(57)【要約】  本発明は、二日酔い（ｖｅｉｓａｌｇｉａ）、アルコール中毒、食道癌、または口腔咽頭癌などのアセトアルデヒド毒性の増加に関連する状態または不十分なアルデヒド脱水素酵素（ＡＬＤＨ）の酵素活性の結果生じる状態の治療および予防において使用するための、β−エスシン（ベータ−エスシン）およびチョークベリー果実抽出物を含む経口液体組成物に関する。対象へ本発明の組成物を投与することにより、アルデヒド基質、特にアルコールの異化作用に由来し、その毒性のためにヒトに危害を表すものの代謝が増加することとなる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
サポニンおよびチョークベリー果実抽出物を含む経口投与用液体組成物であって、前記サポニンがβ−エスシンであることを特徴としており、前記サポニンは、２０〜８０ｍｇ／ｌの濃度で前記組成物中に存在し、かつ前記チョークベリー果実抽出物は、β−エスシンの味を隠すのに十分な量で存在する、アセトアルデヒド毒性の増加に関連する代謝状態の治療および／または予防に使用するための組成物。
【請求項２】
β−エスシンの濃度が５０ｍｇ／ｌ〜７５ｍｇ／ｌである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
β−エスシンの前記濃度が６２．５ｍｇ／ｌである、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記チョークベリー果実抽出物が、５０〜２００ｇ／ｌの濃度で前記組成物中に存在する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
チョークベリー果実抽出物が、１００ｇ／ｌ〜１５０ｇ／ｌの濃度で前記組成物中に存在する、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
チョークベリー果実抽出物が１１５ｇ／ｌ〜１３５ｇ／ｌの濃度で前記組成物中に存在する、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
チョークベリー果実抽出物が、１２５ｇ／ｌの濃度で前記組成物中に存在する、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
チョークベリー果実抽出物がチョークベリー果汁濃縮物である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
β−エスシンが６２．５ｍｇ／ｌの濃度で存在し、前記チョークベリー果汁濃縮物が１２５ｇ／ｌの濃度で存在する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
溶媒をさらに含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記溶媒が水またはエタノールである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
香味料、保存料、ビタミン、甘味料、消泡剤、抗酸化剤、ＣＯ２およびミネラルから選択される１つ以上の添加剤をさらに含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物の総容量が５０ｍｌ〜５００ｍｌである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物の前記総容量が１００ｍｌ〜３３０ｍｌである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物の前記総容量が２２０〜３００ｍｌである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記組成物の前記総容量が２７５ｍｌである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記代謝状態が、二日酔い、アルコール中毒、食道癌、または口腔咽頭癌、または不十分なアルデヒド脱水素酵素（ＡＬＤＨ）の酵素活性の結果生じる状態からなる群から選択される、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記代謝状態は、遺伝子突然変異ＡＬＤＨ２＊２を有する対象にある、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記状態が、アルコールフラッシング反応およびアルコール誘発性呼吸反応から選択される、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
対象における不十分なアルデヒド脱水素酵素（ＡＬＤＨ）の酵素活性の結果生じるアセトアルデヒド毒性の増加に関連する代謝状態の治療方法および／または予防方法であって、前記方法は、β−エスシンおよびチョークベリー果実抽出物を含む液体組成物を前記対象に経口投与することを含み、β−エスシンの濃度は、２０〜８０ｍｇ／ｌであり、前記チョークベリー果実抽出物は、β−エスシンの味を隠すのに十分な量で存在する、方法。
【請求項２１】
前記代謝状態が、二日酔い、アルコール中毒、食道および口腔咽頭癌を含む群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記代謝状態は、遺伝子突然変異ＡＬＤＨ２＊２を有する対象にある、請求項２１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、二日酔い（ｖｅｉｓａｌｇｉａ）、アルコール中毒、食道癌、または口腔咽頭癌などのアセトアルデヒド毒性の増加に関連する状態または不十分なアルデヒド脱水素酵素（ＡＬＤＨ）の酵素活性の結果生じる状態の治療および予防において使用するための、β−エスシン（ベータ−エスシン）およびチョークベリー果実抽出物を含む経口液体組成物に関する。対象へ本発明の組成物を投与することにより、アルデヒド基質、特にアルコールの異化作用に由来し、その毒性のためにヒトに危害を表すものの代謝が増加することとなる。本発明の組成物は、メタノールなど、他の生体異物の代謝から生じるアルデヒド基質を除去するのにも有用である。このように、本発明の組成物は、アルコール耐性を増大させ、かつアルコールに対する感受性を減少させ、アルコールの過剰摂取後に不快な生理学的および心理的効果を経験する二日酔いの予防および治療に有効である。
【背景技術】
【０００２】
生体異物とは、ある生物がさらされる、その生物の通常の代謝に外因性である化学物質として定義されてきた。代謝がなければ、多くの生体異物が有毒濃度に達することになる。生体異物としては、農薬、職業化学物質、環境汚染物質、臨床薬物、乱用薬物、配備関連化学物質、他の生物によって作られた外来化学物質などが挙げられる。本明細書においてアルコールとも呼ばれるエチルアルコール（エタノール）は、世界中で何百万もの人々によって最も一般的に毎日摂取される生体異物のうちの１つである（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｓｕｂｓｔａｎｃｅ＿ａｂｕｓｅ／ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ／ｇｌｏｂａｌ＿ａｌｃｏｈｏｌ＿ｒｅｐｏｒｔ／ｍｓｂ＿ｇｓｒ＿２０１４＿３．ｐｄｆ）。世界保健機関によると、世界的に、２０１６年における推定アルコール摂取量は１５歳以上の人１人あたり６．４リットルの純アルコールである（ｈｔｔｐ：／／ａｐｐｓ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｇｈｏ／ｄａｔａ／ｎｏｄｅ．ｓｄｇ．３−５−ｖｉｚ？ｌａｎｇ＝ｅｎ）。
【０００３】
エタノールを含むアルコール飲料の摂取は、相対的に緩和していても、即効性および遅発性のアルコール関連の影響のうちの１つ以上を引き起こし得る。これは、職業的、認知的、視覚的空間的技能能力の低下、集中力の問題、および行動の自主規制による制御の低下に関連する。これらに関連した影響を経験しながら通常のルーチンを継続することは、運転、労働の着手、または機械の操作などの通常の日常活動を危険にさらし得る。多くの人々は、アルコールの摂取後、たとえ自分たちの症状が通常の日常業務を危険にしているとしても、または少なくとも困難にしていても通常の活動を継続することから、アルコールの摂取はかなり問題である。エタノールの有害な影響、短期および長期の影響は、文書において十分に報告されており、こうした影響は、その毒性に関連している。アルコールは、多くの様々な細胞型における膜タンパク質の機能を変化させることによってその影響を発揮する。最も強く影響を受けるのは、消化器系、尿路系、心臓血管系、神経系の細胞である。
