(57)【要約】  １つ以上の所望の利益を対象とする局所皮膚組成物が提示される。本組成物は、局所皮膚組成物の適用によって得られる所望の皮膚の利益に基づいて選択される１種以上のタンパク質を含む。一態様では、各タンパク質は、２体以上の個体を有する１つのドナー群からのものである。別の態様では、タンパク質は、２つ以上のドナー群からのものである。【選択図】  図１
2019500418.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
所望の皮膚の利益を達成するように製剤化された局所皮膚組成物であって、
前記局所皮膚組成物の適用によって得られる前記所望の皮膚の利益に基づいて選択されたタンパク質のブレンドと、
前記タンパク質のための送達ビヒクルと
を含み、
前記タンパク質のブレンドのうちの各々が、２体以上の個体を有する同種ドナー群からのものであり、
前記タンパク質のブレンドが、前記局所皮膚組成物の全重量に基づいて０．０００１重量％〜１０重量％の量で存在する、局所皮膚組成物。
【請求項２】
前記量が０．００１重量％〜５．０重量％である、請求項１に記載の局所皮膚組成物。
【請求項３】
前記量が０．００１重量％〜１．０重量％である、請求項１に記載の局所皮膚組成物。
【請求項４】
前記同種ドナー群が、アジア人、アフリカ人、および白人からなる群から選択される、請求項１に記載の局所皮膚組成物。
【請求項５】
前記同種ドナー群が、血統の８０％以上が単一の人種または民族性である群を構成するドナーを含む、請求項４に記載の局所皮膚組成物。
【請求項６】
前記タンパク質が合成的に得られる、請求項１に記載の局所皮膚組成物。
【請求項７】
前記所望の皮膚の利益が、色素沈着、創傷治癒、炎症、真皮マトリックス、皺、瘢痕防止、および表皮からなる群から選択される少なくとも１つの皮膚効果である、請求項１に記載の局所皮膚組成物。
【請求項８】
前記局所皮膚組成物がエマルションである、請求項１に記載の局所皮膚組成物。
【請求項９】
前記エマルションが水中油型エマルションである、請求項８に記載の局所皮膚組成物。
【請求項１０】
前記ビヒクルが、１種以上の抗酸化剤、ポリペプチド、ビタミン、植物抽出物、植物幹細胞由来の材料、油、保存剤、増粘剤、セラミド、スキンライトナー、エクスフォリアント、抗老化および抗皺剤、日焼け止め、皮膚バリア修復剤、保湿成分、必須脂肪酸、保水剤、エモリエント、溶媒、界面活性剤、乳化剤、賦形剤、ポリマー、緩衝剤、温度調節剤など、ならびにそれらの組合せからなる群から選択される、少なくとも１種の成分を含む、請求項１に記載の局所皮膚組成物。
【請求項１１】
前記ビヒクルが水を含み得る、請求項１０に記載の局所皮膚組成物。
【請求項１２】
前記ビヒクルが、前記局所皮膚組成物の全重量に基づいて最大９９重量％である、請求項１１に記載の局所皮膚組成物。
【請求項１３】
所望の皮膚の利益を達成するように製剤化された局所皮膚組成物であって、
前記局所皮膚組成物の適用によって得られる前記所望の皮膚の利益に基づいて選択されたタンパク質のブレンドと、
前記タンパク質のための送達ビヒクルと
を含み、
前記タンパク質のブレンドが、少なくとも２つ以上のドナー群の１体以上のドナーからのものであり、
前記タンパク質のブレンドが、前記局所皮膚組成物の全重量に基づいて０．０００１重量％〜１０重量％の量で存在する、局所皮膚組成物。
【請求項１４】
前記ドナー群が、異種性であり、アジア人とアフリカ人、アジア人と白人、アフリカ人と白人、およびアジア人とアフリカ人と白人からなる群から選択される、請求項１３に記載の局所皮膚組成物。
【請求項１５】
前記量が０．００１重量％〜５．０重量％である、請求項１３に記載の局所皮膚組成物。
【請求項１６】
前記量が０．００１重量％〜１．０重量％である、請求項１３に記載の局所皮膚組成物。
【請求項１７】
前記タンパク質が合成的に得られる、請求項１３に記載の局所皮膚組成物。
【請求項１８】
前記所望の皮膚の利益が、色素沈着、創傷治癒、炎症、真皮マトリックス、皺、瘢痕防止、および表皮からなる群から選択される少なくとも１つの皮膚効果である、請求項１３に記載の局所皮膚組成物。
【請求項１９】
前記局所皮膚組成物がエマルションである、請求項１３に記載の局所皮膚組成物。
【請求項２０】
前記ビヒクルが、１種以上の抗酸化剤、ポリペプチド、ビタミン、植物抽出物、植物幹細胞由来の材料、油、保存剤、増粘剤、セラミド、スキンライトナー、エクスフォリアント、抗老化および抗皺剤、日焼け止め、皮膚バリア修復剤、保湿成分、必須脂肪酸、保水剤、エモリエント、溶媒、界面活性剤、乳化剤、賦形剤、ポリマー、緩衝剤、温度調節剤など、ならびにそれらの組合せからなる群から選択される、少なくとも１種の成分を含む、請求項１３に記載の局所皮膚組成物。
【発明の詳細な説明】
【開示の背景】
【０００１】
【開示の分野】
【０００２】
[0001]本開示は、ヒト真皮組織試料の培養線維芽細胞におけるタンパク質産生レベルの判定に関する。本開示はまた、タンパク質マイクロアレイの実行による、異なる民族集団から得たヒト真皮組織試料の培養線維芽細胞上清中のタンパク質産生レベルの判定に関する。本開示は、各民族群に存在する独特なタンパク質産生レベルを理解するためにタンパク質マイクロアレイ性能を分析することにさらに関する。タンパク質を生成物中でひとつにブレンドしてもよく、この生成物は、この混合物およびいずれの個々の線維芽細胞の源でもないレシピエントの皮膚に１つ以上の所望の特性を与えるものであり、以降、非自家性生成物とする。
【関連技術の説明】
【０００３】
[0002]真核細胞の増殖は様々な影響によってモジュレートされ、その中でも増殖因子が特に重要である。増殖を阻害する因子も存在する。増殖因子は、ある範囲の細胞に分裂促進作用を及ぼす。これらの分裂促進因子は、線維芽細胞（コラーゲンおよびエラスチン前駆体、ならびに基底質を産生する）および上皮細胞（例えば皮膚細胞またはケラチノサイト）を含む、様々な細胞型の増殖および活性化を刺激する。
【０００４】
[0003]線維芽細胞の主要な機能の１つは、細胞外マトリックスの前駆体を持続的に分泌することによって結合組織の構造的完全性を維持することである。線維芽細胞は、細胞外マトリックスの全ての成分、主に基底質および種々の繊維または構造タンパク質の前駆体を分泌する。線維芽細胞はまた、近隣細胞の機能および生成物に影響を与え、それらを調和させて組織応答を向上させる、低分子量の拡散性因子を分泌する。細胞外マトリックスの組成は、結合組織の物理的性質を大いに決定する。
【０００５】
[0004]自家性線維芽細胞（即ち、培養線維芽細胞のレシピエントにもなるドナーから得られた線維芽細胞）を使用した処置の方法は、当該技術分野において公知である。そのような線維芽細胞の公知の使用には、培養線維芽細胞を投与することによって、創傷、例えば上皮の創傷または瘻孔の治癒を促進する方法、声帯欠損に下位隣接した（sub-adjacent）の組織の増強による矯正手術の方法、ならびに、声帯ヒダ瘢痕化の処置ならびに皮膚および軟部組織欠損の修復の方法がある。
【０００６】
[0005]当該技術分野では、ドナーでもある個体のために増殖した自家性線維芽細胞からなる投与量単位も公知である。さらに、自家性用途で使用するために線維芽細胞を増殖させる方法も公知である。
【０００７】
[0006]本出願の出願者らは、同性の培養培地から回収された、２つ以上の線維芽細胞培養物、それらに由来する抽出物、および／または拡散性要素の同種または異種の混合物である、非自家性生成物を対象とする先行特許出願を出願した。同性からの同種および／または異種の線維芽細胞培養物またはそれらに由来する抽出物の各混合物は、混合物によって得られることが所望される特性に基づいた「重み付き」因子を有することができ、したがって、終局生成物は、ある特定の目的に合わせて適合化（tailor）され得ると考えられた。重み付き因子および／または適合化に基づいた終局生成物は、１つの民族群のための生成物であってもよく、または、終局生成物が普遍的な生成物の利益を有するように、２つ以上の民族群の因子を組み合わせてもよい。これらの生成物を達成するための機序は、ある特定のタンパク質または酵素が、ある特定の民族群の人々でより広く認められるかまたは独特もしくは固有であり、したがって、ある民族群の因子のブレンドまたは２つ以上の民族群の因子のブレンドによって最適な生成物が達成されるであろうという考えに基づいていた。これまで、どのタンパク質およびそのレベルが各民族群で明らかに異なるのか、また異なるとすればどのように異なるのかを、より深く理解する必要性があった。
【開示の概要】
【０００８】
[0007]本開示は、タンパク質マイクロアレイを使用した、異なる民族集団から得たヒト真皮組織試料の培養線維芽細胞上清中のタンパク質産生レベルの判定を提示する。
【０００９】
[0008]本開示はまた、ある民族群内および／または２つ以上の民族群間のタンパク質産生レベルの差を理解するための、タンパク質マイクロアレイ分析を提示する。
【００１０】
[0009]本開示は、単一の民族群または２つ以上の民族群のどのタンパク質または細胞または因子をひとつにブレンドすれば、この混合物またはいずれの個々の線維芽細胞の源でもないレシピエントの皮膚に所望の特性または利益を与え、したがって、非自家性生成物と定義される生成物を製剤化することができるかを決定するための、タンパク質産生レベル、相互作用、および／または機能の相対測定の分析をさらに提示する。
【００１１】
[0010]本開示は、ある民族群内ならびに２つ以上の民族群間のタンパク質レベル、相互作用、および／または機能の関係の測定の知識に基づいて、レシピエントの皮膚に所望の特性を与える混合物中のタンパク質の効力または可能性を最適化する方法が達成され得ることを、なおもさらに提示する。
【００１２】
[0011]本開示はまた、そのようなタンパク質の測定が、終局生成物に所望の特性をもたらすために得られることが所望される特性に基づいた同種および／または異種の混合物の誘導につながり得ることを提示する。
【００１３】
[0012]本開示は、各終局生成物が、本開示の組成物の使用者の１つ以上の所望の特性の向上、モジュレーション、または処置を対象とする、異なる終局生成物が作製され得ることをさらに提示する。
【００１４】
[0013]本開示はまた、過半数のタンパク質が少なくとも１つの民族群において基準を満たしたことを、生物学的有意性が示したことを提示する。
【００１５】
[0014]本開示は、生物学的に有意なタンパク質である、独特に変化したタンパク質が存在することをさらに提示する。
【００１６】
[0015]本開示は、３つの群全てにおいて対照と比べた平均産生レベルの変化が存在することを示す。
【００１７】
[0016]本開示は、所望の利益または処置に基づいて標的の皮膚障害を処置するための局所組成物を提示する。
【００１８】
[0017]本開示はまた、統計学的有意性によると、アジア人の皮膚が、アフリカ人の皮膚と比べて最も多い数または量のタンパク質産生レベルの変化／異常調節／変動、および白人の皮膚と比べて第２に多い量のタンパク質産生レベルの変化／異常調節／変動を示し、一方で最小量のタンパク質産生レベルの変化／異常調節／変動は、白人の皮膚と比べたアフリカ人の皮膚であったことを示す。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】[0018]図１は、本開示の様々な態様を説明する概念マップである。
