(57)【要約】  本発明は、例えばアルツハイマー病及び軽度の認知障害のアルツハイマー病への進行を治療するためのＢＡＣＥ１の選択的阻害剤としてのＮ−［３−［２−アミノ−５−（１，１−ジフルオロエチル）−４，４a，５，７−テトラヒドロフロ［３，４−Dｄ］［１，３］オキサジン−７a−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボキサミド、すなわち式Ｉの化合物又はその薬学的に許容可能な塩、特にその（４aＲ，５Ｓ，７aＳ）異性体を提供する。2019514987.tif 000040
2019514987.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式の化合物、
2019514987.tif 000037
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
４ａ位の水素が、７ａ位の置換フェニルに対してシス配置である、請求項１に記載の化合物または塩。
2019514987.tif 000038
【請求項３】
５位の１，１−ジフルオロエチルが、４ａ位の水素及び７ａ位の置換フェニルに対してシス配置である、請求項１または請求項２に記載の化合物または塩。
2019514987.tif 000039
【請求項４】
前記化合物が、Ｎ−［３−［（４ａＲ，５Ｓ，７ａＳ）−２−アミノ−５−（１，１−ジフルオロエチル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボキサミドである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物またはその塩。
【請求項５】
Ｎ−［３−［（４ａＲ，５Ｓ，７ａＳ）−２−アミノ−５−（１，１−ジフルオロエチル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボキサミド  ４−メチルベンゼンスルホネートである、請求項４に記載の塩。
【請求項６】
結晶性である、請求項５に記載の塩。
【請求項７】
Ｘ線回折スペクトルにおいて、９．８°、２８．０°、及び１４．７°からなる群より選択されるピークのうちの１つ以上と組み合わされた、４．９°の回折角２θにおける実質的なピークを特徴とし、前記回析角の許容誤差が０．２度である、請求項５または請求項６に記載の塩。
【請求項８】
アルツハイマー病の治療を必要としている患者においてそれを治療する方法であって、前記患者に有効量の請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、方法。
【請求項９】
軽度の認知障害のアルツハイマー病への進行の治療を必要としている患者においてそれを治療する方法であって、前記患者に有効量の請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、方法。
【請求項１０】
療法における使用のための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１１】
アルツハイマー病の治療における使用のための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１２】
軽度の認知障害のアルツハイマー病への進行の治療における使用のための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１３】
１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と共に、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む、薬学的組成物。
【請求項１４】
１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と共に、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を混合することを含む、薬学的組成物の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規のテトラヒドロフロオキサジン化合物、それらの選択的ＢＡＣＥ１阻害剤としての使用、この化合物を含む薬学的組成物、この化合物を使用して生理障害を治療する方法、ならびにこの化合物の合成に有用な中間体及びプロセスに関する。
【０００２】
本発明は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の神経毒性かつ高度に凝集性のペプチドセグメントであるアミロイドβ（Ａｂｅｔａ）ペプチドが関与する、アルツハイマー病ならびに他の疾患及び障害の治療の技術分野のものである。アルツハイマー病は、世界中で何百万人もの患者を冒す破壊的な神経変性障害である。疾患を停止、遅延、または回復させるのではなく、患者に一時的な対症効果のみを提供する、市場で現在承認されている薬剤を考慮すると、アルツハイマー病の治療において満たされていない重大な必要性がある。
【０００３】
アルツハイマー病は、脳内でのＡｂｅｔａの生成、凝集、及び沈着を特徴とする。β−セクレターゼ（β部位アミロイド前駆体タンパク質切断酵素、ＢＡＣＥ）の完全または部分的な阻害は、マウスモデルにおいてプラーク関連及びプラーク依存性病理に対して顕著な効果を有することが示されており、Ａｂｅｔａペプチドレベルのわずかな低減でさえ、プラーク断面積及びシナプス欠損の長期間の顕著な低減をもたらす可能性があり、したがって特にアルツハイマー病の治療において、顕著な治療効果を提供することを示唆する。加えて、ＢＡＣＥ１及びＢＡＣＥ２と称されるＢＡＣＥの２つの相同体が同定されており、ＢＡＣＥ１がアルツハイマー病の発症に最も臨床的に重要であると考えられる。ＢＡＣＥ１がニューロン内で主に発現する一方で、ＢＡＣＥ２は、主に末梢で発現することが示されている（Ｄ．Ｏｅｈｌｒｉｃｈ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，２４，２０３３−２０４５（２０１４）を参照）。加えて、ＢＡＣＥ２は、それが色素細胞特異的メラニン細胞タンパク質のプロセシングにおいて役割を果たすと特定されているため、色素沈着に重要であり得る（Ｌ．Ｒｏｃｈｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１１０（２６），１０６５８−１０６６３（２０１３）を参照）。中枢神経系（ＣＮＳ）透過を伴うＢＡＣＥ阻害剤、特にＢＡＣＥ２よりもＢＡＣＥ１に対して選択的である阻害剤が、アルツハイマー病などのＡｂｅｔａペプチド媒介性障害のための治療を提供するために所望される。
【０００４】
米国特許第９，０７９，９１４号は、アルツハイマー型認知症などのＡβタンパク質によって引き起こされる特定の神経変性疾患の治療に有用なＢＡＣＥ１阻害効果を有する特定の縮合アミノジヒドロオキサジン誘導体を開示している。加えて、米国特許第８，９４０，７３４号は、ＢＡＣＥ１阻害活性を有し、アルツハイマー型認知症などのＡｂｅｔａペプチドによって引き起こされる神経変性疾患のための有用な治療薬としてさらに開示される、縮合アミノジヒドロチアジン誘導体を開示する。
【０００５】
本発明は、ＢＡＣＥ１の阻害剤である、ある特定の新規の化合物を提供する。加えて、本発明は、ＢＡＣＥ２よりもＢＡＣＥ１に対する選択的な阻害剤である、ある特定の新規の化合物を提供する。さらに、本発明は、ＣＮＳに透過する、ある特定の新規の化合物を提供する。本発明はまた、例えば、ＢＡＣＥ２よりもＢＡＣＥ１に対する選択的な阻害を通じて、改善された副作用プロファイルの可能性を有する、ある特定の新規の化合物を提供する。
【０００６】
したがって、本発明は、式Ｉの化合物、
2019514987.tif 000003
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【０００７】
加えて、本発明は、式Ｉａの化合物、
2019514987.tif 000004
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【０００８】
本発明はまた、アルツハイマー病の治療を必要としている患者においてそれを治療する方法であって、患者に有効量の式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、方法を提供する。
【０００９】
本発明はまた、軽度の認知障害のアルツハイマー病への進行の治療を必要としている患者においてそれを治療する方法であって、患者に有効量の式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、方法をさらに提供する。
【００１０】
本発明はまた、患者におけるＢＡＣＥを阻害する方法であって、そのような治療を必要としている患者に、有効量の式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、方法を提供する。本発明はまた、アミロイド前駆体タンパク質のＢＡＣＥ媒介性切断を阻害する方法であって、そのような治療を必要としている患者に、有効量の式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、方法を提供する。本発明はさらに、Ａｂｅｔａペプチドの産生を阻害する方法であって、そのような治療を必要としている患者に、有効量の式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、方法を提供する。
【００１１】
さらに、本発明は、療法における使用、特に、アルツハイマー病の治療における使用、または軽度認知障害のアルツハイマー病への進行の予防における使用のための、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。さらに、本発明は、アルツハイマー病の治療のための医薬の製造のための、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。
【００１２】
本発明はさらに、１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と共に、式ＩもしくはＩａ化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、薬学的組成物を提供する。本発明はさらに、１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と共に、式ＩもしくはＩａ化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を混合することを含む、薬学的組成物を調製するプロセスを提供する。本発明はまた、式Ｉ及びＩａの化合物の合成のための新規の中間体及びプロセスも包含する。
【００１３】
軽度認知障害は、経時的に軽度認知障害からアルツハイマー認知症までを呈する患者の臨床所見及び進行に基づき、アルツハイマー病と関連した認知症の潜在的な前駆期として定義されている。（Ｍｏｒｒｉｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．，５８，３９７−４０５（２００１）、Ｐｅｔｅｒｓｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．，５６，３０３−３０８（１９９９））。用語「軽度認知障害のアルツハイマー病への進行を予防すること」は、患者における軽度認知障害のアルツハイマー病への進行を抑制すること、遅延させること、停止させること、または回復させることを含む。
【００１４】
本明細書で使用されるとき、用語「治療」または「治療すること」は、既存の症状または障害の進行または重症度を抑制すること、遅延させること、停止させること、または回復させることを含む。
【００１５】
本明細書で使用されるとき、用語「患者」は、ヒトを指す。
【００１６】
用語「Ａｂｅｔａペプチドの産生の阻害」は、患者におけるＡｂｅｔａペプチドのインビボレベルの減少を意味するとみなされる。
【００１７】
本明細書で使用されるとき、用語「有効量」は、単回または複数回用量の患者への投与の際に、診断または治療下にある患者に所望の効果を提供する、本発明の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の量または用量を指す。
【００１８】
有効量は、当業者のような担当診断医により、既知の技法の使用により、かつ類似の状況下で得られた結果を観察することによって容易に決定され得る。患者のための有効量を決定する際には、患者の種、そのサイズ、年齢、及び全体的な健康状態、関与する特定の疾患または障害、疾患または障害の程度または関与または重症度、個々の患者の応答、投与される特定の化合物、投与の様式、投与される製剤の生物学的利用率特性、選択された投与レジメン、付随する薬物の使用、ならびにその他の関連する状況を含むが、これらに限定されない、多数の要因が担当診断医によって考慮される。
【００１９】
本発明の化合物は、概して、幅広い用量範囲にわたって有効である。例えば、１日当たりの用量は、通常、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内に属する。ある場合には、前述の範囲の下限よりも低い用量レベルが十分以上である場合があり、他の場合には、許容される副作用を伴って、さらに多い用量が用いられてもよく、したがって、前述の用量範囲は、決して本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【００２０】
本発明の化合物は、好ましくは、経口及び経皮経路を含む、化合物を生体利用可能にする任意の経路によって投与される薬学的組成物として製剤化される。より好ましくは、そのような組成物は経口投与用である。そのような薬学的組成物及びそれらを調製するためのプロセスは、当該技術分野において周知である。（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌ．Ｖ．Ａｌｌｅｎ，Ｅｄｉｔｏｒ，２２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，２０１２を参照）。
【００２１】
式Ｉ及びＩａの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、本発明の治療方法において特に有用であるが、ある特定の基、置換基、及び配置が好ましい。以下の段落は、そのような好ましい基、置換基、及び配置を記載する。これらの選好が、本発明の治療方法と新規の化合物との両方に適用可能であることが理解されるであろう。
【００２２】
本発明のさらなる化合物は、
2019514987.tif 000005
及びその薬学的に許容される塩を含む。
【００２３】