【０００４】
摂取後のアルコールの吸収を減少させるため方法は、何十年もの間広範囲にわたる研究の主題であり、少なくともいくつかの可能な解決策が提示されている（例えば、「Ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅｓ  ｆｒｏｍ  ｂａｙ  ｌｅａｆ  ｏｎ  ｂｌｏｏｄ  ｅｔｈａｎｏｌ  ｅｌｅｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅｔｈａｎｏｌ−ｌｏａｄｅｄ  ｒａｔ：ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｅｍｐｔｙｉｎｇ．」Ｍａｔｓｕｄａ  Ｈ，Ｓｈｉｍｏｄａ  Ｈ，Ｕｅｍｕｒａ  Ｔ，Ｙｏｓｈｉｋａｗａ  Ｍ．，Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ．１９９９年９月２０日；９（１８）：２６４７−５２；「Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ｓａｐｏｎｉｎｓ  ａｎｄ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ．ＶＩ．Ｅｌａｔｏｓｉｄｅｓ  Ａ  ａｎｄ  Ｂ，ｐｏｔｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｅｔｈａｎｏｌ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ，ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｂａｒｋ  ｏｆ  Ａｒａｌｉａ  ｅｌａｔａ  ＳＥＥＭ．（Ａｒａｌｉａｃｅａｅ）：ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｏｌｅａｎｏｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ−ｓａｐｏｎｉｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ａｃｔｉｖｉｔｙ」Ｙｏｓｈｉｋａｗａ  Ｍ，Ｍｕｒａｋａｍｉ  Ｔ，Ｈａｒａｄａ  Ｅ，Ｍｕｒａｋａｍｉ  Ｎ，Ｙａｍａｈａｒａ  Ｊ，Ｍａｔｓｕｄａ  Ｈ．，Ｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ（Ｔｏｋｙｏ）．１９９６年１０月；４４（１０）：１９１５−２２；「Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ｓａｐｏｎｉｎｓ  ａｎｄ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ．ＩＩＩ．Ｈｏｒｓｅ  ｃｈｅｓｔｎｕｔ．（１）：Ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ，ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｅｔｈａｎｏｌ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｅｓｃｉｎｓ  Ｉａ，Ｉｂ，ＩＩａ，ＩＩｂ，ａｎｄ  ＩＩＩａ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｓｅｅｄｓ  ｏｆ  Ａｅｓｃｕｌｕｓ  ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎｕｍ  Ｌ．」Ｙｏｓｈｉｋａｗａ  Ｍ，Ｍｕｒａｋａｍｉ  Ｔ，Ｍａｔｓｕｄａ  Ｈ，Ｙａｍａｈａｒａ  Ｊ，Ｍｕｒａｋａｍｉ  Ｎ，Ｋｉｔａｇａｗａ  Ｉ，Ｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ（Ｔｏｋｙｏ）．１９９６年８月；４４（８）：１４５４−６４；「Ｅ−ｓｅｎｅｇａｓａｐｏｎｉｎｓ  Ａ  ａｎｄ  Ｂ，Ｚ−ｓｅｎｅｇａｓａｐｏｎｉｎｓ  Ａ  ａｎｄ  Ｂ，Ｚ−ｓｅｎｅｇｉｎｓ  ＩＩ  ａｎｄ  ＩＩＩ，ｎｅｗ  ｔｙｐｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｅｔｈａｎｏｌ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｔｓ  ｆｒｏｍ  ｓｅｎｅｇａｅ  ｒａｄｉｘ，ｔｈｅ  ｒｏｏｔｓ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｇａｌａ  ｓｅｎｅｇａ  Ｌ．  ｖａｒ  ｌａｔｉｆｏｌｉａ  Ｔｏｒｒｅｙ  ｅｔ  Ｇｒａｙ」Ｙｏｓｈｉｋａｗａ  Ｍ，Ｍｕｒａｋａｍｉ  Ｔ，Ｕｅｎｏ  Ｔ，Ｋａｄｏｙａ  Ｍ，Ｍａｔｓｕｄａ  Ｈ，Ｙａｍａｈａｒａ  Ｊ，Ｍｕｒａｋａｍｉ  Ｎ．，Ｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ（Ｔｏｋｙｏ）．１９９５年２月；４３（２）：３５０−２；「Ｃａｍｅｌｌｉａｓａｐｏｎｉｎｓ  Ｂ１，Ｂ２，Ｃ１  ａｎｄ  Ｃ２，ｎｅｗ  ｔｙｐｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｅｔｈａｎｏｌ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｔｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ��ｅｅｄｓ  ｏｆ  Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｌ．」Ｙｏｓｈｉｋａｗａ  Ｍ，Ｈａｒａｄａ  Ｅ，Ｍｕｒａｋａｍｉ  Ｔ，Ｍａｔｓｕｄａ  Ｈ，Ｙａｍａｈａｒａ  Ｊ，Ｍｕｒａｋａｍｉ  Ｎ．，Ｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ（Ｔｏｋｙｏ）．１９９４年３月；４２（３）：７４２−４）を参照されたい）。しかし、ヒトの臓器および組織に対するアルコールの悪影響は部分的にのみエタノールに関連しており、その大部分は、その一次代謝産物アセトアルデヒドへのエタノール代謝、および活性酸素と窒素種が関連した形成の結果であることに留意されたい。アルコールは、細胞膜を通して非常に拡散しやすく、ほとんどの組織によって代謝される。したがって、その代謝物の毒性は、ほとんどの臓器に影響を与える。重要なことに、アセトアルデヒドは、微生物のアルコール脱水素酵素によってエタノールからも形成され（例えば、「Ｈｉｇｈ  ａｃｅｔａｌｄｅｈｙｄｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｓａｌｉｖａ  ａｆｔｅｒ  ｅｔｈａｎｏｌ  ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ：ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｓｐｅｃｔｓ  ａｎｄ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」Ｈｏｍａｎｎ  Ｎ，Ｊｏｕｓｉｍｉｅｓ−Ｓｏｍｅｒ  Ｈ，Ｊｏｋｅｌａｉｎｅｎ  Ｋ，Ｈｅｉｎｅ  Ｒ，Ｓａｌａｓｐｕｒｏ  Ｍ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．１９９７年９月；１８（９）：１７３９−４３を参照されたい）、これは、この発癌物質への曝露の増加が消化管全体、すなわち正常なヒトのミクロビオームの細菌が発見される場所にまで拡大する。
【０００５】
アセトアルデヒドおよび酸化剤は、ＤＮＡ、タンパク質、脂質に損傷を与え得る反応性の高い分子である。肝呼吸および脂質代謝が変化することにより、組織低酸素およびミトコンドリア機能の障害がもたらされる。二次的な影響としては、シグナル伝達経路およびイオンチャネル機能の崩壊、折畳み不全タンパク質の応答および酸化ストレス、ならびにアセトアルデヒド−タンパク質付加物によって主に引き起こされる適応免疫応答の活性化が挙げられる。
【０００６】