【図２】[0019]図２は、本開示の態様を生成するための例示的なプロセスを示す。
【図３】[0020]図３は、アフリカ人およびアジア人群について表した全体的なタンパク質ネットワークを示す。
【図４】[0021]図４は、白人およびアジア人群について表した全体的なタンパク質ネットワークを示す。
【図５】[0022]図５は、白人およびアフリカ人群について表した全体的なタンパク質ネットワークを示す。
【図６】[0023]図６は、上位５０の生物学的プロセスの白人対アフリカ人の解釈の円グラフである。
【図７】[0024]図７は、上位５０の生物学的プロセスのアフリカ人対アジア人の解釈の円グラフである。
【図８】[0025]図８は、上位５０の生物学的プロセスの白人対アジア人の解釈の円グラフである。
【図９】[0026]図９は、創傷治癒プロセスに関する、アフリカ人対アジア人群について表した全体的なタンパク質ネットワークを示す。
【図１０】[0027]図１０は、免疫系プロセスに関する、白人対アジア人群について表した全体的なタンパク質ネットワークを示す。
【図１１】[0028]図１１は、免疫系プロセスに関する、白人対アフリカ人群について表した全体的なタンパク質ネットワークを示す。
【図１２】[0029]図１２は、白人、アフリカ人、およびアジア人の民族群間の差次的遺伝子発現を比較するいくつかのベン図を示す。
【好ましい態様の説明】
【００２０】
[0030]ここで使用するとき、「同種」という用語は、血統の８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、最も好ましくは本質的に１００％が単一の人種または民族性である群を構成する（同性の）ドナーから得られた線維芽細胞培養物の使用を意味する。したがって、同種の組の（同性の）ドナー、例えば、アジア人女性、アフリカ人女性、白人女性、アジア人男性、アフリカ人男性、または白人男性の群から得られた線維芽細胞培養物は、単一の源または民族群もしくは民族亜群からのものである。性別混合の組合せも想定される。
【００２１】
[0031]ここで使用する「異種」という用語は、民族非同種の線維芽細胞、例えば、同性だが異なる群または源の２つの組合せ、例えば、アフリカ人女性とアジア人女性、アフリカ人女性と白人女性、またはアジア人女性と白人女性、アジア人女性と白人女性とアフリカ人女性、アフリカ人男性とアジア人男性、アフリカ人男性と白人男性、アジア人男性と白人男性、またはアジア人男性と白人男性とアフリカ人男性の群から得られた線維芽細胞の使用を意味する。３つの民族群に関して詳解されているが、本開示は、さらに多くの民族群および亜群を提示し、したがって、異種混合物は４つ以上の民族群または亜群のブレンドまたは組合せであってもよい。性別混合の組合せも想定される。
【００２２】
[0032]生物学的有意性または生物学的に有意とは、比較対象試料または対照と比べて２倍超の増加／減少を意味する。
【００２３】
[0033]ここで、独特とは、比較対象試料または対照と比べて１つの群のみにおいて生物学的に有意なものと定義される。
【００２４】
[0034]ここで使用するドナーとは、本開示の生成物を得るために培養するための細胞が得られる個体である。ドナーは、男性もしくは女性のいずれか、または両方である。ドナーは、所望の利益もしくは特性または皮膚特性の組合せを有するように選択される。
【００２５】
[0035]白人ドナーは、北欧系統の個体で、祖父母および曽祖父母がその地域に遺伝的根源を有することで知られているものと定義される。白人ドナー群は、例えば、ラテン系ヨーロッパ人、ヒスパニック系ヨーロッパ人、アングロサクソン系ヨーロッパ人、およびスラブ系にさらに細分されてもよいことが想定される。
【００２６】
[0036]アフリカ人ドナーは、サハラ以南系統の個体で、祖父母および曽祖父母がその地域に遺伝的根源を有することで知られているものと定義される。アフリカ人ドナー群は、限定されないが、西アフリカ人および東アフリカ人にさらに細分されてもよいことが想定される。
【００２７】
[0037]アジア人ドナーは、アジア人統、または例えば北アジアおよび南アジアを含むその亜群の個体と定義される。さらに、アジア人ドナー群は、中国、日本、および韓国の亜群に細分されてもよい。アジア人ドナーは、祖父母および曽祖父母がその地域に遺伝的根源を有することで知られているものである。
【００２８】
[0038]ドナーは、好ましくは、疾患についてスクリーニングされる。また、環境条件、例えばフリーラジカル発生、とりわけ太陽および高度腫瘍に起因する早期老化、ならびに喫煙に起因する早期老化は、ドナー「プール」から除外されるべきである。
【００２９】
[0039]ドナーは、好ましくは、８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、最も好ましくは本質的に１００％が単一の人種または民族性である血統を有する。
【００３０】
[0040]ドナーは、好ましくは、その皮膚および線維芽細胞が人生において最適な状態にあることから、若年である。そのような年齢範囲は、民族性に基づいて異なり得る。好ましい年齢範囲は、１８〜３５歳、より好ましくは１８〜３０歳であると考えられている。しかしながら、年齢範囲は、ドナーが居住し生検が行われるところの適用法令によって許容されるものと同程度に低い下限を有してもよいことが想定される。
【００３１】
[0041]対照的に、レシピエントとは、本開示の生成物が適用または投与される皮膚を有する個体で、好ましくはここで詳解される皮膚状態のうちの１つ以上を有する皮膚を有するものである。レシピエントは、生成物、混合物、またはいずれの個々の線維芽細胞の源でもなく、したがって、ドナーについて上記に詳解したものと同じ精査の対象とはならない。レシピエントは、ここで詳解される利益もしくは特性または皮膚特性の組合せを得る。
【００３２】
[0042]白人レシピエントは、ヨーロッパ系の遺伝的背景を有するものとの遺伝的同一性が最も高いものとして自己を特定する個体で、典型的にはフィッツパトリック皮膚タイプＩ〜ＩＶを有するものと定義される。
【００３３】
[0043]アフリカ人レシピエントは、サハラ以南の遺伝的背景を有するものとの遺伝的同一性が最も高いものとして自己を特定する個体で、典型的にはフィッツパトリック皮膚タイプＩＶ〜ＶＩを有するものと定義される。
【００３４】
[0044]アジア人レシピエントは、アジア人の遺伝的背景を有するものとの遺伝的同一性が最も高いものとして自己を特定する個体で、典型的にはフィッツパトリック皮膚タイプＩＩＩ〜Ｖを有するものと定義される。
【００３５】
[0045]本出願で使用される（「ここで使用する」）次の用語は、次のように定義される。皮膚色素沈着とは、皮膚における様々なメラニン色素の沈着によってもたらされた皮膚の色を意味する。皮膚色素沈着には、色素沈着過剰、色素沈着低下、色素脱失、および不均一な色素沈着が含まれる。色素沈着過剰とは、皮膚の一部分が、普通または背景の色よりも暗く、即ちより高色素に見える、不均一な色素沈着域を意味する。色素沈着低下とは、皮膚の一部分が、普通または背景よりも明るく、即ちより低色素に見える、不均一な色素沈着域を意味する。色素脱失とは、メラニン色素を欠いている皮膚を意味する。不均一な色素沈着とは、色素沈着が混合型または斑状であり、正常な色素沈着、色素沈着低下、および色素沈着過剰のランダムまたは非連続的なパターンを有する、皮膚の領域を意味する。
【００３６】
[0046]ここで使用するとき、創傷治癒とは、局所的に産生され散在したタンパク質、真皮マトリックスを含む細胞、および他の生体または細胞分子の影響下で自己の修復を自律し調節する皮膚の能力を意味する。真皮マトリックスを含む細胞としては、線維芽細胞、血管内皮細胞、血液細胞（好中球およびリンパ球）、リンパ細胞、マクロファージ、およびマスト細胞が挙げられる。創傷は、急性または慢性であり得る。急性とは、創傷が急速に自然治癒することを意味する。慢性とは、創傷がゆっくりと治癒し、多くの場合、処置を必要とすることを意味する。
【００３７】
[0047]ここで使用するとき、炎症とは、明確な視認できる傷害の原因となる場合もならない場合もある内的または外的な刺激に対する皮膚の応答を意味する。一度開始されれば、刺激への応答は炎症である。これは、局所的に産生されるタンパク質によって制御または調節される。
【００３８】
[0048]炎症には、低減および防止が含まれる。ここで使用するとき、低減とは、炎症促進性であるタンパク質のカスケードを制限することを意味する。これには、炎症の作用を逆転させるプロセスも含まれる。ここで使用するとき、防止とは、皮膚の表面に視認できる影響を及ぼすことなく、生体タンパク質および他の細胞生成物の炎症促進性カスケードを誘導し得る内的または外的（環境的）な侵襲の影響を逆転させるために、生体分子を使用することを意味する。
【００３９】
[0049]ここで使用するとき、真皮マトリックスとは、真皮の網状または基底層を作る、１種以上のコラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸、プロテオグリカン、および他の巨大分子の混合を意味する。真皮マトリックスは、皺、老化、瘢痕化、および菲薄化を含む。
【００４０】
[0050]本出願で使用されるこれらの用語は、次のように定義される。皺とは、不十分なレベルの表皮中の水分、または内的もしくは外的な炎症性刺激によって生じることの多い真皮網状層への損傷によって生じる、平らでない皮膚表面を意味する。早期老化とは、個体の見かけの年齢を実年齢よりも上に見せる、皺、たるみ、不均一な色素沈着、および／または表在血管損傷によって特徴付けられた皮膚表面の外観を意味する。瘢痕化とは、コラーゲンおよび他の真皮巨大分子の沈着が、周囲の皮膚と明らかに差別化される平らでない表面をもたらす、皮膚の重度傷害に対する応答を意味する。菲薄化とは、皮膚の真皮および表皮層の深さおよび密度の低減をもたらす、完全に修復され再生する皮膚の能力の低減を意味する。
【００４１】
[0051]ここで使用するとき、瘢痕防止とは、周囲のまたは未損傷の皮膚の典型であるバスケット織りではない、ランダムなパターンで異常な量のコラーゲンを沈着させる、治癒プロセスの低減を意味する。瘢痕防止は、ケロイド瘢痕、肥厚性瘢痕、萎縮性瘢痕、収縮性瘢痕、色素過剰瘢痕、および低色素性瘢痕の防止を含む。ここで使用するとき、ケロイド瘢痕とは、コラーゲンの過度の産生が、初期創傷の領域外へ広がる大きく隆起した病変へと無制限に成長し続ける、肥厚性瘢痕化の一形態である。ここで使用するとき、肥厚性瘢痕とは、結果として生じる瘢痕を周囲の皮膚の表面より高く隆起させる、深刻な損傷の治癒中のコラーゲンの過剰産生および沈着から生じる瘢痕である。ここで使用するとき、萎縮性瘢痕とは、周囲の皮膚の表面より下に陥凹している外観を有する瘢痕である。萎縮性瘢痕は、典型的には、周囲の支持組織を損傷する炎症プロセスによって生じる。ここで使用するとき、色素過剰瘢痕とは、色素沈着の度合いが周囲の皮膚よりも高い、即ち暗い瘢痕である。ここで使用するとき、低色素性瘢痕とは、色素沈着の度合いが周囲の皮膚よりも低い、即ち明るい瘢痕である。
【００４２】
