ−１，８−ナフタルイミド、二カリウム塩；５−（（５−アミノペンチル）チオウレイジル）フルオレセイン、二臭化水素酸塩；Ｎ−（５−アミノペンチル）ビオチンアミド、トリフルオロ酢酸塩；ビマンアミン；８−ブロモメチル−４，４−ジフルオロ−１，３，５，７−テトラメチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン；６−ブロモアセチル−２−ジメチルアミノナフタレン；５−（ブロモメチル）フルオレセイン；ビオシチン；ビオシチンヒドラジド；６−（（ビオチノイル）アミノ）ヘキサン酸、スクシンイミジルエステル；６−（（ビオチノイル）アミノ）ヘキサン酸、スルホスクシンイミジルエステル、ナトリウム塩；６−（（６−（（ビオチノイル）アミノ）ヘキサノイル）アミノ）ヘキサン酸、スクシンイミジルエステル；６−（（６−（（ビオチノイル）アミノ）ヘキサノイル）アミノ）ヘキサン酸、スルホスクシンイミジルエステル、ナトリウム塩；Ｎ−（ビオチノイル）−Ｎ’−（ヨードアセチル）エチレンジアミン；Ｄ−ビオチン、スクシンイミジルエステル；５−（（（Ｎ−（ビオチノイル）アミノ）ヘキサノイル）アミノ）ペンチルアミン、トリフルオロ酢酸塩；ビオチン−Ｘ  ２，４−ジニトロフェニル−Ｘ−Ｌ−リシン、スクシンイミジルエステル；ＢＯＤＩＰＹ（登録商標）ＦＬ、ＳＴＰエステル、ナトリウム塩；Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｌｕｅ（登録商標）アセチルアジド、三ナトリウム塩；６−（（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオニル）アミノ）ヘキサン酸、スクシンイミジルエステル；６−（（５−ジメチルアミノナフタレン−１−スルホニル）アミノ）ヘキサン酸、スクシンイミジルエステル；６−（２，４−ジニトロフェニル）アミノヘキサン酸、スクシンイミジルエステル；デスチオビオチン−Ｘ  Ｃ２−ヨードアセトアミド；５−ジメチルアミノナフタレン−１−（Ｎ−（２−アミノエチル））スルホンアミド；５−ジメチルアミノナフタレン−１−（Ｎ−（５−アミノペンチル））スルホンアミド；６−（フルオレセイン−５−（および−６）−カルボキサミド）ヘキサン酸、スクシンイミジルエステル；フルオレセイン−５−ＥＸ、スクシンイミジルエステル；ルシファーイエローヨードアセトアミド、二カリウム塩；リサミンローダミンＢエチレンジアミン；Ｎα−（３−マレイミジルプロピオニル）ビオシン；ノルビオチンアミン、塩酸塩；２−（２，３−ナフタルイミノ）エチルトリフルオロメタンスルホネート；Ｏ６１８５  Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ（登録商標）４８８−Ｘ、スクシンイミジルエステル＊６−異性体＊；ＱＳＹ（登録商標）７アミン、塩酸塩；Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｒｅｄ（商標）−Ｘ、スクシンイミジルエステル＊５−異性体＊；６−（テトラメチルローダミン−５−（および−６）−カルボキサミド）ヘキサン酸、スクシンイミジルエステル；Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ（登録商標）−Ｘ、スクシンイミジルエステル；ＴＳ−Ｌｉｎｋ（商標）デスチオビオチン−Ｘ  Ｃ５−チオサルフェート、ナトリウム塩；Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ（登録商標）カダベリンを含む。
【０２６５】
一般に、式ＩＩの化合物は、スキーム１において説明される方法により２つのステップで得ることができる。
【０２６６】
【化３６】
2019512546.tif 000042
【０２６７】
式中、Ｐ、Ｌ１、Ｘ１、Ｘ２、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ５、Ｒ６およびＤは、式ＩＩの化合物に関連して以前に説明された意味を有し；ＰＧは、アミン保護基、例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）等を表し；Ｘ１ａおよびＸ１ｂは、適切な変換反応によりＸ１を生成し得る−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃｌ、−ハロゲン、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＨＲ１、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ、−ＯＨ、−ＳＯ２Ｃｌ、−ＳＨ、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃｌとしての官能基を表す。
【０２６８】
第１のステップ（ステップａ）において、式ＩＩ−Ｂの化合物のＩＩ−Ｃへのカップリングにより式ＩＩ−Ａの化合物が調製され得、その両方の部分が、−Ｘ１−を
生成し得るＸ１ａおよびＸ１ｂとして便利な反応性官能基を有する。
【０２６９】
例えば、Ｘ１が−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−である場合、Ｘ１ａはカルボン酸（−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ）であり、Ｘ１ｂはアミノ基（−ＮＨＲ１）である、およびその逆であり、式ＩＩ−Ａの化合物は、活性化剤を用いて得ることができる。前記活性化剤の例は、中でも、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）、１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノ）カルボジイミド（ＥＤＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢｏｐ）、Ｏ−（１Ｈベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）である。反応は、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、トリエチルアミン、またはＮ−メチルモルホリン等の塩基の存在下、ジメトキシエタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジクロロメタンまたはジオキサン等の溶媒中で行うことができる。代替として、カルボン酸（Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ）は、混合無水物または酸塩化物として活性化され、次いで、水素化ナトリウム、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジンまたは同様のもの等の好適な塩基の存在下でアミド（−ＮＨＲ１）とカップリングされる。
【０２７０】
例えば、Ｘ１が−ＮＲ１−であり、Ｘ１ａがケトンまたはアルデヒド（−Ｃ（＝Ｏ）または−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ）であり、Ｘ１ｂがアミノ基（−ＮＨＲ１）である、およびその逆である場合、式ＩＩ−Ａの化合物は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムまたはナトリウムトリアセトキシボロヒドリド等の還元剤の存在下、ジオキサン、ＴＨＦ、ジクロロメタンまたはジエチルエーテル等の好適な溶媒中での還元アミノ化またはアルキル化を用いて得ることができる。代替として、Ｘ１が−ＮＲ１−であり、Ｘ１ａがアルキルハライド（−Ｘ）であり、Ｘ１ｂがアミノ基（−ＮＨＲ１）であり、またその逆である場合、式ＩＩ−Ａの化合物は、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、リン酸カリウムまたは同様のもの等の塩基の存在下でのアミンアルキル化を用いて得ることができる。他の好ましい溶媒は、ジオキサン、テトラヒドロフランおよびピリジンを含む。温度は、室温から１００℃まで変動し得る。
【０２７１】
例えば、Ｘ１が−ＳＯ２−ＮＲ１−または−ＳＯ２−ＮＲ１−であり、Ｘ１ａが塩化スルホニル（−ＳＯ２Ｃｌ）−）であり、Ｘ１ｂがアミノ基（−ＮＨＲ１）である、およびその逆である場合、式ＩＩ−Ａの化合物は、任意選択で４−ジメチルアミノピリジン等の塩基の存在下、ジオキサン、クロロホルム、ジクロロメタンまたはピリジン等の好適な溶媒中での両方の化合物の直接的反応を用いて得ることができる。
【０２７２】
例えば、Ｘ１が−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−または−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−であり、Ｘ１ａがクロロホルメート（−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃｌ）であり、Ｘ１ｂがアミノ基（−ＮＨＲ１）である、およびその逆である場合、式ＩＩ−Ａの化合物は、任意選択で４−ジメチルアミノピリジン等の塩基の存在下、ジオキサン、クロロホルム、ジクロロメタンまたはピリジン等の好適な溶媒中での両方の化合物の直接的反応を用いて得ることができる。
【０２７３】
例えば、Ｘ１が−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−または−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｘ１ａがカルボン酸（−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＨ）であり、Ｘ１ｂがアルコール基（−ＯＨ）である、およびその逆である場合、式ＩＩ−Ａの化合物は、活性化剤を用いて得ることができる。前記活性化剤の例は、中でも、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）、１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノ）カルボジイミド（ＥＤＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢｏｐ）、Ｏ−（１Ｈベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）である。反応は、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、トリエチルアミン、またはＮ−メチルモルホリン等の塩基の存在下、ジメトキシエタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジクロロメタンまたはジオキサン等の溶媒中で行うことができる。代替として、Ｘ１が−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−または−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｘ１ａがカルボン酸（−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＨ）であり、Ｘ１ｂがアルコール基（−ＯＨ）である、およびその逆である場合、式ＩＩ−Ａの化合物は、硫酸、塩化チオニル、ＴＭＳＣｌ、ｐＴＳＯＨ、ＨＣｌ、または塩化オキサリルとしての触媒量の酸の存在下でのフィッシャーエステル化により得ることができる。
【０２７４】
例えば、Ｘ１が−Ｏ−であり、Ｘ１ａがアルキルハライド（−Ｘ）であり、Ｘ１ｂがアルコール基（−ＯＨ）である、およびその逆である場合、式ＩＩ−Ａの化合物は、水素化ナトリウム、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の塩基、またはベンジルトリメチルアンモニウムクロリド、ベンジルトリエチルアンモニウムクロリド、メチルトリカプリルアンモニウムクロリド、メチルトリブチルアンモニウムクロリド、メチルトリオクチルアンモニウムクロリドもしくはヘキサデシルトリブチルホスホニウムブロミド等の相間移動触媒の存在下でのウィリアムソンエーテル合成により得ることができる。
【０２７５】
例えば、Ｘ１が−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−であり、Ｘ１ａがアルキルイソシアネート（−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ）であり、Ｘ１ｂがアミノ基（−ＮＨＲ１）である、およびその逆である場合、式ＩＩ−Ａの化合物は、ジオキサン、トルエン、またはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の好適な溶媒中での両方の化合物の直接的反応を用いて得ることができる。
【０２７６】
例えば、Ｘ１が−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−であり、Ｘ１ａがアルキルイソチオシアネート（−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ）であり、Ｘ１ｂがアミノ基（−ＮＨＲ１）である、およびその逆である場合、式ＩＩ−Ａの化合物は、ジオキサン、トルエン、またはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の好適な溶媒中での両方の化合物の直接的反応を用いて得ることができる。
【０２７７】
最後のステップ（ステップｂ）において、式ＩＩ−Ａの化合物の保護基は、文献中に説明されている標準条件下で開裂され、化合物ＩＩを生成する。例えば、ＢｏｃがＰＧとして使用される場合、開裂は、典型的には、室温で化合物ＩＩ−Ａを４Ｍジオキサン／ＨＣｌ（ｇ）混合物で処理することにより行われる。
【０２７８】
【化３７】
2019512546.tif 000043
【０２７９】
式ＩＩ−Ｂの化合物は、スキーム２に示されるように、鈴木カップリングに関する文献において報告されている条件下での、式ＩＩ−Ｅの化合物と式ＩＩ−Ｄの化合物との反応により得ることができる。例えば、反応は、Ｎａ２ＣＯ３、ＮａＯＨ、Ｃｓ２ＣＯ３、ＣｓＦまたはＢａ（ＯＨ）２等の塩基、およびＰｄ（ＰＰｈ３）４、Ｐｄ２（ｄｂａ）３またはＰｄ（ＯＡｃ）２等のパラジウム触媒の存在下、ジメトキシエタン、トルエン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフランまたはジオキサン等の溶媒中、任意選択で水、および好ましくは約９０℃での加熱の存在下で行うことができる。
【０２８０】
【化３８】
2019512546.tif 000044
【０２８１】
式ＩＩ−Ｄの化合物は、スキーム３に示されるように２つのステップで調製され得る。第１のステップ（ステップａ）において、式ＩＩ−Ｇの化合物を、還元アルキル化標準条件下で、例えばナトリウムトリアセトキシボロヒドリドまたは水素化ホウ素ナトリウムを還元剤として使用して、ジクロロエタンまたはメタノール等の好適な溶媒中で市販のアルデヒドまたはケトンと反応させ、式ＩＩ−Ｆの（ｔｒａｎｓ）−シクロプロピルアミノ誘導体の形成をもたらす。第２のステップにおいて、アミノ基を、標準条件下で、例えばＢｏｃ無水物および塩基、好ましくはトリエチルアミンを使用して、ＴＨＦまたはＡＣＮ等の好適な溶媒中でＢｏｃ保護基（Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）で保護し、式ＩＩ−Ｄの化合物を生成する。
【０２８２】
代替として、最終ステップにおけるＰのＬ１へのカップリングにより式ＩＩの化合物が調製されてもよく、その両方の部分が便利に官能化されている。カップリング反応の例は、これらに限定されないが、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−、−ＮＲ１−ＳＯ２−または−Ｏ−基の形成を含む。式ＩＩの化合物におけるＸ１基の調製に関して説明された合成法が、ＰのＬ１へのカップリングに適用され得る。
【０２８３】
式ＩＩａ、ＩＩＩおよびＩＩＩａの化合物も同様に調製され得る。
さらに、本発明のいくつかの化合物はまた、標準実験条件下で有機化学における周知の反応を使用して、１つまたはいくつかのステップにおいて官能基の適切な変換反応により式Ｉの他の化合物から得ることができる。
【０２８４】
例えば、前記転換は、例えばＰｄ／Ｃ等の好適な触媒の存在下での水素、ヒドラジンもしくはギ酸での処理により；またはＮｉＣｌ２もしくはＳｎＣｌ２の存在下での水素化ホウ素ナトリウムでの処理によりアミノ基を生成するニトロ基の還元；標準条件におけるアルキル化剤での処理、または還元アミノ化、すなわちシアノ水素化ホウ素ナトリウムもしくはナトリウムトリアセトキシボロヒドリド等の還元剤の存在下でのアルデヒドもしくはケトンでの処理による、第１級または第２級アミンの置換；任意選択で４−ジメチルアミノピリジン等の塩基の存在下、ジオキサン、クロロホルム、ジクロロメタンまたはピリジン等の好適な溶媒中、任意選択でトリエチルアミンまたはピリジン等の塩基の存在下での塩化スルホニル等のスルホニルハライドとの反応による、アミンからスルホンアミドへの変換；標準条件下でのアミンからアミド、カルバメートまたは尿素への変換；塩基性条件下でのアルキル化剤での処理によるアミドのアルキル化；標準条件下でのアルコールからエーテル、エステルまたはカルバメートへの変換；標準条件下でチオエーテルを生成するチオールのアルキル化；標準酸化条件下でケトン、アルデヒドまたはカルボン酸を生成するアルコールの部分的または完全酸化；水素化ホウ素ナトリウム等の還元剤での処理によるアルデヒドまたはケトンの還元；ジイソブチルアルミニウムヒドリドまたはＬｉＡｌＨ４等の還元剤での処理による、カルボン酸またはカルボン酸誘導体からアルコールへの還元；標準条件下でのチオエーテルからスルホキシドまたはスルホンへの酸化；Ｐ２Ｏ５またはＰＣｌ３の存在下でのＳＯＣｌ２、ＰＢｒ３、テトラブチルアンモニウムブロミドとの反応による、アルコールからハロゲンへの変換；任意選択で好適な溶媒の存在下、および好ましくは加熱下でのアミンとの反応による、ハロゲンからアミンへの変換；ならびに標準条件下での第１級アミドから−ＣＮ基への変換を含む。
【０２８５】
同様に、本発明の化合物の芳香環のいずれも、文献において広く説明されている芳香族求電子置換反応または芳香族求核置換反応を生じ得る。
これらの相互変換反応のいくつかは、実施例においてより詳細に説明される。当業者に明らかなように、これらの相互変換反応は、式Ｉの化合物、およびその任意の好適な合成中間体に対して行うことができる。
【０２８６】
上述の合成方法における式Ｉの化合物へのいずれの言及も、式ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩおよびＩＩＩａの化合物に同様に適用される。
ＫＤＭ１Ａ阻害剤
本発明の方法、アッセイおよび化学プローブは、ＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合を決定するために使用され得る。
【０２８７】
不可逆的および可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤の両方が報告されている。不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、ＫＤＭ１Ａ活性部位内のＦＡＤ補因子に共有結合することによりその阻害活性を発揮し、一般に、２−（ヘテロ）アリールシクロプロピルアミノ部分等の２−シクリル−シクロプロピルアミノ部分をベースとする。ＫＤＭ１Ａの可逆的阻害剤もまた開示されている。
【０２８８】
ＫＤＭ１Ａ阻害剤の限定されない例は、例えば、ＷＯ２０１０／０４３７２１、ＷＯ２０１０／０８４１６０、ＷＯ２０１１／０３５９４１、ＷＯ２０１１／０４２２１７、ＷＯ２０１１／１３１６９７、ＷＯ２０１２／０１３７２７、ＷＯ２０１２／０１３７２８、ＷＯ２０１２／０４５８８３、ＷＯ２０１３／０５７３２０、ＷＯ２０１３／０５７３２２、ＷＯ２０１０／１４３５８２、ＵＳ２０１０−０３２４１４７、ＷＯ２０１１／０２２４８９、ＷＯ２０１１／１３１５７６、ＷＯ２０１２／０３４１１６、ＷＯ２０１２／１３５１１３、ＷＯ２０１３／０２２０４７、ＷＯ２０１３／０２５８０５、ＷＯ２０１４／０５８０７１、ＷＯ２０１４／０８４２９８、ＷＯ２０１４／０８６７９０、ＷＯ２０１４／１６４８６７、ＷＯ２０１４／２０５２１３、ＷＯ２０１５／０２１１２８、ＷＯ２０１５／０３１５６４、ＵＳ２０１５−００６５４３４、ＷＯ２００７／０２１８３９、ＷＯ２００８／１２７７３４、ＷＯ２０１５／０８９１９２、ＣＮ１０４１１９２８０、ＣＮ１０３９６１３４０、ＣＮ１０３８９３１６３、ＣＮ１０３３１９４６６、ＣＮ１０３０５４８６９、ＷＯ２０１５／１２３４０８、ＷＯ２０１５／１２３４２４、ＷＯ２０１５／１２３４３７、ＷＯ２０１５／１２３４６５、ＷＯ２０１５／１５６４１７、ＷＯ２０１５／１８１３８０、ＷＯ２０１６／１２３３８７、ＷＯ２０１６／１３０９５２、ＷＯ２０１６／１７２４９６、ＷＯ２０１６／１７７６５６、ＷＯ２０１７／０２７６７８、ＣＮ１０６０４５８６２、ＷＯ２０１２／０７１４６９、ＷＯ２０１３／０３３６８８、ＷＯ２０１４／０８５６１３、ＷＯ２０１５／１２０２８１、ＷＯ２０１５／１３４９７３、ＷＯ２０１５／１６８４６６、ＷＯ２０１５／２００８４３、ＷＯ２０１６／００３９１７、ＷＯ２０１６／００４１０５、ＷＯ２０１６／００７７２２、ＷＯ２０１６／００７７２７、ＷＯ２０１６／００７７３１、ＷＯ２０１６／００７７３６、ＷＯ２０１６／０３４９４６、ＷＯ２０１６／０３７００５、ＷＯ２０１６／１６１２８２、およびＷＯ２０１７／００４５１９、Ｋ  Ｔａｅｋｏら、Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ  ２０１５、２５（９）：１９２５〜８．  ｄｏｉ：  １０．１０１６／ｊ．ｂｍｃｌ．２０１５．０３．０３０．  Ｅｐｕｂ  ２０１５  Ｍａｒ  ２０、ＰＭＩＤ：  ２５８２７５２６；Ｓ  Ｖａｌｅｎｔｅら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．  ２０１５、９４：１６３〜７４．  ｄｏｉ：  １０．１０１６／ｊ．ｅｊｍｅｃｈ．２０１５．０２．０６０．  Ｅｐｕｂ  ２０１５  Ｍａｒ  ３、ＰＭＩＤ：２５７６８７００；ＭＮ  Ａｈｍｅｄ  Ｋｈａｎら、Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏｍｍｕｎ．、２０１５、６、４０７〜４１２、ＤＯＩ：  １０．１０３９／Ｃ４ＭＤ００３３０Ｆ  ｅｐｕｂ  ２９  Ｓｅｐ  ２０１４；Ｍ  Ｐｉｅｒｏｎｉら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．  ２０１５  ；９２：３７７〜３８６．  ｄｏｉ：  １０．１０１６／ｊ．ｅｊｍｅｃｈ．２０１４．１２．０３２．  Ｅｐｕｂ  ２０１５  Ｊａｎ  ７．  ＰＭＩＤ：２５５８５００８；Ｖ  Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚら、Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏｍｍｕｎ．、２０１５、６、６６５〜６７０  ＤＯＩ：  １０．１０３９／Ｃ��ＭＤ００５０７Ｄ、Ｅｐｕｂ  ２３  Ｄｅｃ  ２０１４；Ｐ  Ｖｉａｎｅｌｌｏら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．  ２０１４、８６：３５２〜６３．  ｄｏｉ：  １０．１０１６／ｊ．ｅｊｍｅｃｈ．２０１４．０８．０６８．  Ｅｐｕｂ  ２０１４  Ａｕｇ  ２７；ＤＰ  Ｍｏｕｌｄら、Ｍｅｄ．  Ｒｅｓ．  Ｒｅｖ．、２０１５，３５：５８６〜６１８．  ｄｏｉ：１０．１００２／ｍｅｄ．２１３３４、ｅｐｕｂ  ２４−ｎｏｖ−２０１４；ＬＹ  Ｍａら、  ２０１５、５８（４）：１７０５〜１６．  ｄｏｉ：  １０．１０２１／ａｃｓ．ｊｍｅｄｃｈｅｍ．５ｂ０００３７．  Ｅｐｕｂ  ２０１５  Ｆｅｂ  ６；ＳＬ  Ｎｏｗｏｔａｒｓｋｉら、２０１５、２３（７）：１６０１〜１２．  ｄｏｉ：  １０．１０１６／ｊ．ｂｍｃ．２０１５．０１．０４９．  Ｅｐｕｂ  ２０１５  Ｆｅｂ  ７．  ＰＭＩＤ：２５７２５６０９；ＣＪ  Ｋｕｔｚら、Ｍｅｄｃｈｅｍｃｏｍｍ．  ２０１４、５（１２）：１８６３〜１８７０  ＰＭＩＤ：  ２５５８０２０４；Ｃ  Ｚｈｏｕら、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ＆Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，２０１５、８５（６）：６５９〜６７１．  ｄｏｉ：１０．１１１１／ｃｂｄｄ．１２４６１、ｅｐｕｂ  ２２−ｄｅｃ−２０１４；Ｐ  Ｐｒｕｓｅｖｉｃｈら、ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．  ２０１４、９（６）：１２８４〜９３．  ｄｏｉ：  １０．１０２１／ｃｂ５０００１８ｓ．  Ｅｐｕｂ  ２０１４  Ａｐｒ  ７；Ｂ  Ｄｕｌｌａら、Ｏｒｇ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２０１３，１１、３１０３〜３１０７、ｄｏｉ：  １０．１０３９／ｃ３ｏｂ４０２１７ｇ；ＪＲ  Ｈｉｔｃｈｉｎら、ＭｅｄＣｈｅｍＣｏｍｍｕｎ，２０１３、４、１５１３〜１５２２  ＤＯＩ：  １０．１０３９／ｃ３ｍｄ００２２６ｈ；およびＹ  Ｚｈｏｕら、Ｂｉｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ、２０１５、オンライン公開２０−Ｊｕｎ−２０１５、ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｍｃｌ．２０１５．０６．０５４において開示されている。
【０２８９】
本発明の化学プローブおよび方法を使用して試験され得る不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤（非ペプチド性である）は、これらに限定されないが、ＷＯ２０１０／０４３７２１、ＷＯ２０１０／０８４１６０、ＷＯ２０１１／０３５９４１、ＷＯ２０１１／０４２２１７、ＷＯ２０１１／１３１６９７、ＷＯ２０１２／０１３７２７、ＷＯ２０１２／０１３７２８、ＷＯ２０１２／０４５８８３、ＷＯ２０１３／０５７３２０、ＷＯ２０１３／０５７３２２、ＷＯ２０１０／１４３５８２、ＵＳ２０１０−０３２４１４７、ＷＯ２０１１／１３１５７６、ＷＯ２０１２／１３５１１３、ＷＯ２０１３／０２２０４７、ＷＯ２０１４／０５８０７１、ＷＯ２０１４／０８４２９８、ＷＯ２０１４／０８６７９０、ＷＯ２０１４／１６４８６７、ＷＯ２０１５／０２１１２８；ＷＯ２０１５／１２３４０８、ＷＯ２０１５／１２３４２４、ＷＯ２０１５／１２３４３７、ＷＯ２０１５／１２３４６５、ＷＯ２０１５／１５６４１７、ＷＯ２０１５／１８１３８０、ＷＯ２０１６／１２３３８７、ＷＯ２０１６／１３０９５２、ＷＯ２０１６／１７２４９６、ＷＯ２０１６／１７７６５６、ＷＯ２０１７／０２７６７８、ＣＮ１０６０４５８６２、Ｋ  Ｔａｅｋｏら、Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ．  ２０１５、２５（９）：１９２５〜８．  ｄｏｉ：  １０．１０１６／ｊ．ｂｍｃｌ．２０１５．０３．０３０．  Ｅｐｕｂ  ２０１５  Ｍａｒ  ２０、ＰＭＩＤ：  ２５８２７５２６；Ｓ  Ｖａｌｅｎｔｅら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．  ２０１５、９４：１６３〜７４．  ｄｏｉ：  １０．１０１６／ｊ．ｅｊｍｅｃｈ．２０１５．０２．０６０．  Ｅｐｕｂ  ２０１５  Ｍａｒ  ３、ＰＭＩＤ：２５７６８７００；ＭＮ  Ａｈｍｅｄ  Ｋｈａｎら、Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏｍｍｕｎ．、２０１５、６、４０７〜４１２、ＤＯＩ：  １０．１０３９／Ｃ４ＭＤ００３３０Ｆ  ｅｐｕｂ  ２９  Ｓｅｐ  ２０１４；Ｍ  Ｐｉｅｒｏｎｉら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．  ２０１５；９２：３７７〜３８６．  ｄｏｉ：  １０．１０１６／ｊ．ｅｊｍｅｃｈ．２０１４．１２．０３２．  Ｅｐｕｂ  ２０１５  Ｊａｎ  ７．  ＰＭＩＤ：２５５８５００８；Ｖ  Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚら、Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏｍｍｕｎ．、２０１５、６、６６５〜６７０  ＤＯＩ：  １０．１０３９／Ｃ４ＭＤ００５０７Ｄ、Ｅｐｕｂ  ２３  Ｄｅｃ  ２０１４；Ｐ  Ｖｉａｎｅｌｌｏら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．  ２０１４、８６：３５２〜６３．  ｄｏｉ：  １０．１０１６／ｊ．ｅｊｍｅｃｈ．２０１４．０８．０６８．  Ｅｐｕｂ  ２０１４  Ａｕｇ  ２７において開示されている化合物を含む。
【０２９０】
本発明の化学プローブおよび方法を使用して試験され得る可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤（非ペプチド性である）は、限定されることなく、ＷＯ２００７／０２１８３９、ＷＯ２００８／１２７７３４、ＷＯ２０１１／０２２４８９、ＷＯ２０１２／０３４１１６、ＷＯ２０１２／０７１４６９、ＷＯ２０１３／０２５８０５、ＵＳ２０１５／００６５４３４、ＷＯ２０１３／０３３６８８、ＣＮ１０３０５４８６９、ＣＮ１０３３１９４６６、ＷＯ２０１４／０８５６１３、ＣＮ１０３８９３１６３Ａ、ＣＮ１０３９６１３４０、ＷＯ２０１４／２０５２１３、ＷＯ２０１５／０３１５６４、ＷＯ２０１５／０８９１９２、ＷＯ２０１５／１２０２８１、ＷＯ２０１５／１３４９７３、ＷＯ２０１５／１６８４６６、ＷＯ２０１５／２００８４３、ＷＯ２０１６／００３９１７、ＷＯ２０１６／００４１０５、ＷＯ２０１６／００７７２２、ＷＯ２０１６／００７７２７、ＷＯ２０１６／００７７３１、ＷＯ２０１６／００７７３６、ＷＯ２０１６／０３４９４６、ＷＯ２０１６／０３７００５、ＷＯ２０１６／１６１２８２、およびＷＯ２０１７／００４５１９において開示されている化合物を含む。
【０２９１】
本発明による方法および使用において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、好ましくは不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤、好ましくは２−（ヘテロ）アリールシクロプロピルアミノＫＤＭ１Ａ阻害剤である。本明細書において使用される場合、「２−（ヘテロ）アリールシクロプロピルアミノＫＤＭ１Ａ阻害剤」または「２−（ヘテロ）アリールシクロプロピルアミノ化合物」は、その化学構造が、１位でアミノ基（これは任意選択で置換されている）で置換され、また２位でアリールまたはヘテロアリール基（アリールまたはヘテロアリール基は任意選択で置換されている）で置換されたシクロプロピル環を含むＫＤＭ１Ａ阻害剤を意味する。
【０２９２】
ＫＤＭ１Ａを阻害する化合物の能力は、当技術分野において知られているＫＤＭ１Ａ阻害を決定するための任意の方法、例えば実施例２において開示されている方法を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験され得る。
【０２９３】
本発明による方法および使用において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、式（Ａ）の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくは立体異性体の混合物（例えばラセミ混合物もしくはジアステレオマー混合物）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であってもよい。
【０２９４】
【化３９】
2019512546.tif 000045
【０２９５】
式（Ｉ）中、Ｒ１〜Ｒ５のそれぞれは、任意選択で置換され、また−Ｈ、ハロ、アルキル、アルコキシ、シクロアルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−Ｌ−アリール、−Ｌ−ヘテロアリール、−Ｌ−ヘテロシクリル、−Ｌ−炭素環、アシルアミノ、アシルオキシ、アルキルチオ、シクロアルキルチオ、アルキニル、アミノ、アリール、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、アリールアルコキシ、アリールオキシ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、シアノ、シアナト、ハロアリール、ヒドロキシル、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルコキシ、イソシアナト、イソチオシアナト、ニトロ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、チオカルボニル、チオシアナト、トリハロメタンスルホンアミド、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、およびＣ−アミドから独立して選択され；
Ｒ６は、−Ｈおよびアルキルから選択され；
Ｒ７は、−Ｈ、アルキル、およびシクロアルキルから選択され；
Ｒ８は、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｘＲｙおよび−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｚから選択され；
Ｒｘは、存在する場合、−Ｈ、アルキル、アルキニル、アルケニル、−Ｌ−炭素環、−Ｌ−アリール、−Ｌ−ヘテロシクリルから選択され、これらは全て任意選択で置換され；
Ｒｙは、存在する場合、−Ｈ、アルキル、アルキニル、アルケニル、−Ｌ−炭素環、−Ｌ−アリール、−Ｌ−ヘテロシクリルから選択され、これらは全て任意選択で置換され；
Ｒｚは、存在する場合、−Ｈ、アルコキシ、−Ｌ−炭素環、−Ｌ−ヘテロ環、−Ｌ−アリールから選択され、アリール、ヘテロシクリル、または炭素環は任意選択で置換され；
各Ｌは、飽和、部分飽和、または不飽和であってもよく、−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｓ）Ｓ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＯＣ（＝Ｏ）Ｓ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＯ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＳ（ＣＨ２）ｎ−、および−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され、各ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、および８から独立して選択され、任意選択で置換されたとは、アシルアミノ、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、シクロアルコキシ、アルキル、アルキルチオ、シクロアルキルチオ、アルキニル、アミノ、アリール、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、アリールアルコキシ、アリールオキシ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、カルボシクリル、シアノ、シアナト、ハロ、ハロアルキル、ハロアリール、ヒドロキシル、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロアリールアルコキシ、イソシアナト、イソチオシアナト、ニトロ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、チオカルボニル、チオシアナト、トリハロメタンスルホンアミド、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、およびＣ−アミドから独立して選択されるゼロまたは１〜４個の任意選択の置換基を指す。
【０２９６】
シクロプロピル環上の置換基に（ｔｒａｎｓ）配置を有する式（Ａ）の化合物が好ましい。
好ましくは、式（Ａ）の化合物は、以下のリストからの化合物である。
Ｎ−シクロプロピル−２−｛［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝アセトアミド；
２−｛［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝アセトアミド；
Ｎ−シクロプロピル−２−｛［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝プロパンアミド；
２−｛［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝−Ｎ−プロパ−２−イニルアセトアミド；
Ｎ−イソプロピル−２−｛［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝アセトアミド；
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）−２−｛［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝アセトアミド；
Ｎ−（２−モルホリン−４−イル−２−オキソエチル）−Ｎ−［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミン；
２−｛［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝プロパンアミド；
メチル２−｛［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝プロパノアート；
Ｎ−シクロプロピル−２−｛メチル［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝アセトアミド；
２−｛メチル［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝アセトアミド；
Ｎ−メチル−ｔｒａｎｓ−２−（フェニルシクロプロピルアミノ）プロパンアミド；
１−（４−メチルピペラジン−１−イル）−２−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピルアミノ）エタノン；
１−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピルアミノ）エタノン；
１−（４−ベンジルピペラジン−１−イル）−２−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピルアミノ）エタノン；
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピルアミノ）−１−（４−フェニルピペラジン−１−イル）エタノン；
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）−１−（４−メチルピペラジン−１−イル）エタノン；
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）−Ｎ−シクロプロピルアセトアミド；
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（３−フルオロベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）−１−（４−メチルピペラジン−１−イル）エタノン；
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（３−クロロベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）−１−（４−メチルピペラジン−１−イル）エタノン；
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（ビフェニル−４−イル）シクロプロピルアミノ）−１−（４−メチルピペラジン−１−イル）エタノン；
１−（４−メチルピペラジン−１−イル）−２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−フェネトキシフェニル）シクロプロピルアミノ）エタノン；
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（４−フルオロベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）−１−（４−メチルピペラジン−１−イル）エタノン；
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ビフェニル−４−イルメトキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）−１−（４−メチルピペラジン−１−イル）エタノン；
２−（｛（ｔｒａｎｓ）−２−［４−（ベンジルオキシ）フェニル］シクロプロピル｝アミノ）−Ｎ−シクロプロピルアセトアミド、
Ｎ−［（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ベンジルオキシフェニル）シクロプロピル］｝−Ｎ−［２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−２−オキソエチル］アミン、
Ｎ−［２−オキソ−２−（４−フェニルピペラジン−１−イル）エチル］−Ｎ−［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミン、
Ｎ−［２−（４−ベンジルピペラジン−１−イル）−２−オキソエチル］−Ｎ−［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミン、
Ｎ−［２−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−オキソエチル］−Ｎ−［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミン、
Ｎ−［２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−２−オキソエチル］−Ｎ−［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミン、
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ピリジン−３−イルフェニル）シクロプロピルアミノ）−１−（４−メチルピペラジン−１−イル）エタノン、および
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−メトキシ−１，１’−ビフェニル−４−イル）シクロプロピルアミノ）−１−（４−メチルピペラジン−１−イル）エタノン、
およびそれらの薬学的に許容される塩。
【０２９７】
式（Ａ）の化合物は、ＷＯ２０１０／０４３７２１において開示される方法により調製することができ、その開示は、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
本発明による方法および使用において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、式（Ｂ）の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくは立体異性体の混合物（例えばラセミ混合物もしくはジアステレオマー混合物）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であってもよい。
【０２９８】
【化４０】
2019512546.tif 000046
【０２９９】
式（Ｂ）中、Ｒ１〜Ｒ５のそれぞれは、−Ｈ、ハロ、アルキル、アルコキシ、シクロアルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−Ｌ−アリール、−Ｌ−ヘテロシクリル、−Ｌ−カルボシクリル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルキルチオ、シクロアルキルチオ、アルキニル、アミノ、アルキルアミノ、アリール、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、アリールアルコキシ、アリールオキシ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、シアノ、シアナト、ハロアリール、ヒドロキシル、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルコキシ、イソシアナト、イソチオシアナト、ニトロ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、チオカルボニル、チオシアナト、トリハロメタンスルホンアミド、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、およびＣ−アミドから独立して選択され；
Ｒ６は、−Ｈおよびアルキルから選択され；
Ｒ７は、−Ｈ、アルキル、およびシクロアルキルから選択され；
Ｒ８は、−Ｌ−ヘテロシクリルであり、前記−Ｌ−ヘテロシクリルの環もしくは環系は、ハロ、アルキル、アルコキシ、シクロアルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−Ｌ−アリール、−Ｌ−ヘテロシクリル、−Ｌ−カルボシクリル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルキルチオ、シクロアルキルチオ、アルキニル、アミノ、アルキルアミノ、アリール、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、アリールアルコキシ、アリールオキシ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、シアノ、シアナト、ハロアリール、ヒドロキシル、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルコキシ、イソシアナト、イソチオシアナト、ニトロ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、チオカルボニル、チオシアナト、トリハロメタンスルホンアミド、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、およびＣ−アミドから選択される０〜３個の置換基を有し；または、