縮合二環式環がシス配置である、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩が好ましい。例えば、以下のスキームＡに示すように、位置４ａの水素は、位置７ａの置換フェニルに対してシス配置であることを当業者は理解するであろう。加えて、位置４ａ、５、及び７ａの好ましい相対配置はまたスキームＡにも示され、そこでは、位置５の１，１−ジフルオロエチル置換基が位置４ａの水素及び位置７ａの置換フェニルに対してシス配置である。
スキームＡ
2019514987.tif 000006
【００２４】
本発明が全ての個々のエナンチオマー及びジアステレオマー、ならびにラセミ化合物を含む上記化合物のエナンチオマーの混合物を企図するが、以下に記載される絶対配置を有する化合物が好ましい。
Ｎ−［３−［（４ａＲ，５Ｓ，７ａＳ）−２−アミノ−５−（１，１−ジフルオロエチル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボキサミド及びその薬学的に許容可能な塩、ならびに
Ｎ−［３−［（４ａＲ，５Ｓ，７ａＳ）−２−アミノ−５−（１，１−ジフルオロエチル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボキサミド４−メチルベンゼンスルホネート
【００２５】
Ｎ−［３−［（４ａＲ，５Ｓ，７ａＳ）−２−アミノ−５−（１，１−ジフルオロエチル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボキサミド４−メチルベンゼンスルホネートの結晶形であって、Ｘ線回折スペクトルにおいて、９．８°、２８．０°、及び１４．７°からなる群より選択されるピークのうちの１つ以上と組み合わされた、４．９°の回折角２θにおける実質的なピークを特徴とし、回析角の許容誤差が０．２度であるものがさらに好ましい。
【００２６】
当業者は、本発明の化合物が、以下のスキームＢに示すように、互変異性型で存在し得ることを理解するであろう。本願において本発明の化合物の特定の互変異性体のうちの１つへの任意の参照が示されるとき、互変異性型とこれらの全ての混合物との両方を包含することが理解される。
スキームＢ
2019514987.tif 000007
【００２７】
さらに、以下の調製法に記載される特定の中間体は、１つ以上の窒素保護基を含み得る。保護基は、当業者によって理解されるように、特定の反応条件及び実施される特定の変換に依存して変動し得ることを理解されたい。保護及び脱保護の条件は、当業者に周知であり、文献に記載されている（例えば、“Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｂｙ  Ｐｅｔｅｒ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．２００７を参照）。
【００２８】
個々の異性体、エナンチオマー、及びジアステレオマーは、本発明の化合物の合成における任意の都合のよい時点において、選択的結晶化技術またはキラルクロマトグラフィー等の方法を用いて当業者によって分離または分解され得る（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ"，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９８１、及びＥ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ  ａｎｄ  Ｓ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ，”  Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４を参照）。
【００２９】
本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩、例えば、塩酸塩は、当該技術分野において周知の標準的な条件下での、ジエチルエーテル等の好適な溶媒中での、例えば、本発明の化合物の適切な遊離塩基と、塩酸、ｐ−トルエンスルホン酸、またはマロン酸等の適切な薬学的に許容可能な酸との反応によって形成することができる。さらに、そのような塩の形成は、窒素保護基の脱保護時に同時に起こり得る。そのような塩の形成は、当該技術分野で周知であり、また理解されている。例えば、Ｇｏｕｌｄ，Ｐ．Ｌ．，“Ｓａｌｔ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｂａｓｉｃ  ｄｒｕｇｓ，”  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，３３：  ２０１−２１７（１９８６）、Ｂａｓｔｉｎ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．“Ｓａｌｔ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｎｅｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｎｔｉｔｉｅｓ，”  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，４：  ４２７−４３５（２０００）、及びＢｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，”  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６６：  １−１９，（１９７７）を参照。
【００３０】
特定の略語は以下のように定義される：「ＡＰＰ」はアミロイド前駆体タンパク質を指し、「ＡＵＣ」は曲線下の領域を指し、「ＢＳＡ」はウシ血清アルブミンを指し、「ＣＤＩ」は１，１'−カルボニルジイミダゾールを指し、「ｃＤＮＡ」は相補的デオキシリボ核酸を指し、「ＣＳＦ」は脳脊髄液を指し、「ＤＣＣ」は１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドを指し、「Ｄｅｏｘｏ−Ｆｌｕｏｒ（登録商標）」は、ビス（２−メトキシエチル）アミノ硫黄トリフルオリドを指し、「ＤＩＣ」は１，３−ジイソプロピルカルボジイミドを指し、「ＤＭＡＰ」は、４−ジメチルアミノピリジンを指し、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し、「ＥＢＳＳ」はアール平衡塩類溶液を指し、「ＥＤＣＩ」は、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリドを指し、「ＥＬＩＳＡ」は、酵素結合免疫吸着アッセイを指し、「Ｆ１２」はハムＦ１２培地を指し、「ＦＢＳ」はウシ胎仔血清を指し、「Ｆｃ」は結晶化可能なフラグメントを指し、「ＦＬＵＯＬＥＡＤ（商標）」は、４−ｔｅｒｔ−ブチル−２，６−ジメチルフェニル硫黄トリフルオリドを指し、「ＦＲＥＴ」は蛍光共鳴エネルギー移動を指し、「ＨＡＴＵ」は、（ジメチルアミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イルオキシ）メタンイミニウムヘキサフルオロホスフェートを指し、「ＨＢＴＵ」は、（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）（ジメチルアミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルメタンイミニウムヘキサフルオロホスフェートを指し、「ＨＥＫ」はヒト胚性腎臓を指し、「ＨＦ−ピリジン」は、フッ化水素ピリジンまたはオラ（Ｏｌａｈ）試薬またはポリ（ピリジンフッ化物）を指し、「ＨＯＡｔ」は、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾールを指す。「ＨＯＢＴ」は１−ヒドロキシルベンゾトリアゾール水和物を指し、「ＩＣ５０」は、その薬剤について可能な最大阻害応答の５０％を生成する薬剤の濃度を指し、「ＩｇＧ１」は、免疫グロブリン様ドメインＦｃ−γ受容体を指し、「ＭＥＭ」は最小必須培地を指し、「ＰＢＳ」はリン酸緩衝生理食塩水を指し、「ｐ．ｏ．」は経口投与を指し、「ＰｙＢＯＰ」は（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）を指し、「ＰｙＢｒＯＰ」は、ブロモ−トリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェートを指し、「ＲＦＵ」は、相対蛍光単位を指し、「ＲＴ−ＰＣＲ」は、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応を指し、「ＳＤＳ−ＰＡＧＥ」は、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動を指し、「ＳＦＣ」は、超臨界クロマトグラフィーを指し、「Ｔ３Ｐ（登録商標）」は、プロピルホスホン酸無水物を指し、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指し、「ＴＥＭＰＯ」は、（２，２，６，６−テトラメチル−ピペリジン−１−イル）オキシルを指し、「ＴＭＥＭ」は、膜貫通タンパク質を指し、「トリス」は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを指し、「トリチル」は、式「（Ｐｈ）３Ｃ−の基を指し、Ｐｈはフェニル基を指し、「ＸｔａｌＦｌｕｏｒ−Ｅ（登録商標）またはＤＡＳＴジフルオロスルフィニウム塩」は、（ジエチルアミノ）ジフルオロスルホニウムテトラフルオロボレートまたはＮ，Ｎ−ジエチル−Ｓ，Ｓ−ジフルオロスルフィルイミニウムテトラフルオロボレートを指し、「ＸｔａｌＦｌｕｏｒ−Ｍ（登録商標）またはモルフォＤＡＳＴジフルオロスルフィニウム塩」とは、ジフルオロ（モルホリノ）スルホニウムテトラフルオロボレートまたはジフルオロ−４−モルホリニルスルホニウムテトラフルオロボレートを指す。
【００３１】
本発明の化合物またはその塩は、当業者に既知の様々な手順によって調製されてもよく、そのうちのいくつかが、以下のスキーム、調製法、及び実施例に示される。当業者は、記載される経路の各々についての特定の合成ステップが、本発明の化合物またはその塩を調製するために、異なる様式で、または他のスキームからのステップと併せて、組み合わせることができることを認識する。以下のスキームにおける各々のステップの産物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、ろ過、磨砕、及び結晶化を含む、当該技術分野で周知の従来の方法によって回収することできる。以下のスキームにおいて、全ての置換基は、別途指示のない限り、以前に定義された通りである。試薬及び出発物質は、当業者にとって容易に入手可能である。本発明の範囲を限定することなく、以下のスキーム、調製物、及び実施例は、本発明をさらに説明するために提供される。
スキーム１
2019514987.tif 000008
【００３２】
スキーム１のステップＡにおいて、ヨウ化トリメチルスルホニウムを、ＴＨＦなどの溶媒中、約−５０℃の温度で、ｎ−ブチルリチウムのような有機塩基で処理する。トリチル基のような好適な保護基で保護されている、保護されたオキシメチルオキシランは、次いで、−１０℃で塩基性溶液に添加し、約２時間攪拌してスキーム１のステップＡの保護された産物をもたらす。「ＰＧ」は、アミノ基または酸素基のために開発された保護基、例えばカルバメート、アミド、またはエステルなどである。そのような保護基は、当該技術分野において周知であり、理解されている。代替的に、（２Ｓ）−ブタ−２−エン−１，２−ジオールなどのジオールを、ジクロロメタンなどの溶媒中で、トリフェニルメチルクロリドとＤＭＡＰ及びトリエチルアミンなどの有機塩基とを使用して、１つのヒドロキシにおいて選択的に保護して、スキーム１のステップＡの保護された産物をもたらす。ステップＡの保護された産物を、ほぼ室温において、テトラ−Ｎ−ブチルアンモニウムサルフェートまたは他の第四級アンモニウム塩相転移触媒を用いて、トルエンなどの溶媒及び水酸化ナトリウムなどの水性無機塩基中で、ｔｅｒｔ−ブトキシブロモアセテートなどのα−ハロエステルと反応させて、スキーム１のステップＢの化合物をもたらす。そのようなアルキル化は当該技術分野において周知である。代替的に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはＴＨＦのような溶媒と油中のそのような６０％水素化ナトリウムなどの塩基、及び０〜１００℃の温度範囲を使用して、ステップＢの保護された産物をもたらすことができる。ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアセテートは、２ステップの操作によりオキシムに変換される。ヘキサン中のそのようなイソブチルヒドリドなどの還元剤を、約−７０℃の温度で滴下し、その後に約−６０℃の温度で塩酸などの水性酸を滴下する。集成を有機抽出によって達成し、中間物質をもたらす。この物質をジクロロメタンのような有機溶媒に溶解し、酢酸ナトリウム、続いてヒドロキシルアミンヒドロクロリドで処理して、ステップＣのオキシム産物を得る。スキーム１のステップＣのオキシム産物は、対応するオキシムは、次亜塩素酸ナトリウムの水溶液またはＮ−クロロコハク酸イミドなどの代替酸化剤を使用し、約１０〜１５℃の温度でまたは加熱しながら、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、トルエン、またはキシレンなどの溶媒中におけるようないくつかの方法による３＋２環化において、ステップＤの二環式４，５−ジヒドロイソオキサゾール産物に変換され得る。２−フルオロ−５−ブロモフェニル基は、有機金属試薬を生成することによって、ジヒドロイソオキサゾールに添加することができる。有機金属試薬は、ＴＨＦなどの溶媒中で、ｎ−ブチルリチウムまたはイソプロピルマグネシウムクロリド塩化リチウム錯体などの試薬とのハロゲン−金属交換を使用し、約−７８℃〜１５℃の温度範囲での滴下で、４−ブロモ−１−フルオロ−２−ヨード−ベンゼンから生成することができる。次いで、三フッ化ホウ素ジエチルエーテラートなどのルイス酸を加えて、スキーム１のステップＥの産物を得る。
スキーム２
2019514987.tif 000009
【００３３】