[0052]ここで使用するとき、表皮とは、身体を被覆し、身体を覆う保護膜、層、または被覆を形成する、皮膚の層を意味する。表皮は、角質層として知られる層を含む。表皮は、免疫において重要な役割を有し、皮膚の色を決定するメラニン色素を含有する。表皮は、毛穴、皮膚のきめ、およびバリア機能を含む。ここで使用するとき、毛穴は、皮脂腺性毛包（sebaceous follicle）によって作られる皮膚の解剖学的構造であり、汗および／または皮脂の通過のための管として機能する。毛穴は、充填されていないまたは充填されている開口部として皮膚表面に現れる。ここで使用するとき、皮膚のきめとは、皮膚表面上で明らかな通常の組織分布および図形パターン（glyphic pattern）を意味する。皮膚のきめは、皮膚の知覚される水分レベル、柔らかさ、復元力、および弾性に影響される。ここで使用するとき、バリア機能とは、水分透過性、外的（環境的）な侵襲からの保護、ならびに皮膚および下層の組織と構造を保護する免疫機能の度合いを調節する、皮膚の能力を意味する。
【００４３】
[0053]ここで使用するとき、上方調節とは、対照試料もしくは細胞株／型の標準またはそれ以前の時点もしくは処置前における個体のベースライン値と比べた、正規化された遺伝子発現および／または所与の細胞株／型もしくは個体におけるタンパク質産生の増加を意味する。
【００４４】
[0054]ここで使用するとき、下方調節とは、対照試料もしくは細胞株／型の標準またはそれ以前の時点もしくは処置前における個体のベースライン値と比べた、正規化された遺伝子発現および／または所与の細胞株／型もしくは個体におけるタンパク質産生の減少を意味する。
【００４５】
[0055]線維芽細胞の細胞培養物、細胞の共培養物、細胞もしくは培養物からの抽出物、細胞培養物を形成する拡散性要素、または培養培地の使用は、単独にせよ環境的条件を伴うにせよ、細胞を増殖させて細胞の生物活性要素のアレイを産生するよう細胞を誘導するために使用される。これらの要素は、細胞によって産生されて分泌されるか、または細胞から抽出される。これらの細胞、培養物、細胞の共培養物、拡散性要素が、細胞培養物および培養培地を形成する。
【００４６】
[0056]図１を参照すると、本開示は、新しい組織の産生を刺激するように皮膚部位における細胞伝達を改変する、参照番号１０００によって概ね表されている生成物を提示する。具体的には、本開示は、１体以上のドナーから得られたタンパク質を有する組成物、および遺伝子発現を刺激するための局所生成物の製剤化を提示する。具体的には、タンパク質は、細胞培養物ならびに培養培地および／または要素を形成する、線維芽細胞、細胞、共培養物、培養物、拡散性要素に由来していてもよい。例えば、線維芽細胞は、増殖し、コラーゲンおよびフィブロネクチン（以降、集合的に組織培養物と呼ぶ）を排出することにより、新しい一時的な細胞外マトリックス（ＥＣＭ）を形成することができる。上記のうちのいずれかに由来するタンパク質は、本開示の対象である。細胞シグナル伝達経路のタンパク質は、増殖および遊走を含めた線維芽細胞の「挙動」をモジュレートすることができ、この側面も本開示の対象である。
【００４７】
[0057]本開示の各態様において、生成物１０００のレシピエント４００は、細胞混合物またはいずれの個々の線維芽細胞の源またはドナーでもない。したがって、タンパク質のレシピエント４００は、タンパク質を産生するために細胞が使用されたのと同じ人物ではなく、そのため、誘導された生成物１０００のレシピエント４００への適用は、「非自家性」である。
【００４８】
[0058]本開示において、生成物４００は、状態を処置すること、またはレシピエント４００が所望する利益をもたらすことを対象とする。
【００４９】
[0059]生成物１０００において、タンパク質はひとつにブレンドされている。しかしながら、各生成物１０００は、特定の性別、即ち女性または男性を対象としたものであり、そのため、１つの性別からのタンパク質のみがひとつにブレンドされている。
【００５０】
[0060]本開示は、所望の利益または所望の特性に基づいて標的の皮膚障害
を処置するための局所組成物を提示する。本開示の研究によって見出された、いくつかの所望の利益または特性は、老化または早期老化した皮膚の視覚的徴候を防止すること、低減すること、および／または逆転することである（以降、集合的に「皮膚および関連利益」と呼ぶ）。そのような皮膚および関連利益としては、色素沈着の改善または正常化；バリア機能の改善；真皮マトリックスの改善；表皮または肌質の改善；創傷治癒の促進；瘢痕化の最小化または防止；炎症の低減または排除；皺、皮膚線条、たるんだ皮膚、瘢痕、例えば手術、外傷、ざ瘡、または水痘の瘢痕の処置が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５１】
[0061]誘導された生成物は、ある特定のドナーに由来するタンパク質のブレンドであり、上述の利益を含めた所望の利益を達成する生成物組成をもたらす。この度、ある特定の民族のドナーにおいて、ある特定の遺伝子の遺伝子発現が上方調節され、他の遺伝子の遺伝子発現が下方調節され、なおも他の遺伝子はそのいずれでもないこと実証する、本開示の研究によって、本発明が証明された。
【００５２】
[0062]本開示は、生成物１０００が同種生成物２００または異種生成物３００のいずれでもよいことを企図する。
【００５３】
[0063]同種生成物２００をまず説明する。
【００５４】
[0064]一態様において、同種生成物２００は、単一の民族群、例えば、女性アジア人ドナー２１０のみの組織培養物に由来するタンパク質を有する生成物である。類似的に、別の態様において、同種生成物２００は、男性アジア人ドナー２１０の群のみから得られた組織培養物に由来する。同様に、同種生成物２００は、男性および女性のアジア人ドナー２１０の混合群から得られた組織培養物に由来する。
【００５５】
[0065]さらに別の態様では、同種生成物２００は、女性アフリカ人ドナー２２０の群のみから得られた組織培養物に由来する。なおも別の態様では、同種生成物２００は、男性アフリカ人ドナー２２０の群のみから得られた組織培養物に由来する。類似的に、同種生成物２００は、男性および女性のアフリカ人ドナー２２０の混合群から得られた組織培養物に由来する。
【００５６】
[0066]さらなる態様において、同種生成物２００は、女性白人ドナー２３０の群のみから得られた組織培養物に由来する。なおもさらなる態様において、同種生成物２００は、男性白人ドナー２３０の群のみから得られた組織培養物に由来する。なおもさらなる態様において、同種生成物２００は、男性および女性の白人ドナー２３０の混合群のみから得られた組織培養物に由来する。
【００５７】
[0067]他のドナー２９０も、本開示に則した同種生成物２００の基礎を形成することができる。
【００５８】
[0068]また、レシピエント４００は、同種生成物２００中のドナー民族群と同じ民族群のものであっても、または別の民族群のものであってもよく、それでもなお生成物が同種生成物とみなされることを理解されたい。
【００５９】
[0069]ここで、異種生成物３００を説明する。
【００６０】
[0070]一態様において、異種生成物３００は、２つ以上の民族群から得られた組織培養物に由来する。例えば、１つの異種生成物３００は、女性アジア人および女性白人ドナーの群３４０に由来する。別の態様において、異種生成物３００は、男性アジア人および男性白人ドナーの群３４０から得られた組織培養物に由来する。さらに、異種生成物３００は、男性アジア人および女性白人ドナーの群３４０、または女性アジア人および男性白人ドナーの群３４０、または男性および女性アジア人ならびに男性および女性白人ドナーの混合群３４０から得られた、組織培養物に由来する。
【００６１】
[0071]別の態様において、異種生成物３００は、女性アジア人および女性アフリカ人ドナーの群３５０のみから得られた組織培養物に由来する。なおも別の態様では、異種生成物３００は、男性アジア人および男性アフリカ人ドナーの群３５０のみから得られた組織培養物に由来する。なおもさらには、異種生成物３００は、男性アジア人および女性アフリカ人ドナーの群３５０のみから得られた組織培養物に由来するか、または、異種生成物３００は、女性アジア人および男性アフリカ人ドナーの群３５０のみから得られた組織培養物に由来するか、または、異種生成物３００は、男性もしくは女性アジア人および男性もしくは女性アフリカ人ドナーの混合群３５０から得られた組織培養物に由来する。
【００６２】
[0072]さらなる態様において、異種生成物３００は、女性白人および女性アフリカ人ドナーの群３６０のみから得られた組織培養物に由来する。なおも別の態様では、異種生成物３００は、男性白人および男性アフリカ人ドナーの群３６０のみから得られた組織培養物に由来する。なおもさらなる態様において、異種生成物３００は、男性白人および女性アフリカ人ドナーの群３６０、女性白人および男性アフリカ人ドナーの群３６０、または男性および女性白人ならびに男性および女性アフリカ人ドナーの混合群３６０のみから得られた、組織培養物に由来する。
【００６３】
[0073]なおもさらなる態様において、異種生成物３００は、女性白人と女性アフリカ人と女性アジア人ドナーの群３７０のみから得られた組織培養物に由来する。別の態様において、異種生成物３００は、男性白人と男性アフリカ人と男性アジア人ドナーの群３７０のみから得られた組織培養物に由来する。別の態様において、異種生成物３００は、男性白人と男性アフリカ人と男性アジア人ドナーの群３７０のみから得られた組織培養物に由来する。
【００６４】
[0074]他のドナー群３８０も、本開示に則した異種生成物３００の基礎を形成することができる。
【００６５】
[0075]上記およびさらにここで詳解される同種および異種の態様は、例示的かつ非限定的であり、本開示の範囲は、本開示を理解すれば当業者には明らかとなるであろう。
【００６６】
[0076]同種生成物２００および異種生成物３００は、レシピエント４００の皮膚に与えられる所望の効果を有することを標的とした生成物である。
【００６７】
[0077]これらの標的化生成物は、標的化同種生成物が２００番代の番号で表され、標的化異種生成物が３００番代の番号で表されている、図１に（生成物１０００の種として）示されている。したがって、本開示によって企図される標的化生成物は、少なくとも、色素沈着２１５、３１５、表皮２２５、３２５、創傷治癒２３５、３３５、真皮マトリックス２４５、３４５、瘢痕防止２５５、３５５、および炎症２６５、３６５を含む。さらに、そのような標的化生成物の組成に関する概念実証および詳細は、ここで詳解される研究によって確立されている。
【００６８】
[0078]詳解されるように、標的化生成物２１５、３１５、２２５、３３５、２４５、３４５、２５５、３５５、２６５、および３６５は、意図されるレシピエント、例えばレシピエント４００のためのものである。レシピエント４００は、女性もしくは男性アジア人４１０、女性もしくは男性アフリカ人４２０、女性もしくは男性白人４３０、または別の民族起源の女性もしくは男性の、その他４８０である。
【００６９】
[0079]本開示において詳解されるように、生成物１０００のための細胞培養タンパク質の選択および重み付けは、改善されることまたはレシピエント４００の皮膚に与えられることが所望される、特定の性質もしくは色素または他の特性を前提としてもよい。したがって、少なくとも１つの性質を好ましくは皮膚にもたらす終局生成物を達成する、単一の民族群のドナー、または異なる民族群のドナー群、および「重み付き」組成物の選択が可能である。さらに、生成物１０００を使用する（任意の民族的背景の）任意の人物において、１つの性質を改善することができる。