Ｒ８は、−Ｌ−アリールであり、前記−Ｌ−アリールの環もしくは環系は、ハロ、アルキル、アルコキシ、シクロアルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−Ｌ−アリール、−Ｌ−ヘテロシクリル、−Ｌ−カルボシクリル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルキルチオ、シクロアルキルチオ、アルキニル、アミノ、アルキルアミノ、アリール、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、アリールアルコキシ、アリールオキシ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、シアノ、シアナト、ハロアリール、ヒドロキシル、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルコキシ、イソシアナト、イソチオシアナト、ニトロ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、チオカルボニル、チオシアナト、トリハロメタンスルホンアミド、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、およびＣ−アミドから選択される１〜３個の置換基を有し；
各Ｌは、−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＯ（ＣＨ２）ｎ−、および−（ＣＨ２）ｎＳ（ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され、各ｎは、０、１、２、および３から独立して選択される。
【０３００】
シクロプロピル環上の置換基に（ｔｒａｎｓ）配置を有する式（Ｂ）の化合物が好ましい。
好ましくは、式（Ｂ）の化合物は、以下のリストからの化合物である。
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（４−フルオロベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（４−フルオロベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミニウム；
４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピルアミノ）メチル）ベンゾニトリル；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（４−シアノベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミニウム；
（ｔｒａｎｓ）−２−フェニル−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−フェニル−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）シクロプロパンアミニウム；
（ｔｒａｎｓ）−２−フェニル−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−フェニル−Ｎ−（ピリジン−３−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−フェニル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（６−メチルピリジン−２−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−フェニル−Ｎ−（チアゾール−２−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−フェニル−Ｎ−（チオフェン−２−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（３−ブロモチオフェン−２−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（４−ブロモチオフェン−２−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（３，４−ジクロロベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（３−フルオロベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミニウム；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２−フルオロベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−フェニル−Ｎ−（キノリン−４−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（３−メトキシベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−フェニル−Ｎ−（（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）メチル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（６−クロロピリジン−３−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（４−メチルピリジン−２−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（６−メトキシピリジン−２−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
２−（（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピルアミノ）メチル）ピリジン−３−オール；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（６−ブロモピリジン−２−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）メチル）ベンゾニトリル；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（４−（ベンジルオキシ）ベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−ベンジル−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−Ｎ−（４−メトキシベンジル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−Ｎ−（４−フルオロベンジル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−フェニル−Ｎ−（キノリン−２−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−フェニル−Ｎ−（（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）メチル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（３−フルオロピリジン−２−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−フェニル−Ｎ−（キノリン−３−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（６−メトキシピリジン−３−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（５−メトキシピリジン−３−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（２−メトキシピリジン−３−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（３Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
３−（（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピルアミノ）メチル）ベンゾニトリル；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２−メトキシベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
３−（（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピルアミノ）メチル）ピリジン−２−アミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（２−クロロピリジン−３−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（３，４−ジメトキシベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イルメチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２，６−ジフルオロ−４−メトキシベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−フェニル−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（５−フルオロ−２−メトキシベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２−フルオロ−４−メトキシベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（４−メトキシナフタレン−１−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２−フルオロ−６−メトキシベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（２−メトキシナフタレン−１−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（４，７−ジメトキシナフタレン−１−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（４−メトキシ−３−メチルベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（４−メトキシ−２−メチルベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキセピン−６−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキセピン−７−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（２，２−ジメチルクロマン−６−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（４−メトキシ−２，３−ジメチルベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（４−メトキシ−２，５−ジメチルベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２−フルオロ−４，５−ジメトキシベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（３−クロロ−４，５−ジメトキシベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２，４−ジメトキシ−６−メチルベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２，５−ジメトキシベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２，３−ジメトキシベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２−クロロ−３−メトキシベンジル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（１Ｈ−インドール−５−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−Ｎ−（２−メトキシベンジル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（１−（４−メトキシフェニル）エチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（１−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）エチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（１−（５−フルオロ−２−メトキシフェニル）エチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（１−（３，４−ジメトキシフェニル）プロパン−２−イル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（（３−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
およびそれらの薬学的に許容される塩。
【０３０１】
式（Ｂ）の化合物は、ＷＯ２０１０／０８４１６０において開示される方法により調製することができ、その開示は、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
本発明による方法および使用において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、式（Ｃ）の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくは立体異性体の混合物（例えばラセミ混合物もしくはジアステレオマー混合物）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であってもよい。
（Ａ’）Ｘ−（Ａ）−（Ｂ）−（Ｚ）−（Ｌ）−（Ｄ）
（Ｃ）
式（Ｃ）中、（Ａ）は、ヘテロアリールまたはアリールであり；
各（Ａ’）は、存在する場合、アリール、アリールアルコキシ、アリールアルキル、ヘテロシクリル、アリールオキシ、ハロ、アルコキシ、ハロアルキル、シクロアルキル、ハロアルコキシ、およびシアノから独立して選択され、各（Ａ’）は、ハロ、ハロアルキル、アリール、アリールアルコキシ、アルキル、アルコキシ、シアノ、スルホニル、アミド、およびスルフィニルから独立して選択される０、１、２、または３個の置換基で置換され；
Ｘは、０、１、２、または３であり；
（Ｂ）は、シクロプロピル環であり、（Ａ）および（Ｚ）は、（Ｂ）の異なる炭素原子に共有結合し；
（Ｚ）は、−ＮＨ−であり；
（Ｌ）は、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、および−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−から選択され；
（Ｄ）は、−Ｎ（−Ｒ１）−Ｒ２、−Ｏ−Ｒ３、および−Ｓ−Ｒ３から選択され、式中、
Ｒ１およびＲ２は、Ｒ１およびＲ２が結合している窒素原子と共に相互連結してヘテロ環式環を形成し、前記へテロ環式環は、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、アルキル、ハロ、シアノ、アルコキシ、ハロアルキル、およびハロアルコキシから独立して選択される０、１、２、もしくは３個の置換基を有し、または
Ｒ１およびＲ２は、−Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、およびヘテロシクリルから独立して選択され、Ｒ１およびＲ２上の置換基の合計は、０、１、２、もしくは３個であり、置換基は、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、およびフルオロから独立して選択され；
Ｒ３は、−Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、およびヘテロシクリルから選択され、Ｒ３は、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、およびフルオロから独立して選択される０、１、２、または３個の置換基を有する。
【０３０２】
シクロプロピル環上の置換基に（ｔｒａｎｓ）配置を有する式（Ｃ）の化合物が好ましい。
好ましくは、式（Ｃ）の化合物は、以下のリストからの化合物である。
Ｎ−［２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル］−Ｎ−［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミン；
Ｎ−シクロプロピル−Ｎ’−［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］エタン−１，２−ジアミン；
Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ’−（２−｛［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝エチル）エタン−１，２−ジアミン；
（３Ｒ）−１−（２−｛［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝エチル）ピロリジン−３−アミン；
（３Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−（２−｛［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝エチル）ピロリジン−３−アミン；
（３Ｒ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−（２−｛［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ｝エチル）ピロリジン−３−アミン；
Ｎ−［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］−Ｎ−（２−ピペラジン−１−イルエチル）アミン；
Ｎ１，Ｎ１−ジエチル−Ｎ２−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）エタン−１，２−ジアミン；
Ｎ−［（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル］−Ｎ−（２−ピペリジン−１−イルエチル）アミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−Ｎ−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）−２−（３’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−４−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−クロロビフェニル−４−イル）−Ｎ−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）シクロプロパンアミン；
（Ｒ）−１−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−４−イル）シクロプロピルアミノ）エチル）ピロリジン−３−アミン；および
Ｎ１−シクロプロピル−Ｎ２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−４−イル）シクロプロピル）エタン−１，２−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（３−ブロモベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）−Ｎ２−シクロプロピルエタン−１，２−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−クロロビフェニル−４−イル）シクロプロピル）−Ｎ２−シクロプロピルエタン−１，２−ジアミン；
Ｎ１−シクロプロピル−Ｎ２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−フェネトキシフェニル）シクロプロピル）エタン−１，２−ジアミン；
Ｎ１，Ｎ１−ジエチル−Ｎ２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（３−フルオロベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）エタン−１，２−ジアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ブロモフェニル）−Ｎ−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）シクロプロパンアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（テルフェニル−４−イル）シクロプロピル）−Ｎ２−シクロプロピルエタン−１，２−ジアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２−（ピペリジン−１−イル）エチル）−２−（３’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−４−イル）シクロプロパンアミン；
Ｎ１，Ｎ１−ジエチル−Ｎ２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−４−イル）シクロプロピル）エタン−１，２−ジアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２−（ピペラジン−１−イル）エチル）−２−（３’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−４−イル）シクロプロパンアミン；
（Ｓ）−１−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−４−イル）シクロプロピルアミノ）エチル）ピロリジン−３−アミン；
（Ｒ）−１−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−クロロビフェニル−４−イル）シクロプロピルアミノ）エチル）ピロリジン−３−アミン；
（Ｒ）−１−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４’−クロロビフェニル−４−イル）シクロプロピルアミノ）エチル）ピロリジン−３−アミン；
（Ｒ）−１−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−メトキシビフェニル−４−イル）シクロプロピルアミノ）エチル）ピロリジン−３−アミン；
（Ｒ）−１−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（３−ブロモベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）エチル）ピロリジン−３−アミン；および
（Ｒ）−１−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロピルアミノ）エチル）ピロリジン−３−アミン；
Ｎ−（ｔｒａｎｓ）−２−（イソブチルチオ）−エチル−２−フェニルシクロプロパンアミン、
Ｎ−ｔｒａｎｓ−（２−エトキシエチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン、および
Ｎ−ｔｒａｎｓ−（２−メトキシエチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン、
（Ｒ）−１−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（４−ブロモベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）エチル）ピロリジン−３−アミン；
（Ｒ）−１−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（４−クロロベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）エチル）ピロリジン−３−アミン；
（Ｒ）−１−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ビフェニル−４−イルメトキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）エチル）ピロリジン−３−アミン；
（Ｒ）−１−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’，５’−ジクロロビフェニル−４−イル）シクロプロピルアミノ）エチル）ピロリジン−３−アミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）２−（２−［１，１’；４’，１’’］テルフェニル−４’’−イル−シクロプロピル）−Ｎ２−シクロプロピルエタン−１，２−ジアミン；
（Ｒ）−１−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（ベンジルオキシ）−４’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−３−イル）シクロプロピルアミノ）エチル）ピロリジン−３−アミン；および
（Ｒ）−１−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（ベンジルオキシ）ビフェニル−３−イル）シクロプロピルアミノ）エチル）ピロリジン−３−アミン；
（Ｒ）−１−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−フェネトキシフェニル）シクロプロピルアミノ）エチル）ピロリジン−３−アミン；
（Ｒ）−１−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロピルアミノ）エチル）ピロリジン−３−アミン；
（Ｒ）−１−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（４−クロロフェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロピルアミノ）エチル）ピロリジン−３−アミン；および
４−（（４−（（ｔｒａｎｓ）−２−（２−（（Ｒ）−３−アミノピロリジン−１−イル）エチルアミノ）シクロプロピル）フェノキシ）メチル）ベンゾニトリル；
およびそれらの薬学的に許容される塩。
【０３０３】
式（Ｃ）の化合物は、ＷＯ２０１１／０３５９４１において開示される方法により調製することができ、その開示は、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
本発明による方法および使用において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、式（Ｄ）の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくは立体異性体の混合物（例えばラセミ混合物もしくはジアステレオマー混合物）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であってもよい。
【０３０４】
（Ａ’）Ｘ−（Ａ）−（Ｂ）−（Ｚ）−（Ｌ）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２
（Ｄ）
式（Ｄ）中、（Ａ）は、ヘテロアリールまたはアリールであり；
各（Ａ’）は、存在する場合、アリール、アリールアルコキシ、アリールアルキル、ヘテロシクリル、アリールオキシ、ハロ、アルコキシ、ハロアルキル、シクロアルキル、ハロアルコキシ、およびシアノから独立して選択され、各（Ａ’）は、ハロ、ハロアルキル、アリール、アリールアルコキシ、アルキル、アルコキシ、シアノ、スルホニル、スルフィニル、およびカルボキサミドから独立して選択される０、１、２、または３個の置換基で置換され；
Ｘは、０、１、２、または３であり；
（Ｂ）は、シクロプロピル環であり、（Ａ）および（Ｚ）は、（Ｂ）の異なる炭素原子に共有結合し；
（Ｚ）は、−ＮＨ−であり；
（Ｌ）は、−（ＣＨ２）ｍＣＲ１Ｒ２−であり、式中、ｍは、０、１、２、３、４、５、または６であり、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
但し、（Ｌ）が−ＣＨ２−または−ＣＨ（ＣＨ３）−である場合、Ｘは０ではない。
【０３０５】
シクロプロピル環上の置換基に（ｔｒａｎｓ）配置を有する式（Ｄ）の化合物が好ましい。
好ましくは、式（Ｄ）の化合物は、以下のリストからの化合物である。
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（４−シアノベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）アセトアミド、
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（３−シアノベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）アセトアミド、
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）アセトアミド、
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（４−フルオロベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）アセトアミド、
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（３−フルオロベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）アセトアミド、
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（３−クロロベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）アセトアミド、
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（４−クロロベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）アセトアミド、
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（３−ブロモベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）アセトアミド、
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（３，５−ジフルオロベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）アセトアミド、
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−フェネトキシフェニル）シクロプロピルアミノ）アセトアミド、
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−４−イル）シクロプロピルアミノ）アセトアミド、
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−クロロビフェニル−４−イル）シクロプロピルアミノ）アセトアミド、
２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（４−クロロフェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロピルアミノ）アセトアミド、
（Ｒ）−２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（３−フルオロベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）プロパンアミド、
（Ｓ）−２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（４−フルオロベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）プロパンアミド、
（Ｒ）−２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（４−フルオロベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）プロパンアミド、
（Ｓ）−２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（４−フルオロベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）プロパンアミド、
（Ｒ）−２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）プロパンアミド、
（Ｓ）−２−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）プロパンアミド、
２−（２−［１，１’；４’，１’’］テルフェニル−４’’−イル−シクロプロピルアミノ）アセトアミド、
５’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（２−アミノ−２−オキソエチルアミノ）シクロプロピル）−２’−（ベンジルオキシ）ビフェニル−３−カルボキサミド、
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４’−クロロビフェニル−４−イル）シクロプロピルアミノ）ペンタンアミド、
３−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（３−ブロモベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）プロパンアミド、
４−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピルアミノ）ブタンアミド、
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピルアミノ）ペンタンアミド、
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４’−クロロビフェニル−４−イル）シクロプロピルアミノ）−２−メチルペンタンアミド、
４−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４’−クロロビフェニル−４−イル）シクロプロピルアミノ）−２−メチルブタンアミド、
３−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（３−フルオロベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）−２，２−ジメチルプロパンアミド、
３−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４’−クロロビフェニル−４−イル）シクロプロピルアミノ）プロパンアミド、
４−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４’−クロロビフェニル−４−イル）シクロプロピルアミノ）ブタンアミド、
４−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（３−ブロモベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）ブタンアミド、
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（３−ブロモベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）ペンタンアミド、
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（ベンジルオキシ）ビフェニル−３−イル）シクロプロピルアミノ）ペンタンアミド、および
４−（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（ベンジルオキシ）ビフェニル−３−イル）シクロプロピルアミノ）ブタンアミド、
およびそれらの薬学的に許容される塩。
【０３０６】
式（Ｄ）の化合物は、ＷＯ２０１１／０４２２１７において開示される方法により調製することができ、その開示は、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
本発明による方法および使用において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、式（Ｅ）の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくは立体異性体の混合物（例えばラセミ混合物もしくはジアステレオマー混合物）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であってもよい。
【０３０７】
【化４１】
2019512546.tif 000047
【０３０８】
式（Ｅ）中、Ｅは、−Ｎ（Ｒ３）−、−Ｏ−もしくは−Ｓ−であり、または−Ｘ３＝Ｘ４−であり；
Ｘ１およびＸ２は、独立してＣ（Ｒ２）またはＮであり；
Ｘ３およびＸ４は、存在する場合、独立してＣ（Ｒ２）またはＮであり；
（Ｇ）は、シクリル基であり；
各（Ｒ１）は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクリル、−Ｌ１−シクリル、−Ｌ１−アミノ、−Ｌ１−ヒドロキシル、アミノ、アミド、ニトロ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、シアノ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、ヒドロキシル、アルコキシ、尿素、カルバメート、アシル、またはカルボキシルから独立して選択され；
各（Ｒ２）は、−Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクリル、−Ｌ１−シクリル、−Ｌ１−アミノ、−Ｌ１−ヒドロキシル、アミノ、アミド、ニトロ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、シアノ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、ヒドロキシル、アルコキシ、尿素、カルバメート、アシル、またはカルボキシルから独立して選択され、各（Ｒ２）基は、１、２、もしくは３個の独立して選択される任意選択の置換基を有し、または、２個の（Ｒ２）基が一緒になって、１、２、もしくは３個の独立して選択される任意選択の置換基を有するヘテロシクリルもしくはアリール基を形成し、前記任意選択の置換基は、アルキル、アルカノイル、ヘテロアルキル、ヘテロシクリル、ハロアルキル、シクロアルキル、カルボシクリル、アリールアルコキシ、ヘテロシクリルアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロシクリルオキシ、アルコキシ、ハロアルコキシ、オキソ、アシルオキシ、カルボニル、カルボキシル、カルボキサミド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、アミノアルキル、アミドアルキル、アミド、ニトロ、チオール、アルキルチオ、アリールチオ、スルホンアミド、スルフィニル、スルホニル、尿素、またはカルバメートから独立して選択され；
Ｒ３は、−Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり；
各Ｌ１は、独立してアルキレンまたはヘテロアルキレンであり；
ｎは、０、１、２、３、４または５である。
【０３０９】
シクロプロピル環上の置換基に（ｔｒａｎｓ）配置を有する式（Ｅ）の化合物が好ましい。
好ましくは、式（Ｅ）の化合物は、以下のリストからの化合物である。
（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）ビフェニル−４−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（テルフェニル−４−イル）シクロプロパンアミン；
４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ビフェニル−４−オール；
４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ビフェニル−３−オール；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３，５−ジクロロフェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（４−クロロフェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−クロロフェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（４−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
４−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）ベンゾニトリル；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）ベンゾニトリル；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（６−ｐ−トリルピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（６−ｍ−トリルピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
４−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）フェノール；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）フェノール；
４−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）ベンズアミド；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）ベンズアミド；
２−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）フェノール；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）フェノール；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−メトキシ−４−メチルフェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
５−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−２−フルオロフェノール；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−５−フルオロフェノール；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−４−フルオロフェノール；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−２−フルオロフェノール；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−２，４−ジフルオロフェノール；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−２，４，６−トリフルオロフェノール；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−５−クロロフェノール；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（６−（２−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（６−（５−クロロチオフェン−２−イル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（６−（５−メチルチオフェン−２−イル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（６−（１Ｈ−インドール−６−イル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（６−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−５−イル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−３−メチルピリジン−２−イル）フェノール；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−クロロフェニル）−５−メチルピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（５−メチル−６−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（４−フルオロ−３−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−フルオロ−５−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（２−フルオロ−５−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（２−フルオロ−３−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−クロロ−５−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（２−クロロ−５−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−メトキシ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−５−メトキシベンゾニトリル；
