(57)【要約】  ６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩と、４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩との、治療的に有効な組み合わせを含む、急性骨髄性白血病を治療するための、方法、使用、および組成物が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩と、４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩との治療的に有効な組み合わせを、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、急性骨髄性白血病の治療方法。
【請求項２】
前記急性骨髄性白血病がＦＬＴ３変異を伴う急性骨髄性白血病である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記急性骨髄性白血病が、変異ＦＬＴ３ポリヌクレオチド陽性の急性骨髄性白血病、ＦＬＴ３遺伝子内縦列重複(ＩＴＤ)陽性の急性骨髄性白血病、またはＦＬＴ３点変異を有する急性骨髄性白血病である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記化合物が、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド  ヘミフマル酸塩である、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩、もしくはそのヘミフマル酸塩が、経口的に投与される、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩、もしくはそのヘミフマル酸塩、および前記４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩が、同時に投与される、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩、もしくはそのヘミフマル酸塩、および前記４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩が、連続的に投与される、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩、もしくはそのヘミフマル酸塩、および前記４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩が、単一用量において投与される、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩、もしくはそのヘミフマル酸塩、および前記４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩が、別個の剤形において投与される、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩が、患者の体重１ｋｇ当たり約０.００１ｍｇ〜約１００ｍｇの投薬量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩が、経口的に投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩が、患者の体表面積１ｍ2当たり約５ｍｇ〜約１２５ｍｇの投薬量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩が、皮下注射または静脈内注入により投与される、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩を含む、４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン(アザシチジン)、またはその塩と併用する、がん治療用組成物。
【請求項１５】
前記化合物が、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド  ヘミフマル酸塩である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
治療を必要とする患者における急性骨髄性白血病を治療するための、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩と、４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩との、治療的に有効な組み合わせの使用。
【請求項１７】
前記急性骨髄性白血病が、ＦＬＴ３変異を伴う急性骨髄性白血病である、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
前記急性骨髄性白血病が、変異ＦＬＴ３ポリヌクレオチド陽性の急性骨髄性白血病、ＦＬＴ３遺伝子内縦列重複(ＩＴＤ)陽性の急性骨髄性白血病、またはＦＬＴ３点変異を有する急性骨髄性白血病である、請求項１６に記載の使用。
【請求項１９】
前記化合物が、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド  ヘミフマル酸塩である、請求項１６〜１８のいずれかに記載の使用。
【請求項２０】
前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩が、経口的に投与される、請求項１６〜１８のいずれかに記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【関連出願に対する相互参照】
【０００１】
本出願は、２０１６年３月２９日に出願された、米国仮特許出願第６２／３１４，７００号、および２０１６年７月２９日に出願された、米国仮特許出願第６２／３６８，３４３号について優先権を主張し、これらの内容は、その全体が参考として援用される。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩と、４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩との、治療的に有効な組み合わせを含む、急性骨髄性白血病を治療するための、方法、使用、および組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
