(57)【要約】  本発明は、本明細書に開示される細胞外ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供する。本発明の幾つかの態様は、本明細書に開示される細胞外ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードするポリヌクレオチドに関する。本発明の他の態様は、ＣＡＲ又はＴＣＲを含む細胞、及びＴ細胞療法におけるそれらの使用に関する。【選択図】図１Ｂ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離されたポリヌクレオチドであって、（ｉ）抗原結合分子と、（ｉｉ）共刺激ドメインと、（ｉｉｉ）活性化ドメインとを含み、ここで、前記共刺激ドメインが細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内ドメインとを含み、前記細胞外ドメインが（ｉ）配列番号１のアミノ酸１２３〜１５２に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列、及び任意に（ｉｉ）１個〜６個のアミノ酸から本質的になる又はそれからなる短縮ヒンジドメインを含む、ポリヌクレオチド。
【請求項２】
前記１個〜６個のアミノ酸が異種性アミノ酸である、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】
前記短縮ヒンジドメインが、配列番号１のアミノ酸１２３〜１５２に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列から本質的になる又はそれからなる、請求項１又は２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】
前記アミノ酸配列が、配列番号２に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる、請求項１又は２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】
前記膜貫通ドメインが、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、Ｔ細胞受容体のベータ鎖、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８アルファ、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４若しくはＴ細胞受容体のゼータ鎖、又はそれらの任意の組み合わせの膜貫通ドメインである、請求項１又は２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
前記膜貫通ドメインが、配列番号５に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項７】
前記膜貫通ドメインが、配列番号４に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列によってコードされる、請求項６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】
前記細胞内ドメインが、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｂ７−Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２９、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ−１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、免疫グロブリン様タンパク質、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−１、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４；ＴＮＦＳＦ１４）、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＭＨＣクラスＩ分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ−４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１；ＣＤ１５０；ＩＰＯ−３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４；２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ；Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１若しくはＶＬＡ−６、又はそれらの組み合わせのシグナル伝達領域を含む、請求項１又は２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】
前記細胞内ドメインが、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７シグナル伝達領域を含む、請求項１又は２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０】
前記細胞内ドメインが、配列番号７に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１】
前記細胞内ドメインが、配列番号６に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１２】
前記抗原結合分子が、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、前記ＶＨが３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記ＶＬが３つのＣＤＲを含む、請求項１又は２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１３】
前記抗原結合分子が、５Ｔ４、アルファフェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＣＡ−１２５、癌胚抗原、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ｃ−Ｍｅｔ、ＣＳＰＧ４、Ｃ型レクチン様分子１（ＣＬＬ−１）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、上皮性腫瘍抗原、ＥＲＢＢ２、ＦＬＴ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＥＲ１−ＨＥＲ２の組み合わせ、ＨＥＲ２−ＨＥＲ３の組み合わせ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＨＥＲＶ−Ｋ、ＨＩＶ−１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＨＩＶ−１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＩＬ−ｌｌＲアルファ、カッパー鎖、ラムダ鎖、黒色腫関連抗原、メソテリン、ＭＵＣ−１、変異ｐ５３、変異ｒａｓ、前立腺特異抗原、ＲＯＲ１若しくはＶＥＧＦＲ２、又はそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される抗原を特異的に結合する、請求項１又は２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１４】
前記抗原結合分子が、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ−１、又はＦＬＴ３を特異的に結合する、請求項１又は２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１５】
前記活性化ドメインが、配列番号９又は配列番号２５１に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１６】
前記活性化ドメインが、配列番号８に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列によってコードされる、請求項１又は２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１７】
前記ＣＡＲ又はＴＣＲがリーダーペプチドを更に含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１８】
前記リーダーペプチドが、配列番号１１に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１９】
前記リーダーペプチドが、配列番号１０に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列によってコードされる、請求項１７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項２１】
前記ベクターが、アデノウイルスベクター、アデノウイルス随伴ベクター、ＤＮＡベクター、レンチウイルスベクター、プラスミド、レトロウイルスベクター、若しくはＲＮＡベクター、又はそれらの任意の組み合わせである、請求項２０に記載のベクター。
【請求項２２】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、又は請求項２０若しくは２１に記載のベクターによってコードされるポリペプチド。
【請求項２３】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項２０若しくは２１に記載のベクター、請求項２２に記載のポリペプチド、又はそれらの任意の組み合わせを含む細胞。
【請求項２４】
Ｔ細胞である、請求項２３に記載の細胞。
【請求項２５】
前記Ｔ細胞が同種異系Ｔ細胞、自己Ｔ細胞、操作された自己Ｔ細胞（ｅＡＣＴ）、又は腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である、請求項２４に記載の細胞。
【請求項２６】
前記Ｔ細胞がＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項２４又は２５に記載の細胞。
【請求項２７】
前記Ｔ細胞がＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項２４又は２５に記載の細胞。
【請求項２８】
前記Ｔ細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞である、請求項２４又は２５に記載の細胞。
【請求項２９】
前記Ｔ細胞は自己Ｔ細胞である、請求項２４又は２５に記載の細胞。
【請求項３０】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項２０若しくは２１に記載のベクター、請求項２２に記載のポリペプチド、又は請求項２３〜２９のいずれか一項に記載の細胞を含む組成物。
【請求項３１】
少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤を任意に含み、被験体に送達されるように製剤化されている、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
好適な条件下で、請求項１〜１９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドで細胞を形質導入することを含む、ＣＡＲ又はＴＣＲを発現する細胞を作製する方法。
【請求項３３】
前記細胞を単離することを更に含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
腫瘍に対する免疫を誘導する方法であって、請求項１〜１９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項２０若しくは２１に記載のベクター、請求項２２に記載のポリペプチド、又はそれらの任意の組み合わせを含む細胞を有効量、被験体に投与することを含む、方法。
【請求項３５】
癌の治療を必要とする被験体において癌を治療するための医薬の製造のための、請求項１〜１９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項２０若しくは２１に記載のベクター、請求項２２に記載のポリペプチド、請求項２３〜２９のいずれか一項に記載の細胞、又は請求項３０若しくは３１に記載の組成物の使用。
【請求項３６】
前記癌が血液の癌である、請求項３５に記載の使用。
【請求項３７】
前記癌が白血球の癌である、請求項３５に記載の使用。
【請求項３８】
前記癌が形質細胞の癌である、請求項３５に記載の使用。
【請求項３９】
前記癌が、白血病、リンパ腫又は骨髄腫である、請求項３５〜３８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４０】
前記癌が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、急性骨髄白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病、慢性若しくは急性の白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、毛様細胞性白血病、ホジキン病、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖性障害（無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）を含む）、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、形質細胞腫（形質細胞異常増殖症；孤立性骨髄腫；孤立性形質細胞腫；髄外性形質細胞腫；及び多発性形質細胞腫を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ−Ｆｕｋａｓｅ症候群、高月病、及びＰＥＰ症候群としても知られる）、縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞若しくは大細胞濾胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、Ｔ細胞リンパ腫、形質転換後濾胞性リンパ腫、若しくはワルデンストレームマクログロブリン血症、又はそれらの組み合わせである、請求項３５〜３８のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年４月１日付で出願された米国仮特許出願第６２／３１７，２５８号の利益を主張し、その開示全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。２０１７年３月３０日付けで作製された上記ＡＳＣＩＩコピーの名前はＫ−１０３１＿０２＿ＳＬ．ｔｘｔであり、４１４９６３バイトのサイズである。
【背景技術】
【０００３】
ヒト癌は、本質的に正常細胞で構成され、この正常細胞が遺伝的又はエピジェネティックな変換を受けて異常な癌細胞となる。そうすることで、癌細胞は、正常細胞によって発現されるものとは明確に異なるタンパク質及び他の抗原を発現し始める。これらの異常な腫瘍抗原は、身体の自然免疫系によって、癌細胞を特異的に標的とし死滅させるのに使用され得る。しかしながら、癌細胞は、Ｔリンパ球及びＢリンパ球等の免疫細胞が癌細胞を標的とすることに成功しないように様々な機構を利用する。
【０００４】
現行の療法のＴ細胞療法は、患者において癌細胞を標的とし、死滅させるために富化又は改変されたヒトＴ細胞に頼っている。Ｔ細胞が特定の癌細胞を標的とし死滅させる能力を増加するため、特定の標的癌細胞へとＴ細胞を方向づけるコンストラクトを発現するようＴ細胞を操作する方法が開発された。特定の腫瘍抗原と相互作用することができる結合ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及び操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、Ｔ細胞が特定の腫瘍抗原を発現する癌細胞を標的とし、死滅させることを可能とする。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
癌細胞を標的とし、死滅させるための改善されたＣＡＲ及びＴＣＲが必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、癌細胞を特異的に標的とし、死滅させる抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する遺伝子操作された免疫細胞を含む、組成物及び方法を提供することによってこのニーズに取り組む。
【０００７】
ＣＡＲは、例えば、（ｉ）抗原特異的成分（「抗原結合分子」）と、（ｉｉ）１以上の共刺激ドメイン（ヒンジドメインを含む）と、（ｉｉｉ）１以上の活性化ドメインとを含み得る。各ドメインは異種性であってもよく、すなわち、異なるタンパク質鎖に由来する配列で構成されてもよい。ＣＡＲ発現免疫細胞（Ｔ細胞等）は、癌の治療法を含む様々な治療法で使用され得る。
【０００８】
実施例の節を含めて、以下に更に詳述されるように、短縮ヒンジドメイン（「ＴＨＤ」：truncated hinge domain）を含む共刺激ドメインを含むＣＡＲは、完全ヒンジドメイン（「ＣＨＤ」：complete hinge domain）を含む共刺激ドメインを含むＣＡＲと比較した場合に予想外に優れた特性をもたらす。かかるＣＡＲをコードするポリヌクレオチドは、Ｔ細胞へと形質導入され得て、ＣＡＲがＴ細胞、例えば患者自身のＴ細胞において発現される。形質導入されたＴ細胞を患者に移植して戻す場合、ＣＡＲはＴ細胞が、癌細胞の表面に存在するエピトープを認識して結合するように指示し、それによって非癌性細胞ではなく癌細胞の結合を可能とする。この結合は、結合された癌細胞を特異的に死滅させるＴ細胞における細胞溶解機構の活性化をもたらす。本発明に先立って、ＴＨＤを含むＣＡＲが、ＣＨＤを含むＣＡＲよりも優れていることが知られていなかった。したがって、本発明は、癌を治療するための新規で改善された治療法に対して存在する未だ対処されていないニーズを満たす。
【０００９】
本発明の態様は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離されたポリヌクレオチドであって、（ｉ）抗原結合分子と、（ｉｉ）共刺激ドメインと、（ｉｉｉ）活性化ドメインとを含む、単離されたポリヌクレオチドである。前記共刺激ドメインが細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内ドメインとを含むことができ、前記細胞外ドメインが（ｉ）配列番号１のアミノ酸１２３〜１５２に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列、及び任意に（ｉｉ）１個〜６個のアミノ酸から本質的になる又はそれからなる短縮ヒンジドメインを含む。
【００１０】
幾つかの実施の形態では、前記１個〜６個のアミノ酸が異種性アミノ酸である。
【００１１】
幾つかの実施の形態では、前記短縮ヒンジドメインが、配列番号１のアミノ酸１２３〜１５２に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列から本質的になる又はそれからなる。
【００１２】
幾つかの実施の形態では、前記アミノ酸配列が、配列番号２に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。
【００１３】
幾つかの実施の形態では、前記膜貫通ドメインが、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、Ｔ細胞受容体のベータ鎖、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８アルファ、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４若しくはＴ細胞受容体のゼータ鎖、又はそれらの任意の組み合わせの膜貫通ドメインである。
【００１４】
幾つかの実施の形態では、前記膜貫通ドメインが、配列番号５に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【００１５】
幾つかの実施の形態では、前記膜貫通ドメインが、配列番号４に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列によってコードされる。
【００１６】
幾つかの実施の形態では、前記細胞内ドメインが、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｂ７−Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２９、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ−１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、免疫グロブリン様タンパク質、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−１、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４；ＴＮＦＳＦ１４）、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＭＨＣクラスＩ分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ−４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１；ＣＤ１５０；ＩＰＯ−３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４；２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ；Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１若しくはＶＬＡ−６、又はそれらの組み合わせのシグナル伝達領域を含む。
【００１７】
幾つかの実施の形態では、前記細胞内ドメインが、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７シグナル伝達領域を含む。
【００１８】
幾つかの実施の形態では、前記細胞内ドメインが、配列番号７に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【００１９】
幾つかの実施の形態では、前記細胞内ドメインが、配列番号６に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。
【００２０】
幾つかの実施の形態では、前記抗原結合分子が、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、前記ＶＨが３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記ＶＬが３つのＣＤＲを含む。
【００２１】
幾つかの実施の形態では、前記抗原結合分子が、５Ｔ４、アルファフェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＣＡ−１２５、癌胚抗原、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ｃ−Ｍｅｔ、ＣＳＰＧ４、Ｃ型レクチン様分子１（ＣＬＬ−１）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、上皮性腫瘍抗原、ＥＲＢＢ２、ＦＬＴ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＥＲ１−ＨＥＲ２の組み合わせ、ＨＥＲ２−ＨＥＲ３の組み合わせ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＨＥＲＶ−Ｋ、ＨＩＶ−１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＨＩＶ−１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＩＬ−１１Ｒアルファ、カッパー鎖、ラムダ鎖、黒色腫関連抗原、メソテリン、ＭＵＣ−１、変異ｐ５３、変異ｒａｓ、前立腺特異抗原、ＲＯＲ１若しくはＶＥＧＦＲ２、又はそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される抗原を特異的に結合する。
【００２２】
幾つかの実施の形態では、前記抗原結合分子が、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ−１、又はＦＬＴ３を特異的に結合する。
【００２３】
幾つかの実施の形態では、前記活性化ドメインが、配列番号９又は配列番号２５１に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【００２４】
幾つかの実施の形態では、前記活性化ドメインが、配列番号８に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列によってコードされる。
【００２５】
幾つかの実施の形態では、前記ＣＡＲ又はＴＣＲがリーダーペプチドを更に含む。
【００２６】
幾つかの実施の形態では、前記リーダーペプチドが、配列番号１１に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【００２７】
幾つかの実施の形態では、前記リーダーペプチドが、配列番号１０に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列によってコードされる。
【００２８】
本発明の別の態様は、上の態様若しくは実施の形態のポリヌクレオチドを含むベクターである。
【００２９】
幾つかの実施の形態では、前記ベクターが、アデノウイルスベクター、アデノウイルス随伴ベクター、ＤＮＡベクター、レンチウイルスベクター、プラスミド、レトロウイルスベクター、若しくはＲＮＡベクター、又はそれらの任意の組み合わせである。
【００３０】
本発明の更に別の態様は、上の態様若しくは実施の形態のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、又は上の態様若しくは実施の形態のベクターである。
【００３１】
別の態様では、本発明は、上の態様若しくは実施の形態のポリヌクレオチド、上の態様若しくは実施の形態のベクター、又は上の態様若しくは実施の形態のポリペプチド、又はそれらの任意の組み合わせを含む細胞である。
【００３２】
幾つかの実施の形態では、上記細胞はＴ細胞である。
【００３３】
幾つかの実施の形態では、上記Ｔ細胞は、同種異系Ｔ細胞、自己Ｔ細胞、操作された自己Ｔ細胞（ｅＡＣＴ（商標））、又は腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である。
【００３４】
幾つかの実施の形態では、前記Ｔ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞である。
【００３５】
幾つかの実施の形態では、前記Ｔ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞である。
【００３６】
幾つかの実施の形態では、前記Ｔ細胞はｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞である。
【００３７】
幾つかの実施の形態では、前記Ｔ細胞は自己Ｔ細胞である。
【００３８】
本発明の態様は、上の態様若しくは実施の形態のポリヌクレオチドを含む、上の態様若しくは実施の形態のベクターを含む、上の態様若しくは実施の形態のポリペプチドを含む、又は上の態様若しくは実施の形態の細胞を含む組成物である。
【００３９】
幾つかの実施の形態では、上記組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤を任意に含めて、被験体に送達されるように製剤化される。
【００４０】
本発明の別の態様は、好適な条件下で、上の態様若しくは実施の形態のポリヌクレオチドで細胞を形質導入することを含む、ＣＡＲ又はＴＣＲを発現する細胞を作製する方法である。
【００４１】
幾つかの実施の形態では、上記方法は、細胞を単離することを更に含む。
【００４２】
本発明の更に別の態様は、上の態様若しくは実施の形態のポリヌクレオチドを含む、上の態様若しくは実施の形態のベクターを含む、若しくは上の態様若しくは実施の形態のポリペプチドを含む、又はそれらの任意の組み合わせを含む細胞を有効量、被験体に投与することを含む、腫瘍に対する免疫を誘導する方法である。
【００４３】
別の態様では、本発明は、上の態様若しくは実施の形態のポリヌクレオチド、上の態様若しくは実施の形態のベクター、上の態様若しくは実施の形態のポリペプチド、上の態様若しくは実施の形態の細胞、又は上の態様若しくは実施の形態の組成物を被験体に投与することを含む、癌の治療を、それを必要とする被験体において行う方法である。
【００４４】
幾つかの実施の形態では、前記癌は血液の癌である。
【００４５】
幾つかの実施の形態では、前記癌は白血球の癌である。
【００４６】
幾つかの実施の形態では、前記癌は形質細胞の癌である。
【００４７】
幾つかの実施の形態では、前記癌は、白血病、リンパ腫又は骨髄腫である。
【００４８】
幾つかの実施の形態では、前記癌は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、急性骨髄白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病、慢性若しくは急性の白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、毛様細胞性白血病、ホジキン病、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖性障害（無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）を含む）、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、形質細胞腫（形質細胞異常増殖症；孤立性骨髄腫；孤立性形質細胞腫；髄外性形質細胞腫；及び多発性形質細胞腫を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ−Ｆｕｋａｓｅ症候群、高月病、及びＰＥＰ症候群としても知られる）、縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞若しくは大細胞濾胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、Ｔ細胞リンパ腫、形質転換後濾胞性リンパ腫、若しくはワルデンストレームマクログロブリン血症、又はそれらの組み合わせである。
【００４９】
一般的には、本発明は、養子細胞移植（adoptive cell transfer）としても知られる「ｅＡＣＴ（商標）」と略記される、操作された自己細胞療法（Engineered Autologous Cell Therapy）に関する。ｅＡＣＴ（商標）は、患者自身のＴ細胞を収集し、その後、１以上の特定の癌細胞の細胞表面に発現される１以上の抗原を認識し、標的とするように遺伝子操作するプロセスである。Ｔ細胞は、例えばＣＡＲ又はＴＣＲを発現するように操作され得る。ＣＡＲ陽性（ＣＡＲ＋）Ｔ細胞は、ＣＡＲを発現するように操作される。ＣＡＲは、例えば、特定の腫瘍抗原に対する特異性を有する細胞外単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み得て、該ｓｃＦｖは、少なくとも１つの活性化ドメインに直接又は間接に連結される、少なくとも１つの共刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達部分に直接又は間接に連結され、それらの成分は任意の順序で配列され得る。共刺激ドメインは、当該技術分野で知られている共刺激タンパク質、例えば配列番号１に由来し得て、活性化ドメインは、例えばＣＤ３−ゼータのいずれかの形態に由来し得る。幾つかの実施の形態では、ＣＡＲは２個、３個、４個、又はそれ以上の共刺激ドメインを有するように設計される。幾つかの実施の形態では、ＣＡＲは、共刺激ドメインが別々のポリペプチド鎖として発現されるように操作される。ＣＡＲ  Ｔ細胞療法及びコンストラクトの例は、米国特許出願公開第２０１３／０２８７７４８号、同第２０１４／０２２７２３７号、同第２０１４／００９９３０９号、及び同第２０１４／００５０７０８号、国際公開第２０１２０３３８８５号、国際公開第２０１２０７９０００号、国際公開第２０１４１２７２６１号、国際公開第２０１４１８６４６９号、国際公開第２０１５０８０９８１号、国際公開第２０１５１４２６７５号、国際公開第２０１６０４４７４５号、及び国際公開第２０１６０９０３６９号；並びにSadelain et al, Cancer Discovery, 3: 388-398 (2013)に記載され、各々、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【００５０】
本明細書に記載される任意の態様又は実施の形態は、本明細書に開示される任意の他の態様又は実施の形態と組み合わせられ得る。本発明はその詳細な説明と併せて記載されているが、上述の記載は解説を意図するものであって、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を限定するものではない。他の態様、利点、及び変更形態は、添付の特許請求の範囲に含まれる。
【００５１】
本明細書で言及される特許及び科学文献は、当業者に利用可能な知識を確立する。本明細書で引用される米国特許、及び公開又は未公開の米国特許出願はいずれも、引用することにより本発明の一部をなす。本明細書で引用される公開された外国の特許及び特許出願はいずれも引用することにより本明細書の一部を成す。本明細書で引用される他の公開された参照文献、辞書、文書、原稿及び科学文献はいずれも、引用することにより本明細書の一部を成す。