５−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−２−メチルフェノール；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−４−クロロフェノール；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）フェノール；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
Ｎ−（３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）フェニル）アセトアミド；
Ｎ−（３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）フェニル）メタンスルホンアミド；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
５−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）チオフェン−２−カルボニトリル；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（４−メチルチオフェン−３−イル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（２−（４−クロロフェニル）−６−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
４−（３−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−６−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−２−イル）フェノール；
４−（３−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−６−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−２−イル）ベンズアミド；
（ｔｒａｎｓ）−２−（２−メチル−６−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−５−ヒドロキシベンゾニトリル；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３，４−ジフルオロ−５−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
５−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−２，３−ジフルオロフェノール；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−クロロ−４−フルオロ−５−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
５−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−３−クロロ−２−フルオロフェノール；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（１Ｈ−インダゾール−６−イル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（９Ｈ−カルバゾール−２−イル）ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
６−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）インドリン−２−オン；
６−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）ベンゾフラン−２（３Ｈ）−オン；
４−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）ピリジン−２（１Ｈ）−オン；
Ｎ−（３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）フェニル）ベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−（３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）フェニル）プロパン−２−スルホンアミド；
４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−４−フルオロビフェニル−３−オール；
４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−５−クロロビフェニル−３−オール；
４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−５−クロロ−４−フルオロビフェニル−３−オール；
Ｎ−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ビフェニル−３−イル）ベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ビフェニル−３−イル）プロパン−２−スルホンアミド；
Ｎ−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ビフェニル−３−イル）メタンスルホンアミド；
Ｎ−（２−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）フェニル）メタンスルホンアミド；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−４−メトキシベンゾニトリル；
Ｎ−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ビフェニル−２−イル）メタンスルホンアミド；
４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−６−メトキシビフェニル−３−カルボニトリル；
Ｎ−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−６−メトキシビフェニル−３−イル）メタンスルホンアミド；
４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−６−ヒドロキシビフェニル−３−カルボニトリル；
Ｎ−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−６−ヒドロキシビフェニル−３−イル）メタンスルホンアミド；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−４−ヒドロキシベンゾニトリル；
Ｎ−（３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−４−ヒドロキシフェニル）メタンスルホンアミド；
Ｎ−（３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）エタンスルホンアミド；
Ｎ−（３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）メタンスルホンアミド；
３−（６−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−３−イル）フェノール；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（５−（３−メトキシフェニル）ピリジン−２−イル）シクロプロパンアミン；
４−（６−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−３−イル）フェノール；
２−（６−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−３−イル）フェノール；
２−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）チオフェン−２−イル）フェノール；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）チオフェン−２−イル）フェノール；
４−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）チオフェン−２−イル）フェノール；
２−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）チアゾール−２−イル）フェノール；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）チアゾール−２−イル）フェノール；
４−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）チアゾール−２−イル）フェノール；
２−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）チアゾール−５−イル）フェノール；
３−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）チアゾール−５−イル）フェノール；
２−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）チアゾール−５−イル）フェノール；
３−（２−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）チアゾール−５−イル）フェノール；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリミジン−２−イル）フェノール；
４−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリミジン−２−イル）フェノール；
Ｎ−（３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−４−メトキシフェニル）メタンスルホンアミド；
Ｎ−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−５−クロロ−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メタンスルホンアミド；
Ｎ−（３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−５−クロロフェニル）メタンスルホンアミド；
Ｎ−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−４−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メタンスルホンアミド；
Ｎ−（５−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−２−フルオロフェニル）メタンスルホンアミド；
Ｎ−（３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）フェニル）エタンスルホンアミド；
Ｎ−（３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）フェニル）−４−シアノベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−（３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）フェニル）−３−シアノベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−（３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）フェニル）−２−シアノベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−（３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−シアノベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−１，１，１−トリフルオロメタンスルホンアミド；
４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−６−ヒドロキシ−［１，１’−ビフェニル］−３−カルボニトリル；
４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−２−オール；
４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−３’−メトキシ−［１，１’−ビフェニル］−３−オール；
Ｎ−（３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）チアゾール−２−イル）フェニル）−２−シアノベンゼンスルホンアミド；
およびそれらの薬学的に許容される塩。
【０３１０】
式（Ｅ）の化合物は、ＷＯ２０１２／０１３７２７において開示される方法により調製することができ、その開示は、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
本発明による方法および使用において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、式（Ｆ）の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくは立体異性体の混合物（例えばラセミ混合物もしくはジアステレオマー混合物）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であってもよい。
（Ａ’）Ｘ−（Ａ）−（Ｂ）−（Ｚ）−（Ｌ）−（Ｄ）
（Ｆ）
式（Ｆ）中、（Ａ）は、ヘテロアリールまたはアリールであり；
各（Ａ’）は、存在する場合、アリール、アリールアルコキシ、アリールアルキル、ヘテロシクリル、アリールオキシ、ハロ、アルコキシ、ハロアルキル、シクロアルキル、ハロアルコキシ、およびシアノから独立して選択され、各（Ａ’）は、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、アリール、アリールアルコキシ、アルキル、アルコキシ、アミド、−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、ヘテロアリール、シアノ、スルホニル、およびスルフィニルから独立して選択される０、１、２、または３個の置換基で置換され；
Ｘは、０、１、２、または３であり；
（Ｂ）は、シクロプロピル環であり、（Ａ）および（Ｚ）は、（Ｂ）の異なる炭素原子に共有結合し；
（Ｚ）は、−ＮＨ−であり；
（Ｌ）は、単結合、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、および−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−から選択され；
（Ｄ）は、脂肪族炭素環基またはベンゾシクロアルキルであり、前記脂肪族炭素環基または前記ベンゾシクロアルキルは、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、アルキル、ハロ、アミド、シアノ、アルコキシ、ハロアルキル、およびハロアルコキシから独立して選択される０、１、２、または３個の置換基を有する。
【０３１１】
好ましくは、式（ＶＩ）中、
（Ａ）は、アリールまたはヘテロアリールである。前記アリールは、好ましくはフェニルである。前記ヘテロアリールは、好ましくはピリジニル、ピリミジニル、もしくはチオフェニルであり；および／または、
（Ａ’）は、存在する場合、アリールもしくはアリールアルコキシである。前記アリールは、好ましくはフェニルである。前記アリールアルコキシは、好ましくはベンジルオキシであり、その全ては、上記のように任意選択で置換されていてもよく；および／または、
（Ｌ）は、単結合である。
【０３１２】
シクロプロピル環上の置換基に（ｔｒａｎｓ）配置を有する式（Ｆ）の化合物が好ましい。
好ましくは、式（Ｆ）の化合物は、以下のリストからの化合物である。
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）−６−メトキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）−５，６−ジメトキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）−４，５−ジメトキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−アミン；
６−メトキシ−Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−アミン；
６−クロロ−Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−６−（トリフルオロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−アミン；
７−メトキシ−Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−クロロビフェニル−４−イル）シクロプロピル）−６−メトキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４’−クロロビフェニル−４−イル）シクロプロピル）−６−メトキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−アミン；
６−メトキシ−Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−メトキシビフェニル−４−イル）シクロプロピル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−アミン；
Ｎ−ｔｒａｎｓ−（２−シクロヘキシルエチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（３−シクロヘキシルプロピル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２−シクロヘプチルエチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（４−（３−ブロモベンジルオキシ）フェニル）−Ｎ−（２−シクロヘキシルエチル）シクロプロパンアミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（３−ブロモベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）−６−メトキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−アミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（３’−クロロビフェニル−４−イル）−Ｎ−（２−シクロヘキシルエチル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（４’−クロロビフェニル−４−イル）−Ｎ−（２−シクロヘキシルエチル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２−シクロヘキシルエチル）−２−（３’−メトキシビフェニル−４−イル）シクロプロパンアミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）−７−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−アミン；および
１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）シクロプロパンカルボキサミド；
およびそれらの薬学的に許容される塩。
【０３１３】
式（Ｆ）の化合物は、ＷＯ２０１１／１３１６９７において開示される方法により調製することができ、その開示は、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
本発明による方法および使用において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、式（Ｇ）の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくは立体異性体の混合物（例えばラセミ混合物もしくはジアステレオマー混合物）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であってもよい。
【０３１４】
【化４２】
2019512546.tif 000048
【０３１５】
式（Ｇ）中、Ｅは、−Ｘ３＝Ｘ４−、−Ｎ（Ｒ３）−、−Ｓ−、または−Ｏ−であり；
Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立してＣ（Ｒ２）またはＮであり；
Ｘ３およびＸ４は、存在する場合、それぞれ独立してＣ（Ｒ２）またはＮであり；
Ｌ１は、−ＮＨ−または−ＮＨ−ＣＨ２−であり；
Ｇは、シクリル基であり；
各Ｒ１は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクリル、−Ｌ２−シクリル、−Ｌ２−アミノ、−Ｌ２−ヒドロキシル、アミノ、アミド、ニトロ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、シアノ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、ヒドロキシル、アルコキシ、尿素、カルバメート、アシル、またはカルボキシルから独立して選択され；
各Ｒ２は、−Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクリル、−Ｌ２−シクリル、−Ｌ２−アミノ、−Ｌ２−ヒドロキシル、アミノ、アミド、ニトロ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、シアノ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、ヒドロキシル、アルコキシ、尿素、カルバメート、アシル、またはカルボキシルから独立して選択され、各Ｒ２基は、１、２、または３個の独立して選択される任意選択の置換基を有し、さらに、隣接炭素原子に結合した２個のＲ２基が一緒になって、１、２、または３個の独立して選択される任意選択の置換基を有するヘテロシクリルまたはアリール基を形成してもよく；前記任意選択の置換基は、アルキル、アルカノイル、ヘテロアルキル、ヘテロシクリル、ハロアルキル、シクロアルキル、カルボシクリル、アリールアルコキシ、ヘテロシクリルアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロシクリルオキシ、アルコキシ、ハロアルコキシ、オキソ、アシルオキシ、カルボニル、カルボキシル、カルボキサミド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、アミノアルキル、アミドアルキル、アミド、ニトロ、チオール、アルキルチオ、アリールチオ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、尿素またはカルバメートからそれぞれ独立して選択され；
Ｒ３は、−Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり；
各Ｌ２は、アルキレンまたはヘテロアルキレンから独立して選択され；
ｎは、０、１、２、３、４または５である。
【０３１６】
シクロプロピル環上の置換基に（ｔｒａｎｓ）配置を有する式（Ｇ）の化合物が好ましい。
好ましくは、式（Ｇ）の化合物は、以下のリストからの化合物である。
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（３−クロロフェニル）ピリジン−２−アミン；
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（４−クロロフェニル）ピリジン−２−アミン；
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−２−アミン；
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（３−メトキシフェニル）ピリジン−２−アミン；
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（４−メトキシフェニル）ピリジン−２−アミン；
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−ｐ−トリルピリジン−２−アミン；
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−ｍ−トリルピリジン−２−アミン；
４−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イルアミノ）ベンゾニトリル；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イルアミノ）ベンゾニトリル；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イルアミノ）ベンズアミド；
４−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イルアミノ）ベンズアミド；
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（３−クロロベンジル）ピリジン−２−アミン；
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（４−クロロベンジル）ピリジン−２−アミン；
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（３−（トリフルオロメチル）ベンジル）ピリジン−２−アミン；
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）ピリジン−２−アミン；
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（３−メチルベンジル）ピリジン−２−アミン；
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（４−メチルベンジル）ピリジン−２−アミン；
３−（（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イルアミノ）メチル）ベンゾニトリル；
４−（（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イルアミノ）メチル）ベンゾニトリル；
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（３−メトキシベンジル）ピリジン−２−アミン；
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（４−メトキシベンジル）ピリジン−２−アミン；
４−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イルアミノ）フェノール；
３−（（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イルアミノ）メチル）ベンズアミド；
４−（（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イルアミノ）メチル）ベンズアミド；
４−（（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イルアミノ）メチル）フェノール；
５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）ピリジン−２−アミン；
Ｎ−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−１Ｈ−インドール−７−アミン；
Ｎ−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−７−アミン；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）ピリジン−２−イルアミノ）フェノール；
４−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（４−メチルベンジル）アニリン；
４−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ベンジル）アニリン；
４−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（３−クロロベンジル）アニリン；
３−（（（４−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）フェニル）アミノ）メチル）ベンゾニトリル；
４−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（ｐ−トリル）アニリン；
４−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）−Ｎ−（４−クロロフェニル）アニリン；
３−（（４−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）フェニル）アミノ）ベンゾニトリル；
Ｎ−（４−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）フェニル）−３−メトキシアニリン；
３−（（４−（（ｔｒａｎｓ）−２−アミノシクロプロピル）フェニル）アミノ）ベンズアミド；
およびそれらの薬学的に許容される塩。
【０３１７】
式（Ｇ）の化合物は、ＷＯ２０１２／０４５８８３において開示される方法により調製することができ、その開示は、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
本発明による方法および使用において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、式（Ｈ）の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくは立体異性体の混合物（例えばラセミ混合物もしくはジアステレオマー混合物）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であってもよい。
【０３１８】
【化４３】
2019512546.tif 000049
【０３１９】
式（Ｈ）中、（Ａ）は、ｎ個の置換基（Ｒ３）を有するシクリル基であり；
（Ｂ）は、シクリル基または−（Ｌ１）−シクリル基であり、前記シクリル基または前記−（Ｌ１）−シクリル基に含まれるシクリル部分は、ｎ個の置換基（Ｒ２）を有し；
（Ｌ１）は、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｎ（アルキル）−、アルキレンまたはヘテロアルキレンであり；
（Ｄ）は、ヘテロアリール基または−（Ｌ２）−ヘテロアリール基であり、前記ヘテロアリール基または前記−（Ｌ２）−ヘテロアリール基に含まれるヘテロアリール部分は、１個の置換基（Ｒ１）を有し、さらに、前記ヘテロアリール基は、環炭素原子を介して分子の残りに共有結合し、または、前記（Ｌ２）−ヘテロアリール基に含まれるヘテロアリール部分は、環炭素原子を介して（Ｌ２）部分に共有結合し；
（Ｌ２）は、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｎ（アルキル）−、アルキレンまたはヘテロアルキレンであり；
（Ｒ１）は、これらに限定されないが、−ＯＨ、−ＮＨ２、アミド、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２または−ＣＨ２−ＮＨ２を含む水素結合基であり；
各（Ｒ２）は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクリル、アミノ、アミド、Ｃ−アミド、アルキルアミノ、ヒドロキシル、ニトロ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、シアノ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、アルコキシ、アシル、カルボキシル、カルバメートまたは尿素から独立して選択され；
各（Ｒ３）は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクリル、アミノ、アミド、Ｃ−アミド、アルキルアミノ、ヒドロキシル、ニトロ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、シアノ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、アルコキシ、アシル、カルボキシル、カルバメートまたは尿素から独立して選択され；
ｎは、独立して、０、１、２、３または４である。
【０３２０】
好ましくは、式（Ｈ）中、
（Ａ）は、アリールまたはヘテロアリールである。前記アリールは、好ましくはフェニルである。前記ヘテロアリールは、好ましくはピリジニルであり、および／または；
（Ｂ）は、−Ｏ−ＣＨ２−フェニルもしくはフェニルであり、そのそれぞれは、ｎ個の置換基Ｒ２で任意選択で置換されていてもよく、および／または；
（Ｄ）は、単環式ヘテロアリール、好ましくはチアゾリル、オキサジアゾリルもしくはピリミジニル、より好ましくはオキサジアゾリルであり；および／または；
（Ｒ１）は、−ＮＨ２もしくは−ＮＨＣＨ３、より好ましくは−ＮＨ２である。
【０３２１】
シクロプロピル環上の置換基に（ｔｒａｎｓ）配置を有する式（Ｈ）の化合物が好ましい。
好ましくは、式（Ｈ）の化合物は、以下のリストからの化合物である。
５−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）メチル）ピリミジン−２−アミン；
５−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）メチル）チアゾール−２−アミン；
５−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロピルアミノ）メチル）ピリミジン−２−アミン；
５−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロピルアミノ）メチル）チアゾール−２−アミン；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（２−アミノピリミジン−５−イル）メチルアミノ）シクロプロピル）ピリジン−２−イル）フェノール；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（２−アミノチアゾール−５−イル）メチルアミノ）シクロプロピル）ピリジン−２−イル）フェノール；
４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（２−アミノピリミジン−５−イル）メチルアミノ）シクロプロピル）ビフェニル−３−オール；
４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（２−アミノチアゾール−５−イル）メチルアミノ）シクロプロピル）ビフェニル−３−オール；
５−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）メチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−アミン；
５−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（４−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（３−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（３，５−ジフルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（４−クロロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（３−クロロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（２−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−Ｎ−メチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
Ｎ−（５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）アセトアミド；
４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（（５−アミノ−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）メチル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−オール；
５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−アミン；
２−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）チアゾール−５−アミン；
４−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）アミノ）メチル）チアゾール−２−アミン；
２−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）オキサゾール−５−アミン；
３−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）イソオキサゾール−５−アミン；
５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１，３，４−オキサジアゾール−３−アミン；
３−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−アミン；
５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，２，４−チアジアゾール−３−アミン；
５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）ピリジン−２−アミン；
６−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）ピリダジン−３−アミン；
５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）ピラジン−２−アミン；
２−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）ピリミジン−５−アミン；
６−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，２，４−トリアジン−３−アミン；
３−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，２，４−トリアジン−６−アミン；
４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（２−アミノチアゾール−５−イル）メチルアミノ）シクロプロピル）ビフェニル−３−オール；
５−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）メチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−アミン；
５−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（４−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（３−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
（−）５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
（−）５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（３−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
（−）５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−Ｎ−メチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
（−）Ｎ−（５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）アセトアミド；
（−）５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）ピリミジン−２−アミン；
（−）５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−アミン；
（−）５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（２−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（２−アミノチアゾール−５−イル）メチルアミノ）シクロプロピル）ビフェニル−３−オール；
５−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）メチル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−アミン；
５−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（４−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（３−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
（−）５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
（−）５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（３−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
（−）５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−Ｎ−メチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
（−）Ｎ−（５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）アセトアミド；
（−）５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）ピリミジン−２−アミン；
（−）５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−チアジアゾール−２−アミン；
（−）５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（２−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
およびそれらの薬学的に許容される塩。
【０３２２】
さらにより好ましくは、式（Ｈ）の化合物は、（−）５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン、またはその薬学的に許容される塩である。
【０３２３】
式（Ｈ）の化合物は、ＷＯ２０１２／０１３７２８において開示される方法により調製することができ、その開示は、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
本発明による方法および使用において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、式（Ｊ）の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくは立体異性体の混合物（例えばラセミ混合物もしくはジアステレオマー混合物）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であってもよい。
【０３２４】
【化４４】
2019512546.tif 000050
【０３２５】
式中、
Ａは、アリールまたはヘテロアリールであり、前記アリールまたは前記ヘテロアリールは、１個または複数のＲ１で任意選択で置換され；
Ｂは、水素、Ｒ１または−Ｌ−Ｅであり；
Ｅは、アリールまたはヘテロアリールであり、前記アリールまたは前記ヘテロアリールは、１個または複数のＲ２で任意選択で置換され；
Ｌは、結合、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）−、Ｃ１〜４アルキレンまたはヘテロＣ１〜４アルキレンであり；
Ｄは、４から７個のＣ原子を有するシクロアルキル基であり、前記シクロアルキル基は、１個または２個の置換基Ｒ３を有し、１個または複数のＲ４でさらに任意選択で置換され、シクロアルキル基は、任意選択で、
（ａ）フェニルまたはＮ、ＯおよびＳから独立して選択される１から３個のヘテロ原子を含有する５員もしくは６員芳香族ヘテロ環式環に融合し、前記融合フェニルまたは前記融合芳香族ヘテロ環式環は、任意選択で１個または複数のＲ５で置換され；あるいは、
（ｂ）シクロアルキル基の任意の２個の非隣接環炭素原子を連結するリンカー基−（Ｃ（Ｒａ）２）ｐ−に結合し、式中、ｐは１または２であり、各Ｒａは、独立して水素またはＣ１〜４アルキルであり；あるいは
（ｃ）３から７員飽和炭素環式環、またはＮ、ＯおよびＳから独立して選択される１から３個のヘテロ原子を含有する３から７員飽和へテロ環式環である第２の環に連結し、前記第２の環は、両方の環に共通する単一の炭素原子を介してシクロアルキル基と連結し、前記第２の環は、１個または複数のＲ６で任意選択で置換され；
各Ｒ１は、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ２〜８アルケニル、Ｃ２〜８アルキニル、シクリル、アミノ、アミド、ヒドロキシル、ニトロ、ハロ、ハロＣ１〜８アルキル、ハロＣ１〜８アルコキシ、シアノ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、Ｃ１〜８アルコキシ、アシル、カルボキシル、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルボキシ、カルバメートおよび尿素から独立して選択され；