９０％を超える白血病の症例は、２０歳以上の成人において診断されておりその内最も一般的なタイプは、慢性リンパ球性白血病(３５％)および急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)(３２％)である(Ｃａｎｃｅｒ Ｆａｃｔｓ ＆ Ｆｉｇｕｒｅｓ， Ａｔｌａｎｔａ， Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ；２０１４)。診断時の年齢中央値は６７歳であり、患者の５４％が診断時に６５歳以上であった(Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌら、Ａｃｕｔｅ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ， Ｊ Ｎａｔｌ Ｃｏｍｐｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｎｅｔｗｏｒｋ， ２０１２；１０：９８４-１０２１)。２０１４年の米国において、１８，８６０人(男性１１，５３０人および女性７，３３０人)がＡＭＬと診断され、そして１０，４６０人がその疾患で死亡したと推定された(同上、 Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ；２０１４)。若年患者の６０％〜８０％は、標準的な治療で完全寛解(ＣＲ)するものの、長期の無病生存期間を有するのは全体の患者集団の約３０〜４０％のみである(Ｔａｌｌｍａｎ， 抗体および他の新規な薬剤を含む急性骨髄性白血病の処置のための新規な戦略(Ｔａｌｌｍａｎ，Ｎｅｗ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｎｏｖｅｌ ａｇｅｎｔｓ， Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ａｍ Ｓｏｃ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｅｄｕｃ Ｐｒｏｇｒａｍ. ２００５:１４３-５０)。６０歳以上の患者の転帰はより悪く、ＣＲ率が４０％〜５５％の範囲であり、長期生存率が低い。
【０００４】
ＦＬＴ３(ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３)は、ＡＭＬにおいて最も頻繁に変異が起きる遺伝子の１つである。新規に診断されたＡＭＬ症例の約２５〜３０％には、膜近傍ドメインでの遺伝子内縦列重複(ＩＴＤ)のようなＦＬＴ３における活性化変異が存在する。シタラビン(ＡｒａＣ)およびアントラサイクリン(ダウノルビシン[ＤＮＲ]またはイダルビシン[ＩＤＲ])を用いた最新の導入化学療法での治療後も、ＦＬＴ３-ＩＴＤ変異を有するＡＭＬ患者の予後は不良である。アザシチジンは、強化化学療法に適しないＡＭＬ患者のための治療の選択肢である。
【０００５】
寛解率および全生存期間(ＯＳ)は、年齢だけでなく、細胞遺伝学的な因子、既往の骨髄疾患(例えば、骨髄異形成症候群[ＭＤＳ])、および共存疾患を含む、多くの他の因子に依存する。現在、この疾患に対する有効な治療は存在していない。それゆえ、急性骨髄性白血病の治療および予防に関する新規な治療が依然として現在も緊急で必要とされている。このような治療においては、効力の増大、副作用の数の低下、重篤な副作用の低減、薬剤耐性化の低減、単独での薬物投与と比較した際の準最適用量もしくは亜臨床的用量として投与される薬物の量の低減、および／または症状の軽減のうち少なくとも１つがなされているのが望ましい。
【０００６】
ギルテリチニブ(Ｇｉｌｔｅｒｉｔｉｎｉｂ)は、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド(以後、「化合物Ａ」と称してもよい)という化合物名であり、以下の構造を有する：
【０００７】
【化１】
2019512495.tif 000002
化合物Ａ、またはその塩は、特許文献１および特許文献２において記載されており、特許文献１と同様の方法を用いて製造する事ができる。化合物Ａの好ましい塩は、ヘミフマル酸塩である。化合物Ａ、またはその塩は、開発中のＡＭＬ治療用のＦＬＴ３阻害剤である(Ｆｕｔｕｒｅ Ｏｎｃｏｌ.， １１(１８)， ２４９９-２５０１ (２０１５)、第５０回年会. Ａｍ. Ｃｈｅｍ. Ｓｏｃ. Ｃｌｉｎ. Ｏｎｃｏｌ. (ＡＳＣＯ) ２０１４， 要約 ７０７０、第５０回年会. Ａｍ. Ｃｈｅｍ. Ｓｏｃ. Ｃｌｉｎ. Ｏｎｃｏｌ. (ＡＳＣＯ) ２０１４， 要約 ７０７１、第５１回年会 Ａｍ. Ｃｈｅｍ. Ｓｏｃ. Ｃｌｉｎ. Ｏｎｃｏｌ. (ＡＳＣＯ) ２０１５， 要約 ７００３)。化合物Ａ、またはその塩はＡＸＬ、白血球受容体型チロシンキナーゼ(ＬＴＫ)、および未分化リンパ腫キナーゼ(ＡＬＫ)を阻害する活性も有する。化合物Ａ、またはその塩は、好ましくは、経口的に投与される。
【０００８】
アザシチジンは、４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オンという化合物名であり、５-アザシチジンは、以下の構造を有する：
【０００９】
【化２】
2019512495.tif 000003
アザシチジンは、Ｖｉｄａｚａ(登録記号)という名称で販売される承認薬である。Ｖｉｄａｚａは、以下のＦＡＢ骨髄異形成症候群(ＭＤＳ)のサブタイプ：不応性貧血(ＲＡ)または環状鉄芽球を伴う不応性貧血(ＲＡＲＳ)(好中球減少もしくは血小板減少症を併発する場合、または輸血が必要とされる場合)、芽球増加を伴う不応性貧血(ＲＡＥＢ)、移行期の芽球増加を伴う不応性貧血(ＲＡＥＢ-Ｔ)および慢性骨髄単球性白血病(ＣＭＭｏＬ)を伴う患者の治療に適応される、ヌクレオシド代謝阻害剤(低メチル化剤)である。最初の治療サイクルに推奨される開始用量は、皮下(ＳＣ)注射または静脈内(ＩＶ)注入で投与する場合、血液検査の基準値に関わらず全患者に対して、１日当たりＶｉｄａｚａ  ７５ｍｇ／ｍ2を７日間である。患者は吐き気および嘔吐について予め投薬治療を受けてもよい。治療サイクルは、４週間毎に繰り返しても良い。２サイクル後、有益な効果が見られず、かつ吐き気および嘔吐以外の毒性が何ら生じない場合、用量を１００ｍｇ／ｍ2に増加してもよい。患者は最低４〜６サイクルで治療すべきである。完全奏功または部分奏功に応じてさらに投与サイクルを追加しても良い。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第２０１０／１２８６５９号
【特許文献２】国際公開第２０１５／１１９１２２号