【００７０】
[0080]したがって、ある特定のタンパク質発現レベルの差およびそれらの生物学的有意性に関してここで記述されるデータは、同種および／または異種の組織または線維芽細胞培養物の混合物が、特定の望ましい皮膚の利益もしくは特性または皮膚特性の組合せをもたらすように「適合化」されてもよいことを明確にする。したがって、「適合化」は、より大きな割合の、１つの同種群または異種群のドナー間の線維芽細胞培養物または誘導タンパク質を含んでいてもよい。「適合化」は、１つの民族群を別の民族群よりも多く含んでいてもよい。さらに、「適合化」は、混合物によって得られることが所望される特性（上記）に基づく因子の検討事項を含んでいてもよい。この因子としては、年齢、ＤＮＡ検査、民族同種性、健康、および身体美が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、身体美は、身体的または生理学的な比率の黄金比、またはフィボナッチ数列を使用した他の同様の誘導もしくは近似によって説明される、古典的美に従うことによって決定され得る。
【００７１】
[0081]このデータが明らかに示すのは、（上述のように）ある民族群内の異なるドナーまたは異なる民族群内の異なるドナーのどの線維芽細胞または細胞を混合すれば所望の特性を得ることができるかを判定する能力である。これはタンパク質レベルで行うことができる。したがって、ここでの詳解は、生成物の手段によってレシピエントに与えられる、タンパク質に由来する、好ましくはドナーの線維芽細胞または細胞培養物に由来する、利益もしくは特性または皮膚特性の組合せを対象とする。
【００７２】
[0082]図２は、本開示の例示であり、決して包括的なものではない。実際には、ドナー群２１０、２２０、２３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、および２９０の各個々のドナーのために、マスター細胞バンクが作られる。
【００７３】
[0083]同種生成物２００の一例では、マスター細胞バンク５１０および５２０が、それぞれ、ドナー群２１０の個々のドナー２１２および２１４のために作られる。マスター細胞バンク５１０および５２０から産生された細胞を混合することにより、そこから作業細胞バンク６１０が誘導される。作業細胞バンク６１０から、アジア人ドナー２１０の同種生成物２００が製剤化される。次に、標的化生成物、例えば色素沈着２１５が、レシピエント４００のために同種生成物２００から誘導される。
【００７４】
[0084]異種生成物３００の別の例では、ドナー群２１０の個々のドナー２１４のためにマスター細胞バンク５２０が作られ、ドナー群２３０の個々のドナー２３２および２３４の各々のためにマスター細胞バンク５３０および５４０がそれぞれ作られる。マスター細胞バンク５２０、５３０、および５４０から産生された細胞は、作業細胞バンク６３０でひとつにブレンドされる。ドナー２１４はアジア人であり、ドナー２３２および２３４は白人であるため、異種生成物３００が作られる。次に、標的化生成物、例えば色素沈着または色素沈着向上生成物３１５が、レシピエント４００のために異種生成物３００から誘導されてもよい。
【００７５】
[0085]生成物１０００は、局所組成物である。好ましい局所組成物は、クリーム、セラム、またはローションである。この組成物は、送達ビヒクル、例えばリポソームおよびミセルを含んでいてもよい。この組成物はまた、輸送分子、例えば、分子滑り（molecular sledding）を促進するかまたはもたらすタンパク質または巨大分子を含んでいてもよい。そのような輸送分子の使用は、レシピエントの表皮または真皮への要素の送達を可能にする。しかしながら、この組成物は、非経口（例えば、注射式、静脈内など）であっても、デバイス（例えばレーザー、ミクロン針、吸入器など）によって送達されても、または洗口液を含む経口歯周薬であってもよい。
【００７６】
[0086]この組成物は、いくつかの態様では、バルクおよび物理的形態をもたらすために、薬学的かつ／または局所的に許容されるビヒクルを含む。アレルゲンおよび他の刺激性薬剤は色素沈着を悪化させるため、他の態様では、ビヒクルは低アレルギー性である。これらの利益に好適なビヒクルとしては、セチルアルコール、エタノール、グリセリン、ミリスチルパルミテート、ポリビニルアルコール、プロピレングリコール、プロパノール、および水、ならびにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７７】
[0087]局所組成物は、局所組成物の調製の技術分野で一般的に使用されている少なくとも１種の担体および添加剤と一緒に、ここでのタンパク質を使用して、当該技術分野において公知の任意の方法において容易に調製することができる。局所薬剤の例としては、エモリエント、保水剤、着色剤、色素、芳香剤、保湿剤、粘度調整剤、および任意の他の局所形成剤が挙げられる。局所組成物には、１種以上の局所薬剤が含まれていてもよい。局所組成物の形態は、粉末、ローション、ゲル、スプレー、スティッククリーム、軟膏、液体、エマルション、またはフォームであり得る。当該技術分野において公知のさらなる活性成分が使用されてもよい。担体の例としては、皮膚軟化剤、皮膚浸透向上剤、着色剤、芳香族化合物、乳化剤、増粘剤、および溶媒を挙げることができるが、これらに限定されない。また、局所組成物は、香料、色素、殺菌剤、抗酸化剤、保存剤、および保湿剤、ならびに、物理的性質の改善を目的とした、増粘剤、無機塩、および合成ポリマー物質をさらに含んでいてもよい。
【００７８】
[0088]そのような材料のリスト、ならびに特定のタイプのローション、クリーム、および他のそのような形態を作るための製剤は、特許文献および商業用ハンドブックにおいて広く入手可能であり、そのような製剤の調製の当業者により、ここでの組成物を組み込むために使用されてもよい。
【００７９】
[0089]一例において、クリームまたは生成物１０００は、本組成物を一般的な水中油型（Ｏ／Ｗ）クリームベースに添加することによって調製され得る。クリームは、香料、キレート剤、色素、抗酸化剤、および保存剤、ならびに、物理的性質の改善を目的とした、合成または天然の材料、ミネラル、およびビタミンをさらに含んでいてもよい。
【００８０】
[0090]生成物１０００は、上記に詳解したタンパク質に加えて、他の生体適合性構成成分を有していてもよい。これらの構成成分としては、１種以上の抗酸化剤、ポリペプチド、ビタミン、植物抽出物、植物幹細胞由来の材料、油、保存剤、増粘剤、セラミド、スキンライトナー、エクスフォリアント、抗老化および抗皺剤、日焼け止め、皮膚バリア修復剤、保湿成分、必須脂肪酸、保水剤、エモリエント、溶媒、界面活性剤、乳化剤、賦形剤、ポリマー、緩衝剤、温度調節剤など、ならびにそれらの組合せを挙げることができる。
【００８１】
[0091]これらの構成成分は、局所生成物中の送達ビヒクルを含み得る。ビヒクルは水を含んでいてもよいことが想定される。さらに、ビヒクルは、終局生成物の最大９９重量％である。
【００８２】
[0092]表皮および真皮（真皮下（sub dermis）を含む）の全ての細胞が局所製剤の影響を受けてもよいことが想定される。ある特定の送達ビヒクルは、真皮下よりもさらに深部に影響を及ぼし得る。
【００８３】
[0093]本開示は、作業細胞バンク６１０または６３０から誘導されたタンパク質を組成物中でレシピエント４００の皮膚に適用すると、以下に詳解される特定の効果のうちの１つ以上があり得ることを証明した。
【００８４】
[0094]本開示の態様の１つの機序では、タンパク質自体を直接吸収して利用してもよい。例えば、皮膚を通してコラーゲンを沈着させて、マトリックス構造糖タンパク質または他の巨大分子基底質として使用してもよい。あるいは、ＭＭＰ−１を吸収して、コラーゲンを分解してもよい。
【００８５】
[0095]本開示の態様の別の機序では、タンパク質は、将来の遺伝子発現の変化を刺激し得る。例えば、過剰量の沈着／送達された炎症促進性タンパク質を検出する細胞は、抗炎症性遺伝子応答を刺激してもよい。これは、より多くの炎症促進性タンパク質産生を「過給」し得る正のフィードバックループを作る場合もある。あるいは、これは、特異的な膜部位に結合し、遺伝子またはタンパク質の合成を活性化することによって二次メッセンジャー応答を開始してもよい。
【００８６】
[0096]本開示の態様のなおも別の機序では、タンパク質は、活性部位または細胞受容体に結合してもよい。これは、全ての利用可能な細胞機構を占有することによってプロセスを停止させ得るか、または細胞および／もしくは細胞ネットワークの立体構造変化をもたらし得るかのいずれかである。
【００８７】
[0097]本開示の態様のさらに別の機序では、ｔタンパク質を分解してもよく、その後の成分を利用して皮膚／細胞プロセスを促してもよい。
【００８８】
[0098]本開示の態様のなおもさらに別の機序では、ｔタンパク質を使用して、「非機能性」または「変異型」タンパク質を置きかえ、適切な細胞機能／プロセスを修復してもよい。なおもさらには、ｔタンパク質はまた、「機能性」を「変異型／非機能性」または変異体タンパク質と置きかえてもよい。
【００８９】
[0099]本開示は、ここで詳解される態様の異なる組合せおよび用途を企図した。
【００９０】
[0100]ＴＹＫ２は、ＩＬ−２２依存性炎症および表皮過形成を直接調節する。ＴＹＫ２欠乏症は、免疫応答の低減および感染症（ウイルスおよびマイコバクテリア）の増加につながる複数の作用を有する。アジア人集団は、低減したレベルのＴＹＫ２を有する。したがって、アフリカ人細胞からのＴＹＫ２タンパク質（アフリカ人細胞は他の群よりも多い量のＴＹＫ２を産生する）の補充は、免疫応答を増強し、かつ／または感染率を低下させ得る。そのような製剤または組成物は、同種生成物におけるアフリカ人ドナー群２２０に由来するタンパク質、または白人およびアフリカ人ドナー群３６０に由来するタンパク質を含んでいてもよい。
【００９１】
[0101]アジア人の皮膚は、線維化促進性であるＴＧＦＢの負の調節因子であるＧＤＦ３をより低い量で有する。アフリカ人および／または白人ＧＤＦ３の適用は、瘢痕化またはケロイド形成の速度／量を減少させるのに役立ち得る。したがって、そのような製剤または組成物は、同種生成物２００におけるアフリカ人ドナー２２０および白人ドナー２３０のドナー、または異種生成物３００における白人およびアフリカ人ドナー３６０に由来する細胞を含む。
【００９２】
[0102]アジア人の皮膚は、抗線維化性であるビスファチン酵素のより低い濃度を示す。この酵素の補充は、瘢痕化、ケロイド形成、および／または乾癬を減少させ得る。したがって、標的化生成物または組成物は、同種生成物２００におけるアフリカ人ドナー２２０および白人ドナー２３０のドナー、または異種生成物３００における白人とアフリカ人ドナー３６０に由来する細胞を含む。
【００９３】
[0103]アジア人の皮膚は、局所に適用すると色素沈着を抑制し創傷治癒を改善し得るビタミンＫ１のより低いレベルを有する。白人ＶＩＴＫ１の添加は、色素低下剤（pigment lightener）として機能し得る。標的化生成物または組成物３００は、同種生成物２００におけるドナー２３０のドナーに由来する細胞、および白人とアフリカ人ドナー３６０のドナーに由来する細胞を有する。