各Ｒ２は、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ２〜８アルケニル、Ｃ２〜８アルキニル、シクリル、アミノ、アミド、ヒドロキシル、ニトロ、ハロ、ハロＣ１〜８アルキル、ハロＣ１〜８アルコキシ、シアノ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、Ｃ１〜８アルコキシ、アシル、カルボキシル、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルボキシ、カルバメートおよび尿素から独立して選択され；
各Ｒ３は、−ＮＲ７Ｒ８、−ＮＨＯＨ、−ＮＲ９ＣＯＲ１０、−ＮＲ９ＳＯ２Ｒ１０、−ＮＲ９ＣＯＯＲ１０、−ＮＲ９ＣＯＮＲ７Ｒ８、−ＮＲ９ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８、−ＯＨ、−ＣＯＮＲ７Ｒ８、オキソ、−Ｃ１〜４アルキレン−ＮＲ７Ｒ８、−Ｃ１〜４アルキレン−ＮＨＯＨ、−Ｃ１〜４アルキレン−ＮＲ９ＣＯＲ１０、−Ｃ１〜４アルキレン−ＮＲ９ＳＯ２Ｒ１０、−Ｃ１〜４アルキレン−ＮＲ９ＣＯＯＲ１０、−Ｃ１〜４アルキレン−ＮＲ９ＣＯＮＲ７Ｒ８、−Ｃ１〜４アルキレン−ＮＲ９ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８、−Ｃ１〜４アルキレン−ＯＨおよび−Ｃ１〜４アルキレン−ＣＯＮＲ７Ｒ８から独立して選択され；
各Ｒ４および各Ｒ６は、Ｃ１〜８アルキル、ハロ、ハロＣ１〜８アルキル、ハロＣ１〜８アルコキシ、およびＣ１〜８アルコキシから独立して選択され；
各Ｒ５は、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ２〜８アルケニル、Ｃ２〜８アルキニル、シクリル、アミノ、アミド、ヒドロキシル、ニトロ、ハロ、ハロＣ１〜８アルキル、ハロＣ１〜８アルコキシ、シアノ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、Ｃ１〜８アルコキシ、アシル、カルボキシル、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルボキシ、カルバメートおよび尿素から独立して選択され；
各Ｒ７および各Ｒ８は、水素、Ｃ１〜８アルキル、Ｒ１２Ｒ１３Ｎ−Ｃ１〜８アルキルおよびヒドロキシＣ１〜８アルキルから独立して選択され、または、Ｒ７およびＲ８は、互いに連結して、それらが結合しているＮ原子と共に、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個のさらなるヘテロ原子を任意選択で含有する飽和３から７員へテロ環式環を形成し、前記へテロ環式環の１個または複数のＣ原子は、任意選択で酸化されてＣＯ基を形成し、前記へテロ環式環における１個または複数のＳ原子は、存在する場合、任意選択で酸化されて、独立してＳＯ基またはＳＯ２基を形成し、前記へテロ環式環は、１個または複数のＲ１１で任意選択で置換され；
各Ｒ９は、水素およびＣ１〜４アルキルから独立して選択され；
各Ｒ１０は、Ｃ１〜８アルキル、ハロＣ１〜８アルキル、シクリルおよびシクリルＣ１〜８アルキルから独立して選択され、前記シクリルまたは前記シクリルＣ１〜８アルキルに含まれるシクリル部分は、１個または複数のＲ１４で任意選択で置換され；
各Ｒ１１は、Ｃ１〜８アルキル、ハロ、Ｃ１〜８アルコキシ、ヒドロキシルおよび−ＮＲ１２Ｒ１３から独立して選択され；
各Ｒ１２および各Ｒ１３は、水素およびＣ１〜８アルキルから独立して選択され；
各Ｒ１４は、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ２〜８アルケニル、Ｃ２〜８アルキニル、アミノ、アミド、ヒドロキシル、ニトロ、ハロ、ハロＣ１〜８アルキル、ハロＣ１〜８アルコキシ、シアノ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、Ｃ１〜８アルコキシ、アシル、カルボキシル、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルボキシ、カルバメートおよび尿素から独立して選択され；
各Ｒｗ、Ｒｘ、ＲｙおよびＲｚは、水素、ハロおよびＣ１〜４アルキルから独立して選択される。
【０３２６】
好ましくは、式（Ｊ）中、
（Ａ）は、フェニル、チアゾリルもしくはピリジル、好ましくはフェニルであり、この環は、１個もしくは複数のＲ１で任意選択で置換されていてもよく、ならびに／または
（Ｂ）は、Ｈであり、ならびに／または
（Ｒ１）は、Ｃ１〜８アルキル、アミノ、アミド、ヒドロキシル、ハロ、ハロＣ１〜８アルキル、ハロＣ１〜８アルコキシ、シアノ、スルホンアミド、Ｃ１〜８アルコキシ、アシル、カルボキシル、カルバメート、および尿素、より好ましくはハロ、Ｃ１〜４アルキル、ハロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシおよびＣ３〜６シクロアルキルであり；ならびに／または
（Ｄ）は、Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３およびＤ４から選択され、
【０３２７】
【化４５】
2019512546.tif 000051
【０３２８】
より好ましくはＤ３であり；ならびに／または
（Ｒ３）は、−ＮＲ７Ｒ８、−ＮＨＯＨ、−ＮＲ９ＣＯＲ１０、−ＮＲ９ＳＯ２Ｒ１０、−ＮＲ９ＣＯＯＲ１０、−ＮＲ９ＣＯＮＲ７Ｒ８、−ＮＲ９ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８、−ＯＨ、−ＣＯＮＲ７Ｒ８、オキソ、−Ｃ１〜４アルキレン−ＮＲ７Ｒ８、−Ｃ１〜４アルキレン−ＯＨおよび−Ｃ１〜４アルキレン−ＣＯＮＲ７Ｒ８から、より好ましくは−ＮＲ７Ｒ８、−ＯＨ、−Ｃ１〜４アルキレン−ＮＲ７Ｒ８、および−Ｃ１〜４アルキレン−ＯＨから選択され、さらにより好ましくは−ＮＲ７Ｒ８（例えば−ＮＨ２）であり；ならびに／または
各Ｒｗ、Ｒｘ、ＲｙおよびＲｚは、水素である。
【０３２９】
シクロプロピル環上の置換基に（ｔｒａｎｓ）配置を有する式（Ｊ）の化合物が好ましい。
好ましくは、式（Ｊ）の化合物は、以下のリストからの化合物である。
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｃｉｓ）−Ｎ１−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｃｉｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（チアゾール−５−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（ピリジン−３−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロピル）アミノ）シクロヘキサノール；
４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロピル）アミノ）シクロヘキサンカルボキサミド；
Ｎ−（４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロピル）アミノ）シクロヘキシル）アセトアミド；
Ｎ−（４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロピル）アミノ）シクロヘキシル）メタンスルホンアミド；
（Ｒ）−１−（４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）アミノ）シクロヘキシル）ピロリジン−３−アミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４’−クロロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−クロロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−オール；
Ｎ−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メタンスルホンアミド；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（２−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（３−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（４−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−メチル−Ｎ４−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−メチル−Ｎ４−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）−Ｎ４−メチルシクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロブタン−１，３−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）シクロブタン−１，３−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）シクロブタン−１，３−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１，３−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１，３−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１，３−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−フルオロ−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（１Ｓ，２Ｓ）−２−フルオロ−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｒ）−２−フルオロ−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
１−メチル−Ｎ４−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
４−（アミノメチル）−Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサンアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，３−ジアミン；
Ｎ１−（（ｃｉｓ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｔｅｒｔ−ブチル（４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）アミノ）シクロヘキシル）カルバメート；
１−エチル−３−（４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）アミノ）シクロヘキシル）尿素；
４−モルホリノ−Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサンアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ブロモフェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（２−（ｏ−トリル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（２−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（２−（４−メトキシフェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
４−（２−（（４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）フェノール；
Ｎ１−（２−（２−フルオロフェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（２−（３，４−ジフルオロフェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（２−（ナフタレン−２−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（２−メチル−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（Ｒ）−１−（４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）アミノ）シクロヘキシル）ピロリジン−３−アミン；
（Ｃｉｓ）−Ｎ１−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（Ｃｉｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−シクロプロピルフェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ピリジン−３−イル）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（１Ｈ−インダゾール−６−イル）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）チオフェン−２−イル）フェノール；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）チアゾール−２−イル）フェノール；
３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）ピリジン−２−イル）−５−メトキシベンゾニトリル；
５−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）ピリジン−２−イル）−２−メチルフェノール；
Ｎ−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−６−メトキシ−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メタンスルホンアミド；
Ｎ−（３−（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）チアゾール−２−イル）フェニル）−２−シアノベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−２−シアノベンゼンスルホンアミド；
６−アミノ−Ｎ−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）ピリジン−３−スルホンアミド；
Ｎ−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）ピペラジン−１−スルホンアミド；
Ｎ１−（（ｃｉｓ）−２−フルオロ−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（３−（ピペラジン−１−イル）ベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ピリジン−３−イルメトキシ）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（（３−メチルベンジル）アミノ）ピリジン−３−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
３−（（５−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）ピリジン−２−イル）アミノ）ベンゾニトリル；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（ナフタレン−２−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（ｏ−トリル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−メトキシフェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（２−フルオロフェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３，４−ジフルオロフェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ１−（（ｔｒａｎｓ）−２−メチル−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｃｉｓ）−Ｎ１−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（ピリジン−３−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（ピリジン−３−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｃｉｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（ピリジン−３−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（ピリジン−３−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｃｉｓ）−Ｎ１−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロブタン−１，３−ジアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロブタン−１，３−ジアミン；
（ｃｉｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロブタン−１，３−ジアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロブタン−１，３−ジアミン；
（ｃｉｓ）−Ｎ１−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（３，４−ジフルオロフェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（３，４−ジフルオロフェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｃｉｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（３，４−ジフルオロフェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（３，４−ジフルオロフェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｃｉｓ）−Ｎ１−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（ナフタレン−２−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（ナフタレン−２−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｃｉｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（ナフタレン−２−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（ナフタレン−２−イル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｃｉｓ）−Ｎ１−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（４−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（４−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｃｉｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（４−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（４−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
Ｎ−（４’−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（（（ｃｉｓ）−４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）ピペラジン−１−スルホンアミド；
Ｎ−（４’−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（（（ｔｒａｎｓ）−４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）ピペラジン−１−スルホンアミド；
Ｎ−（４’−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（（（ｃｉｓ）−４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）ピペラジン−１−スルホンアミド；
Ｎ−（４’−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（（（ｔｒａｎｓ）−４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）ピペラジン−１−スルホンアミド；
（ｃｉｓ）−Ｎ１−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（４−（（２−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（４−（（２−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｃｉｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（４−（（２−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（４−（（２−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）シクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；
およびそれらの薬学的に許容される塩。
【０３３０】
さらにより好ましくは、式（Ｊ）の化合物は、（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン；またはその薬学的に許容される塩である。
【０３３１】
式（Ｊ）の化合物は、ＷＯ２０１３／０５７３２２において開示される方法により調製することができ、その開示は、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
本発明による方法および使用において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、式（Ｋ）の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくは立体異性体の混合物（例えばラセミ混合物もしくはジアステレオマー混合物）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であってもよい。
【０３３２】
【化４６】
2019512546.tif 000052
【０３３３】
式中、
Ａは、アリールまたはヘテロアリールであり、前記アリールまたはヘテロアリールは、１個または複数のＲ１で任意選択で置換され；
Ｂは、Ｈ、Ｒ１または−Ｌ１−Ｅであり；
Ｅは、アリールまたはヘテロアリールであり、前記アリールまたは前記ヘテロアリールは、１個または複数のＲ２で任意選択で置換され；
Ｌ１は、結合、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）−、Ｃ１〜４アルキレンまたはヘテロＣ１〜４アルキレンであり；
Ｌ２は、結合であり、Ｄは、
（ｉ）Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される１もしくは２個のヘテロ原子を含有する３から７員単環式飽和へテロ環式環、ならびに
（ｉｉ）少なくとも１つの飽和へテロ環式環を含む７から１５員多環式環系であって、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される１から４個のヘテロ原子を含有する多環式環系
から選択される環式基であり、
環式基（ｉ）もしくは（ｉｉ）は、環Ｃ原子を介して式Ｉの化合物の残りに連結し、
環式基（ｉ）もしくは（ｉｉ）中の１個もしくは複数の環Ｃ原子は、任意選択で酸化されてＣＯ基を形成し、
存在する場合には、環式基（ｉ）もしくは（ｉｉ）中の１個もしくは複数のＳ原子は、任意選択で酸化されて、独立してＳＯ基もしくはＳＯ２基を形成し、
環式基（ｉ）もしくは（ｉｉ）は、１個もしくは複数のＲ３で任意選択で置換され；
または、Ｌ２は、Ｃ１〜４アルキレンであり、Ｄは、
（ｉｉｉ）Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される１もしくは２個のヘテロ原子を含有する３から７員単環式飽和へテロ環式環、ならびに
（ｉｖ）少なくとも１つのへテロ環式環を含む７から１５員多環式飽和環系であって、Ｎ、ＯおよびＳから独立して選択される１から４個のヘテロ原子を含有する多環式飽和環系
から選択される環式基であり、
環式基（ｉｉｉ）もしくは（ｉｖ）は、環Ｃ原子を介して式Ｉの化合物の残りに連結し、
環式基（ｉｉｉ）もしくは（ｉｖ）中の１個もしくは複数の環Ｃ原子は、任意選択で酸化されてＣＯ基を形成し、
存在する場合には、環式基（ｉｉｉ）もしくは（ｉｖ）中の１個もしくは複数のＳ原子は、任意選択で酸化されて、独立してＳＯ基もしくはＳＯ２基を形成し、
環式基（ｉｉｉ）もしくは（ｉｖ）は、１個もしくは複数のＲ３で任意選択で置換され；
各Ｒ１は、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ２〜８アルケニル、Ｃ２〜８アルキニル、シクリル、アミノ、アミド、ヒドロキシル、ニトロ、ハロ、ハロＣ１〜８アルキル、ハロＣ１〜８アルコキシ、シアノ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、Ｃ１〜８アルコキシ、アシル、カルボキシル、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルボキシ、カルバメートおよび尿素から独立して選択され；
各Ｒ２は、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ２〜８アルケニル、Ｃ２〜８アルキニル、シクリル、アミノ、アミド、ヒドロキシル、ニトロ、ハロ、ハロＣ１〜８アルキル、ハロＣ１〜８アルコキシ、シアノ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、Ｃ１〜８アルコキシ、アシル、カルボキシル、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルボキシ、カルバメートおよび尿素から独立して選択され；
各Ｒ３は、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ２〜８アルケニル、Ｃ２〜８アルキニル、シクリル、アミノ、アミド、ヒドロキシル、ニトロ、ハロ、ハロＣ１〜８アルキル、ハロＣ１〜８アルコキシ、シアノ、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミド、Ｃ１〜８アルコキシ、アシル、カルボキシル、Ｏ−カルボキシ、Ｃ−カルボキシ、カルバメートおよび尿素から独立して選択され；
各Ｒｗ、Ｒｘ、ＲｙおよびＲｚは、水素、ハロおよびＣ１〜４アルキルから独立して選択される。
【０３３４】
好ましくは、式（Ｋ）中、
（Ａ）は、フェニル、チアゾリルもしくはピリジル、好ましくはフェニルであり、この環は、１個もしくは複数のＲ１で任意選択で置換されていてもよく、ならびに／または
（Ｂ）は、Ｈであり、ならびに／または
（Ｒ１）は、Ｃ１〜８アルキル、アミノ、アミド、ヒドロキシル、ハロ、ハロＣ１〜８アルキル、ハロＣ１〜８アルコキシ、シアノ、スルホンアミド、Ｃ１〜８アルコキシ、アシル、カルボキシル、カルバメート、および尿素、より好ましくはハロ、Ｃ１〜４アルキル、ハロＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシおよびＣ３〜６シクロアルキルであり；ならびに／または
Ｌ２は、結合であり、（Ｄ）は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個のヘテロ原子を含有する３から７員単環式飽和へテロ環式環（Ｄは、Ｃを介して式（Ｘ）の化合物の残りに連結している）、より好ましくは１個のＮ原子を含有する３から７員単環式飽和ヘテロ環式環（Ｄは、Ｃを介して式（Ｘ）の化合物の残りに連結している）であり、さらにより好ましくは、Ｄは、４−ピペリジニルであり、もしくは、Ｌ２は、結合であり、（Ｄ）は、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）から選択される環系であり、
【０３３５】
【化４７】
2019512546.tif 000053
【０３３６】
いずれのＤも、１個もしくは複数のＲ３で任意選択で置換され；ならびに／または
各Ｒｗ、Ｒｘ、ＲｙおよびＲｚは、水素である。
シクロプロピル環上の置換基に（ｔｒａｎｓ）配置を有する式（Ｋ）の化合物が好ましい。
【０３３７】
好ましくは、式（Ｋ）の化合物は、以下のリストからの化合物である。
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロピル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（ピリジン−３−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（チアゾール−５−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）ピペリジン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）ピペリジン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）ピロリジン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）ピロリジン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）ピロリジン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）アゼチジン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）アゼチジン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アゼチジン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）アゼパン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−３−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）デカヒドロキノリン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−３−アザスピロ［５．５］ウンデカン−９−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−２−アザスピロ［４．５］デカン−８−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−２，３−ジヒドロスピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−３−アミン；
Ｎ−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（ピリジン−３−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（ピリジン−３−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｓ，２Ｓ）−２−（チアゾール−５−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｒ）−２−（チアゾール−５−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−７−アザスピロ［３．５］ノナン−２−アミン；
Ｎ−（２−（ｏ−トリル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（２−（２−フルオロフェニル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（２−（３，４−ジフルオロフェニル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（２−（４−メトキシフェニル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（２−（ナフタレン−２−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（２−メチル−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（６−メトキシ−４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（ピペリジン−４−イルアミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メタンスルホンアミド；
Ｎ−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（ピペリジン−４−イルアミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）プロパン−２−スルホンアミド；
１−（メチルスルホニル）−Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
１−（４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ブロモフェニル）シクロプロピル）アミノ）ピペリジン−１−イル）エタノン；
４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ブロモフェニル）シクロプロピル）アミノ）ピペリジン−１−カルボキサミド；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ブロモフェニル）シクロプロピル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−アミン；
２，２，６，６−テトラメチル−Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
１−メチル−Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
１−イソプロピル−Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−１−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−１−（ピリジン−４−イル）ピペリジン−４−アミン；
４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ブロモフェニル）シクロプロピル）アミノ）テトラヒドロ−２Ｈ−チオピラン１，１−ジオキシド；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フルオロ−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｓ，２Ｓ）−２−フルオロ−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｒ）−２−フルオロ−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（ナフタレン−２−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−メチル−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（ｏ−トリル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（２−フルオロフェニル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３，４−ジフルオロフェニル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−メトキシフェニル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−フェニル−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−フェニル−Ｎ−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−フェニル−Ｎ−（２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（４’−クロロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−Ｎ−（２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）−２−（ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）−２−（チアゾール−５−イル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）−２−（ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）−２−（チアゾール−５−イル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−Ｎ−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）シクロプロパンアミン；
（１Ｓ，２Ｒ）−２−フェニル−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニル−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（１Ｓ，２Ｒ）−２−フェニル−Ｎ−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）シクロプロパンアミン；
（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニル−Ｎ−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）シクロプロパンアミン；
（１Ｓ，２Ｒ）−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）−２−（ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（１Ｒ，２Ｓ）−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）−２−（ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）−２−（チアゾール−５−イル）シクロプロパンアミン；
（１Ｒ，２Ｒ）−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）−２−（チアゾール−５−イル）シクロプロパンアミン；
（１Ｓ，２Ｒ）−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロパンアミン；
（１Ｒ，２Ｓ）−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロパンアミン；
（１Ｓ，２Ｒ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（１Ｒ，２Ｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（１Ｓ，２Ｒ）−Ｎ−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）−２−（ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（１Ｒ，２Ｓ）−Ｎ−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）−２−（ピリジン−３−イル）シクロプロパンアミン；
（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）−２−（チアゾール−５−イル）シクロプロパンアミン；
（１Ｒ，２Ｒ）−Ｎ−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）−２−（チアゾール−５−イル）シクロプロパンアミン；
（１Ｓ，２Ｒ）−Ｎ−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロパンアミン；
（１Ｒ，２Ｓ）−Ｎ−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロパンアミン；
（１Ｓ，２Ｒ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−Ｎ−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）シクロプロパンアミン；
（１Ｒ，２Ｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−Ｎ−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−フェニル−Ｎ−（ピロリジン−３−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（４−（（２−フルオロベンジル）オキシ）フェニル）−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（アゼチジン−３−イルメチル）−２−フェニルシクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（４−シクロプロピルフェニル）−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）−２−（４−（ピリジン−３−イル）フェニル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（４−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）フェニル）−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（Ｔｒａｎｓ）−２−（ナフタレン−２−イル）−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）シクロプロパンアミン；
２−メチル−２−フェニル−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−メチル−２−フェニル−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）シクロプロパンアミン；
（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）−Ｎ−（（１−メチルピペリジン−４−イル）メチル）シクロプロパンアミン；
およびそれらの薬学的に許容される塩。
【０３３８】
さらにより好ましくは、式（Ｋ）の化合物は、以下のリストからの化合物である。
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（６−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ピリジン−３−イル）シクロプロピル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（ピリジン−３−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（チアゾール−５−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）ピペリジン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）ピペリジン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）ピロリジン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）ピロリジン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）ピロリジン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）アゼチジン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）アゼチジン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アゼチジン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）アゼパン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−３−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）デカヒドロキノリン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−３−アザスピロ［５．５］ウンデカン−９−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−２−アザスピロ［４．５］デカン−８−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−２，３−ジヒドロスピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−３−アミン；