【００５２】
本発明の他の特徴及び利点は、図面、及び実施例を含む以下の詳細な説明、並びに特許請求の範囲から明らかとなる。
【００５３】
添付の図面と併せて考慮された場合、上記及び更なる特徴は以下の詳細な記述からより明確に理解される。しかしながら、図面は限定ではなく、解説の目的であるにすぎない。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】図１Ａは、配列番号１のアミノ酸配列を有する共刺激タンパク質を示す。共刺激タンパク質のヒンジドメイン（実線）、膜貫通ドメイン（点線）、及びシグナル伝達ドメイン（破線）を表示する。新規な短縮ヒンジドメイン（「ＴＨＤ」）は太字で示している。図１Ｂ及び図１Ｃは、配列番号１のアミノ酸配列を有する共刺激タンパク質の細胞外ドメインのリボンダイアグラムを提供する。図１Ｂは、ＣＡＲに関して、ヒンジ領域の一実施形態を得るために使用した配列番号１のアミノ酸配列内の領域の例、すなわち、配列番号１のアミノ酸１１４〜１５２を含む領域（本明細書では完全ヒンジドメイン、すなわち「ＣＨＤ」と称される；黒色及び濃い灰色で示される）を示す。図１Ｃは、配列番号１のアミノ酸１２３〜１５２を含むＴＨＤを示す（黒色で示す）。図１Ｂでは、図１Ｃから排除されるヒンジ領域の部分を濃い灰色で示し、丸で囲む。
【図２】図２Ａ〜図２Ｈは、本明細書に開示される８つの結合分子の例のＣＬＵＴＳＴＡＬ  Ｗ（２．８３）多重配列アラインメントを示す。図２Ａは、ＶＨドメインを含む、抗ＣＬＬ−１結合分子の例の配列アラインメントを示す。Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングによって特定される、ＣＤＲ及びフレームワーク領域ＦＲが示される（図２Ａ）。図２Ｂは、図２Ａに図示される各ＶＨ及びＣＤＲに対する配列番号を提供する表である。図２Ｃは、ＶＬドメインを含む、抗ＣＬＬ−１結合分子の例の配列アラインメントを示す。Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングによって特定される、ＣＤＲ及びＦＲが示される（図２Ｃ）。図２Ｄは、図２Ｃに図示される各ＶＨ及びＣＤＲ配列に対する配列番号を提供する表である。図２Ｅは、ＶＨドメインを含む、抗ＢＣＭＡ結合分子の例の配列アラインメントを示す。Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングによって特定される、相補性決定領域（ＣＤＲ）及びフレームワーク領域（ＦＲ）が示される（図２Ｅ）。図２Ｆは、図２Ｅに図示される各ＶＨ及びＣＤＲに対する配列番号を提供する表である。図２Ｇは、ＶＬドメインを含む、抗ＢＣＭＡ結合分子の例の配列アラインメントを示す。Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングによって特定される、ＣＤＲ及びＦＲが示される（図２Ｇ）。図２Ｈは、図２Ｇに図示される各ＶＨ及びＣＤＲ配列に配列番号を提供する表である。
【図３】様々なＣＡＲをコードするｍＲＮＡで電気穿孔された初代ヒトＴ細胞におけるＣＡＲ発現を表す。完全ヒンジドメイン（「ＣＨＤ」）を有するＣＡＲから得られたデータを示し、また短縮ヒンジドメイン（「ＴＨＤ」）を有するＣＡＲから得られたデータを示す。
【図４】図４Ａ〜図４Ｘは、指定の標的細胞株との１６時間の共培養の後の、電気穿孔された抗ＦＬＴ３  ＣＡＲ  Ｔ細胞によるＩＦＮγ、ＩＬ−２、及びＴＮＦαの産生を示す。図４Ａ及び図４Ｂ、図４Ｇ及び図４Ｈ、図４Ｍ及び図４Ｎ、並びに図４Ｓ及び図４Ｔは、Ｎａｍａｌｗａ、ＥｏＬ−１、ＨＬ６０及びＭＶ４；１１の標的細胞との共培養後のＩＦＮγ産生をそれぞれ示す。図４Ｃ及び図４Ｄ、図４Ｉ及び図４Ｊ、図４Ｏ及び図４Ｐ、並びに図４Ｕ及び図４Ｖは、Ｎａｍａｌｗａ、ＥｏＬ−１、ＨＬ６０及びＭＶ４；１１の標的細胞との共培養後のＩＬ−２産生をそれぞれ示す。図４Ｅ及び図４Ｆ、図４Ｋ及び図４Ｌ、図４Ｑ及び図４Ｒ、並びに図４Ｗ及び図４Ｘは、Ｎａｍａｌｗａ、ＥｏＬ−１、ＨＬ６０及びＭＶ４；１１の標的細胞との共培養後のＴＮＦα産生をそれぞれ示す。
【図５】図５Ａ〜図５Ｈは、１６時間の共培養の後のＮａｍａｌｗａ（図５Ａ及び図５Ｂ）、ＥｏＬ１（図５Ｃ及び図５Ｄ）、ＨＬ６０（図５Ｅ及び図５Ｆ）及びＭＶ４；１１（図５Ｇ及び図５Ｈ）の標的細胞株に対する電気穿孔された抗ＦＬＴ３  ＣＡＲ  Ｔ細胞の細胞溶解性活性を示す。
【図６】図６Ａ及び図６Ｂは、２名の健康なドナーに由来する、レンチウイルスで形質導入された初代ヒトＴ細胞におけるＣＡＲ発現を表す。
【図７】図７Ａ〜図７Ｆは、指定の標的細胞株との１６時間の共培養の後の、２名の健康なドナーに由来する、レンチウイルスで形質導入されたＣＡＲ  Ｔ細胞によるＩＦＮγ（図７Ａ及び図７Ｂ）、ＴＮＦα（図７Ｃ及び図７Ｄ）及びＩＬ−２（図７Ｅ及び図７Ｆ）の産生を示す。
【図８】図８Ａ〜図８Ｄは、Ｎａｍａｌｗａ（図８Ａ）、ＥｏＬ１（図８Ｂ）、ＭＶ４；１１（図８Ｃ）及びＨＬ６０（図８Ｄ）の標的細胞株と共に１６時間、４０時間、６４時間、８８時間又は１１２時間に亘って共培養した抗ＦＬＴ３  ＣＡＲコンストラクトを発現する２名の健康なドナーによる経時的な平均細胞溶解活性を示す。
【図９】図９Ａ及び図９Ｂは、２名の健康なドナーに由来する、ＣＦＳＥ標識化レンチウイルスで形質導入されたＣＡＲ  Ｔ細胞のＣＤ３−ＣＤ２８ビーズ又は指定の標的細胞株との５日間の共培養の後の増殖を表す。
【図１０】図１０Ａ〜図１０Ｄは、ｉｎ  ｖｉｖｏ研究に使用されるレンチウイルスで形質導入された初代ヒトＴ細胞におけるＣＡＲ発現を表す。図１０Ｅ及び図１０Ｆは、２回繰り返して行われた、異種モデルにおける、対照（モック）又は抗ＦＬＴ３  ＣＡＲ  Ｔ細胞（１０Ｅ３−ＣＨＤ、１０Ｅ３−ＴＨＤ又は８Ｂ５−ＴＨＤ）のいずれかの静脈内注射の後の、標識化急性骨髄白血病（ＡＭＬ）細胞の測定された生物発光イメージングをグラフで表す。図１０Ｇは、図１０Ｅにおける各データ点に対するｐ値を提供する。図１０Ｈ〜図１０Ｋはモック若しくは１０Ｅ３−ＣＨＤ（図１０Ｈ）、モック若しくは１０Ｅ３−ＴＨＤ（図１０Ｉ）、モック若しくは８Ｂ５−ＴＨＤ（図１０Ｊ）、又は１０Ｅ３−ＴＨＤ若しくは８Ｂ５−ＴＨＤ（図１０Ｋ）のＣＡＲ  Ｔ細胞を注入したマウスの生存曲線を示す。
【図１１】図１１Ａ及び図１１Ｂは、ｍＲＮＡ電気穿孔から６時間後のプロテインＬによって特定されるＣＬＬ−１  ＣＡＲ発現を示す。
【図１２】図１２Ａ〜図１２Ｃは、ｍＲＮＡ電気穿孔から２４時間後の種々のＣＬＬ−１  ＣＡＲ−Ｔ細胞コンストラクトからのサイトカイン放出アッセイによる結果を示す。及び指定されるＮａｍａｌｗａ、ＭＶ４；１１、Ｕ９３７、ＨＬ６０及びＥｏＬ−１の細胞と共培養した、対照（標的単独、モック、ＧＦＰ及びＣＤ１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞）、抗ＣＬＬ−１  ＣＡＲ  Ｔ細胞（２４Ｃ１＿ＨＬ−ＴＨＤ、２４Ｃ１＿ＨＬ＿ＣＨＤ、２４Ｃ８＿ＨＬ−ＣＨＤ及び２４Ｃ８＿ＨＬ＿ＴＨＤ）に対するＩＬ−２（図１２Ａ）、ＩＦＮγ（図１２Ｂ）及びＴＮＦα（図１２Ｃ）の産生レベルを示す。
【図１３】図１３Ａ〜図１３Ｅは、ｍＲＮＡ電気穿孔から２４時間後の種々のＣＬＬ−１  ＣＡＲ−Ｔ細胞コンストラクトの細胞溶解性活性を示す。対照コンストラクト（モック、ＧＦＰ、及びＣＤ１９  ＣＡＲ）又は抗ＣＬＬ−１  ＣＡＲコンストラクト（２４Ｃ８＿ＨＬ−ＣＨＤ及び２４Ｃ８＿ＨＬ＿ＴＨＤ）で電気穿孔したＴ細胞をＮａｍａｌｗａ（図１３Ａ）、ＭＶ；４１１（図１３Ｂ）、ＥｏＬ−１（図１３Ｃ）、ＨＬ−６０（図１３Ｄ）及びＵ９３７の標的細胞と共培養し、各標的細胞株の特異的溶解（specific lysis）パーセントを判定した。
【図１４】図１４Ａ〜図１４Ｃは、種々の細胞株との共培養から１６時間後の種々の形質導入された抗ＣＬＬ−１  ＣＡＲ  Ｔ細胞からのサイトカイン放出アッセイによる結果を示す。ＩＦＮγ（図１４Ａ）、ＩＬ−２（図１４Ｂ）、及びＴＮＦα（図１４Ｃ）の産生レベルを、指定されるＮａｍａｌｗａ、ＨＬ−６０又はＭＶ４；１１の標的細胞と共培養した、対照（標的単独及びモック）、及び形質導入された抗ＣＬＬ−１  ＣＡＲ  Ｔ細胞（１０Ｅ３＿ＴＨＤ及び２４Ｃ１＿ＬＨ＿ＴＨＤ）について示す。
【図１５】図１５Ａ〜図１５Ｃは、Ｎａｍａｌｗａ（図１５Ａ）、ＭＶ４；１１（図１５Ｂ）、又はＨＬ−６０  （図１５Ｃ）の標的細胞との共培養から１６時間後及び４０時間後の抗ＣＬＬ−１  ＣＡＲ  Ｔ細胞（Ｃ１＿２４Ｃ１＿ＬＨ＿ＴＨＤ）による細胞溶解活性を示す。
【図１６】図１６Ａ〜図１６Ｆは、ＥｏＬ−１（黒色）、ＮＣＩ−Ｈ９２９（薄い灰色）、又はＭＭ１Ｓ（灰色）の標的細胞株と１６時間、共培養した後の、２名の健康なドナーに由来する、レンチウイルスで形質導入されたＣＡＲ  Ｔ細胞によるＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ−２の産生を示す。図１６Ａ及び図１６Ｂは、第１のドナー（図６Ａ）及び第２のドナー（図１６Ｂ）に由来するレンチウイルスで形質導入されたＣＡＲ  Ｔ細胞におけるＩＦＮγ（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）産生を示す。図１６Ｃ及び図１６Ｄは、第１のドナー（図１６Ｃ）及び第２のドナー（図１６Ｄ）に由来するレンチウイルスで形質導入されたＣＡＲ  Ｔ細胞におけるＴＮＦα（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）産生を示す。図１６Ｅ及び図１６Ｆは、第１のドナー（図１６Ｅ）及び第２のドナー（図１６Ｆ）に由来するレンチウイルスで形質導入されたＣＡＲ  Ｔ細胞におけるＩＬ−２産生（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）を示す。
【図１７】図１７Ａ〜図１７Ｆは、ＥｏＬ１（図１７Ａ及び図１７Ｂ）、ＮＣＩ−Ｈ９２９（図１７Ｃ及び図１７Ｄ）、又はＭＭ１Ｓ（図１７Ｅ及び図１７Ｆ）の標的細胞と１６時間、４０時間、６４時間、８８時間、又は１１２時間に亘って共培養された、指定されるＣＡＲを発現する２名の健康なドナーによる経時的な平均細胞溶解活性（残存する生存可能な標的細胞のパーセンテージとして；ｙ軸）を示す。図１７Ａ及び図１７Ｂは、ＥｏＬ１標的細胞と１６時間、４０時間、６４時間、８８時間、又は１１２時間に亘って共培養された第１のドナー（図１７Ａ）及び第２のドナー（図１７Ｂ）に由来する形質導入されたＣＡＲ  Ｔ細胞の平均細胞溶解活性を示す。図１７Ｃ及び図１７Ｄは、ＮＣＩ−Ｈ９２９標的細胞と１６時間、４０時間、６４時間、８８時間、又は１１２時間に亘って共培養された第１のドナー（図１７Ｃ）及び第２のドナー（図１７Ｄ）に由来する形質導入されたＣＡＲ  Ｔ細胞の平均細胞溶解活性を示す。図１７Ｅ及び図１７Ｆは、ＭＭ１Ｓ標的細胞と１６時間、４０時間、６４時間、８８時間、又は１１２時間に亘って共培養された第１のドナー（図１７Ｅ）及び第２のドナー（図１７Ｆ）に由来する形質導入されたＣＡＲ  Ｔ細胞の平均細胞溶解活性を示す。
【図１８】図１８Ａ及び図１８Ｂは、ＣＤ３−ＣＤ２８ビーズ（最上段）、ＥｏＬ−１（２段目）、ＮＣＩ−Ｈ９２９（３段目）又はＭＭ１Ｓ（最下段）の標的細胞株と６日間、共培養した後の第１の健康なドナー（図１８Ａ）及び第２の健康なドナー（図１８Ｂ）に由来するＣＦＳＥ標識化レンチウイルスで形質導入されたＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖を示す。
【図１９】図１９Ａ及び図１９Ｂは、本発明のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の熱安定性を示すグラフである。図１９Ａ：リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）溶液中では、短縮ヒンジドメイン（「ＴＨＤ」）を有する細胞外ドメインを含むＣＡＲは、完全ヒンジドメイン（「ＣＨＤ」）を有する細胞外ドメインを含むＣＡＲと比較して、より高い融点を有する。図１９Ｂ：５０ｍＭ  ＮａＣｌの存在下では、ＴＨＤを有する細胞外ドメインを含むＣＡＲは、ＣＨＤを有する細胞外ドメインを含むＣＡＲと比較して、より高い融点を有する。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
本発明は、新規な短縮ヒンジドメイン（「ＴＨＤ」）を含む新規なポリペプチド、及びそれをコードするポリヌクレオチドに関する。本発明の幾つかの態様は、本明細書に開示されるＴＨＤを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ：chimeric antigen receptor）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ：T cell receptor）をコードするポリヌクレオチドに関する。また、本発明は、かかるポリヌクレオチドを含むベクター（例えばウイルスベクター）、及びかかるベクターを含む組成物を提供する。本発明は、かかるＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチド、及びかかるポリヌクレオチドを含む組成物を更に提供する。さらに、本発明は、かかるポリヌクレオチドを含む及び／又はかかるウイルスベクターによって形質導入された操作された細胞（例えばＴ細胞）、並びにかかる操作された細胞を含む組成物を提供する。本発明は、複数の操作されたＴ細胞を含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。本発明は、かかる操作されたＴ細胞及び組成物を製造する方法、並びにかかる操作されたＴ細胞及び組成物の（例えば黒色腫の治療における）使用を提供する。また、本発明は、本発明のポリヌクレオチド、ベクター、又はポリペプチドを含む細胞を有効量、被験体に投与することを含む、腫瘍に対する免疫を誘導する方法を提供する。本発明の他の態様は、ＣＡＲ又はＴＣＲを含む細胞、Ｔ細胞療法、例えば癌に罹患した患者の治療に対する自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））におけるそれらの使用に関する。
【００５６】
定義
本発明がより容易に理解されるように、まず特定の用語を以下に定義する。以下の用語及び他の用語に対する更なる定義は、本明細書を通して記載される。
【００５７】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される、数量を特定していないもの（the singular forms "a," "an" and "the"）は、文脈より別段の明確な指示がない限り複数の指示対象を含む。
【００５８】
具体的に述べられない又は文脈より明らかでない限り、本明細書で使用される「又は」の用語は「又は」と「及び」の両方を含み、それらを包含すると理解される。
【００５９】
本明細書において使用される場合、「及び／又は」の用語は、２つの指定される特徴又は成分の各々ともう一方とを含む、又はもう一方を含まない具体的な開示として理解される。したがって、本明細書において「Ａ及び／又はＢ」等の句で使用される「及び／又は」の用語は、Ａ及びＢ；Ａ又はＢ；Ａ（単独）；及びＢ（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」等の句において使用される「及び／又は」の用語は、Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；並びにＣ（単独）の態様の各々を包含することが意図される。
【００６０】
本明細書で使用される「例えば」及び「すなわち」の用語は、限定を意図せずに例として使用されるにすぎず、本明細書において明らかに列挙されるそれらの項目のみを指すものと解釈されるべきではない。
【００６１】
「以上」、「少なくとも」、「それよりも多く」等の用語、例えば「少なくとも１つ」は、限定されないが、示される値よりも少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９又は１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００以上多い値を含むと理解される。また、任意のより大きな数、又はその間の分数も含まれる。
【００６２】
逆に、「以下」の用語は示される値よりも小さい各値を含む。例えば、「１００ヌクレオチド以下」は、１００個、９９個、９８個、９７個、９６個、９５個、９４個、９３個、９２個、９１個、９０個、８９個、８８個、８７個、８６個、８５個、８４個、８３個、８２個、８１個、８０個、７９個、７８個、７７個、７６個、７５個、７４個、７３個、７２個、７１個、７０個、６９個、６８個、６７個、６６個、６５個、６４個、６３個、６２個、６１個、６０個、５９個、５８個、５７個、５６個、５５個、５４個、５３個、５２個、５１個、５０個、４９個、４８個、４７個、４６個、４５個、４４個、４３個、４２個、４１個、４０個、３９個、３８個、３７個、３６個、３５個、３４個、３３個、３２個、３１個、３０個、２９個、２８個、２７個、２６個、２５個、２４個、２３個、２２個、２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、１個及び０個のヌクレオチドを含む。また、任意のより小さな数、又はその間の分数も含まれる。
【００６３】
「複数」、「少なくとも２つ」、「２以上」、「少なくとも第２の」等の用語は、限定されないが、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９又は１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００以上を含むと理解される。また、任意のより大きな数、又はその間の分数も含まれる。
【００６４】
明細書を通して、「含んでいる、含む（comprising）」の文言、又は「含む（comprises）」若しくは「含んでいる（comprising）」等の変化形は、示される要素、整数若しくは工程、又は要素、整数若しくは工程の群を含むことを含意するが、任意の他の要素、整数若しくは工程、又は要素、整数若しくは工程の群を排除しないと理解される。本明細書において「含んでいる、含む」の言葉と共に態様が記載される場合はいつでも、「からなる」及び／又は「から本質的になる」の用語で記載される他の類似の態様も提供されると理解される。
【００６５】
具体的に述べられておらず又は文脈より明らかでない限り、本明細書で使用される「約」の用語は、当業者によって決定される特定の値又は組成に対する許容可能な誤差範囲に含まれる値又は組成を指し、その値又は組成がどのように測定され又は決定されるのか、すなわち測定システムの制限に部分的に依存する。例えば、「約」又は「を本質的に含む、を本質的に含んでいる（comprising essentially of）」は、当該技術分野における１回の実施当たりの１以上の標準偏差の範囲内を意味し得る。「約」又は「を本質的に含む、を本質的に含んでいる」は、最大１０％（すなわち±１０％）の範囲を意味し得る。したがって、「約」は、示される値よりも１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、０．０１％、又は０．００１％大きい又は小さい範囲に含まれると理解され得る。例えば、約５ｍｇは、４．５ｍｇ〜５．５ｍｇの間の任意の量を含み得る。さらに、特に生物学的なシステム又はプロセスに関して、上記用語は、或る値の最大１０倍又は最大５倍を意味する場合がある。特定の値又は組成が本開示で提供される場合、別段の指示がない限り、「約」又は「を本質的に含む、を本質的に含んでいる」の意味は、その特定の値又は組成に対する許容可能な誤差の範囲に含まれるとされる。
【００６６】
本明細書に記載されるように、任意の濃度範囲、パーセンテージの範囲、比率範囲、又は整数の範囲は、別段の指示がない限り、述べられる範囲に含まれる任意の整数、また適切な場合には、その分数（或る整数の１０分の１、及び１００分の１等）の値を含むものと理解される。
【００６７】
本明細書で使用される単位、接頭辞及び記号は、それらの国際単位系（ＳＩ：Systeme International de Unites）の容認される形態で提示される。数値範囲は、その範囲を規定する数字を含む。
【００６８】
別段の規定がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、この開示が関係する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、Juo, "The Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology", 2nd ed., (2001), CRC Press、"The Dictionary of Cell & Molecular Biology", 5th ed., (2013), Academic Press、及び"The Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology", Cammack et al. eds., 2nd ed, (2006), Oxford University Pressは、この開示で使用される多くの用語の一般的な辞書を当業者に提供する。
【００６９】
「投与すること、投与する（Administering）」は、当業者に知られている様々な方法及び送達システムのいずれかを使用する、被験体に対する薬剤の物理的な導入を指す。本明細書に開示される製剤に対する例示的な投与経路として、例えば注射又は点滴による静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、脊柱又は他の非経口的な（parenteral：腸管外）投与経路が挙げられる。本明細書で使用される「非経口投与」の句は、経腸及び局所の投与以外の、通常は注射による投与様式を意味し、限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ管内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内の注射及び点滴、また同様にｉｎ  ｖｉｖｏ電気穿孔を含む。幾つかの実施形態では、上記製剤は、非経口的ではない経路、例えば経口で投与される。他の非経口的ではない経路として、局所、表皮、又は粘膜の投与経路、例えば、鼻腔内、経膣的、直腸、舌下又は局所的なものが挙げられる。また、投与は、例えば１回、複数回、及び／又は１以上の延長された期間に亘って行われ得る。
【００７０】
「抗体」（Ａｂ）の用語は、限定されず、抗原に特異的に結合する糖タンパク質免疫グロブリンを含む。一般に、抗体は、ジスルフィド結合によって相互に連結された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖及び２本の軽（Ｌ）鎖、又はそれらの抗原結合分子を含み得る。各Ｈ鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略記する）及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つの定常ドメイン、すなわちＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略記する）及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つの定常ドメイン、すなわちＣＬを含む。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存される領域が介在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域に更に細分され得る。ＶＨ及びＶＬはそれぞれ、アミノ末端からカルボキシ末端にＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の順で並ぶ、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲを含む。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。Ａｂの定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）及び古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主の組織又は因子に対する免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【００７１】
抗体として、例えば、モノクローナル抗体、組み換えにより生成された抗体、単一特異的抗体、多重特異的抗体（二重特異的抗体を含む）、ヒト抗体、操作された抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２本の重鎖分子及び２本の軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖−抗体重鎖対、イントラボディ（intrabodies）、抗体融合体（本明細書では「抗体コンジュゲート」と称されることがある）、ヘテロコンジュゲート抗体、単一ドメイン抗体、一価抗体、単鎖抗体又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体、アフィボディ（affybodies）、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば抗−抗−Ｉｄ抗体を含む）、ミニボディ（minibodies）、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書では「抗体模倣物」と称されることがある）、及び上記のいずれかの抗原結合フラグメントが挙げられ得る。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ポリクローナル抗体集団を指す。
【００７２】
免疫グロブリンは、限定されないが、ＩｇＡ、分泌型ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ及びＩｇＭを含む、一般的に知られているアイソタイプのいずれかに由来し得る。ＩｇＧサブクラスもまた、当業者に良く知られており、限定されないが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む。「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされるＡｂクラス又はサブクラス（例えば、ＩｇＭ又はＩｇＧ１）を指す。「抗体」の用語は、例として、天然起源と非天然起源の両方のＡｂ、モノクローナル及びポリクローナルのＡｂ；キメラＡｂ及びヒト化Ａｂ；ヒトＡｂ又は非ヒトＡｂ；全合成Ａｂ；並びに単鎖Ａｂを含む。非ヒトＡｂは、ヒトにおけるその免疫原性を減少させるため、組み換え法によってヒト化され得る。明確に述べられない場合、また別段の指示がない限り、「抗体」の用語は、前述の免疫グロブリンのいずれかの抗原結合フラグメント又は抗原結合部分も含み、一価及び二価のフラグメント又は部分、並びに単鎖Ａｂを含む。
【００７３】
「抗原結合分子」、「抗原結合部分」又は「抗体フラグメント」は、抗体の抗原結合部（例えばＣＤＲ）を含む任意の分子を指し、この分子は該抗体に由来する。抗原結合分子は、抗原相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み得る。抗体フラグメントの例として、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント、ｄＡｂ、直鎖抗体、ｓｃＦｖ抗体、並びに抗原結合分子から形成される多重特異性抗体が挙げられる。ペプチボディ（Peptibodies）（すなわち、ペプチド結合ドメインを含むＦｃ融合分子）は、好適な抗原結合分子の別の例である。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は腫瘍細胞上の抗原に結合する。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、過剰増殖性疾患（hyperproliferative disease）に関与する細胞上の抗原、又はウイルス若しくは細菌の抗原に結合する。特定の実施形態では、抗原結合分子はＢＣＭＡ、ＣＬＬ−１又はＦＬＴ３に結合する。更なる実施形態では、抗原結合分子は、その１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗原に特異的に結合する抗体フラグメントである。更なる実施形態では、抗原結合分子は単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、アビマー（avimers）を含む、又はそれからなる。
【００７４】
本明細書で使用される「可変領域」又は「可変ドメイン」の用語は、交換可能に使用され、当該技術分野において一般的である。可変領域は、典型的には抗体の一部、一般的には、軽鎖又は重鎖の一部、典型的には成熟重鎖中のアミノ末端の約１１０個〜１２０個のアミノ酸、及び成熟軽鎖中の約９０個〜１１５個のアミノ酸を指し、それらは、抗体間で配列が広範囲に異なり、その特定の抗原に対する特定の抗体の結合及び特異性において使用される。配列における可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される領域に濃縮されるのに対し、可変ドメイン中のより高度に保存された領域はフレームワーク領域（ＦＲ）と称される。いかなる特定の機構又は理論にも縛られることを望むものではないが、軽鎖及び重鎖のＣＤＲは、抗体の抗原との相互作用及び特異性を主として担うものと考えられる。特定の実施形態では、可変領域はヒト可変領域である。特定の実施形態では、可変領域は、齧歯類又はネズミ科のＣＤＲ、及びヒトのフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の実施形態では、可変領域は霊長類（例えば非ヒト霊長類）の可変領域である。特定の実施形態では、可変領域は、齧歯類又はネズミ科のＣＤＲ、及び霊長類（例えば非ヒト霊長類）のフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
【００７５】
「ＶＬ」及び「ＶＬドメイン」の用語は、抗体の軽鎖可変領域又はその抗原結合分子を指すため区別なく使用される。
【００７６】
「ＶＨ」及び「ＶＨドメイン」の用語は、抗体の重鎖可変領域又はその抗原結合分子を指すため区別なく使用される。
【００７７】
ＣＤＲの多くの定義、すなわち、Ｋａｂａｔナンバリング、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリング、ＡｂＭナンバリング、又は接触（contact）ナンバリングが一般に使用されている。ＡｂＭ定義は、Oxford Molecular社のＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用される２つの折衷案である。接触定義は、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づく。
【００７８】
【表１】
2019516350.tif 000003
【００７９】
「Ｋａｂａｔナンバリング」の用語及び類似の用語は、当該技術分野において認められ、抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域、又はその抗原結合分子中のアミノ酸残基をナンバリングするシステムを指す。特定の態様では、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って、抗体のＣＤＲを特定することができる（例えば、Kabat EA & Wu TT (1971) Ann NY Acad Sci 190: 382-391、及びKabat EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242を参照されたい）。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用すると、抗体重鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、３５（Ｋａｂａｔナンバリングスキームでは３５Ａ及び３５Ｂと呼ばれる）に続いて任意に１つ又は２つの追加のアミノ酸を含み得るアミノ酸３１位〜３５位（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０位〜６５位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸９５位〜１０２位（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用すると、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸２４位〜３４位（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０位〜５６位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸８９位〜９７位（ＣＤＲ３）に存在する。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って決定された。
【００８０】