【００９４】
[0104]一態様において、アジア人レシピエントの表皮を処置するために、生成物１０００はＴＳＨを有する。同種生成物２００は、アフリカ人ドナー２２０に由来する。異種生成物３００は、白人とアフリカ人ドナー３６０に由来する。異種生成物３００は、アフリカ人ドナー約５０％対白人ドナー５０％、アフリカ人ドナー６０％対白人ドナー４０％、アフリカ人ドナー７０％対白人ドナー３０％、アフリカ人ドナー８０％対白人ドナー２０％、またはアフリカ人ドナー９０％対白人ドナー１０％である、アフリカ人ドナー対白人ドナーの比を有する。この段落における約とは、プラスまたはマイナス８％、好ましくはプラスまたはマイナス５％、最も好ましくはプラスまたはマイナス３％を意味し、合計は１００％を超えない。
【００９５】
[0105]別の態様において、アジア人レシピエントの皮膚色素沈着を処置するために、生成物１０００はビタミンＫ１を有する。同種生成物２００は、白人ドナー２３０に由来する。
【００９６】
[0106]白人の皮膚は、より多くのＥＤＡＲタンパク質を産生し、これは、皮脂腺の相互作用を通じて乾燥および湿疹に寄与する。ＥＤＡＲの適用は、油性肌のための可能性のある処置となり得る。標的化生成物または組成物は、同種生成物２００におけるドナー２３０のドナーに由来する細胞を有するであろう。別の標的化生成物または組成物３００は、白人とアジア人ドナー３４０、または白人とアジア人とアフリカ人ドナー３７０のドナーに由来する細胞を有する。
【００９７】
[0107]生成物１０００に関する他の製剤成分および検討事項が企図される。抗瘢痕化に関しては、フォリスタチン、ＭＭＰ７、ＭＭＰ１、ＧＤＦ３、ビスファチン、ＴＰＡ、バソプレシン、ＭＭＰ１０、およびＰｒｏ−ＭＭＰ１３が、何らかの組合せで直接適用されると瘢痕および／またはケロイド形成の直接的な成分となることが示されている、可能性のあるタンパク質である。したがって、標的生成物は、所望の効果に基づいて上方調節あるいは下方調節された、これらのタンパク質が発現する特定の民族群からのタンパク質を有する。
【００９８】
[0108]同様に、創傷治癒に関しては、タンパク質ＴＹＲ１０、ＲＢＰ４、ｕＰＡ、ｂＦＧＦ、ＭＭＰ７、ＩＬ２４、潜在型ＴＧＦＢ１、ＴＰＡ、ＴＰＭ１、トロンビン、ＩＬ−１９、ＭＭＰ８、ＭＢＬ、ＮＭ２３−Ｈ１／Ｈ２、ＮＯＶ／ＣＣＮ３、ＩＬ６、ＰＹＫ２、Ｐｒｏ−ＭＭＰ１３が重要とみなされる。したがって、標的生成物は、所望の効果に基づいて、これらのタンパク質が発現する特定の民族群からのタンパク質を有する。
【００９９】
[0109]したがって、標的生成物は、後述するように、これらのタンパク質が発現する特定の民族群からのタンパク質を有する。
【０１００】
[0110]皮膚色素沈着に関しては、タンパク質ＳＨＢＧ、ＤＴＫ、ＧＤＮＦ、およびビタミンＫ依存性タンパク質が、陽性の改善効果を有することが見出されている。
【０１０１】
[0111]抗炎症性効果に関しては、ＩＬ２８Ａ、フォリスタチン、ＭＭＰ８、ＦＩＨ、ＳＥＲＰＩＮＡ１２、およびＳＳＴＲ２が有用である。
【０１０２】
[0112]抗老化効果に関しては、有効なタンパク質は、ＮＲＧ２、カリクレイン６、ＲＢＰ４、ｂＦＧＦ、カリクレイン１４、カリクレイン８、潜在型ＴＧＦＢ１、ＶＤＵＰ１、ＩＮＳＬ３、トロンビン、Ｔｒａｐｐｉｎ−２／エラフィン、ＧＲＰ７５、ＰＡＲＫ７、マンマグロビンＡ、ＴＭＥＦＦ１／トモレグリン（Tomoregulin）１である。
【０１０３】
[0113]抗酸化酵素としては、Ａ１ＭおよびＧＰＸ３が挙げられる。
【０１０４】
[0114]抗老化／皺製剤は、ＲＢＰ４、ｂＦＧＦ、潜在型ＴＧＦＢ１、ＩＮＳＬ３、Ｔｒａｐｐｉｎ−２、ＧＲＰ７５、ＰＡＲＫ７、マンマグロビンＡ、ＴＭＥＦＦ１／トモレグリン１、Ａ１Ｍ、およびＧＰＸ３のうちの１種以上を有する。
【０１０５】
[0115]これらのタンパク質は、ある特定の利益を有する。例えば、ＲＢＰ４は、レチノールの主な担体である。ｂＦＧＦは、線維芽細胞の増殖を刺激する。潜在型ＴＧＦＢ１は、弾性線維の産生を刺激する。ＩＮＳＬ３は、皮膚の皺を低減し、皮膚の外観を向上させ、バリア機能を改善する。Ｔｒａｐｐｉｎ−２は、エラスチン分解の阻害を促進する。ＧＲＰ７５は、皺を防止し、コラーゲン産生を支持する。ＰＡＲＫ７は、糖化の修復を刺激する。マンマグロビンは、バリア機能を増強する。ＴＭＥＦＦ１／トモレグリン１は、ＢＭＰシグナル伝達を阻害し、抗老化性質を一般に呈する。Ａ１Ｍは、ラジカル捕捉剤およびヘム結合剤である。ＧＰＸ３は、抗酸化剤である。
【０１０６】
[0116]抗瘢痕化製剤は、フォリスタチンを有していてもよい。フォリスタチンは、抗線維化性かつ抗炎症性であるアクチビンアンタゴニストである。あるいは、または組合せにおいて、そのような抗瘢痕化製剤は、炎症応答を向上させることによる抗線維化薬であるビスファチンを有していてもよい。ＭＭＰ１、ＭＭＰ７、ＭＭＰ１０、およびＭＭＰ１３は、細胞外マトリックスの再構築および皮膚の構造成分の分解に役立つ。ＴＰＡは、創傷治癒に関与し、抗線維化性である。
【０１０７】
[0117]色素低下製剤は、ＳＨＢＧを含んでいてもよい。年齢およびエストロゲンレベルの低下とともに、ＳＨＢＧは減少する。これは、テストステロンレベルの上昇および色素異常症、ならびに不必要な顔の毛をもたらし得る。
【０１０８】
[0118]色素低下製剤はまた、色素沈着の抑制のためにビタミンＫ依存性タンパク質Ｓを有していてもよい。
【０１０９】
[0119]創傷治癒製剤は、ＴＹＲＯ１０、ＲＢＰ４、ｕＰＡ、ｂＦＧＦ、ＭＭＰ１、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８、潜在型ＴＧＦＢ１、ＴＰＡ、ＴＰＭ１、トロンビン、ＩＬ１９、ＮＭ２３−Ｈ１／Ｈ２、ＮＯＶ／ＣＣＮ３、ＩＬ６、およびＰＹＫ２を含んでいてもよい。
【０１１０】
[0120]ＴＹＲＯ１０は、線維芽細胞の遊走を媒介し、皮膚の創傷治癒に寄与する。ＲＢＰ４は、レチノールの主な担体である。ｕＰＡは、創傷治癒プロセスの重要な調節因子であるプラスミノーゲン活性化因子である。ｂＦＧＦは、線維芽細胞の増殖を刺激する。ＭＭＰ１、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８は、創傷治癒の一段階であるマトリックスの再構築を促進する。潜在型ＴＧＦＢ１は、弾性線維の産生を刺激する。ＴＰＡは、プラスミノーゲン活性化因子であり、創傷治癒に関与し、抗線維化性である。ＴＰＭ１は、創傷治癒プロセス中の細胞遊走を促進する。トロンビンは、線維芽細胞の増殖を媒介する。ＩＬ１９は、他の増殖因子発現（ＫＧＦ）を増加させることによって創傷治癒を促進する。ＮＭ２３−Ｈ１／Ｈ２は、創傷治癒に関与している。ＮＯＶ／ＣＣＮ３は、創傷治癒プロセスを助けるＮＯＴＣＨ１媒介性シグナル伝達をもたらす。ＩＬ６は、正常な創傷治癒に必要とされる。ＰＹＫ２は、再上皮化を促進する。
【０１１１】
[0121]生成物１０００は、差次的タンパク質発現の比に基づいて配分されることが想定される。いくつかの態様において、製剤化の方法は、２対１対１の比の、第１のタンパク質と第２のタンパク質と第３のタンパク質Ｃとを含む。さらに、生成物１０００は、生成物組成の全重量に基づいて、０．０００１重量パーセント（重量％）〜１０．０重量％、好ましくは０．００１重量％〜５．０重量％、最も好ましくは０．００１重量％〜１．０重量％の濃度または量の、活性物質（またはタンパク質）を有する。
【０１１２】
[0122]皮膚に対する生成物の適用方法は、当該技術分野において公知である任意の局所適法方法によるものである。この適用は、１日１回投与されることが想定される。しかしながら、所望の利益、例えば瘢痕治癒が、１日における反復適用に耐えるものであれば、適用が１日に２回であってもよいことも想定される。また、推奨される１日当たりの適用回数および適用期間は、レシピエントに与えられる生成物の所望の利益に基づいて異なる。
【０１１３】
[0123]さらに、生成物の適用は、長期間にわたって継続してもよいことが想定される。
【０１１４】
[0124]創傷治癒の段階を反映して、生成物１０００の異なる態様が経時的に使用されてもよい。例えば、抗炎症性である生成物１０００の第１の態様が、第１回目に投与される。第２回目には、抗色素沈着過剰である生成物１０００の第２の態様が投与される。第３回目には、抗瘢痕化性である生成物１０００の第３の態様が投与される。
【０１１５】
[0125]急性傷害に関しては、傷害が生じた後可能な限り素早く処置を開始することが望ましい。例えば、アジア人の皮膚、アジア人４１０では、急性傷害、例えば日焼け、熱傷、擦過、外傷的傷害、または選択的手技、例えばレーザー処置もしくは外科的切開を処置するためには、第１回目において、生成物１０００は、ＩＬ２８Ａを有するように製剤化され、第２回目には、生成物１０００は、ビタミンＫを有するように製剤化され、第３回目には、生成物１０００は、ＧＤＦ３を有するように製剤化される。
【０１１６】
[0126]より具体的には、初期治癒段階（典型的には１〜１０日間）では、創傷治癒を加速させる生成物１０００の製剤の、１日当たり最大３回またはそれ以上の高頻度の処置が望ましい。
【０１１７】
[0127]初期治癒段階または再上皮化が生じた後、生成物１０００での処置は、炎症を低減し、異常色素沈着を低減し、肥厚性または萎縮性瘢痕化のリスクを低減する、生成物１０００の製剤の１日当たり１〜２回の使用に変更してもよい。この第２段階では、皮膚への投与は、単一の生成物１０００のツーインワンもしくはスリーインワンの組合せで行っても、または生成物１０００の単一またはツーインワンの組合せでＡＭとＰＭとで交互に行ってもよい。この第２段階は、典型的には１〜４週間（またはそれ以上）にわたって継続してもよい。場合により、色素沈着過剰の防止または瘢痕化の防止のため、この第２段階は、数ヶ月以上にわたって継続してもよい。好ましくは、抗炎症性生成物１０００は、４週間後に投与中止される。
【０１１８】
[0128]また、レシピエント４００は、異常色素沈着のリスクを最低限に抑えるために、選択的手技の前に生成物１０００で処置され得ることが想定される。処置は、選択的手技の１〜４週間前であってもよい。具体的には、創傷治癒のために製剤化された生成物１０００は、より速く治癒するように皮膚を準備する。そのような生成物１０００はトレチノインを含み、適用は、選択的手技前の１〜２週間にわたって毎日行われる。
【０１１９】
[0129]ここで詳解される標的化生成物の他に、さらなる生成物は、創傷治癒の加速、皮膚線条の改善、低減、もしくは改善、打撲傷の低減、皮脂産生の改善、毛髪の成長、皮膚のハリもしくは滑らかさの向上もしくはモジュレーション、皮膚の外観、皮膚の美しさ、皮膚のふくよかさ（fullness）の向上、皮膚のトーン、皮膚の弾性、瘢痕化の低減、皺の低減、毛穴サイズの低減、炎症性刺激への応答、打撲傷の最小化、水分を保持する能力、新しい脈管構造を作り栄養素および皮膚の厚みもしくは密度をもたらす傾向、傷害もしくはフリーラジカルによる損傷への応答の改善、瘢痕化の低減、創傷治癒の改善、皮膚疾患の防止、または当業者には明らかとなるであろう有益な皮膚特性の組合せを含むがこれらに限定されない、所望の特定の性質または特性を誘導する性質に焦点を当てるか、またはこれらの性質を有し得る。また、本開示は、環境的損傷、老化、または疾患から「損傷した」皮膚を処置するために使用することができる。さらに、本開示は、獣医学的用途に使用してもよい。本開示は、ざ瘡、アトピー性皮膚炎、酒さ、および乾癬を含むがこれらに限定されない、皮膚疾患の処置のための補助治療として使用してもよい。