代替的に、スキーム２において、スキーム１のステップＡの保護された産物を、約５℃の温度で、トルエンなどの溶媒中、４−（２−クロロアセチル）モルホリノ及びテトラブチルアンモニウムハイドロジェンスルフェートなどの塩基によって処理して、スキーム２のステップＡの産物をもたらすことができる。次いで、モルホリノ基は、スキーム２のステップＢにおいて脱離基としての機能を果たすことができる。例えば、約５℃の温度において、スキーム２のステップＡの産物は、イソプロピルマグネシウムクロリド塩化リチウム錯体及び４−ブロモ−１−フルオロ−２−ヨードベンゼンからその場で調製することができる適切なグリニャール試薬によって処理することができ、または適切なグリニャール試薬が入手可能である場合、試薬をスキーム２のステップＡの産物へと直接添加することができ、スキーム２のステップＢの産物をもたらすことができる。酢酸カルボニルは、約５０℃に加熱したヒドロキシルアミンヒドロクロリド及び酢酸ナトリウムによってオキシムに変換し、スキーム２のステップＣの産物をもたらすことができる。次いで、スキーム２のステップＣのオキシム産物を、トルエンのような溶媒中でヒドロキノンを使用し、加熱還流することにより、スキーム２、ステップＤの産物（スキーム１のステップＥと同じ産物）に変換することができる。スキーム２のステップＤのアミン産物は、約０〜５℃の温度において、例えばジクロロメタンのような溶媒中、ＤＭＡＰ及びピリジンのような有機塩基を用いて、塩化アセチルを用いてアセチルで保護し、スキーム２のステップＥの産物をもたらすことができる。次いで、スキーム２のステップＥの産物を、以下に説明するように、スキーム３のステップＡの産物に変換することができる。
スキーム３
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【００３４】
スキーム２のステップＥの産物を、メタノール及びジクロロメタンなどの溶媒中でｐ−トルエンスルホン酸一水和物またはギ酸を添加するなどの酸性条件を使用してヒドロキシにおいて選択的に脱保護し、スキーム３のステップＡの産物をもたらすことができる。別の経路において、スキーム２のステップＤの化合物のイソオキサゾール窒素をアセチル基で保護することができ、ヒドロキシメチルの保護基を２ステップの操作により除去することができる。例えば、スキーム２のステップＤの化合物を、ジクロロメタンなどの溶媒中、ＤＭＡＰ及びピリジンなどの有機塩基で処理し、塩化アセチルを添加する。温度を約１０℃未満に維持し、次いでほぼ室温において攪拌する。例えば、反応物を水で希釈し、ジクロロメタンなどの溶媒で抽出する。有機抽出物を１Ｎ塩酸のような水性酸で洗浄し、水性抽出物を再びジクロロメタンのような溶媒で抽出し、続いて水性洗浄する。有機溶媒を部分的に除去し、ジクロロメタン及びメタノールなどの溶媒中で、ギ酸またはｐ−トルエンスルホン酸一水和物のような酸を添加して、ヒドロキシメチルを脱保護することができる。混合物は、ヒドロキシの脱保護が完了してステップＡのスキーム３の化合物をもたらすまで、室温で、または約４０℃の温度まで加熱して、攪拌することができる。スキーム３のステップＡのヒドロキシメチル産物は、ＤＭＳＯなどの溶媒中で、０〜２２℃の温度で、２−ヨードキシ安息香酸（ＩＢＸ）などの酸化剤を用いて、または、約５〜２５℃の温度で攪拌しながらのアセトニトリルもしくはアセトニトリル及び水などの溶媒中での（ジアセトキシヨード）ベンゼンの少量ずつもしくは一度で全ての添加で、スキーム３のステップＢのカルボン酸産物に酸化し、スキーム３のステップＢの産物をもたらすことができる。好ましい場合には、ＴＥＭＰＯを酸化の触媒として使用することもできる。Ｗｅｉｎｒｅｂアミドは、スキーム３のステップＣにおいて、−２０℃へと冷却し、約１時間攪拌しながら、ジクロロメタンなどの溶媒の少量ずつまたは一度での添加で、及びＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミンヒドロクロリドの少量ずつまたは一度に全ての添加で、ＣＤＩなどのカップリング剤を使用して調製できる。反応を促進するために、トリエチルアミンなどの有機塩基も使用することができる。ＣＤＩ及びＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミンのさらなる添加を、完全な反応が観察されて、スキーム３のステップＣのＷｅｉｎｒｅｂアミド産物をもたらすまで追加することができる。使用することができる他のカップリング剤は、ＤＣＣ、ＤＩＣ、もしくはＥＤＣＩなどのカルボジイミド、またはＨＡＴＵ、ＨＢＴＵ、ＰｙＢＯＰ、及びＰｙＢｒＯＰなどの非求核性アニオンの他のウロニウムまたはホスホニウム塩を含む。スキーム３のステップＤのケトンは、ＴＨＦなどの溶媒中で、グリニャール試薬または有機リチウム試薬などの有機金属試薬を使用して、Ｗｅｉｎｒｅｂアミドから形成することができる。適切なグリニャール試薬は約−７８℃〜０℃の温度において、エーテルまたは２−メチルテトラヒドロフランのような溶媒中の溶液として、Ｗｅｉｎｒｅｂアミドに添加し、スキーム３のステップＤのケトンをもたらすことができる。ステップＤのケトンは、約−７８℃〜室温において、ジクロロメタンなどの溶媒中でＸｔａｌＦｌｕｏｒ−Ｍ（登録商標）にケトンを添加し、続いてトリエチルアミントリヒドロフルオリドを滴下することによって、ジフルオロメチル基に変換し、スキーム３のステップＥの化合物をもたらすことができる。代替的に、ＸｔａｌＦｌｕｏｒ−Ｍ（登録商標）などのフッ素化試薬は、約−２０℃〜１０℃の温度で、スキーム３のステップＤのケトン産物に少しずつ添加し、続いてトリエチルアミントリヒドロフルオリドを滴下して、スキーム３のステップＥの産物をもたらすことができる。約２時間攪拌しながらジクロロメタンなどの溶媒中でＤｅｏｘｏ−Ｆｌｕｏｒ（登録商標）及びトリフルオリドジエチルエーテラートを使用し、続いてスキーム３のステップＤのケトン及びトリエチルアミントリヒドロフルオリドを添加する別の代替的な手順は、スキーム３のステップＥの産物をもたらす。当該技術分野で周知である、使用することのできる他のフッ素化剤は、ＨＦ−ピリジンのような添加剤を用いる、トリエチルアミントリヒドロフルオリドまたはＦＬＵＯＬＥＡＤ（商標）のような添加剤を伴う、ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（「ＤＡＳＴ」とも呼ばれる）、及びＸｔａｌＦｌｕｏｒ−Ｅ（登録商標）である。アセチルテトラヒドロイソキザゾールは、塩酸を使用し、約１００℃に加熱するなどの当該技術分野において周知の産生条件下で脱保護し、スキーム３のステップＦの産物をもたらすことができる。二環式テトラヒドロイソオキサゾールを、酢酸中の亜鉛で処理して、スキーム１のステップＦに記載される手順と類似の方法で、スキーム３のステップＧの開環産物を形成することができる。スキーム３のステップＨのオキサジン産物は、エタノールなどの溶媒中で臭化シアンを使用して、約８５℃まで加熱して調製し、ステップＨのアミノオキサジン環産物を形成することができる。フェニルの５−ブロモは、水酸化アンモニウムと共に、ヨウ化銅（Ｉ）、Ｌ−ヒドロキシプロリン、炭酸カリウムのような無機塩基、及び窒素ガスを用いてアミノ基に置き換え、スキーム３のステップＩの産物をもたらすことができる。
スキーム４
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【００３５】
スキーム４のステップＡにおいて、スキーム３のステップＩのアニリン産物を、当該技術分野において周知のカップリング条件を利用してヘテロ芳香族カルボン酸とカップリングさせることができる。当業者であれば、カルボン酸とアミンとの反応によって生じるアミド形成のための多数の方法及び試薬が存在することを理解するであろう。例えば、カップリング試薬及びジイソプロピルエチルアミンまたはトリエチルアミンなどのアミン塩基の存在下での適切なアニリンと適切な酸との反応により、スキーム４のステップＡの式Ｉの化合物をもたらす。カップリング試薬は、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＥＤＣＩなどのカルボジイミド、ならびにＨＯＢｔ及びＨＯＡｔなどの芳香族オキシムを含む。加えて、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＰｙＢＯＰ、及びＰｙＢｒｏＰなどの非求核性アニオンのウロニウムまたはホスホニウム塩またはＴ３Ｐ（登録商標）などの環状無水リン酸を、より伝統的なカップリング試薬の代わりに使用できる。ＤＭＡＰなどの添加剤を使用して反応を促進することができる。代替的に、アニリンアミンは、トリエチルアミンまたはピリジンなどの塩基の存在下で適切な芳香族酸塩化物を使用してアシル化されて、式Ｉａの化合物をもたらすことができる。
スキーム５
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【００３６】
代替的に、スキーム５のステップＡにおいて、スキーム３のステップＧのアミン産物を保護し、オキサジン環を２ステップワンポット反応で形成することができる。アミンを、約５℃〜室温で、ジクロロメタンまたはＴＨＦなどの溶媒中でベンゾイルイソチオシアネートと反応させ、ステップＡの中間体化合物をもたらすことができる。オキサジン環は、粗混合物を約１０℃に冷却し、ＤＭＳＯを添加し、続いて、クロロトリメチルシランをゆっくりと加えることによって形成することができる。水酸化ナトリウム（５０％）及びブリーチを使用して、反応混合物からガスを除去することができる。臭化物は、１，４−ジオキサンなどの溶媒中で、５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド、４Åモレキュラーシーブなどの乾燥剤、炭酸カリウムなどの無機塩基、及びヨウ化ナトリウムを用いて所望のアミドに変換することができる。約３０分間、溶液を通して窒素を通気することができる。ヨウ化銅（Ｉ）及びそのようなトランスラセミ−Ｎ１，Ｎ２−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン等のジアミンまたは関連するリガンドを添加し、混合物を、反応が完了するまで、または７日まで、約１００〜１１０℃に加熱して、スキーム５のステップＢのアミド産物をもたらす。オキサジンアミンは、当業者に既知の条件を用いてピリジンなどの有機塩基、エタノールなどの溶媒、及びＴＨＦなどの溶媒中のＯ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩で脱保護して、式Ｉａの化合物を得ることができる。
【００３７】
下記の調製物及び実施例は、本発明をさらに例示する。
【００３８】
調製物１
（２Ｓ）−１−トリチルオキシブタ−３−エン−２−オール
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スキーム１のステップＡ：ＴＨＦ（１２６４ｍＬ）中のヨウ化トリメチルスルホニウム（１９３．５ｇ、９４８．２ｍｍｏｌ）を周囲温度で７５分間攪拌する。−５０℃に混合物を冷却し、３０分間にわたって、カニューレを介してｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中２．５モル／Ｌ、３７９ｍＬ、９４８．２ｍｍｏｌ）を添加する。反応を−３０℃まで徐々に温め、６０分間攪拌する。温度を−１０℃未満に維持しつつ、（２Ｓ）−２−トリチルオキシメチルオキシラン（１００ｇ、３１６．１ｍｍｏｌ）を少しずつ添加する。添加が完了した後、反応混合物を室温まで温め、２時間攪拌する。反応物を飽和塩化アンモニウムに注ぎ、相を分離し、酢酸エチルで水相を抽出する。有機層を混合し、硫酸マグネシウム上で乾燥させる。ろ過し、そして減圧下で濃縮して残渣を得る。メチルｔ−ブチルエーテル：ヘキサン（１０〜１５％勾配）で溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標記化合物をもたらす（５６．２２ｇ、５４％）。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ３５３（Ｍ＋Ｎａ）。
【００３９】
代替的な調製物１
（２Ｓ）−１−トリチルオキシブタ−３−エン−２−オール
スキーム２のステップＡの出発物質：ジクロロメタン（８５０ｍＬ）中の（２Ｓ）−ブタ−２−エン−１，２−ジオールの溶液（ＪＡＣＳ，１９９９，１２１，８６４９のように調製）（６４．５ｇ、６３１ｍｍｏｌ）に、トリフェニルメチルクロリド（２８７ｇ、９４７．１ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（７．７１ｇ、６３．１ｍｍｏｌ）、及びトリエチルアミン（１４０ｇ、１３８３．５ｍｍｏｌ）を添加する。２４℃で２４時間攪拌する。１Ｎクエン酸水溶液（４２５ｍＬ）を添加する。層を分離し、有機抽出物を減圧下で濃縮乾固する。メタノール（９００ｍＬ）を添加し、１時間５℃に冷却する。ろ過により固形物を回収し５℃のメタノール（５０ｍＬ）で洗浄する。固形物を捨て、母液を減圧下で濃縮乾固する。トルエン（８００ｍＬ）を添加し、濃縮して２６８ｇの質量にし、トルエンの４８重量％溶液で表題化合物を得る（１２９ｇ、６７％）。
【００４０】
調製物２
１−モルホリノ−２−［（１Ｓ）−１−（トリチルオキシメチル）アリルオキシ］エタノン
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スキーム２のステップＡ：テトラブチルアンモニウム水素サルフェート（８３．２ｇ、２４５．０ｍｍｏｌ）及び４−（２−クロロアセチル）モルホリン（６３８．５０ｇ、３９０２．７ｍｍｏｌ）を、０〜５℃の間のトルエン（５８００ｍＬ）中の１−トリチルオキシブタ−３−エン−２−オール（８３２．４ｇ、２５１９ｍｍｏｌ）に添加する。水（１０４１ｍＬ）中の水酸化ナトリウム（１００８．０ｇ、２５．２０２ｍｏｌ）を添加する。０〜５℃の間で１９時間攪拌する。水（２５００ｍＬ）及びトルエン（２５００ｍＬ）を添加する。層を分離し、有機抽出物を水（２×３５００ｍＬ）で洗浄する。有機抽出物を減圧下で濃縮乾固する。残渣にトルエン（２５００ｍＬ）を添加し、次いでｎ−ヘプタン（７５００ｍＬ）をゆっくりと添加する。１６時間攪拌する。ろ過により残留する固形物を回収し、ｎ−ヘプタン（１２００ｍＬ）で洗浄する。固形物を真空下で乾燥させて、表題化合物を得る（１０７５．７ｇ、９８％）。
【００４１】
調製物３
１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−［（１Ｓ）−１−（トリチルオキシメチル）アリルオキシ］エタノン
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スキーム２のステップＢ：ＴＨＦ中のイソプロピルマグネシウムクロリド塩化リチウム錯体（３０７９ｍＬ、２０００ｍｍｏｌ）の１．３Ｍ溶液を、トルエン（２５００ｍＬ）中の４−ブロモ−１−フルオロ−２−ヨードベンゼン（６７３．２ｇ、２２３７．５ｍｍｏｌ）の溶液に、反応温度を５℃未満に維持する速度で添加する。１時間攪拌する。生じるグリニャール溶液（５１５０ｍＬ）をトルエン（５０００ｍＬ）中の１−モルホリノ−２−［（１Ｓ）−１−（トリチルオキシメチル）アリルオキシ］エタノン（５００ｇ、１０９３ｍｍｏｌ）の溶液に、反応温度を５℃未満に維持する速度で添加する。温度を５℃未満に維持しつつ、３時間攪拌する。さらに調製したグリニャール溶液（４２９ｍＬ）を添加し、１時間攪拌する。１Ｎクエン酸水溶液（５０００ｍｌ）を、温度を５℃未満に維持する速度で添加する。層を分離し、有機抽出物を水（５０００ｍＬ）で洗浄する。溶液を減圧下で濃縮乾固する。残渣にメタノール（２０００ｍＬ）を添加し、濃縮して、残渣として表題化合物をもたらす（７９３ｇ、７３．４％有効性、８３％）。