特定の態様では、抗体のＣＤＲは、免疫グロブリンの構造ループの位置を指す、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキームに従って特定され得る（例えば、Chothia C & Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917、Al-Lazikani B et al., (1997) J Mol Biol 273: 927-948、Chothia C et al., (1992) J Mol Biol 227: 799-817、Tramontano A et al., (1990) J Mol Biol 215(1): 175-82、及び米国特許第７，７０９，２２６号を参照されたい）。典型的には、Ｋａｂａｔナンバリング規定を使用する場合、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ１ループは重鎖のアミノ酸２６〜３２、３３又は３４に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ２ループは重鎖のアミノ酸５２〜５６に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ３ループは重鎖のアミノ酸９５〜１０２に存在するのに対し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｌ１ループは軽鎖のアミノ酸２４〜３４に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｌ２ループは軽鎖のアミノ酸５０〜５６に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｌ３ループは軽鎖のアミノ酸８９〜９７に存在する。ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−ＨＩループの末端は、Ｋａｂａｔナンバリング規定を使用して番号を付与した場合には、ループの長さに応じてＨ３２〜Ｈ３４の間で変動する（これは、ＫａｂａｔナンバリングスキームがＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を置くため、すなわち３５Ａも３５Ｂも存在しない場合には３２でループが終了し、３５Ａのみが存在する場合には３３でループが終了し、３５Ａと３５Ｂの両方が存在する場合には３４でループが終了するからである）。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体のＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａナンバリングスキームに従って特定された。
【００８１】
本明細書で使用される「定常領域」及び「定常ドメイン」の用語は区別なく用いられ、当該技術分野で共通の意味を有する。定常領域は抗体部分、例えば、抗原に対する抗体の結合に直接関係しないが、Ｆｃ受容体との相互作用等の様々なエフェクター機能を呈し得る、軽鎖及び／又は重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は、一般に、免疫グロブリン可変ドメインと比較して、より保存されたアミノ酸配列を有する。
【００８２】
本明細書で使用される「重鎖」の用語は、抗体に関して使用される場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の異なる種類、ＩｇＧのサブクラス、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭのクラスの抗体をそれぞれ生じさせる、例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）を指す場合がある。
【００８３】
本明細書で使用される「軽鎖」の用語は、抗体に関して使用される場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の異なる種類、例えばカッパー（κ）又はラムダ（λ）を指す場合がある。軽鎖アミノ酸配列は当該技術分野においてよく知られている。具体的な実施形態では、軽鎖はヒト軽鎖である。
【００８４】
「結合親和性」は、一般的には、分子（例えば抗体）の単一の結合部位と、その結合パートナー（例えば抗原）との間の非共有結合的な相互作用の合計の強さを指す。別段の指示がない限り、本明細書で使用される「結合親和性」は、結合ペアのメンバー（例えば抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する、固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般的には、解離定数（ＫＤ）によって表され得る。親和性は、限定されないが、平衡解離定数（ＫＤ）及び平衡会合定数（ＫＡ）を含む、当該技術分野で知られている多くの方法で測定され得る及び／又は表され得る。ＫＤはｋｏｆｆ／ｋｏｎの商から計算されるが、ＫＡはｋｏｎ／ｋｏｆｆの商から計算される。ｋｏｎは、例えば抗原に対する抗体の会合速度定数を指し、ｋｏｆｆは、例えば抗原に対する抗体の解離を指す。ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）又はＫｉｎＥｘＡ等の当業者に知られている技術によって決定され得る。
【００８５】
本明細書で使用される「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されるものである。側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当該技術分野において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合分子のＣＤＲ（複数の場合がある）内又はフレームワーク領域（複数の場合がある）内の１以上のアミノ酸残基を、類似する側鎖を有するアミノ酸残基で置換することができる。
【００８６】
本明細書で使用される「異種性（の）（heterologous）」の用語は、天然起源の配列以外の任意の供給源によることを意味する。例えば、配列番号１のアミノ酸配列を有する共刺激タンパク質、例えば対応するヒト共刺激タンパク質の一部として含まれる異種性配列は、野生型ヒト共刺激タンパク質として天然に生じない、すなわちそれと整列（align）されないアミノ酸配列である。例えば、異種性ヌクレオチド配列は、野生型ヒト共刺激タンパク質コーディング配列以外のヌクレオチド配列を指す。
【００８７】
本明細書で使用される「エピトープ」は、当該技術分野における用語であり、抗体が特異的に結合することができる抗原の局在化領域を指す。エピトープは、例えばポリペプチドの隣接するアミノ酸（直鎖の又は隣接するエピトープ）であってもよく、又はエピトープは、例えば、ポリペプチド（複数の場合がある）の２以上の隣接しない領域に共に由来するもの（配座、非直鎖、不連続、又は隣接しないエピトープ）であってもよい。特定の実施形態では、抗体が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析と結合された水素／重水素交換（例えば液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、アレイに基づくオリゴペプチド走査アッセイ、及び／又は突然変異誘発マッピング（例えば部位特異的変異誘発マッピング）によって特定され得る。Ｘ線結晶学研究のため、結晶化は、当該技術分野の既知の方法（例えば、Giege R et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350、McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23、Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274、McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303）のいずれかを使用して遂行され得る。抗体：抗原の結晶は、良く知られているＸ線回折技術を使用して研究され得て、Ｘ−ＰＬＯＲ（Yale University, 1992、Molecular Simulations, Inc.によって配布；例えば、Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW et al.,を参照されたい；米国特許出願公開第２００４／００１４１９４号）、及びＢＵＳＴＥＲ（Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1): 37-60、Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter CW、Roversi P et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323）等のコンピューターソフトウェアを使用してリファインされ得る。突然変異誘発マッピング研究は、当業者に知られている任意の方法を使用して遂行され得る。例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発技術を含む、突然変異誘発技術の説明について、Champe M et al., (1995) J Biol Chem 270: 1388-1394、及びCunningham BC & Wells JA (1989) Science 244: 1081-1085を参照されたい。
【００８８】
本明細書で使用されるように、抗原と、第１の結合分子、抗体又はその抗原結合分子との相互作用が、参照結合分子、参照抗体又はその抗原結合分子の抗原と相互作用する能力を遮断する、制限する、阻害する、或いは減少させる場合、抗原結合分子、抗体又はその抗原結合分子は、参照抗体又はその抗原結合分子と「交差競合する」。交差競合は、完全なものであってもよく、例えば、抗原に対する結合分子の結合が、参照結合分子の抗原に結合する能力を完全に遮断するか、又は交差競合は、部分的であってもよく、例えば、抗原に対する結合分子の結合が、参照結合分子の抗原に結合する能力を減少させる。特定の実施形態では、参照抗原結合分子と交差競合する抗原結合分子は、参照抗原結合分子と同じ、又はそれと重複するエピトープを結合する。他の実施形態では、参照抗原結合分子と交差競合する抗原結合分子は、参照抗原結合分子とは異なるエピトープを結合する。多くの種類の競合結合アッセイ、例えば、固相直接又は間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）；固相直接又は間接酵素免疫定量法（ＥＩＡ）；サンドイッチ競合アッセイ（Stahli et al., 1983, Methods in Enzymology 9:242-253）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Kirkland et al., 1986, J. Immunol. 137:3614-3619）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Harlow and Lane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press）；Ｉ１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Morel et al., 1988, Molec. Immunol. 25:7-15）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Cheung, et al., 1990, Virology 176:546-552）；及び直接標識ＲＩＡ（Moldenhauer et al., 1990, Scand. J. Immunol. 32:77-82）を使用して、或る一つの抗原結合分子が他方と競合するかどうかを判断することができる。
【００８９】
本明細書で使用される「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、「特異的に結合する」、及び「特異的に認識する」の用語は、抗体に関して類似の用語であって、抗原（例えばエピトープ又は免疫複合体）に結合する分子を指し、かかる結合は当業者によって理解される通りである。例えば、抗原に特異的に結合する分子は、一般的には、例えばイムノアッセイ、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）、ＫｉｎＥｘＡ  ３０００測定器（アイダホ州ボイシのSapidyne Instruments）又は当該技術分野で知られている他のアッセイによって特定されるように、より低い親和性で他のペプチド又はポリペプチドに結合し得る。具体的な実施形態では、抗原に特異的に結合する分子は、分子が別の抗原に結合する場合のＫＡと比べて少なくとも２ｌｏｇ、２．５ｌｏｇ、３ｌｏｇ、４ｌｏｇ以上のＫＡで抗原に結合する。
【００９０】
別の実施形態では、抗原に特異的に結合する分子は、約１×１０−７Ｍの解離定数（Ｋｄ）で結合する。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、Ｋｄが約１×１０−９Ｍ〜約５×１０−９Ｍである場合、「高い親和性」で抗原を特異的に結合する。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、Ｋｄが約１×１０−１０Ｍ〜約５×１０−１０Ｍである場合、「非常に高い親和性」で抗原を特異的に結合する。一実施形態では、抗原結合分子は１０−９ＭのＫｄを有する。一実施形態では、解離速度（off-rate）は約１×１０−５未満である。他の実施形態では、抗原結合分子は、約１×１０−７Ｍ〜約１×１０−１３ＭのＫｄでヒトＢＣＭＡを結合する。更に別の実施形態では、抗原結合分子は、約１×１０−１０Ｍ〜約５×１０−１０ＭのＫｄでヒトＢＣＭＡを結合する。
【００９１】
具体的な実施形態では、別の種の標的抗原、例えば非ヒトＢＣＭＡ又は非ヒトＣＬＬ−１に対するよりも高い親和性にて標的ヒト抗原、例えばヒトＢＣＭＡ又はヒトＣＬＬ−１に結合する抗体又はその抗原結合分子が本明細書において提供される。特定の実施形態では、例えばラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴又は動力学的排除アッセイ（kinetic exclusion assay）によって測定される、別の種の標的抗原に対するよりも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％以上高い親和性にて標的ヒト抗原、例えばヒトＢＣＭＡ又はヒトＣＬＬ−１に結合する抗体又はその抗原結合分子が本明細書において提供される。具体的な実施形態では、標的ヒト抗原に結合する、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合分子は、例えばラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴又は動力学的排除アッセイによって測定される、ヒト抗原に対する抗体又はその抗原結合分子の結合の１０％、１５％、又は２０％未満で別の種の標的抗原に結合する。
【００９２】
「抗原」は、免疫応答を誘発する、又は抗体若しくは抗原結合分子によって結合されることが可能な任意の分子を指す。免疫応答は、抗体産生若しくは特定の免疫適格細胞（immunologically-competent cells）の活性化のいずれか、又はそれらの両方を含み得る。当業者は、実質的に全てのタンパク質又はペプチドを含む任意の高分子が抗原としての役割を果たし得ることを容易に理解する。抗原は内因性に発現され得て、すなわちゲノムＤＮＡによって発現され得るか、又は組み換えによって発現され得る。抗原は、癌細胞等の特定の組織に特異的となり得るか、又は広く発現され得る。さらに、より大きな分子のフラグメントが抗原として作用し得る。一実施形態では、抗原は腫瘍抗原である。特定の一実施形態では、抗原はＢＣＭＡ、ＦＬＴ３又はＣＬＬ−１の全部又はフラグメントである。
【００９３】
「中和する、中和すること」の用語は、リガンドに結合し、そのリガンドの生物学的効果を妨げる又は減少させる抗原結合分子、ｓｃＦｖ、抗体、又はそのフラグメントを指す。幾つかの実施形態では、抗原結合分子、ｓｃＦｖ、抗体、又はそのフラグメントは、リガンド上の結合部位を直接遮断する、或いは間接的な手段（リガンドの構造の又はエネルギーの変更等）によってリガンドの結合能を変更する。幾つかの実施形態では、抗原結合分子、ｓｃＦｖ、抗体、又はそのフラグメントは、結合されるタンパク質が生体機能を実施するのを妨げる。
【００９４】
本明細書で使用される「ＢＣＭＡ」の用語は、限定されないが、ナイーブＢＣＭＡ、ＢＣＭＡのアイソフォーム、又はＢＣＭＡの種間ＢＣＭＡホモログを含み得る、Ｂ細胞成熟抗原を指す。ＢＣＭＡ（ＴＮＦＲＳＦ１７、ＣＤ２６９及びＴＮＦＲＳＦ１３Ａとしても知られる）は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−受容体スーパーファミリーのメンバーである。ＢＣＭＡは多発性骨髄腫細胞の表面に発現されるが、健康な組織では、形質細胞及び成熟Ｂ細胞のサブセットに高度に限定される。ヒトＢＣＭＡ（ｈＢＣＭＡ）のアミノ酸配列は、ＮＣＢＩアクセッションＱ０２２２３．２（ＧＩ：３１３１０４０２９）に提供される。本明細書で使用されるＢＣＭＡは、ヒトＢＣＭＡ及び非ヒトＢＣＭＡホモログと並んで、変異体、フラグメント、又は限定されないが、ＢＣＭＡのＮ結合型及びＯ結合型のグリコシル化形態を含む、それらの翻訳後（post-transnationally）修飾形態を含む。ＢＣＭＡタンパク質は、ＢＣＭＡの細胞外ドメインの全部又は一部（例えば、ｈＢＣＭＡのアミノ酸１〜５４の全部又は一部）を含むフラグメントを更に含み得る。
【００９５】
本明細書で使用される「ＣＬＬ−１」の用語は、Ｃ型レクチン様分子−１を指し、限定されないが、天然ＣＬＬ−１、ＣＬＬ−１のアイソフォーム又はＣＬＬ−１の種間ＣＬＬ−１ホモログを含み得る。ＣＬＬ−１（Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ、ＣＬＥＣ１２Ａ、樹状細胞関連レクチン２、ＤＣＡＬ−２、骨髄抑制Ｃ型レクチン様受容体、及びＭＩＣＬとしても知られる）は、シグナル伝達カスケードを調節し、標的ＭＡＰキナーゼのチロシンリン酸化を媒介する細胞表面受容体である。ＣＬＬ−１発現は、例えば急性骨髄白血病（ＡＭＬ）細胞において観察される。ヒトＣＬＬ−１（ｈＣＬＬ−１）のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ５ＱＧＺ９．３（ＧＩ：３０８１５３６１９）において提供される。本明細書で使用されるように、ＣＬＬ−１は、ヒトＣＬＬ−１及び非ヒトＣＬＬ−１ホモログと並んで、限定されないが、ＣＬＬ−１のＮ結合型及びＯ結合型のグリコシル化形態を含む、その変異体、フラグメント、又は翻訳後修飾の形態を含む。
【００９６】
本明細書で使用される「ＦＬＴ３」の用語は、限定されないが、天然ＦＬＴ３、ＦＬＴ３のアイソフォーム、又はＦＬＴ３の種間ＦＬＴ３ホモログを含み得る、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ−３）を指す。ＦＬＴ３（分化抗原群１３５クラスタ（ＣＤ１３５）、受容体型チロシンプロテインキナーゼＦＬＴ３、ＦＭＳ関連チロシンキナーゼ３、幹細胞チロシンキナーゼ１、ＦＬサイトカイン受容体、ＩＩＩ型成長因子受容体チロシンキナーゼ、ＳＴＫ１、又は胎児肝臓キナーゼ−２（Ｆｌｋ２）としても知られる）は、受容体チロシンキナーゼクラスＩＩＩに属するサイトカイン受容体である。ＣＤ１３５は、サイトカインＦｌｔ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）に対する受容体である。ＦＬＴ３は様々な造血前駆細胞の表面、及び急性骨髄白血病（ＡＭＬ）細胞の表面で発現される。ヒトＦＬＴ３（ｈＦＬＴ３）のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ３６８８８（ＧＩ：１５６６３０８８７）に提供される。本明細書で使用されるように、ＦＬＴ３は、ヒトＦＬＴ３及び非ヒトＦＬＴ３ホモログと並んで、限定されないがＦＬＴ３のＮ結合型及びＯ結合型のグリコシル化形態を含む、その変異体、フラグメント、又は翻訳後修飾の形態を含む。
【００９７】
「自己」の用語は、後に再導入されることになっているのと同じ個体に由来する任意の材料を指す。例えば、本明細書に記載される操作された自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））は、患者からのリンパ球の収集を含み、該リンパ球は、その後、例えばＣＡＲコンストラクトを発現するように操作した後、同じ患者に戻される（administered back）。
【００９８】
「同種異系」の用語は、一個体に由来する任意の材料を指し、該材料はその後、同種の別の個体に導入される（例えば同種異系Ｔ細胞移植）。
【００９９】
「形質導入」及び「形質導入された」の用語は、外来ＤＮＡがウイルスベクターによって細胞へと導入されるプロセスを指す（Jones et al., "Genetics: principles and analysis," Boston: Jones & Bartlett Publ. (1998)を参照されたい）。幾つかの実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクター、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、アデノウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、エプスタイン−バールウイルスベクター、パポバウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルス随伴ベクター、レンチウイルスベクター、又はそれらの任意の組み合わせである。
【０１００】
本明細書で使用される「短縮（された）」の用語は、全体よりも少ない任意のものを指す。例えば、短縮ヒンジドメイン（或いは、本明細書で「ＴＨＤ」と称される）のアミノ酸配列は、全長の又は完全なヒンジドメイン（「ＣＨＤ」）よりも短い任意のアミノ酸配列を含み得る。幾つかの実施形態では、ＴＨＤは、配列番号１のアミノ酸１１８〜１５２、１１９〜１５２、１２０〜１５２、１２１〜１５２、１２２〜１５２、１２３〜１５２、１２４〜１５２、１２５〜１５２、１２６〜１５２、１２７〜１５２、１２８〜１５２、１２９〜１５２、又は１３０〜１５２から本質的になる、又はそれからなる。一実施形態では、上記ＴＨＤは、配列番号１のアミノ酸配列１２３〜１５２からなる、配列番号３のアミノ酸配列から本質的になる又はそれからなる。
【０１０１】
「癌」は、身体における異常な細胞の制御されていない成長を特徴とする、幅広い各種疾患のグループを指す。制御されていない細胞の分裂及び成長は、隣接する組織に侵入して、またリンパ系又は血流によって身体の離れた部分へと転移し得る、悪性腫瘍の形成をもたらす。「癌」又は「癌組織」は、腫瘍を含む場合がある。本発明の方法によって治療され得る癌の例として、限定されないが、リンパ腫、白血病、骨髄腫、及び他の白血球の悪性腫瘍（leukocyte malignancies）を含む免疫系の癌が挙げられる。幾つかの実施形態では、本発明の方法は、例えば、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頚部癌、皮膚又は眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頚癌、膣癌、外陰癌、多発性骨髄腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ：primary mediastinal large B cell lymphoma）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ：diffuse large B cell lymphoma）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、形質転換後濾胞性リンパ腫（transformed follicular lymphoma）、脾辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ：splenic marginal zone lymphoma）、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性又は急性の白血病、急性骨髄白血病、慢性骨髄白血病（chronic myeloid leukemia）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、幼少期の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓又は尿管の癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍（spinal axis tumor）、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、石綿によって誘導されるものを含む、環境によって誘導される癌、他のＢ細胞悪性腫瘍、及び上記癌の組み合わせに由来する腫瘍のサイズを減少するため使用され得る。特定の一実施形態では、癌は多発性骨髄腫である。特定の癌は、化学療法又は放射線療法に反応性となり得るが、そうでなければその癌は難治性となり得る。難治性癌は、外科的処置に適用できない癌を指し、その癌は最初に化学療法若しくは放射線療法に無反応であるか、又はその癌は経時的に無反応となるいずれかである。
【０１０２】
本明細書に使用される「抗腫瘍効果」は、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞数の減少、腫瘍細胞増殖の減少、転移の数の減少、全体生存期間又は無増悪生存期間の増加、平均余命の増加、又は腫瘍と関係する様々な生理学的症状の改善として提示され得る、生物学的効果を指す。また、抗腫瘍効果は、腫瘍の発生の予防、例えばワクチンを指す場合がある。
【０１０３】
本明細書で使用される「サイトカイン」は、特異抗原との接触に反応して１つの細胞によって放出される非抗体タンパク質を指し、ここで、サイトカインは第２の細胞と相互作用して、第２の細胞における反応を媒介する。サイトカインは、細胞によって内因性に発現され得るか、又は被験体に投与され得る。サイトカインは、マクロファージ、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及び肥満細胞を含む免疫細胞によって放出されて、免疫応答を伝播し得る。サイトカインは、レシピエント細胞において様々な反応を誘導し得る。サイトカインは、ホメオスタシスサイトカイン（homeostatic cytokines）、ケモカイン、炎症誘発性サイトカイン、エフェクター及び急性期タンパク質を含み得る。例えば、インターロイキン（ＩＬ）７及びＩＬ−１５を含むホメオスタシスサイトカインは、免疫細胞の生存及び増殖を促進し、炎症誘発性サイトカインは炎症反応を促進し得る。ホメオスタシスサイトカインの例として、限定されないが、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１５及びインターフェロン（ＩＦＮ）ガンマが挙げられる。炎症誘発性サイトカインの例として、限定されないが、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７ａ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−アルファ、ＴＮＦ−ベータ、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）２、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、可溶性細胞間接着分子１（ｓＩＣＡＭ−１）、可溶性血管接着分子１（ｓＶＣＡＭ−１）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ及び胎盤増殖因子（ＰＬＧＦ）が挙げられる。エフェクターの例として、限定されないが、グランザイムＡ、グランザイムＢ、可溶性Ｆａｓリガンド（ｓＦａｓＬ）及びパーフォリンが挙げられる。急性期タンパク質の例として、限定されないが、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）及び血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）が挙げられる。
【０１０４】
「ケモカイン」は細胞走化性又は指向性運動を媒介するサイトカインの一種である。ケモカインの例として、限定されないが、ＩＬ−８、ＩＬ−１６、エオタキシン、エオタキシン−３、マクロファージ由来ケモカイン（ＭＤＣ又はＣＣＬ２２）、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１又はＣＣＬ２）、ＭＣＰ−４、マクロファージ炎症性タンパク質１α（ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１ａ）、ＭＩＰ−１β（ＭＩＰ−１ｂ）、ガンマ誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）、並びに胸腺及び活性化制御ケモカイン（ＴＡＲＣ又はＣＣＬ１７）が挙げられる。
【０１０５】
「治療的有効量」、「有効用量」、「有効量」又は「治療的に有効な投薬量」の治療剤、例えば操作されたＣＡＲ  Ｔ細胞は、単独で又は別の治療剤と組み合わせて使用された場合に、疾患の発症から被験体を保護する、又は疾患症状の重症度の減少、疾患症状のない期間の頻度及び持続期間の増加、若しくは疾患の罹患に起因する機能障害若しくは身体障害の予防によって明示される疾患の退縮を促進する、任意の量である。治療剤の疾患の退縮を促進する能力は、熟練した医師に知られている様々な方法を使用して、例えば、臨床試験中のヒト被験体において、ヒトにおける効能を予測する動物モデル系において、又はｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおいて薬剤の活性をアッセイすることによって評価され得る。
【０１０６】
本明細書で使用される「リンパ球」の用語は、ナチュラルキラー（ＮＫ：natural killer）細胞、Ｔ細胞、又はＢ細胞を含む。ＮＫ細胞は、生得免疫系の主な成分を占める細胞傷害性（細胞毒性）リンパ球の一種である。ＮＫ細胞は腫瘍及びウイルスによって感染された細胞を拒絶する。ＮＫ細胞は、アポトーシス又はプログラム細胞死のプロセスによって作用する。ＮＫ細胞は、細胞を死滅させるために活性化を必要としないことから、「ナチュラルキラー」と名付けられた。Ｔ細胞は、細胞媒介免疫（抗体が関与しない）において主な役割を果たす。そのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、他の種類のリンパ球からそれら自体を分化させる。免疫系の特殊化された器官である胸腺は、主としてＴ細胞の成熟を担う。６種類のＴ細胞、すなわち、ヘルパーＴ細胞（例えばＣＤ４＋細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＴＣ、細胞傷害性Ｔリンパ球、ＣＴＬ、Ｔ−キラー細胞、細胞溶解性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞又はキラーＴ細胞としても知られる）、メモリーＴ細胞（（ｉ）ナイーブ細胞のようなステムメモリーＴＳＣＭ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ−、ＣＣＲ７＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋（Ｌ−セレクチン）、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋及びＩＬ−７Ｒα＋であるが、それらは、大量のＣＤ９５、ＩＬ−２Ｒβ、ＣＸＣＲ３及びＬＦＡ−１を発現し、メモリー細胞に特有の多数の機能的な属性を示す；（ｉｉ）セントラルメモリーＴＣＭ細胞は、Ｌ−セレクチン及びＣＣＲ７を発現し、ＩＦＮγ又はＩＬ−４ではなくＩＬ−２を分泌する；並びに（ｉｉｉ）エフェクターメモリーＴＥＭ細胞はＬセレクチンもＣＣＲ７も発現しないものの、ＩＦＮγ及びＩＬ−４のようなエフェクターサイトカインを産生する）、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ、サプレッサーＴ細胞又はＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節性Ｔ細胞）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）及びガンマデルタＴ細胞が存在する。一方、Ｂ細胞は、液性免疫（抗体が関与する）で最も重要な役割を果たす。Ｂ細胞は抗体及び抗原を作製し、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の役割を行い、抗原の相互作用による活性化の後、メモリーＢ細胞となる。哺乳動物では、未成熟Ｂ細胞は、その名前が由来する骨髄で形成される。
【０１０７】
「遺伝子操作された」又は「操作された」の用語は、限定されないが、コーディング領域若しくは非コーディング領域、又はそれらの一部分の欠失、又はコーディング領域若しくはその一部分の挿入を含む、細胞のゲノムを修飾する方法を指す。幾つかの実施形態では、修飾される細胞はリンパ球、例えば、患者又はドナーのいずれかから得ることができるＴ細胞である。Ｔ細胞は、例えば、細胞のゲノムに組み込まれる、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）等の外来コンストラクトを発現するように修飾され得る。
【０１０８】
「免疫応答」は、侵入病原体、病原体に感染した細胞若しくは組織、癌性若しくは他の異常な細胞、又は自己免疫若しくは病理学的炎症の場合、正常なヒトの細胞若しくは組織の選択的な標的化、それらへの結合、それらに対する損傷、それらの破壊、及び／又は脊椎動物の身体からのそれらの排除をもたらす、免疫系の細胞（例えばＴリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞、及び好中球）及びこれらの細胞のいずれか又は肝臓によって産生される可溶性高分子（Ａｂ、サイトカイン、及び補体を含む）の作用を指す。
【０１０９】
「免疫療法」の用語は、免疫応答を誘導する、増強する、抑制する、或いは修飾することを含む方法による、疾患に冒された、又は疾患にかかる若しくは疾患の再発を患うリスクがある被験体の治療を指す。免疫療法の例として、限定されないが、Ｔ細胞療法が挙げられる。Ｔ細胞療法は、養子Ｔ細胞療法（adoptive T cell therapy）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）免疫療法、自己細胞治療、操作された自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））、及び同種異系Ｔ細胞移植を含み得る。しかしながら、当業者は、本明細書に開示されるコンディショニング法（conditioning methods）が任意の移植Ｔ細胞療法の有効性を増強し得ることを認識するであろう。Ｔ細胞療法の例は、米国特許出願公開第２０１４／０１５４２２８号及び同第２００２／０００６４０９号、米国特許第５，７２８，３８８号及び国際公開第２００８／０８１０３５号に記載される。