【０１２０】
[0130]皮膚に関して詳解されるものの、本開示は爪および毛髪にも適用されることが想定される。例えば、透明なケラチンタンパク質で作られた爪の固い部分である爪甲は、皮膚と類似したバイオプロセスを受ける。同様に、毛髪は、皮膚の毛包から成長するタンパク質繊維であり、タンパク質、とりわけケラチンから主に構成されている。
【０１２１】
[0131]本開示は、特定の必要性に合わせて適合化され得る人工遺伝子の商業的生産にも適用される。想定される例示的な技術が以下に続く。この技術には、望ましい遺伝子もしくは遺伝子産物からのタンパク質またはＤＮＡの配列決定、またはデノボ遺伝子配列の完全合成による構築が含まれる。所望の二本鎖ＤＮＡ配列が一度特定されれば、適切なコーディングおよびノンコーディングセクターならびにプロモーター配列を有するプラスミドベクターへの組合せを行うことができる。例えば、ＤＮＡ配列を適合性のある細菌に挿入し、ＲＮＡまたはタンパク質産物の複製のための工場として使用してもよい。配列最適化およびオリゴ設計がまず行われ、続いてオリゴ合成、遺伝子アセンブリー、配列検証、およびエラー補正、そして最後に適用のための合成ＤＮＡの調製が行われる。
【０１２２】
[0132]上述のように、本開示は、タンパク質マイクロアレイの実行による、３つの異なる民族集団から得たヒト真皮組織試料の培養線維芽細胞上清中のタンパク質産生レベルを判定するための試験および分析を説明する。
【０１２３】
例１
[0133]アッセイを行い、３つの民族的皮膚群（アジア人、アフリカ人、白人／ヨーロッパ系）のうち各々の民族的祖先の要件を満たした健常な志願者の細胞培養物上清６つの試料と、濃縮培地対照１つとを、タンパク質マイクロアレイ（ＡＡＨ−ＢＬＭ−１０００、ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ、Ｎｏｒｃｒｏｓｓ；ＧＡ）によって測定した場合に異なるタンパク質産生レベルについて（１，０００種のヒトタンパク質について）検査した。志願者は女性で１８〜３０歳の範囲の年齢であった。女性を選択したが、男性が志願者として選択されても、またはその組合せでも、同様の結果が得られると考えられる。以下は、ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈによって行われたマイクロアレイプロセスの説明である。Ｈｕｍａｎ  Ｌ−１０００アレイを使用する第１工程は、試料中のタンパク質の一級アミンをビオチン化することである。次に、標準的なウェスタンブロットと同様の態様で膜アレイをブロッキングし、予めプリントされたアレイにビオチン標識試料を加える。このアレイは標的タンパク質に特異的な捕捉抗体で予めプリントされており、試料中のタンパク質がインキュベーション期間中にアレイ上の抗体と結合する。ＨＲＰ共役ストレプトアビジンを使用したインキュベーションの後、化学発光法によってシグナルを可視化し、数量化することができる。アレイの画像を作成し、シグナルの強度を分析する。
【０１２４】
[0134]以下は、結果の分析である。
【０１２５】
[0135]試料は、次のように説明される。１９個の試料が到着し、これらを試験施設に対して非特定化およびコード化した。全ての試料は製造元の限度内で用い、データ表およびアレイ画像を作成した。
【０１２６】
[0136]アレイ画像を含むデータを得た。コード化された識別番号による完了の後に各試料アレイの個々の画像が続く（試料群は、Ａｓ＝アジア人、Ａｆ＝アフリカ人、およびＣａ＝白人の接頭辞によって表記されている）。産生されたタンパク質の量は、アレイ上に生じたスポットのサイズおよび密度によって可視化することができる。各アレイは、視覚的参照がしやすいように、同じ位置に同じタンパク質を有する。
【０１２７】
[0137]以下は、データ表である。
【０１２８】
[0138]表１は、タンパク質マイクロアレイ（ＡＡＨ−ＢＬＭ−１０００）における、各試料民族群に関する全てのタンパク質の平均産生レベルのリストである。アステリスク（「＊」）は、生物学的有意性（比較対象試料；この場合は対照＝馴化培地と比べて２倍超の増加／減少）を示すタンパク質レベルの印である。３つの試料群は、Ａｓ＝アジア人、Ａｆ＝アフリカ人、およびＣａ＝白人であった。
【０１２９】
【表１−１】
2019500418.tif 000003
【０１３０】
【表１−２】
2019500418.tif 000004
【０１３１】
【表１−３】
2019500418.tif 000005
【０１３２】
【表１−４】
2019500418.tif 000006
【０１３３】
【表１−５】
2019500418.tif 000007
【０１３４】
【表１−６】
2019500418.tif 000008
【０１３５】
【表１−７】
2019500418.tif 000009
【０１３６】
【表１−８】
2019500418.tif 000010
【０１３７】
【表１−９】
2019500418.tif 000011
【０１３８】
【表１−１０】
2019500418.tif 000012
【０１３９】
【表１−１１】
2019500418.tif 000013
【０１４０】
【表１−１２】
2019500418.tif 000014
【０１４１】
【表１−１３】
2019500418.tif 000015
【０１４２】
【表２−１】
2019500418.tif 000016
【０１４３】
【表２−２】
2019500418.tif 000017
【０１４４】
【表２−３】
2019500418.tif 000018
【０１４５】
【表２−４】
2019500418.tif 000019
【０１４６】
【表２−５】
2019500418.tif 000020
【０１４７】
【表２−６】
2019500418.tif 000021
【０１４８】
【表２−７】
2019500418.tif 000022
【０１４９】
【表２−８】
2019500418.tif 000023
【０１５０】
【表２−９】
2019500418.tif 000024
【０１５１】
【表２−１０】
2019500418.tif 000025
【０１５２】
【表２−１１】
2019500418.tif 000026
【０１５３】
【表２−１２】
2019500418.tif 000027
【０１５４】
[0139]表１は、平均した試料群のうちの少なくとも１つにおいて、試験したタンパク質のうち合計６６１／１０００（６６．１％）が、試験プロトコルに記載の生物学的有意性（対照／比較対象試料と比べて≧２倍の増加／減少）を示したことを示す。
【０１５５】
[0140]表２は、３つ全ての群で生物学的有意性を示した各試料民族群（Ａｓ＝アジア人、Ａｆ＝アフリカ人、Ｃａ＝白人）の平均産生レベルの一覧である。これらの共通のタンパク質を、続く初期評価の基準とした。
【０１５６】
【表３−１】
2019500418.tif 000028
【０１５７】
【表３−２】
2019500418.tif 000029
【０１５８】
【表３−３】
2019500418.tif 000030
【０１５９】
【表３−４】
2019500418.tif 000031
【０１６０】
【表３−５】
2019500418.tif 000032
【０１６１】
【表３−６】
2019500418.tif 000033
【０１６２】
[0141]表２は、対照と比べて生物学的に有意なものと特定されたタンパク質のうち合計２３１／６１６（３７．５％）が、３つ全ての民族群で共通していたことを示す。残りの３８５／６１６（６２．５％）のタンパク質は、試料群のうちの２つ以下で生物学的有意性を示した。
【０１６３】
[0142]表３は、２３１種の共通した生物学的に有意なタンパク質においてアジア人（Ａｓ）試料をアフリカ人（Ａｆ）試料と比較した平均産生レベルの比較である。プロトコルに記載した、相対産生レベルの≧２５％の増加／減少の基準を使用して、アジア人試料のタンパク質を、アフリカ人試料よりも産生が増加したもの（１つのアステリスク、「＊」）または減少したもの（３つのアステリスク、「＊＊＊」）として評価した。
【０１６４】
【表４−１】
2019500418.tif 000034
【０１６５】
【表４−２】
2019500418.tif 000035
【０１６６】
【表４−３】
2019500418.tif 000036
【０１６７】
【表４−４】
2019500418.tif 000037
【０１６８】
【表４−５】
2019500418.tif 000038
【０１６９】
【表４−６】
2019500418.tif 000039
【０１７０】
[0143]表３は、アジア人試料が、アフリカ人試料と比べて、比較したタンパク質のうち１８３／２３１（７８％）において産生レベルの２５％の差を示したことを示す。そのうち、１０／１８２（５％）のみが、アフリカ人試料と比べて上昇した産生レベルを示した。残りの１７２／１８２（９５％）は、アフリカ人試料と比べて低下した産生レベルを示した。
【０１７１】
[0144]表４は、２３１種の共通した生物学的に有意なタンパク質において白人（Ｃａ）試料をアフリカ人（Ａｆ）試料と比較した平均産生レベルの比較である。プロトコルに記載した、相対産生レベルの≧２５％の増加／減少の基準を使用して、白人（Ｃａ）試料のタンパク質を、アフリカ人試料よりも産生が増加したもの（１つのアステリスク、「＊」）または減少したもの（３つのアステリスク、「＊＊＊」）として評価した。
【０１７２】
【表５−１】
2019500418.tif 000040
【０１７３】
【表５−２】
2019500418.tif 000041
【０１７４】
【表５−３】
2019500418.tif 000042
【０１７５】
【表５−４】
2019500418.tif 000043
【０１７６】
【表５−５】
2019500418.tif 000044
【０１７７】
【表５−６】
2019500418.tif 000045
【０１７８】
[0145]表４は、白人試料が、アフリカ人試料と比べて、比較したタンパク質のうち１０４／２３１（４５％）において産生レベルの２５％の差を示したことを示す。そのうち、６４／１０４（６２％）のみが、アフリカ人試料と比べて上昇した産生レベルを示した。残りの４０／１０４（３８％）は、アフリカ人試料と比べて低下した産生レベルを示した。
【０１７９】
[0146]表５は、２３１種の共通した生物学的に有意なタンパク質において白人（Ｃａ）試料をアジア人（Ａｓ）試料と比較した平均産生レベルの比較である。プロトコルに記載した、相対産生レベルの≧２５％の増加／減少の基準を使用して、白人（Ｃａ）試料のタンパク質を、アフリカ人試料よりも産生が増加したもの（１つのアステリスク、「＊」）または減少したもの（３つのアステリスク、「＊＊＊」）として評価した。
【０１８０】
【表６−１】
2019500418.tif 000046
【０１８１】
【表６−２】
2019500418.tif 000047
【０１８２】
【表６−３】
2019500418.tif 000048
【０１８３】
【表６−４】
2019500418.tif 000049