アセトアルデヒドの遺伝毒性および組織損傷の影響および作用機序は、十分に記述されている（例えば、Ａｃｅｔａｌｄｅｈｙｄｅ  ｉｎ  Ｔｈｅ  ＭＡＫ−Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｐａｒｔ  Ｉ，ＭＡＫ  Ｖａｌｕｅ  Ｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎｓ  ２０１３、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ  Ｖｅｒｌａｇ  ＧｍｂＨ＆Ｃｏ．ＫＧａＡを参照されたい）。一般人口の健康リスクを超えて、東アジア人の約４０％（世界人口の約５億６０００万人、または世界人口の約８％）は、アセトアルデヒドの深刻な蓄積につながる突然変異を担持している。アセトアルデヒドは、確認されているグループ１の発癌物質であるため（Ｂａａｎ  Ｒ、ら、ＷＨＯ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｇｅｎｃｙ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ  （２００７）Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｂｅｖｅｒａｇｅｓ．Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ  ８（４）：２９２−２９３）、曝露の期間およびその程度が、その毒性に影響を与えることから、アセトアルデヒドのクリアランス率が上昇することにより、重要な健康上のリスクが低下し得る。
【０００７】
エタノールの主な経路は、アルコール脱水素酵素（ＡＤＨ）によるエタノールのアセトアルデヒドへの変換が関与している。アセトアルデヒドは、アルデヒド脱水素酵素（ＡＬＤＨ）によってさらに酢酸に酸化される。
【０００８】
現在まで、過剰のアルコール摂取から生じる副作用を改善する手段にもかなりの注意が向けられてきた。例えば、アスピリンおよびイブプロフェンなどの一般的な鎮痛薬が研究されてきたが、症状の軽減に対する効果は、ほとんどまたは全く観察されなかった。カフェイン、果実／果汁、茶、ビタミンロゼンジは、これらの症状の有意な緩和をもたらすとは考えられないため、これらのうちのいずれかが、ヒト臨床試験において改善をもたらすことを裏付ける明確なエビデンスはない。さらに、多くの市販薬にはそれ自体の望ましくない副作用がある。
【０００９】
韓国公開特許第２０１４００９０４５３号では、有効成分としてチョークベリー果実抽出物を含む、二日酔い（ｈａｎｇｏｖｅｒ）を予防および治療するための肝保護組成物を開示している。その明細書に開示されているように、アルコールは急速に分解され、アルコールの摂取により生成するアセトアルデヒドが、チョークベリー果実抽出物の抗酸化活性を利用して、急速に代謝される。しかしながら、サポニンなど、他のあらゆる活性成分の使用については、記載がない。
【００１０】
米国特許第８１３７７１２号では、二日酔い症状を軽減するための配合物におけるニンジン（一部のサポニン含有量）の使用を開示しており、アロニア（チョークベリー）が着色剤のリストのうちの１種として微量（最大０．１％）で使用され得る。しかしながら、この刊行物では、関連する技術的効果を提供するのに有用であるか、またはそれらの組み合わせがこの点で有用であるような量でこれらの２つの具体的に選択された成分を含むように企図された配合物に関するものではない。
【００１１】
ヤブツバキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｌ．）の種子から抽出された一部のサポニンは、ラットにおけるエタノール吸収の新しい種類の阻害剤として言及されている。それにもかかわらず、このカメリアサポニンは、サポニンの非常に特異的な群を構成し、その阻害効果は、それらの特異的な化学構造から生じる。さらに、出版物（Ｍ．Ｙｏｓｈｉｋａｗａら、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４２（６）１３５７−１３５９、１９９４年）に示されたこの群のその後の結果では、クリの木およびそれらの生物学的活性物質から抽出された特定のエスシン（エスシン−Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩａ、ＩＩｂおよびＩＩＩａ）を同定している。その中には、特に、エスシンＩａ、Ｉｂ、ＩＩａ、およびＩＩｂは、ラットにおけるエタノール吸収に対して、それらの化学構造にも関連する阻害効果を有することが記載されている。しかしながら、この刊行物では、アルコールの代謝を補助し、それによって関連する効果を減少させるための、ヒトおよび動物細胞におけるＡＬＤＨ活性に対するエスシン関連効果については、記載されておらず、示唆もしていない。非常に高用量の、体重１ｋｇあたりセイヨウトチイキのサポニン画分２００ｍｇを経口投与する場合、さらに、サポニンのエタノール吸収に対する阻害効果が実証された。投与量が少ない場合、特に投与量が５０ｍｇ／ｋｇである場合、こうした阻害効果はそれほど強力ではなかった。
【００１２】
サポニン組成物が先行技術において公知であっても、サポニン苦味を効率よく隠すことに関する教示はない。この苦味は、サポニン含有組成物が対象によって経口摂取されるときに、結果として、非常に不快な感覚をもたらす。したがって、苦味が十分に隠れており、経口投与に簡便である経口サポニン組成物が必要とされている。この問題は、高用量のサポニンを使用した場合に特に顕著になる。したがって、サポニンの味が十分に隠れている組成物が必要とされている。
【００１３】
これまで、ヒトなどの対象にとって、経口投与中に安全であると同時に、アルコール中毒を引き起こすアセトアルデヒド毒性の予防、または二日酔いの治療に効果的である特定の治療法が存在するといういかなるエビデンスも示唆もない。そのために、特にアセトアルデヒドの消失を増やすため、または二日酔いもしくは上昇したアセトアルデヒド毒性に関連する他の状態を治療または予防するための、医薬品として、安全であり、効果的であり、かつ有用である新規組成物に対する必要性が依然として存在する。
【発明の概要】
【００１４】
本発明の主題は、例えば、アルコール（エタノール）の過剰摂取後、または所与の物質を解毒する能力が損なわれている対象において、毒性アセトアルデヒドの代謝を増強する経口投与用の新規な液体組成物を提供する。したがって、本発明の組成物は、アルコール中毒を予防し、かつ治療する。
【００１５】
アルコールの過剰摂取とは、結果的に二日酔いまたはアルコール中毒症状さえ引き起こす、こうした摂取である。結果的にアルコール中毒および二日酔いを引き起こすアルコールの量は、すべての対象に固有のものである。本明細書で使用される「アルコール中毒」という用語は、有毒な量のアルコールが摂取された結果生じる状態として定義され、これは、非常に多くの場合、アルコールの異化作用に由来する非常に有毒なアルデヒド基質によって引き起こされる二日酔い症状によって明示される。
【００１６】
また、本発明の目的は、ＡＬＤＨ２＊２遺伝子突然変異を有するなど、過剰なアセトアルデヒドの構築を特に受けやすいことが知られている集団において、アルコール誘発症状の治療または二日酔いの治療における医薬品として使用するための新規組成物を提供することである。
【００１７】
本発明は、サポニンおよびチョークベリー果実抽出物を含む経口投与用の液体組成物に関し、サポニンはβ−エスシンであることを特徴とし、組成物中に２０〜８０ｍｇ／ｌ、好ましくは５０ｍｇ／ｌ〜７５ｍｇ／ｌの濃度で存在し、より好ましくはβ−エスシンは、６２．５ｍｇ／ｌの濃度で存在し、かつチョークベリー果実抽出物は、アセトアルデヒド毒性の増加に関連する代謝状態の治療および／または予防に使用するためにβ−エスシンの味を隠すのに十分な量で存在する。好ましい実施形態では、チョークベリー果実抽出物は、５０〜２００ｇ／ｌ、好ましくは１００ｇ／ｌ〜１５０ｇ／ｌ、より好ましくは１１５ｇ／ｌ〜１３５ｇ／ｌ、の濃度で、本発明の組成物中に存在し、最も好ましくは１２５ｇ／ｌまでのチョークベリー果実抽出物の濃度である。
【００１８】
より好ましくは、本発明の組成物中のチョークベリー果実抽出物は、チョークベリー果汁濃縮物である。
【００１９】
最も好ましい実施形態では、本発明の組成物は、６２．５ｍｇ／ｌの濃度のβ−エスシンおよび１２５ｇ／ｌの濃度のチョークベリー果汁濃縮物を含む。
【００２０】
本発明の組成物は、溶媒、好ましくは水またはエタノール、最も好ましくは水をさらに含む。
【００２１】
本発明の組成物は、香味料、保存料、ビタミン、甘味料、消泡剤、抗酸化剤、ＣＯ２、およびミネラルから選択される１種以上の添加剤を含む、さらに好ましい実施形態である。
【００２２】
別の実施形態では、本発明の組成物の総容量は、５０ｍｌ〜５００ｍｌ、好ましくは１００ｍｌ〜３３０ｍｌ、より好ましくは２２０〜３００ｍｌであり、最も好ましくは２７５ｍｌの量である。