Ｎ−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（ピリジン−３−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（ピリジン−３−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｓ，２Ｓ）−２−（チアゾール−５−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｒ）−２−（チアゾール−５−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｓ，２Ｒ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（３’−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−７−アザスピロ［３．５］ノナン−２−アミン；
Ｎ−（２−（ｏ−トリル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（２−（２−フルオロフェニル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（２−（３，４−ジフルオロフェニル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（２−（４−メトキシフェニル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（２−（ナフタレン−２−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（２−メチル−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（６−メトキシ−４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（ピペリジン−４−イルアミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メタンスルホンアミド；
Ｎ−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（ピペリジン−４−イルアミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）プロパン−２−スルホンアミド；
１−（メチルスルホニル）−Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
１−（４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ブロモフェニル）シクロプロピル）アミノ）ピペリジン−１−イル）エタノン；
４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ブロモフェニル）シクロプロピル）アミノ）ピペリジン−１−カルボキサミド；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ブロモフェニル）シクロプロピル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−アミン；
２，２，６，６−テトラメチル−Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
１−メチル−Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
１−イソプロピル−Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−１−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フェニルシクロプロピル）−１−（ピリジン−４−イル）ピペリジン−４−アミン；
４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ブロモフェニル）シクロプロピル）アミノ）テトラヒドロ−２Ｈ−チオピラン１，１−ジオキシド；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−フルオロ−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｓ，２Ｓ）−２−フルオロ−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｒ）−２−フルオロ−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（ナフタレン−２−イル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−メチル−２−フェニルシクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（ｏ−トリル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（２−フルオロフェニル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（３，４−ジフルオロフェニル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
Ｎ−（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−メトキシフェニル）シクロプロピル）ピペリジン−４−アミン；
またはそれらの薬学的に許容される塩。
【０３３９】
式（Ｋ）の化合物は、ＷＯ２０１３／０５７３２０において開示される方法により調製することができ、その開示は、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
本発明による方法および使用において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、式（Ｌ）の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくは立体異性体の混合物（例えばラセミ混合物もしくはジアステレオマー混合物）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であってもよい。
【０３４０】
【化４８】
2019512546.tif 000054
【０３４１】
式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＮＳＯ２Ｍｅ、−ＮＳＯ２Ｐｈ、アリールアルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、−ＮＣ（Ｏ）Ｒａ、１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ハロゲン、アミド、アミノ、置換アミノ、および−Ｃ（Ｏ）ＯＲａからなる群から選択され；
Ｒ２は、水素またはＣＯＯＨであり；
各Ｒ３は、アリール、ヘテロアリール、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−ＳＯ２Ｒａ、−ＮＣ（Ｏ）Ｒａ、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、置換アミノ、アミノ、尿素、アミド、スルホンアミド、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群から独立して選択され；
各Ｒａは、独立して、水素、フェニル、フェニルメチル、３，５−ジメチルイソオキサゾール−４−イル、１，２−ジメチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ３アルキルアミノ、もしくは−ＮＨＰｈであり；
Ｒｂは、水素もしくはＣ１〜Ｃ３アルキルであり、または、同じ原子に結合した場合；または
ＲａおよびＲｂは、一緒に５もしくは６員ヘテロシクロアルキル環を形成し；
Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、アシル、−Ｃ（Ｏ）ＣＦ３または水素であり；
Ｗは、−（ＣＨ２）１〜４、または−ＣＨ（Ｒｃ）（ＣＨ２）０〜３であり、式中、Ｒｃは、ＣＮまたはＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｙは、ＮまたはＣであり；
Ｘは、ＮまたはＣであり；
Ｚは、Ｏまたは（ＣＨ２）ｑであり、式中、ｑは、０〜２であり、ｑが０である場合、Ｚは結合を表し；
ｍは、０〜３であり、ｎは、０〜３であり；
但し、ＺがＯである場合、ＹはＮおよびＸはＣであり；
また、ＸがＣである場合、Ｘに結合しているＲ３基の少なくとも１個は水素ではない。
【０３４２】
式（Ｌ）の化合物は、ＷＯ２０１２／１３５１１３において開示される方法により調製することができ、その開示は、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
好ましくは、式（Ｌ）の化合物は、ＷＯ２０１２／１３５１１３における実施例１から１５０からの化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩である。さらにより好ましくは、式（Ｌ）の化合物は、４−（（４−（（（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル）アミノ）メチル）ピペリジン−１−イル）メチル）安息香酸またはその薬学的に許容される塩である。
【０３４３】
本発明による方法および使用において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、式（Ｍ）の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくは立体異性体の混合物（例えばラセミ混合物もしくはジアステレオマー混合物）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であってもよい。
【０３４４】
式（Ｍ）：
【０３４５】
【化４９】
2019512546.tif 000055
【０３４６】
（式中、Ａは、任意選択で置換基を有する炭化水素基、または任意選択で置換基を有するヘテロ環式基であり；
Ｂは、任意選択でさらなる置換基を有するベンゼン環であり；
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、任意選択で置換基を有する炭化水素基、または任意選択で置換基を有するヘテロ環式基であり、
ＡおよびＲ１は、任意選択で互いに結合して、隣接窒素原子と一緒になって任意選択で置換基を有する環式基を形成し；
Ｒ２およびＲ３は、任意選択で互いに結合して、隣接窒素原子と一緒になって任意選択で置換基を有する環式基を形成する）により表される化合物。
【０３４７】
式（Ｍ）の化合物は、ＷＯ２０１４／０５８０７１において開示される方法により調製することができ、その開示は、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
好ましくは、式（Ｍ）の化合物は、ＷＯ２０１４／０５８０７１における実施例１から２７３からの化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩である。より好ましくは、式（Ｍ）の化合物は、３−（ｔｒａｎｓ−２−（（シクロプロピルメチル）アミノ）シクロプロピル）−Ｎ−（５−メチル−１，２−オキサゾール−３−イル）ベンズアミド、３−（ｔｒａｎｓ−２−（（１−シクロプロピルピペリジン−４−イル）アミノ）シクロプロピル）−Ｎ−（５−メチル−１，３，４−チアジアゾール−２−イル）ベンズアミド、３−（ｔｒａｎｓ−２−（（シクロブチルアミノ）シクロプロピル）−Ｎ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）ベンズアミド、またはそれらの塩である。
【０３４８】
本発明による方法および使用において、ＫＤＭ１Ａ阻害剤は、式（Ｎ）の化合物、またはその鏡像異性体、ジアステレオマーもしくは立体異性体の混合物（例えばラセミ混合物もしくはジアステレオマー混合物）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であってもよい。
【０３４９】
【化５０】
2019512546.tif 000056
【０３５０】
式中、Ａは、任意選択で置換基を有する炭化水素基、もしくは任意選択で置換基を有するヘテロ環式基であり；
Ｒは、水素原子、任意選択で置換基を有する炭化水素基、もしくは任意選択で置換基を有するヘテロ環式基であり；または
ＡおよびＲは、任意選択で互いに結合して、任意選択で置換基を有する環を形成し；
Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３およびＱ４は、それぞれ独立して、水素原子または置換基であり；Ｑ１およびＱ２、ならびにＱ３およびＱ４は、それぞれ任意選択で互いに結合して、任意選択で置換基を有する環を形成し；
Ｘは、水素原子、任意選択で置換基を有する非環式炭化水素基、または任意選択で置換基を有する飽和環式基であり；
Ｙ１、Ｙ２およびＹ３は、それぞれ独立して、水素原子、任意選択で置換基を有する炭化水素基、または任意選択で置換基を有するヘテロ環式基であり；
ＸおよびＹ１、ならびにＹ１およびＹ２は、それぞれ任意選択で互いに結合して、任意選択で置換基を有する環を形成し；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、それぞれ独立して水素原子または置換基である。
【０３５１】
式（Ｎ）の化合物は、ＷＯ２０１３／０２２０４７において開示される方法により調製することができ、その開示は、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
好ましくは、式（Ｎ）の化合物は、ＷＯ２０１３／０２２０４７における実施例１から１６６からの化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩である。より好ましくは、式（Ｎ）の化合物は、Ｎ−（４−（ｔｒａｎｓ−２−［（シクロプロピルメチル）アミノ］シクロプロピル）フェニル）ビフェニル−４−カルボキサミド、Ｎ−（４−（ｔｒａｎｓ−２−［（１−メチルピペリジン−４−イル）アミノ］シクロプロピル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、Ｎ−（４−（ｔｒａｎｓ−２−［（シクロプロピルメチル）アミノ］シクロプロピル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、またはそれらの塩である。特に好ましい式（Ｎ）の化合物は、Ｎ−［４−［２−［（シクロプロピルメチルアミノ）メチル］シクロプロピル］フェニル］−１−メチル−ピラゾール−４−カルボキサミド（実施例１６３）、またはその塩である。
【０３５２】
ＫＤＭ１Ａ阻害剤はまた、化合物１−（（４−（メトキシメチル）−４−（（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピルアミノ）メチル）ピペリジン−１−イル）メチル）シクロブタンカルボン酸またはその塩、例えばｐ−トルエンスルホン酸塩であってもよい。この化合物は、ＷＯ２０１７／２７６７８において開示されている。
【０３５３】
本発明の方法における使用に特に好ましいＫＤＭ１Ａ阻害剤は、（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン、またはその塩である。
【０３５４】
本発明の方法における使用に好ましい他のＬＳＤ１阻害剤は、
（−）５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン；
４−（（４−（（（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル）アミノ）メチル）ピペリジン−１−イル）メチル）安息香酸；
およびそれらの塩である。
【０３５５】
好ましくは、上で開示されるようなＫＤＭ１Ａ阻害剤の塩は、薬学的に許容される塩である。本明細書において使用される場合、「薬学的に許容される塩」は、親化合物の生物学的有効性および／または特性を保持する塩（すなわち、該当する場合には遊離酸または遊離塩基）、ならびに生物学的にまたは別様に有害ではない塩を意味することを意図する。薬学的に許容される塩は、無機または有機塩基と形成された塩、ならびに無機および有機酸と形成された塩を含む。薬学的に許容される塩は、当該技術分野において周知である。例示的な薬学的に許容される塩は、本発明の化合物と鉱酸もしくは有機酸との反応により調製されたそれらの塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、リン酸塩、一リン酸水素塩、二リン酸水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソブチル酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオル酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４ジオエート、ヘキシン−１，６−ジオエート、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、ガンマ−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、マンデル酸塩、ピルビン酸塩、ステアリン酸塩、アスコルビン酸塩、またはサリチル酸塩を含む。本発明の化合物が酸性部分を有する場合、その好適な薬学的に許容される塩は、アルカリ金属塩、例えばナトリウムまたはカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばカルシウムまたはマグネシウム塩；および好適な有機リガンド、例えばアンモニア、アルキルアミン、ヒドロキシアルキルアミン、リシン、アルギニン、Ｎ−メチルグルカミン、プロカイン等と形成された塩を含み得る。本発明の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法により、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から調製され得る。例えば、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を、化学量論的量の適切な塩基または酸と好適な溶媒中で反応させることにより調製され得る。
【０３５６】
本発明は、一般的および／または好ましい特徴／実施形態の任意の組合せを含む、本明細書に記載の特徴または実施形態のありとあらゆる組合せに具体的に関連することを理解されたい。特に、本発明は、本明細書に記載の方法および使用の好ましい特徴／実施形態（好ましさの全ての度合いを含む）の全ての組合せに具体的に関連する。
【０３５７】
別段に指定されない限り、上に記載されたＫＤＭ１Ａ阻害剤の定義、特に式（Ａ）から（Ｎ）の化合物の定義において、該当する場合には以下の定義が適用される。
本明細書における定義はいずれも、複合構造の基を説明するために、任意の他の定義と組み合わせて使用され得る。慣例により、任意のそのような定義の後端の要素は、親部分に結合する要素である。例えば、複合基シクリルＣ１〜８アルキルは、Ｃ１〜８アルキル基を介して親分子に結合したシクリル基を表す。
【０３５８】
本明細書において使用される場合、「アシル」という用語は、アルケニル、アルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、または任意の他の部分に結合したカルボニルを指し、カルボニルに結合する原子は炭素である。好ましくは、「アシル」という用語は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ”の基を指し、式中、Ｒ”は、アルケニル、アルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルを表す。「アセチル」基は、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３基を指す。「アルキルカルボニル」または「アルカノイル」基は、カルボニル基を介して親分子部分に結合したアルキル基を指す。そのような基の例は、これらに限定されないが、メチルカルボニルまたはエチルカルボニルを含む。アシル基の例は、これらに限定されないが、ホルミル、アルカノイルまたはアロイルを含む。
【０３５９】
本明細書において使用される場合、「アルケニル」という用語は、１つまたは複数の二重結合を有し、また２から２０個の炭素原子を含有する、直鎖または分岐鎖炭化水素基を指す。Ｃ２〜８アルケニルは、２から８個の炭素原子を有するアルケニル基である。
【０３６０】
本明細書において使用される場合、「アルコキシ」という用語は、アルキルエーテル基（すなわち式アルキル−Ｏ−の基）を指し、アルキルという用語は、以下で定義される通りである。好適なアルキルエーテル基の例は、これらに限定されないが、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｉｓｏ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、またはｎ−ペントキシを含む。Ｃ１〜ｚアルコキシという用語は、アルキル部分が１からｚ個の炭素原子を有するアルコキシ基を指し；例えば、Ｃ１〜８アルコキシは、アルキル部分がＣ１〜８アルキルであるアルコキシ基、すなわち式Ｃ１〜８アルキル−Ｏ−の基である。
【０３６１】
本明細書において使用される場合、「アルキル」という用語は、１から２０個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖アルキル基を指す。Ｃ１〜ｚアルキルは、１からｚ個の炭素原子のアルキルであり；したがって、Ｃ１〜８アルキルは、１から８個の炭素原子を有し、Ｃ１〜４アルキルは、１から４個の炭素原子を有し、Ｃ１〜２アルキルは、１から２個の炭素原子を有する。アルキル基の例は、これらに限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ｎｅｏ−ペンチル、ｉｓｏ−アミル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、またはノニルを含む。
【０３６２】
本明細書において使用される場合、「Ｃ１〜４アルキレン」という用語は、２つの位置で結合したＣ１〜４アルキル基、すなわちアルカンジイル基を指す。その例は、これらに限定されないが、メチレン（すなわち式−ＣＨ２−の基）、エチレン（エタン−１，２−ジイルおよびエタン−１，１−ジイルを含む）、プロピレン（例えば、プロパン−１，３−ジイル、プロパン−１，２−ジイルおよびプロパン−１，１−ジイル）ならびにブチレン（例えば、ブタン−１，４−ジイル、ブタン−１，３−ジイルまたはブタン−１，１−ジイル）を含む。したがって、「Ｃ１〜４アルキレン」という用語は、１から４個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルキレン基を指し得る。「直線Ｃ１〜４アルキレン」は、１から４個の炭素原子を有する直鎖アルキレン基、すなわち−（ＣＨ２）ｙ−基（式中、ｙは、１、２、３または４である）を指す。
【０３６３】
本明細書において使用される場合、「アルキルアミノ」という用語は、アミノ基を介して親分子部分に結合したアルキル基を指す。好適なアルキルアミノ基は、モノ−またはジアルキル化されて、これらに限定されないが、Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−エチルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ、Ｎ，Ｎ−エチルメチルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ、Ｎ−プロピルアミノ、およびＮ，Ｎ−メチルプロピルアミノを含む基を形成してもよい。
【０３６４】
本明細書において使用される場合、「アルキニル」という用語は、１つまたは複数の三重結合を有し、また２から２０個の炭素原子を含有する、直鎖または分岐鎖炭化水素基を指す。Ｃ２〜８アルキニルは、２から８個の炭素原子を有する。アルキニル基の例は、これらに限定されないが、エチニル、プロピニル、ヒドロキシプロピニル、ブチン−１−イル、ブチン−２−イル、ペンチン−１−イル、３−メチルブチン−１−イル、またはヘキシン−２−イルを含む。
【０３６５】
本明細書において使用される場合、「アミド」および「カルバモイル」という用語は、カルボニル基を介して親分子部分に結合した（例えば−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＲ’）、またはその逆（−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’）の後述のようなアミノ基を指す。「アミド」および「カルバモイル」は、本明細書において定義されるような「Ｃ−アミド」および「Ｎ−アミド」を包含する。ＲおよびＲ’は、本明細書において定義される通りである。
【０３６６】
本明細書において使用される場合、「Ｃ−アミド」という用語は、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＲ’基を指し、ＲおよびＲ’は、本明細書において定義される通りである。
本明細書において使用される場合、「Ｎ−アミド」という用語は、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’基を指し、ＲおよびＲ’は、本明細書において定義される通りである。
【０３６７】
本明細書において使用される場合、「アミノ」という用語は、−ＮＲＲ’を指し、式中、ＲおよびＲ’は、水素、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、カルボシクリル、およびヘテロシクリルからなる群から独立して選択される。さらに、ＲおよびＲ’は、組み合わさってヘテロシクリルを形成してもよい。例示的な「アミノ」基は、これらに限定されないが、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）および−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）（Ｃ１〜４アルキル）を含む。
【０３６８】
本明細書において使用される場合、「アリール」という用語は、１つの環、または互いに融合した２つもしくは３つの環を含有する炭素環芳香族系を指し、環原子は全て炭素である。「アリール」という用語は、これらに限定されないが、フェニル、ナフチル、またはアントラセニル等の基を含む。「単環式アリール」という用語は、フェニルを指す。
【０３６９】
本明細書において使用される場合、「アリールアルコキシ」または「アラルコキシ」という用語は、アルコキシ基を介して親分子部分に結合したアリール基を指す。アリールアルコキシ基の例は、これらに限定されないが、ベンジルオキシまたはフェネトキシを含む。
【０３７０】
本明細書において使用される場合、「アリールアルキル」または「アラルキル」という用語は、アルキル基を介して親分子部分に結合したアリール基を指す。
本明細書において使用される場合、「アリールオキシ」という用語は、オキシ（−Ｏ−）を介して親分子部分に結合したアリール基を指す。
【０３７１】
本明細書において使用される場合、「カルバメート」という用語は、本明細書において定義されるようなＯ−カルバミルまたはＮ−カルバミル基を指す。Ｎ−カルバミル基は、−ＮＲ−ＣＯＯＲ’を指し、式中、ＲおよびＲ’は、本明細書において定義される通りである。Ｏ−カルバミル基は、−ＯＣＯ−ＮＲＲ’を指し、式中、ＲおよびＲ’は、本明細書において定義される通りである。
【０３７２】
本明細書において使用される場合、「カルボニル」という用語は、単独の場合ホルミル−Ｃ（＝Ｏ）Ｈを含み、組合せでは−Ｃ（＝Ｏ）−基である。
本明細書において使用される場合、「カルボキシル」または「カルボキシ」という用語は、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、またはカルボン酸塩中等の対応する「カルボキシレート」アニオンを指す。
【０３７３】
「Ｏ−カルボキシ」基は、ＲＣ（＝Ｏ）Ｏ−基を指し、式中、Ｒは、本明細書において定義される通りである。
「Ｃ−カルボキシ」基は、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ基を指し、式中、Ｒは、本明細書において定義される通りである。
【０３７４】
本明細書において使用される場合、「シアノ」という用語は、−ＣＮを指す。
本明細書において使用される場合、「カルボシクリル」という用語は、飽和または部分飽和単環式または融合二環式もしくは三環式基を指し、環系の環原子は全て炭素であり、各環式部分は、３から１２個の炭素原子環員を含有する。「カルボシクリル」は、カルボシクリル環系に融合したベンゾを包含する。カルボシクリルの１個の基は、５から７個の炭素原子を有する。カルボシクリル基の例は、これらに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、オクタヒドロナフチル、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデニル、またはアダマンチルを含む。
【０３７５】
本明細書において使用される場合、「シクロアルキル」という用語は、別段に指定されない限り、飽和単環式、二環式または三環式基を指し、環系の環原子は全て炭素であり、各環式部分は、３から１２個の炭素原子環員を含有する。Ｃ３〜６シクロアルキルは、３から６個の炭素原子を有するシクロアルキル、すなわち、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルである。４から７個のＣ原子を含有するシクロアルキルは、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルを含む。シクロアルキル基の例は、これらに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、またはアダマンチルを含む。
【０３７６】
本明細書において使用される場合、「シクロアルケニル」という用語は、部分飽和単環式、二環式または三環式基を指し、環系の環原子は全て炭素であり、各環式部分は、３から１２個の炭素原子環員を含有する。カルボアルケニルの１個の基は、５から７個の炭素原子を有する。シクロアルケニル基の例は、これらに限定されないが、シクロブテニル、シクロペンテニル、またはシクロヘキセニルを含む。
【０３７７】
本明細書において使用される場合、「シクリル」という用語は、本明細書において定義されるようなアリール、ヘテロシクリル、またはカルボシクリル基を指す。
本明細書において使用される場合、「シクリルＣ１〜８アルキル」は、Ｃ１〜８アルキル基中の１個の水素原子が上で定義されたような１個のシクリル基で置換された、上で定義されたようなＣ１〜８アルキルを指す。
【０３７８】
本明細書において使用される場合、「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を指す。
本明細書において使用される場合、「ハロアルコキシ」という用語は、酸素原子を介して親分子部分に結合した（下で定義されるような）ハロアルキル基を指す。ハロＣ１〜８アルコキシ基は、ハロアルキル部分が１から８個のＣ原子を有するハロアルコキシ基を指す。ハロアルコキシ基の例は、これらに限定されないが、トリフルオロメトキシ、２−フルオロエトキシ、ペンタフルオロエトキシ、または３−クロロプロポキシを含む。
【０３７９】
本明細書において使用される場合、「ハロアルキル」という用語は、１個または複数の水素がハロゲンで置換された、上で定義されたような意味を有するアルキル基を指す。ハロＣ１〜８アルキル基は、アルキル部分が１から８個のＣ原子を有するハロアルキル基を指す。具体的には、モノハロアルキル、ジハロアルキルまたはポリハロアルキル基が包含される。例えば、モノハロアルキル基は、基の中にヨード、ブロモ、クロロまたはフルオロ原子を有し得る。ジハロまたはポリハロアルキル基は、同じハロ原子の２個以上、または異なるハロ原子の組合せを有してもよい。ハロアルキル基の例は、これらに限定されないが、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、クロロメチル、ジクロロメチル、トリクロロメチル、ペンタフルオロエチル、ヘプタフルオロプロピル、ジフルオロクロロメチル、ジクロロフルオロメチル、ジフルオロエチル、ジフルオロプロピル、ジクロロエチルまたはジクロロプロピルを含む。
【０３８０】
本明細書において使用される場合、「ヘテロアルキル」という用語は、直鎖または分岐アルキル鎖を指し、アルキル鎖を形成する１個、２個または３個の炭素が、それぞれ、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から独立して選択されるヘテロ原子により置き換えられ、窒素および／または硫黄へテロ原子（存在する場合）は、任意選択で酸化されていてもよく、また窒素ヘテロ原子（存在する場合）は、任意選択で四級化されていてもよい。ヘテロ原子Ｏ、ＮおよびＳは、例えば、ヘテロアルキル基の端部または内部位置に位置してもよく、すなわち、ヘテロアルキルは、ヘテロ原子または炭素原子を介して分子の残りに結合していてもよい。例えば−ＣＨ２−ＮＨ−ＯＣＨ３のように、２個までのヘテロ原子が連続していてもよい。したがって、「ヘテロアルキル」基のさらなる例は、２個の連続した炭素原子がそれぞれヘテロ原子ＳおよびＮにより置き換えられた直鎖または分岐アルキル基であり、硫黄ヘテロ原子はさらに酸化され、例えば−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ（アルキル）または−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）（アルキル）等の部分をもたらす。
【０３８１】
本明細書において使用される場合、「ヘテロアルキレン」という用語は、２つの位置で結合したヘテロアルキル基を指す。その例は、これらに限定されないが、−ＣＨ２ＯＣＨ２−、−ＣＨ２ＳＣＨ２−、および−ＣＨ２ＮＨＣＨ２−、−ＣＨ２Ｓ−、または−ＣＨ２ＮＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−を含む。したがって、「ヘテロアルキレン」という用語は、例えば、１から６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキレン基（すなわち直鎖または分岐アルカンジイル基）を指し得、前記炭素原子の１、２（存在する場合）または３個（存在する場合）が、Ｏ、ＮまたはＳから独立して選択されるヘテロ原子によりそれぞれ置き換えられている。水素原子の存在は、それぞれの炭素原子を置き換えるヘテロ原子の価数に依存することを理解されたい。例えば、−ＣＨ２−基中の炭素原子がＯまたはＳにより置き換えられる場合、得られる基はそれぞれ−Ｏ−または−Ｓ−であり、一方炭素原子がＮにより置き換えられる場合、得られる基は−Ｎ（Ｈ）−である。同様に、基−ＣＨ２−ＣＨ（−ＣＨ３）−ＣＨ２−中の中心炭素原子がＮにより置き換えられる場合、得られる基は−ＣＨ２−Ｎ（−ＣＨ３）−ＣＨ２−である。「ヘテロアルキレン」基の例は、連続した２個の炭素原子がヘテロ原子ＳおよびＮによりそれぞれ置き換えられた直鎖または分岐アルキレン基であり、硫黄ヘテロ原子は、さらに酸化されて、例えば−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（Ｈ）−または−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）−等の部分をもたらす。したがって、基−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（Ｈ）−および−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）−（例えば−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）−）は、例示的な「ヘテロアルキレン」基である。
【０３８２】
本明細書において使用される場合、「ヘテロＣ１〜４アルキレン」という用語は、Ｏ、ＮおよびＳから選択される１個のヘテロ原子に連結した直鎖または分岐Ｃ１〜４アルキレン基（すなわち直鎖または分岐Ｃ１〜４アルカンジイル基）を指し、また、直鎖または分岐Ｃ１〜４アルキレン基を指し、前記アルキレン基の炭素原子の１個または複数（例えば、１、２（存在する場合）または３個（存在する場合））は、Ｏ、ＮまたはＳから独立して選択されるヘテロ原子によりそれぞれ置換されている。窒素および／または硫黄へテロ原子（存在する場合）は、任意選択で酸化されていてもよく、窒素へテロ原子（存在する場合）は、任意選択で四級化されていてもよい。ヘテロ原子Ｏ、ＮおよびＳは、ヘテロＣ１〜４アルキレン基の端部および／または内部位置に位置してもよい。水素原子の存在は、それぞれの炭素原子を置き換えるヘテロ原子の価数に依存することを理解されたい。例えば、−ＣＨ２−基中の炭素原子がＯまたはＳにより置き換えられる場合、得られる基はそれぞれ−Ｏ−または−Ｓ−であり、一方炭素原子がＮにより置き換えられる場合、得られる基は−Ｎ（Ｈ）−である。同様に、基−ＣＨ２−ＣＨ（−ＣＨ３）−ＣＨ２−中の中心炭素原子がＮにより置き換えられる場合、得られる基は−ＣＨ２−Ｎ（−ＣＨ３）−ＣＨ２−である。「ヘテロＣ１〜４アルキレン」基の例は、連続した２個の炭素原子がヘテロ原子ＳおよびＮによりそれぞれ置き換えられた直鎖または分岐Ｃ１〜４アルキレン基であり、硫黄ヘテロ原子は、さらに酸化されて、例えば−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（Ｈ）−または−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（ＣＨ３）−等の部分をもたらす。
【０３８３】
本明細書において使用される場合、「ヘテロアリール」という用語は、５から６員不飽和単環式環、または融合二環式もしくは三環式環系を指し、環は芳香環であり、少なくとも１つの環は、Ｏ、Ｓ、およびＮからなる群から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含有する。好ましいヘテロアリール基は、５から６員単環式または９から１０員二環式ヘテロアリール基である。ヘテロアリール基の例は、これらに限定されないが、ピリジニル、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、ピリミジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、またはフロピリジニルを含む。
【０３８４】
本明細書において使用される場合、「ヘテロシクリル」または「ヘテロ環」という用語は、それぞれ、環員として少なくとも１個のヘテロ原子を含有する飽和、部分不飽和、または完全不飽和単環式、二環式、または三環式ヘテロ環式基を指し、それぞれの前記へテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄からなる群から独立して選択されてもよく、窒素または硫黄原子は、酸化されていてもよい（例えば、−Ｎ＝Ｏ、−Ｓ（＝Ｏ）−、または−Ｓ（＝Ｏ）２−）。さらに、ヘテロシクリルの炭素原子の１個、２個、または３個が、任意選択で酸化されていてもよい（例えば、オキソ基または＝Ｏを形成してもよい）。ヘテロシクリルの１つの基は、環員として１から４個のヘテロ原子を有する。ヘテロシクリルの別の基は、環員として１から２個のヘテロ原子を有する。ヘテロシクリルの１つの基は、各環内に３から８個の環員を有する。ヘテロシクリルのさらに別の基は、各環内に３から７個の環員を有する。またヘテロシクリルの別の基は、各環内に５から６個の環員を有する。「ヘテロシクリル」は、カルボシクリルまたはベンゾ環系に融合したヘテロシクリル基を包含することを意図する。ヘテロシクリル基の例は、これらに限定されないが、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオキサニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、２−ピロリニル、３−ピロリニル、インドリニル、２Ｈ−ピラニル、４Ｈ−ピラニル、ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリジニルイミダゾリニル、またはイミダゾリジニルを含む。ヘテロシクリルであるヘテロアリールの例は、これらに限定されないが、ピリジニル、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、ピリミジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、またはフロピリジニルを含む。
【０３８５】
本明細書において使用される場合、「ヘテロシクロアルキル」という用語は、完全には不飽和ではない、例えばヘテロシクロアルキルの環系の１つまたは複数が芳香族ではないヘテロシクリル基を指す。ヘテロシクロアルキルの例は、ピペラジニル、モルホリニル、ピペリジニル、またはピロリジニルを含む。
【０３８６】
本明細書において使用される場合、「ヒドロキシル」または「ヒドロキシ」という用語は、−ＯＨを指す。
本明細書において使用される場合、「ヒドロキシアルキル」という用語は、アルキル基を介して親分子部分に結合したヒドロキシル基を指す。
【０３８７】
本明細書において使用される場合、「ヒドロキシＣ１〜８アルキル」という用語は、１個または複数の水素原子（好ましくは１個または２個）がヒドロキシ基により置き換えられたＣ１〜８アルキル基を指す。
【０３８８】
本明細書において使用される場合、「Ｒ１２Ｒ１３Ｎ−Ｃ１〜８アルキル」という用語は、１個または複数の水素原子（好ましくは１個または２個、より好ましくは１個）が−ＮＲ１２Ｒ１３により置き換えられたＣ１〜８アルキル基を指す。
【０３８９】
本明細書において使用される場合、「主鎖において」という語句は、本明細書において開示される式のいずれか１つの化合物に対する基の結合点から開始する、炭素原子の最長連続または隣接鎖を指す。
【０３９０】
本明細書において使用される場合、「原子の直線鎖」は、炭素、窒素、酸素および硫黄から独立して選択される原子の最長直鎖を指す。
本明細書において使用される場合、「低級」という用語は、別段に具体的に定義されない限り、１個から６個以下の炭素原子を含有することを意味する。
【０３９１】
本明細書において使用される場合、「低級アリール」という用語は、フェニルまたはナフチルを意味する。
本明細書において使用される場合、「ニトロ」という用語は、−ＮＯ２を指す。
【０３９２】
本明細書において使用される場合、環に関連した「飽和」という用語は、環がいかなる不飽和も含有しないことを意味する。
本明細書において使用される場合、「スルホネート」、「スルホン酸」および「スルホン」という用語は、スルホン酸が塩形態で使用される場合、−ＳＯ３Ｈ基およびそのアニオンを指す。
【０３９３】
本明細書において使用される場合、「スルファニル」という用語は、−Ｓ−を指す。
本明細書において使用される場合、「スルフィニル」という用語は、−Ｓ（＝Ｏ）（Ｒ）を指し、Ｒは、本明細書において定義される通りである。
【０３９４】
本明細書において使用される場合、「スルホニル」という用語は、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒを指し、Ｒは、本明細書において定義される通りである。
本明細書において使用される場合、「スルホンアミド」という用語は、本明細書において定義されるようなＮ−スルホンアミドまたはＳ−スルホンアミドを指す。
【０３９５】
本明細書において使用される場合、「Ｎ−スルホンアミド」という用語は、ＲＳ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）−基を指し、ＲおよびＲ’は、本明細書において定義される通りである。好ましいＮ−スルホンアミド基は、−ＮＨＳＯ２Ｒであり、式中、Ｒは、本明細書において定義される通りであり、好ましくは、Ｒは、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、より好ましくは、Ｒは、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、前記アルキル、前記シクロアルキル、前記ヘテロアルキル、前記アリール、前記ヘテロアリールおよび前記ヘテロシクロアルキルは、それぞれ任意選択で置換されている。前記アルキル、前記シクロアルキル、前記ヘテロアルキル、前記アリール、前記ヘテロアリールおよび前記ヘテロシクロアルキル上の任意選択の置換基は、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルカノイル、低級ヘテロアルキル、低級ヘテロシクロアルキル、低級ハロアルキル、低級シクロアルキル、フェニル、アリール、ヘテロアリール、ピリジル、アリールオキシ、低級アルコキシ、低級ハロアルコキシ、オキソ、低級アシルオキシ、カルボニル、カルボキシル、低級アルキルカルボニル、低級カルボキシエステル、低級カルボキサミド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、アミド、ニトロ、チオール、低級アルキルチオ、低級ハロアルキルチオ、低級パーハロアルキルチオ、アリールチオ、スルホネート、スルホン酸、三置換シリル、Ｎ３、ＳＨ、ＳＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、ＣＯ２ＣＨ３、ＣＯ２Ｈ、カルバメート、および尿素から独立して選択され得る。好ましくは、任意選択の置換基は、ヒドロキシル、ハロ、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−Ｎ（Ｃ１〜３アルキル）２、−ＮＨ（Ｃ１〜３アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（Ｃ１〜３アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｃ１〜３アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１〜３アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜３アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（シクロアルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜３アルキル）２、−Ｓ（＝Ｏ）２（Ｃ１〜３アルキル）、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｃ１〜３アルキル）２、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ（Ｃ１〜３アルキル）、−ＣＨＦ２、−ＯＣＦ３、−ＯＣＨＦ２、−ＳＣＦ３、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、またはテトラゾリルから独立して選択される。特に好ましくは、Ｎ−スルホンアミド基は、−ＮＨＳＯ２Ｒであり、式中、Ｒは、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、好ましくは、Ｒは、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル、および−ＮＨＳＯ２（任意選択で置換されたアリール）である。さらにより好ましいＮ−スルホンアミド基は、−ＮＨＳＯ２アルキルおよび−ＮＨＳＯ２（任意選択で置換されたアリール）である。例示的な限定されないＮ−スルホンアミド基は、−ＮＨＳＯ２アルキル、例えば−ＮＨＳＯ２ＣＨ３、−ＮＨＳＯ２ＣＨ２ＣＨ３または−ＮＨＳＯ２（イソプロピル）、および−ＮＨＳＯ２（任意選択で置換されたアリール）、例えば−ＮＨＳＯ２−フェニル、−ＮＨＳＯ２−（２−シアノフェニル）、−ＮＨＳＯ２−（３−シアノフェニル）、−ＮＨＳＯ２−（４−シアノフェニル）、−ＮＨＳＯ２−（２−アミノフェニル）、−ＮＨＳＯ２−（３−アミノフェニル）または−ＮＨＳＯ２−（４−アミノフェニル）である。他の例示的なＮ−スルホンアミド基は、−ＮＨＳＯ２（任意選択で置換されたヘテロシクロアルキル）、例えば−ＮＨＳＯ２−（ピペラジン−１−イル）、および−ＮＨＳＯ２（任意選択で置換されたヘテロアリール）、例えば−ＮＨＳＯ２−（任意選択で置換されたピリジル）、例えば−ＮＨＳＯ２−（３−ピリジル）または−ＮＨＳＯ２−（６−アミノ−３−ピリジル）である。