【０１１０】
免疫療法のＴ細胞は、当該技術分野において知られている任意の供給源に由来し得る。例えば、Ｔ細胞は、造血幹細胞集団からｉｎ  ｖｉｔｒｏで分化されてもよく、又はＴ細胞は被験体から得られてもよい。Ｔ細胞を、例えば末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位に由来する組織、腹水、胸水、脾臓組織及び腫瘍から得ることができる。さらに、Ｔ細胞は、当該技術分野において利用可能な１以上のＴ細胞株に由来してもよい。また、Ｔ細胞は、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離及び／又はアフェレーシス（apheresis）等の当業者に知られている任意の多くの技術を使用して被験体から収集された血液単位から得ることもできる。Ｔ細胞療法用のＴ細胞を単離する更なる方法は、米国特許出願公開第２０１３／０２８７７４８号に開示され、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【０１１１】
「ｅＡＣＴ（商標）」と略記することができ、養子細胞移植としても知られる「操作された自己細胞療法」の用語は、患者自身のＴ細胞を収集し、その後、１以上の特定の腫瘍細胞又は悪性腫瘍の細胞表面上に発現される１以上の抗原を認識し、標的とするように遺伝的に変更するプロセスである。Ｔ細胞は、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように操作され得る。ＣＡＲ陽性（＋）Ｔ細胞は、少なくとも１つの共刺激ドメイン及び少なくとも１つの活性化ドメインを含む細胞内シグナル伝達部に連結された特定の腫瘍抗原に対する特異性を有する細胞外単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を発現するように操作される。共刺激ドメインは、例えば配列番号１のアミノ酸配列を有する天然起源の共刺激ドメイン、又はその変異体、例えば短縮ヒンジドメイン（「ＴＨＤ」）を有する変異体に由来し得て、活性化ドメインは、例えばＣＤ３−ゼータに由来し得る。特定の実施形態では、ＣＡＲは２個、３個、４個又はそれ以上の共刺激ドメインを有するように設計される。ＣＡＲ  ｓｃＦｖは、例えば、全ての正常なＢ細胞、並びに限定されないがＮＨＬ、ＣＬＬ、及び非Ｔ細胞ＡＬＬを含むＢ細胞悪性腫瘍を含む、Ｂ細胞系統の細胞によって発現される膜貫通タンパク質であるＣＤ１９を標的とするように設計され得る。幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、共刺激ドメインが別々のポリペプチド鎖として発現されるように操作される。ＣＡＲ  Ｔ細胞療法及びコンストラクトの例は、米国特許出願公開第２０１３／０２８７７４８号、同第２０１４／０２２７２３７号、同第２０１４／００９９３０９号、及び同第２０１４／００５０７０８号に記載され、これらの引用文献はそれらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【０１１２】
本明細書で使用される「患者」は、癌（例えばリンパ腫又は白血病）に冒された任意のヒトを含む。「被験体」及び「患者」の用語は、本明細書では区別なく使用される。
【０１１３】
本明細書で使用される「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞」の用語は、ｅｘ  ｖｉｖｏで培養される任意の細胞を指す。特に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞はＴ細胞を含み得る。
【０１１４】
「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」の用語は区別なく使用され、ペプチド結合によって共有結合的に連結されたアミノ酸残基で構成される化合物を指す。タンパク質又はペプチドは、少なくとも２個のアミノ酸を含み、タンパク質又はペプチドの配列を含み得るアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、ペプチド結合によって互いにつながれた２個以上のアミノ酸を含む任意のペプチド又はタンパク質を含む。本明細書で使用されるように、上記用語はまた、当該技術分野において、例えばペプチド、オリゴペプチド及びオリゴマーと一般的に称される短い鎖と、当該技術分野において一般的にはタンパク質と称され、多くの種類が存在する、より長い鎖の両方を指す。「ポリペプチド」として、例えば、特に、生物学的に活性なフラグメント、実質的に相同性のポリペプチド、オリゴペプチド、ホモダイマー、ヘテロダイマー、ポリペプチドの変異体、改変ポリペプチド、誘導体、類縁体、融合タンパク質が挙げられる。ポリペプチドは、天然ペプチド、組み換えペプチド、合成ペプチド、又はそれらの組み合わせを含む。
【０１１５】
本明細書で使用される「刺激」は、その同族のリガンドと刺激分子を結合することによって誘導される一次応答を指し、ここで、その結合はシグナル伝達事象を媒介する。「刺激分子」は、Ｔ細胞上の分子、例えば、抗原提示細胞上に存在する同族の刺激リガンドと特異的に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３複合体を指す。「刺激リガンド」は、抗原提示細胞（例えば、ＡＰＣ、樹状細胞、Ｂ細胞等）上に存在する場合、Ｔ細胞上の刺激分子と特異的に結合することができ、それによって、限定されないがＴ細胞の活性化、免疫応答の開始、増殖等を含むＴ細胞による一次応答を媒介するリガンドである。刺激リガンドとして、限定されないが、抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３等）、ペプチドで充填されたＭＨＣクラスＩ分子、スーパーアゴニスト抗ＣＤ２抗体、及びスーパーアゴニスト抗ＣＤ２８抗体が挙げられる。
【０１１６】
本明細書で使用される「共刺激シグナル」は、ＴＣＲ／ＣＤ３ライゲーション等の一次シグナルと組み合わせて、限定されないがＴ細胞の増殖及び／又は主要な分子の上方制御若しくは下方制御等のＴ細胞の応答をもたらすシグナルを指す。
【０１１７】
本明細書で使用される「共刺激リガンド」は、Ｔ細胞上の同族の共同刺激分子を特異的に結合する抗原提示細胞上の分子を含む。共刺激リガンドの結合は、限定されないが、Ｔ細胞の増殖、活性化、分化等を含むＴ細胞応答を媒介するシグナルを提供する。共刺激リガンドは、一次シグナルに加えて、刺激分子によって、例えば、ペプチドがロードされた主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子とのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３複合体の結合によって提供されるシグナルを誘導する。共刺激リガンドとして、限定されないが、３／ＴＲ６、４−１ＢＢリガンド、Ｔｏｌｌリガンド受容体に結合するアゴニスト又は抗体、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ４０、ＣＤ７、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ：herpes virus entry mediator）、ヒト白血球抗原Ｇ（ＨＬＡ−Ｇ）、ＩＬＴ４、免疫グロブリン様転写物（ＩＬＴ：immunoglobulin-like transcript）３、誘導性共刺激リガンド（ＩＣＯＳ−Ｌ）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）、Ｂ７−Ｈ３と特異的に結合するリガンド、リンフォトキシンベータ受容体、ＭＨＣクラスＩ鎖関連タンパク質Ａ（ＭＩＣＡ）、ＭＨＣクラスＩ鎖関連タンパク質Ｂ（ＭＩＣＢ）、ＯＸ４０リガンド、ＰＤ−Ｌ２、又はプログラム細胞死（ＰＤ）Ｌ１が挙げられ得る。共刺激リガンドとして、限定されず、４−１ＢＢ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７、ＩＣＯＳ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ナチュラルキラー細胞受容体Ｃ（ＮＫＧ２Ｃ）、ＯＸ４０、ＰＤ−１、又は腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＳＦ１４又はＬＩＧＨＴ）等のＴ細胞上に存在する共刺激分子と特異的に結合する抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１８】
「共刺激分子」は、共刺激リガンドと特異的に結合することにより、限定されないが増殖等のＴ細胞による共刺激応答を媒介する、Ｔ細胞上の同族の結合パートナーである。共刺激分子として、限定されないが、「共刺激分子」は、共刺激リガンドと特異的に結合することにより、限定されないが増殖等のＴ細胞による共刺激応答を媒介する、Ｔ細胞上の同族の結合パートナーである。共刺激分子として、限定されないが、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、Ｂ７−Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ３３、ＣＤ４５、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＣＤ１６、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３（アルファ；ベータ；デルタ；イプシロン；ガンマ；ゼータ）、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ４、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５、ＣＤ６４、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８０、ＣＤ８３リガンド、ＣＤ８４、ＣＤ８６、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、ＤＡＰ−１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−１、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４；ＴＮＦＳＦ１４）、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８））、ＭＨＣクラスＩ分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ−１、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１；ＣＤ１５０；ＩＰＯ−３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４；２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ；Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＮＦ、ＴＮＦｒ、ＴＮＦＲ２、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１若しくはＶＬＡ−６、又はそれらのフラグメント、短縮物（truncations）、若しくは組み合わせが挙げられる。
【０１１９】
「減少する、減少させる（reducing）」及び「減じる（decreasing）」の用語は、本明細書において区別なく使用され、本来よりも少ない、あらゆる変化を示す。「減少する、減少させる」及び「減じる」は測定前と測定後の比較を必要とする、相対的な用語である。「減少する、減少させる」及び「減じる」は完全な欠乏を含む。
【０１２０】
被験体の「治療（Treatment）」又は被験体を「治療する、治療すること（treating）」は、症状、合併症若しくは病状の発症、進行、発現、重症度若しくは再発、又は疾患と関連する生化学的指標の転換、緩和、改善、阻害、遅延又は予防の目的で、被験体に対して行われる任意の種類の処置若しくはプロセス、又は被験体に対する有効成分の投与を指す。一実施形態では、「治療」又は「治療する、治療すること」は部分寛解を含む。別の実施形態では、「治療」又は「治療する、治療すること」は完全寛解を含む。
【０１２１】
パーセント同一性を計算するため、典型的には、配列間の最も大きな一致を与える方法で比較される配列を整列させる。パーセント同一性を特定するために使用され得るコンピュータープログラムの一例は、ＧＡＰ（Devereux et al., 1984, Nucl. Acid Res. 12:387、ウィスコンシン州マディソンのウィスコンシン大学、Genetics Computer Group）を含むＧＣＧプログラムパッケージである。コンピューターアルゴリズムであるＧＡＰを使用して、パーセント配列同一性が特定される２つのポリペプチド又はポリヌクレオチドを整列させる。配列を、それらの各アミノ酸又はヌクレオチドの最適なマッチング（アルゴリズムによって特定される、「一致スパン（matched span）」）について整列させる。また特定の実施形態では、上記アルゴリズムによって、標準的な比較マトリクス（Dayhoff et al., 1978, Atlas of Protein Sequence and Structure 5:345-352 for the PAM 250 comparison matrix、Henikoff et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:10915-10919 for the BLOSUM 62 comparison matrixを参照されたい）が使用される。
【０１２２】
本発明の様々な態様は、以下のサブセクションに更に詳細に記載される。
【０１２３】
Ｉ．キメラ抗原受容体及びＴ細胞受容体
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ又はＣＡＲ−Ｔ）及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、遺伝子操作された受容体である。これらの操作された受容体は、当該技術分野で知られている技術によりＴ細胞を含む免疫細胞に容易に挿入され得て、その細胞によって発現され得る。ＣＡＲにより、単一の受容体は、特異抗原を認識するとともに、その抗原に結合した場合に免疫細胞を活性化させてその抗原を持っている細胞を攻撃して破壊するよう、プログラム化され得る。これらの抗原が腫瘍細胞上に存在する場合、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、腫瘍細胞を標的とし、死滅させることができる。
【０１２４】
本発明の一態様は、短縮ヒンジドメイン（「ＴＨＤ」）を含む新規な細胞外ドメインを含む共刺激ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードするポリヌクレオチド、及び新規なＴＨＤを含む共刺激ドメインを含む操作されたＴ細胞に関する。上記共刺激ドメインは、膜貫通ドメイン及び／又は細胞内ドメインを更に含み得る。幾つかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドによってコードされるＣＡＲ又はＴＣＲは、標的抗原に特異的に結合する抗原結合分子を更に含む。幾つかの実施形態では、上記ポリヌクレオチドによってコードされるＣＡＲ又はＴＣＲは活性化ドメインを更に含む。特定の一実施形態では、上記ポリヌクレオチドによってコードされるＣＡＲ又はＴＣＲは、（ｉ）標的抗原に特異的に結合する抗原結合分子と、（ｉｉ）細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含む共刺激ドメインと、（ｉｉｉ）活性化ドメインとを含み、ここで、細胞外ドメインは、本明細書に記載されるＴＨＤ、例えば配列番号３を含む、それから本質的になる、又はそれからなる。
【０１２５】
幾つかの実施形態では、本発明によるＣＡＲの配置は、共刺激ドメイン及び活性化ドメインとタンデムに抗原結合ドメイン（ｓｃＦｖ等）を含む。共刺激ドメインは、１以上の細胞外部分と、膜貫通部分と、細胞内部分とを含み得る。他の実施形態では、複数の共刺激ドメインをタンデムに利用することができる。
【０１２６】
Ｉ．Ａ．共刺激ドメイン
キメラ抗原受容体は、それらの効力を増すために共刺激（シグナル伝達）ドメインを組み込む。米国特許第７，７４１，４６５号及び同第６，３１９，４９４号と並んで、Krause et al.及びFinney et al.（上記参照）、Song et al., Blood 119:696-706 (2012)、Kalos et al., Sci Transl. Med. 3:95 (2011)、Porter et al., N. Engl. J. Med. 365:725-33 (2011)、並びにGross et al., Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 56:59-83 (2016)を参照されたい。配列番号１のアミノ酸配列を有する共刺激タンパク質は、Ｔ細胞上に天然に見られる共刺激タンパク質である。この共刺激タンパク質の完全な天然アミノ酸配列はＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００６１３０．１に記載される。図１Ａを参照されたい。この共刺激タンパク質の完全な天然核酸配列は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００６１３９．１に記載される。
【０１２７】
新規な細胞外ドメイン：本開示は、共刺激タンパク質の、短縮ヒンジドメイン（「ＴＨＤ」）を含む、新規な細胞外ドメインがＣＡＲ又はＴＣＲの１以上の特性を改善し得ることを示す。幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤドメインは、完全ヒンジドメイン（「ＣＨＤ」）の短縮型である。特定の実施形態では、ＴＨＤをコードする単離されたポリヌクレオチドは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸１２３〜１５２に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列を含み、ここで、上記ＴＨＤドメインは配列番号１のアミノ酸１〜１２２を含まない。
【０１２８】
他の実施形態では、上記ＴＨＤは、配列番号１のアミノ酸１２３〜１５２に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列から本質的になる又はそれからなる。他の実施形態では、上記ＴＨＤは、配列番号３に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列から本質的になる又はそれからなる。
【０１２９】
幾つかの実施形態では、ＴＨＤをコードする単離されたポリヌクレオチドは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸１２３〜１５２に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列、及び（ｉｉ）任意に±１個のアミノ酸、±２個のアミノ酸、±３個のアミノ酸、±４個のアミノ酸、±５個のアミノ酸、又は±６個のアミノ酸から本質的になる、又はそれからなる。幾つかの実施形態では、ＴＨＤをコードする単離されたポリヌクレオチドは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸１２３〜１５２に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列、及び（ｉｉ）任意に、１個又は２個のアミノ酸、１個〜３個のアミノ酸、１個〜４個のアミノ酸、１個〜５個のアミノ酸、又は１個〜６個のアミノ酸から本質的になる、又はそれからなる。ＴＨＤ中のアミノ酸配列に付加され得る又はそれから欠失され得る１個〜６個のアミノ酸は、Ｎ末端、Ｃ末端、又はＮ末端とＣ末端の両方のいずれかに存在し得る。
【０１３０】
幾つかの実施形態では、ＴＨＤをコードする単離されたポリヌクレオチドは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸１２３〜１５２に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列、及び（ｉｉ）１個の追加のＮ末端アミノ酸、２個の追加のＮ末端アミノ酸、３個の追加のＮ末端アミノ酸、４個の追加のＮ末端アミノ酸、５個の追加のＮ末端アミノ酸、又は６個の追加のＮ末端アミノ酸から本質的になる又はそれからなる。
【０１３１】
幾つかの実施形態では、追加のアミノ酸はＮ末端アミノ酸であってもよい。幾つかの実施形態では、追加のアミノ酸は異種性であってもよい。他の実施形態では、追加のアミノ酸は天然起源の共刺激タンパク質配列の一部である。
【０１３２】
幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤは、配列番号１のアミノ酸１２３〜１５２、配列番号１のアミノ酸１２２〜１５２、配列番号１のアミノ酸１２１〜１５２、配列番号１のアミノ酸１２０〜１５２、配列番号１のアミノ酸１１９〜１５２、配列番号１のアミノ酸１１８〜１５２、又は配列番号１のアミノ酸１１７〜１５２に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列から本質的になる又はそれからなる。
【０１３３】
他の実施形態では、上記ＴＨＤは、配列番号１のアミノ酸１２４〜１５２、配列番号１のアミノ酸１２５〜１５２、配列番号１のアミノ酸１２６〜１５２、配列番号１のアミノ酸１２７〜１５２、配列番号１のアミノ酸１２８〜１５２、配列番号１のアミノ酸１２９〜１５２、又は配列番号１のアミノ酸１３０〜１５２に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列から本質的になる又はそれからなる。
【０１３４】
幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤは配列番号１のアミノ酸１〜１１６を含まない。幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤは配列番号１のアミノ酸１〜１１７を含まない。幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤは配列番号１のアミノ酸１〜１１８を含まない。幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤは配列番号１のアミノ酸１〜１１９を含まない。幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤは配列番号１のアミノ酸１〜１２０を含まない。幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤは配列番号１のアミノ酸１〜１２１を含まない。幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤは配列番号１のアミノ酸１〜１２２を含まない。幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤは配列番号１のアミノ酸１〜１２３を含まない。幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤは配列番号１のアミノ酸１〜１２４を含まない。幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤは配列番号１のアミノ酸１〜１２５を含まない。幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤは配列番号１のアミノ酸１〜１２６を含まない。幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤは配列番号１のアミノ酸１〜１２７を含まない。幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤは配列番号１のアミノ酸１〜１２８を含まない。幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤは配列番号１のアミノ酸１〜１２９を含まない。
【０１３５】
上記ＴＨＤの対応するアミノ酸配列は、配列番号３：ＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩ  ＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰ  ＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰに示される。ＴＨＤの細胞外タンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２：ＣＴＴＧＡＴＡＡＴＧＡＡＡＡＧＴＣＡＡＡＣＧＧＡＡＣＡＡＴＣＡＴＴＣＡＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＴＣＣＧＴＣＡＣＣＣＴＴＧＴＴＣＣＣＴＧＧＴＣＣＡＴＣＣＡＡＧＣＣＡに示される。
【０１３６】
特定の実施形態では、ＣＡＲ又はＴＣＲ中の共刺激ドメインをコードするポリヌクレオチドは、配列番号３に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列を含み、ここで、該ヌクレオチド配列はＴＨＤをコードし、該ＣＡＲ又はＴＣＲは配列番号１のアミノ酸１〜１２２を含まない。
【０１３７】
特定の一実施形態では、上記ＴＨＤは、配列番号３のアミノ酸配列に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列から本質的になる又はそれからなる。具体的な実施形態では、ＴＨＤをコードするポリヌクレオチドは、配列番号２のヌクレオチド配列に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列から本質的になる又はそれからなる。
【０１３８】
幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ等の免疫グロブリンファミリーのメンバーの幾つか若しくは全て、又はそれらのフラグメントを更に含む。
【０１３９】
幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤは、ヒト完全ヒンジドメイン（「ＣＨＤ」）、例えば配列番号１のアミノ酸配列を有する共刺激タンパク質に由来する。他の実施形態では、上記ＴＨＤは、共刺激タンパク質の齧歯類、ネズミ科、又は霊長類（例えば、非ヒト霊長類）のＣＨＤに由来する。幾つかの実施形態では、上記ＴＨＤは共刺激タンパク質のキメラＣＨＤに由来する。
【０１４０】
膜貫通ドメイン：本発明のＣＡＲ又はＴＣＲに対する共刺激ドメインは、膜貫通ドメイン及び／又は細胞内シグナル伝達ドメインを更に含み得る。膜貫通ドメインは、ＣＡＲの細胞外ドメインに融合されるように設計され得る。同様に、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの細胞内ドメインに融合され得る。一実施形態では、ＣＡＲ中のドメインの１つと自然に会合する膜貫通ドメインを使用する。幾つかの例では、上記膜貫通ドメインは、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小化するため、同じ又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインに対するかかるドメインの結合を回避するように選択され得るか、又はアミノ酸置換によって修飾され得る。上記膜貫通ドメインは、天然起源又は合成起源のいずれに由来してもよい。供給源が天然である場合、上記ドメインは任意の膜結合型又は膜貫通型のタンパク質に由来し得る。本発明における特定の用途の膜貫通領域は、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、免疫グロブリンタンパク質、Ｂ７−Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ−１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−１、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１；ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＭＨＣクラス１分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ−４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１；ＣＤ１５０；ＩＰＯ−３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４；２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ；Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＳＦ１４、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１若しくはＶＬＡ−６、又はそれらのフラグメント、短縮物若しくは組み合わせに由来し得る（すなわちそれらを含み得る）。
【０１４１】
任意に、短いリンカーは、ＣＡＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインのいずれかの間、又はそれらの幾つかの間の結合を形成することができる。
【０１４２】
具体的な一実施形態では、共刺激タンパク質の膜貫通ドメインのヌクレオチド配列は、配列番号４：ＴＴＣＴＧＧＧＴＧＴＴＧＧＴＣＧＴＡＧＴＧＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＣＧＣＴＴＧＴＴＡＣＴＣＴＣＴＧＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＧＧＣＴＴＴＴＡＴＡＡＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＴに示される。
【０１４３】
一実施形態では、共刺激ドメイン内の膜貫通ドメインをコードするポリヌクレオチドは、配列番号４のヌクレオチド配列に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列を含む。
【０１４４】
共刺激タンパク質の膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、配列番号５：ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶ  ＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶ  ＡＦＩＩＦＷＶに示される。
【０１４５】
特定の一実施形態では、共刺激ドメイン内の上記膜貫通ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【０１４６】
別の実施形態では、上記膜貫通ドメインはＣＤ８に由来する（すなわち、それを含む）。一実施形態では、ＣＤ８の細胞外ドメイン及び膜貫通ドメインのヌクレオチド配列は、配列番号２３８：ＧＣＴＧＣＡＧＣＡＴＴＧＡＧＣＡＡＣＴＣＡＡＴＡＡＴＧＴＡＴＴＴＴＡＧＴＣＡＣＴＴＴＧＴＡＣＣＡＧＴＧＴＴＣＴＴＧＣＣＧＧＣＴＡＡＧＣＣＴＡＣＴＡＣＣＡＣＡＣＣＣＧＣＴＣＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＴＣＣＴＡＣＣＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＣＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＧＧＣＴＴＧＣＣＧＡＣＣＧＧＣＣＧＣＡＧＧＧＧＧＣＧＣＴＧＴＴＣＡＴＡＣＣＡＧＡＧＧＡＣＴＧＧＡＴＴＴＣＧＣＣＴＧＣＧＡＴＡＴＣＴＡＴＡＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＣＴＧＧＣＣＧＧＡＡＣＣＴＧＣＧＧＣＧＴＡＣＴＣＣＴＧＣＴＧＴＣＣＣＴＧＧＴＣＡＴＣＡＣＧＣＴＣＴＡＴＴＧＴＡＡＴＣＡＣＡＧＧＡＡＣに示される。
【０１４７】
幾つかの実施形態では、共刺激ドメイン内の膜貫通ドメインをコードするポリヌクレオチドは、ＣＤ８膜貫通ドメインのヌクレオチド配列に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列を含む。
【０１４８】
ＣＤ８の細胞外ドメイン及び膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、配列番号２３９：ＡＡＡＬＳＮＳＩＭＹＦＳＨＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮに示される。
【０１４９】
一特定の実施形態では、共刺激ドメイン内の上記膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインのアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【０１５０】
細胞内（シグナル伝達）ドメイン：本発明の操作されたＴ細胞の細胞内（シグナル伝達）ドメインは、活性化ドメインに対してシグナル伝達を提供することができ、該シグナル伝達はその後、免疫細胞の少なくとも１つの正常なエフェクター機能を活性化する。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、細胞溶解活性、又はサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であってもよい。