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、ＦＬＴ３変異を有する患者を含む、ＡＭＬ治療のための代替療法を提供することにより、１つまたは複数の上述のニーズに応えることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】アザシチジンとともに化合物Ａ  ヘミフマル酸塩で処理したＭＶ４‐１１細胞における、アネキシンＶ(Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ)陽性集団を示す。３回の独立した実験の平均と標準誤差が示されている。化合物Ａ  ヘミフマル酸塩のみで処理した群の値と比較して、***は、Ｐ＜０.００１であり、ならびにアザシチジンのみで処理した群の値と比較して、##は、Ｐ＜０.０１、###は、Ｐ＜０.００１である(Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ‐検定)。縦軸は、ＭＶ４‐１１細胞における、アネキシンＶ陽性集団を示し、横軸は、最終濃度が０(ＤＭＳＯ)または１０００ｎｍｏｌ／Ｌのアザシチジンと組み合わせた、最終濃度０(ＤＭＳＯ)、１、３、または１０ｎｍｏｌ／Ｌの化合物Ａを示す。
【００１３】
【図２】アザシチジンありまたはなしの化合物Ａ  ヘミフマル酸塩でＭＶ４‐１１細胞を処理した後のタンパク質の発現を示す。
【００１４】
【図３】ＭＶ４‐１１細胞で異種移植されたヌードマウスにおける、アザシチジンと併用した化合物Ａ  ヘミフマル酸塩の抗腫瘍効果を示す。２１日目における化合物Ａ  ヘミフマル酸塩処理群の値と比較して、***は、Ｐ＜０.００１であり、およびアザシチジン処理群の値と比較して、+++は、Ｐ＜０.００１である(Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定)。縦軸は腫瘍体積(ｍｍ3)を示し、横軸は日数を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩と、４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩との、治療的に有効な組み合わせを、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、急性骨髄性白血病の治療方法を提供する。ある実施態様としては、急性骨髄性白血病は、ＦＬＴ３変異を伴う急性骨髄性白血病である。ある実施態様としては、急性骨髄性白血病は、変異ＦＬＴ３ポリヌクレオチド陽性の急性骨髄性白血病、ＦＬＴ３遺伝子内縦列重複(ＩＴＤ)陽性の急性骨髄性白血病、またはＦＬＴ３点変異を有する急性骨髄性白血病である。ある実施態様としては、化合物は、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド  ヘミフマル酸塩である。ある実施態様としては、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩、もしくはそのヘミフマル酸塩は、経口的に投与される。
【００１６】
本発明は、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩を活性成分として含み、４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン(アザシチジン)、またはその塩との併用投与に用いられるがん治療用組成物を提供する。本発明は、４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩を活性成分として含み、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩との併用投与に用いられるがん治療用組成物を提供する。当該組成物のある実施態様としては、がんは急性骨髄性白血病である。当該組成物のある実施態様としては、がんは、ＦＬＴ３変異を伴う急性骨髄性白血病である。当該組成物のある実施態様としては、がんは、変異ＦＬＴ３ポリヌクレオチド陽性の急性骨髄性白血病、ＦＬＴ３遺伝子内縦列重複(ＩＴＤ)陽性の急性骨髄性白血病、またはＦＬＴ３点変異を有する急性骨髄性白血病である。当該組成物のある実施態様としては、化合物は、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド  ヘミフマル酸塩である。
【００１７】
本発明は、治療を必要とする患者における急性骨髄性白血病を治療するための、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩と、４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩との、治療的に有効な組み合わせの使用を提供する。ある実施態様としては、急性骨髄性白血病は、ＦＬＴ３変異を伴う急性骨髄性白血病である。ある実施態様としては、急性骨髄性白血病は、変異ＦＬＴ３ポリヌクレオチド陽性の急性骨髄性白血病、ＦＬＴ３遺伝子内縦列重複(ＩＴＤ)陽性の急性骨髄性白血病、またはＦＬＴ３点変異を有する急性骨髄性白血病である。ある実施態様としては、化合物は、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド  ヘミフマル酸塩である。ある実施態様としては、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩、もしくはそのヘミフマル酸塩は、経口的に投与される。
【００１８】
本発明は、４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１,３,５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩と組み合わせた、急性骨髄性白血病の治療薬の製造における６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩の使用を提供する。本発明は、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩と組み合わせた、急性骨髄性白血病の治療薬の製造における４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩の使用を提供する。当該使用のある実施態様としては、急性骨髄性白血病は、ＦＬＴ３変異を伴う急性骨髄性白血病である。当該使用のある実施態様としては、急性骨髄性白血病は、変異ＦＬＴ３ポリヌクレオチド陽性の急性骨髄性白血病、ＦＬＴ３遺伝子内縦列重複(ＩＴＤ)陽性の急性骨髄性白血病、またはＦＬＴ３点変異を有する急性骨髄性白血病である。当該使用のある実施態様としては、当該化合物は、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド  ヘミフマル酸塩である。当該使用のある実施態様としては、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩、もしくはそのヘミフマル酸塩は、経口薬である。