【００４２】
調製物４
１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−［（１Ｓ）−１−（トリチルオキシメチル）アリルオキシ］エタノンオキシム
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スキーム２のステップＣ：ヒドロキシルアミンヒドロクロリド（９８．３ｇ）及びメタノール（３８００ｍＬ）中の酢酸ナトリウム（１７４ｇ）を、１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−［（１Ｓ）−１−（トリチルオキシメチル）アリルオキシ］エタノン（４５０ｇ、７０７ｍｍｏｌ）に添加する。溶液を５０℃で２時間加熱する。２４℃に冷却し、濃縮する。残留物に水（１０００ｍＬ）及びトルエン（１５００ｍＬ）を添加する。層を分離し、トルエン（５００ｍＬ）で水相を抽出する。有機抽出物を混合し、水（２×４００ｍｌ）で洗浄する。溶液を減圧下で濃縮して、残渣として標記化合物をもたらす（５６７ｇ、６１．４％有効性、８８％）。
【００４３】
調製物５
ｔｅｒｔ−ブチル２−［（１Ｓ）−１−（トリチルオキシメチル）アリルオキシ］アセテート
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スキーム１のステップＢ：（２Ｓ）−１−トリチルオキシブタ−３−エン−２−オール（７４．６７ｇ、２２６．０ｍｍｏｌ）を、トルエン（３７６ｍＬ）中のテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムサルフェート（１３．２６ｇ、２２．６ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。水（１１９ｍＬ）中の水酸化ナトリウム（５０質量％）、続いてｔｅｒｔ−ブチル−２−ブロモアセテート（１１０．２０ｇ、５６５．０ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を周囲温度で１８時間攪拌する。水に注ぎ、相を分離し、酢酸エチルで水相を抽出する。有機層を混合し、硫酸マグネシウム上で乾燥させる。混合物をろ過し、減圧下で濃縮して標題化合物をもたらす（７７．８６ｇ、７７％）。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ４６７（Ｍ＋Ｎａ）。
【００４４】
調製物６
（１Ｅ）−２−［（１Ｓ）−１−（トリチルオキシメチル）アリルオキシ］アセトアルデヒドオキシム
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スキーム１のステップＣ：ジクロロメタン（５８２．２ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−［（１Ｓ）−１−（トリチルオキシメチル）アリルオキシ］アセテート（７７．６６ｇ、１７４．７ｍｍｏｌ）の溶液を−７８℃に冷却する。ヘキサン中のジイソブチルアルミニウムヒドリドの溶液（１モル／Ｌ、１７４．７ｍＬ）を３５分間かけて滴下し、温度を−７０℃未満に維持する。−７８℃で５時間攪拌する。温度を−６０℃に維持しつつ、反応混合物に水中の塩酸（２モル／Ｌ、１９２．１ｍｌ）を滴下する。反応を室温まで徐々に温め、６０分間攪拌する。有機抽出物を分離し、飽和重炭酸ナトリウムで洗浄する。硫酸マグネシウム上で溶液を乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して残渣をもたらす。残渣をジクロロメタンに溶解する。酢酸ナトリウム（２８．６６ｇ、３４９．３ｍｍｏｌ）、続いてヒドロキシルアミンヒドロクロリド（１８．２１ｇ、２６２．０ｍｍｏｌ）を添加する。室温で１８時間攪拌する。水に注ぎ、相を分離し、ジクロロメタンで水相を抽出する。有機層を混合し、硫酸マグネシウム上で乾燥させる。混合物をろ過し、減圧下で濃縮して標題化合物をもたらす（６８．３８ｇ、１０１％）。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ３８６（Ｍ−Ｈ）。
【００４５】
調製物７
（３ａＲ，４Ｓ）−４−（トリチルオキシメチル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロフロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール
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スキーム１のステップＤ：ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（７１７ｍＬ）中の（１Ｅ）−２−［（１Ｓ）−１−（トリチルオキシメチル）アリルオキシ］アセトアルデヒドオキシム（５５．５７ｇ、１４３．４ｍｍｏｌ）の溶液を５℃に冷却する。温度を１０℃未満に維持しつつ、次亜塩素酸ナトリウム（水中５％、５９１ｍＬ、４３０．２ｍｍｏｌ）を滴下する。１０℃で３０分間攪拌する。反応物を１５℃まで温める。１５℃で１８時間攪拌する。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和重炭酸ナトリウムで洗浄する。相を分離し、有機相を５％亜硫酸水素ナトリウム溶液及びブラインで洗浄する。硫酸マグネシウム上で溶液を乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して残渣をもたらす。５０％メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル／ジクロロメタン：ヘキサン（２０〜２７％勾配）で溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、表題化合物をもたらす（３５．８４ｇ、６５％）。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ４０８（Ｍ＋Ｎａ）。
【００４６】
調製物８
（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（トリチルオキシメチル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロフロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール
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スキーム１のステップＥ：ＴＨＦ（１４４．５ｍＬ）及びトルエン（１４４５ｍＬ）中の４−ブロモ−１−フルオロ−２−ヨード−ベンゼン（８６．９４ｇ、２８８．９ｍｍｏｌ）の溶液を−７８℃に冷却する。温度を−７０℃未満に維持しつつ、ｎ−ブチルリチウム（水中２．５Ｍ、１２０ｍＬ、２８８．９ｍｍｏｌ）を滴下する。−７８℃で３０分間攪拌する。温度を−７０℃未満に維持しつつ、三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート（３６．５ｍＬ、２８８．９ｍｍｏｌ）を滴下する。−７８℃で３０分間攪拌する。−６５℃未満の温度を維持しつつ、ＴＨＦ（４８２ｍＬ）中の（３ａＲ，４Ｓ）−４−（トリチルオキシメチル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロフロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール（５５．６９ｇ、１４４．５ｍｍｏｌ）の溶液を反応物に３０分の期間にわたって添加する。−７８℃で９０分間攪拌する。−６０℃未満の温度を維持しつつ、飽和塩化アンモニウムを急速に添加する。ブラインに注ぎ、酢酸エチルで水相を抽出する。有機抽出物を混合し、硫酸マグネシウム上で乾燥させる。ろ過し、そして減圧下で濃縮して残渣を得る。１０〜１５％ジエチルエーテル：ヘキサン（０〜７０％勾配）で溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標記化合物をもたらす（３６．５２ｇ、４５％）。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）５６０／５６２［Ｍ＋Ｈ］。
【００４７】
代替的な調製物８
スキーム２のステップＤ：トルエン（４０００ｍＬ）中の１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−［（１Ｓ）−１−（トリチルオキシメチル）アリルオキシ］エタノンオキシム（４５８ｇ、５０２ｍｍｏｌ）及びヒドロキノン（５６．３ｇ  ５１１ｍｍｏｌ）の溶液を窒素下で２７時間加熱還流する。溶液を２４℃に冷却し、炭酸ナトリウム水溶液（８００ｍｌ）を添加する。層を分離し、トルエン（３００ｍＬ）で水相を抽出する。有機抽出物を混合し、水（２×５００ｍｌ）で洗浄する。溶液を減圧下で濃縮して残渣をもたらす。イソプロピルアルコール（１５００ｍＬ）を添加して、加熱還流する。２４℃に冷却し、ろ過により固形物を回収する。固形物を真空下で乾燥させて、表題化合物を得る（２１２ｇ、７５％）。
【００４８】
調製物９
１−［（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（トリチルオキシメチル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロフロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−１−イル］エタノン
2019514987.tif 000021
スキーム２のステップＥ：５℃未満の内部温度を維持しつつ、窒素下で、ジクロロメタン（７２０ｍＬ）中の（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（トリチルオキシメチル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロフロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール（２３５．３ｇ、４２０ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（５．１３ｇ、４２．０ｍｍｏｌ）、及びピリジン（６６．４５ｇ、８４０．１ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化アセチル（３５．５６ｇ、５０３．９ｍｍｏｌ）を添加する。１時間攪拌し、次いで水（３００ｍＬ）及び１Ｍ硫酸（３００ｍＬ）を添加する。混合物を１０分間攪拌し、層を分離させる。有機抽出物を回収し、飽和炭酸ナトリウム（５００ｍＬ）及び水（５００ｍＬ）で洗浄する。溶液を硫酸マグネシウム上で乾燥させる。ろ過し、減圧下で濃縮して、灰色の固形物として表題化合物をもたらす（２３５ｇ、９３％）。
【００４９】
調製物１０
１−［（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−１Ｈ，３Ｈ−フロ［３，４−ｃ］［１，２］オキサゾール−１−イル］エタノン
2019514987.tif 000022
スキーム３のステップＡ：ジャケット反応器中において、１０℃未満の内部温度を維持しつつ、窒素下で、ジクロロメタン（１０Ｌ）中の（３ａＲ，４Ｓ，６ａＲ）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（トリチルオキシメチル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロフロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール（１９９６ｇ、３３８４ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（５６．０ｇ、４５８ｍｍｏｌ）、ピリジン（５００ｍＬ、６１８０ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化アセチル（２９０ｍＬ、４０７５ｍｍｏｌ）を添加する。添加の完了（１時間）後、２０℃に温め、一晩攪拌する。反応が完了していない場合は、塩化アセチル、ＤＭＡＰ、ピリジン、及びジクロロメタンを反応の完了が観察されるまで添加する。反応混合物を０℃に冷却し、水（５Ｌ）をゆっくりと加え、１０℃で３０分間反応混合物を攪拌し、層を分離させた。有機抽出物を回収し、水性物をジクロロメタン（１Ｌ）で洗浄する。混合した有機抽出物を１Ｎ塩酸水溶液（２×４Ｌ）で洗浄し、水性物をジクロロメタン（２×１Ｌ）で抽出する。混合した有機抽出物を水（４Ｌ）で洗浄し、溶媒を減圧下で除去して、約５Ｌの総容量をもたらす。９０％ギ酸（１８００ｍＬ）を添加し、混合物を周囲温度で３日間放置する。２時間、４０℃に温め、次いで減圧下で溶媒を除去する。残渣をメタノール（４Ｌ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（３Ｌ）をゆっくりと添加する。固体炭酸ナトリウム（３７５ｇ）を添加してｐＨを８〜９に調整する。４５℃で１時間攪拌し、次いで周囲温度まで冷却する。ろ過により固形物を除去し、メタノール（４×５００ｍＬ）で洗浄し、次いで２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で処理し、周囲温度で１時間放置する。ろ過により固形物を除去し、メタノール（２×１００ｍＬ）で洗浄する。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を酢酸エチル（５Ｌ）と水（２Ｌ）との間で分離する。水性物を酢酸エチル（２Ｌ）で抽出し、混合した有機抽出物をブライン（２×１Ｌ）で洗浄する。溶媒を減圧下で除去し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２．５Ｌ）を添加し、蒸発乾固する。メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（４Ｌ）を添加し、６５℃で１時間攪拌し、周囲温度に冷却し、ろ過によって固形物を回収し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３×５００ｍＬ）で洗浄する。真空下でベージュ色の固形物になるまで乾燥させる。トルエン（７．５Ｌ）中に完全に溶解するまで１１０℃でこの固形物を加熱し、１時間かけて１８℃に冷却し、この温度で１時間攪拌する。４０℃に加熱し、沈殿物が形成されるとき、もう１度１８℃に冷却する。４５分間攪拌し、次いでろ過により固形物を回収し、トルエン（２×５００ｍＬ）で洗浄する。固形物を真空下で乾燥させて、表題化合物を得る（４４３．１ｇ、３６％、ＬＣＭＳによる純度９５％）。ろ過液を真空下で蒸発させて残渣をもたらす。残渣を、イソヘキサン中の２０％〜１００％酢酸エチルで溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製する。産物含有画分をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２Ｌ）中で６０℃で３０分間スラリー化し、周囲温度に冷却し、ろ過によって固形物を回収し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２×２００ｍＬ）で洗浄する。固��物を真空下で乾燥させて、ベージュ色の結晶性固形物として表題化合物をもたらす（３０４ｇ、２４％、ＬＣＭＳによる純度８８％）。ろ過液を真空下で蒸発させて残渣を得る。イソヘキサン中２０％〜１００％の酢酸エチルで溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって残渣を精製して、表題化合物をもたらす（５７．８ｇ、５％、ＬＣＭＳによる純度８８％）。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）３６０．０／３６２．０［Ｍ＋Ｈ］。