【０１５１】
特定の実施形態では、好適な細胞内シグナル伝達ドメインとして、限定されないが、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、免疫グロブリンタンパク質、Ｂ７−Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ−１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−１、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、Ｌｙ１０８）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１；ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＭＨＣクラス１分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ−４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１；ＣＤ１５０；ＩＰＯ−３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４；２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＳＦ１４、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１若しくはＶＬＡ−６、又はそれらのフラグメント、短縮物若しくは組み合わせが挙げられる（すなわちそれらを含む）。
【０１５２】
細胞内シグナル伝達ドメインをコードするヌクレオチド配列の例は、配列番号６：ＡＧＡＴＣＣＡＡＡＡＧＡＡＧＣＣＧＣＣＴＧＣＴＣＣＡＴＡＧＣＧＡＴＴＡＣＡＴＧＡＡＴＡＴＧＡＣＴＣＣＡＣＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＣＣＣＣＡＣＡＡＧＧＡＡＡＣＡＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＧＣＡＣＣＡＣＣＴＡＧＡＧＡＴＴＴＣＧＣＴＧＣＣＴＡＴＣＧＧＡＧＣに示される。
【０１５３】
一実施形態では、共刺激ドメイン内の細胞内シグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチドは、配列番号６のヌクレオチド配列に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列を含む。
【０１５４】
細胞内シグナル伝達ドメインの例は、配列番号７：ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳに示される。
【０１５５】
特定の一実施形態では、共刺激ドメイン内の細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【０１５６】
幾つかの実施形態では、上記共刺激ドメインは、細胞外ＴＨＤ、並びに共刺激タンパク質の膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含む、それから本質的になる、又はそれからなる。例えば、共刺激ドメインをコードするヌクレオチド配列は、配列番号２４０：ＣＴＴＧＡＴＡＡＴＧＡＡＡＡＧＴＣＡＡＡＣＧＧＡＡＣＡＡＴＣＡＴＴＣＡＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＴＣＣＧＴＣＡＣＣＣＴＴＧＴＴＣＣＣＴＧＧＴＣＣＡＴＣＣＡＡＧＣＣＡＴＴＣＴＧＧＧＴＧＴＴＧＧＴＣＧＴＡＧＴＧＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＣＧＣＴＴＧＴＴＡＣＴＣＴＣＴＧＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＧＧＣＴＴＴＴＡＴＡＡＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＴＡＧＡＴＣＣＡＡＡＡＧＡＡＧＣＣＧＣＣＴＧＣＴＣＣＡＴＡＧＣＧＡＴＴＡＣＡＴＧＡＡＴＡＴＧＡＣＴＣＣＡＣＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＣＣＣＣＡＣＡＡＧＧＡＡＡＣＡＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＧＣＡＣＣＡＣＣＴＡＧＡＧＡＴＴＴＣＧＣＴＧＣＣＴＡＴＣＧＧＡＧＣに示される。
【０１５７】
幾つかの実施形態では、共刺激ドメインをコードするポリヌクレオチドは、配列番号２４０のヌクレオチド配列に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列を含み、それから本質的になり、又はそれからなり、ここで、上記共刺激ドメインは、配列番号１のアミノ酸１〜１２２、配列番号１のアミノ酸１〜１２１、配列番号１のアミノ酸１〜１２０、配列番号１のアミノ酸１〜１１９、配列番号１のアミノ酸１〜１１８、又は配列番号１のアミノ酸１〜１１８を含まない。
【０１５８】
共刺激ドメインの対応するアミノ酸配列は、配列番号２４１：ＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳに示される。
【０１５９】
幾つかの実施形態では、上記共刺激ドメインは、配列番号２４１のアミノ酸配列に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列を含み、それから本質的になり、又はそれからなり、ここで、上記共刺激ドメインは、配列番号１のアミノ酸１〜１２２、配列番号１のアミノ酸１〜１２１、配列番号１のアミノ酸１〜１２０、配列番号１のアミノ酸１〜１１９、配列番号１のアミノ酸１〜１１８又は、配列番号１のアミノ酸１〜１１８を含まない。
【０１６０】
Ｉ．Ｂ．活性化ドメイン
ＣＤ３は、天然Ｔ細胞上のＴ細胞受容体の要素であり、ＣＡＲ中の重要な細胞内活性化要素であることが示されている。一実施形態では、ＣＤ３はＣＤ３ゼータであり、そのヌクレオチド配列は、配列番号８：ＡＧＧＧＴＧＡＡＧＴＴＴＴＣＣＡＧＡＴＣＴＧＣＡＧＡＴＧＣＡＣＣＡＧＣＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＡＣＴＧＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＣＣＴＧＧＧＡＣＧＣＡＧＧＧＡＡＧＡＧＴＡＴＧＡＣＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＣＧＣＡＧＡＧＧＡＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＴＧＧＣＡＡＡＣＣＡＡＧＡＣＧＡＡＡＡＡＡＣＣＣＣＣＡＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＡＴＡＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＧＡＡＧＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＡＡＧＣＣＴＡＴＴＣＴＧＡＡＡＴＡＧＧＣＡＴＧＡＡＡＧＧＡＧＡＧＣＧＧＡＧＡＡＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣＡＣＧＡＣＧＧＴＴＴＧＴＡＣＣＡＧＧＧＡＣＴＣＡＧＣＡＣＴＧＣＴＡＣＧＡＡＧＧＡＴＡＣＴＴＡＴＧＡＣＧＣＴＣＴＣＣＡＣＡＴＧＣＡＡＧＣＣＣＴＧＣＣＡＣＣＴＡＧＧに示される。
【０１６１】
幾つかの実施形態では、活性化ドメインをコードするポリヌクレオチドは、配列番号８のヌクレオチド配列に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列を含む。
【０１６２】
細胞内ＣＤ３ゼータの対応するアミノ酸は、配列番号９：ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲに示される。
【０１６３】
幾つかの実施形態では、上記活性化ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列を含む。
【０１６４】
幾つかの実施形態では、上記活性化ドメインは、ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号２５１）のアミノ酸配列に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【０１６５】
Ｉ．Ｃ．抗原結合分子
ＣＡＲは、その標的抗原と相互作用する抗原結合分子を組み込むことによって抗原（細胞表面抗原等）に結合するように操作され得る。幾つかの実施形態では、上記抗原結合分子は、その抗体フラグメント、例えば１以上の単鎖抗体フラグメント（「ｓｃＦｖ」）である。ｓｃＦｖは、共に連結された抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域を有する単鎖抗体フラグメントである。米国特許第７，７４１，４６５号、及び同第６，３１９，４９４号と並んでEshhar et al., Cancer Immunol Immunotherapy (1997) 45: 131-136を参照されたい。ｓｃＦｖは、親抗体の標的抗原と特異的に相互作用する能力を保持する。ｓｃＦｖは、他のＣＡＲ成分と共に単鎖の一部として発現されるように操作され得ることから、キメラ抗原受容体において有用である（同上）。Krause et al., J. Exp. Med., Volume 188, No. 4, 1998 (619-626)、Finney et al., Journal of Immunology, 1998, 161: 2791-2797も参照されたい。抗原結合分子は、典型的には、目的の抗原を認識し、結合することができるようにＣＡＲの細胞外部分に含まれることが理解される。２以上の目的の標的に対する特異性を有する二重特異性及び多重特異性のＣＡＲは、本発明の範囲に含まれることが意図される。
【０１６６】
幾つかの実施形態では、上記ポリヌクレオチドは、本発明のＴＨＤを含むＣＡＲ又はＴＣＲ、及び標的抗原に特異的に結合する抗原結合分子をコードする。幾つかの実施形態では、上記標的抗原は腫瘍抗原である。幾つかの実施形態では、上記抗原は、腫瘍関連表面抗原（５Ｔ４等）、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＢＣＭＡ、Ｂ−ヒト絨毛膜性生殖腺刺激ホルモン、ＣＡ−１２５、癌胚抗原（ＣＥＡ）、癌胚抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ８、ＣＬＬ−１、ｃ−Ｍｅｔ、ＣＭＶ特異抗原、ＣＳＰＧ４、ＣＴＬＡ−４、ジシアロガングリオシドＧＤ２、膵管上皮ムチン（ductal-epithelial mucine）、ＥＢＶ特異抗原、ＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＥＬＦ２Ｍ、エンドグリン、エフリンＢ２、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、上皮性腫瘍抗原、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、線維芽細胞関連タンパク質（ｆａｐ）、ＦＬＴ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、神経膠腫関連抗原、スフィンゴ糖脂質、ｇｐ３６、ＨＢＶ特異抗原、ＨＣＶ特異抗原、ＨＥＲ１−ＨＥＲ２、ＨＥＲ２−ＨＥＲ３の組み合わせ、ＨＥＲＶ−Ｋ、高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）、ＨＩＶ−１型エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＨＰＶ特異抗原、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＩＧＦＩ受容体、ＩＧＦ−ＩＩ、ＩＬ−１１Ｒアルファ、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、インフルエンザウイルス特異抗原；ＣＤ３８、インスリン増殖因子（ＩＧＦｌ）−１、腸カルボキシルエステラーゼ、カッパー鎖、ＬＡＧＡ−１ａ、ラムダ鎖、ラッサ熱ウイルス特異抗原、レクチン反応性ＡＦＰ、系譜特異又は組織特異抗原（ＣＤ３等）、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ−Ａ１、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子、腫瘍特異的ペプチドエピトープを提示する主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子、Ｍ−ＣＳＦ、黒色腫関連抗原、メソテリン、メソテリン、ＭＮ−ＣＡ  ＩＸ、ＭＵＣ−１、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、変異ｐ５３、変異ｐ５３、変異ｒａｓ、好中球エラスターゼ、ＮＫＧ２Ｄ、Ｎｋｐ３０、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｐ５３、ＰＡＰ、プロスターゼ（prostase）、プロスターゼ特異抗原（ＰＳＡ：prostase specific antigen）、前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴＡ−１）、前立腺特異抗原、プロステイン（prostein）、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ−１、ＲＯＲ１、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、表面接着分子、生存及びテロメラーゼ（surviving and telomerase）、ＴＡＧ−７２、フィブロネクチンのエクストラドメイン（extra domain）Ａ（ＥＤＡ）及びエクストラドメインＢ（ＥＤＢ）、並びにテネイシン−ＣのＡ１ドメイン（ＴｎＣ  Ａ１）、チログロブリン、腫瘍間質抗原、血管内皮細胞増殖因子受容体−２（ＶＥＧＦＲ２）、ウイルス特異表面抗原（ＨＩＶ特異抗原（例えばＨＩＶ  ｇｐ１２０）等）と並んで、これらの表面マーカーの任意の誘導体又は変異体から選択される。特定の実施形態では、上記抗原結合分子はＢＣＭＡに特異的に結合する。他の実施形態では、上記抗原結合分子はＣＬＬ−１に特異的に��合する。他の実施形態では、上記抗原結合分子はＦＬＴ３に特異的に結合する。
【０１６７】
幾つかの実施形態では、上記抗原結合分子はＢＣＭＡを特異的に結合する。特定の実施形態では、上記抗原結合分子は、（ａ）配列番号１３〜配列番号２０から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２１〜配列番号２８から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号２９〜配列番号３６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号３７〜配列番号４４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号４５〜配列番号５２から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は（ｆ）配列番号５３〜配列番号６０から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１６８】
一実施形態では、上記抗原結合分子は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸を含むＶＨ  ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は（ｆ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１６９】
別の実施形態では、上記抗原結合分子は、（ａ）配列番号１４のアミノ酸を含むＶＨ  ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は（ｆ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１７０】
別の実施形態では、上記抗原結合分子は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸を含むＶＨ  ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は（ｆ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１７１】
別の実施形態では、上記抗原結合分子は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸を含むＶＨ  ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は（ｆ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１７２】
別の実施形態では、上記抗原結合分子は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸を含むＶＨ  ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は（ｆ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１７３】
別の実施形態では、上記抗原結合分子は、（ａ）配列番号１８のアミノ酸を含むＶＨ  ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は（ｆ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１７４】
別の実施形態では、上記抗原結合分子は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸を含むＶＨ  ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は（ｆ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１７５】
別の実施形態では、上記抗原結合分子は、（ａ）配列番号２０のアミノ酸を含むＶＨ  ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は（ｆ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１７６】
特定の実施形態では、上記抗原結合分子は、配列番号７７〜配列番号８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号８５〜配列番号９２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態では、上記抗原結合分子は、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号８５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。別の実施形態では、上記抗原結合分子は、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号８６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。別の実施形態では、上記抗原結合分子は、配列番号７９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号８７のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。別の実施形態では、上記抗原結合分子は、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号８８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。別の実施形態では、上記抗原結合分子は、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号８９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。別の実施形態では、上記抗原結合分子は、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。別の実施形態では、上記抗原結合分子は、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。別の実施形態では、上記抗原結合分子は、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０１７７】
特定の一実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号６１〜配列番号６８からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列を含む。別の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号６９〜配列番号７６からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列を含む。
【０１７８】
他の既知の抗ＢＣＭＡ抗体又はその抗原結合分子を、本発明のＴＨＤを含むＣＡＲ又はＴＣＲの抗原結合分子として使用することができる。かかるＢＣＭＡ抗体又はその抗原結合分子の非限定的な例として、２０１５年１０月２２日付公開の国際公開第２０１５１５８６７１号、及び２０１６年１月２８日付公開の国際公開第２０１６０１４５６５号に記載される抗体又は抗原結合分子が挙げられる。
【０１７９】
幾つかの実施形態では、上記抗原結合分子はＣＬＬ−１を特異的に結合する。特定の実施形態では、上記抗原結合分子は、（ａ）配列番号９３〜配列番号９６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号９７〜配列番号１００から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号１０１〜配列番号１０４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１０５〜配列番号１０８から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１０９〜配列番号１１２から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は（ｆ）配列番号１１３〜配列番号１１６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１８０】
一実施形態では、上記抗原結合分子は、（ａ）配列番号９３のアミノ酸を含むＶＨ  ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は（ｆ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１８１】
一実施形態では、上記抗原結合分子は、（ａ）配列番号９４のアミノ酸を含むＶＨ  ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は（ｆ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１８２】
一実施形態では、上記抗原結合分子は、（ａ）配列番号９５のアミノ酸を含むＶＨ  ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は（ｆ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１８３】
一実施形態では、上記抗原結合分子は、（ａ）配列番号９６のアミノ酸を含むＶＨ  ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は（ｆ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１８４】
特定の実施形態では、上記抗原結合分子は、配列番号１２５〜配列番号１２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１２９〜配列番号１３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態では、上記抗原結合分子は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。別の実施形態では、上記抗原結合分子は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。別の実施形態では、上記抗原結合分子は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。別の実施形態では、上記抗原結合分子は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０１８５】
特定の一実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１１７〜配列番号１２０からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列を含む。別の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１２１〜配列番号１２４からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のヌクレオチド配列を含む。
【０１８６】
抗ＣＬＬ−１抗体又はその抗原結合分子の他の例として、２０１６年１月２８日付公開の国際公開第２０１６０１４５３５号、及び２０１６年２月２５日付公開の米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１号に記載される抗体又は抗原結合分子が挙げられる。
【０１８７】
本発明のポリヌクレオチドによってコードされる抗原結合分子は、一本鎖であってもよく、又は二本鎖であってもよい。幾つかの実施形態では、上記抗原結合分子は、一本鎖である。特定の実施形態では、上記抗原結合分子は、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）２、ｄＡｂ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。特定の一実施形態では、上記抗原結合分子はｓｃＦｖを含む。
【０１８８】
特定の実施形態では、上記抗原結合分子は一本鎖を含み、ここで、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、リンカーによって接続される。幾つかの実施形態では、ＶＨはリンカーのＮ末端に位置し、ＶＬはリンカーのＣ末端に位置する。他の実施形態では、ＶＬはリンカーのＮ末端に位置し、ＶＨはリンカーのＣ末端に位置する。幾つかの実施形態では、上記リンカーは、少なくとも約５個、少なくとも約８個、少なくとも約１０個、少なくとも約１３個、少なくとも約１５個、少なくとも約１８個、少なくとも約２０個、少なくとも約２５個、少なくとも約３０個、少なくとも約３５個、少なくとも約４０個、少なくとも約４５個、少なくとも約５０個、少なくとも約６０個、少なくとも約７０個、少なくとも約８０個、少なくとも約９０個、又は少なくとも約１００個のアミノ酸を含む。幾つかの実施形態では、上記リンカーは少なくとも約１８個のアミノ酸を含む。特定の実施形態では、上記リンカーは、アミノ酸配列ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１２）に対して、少なくとも約７５％、少なくとも約８５％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列、又はアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３７）を含む。一実施形態では、上記リンカーはＷｈｉｔｌｏｗリンカーである。特定の実施形態では、結合分子は一本鎖を含み、ここで、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域はリンカーによって接続され、ここで、リンカーは配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
【０１８９】
幾つかの実施形態では、上記抗原結合分子は、１×１０−６Ｍ未満、１×１０−７Ｍ未満、１×１０−８Ｍ未満、又は１×１０−９Ｍ未満のＫＤで標的抗原（例えばヒトＢＣＭＡ、ヒトＦＬＴ３又はヒトＣＬＬ−１）を結合する。特定の一実施形態では、上記抗原結合分子は、１×１０−７Ｍ未満のＫＤで標的抗原（例えばヒトＢＣＭＡ、ヒトＦＬＴ３又はヒトＣＬＬ−１）を結合する。別の実施形態では、上記抗原結合分子は、１×１０−８Ｍ未満のＫＤで標的抗原（例えばヒトＢＣＭＡ、ヒトＦＬＴ３又はヒトＣＬＬ−１）を結合する。幾つかの実施形態では、上記抗原結合分子は、約１×１０−７Ｍ、約２×１０−７Ｍ、約３×１０−７Ｍ、約４×１０−７Ｍ、約５×１０−７Ｍ、約６×１０−７Ｍ、約７×１０−７Ｍ、約８×１０−７Ｍ、約９×１０−７Ｍ、約１×１０−８Ｍ、約２×１０−８Ｍ、約３×１０−８Ｍ、約４×１０−８Ｍ、約５×１０−８Ｍ、約６×１０−８Ｍ、約７×１０−８Ｍ、約８×１０−８Ｍ、約９×１０−８Ｍ、約１×１０−９Ｍ、約２×１０−９Ｍ、約３×１０−９Ｍ、約４×１０−９Ｍ、約５×１０−９Ｍ、約６×１０−９Ｍ、約７×１０−９Ｍ、約８×１０−９Ｍ、約９×１０−９Ｍ、約１×１０−１０Ｍ、又は約５×１０−１０ＭのＫＤで標的抗原（例えばヒトＢＣＭＡ、ヒトＦＬＴ３又はヒトＣＬＬ−１）を結合する。特定の実施形態では、ＫＤはｋｏｆｆ／ｋｏｎの商として計算され、ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴技術によって測定される、Ｆａｂフラグメント等の一価抗体を使用して特定される。他の実施形態では、ＫＤはｋｏｆｆ／ｋｏｎの商として計算され、ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴技術によって測定される、Ｆａｂフラグメント等の二価抗体を使用して特定される。
【０１９０】
幾つかの実施形態では、上記抗原結合分子は、１×１０−４Ｍ−１ｓ−１未満、２×１０−４Ｍ−１ｓ−１未満、３×１０−４Ｍ−１ｓ−１未満、４×１０−４Ｍ−１ｓ−１未満、５×１０−４Ｍ−１ｓ−１未満、６×１０−４Ｍ−１ｓ−１未満、７×１０−４Ｍ−１ｓ−１未満、８×１０−４Ｍ−１ｓ−１未満、９×１０−４Ｍ−１ｓ−１未満、１×１０−５Ｍ−１ｓ−１未満、２×１０−５Ｍ−１ｓ−１未満、３×１０−５Ｍ−１ｓ−１未満、４×１０−５Ｍ−１ｓ−１未満、５×１０−５Ｍ−１ｓ−１未満、６×１０−５Ｍ−１ｓ−１未満、７×１０−５Ｍ−１ｓ−１未満、８×１０−５Ｍ−１ｓ−１未満、９×１０−５Ｍ−１ｓ−１未満、１×１０−６Ｍ−１ｓ−１未満、２×１０−６Ｍ−１ｓ−１未満、３×１０−６Ｍ−１ｓ−１未満、４×１０−６Ｍ−１ｓ−１未満、５×１０−６Ｍ−１ｓ−１未満、６×１０−６Ｍ−１ｓ−１未満、７×１０−６Ｍ−１ｓ−１未満、８×１０−６Ｍ−１ｓ−１未満、９×１０−６Ｍ−１ｓ−１未満、又は１×１０−７Ｍ−１ｓ−１未満の会合速度（ｋｏｎ）で標的抗原（例えばヒトＢＣＭＡ、ヒトＦＬＴ３又はヒトＣＬＬ−１）を結合する。特定の実施形態では、ｋｏｎは、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴技術によって測定される、Ｆａｂフラグメント等の一価抗体を使用して特定される。他の実施形態では、ｋｏｎは、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴技術によって測定される、二価抗体を使用して特定される。
【０１９１】
幾つかの実施形態では、上記抗原結合分子は、１×１０−２ｓ−１未満、２×１０−２ｓ−１未満、３×１０−２ｓ−１未満、４×１０−２ｓ−１未満、５×１０−２ｓ−１未満、６×１０−２ｓ−１未満、７×１０−２ｓ−１未満、８×１０−２ｓ−１未満、９×１０−２ｓ−１未満、１×１０−３ｓ−１未満、２×１０−３ｓ−１未満、３×１０−３ｓ−１未満、４×１０−３ｓ−１未満、５×１０−３ｓ−１未満、６×１０−３ｓ−１未満、７×１０−３ｓ−１未満、８×１０−３ｓ−１未満、９×１０−３ｓ−１未満、１×１０−４ｓ−１未満、２×１０−４ｓ−１未満、３×１０−４ｓ−１未満、４×１０−４ｓ−１未満、５×１０−４ｓ−１未満、６×１０−４ｓ−１未満、７×１０−４ｓ−１未満、８×１０−４ｓ−１未満、９×１０−４ｓ−１未満、１×１０−４ｓ−１未満、又は５×１０−４ｓ−１未満の解離速度（ｋｏｆｆ）で標的抗原（例えばヒトＢＣＭＡ、ヒトＦＬＴ３又はヒトＣＬＬ−１）を結合する。特定の実施形態では、ｋｏｆｆは、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴技術によって測定される、Ｆａｂフラグメント等の一価抗体を使用して特定される。他の実施形態では、ｋｏｆｆは、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴技術によって測定される、二価抗体を使用して特定される。
【０１９２】
幾つかの実施形態では、上記ポリヌクレオチドはＴＣＲをコードし、ここで、ＴＣＲは第４の相補性決定領域（ＣＤＲ４）を更に含む。特定の実施形態では、上記ポリヌクレオチドはＴＣＲをコードし、ここで、ＴＣＲは、定常領域を更に含む。幾つかの実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ及びＩｇＭの定常領域から選択される。
【０１９３】
Ｉ．Ｄ．スイッチドメイン