【０３９６】
本明細書において使用される場合、「Ｓ−スルホンアミド」という用語は、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲＲ’基を指し、ＲおよびＲ’は、本明細書において定義される通りである。
本明細書において使用される場合、「尿素」という用語は、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）（Ｒ’）基を指し、式中、ＲおよびＲ’は、本明細書において定義される通りである。
【０３９７】
本明細書において使用される場合、「水素結合基」は、水素と別の原子（通常は窒素または酸素）との間の非共有結合的な結合に関与することができる置換基を指す。その例は、これらに限定されないが、−ＮＨ２、−ＯＨ、アミド、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−および−ＣＨ２−ＮＨ２を含む。他の限定されない例は、ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ３または−ＮＨＣＨ３を含む。
【０３９８】
本明細書において使用される場合、「アミド等配電子体（ａｍｉｄｅ  ｉｓｏｓｔｅｒｅ）」という用語は、アミド部分と等配電子的（ｉｓｏｓｔｅｒｉｃ）または生物学的等価性（ｂｉｏｉｓｏｓｔｅｒｉｃ）である単環式または二環式環系を指す。アミド等配電子体の例は、これらに限定されないが、例えば、Ｍｅａｎｗｅｌｌ  （２０１１）  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ＰＭＩＤ：  ２１４１３８０８において開示されているものを含む。
【０３９９】
単独で、および数の指定なしで出現するＲという用語またはＲ’という用語は、別段に定義されない限り、水素、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクロアルキルからなる群から選択される部分を指す。上記基の非置換および置換形態の両方が包含される。
【０４００】
Ｒ基が数の指定を有するか否かに関わらず、Ｒ、Ｒ’およびＲｚ（式中、ｚ＝（１、２、３、・・・ｚ）である）を含むいずれのＲ基、いずれの置換基、およびいずれの用語も、群からの選択に関して、他のいずれとも独立していることが理解されるべきである。いずれかの変数、置換基、または用語（例えば、アリール、ヘテロ環、Ｒ等）が式または一般構造中に２回以上出現する場合、各出現におけるその定義は、他のいずれの出現における定義からも独立している。当業者には、ある特定の基が、親分子に結合していてもよい、または記述されるようないずれかの端部からの元素鎖内の位置を占有してもよいことがさらに認識される。したがって、単なる例示として、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）−等の非対称基は、炭素または窒素のいずれかで親分子に結合し得る。
【０４０１】
本明細書において使用される場合、「任意選択で置換される」という用語は、前置される、または先行する基が置換されていてもよい、または置換されていなくてもよいことを意味する。置換される場合、また別段に指定されない限り、「任意選択で置換された」基の置換基は、限定されることなく、以下の群または特定の指定された群の組から独立して選択される１個または複数の置換基を、単独または組合せとして含み得る：低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルカノイル、低級ヘテロアルキル、低級ヘテロシクロアルキル、低級ハロアルキル、低級シクロアルキル、フェニル、アリール、ヘテロアリール、ピリジル、アリールオキシ、低級アルコキシ、低級ハロアルコキシ、オキソ、低級アシルオキシ、カルボニル、カルボキシル、低級アルキルカルボニル、低級カルボキシエステル、低級カルボキサミド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、アミド、ニトロ、チオール、低級アルキルチオ、低級ハロアルキルチオ、低級パーハロアルキルチオ、アリールチオ、スルホネート、スルホン酸、三置換シリル、Ｎ３、ＳＨ、ＳＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、ＣＯ２ＣＨ３、ＣＯ２Ｈ、カルバメート、および尿素。２個の置換基が互いに繋がって、融合した５員、６員または７員の炭素環式または０から３個のヘテロ原子からなるヘテロ環式環を形成してもよく、例えばメチレンジオキシまたはエチレンジオキシを形成してもよい。任意選択で置換された基は、非置換（例えば−ＣＨ２ＣＨ３）、完全置換（例えば−ＣＦ２ＣＦ３）、一置換（例えば−ＣＨ２ＣＨ２Ｆ）、または完全置換と一置換との間のいずれかのレベルでの置換（例えば−ＣＨ２ＣＦ３）であってもよい。置換に関する条件付けなしで置換基が列挙されている場合、置換および非置換形態の両方が包含される。置換基が「置換された」として条件付けられている場合、置換形態が具体的に意図される。さらに、必要に応じて、特定の部分に対する任意選択の置換基の異なる組が定義されてもよく、この場合、任意選択の置換は、しばしば「〜で任意選択で置換される」という語句の直後で定義される通りである。１つの特定の定義において、任意選択の置換基は、ヒドロキシル、ハロ、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−Ｎ（Ｃ１〜３アルキル）２、−ＮＨ（Ｃ１〜３アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（Ｃ１〜３アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｃ１〜３アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１〜３アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜３アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（シクロアルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜３アルキル）２、−Ｓ（＝Ｏ）２（Ｃ１〜３アルキル）、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｃ１〜３アルキル）２、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ（Ｃ１〜３アルキル）、−ＣＨＦ２、−ＯＣＦ３、−ＯＣＨＦ２、−ＳＣＦ３、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、またはテトラゾリルから選択される。
【０４０２】
本明細書において使用される場合、「任意選択の置換基」という用語は、対応する置換基が存在してもよい、または存在しなくてもよいことを示す。したがって、１、２または３個の任意選択の置換基を有する化合物は、非置換であってもよく、または同じもしくは異なっていてもよい１、２もしくは３個の置換基で置換されていてもよい。
【０４０３】
上記に従い、本発明は、特に以下に関する。
１．式（Ｉ）
Ｐ−Ｌ−Ｚ  （Ｉ）
の化合物またはその塩。
（式中、
Ｐはタグまたは標識であり；
Ｌは、二価Ｃ６〜１００炭化水素基であり、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択されるヘテロ原子により任意選択で置き換えられ、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−および−ＮＲ１−ＳＯ２−からなる群から独立して選択される基により任意選択で置き換えられており、Ｌは、ＰとＺとの間に少なくとも６原子の距離を与え；
Ｒ１は、水素またはＣ１〜４アルキルであり；
Ｚは、ＫＤＭ１Ａ阻害剤の基である。）
２．Ｚが、不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤の基である、項目１に記載の化合物。
【０４０４】
３．Ｚが、２−シクリル−シクロプロピルアミノ部分を含む不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤の基である、項目１または２に記載の化合物。
４．Ｚが、ＷＯ２０１０／０４３７２１、ＷＯ２０１０／０８４１６０、ＷＯ２０１１／０３５９４１、ＷＯ２０１１／０４２２１７、ＷＯ２０１１／１３１６９７、ＷＯ２０１２／０１３７２７、ＷＯ２０１２／０１３７２８、ＷＯ２０１２／０４５８８３、ＷＯ２０１３／０５７３２０、ＷＯ２０１３／０５７３２２、ＷＯ２０１２／１３５１１３、ＷＯ２０１３／０２２０４７、ＷＯ２０１４／０５８０７１、ＷＯ２０１０／１４３５８２、ＵＳ２０１０／０３２４１４７、ＷＯ２０１１／１３１５７６、ＷＯ２０１４／０８４２９８、ＷＯ２０１４／０８６７９０、ＷＯ２０１４／１６４８６７、ＷＯ２０１５／０２１１２８、ＷＯ２０１５／１２３４０８、ＷＯ２０１５／１２３４２４、ＷＯ２０１５／１２３４３７、ＷＯ２０１５／１２３４６５、ＷＯ２０１５／１５６４１７またはＷＯ２０１５／１８１３８０において開示されている不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤の基である、項目１から３のいずれか１項に記載の化合物。
【０４０５】
５．Ｚが、式Ｚ１
【０４０６】
【化５１】
2019512546.tif 000057
【０４０７】
（式中、
Ａは、アリールまたはヘテロアリールであり、前記アリールまたは前記ヘテロアリールは、任意選択で置換され；
Ｂは、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、Ｂは、任意選択で置換され；
ｍは、０または１であり；
Ｙは、結合、−（Ｃ１〜４アルキレン）−Ｏ−、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ＮＲ２−、−（Ｃ０〜４アルキレン）−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ２−、または−（Ｃ０〜４アルキレン）−ＮＲ２−Ｃ（＝Ｏ）−であり；
Ｒ２は、水素またはＣ１〜４アルキルであり；
Ｄは、水素、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ＣＯ−ＮＲ３Ｒ４、シクリルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、シクリル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、それぞれ任意選択で置換され；
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ、水素、Ｃ１〜４アルキルおよび−（Ｃ０〜４アルキレン）−シクリルから独立して選択され、−（Ｃ０〜４アルキレン）−シクリルのシクリル部分は、任意選択で置換され、または、Ｒ３およびＲ４は、互いに連結して、それらが結合しているＮ原子と共にヘテロ環式環を形成し、ヘテロ環式環は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数の追加のヘテロ原子を含有してもよく、また任意選択で置換され；
シクロプロピル環上の基−（Ｂ−Ｙ）ｍ−Ａ−および−ＮＨ−Ｄは、トランス配置にある）の基である、項目１から３のいずれか一項に記載の化合物。
【０４０８】
６．Ｄが、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ＣＯ−ＮＲ３Ｒ４、シクリルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、シクリル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、それぞれ任意選択で置換されている、項目５に記載の化合物。
【０４０９】
７．Ｄが、シクリルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、シクリル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、それぞれ任意選択で置換されている、項目５に記載の化合物。
【０４１０】
８．Ｄが、シクロアルキル、ベンゾシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、シクロアルキル、ベンゾシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、それぞれ任意選択で置換されている、項目５に記載の化合物。
【０４１１】
９．Ｄが、任意選択で置換されたシクロアルキルまたは任意選択で置換されたベンゾシクロアルキルである、項目５に記載の化合物。
１０．Ｄが、式
【０４１２】
【化５２】
2019512546.tif 000058
【０４１３】
の基である、項目９に記載の化合物。
１１．Ｄが、任意選択で置換されたヘテロシクロアルキルである、項目５に記載の化合物。
【０４１４】
１２．Ｄが、任意選択で置換されたピペリジニルである、項目１１に記載の化合物。
１３．Ｄが、任意選択で置換された４−ピペリジニルである、項目１１に記載の化合物。
【０４１５】
１４．Ｄが、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、任意選択で置換されている、項目５に記載の化合物。
【０４１６】
１５．Ｄが、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクロアルキルであり、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクロアルキルにおけるシクロアルキルは、任意選択で置換されている、項目１４に記載の化合物。
【０４１７】
１６．Ｄが、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ヘテロシクロアルキルであり、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ヘテロシクロアルキルにおけるヘテロシクロアルキルは、任意選択で置換されている、項目１４に記載の化合物。
【０４１８】
１７．Ｄが、−ＣＨ２−ヘテロシクロアルキル、好ましくは−ＣＨ２−（４−ピペリジニル）であり、−ＣＨ２−ヘテロシクロアルキルにおけるヘテロシクロアルキルおよび−ＣＨ２−（４−ピペリジニル）における４−ピペリジニルは、それぞれ任意選択で置換されている、項目１６に記載の化合物。
【０４１９】
１８．Ｄが、式
【０４２０】
【化５３】
2019512546.tif 000059
【０４２１】
の基である、項目１７に記載の化合物。
１９．Ｄが、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ヘテロアリール、好ましくは−ＣＨ２−ヘテロアリールであり、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ヘテロアリールにおけるヘテロアリールおよび−ＣＨ２−ヘテロアリールにおけるヘテロアリールは、任意選択で置換されている、項目１４に記載の化合物。
【０４２２】
２０．Ｄが、式
【０４２３】
【化５４】
2019512546.tif 000060
【０４２４】
の基である、項目１９に記載の化合物。
２１．Ｙが、結合、−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ２−、または−ＮＲ２−Ｃ（＝Ｏ）−である、項目５から２０のいずれか一項に記載の化合物。
【０４２５】
２２．Ｒ２が、水素である、項目５から２１のいずれか一項に記載の化合物。
２３．Ａが、任意選択で置換されたフェニルである、項目５から２２のいずれか一項に記載の化合物。
【０４２６】
２４．Ａが、フェニルである、項目５から２２のいずれか一項に記載の化合物。
２５．ｍが、０である、項目５から２４のいずれか一項に記載の化合物。
２６．ｍが、１である、項目５から２４のいずれか一項に記載の化合物。
【０４２７】
２７．Ｙが、結合である、項目２６に記載の化合物。
２８．Ｂが、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｂが、任意選択で置換されている、項目５から２４または２６から２７のいずれか一項に記載の化合物。
【０４２８】
２９．Ｂが、任意選択で置換されたアリール、好ましくは任意選択で置換されたフェニルである、項目５から２４または２６から２８のいずれか一項に記載の化合物。
３０．Ｂが、フェニルである、項目２９に記載の化合物。
【０４２９】
３１．Ｚが、式Ｚ２
【０４３０】
【化５５】
2019512546.tif 000061
【０４３１】
の基であり、式中、フェニル環は、任意選択で置換され、シクロプロピル環上の置換基は、トランス配置にある、項目１から３または５のいずれか一項に記載の化合物。
３２．Ｚが、式Ｚ３ａまたはＺ３ｂ
【０４３２】
【化５６】
2019512546.tif 000062
【０４３３】
の基であり、Ｚ３ａおよびＺ３ｂ中、フェニル環は、任意選択で置換され、シクロプロピル環上の置換基は、トランス配置にある、項目３１に記載の化合物。
３３．Ｚが、式Ｚ４：
【０４３４】
【化５７】
2019512546.tif 000063
【０４３５】
の基である、項目３１に記載の化合物。
３４．Ｚが、式Ｚ５ａまたはＺ５ｂ
【０４３６】
【化５８】
2019512546.tif 000064
【０４３７】
の基である、項目３３に記載の化合物。
３５．Ｌが、ＰとＺとの間に６から９０原子の距離を与える、項目１から２５のいずれか一項に記載の化合物。
【０４３８】
３６．Ｌが、二価Ｃ３０〜Ｃ８０炭化水素基であり、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択されるヘテロ原子により任意選択で置き換えられ、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−および−ＮＲ１−ＳＯ２−からなる群から独立して選択される基により任意選択で置き換えられており、Ｌは、ＰとＺとの間に２５から７０原子の距離を与える、項目１から３５のいずれか一項に記載の化合物。
【０４３９】
３７．Ｌが、二価Ｃ４０〜Ｃ7０炭化水素基であり、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択されるヘテロ原子により任意選択で置き換えられ、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−および−ＮＲ１−ＳＯ２−からなる群から独立して選択される基により任意選択で置き換えられており、Ｌは、ＰとＺとの間に３５から６５原子の距離を与える、項目１から３６のいずれか一項に記載の化合物。
【０４４０】
３８．Ｌが、６から７０原子、好ましくは６から５０原子のヘテロアルキレン基を含む、項目１から３５のいずれか一項に記載の化合物。
３９．Ｌが、式（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−（式中、ｎは、６から２０、好ましくは８から１８の整数であり、ｐは、１から５の整数である）；または
（ｉｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘ−（ＣＨ２）ｑ−Ｇ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ（ＣＨ２）ｒ−（式中、Ｇは、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、もしくは−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、好ましくは、Ｇは、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−もしくは−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−であり、ｘおよびｙの一方は、１から１８の整数であり、ｘおよびｙの他方は、０から１７の整数であるが、但し、ｘ＋ｙは、４から１８であり、好ましくは、ｘ＋ｙは、６から１６であり、ｑおよびｒのそれぞれは、１から５から独立して選択される整数である）
の基を含む、項目１から３５のいずれか一項に記載の化合物。
【０４４１】
４０．Ｌが、式（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−（式中、ｎは、６から２０、好ましくは８から１８の整数であり、ｐは、１から５の整数である）；または
（ｉｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘ−（ＣＨ２）ｑ−Ｇ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ（ＣＨ２）ｒ−（式中、Ｇは、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−もしくは−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−であり、ｘおよびｙの一方は、１から１８の整数であり、ｘおよびｙの他方は、０から１７の整数であるが、但し、ｘ＋ｙは、４から１８であり、好ましくは、ｘ＋ｙは、６から１６であり、ｑおよびｒのそれぞれは、１から５から独立して選択される整数である）
の基を含む、項目３９に記載の化合物。
【０４４２】
４１．Ｌが、式−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−の基を含み、式中、ｎは、６から２０、好ましくは８から１８の整数であり、ｐは、１から５の整数である、項目１から３５のいずれか一項に記載の化合物。
【０４４３】
４２．Ｌが、式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３の基を含み、Ｘ１は、Ｌの残りに連結し、Ｘ３は、Ｚに連結し、
Ｘ１は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−、−ＮＲ１−ＳＯ２−または−Ｏ−であり；
Ｘ２は、Ｃ０〜５アルキレンであり；
Ｘ３は、アリーレンまたはヘテロアリーレンであり、前記アリーレンおよび前記ヘテロアリーレンは、それぞれ任意選択で置換されている、項目１から４１のいずれか一項に記載の化合物。
【０４４４】
４３．Ｘ１が、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＳＯ２−ＮＨ−または−ＮＨ−ＳＯ２−である、項目４２に記載の化合物。
４４．Ｘ１が、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、好ましくは−ＮＨＣ（＝Ｏ）−である、項目４２または４３に記載の化合物。
【０４４５】
４５．Ｘ３が、１，３位でＸ１−Ｘ２およびＺに接続する、項目４２から４４のいずれか一項に記載の化合物。
４６．Ｘ３が、式：
【０４４６】
【化５９】
2019512546.tif 000065
【０４４７】
の基であり、各環は、任意選択で置換されている、項目４５に記載の化合物。
４７．Ｘ３が、式：
【０４４８】
【化６０】
2019512546.tif 000066
【０４４９】
の基であり、これは任意選択で置換されている、項目４６に記載の化合物。
４８．Ｘ２が、Ｃ１〜５アルキレン、好ましくは−（ＣＨ２）１〜５−である、項目４２から４７のいずれか一項に記載の化合物。
【０４５０】
４９．Ｘ１が、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−であり、Ｘ２が、Ｃ１〜５アルキレンであり、Ｘ３が、式：
【０４５１】
【化６１】
2019512546.tif 000067
【０４５２】
の基である、項目４２に記載の化合物。
５０．Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３が、式：
【０４５３】
【化６２】
2019512546.tif 000068
【０４５４】
の基であり、基は、フェニル環を介してＺに、およびＮ原子を介してＬの残りに連結する、項目４２に記載の化合物。
５１．式（ＩＩ）
【０４５５】
【化６３】
2019512546.tif 000069
【０４５６】
の化合物またはその塩。
（式中、
Ｐは、タグまたは標識であり；
Ｄは、シクリルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、シクリル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、それぞれ任意選択で置換され；
Ｌ１は、二価Ｃ６〜９０炭化水素基であり、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、Ｏ、ＳおよびＮから独立して選択されるヘテロ原子により任意選択で置き換えられ、前記炭化水素基内に含まれる１個または複数の炭素原子は、それぞれ、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−および−ＮＲ１−ＳＯ２−からなる群から独立して選択される基により任意選択で置き換えられており、Ｌ１は、ＰとＸ１との間に少なくとも３原子の距離を与え；
Ｒ１は、水素またはＣ１〜４アルキルであり；
Ｘ１は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−、−ＮＲ１−ＳＯ２−または−Ｏ−であり；
Ｘ２は、Ｃ０〜５アルキレンであり；
Ｚ１およびＺ２の一方は、ＣＨまたはＮであり、Ｚ１およびＺ２の他方は、ＣＨであり；
ｓおよびｔは、それぞれ０、１および２から独立して選択され；
Ｒ５およびＲ６は、出現する毎に、Ｃ１〜４アルキル、ハロ、−ＮＨ２、−ＮＲａＲｃ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＯＲｃ、ハロＣ１〜４アルキル、シクリル、シクリルＣ１〜４アルキル−、Ｃ１〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキルから独立して選択され；
Ｒａは、水素、Ｃ１〜４アルキルおよびハロＣ１〜４アルキルから選択され；
Ｒｃは、Ｃ１〜４アルキル、ハロＣ１〜４アルキル、シクリル、シクリルＣ１〜４アルキル−、およびＣ１〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキルから独立して選択され；
シクロプロピル環上のフェニルおよび−ＮＨ−Ｄ基は、トランス配置にある。）
５２．式（ＩＩａ）を有する項目５１に記載の化合物、またはその塩。
【０４５７】
【化６４】
2019512546.tif 000070
【０４５８】
５３．Ｄが、シクロアルキル、ベンゾシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルまたは−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、シクロアルキル、ベンゾシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、および−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、それぞれ任意選択で置換されている、項目５１または５２に記載の化合物。
【０４５９】
５４．Ｄが、任意選択で置換されたシクロアルキルまたは任意選択で置換されたベンゾシクロアルキルである、項目５１または５２に記載の化合物。
５５．Ｄが、任意選択で置換されたヘテロシクロアルキルである、項目５１または５２に記載の化合物。
【０４６０】
５６．Ｄが、任意選択で置換されたピペリジニルである、項目５１または５２に記載の化合物。
５７．Ｄが、任意選択で置換された４−ピペリジニルである、項目５１または５２に記載の化合物。
【０４６１】
５８．Ｄが、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルであり、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクリルにおけるシクリル部分は、任意選択で置換されている、項目５１または５２に記載の化合物。
【０４６２】
５９．Ｄが、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクロアルキルであり、−（Ｃ１〜４アルキレン）−シクロアルキルにおけるシクロアルキルは、任意選択で置換されている、項目５１または５２に記載の化合物。
【０４６３】
６０．Ｄが、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ヘテロシクロアルキルであり、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ヘテロシクロアルキルにおけるヘテロシクロアルキルは、任意選択で置換されている、項目５１または５２に記載の化合物。
【０４６４】
６１．Ｄが、−ＣＨ２−ヘテロシクロアルキル、好ましくは−ＣＨ２−（４−ピペリジニル）であり、−ＣＨ２−ヘテロシクロアルキルにおけるヘテロシクロアルキルおよび−ＣＨ２−（４−ピペリジニル）における４−ピペリジニルは、それぞれ任意選択で置換されている、項目５１または５２に記載の化合物。
【０４６５】
６２．Ｄが、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ヘテロアリール、好ましくは−ＣＨ２−ヘテロアリールであり、−（Ｃ１〜４アルキレン）−ヘテロアリールにおけるヘテロアリールおよび−ＣＨ２−ヘテロアリールにおけるヘテロアリールは、任意選択で置換されている、項目５１または５２に記載の化合物。
【０４６６】
６３．Ｄが、式
【０４６７】
【化６５】
2019512546.tif 000071
【０４６８】
の基である、項目５１または５２に記載の化合物。
６４．式（ＩＩＩ）を有する項目５１に記載の化合物、またはその塩。
【０４６９】
【化６６】
2019512546.tif 000072
【０４７０】
（式中、シクロプロピル環上の置換基は、トランス配置にある。）
６５．式（ＩＩＩａ）を有する項目６４に記載の化合物、またはその塩。
【０４７１】
【化６７】
2019512546.tif 000073
【０４７２】
６６．Ｘ１が、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＳＯ２−ＮＲ１−または−ＮＲ１−ＳＯ２−である、項目５１から６５のいずれか一項に記載の化合物。
６７．Ｘ１が、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＳＯ２−ＮＨ−または−ＮＨ−ＳＯ２−である、項目６６に記載の化合物。
【０４７３】
６８．Ｘ１が、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−である、項目６６に記載の化合物。
６９．Ｘ１が、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−である、項目６６に記載の化合物。
【０４７４】
７０．Ｘ２が、Ｃ１〜５アルキレン、好ましくは−（ＣＨ２）１〜５−である、項目５１から６９のいずれか一項に記載の化合物。
７１．Ｘ１−Ｘ２が、式
【０４７５】
【化６８】
2019512546.tif 000074
【０４７６】
の基であり、基は、炭素原子を介して環に、およびＮ原子を介してＬ１に連結している、項目５１から６５のいずれか一項に記載の化合物。
７２．Ｚ１およびＺ２のそれぞれが、ＣＨである、項目５１から７１のいずれか一項に記載の化合物。
【０４７７】
７３．ｓおよびｔのそれぞれが、０である、項目５１から７２のいずれか一項に記載の化合物。
７４．Ｌ１が、式Ｘ４−Ｘ５の基であり、Ｘ４は、Ｐに連結し、Ｘ５は、Ｘ１に連結し、
Ｘ４は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−ＮＲ１−または−ＮＲ１−ＳＯ２−であり；
Ｘ５は、式（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−（式中、ｎは、６から２０、好ましくは８から１８の整数であり、ｐは、１から５の整数である）；または
（ｉｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘ−（ＣＨ２）ｑ−Ｇ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ（ＣＨ２）ｒ−（式中、Ｇは、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ１−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、もしくは−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、好ましくは、Ｇは、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−もしくは−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−であり、ｘおよびｙの一方は、１から１８の整数であり、ｘおよびｙの他方は、０から１７の整数であるが、但し、ｘ＋ｙは、４から１８であり、好ましくは、ｘ＋ｙは、６から１６であり、ｑおよびｒのそれぞれは、１から５から独立して選択される整数である）
の基である、項目５１から７３のいずれか一項に記載の化合物。
【０４７８】
７５．Ｘ５が、式（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−（式中、ｎは、６から２０、好ましくは８から１８の整数であり、ｐは、１から５の整数である）；または
（ｉｉ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘ−（ＣＨ２）ｑ−Ｇ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ（ＣＨ２）ｒ−（式中、Ｇは、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−もしくは−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１−であり、ｘおよびｙの一方は、１から１８の整数であり、ｘおよびｙの他方は、０から１７の整数であるが、但し、ｘ＋ｙは、４から１８であり、好ましくは、ｘ＋ｙは、６から１６であり、ｑおよびｒのそれぞれは、１から５から独立して選択される整数である）
の基である、項目７４に記載の化合物。
【０４７９】
７６．Ｘ５が、式−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｐ−（式中、ｎは、６から２０、好ましくは８から１８の整数であり、ｐは、１から５の整数である）の基である、項目７４に記載の化合物。
【０４８０】
７７．Ｐが、タグである、項目１から７６のいずれか一項に記載の化合物。
７８．Ｐが、ビオチンまたはビオチン誘導体である、項目７７に記載の化合物。
７９．Ｐが、標識である、項目１から７６のいずれか一項に記載の化合物。
【０４８１】
８０．Ｐが、蛍光標識である、項目７９に記載の化合物。
８１．Ｐが、フルオレセインまたはフルオレセイン誘導体である、項目８０に記載の化学プローブ。
【０４８２】
８２．１ｍｃＭ未満、より好ましくは５００ｎＭ未満のＫＤＭ１Ａに対するＩＣ５０を有する、項目１から８１のいずれか一項に記載の化合物。
８３．他のＦＡＤ依存性モノアミンオキシダーゼよりも、ＫＤＭ１Ａに対して少なくとも１０倍の選択性を有する、項目１から８２のいずれか一項に記載の化合物。
【０４８３】
８４．他のＦＡＤ依存性モノアミンオキシダーゼよりも、ＫＤＭ１Ａに対して少なくとも３０倍の選択性を有する、項目１から８２のいずれか一項に記載の化合物。
８５．他のＦＡＤ依存性モノアミンオキシダーゼよりも、ＫＤＭ１Ａに対して少なくとも５０倍の選択性を有する、項目１から８２のいずれか一項に記載の化合物。
【０４８４】
８６．
【０４８５】
【化６９】
2019512546.tif 000075
【０４８６】
およびそれらの塩から選択される、項目１または５１に記載の化合物。
８７．
【０４８７】
【化７０】
2019512546.tif 000076
【０４８８】
およびそれらの塩から選択される、項目１または５１に記載の化合物。
８８．
【０４８９】
【化７１】
2019512546.tif 000077
【０４９０】
またはその塩である、項目１または５１に記載の化合物。
８９．試料または対象中の遊離ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するための方法であって、
（ｉ）ＫＤＭ１Ａを化学プローブに接触させる、または曝露するステップであって、前記化学プローブは、項目１から８８のいずれか一項に記載の化合物であるステップと；
（ｉｉ）前記試料または対象において前記化学プローブを使用して遊離ＫＤＭ１Ａの前記レベルを決定するステップと
を含む方法。
【０４９１】
９０．試料中の遊離ＫＤＭ１Ａのレベルをｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定するための方法であって、
（ｉ）ＫＤＭ１Ａを化学プローブに接触させる、または曝露するステップであって、前記化学プローブは、項目１から８８のいずれか一項に記載の化合物であるステップと；
（ｉｉ）前記試料において前記化学プローブを使用して遊離ＫＤＭ１Ａの前記レベルを決定するステップと
を含む方法。
【０４９２】
９１．前記試料中の全ＫＤＭ１Ａのレベルを決定することをさらに含む、項目８９または９０に記載の方法。
９２．前記試料中のＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合を決定するステップをさらに含む、項目８９から９１のいずれか一項に記載の方法。
【０４９３】
９３．前記標的会合の決定が、試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルとの間の比率を計算することを含む、項目９２に記載の方法。
９４．前記標的会合の決定が、試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルとの間の比率を計算することを含む、項目９２に記載の方法。
【０４９４】
９５．前記標的会合の決定が、比率ＲＸ／ＲＲＥＦを計算することを含み、ＲＸは、試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルの比率であり、ＲＲＥＦは、参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルの比率である、項目９２に記載の方法。
【０４９５】
９６．標的会合が、項目９３から９５のいずれか一項に従って計算された比率を１から差し引いたものとして決定され、１は、完全標的会合に対応し、０は、標的会合の非存在に対応する、項目９２に記載の方法。
【０４９６】
９７．試料中のＫＤＭ１Ａの阻害剤の標的会合をｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定するための方法であって、
（ｉ）ＫＤＭ１Ａを化学プローブに接触させる、または曝露するステップであって、前記化学プローブは、項目１から８８のいずれか一項に記載の化合物であるステップと；
（ｉｉ）前記試料において前記化学プローブを使用して遊離ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップと；
（ｉｉｉ）参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップと；
（ｉｖ）試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルとの間の比率を計算するステップと；
（ｖ）ステップ（ｉｖ）において計算された比率を１から差し引いたものとして標的会合を決定するステップと
を含む方法。
【０４９７】
９８．試料中のＫＤＭ１Ａの阻害剤の標的会合をｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定するための方法であって、
（ｉ）ＫＤＭ１Ａを化学プローブに接触させる、または曝露するステップであって、前記化学プローブは、項目１から８８のいずれか一項に記載の化合物であるステップと；
（ｉｉ）前記試料において前記化学プローブを使用して遊離ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップと；
（ｉｉｉ）前記試料中の全ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップと；
（ｉｖ）試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルとの間の比率を計算するステップと；
（ｖ）ステップ（ｉｖ）において計算された比率を１から差し引いたものとして標的会合を決定するステップと
を含む方法。
【０４９８】
９９．試料中のＫＤＭ１Ａの阻害剤の標的会合をｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定するための方法であって、
（ｉ）ＫＤＭ１Ａを化学プローブに接触させる、または曝露するステップであって、前記化学プローブは、項目１から８８のいずれか一項に記載の化合物であるステップと；
（ｉｉ）前記試料において前記化学プローブを使用して遊離ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップと；
（ｉｉｉ）前記試料中の全ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップと；
（ｉｖ）参照試料において前記化学プローブを使用して遊離ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップと；
（ｖ）前記参照試料中の全ＫＤＭ１Ａのレベルを決定するステップと；  
（ｖｉ）比率Ａ／Ｂを計算するステップであって、Ａは、試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルの比率であり、Ｂは、参照試料中の遊離ＫＤＭ１Ａレベルと全ＫＤＭ１Ａレベルの比率であるステップと；
（ｖｉｉ）ステップ（ｖｉ）において計算された比率を１から差し引いたものとして標的会合を決定するステップ
含む方法。
【０４９９】
１００．ＫＤＭ１Ａ標的会合の薬力学を評価するために使用される、項目９７から９９のいずれか一項に記載の方法。
１０１．試料中の遊離ＫＤＭ１Ａの空間分布をｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定するための方法であって、
（ｉ）ＫＤＭ１Ａを化学プローブに接触させる、または曝露するステップであって、前記化学プローブは、項目１から８８のいずれか一項に記載の化合物であるステップと；
（ｉｉ）化学プローブの検出により、前記試料中の前記遊離ＫＤＭ１Ａの空間分布を可視化するステップと
を含む方法。
【０５００】
１０２．前記試料中の全ＫＤＭ１Ａの空間分布を決定するステップをさらに含む、項目１０１に記載の方法。
１０３．ＫＤＭ１Ａの相互作用因子をｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定するための方法であって、
（ｉ）試料を化学プローブに接触させる、または曝露するステップであって、前記化学プローブは、項目１から８８のいずれか一項に記載の化合物であるステップと；
（ｉｉ）化学プローブ結合ＫＤＭ１Ａ含有複合体を単離するステップと；
（ｉｉｉ）ＫＤＭ１Ａの前記相互作用因子を特定するステップであって、前記相互作用因子は、核酸および／またはポリペプチドであるステップと
を含む方法。
【０５０１】
１０４．前記試料が、対象から得られる、項目８９から１０３のいずれか一項に記載の方法。
１０５．前記対象が、ＫＤＭ１Ａ阻害剤を投与されている、項目１０４に記載の方法。
【０５０２】
１０６．前記試料が、ＫＤＭ１Ａ阻害剤に曝露または接触されている、項目８９から１０３のいずれか一項に記載の方法。
１０７．ＫＤＭ１Ａの前記阻害剤が、ＫＤＭ１Ａの不可逆的阻害剤である、項目９２から１００のいずれか一項に記載の方法。
【０５０３】
１０８．前記不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤が、ＷＯ２０１０／０４３７２１、ＷＯ２０１０／０８４１６０、ＷＯ２０１１／０３５９４１、ＷＯ２０１１／０４２２１７、ＷＯ２０１１／１３１６９７、ＷＯ２０１２／０１３７２７、ＷＯ２０１２／０１３７２８、ＷＯ２０１２／０４５８８３、ＷＯ２０１３／０５７３２０、ＷＯ２０１３／０５７３２２、ＷＯ２０１０／１４３５８２、ＵＳ２０１０−０３２４１４７、ＷＯ２０１１／１３１５７６、ＷＯ２０１２／１３５１１３、ＷＯ２０１３／０２２０４７、ＷＯ２０１４／０５８０７１、ＷＯ２０１４／０８４２９８、ＷＯ２０１４／０８６７９０、ＷＯ２０１４／１６４８６７、ＷＯ２０１５／０２１１２８；ＷＯ２０１５／１２３４０８、ＷＯ２０１５／１２３４２４、ＷＯ２０１５／１２３４３７、ＷＯ２０１５／１２３４６５、ＷＯ２０１５／１５６４１７またはＷＯ２０１５／１８１３８０において開示されている化合物である、項目１０７に記載の方法。
【０５０４】
１０９．前記不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤が、（ｔｒａｎｓ）−Ｎ１−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル）シクロヘキサン−１，４−ジアミン、（−）５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミン、もしくは４−（（４−（（（（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル）アミノ）メチル）ピペリジン−１−イル）メチル）安息香酸、またはそれらの塩である、項目１０８に記載の方法。