【００５０】
代替的な調製物１０
スキーム３のステップＡ：１−［（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（トリチルオキシメチル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロフロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−１−イル］エタノン（６９ｇ、１１４．５ｍｍｏｌ）を、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（２．２ｇ、１１．４５ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（２８０ｍＬ）、及びメタノール（７００ｍＬ）の１５℃の溶液に添加する。１８時間攪拌し、次いで減圧下で溶媒を除去する。残渣をジクロロメタン（３５０ｍＬ）で希釈し、１Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（１４０ｍＬ）及び水（１４０ｍＬ）を添加する。層を分離し、減圧下で有機層を蒸発させる。残渣にトルエン（３５０ｍＬ）を添加し、１時間加熱還流する。１０℃／時間の速度で１０〜１５℃に冷却する。ろ過により固形物を回収し、トルエン（７０ｍＬ）で洗浄する。固形物を真空下で乾燥させて、灰色の固形物として表題化合物を得る（３０ｇ、６５％）。
【００５１】
調製物１１
（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−１−アセチル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロフロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−４−カルボン酸
2019514987.tif 000023
スキーム３のステップＢ：２０Ｌのジャケット反応器中において、アセトニトリル（４．５Ｌ）中の１−［（４Ｓ，６ａＳ）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（ヒドロキシメチル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロフロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−１−イル］エタノン（８０４．９ｇ、２１７７ｍｍｏｌ）、ＴＥＭＰＯ（４０．０ｇ、２５１ｍｍｏｌ）の懸濁液に水（２Ｌ）を添加し、５℃の内部温度に冷却する。（ジアセトキシヨード）ベンゼン（１６９３ｇ、４９９３．４３ｍｍｏｌ）を３０分間かけて少しずつ添加する。反応器の冷却を使用して発熱を制御し、ＬＣＭＳが反応の完了を示すまで２０℃で保持する。２５℃未満の内部温度を維持しつつ、周囲温度で水（３００ｍＬ）中の亜硫酸水素ナトリウムの懸濁液（７０グラム、６７２．６８ｍｍｏｌ）をゆっくり添加する。３０分間攪拌し、その後５℃に冷却する。水（２Ｌ）を添加し、次いで１０℃未満の内部温度を維持しつつ、１時間かけて４７重量％水酸化ナトリウム水溶液（７８０ｍｌ）をゆっくりと添加する。酢酸エチル（２Ｌ）及びイソヘキサン（５Ｌ）を添加し、激しく攪拌し、層を分離する。二相性有機層を水（１Ｌ）で抽出し、混合した水性物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２．５Ｌ）で洗浄する。水性抽出物を５℃に冷却し、内部温度を約５℃に維持しつつ、３０分間かけて３７％塩酸（１．４Ｌ）をゆっくりと添加する。酢酸エチル（５Ｌ）を添加し、層を分離し、ブライン（３×１Ｌ）で有機物を洗浄する。混合した水性抽出物を酢酸エチル（２．５Ｌ）で抽出し、混合した有機物をブライン（１Ｌ）で洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過する。有機物をヘプタン（２．５Ｌ）で希釈し、減圧下で蒸発乾固する。メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１．５Ｌ）及びヘプタン（１．５Ｌ）を添加し、蒸発乾固させる。ヘプタン（２．５Ｌ）を添加し、蒸発乾固する。ヘプタン（５００ｍＬ）及びメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（５００ｍＬ）を添加し、４０℃で３０分間攪拌し、次いで沈殿物をろ過により回収し、ヘプタン／メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１：１、１Ｌ）、次いでメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３×３００ｍＬ）で洗浄し、風乾して、ベージュ色の結晶性固形物として表題化合物をもたらす（７７９ｇ、９１％）。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）３７４．０／３７６．０［Ｍ＋Ｈ］、［α］２０Ｄ−１９．０°（ｃ  １．００４、クロロホルム）。
【００５２】
代替的な調製物１１
スキーム３のステップＢ：１−［（４Ｓ、６ａＳ）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（ヒドロキシメチル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロフロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−１−イル］エタノン（３０ｇ、７３．３ｍｍｏｌ）、ＴＥＭＰＯ（１．１４ｇ、７．３０ｍｍｏｌ）、及び（ジアセトキシヨード）ベンゼン（５１．９ｇ、１６１ｍｍｏｌ）に水（１５０ｍＬ）及びアセトニトリル（１５０ｍＬ）を添加する。１５℃に冷却し、２時間攪拌する。周囲温度で、水（１５０ｍＬ）中のチオ硫酸ナトリウム（２１ｇ）及び炭酸カリウム（２２ｇ）をゆっくりと添加する。１時間攪拌し、次いでメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１５０ｍＬ）を添加する。層を分離し、濃硫酸で水層のｐＨを２〜３に調整する。酢酸エチル（１５０ｍＬ）を添加し、層を分離する。減圧下で有機層を蒸発乾固させる。ｎ−ヘプタン（９０ｍＬ）を添加し、１時間加熱還流する。１５℃に冷却し、次いで、ろ過によって沈殿物を回収し、ｎ−ヘプタン（９０ｍＬ）で洗浄する。真空下で乾燥させて、白色の固形物として表題化合物をもたらす（２７ｇ、９８％）。
【００５３】
調製物１２
（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−１−アセチル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルテトラヒドロ−１Ｈ，３Ｈ−フロ［３，４−ｃ］［１，２］オキサゾール−４−カルボキサミド
2019514987.tif 000024
スキーム３のステップＣ：１０Ｌのジャケット付き反応器中において、ジクロロメタン（７．０Ｌ）中の（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−１−アセチル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロフロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−４−カルボン酸（７７１ｇ、２０１９ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素下で０℃に冷却し、ＣＤＩ（４００ｇ、２４２１ｍｍｏｌ）を４０分間かけて少しずつ添加する。反応器のジャケットを−２０℃に冷却し、１時間攪拌し、次いで約３０分間かけてＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミンヒドロクロリド（２６０．０ｇ、２６１２ｍｍｏｌ）を少しずつ追加する。−２０℃で１時間攪拌し、０℃で２時間攪拌し、１０℃で７時間攪拌する。ＣＤＩ（１７５ｇ、１０５８ｍｍｏｌ）を添加し、１０℃で一晩攪拌する。１０℃でＣＤＩ（１８０ｇ、１０８８ｍｍｏｌ）をさらに添加し、１時間攪拌し、次いで、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミンヒドロクロリド（１４０ｇ、１４０７ｍｍｏｌ）を添加し、１０℃で攪拌し続ける。反応が不完全である場合、完全な反応が観察されるまで、ＣＤＩ、続いてＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミンヒドロクロリドのさらなる充填を実施することができる。５℃に反応混合物を冷却し、１Ｎ塩酸水溶液（５Ｌ）、次いで２Ｎ塩酸水溶液（５Ｌ）で洗浄する。混合した水溶液をジクロロメタン（１Ｌ）で抽出し、有機抽出物を混合し、水（２．５Ｌ）、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２．５Ｌ）、及び水（２．５Ｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で蒸発させて残渣をもたらす。メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３Ｌ）を添加し、減圧下で蒸発させる。さらに、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２Ｌ）を添加し、５０℃で１時間攪拌し、２５℃に冷却し、３０分間攪拌する。生じる固形物をろ過して回収し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２×５００ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥させ、白色固形物として標記化合物をもたらす（７６０ｇ、８８％）。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）４１７．０／４１９．０［Ｍ＋Ｈ］。
【００５４】
代替的な調製物１２
スキーム３のステップＣ：窒素下で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１３５ｍＬ）中の（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−１−アセチル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロフロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−４−カルボン酸（２７ｇ、７０．７ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、ＣＤＩ（１４．９ｇ、９１．９ｍｍｏｌ）を添加する。１時間攪拌し、次にＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミンヒドロキシクロリド（９．０ｇ、９２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１４．３ｇ、１４１ｍｍｏｌ）を添加する。１５℃で１６時間攪拌する。反応混合物を０℃に冷却し、０．５Ｍ硫酸水溶液（６７５ｍｌ）を添加する。１時間攪拌する。生じる固形物をろ過により回収する。固形物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（９０ｍＬ）中で１時間スラリー化する。ろ過によって固形物を回収し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３０ｍＬ）で洗浄する。真空下で乾燥させて、固形物として表題化合物をもたらす（２３ｇ、７８％）。
【００５５】
調製物１３
１−［（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−１−アセチル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロフロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール−４−イル］エタノン
2019514987.tif 000025
スキーム３のステップＤ：２０Ｌのジャケット反応器中において、ＴＨＦ（１０Ｌ）中の（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−１−アセチル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルテトラヒドロ−１Ｈ，３Ｈ−フロ［３，４−ｃ］［１，２］オキサゾール−４−カルボキサミド（６５４．０ｇ、１５３６ｍｍｏｌ）の溶液を−６０℃に冷却し、内部温度を−４０℃未満に維持しつつ、２−メチルテトラヒドロフラン（６６０ｍＬ、２１１０ｍｍｏｌ）中のメチルマグネシウムブロミドの３．２Ｍ溶液を滴下する。反応混合物を−４０℃で３０分間攪拌し、次いで−５０℃に冷却し、内部温度を−３８℃に維持しつつ、ＴＨＦ（２Ｌ）中の１Ｎ塩酸水溶液（２Ｌ）の溶液を添加する。１０℃に温度を上昇させ、酢酸エチル（５Ｌ）及び水（１Ｌ）を添加し、攪拌し、内部温度を５℃に到達させ、層を分離する。水層を酢酸エチル（１Ｌ）で抽出し、有機抽出物を混合する。有機抽出物を水（２Ｌ）で洗浄し、水層を酢酸エチル（１Ｌ）で抽出する。有機抽出物を混合し、ブライン（３×２Ｌ）で洗浄し、次いで硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で蒸発させて残渣を得る。シクロヘキサン（２．５Ｌ）を添加し、６０℃で１時間攪拌し、次いで２０℃で３０分間攪拌し、ろ過によって固形物を回収し、シクロヘキサン（５００ｍＬ）で洗浄する。固形物を真空下で乾燥させて、白色固形物として表題化合物を得る（５６５ｇ、９９％）。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）３７２．０／３７４．０［Ｍ＋Ｈ］、［α］２０Ｄ−５８．０°（ｃ  １．０００、クロロホルム）。