【００１９】
本発明はまた、以下を提供する。
（１）６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩と、４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩との、治療的に有効な組み合わせを、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、急性骨髄性白血病の治療方法。
（２）前記急性骨髄性白血病がＦＬＴ３変異を伴う急性骨髄性白血病である、（１）に記載の方法。
（３）前記急性骨髄性白血病が、変異ＦＬＴ３ポリヌクレオチド陽性の急性骨髄性白血病、ＦＬＴ３遺伝子内縦列重複(ＩＴＤ)陽性の急性骨髄性白血病、またはＦＬＴ３点変異を有する急性骨髄性白血病である、（１）または（２）に記載の方法。
（４）前記化合物が、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド  ヘミフマル酸塩である、（１）〜（３）のいずれかに記載の方法。
（５）前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩、もしくはそのヘミフマル酸塩が、経口的に投与される、（１）〜（４）のいずれかに記載の方法。
（６）前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩、もしくはそのヘミフマル酸塩、および前記４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩が、同時に投与される、（１）〜（５）のいずれかに記載の方法。
（７）前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩、もしくはそのヘミフマル酸塩、および前記４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩が、連続的に投与される、（１）〜（５）のいずれかに記載の方法。
（８）前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩、もしくはそのヘミフマル酸塩、および前記４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩が、単一用量において投与される、（１）〜（５）のいずれかに記載の方法。
（９）前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩、もしくはそのヘミフマル酸塩、および前記４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩が、別個の剤形において投与される、（１）〜（５）のいずれかに記載の方法。
（１０）前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩が、患者の体重１ｋｇ当たり約０.００１ｍｇ〜約１００ｍｇの投薬量で投与される、（１）に記載の方法。
（１１）前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩が、経口的に投与される、（１０）に記載の方法。
（１２）前記４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩が、患者の体表面積１ｍ2当たり約５ｍｇ〜約１２５ｍｇの投薬量で投与される、（１）に記載の方法。
（１３）前記４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩が、皮下注射または静脈内注入により投与される、（１）〜（９）のいずれかに記載の方法。
（１４）６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩を含む、４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン(アザシチジン)、またはその塩と併用する、がん治療用組成物。
（１５）前記化合物が、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド  ヘミフマル酸塩である、（１４）の組成物。
（１６）治療を必要とする患者における急性骨髄性白血病を治療するための、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩と、４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩との、治療的に有効な組み合わせの使用。
（１７）前記急性骨髄性白血病が、ＦＬＴ３変異を伴う急性骨髄性白血病である、（１６）の使用。
（１８）前記急性骨髄性白血病が、変異ＦＬＴ３ポリヌクレオチド陽性の急性骨髄性白血病、ＦＬＴ３遺伝子内縦列重複(ＩＴＤ)陽性の急性骨髄性白血病、またはＦＬＴ３点変異を有する急性骨髄性白血病である、（１６）の使用。
（１９）前記化合物が、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド  ヘミフマル酸塩である、（１６）〜（１８）のいずれかに記載の使用。
（２０）前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩が、経口的に投与される、（１６）〜（１８）のいずれかに記載の使用。
【００２０】
本発明はまた、以下を提供する。
（１）６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩と、４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩との、治療的に有効な組み合わせを、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、急性骨髄性白血病の治療方法。