有害事象は、自殺遺伝子で免疫細胞（１以上のＣＡＲ又はＴＣＲを含む）を形質導入することにより最小化され得ることが理解される。また、免疫細胞への誘導性の「オン」又は「アクセラレーター（accelerator）」スイッチを組み込むことが望ましい場合がある。好適な技術として、細胞が本発明のＣＡＲコンストラクトで形質導入される前、その後、又はそれと同時の誘導性カスパーゼ−９（米国特許出願公開第２０１１／０２８６９８０号）又はチミジンキナーゼの使用が挙げられる。自殺遺伝子及び／又は「オン」スイッチを導入する追加の方法として、ＴＡＬＥＮＳ、ジンクフィンガー、ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンス技術、及び当該技術分野で知られている他の技術が挙げられる。
【０１９４】
本発明によれば、追加のオン−オフ又は他の種類の制御スイッチ技術が本発明に組み込まれ得る。これらの技術は、二量体化ドメイン及びかかるドメイン二量体化の任意の活性化因子の使用を利用し得る。これらの技術として、例えば、特定の細胞においてＦＫＢＰ／Ｒａｐａｌｏｇ二量体化システムを利用するWu et al., Science 2014 350 (6258)によって記載される技術が挙げられ、その内容は、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす。追加の二量体化技術は、例えばFegan et al. Chem. Rev. 2010, 110, 3315-3336と並んで、米国特許第５，８３０，４６２号、同第５，８３４，２６６号、同第５，８６９，３３７号、及び同第６，１６５，７８７号に記載され、それらの内容は、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす。追加の二量体化対として、シクロスポリン−Ａ／サイクロフィリン受容体、エストロゲン／エストロゲン受容体（任意にタモキシフェンを使用する）、糖質コルチコイド／糖質コルチコイド受容体、テトラサイクリン／テトラサイクリン受容体、ビタミンＤ／ビタミンＤ受容体が挙げられ得る。二量体化技術の更なる例は、例えば、国際公開第２０１４／１２７２６１号、国際公開第２０１５／０９０２２９号、米国特許出願公開第２０１４／０２８６９８７号、米国特許出願公開第２０１５／０２６６９７３号、米国特許出願公開第２０１６／００４６７００号、米国特許第８，４８６，６９３号、米国特許出願公開第２０１４／０１７１６４９号、及び米国特許出願公開第２０１２／０１３００７６号に見ることができ、それらの内容は、それらの全体が引用することにより更に本明細書の一部をなす。
【０１９５】
Ｉ．Ｅ．リーダーペプチド
幾つかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドはＣＡＲ又はＴＣＲをコードし、ＣＡＲ又はＴＣＲはリーダーペプチド（本明細書では「シグナルペプチド」とも称される）を更に含むことができる。特定の実施形態では、リーダーペプチドは、アミノ酸配列ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ（配列番号１１）に対して、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、リーダーペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
【０１９６】
幾つかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドはＣＡＲ又はＴＣＲをコードし、ここで、ＣＡＲ又はＴＣＲは、リーダーペプチド（Ｐ）と、抗原結合分子（Ｂ）と、共刺激タンパク質の細胞外ドメイン（Ｅ）と、膜貫通ドメイン（Ｔ）と、共刺激領域（Ｃ）と、活性化ドメイン（Ａ）とを含み、ここで、ＣＡＲはＰ−Ｂ−Ｅ−Ｔ−Ｃ−Ａにより構成される。幾つかの実施形態では、抗原結合分子はＶＨ及びＶＬを含み、ここで、ＣＡＲはＰ−ＶＨ−ＶＬ−Ｅ−Ｔ−Ｃ−Ａ又はＰ−ＶＬ−ＶＨ−Ｅ−Ｔ−Ｃ−Ａにより構成される。幾つかの実施形態では、ＶＨ及びＶＬはリンカー（Ｌ）によって接続され、ここで、ＣＡＲはＮ末端からＣ末端へ、Ｐ−ＶＨ−Ｌ−ＶＬ−Ｅ−Ｔ−Ｃ−Ａ又はＰ−ＶＨ−Ｌ−ＶＬ−Ｅ−Ｔ−Ｃ−Ａにより構成される。
【０１９７】
幾つかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドはＣＡＲをコードし、ここで、ＣＡＲは、表２から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約７５％、少なくとも約８５％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドはＣＡＲをコードし、ここで、ＣＡＲは、表２から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１９８】
【表２−１】
2019516350.tif 000004
【表２−２】
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【表２−３】
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【表２−４】
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【表２−５】
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【表２−６】
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【表２−７】
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【表２−８】
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【表２−９】
2019516350.tif 000012
【表２−１０】
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【表２−１１】
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【表２−１２】
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【表２−１３】
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【表２−１４】
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【表２−１５】
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【表２−１６】
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【表２−１７】
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【表２−１８】
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【表２−１９】
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【表２−２０】
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【表２−２１】
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【表２−２２】
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【表２−２３】
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【表２−２４】
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【表２−２５】
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【表２−２６】
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【表２−２７】
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【表２−２８】
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【表２−２９】
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【表２−３０】
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【表２−３１】
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【表２−３２】
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【表２−３３】
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【表２−３４】
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【表２−３５】
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【表２−３６】
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【表２−３７】
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【表２−３８】
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【表２−３９】
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【表２−４０】
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【表２−４１】
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【表２−４２】
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【表２−４３】
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【表２−４４】
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【表２−４５】
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【表２−４６】
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【表２−４７】
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【表２−４８】
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【表２−４９】
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【０１９９】
幾つかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドはＣＡＲをコードし、ここで、ＣＡＲは、配列番号１３４、配列番号１３６、配列番号１３８、配列番号１４０、配列番号１４２、配列番号１４４、配列番号１４６、配列番号１４８、配列番号１５０、配列番号１５２、配列番号１５４、配列番号１５６、配列番号１５８、配列番号１６０、配列番号１６２、配列番号１６４、配列番号１６６、配列番号１６８、配列番号１７８、配列番号１８０、配列番号１９０、配列番号１９２、配列番号２０２、配列番号２０４、配列番号２１４、配列番号２１６、配列番号２２６及び配列番号２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約７５％、少なくとも約８５％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１３４、配列番号１３６、配列番号１３８、配列番号１４０、配列番号１４２、配列番号１４４、配列番号１４６、配列番号１４８、配列番号１５０、配列番号１５２、配列番号１５４、配列番号１５６、配列番号１５８、配列番号１６０、配列番号１６２、配列番号１６４、配列番号１６６、配列番号１６８、配列番号１７８、配列番号１８０、配列番号１９０、配列番号１９２、配列番号２０２、配列番号２０４、配列番号２１４、配列番号２１６、配列番号２２６及び配列番号２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０２００】
幾つかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１３７、配列番号１３９、配列番号１４１、配列番号１４３、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１５１、配列番号１５３、配列番号１５５、配列番号１５７、配列番号１５９、配列番号１６１、配列番号１６３、配列番号１６５、配列番号１６７、配列番号１７７、配列番号１７９、配列番号１８９、配列番号１９１、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２１３、配列番号２１５、配列番号２２５及び配列番号２２７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８５％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は１００％同一のヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、上記ポリヌクレオチドは、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１３７、配列番号１３９、配列番号１４１、配列番号１４３、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１５１、配列番号１５３、配列番号１５５、配列番号１５７、配列番号１５９、配列番号１６１、配列番号１６３、配列番号１６５、配列番号１６７、配列番号１７７、配列番号１７９、配列番号１８９、配列番号１９１、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２１３、配列番号２１５、配列番号２２５及び配列番号２２７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
【０２０１】
ＩＩ．ベクター、細胞及び医薬組成物
特定の態様では、本発明のポリヌクレオチドを含むベクターが本明細書において提供される。幾つかの実施形態では、本発明は、上に記載される短縮ヒンジドメイン（「ＴＨＤ」）ドメインを含むＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクター又はベクターのセットに関する。
【０２０２】
当該技術分野において知られている任意のベクターが本発明に対して好適となり得る。幾つかの実施形態では、ベクターはウイルスベクターである。幾つかの実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクター、ＤＮＡベクター、マウス白血病ウイルスベクター、ＳＦＧベクター、プラスミド、ＲＮＡベクター、アデノウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、エプスタイン−バールウイルスベクター、パポバウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルス随伴ベクター（ＡＡＶ）、レンチウイルスベクター、又はそれらの任意の組み合わせである。
【０２０３】
或る実施形態では、本発明に関して利用され得るベクターはｐＧＡＲであり、ＣＴＧＡＣＧＣＧＣＣＣＴＧＴＡＧＣＧＧＣＧＣＡＴＴＡＡＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＴＡＣＧＣＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＣＴＡＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＣＧＣＣＣＴＡＧＣＧＣＣＣＧＣＴＣＣＴＴＴＣＧＣＴＴＴＣＴＴＣＣＣＴＴＣＣＴＴＴＣＴＣＧＣＣＡＣＧＴＴＣＧＣＣＧＧＣＴＴＴＣＣＣＣＧＴＣＡＡＧＣＴＣＴＡＡＡＴＣＧＧＧＧＧＣＴＣＣＣＴＴＴＡＧＧＧＴＴＣＣＧＡＴＴＴＡＧＴＧＣＴＴＴＡＣＧＧＣＡＣＣＴＣＧＡＣＣＣＣＡＡＡＡＡＡＣＴＴＧＡＴＴＡＧＧＧＴＧＡＴＧＧＴＴＣＡＣＧＴＡＧＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧＣＣＣＴＧＡＴＡＧＡＣＧＧＴＴＴＴＴＣＧＣＣＣＴＴＴＧＡＣＧＴＴＧＧＡＧＴＣＣＡＣＧＴＴＣＴＴＴＡＡＴＡＧＴＧＧＡＣＴＣＴＴＧＴＴＣＣＡＡＡＣＴＧＧＡＡＣＡＡＣＡＣＴＣＡＡＣＣＣＴＡＴＣＴＣＧＧＴＣＴＡＴＴＣＴＴＴＴＧＡＴＴＴＡＴＡＡＧＧＧＡＴＴＴＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＧＧＣＣＴＡＴＴＧＧＴＴＡＡＡＡＡＡＴＧＡＧＣＴＧＡＴＴＴＡＡＣＡＡＡＡＡＴＴＴＡＡＣＧＣＧＡＡＴＴＴＴＡＡＣＡＡＡＡＴＡＴＴＡＡＣＧＣＴＴＡＣＡＡＴＴＴＧＣＣＡＴＴＣＧＣＣＡＴＴＣＡＧＧＣＴＧＣＧＣＡＡＣＴＧＴＴＧＧＧＡＡＧＧＧＣＧＡＴＣＧＧＴＧＣＧＧＧＣＣＴＣＴＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＧＣＣＡＧＣＴＧＧＣＧＡＡＡＧＧＧＧＧＡＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＧＡＴＴＡＡＧＴＴＧＧＧＴＡＡＣＧＣＣＡＧＧＧＴＴＴＴＣＣＣＡＧＴＣＡＣＧＡＣＧＴＴＧＴＡＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴＧＡＡＴＴＧＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧＣＧＡＣＣＣＧＧＧＧＡＴＧＧＣＧＣＧＣＣＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＧＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＣＴＧＡＴＧＣＧＧＴＴＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＴＧＧＧＣＧＴＧＧＡＴＡＧＣＧＧＴＴＴＧＡＣＴＣＡＣＧＧＧＧＡＴＴＴＣＣＡＡＧＴＣＴＣＣＡＣＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＡＧＴＴＴＧＴＴＴＴＧＧＣＡＣＣＡＡＡＡＴＣＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＡＡＡＴＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＣＴＣＣＧＣＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＣＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＴＡＧＧＣＧＴＧＴＡＣＧＧＴＧＧＧＡＧＧＴＣＴＡＴＡＴＡＡＧＣＡＧＡＧＣＴＧＧＴＴＴＡＧＴＧＡＡＣＣＧＧＧＧＴＣＴＣＴＣＴＧＧＴＴＡＧＡＣＣＡＧＡＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＣＴＡＡＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＡＣＴＧＣＴＴＡＡＧＣＣＴＣＡＡＴＡＡＡＧＣＴＴＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＣＴＴＣＡＡＧＴＡＧＴＧＴＧＴＧＣＣＣＧＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＡＣＴＣＴＧＧＴＡＡＣＴＡＧＡＧＡＴＣＣＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＴＴＴＡＧＴＣＡＧＴＧＴＧＧＡＡＡＡＴＣＴＣＴＡＧＣＡＧＴＧＧＣＧＣＣＣＧＡＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＡＡＧＣＧＡＡＡＧＧＧＡＡＡＣＣＡＧＡＧＧＡＧＣＴＣＴＣＴＣＧＡＣＧＣＡＧＧＡＣＴＣＧＧＣＴＴＧＣＴＧＡＡＧＣＧＣＧＣＡＣＧＧＣＡＡＧＡＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＴＧＡＧＴＡＣＧＣＣＡＡＡＡＡＴＴＴＴＧＡＣＴＡＧＣＧＧＡＧＧＣＴＡＧＡＡＧＧＡＧＡＧＡＧＡＴＧＧＧＴＧＣＧＡＧＡＧＣＧＴＣＡＧＴＡＴＴＡＡＧＣＧＧＧＧＧＡＧＡＡＴＴＡＧＡＴＣＧＣＧＡＴＧＧＧＡＡＡＡＡＡＴＴＣＧＧＴＴＡＡＧＧＣＣＡＧＧＧＧＧＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＴＡＴＡＡＡＴＴＡＡＡＡＣＡＴＡＴＡＧＴＡＴＧＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＧＡＧＣＴＡＧＡＡＣＧＡＴＴＣＧＣＡＧＴＴＡＡＴＣＣＴＧＧＣＣＴＧＴＴＡＧＡＡＡＣＡＴＣＡＧＡＡＧＧＣＴＧＴＡＧＡＣＡＡＡＴＡＣＴＧＧＧＡＣＡＧＣＴＡＣＡＡＣＣＡＴＣＣＣＴＴＣＡＧＡＣＡＧＧＡＴＣＡＧＡＡＧＡＡＣＴＴＡＧＡＴＣＡＴＴＡＴＡＴＡＡＴＡＣＡＧＴＡＧＣＡＡＣＣＣＴＣＴＡＴＴＧＴＧＴＧＣＡＴＣＡＡＡＧＧＡＴＡＧＡＧＡＴＡＡＡＡＧＡＣＡＣＣＡＡＧＧＡＡＧＣＴＴＴＡＧＡＣＡＡＧＡＴＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＣＡＡＡＡＣＡＡＡＡＧＴＡＡＧＡＣＣＡＣＣＧＣＡＣＡＧＣＡＡＧＣＣＧＣＣＧＣＴＧＡＴＣＴＴＣＡＧＡＣＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＡＴＧＡＧＧＧＡＣＡＡＴＴＧＧＡＧＡＡＧＴＧＡＡＴＴＡＴＡＴＡＡＡＴＡＴＡＡＡＧＴＡＧＴＡＡＡＡＡＴＴＧＡＡＣＣＡＴＴＡＧＧＡＧＴＡＧＣＡＣＣＣＡＣＣＡＡＧＧＣＡＡＡＧＡＧＡＡＧＡＧＴＧＧＴＧＣＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＡＡＧＡＧＣＡＧＴＧＧＧＡＡＴＡＧＧＡＧＣＴＴＴＧＴＴＣＣＴＴＧＧＧＴＴＣＴＴＧＧＧＡＧＣＡＧＣＡＧＧＡＡＧＣＡＣＴＡＴＧＧＧＣＧＣＡＧＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＣＴＧＡＣＧＧＴＡＣＡＧＧＣＣＡＧＡＣＡＡＴＴＡＴＴＧＴＣＴＧＧＴＡＴＡＧＴＧＣＡＧＣＡＧＣＡＧＡＡＣＡＡＴＴＴＧＣＴＧＡＧＧＧＣＴＡＴＴＧＡＧＧＣＧＣＡＡＣＡＧＣＡＴＣＴＧＴＴＧＣＡＡＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＡＴＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＡＡＴＣＣＴＧＧＣＴＧＴＧＧＡＡＡＧＡＴＡＣＣＴＡＡＡＧＧＡＴＣＡＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＧＧＧＡＴＴＴＧＧＧＧＴＴＧＣＴＣＴＧＧＡＡＡＡＣＴＣＡＴＴＴＧＣＡＣＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＴＧＧＡＡＴＧＣＴＡＧＴＴＧＧＡＧＴＡＡＴＡＡＡＴＣＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＡＴＴＴＧＧＡＡＴＣＡＣＡＣＧＡＣＣＴＧＧＡＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＡＡＡＴＴＡＡＣＡＡＴＴＡＣＡＣＡＡＧＣＴＴＡＡＴＡＣＡＣＴＣＣＴＴＡＡＴＴＧＡＡＧＡＡＴＣＧＣＡＡＡＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＡＡＡＧＡＡＴＧＡＡＣＡＡＧＡＡＴＴＡＴＴＧＧＡＡＴＴＡＧＡＴＡＡＡＴＧＧＧＣＡＡＧＴＴＴＧＴＧＧＡＡＴＴＧＧＴＴＴＡＡＣＡＴＡＡＣＡＡＡＴＴＧＧＣＴＧＴＧＧＴＡＴＡＴＡＡＡＡＴＴＡＴＴＣＡＴＡＡＴＧＡＴＡＧＴＡＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＧＧＴＴＴＡＡＧＡＡＴＡＧＴＴＴＴＴＧＣＴＧＴＡＣＴＴＴＣＴＡＴＡＧＴＧＡＡＴＡＧＡＧＴＴＡＧＧＣＡＧＧＧＡＴＡＴＴＣＡＣＣＡＴＴＡＴＣＧＴＴＴＣＡＧＡＣＣＣＡＣＣＴＣＣＣＡＡＣＣＣＣＧＡＧＧＧＧＡＣＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＧＡＡＧＧＡＡＴＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＣＡＧＡＧＡＣＡＧＡＴＣＣＡＴＴＣＧＡＴＴＡＧＴＧＡＡＣＧＧＡＴＣＴＣＧＡＣＧＧＴＡＴＣＧＧＴＴＡＡＣＴＴＴＴＡＡＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＴＴＧＧＧＧＧＧＴＡＣＡＧＴＧＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＡＴＡＧＴＡＧＡＣＡＴＡＡＴＡＧＣＡＡＣＡＧＡＣＡＴＡＣＡＡＡＣＴＡＡＡＧＡＡＴＴＡＣＡＡＡＡＡＣＡＡＡＴＴＡＣＡＡＡＡＴＴＣＡＡＡＡＴＴＴＴＡＴＣＧＣＧＡＴＣＧＣＧＧＡＡＴＧＡＡＡＧＡＣＣＣＣＡＣＣＴＧＴＡＧＧＴＴＴＧＧＣＡＡＧＣＴＡＧＣＴＴＡＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＴＴＴＴＧＣＡＡＧＧＣＡＴＧＧＡＡＡＡＴＡＣＡＴＡＡＣＴＧＡＧＡＡＴＡＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＧＡＴＣＡＡＧＧＴＴＡＧＧＡＡＣＡＧＡＧＡＧＡＣＡＧＣＡＧＡＡＴＡＴＧＧＧＣＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＧＴＧＧＴＡＡＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧＴＣＣＣＣＡＧＡＴＧＣＧＧＴＣＣＣＧＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＴＴＴＣＴＡＧＡＧＡＡＣＣＡＴＣＡＧＡＴＧＴＴＴＣＣＡＧＧＧＴＧＣＣＣＣＡＡＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＡＴＧＡＣＣＣＴＧＴＧＣＣＴＴＡＴＴＴＧＡＡＣＴＡＡＣＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＧＣＴＴＣＴＣＧＣＴＴＣＴＧＴＴＣＧＣＧＣＧＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＣＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＡＡＡＡＧＡＧＣＣＣＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＡＣＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＡＧＴＣＣＴＴＣＧＡＡＧＴＡＧＡＴＣＴＴＴＧＴＣＧＡＴＣＣＴＡＣＣＡＴＣＣＡＣＴＣＧＡＣＡＣＡＣＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＣＧＣＴＧＣＣＡＡＧＣＴＴＣＣＧＡＧＣＴＣＴＣＧＡＡＴＴＡＡＴＴＣＡＣＧＧＴＡＣＣＣＡＣＣＡＴＧＧＣＣＴＡＧＧＧＡＧＡＣＴＡＧＴＣＧＡＡＴＣＧＡＴＡＴＣＡＡＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＡＣＡＡＡＡＴＴＴＧＴＧＡＡＡＧＡＴＴＧＡＣＴＧＧＴＡＴＴＣＴＴＡＡＣＴＡＴＧＴＴＧＣＴＣＣＴＴＴＴＡＣＧＣＴＡＴＧＴＧＧＡＴＡＣＧＣＴＧＣＴＴＴＡＡＴＧＣＣＴＴＴＧＴＡＴＣＡＴＧＣＴＡＴＴＧＣＴＴＣＣＣＧＴＡＴＧＧＣＴＴＴＣＡＴＴＴＴＣＴＣＣＴＣＣＴＴＧＴＡＴＡＡＡＴＣＣＴＧＧＴＴＧＣＴＧＴＣＴＣＴＴＴＡＴＧＡＧＧＡＧＴＴＧＴＧＧＣＣＣＧＴＴＧＴＣＡＧＧＣＡＡＣＧＴＧＧＣＧＴＧＧＴＧＴＧＣＡＣＴＧＴＧＴＴＴＧＣＴＧＡＣＧＣＡＡＣＣＣＣＣＡＣＴＧＧＴＴＧＧＧＧＣＡＴＴＧＣＣＡＣＣＡＣＣＴＧＴＣＡＧＣＴＣＣＴＴＴＣＣＧＧＧＡＣＴＴＴＣＧＣＴＴＴＣＣＣＣＣＴＣＣＣＴＡＴＴＧＣＣＡＣＧＧＣＧＧＡＡＣＴＣＡＴＣＧＣＣＧＣＣＴＧＣＣＴＴＧＣＣＣＧＣＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＧＣＴＣＧＧＣＴＧＴＴＧＧＧＣＡＣＴＧＡＣＡＡＴＴＣＣＧＴＧＧＴＧＴＴＧＴＣＧＧＧＧＡＡＧＣＴＧＡＣＧＴＣＣＴＴＴＴＣＡＴＧＧＣＴＧＣＴＣＧＣＣＴＧＴＧＴＴＧＣＣＡＣＣＴＧＧＡＴＴＣＴＧＣＧＣＧＧＧＡＣＧＴＣＣＴＴＣＴＧＣＴＡＣＧＴＣＣＣＴＴＣＧＧＣＣＣＴＣＡＡＴＣＣＡＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣＣＧＣＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＧＧＣＴＣＴＧＣＧＧＣＣＴＣＴＴＣＣＧＣＧＴＣＴＴＣＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＴＣＡＧＡＣＧＡＧＴＣＧＧＡＴＣＴＣＣＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＣＣＣＧＣＣＴＧＧＴＴＡＡＴＴＡＡＡＧＴＡＣＣＴＴＴＡＡＧＡＣＣＡＡＴＧＡＣＴＴＡＣＡＡＧＧＣＡＧＣＴＧＴＡＧＡＴＣＴＴＡＧＣＣＡＣＴＴＴＴＴＡＡＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＣＴＧＧＡＡＧＧＧＣＧＡＡＴＴＣＡＣＴＣＣＣＡＡＣＧＡＡＧＡＣＡＡＧＡＴＣＴＧＣＴＴＴＴＴＧＣＴＴＧＴＡＣＴＧＧＧＴＣＴＣＴＣＴＧＧＴＴＡＧＡＣＣＡＧＡＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＣＴＡＡＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＡＣＴＧＣＴＴＡＡＧＣＣＴＣＡＡＴＡＡＡＧＣＴＴＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＣＴＴＣＡＡＧＴＡＧＴＧＴＧＴＧＣＣＣＧＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＡＣＴＣＴＧＧＴＡＡＣＴＡＧＡＧＡＴＣＣＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＴＴＴＡＧＴＣＡＧＴＧＴＧＧＡＡＡＡＴＣＴＣＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＣＡＧＡＣＡＴＧＡＴＡＡＧＡＴＡＣＡＴＴＧＡＴＧＡＧＴＴＴＧＧＡＣＡＡＡＣＣＡＣＡＡＣＴＡＧＡＡＴＧＣＡＧＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＧＣＴＴＴＡＴＴＴＧＴＧＡＡＡＴＴＴＧＴＧＡＴＧＣＴＡＴＴＧＣＴＴＴＡＴＴＴＧＴＡＡＣＣＡＴＴＡＴＡＡＧＣＴＧＣＡＡＴＡＡＡＣＡＡＧＴＴＡＡＣＡＡＣＡＡＣＡＡＴＴＧＣＡＴＴＣＡＴＴＴＴＡＴＧＴＴＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＧＧＧＧＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＧＧＴＴＴＴＴＴＧＧＣＧＣＧＣＣＡＴＣＧＴＣＧＡＧＧＴＴＣＣＣＴＴＴＡＧＴＧＡＧＧＧＴＴＡＡＴＴＧＣＧＡＧＣＴＴＧＧＣＧＴＡＡＴＣＡＴＧＧＴＣＡＴＡＧＣＴＧＴＴＴＣＣＴＧＴＧＴＧＡＡＡＴＴＧＴＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＡＡＴＴＣＣＡＣＡＣＡＡＣＡＴＡＣＧＡＧＣＣＧＧＡＡＧＣＡＴＡＡＡＧＴＧＴＡＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＴＧＣＣＴＡＡＴＧＡＧＴＧＡＧＣＴＡＡＣＴＣＡＣＡＴＴＡＡＴＴＧＣＧＴＴＧＣＧＣＴＣＡＣＴＧＣＣＣＧＣＴＴＴＣＣＡＧＴＣＧＧＧＡＡＡＣＣＴＧＴＣＧＴＧＣＣＡＧＣＴＧＣＡＴＴＡＡＴＧＡＡＴＣＧＧＣＣＡＡＣＧＣＧＣＧＧＧＧＡＧＡＧＧＣＧＧＴＴＴＧＣＧＴＡＴＴＧＧＧＣＧＣＴＣＴＴＣＣＧＣＴＴＣＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＣＴＣＧＣＴＧＣＧＣＴＣＧＧＴＣＧＴＴＣＧＧＣＴＧＣＧＧＣＧＡＧＣＧＧＴＡＴＣＡＧＣＴＣＡＣＴＣＡＡＡＧＧＣＧＧＴＡＡＴＡＣＧＧＴＴＡＴＣＣＡＣＡＧＡＡＴＣＡＧＧＧＧＡＴＡＡＣＧＣＡＧＧＡＡＡＧＡＡＣＡＴＧＴＧＡＧＣＡＡ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ＣＡＧＧＡＣＴＡＴＡＡＡＧＡＴＡＣＣＡＧＧＣＧＴＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＡＡＧＣＴＣＣＣＴＣＧＴＧＣＧＣＴＣＴＣＣＴＧＴＴＣＣＧＡＣＣＣＴＧＣＣＧＣＴＴＡＣＣＧＧＡＴＡＣＣＴＧＴＣＣＧＣＣＴＴＴＣＴＣＣＣＴＴＣＧＧＧＡＡＧＣＧＴＧＧＣＧＣＴＴＴＣＴＣＡＴＡＧＣＴＣＡＣＧＣＴＧＴＡＧＧＴＡＴＣＴＣＡＧＴＴＣＧＧＴＧＴＡＧＧＴＣＧＴＴＣＧＣＴＣＣＡＡＧＣＴＧＧＧＣＴＧＴＧＴＧＣＡＣＧＡＡＣＣＣＣＣＣＧＴＴＣＡＧＣＣＣＧＡＣＣＧＣＴＧＣＧＣＣＴＴＡＴＣＣＧＧＴＡＡＣＴＡＴＣＧＴＣＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＣＣＣＧＧＴＡＡＧＡＣＡＣＧＡＣＴＴＡＴＣＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＧＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＡＣＡＧＧＡＴＴＡＧＣＡＧＡＧＣＧＡＧＧＴＡＴＧＴＡＧＧＣＧＧＴＧＣＴＡＣＡＧＡＧＴＴＣＴＴＧＡＡＧＴＧＧＴＧＧＣＣＴＡＡＣＴＡＣＧＧＣＴＡＣＡＣＴＡＧＡＡＧＡＡＣＡＧＴＡＴＴＴＧＧＴＡＴＣＴＧＣＧＣＴＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＣＡＧＴＴＡＣＣＴＴＣＧＧＡＡＡＡＡＧＡＧＴＴＧＧＴＡＧＣＴＣＴＴＧＡＴＣＣＧＧＣＡＡＡＣＡＡＡＣＣＡＣＣＧＣＴＧＧＴＡＧＣＧＧＴＧＧＴＴＴＴＴＴＴＧＴＴＴＧＣＡＡＧＣＡＧＣＡＧＡＴＴＡＣＧＣＧＣＡＧＡＡＡＡＡＡＡＧＧＡＴＣＴＣＡＡＧＡＡＧＡＴＣＣＴＴＴＧＡＴＣＴＴＴＴＣＴＡＣＧＧＧＧＴＣＴＧＡＣＧＣＴＣＡＧＴＧＧＡＡＣＧＡＡＡＡＣＴＣＡＣＧＴＴＡＡＧＧＧＡＴＴＴＴＧＧＴＣＡＴＧＡＧＡＴＴＡＴＣＡＡＡＡＡＧＧＡＴＣＴＴＣＡＣＣＴＡＧＡＴＣＣＴＴＴＴＡＡＡＴＴＡＡＡＡＡＴＧＡＡＧＴＴＴＴＡＡＡＴＣＡＡＴＣＴＡＡＡＧＴＡＴＡＴＡＴＧＡＧＴＡＡＡＣＴＴＧＧＴＣＴＧＡＣＡＧＴＴＡＣＣＡＡＴＧＣＴＴＡＡＴＣＡＧＴＧＡＧＧＣＡＣＣＴＡＴＣＴＣＡＧＣＧＡＴＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＧＴＴＣＡＴＣＣＡＴＡＧＴＴＧＣＣＴＧＡＣＴＣＣＣＣＧＴＣＧＴＧＴＡＧＡＴＡＡＣＴＡＣＧＡＴＡＣＧＧＧＡＧＧＧＣＴＴＡＣＣＡＴＣＴＧＧＣＣＣＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＡＴＧＡＴＡＣＣＧＣＧＡＧＡＣＣＣＡＣＧＣＴＣＡＣＣＧＧＣＴＣＣＡＧＡＴＴＴＡＴＣＡＧＣＡＡＴＡＡＡＣＣＡＧＣＣＡＧＣＣＧＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＧＣＧＣＡＧＡＡＧＴＧＧＴＣＣＴＧＣＡＡＣＴＴＴＡＴＣＣＧＣＣＴＣＣＡＴＣＣＡＧＴＣＴＡＴＴＡＡＴＴＧＴＴＧＣＣＧＧＧＡＡＧＣＴＡＧＡＧＴＡＡＧＴＡＧＴＴＣＧＣＣＡＧＴＴＡＡＴＡＧＴＴＴＧＣＧＣＡＡＣＧＴＴＧＴＴＧＣＣＡＴＴＧＣＴＡＣＡＧＧＣＡＴＣＧＴＧＧＴＧＴＣＡＣＧＣＴＣＧＴＣＧＴＴＴＧＧＴＡＴＧＧＣＴＴＣＡＴＴＣＡＧＣＴＣＣＧＧＴＴＣＣＣＡＡＣＧＡＴＣＡＡＧＧＣＧＡＧＴＴＡＣＡＴＧＡＴＣＣＣＣＣＡＴＧＴＴＧＴＧＣＡＡＡＡＡＡＧＣＧＧＴＴＡＧＣＴＣＣＴＴＣＧＧＴＣＣＴＣＣＧＡＴＣＧＴＴＧＴＣＡＧＡＡＧＴＡＡＧＴＴＧＧＣＣＧＣＡＧＴＧＴＴＡＴＣＡＣＴＣＡＴＧＧＴＴＡＴＧＧＣＡＧＣＡＣＴＧＣＡＴＡＡＴＴＣＴＣＴＴＡＣＴＧＴＣＡＴＧＣＣＡＴＣＣＧＴＡＡＧＡＴＧＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＡＣＴＧＧＴＧＡＧＴＡＣＴＣＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＴＴＣＴＧＡＧＡＡＴＡＧＴＧＴＡＴＧＣＧＧＣＧＡＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＣＴＴＧＣＣＣＧＧＣＧＴＣＡＡＴＡＣＧＧＧＡＴＡＡＴＡＣＣＧＣＧＣＣＡＣＡＴＡＧＣＡＧＡＡＣＴＴＴＡＡＡＡＧＴＧＣＴＣＡＴＣＡＴＴＧＧＡＡＡＡＣＧＴＴＣＴＴＣＧＧＧＧＣＧＡＡＡＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＡＴＣＴＴＡＣＣＧＣＴＧＴＴＧＡＧＡＴＣＣＡＧＴＴＣＧＡＴＧＴＡＡＣＣＣＡＣＴＣＧＴＧＣＡＣＣＣＡＡＣＴＧＡＴＣＴＴＣＡＧＣＡＴＣＴＴＴＴＡＣＴＴＴＣＡＣＣＡＧＣＧＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＡＧＣＡＡＡＡＡＣＡＧＧＡＡＧＧＣＡＡＡＡＴＧＣＣＧＣＡＡＡＡＡＡＧＧＧＡＡＴＡＡＧＧＧＣＧＡＣＡＣＧＧＡＡＡＴＧＴＴＧＡＡＴＡＣＴＣＡＴＡＣＴＣＴＴＣＣＴＴＴＴＴＣＡＡＴＡＴＴＡＴＴＧＡＡＧＣＡＴＴＴＡＴＣＡＧＧＧＴＴＡＴＴＧＴＣＴＣＡＴＧＡＧＣＧＧＡＴＡＣＡＴＡＴＴＴＧＡＡＴＧＴＡＴＴＴＡＧＡＡＡＡＡＴＡＡＡＣＡＡＡＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＧＣＧＣＡＣＡＴＴＴＣＣＣＣＧＡＡＡＡＧＴＧＣＣＡＣのコーディング配列を有する。