【００２３】
本発明の組成物は、好ましくは、二日酔い、アルコール中毒、食道癌、または口腔咽頭癌、または不十分なアルデヒド脱水素酵素（ＡＬＤＨ）の酵素活性の結果生じる状態からなる群から選択される代謝状態の治療に使用するためのものである。好ましい実施形態では、この状態は遺伝子突然変異ＡＬＤＨ２＊２を有する対象におけるものであり、より好ましくはアルコールフラッシング反応（ａｌｃｏｈｏｌ−ｆｌａｓｈ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）およびアルコール誘発性呼吸反応から選択される。
【００２４】
さらなる実施形態において、対象における不十分なアルデヒド脱水素酵素（ＡＬＤＨ）の酵素活性の結果生じるアセトアルデヒド毒性の増加に関連する代謝状態の治療および／または予防の方法が提供され、この方法は、β−エスシンおよびチョークベリー果実抽出物を含む液体組成物を対象に経口投与することを含み、β−エスシンの濃度は、２０〜８０ｍｇ／ｌであり、チョークベリー果実抽出物は、β−エスシンの味を隠すのに十分な量で存在する。好ましくは、代謝状態は、二日酔い、アルコール中毒、食道および口腔咽頭癌を含む群から選択される。最も好ましくは、代謝状態は、遺伝子突然変異ＡＬＤＨ２＊２を有する対象にある。
【００２５】
例えばマリファナなど、他の生体異物の代謝経路は、エタノールの代謝経路と類似しているため、本発明は、対象におけるこうした生体異物の影響を改善するのにも有用である。
【００２６】
ＡＬＤＨが広範囲のアルデヒドを酸化するという事実のために、本発明は、それぞれ、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）および４−ヒドロキシ−２−ノネナール（４−ＨＮＥ）、脂質過酸化の最も変異原性および毒性の高い生成物など（例えば、米国特許第９６８７４８１号を参照されたい）（「Ｌｉｐｉｄ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ：Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ａｎｄ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ  ａｎｄ  ４−Ｈｙｄｒｏｘｙ−２−Ｎｏｎｅｎａｌ」Ａｙａｌａ  Ａ．，Ｍｕｎｏｚ  Ｍ．Ｆ．，Ａｒｇｉｉｅｌｌｅｓ  Ｓ．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｌｏｎｇｅｖｉｔｙ，Ｖｏｌｕｍｅ  ２０１４（２０１４年），Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ３６０４３８）、または蒸気を吸っている間タバコの煙そして電子タバコの蒸気の過多の有毒なアルデヒド、飽和アルデヒド（例えば、ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、２，３−ブタンジオン、プロピオンアルデヒド、ブチルアルデヒド、およびバレルアルデヒド）および不飽和アルデヒド（例えば、アクロレイン、フランカルボキシアルデヒド、およびクロトンアルデヒド）（「Ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ａｌｄｅｈｙｄｅｓ  ｉｎ  ｃｉｇａｒｅｔｔｅ  ｓｍｏｋｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｃｕｔｅ  ａｉｒｗａｙ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ」Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｔｏｏｒｎ  Ｍ，Ｓｌｅｂｏｓ  Ｄ−Ｊ，ｄｅ  Ｂｒｕｉｎ  ＨＧ，ら、Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０１３年；１４（１）：４５；「Ｅ−ｃｉｇａｒｅｔｔｅｓ：ａｎ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｕｐｄａｔｅ  Ａ  ｒｅｐｏｒｔ  ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｄ  ｂｙ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  ＥｎｇｌａｎｄＭｃＮｅｉｌｌ  Ａ，Ｂｒｏｓｅ  ＬＳ，Ｃａｌｄｅｒ  Ｒ，Ｈｉｔｃｈｍａｎ  ＳＣ，Ｈａｊｅｋ  Ｐ，ＭｃＲｏｂｂｉｅ  Ｈ，２０１５年，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｅｎｇｌａｎｄ」ＰＨＥ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｇａｔｅｗａｙ  ｎｕｍｂｅｒ：２０１５２６０）など、アセトアルデヒド以外の有毒なアルデヒドの代謝を改善するのにも有用である。重要なことに、アクロレインは、ＡＬＤＨ活性の阻害剤であることが証明されている。このメカニズムは、例えば肺水腫、急性肺傷害、および内皮バリア機能不全に関連しており、ＡＬＤＨ活性の回復は、煙の吸入後に、発生し得るアクロレイン関連肺疾患を予防および治療するための新しいアプローチとなり得る（「Ａｌｄａ−１  Ｐｒｏｔｅｃｔｓ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ａｃｒｏｌｅｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  Ａｃｕｔｅ  Ｌｕｎｇ  Ｉｎｊｕｒｙ  ａｎｄ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｂａｒｒｉｅｒ  Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ」Ｌｕ  Ｑ，Ｍｕｎｄｙ  Ｍ，Ｒｏｕｎｄｓ  Ｓら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｏｆ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｃｅｌｌ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２０１７年８月）。
【００２７】
すでに上で述べたように、β−エスシンは、他のサポニンと同様に、特徴的な苦味を有する。したがって、対象が経口により摂取すると、非常に不快な感覚をもたらす。驚くべきことに、本発明者は、チョークベリー果実抽出物が、β−エスシンの味を効果的に隠す能力を有していることを見出した。
【００２８】
本発明の主題を図面に示した。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）におけるβ−エスシン誘発性アルデヒド脱水素酵素（ＡＬＤＨ）の活性のインビトロでの結果を示すグラフである。
【図２】マウス筋肉細胞（Ｃ２Ｃ１２）におけるβ−エスシン誘発性ＡＬＤＨ活性のインビトロでの結果を示すグラフである。
【図３】β−エスシンおよびキラヤサポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ）サポニンによるインビトロ処置後のマウス筋肉細胞（Ｃ２Ｃ１２）におけるＡＬＤＨ活性を示す図である。
【図４】マウス筋肉細胞（Ｃ２Ｃ１２）におけるβ−エスシン誘発性アルコール脱水素酵素（ＡＤＨ）の活性のインビトロでの結果を示すグラフである。
【図５】対象から得たＰＢＭＣ中のＡＬＤＨ活性に対するβ−エスシンの影響のインビボ結果を示すグラフである。
【図６】血中のエタノール濃度に対するβ−エスシンの影響のインビボ結果を示すグラフである。
【図７】対象の血清の抗酸化能のインビボ結果を示す図である。
【図８−９】アルコール摂取後に本発明の組成物が摂取された場合の、血中のエタノール濃度に対するβ−エスシンの影響のインビボでの結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