（２）前記急性骨髄性白血病がＦＬＴ３変異を伴う急性骨髄性白血病である、（１）に記載の方法。
（３）前記急性骨髄性白血病が、変異ＦＬＴ３ポリヌクレオチド陽性の急性骨髄性白血病、ＦＬＴ３遺伝子内縦列重複(ＩＴＤ)陽性の急性骨髄性白血病、またはＦＬＴ３点変異を有する急性骨髄性白血病である、（１）または（２）に記載の方法。
（４）前記化合物が、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド  ヘミフマル酸塩である、（１）〜（３）のいずれかに記載の方法。
（５）前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩が、経口的に投与される、（１）〜（４）のいずれかに記載の方法。
（６）６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩を活性成分として含み、４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン(アザシチジン)、またはその塩との併用投与に用いられるがん治療用組成物。
（７）４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩を活性成分として含み、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩との併用投与に用いられるがん治療用組成物。
（８）前記がんが急性骨髄性白血病である、（６）または（７）の組成物。
（９）前記がんがＦＬＴ３変異を伴う急性骨髄性白血病である。（６）〜（８）のいずれかの組成物。
（１０）前記がんが、変異ＦＬＴ３ポリヌクレオチド陽性の急性骨髄性白血病、ＦＬＴ３遺伝子内縦列重複(ＩＴＤ)陽性の急性骨髄性白血病、またはＦＬＴ３点変異を有する急性骨髄性白血病である、（６）〜（９）のいずれかの組成物。
（１１）前記化合物は、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド  ヘミフマル酸塩(ＨＦＭ)である、（６）〜（１０）のいずれかの組成物。
（１２）治療を必要とする患者における急性骨髄性白血病を治療するための、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩と、４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩との、治療的に有効な組み合わせの使用。
（１３）前記急性骨髄性白血病が、ＦＬＴ３変異を伴う急性骨髄性白血病である、（１２）の使用。
（１４）前記急性骨髄性白血病が、変異ＦＬＴ３ポリヌクレオチド陽性の急性骨髄性白血病、ＦＬＴ３遺伝子内縦列重複(ＩＴＤ)陽性の急性骨髄性白血病、またはＦＬＴ３点変異を有する急性骨髄性白血病である、（１２）または（１３）の使用。
（１５）前記化合物が、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド  ヘミフマル酸塩(ＨＦＭ)である、（１２）〜（１４）のいずれかに記載の使用。
（１６）前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩が、経口的に投与される、（１２）〜（１５）のいずれかに記載の使用。
（１７）４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１,３,５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩と組み合わせた、急性骨髄性白血病の治療薬の製造における６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩の使用。
（１８）６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩と組み合わせた、急性骨髄性白血病の治療薬の製造における４-アミノ-１-β-Ｄ-リボフラノシル-１，３，５-トリアジン-２(１Ｈ)-オン、またはその塩の使用。
（１９）前記急性骨髄性白血病が、ＦＬＴ３変異を伴う急性骨髄性白血病である、（１７）または（１８）の使用。
（２０）前記急性骨髄性白血病が、変異ＦＬＴ３ポリヌクレオチド陽性の急性骨髄性白血病、ＦＬＴ３遺伝子内縦列重複(ＩＴＤ)陽性の急性骨髄性白血病、またはＦＬＴ３点変異を有する急性骨髄性白血病である、（１７）〜（１９）のいずれかの使用。
（２１）前記化合物が、６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド  ヘミフマル酸塩(ＨＦＭ)である、（１７）〜（２０）のいずれかに記載の使用。
（２２）前記６-エチル-３-({３-メトキシ-４-[４-(４-メチルピペラジン-１-イル)ピペリジン-１-イル]フェニル}アミノ)-５-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ピラジン-２-カルボキサミド、またはその塩が経口薬である、（１７）または（１９）〜（２１）のいずれかに記載の使用。
【００２１】
急性骨髄性白血病には、ＦＬＴ３変異を伴う急性骨髄性白血病が含まれる。ＦＬＴ３変異を伴う急性骨髄性白血病としては、変異ＦＬＴ３ポリヌクレオチド陽性の急性骨髄性白血病、ＦＬＴ３遺伝子内縦列重複(ＩＴＤ)陽性の急性骨髄性白血病、またはＦＬＴ３点変異を有する急性骨髄性白血病が挙げられる。
【００２２】
ＦＬＴ３は、クラスＩＩＩ受容体型チロシンキナーゼ(ＴＫ)ファミリーのメンバーであり、これは通常、造血前駆細胞の細胞表面上で発現する。ＦＬＴ３およびそのリガンドは、多能性幹細胞の増殖、生存、および分化において重要な役割を果たす。ＦＬＴ３は、ＡＭＬ症例の大多数において過剰発現している。さらに、膜近傍ドメインおよびその周辺での遺伝子内縦列重複(ＩＴＤ)を伴うＦＬＴ３活性化変異、および活性化ループ中のＤ８３５付近におけるチロシンキナーゼドメインの点変異を伴うＦＬＴ３活性化変異は、それぞれ、ＡＭＬ症例中２８％〜３４％、および１１％〜１４％を占める。これらのＦＬＴ３活性化変異は腫瘍形成性があり、そして細胞中で形質転換活性を示す。臨床研究においてＦＬＴ３-ＩＴＤ変異を伴う患者は、再発率が高く、初期治療からの寛解期間が短く(６カ月：１１.５カ月(ＦＬＴ３-ＩＴＤ変異を伴わない患者))、また無病生存期間(５年で１６％〜２７％：４１％)およびＯＳ(５年で１５％〜３１％：４２％)が短く、予後不良であることが示されている。ＦＬＴ３‐ＩＴＤを伴う患者における造血幹細胞移植(ＨＳＣＴ)後の再発率は高い(２年間で３０％：１６％(ＦＬＴ３‐ＩＴＤを伴わない患者))。１次治療の予後に類似して、再発／不応性ＦＬＴ３変異陽性ＡＭＬの患者は、ＦＬＴ３変異陰性患者に比べ、救援化学療法での寛解率が低く、二次再発までの寛解期間が短く、ＯＳも短い。