【０２０４】
ｐＧＡＲベクターマップを以下に示す。
【化１】
2019516350.tif 000053
好適な追加の例示的なベクターとして、例えばｐＢＡＢＥ−ｐｕｒｏ、ｐＢＡＢＥ−ｎｅｏ  ｌａｒｇｅＴｃＤＮＡ、ｐＢＡＢＥ−ｈｙｇｒｏ−ｈＴＥＲＴ、ｐＭＫＯ．１  ＧＦＰ、ＭＳＣＶ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰ、ｐＭＳＣＶ  ＰＩＧ（Ｐｕｒｏ  ＩＲＥＳ  ＧＦＰ空プラスミド）、ｐＭＳＣＶ−ｌｏｘｐ−ｄｓＲｅｄ−ｌｏｘｐ−ｅＧＦＰ−Ｐｕｒｏ−ＷＰＲＥ、ＭＳＣＶ  ＩＲＥＳ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ、ｐＭＩＧ、ＭＤＨ１−ＰＧＫ−ＧＦＰ＿２．０、ＴｔＲＭＰＶＩＲ、ｐＭＳＣＶ−ＩＲＥＳ−ｍＣｈｅｒｒｙ  ＦＰ、ｐＲｅｔｒｏＸ  ＧＦＰ  Ｔ２Ａ  Ｃｒｅ、ｐＲＸＴＮ、ｐＬｎｃＥＸＰ、及びｐＬＸＩＮ−Ｌｕｃが挙げられる。
【０２０５】
他の態様では、本発明のポリヌクレオチド又はベクターを含む細胞が本明細書において提供される。幾つかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載されるＴＣＤを含むＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む細胞、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞に関する。他の実施形態では、本発明は、本明細書に記載されるＴＣＤを含むＣＡＲ又はＴＣＲによってコードされるポリペプチドを含む細胞、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞に関する。
【０２０６】
いずれの細胞も本発明のポリヌクレオチド、ベクター又はポリペプチドに対する宿主細胞として使用され得る。幾つかの実施形態では、細胞は、原核細胞、真菌細胞、酵母細胞、又は哺乳動物細胞等のより高等な真核細胞であってもよい。好適な原核細胞として、限定されずに、グラム陰性又はグラム陽性の生物等の真正細菌、例えばエンテロバクテハシエ（Enterobactehaceae：腸内細菌科）、例えばエシェリヒア（Escherichia）、例えばＥ．コリ；エンテロバクター（Enterobacter）；エルウィニア（Erwinia）；クレブシエラ（Klebsiella）；プロテウス（Proteus）；サルモネラ（Salmonella）、例えばサルモネラ・チフィムリウム（Salmonella typhimurium）；セラチア（Serratia）、例えばセラチア・マルセッセンス（Serratia marcescans）及びシゲラ（Shigella）；Ｂ．サチリス（subtilis）及びＢ．リケニフォルミス（licheniformis）等の桿菌；Ｐ．アエルギノーザ（aeruginosa）等のシュードモナス；及びストレプトマイセス（Streptomyces）等が挙げられる。幾つかの実施形態では、細胞はヒト細胞である。幾つかの実施形態では、細胞は免疫細胞である。幾つかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＴＣＲ発現細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞、顆粒球、生得のリンパ系細胞、巨核球、単球、マクロファージ、血小板、胸腺細胞、及び骨髄性細胞からなる群から選択される。一実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。別の実施形態では、免疫細胞はＮＫ細胞である。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自己Ｔ細胞、操作された自己Ｔ細胞（ｅＡＣＴ（商標））、同種異系Ｔ細胞、異種性Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせである。
【０２０７】
本発明の細胞を、当該技術分野で知られている任意の供給源によって得ることができる。例えば、Ｔ細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで造血幹細胞集団から分化されてもよく、又はＴ細胞は被験体から得られてもよい。Ｔ細胞は、例えば末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位に由来する組織、腹水、胸水、脾臓組織、及び腫瘍から得られてもよい。さらに、Ｔ細胞は、当該技術分野において利用可能な１以上のＴ細胞株に由来し得る。また、Ｔ細胞は、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離及び／又はアフェレーシス等の当業者に知られている数多くの技術を使用して被験体から収集された血液単位から得られてもよい。特定の実施形態では、アフェレーシスによって収集された細胞を洗浄して血漿画分を除去し、後の処理に適切なバッファー又は培地に入れる。幾つかの実施形態では、細胞をＰＢＳで洗浄する。理解されるように、洗浄工程は、例えばＣｏｂｅ（商標）２９９１細胞処理装置、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅ（商標）等の半自動フロースルー遠心分離機等を使用することによって使用され得る。幾つかの実施形態では、洗浄された細胞を１以上の生体適合性のバッファー、又はバッファーを含む若しくは含まない他の生理食塩水溶液に再懸濁する。特定の実施形態では、アフェレーシス試料の望ましくない成分が除去される。Ｔ細胞療法用にＴ細胞を単離する追加の方法は、米国特許出願公開第２０１３／０２８７７４８号に開示され、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【０２０８】
特定の実施形態では、Ｔ細胞は、例えばＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離を使用することによる赤血球の溶解及び単球の枯渇によってＰＢＭＳから単離される。幾つかの実施形態では、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋及びＣＤ４５ＲＯ＋のＴ細胞等のＴ細胞の特定の亜集団は、当該技術分野において知られている正又は負の選択技術によって更に単離される。例えば、負の選択によるＴ細胞集団の富化は、負に選択される細胞に特有の表面マーカーに対する抗体の組み合わせによって遂行され得る。幾つかの実施形態では、負に選択される細胞に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する負の磁気免疫付着（negative magnetic immunoadherence）又はフローサイトメトリーによる細胞の選別及び／又は選択を使用することができる。例えば、負の選択によってＣＤ４＋細胞を富化するため、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ８、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ２０及びＨＬＡ−ＤＲに対する抗体を含む。特定の実施形態では、フローサイトメトリー及び細胞選別は、本発明における使用に対する目的の細胞集団を単離するために使用される。
【０２０９】
幾つかの実施形態では、ＰＢＭＣは、本明細書に記載される方法を使用して、免疫細胞（ＣＡＲ又はＴＣＲ等）により遺伝子修飾に直接使用される。特定の実施形態では、ＰＢＭＣを単離した後、Ｔリンパ球を更に単離し、遺伝子修飾及び／又は拡大の前又は後のいずれかに、細胞傷害性Ｔリンパ球とヘルパーＴリンパ球の両方を、ナイーブ、メモリー、及びエフェクターのＴ細胞亜集団へと選別する。
【０２１０】
幾つかの実施形態では、ＣＤ８＋細胞は、これら各種のＣＤ８＋細胞と関連する細胞表面抗原を同定することによって、ナイーブ細胞、セントラルメモリー細胞、及びエフェクター細胞へと更に選別される。幾つかの実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞の表現型マーカーの発現は、ＣＣＲ７、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、及びＣＤ１２７を含み、グランザイムＢに対して陰性である。幾つかの実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞は、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＯ＋及びＣＤ６２Ｌ＋のＴ細胞である。幾つかの実施形態では、エフェクターＴ細胞は、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ６２Ｌ及びＣＤ１２７に対して陰性であり、グランザイムＢ及びパーフォリンに対して陽性である。特定の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞は亜集団へと更に選別される。例えば、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞は、細胞表面抗原を有する細胞集団を同定することによって、ナイーブ細胞、セントラルメモリー細胞及びエフェクター細胞へと選別され得る。
【０２１１】
幾つかの実施形態では、免疫細胞、例えばＴ細胞は、単離に続いて、既知の方法を使用して遺伝子修飾されるか、又は遺伝子修飾に先だってｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫細胞が活性化され、拡大される（すなわち、前駆細胞の場合、分化される）。別の実施形態では、免疫細胞、例えばＴ細胞は、本明細書に記載されるキメラ抗原受容体によって遺伝子修飾され（例えば、ＣＡＲをコードする１以上のヌクレオチド配列を含むウイルスベクターによって形質導入される）、次いでｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化及び／又は拡大される。Ｔ細胞を活性化及び拡大する方法は当該技術分野において知られており、例えば米国特許第６，９０５，８７４号、同第６，８６７，０４１号、及び同第６，７９７，５１４号、並びにＰＣＴ公報国際公開第２０１２／０７９０００号に記載され、それらの内容は、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす。一般的には、かかる方法は、ＰＢＭＣ又は単離されたＴ細胞と、一般的にはビーズ又は他の表面に付着された抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等の刺激物質及び共刺激物質とを、ＩＬ−２等の適切なサイトカインを含む培養培地中で接触させることを含む。同じビーズに付着された抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体は、「代理」抗原提示細胞（ＡＰＣ）としての役割を果たす。一例は、ヒトＴ細胞の生理学的な活性化に対するＣＤ３／ＣＤ２８活性化因子／刺激因子システムである、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）システムである。他の実施形態では、米国特許第６，０４０，１７７号及び同第５，８２７，６４２号、並びにＰＣＴ公報国際公開第２０１２／１２９５１４号（それらの内容は、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす）に記載されるような方法を使用して、フィーダー細胞、並びに適切な抗体及びサイトカインによって、Ｔ細胞は活性化され、刺激されて増殖する。
【０２１２】
特定の実施形態では、Ｔ細胞はドナー被験体から得られる。幾つかの実施形態では、ドナー被験体は、癌又は腫瘍に冒されたヒト患者である。他の実施形態では、ドナー被験体は癌又は腫瘍に冒されていないヒト患者である。
【０２１３】
本発明の他の態様は、本明細書に記載されるポリヌクレオチドを含む組成物、本明細書に記載されるベクター、本明細書に記載されるポリペプチド、又は本明細書に記載されるｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞に関する。幾つかの実施形態では、上記組成物は、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、可溶化剤、乳化剤、防腐剤、及び／又はアジュバントを含む。幾つかの実施形態では、上記組成物は賦形剤を含む。一実施形態では、上記組成物は、本明細書に記載される短縮ヒンジドメイン（「ＴＨＤ」）を含むＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む。別の実施形態では、上記組成物は、本発明のポリヌクレオチドによってコードされるＴＣＤを含むＣＡＲ又はＴＣＲを含む。別の実施形態では、上記組成物は、本明細書に記載されるＴＣＤを含むＣＡＲ又はＴＣＲを含むＴ細胞を含む。
【０２１４】
他の実施形態では、上記組成物は、非経口的な送達に対し、吸入に対し、又は経口等の消化管による送達に対して選択される。かかる薬学的に許容可能な組成物の作製は、当業者の能力の範囲に含まれる。特定の実施形態では、バッファーを使用して上記組成物を生理学的ｐＨ又はわずかに低いｐＨ、典型的には約５〜約８の範囲のｐＨに維持する。特定の実施形態では、非経口投与が検討される場合、上記組成物は、薬学的に許容可能なビヒクル中、追加の治療剤と共に又はそれを伴わずに、本明細書に記載される組成物を含む、パイロジェンフリー（pyrogen-free）の非経口的に許容可能な水溶液の形態である。特定の実施形態では、非経口注射用のビヒクルは滅菌蒸留水であり、該蒸留水中において、少なくとも１つの追加の治療剤と共に又はそれを伴わずに、本明細書に記載される組成物が適切に保存される無菌の等張液として製剤化される。特定の実施形態では、上記作製は、所望の分子と、製品の制御放出又は持続放出を提供する、高分子化合物（ポリ乳酸又はポリグリコール酸等）、ビーズ、又はリポソームとの製剤化を含み、その後、デポー注射によって送達される。特定の実施形態では、所望の分子を導入するために、埋め込み可能な薬物送達デバイスが使用される。
【０２１５】
ＩＩＩ．本発明の方法
本発明の別の態様は、好適な条件下で、本明細書に開示されるポリヌクレオチドで細胞を形質導入することを含む、ＣＡＲ又はＴＣＲを発現する細胞を作製する方法に関する。幾つかの実施形態では、上記方法は、本明細書に開示されるように、ＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドで細胞を形質導入することを含む。幾つかの実施形態では、上記方法は、ＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターで細胞を形質導入することを含む。
【０２１６】
本発明の別の態様は、本明細書に記載されるポリヌクレオチド、本明細書に記載されるベクター、又は本明細書に記載されるＣＡＲ若しくはＴＣＲを含む細胞を有効量、被験体に投与することを含む、腫瘍に対する免疫を誘導する方法に関する。一実施形態では、上記方法は、本明細書に開示されるＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む細胞を有効量、被験体に投与することを含む。別の実施形態では、上記方法は、本明細書に開示されるＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む細胞を有効量、被験体に投与することを含む。別の実施形態では、上記方法は、本明細書に開示されるポリヌクレオチドによってコードされるＣＡＲ又はＴＣＲを含む細胞を有効量、被験体に投与することを含む。
【０２１７】
本発明の別の態様は、有効量の本出願の操作された免疫細胞を投与することを含む、被験体において免疫応答を誘導する方法に関する。幾つかの実施形態では、免疫応答はＴ細胞媒介免疫応答である。幾つかの実施形態では、Ｔ細胞媒介免疫応答は、１以上の標的細胞に対するものである。幾つかの実施形態では、操作された免疫細胞はＣＡＲ又はＴＣＲを含み、ここで、ＣＡＲ又はＴＣＲは、本開示に記載されるＴＨＤを含む。幾つかの実施形態では、標的細胞は腫瘍細胞である。
【０２１８】
本発明の別の態様は、悪性腫瘍を治療する又は予防する方法に関し、該方法は、有効量の少なくとも１つの免疫細胞を、それを必要とする被験体に投与することを含み、ここで、該免疫細胞は少なくとも１つのＣＡＲ又はＴＣＲを含み、該ＣＡＲ又はＴＣＲが本明細書に記載されるＴＨＤを含む。
【０２１９】
本発明の別の態様は、本明細書に開示されるポリヌクレオチド、ベクター、ＣＡＲ若しくはＴＣＲ、細胞、又は組成物を被験体に投与することを含む、癌の治療を、それを必要とする被験体において行う方法に関する。一実施形態では、上記方法は、ＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを投与することを含む。別の実施形態では、上記方法は、ＣＡＲ又はＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを投与することを含む。別の実施形態では、上記方法は、本明細書に開示されるポリヌクレオチドによってコードされるＣＡＲ又はＴＣＲを投与することを含む。別の実施形態では、上記方法は、ＣＡＲ又はＴＣＲをコードする、ポリヌクレオチドを含む細胞、又は該ポリヌクレオチドを含むベクターを投与することを含む。
【０２２０】
幾つかの実施形態では、癌の治療を、それを必要とする被験体において行う方法は、Ｔ細胞療法を含む。一実施形態では、本発明のＴ細胞療法は操作された自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））である。この実施形態によれば、上記方法は、患者から血液細胞を収集することを含み得る。単離された血液細胞（例えばＴ細胞）は、その後、本発明のＣＡＲ又はＴＣＲを発現するように操作され得る。特定の実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＴＣＲ  Ｔ細胞は患者に投与される。幾つかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＴＣＲ  Ｔ細胞は、患者において腫瘍又は癌を治療する。一実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＴＣＲ  Ｔ細胞は、腫瘍又は癌のサイズを減少する。
【０２２１】
幾つかの実施形態では、Ｔ細胞療法における使用に対するドナーＴ細胞は、（例えば自己Ｔ細胞療法に対しては）患者から得られる。他の実施形態では、Ｔ細胞療法における使用に対するドナーＴ細胞は、患者でない被験体から得られる。
【０２２２】
Ｔ細胞は治療的有効量で投与され得る。例えば、Ｔ細胞の治療的有効量は、少なくとも約１０４個の細胞、少なくとも約１０５個の細胞、少なくとも約１０６個の細胞、少なくとも約１０７個の細胞、少なくとも約１０８個の細胞、少なくとも約１０９個の細胞、又は少なくとも約１０１０個の細胞となり得る。別の実施形態では、Ｔ細胞の治療的有効量は、約１０４個の細胞、約１０５個の細胞、約１０６個の細胞、約１０７個の細胞、又は約１０８個の細胞である。特定の一実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＴＣＲ  Ｔ細胞の治療的有効量は、約２×１０６細胞／ｋｇ、約３×１０６細胞／ｋｇ、約４×１０６細胞／ｋｇ、約５×１０６細胞／ｋｇ、約６×１０６細胞／ｋｇ、約７×１０６細胞／ｋｇ、約８×１０６細胞／ｋｇ、約９×１０６細胞／ｋｇ、約１×１０７細胞／ｋｇ、約２×１０７細胞／ｋｇ、約３×１０７細胞／ｋｇ、約４×１０７細胞／ｋｇ、約５×１０７細胞／ｋｇ、約６×１０７細胞／ｋｇ、約７×１０７細胞／ｋｇ、約８×１０７細胞／ｋｇ、又は約９×１０７細胞／ｋｇである。
【０２２３】
ＩＶ．癌治療
本発明の方法は、被験体において癌を治療するため、腫瘍のサイズを減少させるため、腫瘍細胞を死滅させるため、腫瘍細胞増殖を予防するため、腫瘍の成長を予防するため、患者から腫瘍を排除するため、腫瘍の再燃を予防するため、腫瘍転移を予防するため、患者において寛解を誘導するため、又はそれらの任意の組み合わせに使用され得る。特定の実施形態では、上記方法は完全奏功を誘導する。他の実施形態では、上記方法は部分奏功を誘導する。
【０２２４】
治療され得る癌は、血管新生化されていない、まだ実質的に血管新生化されていない、又は血管新生化された腫瘍を含む。また、癌は固形腫瘍又は非固形腫瘍を含み得る。幾つかの実施形態では、癌は血液の癌である。幾つかの実施形態では、癌は白血球の癌である。他の実施形態では、癌は形質細胞の癌である。幾つかの実施形態では、癌は白血病、リンパ腫又は骨髄腫である。特定の実施形態では、上記癌は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、及び血球貪食リンパ組織球増多症（ＨＬＨ））、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病（ＣＭＬ）、慢性若しくは急性の肉芽腫性疾患、慢性若しくは急性の白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、毛様細胞性白血病、血球貪食症候群（マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ））、ホジキン病、大細胞肉芽腫（large cell granuloma）、白血球接着不全症、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、限定されないが急性骨髄白血病（ＡＭＬ）を含む骨髄疾患、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖性障害（例えば、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫））、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症；孤立性骨髄腫；孤立性形質細胞腫；髄外性形質細胞腫；及び多発性形質細胞腫）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ−Ｆｕｋａｓｅ症候群、高月病、及びＰＥＰ症候群）、縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞若しくは大細胞濾胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、Ｔ細胞リンパ腫、形質転換後濾胞性リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、又はそれらの組み合わせである。
【０２２５】
一実施形態では、癌は骨髄腫である。特定の一実施形態では、癌は多発性骨髄腫である。別の実施形態では、癌は白血病である。一実施形態では、癌は急性骨髄白血病である。
【０２２６】
幾つかの実施形態では、上記方法は化学療法剤を投与することを更に含む。特定の実施形態では、選択される化学療法剤は、リンパ枯渇（lymphodepleting）（プレコンディショニング）化学療法剤である。有益なプレコンディショニング治療のレジメンは、相関的な有益なバイオマーカーと共に、米国仮特許出願第６２／２６２，１４３号及び同第６２／１６７，７５０号に記載され、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす。これらは、例えば、指定される有益な用量のシクロホスファミド（２００ｍｇ／ｍ２／日〜２０００ｍｇ／ｍ２／日）及び指定される用量のフルダラビン（２０ｍｇ／ｍ２／日〜９００ｍｇ／ｍ２／日）を患者に投与することを含むＴ細胞療法を必要とする患者をコンディショニングする方法を記載する。或る一つのかかる投薬レジメンは、治療的有効量の操作されたＴ細胞の患者への投与の３日前に、約５００ｍｇ／ｍ２／日のシクロホスファミド及び約６０ｍｇ／ｍ２／日のフルダラビンを毎日患者に投与することを含む、患者を治療することを含む。
【０２２７】
他の実施形態では、抗原結合分子、形質導入された（或いは操作された）細胞（ＣＡＲ又はＴＣＲ等）、及び化学療法剤は、各々、被験体における疾患又は状態を治療するのに有効な量で投与される。
【０２２８】
特定の実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲ又はＴＣＲを発現する免疫エフェクター細胞を含む組成物は、任意の数の化学療法剤と併せて投与され得る。化学療法剤の例として、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））等のアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン等のアルキルスルホン酸塩；ベンゾドーパ（benzodopa）、カルボコン、メツレドーパ（meturedopa）、及びウレドーパ（uredopa）等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド（triethylenethiophosphaoramide）、及びトリメチロロメラミン（trimethylolomelamine）のレジメ（resume）を含む、エチレンイミン及びメチラメラミン（methylamelamines）；クロラムブチル、クロルナファジン、コロホスファミド（cholophosphamide）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベムビチン（novembichin）、フェネステリン（phenesterine）、プレドニムスチン（prednimustine）、トロホスファミド（trofosfamide）、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン及びラニムスチン（ranimustine）等のニトロソウレア；アクラシノマイシン（aclacinomysins）、アクチノマイシン、アントラマイシン（authramycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリチアマイシン、カラビシン（carabicin）、カルミノマイシン、カルジオリピン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（detorubicin）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン（esorubicin）、イダルビシン、マルセロマイシン（marcellomycin）、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（potfiromycin）、ピューロマイシン、ケラマイシン（quelamycin）、ロドルビシン（rodorubicin）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン（zorubicin）等の抗生物質；メトトレキセート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）等の代謝拮抗薬；デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート等の葉酸類縁体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン（thiamiprine）、チオグアニン等のプリン類縁体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５−ＦＵ等のピリミジン類縁体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン；アミノグルテチミド、マイトテイン、トリロスタン等の抗副腎剤；フロリン酸（frolinic acid）等の葉酸補液；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル（bestrabucil）；ビスアントレン；エダトラキサート（edatraxate）；デフォファミン（defofamine）；デメコルチン；ジアジコン；エルフォルミチン（elformithine）；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキウレア；レンティナン；ロニ��ミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン（nitracrine）；ペントスタチン；フェナメット（phenamet）；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（商標）；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２、２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（gacytosine）；アラビノシッド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ）；クロラムブチル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；シスプラチン及びカルボプラチン等の白金類縁体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロン酸；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオミチン（ＤＭＦＯ）；Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（商標）（ベキサロテン）、Ｐａｎｒｅｔｉｎ（商標）（アリトレチノイン）等のレチノイン酸誘導体；ＯＮＴＡＫ（商標）（デニロイキンジフチトクス）；エスペラミシン；カペシタビン；並びに上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体が挙げられる。幾つかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲ及び／又はＴＣＲを発現する免疫エフェクター細胞を含む組成物は、腫瘍に対するホルモンの作用を調節又は阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン（keoxifene）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びトレミフェン（フェアストン）を含む抗エストロゲン薬；並びにフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリド及びゴセレリン等の抗アンドロゲン薬；並びに上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体と併せて投与され得る。また適切な場合には、限定されないが、ＣＨＯＰ、すなわち、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（商標））、ドキソルビシン（ヒドロキシドキソルビシン）、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（商標））及びプレドニゾンを含む化学療法剤の組み合わせが投与される。