【０１８４】
【表６−５】
2019500418.tif 000050
【０１８５】
【表６−６】
2019500418.tif 000051
【０１８６】
[0147]表５は、白人試料が、アジア人試料と比べて、比較したタンパク質のうち２０４／２３１（８８％）において産生レベルの２５％の差を示したことを示す。そのうち、１９６／２０４（９６％）が、アジア人試料と比べて上昇した産生レベルを示した。残りの８／２０４（４％）は、アジア人試料と比べて低下した産生レベルを示した。
【０１８７】
[0148]表６は、各試料群に独特な生物学的に有意な（異常調節≧２倍の）タンパク質のリスト（および対照と比べた指示的表示）である。
【０１８８】
【表７−１】
2019500418.tif 000052
【０１８９】
【表７−２】
2019500418.tif 000053
【０１９０】
【表７−３】
2019500418.tif 000054
【０１９１】
[0149]表６は、アジア人試料が、１１４／１０００｛１１．４％｝のタンパク質において独特な異常調節（主に、２つを除いた全ての事例で対照よりも低い産生）を示したことを示す。アフリカ人試料は、３０／１０００｛３％｝のタンパク質において独特な異常調節を示した（全て、対照よりも高い産生を示した）。白人試料は、８８／１０００｛８．８％｝のタンパク質において独特な異常調節を示した（全て、対照よりも高い産生を示した）。
【０１９２】
[0150]表７は、アジア人と比べたアフリカ人の統計的に有意な（≧０．０５）タンパク質のリスト（比較対象と比べた指示的表示を含む）である。
【０１９３】
【表８−１】
2019500418.tif 000055
【０１９４】
【表８−２】
2019500418.tif 000056
【０１９５】
【表８−３】
2019500418.tif 000057
【０１９６】
【表８−４】
2019500418.tif 000058
【０１９７】
【表８−５】
2019500418.tif 000059
【０１９８】
[0151]表７は、アフリカ人試料が、全１６１種の統計的に有意なタンパク質において、アジア人試料と比べて最低で２倍の増加（マンホイットニーＵ検定によって判定）を示したことを示す。これは、３つ全ての相対比較における統計的に有意なタンパク質の最も大きな集合であった。
【０１９９】
[0152]表８は、アジア人と比べた白人の統計的に有意な（≧０．０５）タンパク質のリスト（および比較対象と比べた指示的表示）である。
【０２００】
【表９】
2019500418.tif 000060
【０２０１】
[0153]表８は、白人試料が、全２４種の統計的に有意なタンパク質において、アジア人試料と比べて最低で２倍の増加（マンホイットニーＵ検定によって判定）を示したことを示す。これは、３つ全ての相対比較における統計的に有意なタンパク質の第２に大きな集合であった。
【０２０２】
[0154]表９は、アフリカ人と比べた白人の統計的に有意な（≧０．０５）タンパク質のリスト（および比較対象と比べた指示的表示）である。
【０２０３】
【表１０】
2019500418.tif 000061
【０２０４】
[0155]表９は、白人試料が、全５種の統計的に有意なタンパク質において、アフリカ人試料と比較して最低で２倍の減少（マンホイットニーＵ検定によって判定）を示したことを示す。これは、３つ全ての相対比較における統計的に有意なタンパク質の最も小さな集合であった。
【０２０５】
[0156]上記のデータは、少なくとも次の結論を支持する。
【０２０６】
[0157]生物学的有意性は、プロトコルの定義に記載されるように、比較対象試料と比べて２倍超の増加または減少を意味する。生物学的有意性は、少なくとも１つの群において基準を満たした６１６／１０００のタンパク質を示した。また、２３１／６１６は、全ての群で共通していた。
【０２０７】
[0158]このデータは、次のような独特に変化したタンパク質（１つの群のみにおいて生物学的有意）をさらに示した。
【０２０８】
アジア人：１１４／１０００
アフリカ人：３０／１０００
白人：８８／１０００
[0159]平均産生レベルの変化は、プロトコルの定義により、比較対象と比べて２５％超の増加／減少と定義される。このデータは、平均産生レベルの変化が、３つ全ての群において、共通した２３１種の生物学的に有意なタンパク質の変動を示したことを示す。概して、アジア人の試料または皮膚は、アフリカ人および白人の試料または皮膚と比べて低下したタンパク質産生レベルを示したが、白人の皮膚は、産生レベルの最も高い上昇を示した。
【０２０９】
[0160]マンホイットニー検定を使用したデータの統計学的有意性は、アジア人の皮膚が、アフリカ人の皮膚と比べて、９５％信頼区間において、最も多い数または量のタンパク質を示したことをさらに示した。第２に多い量のタンパク質は、白人の皮膚と比べたアジア人の皮膚であった。最小量のタンパク質は、白人の皮膚と比べたアフリカ人の皮膚であった。
【０２１０】
[0161]このデータは、タンパク質およびそれらの経路のさらなる分析が、これらの民族群間における皮膚の構造、機能、健康、および美の相違の理解を深めるという考えを支持する。
【０２１１】
[0162]このデータは、以下のさらなる研究において言及されるように、同性からの同種か異種かにかかわらず、２つ以上の組織培養物の混合物が、レシピエントに対して所望の効果を達成することが可能であることを裏付ける。言い換えると、各民族群のタンパク質の特性およびレシピエントの皮膚に与えられる所望の特性に基づいて、生成物中に、１つの民族群の、または２つ以上の民族群間の組織培養物をブレンドすることが可能である。
【０２１２】
例２
[0163]白人（ＣＡ）、アフリカ人（ＡＦ）、およびアジア人（ＡＳ）の３つの民族群間で、皮膚線維芽細胞による全般的遺伝子発現（即ちタンパク質レベル）を比較した。この研究では、各民族性から６人の患者を動員した。各生検から皮膚線維芽細胞を単離し、同様の組織培養条件下で増殖させた。タンパク質を抽出し、インハウスプロトコルに従って、試料をタンパク質アッセイ、試験、および分析にかけた。ここで明記されるように、ＢｉｏＦａｓｔ  Ｃｏｎｓｕｌｔａｎｔ  Ｇｒｏｕｐによってデータをさらに補正し、解釈した。
【０２１３】
[0164]全試料中のタンパク質発現を評価するため、ＲａｙＢｉｏ（登録商標）ヒトビオチン標識ベースの抗体アレイ−Ｈｕｍａｎ  Ｌ−５０７アレイを利用した。このアレイは、１０００種のタンパク質を二連で評価するように設計されている。異なるアレイ間（イントラアレイ）または各アレイ内（インターアレイ）の差を説明するために、２つの正規化工程を行った。これは陽性対照への正規化を含み、次にバックグラウンド値が減算される（陰性対照）。次に、重複値を平均した（これが、最終的な分析および統計に使用される１つの最終強度値になる）。
【０２１４】
[0165]生物学的観点から、データ正規化後に、平均遺伝子発現強度が、異なる試験群（即ち、ＡＳ、ＡＦ、およびＣＡ）の間で異ならないことが予想される。したがって、これを試験するために、各試料（即ち、合計１８個の試料）および民族群の全般的強度平均を計算した。この初期分析の結果を、ページ付けの目的で表１０Ａ、１０Ｂ、および１０Ｃとして示した、以下の表１０に示す。
【０２１５】
[0166]
【０２１６】
【表１１Ａ】
2019500418.tif 000062
【０２１７】
[0167]
【０２１８】
【表１１Ｂ】
2019500418.tif 000063
【０２１９】
[0168]
【０２２０】
【表１１Ｃ】
2019500418.tif 000064
【０２２１】
[0169]元の正規化データ値を使用して、３つの独立した比較：ＡＦ／ＡＳ、ＣＡ／ＡＳ、ＣＡ／ＡＦを行うことにより、各遺伝子に関する変化倍率（fold changes）を異なる群の間で計算した。統計的に有意な（ｔ検定）上方調節および下方調節された遺伝子の総数を示す要約された結果を、以下の表１１に示す。
【０２２２】
[0170]
【０２２３】
【表１２】
2019500418.tif 000065
【０２２４】
[0171]強度（即ち遺伝子発現）の値のうちの多くが「１」に等しかったことが認められた。これが意味するのは、所与のタンパク質の発現レベルがアッセイの検出下限を下回った（または陰性対照よりも低かった）こと、または、未確定の技術的理由がその特定のタンパク質の検出を失敗させたことのいずれかである。これら全ての「１」が分析に含まれているとき、それらは、偽陽性の結果をもたらす場合がある。例えば、アジア人群に関する遺伝子Ｘの平均強度が１であり、アフリカ人群における同じ遺伝子の平均強度が３００である場合、実際にはアジア人群における遺伝子Ｘの発現が単純に（未知の理由で）判定され得なかったときでも、データ分析は、アフリカ人群における３００倍の上方調節を示唆することになる。
【０２２５】
[0172]全般的強度の平均の比較から、民族群間の全体的な検出シグナルに明白な差が存在したことが認められ、最も低い値はアジア人群で観察され、白人で最高であった。これは、他の群と比較して白人群において、平均して「より多くのタンパク質」が検出されたことを意味する。この現象は予想外であり、不均等なタンパク質負荷、一貫性のない膜洗浄、またはイントラおよびインターアレイ正規化工程によって明らかに補正され得なかった他の技術的問題に起因する、人為的結果である可能性が最も高い。
【０２２６】
[0173]単一の理論に拘束されることを望むものではないが、群間の不均一な強度検出レベルならびに多数の未確定の検出を少なくとも部分的に説明し得る、一連の問題が特定された。アレイ内のタンパク質負荷が等しくなく、いくつかの試料は検出が極めて低いか全くなく、スキャナの正常検出範囲を超えるかアレイ内の別のスポットと重なる点まで強度が極めて高くなるような飽和の問題があり、いくつかの膜においてある特定の領域が膜の残部と比較して暗いこと（「汚れた領域」）が認められるようなバックグラウンド問題がある。
【０２２７】
[0174]上記の問題に対処し、偽陽性および陰性の可能性がある結果に基づいて結論を導くことを回避するために、次の工程を行った。
【０２２８】
[0175]人為的結果とみなされたデータ点をフィルタ除去した。１００超だが５００００未満の強度値のみを有効とみなす。したがって、１０１未満および４９９９９超の全ての値をフィルタ除去／除外した。どれだけ多くのデータ点がこの行為によって「失われた」かの概要を、以下に示す表１２に明記する。
【０２２９】
[0176]
【０２３０】
【表１３】
2019500418.tif 000066
【０２３１】
[0177]この変化がデータの補正に十分であったことを確かめるために、全般的タンパク質発現の平均を群間で比較した。民族群間の全般的タンパク質発現の変化がほとんど消失したため、「不良な」データ点のフィルタリングが全体としてデータセットを改善したことが認められた。これを、ページ付けの目的で表１３Ａ、１３Ｂ、および１３Ｃとして示した、以下の表１３に示す。
【０２３２】
[0178]
【０２３３】
【表１４Ａ】
2019500418.tif 000067
【０２３４】
[0179]
【０２３５】
【表１４Ｂ】
2019500418.tif 000068
【０２３６】
[0180]
【０２３７】
【表１４Ｃ】
2019500418.tif 000069
【０２３８】