【００２３】
ＡＸＬチロシンキナーゼ(ＡＸＬ)は、ＴＡＭファミリー(Ｔｙｒｏ-３、ＡＸＬ、Ｍｅｒ)受容体型ＴＫのメンバーであり、通常、骨芽細胞、線維芽細胞、および血液細胞のような間葉起源の細胞において発現する。ＡＸＬは、ＡＭＬを含む多くのガンにおいて過剰発現または活性化されることが報告されている。ＡＭＬにおけるＡＸＬ過剰発現により薬物耐性が生じ、そしてＡＭＬにおけるＡＸＬ過剰発現は予後不良との関連がある。ＡＸＬ阻害によりインビボにおいてはヒトＦＬＴ３陽性ＡＭＬの増殖が抑制される。さらに、ＡＸＬ阻害はまた、インビボにおいてＡＸＬを発現するＦＬＴ３陰性ＡＭＬに対して有効である。
【００２４】
化合物Ａおよびアザシチジンの塩は、本発明において使用されてもよい。「塩」は、開示される化合物の製薬学的に許容される誘導体をいい、ここで親化合物は既存の酸または塩基部分をその塩の形態に変換することにより修飾される。適切な塩は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１７版，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ.，１９８５，第１４１８頁、およびＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ６６，２（１９７７)において列挙される。
【００２５】
用語「治療すること」、「治療する」、「治療するため」、または「治療」は、既存の症状、障害、状態、または疾患の進行または重篤度を、抑制する、遅延する、停止する、軽減する、または逆転することを含む。
【００２６】
用語「患者」は、哺乳動物、好ましくはヒトをいう。
【００２７】
用語「約」は、一般的に、値の１０％、５％、または１％を超えない可能な範囲のばらつきを示す。例えば、「約２５ｍｇ／ｋｇ」は、一般に、その最も広範な意味において、２２.５〜２７.５ｍｇ／ｋｇ、すなわち、２５±２.５ｍｇ／ｋｇの値である。
【００２８】
「治療的に有効な量」は、患者に組み合わせて投与される場合の、急性骨髄性白血病を治療する化合物の量である。所定の例において、特定の対象に対して治療的に有効な量であることが証明される量は、このような投薬量が当業者によって治療的に有効な量と判断されたとしても、その疾患について同様に治療された対象の１００％に有効ではない可能性がある。治療的に有効な量に相当する化合物の量は、がんの特定のタイプ、がんの病期、治療を受ける患者の年齢、および他の因子に強く依存する。一般に、これらの化合物の治療的に有効な量は、当該分野において周知である。さらに、治療的に有効な量は、化合物Ａ、またはその塩と、アザシチジンの一方または両方が、治療的に有効な量に満たない量で投与されるが、急性骨髄性白血病が治療される場合の組み合わせの量であってもよい。治療的に有効な量に満たない量は、単独で患者に投与される場合、意図される標的の生物学的活性を経時的に完全には阻害しない化合物の量である。
【００２９】
本発明には治療的に有効な間隔における組み合わせの使用または投与が含まれる。「治療的に有効な間隔」は、一方の化合物が患者に投与されるときを始まりとし、二つの化合物の併用投与の利益が保たれるような他方の化合物の投与の限界を終わりとする期間である。それゆえ、併用投与は、同時、または連続的、および任意の順序でよい。
【００３０】
併用投与の期間またはサイクルは、合計１週間、２８日間、１カ月、２カ月、３カ月、もしくは４カ月、またはそれ以上であり得る。個々の薬物は、それぞれ、その期間またはサイクルの全ての期間において、毎日投与してもよく、またはその期間またはサイクルの一部においてのみ投与をしても良い。例えば、２８日間のサイクルにおいて、化合物Ａ、またはその塩を、そのサイクル中毎日投与してもよく、一方アザシチジンを、その一部においてだけ、例えば、連続５日間、連続７日間、または連続１０日間の期間において投与してもよい。そして連続５、７、および１０日間は、それぞれ、期間またはサイクルの最初の５、７、または１０日間であってもよい。
【００３１】
当該分野において公知の、任意の許容される投与または剤の態様で化合物、またはそれらの塩を投与してもよい。例えば、経口的、経鼻的、非経口的(静脈内、筋肉内、または皮下)、局所的、経皮的、膣内、膀胱内、嚢内、または直腸内に当該化合物を投与してもよい。剤形は、例えば、固体、半固体、凍結乾燥粉末、または液体の剤形(例えば、錠剤、丸薬、軟性カプセル、硬質ゼラチンカプセル、粉末、溶液、懸濁液、座薬、エアロゾルなど)であってよく、好ましくは、正確な用量で簡素に投与するのに適している、単位ごとの剤形である。化合物Ａ、またはその塩についての投与の好ましい経路は経口であり、一方アザシチジンの好ましい経路は皮下および注入である。
【００３２】
当該化合物については、単一用量または別個の剤形において投与してもよく、ならびにその剤形において用いられる製剤には、他の活性成分および／または公知の担体が含まれていてもよい。助剤およびアジュバント剤としては、例えば、保存剤、湿潤剤、懸濁剤、甘味剤、香料、芳香剤、乳化剤、および調剤が挙げられる。一般に、種々の抗菌剤および抗真菌剤(例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸など)により微生物の働きが抑えられる。糖類、塩化ナトリウムなどのような等張剤が含まれてもよい。吸収を遅延する薬剤(例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン)を使用する事で、注射可能な製剤は長期的に吸収される。助剤としてはまた、湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝剤、および抗酸化剤(例えば、クエン酸、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミン、ブチル化ヒドロキシトルエンなど)が挙げられる。製剤および剤形の調製方法は当業者に公知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ's Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， 第１８版 (Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ.， １９９０)に例示されている。