【０２２９】
幾つかの実施形態では、化学療法剤は、操作された細胞又は核酸の投与と同時に又は投与の１週以内に投与される。他の実施形態では、化学療法剤は、操作された細胞又は核酸の投与の後、１週間〜４週間、すなわち１週間〜１ヶ月、１週間〜２ヶ月、１週間〜３ヶ月、１週間〜６ヶ月、１週間〜９ヶ月、又は１週間〜１２ヶ月投与される。幾つかの実施形態では、化学療法剤は、細胞又は核酸を投与する少なくとも１ヶ月前に投与される。幾つかの実施形態では、上記方法は、２以上の化学療法剤を投与することを更に含む。
【０２３０】
様々な追加の治療剤が、本明細書に記載される組成物と併せて使用され得る。例えば、有用な可能性がある追加の治療剤として、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（商標））、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（商標））、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ（CureTech）、及びアテゾリズマブ（Roche）等のＰＤ−１阻害剤が挙げられる。
【０２３１】
本発明との併用に適している追加の治療剤として、限定されないが、イブルチニブ（ＩＭＢＲＵＶＩＣＡ（商標））、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（商標））、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（商標））、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標））、トラスツズマブエムタンシン（ＫＡＤＣＹＬＡ（商標））、イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（商標））、カツマキソマブ、イブリツモマブ、オファツムマブ、トシツモマブ、ブレンツキシマブ、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、バンデタニブ、アファチニブ、ラパチニブ、ネラチニブ、アキシチニブ、マシチニブ、パゾパニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、トセラニブ、レスタウルチニブ、アキシチニブ、セジラニブ、レンバチニブ、ニンテダニブ、パゾパニブ、レゴラフェニブ、セマクサニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、チボザニブ、トセラニブ、バンデタニブ、エントレクチニブ、カボザンチニブ、イマチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ポナチニブ、ラドチニブ（radotinib）、ボスチニブ、レスタウルチニブ、ルキソリチニブ、パクリチニブ、コビメチニブ、セルメチニブ、トラメチニブ、ビニメチニブ、アレクチニブ、セリチニブ、クリゾチニブ、アフリベルセプト、アジポチド、デニロイキンジフチトクス、エベロリムス及びテムシロリムス等のｍＴＯＲ阻害剤、ソニデギブ及びビスモデギブ等のヘッジホッグ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤（パルボシクリブ）等のＣＤＫ阻害剤が挙げられる。
【０２３２】
追加の実施形態では、ＣＡＲ及び／又はＴＣＲを含む免疫を備える組成物は、抗炎症剤と共に投与される。抗炎症剤又は抗炎症薬として、限定されないが、ステロイド及びグルココルチコイド（ベタメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンを含む）、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、メトトレキセート、スルファサラジン、レフルノミド、抗ＴＮＦ薬、シクロホスファミド、及びミコフェノール酸（mycophenolate）を含む非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が挙げられ得る。例示的なＮＳＡＩＤとして、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、Ｃｏｘ−２阻害剤、及びシアリレート（sialylates）が挙げられる。例示的な鎮痛剤として、アセトアミノフェン、オキシコドン、塩酸プロポキシフェンのトラマドールが挙げられる。例示的なグルココルチコイドとして、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、又はプレドニゾンが挙げられる。例示的な生物学的応答修飾物質として、細胞表面マーカー（例えばＣＤ４、ＣＤ５等）に対する分子、サイトカイン阻害剤（例えば、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（商標））及びインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標）））、ケモカイン阻害剤、及び接着分子阻害剤が挙げられる。生物学的応答修飾物質は、分子の組み換え形態と並んで、モノクローナル抗体も含む。例示的なＤＭＡＲＤとして、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキセート、ペニシラミン、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、金（経口（オーラノフィン）及び筋肉内）、及びミノサイクリンが挙げられる。
【０２３３】
特定の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、サイトカインと併せて投与される。本明細書で使用される「サイトカイン」は、細胞間メディエーターとして別の細胞に対して作用する、１つの細胞集団によって放出されるタンパク質を指すことを意味する。サイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン及び従来のポリペプチドホルモンである。サイトカインの中でも、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモン等の成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）等の糖タンパク質ホルモン；肝臓増殖因子（ＨＧＦ）；線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；ミューラー阻害物質；マウス性腺刺激ホルモン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮細胞増殖因子；インテグリン；トロンボポイエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−ベータ等の神経成長因子（ＮＧＦ）；血小板増殖因子；ＴＧＦ−アルファ及びＴＧＦ−ベータ等のトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様増殖因子Ｉ及びＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン−アルファ、ベータ及びガンマ等のインターフェロン；マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；及び顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）等のコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；ＩＬ−１、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２；ＩＬ−１５等のインターロイキン（ＩＬ）、ＴＮＦ−アルファ又はＴＮＦ−ベータ等の腫瘍壊死因子；並びにＬＩＦ及びｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子が挙げられる。本明細書で使用されるサイトカインの用語は、天然起源の又は組み換え細胞培養物由来のタンパク質、及び本来の配列のサイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。
【０２３４】
本明細書で言及される全ての出版物、特許、及び特許出願は、個々の出版物、特許又は特許出願が各々、具体的かつ個別に引用することにより本明細書の一部をなすことが指示されるのと同じ程度に、引用することにより本明細書の一部をなす。しかしながら、本明細書における参照文献の引用は、かかる参照文献が本発明に対する先行技術の認識として解釈されるべきではない。引用することにより本明細書の一部をなす参照文献に提供される定義又は用語のいずれかが本明細書に提供される用語及び考察とは異なる場合は、本発明の用語及び定義を優先する。
【０２３５】
本発明は、以下の実施例によって更に説明されるが、更なる限定として解釈されるべきではない。本出願全体を通して引用される全ての参照文献の内容は、引用することにより明らかに本明細書の一部をなす。
【実施例】
【０２３６】
実施例１
Ｔ７プロモーター、ＣＡＲコンストラクト、及びベータグロビン安定化配列をコードするプラスミドを、ＥｃｏＲＩ及びＢａｍＨＩ（NEB）によってＤＮＡ  １０μｇの消化を一晩行うことにより線状化した。次いで、プロテイナーゼＫ（Thermo Fisher、６００Ｕ／ｍｌ）により５０℃で２時間、ＤＮＡを消化して、フェノール／クロロホルムで精製し、酢酸ナトリウム及び２体積のエタノールを添加することによって沈澱させた。次いで、ペレットを乾燥させ、ＲＮアーゼ／ＤＮアーゼフリー水に再懸濁し、ＮａｎｏＤｒｏｐを使用して定量した。次いで、製造業者の使用説明書に従って、１μｇの直鎖ＤＮＡをｍＭＥＳＳＡＧＥ  ｍＭＡＣＨＩＮＥ  Ｔ７  Ｕｌｔｒａ（Thermo Fisher）を使用するｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写に使用した。製造業者の使用説明書に従って、ＭＥＧＡＣｌｅａｒ  Ｋｉｔ（Thermo Fisher）を使用してＲＮＡを更に精製し、ＮａｎｏＤｒｏｐを使用して定量した。ｍＲＮＡの完全性（mRNA integrity：ｍＲＮＡインテグリティ）をアガロースゲル上での移動度を使用して評価した。製造業者の使用説明書の通り、ｆｉｃｏｌｌ−ｐａｑｕｅ密度遠心分離を使用して、健康なドナーのロイコパック（Hemacare）からＰＢＭＣを単離した。Ｒ１０培地＋ＩＬ−２（３００ＩＵ／ｍｌ、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（商標）、Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ（商標）Therapeutics and Diagnostics）中、ＯＫＴ３（５０ｎｇ／ｍｌ、Miltenyi Biotec）でＰＢＭＣを刺激した。刺激から７日後、Ｔ細胞をＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地（Thermo Fisher Scientific）中で２回洗浄し、２．５×１０７細胞／ｍｌの最終濃度でＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地中に再懸濁した。１回の電気穿孔に対して１０μｇのｍＲＮＡを使用した。２ｍｍのキュベット（Harvard Apparatus BTX）において０．５ｍｓに亘り４００Ｖの単パルスを送達するため、Ｇｅｍｉｎｉ  Ｘ２システム（Harvard Apparatus BTX）を使用して、細胞の電気穿孔を行った。細胞をすぐにＲ１０＋ＩＬ−２培地に移し、６時間回復させた。ＣＡＲ発現を調べるため、４℃にて３０分間、染色バッファー（BD Pharmingen）中にてＦＬＴ−＝３−ＨＩＳ（Sino Biological Inc.）又はビオチン化プロテインＬ（Thermo Scientific）でＴ細胞を染色した。次いで、細胞を洗浄し、４℃で３０分間、染色バッファー中において、抗ＨＩＳ−ＰＥ（Miltenyi Biotec）又はＰＥストレプトアビジン（BD Pharmingen）で染色した。次いで、細胞を洗浄し、データ取得に先立ってヨウ化プロピジウム（BD Pharmingen）を含む染色バッファー中に再懸濁した。電気穿孔されたＴ細胞におけるＦＬＴ３  ＣＡＲの発現を図３に示す。
【０２３７】
１０Ｅ３、２Ｅ７、８Ｂ５、４Ｅ９、又は１１Ｆ１１の抗ＦＬＴ３結合分子、及び全長ヒンジドメイン（完全ヒンジドメイン、すなわち「ＣＨＤ」）又は短縮ヒンジドメイン（「ＴＨＤ」）から選択されるヒンジ領域を含む抗ＦＬＴ３  ＣＡＲをコードするプラスミドでＴ細胞を電気穿孔した。次いで、電気穿孔された抗ＦＬＴ３  ＣＡＲ  Ｔ細胞をＮａｍａｌｗａ（ＦＬＴ３陰性）、ＥｏＬ１（ＦＬＴ３陽性）、ＨＬ６０（ＦＬＴ３陽性）又はＭＶ４；１１（ＦＬＴ３陽性）の標的細胞と、Ｒ１０培地中、１：１のＥ：Ｔ比で共培養した。共培養から１６時間後、Ｎａｍａｌｗａ（図４Ａ〜図４Ｆ）、ＥｏＬ１（図４Ｇ〜図４Ｌ）、ＨＬ６０（図４Ｍ〜図４Ｒ）、及びＭＶ４；１１（図４Ｓ〜図４Ｘ）から得られる上清を、ＩＦＮγ（図４Ａ、図４Ｂ、図４Ｇ、図４Ｈ、図４Ｍ、図４Ｎ、図４Ｓ及び図４Ｔ）、ＩＬ−２（図４Ｃ、図４Ｄ、図４Ｉ、図４Ｊ、図４Ｏ、図４Ｐ、図４Ｕ及び図４Ｖ）、及びＴＮＦα（図４Ｅ、図４Ｆ、図４Ｋ、図４Ｌ、図４Ｑ、図４Ｒ、図４Ｗ及び図４Ｘ）の産生についてＬｕｍｉｎｅｘ（EMD Millipore）によって分析した。
【０２３８】
ＣＤ３陰性細胞によるヨウ化プロピジウム（ＰＩ）取り込みのフローサイトメトリー分析によって、標的細胞の生存率を評価した。電気穿孔された抗ＦＬＴ３  ＣＡＲ  Ｔ細胞をＮａｍａｌｗａ（図５Ａ及び図５Ｂ）、ＥｏＬ１（図５Ｃ及び図５Ｄ）、ＨＬ６０（図５Ｅ及び図５Ｆ）、及びＭＶ４；１１（図５Ｇ及び図５Ｈ）の標的細胞と、共培養から１６時間に共培養した。
【０２３９】
実施例２
種々のＣＡＲコンストラクトを含む第３世代のレンチウイルストランスファーベクターをＶｉｒａＰｏｗｅｒ  Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｐａｃｋａｇｉｎｇ  Ｍｉｘ（Life Technologies）と共に使用して、レンチウイルス上清を作製した。簡潔には、ＤＮＡ  １５μｇと、ＯｐｔｉＭＥＭ培地６００μｌ中のポリエチレンイミン２２．５μｌ（Polysciences、１ｍｇ／ｍｌ）とを混合することにより、トランスフェクションミックスを作製した。そのミックスを室温で５分間インキュベートした。同時に２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ）をトリプシン処理し、計数し、トランスフェクションミックスを含むＴ７５フラスコに合計１０×１０６個の細胞を播種した。トランスフェクションから３日後、上清を収集し、０．４５μｍフィルターで濾過し、使用まで−８０℃にて保管した。製造業者の使用説明書の通り、ｆｉｃｏｌｌ−ｐａｑｕｅ密度遠心分離を使用して健康なドナーのロイコパック（Hemacare）からＰＢＭＣを単離した。Ｒ１０培地＋ＩＬ−２（３００ＩＵ／ｍｌ、ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（商標）、ＰＲＯＭＥＴＨＥＵＳ（商標）Therapeutics and Diagnostics）中、ＯＫＴ３（５０ｎｇ／ｍｌ、Miltenyi Biotec）を使用してＰＢＭＣを刺激した。刺激から４８時間後、ＭＯＩ＝１０でレンチウイルスを使用して細胞を形質導入した。活性アッセイでの使用に先立って、細胞を０．５×１０６個細胞／ｍｌ〜２．０×１０６個細胞／ｍｌで維持した。ＣＡＲ発現を調べるため、４℃にて３０分間、染色バッファー（BD Pharmingen）中、ＦＬＴ−３−ＨＩＳ（Sino Biological Inc.）又はビオチン化プロテインＬ（Thermo Scientific）でＴ細胞を染色した。次いで、細胞を洗浄し、４℃にて３０分間、染色バッファー中、抗ＨＩＳ−ＰＥ（Miltenyi Biotec）又はＰＥストレプトアビジン（BD Pharmingen）で染色した。次いで、細胞を洗浄し、データ取得に先立って、ヨウ化プロピジウム（BD Pharmingen）を含む染色バッファー中に再懸濁した。２名の健康なドナーに由来するＴ細胞におけるＦＬＴ３  ＣＡＲの発現を図６Ａ及び図６Ｂに示す。
【０２４０】
１０Ｅ３、８Ｂ５、又は１１Ｆ１１の結合分子、及び完全ヒンジドメイン（「ＣＨＤ」）、短縮ヒンジドメイン（「ＴＨＤ」）、及びＣＤ８ヒンジ領域から選択されるヒンジ領域を含む、抗ＦＬＴ３  ＣＡＲ  Ｔ細胞をコードするレンチウイルスベクターで２名の健康なドナーに由来するＴ細胞を形質導入した。形質導入されたＴ細胞を、Ｒ１０培地中１：１のＥ：Ｔ比で標的細胞と共培養した。共培養から１６時間後、上清をＩＦＮγ（図７Ａ及び図７Ｂ）、ＴＮＦα（図７Ｃ及び図７Ｄ）及びＩＬ−２（図７Ｅ及び図７Ｆ）の産生についてＬｕｍｉｎｅｘ（EMD Millipore）によって分析した。
【０２４１】
標的細胞の生存率を、ＣＤ３陰性細胞によるヨウ化プロピジウム（ＰＩ）取り込みのフローサイトメトリー分析によって評価した。Ｎａｍａｌｗａ（図８Ａ）、ＥｏＬ１（図８Ｂ）、ＭＶ４；１１（図８Ｃ）及びＨＬ６０（図８Ｄ）の標的細胞と共培養した、レンチウイルスで形質導入されたＣＡＲ  Ｔ細胞（２名の健康なドナーに由来する）の平均細胞溶解活性を測定した。
【０２４２】
ＦＬＴ３を発現する標的細胞に応じたＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖を評価するため、Ｒ１０培地中１：１のＥ：Ｔ比での標的細胞との共培養に先立って、Ｔ細胞をＣＦＳＥで標識化した。５日後、Ｔ細胞増殖をＣＦＳＥ希釈物のフローサイトメトリー分析によって評価した。ＦＬＴ３  ＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖を図９Ａ及び図９Ｂに示す。
【０２４３】
実施例３
ｉｎ  ｖｉｖｏ抗白血病（anti-leukemic）活性を調べるため、ヒトＡＭＬの異種モデルにおける使用に対してＦＬＴ３  ＣＡＲ  Ｔ細胞を作製した。ヒトＡＭＬの異種モデルで使用される様々なエフェクター株のＣＡＲ発現を図１０Ａ〜図１０Ｄに示す。５週齢〜６週齢の雌性ＮＳＧマウスの静脈内にルシフェラーゼ標識化ＭＶ４；１１細胞（２×１０６細胞／動物）を注入した。６日後、ＰＢＳ  ２００μｌ中の６×１０６個のＴ細胞（約５０％ＣＡＲ＋）を静脈内に注入し、生物発光イメージングを使用して動物の腫瘍量（tumor burden）を毎週測定した（図１０Ｅ〜図１０Ｇ）。対照（モック）、又は１０Ｅ３−ＣＨＤ（図１０Ｈ）、１０Ｅ３−ＴＨＤ（図１０Ｉ）若しくは８Ｂ５−ＴＨＤ（図１０Ｊ）を発現するＣＡＲ  Ｔ細胞の注入により、生存分析を行った。
【０２４４】
実施例４
抗ＣＬＬ−１  ＣＡＲコンストラクトである２４Ｃ８＿ＨＬ−ＣＨＤ  ＣＡＲ（共刺激タンパク質の完全ヒンジドメインを含む）及び２４Ｃ８＿ＨＬ−ＴＨＤ  ＣＡＲ（共刺激タンパク質の短縮ヒンジドメインを含む）をコードするプラスミドでＴ細胞を電気穿孔した。電気穿孔されたＴ細胞による抗ＣＬＬ−１発現を図１１Ａ〜図１１Ｄに示す。次いで、抗ＣＬＬ−１  ＣＡＲ  Ｔ細胞を、ｍＲＮＡ電気穿孔から６時間後にＲ１０培地中において１：１のＥ：Ｔ比で、標的のＮａｍａｌｗａ（ＡＴＣＣ；ＣＬＬ−１陰性）、Ｕ９３７（ＡＴＣＣ；ＣＬＬ−１陽性）、ＨＬ−６０（ＡＴＣＣ；ＣＬＬ−１陽性）、ＥｏＬ−１（Sigma；ＣＬＬ−１陽性）、ＫＧ１ａ（ＡＴＣＣ；ＣＬＬ−１陽性）及びＭＶ４；１１（ＡＴＣＣ；ＣＬＬ−１陽性）の細胞と共に培養した。共培養から１６時間後、製造業者の使用説明書に従って、ＩＬ−２（図１２Ａ）、ＩＦＮγ（図１２Ｂ）及びＴＮＦα（図１２Ｃ）の産生についてＬｕｍｉｎｅｘ（EMD Millipore）により上清を分析した。
【０２４５】
ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）取り込みのフローサイトメトリー分析によって、標的細胞の生存率を評価した。電気穿孔された抗ＣＬＬ−１  ＣＡＲ  Ｔ細胞を、１６時間に亘りＮａｍａｌｗａ（図１３Ａ）、ＭＶ４；１１（図１３Ｂ）、ＥｏＬ−１（図１３Ｃ）、ＨＬ−６０（図１３Ｄ）、又はＵ９３７（図１３Ｅ）の標的細胞と共培養した。予想通り、抗ＣＬＬ−１  ＣＡＲ  Ｔ細胞と共培養したＮａｍａｌｗａ細胞は、対照と比べて標的細胞生存率にほとんど変化を示さなかった（図１３Ａ）。しかしながら、２４Ｃ８＿ＨＬ−ＴＨＤ  Ｔ細胞の共培養物において観察された標的細胞のより大きな細胞溶解活性と共に、対照と比較して、２４Ｃ８＿ＨＬ−ＣＨＤ及び２４Ｃ８＿ＨＬ−ＴＨＤのＴ細胞と共培養したＭＶ；４１１細胞において細胞溶解活性の増加が観察された（図１３Ｂ）。さらに、対照と比較して、２４Ｃ８＿ＨＬ−ＣＨＤ及び２４Ｃ８＿ＨＬ−ＴＨＤのＴ細胞と共培養したＥｏＬ−１細胞において細胞溶解活性の増加が観察された（図１３Ｃ）。対照と比較して、２４Ｃ８＿ＨＬ−ＣＨＤ及び２４Ｃ８＿ＨＬ−ＴＨＤのＴ細胞と共培養したＨＬ−６０細胞において細胞溶解活性の増加が観察された（図１３Ｄ）。２４Ｃ８＿ＨＬ−ＴＨＤ  Ｔ細胞の共培養物において観察された標的細胞のより大きな細胞溶解活性と共に、対照と比較して、２４Ｃ８＿ＨＬ−ＣＨＤ及び２４Ｃ８＿ＨＬ−ＴＨＤのＴ細胞と共培養したＵ９３７細胞において細胞溶解活性の増加が観察された（図１３Ｅ）。
【０２４６】
実施例５
共刺激タンパク質の短縮ヒンジドメイン（「ＴＨＤ」）、１０Ｅ３＿ＴＨＤ又は２４Ｃ１＿ＬＨ＿ＴＨＤを有する抗ＣＬＬ−１  ＣＡＲコンストラクトを含むレンチウイルスベクターで形質導入されたＴ細胞を、Ｔ細胞刺激の１２日後にＲ１０培地中１：１のＥ：Ｔ比でＮａｍａｌｗａ、Ｕ９３７、ＨＬ−６０、ＥｏＬ−１、ＫＧ１ａ及びＭＶ４；１１の標的細胞と共培養した。共培養から１６時間後、製造業者の使用説明書に従って、指定される標的Ｎａｍａｌｗａ、ＨＬ−６０又はＭＶＡ；１１細胞とのエフェクター１０Ｅ３＿ＴＨＤ  ＣＡＲ  Ｔ細胞及び２４Ｃ１＿ＬＨ＿ＴＨＤ  ＣＡＲ  Ｔ細胞の共培養物における、サイトカインＩＦＮγ（図１４Ａ）、ＩＬ−２（図１４Ｂ）、及びＴＮＦα（図１４Ｃ）の産生についてＬｕｍｉｎｅｘ（EMD Millipore）により上清を分析した。
【０２４７】
ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）取り込みのフローサイトメトリー分析により標的細胞生存率を評価した。形質導入されたエフェクター２４Ｃ１＿ＬＨ＿ＴＨＤ  ＣＡＲ  Ｔ細胞をＮａｍａｌｗａ、Ｕ９３７、ＨＬ−６０、ＥｏＬ−１、ＫＧ１ａ、又はＭＶ４；１１の標的細胞と１６時間又は４０時間共培養した。形質導入されたＣ１＿２４Ｃ１＿ＬＨ＿ＴＨＤ  ＣＡＲ  Ｔ細胞とのＮａｍａｌｗａ標的細胞の共培養は、モック対照と比較して、１６時間及び４０時間での生存可能なＮａｍａｌｗａ標的細胞の割合に影響を及ぼさなかった（図１５Ａ）。しかしながら、ＭＶ４；１１（図１５Ｂ）又はＨＬ−６０（図１５Ｃ）のいずれかの標的細胞と共培養したＣ１＿２４Ｃ１＿ＬＨ＿ＴＨＤ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、モック対照と比較して、１６時間及び４０時間の両方において、より低い割合の生存可能な標的細胞を生じた。
【０２４８】
実施例６
Ｔ細胞刺激の１２日後、共刺激タンパク質の短縮ヒンジドメイン（「ＴＨＤ」）を含む抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲコンストラクトで形質導入されたＣＡＲ  Ｔ細胞を、Ｒ１０培地中、標的細胞に対するエフェクター細胞（Ｅ：Ｔ）の比１：１で標的細胞と培養した。試験した細胞株は、ＥｏＬ−１（Sigma；ＢＣＭＡ陰性）、ＮＣＩ−Ｈ９２９（Molecular Imaging；ＢＣＭＡ陽性）及びＭＭ１Ｓ（Molecular Imaging；ＢＣＭＡ陽性）を含んだ。共培養の１６時間後、サイトカインＩＦＮγ（図１６Ａ及び図１６Ｂ）、ＴＮＦα（図１６Ｃ及び図１６Ｄ）及びＩＬ−２（図１６Ｅ及び図１６Ｆ）の産生について、製造業者の使用説明書に従い、Ｌｕｍｉｎｅｘ（EMD Millipore）によって上清を分析した。両方のドナー（図１６Ａ及び図１６Ｂ）において試験した各抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞に対するＮＣＩ−Ｈ９２９及びＭＭ１Ｓの標的細胞共培養物の上清中、ＩＦＮγ（図１６Ａ及び図１６Ｂ）、ＴＮＦα（図１６Ｃ及び図１６Ｄ）及びＩＬ−２（図１６Ｅ及び図１６Ｆ）が観察されたが、ＩＲ陰性対照Ｔ細胞に対するバックグラウンド上でのＥｏＬ−１標的細胞共培養物の上清中においてのみ（図１６Ａ）、ＩＦＮγ（図１６Ａ及び図１６Ｂ）、ＴＮＦα（図１６Ｃ及び図１６Ｄ）及びＩＬ−２（図１６Ｅ及び図１６Ｆ）が観察された。
【０２４９】
標的細胞の生存率を、ＣＤ３陰性細胞のヨウ化プロピジウム（ＰＩ）取り込みのフローサイトメトリー分析によって評価した。抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞を、１６時間、４０時間、６４時間、８８時間又は１１２時間に亘って、ＥｏＬ１（図１７Ａ及び図１７Ｂ）、ＮＣＩ−Ｈ９２９（図１７Ｃ及び図１７Ｄ）又はＭＭ１Ｓ（図１７Ｅ及び図１７Ｆ）の標的細胞と共培養した。抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞については、細胞溶解活性は、いかなる期間でもＥｏＬ−１共培養物においてほとんど観察されなかった（図１７Ａ及び図１７Ｂ）。しかしながら、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞、及びＮＣＩ−Ｈ９２９又はＭＭ１Ｓの標的細胞の共培養は、各々の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞について測定された各時間点において生存可能な標的細胞のパーセンテージの減少をもたらした。
【０２５０】
増殖を調査するため、Ｒ１０培地中１：１のＥ：Ｔ比のＥｏＬ−１、ＮＣＩ−Ｈ９２９、又はＭＭ１Ｓの標的細胞との共培養に先立って、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞をカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識化した。５日後、Ｔ細胞増殖を、ＣＦＳＥ希釈物のフローサイトメトリー分析によって評価した（図１８Ａ及び図１８Ｂ）。
【０２５１】
実施例７
増強された安定性は、タンパク質の望ましい特性である。これは、しばしば、様々な条件下でタンパク質の融点を特定することにより評価される。より高い融点を有するタンパク質は、一般的により長時間に亘って安定である。ＣＡＲがより熱安定性である場合、細胞の表面上でより長期間に亘って機能的に活性となり得る。
【０２５２】
より長いヒンジドメイン、すなわち完全ヒンジドメイン（「ＣＨＤ」）を有するＣＡＲ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の熱安定性、及び短縮ヒンジドメイン（「ＴＨＤ」）を有するＣＡＲ  ＥＣＤの熱安定性をＢｉｏ−Ｒａｄ  Ｃ１０００サーマルサイクラーのＣＦｘ９６  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅシステムを使用して測定した。タンパク質のアンフォールディング（Unfolding）を、タンパク質がアンフォールドするにつれて溶媒曝露となる疎水性アミノ酸に結合する蛍光色素ＳＹＰＲＯ  Ｏｒａｎｇｅ（Invitrogen）を使用してモニターした。温度勾配を２５℃から９５℃に１℃／１分上昇で設定した。各試料は１０μＭの組み換えＣＡＲ  ＥＣＤタンパク質及び５×ＳＹＰＲＯ  Ｏｒａｎｇｅ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（商標）ＳＹＰＲＯ（商標）Ｏｒａｎｇｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇｅｌ  Ｓｔａｉｎ（ＤＭＳＯ中５０００倍濃縮））を含んだ。上記アッセイを５０ｍＭのＮａＣｌを含む又は含まないＰＢＳ中で行った。
【０２５３】
図１９Ａ及び図１９Ｂに示されるように、ＴＨＤを有するＣＡＲのＥＣＤは、例えばＩＥＶＭＹＰＰＰＹ（配列番号２５０）モチーフを含むＣＨＤを有するＣＡＲのＥＣＤと比較して、増強された熱安定性を示す。一旦Ｔ細胞がＣＡＲをコードするｍＲＮＡによって形質導入されると、形質導入されたＴ細胞はＣＡＲを発現し、個々のｍＲＮＡ又はタンパク質の安定性を容易に評価することができないため、この実施例に記載されるこれらの方法は、ＣＡＲをコードするｍＲＮＡ及びＣＡＲそれ自体の安定性を試験するのに有用な方法である。
【図１】
2019516350.tif 000054
【図２−１】
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【図２−２】
2019516350.tif 000056
【図２−３】
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【図２−４】
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【図３】
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【図４−１】
2019516350.tif 000060
【図４−２】
2019516350.tif 000061
【図４−３】
2019516350.tif 000062
【図４−４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図５−３】
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【図５−４】
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【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図７−３】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図９−１】
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【図９−２】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１０−３】
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【図１０−４】
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【図１０−５】
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【図１１】
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【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１２−３】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１３−３】
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【図１４−１】
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【図１４−２】
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【図１４−３】
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【図１５−１】
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【図１５−２】
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【図１５−３】
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【図１６−１】
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【図１６−２】
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【図１６−３】
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【図１７−１】
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【図１７−２】
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【図１７−３】
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【図１８】
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【図１９】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年5月14日(2019.5.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２−２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２−２】
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【国際調査報告】
2019516350.tif 000103
2019516350.tif 000104
2019516350.tif 000105