【０５０５】
１１０．ＫＤＭ１Ａの前記阻害剤が、ＫＤＭ１Ａの可逆的阻害剤である、項目９２から１００のいずれか一項に記載の方法。
１１１．ＫＤＭ１Ａの前記可逆的阻害剤が、ＷＯ２００７／０２１８３９、ＷＯ２００８／１２７７３４、ＷＯ２０１１／０２２４８９、ＷＯ２０１２／０３４１１６、ＷＯ２０１２／０７１４６９、ＷＯ２０１３／０２５８０５、ＵＳ２０１５／００６５４３４、ＷＯ２０１３／０３３６８８、ＣＮ１０３０５４８６９、ＣＮ１０３３１９４６６、ＷＯ２０１４／０８５６１３、ＣＮ１０３８９３１６３Ａ、ＣＮ１０３９６１３４０、ＷＯ２０１４／２０５２１３、ＷＯ２０１５／０３１５６４、ＷＯ２０１５／０８９１９２、ＷＯ２０１５／１２０２８１、ＷＯ２０１５／１３４９７３、ＷＯ２０１５／１６８４６６、ＷＯ２０１５／２００８４３、ＷＯ２０１６／００３９１７、ＷＯ２０１６／００４１０５、ＷＯ２０１６／００７７２２、ＷＯ２０１６／００７７２７、ＷＯ２０１６／００７７３１、ＷＯ２０１６／００７７３６、ＷＯ２０１６／０３４９４６およびＷＯ２０１６／０３７００５において開示されている化合物である、項目１１０に記載の方法。
【０５０６】
１１２．化学プローブが、遊離ＫＤＭ１Ａを捕捉または検出するために使用される、項目８９から１１１のいずれか一項に記載の方法。
１１３．化学プローブ中のＰが、タグであり、化学プローブは、好適な捕捉または検出剤により捕捉または検出される、１１２に記載の方法。
【０５０７】
１１４．遊離ＫＤＭ１Ａのレベルの決定が、ＫＤＭ１Ａのエピトープに特異的な抗体の使用を含む、項目１１２または１１３に記載の方法。
１１５．全ＫＤＭ１Ａのレベルの決定が、全ＫＤＭ１Ａを捕捉または検出するための、ＫＤＭ１Ａのエピトープに特異的な第１の抗体の使用を含む、項目１１２から１１４のいずれか一項に記載の方法。
【０５０８】
１１６．全ＫＤＭ１Ａのレベルの決定が、全ＫＤＭ１Ａを捕捉または検出するための、ＫＤＭ１Ａのエピトープに特異的な第２の抗体の使用を含み、前記第２の抗体の前記エピトープは、第１の抗体の前記エピトープとは異なる、項目１１５に記載の方法。
【０５０９】
１１７．化学プローブ中のタグを捕捉または検出するため、および遊離ＫＤＭ１Ａの前記レベルを決定するためのタンパク質の使用を含む、項目８９から１１６のいずれか一項に記載の方法。
【０５１０】
１１８．前記抗体の一方が、ＫＤＭ１ＡのＮ末端領域に位置するエピトープに対するものであり、他方の抗体が、ＫＤＭ１ＡのＣ末端領域に位置するエピトープに対するものである、項目１１６に記載の方法。
【０５１１】
１１９．前記抗体の一方が、エピトープＥＰ１を標的化し、ＥＰ１は、ヒトＫＤＭ１Ａ配列（ＵＮＩＰＲＯＴ  ＩＤ  Ｏ６０３４１−１）のプロリン６０（Ｐ６０）に近接するＮ末端領域に位置し、ペプチド＃ＬＳＤ１  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｐｅｐｔｉｄｅ−２１８４特異性（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）によりブロックされる、項目１１６に記載の方法。
【０５１２】
１２０．前記抗体の他方が、エピトープＥＰ２を標的化し、ＥＰ２は、Ｃ末端領域に位置し、ヒトＫＤＭ１ＡのＡＡ８３２〜８４７に対応するＡＭＹＴＬＰＲＱＡＴＰＧＶＰＡＱを含む、項目１１９に記載の方法。
【０５１３】
１２１．抗体が、ｍＡｂ−８４４およびｍＡｂ−８２５であり、ＫＤＭ１Ａ化学プローブ中のタグＰが、ビオチンであり、化学プローブを捕捉するために使用されるタンパク質が、ストレプトアビジンである、項目１２０に記載の方法。
【０５１４】
１２２．全ＫＤＭ１Ａのレベルが、サンドイッチＥＬＩＳＡにより決定され、遊離ＫＤＭ１Ａのレベルが、ＫＤＭ１Ａ化学プローブ捕捉ＥＬＩＳＡにより決定される、項目１２１に記載の方法。
【０５１５】
１２３．ＥＬＩＳＡが、化学発光検出を使用する、項目１２２に記載の方法。
１２４．前記試料中の下流ＫＤＭ１Ａ標的の空間分布を決定するステップをさらに含む、項目１０１または１０２に記載の方法。
【０５１６】
１２５．ＫＤＭ１Ａの前記相互作用因子が、質量分析、抗体マイクロアレイまたはウェスタンブロット分析により特定される、項目１０３に記載の方法。
１２６．ＫＤＭ１Ａの前記相互作用因子が、ｑＰＣＲ、ＤＮＡマイクロアレイ分析または次世代シーケンシングにより特定される、項目１０３に記載の方法。
【０５１７】
以下の実施例は、本発明の様々な態様を例示する。当然ながら、実施例は、単に本発明のある特定の実施形態のみを例示するものであり、本発明の範囲に対する限定を構成するものではないことが理解されるべきである。
【実施例】
【０５１８】
別段に指定されない限り、本明細書の全ての実施例の化合物において、立体化学配置は、描かれている構造がより具体的な配置を表し得るとしても、それぞれの化合物に対して示された化学名により定義される。それにもかかわらず、本発明は、本明細書において説明および定義される化合物の全ての立体異性体に関する。したがって、本発明は、その化学名により定義されるような実施例において説明される化合物、および、それに加えて、それぞれ描かれた構造において示される絶対配置を有する対応する化合物を包含する。
【０５１９】
以下の略語が使用されている。
ＡＣＮ：アセトニトリル、ＡｃＯＨ：酢酸、ａｑ：水、Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル、（Ｂｏｃ）２Ｏ：ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート、ＤＣＥ：１，２−ジクロロエタン、ＤＣＭ：ジクロロメタン、ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド、ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル、ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル、ＨＡＴＵ：１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート、ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー、ＬＣ−ＭＳ：液体クロマトグラフィー−質量分析、ｍ：多重項、ＭｅＯＨ：メタノール、ＮＭＲ：核磁気共鳴、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４：テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、ＰＥＧ：ポリエチレングリコール、Ｐｅｔエーテル：石油エーテル、ｑ：四重項、Ｒｔ：保持時間、ＲＴ：室温、ｓａｔ．：飽和、ＴＥ：標的会合、ＴＥＡ：トリエチルアミン、ＴＨＦ：テトラヒドロフラン、ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー、ｕｍ：マイクロメートル、ＵＰＬＣ：超高速液体クロマトグラフィー。
【０５２０】
本明細書において使用される場合、μ、ｕ、ｍｃは、μＭ、ｕＭ、ｍｃＭ：マイクロモル、μｇ、ｕｇ、ｍｃｇ：マイクログラム、μｌ、ｕｌ：マイクロリットル、μｍ、ｕｍ：マイクロメートル等のように、マイクロを示すように同義的に使用されている。
【０５２１】
実施例１：化学プローブの合成
以下の方法の１つを、ＬＣ−ＭＳによる決定に使用した。
方法１：カラム：Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８（１００ｍｍ×４．６ｍｍ、３．５ｕｍ）；移動相：Ａ：アセトニトリル、Ｂ：水中０．０１Ｍ重炭酸アンモニウム；勾配：時間／％Ａ：０／５、３／５、１０／８０、１２／９０、１５／９０、１５．１／５；流速：１．０ｍＬ／分；希釈剤：アセトニトリル：水（７０：３０）
方法２：カラム：Ａｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、１．７ｕｍ）；移動相：Ａ：水中０．０５％ギ酸、Ｂ：アセトニトリル中０．０５％ギ酸；勾配：時間／％Ａ：０／９７、０．３／９７、３．２／２、３．８／２、４．３／９７、４．５／９７；カラム温度：３５℃；流速：０．６ｍＬ／分
方法３：カラム：Ａｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、１．７ｕｍ）；移動相：Ａ：水中０．１％ギ酸、Ｂ：アセトニトリル中０．１％ギ酸；勾配：時間／％Ｂ：０／３、０．４／３、３．２／９８、３．８／９８、４．２／３、４．５／３；カラム温度：３５℃；流速：０．６ｍＬ／分
方法４：カラム：Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８（１００ｍｍ×４．６ｍｍ、３．５ｕｍ）；移動相：Ａ：アセトニトリル、Ｂ：水中０．０１Ｍ重炭酸アンモニウム；勾配：時間／％Ｂ：０／９０、３／１５、５／２、７／２、８／９０、１０／９０；流速：１．０ｍＬ／分；希釈剤：水
方法５：カラム：Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８（１００ｍｍ×４．６ｍｍ、３．５ｕｍ）；移動相：Ａ：１００％アセトニトリル、Ｂ：水；勾配：時間／％Ｂ：０／１００、５／１００、８／１０、１０／１０、１５／９８；流速：１．０ｍＬ／分；希釈剤：水
方法６：カラム：Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ、５ｕｍ）；移動相：Ａ：０．０１Ｍ酢酸アンモニウム（ａｑ）、Ｂ：アセトニトリル；勾配：時間／％Ｂ：０／１０、１／１０、６／９０、８／９８、１２／９８、１２．０１／１０；流速：１．０ｍＬ／分；希釈剤：水
方法７：カラム：Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８（１００ｍｍ×４．６ｍｍ、３．５ｕｍ）；移動相：Ａ：アセトニトリル、Ｂ：Ａｑ中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム；勾配：時間／％Ｂ：０／９５、２／９５、４／５、７／５、８／９５、１０／９５；流速：１．０ｍＬ／分；希釈剤：アセトニトリル：水（１：１）
方法８：カラム：Ａｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、１．７ｕｍ）；移動相：Ａ：アセトニトリル中０．１％ギ酸、Ｂ：水中０．１％ギ酸；勾配：時間／％Ｂ：０／９７、０．３／９７、３．２／２、４／２、４．０１／９７；カラム温度：３５℃；流速：０．６ｍＬ／分
方法９：カラム：Ａｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、１．７ｕｍ）；移動相：Ａ：アセトニトリル中０．１％ギ酸、Ｂ：水中０．１％ギ酸；勾配：時間／％Ｂ：０／９７、０．３／９７、５．５／２、６／２、６．０１／９７；カラム温度：３５℃；流速：０．６ｍＬ／分
方法１０：カラム：Ａｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、１．７ｕｍ）；移動相：Ａ：水中０．０５％ギ酸、Ｂ：アセトニトリル中０．０５％ギ酸；勾配：時間／％Ａ：０／９７、０．３／９７、３．２／２、４．８／２、５／９７、５．１０／９７；カラム温度：３５℃；流速：０．６ｍＬ／分
方法１１：カラム：Ａｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、１．７ｕｍ）；移動相：Ａ：水中０．０５％ギ酸、Ｂ：アセトニトリル中０．０５％ギ酸；勾配：時間／％Ａ：０／９７、０．３／９７、３．５／２、４．８／２、５／９７、５．０１／９７；カラム温度：３５℃；流速：０．６ｍＬ／分
方法１２：カラム：Ａｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、１．７ｕｍ）；移動相：Ａ：水中０．０５％ギ酸、Ｂ：アセトニトリル中０．０５％ギ酸；勾配：時間／％Ａ：０／９５、１．５／９５、３／８５、７／４５、１０／５、１４／５、１７／９５、２０／９５；カラム温度：３５℃；流速：０．６ｍＬ／分
参照例１
３−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（（ｔｒａｎｓ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）プロパン酸
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル（（ｔｒａｎｓ）−４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ブロモフェニル）シクロプロピル）アミノ）シクロヘキシル）カルバメートの調製
Ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソシクロヘキシルカルバメート（２２．１ｇ、０．１０４ｍｏｌ）を、ｔｒａｎｓ−２−（４−ブロモフェニル）シクロプロパンアミン（２２ｇ、０．１０４ｍｏｌ）のＤＣＥ（４００ｍＬ）中の溶液に０℃で添加し、続いてＡｃＯＨ（１．６ｍＬ）を添加し、混合物を同じ温度で５分間撹拌した。ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（４０ｇ、０．１８７ｍｏｌ）を０℃で少量ずつ徐々に添加し、混合物をＲＴで１６時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣにより監視した。完了後、反応混合物を飽和ａｑ．ＮａＨＣＯ３溶液（１００ｍＬ）に注ぎ込み、ＤＣＭ（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、水（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濾液を蒸発させると、ｔｅｒｔ−ブチル（４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ブロモフェニル）シクロプロピル）アミノ）シクロヘキシル）カルバメートのｃｉｓおよびｔｒａｎｓ混合物が得られた（粗生成物で２８ｇ）。
【０５２２】
（ＳｉＯ２）ＥｔＯＡｃ：ｐｅｔエーテル（７０：３０）を使用して粗化合物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製すると、まずより極性の低いｔｅｒｔ−ブチル（（ｃｉｓ）−４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ブロモフェニル）シクロプロピル）アミノ）シクロヘキシル）カルバメート（３ｇ）が単離され、続いてより極性の高いｔｅｒｔ−ブチル（（ｔｒａｎｓ）−４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ブロモフェニル）シクロプロピル）アミノ）シクロヘキシル）カルバメート（６ｇ、収率１４．０９％）が白色固体として得られ、また１５ｇのｃｉｓ−ｔｒａｎｓ混合物も回収された。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝４．８７分；ｍ／ｚ＝４０９．３／４１１．４（Ｍ＋Ｈ＋／Ｍ＋２＋Ｈ＋）。
【０５２３】
ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ブロモフェニル）シクロプロピル）（（ｔｒａｎｓ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロヘキシル）カルバメートの調製
ＴＥＡ（５．１ｍＬ、０．０３６７ｍｏｌ）および（Ｂｏｃ）２Ｏ（６．４１ｇ、０．０２９４ｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル（（ｔｒａｎｓ）−４−（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ブロモフェニル）シクロプロピル）アミノ）シクロヘキシル）カルバメート（参照例１のステップ１）（１０ｇ、０．０２４５ｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の溶液に１０℃で添加した。次いで、反応混合物をＲＴで１６時間撹拌した。反応の完了を、ＴＬＣにより確認した。反応混合物を水（２００ｍＬ）に注ぎ込み、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濾液を減圧下で蒸発させた。ＥｔＯＡｃ：ｐｅｔエーテル（２：８）を使用して粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ブロモフェニル）シクロプロピル）（（ｔｒａｎｓ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロヘキシル）カルバメート（１０．４ｇ、収率：８３．３％）がオフホワイトの固体として得られた。
【０５２４】
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝３．２３分；ｍ／ｚ＝５３１．１５／５３３．１９（Ｍ＋Ｎａ＋／Ｍ＋２＋Ｎａ＋）。
ステップ３：３−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（（ｔｒａｎｓ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）プロパン酸の調製
Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（３９．８２ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−ブロモフェニル）シクロプロピル）（（ｔｒａｎｓ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロヘキシル）カルバメート（参照例１のステップ２）（３５０ｍｇ、０．６８８ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２８５．２ｍｇ、２．０６６ｍｍｏｌ）および３−（２−カルボキシエチル）フェニルボロン酸（０．８２６ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ−Ｈ２Ｏ（４０ｍＬ、８：２）中の脱気溶液にＲＴで添加した。混合物を再び５分間脱気し、９０℃まで１６時間加熱した。反応の完了を、ＴＬＣにより確認した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、セライトのパッドを通して濾過し、濾液を濃縮し、粗化合物を分取ＨＰＬＣにより精製すると、３−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（（ｔｒａｎｓ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）プロパン酸（２５０ｍｇ、収率：６２．８％）がオフホワイトの固体として得られた。
【０５２５】
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝４．６３分；ｍ／ｚ＝５７７．０（Ｍ−Ｈ＋）。
参照例２〜４
以下の化合物は、参照例１に記載の手順に従い、好適な出発材料を使用して得られた。
【０５２６】
【表１】
2019512546.tif 000078
【０５２７】
参照例１、２、および３は、シクロプロピル環に対する２つの異なる（ｔｒａｎｓ）配置の組合せに対応する２つの異性体（それぞれ（１Ｒ，２Ｓ）および（１Ｓ，２Ｒ））の混合物であり、参照例４は、シクロプロピル環に対する単一の（１Ｓ，２Ｒ）異性体である。参照例１および４は、ＴＲＡＮＳ配置のシクロヘキサン環を含有する。
【０５２８】
参照例５
（＋）−ビオチン−ＰＥＧ７−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２．ＨＣｌ（Ｎ−（２３−アミノ−３，６，９，１２，１５，１８，２１−ヘプタオキサトリコシル）−５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド塩酸塩）
ステップ１：（ｔｅｒｔ−ブチル（２５−オキソ−２９−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）−３，６，９，１２，１５，１８，２１−ヘプタオキサ−２４−アザノナコシル）カルバメート）の調製
ＨＡＴＵ（０．９７ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．６７ｍＬ、３．８４ｍｍｏｌ）を、Ｂｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ７−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２（ｔｅｒｔ−ブチル２３−アミノ−３，６，９，１２，１５，１８，２１−ヘプタオキサトリコシルカルバメート）（１．２ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）および５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタン酸（０．７ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１２ｍＬ）中の溶液に添加した。反応混合物をＲＴで１６時間撹拌した。完了後、反応混合物を氷水（５０ｍＬ）に注ぎ込み、１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２×４０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、水（２×４０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濾液を蒸発させると、粗生成物が得られ、これをカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２）により３％ＭｅＯＨ：ＤＣＭで溶出することで精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル（２５−オキソ−２９−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）−３，６，９，１２，１５，１８，２１−ヘプタオキサ−２４−アザノナコシル）カルバメート（６００ｍｇ、収率：３３．７％）がオフワイトの半固体として得られた。
【０５２９】
ＬＣ−ＭＳ（方法１１）：Ｒｔ＝２．１０分；ｍ／ｚ＝６９５．６（Ｍ＋Ｈ＋）
ステップ２：（＋）−ビオチン−ＰＥＧ７−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２．ＨＣｌ（Ｎ−（２３−アミノ−３，６，９，１２，１５，１８，２１−ヘプタオキサトリコシル）−５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド塩酸塩）の調製
１，４−ジオキサン（４Ｍ）（２．０ｍＬ）中のＨＣｌを、ｔｅｒｔ−ブチル（２５−オキソ−２９−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）−３，６，９，１２，１５，１８，２１−ヘプタオキサ−２４−アザノナコシル）カルバメート（参照例５のステップ１）（４００ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１．０ｍＬ）中の溶液に１０℃で添加した。反応混合物をＲＴで２時間撹拌した。完了後、反応混合物を蒸発させ、残渣をジエチルエーテルと研和すると、（＋）−ビオチン−ＰＥＧ７−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２．ＨＣｌ（Ｎ−（２３−アミノ−３，６，９，１２，１５，１８，２１−ヘプタオキサトリコシル）−５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド塩酸塩）（３００ｍｇ、８３．４％）が淡褐色の粘性液体として得られた。
【０５３０】
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝３．６４分；ｍ／ｚ＝５９６．１（Ｍ＋Ｈ＋）
参照例６
（＋）−ビオチン−ＰＥＧ１５−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２．ＨＣｌ（Ｎ−（４７−アミノ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９，４２，４５−ペンタデカオキサヘプタテトラコンチル）−５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド塩酸塩）
この化合物は、参照例５に記載の手順に従い、Ｂｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ７−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２の代わりにＢｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ１５−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２を使用して得られた。
【０５３１】
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝３．５９分；ｍ／ｚ＝９４７．６（Ｍ＋Ｈ＋）
参照例７
ｔｅｒｔ−ブチル（（ｔｒａｎｓ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロヘキシル）（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（３，４１−ジオキソ−４５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）−７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７−ウンデカオキサ−４，４０−ジアザペンタテトラコンチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）カルバメート
（＋）−ビオチン−ＰＥＧ１１−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２（２１２．８ｍｇ、０．２７６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の溶液を、３−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（（ｔｒａｎｓ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）プロパン酸（参照例１）（１６０ｍｇ、０．２７６ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１０４ｍｇ、０．２７６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（５６ｍｇ、０．４１４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．５ｍＬ）中の溶液にＲＴで添加した。反応混合物をＲＴで１６時間撹拌した。反応の完了を、ＴＬＣにより確認した。反応混合物を氷水（５０ｍＬ）に注ぎ込み、酢酸エチル（２×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、飽和ａｑ．ＮａＨＣＯ３溶液（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル（（ｔｒａｎｓ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロヘキシル）（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（３，４１−ジオキソ−４５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）−７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７−ウンデカオキサ−４，４０−ジアザペンタテトラコンチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）カルバメート（５０ｍｇ、収率：１３．６％）がオフホワイトの粘性固体として得られた。
【０５３２】
ＬＣ−ＭＳ（方法１１）：Ｒｔ＝３．１７分；ｍ／ｚ＝１３３１．９（Ｍ＋Ｈ＋）。
参照例８〜１２
以下の化合物は、参照例８に記載の手順に従い、好適な出発材料を使用して得られた。
【０５３３】
【表２−１】
2019512546.tif 000079
【０５３４】
【表２−２】
2019512546.tif 000080
【０５３５】
参照例８、９、１０、および１１は、シクロプロピル環に対する２つの異なる（ｔｒａｎｓ）配置の組合せに対応する２つの異性体（それぞれ（１Ｒ，２Ｓ）および（１Ｓ，２Ｒ））の混合物であり、参照例１２は、シクロプロピル環に対する単一の（１Ｓ，２Ｒ）異性体である。参照例８、９および１２は、ＴＲＡＮＳ配置のシクロヘキサン環を含有する。
【０５３６】
実施例１．１
Ｎ−（３９−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（（ｔｒａｎｓ）−４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−３７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ウンデカオキサ−３６−アザノナトリアコンチル）−５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド二塩酸塩
１，４−ジオキサン（４Ｍ）（０．５ｍＬ）中のＨＣｌを、ｔｅｒｔ−ブチル（（ｔｒａｎｓ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロヘキシル）（（ｔｒａｎｓ）−２−（３’−（３，４１−ジオキソ−４５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）−７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７−ウンデカオキサ−４，４０−ジアザペンタテトラコンチル）−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）シクロプロピル）カルバメート（参照例７）（５０ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（０．３ｍＬ）中の溶液に１０℃で添加し、反応混合物を１０℃で２時間撹拌した。反応の完了を、ＬＣＭＳにより確認した。反応混合物を減圧下で３０℃未満で濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ／ジエチルエーテルと研和し、得られた化合物を脱イオン水中に溶解して凍結乾燥すると、Ｎ−（３９−（４’−（（ｔｒａｎｓ）−２−（（（ｔｒａｎｓ）−４−アミノシクロヘキシル）アミノ）シクロプロピル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−３７−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ウンデカオキサ−３６−アザノナトリアコンチル）−５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド二塩酸塩（４０ｍｇ、収率：８９．８％）がオフホワイトの固体として得られた。
【０５３７】
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝３．８２分；ｍ／ｚ＝１１３２．８（Ｍ＋Ｈ＋）。
実施例１．２〜１．６
以下の化合物は、実施例１．１に記載の手順に従い、好適な出発材料を使用して得られた。
【０５３８】
【表３−１】
2019512546.tif 000081
【０５３９】
【表３−２】
2019512546.tif 000082
【０５４０】
実施例１．１から１．６の化合物の化学構造を、以下の表に示す。
【０５４１】
【表４】
2019512546.tif 000083
【０５４２】
実施例１．１、１．２、１．３、１．４および１．５は、シクロプロピル環に対する２つの異なる（ｔｒａｎｓ）配置の組合せに対応する２つの異性体（それぞれ（１Ｒ，２Ｓ）および（１Ｓ，２Ｒ））の混合物であり、実施例１．６は、シクロプロピル環に対する単一の（１Ｓ，２Ｒ）異性体である。参照例１．１、１．２、１．３および１．６は、ＴＲＡＮＳ配置のシクロヘキサン環を含有する。
【０５４３】
実施例１．２、１．３、１．４および１．５の対応する単一の（１Ｓ，２Ｒ）異性体もまた調製され得る。
【０５４４】
【化７２】
2019512546.tif 000084
【０５４５】
調製され得る他の化学プローブ：
【０５４６】
【化７３−１】
2019512546.tif 000085
【０５４７】
【化７３−２】
2019512546.tif 000086
【０５４８】
これらの化学プローブは、シクロプロピル環に対する２つの異なる（ｔｒａｎｓ）配置の組合せに対応する２つの異性体（それぞれ（１Ｒ，２Ｓ）および（１Ｓ，２Ｒ））の混合物として、またはシクロプロピル環に対する単一の（１Ｓ，２Ｒ）異性体として調製され得る。
【０５４９】
生物学的アッセイ
実施例２：ＫＤＭ１Ａ活性の化学プローブ阻害
ＫＤＭ１Ａを阻害する化学プローブの能力を、以下で説明されるアッセイを使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験した。
【０５５０】
ＫＤＭ１Ａ阻害アッセイ：酵素がまず２１  ＡＡ  Ｈ３Ｋ４ｍｅ２  Ｎ末端ペプチドにおけるリシン４の脱メチル化の間にＨ２Ｏ２を生成する、複数ステップの酵素反応。ＫＤＭ１Ａ化学プローブを、アッセイ緩衝液（５０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．４）中で、ヒト組換えＫＤＭ１Ａ酵素（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｒｅｆ．５０１００）と共に氷上で１５分間、事前にインキュベートした。ＫＭジメチルＨ３Ｋ４ペプチド基質（Ａｎａｓｐｅｃ、Ｒｅｆ．６３６７７）の添加により、酵素反応を開始させた。３７℃で３０分のインキュベーション後、Ａｍｐｌｅｘ  Ｒｅｄ試薬およびホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）溶液を、供給業者（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の推奨に従って添加し、室温で５分間、暗所でインキュベートした。マイクロプレートリーダー（Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｆ２００  Ｔｅｃａｎ）を使用して、Ａｍｐｌｅｘ  Ｒｅｄ試薬からレゾルフィンへの変換を蛍光（λｅｘ＝５４０ｎｍ、λｅｍ＝５９０ｎｍ）により監視した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて、信号をバックグラウンドに対して補正し、ＩＣ５０値を計算した。
【０５５１】
実施例１に記載の全ての化合物のＫＤＭ１Ａ  ＩＣ５０値を、表１に要約する。
【０５５２】
【表５】
2019512546.tif 000087
【０５５３】
実施例３：ＫＤＭ１Ａの化学プローブ媒介沈殿
試料調製およびアッセイ条件：
組み込まれたビオチンタグを有する選択されたＫＤＭ１Ａ化学プローブ（実施例１．１および１．６）を、ヒト組換えＫＤＭ１Ａ（Ａｃｔｉｖｅ  Ｍｏｔｉｆ；＃３１３３４）またはＫＤＭ１Ａ発現ＴＨＰ−１もしくはＭＶ（４；１１）（ＡＴＣＣからのヒトＡＭＬ細胞株）から得られた細胞抽出物と共に、化学プローブの濃度を増加させてインキュベートした。使用された捕捉剤は、ストレプトアビジン被覆常磁性ビーズ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；＃１１２０５Ｄ）であった。
【０５５４】
１Ｘ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｍｉｎｉ，  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｃｏｃｋｔａｉｌ  Ｔａｂｌｅｔｓ（ＲＯＣＨＥ；＃１１８３６１５３００１）を含有する１Ｘ  Ｃｅｌｌ  Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ；＃９８０３）に細胞を溶解させ、１×１０６個の細胞を含有する凍結細胞ペレットに化学プローブ（プルダウンアッセイ用の指示された濃度、例えば５μＭ）を添加した。管を氷上で５分間インキュベートし、短時間超音波照射して溶解を達成した。得られた抽出物を、４℃、１４．０００×で１０分間遠心分離した。上澄みを回収し、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイ（ＢＩＯ−ＲＡＤ；＃５００−０００６）により、製造業者の指示に従って定量した。
【０５５５】
２５０μＬのＤｙｎａｂｅａｄｓ  Ｍ−２８０  Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；＃１１２０５Ｄ）を３回洗浄し、２５０μＬのＰＢＳ中に再懸濁させた。次いで、３５０μｇのタンパク質抽出物（化学プローブを含有する）を添加し、穏やかな回転を使用して室温（ＲＴ）で３０分間インキュベートした。ストレプトアビジンビーズに結合した化学プローブ−ＫＤＭ１Ａ複合体を、磁石を使用して分離し、ＰＢＳ中で４回洗浄した。最後の洗浄後、試料を２５μＬの３×ＳＤＳ試料緩衝液中に再懸濁させ、ウェスタンブロットにより分析した。１０％  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ  ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）Ｎｏｖｅｘ（登録商標）Ｐｒｅｃａｓｔゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；＃Ｐ０３０１ＢＯＸ）上で、製造業者の指示に従って試料を分離した。セミドライ転写による免疫検出のために、ゲルをニトロセルロース膜（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；＃ＲＰＮ３０３Ｄ）上に転写した。ブロッキング緩衝液（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ  ０．１％中の５％脱脂粉乳）中でＲＴで１時間インキュベートすることにより、Ｎ特異的結合部位をブロックした。次いで、一次検出試薬として、１：１０００に希釈された抗ＫＤＭ１Ａ抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ；＃２１８４）と共に、ニトロセルロース膜をブロッキング緩衝液中で４℃で一晩（Ｏ／Ｎ）インキュベートした。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ  ０．５％中で５回洗浄した後、１：５０００に希釈されたペルオキシダーゼコンジュゲート二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｎｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ；＃７１１−０３５−１５２）と共に、膜をＲＴで１時間インキュベートした。信号は、ＧｅｎｅＧｎｏｍｅ  ＨＲ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｓｙｎｇｅｎｅ）を使用して、増強化学発光（ＥＣＬ、Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；＃Ｗ９６４３３５０）により検出された。
【０５５６】
結果：
化学プローブ（０．２〜５００ｎＭの濃度）を使用して滴定分析を行い、タンパク質複合体をプルダウンするのに必要なプローブ濃度を決定した。図１Ａに示される結果は、化学プローブ実施例１．６が、ＴＨＰ−１細胞からのＫＤＭ１Ａに用量依存的に効率的に結合すること、およびそのビオチン基が常磁性ビーズの表面上のストレプトアビジンに容易に到達可能であることを実証している。
【０５５７】
増加濃度のＯＲＹ−１００１（０．２、１、５および２５ｎＭ）による細胞の４日間の前処理は、化学プローブ１．１または１．６を使用してプルダウンされ得るＫＤＭ１Ａの量の用量依存的低減を誘発した。細胞抽出物は、過剰（５ｕＭ）の化学プローブ、およびＫＤＭ１Ａ抗体を使用してウェスタンブロットにより分析された磁性ストレプトアビジンＤｙｎａｂｅａｄｓを使用してプルダウンされたタンパク質の存在下で得られた。２５ｎＭのＯＲＹ−１００１での前処理は、実施例１．１に対応する化学プローブでのＫＤＭ１Ａのプルダウンを完全に防止したが、これは、ＫＤＭ１Ａ阻害がこの用量において完了したことを示している。図１Ｂは、異なる用量のＯＲＹ−１００１（ｎＭ）での細胞の前処理の、ＴＨＰ−１細胞からの化学プローブ媒介プルダウンに対する効果を示す。
【０５５８】
本発明者らはまた、５ｕＭの実施例１．４および１．５等の他の化学プローブが、５００ｕｇのＭＶ（４；１１）タンパク質抽出物からＫＤＭ１Ａを効率的にプルダウンすることを検証した。２５ｎＭのＯＲＹ−１００１での細胞の前処理は、これらの化学プローブでのＫＤＭ１Ａのプルダウンを完全に防止した。
【０５５９】
実施例４：化学プローブ結合および特異性
実施例４．１
化学プローブ特異性
優先的には、本発明に使用された化学プローブは、ＫＤＭ１Ａ標的に選択的に結合し、他のタンパク質には結合せず、より具体的には、化学プローブは、他の構造的に関連したモノアミンオキシダーゼにおけるＦＡＤ補因子に結合しない。他のＦＡＤ含有酵素に比べてＫＤＭ１Ａ中のＦＡＤに結合する化学プローブの標的選択性は、異なる生化学的アッセイにおいて化学プローブを試験し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでそのＭＡＯ−Ａ、ＭＡＯ−Ｂ、ＩＬ４Ｉ１およびＳＭＯＸ阻害活性を決定することにより評価される。全てのＩＣ５０値は、Ｇｒａｐｈ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して計算された。
【０５６０】
実施例４．１．１
ＭＡＯ阻害
ヒト組換えＭＡＯ−ＡおよびＭＡＯ−Ｂを、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（それぞれ＃Ｍ７３１６および＃Ｍ７４４１）から購入した。酵素活性および阻害速度を、基質としてキヌラミン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  ＃Ｋ３２５０）を使用した蛍光ベースアッセイにおいて分析した。ＭＡＯ−ＡおよびＭＡＯ−Ｂの特異的阻害の対照として、それぞれクロルギリンおよびデプレニル（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  ＃Ｍ３７７８および＃Ｍ００３）を使用した。化合物を、タンパク質と共に１００ｍＭのＨｅｐｅｓ  ｐＨ７．５中で氷上で１５分間、事前にインキュベートした。特定のＫＭキヌラミンの添加により酵素反応を開始させ、３７℃で１時間インキュベートした。ＮａＯＨ  ２Ｎ（ｖ／ｖ）を添加することにより、反応を停止させた。マイクロプレートリーダーを使用して、キヌラミンから４−ヒドロキシキノリンへの変換を蛍光（λｅｘ＝３２０ｎｍ、λｅｍ＝３６０ｎｍ）により監視した。化学プローブ（実施例１．６）は、試験された用量範囲内ではＭＡＯ−ＡまたはＭＡＯ−Ｂ活性を阻害せず、そのＭＡＯ−ＡおよびＭＡＯ−Ｂ  ＩＣ５０は＞１００ｕＭである。
【０５６１】
実施例４．１．２
ＩＬ−４Ｉ１阻害
ヒト組換えＩＬ−４Ｉ１を、ＲＤ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（＃５６８４−ＡＯ−０２０）から購入した。Ａｍｐｌｅｘ  ｒｅｄを基質として使用したホースラディッシュペルオキシダーゼ結合アッセイにおいて、フェニルアラニンを酸化してＨ２Ｏ２を生成するその能力により、生化学的活性を測定した。アッセイ緩衝液は、５０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ７であり；試験した化合物によるＩＬ−４Ｉ１の阻害を、ＫＭフェニルアラニンの存在下で３０分間監視した。化学プローブ実施例１．６は、１００ｕＭで３１％のｈＩＬ−４Ｉ１阻害を示し、そのＩＣ５０は＞１００ｕＭであった。
【０５６２】
実施例４．１．３
ＳＭＯＸ阻害
マウス組換えＳＭＯＸ酵素は、Ｐａｏｌｏ  Ｍａｒｉｏｔｔｉｎｉ教授（Ｒｏｍｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）により提供された。Ａｍｐｌｅｘ  ｒｅｄを基質として使用したホースラディッシュペルオキシダーゼ結合アッセイにおいて、スペルミンを酸化するその能力により、生化学的活性を測定した。ｍＳＭＯＸ反応用のアッセイ緩衝液は、１００ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ８．０であった。試験した化合物による阻害は、ＫＭスペルミンの存在下で１０分間監視された。化学プローブ実施例１．６のｍＳＭＯＸ  ＩＣ５０値は、１３ｕＭであった。
【０５６３】
実施例４．１．４
細胞結合
化学プローブが細胞抽出物中でＫＤＭ１Ａに選択的に結合するかどうかを評価するために、ＫＤＭ１Ａ化学プローブを使用して細胞からタンパク質を化学的に沈殿させることができる。化学プローブ実施例１．６は、１３ｕＭのＩＣ５０で組換えＳＭＯＸを阻害した。化学プローブ実施例１．６を使用して、磁性ストレプトアビジンビーズを捕捉剤として用いてＭＶ（４；１１）細胞から標的タンパク質をプルダウンし、１：２００に希釈された抗ＳＭＯＸ抗体（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃ  Ｅｕｒｏｐｅ；＃１５０５２−１−ＡＰ）または抗ＫＤＭ１Ａ抗体を説明された一次検出試薬として使用して、ウェスタンブロットによる分析を実施例３に記載のように行った。図２に示されるように、ＫＤＭ１Ａは化学的沈殿により量的に回復したが、ＳＭＯＸは検出されず、これは細胞抽出物中のＫＤＭ１Ａ酵素に対するプローブの選択性を示している。
【０５６４】
実施例５：全および遊離ＫＤＭ１Ａを検出するための化学プローブ免疫吸着アッセイの開発
本発明者らは、固相アッセイにおける生物学的試料（例えば細胞または組織）からの組換えＫＤＭ１Ａ全長タンパク質中、またはタンパク質抽出物中の全および遊離ＫＤＭ１Ａの両方を決定するための、２つの独立したＫＤＭ１Ａ  ＥＬＩＳＡアッセイを開発した。特に、遊離ＫＤＭ１Ａレベルを決定するために、ＫＤＭ１Ａ化学プローブベース免疫吸着アッセイを使用した。全ＫＤＭ１Ａおよび特に遊離ＫＤＭ１Ａのレベルの評価は、実施例７においてより詳細に説明されるように、ＫＤＭ１Ａ阻害剤によるＫＤＭ１Ａの占有（標的会合）の程度を評価するのに有用である。
【０５６５】
実施例５．１：ＥＬＩＳＡ用途に有用な特定のＫＤＭ１Ａ抗体の選択