【００３３】
患者に投与される２つの化合物の量は、当業者のような専門の診断医によって、公知の技術を用いることによって、および類似の状況下で得られた結果を観察することによって決定してもよい。投与される化合物の有効量または用量の決定においては、多くの因子が専門の診断医によって考慮される。例えば：哺乳動物の種；その大きさ、年齢、および全体的な健康状態；関連のある特定の腫瘍；腫瘍の関与または重篤度の程度；個々の患者の奏功；投与される特定の化合物；投与の態様；投与される調製物の生物学的利用能；選択される投与計画；併用薬の使用；および他の関連の状況が挙げられるが、これらに制限されない。例えば、化合物Ａ、またはその塩が、経口的に投与される場合、１日用量は、患者の体重当たり、約０.００１〜約１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０.００５〜約３０ｍｇ／ｋｇであって、より好ましくより適しているのは約０.０１〜約１０ｍｇ／ｋｇである。ある態様においては、化合物Ａ、またはその塩は、１日当たり約８０ｍｇ投与される。静脈内に投与される場合、１日用量は、患者の体重当たり、適切には、約０.０００１〜約１０ｍｇ／ｋｇであるのがより適しており、総量を１日に１回以上の用量に分けて投与しても良い。さらに、経粘膜剤は、患者の体重当たり、約０.００１〜約１００ｍｇ／ｋｇの用量にて投与され、そして１日１回または１日において数回に分けて投与してもよい。アザシチジンは、患者の表面積当たり、約５ｍｇ／ｍ2〜約１２５ｍｇ／ｍ2、約５０ｍｇ／ｍ2〜約１００ｍｇ／ｍ2、より好ましくは約７５ｍｇ／ｍ2の量で投与してもよい。アザシチジンは、１日当たり約２５０〜約５００ｍｇの量で投与してもよい。
【実施例１】
【００３４】
ＭＶ４‐１１細胞において誘導されたアポトーシス
ヒトＡＭＬに由来する細胞株であり、ＦＬＴ３-ＩＴＤ突然変異を有するＭＶ４‐１１は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ (ＡＴＣＣ)から購入した。細胞を、熱で非働化した１０％胎児ウシ血清を加えたＩｓｃｏｖｅ改変Ｄｕｌｂｅｃｃｏ培地中で、５％ＣＯ2、３７℃条件下にて培養した。細胞を１２ウェルプレートに播種し、そして一晩培養した。細胞を、０(ＤＭＳＯ)または１０００ｎｍｏｌ／Ｌの最終濃度のアザシチジン(東京化成工業株式会社)と組み合わせて、最終濃度０(ＤＭＳＯ)、１、３、または１０ｎｍｏｌ／Ｌの化合物Ａで処理した。４８時間後、細胞を回収し、そしてＧｕａｖａ(登録記号)Ｎｅｘｉｎ Ｒｅａｇｅｎｔ(Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ)を用いてインキュベートし、そしてアネキシンＶ陽性細胞を、Ｇｕａｖａ(登録記号)ＰＣＡマイクロサイトメーター(Ｇｕａｖａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ)を使用して測定した。各サンプルにおけるアネキシンＶ陽性細胞のパーセントを、ＣｙｔｏＳｏｆｔ ｓｏｆｔｗａｒｅ(Ｇｕａｖａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ)を使用して分析した。平均および標準誤差(ＳＥ)値を、３回の独立した実験から得た。
１０００ｎｍｏｌ／Ｌの濃度のアザシチジンと、３および１０ｎｍｏｌ／Ｌの濃度の化合物Ａを用いた４８時間の処理においては、化合物Ａ  ヘミフマル酸塩のみ、またはアザシチジンのみで処理した細胞と比較していずれとも、ＭＶ４‐１１細胞中のアネキシンＶ陽性集団が有意に増加した(Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定を使用した)(図１)。
【００３５】
この結果は、１０００ｎｍｏｌ／Ｌの濃度のアザシチジンと、３および１０ｎｍｏｌ／Ｌの濃度の化合物Ａが、ＭＶ４‐１１細胞においてアポトーシスを誘導することを示す。
【実施例２】
【００３６】
抗アポトーシスタンパク質発現
ＭＶ４‐１１細胞を、１５ｃｍ皿に播種し、そして一晩培養した。細胞を、０(ＤＭＳＯ)または１０００ｎｍｏｌ／Ｌの最終濃度のアザシチジンと、０(ＤＭＳＯ)または１０ｎｍｏｌ／Ｌの化合物Ａで処理した。アッセイは２連で行った。２４時間後、細胞を回収し、そして溶解バッファー(ＲＩＰＡ Ｂｕｆｆｅｒ [Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ]， １×Ｈａｌｔ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ [Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ]、およびＰｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ [Ｓｉｇｍａ‐Ａｌｄｒｉｃｈ])で溶解した。サンプルを遠心分離し、そして上清のタンパク質濃度をＰｉｅｒｃｅ (商標) ６６０ｎｍ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ (Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ)を使用して測定した。２.０μｇタンパク質／μＬのアリコートを、サンプルバッファー中に調製し(溶解バッファー中、１０ｍｍｏｌ／Ｌ  ジチオスレイトール(ＤＴＴ)［ナカライテスク］および１×ＳＤＳサンプルバッファー［和光純薬株式会社］)、次いで５分間煮沸した。