[0181]データのフィルタリング（上記）の後、任意の所与の群（ＡＳ、ＡＦ、およびＣＡ）に関する任意の所与のタンパク質の強度値を、これらの値のうちの少なくとも３つが利用可能であった場合にのみ（所与の群においてｎ≧３）、さらに分析した。このパラメータ（ｎ≧３）に従うエントリ／タンパク質について、群間の変化倍率／比を計算した。
【０２３９】
[0182]データ補正後に有意に上方および下方調節された遺伝子の概要も、以下の表１４に示す。
【０２４０】
[0183]
【０２４１】
【表１５】
2019500418.tif 000070
【０２４２】
[0184]有意に変化したタンパク質を、その後、後述するタンパク質ネットワーク相互作用の研究に利用した。
【０２４３】
[0185]１つの民族群と別のものとで差次的にモジュレートされた主要な生物学的プロセスおよび細胞シグナル伝達経路を特定するために、データをストリングネットワーク分析にかけた。ソフトウェアへの入力として、群間（ＡＦ／ＡＳ、ＣＡ／ＡＳ、ＣＡ／ＡＦで発現レベルの有意差（片側Ｔ検定によってｐ＜０．０５）を示したタンパク質のみを含んだ、３つの別々のエントリリストを（上述のように）使用した。これら３つのリストの各々に関する全体的なタンパク質ネットワークが、図３〜５に示されている。
【０２４４】
[0186]図３〜５は、タンパク質ネットワークＡＦ／ＡＳ、ＣＡ／ＡＳ、およびＣＡ／ＡＦを示す。線の太さは、タンパク質間の機能的相互作用を支持するデータの強度に比例している。
【０２４５】
[0187]ストリングネットワーク分析から、上位５０の（統計学的有意性／偽発見率に関して上位５０にランク付けされた）生物学的プロセスを分類／解釈した。なお、包括的／いずれかの生物学的プロセス（例えば、「細胞シグナル伝達」）に関する可能性があるとみなされたプロセスは無視した。
【０２４６】
[0188]図６〜８は、１つの群と別のものとで差次的にモジュレートされる主要な生物学的プロセスがここで報告されていることを説明する。
【０２４７】
[0189]加えて、上位の即ち最もスコアの高い生物学的プロセスが、全体的なタンパク質ネットワーク内にどのように当てはまるかに関する重要な例が、図９〜１１に示されている。
【０２４８】
[0190]図９では、創傷治癒プロセスに関して特定された遺伝子（赤色）のほとんどが、ネットワークの最も強い機能的相互作用の中心にあるように見えることが明らかである。
【０２４９】
[0191]図１０では、免疫応答に関して特定された遺伝子（赤色）のほとんどが、全体的なネットワークにおいて機能的に連関しているように見えることが明らかである。
【０２５０】
[0192]しかしながら、図１１では、免疫応答に関する特定された遺伝子（赤色）の５０％のみが、全体的なネットワークにおいて機能的に連関しているように見える。
【０２５１】
[0193]差次的にモジュレートされたタンパク質の３つのリスト、ＡＦ／ＡＳ、ＣＡ／ＡＳ、およびＣＡ／ＡＳの各々で、全体的なタンパク質ネットワーク内に当てはまる最も有意な経路は、それぞれ、「補体と凝固カスケード」、「サイトカイン−サイトカイン受容体相互作用」、そして同じく「サイトカイン−サイトカイン受容体相互作用」であった。
【０２５２】
[0194]タンパク質ネットワーク分析から、いくつかの結論を導くことができる。
【０２５３】
[0195]ＡＦ／ＡＳに関しては、創傷治癒プロセス、ならびに細胞外マトリックスの調節が、ＡＦを分子レベルでＡＳと区別し得る主要な生物学的プロセスである。これらのプロセスは、ＡＳと比較してＡＦにおいて主に上方調節されている（過半数のタンパク質がその比に対して上方調節されたため）。注目すべきことに、「補体と凝固経路」は、創傷治癒プロセスの中心にあるように思われる。
【０２５４】
[0196]ＣＡ／ＡＳに関しては、免疫系応答／炎症が、機能している主要な生物学的プロセスであり、ＡＳと比較して、ＣＡでは主に上方調節された（過半数のタンパク質がその比に対して上方調節されたため）。さらに、「サイトカイン−サイトカイン受容体経路」および「ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路」は、ＣＡとＡＳとの間の免疫系のそのような差次的基礎モジュレーションに関与している可能性が高い。
【０２５５】
[0197]ＣＡ／ＡＦに関しては、同じく免疫応答が、最高スコアの生物学的プロセスであり、ＡＦと比較して、ＣＡでは上方調節された（過半数のタンパク質がその比に対して上方調節されたため）。しかしながら、同じプロセスは、（差次的に発現したタンパク質の）全体的なストリングネットワークの機能的相互作用の中心を十分に網羅しなかった。おそらく、この場合（ＣＡ／ＡＦ）では、機能しているいくつかの異なるプロセスが均衡しているようだが、これは、タンパク質リストおよび後続のネットワーク分析からは明らかに推測することができない。いずれにせよ、「サイトカイン−サイトカイン受容体経路」および「補体と凝固カスケード」の混合物は、ＣＡとＡＦとの主な相違を網羅するように思われる。
【０２５６】
[0198]次に、各民族群における皮膚に関連性のある遺伝子を次のように特定した。所与の民族性／群から少なくとも３人の対象（ｎ≧３）の値が入手可能であった場合、これらの値を平均した。これらの平均を、残りの民族性から少なくとも３つの値も入手可能であることを条件として、残りの民族性の値の平均と比較した。群間の有意差をＴ検定によって試験した（ｐ＜０．０５を統計的に有意とみなす）。
【０２５７】
[0199]上記から、いくつかの結論が可能である。ＣＡは、他の民族性と比較して、主に上方調節された遺伝子を示す。ＡＳは、他の民族性と比較して、主に下方調節された遺伝子を示す。ＡＦは、他の民族性と比較して、等しい上方調節および下方調節を示す。表１５を参照されたい。
【０２５８】
[0200]
【０２５９】
【表１６】
2019500418.tif 000071
【０２６０】
[0201]特定の群において差次的に発現／モジュレートされる標的遺伝子を選択／選定しつつ、同時に、偽陽性を選択する確率を低減するために、対照集団が何であろうと特定の群において差次的に調節される遺伝子の特定を優先する手法を採った。図１２のベン図に示されるように、ＡＳについては１７個、ＣＡについては１４個、ＡＦ群については４個の遺伝子を特定した。
【０２６１】
[0202]次の表１６、１７、および１８は、前段落で詳解した所見を要約する。
【０２６２】
[0203]
【０２６３】
【表１７−１】
2019500418.tif 000072
【０２６４】
【表１７−２】
2019500418.tif 000073
【０２６５】
[0204]
【０２６６】
【表１８−１】
2019500418.tif 000074
【０２６７】
【表１８−２】
2019500418.tif 000075
【０２６８】
[0205]
【０２６９】
【表１９】
2019500418.tif 000076
【０２７０】
[0206]上述の分析は、ＡＳ、ＡＦ、およびＣＡにおいて差次的にモジュレートされた遺伝子の数が、残りの群（合計）と比較したとき、それぞれ７９、２３、および１４１であったことを明らかにした。さらなる比較分析は、対照群から独立して試験群の各々において差次的に調節されたことが見出された様々な遺伝子を特定した（ベン図に示すとおり）。ＡＳについては１７個、ＣＡについては１４個、ＡＦ群については４個の遺伝子を特定した。このデータに基づいて、皮膚機能および病理学の異なる側面を制御する（皮膚線維芽細胞によって発現する）様々な遺伝子が、アフリカ人、アジア人、および白人の皮膚で差次的に調節されると結論することができる。したがって、このデータは、差次的な遺伝子の調節が、皮膚の性質、外観、または病理学の人種的相違に関与しているという主張を支持する。
【０２７１】
[0207]さらに、本開示のデータは、遺伝子細胞に由来するタンパク質に基づいて、アジア人、アフリカ人、または白人（または他の民族群もしくは亜群）の皮膚に具体的に適した化粧用および治療用生成物を開発する理論的根拠を証明し可能にする。さらに、このデータは、いかなるレシピエントにも使用され得る生成物に所望される利益または特性を誘導するように、タンパク質が民族群（または亜群）から選択され得ることを証明する。
【０２７２】
[0208]したがって、本開示は、各民族群（および／または亜群）が、差次的に調節される遺伝子を有し、そのため、所望の利益または特性の最大化を達成する標的化生成物の製剤化が今や可能であることを予想外に見出した。さらに、生成物の所望の利益または特性に基づいて、全体的な生成物組成においてタンパク質の比率がより高い標的化生成物を製剤化することもできる。この「適合化」は、単一の民族群（または亜群）における単一のドナー、ならびに単一の民族群または亜群における２体以上のドナーによって、そしてまた２つ以上の群および／または亜群における２体以上のドナーにおいて達成され得る。
【０２７３】
[0209]続く表１９は、本開示によって決定された非重複遺伝子の完全なリストである。
【０２７４】
【表２０−１】
2019500418.tif 000077
【０２７５】
【表２０−２】
2019500418.tif 000078
【０２７６】
【表２０−３】
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【０２７７】
[0210]以下の表２０は、いずれかの群において他の２つの群の平均と比較して差次的に調節されることが見出された各遺伝子／タンパク質に関する情報を含む。
【０２７８】
【表２１−１】
2019500418.tif 000080
【０２７９】
【表２１−２】
2019500418.tif 000081
【０２８０】
【表２１−３】
2019500418.tif 000082
【０２８１】
【表２１−４】
2019500418.tif 000083
【０２８２】
【表２１−５】
2019500418.tif 000084
【０２８３】
【表２１−６】
2019500418.tif 000085
【０２８４】
【表２１−７】
2019500418.tif 000086
【０２８５】
【表２１−８】
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【０２８６】
【表２１−９】
2019500418.tif 000088
【０２８７】
【表２１−１０】
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【０２８８】
【表２１−１１】
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【０２８９】
[0211]１つ以上の例示的なデータの態様を参照して本開示を説明してきた。しかしながら、当業者であれば、本開示の範囲を逸脱することなく様々な変更を行うことができ、均等物を代用してもよいことを理解するであろう。加えて、本開示の範囲を逸脱することなく改変を行って、特定の材料を本開示の教示に適合させてもよい。したがって、本開示は、開示される特定の材料または態様に限定されることを意図するものではなく、その範囲内に含まれる全ての材料および態様を含む。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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