本発明者らのアッセイにおける使用のためのＫＤＭ１Ａタンパク質に結合する能力を有する抗体の対を選択するために、以下のパラメータを評価した：抗ＫＤＭ１Ａ抗体は、ストレプトアビジンまたは化学プローブに結合した他のタグにも、またＫＤＭ１ＡとＣｏ−ＲＥＳＴとの間の相互作用にも干渉しない非重複エピトープを認識することができた。優先的にモノクローナルであり、ＩＨＣ、ＩＰおよびＷＢにおいて機能的であることが公表されている抗体に関して、市販の抗体のリストを走査した。多様性および望ましくない相互作用の可能性を評価するために、ＫＤＭ１Ａタンパク質上の抗体のエピトープ認識部位の予備モデリングを行い、さらなる機能的評価のために候補抗体を選択した。次いで、前記候補抗体を、ヒト細胞由来の新鮮な抽出物からのＫＤＭ１Ａタンパク質を免疫沈降させる能力に関して検証した。異なる種からの２種の抗体、本明細書においてｍＡｂ−８４４で指定されるマウスＣ末端ｍＡｂ−ＫＤＭ１Ａ（Ａｂｃａｍ  ＃ａｂ５３２６９）、および本明細書においてｍＡｂ−８２５で指定されるウサギＮ末端ｍＡｂ−ＫＤＭ１Ａ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃２１８４）を選択したが、これらは互いの結合に干渉することなく、またＫＤＭ１Ａ化学プローブ実施例１．６の結合に影響することなくＫＤＭ１Ａに結合することができる。逆もまた同様に、ＫＤＭ１ＡのＫＤＭ１Ａ阻害剤（および化学プローブ）による阻害は、抗体によるＫＤＭ１Ａ認識に干渉せず、抗体−抗体または抗体−プローブの間に立体障害は検出されず、細胞抽出物を使用して全ＫＤＭ１Ａタンパク質を測定する能力に干渉しなかった。
【０５６６】
ｍＡｂ−８２５：
ヒトＫＤＭ１Ａ配列（ＵＮＩＰＲＯＴ  ＩＤ  Ｏ６０３４１−１）のプロリン６０（Ｐ６０）に近接するＮ末端領域に位置し、ペプチド＃ＬＳＤ１  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｐｅｐｔｉｄｅ−２１８４特異性（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）によりブロックされる、本明細書においてＥＰ１と指定されるエピトープを標的化するウサギＮ末端ｍＡｂ−ＫＤＭ１Ａ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃２１８４）。
【０５６７】
ｍＡｂ−８４４：
マウスＣ末端ｍＡｂ−ＫＤＭ１Ａ（Ａｂｃａｍ  ＃ａｂ５３２６９）。この抗体は、Ｃ末端領域に位置し、ヒトＫＤＭ１ＡのＡＡ８３２〜８４７に対応するＡＭＹＴＬＰＲＱＡＴＰＧＶＰＡＱを含む、本明細書においてＥＰ２と指定されるエピトープを標的化する。
【０５６８】
抗体は両方とも、少なくともヒト、ラットおよびマウスＫＤＭ１Ａタンパク質を認識する。
実施例５．２：発光ＫＤＭ１Ａ  ＥＬＩＳＡ
組織および細胞試料中の全および遊離ＫＤＭ１Ａタンパク質量の定量のために、発光ＫＤＭ１ＡサンドイッチＥＬＩＳＡおよびＫＤＭ１Ａ化学プローブＥＬＩＳＡアッセイを確立した。全ＫＤＭ１Ａレベルを測定するために、表面に結合した第１の抗ＫＤＭ１Ａ抗体を捕捉抗体（例えばｍＡｂ−８４４）として使用し、続いて検出のための第２の抗ＫＤＭ１Ａ抗体（例えばｍＡｂ−８２５）を使用する、サンドイッチＥＬＩＳＡを用いた。抗ＫＤＭ１Ａ抗体（ｍＡｂ−８２５）に対するホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲート二次抗体を用いて、プレート表面に結合した全ＫＤＭ１Ａを測定した。全ＫＤＭ１Ａを検出するためのサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイの概略図を、図３Ａに示す。遊離ＫＤＭ１Ａレベルを測定するために、前述のようなＨＲＰコンジュゲート二次抗体を使用して、ＫＤＭ１Ａに結合したビオチンタグ付けＫＤＭ１Ａ化学プローブを捕捉するためにストレプトアビジン被覆プレートを用い、また検出抗体として抗ＫＤＭ１Ａ抗体（例えばｍＡｂ−８２５）を用いる化学プローブ連結免疫吸着アッセイを使用した。遊離ＫＤＭ１Ａを検出するためのこのＫＤＭ１Ａ化学プローブベースＥＬＩＳＡアッセイの概略図を、図３Ｂに示す。
【０５６９】
密度勾配遠心分離による末梢血からのＰＢＭＣの単離：
ラットからの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、血液用の抗凝固剤入り管（好ましい抗凝固剤入り管としてＫ２−またはＫ３−ＥＤＴＡ）内に回収された末梢新鮮血から単離し、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  ＰＬＵＳ試薬（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；＃１７−１４４０−０２）またはＬｅｕｃｏｓｅｐ  Ｔｕｂｅｓ（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ｂｉｏ−ｏｎｅ；＃２２７２８８）を製造業者の指示に従って使用して、等体積のＰＢＳで希釈した。細胞をトリパンブルーで染色し、光学顕微鏡内のＮｅｕｂａｕｅｒ  Ｃｈａｍｂｅｒを使用して、細胞数および生存能力を決定した。１×１０６個のＰＢＭＣのペレットを、−８０℃で保存した。ヒトまたはマウス血等の他の源からのＰＢＭＣの単離のために、同じ手順を使用することができる。ヒト試料の場合、好ましくはＬｅｕｃｏｓｅｐ手順が使用され、一方マウスＰＢＭＣの場合、Ｆｉｃｏｌｌ手順が好ましい。
【０５７０】
試料調製：
実施例３に記載の条件に従って、１×１０６個の細胞を含有する凍結細胞ペレットに添加された２５ｎＭのＫＤＭ１Ａ化学プローブ実施例１．６の存在下で細胞を溶解させた。全ＫＤＭ１Ａの決定のために開発されたサンドイッチＥＬＩＳＡ、および遊離ＫＤＭ１Ａの決定のために開発されたＫＤＭ１Ａ化学プローブ捕捉ＥＬＩＳＡにおいて、同じタンパク質抽出物が使用される。
【０５７１】
ＥＬＩＳＡ：
全ＫＤＭ１Ａを定量するために、Ｌｕｍｉｎｕｎｃ  Ｐｌａｔｅｓ  Ｍａｘｉｓｏｒｐ（ＮＵＮＣ；＃４３６１１０）を、捕捉剤としてのＰＢＳ中２μｇ／ｍＬのモノクローナル抗ＫＤＭ１Ａ抗体（Ａｂｃａｍ；＃ａｂ５３２６９、ｍＡｂ−８４４と呼ばれる）で被覆した。遊離ＫＤＭ１Ａの定量のために、プレートの表面を、捕捉剤としてのＰＢＳ中１０μｇ／ｍＬのストレプトアビジン（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｂｅｒｉｃａ；＃Ｚ７０４１）で被覆した。被覆は、４℃でＯ／Ｎで行った。ウェルをＰＢＳ、０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０で３回洗浄し、ＰＢＳ−ＢＳＡ  １％（Ｓｉｇｍａ；＃Ａ３０５９）で２時間ブロックした。
【０５７２】
ＰＢＳ中で希釈された全長ｒＫＤＭ１Ａ（Ａｃｔｉｖｅ  Ｍｏｔｉｆ；＃３１３３４）のＫＤＭ１Ａ較正曲線を各プレートに含めた。次いで、プレートをＲＴで１時間インキュベートし、５回洗浄した。その後、一次検出剤として使用されるモノクローナル抗ＫＤＭ１Ａ抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ；＃２１８４、ｍＡｂ−８２５と呼ばれる）を、ＰＢＳ中で０．１２５μｇ／ｍＬに希釈し、プレートをＲＴで１時間インキュベートした。６回の洗浄後、二次検出剤、すなわち１：５０００に希釈されたペルオキシダーゼコンジュゲート二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｎｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ；＃７１１−０３５−１５２）をプレートに添加し、ＲＴで１時間インキュベートし、再びプレートを洗浄した。ＥＬＩＳＡ手順におけるホースラディッシュペルオキシダーゼ［ＨＲＰ］に特異的な１００μＬ／ウェルの化学発光基質（ｓｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  ＥＬＩＳＡ  Ｆｅｍｔｏ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；＃３７０７４）を添加した。プレートを１，５００×ｇで３０秒間遠心分離し、１００ｒｐｍで１分間振盪し、マイクロプレートリーダー（Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  ２００、Ｔｅｃａｎ）内で２５℃で３分間インキュベートした。１０００ｍｓの積分時間および１５０ｍｓの安定化時間を用いて取得された相対発光単位（ＲＬＵ）読取値を使用して、全ＫＤＭ１Ａのレベルを決定した。図３は、開発されたＫＤＭ１Ａ  ＥＬＩＳＡアッセイ、全ＫＤＭ１Ａの決定のためのサンドイッチＥＬＩＳＡ（図３Ａ）、および遊離ＫＤＭ１Ａの決定のためのＫＤＭ１Ａ化学プローブ捕捉ＥＬＩＳＡ（図３Ｂ）を示す。２つの別個のアッセイにおいて２つの決定が行われ、抗ＫＤＭ１Ａ抗体に対するＨＲＰ結合二次抗体は適切な基質と反応して、発光信号を生成する。
【０５７３】
結果：
全長活性組換えｒＫＤＭ１Ａの一連の希釈物を使用して、標準曲線を確立し、全および遊離ＫＤＭ１Ａの発光アッセイのダイナミックレンジおよび感度を評価した。図４は、全および遊離ヒトｒＫＤＭ１Ａ（Ａｃｔｉｖｅ  Ｍｏｔｉｆ  Ｒｅｆ  ３１３３４、バッチ＃３３０３００４）の標準曲線を示すが、サンドイッチＥＬＩＳＡおよびＫＤＭ１Ａ化学プローブ捕捉ＥＬＩＳＡの両方が、化学プローブ実施例１．６（２５ｎＭ）の存在下で行われる。図４に示されるように、全および遊離ＫＤＭ１Ａ標準曲線は、直線挙動を示した（ｒ２＞０．９９）。ＥＬＩＳＡのＬＬＯＤ（検出下限）は、約１０ｐｇのＫＤＭ１Ａであり、検出範囲は１５〜２５００ｐｇである。
【０５７４】
この曲線は、全および遊離組換えＫＤＭ１Ａと細胞の全および遊離ＫＤＭ１Ａの検出効率、ならびに組換えおよび細胞ＫＤＭ１Ａの比活性度が同じである場合、または、適切な補正関数の適用後、組換えおよび細胞遊離ＫＤＭ１Ａの検出効率および比活性度が異なる場合、生物学的試料中の全ＫＤＭ１Ａおよび遊離ＫＤＭ１Ａの濃度（量）を決定するために直接使用され得る。標準曲線は、各ＥＬＩＳＡアッセイにおいて陽性対照として含めることができる。
【０５７５】
説明された条件および試薬を使用した上述のＫＤＭ１ＡサンドイッチＥＬＩＳＡおよびＫＤＭ１Ａ化学プローブＥＬＩＳＡアッセイ（共に全および遊離ＫＤＭ１Ａに対する）は、少なくとも、ヒト、ラットおよびマウスを含む異なる種からの生物学的試料の分析に使用され得る。それらはまた、他の動物種に対する好適な抗体を選択することによって、前記種からの試料を分析するように適合され得る。重要なことに、方法は、ＰＢＭＣ単離プロトコルを使用して、例えば上で開示されたＰＢＭＣ単離プロトコルの１つを使用して、臨床的に有用な試料、例えばヒト血液から得られたＰＢＭＣにおける全および遊離ＫＤＭ１Ａを評価するために使用され得る。図５は、３人の健常ドナーのＰＢＭＣからの７．５ｕｇのタンパク質抽出物中の全（図５Ａ）および遊離（図５Ｂ）ＫＤＭ１Ａのレベルの決定を示す（陽性対照としての全および遊離ＫＤＭ１ＡのｒＫＤＭ１Ａの標準曲線と並行して行われた）。図５Ａおよび５Ｂにおけるデータは、遊離および全ＫＭＤ１ＡレベルがヒトＰＢＭＣにおいて決定され得ることを示している。
【０５７６】
実施例５．３：比色ＫＤＭ１Ａ  ＥＬＩＳＡ
行われるアッセイは、発光ＥＬＩＳＡに関して上で開示されたアッセイと同様であるが、表面としてＭａｘｉｓｏｒｐプレート（ＮＵＮＣ；＃７３５−００１３）を、また二次検出剤の基質としてテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）液体基質系（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ；＃Ｔ０４４０）を使用する。ウェル当たり１００μＬのＴＭＢを添加し、プレートを１０分間インキュベートしてから、１００ｕＬ／ウェルの２Ｎリン酸溶液の添加により反応を停止させた。マイクロプレートリーダー（Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  ２００、Ｔｅｃａｎ）を使用して、４５０ｎｍで吸光度を読み出した。
【０５７７】
この方法の検出範囲は、発光ＥＬＩＳＡほど感度は高くないものの、生物学的試料の分析における使用にまだ良好であり、好適である。全および遊離ＫＤＭ１Ａ標準曲線は、直線的な挙動を示した（ｒ２＞０．９９）。比色ＥＬＩＳＡのＬＬＯＤは、約２００ｐｇのＫＤＭ１Ａであり、検出範囲は０．２５〜２．５ｎｇである。予測されたように、化学発光を使用してＥＬＩＳＡを行った場合、優れた感度が見られた。
【０５７８】
実施例６：全および遊離ＫＤＭ１Ａを検出するためのＡｍｐｌｉｆｉｅｄ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ  Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓアッセイ
Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ  Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓアッセイ（Ａｌｐｈａ）技術は、実施例５．２に記載のもの等の古典的なＥＬＩＳＡアッセイの代替となる均一免疫アッセイプラットフォームである。
【０５７９】
ＡｌｐｈａＬＩＳＡアッセイは、６８０ｎＭでの照射後に一重項酸素を放出するフタロシアニンを含有する２５０ｎＭのラテックスドナービーズを含有する第１の検出剤の、一重項酸素の吸収後に６１５ｎＭで狭いピークの光を発光するユーロピウムを含有する同様のサイズのアクセプタービーズを含有する第２の検出剤に対する近接性を検出する。ＡｌｐｈａＰｌｅｘアッセイは、同じアッセイ体積中の複数の検体の検出を可能にし、同様に機能するが、それぞれテルビウムまたはサマリウムを含有し、吸収後に５４５ｎＭまたは６４５ｎＭで発光する２つのアクセプタービーズが使用される（第２および第３の検出剤）。効果的な一重項酸素移動は、ドナーおよびアクセプタービーズが２００ｎｍ未満の距離だけ離れている場合に生じる。
【０５８０】
抗ＫＤＭ１Ａ抗体ｍＡｂ−８２５およびｍＡｂ−８４４が、ＫＤＭ１Ａの表面上において、互いに、および突出するＫＤＭ１Ａ化学プローブ（実施例１．６）と極めて近接する形で結合させるために選択された（実施例５．１を参照されたい）。化学プローブの結合は、抗体の結合に影響せず、またｍＡｂ−８４４の表面への結合は、使用された実験設定におけるｍＡｂ−８２５の結合に干渉しなかった。ＫＤＭ１Ａ標的会合を評価するために、化学プローブベース免疫アッセイのＡｌｐｈａＬｉｓａ／ＡｌｐｈａＰｌｅｘ形式が開発された。
【０５８１】
例えば、抗ＫＤＭ１Ａ抗体（ｍＡｂ−８４４）は、ＡｌｐｈａＬＩＳＡアクセプタービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＃６７７２００１）にコンジュゲートして第１の検出剤を生成し、抗ＫＤＭ１Ａ抗体（ｍＡｂ−８２５）は、ＡｌｐｈａＬＩＳＡドナービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＃６７６２０１３）にコンジュゲートして第２の検出剤を生成したが、これらが一緒になって全ＫＤＭ１Ａレベルを決定するために使用され得る検出系を形成する。第１の検出試薬はまた、ビオチンタグを有するＫＤＭ１Ａ化学プローブ実施例１．６を標的化する第３の検出試薬、ストレプトアビジン被覆ＡｌｐｈａＬＩＳＡドナービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＃６７６０００２）と組み合わせて使用され、遊離ＫＤＭ１Ａレベルを検出するために使用され得る第２の検出系を形成し得る。ＡｌｐｈａＬＩＳＡアッセイ、ならびにドナーおよびアクセプタービーズへの抗体のコンジュゲーションは、供給業者の指示に従って行った。
【０５８２】
全および遊離ＫＤＭ１Ａを検出するためのＡｌｐｈａＬＩＳＡの使用を例示するために、ヒトｒＫＤＭ１Ａの一連の希釈物を調製し、１００ｎＭの化学プローブ実施例１．６と共にインキュベートし、抗ＫＤＭ１Ａ  ｍＡｂ−８４４コンジュゲートＡｌｐｈａＬＩＳＡアクセプタービーズ、および遊離（図６Ａ）または全（図６Ｂ）ＫＤＭ１Ａそれぞれを検出するための抗ＫＤＭ１Ａ  ｍＡｂ−８２５コンジュゲートＡｌｐｈａＬＩＳＡドナービーズまたはストレプトアビジン被覆ＡｌｐｈａＬＩＳＡドナービーズのいずれかと混合した。得られた曲線は釣鐘型であり、初期濃度依存的信号増加後に得られるプラトー、およびこれに続く滴定可能な信号減少（フック効果）を特徴とし、これはＡｌｐｈａＬＩＳＡアッセイに典型的なパターンである。バックグラウンドに対する信号の最大比率は、１００ｎＭのｒＫＤＭ１Ａで、すなわち等モル濃度の化学プローブおよび酵素で得られた。予測されたように、ＫＤＭ１Ａ阻害剤はＫＤＭ１Ａ化学プローブへの結合に利用可能な遊離ＫＤＭ１Ａが存在しないようにＫＤＭ１Ａに結合するため、遊離ＫＤＭ１Ａ信号は、ＯＲＹ−１００１（５ｕＭ）での酵素の前処理によりブロックされた。図６Ｃを参照されたいが、図中、菱形はｒＫＤＭ１Ａ＋ＫＤＭ１Ａ化学プローブ（実施例１．６、１００ｎＭ）に対応し、丸はｒＫＤＭ１Ａ＋ＫＤＭ１Ａ化学プローブ（実施例１．６、１００ｎＭ）＋ＯＲＹ−１００１（５ｕＭ）に対応し、三角形は陰性対照（ｒＫＤＭ１Ａタンパク質のみ）に対応する。
【０５８３】
多重アッセイにおいて、フタロシアニン含有Ａｌｐｈａｐｌｅｘドナービーズは、抗ＫＤＭ１Ａ抗体（例えばｍＡｂ−８２５）の１つに結合することができ、テルビウム含有アクセプタービーズは、第２の抗ＫＤＭ１Ａ抗体（例えばｍＡｂ−８４４）に結合することができ、サマリウム含有ＡｌｐｈａＰＬＥＸ  ６４５ストレプトアビジンアクセプタービーズは、化学プローブ実施例１．６に結合するように（またはその逆）、ならびに全および遊離ＫＤＭ１Ａを同時に検出するために使用され得る。
【０５８４】
実施例７：細胞におけるＫＤＭ１Ａ標的会合の評価のための化学プローブの使用
上述の化学プローブベース免疫アッセイを使用して、以下に示されるように細胞におけるＫＤＭ１Ａ標的会合を評価することができる。
【０５８５】
７．１  方法：
用量曲線を確立するために、ＭＶ（４；１１）細胞をビヒクルまたは増加用量のＯＲＹ−１００１で９６時間処理した。実施例５．２に記載のように、２５ｎＭの化学プローブ（実施例１．６）の存在下で細胞を溶解させ、タンパク質抽出物を得た。全タンパク質抽出物を定量し、１ｕｇの全タンパク質を使用して、発光基質を用いて上述のように標的会合分析を行った。
【０５８６】
７．２  標的会合計算
細胞をＯＲＹ−１００１等のＫＤＭ１Ａ阻害剤で処理した後に、遊離ＫＤＭ１Ａ酵素の一部が化合物により占有され得る。これらの細胞からのＫＤＭ１Ａが実施例１．６等の過剰のＫＤＭ１Ａ化学プローブに曝露されると、化学プローブはＦＡＤ補因子に急速に結合して、遊離ＫＤＭ１Ａをタグ付けする。本明細書に記載の化学プローブおよび方法は、ＫＤＭ１Ａを発現する細胞、組織および／または他の生物学的試料中のＯＲＹ−１００１または任意の他のＫＤＭ１Ａ阻害剤の直接的ＫＤＭ１Ａ占有（標的会合）を評価するために使用され得る。
【０５８７】
標的会合（ＴＥ）を決定するために、所与の試料Ｘにおける標的会合が同じ性質の参照試料ＲＥＦ（前処理またはビヒクル）と比べて計算される、相対的定量法が使用された。未処理データの処理（Ｇｒｕｂｂｓ基準によるレプリカ解析点における外れ値の安定した排除およびブランク信号の除去）後、標的会合は以下のように計算された。
ＴＥＸ＝１−（ＲＸ／ＲＲＥＦ）（式中、ＲＸ＝（ＲＬＵＦｒｅｅ，Ｘ／ＲＬＵＴｏｔａｌ，Ｘ）であり、ＲＲＥＦ＝（ＲＬＵＦｒｅｅ，ＲＥＦ／ＲＬＵＴｏｔａｌ，ＲＥＦ）である）；
または、％で表現すると、
ＴＥＸ（％）＝１００−（（ＲＸ（％）／ＲＲＥＦ（％））×１００）（式中、ＲＸ（％）＝（ＲＬＵＦｒｅｅ，Ｘ／ＲＬＵＴｏｔａｌ，Ｘ）×１００であり、ＲＲＥＦ（％）＝（ＲＬＵＦｒｅｅ，ＲＥＦ／ＲＬＵＴｏｔａｌ，ＲＥＦ）×１００である）。
【０５８８】
７．３  結果：
ＲＬＵで測定される全および遊離ＫＤＭ１Ａレベルは、実施例５．２に記載の条件に従って決定され、標的会合は、上記７．２に記載の方法に従って計算された。図７は、ＯＲＹ−１００１濃度に対してプロットされた標的会合の％を示し、ＯＲＹ−１００１のＭＶ（４；１１）におけるＫＤＭ１Ａに対する標的会合のＩＣ５０値は、Ｇｒａｐｈ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して０．３５ｎＭと計算された。
【０５８９】
本発明者らはまた、同じ方法を使用して、ＭＶ（４；１１）細胞における２４時間の処理後の化合物Ａおよび化合物Ｂ等の他のＫＤＭ１Ａ阻害剤によるＫＤＭ１Ａ標的会合を評価した。化合物Ａ（または化Ａ）は、化学名（ｔｒａｎｓ）−２−フェニル−Ｎ−（ピペリジン−４−イルメチル）シクロプロパン１−アミンを有する化合物であり、これはＷＯ２０１３／０５７３２０の実施例５において開示されている。化合物Ｂ（または化Ｂ）は、化学名ｔｒａｎｓ−２−フェニルシクロプロピルアミンを有するトラニルシプロミンとしても知られるパルネート（ｐａｒｎａｔｅ）である。結果を図８Ａに示すが、ＯＲＹ−１００１（０．１、１および１０ｎＭ）、化Ａ（０．１、１および１０ｎＭ）ならびに化Ｂ（１０ｎＭ、１ｍｃＭおよび１０ｍｃＭ）のＫＤＭ１Ａ標的会合の％がプロットされている。図８Ａは、生化学的ＫＤＭ１Ａ活性による用量応答性の細胞標的会合を示している（ＯＲＹ−１００１、化Ａおよび化Ｂに対してそれぞれＩＣ５０ＬＳＤ１＝０．０１８ｕＭ、０．０２２ｕＭおよび１５ｕＭ）。
【０５９０】
また、本明細書において開示される方法および化学プローブを使用して、ＴＨＰ−１等の他の白血病細胞株、ならびに前立腺がんおよび小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）細胞株等の固形腫瘍細胞株を含むさらなる細胞株におけるＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合を決定した。例えば、白血病ＴＨＰ−１細胞または前立腺がんＬＮＣａｐ細胞を、ＯＲＹ−１００１（ＴＨＰ−１細胞においては０．２５〜２５ｎＭの範囲内の濃度、ＬＮＣａｐ細胞においては０．１、１および１０ｎＭ）で２４時間処理し、次いで上述のような化学プローブ実施例１．６（２５ｎＭ）の存在下でＣｅｌｌ  Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒ  １Ｘ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）中に溶解させ、遊離および全ＫＤＭ１Ａレベルを実施例５．２に記載のように決定し、上述のように標的会合を計算するために使用した。ＯＲＹ−１００１で処理されたＴＨＰ−１細胞において得られた標的会合の％を、図８Ｂに示す。結果は、用量応答性の細胞標的会合を示し、ＴＨＰ−１細胞中のＫＤＭ１Ａに対するＯＲＹ−１００１の標的会合に関してＧｒａｐｈ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して計算されたＩＣ５０値は、０．６ｎＭである。ＯＲＹ−１００１で処理されたＬＮＣａｐ細胞において得られた標的会合データを図８Ｃに示すが、試験したＫＤＭ１Ａ阻害剤の明確なＫＤＭ１Ａ標的会合が見られる。
【０５９１】
この実施例７に記載された結果は、本発明の化学プローブベースの方法を使用して、白血病および固形腫瘍細胞を含む異なる種類の細胞におけるＫＤＭ１Ａ阻害剤の標的会合を、信頼性をもって決定することができることを示している。
【０５９２】
実施例８：ｅｘ  ｖｉｖｏ試料を使用したｉｎ  ｖｉｖｏ  ＫＤＭ１Ａ標的会合の評価のための化学プローブの使用
本発明の化学プローブおよび化学プローブベースの方法を使用して、ＫＤＭ１Ａ阻害剤で処理された動物（例えばラットまたはマウス）およびヒト等の生きた対象におけるＫＤＭ１Ａ標的会合を、前記対象から採取された試料（ｅｘ  ｖｉｖｏ試料）を使用して決定することに成功した。
【０５９３】
例えば、セクション８．１から８．３に示されるように、ラットまたはマウスに異なる用量のＫＤＭ１Ａ阻害剤またはビヒクルを投与し、次いで前記動物から試料を得（例えば血液試料または組織もしくは器官試料）、前記試料中の遊離および全ＫＤＭ１Ａレベルを決定するために分析し、これらのレベルを使用して、上述のようにＫＤＭ１Ａ阻害剤によるＫＤＭ１Ａ標的会合を決定した。同様に、同じ手法を使用して、以下の実施例９においてより詳細に説明されるように、ＫＤＭ１Ａ阻害剤で処理されたヒトにおけるＫＤＭ１Ａ標的会合もまた示された。
【０５９４】
８．１．試料調製および細胞からのタンパク質抽出物の獲得は、実施例５に記載のように行った。ドライアイス上で冷却しながら、凍結組織を乳鉢および乳棒でホモジナイズした。粉末化した試料を溶解緩衝液中に再懸濁させ、１８ゲージブラントシリンジ針に押し通して細胞を溶解させ、次いで細胞ペレットに関して上述したように（実施例５．２）タンパク質を抽出した。末梢血からのＰＢＭＣの単離もまた、実施例５．２に記載の通りであった。
【０５９５】
８．２．アッセイプロトコルおよびＴＥの計算：実施例７．１および７．２における説明と同じである。
８．３．結果：
発光ＥＬＩＳＡ法を使用して、連続４日間の経口強制飼養によりＯＲＹ−１００１で処理されたラットのｅｘ−ｖｉｖｏ試料を用い、ＫＤＭ１Ａ標的会合を評価した。４つの異なる用量を使用した（１、３、１０および３０ｕｇ／ｋｇ／日）。ＫＤＭ１Ａ標的会合は前に説明されたように（実施例７を参照されたい）計算されたが、ＲＸは、分析された各条件に対応し、ＲＲＥＦは、ビヒクル（非処理）ラットＰＢＭＣに対応する試料である。図９Ａは、試験した各用量でＯＲＹ−１００１で処理され、最後の投与から２時間後に単離されたプールラットＰＢＭＣ（ｎ＝３）におけるＫＤＭ１Ａ標的会合（％）を要約しており、図９Ｂは、ＯＲＹ−１００１で処理された同じ動物からのプールラット肺（ｎ＝３）におけるＫＤＭ１Ａ標的会合（％）を示す。ＰＢＭＣおよび肺の両方において、ＯＲＹ−１００１処理に対するＫＤＭ１Ａ標的会合の明確な用量応答性が観察された。
【０５９６】
また、本発明の方法を使用して、化合物Ｃで指定されたＫＤＭ１Ａ阻害剤で処理されたＳＡＭＰ８マウス（アルツハイマー病を想起させる神経変性の非遺伝子組換えモデル）におけるＫＤＭ１Ａ標的会合を決定した。化合物Ｃは、ＷＯ２０１２／０１３７２８において説明されている化学名（−）５−（（（（ｔｒａｎｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピル）アミノ）メチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−アミンを有する化合物である。この化合物は、１０１ｎＭのＩＣ５０（生化学的アッセイ）でＫＤＭ１Ａを阻害し、経口的に利用可能であり、血液脳関門を通過することが示されている。雌ＳＡＭＰ８マウスを、５カ月齢から開始して２カ月間、化合物Ｃで処理した。ビヒクルまたは０．１１ｍｇ／ｋｇ／日もしくは０．３２ｍｇ／ｋｇ／日の化合物Ｃをそれぞれ投与される３つの群に、マウスを無作為に分配した。化合物Ｃを、ビヒクル（１．８％のヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリン、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）中に希釈し、飲用水中で投与した。ケージ当たりの動物の平均水摂取量により用量を計算し、毎週調整した。化合物Ｃ（またはビヒクル）は、１週間の期間において、５日間に続く２日間のクリアランスで利用可能であった。２カ月の処理後、動物を致死させ、さらなるＴＥ分析のために脳を切除してドライアイス上で急速冷凍し、前に説明した手順に従ってＴＥ分析を行った。結果を、試験した化Ｃの各用量に対する平均％ＫＤＭ１Ａ標的会合を示す図９Ｃに示すが、脳における化合物Ｃによる処理に対するＫＤＭ１Ａ標的会合の明確な用量応答性が観察された。
【０５９７】
この実施例８において報告されたデータは、生体におけるＫＤＭ１Ａ標的会合を監視する上での、本発明の化学プローブおよび化学プローブベースの方法の有用性を裏付けている。
【０５９８】
実施例９：薬力学の分析およびＫＤＭ１Ａ標的ターンオーバーの評価のための化学プローブの使用
本発明による化学プローブおよび方法を使用して、ＫＤＭ１Ａ標的会合を定量し、動物およびヒトにおけるＫＤＭ１Ａに対するＫＤＭ１Ａ阻害剤の結合の薬力学を評価した。この種の試験において、典型的には、動物（例えばラットもしくはマウス）またはヒト（例えば、健常ボランティアもしくは患者を用いた臨床試験中）に、ＫＤＭ１Ａ阻害剤が単回用量または反復用量（数日もしくは数カ月にわたる）として投与され、異なる時点で、例えばＫＤＭ１Ａ阻害剤による処理の開始前および処理の開始後の異なる時点で前記対象から試料が採取され、前記試料における標的会合が上述の方法を使用して決定される。
【０５９９】
ラット
タンパク質抽出物の獲得、アッセイプロトコルおよびＴＥの計算は、それぞれ実施例８．１、７．１および７．２に記載の通りである。
【０６００】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの標的会合の動力学を評価するために、１日または連続５日間、２．５および１５ｕｇ／ｋｇ／日の用量でビヒクルまたはＯＲＹ−１００１をラットに経口投与した。投薬前（薬物投与の開始前）および単回用量投与から２、６、２４時間後に、または投薬前（すなわち０時間）ならびに複数用量投与における最後の薬物投与から２、６、２４、４８および７２時間後にＰＢＭＣを得た。０．５ｕｇの全タンパク質抽出物を使用して、ＰＢＭＣにおける全および遊離ＫＤＭ１Ａタンパク質レベルを評価した。図１０は、単回用量（１）として、および複数回用量（５日間、１１１１１）として経口投与されたＯＲＹ−１００１（２．５および１５ｕｇ／Ｋｇ／日）で処理されたプールラットＰＢＭＣ（ｎ＝３）のＫＤＭ１Ａ標的会合のパーセンテージを示す。ＫＤＭ１Ａ標的会合は前述のように（セクション７．２を参照されたい）計算されたが、ＲＸは、分析された各時点に対応し、ＲＲＥＦは、ラットＰＢＭＣの投薬前に対応する試料である。図１０は、ＫＤＭ１Ａ標的会合における明確な時間および用量応答性を示している。同じ用量レベルにおいて、複数投与後の標的会合は、単回投与よりも高い。また、図１０に示されるように、さらなる処理がない最後の投薬後は、ＫＤＭ１Ａ標的会合のパーセンテージは徐々に減少する。
【０６０１】
ヒト
健常ボランティアにおける化合物Ｃの安全性、耐容性、薬物動態および薬力学を特性決定するために、第Ｉ相臨床試験を行った。この臨床試験の第１段階は、無作為化二重盲検用量漸増試験であり、ＫＤＭ１Ａ阻害剤はカプセル内の単回経口用量として投与された。化合物Ｃ（ｎ＝６）またはプラセボ（ｎ＝２）を投与されるように無作為化した８名のボランティアのコホートにおいて、最大５つの異なる用量レベルを試験した。この臨床試験における薬力学的評価の一環として、処理前ならびに薬物投与から１２および７２時間後にＫＤＭ１Ａ標的会合（ＴＥ）を評価した。簡潔に説明すると、全ての処理後ボランティア（活性薬物およびプラセボ、用量レベル当たりｎ＝８）からＥＤＴＡ−Ｋ２管内に血液試料（１０ｍＬ）を採取し、Ｌｅｕｃｏｓｅｐ（商標）管内に密度勾配遠心分離によりＰＢＭＣペレットを得、分析まで−９０℃で保存した。事前に確立された試料品質管理基準に適合するＰＢＭＣ試料のみが、ＴＥ分析に使用される。特に、溶血の兆候および／または赤血球の痕跡を有する試料は廃棄される。
【０６０２】
１．５ｍｇの単回用量の化合物Ｃに対応するボランティアのコホートにおける各ボランティアに対して得られたＫＤＭ１Ａ  ＴＥ値を、図１１に示す。６名のボランティアにおいて、投与後１２および７２時間で明確なＫＤＭ１Ａ標的会合が観察され、一方、残りの２名の対象において、０％のＫＤＭ１Ａ  ＴＥレベルが観察された。これらの結果は、本発明の化学プローブおよび方法が、ヒト臨床試料におけるＫＤＭ１Ａ阻害剤によるＫＤＭ１Ａ標的会合を決定するために有用であることを示している。
【０６０３】
実施例１０：ＫＤＭ１Ａの化学プローブ媒介ケモプロテオミクス
ＫＤＭ１Ａ化学プローブを使用して、ＫＤＭ１Ａ含有複合体を化学的に沈降させること、およびウェスタンブロット分析、抗体マイクロアレイ分析または質量分析によりＫＤＭ１Ａ相互作用タンパク質パートナーを同定することができる。
【０６０４】
選択された化学プローブ（実施例１．１および１．６）を、ビヒクルまたはＫＤＭ１Ａ阻害剤（ここでは陰性対照として使用される）処理ＴＨＰ−１またはＭＶ（４；１１）から得られた細胞抽出物と共にインキュベートする。１Ｘ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｍｉｎｉ，  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｃｏｃｋｔａｉｌ  Ｔａｂｌｅｔｓ（ＲＯＣＨＥ；＃１１８３６１５３００１）を含有する１Ｘ  Ｃｅｌｌ  Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ；＃９８０３）中に細胞を溶解させ、ＫＤＭ１Ａ化学プローブ実施例１．６（プルダウン用に５μＭ）を、１０ｍｇの細胞ペレット（１０７個の細胞が使用される）に対して２００μｌのＣｅｌｌ  Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒの比率で凍結細胞ペレットに添加する。管を氷上で５分間インキュベートし、短時間超音波照射して溶解を達成する。得られた抽出物を、４℃、１４，０００×ｇで１０分間遠心分離する。上澄みを回収し、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイ（ＢＩＯ−ＲＡＤ；＃５００−０００６）により、製造業者の指示に従って定量する。２５０μＬのＤｙｎａｂｅａｄｓ  Ｍ−２８０  Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；＃１１２０５Ｄ）を捕捉剤として使用し、３回洗浄して、２５０μＬのＰＢＳ中に再懸濁させる。次いで、タンパク質抽出物（化学プローブを含有する）を添加し、穏やかな回転を使用して氷中で６０分間インキュベートする。
【０６０５】
ストレプトアビジンビーズに結合した化学プローブ−ＫＤＭ１Ａ複合体を、磁石を使用して分離し、ＰＢＳまたはＣｅｌｌ  Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒ中で４回洗浄してから溶離する。次いで、溶離されたタンパク質を、例えば以下で説明されるようにウェスタンブロット、抗体アレイ分析または質量分析等の異なる技術を使用して分析することができる。
【０６０６】
ウェスタンブロット：
最後の洗浄後、試料を２５μＬの３×変性試料緩衝液中に再懸濁させる。
１０％  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ  ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）  Ｎｏｖｅｘ（登録商標）  Ｐｒｅｃａｓｔゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；＃Ｐ０３０１ＢＯＸ）上で、製造業者の指示に従って試料を分離する。セミドライ転写による免疫検出のために、ゲルをニトロセルロース膜（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；＃ＲＰＮ３０３Ｄ）上に転写する。ブロッキング緩衝液（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ  ０．１％中の５％脱脂粉乳）中でＲＴで１時間インキュベートすることにより、Ｎ特異的結合部位をブロックする。供給業者の指示に従い、１：１０００に希釈された抗ＫＤＭ１Ａ抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ；＃２１８４）と共に、または一次検出試薬としての目的の抗体と共に、ニトロセルロース膜をブロッキング緩衝液中で４℃で一晩（Ｏ／Ｎ）インキュベートする。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ  ０．５％中で５回の洗浄した後、二次検出試薬としての１：５０００に希釈されたペルオキシダーゼコンジュゲート二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｎｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ；＃７１１−０３５−１５２）と共に、膜をＲＴで１時間インキュベートする。信号は、ＧｅｎｅＧｎｏｍｅ  ＨＲ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｓｙｎｇｅｎｅ）を使用して、増強化学発光（ＥＣＬ、Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；＃Ｗ９６４３３５０）により検出される。
【０６０７】
抗体アレイ分析
ビヒクルおよびＫＤＭ１Ａ阻害剤処理細胞から得られた化学プローブ沈殿物を、それぞれＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｃｙ５またはＣｙ３  Ｍｏｎｏｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｄｙｅ  Ｐａｃｋ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＰＡ２５００１／ＰＡ２３００１）を使用して供給業者の指示に従い標的化する。化学プローブ結合ＫＤＭ１Ａ複合体におけるＫＤＭ１Ａ相互作用タンパク質への潜在的捕捉剤を含有する抗体マイクロアレイを、１×ＰＢＳ／０．２％  ＮＰ−４０中で一晩インキュベートし、次いで、Ａｇｉｌｅｎｔスライドガスケット（１ウェル）およびハイブリダイゼーションチャンバ内で、ブロッキング緩衝液四ホウ酸ナトリウム１０水和物（２．８５ｇ／１００ｍｌ）エタノールアミン（４５３ｕｌ／１００ｍｌ）中で室温で１時間インキュベートし、Ａｇｉｌｅｎｔガスケットロテータ内で速度５で光から保護する。この後、ガスケットを取り外し、５００ｕｌのＣｙ３／Ｃｙ５標識化タンパク質をスライド上に滴下し、ブロッキングに使用したのと同じ条件で、ガスケット内に１時間装着する。このインキュベーション後、洗浄緩衝液３中でスライドを開き、洗浄緩衝液１（２×ＰＢＳ  ０，５％  ＮＰ−４０）中、２×洗浄緩衝液２（１×ＰＢＳ／０，５％  ＮＰ−４０）中；２×洗浄緩衝液３（１×ＰＢＳ／０，２％  ＮＰ−４０）中および水ｍｉｌｌｉＱ（３×）中で５分間洗浄し、その後それらを乾燥させ、Ａｇｉｌｅｎｔスキャナで走査する。データ取得は、ＰＣ＿Ｓｃａｎ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｓｃａｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖ．７．０  ｏ  ｓｕｐ．）を使用して行う。
【０６０８】
質量分析：
質量分析タンパク質同定のための溶離は、２％ＳＤＳ中のＤｙｎａｂｅａｄｓを４５分間（９５℃の加熱ブロック内で）インキュベートして、または８Ｍの尿素（ｐＨ８．５）中で３０分間（室温で）インキュベートすることにより行うことができる。次いで、タンパク質を、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）およびヨードアセトアミド（ＩＡＡ）で処理してジサルファイト結合を破壊してから、トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）／アセトン沈殿および１μｇのブタトリプシンによる一晩（約１６時間）の消化を行う。１μＬのギ酸１％との反応を停止させた後、ＨＰＬＣ  ＡＳ２ｎａｎｏＵＬＴＲＡ（ＥＫＳＩＧＥＮＴ）装置における分離のために１〜５μＬを注入する。タンパク質同定は、ＬＱＴ−Ｖｅｌｏｓ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）質量分析計を使用して行った。
【０６０９】
例えば、タンパク質同定にＭＳを使用したＫＤＭ１Ａケモプロテオミクス分析を、以下のように行った。
ＫＤＭ１Ａをゲノム中のその標的部位に動員する相互作用タンパク質および転写因子を同定するために、対照としてＫＤＭ１Ａ阻害細胞または模擬プルダウン産物を使用して、活性ＫＤＭ１Ａ特異的化学プローブを用い、ＭＶ（４；１１）細胞においてプルダウン実験を行った。具体的には、ＭＶ（４；１１）細胞をＤＭＳＯ（０．１％）または不可逆的ＫＤＭ１Ａ阻害剤（２００ｎＭ）で処理した。処理から４日後に１０７個の細胞のペレットを調製し、−８０℃で凍結した。プルダウンのために、細胞を、１００ｎＭの実施例１．６のＫＤＭ１Ａ化学プローブを加えた４００μＬのＣｅｌｌ  Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）中に再懸濁させた。試料を氷中に５分間維持してから、超音波処理および高速遠心分離を行って細胞残屑を分離した。次いで、清澄化された溶解物を氷上で１時間インキュベートし、化学プローブを結合させた。プルダウンのために、１５０μＬのストレプトアビジンビーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を３００μＬの細胞溶解緩衝液中の４５０μｇのタンパク質に添加し、回転ホイール上で室温で３０分間インキュベートした。磁器分離後、ビーズを氷冷ＰＢＳで５回洗浄し、非特異的結合を除去した。２５μＬの１％ＳＤＳを使用して溶離を行い、ビーズを９５℃で１５分間インキュベートした。溶離されたタンパク質をトリクロロ酢酸で沈殿させ、８Ｍの尿素（ｐＨ８．０）中に再懸濁させ、ブタトリプシン（１μｇ）で一晩消化させた。分離用のＡＳ２ｎａｎｏＵＬＴＲＡ  ＨＰＬＣシステム（Ｅｋｓｉｎｇｅｎｔ）およびＬＴＱ−Ｖｅｌｏｓ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ検出器（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、ＬＣ−ＭＳによりペプチドを同定した。ＫＤＭ１Ａに会合したタンパク質ネットワークの最終的なグラフ表現を生成するために、タンパク質のリストをＳｔｒｉｎｇ（ｈｔｔｐ：／／ｓｔｒｉｎｇ−ｄｂ．ｏｒｇ／）（７６）により処理した。処理されたＭＶ（４；１１）細胞に対して未処理ＭＶ（４；１１）細胞において化学プローブプルダウンにより濃縮されたタンパク質は、中でも、ＣｏＲＥＳＴに関連付けられるＫＤＭ１Ａを説明している科学文献中の公開された報告に一致して、ＣｏＲＥＳＴ複合体の成分を含んでいた。
【０６１０】
これは、本発明のＫＤＭ１Ａ化学プローブがＫＤＭ１Ａ相互作用タンパク質パートナーを同定する上で有用であることを裏付けている。
実施例１１：クロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ）アッセイ
ＣｈＩＰアッセイは、例えば、ＳｉｍｐｌｅＣｈＩＰ  Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  Ｃｈｒｏｍａｔｉｎ  ＩＰ  Ｋｉｔ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、９００３）を、供給業者の指示に従って使用して行うことができる。簡潔に説明すると、ＴＨＰ−１細胞を、ビヒクルまたは２０ｎＭのＯＲＹ−１００１で９６時間処理し、１％のホルムアルデヒド（ｖ／ｖ）で室温で１０分間固定する。固定は、グリシンの添加により停止させる。ビオチンタグ（実施例１．６）を含むＫＤＭ１Ａ化学プローブの存在下で細胞を溶解させ、クロマチンを、黄色ブドウ球菌からのミクロコッカスヌクレアーゼ（Ｒｏｃｈｅ）により３７℃で２０分間消化し、超音波洗浄機（ＣＤ−４８２０  ＣＯＢＯＳ）で高出力で５×３０秒のオン／オフにより超音波処理して、１５０〜３００ｂｐのクロマチン断片を生成する。溶解物を、捕捉剤として磁性ストレプトアビジンビーズを使用したプルダウンに供する。クロマチン複合物のプルダウン後、タンパク質−ＤＮＡ架橋を反転し、ＤＮＡを精製する。次世代シーケンシング分析（ＣｈＩＰ−Ｓｅｑ）により、または目的の遺伝子の特定のプライマーを使用したｑＰＣＲにより、プルダウンされた配列を分析する。
【０６１１】
実施例１２：化学組織化学（ｃｈｅｍｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）
標識またはタグを組み込んだＫＤＭ１Ａ化学プローブ、例えばフルオレセイン標識化またはビオチン標識化プローブを、新鮮または固定組織中のＫＤＭ１Ａの組織学的局在化に使用することができる。活性ＫＤＭ１Ａが試料中に存在する場合、フルオレセイン標識化プローブが使用される場合には蛍光による、および／またはフルオロフォアにコンジュゲートしたフルオレセインもしくはストレプトアビジン（ビオチン標識化プローブが使用される場合）に対する抗体を使用した二次検出による直接的局在化に適した酵素に共有結合することができる。蛍光の代わりに、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼまたは発色性生成物との任意の他の酵素反応を用いて、酵素二次検出を使用することができる。アッセイは、任意の細胞または組織区画における活性ＫＤＭ１Ａの特定を可能にする。ＫＤＭ１Ａの免疫検出と組み合わせて、アッセイは、標的組織における遊離／全ＫＤＭ１Ａ比率を計算するために使用される。
【０６１２】
別段に定義されていない限り、本明細書で使用されている技術的および科学的用語は全て、本発明が関連する技術分野の当業者により一般的に理解されているのと同じ意味を有する。
【０６１３】
本明細書において引用される全ての刊行物、特許および特許出願は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。
本発明は、その特定の実施形態に関連して説明されたが、本発明はさらなる変更が可能であり、本出願は、概して本発明の原理に従う本発明の任意の変形、使用または適応を、本発明が関連する技術分野内の周知のまたは慣例的な実践に包含されるような本開示からの逸脱、ならびに本明細書において上に記載される、および添付の特許請求の範囲に記載のような本質的特徴に適用され得るような本開示からの逸脱を含めて、包含することを意図することが理解される。
【図１】
2019512546.tif 000103
【図２】
2019512546.tif 000104
【図３】
2019512546.tif 000105
【図４】
2019512546.tif 000106
【図５】
2019512546.tif 000107
【図６Ａ】
2019512546.tif 000108
【図６Ｂ】
2019512546.tif 000109
【図６Ｃ】
2019512546.tif 000110
【図７】
2019512546.tif 000111
【図８Ａ】
2019512546.tif 000112
【図８Ｂ】
2019512546.tif 000113
【図８Ｃ】
2019512546.tif 000114
【図９Ａ】
2019512546.tif 000115
【図９Ｂ】
2019512546.tif 000116
【図９Ｃ】
2019512546.tif 000117
【図１０】
2019512546.tif 000118
【図１１】
2019512546.tif 000119
【配列表】
2019512546000001.app
【国際調査報告】
2019512546.tif 000120
2019512546.tif 000121
2019512546.tif 000122
2019512546.tif 000123
2019512546.tif 000124