【００５６】
代替的な調製物１３
スキーム３のステップＤ：ＴＨＦ（６０ｍＬ）中の（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−１−アセチル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルテトラヒドロ−１Ｈ，３Ｈ−フロ［３，４−Ｃ］［１，２］オキサゾール−４−カルボキサミド（４．０ｇ、９．５９ｍｍｏｌ）の溶液を−５℃に冷却し、内部温度を−５〜０℃の間に維持しつつ、２−メチルテトラヒドロフラン（５．０ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）中のメチルマグネシウムブロミドの３．０Ｍ溶液を滴下する。反応混合物を−５〜０℃で６０分間攪拌し、次いで飽和塩化アンモニウムの溶液（２０ｍＬ）を添加する。メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（４０ｍｌ）を添加し、内部温度を５℃に到達させ、層を分離する。有機層を減圧下で濃縮乾固する。ｎ−ヘプタン（５０ｍＬ）を添加し、攪拌し、ろ過によって固形物を回収する。固形物を真空下で乾燥させて、固形物として表題化合物を得る（３．０ｇ、７７％）。
【００５７】
調製物１４
１−［（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−（１，１−ジフルオロエチル）テトラヒドロ−１Ｈ，３Ｈ−フロ［３，４−ｃ］［１，２］オキサゾール−１−イル］エタノン
2019514987.tif 000026
スキーム３のステップＥ：０〜５℃で、単一部分の１−［（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−１−アセチル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロフロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−４−イル］エタノン（５．０８ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）を、無水ジクロロメタン（１００ｍＬ）中のＸｔａｌＦｌｕｏｒ−Ｍ（登録商標）（１０．０２ｇ、３９．１８ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に添加する。混合物を１０分間攪拌し、トリエチルアミントリヒドロフルオリド（４．５ｍＬ、２７ｍｍｏｌ）を１０分かけて滴下する。反応混合物を氷浴中で８時間攪拌し、次いで周囲温度に温め、一晩攪拌する。飽和炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）を添加し、１時間攪拌する。層を分離し、ジクロロメタン（２×５０ｍＬ）で水性物を抽出する。有機抽出物を混合し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）、２Ｎ塩酸水溶液（２×１００ｍＬ）、及びブライン（１００ｍＬ）で洗浄する。淡褐色固形物に蒸発乾固させ、６０℃でメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３００ｍＬ）に溶解する。高温の溶液をろ過し、ろ過液を蒸発させて、褐色の固形物を得（５．３ｇ、８１％、ＬＣＭＳによる純度８２％）、これをさらに精製することなく使用する。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）３９３．８／３９５．８［Ｍ＋Ｈ］。
【００５８】
代替的な調製物１４
スキーム３のステップＥ：−１４℃で、無水ジクロロメタン（５Ｌ）中の１−［（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−１−アセチル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロフロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−４−イル］エタノン（５６５ｇ、１．５１ｍｏｌ）の攪拌溶液にＸｔａｌＦｌｕｏｒ−Ｍ（登録商標）（１．２１ｋｇ、４．７３ｍｏｌ）の一部を添加する。混合物を１０分間攪拌し、トリエチルアミントリヒドロフルオリド（５５０ｇ、３．３４ｍｏｌ）を２０分かけて滴下する。反応混合物を−１０℃で約１０時間攪拌し、次いで周囲温度に温め、一晩攪拌する。内部温度を１０℃未満に維持しつつ、５０％水酸化ナトリウム水溶液（７５０ｍｌ）をゆっくりと添加し、次いで水（１．５Ｌ）及び飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１Ｌ）を添加し、３０分間攪拌する。層を分離し、ジクロロメタン（１Ｌ）で水性物を抽出する。有機抽出物を混合し、ブライン（３Ｌ）、２Ｎ塩酸水溶液（５Ｌ）、及びブライン（３Ｌ）で洗浄する。蒸発させて残渣をもたらし、イソヘキサン中５０〜１００％ジクロロメタン、次いでジクロロメタン中１０％メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで溶離する、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、次いで、白色粉末として標題化合物を得る（４６７ｇ、７３％、ＬＣＭＳによる純度９４％）。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）３９３．８／３９５．８［Ｍ＋Ｈ］。
【００５９】
調製物１５
（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（１，１−ジフルオロエチル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール
2019514987.tif 000027
スキーム３のステップＦ：１０Ｌのジャケット反応器中において、１，４−ジオキサン（５Ｌ）中の１−［（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−（１，１−ジフルオロエチル）テトラヒドロ−１Ｈ，３Ｈ−フロ［３，４−ｃ］［１，２］オキサゾール−１−イル］エタノン（５７０ｇ、１．４５ｍｏｌ）の溶液に、３７重量％の塩酸水溶液（１．３Ｌ、１６ｍｏｌ）を添加し、１００℃で約３時間またはＬＣＭＳが反応の完了を示すまで攪拌する。反応混合物を１０℃に冷却し、水（１Ｌ）で希釈し、内部温度を２０℃未満に維持しつつ、混合物に５０重量％水酸化ナトリウム水溶液（８００  ｍＬ）及び水（１Ｌ）を添加する。酢酸エチル（２．５Ｌ）を添加し、激しく攪拌し、層を分離し、有機相をブライン（２Ｌ）、さらにブライン（１Ｌ）、及び水（１Ｌ）で洗浄する。硫酸マグネシウム上で溶液を乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮乾固して残渣をもたらす。シクロヘキサン（２．５Ｌ）を加え、蒸発乾固して、褐色の油状物として表題化合物を得る（５２７ｇ、８９％、ＬＣＭＳによる純度８６％）。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）３５１．８／３５３．８［Ｍ＋Ｈ］。
【００６０】
調製物１６
［（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−４−アミノ−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（１，１−ジフルオロエチル）テトラヒドロフラン−３−イル］メタノール
2019514987.tif 000028
スキーム３のステップＧ：室温で、酢酸（１００ｍＬ）中の（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（１，１−ジフルオロエチル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール（５．０６ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）の溶液に、亜鉛粉末（６．０ｇ、９２ｍｍｏｌ）を添加し、一晩攪拌する。混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）及び水（３００ｍＬ）で希釈し、炭酸ナトリウム（９７ｇ、９１５ｍｍｏｌ）を添加しつつ激しく攪拌する。層を分離し、有機層をブライン（２×２００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、濃縮して残渣をもたらす。イソヘキサン中０％〜１００％のメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで溶離するシリカゲルクロマトグラフィーによって残渣を精製して、ワックス状固形物として表題化合物をもたらす（４．６７ｇ、８９％、ＬＣＭＳによる純度９０％）。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）３５４．０／３５６．０［Ｍ＋Ｈ］。
【００６１】
代替的な調製物１６
スキーム３のステップＧ：２０℃で、酢酸（２Ｌ）及び水（２Ｌ）中の（３ａＲ，４Ｓ，６ａＳ）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（１，１−ジフルオロエチル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−フロ［３，４−ｃ］イソオキサゾール（３０４ｇ、純度７５％、６４７ｍｍｏｌ）の溶液に、亜鉛粉末（２００  ｇ、３．０６  ｍｏｌ）を少しずつ添加し、次いで４０℃に温め、一晩攪拌する。混合物を水（２Ｌ）で希釈し、炭酸ナトリウム（４ｋｇ、４３．４ｍｏｌ）を添加しつつ激しく攪拌し、次いで炭酸ナトリウムでｐＨ８〜９に調整する。酢酸エチル（５Ｌ）及び水（２．５Ｌ）を添加し、３０分間攪拌し、珪藻土を通してろ過し、２：１のアセトニトリル／水で洗浄する。層を分離し、酢酸エチル（２×２．５Ｌ）で水性物を抽出し、混合した有機抽出物をブライン（２×２．５Ｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過し、濃縮して残渣をもたらす。残渣をＳＦＣカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ（５）、５０×２５０ｍｍ、溶離液：１２％エタノール（ＣＯ２中の０．２％ジエチルメチルアミン、流速：３４０ｇ／分、ＵＶ２２０ｎｍ）によりで精製し、白色固形物として標記化合物をもたらす（１９７．７ｇ、８４％）。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）３５４．０／３５６．０［Ｍ＋Ｈ］、［α］２０Ｄ−６．９３°（ｃ  ０．６７８、クロロホルム）。
【００６２】
調製物１７
（４ａＲ，５Ｓ，７ａＳ）−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−５−（１，１−ジフルオロエチル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−２−アミン
2019514987.tif 000029
スキーム３のステップＨ：エタノール（２２．３ｍＬ）中に［（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−４−アミノ−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（１，１−ジフルオロエチル）テトラヒドロフラン−３−イル］メタノール（１．５１ｇ、４．２４ｍｍｏｌ）を溶解し、次いで臭化シアン（１．３０ｍＬ、６．５０ｍｍｏｌ、アセトニトリル中５Ｍ溶液）を添加する。予熱した、８５℃油浴中で生じる溶液を放置する。８５℃で１０時間攪拌する。周囲温度に冷却し、次いで飽和重炭酸ナトリウムを添加する。相を分離し、酢酸エチル及びジクロロメタンで抽出する。混合した有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して、表題化合物をもたらす（１．４１ｇ、８７％）。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）３７９／３８１［Ｍ＋Ｈ］。
【００６３】
調製物１８
（４ａＲ，５Ｓ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−５−（１，１−ジフルオロエチル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−２−アミン
2019514987.tif 000030
スキーム３のステップＩ：ＤＭＳＯ（２０ｍＬ）中に、ヨウ化銅（Ｉ）（０．７１ｇ、３．７４ｍｍｏｌ）、Ｌ−ヒドロキシプロリン（０．９９ｇ、７．５０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．５６ｇ、１１．２０ｍｍｏｌ）、及び（４ａＲ，５Ｓ，７ａＳ）−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−５−（１，１−ジフルオロエチル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−２−アミン（１．４２ｇ、３．７２ｍｍｏｌ）を溶解する。表面下に窒素ガスを１０分間通気する。水酸化アンモニウム（２９％ｗｔ／ｗｔの水溶液、３．０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を添加し、８５℃に１４時間加熱する。周囲温度に冷却し、飽和重炭酸ナトリウムを添加する。相を分離し、ジクロロメタンで抽出する。有機抽出物を混合し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して残渣をもたらす。１〜１０％勾配の［メタノール中７ＮのＮＨ３］：ジクロロメタンで溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標記化合物（０．７２ｇ、５８％）をもたらす。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ３１６［Ｍ＋Ｈ］。
【００６４】
調製物１９
５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボキサミド
2019514987.tif 000031
１，４−ジオキサン（７００ｍＬ）中に５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボン酸（６７．５ｇ、３５３ｍｍｏｌ）を溶解し、室温で攪拌する。溶液に塩化チオニル（８０ｍＬ、１０９０ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加し、６５℃の内部温度に温め、１９時間攪拌する。反応混合物を蒸発乾固させ、１，４−ジオキサンで希釈して全量を４００ｍＬにする。水中の水酸化アンモニウムの攪拌溶液（３５重量％、１．６Ｌ）にこの溶液を添加し５℃に冷却し、１時間攪拌する。ろ過によって沈殿物を回収し、水（３×２５０ｍＬ）、イソヘキサン（３×２５０ｍＬ）で洗浄し、５０℃で真空下で乾燥させ、白色の固形物として表題化合物をもたらす（５８．３７ｇ、８６％）。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  １９１．０（＋Ｈ）。
【００６５】
調製物２０
Ｎ−［（４ａＲ，５Ｓ，７ａＳ）−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−５−（１，１−ジフルオロエチル）−４ａ，５，７，７ａ−テトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−２−イル］ベンズアミド
2019514987.tif 000032
スキーム５のステップＡ：１８℃で窒素下で、ジクロロメタン（５Ｌ）中に、［（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−４−アミノ−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（１，１−ジフルオロエチル）テトラヒドロフラン−３−イル］メタノール（５８０ｇ、１６２１ｍｍｏｌ）を溶解し、ベンゾイルイソチオシアネート（３４５ｇ、２１１４ｍｍｏｌ）を添加し、一晩攪拌する。反応混合物を１０℃に冷却し、５０％ｗ／ｗ濃水酸化ナトリウム（２５０ｍＬ、３当量）及びブリーチ（４Ｌ、約２当量）を含むスクラバーを取り付けて、反応混合物からガスを抜き出す。反応混合物にＤＭＳＯ（１５０ｍＬ、２１１０ｍｍｏｌ）を添加し、続いてクロロトリメチルシラン（２５０ｍＬ、１９３０ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加し、１０℃で１時間攪拌する。水（３Ｌ）中の炭酸ナトリウム（５００ｇ、４７１７．５２ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、３０分間攪拌し、次いで層を分離する。有機層を水（２Ｌ）で洗浄し、ジクロロメタン（２．５Ｌ）で水性物を抽出する。有機抽出物を混合し、蒸発させて残渣とする。残渣をメタノール（４Ｌ）で希釈し、溶液を４０℃で１時間攪拌し、珪藻土（５００ｇ）を通してろ過し、メタノール（４×５００ｍＬ）で洗浄する。残渣に蒸発させ、アセトニトリル（３Ｌ）を添加する。溶液を４０℃で１時間攪拌し、珪藻土（５００ｇ）を通してろ過し、アセトニトリル（４×５００ｍＬ）で洗浄し、次いでろ過液を蒸発させて褐色の泡状物を得る。イソヘキサン中０％〜３０％の酢酸エチルで溶離するシリカゲルクロマトグラフィーによって粗生成物を精製して、表題化合物（８６０ｇ、純度８７％）をもたらす。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）４８３．０／４８５．０［Ｍ＋Ｈ］。
【００６６】
調製物２１
Ｎ−［３−［（４ａＲ，５Ｓ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−５−（１，１−ジフルオロエチル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボキサミド
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スキーム５のステップＢ：Ｎ−［（４ａＲ、５Ｓ、７ａＳ）−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−５−（１，１−ジフルオロエチル）−４ａ，５，７，７ａ−テトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−２−イル］ベンズアミド（１３５．３ｇ、純度８７％、２４３．６ｍｍｏｌ）に、無水１，４−ジオキサン（１．４Ｌ）、４Åモレキュラーシーブ（２１．６ｇ）、５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド（６１．２１ｇ、３１８．６ｍｍｏｌ）、微粉砕炭酸カリウム（６１．５ｇ、４４５ｍｍｏｌ）、及びヨウ化ナトリウム（６２．０ｇ、４１３．６ｍｍｏｌ）をまとめて添加し、反応混合物に３０分間窒素を通気する。トランス−Ｎ、Ｎ'−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（１２ｍＬ、７６．１ｍｍｏｌ）及びヨウ化銅（Ｉ）（９．３ｇ、４９ｍｍｏｌ）を添加し、溶液に１０分間窒素を通気し続けた。７日間、窒素下で、混合物を攪拌し、１０９℃の内部温度に加熱する。反応混合物を周囲温度に冷却し、反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液（１Ｌ）で希釈する。３時間攪拌し、ケイソウ土を通してろ過する。ろ過液を飽和塩化アンモニウム水溶液（５００ｍＬ）及び酢酸エチル（４×２５０ｍＬ）で洗浄する。層を分離し、有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液（５００ｍＬ）で洗浄し、水（３００ｍＬ）の濃水酸化アンモニウム（２００ｍＬ）で２回洗浄する。有機層を蒸発乾固させ、トルエン（１Ｌ）を添加し、残渣に蒸発させる。イソプロパノール（５００Ｌ）を添加し、蒸発乾固する。イソプロパノール（１．５Ｌ）を添加し、７０℃で３０分間攪拌し、一晩室温に冷却する。ろ過によって固形物を回収し、イソプロパノール（２×２００ｍＬ）で洗浄する。固形物を真空下で乾燥させて、ベージュ色の固形物として表題化合物（１０３．６ｇ、７０％）をもたらす。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ５９３．２（Ｍ＋Ｈ）、［α］２０Ｄ−２０８．４３（ｃ  ０．５、クロロホルム）。
【００６７】
実施例１
Ｎ−［３−［（４ａＲ，５Ｓ，７ａＳ）−２−アミノ−５−（１，１−ジフルオロエチル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボキサミド。
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スキーム４のステップＡ：アセトニトリル（２ｍＬ）中に５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボン酸（０．０４０ｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を溶解し、次いで塩化オキサリル（１４．７μＬ、０．１６ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（一滴）を添加する。周囲温度、窒素下で１時間攪拌する。減圧下で濃縮し、アセトニトリル（２ｍＬ）で再構成し、次に記載する５０℃の溶液に添加する。別の容器に、（４ａＲ，５Ｓ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−５−（１，１−ジフルオロエチル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−２−アミン（０．０４０ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、エタノール（２ｍＬ）、及び水（２ｍＬ）を添加する。混合物を５０℃に加熱し、１時間攪拌する。飽和炭酸水素ナトリウム、酢酸エチルを添加し、相を分離する。水相を酢酸エチルで抽出する。有機抽出物を混合し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して残渣をもたらす。メタノール：ジクロロメタン中の７ＮのＮＨ３の０〜２％勾配で溶離するシリカゲルクロマトグラフィーで残渣を精製して、標記化合物（０．０５２ｇ、８１％）をもたらす。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ４８９［Ｍ＋Ｈ］。
【００６８】
代替的な調製物の例１
スキーム５のステップＣ：エタノール（６００ｍＬ）中のＮ−［３−［（４ａＲ，５Ｓ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−５−（１，１−ジフルオロエチル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボキサミド（１０３．６ｇ、１６９．６ｍｍｏｌ）、Ｏ−メチルヒドロキシルアミンヒドロクロリド（３５．５４ｇ、４２５．５ｍｍｏｌ）、及びピリジン（７０ｍＬ、８６５ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に、ジクロロメタン（５００ｍＬ）を添加する。周囲温度で４６時間攪拌し、残渣まで蒸発させる。残渣をジクロロメタン（１Ｌ）中に溶解し、５Ｎ塩酸水溶液（５００ｍＬ）を添加し、１０分間攪拌し、飽和塩化ナトリウム水溶液（６００ｍＬ）、及びヘプタン（１Ｌ）を添加する。さらに１５分間攪拌し、生じる沈殿物をろ過によって回収し、飽和塩化ナトリウム水溶液（４×２００ｍＬ）及びジクロロメタン／ヘプタン（１：１、４×２００ｍＬ）で洗浄して、粗表題化合物として湿ったベージュ色の固形物を得る（１４３ｇ）。この物質に対し、酢酸エチル（１Ｌ）中の本質的に同様に前もって調製した標題化合物（１９．８ｇ、純度９１％、３７．０ｍｍｏｌ）、及び飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）を添加する。全ての固形物が溶解するまで３０分間攪拌する。層を分離し、酢酸エチル（５００ｍＬ）で水性物を抽出する。有機物を飽和塩化ナトリウム水溶液（２×２００ｍＬ）で洗浄し、蒸発乾固してベージュ色の固形物をもたらす。攪拌しながら６０℃でメタノール（１Ｌ中）に残渣を溶解し、１０分かけて水（１Ｌ）をゆっくりと添加し、次いで、懸濁液を攪拌し、一晩室温に冷却させる。ろ過によって結晶を回収し、メタノール／水（１：１、２×３００ｍＬ）で洗浄する。次いで、メタノール／水（１：１、１Ｌ）中の固形物を周囲温度で２時間攪拌し、ろ過によって沈殿物を回収し、メタノール／水（１：１、２×１００ｍＬ）で洗浄する。固形物を４５°Ｃで真空下で乾燥させて、明るいベージュ色の粉末として表題化合物（８８．８ｇ）をもたらす。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ５９３．２（Ｍ＋Ｈ）、［α］２０Ｄ＋８１．５４（ｃ  １．０、クロロホルム）。
【００６９】
実施例１Ａ
Ｎ−［３−［（４ａＲ，５Ｓ，７ａＳ）−２−アミノ−５−（１，１−ジフルオロエチル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボキサミド４−メチルベンゼンスルホネート
2019514987.tif 000035
Ｎ−［３−［（４ａＲ，５Ｓ，７ａＳ）−２−アミノ−５−（１，１−ジフルオロエチル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボキサミド（１ｇ、２．０４８ｍｍｏｌ）をエタノール（１０ｍＬ）と共に攪拌する。懸濁液を６０℃に加熱し、さらにエタノール（１０ｍＬ）を少しずつ添加する。１５分間かけて溶液を９０℃に加熱し、透明な溶液をもたらす。エタノール（１ｍＬ）中のｐ−トルエンスルホン酸一水和物（４００ｍｇ、２．０８２ｍｍｏｌ）を添加し、エタノール（１ｍＬ）で容器をすすぐ。溶液に標記化合物（約５ｍｇ）を播種する。１時間かけて室温に溶液を冷却し、１０℃で１５分間攪拌する。生じる沈殿物をろ過し、固形物をエタノール（２×２ｍＬ）で洗浄し、真空下で４５分間乾燥させて、表題化合物をもたらす（０．９７２ｇ、１．４７ｍｍｏｌ）。
【００７０】
実施例１ＡのＸ線粉末回折（ＸＲＤ）
結晶性固形物のＸＲＤパターンは、３５ｋＶ及び５０ｍＡで作動する、ＣｕＫａ源（λ＝１．５４０６０Å）及びＶａｎｔｅｃ検出器を備えたＢｒｕｋｅｒ  Ｄ４  Ｅｎｄｅａｖｏｒ  Ｘ線粉末回折計において得られる。試料は、２θで０．００９°のステップサイズ及び０．５秒／ステップの走査速度で、ならびに０．６ｍｍの発散スリット、５．２８の固定散乱防止スリット、及び９．５ｍｍの検出器スリットで、２θにおいて４〜４０°で走査される。乾燥粉末を石英試料ホルダに充填し、スライドガラスを使用して滑らかな表面を得る。結晶形の回折パターンは、周囲温度及び相対湿度で収集される。結晶学の分野において、任意の所与の結晶形に関して、結晶形態及び晶癖等の要因から生じる好ましい配向に起因して、回折ピークの相対強度が変化し得ることは周知である。好ましい配向の効果が存在する場合、ピーク強度は変化するが、多形の特徴的なピーク位置は変化しない。例えば、Ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ＃２３，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ＃１８，ｐａｇｅｓ  １８４３−１８４４，１９９５を参照のこと。さらに、結晶学の分野において、任意の所与の結晶形に関して、ピークの角度位置が若干変化し得ることもまた周知である。例えば、ピーク位置は、試料が分析される温度もしくは湿度における変動、試料の変位、または内部標準の有無に起因して推移し得る。本発明の場合、２θにおける±０．２のピーク位置の変動性で、指示された結晶形の明確な識別を妨げることなく、これらの潜在的な変動が考慮される。結晶形態の確認は、（°２θの単位における）識別ピーク、典型的には、より突出したピークの任意の独自の組み合わせに基づきなされてよい。周囲温度及び相対湿度にて収集された結晶形態回折パターンは、８．８５３及び２６．７７４°２θで、ＮＩＳＴ６７５標準ピークに基づき調整する。
【００７１】
結晶性Ｎ−［３−［（４ａＲ，５Ｓ，７ａＳ）−２−アミノ−５−（１，１−ジフルオロエチル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］オキサジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボキサミド４−メチルベンゼンスルホネートの調製された試料は、以下の表１に記載されるような回析ピーク（２θ値）を有するものとしての、特に９．８°、２８．０°、及び１４．７°からなる群より選択されるピークのうちの１つ以上と組み合わされた、４．９°のピークを有するものとしての、ＣｕＫａ照射を用いるＸＲＤパターンを特徴とし、回析角の許容誤差が０．２度である。