本発明の組成物および方法は、アルコール耐性を増大させること／アルコールに対する感受性を低下させることによって、アルコール誘発症状を予防することおよび治療することに有用である。用語「治療すること」は、１つ以上のアルコール誘発症状の進行を遅延させることもしくは逆転させること、またはこれらの症状を軽減させることもしくは改善させることを指す。本明細書で使用される「治療」という用語は、１つ以上のアルコール誘発症状を治療する行為を指す。用語「予防すること」は、１つ以上のアルコール誘発症状の発症を予防すること、または遅延させることを指す。用語「予防」は、１つ以上のアルコール誘発症状を予防すること、予防的に（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅｌｙ）治療すること、または予防的に（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃａｌｌｙ）治療する行為を指す。
【００３１】
本発明の組成物に使用されるβ−エスシンは、セイヨウトチイキ（Ａｅｓｃｕｌｕｓ  ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎｕｍ，Ｌ．）の種子から単離されたトリテルペンサポニンの混合物である。民族薬理学的研究では、膀胱疾患、咳、下痢、月経困難症および耳鳴りなど、多くの多様な疾患を治療するための広範な使用についてのエビデンスを提供しているが、現在の用途は、主に静脈強壮（ｖｅｎｏｔｏｎｉｃ）および静脈保護性（ｖｅｎｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）の適応症に限定されている。β−エスシンの治療的意義、ならびに米国および欧州では、２０１４年に２億２６００万米ドルの市場を占める最も販売されているハーブ抽出物のうちの１つであり続けている薬物の人気にもかかわらず（ＩＭＳ  Ｋｉｌｏｃｈｅｍ）、β−エスシンの正確な作用機序は、依然として十分に解明されていない。
【００３２】
β−エスシンは、他のサポニンとは化学構造および活性が異なる。例えば、炭水化物の長さおよび組成において、最も一般的に調査されているカメリアサポニンとは異なる（すなわち、糖部分の組成が異なる）。さらに、Ｃ２３位のβ−エスシントリテルペン環中にＯＨ基が存在することにより、エステルの形成が可能になる。このＯＨ基は、カメリアサポニンのトリテルペン環には存在していない。さらに、トリテルペン環のＣ２８中のβ−エスシンＯＨ基は、アセチル化が可能であり、同じ位置のカメリアサポニンＯＨは、常に非エステル化形態にある。このため、β−エスシンおよびカメリアサポニンは、両方ともサポニンであるが、化学的には異なるものである。
【００３３】
発明者は、臨床試験において、本発明の組成物は、二日酔いを予防することおよび治療すること、アルコールの摂取に関連する影響、特にアルコールの異化作用に由来する有毒なアルデヒド基質に関連する影響を減少させることに関して、驚くべき影響を有することを観察し、確認した。有利には、この組成物により、アセトアルデヒドの消失が改善されたこと、およびエタノール由来の酸化的損傷が減少したことによるアルコール耐性の増大、および疲労の減少が可能になる。
【００３４】
本発明者は、驚くべきことに、本発明の組成物が、ヒトおよび動物の細胞においてＡＬＤＨ活性を誘発してアルコールの代謝を補助し、それによって関連する影響を減少させることを見出した。したがって、本発明は、アセトアルデヒドから酢酸への変換を上方制御することを助け、それによって、アセトアルデヒドの構築を防ぐか、またはアセトアルデヒドに関連する毒性の影響を打ち消す構築がすでにある場合には、その構築を急速に減少させることを防ぐ。アセトアルデヒドの血中レベルが高い場合には、紅潮、吐き気、頻脈などの有害反応を引き起こす可能性がある。「二日酔い」として現れる軽度の影響としては、頭痛、眠気、口渇、疲労感、発汗、めまい、吐き気、嘔吐、不安、および認知能力または視空間能力の低下の組み合わせのいずれかを挙げることができる。いくつかの影響は、アセトアルデヒドがタンパク質、核酸、および影響を受けた化合物の活性を損なう他の化合物と付加物を形成するという事実から生じると考えられている。
【００３５】
最大用量のβ−エスシンは、２００ｍｇ／ｌであり、対象に最大容量５００ｍｌを提供する。この化学物質は、膵リパーゼの強力な阻害剤であるので、組成物中のβ−エスシンの相対量（用量）は重要である。高用量は、結果として、脂肪便症または少なくとも望ましくない腹痛を引き起こす可能性がある。このため、この化合物の用量が、本来的に望ましくない副作用を引き起こすことなく、アルコール誘発症状を予防するもしくは軽減する、および／または二日酔いを治療するという望ましい技術的効果を達成するのに十分であることが重要である。
【００３６】
本発明によるレベルにおいて、均衡のとれている用量のβ−エスシンは、関連する望ましくない副作用なく、有用な抗アルコール中毒作用をもたらし得る。さらに、β−エスシンとチョークベリー果汁濃縮物またはチョークベリー果実抽出物との組み合わせは、β−エスシンの苦味が非常によく隠されている経口投与用の組成物となる。したがって、この組成物は、心地よい味を有し、悪心および嘔吐などの二日酔いの胃症状を経験している対象に投与できる。
【００３７】
本発明の組成物は、チョークベリー果実抽出物を含む。本明細書で使用される「チョークベリー果実抽出物」という用語は、チョークベリー果実、特にチョークベリー果汁から得られるあらゆる液体配合物を指す。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、チョークベリー果汁濃縮物を含む。果汁濃縮物などのチョークベリー果実抽出物は、当業者が容易にわかる任意の形態で提供されてもよく、例えばそれは乾燥抽出形態であってもよい。このような果汁濃縮物は、容易に入手可能であり、かつその抽出物のブリックス値が典型的には６５〜６８°Ｂｘであることを特徴とする。チョークベリー濃縮物または抽出物の同じ濃縮物をもたらすのに十分な、任意の好適な代替的供給物が想定される。
【００３８】
本発明の組成物中に使用される成分の組み合わせは、抗アルコール中毒作用の増強をもたらし、同時にβ−エスシン味を適切に隠すようにする。通常の条件下（過剰なアルコールを取り入れていない）では、活性酸素種（ＲＯＳ）の産生と抗酸化物質の除去のバランスが細胞内に存在している。エタノールの酸化中にこのバランスが崩れ、ＲＯＳの産生が劇的に増加する。高反応性の酸素含有分子が形成されることで、他の細胞成分を損傷させる可能性があり、このため、こうした形成は、存在しないことが望ましいとされる、さらなる急性の結果生じる。したがって、本発明の組成物は、抗酸化能を高めることによって反応種を減少させるための手段を提供する。行われた研究では、本発明の組成物により、対象の抗酸化能が高まり、それによってエタノール由来の酸化的損傷を減少するか、または防ぐことを示唆している。
【００３９】
本発明の液体組成物に使用される溶媒は、好ましくは水である。しかしながら、例えばエタノールなどの他の好適な溶媒もまた使用され得る。本発明の組成物は、少なくとも約４％の水、少なくとも約２０％の水、少なくとも約４０％の水、少なくとも約５０％の水、少なくとも約７５％の水、および少なくとも約８０％の水を含んでもよい。これらのレベルで含まれている水としては、添加されたすべての水および組み合わせた成分、例えば果汁または果汁濃縮物中に存在するあらゆる水が挙げられる。
【００４０】
いくつかの実施形態では、組成物は、香味料、保存料、ビタミン、甘味料、消泡剤、抗酸化物質、ＣＯ２およびミネラルから選択される１つ以上の添加剤を追加で含んでもよい。ビタミン、抗酸化物質およびミネラルなど、これらの添加剤のいくつかは対象の健康を改善することを目的としている。香味料、甘味料、およびＣＯ２での飽和などの他の添加剤は、本発明の組成物の味を改善することを目的とする。最後に、消泡剤および保存料などの添加剤が、組成物の品質を改善するために添加される。β−エスシンは、界面活性剤であるので、消泡剤は、本発明の組成物が炭酸飲料として配合されるときに特に重要である。
【００４１】
本発明は、上記の組成物を含む食品補助剤にもさらに及ぶ。
【００４２】
２００ｍｇ／ｌ未満の濃度のβ−エスシンを、５０〜２００ｇ／ｌのチョークベリー果汁濃縮物または抽出物と共に含む本発明の経口液体組成物は、医薬品としての使用において初めて開示される。この組成物は、過剰なアルコール摂取の症状の治療および二日酔いの治療に特に有用である。
【００４３】
組成物が医薬品として使用するためのものである場合、より具体的には二日酔いを治療するための治療における場合、この組成物は、上記定義内の各活性物質の濃度を含む単回投与またはその後の投薬量を含み得る。例えば、組成物は、１回の投与量に総容量２７５ｍｌを含んでもよく、これには、１２．５ｍｇのβ−エスシンおよび２５ｍｇのチョークベリー果汁濃縮物を含む。
【００４４】
好ましくは、組成物は、アルコールを摂取する前または摂取中に服用される。しかしながら、摂取後に組成物を取ることから、治療上の利益が生じることがさらに実証されている。