サンプルを電気泳動によって分離し、そしてＴｒａｎｓ‐Ｂｌｏｔ(登録記号)Ｔｕｒｂｏ ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｐａｃｋ ＰＶＤＦ(Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ)を用いて転写した。Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｏｎｅ(ナカライテスク)で１時間のブロッキング後、各メンブレンを抗ＭＣＬ-１抗体(品番５４５３、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ)、抗ＢＣＬ２Ｌ１０抗体(品番３８６９、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ)、抗サバイビン抗体(品番ＡＦ８８６、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ)、抗断片化ＰＡＲＰ抗体(品番９５４１、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ)、または抗アクチン抗体(Ａ２０６６、Ｓｉｇｍａ‐Ａｌｄｒｉｃｈ)とともに、冷却室において一晩インキュベートした。洗浄後、メンブレンを、抗ウサギＩｇＧ  ＨＲＰ結合抗体(品番７０７４、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ)とともに、室温にて１時間インキュベートした。最後の洗浄後、各タンパク質のシグナルを、化学発光試薬ＥＣＬ‐ｐｒｉｍｅ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ(ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ)を使用して、ＣＣＤカメラ(ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ ＬＡＳ４０００， ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ)で検出した。
【００３７】
化合物Ａ  ヘミフマル酸塩は、ＭＶ４‐１１細胞において、抗アポトーシスタンパク質ＭＣＬ‐１、ＢＣＬ２Ｌ１０、およびサバイビンの発現を阻害した(図２を参照のこと)。化合物Ａ  ヘミフマル酸塩処理の後、ＭＶ４‐１１細胞においてＰＡＲＰ断片の増加も観察され；化合物Ａ  ヘミフマル酸塩およびアザシチジンで併用処理された細胞においては、ＰＡＲＰ断片は更に増加した。
【実施例３】
【００３８】
ＭＶ４‐１１を異種移植されたマウスモデル
４週齢の雄ヌードマウス｛ＣＡｎＮ.Ｃｇ−Ｆｏｘｎ１ｎｕ／ＣｒｌＣｒｌｊ（ｎｕ／ｎｕ)｝を、日本チャールス・リバー社から購入した。ＭＶ４‐１１細胞を、５×１０6細胞／０.１ｍＬ／マウスで、脇腹に皮下接種し、そして増殖させた。腫瘍体積が１００〜３００ｍｍ2(長さ×幅2×０.５)であるマウスを投与の１日前に選択し、そして各群における平均腫瘍体積がほぼ等しくなるように、４つの群に分けた(ｎ＝１０)。コントロール群には、０〜２０日目まで、０.５％メチルセルロース溶液を１日１回経口で投与し、０〜４日目までは、生理食塩水を１日１回静脈内投与した。化合物Ａ  ヘミフマル酸塩群には、０〜２０日目まで、３ｍｇ／ｋｇ／日の化合物Ａ  ヘミフマル酸塩を１日１回経口で投与し、０〜４日目までは、生理食塩水を１日１回静脈内投与した。アザシチジン群には、０〜２０日目まで、０.５％メチルセルロースを１日１回経口で投与し、０〜４日目までは、３ｍｇ／ｋｇ／日のアザシチジンを１日１回静脈内投与した。組み合わせの群には、０〜２０日目まで、３ｍｇ／ｋｇ／日の化合物Ａ  ヘミフマル酸塩を１日１回経口で投与し、０〜４日目までは、３ｍｇ／ｋｇ／日のアザシチジンを１日１回静脈内投与した。
結果を図３に示す。組み合わせの群における、２１日目の平均腫瘍体積は、化合物Ａ  ヘミフマル酸塩のみで処理した群およびアザシチジンのみで処理した群と比較して、有意に小さかった(Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定を用いた)。
【００３９】
まとめると、アザシチジンと併用する化合物Ａ  ヘミフマル酸塩は、ＭＶ４‐１１細胞で異種移植されたマウスにおいて、化合物Ａ  ヘミフマル酸塩のみで処理した群、またはアザシチジンのみで処理した群と比べて、優れた抗腫瘍効果を示す。
【実施例４】
【００４０】
急性骨髄性白血病と新規に診断された、強化誘導療法に適さない約５２８人のヒト被験体を、無作為に１：１：１に分け、化合物Ａ  ヘミフマル酸塩(Ａｒｍ  Ａ)、化合物Ａ  ヘミフマル酸塩＋アザシチジン(Ａｒｍ  ＡＣ)、またはアザシチジンのみ(Ａｒｍ  Ｃ)を投与する。無作為化は以下に記載する年齢群に基づいて分類する：
１)年齢≧７５歳
２)年齢＜７５歳
治療期間は２８日サイクルである。Ａｒｍ  Ａにおいては、化合物Ａ  ヘミフマル酸塩の開始経口用量は、１２０ｍｇ／日である。Ａｒｍ  ＡＣにおいては、化合物Ａ  ヘミフマル酸塩の開始経口用量は、１日当たり、１２０ｍｇまたは８０ｍｇのいずれかである。Ａｒｍ  ＡＣおよびＣにおいては、アザシチジンを、サイクルのうち１〜７日目に、毎日７５ｍｇ／ｍ2、皮下注射または静脈内注入により投与する。化合物Ａ  ヘミフマル酸塩およびアザシチジンについてのみ、用量の増加または減少が許可される。例えば、化合物Ａ  ヘミフマル酸塩の用量を、２００ｍｇ／日に増加してもよい。
被験体を、以下のパラメーターについてモニターする：全生存期間(ＯＳ)、無症候生存期間(ＥＦＳ)、完全寛解(ＣＲ)率、無白血病生存期間(ＬＦＳ)、寛解期間、複合完全寛解(ＣＲｃ)率、患者報告の疲労(簡易疲労一覧表(Ｂｒｉｅｆ  Ｆａｔｉｇｕｅ  Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ)[ＢＦＩ])、有害な事象(ＡＥｓ)、移植率、微小残存病変(ＭＲＤ)、ＦＬＴ３遺伝子変異状態(変異のタイプおよび頻度、有効性および安全性との関係、獲得した耐性の機構)、患者報告の呼吸困難(慢性疾患治療の機能的評価‐呼吸困難‐簡易形態［ＦＡＣＩＴ‐Ｄｙｓ‐ＳＦ］)、患者報告のＡＭＬの兆候、症状、および影響(ガン治療の機能的な評価‐白血病［ＦＡＣＴ‐Ｌｅｕ］ならびに目まいおよび口内炎の項目)、ＥｕｒｏＱｏｌ Ｇｒｏｕｐ ５-ｄｉｍｅｎｔｉｏｎ ５-ｌｅｖｅｌ (ＥＱ‐５Ｄ‐５Ｌ)計器によって評価される健康に関連した生活の質、および、入院、輸血、抗体静脈内注入、ＡＥについての薬剤、およびオピオイドの使用を含むリソースの利用。
被験体には治療の停止後７日以内に治療終了訪問を行い、続いて安全のため３０日のフォローアップを行う。この後、被験体は、その後の治療、寛解状態、ＥＱ‐５Ｄ‐５Ｌ、および生存期間(死因および死亡日)データの収集のために、長期のフォローアップ期間に入る。
【産業上の利用可能性】
【００４１】
上述の１つまたは複数の実験で示された良い効果(詳述されている１つまたは複数のパラメーターに対する効果を含む)により、併用療法の有用性が示されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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