表１：実施例１ＡのＸ線粉末回折ピーク
2019514987.tif 000036
【００７２】
インビトロアッセイ手順：
ＢＡＣＥ２よりもＢＡＣＥ１の選択性を評価するために、試験化合物を、以下に記載されるように、ＢＡＣＥ１及びＢＡＣＥ２に対する特異的な基質を使用したＦＲＥＴアッセイにおいて評価する。インビトロ酵素及び細胞アッセイのために、試験化合物を、ＤＭＳＯ中で調製し、１０ｍＭ原液を作製する。原液は、ＤＭＳＯ中で段階希釈されて、インビトロ酵素及び全細胞アッセイを実施する前に、９６ウェル丸底プレート中で、１０μＭ〜０．０５ｎＭの範囲の最終化合物濃度を有する、１０点希釈曲線を得る。
【００７３】
インビトロプロテアーゼ阻害アッセイ：
ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃ及びｈｕＢＡＣＥ２：Ｆｃの発現。
ＲＴ−ＰＣＲにより全脳ｃＤＮＡからヒトＢＡＣＥ１（受託番号：ＡＦ１９０７２５）及びヒトＢＡＣＥ２（受託番号：ＡＦ２０４９４４）をクローニングする。アミノ酸配列番号１〜４６０に対応するヌクレオチド配列を、ヒトＩｇＧ１（Ｆｃ）ポリペプチドをコードするｃＤＮＡに挿入する（Ｖａｓｓａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８６，７３５−７４２（１９９９））。それぞれｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃ及びｈｕＢＡＣＥ２：Ｆｃと名づけられた、この、ＢＡＣＥ１（１−４６０）またはＢＡＣＥ２（１−４６０）及びヒトＦｃの融合タンパク質を、ｐＪＢ０２ベクター中で構築する。ヒトＢＡＣＥ１（１−４６０）：Ｆｃ（ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃ）及びヒトＢＡＣＥ２（１−４６０）：Ｆｃ（ｈｕＢＡＣＥ２：Ｆｃ）を、ＨＥＫ２９３細胞において一過的に発現する。各コンストラクトのｃＤＮＡ（２５０μｇ）をＦｕｇｅｎｅ  ６と混合し、１リットルのＨＥＫ２９３細胞に添加する。トランスフェクションの４日後、培養上清を、精製のために採取する。ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃ及びｈｕＢＡＣＥ２：Ｆｃを、以下に記載するように、プロテインＡクロマトグラフィーによって精製する。酵素は、小アリコートで−８０℃において貯蔵する。（Ｙａｎｇ，ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，９１（６）１２４９−５９（２００４）を参照）。
【００７４】
ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃ及びｈｕＢＡＣＥ２：Ｆｃの精製。
ｈｕＢＡＣＥ１：ＦｃまたはｈｕＢＡＣＥ２：ＦｃのｃＤＮＡで一過性にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞の培養上清を、回収する。０．２２μｍの滅菌フィルターを通じて培養上清をろ過することによって細胞残屑を除去する。プロテインＡ−アガロース（５ｍｌ）（ベッド容量）を培養上清（４リットル）に添加する。この混合物を４℃で一晩穏やかに攪拌する。プロテインＡ−アガロース樹脂を回収し、低圧クロマトグラフィカラムに詰める。カラムは、１時間当たり２０ｍＬの流速で、２０×ベッド容量のＰＢＳで洗浄する。結合したｈｕＢＡＣＥ１：ＦｃまたはｈｕＢＡＣＥ２：Ｆｃのタンパク質を、１時間当たり２０ｍＬの流速で、５０ｍＭの酢酸、ｐＨ３．６で溶離する。溶出液の画分（１ｍｌ）を直ちに酢酸アンモニウム（０．５ｍｌ、２００ｍＭ）、ｐＨ６．５で中和する。最終産物の純度は、４〜２０％のＴｒｉｓ−Ｇｌｙｃｉｎｅ  ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおける電気泳動によって評価する。酵素は、小アリコートで−８０℃において貯蔵する。
【００７５】
ＢＡＣＥ１のＦＲＥＴアッセイ
試験化合物の段階希釈物を、上述の通り調製する。化合物を、ＫＨ２ＰＯ４緩衝液中でさらに２０×希釈する。各々の希釈物（１０μＬ）を、反応混合物（２５μＬの５０ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ４．６、１ｍＭのＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、及びＡＰＰの配列に基づく１５μＭのＦＲＥＴ基質）を含む対応する低タンパク質結合ブラックプレートの列Ａ〜Ｈの各々のウェルに添加する（Ｙａｎｇ，ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，９１（６）１２４９−５９（２００４）を参照）。含有物を、１０分間プレートシェーカー上で十分に混合する。ＫＨ２ＰＯ４緩衝液中のヒトＢＡＣＥ１（１−４６０）：Ｆｃ（２００ｐＭを１５μＬ）（Ｖａｓｓｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８６，７３５−７４１（１９９９）を参照）を、基質及び試験化合物を含むプレートに添加して、反応を開始する。０時間における混合物のＲＦＵは、プレートシェーカー上での短時間の混合後、励起波長３５５ｎｍ及び放出波長４６０ｎｍで記録される。反応プレートは、アルミホイルで被覆され、１６〜２４時間室温で、暗い加湿オーブン内で保持される。インキュベーションの終わりにおけるＲＦＵは、０時間において使用された同じ励起及び放出設定で記録される。０時間におけるＲＦＵとインキュベーションの終わりの差は、化合物処理下でのＢＡＣＥ１の活性を表す。ＲＦＵの差は、阻害剤濃度に対してプロットされ、曲線は、ＩＣ５０値を得るために、４パラメータロジスティック方程式に適合される。（Ｍａｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，３１，１６５０７−１６５１６（２０１１））。
【００７６】
実施例１の化合物を、本質的に上記の通り試験し、１１．９ｎＭ±３．５、ｎ＝１２のＢＡＣＥ１に対するＩＣ５０を示す（平均±平均の標準偏差）。このデータは、実施例１の化合物が、インビトロで、精製された組み換えＢＡＣＥ１酵素活性を阻害することを実証する。
【００７７】
ＢＡＣＥ２  ＴＭＥＭ２７のＦＲＥＴアッセイ
試験化合物の段階希釈物を、上述の通り調製する。化合物を、ＫＨ２ＰＯ４緩衝液中でさらに２０×希釈する。各々の希釈物（１０μＬ）を、反応混合物（２５μＬの５０ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ４．６、１ｍＭのＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、及び５μＭのＴＭＥＭ  ＦＲＥＴ基質）（ＤＡＢＣＹＬ−ＱＴＬＥＦＬＫＩＰＳ−ＬｕｃＹ、ＷＯ２０１０／０６３６４０  Ａ１）を含む対応する低タンパク質結合ブラックプレートの列Ａ〜Ｈの各々のウェルに添加する。次いで、ＫＨ２ＰＯ４緩衝液中の２０μＭのヒトＢＡＣＥ２（１−４６０）：Ｆｃの１５μＬ（Ｖａｓｓｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８６，７３５−７４１（１９９９）を参照）を、基質及び試験化合物を含むプレートに添加して、反応を開始する。含有物は、１０分間プレートシェーカー上で十分に混合される。０時間における混合物のＲＦＵは、励起波長４３０ｎｍ及び放出波長５３５ｎｍで記録される。反応プレートは、アルミホイルで被覆され、１６〜２４時間室温で、暗い加湿オーブン内で保持される。インキュベーションの終わりにおけるＲＦＵは、０時間において使用された同じ励起及び放出設定で記録される。０時間におけるＲＦＵとインキュベーションの終わりの差は、化合物処理下でのＢＡＣＥ２の活性を表す。ＲＦＵの差は、阻害剤濃度に対してプロットされ、曲線は、ＩＣ５０値を得るために、４パラメータロジスティック方程式に適合される。（Ｍａｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，３１，１６５０７−１６５１６（２０１１））。
【００７８】
実施例１の化合物を、本質的に上記の通り試験し、６０２ｎＭ±３７．４、ｎ＝６のＢＡＣＥ２のＩＣ５０を示す（平均±平均の標準偏差）。ＢＡＣＥ１（ＦＲＥＴ  ＩＣ５０酵素アッセイ）のＢＡＣＥ２（ＴＭＥＭ２７  ＬｕｃＹ  ＦＲＥＴアッセイ）に対する比は、約５０倍であり、ＢＡＣＥ１酵素を阻害するための機能的選択性を示す。上記のデータは、実施例１の化合物がＢＡＣＥ２よりもＢＡＣＥ１に対して選択的であることを実証する。
【００７９】
ＳＨ−ＳＹ５ＹＡＰＰ６９５Ｗｔ全細胞アッセイ
ＢＡＣＥ１活性の阻害の測定のための慣例的な全細胞アッセイは、ヒトＡＰＰ６９５ＷｔのｃＤＮＡを安定的に発現する、ヒト神経芽腫細胞株ＳＨ−ＳＹ５Ｙ（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ２２６６）を利用する。細胞は、慣例的には継代数６代まで使用し、その後廃棄する。
【００８０】
ＳＨ−ＳＹ５ＹＡＰＰ６９５Ｗｔ細胞を、２００μＬの培地（１０％ＦＢＳを含む、５０％ＭＥＭ／ＥＢＳＳ及びＨａｍ’ｓ  Ｆ１２、１×各ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸、ならびにＮａＨＣＯ３）中、５．０×１０４細胞／ウェルで、９６ウェル組織培養プレートに播種する。翌日、細胞から培地を除去し、新規の培地を添加し、次いで、所望の濃度範囲において、試験化合物の存在／非存在下で、３７℃において２４時間インキュベートする。
【００８１】
インキュベーションの終わりに、培養上清を、特異的サンドイッチＥＬＩＳＡによるＡｂｅｔａペプチド１−４０及び１−４２の分析によって、ベータ−セクレターゼ活性の実証のために分析する。Ａｂｅｔａのこれらの特異的イソ型を測定するために、モノクローナル２Ｇ３を、Ａｂｅｔａ１−４０のための捕捉抗体として使用し、モノクローナル２１Ｆ１２を、Ａｂｅｔａ１−４２のための捕捉抗体として使用する。Ａｂｅｔａ１−４０とＡｂｅｔａ１−４２のＥＬＩＳＡの両方は、レポーティング抗体としてビオチン化３Ｄ６を使用する（抗体の説明について、Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４，１５５０−１５５５（１９９７）を参照）。化合物による処理後に培養上清中に放出されたＡｂｅｔａの濃度は、そのような条件下でＢＡＣＥ１の活性に対応する。１０点阻害曲線がプロットされ、４パラメータロジスティック方程式に適合されて、Ａｂｅｔａ低下効果に対するＩＣ５０値を得る。
【００８２】
実施例１の化合物は、本質的に上述の通り試験し、ＳＨ−ＳＹ５ＹＡＰＰ６９５ＷｔのＡ−ｂｅｔａ（１−４０）ＥＬＩＳＡについて、１．０３ｎＭ±０．５８、ｎ＝４のＩＣ５０を示し、ＳＨ−ＳＹ５ＹＡＰＰ６９５ＷｔのＡ−ｂｅｔａ（１−４２）ＥＬＩＳＡについて、１．２８ｎＭ±１．０９、ｎ＝４のＩＣ５０を示す（平均±平均の標準偏差）。上記のデータは、実施例１の化合物が全細胞アッセイにおいてＢＡＣＥ１を阻害することを示す。
【００８３】
ベータ−セクレターゼのインビボ阻害
マウス、モルモット、イヌ、及びサルを含むいくつかの動物モデルが、化合物による処理後のインビボでのベータ−セクレターゼ活性の阻害についてスクリーニングするために使用され得る。本明細書において、カニューレを挿入したビーグル犬モデルにおいて中枢薬理試験を実施する。このモデルにおいて、雄ビーグル犬のコホートが、腰椎領域にカニューレを埋め込まれ、頚椎に向かってねじ込まれる。このモデルは、脊髄カテーテルに取り付けられた皮下の腰部ポートを通して、単一の４８〜７２時間の試験期間を通じて複数回のＣＳＦの採取を可能にする。カニューレが開存したままである限り、追加のＣＳＦ薬理学試験を同一のイヌのコホート内で実施することができる。血液試料を処理して血漿を得、次いで血漿及びＣＳＦの試料をアリコートに分けて、試験化合物及びＡｂｅｔａのＣＳＦ濃度の測定を可能にする。
【００８４】
この試験において、６頭のビーグル犬が０．５Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ＝２．０）中の１．０ｍｇ／ｋｇの実施例１の製剤によって腹腔内投与され、血液（０．５、１、２、３、６、９、１２、２４、及び４８時間）及びＣＳＦ（３、６、９、２４、及び４８時間）を採取する。血漿及びＣＳＦの化合物の濃度は、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法によって決定する。血漿及びＣＳＦもまた、Ａｂｅｔａ  １−ｘについて分析される。本明細書で使用されるとき、「Ａｂｅｔａ  １−ｘ」は、残基１で開始し、残基２８よりも大きいＣ末端で終結する、Ａｂｅｔａ種の合計を指す。これは、Ａｂｅｔａ種の過半数を検出し、しばしあば「全Ａｂｅｔａ」と呼ばれる。全Ａｂｅｔａペプチド（Ａｂｅｔａ  １−ｘ）のレベルは、モノクローナル２６６を捕捉抗体として、及びビオチン化３Ｄ６をレポーティング抗体として使用した、サンドイッチＥＬＩＳＡによって測定される。（Ｍａｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，３１，１６５０７−１６５１６（２０１１）を参照）。
【００８５】
投与後４８時間の間、実施例１の経口投与後に、Ａｂｅｔａ  １−ｘの血漿レベルの強い変化（最下点における８０％までの減少）が観察される。ＣＳＦのＡｂｅｔａ  １−ｘレベルは、１．０ｍｇ／ｋｇの実施例１の経口投与後、それぞれ２４時間及び４８時間でベースラインに対して約６５〜５５％低下する。７，９６０ｎＭ＊時間の全血漿ＡＵＣ曝露が達成される。血漿中の化合物の遊離画分は、平衡透析により測定され（Ｚａｍｅｋ−Ｇｌｉｓｚｃｚｙｎｋｉ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．２０１１  Ｊｕｎ；  １００（６）：  ２４９８−５０７）、この値は、測定された全血漿中の遊離薬物血漿濃度値を導き出すのに使用した。実施例１のＣＳＦのＡＵＣの遊離血漿のＡＵＣに対する比は０．１７であり、この化合物がイヌのＣＮＳから部分的に排除されているが、ＣＳＦ区画において強いＡβ低下を誘導するのに十分であることを示している。
【００８６】
インビトロのＢＡＣＥ１酵素に対する実施例１の活性を前提とすると、これらのＡｂｅｔａ低下効果は、インビボのＢＡＣＥ１阻害と一致し、実施例１の化合物のＣＮＳ透過をさらに実証する。
【００８７】
これらの研究は、本発明の化合物がＢＡＣＥ１を阻害し、したがって、末梢及び中枢の区画におけるＡｂｅｔａのレベルを低下させるのに有用であることを示す。
【国際調査報告】
2019514987.tif 000041
2019514987.tif 000042