【００４５】
さらなる一態様では、本発明は、本発明の組成物を投与することを含む、個体におけるアルコール中毒を治療する方法、または二日酔い症状の発症を予防する方法を提供する。一実施形態では、投与することは、それを必要とする対象によってアルコールが摂取される前、摂取されるのと同時に、または摂取された後に行われる。本明細書で使用される「対象」という用語は、哺乳動物、特にヒトを指す。
【００４６】
さらに、こうした組成物から特に恩恵を受けると考えられている集団のサブセットがある。ＡＬＤＨ酵素ファミリーの点変異（ＡＬＤＨ２＊２）は、アセトアルデヒドのプロセシング経路において極めて重要であり、東アジア人の少なくとも４０％、世界人口の８％で発生することが知られている。この集団のサブセットは、重度のＡＬＤＨ２欠損を有し、同じＡＬＤＨ酵素の正常なレベルを現わしているそれらの対象よりも、約２０倍多くのアセトアルデヒドがアルコールの摂取後（１〜２単位）に血液中に検出されることがわかっている。このような集団サブグループは、グルタミン酸がヒトＡＬＤＨ２のアミノ酸位置４８７でリジンによって置換されている（突然変異Ｅ４８７Ｋを生じる）遺伝子置換を有する。不活性化突然変異は優性であり、ＡＬＤＨ２＊１／＊２個体における活性は、ＡＬＤＨ２＊１／＊１（正常）個体の酵素活性のわずか１７〜３０％である。この影響は、例えば、Ｄａｖｉｄ  Ｗ．Ｃｒａｂｂらによって記載され（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１９８９年１月；８３（１）：３１４−３１６，「Ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ  ｆｏｒ  ａｌｄｅｈｙｄｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ａｎｄ  ａｌｃｏｈｏｌ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ」）、この中で、ミトコンドリアのアルデヒド脱水素酵素（ＡＬＤＨ２）活性がエタノール代謝中に生成されたアセトアルデヒドを酸化させる役割を担うことが示唆されている。ＡＬＤＨ２活性を有さない個人、例えばアジア人は、アルコール飲料を飲んでいるときに、アルコールフラッシング反応を起こす。この反応は、アセトアルデヒドが蓄積することによって引き起こされる。ホモ四量体酵素のサブユニットの配列を決定した後、不活性酵素の異常は、４８７位において、グルタミン酸塩がリジンに置換されていることがわかった。
【００４７】
したがって、さらなる態様では、本発明は、例えば二日酔い、アルコール中毒、食道癌、もしくは口腔咽頭癌、ＡＬＤＨ２＊２として公知である点突然変異を有する対象における不十分なアルデヒド脱水素酵素（ＡＬＤＨ）の酵素活性の結果生じる状態など、アセトアルデヒド毒性の増加に関連する状態の予防または治療に使用するための組成物を提供する。アセトアルデヒドの処理を行うための重要な酵素経路のうちの１つが損なわれている個人では、酵素ＡＬＤＨ１を介した処理など、別の経路の活性を上方制御することが非常に有用となることが明らかである。
【００４８】
この突然変異が、後者の経路に影響を及ぼすことがなく、このため、アルコールの異化作用の速度を早めることがわかっている組成物が、個体において特に有用であると考えられる。
【００４９】
炎症状態にあるヒト内皮細胞におけるβ−エスシンの保護効果の根底にある新規経路を同定するための細胞生物学ツールと組み合わせた、発見型および標的化グローバルプロテオミクス法など、広範な実験的研究を行う間、この薬物が、驚くことに、細胞内ＡＬＤＨの存在量を有意に増加させることがわかった。観察結果をさらに評価するために、以下のインビトロおよびインビボ研究を行った。
【００５０】
実施例１：β−エスシンで処理したヒト内皮細胞のグローバルプロテオーム解析
内皮は、血管系の基本的な機能的要素であり、最大のヒト内分泌腺／器官として可視可能であり、多数の血管新生促進因子／抗血管新生因子、サイトカインおよび血管緊張を制御する低分子量メディエーターを分泌する。循環と組織との間の界面における内皮の場所では、この上皮層を血流から来る物理的および化学的な合図に特にさらすようにする。こうした刺激に応答して、内皮はその形態を調節し、血管恒常性を維持するように機能する。
【００５１】
肝臓から放出されたアセトアルデヒドは、血漿および赤血球において、移動し、可逆的に結合し、その後肝臓外組織、特に内皮細胞によって取り込まれる。
【００５２】
内皮の細胞代謝は、非常に動的であり、変化する環境条件に迅速に適応できる。内皮は、身体の代謝を間接的に管理し、食習慣と健康への影響との間での重要な中間体である。血管内皮は、全身にわたって広く分布しているために、とりわけその分解に大いに寄与するアセトアルデヒドの肝臓外代謝に関与していることが実証されている（「Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｏｆ  ａｃｅｔａｌｄｅｈｙｄｅ  ｂｙ  ｒａｔ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ａｏｒｔｉｃ  ｒｉｎｇｓ：Ｄｏｅｓ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｔｉｓｓｕｅ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ  ｔｏ  ｉｔｓ  ｅｘｔｒａｈｅｐａｔｉｃ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ？」Ｔａｍｐｉｅｒ  Ｌ．，Ｃａｒｉｚ  Ｓ．，Ｑｕｉｎｔａｎｉｌｌａ  ＭＥ．Ａｌｃｏｈｏｌ，１９９３年５月−６月，１０（３）：２０３−２０６）。重要なことに、アセトアルデヒドは、例えば血管平滑筋に対するその抑制作用および誘発された血管拡張によって強力な血管作用を発揮することが一般に認められている。アルコールフラッシングの原因の根底にあるのは、血中エタノールではなく血中アセトアルデヒドであることもまた十分に文書により報告されている（Ａｌｃｏｈｏｌ  ｉｎｇｅｓｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ  Ｗｏｌｆ  Ｒ．，Ｔｕｚｕｎ  Ｂ．，Ｔｕｚｕｎ  Ｙ．  Ｃｌｉｎｉｃｓ  ｉｎ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，１９９９年７月−８月，１７（４）：３９５−４０３）。したがって、内皮細胞によりアセトアルデヒドの分解が増加することで、そのクリアランス速度に直接影響を与える可能性がある。
【００５３】
このファミリーの新規アルコール代謝メンバー（ＡＬＤＨ１Ｌ１、ＡＬＤＨ１Ｌ２、ＡＬＤＨ１Ａ２、ＡＬＤＨ３Ｂ１、ＡＬＤＨ５Ａ１、ＡＬＤＨ６Ａ１、およびＡＬＤＨ１８Ａ１）（これらは、ゲノムワイドな構成要素研究から得た（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ＳＮＰｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｌｃｏｈｏｌ  ｍｅｔａｂｏｌｉｚｉｎｇ  ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  ａｌｃｏｈｏｌｉｓｍ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ  ｉｎ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ａｍｅｒｉｃａｎｓ  Ｓｈｅｒｖａ  Ｒ．ら、Ａｌｃｏｈｏｌｉｓｍ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００９年５月、３３（５）：８４８−８５７）など、内皮アルデヒド脱水素酵素に対するβ−エスシンの影響を調べるために、発明者はβ−エスシン処理に対するヒト内皮細胞応答の発見型グローバルプロテオーム解析を行った。
【００５４】
広範にわたる研究により、食物成分が内皮機能に大きく影響する可能性があるという考えが明確に裏付けられている。
【００５５】
ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ、性別不明、Ｌｏｎｚａ）を、内皮成長サプリメント混合物（ＥＧＭ−２  ＳｉｎｇｌｅＱｕｏｔ  Ｋｉｔ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ、Ｌｏｎｚａ）を補充したＥＢＭ−２（Ｌｏｎｚａ）中で標準的な細胞培養条件下（３７℃、５％ＣＯ２）において培養した。細胞は、Ａｃｃｕｔａｓｅ（ＰＡＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて採取した。実験は、継代４代目の細胞を用いて実施した。細胞をＤＭＳＯ可溶化３μＭβ−エスシン（Ｎｏｂｉｌｕｓ  Ｅｎｔ）で２４時間処理した。細胞培養培地中のＤＭＳＯ濃度が、０．０１５％を超えることはなく、すなわちそのＨＵＶＥＣの影響は無視できるほどであったので（「Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ  ａｎｄ  ＭＴＴ  ａｓｓａｙｓ  ｏｆ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｐｌａｎｔ  ｅｘｔｒａｃｔｓ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ」Ｂｏｎｄｅｒ  Ｍ，Ｒｏｚａｌｓｋｉ  Ｍ，Ｋｒａｊｅｗｓｋａ  Ｕ，Ｐｏｄｓｅｄｅｋ  Ａ，Ｗａｔａｌａ  Ｃ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１４；６９（１）：９−１６）、ＤＭＳＯ対照は、実験プロトコルに含めなかった。β−エスシンで処理した細胞のｉＴＲＡＱ（Ｉｓｏｂａｒｉｃ  Ｔａｇｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｌａｔｉｖｅ  ａｎｄ  Ａｂｓｏｌｕｔｅ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ）解析およびグローバルプロテオーム解析のためのサンプル調製に関する詳細な説明は、Ｄｏｍａｎｓｋｉらが提示している（「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  β−ｅｓｃｉｎ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」Ｄｏｍａｎｓｋｉ  Ｄ，Ｚｅｇｒｏｃｋａ−Ｓｔｅｎｄｅｌ  Ｏ，Ｐｅｒｚａｎｏｗｓｋａ  Ａ，Ｄｕｔｋｉｅｗｉｃｚ  Ｍ，Ｋｏｗａｌｅｗｓｋａ  Ｍ，Ｇｒａｂｏｗｓｋａ  Ｉ，Ｍａｃｉｅｊｋｏ  Ｄ，Ｆｏｇｔｍａｎ  Ａ，Ｄａｄｌｅｚ  Ｍ，Ｋｏｚｉａｋ  Ｋ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．１１，ｅ０１６４３６５，２０１６年）。簡潔に述べると、発見型プロテオミクス解析は、サンプル中に存在するすべての検出可能なタンパク質の同定および相対的定量化が可能であるｉＴＲＡＱ（Ｉｓｏｂａｒｉｃ  Ｔａｇｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｌａｔｉｖｅ  ａｎｄ  Ａｂｓｏｌｕｔｅ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ）法を用いて行った。タンパク質は、Ｍａｓｃｏｔにより同定され、差次的に発現させたタンパク質をＤｉｆｆｐｒｏｔおよびＭＳｃａｎソフトウェアツールを使用して統計的有意性の推定と共に査定した。ｉＴＲＡＱ実験において、確信を持ってタンパク質を同定するために、誤発見率が１％未満である最小数の２つのペプチドを使用した。０．０５よりも低いｑ値および１．１よりも高い発現率を有するタンパク質は、有意に差次的に発現したと考えられており、これは、相対存在量が変化することが関連している。
【００５６】
ｉＴＲＡＱを用いたβ−エスシン処理内皮細胞の示差的プロテオーム解析により、β−エスシンは、アルコール代謝に関与し、アセトアルデヒド蓄積に関連する代謝障害に対するヒトの感受性に影響を与える少なくとも２つの酵素：アルデヒド脱水素酵素１８ファミリーメンバーＡ１（ＡＬＤＨ１８Ａ１、受託番号Ｐ５４８８６、ｑ値０．００６４４、発現量１．１）およびアルデヒド脱水素酵素１ファミリーメンバーＡ１（ＡＬＤＨ１Ａ１、受託番号Ｐ００３５２、ｑ値０．００７８、発現量１．１）の存在量を有意に増加させたことが明らかになった。β−エスシン処理後の他のＡＬＤＨファミリーメンバーの量の観察された変化、すなわちＡＬＤＨ６Ａ１、ＡＬＤＨ１Ａ２、ＡＬＤＨ９Ａ１、ＡＬＤＨ１Ｂ１、ＡＬＤＨ４Ａ１、ＡＬＤＨ１６Ａ１、ＡＬＤＨ２およびＡＬＤＨ７Ａ１は、この解析において統計的有意性に到達することはなかった。
【００５７】
実施例２：インビトロでのＡＬＤＨ活性
ＡＬＤＨファミリーメンバーのタンパク質発現プロファイル（すなわちタンパク質含有量）における有意な変化を発見したｉＴＲＡＱを用いたβ−エスシン処理内皮細胞の示差的プロテオーム解析後、発明者は観察された現象をさらに調べるために、ＡＬＤＨの機能解析（すなわちその酵素活性）を行った。
【００５８】
ＡＬＤＨ活性は、健康な献血者から得たヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）およびマウス筋肉細胞（Ｃ２Ｃ１２）において評価した。
【００５９】
末梢血単核球（ＰＢＭＣ）は、密度勾配遠心分離に関する標準的なプロトコルの下で健康な男性ドナーから単離されたものである。簡潔に述べると、３０ｍｌの２倍希釈血液を１５ｍｌのＬｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ａｘｉｓ−ｓｈｉｅｌｄ）上に重層し、８００ｘｇで１５分間遠心分離した。ＰＢＭＣの層を回収し、細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（ＢＩＯＭＥＤ−ＬＵＢＬＩＮ、Ｐｏｌａｎｄ）で２回洗浄し、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｓｉｇｍａ）、１０％ウシ胎児血清（ＢＩＯＭＥＤ−ＬＵＢＬＩＮ）、および抗生物質−抗真菌剤溶液（硫酸ストレプトマイシン、ペニシレートナトリウムＧ、アムホテリシンＢ、ＰＡＡ、Ａｕｓｔｒｉａ）を含むＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）に懸濁した。
【００６０】
製造業者の指示に従って、アルデヒド脱水素酵素活性比色アッセイキット（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いてＡＬＤＨの酵素活性を評価した。この試験では、ＡＬＤＨ活性は、存在するＡＬＤＨ活性に比例する比色（４５０ｎｍ）生成物を生成するプローブと反応するＡＬＤＨ生成ＮＡＤＨによってアセトアルデヒドが酸化される共役酵素アッセイによって決定される。
【００６１】
図１および図２に示すように、β−エスシンは、両方の細胞型においてＡＬＤＨ活性の強力な増加を引き起こす。
【００６２】
ＡＬＤＨ活性に対するβ−エスシンの影響の特異性を試験するために、発明者は石鹸樹皮の木キラヤサポナリアから抽出したサポニンによる細胞処理の結果を調査した。図３に提示した結果は、β−エスシン（２０μＭ）およびキラヤサポナリアサポニン（２０μＭ）で一晩（ｏ／ｎ）処理した後のＣ２Ｃ１２マウス筋肉細胞株におけるＡＬＤＨ活性の時系列を示すものであり、キラヤサポナリアサポニンが、ＡＬＤＨ活性を誘導しないことを明確に示している。この解析から、すべてのサポニンがＡＬＤＨ活性に対して同じ影響を及ぼすものではないことを結論付けることができる。したがって、すべてのサポニンがアルコールの異化作用に由来するアルデヒド基質によって引き起こされた状態の治療または予防において有効であるのではない。
【００６３】
ＡＬＤＨ活性の査定と並行して、本発明者は、アルコール脱水素酵素活性アッセイキット（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて、アルコール脱水素酵素（ＡＤＨ）活性に対するβ−エスシンの影響をアッセイした。アッセイにおいて、ＡＤＨ活性は、酵素反応における基質としてイソプロパノールを使用して決定され、結果として、存在している酵素活性に比例する比色（４５０ｎｍ）生成物をもたらす。図４に示されるように、β−エスシンはＡＬＤＨ応答に対応する時系列において、ＡＤＨ活性に影響を及ぼすことはなく、ＡＤＨ活性の増加が４８時間の処置後にのみ検出された。
【００６４】
実施例３  配合物の味のアッセイ
β−エスシンは、特に強い苦味を特徴とする。アッセイ対象の配合物の不快な苦味を遮断することが課題として挙げられており、この課題は、有益な健康効果を得るために克服する必要があった。本発明の目的の１つは、β−エスシンの苦味が隠される組成物を提供することであった。
【００６５】
特に良好な味の隠し特性は、１回投与量２７５ｍｌ中に最大３０ｍｇのβ−エスシンを提供することができるチョークベリー果汁濃縮物により得られた（β−エスシンの用量が多い場合には、脂肪便症および腹痛のリスクが高くなるために試験は行わなかった）。この研究において、５、７．５、１０、１２．５、１５、１７．５、２０、２２．５、２５、２７．５および３０ｍｇのβ−エスシンおよび２５ｇのチョークベリー果汁濃縮物の入った水を含む総量２７５ｍｌの液体経口組成物を１０名の対象に投与した。対象の大多数は、２７５ｍｌの単回投与量中、味が快適である最大投与量が１７ｍｇであること示した。次いで、β−エスシン含有量の増加と共に、味の知覚は減少した。チョークベリー（アロニアメラノカルパ（Ａｒｏｎｉａ  ｍｅｌａｎｏｃａｒｐｄ））含有物は、果物の中でも抗酸化活性が最も高いもののうちの１つであるため、かなりの利点をもたらす。酸化ストレス関連疾患の予防および治療におけるその役割は、十分に文書により報告されている。チョークベリーの抗酸化効果は、ラジカル捕捉をはるかに超えて広がり、活性酸素および窒素種の形成の抑制、プロオキシダント酵素の抑制、抗酸化酵素の修復、および抗酸化化合物および酵素のレベルを調節するための細胞内シグナル伝達が挙げられることが明らかである（「Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｂｌａｃｋ  Ｃｈｏｋｅｂｅｒｒｙ（Ａｒｏｎｉａ  ｍｅｌａｎｏｃａｒｐａ）Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  Ｅｖｉｄｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｐｏｓｓｉｂｌｅ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ａｃｔｉｏｎ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ」Ｄｅｎｅｖ，Ｐ．Ｎ．，Ｋｒａｔｃｈａｎｏｖ，Ｃ．Ｇ．，Ｃｉｚ，Ｍ．，Ｌｏｊｅｋ，Ａ．，Ｋｒａｔｃｈａｎｏｖａ，Ｍ．Ｇ．Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｆｏｏｄ  Ｓａｆｅｔｙ，２０１２年８月；１１（５）：４７１−４８９）。
【００６６】
他の果汁は、チョークベリー果汁について上述の試験と類似の様式で実施された試験によって示されるように、β−エスシン味を隠す効果は低かった。例えば、リンゴ果汁の場合、対象によって許容可能であるβ−エスシンの最大用量は少なく（ほぼ４ｍｇ）、Ｓｔｅｖｉｏｓｅなどの甘味料を添加しても改善されなかった。
【００６７】
実施例４：インビボ試験
１．試験番号１
５０歳の健常な男性志願者は、０日目、１日目および２日目のそれぞれに４０ｇのエタノールが摂取される３日間の研究を始める前に１２時間絶食した。
【００６８】
０日目に、組成物の試験は行わず、その活性の基本対照とした。
【００６９】
１日目には、アルコールを摂取する１時間前に、対象に１２．５ｍｇのβ−エスシンおよび２５ｇのチョークベリー果汁濃縮物を含む飲料２００ｍｌを与えて摂取させた。
【００７０】
２日目には、アルコールを摂取する１時間前に、対象に１２．５ｍｇのβ−エスシンおよび２５ｇのチョークベリー果汁濃縮物を含む飲料２００ｍｌを与えて摂取させた。
【００７１】
アルコール（エタノール）摂取の１時間および２時間後に血液サンプルを採取し、その血液の生化学的分析を行った。図５、図６および図７に示した結果では、β−エスシンおよびチョークベリー含有組成物の結果生じるインビボの影響、すなわち、それぞれＰＢＭＣにおけるＡＬＤＨ活性、血中のエタノール濃度に対する影響、および対象の血清の抗酸化能を示している。
【００７２】
末梢血単核球（ＰＢＭＣ）は、インビトロ試験の実施例において上記のように対象から単離した。
【００７３】
ＰＢＭＣ中のＡＬＤＨの酵素活性は、インビトロ研究について上述したアルデヒド脱水素酵素活性比色アッセイキット（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて査定した。血清の抗酸化能は、Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて、製造業者の指示に従って厳密に測定した。抗酸化アッセイは、ミオグロビンおよび過酸化水素からのフェリルミオグロビンラジカルの形成に基づき、ＡＢＴＳ（２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−スルホン酸））を酸化させて、４０５ｎｍで測定できる可溶性緑色色素のラジカルカチオンＡＢＴＳ＋を生成する。抗酸化物質の存在下において、ラジカルカチオンは、抗酸化物質の活性にある程度依存して抑制され、色強度は比例して減少する。水溶性ビタミンＥ類似体であるトロロックスは、標準または対照抗酸化物質として機能する。
【００７４】
グラフ（図５）に示すように、ＡＬＤＨ酵素活性レベルは、試験飲料の摂取後、０日目から１日目および２日目までに劇的に増加する。
【００７５】
このグラフは、ＡＬＤＨ活性の変化を表したものであり、０日目に得られた値の割合（パーセンテージ）として表されている。ＡＬＤＨ活性の増加は、１日目にはすでに１６０％に達し、２日目にはさらに高くなり、４３７％の値となった。同時に、血清抗酸化能の上昇が観察される。重要なことに、試験が行われた飲料で達成された血清中の抗酸化物質の可能性は、対象によって摂取されたアルコールによって減少することはない。
【００７６】
２．試験番号２
５０歳の健康な男性の志願者は、０日目、１日目および２日目のそれぞれに、４０ｇのエタノールを摂取する３日間の研究を始める前に１２時間絶食した。
【００７７】
０日目に、組成物の試験は行わず、その活性の基本対照とした。
【００７８】
１日目には、アルコール摂取後１５分に、対象に１２．５ｍｇのβ−エスシンおよび２５ｇのチョークベリー果汁濃縮物を含む飲料２００ｍｌを与えて摂取させた。
【００７９】
２日目には、アルコール摂取後１５分に、対象に１２．５ｍｇのβ−エスシンおよび２５ｇのチョークベリー果汁濃縮物を含む飲料２００ｍｌを与えて摂取させた。
【００８０】
エタノール濃度を測定するために、アルコール（エタノール）を摂取した１時間後および２時間後に血液サンプルを得た。
【００８１】
血中のエタノール濃度は、試薬Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ（登録商標）Ｆｌｅｘ（登録商標）エチルアルコール定量測定を用いて、アナライザーＤｉｍｅｎｓｉｏｎ（Ｓｉｅｍｅｎｓ）で測定した。ＥＴＯＨ法は、Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ（登録商標）臨床化学システムにおけるヒト血清、血漿、および尿中のエチルアルコール（エタノール）を定量的に測定するためのインビトロ診断試験である。エチルアルコール検査結果は、エチルアルコール中毒（ｉｎｔｏｘｉｃａｔｉｏｎ）および中毒（ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ）の診断および監視に使用されることがある。
【００８２】
図８および図９に示した結果では、β−エスシンおよびチョークベリー含有組成物の結果生じるインビボの影響、すなわち、血中エタノール濃度に対する影響を示している。
【００８３】
血液からのエタノールクリアランスを表す図８のグラフは、０日目と１日目の間の消失曲線の有意な変化を示している。このことは、β−エスシンおよびチョークベリー含有飲料が、アルコールの後に摂取されたときにも、このプロセスの動態に影響を及ぼすことを示している。
【００８４】
２日目には、図９に示すように、抗アルコール中毒作用がさらに明白であり、連続した日に本発明の組成物を摂取した場合の複合的な影響を反映している。２日目に明らかに観察されたエタノール低下作用は、おそらく、４８時間後にのみβ−エスシンにより誘発される、ＡＤＨ活性の増加に関連している。
【００８５】
理論的基礎は、本発明者によって行われたインビトロおよびヒトでの研究と共に、対象、特にヒトに投与されたときに本発明の組成物が有用な技術的効果を提供するという確かな基礎を実証している。本組成物は、定期的に、例えば１日１回使用して、持続的効果をもたらすことができ、したがって医薬品として有用であり、特にアルコール誘発性アセトアルデヒド毒性および二日酔い症状の予防および／または治療に有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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